CN110651029B - 糖基水解酶 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有水解活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,以及产生和使用这些多肽的方法。

Description

糖基水解酶
序列表的引用
本申请包含处于计算机可读形式的序列表,将其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及包含具有水解活性的Glyco_hydro_114pFam结构域(PF03537)的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞,以及产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
几十年来,酶一直被用于洗涤剂中。通常将多种酶的混合物添加到洗涤剂组合物中。酶混合物通常包含多种酶,其中每种酶各自靶向其特异性底物,例如淀粉酶对淀粉污渍有活性,蛋白酶对蛋白质污渍有活性等。纺织品和表面(如衣物和餐具)会被许多不同类型的污垢弄脏。污垢可能由蛋白质、油脂、淀粉等组成。生物膜是污垢的一个实例,而且生物膜的存在产生了若干缺点。生物膜包含细胞外聚合物基质,其由例如多糖、细胞外DNA(eDNA)和蛋白质组成。细胞外聚合物基质可以是粘性的或粘合的,当其存在于纺织品上时,引起污垢的再沉积或反染色,从而导致织物变灰。另一个缺点是恶臭可能被滞留在有机结构中。因此,生物膜在纺织品和与清洁(如洗衣机等)相关的表面中是不可取的。由于生物膜是多糖、蛋白质、DNA等的复杂混合物,因此需要有效地防止、去除或减少在物品(如织物)上的此类污垢组分(如多糖组分)的酶。需要有效去除或减少有机污垢(例如在清洁过程(如衣物和硬表面清洁)中的例如EPS中的多糖)组分的酶。本发明的目的是提供如下酶:其与清洁组合物(例如洗涤剂)相容并且有效地减少例如与EPS相关的多糖。
发明内容
本发明提供具有水解酶活性的多肽,其中这些多肽包含Pfam数据库结构域Glyco_hydro_114(Pfam结构域id PF03537,Pfam版本31.0Finn(2016).Nucleic Acids Research[核酸研究],Database Issue[数据库卷]44:D279-D285)。结构域是为多肽提供水解活性的功能结构域。本发明还提供包含含有Glyco_hydro_114结构域的多肽的洗涤剂组合物,以及这类多肽在清洁过程中用于清洁(例如深度清洁)的用途。包含Glyco_hydro_114结构域的本发明多肽在清洁过程中具有有益的性质,例如清洁(例如深度清洁)。清洁过程包括衣物洗涤和餐具洗涤。
在第一方面,本发明涉及包含一个、两个或所有三个基序GX[FY][LYF]D(SEQ IDNO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)和GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶具有水解活性,并且其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶包含选自由以下组成的组的多肽或由其组成:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
本发明还涉及糖基水解酶,例如包含至少一个Glyco_hydro_114糖基水解酶结构域的多肽。特别地,本发明涉及选自由以下组成的组的多肽:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(gg)选自由SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30和SEQ IDNO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ IDNO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ IDNO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ IDNO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 96组成的组的多肽的变体,其中该变体具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置处包含一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(hh)多肽,该多肽包含(a)至(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(ii)多肽,该多肽包含(a)至(l)的多肽以及1至10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(jj)(a)至(l)的多肽的片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有成熟多肽的至少90%的长度。
本发明还涉及清洁组合物(例如洗涤剂组合物、ADW组合物、洗衣组合物),其包含根据本发明的多肽。
一个方面涉及清洁组合物,其包括:
a)至少0.001ppm的根据本发明的至少一种Glyco_hydro_114糖基水解酶;以及
b)一种或多种清洁组合物组分,优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
本发明还涉及用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于包含根据本发明的多肽的洗涤液或包含根据本发明的多肽的清洁组合物;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,其中该物品是纺织品。
本发明进一步涉及用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于包含根据本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶的洗涤液或根据本发明的组合物;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
本发明进一步涉及根据本发明的多肽用于清洁(例如深度清洁)物品(例如纺织品(例如织物))的用途。本发明进一步涉及根据本发明的多肽的以下用途:
(i)用于防止、减少或去除该物品的粘性;
(ii)用于预处理该物品上的污渍;
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
(iv)用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
(v)用于维持或改进该物品的白度;
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。
本发明进一步涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶在清洁过程(例如衣物洗涤和/或餐具洗涤)中的用途。本发明还涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶的以下用途:
i.用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分;
iii.用于减少或去除该物品上的菌膜(pel)污渍;
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
v.用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
vi.用于维持或改进该物品的白度;
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。
在一个方面中,本发明涉及颗粒,其包含:
(a)核心,该核心包含根据本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶,以及
(b)任选地包衣,该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
本发明进一步涉及编码本发明多肽的多核苷酸。核酸构建体或表达载体,该核酸构建体或表达载体包含编码本发明多肽的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。本发明进一步涉及重组宿主细胞,该重组宿主细胞包含编码本发明多肽的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列,其中该方法可以进一步包括在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽,以及任选地回收该多肽。
序列综述
SEQ ID NO 1DNA,编码来自假单胞菌属物种-62208的全长多肽
SEQ ID NO 2多肽,衍生自SEQ ID NO 1
SEQ ID NO 3成熟多肽,获得自假单胞菌属物种-62208
SEQ ID NO 4DNA,编码来自环境细菌群落A的全长多肽
SEQ ID NO 5多肽,衍生自SEQ ID NO 4
SEQ ID NO 6成熟多肽,获得自环境细菌群落A
SEQ ID NO 7DNA,编码来自热海栖热菌(Thermus rehai)的全长多肽
SEQ ID NO 8多肽,衍生自SEQ ID NO 7
SEQ ID NO 9成熟多肽,获得自热海栖热菌
SEQ ID NO 10DNA,编码来自环境细菌群落LE的全长多肽
SEQ ID NO 11多肽,衍生自SEQ ID NO 10
SEQ ID NO 12成熟多肽,获得自环境细菌群落LE
SEQ ID NO 13DNA,编码来自伯克霍尔德菌属物种-63093的全长多肽
SEQ ID NO 14多肽,衍生自SEQ ID NO 13
SEQ ID NO 15成熟多肽,获得自伯克霍尔德菌属物种-63093
SEQ ID NO 16DNA,编码来自大孢粘球菌(Myxococcusmacrosporus)的全长多肽
SEQ ID NO 17多肽,衍生自SEQ ID NO 16
SEQ ID NO 18成熟多肽,获得自大孢粘球菌
SEQ ID NO 19DNA,编码来自食五环芳烃加利西亚单胞菌(Gallaecimonaspentaromativorans)的全长多肽
SEQ ID NO 20多肽,衍生自SEQ ID NO 19
SEQ ID NO 21成熟多肽,获得自食五环芳烃加利西亚单胞菌
SEQ ID NO 22DNA,编码来自科克斯野野村氏菌(Nonomuraeacoxensis)的全长多肽
SEQ ID NO 23多肽,衍生自SEQ ID NO 22
SEQ ID NO 24成熟多肽,获得自科克斯野野村氏菌
SEQ ID NO 25DNA,编码来自鲁特介斯糖霉菌(Glycomycesrutgersensis)的全长多肽
SEQ ID NO 26多肽,衍生自SEQ ID NO 25
SEQ ID NO 27成熟多肽,获得自鲁特介斯糖霉菌
SEQ ID NO 28DNA,编码来自环境细菌群落XE的全长多肽
SEQ ID NO 29多肽,衍生自SEQ ID NO 28
SEQ ID NO 30成熟多肽,获得自环境细菌群落XE
SEQ ID NO 31DNA,编码来自吩嗪副伯克霍尔德菌(Paraburkholderiaphenazinium)的全长多肽
SEQ ID NO 32多肽,衍生自SEQ ID NO 31
SEQ ID NO 33成熟多肽,获得自吩嗪副伯克霍尔德菌
SEQ ID NO 34基序[G]X[FY][LYF]D
SEQ ID NO 35基序AYX[SET]XX[EAS]
SEQ ID NO 36信号肽MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA
SEQ ID NO 37HHHHHHPR His-标签
SEQ ID NO 38DNA,编码来自微生物群落的全长多肽
SEQ ID NO 39多肽,衍生自SEQ ID NO 38
SEQ ID NO 40成熟多肽,获得自微生物群落
SEQ ID NO 41DNA,编码来自变绿粘球菌(Myxococcusvirescens)的全长多肽
SEQ ID NO 42多肽,衍生自SEQ ID NO 40
SEQ ID NO 43成熟多肽,获得自变绿粘球菌
SEQ ID NO 44DNA,编码来自橙色粘球菌(Myxococcusfulvus)的全长多肽
SEQ ID NO 45多肽,衍生自SEQ ID NO 43
SEQ ID NO 46成熟多肽,获得自橙色粘球菌
SEQ ID NO 47DNA,编码来自大孢粘球菌的全长多肽
SEQ ID NO 48多肽,衍生自SEQ ID NO 47
SEQ ID NO 49成熟多肽,获得自大孢粘球菌
SEQ ID NO 50DNA,编码来自叶柄粘球菌(Myxococcusstipitatus)的全长多肽
SEQ ID NO 51多肽,衍生自SEQ ID NO 50
SEQ ID NO 52成熟多肽,获得自叶柄粘球菌
SEQ ID NO 53DNA,编码来自大孢粘球菌的全长多肽
SEQ ID NO 54多肽,衍生自SEQ ID NO 53
SEQ ID NO 55成熟多肽,获得自大孢粘球菌
SEQ ID NO 56DNA,编码来自seleniipraecipitans假单胞菌(Pseudomonasseleniipraecipitans)的全长多肽
SEQ ID NO 57多肽,衍生自SEQ ID NO 56
SEQ ID NO 58成熟多肽,获得自seleniipraecipitans假单胞菌
SEQ ID NO 59DNA,编码来自米氏假单胞菌(Pseudomonas migulae)的全长多肽
SEQ ID NO 60多肽,衍生自SEQ ID NO 59
SEQ ID NO 61成熟多肽,获得自米氏假单胞菌
SEQ ID NO 62DNA,编码来自皱褶假单胞菌(Pseudomonas corrugata)的全长多肽
SEQ ID NO 63多肽,衍生自SEQ ID NO 62
SEQ ID NO 64成熟多肽,获得自皱褶假单胞菌
SEQ ID NO 65DNA,编码来自大海假单胞菌(Pseudomonas pelagia)的全长多肽
SEQ ID NO 66多肽,衍生自SEQ ID NO 65
SEQ ID NO 67成熟多肽,获得自大海假单胞菌
SEQ ID NO 68DNA,编码来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1的全长多肽
SEQ ID NO 69多肽,衍生自SEQ ID NO 68
SEQ ID NO 70成熟多肽,获得自铜绿假单胞菌PAO1
SEQ ID NO 71DNA,编码来自灰褐链霉菌(Streptomyces griseofuscus)的全长多肽
SEQ ID NO 72多肽,衍生自SEQ ID NO 71
SEQ ID NO 73成熟多肽,获得自灰褐链霉菌
SEQ ID NO 74DNA,编码来自解木糖赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusxylanilyticus)的全长多肽
SEQ ID NO 75多肽,衍生自SEQ ID NO 74
SEQ ID NO 76成熟多肽,获得自解木糖赖氨酸芽孢杆菌
SEQ ID NO 77DNA,编码来自人参土膨胀芽孢杆菌(Tumebacillusginsengisoli)的全长多肽
SEQ ID NO 78多肽,衍生自SEQ ID NO 77
SEQ ID NO 79成熟多肽,获得自人参土膨胀芽孢杆菌
SEQ ID NO 80DNA,编码来自耐硼赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillusboronitolerans)的全长多肽
SEQ ID NO 81多肽,衍生自SEQ ID NO 80
SEQ ID NO 82成熟多肽,获得自耐硼赖氨酸芽孢杆菌
SEQ ID NO 83DNA,编码来自水解产微球茎菌(Microbulbiferhydrolyticus)的全长多肽
SEQ ID NO 84多肽,衍生自SEQ ID NO 83
SEQ ID NO 85成熟多肽,获得自水解产微球茎菌
SEQ ID NO 86DNA,编码来自约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊(Carnobacteriuminhibens subsp.gilichinskyi)的全长多肽
SEQ ID NO 87多肽,衍生自SEQ ID NO 86
SEQ ID NO 88成熟多肽,获得自约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊
SEQ ID NO 89DNA,编码来自环境细菌群落的全长多肽
SEQ ID NO 90多肽,衍生自SEQ ID NO 89
SEQ ID NO 91成熟多肽,获得自环境细菌群落
SEQ ID NO 92DNA,编码来自堆肥假单胞菌(Pseudomonas composti)的全长多肽
SEQ ID NO 93多肽,衍生自SEQ ID NO 92
SEQ ID NO 94成熟多肽,获得自堆肥假单胞菌
SEQ ID NO 95成熟多肽,获得自吩嗪副伯克霍尔德菌
SEQ ID NO 96成熟多肽,获得自伯克霍尔德菌属物种-63093
SEQ ID NO 97:基序GXXGX[FY][LYFI]D
SEQ ID NO 98:基序[ILFQV]N[RW]G[FL]
SEQ ID NO 99:基序DTLDS[YF]
SEQ ID NO 100:基序G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ]
SEQ ID NO 101:基序DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN]
SEQ ID NO 102:基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY
SEQ ID NO 103:基序[QL]N[AS]PEL
SEQ ID NO 104:基序[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE
定义
活性:本发明涉及糖基水解酶(EC 3.2.1.-),其是一组广泛的酶,这组酶水解两种或更多种糖类之间或糖类与非糖类部分之间的糖苷键。已经提出了基于氨基酸序列相似性对家族中糖苷水解酶进行分类。本发明的多肽包含至少一个糖基水解酶结构域,并且在本文中定义为糖基水解酶。因此,本发明的多肽水解糖苷键,而且本发明的多肽具有水解活性。包含在本发明多肽中的糖基水解酶结构域可以分类为Glyco_hydro_114(Pfam结构域idPF03537,Pfam版本31.0Finn(2016).Nucleic Acids Research[核酸研究],DatabaseIssue[数据库卷]44:D279-D285)。本发明的多肽可以进一步包含多糖脱乙酰酶结构域(CE4),并且在优选的实施例中,本发明的多肽具有水解活性和/或脱乙酰酶活性。根据本发明的具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽包括Glyco_hydro_114糖基水解酶。Glyco_hydro_114糖基水解酶在本发明的上下文中是包含糖基水解酶结构域(DUF297)的糖基水解酶,其在本文中被称为Glyco_hydro_114(Pfam结构域id PF03537,Pfam版本31.0Finn(2016)。Glyco_hydro_114糖基水解酶结构域位于:SEQ ID NO 3中第9至218位,SEQ ID NO6中第14至247位,SEQ ID NO 9中第222至420位,SEQ ID NO 76中第18至229位,SEQ ID NO79中第31至241位,SEQ ID NO 82中第14至226位,SEQ ID NO 73中第56至199位,SEQ ID NO15中第12至221位,SEQ ID NO 18中第205至427位,SEQ ID NO 12中第206至428位,SEQ IDNO 21中第6至204位,SEQ ID NO 24中第11至237位,SEQ ID NO 27中第16至240位,SEQ IDNO 30中第10至243位,SEQ ID NO 33中第22至231位,SEQ ID NO 40中第9至218位,SEQ IDNO 43中第205至427位,SEQ ID NO 46中第202至424位,SEQ ID NO 49中第213至435位,SEQID NO 52中第207至429位,SEQ ID NO 55中第213至435位,SEQ ID NO 58中第60至269位,SEQ ID NO 61中第9至218位,SEQ ID NO 64中第9至218位,SEQ ID NO 67中第10至219位,SEQ ID NO 70中第6至215位,SEQ ID NO 85中第181至310位,SEQ ID NO 88中第27至226位,SEQ ID NO 91中第173至292位,SEQ ID NO 94中第5至210位,SEQ ID NO 95中第22至231位,SEQ ID NO 96中第12至221位。本发明的多肽是糖基水解酶,优选地是Glyco_hydro_114糖基水解酶。在一个优选的实施例中,本发明的多肽是内切-α-1,4-聚半乳糖胺酶。本发明的多肽对糖苷键至少具有水解活性,并且还可具有脱乙酰酶活性。在本发明的上下文中,Glyco_hydro_114糖基水解酶是PelA酶,其对(存在于许多生物膜中的)多糖菌膜具有活性。菌膜(pellicle,PEL)多糖例如由铜绿假单胞菌合成,并且是对细菌毒力和持久性起关键作用的重要生物膜组分。菌膜是一种阳离子聚合物,其由N-乙酰半乳糖胺和N-乙酰葡糖胺的部分乙酰化1→4糖苷键组成,其通过与细胞外DNA的静电相互作用促进生物膜基质内的细胞-细胞相互作用(Jennings等人PNAS[美国国家科学院院刊]2015年9月,第112卷,第36期,11353-11358;Marmont等人J Biol Chem.[生物化学杂志]2017年11月24日;292(47):19411-19422.2017)。
等位基因变体:术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生,并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
生物膜:生物膜是由其中细胞彼此黏附在一起或黏附至表面(如纺织品、餐具或硬表面)或另一种表面的任何群组的微生物产生的有机物。这些粘附细胞经常包埋在细胞外聚合物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质、和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下,浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。生活在生物膜中的细菌通常与同一物种的浮游细菌具有显著不同的特性,因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。微生物的这一环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性,因为,密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。关于产生衣物洗涤生物膜或EPS的细菌,可以在以下物种中找到:不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)以及寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)。在一个方面中,产生生物膜的菌株是假单胞菌。在一个方面中,产生EPS的菌株是铜绿假单胞菌、嗜碱性假单胞菌或荧光假单胞菌。在一个实施例中,生物膜由产生菌膜的微生物或微生物群引起。在另一个实施例中,生物膜产生可通过本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶降解的多糖。可以在表面(例如纺织品)上形成的生物膜,可以由形成PelA依赖性生物膜的任何微生物或微生物群引起,微生物包括但不限于:不动杆菌属物种、气微菌属物种、短波单胞菌属物种、微杆菌属物种、滕黄微球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、假单胞菌属物种、铜绿假单胞菌、嗜碱性假单胞菌、荧光假单胞菌、寡养单胞菌属物种、副伯克霍尔德菌、伯克霍尔德菌属物种、假丝酵母属物种、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、鼠疫耶尔森氏菌、大肠杆菌和曲霉属物种。
催化结构域:术语“催化结构域”意指酶的含有该酶的催化机构的区域。
进化枝:进化枝是根据追溯至共同祖先的同源性特征聚集在一起的一组多肽。多肽进化枝可以被看作是系统发生树,并且进化枝是由共同祖先及其所有直系后裔组成的一组多肽。实例5描述了系统发育树的生成。
cDNA:术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体,其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工,然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列:术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定,该可读框以起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列:术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即,来自相同基因)或外源的(即,来自不同基因),或相对于彼此是天然的或外源的。这类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、和转录终止子。最少,控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的,这些控制序列可以提供有多个接头。
深度清洁:术语“深度清洁”意指破坏、减少或去除有机组分,例如多糖(如菌膜)、蛋白质、DNA、污垢或存在于有机物(如生物膜)中的其他组分。
清洁组分:清洁组分(例如洗涤剂佐剂成分)与本发明的多肽不同。这些另外的清洁或佐剂组分的精确性质、其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的清洁组分包括,但不限于:以下描述的组分,如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物软化剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
清洁组合物:术语清洁组合物包括“洗涤剂组合物”并且是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品,用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的具体类型的清洁组合物和产品的形式(例如、液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物,并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如,液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂;织物清新剂;织物软化剂;以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了包含本发明的酶之外,该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物),和/或洗涤剂辅助剂成分,例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
酶洗涤益处:本文中将术语“酶洗涤益处”定义为将酶添加到洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(又称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(又称作白化的效果),该纺织品最初是白色的,但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果),从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果),改进织物柔软性,织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处,其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
表达:术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤,包括但不限于:转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体:术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子,其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
片段:术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个(例如,若干个)氨基酸的多肽或催化结构域;其中该片段具有活性。
宿主细胞:术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
分离的:术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质,(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质,该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除;(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质;或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分,增加物质的量而修饰的任何物质(例如,宿主细胞中的重组产生;编码该物质的基因的多个拷贝;以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中;例如宿主细胞可以经遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。
改进的洗涤性能:本文将术语“改进的洗涤性能”定义为相对于没有酶的相同洗涤剂组合物的洗涤性能,展示出洗涤剂组合物中增加的洗涤性能的酶,例如,通过增加污渍去除或较少的再沉积。术语“改进的洗涤性能”包括在衣物中的洗涤性能。
洗涤:术语“洗涤”涉及家用洗涤和工业洗涤两者并且意指用一种包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
恶臭:关于术语“恶臭”意指在清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净,而没有黏附于所述物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物,所述化合物可以是微生物产生的。另一个实例是令人不愉快的气味可以是黏附于已经与人类或动物接触的物品的汗味或体味。恶臭的另一个实例可以是来自香料的气味,其粘附于物品,例如气味强烈的咖喱或其他异国香料。
成熟多肽:术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰(例如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等)之后处于其最终形式的多肽。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 2的氨基酸1至904,并且SEQ ID NO 2的氨基酸-32至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQID NO 5的氨基酸1至281,并且SEQ ID NO 5的氨基酸-21至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 8的氨基酸1至458,并且SEQ ID NO 8的氨基酸-18至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 9的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 11的氨基酸1至468,并且SEQ ID NO 11的氨基酸-26至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 12的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 14的氨基酸1至266,并且SEQ ID NO 14的氨基酸-45至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ IDNO 15的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 17的氨基酸1至467,并且SEQID NO 17的氨基酸-28至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 18的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 20的氨基酸1至882,并且SEQ ID NO 20的氨基酸-16至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 21的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 23的氨基酸1至279,并且SEQ ID NO 23的氨基酸-21至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 24的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 26的氨基酸1至276,并且SEQ ID NO 26的氨基酸-22至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 27的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 29的氨基酸1至277,并且SEQ ID NO 29的氨基酸-26至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 30的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 32的氨基酸1至271,并且SEQ ID NO 32的氨基酸-29至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 33的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 39的氨基酸1至905,并且SEQ ID NO 39的氨基酸-32至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 40的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ IDNO 42的氨基酸1至467,并且SEQ ID NO 42的氨基酸-28至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 43的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 45的氨基酸1至464,并且SEQ ID NO 45的氨基酸-18至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 46的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 48的氨基酸1至475,并且SEQ ID NO 48的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 49的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 51的氨基酸1至469,并且SEQ ID NO 51的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ IDNO 52的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 54的氨基酸1至475,并且SEQID NO 54的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 55的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 57的氨基酸1至906,并且SEQ ID NO 57的氨基酸-49至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 58的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 60的氨基酸1至905,并且SEQ ID NO 60的氨基酸-32至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 61的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 63的氨基酸1至905,并且SEQ ID NO 63的氨基酸-32至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 64的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 66的氨基酸1至906,并且SEQ ID NO 66的氨基酸-31至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 67的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 69的氨基酸1至257,并且在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO70的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 72的氨基酸1至269,并且SEQ IDNO 72的氨基酸-43至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 73的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 75的氨基酸1至260,并且SEQ ID NO 75的氨基酸-26至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 76的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 78的氨基酸1至275,并且SEQ ID NO 78的氨基酸-30至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 79的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 81的氨基酸1至268,并且SEQ ID NO 81的氨基酸-28至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 82的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 84的氨基酸1至313,并且SEQ ID NO 84的氨基酸-16至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 85的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 87的氨基酸1至257,并且SEQ ID NO 87的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 88的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ IDNO 90的氨基酸1至296,并且SEQ ID NO 90的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 91的氨基酸序列。在一些方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 93的氨基酸1至897,并且SEQ ID NO 93的氨基酸-26至-1是信号肽。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 94的氨基酸序列。在一个方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 95的氨基酸1至271。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 95的氨基酸序列。在一个方面中,该成熟多肽是SEQ ID NO 96的氨基酸1至271。在一些方面中,该成熟多肽是具有SEQ ID NO 96的氨基酸序列。
