CN106414698B - 洗涤剂组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含具有半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤剂。本发明进一步涉及湿洗方法和半乳聚糖酶的用途。本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性的多肽、编码该多肽的核苷酸、连同生产这些多肽的方法。

Description

洗涤剂组合物

对序列表的引用

本申请包括计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

发明领域

本发明涉及包含半乳聚糖酶的洗涤剂。本发明进一步涉及湿洗方法和半乳聚糖酶的用途。本发明进一步涉及具有半乳聚糖酶活性的多肽、编码该多肽的核苷酸、连同生产这些多肽的方法。

发明背景

在许多自然、工业和医疗环境中，微生物一般附着于表面而生存，由包括生物聚合物和高分子的细胞外物质进行囊化。经粘液囊化的微生物所产生的层被称为生物膜。

生物膜是细菌在自然环境中生长的主要模式，并且在生物膜中生长的细菌表现出独特的生理性质。与其浮游生长的对应物相比，生物膜中的细菌更耐受抗生素、紫外光照射、洗涤剂和宿主免疫应答。

许多年来，从衬衫和上衣去除腋下汗水形成的斑是已知的问题。这种污渍很难溶解并且通常包含大量不同的组分。当使用衣物(像T恤或运动衣)时，它们暴露于来自使用者的身体和来自它们使用的环境的其余部分的细菌。这些细菌中的一些能够粘附于衣物物品并且在该物品上形成生物膜。细菌的存在意味着，衣物物品变得粘稠，并且因此污垢粘附在粘稠区域上。这种污垢已经显示出难以通过可商购的洗涤剂组合物来去除。此外，当非常脏的衣物物品与不太脏的衣物物品一起洗涤时，洗涤液中存在的污物倾向于附着于生物膜上。其结果是，该衣物物品在洗涤后比洗涤前更“脏”。

温度对溶解和消除汗水污渍的组分具有显著影响。不充分的汗水污渍去除会导致腋下区域的变色。如果该衣物与其他非常脏的衣服一起洗涤时，这种变色会增加。运动服是很好的例子，因为在与非常带汗味的衬衫一起洗涤的衣服上经常有污垢、粘土和交通灰尘。洗来洗去，该汗水污渍变得越来越有色以至于它们最终表现为显色的斑点。这种污物是人们丢弃他们的衣服的一个原因。虽然这个问题对于大多数衣物是熟知的，但这个问题对混合织物是非常明显的。欧洲政治界有为衣物节约资源的愿望，这已经导致在欧盟他们采取针对洗衣机的标签法以排除高需求的机器。这意味着冷水洗涤在欧盟中远远更普遍，并且因此变得更像世界其他地方的洗涤环境。这表示有这样的风险：相比于丢弃衣服和买新衣服，能源消耗从热洗涤移动并去除更多的汗水污渍。存在一种迫切需要以解决有效地去除汗渍的问题。

发明概述

本发明涉及一种包含多肽的洗涤剂组合物，该多肽具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性和洗涤剂佐剂成分。

本发明进一步涉及用于清洁或湿洗物品的清洁或湿洗方法，该方法包括以下步骤：

a.将物品暴露于包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤液或包含洗涤剂组合物(该洗涤剂组合物包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽)的洗涤液；

b.完成至少一个洗涤周期；并且

c.任选地漂洗该物品，

其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

另外，要求保护的是具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途。

本发明进一步涉及具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽、编码该多肽的核苷酸以及生产该多肽的方法。

定义

术语“自动餐具洗涤组合物”是指旨在在洗碗机中清洁餐具，例如盘子、杯子、玻璃杯、碗、用餐工具(例如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯的组合物。

该术语涵盖经选择用于家庭或工业洗涤应用的任何材料/化合物并且产品形式可以是液体、粉末或颗粒。除内切-β-1,6-半乳聚糖酶之外，自动餐具洗涤组合物包含洗涤剂组合物如酶、聚合物、漂白系统、漂白活化剂、漂白催化剂、硅酸盐、染料和金属护理剂。

等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然发生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(在编码的多肽方面无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。

生物膜：生物膜是在表面上，例如纺织品、餐具或硬表面上，细胞彼此粘附在一起的任何群组的微生物。这些粘附细胞经常包埋在胞外高聚物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外的DNA、蛋白、和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体培养基中漂浮或浮游的单个细胞)是在生理上不同的。

生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为被膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个益处是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为，密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。

在衣物上，会发现产生生物膜的细菌是在以下物种中：不动杆菌属物种、气微菌属物种、短波单胞菌属物种、微杆菌属物种、滕黄微球菌、假单胞菌属物种、表皮葡萄球菌、干燥棒杆菌和寡养单胞菌属物种。

cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录物本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。

编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定，该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。

对照序列：术语“控制序列”是指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子，以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。

洗涤剂佐剂成分：该洗涤剂佐剂成分不同于本发明的内切-β-1,6-半乳聚糖酶。这些额外佐剂组分的精确性质、其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的佐剂材料包括，但不限于：以下描述的组分，如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”包括(除非另外指明)所有形式的洗涤剂组合物，例如凝胶、颗粒、液体、糊状、粉末、喷雾或片剂组合物，包括重垢液(HDL)、精细织物液体洗涤剂、液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁配制品，用于例如玻璃、木材、陶瓷和金属台面以及窗户；地毯清洁剂；炉灶清洁剂；织物清新剂；织物柔软剂；纺织品和衣物预去污剂(pre-spotter)，连同餐具洗涤剂，例如手洗餐具洗涤剂、轻垢餐具洗涤剂、机洗餐具洗涤剂(例如自动餐具洗涤(ADW))；通用或重垢清洗剂，液体、凝胶或糊状形式的通用清洗剂、液体清洁和消毒剂，包括抗细菌手洗类型、清洁棒、漱口水、义齿清洁剂、汽车或地毯香波、浴室清洁剂；头发香波和头发漂洗剂(hair-rinse)；淋浴露、泡沫浴；金属清洁剂；连同清洁辅助剂，例如漂白添加剂和“去污棒(stain-stick)”或预处理类型。洗涤剂组合物包括用于衣物、硬表面清洁、自动餐具洗涤、手工餐具洗涤、ADW、工业清洁的清洁组合物，这些组合物可以用于针对清洁或湿洗物品的清洁或湿洗方法中，其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

除了包含本发明的内切-β-1,6-半乳聚糖酶之外，该洗涤剂配制品还可以包含一种或多种酶(例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶，或其任何混合物)，和/或组分，例如表面活性剂、助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。

餐具：术语餐具旨在意指任何形式的厨房用具、成套餐具或餐桌用餐具，例如但不限于平底锅、盘子、杯子、刀、叉、匙、瓷器等。

餐具洗涤组合物：术语“餐具洗涤组合物”是指包括洗涤剂组分的组合物，该组合物用于清洁盘、餐具、罐、平底锅、用餐工具的组合物和用于清洁厨房中硬表面区域的所有形式。本发明不局限于任何具体类型的餐具洗涤组合物或任何具体洗涤剂。

内切-β-1,6-半乳聚糖酶：该术语“内切-β-1,6-半乳聚糖酶”或“具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽”意指催化具有聚合程度(DP)高于3的1,6-β-D-半乳寡糖，和在非还原末端具有4-O-甲基葡糖醛酸(methylglucosyluronate)或葡糖醛酸基团的其酸性衍生物的水解裂解的内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性(EC 3.2.1.164)。出于本发明的目的，根据测定I中所述的程序确定内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。在一方面，本发明的多肽具有SEQ IDNO:2的成熟多肽的至少20％，例如至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和内切-β-1,6-半乳聚糖酶这两个术语可以互换使用。

酶洗涤益处：在此将术语“酶洗涤益处”定义为将一种酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的同一洗涤剂相比的有利效果。可能由酶提供的重要去污益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污物或污物非常少、阻止或减少在洗涤过程中释放的污物再沉积(一种又称作抗再沉积的作用)、完全或部分地恢复纺织品的白度(一种又称作增白的作用)，其中所述纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。不直接与污垢的催化去污或其再沉积的预防相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是预防或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(一种也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的绒球或绒毛(一种也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是一种另外的酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(例如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。

表达：术语“表达”包括涉及多肽的产生的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。

表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，该分子包括编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。

片段：术语“片段”意指在一种成熟多肽的氨基和/或羧基末端不存在一个或多个(例如若干个)氨基酸的一种多肽；其中该片段具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。在一个方面，一个片段包含至少438个氨基酸残基(例如，SEQ ID NO:2的氨基酸11至448)；

硬表面清洁：在此将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，例如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。该术语包括家庭和工业清洁应用两者。

宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包括本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。

改进的洗涤性能：术语“改进的洗涤性能”在此定义为相对于没有酶的相同洗涤剂组合物的洗涤性能，展示出洗涤剂组合物中增加的洗涤性能的酶，例如，通过增加去污或较少的再沉积。术语“改进洗涤性能”包括在衣物洗涤并且例如在硬表面清洁如自动化餐具洗涤(ADW)中的洗涤性能。

分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从一个或多个或所有与它在自然界中相关的天然存在的成分中除去的任何物质，包括但不限于，任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子，也就是；(3)相对于在自然界中发现的物质经过人为改变的任何物质；或(4)相对于与它天然相关联的其它组分通过增加该物质的量(例如，在宿主细胞中的重组生产；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子)而改变的任何物质。分离的物质可以存在于发酵液样品中，例如，可以将宿主细胞进行遗传修饰来表达本发明多肽。来自宿主细胞的发酵液将包括分离的多肽。

湿洗(laundering)：术语“湿洗”或“洗涤”涉及家用湿洗和工业湿洗两者并且意指用一种包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。例如该湿洗过程可以使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一个方面中，成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至458。SEQ ID NO:2的氨基酸-20至-1是信号肽。本领域已知，宿主细胞可以产生由同一多核苷酸表达的两种或更多种不同成熟多肽(即，具有不同C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。本领域还已知，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达一种多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生一种不同的成熟多肽(例如，具有一个不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。

成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的成熟多肽的一种多核苷酸。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸61至1434，并且SEQ ID NO:1的核苷酸1至60编码信号肽。

核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链-或双-链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包括一个或多个控制序列。

可操作地连接的：术语“可操作地连接”意指如下的构造，其中，控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置，从而使得该控制序列指导该编码序列的表达。

