JPH06502205A

JPH06502205A - 酸性エンドグルカナーゼ型成分の豊富なセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物

Info

Publication number: JPH06502205A
Application number: JP3517578A
Authority: JP
Inventors: エイクラークソン，キャスリーン; エルワイス，ジェフリー; エイレアナス，エドマンド; シューメイカー，シャロン　ピー
Original assignee: ジェネンコア　インターナショナル　インコーポレーテッド
Priority date: 1990-10-05
Filing date: 1991-10-04
Publication date: 1994-03-10
Also published as: EP0552276A4; FI931490A0; WO1992006210A1; EP0552276A1; FI931490A; CA2093425A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

発明の背景１、　産業上の利用分野本発明は特定のセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物に関するものである。特に、本発明は、洗浄に効果的な量の界面活性剤と、エキソ−セロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ）Ｉ型成分、好ましくは全てのＣＢＨ型成分と比較して豊富な量の酸性エンドグルカナーゼ（ＥＧ）型成分を含む酸性セルラーゼ組成物とを含有する洗浄剤組成物に関するものである。さらに詳しくは、本発明は、洗浄に効果的な量の界面活性剤およびセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物であって、ここで該セルラーゼ組成物は、１つ以上の酸性ＥＧ型成分および必要に応じてのＣＢＨＩ型成分からなり、該セルラーゼ組成物は、５：１より大きい全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする洗浄剤組成物に関するものである。そのような洗浄剤組成物は、軟らがさ、感触色彩保持／復元等における実質的な改善を提供する。加えて、そのような洗浄剤が、少なくとも約１重量パーセント、好ましくは少なくとも約５重量パーセント、ざらに好ましくは少なくとも約１０重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分（全酸性ＥＧ酸成分合計タンパク質重量に基づく）を含有する１つ以上の酸性ＥＧ型成分からなる場合、増大した洗浄効果力やまた観察される。２、　従来技術セルラーゼは、セルロース（β−１，４−グルカン環）を加水分解し、それによりグルコース、セロビオース、セロ−オリゴ糖類等の形成を生じせしめる酵素として従来技術において知られている。セルラーゼは菌類、細菌等中で産生（表現）される一方、ある菌類はセルロースの結晶性形状を分解可能な完全セルラーゼ系を産生じ、そのようなセルラーゼは、発酵工程により大量に容易に産生されるので、菌類により産生されたセルラーゼは最も注目されている。上述点に関して、ウッドらの「酵素学における方法」１６０．２５、頁２３４　（１９８８）は、ある菌類が、エキソ−セロビオヒドロラーゼ（ＥＣ３，２，１，９１）（ｒＣＢＨＪ　）　、エンドグルカナーゼ（ＥＣ３，２，１゜４）（ｒＥＧＪ）およびβ−グルコシダーゼ（ＥＣ３゜２．１．２１）（ｒＢＧＪ）として同定される酵素を含むいくつかの異なる酵素分類からなる完全セルラーゼ系を産生ずることを開示している。一方で、ある菌類は完全セルラーゼ系を産生できない。一般的に、これらの系はＣＢＨ成分を欠いている。例えば、コーワンらのセルロース分解の生化学および遺伝学、アルバートら、編集者、頁１１、（アカデミツク出版、１９８８）；およびウッドらの、酵素学における方法、１６０．２５、頁８７、（アカデミツク出版、ニューヨーク、１９８８）を参照のこと。同様に、細菌セルラーゼが、ＣＢＨをほとんどまたは全く含有しないとして文献に報告されているが、細菌セルラーゼから誘導されたＣＢＨ状成分成分キソ−セロビオヒドロラーゼ活性を有すると報告された事例はわずかである。ＣＢＨＳＥＧおよびＢＧの菌類セルラーゼ分類はさらに拡大して、各分類内の多重（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）成分を含有することかできる。例えば、多重ＣＢＨおよびＥＧは、２つのＣＢＨ，すなわち、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ。および少なくとも３つのＥＣ，すなわち、ＥＧ　Ｉ、ＥＧＩＩおよびＥＧ　ＩＩＩを含有するＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉを含む様々な菌類源から単離される。各ＣＢＨＳＥＧおよびＢＧ分類からの成分からなる完全セルラーゼ系には、結晶性セルロースをグルコースに効果的に転化することが要求される。単離された成分は、結晶性セルロースを加水分解するに際して全く効果的ではない。さらに、セルラーゼ成分の間に、特にそれらが異なる分類にある場合、相乗関係が観察される。すなわち、完全セルラーゼ系の効果的なことは、同一の分類の単離成分からの貢献の合計よりも著しく大きい。この点に関して、ＥＧ酸成分よびＣＢＨ成分は相乗的に相互作用してより効果的にセルロースを分解することが従来技術において知られている。例えば、ウッド、バイオケム、Ｓｏｃ、Ｔｒａｎｓ、、１３、頁４０７−４１０　（１９８５）り照のこと。基質特異性および異なるセルラーゼ成分の作用様式は、結合成分の相乗作用を説明する分類に関して著しく異なる。例えば、セルラーゼ作用の現在受は入れられている様式は、エンドグルカナーゼ成分か、特にセルロースの低結晶度の領域における、内部β−１，４−グルコシド結合を加水分解し、エキソ−セロビオヒドロラーゼ成分か、セルロースの非還元末端からのセロビオースを加水分解する二とである。エンドグルカナーゼ成分の作用は、エキソ−セロビオヒドロラーゼ成分により認工される新たな鎖末端を作成することにより、エキソ−セロビオヒドロラーゼの作用を大きく促進させる。 β−グルコシダーゼ成分は、セロオリゴ糖類、例えば、セロビオース、のみに作用腰椎−の産生物としてグルコースを与える。β−グルコシダーゼ成分はグルコースに対する全体的な反応を行ない、それによりＣＢＨおよびＥＧ酸成分上セロビオースの阻害効果を解放するので、セルラーゼ系の必須部分であると考えられる。一方では、セルラーゼはまた従来技術において、組成物の洗浄能力を高める目的の、柔軟剤としての使用の、および綿織物等の感触を改善する洗浄剤組成物に使用されることが知られている。セルラーゼ組成物か衣類を柔軟化する正確な機構は完全には理解されていないが、セルラーゼの柔軟化および色彩回復特性は、セルラーゼ組成物中のアルカリ性エンドグルカナーゼに帰する。それゆえ、例えば、国際出願公報Ｗ○８９１０９２５９号は、特定アルカリ性エンドグルカナーゼ成分の豊富なセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物は、そのような成分が豊富でないセルラーゼ組成物と比較して、処理衣類に色彩の回復および改善された柔らかさを与えることを開示している。加えて、洗浄剤組成物中へのそのようなアルカリ性エンドグルカナーゼ成分の使用は、その洗浄剤組成物のｐＨ必要条件を補足する。この参照文献のエンド−グルカナーゼせいぶんは、７．５から１０のアルカリ性ｐＨで最大の活性を示し、アビセルとカルボキシメチル−セルロース上の活性基準を定義するものとして定義される。一方で、最も容易に用いられるセルラーゼ組成物の供給源は、酸性ｐＨで最大の活性を示し、アルカリ性ｐＨでより少なく活性を示す、菌類より誘導されたセルラーゼ組成物および成分である。さらに、容易に得られるそのような酸性菌類セルラーゼ組成物の点から見て、そのようなセルラーゼを、洗浄剤組成物、特にアルカリ性条件において使用される洗浄剤組成物に用いることが有利である。発明の概要酸性エンドグルカナーゼ型成分が豊富な菌類セルラーゼ組成物は、洗浄剤組成物中で結合して、柔軟化、色彩の保持／復元および感触における改善を達成できることか分かった。さらに、そのようなセルラーゼ組成物は、酸性、中性、またはアルカリ性の洗濯媒質中においても色彩の保持／復元、柔軟化および感触の改善を与えることが分かった。アルカリ性洗濯媒質中において、柔軟化、色彩の保持／復元、および感触の改善は、酸性エンドグルカナーセ型成分かアルカリ性媒質中で最小の酵素活性を示し、アルカリ性条件下では不安定であると考えられているので、特に驚くべきことである。しかしながら、本発明において、アルカリ性媒質中で最小の活性を有し、アルカリ性条件下でのその不安定さに抵抗できなくても、酸性エンドグルカナーゼ型成分はまだ、アルカリ性洗浄剤媒質で処理する綿織物に、柔軟化、色彩の保持／復元、および感触の改善を与えることが、予期せずに発見された。そのような改善は、そのようなセルラーゼ組成物をより高濃度で用いる１回の洗濯において、またはそのようなセルラーゼ組成物をより低濃度で用いる繰返しの洗濯のいずれにかにおいて特に顕著である。ＣＢＨＩ欠ｂｔ、ＣＢ　ＨＩ　豊Ｍ、＊　ハＥ　Ｇ　Ｉ　ｒ　Ｉ　豊富テＪるセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物に関して、セルロースからの還元糖を産生ずるのは、セルラーゼの量であって、特定の酵素成分の加水分解の相対比ではなく、このことは綿含有織物に所望の洗浄剤特性、例えば、洗浄剤組成物に１つ以上の改善された色彩回復、改善された柔軟化および改善された洗浄を与えることを発見した。したかって、１つのその組成部の面において、本発明は、洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物、および、約０．０１から約５重量パーセント、好ましくは約０．０５から約２重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ型成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であって、前記セルラーゼ組成物か５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有する洗浄剤組成物に関するものである。好ましい実施態様において、洗浄剤組成物に用いられる菌類セルラーゼ組成物は、１つ以上の酸性ＥＧ型成分および必要に応じての１つ以上のＣＢＨ型成分からなり、該セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有する。さらに好ましくは、この菌類セルラーゼ組成物は、全てのＣＢＨＩ型成分、好ましくは全てのＣＢＨ型成分を含まない。別の好ましい実施態様において、セルラーゼ組成物は、いかなるＣＢＩ（Ｉ型成分、好ましくはいかなるＣＢＨ型成分、すなわちＣＢＨＩ型およびＣＢＨＩＩＩ型成分産生できないように遺伝学的に修飾された微生物から誘導される。さらに好ましい実施態様において、セルラーゼ組成物は、いかなる異種タンパク質を導入することなく、いかなるＣＢＨＩ型成分またはＣＢＨ型成分を産生できないように遺伝学的に修飾された微生物から誘導される。１つの方法の面において、本発明は、綿含有織物の軟らかさを高める方法であって、該方法は、洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物、および、約０゜０１から約５重量パーセント、好ましくは約０．０５から約２重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＣ型成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であって、前記セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有する洗浄剤組成物から誘導される洗濯媒質中で前記織物を洗濯することからなる方法に関するものである。別の方法の面において、本発明は綿含有織物の色彩を保持／復元する方法であって、該方法は、洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物、および、約０゜０１から約５重量パーセント、好ましくは約０．０５から約２重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ型成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であって、前記セルラーゼ組成物が５＝１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＣ型成分のタンパク質重量比を有する洗浄剤組成物から誘導される洗濯媒質中で前記織物を１回以上洗濯することからなる方法に関するものである。図面の簡単な説明図１は、ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４の構成の概略図である。図２は、１つのＴ、ｒｅｅｓｅｉ染色体上のｃｂｈｌ座でのｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４がらの大きなＥｃｏＲＩ断片の組込みによるＴ、ｒｅｅｓｅｉ遺伝子の削除を説明する図。図３は、プローブとして３２ｐ標識ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４を用いたサザン分析後のＥｃｏＲＩ切断ｐΔＣＢＩ（Ｉｐｙ「４で転換したＴ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＧＣ６９がらのＤＮＡのオートラジオグラフである。分子量マーカーのサイズは、図の左側にキロベースペアで示す。図４は、プローブとして３２ｐ標識ｐｌｎｔｃＢＨＩを用いたサザン分析後のＥｃｏＲＩ切断ｐΔＣＢＨｒｐｙｒ４で転換したＴ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＧＣ６９がらのＤＮＡのオートラジオグラフである。分子量マーカーのサイズは、図の左側にキロベースベアで示ス。図５は、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉの野生型により、そして転換菌株により分泌されたタンパク質を示す等電点電気泳動ゲルである。特に、図５において、等電点電気泳動ゲルのレーンＡはＴ、ｒｅｅｓｅｉからの部分的精製ＣＢＨＩを用いている；レーンＢは野生型Ｔ、ｒｅｅｓｅｉを用いている；レーンＣはｃｂｈｌ遺伝子が欠失されたＴ、ｒｅｅｓｅｉ菌株からのタンパク質を用いている：そしてレーンＤはｃｂｈｌ遺伝子およびｃｂｈ２遺伝子が欠失されたＴ。ｒｅｅｓｅｉ菌株がらのタンパク質を用いている。図５にれた単一のタンパク質の位置を示すように印を付けたものである。特に、ＢＧはβ−グルコシダーゼを指し、Ｅｌはエンドグルカナーゼ■を指し、Ｅ２はエンドグルカナーゼＩＩを指し、Ｅ３はエンドグルカナーゼＩＩＩを指し、Ｃ１はエキソ−セロビオヒドロラーゼＩを指し、そして０２はエキソ−セロビオヒドロラーゼＩＩを指す。図６Ａは、ゲノムＤＮＡ上の４．１ｋｂ　ＥｃｏＲＩ断片としてクローンしたＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｃｂｈ２座を示した図であり、図６Ｂは、ｃｂｈ２遺伝子欠失ベクターｐＰΔＣＢＨＩＩを示した図である。図７は、プローブとして３２ｐ標識ｐＰΔＣＢＨＩＩを用いたサザン分析後のＥｃｏＲＩ切断ｐＰΔＣＢＨＩＩで転換したＴ、ｒｅｅｓｅｉ菌株Ｐ３７ＰΔＣＢＨＩＰｙｒ２６からのＤＮＡのオートラジオグラフである。分子量マーカーのサイズは、図の左側にキロベースベアで示す。図８は、プラスミドｐＥＧＩｐｙｒ４のダイヤグラムである。図９は、４０℃でのｐＨ範囲に亘るＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導された酸性ＥＧ豊富菌類セルラーゼ組成物（ＣＢＨＩおよびＩＩを欠失した）のＲＢＢ−ＣＭＣ活性プロフィール、並びに４０℃でのｐＨ範囲に亘るＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導された豊富ＥＧＩＩＩセルラーゼ組成物の活性プロフィールを説明する図である。図１０は、様々な量のＣＢＨ成分を有するセルラーゼ組成物で処理した綿含有織物のランダロメータ（ｌａｕｎｄｅｒｏｍｅｔｅｒ）中の３回の洗濯後の強度損失の結果を説明する図である。図１１は、様々なｐＨての野生型Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉにより分泌されたセルラーゼで処理した綿含有織物の繊維除去の結果（パネルテストスコアに基づく）を説明する図である。図１２は、野生型Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉにより分泌された様々な濃度のでルラーゼ（ｐｐｍ）で処理した綿含有織物、およびＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを分泌できないように遺伝学的に設計したＴｒｉｃｈ。ｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉの菌株により分泌されたセルラーゼで処理した綿織物の繊維除去の結果（パネルテストスコアに基づく）を説明する図である。図１３は、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを分泌できないように遺伝学的に変更したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉの菌株から誘導した様々な濃度（ｐｐｍ）のＥＧ豊富セルラーゼ組成物の柔軟さのパネルテストを説明する図である。図１４は、都合のよい制限エンドヌクレアーゼ開裂部位を生成するためにｅｇｌｌおよびｃｂｈｌに作られた部位特定交代のダイヤグラムである。それぞれの場合において、上側のラインは元のＤＮＡ配列を示し、導入された変化を中はどのラインに示し、新たな配列は下側のラインに示す。図１５は、ｐｃＥＰｃｌから得られるより大きなＥｃ。ＲＩ断片のダイヤグラムである。図１６は、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ＲｕｔＣ３０の未変換菌株からの、およびＴ、ｒｅｅｓｅｉをＥｃｏＲＩｉ断ｐＣＥＰＣＩで変換することにより得られた２つの形質転換株からのＤＮＡのオートラジオグラフである。ＤＮＡをＰｓｔｌで切断して相補性ＤＮＡ鎖が得られ、５２ｐ標２ｐ　Ｕ　Ｃ４に：　：　ｃｂｈｌて雑種形成した。マーカーＤ　Ｎ　Ａ断片のサイズは図の左側にキロベースの組で示す。図１７は、プラスミドｐＥＧＩ　Ｉ　：　：　Ｐ−１のダイヤグラムである。図１８は、Ｈｉｎｃｔｌ　Ｉ　ＩおよびＢａｍＨＩで切断したｐＥＧＩ　Ｉ　：　：　Ｐ−１で変換したＴ、ｒｅｅｓｅｉ菌株Ｐ３７’ＰΔΔ６７Ｐ１からのＤ　Ｎ　Ａのオートラジオグラフである。を目補性ＤＮＡ鎖を調製し、ＤＮＡは、ｅｇ１３遺伝子を含有する放射線標識Ｔ、ｒｅｅｓｅｉＤＮＡの約４ｋｂ　ＰｓｔＩ断片で雑種形成した。ラインＡ、ＣおよびＥは、未変換法からのＤＮＡを含有し、一方・ＢＳＤおよびＦは、未変換Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株からのＤＮＡを含有する。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉＤＮＡを、ラインＡＳＢのＢｇｌＩｌで、ラインＣ，ＤのＥｃｏＲＶで、そしてラインＥ、ＦのＰｓ