在本领域中已知的是,宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或多种不同的成熟多肽(即,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是,不同的宿主细胞以不同的方式加工多肽,且因此表达多核苷酸的一种宿主细胞当与表达相同多核苷酸的另一种宿主细胞相比时可产生不同的成熟多肽(例如,具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列:术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有活性的成熟多肽的多核苷酸。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 1的核苷酸97至2808,并且SEQID NO 1的核苷酸1至96编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 4的核苷酸64至906,并且SEQ ID NO 4的核苷酸1至63编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 7的核苷酸55至1428,并且SEQ ID NO 7的核苷酸1至54编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 10的核苷酸79至1482,并且SEQ ID NO10的核苷酸1至78编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 13的核苷酸136至933,并且SEQ ID NO 13的核苷酸1至135编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 16的核苷酸85至1485,并且SEQ ID NO 16的核苷酸1至84编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 19的核苷酸49至2694,并且SEQ ID NO19的核苷酸1至48编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 22的核苷酸64至900,并且SEQ ID NO 22的核苷酸1至63编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 25的核苷酸67至894,并且SEQ ID NO 25的核苷酸1至66编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 28的核苷酸79至909,并且SEQ ID NO 28的核苷酸1至78编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 31的核苷酸88至900,并且SEQ ID NO 31的核苷酸1至87编码信号肽。
在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 38的核苷酸97至2811,并且SEQID NO 38的核苷酸1至96编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 41的核苷酸85至1485,并且SEQ ID NO 41的核苷酸1至84编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 44的核苷酸55至1446,并且SEQ ID NO 44的核苷酸1至54编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 47的核苷酸73至1497,并且SEQID NO 47的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 50的核苷酸73至1479,并且SEQ ID NO 50的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 53的核苷酸73至1497,并且SEQ ID NO 53的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 56的核苷酸148至2865,并且SEQID NO 56的核苷酸1至147编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO59的核苷酸97至2811,并且SEQ ID NO 59的核苷酸1至96编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 62的核苷酸97至2811,并且SEQ ID NO 62的核苷酸1至96编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 65的核苷酸94至2811,并且SEQ ID NO 65的核苷酸1至93编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ IDNO 68的核苷酸1至771。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 71的核苷酸130至936,并且SEQ ID NO 71的核苷酸1至129编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 74的核苷酸79至858,并且SEQ ID NO 74的核苷酸1至78编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 77的核苷酸91至915,并且SEQ ID NO 77的核苷酸1至90编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 80的核苷酸85至888,并且SEQ ID NO 80的核苷酸1至84编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 83的核苷酸49至987,并且SEQ ID NO 83的核苷酸1至48编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 86的核苷酸73至843,并且SEQ ID NO 86的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO 89的核苷酸73至960,并且SEQ ID NO 89的核苷酸1至72编码信号肽。在一个方面中,该成熟多肽编码序列是SEQID NO 92的核苷酸79至2769,并且SEQ ID NO 92的核苷酸1至78编码信号肽。
核酸构建体:术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子,该核酸分子是从天然存在的基因中分离的,或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段,或是合成的,所述核酸分子包含一个或多个控制序列。
命名法:出于本发明的目的,命名法[E/Q]是指在该位置的氨基酸可以是谷氨酸(Glu,E)或谷氨酰胺(Gln,Q)。同样,命名法[V/G/A/I]意指在此位置的氨基酸可以是缬氨酸(Val,V)、甘氨酸(Gly,G)、丙氨酸(Ala,A)或异亮氨酸(Ile,I),对于如本文所描述的其他组合,依次类推。除非进一步另有限制,否则氨基酸X被这样定义,使得它可以是20种天然氨基酸中的任一种。
可操作地连接:术语“可操作地连接”意指如下的构型,在该构型中,控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处,使得该控制序列引导该编码序列的表达。
序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的,使用尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性,该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS:欧洲分子生物学开放软件套件(The European Molecular Biology Open Software Suite),Rice等人,2000,TrendsGenet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算:
(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
变体:术语“变体”意指具有水解酶活性的、在一个或多个(例如,若干个)位置处包含改变(即,取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占用某一位置的氨基酸;缺失意指去除占用某一位置的氨基酸;并且插入意指在邻接并且紧随占用某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。
具体实施方式
在清洁过程中应用多种酶,每种酶都针对特定类型的污垢(例如蛋白质、淀粉和油脂污垢)。现在,酶是用于衣物洗涤和餐具洗涤的洗涤剂的标准成分。这些商业酶的有效性提供了去除大部分污垢的洗涤剂。然而,由于此类有机物质的复杂性质,包含在许多生物膜中的有机物质(如EPS(细胞外聚合物))构成了具有挑战性的污垢类型。尚无可商购的洗涤剂有效地去除或减少与EPS相关的污垢。生物膜由其中细胞彼此黏附在一起或黏附至表面(如纺织品、餐具或硬表面)或另一种表面的任何群组的微生物产生。这些粘附细胞通常嵌入细胞外聚合物(EPS)的自生基质中,其构成生物膜总有机物的50%至90%。EPS主要由多糖(胞外多糖)和蛋白质组成,但包括其他大分子,如DNA、脂质和人体物质。EPS是细菌沉降的构建材料,并且保持附着于细胞的外表面,或分泌到其生长培养基中。EPS是多种多样细菌产生的生物膜的发展形成和完整性所必需的。诸位发明人已经表明,包含Glyco_hydro_114糖基水解酶结构域和/或脱乙酰基酶CE4结构域的Glyco_hydro_114多肽对胞外多糖菌膜具有水解活性,并且因此具有减少或去除EPS组分的潜力,从而减少或去除例如纺织品中EPS相关的污垢。众所周知,衍生自生物体的多肽可以共享共同的结构元件,这可以通过比较一级结构(例如氨基酸序列)和根据序列同源性对多肽分组来鉴别。然而,通过比较多种多肽的三维(3D)结构也可以鉴别共同的结构元件。这两种方法都已应用于本发明中。
这些方法鉴别了以下多肽:衍生自不同分类群的生物体,但对于所鉴别的群共享共同的结构元件。
本发明的多肽包含在此称为CE4_PelA_样结构域的结构域,其由蛋白质PelA代表,这种蛋白质由pelA-G基因簇中的基因编码,用于在铜绿假单胞菌中产生菌膜和形成生物膜。PelA和大多数家族成员含有在N末端的未知功能的结构域DUF297(PF03537)以及C末端结构域,该C末端结构域显示出与六链桶状根瘤菌NodB样蛋白的催化结构域的高度序列相似性,其从细胞壁多糖中去除N-连接或O-连接的乙酰基并且属于较大的糖类酯酶4(CE4)超家族。本发明的多肽包含Glyco_hydro_114结构域和若干个基序。一个实例是位于对应于假单胞菌属物种-62208(SEQ ID NO 3)中的位置113至117的位置处的GX[FY][LYF]D(SEQ IDNO 34)。可以由本发明的多肽包含的另一个基序是位于对应于假单胞菌属物种-62208(SEQID NO 3)中的位置53至58的位置处的AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)。可以将Glyco_hydro_114中的多肽分成不同的子簇,其中我们将一个包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO34)或基序GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)的子簇表示为家族FLD。这种结构域的另一个基序特征是AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含DUF297结构域,以及优选包含一个、两个或所有三个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)的Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽,其中该多肽具有水解活性,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
本发明的多肽优选属于簇FLD,其包含糖基水解结构域Glyco_hydro_114并且具有水解活性。在一些实施例中,多肽另外包含CE4结构域并且具有脱乙酰酶活性。
FLD进化枝的多肽,其包括所有PelA Glyco_hydro_114糖基水解酶,其包含SEQ IDNO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO95和SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列。可以将FLD-进化枝(或FLD-结构域的多肽)分成另外两个进化枝或亚进化枝(参见图3),也可以将其再次分成另外的进化枝,见下文。这些亚进化枝被称为NRG和IGEAE进化枝,并且包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于FLD进化枝。
NRG进化枝的多肽包含基序实例[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98),对应于SEQID NO 3的第155至159位处的氨基酸FNRGF,其中N和G(对应于SEQ ID NO 3的第156和158位)在NRG进化枝中是完全保守的。NRG进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO9、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、和SEQ ID NO 96。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ IDNO 98)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
可以将NRG子进化枝进一步分为另一个亚组,这里称为DTLDS进化枝(见图3)。DTLDS进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于NRG进化枝(和FLD-进化枝)。所述进化枝的多肽包含基序实例DTLDS[YF](SEQ ID NO 99),对应于SEQ ID NO 3的氨基酸DTLDSF位置117至122,其中DTLDS(对应于SEQ ID NO 3的第117和121位)在DTLDS进化枝中是完全保守的,并且在第117位的D是底物结合口袋的一部分和两个推定的催化位点残基之一。DTLDS进化枝的多肽的实例包括SEQID NO 3、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 58、SEQID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、和SEQ ID NO 96。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ IDNO 98)和/或基序DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)和/或基序DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
可以将DTLDS子进化枝进一步分为另一个亚组,这里称为GVFLD进化枝(见图3)。GVFLD进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于DTLDS进化枝(以及NRG和FLD-进化枝)。GVFLD进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于DTLDS进化枝(以及NRG和FLD-进化枝)。所述GVFLD进化枝的多肽包含基序G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQID NO 100),对应于SEQ ID NO 3的氨基酸GLFLDTLDSFQLL位置113至125,其中D(对应于SEQID NO 3的第117位)在GVFLD进化枝中是完全保守的,是底物结合口袋的一部分和两个推定的催化位点残基之一。GVFLD进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 40、SEQ IDNO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、和SEQ ID NO 94。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ IDNO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)和/或G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)和/或G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
可以将NRG子进化枝进一步分为另一个亚组,这里称为DTVG进化枝(见图3)。DTVG进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于NRG进化枝(和FLD进化枝)。所述进化枝的多肽包含基序实例DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101),对应于SEQ ID NO 76中的氨基酸DTVGNIN、SEQ ID NO76的第134至140位,其中D和T(对应于SEQ ID NO 76的第134和135位)在DTVG进化枝中是完全保守的。DTVG进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 76和SEQ ID NO 82。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ IDNO 98)和/或基序DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)和/或基序DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
如上所述,可以将FLD进化枝的糖基水解酶分为两个进化枝,即被称为NRG和IGEAE的进化枝(见图3)。IGEAE包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其中这些多肽包含Glyco_hydro_114结构域并且属于FLD进化枝。所述进化枝的多肽包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102),对应于SEQ ID NO 12的第262至269位的氨基酸EIGAIEEY,其中G和E(对应于SEQ ID NO 12的第264和267位)在IGEAE进化枝中是完全保守的。在第265位处的残基A是底物结合口袋的一部分。IGEAE进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 6、SEQ ID NO12、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO52和SEQ ID NO 55。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
可以将IGEAE子进化枝进一步分为另一个亚组,这里称为QNSPEL进化枝(见图3)。QNSPEL进化枝包含具有水解酶活性的细菌来源的多肽,其包含Glyco_hydro_114结构域并且属于IGEAE进化枝。所述进化枝的多肽包含基序实例[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103),对应于SEQ ID NO 12的第370至375位处的氨基酸QNSPEL,其中P、E和L(对应于SEQ ID NO 12的第373至375位)在QNSPEL进化枝中是完全保守的。该进化枝的另一个保守基序是[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104),其位于SEQ ID NO 12中的第366至374位,并且对应于SEQ ID NO 12中的肽KVVPQNSPE。QNSPEL进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 12、SEQ ID NO18、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52和SEQ IDNO 55。
本发明的一个实施例涉及糖基水解酶,优选包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)和/或基序[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)、[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQID NO 104)中一者或两者的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)和/或基序[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)、[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)中一者或两者的Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
因此,在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个、两个或所有三个基序:GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含基序([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98),其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在另一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个、两个或所有三个基序:GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102),其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
本发明的多肽对胞外多糖菌膜具有活性,胞外多糖菌膜是一些生物膜基质的组分。本发明的一个实施例涉及根据本发明的多肽用于减少或去除菌膜的用途,其中菌膜包含在生物膜中。特别地,本发明的多肽在洗涤剂中具有活性,并且可用于清洁过程(例如衣物洗涤和/或餐具洗涤,例如用于深度清洁表面(如纺织品和硬表面))。本披露还提供了一种用于防止、减少或去除物品上含有菌膜的有机污垢的方法,该方法包括将至少一种本发明的多肽施用于物品以及任选地冲洗该物品。该物品优选地是纺织品或硬表面(例如餐具)。
有机物(如EPS或其组分)可具有类似胶的性质,并且存在于例如纺织品上的生物膜可导致物品或物品上的区域有“粘性”。污垢通常会粘附在粘性区域上,并且此类污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物去除。此外,当脏的衣物物品与不太脏的衣物物品一起洗涤时,洗涤液中存在的污物倾向于粘附于有机物(如EPS)上。结果是,衣物洗涤物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。这种效应也可以称为再沉积。包含如上定义的基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO97),([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)中的一个或多个的Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽可用于减少或去除再沉积。
包含如上定义的基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ IDNO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ IDNO 104)中的一个或多个的Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽可用于减少或去除被洗涤物品的恶臭。诸位发明人惊讶地发现,包含如上定义的基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO97),([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)中的一个或多个的多肽可用于减少或去除衣物相关的菌膜。
本发明的多肽可以用于清洁组合物,并且可有效深度清洁表面(如织物)。本发明的多肽可有效减少或去除来自例如有机物的多糖污垢。有机物的一个实例是生物膜,其由多种微生物产生。生物膜的细胞外聚合物基质EPS由多糖、细胞外DNA和蛋白质组成。生物膜EPS可以是粘性的或粘合的,当其存在于纺织品上时,可引起污垢的再沉积或反染色,从而导致织物变灰。有机物(如生物膜)的另一个缺点是恶臭,因为多种恶臭相关分子通常与有机物质(如生物膜)相关。本发明的一个方面涉及用于洗涤物品的洗涤方法,该洗涤方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于包含多肽的洗涤液或包含多肽的清洁组合物,该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 96或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,其中该多肽具有水解活性和/或脱乙酰酶活性;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
因此,本发明的多肽可用于防止、减少或去除恶臭以及用于防止、减少再沉积和改进白度。
本发明的一个实施例涉及选自由以下组成的组的多肽:SEQ ID NO 3、SEQ ID NO6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽用于深度清洁物品的用途,其中该物品是纺织品。本发明的一个实施例涉及选自由以下组成的组的多肽:SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 96或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽的以下用途:
(i)用于防止、减少或去除该物品的粘性;
(ii)用于预处理该物品上的污渍;
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
(iv)用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
(v)用于维持或改进该物品的白度;
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。纺织品可以是例如棉或聚酯或其混合物。
其他方法和用途在下面的“用途”部分中描述。
本发明的一个实施例涉及与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95或SEQ ID NO 96中所示多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
本发明的一个实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽,其中该多肽具有水解活性,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽,其中该多肽具有水解活性,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
本发明的另一个优选实施例涉及包含一个、两个或所有三个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)的Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽,其中该多肽具有水解活性,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在一个实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 2的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 2的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 5的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 5的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 8的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 8的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 11的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 11的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 14的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 14的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一些实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 17的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 7的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 20的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 20的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 23的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 23的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 26的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 26的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 29的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 29的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 32的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 32的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 39的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 39的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 42的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 42的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 45的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 45的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 48的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 48的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 51的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 51的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 54的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 54的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 57的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 57的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 60的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 60的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 63的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 63的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 66的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 66的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 69的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 69的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 72的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 72的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 75的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 75的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 78的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 78的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 81的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 81的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 84的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 84的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 87的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 87的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 90的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 90的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 93的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 93的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 95的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 95的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一个具体实施例中,本发明涉及与SEQ ID NO 96的成熟多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽,并且其中该多肽具有SEQ ID NO 96的成熟多肽的至少70%的水解活性和/或脱乙酰酶活性。