严格条件：

术语“非常低严格条件”意指对于至少100个核苷酸长度的探针，按照标准DNA印迹程序在42℃于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切和变性的鲑精DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在45℃下使用2X SSC、0.2％SDS将载体材料洗涤三次，每次15分钟。

术语“低严格条件”意指对于至少100个核苷酸长度的探针，按照标准DNA印迹程序在42℃于5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切和变性的鲑精DNA和25％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在50℃下使用2X SSC、0.2％SDS将载体材料洗涤三次，每次15分钟。

术语“中严格条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑精DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在55℃下使用2X SSC、0.2％SDS将载体材料洗涤三次，每次15分钟。

术语“中-高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑精DNA和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在60℃下使用2X SSC、0.2％SDS将载体材料洗涤三次，每次15分钟。

术语“高严格条件”意指对于长度为至少100个核苷酸的探针来说，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/毫升剪切并变性的鲑鱼精子DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。载体材料最终使用2X SSC、0.2％SDS，在65℃下洗涤三次，每次15分钟。

术语“非常高严格条件”是指对于长度为至少100个核苷酸的探针而言，遵循标准DNA印迹程序，在42℃下在5X SSPE、0.3％SDS、200微克/ml剪切并变性的鲑精DNA和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时。最后在70℃下使用2X SSC、0.2％SDS将载体材料洗涤三次，每次15分钟。

子序列：术语“子序列”意指使一个或多个(例如，若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5’端和/或3’端缺少的多核苷酸，其中该子序列编码具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的片段。在一个方面，一个子序列包含至少438个核苷酸(例如，SEQ ID NO:1的核苷酸11至448)。

纺织品：术语“纺织品”意指包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织物材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料的任何纺织品材料，这些材料制造的织物和由这些织物制成的产品(例如服装和其他物品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。这些纺织品可以是纤维素基的，如天然纤维素，包括棉布、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物其以及基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉布和/或人造丝/纤维胶与一种或几种伴随材料的共混物，该伴随材料例如是羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/纤维胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如玷污的家居衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。

变体：术语“变体”意指具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的、在一个或多个(例如，若干个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)的多肽。取代意指占据一个位置的氨基酸由不同的氨基酸代替；缺失意指除去占据一个位置的氨基酸；以及插入意指在占据一个位置的氨基酸的毗邻处和紧邻处添加一个氨基酸。

洗涤周期：在此将术语“洗涤周期”定义为一个洗涤操作，其中将纺织品、硬表面或餐具与洗涤液接触，将某种机械作用施加至该纺织品、硬表面或餐具，以释放污物，并且促进洗涤液流进和流出该纺织品或在硬表面/餐具上流动，并且最终去除多余的洗液。在一个或多个洗涤周期后，总体上对该纺织品、硬表面或餐具进行漂洗和干燥。对于餐具洗涤，该术语“洗涤周期”也指的是洗涤操作，其中通过循环该洗涤液并且将该洗涤液喷到餐具上，将餐具与洗涤液接触一段时间，以便清洁该餐具，并且最后去除多余的洗涤液。在相同或不同温度下，洗涤周期可以重复一次、两次、三次、四次、五次或甚至六次。此后，通常将餐具漂洗并且干燥。洗涤周期之一可以是浸泡步骤，其中将该纺织品、硬表面或餐具保持浸泡在洗涤液中一段时间。

洗涤液：该术语“洗涤液”旨在意指任选地包括本发明的多肽的水和洗涤剂的溶液或混合物。

白度：该术语“白度”是在不同领域并且针对不同顾客具有不同含义的广义术语。白度的损失可以例如归因于灰化、黄化、或光学增亮剂/调色剂的去除。灰化和黄化可归因于污垢再沉积、身体污垢、来自例如铁和铜离子或染料转移的着色。如在此定义的术语“白度”包括来自以下列表的一个或若干问题：着色剂或染料作用；不完全污物去除(例如身体污垢、皮脂等)；再沉积(物体的灰化、黄化或其他变色)(去除的污垢与纺织品的其他部分(弄脏的或未弄脏的)再关联)；在应用过程中纺织品的化学变化；以及颜色的澄清或淡色化。

发明详述

本发明的诸位发明人已经发现具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽可以用于防止、减少或去除物品(例如纺织品、餐具或硬表面)上的生物膜。

当物品上存在微生物并且在物品上粘在一起时，生物膜会在物品上发展。一些微生物倾向于粘附至物品(例如纺织品)的表面上。一些微生物粘附在此类表面上并且在表面上形成生物膜。生物膜可以是粘性的并且粘附的微生物和/或生物膜是难以除去的。此外，由于生物膜的粘性性质，生物膜粘附污垢。市场上可获得的商业衣物洗涤剂组合物并不能有效地除去此类粘附的微生物或纺织品、餐具或硬表面上的生物膜。

本发明涉及具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途，其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。在本发明的一个实施例中，具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或除去物品的粘性。粘性也可也描述为粘合或胶性，并且是污垢微粒附着到如纺织品表面的现象。将污物粘合到表面的能力是大多数生物膜(无论是位于纺织品或其他类型的表面)的典型的现象。这种粘合作用是未定义的污物积累在表面的主要原因并加剧这些表面的变色。可以将具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽进一步用于预处理纺织品、餐具或硬表面上的生物膜污渍，如具有附着于该物品的明显量的生物膜的物品。当使用物品(像T恤或运动衣)时，除了汗水，它们暴露于来自使用者的身体和来自T恤或运动衣使用的环境的其余部分的细菌。具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽能够防止、减少或去除污垢对衣物的附着。

此外，本发明涉及具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽在洗涤周期过程中用于防止、减少或去除污垢再沉积的用途。当将该多肽用于例如纺织品的湿洗中时，该多肽阻止洗涤液中存在的污垢沉积在纺织品上。

此外，本发明涉及具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着的用途。在一个实施例中，该物品是纺织品。当该污垢没有附着于该物品(例如纺织品)时，该物品显得更白更干净。因此，本发明进一步涉及具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于维持或改进该物品白度的用途。

在本发明的一个实施例中，具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽改进物品如纺织品的白度。在一个实施例中，本发明的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽帮助维持纺织品上的颜色。当反复洗涤纺织品时，颜色倾向于变得不太亮。在一个实施例中，具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶的本发明的多肽在维持有色纺织品的颜色上，即使在反复洗涤后，也具有改进的作用。在一个实施例中，本发明的多肽也能降低在洗涤中存在的相同的或另外的纺织品的非有色部分的着色。

本发明的诸位发明人已经发现将具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和漂白系统一起使用，该物品的白度进一步改进。该漂白系统可以选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)、和/或其混合物。在优选的实施例中，该漂白系统包含四乙酰乙二胺(TAED)和NaHCO₃。

该漂白系统还可以包括漂白催化剂或加强剂。

可以用于本发明的组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰-胶原、钴-胺催化剂和锰-三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；具体地优选的是具有1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的锰的络合物，具体地是Me3-TACN，例如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2″-次氨基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-亚甲基)三酚根合-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂也可以是其他金属化合物，例如铁或钴络合物。在一个实施例中，漂白包含漂白催化剂，该漂白催化剂选自由具有下式的有机催化剂组成的组：

(iii)及其混合物；

其中每个R1独立地是含有从9到24个碳的支链烷基或含有从11到24个碳的直链烷基，其中每个R1独立地是含有从9到18个碳的支链烷基或含有从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R1独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

本发明进一步涉及包含多肽和洗涤剂佐剂成分的洗涤剂组合物，该多肽具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。本发明的洗涤剂组合物可以用于从物品上防止、减少或去除生物膜，用于防止、减少或去除物品的粘性，用于预处理物品上的污渍，用于在洗涤周期过程中防止、用于减少或去除污垢在物品上的附着，用于维持或改进物品的白度并且用于防止、减少或去除物品的恶臭。本发明的洗涤剂组合物克服了现有技术的问题。

本发明的诸位发明人出人意料地发现，当具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽与蛋白酶一起使用，该蛋白酶加强具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，这意味着具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤性能得到了改进。

优选的蛋白酶可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶。优选的蛋白酶包括BPN’、枯草杆菌蛋白酶诺和(subtilisin Novo)、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(subtilisin Carlsberg)、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147、枯草杆菌蛋白酶168。其他有用的蛋白酶可以是胰蛋白酶样蛋白酶，例如牛或猪来源的胰蛋白酶和来自镰刀菌的蛋白酶。在本发明的一个实施例中，该洗涤剂组合物包括如在此要求保护的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽。

在本发明的一个实施例中，该洗涤剂佐剂成分选自下组，该组由以下各项组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

该洗涤剂佐剂成分可以是表面活性剂。在包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤剂组合物中包括表面活性剂的一个优势是洗涤性能得以改进。该表面活性剂可以是在如上描述的非离子、阴离子和/或两性离子表面活性剂中选择的，优选地阴离子或非离子表面活性剂也可以使用两性离子表面活性剂。一般而言，优选漂白稳定的表面活性剂，在本发明的组合物中有用的表面活性剂描述如下。

该洗涤剂佐剂成分可以是助洗剂。在一个实施例中，该洗涤剂佐剂成分是以下提及的一种或多种助洗剂。

该洗涤剂佐剂成分可以是漂白系统。该漂白系统可以选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS))、6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)、NaHCO₃和/或其混合物。在优选的实施例中，该漂白系统可以包含四乙酰乙二胺(TAED)和NaHCO₃。

在本发明的一个实施例中，该漂白系统包含漂白催化剂，该漂白催化剂选自由具有下式的有机催化剂组成的组：

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，其中每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

在本发明的一个实施例中，洗涤剂佐剂成分是酶。该洗涤剂组合物可以包括一种或多种酶。该一种或多种酶可以选自下组，该组由以下各项组成：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶和氧化酶。

在本发明的一个实施例中，将本发明的洗涤剂组合物与一种蛋白酶一起配制，该蛋白酶是动物、植物或微生物来源的。将该蛋白酶进行化学修饰或蛋白质工程化。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选是碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。