【Ｏて切断した。マーカーＤＮＡ断片のサイズｊ；図の左側にキロベースベアで示す。図１９は、プラスミドｐＰΔＥＧＩ−１のダイヤグラムである。図２０は、ＨｉｎｄＩＩＩ切断ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３により得られた菌株ＧＣ６９の形質転換株から単離したＤＮＡの相補性ＤＮＡ鎖のオートラジオグラフである。未変換法に予期したプローブ、放射線積置ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３による雑種形成の＠様をレーンＣに示す。レーンＡはｅｑ１１遺伝子が分裂した形質転換株に予期された模様を示し、レーンＢはｐΔＥＧＩｐｙｒ−３ＤＮＡがゲノム中に組込まれたがｅｑｌｌ遺伝子を分裂しない形質転換株を示す。レーンＤはＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉで切断したｐΔＥＧＩｐｙｒ−３を含有し、適切なサイズのマーカーを提供する。マーカーＤＮＡ断片のサイズは図の左側にキロベースベアで示す。発明の詳細な説明上述したように、本発明は概して、ＣＢＨＩ型成分と比較して酸性ＥＧ型セルラ〜ゼ成分か豊富な菌類セルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物並びにそのようなセルラーゼ組成物を用いた方法に関するものである。酸性、中性またはアルカリ性のｐＨでの洗浄剤組成物に用いられる場合、そのような組成物は、柔軟化、色彩の保持／復元、および感触における改善を処理した綿含有織物に与える。しかしながら、本発明を詳細に論じる前に、以下の用語を最初に定義しておく。７菌類でルラーゼ」という用語は、菌類から得られたでルラーゼ遺伝子の全てまたは一部を含有し表現するために遺伝学的に変更された菌類源または微生物から誘導された酵素組成物を指す。菌類セルラーゼはセルロースまたはその誘導体に作用し、セルロースを加水分解し、主生成物、グルコースとセロビオースを与える。菌類セルラーゼは、放線菌、滑走細菌（粘液細菌）および真性細菌のような微生物を含む非菌類源から生成したセルラーゼから区別される。ここに記載した洗浄剤組成物に用いられるセルラーゼ組成物を調製するのに都合のよいセルラーゼを生成することのできる菌類は、英国特許第２，０９４，８２６号に開示されており、その開示をここに参照文献として用いる。最良の菌類セルラーゼは一般的に、酸性または中性のｐＨ範囲において最大の活性を有するが、いくつかの菌類セルラーゼが、中性およびややアルカリ性の条件下で著しい活性を有することが知られており、すなわち、例えばＨｕｍｉｃｏｌａ　１ｎｓｏｌｅｎｓから誘導されたセルラーゼは中性からややアルカリ性条件下で著しい活性を有することが知られている。菌類セルラーゼは、異なる基質特異性、酵素的作用パターン等を有するいくつかの酵素分類からなることか知られている。加えて、各分類内の酵素成分は、異なる分子量、ことなるグリコジル化度、異なる等電点、異なる基質特異性等を示し得る。例えば、菌類セルラーゼは、エンドグルカナーゼ（ＥＧ）、エキソ−セロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ）、β−グルコンダーゼ（ＢＧ）等を含むセルラーゼ分類を含む。一方、細菌セルラーゼが、はとんどまたは全くＣＢＨ成分を含有しないと文献に報告されているが、細菌セルラーゼから誘導されたＣＢＨ状成分がエキソ−セロビオヒドロラーゼ活性を有すると報告されたことはまれである。自然に発生した菌類源により産生されて１つ以上のＣＢＨおよびＥＧ酸成分らなる菌類セルラーゼ組成物は、これらの成分それぞれが菌類源により産生された比率で発見され、ここではときどき「完全菌類セルラーゼ系」または「完全菌類セルラーゼ組成物」と称され、その組成物を、そこから単離されたセルラーゼの分類および成分から、細菌とある菌類により産生された不完全セルラーゼ組成物から、またはセルラーゼのＣＢＨおよび／またはＥＧ酸成分生産しないように、または産生過剰、産生不足となるように遺伝学的に修飾した微生物から得たセルラーゼ組成物から区別する。セルラーゼの産生のための菌類を培養する発酵方法は、従来技術においてそれ自体が知られている。例えば、セルラーゼ系は、バッチ、フェト−バッチ（ｆｅｄ −ｂａｔｃｈ）および連続流動工程を含む固体または浸水培地のいずれかにより産生され得る。発酵肉汁（ｂｒｏｔｈ）からのセルラーゼ系の集積および精製はまた、従来技術においてそれ自体が知られている方法により達成される。「酸性菌類セルラーゼ組成物」は、７．　０より低いｐＨで、好ましくは６．５より低いｐ）ｆで最適なｐＨを有する活性プロフィールを有する菌類誘導セルラーゼ組成物を指す。必すしも必要ではないが一般的に、そのような酸性セルラーゼ組成物は、酸性ＥＧおよび酸性ＣＢＨ成分を含有する。「エンドグルカナーゼ（ｒＥＧＪ　）型成分」は、それら全ての菌類セルラーゼ成分またはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉのエンドグルカナーゼ成分に似た洗浄剤活性特性を示す成分の組ごせを示す。この点に関して、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのエンドグルカナーゼ成分（特に、ＥＧ　Ｉ、ＥＧＩＩ、ＥＧ　ＩＩＩ等を単一または組合せで）は、これらの成分が洗濯媒質ちゅに含まれ、その織物がこの媒質で処理された場合、綿含有織物に、柔らかさ、色彩保持／回復および改善された感触を与える。したがって、エンドグルカナーゼ型成分は、これらの成分が洗濯媒質中に含まれる場合に綿衣類に柔らかさ、色彩保持／回復および改善された感触を与える菌類セルラーゼ成分である。好ましい実施態様において、本発明の洗浄剤組成物に用いられるエンドグルカナーゼ型成分はまた、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導された完全セルラーゼ系から生じた強度損失と比較して、綿含有織物により少ない強度損失を与える。そのようなエンドグルカナーゼ型成分は、（ａ）カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）のような溶性セルロース誘導体を加水分解して、それにより溶液を含有するＣＭＣの粘度を減少せしめる、（ｂ）リン酸膨潤セルロース（例えば、ワルセスセルロース）のようなセルロースの水和形態を容易に加水分解する、およびセルロースのより高度な結晶性形態（例えば、アビセル、ソルカフロク等）を容易ではないが加水分解する、成分の能力のような活性試験を用いてエンドグルカナーゼとして伝統的に分類される成分を含まない。一方で、そのような活性試験により定義されるような全てのエンドグルカナーゼ成分が、綿含有織物に、改善された柔らかさ、感触および色彩保持／回復を与えるわＩすではないと５思われている。したがって、エンドグルカナーゼ型成分を、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのエンドグルカナーゼ成分により所音されるような類似の洗浄剤組成物における特性を所有する菌類セルラーゼの成分として定義することが本発明にとってより正確である。菌類セルラーゼは１つより多いＥＧ型成分を含有し得る。異なる成分は一般的に、異なる等電点、異なる分子量、異なるグリコジル化度、異なる基質特異性、異なる酵素活性パターン等を有する。成分の異なる等電点により、イオン交換クロマトグラフィー等による分離が可能となる。実際、異なる菌類源からの成分の単離は従来技術において知られている。例えば、ボルフらの米国特許出願０７／４２２，８１４、シュラインらの、国際８願Ｗ　Ｏ８９１０９２５９、つ・シトらのセルロ−ス分解の生化学および遺伝学、３１から５２　（１９８ｇ）　：ウッドらの炭化水素リサーチ、１９０巻、２７９から２９７　（１９８ｇ）　；シュライン、酵素学における方法、１６０巻、２３４から２４２（１９８８）等を参照のこと。これらの各参照文献の完全な開示を、ここに引用する。「酸性菌類ＥＧ型成分」　（酸性ＥＧ型成分）は、７．０より低い、好ましくは６．５より低い最適ｐＨを有するが、アルカリ性媒質中（すなわち、７より大きく約１０のｐ）Ｉ、好ましくは７より大きく約８のｐＨに緩衝せしめられた酸性ＥＧＧセルラーゼ成分を含有する水溶液）４０℃でのＲＢＢ−ＣＭＣでも少な（ともいくらかの活性を有する（実施例１５）菌類誘導ＥＣ型成分を指す。好ましくは、ｐＨ７，５の４０℃で、酸性ＥＧ型成分はその最大活性の少なくとも１０％を有する。一般的に、酸性ＥＧ型成分の組合せは、単一の酸性ＥＧ酸成分比較して柔らかさ、色彩保持／回復および感触を改善する際に、相乗応答を示すと考えられている。一方では、単一の酸性ＥＧ型成分はより安定であり、ｐＨ範囲に亘り広いスペクトルの活性を有する。したかって、本発明に用いられる酸性ＥＧ型成分は、単一のＥＧ型成分または２つ以上の酸性ＥＧ型成分の組合せのいずれかである。成分の組合せが用いられる場合、酸性ＥＣ型成分は同一または異なる菌類源から誘導される。「エキソ−セロビオヒドロラーゼ型ＣｒＣＢＨ型」）成分」は、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのＣＢＨＩおよび／またはＣＢＨＩＩセルラーゼに類似した洗浄剤活性特性を示す菌類セルラーゼ成分を指す。この点に関して、ＥＧ型酸成分セルラーゼ成分不在下で用いられた場合（上記定義したように）　、Ｔｒ　ｉ　ｃｈｏｄｅ　ｒｍａｒｅｅｓｅｉのＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ酸成分みでは、その処理した綿含有織物に、色彩保持／回復および改善された感触を与えない。したがって、ＥＧ型成分と組み合わせて用いた場合、Ｔｒｉｃｈｏｃｆｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのＣＢＨＩ成分は、その綿含有織物に高められた強度の損失および増大した洗浄効果を与える。したがって、ＣＢＨＩ型成分およびＣＢＨＩＩ型酸成分、それぞれＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ酸成分類似した洗浄剤活性特性を示す菌類セルラーゼ成分を指す。上述したように、ＣＢＨＩ型成分に関して、このことは、ＥＧ型成分の存在下で用いられる場合、綿含有織物の強度損失を高める、および／または増大した洗浄効果を与える特性を含む。好ましい実施態様において、ＥＧ型成分の存在下で用いられる場合、ＣＢＨＩ成分はまた増大した柔軟化効果を与える。そのようなエキソ−セロビオヒドロラーゼ型成分はどうしても、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを特徴付けるのに用いられたような活性試験を用いてエキソ−セロビオヒドロラーゼとして因襲的に分類された成分は含まない。例えば、そのような成分は、（ａ）セルビオースにより競争的に阻害される（Ｋｉは約１ｍＭ）；　（ｂ）カルボキシメチルセルロース等のような置換セルロースを著しくは加水分解できない；（ｃ）リン酸膨潤セルロースを加水分解し、高度な結晶性セルロースはあまり加水分解しない。対称的に、活性試験によりＣＢＨ成分として特徴付けられたある菌類セルラーゼ成分は、洗浄剤組成物中で単独で用いられる場合、綿含有織物に、改善された柔らかさ、感触および色彩保持／回復を提供すると思われる。したがって、エキソ−セロビオヒドロラーゼ成分は、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのエンドグルカナーゼ成分により所有されるような洗浄剤組成物の類偲の機能特性を所存するので、そのようなエキソ−セロビオヒドロラーゼをＥＧ型成分として定義することが本発明に関してより正確であると思われる。「酸性菌類ＣＢＩ（型成分」　（酸性ＣＢＨ型成分）は、７゜０より低い、好ましくは６．５より低いｐＨで最適なｐＨを有する４０℃のＲＢ　Ｂ　−ＣＭ　Ｃ上の活性プロフィールを育する菌類誘導ＣＢＨ型成分（実施例１５）を指す。酸性ＥＧ酸成分豊富な酸性菌類セルラーゼは、精製技術により得られる。つまり、完全菌類セルラーゼ系は、適切なｐＨでのイオン交換クロマトグラフィー、親和力クロマトグラフィー、サイズ排他等を含む、文献中においてよく出版されている認識された分離技術により、実質的に純粋な成分に精製できる。例えば、イオン交換クロマトグラフィーにおいて（通常陰イオン交換クロマトグラフィー）、ｐＨ勾配、または塩勾配、またはｐ）ｆと塩の両方の勾配で溶出することにより、セルラーゼ成分を分離できる。ＣＢＨＩ型セルラーゼ成分に対する酸性ＥＧ型成分の必要な比率を有するセルラーゼ成分の混合物が、その成分の単離および組換え以外の方法で調製されることも考えられる。この点に関して、ＣＢＨ成分に対するＥＧ酸成分比較的高い比率を与えるために、天然微生物の発酵条件を変更する二とも可能である。同様に、組換え技術は、ＣＢＨ成分に対するＥＧ酸成分比較的高い比率を有する、または全ＣＢＨ成分を含まない１つ以上のＥＧ酸成分産生できるセルラーゼ成分の混合物を産生ずるようにＣＢＨ成分に対するＥＧ酸成分相対比率を変更することもてきる。上述した二とに関して、酸性ＥＧ酸成分豊富なセルラーゼ組成物の調製に適した方法は、１つ以上のＣＢＨ型成分を産生できないように遺伝学的に微生物を修飾することによるものであり、その方法はいかなる異種タンパク質も産生じない。同様に、１つ以上の酸性ＥＧ型成分を過剰産生ずるように遺伝学的に微生物を修飾することもまた可能である。例えば、１９９０年１０月５日に出願され、ここにその全体を１照文献として含む米国特許出１ｊｉ０７１５９３゜９１９号は、１つ以上のＣＢＨ成分を産生できないようにおよび／または１つ以上のＥＣ成分を過剰産生てきないように遺伝学的にＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉを作成する方法を開示している。さらに、その用途の方法は、いかなる異種タンパク質も産生しないＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉを産生する。同様に、ミラーらの、ｒＡｓｐｅｒｇｊｌｌｕｓ　ｎ１ｄｕｌａｎｓにおける直接または間接置換」分子および細胞生化学、頁１７１４−１．７２１（１９８５）は、相同ＤＮＡの線形断片を用いたＤＮＡ媒介転換によりＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎ１ｄｕｌａｎｓ中の遺伝子を欠失する方法を開示している。ミラーらの方法は、いかなる異種タンパク質を産生ずることなく遺伝子の欠失を達成する。上述点に関して、ＣＢＨＩ型またはＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分のいずれかを産生ずる原因となる遺伝子の欠失は、セルラーゼ組成物中に存在するＥＧ型成分の量を豊富にする効果を有する。同様に、ＣＢＨＩ型およびＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分を産生ずる原因となる遺伝子の欠失は、ＣＢＨ型成分を含まないセルラーゼ組成物となる。さらに、菌類セルラーゼ組成物は、不完全な菌類セルラーゼ組成物を産生ずる菌類源からここに用いられる。例えば、ある菌類かＣＢＨ成分を含まないセルラーゼ組成物を産生ずることが知られている。例えば、コーラランらの、セルロース分解の生化学および遺伝子学、オーパートらの編集、頁１ｌ−３０（アカデミツク出版、１９８８）は、赤腐れ菌類は、明らかにＣＢＨ成分を産生じないか、これらの成分の１つ以上がＣＢＨＩ型成分であるかのうせいもあることを開示している。一方、本発明の目的のために、そのような菌類により産生された十分な量のエンドグルカナーゼがＥＧ型成分である場合、ＣＢＨＩ型成分に対するＥＧ型成分の必要な比率を得るために豊富にすることなく、本発明の実施にそのようなセルラーゼを用いることが可能である。加えて、従来の方法により精製された１つ以上のＣＢＨ型成分の必要量は、１つ以上のＣＢＨ型成分に対する酸性ＥＧ型成分の特定比率を達成するように、ＣＢＨ型成分を産生できないように遺伝学的に作成された微生物から産生されるセルラーゼ組成物に加えられる、すなわち、酸性ＥＣ型成分が豊富であるように全ＣＢＨ型成分を含まない酸性セルラーゼ組成物は、１重量パーセントの精製ＣＢＨＩ型成分をセルラーゼ組成物に加えることによるだけで、１重量パーセントのＣＢＨＩ型成分を含有するように配合できる。「β−グルコシダーゼ（ＢＧ）成分Ｊは、ＢＧ活性を示すセルラーゼ成分を指し、すなわちそのような成分はセロビオースの非還元末端および他のセロオリゴ糖類（「セロビオース」）から作用し、単一産生物としてのグルコースを与える。ＢＧ酸成分セルロース高分子上に吸着されず、または反応しない。