JP2022524490A - α-アミラーゼ変異体及びこれをコードするポリヌクレオチド - Google Patents

α-アミラーゼ変異体及びこれをコードするポリヌクレオチド Download PDF

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Abstract

本発明は、親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体に関し、ここで、前記α-アミラーゼ変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して改善した洗浄性能を有する。本発明は、また、本発明の変異体を含む組成物、前記変異体の使用及び前記変異体を生成する方法にも関する。

Description

配列表の参照
本出願は、コンピュータ読み取り可能な形態の配列表を含んでおり、これは本明細書において参照により援用される。
本発明は、α-アミラーゼ変異体、変異体をコードするポリヌクレオチド、変異体を生成する方法、並びにこれらの変異体を使用する方法に関する。
α-アミラーゼ(α-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ、E.C.3.2.1.1)は、内部α-1,4-グリコシド結合を切断することにより、デンプン、グリコーゲン、及び他の関連多糖類を加水分解する酵素群である。これは、例えば、α-アミラーゼが、デンプン含有、又はデンプンベースとする汚れの除去に有益な効果を有することがよく知られるランドリーにおいて長年にわたり使用されている。しかし、他の商業用途において、上記酵素は、デンプン加工の初期段階(液化)、生地の糊抜き、アルコール生産などで、並びに洗剤組成物中の洗浄剤として重要になっている。
近年、様々なアミラーゼの特性を改善する要望がある。特に、エネルギー消費を低減するために、ランドリーの温度を下げる目標は、家庭用品部門に関して、主要な焦点となっている。従って、改善されたα-アミラーゼ変異体を見出すことに多くの努力が為されてきた。
それにもかかわらず、改変された特性を有し、及び様々な産業用途で改善された性能を提供するα-アミラーゼ変異体に対するニーズが、依然として存在する。従って、本発明は、その親と比較して改善された特性を備える、そのようなさらに改善されたα-アミラーゼ変異体を提供する。
本発明の目的は、特に自動洗浄機及び/又は食器洗浄機に使用するための、改善された洗浄性能を有するα-アミラーゼ活性を有するポリペプチド(α-アミラーゼ)を提供することである。
本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ若しくは複数の位置に修飾を含む親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、前記変異体がα-アミラーゼ活性を有し、及び前記変異体が配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、及び前記変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能を有し、及び前記親α-アミラーゼは、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列を有する、α-アミラーゼ変異体に関する。
本発明はまた、変異体をコードするポリヌクレオチド;ポリヌクレオチドを含む核酸構築物、ベクター、及び宿主細胞;並びに変異体を生産する方法にも関する。
本発明はまた、親α-アミラーゼの洗浄性能を改善する方法にも関する。
定義
この詳細な説明に従って、以下の定義が適用される。単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」、及び「その」は、文脈から明らかに別の解釈が要求されない限り、複数の指示物を包含することに留意されたい。
本明細書において、数値又はパラメータの前で「約」と言うとき、当該数値又はパラメータ自体に向けた態様を含む。例えば、「約X」という表現は、態様「X」を含む。
文脈から別に定義されるか又は明らかに指示されるのでない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の技術者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。
「α-アミラーゼ」という用語は、「α-アミラーゼ活性を有するポリペプチド」という用語と同義である。「α-アミラーゼ活性」という用語は、デンプン並びに他の直鎖及び分岐1,4-グリコシドオリゴ糖及び多糖類の加水分解を触媒する酵素群を構成するα-1,4-グルカン-4-グルカノヒドロラーゼ(E.C.3.2.1.1)の活性を意味する。従って、本明細書で使用される「α-アミラーゼ」という用語は、グルコース及びマルトースをもたらす、デンプン及びグリコーゲンなどの大型α-連結多糖のα結合を加水分解するα-アミラーゼ活性を有する酵素(酵素クラス;EC3.2.1.1)を指す。「α-アミラーゼ」及び「アミラーゼ」という用語は、本明細書において置き換え可能に使用され、同じ意味及び目的となり得る。本発明の目的のために、α-アミラーゼ活性は、方法という副題の下で以下に説明される手順に従って決定される。一態様では、本発明のα-アミラーゼは、配列番号1~17のポリペプチドの1つ若しくは複数の少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも100%のα-アミラーゼ活性を有する。
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、標準的な20の遺伝子コード化アミノ酸及びそれらの対応する「d」型立体異性体(天然「l」型と比較して)、オメガ-アミノ酸、他の天然に存在するアミノ酸配列、非標準アミノ酸(例えば、α、α-二置換アミノ酸、N-アルキルアミノ酸など)及び化学的誘導体化アミノ酸を指す。1つ又は複数のアミノ酸の化学誘導体は、側鎖官能基との反応により達成され得る。こうした誘導体化分子として、例えば、遊離アミノ基が誘導体化されて、アミン塩酸塩を形成する分子、p-トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、t-ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基又はホルミル基が挙げられる。遊離カルボキシル基は、誘導体化されて、塩、メチル及びエチルエステル、又は他のタイプのエステル及びヒドラジドを形成し得る。遊離ヒドロキシル基は、誘導体化されて、O-アシル又はO-アルキル誘導体を形成し得る。また、化学誘導体として、20の標準アミノ酸の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば:4-ヒドロキシプロリンは、プロリンの代わりに用いることができ;5-ヒドロキシリシンは、リシンの代わりに用いることができ;3-メチルヒスチジンは、ヒスチジンの代わりに用いることができ;ホモセリンはセリンの代わりに、またオルニチンはリシンの代わりに用いることができる。誘導体はまた、必要な活性が維持される限り、1つ若しくは複数の付加また欠失を含有するペプチドも含む。他に含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化(例えば、アセチル化又はチオグリコール酸アミド化)、末端カルボキシル化(例えば、アンモニア又はメチルアミン)、並びに同様の末端修飾である。
アミノ酸が、「アラニン」又は「Ala」又は「A」のように、具体的に列挙される場合、この用語は、他に明示されない限り、l-アラニン及びd-アラニンの両方を指す。また、他の非標準アミノ酸も、所望の機能特性がポリペプチドにより保持されている限り、本発明のポリペプチドに適切な成分となり得る。示されるペプチドについて、各々コード化されたアミノ酸残基は、必要に応じて、標準アミノ酸の慣用名に対応する1文字表記により表される。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、l-アミノ酸を含むか、又はそれらから構成される。
「触媒ドメイン」という用語は、酵素の触媒機構を含む酵素の領域を意味する。
「cDNA」という用語は、真核細胞から得られた成熟、スプライシング、mRNA分子からの逆転写により作製することができるDNA分子を意味する。cDNAは、対応するゲノムDNA中に存在し得るイントロン配列が欠如している。初期の、一次RNA転写物は、スプライシングを含む一連のステップを通してプロセッシングされた後、成熟型スプライシングmRNAとして現れるmRNAの前駆体である。
「コーディング配列」という用語は、そのポリペプチド産物のアミノ酸配列を直接指定するポリヌクレオチドを意味する。コーディング配列の境界は、一般に、オープンリーディングフレームにより決定され、これは、通常、ATG出発コドン又はGTG及びTTGなどの代替出発コドンで開始し、TAA、TAG、及びTGAなどの終止コドンで終わる。コーディング配列は、DNA、cDNA、合成又は組換えポリヌクレオチドであり得る。
「制御配列」という用語は、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドの発現に必要な全ての構成要素を意味する。各制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドに対してネイティブ若しくは外性であるか、又は互いにネイティブ若しくは外性であり得る。こうした制御配列として、限定されないが、リーダ、ポリアデニル化配列、プロペプチド配列、プロモータ、シグナルペプチド配列、及び転写ターミネータが挙げられる。最低でも、制御配列は、プロモータ、並びに転写及び翻訳終止シグナルを含む。制御配列は、変異体をコードするポリヌクレオチドのコーディング領域と制御配列との連結を促進する特定の制限部位を導入する目的で、リンカーを備えていてもよい。
本明細書で使用される「に対応する」という用語は、配列の特定のアミノ酸配列を決定する方式を指し、その際、特定のアミノ酸配列が参照される。例えば、本発明の目的のために、特定のアミノ酸位置が参照される場合、当業者は、別のアミノ酸配列を、参照が為された前記アミノ酸配列とアラインメントすることにより、どの特定のアミノ酸が、前記別のアミノ酸配列において関連し得るかを決定することができる。別のアミノ酸配列と、例えば、配列番号1に記載の配列、又は本明細書に列記されるいずれか他の配列とのアラインメントは、本明細書の他の箇所で記載されている。別のアミノ酸配列と、例えば、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17に記載の配列、又は本明細書に列記されるいずれか他の配列とのアラインメントは、本明細書の他の箇所で記載されている。代替的アラインメント方法を使用してもよく、そうした方法は、当業者には周知である。
本明細書で使用される「食器洗浄組成物」という用語は、硬質面をクリーニングするためのあらゆる形態の組成物を指す。本発明は、いずれの特定のタイプの食器洗浄組成物又はいずれの特定の洗剤にも限定されない。従って、一実施形態では、食器洗浄組成物は、液体食器洗浄組成物、粉末食器洗浄組成物であり、その際、組成物は、任意選択で単位用量の形態をしていてもよい。
本明細書で使用される「酵素洗剤有益性」という用語は、酵素を含まない同じ洗剤と比較して、酵素が洗剤に加え得る有利な効果を指す。酵素によりもたらされ得る重要な洗浄有益性は、洗浄及び/又はクリーニング後に見える汚れが全く若しくはほとんどない汚れの除去、洗浄工程で放出された汚染物の再付着の防止又は低減(再付着防止とも呼ばれる効果)、初めは白色であったが、何度も使用と洗浄を繰り返した後、灰色若しくは黄色っぽい外観となった生地の白色性の完全若しくは部分的回復(白色化とも呼ばれる効果)である。生地ケア有益性はまた、触媒による汚れ除去又は汚染物の再付着防止には直接関連しないが、酵素洗浄力有益性にとっても重要である。こうした生地ケア有益性の例は、1つの生地から別の生地への、若しくは同じ生地の別の部分への移染の防止又は低減(移染防止又は逆染色防止とも呼ばれる効果)、ピリング傾向の低下又は既存のピル若しくは毛羽を除去するための生地表面からの飛出し若しくは切断繊維の除去(アンチピリングとも呼ばれる効果)、生地柔軟性の改善、生地の色彩鮮明化、並びに生地若しくは衣服の繊維内に詰まった粒子状汚染物の除去である。酵素による漂白は、さらに別の酵素洗浄力有益性であり、この場合、過酸化水素又は他の過酸化物などの漂白成分の形成を触媒するために、触媒活性が一般に用いられる。
本明細書で使用される「発現」という用語は、変異体の生成に関与する任意のステップを指し、限定はされないが、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、及び分泌を含む。
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを含み、且つ、その発現をもたらす制御配列に作動可能にリンクされている線状若しくは環状DNA分子を指す。
「断片」という用語は、成熟型ポリペプチドのアミノ酸及び/又はカルボキシル末端から欠失された1つ若しくは複数の(いくつかの)アミノ酸を有するポリペプチドを意味し;ここで、断片は、α-アミラーゼ活性を有する。
「高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的には、各回について2×SSC、0.2%SDSを使用して、65℃で15分間、3回洗浄される。
本明細書で使用される「硬質面クリーニング」という用語は、硬質面のクリーニングを指し、ここで、硬質面は、床、テーブル、壁など、並びに自動車(自動洗浄)及び食器(食器洗浄)などの硬質物品の表面を含み得る。食器洗浄としては、限定されないが、皿、カップ、グラス、ボール、スプーン、ナイフ、フォーク、キッチン用品、セラミック、プラスチック製品、金属製品、磁器、ガラス及びアクリル製品などのカトラリーのクリーニングが挙げられる。
「改善された特性」という用語は、親α-アミラーゼと比して改善された変異体に関連する特徴として本明細書で定義される。このような改善された特性としては、これらに限定されないが、アミロース分解活性の増大、触媒効率の向上、触媒速度の向上、化学安定性の向上、酸化安定性の向上、pH活性の向上、pH安定性の向上、相対比活性の増大、比活性の増大、基質結合の増大、基質切断の増大、基質特異性の増大、基質安定性の向上、表面特性の向上、熱活性の増大、耐熱性の向上、汚染物除去性能、例えば、デンプン含有汚染物に対する性能、汚れ除去、灰色化防止などの洗浄性能の向上、安定性、例えば、熱安定性、pH安定性、又はキレート剤を含めビルダーの存在下での安定性、粉末、液体若しくはゲル洗剤製剤又は食器洗浄組成物中での安定性、温度変化依存性性能及び活性プロフィール、pH活性、基質特異性、製品特異性、並びに化学安定性が挙げられる。改善された特性は、洗浄性能のように、本明細書に定義及び説明される特性のいずれかであり得る。
「改善された洗浄性能」という用語は、本明細書では、配列番号1又は配列番号2の親α-アミラーゼの洗浄性能に対する本発明のアミラーゼの洗浄性能の改変を示すものとして定義される。この改変は、例えば、汚れ除去の向上として認めることができる。洗浄性能は、改善度(IF)が、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3である場合には改善されている。
本明細書で使用される「単離された」という用語は、自然界では起こらない形態で、又は環境に存在する物質を指す。単離された物質の非限定的な例として、以下:(1)天然に存在しない任意の物質、(2)限定されないが、いずれかの酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチド若しくは補因子を含め、自然界では結合していた天然の成分の1つ若しくは複数又は全部から少なくとも部分的に取り出された任意の物質;(3)自然界に存在する物質に対して、人工的に修飾された任意の物質;又は(4)天然に結合していた他の成分に対して当該物質の量を増加することにより修飾された任意の物質(例えば、当該物質をコードする遺伝子の多重コピー;当該物質をコードする遺伝子と天然に結合していたプロモータよりも強力なプロモータの使用)が挙げられる。単離された物質は、発酵ブロスサンプル中に存在し得る。
「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、人工的に修飾されたポリヌクレオチドを意味する。一態様において、単離されたポリヌクレオチドは、アガロース電気泳動による測定で、少なくとも1%の純度、例えば、少なくとも5%の純度、少なくとも10%の純度、少なくとも20%の純度、少なくとも40%の純度、少なくとも60%の純度、少なくとも80%の純度、少なくとも90%の純度及び少なくとも95%の純度である。ポリヌクレオチドは、ゲノム、cDNA、RNA、半合成、合成由来、又は、これらのいずれかの組み合わせであり得る。
本明細書において用いられる、「成熟型ポリペプチド」という用語は、N末端プロセシング、C末端切断、グリコシル化、リン酸化等などの翻訳及びいずれかの翻訳後修飾に続くその最終形態にあるポリペプチドを意味する。当該技術分野では、宿主細胞が、同じポリヌクレオチドにより発現される2つ以上の異なる成熟型ポリペプチド(即ち、異なるC末端及び/又はN末端アミノ酸を有する)の混合物を産生し得ることは公知である。
本明細書において用いられる、「成熟型ポリペプチドコード配列」という用語は、α-アミラーゼ活性を有する成熟型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをいう。
本発明のポリペプチドに関連して、「修飾」という用語は、参照アミノ酸配列(即ち、配列番号1又は2)内の1つ若しくは複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸での置換により、アミノ酸の挿入により、又は欠失、好ましくは少なくとも2つの欠失により改変されることを意味する。「修飾」、「改変」及び「突然変異」という用語は、置き換え可能に使用されて、同じ意味及び目的を構成し得る。
「中度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的には、各回につき2×SSC、0.2%SDSを使用して、55℃で15分間、3回洗浄される。
「中高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに35%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的には、各回につき2×SSC、0.2%SDSを使用して、60℃で15分間、3回洗浄される。
「ミュータント」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを意味する。
「核酸構築物」という用語は、一重螺旋又は二重螺旋を有する核酸分子を意味し、これは、天然の遺伝子から単離されるか、若しくは、そうでなければ自然に存在しないであろう様式で核酸のセグメントを含有するよう修飾されるか、又は、合成物である。核酸構築物という用語は、核酸構築物が、本発明のコード配列の発現に要求される制御配列を含有する場合、「発現カセット」という用語と同義である。
「作動可能にリンクされた」という用語は、制御配列がコード配列を発現させるよう、ポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に制御配列が位置する構造を意味する。
「親」又は「親α-アミラーゼ」という用語は、本発明の酵素変異体を生成するように修飾が為されたα-アミラーゼを意味する。親は、天然に存在する(野生型)ポリペプチド又はその変異体であり得る。
本明細書において用いられる、「配列同一性」という用語は、2つのアミノ酸配列間又は2つのヌクレオチド配列間の関連性が、パラメータ「配列同一性」によって記載されることをいう。
本発明の目的のために、2つのアミノ酸配列間の配列同一性は、好ましくはバージョン5.0.0以降のEMBOSSパッケージ(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)のNeedleプログラムにおいて実装されている、Needleman-Wunschアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)を用いて判定される。用いられるパラメータは、10のギャップオープンペナルティ、0.5のギャップエクステンションペナルティ及びEBLOSUM62(BLOSUM62のEMBOSSボージョン)置換マトリックスであり得る。Needle標識された「最長の同一性」(-nobriefオプションを用いて得られる)の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
(同等の残基×100)/(アラインメントの長さ-アラインメント中のギャップの総数)
代替的に、用いられるパラメータは、10のギャップオープンペナルティ、0.5のギャップエクステンションペナルティ及びEDNAFULL(NCBI NUC4.4のEMBOSSバージョン)置換マトリックスである。Needle標識された「最長の同一性」(-nobriefオプションを用いて得られる)の出力が同一性割合として用いられ、以下のとおり算出される。
(同等のデオキシリボヌクレオチド×100)/(アラインメントの長さ-アラインメント中のギャップの総数)
本明細書において用いられる、「サブ配列」という用語は、成熟型ポリペプチドコード配列の5’及び/又は3’末端から欠失した1つ又は複数(例えばいくつか)のヌクレオチドを有するポリヌクレオチドを意味し;ここで、サブ配列はα-アミラーゼ活性を有する断片をコードする。
「生地」という用語は、織物、並びに糸、織物、ニット、及び不織布への変換又はそうしたものとして使用するために好適なステープルファイバー及びフィラメントを指す。この用語は、天然、並びに合成(例えば、人造)繊維から製造された糸を包含する。「生地材」という用語は、繊維、糸中間体、糸、布地、並びに布地から製造された製品(例えば、衣服及びその他の製品)の一般的な用語である。
「生地ケア有益性」という用語は、本明細書で使用される場合、触媒による汚れ除去又は汚染物の再付着防止に直接関連しないものとして定義され、酵素洗浄力有益性にも重要である。こうした生地ケア有益性の例は、1つの生地から別の生地への、若しくは同じ生地の別の部分への移染の防止又は低減(移染防止又は逆染色防止とも呼ばれる効果)、ピリング傾向の低下又は既存のピル若しくは毛羽の除去を目的とする生地表面からの飛出し若しくは切断繊維の除去(アンチピリングとも呼ばれる効果)、生地柔軟性の改善、生地の色彩鮮明化、並びに生地の繊維内に詰まった粒子状汚染物の除去である。酵素による漂白は、さらに別の酵素洗浄力有益性であり、この場合、過酸化水素若しくは他の過酸化物又は他の漂白剤種などの漂白成分の形成を触媒するために、触媒活性が一般に用いられる。
「変異体」又は「ポリペプチド変異体」又は「ポリペプチド」又は「α-アミラーゼ変異体」という用語は、本明細書で使用されるように、本発明の変異体に関して使用されるとき、配列番号1又は2の「親α-アミラーゼ」に対して、改変、即ち、置換、挿入及び/又は欠失を1つ又は複数(例えば、いくつか)の位置で含むα-アミラーゼ活性を有するポリペプチドを指す。置換とは、ある位置を占めるアミノ酸の異なるアミノ酸による置き換えを意味し;欠失とは、ある位置を占めるアミノ酸の除去を意味し;及び、挿入とは、ある位置を占めるアミノ酸の直後に続き、隣接してアミノ酸を付加することを意味する。本発明の変異体は、配列番号1~17のポリペプチドの少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも100%のα-アミラーゼ活性を有する。
「極めて高度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに50%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的には、各回について2×SSC、0.2%SDSを使用して、70℃で15分間、3回洗浄される。
「極めて低度の緊縮条件」という用語は、長さが少なくとも100ヌクレオチドのプローブに関して、12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに25%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。キャリア材料は、最終的には、各回について2×SSC、0.2%SDSを使用して、45℃で15分間、3回洗浄される。
本明細書において、「洗浄性能」という用語は、配列番号1又は配列番号2の親アミラーゼの洗浄性能に対して、本発明のアミラーゼの洗浄性能の変化を示すものとして定義される。改善された洗浄性能は、いわゆる強度値の比較により測定され得る。
本明細書で使用される「野生型α-アミラーゼ」という用語は、自然界に存在する細菌、酵母、又は糸状菌などの天然に存在する微生物により発現されるα-アミラーゼを指す。
「洗浄サイクル」という用語は、本明細書では、食器洗浄に関して、食器を洗浄するために洗浄液を循環させて、洗浄液を食器に噴霧することにより、特定の期間にわたって食器を洗浄液に曝露し、最後に余分な洗浄液を除去する洗浄作業として定義される。洗浄サイクルは、同じ、又は異なる温度で、1、2、3、4、5、若しくは6回反復され得る。その後、一般に、食器をすすぎ、乾燥させる。洗浄サイクルの1つは、浸漬ステップであってもよく、その場合、所定の期間にわたって食器を洗浄液に浸けたままにしておく。
「洗浄液」という用語は、本明細書において、水と洗剤成分の溶液又は混合物として定義される。
自動食器洗浄に関して「洗浄時間」という用語は、本明細書において、全洗浄工程にかかる時間;即ち、洗浄サイクルとすすぎサイクルを合わせた時間として定義される。
「洗剤組成物」という用語は、別に指示のない限り、粒状若しくは粉末状の汎用又は重質洗剤、特にクリーニング洗剤;液体、ジェル若しくはペースト状の汎用洗剤、特にいわゆる重質液体(HDL)タイプ;繊細な生地用の液体洗剤;手洗い用食器洗浄剤若しくは軽質食器洗浄剤、特に高起泡タイプのもの;家庭用及び産業用途の多様な錠剤、顆粒、液体及びリンスエイドタイプをはじめとする、食洗機用洗浄剤;抗菌手洗いタイプ、クリーニングバー、セッケンバー、マウスウォッシュ、義歯洗浄剤、自動車若しくはカーペットシャンプー、浴室クリーナーをはじめとする液体クリーニング及び消毒剤;ヘアシャンプー及びヘアリンス;シャワージェル、フォームバス;金属クリーナー;並びに漂白添加剤及び「ステインスティック」又は前処理タイプなどのクリーニング助剤を含む。「洗剤組成物」及び「洗剤配合物」という用語は、汚れた物品のクリーニングのための洗浄媒体での使用が意図される混合物に関して使用される。一部の実施形態では、この用語は、布地及び/又は衣服の洗濯に関して使用される(例えば、「ランドリー洗剤」)。別の実施形態では、この用語はその他の洗剤、例えば、食器、カトラリーなどを洗浄するために用いられるもの(例えば、「食器洗浄用洗剤」)を指す。
「自動食器洗浄用洗剤組成物」という用語は、洗剤成分を含む組成物を指し、この組成物は、皿、カップ、グラス、ボールなどの食器類、スプーン、ナイフ、フォーク、キッチン用品、セラミック、プラスチック製品、金属製品、磁器、ガラス及びアクリル製品などのカトラリーを食器洗浄機でクリーニングすることを目的とする。本発明がいずれか特定の洗剤配合物又は組成物に限定されることは意図されない。
「洗剤組成物」という用語は、界面活性剤を含有する組成物に限定されるものではない。本明細書に記載の酵素に加えて、洗剤組成物は、例えば、安定剤、界面活性剤、ヒドロトープ、ビルダー、コビルダー、キレート剤、漂白系、漂白活性剤、漂白触媒、ポリマー、金属ケア剤、ガラスケア剤、結晶成長阻害剤及び布地色調剤から選択される1つ又は複数の成分を含んでもよいことが意図される。
「非布地洗剤組成物」という用語は、生地以外の表面洗剤組成物を含み、そうしたものとして、限定されないが、食器洗浄洗剤組成物などの硬質面クリーニング用組成物、口内洗剤組成物、義歯洗剤組成物、及びパーソナルクレンジング組成物が挙げられる。
「酵素の有効量」という用語は、特定の用途、例えば、定義される洗剤組成物に要求される酵素活性を達成するのに必要な酵素の量を指す。こうした有効量は、当業者により容易に確認され、これは、例えば、使用した特定の酵素、クリーニング用途、洗剤組成物の具体的な組成、並びに液体又は乾燥(例えば、粒状、棒状)組成物のいずれが要求されるかなどの様々な要因に基づく。酵素の「有効量」という用語は、例えば、定義される洗剤組成物において、所望のレベルの酵素活性を達成する、本明細書で上述した酵素の量を指す。一実施形態では、プロテアーゼの有効量は、α-アミラーゼの有効量と同じである。別の実施形態では、プロテアーゼの有効量は、α-アミラーゼの有効量とは異なり、例えば、プロテアーゼの有効量は、α-アミラーゼの有効量より多いか、又はそれより少ない場合がある。
本明細書で使用される「水の硬度」又は「硬度」又は「dH」若しくは「°dH」という用語は、ドイツの硬度を指す。1度は、水1リットル当たり10ミリグラムの酸化カルシウムとして定義される。
「関連洗浄条件」という用語は、本明細書では、洗剤マーケットセグメントにおいて家庭で実際に使用される条件、特に洗浄温度、時間、洗浄機、洗剤濃度、洗剤の種類及び水の硬度を示すために使用される。
「付加物」という用語は、特定の種類の洗剤組成物及び製品の形態(例えば、液体、粒状、粉末、棒、ペースト、スプレー、錠剤、ジェル、若しくはフォーム組成物)について選択される任意の液体、固体若しくは気体材料を意味し、これらの材料は、好ましくは、組成物に使用される酵素とも適合性である。一部の実施形態では、粒状組成物は「圧縮」形態であり、他の実施形態で、液体組成物は「濃縮」形態である。
本明細書で使用される「汚れ除去酵素」という用語は、布地又は硬質面からの汚れ又は汚染物の除去を助ける酵素を表す。汚れ除去酵素は、特定の基質に作用し、例えば、プロテアーゼはタンパク質に、アミラーゼはデンプンに、リパーゼ及びクチナーゼは脂質(脂肪及び油)に、ペクチナーゼはペクチンに、ヘミセルラーゼはヘミセルロースに作用する。汚れは、多くの場合、様々な成分の複雑な混合物の付着物であり、それは、物質それ自体の局所的変色を招くか、又は洗浄液に溶解した汚染物を引き付け得る物品に粘着性表面が残り、それによって、汚れた領域の変色を引き起こす。酵素が、汚れに存在するその特定の基質に作用すると、酵素は、その基質を分解するか、又は部分的に分解し、それによって、洗浄工程中に基質と結合した汚染物及び汚れ成分の除去を助ける。例えば、プロテアーゼが草の汚れに作用すると、それは、草のタンパク質成分を分解し、洗浄中に緑/褐色を遊離させることができる。
これに関して「減少(した)量」という用語は、成分の量が、それ以外は同じ条件下の参照工程で使用されるであろう量よりも少ないことを意味する。好ましい実施形態では、この量は、例えば、少なくとも5%、例えば、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%又はそれ以外に本明細書に記載されるように減少する。
「低洗剤濃度」系という用語は、約800ppm未満の洗剤成分が洗浄水に存在する洗剤を含む。アジア、例えば、日本の洗剤は、典型的に低洗剤濃度系と考えられる。
「中洗剤濃度」系という用語は、約800ppm~約2000ppmの洗剤成分が洗浄水に存在する洗剤を含む。北米の洗剤は、一般に中洗剤濃度系と考えられる。
「高洗剤濃度」系という用語は、約2000ppmを超える洗剤成分が洗浄水に存在する洗剤を含む。欧州の洗剤は、一般に高洗剤濃度系と考えられる。
本明細書で使用される「液体ランドリー洗剤組成物」という用語は、安定化された液体形態であり、布地を洗濯する方法に使用される洗剤組成物を指す。従って、洗剤組成物は、液体形態となるように配合物されている。
本明細書で使用される「粉末ランドリー洗剤組成物」という用語は、粒質物、非発塵性粒質物などの固体形態であり、これは、布地を洗濯する方法に使用される洗剤組成物を指す。
本明細書で使用される「液体食器洗浄洗剤組成物」という用語は、安定化された液体形態であり、食器洗浄に使用される洗剤組成物を指す。食器洗浄は、例えば、手による食器洗浄及び自動食器洗浄(ADW)などのあらゆる種類の食器洗浄であってよい。
本明細書で使用される「粉末食器洗剤組成物」という用語は、粒質物、粉末、又は圧縮単位などの固体形態であり、これは、食器洗浄に使用される洗剤組成物を指す。粉末食器洗浄洗剤組成物は、典型的に、自動食器洗浄に使用されるが、使用はこうしたADWに限定されるわけではなく、手による食器洗浄などの任意の他の種類の食器洗浄での使用も意図され得る。
「デルタ強度」又は「デルタ強度値」という用語は、本明細書では、試験材料、例えば、デンプンDM-277で汚したメラミンタイル(Center For Testmaterials BV、P.O.Box 120、3133 KT Vlaardingen、the Netherlands)又は硬質面の強度測定の結果として定義される。デルタ強度は、アミラーゼで洗浄した試験材料の強度値から、アミラーゼなしで洗浄した試験材料の強度値を差し引いたものである。
本明細書で使用される「番号付けは・・・に従う」という用語は、本発明のポリペプチドのアミノ酸残基の各々が番号付けされる方式を指し、即ち、当業者は、例えば、202位が配列番号1に従って番号付けされる場合、配列番号1といずれか他のポリペプチドのアラインメントによって、他のポリペプチド中の対応するアミノ酸残基を決定し得ることがわかるだろう。2つ以上のアミノ酸配列のアラインメントは、本明細書の他の箇所で説明されている。
従来の変異体の決定
本発明の目的のために、配列番号1において開示されているポリペプチドが、他のα-アミラーゼにおける対応するアミノ酸残基を判定するために用いられる。他のα-アミラーゼのアミノ酸配列が配列番号1において開示されているポリペプチドとアラインされ、このアラインメントに基づいて、配列番号1に開示されている成熟型ポリペプチドにおけるいずれかのアミノ酸残基に対応するアミノ酸位置番号が、好ましくはバージョン3.0.0以降のEMBOSSパッケージのNeedleプログラム(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277)において実装されているNeedleman-Wunschアルゴリズム(Needleman and Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453)を用いて、判定される。
他のα-アミラーゼにおける対応するアミノ酸残基の同定は、「ClustalW」(Larkin et al.,2007,Bioinformatics 23:2947-2948)を用いて複数のポリペプチド配列のアラインメントによって確認可能である。
配列番号1のポリペプチドから他の酵素が分化して、従来からの配列に基づく比較による関係の検出ができない場合(Lindahl and Elofsson,2000,J.Mol.Biol.295:613-615)、他の対配列比較アルゴリズムを用いることが可能である。配列に基づくサーチにおける感度は、データベースのサーチにポリペプチドファミリー(プロファイル)の確率表現を利用するサーチプログラムを用いることで高めることが可能である。例えば、PSI-BLASTプログラムは、反復データベースサーチプロセスを介してプロファイルを生成し、離れた相同体を検出することが可能である(Atschul et al.,1997,Nucleic Acids Res.25:3389-3402)。ポリペプチドに係るファミリー又はスーパーファミリーがタンパク質構造データベースにおいて1つ又は複数の表現を有する場合には、感度をさらに高めることが可能である。GenTHREADER(Jones,1999,J.Mol.Biol.287:797-815;McGuffin and Jones,2003,Bioinformatics 19:874-881)などのプログラムは、問い合わせ配列に係るフォールド構造を予想するニューラルネットワークに対する入力として、多様なソース(PSI-BLAST、二次構造予測、構造アラインメントプロファイル及び溶媒和ポテンシャル)からの情報を利用する。同様に、Gough et al.,2000,J.Mol.Biol.313:903-919による方法が、未知の構造の配列とSCOPデータベースに存在するスーパーファミリーモデルとのアラインに用いられることが可能である。次いで、これらのアラインメントを用いてポリペプチドに係る相同性モデルを生成することが可能であり、このようなモデルは、その目的のために開発された多様なツールを用いて正確に評価可能である。
公知の構造のタンパク質に関して、数々のツール及びリソースが、構造アラインメントの検索及び生成のために使用可能である。例えばタンパク質のSCOPスーパーファミリーが構造的にアラインされており、これらのアラインメントはアクセス及びダウンロードが可能である。2つ以上のタンパク質構造は距離アラインメントマトリックス(Holm and Sander,1998,Proteins 33:88-96)又は組み合わせ拡張法(Shindyalov and Bourne,1998,Protein Engineering 11:739-747)などの多様なアルゴリズムを用いてアラインすることが可能であり、これらのアルゴリズムを、可能性のある構造相同体を発見するために、対象の構造と共に問い合わせ構造データベースに対して追加的に実行することが可能である(例えば、Holm and Park,2000,Bioinformatics 16:566-567)。
本発明の変異体の記載において、以下の命名法が参照を容易とするために採用される。公認されているIUPACの1文字又は3文字のアミノ酸略記が利用されている。
置換.アミノ酸置換に関しては以下の命名法が用いられている:元のアミノ酸、位置、置換されたアミノ酸。従って、位置226でのスレオニンのアラニンでの置換は、「Thr226Ala」又は「T226A」と示される。複数の突然変異は加算記号(「+」)によって分けられており、例えば、「Gly205Arg+Ser411Phe」又は「G205R+S411F」とされ、それぞれ、グリシン(G)のアルギニン(R)による、及び、セリン(S)のフェニルアラニン(F)による位置205及び411での置換が表されている。
欠失.アミノ酸欠失に関しては以下の命名法が用いられている:元のアミノ酸、位置。従って、位置195でのグリシンの欠失は「Gly195」又は「G195」と示される。複数の欠失は加算記号(「+」)によって分けられており、例えば、「Gly195+Ser411」又は「G195+S411」とされる。
挿入.アミノ酸挿入に関しては以下の命名法が用いられている:元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸。従って、位置195でのグリシンの後へのリシンの挿入は、「Gly195GlyLys」又は「G195GK」と示される。複数のアミノ酸の挿入は、[元のアミノ酸、位置、元のアミノ酸、挿入されたアミノ酸1番、挿入されたアミノ酸2番;等]と示される。例えば、位置195でのグリシンの後へのリシン及びアラニンの挿入は、「Gly195GlyLysAla」又は「G195GKA」と示される。
このような事例において、挿入されたアミノ酸残基には、挿入されたアミノ酸残基の前のアミノ酸残基に下付文字を付与することにより番号が付される。それ故、上記の例において配列は以下のとおりとなる。
Figure 2022524490000001
複数の修飾.複数の修飾を含む変異体は加算記号(「+」)によって分けられており、例えば、「Arg170Tyr+Gly195Glu」又は「R170Y+G195E」は、それぞれ、位置170及び195でのアルギニン及びグリシンのチロシン及びグルタミン酸による置換を表す。
異なる修飾.1つの位置で異なる修飾を導入可能である場合、異なる改変はコンマによって分けられ、例えば、「Arg170Tyr,Glu」は、位置170でのアルギニンのチロシン又はグルタミン酸による置換を表す。それ故、「Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala」は以下の変異体を示す。
「Tyr167Gly+Arg170Gly」、「Tyr167Gly+Arg170Ala」、「Tyr167Ala+Arg170Gly」、及び「Tyr167Ala+Arg170Ala」。
[発明を実施するための形態]
本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数(例えば、いくつか)の位置に修飾を含む親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、各修飾が、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体が、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、例えば、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、及び前記変異体が、前記親ポリペプチドと比較して改善された洗浄性能を有する、α-アミラーゼ変異体に関する。
一態様では、本発明は、α-アミラーゼ活性を有する親α-アミラーゼポリペプチドのα-アミラーゼ変異体に関する。従って、特定の態様では、本発明は、α-アミラーゼ活性を有する親α-アミラーゼポリペプチドの変異体であって、前記変異体が、改善された洗浄性能を有し、且つ、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有する、α-アミラーゼ変異体に関する。
一態様では、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数(例えば、いくつか)の位置に修飾を含む親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体であって、各修飾が、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体が、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、例えば、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、前記変異体が、前記親ポリペプチドと比較して改善された洗浄性能を有し、且つ、前記親α-アミラーゼが、配列番号1又は配列番号2のアミノ酸配列を有する、α-アミラーゼ変異体に関する。
一態様では、改変の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49若しくは50の改変である。
一態様では、置換の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49若しくは50の置換である。
一態様では、置換されたアミノ酸残基は、その位置に天然で存在するアミノ酸残基とは異なる。一実施形態では、置換は、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、P、Q、R、S、T、V、W及びYからなる群から選択され、但し、その場合、置換されたアミノ酸残基は、その位置に天然で存在するアミノ酸残基とは異なるものとする。
特定の実施形態では、変異体は、α-アミラーゼの特定のループ内にペアワイズ欠失を含み得、これは、α-アミラーゼをさらに安定化させることがわかっている。従って、一実施形態では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、R181、G182、D183及びG184に対応するアミノ酸残基のペアワイズ欠失をさらに含み、但し、その場合、R181及び/又はG184に対応する位置のアミノ酸が置換されているとき、ペアワイズ欠失は、番号付けのために配列番号1を用いて、G182及びD183に対応する位置である。
本明細書で使用される「ペアワイズ欠失」という用語は、2つの個別位置における1つの欠失を指す。こうした位置は、互いに隣接していてもよいが、そのような隣接するペアに限定されない。このように、ペアワイズ欠失は、1アミノ酸と別のアミノ酸の欠失であってもよく、別のアミノ酸は、最初の欠失からさらに下流若しくは上流の、最大3つのアミノ酸であってよい。従って、一実施形態では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、R181+G182、R181+D183、R181+G184、G182+D183、G182+G182、及びD183+G184からなる群から選択されるアミノ酸残基のペアワイズ欠失を含む。
一態様では、配列番号2は、以下:番号付けのために配列番号1を用いて、R181+G182、R181+D183、R181+G184、G182+D183、G182+G182、及びD183+G184からなる群から選択されるアミノ酸残基、好ましくはD183+G184の二重欠失を含むアミノ酸配列である。
一態様では、欠失の数は、1~50、例えば、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10又は1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49若しくは50の欠失である。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する2つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する3つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する4つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する5つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する6つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する7つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する8つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する9つ以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する10以上の位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481のいずれかに対応する各位置に修飾を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、本明細書に記載の有用な変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481の1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体が、α-アミラーゼ活性を有し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481の1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、例えば、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の態様では、変異体は、1位に対応する位置に欠失を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、1位に対応する位置のアミノ酸は、配列番号2のポリペプチドから欠失している。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失H1*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、2位に対応する位置に欠失を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、2位に対応する位置のアミノ酸は、配列番号2のポリペプチドから欠失している。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失H2*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、7位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、7位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G7Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、9位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、9位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換I9Mを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、11位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、11位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q11Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、16位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、16位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N16E又はN16H又はN16Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、19位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、19位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N19Dを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、25位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、25位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N25K又はN25M又はN25Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、37位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、37位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A37Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、43位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、43位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W43Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、48位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、48位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W48Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、54位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、54位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N54Q又はN54Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、56位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、56位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V56I又はV56Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、58位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、58位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y58Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、59位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、59位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G59Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、60位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、60位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A60S又はA60Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、63位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、63位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L63Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、81位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、81位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換T81Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、84位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、84位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E84Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、86位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、86位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E86Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、90位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、90位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R90H若しくはR90N又はR90Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、98位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、98位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q98Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、104位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、104位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V104Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、109位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、109位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G109Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、111位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、111位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A111Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、113位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、113位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換F113A若しくはF113G若しくはF113N若しくはF113Q若しくはF113T若しくはF113Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、116位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、116位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R116C若しくはR116D若しくはR116F若しくはR116H若しくはR116K若しくはR116N若しくはR116S若しくはR116Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、118位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、118位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q118N若しくはQ118Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、125位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、125位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q125G若しくはQ125Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、127位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、127位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R127A又はR127F若しくはR127H若しくはR127L若しくはR127N若しくはR127Tを含むか、若しくはそれから構成される。