在本发明的一个实施例中，该蛋白酶选自下组，该组由以下各项组成：BPN’、枯草杆菌蛋白酶诺和、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147、枯草杆菌蛋白酶168、迟缓芽孢杆菌DSM 5483蛋白酶、胰蛋白酶样蛋白酶、镰孢属蛋白酶及其变体。在一个实施例中，该蛋白酶是与SEQ ID NO:7具有至少50％、例如至少55％、例如至少60％、例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％一致性的蛋白酶。在一个实施例中，该蛋白酶与SEQ ID NO:7的氨基酸序列或其变体具有至少90％序列一致性，其中该变体具有如下改变，例如在一个或多个对应于SEQ ID NO 7的位置3、4、9、15、27、36、42、53、55、57、66、74、76、85、87、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、120、123、126、127、128、154、156、158、161、164、167、170、188、189、193、194、199、200、206、211、212、216、218、222、224、226、229、230、235、239、242、246、255、256和268的下列位置处的取代，优选地该变体是与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少60％、如至少65％、如至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％序列一致性的碱性蛋白酶，并且与SEQ ID NO 7相比包含以下修饰：S3T、V4I、S9R,E、A15T、K27R、*36D、N42R、V66A、N74D、N85S,R、A96S、*97E、S97G,D,A、S97AD、S99E,D,G,M,R,N、S101A、V102I,Y,N、S104A、G116V,R、H118D,N、N121S、S126A,L、P127Q、S128A、S154D、S158D、Y161A、R164S、A188P、G189E、V193M、V199I、L211D,Q、N212D、M216S、A226V、K249L、Q230H、Q239R、N246K、N255E,D、L256E,D、T268A，其中根据常规的BPN’(SEQ IDNO 8)编号，这些修饰对应于S3T、V4I、S9R,E、A15T、K27R、*36D、N43R、V68A、N76D、N87S,R、A98S、*99E、S99G,D,A、S99AD、S101E,D,G,M,R,N、S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128A,L、P129Q、S130A、S156D、S160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D,Q、N218D、M222S、A232V、K255L、Q236H、Q245R、N252K、N261E,D、L262E,D和T274A。通常使用BPN’编号系统并且该系统描述于例如WO 1991/000345中并示于WO 2004/041979的图1中。在一个实施例中，该蛋白酶包含以下取代中的任一个：S9R、S9E、N76D、S99D、S101E、S101D、L217D、S128A、S128L、L217Q、M222S。在一个实施例中，该蛋白酶包含以下取代组中的任一组：S9R+V66A、V66A+S104A、V66A+N212D、S126A+217Q、S99AD、S9E+N43R、N76D+A194P、S99D+S101E、S101E+V205I或N76D+G195E。

在本发明的一个实施例中，该洗涤剂组合物能够减少选自下组的细菌粘附至表面，该组由以下各项组成：不动杆菌属、气微菌属、短波单胞菌属、微杆菌属、滕黄微球菌、假单胞菌属、表皮葡萄球菌、寡养单胞菌属和干燥棒杆菌，或能够使细菌从它们粘附至其上的表面释放。

在本发明的一个实施例中，该表面是纺织品表面、餐具表面或硬表面。该纺织品是由棉、亚麻(flax/linen)、黄麻、苎麻、剑麻、纤维素纺织品、粘胶纤维/人造纤维、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)、羊毛、丝绸、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛、尼龙、芳香聚酰胺、聚酯、丙烯酸的、聚丙烯和氨纶/弹性纤维、聚酰胺、聚丙烯、或其共混物，以及基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物制成。该洗涤剂组合物可以被配制为条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。该洗涤剂组合物可以是液体洗涤剂、粉状洗涤剂或颗粒洗涤剂。

本发明进一步涉及用于湿洗物品的方法，该方法包括以下步骤：

a.将物品暴露于包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤液或包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的洗涤剂组合物；

b.完成至少一个洗涤周期；并且

c.任选地漂洗该物品，

其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

该洗涤液的pH在5,5到11的范围内，如在7到9的范围内，在7到8的范围内或在7到8.5的范围内。

该洗涤液可以具有在5℃到95℃范围内，或在10℃到80℃范围内，在10℃到70℃范围内，在10℃到60℃范围内，在10℃到50℃范围内，在15℃到40℃范围内或在20℃到30℃范围内的温度。在一个实施例中，该洗涤液的温度是30℃。

在本发明的一个实施例中，用于湿洗物品的方法进一步包括在完成洗涤周期后排掉洗涤液或部分洗涤液。然后可以将洗涤液在后续洗涤循环中或在后续漂洗循环中重复使用。在第一个和任选地第二个或第三个洗涤循环过程中，可以将该物品暴露于洗涤液。在一个实施例中，在暴露于洗涤液后，漂洗该物品。可以将该物品用水或用包括调节剂的水进行漂洗。

本发明进一步涉及根据本发明方法洗涤的物品。

具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽

具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性或内切-β-1,6-半乳聚糖酶的多肽是催化具有聚合程度(DP)高于3的1,6-β-D-半乳寡糖，和在非还原末端具有4-O-甲基葡糖醛酸或葡糖醛酸基团的其酸性衍生物的水解裂解的任何酶。可以在如在此描述的测定I中测试该内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。因此，具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽是当在测定I中测试时显示活性的多肽。具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和内切-β-1,6-半乳聚糖酶这两个术语可互换使用。

根据本发明，可获得自真菌的内切-β-1,6-半乳聚糖酶是优选的；具体地，可获得自木霉属的内切-β-1,6-半乳聚糖酶是优选的；具体地，可获得自哈茨木霉的内切-β-1,6-半乳聚糖酶是优选的。

本发明中使用的内切-β-1,6-半乳聚糖酶包括示为SEQ ID NO:2的氨基酸1至458的SEQ ID NO:2的成熟多肽，其获得自哈茨木霉。

该内切-β-1,6-半乳聚糖酶可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸1至458所示的氨基酸序列或其具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶的片段，如成熟多肽，或由其组成。或者该内切-β-1,6-半乳聚糖酶可以包括SEQ ID NO:2的氨基酸11至448的片段，或由其组成，针对该片段从SEQ ID NO:2的氨基和/或羧基末端删除一个或多个氨基酸。

本发明还提供了基本上与以上多肽同源的内切-β-1,6-半乳聚糖酶多肽及其种类同系物(旁系同源物或直系同源物)。在此使用术语“基本上同源”表示与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少95％、甚至更优选至少97％相同，并且最优选至少99％或更多相同的多肽、或其具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的片段、或其直系同源物或旁系同源物。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少65％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少70％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少75％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少80％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少85％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少90％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少91％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少92％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少93％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少94％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少95％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少96％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少97％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少98％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少99％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少100％序列一致性的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，并且将该多肽用于从物品上防止、减少或除去生物膜。

洗涤液中内切-β-1,6-半乳聚糖酶的浓度典型地在0.02-15ppm酶蛋白的范围内、在0.05-15ppm酶蛋白的范围内、在0.1-10ppm酶蛋白的范围内、在0.2-5ppm酶蛋白的范围内、在0.25-5ppm酶蛋白的范围内、在0.3-3ppm酶蛋白的范围内、在0.4-2ppm酶蛋白的范围内、或在0.5-1ppm酶蛋白的范围内。

可以将本发明的内切-β-1,6-半乳聚糖酶以一定量添加到洗涤剂组合物中，该量对应于每克洗涤剂组合物至少0.01mg的内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白，如至少0.015mg的蛋白、至少0.1mg的蛋白、至少0.2mg的蛋白、至少0.3mg的蛋白、至少0.5mg的蛋白、至少1mg的蛋白或至少2mg的蛋白。因此，该洗涤剂组合物可以包括至少0.001％内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白，优选地至少0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.008％、0.01％、0.02％、0.03％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％或1.0％的内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白。

当在洗涤液中与蛋白酶组合使用时，内切-β-1,6-半乳聚糖酶的浓度可能比单独使用时要更低。内切-β-1,6-半乳聚糖酶的浓度可以在0.0025-15ppm酶蛋白的范围内、在0.005-15ppm酶蛋白的范围内、在0.01-10ppm酶蛋白的范围内、在0.02-5ppm酶蛋白的范围内、在0.025-5ppm酶蛋白的范围内、在0.025-3ppm酶蛋白的范围内、在0.025-2ppm酶蛋白的范围内、或在0.025-1ppm酶蛋白的范围内。该蛋白酶的浓度可以在0.05-100.0ppm酶蛋白的范围内、在0.05-50.0ppm酶蛋白的范围内、在0.5-50.0ppm酶蛋白的范围内、在1.0-20.0ppm酶蛋白的范围内、在2.0-20.0ppm酶蛋白的范围内、在2.4-10.0ppm酶蛋白的范围内、在1.0-5.0ppm酶蛋白的范围内、或在1.0-3.0ppm酶蛋白的范围内。

当在洗涤剂组合物中与蛋白酶组合使用时，内切-β-1,6-半乳聚糖酶的浓度可能比单独使用时要更低。可以将本发明的内切-β-1,6-半乳聚糖酶以一定量添加到洗涤剂组合物中，该量对应于每克洗涤剂组合物至少0.01mg的内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白，如至少0.015mg的蛋白、至少0.1mg的蛋白、至少0.2mg的蛋白、至少0.3mg的蛋白、至少0.5mg的蛋白、至少1mg的蛋白或至少2mg的蛋白。因此，当0.0048％的SEQ ID NO:7的蛋白酶或与其有至少60％序列一致性的蛋白酶存在时，该洗涤剂组合物可以包含至少0.00004％内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白。因此，当0.012％的SEQ ID NO:7的蛋白酶或与其有至少60％序列一致性的蛋白酶存在时，该洗涤剂组合物可以包含至少0.0001％内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白。当0.12％的SEQ ID NO:7的蛋白酶或与其有至少60％序列一致性的蛋白酶存在时，该洗涤剂组合物可以包含至少0.0004％内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白。当0.12％的SEQ ID NO:7的蛋白酶或与其有至少60％序列一致性的蛋白酶存在时，该洗涤剂组合物可以包含至少0.0001％的内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白，优选地至少0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0008％、0.001％、0.002％、0.003％、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.5％、0.8％、1.0％、1.1％的内切-β-1,6-半乳聚糖酶蛋白。

该洗涤剂组合物可以包括颗粒，该颗粒包括一个芯和一个保护性涂层。该涂层可以是如WO 2011/134809中所描述的涂层。如果将该组合物的酶用于液体洗涤剂组合物中，可以将该组合物用描述于WO 2009/118375中的化合物进行稳定化。

可以使用常规稳定剂稳定本发明的清洁剂组合物的内切-β-1,6-半乳聚糖酶，这些常规稳定剂例如是多元醇，例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳香族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，例如4-甲酰苯基硼酸，并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所述配置该组合物。