さらに、そのようなりＧ成分は競争的にグルコースにより阻害される（Ｋｉは約１ｍＭ）。厳密な意味において、ＢＧ酸成分セルロースを分解できないので文字通りにはセルラーゼではないが、そのようなりＧ成分は、これらの酵素か、ＣＢＨ成分およびＥＣ成分の結合作用により産生された阻害セルロース分解産生物（特にセロビオース）をさらに分解することによりセルロースの全体的な分解を促進させるため、セルラーゼ系の定義内に含まれる。ＢＧ酸成分存在なくしては、結晶性セルロースの加水分解は緩やかにしかまたはほとんど生しない。ＢＧ酸成分しばしば、ｐ−ニトロフェノールＢ−Ｄ−グルコシド（ＰＮＰＧ）のようなアリル基質に特徴付けられ、それゆえしばしばアリル−グルコシダーゼと呼ばれる。全てのアリルグルコシダーゼがＢＧ酸成分あるわけてはなく、あるものはセロビオースを加水分解しない。セルラーゼ組成物中のＢＧ酸成分存在または不在は、ＣＢＨ成分の活性を調整するのに用いられると考えられる。つまり、セロビオースはＣＢＨ成分によるセルロース分解中に産生されるので、そして高濃度のセロビオースがＣＢＨ活性を阻害することが知られているので、さらにそのようなセロビオースはＢＧ酸成分よりグルコースに加水分解されるので、セルラーゼ組成物中のＢＧ酸成分不在は、セロビオースの濃度が阻害水準に達する場合にＣＢＨ活性を「消失コさせる。また、１つ以上の添加剤（例えば、セロビオース、グルコース等〕を、そのセルラーゼ組成物に加えて、直接にまたは間接的に、いくらかまたは全てのＣＢＨｌ型活性、並びに他のＣＢＨ活性を効果的に「消失」できると考えられる。そのような添加剤が用いられた場合、用いられる添加剤の量が、ＣＢＨＩ復活性を、ここに記載したセルラーゼ組成物を用いることにより達成されるＣＢＨＩ復活性と等しい水準、または少ない水準に低下させるのに十分であれば、本発明への使用に適した組成物であると考えられる。一方、ＣＢＨ成分により生成されたセロビオースの水準が、添加したＢＧ酸成分不在下でそのような全体の加水分解の制限となる場合、添加した量のＢＧ酸成分含有するセルラーゼ組成物は、セルロースの全体の加水分解を増大させる。セルラーゼ組成物中のＢＧ酸成分量を増加せしめるまたは減少せしめるいずれかの方法が、事務所明細書番号的００５５−０５６として１９９０年１２月１０日に出願され、「クローニングによるセルロースの糖化およびＴＲＩ　ＣＨＯＤＥＲＭＡＲＥＥＳＥＩによるβ−グルコシダーゼ遺伝子の増幅」と題された米国特許出願筒０７／［ｉ２５．１４０号に記載されており、ここに参照文献として含む。菌類セルラーゼは１つ以上のＢＧ酸成分含有できる。異なる成分は一般的に、イオン交換クロマトグラフィー等によりそれらの分離を可能にする異なる等電点を有する。単体ＢＧ成分またはＢＧ酸成分組合せのいずれかが用いられ洗浄剤組成物中で用いられる場合、ＢＧ酸成分一般的に、セロビオースにより、ＣＢＨおよびＥＧ酸成分そして特に、ＣＢＨＩ型成゛分の阻害を防ぐのに十分な量で加えられる。加えるＢＧ酸成分量は、当業者により容易に決定される洗浄剤洗濯中に産生されるセロビオースの量に依存する。しかしながら、使用される場合、セルラーゼ組成物中に存在するいかなるＣＢＨ型成分と比較したＢＧ酸成分重量７々−セントは、好ましくは約Ｑ、２から約１０１量ｚ’−セントであり、より好ましくは約０．５から約５重ニック−セントである。本発明に用いられる菌類セルラーゼ組成物を調製するのに使用される好ましい菌類セルラーゼは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋ。ｎｉｎｇｉｉ、Ｐｅｎｃｉｌｌｕｍ　ｓｐ、、等から得られるものである。ある菌類セルラーゼは市販されて０る。すなわち、セルキャスト（デンマーク、コペンノ１−ゲン、ノボインダストリー社から得られる）、ラピダーゼ（オランダ、デルフト、Ｎ、Ｖ、　、ギストブロケイド社から得られる）、サイトラーゼ１２３（カリフォルニア州、南すンフラッジスコ、ジネンカーインターナショナル社から得られる）等である。他の菌類セルラーゼもまた、周知の発酵および単離方法により容易に単離できる。「綿含有織物」という用語は、綿を編んだ織物、綿量・ノド、綿デニム等を含む綿ブレンドまたは純粋な綿から作られる縫った、または縫われていない織物を指す。綿ブレンドが用いられる場合、織物中の綿の量は、少なくとも４０重量パーセントの綿、好ましくは約６０重量パーセントより多い綿、そして最も好ましくは約７５重量パーセントより多い綿である。ブレンドとして用いられる場合、その織物に用いられる材料は、ポリアミド繊維（例えば、ナイロン６およびナイロン６６）、アクリル繊維（例えば、ポリアクリロニトリル繊維）、ポリエステルｍ維（例えば、ポリエチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール繊維（例えば、ビニロン）、ポリ塩化ビニル繊維、ポリ塩化ビニリデン繊維、ポリウレタン繊維、ポリ尿素繊維およびアラミド繊維のような合成繊維を含む１つ以上の綿ではない繊維を含む。レーヨンのような再生セルロースは、綿含有織物中で綿の代替物として用いられる。「界面活性剤」という用語は、洗浄剤組成物中への使用としてよく知られているアニオン、非イオンおよび両性電解質界面活性剤を指す。「洗濯媒質」という用語は、必要量の洗浄剤（界面活性剤）組成物を水に加えることにより調製される水性洗濯溶液を指す。その洗濯媒質は一般的に、洗浄に効果的な量の洗浄剤を含む。洗濯媒質は、その媒質のｐＨが約４から約７未満である場合、「酸性洗濯媒質」と定義される。洗濯媒質は、その媒質のｐＨか約７である場合、「中性媒質Ｊと定義される。洗濯媒質は、その媒質のｐＨが７より上で約１０までである場合、「アルカリ性洗濯媒質ｊと定義される。好ましくは、アルカリ性洗濯媒質は、７より上で約９まで、さらに好ましくは７より上で約８までのｐＨを宵する。本発明は、酸性ＥＧ型成分か、洗浄剤組成物中に用いられ、その組成物が酸性、中性またはアルカリ性洗濯媒質中で用いられるかにかかわらず、綿含有織物の柔軟化をもたらすことができるという発見に基づく。特に、そのように用いられる場合、洗浄剤組成物はまた、色彩の保持／復元にも影響し、処理した織物の感触をも改善する。ＥＧ酸成分存在は色彩の保持／復元、柔軟化および改善された感触をもたらすのに必要であるが、ＥＧ型成分およびＣＢＨ型成分（ＣＢＨＩ型成分を含む）の特定の混合物はまた、同一の利益またはいくらか増大した利益を示す。特に、そのような成分の混合物が用いられる場合、その混合物は、１つ以上の酸性ＥＧ型成分および１つ以上のＣＢＨＩ型成分金成分、ここでそのセルラーゼ組成物は、５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比、好ましくは５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分の比をＨする。加えて、ＥＧ酸成分使用は、いくらかの洗浄効果となる一方、増大した洗浄効果か、酸性ＥＧ成分か豊富で、少ζくとも約１重量パーでシト、好ましくｉ北門くとも約５重量パーセント、さらに好ましくは少なくとも約１０重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分を含有する（全酸性ＥＧせいぶんの合計タンパク質重量に基づく）セルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物で洗濯した綿含有織物に観察される。一方、色彩の保持／復元、軟らかさ、および改善された感触を与えるのに加え、酸性ＥＧ型せいぶんが豊富で、ＣＢＨＩ型成分（好ましくは全ＣＢＨ型成分）を含まないでルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物はまた、酸性ＥＧ型成分が豊富で、ＣＢＨＩ型成分を含有するセルラーゼ組成物と比較して綿含有織物の著しく減少した強度損失となる。すなわち、酸性ＥＧ型成分が豊富で、ＣＢＨＪ型成分を含まないセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物での繰返しの洗濯は、酸性ＥＧ型成分およびＣＢＨ型成分の両方からなるセルラーゼ組成物を含有する洗浄剤組成物と比較して、著しく減少した綿含有織物の強度損失となる。したかって、洗浄剤組成物に使用する特定のセルラーゼ組成物を選択するにあって、当業者は、強度損失抵抗に対して所望の増大した洗浄効果を釣り合わせることが必要である。すなわち、セルラーゼを洗浄剤組成物中に含む主な重点が、綿含有織物の著しい強度損失なく、改善された軟らかさ、色彩保持／復元、および改善された感触のためである場合、洗浄剤組成物に用いらｎるでルラーゼは好ましくは、全ＣＢＨＩ型成分を含まず、１つ以上の酸性ＥＧ型成分からなるべきである。一方で、セルラーゼを洗浄剤組成物中に含む主な重点が、増大した洗浄効果とともに、色彩保持／復元、改善された軟らかさ、および改善された感触のためである場合、洗浄剤組成物に用いられるセルラーゼは、１つ以上の酸性ＥＧ型成分並びに少なくとも約１重量パーセントのＣＢＨＪ型成分（全酸性ＥＧ酸成分合計タンパク質重量に基づく）からなるセルラーゼを含有するべきである。上述点に関して、本発明の洗浄剤組成物中に一般的に用いられるセルラーゼの量は、線表類に色彩保持／復元および軟らかさを与えるのに十分な量である。好ましくは、でルラーゼ組成物は、全洗浄剤組成物の重量に対して、約０゜０１重量パーセントから約５重量パーセントで用いられる。さらに好ましくは、でルラーゼ組成物は、全洗浄剤組成物の重量に対して、約０，０５重量パーセントから約２重量パーセントで用いられる。洗浄剤組成物中に用いられるセルラーゼの特定の濃度は、洗濯媒質への希釈において、酸性ＥＣ型成分の濃度か約０．　５から約５００ｐｐｍ、好ましくは約２から約１１００ｐｐの範囲となるように選択される。洗浄剤組成物中に用いられるらるの特定量は１、セルラーゼ組成物中のＥＧ型成分の量、並びにその洗浄剤組成物か水への添加により希釈されて洗濯媒質を形成する程度に依存する。これらの要因は、当業者により容易に確認される。好ましくは、本発明の洗浄剤組成物中に用いられるセルラーゼ組成物は、タンパク質の合計重量に基づいて少なくとも約２重量パーセントのエンドグルカナーゼ型成分を含をする。より低いセルラーゼ濃度では（すなわち、洗濯媒質中で約５ｐｐｍ未満の酸性ＥＧ型成分の濃度）、本発明の洗浄剤組成物の使用により達成される軟らかさ、色彩の保持／復元および改善された感触は、繰り返しの洗濯に亘りより明確である。より高い濃度では（すなわち、洗濯媒質巾約５ｐｐｍおよびそれより高い酸性ＥＧ型成分の濃度）、その改善は１回の洗濯において顕著である。本発明の重要な面の１つは、酸性ＥＧ酸成分豊富な量を含有するセルラーゼ組成物を調製することにより、洗浄剤組成物中のより低い濃度のセルラーゼの使用で、柔軟化、色彩保持／復元、および改善された感触の所望の効果を達成できることである。変わって、タンパク質にアレルギーを示す消費者に関して、洗浄剤中のより低い濃度のセルラーゼの使用は、より高濃度のセルラーゼを含有する組成物よりもひくいアレルギー水準となる。上述したセルラーゼ組成物は、液体希釈物、粒状、乳濁液、ゲル、ペースト等のいずれかの状態で洗浄剤組成物に加えられる。そのような形状は当業者によく知られている。固体の洗浄剤組成物が用いられる場合、セルラーゼ組成物は好ましくは粒剤として配合される。好ましくは、その粒剤は、セルラーゼ保護剤を含有するように配合される。例えば、その明細書がここにその全体を２照文献として含まれる、１９９１年１月１７日に出願され、「酵素および酵素保護剤を含有する粒剤、並びにそのような粒剤を含有する洗浄剤組成物」という名称の米国特許出願第０７　／　６４２．６６９号を参照のこと。同様に、その粒剤は、その粒剤の洗濯媒質中への溶解度を減少させる物質を含有するように配合され得る。そのような物質および粒剤は、その明旧書がここにその全体を参照文献として含まれる、事務所番号ＧＣ５−１７１−ＵＳＩとして１９９１年１月１７日に出願され、Ｕ粒剤組成物」と称する米国特許第０７／６４２．５９６号に開示されている。本発明の洗浄剤組成物は、洗浄剤組成物中への使用がよく知られているアニオン、非イオン、両性電解質界面活性剤を含む界面活性剤を使用する。本発明の洗浄剤組成物への使用に適したアニオン界面活性剤は、直鎖または枝別れアルキルゼンゼンスルホン酸塩、直鎖または枝別れアルキル基またはアルケニル基を有するアルキルまたはアルケニルエーテル硫酸塩、アルキルまはアルケニル硫酸塩、オレフィン硫酸塩、アルカン−スルホン酸塩等を含む。アニオン界面活性剤に適した対イオンは、ナトリウムおよびカリウムのようなアルカリ金属イオン、カル／ラムおよびマグネシウムのようなアルカリ土類金１４、アレモニウムイオン、および炭素数２または３のアルカノール基を１から３二有するアルカノールアミンを含む。両性電解質界面活性剤は、第４級アンモニウム塩スルホン酸塩、ベタイン型両性電解質界面活性剤等を含む。そのような両性電解質界面活性剤は、同一の分子中に陽性および陰性に荷電した基の両者を含む。非イオン界面活性剤は一般的に、ポリオキシ−アルキレンエーテル、並びに高級脂肪酸アルカノールアミドまはそのアルキレン酸化物付加物、高級酸グリセリン七ジエステル等からなる。本発明への使用に適した界面活性剤は、英国特許第２゜０９４．８２６号に開示されており、その開示をここに参照文献として含む。そのような界面活性剤の混合物もまた用いられる。界面活性剤または界面活性剤の混合物は一般的に、洗浄剤組成物合計の約１重量パーセントから約２重量パーセントの量で、好ましくは、洗浄剤組成物合計の約５重量パーセントから約２重量パーセントの量で本発明の洗浄剤組成物中に用いられる。洗濯媒質中の希釈に関して、界面活性剤の濃度は一般的に、約５００ｐｐｍまたはそれ以上、好ましくは、約１１０００ｐｐから１５．０００ｐｐｍである。セルラーゼ組成物および界面活性剤に加えて、本発明の洗浄剤組成物は必要に応して、１つ以上の以下の成分を含有てきる：セルラーゼ以外の加水分解酵素そのような加水分解酵素は、エステル結合に作用するカルボキシレートエステル加水分解酵素、千オニステル加水分解酵素、リン酸塩モジエステル加水分解酵素およびリン酸塩ジエステル加水分解酵素；グリコジル化合物に作用するグリコシド加水分解酵素；Ｎ−グリコジル化合物を加水分解する酵素：エーテル結合に作用するチオエーテル加水分解酵素；ペプチド結合に作用するα−アミノ−アシル −ペプチド加水分解酵素、ペプチジル−アミノ酸加水分解酵素、アシル−アミノ酸加水分解酵素、ジペプチド加水分解酵素、およびペプチジル−ペプチド加水分解酵素を含む。それらの中で好ましいものは、カルボキンレートエステル加水分解酵素、グリコシド加水分解酵素、およびベプチシルーペプチド加水分解酵素である。適した加水分解酵素は、（１）ペプシン、ペプシンＢルンニン、トリプシン、キモトリプシンＡ１キモトリプシンＢ、エラスターゼ、エンテロキナーゼ、カテプシンＣ１パパイン、キモパパイン、フィシン、トロンビン、フィブリノリジン、レニン、サブチリシン、アスペルギルベブチダーゼＡ１コラゲナーゼ、クロストリジオペブチダーゼＢ１カリクレイン、ガストリシン、カテブンンＤ０、ブロメリン、ケラチナーゼ、キモトリプシンＣ１ペブンンＣ１アスペルギルベブチダーゼＢ１ウロキナーゼ、カルボキシ−ペプチダーゼＡとＢ、および、アミノペプチダーゼのようなペプチジル−ペプチド加水分解酵素に属するプロテアーゼ、（２）α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、インへルターゼ、リソシーム、ペクチナーゼ、キチナーゼおよびテキストナラーゼのようなグリコシド加水分解酵素（本質的な成分であるセルラーゼはこの群より除外される。それらの中で好ましいもの、α−アミラーゼおよびβ−アミラーゼである。それらは酸性から中性系で機能し、アルカリ性系において高い活性を示す細菌から得られるものもある。（３）カルボキシエステラーゼ、リパーゼ、ペクチンエステラーゼおよびクロロフィラーゼを含むカルボキシレートエステラーゼ。それらの中で特に効果的なものはリパーゼである。市販されている製品の商標名および製造社は以下のとおりである＝　「アルカラーゼ」、「エスペラーゼ」、「サビナーゼ」、ｒＡＭＧＪ、ｒＢＡＮＪ、「フンガミル」、「スイートザイム」、「テルマミル」　（デンマーク、コペンハーゲン、ノボインダストリー）：「マカスターゼ」、「高アルカリ性プロテアーゼ」、「アミラーゼＴＨＣＪ、「リパーゼ」　（オランダ、デルフト、Ｎ、Ｖ、　、ギストブロケード）；「プロテアーゼＢ−４００Ｊ、［プロテアーゼＢ−４０００Ｊ、［プロテアーゼＡＰＪ、［プロテアーゼＡＰ２１００Ｊ　（スイス、バセル、スイスファーメントＡ、Ｇ、）、ｒＣＲＤプロテアーゼ」　（ミズーリ、セントルイス、モンサント社）；「ビオカーゼＪ　（イリノイ、ミンチセロ、ビオピン社）、［プロナーゼＰ」、「プロナーゼＡＳＪ、「プロナーゼＡＦｊ　（日本、カケンケミカル社）；　「ラピダーゼＰ−２０００Ｊ　（フランス、セフラン、ラピダス）；プロテアーゼ産生物（タイラー標準ふるい、１６メツシユで１００％通過し、１５０メツシユで１００％残る）にューヨーク、スタンダードブランド社の部門、クリントンコーンブロダクツ）：「タカミネ」、「プロメレイン１：１０Ｊ、ｒＨＴプロテアーゼ２００」、「酵素Ｌ−ＷＪ　（細菌ではなく、菌類から得られた）（インディアナ、エルクハート、マイルスケミカル社）；「ロザイムＰ−１１濃縮物」、「ベクチノール」、「リパーゼＢ」、［ロザイムＰＦＪ、「ロザイムＪ−２５Ｊ　（ＣＡ、南すンフランシスコ、ジネンカー、ローム＆ハース社）；　ｒアンブロザイム２００Ｊ　（Ｎ、Ｊ、　、ネワーク、ノブコケミカル社に従属するジャックウルツ社）：　ｒＡＴＰ４０Ｊ、ｒＡＴＰ１２０Ｊ、ｒＡＴＰ１６０Ｊ　（フランス、セフラン、ラピダス）；「オリバーゼ」　（日本、長潮産業）。セルラーゼ以外の加水分解酵素が、目的により要求されるだけ洗浄剤組成物中に含まれる。その加水分解酵素は、好ましくは、精製したものに関して、０．００１から５重量パーセント、さらに好ましくは０．０２から３重量パーセントの量で含まれる。この酵素は、粗製酵素のみから作られた粒剤の形状で、または洗浄剤組成物中の他の成分と組み合わされて用いられる。粗製酵素の粒剤は、精製酵素がその粒剤中に０．００１から５０重量バーでレトとなる量で用いられる。その粒剤は、０．００２から２０、好ましくは０．１から１０重量パーセントの量で用いられる。