CN113056476A - 具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 - Google Patents

具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 Download PDF

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Abstract

本发明涉及包含具有α‑甘露聚糖降解活性的多肽的组合物以及这些多肽的用途。本发明涉及具有α‑甘露聚糖降解活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。

Description

具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以及编码它们的多核苷酸
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及包含具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的组合物以及这些多肽的用途。本发明涉及具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
几十年来，酶一直被用于洗涤剂中。通常将多种酶的混合物添加至洗涤剂组合物中。酶混合物通常包含多种酶，其中每种酶各自靶向其特异性底物，例如淀粉酶对淀粉污渍有活性、蛋白酶对蛋白质污渍有活性等。
甘露聚糖在本领域中被称为具有β-1,4-连接的D-吡喃甘露糖基残基的主链的植物多糖，它可以包含半乳糖或乙酰基取代，并且可以在主链中具有葡萄糖残基。参与甘露聚糖降解的主要酶类型是内切-1,4-β-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)，它水解在甘露聚糖主链中的内部糖苷键。β-甘露聚糖酶(在文献中通常简称为甘露聚糖酶)已在洗涤剂工业中使用多年，用于基于植物的污渍的有效污渍去除。
甘露聚糖的另一种重要类型是例如在酵母细胞壁中发现的细胞壁多糖，称为α-甘露聚糖。与上述基于植物的β-甘露聚糖多糖相比，这些α-甘露聚糖含有通过α-(1,6)-连接的线性主链与α-(1,2)和α-(1,3)连接的支链连接的甘露糖残基，这些甘露糖残基也可以被磷酸化。
α-甘露聚糖也是生物膜的组分。纺织品表面和硬表面(如餐具或经受多次洗涤循环的洗衣机内部空间)被许多不同类型的污垢弄脏，这些污垢可能由蛋白质、油脂、淀粉等构成。污垢的一种类型可以是有机物质(如生物膜、细胞外聚合物(EPS)等)。有机物质由不同的分子(如多糖、细胞外DNA(eDNA)、和蛋白质)构成。一些有机物质构成细胞外聚合物基质，其可以是粘性的或粘合的，当其存在于纺织品上时，吸引污垢并且可以使污垢再沉积或返染从而导致纺织品变灰。另外，有机物质(如生物膜)经常引起恶臭问题，因为多种恶臭分子可以被复合细胞外基质中的多糖、细胞外DNA(eDNA)、和蛋白质粘附并且被缓慢释放出以引起消费者明显的恶臭问题。
因此，在其中需要降解α-甘露聚糖的应用中使用酶可能是有利的。
根据在线碳水化合物活性酶(“CAZy”)数据库(在cazy.org可获得)，已经在糖苷水解酶家族(包括76、92和99)中发现了α-甘露聚糖降解酶。本发明提供了具有α-甘露聚糖酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸，这些多肽在降解α-甘露聚糖时有高度活性并因此可以用于前述应用中。
发明内容
本发明涉及清洁组合物，其包含至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽或者其具有α-甘露聚糖降解活性的变体或片段；以及清洁组合物组分。
本发明提供具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。在实施例中，该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽属于糖基水解酶家族76(GH76)、糖基水解酶家族92(GH92)、糖基水解酶家族99(GH99)，特别是糖基水解酶家族76。
一方面涉及多肽，这些多肽包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。
一方面涉及多肽，这些多肽包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQID NO:64)。
一方面涉及多肽，这些多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
一方面涉及多肽，这些多肽包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ IDNO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)。
一方面涉及多肽，这些多肽属于AMXAAE进化枝并且是真菌来源的。
一方面涉及多肽，这些多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
因此，本发明涉及具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54、或SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
因此，本发明涉及具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少60％序列同一性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与SEQ ID NO:1、SEQID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列的全长互补序列杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ IDNO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ IDNO:52或其cDNA序列、SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少60％序列同一性；
(d)(a)、(b)、或(c)的多肽的片段，该片段具有α-甘露聚糖降解活性。
本发明还涉及编码本发明的多肽的分离的或纯化的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、重组表达载体、重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。
本发明进一步涉及包含核心粒子(core particle)和一个或多个包衣的颗粒(granule)，其中该颗粒包含如上定义的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽，并且涉及包含多元醇和具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的液体组合物，其中该多肽如上定义。
本发明进一步涉及该肽在各种应用中的用途，如降解α-甘露聚糖，衣物洗涤，洗涤，清洁，饲料，食品，提取咖啡，降解纤维素材料，生产发酵产物、编码本发明多肽的分离的多核苷酸、重组宿主细胞，以及产生本发明多肽的方法。
序列综述
SEQ ID NO:1DNA，其编码来自解葡聚糖类芽孢杆菌(Paenibacillusglycanilyticus)的全长多肽
SEQ ID NO:2多肽，其来源于SEQ ID NO:1
SEQ ID NO:3成熟多肽，其获得自解葡聚糖类芽孢杆菌
SEQ ID NO:4DNA，其编码来自酸性芽孢杆菌(Bacillus acidicola)的全长多肽
SEQ ID NO:5多肽，其来源于SEQ ID NO:4
SEQ ID NO:6成熟多肽，其获得自酸性芽孢杆菌
SEQ ID NO:7DNA，其编码来自芽孢杆菌属物种(Bacillus sp.)的全长多肽
SEQ ID NO:8多肽，其来源于SEQ ID NO:7
SEQ ID NO:9成熟多肽，其获得自芽孢杆菌属物种
SEQ ID NO:10DNA，其编码来自类芽孢杆菌属物种A(Paenibacillus sp.A)的全长多肽
SEQ ID NO:11多肽，其来源于SEQ ID NO:10
SEQ ID NO:12成熟多肽，其获得自类芽孢杆菌属物种A
SEQ ID NO:13DNA，其编码来自类芽孢杆菌属物种B的全长多肽
SEQ ID NO:14多肽，其来源于SEQ ID NO:13
SEQ ID NO:15成熟多肽，其获得自类芽孢杆菌属物种B
SEQ ID NO:16DNA，其编码来自类芽孢杆菌属物种C的全长多肽
SEQ ID NO:17多肽，其来源于SEQ ID NO:16
SEQ ID NO:18成熟多肽，其获得自类芽孢杆菌属物种C
SEQ ID NO:19DNA，其编码来自微生物群落B的全长多肽
SEQ ID NO:20多肽，其来源于SEQ ID NO:19
SEQ ID NO:21成熟多肽，其获得自微生物群落B
SEQ ID NO:22DNA，其编码来自微生物群落H的全长多肽
SEQ ID NO:23多肽，其来源于SEQ ID NO:22
SEQ ID NO:24成熟多肽，其获得自微生物群落H
SEQ ID NO:25DNA，其编码来自新芽孢杆菌(Bacillus novalis)的全长多肽
SEQ ID NO:26多肽，其来源于SEQ ID NO:25
SEQ ID NO:27成熟多肽，其获得自新芽孢杆菌
SEQ ID NO:28DNA，其编码来自金黄杆菌属物种(Chryseobacterium sp.)的全长多肽
SEQ ID NO:29多肽，其来源于SEQ ID NO:28
SEQ ID NO:30成熟多肽，其获得自金黄杆菌属物种
SEQ ID NO:31DNA，其编码来自棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的全长多肽
SEQ ID NO:32多肽，其来源于SEQ ID NO:31
SEQ ID NO:33成熟多肽，其获得自棘孢曲霉
SEQ ID NO:34DNA，其编码来自棘孢曲霉的全长多肽
SEQ ID NO:35多肽，其来源于SEQ ID NO:34
SEQ ID NO:36成熟多肽，其获得自棘孢曲霉
SEQ ID NO:37DNA，其编码来自棘孢曲霉的全长多肽
SEQ ID NO:38多肽，其来源于SEQ ID NO:37
SEQ ID NO:39成熟多肽，其获得自棘孢曲霉
SEQ ID NO:40DNA，其编码来自棘孢曲霉的全长多肽
SEQ ID NO:41多肽，其来源于SEQ ID NO:40
SEQ ID NO:42成熟多肽，其获得自棘孢曲霉
SEQ ID NO:43DNA，其编码来自特异腐质霉(Humicola insolens)的全长多肽
SEQ ID NO:44多肽，其来源于SEQ ID NO:43
SEQ ID NO:45成熟多肽，其获得自特异腐质霉
SEQ ID NO:46DNA，其编码来自特异腐质霉的全长多肽
SEQ ID NO:47多肽，其来源于SEQ ID NO:46
SEQ ID NO:48成熟多肽，其获得自特异腐质霉
SEQ ID NO:49DNA，其编码来自特异腐质霉的全长多肽
SEQ ID NO:50多肽，其来源于SEQ ID NO:43
SEQ ID NO:51成熟多肽，其获得自特异腐质霉
SEQ ID NO:52DNA，其编码来自特异腐质霉的全长多肽
SEQ ID NO:53多肽，其来源于SEQ ID NO:43
SEQ ID NO:54成熟多肽，其获得自特异腐质霉
SEQ ID NO:55DNA，其编码来自微生物群落H的截短多肽
SEQ ID NO:56多肽，其来源于SEQ ID NO:55
SEQ ID NO:57成熟多肽，其获得自微生物群落H
SEQ ID NO:58是分泌信号
SEQ ID NO:59是His标签
SEQ ID NO:60是基序[YND]DD[QINLEM]
SEQ ID NO:61是基序GG[ILMV]X[WS]
SEQ ID NO:62是基序[GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV]
SEQ ID NO:63是基序LA[EQ]X[VL][YF]
SEQ ID NO:64是基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM]
SEQ ID NO:65是基序KNTPANAPA
SEQ ID NO:66是基序N[EQD][WFY][HG]E
SEQ ID NO:67是可获得自博戈里亚芽孢杆菌(Bacillus bogoriensis)的β-甘露聚糖酶
SEQ ID NO:68是可获得自类芽孢杆菌属物种(PspMan4)的β-甘露聚糖酶
SEQ ID NO:69是可获得自半解纤维素芽孢杆菌(Bacillushemicellulosilyticus)的β-甘露聚糖酶
定义
根据此详细描述，以下定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“该(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。
本文提及“约”值或参数包括针对该值或参数本身的方面。例如，提及“约X”的描述包括方面“X”。
除非另外定义或由上下文明确指示，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
α-甘露聚糖降解酶：术语“α-甘露聚糖降解酶”或“具有α-甘露聚糖降解活性的多肽”意指对α-甘露聚糖具有水解酶活性的酶。相关的是具有α-甘露聚糖酶和/或α-甘露糖苷酶活性的酶。特别地，具有α-甘露聚糖降解活性的多肽包括糖苷水解酶结构域GH76、GH92或GH99，如在CAZY中所定义(在cazy.org可获得，并且如以下文献所述：Lombard V等人,2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。这些可以包括酶活性，如α-1,6-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.101)、α-1,2-甘露聚糖酶(mannase)；甘露糖基-寡糖α-1,2-甘露糖苷酶(EC3.2.1.113)；甘露糖基-寡糖α-1,3-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；甘露糖基-寡糖α-1,6-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)；α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-1,3-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-1,4-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；甘露糖基-1-磷酸二酯α-1,P-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；糖蛋白内切-α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.130)；和/或甘露聚糖内切-1,2-α-甘露聚糖酶(3.2.1.-)活性。
β-甘露聚糖酶：如本文所用，术语“β-甘露聚糖酶”或“半乳甘露聚糖酶”是指如下β-甘露聚糖酶，其被定义为正式命名的甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶，并且具有可替代的名称β-甘露聚糖酶和内切-1,4-甘露聚糖酶。β-甘露聚糖酶术语还意指酶的多肽或多肽结构域，该酶具有催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的(1->4)β-D-甘露糖苷键的切割或水解的能力。因此，这意味着β-甘露聚糖酶具有β-甘露聚糖酶活性(EC 3.2.1.78)。出于本发明的目的，根据实例中所描述的程序确定β-甘露聚糖酶活性。在一方面，本发明的变体具有SEQ ID NO:67的多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、或至少100％的甘露聚糖酶活性。
结合模块：术语“结合模块”是指介导酶结合至纤维素底物的非晶区域的酶的区域。碳水化合物结合模块(CBD)典型地发现于α-甘露聚糖降解酶的N-末端处或C-末端的端点处。
催化结构域：术语“催化结构域”意指含有该酶的催化机构的酶的区域。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mRNA。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
片段：术语“片段”意指从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽、催化结构域、或碳水化合物结合模块；其中该片段具有α-甘露聚糖降解活性。在一些实施例中，片段含有成熟多肽的长度的至少90％，如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的至少317个氨基酸残基、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6的至少314个氨基酸残基、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的至少315个氨基酸残基、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的至少431个氨基酸、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15的至少440个氨基酸、SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:18的至少313个氨基酸、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的至少484个氨基酸、SEQID NO:23或SEQ ID NO:24的至少487个氨基酸、SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:27的至少1240个氨基酸、SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:30的至少307个氨基酸、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的至少332个氨基酸、SEQ ID NO:35或SEQ ID NO:36的至少388个氨基酸、SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39的至少345个氨基酸、SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:42的至少342个氨基酸、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:45的至少352个氨基酸、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:48的至少355个氨基酸、SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:51的至少345个氨基酸、SEQ ID NO:53或SEQ IDNO:54的至少362个氨基酸、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:57的至少450个氨基酸。
融合多肽：术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。
异源的：对于宿主细胞，术语“异源的”意指多肽或核酸不是天然存在于宿主细胞中。对于多肽或核酸，术语“异源的”意指控制序列(例如，多肽或核酸的启动子或结构域)不与该多肽或核酸天然地相关联，即，控制序列是来自编码SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56的成熟多肽的基因以外的基因。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。
杂合多肽：术语“杂合多肽”意指包含来自两个或更多个多肽的结构域的多肽，例如，来自一个多肽的结合模块和来自另一个多肽的催化结构域。结构域可以在N-末端或C-末端融合。
杂交：术语“杂交”意指使用标准DNA印迹程序将核酸的基本上互补的链配对。杂交可以在中、中-高、高或非常高严格条件下进行。中严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在55℃使用0.2X SSC、0.2％SDS洗涤三次，每次15分钟。中-高严格条件意指在42℃，于5XSSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在60℃使用0.2X SSC、0.2％SDS洗涤三次，每次15分钟。高严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在65℃使用0.2X SSC、0.2％SDS洗涤三次，每次15分钟。非常高严格条件意指在42℃，于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在70℃使用0.2X SSC、0.2％SDS洗涤三次，每次15分钟。
分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中；例如宿主细胞可以经遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。
在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至353，并且SEQ ID NO:2的氨基酸-32至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:5的氨基酸1至349，并且SEQ ID NO:5的氨基酸-29至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:8的氨基酸1至350，并且SEQ ID NO:8的氨基酸-30至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ IDNO:11的氨基酸1至479，并且SEQ ID NO:11的氨基酸-31至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:14的氨基酸1至489，并且SEQ ID NO:14的氨基酸-31至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQID NO:15中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:17的氨基酸1至348，并且SEQ ID NO:17的氨基酸-21至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:20的氨基酸1至538，并且SEQ IDNO:20的氨基酸-35至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:23的氨基酸1至542，并且SEQ ID NO:23的氨基酸-35至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:24中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:26的氨基酸1至1378，并且SEQ ID NO:26的氨基酸-33至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:29的氨基酸1至342，并且SEQ ID NO:29的氨基酸-22至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:30中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:32的氨基酸1至369，并且SEQ ID NO:32的氨基酸-18至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:33中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ IDNO:35的氨基酸1至432，并且SEQ ID NO:35的氨基酸-25至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:36中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:38的氨基酸xx，并且SEQ ID NO:38的氨基酸-24至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ IDNO:39中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:41的氨基酸1至380，并且SEQ ID NO:41的氨基酸-25至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:42中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:44的氨基酸1至392，并且SEQ IDNO:44的氨基酸-23至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:47的氨基酸1至395，并且SEQ ID NO:47的氨基酸-30至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:48中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:50的氨基酸1至384，并且SEQ ID NO:50的氨基酸-21至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:53的氨基酸1至403，并且SEQ ID NO:53的氨基酸-20至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:54中所示的氨基酸序列。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:56的氨基酸1至500，并且SEQ ID NO:56的氨基酸-35至-1是信号肽。在一些方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:57中所示的氨基酸序列。