本发明的多肽还可以结合到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，通过引用将其结合在此。

在一个实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽，这些多肽具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性。在一个方面中，这些多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸的差异。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少70％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少85％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少75％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少90％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少80％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少91％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少85％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少92％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少90％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少93％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少95％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少94％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少95％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少96％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少97％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少98％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少99％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在具体的实施例中，本发明涉及与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有100％序列一致性的多肽并且其中该多肽具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的至少100％内切-1,6-半乳聚糖酶活性。

在一个实施例中，该多肽已经被分离。本发明的多肽优选地包含SEQ ID NO:2或其等位基因变体的氨基酸序列或由其组成；或是其具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的片段。在另一方面中，该多肽包括SEQ ID NO:2的成熟多肽或由其组成。在另一个方面，该多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至485或由其组成。

在另一个实施例中，本发明涉及由以下多核苷酸编码的具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，该多核苷酸在非常低严格条件、低严格条件、中严格条件、中-高严格条件、高严格条件、或非常高严格条件下与以下各项杂交：(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列，或(ii)(i)的全长互补体(萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1989，分子克隆实验指南(Molecular Cloning,A Laboratory Manual)，第二版，冷泉港(Cold Spring Harbor)，纽约)。在一个实施例中，该多肽已经被分离。

可以使用SEQ ID NO:1的多核苷酸或其子序列、连同SEQ ID NO:2的多肽或其片段来设计核酸探针，以便根据本领域熟知的方法鉴定和克隆编码来自不同属或种的菌株的具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的DNA。具体而言，这类探针可以用于按照标准DNA印迹程序与感兴趣细胞的基因组DNA或cDNA杂交，以便鉴定和分离其中的相应基因。此类探针可以明显短于完整序列，但是长度应为至少15，例如至少25、至少35、或至少70个核苷酸。优选地，核酸探针具有至少100个核苷酸长度，例如至少200个核苷酸长度、至少300个核苷酸长度、至少400个核苷酸长度、至少500个核苷酸长度、至少600个核苷酸长度、至少700个核苷酸长度、至少800个核苷酸长度、或至少900个核苷酸长度。DNA和RNA探针二者均可使用。典型地这些探针被标记用于检测相应的基因(例如用³²P、³H、³⁵S、生物素或亲合素)。这类探针涵盖于本发明中。

可以针对与以上描述的探针杂交并且编码具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的DNA，对从这类其他菌株制备的基因组DNA或cDNA库进行筛选。来自此类其他菌株的基因组DNA或其他DNA可以通过琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳、或其他分离技术来分离。来自文库的DNA或分离的DNA可转移到并固定在硝酸纤维素或其他适合的载体材料上。为了鉴定与SEQ ID NO:1杂交的克隆或DNA或其子序列，在DNA印迹中使用载体材料。

出于本发明的目的，杂交表明多核苷酸在非常低、低严格条件、中低严格条件、中严格条件、中高严格条件、高严格条件或非常高严格条件下与一种被标记的核酸探针杂交，该探针对应于(i)SEQ ID NO:1；(ii)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列；(iii)其全长互补体；或(iv)其子序列。可以使用例如X-射线胶片或本领域已知的任何其他检测手段检测在这些条件下与核酸探针杂交的分子。

在一个方面，该核酸探针由从SEQ ID NO:1的DNA产生的探针片段或其亚片段组成。在另一个方面，该核酸探针是编码SEQ ID NO:2的多肽的多核苷酸；其成熟多肽；或其片段。在另一个实施例中，本发明涉及一种多肽，该多肽具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性，由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多核苷酸编码。在另外的实施例中，该多肽已经被分离。

在另一个实施例中，本发明涉及在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体。在实施例中，引入SEQ ID NO:2的成熟多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。氨基酸变化可以是微小性质的，即不显著影响蛋白质折叠和/或活性的保守性氨基酸置换或插入；典型地1至30个氨基酸的小缺失；小氨基-端或羧基端延长，如氨基端甲硫氨酸残基；至多20-25个残基的小连接肽；或通过改变净电荷或另一种功能而促进纯化的小延长部分，如多组氨酸束、抗原表位或结合结构域。

保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及蛋氨酸)。通常不改变比活性的氨基酸置换是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979，引自蛋白质(The Proteins)，学术出版社(AcademicPress)，纽约(New York)描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。

可替代地，氨基酸变化是这样一种性质，使得多肽的理化性质被改变。例如，氨基酸改变可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH等。

可以根据本领域已知的方法，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变鉴定多肽中的必需氨基酸(康宁汉(Cunningham)和韦尔斯(Wells)，1989，科学(Science)244:1081-1085)。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得分子的内切-1,6-半乳聚糖酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还见希尔顿(Hilton)等人，1996，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射、或光亲和标记进行确定，对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，德穧沃斯(de Vos)等人，1992，科学(Science)255:306-312；史密斯(Smith)等人，1992，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904；Wlodaver等人，1992，欧洲生物化学学会联盟通讯(FEBS Lett.)309:59-64。也可以从与相关多肽的比对推断必需氨基酸的身份。

可以做出单个或多个氨基酸置换、缺失和/或插入并且使用已知的诱变、重组和/或改组方法进行测试，随后进行有关筛选程序，如Reidhaar-Olson和索尔(Sauer)，1988，科学，241:53-57；鲍威(Bowie)和索尔，1989，美国科学院院刊，86:2152-2156；WO 95/17413或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，罗曼(Lowman)等人，1991，生物化学(Biochemistry)30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO92/06204)和区域定向诱变(德比舍尔(Derbyshire)等人，1986，基因(Gene)46:145；Ner等人，1988，DNA 7:127)。

诱变/改组方法可以与高通量自动化筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的诱变多肽的活性(奈斯(Ness)等人，1999，自然生物技术(Nature Biotechnology)17:893-896)。编码活性多肽的诱变的DNA分子可以回收自宿主细胞，并且使用本领域的标准方法对其进行迅速测序。这些方法允许迅速确定多肽中单个氨基酸残基的重要性。

该多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。

该多肽可以是融合多肽或可裂解的融合多肽，其中另一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明多核苷酸融合而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列，使得它们在框内，并且融合多肽的表达处于相同的启动子和终止子的控制之下。也可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中以翻译后方式产生融合多肽(库珀(Cooper)等人，欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)12:2575-2583；道森(Dawson)等人，1994，科学(Science)266:776-779)。

融合多肽可以进一步包含在两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于以下各项中披露的位点：马丁(Martin)等人，2003，工业微生物学与生物技术杂志(J.Ind.Microbiol.Biotechnol.)3:568-576；斯韦蒂纳(Svetina)等人，2000，生物技术杂志(J.Biotechnol.)76:245-251；拉斯马森(Rasmussen)-威尔逊(Wilson)等人，1997，应用环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)63:3488-3493；华德(Ward)等人，1995，生物技术(Biotechnology)13:498-503；以及孔特拉斯(Contreras)等人，1991，生物技术9:378-381；伊顿(Eaton)等人，1986，生物化学(Biochemistry)25:505-512；柯林斯(Collins)-莱斯(Racie)等人，1995，生物技术13:982-987；卡特(Carter)等人，1989，蛋白：结构、功能和遗传学(Proteins:Structure,Function,and Genetics)6:240-248；以及史蒂文斯(Stevens)，2003，世界药物发现(Drug Discovery World)4:35-48。

具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的来源

本发明的具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如在此与给出的来源结合使用，术语“从…获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面，从给定来源获得的多肽分泌至细胞外。

在另一方面，该多肽是木霉属多肽，例如，从哈茨木霉获得的多肽。

应理解的是对于前述的种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学的等同物(equivalent)，例如无性型(anamorph)，而与它们已知的种名无关。本领域普通技术人员将容易地识别适当等效物的身份。

这些物种的菌株可以容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(ATCC)、德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(CentraalbureauVoor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(NRRL)。

可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等等)分离的微生物或直接从自然材料(例如，土壤、堆肥、水等等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从自然生活环境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员所知的技术分离或克隆多核苷酸(参见，例如萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1989，上文)。

多核苷酸

本发明还涉及编码如在此描述的多肽的多核苷酸。在一个实施例中，编码本发明的多肽的多核苷酸已经被分离。

用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域中已知的并且包括从基因组DNA或cDNA、或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见，例如英尼斯(Innis)等人，1990，PCR：方法和应用指南(PCR:A Guide to Methods andApplication)，学术出版社(Academic Press)，纽约(New York)。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。可以从木霉属菌株或相关生物中克隆多核苷酸，并且因此，例如可以是多核苷酸的多肽编码区的等位基因变体或物种变体。

修饰编码本发明多肽的多核苷酸对于合成与该多肽基本上相似的多肽可能是必需的。术语“基本上类似于”该多肽是指该多肽的非天然存在的形式。这些多肽可以因某种工程化方式而与从其天然来源分离的多肽不同，例如在比活性、热稳定性、最适pH等方面不同的变体。可以如下构建变体：基于作为SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列(例如，其子序列)所提出的多核苷酸，和/或通过引入核苷酸置换，所述核苷酸置换不导致多肽的氨基酸序列变化，但是对应于旨在用于产生酶的宿主生物的密码子使用，或通过引入可以产生不同氨基酸序列的核苷酸置换。对于核苷酸置换的一般描述，参见，例如福德(Ford)等人，1991，蛋白质表达与纯化(Protein Expression and Purification)2:95-107。

核酸构建体

本发明还涉及包含与一个或多个控制序列可操作地连接的本发明多核苷酸的核酸构建体，其中所述控制序列指导编码序列在适合的宿主细胞中在与所述控制序列相容的条件下的表达。

可以用许多方式操作所述多核苷酸以便于多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操纵可以是令人希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。

该控制序列可以是启动子，即，被宿主细胞识别以对编码本发明的多肽的多核苷酸进行表达的多核苷酸。启动子含有介导多肽表达的转录控制序列。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括变体、截短型及杂合型启动子，并且可以是由编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。

用于指导在细菌宿主细胞中本发明的核酸构建体的转录的合适的启动子的实例是从以下各项获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热芽孢杆菌麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽胞杆菌crylllA基因(阿盖塞(Agaisse)和勒尔克吕(Lereclus)，1994，分子微生物学(Molecular Microbiology)13:97-107)、大肠杆菌乳糖操纵子、大肠杆菌trc启动子(埃贡(Egon)等人，1988、基因(Gene)69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)、和原核β-内酰胺酶基因(维拉-科马罗夫(Villa-Kamaroff)等人，1978、美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)75:3727-3731)；以及tac启动子(德波尔(DeBoer)等人，1983、美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)80:21-25)。另外吉尔伯特(Gilbert)等人，1980，科学美国人(Scientific American)，242:74-94的“来自重组细菌的有用蛋白质”(useful proteins from recombinant bacteria)中；以及萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1989，上文中描述过另外的启动子。在WO 99/43835中公开了串联启动子的实例。