セルラーゼに関して、これらの粒剤は、酵素保護剤および溶解遅延物質を含有するように配合される。陽イオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩そのような陽イオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩は、飽和または不飽和脂肪酸塩、アルキルまたはアルケニルエーテルカルボン酸塩、α−スルホ脂肪酸塩またはエステル、アミノ酸型界面活性剤、リン酸塩エステル界面活性剤、３から４のアルキル置換基および１まてのフェニル置換アルキル置換基を存するものを含む第４アンモニウム塩を含む。適切な陽イオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩が、英国特許第２．０９４，８２６号に開示されており、その開示をここに参照文献として含む。その組成物は、そのような陽イオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩の約１から約２０重量パーセントを含む。ビルダーＡ、二価金属イオン封鎖剤その組成物は、以下の化合物のアルカリ金属塩およびアルカノールアミン塩からなる群より選択される１つ以上のビルダー成分を約Ｏから約５０重量パーセントで含むニリン酸塩、ホスホン酸塩、ホスホノカルボキシレート、アミノ酸の塩、アミノポリ酢酸塩高分子電解質、非溶解ポリマー、ジカルボン酸の塩、およびアルミノケイ酸塩。適切な二価金属イオン封鎖剤か、英国特許第２．０９４．８２６号に開示されており、その開示をここに２照文献として含む。Ｂ、アルカリまたは無機電解質その組成物は、アルカリまたは無機型［とじで以下の化合物の１つ以上のアルカリ金属塩の組成物を、杓１がら約５０重量パーセント、好ましくは約５から約３０！ｆＬｆｆｉ・ぐ−セントで含む：ケイ酸塩、炭酸塩および硫酸塩、並びにトリエタノールアミン、ジェタノールアミン、モノエタ、ノールアミンおよびトリイソプロパツールアミンのような有機アルカリ。抗再析出剤その組成物は、抗再析出剤として以下の化合物の１つ以上を約０，１から約５重量パーセントで含む：ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびカルボキシメチルセルロース。それらの中で、カルボキシメチルセルロースおよび／またはポリエチレングリコールと本発明のセルラーゼ組成物の組合せは、特に有用な泥除去組成物を提供する。漂白剤過炭酸ナトリウム、過硼酸ナトリウム、硫酸ナトリウム／過酸化水素付加物および塩化ナトリウム／過酸化水素付加物のよにうな漂白剤または／およびスルホン化フタロシアニンの亜鉛またはアルミニウム塩のような感光漂白染料と組み合わせての本発明のセルラーゼの使用はさらに、洗浄効果を改善する。青味付は剤および蛍光染料必要であれば、組成物中に青味付は剤および蛍光染料を含有できる。適切な青味付は剤および蛍光染料が、英国特許第２．０９４．８２６号に開示されており、その開示をここに参照文献として含む。固化阻害剤以下の固化阻害剤が、粉末の洗浄剤中に含まれる：ｐ−トルエンスルホン酸塩、キンレンスルホン酸塩、酢酸塩、スルホサクンン酸塩、タルク、微粉砕シリカ、粘土、ケイ酸カルシウム（ジョーンズマンビル社のミクロセルのような）炭酸カルシウムおよび酸化マグネシウム。セルラーゼ活性を阻害する因子のマスキング剤本発明のセルラーゼ組成物は、銅イオン、亜鉛イオン、クロムイオン、水銀イオン、鉛イオン、マンガンイオンまたは銀イオンもしくはその化合物の存在下においである場合には失活せしめられる。様々な金属キレート剤および金属沈殿剤がこれらの阻害剤に対して効果的である。それらは、例えば、必要に応じての添加剤に関して上記に記載したような二価金属イオン封鎖剤並びにケイ酸マグネシウムおよび硫酸マグネシウムを含む。セロビオース、グルコースおよびグルコノラクトンは、同時に阻害剤として作用する。これらの糖類とセルラーゼの共存は、できる限り避けることが好ましい。共存か不可避の場合、糖類とセルラーゼの直接の接触を、例えばそれらを被覆することにより避けることか必要である。長鎖脂肪酸塩および陽イオン界面活性剤はある場合には阻害剤として作用する。しかしながら、これらの物質とセルラーゼとの共存は、それらの直接の接触が、タブレット化または被覆のような方法により避けられる場合、さしつかえない。上述したマスキング剤および方法は、２要であれば、本発明に用いられる。セルラーゼ活性剤活性剤は、様々なセルラーゼに依存して変化する。タンパク質、コバルトおよびその塩、マグネシウムおよびその塩、カルシウムおよびその塩、カリウムおよびその塩、ナトリウムおよびその塩、またはマンノースとキシロースのような単糖類の存在下において、セルラーゼは活性化せしめられ、その洗浄力は著しく改善される。抗酸化剤抗酸化剤は、例えば、第３ブチル−ヒドロキシトルエン、４．４′−ブチリデンビス（６−第３−ブチル−３−メチル−フェノール）、２．２’−ブチリデンビス（６−第３−ブチル−４−メチル−フェノール）、モノスチレン化フェノール、ジスチレン化フニノールおよび１．１−ビス（４−ヒドロキシーフニノール）シクロヘキサジを含む。可溶化剤可溶化剤は、例えば、エタノールのような低級アルコール、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のような低級アルキル−ベンゼンスルホン酸塩、プロピレングリコールのようなグリコール、アセチルベンゼンスルホン酸塩、アセトアミド、ピリジンジカルボン酸アミド、安息香酸塩および尿素を含む。本発明の洗浄剤組成物は、酸性からアルカリ性ｐＨまでの広いｐＨ範囲において用いられる。好ましい実施態様において、本発明の洗浄剤組成物は、アルカリ性洗浄剤洗濯媒質中、さらに好ましくは、７より上で８以下のｐＨを有するアルカリ性洗浄剤洗濯媒質中で用いられる。上述した成分は別として、所望であれば、本発明の洗浄剤組成物に、香料、緩衝液、保存剤、染料等が用いられる。そのような成分は、これまで従来技術において用いられている量で用いられる。本発明に使用される洗浄剤のベースか粉末の形状である場合、吹付は一乾燥法および粒剤法を含む既知の調製方法により調製されるものである。特に吹付は一乾燥法および／または吹付は一乾燥粒剤法により得られた洗浄剤ベースが好ましい。吹付は一乾燥法により得られた洗浄剤ベースは、調製条件間して制限されない。その吹付は一乾燥法により得られた洗浄剤ベースは、界面活性剤およびビルダーのような熱抵抗性成分の水性スラリーを熱した空間に吹き付けることにより得られる中空の粒剤である。その粒剤は５０から２０００マイクロメーターのサイズを有する。吹付は一乾燥後、香料、酵素、漂白剤、無機アルカリ性ビルダーを加える。・吹付は一乾燥拉刑法により得られるような高密度の粒剤洗浄剤ベースに関して、様々な製粉がそのへ一スの調製後に加えられる。洗浄剤ベースが液体である場合、均質な溶液または不均質な分散物のいずれかである。洗浄剤中のセルラーゼによりカルボキンメチルセルロースの析出物を除去するために、その組成物中に自存する前に、カルボキシメチルセルロースは粒剤化または塗膜されることか望ましい。本発明の洗浄剤組成物は、工業的および家族的に、これらの環境で従来用いられる温度および液体比率で用いられる。洗濯洗浄剤への使用に加えて、ここに記載したセルラーゼ組成物は、色彩の保持／復元、柔軟化および感触における所望の改善を提供する十分な活性を示す中間のｐＨでの適切な溶液中での予洗工程においても用いることができる。セルラーゼはまた、スポットリムーバーとしての使用のために液体、吹付け、ゲルまたはペーストのいずれがのブリソーク（ｐｒｅ−ｓｏａｋ）として用いられる。そのように用いられる場合、ここに記載したセルラーゼ組成物は一般的に、プリソーク組成物の合計重量に基づいて約ｏ、。０２から約０，５重量パーセントで用いられる。そのような組成物において、界面活性剤も必要に応して用いられ、用いられる場合には、予洗組成物の合計重量に基づいて約０．０１から約２０重量パーセントで存在する。組成物の残りは、予洗に用いられている従来の成分、すなわちそれぞれ従来の濃度で、希釈剤、緩衝液、他の酵素（プロテアーゼ）等からなる。また、ここに・記載したセルラーゼ組成物は、色褪せた織物に色彩を復元するのに適した孤立組成物として家庭の用途で用いられる。例えば、ここにその全体を参照文献として含む、米国特許第４，７３８，６８２号を参照のこと。以下の実施例は本発明を説明するために提示されたものであり、その視野を限定するように解釈されるべきではない。実施例実施例１−１２および２０−２８は、１つ以上のセルラーゼ組成物を産生できないように、または特定のセルラーゼ組成物を過剰産生ずるように、遺伝学的に設計したＴ「ｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉの産生を説明する。実施例ＩＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉのｐＹｒ４誘導体の選択ｐｙｒ４遺伝子は、ウリジンの生合成に必要とされる酵素である、オロチジン− ５′−モノリン酸塩デカルボキシラーゼをコードする。毒性阻害因子５−フルオロオロチン酸（ＦＯＡ）が、野生型細胞によりウリジン中に含まれ、それゆえ細胞を毒する。しかしながら、ｐｙｒ４遺伝子中に検出される細胞は二の阻害因子に対する抵抗を有するか、成長のためにウリジンを必要とする。それゆえ、Ｆ　ＯＡを用いてｐｙｒ４誘導体菌株を選択することが可能である。実際、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＲＬ−Ｐ３７の芽胞（シールーニース、Ｇ、およびモンテンコート、Ｂ、Ｓ９、Ａｐｐ＋、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２０、ｐ、　４６−５３　（１９１１４）　）を、２ｍｇ／ｍｌのウリジンおよび１．２ｍｇ／ｍｌのＦＯＡを含有する固体化した媒質の表面上に広げた。３または４日以内に、自然なＦＯＡ抵抗抵抗炉体れ、その後に、成長のためにウリジンを必要とするそれらのＦＯＡ抵抗誘導体を同定することができる。特異的に欠損ｐｙｒ４遺伝子を何したそれらの誘導体を同定するために、プロトプラストを産生じ、野生型ｐｙｒ４遺伝子を自存するプラスミドで転換した（実施例３および４参照）。転換に続いて、プロトプラストを、ウリジンを欠いた媒質上に展開した。転換炉体の続いての成長は、プラスミドボーン（ｂｏｒｎｅ）ｐｙｒ４遺伝子による欠損ｐｙｒ４遺伝子の補完を示した。このようにして、菌株ＧＣ６９を、菌株ＲＬ　−Ｐ　３７のｐｙｒ４誘導体であると同定した。実施例２ＣＢＨＩ欠夫ヘクター、つ調製ＣＢＨＩタンパク質をコードするｃｂｈｌ遺伝子を、既知のプローブ合成方法を用いた、この遺伝子に関して公表された配列を元にして設計したオリゴヌクレオチドプローブでの雄型形成により、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＲＬ−Ｐ３７のゲノムＤＮＡからクローンした（シューメーカーら、１９１１ｆ３ｂ　）　、　ｃｂｈｌ遺伝子は、６．５ｋｂ　ＰｓｔＩ断片上に存在し、当業者に知られた技術を用いてこのベクターのＫａｎ’遺伝子を置換することによりＰｔ５ｒ切断ｐＵＣ４Ｋ　ＣＮＩ、ビス力タウエイ、ファーマンア社がら購入）中に挿入され、この技術はマニアチスらにより述べられており（ｔ９ａ９）　、ここに参照文献として含む。次いで産生じたプラスミド、ｐＵＣ４Ｋ　：　：　ｃ　ｂｈ　ｌをＨｊｎｄＩＩＩで切断し、約６ｋｂのより大きな断片を単離して、再結さつしてｐＵＣ４に：　：　ｃｂｈｌΔＨ／Ｈを与えた（図１３照）。この方法は、完全なｃｂｈｌ暗号配ダリおよび約１゜２ｋｂ上流と１．５ｋｂ下流下流側列配除去する。元来のＰｓｔｒ断片のいずれかの末端からの、おおよそｌｋｂの側腹ＤＮＡが残る。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子を、マニアチスらの方法に従って、ｐＵｃ１８中のゲノムＤ　Ｎ−Ａの６．５ｋｂＨｉｎｄＩＩＩ断片としてクローンし、ｐＴｐｙｒ２（スミスら、１９９１）を形成した。プラスミドｐＵＣ４に：　：ｃｂｈｌΔＨ／ＨをＨｉｎｄｌ　Ｉ　Ｉ″′：切断し、その末端を子牛腸アルカリ性ホスファターゼで悦リンした。この末端脱リンＤＮＡを、Ｔ、ｒｅｅｓｅｌ　ｐｙｒ４遺伝子を含有する６、５ｋｂ　ＨｉｎｄｌｌＩ断片と連結し、ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４を得た。図１はこのプラスミドの構成を説明している。実施例３プロトプラストの単離５００ｍ１のフラスコ中の１００ｍ１のＹＥＧ　（０，５％の酵母抽出物、２％のグルコース）を約５Ｘ１０’のＴ。ｒｅｅｓｅｉ　ＧＣ６９芽胞（ｐｙｒ４誘導体菌株）で接種することにより菌糸体を得た。次いでそのフラスコを振動させながら３７℃で約１６時間、培養した。２．　７５０×ｇての遠心分離により菌糸体を収穫した。収穫した菌糸体をさらに、１．２Ｍツルビット溶液中で洗浄し、５ｍｇ／ｍｌのノボザイム２３４溶Ｍ（Ｃｔ、ダンバリー、ノボバイオラボから得られる、１．３−アルファーグルカナーゼ、１．３−ベーターグルカナーゼ、ラミナリナーゼ、キシラーゼ、キチナーゼおよびプロテアーゼを含有する多成分酵素系の商標である）＋５ｍｇ／ｍｌのＭｇＳＯ４・７Ｈ２０；　０．５ｍｇ／ｍ　ｌの牛血清アルブミン；１．２Ｍソルビットを含有する４０ｍ１の溶液中に再懸濁せしめた。プロトプラストを、ミラクロス（ＣＡ、ラジョラ、カルビオケム社）を通してのＪ＃、過により細胞デブリから除去し、２．０００ｇでの遠心分離により集積した。そのプロトプラストを、１．２ｈｓのソルビット中で３回洗浄して、１゜２に１のツルピント、５０　ｍ　ＭのＣａＣｌ□中で１回洗浄し、遠心分離し、１．２Ｍツルビット、５０　ｍ　ＭのＣａＣ１゜のｍ１当たり約２×１０８プロトプラストの密度で再＠濁せしめた。実施例４菌類プロトプラストのｐΔＣＢＨＩ　ｐ　ｙ　ｒ４による転換実施例３において調製した２００μｌのプロトプラスト懸濁液を、２０ｕ　ｌのＴＥ緩衝液（１０ｍｌ　トリス、ｐＨ７，４，１ｍ　Ｍ　Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａ　）中のＥｃｏＲ１切断ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４（実施例２において調製）、および２５％ＰＥＧ　４０００．０．６Ｍ　ＫＣＩおよび５０ｍＭのＣａｃ１２を含有する５０μｌのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）溶液に加えた。この混合物を２０分間、氷上で培養した。この培養期間の後に、そこに上述のように同定した２、０ｍｌのＰＥＧを加え、その溶液をさらに混合し、室温で５分間培養した。この第２の培養後、１．２Ｍのソルビットおよび５０ｍＭのＣａＣｌ２を含有する４、０ｍｌの溶液をそれに加え、この溶液をさらに混合した。次いでそのプロトプラスト溶液を、追加の１％のグルコース、１．２Ｍのソルビットおよび１％のアガロースを含有するボゲルス媒質Ｎ（１リツトル当たり、３グラムのクエン酸ナトリウム、５グラムのＫＨ２ＰＯイ、２グラムのＮＨ４ＮＱヨ、０，２グラムのＭ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７Ｈ２０，０，１グラムのＣａＣ１２−２Ｈ２０，５ｕｇのα−ビオチン、５ｍｇのクエン酸、５ｍｇのＺｎＳＯ４・７Ｈ２０，１ｍｇのＦｅ　（ＮＨ４）２　”　６Ｈ２０，０，２５ｍｇのＣｕＳＯ４−５Ｈ２０，５０ｕｇのＭｎＳＯ４ ”４Ｈ２０）の溶解アリコートに直ちに加えた。次いでプロトプラスト／媒質混合物を、上述した同一のボケル媒質を含有する固体媒質上に注いだ。その媒質中にはウリジンは全く存在せず、それゆえ、転換群体のみが、ｐΔＣＢＨＩｐｙｒ４中に挿入された野生型ｐｙｒ４遺伝子による菌株ＧＣ６９のｐｙｒ４突然変異の補完の結果として成長することができた。これらの炉体を続いて転移せしめ、添加剤として１％のグルコースを含有する固体ボゲル媒質Ｎ上に精製し、安定な形質転換体をさらなる分析のために選択した。この段階において、安定な形質転換体を、そのより速い成長速度およびウリジンを欠いた固体培養媒質上のぎざぎざというよりもむしろ滑らかな輪郭を有する円形の炉体の形成により不安定な形質転換体とは区別した。ある場合においては、固体の非選択性媒質（すなわち、ウリジンを含有する）上に形質転換体を成長させ、この媒質から芽胞を収穫し、続いて発芽してウリジンを欠いた選択性媒質上に成長するこれらの芽胞の百分率をめることにより、さらなる安定性の試験を行なった。実施例５形質転換体の分析形質転換体が、１０ｏのグルコースを含有する液体水ゲル媒質Ｎ中で成長せしめられた後に、ＤＮＡを、実施例４で得られた形質転換体から単離した。これらの形質転換体ＤＮＡ試料をさらにｐｓｔｌ制限酵素で切断し、アガロースゲル電気泳動を行なった。次いでそのゲルを、ニドラン膜フイルタ上にプロットし、３２ｐ標識ｐΔＣＢＨ１ｐｙｒ４プローブで雑種形成した。プローブを選択して、６．５ｋｂ　Ｐｓｔｌ断片としての天然ｃｂｈｌ遺伝子、転換ＤＮＡ断片から誘導されたいかなるＤＮＡ配列および天然ｐｙｒ４遺伝子を同定した。雑種形成からの放射線活性帯は、オートラジオグラフィーにより顕像化された。そのオートラジオグラフィーを図３に示す。上述したように５つの試料Ａ、Ｂ、ＣＳＤおよびＥを試験した。Ｅは未転換菌株ＧＣ６９であり、本分析において対照として用いた。レーンＡからＤは、上述した方法により得られた形質転換化体を示す。オートラジオグラフィーの横側の数は、分子量マーカーのサイズを示す。このオートラジオグラフィーから分かるように、レーンＤは６．５ｋｂ　ＣＢＨＩ帯を含まず、この遺伝子が全体的に、ｃｂｈｌ遺伝子でのＤＮＡ断片の組込みにより形質転換体中に欠失されたことを示す。ｃｂｈｌ欠失菌株はＰ３７ＰΔＣＢＨＩと呼ばれる。図２は、Ｔ、ｒｅｅｓｅｔ染色体の１つのｃｂｈｌ座でのｐ ΔＣＢＨＩｐｙｒ４からのより大きなＥｃｏＲＩ断片の二重交さの発生を通しての組込みによるＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｃｂｈｌ遺伝子の欠失の概略を示す。分析した他の形質転換体は、未転換対照菌株と同一であると思われる。実施例６ｐ　Ｉ　ｎ　ｔ　ＣＢＨ・■を有する形質転換体の分析使用したプローブが３２ｐ標識ｐ■ｎｔｃＢＨＩプローブに代わったことを除いては、実施例５と同一の方法を本実施例において用いた。