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 2的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 2的氨基酸1至904或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 3的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 3长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 5的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 5的氨基酸1至281或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 6的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 6长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 8的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 8的氨基酸1至458或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 9的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 9长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 11的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 11的氨基酸1至468或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 12的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 12长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 14的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 14的氨基酸1至266或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 15的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 15长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 17的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 17的氨基酸1至467或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 18的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 18长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 20的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 20的氨基酸1至882或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 21的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 21长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 23的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 23的氨基酸1至279或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 24的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 24长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 26的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 26的氨基酸1至276或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 27的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 27长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 29的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 29的氨基酸1至277或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 30的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 30长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 32的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 32的氨基酸1至271或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 33的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 33长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 40中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 39的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 39的氨基酸1至905或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 40中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 40中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 40的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 40长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 43中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 42的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 42的氨基酸1至467或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 43中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 43中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 43的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 43长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 46中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 45的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 45的氨基酸1至464或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 46中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 46中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 46的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 46长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 49中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 48的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 48的氨基酸1至475或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 49中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 49中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 49的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 49长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 52中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 51的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 51的氨基酸1至469或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 52中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 52中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 52的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 52长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 55中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 54的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 54的氨基酸1至475或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 55中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 55中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 55的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 55长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 58中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 57的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 57的氨基酸1至906或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 58中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 58中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 58的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 58长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 61中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 60的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 60的氨基酸1至905或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 61中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 61中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 61的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 61长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 64中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 63的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 63的氨基酸1至905或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 64中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 64中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 64的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 64长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 67中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 66的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 66的氨基酸1至906或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 67中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 67中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 67的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 67长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 70中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 69的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 69的氨基酸1至257或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 70中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 70中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 70的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 70长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 73中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 72的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 72的氨基酸1至269或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 73中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 73中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 73的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 70长度的至少50%,如至少60%、至少73%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 76中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 75的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 75的氨基酸1至260或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 76中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 76中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 76的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 70长度的至少50%,如至少60%、至少76%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 79中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 78的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 78的氨基酸1至275或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 79中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 79中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 79的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 70长度的至少50%,如至少60%、至少79%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 82中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 81的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 81的氨基酸1至268或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 82中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 82中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 82的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 82长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 85中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 84的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 84的氨基酸1至313或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 85中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 85中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 85的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 85长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 88中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 87的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 87的氨基酸1至257或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 88中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 88中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 88的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 85长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少88%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 91中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 90的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 90的氨基酸1至296或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 91中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 91中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 91的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 91长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 94中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 93的成熟多肽或由其组成。在另一方面中,该多肽包含SEQ ID NO 93的氨基酸1至897或由其组成。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 94中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 94中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 94的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 94长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 95中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 95中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 95的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 95长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 95中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。
在一个实施例中,该多肽优选地包含SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列或由其组成;包含SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;包含SEQ ID NO 96的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;或者是其片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有SEQ ID NO 96长度的至少50%,如至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%。在一些实施例中,该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列或其等位基因变体或由其组成;或是其具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的片段。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 6中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 9中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 12中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 15中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 18中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 21中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 24中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 27中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 30中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 33中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 40中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 43中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 46中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 49中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 52中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 55中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 58中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 61中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 64中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 67中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 70中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 73中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 76中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 79中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 82中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 85中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 88中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 91中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 94中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 95中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些方面中,本发明涉及包含SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列或由其组成的多肽。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 3中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO3中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 6中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO6中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 9中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO9中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 12中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO12中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 15中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO15中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 18中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO18中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 21中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO21中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 24中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO24中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 27中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO27中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 30中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO30中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 33中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO33中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 40中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO40中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 43中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO43中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 46中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO46中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 49中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO49中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 52中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO52中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 55中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO55中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 58中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO58中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 61中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO61中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 64中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO64中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 67中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO67中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 70中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO70中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 73中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO73中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 76中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO76中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 79中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO79中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 82中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO82中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 85中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO85中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 88中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO88中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 91中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO91中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 94中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO94中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 95中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO95中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在一些实施例中,本发明涉及在一个或多个(例如,若干个)位置处包含取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO 96中所示的成熟多肽的变体。在一些实施例中,引入SEQ ID NO96中所示的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个,例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
这些氨基酸改变可以具有微小性质,即,不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入;典型地为1-30个氨基酸的小缺失;小的氨基-末端或羧基末端延伸,例如氨基末端的甲硫氨酸残基;多达20-25个残基的小接头肽;或小的延伸,其通过改变净电荷或另一官能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
保守取代的实例是在下组之内:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],学术出版社(Academic Press),纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴别多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中,在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变,并且测试所得分子的水解活性和/或脱乙酰酶活性以鉴别对于该分子的活性关键的氨基酸残基。还参见,Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定,如由下述技术确定:核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记,连同对推定的接触位点(contract site)氨基酸进行突变。参见,例如,de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312;Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904;Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行一个相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试,这些相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57;Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156;WO 95/17413;或WO 95/22625所披露。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837;美国专利号5,223,409;WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145;Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子,并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽,其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。
该多肽可以是融合多肽或可切割的融合多肽,其中另一个多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的,且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框,而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽,其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583;Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时,该位点被切割,从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点:Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576;Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251;Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493;Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503;和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381;Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512;Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987;Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质:结构、功能以及遗传学]6:240-248;以及Stevens,2003,Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
具有多肽活性的多肽来源