在丝状真菌宿主细胞中，用于指导本发明的核酸构建体的转录的合适启动子的实例是获得自以下各项的基因的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖镰孢胰蛋白酶–样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢菌淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Daria(达莉亚)(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Quinn(奎恩)(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延伸因子，连同NA2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已经用来自曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替换未翻译的前导子；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已经用来自构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替换未翻译的前导子)；和突变，截短的和杂合启动子体。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。

在酵母宿主中，从针对以下各项的基因获得有用的启动子：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母乙醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1，ADH2/GAP)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。在罗马诺斯(Romanos)等人，1992，酵母(Yeast)8:423-488中描述了酵母宿主细胞的其他有用启动子。

控制序列也可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。终止子与编码该多肽的多核苷酸的3’-末端可操作地连接。在宿主细胞中有功能的任何终止子可以用于本发明中。

细菌宿主细胞的优选终止子从针对以下各项的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。

用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。

酵母宿主细胞的优选终止子从针对以下各项的基因获得：酿酒酵母烯醇化酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。在罗马诺斯(Romanos)等人，1992，上文中描述了酵母宿主细胞的其他有用终止子。

该控制序列还可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区域，它增加该基因的表达。

合适的mRNA稳定剂区域实例从苏云金芽胞杆菌cryIIIA基因(WO94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(休(Hue)等人，1995，细菌学杂志(Journal of Bacteriology)177:3465-3471)获得。

该控制序列也可以是前导子，所述前导子是对宿主细胞翻译重要的mRNA的非翻译区。该前导子与编码该多肽的多核苷酸的5’-末端可操作地连接。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导子。

从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉磷酸丙糖异构酶的基因获得用于丝状真菌宿主细胞的优选前导子。

从酿酒酵母烯醇化酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母醹-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)的基因获得用于酵母宿主细胞的合适的前导子。

控制序列也可以是多聚腺苷化序列，一种与多核苷酸3’-末端可操作地连接并在转录时由宿主细胞识别为向转录的mRNA添加聚腺苷酸残基的信号序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多聚腺苷酸化序列。

丝状真菌宿主细胞的优选多聚腺苷酸化从针对以下各项的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸酯合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉醹-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶和尖孢镰刀菌胰蛋白酶样蛋白酶。

对于酵母宿主细胞有用的多聚腺苷酸化序列在郭(Guo)和谢尔曼(Sherman)，1995，分子细胞生物学(Mol.Cellular Biol.)15:5983-5990)。

控制序列也可以是编码信号肽的信号肽编码区，其中所述信号肽与多肽的N-末端连接并且指导多肽进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5’-末端可以内在地含有在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’-末端可以含有相对于编码序列为外来的信号肽编码序列。在编码序列不天然地含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外来信号肽编码序列。可替代地，外来信号肽编码序列可以单纯地替代天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。

用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837生麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌鈣-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌醹-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。其他信号序列由西莫宁(Simonen)和帕尔瓦(Palva)，1993，微生物评论(Microbiological Reviews)57:109-137描述。

用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶的基因获得的信号肽编码序列。

从酿酒酵母醹-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得用于酵母宿主细胞的有用信号肽。其他的有用的信号肽编码序列由罗曼诺斯(Romanos)等人(1992，上文)描述。

控制序列也可以是编码位于多肽N-末端处的前肽的前肽编码序列。生成的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可以通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。可以从枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母醹-因子的基因获得前肽编码序列。

在信号肽和前肽序列两者都在的情况下，将前肽序列紧邻多肽的N-末端定位并且将信号肽序列紧邻前肽序列的N-末端定位。

也可能令人希望的是添加调节序列，所述调节序列调节相对于宿主细胞的生长的多肽的表达。调节序列的实例是使得基因的表达响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac以及trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调控序列的其他实例是允许基因扩增的那些。在真核系统中，这些调控序列包括在甲氨蝶呤存在下被扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸将与调控序列可操作地连接。

表达载体

本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该多肽的多核苷酸。可替代地，该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包括该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中来表达。在产生该表达载体时，该编码序列位于该载体中，这样使得该编码序列与该供表达的适当控制序列可操作地连接。

重组表达载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其能够方便地进行重组DNA程序，并且能够引起多核苷酸的表达。载体的选择将典型地取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是线性的或闭合的环状质粒。

该载体可以是自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。该载体可以包含任何用以保证自我复制的要素。可替代地，该载体可以是这样载体，当它被引入该宿主细胞中时，被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒(这些载体或质粒共同包含待引入宿主细胞的基因组中的总DNA)或转座子。

该载体优选包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是这样一种基因，该基因的产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。

细菌性选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因，或赋予抗生素抗性(如氨比西林、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素或四环素抗性)的标记。用于酵母宿主细胞的合适标记包括，但不限于，ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、和URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于，adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、连同其等效物。优选地用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌bar基因。在木霉属细胞中优选使用的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。

选择性标记可以是如在WO 2010/039889中描述的双选择性标记系统。在一个方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。

载体优选含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。

对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或者用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可以包含用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置整合的可能性，这些整合元件应包含足够数量的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，这些碱基对与对应的靶序列具有高度的序列一致性以提高同源重组的可能性。这些整合元件可以是与宿主细胞的基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，这些整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一方面，该载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。

对于自主复制，该载体可以进一步包括使该载体能够在所讨论的宿主细胞中自主复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点(origin of replication)”或“质粒复制子(plasmid replicator)”意指使得质粒或载体可在体内复制的多核苷酸。

细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、以及pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、以及pAMβ1的复制起点。

用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1和CEN3的组合、以及ARS4和CEN6的组合。

在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人，1991，基因(Gene)98:61-67；卡伦(Cullen)等人，1987，核酸研究(Nucleic Acids Res.)15:9163-9175；WO 00/24883)。可以根据WO00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。

可以将本发明多核苷酸的一个以上的拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。可以通过将至少一个另外拷贝的序列整合至宿主细胞基因组中或随该多核苷酸一起包含可扩增选择标记基因而获得多核苷酸的拷贝数的增加，其中可以通过在适当的选择剂存在下培养所述细胞来选择含有已扩增拷贝的选择标记基因并因而含有另外的拷贝的多核苷酸的细胞。

用来连接上述元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域技术人员熟知的(参见，例如，桑布鲁克(Sambrook)等人，1989，上文)。

宿主细胞

本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接到一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，这些控制序列指导本发明的多肽的产生。将包括多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体，如早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。

该宿主细胞可以是有用于重组产生本发明的多肽的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。

原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括，但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟球菌属、假单胞菌属、沙门菌属和脲原体属。

细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌细胞，包括但不限于：嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金杆菌细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于：似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽瘟亚种细胞。

细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌细胞，包括但不局限于不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。

将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，张(Chang)和科恩(Cohen)，1979，分子遗传学与基因组学(Mol.Gen.Genet.)168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，杨格(Young)和斯皮宰曾(Spizizen)，1961，细菌学杂志(J.Bacteriol.)81:823-829；或杜拜努(Dubnau)以及大卫杜夫-阿贝尔森(Davidoff-Abelson)，1971，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)56:209-221)、电穿孔(参见例如，茂川(Shigekawa)和道尔(Dower)，1988，生物技术(Biotechniques)6:742-751)、或者接合(参见例如，克勒(Koehler)和索恩(Thorne)，1987，细菌学杂志169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，哈纳汗(Hanahan)，1983，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)166:557-580)或电穿孔(参见例如，道尔(Dower)等人，1988，核酸研究(Nucleic Acids Res.)16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，贡(Gong)等人，2004，叶线形微生物学(FoliaMicrobiol.)(Praha(布拉格))49:399-405)、接合(参见例如，马佐迪耶(Mazodier)等人，1989，细菌学杂志(J.Bacteriol.)171:3583-3585)、或转导(参见例如，伯克(Burke)等人，2001，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可通过以下来实现：电穿孔(参见例如，蔡(Choi)等人，2006，微生物学方法杂志(J.Microbiol.Methods)64:391-397)或接合(参见例如，皮内多(Pinedo)和斯梅茨(Smets)，2005，应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)71:51-57)。可以通过天然感受态(参见，例如斐瑞(Perry)和仓光(Kuramitsu)，感染免疫学(Infect.Immun.)32:1295-1297)、通过原生质体转化(参见，例如卡特(Catt)和Jollick，1991、微生物(Microbios)68:189-207)、通过电穿孔(参见，例如巴克利(Buckley)等人，1999、应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)65:3800-3804)或通过接合(参见，例如克勒韦尔(Clewell)，1981、微生物学评论(Microbiol.Rev.)45:409-436)实现向链球菌细胞中引入DNA。然而，可以使用本领域已知的用于将DNA引入宿主细胞中的任何方法。

宿主细胞也可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。

宿主细胞可以是真菌细胞。如在此所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如霍克斯沃思(Hawksworth)等人定义，引自：安斯沃斯(Ainsworth)和比斯比(Bisby)的真菌大词典(Dictionary of The Fungi)，第8版，1995，国际CAB，大学出版社(University Press)，剑桥(Cambridge)，英国)。

真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如在此使用的“酵母”包括产子嚢酵母(内孢霉目)、产担子酵母和属于半知菌类(芽孢纲)的酵母。由于酵母的分类可能在将来变化，为了本发明的目的，酵母应当如酵母的生物学与活性(Biology and Activities of Yeast)(斯金纳(Skinner)，帕斯莫尔(Passmore)和达文波特(Davenport)编著，应用细菌学学会专题论文集系列9(Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9)，1980)所描述那样定义。

酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。

该真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)亚类的所有丝状形式(如霍克斯沃思等人，1995，上文定义)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵的。

丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。

例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。

可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及以本身已知的方式进行细胞壁再生的过程来转化真菌细胞。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序在EP 238023和约尔顿(Yelton)等人，1984，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)81:1470-1474以及科里蒂森(Christensen)等人，1988，生物/技术(Bio/Technology)6:1419-1422中描述。用于转化镰孢属物种的适合方法在马拉迪耶(Malardier)等人，1989，基因(Gene)78:147-156和WO 96/00787中描述。可以使用以下文献中描述的程序转化酵母：贝克尔(Becker)和瓜伦特(Guarente)，引自阿贝尔森(Abelson)，J.N.和西蒙(Simon)，M.I.编者，酵母遗传学与分子生物学指南(Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology)，酶学方法(Methods in Enzymology)，第194卷，第182-187页，学术出版社公司(AcademicPress,Inc.)，纽约；Ito等人，1983，细菌学杂志(J.Bacteriol.)153:163；和Hinnen等人，1978，美国国家科学院院刊75:1920。

产生的方法

本发明还涉及产生本发明的内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的方法，该方法包括：(a)培养细胞，该细胞处于其野生型形式，在有益于产生该多肽的条件下产生该多肽；以及任选地，(b)回收该多肽。在一方面，该细胞是一种木霉属细胞。在另一方面，该细胞是一种哈茨木霉细胞。

本发明还涉及产生本发明多肽的方法，该方法包括：(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地，(b)回收该多肽。

这些宿主细胞是在适合于使用本领域中已知的方法产生该多肽的一种营养培养基中培养的。例如，可以通过在适合的培养基中和在允许表达和/或分离该多肽的条件下，进行摇瓶培养，或者在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续，分批，分批补料，或固态发酵)来培养细胞。该培养是使用本领域中已知的程序，在一种适合营养培养基中发生，该培养基包括碳和氮来源及无机盐。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果多肽分泌到该营养培养基中，那么可直接从培养基中回收多肽。如果多肽不分泌，那么其可从细胞裂解液中进行回收。

可以使用本领域已知的专门用于该多肽的方法检测具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽。这些检测方法可以包括但不限于利用特异性抗体、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，酶测定法可以用来测定多肽的活性。

可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，该多肽可以通过常规程序，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从该营养培养基回收。在一方面，回收包含该多肽的发酵液。

可以通过本领域已知的多种方法纯化多肽，所述方法包括但不限于色谱(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法、聚焦色谱法和大小排阻色谱法)、电泳方法(例如，制备性等电聚焦)、差异性溶解(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见，例如，蛋白质纯化(Protein Purification)，编者Janson和Ryden，VCH出版公司，纽约，1989)，以便获得基本上纯的多肽。

在替代性方面，不回收多肽，而是使用表达该多肽的本发明宿主细胞作为多肽的来源。

发酵液配制品或细胞组合物

本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。发酵液产物进一步包括在发酵过程中使用的另外的成分，例如像，细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞被用于产生感兴趣的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵介质和/或发酵产物。在一些实施例中，该组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。

如在此使用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生、不经历或经历最低限的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物生长至饱和，在碳限制条件下孵育以允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞进行酶的表达)并且分泌到细胞培养基中时，产生发酵液。发酵液可以包含在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，发酵液是未分级的并且包括用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液包含用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。

在一个实施例中，该发酵液配制品和细胞组合物包括第一有机酸组分(包括至少一种1-5碳的有机酸和/或其盐)以及第二有机酸组分(包括至少一种6碳或更多碳的有机酸和/或其盐)。在具体实施例中，该第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐，或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐，或前述两种或更多种的混合物。

在一个方面，该组合物包含一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。

这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包括防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域中已知的其他试剂。

该细胞杀灭的全培养液或组合物可以包含在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。

如在此描述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以除去不溶性组分以提供澄清的液体组合物。

可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673所述的方法产生本发明的全培养液配制品和细胞组合物。

洗涤剂组合物

在一个实施例中，本发明针对洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含结合一种或多种额外的清洁组合物组分的本发明的具有内切-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽。另外的组分的选择处于本领域技术人员能力范围内并且包含常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。

在一个实施例中，本发明涉及ADW(自动餐具洗涤)组合物，该组合物包括与一种或多种另外的ADW组合物组分相结合的本发明的酶。在一个实施例中，本发明涉及工业清洁组合物，该清洁组合物包含与一种或多种另外的工业清洁组合物组分组合的本发明的酶。

在一个实施例中，本发明涉及洗衣粉组合物，该洗衣粉组合物包含与一种或多种另外的洗衣粉组合物组分组合的本发明的酶。

在一个实施例中，本发明涉及液体洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含与一种或多种另外的液体洗涤剂组合物组分组合的本发明的酶。另外的组分的选择处于本领域技术人员能力范围内并且包含常规的成分，包括下文所述的示例性非限制性组分。

表面活性剂

洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的或其混合物。在一个具体实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。典型地，表面活性剂按重量计以从大约0.1％至60％，如大约1％至大约40％、或大约3％至大约20％、或大约3％至大约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择这种或这些表面活性剂，并且这种或这些表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。

当包含在其中时，该洗涤剂通常将会包含按重量计约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地说是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或脂肪酸盐(皂)的二酯和单酯及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)，烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)，烷基酚乙氧基化物(APE)，壬基酚乙氧基化物(NPE)，烷基多糖苷(APG)，烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)，脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)，乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)，丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)，或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品，及其组合。

当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0％至约40％的半极性表面活性剂。半极化表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲胺氧化物和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)胺氧化物，及其组合。

当包括于其中时，洗涤剂通常将含有按重量计从大约0％至大约40％的两性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。

助水溶剂

助水溶剂是如下化合物，该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中的极性物质)。典型地，助水溶剂同时具有亲水的和疏水的特征(如从表面活性剂已知的所谓两亲特性)；然而助水溶剂的分子结构一般并不有利于自发自聚集，参见例如霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)(2007)的综述，胶体&界面科学新见(Current Opinion inColloid&Interface Science)，12:121-128。助水溶剂并不显示一个临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。很多助水溶剂反而示出一个连续型聚集过程，其中聚集体的大小随着浓度增加而增长。然而，很多助水溶剂改变了包含极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性和胶体特性。经典地从制药、个人护理、食品跨行业至技术应用使用助水溶剂。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过除去水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，例如相分离或高粘度。

洗涤剂可以包含按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的助水溶剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。

助洗剂和共助洗剂

洗涤剂组合物可以含有按重量计大约0-65％，如大约5％至大约50％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂，或其混合物。在餐具洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％、特别地50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以特别地是与Ca和Mg形成水溶性络合物的络合剂。可以使用本领域中已知用于在洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙-1-醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)、及其组合。

该洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-50％，例如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。去污剂组合物可以包括单独的共增洁剂、或与如沸石增洁剂等增洁剂组合的共增洁剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐，螯合剂，例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和磷酸盐，以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂在例如WO09/102854、US 5977053中描述。

漂白系统

洗涤剂可以包含按重量计0-30％，如大约1％至大约20％的漂白系统。可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠、过硼酸钠和过氧化氢-尿素(1:1)、预成型过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于过氧羧酸及盐、二过氧二羧酸、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白系统，这些系统可以包括例如与过酸形成漂白活化剂组合的无机盐，包括碱金属盐，如过硼酸盐(通常是单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。术语漂白活化剂在此意指与过氧化氢反应以经由过水解反应形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。有待在此使用的适合漂白活化剂包括属于酯、酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点，它是环境友好的。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在存储时在产品中具有良好的水解稳定性，并且是一种有效的漂白活化剂。最后，ATC是多功能的，因为在过水解反应中释放的柠檬酸盐可以作为助洗剂起作用。可替代地，漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸，例如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。

该漂白系统还可以包括漂白催化剂或加强剂。

可以用于本发明的组合物中的漂白催化剂的一些非限制性实例包括草酸锰、乙酸锰、锰-胶原、钴-胺催化剂和锰-三氮杂环壬烷(MnTACN)催化剂；具体地优选的是具有1,4,7-三甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me3-TACN)或1,2,4,7-四甲基-1,4,7-三氮杂环壬烷(Me4-TACN)的锰的络合物，具体地是Me3-TACN，例如双核锰络合物[(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2、和[2,2',2″-次氨基三(乙烷-1,2-二基氮烷基亚基-κN-亚甲基)三酚根合-κ3O]锰(III)。这些漂白催化剂也可以是其他金属化合物，例如铁或钴络合物。

在一些实施方案中，漂白组分可以是选自具有下式的有机催化剂的有机催化剂：

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，优选地每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，更优选地每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO2007/087259、EP 1867708(维生素K)以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌或酞菁铝。

优选地，除了漂白催化剂、特别是有机漂白催化剂以外，漂白组分还包括过酸源。过酸的来源可以选自(a)预形成的过酸；(b)过碳酸盐、过硼酸盐或过碳酸盐(过氧化氢源)，优选与漂白活化剂组合；以及(c)过水解酶以及酯，用于在纺织品或硬表面处理步骤中在水的存在下原位形成过酸。

聚合物

洗涤剂可以含有按重量计0-10％，如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。

织物调色剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包括所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，因为它们吸收至少一部分可见光光谱，所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红或其混合物，例如如描述于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1876226(通过引用而特此结合)中。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是特别优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。酶

洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种另外的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。

一般而言，一种或多种所选酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶和非酶成分的相容性，等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。

纤维素酶

适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳属、枝顶孢霉属的纤维素酶，例如在US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757和WO 89/09259中披露的从特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀菌产生的真菌纤维素酶。

特别适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。这类纤维素酶的实例是在EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中描述的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 99/001544中的那些纤维素酶变体。

其他纤维素酶是内切-β-1,4-葡聚糖酶(其具有与WO 2002/099091的SEQ ID NO:2位置1至位置773的氨基酸序列具有至少97％一致性的序列)或族44木葡聚糖酶(其具有与WO 2001/062903的SEQ ID NO:2位置40-559具有至少60％一致性的序列)。

可商购的纤维素酶包括Celluzyme^TM和Carezyme^TM(诺维信公司(Novozymes A/S))、Carezyme Premium^TM(诺维信公司)、Celluclean^TM(诺维信公司)、CellucleanClassic^TM(诺维信公司)、Cellusoft^TM(诺维信公司)、Whitezyme^TM(诺维信公司)、Clazinase^TM和Puradax HA^TM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))以及KAC-500(B)^TM(花王株式会社(Kao Corporation))。

蛋白酶：

适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，例如来自M5、M7或M8家族的那些。

术语“枯草杆菌酶”是指根据斯艾森(Siezen)等人，蛋白质工程(Protein Engng.)4(1991)719-737和斯艾森等人，蛋白质科学(Protein Science)6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。这些底物可以分为6个亚族，即枯草杆菌蛋白酶族、嗜热蛋白酶族、蛋白酶K族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶族、科信(Kexin)族和超嗜热蛋白酶(Pyrolysin)族。