このプローブは、ｐＵＣ４に：　：　ｃｂｈｌ ΔＨ／Ｈ中で欠失された領域内のｃｂｈｌ座からの２ｋｂ　Ｂｇｌｌｌ断片を含有するｐＵＣ−型プラスミドである。この実施例において、対照、未転換菌株ＧＣ６９である試料Ａ、形質転換体Ｐ３７ＰΔＣＢＨＩを含む２つの試料を分析した。図４から分かるように、６．５ｋｂでの帯により示されるように、試料Ａはｃｂｈｌ遺伝子を含有した。しかしながら、形質転換体、試料Ｂはこの６．５ｋｂでの帯を含有せず、それゆえｃｂｈｌ遺伝子を含有せず、ｐＵＣプラスミドから誘導されたいかなる配列をも含有しない。実施例７菌株Ｐ３７ＰΔＣＢＨＩによるタンパク質分泌産生したＰ３７ＰΔＣＢＨＩ菌株からの芽胞を、１９６のグルコース、ｏ、１４９ｏの（ＮＨＪ　）２　ＳＯ２，０，２００のＫＨ２Ｐ　Ｏ＜　、０．　０３９６のＭｇ　Ｓ　０４　、ＩＩ　０３０６の尿素、０，７５％のバクトドリブトン（ｂａｃｔｏｔｒｙｐｔｏｎｅ）　、０．０５’、６のツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０．０．００００１６９０のＣｕ　Ｓ　Ｏ４・５Ｈ２０，０，００１９６のＦｅＳＯ４・７Ｈ２０，０，０００１２８％のＺｎ５０４−７Ｈ２０，０，０００００５４％のＮａ２ＭｏＯ４−２Ｈ２０、および０．００００００７％のＭｎＣ１・４Ｈ２０を含有する５Ｃ１ｍｌのＴｒｉｃｈｏｄｅｒｒｎａ基礎媒質中に接種した。その媒質を振動させながら、２５０ｍ１のフラスコ中、３７℃で約４８時間、培養した。産生じた菌糸体わミラクロス（カルバイオケム社）を通過させた濾過により集積し、１７ｍＦＶｉのリン酸カリウムで２または３回洗浄した。その菌糸体は最終的に、１ｍＭのソフォロース（ｓｏｐｈｏｒｏｓｅ）を有する１７ｍＭのリン酸カリウム中で懸濁せしめ、さらに振動させなから３０℃で２４時間、培養した。次いで上澄みをこれらの培養物から集積し、菌糸体を捨てた。培養上澄みの試料を、フ７−マシアファストゲルシステムおよび製造者の指示に従ったｐＨ３−９プレキヤストゲルを用いた等電点電気泳動により分析した。そのゲルは銀染料で染色し、タンパク質帯を顕像化した。ｃｂｈｌタンパク質に対応する帯は、図５に示すように、菌株Ｐ３７ＰΔＣＢＨＩから誘導した試料には存在しなかった。この等電点電気泳動ゲルは、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉの異なる上澄み培養中の様々なタンパク質を示す。レーンＡは部分的に精製したＣＢＨＩであり、レーンＢは未転換Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ培養からの上澄みてあり、レーンＣは本発明の方法により産生された菌株Ｐ３７ＰΔＣＢ）ｉｆからの上澄みである。様々なセルラーゼ成分の位置を、ＣＢＨＩ、ＣＢＨＩ　Ｉ、ＥＧＩ、ＥＧＩ　Ｉ、およびＥＧＩＩＩて標識する。ＣＢＨＩは全細胞外タンパク質の５０９６を構成するので、ＣＢＨＩは主な分泌タンパク質であり、そり質の欠失を示す。実施例８ｐｐΔＣＢＨＩＩの調製ＣＢＨＩＩタンパク質をコードするＴ、ｒｅｅｓｅｉのｃｂｈ２遺伝子は、図６Ａの図表に示すゲノムＤＮＡの４゜ｌｋｂ　ＥｃｏＲｒ断片としてクローンしである（チェノら、１９８７、バイオテクノロジー５　：　２７４−２７８）。二の４．１ｋｂ断片をｐＵＣ４ＸＬのＥｃｏＲ１部位の間に挿入した。後者のプラスミドは、ここに示す順番：Ｅｃ。ＲＩ、ＢａｍＨＩＳＳａｃ　Ｉ、Ｓｍａ　Ｉ、ＨｉｎｄｌｌＩ、ＸｈｏＩ、ＢｇｌｌＩ、Ｃ１ａＩ、ＢｇｌＩ　Ｉ、ＸｈｏＬＨｉｎｄｌＩ　Ｉ、Ｓｍａｌ、５ａｃＩ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ、で配列した制限エンドグルカナーゼ部位の相称的な模様を有する多重クローニング部位を含有するｐＵＣ誘導体（ジネンカーインターナショナル社のＲ，Ｍ、ベーカにより構成された）である。従来技術において知られている方法を用いて、プラスミド、ｐＰΔ（：ＢＨＩＩ（図６Ｂ）を構成し、ユニで（ＣＢＨＩＩ翻訳開始部位の７４ｂｐ３′での）ＨｉｎｄｌｌＩ部位と（ＣＢＨＩＩの最後のコドンの２６５ｂｐ３′での）Ｃｏａ１部位との間のこの遺伝子の１．７ｋｂ中央領域を除去し、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子を含有する１、６ｋｂ　ＨｉｎｄＩＩＩ　−Ｃ１ａＩ　ＤＮＡと置換した。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子を１，６ｋｂＮｈｅＩ−５ｐｈｌ断片上のｐＴｐｙｒ２　＜実施例２参照）から切除し、ｐＵｃ２１９の５ｐｈｌとＸｂａＩ部位との間に挿入しく実施例２５参照）、９２１９Ｍを産生じた（スミスら、１９９１、Ｃｕｒｒ、Ｇｅｎｅｔ　１９ｐ、２７−３３）。次いでｐｙｒ４遺伝子を、一方の末端にＤＮＡの７ｂｐと、他方の末端にＤＮＡの６ｂｐを有し、ｐＵｃ２１９多重クローニング部位から誘導されたＨｉｎｄｌＩＩ−Ｃ１ａＩ断片として除去し、Ｃｂｈ２遺伝子のＨｉｎｄｌｌｌおよびＣＩａ１部位中に挿入し、プラスミドｐＰΔＣＢＨＩＩを形成した（図６８り照）。このプラスミドのＥｃｏＲＩでの切断は、一方の末端でのｃｂｈ２座からの０．７ｋｂの側端ＤＮＡ、他方の末端でのｃｂｈ２座からの１．７ｋｂの側端ＤＮＡおよび真中のＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子を有する断片を離生ずる。実施例９Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＧＣ６９中のｃｂｈ２遺伝子の欠失実施例３および４に略述した方法に従って、菌株のブロドブラストを産生し、ＥｃｏＲＩ切断ｐＰΔＣＢＨＩＩて転換する。形質転換体からのＤＮＡを、ＥｃｏＲＩおよびＡｓｐ７１ｇで切断し、アガロースゲル電気泳動を行なう。ゲルからのＤＮＡを膜フィルタにプロットし、実施例１１の方法に従って３２Ｐ漂：ｍｐＰΔＣＢＨＩ　Ｉで雑種形成する。正確にｃｂｈ２座で組み込まれたｐＰΔＣＢＨＩＩからのＥｃｏＲＩ断片の単一のコピーを有する形質転換体を同定する。その形質転換体はまた、実施例７におけるような振動フラスコ中で成長せしめられ、培養上澄み中のタンパク質は等重点電気泳動により試験される。このようにして、ＣＢＨＩＩタンパク質を産生じないＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ＧＣ６９形質転換体が産生される。実施例１０Ｐ３７ＰΔＣＢ）（Ｉのｐｙｒ４誘導体の産生ｃｂｈｌ遺伝子に関して欠失された形質転換体の芽胞（Ｐ３７ＰΔＣＢ）ＩＩ）を、ＦＯＡ含有含有媒質層開した。続いて、実施例１の方法を用いてこの形質転換体のｐｙｒ４誘導体を得た。このｐｙｒ４菌株をＰ３７ＰΔＣＢＨＩＰｙｒ２６と称した。実施例１１ｃｂｈｌに関して事前に欠失した菌株中のｃｂｈ２遺伝子の欠失菌株Ｐ３７ＰΔＣＢＨＩＰｙｒ２６を産生し、実施例３および４において概略を示した方法に従ってＥｃｏＴＩす断ｐＰΔＣＢＨＩＩて転換した。精製した安定形質転換体を実施例７のように振動フラスコ中で培養し、その培養上澄み中のタンパク質を等電点電気泳動により試験した。どのようなＣＢＨＩＩタンパク質も産生じなかった１つの形質転換体Ｐ３７ＰΔΔＣＢＨ６７と称する）を同定した。図５のレーンＤは、本発明の方法に従って産生したｃｂｈｌおよびｃｂｈ２遺伝子の両方を欠失した形質転換体からの上澄みを示す。ＤＮＡを、ＥｃｏＲＩとＡＳ＋）７１８て切断した菌株Ｐ３７ＰΔΔＣＢＨ６７から抽出し、アガロースゲル電気泳動を行なった。このゲルからのＤＮＡを膜フィルターにプロットし、３２ｐ標慮ｐＰΔＣＢＨＩＩて雑種形成した（図７）。図７のレーンＡは、未転換Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株からのＤＮＡに関して観察された雑種形成パターンを示す。野生型ｃｂｈ２遺伝子を含有する４、１ｋｂ　ＥｃｏＲＩ断片か観察された。レーンＢは、菌株Ｐ３７ＰΔΔＣＢＨ６７に関して観察された雑種形成パターンを示す。１つの４．１ｋｂ帯が除去され、約０．９および３．１ｋｂの２つの帯により置換された。これは、ｐＰΔＣＢＨＩＩからのＥｃｏＲＩ断片の１つのコピーが正確にｃｂｈ２座で組み込まれた場合に予期されるパターンである。同一のＤＮＡ試料をまたＥｃｏＲＩて切断し、サザン分析を上述したように行なった。この実施例において、プローブは３２ｐ標ＪｐＩｎ　ｔ　ＣＢＨＩ　Ｉであった。このプラスミドは、プラスミドｐＰΔＣＢＨＩＩ中で欠失されたｃｂｈ２遺伝子のその断片内からのｃｂｈ２遺伝子暗号配列の一部を含む。どの雑種形成も菌株Ｐ３７ＰΔΔＣＢＨ６７からのＤＮＡに関して見られず、二のことはｃｂｈ２遺伝子か欠失されたこと、およびｐＵＣプラスミドから誘導されたとの配列もこの菌株中に存在しなかったことを示す。実施例１２ｐＥＧＩｐｙｒ４の構成ＥＧＩをコードするＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｅｑｌｌ遺伝子は、公表された配列に従って合成されたオリゴヌクレオチドでの雑種形成による菌株ＲＬ−Ｐ３７からのゲノムＤＮＡの４．２ｋｂ　ＨｉｎｄｌＩＩ断片としてクローンされた（ベンチラら、１９８６、遺伝子４５　：　２５３−２６３　；パンアースデルら、１９８７、バイオ／テクノロジー５　：　６Ｏ−６４）、３．６ｋｂ　Ｈｉｎｄｌｌ　Ｉ−ＢａｍＨＩ断片をこのクローンから取り出しで、ＨｉｎｄＩＩＩで切断したｐＵｃ２１８　（ｐＵｃ２１９と同一であるが、反対の配向において多重クローニング部位を有する、実施例２５参照）およびｐＴｐｙｒ２からＲｔ二Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子（実施例２り照）を含有する１、６ｋｂ　Ｈｉｎｄｌ　１１−ＢａｍＨＩ断片と連結し、プラスミドｐＥＧＩｐｙｒ４を得た（図８）、ｐＥＧＩｐｙｒ４のＨｉｎｄＩＩＩでの切断は、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉゲノムＤＮＡＣｅｇｌｌおよびｐｙｒ４遺伝子）のみを含有し、２つの遺伝子の間の２４ｂｐ配列合成りＮＡおよび一方の末端での６ｂｐ配列合成りＮＡを除＜ＤＮＡの断片を雌牛ずる（図８）。実施例１３サイトラーゼ１２３セルラーゼのセルラーゼ成分への精製サイトラーゼ１２３セルラーゼを以下のように分画した。このセルラーゼ系のセルラーゼ成分の通常の分配は以下のとおりであるＣＢＨＩ　４５−５５重量パーセントＣＢＨＩＩ　１３−１５重量パーセントＥＧ　Ｉ　１１−１３重量パーでントＥＧ　ＩＩ　８−１０重量パーセントＥＧ　ＩＩＩ　１−４　重量パーセントＢＧ　０．５−１重量パーセントその分画は以下の樹脂を含有するカラムを用いて行なったニングマケミカル社（ＭＯ、セントルイス）からのセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂、ＩＢＦバイオテクニクス（Ｍ　Ｄ　、サバジ）からのＳＰトリサクリルＭ陽イオン交換樹脂およびＱＡトリサクリルＭ陰イオン交換樹脂。ｐＨ６，８の１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液とセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂で満たした３リツトルのカラムを用いてサイトラーゼ１２３セルラーゼ、０．５ｇを脱塩した。次いで脱塩溶液をＱＡＩ−リサクリルＭ陰イオン交換樹脂の２０ｍ１Ｏカラムに装填した。二〇カラムに結合しｚ分画はＣＢＨＩおよびＥＧ　Ｉ＠倉付し、−為　これらの成分を、Ｏから約５００ｍＭの塩化ナトリウムを含有する水性勾配を用いて勾配溶出により分離した。二のカラムに結合しなかった分画はＣＢＨＩＩおよびＥＧＩＩを含有した。これらの分画を、ｐＨ３，３の１０ｍＭのクエン酸ナトリウムで均衡化したセファデックスＧ−２５ケル濾過樹脂のカラムを用いて脱塩した。次いでこの溶液、２００ｍ１を、ＳＰトリサクリル〜１陽イオン交換樹脂の２０ｍ１のカラムに装填した。ＣＢＨＩＩおよびＥＧＩＩを、Ｏから約２００ｍ〜１の塩化ナトリウムを含有する水性勾配を用いて別々に溶出した。上述した実施例１３の方法と類似した方法に従って、それらの成分中に分離できる他のセルラーゼ系は、セルキャスト（デンマーク、コペンハーケン、ノボインダストリーから得られる）、ラビダーゼ（オランダ、デルフト、Ｎ。 ■５、ギストブロケイドから得られる）、およびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉＳＰｅｎｉｃｉｌｌｕｍ　ｓｐ、等から誘導したセルラーゼ系を含む。実施例１４サイトラーゼ１２３セルラーゼからのＥＧ　ＩＩＩの精製上述した実施例１３は、サイトラーゼ１２３セルラーゼからのいくつかの成分の単離を示した。しかしながら、ＥＧ　ＩＩＩはサイトラーゼ１２３セルラーゼ中に非常に少量した存在しないので、二の成分を単離するのに以下の方法か用いられた。Ａ、ＥＧＩＩＩセルラーゼ酵素の大規模な抽出１００リツトルの旧胞不含釘セルラーセ濾液を約３０℃まで加熱した。加熱した物質は、約り％重量／容積ＰＥＧ３０００　（約８０００の分子量、ポリエチレングリコール）および約り０％重量／容積の無水硫酸ナトリウムから調製された。その混合物は２相液体混合物を形成した。二の相を、５Ａ−１ディスクスタック遠心分離機を用いて分離した。その相を、銀染色等電点電気泳動ゲルを用いて分析した。分離によりＥＧ　ＩＩＩおよびキシラナーゼを得た。取り出した組成物は、約２０から５０重量パーセントのＥＧ　ＩＩＩを含有した。上述した方法に関して、約８０００未満の分子量を有するポリエチレングリコールの使用は分離に不適切であり、一方約８０００より大きい分子量を有するポリエチレングリコールの使用は取り出した組成物中の所望の酵素を排除することとなる。硫酸ナトリウムの量に関して、１０％重量／容積より大きな硫酸ナトリウムの水準は沈殿問題を引き起こし、一方１０％重Ｉｔ／容積未満の硫酸ナトリウムの水準では不十分な分離または１つの相中に残留する溶液となった。Ｂ０分画によるＥＧ　ＩＩＩの精製ＥＧ　ＩＩＩの精製は、野生型Ｔｒ　ｆ　ａｈ　ｉ　ｄｅ　ｒｍａｒｅｅｓｅｉにより産生される完全な菌類セルラーゼ組成物（ＣＡ、南すンフランシスコ、ジネンカーインターナショナルから市販されている、サイトラーセ１２３でルラーゼ）からの分画により行なわれる。つまり、分画は、以下の樹脂：ングマケミカル社（ＭｏＳ（ｒ／トルイス）から得られるセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂、ＩＢＦバイオテクニクス（ＭＤ、サバジ）からのＳＰトリサクリル〜１陽イオン交換樹脂およびＱＡＩ−リサクリルＭ陰イオン交換樹脂を含有するカラムを用いて行なわれる。ｐＨ６，８の１０ｍ〜■リン酸ナトリウム緩衝液とセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂で満たした３リツトルのカラムを用いてサイトラーゼ１２３セルラーゼ、０，５ｇを脱塩した。次いて脱塩溶液をＱＡトリサクリルＮ１陰イオン交換樹脂の２０ｍ１のカラムに装填した。このカラムに結合した分画はＣＢＨＩおよびＥＧ　Ｉを含有した。このカラムに結合しない分画は、ＣＢＨＩＩ、ＥＧ　ＩＩおよびＥＧ　ＩＩＩを含む。これらの分画を、ｐＨ４，５の１０ｍＭのクエン酸ナトリウムで均衡化したセファデックスＧ−２５ゲル濾過樹脂のカラムを用いて脱塩した。次いでこの溶液、２００ｍ１を、ＳＰ）リサクリルＭ陽イオン交換樹脂の２０ｍ１のカラムに装填した。ＥＧ　ＩＩＩを、２００ｍＭの塩化ナトリウム１００ｍ１で溶出した。ＥＧＩＩＩの単離能率を高めるために、１つ以上のＥＧ　Ｉ、ＥＧ　ＩＩ、ＣＢＨＩおよび／またはＣＢＨＩＩ成分を産生できないように遺伝学的に修飾されたＴ「ｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉを使用する二とか望ましい。１つ以上のこのような成分の不在は必然的に、ＥＧＩＩＩのより効果的な単離を導く。同様に、上述したＥＧ　ＩＩＩ組成物をさらに精製して、実質的に純粋なＥＧ　ＩＩＩ組成物、すなわち、タンパク質の約８０重量パーセントより多いＥＧ　ＩＩＩを含有する組成物を提供することか望ましい。例えば、そのような実質的に純粋なＥＧＩＩＩタンパク質は、方法Ｂの方法Ａから得られた物質を用いることにより得られる。ざらにＥＧ　ＩＩ’Ｉを精製する１つの特定の方法は、この実施例１４のバートｂ）で得られたＥＧ　ＩＩＩ試料のさらなる分画によるものである。さらなる分画は、モノ−５−ＨＲ３１５カラム（ＮＪ、ビス力タウェイ、ファーマンアＬＫＢバイオテクノロジーから得られる）を用いたＦＰＬＣシステムにより行なわれる。ＦＰＬＣシステムは、液体クロマトグラフィーコントローラ、２つのポンプ、二重通路モニター、分画集積装置およびチャートレコーダー（全てＮＪ、ビス力タウェイ、）７−マシアＬＫＢバイオテクノロジーから得られる）からなる。分画は、実施例１４のパートｂ）で調製したＥＧ　ＩＩＩ試料、５ｍｌを、以前にｐＨ４の１０ｍＭクエン酸ナトリウムで均衡化した２０ｍ１セフ７デンクスＧ−２５カラムて脱塩することにより行なわれた。次いでカラムを、１ｍｌの分画に集積した試料■関して、０．５ｍｂ′分の速度でのＮ　ａ　ＣＩの０−２００　ｍ　Ｍ水性勾配により溶出させた。ＥＧ　ＩＩＩは、分画】０および１１において取り出され、ＳＤＳゲル電気泳動により９０９６より純粋であると測定された。この純粋なＥＧ　ＩＩＩは、既知の技術によるＮ末端アミノ酸配列の測定に適している。上述した実施例１３において精製した実質的に純粋なＥＧ　ＩＩＩ並びにＥＧ　ＩおよびＥＧＩＩ成分は、本発明の方法に単一または混合物で用いられる。こらのＥＧ酸成分以下の特性を有する。〜ＩＷ　ｐ＋　最適ｐＨＩＥＧ　Ｉ　〜４７−４９ｋＤ　４．７　〜５ＥＧＩＩ　〜３５ｋＤ５．５　〜５ＥＧＩＩＩ　〜２５−２８ｋ　Ｄ　７．４　〜５．５−８．０１、以下の実施例１５によるＲ　Ｂ　Ｂ　−ＣＭ　Ｃ活性により測定された最適ｐＨ０したかって、各ＥＧ　Ｉ、ＥＧ　ＩＩおよびＥＧＩＩＩは酸性ＥＧ成分である。本発明の実施にこれらの混合物を使用すると、単一の成分と比較して、柔らかさ、感触、外観等を改善する相乗応答が得られる。一方で、本発明の実施に単一の成分を使用すると、より安定であるか、またはｐＨ範囲に亘り広い活性のスペクトルを何する二ととなる。