本发明的具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽可从任何属的微生物获得。出于本发明的目的,如本文结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面中,获得自给定来源的多肽被分泌到细胞外。在一个方面中,该多肽是假单胞菌多肽,例如从假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是细菌多肽,例如从环境细菌群落A、环境细菌群落LE或环境细菌群落XE获得的多肽。在一个方面中,该多肽是栖热菌属多肽,例如从热海栖热菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是伯克霍尔德菌属多肽,例如从伯克霍尔德菌属物种-63093中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是粘球菌属多肽,例如从大孢粘球菌、变绿粘球菌、橙色粘球菌或叶柄粘球菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是加利西亚单胞菌属多肽,例如从食五环芳烃加利西亚单胞菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是野野村菌属多肽,例如从科克斯野野村氏菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是副伯克霍尔德菌属多肽,例如从吩嗪副伯克霍尔德菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是产微球茎菌属多肽,例如从水解产微球茎菌中获得的多肽。在一个方面中,该多肽是肉食杆菌属多肽,例如从约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊中获得的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶,即包含Glyco_hydro_114结构域的多肽是细菌的。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶,即包含Glyco_hydro_114结构域的多肽衍生自假单胞菌,例如假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自假单胞菌,优选假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自假单胞菌,优选假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自假单胞菌,优选假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌,并且其中Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自假单胞菌,优选假单胞菌属物种-62208、seleniipraecipitans假单胞菌、米氏假单胞菌、皱褶假单胞菌、大海假单胞菌、铜绿假单胞菌或堆肥假单胞菌,其中Glyco_hydro_114糖基包含四个、五个或六个选自由以下组成的组的基序:GX[FY][LYF]D(SEQ IDNO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)和G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQID NO 100),并且其中Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶,即包含Glyco_hydro_114结构域的多肽是细菌的。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自粘球菌属,优选大孢粘球菌、变绿粘球菌、橙色粘球菌或叶柄粘球菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)、[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自粘球菌属,优选大孢粘球菌、变绿粘球菌、橙色粘球菌或叶柄粘球菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自粘球菌属,优选大孢粘球菌、变绿粘球菌、橙色粘球菌或叶柄粘球菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自粘球菌属,优选大孢粘球菌、变绿粘球菌、橙色粘球菌或叶柄粘球菌,其中Glyco_hydro_114糖基包含四个、五个或六个选自由以下组成的组的基序:GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO103)、[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104),并且其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自栖热菌属,优选热海栖热菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自栖热菌属,优选热海栖热菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自伯克霍尔德菌属,优选伯克霍尔德菌属物种-63093,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自伯克霍尔德菌属,优选伯克霍尔德菌属物种-63093,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽或与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自加利西亚单胞菌属,优选食五环芳烃加利西亚单胞菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自加利西亚单胞菌属,优选食五环芳烃加利西亚单胞菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自野野村菌属,优选科克斯野野村氏菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO97)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自野野村菌属,优选科克斯野野村氏菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自糖霉菌属,优选鲁特介斯糖霉菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自糖霉菌属,优选鲁特介斯糖霉菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自副伯克霍尔德菌属,优选吩嗪副伯克霍尔德菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自副伯克霍尔德菌属,优选吩嗪副伯克霍尔德菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽或与SEQ IDNO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自链霉菌属,优选灰褐链霉菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自链霉菌属,优选灰褐链霉菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自赖氨酸芽孢杆菌属,优选解木糖赖氨酸芽孢杆菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ IDNO 101)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自赖氨酸芽孢杆菌属,优选解木糖赖氨酸芽孢杆菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽或与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自膨胀芽孢杆菌属,优选人参土膨胀芽孢杆菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自膨胀芽孢杆菌属,优选人参土膨胀芽孢杆菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自产微球茎菌属,优选水解产微球茎菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO97)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自产微球茎菌属,优选水解产微球茎菌,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自肉食杆菌属,优选约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶包含一个或多个、或甚至全部基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)。在一个实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶获得自肉食杆菌属,优选约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊,其中Glyco_hydro_114糖基水解酶是与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
应理解的是对于前述的种,本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states),和其他分类学的等同物(equivalent),例如无性型(anamorph),而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得,如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoorSchimmelcultures,CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center,NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源,包括从自然界(例如,土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如,土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴别和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸,则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸,如本文中所述。在一些实施例中,编码本发明的多肽的多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 1的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 4的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 7的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 10的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 13的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 16的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 19的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 22的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 25的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 28的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 31的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 38的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 41的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 44的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 47的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 50的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 53的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 56的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 59的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 62的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 65的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 68的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 71的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 74的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 77的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 80的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 83的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 86的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 89的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 92的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 95的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
在一些实施例中,本发明涉及编码具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的多核苷酸,其中该多核苷酸与SEQ ID NO 98的成熟多肽编码序列具有至少60%,例如至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%序列同一性。在另外的实施例中,该多核苷酸已经被分离。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段,实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如,Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and ApplicationA Guide to Methods andApplication[PCR:方法和应用指南],学术出版社(Academic Press),纽约。可以使用其他核酸扩增程序如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体,其包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸,在与控制序列相容的条件下,该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作所述多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体,在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可为启动子,即,被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含转录控制序列,其介导该多肽的表达。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸,包括变体、截短型及杂合型启动子,并且可以从编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子:解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”;和在Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中,用于指导本发明的核酸构建体的转录的适合启动子的实例是从以下的基因获得的启动子:构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶-样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(达莉亚)(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(奎恩)(WO00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶,以及里氏木霉翻译延伸因子,连同NA2-tpi启动子(来自编码中性α-淀粉酶的曲霉属基因的修饰的启动子,其中已经用来自编码丙糖磷酸异构酶的曲霉属基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列;非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子,其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替换未翻译的前导序列);及其变体、截短型、以及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中,从以下酶的基因获得有用的启动子:酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1,ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接到编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得:克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下酶的基因获得:构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶-样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
用于酵母宿主细胞的优选的终止子从以下酶的基因获得:酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人,1992,同上描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域,其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区的实例从以下获得:苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列,即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下酶的基因获得:酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列也可以是多腺苷酸化序列,一种与多核苷酸3’-末端可操作地连接并在转录时由宿主细胞识别为向转录的mRNA添加多腺苷酸残基的信号序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因获得:构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列也可为编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5'-端可固有地包含在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地,编码序列的5'-端可包含对于编码序列为外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不包含信号肽编码序列的情况下,可能需要外源信号肽编码序列。可替代地,外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而,可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列:黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人,1992,同上描述。
控制序列也可以是编码位于多肽N-末端处的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得:枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列两者都存在的情况下,该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
也可为希望的是添加调节序列,该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中,可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中,可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中,这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中,编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体,该重组表达载体可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地,可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生该表达载体时,该编码序列位于该载体中,这样使得该编码序列与该用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如,质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体,即作为染色体外实体存在的载体,其复制独立于染色体复制,例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以包含用于确保自我复制的任何手段。可替代地,载体可以是这样的载体,当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外,可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒,其共同包含待引入宿主细胞基因组的总DNA,或可以使用转座子。
载体优选地包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标志。选择性标志是一种基因,其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标志的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标志。酵母宿主细胞的适合的标志包括但不限于:ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞中的选择性标志包括但不限于:adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、以及其等同物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选地用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标志可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标志系统。在一个方面中,双选择性标志是hph-tk双选择性标志系统。
载体优选地包含允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中,该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地,该载体可包含用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性,整合元件应当包含足够数目的核酸,如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对,这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外,整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面,载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制,载体还可以另外包含复制起点,该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点,以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67;Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175;WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标志基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目,其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标志基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如,Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞,这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸,该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中,这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持,如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
该宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞,例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于:芽孢杆菌属(Bacillus)、梭菌属(Clostridium)、肠球菌属(Enterococcus)、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)和链霉菌属(Streptomyces)。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单孢菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞,包括但不限于:嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、植物解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciensplantarum)亚种、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞,包括但不限于类马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞,包括但不限于:不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现:原生质体转化(参见,例如,Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如,Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829;或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如,Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或轭合(参见例如,Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化(参见例如,Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如,Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现:原生质体转化、电穿孔(参见例如,Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如,Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如,Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下方式来实现:电穿孔(参见例如,Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如,Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。可通过如下方法实现将DNA引入到链球菌属细胞:例如天然感受态(natural competence)(参见,例如,Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见,例如,Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见,例如,Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见,例如,Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而,可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物,如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义:Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[Ainsworth和Bisby氏真菌字典],第8版,1995,国际应用生物科学中心(CAB International),英国剑桥大学出版社(UniversityPress,Cambridge,UK))。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文使用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化,出于本发明的目的,酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编,Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁弗酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母菌属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞,如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(见上文)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳多糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延长来进行的,而碳分解代谢是专性需氧的。相反,酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的,而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属(Acremonium)、曲霉属(Aspergillus)、短梗霉属(Aureobasidium)、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属(Ceriporiopsis)、金孢子菌属(Chrysosporium)、鬼伞属(Coprinus)、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属(Cryptococcus)、线黑粉菌属(Filibasidium)、镰孢属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属(Mucor)、毁丝霉属(Myceliophthora)、新美鞭菌属(Neocallimastix)、链孢菌属(Neurospora)、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、平革菌属(Phanerochaete)、射脉菌属(Phlebia)、梨囊鞭菌属(Piromyces)、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属(Schizophyllum)、篮状菌属(Talaromyces)、嗜热子囊菌属(Thermoascus)、梭孢壳属(Thielavia)、弯颈霉属(Tolypocladium)、栓菌属(Trametes)或木霉属(Trichoderma)细胞。
例如,丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、臭曲霉(Aspergillus foetidus)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑刺烟管菌(Bjerkanderaadusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsiscaregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsispannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsissubrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporiuminops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporiumlucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporiummerdarium)、租金孢子菌(Chrysosporiumpannicola)、女王杜香金孢子菌(Chrysosporiumqueenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporiumtropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporiumzonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢(Fusarium bactridioides)、谷类镰孢(Fusariumcerealis)、库威镰孢(Fusarium crookwellense)、大刀镰孢(Fusarium culmorum)、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)、禾赤镰孢(Fusarium graminum)、异孢镰孢(Fusariumheterosporum)、合欢木镰孢(Fusarium negundi)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、多枝镰孢(Fusarium reticulatum)、粉红镰孢(Fusarium roseum)、接骨木镰孢(Fusariumsambucinum)、肤色镰孢(Fusarium sarcochroum)、拟分枝孢镰孢(Fusariumsporotrichioides)、硫色镰孢(Fusarium sulphureum)、圆镰孢(Fusarium torulosum)、拟丝孢镰孢(Fusarium trichothecioides)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)、特异腐质霉(Humicolainsolens)、柔毛腐质霉(Humicolalanuginosa)、米黑毛霉(Mucor miehei)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)、产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotuseryngii)、土生梭孢壳霉(Thielaviaterrestris)、长域毛栓菌(Trametesvillosa)、变色栓菌(Trametesversicolor)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、康宁木霉(Trichoderma koningii)、长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)、里氏木霉(Trichoderma reesei)或绿色木霉(Trichoderma viride)细胞。
真菌细胞可以通过以下过程转化,该过程涉及原生质体形成、原生质体转化以及以本身已知的方式再生细胞壁。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适程序描述于以下文献中:EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的合适方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母:Becker和Guarente,Abelson、J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,纽约学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.,New York);Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163;以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法,这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽;和任选地(b)回收该多肽。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法,这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞;和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如,可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵器中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞,该培养在合适的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序,培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养介质中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如,在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中,那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌,那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用特异性针对具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的本领域已知的方法来检测该多肽。这些检测方法包括但不限于:特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如,可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如,可通过常规方法,包括但不限于,收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀,从营养培养基回收多肽。在一个方面中,回收包含多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化多肽以获得基本上纯的多肽,这些程序包括但不限于:色谱法(例如,离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和尺寸排阻)、电泳程序(例如,制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如,硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或提取(参见例如,ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)。
在一个替代性方面,不回收多肽,而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作多肽的来源。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分,例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞,这些宿主细胞用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中,组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如,当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如,由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时,产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地,该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中,该发酵液配制品和细胞组合物包括第一有机酸组分(包括至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)以及第二有机酸组分(包括至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在一个具体实施例中,该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐,或前述中的两种或更多种的混合物;并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐,或前述中的两种或更多种的混合物。