枯草杆菌酶的实例是获得自芽孢杆菌属的那些，例如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶迟缓(lentus)、枯草杆菌蛋白酶诺和(Novo)、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024以及WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如，猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)，以及从纤维单胞菌(Cellumonas)获得的的糜蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。

另外的优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在(例如)WO95/23221中所述)、以及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。

金属蛋白酶的实例是如描述于WO 07/044993(杰能科国际公司(Genencor Int.))中的中性金属蛋白酶，例如获得自解淀粉芽孢杆菌的那些。

有用的蛋白酶的实例是描述在WO 92/19729、WO 96/034946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264中的变体，特别是在一个或多个对应于SEQ ID NO 7的位置3、4、9、15、27、36、42、53、55、57、66、74、76、85、87、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、120、123、126、127、128、154、156、158、161、164、167、170、188、189、193、194、199、200、206、211、212、216、218、222、224、226、229、230、235、239、242、246、255、256和268的下列位置处具有改变的变体，优选地该蛋白酶变体是与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少60％(例如至少65％、例如至少70％、例如至少75％、例如至少80％、例如至少85％、例如至少90％、例如至少95％)一致性的碱性蛋白酶并且与SEQ ID NO:7相比包含下列修饰：S3T、V4I、S9R,E、A15T、K27R、*36D、N42R、V66A、N74D、N85S,R、A96S、*97E、S97G,D,A、S97AD、S99E,D,G,M,R,N、S101A、V102I,Y,N、S104A、G116V,R、H118D,N、N121S、S126A,L、P127Q、S128A、S154D、S158D、Y161A、R164S、A188P、G189E、V193M、V199I、L211D,Q、N212D、M216S、A226V、K249L、Q230H、Q239R、N246K、N255E,D、L256E,D、T268A。合适的可商购的蛋白酶包括按以下商品名出售的蛋白酶：

Duralase^Tm、Durazym^Tm、

Ultra、

Ultra、

Ultra、

Ultra、

和

(诺维信公司(Novozymes A/S))；按以下商品名出售的蛋白酶：Purafect

Preferenz^Tm、Purafect

Purafect

Purafect

和

(杜邦丹尼斯克公司(Danisco/DuPont))、Axapem^TM(Gist-Brocases N.V.)、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高公司(Henkel AG))；以及来自花王(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。

脂肪酶和角质酶：

适合的脂肪酶和角质酶包括细菌来源或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变酶。实例包括如在EP 258 068和EP 305 216中所述的来自嗜热丝孢菌属(Thermomyces)(例如来自疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(以前命名为柔毛腐质霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶、来自腐质霉(例如特异腐质霉(H.insolens)(WO 96/13580))的角质酶、来自假单胞菌属(Pseudomonas)(这些假单胞菌属中的一些现在重命名为伯克氏菌属)的脂肪酶(例如，产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligene)(EP 218272))、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331 376)、菌株SD705(WO 95/06720&WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)、GDSL型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)、来自稻瘟病菌(WO 10/107560)的角质酶、来自门多萨假多胞菌(US 5,389,536)的角质酶、来自嗜热裂孢菌(WO 11/084412)的脂肪酶、嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)、来自枯草芽孢杆菌(WO 11/084599)的脂肪酶、以及来自灰色链霉菌(WO 11/150157)的脂肪酶和始旋链霉菌(WO 12/137147)。

其他实例是脂肪酶变体，例如在EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508和WO 09/109500中所描述的那些。

优选的商业化脂肪酶产品包括Lipolase^TM、Lipex^TM；Lipolex^TM和Lipoclean^TM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。

再其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

淀粉酶：

能与本发明的多肽一起使用的合适的淀粉酶可以是α淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌来源的或真菌来源的。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如从在GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特定菌株获得的α淀粉酶。

合适的淀粉酶包括具有在WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ IDNO:3具有90％序列一致性的其变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，例如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。

不同的合适的淀粉酶包括具有在WO 02/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列一致性的其变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。

其他适合的淀粉酶是包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的获得自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列一致性的变体。此杂合α-淀粉酶的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的获得自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些：

M197T

H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或

G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。

另外的合适的淀粉酶是具有在WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列一致性的其变体。SEQ ID NO:6的优选变体是那些在以下一个或多个位置具有取代、缺失或插入的变体：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。

能被使用的另外的淀粉酶是那些具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的淀粉酶或与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列一致性的其变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是那些在以下一个或多个位置具有取代、缺失或插入的变体：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476，使用WO 96/023873的SEQ ID 2用于编号。更优选的变体是那些在选自181、182、183和184的两个位置上具有缺失的变体，例如181和182、182和183、或位置183和184。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选淀粉酶变体是那些在位置183和184具有缺失并在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个具有取代的变体。

其他能被使用的淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712的SEQID NO:10的淀粉酶或与WO 08/153815的SEQ ID NO:2或WO 01/66712的SEQ ID NO:10具有90％序列一致性的其变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。

另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ IDNO:2具有90％序列一致性的其变体。SEQ ID NO:2的优选变体是那些具有C末端截断和/或在以下一个或多个位置具有取代、缺失或插入的变体：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选的变体是那些在以下一个或多个位置具有取代的变体：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K；和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183具有缺失的变体。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是那些在以下位置具有取代的变体：

N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；

N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；

S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或

S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C末端截断的并且任选地进一步包含在位置243的取代和/或在位置180和/或位置181的缺失。

其他的合适的淀粉酶是具有在WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的淀粉酶或与SEQID NO:12具有90％序列一致性的其变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有R118K、N195F、R320K及R458K的取代的变体，以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。

其他的实例是淀粉酶变体，例如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。

可商购的淀粉酶是Duramyl^TM、特妙淀粉酶^TM、Fungamyl^TM、Stainzyme ^TM、StainzymePlus^TM、Natalase^TM、Liquozyme X及BAN^TM(来自诺维信公司)，以及Rapidase^TM、Purastar^TM/Effectenz^TM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100及Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(Genencor International Inc./DuPont))。

过氧化物酶/氧化酶：

根据本发明的过氧化物酶是由如由国际生物化学与分子生物学联合会命名委员会(IUBMB)陈述的酶分类EC 1.11.1.7包括的过氧化物酶，或获得自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。

适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。

根据本发明的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶加以分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。

在一个实施例中，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。

已经从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，比如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。

还已经从细菌，如假单胞菌属(例如，吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。

在优选实施例中，该卤代过氧化物酶可源自弯孢属，特别是疣枝弯孢(Curvulariaverruculosa)和不等弯孢，例如如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS 102.42或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或可源自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii，如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium sp.。

根据本发明的氧化酶具体包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或获得自其中的展示出漆酶活性的片段、或展示出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。

优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以获得自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。

来自真菌的适合实例包括可源自以下项的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。

来自细菌的适合实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。

优选的是获得自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是获得自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。

该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包含一种或多种酶的单独的添加剂，或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等，优选的洗涤剂添加剂剂型为颗粒，特别是无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或者浆液。

无尘颗粒例如可以如在US 4,106,991和4,661,452中所披露的那样产生并且可以任选地通过本领域已知的方法包衣。蜡质包衣材料的实例是平均摩尔重量1000至20000的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；其中醇含有12至20个碳原子并且其中存在15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪醇；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸甘油单酯和甘油二酯和甘油三酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制品可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。

其他材料

还可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物整理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢助悬剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以使用本领域中已知用于洗涤剂中的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术内。

分散剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地说，粉状洗涤剂可以包括分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括至少两个羧基，这两个羧基被不超过两个碳原子彼此分开。适合的分散剂例如描述于粉状洗涤剂，表面活性剂科学系列，第71卷中，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。

染料转移抑制剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在受试组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从大约0.0001％至大约10％、从大约0.01％至大约5％或甚至从大约0.1％至大约3％的水平存在。

荧光增白剂

本发明的洗涤剂组合物将优选地还包含另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。其中增亮剂优选以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨芪-磺酸衍生物型的实例包括以下各项的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-GeigyAG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选荧光增白剂，是可商购的Parawhite KX，由派拉蒙矿物与化学(Paramount Minerals and Chemicals)，孟买，印度供应。适合在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。

适当的荧光增白剂水平包括从大约0.01wt％，从0.05wt％，从大约0.1wt％或甚至从大约0.2wt％至上限水平0.5wt％或甚至0.75wt％的较低水平。

污物释放聚合物

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉布和基于聚酯的织物)移除污物，特别是从基于聚酯的织物移除疏水性污物。污垢释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如粉状洗涤剂，表面活性剂科学系列第71卷第7章，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker，Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和连接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。该核心结构可以包含聚烯亚胺结构或聚烷醇胺结构，如在WO 2009/087523中详述(特此通过引用的方式结合)。此外，随机接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中(将其通过引用而特此结合)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如改性纤维素衍生物，如在EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(二者特此通过引用的方式结合)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺和其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、兼性离子改性的纤维素及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。

抗再沉积剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污物释放聚合物下描述的纤维素基聚合物还可以用作抗再沉积剂。

流变改性剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下各项组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如如在EP 2169040中所示。

其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、助水溶剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。

洗涤剂产品的配制

本发明的洗涤剂组合物可以处于任何合宜的形式，例如，棒、均质片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个隔室的小袋、常规或压型粉末、颗粒、糊剂、凝胶或常规、压型或浓缩液体。

袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有适合容持该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料，优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少大约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，该共混组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSolLLC公司销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。US 2009/0011970A1。

可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。由此可以避免组分之间的负面的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可以包含从0-30％的有机溶剂。

液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

液体洗涤剂组合物

该液体洗涤剂组合物可以包括本发明的微囊，并且由此形成处于任何形式的任何洗涤剂组合物的一部分，如液体和粉状洗涤剂，以及皂和洗涤剂条。

在一个实施例中，本发明针对液体洗涤剂组合物，这些组合物包含微囊(如上所述)与一种或多种另外的清洁组合物组分组合。

该微囊(如上所述)可以按对应于从0.0001％至5％(w/w)活性酶蛋白(AEP)的量被添加至该液体洗涤剂组合物；优选地从0.001％至5％，更优选地从0.005％至5％，更优选地从0.005％至4％，更优选地从0.005％至3％，更优选地从0.005％至2％，甚至更优选地从0.01％至2％，并且最优选地从0.01％至1％(w/w)活性酶蛋白。