別の態様では、変異体は、130位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、130位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E130D又はE130F若しくはE130I若しくはE130K若しくはE130L若しくはE130N若しくはE130S若しくはE130T若しくはE130Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、132位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、132位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S132A若しくはS132D若しくはS132F若しくはS132L若しくはS132M若しくはS132P若しくはS132Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、133位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、133位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G133Dを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、134位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、134位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換T134C若しくはT134E若しくはT134N若しくはT134P若しくはT134R若しくはT134S若しくはT134W若しくはT134Y若しくはT134Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、135位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、135位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y135Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、136位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、136位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q136D若しくはQ136E若しくはQ136G若しくは136N若しくはQ136R若しくはQ136Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、139位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、139位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A139Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、142位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、142位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G142Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、144位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、144位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N144Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、149位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、149位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G149Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、158位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、158位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R158C若しくはR158H若しくはR158K若しくはR158Q若しくはR158Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、160位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、160位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y160D若しくはY160F若しくはY160H若しくはY160Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、163位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、163位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換D163Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、167位に対応する位置に欠失を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失W167*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、169位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、169位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失Q169*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、170位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、170位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S170Aを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失S170*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、171位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、171位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R171H若しくはR171K若しくはR171L若しくはR171Yを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失R171*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、172位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、172位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q172K若しくはQ172N若しくはQ172Sを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失Q172*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、173位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、173位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L173Kを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失L173*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、174位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、174位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A174N若しくはA174Sを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失A174*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、175位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、175位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N175Sを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失N175*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、176位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、176位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R176Aを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失R176*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、178位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、178位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y178Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、181位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、181位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R181A若しくはR181C若しくはR181E若しくはR181G若しくはR181H若しくはR181K若しくはR181N若しくはR181Qを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失R181*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、182位に対応する位置に欠失若しくは置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、182位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G182T N175Sを含むか、又はそれから構成される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの欠失G182*を含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、186位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、186位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A186D若しくはA186E若しくはA186H若しくはA186K若しくはA186N若しくはA186Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、187位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、187位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W187Mを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、195位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、195位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N195D若しくはN195F若しくはN195H若しくはN195Q若しくはN195Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、202位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、202位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換M202Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、203位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、203位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y203Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、204位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、204位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A204Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、206位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、206位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V206Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、209位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、209位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換D209Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、210位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、210位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換H210K若しくはH210Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、212位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、212位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E212Dを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、227位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、227位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換T227K若しくはT227Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、235位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、235位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L235Iを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、238位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、238位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V238Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、246位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、246位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換M246I若しくはM246L若しくはM246T若しくはM246Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、256位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、256位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q256H若しくはQ256Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、259位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、259位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換K259G若しくはK259Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、264位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、264位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V264A若しくはV246I若しくはV264Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、265位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、265位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A265Gを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、266位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、266位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E266Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、267位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、267位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y267F若しくはY267H若しくはY267Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、269位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、269位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換K269M若しくはK269Q若しくはK269Rを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、270位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、270位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N270G若しくはN270Pを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、272位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、272位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L272Iを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、273位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、273位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G273Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、274位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、274位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A274K若しくはA274Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、275位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、275位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L275A若しくはL275I若しくはL275Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、276位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、276位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換E276Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、291位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、291位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V291A若しくはV291I若しくはV291Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、284位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、284位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W284R若しくはW284Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、286位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、286位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換M286Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、291位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、291位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V291A若しくはV291I若しくはV291Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、293位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、293位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L293I若しくはL293Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、295位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、295位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y295Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、298位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、298位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y298E若しくはY298Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、299位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、299位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q299N若しくはQ299Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、302位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、302位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N302A若しくはN302H若しくはN302K若しくはN302Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、303位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、303位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S303Gを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、304位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、304位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S304G若しくはS304Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、306位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、306位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N306H若しくはN306K若しくはN306Q若しくはN306R若しくはN306Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、310位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、310位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R310N若しくはR310S若しくはR310Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、311位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、311位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N311K若しくはN311Rを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、314位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、314位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N314Qを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、315位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、315位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G315Nを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、317位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、317位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L317Vを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、319位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、319位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q319Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、320位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、320位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R320K若しくはR320Q若しくはR320Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、323位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、323位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S323T若しくはS323Kを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、328位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、328位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換F328Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、337位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、337位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G337D若しくはG337Eを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、339位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、339位に対応する位置のアミノ酸は、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換A339Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、345位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、345位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q345N若しくはQ345Rを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、357位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、357位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換L357Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、365位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、365位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q365A若しくはQ365C若しくはQ365E若しくはQ365H若しくはQ365K若しくはQ365M若しくはQ365Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、377位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、377位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換P377K若しくはP377Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、375位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、375位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換D375H若しくはD375N若しくはD375Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、386位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、386位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q386Lを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、391位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、391位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換K391Aを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、395位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、395位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q395Kを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、400位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、400位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R400Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、406位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、406位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換D406Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、408位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、408位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W408Hを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、410位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、410位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V410Iを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、431位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、431位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換S431Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、435位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、435位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G435Cを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、439位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、439位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W439R若しくはW439Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、444位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、444位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R444Tを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、445位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、445位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q445Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、178位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、178位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y178Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、458位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、458位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換R458Kを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、465位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、465位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換N465Gを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、466位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、466位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Q466Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、469位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、469位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換W469N又はW469Yを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、178位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、178位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換Y178Fを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、473位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、473位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換F473I若しくはF473P若しくはF473Sを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、476位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、476位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、又はValで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換G476Kを含むか、又はそれから構成される。
別の態様では、変異体は、481位に対応する位置に置換を含むか、又はそれから構成される。別の態様では、481位に対応する位置のアミノ酸は、Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、又はTyrで置換される。別の態様では、変異体は、配列番号2のポリペプチドの置換V481Aを含むか、又はそれから構成される。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、例えば、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
変異体は、配列番号1~17のポリペプチドの少なくとも20%、例えば、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、又は少なくとも100%のα-アミラーゼ活性を有する。
一実施形態では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する親ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号1に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号2に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号3に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号4に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号5に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号6に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号7に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号8に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号9に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号10に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号11に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号12に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号13に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号14に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号15に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号16に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
別の実施形態では、変異体は、配列番号17に対して、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、例えば、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号2のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号3のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号4のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号5のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号6のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号7のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号8のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号9のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号10のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号11のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号12のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号13のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号14のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号15のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号16のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、1つ又は複数の位置における修飾は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aに対応する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:A174*+A339S、A174*+G109A、A174*+G149A、A174*+G182T、A174*+H1*、A174*+I9M、A174*+K391A、A174*+M202L、A174*+N16Y、A174*+N195F、A174*+N54S、A174*+Q169E、A174*+Q169E、A174*+Q172K、A174*+Q299Y、A174*+Q345R、A174*+Q365S、A174*+R320K、A174*+R458K、A174*+S323T、A174*+V206L、A174*+Y295F、A339S+G109A、A339S+G149A、A339S+G182T、A339S+H1*、A339S+I9M、A339S+K391A、A339S+M202L、A339S+N16Y、A339S+N195F、A339S+N54S、A339S+Q169E、A339S+Q169E、A339S+Q172K、A339S+Q299Y、A339S+Q345R、A339S+Q365S、A339S+R320K、A339S+R458K、A339S+S323T、A339S+V206L、A339S+Y295F、G109A+G149A、G109A+G182T、G109A+H1*、G109A+I9M、G109A+K391A、G109A+M202L、G109A+N16Y、G109A+N195F、G109A+N54S、G109A+Q169E、G109A+Q169E、G109A+Q172K、G109A+Q299Y、G109A+Q345R、G109A+Q365S、G109A+R320K、G109A+R458K、G109A+S323T、G109A+V206L、G109A+Y295F、G149A+G182T、G149A+H1*、G149A+I9M、G149A+K391A、G149A+M202L、G149A+N16Y、G149A+N195F、G149A+N54S、G149A+Q169E、G149A+Q169E、G149A+Q172K、G149A+Q299Y、G149A+Q345R、G149A+Q365S、G149A+R320K、G149A+R458K、G149A+S323T、G149A+V206L、G149A+Y295F、G182T+H1*、G182T+I9M、G182T+K391A、G182T+M202L、G182T+N16Y、G182T+N195F、G182T+N54S、G182T+Q169E、G182T+Q169E、G182T+Q172K、G182T+Q299Y、G182T+Q345R、G182T+Q365S、G182T+R320K、G182T+R458K、G182T+S323T、G182T+V206L、G182T+Y295F、H1*+I9M、H1*+K391A、H1*+M202L、H1*+N16Y、H1*+N195F、H1*+N54S、H1*+Q169E、H1*+Q169E、H1*+Q172K、H1*+Q299Y、H1*+Q345R、H1*+Q365S、H1*+R320K、H1*+R458K、H1*+S323T、H1*+V206L、H1*+Y295F、I9M+K391A、I9M+M202L、I9M+N16Y、I9M+N195F、I9M+N54S、I9M+Q169E、I9M+Q169E、I9M+Q172K、I9M+Q299Y、I9M+Q345R、I9M+Q365S、I9M+R320K、I9M+R458K、I9M+S323T、I9M+V206L、I9M+Y295F、K391A+M202L、K391A+N16Y、K391A+N195F、K391A+N54S、K391A+Q169E、K391A+Q169E、K391A+Q172K、K391A+Q299Y、K391A+Q345R、K391A+Q365S、K391A+R320K、K391A+R458K、K391A+S323T、K391A+V206L、K391A+Y295F、M202L+N16Y、M202L+N195F、M202L+N54S、M202L+Q169E、M202L+Q169E、M202L+Q172K、M202L+Q299Y、M202L+Q345R、M202L+Q365S、M202L+R320K、M202L+R458K、M202L+S323T、M202L+V206L、M202L+Y295F、N16Y+N195F、N16Y+N54S、N16Y+Q169E、N16Y+Q169E、N16Y+Q172K、N16Y+Q299Y、N16Y+Q345R、N16Y+Q365S、N16Y+R320K、N16Y+R458K、N16Y+S323T、N16Y+V206L、N16Y+Y295F、N195F+N54S、N195F+Q169E、N195F+Q169E、N195F+Q172K、N195F+Q299Y、N195F+Q345R、N195F+Q365S、N195F+R320K、N195F+R458K、N195F+S323T、N195F+V206L、N195F+Y295F、N54S+Q169E、N54S+Q169E、N54S+Q172K、N54S+Q299Y、N54S+Q345R、N54S+Q365S、N54S+R320K、N54S+R458K、N54S+S323T、N54S+V206L、N54S+Y295F、Q169E+Q169E、Q169E+Q172K、Q169E+Q299Y、Q169E+Q345R、Q169E+Q365S、Q169E+R320K、Q169E+R458K、Q169E+S323T、Q169E+V206L、Q169E+Y295F、Q169E+Q172K、Q169E+Q299Y、Q169E+Q345R、Q169E+Q365S、Q169E+R320K、Q169E+R458K、Q169E+S323T、Q169E+V206L、Q169E+Y295F、Q172K+Q299Y、Q172K+Q345R、Q172K+Q365S、Q172K+R320K、Q172K+R458K、Q172K+S323T、Q172K+V206L、Q172K+Y295F、Q299Y+Q345R、Q299Y+Q365S、Q299Y+R320K、Q299Y+R458K、Q299Y+S323T、Q299Y+V206L、Q299Y+Y295F、Q345R+Q365S、Q345R+R320K、Q345R+R458K、Q345R+S323T、Q345R+V206L、Q345R+Y295F、Q365S+R320K、Q365S+R458K、Q365S+S323T、Q365S+V206L、Q365S+Y295F、R320K+R458K、R320K+S323T、R320K+V206L、R320K+Y295F、R458K+S323T、R458K+V206L、R458K+Y295F、S323T+V206L、S323T+Y295F、V206L+Y295Fの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:A174*+A339S+G109A、A174*+A339S+G149A、A174*+A339S+G182T、A174*+A339S+H1*、A174*+A339S+I9M、A174*+A339S+K391A、A174*+A339S+M202L、A174*+A339S+N16Y、A174*+A339S+N195F、A174*+A339S+N54S、A174*+A339S+Q169E、A174*+A339S+Q169E、A174*+A339S+Q172K、A174*+A339S+Q299Y、A174*+A339S+Q345R、A174*+A339S+Q365S、A174*+A339S+R320K、A174*+A339S+R458K、A174*+A339S+S323T、A174*+A339S+V206L、A174*+A339S+Y295F、A174*+G109A+G149A、A174*+G109A+G182T、A174*+G109A+H1*、A174*+G109A+I9M、A174*+G109A+K391A、A174*+G109A+M202L、A174*+G109A+N16Y、A174*+G109A+N195F、A174*+G109A+N54S、A174*+G109A+Q169E、A174*+G109A+Q169E、A174*+G109A+Q172K、A174*+G109A+Q299Y、A174*+G109A+Q345R、A174*+G109A+Q365S、A174*+G109A+R320K、A174*+G109A+R458K、A174*+G109A+S323T、A174*+G109A+V206L、A174*+G109A+Y295F、A174*+G149A+G182T、A174*+G149A+H1*、A174*+G149A+I9M、A174*+G149A+K391A、A174*+G149A+M202L、A174*+G149A+N16Y、A174*+G149A+N195F、A174*+G149A+N54S、A174*+G149A+Q169E、A174*+G149A+Q169E、A174*+G149A+Q172K、A174*+G149A+Q299Y、A174*+G149A+Q345R、A174*+G149A+Q365S、A174*+G149A+R320K、A174*+G149A+R458K、A174*+G149A+S323T、A174*+G149A+V206L、A174*+G149A+Y295F、A174*+G182T+H1*、A174*+G182T+I9M、A174*+G182T+K391A、A174*+G182T+M202L、A174*+G182T+N16Y、A174*+G182T+N195F、A174*+G182T+N54S、A174*+G182T+Q169E、A174*+G182T+Q169E、A174*+G182T+Q172K、A174*+G182T+Q299Y、A174*+G182T+Q345R、A174*+G182T+Q365S、A174*+G182T+R320K、A174*+G182T+R458K、A174*+G182T+S323T、A174*+G182T+V206L、A174*+G182T+Y295F、A174*+H1*+I9M、A174*+H1*+K391A、A174*+H1*+M202L、A174*+H1*+N16Y、A174*+H1*+N195F、A174*+H1*+N54S、A174*+H1*+Q169E、A174*+H1*+Q169E、A174*+H1*+Q172K、A174*+H1*+Q299Y、A174*+H1*+Q345R、A174*+H1*+Q365S、A174*+H1*+R320K、A174*+H1*+R458K、A174*+H1*+S323T、A174*+H1*+V206L、A174*+H1*+Y295F、A174*+I9M+K391A、A174*+I9M+M202L、A174*+I9M+N16Y、A174*+I9M+N195F、A174*+I9M+N54S、A174*+I9M+Q169E、A174*+I9M+Q169E、A174*+I9M+Q172K、A174*+I9M+Q299Y、A174*+I9M+Q345R、A174*+I9M+Q365S、A174*+I9M+R320K、A174*+I9M+R458K、A174*+I9M+S323T、A174*+I9M+V206L、A174*+I9M+Y295F、A174*+K391A+M202L、A174*+K391A+N16Y、A174*+K391A+N195F、A174*+K391A+N54S、A174*+K391A+Q169E、A174*+K391A+Q169E、A174*+K391A+Q172K、A174*+K391A+Q299Y、A174*+K391A+Q345R、A174*+K391A+Q365S、A174*+K391A+R320K、A174*+K391A+R458K、A174*+K391A+S323T、A174*+K391A+V206L、A174*+K391A+Y295F、A174*+M202L+N16Y、A174*+M202L+N195F、A174*+M202L+N54S、A174*+M202L+Q169E、A174*+M202L+Q169E、A174*+M202L+Q172K、A174*+M202L+Q299Y、A174*+M202L+Q345R、A174*+M202L+Q365S、A174*+M202L+R320K、A174*+M202L+R458K、A174*+M202L+S323T、A174*+M202L+V206L、A174*+M202L+Y295F、A174*+N16Y+N195F、A174*+N16Y+N54S、A174*+N16Y+Q169E、A174*+N16Y+Q169E、A174*+N16Y+Q172K、A174*+N16Y+Q299Y、A174*+N16Y+Q345R、A174*+N16Y+Q365S、A174*+N16Y+R320K、A174*+N16Y+R458K、A174*+N16Y+S323T、A174*+N16Y+V206L、A174*+N16Y+Y295F、A174*+N195F+N54S、A174*+N195F+Q169E、A174*+N195F+Q169E、A174*+N195F+Q172K、A174*+N195F+Q299Y、A174*+N195F+Q345R、A174*+N195F+Q365S、A174*+N195F+R320K、A174*+N195F+R458K、A174*+N195F+S323T、A174*+N195F+V206L、A174*+N195F+Y295F、A174*+N54S+Q169E、A174*+N54S+Q169E、A174*+N54S+Q172K、A174*+N54S+Q299Y、A174*+N54S+Q345R、A174*+N54S+Q365S、A174*+N54S+R320K、A174*+N54S+R458K、A174*+N54S+S323T、A174*+N54S+V206L、A174*+N54S+Y295F、A174*+Q169E+Q169E、A174*+Q169E+Q172K、A174*+Q169E+Q299Y、A174*+Q169E+Q345R、A174*+Q169E+Q365S、A174*+Q169E+R320K、A174*+Q169E+R458K、A174*+Q169E+S323T、A174*+Q169E+V206L、A174*+Q169E+Y295F、A174*+Q169E+Q172K、A174*+Q169E+Q299Y、A174*+Q169E+Q345R、A174*+Q169E+Q365S、A174*+Q169E+R320K、A174*+Q169E+R458K、A174*+Q169E+S323T、A174*+Q169E+V206L、A174*+Q169E+Y295F、A174*+Q172K+Q299Y、A174*+Q172K+Q345R、A174*+Q172K+Q365S、A174*+Q172K+R320K、A174*+Q172K+R458K、A174*+Q172K+S323T、A174*+Q172K+V206L、A174*+Q172K+Y295F、A174*+Q299Y+Q345R、A174*+Q299Y+Q365S、A174*+Q299Y+R320K、A174*+Q299Y+R458K、A174*+Q299Y+S323T、A174*+Q299Y+V206L、A174*+Q299Y+Y295F、A174*+Q345R+Q365S、A174*+Q345R+R320K、A174*+Q345R+R458K、A174*+Q345R+S323T、A174*+Q345R+V206L、A174*+Q345R+Y295F、A174*+Q365S+R320K、A174*+Q365S+R458K、A174*+Q365S+S323T、A174*+Q365S+V206L、A174*+Q365S+Y295F、A174*+R320K+R458K、A174*+R320K+S323T、A174*+R320K+V206L、A174*+R320K+Y295F、A174*+R458K+S323T、A174*+R458K+V206L、A174*+R458K+Y295F、A174*+S323T+V206L、A174*+S323T+Y295F、A174*+V206L+Y295F、A339S+G109A+G149A、A339S+G109A+G182T、A339S+G109A+H1*、A339S+G109A+I9M、A339S+G109A+K391A、A339S+G109A+M202L、A339S+G109A+N16Y、A339S+G109A+N195F、A339S+G109A+N54S、A339S+G109A+Q169E、A339S+G109A+Q169E、A339S+G109A+Q172K、A339S+G109A+Q299Y、A339S+G109A+Q345R、A339S+G109A+Q365S、A339S+G109A+R320K、A339S+G109A+R458K、A339S+G109A+S323T、A339S+G109A+V206L、A339S+G109A+Y295F、A339S+G149A+G182T、A339S+G149A+H1*、A339S+G149A+I9M、A339S+G149A+K391A、A339S+G149A+M202L、A339S+G149A+N16Y、A339S+G149A+N195F、A339S+G149A+N54S、A339S+G149A+Q169E、A339S+G149A+Q169E、A339S+G149A+Q172K、A339S+G149A+Q299Y、A339S+G149A+Q345R、A339S+G149A+Q365S、A339S+G149A+R320K、A339S+G149A+R458K、A339S+G149A+S323T、A339S+G149A+V206L、A339S+G149A+Y295F、A339S+G182T+H1*、A339S+G182T+I9M、A339S+G182T+K391A、A339S+G182T+M202L、A339S+G182T+N16Y、A339S+G182T+N195F、A339S+G182T+N54S、A339S+G182T+Q169E、A339S+G182T+Q169E、A339S+G182T+Q172K、A339S+G182T+Q299Y、A339S+G182T+Q345R、A339S+G182T+Q365S、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0%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:
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6L、Q169E+Q345R+S323T+Y295F、Q169E+Q345R+V206L+Y295F、Q169E+Q365S+R320K+R458K、Q169E+Q365S+R320K+S323T、Q169E+Q365S+R320K+V206L、Q169E+Q365S+R320K+Y295F、Q169E+Q365S+R458K+S323T、Q169E+Q365S+R458K+V206L、Q169E+Q365S+R458K+Y295F、Q169E+Q365S+S323T+V206L、Q169E+Q365S+S323T+Y295F、Q169E+Q365S+V206L+Y295F、Q169E+R320K+R458K+S323T、Q169E+R320K+R458K+V206L、Q169E+R320K+R458K+Y295F、Q169E+R320K+S323T+V206L、Q169E+R320K+S323T+Y295F、Q169E+R320K+V206L+Y295F、Q169E+R458K+S323T+V206L、Q169E+R458K+S323T+Y295F、Q169E+R458K+V206L+Y295F、Q169E+S323T+V206L+Y295F、Q172K+Q299Y+Q345R+Q365S、Q172K+Q299Y+Q345R+R320K、Q172K+Q299Y+Q345R+R458K、Q172K+Q299Y+Q345R+S323T、Q172K+Q299Y+Q345R+V206L、Q172K+Q299Y+Q345R+Y295F、Q172K+Q299Y+Q365S+R320K、Q172K+Q299Y+Q365S+R458K、Q172K+Q299Y+Q365S+S323T、Q172K+Q299Y+Q365S+V206L、Q172K+Q299Y+Q365S+Y295F、Q172K+Q299Y+R320K+R458K、Q172K+Q299Y+R320K+S323T、Q172K+Q299Y+R320K+V206L、Q172K+Q299Y+R320K+Y295F、Q172K+Q299Y+R458K+S323T、Q172K+Q299Y+R458K+V206L、Q172K+Q299Y+R458K+Y295F、Q172K+Q299Y+S323T+V206L、Q172K+Q299Y+S323T+Y295F、Q172K+Q299Y+V206L+Y295F、Q172K+Q345R+Q365S+R320K、Q172K+Q345R+Q365S+R458K、Q172K+Q345R+Q365S+S323T、Q172K+Q345R+Q365S+V206L、Q172K+Q345R+Q365S+Y295F、Q172K+Q345R+R320K+R458K、Q172K+Q345R+R320K+S323T、Q172K+Q345R+R320K+V206L、Q172K+Q345R+R320K+Y295F、Q172K+Q345R+R458K+S323T、Q172K+Q345R+R458K+V206L、Q172K+Q345R+R458K+Y295F、Q172K+Q345R+S323T+V206L、Q172K+Q345R+S323T+Y295F、Q172K+Q345R+V206L+Y295F、Q172K+Q365S+R320K+R458K、Q172K+Q365S+R320K+S323T、Q172K+Q365S+R320K+V206L、Q172K+Q365S+R320K+Y295F、Q172K+Q365S+R458K+S323T、Q172K+Q365S+R458K+V206L、Q172K+Q365S+R458K+Y295F、Q172K+Q365S+S323T+V206L、Q172K+Q365S+S323T+Y295F、Q172K+Q365S+V206L+Y295F、Q172K+R320K+R458K+S323T、Q172K+R320K+R458K+V206L、Q172K+R320K+R458K+Y295F、Q172K+R320K+S323T+V206L、Q172K+R320K+S323T+Y295F、Q172K+R320K+V206L+Y295F、Q172K+R458K+S323T+V206L、Q172K+R458K+S323T+Y295F、Q172K+R458K+V206L+Y295F、Q172K+S323T+V206L+Y295F、Q299Y+Q345R+Q365S+R320K、Q299Y+Q345R+Q365S+R458K、Q299Y+Q345R+Q365S+S323T、Q299Y+Q345R+Q365S+V206L、Q299Y+Q345R+Q365S+Y295F、Q299Y+Q345R+R320K+R458K、Q299Y+Q345R+R320K+S323T、Q299Y+Q345R+R320K+V206L、Q299Y+Q345R+R320K+Y295F、Q299Y+Q345R+R458K+S323T、Q299Y+Q345R+R458K+V206L、Q299Y+Q345R+R458K+Y295F、Q299Y+Q345R+S323T+V206L、Q299Y+Q345R+S323T+Y295F、Q299Y+Q345R+V206L+Y295F、Q299Y+Q365S+R320K+R458K、Q299Y+Q365S+R320K+S323T、Q299Y+Q365S+R320K+V206L、Q299Y+Q365S+R320K+Y295F、Q299Y+Q365S+R458K+S323T、Q299Y+Q365S+R458K+V206L、Q299Y+Q365S+R458K+Y295F、Q299Y+Q365S+S323T+V206L、Q299Y+Q365S+S323T+Y295F、Q299Y+Q365S+V206L+Y295F、Q299Y+R320K+R458K+S323T、Q299Y+R320K+R458K+V206L、Q299Y+R320K+R458K+Y295F、Q299Y+R320K+S323T+V206L、Q299Y+R320K+S323T+Y295F、Q299Y+R320K+V206L+Y295F、Q299Y+R458K+S323T+V206L、Q299Y+R458K+S323T+Y295F、Q299Y+R458K+V206L+Y295F、Q299Y+S323T+V206L+Y295F、Q345R+Q365S+R320K+R458K、Q345R+Q365S+R320K+S323T、Q345R+Q365S+R320K+V206L、Q345R+Q365S+R320K+Y295F、Q345R+Q365S+R458K+S323T、Q345R+Q365S+R458K+V206L、Q345R+Q365S+R458K+Y295F、Q345R+Q365S+S323T+V206L、Q345R+Q365S+S323T+Y295F、Q345R+Q365S+V206L+Y295F、Q345R+R320K+R458K+S323T、Q345R+R320K+R458K+V206L、Q345R+R320K+R458K+Y295F、Q345R+R320K+S323T+V206L、Q345R+R320K+S323T+Y295F、Q345R+R320K+V206L+Y295F、Q345R+R458K+S323T+V206L、Q345R+R458K+S323T+Y295F、Q345R+R458K+V206L+Y295F、Q345R+S323T+V206L+Y295F、Q365S+R320K+R458K+S323T、Q365S+R320K+R458K+V206L、Q365S+R320K+R458K+Y295F、Q365S+R320K+S323T+V206L、Q365S+R320K+S323T+Y295F、Q365S+R320K+V206L+Y295F、Q365S+R458K+S323T+V206L、Q365S+R458K+S323T+Y295F、Q365S+R458K+V206L+Y295F、Q365S+S323T+V206L+Y295F、R320K+R458K+S323T+V206L、R320K+R458K+S323T+Y295F、R320K+R458K+V206L+Y295F、R320K+S323T+V206L+Y295F、R458K+S323T+V206L+Y295F
の1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、下記位置に対応する位置における以下の修飾:H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+ Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458Kの1つ又は複数を含み、ここで、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
本発明の発明者らは、配列番号1又は2に記載されるアミノ酸配列のこれらの位置におけるこれらの特定の修飾が、親ポリペプチドに対して少なくとも60%の配列同一性を有する変異体α-アミラーゼの性能改善に特に関連することを見出した。
本発明によれば、1.0の値は、親ポリペプチドについて観察された性能に相当する。1.0を超える値は、親ポリペプチドと比較して、試験変異体の性能の改善を示す。従って、いずれかの>1.0の値は、親ポリペプチドと比較した変異体の特性、例えば、性能の改善を示す。
本発明によれば、少なくとも1つの試験条件下で特性の改善を示す変異体は、親ポリペプチドと比較して、改善された特性を有する変異体と考えられる。
本明細書の他の箇所で述べるように、親ポリペプチドは、α-アミラーゼ活性及び配列番号2に記載されるアミノ酸配列のいずれか1つに対して少なくとも60%の配列同一性を有する任意のポリペプチドであってよい。
実施例3、4及び5で得られるデータからわかるように、全ての試験変異体は、以下:
(i)モデル洗剤A及び0.1mg/Lの酵素濃度、
(ii)45℃でのADWモデル洗剤及び0.35mg/Lの酵素濃度、
(iii)40℃でのADWモデル洗剤及び1.5mg/Lの酵素濃度、
(iv)45℃でのADW洗剤及び0.9mg/Lの酵素濃度
のいずれかで検定して、少なくとも1.1の(即ち、配列番号2を有する親ポリペプチドを超える)改善度(IF)を有する。
一実施形態では、変異体は、α-アミラーゼ活性を有する前記親α-アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能、即ち、少なくとも1.1、好ましくは、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)に相当する増強された洗浄性能を有し、ここで、前記IFは、モデル洗剤A組成物及び/又はADW洗剤組成物を用いて決定され、前記親α-アミラーゼは、配列番号1又は配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A60T
Y135H
Q169E
W48Y
A174*
M246L
R90Q
Y203L+V206L
Q169F+S170A
S132D+G133D
N195F+Q365C
N195F+Q365S
N195F+Q365M
R127L+Q365S
R127N+Q365S
R127L+Q365C
N195F+Q365K
I9M+N195F
R171H+Q365C
Y267F+Q365S
F328L+Q365S
R171L+Q365S
N195F+M286L
T134P+N195F
S170*+R171*+A174*
V264I+A265G+Y267F
Q169*+S170*+A174*
M246L+L275V+Q365S
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+F328L+Q365C
I9M+N195F+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
I9M+N195F+Q365S
V264I+Y267F+Q365K
R127L+M246V+Q365S
A60S+R171Y+Q365S
R127N+M246T+L275V
V104A+N195F+Q365S
V264I+F328L+Q365S
R171H+N302H+Q365S
V264I+Y267F+Q365S
A174*+N175*+Y178F
V264I+A265G+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+M246V+Q365C
R171Y+M246L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
I9M+Y160H+N195F+Q365S
I9M+R127N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
Q169*+S170*+R171*+A174*
M246L+L275V+Q365S+D406H
I9M+G184K+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+Q365S
R171H+M246L+L275V+Q365S
R127H+M246I+Q365C+V481A
Y267F+V291A+F328L+Q365C
I9M+A186E+N195F+Q365S
E86L+R171L+N306R+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365S
I9M+N195F+V291A+Q365S
R127L+L235I+M246I+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365K
Q11H+V264I+A265G+Q365C
W187M+N195F+H210K+Q365S
R127H+M246T+L275A+Q365S
I9M+A111T+N195F+Q365S
I9M+Y58F+N195F+Q365S
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C
R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I
R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S
V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*
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N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
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E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
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E86L+R171L+N306R+Q365S
F113Q+R116H
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G7A+F113N+R116N+E276N+S304G+R320S+Q345N+W439R+N465G+Q466S+W469Y
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H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
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H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A
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H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L235I+V238A+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311K+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365H+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V238A+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R127F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A
H1*+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
I9M+A186E+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+G184K+N195F+Q365S
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S
I9M+N195F+N270G+Q365S
I9M+N195F+N270P+Q365S
I9M+N195F+Q365C
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S
I9M+N195F+V291A+Q365S
I9M+R127N+N195F+Q365S
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
I9M+Y160H+N195F+Q365S
I9M+A186E+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+G184K+N195F+Q365S
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
I9M+N195F+Q365C
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
I9M+R127N+N195F+Q365S
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
I9M+Y160H+N195F+Q365S
M202L
M246L+L275V+Q365S+D406H
M246L
M246L+L275V+Q365S
M246L+L275V+Q365S+D406H
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+Q365S
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q169*+S170*+A174*
Q169*+S170*+R171*+A174*
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
R127L+M246V+Q365S
R127L+Q365C
R127L+Q365S
R127L
R127N+M246L+L275V+Q365S
R127N+Q365S
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H+Q365C
R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H+N302H+Q365S
R171H
R171H+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+Q365S
R171Y++M246L+Q365S
R171Y+N306K
R181S+G184S
V104A+N195F+Q365S
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F
V264I+F328L+Q365C
V264I+F328L+Q365S
V264I+L357F
V264I+Q365C
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365S
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I
V264I+Y267F+Q365K
V264I+Y267F+Q365S
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F
V264I+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
V264T+Y267L+F328L+Q365C
V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
W187M+N195F+H210K+Q365S
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y295F
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して、モデル洗剤A組成物及び/又は漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有すると共に、前記親α-アミラーゼは、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A60T
Y135H
Q169E
W48Y
A174*
M246L
R90Q
Y203L+V206L
Q169F+S170A
S132D+G133D
N195F+Q365C
N195F+Q365S
N195F+Q365M
R127L+Q365S
R127N+Q365S
R127L+Q365C
N195F+Q365K
I9M+N195F
R171H+Q365C
Y267F+Q365S
F328L+Q365S
R171L+Q365S
N195F+M286L
T134P+N195F
S170*+R171*+A174*
V264I+A265G+Y267F
Q169*+S170*+A174*
M246L+L275V+Q365S
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+F328L+Q365C
I9M+N195F+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
I9M+N195F+Q365S
V264I+Y267F+Q365K
R127L+M246V+Q365S
A60S+R171Y+Q365S
R127N+M246T+L275V
V104A+N195F+Q365S
V264I+F328L+Q365S
R171H+N302H+Q365S
V264I+Y267F+Q365S
A174*+N175*+Y178F
V264I+A265G+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+M246V+Q365C
R171Y+M246L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
I9M+Y160H+N195F+Q365S
I9M+R127N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
Q169*+S170*+R171*+A174*
M246L+L275V+Q365S+D406H
I9M+G184K+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+Q365S
R171H+M246L+L275V+Q365S
R127H+M246I+Q365C+V481A
Y267F+V291A+F328L+Q365C
I9M+A186E+N195F+Q365S
E86L+R171L+N306R+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365S
I9M+N195F+V291A+Q365S
R127L+L235I+M246I+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365K
Q11H+V264I+A265G+Q365C
W187M+N195F+H210K+Q365S
R127H+M246T+L275A+Q365S
I9M+A111T+N195F+Q365S
I9M+Y58F+N195F+Q365S
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
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H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A
H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L235I+V238A+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して、モデル洗剤A組成物中で少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有すると共に、前記親α-アミラーゼは、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S
A186D+N195F
A60S+R171Y+Q365S
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
E86L+R171L+N306R+Q365S
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
E86L+R171L+N306R+Q365S
F113Q+R116H
F113T+R171K+G273V
F328L+Q365S
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+W284Y+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109+Q169E+Q172K+A174*+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
I9M+A186E+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+G184K+N195F+Q365S
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S
I9M+N195F+N270G+Q365S
I9M+N195F+N270P+Q365S
I9M+N195F+Q365C
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S
I9M+N195F+V291A+Q365S
I9M+R127N+N195F+Q365S
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
I9M+Y160H+N195F+Q365S
I9M+A186E+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+G184K+N195F+Q365S
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
I9M+N195F+Q365C
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
I9M+R127N+N195F+Q365S
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
I9M+Y160H+N195F+Q365S
M202L
M246L
M246L+L275V+Q365S+D406H
M246L+L275V+Q365S
M246L+L275V+Q365S+D406H
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+Q365S
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q169*+S170*+A174*
Q169*+S170*+R171*+A174*
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
R127L
R127L+M246V+Q365S
R127L+Q365C
R127L+Q365S
R127N+M246L+L275V+Q365S
R127N+Q365S
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H
R171H+Q365C
R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H+N302H+Q365S
R171H+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+Q365S
R171Y++M246L+Q365S
R171Y+N306K*
R181S+G184S
V104A+N195F+Q365S
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S
V264I+F328L+Q365C
V264I+F328L+Q365S
V264I+L357F
V264I+Q365C
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365S
V264I+Y267F+Q365K
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I
V264I+Y267F+Q365S
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F
V264I+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
V264T+Y267L+F328L+Q365C
W187M+N195F+H210K+Q365S
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y295F
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して、漂白剤含有ADW洗剤中で少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有すると共に、前記親α-アミラーゼは、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A60T、
Y135H、
Q169E、
W48Y、
A174*、
M246L、
R90Q、
Y203L+V206L、
Q169F+S170A、
S132D+G133D、
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
N195F+Q365K、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+Q365C、
Y267F+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F、
N195F+M286L、
T134P+N195F、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
M246L+L275V+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
R127L+M246V+Q365S、
A60S+R171Y+Q365S、
R127N+M246T+L275V、
V104A+N195F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
V264I+Y267F+Q365S、
A174*+N175*+Y178F、
V264I+A265G+Q365C、
R171L+N302H+Q365C、
R171L+M246V+Q365C、
R171Y+M246L+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
R127L+L235I+M246I+Q365C、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
W187M+N195F+H210K+Q365S、
R127H+M246T+L275A+Q365S、
I9M+A111T+N195F+Q365S、
I9M+Y58F+N195F+Q365S、
V264T+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+Q365C、
V264I+A265G+Y267F+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S、
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S、
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+Y58F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195H+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158C+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L272I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+G109A+K391A+N16Y+N54S+V56T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158S+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
R127N+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+A274S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186E+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90H+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
I9M+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q172S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365C+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365E+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186H+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+R181S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172S+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V291A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
Y160H+R171L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+G109A+K391A+N54S+V56T+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q118N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+T134P+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*N195F+V206L+Q299Y+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q299N+K391A、
Y160H+E212D+L275V+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306Q+K391A、
H1*+W43Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311R+K391A、
Y160H+E212D+M246L+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E84Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q125G+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K269M+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
G7A+F113N+R116N+E276N+S304G+R320S+Q345N+W439R+N465G+Q466S+W469Y、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D377H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V238A+K391A、
Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365H+K391A、
Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
G109A+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L235I+V238A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物において少なくとも≧1.1の改善された相対比活性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M246L、
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
N195F+Q365K、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R171H+Q365C、
Y267F+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
M246L+L275V+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
R127L+M246V+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
R127L+L235I+M246I+Q365C、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S、
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158C+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L272I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+G109A+K391A+N16Y+N54S+V56T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158S+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
R127N+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+A274S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186E+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90H+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
I9M+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q172S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365C+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365E+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186H+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+R181S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172S+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V291A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
Y160H+R171L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+G109A+K391A+N54S+V56T+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q118N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+T134P+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*N195F+V206L+Q299Y+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q299N+K391A、
Y160H+E212D+L275V+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306Q+K391A、
H1*+W43Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311R+K391A、
Y160H+E212D+M246L+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E84Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物において少なくとも≧1.5の改善された相対比活性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物において少なくとも≧2.0の改善された相対比活性を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365C、
S170*+R171*+A174*、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物において少なくとも≧2.5の改善された相対比活性を有する。
一実施形態では、変異体は、前記親α-アミラーゼと比較して、改善された洗浄性能、即ち、自動機械式応力アッセイ(AMSA)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤中で少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)に相当する増強した洗浄性能を有し、ここで、前記親α-アミラーゼは、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
M202L、
R181S+G184S、
F113Q+R116H、
V264I+L357F、
Y267F+Q365S、
R171H、
R171Y+N306K、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
R171Y++M246L+Q365S、
F328L+Q365S、
R127L、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R127L+Q365S、
R127L+M246V+Q365S、
A186D+N195F、
V264I+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
V264I+V291T+Q365K、
A60S+R171Y+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
Q11H+Y267F+Q365C、
V104A+N195F+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+Y267F+Q365S、
F113T+R171K+G273V、
Q169*+S170*+A174*、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
V264T+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
I9M+N195F+N270G+Q365S、
I9M+N195F+N270P+Q365S、
V264T+Y267L+F328L+Q365C、
V264I+A265G+V291A+Q365C、
W187M+N195F+H210K+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+W284Y+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
M202L、
R181S+G184S、
F113Q+R116H、
Y267F+Q365S、
R171H、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
R171Y++M246L+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
V264I+V291T+Q365K、
A60S+R171Y+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M202L、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M202L、
R171H+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
R171L+Q365S、
Y267F+Q365S、
R127L+Q365S、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
N195F+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.0の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
N195F+Q365S、
R171H+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.2の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.3の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する。
一態様では、変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.0の改善度(IF)を有する。
本発明の変異体は、1つ又は複数(例えば、いくつか)の他の位置における前述のもの以外に1つ又は複数の別の改変をさらに含んでもよい。
アミノ酸の変化は、軽度のもの、即ち、タンパク質のフォールディング及び/又は活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換若しくは挿入;典型的に1~30アミノ酸の小さな欠失;例えば、アミノ末端メチオニン残基などの小アミノ-若しくはカルボキシル末端伸長;最大20~25残基の小さなリンカーペプチド;或いは正味電荷、又はポリヒスチジントラクト、抗原エピトープ若しくは結合ドメインの変更により精製、又はその他の機能を促進する小さな伸長であってもよい。
保存的置換の例は、塩基性アミノ酸(アルギニン、リシン及びヒスチジン)、酸性アミノ酸(グルタミン酸及びアスパラギン酸)、極性アミノ酸(グルタミン酸及びアスパラギン)、疎水性アミノ酸(ロイシン、イソロイシン及びバリン)、芳香族アミノ酸(フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシン)、並びに低分子アミノ酸(グリシン、アラニン、セリン、トレオニン及びメチオニン)からなる群に含まれる。概して比活性を変化させないアミノ酸置換は、当該技術分野で公知であり、例えば、H. Neurath及びR.L.Hill,1979,In,The Proteins,Academic Press,New Yorkに記載されている。一般的な置換は、Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、及びAsp/Glyである。
或いは、アミノ酸の変化は、ポリペプチドの物理-化学的特性が変化する性質のものである。例えば、アミノ酸の変化は、ポリペプチドの熱安定性を改善させる、基質特異性を改変する、最適pHを変化させるなどであってもよい。
ポリペプチドの必須アミノ酸は、当該技術分野で公知の手順、例えば、部位特異的突然変異誘発又はアラニンスキャニング突然変異誘発(Cunningham and Wells,1989,Science 244:1081-1085)に従って同定することができる。後者の技術では、単一アラニン変異を分子中の全ての残基に導入し、これにより得られたミュータント分子をα-アミラーゼ活性について試験して、分子の活性に重要なアミノ酸残基を同定する。Hilton et al.,1996,J.Biol.Chem.271:4699-4708も参照されたい。また、酵素の活性部位又は他の生物学的相互作用は、推定接触部位アミノ酸の突然変異と一緒に、核磁気共鳴、結晶学、電子解析、又は光親和性標識などの技術によって決定されるように、構造の物理解析により決定することもできる。例えば、de Vos et al.,1992,Science 255:306-312;Smith et al.,1992,J.Mol.Biol.224:899-904;Wlodaver et al.,1992,FEBS Lett.309:59-64を参照されたい。必須アミノ酸の同一性は、関連ポリペプチドとのアラインメントから推測することもできる。
本発明の変異体は、400~485アミノ酸、例えば、410~485、425~485、及び440~485アミノ酸から構成され得る。
親α-アミラーゼ
親α-アミラーゼは、配列番号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、又は17からなるポリペプチドのいずれか1つと少なくとも60%の配列同一性を有するポリペプチドであり得る。
一実施形態において、この親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号1のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号1のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号1のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号1のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号2のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号2のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号2のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号2のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号3のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号3のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号3のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号3のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号4のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号4のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号4のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号4のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、この親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号5のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号5のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号5のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号5のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号6のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号6のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号6のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号6のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、この親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号7のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する。一実施形態では、親のアミノ酸配列は、配列番号7のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号7のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。別の実施形態では、親は、配列番号7のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号8のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号8のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号8のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号8のポリペプチドを含むか、又は、これから構成されることが好ましい。他の実施形態において、親は配列番号8のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号9のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号9のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号9のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号9のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号9のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号10のポリペプチドに対して、例えば、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号10のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号10のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号10のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号10のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号11のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号11のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号11のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号11のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号11のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号12のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号12のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号12のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号12のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号12のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号13のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号13のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号13のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号13のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号13のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号14のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号14のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号14のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号14のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号14のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号15のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号15のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号15のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号15のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号15のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号16のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号16のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号16のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号16のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号16のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