例えば、以下の実施例１５は、ＥＧ　ＩＩＩかアルカリ性条件下のＲＢＢ−ＣＭＣに対して著しい活性を有することを示す。実施例１５ｐＨ範囲に亘るでルラーゼ組成物の活性２つの異なるセルラーゼ組成物のｐＨプロフィールを測定するために以下の方法を用いた。第１のセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ成分を産生ずることができないように上述した方法と類似の方法で遺伝学的に修飾したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから調製したＣＢＨＩおよびＩＩ欠失セルラーゼ組成物であった。このセルラーゼ組成物が、一般的にＴ　ｒ　ｉ　ｃｈｏｄｅ　ｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導されたセルラーゼ組成物、約５８から７０パーセントからなるＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩを含有しない限り、このセルラーゼ組成物は、必ず実質的にＣＢＨＩ型およびＣＢＨＩＩ型セルラーゼ成分を含まず、したがってＥＧ酸成分すなわち、ＥＧＩ、ＥＧ　ＩＩ、ＥＧ　ＩＩＩ等が豊富である。第２のセルラーゼ組成物は、実施例１４のパートｂ）と類似の精製方法によりＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導されたセルラーゼ組成物から単離したＥＧＩＩＩの純粋な分画、約２０から４０％であった。これらのセルラーゼ組成物の活性を、４０℃で測定し、その測定は以下の方法を用いて行なわれた。最終溶液中に必要な量の酵素を提供するのに十分な濃度で、適切な酵素溶液、５から２０μｌを加える。ｐＨ４，５，５，５，６，６，５，７，７，５および８の、０，０５Ｍクエン酸塩／リン酸塩緩衝液中で２重量バーでントのＲＢＢ−ＣＭＣ（オーストラリア、Ｎ、Ｓ、Ｗ、２１５１、ノースロック、６アルトナブレイス、メガザイムから市販されているレマゾルブリリアントブルーＲ−カルポキンメメチルセルロース）、２５０μｌを加える。撹拌し、４０℃で３０分培養する。水浴中で５から１０分間、冷却する。０．３Ｍの酢酸ナトリウムおよび０．０２Ｍの酢酸亜鉛を含有するメチルセロソルブ、１０００μｌを加える。撹拌し、５−１０分間、放置する。遠心分離し、上澄みをキュベツト中に注ぐ。各キュベツト中の溶液の５９０ｎｍての光学濃度（ＯＤ）を測定する。より高い水準の光学濃度が、より高い水準の酵素活性に対応する。この分析の結果を図９に述べるが、これは、ＥＧＩＩ■セルラーゼ組成物と比較したＣＢＨＩおよびＩＩ欠失でルラーゼ組成物の相対活性を説明している。この図から、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩの欠失したセルラ−ゼ成物は、ｐＨ５，５あたりてＲＢＢ−ＣＭｃに対する最適なセルロースを加水分解する活性ををし、アルカリ性ｐＨ５すなわち、７より上で８のｐＨである程度の活性を有する。一方で、ＥＧ　ＩＩＩの豊富なセルラーゼ組成物は、ｐＨ５，５−６で最適なセルロースを加水分解する活性を有し、アルカリ性ｐＨて相当な活性を存する。実施例１６でルラーセ組成物のラシグロメーター強フｔｉ失検定下実施例の目的は、異−；るでルラーで組成物の綿含有織物の強度を減少せしめる能力を試験することにある。Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導されたほとんどのセルラーゼ組成物の活性はｐＨ５またはそのあたりで最大であるので、強度損失は、その検定がこのｐＨあたりで行なわれる場合に、最も明確になる。しかしながら、ｐＨ５で達成された結果は、別のｐＨで生しる強度損失の結果と相関すると思われ、したかって、分析したセルラーゼ成分の相対強度損失能力を示している。つまり、この実施例において、分析した第１のセルラーゼ組成物は、野生型のＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから産生された完全菌類セルラーゼ系（ＣＡ、南すンフランシスコ、ジネンカーインターナショナルから市販されているサイトラーゼ１２３セルラーゼ）であり、ＧＣＯｌｏと同定される。分析した第２のセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩＩを表現できないように、上述した１から１２および以下の２０から２８の実施例と類似した方法で遺伝学的に修飾したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから調製したＣＢＨＩＩ欠失セルラーゼ組成物であり、ＣＢＨＩＩｄと同定される。ＣＢＨＩＩがセルラーゼ組成物の約１５パーセントまでからなる限りは、この成分の欠失は、ＣＢＨｌ、および全てのＥＧ酸成分豊富な水準となる。分析した第３のセルラーゼ組成物は、ＣＢ　ＨＩ　オヨヒＣＢＨＩＩを表現できないように、上述した方法と類似した方法で遺伝学的に修飾したＴｒ　ｉ　ｃｈｏｄｅ　ｒｍａｒｅｅｓｅｉから調製したＣＢＨＩおよびＣＢＨ１１欠失セルラ一ゼ組成物であり、ＣＢＨＩ／ＩＩｄと同定される。ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩが約７００６までのでルラーゼ組成物からなる限り、この成分の欠失は、豊富な水準の全てのＥＣ成分となる。分析した最後のセルラーゼ組成物は、ＣＢＨＩを表現できないように、上述した方法と類似した方法で遺伝学的に修飾したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉがら調製したＣＢＨＩ欠失セルラーゼ組成物であり、ＣＢＨ１ｄと同定される。ＣＢＨｆか約５５９６までのセルラーゼ組成物からなる限りは、この成分の欠失は豊富な水準のＣＢＨＩＩおよび全てのＥＣ成分となる。ランノロメーター中て綿含有織物の強度損失の効果について、上述したセルラーゼ組成物を試験した。その組成物を、等量のＥＣ成分が用いられるように、最初に標準化した。各セルラーゼ組成物を加えて、ｐＨ５に滴定し、０゜５ｍｌの非イオン界面活性剤を含有する２　０　ｍ　Ｍクエン酸塩／リン酸塩緩衝液、４００ｍ１の溶液を分離した。精製した各溶液を分離ランダロメーターキャニスターに加えた。これらのキャニスタ−中に、強度損失を促進させるある量の大理石、並びに１６インチ×２０インチの綿織物ＣＮＪ０８８４６、ミドルセソクス、ブラックフォード通り２゜Ｏ１テストフ７ブリソタ社からのスタイル４６７番とじて得られる）を加えた。次いでそのキャニスタ−を閉じて、４３℃に保持されたランノロメーター中に降ろした。次いてそのキャニスタ−を約１時間に亘り、１分間に少なくとも４０回転（ｒｐｍ）の速度で浴中て回転せしめた。その後、衣類を取り出してよく濯ぎ、標準乾燥機中で乾燥せしめた。強度損失結果を最大限度にするために、上述した方法をさらに２回繰り返し、３回目の処理後、綿織物を取り出し、強度損失の分析を行なった。強度損失は、インストロンテスターを用いた横方向の引張り強度（ｒＦＴＳＪ　）を測定することによりめ、その結果を、セルラーゼを加えなかったことを除いては同一の溶液で処理した織物のＦＴＳと比較した。この分析の結果を、以下の式によりめた強度損失パーセントとして報告する：この分析の結果を図１０に示すが、これは、ＣＢＨＩ、すなわち全セルラーゼ（ＧＣＯＩＯ）およびＣＢＨＩＩ欠失セルラーゼを含有する組成物が最大の強度損失を有し、一方、ＣＢＨＩを含有しない組成物が、全セルラーゼおよびＣＢＨＩＩ欠失セルラーゼと比較して著しく減少した強度損失を有することを示す。これらの結果から、セルラーゼ組成物中のＣＢＨＩ四成分の存在は、ＣＢＨ１塑成分を倉荷しない類似の組成物と比較して、その組成物に増大した強度損失を与えることか分かった。同様に、これらの結果は、ＣＢＨＩＩか強度損失においである役割を果たすことを示す。したがって、これらの結果から見て、強度損失抵抗でルラーゼ組成物は、全てのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分および、好ましくは全てのＣＢＨ型セ小セルラーゼ成分まない組成物である。この点に関して、酸性ＥＧ豊富セルラーゼ組成物は、図１０に示すｐＨ５で観察されたそれらの結果よりもｐＨ≧７でのより低い強度損失となると考えられる。実施例１７色彩の回復綿含有織物中の色彩を回復せしめる酸性ＥＧ豊富セルラーゼの能力を、以下の実験において分析した。つまり、すり切れた綿織物の色彩復元は、ある期間に亘る織物上の表面繊維の蓄積から生じる。これらの繊維は、織物の色褪せて纏れた外観を生じさせ、したかって、これらの繊維の除去は、その織物に元来の鮮明な色彩を復元させるのに必要な条件である。上記点に関して、これらの実験は、表面繊維を除去するセルラーゼ組成物の能力をＪ１１定することにより、色彩を復元するセルラーゼ組成物の能力を決定する。最初の実験は、野生型Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｔにより産生された完全セルラーゼ系（ＣＡ、南す−フラッジスコ、ジネンカーイシターナショナルから市販されているサイトラーゼ１２３セルラーゼ）の様々なｐＨに亘る綿含有織物から表面繊維を除去する能力を測定する。このセルラーゼを、ランノロメーター中で表面繊維を除去する能力について試験した。最終組成物中に２５ｐｐｍまたは１１００ｐｐのいずれかのセルラーゼをていきをうする適切な量のセルラーゼは、０．５ｍｌの非イオン界面活性剤を含有する２０ｍＭのクエン酸塩／リン酸塩緩衝液の分離溶液４００ｍ１に加えた。各試料を調製し、ｐＨ５、ｐＨ６、ｐＨ７およびｐＨ７，５の試料を提供するように滴定した。次いで生成した各溶液を、分離ランクロメータ−キャニスタ−中に加えた。これらのキャニスタ−中に、ｍ維の除去を促進させる量の大理石、並びにフインチ×５インチの綿織物（ＮＪＯ８８４６、ミドルセックス、ブラックフォード通り２００、テストファブリック社からスタイル４３９Ｗとして得られる１００％織られた綿）を加えた。次いでそのキャニスタ−を閉して、４３℃に保持されたランダロメーター浴中に降ろした。次いてそのキャニスタ−は、約１時間、１分あたり少なくとも約４０回転（ｒｐｍ）の速度でその浴中で回転せしめた。その後、衣類を取り出して、よく濯ぎ、標準乾燥機中で乾燥させる。次いでそのように処理した織物を、パネル試験におｊする評価により繊維の除去について分析した。特に、織物（マークせず）を６つの個々により繊維の水準に関して評価した。織物を、表面繊維に関して視覚的に評価し、０から６のスケールで評価した。このスケールは意義のある比較を行なうために６つのは準をＨする。その標準は：評価　標準２０　セルラーゼで処理してない織物１　８ｐｐｍのセルラーゼで処理した３織物２　１６ｐｐｍのセルラーゼで処理した織物３　２０ｐｐｍのセルラーゼで処理した織物４　４０ｐｐｍのセルラーゼで処理した織物５　５０ｐｐｍのセルラーゼで処理した織物６　１１００ｐｐのセルラーゼで処理した織物２）　全ての標準において、織物は、ＮＪＯ８８４６、ミドルセックス、ブラックフォード通り２００１テストフ７ブリソク社から得た１００％綿シート標準化試験織物（スタイル４３９Ｗ番）てあった。３）　全ての試料は同一のセルラーゼ組成物で処理した。セルラーゼ濃縮物は合計のタンパク質であった。ランダロメーター処理条件は、上述した実施例１６中に示す。評価する織物に、その標準の最も厳密に適合した評価を与えた。織物の完全な分析の後に、個々の全てにより各織物に与えられた値を加え、平均値を出した。この分析の結果を図１１に示す。つまり、図１１は、同一のｐＨにおいて、用量依存応答が除去された繊維の二として見られることを示す。すなわち、同一のｐＨにおいて、より多いセルラーゼで処理した繊維は、より少ないセルラーゼで処理した繊維と比較して繊維除去のより高い水準を提供した。さらに、この形の結果は、より高いｐＨにおいて、繊維の除去はまた、単により高濃度のセルラーゼを用いることにより影響を受けることを示す。第２に実験において、２つの異なるセルラーゼ組成物を、繊維を除去する能力について比較した。つまり、分析した第１のセルラーゼは、野生型Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉにより産生された完全セルラーゼ基（ＣＡ、南すンフランシスコ、ジネンカーインターナショナルから市販されている、サイトラーゼ１２３）であり、ＧＣＯＩＯと称される。分析した第２のセルラーゼ組成物は、その組成をＣＢＨＩおよびＣＢＨ１１を産生できないように上述した方法と類似の方法で遺伝学的に修飾したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉにより調製されたＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ欠失セルラーゼ組成物であり、ＣＢＨ型成分　Ｉ欠失として同定される。ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩがセルラーゼ組成物の約７０パーセントまでを構成する限りは、この成分の欠失は、全てのＥＣ成分の豊富な水準となる。そのセルラーゼ組成物を、同一量のＥＣ成分が用いられるように、最初に標準化した。これらの組成物を、ランノロメーター中の表面繊維を除去する能力について試験した。最終組成物中にＥＣ成分の必要な濃度を提供するのに適切な量のセルラーゼを、０．５ｍｇの非イオン界面活性剤を含有する２　０　ｍ　Ｍのクエン酸塩／リン酸塩緩衝液４００ｍ１の分離溶液に加えた。試料を調製し、ｐＨ５に滴定した。次いで作成した各溶液をランプロメーターキャニスタ−中に加えた。これらのキャニスタ−中に、繊維の除去を促進させるある量の大理石、並びにフインチ×５インチの綿織物（ＮＪ　０８８４６、ミドルセックス、ブラックフォード通り２００、テストファブリツタ社からのスタイル４３９Ｗ番として得られる、１００９６５ｍ綿）を加えた。次いてそのキャニスタ−を閉じて、４３℃に保持されたランノロメーター中に降ろし１こ。次いでキャニスタ−を、１分当たり少なくとも約４０回転（ｒｐｍ）の速度で１時間、浴中で回転せしめた。その後に衣類を取り出して、よ（濯ぎ、標準乾燥機中で乾燥せしめる。次いでそのように処理した織物を上述したパネル試験の評価により繊維除去の分析を行なった。二の分析の結果を、図１２に示す。つまり、図１２は、ＧＣＯＩＯおよびＣＢＨｌ、／ＩＩ欠夫亡夫セルラーゼ組成物実質的に同一の繊維除去結果を与えたことを示唆する。これら結果は、謙Ｑ１１除去を提供するのは酸性ＥＣ成分であることを示唆しでいる。図１１の結果と関連したこれらの結果は、ＥＣ成分っ・アルカリ性条件下においでも表面磁性を除去することを示す。実施例１８テルゴトメーター（Ｔｅｒｇｏｔｏｍｅｔｅｒ）色彩の復元この実施例はさらに実施例１７に関するものであり、ＣＢＨ型成分か色彩の復元に必要のないことを実証するものである。本実施例の目的は、ＣＢＨ型成分の欠失したセルラーゼ組成物の綿含有織物に対して色彩を復元する能力を調査することにある。Ｔｒｉｃｏｄ、ｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｌから誘導されたほとんどのＥＣ成分の活性はｐＨでまたはそのあたりで最大であるので、色彩復元結果は、その検定かはほこのｐＨで行なわれる場合に最も明確である。しかしながら、ｐＨ５で達成された結果は、他のｐＨで生じた色彩復元の結果と相関するとおもわれ、したがって、分析するセルラーゼ成分の相対色彩復元能力を示す。つまり、本実施例に用いたでルラーセ組成物は、ＣＢＨｌおよびＣＢＨＩＩを産生することのできないように上述した方法と類似の方法で遺伝学的に修飾したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから調製したＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ欠失セルラーゼ組成物であった。ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩがセルラーゼ組成物の約７０パーセントまでを構成する限りは、二の成分の欠失は、全てのＥＣ成分の豊富な水準とな８ａ検定は、十分な濃度の二〇−！ルラーセ組成物を５０ｍＭのクエン酸Ｆ／リン酸塩緩衝液に加え、５００ｐｐｍのでルラーゼを提供することにより行なった。その溶液をｐＨ５に滴定し、０．　１！１ｉｆｆｉパーセントの非イオン界面活性剤（ＮＣ２７３６０、トーマスピル、クレスニＮｆｇ、、から市販されている、グレスコタークＧＬ１００）を含有した。１０インチＸＩＯイシチの色褪せた綿含有織物を、二の緩衝液の１リツトルの中に配し、ｌｌ０Ｆ’で３０分間放置し、次いで３０分間、１分当たり少なくとｉ）’、　００回転で撹拌した。次いて織物を緩衝液から取り出し、洗浄し、乾燥せしめた。生じた織物を次いて、処理前の織物と比較した。この分析の結果を以下に示す。綿含有材料　結果すり切れた綿Ｔシャツ　利益が見られた新しい綿ニット　利益が見られた「利益が見られた」という言葉は、処理織物が、非処理織物と比較して色彩の復元（すなわち、色褪せて見えない）を示す。これらの結果は、ＣＢＨ型成分の存在が色褪せた綿含有織物の色彩復元をもたらすのに必要ないという実施例１７の結果を実証する。そのようなセルラーゼ組成物は、織物への有害な強度損失なくして、加工中に生成される破壊された／緩んだ繊維を除去するので、その組成物の使用は繊維加工中に利益をもたらすと考えられる。実施例１つ柔軟さ本実施例は、ＣＢＨ型成分の存在力・綿含有織物に改善された柔軟さを与えるのに必要ないことを示す。つまり、この実施例は、その組成物か、ＣＢＨＩおよびＣＢＨＩＩ成分を産生することかできないように上述した方法により遺伝学的に製造したＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉから誘導したものであるセルラーゼ組成物を用いる。このセルラーゼ組成物を、テリー織りの洗浄布を柔らかくする能力に関して試験した。つまり、１４インチＸ１５インチの、柔軟化されていない８．５オンスの綿テリー織り布（ＮＪＯ８８４６、ミドルセックス、ブラックフォード通り２００、テストファブリック社からのスタイル４２ＯＮＳ番として得られる）を、フインチ×７．５インチの切れ端に切断した。上述したセルラーゼ組成物を、ランノロメーター中でこれらの切れ端を柔らかくする能力について試験した。