在一个方面中,组合物含有一种或多种有机酸,并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中,从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片,以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如,抑菌)剂,包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地,该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如,丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中,细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中,可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体,但是可以含有不溶性组分,如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中,可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生。
酶组合物
本发明涉及组合物,这些组合物包含与一种或多种另外的组分组合的本发明的多肽。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分,包括下文所述的示例性非限制性组分。
本发明的一些实施例涉及组合物,该组合物包含:
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽,其中该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ IDNO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ IDNO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ IDNO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ IDNO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ IDNO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽;
b)一种或多种佐剂成分。
本发明的一些实施例涉及清洁组合物,该清洁组合物包含:
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽,其中该多肽选自由以下组成的组:SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ IDNO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ IDNO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ IDNO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ IDNO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ IDNO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽;
b)一种或多种清洁组合物组分,优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
本发明的一些实施例涉及清洁组合物,该清洁组合物包含:
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽,其中该多肽包含一个或多个选自由以下组成的组的基序:GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ IDNO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)和G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)、DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)、[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)以及[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104);以及
b)一种或多种清洁组合物组分,优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
一个实施例涉及清洁组合物,其包含:
a)至少0.001ppm的至少一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽(例如Glyco_hydro_114糖基水解酶),其中该多肽选自由以下组成的组:
i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
ii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
iii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
iv)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
vi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
vii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
viii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
ix)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xiii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xiv)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xv)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xvi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xvii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xviii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xix)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xx)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxiii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxiv)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxv)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxvi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxvii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxviii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxix)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxx)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxxi)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
xxxii)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
b)一种或多种清洁组合物组分,优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶。
清洁组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类,但是这并不被解释为限制,因为如将被普通技术人员所理解,组分可以包含另外的功能性。
表面活性剂
该洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂,它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在具体实施例中,所述洗涤剂组合物包含一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子型表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1%至60%(如约1%至约40%、或约3%至约20%、或约3%至约10%)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂,并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何常规表面活性剂。
当被包括在其中时,该洗涤剂通常将会含有按重量计约1%至约40%的阴离子表面活性剂,如约5%至约30%,包括从约5%至约15%,或从约15%至约20%,或从约20%至约25%的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,具体地,直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)、及其组合。
当被包括在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约1%至约40%的阳离子表面活性剂,例如从约0.5%至约30%,特别是从约1%至约20%、从约3%至约10%,如从约3%至约5%、从约8%至约12%或从约10%至约12%。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。
当被包括在其中时,该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2%至约40%的非离子型表面活性剂,例如从约0.5%至约30%,特别是从约1%至约20%、从约3%至约10%,如从约3%至约5%、从约8%至约12%或从约10%至约12%。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化的胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品、及其组合。
当被包括在其中时,所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1%至约10%的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO),如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物,及其组合。
当被包括在其中时,所述洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1%至约10%的兼性离子型表面活性剂。兼性离子型表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱,如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
助洗剂和共助洗剂
该洗涤剂组合物可以包含按重量计约0%-65%(如约5%至约50%)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中,助洗剂的水平典型地是40%-65%、特别是50%-65%。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性络合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA,也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。
该洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-50%,如约5%至约30%的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂,或与助洗剂,例如沸石助洗剂组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
漂白系统
洗涤剂可以含有按重量计0%-30%,例如约1%至约20%的漂白系统。可以利用包含本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的组分的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括过氧化氢源;过酸源;和漂白催化剂或增效剂。
过氧化氢源:
适合的过氧化氢源是无机过酸盐,包括碱金属盐(如过碳酸钠和过硼酸钠(通常是一水合物或四水合物)),以及过氧化氢―尿素(1/1)。
过酸源:
过酸可以是(a)直接作为预形成过酸掺入,或(b)从过氧化氢和漂白活化剂(过水解)在洗涤液中原位形成,或(c)从过氧化氢和过氧化氢酶和后者适合的底物(例如酯)在洗涤液中原位形成。
a)适合的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸(如过氧苯甲酸)及其环取代的衍生物、过氧-α-萘甲酸、过氧邻苯二甲酸、过氧月桂酸、过氧硬脂酸、ε-邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸[邻苯二甲酰亚氨基过氧己酸(PAP)]、和邻-羧基苯甲酰氨基过氧己酸;脂族和芳族二过氧二羧酸,如二过氧十二烷二酸、二过氧壬二酸、二过氧癸二酸、二过氧巴西基酸、2-癸基二过氧丁二酸、以及二过氧邻苯二甲酸、-间苯二甲酸和-对苯二甲酸;过亚氨酸;过氧单硫酸;过氧二硫酸;过氧磷酸;过氧硅酸;以及所述化合物的混合物。应理解的是,在一些情况下,所提到的过酸可能最好是作为适合的盐的添加,如碱金属盐(例如
Figure BDA0002222285550001202
)或碱土金属盐。
b)适合的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺、腈类或酸酐类别的那些,以及适用时,其盐。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸钠(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸钠、4-(癸酰基氧基)苯甲酸(DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸钠(NOBS)、和/或披露于WO98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP624154中并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋精)具有它们是环境友好的优点。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三醋精在存储时在产品中具有良好的水解稳定性,并且是有效的漂白活化剂。最后,ATC是多功能的,因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。
漂白催化剂和增效剂
该漂白系统还可以包括漂白催化剂或增效剂。
可以用于本发明组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰胶原、钴-胺催化剂和锰三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂;特别优选锰与1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的络合物,具体地是Me3-TACN,如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2”-次氮基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-甲基亚基)三酚并-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂还可以是其他金属化合物,如铁或钴络合物。
在其中过酸的来源包括在内的一些实施例中,可以使用具有下式之一的有机漂白催化剂或漂白增效剂:
Figure BDA0002222285550001201
(iii)及其混合物;其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基或含有从11至24个碳的直链烷基,优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基或含有从11至18个碳的直链烷基,更优选地每个R1独立地选自下组,该组由以下组成:2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。
其他示例性漂白系统描述于例如WO2007/087258、WO2007/087244、WO2007/087259、EP1867708(维生素K)以及WO2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
金属护理剂
金属护理剂可以防止或减少金属的锈蚀、腐蚀或氧化,这些金属包括铝、不锈钢和非铁金属,如银和铜。适合的实例包括以下的一个或多个:
(a)苯并三唑类,包括苯并三唑或双-苯并三唑及其取代衍生物。苯并三唑衍生物是其中芳环上可获得的取代位点被部分或完全取代的那些化合物。适合的取代基包括直链或支链Ci-C20-烷基基团(例如C1-C20-烷基基团)和羟基、硫代、苯基或卤素(例如氟、氯、溴和碘);
(b)选自下组的金属盐和络合物,该组由以下组成:锌、锰、钛、锆、铪、钒、钴,镓和铯盐和/或络合物,这些金属处于氧化态II、III、IV、V或VI之一。在一个方面中,适合的金属盐和/或金属络合物可以选自由以下组成的组:Mn(II)硫酸盐、Mn(II)柠檬酸盐、Mn(II)硬脂酸盐、Mn(II)乙酰丙酮酸盐、K^TiF6(例如,K2TiF6)、K^ZrF6(例如,K2ZrF6)、CoSO4、Co(NOs)2和Ce(NOs)3、锌盐,例如,硫酸锌、水锌矿、或乙酸锌;
(c)硅酸盐,包括硅酸钠或硅酸钾、二硅酸钠、硅酸钠、结晶层状硅酸盐及其混合物。
WO 94/26860和WO 94/26859中披露了用作银/铜腐蚀抑制剂的另外适合的有机和无机氧化还原活性物质。优选地,本发明的组合物按重量计包含从0.1%至5%的金属护理剂的组合物,优选地该金属护理剂是锌盐。
水溶助剂
洗涤剂可以包含按重量计0-10%,例如按重量计0-5%,例如约0.5%至约5%、或约3%至约5%的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0-10%(如0.5%-5%、2%-5%、0.5%-2%或0.2%-1%)的聚合物。可以利用本领域中已知的在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用,或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或抑泡特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物,如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。适合的实例包括来自亚什兰亚跨龙公司(Ashland Aqualon)的PVP-K15、PVP-K30、ChromaBond S-400、ChromaBond S-403E和Chromabond S-100,以及来自BASF公司的
Figure BDA0002222285550001221
HP 165、
Figure BDA0002222285550001222
HP 50(分散剂)、
Figure BDA0002222285550001223
HP 53(分散剂)、
Figure BDA0002222285550001224
HP59(分散剂)、
Figure BDA0002222285550001225
HP 56(染料转移抑制剂)、
Figure BDA0002222285550001226
HP 66K(染料转移抑制剂)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。特别优选的聚合物是来自BASF公司的乙氧基化均聚物
Figure BDA0002222285550001227
HP 20,其有助于防止洗涤液中的污垢再沉积。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂,如染料或颜料,当配制在洗涤剂组合物中时,当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上,所述洗涤液包含所述洗涤剂组合物,并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下,当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时,它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物,并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成:直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物,例如于WO2005/03274、WO2005/03275、WO2005/03276和EP1876226中所描述的(通过引用并入本文)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt%至约0.2wt%、从约0.00008wt%至约0.05wt%、或甚至从约0.0001wt%至约0.04wt%的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt%至0.2wt%的织物调色剂,当该组合物处于单位剂量袋的形式时,这可以是尤其优选的。适合的调色剂还披露于例如WO2007/087257和WO2007/087243中。
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种另外的酶,例如一种或多种脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶,例如漆酶、和/或过氧化物酶。
一般而言,一种或多种所选酶的特性应与所选洗涤剂相容(即,最适pH,与其他酶和非酶成分的相容性等),并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、枝顶孢属的纤维素酶,例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
特别合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶,该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO 2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97%同一性,或家族44木葡聚糖酶,该木葡聚糖酶具有以下序列,该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO 2的位置40-559具有至少60%同一性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme PremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、CellucleanClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
甘露聚糖酶
合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或基因修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型,特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
过氧化物酶/氧化酶
适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(例如来自灰盖鬼伞)的过氧化物酶及其变体,如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
脂肪酶和角质酶:
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括如在EP 258 068和EP 305 216中所述的来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)(例如来自疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(以前命名为柔毛腐质霉(Humicolalanuginosa))的脂肪酶、来自腐质霉(例如特异腐质霉(H.insolens)(WO96/13580))的角质酶、来自假单胞菌属(Pseudomonas)(这些假单胞菌属中的一些现在重命名为伯克霍尔德菌属)的脂肪酶(例如,产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligene)(EP218272))、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331376)、菌株SD 705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)、GDSL型链霉菌属脂肪酶(WO10/065455)、来自稻瘟病菌(WO10/107560)的角质酶、来自门多萨假多胞菌(US5,389,536)的角质酶、来自嗜热裂孢菌(WO11/084412)的脂肪酶、嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO11/084417)、来自枯草芽孢杆菌(WO11/084599)的脂肪酶、以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)的脂肪酶和始旋链霉菌(WO12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体,如描述于EP407225、WO92/05249、WO94/01541、WO94/25578、WO95/14783、WO95/30744、WO95/35381、WO95/22615、WO96/00292、WO97/04079、WO97/07202、WO00/34450、WO00/60063、WO01/92502、WO07/87508以及WO09/109500中的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM;LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司),Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。
仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶,例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO10/100028)。
淀粉酶:
适合的淀粉酶包括α-淀粉酶和/或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO 2的淀粉酶或其与SEQ ID NO3具有90%序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO4中,如在一个或多个以下位置中具有取代的变体:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQ ID NO 6具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包括WO 2006/066594的SEQ ID NO 6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO 4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90%序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO 6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO 4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQID NO 6具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 3、SEQID NO 2或SEQ ID NO 7的那些或其与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3或SEQ IDNO 7具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476,使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO 2、WO 01/66712中的SEQ ID NO 10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO 2具有90%序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO 10具有90%序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO 10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO 2的淀粉酶或其与SEQ IDNO 2具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO 2的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K,和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183处具有缺失的那些。SEQ ID NO 2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中这些变体是C-末端截短的,并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 13184577的SEQ ID NO 1的淀粉酶或其与SEQ IDNO 1具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO 1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些:K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K,和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中这些变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 10104675的SEQ ID NO 1的淀粉酶或其与SEQ IDNO 1具有90%序列同一性的变体。SEQ ID NO 1的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO 1的更优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代的那些:N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K、以及G478K,和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO 1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些:
N21D+D97N+V128I
其中这些变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO01/66712中的SEQ ID NO 12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO 12具有至少90%序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO 12中的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些:R28、R118、N174;R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314;R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体,以及另外在一个或多个选自下组的位置中具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339,最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体,如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司),和RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司)。
蛋白酶:
适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些,例如植物或微生物来源。优选的是微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶,如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族的(如胰蛋白酶)或S8家族的(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶,如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征在于在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类,即,枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是衍生自芽孢杆菌属的那些,例如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌;和枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及例如描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 01/016285和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属(Fusarium)蛋白酶(描述于WO 94/25583和WO 05/040372中),以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO 95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO 07/044993(宝洁公司(Procter&Gamble)/杰能科国际有限公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶,如来源于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的那些。
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体:WO 89/06279、WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264,尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体:3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269,其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。更优选的蛋白酶变体可以包含选自下组的一种或多种突变,该组由以下组成:S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、S85R、A96S、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、A120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A以及R269H。这些蛋白酶变体优选地是在WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶
Figure BDA0002222285550001301
的变体、在WO 2016/001449的SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(BPN')的变体。这些蛋白酶变体与WO 2016/001449的SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2优选地具有至少80%序列同一性。
在以下一个或多个位置包含取代的蛋白酶变体,该位置对应于WO2004/067737的SEQ ID NO 1的位置171、173、175、179或180,其中所述蛋白酶变体与WO2004/067737的SEQID NO 1具有至少75%但少于100%的序列同一性。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些:
Figure BDA0002222285550001302
DuralaseTm、DurazymTm
Figure BDA0002222285550001303
Ultra、
Figure BDA0002222285550001304
Ultra、
Figure BDA0002222285550001305
Ultra、
Figure BDA0002222285550001306
Figure BDA0002222285550001307
Ultra、
Figure BDA0002222285550001308
Blaze
Figure BDA0002222285550001309
100T、Blaze
Figure BDA00022222855500013010
125T、Blaze
Figure BDA00022222855500013011
150T、
Figure BDA00022222855500013012
Figure BDA00022222855500013013
(诺维信公司),在以下商品名下出售的那些:
Figure BDA00022222855500013014
Purafect
Figure BDA00022222855500013015
Figure BDA00022222855500013016
ExcellenzP1000TM、Excellenz P1250TM
Figure BDA00022222855500013017
Preferenz P100TM、Purafect
Figure BDA00022222855500013018
PreferenzP110TM、Effectenz P1000TM
Figure BDA0002222285550001311
Effectenz P1050TM
Figure BDA0002222285550001312
Effectenz P2000TM
Figure BDA0002222285550001313
Figure BDA0002222285550001314
(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-BrocasesN.V.))、BLAP(在US5352604的图29中示出的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
过氧化物酶/氧化酶
根据本发明的过氧化物酶是由酶分类EC 1.11.1.7囊括的由国际生物化学和分子生物学联盟命名委员会(IUBMB)规定的酶,或来源于其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属,例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486),及其变体,如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中所描述的那些。