一実施形態において、親は、α-アミラーゼ活性を有する配列番号17のポリペプチドに対して、少なくとも60%、例えば、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも87%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%又は100%の配列同一性を有する。一実施形態において、親のアミノ酸配列は、配列番号17のポリペプチドとは、例えば、5個のアミノ酸、4個のアミノ酸、3個のアミノ酸、2個のアミノ酸及び1個のアミノ酸といった、10個以下のアミノ酸が異なっている。
親は、配列番号17のアミノ酸配列を含むか、又は、これから構成されることが好ましい。一実施形態において、親は、配列番号17のポリペプチドを含むか、又は、これから構成される。他の実施形態において、親は、配列番号17のポリペプチドの対立遺伝子変異体である。
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17のアミノ酸配列又はその活性断片は、技術分野において周知である方法に従って、異なる属若しくは種の系統から親をコードするDNAを同定及びクローン化するために核酸プローブの設計に用いられ得る。特に、このようなプローブは、含まれる対応する遺伝子を同定及び単離するために、標準的なサザンブロッティング法の後に、対象の属若しくは種のゲノム若しくはcDNAとのハイブリダイゼーションに用いられることが可能である。このようなプローブは配列全体よりもかなり短いことが可能であるが、例えば、長さが少なくとも25、少なくとも35又は少なくとも70ヌクレオチドといった少なくとも14ヌクレオチドであるべきである。好ましくは、核酸プローブは、少なくとも100ヌクレオチドの長さ、又は少なくとも200ヌクレオチドの長さ、少なくとも300ヌクレオチド、少なくとも400ヌクレオチド、少なくとも500ヌクレオチド、少なくとも600ヌクレオチド、少なくとも700ヌクレオチド、少なくとも800ヌクレオチド又は少なくとも900ヌクレオチドの長さである。DNA及びRNAプローブの両方が用いられることが可能である。プローブは、典型的には、対応する遺伝子を検出するために標識化される(例えば、32P、H、35S、ビオチン又はアビジンで)。このようなプローブは本発明によって包含される。
このような他の生体から調製したゲノムDNA若しくはcDNAライブラリは、上記のプローブとハイブリダイズし、親をコードするDNAについてスクリーニングされ得る。このような他の生体由来のゲノム又は他のDNAは、アガロース若しくはポリアクリルアミドゲル電気泳動、又は、他の分離技術によって分離され得る。これらのライブラリからのDNA又は分離されたDNAが、ニトロセルロース若しくは他の好適なキャリア材料に移され固定化され得、これがサザンブロッティングにおいて用いられる。
本発明の目的に関して、ハイブリダイゼーションとは、低度~きわめて高度の緊縮条件下で、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17又はそのサブ配列をコードするポリヌクレオチドに対応する標識化ヌクレオチドプローブにポリヌクレオチドがハイブリダイズすることを表す。プローブがハイブリダイズする分子は、例えば、X線フィルム又は技術分野において公知であるいずれかの他の検出手段を用いて検出可能である。
一態様において、核酸プローブは、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17又はその活性断片のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
長さが少なくとも100ヌクレオチドの長鎖プローブに関して、きわめて低度~きわめて高度の緊縮条件は、最適には12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、42℃での、5×SSPE、0.3%SDS、200マイクログラム/ml断片処理及び変性済みのサケ精子DNA、並びに、きわめて低度及び低度の緊縮性に対しては25%ホルムアミド、中度及び中度-高度の緊縮性に対しては35%ホルムアミド、又は、高度及びきわめて高度の緊縮性に対しては50%ホルムアミドでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションとして定義される。キャリア材料は、最終的には、2×SSC、0.2%SDS、45℃(きわめて低度の緊縮性)、50℃(低度の緊縮性)、55℃(中度の緊縮性)、60℃(中度-高度の緊縮性)、65℃(高度の緊縮性)又は70℃(きわめて高度の緊縮性)で、15分間、3回洗浄される。
長さが約15ヌクレオチド~約70ヌクレオチドの短い短鎖プローブに関して、緊縮条件は、最適には12~24時間の標準的なサザンブロッティング法に続く、Bolton and McCarthy(1962,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:1390)に従う計算を用いて算出したTよりも約5℃~約10℃低い温度で、0.9M NaCl、0.09Mトリス-HCl pH7.6、6mMEDTA、0.5%NP-40、1×デンハート溶液、1mMピロリン酸ナトリウム、1mMナトリウム一塩基性リン酸、0.1mM ATP及び0.2mgのイースト菌RNA/mlでのプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションとして定義される。キャリア材料は、最終的には、6X SCC中で1度、また、0.1%SDS中で15分間、及び、算出したTより5℃~10℃低い温度で6×SSCを用いて15分間ずつ2回洗浄される。
親は、いずれかの属の微生物から得られ得る。本発明の目的のために、「~から得られる」という用語は、本明細書において用いられるところ、所与のソースに関連して、ポリヌクレオチドによってコードされた親がソースによって、又は、ソースからのポリヌクレオチドが挿入された細胞によって生成されることを意味することとする。一態様において、親は、細胞外に分泌される。
親は細菌性α-アミラーゼであり得る。例えば、親は、バチルス属(Bacillus)、クロストリジウム属(Clostridium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ゲオバチルス属(Geobacillus)、ラクトバチルス属(Lactobacillus)、ラクトコッカス属(Lactococcus)、オセアノバチルス属(Oceanobacillus)、スタフィロコッカス属(Staphylococcus)、ストレプトコッカス属(Streptococcus)、若しくはストレプトマイセス属(Streptomyces)α-アミラーゼなどのグラム陽性細菌性ポリペプチド、又は、カムピロバクター属(Campylobacter)、大腸菌(E.coli)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、フソバクテリウム属(Fusobacterium)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、イリオバクター属(Ilyobacter)、ネイッセリア属(Neisseria)、シュードモナス属(Pseudomonas)、サルモネラ属(Salmonella)又はウレアプラズマ属(Ureaplasma)α-アミラーゼなどのグラム陰性細菌性ポリペプチドであり得る。
一態様において、親は、バチルスアルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バチルスアミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルスブレビス(Bacillus brevis)、バチルスシルクランス(Bacillus circulans)、バチルスクラウシイ(Bacillus clausii)、バチルスコアグランス(Bacillus coagulans)、バシラスフィルムス(Bacillus firmus)、バチルスラウツス(Bacillus lautus)、バチルスレンツス(Bacillus lentus)、バチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)、バチルスメガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルスプミルス(Bacillus pumilus)、バチルスステアロテルモフィルス(Bacillus stearothermophilus)、古草菌(Bacillus subtilis)又はバチルスチューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)α-アミラーゼである。
他の態様において、親は、ストレプトコッカスエクイシミリス(Streptococcus equisimilis)、化膿レンサ球菌(Streptococcus pyogenes)、ストレプトコッカスウベリス(Streptococcus uberis)又はストレプトコッカスズーエピデミカス(Streptococcus equi subsp.Zooepidemicus)α-アミラーゼである。
他の態様において、親は、ストレプトマイセスアウロモゲネス(Streptomyces achromogenes)、ストレプトマイセスアベルミチリス(Streptomyces avermitilis)、ストレプトマイセスコエリコロル(Streptomyces coelicolor)、ストレプトマイセスグリセウス(Streptomyces griseus)又はストレプトマイセスリビダンス(Streptomyces lividans)α-アミラーゼである。
親は、真菌性α-アミラーゼであり得る。例えば、親は、カンジダ属(Candida)、クルイベロマイセス属(Kluyveromyces)、ピチア属(Pichia)、サッカロマイセス属(Saccharomyces)、シゾサッカロマイセス属(Schizosaccharomyces)又はヤロウイア属(Yarrowia)α-アミラーゼなどのイースト菌α-アミラーゼであり得る。例えば、親は、アクレモニウム属(Acremonium)、アガリクス属(Agaricus)、アルテルナリア属(Alternaria)、アスペルギルス属(Aspergillus)、アウレオバシジウム属(Aureobasidium)、ボトリオスペリア属(Botryospaeria)、セリポリオプシス属(Ceriporiopsis)、ケトミジウム属(Chaetomidium)、クリソスポリウム属(Chrysosporium)、クラビセプス属(Claviceps)、コクリオボルス属(Cochliobolus)、コプリノプシス属(Coprinopsis)、コプトテルメス属(Coptotermes)、コリナスクス属(Corynascus)、クリホネクトリア属(Cryphonectria)、クリプトコッカス属(Cryptococcus)、ジプロディア属(Diplodia)、エクシディア属(Exidia)、フィリバシジウム属(Filibasidium)、フザリウム属(Fusarium)、ギベレラ属(Gibberella)、ホロマスチゴトイデス属(Holomastigotoides)、フミコラ属(Humicola)、イルペクス属(Irpex)、レンチヌラ属(Lentinula)、レプトスパエリア属(Leptospaeria)、マグナポルテ属(Magnaporthe)、メラノカルプス属(Melanocarpus)、メリピルス属(Meripilus)、ムコール属(Mucor)、ミセリオフトラ属(Myceliophthora)、ネオカリマスチクス属(Neocallimastix)、ニューロスポラ属(Neurospora)、パエシロマイセス属(Paecilomyces)、ペニシリウム属(Penicillium)、ファネロケーテ属(Phanerochaete)、ピロマイセス属(Piromyces)、ポイトラシア属(Poitrasia)、シュードプレクタニア属(Pseudoplectania)、シュードトリコニムファ属(Pseudotrichonympha)、リゾムコール属(Rhizomucor)、シゾフィルム属(Schizophyllum)、シタリジウム属(Scytalidium)、タラロマイセス属(Talaromyces)、テルモアスクス属(Thermoascus)、チエラビア属(Thielavia)、トリポクラジウム属(Tolypocladium)、トリコデルマ属(Trichoderma)、トリコファエア属(Trichophaea)、ベルチシリウム属(Verticillium)、ボルバリエラ属(Volvariella)又はキシラリア属(Xylaria)α-アミラーゼなどの糸状真菌性α-アミラーゼであり得る。
他の態様において、親は、サッカロマイセスカルスベルゲンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロマイセスセレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロマイセスジアスタチクス(Saccharomyces diastaticus)、サッカロマイセスドウグラシイ(Saccharomyces douglasii)、サッカロマイセスクルイベリ(Saccharomyces kluyveri)、サッカロマイセスノルベンシス(Saccharomyces norbensis)又はサッカロマイセスオビホルミス(Saccharomyces oviformis)α-アミラーゼである。
他の態様において、親は、アクレモニウムセルロリチクス(Acremonium cellulolyticus)、アスペルギルスアクレアツス(Aspergillus aculeatus)、アスペルギルスアワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルスフォエティダス(Aspergillus foetidus)、アスペルギルスフミガーツス(Aspergillus fumigatus)、アスペルギルスジャポニクス(Aspergillus japonicus)、アスペルギルスニズランス(Aspergillus nidulans)、アスペルギルスニガー(Aspergillus niger)、アスペルギルスオリゼー(Aspergillus oryzae)、クリソスポリウムイノプス(Chrysosporium inops)、クリソスポリウムケラチノフィルム(Chrysosporium keratinophilum)、クリソスポリウムルクノウェンス(Chrysosporium lucknowense)、クリソスポリウムメルダリウム(Chrysosporium merdarium)、クリソスポリウムパンニコラ(Chrysosporium pannicola)、クリソスポリウムクイーンスランジクム(Chrysosporium queenslandicum)、クリソスポリウムトロピクム(Chrysosporium tropicum)、クリソスポリウムゾナツム(Chrysosporium zonatum)、フザリウムバクテリジオイデス(Fusarium bactridioides)、フザリウムセレアリス(Fusarium cerealis)、フザリウムクロークウェレンス(Fusarium crookwellense)、フザリウムクルモルム(Fusarium culmorum)、フザリウム グラミネアルム(Fusarium graminearum)、フザリウムグラミヌム(Fusarium graminum)、フザリウムヘテロスポルム(Fusarium heterosporum)、フザリウムネグンディ(Fusarium negundi)、フザリウム オキシスポルム(Fusarium oxysporum)、フザリウムレチクランツム(Fusarium reticulatum)、フザリウム ロゼウム(Fusarium roseum)、フザリウムサムブシヌム(Fusarium sambucinum)、フザリウムサルコクロウム(Fusarium sarcochroum)、フザリウムスポロトリキオイデス(Fusarium sporotrichioides)、フザリウムスルフレウム(Fusarium sulphureum)、フザリウムトルロスム(Fusarium torulosum)、フザリウムトリコテシオイデス(Fusarium trichothecioides)、フザリウムベネナツム(Fusarium venenatum)、フミコラグリセア(Humicola grisea)、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、フミコララヌギノサ(Humicola lanuginosa)、イルペクスラクテウス(Irpex lacteus)、ムコールミエヘイ(Mucor miehei)、ミセリオフトラテルモフィラ(Myceliophthora thermophila)、ニューロスポラクラッサ(Neurospora crassa)、ペニシリウムフニクロスム(Penicillium funiculosum)、ペニシリウムプルプロゲヌム(Penicillium purpurogenum)、ファネロケーテクリソスポリウム(Phanerochaete chrysosporium)、チエラビアアクロマチカ(Thielavia achromatica)、チエラビアアルボミセス(Thielavia albomyces)、チエラビアアルボピロサ(Thielavia albopilosa)、チエラビアアウストラレインシス(Thielavia australeinsis)、チエラビアフィメティ(Thielavia fimeti)、チエラビアミクロスポラ(Thielavia microspora)、チエラビアオビスポラ(Thielavia ovispora)、チエラビアペルビアナ(Thielavia peruviana)、チエラビアセトサ(Thielavia setosa)、チエラビアスペデドニウム(Thielavia spededonium)、チエラビアスブテルモフィラ(Thielavia subthermophila)、チエラビアテルレストリス(Thielavia terrestris)、トリコデルマハルジアヌム(Trichoderma harzianum)、トリコデルマコニンギイ(Trichoderma koningii)、トリコデルマロンギブラキアツム(Trichoderma longibrachiatum)、トリコデルマレエセイ(Trichoderma reesei)又はトリコデルマビリデ(Trichoderma viride)α-アミラーゼである。
他の態様において、親は、例えば、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17のα-アミラーゼといったバチルス属の一種(Bacillus sp.)α-アミラーゼである。
前述の種について、本発明は、知られている種の名称に関わらず、完全及び不完全世代、並びに、例えば無性世代といった他の分類学上の均等物の両方を含むことが理解されるであろう。当業者は、適切な均等物の同一性を容易に認識するであろう。
これらの種の系統は、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関(ATCC:American Type Culture Collection)、ドイツ微生物細胞培養コレクション(DSM:Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)、オランダ微生物株保存センター(CBS:Centraalbureau Voor Schimmelcultures)、及び、農業研究局特許培養物コレクション(Agricultural Research Service Patent Culture Collection)、北方リサーチセンター(NRRL:Northern Regional Research Center)などの多数の微生物保存機関において公共に容易に利用可能である。
親は、上記のプローブを用いて、自然(例えば、汚染物、コンポスト、水等)から単離された微生物、又は、天然材料(例えば、汚染物、コンポスト、水等)から直接的に得られたDNAサンプルを含む他のソースから同定及び得られ得る。微生物及びDNAを自然環境から直接的に単離する技術は技術分野において周知である。次いで、親をコードするポリヌクレオチドは、他の微生物又は混合DNAサンプルのゲノム若しくはcDNAライブラリを同じようにスクリーニングすることによりもたらされ得る。一旦、親をコードするポリヌクレオチドがプローブで検出されたら、ポリヌクレオチドは、当業者に公知の技術(例えば、前述のSambrook et al.,1989を参照のこと)を利用することにより単離又はクローン化され得る。
親は、一のポリペプチドの一部分が、他のポリペプチドの一部分のN-末端又はC-末端で融合したハイブリッドポリペプチドであり得る。
親はまた、1個のポリペプチドが他のポリペプチドのN-末端又はC-末端で融合した融合ポリペプチド又は切断可能な融合ポリペプチドであり得る。融合ポリペプチドは、一のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを他のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに融合することにより生成される。融合ポリペプチドを生成する技術は、技術分野において公知であると共に、フレーム中に収まり、融合ポリペプチドの発現が同一のプロモータ及びターミネータによる制御下にあるよう、ポリペプチドをコードするコード配列を連結するステップを含む。融合タンパク質はまた、翻訳後に融合が形成されるインテインテクノロジーを用いて構築されてもよい(Cooper et al.,1993,EMBO J.12:2575-2583;Dawson et al.,1994,Science 266:776-779)。
融合ポリペプチドは、2つのポリペプチドの間に切断部位をさらに含んでいることが可能である。融合タンパク質が分泌される際に、この部位が切断されて2つのポリペプチドが遊離される。切断部位の例としては、これらに限定されないが、Martin et al.,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.3:568-576;Svetina et al.,2000,J.Biotechnol.76:245-251;Rasmussen-Wilson et al.,1997,Appl.Environ.Microbiol.63:3488-3493;Ward et al.,1995,Biotechnology 13:498-503;及び、Contreras et al.,1991,Biotechnology 9:378-381;Eaton et al.,1986,Biochemistry 25:505-512;Collins-Racie et al.,1995,Biotechnology 13:982-987;Carter et al.,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics 6:240-248;及び、Stevens,2003,Drug Discovery World 4:35-48に開示されている部位が挙げられる。
ポリヌクレオチド
本発明はまた、本発明の変異体のいずれかをコードするポリヌクレオチドに関連する。従って、特に、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体をコードするポリヌクレオチドに関する。
本明細書で使用される「コードするポリヌクレオチド」という用語は、α-アミラーゼ活性を備えるα-アミラーゼを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。一態様では、ポリペプチドをコードする配列は、配列番号18に記載されるヌクレオチド配列である。
一実施形態において、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号18のポリペプチドに対して少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも96%、例えば少なくとも97%、例えば少なくとも98%、例えば少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する。
核酸構築物
本発明はまた、制御配列に適合する条件下で好適な宿主細胞中にコード配列を発現させる1つ又は複数の制御配列に作動可能にリンクした本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物にも関する。従って、特に、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481Aに対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体をコードするポリヌクレオチドを含む核酸構築物に関する。
本明細書で使用される「核酸構築物」という用語は、1つ若しくは複数の制御配列を含む一本鎖又は二本鎖いずれかの核酸分子を指し、これは、天然の遺伝子から単離されるか、若しくは、そうでなければ自然に存在しないであろう様式で核酸のセグメントを含有するよう修飾されるか、又は、合成物である。
本明細書で使用される「作動可能にリンクされた」という用語は、制御配列がコード配列を発現させるよう、ポリヌクレオチドのコード配列に対して適切な位置に制御配列が位置している構造を意味する。
ポリヌクレオチドは、変異体を発現させるように様々な方法で操作してもよい。発現ベクターに応じて、ベクターに挿入する前のポリヌクレオチドの操作が、望ましいか、又は必要となり得る。組換えDNA法を用いてポリヌクレオチドを修飾する技術は当該技術分野で公知である。
制御配列は、プロモータ、即ち、ポリヌクレオチドの発現のための宿主細胞によって認識されるポリヌクレオチドであってよい。プロモータは、変異体の発現を媒介する転写制御配列を含む。プロモータは、宿主細胞において転写活性を示す任意の核酸配列であってよく、そうしたものとして、ミュータント、切断及びハイブリッドプロモータがあり、また、プロモータは、宿主細胞に対して相同性又は非相同性のいずれかである細胞外若しくは細胞内ポリペプチドをコードする遺伝子から得ることができる。
発現ベクター
本発明はまた、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチド、プロモータ、並びに、転写及び翻訳終止シグナルを含む組換え発現ベクターにも関する。従って、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体をコードするポリヌクレオチド、プロモータ、並びに、転写及び翻訳終止シグナルを含む発現ベクター、任意選択で組換え発現に関する。
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、変異体をコードするポリヌクレオチドを含み、且つ、その発現を可能にする制御配列に作動可能にリンクされた直鎖又は環状DNA分子を指す。
様々なヌクレオチド及び制御配列を互いに連結して、1つ又は複数の好都合な制限部位を含み得る組換え発現ベクターを作製して、こうした部位で、変異体をコードするポリヌクレオチドの挿入又は置換を可能にすることができる。或いは、発現のための適切なベクター中に、ポリヌクレオチド、又はポリヌクレオチドを含有する核酸構築物を挿入することによってポリヌクレオチドを発現させることもできる。発現ベクターを作製する際、コード配列が、発現のための適切な制御配列と作動可能にリンクするように、コード配列をベクター内に配置する。
組換え発現ベクターは、組換えDNA法に簡便に供されることが可能であり、且つ、ポリヌクレオチドの発現を達成することができる任意のベクター(例えば、プラスミド又はウイルス)であってよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞に対するベクターの親和性に応じて異なる。ベクターは、直鎖又は閉じた環状プラスミドであってよい。
ベクターは、例えば、プラスミド、染色体外要素、微小染色体、又は人工染色体といった、自己複製ベクター(即ち、染色体外のエンティティとして存在し、その複製が染色体複製とは無関係なベクター)であり得る。ベクターは、自己複製を確実にするための何らかの手段を含有し得る。或いは、ベクターは、宿主細胞に導入された際に、ゲノム中に統合されて、中に統合された染色体と一緒に複製されるものであってもよい。さらには、単一のベクター若しくはプラスミド、又は、一緒になって、宿主細胞のゲノムに導入される全DNAを含有する2つ以上のベクター若しくはプラスミド、又は、トランスポゾンを用いてもよい。
ベクターは、形質転換、形質移入、形質導入等が為された細胞の選択を容易にする1つ又は複数の選択マーカーを含有することが好ましい。選択マーカーは、その生成物が、殺生剤又はウイルス耐性、重金属に対する耐性、栄養要求体に対する原栄養性等をもたらす遺伝子である。
当業者であれば、どの発現ベクターが、特定の発現系に最も好適であるかを熟知していよう。従って、本発明は、いずれか特定の発現ベクターに限定されるわけではなく、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドを含むあらゆる発現ベクターが本発明の一部とみなされる。
宿主細胞
本発明はまた、本発明の変異体の生成をもたらす1つ又は複数の制御配列に作動可能にリンクした、本発明の変異体をコードするポリヌクレオチドを含む組換え宿主細胞にも関する。従って、本発明は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体をコードすると共に、変異体の生成をもたらす1つ又は複数の制御配列に作動可能にリンクしたポリヌクレオチドを含む宿主細胞、任意選択で組換え宿主細胞に関する。
本明細書で使用される「宿主細胞」という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む核酸構築物又は発現ベクターによる形質転換、形質移入、形質導入等に対して感受性の任意の細胞型を指す。「宿主細胞」という用語は、複製の最中に生じる突然変異により親細胞と同一ではない、親細胞の任意の子孫を包含する。
ポリヌクレオチドを含む構築物又はベクターを宿主細胞に導入して、構築物又はベクターが、前述したように染色体組込み体若しくは自己複製染色体外ベクターとして維持されるようにする。宿主細胞の選択は、変異体をコードする遺伝子及びそのソースに大きく依存することとなる。
宿主細胞は、例えば、原核生物又は真核生物といった、変異体の組換え生成において有用な任意の細胞であってよい。
原核宿主細胞は、任意のグラム陽性又はグラム陰性バクテリアであってよい。グラム陽性バクテリアとしては、これらに限定されないが、バチルス属(Bacillus)、クロストリジウム属(Clostridium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ゲオバチルス属(Geobacillus)、ラクトバチルス属(Lactobacillus)、ラクトコッカス属(Lactococcus)、オセアノバチルス属(Oceanobacillus)、スタフィロコッカス属(Staphylococcus)、ストレプトコッカス属(Streptococcus)及びストレプトマイセス属(Streptomyces)が挙げられる。グラム陰性バクテリアとしては、これらに限定されないが、カムピロバクター属(Campylobacter)、大腸菌(E.coli)、フラボバクテリウム属(Flavobacterium)、フソバクテリウム属(Fusobacterium)、ヘリコバクター属(Helicobacter)、イリオバクター属(Ilyobacter)、ネイッセリア属(Neisseria)、シュードモナス属(Pseudomonas)、サルモネラ属(Salmonella)及びウレアプラズマ属(Ureaplasma)が挙げられる。
変異体の調製
本発明は、また、α-アミラーゼ活性を備える変異体を取得する方法に関し、これは、以下(a)配列番号2の親α-アミラーゼに、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を導入するステップであって、変異体がα-アミラーゼ活性を備えるステップ;並びに(b)変異体を回収するステップを含む。
本発明は、また、α-アミラーゼ活性を備える変異体を取得する方法にも関し、これは、以下(a)配列番号2の親α-アミラーゼに、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;Y160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q385L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を導入するステップを含む。
変異体の調製
変異体は、部位特異的突然変異誘発、合成遺伝子構築、半合成遺伝子構築、無作為突然変異誘発、シャッフリング等などの技術分野において公知であるいずれかの突然変異誘発法を用いて調製され得る。
部位特異的突然変異誘発は、親をコードするポリヌクレオチドにおける1つ又は複数の規定の部位で1つ又は複数(いくつか)の修飾を形成する技術である。
部位特異的突然変異誘発は、所望の修飾を含有するオリゴヌクレオチドプライマーが使用されるPCRによってインビトロで達成されることが可能である。部位特異的突然変異誘発はまた、親をコードするポリヌクレオチドを含むプラスミドにおける部位が制限酵素により切断され、及び、その後、ポリヌクレオチドに修飾を含有するオリゴヌクレオチドが連結されるカセット式突然変異誘発によって、インビトロで行われることが可能である。通常、プラスミド及びオリゴヌクレオチドで消化する制限酵素は同一であり、プラスミドの付着末端と挿入断片とを互いに連結させる。例えば、Scherer and Davis,1979,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76:4949-4955;及び、Barton et al.,1990,Nucleic Acids Res.18:7349-4966を参照のこと。
部位特異的突然変異誘発はまた、技術分野において公知である方法によってインビボで達成可能である。例えば、米国特許出願公開第2004/0171154号明細書;Storici et al.,2001,Nature Biotechnol.19:773-776;Kren et al.,1998,Nat.Med.4:285-290;及び、Calissano and Macino,1996,Fungal Genet.Newslett.43:15-16を参照のこと。
いずれかの部位特異的突然変異誘発法が本発明において用いられることが可能である。変異体の調製に用いられることが可能である多くの市販のキットが入手可能である。
合成遺伝子構築には、対象のポリペプチドをコードするための設計されたポリヌクレオチド分子のインビトロ合成が伴う。遺伝子合成は、Tian et al.(2004,Nature 432:1050-1054)により記載されている多重マイクロチップ系テクノロジー、並びに、オリゴヌクレオチドが合成されると共に光による制御が可能なマイクロ流体チップにアセンブルされる同様のテクノロジーなどの多数の技術を利用して行うことが可能である。
単一若しくは複数のアミノ酸置換、欠失、及び/又は挿入は、Reidhaar-Olson and Sauer,1988,Science 241:53-57;Bowie and Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:2152-2156;国際公開第95/17413号パンフレット;又は、国際公開第95/22625号パンフレットにより開示されているものなどの公知の突然変異誘発方法、組換え法、及び/又は、シャッフリング法、これに続く関連するスクリーニング法を用いて行い、テストすることが可能である。用いられることが可能である他の方法としては、エラープローンPCR、ファージディスプレイ(例えば、Lowman et al.,1991,Biochemistry 30:10832-10837;米国特許第5,223,409号明細書;国際公開第92/06204号パンフレット)、及び、領域特異的突然変異誘発(Derbyshire et al.,1986,Gene 46:145;Ner et al.,1988,DNA 7:127)が挙げられる。
突然変異誘発/シャッフリング法は、宿主細胞によって発現されたクローン化突然変異誘発ポリペプチドの活性を検出するために、高スループット自動スクリーニング法と組み合わせることが可能である(Ness et al.,1999,Nature Biotechnology 17:893-896)。活性ポリペプチドをコードする突然変異誘発DNA分子は、宿主細胞から回収可能であり、技術分野における標準的な方法を用いて直ぐに配列決定されることが可能である。これらの方法では、ポリペプチドにおける個別のアミノ酸残基の重要性を直ぐに判定することが可能である。
半合成遺伝子構築は、合成遺伝子構築及び/又は部位特異的突然変異誘発及び/又はランダム突然変異誘発及び/又はシャッフリングの態様を組み合わせることにより達成される。半合成構築は、PCR技術と組み合わされる、合成されたポリヌクレオチド断片を利用するプロセスに代表される。それ故、遺伝子の定義された領域が新たに合成され得、一方で、他の領域が部位特異的突然変異誘発性プライマーを用いて増幅され得、一方で、さらに他の領域がエラープローンPCR又は非エラープローンPCR増幅に供され得る。次いで、ポリヌクレオチドサブ配列がシャッフルされ得る。
生成方法
本発明はまた:(a)本発明の宿主細胞を変異体の発現に好適な条件下で培養するステップ;及び、(b)変異体を回収するステップを含む、α-アミラーゼ変異体を生成する方法に関する。
宿主細胞は、技術分野において公知である方法を用いて変異体の生成に好適な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、好適な培地中並びにポリペプチドの発現及び/又は単離が許容される条件下で行われる、振盪フラスコ培養により、又は、実験用若しくは産業用発酵槽における小規模若しくは大規模発酵(連続式、バッチ式、フェドバッチ式又は固体状発酵を含む)により培養され得る。培養は、炭素及び窒素源及び無機塩を含む好適な栄養培地において、技術分野において公知である手法を用いて行われる。好適な媒体は、商業的な供給者から入手可能であるか、又は、公開された組成に従って調製され得る(例えば、American Type Culture Collectionのカタログ)。変異体が栄養培地に分泌される場合、変異体は培地から直接回収可能である。変異体が分泌されない場合、細胞ライセートから回収可能である。
変異体は、変異体に特異的な技術分野において公知である方法を用いて検出され得る。これらの検出方法は、特定の抗体の使用、酵素産生物の形成、又は、酵素基質の消失を含み得る。例えば、酵素アッセイを用いて変異体の活性を判定してもよい。
変異体は技術分野において公知である方法により回収され得る。例えば、変異体は、特にこれらに限定されないが、収集、遠心分離、ろ過、抽出、噴霧乾燥、蒸発又は沈殿を含む従来の手法により栄養培地から回収され得る。
変異体は、実質的に純粋な変異体を得るために、特にこれらに限定されないが、クロマトグラフィ(例えば、イオン交換、親和性、疎水性、クロマトフォーカシング及びサイズ排除)、電気泳動的手法(例えば、分取等電点電気泳動)、較差溶解度(例えば、硫酸アンモニウム沈殿)、SDS-PAGE、又は、抽出(例えば、Protein Purification,J.-C.Janson and Lars Ryden,editors,VCH Publishers,New York,1989を参照のこと)を含む技術分野において公知である多様な手法によって精製され得る。
代替的には、変異体は回収されず、変異体を発現する本発明の宿主細胞が変異体のソースとして用いられ得る。
発酵ブロス調合物又は細胞組成物
本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含む発酵ブロス調合物又は細胞組成物にも関する。従って、一実施形態では、発酵ブロス調合物又は細胞組成物は、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ若しくは複数の位置に修飾を含む変異体をコードするポリヌクレオチドであって、上記位置が配列番号2に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸位置に対応するポリヌクレオチド、
以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ若しくは複数の位置に修飾を含む変異体をコードする核酸構築物であって、上記位置が配列番号2に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸位置に対応する核酸構築物、又は
以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体をコードする発現ベクターであって、上記位置が配列番号2に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸位置に対応する発現ベクターを含む。発酵ブロス生成物は、さらに、発酵工程に使用される別の材料、例えば、細胞(目的のポリペプチドを生成するのに用いられる本発明のポリペプチドをコードする遺伝子を含有する宿主細胞)、細胞残屑、バイオマス、発酵培地及び/又は発酵産物を含んでもよい。一部の実施形態では、組成物は、有機酸、死滅細胞及び/又は細胞残屑、並びに細胞培地を含む細胞死滅全ブロスである。
本明細書で使用される「発酵ブロス」という用語は、細胞発酵により生成される調製物を指し、これは、回収及び/又は精製を全く受けないか、又は最小限しか受けない。例えば、発酵ブロスは、微生物培地を飽和まで成長させ、タンパク質合成(例えば、宿主細胞による酵素の発現)及び細胞培地への分泌を可能にする炭素制限条件下でインキュベートすると、生成される。発酵ブロスは、発酵の終了時に得られる発酵材料の未分画又は分画内容物を含有し得る。典型的には、発酵ブロスは、未分画であり、微生物細胞(例えば、糸状真菌細胞)を例えば遠心分離により除去した後に存在する使用済み培地及び細胞屑を含有する。一部の実施形態では、発酵ブロスは、使用済み細胞培地、細胞外酵素、並びに生存及び/又は非生存微生物細胞を含有する。
一実施形態では、発酵ブロス調合物及び細胞組成物は、少なくとも1つの1~5炭素有機酸及び/又はその塩を含む第1有機酸成分と、少なくとも1つの6炭素以上の有機酸及び/又はその塩を含む第2有機酸成分とを含有する。特定の実施形態では、第1有機酸成分は、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、その塩、又はこれらの2種以上の混合物であり、第2有機酸成分は、安息香酸、シクロヘキサンカルボン酸、4-メチル吉草酸、フェニル酢酸、それらの塩、又はこれらの2種以上の混合物である。
一実施形態では、組成物は、有機酸を含有し、任意選択で、死滅細胞及び/又は細胞残屑をさらに含有する。一実施形態では、死滅細胞及び/又は細胞残屑を細胞死滅全ブロスから除去して、これらの成分を含有しない組成物を取得する。
発酵ブロス調合物又は細胞組成物は、保存料及び/又は抗菌(例えば、静菌)剤をさらに含んでもよく、こうしたものとして、例えば、ソルビトール、塩化ナトリウム、ソルビン酸カリウム、及び当該技術分野で公知の他の薬剤が挙げられる。
細胞死滅全ブロス又は組成物は、発酵の終了時に得られる発酵材料の未分画内容物を含み得る。典型的には、細胞死滅全ブロス又は組成物は、微生物細胞(例えば、糸状真菌細胞)が飽和まで増殖し、タンパク質合成を可能にする炭素制限条件下でインキュベートされた後に存在する使用済み培地及び細胞残屑を含む。一部の実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物は、使用済み細胞培地、細胞外酵素、及び死滅糸状真菌細胞を含む。一部の実施形態では、細胞死滅全ブロス又は組成物中に存在する微生物細胞は、当該技術分野で公知の方法を用いて透過処理及び/又は溶解してもよい。
本明細書に記載の全ブロス又は細胞組成物は、典型的に液体であるが、死滅細胞、細胞残屑、培地成分、及び/又は不溶性酵素などの不溶性成分を含み得る。一部の実施形態では、不溶性成分を除去して、清澄化された液体組成物を得ることができる。
本発明の全ブロス調合物及び細胞組成物は、国際公開第90/15861号パンフレット又は同第2010/096673号パンフレットに記載されている方法により生成することができる。
組成物
本発明は、また、本発明の変異体を含む組成物にも関する。従って、本発明は、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ若しくは複数の位置に修飾を有する変異体を含む組成物に関し、ここで、上記位置は、配列番号2に記載されるアミノ酸配列のアミノ酸位置に対応する。
一実施形態では、組成物は、以下:
a)配列番号2に記載されるアミノ酸配列の位置R181、G182、D183、及びG184に対応する2つ以上の位置に欠失及び/又は置換、並びに
b)配列番号2に記載されるアミノ酸配列の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ若しくは複数の位置における修飾
を含む変異体を含む。
本発明はまた、本発明の変異体を含む組成物に関する。好ましくは、組成物は、このような変異体が富化されている。「富化」という用語は、組成物のα-アミラーゼ活性が、例えば1.1の富化因子で高められることを意味する。
一実施形態では、本発明は、1つ又は複数の追加成分と組み合わせて、本発明の変異体を含む組成物に関する。追加成分の選択は、当業者の技量の範囲内であり、以下に記載される例示的な非限定的成分などの従来の成分が含まれる。
一実施形態では、本発明は、1種若しくは複数種の酵素、酸化剤、漂白活性化剤、漂白触媒、キレート剤、増量剤、ビルダー、緩衝剤、構造化剤(structurant)、金属イオン封鎖剤、光学増白剤、消泡剤、酵素、芳香剤、再汚染防止剤、皮膚コンディショニング剤、柔軟剤、乳化剤、結晶成長阻害剤、金属ケア剤、ガラスケア剤及び着色料からなる群から選択される1つ又は複数の追加成分を含む組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、界面活性剤を含む組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、界面活性剤が、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、双イオン性界面活性剤、及び両性界面活性剤、又はこれらの任意の混合物からなる群から選択される1若しくは複数の界面活性剤である、組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、組成物が、洗剤組成物である組成物に関する。
一実施形態では、組成物は、液体ランドリー又は液体食器洗浄組成物、例えば、自動食器洗浄用(ADW)液体洗剤組成物、又は粉末ランドリー、例えば、セッケンバー、又は粉末食器洗浄組成物、例えば、ADW単位用量洗剤組成物、例えば、手洗い用食器洗浄(HDW)洗剤組成物である。
一実施形態では、本発明は、組成物が、1種又は複数種の追加酵素を含む組成物に関する。
組成物は、主要酵素成分、例えば、単一成分組成物として変異体を含む。或いは、組成物は、複数の酵素活性、例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、ホスホ-リパーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ヘミセルラーゼペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペロキシダーゼ、ケラチナーゼ、ハロペロキシゲナーゼ、カタラーゼ、マンナーゼ、レキナーゼ、RNase、DNAse、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペント-サナーゼ、マラナーゼ、β-グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、及びラッカーゼ又はこれらの任意の混合物を含み得る。
追加の酵素が、例えば、バチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)、及びバチルスサブチリス(Bacillus subtilis)といったバチルス(Bacillus)属、例えば、アスペルギルスアクレアツス(Aspergillus aculeatus)、アスペルギルスアワモリ(Aspergillus awamori)、アスペルギルスフォエティダス(Aspergillus foetidus)、アスペルギルスフミガーツス(Aspergillus fumigatus)、アスペルギルスジャポニクス(Aspergillus japonicus)、アスペルギルスニズランス(Aspergillus nidulans)、アスペルギルスニガー(Aspergillus niger)又はアスペルギルスオリゼー(Aspergillus oryzae)といったアスペルギルス属(Aspergillus);例えば、フザリウムバクテリジオイデス(Fusarium bactridioides)、フザリウムセレアリス(Fusarium cerealis)、フザリウムクロークウェレンス(Fusarium crookwellense)、フザリウムクルモルム(Fusarium culmorum)、フザリウム グラミネアルム(Fusarium graminearum)、フザリウムグラミヌム(Fusarium graminum)、フザリウムヘテロスポルム(Fusarium heterosporum)、フザリウムネグンディ(Fusarium negundi)、フザリウム オキシスポルム(Fusarium oxysporum)、フザリウムレチクランツム(Fusarium reticulatum)、フザリウム ロゼウム(Fusarium roseum)、フザリウムサムブシヌム(Fusarium sambucinum)、フザリウムサルコクロウム(Fusarium sarcochroum)、フザリウムスルフレウム(Fusarium sulphureum)、フザリウムトルロセウム(Fusarium toruloseum)、フザリウムトリコテシオイデス(Fusarium trichothecioides)若しくはフザリウムベネナツム(Fusarium venenatum)といったフザリウム属(Fusarium);フミコラ属(Humicola)、例えば、フミコラインソレンス(Humicola insolens)若しくはフミコララヌギノサ(Humicola lanuginosa);又は、例えば、トリコデルマハルジアヌム(Trichoderma harzianum)、トリコデルマコニンギイ(Trichoderma koningii)、トリコデルマロンギブラキアツム(Trichoderma longibrachiatum)、トリコデルマレエセイ(Trichoderma reesei)又はトリコデルマビリデ(Trichoderma viride)といったトリコデルマ属(Trichoderma)に属する微生物によって、又は本明細書に記載の他の宿主細胞によって、例えば生成され得る。
組成物は、技術分野において公知である方法に従って調製され得、また、液体又は乾燥組成物の形態であり得る。例えば、組成物は、粒質物又は微粒剤の形態であり得る。変異体は、技術分野において公知である方法に従って安定化され得る。
こうした組成物は、クリーニング/洗剤成分、好ましくはこれら成分の混合物を含む。典型的には、クリーニング成分は、0.001~99.9wt%、より典型的には0.01~80wt%の量で組成物中に存在する。
別の好ましい態様では、組成物は、1種又は複数種の界面活性剤を含み、半極性を含むノニオン性及び/又はアニオン性及び/又はカチオン性及び/又は双性イオン性及び/又は両性及び/又は半極性ノニオン性及び/又はこれらの混合物であってよい。界面活性剤は、典型的に、組成物の0.1%~60重量%又は0.5%~50wt%又は1%~40wt%のレベルで存在する。
本発明の一実施形態において、本発明の変異体は、洗浄液1リットル当たり、0.01~100mgのタンパク質、好ましくは0.005~50mgのタンパク質、より好ましくは0.01~25mgのタンパク質、さらにより好ましくは0.05~10mgのタンパク質、最も好ましくは0.05~5mgのタンパク質、及び、さらに最も好ましくは0.01~1mgのタンパク質などの0.001~100mgのタンパク質に対応する量で洗剤組成物に添加され得る。これに関連して「タンパク質」という用語は、本発明の変異体を含むと理解すべきであると考えられる。
自動食器洗浄(ADW)に使用するための組成物は、例えば、組成物の重量に基づいて0.0001%~50%、例えば、0.001%~20%、例えば、0.01%~10%、例えば、0.05%~5%の酵素タンパク質を含有し得る。
ランドリー粒状洗剤に使用するための組成物は、例えば、組成物の重量に基づいて0.0001%~50%、例えば、0.001%~20%、例えば、0.01%~10%、例えば、0.05%~5%の酵素タンパク質を含有し得る。
ランドリー液体洗剤に使用するための組成物は、例えば、組成物の重量に基づいて0.0001%~10%、例えば、0.001%~7%、例えば、0.1%~5%の酵素タンパク質を含有し得る。
本発明の変異体、さらには追加の酵素などのさらなる活性成分は、例えば、プロピレングリコール若しくはグリセロールなどのポリオール、糖質若しくは糖質アルコール、乳酸、ホウ酸、若しくは、例えば芳香族ホウ酸エステルといったホウ酸誘導体、又は、4-ホルミルフェニルボロン酸などのフェニルボロン酸誘導体といった従来の安定化剤を用いて安定化され得、及び、組成物は、例えば、国際公開第92/19709号パンフレット及び国際公開第92/19708号パンフレットに記載されているとおり配合され得る。
特定の市場では、様々な洗浄条件、従って、多様なタイプの洗剤が使用される。これは、例えば、欧州特許第1,025,240号明細書に開示されている。例えば、アジア(日本)では、低洗剤濃度系が使用されているが、米国では、中洗剤濃度系を使用し、欧州は、高洗剤濃度系を使用する。
低洗剤濃度系は、洗浄水中に約800ppm未満の洗剤成分が存在する洗剤を含む。日本の洗剤は、洗浄水中に約667ppmの洗剤成分が存在するため、典型的に低洗剤濃度系と考えられる。
中洗剤濃度は、洗浄水中に約800ppm~約2000ppmの洗剤成分が存在する洗剤を含む。北米の洗剤は、洗浄水中に約975ppmの洗剤成分が存在するため、一般的に中洗剤濃度系と考えられる。
高洗剤濃度系は、洗浄水中に約2000ppmを超える洗剤成分が存在する洗剤を含む。欧州の洗剤は、洗浄水中に約4500ppm~約5000ppmの洗剤成分が存在するため、一般的に中洗剤濃度系と考えられる。
ラテンアメリカの洗剤は、一般に、多くのセッケン泡を発生するリン酸ビルダー洗剤であり、ラテンアメリカで用いられる多様な洗剤は、洗浄水中に1500ppm~6000ppmの洗剤成分の範囲にあることから、中濃度及び高洗剤濃度に含まれ得る。こうした洗剤組成物は、本発明の全ての実施形態である。
本発明の変異体はまた、参照により本明細書に援用される国際公開第97/07202号パンフレットに開示の洗剤配合物に組み込まれてもよい。
本発明の組成物の好ましい使用の例を本明細書に記載する。組成物の用量及び組成物が使用される他の条件は、当該技術分野で公知の方法に基づいて決定することができる。
特に、本発明の組成物は、キレート剤をさらに含む。
本明細書で使用される「キレート剤」という用語は、特定の金属イオンと分子を形成して、イオンが他の元素と反応することができないようにそれらのイオンを不活性化する化学物質を指す。従って、キレート剤は、キレートを形成することにより化学活性を抑制する結合剤として定義され得る。キレート化は、リガンドと単一中心原子との2つ以上の個別の結合の形成又は存在である。リガンドは、任意の有機化合物、ケイ酸塩又はリン酸塩であってよい。本発明に関して、「キレート剤」という用語は、カルシウム及びマグネシウムなどの金属イオンと水溶性錯体を形成する、ケラント(chelant)、キレート剤、複数のキレート剤、錯化剤、又は金属イオン封鎖剤を含む。キレート効果は、同じ金属に対する類似の非キレート化リガンドの集団の親和性と比較して、金属イオンに対するキレート化リガンドの親和の増大を表す。キレート剤は、金属イオン、特に、カルシウム(Ca2+)イオンとの結合能力を有するため、一般に、ランドリー又は食器洗浄などの洗浄用の洗剤及び組成物中に広く使用されている。しかし、キレート剤は、それ自体で酵素活性を阻害することが明らかにされている。キレート剤という用語は、本願において、「錯化剤」又は「キレート剤」若しくは「ケラント」と置き換え可能に使用される。
ほとんどのα-アミラーゼは、カルシウム感受性であることから、これらのキレート剤の存在は、酵素活性を損なう恐れがある。α-アミラーゼのカルシウム感受性は、強力なキレート剤の存在下で所与のα-アミラーゼをインキュベートし、対象のα-アミラーゼの活性に対するこのインキュベーションの影響を分析することにより、決定することができる。カルシウム感受性α-アミラーゼは、インキュベーション中にその活性の大部分又は全部を失う。キレート剤は、0.0001wt%~20wt%、好ましくは0.01wt%~10wt%、より好ましくは0.1wt%~5wt%の量で組成物中に存在し得る。
キレート剤の非限定的な例は、EDTA、DTMPA、HEDP、及びクエン酸塩である。従って、一実施形態では、組成物は、本発明の変異体と、キレート剤、例えば、EDTA、DTMPA、HEDP、又はクエン酸塩を含む。
本明細書で使用される「EDTA」という用語は、エチレン-ジアミン-テトラ-酢酸を指し、これは、「強力なキレート剤」の定義に入る。
本明細書で使用される「DTMPA」という用語は、ジエチレントリアミンペンタ(メチレンリン酸)を指す。DTMPAは、炭酸塩、硫酸塩及びリン酸塩のスケール形成を阻害することができる。
本明細書で使用される「HEDP」という用語は、ヒドロキシ-エタンジホスホン酸を指し、これは、「強力なキレート剤」の定義に入る。
キレート効果又はキレート化効果とは、同じ金属に対する類似の非キレートリガンドの集団の親和性と比較して、金属イオンに対するキレート化リガンドの親和の増大を表す。しかし、このキレート効果の強度は、各種アッセイ又は計測方法により決定することができ、それにより、そのキレート化効果(若しくは強度)に応じてキレート剤を識別又は等級付けすることができる。
一アッセイでは、キレート剤は、例えば、M.K.Nagarajan et al.,JAOCS,Vol.61,no.9(September 1984),pp.1475-1478により記載される方法に基づく試験を用いて、pH8.0で2.0mM~0.10mM以下の遊離カルシウムイオン(Ca2+)の濃度を低下させるその能力により特性決定され得る。
参照として、同等のキレート剤濃度のEDTAと、pHで2.0mM~0.10mMの遊離カルシウムイオン(Ca2+)の濃度を低下させる同じ能力を有するキレート剤は、強力なキレート剤と言える。
本発明の組成物は、例えば、バー、均質な錠剤、2つ以上の層を有する錠剤、1つ以上のコンパートメントを有するポーチ、通常の若しくは圧縮された粉末、顆粒、ペースト、ゲル、又は、通常の圧縮若しくは濃縮液体といった任意の簡便な形態であってよい。層(同一の又は異なる相)、ポーチ、並びに機械用量単位に対応した形態など、いくつかの洗剤配合物形態がある。
ポーチは、単一又は複数のコンパートメントとして構成されることが可能である。例えば、水と接触する前にポーチから組成物を放出させることなく、組成物の保持に好適であれば如何なる形態、形状及び材料のものであってもよい。ポーチは、内部容積を包含する水溶性フィルム製のものである。前記内部容積は、ポーチの複数のコンパートメントに区分することができる。好ましいフィルムは、高分子材料、好ましくは、フィルム又はシートに形成されるポリマーである。好ましいポリマー、コポリマー又はその誘導体は、ポリアクリレート、及び、水溶性アクリレートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマー、及びヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)から選択される。好ましくは、フィルム中のポリマーのレベルは、例えば、PVAの場合、少なくとも約60%である。好ましい平均分子量は、典型的には、約20,000~約150,000であろう。フィルムはまた、ポリアクチド及びポリビニルアルコール(Chris Craft In.Prod.Of Gary,Ind.,USから市販されている商品名M8630で知られている)などの加水分解的に分解性及び水溶性のポリマーブレンドと、グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール及びこれらの混合物などの可塑剤とを含むブレンド組成物であってもよい。ポーチは、水溶性フィルムにより分離された固体ランドリークリーニング組成物又は部分成分及び/又は液体クリーニング組成物又は部分成分を含んでいることが可能である。液体成分用のコンパートメントは、固形分を含有するコンパートメントとは組成が異なり得る。参照:(米国特許出願公開第2009/0011970A1号明細書)。