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有α-甘露聚糖降解活性的成熟多肽的多核苷酸。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸97至1155，并且SEQ ID NO:1的核苷酸1至96编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:4的核苷酸88至1134，并且核苷酸1至87编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ IDNO:7的核苷酸91至1140，并且核苷酸1至90编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQID NO:10的核苷酸94至1530，并且核苷酸1至93编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:13的核苷酸94至1560，并且核苷酸1至93编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:16的核苷酸64至1107，并且核苷酸1至63编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:19的核苷酸106至1719，并且核苷酸1-105编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:22的核苷酸106至1731，并且核苷酸1至105编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:25的核苷酸100至4236，并且核苷酸1至99编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:28的核苷酸67至1092，并且核苷酸1至66编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:31的核苷酸55至483和587以及1264，并且核苷酸1至54编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:34的核苷酸76至100、159至853、和905至1480，并且核苷酸1至75编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:37的核苷酸73至97、163至857、和921至1304，并且核苷酸1至72编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:40的核苷酸76至100、233至477、543至992、和1054至1473，并且核苷酸1至75编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ IDNO:43的核苷酸70至100、179至900、967至1389，并且核苷酸1至69编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:46的核苷酸91至118、180至1336，并且核苷酸1至90编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:49的核苷酸64至85、161至640、696至937、和1015至1422，并且核苷酸1至63编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:52的核苷酸61至85和154至1337，并且核苷酸1至60编码信号肽。在一方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:55的核苷酸106至1605，并且核苷酸1至105编码信号肽。
天然的：术语“天然的”意指天然存在于宿主细胞中的核酸或多肽。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以原本不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
纯化的：术语“纯化的”是指基本上不含其他组分的核酸或多肽，如通过本领域熟知的分析技术(例如，在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经过密度梯度离心的培养基中，纯化的多肽或核酸可形成离散的条带)所测定。纯化的核酸或多肽是至少约50％纯的，通常是至少约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或更加纯的(例如，以摩尔计的重量百分比)。在相关意义上，当在应用纯化或富集技术之后存在分子的浓度的大幅度增加时，对于该分子而言组合物被富集了。术语“富集”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他指定材料或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。
重组体：当用于提及细胞、核酸、蛋白质或载体时，术语“重组体”意指已经从其天然状态经修饰。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因，或与在自然界中发现的相比，以不同水平表达或在不同条件下表达天然基因。重组核酸与天然序列的差异在于一个或多个核苷酸和/或与异源序列(例如，表达载体中的异源启动子)可操作地连接。重组蛋白与天然序列的差异可以在于一个或多个氨基酸和/或与异源序列融合。包含编码多肽的核酸的载体是重组载体。术语“重组体”与“遗传修饰的”和“转基因的”同义。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(EMBOSS的BLOSUM62版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项(nobrief option)获得)用作同一性百分比并且计算如下：
(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的Needle的输出(使用非简化选项(nobrief option)获得)用作同一性百分比并且计算如下：
(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失一个或多个(例如，几个)核苷酸的多核苷酸；其中该子序列编码具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；而插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。
野生型：关于氨基酸序列或核酸序列的术语“野生型”意指该氨基酸序列或核酸序列是天然或天然存在的序列。如本文所用，术语“天然存在的”是指在自然界中发现的任何物质(例如蛋白质、氨基酸或核酸序列)。相反，术语“非天然存在的”是指在自然界中未发现的任何物质(例如，在实验室中产生的重组核酸和蛋白质序列、或野生型序列的修饰)。
生物膜：术语“生物膜”意指在表面上，例如纺织品、餐具或硬表面上，细胞彼此粘附在一起的任何群组的微生物。这些粘附细胞通常嵌入细胞外聚合物(EPS)的自生基质中。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一生物的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。
生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个作用是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为，密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。
关于产生衣物洗涤生物膜的细菌可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜碱性假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)、副伯克霍尔德菌(Paraburkholderia)、伯克霍尔德菌属物种(Burkolderia sp.)、假丝酵母属物种(Candida sp.)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)、大肠杆菌以及曲霉属物种。
清洁组分：清洁组分(例如，洗涤剂辅助剂成分)与本发明的多肽不同。这些另外的清洁或辅助剂组分的精确性质、其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。合适的清洁组分包括但不限于以下描述的组分，如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预成型过酸、聚合剂、粘土去污剂/抗再沉积剂、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、运载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。
清洁组合物：术语清洁组合物包括“洗涤剂组合物”并且是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了含有本发明的酶之外，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物)，和/或洗涤剂辅助剂成分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
深度清洁：术语“深度清洁”意指破坏、减少或去除有机组分，如多糖、蛋白质、DNA、污垢或存在于有机物质(如生物膜)中的其他组分。
Δ反射值(ΔRem)：本文将术语“Δ反射”或“Δ反射值”定义为在某一波长处(典型地为460nm)的反射比或反射测量的结果。用一种具有类似颜色的小块布样，优选一种来自重复洗涤的小块布样作为背景测量该小块布样。在洗涤之前，测量代表每种小块布样类型的小块布样。Δ酶反射是在存在酶的洗涤剂中洗涤的小块布样的反射值减去在不存在酶的洗涤剂中洗涤的类似小块布样的反射值。
酶洗涤益处：术语“酶洗涤益处”在本文中定义为将酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(也被称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(也被称作变白的效果)，该纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
硬表面清洁：本文将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于，清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、刀叉餐具(如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
恶臭：术语“恶臭”意指清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净，而没有粘附在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，这些化合物可以是微生物产生的。另一个实例是令人不愉快的气味可以是粘附于已经与人类或动物接触的物品的汗味或体味。恶臭的另一个实例可以是来自香味料的气味，其粘附于物品，例如气味强烈的咖喱或其他异国香味料。
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物(woven)、牛仔布(denim)、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。该纺织品可以是基于纤维素的，如天然纤维素制品，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维，或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物以及基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家用衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。
纺织品护理益处：不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一纺织品转移至另一纺织品或同一纺织品的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从纺织品表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善纺织品柔软性，使纺织品的颜色澄清以及去除陷在纺织品的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是一种另外的酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(例如过氧化氢或其他过氧化物或其他漂白种类)的形成。
洗涤性能：术语“洗涤性能”被用作酶在例如洗涤(衣物洗涤)或硬表面清洁过程中去除存在于有待清洁的物体上的污渍的能力。洗涤性能的改进可以通过计算如本文实例中所述的所谓强度值(Int)来量化。本文将术语“改进的洗涤性能”定义为相对于没有酶的相同清洁组合物的洗涤性能，展示出清洁组合物中增加的洗涤性能的酶，例如，通过增加污渍去除或较少的再沉积。术语“改进的洗涤性能”包括在衣物洗涤并且例如在硬表面清洁如自动化餐具洗涤(ADW)中的洗涤性能。
具体实施方式
具有α-甘露聚糖降解活性的多肽
具有α-甘露聚糖降解活性的多肽或α-甘露聚糖降解酶是对α-甘露聚糖具有水解酶活性的酶。特别地，具有α-甘露聚糖降解活性的多肽包括来自糖苷水解酶结构域GH76、GH92和GH99的酶，其是具有α-甘露聚糖酶和/或α-甘露糖苷酶活性的酶。在实施例中，多肽属于GH家族76。
这些可以包括酶活性，如α-1,6-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.101)、α-1,2-甘露聚糖酶；甘露糖基-寡糖α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.113)；甘露糖基-寡糖α-1,3-甘露糖苷酶(EC3.2.1.-)；甘露糖基-寡糖α-1,6-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.24)；α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-1,3-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；α-1,4-甘露糖苷酶(EC3.2.1.-)；甘露糖基-1-磷酸二酯α-1,P-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.-)；糖蛋白内切-α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.130)；和/或甘露聚糖内切-1,2-α-甘露聚糖酶(3.2.1.-)活性。
还考虑了具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的共混物，包括例如根据CAZY命名系统的具有两种或更多种不同GH分类的多肽的组合。
在实施例中，提供了包含属于GH家族76的多肽和属于GH家族92的多肽；属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽；属于GH家族92的多肽和属于GH家族99的多肽；并且特别是，属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽的共混物。
还考虑了根据CAZY命名系统的三种或更多种不同GH分类的共混物，包括包含属于GH家族76的多肽、属于GH家族92的多肽、和属于GH家族99的多肽的共混物。
还如实例中所述，构建了系统发生树并且已鉴定了各种基序。因此，在一方面，多肽属于GH家族76，并且包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。优选地，多肽进一步包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)。在更优选的方面，多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
在另一方面，多肽属于GH家族76，并且包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)中的一个或多个。优选地，多肽属于AMXAAE进化枝并且是真菌来源的。
在另一方面，多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，包括如下条件，即分离的或纯化的多肽不是如WO 2009/108941A2中所述的geneseqp：AXR38305的多肽。
在一些实施例中，本发明涉及属于家族GH76的分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(i)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(j)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(k)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(l)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(m)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(n)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(o)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(p)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(q)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及属于家族GH92的分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及属于家族GH99的分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:2或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:5的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:5或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:8的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:8或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:11的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:11或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:14的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:14或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:17的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:17或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:20的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:20的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:20或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:23的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:23或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:26的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:26或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:29的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:29或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:32的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:32或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:35的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:35或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:38的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:38或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:41的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:41或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:44的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:44或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:47的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:47的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:47或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:50的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:50的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:50或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:53的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:53的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:53或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及分离的或纯化的多肽，这些分离的或纯化的多肽与SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，这些分离的或纯化的多肽具有α-甘露聚糖降解活性。在一方面，这些多肽与SEQ ID NO:56的成熟多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。
该多肽优选地包含SEQ ID NO:56或其成熟多肽的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成；或为其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，这些多核苷酸在中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列的全长互补序列或其cDNA杂交(Sambrook等人,1989,Molecular Cloning,A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册],第2版,Cold Spring Harbor[冷泉港],纽约)。
可以使用SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ IDNO:31、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:49、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:55中任一个的多核苷酸或其任一个的子序列，以及SEQID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ IDNO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ IDNO:56的成熟多肽或其任一个的片段来设计核酸探针以根据本领域熟知的方法来鉴定并克隆编码来自不同属或物种的菌株的、具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的DNA。此类探针可以用于遵循标准DNA印迹程序与目的细胞的基因组DNA或cDNA杂交，以便鉴定和分离其中相应的基因。此类探针可明显短于完整序列，但是长度应为至少15个，例如至少25个、至少35个、或至少70个核苷酸。优选地，核酸探针长度为至少100个核苷酸，例如长度为至少200个核苷酸、至少300个核苷酸、至少400个核苷酸、至少500个核苷酸、至少600个核苷酸、至少700个核苷酸、至少800个核苷酸、或至少900个核苷酸。DNA和RNA探针两者都可使用。典型地将探针进行标记(例如，用32P、3H、35S、生物素、或抗生物素蛋白)，用于检测相应的基因。此类探针涵盖于本发明中。