つまり、最終セルラーゼ組成物中に５００ｐｐｍ、２５０ｐｐｍ、１１００ｐｌ）、５０ｐｐｍ、および１０ｐｐｍのセルラーゼを提供するように、適切な量のセルラーゼを、０゜０２５重量パーセントの非イオン界面活性剤（トリトンＸ１１４）を含有する２０ｍＭクエン酸塩／リン酸塩緩衝液４００ｍ１の分離溶液に加えた。加えて、同一の溶液を含有するが、セルラーゼの加えられていないブランクを作成した。そのように調製した試料を、ｐＨ５に滴定した。次いて作成した各溶液を分離ランダロメーターキャニスターに加えた。これらのキャニスタ−中に、柔軟さを促進させる量の大理石、並びに上述した綿の切れ端を加えた。全ての条件は、キャニスタ−ごとに２つの切れ端で３重に行なった。次いでそのキャニスタ−を閉じて、３７℃に保持されたランノロメーター中に降ろした。次いでキャニスタ−を、１分当たり少なくとも約４０回転（ｒｐｍ）の速度で１時間、浴中で回転せしめた。その後に衣類を取り出して、よく濯ぎ、標準乾燥機中で乾燥せしめた。次いてその切れ端を、選択試験における評価により柔軟さについて試験した。つまり、６人のパネリストに、各自の一連の切れ端を与え、全体の織物の柔軟性のような柔軟の判定基準に基づいた柔軟さに関してその切れ端を評価するように指示した。５つの異なる酵素濃度での処理により得られｆ：切れ端とブランクをスクリーンの背後に配し、パネリストは最も柔らかくないものから最も柔らかいものまで順番に並べるように指示した。他の切れ端に対するその順番に基づいて各切れ端にスコアを付けた。５が最も柔らかく、０が最も柔らかくない。各パネリストからのスコアを累積して、平均した。この平均の結果を図１３に示す。つまり、これらの結果は、濃度が高ければ高いほど、改善された柔軟さが得られることを示す。この改善された柔軟化は、セルラーゼ組成物中にＣＢＨ１またはＩＩのいずれかのζｆ存在くして達成されることが分かる。これらの結果に関して、セルラーゼ組成物のより低い濃度においても、改善された柔軟化か繰返しの洗濯に亘り明確になる。実施例１６から１９に関して、Ｔｒ　ｉ　ｃｏｄｅ　ｒｍａｒｅｅｓｅｉ以外の微生物から誘導された酸性ＥＧ型成分の豊富なセルラーゼ組成物は、これらの実施例に記載したセルラーゼ組成物と置き換えて用いられる。特に、酸性ＥＧ型成分の豊富なセルラーゼ組成物の供給源は、本発明にとって重要ではなく、酸性ＥＧ型成分の豊富などのような菌類セルラーゼ組成物も用いられる。例えば、本発明に用いられる菌類セルラーゼ組成物を調製するのに使用する菌類セルラーゼは、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉｉ、Ｐｅｎｃｉ、ｌｌｕｍ　ｓｐ、等から得られ、または市販されているセルラーゼ、すなわち、セルクラスト（デンマーク、コペンハーゲン、ノボインダストリーから得られる）、ラビダーゼ（オランダ、デルフト、Ｎ、Ｖ９、ギストブロケードから得られる）等が用いられる。実施例２０プラスミドｐＥＧＩｐｙｒ４を含有するＴｒ　ｉ　ｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉの転換実施例１に概略を示した方法により、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株Ｒｕ　ｔｃ３０のｐｙｒ４欠損誘導体（シールニースおよびモンテンー］−ト、（１９８４）、Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　２０：　：４６−５３）を得た。この菌株のプロトプラストを、未切断ｐＥＧＩｐｙｒ４で転換し、安定形質転換体を精製した。これらの形質転換体の５つ（ＥＰ２、ＥＰ４、ＥＰ５、ＥＰ６、ＥＰＩＩと称する）、奈良ＦＬＤＨに未転換ＲｕｔＣ３０を、２５０ｍ１の振動フラスコ中の５０ｍ１のＹＥＧ媒質に接種し、２日間、２８℃で振動させながら培養した。生成した菌糸体を無菌水で洗浄し、５０ｍ１のＴＳＦ媒質（０，０５Ｍのクエン酸−リン酸緩衝液、ｐＨ５，ｏ；アビセルミクロ結晶性セルロース、１０ｇ／ｌ　；ＫＨ２ＰＯａ、２．０ｇ／ｌ：　（ＮＨ４）２　ＳＯＪ、１．４ｇ／ｌ；ブロテオースベブトン、］、、Ｏｇ／］；尿素、０．３ｇ／ｌ；ＭｇＳＯ４−７Ｈ７０，０，３ｇ／　ｌ　；　ＣａＣ１２，０，３ｇ／　１　；　Ｆ　ｅ　ＳＯ４・７Ｈ２０，５，０ｍｇ／ｌ；ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ，１，６ｍｇ／ｌ　：ＺｎＳＯ４，１゜４ｍｇ／Ｉ　；ＣｏＣ１２，２，０ｍｇ／　ｌ　；　０．１％ツイーン８０）に加えた。これらの培養物はさらに２８℃で４日間、振動させなから培養した。これらの培養物から上澄み試料を採取し、タンパク質およびエンドグルカナーゼ活性の合計量を測定するための検定を以下に記載するようにして行なった。エンドグルカナーセ検定は、レマゾールブリリアントブルーカルボキシメチルでルロース（オーストラリア、ＮＳＷ、／−スロック、メガザイムから得られる、ＲＢＢ−ＣＭＣ）からの溶性染色オリゴ糖類の解放により行なわれる。２ｇの乾燥ＲＢ　Ｂ　−ＣＭ　Ｃを８０ｍ１の激しく撹拌し沸騰したでの脱イオン水に加えることにより媒質を調製した。室温まで冷却したときに、５ｍｌの２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４，８）を加え、ｐＨを４．５に調整した。脱イオン水により、その容積を最終的に１００ｍ１に調節し、０．０２％の最終濃度までナトリウムアジ化物を加えた。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ対照培養物、ｐＥＧＩｐｙｒ４形質転換体培養物上澄みまたはブランクとしての０．１Ｍ酢酸ナトリウム（１０−２０μｌ）のアリコートを、管中に配し、２５０μｌの媒質を加え、その管を３７℃で３０分間培養した。その管を氷上に１０分間配し、１ｍｌの冷たい沈殿剤（３，３％の酢酸ナトリウム、０．４％の酢酸亜鉛、ＨＣｌによるｐＨ５，７６％エタノール）を加えた。その管に渦を生じさせ、約１３，０００Ｘｇでの３分間の遠心分離の前に、５分間放置した。光学濃度を、５９０−６００ｎｍの波長で分光測光的に測定した。使用したタンパク質検定は、米国イリノイ州、ロックフォード、ピアースから得られた試薬を用いたＢＣＡ（ビシシクロニック酸）検定であった。標準は、子牛血清アルブミン（ＢＳＡ）であった。ＢＣＡ試薬は、１部の試薬Ｂと５０部の試薬Ａとの混合により調製した。１ｍｌのＢＣＡ拭薬を５０μｍの適切に希釈したＢＳＡまたは試験培養上澄みと混合した。培養は３７℃で３０分間行ない、光学密度は最終的に５６２ｎｍの波長て光学測光的に測定した。上述した検定結果を表１に示す。産生じた形質転換体のいくつかは、未転換菌株Ｒｕｔｃ３０と比較してエンドグルカナーゼ活性の量を増加せしめた二とか明確である。未転換Ｔ、ｒｅｅｓｅｉにより産生されたエキソ−セロビオヒドロラーゼおよびエンドグルカナーゼは、分泌されたタンパク質の合計量のそれぞれ７０および２０パーセントを構成すると思われる。それゆえ、菌株ＲｕｔＣ３０よりもほぼ４倍のエンドグルカナーゼを産生ずるＥＰ５のような形質転換体は、はぼ等量のエンドグルカナーゼ型およびエキソ−セロビオヒドロラーゼ型タンパク質を分泌すると予期される。本実施例に記載した形質転換体は、完全なｐＥＧＩ＋）”／ｒ４を用いて得られ、ｐＵＣプラスミドから誘導されたゲノム中に組み込まれるＤ　Ｎ　、Ａ配列を含有する。転換の前に、ＨｉｎｄＩＩＩてｐＥＧＩｐｙｒ４を切断し、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉＤＮＡのみを含有するより大きなり　Ｎ　Ａ断片を単離することが可能である。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉの、ＤＮＡの二の単離断片による転換により、ＥＧＩを過剰産生し、図８に示す合成り　Ｎ　Ａの２つの短片を除いた異種Ｄ　Ｎ　Ａ配列をまったく含まない形質転換体の単離かできる。また、ｐＥＧ　Ｉ　ｐ　ｙ　ｒ４を用いて、ｃｂｈｌ遺伝子、またはｃｂｈ２４伝子、また：ま両方の遺伝子か欠失した菌株を転換することも可能である。二〇ようにして、ＥＧＩを過剰産生し、制限範囲のエキソ−セロビオヒドロラーゼを産生じ、またはエキソ−でロビオヒドロラーゼを全く産生じない菌株が構成される。実施例２０の方法は、他のセルラーゼ組成物、キシラナーゼ成分またはＴ、ｒｅｅｓｅｉにより通常産生される他のタンパク質のいずれかを過剰に産生ずるＴ、ｒｅｅｓｅ１菌株を産生ずるのに用いられる。表　１ｒ、ｒｅｅｓｅ＋形質転換の分泌エンドグルカナーゼ活性Ａ　Ｂエンドグルカナーゼの活性　タ　ンパク質菌株　（５９０ｎｍでの（Ｒｆ）　（ｍｇ／ｌ）　Ａ乙且ＲｕｔＣ３００，３２４，１０，０７８ＥＰ２　０．７０　３．７　０．１８９ＥＰ４　０．７８　３，６５　０．２０８ＥＰ５　１．２４　４．１　０．３０２ＥＰ６　０．５２　２．９３　０Ａ７７ＥＰＩＩ　Ｏ，９９４，１１０，２４１上述した結果は、合計タンパク質に対するＥＧＩ成分の産生過剰を示す目的にために提示したものであって、産生過剰の文合いを示す目的のためではない。二の点に関して、産生過剰は各実施例に関して変わるものと菅、われる。実施例２１プラスミド、ｐｃＥＰｃｌを構成した。ここでＥＧＩの暗号配列は、ｃｂｈｌ遺伝子からのプロモーターに機能的に融合された。これは、それぞれの翻訳開始部位の５′（上流）の都合のよい制限エンドヌクレアーゼ開裂部位を生成するためにｃｂｈｌおよびｅｇｌｌ遺伝子のＤＮＡ配列を変更する、生体外の部位特異性突然誘発を用いて行なわれる。ＤＮＡ配列分析を行なって、２つのＤＮＡ断片の間の接合部での予期した配列を確認した。行なわれた特異的な変更を図１４に示す。ｐｃＥＰｃｌを形成するように結合されたＤＮＡ断片は、ｐＵＣ４にのＥｃｏＲ１部位の間に挿入され、これは以下のようであった：Ａ）　ｃｂｈｌ座の５′側腹領域からの２．１ｋｂ断片。これはプロモーター領域を含み、製造したＢｃｌＩ部位に延び、ｃｂｈｌ暗号配列を含まない。Ｂ）　製造したＢａｍＨ１部位を有する５′末端で開始し、翻訳停止コードンの向こうに約０．５ｋｂを含むｅｇｌｌ座からのゲノムＤ　Ｎ　Ａの１．９ｋｂ断片。その断片の３′末端にはｐＵｃ２１８多重クローニング部位から誘導された１８ｂｐがあり、１５ｂｐ合成オリゴヌクレオチドがこの断片を以下の断片と連結させるのに用いられる。Ｃ）　ｃｂｈｌ翻訳停止コードシの約１ｋｂ下流の位置から約２．５ｋｂ下流に延びる、ｃｂｈｌ座の３′側腹鎮域からのＤ　Ｎ　Ａの断片。Ｄ）ｐＴｐｙｒ２から得られたＴ。ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子（実施例２）を含有し、ｐＩ　ＵＣｌ３多重クローニング部位から誘導された１末端でのＤ　Ｎ　Ａの２４ｂｐを有するＤＮＡの３．１ｋｂ　ＮｈｅＯ−ｓｐｈｒ断片を、断片（Ｃ）のＮｈｅ１部位中に挿入した。プラスミド、ｐｃＥＰｃｌを、ＥＧＩ暗号配列かｃｂｈｌ座で組み込まれ、いかなる異種ＤＮＡをも宿主菌株中に導入せずにＣＢＨＩの暗号配列を置換するように設計した。二のプラスミドのＥｃｏＲＩによる切断は、ｃｂｈｌプロモーター領域、ｅｇ１１暗号配列および転写終止領域を含む断片、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子およびｃｂｈｌ座の３′　（下流）側腹領域からのＤＮＡ断片を雌牛ずる（図１５参照）。実施例２２ｐｃＥＰｃＩ　ＤＮＡを含有する形質転換体Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ　ＲｕｔＣ３０のｐｙｒ４欠損菌株（シールーニース、前述）を、実施例１に概略を説明した方法により得た。この菌株は、ＥｃｏＲｌで切断されたｐＣＥＰＣＩにより転換された。安定な形質転換体を選択し、続いて実施例２０に記載したようにセルラーゼ産生のために振動フラスコ中で培養した。セルラーゼタンパク質を視覚化するために、実施例７に記載した方法を用いてこれらの培養物からの試料上に等電点電気泳動ゲルの電気泳動を行なった。この方法により分析した合計２３の形質転換体のうち１２か、ＣＢＨＩタンパク質を全く産生じない二とか分かり、これはｃｂｈｌ座でのｐｃＥＰｃＩ　ＤＮＡの組込みの予期した結果である。サザン法分析を用いて、統合かこらの形質転換体のうちのいくつかのｃｂｈｌ座で完全に生じた二と、および細菌ブラスミトヘクター＜ｐＵＣ４Ｋ）から誘導された配列が全く存在しないこと（図１６２照）をｉＬＪした。この分析に関して、形質転換体からのＤＮＡを、電気泳動を行ない、膜フィルターにプロットする前に、Ｐｓｔｆて切断した。生成しγこサザンプロットは、放射性標１プラスミドｐＵＣ４Ｋ　：　：　ｃｂｈｌてプローブした（実施例２）。そのプローブは、未転換対照培養物からのＤＮＡの６．５ｋｂ断片上のｃｂｈｌ遺伝子に雑種形成した（図１６、レーンＡ）。ｃｂｈｌ座でのＤＮＡのｐＣＥＰＣＩ断片の組込みは、この６．５ｋｂ帯の損失およびほぼ１．Ｏｋｂ、２．ｏｋｂおよび３．０ｋｂのＤＮＡ断片と対応する３つの他の帯の外観となると思われる。これは、図１６、レーンＣに示した形質転換体に観察される正確な模様である。また図１６に示すように、レーンＢは、ｐｃＥＰｃｌの多重コピーかｃｂｈｌ座以外のゲノム中の部位で組み込まれた形質転換体の実施例である。試料中のタンパク質濃度が約０．０３と０．０７ｍｇ／ｍｌの間にあるように、エンドグルカナーゼ活性検定を、未転換培養物、および試料が検定の前に５０倍に希釈されたことを除いて実施例２０に記載したように形質転換体、からの培養上澄みの試料に行なった。未転換対照培養物および４つの異なる形質転換体（ｃＥＰｃＩ−１０１，ＣＥＰＣＩ−１０３、ＣＥＰＣＩ−１０５およびＣＥＰＣＩ −１１２と称する）に行なった検定の結果を表２に示す。形質転換体ＣＥＰＣＩ　１０３８よびＣＥＰＣｌ　１１２ｆｔ、ＣＥＰＣＩ断片の統合かＣＢＨＩ産生の損失となった実施例である。表　２Ｔ、　ｒｅｅｓｅｉ形質転換体の分泌エンドグルカナーゼ活性Ａ　Ｂ工７ドグルカナーゼの社　タ　ンパク質菌株　Ｃ５９０ｎ１Ｍ　で３ｆ？ｊ度）　ｆｇ／ｍｌ）　Ａ／ＢＲｕｔＣ３０００，０３７２，３８０，０１６ＣＥＰＣＩ−１ｃＩＩ　Ｏ，０８２２，７２０，０３０ＣＥＰＣＩ−１０３０，０９９１，９３０，０５１ＣＥＰＣＩ−１０５０，０３３２，０７０，０１６ＣＥＰＣ’ ｌ−１１２０，０９３１，７２０，０５４上述した結果は、合計タンパク質に対するＥＧＩ成分の産生過剰を示す目的にために提示したものであって、産生過剰の度合いを示す目的のためではない。この点に関して、産生過剰は各実施例に関して変わるものと思われる。ｐｃＥＰｃｌに類似するが、ｅｇｌ　１遺伝子を置換する池のＴ、ｒｅｅｓｅｉ遺伝子を有するプラスミドを構成することが可能である。このようにして、他の遺伝子の表現過剰およびｃｂｈｌ遺伝子の同時の欠失を達成できた。また、事前に他の遺伝子、例えばｃｂｈ２が欠失したＴ。ｒｅｅｓｅｉのｐｙｒ４誘導体菌株をｐｃＥＰｃｌで転換し、例えば全くエキソ −セロビオヒドロラーゼを産生ぜず、エンドグルカナーゼを過剰表現する形質転換体を構成することも可能である。ｐｃＥＰｃｌに類似の構成物を用いるか、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉの別の座からのＤＮＡをｃｂｈｌ座からのＤＮＡと置換する場合、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉゲノム中の別の座での別のプロモーターの制御下で遺伝子を挿入することも可能である。実施例２３ｐＥＧＩ　Ｉ　：　：Ｐ−１の構成ＥＧＩＩをコードする（以前に他者によりＥＧＩＩＩと称された）ｅｇ１３遺伝子が、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉからクローンされ、そのＤＮＡ配列が公表された（サロヘイモら、１９８８、遺伝子６３：１ｌ−２１）。菌株Ｐ−Ｌ　−Ｐ　３７から、ｐＵＣ２１９のＰｓｔ１部位およびＸｈｏ１部位の間に挿入されたゲノムＤＮＡの約４ｋｂ　ＰｓｔＩ−ＸｈｏＩ断片として遺伝子を得た。ベクターｐＵｃ２１９は、ＢｇｌＩＩ、Ｃ１ａＩおよびＸｈｏｌの制限部位を含むように多重クローニング部位を広げることによりｐＵｃ２１９から誘導される（ウィルソンらにより１９８９年に記載された、遺伝子７７：６９　７８）。従来技術において知られている方法を用いて、ゲノムＤＮＡの２．７ｋｂ　５ａｌＩ断片上に存在するＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４ｍ伝子を、ＥＧＩＩ暗号配列内の５ａＩ１部位中に挿入し、プラスミドｐＥＧＩ　Ｉ　：　：　Ｐ−１を産生じた（図１７）。これは、どの配列を欠失することがないがＥＧＩＩ暗号配列の分断となった。プラスミド、ｐＥｃｒ　Ｉ　：　：Ｐ−１は、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＢａｍＨＩで切断でき、その両者がｐＵｃ２１つの多重クローニング部位から誘導された、一方の末端の５ｂｐ上、および他方の末端の１６ｂｐを除いたＴ、ｒｅｅｓｅｉから排他的に誘導されたＤＮＡの線形断片を産生できる。実施例２４ＥＧＩＩ６．７５を産生できない菌株を産生ずるためのＴ。ｒｅｅｓｅｉ　ＧＣ６９のｐＥＧＩ　Ｉ　：　：Ｐ−１による転換Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＧＣ６９は、以前に）（ｉｎｄｌｌＩおよびＢａｍＨＩで切断されたｐＥＧＩ　Ｉ　：　：Ｐ−１で転換され、安定な形質転換体か選択される。全ＤＮＡはそれらの形質転換体から単離され、サイン法分析が、これらの形質転換体を同定するのに用いられ、ここでｐｙｒ４およびｅｇ１３遺伝子を含ＨするＤＮＡの断片がｅｇｌＢ座で組み込まれ、その結果としてＥＧＩＩ暗号配列を分断した。その形質転換体はＥＧＩＩを産生ずることかできない。また、ｐＥＧ　Ｉ　Ｉ、：　：　Ｐ−１を用いて、ｃｂｈｌｉｉ伝子、ｃｂｈ２遺伝子、またはｅｇｌｌ遺伝子のいずれか、または全てか欠失された菌株を転換することもできる。このようにして、あるセルラーゼ成分を産生じ、ＥＧＩＩ成分を全く産生じない菌株を構成できた。実施例２５ＣＢＨＩ、ＣＢＨＩＩ、およびＥＧＩＩを産生する二とのできない菌株を産生ずるためのＴ、ｒｅｅｓｅｉのｐＥＧｌｌ：：Ｐ−１による転換実施例１に概略を示した方法により、菌株Ｐ３７ＰΔΔＣＢＨ６７のｐｙｒ４欠損誘導体（実施例１１から）を得た。