洗剤成分は、水溶性ポーチ中のコンパートメントにより、又は、錠剤の異なる層中において相互に物理的に分離されていてもよい。これにより、成分間の負の保管相互作用を防止することができる。また、コンパートメントの各々の異なる溶解プロファイルによって、洗浄溶液中の選択された成分の溶解を遅らせることができる。
単一用量式ではない液体又はゲル製剤は、水性であってもよく、典型的に、少なくとも20重量%及び最大95%の水、例えば、最大約70%の水、最大約65%の水、最大約55%の水、最大約45%の水、最大約35%の水を含有する。他のタイプの液体、限定されないが、アルカノール、アミン、ジオール、エーテル及びポリオールを水性液体又はゲルに含有させてもよい。水性液体又はゲル洗剤は、0~30%有機溶剤を含有し得る。液体又はゲル洗剤は、非水性であってもよい。
組成物の別の形態は、例えば、ランドリーセッケンバーなどのセッケンバーの形態であり、手洗いのランドリー、布地及び/又は生地に使用され得る。本明細書で使用される「セッケンバー」という用語は、ランドリーバー、セッケンバー、コンボバー、合成洗剤バー及び洗剤バーを含むことを意味する。これらのタイプのバーは、通常、それらが含有する界面活性剤の種類が異なり、ランドリーセッケンバーという用語は、脂肪酸から成るセッケン及び/又は合成セッケンを含有するものを含む。ランドリーセッケンバーは、室温で固体の物理的形状を有し、液体、ゲル又は粉末ではない。本明細書で使用される「固体」という用語は、時間の経過とともに有意に変化しない物理的形状を意味する、即ち、固体の物品(例えば、ランドリーセッケンバー)が、容器内部に入っている場合、固体の物品は、それが入っている容器を満たすように変化しない。バーは、典型的に、棒状であるが、円又は楕円などの別の固体形状であってもよい。
セッケンバーは、また、EDTA及びHEDPなどの錯化剤、香料及び/又は各種充填材、界面活性剤、例えば、アニオン性合成界面活性剤、ビルダー、ポリマー汚れ放出剤、洗剤キレート剤、安定剤、充填材、染料、着色料、移染防止剤、アルコキシル化ポリカーボネート、セッケン泡抑制剤、構造化剤、結合剤、浸出剤、漂白活性化剤、粘土汚れ除去剤、再汚染防止剤、ポリマー分散剤、増白剤、生地柔軟剤、香料及び/又は当該技術分野で公知の他の化合物を含んでもよい。
セッケンバーは、従来のランドリーセッケンバー製造装置、例えば、限定されないが、以下:ミキサー、プロッダー、例えば、2段階真空プロッダー、押出機、切断機、ロゴスタンパー、冷却トンネル及び包装機などで加工することができる。本発明は、いずれか単一の方法によるセッケンバーの製造に限定されるわけではない。本発明のプレミックスは、製法の様々な段階でセッケンに添加することができる。例えば、セッケン、酵素、任意選択で1種又は複数種の追加酵素、プロテアーゼ阻害剤、及び一価カチオン及び有機アニオンの塩を含むプレミックスを調製した後、混合物をプロッドすることができる。酵素と任意選択の追加酵素を、例えば、液体状で、酵素阻害剤、例えば、プロテアーゼ阻害剤と同時に添加してよい。混合及びプロッドステップ以外に、製法は、さらに、粉砕、押出し、切断、スタンプ、冷却及び/又は包装の各ステップを含み得る。
界面活性剤
洗剤組成物は、アニオン性及び/又はカチオン性及び/又はノニオン性及び/又は半極性及び/又は両イオン性又はこれらの混合物であり得る1種又は複数種の界面活性剤を含んでいてもよい。特定の実施形態において、洗剤組成物は、1種又は複数種のノニオン性界面活性剤及び1種又は複数種のアニオン性界面活性剤の混合物を含む。界面活性剤は、典型的には、約1%~約40%又は約3%~約20%又は約3%~約10%などの約0.1%~60重量%のレベルで存在する。界面活性剤は所望のクリーニング用途に基づいて選択され、技術分野において公知であるいずれかの従来の界面活性剤を含む。洗剤に用いられ得る技術分野において公知であるいずれかの界面活性剤が利用され得る。
含まれる場合、洗剤は、通常は、約5%~約15%又は約20%~約25%を含む約5%~約30%などの約1%~約40重量%のアニオン性界面活性剤を含有するであろう。アニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、硫酸塩及びスルホン酸塩、特に、直鎖アルキルベンゼンスルホネート(LAS)、LASの異性体、分岐アルキルベンゼンスルホネート(BABS)、フェニルアルカンスルホネート、α-オレフィンスルホネート(AOS)、オレフィンスルホネート、アルケンスルホネート、アルカン-2,3-ジイルビス(硫酸塩)、ヒドロキシアルカンスルホネート及びジスルホネート、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)などのアルキルスルフェート(AS)、脂肪族アルコールスルフェート(FAS)、第1級アルコールスルフェート(PAS)、アルコールエーテルスルフェート(アルコールエトキシスルフェート又は脂肪族アルコールエーテルスルフェートとしても公知であるAES又はAEOS又はFES)、第2級アルカンスルホネート(SAS)、パラフィンスルホネート(PS)、エステルスルホネート、スルホン化脂肪酸グリセロールエステル、メチルエステルスルホネート(MES)を含むα-スルホ脂肪酸メチルエステル(α-SFMe又はSES)、アルキル-又はアルケニルコハク酸、ドデセニル/テトラデセニルコハク酸(DTSA)、アミノ酸の脂肪酸誘導体、スルホコハク酸又はセッケンのジエステル及びモノエステル、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
含まれる場合、洗剤は、通常、約0%~約40重量%のカチオン性界面活性剤を含むであろう。カチオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルエタノール第4級アミン(ADMEAQ)、臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、ジメチルジステアリル塩化アンモニウム(DSDMAC)及びアルキルベンジルジメチルアンモニウム、アルキル第4級アンモニウム化合物、アルコキシル化第4級アンモニウム(AQA)化合物、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
含まれる場合、洗剤は、通常、約3%~約5%又は約8%~約12%などの、例えば約0.5%~約30%、特に約1%~約20%、約3%~約10%といった約0.2%~約40重量%のノニオン性界面活性剤を含有するであろう。ノニオン性界面活性剤の非限定的な例としては、アルコールエトキシレート(AE又はAEO)、アルコールプロポキシレート、プロポキシル化脂肪族アルコール(PFA)、エポキシキャップ化ポリ(オキシアルキレート化)アルコール、エトキシル化及び/又はプロポキシル化脂肪酸アルキルエステルなどのアルコキシル化脂肪酸アルキルエステル、アルキルフェノールエトキシレート(APE)、ノニルフェノールエトキシレート(NPE)、アルキルポリグリコシド(APG)、アルコキシル化アミン、脂肪酸モノエタノールアミド(FAM)、脂肪酸ジエタノールアミド(FADA)、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド(EFAM)、プロポキシル化脂肪酸モノエタノールアミド(PFAM)、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又は、グルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体(グルコサミドGA又は脂肪酸グルカミドFAGA)、並びに、商品名SPAN及びTWEENで入手可能な生成物、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
含まれる場合、洗剤は、通常、約0%~約40重量%の半極性界面活性剤を含有するであろう。半極性界面活性剤の非限定的な例としては、アルキルジメチルアミンオキシド、N-(ココアルキル)-N,N-ジメチルアミンオキシド及びN-(獣脂-アルキル)-N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)アミンオキシドなどのアミンオキシド(AO)、脂肪酸アルカノールアミド及びエトキシル化脂肪酸アルカノールアミド、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
含まれる場合、洗剤は、通常、約0%~約40重量%の両性イオン性界面活性剤を含有するであろう。両性イオン性界面活性剤の非限定的な例としては、ベタイン、アルキルジメチルベタイン、スルホベタイン、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
洗剤組成物は、また、米国特許出願公開第20130072416号明細書又は同第20130072415号明細書に開示されるような1種又は複数種のイソプレノイド界面活性剤を含有してもよい。
ヒドロトロープ
ヒドロトロープは、疎水性化合物を水溶液(又は、反対に、極性物質を非極性環境)中に可溶化させる化合物である。典型的には、ヒドロトロープは、親水特性及び疎水特性の両方を有する(いわゆる、界面活性剤から公知である両親媒性特性)が;しかしながら、ヒドロトロープの分子構造は、一般に、自発的な自己凝集を好まず、例えば、Hodgdon and Kaler(2007),Current Opinion in Colloid & Interface Science 12:121-128による概説を参照のこと。ヒドロトロープは、ミセル相、層状相又は他の良好に画定されたメソ相を形成する界面活性剤及び脂質について見出されるような、超えると自己凝集を生じる限界濃度を示さない。代わりに、多くのヒドロトロープは、凝集物の大きさが濃度の増加に伴って大型化する連続タイプの凝集プロセスを示す。しかしながら、多くのヒドロトロープは、水、脂、界面活性剤及びポリマーの混合物を含む、極性及び非極性特性の物質を含有する系の相挙動、安定性及びコロイド特性を改変させる。ヒドロトロープは、伝統的に、製薬、パーソナルケア、食品から技術的用途にわたり産業で用いられている。洗剤組成物中においてヒドロトロープを使用することにより、相分離又は高粘度などの望ましくない現象を誘起することなく、例えば、界面活性剤のより濃縮された配合物(水を排除することにより液体洗剤をコンパクトにするプロセスのとおり)が可能となる。
洗剤は、約0.5~約5%又は約3%~約5%などの0~5重量%のヒドロトロープを含有し得る。洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかのヒドロトロープが利用され得る。ヒドロトロープの非限定的な例としては、ベンゼンスルホン酸ナトリウム、p-トルエンスルホン酸ナトリウム(STS)、キシレンスルホン酸ナトリウム(SXS)、クメンスルホン酸ナトリウム(SCS)、シメンスルホン酸ナトリウム、アミンオキシド、アルコール及びポリグリコールエーテル、ヒドロキシナフタレンナトリウム、ヒドロキシナフタレンスルホン酸ナトリウム、エチルヘキシル硫酸ナトリウム、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
ビルダー及びコビルダー
洗剤組成物は、約5%~約50%などの約0~65重量%の洗剤ビルダー若しくはコビルダー、又は、これらの混合物を含有し得る。皿洗浄洗剤において、ビルダーのレベルは、典型的には40~65%、特に50~65%である。ビルダー及び/又はコビルダーは特に、Ca及びMgと共に水溶性錯体を形成するキレート化剤であり得る。ランドリー/ADW/硬質面クリーニングに用いられ得る洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかのビルダー及び/又はコビルダーが利用され得る。ビルダーの非限定的な例としては、ゼオライト、二リン酸塩(ピロリン酸塩)、三リン酸ナトリウム(STP又はSTPP)などの三リン酸塩、炭酸ナトリウムなどの炭酸塩、メタケイ酸ナトリウムなどの可溶性ケイ酸塩、層状ケイ酸塩(例えば、Hoechst製SKS-6)、2-アミノエタン-1-オール(MEA)、ジエタノールアミン(DEA、2,2’-イミノジエタン-1-オールとしても知られる)、トリエタノールアミン(TEA、2,2’,2”-ニトリロトリエタン-1-オールとしても知られる)などのエタノールアミン、及び(カルボキシメチル)イヌリン(CMI)、並びに、これらの組み合わせが挙げられる。
洗剤組成物はまた、約5%~約30%などの0~50重量%の洗剤コビルダー又はこれらの混合物を含有し得る。洗剤組成物は、コビルダーを単独で含んでいても、又は、例えばゼオライトビルダーといったビルダーと組み合わせて含んでいてもよい。コビルダーの非限定的な例としては、ポリ(アクリル酸)(PAA)又はコポリ(アクリル酸/マレイン酸)(PAA/PMA)などのポリアクリレートのホモポリマー又はそのコポリマーが挙げられる。さらに非限定的な例としては、クエン酸塩、アミノカルボン酸塩、アミノポリカルボン酸塩及びホスホン酸塩などのキレート剤、並びに、アルキル-又はアルケニルコハク酸が挙げられる。追加の特定の例としては、2,2’,2”-ニトリロ三酢酸(NTA)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、イミノジコハク酸(IDS)、エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸(EDDS)、メチルグリシン二酢酸(MGDA)、グルタミン酸-N,N-二酢酸(GLDA)、1-ヒドロキシエタン-1,1-ジホスホン酸(HEDP)、エチレンジアミンテトラ(メチレンホスホン酸)(EDTMPA)、ジエチレントリアミンエペンタキス(メチレンホスホン酸)(DTMPA又はDTPMPA)、N-(2-ヒドロキシエチル)イミノ二酢酸(EDG)、アスパラギン酸-N-一酢酸(ASMA)、アスパラギン酸-N,N-二酢酸(ASDA)、アスパラギン酸-N-モノプロピオン酸(ASMP)、イミノジコハク酸(IDA)、N-(2-スルホメチル)アスパラギン酸(SMAS)、N-(2-スルホエチル)アスパラギン酸(SEAS)、N-(2-スルホメチル)グルタミン酸(SMGL)、N-(2-スルホエチル)グルタミン酸(SEGL)、N-メチルイミノ二酢酸(MIDA)、α-アラニン-N,N-二酢酸(α-ALDA)、セリン-N,N-二酢酸(SEDA)、イソセリン-N,N-二酢酸(ISDA)、フェニルアラニン-N,N-二酢酸(PHDA)、アントラニル酸-N,N-二酢酸(ANDA)、スルファニル酸-N,N-二酢酸(SLDA)、タウリン-N,N-二酢酸(TUDA)及びスルホメチル-N,N-二酢酸(SMDA)、N-(2-ヒドロキシエチル)エチレンジアミン-N,N’,N’’-三酢酸(HEDTA)、ジエタノールグリシン(DEG)、ジエチレントリアミンペンタ(メチレンホスホン酸)(DTPMP)、アミノトリス(メチレンホスホン酸)(ATMP)、並びに、これらの組み合わせ及び塩が挙げられる。さらなる例示的なビルダー及び/又はコビルダーは、例えば、国際公開第09/102854号パンフレット、米国特許第5977053号明細書に開示されている。
漂白系
洗剤は、約1%~約20%などの0~30重量%の漂白系を含有し得る。ランドリー/ADW/硬質面クリーニング洗剤において用いられるいずれかの技術分野において公知である漂白系が利用され得る。好適な漂白系成分としては、漂白触媒、光漂白、漂白活性化剤、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム、及び過酸化水素-尿素(1:1)などの過酸化水素の供給源、事前に形成した過酸、並びに、これらの混合物が挙げられる。好適な事前に形成した過酸としては、これらに限定されないが、ペルオキシカルボン酸及び塩、過炭酸及び塩、ジペルオキシジカルボン酸、過イミド酸及び塩、ペルオキシ一硫酸及び塩、例えば、オキソン(R)、並びに、これらの混合物が挙げられる。漂白系の非限定的な例としては、例えば、過ホウ酸(通常は一水和物又は四水和物)、過炭酸、過硫酸、過リン酸、過ケイ酸のナトリウム塩などのアルカリ金属塩を含む無機塩を、過酸-形成性漂白活性化剤と組み合わせて含み得るペルオキシド系漂白系が挙げられる。本明細書において、漂白活性化剤という用語は、ペルオキシド過酸化水素と反応して、過酸化水素分解を介して過酸を形成する化合物を意味する。このようにして形成された過酸は、活性化された漂白剤を構成する。本明細書において用いられる好適な漂白活性化剤は、エステルアミド、イミド又は無水物の分類に属するものを含む。好適な例は、テトラアセチルエチレンジアミン(TAED)、アシル化トリアジン誘導体、特に、1,5-ジアセチル-2,4-ジオキソヘキサヒドロ-1,3,5-トリアジン(DADHT)、アシル化グリコールウリル、特に、テトラアセチルグリコールウリル(TAGU)、N-アシルイミド、特に、N-ノナノイルスクシンイミド(NOSI)、ナトリウム4-[(3,5,5-トリメチルヘキサノイル)オキシ]ベンゼン-1-スルホネート(ISONOBS)、4-(ドデカノイルオキシ)ベンゼン-1-スルホネート(LOBS)、4-(デカノイルオキシ)ベンゼン-1-スルホネート、4-(デカノイルオキシ)安息香酸塩(DOBS若しくはDOBA)、4-(ノナノイルオキシ)ベンゼン-1-スルホネート(NOBS)、及び/又は国際公開第98/17767号パンフレットに開示されているものである。対象の漂白活性化剤の特定のファミリーは欧州特許第624154号明細書に開示されており、アセチルトリエチルシトレート(ATC)が特に好ましいファミリーである。ATC又は短鎖トリグリセリド様トリアセチンは、環境にやさしいという利点を有する。さらに、アセチルトリエチルシトレート及びトリアセチンは、保管に際して生成物中における良好な加水分解安定性を有しており、これは効果的な漂白活性化剤である。最後に、過加水分解反応中に遊離したクエン酸塩は、ビルダーとして機能し得るため、ATCは、多機能性である。或いは、漂白系は、例えば、アミド、イミド又はスルホンタイプの過酸を含み得る。漂白系はまた、6-(フタロイルアミド)ペルオキシヘキサン酸(PAP)などの過酸を含み得る。漂白系はまた、漂白触媒、例えば、マンガントリアザシクロノナン、シュウ酸マンガン、Co、Cu、Mn及びFeビスピリジルアミン及びペンタミンアセテートコバルト(III)を含有してもよい。いくつかの実施形態において、漂白剤成分は、以下の式を有する有機触媒:
Figure 2022524490000002
(iii)及びこれらの混合物(式中、各Rは、独立して、9~24個の炭素を含有する分岐アルキル基又は11~24個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、好ましくは、各Rは、独立して、9~18個の炭素を含有する分岐アルキル基又は11~18個の炭素を含有する直鎖アルキル基であり、より好ましくは各Rは、独立して、2-プロピルヘプチル、2-ブチルオクチル、2-ペンチルノニル、2-ヘキシルデシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、イソノニル、イソデシル、イソトリデシル及びイソペンタデシルからなる群から選択される)からなる群から選択される有機触媒であり得る。他の例示的な漂白系は、例えば、国際公開第2007/087258号パンフレット、国際公開第2007/087244号パンフレット、国際公開第2007/087259号パンフレット、欧州特許第1867708号(ビタミンK)及び国際公開第2007/087242号パンフレットに記載されている。好適な光漂白は、例えばスルホン化アエン又はアルミニウムフタロシアニンであり得る。
好ましくは、漂白剤成分は、漂白触媒、特に、有機漂白触媒以外に、過酸の供給源を含む。過酸の供給源は、(a)事前に形成された過酸;(b)好ましくは、漂白活性化剤と組み合わせて、過炭酸、過ホウ酸又は過硫酸塩(過酸化水素の供給源);並びに生地又は硬質面処理ステップにおける水の存在下、インサイチュで過酸を形成するためのペルヒドロラーゼ酵素及びエステルから選択することができる。
ポリマー
洗剤は、0.5~5%、2~5%、0.5~2%又は0.2~1%などの0~10重量%のポリマーを含有し得る。洗剤において用いられる技術分野において公知であるいずれかのポリマーが利用され得る。ポリマーは、上記のコビルダーとして機能し得、又は、再汚染防止、繊維保護、汚染物遊離、移染防止、油脂クリーニング及び/又は消泡特性を提供し得る。いくつかのポリマーは、前述した特性の2つ以上及び/又は後述するモチーフの2つ以上を有し得る。例示的なポリマーとしては、(カルボキシメチル)セルロース(CMC)、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、ポリ(ビニルピロリドン)(PVP)、ポリ(エチレングリコール)又はポリ(エチレンオキシド)(PEG)、エトキシル化ポリ(エチレンイミン)、カルボキシメチルイヌリン(CMI)、並びにPAA、PAA/PMA、ポリアスパラギン酸、及びラウリルメタクリレート/アクリル酸コポリマーなどのポリカルボキシレート、疎水性修飾CMC(HM-CMC)及びシリコーン、テレフタル酸及びオリゴマー系グリコールのコポリマー、ポリ(エチレンテレフタレート)及びポリ(オキシエテンテレフタレート)のコポリマー(PET-POET)、PVP、ポリ(ビニルイミダゾール)(PVI)、ポリ(ビニルピリジン-N-オキシド)(PVPO又はPVPNO)並びにポリビニルピロリドン-ビニルイミダゾール(PVPVI)が挙げられる。さらに別の例示的なポリマーとして、スルホン化ポリカルボキシレート、ポリエチレンオキシド及びポリプロピレンオキシド(PEO-PPO)並びにジクオタニウムエトキシスルフェートが挙げられる。他の例示的なポリマーは、例えば、国際公開第2006/130575号パンフレットに開示されている。また、前述したポリマーの塩も考慮される。
布地色調剤
本発明の洗剤組成物はまた、染料又は顔料などの布地色調剤を含んでいてもよく、これは、洗剤組成物に配合された場合に、前記布地が前記洗剤組成物を含む洗浄液と接触させられる際に布地に付着し、且つこれにより、可視光の吸収/反射を介して前記布地の色合いを変えることが可能である。蛍光性白色化剤は少なくともいくらかの可視光を放つ。対照的に、布地色調剤は、可視光スペクトルの少なくとも一部分を吸収することで表面の色合いを変える。好適な布地色調剤としては、染料及び染料-クレイ複合体が挙げられ、また、顔料もまた挙げられ得る。好適な染料としては、微小分子染料及び高分子染料が挙げられる。好適な微小分子染料としては、例えば国際公開第2005/03274号パンフレット、国際公開第2005/03275号パンフレット、国際公開第2005/03276号パンフレット及び欧州特許第1876226号明細書(本明細書において参照により援用される)に記載されている、Direct Blue、Direct Red、Direct Violet、Acid Blue、Acid Red、Acid Violet、Basic Blue、Basic Violet及びBasic Red、又は、これらの混合物の染料索引(C.I.)分類に属する染料からなる群から選択される微小分子染料が挙げられる。洗剤組成物は、約0.00003重量%~約0.2重量%、約0.00008重量%~約0.05重量%又はさらには約0.0001重量%~約0.04重量%の布地色調剤を含むことが好ましい。組成物は、0.0001重量%~0.2重量%の布地色調剤を含み得、これは、組成物が単位用量ポーチの形態である場合に特に好ましい場合がある。好適な色調剤はまた、例えば、国際公開第2007/087257号パンフレット、及び国際公開第2007/087243号パンフレットに開示されている。
補助材
ランドリー、ADW又は硬質面クリーニング洗剤での使用を目的とする当該技術分野において公知の任意の洗剤成分を使用することもできる。他の任意の洗剤成分としては、単独若しくは組み合わせで、耐食剤、収縮防止剤、再汚染防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、結合剤、腐食抑制剤、金属ケア剤、ガラスケア剤、崩壊剤/分解剤、染料、酵素安定化剤(ホウ酸、ホウ酸塩、CMC、及び/又はプロピレングリコールなどのポリオールを含む)、クレイを含む布地コンディショナ、充填材/加工助剤、蛍光性白色化剤/光学増白剤、起泡増進剤、起泡(セッケンの泡)調節剤、香料、汚染物-懸濁剤、軟化剤、セッケン泡抑制剤、色あせ防止剤、及び、ウィッキング剤が挙げられる。ランドリー、ADW又は硬質面クリーニング洗剤での使用を目的とする当該技術分野で公知の任意の処方成分を使用することができる。このような処方成分の選択は十分に当業者の技能の範囲内である。
分散剤
本発明の洗剤組成物はまた、分散剤を含有し得る。特に、粉末洗剤は、分散剤を含んでいてもよい。好適な水溶性有機材料としては、ホモ-又はコポリマー酸又はその塩が挙げられ、ここで、ポリカルボン酸は、2個以下の炭素原子によって相互に隔てられた少なくとも2つのカルボキシルラジカルを含む。好適な分散剤は、例えば、Powdered Detergents、Surfactant science series volume 71,Marcel Dekker,Inc.に記載されている。
移染防止剤
本発明の洗剤組成物はまた、1種又は複数種の移染防止剤を含んでもよい。好適な高分子移染防止剤としては、これらに限定されないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンN-オキシドポリマー、N-ビニルピロリドン及びN-ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン及びポリビニルイミダゾール又はこれらの混合物が挙げられる。主題の組成物中に存在する場合、移染防止剤は、組成物の約0.0001%~約10%、約0.01%~約5%、又は、さらには約0.1%~約3重量%のレベルで存在し得る。
蛍光性白色化剤
本発明の洗剤組成物はまた、好ましくは、蛍光性白色化剤又は光学増白剤などのクリーニングされる物品の色合いを変え得る追加の成分を含有し得る。存在する場合、増白剤は、約0.01%~約0.5%のレベルであることが好ましい。ランドリー洗剤組成物での使用に好適な任意の蛍光性白色化剤を本発明の組成物に使用することができる。最も一般的に用いられる蛍光性白色化剤は、ジアミノスチルベン-スルホン酸誘導体、ジアリールピラゾリン誘導体及びビスフェニル-ジスチリル誘導体のクラスに属するものである。ジアミノスチルベン-スルホン酸誘導体タイプの蛍光性白色化剤の例としては:4,4’-ビス-(2-ジエタノールアミノ-4-アニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2,2’-ジスルホネート、4,4’-ビス-(2,4-ジアニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2.2’-ジスルホネート、4,4’-ビス-(2-アニリノ-4(N-メチル-N-2-ヒドロキシ-エチルアミノ)-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2,2’-ジスルホネート、4,4’-ビス-(4-フェニル-1,2,3-トリアゾール-2-イル)スチルベン-2,2’-ジスルホネート及びナトリウム5-(2H-ナフト[1,3-d][1,2,3]トリアゾール-2-イル)-2-[(E)-2-フェニルビニル]ベンゼンスルホネートのナトリウム塩が挙げられる。好ましい蛍光性白色化剤は、Ciba-Geigy AG,Basel,Switzerlandから入手可能であるTinopal DMS及びTinopal CBSである。Tinopal DMSは、4,4’-ビス-(2-モルホリノ-4アニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2,2’-ジスルホネートのジナトリウム塩である。Tinopal CBSは、2,2’-ビス-(フェニル-スチリル)-ジスルホネートのジナトリウム塩である。また、好ましい蛍光性白色化剤は、Paramount Minerals and Chemicals,Mumbai,India供給の市販のParawhite KXである。本発明で使用するのに好適な他の蛍光剤としては、1-3-ジアリールピラゾリン及び7-アルキルアミノクマリンが挙げられる。
好適な蛍光性増白剤レベルは、約0.01、0.05、約0.1、又は、さらには約0.2重量%の下限レベルから、0.5又はさらには0.75重量%の上限レベルまでを含む。
汚染物遊離ポリマー
本発明の洗剤組成物はまた、綿及びポリエステル系布地などの布地からの汚染物の除去、特にポリエステル系布地からの疎水性汚染物の除去を補助する1種又は複数種の汚染物遊離ポリマーを含んでもよい。汚染物遊離ポリマーは、例えば、ノニオン性又はアニオン性テレフタレート系ポリマー、ポリビニルカプロラクタム及び関連するコポリマー、ビニルグラフトコポリマー、ポリエステルポリアミドであってよい(例えばChapter 7,Powdered Detergents,Surfactant science series volume 71,Marcel Dekker,Inc.を参照のこと)。他のタイプの汚染物遊離ポリマーは、コア構造と、このコア構造に結合した複数のアルコキシレート基とを含む両親媒性アルコキシル化油脂クリーニングポリマーである。コア構造は、国際公開第2009/087523号パンフレット(本明細書において参照により援用されている)に詳述されている通り、ポリアルキレンイミン構造又はポリアルカノールアミン構造を含み得る。さらに、ランダムグラフトコポリマーは、好適な汚染物遊離ポリマーである。好適なグラフトコポリマーは、国際公開第2007/138054号パンフレット、国際公開第2006/108856号パンフレット及び国際公開第2006/113314号パンフレット(本明細書において参照により援用されている)により詳細に記載されている。他の汚染物遊離ポリマーは、欧州特許第1867808号明細書又は国際公開第2003/040279号パンフレット(共に本明細書において参照により援用されている)に記載されているものなどの変性セルロース誘導体などの特に置換セルロース系構造といった置換多糖類構造である。好適なセルロース系ポリマーとしては、セルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、セルロースアミド及びこれらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、アニオン性変性セルロース、ノニオン性変性セルロース、カチオン性変性セルロース、双性イオン性変性セルロース、及び、これらの混合物が挙げられる。好適なセルロース系ポリマーとしては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、エステルカルボキシメチルセルロース及びこれらの混合物が挙げられる。
再汚染防止剤
本発明の洗剤組成物としてはまた、カルボキシメチルセルロース(CMC)、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリビニルピロリドン(PVP)、ポリオキシエチレン及び/又はポリエチレングリコール(PEG)、アクリル酸のホモポリマー、アクリル酸とマレイン酸とのコポリマー、並びに、エトキシル化ポリエチレンイミンなどの1種又は複数種の再汚染防止剤が挙げられ得る。上の汚染物遊離ポリマーの見出しに記載されるセルロース系ポリマーは、再汚染防止剤としても機能し得る。
レオロジー調整剤
本発明の洗剤組成物はさらに、粘度低下剤とは異なる1種又は複数種のレオロジー調整剤、構造化剤又は増粘剤を含んでもよい。レオロジー調整剤は、非ポリマー結晶性、ヒドロキシ-機能性材料、液体洗剤組成物の水性液体マトリックスにずり減粘特性を賦与するポリマーレオロジー調整剤からなる群から選択される。洗剤のレオロジー及び粘度は、当該技術分野で公知の方法、例えば、欧州特許第2169040号明細書に示されるように、調整及び調節することができる。
他の好適な補助材としては、これらに限定されないが、収縮防止剤、しわ防止剤、殺菌剤、結合剤、キャリア、染料、酵素安定化剤、布地軟化剤、充填材、起泡調節剤、ヒドロトロープ、香料、顔料、セッケン泡抑制剤、溶剤、液体洗剤用構造化剤、及び/又は構造弾性化剤が挙げられる。
酵素
一実施形態では、本発明の組成物は、1種又は複数種のさらなる酵素、例えば、少なくとも2種の酵素、より好ましくは、少なくとも3種、4種又は5種の酵素を含む。好ましくは、洗剤組成物の酵素は、様々な基質特異性、例えば、タンパク質分解活性、アミロース分解活性、脂肪分解活性、セルロース分解活性、ヘミセルロース分解活性、酸化活性、RNAse活性、DNAse活性又はペクチン分解活性を有する。
本発明の組成物は、プロテアーゼ、第2アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、レキナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペロキシダーゼ、ハロペロキシゲナーゼ、カタラーゼ、マンナーゼ、又はこれらの混合物から選択される1種若しくは複数種の追加酵素を含んでもよい。他の好適な酵素としては、糖質関連酵素、例えばカルボヒドラーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ;又はオキシダーゼ、例えば、ラッカーゼ、及び/又はペルオキシダーゼが挙げられる。
一般に、選択された酵素の特性は選択された洗剤と適合性であるべきであり(すなわち、至適pH、他の酵素的及び非酵素的処方成分等との親和性)、酵素は有効量で存在しているべきである。
セルラーゼ
好適なセルラーゼは、細菌性又は真菌性由来のものを含む。化学的に修飾されたミュータント又はタンパク質改変ミュータントが含まれる。好適なセルラーゼとしては、例えば、米国特許第4,435,307号明細書、米国特許第5,648,263号明細書、米国特許第5,691,178号明細書、米国特許第5,776,757号明細書及び国際公開第89/09259号パンフレットに開示されている、フミコラインソレンス(Humicola insolens)、ミセリオフトラテルモフィラ(Myceliophthora thermophila)及びフザリウム オキシスポルム(Fusarium oxysporum)から生成された真菌セルラーゼといった、バチルス属(Bacillus)、シュードモナス属(Pseudomonas)、フミコラ属(Humicola)、フザリウム属(Fusarium)、チエラビア属(Thielavia)、アクレモニウム属(Acremonium)由来のセルラーゼが挙げられる。
特に好適なセルラーゼは、色の取り扱いに関する有益性を有するアルカリ性又は中性セルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許第0 495 257、欧州特許第0 531 372号明細書、国際公開第96/11262号パンフレット、国際公開第96/29397号パンフレット、国際公開第98/08940号パンフレットに記載されているセルラーゼである。他の例は、国際公開第94/07998号パンフレット、欧州特許第0 531 315号明細書、米国特許第5,457,046号明細書、米国特許第5,686,593号明細書、米国特許第5,763,254号明細書、国際公開第95/24471号パンフレット、国際公開第98/12307号パンフレット及び国際特許出願第99/001544号パンフレットに記載されているものなどのセルラーゼ変異体である。
他のセルラーゼは、国際公開第2002/099091号パンフレットの配列番号2の1位~773位のアミノ酸配列と少なくとも97%の同一性を有する配列を有するエンド-β-1,4-グルカナーゼ酵素又はファミリー44キシログルカナーゼであり、このキシログルカナーゼ酵素は、国際公開第2001/062903号パンフレットの配列番号2の40~559位と少なくとも60%の同一性を有する配列を有する。
市販されているセルラーゼとしては、Celluzyme(商標)及びCarezyme(商標)(Novozymes A/S)、Carezyme Premium(商標)(Novozymes A/S)、Celluclean(商標)(Novozymes A/S)、Celluclean Classic(商標)(Novozymes A/S)、Cellusoft(商標)(Novozymes A/S)、Whitezyme(商標)(Novozymes A/S)、Clazinase(商標)及びPuradax HA(商標)(Genencor International Inc.)及びKAC-500(B)(商標)(花王株式会社)が挙げられる。
マンガナーゼ
好適なマンガナーゼは、細菌又は真菌に由来するものを含む。化学的に又は遺伝子改変したミュータントも含まれる。マンガナーゼは、ファミリー5又は26のアルカリマンガナーゼであってもよい。これは、バチルス属(Bacillus)又はフミコラ属(Humicola)、特に、B.アガラドヘレンス(B.agaradhaerens)、B.リケニホルミス(B.licheniformis)、B.ハロズランス(B.halodurans)、B.カラシイ(B.clausii)、又はH.インソレンス(H.insolens)由来の野生型であってよい。好適なマンガナーゼは、国際公開第1999/064619号パンフレットに記載されている。市販されているマンガナーゼは、Mannaway(Novozymes A/S)である。
ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ:
本発明のペルオキシダーゼは、国際生化学・分子生物学連合(International Union of Biochemistry and Molecular Biology)(IUBMB)の命名委員会(Nomenclature Committee)により記載される通り、酵素分類EC 1.11.1.7に含まれる、ペルオキシダーゼ活性を呈示するペルオキシダーゼ酵素、又はそれに由来する任意の断片である。
好適なペルオキシダーゼは、植物、細菌性又は真菌性由来のものを含む。化学修飾ミュータント又はタンパク質改変ミュータントが含まれる。有用なペルオキシダーゼの例としては、例えば、C.シネレア(C.cinerea)といったヒヨタケ属(Coprinopsis)由来のペルオキシダーゼ(欧州特許第179,486号明細書)、並びに国際公開第93/24618号パンフレット、国際公開第95/10602号パンフレット及び国際公開第98/15257号パンフレットに記載されているものなどのその変異体が挙げられる。市販されているペルオキシダーゼとしては、Guardzyme(商標)(Novozymes A/S)が挙げられる。
本発明のペルオキシダーゼには、ハロペルオキシダーゼ酵素、例えば、クロロペルオキシダーゼ、ブロモペルオキシダーゼ及びクロロペルオキシダーゼ又はブロモペルオキシダーゼ活性を呈示する化合物なども挙げられる。ハロペルオキシダーゼは、ハロゲン化物イオンに対するそれらの特異性に応じて分類される。クロロペルオキシダーゼ(EC.1.11.1.10)は、塩化物イオンからの次亜塩素酸塩の形成を触媒する。
一実施形態では、本発明のハロペルオキシダーゼは、クロロペルオキシダーゼである。好ましくは、ハロペルオキシダーゼは、バナジウムハロペルオキシダーゼ、即ち、バナジン酸塩含有ハロペルオキシダーゼである。本発明の好ましい方法では、バナジン酸塩含有ハロペルオキシダーゼは、塩化物イオンの供給源と組み合わせる。
ハロペルオキシダーゼは、多くの異なる真菌、特に、真菌群暗色線菌科(dematiaceous hyphomycetes)、例えば、カルダリオマイセス(Caldariomyces)属、例えば、C.フマゴ(C.fumago)、アルタネリア(Alternaria)、クルブラリア(Curvularia)、例えば、C. ベルキュロサ(C.verruculosa)及びC.イネクアリス(C.inaequalis)、ドレキスレラ(Drechslera)、ウロクラジウム(Ulocladium)及びポトリチス属(Botrytis)から単離されている。
ハロペルオキシダーゼはまた、細菌、例えば、シュードモナス(Pseudomonas)、例えばP.ピロシニア(P.pyrrocinia)及びストレプトマイセス(Streptomyces)、例えばS.アウレオファシエンス(S.aureofaciens)からも単離されている。
好ましい実施形態において、ハロペルオキシダーゼは、クルブラリア種(Curvularia sp.)、特にクルブラリアベルキュロサ(Curvularia verruculosa)又はクルブラリアイネクアリス(Curvularia inaequalis)、例えば国際公開第95/27046号パンフレットに記載されるようなC.イネクアリス(C.inaequalis)CBS102.42;又は国際公開第97/04102号パンフレットに記載されるようなC.ベルキュロサ(C.verruculosa)CBS147.63若しくはC.ベルキュロサ(C.verruculosa)CBS444.70から;或いは、国際公開第01/79459号パンフレットに記載されるようなドレキスレラハルトレビ(Drechslera hartlebii)、国際公開第01/79458号パンフレットに記載されるようなデンドリフィエラサリナ(Dendryphiella salina)、国際公開第01/79461号パンフレットに記載されるようなファエオトリココニスクロタラリエ(Phaeotrichoconis crotalarie)、又は国際公開第01/79460号パンフレットに記載されるようなゲニキュロスポリウム種(Geniculosporium sp.)から誘導可能である。
本発明のオキシダーゼは、特に、酵素分類EC 1.10.3.2に含まれる任意のラッカーゼ酵素、又はラッカーゼ活性を呈示するそれに由来する任意の断片、又は類似の活性を呈示する化合物、例えば、カテコールオキシダーゼ(EC 1.10.3.1)、o-アミノフェノールオキシダーゼ(EC 1.10.3.4)、又はビリルビンオキシダーゼ(EC 1.3.3.5)を含む。
好ましいラッカーゼ酵素は、細菌由来の酵素である。酵素は、植物、細菌又は真菌(糸状真菌及び酵母を含む)由来であってもよい。
真菌由来の好適な例として、アスペルギルス属(Aspergillus)、ニューロスポラ属(Neurospora)、例えば、N.クラッサ(N.crassa)、ポドスポラ属(Podospora)、ボトリティス属(Botrytis)、モリノカレバタケ属(Collybia)、キコブタケ属(Fomes)、マツオウジ属(Lentinus)、ヒラタケ属(Pleurotus)、ホウロウクタケ属(Trametes)、例えば、T.ビロサ(T.villosa)及びT.ベルシコロール(T.versicolor)、リゾクトニア属(Rhizoctonia)、例えば、R.ソラニ(R.solani)、ヒメヒトヨタケ(Coprinopsis)、例えば、C.シネレア(C.cinerea)、C.コマツス(C.comatus)、C.フリエシイ(C.friesii)、及びC.プリカチリス(C.plicatilis)、ナヨタケ属(Psathyrella)、例えば、P.コンデレアナ(P.condelleana)、ヒカゲタケ(Panaeolus)、例えば、P.パピリオナセウス(P.papilionaceus)、マイセリオフトーラ属(Myceliophthora)、例えば、M.サーモフィラ(M.thermophila)、スキタリジウム属(Schytalidium)、例えば、S.サーモフィルム(S.thermophilum)、タマチョレイタケ属(Polyporus)、例えば、P.ピンシツス(P.pinsitus)、シワウロコタケ属(Phlebia)、例えば、P.ラディアタ(P.radiata)(国際公開第92/01046号パンフレット)、又はカワラタケ属(Coriolus)、例えば、C.ヒルスツス(C.hirsutus)(日本特許第2238885号公報)の株から誘導が可能なラッカーゼが挙げられる。
細菌由来の好適な例として、バチルス属(Bacillus)の株から誘導が可能なラッカーゼがある。
ヒメヒトヨタケ(Coprinopsis)又はマイセリオフトーラ属(Myceliophthora)から誘導されたラッカーゼが好ましく;特に、国際公開第97/08325号パンフレットに開示される通り、コプリノプシスシネレア(Coprinopsis cinerea)由来;又は国際公開第95/33836号パンフレットに開示される通り、マイセリオフトーラサーモフィラ(Myceliophthora thermophila)由来のラッカーゼが好ましい。
プロテアーゼ
好適なプロテアーゼは、細菌、真菌、植物、ウイルス又は動物由来、例えば、野菜若しくは微生物由来のものを含む。微生物性由来のものが好ましい。化学修飾ミュータント又はタンパク質改変ミュータントが含まれる。これは、アルカリ性プロテアーゼ、例えば、セリンプロテアーゼ又はメタロプロテアーゼであってもよい。セリンプロテアーゼは、例えば、トリプシンなどのS1ファミリー、又はサブチリシンなどのS8ファミリーのものであってよい。メタロプロテアーゼプロテアーゼは、例えば、ファミリーM4からのサーモリシン、又はM5、M7若しくはM8ファミリーなどの他のメタロプロテアーゼであってよい。
「サブチラーゼ」という用語は、Siezen et al.,Protein Engng.4(1991)719-737及びSiezen et al.Protein Science 6(1997)501-523に記載のセリンプロテアーゼの亜群を指す。セリンプロテアーゼは、基質と共有結合付加体を形成する活性部位にセリンを有することを特徴とするプロテアーゼの亜群である。サブチラーゼは、6つの下位区分、即ち、サブチリシンファミリー、テルミターゼファミリー、プロテイナーゼKファミリー、ランチビオティックペプチダーゼファミリー、ケキシンファミリー及びピロリシンファミリーに分けることができる。
サブチラーゼの例は、バチルス属(Bacillus)から誘導されたもの、例えば、米国特許第7262042号明細書及び国際公開第09/021867号パンフレットに記載されているバチルスレンツス(Bacillus lentus)、バチルスアルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、枯草菌(Bacillus subtilis)、バチルスアミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルスプミルス(Bacillus pumilus)及びバチルスギブソニイ(Bacillus gibsonii);並びにサブチリシンレンツス(Subtilisin lentus)、サブチリシンNovo、サブチリシンCarlsberg、バチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)、サブチリシンBPN’、サブチリシン309、サブチリシン147及びサブチリシン168並びに例えば、(国際公開第93/18140号パンフレット)に記載のプロテアーゼPD138である。その他の有用なプロテアーゼは、国際公開第01/016285号パンフレット及び国際公開第02/016547号パンフレットに記載のものであり得る。トリプシン様プロテアーゼの例は、国際公開第94/25583号パンフレット及び国際公開第05/040372号パンフレットに記載のトリプシン(例えば、ブタ又はウシ由来)及びフザリウム属(Fusarium)プロテアーゼ、並びに国際公開第05/052161号パンフレット及び国際公開第05/052146号パンフレットに記載のセルロモナス属(Cellumonas)から誘導されたキモトリプシンプロテアーゼである。
さらに別の好ましいプロテアーゼは、国際公開第95/23221号パンフレットに記載される通り、バチルスレンツス(Bacillus lentus)DSM5483由来のアルカリ性プロテアーゼ、並びに国際公開第92/21760号パンフレット、国際公開第95/23221号パンフレット、欧州特許第1921147号明細書及び同第1921148号明細書に記載されるその変異体である。
メタロプロテアーゼの例は、国際公開第07/044993号パンフレット(Proctor & Gamble/Genencor Int.)に記載されている中性メタロプロテアーゼ、例えば、バチルスアミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)から誘導されたものである。
有用なプロテアーゼの例は、国際公開第89/06279号パンフレット、同第92/19729号パンフレット、同第96/034946号パンフレット、同第98/20115号パンフレット、同第98/20116パンフレット号、同第99/011768号パンフレット、同第01/44452号パンフレット、同第03/006602号パンフレット、同第04/03186号パンフレット、同第04/041979号パンフレット、同第07/006305号パンフレット、同第11/036263号パンフレット、同第11/036264号パンフレットに記載の変異体、特に、以下の位置:3、4、9、15、24、27、42、55、59、60、66、74、85、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、126、127、128、154、156、157、158、161、164、176、179、182、185、188、189、193、198、199、200、203、206、211、212、216、218、226、229、230、239、246、255、256、268及び269の1つ又は複数に置換を有し、ここで、上記位置が、国際公開第2016/001449号パンフレットの配列番号1に示されるバチルスレンツス(Bacillus lentus)プロテアーゼの位置に対応する変異体である。より好ましいプロテアーゼ変異体は、以下:S3T、V4I、S9R、S9E、A15T、S24G、S24R、K27R、N42R、S55P、G59E、G59D、N60D、N60E、V66A、N74D、S85R、A96S、S97G、S97D、S97A、S99E、S99D、S99G、S99M、S99N、S99R、S99H、S101A、V102I、V102Y、V102N、S104A、G116V、G116R、H118D、H118N、A120S、S126L、P127Q、S128A、S154D、A156E、G157D、G157P、S158E、Y161A、R164S、Q176E、N179E、S182E、Q185N、A188P、G189E、V193M、N198D、V199I、Y203W、S206G、L211Q、L211D、N212D、N212S、M216S、A226V、K229L、Q230H、Q239R、N246K、N255W、N255D、N255E、L256E、L256D T268A及びR269Hからなる群から選択される突然変異の1つ又は複数を含み得る。プロテアーゼ変異体は、好ましくは、国際公開第2016/001449号パンフレットの配列番号1に示されるバチルスレンツス(Bacillus lentus)プロテアーゼ、国際公開第2016/001449号パンフレットの配列番号2に示されるバチルスアミロリケニファシエンス(Bacillus amylolichenifaciens)プロテアーゼ(BPN’)の変異体である。プロテアーゼ変異体は、国際公開第2016/001449号パンフレットの配列番号1又は配列番号2と少なくとも80%の配列同一性を有するのが好ましい。
国際公開第2004/067737号パンフレットの位置171、173、175、179、又は180に対応する1つ又は複数の位置に置換を含むプロテアーゼ変異体(ここで、前記プロテアーゼ変異体は、国際公開第2004/067737号パンフレットの配列番号1と少なくとも75%、及び100%未満の配列同一性を有する)。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99D(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%又は少なくとも98%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99Dを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99E(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%又は少なくとも98%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99Eを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異Y167A+R170S+A194P(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%又は少なくとも98%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異Y167A+R170S+A194Pを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262E(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S9E+N43R+N76D+V205I+Q206L+Y209W+S259D+N261W+L262Eを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217D(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S3T+V4I+S99D+S101R+S103A+V104I+G160S+V199M+V205I+L217Dを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205I(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S3T+V4I+S99D+S101E+S103A+V104I+G160S+V205Iを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99D+S101E+S103A+V104I+G160S(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99D+S101E+S103A+V104I+G160Sを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262E(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、変異体は、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S99D+S101E+S103A+V104I+S156D+G160S+L262Eを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S87N+S101G+V104N(位置番号は、配列番号20のポリペプチドの位置に対応する)を含む配列番号19のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号19に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%又は少なくとも98%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S87N+S101G+V104Nを有する配列番号19のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、配列番号20のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異Y217Lを含む配列番号20のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号20に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%又は少なくとも98%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異Y217Lを有する配列番号20のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Qを含む配列番号20のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号20に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S24G+S53G+S78N+S101N+G128S+Y217Qを有する配列番号20のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Qを含む配列番号20のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号20に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S24G+S53G+S78N+S101N+G128A+Y217Qを有する配列番号20のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、配列番号21のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
一実施形態では、プロテアーゼは、配列番号21に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、又は少なくとも95%の配列同一性を有する、配列番号21のポリペプチドの変異体である。プロテアーゼは、例えば、以下:S27K、N109K、S111E、S171E、S173P、G174K、S175P、F180Y、G182A、L184F、Q198E、N199K及びT297Pからなる群から選択される1つ又は複数の突然変異、例えば、前記突然変異の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12若しくは全部を含む、配列番号21のポリペプチドの変異体であり得る。
一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297Pを含む配列番号21のポリペプチドの変異体、例えば、配列番号21に対して少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%の配列同一性を有する変異体である。一実施形態では、プロテアーゼは、突然変異S27K+N109K+S111E+S171E+S173P+G174K+S175P+F180Y+G182A+L184F+Q198E+N199K+T297Pを有する配列番号21のポリペプチドを含むか、又はそれから構成される。
好適な市販のプロテアーゼ酵素として、以下の商品名で市販されているもの:Alcalase(商標)、Duralase(商標)、Durazym(商標)、Relase(登録商標)、Relase(登録商標)Ultra、Savinase(登録商標)、Savinase(登録商標)Ultra、Primase(登録商標)、Polarzyme(登録商標)、Kannase(登録商標)、Liquanase(登録商標)、Liquanase(登録商標)Ultra、Ovozyme(登録商標)、Coronase(登録商標)、Coronase(登録商標)Ultra、Blaze(登録商標)、Blaze Evity(登録商標)100T、Blaze Evity(登録商標)125T、Blaze Evity(登録商標)150T、Neutrase(登録商標)、Everlase(登録商標)、Esperase(登録商標)、Novozymes Progress(登録商標)、Novozymes Progress(登録商標)Uno及びNovozymes Progress(登録商標)Excel(Novozymes A/S)、以下の商品名で市販されているもの:Maxatase(登録商標)、Maxacal(登録商標)、Maxapem(登録商標)、Purafect Ox(登録商標)、Purafect OxP(登録商標)、Puramax(登録商標)、FN2(登録商標)、FN3(登録商標)、FN4(登録商標)、Excellase(登録商標)、Excellenz P1000(商標)、Excellenz P1250(商標)、Eraser(登録商標)、Preferenz P100(商標)、Purafect Prime(商標)、Preferenz P110(商標)、Effectenz P1000(商標)、Purafect(登録商標)(商標)、Effectenz P1050(商標)、Purafect Ox(登録商標)(商標)、Effectenz P2000(商標)、Purafast(登録商標)、Properase(登録商標)、Opticlean(登録商標)及びOptimase(登録商標)(Danisco/DuPont)、Axapem(商標)(Gist-Brocases N.V.)、BLAP(米国特許第5352604号明細書の図29に示される配列)及びその変異体 (Henkel AG)並びに花王からのKAP(バチルスアルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)サブチリシン)が挙げられる。
ヌクレアーゼ