可以筛选由此类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA文库的与上述探针杂交并编码具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的DNA。来自此类其他菌株的基因组DNA或其他DNA可通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他分离技术来分离。可将来自文库的DNA或分离的DNA转移到并固定在硝化纤维素或另一个适合的运载体材料上。为了鉴定与SEQ ID NO:1或其子序列杂交的克隆或DNA，在DNA印迹中使用该运载体材料。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:1；(ii)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。可以使用例如X-射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段来检测在这些条件下核酸探针杂交的分子。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:4；(ii)SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:4的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:7；(ii)SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:7的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:10；(ii)SEQ ID NO:10的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:10的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:13；(ii)SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:13的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:16；(ii)SEQ ID NO:16的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:16的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:19；(ii)SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:19的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:22；(ii)SEQ ID NO:22的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:22的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:25；(ii)SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:25的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:28；(ii)SEQ ID NO:28的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:28的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:31；(ii)SEQ ID NO:31的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:31的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:34；(ii)SEQ ID NO:34的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:34的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:37；(ii)SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:37的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:40；(ii)SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:40的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:43；(ii)SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:43的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:46；(ii)SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:46的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:49；(ii)SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:49的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:52；(ii)SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列；(iii)其cDNA序列；(iv)其全长互补序列；或(v)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:52的成熟多肽编码序列或其cDNA序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
出于本发明的目的，杂交表示多核苷酸与对应于以下的标记的核酸探针杂交：(i)SEQ ID NO:55；(ii)SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补序列；或(iv)其子序列；该杂交是在非常高严格条件下进行。可以使用例如X-射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段来检测在这些条件下核酸探针杂交的分子。
在一些实施例中，本发明涉及由如下多核苷酸编码的具有α-甘露聚糖降解活性的分离的多肽，这些多核苷酸与SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
在一些实施例中，本发明涉及SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、或SEQ ID NO:56的成熟多肽的变体，这些变体在一个或多个(例如，几个)位置处包含取代、缺失和/或插入。在一方面，引入SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、或SEQ ID NO:56的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个。氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(例如聚组氨酸段、抗原表位或结合模块)来促进纯化。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且测试所得分子的α-甘露聚糖降解活性以鉴定对于该分子的活性关键的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点(contact site)氨基酸进行突变。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽或融合多肽。
具有β-甘露聚糖酶活性的多肽
适用于根据本发明的组合物的β-甘露聚糖酶包括具有β-甘露聚糖酶的多肽，该β-甘露聚糖酶被定义为正式命名的甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶，并且具有可替代的名称β-甘露聚糖酶和内切-1,4-甘露聚糖酶。β-甘露聚糖酶术语还意指酶的多肽或多肽结构域，该酶具有催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的(1->4)β-D-甘露糖苷键的切割或水解的能力。因此，这意味着β-甘露聚糖酶具有β-甘露聚糖酶活性(EC3.2.1.78)。
合适的β-甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性β-甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)或特异腐质霉。合适的GH5β-甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619、WO 2014/088940、WO 2014/100018、WO 2016/007929中。合适的GH26β-甘露聚糖酶描述于WO 2012/149317、WO 2012/149325、WO 2012/149333、WO 2015/144782、WO 2016/054176、WO 2017/021514、WO 2017/021515、WO 2017/021516、WO 2017/021517、WO 2017/021518中。可商购的β-甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司(Novozymes A/S))。
在实施例中，β-甘露聚糖酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:67中所示的可获得自博戈里亚芽孢杆菌的β-甘露聚糖酶的氨基酸序列具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一方面，β-甘露聚糖酶包含SEQ ID NO:67中所示的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。
在实施例中，β-甘露聚糖酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:68中所示的可获得自类芽孢杆菌属物种(PspMan4)的β-甘露聚糖酶的氨基酸序列具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一方面，β-甘露聚糖酶包含SEQ ID NO:68中所示的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。
在实施例中，β-甘露聚糖酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:69中所示的可获得自半解纤维素芽孢杆菌的β-甘露聚糖酶的氨基酸序列具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性。在一方面，β-甘露聚糖酶包含SEQ ID NO:69中所示的氨基酸序列，由其组成或基本上由其组成。
β-甘露聚糖酶的浓度优选在低于2ppm酶蛋白的范围，如在0.01ppm-2.0ppm、0.05ppm-2.0ppm、0.1ppm-2.0ppm、0.1ppm-1.5ppm、0.1ppm-1.0ppm、0.2ppm-2.0ppm、0.5ppm-2.0ppm、0.5ppm-1.5ppm、或优选在0.5ppm与1.0ppm之间的浓度。
具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的来源
本发明的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽可获得自任何属的微生物。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“获得自”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一方面，获得自给定来源的多肽被分泌到细胞外。
在另一方面，多肽是芽孢杆菌属多肽，例如获得自酸性芽孢杆菌、新芽孢杆菌或芽孢杆菌属物种的多肽。在另一方面，多肽是类芽孢杆菌属多肽，例如获得自解葡聚糖类芽孢杆菌或类芽孢杆菌属物种的多肽。
在另一方面，多肽是曲霉属多肽，例如获得自棘孢曲霉的多肽。在另一方面，多肽是腐质霉属多肽，例如获得自特异腐质霉的多肽。
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学等同物(equivalent)，例如无性型，而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)和美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection,Northern RegionalResearch Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码如本文所述的本发明的多肽、催化结构域或碳水化物结合模块的分离的多核苷酸。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。来自基因组DNA的多核苷酸的克隆可以例如通过使用聚合酶链式反应(PCR)或用以对具有共有的结构特征的克隆的DNA片段进行检测的表达库抗体筛选来实现。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],Academic Press[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以克隆自芽孢杆菌属，例如酸性芽孢杆菌、新芽孢杆菌、或芽孢杆菌属物种的菌株；类芽孢杆菌属，例如解葡聚糖类芽孢杆菌或类芽孢杆菌属物种的菌株；或曲霉属，例如棘孢曲霉的菌株；或腐质霉属，例如特异腐质霉的菌株或相关生物，并且因此，例如可以是该多核苷酸的多肽编码区的物种变体。
编码本发明的多肽的多核苷酸的修饰对于合成基本上类似于该多肽的多肽可以是必需的。术语“基本上类似”于该多肽是指多肽的非天然存在的形式。这些多肽可以因某种工程化方式而与从其天然来源分离的多肽不同，例如在比活性、热稳定性、最适pH等方面不同的变体。可以如下构建这些变体：基于以SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或者SEQ ID NO:55或其cDNA序列的成熟多肽编码序列(例如，其子序列)呈现的多核苷酸，和/或通过引入不会改变该多肽的氨基酸序列，但对应于预期用于产生该酶的宿主生物体的密码子用法的核苷酸取代，或通过引入可能产生不同氨基酸序列的核苷酸取代。对于核苷酸取代的一般描述，参见例如Ford等人,1991,Protein Expression and Purification[蛋白质表达与纯化]2:95-107。
核酸构建体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸的核酸构建体，其中该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，在与控制序列相容的条件下，该一个或多个控制序列指导该编码序列在合适的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可能是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含介导多肽的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明多核苷酸的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白质]”；和在Sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于WO 99/43835中。
用于在丝状真菌宿主细胞中指导本发明多核苷酸的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：构巢曲霉(Aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(Aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(Aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉(Aspergillus oryzae)TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢(Fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(Trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延伸因子，连同NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的经修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3'-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人(1992，同上)描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域，其增加该基因的表达。
合适的mRNA稳定子区域的实例是从以下获得的：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,J.Bacteriol.[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的合适的前导序列从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是多腺苷酸化序列，一种可操作地连接至该多核苷酸的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别为将多腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列还可以是编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’端本身可以含有在翻译阅读框中天然与编码多肽的编码序列区段相连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’端可以含有对于该编码序列是异源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要异源信号肽编码序列。可替代地，异源信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiol.Rev.[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992，同上)描述。
控制序列还可以是编码位于多肽的N-末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻前肽序列的N-末端。
还可希望的是添加调节序列，这些调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKA α-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸会与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。多个核苷酸和控制序列可连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可包括一个或多个便利的限制位点以允许编码该多肽的多核苷酸在此类位点处的插入或取代。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列如此位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的合适的标记包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等同物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中，载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，载体可以含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，这些核酸与相应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
在一些实施例中，多肽与重组宿主细胞是异源的。
在一些实施例中，一个或多个控制序列中的至少一个与编码多肽的多核苷酸是异源的。
在一些实施例中，重组宿主细胞包含本发明的多核苷酸的至少两个拷贝，例如三个、四个或五个。
宿主细胞可以是可用于重组产生本发明的多肽的任何微生物或植物细胞，例如原核细胞或真菌细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属(Campylobacter)、大肠杆菌、黄杆菌属(Flavobacterium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、螺杆菌属(Helicobacter)、泥杆菌属(Ilyobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙门氏菌属(Salmonella)、以及脲原体属(Ureaplasma)。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于似马链球菌(Streptococcus equisimilis)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、乳房链球菌(Streptococcus uberis)和马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equisubsp.Zooepidemicus)细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌(Streptomyces achromogenes)、除虫链霉菌(Streptomyces avermitilis)、天蓝链霉菌、灰色链霉菌(Streptomyces griseus)、以及浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961,J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下方式来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下方式来实现：天然感受态(natural competence)(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义：Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge，UK[英国剑桥])。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(Candida)、汉逊酵母属(Hansenula)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母属(Saccharomyces)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(Yarrowia)细胞，如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(Saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖化酵母(Saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(Saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(Saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(Saccharomyces norbensis)、卵形酵母(Saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟蜡菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管霉(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌(Chrysosporiumkeratinophilum)、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌(Chrysosporium pannicola)、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌(Chrysosporium tropicum)、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑根毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebiaradiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、埃默森篮状菌、土生梭孢霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente,在Abelson,J.N.和Simon,M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约)；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
产生方法
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；和任选地(b)回收该多肽。在一方面，细胞是芽孢杆菌属或类芽孢杆菌属或曲霉属或腐质霉属细胞。在另一方面，细胞是酸性芽孢杆菌、新芽孢杆菌、或芽孢杆菌属物种、解葡聚糖类芽孢杆菌、或类芽孢杆菌属物种、或棘孢曲霉、或特异腐质霉细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；和任选地(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵罐中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在适合的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从发酵培养基回收多肽。在一方面，回收包含多肽的全发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化该多肽，包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法和尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦电泳)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)，以便获得基本上纯的多肽。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液配制品或细胞组合物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生目的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文所用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一些实施例中，发酵液配制品或细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在一些实施例中，第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物；并且第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一方面，组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一些实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生。
酶组合物
在实施例中，本发明涉及包含与一种或多种另外的组分组合的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽的组合物，特别是清洁组合物，如洗涤剂组合物。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