この菌株Ｐ３７ΔΔ６７Ｐ１は、以前にＨｉｎｄｌｌＩおよびＢａｍＨＩて切断したｐＥａｒ　Ｉ：　：Ｐ−１で転換され、安定な形質転換体か選択された。全ＤＮＡはそれらの形質転換体から単離され、サイン法分析が、これらの形質転換体を同定するのに用いられ、ここでｐｙｒ４およびｅｇ１３遺伝子を含有するＤＮＡの断片がｅｇｌＢ座で組み込まれ、その結果としてＥＧＩＩ暗号配列を分断した。図１８に説明したサザンプロットを、ｐＵｃ１８のＰｓｔ■部位中にクローンされ、続いて再単離されたｅｇ１３遺伝子を含有するＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ＤＮＡの約４ｋｂ　Ｐｓｔｌ断片でプローブした。菌株Ｐ３７ΔΔ６７Ｐ１から単離したＤ　Ｎ　Ａを、サイン法分析のためにＰｓｔＩで切断した場合、ｅｇｌＢ座は続いてオートラジオグラフ上の単一４　ｋ　ｂ帯として視覚化された（図１８、レーンＥ）。しかしながら、ｅｇ１３遺伝子か分断された形質転換体に関して、この帯は失われ、予期したように２つの新たな帯により置換された（図１８、レーンＦ）、ＤＮＡがＥｃｏＲＶまたはＢｇｌＩＩで切断された場合、ｅｇ１３遺伝子に対応する帯のサイズは、未転換Ｐ３７ΔΔ６７Ｐ１菌株（レーンＡおよびＣ）とｅｇ１３が分断した形質転換体（図１８、レーンＢおよびＤ）との間の約２．７ｋｂ（挿入ｐｙｒ４断片のサイズ）により増加した。図１８に示した分断ｅｇ１３遺伝子を含有する形質転換体（レーンＢ、ＤおよびＦ）は、Ａ２２と称した。図１８において同定した形質転換体は、ＣＢＨＩ、ＣＢＨＴ　ＩまたはＥ（、ＩＩを産生できない。実施例２６ｐＰΔＥＧＩ−１の構成実施例１２に記載したように、Ｔ、ｒｅｅｓｅｉ菌株ＲＬ−Ｐ３７のｅｇｌｌ遺伝子を、ゲノムＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ断片として得た。この断片をｐＵｃｌｏｏのＨｉｎｄＩ１１部位に挿入した（ｐＵｃ１８の誘導体、ヤニシューベロンら、１９８５、遺伝子３３：ＢｇｌＩＩ、Ｃ１ａｌおよびＸｈｏＩの制限部位を加える多重クローニング部位中に挿入されたオリゴヌクレオチドを宵する１　０３ −１１９）。従来技術において知られている方法論を用いて、ＥＧＩ暗号配列の中央に近い位置からその暗号配列の３′末端を超えた位置に広がる約１ｋｂ　ＥｃｏＲＶ断片を除去し、ｐｙｒ４遺伝子を含有するＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ＤＮＡの３．５ｋｂ　５ｃａｌ断片により置換した。作成したプラスミドをｐＰΔＥＧＩ −１と称した（図１９２照）。プラスミドｐＰΔＥＧＩ−１は、ＨｉｎｄＩ　Ｉ　Ｉで切断され、いずれの末端にもｅｇ１１遺伝子の断片およびその中央でＥＧＩ暗号配列の一部を置換するｐｙｒ４遺伝子を育するＴ、ｒｅｅｓｅｉゲノムＤＮＡのみからなるＤＮＡ断片を放出できる。適切なＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４欠損菌株のＨｉｎｄＩＩＩで切断したｐＰΔ ＥＧＩ−１による転換は、形質転換体のある割合においてｅｇｌｌ座にこのＤＮＡを組み込むことを導く。このようにして、ＥＧＩを産生できない菌株が得られる。実施例２７ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３の構成およびＴ、ｒｅｅｓｅｉのｐｙｒ４欠損菌株の転換ＥＧＩ遺伝子を、実施例２６に概説した方法を用いて不活化できるという予想が本実験により増強される。この場合、プラスミド、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒｐｙｒ４遺伝子か選択可能マーカーとしてのＴ、ｒｅｅｓｅｉ　ｐｙｒ４遺伝子を置換することを除いてｐＰΔＥＧＩ−１に＃ｉ似であるｐΔＥＧＩｐｙｒ−３を構成しｔコ。二の場合、ｅｇｌｌ遺伝子は、ｐ　Ｕ　Ｃ１０Ｆ）のＨｉｎｄＩ１１部位に挿入された４、２ｋｂ　Ｈｊｎｄｌｌｌ断片として再度存在しｆコ。ｐＰΔＥＧＩ−１の構成中に（実施例２８参照）、同一の内部１ｋｂ　ＥｃｏＲＶ断片を除去したが、この場合、その断片はクローンされたＡ、ｎｉｇｅｒｐｙｒＧ遺伝子を自存する２、２ｋｂ断片により置換された（ウィルソンら、１９８８、Ｎｕｃｌ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、１６ｐ、２３３９）ｏ　Ｉ）ΔＥＧＩ’ｐｙｒ−３を有するＴ、ｒｅｅｓｅｉのｐｙｒ４欠損菌株（菌株ＧＣ６９）の転換は、その菌株がＢｉｎｄｌｌｌで切断されていずれの末端のｅｇｌｌ座から側腹領域を有するｐｙｒＧ遺伝子を含有する断片を放出した後に、ｅｇｌｌ遺伝子が分断された形質転換体に導かれた。これらの形質転換体は、ＨｉｎｄｌＩＩで切断され、放射線標諜ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３でプローブされた形質転換体ＤＮＡのサザン法分析により認識された。Ｔ、ｒｅｅｓｅｉの未転換菌株において、ｅｇ１１遺伝子は、ＤＮＡの４．２ｋｂ　Ｈ４ｎｄＩＩＩ断片上に存在し、この雑種形成のパターンは、図２０、レーンＣとして表される。しかしながら、ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３からの所望の断片の組込みによるｅｇｌｌ遺伝子の欠失に従って、この４．　２ｋｂ断片は消失し、より大きなサイズの約１．２ｋｂ、図２０、レーンＡの断片により置換された。また図２０に示すように、レーンＢは、ｐΔＥＧＩｐｙｒ−３の単一コピーの組込みがｅｇｌｌ座以外のゲノム中の部位で生じた形質転換体の実施例である。　一実施例２８ＣＢＨＩＳＣＢＨＩ　Ｉ、ＥＧＩおよびＥＧＩＩを産生できない菌株を産生ずるＴ、ｒｅｅｓｅｉのｐＰΔＥＧｒ−１による転換実施例１に概説した方法により、菌株Ａ２２（実施例２５から）のｐｙｒ４欠損菌株を得る。この菌株は、以前にＨｉｎｄｌｌｌで切断され、ｐｙｒ４遺伝子により置換されたＥＧＩ暗号配列の一部を釘するいずれかの末端でｅｇ】１遺伝子の断片を有するＴ、ｒｅｅｓｅｉゲノムＤ　Ｎ　ＡのみからなるＤＮＡ断片を放出するｐＰΔＥＧ　Ｉ−ｉにより転換される。安定なｐ　ｙ　ｒ　４　本形質転換体を選択し、全ＤＮＡをその形質転換体から単離される。ＤＮＡは、形質転換体を同定するためにサザン法分析後に１２ｐ標識ｐＰΔＥＧＩ−１てプローブされる。ここで、ｐｙｒ４遺伝子およびｅｇｌｌ配列を含有するＤＮＡの断片は、ｅｇｌｌ座で組み込まれ、結果としてＥＧＩ暗号配列を分断する。同定された形質転換体は、ＣＢＨＩ、ＣＢＨＩＩ、ＥＧＩおよびＥＧＩＩを産生ずることができない。ＦｃｏＲ；−−”、′ｐＵＣ４のｚＡ”／　’ｌ　；　／７−ＦＩＧ、２２４　ｂｐ登べＤＮＡＦＩＧ、８ＱはＵ。支社ユＦＩＧ、　１４ＥＣＯＲＩ　ｔｎ＠＋＝ｐ）ｌ）ＣＥＰＣＩ　ｔ”；　７％　’＋　唱−ｆｚ　ＤＮＡ　１Ｆ）ｇＦｐ＃ｒｆ５ＦＩＧ、１５ＦＩＧ、　１６ＦＩＧ、　１７ＦＩＧ・１８ｅｑｌｌｊアーイ云欄３・イリ’１）ｌｔ４鈍１亜覧（糸！７１．５ｋｂ）ＦＩＧ、　１９ＦＩＧ、２０国際調査報告一＋＋＋＋″ｅ″′″’　”””””　”　ＰＣｒ／Ｉ！Ｒ１１０７２７３フロントページの続き（５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｄ　Ｏ６Ｌ　１／１２　７１９９−５ＢＤＯ６Ｎｉ　１６１００／／（Ｃ１２Ｎ　９／４２Ｃ１２Ｒ１：８８５）（Ｃ１２Ｎ　１５１５６Ｃ１２Ｒ１：８８５）（８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。ＤＫ、　ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、　ＧＲ，ＩＴ、　ＬＵ、　ＮＬ、ＳＥ）、ＣＡ、ＦＩ、ＪＰ、　ＵＳ（７２）発明者　ワイス、ジエフリー　エルアメリカ合衆国　カリフォルニア州９４１１７　サンフランシスコ　ブエナ　ヴイスタ　アヴ工ニュ−４５７ＦＩ（７２）発明者　レアナス、ニドマント　エイアメリカ合衆国　カリフォルニア州９４０３８　モス　ピーチ　ネヴアダ　３０１（７２）発明者　シューメイカー、シャロン　ピーアメリカ合衆国　カリフォルニア州９４５３３　フェアフィールド　バーバンクドライヴ　３１７３

Claims

【特許請求の範囲】

１．洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物および約０．０１から約５重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であって、前記セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする洗浄剤組成物。
２．前記セルラーゼ組成物が、前記洗浄剤組成物の約０．０５から２重量パーセントを構成することを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
３．前記セルラーゼ組成物が、５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
４．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨＩ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
５．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第４項記載の洗浄剤組成物。
６．前記セルラーゼ組成物が、前記酸性ＥＧ成分の全ての合計タンパク質重量に基づいて少なくとも約１重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分を含むことを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
７．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨＩ型成分も表現できない、および／または１つ以上のＥＧ型成分を過剰表現する遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
８．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨ型成分も表現できないように遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第１項記載の洗浄剤組成物。
９．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第７項記載の洗浄剤組成物。
１０．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第８項記載の洗浄剤組成物。
１１．面含有織物に軟らかさを高める方法であって、該方法が、洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物および約０．０１から約５重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であり、前記セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有する洗浄剤組成物から誘導された洗濯媒質中で前記織物を洗濯することからなることを特徴とする方法。
１２．前記セルラーゼ組成物が、前記洗浄剤組成物の約０．０５から２重量パーセントを構成することを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１３．前記セルラーゼ組成物が、５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１４．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨＩ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１５．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第１４項記載の方法。
１６．前記セルラーゼ組成物が、前記酸性ＥＧ成分の全ての合計タンパク質重量に基づいて少なくとも約１重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分を含むことを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１７．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨＩ型成分も表現できない、および／または１つ以上のＥＧ型成分を過剰表現する遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１８．前記セルラーゼ組成物か、いかなるＣＢＨ型成分も表現できないように遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第１１項記載の方法。
１９．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第１７項記載の方法。
２０．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第１８項記載の方法。
２１．綿含有織物の色彩を保持／復元する方法であって、該方法が、洗浄に効果的な量の界面活性剤または界面活性剤の混合物および約０．０１から約５重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨＩ型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなる洗浄剤組成物であり、前記セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有する洗浄剤組成物から誘導された洗濯媒質中で１回以上前記織物を洗濯することからなることを特徴とする方法。
２２．前記セルラーゼ組成物が、前記洗浄剤組成物の約０．０５から２重量パーセントを構成することを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２３．前記セルラーゼ組成物が、５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２４．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨＩ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２５．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第２４項記載の方法。
２６．前記セルラーゼ組成物が、前記酸性ＥＧ成分の全ての合計タンパク質重量に基づいて少なくとも約１重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分を含むことを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２７．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨＩ型成分も表現できない、および／または１つ以上のＥＧ型成分を過剰表現する遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２８．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨ型成分も表現できないように遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第２１項記載の方法。
２９．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第２７項記載の方法。
３０．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第２８項記載の方法。
３１．約０から約２０重賃パーセントの界面活性剤および約０．００２から約０．５重量パーセントの、１つ以上の酸性ＥＧ型成分と必要に応じての１つ以上のＣＢＨ１型成分とからなる菌類セルラーゼ組成物よりなるプリソーク組成物であって、前記セルラーゼ組成物が５：１より大きな全ＣＢＨＩ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とするプリソーク組成物。
３２．前記セルラーゼ組成物が、５：１より大きな全ＣＢＨ型成分に対する全酸性ＥＧ型成分のタンパク質重量比を有することを特徴とする請求の範囲第３１項記載のプリソーク組成物。
３３．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨＩ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第３１項記載のブリソーク組成物。
３４．前記セルラーゼ組成物が全ＣＢＨ型成分を含まないことを特徴とする請求の範囲第３４項記載のプリソーク組成物。
３５．前記セルラーゼ組成物が、前記酸性ＥＧ成分の全ての合計タンパク質重量に基づいて少なくとも約１重量パーセントのＣＢＨＩ型セルラーゼ成分を含むことを特徴とする請求の範囲第３１項記載のブリソーク組成物。
３６．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨＩ型成分も表現できない、および／または１つ以上のＥＧ型成分を過剰表現する遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第３１項記載のプリソーク組成物。
３７．前記セルラーゼ組成物が、いかなるＣＢＨ型成分も表現できないように遺伝学的に修飾した微生物から誘導されることを特徴とする請求の範囲第３１項記載のプリソーク組成物。
３８．前記セルラーゼ組成物がいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第３６項記載のブリソーク組成物。
３９．前記セルラーゼ組成物かいかなる異種タンパク質も含有しないことを特徴とする請求の範囲第３７項記載のプリソーク組成物。