好適なヌクレアーゼとしては、デオキシリボヌクレアーゼ(DNase)及びリボヌクレアーゼ(RNase)があり、これらは、それぞれDNA又はRNAバックボーンにおいてリン酸ジエステル結合の加水分解切断を触媒し、したがってDNA及びRNAを分解する、任意の酵素である。活性の遺伝子座に基づいて2つの主要な分類がある。エキソヌクレアーゼは、末端から核酸を消化する。エンドヌクレアーゼは、標的分子の中央の領域に作用する。ヌクレアーゼは、好ましくはDNaseであり、好ましいものは、微生物、好ましくは真菌又は細菌から取得可能である。特に、バチルス(Bacillus)の種から取得可能なDNaseが好ましく;とりわけ、バチルスシビ(Bacillus cibi)、枯草菌(Bacillus subtilis)又はバチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)が好ましい。こうしたDNaseの例は、国際公開第2011/098579号パンフレット、同第2014/087011号パンフレット、同第2017/060475号パンフレットに記載されている。特に好ましいのはまた、アスペルギルス属(Aspergillus)の種から取得可能なDNase;とりわけアスペルギルスオリゼー(Aspergillus oryzae)から取得可能なDNase、例えば、国際公開第2015/155350号パンフレットに記載されているDNaseである。洗剤酵素は、1種若しくは複数種の酵素を含有する個別の添加剤を添加するか、又はこれらの酵素を全て含む添加剤の組合せを添加することにより、洗剤組成物中に含有させてもよい。本発明の洗剤添加剤、即ち、個別の添加剤又は添加剤の組合せは、例えば、粒質物、液体、スラリーなどとして配合することができる。好ましい洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に前述したような非発塵性粒質物、液体、とりわけ安定化液体、又はスラリーである。
リパーゼ及びクチナーゼ
好適なリパーゼ及びクチナーゼは、細菌性又は真菌性由来のものを含む。化学修飾ミュータント又はタンパク質改変ミュータント酵素が含まれる。例としては、テルモマイセス属(Thermomyces)由来の、例えば、欧州特許第258068号明細書及び同第305216号明細書に記載のT.ラヌギノスス(T.lanuginosus)(旧名フミコララヌギノサ(Humicola lanuginosa))由来のリパーゼ、H.インソレンス(H.insolens)(国際公開第96/13580号パンフレット)といったフミコラ属(Humicola)由来のクチナーゼ、例えば、P.アルカリゲネス(P.alcaligenes)又はP.シュードアルカリゲネス(P.pseudoalcaligenes)(欧州特許第218272号明細書)、P.セパシア(P.cepacia)(欧州特許第331376号明細書)、シュードモナス属の一種(P.sp.)SD705株(国際公開第95/06720号パンフレット及び同第96/27002号パンフレット)、P.ウィスコンシネンシス(P.wisconsinensis)(国際公開第96/12012号パンフレット)といったシュードモナス属(Pseudomonas)株由来のリパーゼ(これらのいくつかは、現在バークホルデリアセパシア(Burkholderia)に改名されている);GDSL型ストレプトマイセス属(Streptomyces)リパーゼ(国際公開第10/065455号パンフレット)、イネいもち病菌(Magnaporthe grisea)(国際公開第10/107560号パンフレット)由来のクチナーゼ、シュードモナスメンドシナ(Pseudomonas mendocina)由来のクチナーゼ(米国特許第5,389,536号明細書)、サーモビフィダフスカ(Thermobifida fusca)由来のリパーゼ(国際公開第11/084412号パンフレット)、ゲオバチルスステアロサーモフィルス(Geobacillus stearothermophilus)リパーゼ(国際公開第11/084417号パンフレット)、枯草菌(Bacillus.subtilis)由来のリパーゼ(国際公開第11/084599号パンフレット)、並びにストレプトマイセスグリセウス(Streptomyces griseus)(国際公開第11/150157号パンフレット)及びS.プリスチナエスピラリス(S.pristinaespiralis)(国際公開第12/137147号パンフレット)由来のリパーゼが挙げられる。
他の例は、欧州特許第407225号明細書、国際公開第92/05249号パンフレット、国際公開第94/01541号パンフレット、国際公開第94/25578号パンフレット、国際公開第95/14783号パンフレット、国際公開第95/30744号パンフレット、国際公開第95/35381号パンフレット、国際公開第95/22615号パンフレット、国際公開第96/00292号パンフレット、国際公開第97/04079号パンフレット、国際公開第97/07202号パンフレット、国際公開第00/34450号パンフレット、国際公開第00/60063号パンフレット、国際公開第01/92502号パンフレット、国際公開第07/87508号パンフレット及び国際公開第09/109500号パンフレットに記載のものなどのリパーゼ変異体である。
好ましい市販されているリパーゼ製品としては、Lipolase(商標)、Lipex(商標);Lipolex(商標)及びLipoclean(商標)(Novozymes A/S)、Lumafast(最初はGenencorから)及びLipomax(最初はGist-Brocadesから)が挙げられる。
さらに別の例は、アシルトランスフェラーゼ又はペルヒドロラーゼと呼ばれることもあるリパーゼであり、例えば、カンジダアンタルクチカ(Candida antarctica)リパーゼA(国際公開第10/111143号パンフレット)、マイコバクテリウムスメグマチス(Mycobacterium smegmatis)由来のアシルトランスフェラーゼ(国際公開第05/56782号パンフレット)、CE7ファミリー由来のペルヒドロラーゼ(国際公開第09/67279号パンフレット)、及びM.スメグマチス(M.smegmatis)ペルヒドロラーゼ、特に、Huntsman Textile Effects Pte Ltdからの市販の製品Gentle Power Bleachに使用されているS54V変異体(国際公開第10/100028号パンフレット)がある。
アミラーゼ
本発明の組成物と一緒に使用することができる好適なアミラーゼは、α-アミラーゼ又はグルコアミラーゼであってよく、細菌性又は真菌性由来であってよい。化学修飾又はタンパク質改変ミュータントが含まれる。アミラーゼとしては、例えば、英国特許第1,296,839号明細書により詳細に記載されているバチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)の特別な系統といった、例えばバチルス属(Bacillus)から得られるα-アミラーゼが挙げられる。
好適なアミラーゼは、国際公開第95/10603号パンフレットの配列番号2を有するアミラーゼ又は配列番号3に対して90%の配列同一性を有するその変異体を含む。好ましい変異体は、国際公開第94/02597号パンフレット、国際公開第94/18314号パンフレット、国際公開第97/43424号パンフレット、及び国際公開第99/019467号パンフレットの配列番号4に記載されており、例えば、以下の位置:15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408及び444の1つ又は複数に置換を伴う変異体である。
様々な好適なアミラーゼは、国際公開第02/010355号パンフレットの配列番号6を有するアミラーゼ又は配列番号6に対して90%の配列同一性を有する変異体を含む。配列番号6の好ましい変異体は、181位及び182位における欠失と、193位における置換とを有するものである。
好適なその他のアミラーゼは、国際公開第2006/066594号パンフレットの配列番号6に示されるB.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)由来のα-アミラーゼの残基1~33と、国際公開第2006/066594号パンフレットの配列番号4に示されるB.リケニホルミス(B.licheniformis)α-アミラーゼの残基36~483とを含むハイブリッドα-アミラーゼ、又は90%の配列同一性を有するその変異体である。このハイブリッドα-アミラーゼの好ましい変異体は、以下の位置:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209及びQ264の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。国際公開第2006/066594号パンフレットの配列番号6に示されるB.アミロリケファシエンス(B.amyloliquefaciens)由来のα-アミラーゼの残基1~33と、配列番号4に示される残基36~483とを含むハイブリッドα-アミラーゼの最も好ましい変異体は、以下の置換:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S;又は
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S
を有するものである。
好適なさらに別のアミラーゼは、国際公開第99/019467号パンフレットの配列番号6を有するアミラーゼ、又は配列番号6に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。配列番号6の好ましい変異体は、以下の位置:R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216及びK269の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。特に好ましいアミラーゼは、位置R181及びG182、又は位置H183及びG184に欠失を有するものである。
使用することができる別のアミラーゼは、国際公開第96/023873号パンフレットの配列番号1、配列番号3、配列番号2若しくは配列番号7を有するもの、又は配列番号1、配列番号3、配列番号2若しくは配列番号7に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。配列番号1、配列番号2、配列番号3若しくは配列番号7の好ましい変異体は、番号付けのために国際公開第96/023873号パンフレットの配列番号2を用いて、以下の位置:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304及び476の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。より好ましい変異体は、位置181、182、183及び184から選択される2つの位置、例えば、181及び182、182及び183、又は183及び184位に欠失を有するものである。配列番号1、配列番号2若しくは配列番号7の最も好ましいアミラーゼ変異体は、183及び184位における欠失と、位置:140、195、206、243、260、304及び476の1つ又は複数における置換とを有するものである。
使用することができる他のアミラーゼは、国際公開第08/153815号パンフレットの配列番号2、国際公開第01/66712号パンフレットの配列番号10を有するアミラーゼ、又は国際公開第08/153815号パンフレットの配列番号2に対して90%の配列同一性、又は国際公開第01/66712号パンフレットの配列番号10に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。国際公開第01/66712号パンフレットの配列番号10の好ましい変異体は、以下の位置:176、177、178、179、190、201、207、211及び264の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。
さらに別の好適なアミラーゼは、国際公開第09/061380号パンフレットの配列番号2を有するアミラーゼ又は配列番号2に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。配列番号2の好ましい変異体は、C末端の切断及び/又は以下の位置:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444及びG475の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。配列番号2のより好ましい変異体は、以下の位置:Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E及びG475Kの1つ若しくは複数における置換並びに/又は位置:R180及び/若しくはS181又はT182及び/若しくはG183における欠失を有するものである。配列番号2の最も好ましいアミラーゼ変異体は、以下の置換:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;又は
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K
を有するものであり、ここで、変異体は、C末端で切断されており、任意選択で、243位に置換及び/又は180及び/若しくは181位に欠失をさらに含む。
さらに別の好適なアミラーゼは、国際公開第13184577号パンフレットの配列番号1を有するアミラーゼ又は配列番号1に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。配列番号1の好ましい変異体は、以下の位置:K176、R178、G179、T180、G181、E187、N192、M199、I203、S241、R458、T459、D460、G476及びG477の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。配列番号1のより好ましい変異体は、以下の位置:K176L、E187P、N192FYH、M199L、I203YF、S241QADN、R458N、T459S、D460T、G476K及びG477Kの1つ若しくは複数における置換並びに/又は位置:R178及び/若しくはS179又はT180及び/若しくはG181における欠失を有するものである。配列番号1の最も好ましいアミラーゼ変異体は、以下の置換:
E187P+I203Y+G476K
E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
を有するものであり、ここで、変異体は、任意選択で、241位に置換及び/又は178及び/若しくは179位に欠失をさらに有する。
さらに別の好適なアミラーゼは、国際公開第10104675号パンフレットの配列番号1を有するアミラーゼ又は配列番号1に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。配列番号1の好ましい変異体は、以下の位置:N21、D97、V128 K177、R179、S180、I181、G182、M200、L204、E242、G477及びG478の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。配列番号1のより好ましい変異体は、以下の位置:N21D、D97N、V128I K177L、M200L、L204YF、E242QA、G477K及びG478Kの1つ若しくは複数における置換並びに/又は位置:R179及び/若しくはS180又はI181及び/若しくはG182における欠失を有するものである。配列番号1の最も好ましいアミラーゼ変異体は、以下の置換
N21D+D97N+V128I
を有するものであり、ここで、変異体は、任意選択で、200位に置換及び/又は180及び/若しくは181位に欠失をさらに有する。
さらに別の好適なアミラーゼは、国際公開第01/66712号パンフレットの配列番号12を有するα-アミラーゼ又は配列番号12に対して90%の配列同一性を有するその変異体である。国際公開第01/66712号パンフレットの配列番号12の好ましいアミラーゼ変異体は、以下の位置:R28、R118、N174;R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314;R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484の1つ又は複数に置換、欠失若しくは挿入を有するものである。特に好ましいアミラーゼは、D183及びG184における欠失、並びに置換R118K、N195F、R320K及びR458Kを有する変異体、並びに以下の群:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345及びA339から選択される1つ若しくは複数の位置に置換をさらに有する変異体を含み、最も好ましい変異体は、これら全ての位置に置換をさらに含む。
その他の例は、国際公開第2011/098531号パンフレット、同第2013/001078号パンフレット及び同第2013/001087号パンフレットに記載されているものなどのアミラーゼ変異体である。
市販されているアミラーゼは、Amplify Prime(商標)、Atlantic(商標)、Arctic(商標)、Everest(商標)、Duramyl(商標)、Termamyl(商標)、Fungamyl(商標)、Stainzyme(商標)、Stainzyme Plus(商標)、Natalase(商標)、Liquozyme X及びBAN(商標)(Novozymes A/S)、並びにRapidase(商標)、Purastar(商標)/Effectenz(商標)、Powerase(商標)、Preferenz S1000、Preferenz S100 及びPreferenz S110(Genencor International Inc./DuPont)製)である。
本発明の洗剤酵素は、1種又は複数種の酵素を含有する個別の添加剤を加えることにより、又は、これらの酵素のすべてを含む複合添加剤を加えることにより、洗剤組成物に含まれていてもよい。本発明の洗剤添加剤(すなわち、個別の添加剤又は複合添加剤)は、例えば、粒質物、液体、スラリー等として配合され得る。好ましい洗剤添加剤配合物は、粒質物、特に非発塵性粒質物、液体、特に安定化された液体又はスラリーである。
非発塵性粒質物は、例えば、米国特許第4,106,991号明細書及び米国特許第4,661,452号明細書に開示のとおり生成され得、任意により、技術分野において公知である方法によりコーティングされてもよい。ワックス状コーティング材の例は、1000~20000の平均モル重量を有するポリ(エチレンオキシド)生成物(ポリエチレングリコール、PEG);16~50個のエチレンオキシドユニットを有するエトキシル化ノニルフェノール;アルコールが12~20個の炭素原子を含有し、及び、15~80個のエチレンオキシドユニットが存在するエトキシル化脂肪族アルコール;脂肪族アルコール;脂肪酸;並びに、脂肪酸のモノ-及びジ-及びトリグリセリドである。流動床技術による用途に対して好適なフィルム形成性コーティング材の例は英国特許第1483591号明細書に記載されている。液体酵素調製物は、例えば、確立された方法に従って、プロピレングリコールなどのポリオール、糖質又は糖質アルコール、乳酸又はホウ酸を添加することにより安定化され得る。保護された酵素は、欧州特許第238,216号明細書に開示されている方法に従って調製され得る。
微生物
洗剤添加剤並びに洗剤組成物は、また、1種若しくは複数種の微生物、例えば、1種若しくは複数種の真菌、酵母、又は細菌を含んでもよい。
一実施形態では、1種又は複数種の微生物は、脱水した(例えば、凍結乾燥により)細菌又は酵母、例えば、ラクトバチルス属(Lactobacillus)の株である。
別の実施形態では、微生物は、1種又は複数種の微生物胞子(栄養細胞とは対照的に)、例えば細菌胞子;又は真菌胞子、分生子、菌糸である。好ましくは、1種又は複数種の胞子は、バチルス(Bacillus)内生胞子であり;より好ましくは、1種又は複数種の胞子は、枯草菌(Bacillus subtilis)、バチルスリケニホルミス(Bacillus licheniformis)、バチルスアミロリケファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、又はバチルスメガテリウム(Bacillus megaterium)の内生胞子である。
微生物は、酵素と同じ方法で(前掲を参照)洗剤組成物又は添加剤に含有させることができる。
洗剤組成物中に、特に本発明のα-アミラーゼポリペプチドを洗浄液リットル当たり0.01~100mgの酵素タンパク質、好ましくは洗浄液リットル当たり0.05~5mgの酵素タンパク質、とりわけ、洗浄液リットル当たり0.1~1mgの酵素タンパク質に相当する量で添加することができる。
本発明のα-アミラーゼポリペプチドは、さらに、国際公開第2006/002643号パンフレット(参照として本明細書に援用する)に開示されている洗剤配合物中に含有させてもよい。
洗剤生成物の配合物
本発明の洗剤組成物は、例えば、バー、均質な錠剤、2つ以上の層を有する錠剤、1つ以上のコンパートメントを有するポーチ、通常の若しくは圧縮された粉末、顆粒、ペースト、ゲル、又は、通常の、圧縮、若しくは濃縮液体といった、いずれかの簡便な形態であり得る。
本発明の洗剤組成物は、例えば、汚れた布地の前処理に好適なランドリー添加剤組成物及びリンス添加布地柔軟剤組成物などの手洗い用若しくは機械ランドリー洗剤組成物として配合する、又は一般家庭硬質面クリーニング作業に使用される洗剤組成物として配合するか、又は手洗い若しくは機械食器洗浄作業のために配合することができる。
従って、一実施形態では、本発明の洗剤組成物は、液体ランドリー洗剤組成物、粉末ランドリー洗剤組成物、液体食器洗浄洗剤組成物、又は粉末食器洗浄洗剤組成物である。一実施形態では、組成物は、液体若しくは粉末自動食器洗浄(ADW)洗剤組成物;又は手洗い用液体食器洗浄洗剤組成物である。
ポーチは、単一又は複数のコンパートメントとして構成されることが可能である。例えば水との接触に先だってポーチから組成物が漏れ出るような組成物の漏れが防止される、組成物の保持に好適であれば如何なる形態、形状及び材料のものであることも可能である。ポーチは、内部容積を有する水溶性フィルム製のものである。前記内部容積は、ポーチのコンパートメントに分離されていることが可能である。好ましいフィルムは、フィルム又はシートに形成される好ましくはポリマーである高分子材料である。好ましいポリマー、コポリマー又はその誘導体は、ポリアクリレート、及び、水溶性アクリレートコポリマー、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムデキストリン、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、ポリメタクリレート、最も好ましくはポリビニルアルコールコポリマー及びヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)から選択される。好ましくは、フィルム中のポリマーのレベルは、例えばPVAで少なくとも約60%である。好ましい平均分子量は、典型的には約20,000~約150,000であろう。フィルムはまた、ポリアクチド及びポリビニルアルコール(MonoSol LLC,Indiana,USAから市販されている商品名M8630で知られている)などの加水分解的に分解性及び水溶性のポリマーブレンドと、グリセロール、エチレングリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール及びこれらの混合物のような可塑剤とを含むブレンド組成物であることが可能である。ポーチは、水溶性フィルムにより分離された固体ランドリークリーニング組成物又は部分成分及び/又は液体クリーニング組成物又は部分成分を含んでいることが可能である。液体成分用のコンパートメントは、固形分を含有するコンパートメントとは組成が異なっていることが可能である:米国特許出願公開第2009/0011970 A1号明細書。
洗剤処方成分は、水溶性ポーチ中のコンパートメントにより、又は、錠剤の異なる層中において相互に物理的に分離されていることが可能である。これにより、成分間の負の保管相互作用を防止することが可能である。コンパートメントの各々の異なる溶解プロファイルはまた、洗浄溶液中における選択された成分の溶解を遅延させることが可能である。
単位用量式ではない液体又はゲル洗剤は、水性、典型的には、少なくとも20重量%且つ最大95%の水、例えば最大約70%の水、最大約65%の水、最大約55%の水、最大約45%の水、最大約35%の水を含有し得る。限定されないが、アルカノール、アミン、ジオール、エーテル及びポリオールを含む他の種類の液体を水性液体又はゲルに含有させてもよい。水性液体又はゲル洗剤は、0~30%の有機溶媒を含有し得る。
液体又はゲル洗剤は、非水性であってもよい。
粒状洗剤配合物
粒状洗剤は、国際公開第09/092699号パンフレット、欧州特許第1705241号明細書、欧州特許第1382668号明細書、国際公開第07/001262号パンフレット、米国特許第6472364号明細書、国際公開第04/074419号パンフレット又は国際公開第09/102854号パンフレットに記載されているとおり配合され得る。他の有用な洗剤配合物が、国際公開第09/124162号パンフレット、国際公開第09/124163号パンフレット、国際公開第09/117340号パンフレット、国際公開第09/117341号パンフレット、国際公開第09/117342号パンフレット、国際公開第09/072069号パンフレット、国際公開第09/063355号パンフレット、国際公開第09/132870号パンフレット、国際公開第09/121757号パンフレット、国際公開第09/112296号パンフレット、国際公開第09/112298号パンフレット、国際公開第09/103822号パンフレット、国際公開第09/087033号パンフレット、国際公開第09/050026号パンフレット、国際公開第09/047125号パンフレット、国際公開第09/047126号パンフレット、国際公開第09/047127号パンフレット、国際公開第09/047128号パンフレット、国際公開第09/021784号パンフレット、国際公開第09/010375号パンフレット、国際公開第09/000605号パンフレット、国際公開第09/122125号パンフレット、国際公開第09/095645号パンフレット、国際公開第09/040544号パンフレット、国際公開第09/040545号パンフレット、国際公開第09/024780号パンフレット、国際公開第09/004295号パンフレット、国際公開第09/004294号パンフレット、国際公開第09/121725号パンフレット、国際公開第09/115391号パンフレット、国際公開第09/115392号パンフレット、国際公開第09/074398号パンフレット、国際公開第09/074403号パンフレット、国際公開第09/068501号パンフレット、国際公開第09/065770号パンフレット、国際公開第09/021813号パンフレット、国際公開第09/030632号パンフレット、及び、国際公開第09/015951号パンフレット、国際公開第2011025615号パンフレット、国際公開第2011016958号パンフレット、国際公開第2011005803号パンフレット、国際公開第2011005623号パンフレット、国際公開第2011005730号パンフレット、国際公開第2011005844号パンフレット、国際公開第2011005904号パンフレット、国際公開第2011005630号パンフレット、国際公開第2011005830号パンフレット、国際公開第2011005912号パンフレット、国際公開第2011005905号パンフレット、国際公開第2011005910号パンフレット、国際公開第2011005813号パンフレット、国際公開第2010135238号パンフレット、国際公開第2010120863号パンフレット、国際公開第2010108002号パンフレット、国際公開第2010111365号パンフレット、国際公開第2010108000号パンフレット、国際公開第2010107635号パンフレット、国際公開第2010090915号パンフレット、国際公開第2010033976号パンフレット、国際公開第2010033746号パンフレット、国際公開第2010033747号パンフレット、国際公開第2010033897号パンフレット、国際公開第2010033979号パンフレット、国際公開第2010030540号パンフレット、国際公開第2010030541号パンフレット、国際公開第2010030539号パンフレット、国際公開第2010024467号パンフレット、国際公開第2010024469号パンフレット、国際公開第2010024470号パンフレット、国際公開第2010025161号パンフレット、国際公開第2010014395号パンフレット、国際公開第2010044905号パンフレット、国際公開第2010145887号パンフレット、国際公開第2010142503号パンフレット、国際公開第2010122051号パンフレット、国際公開第2010102861号パンフレット、国際公開第2010099997号パンフレット、国際公開第2010084039号パンフレット、国際公開第2010076292号パンフレット、国際公開第2010069742号パンフレット、国際公開第2010069718号パンフレット、国際公開第2010069957号パンフレット、国際公開第2010057784号パンフレット、国際公開第2010054986号パンフレット、国際公開第2010018043号パンフレット、国際公開第2010003783号パンフレット、国際公開第2010003792号パンフレット、国際公開第2011023716号パンフレット、国際公開第2010142539号パンフレット、国際公開第2010118959号パンフレット、国際公開第2010115813号パンフレット、国際公開第2010105942号パンフレット、国際公開第2010105961号パンフレット、国際公開第2010105962号パンフレット、国際公開第2010094356号パンフレット、国際公開第2010084203号パンフレット、国際公開第2010078979号パンフレット、国際公開第2010072456号パンフレット、国際公開第2010069905号パンフレット、国際公開第2010076165号パンフレット、国際公開第2010072603号パンフレット、国際公開第2010066486号パンフレット、国際公開第2010066631号パンフレット、国際公開第2010066632号パンフレット、国際公開第2010063689号パンフレット、国際公開第2010060821号パンフレット、国際公開第2010049187号パンフレット、国際公開第2010031607号パンフレット、国際公開第2010000636号パンフレットに記載されている。
共顆粒(co-granule)への酵素の配合
本発明の酵素は、顆粒として、例えば、1種又は複数種の酵素を組み合わせる共顆粒として配合してもよい。次に、各酵素は、より多くの顆粒中に存在することになり、これにより洗剤中の酵素のより均一な分布を達成する。これはまた、粒径の差による様々な酵素の物理的分離も低減する。洗剤産業の場合に多酵素共顆粒を生産する方法は、IP.com開示IPCOM000200739Dに開示されている。
共顆粒の使用による酵素の配合物の別の例が国際公開第2013/188331号パンフレットに開示されており、これは、(a)多酵素共顆粒;(b)10wt未満のゼオライト(無水ベース);及び(c)10wt未満のリン酸塩(無水ベース)を含む洗剤組成物に関し、ここで、前記酵素共顆粒は、10~98wt%の水蒸気シンク成分を含み、組成物は、20~80wt%の水蒸気シンク成分をさらに含む。
国際公開第2013/188331号パンフレットはまた、表面、好ましくは布地表面を処理及び/又はクリーニングする方法にも関し、これは、(i)前記表面を、特許請求の範囲に記載され、且つ本明細書に記載される洗剤組成物と水性洗浄液中で接触させるステップ、(ii)表面をすすぐ及び/又は乾燥させるステップを含む。
多酵素共顆粒は、本発明の酵素と、(a)リパーゼ、セルラーゼ、キシログルカナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、ラッカーゼ、ヘミセルラーゼ、プロテアーゼ、セロビオース、デヒドロゲナーゼ、キシラナーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、マンナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、リケナーゼ、グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、第2アミラーゼ、及びこれらの混合物からなる群から選択される1種若しくは複数種の酵素と、を含有し得る。
使用
本発明はまた、α-アミラーゼ変異体を使用する方法にも関する。本発明のα-アミラーゼ変異体は、洗剤組成物、ランドリー洗浄、食器洗浄及び/又はクリーニング工程で有用である。
一実施形態では、本発明は、硬質面のクリーニング、例えば食器洗浄、又は洗濯若しくは汚れ除去に使用するための洗剤組成物における、本発明の変異体の使用に関する。別の実施形態では、本発明は、限定されないが、食器洗浄及び産業クリーニングを含め、ランドリー又は硬質面クリーニングなどのクリーニング工程における本発明のα-アミラーゼ変異体の使用に関する。従って、一実施形態では、本発明は、食器洗浄及び産業用クリーニングを含め、ランドリー又は硬質面クリーニングなどのクリーニング工程における、配列番号2の以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含む変異体の使用に関する。
特定の実施形態において、本発明は、食器洗浄及び産業用クリーニングを含め、ランドリー又は硬質面クリーニングなどのクリーニング工程における、a)親α-アミラーゼ中の2つ以上の位置の置換及び/又は欠失(前記位置は、配列番号2の位置:R181、G182、D183、及びG184に対応する);並びに
b)配列番号2の以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置の修飾
を含む変異体の使用に関する。
クリーニングに重要な汚染物及び汚れは多くの異なる物質から構成され、全て異なる基質特異性を備えた多種多様な酵素が、ランドリー及び食器洗浄などの硬質面洗浄の両方に関して、洗剤への使用のために開発されている。これらの酵素は、酵素を用いない同じ工程と比較して、酵素が使用されるクリーニング工程で特異的に汚れ除去を改善するため、酵素洗浄力有益性を提供すると考えられる。当該技術分野で公知の汚れ除去酵素としては、プロテアーゼ、第2アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペロキシダーゼ、ハロペロキシゲナーゼ、カタラーゼ及びマンナーゼなどの酵素が挙げられる。
一態様では、本発明は、家庭用又は産業用クリーニング工程における、本明細書に記載の変異体の使用、又は変異体を含む組成物の使用に関する。
一態様では、本発明は、布地、例えば、ランドリーのクリーニングを目的とする、本明細書に記載の変異体の使用、又は変異体を含む組成物の使用に関する。
一態様では、本発明は、セラミック、プラスチック又はガラス材料のクリーニング、例えば食器洗浄を目的とする、本明細書に記載の変異体の使用、又は変異体を含む組成物の使用に関する。
一態様では、本発明は、家庭用洗濯及び産業用洗濯を目的とし得る洗濯工程に関する。さらに、本発明は、生地(例えば、布地、衣服、衣類など)の洗濯工程に関し、ここで、この工程は、本発明の洗剤組成物を含有する洗浄溶液で生地を処理するステップを含む。洗濯は、例えば、家庭用若しくは産業用洗浄機を用いて実施するか、又は本発明の洗剤組成物を用いて手で実施することができる。
一態様では、本発明は、ADW;又は家庭用クリーニング並びに産業用クリーニング工程を目的とし得る、硬質面クリーニングを含む食器洗浄工程に関する。さらに、本発明は、食器洗浄又は硬質面クリーニングの工程に関し、ここで、この工程は、本発明の洗剤組成物を含有する洗浄溶液で食器又は硬質面を処理するステップを含む。食器洗浄又は硬質面クリーニングは、本発明の洗剤組成物を用いて、例えば、家庭用食器洗浄機を用いて実施しても、又は手で実施してもよい。
使用方法
本発明は、家庭用又は産業用クリーニング工程における本発明の洗剤組成物の使用を提供する。クリーニング工程は、例えば、食器洗浄工程、例えば、自動食器洗浄;ランドリー工程;又は浴室タイル、床、テーブル表面、ドレイン、シンク及び洗面台などの硬質面のクリーニングであり得る。
食器洗浄
自動食器洗浄工程は、以下のステップ:
a.洗剤組成物を含む水性洗浄液に食器を曝露するステップ;
b.少なくとも1つの洗浄サイクルを完了するステップ;並びに
c.任意選択で、食器をすすぎ、乾燥させるステップ
を含み得る。
従って、本発明は、本明細書に記載の洗剤組成物を用いて、自動食器洗浄機で食器を洗浄する方法を提供し、これは、前記食器洗浄機内の洗剤組成物コンパートメントに前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む。
組成物は、洗浄液中約1000~8000ppm、例えば、洗浄液中2000~6000ppmの濃度で使用され得る。洗浄液の硬度は、3~30°dHであってよい。洗浄液のpHは、3~11、例えば、7~11であってよい。
使用する際の洗浄液の温度は、10~70℃の範囲であり得る。例えば、洗浄液の温度は、15~60℃の範囲、20~50℃の範囲、25~50℃の範囲、30~45℃の範囲、35~40℃の範囲、35~55℃の範囲、又は40~50℃の範囲であってよい。
温度は、洗浄プログラム全体を通して変動し得る。或る酵素は、或る活性温度範囲で活性化し、別の酵素は、最初の酵素の活性温度範囲とは異なる他の活性温度範囲で活性化し得る。例えば、1又は複数の洗浄サイクルは、32~38℃の温度で実施してよく、他の洗浄サイクルは、45~55℃の温度で実施してよい。このことの利点は、単一の酵素を最適温度で機能させることである。洗剤組成物の酵素の最適温度は変動し得るが、典型的には、プロテアーゼの場合には65~70℃の範囲、アミラーゼの場合は55~65℃の範囲である。最適温度は、様々なアッセイ、例えば、様々な温度の緩衝溶液中で15分間にわたる活性を比較するなどにより決定することができる。
洗浄サイクルの最中又は終了後、食器を水、又はすすぎ剤を含む水ですすぐことができる。クリーニングの有効性は、酸性すすぎ剤を使用すればさらに改善させることができる。すすぎ剤は、少なくともすすぎステップの間、pHを4未満に低下させることができる必要がある。pHは、さらに、例えば、pH3.5未満にまで、例えば、pH3未満、pH2.5未満又はpH2未満に低下させてもよい。pHを低下させる時間は、少なくとも1分、例えば、少なくとも2分、少なくとも3分、少なくとも4分、少なくとも5分、少なくとも6分又は少なくとも7分であってよい。pHを低下させる時間は、さらにすすぎステップ全体の時間であってもよい。
すすぎステップ中にpHを低下させる能力は、緩衝剤によるものである。pH4以下の低いpHで強力な緩衝能を有する緩衝剤を選択する必要がある。緩衝能は、15mlの4M HCL/すすぎサイクルを用いてpH降下が達成されたのと同じ作用に相当するものとする。すすぎステップ中にpHを低下させる能力は、以下:クエン酸、酢酸、リン酸二水素カリウム、ホウ酸、ジエチルバルビツール酸、Carmodyバッファー及びBritton-Robinsonバッファーからなる群から選択される緩衝剤によるものである。
すすぎ剤は、洗浄サイクル中に食器から遊離するあらゆる汚染物を洗い流すことにより、食器のクリーニングをさらに改善し得る。加えて、酸性すすぎ剤は、食器へのカルシウムの沈着を防止する。
洗濯
ランドリー工程は、例えば、家庭用洗濯であり得るが、産業用洗濯であってもよい。布地及び/又は衣服の洗濯工程は、本明細書に記載の洗剤組成物を含有する洗浄溶液で布地を処理するステップを含む。クリーニング工程又は生地ケア工程は、例えば、機械洗浄工程又は手洗い工程で実施することができる。
洗浄、クリーニング若しくは生地ケア工程に付す布地及び/又は衣服は、通常の洗浄が可能なランドリー、例えば、家庭用ランドリーであってよい。好ましくは、ランドリーの大部分は、ニット、織物、デニム、不織布、フェルト、糸、及びタオル布をはじめとする衣服及び布地である。布地は、綿、亜麻、リネン、ジュート、ラミー、サイザルアサ若しくはコイアをはじめとする天然のセルロース繊維、又はビスコース/レーヨン、ラミー、酢酸セルロース繊維(トリセル)、リオセルをはじめとする(例えば、木材パルプ由来の)人造セルロース繊維、又はそれらのブレンドなど、セルロース基材であってもよい。布地は、羊毛、ラクダ、カシミア、モヘア、ウサギ及び絹をはじめとする天然のポリアミド、又はナイロン、アラミド、ポリエステル、アクリル、ポリプロピレン及びスパンデックス/エラスタンをはじめとする合成ポリマー、又はそれらのブレンドなどの、非セルロース基材であってもよいし、さらには、セルロース基材と非セルロース基材繊維のブレンドであってもよい。
一態様では、本発明は、本明細書に記載の洗剤を用いて自動洗濯機で洗濯する方法に関し、これは、前記自動洗浄機内の洗剤組成物コンパートメントに前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む。別の態様では、本発明は、洗濯方法に関し、これは、本明細書に記載の洗剤組成物を用いて、好ましくは、50℃以下の温度、より好ましくは45℃以下の温度、さらに好ましくは40℃以下の温度、さらに好ましくは35℃以下の温度、さらに好ましくは30℃以下の温度、さらに好ましくは25℃以下の温度、さらに好ましくは20℃以下の温度で、衣服を洗濯するステップを含む。
これらの方法は、布地を洗濯する方法を含む。本方法は、洗剤組成物を含むクリーニングランドリー溶液と、洗濯しようとする布地を接触させるステップを含む。布地は、通常の消費者使用条件で洗濯が可能な任意の布地を含み得る。溶液は、約5.5~約11.5のpHを有する。組成物は、溶液中約100ppm、好ましくは500ppm~約15,000ppmの濃度で使用することができる。水温は、典型的に、約5℃~約95℃の範囲であり、約10℃、約15℃、約20℃、約25℃、約30℃、約35℃、約40℃、約45℃、約50℃、約55℃、約60℃、約65℃、約70℃、約75℃、約80℃、約85℃及び約90℃を含む。水:布地の比は、典型的に、約1:1~約30:1である。
特定の実施形態では、洗浄方法は、約0°dH~約30°dHの硬度で実施される。硬度は、典型的な欧州の洗浄条件下で約16°dHであり、典型的な米国の洗浄条件下で約6°dH、典型的なアジアの洗浄条件下で約3°dHである。
本発明のα-アミラーゼ変異体は、他の多様な産業用途を可能にする有益な特性を有する。例えば、本発明のα-アミラーゼポリペプチドは、デンプン加工、特にデンプンの転換、とりわけデンプンの液化に使用することができる(例えば、全て参照により本明細書に援用される米国特許第3,912,590号明細書、欧州特許出願第252 730号及び同第63 909号明細書、国際公開第99/19467号、及び同第96/28567号パンフレットを参照)。また、デンプン転換のための組成物も考慮され、これは、本発明の変異体以外に、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、及び他のα-アミラーゼも含む。
さらに、本発明のα-アミラーゼ変異体はまた、デンプン又は全粒穀物からの、甘味料及びエタノール、例えば、燃料、飲料及び産業エタノールの生産(例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第5,231,017号明細書を参照)に特に有用である。
本発明のα-アミラーゼ変異体は、生地、布地及び衣服の糊抜き(例えば、参照により本明細書に援用される国際公開第95/21247号パンフレット、米国特許第4,643,736号明細書、欧州特許第119,920号明細書を参照)、ビール製造又は醸造、パルプ及び紙製造にも有用であり得る。
デンプン転換
液化及び糖化工程などの通常のデンプン転換工程は、例えば、参照により本明細書に援用される米国特許第3,912,590号明細書及び欧州特許公開第252,730号及び同第63,909号明細書に記載されている。
一実施形態では、デンプンを糖又は脂肪代替物などの低分子量炭水化物成分に分解するデンプン転換工程は、脱分枝ステップを含む。
デンプンを糖に転換する場合、デンプンを解重合する。こうした解重合工程は、前処理ステップ及び2つ若しくは3つの連続したステップ、即ち、液化工程、糖化工程並びに所望の最終製品に応じて、任意選択で、異性化工程から構成され得る。
(i)ネイティブデンプンの前処理
ネイティブデンプンは、室温で水不溶性である顕微鏡的顆粒から構成される。水性デンプンスラリーを加熱すると、顆粒は、膨潤し、最終的に破裂して、デンプン分子を溶液中に分散させる。この「糊化」プロセス中に、粘土の顕著な上昇が起こる。典型的に産業工程中、固形分が30~40%であれば、デンプンは、薄まる、即ち、「液化」して、操作できるようになるはずである。この粘土の低下は、今日、ほとんどの場合、酵素分解により実施されている。
(ii)液化
液化ステップの間、長鎖デンプンは、α-アミラーゼにより分解されて、分岐した直鎖の短い単位(マルトデキストリン)になる。液化工程は、105~110℃で10分、続いて95℃で1~2時間実施する。pHは、5.5~6.2の間である。これらの条件下で最適な酵素安定性を確実にするために、1mMのカルシウムを添加する(40ppm遊離カルシウムイオン)。この処理の後に、液化デンプンは、10~15の「デキストロース当量」(DE)を有することになる。
(iii)糖化
液化工程の後、グルコアミラーゼ(例えば、AMG)及び脱分枝酵素、例えば、イソアミラーゼ(米国特許第4,335,208号明細書)又はプルラナーゼ(例えば、Promozyme(商標))(米国特許第4,560,651号明細書)の添加により、マルトデキストリンは、デキストロースに転換される。このステップの前に、pHを4.5未満の値まで下げ、高温(95℃超)を維持して、液化α-アミラーゼを不活性化することによって、脱分枝酵素により適切に加水分解することができない「パノース前駆体」と呼ばれる単鎖オリゴ糖の形成を低減する。
温度を60℃に下げ、グルコアミラーゼ及び脱分枝酵素を添加する。糖化工程は、24~72時間進行する。
通常、液化ステップの後にα-アミラーゼを変性させると、糖化生成物の約0.2~0.5%は、分枝三糖6<2>α-グルコシルマルトース(パノース)であり、これは、プルラナーゼにより分解することができない。液化ステップからの活性アミラーゼが糖化工程中に存在する(即ち、非変性)場合、このレベルは、1~2%と高い可能性があり、これは、糖化収率をかなり低下させるため、極めて有害である。
(iv)異性体化
所望の最終糖生成物が、例えば、高フルクトースシロップである場合、デキストロースシロップをフルクトースに転換することができる。糖化工程の後、pHを6~8の範囲内の値、好ましくはpH7.5まで上昇させてから、イオン交換によりカルシウムを除去する。次に、例えば、固定化グルコースイソメラーゼ(例えば、Sweetzyme(商標)IT)を用いて、デキストロースシロップを高フルクトースシロップに転換する。
エタノール生成
一般に、全粒穀物からのアルコール(エタノール)生成は、4つの主要ステップに分けることができる:
-粉砕
-液化
-糖化
-発酵
(i)粉砕
構造を開き、さらなる加工を可能にするために、穀粒を粉砕する。湿式又は乾式製粉の2つの方法を使用する。乾式製粉では、全粒を粉砕して、残りの工程に使用する。湿式製粉は、胚芽とミール(デンプン粒とタンパク質)の非常に良好な分離を達成するが、場所によってはシロップの同時生成が起こるという少数の例外がある。
(ii)液化
液化工程中、デンプン粒は、加水分解により溶解して、ほとんどが4を超えるDPのマルトデキストリンになる。加水分解は、酸処理により実施してもよいし、又はα-アミラーゼにより酵素的に実施してもよい。酸加水分解は、限定的な基準に基づいて使用される。原材料は、粉砕された全粒穀物又はデンプン加工からのサイドストリームであってもよい。
酵素液化は、典型的に、3ステップホットスラリープロセスとして実施される。このスラリーを60~95℃、好ましくは80~85℃まで加熱してから、1種又は複数種の酵素を添加する。次に、スラリーを95~140℃、好ましくは105~125℃でジェットクックし、60~95℃まで冷却し、さらに1種又は複数種の酵素を添加して、最終的な加水分解を達成する。液化工程は、pH4.5~6.5、典型的には5~6のpHで実施する。粉砕及び液化された穀粒は、マッシュとしても知られる。
(iii)糖化
酵母により代謝することができる低分子糖DP1~3を生成するために、液化から得られたマルトデキストリンをさらに加水分解しなければならない。この加水分解は、典型的に、グルコアミラーゼにより酵素的に為され、或いはα-グルコシダーゼ又は酸性α-アミラーゼを使用することもできる。全糖化ステップは、最大72時間継続し得るが、通常は、典型的には40~90分の前糖化のみを行った後、発酵中に完全な糖化(SSF)を実施する。糖化は、典型的には30~65℃、典型的には60℃前後の温度、並びにpH4.5で実施する。
(iv)発酵
典型的には、サッカロミセス種(Saccharomyces spp.)からの酵母をマッシュに添加し、発酵は、24~96時間、例えば、典型的に35~60時間継続する。温度は、26~34℃、典型的には約32℃であり、pHは、pH3~6、好ましくはpH4~5前後である。
最も広く使用される方法は、同時糖化及び発酵(SSF)プロセスであり、この場合、糖化のための維持段階はなく、これは、酵母と酵素を一緒に添加することを意味する。SSFを実施する際、50℃を超える温度での前糖化ステップを発酵の直前に導入するのが一般的である。
(v)蒸留
発酵後、マッシュを蒸留して、エタノールを抽出する。
本発明の方法に従って得られたエタノールは、例えば、燃料エタノール;飲用エタノール、例えば、飲用に適した中性スピリッツ;又は工業用エタノールとして使用することができる。
(vi)副産物
発酵から残るのは、穀粒であり、これは、典型的には、液体又は乾燥状態のいずれかで、動物の飼料に使用される。
液化、糖化、発酵、蒸留、及びエタノールの回収を実施する方法に関するさらなる詳細について当業者は周知である。
本発明の方法に従って、糖化及び発酵を同時又は個別に実施することができる。
パルプ及び紙生産
本発明のアルカリ性α-アミラーゼは、デンプン再強化古紙パルプから、リグノセルロース材料、例えば、パルプ、紙及び段ボールの生産に使用することもでき、その場合、特に、再パルプ化は、7を超えるpHで起こり、アミラーゼは、再強化デンプンの分解によって廃棄材料の分解を促進する。本発明のα-アミラーゼは、特に、デンプン被覆印刷紙から製紙用パルプを生産する方法に有用である。この方法は、国際公開第95/14807号パンフレットに記載される通りに実施され、以下のステップ:
a)紙を崩壊させて、パルプを生成するステップ、
b)ステップa)の前、最中又は後に、デンプン分解酵素で処理するステップ、及び
c)ステップa)及びb)の後にパルプからインク粒子を分離するステップ
を含み得る。
本発明のα-アミラーゼはまた、デンプンを加工するのにも非常に有用となり得、その場合、製紙において、アルカリ性充填材、例えば、炭酸カルシウム、カオリン及びクレイと一緒に、酵素加工デンプンが使用される。本発明のアルカリ性α-アミラーゼを用いて、充填材の存在下でデンプンを加工することが可能となり、従って、より単純な統合された方法が可能になる。
生地、布地及び衣服の糊抜き
本発明のα-アミラーゼはまた、生地、布地及び衣服の糊抜きにも非常に有用となり得る。生地処理産業において、α-アミラーゼは、紡績工程中の横糸に対する保護コーティングとして用いられているデンプン含有糊の除去を容易にする糊抜き工程において補助剤として伝統的に使用されている。紡績後の糊コーティングの完全な除去は、布の洗い流し、漂白及び乾燥という後の工程で最適な結果を確実にするために重要である。酵素によるデンプン分解は、それが繊維材料に有害な作用を一切及ぼさないため、好ましい。加工コストを削減すると共に、ミルスループットを高めるために、糊抜き工程は、洗い流し及び漂白ステップと一緒に行われることもある。そのような場合、伝統的なα-アミラーゼは、高いpHレベル及び漂白剤とあまり適合性ではないため、典型的にはアルカリ又は酸化剤などの非酵素補助剤が、デンプンを分解するために使用される。デンプン糊の非酵素分解は、かなり侵襲性の化学物質を使用するため、ある程度の繊維損傷を招く。従って、本発明のα-アミラーゼを使用するのが望ましいであろう。というのは、それらは、アルカリ性溶液中で改善された性能を有するからである。セルロース含有布地又は生地を糊抜きする場合、α-アミラーゼを単独で、又はセルラーゼと組み合わせて使用することができる。
糊抜き及び漂白プロセスは、当該技術分野で公知である。例えば、そうしたプロセスは、国際公開第95/21247号パンフレット、米国特許第4,643,736号明細書、欧州特許第119,920号明細書に記載されており、これらは、本明細書に参照により組み込まれる。
糊抜きのための市販の製品としては、Novozymes A/SからのAQUAZYME(登録商標)及びAQUAZYME(登録商標)ULTRAがある。
ビール製造
本発明のα-アミラーゼは、ビール製造プロセスにおいても非常に有用となり得る;α-アミラーゼは、典型的にマッシング工程中に添加することになる。
本発明を以下のパラグラフにさらに記載する。
1.親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する。
2.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
3.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号2のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
4.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号3のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
5.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号4のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
6.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号5のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
7.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号6のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
8.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号7のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
9.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号8のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
10.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号9のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
11.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号10のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
12.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号11のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
13.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号12のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
14.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号13のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
15.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号14のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
16.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号15のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
17.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号16のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
18.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、パラグラフ1に記載のα-アミラーゼ変異体。
19.親α-アミラーゼの前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有し、且つ、前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示されるα-アミラーゼ活性を有する前記親ポリペプチドと比較したとき、洗浄性能の尺度について改善度(IF)>1.0を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
20.番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置に修飾;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有し、且つ、前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、洗浄性能の尺度について改善度(IF)>1.0を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
21.前記置換及び/又は欠失の数が、1~20、例えば、1~10、及び1~5、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、若しくは10の置換及び/又は欠失である、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
22.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、位置:R181、G182、D183、及びG184に対応する2つ以上の位置に欠失を含む、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
23.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、位置:R181+G182;R181+D183;R181+G184;G182+D183;G182+G184;又はD183+G184に対応する位置に欠失を含む、パラグラフ22に記載の変異体。
24.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
25.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、モデル洗剤A組成物での洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
26.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、漂白剤含有ADW洗剤組成物での洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
27.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、モデル洗剤A組成物及び/又は漂白剤含有ADW洗剤組成物での洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
28.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、自動機械式応力アッセイ(AMSA)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物での洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
29.前記変異体が、配列番号1又は配列番号2に示される前記親α-アミラーゼと比較したとき、実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物での洗浄性能の尺度について、少なくとも1.1、少なくとも1.2、少なくとも1.3、少なくとも1.4、少なくとも1.5、少なくとも1.6、少なくとも1.7、少なくとも1.8、少なくとも1.9、少なくとも2.0、少なくとも2.2、少なくとも2.4、少なくとも2.6、少なくとも2.8、少なくとも3.0、少なくとも3.2、少なくとも3.4、少なくとも3.6、少なくとも3.8、又は少なくとも4.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