适合的过氧化物酶包括卤代过氧化物酶,如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。优选地,所述卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶,即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。已从许多不同真菌,特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶,如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如,煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如,疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已从细菌,如假单胞菌属(如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如,金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
适合的氧化酶特别包括由酶分类EC 1.10.3.2所包含的任何漆酶或来源于其的展现出漆酶活性的任何片段、或展现出类似活性的化合物,如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。优选的漆酶是微生物来源的酶。该酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。来自真菌的合适实例包括可来源于以下的菌株的漆酶:曲霉属,脉孢菌属(例如,粗糙脉孢菌),柄孢壳菌属,葡萄孢属,金钱菌属(Collybia),层孔菌属(Fomes),香菇属,侧耳属,栓菌属(例如,长绒毛栓菌和变色栓菌),丝核菌属(例如,立枯丝核菌(R.solani)),拟鬼伞属(例如,灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis),小脆柄菇属(Psathyrella)(例如,白黄小脆柄菇(P.condelleana)),斑褶菇属(例如,蝶形斑褶菇(P.papilionaceus)),毁丝霉属(例如,嗜热毁丝霉),Schytalidium(例如,S.thermophilum),多孔菌属(例如,P.pinsitus),射脉菌属(例如,射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如,毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。来自细菌的适合的实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。优选的是来源于拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶;特别是来源于灰盖拟鬼伞的漆酶,如披露于WO 97/08325中;或来源于嗜热毁丝霉,如披露于WO 95/33836中。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地,粉状洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐,其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,Marcel Dekker,Inc[马塞尔德克尔公司]中。
染料转移抑制剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时,染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001%至约10%、从约0.01%至约5%或甚至从约0.1%至约3%的水平存在。
荧光增白剂
本发明的洗涤剂组合物将优选地还包含另外的组分,这些组分可以给正在清洁的物品着色,例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时,该增亮剂优选地以约0.01%至约0.5%的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些:二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐:4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔,瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX,由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。适合用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt%、从0.05wt%、从约0.1wt%或甚至从约0.2wt%的较低水平至0.5wt%或甚至0.75wt%的较高水平。
污垢释放聚合物
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物,这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢,特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺,参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷,第7章,马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基烯亚胺结构或聚链烷醇胺结构,如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外,随机接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(通过引用并入本文)。适合的聚乙二醇聚合物包括随机接枝共聚物,该随机接枝共聚物包含:(i)含有聚乙二醇的亲水主链;和(ii)选自由以下组成的组的一个或多个侧链:C4-C25烷基基团、聚丙烯、聚丁烯、饱和C1-C6单羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的C1-C6烷基酯、及其混合物。适合的聚乙二醇聚合物具有聚乙二醇主链和随机接枝的聚乙酸乙烯酯侧链。聚乙二醇主链的平均分子量可以在2,000Da至20,000Da的范围内、或在4,000Da至8,000Da的范围内。聚乙二醇主链与聚乙酸乙烯酯侧链的分子量比率可以在1:1至1:5的范围内、或在1:1.2至1:2的范围内。每个环氧乙烷单元的平均接枝位数可小于1、或小于0.8,每个环氧乙烷单元的平均接枝位数可以在0.5至0.9的范围内,或每个环氧乙烷单元的平均接枝位数可以在0.1至0.5的范围内、或在0.2至0.4的范围内。适合的聚乙二醇聚合物是Sokalan HP22。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,如修饰的纤维素衍生物,如EP 1867808或WO2003/040279中所描述的那些(将二者都通过引用并入本文)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂,如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂,不同于降粘剂。流变改性剂选自下组,该组由以下各项组成:非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂,它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度,例如,如在EP 2169040中所示。其他适合的清洁组合物组分包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、运载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。
洗涤剂产品的配制品
本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式,例如条,均匀的片剂,具有两层或更多层的片剂,具有一个或多个室的袋,规则的或压缩的粉末,颗粒,膏,凝胶,或规则的、压缩的或浓缩的液体。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料,例如在与水接触之前,不允许该组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成,它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料,优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地,聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60%。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物,其包含可水解降解并且水可溶的聚合物共混物,如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下,如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司销售)加增塑剂,像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。可用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同:US2009/0011970A1。
可以由水可溶袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此,可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中,每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的,典型地包含按重量计至少20%并且最高达95%的水,例如高达约70%的水、高达约65%的水、高达约55%的水、高达约45%的水、高达约35%的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以包含从0-30%的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
颗粒洗涤剂配制品
无尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和4,661,452中所披露而产生,并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇,PEG);具有从16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化的壬基酚;其中的醇包含从12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单元的乙氧基化的脂肪醇;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
可以将糖基水解酶(例如Glyco_hydro_114糖基水解酶)配制为颗粒,例如,配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后,每种酶将存在于多种颗粒中,这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度,不同酶的物理隔离。用于产生针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中,其涉及包含以下项的洗涤剂组合物:(a)多酶共颗粒;(b)少于10wt沸石(无水的基础上);和(c)少于10wt磷酸盐(无水的基础上),其中所述酶共颗粒包含从10wt%至98wt%的水分汇组分(sink component),并且该组合物另外还包含从20wt%至80wt%的洗涤剂水分汇组分。该多酶共颗粒可以包含本发明的酶和一种或多种选自由以下组成的组的酶:蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣多糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶及其混合物。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选织物表面)的方法,该方法包括以下步骤:(i)将所述表面在水性洗涤液中与如本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触,(ii)冲洗和/或干燥该表面。
本发明的实施例涉及包含糖基水解酶(例如Glyco_hydro_114糖基水解酶)的酶颗粒(granule/particle)。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一个或多个包衣(外层)构成。通常,该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm,具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以包括另外材料如填充剂、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、黏度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。该核心可以包括粘合剂,如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。核心可以由惰性颗粒组成,其中酶被吸附到该惰性颗粒之内,或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性颗粒的表面上。该核心的直径可以是20-2000μm,具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以通过粒化成分的共混物来制备,例如通过包括造粒技术的方法,如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床附聚、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、滚圆、粒度减小、转鼓造粒和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册];C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大];第1卷;1980;Elsevier[爱思唯尔]。
该酶颗粒(granule/particle)的核心可以被至少一个包衣包围,例如,以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他合适的包衣材料,如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于WO 93/07263和WO 97/23606中。可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1%(例如,至少0.5%、1%或5%)的量施用。该量至多可以是100%、70%、50%、40%或30%。该包衣优选是至少0.1μm厚,具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一个实施例中,包衣的厚度低于100μm。在另一个实施例中,包衣的厚度低于60μm。在甚至更具体的实施例中,包衣的总厚度是低于40μm。该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣,使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未涂覆的区域。该层或包衣在厚度上应当均匀。该包衣可以进一步含有其他如本领域已知的材料,例如,填充剂、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂,如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。盐包衣按重量w/w计可以包括至少60%的盐,例如,按重量w/w计,至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%。该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加,或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm,如少于10μm或少于5μm)中添加。该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的,并且可具有在20℃下在100g水中至少0.1克的溶解度,优选地至少0.5g/100g水,例如,至少1g/100g水,例如,至少5g/100g水。该盐可以是无机盐,例如,硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子,如6个或更少的碳原子)如柠檬酸、丙二酸或乙酸的盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子,如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言,可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60%的恒定湿度,具体地超过70%、超过80%或超过85%,或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如,无水物)。该盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃=76%)、Na2CO3(CH20℃=92%)、NaNO3(CH20℃=73%)、Na2HPO4(CH20℃=95%)、Na3PO4(CH25℃=92%)、NH4Cl(CH20℃=79.5%)、(NH4)2HPO4(CH20℃=93,0%)、NH4H2PO4(CH20℃=93.1%)、(NH4)2SO4(CH20℃=81.1%)、KCl(CH20℃=85%)、K2HPO4(CH20℃=92%)、KH2PO4(CH20℃=96.5%)、KNO3(CH20℃=93.5%)、Na2SO4(CH20℃=93%)、K2SO4(CH20℃=98%)、KHSO4(CH20℃=86%)、MgSO4(CH20℃=90%)、ZnSO4(CH20℃=90%)以及柠檬酸钠(CH25℃=86%)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。该盐可以处于无水形式,或者它可以是水合盐,即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物,如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4·7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。优选地,作为盐溶液使用该盐,例如使用流化床。
本发明的一个实施例提供了颗粒,该颗粒包含:
(a)核心,该核心包含根据本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶,以及
(b)任选地包衣,该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
本发明的一个实施例涉及颗粒,该颗粒包含:
(a)核心,该核心包含与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95或SEQ ID NO 96中所示的氨基酸序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或100%序列同一性的Glyco_hydro_114糖基水解酶,以及
(b)任选地包衣,该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
医用清洁
本发明还涉及清洁医疗装置的方法,并且涉及包含糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)和至少一种佐剂成分的组合物用于清洁医疗装置的用途。本发明还涉及防止在医疗装置(例如留置医疗装置或植入物)上形成生物膜的方法,该方法包括用至少一种Glyco_114糖基水解酶涂覆该装置。
本发明的一个实施例涉及防止在医疗装置(例如留置医疗装置或植入物)上形成生物膜的方法,该方法包括用至少一种Glyco_114糖基水解酶涂覆该装置。
适用于医用清洁和用于医用清洁的组合物中的多肽如上所述,并且包括:包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)的多肽,和/或选自由以下组成的组的具有SEQ ID NO 3、SEQID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95或SEQ ID NO 96的氨基酸序列的多肽的多肽,以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
本发明的一个方面涉及清洁医疗装置的方法,其中该方法包括
a)使该医疗装置与包含糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)的组合物接触持续有效清洁该医疗装置的一段时间;
b)清洁该医疗装置;以及
c)任选地对该医疗装置进行消毒。
本发明的一个方面涉及清洁医疗装置的方法,其中该方法包括
a)使该医疗装置与包含Glyco_hydro_114糖基水解酶的组合物接触持续有效清洁该医疗装置的一段时间,该糖基水解酶包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),和/或选自由以下组成的组的具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95或SEQ ID NO 96的氨基酸序列的Glyco_hydro_114糖基水解酶,以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽;
b)清洁该医疗装置;以及
c)任选地对该医疗装置进行消毒。
一个实施例涉及包含糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)以及优选地佐剂成分的组合物,该糖基水解酶包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),和/或选自由以下组成的组的具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96的氨基酸序列的糖基水解酶,以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。该组合物可以是抗生物污损组合物,并且该组合物可以是清洁组合物或药物组合物。佐剂成分可以是适用于例如清洁组合物或药物组合物的任何赋形剂。佐剂/赋形剂在本领域技术人员的选择范围内。佐剂成分可以选自下组,该组由以下组成:表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂、以及增溶剂。这些组合物可以用于使例如医疗装置表面上的生物膜脱落或防止生物膜形成。
本发明的一个实施例涉及包含糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)以及优选地佐剂成分的组合物用于清洁医疗装置或植入物的用途,该糖基水解酶包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),和/或选自由以下组成的组的具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO96的氨基酸序列的糖基水解酶,以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
医疗装置的特征可以在于将所述装置的患者可接触表面的至少一部分用包含本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶的组合物进行涂覆。医疗装置或植入物可以是易于形成生物膜的任何装置或植入物。医疗装置可以选自下组,该组由以下组成:导管如中央静脉导管、血管内导管、导尿管、希克曼导管、腹膜透析管、气管导管、或其中该装置是机械心脏瓣膜、心脏起搏器、动静脉分流、巩膜扣、人工关节、鼓膜造孔插管、气管造口管、声音假体、阴茎假体、人工尿道括约肌、合成的耻骨阴道吊带、手术用缝线、骨锚、骨螺钉、人工晶状体、接触镜、宫内节育器、主动脉股动脉移植物、血管移植物、针、Luer-Lok连接器、无针连接器以及外科器械。
用途
具有水解活性的本发明的多肽可用于清洁(例如深度清洁)物品(例如纺织品)。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)在清洁过程(例如衣物洗涤和/或餐具洗涤)中的用途。
在优选的实施例中,本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ IDNO 97)中的一个或多个。在优选的实施例中,Glyco_hydro_114糖基水解酶包含选自由以下组成的组的基序中的一个或多个:GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)、DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)、[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)、[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO 103)以及[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)。
在本发明的一些实施例中,涉及根据本发明的糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)用于防止、减少或去除恶臭的用途。本发明的一些实施例涉及本发明的多肽用于对经过多次洗涤的纺织品进行抗再沉积的防止或减少和改进白度的用途。本发明的一个实施例涉及根据本发明的糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)用于深度清洁物品的用途,其中物品是纺织品。本发明的一个实施例涉及根据本发明的糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽)的以下用途:
(i)用于防止、减少或去除该物品的粘性;
(ii)用于预处理该物品上的污渍;
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
(iv)用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
(v)用于维持或改进该物品的白度;
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。
本发明的一个实施例涉及根据本发明的糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽)用于深度清洁物品的用途,其中物品是纺织品。本发明的一个实施例涉及糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶多肽)的以下用途:
(i)用于防止、减少或去除该物品的粘性;
(ii)用于预处理该物品上的污渍;
(iii)用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
(iv)用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
(v)用于维持或改进该物品的白度;
(vi)用于防止、减少或去除该物品的恶臭,任选地其中该物品是纺织品,其中该糖基水解酶多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶的以下用途:
i.用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分;
iii.用于减少或去除该物品上的菌膜污渍;
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
v.用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
vi.用于维持或改进该物品的白度;
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶的以下用途:
i.用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分;
iii.用于减少或去除该物品上的菌膜污渍;
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
v.用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
vi.用于维持或改进该物品的白度;
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
一个优选的实施例涉及Glyco_hydro_114糖基水解酶的以下用途:
i.用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii.用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分;
iii.用于减少或去除该物品上的菌膜污渍;
iv.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
v.用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
vi.用于维持或改进该物品的白度;
vii.用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品,并且其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
本发明的多肽特别适用于清洁过程(例如衣物洗涤),其中多肽有效地减少生物膜组分,例如包含菌膜的生物膜,如以下实例中所示。本发明的一个实施例涉及用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于包含Glyco_hydro_114糖基水解酶的洗涤液或包含Glyco_hydro_114糖基水解酶的组合物;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
本发明的一个优选的实施例涉及用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
d.将物品暴露于包含糖基水解酶(优选Glyco_hydro_114糖基水解酶)的洗涤液或包含糖基水解酶的组合物;其中糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 70的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ee)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(ff)多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
e.完成至少一个洗涤循环;以及
f.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
一个优选的实施例涉及用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于包含Glyco_hydro_114糖基水解酶的洗涤液或包含Glyco_hydro_114糖基水解酶的组合物,其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)多肽,该多肽与SEQ ID NO 40的多肽具有100%序列同一性;
(m)多肽,该多肽与SEQ ID NO 43的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(n)多肽,该多肽与SEQ ID NO 46的多肽具有100%序列同一性;
(o)多肽,该多肽与SEQ ID NO 49的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(p)多肽,该多肽与SEQ ID NO 52的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(q)多肽,该多肽与SEQ ID NO 55的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(r)多肽,该多肽与SEQ ID NO 58的多肽具有至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(s)多肽,该多肽与SEQ ID NO 61的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(t)多肽,该多肽与SEQ ID NO 64的多肽具有至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(u)多肽,该多肽与SEQ ID NO 67的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(v)多肽,该多肽与SEQ ID NO 73的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(w)多肽,该多肽与SEQ ID NO 76的多肽具有至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(x)多肽,该多肽与SEQ ID NO 79的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(y)多肽,该多肽与SEQ ID NO 82的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(z)多肽,该多肽与SEQ ID NO 85的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(aa)多肽,该多肽与SEQ ID NO 88的多肽具有至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(bb)多肽,该多肽与SEQ ID NO 91的多肽具有至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(cc)多肽,该多肽与SEQ ID NO 94的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(dd)多肽,该多肽与SEQ ID NO 95的多肽具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;以及
多肽,该多肽与SEQ ID NO 96的多肽具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
在以下段落中进一步概述本发明:
1.多肽用于深度清洁物品的用途,该多肽包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ IDNO 104)中的一个或多个,其中该物品是纺织品。
2.根据段落1所述的用途,用于防止、减少或去除该物品的粘性。
3.根据段落1或2中任一项所述的用途,用于预处理该物品上的污渍。
4.根据段落1-3中任一项所述的用途,用于防止、减少或去除洗涤周期期间污垢的再沉积。
5.根据段落1-4中任一项所述的用途,用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着。
6.根据前述段落中任一项所述的用途,用于维持或改进所述物品的白度。
7.根据前述段落中任一项所述的用途,其中从该物品减少或去除恶臭。
8.根据前述组合物段落中任一项所述的用途,其中该表面是纺织品表面。
9.根据前述组合物段落中任一项所述的用途,其中该纺织品由棉、棉/聚酯、聚酯、聚酰胺、聚丙烯和/或丝绸制成。
10.根据前述段落中任一项所述的用途,其中该多肽是根据段落68-108所述的多肽。
11.一种组合物,该组合物包含多肽和清洁成分或佐剂成分,该多肽包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)中的一个或多个。
12.根据段落11所述的组合物,其中该多肽是根据段落68-108所述的多肽。
13.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中洗涤剂佐剂成分选自由以下组成的组:表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物软化剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
14.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物包含从约5wt%至约50wt%、从约5wt%至约40wt%、从约5wt%至约30wt%、从约5wt%至约20wt%、从约5wt%至约10wt%的阴离子表面活性剂,优选地选自直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(例如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或脂肪酸盐(皂)的二酯和单酯及其组合。
15.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物包含从约10wt%至约50wt%的至少一种助洗剂,优选地选自柠檬酸、甲基甘氨酸-N,N-二乙酸(MGDA)和/或谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)及其混合物。
16.根据前述段落中任一项所述的组合物,该组合物包含从约5wt%至约40wt%的非离子型表面活性剂、和从约0wt%至约5wt%的阴离子型表面活性剂。
17.根据段落16所述的组合物,其中该非离子型表面活性剂选自:醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))及其组合。
18.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种酶,该组由以下组成:蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和氧化酶。
19.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物是条,均匀的片剂,具有两个或更多个层的片剂,具有一个或多个室的袋,规则的或压缩的粉末,颗粒,膏,凝胶,或规则的、压缩的或浓缩的液体。
20.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该组合物是选自液体洗涤剂、粉末洗涤剂和颗粒洗涤剂组合物的清洁组合物。
21.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO97)、([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQ ID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104)中的一个或多个,并且其中该多肽选自由以下组成的组:具有SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95、SEQ ID NO 96的氨基酸序列的多肽,以及与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
22.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 3所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
23.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 6所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
24.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 9所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
25.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 12所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
26.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 15所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