可以根据本领域中已知的方法来制备组合物，并且组合物可以处于液体或干组合物的形式。可以根据本领域中已知的方法将组合物稳定化。
下面给出了本发明的组合物的优选的用途的实例。组合物的剂量以及使用组合物的其他条件可以基于本领域中已知的方法进行确定。
在本发明的一个实施例中，可以将具有α-甘露聚糖降解活性的多肽以对应以下的量添加至清洁组合物，如洗涤剂组合物中：每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白质，如0.005-100mg的蛋白质，优选0.01-50mg的蛋白质，更优选0.05-20mg的蛋白质，甚至更优选0.1-10mg的蛋白质。
可以使用常规稳定剂稳定具有α-甘露聚糖降解活性的多肽，以使该多肽包含在组合物中，这些常规稳定剂例如多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如，芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰基苯基硼酸))，并且可以如在例如WO92/19709和WO92/19708中所述配制该组合物。
具有α-甘露聚糖降解活性的多肽还可以结合到WO97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，将其通过引用而特此并入。
在一个实施例中，本发明涉及洗涤剂组合物，这些洗涤剂组合物包含与一种或多种另外的清洁组合物组分组合的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
对于纺织品护理，组分的选择可以包括以下考虑：有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制。尽管根据特定的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。
在一个实施例中，本发明涉及ADW(自动餐具洗涤)组合物，该组合物包含与一种或多种另外的ADW组合物组分相结合的本发明的酶。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。
本发明的一些实施例涉及组合物，该组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽，其中该多肽选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO；30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:54、或SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多肽；
b)一种或多种清洁组分。
本发明的一些实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽，其中该多肽选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO；30、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:54、或SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的多肽；
b)至少一种清洁组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和/或另外的酶。
一个实施例涉及清洁组合物，该清洁组合物包含：
a)至少0.001ppm的至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽，例如糖基水解酶家族76、糖基水解酶家族92、或糖基水解酶家族99，优选糖基水解酶家族76，其中该多肽选自由以下组成的组：
i)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
ii)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
iii)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
iv)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
v)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
vi)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
vii)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
viii)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
ix)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
x)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xi)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xii)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xiii)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xiv)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xv)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xvi)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xvii)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xviii)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
xix)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽，以及
b)至少一种清洁组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和/或另外的酶。
表面活性剂
洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子型和/或阳离子型和/或非离子型和/或半极性型和/或兼性离子型、或其混合物。在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。该一种或多种表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％(如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％)的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何常规表面活性剂。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸的二酯和单酯或脂肪酸盐(皂)、及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。
当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)、烷氧基化的脂肪酸烷基酯(如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及以SPAN和TWEEN商品名可获得的产品、及其组合。
半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物、及其组合。
兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。
水溶助剂
水溶助剂是如下化合物，该化合物在水溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲特性，如由表面活性剂已知的)；然而，水溶助剂的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如通过Hodgdon和Kaler(2007)，Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体和界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他明确定义的中间相。相反，许多水溶助剂显示连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，例如相分离或高粘度。
洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。
助洗剂和共助洗剂
洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％，特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以使用本领域中已知用于在洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)以及(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。
洗涤剂组合物还可以含有按重量计0-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂、或与助洗剂例如沸石助洗剂组合的共助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N”-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。另外的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
漂白系统
洗涤剂可以含有按重量计0-30％，如约1％至约20％的漂白系统。可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢―脲(1:1)、预成型过酸及其混合物。合适的预成型过酸包括但不限于过氧羧酸及盐、二过氧二羧酸、过亚氨酸(perimidicacid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括与过酸形成漂白活化剂组合的基于过氧化物的漂白系统，其可以包含例如无机盐，包括碱金属盐例如过硼酸盐的钠盐(通常为单或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐。术语漂白活化剂本文意指与过氧化氢反应以经由过水解反应形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。本文有待使用的适合的漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP624154中并且该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点，它是环境友好的。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在存储时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是一种有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。可替代地，漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜类型的过氧酸。漂白系统还可以包含过酸，例如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由以下组成：具有下式的有机催化剂：
Figure BDA0003001376650000661
(iii)及其混合物；
其中每个R1独立地是含有从9至24个碳的支链烷基基团或含有从11至24个碳的直链烷基基团，优选地每个R1独立地是含有从9至18个碳的支链烷基基团或含有从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地每个R1独立地选自下组，该组由以下组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO2007/087244、WO 2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。合适的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。
优选地，除了漂白催化剂，特别是有机漂白催化剂以外，漂白组分还包含过酸源。过酸源可以选自(a)预成型过酸；(b)过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐(过氧化氢源)，优选与漂白活化剂组合；和(c)过水解酶以及酯，用于在纺织品或硬表面处理步骤中在水的存在下原位形成过酸。
聚合物
洗涤剂可以含有按重量计0-10％(如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％)的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的上文提到的特性和/或多于一种的下文提到的基序。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧酸酯(如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)、疏水修饰的CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提到的聚合物的盐。
污垢释放聚合物
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是非离子或阴离子对苯二甲酸基的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉状洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,第7章,马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。核心结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详细描述的(通过引用并入本文)。此外，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(通过引用并入本文)。合适的聚乙二醇聚合物包括包含以下的随机接枝共聚物：(i)含有聚乙二醇的亲水性主链；以及(ii)选自下组的一条或多条侧链，该组由以下组成：C4-C25烷基基团、聚丙烯、聚丁烯、饱和C1-C6单羧酸的乙烯基酯、丙烯酸或甲基丙烯酸的Cl-C6烷基酯及其混合物。合适的聚乙二醇聚合物具有聚乙二醇主链(具有随机接枝的聚乙酸乙烯酯侧链)。聚乙二醇主链的平均分子量范围可以为从2,000Da至20,000Da、或从4,000Da至8,000Da。聚乙二醇主链与聚乙酸乙烯酯侧链的分子量比率可以在从1:1至1:5、或从1:1.2至1:2的范围内。每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可以小于1、或小于0.8，每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可在0.5至0.9的范围内，或每个环氧乙烷单元的接枝位点的平均数量可以在0.1至0.5、或0.2至0.4的范围内。合适的聚乙二醇聚合物是Sokalan HP22。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如EP 1867808或WO 2003/040279中所描述的那些(将二者都通过引用并入本文)。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
分散剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。特别地，粉状洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉状洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,马塞尔德克尔公司中。
染料转移抑制剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或颜料，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包含所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如描述于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP 1876226中(通过引用并入本文)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO2007/087257和WO2007/087243中。
荧光增白剂
本发明的洗涤剂组合物将优选地还包含另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，该增亮剂优选地以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用合适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生物型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals andChemicals)供应。合适用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
抗再沉积剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
流变改性剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。其他合适的清洁组合物组分包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、运载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。
另外的酶
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。在实施例中，另外的酶是β-甘露聚糖酶。
通常，一种或多种所选酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、枝顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO99/001544中的那些纤维素酶变体。
其他纤维素酶是具有以下序列的内切-β-1,4-葡聚糖酶，该序列与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2的位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％同一性，或具有以下序列的家族44木葡聚糖酶，该序列与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2的位置40-559具有至少60％同一性。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司)、CarezymePremiumTM(诺维信公司)、CellucleanTM(诺维信公司)、Celluclean ClassicTM(诺维信公司)、CellusoftTM(诺维信公司)、WhitezymeTM(诺维信公司)、ClazinaseTM和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
β-甘露聚糖酶
合适的β-甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性β-甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、耐盐芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌或特异腐质霉。合适的GH5β-甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619、WO 2014/088940、WO 2014/100018、WO 2016/007929中。合适的GH26β-甘露聚糖酶描述于WO 2012/149317、WO 2012/149325、WO 2012/149333、WO 2015/144782、WO 2016/054176、WO 2017/021514、WO 2017/021515、WO 2017/021516、WO 2017/021517、WO 2017/021518中。可商购的β-甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司)。
过氧化物酶/氧化酶
合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
蛋白酶
合适的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)；和迟缓枯草杆菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168，以及例如描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 01/016285和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的胰凝乳蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如描述于WO07/044993(宝洁公司(Procter&Gamble)/杰能科国际有限公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶，如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 89/06279、WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268和269，其中这些位置对应于WO 2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的位置。更优选的蛋白酶变体可以包含选自下组的一种或多种突变，该组由以下组成：S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、S85R、A96S、S97G、S97D、S97A、S97SD、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、A120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D、T268A以及R269H。这些蛋白酶变体优选地是在WO2016/001449的SEQ ID NO 1中示出的迟缓芽孢杆菌蛋白酶的变体、在WO2016/001449的SEQ ID NO 2中示出的解淀粉芽孢杆菌蛋白酶(BPN’)的变体。这些蛋白酶变体与WO 2016/001449的SEQ ID NO 1或SEQ ID NO 2优选地具有至少80％序列同一性。
在以下一个或多个位置(对应于WO2004/067737的SEQ ID NO:1的位置171、173、175、179或180)处包含取代的蛋白酶变体，其中所述蛋白酶变体与WO2004/067737的SEQ IDNO:1具有至少75％但小于100％的序列同一性。
合适的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：
Figure BDA0003001376650000731
DuralaseTm、DurazymTm、
Figure BDA0003001376650000732
Ultra、
Figure BDA0003001376650000733
Ultra、
Figure BDA0003001376650000734
Ultra、
Figure BDA0003001376650000735
Ultra、
Figure BDA0003001376650000736
Blaze
Figure BDA0003001376650000737
100T、Blaze
Figure BDA0003001376650000738
125T、Blaze
Figure BDA0003001376650000739
150T、
Figure BDA00030013766500007310
和
Figure BDA00030013766500007311
(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：
Figure BDA00030013766500007312
Purafect
Figure BDA00030013766500007313
Purafect
Figure BDA00030013766500007314
ExcellenzP1000TM、Excellenz P1250TM、
Figure BDA00030013766500007315
Preferenz P100TM、Purafect
Figure BDA00030013766500007316
PreferenzP110TM、Effectenz P1000TM、
Figure BDA00030013766500007317
Effectenz P1050TM、Purafect
Figure BDA00030013766500007318
Effectenz P2000TM、
Figure BDA00030013766500007319
Figure BDA00030013766500007320
和
Figure BDA00030013766500007321
(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-BrocasesN.V.))、BLAP(在US5352604的图29中显示的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG))和来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶：
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP218272)、洋葱假单胞菌(EP331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是脂肪酶变体，例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中所述的那些。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。
仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。
淀粉酶：
可以与α-甘露聚糖降解酶一起使用的合适的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。
合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO 2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，例如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO 6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2进行编号。更优选的变体是在选自181、182、183和184的两个位置(例如181和182、182和183、或位置183和184)中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ IDNO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选的变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 13184577的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476和G477。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K、以及G477K，和/或在位置R178和/或S179或T180和/或G181中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
其中变体任选地进一步包含在位置241处的取代和/或在位置178和/或位置179处的缺失。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 10104675的SEQ ID NO:1的淀粉酶或其与SEQ IDNO:1具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：N21、D97、V128、K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477和G478。SEQ ID NO:1的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：N21D、D97N、V128I、K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K、以及G478K，和/或在位置R179和/或S180或I181和/或G182中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N21D+D97N+V128I
其中变体任选地进一步包含在位置200处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。
其他合适的淀粉酶是具有WO01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及另外在一个或多个选自下组的位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是淀粉酶变体，如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司)、以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司)。
过氧化物酶/氧化酶
根据本发明的过氧化物酶是由酶分类EC 1.11.1.7囊括的由国际生物化学和分子生物学联盟命名委员会(IUBMB)规定的酶，或来源于其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
合适的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属(Coprinopsis)，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO95/10602以及WO 98/15257中所描述的那些。
根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。
在实施例中，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选的方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。
已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属(Drechslera)、细基格孢属(Ulocladium)以及葡萄孢属(Botrytis)。
还已从细菌，如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在优选的实施例中，卤代过氧化物酶可来源于弯孢属，特别是疣枝弯孢或不等弯孢，如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42；或如描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或来源于如描述于WO 01/79459中的Drechslerahartlebii、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。
根据本发明的氧化酶特别包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或来源于其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以来源于植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的合适实例包括可来源于以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的合适的实例包括可来源于芽孢杆菌属的菌株的漆酶。
优选的是来源于拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是来源于灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来源于嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加含有所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒，特别是无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或浆液。
无粉尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露地产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚乙二醇(PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
微生物
该洗涤剂添加剂以及洗涤剂组合物还可以包含一种或多种微生物，如一种或多种真菌、酵母、或细菌。
在实施例中，该一种或多种微生物是脱水(例如通过冻干)的细菌或酵母，例如乳酸杆菌菌株。
在另一个实施例中，微生物是一种或多种微生物孢子(与营养细胞相对)，例如细菌孢子；或真菌孢子、分生孢子、菌丝。优选地，该一种或多种孢子是芽孢杆菌内生孢子；甚至更优选地，该一种或多种孢子是枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、或巨大芽孢杆菌的内生孢子。
微生物可以按与酶相同的方式包含在洗涤剂组合物或添加剂中(见上文)。
辅助剂材料
其他合适的辅助剂材料包括但不限于防缩剂、防皱剂、杀细菌剂、粘合剂、运载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。
在一方面，该洗涤剂是压缩液体衣物洗涤剂组合物，其包含：a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选从20％至80％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，从约1％至约30％，优选从5％至30％的水；c)按该组合物的重量计，从约1％至约15％，优选从3％至10％的非氨基官能溶剂；以及d)按该组合物的重量计，从约5％至约20％的性能添加剂，该性能添加剂选自螯合剂、污垢释放聚合物、酶及其混合物；其中该压缩液体衣物洗涤剂组合物包括以下中的至少一项：(i)该表面活性剂的阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比为从约1.5:1至约5:1，该表面活性剂包含按该组合物的重量计从约15％至约40％的阴离子表面活性剂并且包含按该组合物的重量计从约5％至约40％的皂；(ii)按该组合物的重量计从约0.1％至约10％的促泡剂(suds boosting agent)，该促泡剂选自促泡聚合物、阳离子表面活性剂、兼性离子表面活性剂、氧化胺表面活性剂、两性表面活性剂及其混合物；以及(ii)(i)和(ii)两者。所有成分都描述于WO 2007/130562中。可用于这些洗涤剂配制品中的另外的聚合物描述于WO 2007/149806中。
在另一方面，该洗涤剂是压缩颗粒状(粉状)洗涤剂，其包含：a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选从15％至60％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，从约10％至80％，优选从20％至60％的助洗剂，其中该助洗剂可以是选自以下的助洗剂的混合物：i)磷酸盐助洗剂，优选少于20％，更优选少于10％，甚至更优选少于5％的总助洗剂是磷酸盐助洗剂；ii)沸石助洗剂，优选少于20％，更优选少于10％，甚至更优选少于5％的总助洗剂是沸石助洗剂；iii)柠檬酸盐，优选0至5％的总助洗剂是柠檬酸盐助洗剂；iv)聚羧酸盐，优选0至5％的总助洗剂是聚羧酸盐助洗剂；v)碳酸盐，优选0至30％的总助洗剂是碳酸盐助洗剂以及vi)硅酸钠，优选0至20％的总助洗剂是硅酸钠助洗剂；c)按该组合物的重量计，从约0％至25％的填料，如硫酸盐，按该组合物的重量计，优选从1％至15％，更优选从2％至10％，更优选从3％至5％的填料；以及d)按该组合物的重量计，从约0.1％至20％的酶，按该组合物的重量计，优选从1％至15％，更优选从2％至10％的酶。
对于洗涤剂配制者而言重要的污垢和污渍由许多不同物质构成，并且已经开发具有不同底物特异性的一系列不同的酶以用于在涉及衣物和硬表面清洁(如餐具洗涤)两者的洗涤剂中使用。认为这些酶提供酶洗涤益处，因为与不具有酶的同一过程相比，它们在其应用至其中的清洁过程中特异性地改进污渍去除。本领域中已知的去污酶包括以下酶，例如糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、角质酶以及果胶酶。
在本发明的优选的方面中，α-甘露聚糖降解酶可以与至少两种另外的酶组合。这些另外的酶详细描述于“其他酶”部分中，更优选是至少三种、四种或五种酶。优选地，这些酶具有不同的底物特异性，例如碳水化合物分解活性(carbolytic activity)、蛋白分解活性、淀粉分解活性、脂肪分解活性、半纤维素分解活性或果胶分解活性。酶组合可以例如是α-甘露聚糖降解酶与去污酶，例如α-甘露聚糖降解酶与蛋白酶、α-甘露聚糖降解酶与丝氨酸蛋白酶、α-甘露聚糖降解酶与淀粉酶、α-甘露聚糖降解酶与纤维素酶、α-甘露聚糖降解酶与脂肪酶、α-甘露聚糖降解酶与角质酶、α-甘露聚糖降解酶与果胶酶、α-甘露聚糖降解酶与β-甘露聚糖酶、或α-甘露聚糖降解酶与抗再沉积酶。更优选地，将α-甘露聚糖降解酶与至少两种去污酶组合，例如α-甘露聚糖降解酶、脂肪酶和淀粉酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和淀粉酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和脂肪酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和半纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶和角质酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶和角质酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶和半纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、脂肪酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、脂肪酶和角质酶；α-甘露聚糖降解酶、脂肪酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、脂肪酶和半纤维素酶。甚至更优选地，α-甘露聚糖降解酶可以与至少三种去污酶组合，例如α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、淀粉酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、淀粉酶和角质酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、淀粉酶和半纤维素酶；α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶、脂肪酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶、脂肪酶和角质酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、淀粉酶、脂肪酶和半纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、脂肪酶和果胶酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、脂肪酶和角质酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶；或α-甘露聚糖降解酶、蛋白酶、脂肪酶和半纤维素酶。α-甘露聚糖降解酶可以与选自非穷尽性列表的酶中的任一种组合，该列表包括：糖酶(如淀粉酶)、半纤维素酶、果胶酶、纤维素酶、β-甘露聚糖酶、黄原胶酶或支链淀粉酶、肽酶、蛋白酶或脂肪酶。
在优选的实施例中，α-甘露聚糖降解酶与丝氨酸蛋白酶(例如S8家族蛋白酶，如
Figure BDA0003001376650000831
)组合。
在本发明的另一个实施例中，α-甘露聚糖降解酶可以与一种或多种金属蛋白酶(如M4金属蛋白酶，包括
Figure BDA0003001376650000832
或嗜热菌蛋白酶)组合。此类组合可以进一步包含如上概述的其他洗涤剂酶的组合。
该清洁过程或纺织品护理过程可以例如是衣物洗涤过程、餐具洗涤过程或硬表面(例如浴室瓷砖、地板、桌面、排水管、水槽以及脸盆)清洁。衣物洗涤过程可以例如是家庭衣物洗涤，但是它也可以是工业衣物洗涤。此外，本发明涉及用于洗涤织物和/或衣物的方法，其中该方法包括用含有洗涤剂组合物和至少一种本发明的甘露聚糖酶的洗涤溶液处理织物。例如，可以在机器清洁过程中或者在手动洗涤过程中进行清洁过程或纺织品保养过程。洗涤溶液可以是例如含有洗涤剂组合物的水性洗涤溶液。
经过洗涤、清洁的织物和/或衣物或者本发明的纺织品保养过程可以是常规的可洗涤衣物洗涤，例如家用洗涤。优选地，衣物洗涤的主要部分是衣物和织物，包括针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布。这些织物可以是基于纤维素的，例如天然纤维素，包括棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维或其共混物。这些织物还可以是基于非纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和丝；或者合成聚合物，如尼龙、芳香族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯以及斯潘德克斯弹性纤维(spandex)/弹性纤维；或其共混物以及基于纤维素和基于非纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或几种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻、亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。
最近几年，人们对替换洗涤剂中的组分的兴趣逐渐增加，这源于用可再生生物组分如酶和多肽替换石油化学品而不损害洗涤性能。当洗涤剂组合物的组分改变新酶活性或新酶相比于常用洗涤剂酶(如蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶)具有替代和/或改进的特性时，需要新酶来实现与传统洗涤剂组合物比较时类似或改进的洗涤性能。
典型的洗涤剂组合物包括除酶之外的各种组分，这些组分具有不同的作用，一些组分像表面活性剂降低洗涤剂的表面张力，这允许正在清洁的污渍被提起和分散并随后被洗涤出来，其他组分像漂白系统通常通过氧化去除颜色并且许多漂白剂还具有强杀菌特性，并且用于消毒和灭菌。再其他组分像助洗剂和螯合剂例如通过从液体中去除金属离子来软化洗涤水。
在特定的实施例中，本发明涉及包含α-甘露聚糖降解酶的组合物在衣物洗涤或餐具洗涤中的用途，其中所述酶组合物进一步包含以下中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分。
在本发明的优选的实施例中，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量相比于在未添加α-甘露聚糖降解酶情况下使用的表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量有所减少。优选地，作为表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的至少一种组分以如下量存在，该量比该组分在未添加α-甘露聚糖降解酶的系统中的量(如这种组分的常规量)少1％、例如少2％、例如少3％、例如少4％、例如少5％、例如少6％、例如少7％、例如少8％、例如少9％、例如少10％、例如少15％、例如少20％、例如少25％、例如少30％、例如少35％、例如少40％、例如少45％、例如少50％。在一方面，将α-甘露聚糖降解酶用于洗涤剂组合物中，其中所述组合物不含至少一种组分，该组分是表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分和/或聚合物。
洗涤剂产品的配制
本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。
袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有适合用于容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且可水溶的聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司(MonoSol LLC)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体洗衣清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。可用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同：US2009/0011970 A1。
可以由水溶性袋中的或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。
液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
洗衣皂条
α-甘露聚糖降解酶可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗衣物、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于他们包含的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括包含来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间显著变化的物理形式，即如果固体物体(例如洗衣皂条)被放置在容器里，该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。该条是固体时典型地是条的形式但也可能是其他的固体形状如圆形或椭圆。
该洗衣皂条可以包含一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物如4-甲酸基苯硼酸、一个或多个皂或合成的表面活性剂、多元醇如甘油、pH控制化合物如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐，其中该一价阳离子可以是例如Na+、K+或NH4 +并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，这样使得一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。
洗衣皂条还可以包含复合剂像EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填料、表面活性剂例如阴离子合成表面活性剂、助洗剂、聚合的污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填料、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化的聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、粘土去污剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增亮剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。
洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，该设备例如但不限于：混合器、压条机(例如两级真空压条机)、挤出机、切割机、标识压模、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在过程的不同阶段向皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备含有皂、α-甘露聚糖降解酶、任选的一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂和一价阳离子和有机阴离子的盐的预混物，并且然后将混合物压条。可以同时添加作为例如处于液体形式的蛋白酶抑制剂的α-甘露聚糖降解酶和任选的另外的酶。除了混合步骤和压条步骤以外，该过程还可以进一步包含研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。
颗粒
本发明还涉及包含α-甘露聚糖降解酶的酶颗粒/粒子。在实施例中，颗粒包含核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)。
核心的直径(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
在实施例中，核心包含一种或多种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
该核心可以包括另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包含粘合剂，例如合成聚合物、蜡、脂肪或碳水化合物。
该核心通常作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
该核心可以包含惰性粒子，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施加(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm，具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以被至少一种包衣包围，例如以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他适合的包衣材料，如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、至少1％、至少5％、至少10％或至少15％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选是至少0.1μm厚，特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm厚。在一些实施例中，该包衣的厚度低于100μm，例如低于60μm或低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。层或包衣特别应在厚度上是均匀的。
该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣可以包含按重量计至少60％的盐，例如按重量计至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
为了提供可接受的保护，盐包衣优选是至少0.1μm厚，例如至少0.5μm、至少1μm、至少2μm、至少4μm、至少5μm或至少8μm。在特定的实施例中，盐包衣的厚度低于100μm，例如低于60μm或低于40μm。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中这些细粒子是少于50μm，例如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，特别地具有在20℃在100g水中至少0.1g的溶解度，优选至少0.5g/100g水，例如至少1g/100g水、例如至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别地，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，特别地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)以及柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。
该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4 .7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4 .7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4 .7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。