30.前記親ポリペプチドが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、若しくは配列番号17のポリペプチドに対して、少なくとも59%、例えば、少なくとも60%、例えば少なくとも62%、少なくとも63%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、又は100%の配列同一性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
31.前記親ポリペプチドが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、若しくは配列番号17のポリペプチドを含むか、又はこれから構成される、パラグラフ11に記載のα-アミラーゼ変異体。
32.前記親ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、少なくとも60%、例えば少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
33.前記変異体が、a)番号付けのために配列番号1を用いて、位置:R181、G182、D183、及びG184に対応する2つ以上の位置における欠失及び/又は置換、並びにb)番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に対応する1つ又は複数の位置における修飾を含む、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
34.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の修飾:H1*;G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含む、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
34.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A60T
Y135H
Q169E
W48Y
A174*
M246L
R90Q
Y203L+V206L
Q169F+S170A
S132D+G133D
N195F+Q365C
N195F+Q365S
N195F+Q365M
R127L+Q365S
R127N+Q365S
R127L+Q365C
N195F+Q365K
I9M+N195F
R171H+Q365C
Y267F+Q365S
F328L+Q365S
R171L+Q365S
N195F+M286L
T134P+N195F
S170*+R171*+A174*
V264I+A265G+Y267F
Q169*+S170*+A174*
M246L+L275V+Q365S
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+F328L+Q365C
I9M+N195F+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
I9M+N195F+Q365S
V264I+Y267F+Q365K
R127L+M246V+Q365S
A60S+R171Y+Q365S
R127N+M246T+L275V
V104A+N195F+Q365S
V264I+F328L+Q365S
R171H+N302H+Q365S
V264I+Y267F+Q365S
A174*+N175*+Y178F
V264I+A265G+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+M246V+Q365C
R171Y+M246L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
I9M+Y160H+N195F+Q365S
I9M+R127N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
I9M+R171H+N195F+Q365S
I9M+A186H+N195F+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
Q169*+S170*+R171*+A174*
M246L+L275V+Q365S+D406H
I9M+G184K+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+Q365S
R171H+M246L+L275V+Q365S
R127H+M246I+Q365C+V481A
Y267F+V291A+F328L+Q365C
I9M+A186E+N195F+Q365S
E86L+R171L+N306R+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365S
I9M+N195F+V291A+Q365S
R127L+L235I+M246I+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+F328L+Q365K
Q11H+V264I+A265G+Q365C
W187M+N195F+H210K+Q365S
R127H+M246T+L275A+Q365S
I9M+A111T+N195F+Q365S
I9M+Y58F+N195F+Q365S
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C
R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I
R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S
V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*
H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+Y58F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195H+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
H1*+N54S+V56T+G109A+R158C+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293V+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L272I+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+R158H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+G109A+K391A+N16Y+N54S+V56T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L
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I9M+Y160H+N195F+Q365S
M202L
M246L+L275V+Q365S+D406H
M246L
M246L+L275V+Q365S
M246L+L275V+Q365S+D406H
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N16E+N195F+G337+Q365S+P375T+D377H
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H
N16Y+Y160H+N195F+L275+S304G+G337E+Q365S
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N
N195F+Q365S
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C
Q11H+Y267F+Q365C
Q11H+V264I+A265G+Q365C
Q169*+S170*+A174*
Q169*+S170*+R171*+A174*
Q98N+F113Y+R158+Y160F+S304+R320S+W439+F473P
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S
R116+S132P+Q136N+N195F+Q365S
R127H+L235I+Q365S+G435C
R127L+M246V+Q365S
R127L+Q365C
R127L+Q365S
R127L
R127N+M246L+L275V+Q365S
R127N+Q365S
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H+Q365C
R171H+M246L+L275V+Q365S
R171H+N302H+Q365S
R171H
R171H+Q365C
R171L+N302H+Q365C
R171L+Q365S
R171Y++M246L+Q365S
R171Y+N306K
R181S+G184S
V104A+N195F+Q365S
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S
V264I+A265G+V291A+Q365C
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F
V264I+F328L+Q365C
V264I+F328L+Q365S
V264I+L357F
V264I+Q365C
V264I+V291I+Q365S
V264I+V291T+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+F328L+Q365S
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I
V264I+Y267F+Q365K
V264I+Y267F+Q365S
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264I+A265G+Y267F
V264I+F328L+Q365C
V264I+Y267F+F328L+Q365K
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C
V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C
V264T+V291A+F328L+Q365S
V264T+Y267F+Q365S
V264T+Y267L+F328L+Q365C
V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
W187M+N195F+H210K+Q365S
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K
Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365C
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y267F+Q365S
Y267F+V291A+F328L+Q365S
Y295F
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物及び/又は漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
35.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
A60T、
Y135H、
Q169E、
W48Y、
A174*、
M246L、
R90Q、
Y203L+V206L、
Q169F+S170A、
S132D+G133D、
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
N195F+Q365K、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+Q365C、
Y267F+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F、
N195F+M286L、
T134P+N195F、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
M246L+L275V+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
R127L+M246V+Q365S、
A60S+R171Y+Q365S、
R127N+M246T+L275V、
V104A+N195F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
V264I+Y267F+Q365S、
A174*+N175*+Y178F、
V264I+A265G+Q365C、
R171L+N302H+Q365C、
R171L+M246V+Q365C、
R171Y+M246L+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
R127L+L235I+M246I+Q365C、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
W187M+N195F+H210K+Q365S、
R127H+M246T+L275A+Q365S、
I9M+A111T+N195F+Q365S、
I9M+Y58F+N195F+Q365S、
V264T+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+Q365C、
V264I+A265G+Y267F+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S、
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S、
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+Y58F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195H+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
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H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
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I9M+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q172S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
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H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
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A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
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H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V291A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
Y160H+R171L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+G109A+K391A+N54S+V56T+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q118N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+T134P+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*N195F+V206L+Q299Y+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q299N+K391A、
Y160H+E212D+L275V+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306Q+K391A、
H1*+W43Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311R+K391A、
Y160H+E212D+M246L+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E84Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q125G+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K269M+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
G7A+F113N+R116N+E276N+S304G+R320S+Q345N+W439R+N465G+Q466S+W469Y、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D377H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V238A+K391A、
Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365H+K391A、
Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
G109A+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L235I+V238A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物中で少なくとも≧1.1の改善された相対比活性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
36.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M246L、
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
N195F+Q365K、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R171H+Q365C、
Y267F+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
M246L+L275V+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
R127L+M246V+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
R127L+L235I+M246I+Q365C、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S、
R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158C+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L272I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+G109A+K391A+N16Y+N54S+V56T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158S+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
R127N+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+A274S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186E+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90H+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
I9M+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+Q172S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365C+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365E+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186H+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+R181S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172S+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V291A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R116F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
Y160H+R171L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+G109A+K391A+N54S+V56T+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q118N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+T134P+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*N195F+V206L+Q299Y+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306K+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365A+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q299N+K391A、
Y160H+E212D+L275V+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306Q+K391A、
H1*+W43Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311R+K391A、
Y160H+E212D+M246L+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E84Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物中で少なくとも≧1.5の改善された相対比活性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
37.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365C、
N195F+Q365S、
N195F+Q365M、
R127L+Q365S、
R127N+Q365S、
S170*+R171*+A174*、
V264I+A265G+Y267F、
Q169*+S170*+A174*、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+V291T+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
R127H+M246I+Q365C+V481A、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物中において少なくとも≧2.0の改善された相対比活性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
38.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365C、
S170*+R171*+A174*、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、配列番号2の親α-アミラーゼと比較した洗浄性能の尺度として、モデル洗剤A組成物中において少なくとも≧2.5の改善された相対比活性を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載のα-アミラーゼ変異体。
39.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
M202L、
R181S+G184S、
F113Q+R116H、
V264I+L357F、
Y267F+Q365S、
R171H、
R171Y+N306K、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
R171Y++M246L+Q365S、
F328L+Q365S、
R127L、
R127N+Q365S、
R127L+Q365C、
R127L+Q365S、
R127L+M246V+Q365S、
A186D+N195F、
V264I+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
V264I+V291T+Q365K、
A60S+R171Y+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
Q11H+Y267F+Q365C、
V104A+N195F+Q365S、
V264I+V291I+Q365S、
V264I+Y267F+Q365S、
F113T+R171K+G273V、
Q169*+S170*+A174*、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
R171H+M246L+L275V+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
V264T+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365S、
R127N+M246L+L275V+Q365S、
I9M+N195F+N270G+Q365S、
I9M+N195F+N270P+Q365S、
V264T+Y267L+F328L+Q365C、
V264I+A265G+V291A+Q365C、
W187M+N195F+H210K+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q169*+S170*+R171*+A174*、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+W284Y+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
40.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
M202L、
R181S+G184S、
F113Q+R116H、
Y267F+Q365S、
R171H、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
R171Y++M246L+Q365S、
F328L+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
V264I+V291T+Q365K、
A60S+R171Y+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S、
V264T+Y267F+Q365S、
V264I+F328L+Q365S、
Q11H+Y267F+Q365C、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+N195F+V291A+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365C、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
41.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M202L、
R171H+Q365C、
R171L+Q365S、
R171H+N302H+Q365S、
R171L+N302H+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
42.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
M202L、
R171H+Q365C、
I9M+N195F+Q365C、
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
43.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、AMSAを用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
44.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
R171L+Q365S、
Y267F+Q365S、
R127L+Q365S、
V264I+F328L+Q365C、
M246L+L275V+Q365S+D406H、
Q11H+V264I+A265G+Q365C、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y267F+V291A+F328L+Q365S、
V264I+Y267F+F328L+Q365K、
R127H+L235I+Q365S+G435C、
N195F+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
I9M+R171H+N195F+Q365S、
I9M+A186H+N195F+Q365S、
I9M+G184K+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
45.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
I9M+N195F+Q365C、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+Y160H+N195F+Q365S、
I9M+A186E+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
46.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
47.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
48.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206LK+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
48.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、40℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
49.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
Y295F、
M246L、
N195F+Q365S、
R171H+Q365C、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.1の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
50.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
N195F+Q365S、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.2の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
51.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
N195F+Q365S、
V264I+A265G+Y267F、
E86L+R171L+N306R+Q365S、
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
I9M+R127N+N195F+Q365S、
I9M+R171L+N195F+Q365S、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.3の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
52.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
V264I+A265G+Y267F
V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S
I9M+R171L+N195F+Q365S
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧1.5の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
53.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧2.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
54.前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K
からなる群から選択され、ここで、前記変異体は、45℃で実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて評価される漂白剤含有ADW洗剤組成物中で少なくとも≧3.0の改善度(IF)を有する、先行パラグラフのいずれか1つに記載の変異体。
55.パラグラフ1~54のいずれか1つに記載の前記変異体をコードするポリヌクレオチド。
56.パラグラフ55に記載の前記ポリヌクレオチドを含む、核酸構築物。
57.パラグラフ55に記載の前記ポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
58.パラグラフ55に記載の前記ポリヌクレオチド、パラグラフ56に記載の前記核酸構築物、又は57に記載の前記発現ベクターを含む、宿主細胞。
59.α-アミラーゼ変異体を生産する方法であって、以下:前記変異体の発現に好適な条件下で、パラグラフ58に記載の前記宿主細胞を培養するステップ;及び(b)前記変異体を回収するステップを含む方法。
60.パラグラフ1~54のいずれか1つに記載の変異体と、少なくとも1つの追加の活性成分と、を含む組成物。
61.1つ又は複数の追加の活性成分が、以下:1種若しくは複数種の酵素、酸化剤、漂白活性化剤、漂白触媒、キレート剤、増量剤、ビルダー、緩衝剤、構造化剤(structurant)、金属イオン封鎖剤、光学増白剤、消泡剤、酵素、芳香剤、再汚染防止剤、結晶成長阻害剤、金属ケア剤、ガラスケア剤、皮膚コンディショニング剤、柔軟剤、乳化剤、及び着色料からなる群から選択される、パラグラフ60に記載の組成物。
62.追加酵素が、プロテアーゼ、アミラーゼ、ホスホ-リパーゼ、エステラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、キシログルカナーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ヘミセルラーゼペクチンリアーゼ、キサンタナーゼ、ペロキシダーゼ、ケラチナーゼ、ハロペロキシゲナーゼ、カタラーゼ、マンナーゼ、レキナーゼ、RNase、DNAse、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペント-サナーゼ、マラナーゼ、β-グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、及びラッカーゼ又はこれらの任意の混合物からなる群から選択される、パラグラフ60~61に記載の組成物。
63.界面活性剤をさらに含み、界面活性剤が、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、ノニオン性界面活性剤、双イオン性界面活性剤、及び両性界面活性剤、又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される1種若しくは複数種の界面活性剤である、パラグラフ60~62に記載の組成物。
64.前記組成物が、洗剤組成物である、パラグラフ60~63のいずれか1つに記載の組成物。
65.洗剤組成物が、液体ランドリー洗剤組成物、粉末ランドリー洗剤組成物、液体食器洗浄洗剤組成物、又は粉末食器洗浄洗剤組成物である、パラグラフ60~64に記載の組成物。
66.前記組成物が、液体又は粉末ランドリー洗剤組成物である、パラグラフ60~65に記載の組成物。
67.前記組成物が、液体又は粉末自動食器洗浄(ADW)洗剤組成物である、パラグラフ60~66に記載の組成物。
68.前記組成物が、手洗い用食器洗浄液体洗剤組成物である、パラグラフ60~67のいずれか1つに記載の組成物。
69.家庭用又は産業用クリーニング工程における、パラグラフ1~54のいずれか1つに記載の変異体、又はパラグラフ60~68のいずれか1つに記載の組成物の使用。
70.布地のクリーニング、例えば、ランドリーを目的とする、パラグラフ69に記載の使用。
71.硬質面のクリーニング、セラミック、金属、プラスチック又はガラス材料のクリーニング、例えば、食器洗浄を目的とする、パラグラフ70に記載の使用。
72.汚染物で汚染された布地又は硬質面を、パラグラフ60~68のいずれか1つに記載の組成物と接触させるステップを含む、布地又は硬質面からの汚染物を除去する方法。
73.布地のクリーニング、例えば、ランドリーを目的とする、パラグラフ72に記載の方法。
74.硬質面のクリーニング、例えば、食器洗浄を目的とする、パラグラフ72に記載の方法。
75.前記方法が、自動食器洗浄機を用いて実施される、パラグラフ74に記載の方法。
76.パラグラフ60~68のいずれか1つに記載の組成物を用いて、自動食器洗浄機で食器を洗浄する方法であって、前記自動食器洗浄機内の洗剤組成物コンパートメントに前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む、方法。
77.パラグラフ60~68のいずれか1つに記載の組成物を用いて、自動洗濯機で洗濯する方法であって、前記自動洗濯機内の洗剤組成物コンパートメントに前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む、方法。
78.配列番号2のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも59%の配列同一性を有する親α-アミラーゼの性能、例えば、洗浄性能を改善させる方法であって、前記方法が、a)番号付けのために配列番号1を用いて、位置:R181、G182、D183、及びG184に対応する2つ以上の位置に置換及び/又は欠失を導入するステップ;並びにb)番号付けのために配列番号1を用いて、以下:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び/又は481からなる群から選択される1つ又は複数の位置に欠失及び/又は置換を導入するステップを含み;前記方法は、これによって前記親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を提供し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性と、配列番号2に示されるα-アミラーゼ活性を有する前記親α-アミラーゼと比較して改善した性能と、を有する方法。
本発明を以下の実施例によりさらに説明するが、これらは、本発明の範囲を制限するものとして解釈すべきではない。
材料及び方法

GH13_5 α-アミラーゼをコードするDNAは、デンマーク国内で収集した汚染物サンプルから単離されたバチルス属種(Bacillus sp)から単離し、国際公開第2000/060058号パンフレットに記載のようにシーケンシングした。
緩衝剤及び基質として使用される化学物質は、少なくとも試薬グレードの市販の製品であった。
CS-28スワッチ-DM-277(二重汚染ミックスデンプン)は、Center for Testmaterials BV,Stoomloggerweg 11,3133 KT Vlaardingen,the Netherlandsから購入した。
α-アミラーゼ活性のアッセイ
1.PNP-G7アッセイ
α-アミラーゼ活性は、pNP-G7基質(PNP-G7:4,6-エチリデン(G7)-p-ニトロフェニル(G1)-α,D-マルトヘプタオシドの略語、即ち、エンド-アミラーゼ、例えばα-アミラーゼにより切断される遮断オリゴ糖)を使用することによって決定した。
抗体をリン酸緩衝食塩水(PBS)(0.010Mリン酸緩衝液pH7.4、0.0027M KCl、0.14M NaCl)バッファーで10μg/mlの濃度まで希釈した。maxisorpマイクロタイタープレートは、各ウェルに100μlの希釈抗体(10μg/ml)を添加後、室温(RT)で1時間インキュベートした後、800rpmで混合することにより抗体でコーティングした。インキュベーション後、マイクロタイタープレートを、0.05%Tween(PBST)(0.010Mリン酸緩衝液pH7.4、0.0027M KCl、0.14M NaCl、0.05%Tween 20)バッファーを含む3×200μlのリン酸緩衝食塩水で洗浄した(Bio-Tek EL×405 ELISAウォッシャーを用いて)。
α-アミラーゼ変異体培養ブロスを含むマイクロタイタープレートをスピンダウンし、上清を新しいマイクロタイタープレートに移してから、PBSTバッファーで4×希釈した。100μlの希釈上清を抗体被覆maxisorpマイクロタイタープレートに移し、RT及び800rpmで混合しながら、1時間インキュベートした。インキュベーションの後、マイクロタイタープレートをPBSTバッファー(3×200μl、ELISAウォッシャー)で洗浄した。
pNP-G7基質の切断後、使用するキットに含まれるα-グルコシダーゼを消化すると、加水分解した基質が、黄色の色をした遊離pNP分子を遊離し、従って、Abs=405nm(400~420nm)の可視分光法により計測することができる。pNP-G7基質及びα-グルコシダーゼを含有するキットは、Roche/Hitachi(cat.No.11876473)により製造されている。100μlのpNP-G7基質を全てのウェルに添加し1分間混合した後、405nmで吸光度を計測した。傾き(吸光度毎分)を決定し、曲線の線形範囲のみを使用する。
時間依存性吸光曲線の傾きは、所与のセットの条件下で、当該α-アミラーゼの活性と直接比例する。
また、α-アミラーゼ比活性は、他の活性アッセイ、例えば、アミラーゼ活性アッセイ、Phadebas活性アッセイ、又は以下に記載する還元糖活性アッセイなどにより決定することもできる。
2.アミラザイム活性アッセイ
アミラザイム活性アッセイ(Megazyme,Ireland製):アミラザイム錠剤は、連結したアミロースポリマーであり、これらは、水不溶性の球状マイクロスフェアの形態をしている。青色色素がこれらのマイクロスフェアに共有結合している。マイクロスフェア中の連結アミロースポリマーは、α-アミラーゼ活性と比例する速度で分解される。α-アミラーゼがアミロースポリマーを分解すると、放出された青色色素は水溶性となり、色素の濃度は、650nmで吸光度を計測することにより決定することができる。青色の濃度は、サンプル中のα-アミラーゼ活性に比例する。
分析対象のアミラーゼサンプルを所望のpHを有する活性バッファーで希釈する。1基質錠剤を5mLの活性バッファー中に懸濁させ、マグネチックスターラの上で混合する。基質の混合中に、150μlをマイクロタイタープレート(MTP)に移す。30μlの希釈アミラーゼサンプルを150μlの基質に添加し、混合する。37℃で15分インキュベートする。30μlの1M NaOHを添加することにより反応を停止し、混合する。MTPを4000×gで5分遠心分離する。100μlを新しいMTPに移し、620nmで吸光度を計測する。
アミラーゼサンプルは、650nmでの吸光度が、0~2.2であり、且つ、活性アッセイの線形範囲内となるように、希釈する必要がある。
3.Phadebasアッセイ
Phadebas錠剤(例えば、Magle Life Sciences,Lund,Sweden製)は、連結したデンプンポリマーを含み、これらは、水不溶性の球状マイクロスフェアの形態をしている。青色色素がこれらのマイクロスフェアに共有結合している。マイクロスフェア中の連結デンプンポリマーは、α-アミラーゼ活性と比例する速度で分解される。α-アミラーゼがデンプンポリマーを分解すると、放出された青色色素は水溶性となり、色素の濃度は、650nmで吸光度を計測することにより決定することができる。青色の濃度は、サンプル中のα-アミラーゼ活性に比例する。
分析対象のアミラーゼサンプルを所望のpHを有する活性バッファーで希釈する。1基質錠剤を5mLの活性バッファー中に懸濁させ、マグネチックスターラの上で混合する。基質の混合中に、150μlをマイクロタイタープレート(MTP)に移す。30μlの希釈アミラーゼサンプルを150μlの基質に添加し、混合する。37℃で15分インキュベートする。30μlの1M NaOHを添加することにより反応を停止し、混合する。MTPを4000×gで5分遠心分離する。100μlを新しいMTPに移し、620nmで吸光度を計測する。
計測された吸光度は、所与のセットの条件下で、当該α-アミラーゼの比活性(純粋α-アミラーゼタンパク質の活性/mg)と直接比例する。
4.還元糖活性アッセイ
デンプン中のα-1,4-グリコシド結合を加水分解するα-アミラーゼにより形成された還元末端の数を、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PHBAH)との反応により決定する。PHBAHとの反応後、還元末端の数は、405nmでの吸光度により計測することができ、還元末端の濃度は、サンプル中のα-アミラーゼ活性に比例する。
トウモロコシデンプン基質(3mg/ml)を、milliQ水中で5分煮沸することにより可溶化した後、アッセイまで冷却させる。停止液のために、Ka-Na-酒石酸塩/NaOH溶液(K-Na-酒石酸塩(Merck 8087)50g/l、NaOH 20g/l)を調製し、p-ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド(PHBAH,Sigma H9882)をKa-Na-酒石酸塩/NaOH溶液に15mg/mlまで添加することにより新しく停止液を調製する。
PCR-MTPにおいて、50μlの活性バッファーを50μlの基質と混合する。50μlの希釈酵素を添加し、混合する。PCR装置にて所望の温度で5分インキュベートする。75μlの停止液(Ka-Na-酒石酸塩/NaOH/PHBAH)を添加することにより、反応を停止する。PCR装置にて95℃で10分インキュベートする。150μlを新しいMTPに移し、405nmで吸光度を計測する。
計測された吸光度は、所与のセットの条件下で、当該α-アミラーゼの比活性(純粋α-アミラーゼタンパク質の活性/mg)と直接比例する。
実施例1:配列番号2に記載される親ポリペプチドの構築
配列番号2に記載されるアミノ酸配列を有するポリペプチド(親ポリペプチド)の構築。ポリペプチドは、グリコシドヒドロラーゼGH13ファミリー、サブファミリー5に属する修飾α-アミラーゼ(EC 3.2.1.1)である。
実施例2:変異体の作製
配列番号2に記載されるアミノ酸配列を有する親α-アミラーゼを用いて、本発明の変異体を構築した。変異体は、標準的手順により作製したが、手短には、以下からなる:遺伝子への部位指定突然変異誘発により、配列番号2にアミノ酸置換を導入するステップ、枯草菌(Bacillus subtilis)宿主細胞を変異遺伝子で形質転換するステップ、形質転換細胞を発酵させるステップ(例えば、国際公開第2004/111220号パンフレットの実施例1に記載の通り)、及び発酵ブロスから変異体を精製するステップ。参照アミラーゼ、即ち、配列番号2に記載されるアミノ酸配列を有する親α-アミラーゼは、枯草菌(Bacillus subtilis)において、同様に組換えにより生成した。
番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481に様々な組合せの修飾を実施した変異体のライブラリを作製した。
作製した変異体を以下の実施例に列記する。
実施例3:CS-28スワッチを用いるアミラーゼ活性アッセイ
精製したアミラーゼ変異体は、最初に0.01%Triton X-100、1mM CaClで0.1mg/ml(280nmでの吸光度に基づく濃度)まで希釈した。別の酵素希釈液は、0.01%Triton X-100中である。
96ウェルの各々にCS-28コメデンプン基質スワッチを含むマイクロタイタープレートに、50μlの希釈アミラーゼ(ウェル中の最終濃度:0.04、0.02及び0.01ppm)を150μlのモデルA洗浄溶液(ウェル中のモデル洗剤Aの最終濃度3.45g/l、21°dH水硬度(Ca:Mg:HCO3のモル比=4:1:10))と混合した。攪拌しながら室温で10~15分のインキュベーションの後、20μlの上清を別の96ウェルマイクロタイタープレートに移して、デンプン断片の可溶化量を決定した。デンプン断片をグルコースに加水分解するために、10μlの0.5mg/mlのグルコアミラーゼを添加し、プレートを攪拌しながら室温で10分インキュベートした。次に、140μlのGOD-Perid試薬(0.1Mリン酸カリウム、pH7、0.6g/lグルコースオキシダーゼ(Sigma G6125)、20mg/lのペルオキシダーゼ(Sigma P8125)、1g/lABTS(Roche 102946))を添加し、グルコース濃度は、15分のインキュベーション後に420nmでのプレートリーダによる吸光度リードと比例すると想定した。各サンプルについて、3つの濃度(0.04、0.02及び0.01ppm)を2回反復で計測する。参照サンプル(配列番号2)を全てのプレートに含有させた。各サンプルについて、4-パラメータロジスティック発現:
A420=A420min+(A420max-A420min)/(1+(C/C50)^傾き)
(式中、A420は、計測された吸光度であり、A420minは、最小吸光度であり、A420maxは、最大吸光度であり、Cは、アミラーゼ濃度であり、C50は、0.5*の吸光度をもたらすアミラーゼ濃度(A420min+A420max)であり、傾きは、勾配パラメータである)
に対して、用量-応答曲線を当てはめた(最小二乗法)。A420min、A420max及び傾きは、プレート上の全てのサンプルについて同一であると想定するのに対し、C50は、各サンプルについて当てはめる。サンプルの用量改善度(用量IF)は、以下:
用量IF(サンプル)=C50(参照)/C50(サンプル)
に従って計算する。
Figure 2022524490000003
上に記載した方法により得られる本発明の変異体の用量IFを以下の表2に示す。試験結果は、変異体が、参照アミラーゼ、即ち、親α-アミラーゼに対して、改善した相対活性を有することを明らかに証明している。
Figure 2022524490000004
Figure 2022524490000005
Figure 2022524490000006
Figure 2022524490000007
Figure 2022524490000008
Figure 2022524490000009
Figure 2022524490000010
Figure 2022524490000011
Figure 2022524490000012
Figure 2022524490000013
実施例4:自動機械応力アッセイ(AMSA)を用いた、自動食器洗浄に関するα-アミラーゼ変異体の洗浄性能の評価
食器洗浄洗剤組成物中での選択したα-アミラーゼ変異体の洗浄性能を評価するために、洗浄実験を実施する。自動機械応力アッセイ(AMSA)を用いて、本願のα-アミラーゼ変異体を試験することができる。AMSAでは、多数の小容量酵素-洗剤溶液の洗浄性能を試験可能である。AMSAプレートは、テスト溶液用の多数のスロットと、洗浄される食器洗浄試験片(dishwash monitor)をすべてのスロット開口部に対してしっかりと押し込む蓋とを有する。洗浄の間、プレート、テスト溶液、食器洗浄試験片及び蓋を激しく振盪してテスト溶液と汚れた食器洗浄試験片とを接触させ、規則正しい周期的な振動で機械的応力を加える。さらなる説明については、国際公開第02/42740号パンフレット、特に第23~24頁の段落「Special method embodiments」を参照のこと。
実験は、以下の表3に指定される実験条件下で実施することができる。
Figure 2022524490000014
Milli-Q水にCaCl、MgCl、及びNaHCO(Ca2+:Mg2+:HCO =4:1:10)を添加することにより、水硬度を21°dHに調節した。
洗浄性能は、食器洗浄試験片の色の輝度として計測される。輝度はまた、白色の光を照射した際のサンプルからの反射光の強度として表されることが可能である。サンプルが汚れている場合、きれいなサンプルのものよりも反射光の強度は低い。従って、反射光の強度を用いて洗浄性能を計測することが可能である。
スキャンしたイメージからの光強度の値を抽出するために、イメージからの24ビットピクセル値をレッド、グリーン及びブルー(RGB)の値に変換する。強度値(Int)は、RGB値をベクターとして一緒に加算し、次いで、得られるベクターの長さから算出される。
Figure 2022524490000015
一般的洗浄性能の説明
水硬度調節水(21°dH、Ca:Mg:HCO3の比=4:1:10)、以下に記載する3.94g/Lの洗剤、及び例えば、0.35mgの酵素タンパク質/Lの濃度の本発明の酵素を含む試験溶液を調製した。食器洗浄モニターとして使用される、デンプンで汚れたメラミンタイル(例えば、Center For Testmaterials BV,P.O.Box 120,3133 KT,Vlaardingen,The Netherlands製のDM-277(二重汚染ミックスデンプン)をAMSAプレートに添加した後、45℃で20分間洗浄した。水道水(冷流水)での入念なすすぎ及び暗所での乾燥後、汚れたタイルの光度を、専用のフラットベッドスキャナ(Kodak iQsmart,Kodak,Midtager 29,DK-2605 Brondby,Denmark)を用いて、洗浄性能の尺度として計測した。
洗浄性能を親α-アミラーゼのそれと比較し、親α-アミラーゼの性能結果に1.0の値を割り当て、変異体の結果をこの値と比較する(改善度(IF)値)。
AMSAにより得られた本発明の変異体の洗浄性能は、以下の通りである。
Figure 2022524490000016
Figure 2022524490000017
Figure 2022524490000018
Figure 2022524490000019
Figure 2022524490000020
実施例5:自動食器洗浄(ADW)を用いたα-アミラーゼ変異体の洗浄性能の評価
洗剤ベース組成物中の本発明のα-アミラーゼ変異体の洗浄性能を評価するために、実物大自動食器洗浄(ADW)を用いて、洗浄実験を実施することができる。通常の消費者設定を模した試験条件下でポリペプチドの洗浄性能を試験するために、実物大ADW設定を使用する。
本試験では、Miele GSL2食器洗浄機を用いる40℃及び45℃洗浄プログラムを使用した。
一般的洗浄性能の説明
デンプンで汚れたメラミンタイル(DM-277)(Center For Test materials BV,P.O.Box 120,3133 KT,Vlaardingen,The Netherlands製)を試験材料として使用し、以下に指定する通り(表5及び表6を参照)、21°dHの水を用い、50gのIKW Ballast土の存在下で、「R40℃/8min/Kl55℃」及び「R45℃/8min/Kl55℃」プログラムで洗浄した。各汚れタイプにつき2つのタイルをそれぞれの自動洗浄機に添加した。4回の反復を実施し、各試験条件について平均値を計算した。
約2分の洗浄機プログラムを実施後(洗剤ディスペンサーが開いているとき)、洗剤と本発明のアミラーゼポリペプチドを添加した。実物大洗浄性能実験は、以下に指定される実験条件下で実施した。
Figure 2022524490000021
Figure 2022524490000022
洗浄性能は、メラミンタイルのレミッション値の差として計測された。レミッション値計測は、スペクトルを取得し、レミッション値及び/又は色差の計算を実施するために使用されるColor-Eye 7000(CE7000)を用いて実施した。レミッション値は、イルミナント中にUV光を含まずに460nmで測定した。
本実験の「改善した洗浄性能」という用語は、配列番号2に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドの洗浄性能に対して、本発明の変異体の洗浄性能の変化を示すものとして定義した。変化は、例えば、汚れ除去の増加として認められ得る。改善した洗浄性能は、前述のように決定した。洗浄性能は、1つ以上の上に挙げた条件、即ち、40C/8/Kl55C又は45C/8/Kl55Cのいずれかで、改善度(IF)が少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2であれば、改善したとみなした。
実物大洗浄により得られた本発明の変異体の洗浄性能は、以下の通りである。
Figure 2022524490000023
Figure 2022524490000024
Figure 2022524490000025
Figure 2022524490000026
本明細書に記載され、特許請求されている本発明は、本明細書に開示されている特定の態様によって範囲が限定されるべきではなく、これは、これらの態様は本発明の数々の態様の例示であることが意図されているためである。いずれかの同等の態様は本発明の範囲内であることが意図されている。実際に、本明細書に示され、記載されているものに追加した本発明の種々の改変形態が、前述の記載から当業者には明らかとなるであろう。このような改変形態もまた、添付の特許請求の範囲の範囲内に属することが意図されている。競合する場合には、定義を含む本開示が優先されることとなる。

Claims (15)

  1. 親α-アミラーゼポリペプチドのα-アミラーゼ変異体は、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の位置:1、2、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び481に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、及び前記変異体は、α-アミラーゼ活性を有する、α-アミラーゼ変異体。
  2. 番号付けのために配列番号1を用いて、以下:H1、H2、G7、I9、Q11、N16、N19、N25、A37、W43、W48、N54、V56、Y58、G59、A60、L63、T81、E84、E86、R90、Q98、V104、G109、A111、F113、R116、Q118、Q125、R127、E130、S132、G133、T134、Y135、Q136、A139、G142、N144、G149、R158、Y160、D163、W167、Q169、S170、R171、Q172、L173、A174、N175、R176、Y178、R181、G182、A186、W187、N195、M202、Y203、A204、V206、D209、H210、E212、T227、L235、V238、M246、Q256、K259、V264、A265、E266、Y267、K269、N270、L272、G273、A274、L275、E276、W284、M286、V291、L293、Y295、Y298、Q299、N302、S303、S304、N306、R310、N311、N314、G315、L317、Q319、R320、S323、F328、G337、A339、Q345、D357、Q365、P377、D375、Q385、K391、Q395、R400、D406、W408、V410、S431、G435、W439、R444、Q445、R458、N465、Q466、W469、F473、G476及びV481の位置に対応する1つ又は複数の位置に修飾を含み;ここで、各修飾は、独立に、置換、挿入、若しくは欠失であり、前記変異体は、配列番号1~17のポリペプチドに対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、若しくは少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、前記変異体はα-アミラーゼ活性を有し、及び、前記変異体が、配列番号1又は配列番号2のα-アミラーゼ活性を有する前記親ポリペプチドと比較したとき、洗浄性能の尺度について改善度(IF)>1.0を有する、請求項1に記載のα-アミラーゼ変異体。