27.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 18所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
28.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 21所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
29.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 24所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
30.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 27所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
31.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 30所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
32.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 33所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
33.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 40所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
34.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 43所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
35.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 46所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
36.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 49所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
37.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 52所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
38.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 55所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
39.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 58所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
40.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 61所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
41.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 64所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
42.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 67所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
43.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 70所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
44.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 73所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
45.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 76所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
46.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 79所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
47.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 82所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
48.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 85所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
49.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 88所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
50.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 91所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
51.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 94所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
52.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 95所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
53.根据前述组合物段落中任一项所述的组合物,其中该多肽包含一个或多个基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)并且包含SEQ ID NO 96所示的氨基酸序列或与其具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽。
54.一种用于洗涤物品的洗涤方法,该方法包括以下步骤:
a.将一种物品暴露于一种洗涤液,该洗涤液包含根据段落68-108所述的多肽或根据段落11-53中任一项所述的组合物;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
55.一种处理物品的方法,其中该物品优选为纺织品,所述方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于选自由以下组成的组的多肽:与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 63、SEQID NO 66、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 81、SEQID NO 84、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 93、SEQ ID NO 95以及SEQ ID NO 96的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽;包含所述多肽的洗涤液或根据任一前述段落所述的组合物。
56.根据任一前述段落所述的方法,其中该洗涤液的pH在1至11的范围内。
57.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该洗涤液的pH在5.5至11的范围内,如在7至9的范围内,在7至8的范围内或在7至8.5的范围内。
58.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该洗涤液的温度在5℃至95℃的范围内、或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内、在20℃至40℃的范围内、在15℃至30℃的范围内或在20℃至30℃的范围内。
59.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该洗涤液的温度是从约20℃至约40℃。
60.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该洗涤液的温度是约15℃至约30℃。
61.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中将该物品上存在的污渍用根据段落68-108所述的多肽或根据段落11-53中任一项所述的洗涤剂组合物进行预处理。
62.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该物品的粘性被减少。
63.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中污垢再沉积被减少。
64.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中污垢在该物品上的附着被减少或去除。
65.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中该物品的白度被维持或改进。
66.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中从该物品减少或去除恶臭。
67.根据前述方法段落中任一项所述的方法,其中在该洗涤液中具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽的浓度为每升洗涤液在0.002mg/L至2mg/L、如0.02mg/L至2mg/L、如0.2mg/L至2mg/L的范围内、或在0.0001mg/L至10mg/L的范围内、或在0.001mg/L至10mg/L的范围内、或在0.01mg/L至10mg/L的范围内、或在0.1mg/L至10mg/L的范围内;任选地本发明的多肽的浓度为在总洗涤剂浓度中0.0001%至2wt%,如0.001至0.1wt%、如0.005至0.1wt%、如0.01至0.1wt%、如0.01至0.5wt%、或最优选的0.002至0.09wt%。
68.一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽,该多肽选自由以下组成的组:
a.与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQID NO 57、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 63、SEQ ID NO 66、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 72、SEQID NO 75、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 90、SEQID NO 93的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽或与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO94、SEQ ID NO 95或SEQ ID NO 96中所示的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多肽;
b.由如下多核苷酸编码的多肽,该多核苷酸在低严格条件下与以下杂交:
i.SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQID NO 56、SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO 71、SEQID NO 74、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 89、SEQID NO 92的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列,或
iii.(i)或(ii)的全长互补序列;
c.由与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO31、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO53、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO71、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO89、SEQ ID NO 92的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%序列同一性的多核苷酸编码的多肽;
d.SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQID NO 94、SEQ ID NO 95和SEQ ID NO 96中所示的成熟多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失和/或插入;以及
e.(a)、(b)、(c)、或(d)的多肽的片段,该片段包含基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)、([ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98)、DTLDS[YF](SEQ ID NO 99)、G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQID NO 100)或DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101)中的一个或多个或基序GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)、GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)、([SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQ ID NO 102)或[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ IDNO 104)中的一个或多个。
69.根据段落68所述的多肽,该多肽具有与SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO8、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO 29、SEQ ID NO 32、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO48、SEQ ID NO 51、SEQ ID NO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 63、SEQ ID NO66、SEQ ID NO 69、SEQ ID NO 72、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO84、SEQ ID NO 87、SEQ ID NO 90、SEQ ID NO 93的成熟多肽或与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95和SEQ IDNO 96中所示的成熟多肽至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
70.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 2的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 3的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
71.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 5的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 6的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
72.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 8的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 9的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
73.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 11的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 12的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
74.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 14的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 15的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
75.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 17的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 18的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
76.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 20的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 21的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
77.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 23的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 24的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
78.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 26的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 27的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
79.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 29的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 30的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
80.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 32的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 33的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
81.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 39的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 40的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
82.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 42的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 43的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
83.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 45的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 46的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
84.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 48的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 49的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
85.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 51的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 52的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
86.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 54的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 55的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
87.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 57的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 58的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
88.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 60的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 61的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
89.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 63的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 64的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
90.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 66的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 67的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
91.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 69的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 70的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
92.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 72的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 73的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
93.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 75的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 76的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
94.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 78的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 79的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
95.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 81的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 82的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
96.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 84的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 85的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
97.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 87的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 88的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
98.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 90的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 91的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
99.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 93的成熟多肽或与示出于SEQ ID NO 94的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
100.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与示出于SEQ ID NO 95的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
101.根据段落68或69所述的多肽,该多肽与示出于SEQ ID NO 96的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
102.根据段落68至101中任一项所述的多肽,该多肽由以下多核苷酸编码,该多核苷酸在低严格条件、低-中严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与以下杂交:
i.SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQID NO 56、SEQ ID NO 59、SEQ ID NO 62、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO 71、SEQID NO 74、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 89、SEQID NO 92的成熟多肽编码序列;
ii.其cDNA序列,或
iii.(i)或(ii)的全长互补序列。
103.根据段落68至102中任一项所述的多肽,该多肽由与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQ ID NO44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 59、SEQ ID NO62、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO 71、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 77、SEQ ID NO80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 92的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性的多核苷酸编码。
104.根据段落68至103中任一项所述的多肽,该多肽包含以下或由以下组成:SEQID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ IDNO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ IDNO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ IDNO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ IDNO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ IDNO 95、SEQ ID NO 96或SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 11、SEQ IDNO 14、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 20、SEQ ID NO 23、SEQ ID NO 26、SEQ ID NO 29、SEQ IDNO 32、SEQ ID NO 39、SEQ ID NO 42、SEQ ID NO 45、SEQ ID NO 48、SEQ ID NO 51、SEQ IDNO 54、SEQ ID NO 57、SEQ ID NO 60、SEQ ID NO 63、SEQ ID NO 66、SEQ ID NO 69、SEQ IDNO 72、SEQ ID NO 75、SEQ ID NO 78、SEQ ID NO 81、SEQ ID NO 84、SEQ ID NO 87、SEQ IDNO 90、SEQ ID NO 93的成熟多肽。
105.根据段落68至104中任一项所述的多肽,该多肽是具有SEQ ID NO 3、SEQ IDNO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ IDNO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 43、SEQ IDNO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ IDNO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ IDNO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、SEQ IDNO 96的任意多肽的变体,该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失和/或插入。
106.根据段落68至105中任一项所述的多肽,用作药物。
107.根据段落68至106中任一项所述的多肽用于治疗或预防细菌感染,优选地所述细菌感染是由革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌引起的感染,进一步优选地,所述细菌感染选自由以下组成的组:葡萄球菌属物种(例如,表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌)、肠球菌属物种(例如,粪肠球菌)、埃希氏菌属物种(例如,大肠杆菌)、李斯特菌属物种(例如,单核细胞增生李斯特氏菌)、假单胞菌属物种(例如,铜绿假单胞菌)、芽孢杆菌属物种、沙门氏菌属物种、凝固酶阴性葡萄球菌,克雷伯氏菌属物种(例如,肺炎克雷伯氏菌)感染。
108.根据段落68至107中任一项所述的多肽,用于治疗或预防选自由以下组成的组的疾病:囊性纤维化肺炎(例如,由铜绿假单胞菌和/或洋葱伯克霍尔德菌引起)、类鼻疽(例如,由类鼻疽假单孢菌引起)、坏死性筋膜炎(例如,由A群链球菌引起)、肌肉骨骼感染(例如,由葡萄球菌和其他革兰氏阳性球菌引起)、中耳炎(例如,由流感嗜血杆菌引起)、胆道感染(例如,由大肠杆菌和其他肠道细菌引起)、尿管膀胱炎(例如,由大肠杆菌和其他革兰氏阴性杆菌引起)、细菌性前列腺炎(例如,大肠杆菌和其他革兰氏阴性细菌)、牙周炎(例如,由革兰氏阴性口腔厌氧细菌引起)、龋齿(例如,由链球菌属物种和其他产酸性革兰氏阳性球菌引起)。
109.一种多核苷酸,该多核苷酸编码根据段落68至108中任一项所述的多肽。
110.一种核酸构建体或表达载体,该核酸构建体或表达载体包含根据段落109所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主内产生的一个或多个控制序列。
111.一种重组宿主细胞,该重组宿主细胞包含根据段落109所述的多核苷酸,该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽产生的一个或多个控制序列。
112.一种产生根据段落68-108中任一项所述的多肽的方法,该方法包括:在有益于产生该多肽的条件下培养细胞,该细胞以其野生型形式产生该多肽。
113.根据段落112所述的方法,该方法进一步包括回收该多肽。
114.一种产生根据段落68至108中任一项所述的多肽的方法,该方法包括:在有益于产生该多肽的条件下培养根据段落111所述的宿主细胞。
115.根据段落114所述的方法,该方法进一步包括回收该多肽。
116.一种核酸构建体或表达载体,该核酸构建体或表达载体包括编码蛋白质的可操作地连接至根据段落109所述的多核苷酸的基因,其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
117.一种重组宿主细胞,该重组宿主细胞包括编码蛋白质的可操作地连接至根据段落109所述的多核苷酸的基因,其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
118.一种产生蛋白质的方法,该方法包括:在有益于产生该蛋白质的条件下培养重组宿主细胞,该重组宿主细胞包括编码蛋白质的可操作地连接至根据段落109所述的多核苷酸上的基因,其中该基因对于编码该信号肽的多核苷酸而言是外源的。
119.根据段落118所述的方法,该方法进一步包括回收该蛋白质。
120.根据段落54-67中任一项所述的方法洗涤的物品。
在以下段落中进一步描述本发明
段落1一种组合物,该组合物包含每克组合物至少0.01mg的活性多肽和至少一种佐剂成分,其中该多肽包含Glyco_hydro_114结构域。
段落2根据段落1所述的组合物,其中该多肽还包含CE4结构域。
段落3根据前述段落中任一项所述的组合物,其中该多肽属于FLD亚家族并且包含基序[GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)中的一个或多个。
段落4根据段落1或2所述的组合物,其中该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、1SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQID NO 27、SEQ ID NO 30或SEQ ID NO 33所示的成熟多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落5根据段落1或3中任一项所述的组合物,
(a)该组合物包含SEQ ID NO 3、或SEQ ID NO 2的成熟多肽或由其组成;
(b)该组合物包含SEQ ID NO 6、或SEQ ID NO 5的成熟多肽或由其组成;
(c)该组合物包含SEQ ID NO 9、或SEQ ID NO 8的成熟多肽或由其组成;
(d)该组合物包含SEQ ID NO 12、或SEQ ID NO 11的成熟多肽或由其组成;
(e)该组合物包含SEQ ID NO 15、或SEQ ID NO 14的成熟多肽或由其组成;
(f)该组合物包含SEQ ID NO 18、或SEQ ID NO 17的成熟多肽或由其组成;
(g)该组合物包含SEQ ID NO 21、或SEQ ID NO 20的成熟多肽或由其组成;
(h)该组合物包含SEQ ID NO 24、或SEQ ID NO 23的成熟多肽或由其组成;
(i)该组合物包含SEQ ID NO 27、或SEQ ID NO 26的成熟多肽或由其组成;
(j)该组合物包含SEQ ID NO 30、或SEQ ID NO 29的成熟多肽或由其组成;或
(k)该组合物包含SEQ ID NO 33、或SEQ ID NO 32的成熟多肽或由其组成。
段落6根据段落1至5中任一项所述的组合物,其中该组合物是清洁组合物,例如衣物或餐具洗涤组合物。
段落7根据段落6所述的组合物,其中该佐剂成分选自由以下组成的组:
a)至少一种助洗剂,
b)至少一种表面活性剂,和
c)至少一种漂白组分。
段落8一种具有水解活性和/或脱乙酰酶活性的多肽,其中该多肽属于FLD亚家族、包含基序[GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)、AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)或GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97)中的一个或多个,其中该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽与SEQ ID NO 3的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(b)多肽,该多肽与SEQ ID NO 6的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(c)多肽,该多肽与SEQ ID NO 9的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(d)多肽,该多肽与SEQ ID NO 12的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(e)多肽,该多肽与SEQ ID NO 15的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(f)多肽,该多肽与SEQ ID NO 18的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(g)多肽,该多肽与SEQ ID NO 21的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(h)多肽,该多肽与SEQ ID NO 24的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(i)多肽,该多肽与SEQ ID NO 27的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(j)多肽,该多肽与SEQ ID NO 30的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(k)多肽,该多肽与SEQ ID NO 33的多肽具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性;
(l)选自由以下组成的组的多肽的变体:SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33,其中该变体具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并包括在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合;
(m)多肽,该多肽包含(a)至(l)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签;