优选地，作为盐溶液使用该盐，例如使用流化床。
这些包衣材料可以是蜡状包衣材料和成膜包衣材料。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。
颗粒可以任选地具有一种或多种另外的包衣。适合的包衣材料的实例是聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例描述于WO 93/07263和WO 97/23606中。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，例如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，例如：
(a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶的微粒状材料。可以用这种方法产生非常小的粒子(Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant ScienceSeries[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；马塞尔·德克尔公司)。
(b)层状产品，其中酶在预形成的惰性核心粒子周围包衣成层，其中含酶溶液通常在流化床装置中被雾化，在该流化床装置中预形成的核心粒子被流体化并且含酶溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有期望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有期望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于，例如，WO 97/23606中。
(c)吸收的核心粒子，其中不是将该酶在核心周围包衣成层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
(d)挤出或丸粒化的产品，其中将含酶糊剂压成丸粒或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊剂中的热发生，这对酶是有害的(Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；马塞尔·德克尔公司)。
(e)颗粒化的产品，其中含酶粉末悬浮于熔化的蜡中并且例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷洒到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；马塞尔·德克尔公司)。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。美国专利号4,016,040和4,713,245描述了这项技术。
(f)混合器造粒产品，其中将含酶液体添加至常用造粒组分的干燥粉末组合物中。将液体和粉末以适合的比例混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并凝集，并且粒子将累积，形成包含酶的颗粒。这样的方法描述于美国专利号4,106,991和相关文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在此方法的特定产品中，各种高剪切混合器可以用作造粒机。将由酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，并释放更少的酶粉尘。
(g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司]中。
(h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着到其上以形成颗粒。
(i)这些核心可经受干燥，例如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用在饲料或酶工业中用于干燥颗粒的其他已知的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核心在用盐包衣之前含有少量的水。如果在过量水去除之前水敏性酶被盐包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1-10％w/w的水。
可以产生无粉尘颗粒，例如如美国专利号4,106,991和4,661,452中所披露，并且这些颗粒可以任选地通过本领域已知的方法来包衣。
该颗粒可以进一步一种或多种另外的酶。然后，每种酶将存在于更多颗粒中，确保酶的更均匀分布，并且还由于不同的粒度而减少不同酶的物理分离。用于产生多酶共颗粒的方法披露于ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露于WO 2013/188331中。
本发明还涉及根据EP 238,216中披露的方法制备的受保护的酶。
在实施例中，颗粒还包含一种或多种另外的酶，例如，水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶和转移酶。该一种或多种另外的酶优选地选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
液体配制品
本发明还涉及包含α-甘露聚糖降解酶的液体组合物。该组合物可包含酶稳定剂(酶稳定剂的实例包括多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、可逆蛋白酶抑制剂、硼酸或硼酸衍生物(例如，芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰基苯基硼酸))。
在一些实施例中，包括一种或多种填料或一种或多种运载体材料以增加此类组合物的体积。适合的填料或运载体材料包括但不限于硫酸盐、碳酸盐和硅酸盐的各种盐以及滑石、粘土等。用于液体组合物的适合的填料或运载体材料包括但不限于水或低分子量伯醇和仲醇(包括多元醇和二元醇)。此类醇的实例包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇以及异丙醇。在一些实施例中，组合物含有约5％至约90％的此类材料。
在一个方面，本发明涉及液体配制品，其包含：
(A)0.001％至25％w/w的一种或多种具有α-甘露聚糖降解活性的本发明的多肽；和
(B)水。
在另一个实施例中，该液体配制品包含20％至80％w/w的多元醇。在一个实施例中，该液体配制品包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂。
在另一个实施例中，本发明涉及液体配制品，其包含：
(A)0.001％至25％w/w的一种或多种具有α-甘露聚糖降解活性的本发明的多肽；
(B)20％至80％w/w的多元醇；
(C)任选地0.001％至2.0％w/w的防腐剂；和
(D)水。
在另一个实施例中，本发明涉及液体配制品，其包含：
(A)0.001％至25％w/w的一种或多种具有α-甘露聚糖降解活性的本发明的多肽；
(B)0.001％至2.0％w/w的防腐剂；
(C)任选地20％至80％w/w的多元醇；和
(D)水。
在另一个实施例中，液体配制品包含一种或多种配制剂，例如选自下组的配制剂，该组由以下组成：多元醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选选自由以下组成的组：硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。在一个实施例中，多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)，更优选地选自由以下组成的组：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)或其任何组合。
在另一个实施例中，液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，例如，25％-75％多元醇、30％-70％多元醇、35％-65％多元醇或40％-60％多元醇。在一个实施例中，液体配制品包含20％-80％的多元醇，例如，25％-75％多元醇、30％-70％多元醇、35％-65％多元醇或40％-60％多元醇，其中该多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在一个实施例中，液体配制品包含20％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，例如，25％-75％多元醇、30％-70％多元醇、35％-65％多元醇或40％-60％多元醇，其中该多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)。
在另一个实施例中，防腐剂选自由以下组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。在一个实施例中，液体配制品包含0.02％至1.5％w/w的防腐剂，例如，0.05％至1.0％w/w防腐剂、或0.1％至0.5％w/w防腐剂。在一个实施例中，液体配制品包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，例如，0.02％至1.5％w/w防腐剂、0.05％至1.0％w/w防腐剂、或0.1％至0.5％w/w防腐剂，其中该防腐剂选自由以下组成的组：山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在另一个实施例中，液体配制品还包含一种或多种另外的酶，例如，水解酶、异构酶、连接酶、裂解酶、氧化还原酶和转移酶。该一种或多种另外的酶优选地选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
用途
洗涤方法
本发明的洗涤剂组合物理想地适用于在衣物洗涤应用中使用。因此，本发明包括用于洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包含根据本发明的洗涤剂组合物的清洁洗衣溶液接触的步骤。该织物可以包括在正常消费者使用条件下能够被清洗的任何织物。该溶液优选具有从约5.5至约8的pH。可以在溶液中按以下浓度使用这些组合物：从约100ppm，优选500ppm至约15,000ppm。水温的范围典型地是从约5℃至约90℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃以及约90℃。水对织物比率典型地是从约1:1至约30:1。
在特定的实施例中，在从约5.0至约11.5的pH进行该洗涤方法，或在替代性实施例中，甚至在从约6至约10.5，例如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至约7、约5.5至约11、约5.5至约10、约5.5至约9、约5.5至约8、约5.5至约7、约6至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6.5至约11、约6.5至约10、约6.5至约9、约6.5至约8、约6.5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9或约7至约8，优选地约5.5至约9，并且更优选地约6至约8的pH进行该洗涤方法。
在特定的实施例中，在以下硬度下进行该洗涤方法：从约0°dH至约30°dH，例如约1°dH、约2°dH、约3°dH、约4°dH、约5°dH、约6°dH、约7°dH、约8°dH、约9°dH、约10°dH、约11°dH、约12°dH、约13°dH、约14°dH、约15°dH、约16°dH、约17°dH、约18°dH、约19°dH、约20°dH、约21°dH、约22°dH、约23°dH、约24°dH、约25°dH、约26°dH、约27°dH、约28°dH、约29°dH、约30°dH。在典型欧洲洗涤条件下，硬度是约15°dH，在典型美国洗涤条件下，是约6°dH，并且在典型亚洲洗涤条件下，是约3°dH。
本发明涉及用包含α-甘露聚糖降解酶的洗涤剂组合物清洁织物、餐具或硬表面的方法。
优选的实施例涉及清洁方法，所述方法包括以下步骤：在适合于清洁物体的条件下使所述物体与包含α-甘露聚糖降解酶的清洁组合物接触。在优选的实施例中，该清洁组合物是洗涤剂组合物并且该过程是衣物洗涤或餐具洗涤过程。
仍另一个实施例涉及用于从织物上除去污渍的方法，该方法包括在适合于清洁物体的条件下使所述织物与包含α-甘露聚糖降解酶的组合物接触。
低温用途
本发明的一个实施例涉及进行衣物洗涤、餐具洗涤或工业清洁的方法，该方法包括使有待清洁的表面与α-甘露聚糖降解酶接触，并且其中所述衣物洗涤、餐具洗涤、工业或机构清洁在约40℃或更低的温度下进行。本发明的一个实施例涉及α-甘露聚糖降解酶在衣物洗涤、餐具洗涤或清洁过程中的用途，其中衣物洗涤、餐具洗涤、工业清洁中的温度是约40℃或更低。
在另一个实施例中，本发明涉及α-甘露聚糖降解酶在除蛋白过程中的用途，其中除蛋白过程中的温度是约40℃或更低。
在以上确定的方法和用途的每一者中，洗涤温度是约40℃或更低，例如约39℃或更低、例如约38℃或更低、例如约37℃或更低、例如约36℃或更低、例如约35℃或更低、例如约34℃或更低、例如约33℃或更低、例如约32℃或更低、例如约31℃或更低、例如约30℃或更低、例如约29℃或更低、例如约28℃或更低、例如约27℃或更低、例如约26℃或更低、例如约25℃或更低、例如约24℃或更低、例如约23℃或更低、例如约22℃或更低、例如约21℃或更低、例如约20℃或更低、例如约19℃或更低、例如约18℃或更低、例如约17℃或更低、例如约16℃或更低、例如约15℃或更低、例如约14℃或更低、例如约13℃或更低、例如约12℃或更低、例如约11℃或更低、例如约10℃或更低、例如约9℃或更低、例如约8℃或更低、例如约7℃或更低、例如约6℃或更低、例如约5℃或更低、例如约4℃或更低、例如约3℃或更低、例如约2℃或更低、例如约1℃或更低。
在另一个优选的实施例中，洗涤温度在约5℃-40℃的范围内，例如约5℃-30℃、约5℃-20℃、约5℃-10℃、约10℃-40℃、约10℃-30℃、约10℃-20℃、约15℃-40℃、约15℃-30℃、约15℃-20℃、约20℃-40℃、约20℃-30℃、约25℃-40℃、约25℃-30℃或约30℃-40℃。在特别优选的实施例中，洗涤温度是约20℃、约30℃、或约40℃。
防止、减少或去除生物膜
当物品上存在微生物并且在物品上粘在一起时，生物膜会在纺织品上发展。一些微生物倾向于粘附至物品(如纺织品)的表面上。一些微生物粘附在此类表面上并且在表面上形成生物膜。生物膜可以是粘性的并且粘附的微生物和/或生物膜会是难以去除的。此外，由于生物膜的粘性性质，生物膜粘附污垢。市场上可获得的商业衣物洗涤剂组合物并不去除此类粘附的微生物或生物膜。
在实施例中，本发明涉及α-甘露聚糖降解酶用于从物品上防止、减少或去除生物膜的用途，其中该多肽获得自真菌来源并且其中该物品是纺织品。在一个实施例中，α-甘露聚糖降解酶用于防止、减少或去除物品的粘性。
食品加工和动物饲料
因此，本发明涉及包含α-甘露聚糖降解酶的动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品。
本发明进一步涉及用于制备这种动物饲料组合物、和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的方法，该方法包括将α-甘露聚糖降解酶与一种或多种动物饲料成分和/或动物饲料添加剂成分和/或宠物食品成分混合。
此外，本发明涉及α-甘露聚糖降解酶在制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品中的用途。
降解纤维素材料和/或产生发酵产物
α-甘露聚糖降解酶可以用于降解纤维素材料，用于产生发酵产物并且用于发酵纤维素材料，例如，在用于产生发酵产物的方法中，该方法包括：(a)用酶组合物糖化纤维素材料，其中该酶组合物包含α-甘露聚糖降解酶；(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；以及(c)从发酵中回收该发酵产物。可以在糖化之前预处理纤维素材料。在一个实施例中，该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
在另一个实施例中，本发明涉及发酵纤维素材料的方法，该方法包括：用一种或多种发酵微生物发酵纤维素材料，其中将纤维素材料用包含α-甘露聚糖降解酶的酶组合物糖化。可以在糖化之前预处理纤维素材料。在一个实施例中，该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
用于发酵饮料的用途
在一方面，本发明涉及制备发酵饮料(如啤酒或葡萄酒)的方法，该方法包括将α-甘露聚糖降解酶与麦芽和/或辅助剂混合。
另一方面涉及提供发酵饮料的方法，该方法包括使醪液和/或麦芽汁与α-甘露聚糖降解酶接触的步骤。
在本发明的上下文中，术语“发酵饮料”意在包括通过以下方法生产的任何饮料，如葡萄酒或啤酒，该方法包括发酵过程，如微生物、细菌和/或酵母发酵。
在本发明的一个方面，该发酵饮料是啤酒。术语“啤酒”意指包括通过发酵/酿造含淀粉的植物材料生产的任何发酵的麦芽汁。通常，啤酒是由麦芽或辅助剂或麦芽和辅助剂的任何组合作为含淀粉的植物材料生产的。如本文所用，术语“麦芽”被理解为任何发芽的谷类谷粒，如发芽的大麦或小麦。
如本文所用，术语“辅助剂”是指不是麦芽(如大麦或小麦麦芽)的任何含淀粉和/或糖的植物材料。作为辅助剂的实例，可以提及可用作淀粉来源的材料，例如普通玉米糁、精制玉米糁、制啤酒用研磨酵母、水稻、高粱、精制玉米淀粉、大麦、大麦淀粉、去壳大麦、小麦、小麦淀粉、烘培谷类、谷类片、黑麦、燕麦、马铃薯、树薯、木薯和糖浆(例如玉米糖浆、甘蔗糖浆、转化糖浆、大麦和/或小麦糖浆)等。
如本文所用，术语“醪液”是指任何含淀粉和/或糖的植物材料如谷粉(例如包括压碎的大麦麦芽、压碎的大麦)和/或其他辅助剂或其组合的水性浆液，随后与水混合以分离成麦芽汁和废糟。
如本文所用，术语“麦芽汁”是指在淀粉糖化(mashing)期间，对谷粉进行提取后，未发酵的液体流出物(run-off)。
处理咖啡提取物
α-甘露聚糖降解酶也可以用于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖。在某些优选的实施例中，α-甘露聚糖降解酶用于在液体咖啡提取物冷冻干燥期间抑制凝胶形成。提取物粘度的降低减少了干燥期间的能量消耗。在某些其他优选的实施例中，为了减少酶的消耗并避免咖啡提取物的污染，α-甘露聚糖降解酶以固定化形式应用。这种用途还披露于EP 676 145中。
一般而言，在其α-甘露聚糖降解酶的存在下，在适合于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖的条件下孵育咖啡提取物。
因此，在一个实施例中，本发明涉及用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
(b)向所述咖啡豆中添加水和α-甘露聚糖降解酶；
(c)孵育以制造水性咖啡提取物；和
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
在烘焙食品中的用途
在另一方面，本发明涉及制备烘焙产品的方法，该方法包括向面团中添加α-甘露聚糖降解酶，随后烘焙该面团。
烘焙产品的实例是本领域技术人员众所周知的，并且包括面包、面包卷、千层饼、甜发酵面团、小圆面包、蛋糕、咸饼干、饼干、小面包、华夫饼、威化饼、墨西哥玉米粉圆饼、早餐谷物、挤压制品等。
α-甘露聚糖降解酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中。面包改良剂是含有多种成分的组合物，其改善了面团特性和烘焙产品(例如面包和蛋糕)的质量。面包改良剂通常由于其有益效果(例如面团稳定性以及面包质地和体积)而被添加到工业烘焙过程中。面包改良剂通常含有脂肪和油、以及添加剂(像乳化剂、酶、抗氧化剂、氧化剂、稳定剂和还原剂)。除本发明的甘露聚糖酶外，面包改良剂中也可能存在其他酶，包括淀粉酶、半纤维素酶、淀粉分解复合物、脂肪酶、蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、支链淀粉酶、非淀粉多糖降解酶和氧化还原酶(如葡萄糖氧化酶、脂肪氧合酶或抗坏血酸氧化酶)。
在一方面，α-甘露聚糖降解酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中，该面包改良剂组合物还包含葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖源，如魔芋胶、瓜尔胶、刺槐豆胶(长角豆(Ceratonia siliqua))、干椰肉粕、象牙坚果甘露聚糖(象牙椰子(Phyteleohas macrocarpa))、海藻甘露聚糖提取物、椰子粕和啤酒酵母的细胞壁(可以是干燥的，或以啤酒酵母提取物的形式使用)。
本发明的另一方面涉及α-甘露聚糖降解酶在面团中用于改善面团耐受性、柔性和粘性的用途。优选地，可以向其中添加本发明的甘露聚糖酶的面团不是纯小麦面粉面团，而是除了纯小麦面粉之外或代替纯小麦面粉，还包含麸皮或燕麦、大米、小米、玉米或豆类面粉。
本发明的又另一方面涉及α-甘露聚糖降解酶在面团中用于改善瓤结构(crumbstructure)并延缓最终烘焙产品如面包的老化的用途。
在乳制食品中的用途
在本发明的一方面，α-甘露聚糖降解酶可以添加到乳或例如还添加了葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的任何其他乳制品中。
在一方面，本发明涉及制备乳或乳制品的方法，该方法包括向乳或乳制品中添加(a)葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖以及(b)α-甘露聚糖降解酶。
在一方面，在添加到基于乳品的食品中之前或之后，将α-甘露聚糖降解酶与任何葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖组合，以产生包含益生元甘露聚糖水解产物的基于乳品的食品。在本发明的另一方面，如此产生的含甘露寡糖的乳制品能够增加有益人肠道菌群中的种群，并且在本发明的又另一方面，基于乳品的食品可包含α-甘露聚糖降解酶以及葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖的任何来源，并且剂量足以用于接种已知在人类大肠中有益的至少一种细菌菌株(如双歧杆菌或乳酸杆菌)。优选地，所述基于乳品的食品是酸奶或乳饮料。
纸浆漂白
α-甘露聚糖降解酶可进一步用于纸浆(例如化学纸浆、半化学纸浆、牛皮纸浆、机械纸浆或通过亚硫酸盐法制备的纸浆)的酶辅助漂白。因此，本发明涉及漂白纸浆的方法，该方法包括将纸浆与α-甘露聚糖降解酶一起孵育。
在一些实施例中，纸浆是用氧气、臭氧、过氧化物或过氧酸漂白的无氯纸浆。在一些实施例中，α-甘露聚糖降解酶用于展示出低木质素含量的纸浆的酶辅助漂白，该纸浆是通过改良的制浆方法或连续制浆方法生产的。在一些其他实施例中，α-甘露聚糖降解酶单独使用或优选与木聚糖酶和/或内切葡聚糖酶和/或α-半乳糖苷酶和/或纤维二糖水解酶组合使用。
在以下段落中进一步定义本发明：
段落1.一种清洁组合物，其包含：
(a)至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽或者其具有α-甘露聚糖降解活性的变体或片段；以及
(b)至少一种清洁组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和/或另外的酶。
段落2.如段落1所述的清洁组合物，其中该多肽具有α-甘露聚糖酶和/或α-甘露糖苷酶活性。
段落3.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽属于糖基水解酶家族76(GH76)、糖基水解酶家族92(GH92)、糖基水解酶家族99(GH99)，特别是糖基水解酶家族76。
段落4.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该多肽包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。
段落5.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该多肽进一步包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)。
段落6.如段落1-5中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
段落7.如段落1-4中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽进一步包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)。
段落8.如段落1-4或7中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽属于AMXAAE进化枝 并且是真菌来源的。
段落9.如段落1-3中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
段落10.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其包含至少两种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
段落11.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其包含属于GH家族76的多肽和属于GH家族92的多肽；属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽；属于GH家族92的多肽和属于GH家族99的多肽；特别是，属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽。
段落12.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽是微生物的，优选地获得自细菌或真菌。
段落13.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽获得自芽孢杆菌属，例如酸性芽孢杆菌、新芽孢杆菌、或芽孢杆菌属物种的菌株；类芽孢杆菌属，例如解葡聚糖类芽孢杆菌或类芽孢杆菌属物种的菌株；或曲霉属，例如棘孢曲霉的菌株；或腐质霉属，例如特异腐质霉的菌株。
段落14.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落15.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；以及
(i)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落16.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落17.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其包含至少0.001ppm的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
段落18.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其包含0.2wt％至20wt％的表面活性剂。