  3. 前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、位置:R181、G182、D183、及びG184に対応する2つ以上の位置に欠失を含む、請求項1又は2に記載のα-アミラーゼ変異体。
  4. 前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下の修飾:H1*;H2*、G7A;I9M;Q11H;N16E;N16H;N16Y;N19D;N25K;N25M;N25T;A37V;W43Y;W48Y;N54Q;N54S;V56I;V56T;Y58F;G59A;A60S;A60T;L63F;T81A;E84Q;E86L;R90H;R90N;R90Q;Q98N;V104A;G109A;A111T;F113A;F113G;F113N;F113Q;F113T;F113Y;R116C;R116D;R116F;R116H;R116K;R116N;R116S;R116Y;Q118N;Q118T;Q125G;Q125S;R127A;R127F;R127H;R127L;R127N;R127T;E130D;E130F;E130I;E130K;E130L;E130N;E130S;E130T;E130V;S132A;S132D;S132F;S132L;S132M;S132P;S132T;G133D;T134C;T134E;T134N;T134P;T134R;T134S;T134W;T134Y;T134A;Y135H;Q136D;Q136E;Q136G;Q136N;Q136R;Q136S;A139T;G142H;N144H;G149A;R158C;R158H;R158K;R158Q;R158S;Y160D;Y160F;T160H;Y160N;D163H;W167*;Q169*;Q169E;Q169F;S170*;S170A;R171*;R171H;R171K;R171L;R171Y;Q172*;Q172K;Q172N;Q172S;L173*;L173K;A174*;A174N;A174S;N175*;N175S;R176*;R176A;Y178F;R181*;R181A;R181C;R181E;R181G;R181H;R181K;R181N;R181Q;G182*;G182T;A186D;A186E;A186H;A186K;A186N;A186T;W187M;N195D;N195F;N195H;N195Q;N195Y;M202L;Y203L;A204V;V206L;D209N;H210K;H210N;E212D;T227K;T227N;L235I;V238A;M246I;M246L;M246T;M246V;Q256H;Q256N;K259G;K259H;V264A;V246I;V264T;A265G;E266V;Y267F;Y267H;Y267L;K269M;K269Q;K269R;N270G;N270P;L272I;G273V;A274K;A274S;L275A;L275I;L275V;E276N;W284R;W284Y;M286L;V291A;V291I;V291T;L293I;L293V;Y295F;Y298E;Y298N;Q299N;Q299Y;N302A;N302H;N302K;N302Q;S303G;S304G;S304Q;N306H;N306K;N306Q;N306R;N306Y;R310N;R310S;R310Q;N311K;N311R;N314Q;G315N;L317V;Q319H;R320K;R320Q;R320S;S323T;H323K;F328L;G337D;G337E;A339S;Q345N;Q345R;L357F;Q365A;Q365C;Q365E;Q365H;Q365K;Q365M;Q365S;P377K;P377T;D375H;D375N;D375Y;Q386L;K391A;Q395K;R400S;D406H;W408H;V410I;S431F;G435C;W439R;W439T;R444T;Q445S;R458K;N465G;Q466S;W469N;W469Y;F473I;F473P;F473S;G476K;及びV481Aの1つ又は複数を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載のα-アミラーゼ変異体。
  5. 前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
    A60T、
    Y135H、
    Q169E、
    W48Y、
    A174*、
    M246L、
    R90Q、
    Y203L+V206L、
    Q169F+S170A、
    S132D+G133D、
    N195F+Q365C、
    N195F+Q365S、
    N195F+Q365M、
    R127L+Q365S、
    R127N+Q365S、
    R127L+Q365C、
    N195F+Q365K、
    I9M+N195F、
    R171H+Q365C、
    Y267F+Q365S、
    F328L+Q365S、
    R171L+Q365S、
    N195F+M286L、
    T134P+N195F、
    S170*+R171*+A174*、
    V264I+A265G+Y267F、
    Q169*+S170*+A174*、
    M246L+L275V+Q365S、
    V264I+V291I+Q365S、
    V264I+V291T+Q365K、
    V264I+F328L+Q365C、
    I9M+N195F+Q365C、
    Q11H+Y267F+Q365C、
    I9M+N195F+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K、
    R127L+M246V+Q365S、
    A60S+R171Y+Q365S、
    R127N+M246T+L275V、
    V104A+N195F+Q365S、
    V264I+F328L+Q365S、
    R171H+N302H+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365S、
    A174*+N175*+Y178F、
    V264I+A265G+Q365C、
    R171L+N302H+Q365C、
    R171L+M246V+Q365C、
    R171Y+M246L+Q365S、
    V264T+Y267F+Q365S、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    I9M+R127N+N195F+Q365S、
    R127H+L235I+Q365S+G435C、
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    Q169*+S170*+R171*+A174*、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    R127N+M246L+L275V+Q365S、
    R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R127H+M246I+Q365C+V481A、
    Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
    V264I+Y267F+F328L+Q365S、
    I9M+N195F+V291A+Q365S、
    R127L+L235I+M246I+Q365C、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    W187M+N195F+H210K+Q365S、
    R127H+M246T+L275A+Q365S、
    I9M+A111T+N195F+Q365S、
    I9M+Y58F+N195F+Q365S、
    V264T+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+Q365C、
    V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
    R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
    I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
    R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
    E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
    A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
    R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
    I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
    E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
    R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
    R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S、
    N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
    V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
    Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
    R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
    V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
    E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
    R116C+S132A+Q136S+R181A+N195F+Q365S、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+Q365S、
    R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
    E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
    R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
    R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
    R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
    N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
    E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
    H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+Y58F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195H+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
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    E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
    E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
    E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
    E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
    E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
    E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
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    F328L+Q365S、
    G109A+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    G7A+F113N+R116N+E276N+S304G+R320S+Q345N+W439R+N465G+Q466S+W469Y、
    H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
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    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+W284Y+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
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    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q125G+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
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    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311K+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365H+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V238A+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R127F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
    H1*+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
    I9M+N195F+N270G+Q365S、
    I9M+N195F+N270P+Q365S、
    I9M+N195F+Q365C、
    I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
    I9M+N195F+V291A+Q365S、
    I9M+R127N+N195F+Q365S
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
    I9M+N195F+Q365C、
    I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
    I9M+R127N+N195F+Q365S、
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    M202L、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    M246L、
    M246L+L275V+Q365S、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+Q365S、
    N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
    N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    Q11H+Y267F+Q365C、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    Q169*+S170*+A174*、
    Q169*+S170*+R171*+A174*、
    Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
    R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
    R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
    R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
    R127H+L235I+Q365S+G435C、
    R127L+M246V+Q365S、
    R127L+Q365C、
    R127L+Q365S、
    R127L、
    R127N+M246L+L275V+Q365S、
    R127N+Q365S、
    R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
    R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R171H+Q365C、
    R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R171H+N302H+Q365S、
    R171H、
    R171H+Q365C、
    R171L+N302H+Q365C、
    R171L+Q365S、
    R171Y++M246L+Q365S、
    R171Y+N306K、
    R181S+G184S、
    V104A+N195F+Q365S、
    V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
    V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+Q365C、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F、
    V264I+F328L+Q365C、
    V264I+F328L+Q365S、
    V264I+L357F、
    V264I+Q365C、
    V264I+V291I+Q365S、
    V264I+V291T+Q365K、
    V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    V264I+Y267F+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
    V264I+Y267F+Q365K、
    V264I+Y267F+Q365S、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F、
    V264I+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C、
    V264T+V291A+F328L+Q365S、
    V264T+Y267F+Q365S、
    V264T+Y267L+F328L+Q365C、
    V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    W187M+N195F+H210K+Q365S、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
    Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y267F+Q365S、
    Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    Y267F+Q365S、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    Y295F
    からなる群から選択され、ここで、前記変異体が、前記親α-アミラーゼと比較したとき、モデル洗剤A組成物及び/又は漂白剤を含むADW洗剤組成物中で、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有し、且つ前記親α-アミラーゼが、配列番号2に示されるアミノ酸配列を有する、請求項1~4のいずれか1つに記載の変異体。
  6. 前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
    A60T、
    Y135H、
    Q169E、
    W48Y、
    A174*、
    M246L、
    R90Q、
    Y203L+V206L、
    Q169F+S170A、
    S132D+G133D、
    N195F+Q365C、
    N195F+Q365S、
    N195F+Q365M、
    R127L+Q365S、
    R127N+Q365S、
    R127L+Q365C、
    N195F+Q365K、
    I9M+N195F、
    R171H+Q365C、
    Y267F+Q365S、
    F328L+Q365S、
    R171L+Q365S、
    N195F+M286L、
    T134P+N195F、
    S170*+R171*+A174*、
    V264I+A265G+Y267F、
    Q169*+S170*+A174*、
    M246L+L275V+Q365S、
    V264I+V291I+Q365S、
    V264I+V291T+Q365K、
    V264I+F328L+Q365C、
    I9M+N195F+Q365C、
    Q11H+Y267F+Q365C、
    I9M+N195F+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K、
    R127L+M246V+Q365S、
    A60S+R171Y+Q365S、
    R127N+M246T+L275V、
    V104A+N195F+Q365S、
    V264I+F328L+Q365S、
    R171H+N302H+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365S、
    A174*+N175*+Y178F、
    V264I+A265G+Q365C、
    R171L+N302H+Q365C、
    R171L+M246V+Q365C、
    R171Y+M246L+Q365S、
    V264T+Y267F+Q365S、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    I9M+R127N+N195F+Q365S、
    R127H+L235I+Q365S+G435C、
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    Q169*+S170*+R171*+A174*、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    R127N+M246L+L275V+Q365S、
    R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R127H+M246I+Q365C+V481A、
    Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
    V264I+Y267F+F328L+Q365S、
    I9M+N195F+V291A+Q365S、
    R127L+L235I+M246I+Q365C、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    W187M+N195F+H210K+Q365S、
    R127H+M246T+L275A+Q365S、
    I9M+A111T+N195F+Q365S
    I9M+Y58F+N195F+Q365S、
    V264T+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+Q365C、
    V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
    R127N+M246I+A265G+Y267H+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    R127N+M246L+L275V+N306R+Q365S、
    I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
    R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
    E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
    A37V+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    Q169*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
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    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
    I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
    E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
    R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    R158Q+Y160N+W187M+N195F+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
    R127N+R171Y+M246L+L275V+Q365S、
    N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
    V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
    Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
    R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
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    E130N+T134S+R181N+A186K+N195F+Q365S、
    E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130D+T134W+R181KA186E+N195F+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
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    R127H+R171H+M246L+L275V+N306R+Q365S、
    E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
    R116C+S132M+Q136S+R181Q+N195F+Q365S、
    R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
    R116S+S132L+Q136E+R181G+N195F+Q365S、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
    N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
    E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    E130K+S132T+T134Y+R181T+A186K+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
    W167*+Q169*+S170*+R171*+Q172*+L173*+A174*+N175*+R176*、
    H1*+G59A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+Y58F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293I+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+D209N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195D+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195H+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
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    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275I+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337E+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N25K+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R127T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D209N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R127N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+L63F+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L275V+K391A、
    H1*+N19D+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    A60S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171L+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G337D+K391A、
    H1*+N25M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+T81A+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N25T+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+R90N+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R158C+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L293V+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L272I+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R158H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+G109A+K391A+N16Y+N54S+V56T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R158S+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    R127N+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+A274S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186E+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+R90H+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    I9M+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+Q172S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184H+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365C+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306H+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302H+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365E+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+A186H+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+A60S+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+R181S+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172S+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+E86L+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302K+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R127L+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+R171Y+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V291A+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
    Y160H+R171L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+G109A+K391A+N54S+V56T+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q118N+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+T134P+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*N195F+V206L+Q299Y+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306K+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365A+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q299N+K391A、
    Y160H+E212D+L275V+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306Q+K391A、
    H1*+W43Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311R+K391A、
    Y160H+E212D+M246L+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+E84Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R158K+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    V56T+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    N54S+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+Q256H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q125G+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N311K+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K269M+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+K391A、
    Y160H+E212D+K259G+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+A174S+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+N195Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+Q169E+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    G7A+F113N+R116N+E276N+S304G+R320S+Q345N+W439R+N465G+Q466S+W469Y、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+D377H+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+V238A+K391A、
    Y160H+N195F+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+Q256N+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365H+K391A、
    Y160H+N195Q+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+R171Y+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    G109A+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R127F+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+L173K+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306R+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+G142H+N144H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N302Q+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+T227K+K269R+K391A、
    H1*+N54S+V56I+G109A+R127A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q385L+K391A、
    Y160H+E212D+Q256H+K259H+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+G315N+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172N+A174*+N175S+N195F+V206L+K391A+S431F、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+S304G+N306Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+L235I+V238A+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q172S+L173K+A174S+N175*+R176A+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    V56T+Y160H+A174N+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    H1*+N54S+V56T+R90Q+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+E266V+Q385L+K391A、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V20+6L+Q385L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+F113A+R116D+Q118T+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Y298E+N302K+S303G+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N314Q+Q385L+K391A、
    H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S
    からなる群から選択され、ここで、前記変異体が、前記親α-アミラーゼと比較したとき、モデル洗剤A組成物中で、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有し、且つ、前記親α-アミラーゼが、配列番号2を有する、請求項1~5のいずれか1つに記載の変異体。
  7. 前記変異体が、番号付けのために配列番号1を用いて、以下:
    A139T+R158S+Y160D+W187M+N195F+H210N+Q365S、
    A186D+N195F、
    A60S+R171Y+Q365S、
    E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
    E130D+T134Y+R181H+N195F+Q365S、
    E130D+T134W+R181K+A186E+N195F+Q365S、
    E130F+T134R+R181S+A186D+N195F+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    E130I+T134A+R181N+N195F+Q365S、
    E130L+T134N+R181W+A186T+N195F+Q365S、
    E130N+T134C+R181Q+A186N+N195F+Q365S、
    E130S+T134E+R181S+A186T+N195F+Q365S、
    E130T+T134Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130V+T134N+R181Y+A186K+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    E130Y+S132T+T134S+R181E+A186D+N195F+Q365S、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
    E86L+Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    E86L+R171L+N306R+Q365S、
    F113Q+R116H、
    F113T+R171K+G273V、
    F328L+Q365S、
    H1*+I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+F113G+R116H+D163H+Q169E+R171H+Q172K+A174S+G182T+N195F+M202L+V206L+M246L+L275V+A288V+L317V+Q319H+H324K+Q365S+K391A、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+W284Y+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+N306R+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+I9M+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16H+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N16Y+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G184K+N195F+V206L+T227N+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+R320S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+M246L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+Q365S+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+R171H+N195F+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+M202L+V206L+K391A、
    H1*+N54S+V56T+G109A+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+N195F+V206L+K391A、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    I9M+N195F+K269Q+A274K+Q365S、
    I9M+N195F+N270G+Q365S、
    I9M+N195F+N270P+Q365S、
    I9M+N195F+Q365C、
    I9M+N195F+V206L+D209N+Q365S、
    I9M+N195F+V291A+Q365S、
    I9M+R127N+N195F+Q365S
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    I9M+Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    I9M+A186E+N195F+Q365S、
    I9M+A186H+N195F+Q365S、
    I9M+G184K+N195F+Q365S、
    I9M+N16Y+N54S+V56T+G109A+R116Y+Q118T+Q125S+Q136E+Y160H+Q169E+Q172K+A174*+R181H+N195F+M202L+V206L+R310N+R320Q+Q365S+K391A+R400S+W408H+R444T+Q445S+Q466S、
    I9M+N195F+Q365C、
    I9M+N54S+V56T+G109A+G149A+Q169E+Q172K+A174*+G182T+N195F+M202L+V206L+Y295F+Q299Y+R320K+S323T+A339S+Q345R+Q365S+K391A+R458K、
    I9M+R127N+N195F+Q365S、
    I9M+R171H+N195F+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+M246L+K269M+W284R+Y298N+Q365S、
    I9M+R171L+N195F+Q365S、
    I9M+Y160H+N195F+Q365S、
    M202L、
    M246L、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    M246L+L275V+Q365S、
    M246L+L275V+Q365S+D406H、
    N16E+N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    N16E+N195F+G337E+Q365S+P375T+D377H、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    N16Y+Y160H+N195F+L275I+S304G+G337E+Q365S、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+G337D+Q365S+P375K+D377Y、
    N195F+G337E+Q365S+P375K+D377N、
    N195F+Q365S、
    N54Q+F113T+R171H+N302A+Q365C、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    Q11H+V264I+A265G+Y267F+Q365C、
    Q11H+V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    Q11H+Y267F+Q365C、
    Q11H+V264I+A265G+Q365C、
    Q169*+S170*+A174*、
    Q169*+S170*+R171*+A174*、
    Q98N+F113Y+R158Q+Y160F+S304Q+R320S+W439R+F473P、
    R116K+S132L+Q136R+R181C+N195F+Q365S、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    R116K+S132P+Q136D+R181Q+N195F+A204V+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    R116N+S132M+Q136R+N195F+Q365S、
    R116N+S132A+Q136D+R181K+N195F+Q365S、
    R116S+S132F+R181N+N195F+Q365S、
    R116S+Y135H+Q136G+R181T+N195F+Q365S、
    R116Y+S132P+Q136N+N195F+Q365S、
    R127H+L235I+Q365S+G435C、
    R127L、
    R127L+M246V+Q365S、
    R127L+Q365C、
    R127L+Q365S、
    R127N+M246L+L275V+Q365S、
    R127N+Q365S、
    R127N+R171L+M246L+L275V+Q365S、
    R127N+R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R171H、
    R171H+Q365C、
    R171H+M246L+L275V+Q365S、
    R171H+N302H+Q365S、
    R171H+Q365C、
    R171L+N302H+Q365C、
    R171L+Q365S、
    R171Y++M246L+Q365S、
    R171Y+N306K、
    R181S+G184S、
    V104A+N195F+Q365S、
    V264A+Y267F+V291T+F328L+Q365C、
    V264I+A265G+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+V291A+Q365C、
    V264I+A265G+Y267F、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F+F328L+Q365S+Q395K、
    V264I+A265G+Y267F+V291I+F328L+Q365S、
    V264I+F328L+Q365C、
    V264I+F328L+Q365S、
    V264I+L357F、
    V264I+Q365C、
    V264I+V291I+Q365S、
    V264I+V291T+Q365K、
    V264I+Y267F+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    V264I+Y267F+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+Q365K、
    V264I+Y267F+Q365K+W408H+V410I、
    V264I+Y267F+Q365S、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    V264I+A265G+Y267F、
    V264I+F328L+Q365C、
    V264I+Y267F+F328L+Q365K、
    V264I+Y267F+V291T+F328L+Q365S、
    V264T+A265G+Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    V264T+A265G+Y267L+F328L+Q365C、
    V264T+V291A+F328L+Q365S、
    V264T+Y267F+Q365S、
    V264T+Y267L+F328L+Q365C、
    W187M+N195F+H210K+Q365S、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+E212D+E276N+W284Y+R320S+Q365S+W408H+W439T+W469N+F473S+G476K、
    Y160H+M202L+E212D+E276N+W284Y+R320S+W408H+W439T+W469N+F473I+G476K、
    Y267F+Q365S、
    Y267F+V291A+F328L+Q365C、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    Y267F+Q365S、
    Y267F+V291A+F328L+Q365S、
    Y295F
    からなる群から選択され、ここで、前記変異体が、前記親α-アミラーゼと比較したとき、漂白剤を含むADW洗剤組成物中で、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.2、例えば少なくとも1.3、例えば少なくとも1.4、例えば少なくとも1.5、例えば少なくとも1.6、例えば少なくとも1.7、例えば少なくとも1.8、例えば少なくとも1.9、例えば少なくとも2.0、例えば少なくとも2.2、例えば少なくとも2.4、例えば少なくとも2.6、例えば少なくとも2.8、例えば少なくとも3.0、例えば少なくとも3.2、例えば少なくとも3.4、例えば少なくとも3.6、例えば少なくとも3.8、又は例えば少なくとも4.0の改善度(IF)を有し、且つ、前記親α-アミラーゼが、配列番号2を有する、請求項1~6のいずれか1つに記載の変異体。
  8. 請求項1~7のいずれか1項に記載の変異体と、少なくとも1種の別の活性成分を含む、組成物。
  9. 前記組成物が、洗剤であり、前記洗剤組成物が、液体ランドリー洗剤組成物、粉末ランドリー洗剤組成物、液体食器洗い洗剤組成物、又は粉末食器洗い洗剤組成物である、請求項8に記載の組成物。
  10. 前記組成物が、液体又は粉末自動食器洗い(ADW)洗剤組成物である、請求項8又は9に記載の組成物。
  11. 家庭用又は産業クリーニング工程における、請求項1~7のいずれか1項に記載の変異体、又は請求項8~10のいずれか1項に記載の組成物の使用。
  12. 請求項8~10のいずれか1項に記載の組成物と、汚染物で汚染された布地又は硬質面とを接触させるステップを含む、布地又は硬質面からの汚染物の除去方法。
  13. 請求項8~10のいずれか1項に記載の組成物を用いて、自動食器洗浄機で食器洗浄する方法であって、前記自動食器洗浄機の洗剤組成物コンパートメント内に前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む方法。
  14. 請求項8~10のいずれか1項に記載の組成物を用いて、自動洗濯機で洗濯する方法であって、前記自動洗濯機の洗剤組成物コンパートメント内に前記洗剤組成物を添加するステップ、及び主要洗浄サイクル中に前記洗剤組成物を放出するステップを含む方法。
  15. 配列番号2のアミノ酸配列を有するか、又はそれに対して少なくとも59%の配列同一性を有する親α-アミラーゼの性能、例えば、洗浄性能を改善する方法であって、前記方法が、a)番号付けのために配列番号1を用いて、R181、G182、D183及びG184に対応する2つ以上の位置に欠失及び/又は置換を導入するステップ;並びにb)番号付けのために配列番号1を用いて、以下:1、7、9、11、16、19、25、37、43、48、54、56、58、59、60、63、81、84、86、90、98、104、109、111、113、116、118、125、127、130、132、133、134、135、136、139、142、144、149、158、160、163、167、169、170、171、172、173、174、175、176、178、181、182、186、187、195、202、203、204、206、209、210、212、T227、235、238、246、256、259、264、265、266、267、269、270、272、273、274、275、276、284、286、291、293、295、298、299、302、303、304、306、310、311、314、315、317、319、320、323、328、337、339、345、357、365、377、375、385、391、395、400、406、408、410、431、435、439、444、445、458、465、466、469、473、476及び/又は481からなる群から選択される1つ若しくは複数の位置に欠失及び/又は置換を導入するステップを含み;前記方法が、これによって前記親α-アミラーゼのα-アミラーゼ変異体を提供し、ここで、前記変異体は、配列番号1~17に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも59%、例えば少なくとも60%、例えば少なくとも65%、例えば少なくとも70%、例えば少なくとも75%、例えば少なくとも80%、例えば少なくとも85%、例えば少なくとも90%、例えば少なくとも95%、例えば少なくとも97%、例えば少なくとも99%、しかし100%未満の配列同一性を有し、且つ、前記変異体は、α-アミラーゼ活性と、親α-アミラーゼと比較して改善した性能と、を有する方法。
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