(n)多肽,该多肽包含(a)至(l)的多肽以及1至10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸;以及
(o)(a)至(l)的多肽的片段,该片段具有水解活性和/或脱乙酰酶活性并且具有成熟多肽的至少90%的长度。
段落9根据段落8所述的多肽,该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO27、SEQ ID NO 30、或SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落10根据段落8至9中任一项所述的多肽,该多肽由以下多核苷酸编码,该多核苷酸与SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28或SEQ ID NO 31的成熟多肽编码序列具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列同一性。
段落11如段落8至10中任一项所述的多肽,该多肽选自由以下组成的组:
(a)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 3、或SEQ ID NO 2的成熟多肽或由其组成;
(b)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 6、或SEQ ID NO 5的成熟多肽或由其组成;
(c)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 9、或SEQ ID NO 8的成熟多肽或由其组成;
(d)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 12、或SEQ ID NO 11的成熟多肽或由其组成;
(e)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 15、或SEQ ID NO 14的成熟多肽或由其组成;
(f)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 18、或SEQ ID NO 17的成熟多肽或由其组成;
(g)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 21、或SEQ ID NO 20的成熟多肽或由其组成;
(h)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 24、或SEQ ID NO 23的成熟多肽或由其组成;
(i)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 27、或SEQ ID NO 26的成熟多肽或由其组成;
(j)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 30、或SEQ ID NO 29的成熟多肽或由其组成;以及
(k)多肽,该多肽包含SEQ ID NO 33、或SEQ ID NO 32的成熟多肽或由其组成。
段落12一种用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
a.将物品暴露于洗涤液,该洗涤液包含根据段落8至11中任一项所述的多肽或根据段落1至7中任一项所述的组合物;
b.完成至少一个洗涤循环;以及
c.任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
段落13包含Glyco_hydro_114结构域的多肽,优选包含Glyco_hydro_114结构域和CE4结构域的多肽在清洁过程,例如衣物洗涤和/或餐具洗涤中的用途。
段落14包含Glyco_hydro_114结构域的多肽,优选包含Glyco_hydro_114结构域和CE4结构域的多肽的以下用途:
i.用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii.用于预处理该物品上的污渍;
iii.用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
iv.用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
v.用于维持或改进该物品的白度;
vi.用于防止、减少或去除该物品的恶臭,
其中该物品是纺织品。
段落15根据前述段落中任一项所述的用途,其中该多肽选自由以下组成的组:与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30或SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60%序列同一性的多肽。
段落16根据段落14所述的用途,其中该多肽与SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ IDNO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO 21、SEQ ID NO 24、SEQ IDNO 27、SEQ ID NO 30或SEQ ID NO 33中所示的多肽具有至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%的序列同一性。
段落17根据段落8至11中任一项所述的多肽用于深度清洁物品的用途,其中该物品是纺织品。
应当理解的是贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低的数值限度,如同此类较低数值限度在此被明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高的数值限度,如同此类较高数值限度本文被明确写出。本说明书中所给出的每个数值范围将包括落入在这样更宽泛数值范围内的每一狭小的范围,如同此类狭小的数值范围都在本文被明确写出。
实例
标准洗涤剂
通过将含有12%LAS、1.1%AEO Biosoft N25-7(NI)、7%AEOS(SLES)、6%MPG、3%乙醇、3%TEA(三乙醇胺)、2.75%可可皂、2.75%大豆皂、2%甘油、2%氢氧化钠、2%柠檬酸钠、1%甲酸钠、0.2%DTMPA和0.2%PCA(所有的百分数都是w/w(重量体积))的3.33g/l标准洗涤剂A溶解在具有硬度15dH的水中制备标准洗涤剂A洗涤液(100%)。
通过将含有NaOH 0.87%、MPG(一丙醇)6%、甘油2%、皂-大豆2.75%、皂-可可2.75%、PCA(Sokalon CP-5)0.2%、AEO Biosoft N25-7(NI)16%、甲酸钠1%、柠檬酸钠2%、DTMPA0.2%、乙醇(96%)3%、用NaOH或柠檬酸调节pH值添加水至100%(所有的百分数都是w/w(重量体积))的3.33g/l非离子型洗涤剂溶解在具有硬度15dH的水中制备Triple-20非离子型标准洗涤剂(60%表面活性剂)。
标准洗涤剂MC:制备含有5%MPG(丙二醇)、5%Pluronic PE 4300(PO/EO嵌段聚合物;70%/30%,约1750g/mol)、2%Plurafac LF 305(脂肪醇烷氧基化物;C6-10+EO/PO)、1%MGDA(甲基甘氨酸二乙酸、1%TEA(三乙醇胺)(所有的百分数都是w/w)的医用清洁标准洗涤剂(标准洗涤剂MC)。用磷酸将pH调节至8.7。
测定
可以按如Marmont等人(2017)“PelA and PelB proteins form a modificationand secretion complex essential for Pel polysaccharide-dependent biofilmformation in Pseudomonas aeruginosa[PelA和PelB蛋白形成铜绿假单胞菌中菌膜多糖依赖性生物膜形成所必需的修饰和分泌复合物]”,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]292,19411-19422中所述或如Colvin,K.M.等人(2013)“PelA deacetylase activity isrequired for Pel polysaccharide synthesis in Pseudomonas aeruginosa[PelA脱乙酰酶活性是铜绿假单胞菌中菌膜多糖合成所必需的]”.J.Bacteriol.[细菌学杂志]195,2329-2339中所述的pNP-乙酸盐测定法来测量本发明的Glyco_hydro_114糖基水解酶的活性。
洗涤测定
迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)标准洗涤系统
迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤系统,其是中等规模标准洗涤系统,它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗涤机并且在一次实验过程中,每个试管将包含一种具有特定的有待测试的洗涤剂/酶系统连同在关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
LOM标准洗涤系统主要用于洗涤剂和酶的中等规模测试,在例如欧洲洗涤条件下。在LOM实验中,因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此,LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前面加载型洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。在迷你LOM中,洗涤是在置于斯图尔特(Stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
实例1多肽的克隆和表达
编码SEQ ID NO 1、SEQ ID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQ ID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQID NO 3、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 18、SEQ IDNO 21、SEQ ID NO 24、SEQ ID NO 27、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ IDNO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52、SEQ ID NO 55、SEQ ID NO 58、SEQ IDNO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 73、SEQ ID NO 76、SEQ IDNO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 85、SEQ ID NO 88、SEQ ID NO 91和SEQ ID NO 94的基因的DNA从不同国家收集的土壤样品中分离的细菌菌株和环境细菌群落中分离出(见表1)。将来自不同菌株和细菌群落的染色体DNA使用Illumina技术进行全基因组测序。针对具有糖基水解酶结构域的蛋白质序列分析基因组序列(根据CAZY定义)。在基因组中鉴别了11个含有Glyco_hydro_114结构域的序列,如PFAM(PF03537,Pfam版本31.0,Finn(2016).NucleicAcids Research[核酸研究],Database Issue[数据库卷]44:D279-D285)中所定义的。
表1:
供体 原产国
SEQ ID NO 3 假单胞菌属物种-62208 美国
SEQ ID NO 6 环境细菌群落A 美国
SEQ ID NO 9 热海栖热菌 中国
SEQ ID NO 15 伯克霍尔德菌属物种-63093 丹麦
SEQ ID NO 18 大孢粘球菌 丹麦
SEQ ID NO 12 环境细菌群落E 丹麦
SEQ ID NO 21 食五环芳烃加利西亚单胞菌 丹麦
SEQ ID NO 24 科克斯野野村氏菌 菲律宾
SEQ ID NO 27 鲁特介斯糖霉菌 中国
SEQ ID NO 30 环境细菌群落E 丹麦
SEQ ID NO 33 吩嗪副伯克霍尔德菌 丹麦
SEQ ID NO 40 环境细菌群落LA 丹麦
SEQ ID NO 43 变绿粘球菌 德国
SEQ ID NO 46 橙色粘球菌 丹麦
SEQ ID NO 49 大孢粘球菌 丹麦
SEQ ID NO 52 叶柄粘球菌 丹麦
SEQ ID NO 55 大孢粘球菌 丹麦
SEQ ID NO 58 seleniipraecipitans假单胞菌 美国
SEQ ID NO 61 米氏假单胞菌 美国
SEQ ID NO 64 皱褶假单胞菌 美国
SEQ ID NO 67 大海假单胞菌 美国
SEQ ID NO 70 铜绿假单胞菌 美国
SEQ ID NO 73 灰褐链霉菌 西班牙
SEQ ID NO 76 解木糖赖氨酸芽孢杆菌 丹麦
SEQ ID NO 79 人参土膨胀芽孢杆菌 丹麦
SEQ ID NO 82 耐硼赖氨酸芽孢杆菌 美国
SEQ ID NO 85 水解产微球茎菌 美国
SEQ ID NO 88 约束肉食杆菌亚种吉利钦思凯伊 丹麦
SEQ ID NO 91 环境细菌群落PA 丹麦
SEQ ID NO 94 堆肥假单胞菌 丹麦
SEQ ID NO 95 吩嗪副伯克霍尔德菌 丹麦
SEQ ID NO 96 伯克霍尔德菌属物种-63093 丹麦
实例2:本发明多肽的克隆和表达使用含有突出端克隆载体的特异性引物,通过标准PCR技术从相应细菌菌株的基因组DNA扩增编码Glyco_hydro_114基因SEQ ID NO 1、SEQID NO 4、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 19、SEQID NO 22、SEQ ID NO 25、SEQ ID NO 28、SEQ ID NO 31、SEQ ID NO 38、SEQ ID NO 41、SEQID NO 44、SEQ ID NO 47、SEQ ID NO 50、SEQ ID NO 53、SEQ ID NO 56、SEQ ID NO 59、SEQID NO 62、SEQ ID NO 65、SEQ ID NO 68、SEQ ID NO 71、SEQ ID NO 74、SEQ ID NO 77、SEQID NO 80、SEQ ID NO 83、SEQ ID NO 86、SEQ ID NO 89、SEQ ID NO 92的成熟肽的DNA。如WO 12/025577中所述,将扩增的PCR片段插入到芽孢杆菌表达载体中。简言之,将编码基因的成熟肽的DNA框内克隆到克劳氏芽孢杆菌分泌信号(BcSP;具有以下氨基酸序列:MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA(SEQ ID NO 36))中。BcSP替代了该基因中的天然分泌信号。在BcSP序列的下游,引入亲和标签序列以便于纯化过程(His-标签;具有以下氨基酸序列:HHHHHHPR(SEQ ID NO 37)。因此,被表达的基因包括BcSP序列,其后是His-标签序列,随后是成熟的野生型Glyco_hydro_114基因序列。将最终表达质粒(BcSP-His-标签-Glyco_hydro_114)转化到枯草芽孢杆菌表达宿主中。在转化时将Glyco_hydro_114BcSP融合基因通过同源重组整合至枯草芽孢杆菌宿主细胞基因组中。在三联启动子系统的控制下表达该基因构建体(如描述于WO 99/43835中)。将编码氯霉素乙酰转移酶的基因用作标记物(如描述于Diderichsen等人,1993,Plasmid[质粒]30:312-315中)。在每ml补充有6毫克氯霉素的LB培养基琼脂上选择转化体。选择一个含有Glyco_hydro_114表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆,并且在旋转摇床上在500ml带挡板的锥形瓶中进行培养,每个锥形瓶含有100ml基于酵母提取物的培养基。在30℃至37℃的3-5天的培养时间后,通过离心收获含有酶的上清液并通过His-标签纯化对这些酶进行纯化。
实例3:His标签纯化方法
在5mL HisTrap Excel柱(通用电气医疗集团生命科学部(GE Healthcare LifeSciences))上,使用Ni2+作为金属离子,通过固定化金属层析(IMAC)纯化带有His-标签的Glyco_hydro_114酶。该纯化发生在pH 7下,并用咪唑对结合蛋白进行洗脱。通过SDS-PAGE检查纯化的酶的纯度,并且在50mM HEPES、100mM NaCl pH 7.0中缓冲液交换后通过280nm的吸光度确定酶的浓度。
实例4.液体标准洗涤剂对菌膜小块布样的迷你LOM深度清洁
从如下铜绿假单胞菌(DSM 19882)制备的生物膜细胞外聚合物菌膜的粗提物;将菌株在LB琼脂(pH 7.3)上重新划线并在环境温度下孵育3天。然后接种500mL的T-肉汤(10g/L BactoTM胰蛋白胨(211705,BD),5g/L氯化钠(31434,西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)))并在环境温度下静态孵育6天。小心地从烧瓶中取出生物膜菌膜,并通过离心进行沉淀(10分钟,16000g,25℃)。然后将沉淀重悬于3M NaCl中,剧烈涡旋并在环境温度下孵育15分钟以提取表面相关的聚合物。然后将细胞重新沉淀(10分钟,16000g,25℃)并回收含有菌膜的上清液。然后将上清液用无菌MilliQ水稀释三次。将提取物储存在-20℃直至进一步使用(称为菌膜提取物)。洗涤性能测定如下;将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A,65%聚酯/35%棉)上,并在环境温度下孵育15分钟。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管中,并将10mL洗涤液(15°dH水和0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884;西格玛奥德里奇公司)中,含3.33g/L液体标准A洗涤剂或非离子型标准洗涤剂)和5μg/ml一种或多种酶(适当时)添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液,并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。
使用Handheld Minolta CR-300测量色差(L)值,并展示在表2中。还指示了Δ值(L(用酶洗涤的小块布样)-L(没有用酶洗涤的小块布样))。
表2.PelA同系物在非离子型标准洗涤剂以及在标准A洗涤剂中的深度清洁效果
Figure BDA0002222285550001901
Figure BDA0002222285550001911
实例5:进化枝和系统发育树的构建
本发明的多肽具有水解酶活性,并且包含Glyco_hydro_114结构域以及簇(如进化枝)。如PFAM(PF03537,Pfam版本31.0,Finn(2016).Nucleic Acids Research[核酸研究],Database Issue[数据库卷]44:D279-D285)中所定义的,构建含有Glyco_hydro_114结构域的多肽序列的系统发育树。系统发育树是从包含至少一个Glyco_hydro_114结构域的成熟多肽序列的多重比对构建。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic AcidsResearch[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对,并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloS one[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。包含Glyco_hydro_114结构域的多肽包含若干个基序。一个实例是位于对应于假单胞菌属物种-62208(SEQ ID NO 3)中的位置113至117的位置处的GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34),其中在第117位的D是底物结合口袋的一部分和两个推定的催化位点残基之一。可以由本发明的多肽包含的另一个基序是位于对应于假单胞菌属物种-62208(SEQ ID NO 3)中的位置53至58的位置处的AYX[SET]XX[EAS](SEQ ID NO 35)。可以将含有Glyco_hydro_114结构域的多肽分成不同的子簇。子簇由一个或多个短序列基序定义,以及通过含有如PFAM(PF03537,Pfam版本31.0)中所定义的Glyco_hydro_114结构域定义。我们将包含基序GXXGX[FY][LYFI]D(SEQID NO 97)的一个子簇表示为FLD进化枝。含有Glyco_hydro_114结构域以及基序的所有多肽序列将被表示为属于FLD进化枝。
可以将FLD进化枝中的多肽进一步分成多个不同的子簇或进化枝,其中我们表示了下面列出的进化枝。下面详细描述每个进化枝的不同基序。
FLD进化枝的生成
如上所定义的构建含有Glyco_hydro_114结构域的多肽序列的系统发育树。系统发育树是从包含至少一个Glyco_hydro_114结构域的成熟多肽序列的多重比对构建。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic Acids Research[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对,并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloS one[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。使用系统发育树,可以将Glyco_hydro_114中的多肽分成不同的子簇,其中之一我们称之为FLD。
该子簇的特征基序是对应于SEQ ID NO 3中第110至117位的氨基酸GYAGLFLD的基序GXXGX[FY][LYFI]D(SEQ ID NO 97),其中在第117位的D是底物结合口袋的一部分和PelA的两个推定的催化位点残基之一。另一个催化位点残基位于SEQ ID NO 3的第175位。FLD进化枝的另外基序是对应于参考多肽(SEQ ID NO 3)中的氨基酸113至117的GX[FY][LYF]D(SEQ ID NO 34)。
NRG进化枝的生成
NRG进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于FLD进化枝。进化枝的多肽包含基序实例[ILFQV]N[RW]G[FL](SEQ ID NO 98),对应于SEQ ID NO 3的第155至159位处的氨基酸FNRGF,其中N和G(对应于SEQ ID NO 3的第156和158位)在NRG进化枝中是完全保守的。
NRG进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 15、SEQ IDNO 21、SEQ ID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ IDNO 67、SEQ ID NO 70、SEQ ID NO 76、SEQ ID NO 79、SEQ ID NO 82、SEQ ID NO 94、SEQ IDNO 95、和SEQ ID NO 96。
DTLDS进化枝的生成
DTLDS进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于NRG进化枝。所述进化枝的多肽包含基序实例DTLDS[YF](SEQ ID NO 99),对应于SEQ ID NO 3的氨基酸DTLDSF位置117至122,其中DTLDS(对应于SEQ ID NO 3的第117和121位)在DTLDS进化枝中是完全保守的,并且在第117位的D是底物结合口袋的一部分和两个推定的催化位点残基之一。
DTLDS进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 21、SEQID NO 33、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 58、SEQ ID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQID NO 70、SEQ ID NO 94、SEQ ID NO 95、和SEQ ID NO 96。
GVFLD进化枝的生成
GVFLD进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于DTLDS进化枝。进化枝的多肽包含基序实例G[VL]FLDTLDSF[QTH]L[LMQ](SEQID NO 100),对应于SEQ ID NO 3的氨基酸GLFLDTLDSFQLL位置113至125,其中D(对应于SEQID NO 3的第117位)在GVFLD进化枝中是完全保守的,是底物结合口袋的一部分和两个推定的催化位点残基之一。
GVFLD进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO 3、SEQ ID NO 40、SEQ ID NO 58、SEQID NO 61、SEQ ID NO 64、SEQ ID NO 67、SEQ ID NO 70、和SEQ ID NO 94。
DTVG进化枝的生成
DTVG进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于NRG进化枝。所述进化枝的多肽包含基序实例DT[VIMA][GD][DNW][VIL][DEN](SEQ ID NO 101),对应于SEQ ID NO 76中的氨基酸DTVGNIN、SEQ ID NO 76的第134至140位,其中D和T(对应于SEQ ID NO 76的第134和135位)在DTVG进化枝中是完全保守的。
DTVG进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 76和SEQ ID NO 82。
IGEAE进化枝的生成
IGEAE进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于FLD进化枝。所述进化枝的多肽包含基序实例[SETC]IG[EQA][ALI]EXY(SEQID NO 102),对应于SEQ ID NO 12的第262至269位的氨基酸EIGAIEEY,其中G和E(对应于SEQ ID NO 12的第264和267位)在IGEAE进化枝中是完全保守的。在第265位处的残基A是底物结合口袋的一部分。
IGEAE进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 18、SEQ IDNO 30、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52和SEQ ID NO 55。
QNSPEL进化枝的生成
QNSPEL进化枝包含细菌来源的具有水解酶活性的多肽,其含有Glyco_hydro_114结构域并且属于IGEAE进化枝。所述进化枝的多肽包含基序实例[QL]N[AS]PEL(SEQ ID NO103),对应于SEQ ID NO 12的第370至375位处的氨基酸QNSPEL,其中P、E和L(对应于SEQ IDNO 12的第373至375位)在QNSPEL进化枝中是完全保守的。该进化枝的另一个保守基序是[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE(SEQ ID NO 104),其位于SEQ ID NO 12中的第366至374位,并且对应于SEQ ID NO 12中的肽KVVPQNSPE。QNSPEL进化枝的多肽的实例是SEQ ID NO 12、SEQID NO 18、SEQ ID NO 30、SEQ ID NO 43、SEQ ID NO 46、SEQ ID NO 49、SEQ ID NO 52和SEQ ID NO 55。
包含在进化枝中的本发明的一些多肽的比对示于图1中。
在进化枝中的多肽的系统发育树示于图2、图3和图4中。
实例6生物膜去除活性
在本实例中将产生菌膜的铜绿假单胞菌菌株DSM19882用作标准微生物。将菌株在LB琼脂上重新划线并在30℃下孵育。将过夜培养物接种于10mL LB中,并将培养物在37℃和振荡条件下孵育16小时。随后将培养物在LBNS中稀释(1:100),加入96孔微量滴定板(每孔150μL,赛默科技公司(Thermo Scientific),目录号167008)中并插入Peg盖(NUNC-TSP,赛默科技公司,目录号445497)。将微量滴定板在26℃下、在静态条件下孵育24小时。孵育后,将peg盖在具有5°dH水硬度的MTP板中冲洗,并在26℃下用不含酶(对照)或含20μg/mL酶的LBNS转移至处理板持续1小时。随后将盖在水硬度中冲洗并用0.095%结晶紫(西格玛奥德里奇公司,目录号V5265)染色15分钟。染色后,将peg盖冲洗两次,移至干净的微量滴定板中,并且将剩余的染料用30%乙酸溶解。在595nm处读取吸光度。结果显示在表3中
表3:Glyco_hydro_114糖基水解酶减少生物膜的性质
Figure BDA0002222285550001941
Figure BDA0002222285550001951
所有测试的Glyco_hydro_114糖基水解酶在产生菌膜的铜绿假单胞菌菌株DSM19882上显示出减少生物膜的性质。
实例7液体标准洗涤剂A对菌膜小块布样的深度清洁
从如上所述的铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备的生物膜细胞外聚合物菌膜的粗提物。洗涤性能测定如下;将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上,并在环境温度下孵育15分钟。用3M NaCl点样对照小块布样。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管,并将10mL洗涤液(15°dH水和0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884;西格玛奥德里奇公司)中,含3.33g/L液体标准A洗涤剂)和2μg/ml酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液,并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量色差(L)值,并展示在表4中。还指示了洗涤性能(WP)值(L(用酶洗涤的小块布样)-L(没有用酶洗涤的小块布样))。
表4.PelA同系物(Glyco_hydro_114糖基水解酶)在标准A洗涤剂中的清洁效果
Figure BDA0002222285550001961
所有测试的Glyco_hydro_114糖基水解酶显示出洗涤性能和从纺织品上去除菌膜污渍的能力。
实例8.液体标准洗涤剂NI对菌膜小块布样的清洁
从如上所述的铜绿假单胞菌PA14(DSM 19882)制备的生物膜细胞外聚合物菌膜的粗提物。洗涤性能测定如下;将50ul等分试样的粗菌膜提取物点在无菌纺织品小块布样(WFK20A)上,并在环境温度下孵育15分钟。将没有EPS的对照小块布样用作对照。将小块布样(无菌或有提取物)置于50mL试管,并将10mL洗涤液(15°dH水和0.2g/L氧化铁(III)纳米粉末(544884;西格玛奥德里奇公司)中,含3.33g/L液体标准NI洗涤剂)和10μg/ml酶添加到每个管中。没有酶的洗涤被包括作为对照。将试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中并在30℃以20rpm孵育1小时。然后去除洗涤液,并且将小块布样用15°dH水冲洗两次并且在滤纸上干燥过夜。使用Handheld Minolta CR-300测量三色刺激光强度(Y)值,并展示在表5中。还指示了洗涤性能,WP(ΔY=Y(用酶洗涤的小块布样)-Y(没有用酶洗涤的小块布样))。
表5.PelA同系物(Glyco_hydro_114糖基水解酶)在标准NI洗涤剂中的清洁效果
Figure BDA0002222285550001971
实例:9PelA同源物(Glyco_hydro_114糖基水解酶)对铜绿假单胞菌生物膜的影响
在此实例中,将两种不同的铜绿假单胞菌临床分离株用于形成医用生物膜。一种生物膜由铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)产生,而另一种由铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)产生。将细菌在TSA板上重新划线,并在30℃孵育三天。孵育三天后,用一个铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)菌落接种8mL的胰蛋白酶大豆肉汤(TSB),并用铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)接种8mL的TSB。将接种的TSB管在30℃,200rpm孵育过夜,并在TSB中稀释至特定的光密度(OD)。在Thermo ScientificTMNuncTMMicroWellTM96孔微孔板(无菌,未处理)中向每个孔中加入150μl稀释的过夜培养物。制备两个具有铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)的板。制备一个具有铜绿假单胞菌PA01(DSM22644)的板。将板在30℃下孵育24小时。孵育24小时后,从培养箱中取出含有生物膜的微量滴定板,并使用VacusafeTM真空吸引系统(INTEGRABiosciences)清空培养基。用200μl 0.9%NaCl溶液冲洗每个孔两次。向每个孔中加入200μl的含有20μg/ml酶的标准洗涤剂液体。包括不含酶的处理作为对照。每种处理一式四份进行测试。加入洗涤剂液+/-酶后,将微量滴定板在30℃静置孵育60分钟。孵育60分钟后,使用真空系统去除处理液。用200μl 0.9%NaCl溶液冲洗每个孔两次,并向每个孔中加入200μl的0.095%结晶紫溶液。将板在环境温度下孵育15分钟。使用真空系统去除结晶紫溶液,并用200μl 0.9%NaCl溶液冲洗每个孔两次。向每个孔中加入150μl的30%乙酸。将板在环境温度下孵育10分钟,之后使用分光光度计(SpectraMax M3,分子仪器公司(MolecularDevices))测量595nm处的吸光度。摇动板10秒钟,然后进行吸光度测量。
将酶处理后剩余的生物膜%计算为ABS595(用标准洗涤剂+酶处理的生物膜)/ABS595(用标准洗涤剂处理的生物膜)×100%。
对于铜绿假单胞菌PA14(DSM19882),计算两个板的平均值。结果显示在表6中。
表6:在标准洗涤剂中用PelA同系物处理后剩余的生物膜%
Figure BDA0002222285550001981
实例10在液体标准洗涤剂中的内窥镜清洁
使用铜绿假单胞菌PA14(DSM19882)建立内镜生物膜:将菌株接种到10mL LB中并在37℃下振荡(200rpm)孵育16小时。繁殖后,将培养物在LBNS中稀释(1:100),并将细菌悬浮液加入96孔微量滴定板(赛默科技公司,目录号167008)中,其含有无菌片(1cm)的内窥镜管(直径4.7mm,Fluoroelastomer/
Figure BDA0002222285550001982
USP VI级,内窥镜开发有限责任公司(EndoscopyDevelopment Company,LLC))。将无菌培养基加入对照孔中。在26℃下24小时(静态孵育)后,用不含酶(对照)或含20μg/mL酶的标准清洁溶液(5g/L标准洗涤剂MC,以5°dH水硬度)在26℃下处理内窥镜管持续1小时。随后用5°dH水冲洗内窥镜片并用0.095%结晶紫(SIGMAV5265)染色15分钟。在额外的冲洗之后,将内窥镜片在吸水纸上吸干,并使用30%乙酸溶解剩余的染料。将200μl等分试样的悬浮液转移至96孔微量滴定板中,并在595nm处测量吸光度。结果在表7中显示为与对照(没有经酶处理的内窥镜生物膜)相比,酶处理后剩余生物膜的百分比。
表7.医用清洁标准洗涤剂MC的内窥镜清洁性能
酶剂量(μg/ml) 剩余的生物膜(未处理对照的%)
没有酶 0 100.0
SEQ ID NO 12 20 23,3
SEQ ID NO 3 20 47,1
SEQ ID NO 70 20 66,7
结果显示,当与不含酶的样品相比时,本发明的多肽具有内窥镜清洁特性,即破坏和/或去除生物膜或所测试的生物膜组分。

Claims (14)

1.一种用于衣物洗涤或餐具洗涤的清洁组合物,该组合物包含:
(a) 至少0.001 ppm的至少一种Glyco_hydro_114糖基水解酶;和
(b) 一种或多种清洁组合物组分,该组分选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和另外的酶;
其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶包含四个、五个或六个选自由以下组成的组的基序:SEQ ID NO 34所示的基序GX[FY][LYF]D、SEQ ID NO 35所示的基序AYX[SET]XX[EAS]、SEQ ID NO 97所示的基序GXXGX[FY][LYFI]D、SEQ ID NO 102所示的基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY、SEQ ID NO 103所示的基序[QL]N[AS]PEL和SEQ ID NO 104所示的基序[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE,
其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶具有水解活性,并且其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有至少95%序列同一性的多肽或由其组成。
2.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有至少96%序列同一性的多肽或由其组成。
3.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有至少97%序列同一性的多肽或由其组成。
4.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有至少98%序列同一性的多肽或由其组成。
5.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有至少99%序列同一性的多肽或由其组成。
6.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含与SEQ ID NO 12的多肽具有100%序列同一性的多肽或由其组成。
7.根据权利要求1所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含SEQID NO 102所示的基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的清洁组合物,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶包含SEQ ID NO 102所示的基序 [SETC]IG[EQA][ALI]EXY和/或SEQ ID NO 103所示的基序[QL]N[AS]PEL、SEQ ID NO 104所示的基序[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE中的一者或两者。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的清洁组合物,其中该Glyco_hydro_114糖基包含以下基序:SEQ ID NO 34所示的基序GX[FY][LYF]D、SEQ ID NO 35所示的基序AYX[SET]XX[EAS]、SEQ ID NO 97所示的基序GXXGX[FY][LYFI]D、SEQ ID NO 102所示的基序[SETC]IG[EQA][ALI]EXY、SEQ ID NO 103所示的基序[QL]N[AS]PEL、SEQ ID NO 104所示的基序[KLYMQ]XX[PV]QN[SA]PE。
10.一种颗粒,该颗粒包含:
(a) 核心,该核心包含如权利要求1至9中任一项中限定的Glyco_hydro_114糖基水解酶,以及任选地
(b) 包衣,该包衣由包围该核心的一个或多个层组成。
11.一种用于洗涤物品的方法,该方法包括以下步骤:
(a) 将物品暴露于洗涤液,该洗涤液包含根据权利要求1至9中任一项所述的清洁组合物;
(b) 完成至少一个洗涤循环;以及
(c) 任选地冲洗该物品,
其中该物品是纺织品。
12.Glyco_hydro_114糖基水解酶在清洁过程中的用途,其中所述Glyco_hydro_114糖基水解酶如权利要求1至9中任一项中限定。
13.根据权利要求12所述的用途,其中所述清洁过程包括衣物洗涤或餐具洗涤。
14.Glyco_hydro_114糖基水解酶用于清洁物品的用途,其中所述物品是纺织品,且其中所述清洁:
i. 用于防止、减少或去除该物品的粘性;
ii. 用于防止、减少或去除生物膜或生物膜组分;
iii. 用于减少或去除该物品上的菌膜污渍;
iv. 用于在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积;
v. 用于防止、减少或去除污垢在该物品上的附着;
vi. 用于维持或改进该物品的白度;或
vii. 用于防止、减少或去除该物品的恶臭;
其中该Glyco_hydro_114糖基水解酶如权利要求1至9中任一项中限定。
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