段落19.如任一项前述段落所述的清洁组合物，其进一步包含具有β-甘露聚糖酶活性的多肽。
段落20.如段落19所述的清洁组合物，其中该具有β-甘露聚糖酶活性的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:67的多肽具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:68的多肽具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:69的多肽具有至少59％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落21.如段落20所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽是与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落22.如段落20所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽是与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落23.如段落20所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽是与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落24.如段落20所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽是与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
段落25.一种颗粒，其包含核心粒子和一种或多种包衣以及具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
段落26.一种液体组合物，其包含多元醇和具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
段落27.如段落1-24中任一项所述的清洁组合物、如段落25所述的颗粒或如段落26所述的液体组合物用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)的用途。
段落28.如段落1-24中任一项所述的清洁组合物、如段落25所述的颗粒或如段落26所述的液体组合物用于以下项的用途：
(a)防止、减少或去除物品的粘性；
(b)防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
(c)在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(d)防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(e)维持或改进物品的白度；或
(f)防止、减少或去除来自物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
段落29.一种用于降解α-甘露聚糖的方法，该方法包括将如段落1-24中任一项所述的清洁组合物、如段落25所述的颗粒或如段落26所述的液体组合物应用至该α-甘露聚糖。
段落30.一种清洁物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使该物品与如段落1-24中任一项所述的清洁组合物、如段落25所述的颗粒或如段落26所述的液体组合物接触；以及
(b)并且任选地冲洗该物品，其中该物品优选地是纺织品或硬表面。
段落31.一种具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽属于糖基水解酶家族76(GH76)、糖基水解酶家族92(GH92)、糖基水解酶家族99(GH99)，特别是糖基水解酶家族76。
段落32.如段落31所述的多肽，该多肽包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。
段落33.如段落31-32中任一项所述的多肽，该多肽进一步包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)。
段落34.如段落31-33中任一项所述的多肽，该多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
段落35.如段落31-32中任一项所述的多肽，该多肽进一步包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)。
段落36.如段落31-32或35中任一项所述的多肽，该多肽属于AMXAAE进化枝并且是 真菌来源的。
段落37.如段落32所述的多肽，该多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
段落38.如任一项前述多肽段落所述的多肽，该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；以及
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段，并且其条件是该分离的或纯化的多肽不是geneseqp：AXR38305的多肽。
段落39.如任一项前述多肽段落所述的多肽，该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；以及
(i)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段，并且其条件是该分离的或纯化的多肽不是geneseqp：AXR38305的多肽。
段落40.如任一项前述多肽段落所述的多肽，该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
段落41.一种具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，该分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少60％序列同一性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与SEQ ID NO:1、SEQID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列的全长互补序列杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ IDNO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ IDNO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少60％序列同一性；
(d)(a)、(b)、或(c)的多肽的片段，该片段具有α-甘露聚糖降解活性；并且其条件是该分离的或纯化的多肽不是geneseqp：AXR38305的多肽。
段落42.如段落35所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ IDNO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落43.如段落41或42所述的多肽，该多肽由如下多核苷酸编码，该多核苷酸在中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下、或非常高严格条件下与SEQ ID NO:1、SEQID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列的全长互补序列杂交。
段落44.如段落41-43中任一项所述的多肽，该多肽由如下多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。
段落45.如段落41-44中任一项所述的多肽，该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、或SEQ ID NO:56的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包含取代、缺失和/或插入。
段落46.如段落41-45中任一项所述的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、或SEQ ID NO:56或其成熟多肽，基本上由其组成或由其组成。
段落47.如段落41-46中任一项所述的多肽，该多肽是SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、或SEQ ID NO:56或其成熟多肽的片段，其中该片段具有α-甘露聚糖降解活性。
段落48.一种融合多肽，其包含如段落41-47中任一项所述的多肽和第二多肽。
段落49.一种颗粒，其包含：(a)含有如段落31-48中任一项所述的多肽的核心，以及任选地(b)由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
段落50.一种组合物，其包含如段落31-48中任一项所述的多肽。
段落51.一种液体组合物，其包含多元醇和如段落31-48中任一项所述的多肽。
段落52.一种全培养液配制品或细胞培养组合物，该全培养液配制品或细胞培养组合物包含如段落31-48中任一项所述的多肽。
段落53.一种分离的或纯化的多核苷酸，该分离的或纯化的多核苷酸编码如段落31-48中任一项所述的多肽。
段落54.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如段落53所述的多核苷酸，其中该多核苷酸优选地可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
段落55.一种重组宿主细胞，其包含如段落53所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
段落56.如段落55所述的重组宿主细胞，其中该多肽与该重组宿主细胞是异源的。
段落57.一种产生如段落31-48中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽。
段落52.如段落51所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。
段落53.如段落31-48中任一项所述的多肽用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)的用途。
段落54.如段落31-48中任一项所述的多肽用于以下项的用途：
(a)防止、减少或去除物品的粘性；
(b)防止、减少或去除生物膜或生物膜组分；
(c)在洗涤循环期间防止、减少或去除污垢的再沉积；
(d)防止、减少或去除污垢在物品上的附着；
(e)维持或改进物品的白度；或
(f)防止、减少或去除来自物品的恶臭，
其中该物品是纺织品。
段落55.一种用于降解α-甘露聚糖的方法，该方法包括将如段落31-48中任一项所述的多肽应用至该α-甘露聚糖。
段落56.一种清洁物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使该物品与如段落31-48中任一项所述的多肽接触；以及
(b)并且任选地冲洗该物品，其中该物品优选地是纺织品或硬表面。
段落57.一种用于制备食品或饲料组合物和/或食品或饲料添加剂的方法，该方法包括将如段落31-48中任一项所述的多肽、如段落49所述的颗粒、如段落50所述的组合物或如段落51所述的液体组合物与一种或多种食品或饲料和/或食品或饲料添加剂成分混合。
段落58.一种用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
(b)向所述咖啡豆中添加水和如段落25-48中任一项所述的多肽、如段落49所述的颗粒、如段落50所述的组合物或如段落51所述的液体组合物；
(c)孵育以制造水性咖啡提取物；以及
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
段落59.一种用于降解纤维素材料的方法，该方法包括：用如段落25-48中任一项所述的多肽、如段落49所述的颗粒、如段落50所述的组合物或如段落51所述的液体组合物处理该纤维素材料。
段落60.一种用于产生发酵产物的方法，该方法包括：
(a)在如段落25-48中任一项所述的多肽、如段落49所述的颗粒、如段落50所述的组合物或如段落51所述的液体组合物的存在下，用酶组合物糖化纤维素材料；
(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；以及
(c)从发酵中回收该发酵产物。
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
实例
材料
用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。
标准洗涤剂
通过将含有12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(Nl)、17.63％AEOS(SLES)、6％MPG、3％乙醇、3.33％TEA(三乙醇胺)、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、1.7％甘油、1.75％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.48％DTMPA和0.46％PCA(所有的百分数都是w/w(重量体积))的3.33g/l标准洗涤剂A溶解在具有硬度15dH的水中制备标准洗涤剂A洗涤液(100％)。
通过将含有NaOH 0.87％、MPG(一丙醇)6％、甘油2％、皂-大豆2.75％、皂-可可2.75％、PCA(Sokalon CP-5)0.2％、AEO Biosoft N25-7(NI)16％、甲酸钠1％、柠檬酸钠2％、DTMPA 0.2％、乙醇(96％)3％、用NaOH或柠檬酸调节pH值添加水至100％(所有的百分数都是w/w(重量体积))的3.33g/l非离子洗涤剂溶解在具有硬度15dH的水中制备Triple-20非离子标准洗涤剂(60％表面活性剂)。
标准洗涤剂MC：制备含有5％MPG(丙二醇)、5％Pluronic PE 4300(PO/EO嵌段聚合物；70％/30％，约1750g/mol)、2％Plurafac LF 305(脂肪醇烷氧基化物；C6-10+EO/PO)、1％MGDA(甲基甘氨酸二乙酸、1％TEA(三乙醇胺)(所有的百分数都是w/w)的医用清洁标准洗涤剂(标准洗涤剂MC)。将pH用磷酸调节至8.7。
迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)标准洗涤系统
迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤系统，其是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗衣机并且在一次实验过程中，每个试管将包含一种具有特定的有待测试的洗涤剂/酶系统连同在关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
LOM标准洗涤系统主要用于洗涤剂和酶的中等规模测试，在例如欧洲洗涤条件下。在LOM实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前装式洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。在迷你LOM中，洗涤是在置于斯图尔特(Stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
实例1：还原端测定
为了估计在底物水解后的甘露糖产率，使用了由Lever(Anal.Biochem.[分析生物化学]47:273-279,1972)开发的还原端测定。该测定是基于4-羟基苯甲酸酰肼，它在碱性条件下与糖的还原端反应。产物是强黄色阴离子，在405nm吸收。
方法.水解反应混合物由溶解在缓冲液中的20μL酶和180μL底物组成。底物是按2mg/mL浓度的如别处描述(Cuskin,Nature[自然],2015,517,165-169)制备的α-1,6-甘露聚糖。缓冲液是25mM乙酸盐、pH 5.5、50mM KCl、0.01％Triton X-100、1mM CaCl2。反应条件为30分钟、37℃、和950rpm。在PAHBAH缓冲液中将4-羟基苯酰肼(PAHBAH)(西格玛公司(Sigma)，H9882)稀释至15mg/ml的浓度。PAHBAH缓冲液含有：50g/L K-Na-酒石酸盐(默克公司(Merck)，1.08087)和20g/L氢氧化钠(西格玛公司，S8045)。就在使用前制成这一PAHBAH混合物。在96孔PCR板(赛默科技公司(Thermo Scientific))中混合70μL PAHBAH混合物和MiliQ水。添加来自水解实验的样品。样品和MiliQ总是达到150μL的总体积，但是样品的稀释度不同。用粘性PCR密封箔片(赛默科技公司)密封该板。在PTC-200热循环仪(MJ研究公司(MJ Research))中将板在95℃孵育10min，冷却并且保持在10℃持续1min。将100μL样品转移至平底96孔微量滴定板(NuncTM)中，并且在SpectraMax 190吸光度酶标仪(分子装置公司(Molecular Devices))上，在405nm测量显色。将结果与甘露糖标准品进行比较，这些甘露糖标准品已经经历了与其进行比较的样品相同的处理和稀释。
实例1A：β-甘露聚糖酶测定
为了估计β-甘露聚糖酶活性，使用了由Lever(Anal.Biochem.[分析生物化学]47:273-279,1972)开发的还原端测定。该测定是基于4-羟基苯甲酸酰肼，它在碱性条件下与糖的还原端反应。产物是强黄色阴离子，在405nm吸收。
方法.水解反应混合物由溶解在缓冲液中的20μL酶和180μL底物组成。底物是刺槐豆胶(5g/L)并且缓冲液是0.1M磷酸钠pH 7.5。反应条件为20分钟、37℃、和950rpm。在PAHBAH缓冲液中将4-羟基苯酰肼(PAHBAH)(西格玛公司，H9882)稀释至15mg/ml的浓度。PAHBAH缓冲液含有：50g/L K-Na-酒石酸盐(默克公司，1.08087)和20g/L氢氧化钠(西格玛公司，S8045)。就在使用前制成这一PAHBAH混合物。在96孔PCR板(赛默科技公司)中混合70μL PAHBAH混合物和MiliQ水。添加来自水解实验的样品。样品和MiliQ总是达到150μL的总体积，但是样品的稀释度不同。用粘性PCR密封箔片(赛默科技公司)密封该板。在PTC-200热循环仪(MJ研究公司)中将板在95℃孵育10min，冷却并且保持在10℃持续1min。将100μL样品转移至平底96孔微量滴定板(NuncTM)中，并且在SpectraMax 190吸光度酶标仪(分子装置公司)上，在405nm测量显色。将结果与甘露糖标准品进行比较，这些甘露糖标准品已经经历了与其进行比较的样品相同的处理和稀释。
实例2：来自细菌菌株的α-甘露聚糖降解酶的克隆和表达
α-甘露聚糖降解酶来源于通过标准微生物分离技术从环境样品中分离的细菌菌株。鉴定分离的纯菌株并基于16S核糖体基因的DNA测序对分类进行指定(表1)。从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)购买了一种菌株(即环状芽孢杆菌ATCC 21590)，但基于16S核糖体基因测序的结果将其指定为解葡聚糖类芽孢杆菌物种。
表1：
Figure BDA0003001376650001181
Figure BDA0003001376650001191
样品1-6的制备：
用来自凯杰公司(Qiagen)(希尔登，德国)的DNA酶血液和组织试剂盒(DNeasyBlood&Tissue Kit)从纯培养物中分离染色体DNA，并使用Illumina技术进行全基因组测序。基因组测序，随后的读取的装配和基因发现(即基因功能的注释)对于本领域技术人员是已知的并且该服务是可商购的。
分析了来自CAZY数据库GH76家族的推定的α甘露聚糖酶的基因组序列(LombardV,Golaconda Ramulu H,Drula E,Coutinho PM,Henrissat B(2014)The Carbohydrate-active enzymes database(CAZy)in 2013[2013年碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495.)。该分析鉴定了6个编码推定的GH76甘露聚糖酶的基因，这些基因随后被克隆并在枯草芽孢杆菌中重组表达。
线性整合构建体是SOE-PCR融合产物(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)Engineering hybrid genes without the use of restrictionenzymes,gene splicing by overlap extension[不使用限制酶，通过重叠延伸的基因剪接进行的工程化杂种基因]Gene[基因]77:61-68)，该融合产物由两个枯草芽孢杆菌染色体区域之间的基因连同强启动子与氯霉素抗性标记的融合制备。专利申请WO 2003095658中也描述了SOE-PCR方法。
在三联启动子系统(如WO 99/43835中所述)的控制下表达甘露聚糖酶基因，该启动子系统由包含稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。
用编码克劳氏芽孢杆菌分泌信号的DNA(编码以下氨基酸序列：MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA(SEQ ID NO:58))替代天然的分泌信号来融合基因。此外，表达构建体导致向成熟甘露聚糖酶添加由氨基酸序列HHHHHHPR(SEQ ID NO:59)组成的氨基末端聚组氨酸标签，以利于通过固定化金属亲和色谱法容易地纯化。
该SOE-PCR产物被转化进枯草芽孢杆菌中并且在染色体上通过同源重组将其整合到果胶裂解酶位点中。随后将包含该整合表达构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆在液体培养基中进行生长。将培养液离心(20000x g，20min)并且将上清液小心地与沉淀物倾析分开，并用于酶的纯化，或可替代地将无菌过滤的上清液直接用于测定。
通过固定化金属亲和色谱法纯化重组酶
将澄清上清液的pH调节至pH 8，通过0.2μM滤器进行过滤，并且将上清液施加于5ml HisTrapTM excel柱上。在加载之前，该柱已经在5个柱体积(CV)的50mM Tris/HCl pH 8中平衡。为了去除未结合的材料，将该柱用8CV的50mM Tris/HCl pH 8洗涤，并且靶标的洗脱是用50mM HEPES pH 7+10mM咪唑获得。将洗脱的蛋白质在HiPrepTM 26/10脱盐柱上进行脱盐，将该脱盐柱使用3CV的50mM HEPES(pH 7)+100mM NaCl进行平衡。也将此缓冲液用于靶标的洗脱，并且流速是10ml/min。选择相关级分，并且基于色谱图和SDS-PAGE分析进行合并。
样品7-11的制备：
根据以上方案克隆和表达菌株。
实例3：来自棘孢曲霉的α-甘露聚糖降解酶的克隆和表达
α甘露聚糖降解酶来源于1962年从热带土壤样品中分离的棘孢曲霉菌株CBS172.66。
使用土壤用FastDNA spin试剂盒(MP生物医疗公司(MP Biomedicals)，俄亥俄州，美国)从棘孢曲霉菌株CBS172.66分离出基因组DNA。
分析了来自CAZY数据库GH76家族的推定的α甘露聚糖酶的联合基因组研究所(Joint Genome Institute)棘孢曲霉ATCC16872基因组组装v1序列(Lombard V,GolacondaRamulu H,Drula E,Coutinho PM,Henrissat B(2014)The Carbohydrate-active enzymesdatabase(CAZy)in 2013[2013年碳水化合物活性酶数据库(CAZy)]Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。该分析鉴定了编码推定的GH76甘露聚糖酶的基因，这些基因随后被克隆并在米曲霉中重组表达。
使用基因特异性引物(其也在起始密码子的5'附近附加Kozak翻译起始序列“TCCACC”)，通过PCR扩增从基因组DNA克隆编码推定的GH76甘露聚糖酶的基因。使用BamHI和XhoI限制性酶切位点，如WO 2013024021中所述将扩增的DNA片段克隆到克隆到表达载体pDAu222中。
证实了克隆于表达载体中的、编码推定的GH76甘露聚糖酶的基因的序列，并将该表达构建体转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中，以产生具有蛋白质序列SEQ IDNO:33的分泌成熟肽。在从原生质体再生期间，在乙酰胺上选择转化体，并且随后在选择下重新分离(Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO 04/032648)。
为了产生重组甘露聚糖酶，将单个曲霉属转化体在各自含有150ml的DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)的二十个500ml带挡板烧瓶中进行培养。将培养物在旋转台上在30℃下以100RPM振荡4天。随后将培养液通过穿过0.22μm过滤器与细胞材料分离。
重组棘孢曲霉甘露聚糖酶的纯化
将过滤液调节至pH 7.0并且在0.22μm PES滤器(Nalge Nunc International公司，耐尔根实验室耗材(Nalgene labware)目录号#595-4520)上过滤。然后，向滤液中添加1.8M硫酸铵。将滤液加载到用1.8M硫酸铵、25mM HEPES pH 7.0平衡的Phenyl SepharoseTM6快流柱(Fast Flow column)(高取代(high sub)(GE医疗集团(GE Healthcare)，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上。用1.0M硫酸铵、25mM HEPES pH 7.0洗脱结合的蛋白质。收集多个级分并且通过SDS-PAGE进行分析。将级分合并并且将其施加到在25mM HEPES pH 7.0中平衡的SephadexTM G-25(中等)(GE医疗集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)柱上。然后将这些级分施加到在25mM HEPES(pH 7.0)中平衡的SOURCETM 15Q(GE医疗集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)柱上，并且用从0-1000mM氯化钠的线性梯度经20CV对结合的蛋白质进行洗脱。收集多个级分并且通过SDS-PAGE进行分析。
实例4.来自真菌菌株的α-甘露聚糖降解酶的克隆、表达和纯化
从两种真菌菌株中克隆了七个编码α-甘露聚糖酶的基因，这些α-甘露聚糖酶属于CAZy定义的蛋白质家族GH76(www.cazy.org,Lombard V,等人(2014)Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)，这些真菌菌株从环境样品中分离并且在下表2中进行描述。可从CBS-KNAW真菌生物多样性中心(Fungal Biodiversity Centre，乌得勒支(Utrecht)，荷兰)获得棘孢曲霉分离株(即CBS 101.43)。
表2.
Figure BDA0003001376650001221
通过本领域技术人员已知的标准方法分离染色体DNA并将其用于全基因组测序。用IDBA或SPAdes基因组组装软件组装全基因组序列(Peng,Y.等人Bioinformatics[生物信息学].(2012),28:1420-1428和Bankevich,A.等人J Comput Biol[计算生物学杂志].(2012)19(5):455-77)，并用GeneMark 2.3c或GeneMark ES v4.28基因预测软件在基因组上注释基因(Ter-Hovhannisyan V.等人Genome Res[基因组研究].(2008)18(12):1979-90.)。
针对与GH76结构域的相似性，检索从全基因组序列上注释的基因预测的肽序列集。上表列出了在该检索中鉴定出的七种肽，以及核苷酸和肽序列的SEQ ID NO。使用基因特异性引物(其也在起始密码子的5'附近附加Kozak翻译起始序列“TCACC”)，通过PCR扩增从基因组DNA克隆编码这些肽的基因。六种α-甘露聚糖酶的预测肽(对应于SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54)包括在C末端处的预测GPI锚或跨膜结构域。为促进重组蛋白的分泌并避免GPI或跨膜结构域介导的锚定到细胞膜，设计PCR引物以扩增截短的肽，这些截短的肽包括预测的GH76催化结构域的完整编码区，但不包括C末端GPI或跨膜结构域。经由返回PCR引物框内添加终止密码子。为了表达而扩增的截短的核苷酸序列分别示于SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQID NO:48、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:54中。将扩增的DNA片段克隆到已经用BamHI和XhoI消化的曲霉属表达载体pMStr57(WO 04/032648)中。
对克隆基因进行测序并确认其与基因组序列中发现的相应基因相同，并通过Christensen等人,1988,Biotechnology[生物技术]6,1419-1422和WO 04/032648中描述的方法转化到米曲霉菌株MT3568(WO 11/057140)中。基于由表达载体中的选择性标记赋予的能力，在从原生质体再生期间选择转化体，以利用乙酰胺作为氮源，并且随后在选择下将这些转化体再分离两次。
通过在96孔深孔微量滴定板中在30℃在0.25ml的YPG培养基(WO 05/066338)中或DAP-4C-1培养基(WO 12/103350)中将转化体培养4天并通过SDS-PAGE监测重组表达来评估重组多肽的产生。
来自棘孢曲霉和特异腐质霉的七个家族GH76α-甘露聚糖酶的色谱纯化
为了大规模产生重组α-甘露聚糖酶，针对每个基于重组产率的甘露聚糖酶选择单个曲霉属转化体，将这些转化体在含有150ml的DAP-4C-1培养基的500ml带挡板烧瓶中进行培养。将培养物在旋转台上在30℃的温度以150RPM振荡4天。将培养液通过穿过0.22um过滤单元与细胞材料分离。
为了纯化样品，将经过滤的样品的pH调节至约pH 7.5，并添加1.8M硫酸铵(AMS)。将这些样品施加至
Figure BDA0003001376650001231
Explorer上的5ml HiTrapTM Phenyl(HS)柱上。在加载之前，该柱已在5个柱体积(CV)的50mM HEPES+1.8M AMS(pH 7)中平衡。为了去除未结合的材料，将该柱用5CV的50mM HEPES+1.8M AMS(pH 7)进行洗涤。使用50mM HEPES+20％异丙醇pH 7将靶蛋白从柱洗脱到10ml环中。从该环中，将样品加载到已经用3CV的50mM HEPES+100mM NaCl pH7.0平衡的脱盐柱(HiPrepTM 26/10脱盐)上。将靶蛋白用50mM HEPES+100mM NaCl pH 7.0洗脱，选择相关级分，并基于色谱图进行合并。流速为5ml/min。
通过测量280nm处的吸收来估计最终样品中的蛋白质浓度。
实例5：微细规模洗涤测定(Milliscale wash assay)(MISWA96)：
生物膜小块布样的制备
生物膜小块布样(10cm x 10cm)是通过在聚酯小块布样上使短波单胞菌属物种生长三天来制备的。将生物膜小块布样在水中冲洗两次并在laf工作台中伴随流动干燥2h，随后冲压成圆形小块布样圈(0.6cm x 0.6cm)，并放入MTP96的孔中，并在4℃下储存以供进一步使用。
洗涤实验
将小块布样从MTP96转移到深孔MTP96，以进行洗涤测定。将深孔板置于Hamilton机器人中并使用以下条件进行洗涤模拟程序：振荡速度：在1000rpm下30秒。洗涤循环的持续时间：伴随振荡30分钟；温度30℃；洗涤液量(总量)：500μl/孔(490μl标准洗涤剂A洗涤液+10μl样品)。为了筛选α-甘露聚糖降解酶的洗涤性能，通过在15°dH的水硬度中溶解3.3g/L来制备洗涤液标准洗涤剂A。随后添加污垢以达到0.7g污垢/L(WFK 09V颜料污垢)的浓度。
将96深孔板用每个酶样品装满，并在机器人上启动程序。测试了浓度为0.5ppm的α-甘露聚糖降解酶。空白由没有添加任何酶的生物膜小块布样组成。在完成洗涤模拟循环之后，将小块布样从洗涤液中取出并在滤纸上干燥。将干燥的小块布样固定在一张白纸上用于扫描。扫描的图像进一步由软件颜色分析仪使用。每个样品具有强度测量(来自颜色分析仪软件分析)，其将用于通过减去不含酶的空白强度来计算Δ强度。超过20Δ强度的值表示视觉清洁效果。这些数据示于表3中。
表3.α-甘露聚糖降解酶的洗涤性能。
Figure BDA0003001376650001241
Figure BDA0003001376650001251
如上所述，还测试了单独的不同α-甘露聚糖降解酶的组合效果，但是测试的每种α-甘露聚糖降解酶的浓度为0.5ppm(总酶浓度为1ppm)。这些数据示于表4中。
表4.α-甘露聚糖降解酶的洗涤性能。
Figure BDA0003001376650001252
实例6：进化枝和系统发生树的构建
GH76系统发生树
构建包含如CAZY中的定义的GH76结构域(GH76，糖苷水解酶家族76，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V,等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)的多肽序列的系统发生树。系统发生树是从包含至少一个GH76结构域的成熟多肽序列的多重比对构建。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic Acids Research[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对，并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloSone[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。
含有GH76结构域的多肽包含几个基序。一个实例是[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)，其位于解葡聚糖类芽孢杆菌(SEQ ID NO:3)中的位置124至127，其中位置124处的D是该家族的催化亲核试剂，并且位置125处的D是通用酸/碱，并且在本发明的多肽中是完全保守的。可以由本发明的多肽包含的另一个基序是GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)，其位于与解葡聚糖类芽孢杆菌(SEQ ID NO:3)中的位置167至171对应的位置。
可以将包含GH76结构域的多肽进一步分成多个不同的子簇或进化枝，其中我们表示了下面列出的进化枝。
AMXAAE进化枝(GH76真菌)
可以将含有GH76结构域的多肽分成不同的子簇。子簇由一个或多个短序列基序定义，并包含如CAZY中定义的GH76结构域(GH76，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V,等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)。
我们将一个包含基序[GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO：62)的子簇称为AMXAAE进化枝。它位于棘孢曲霉(SEQ ID NO：36)中的位置99至107。含有GH76结构域以及基序的所有多肽序列将被表示为属于AMXAAE进化枝。AMXAAE进化枝包含主要是真菌来源的多肽。
可以由AMXAAE进化枝的成员包含的另一个基序是LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)，其位于与棘孢曲霉(SEQ ID NO:36)中的位置122至127对应的位置。
AMXAAE进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:51、和SEQ ID NO:54。
KNTPA进化枝(GH76细菌)
使用上述系统发生树，可以将含有GH76结构域的多肽分成另外的不同的子簇。一个进化枝表示为KNTPA，其包含细菌来源的多肽。
KNTPA进化枝的成员必须是细菌来源的，并且含有基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)，其对应于来自解葡聚糖类芽孢杆菌的SEQ ID NO 3中的位置147至155处的氨基酸KNTPANAPA(SEQ ID NO:65)。
KNTPA进化枝的多肽的实例包括SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、和SEQ ID NO:57。
GH99系统发生树和NEWHE进化枝
构建包含如CAZY中的定义的GH99结构域(GH99，糖苷水解酶家族99，CAZy数据库，www.cazy.org，Lombard V,等人2014,Nucleic Acids Res[核酸研究]42:D490-D495)的多肽序列的系统发生树。系统发生树是从包含至少一个GH92结构域的成熟多肽序列的多重比对构建。使用MUSCLE算法版本3.8.31(Edgar,2004.Nucleic Acids Research[核酸研究]32(5):1792-1797)对序列进行比对，并且使用FastTree版本2.1.8(Price等人,2010,PloSone[公共科学图书馆·综合]5(3))构建树并使用iTOL(Letunic和Bork,2007.Bioinformatics[生物信息学]23(1):127-128)对树进行可视化。
含有GH99结构域的多肽包含几个基序。一个实例是N[EQD][WFY][HG]E(SEQ IDNO:66)，其位于金黄杆菌属物种(SEQ ID NO:30)的位置296至300，其中位置322处的E是该家族的通用酸/碱，并且在该家族中是完全保守的。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的具体方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明几方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，本发明的各种修改因前述说明而对本领域的技术人员变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

Claims (25)

1.一种清洁组合物，其包含：
(a)至少一种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽或者其具有α-甘露聚糖降解活性的变体或片段；以及
(b)至少一种清洁组分，优选地选自表面活性剂、助洗剂、漂白组分、聚合物、分散剂和/或另外的酶。
2.如权利要求1所述的清洁组合物，其中该多肽具有α-甘露聚糖酶和/或α-甘露糖苷酶活性。
3.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽属于糖基水解酶家族76(GH76)、糖基水解酶家族92(GH92)、糖基水解酶家族99(GH99)，特别是糖基水解酶家族76。
4.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该多肽包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。
5.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该多肽进一步包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)。
6.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
7.如权利要求1-4中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽进一步包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)。
8.如权利要求1-4或7中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽属于AMXAAE进化枝并且是真菌来源的。
9.如权利要求1-3中任一项所述的清洁组合物，其中该多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
10.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其包含至少两种具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
11.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其包含属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽；属于GH家族76的多肽和属于GH家族92的多肽；属于GH家族92的多肽和属于GH家族99的多肽；特别是，属于GH家族76的多肽和属于GH家族99的多肽。
12.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽获得自芽孢杆菌属，例如酸性芽孢杆菌、新芽孢杆菌、或芽孢杆菌属物种的菌株；类芽孢杆菌属，例如解葡聚糖类芽孢杆菌或类芽孢杆菌属物种的菌株；或曲霉属，例如棘孢曲霉的菌株；或腐质霉属，例如特异腐质霉的菌株。
13.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其中该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(b)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(c)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(d)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(e)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(f)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(g)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(h)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽；以及
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽。
14.如任一项前述权利要求所述的清洁组合物，其包含至少0.001ppm的具有α-甘露聚糖降解活性的多肽。
15.一种用于降解α-甘露聚糖的方法，该方法包括将如权利要求1-14中任一项所述的清洁组合物应用至该α-甘露聚糖。
16.一种清洁物品的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使该物品与如权利要求1-14中任一项所述的清洁组合物接触；以及
(b)并且任选地冲洗该物品，其中该物品优选地是纺织品或硬表面。
17.一种具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，其中该具有α-甘露聚糖降解活性的多肽属于糖基水解酶家族76(GH76)、糖基水解酶家族92(GH92)、糖基水解酶家族99(GH99)，特别是糖基水解酶家族76。
18.如权利要求17所述的多肽，该多肽包含以下基序的一个或多个：[YND]DD[QINLEM](SEQ ID NO:60)和GG[ILMV]X[WS](SEQ ID NO:61)。
19.如权利要求17-18中任一项所述的多肽，该多肽进一步包含基序[RK][NLT]XXX[NTV]XP[GTLYISAVFNM](SEQ ID NO:64)。
20.如权利要求17-19中任一项所述的多肽，该多肽属于KNTPA进化枝并且是细菌来源的。
21.如权利要求17-18中任一项所述的多肽，该多肽进一步包含基序GA]XX[AVL][ML]X[MA][ATV][EATV](SEQ ID NO:62)或基序LA[EQ]X[VL][YF](SEQ ID NO:63)。
22.如权利要求17-18或21中任一项所述的多肽，该多肽属于AMXAAE进化枝并且是真菌来源的。
23.如权利要求17所述的多肽，该多肽包含基序N[EQD][WFY][HG]E(SEQ ID NO:66)。
24.如任一项前述多肽权利要求所述的多肽，该多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:24的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(b)与SEQ ID NO:3的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(c)与SEQ ID NO:6的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(d)与SEQ ID NO:9的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(e)与SEQ ID NO:12的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(f)与SEQ ID NO:15的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(g)与SEQ ID NO:18的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(h)与SEQ ID NO:21的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(i)与SEQ ID NO:27的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(j)与SEQ ID NO:30的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(k)与SEQ ID NO:33的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(l)与SEQ ID NO:36的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(m)与SEQ ID NO:39的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(n)与SEQ ID NO:42的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(o)与SEQ ID NO:45的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(p)与SEQ ID NO:48的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(q)与SEQ ID NO:51的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；
(r)与SEQ ID NO:54的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段；以及
(s)与SEQ ID NO:57的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的多肽或其具有α-甘露聚糖降解活性的片段。
25.一种具有α-甘露聚糖降解活性的分离的或纯化的多肽，该分离的或纯化的多肽选自由以下组成的组：
(a)与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:53、SEQ ID NO:56的成熟多肽具有至少60％序列同一性的多肽；
(b)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ ID NO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ ID NO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列的全长互补序列杂交；
(c)由如下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:25、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:31或其cDNA序列、SEQ ID NO:34或其cDNA序列、SEQ IDNO:37或其cDNA序列、SEQ ID NO:40或其cDNA序列、SEQ ID NO:43或其cDNA序列、SEQ IDNO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:46或其cDNA序列、SEQ ID NO:49或其cDNA序列、SEQ IDNO:52或其cDNA序列、或SEQ ID NO:55的成熟多肽编码序列具有至少60％序列同一性；
(d)(a)、(b)、或(c)的多肽的片段，该片段具有α-甘露聚糖降解活性。
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