该液体洗涤剂组合物具有一种物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体，糊剂，可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的亦或或结构化的，优选是各向同性的。它可以是一种配制品，用于在自动洗衣机中洗涤或用于手洗。它还可以是个人护理产品，例如个人护理产品洗发水、牙膏、或洗手皂。

该液体洗涤剂组合物可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、或高达20％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以包含从0％-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。

洗涤剂成分可以通过水可溶性小袋中的区室彼此物理性地分开。由此可以避免组分之间的负面的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。

该洗涤剂组分可以采用一种单位剂量产物的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它被越来越多的应用在针对衣物洗涤剂中。一个洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如，在由一种水溶性薄膜制得的一个小袋中)。

袋可以是适于保存该组合物的任意形式、任何形状、和任何材料，例如不允许该组合物在与水接触之前从该袋中释放出。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料，优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少大约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。薄膜还可以是一种混合组合物，包括可通过水解可降解的以及水溶性的聚合物混合物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考(Trade reference)M8630下，由Chris Craft In.Prod.Of Gary，Ind.，US销售)，以及增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的室可以与含有固体的室不同(见例如US2009/0011970)。

洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品保养)有待清洁的纺织品的类型、污物的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据一种具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性。

衣物肥皂棒

本发明的多肽可以被添加至洗衣皂条中并且用于手洗洗衣、织物和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条以及洗涤剂条。条的类型通常区别在于它们包含的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括包含来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间推移显著改变的实体形式，即如果将一个固体物件(例如洗衣皂条)放置在一种容器内，那么该固体物件不会改变以填充放置该固体物件的容器。该条是典型地呈条形式但是可以呈其他固体形状、如圆形或卵形的一种固体。

该衣物肥皂棒可以包含一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂例如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物例如4-甲酸基本硼酸、一个或多个肥皂或合成的表面活性剂、多元醇例如甘油、pH控制化合物例如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐，其中该一价阳离子可以是例如Na⁺、K⁺或NH₄ ⁺并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，因此该一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。

该衣物肥皂棒可以也包含络合剂如EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填料、表面活性剂如阴离子合成表面活性剂、助洗剂、聚合污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填料、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、粘合剂、浸出剂、漂白活化剂、黏土污垢去除剂、抗再沉淀剂、聚合分散剂、增白剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。

洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，例如但不限制于：混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在工艺的不同阶段向肥皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备包含肥皂、酶、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料并且然后将该混合物压条。可以同时添加作为例如处于液态的蛋白酶抑制剂的多肽以及任选的另外的酶。除了混合步骤和出条步骤，该过程可以进一步包含以下步骤：研磨、挤出、切割、冲压、冷却和/或封装。

在以下各段中进一步概述本发明：

1.具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途，其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

2.根据段落1所述的用途，用于防止、减少或去除物品的粘性。

3.根据段落1或2中任一项所述的用途，用于预处理存在于物品上的生物膜。

4.根据段落1-3中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除洗涤循环过程中污垢的再沉积。

5.根据段落1-4中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着。

6.根据以上段落中任一段所述的用途，用于维持或改进该物品的白度。

7.根据以上段落中任一段所述的用途，其中通过组合的使用具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和漂白系统，该白度进一步改进。

8.根据段落7所述的用途，其中该漂白系统选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS))、6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)、NaHCO₃和/或其混合物。

9.根据段落7所述的用途，其中该漂白系统包含选自下组的漂白催化剂，该组由具有以下化学式的有机催化剂组成：

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，其中每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

10.根据以上段落中任一段所述的用途，其中将该具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽与蛋白酶一起使用。

11.根据段落10所述的用途，其中该蛋白酶加强具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽。

12.根据以上段落中任一段所述的用途，其中该具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽获得自真菌来源。

13.根据段落12所述的用途，其中该多肽获得自木霉属。

14.根据段落12-13中任一项所述的用途，其中该多肽获得自哈茨木霉。

15.根据段落12-14中任一项所述的用途，其中该多肽是具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：

(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％的序列一致性；

(b)由如下的多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长互补体杂交；

(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％的序列一致性；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。

16.一种洗涤剂组合物，包含具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和洗涤剂佐剂成分。

17.根据段落12所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自木霉属。

18.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该多肽获得自哈茨木霉。

19.根据以上段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该多肽是如段落59-66所述的多肽。

20.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂佐剂成分选自下组，该组由以下各项组成：表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白系统、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、聚合的分散剂、粘土去污剂/抗再沉淀剂、增白剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、助水溶物、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、防沫剂、分散剂、加工助剂、和/或颜料。

21.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂佐剂成分是表面活性剂。

22.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂佐剂成分是助洗剂。

23.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该漂白系统选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS))、6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)、NaHCO₃和/或其混合物。

24.根据段落23所述的洗涤剂组合物，其中该漂白系统包含四乙酰基乙二胺(TAED)和NaHCO₃。

25.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该漂白系统包含选自下组的漂白催化剂，该组由具有以下化学式的有机催化剂组成：

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，其中每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

26.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种酶，该组由以下各项组成：蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、过氧物酶和氧化酶。

27.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该酶是动物、植物或微生物来源的蛋白酶。

28.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该蛋白酶是化学修饰的或蛋白质工程的。

29.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中蛋白酶是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶，优选碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。

30.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该蛋白酶选自下组，该组由以下各项组成：BPN’、枯草杆菌蛋白酶诺和、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147、枯草杆菌蛋白酶168、迟缓芽孢杆菌DSM 5483蛋白酶、胰蛋白酶样蛋白酶、镰孢属蛋白酶及其变体。

31.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该蛋白酶与SEQ IDNO:7具有至少60％、如至少70％、如至少75％、如至少80％、如至少85％、如至少90％、如至少95％序列一致性。

32.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该蛋白酶与SEQ IDNO:7或其变体的氨基酸序列具有至少90％序列一致性，其中该变体在一个或多个对应于SEQ ID NO 7的位置3、4、9、15、27、36、42、53、55、57、66、74、76、85、87、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、104、116、118、121、120、123、126、127、128、154、156、158、161、164、167、170、188、189、193、194、199、200、206、211、212、216、218、222、224、226、229、230、235、239、242、246、255、256和268的下列位置处具有取代，优选地该变体是与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％一致性的碱性蛋白酶，该碱性蛋白酶具有以下取代：S9R、S9E、N76D、S99D、S101E、S101D、L217D、S128A、S128L、L217Q、M222S或取代N76D+G195E(使用BPN’编号)。

33.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂组合物能够减少选自下组的细菌粘附至表面，该组由以下各项组成：不动杆菌属、气微菌属、短波单胞菌属、微杆菌属、滕黄微球菌、假单胞菌属、表皮葡萄球菌以及寡养单胞菌属，或能够使细菌从它们粘附至其上的表面释放。

34.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该表面是纺织品表面、餐具表面或硬表面。

35.根据段落34所述的洗涤剂组合物，其中该纺织品是由棉、亚麻、黄麻、苎麻、剑麻、纤维素纺织品、粘胶纤维/人造纤维、乙酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维、羊毛、丝绸、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛、尼龙、芳香聚酰胺、聚酯、丙烯酸的、聚丙烯和氨纶/弹性纤维、聚酰胺、聚丙烯、或其共混物，以及基于纤维素和不基于纤维素的纤维的共混物制成。

36.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该组合物是棒、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。

37.根据以上组合物段落中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该组合物是液体洗涤剂、粉状洗涤剂或颗粒洗涤剂。

38.用于洗涤物品的洗涤方法，该方法包括以下步骤：

a.将该物品暴露于一种洗涤液，该洗涤液包括如段落61-68所述的多肽或根据段落16-37中任一项所述的洗涤剂组合物；

b.完成至少一个洗涤周期；并且

c.任选地漂洗该物品，

其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

39.根据段落38所述的方法，其中该洗涤液的pH在5,5至11的范围内。

40.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的pH在7至9的范围内，在7至8的范围内或在7.5至8.5的范围内。

41.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的温度在5℃至95℃的范围内、或在10℃至80℃的范围内、在10℃至70℃的范围内、在10℃至60℃的范围内、在10℃至50℃的范围内、在15℃至40℃的范围内或在20℃至30℃的范围内。

42.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该洗涤液的温度是30℃。

43.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括在完成洗涤周期后排掉洗涤液或部分洗涤液。

44.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中在第一个并且任选地第二个或第三个洗涤循环过程中，将该物品暴露于该洗涤液。

45.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中在暴露于该洗涤液后，漂洗该物品。

46.根据前述方法段落中的任一项所述的方法，其中将该物品用水或用包含调节剂的水进行漂洗。

47.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该物品的粘性被减少。

48.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中将物品上存在的污渍用如段落47-56所述的多肽或根据段落16-34中任一项所述的洗涤剂组合物进行预处理。

49.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中污垢再沉积被防止或减少。

50.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中污垢在物品上的附着被防止、减少或去除。

51.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该物品的白度被维持或改进。

52.根据段落51所述的方法，其中通过组合的使用具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和漂白系统，该白度进一步改进。

53.根据段落52所述的方法，其中该漂白系统选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠(ISONOBS)、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS或DOBA)、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐(NOBS))、6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸(PAP)、NaHCO₃和/或其混合物。

54.根据段落52-53所述的方法，其中该漂白系统包含四乙酰基乙二胺(TAED)和NaHCO₃。

55.根据段落52-54中任一项所述的方法，其中该漂白系统包含选自下组的漂白催化剂，该组由具有以下化学式的有机催化剂组成：

(iii)及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，其中每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

56.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该物品是纺织品。

57.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该物品是餐具。

58.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该物品是硬表面。

59.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中在洗涤液中该多肽的浓度典型地在0.02-15ppm酶蛋白的范围内、在0.05-15ppm酶蛋白的范围内、在0.1-10ppm酶蛋白的范围内、在0.2-5ppm酶蛋白的范围内、在0.25-5ppm酶蛋白的范围内、在0.3-3ppm酶蛋白的范围内、在0.4-2ppm酶蛋白的范围内、或在0.5-1ppm酶蛋白的范围内。

60.根据以上方法段落中任一项所述的方法，其中该蛋白酶的浓度在0.05-100.0ppm酶蛋白的范围内、在0.05-50.0ppm酶蛋白的范围内、在0.5-50.0ppm酶蛋白的范围内、在1.0-20.0ppm酶蛋白的范围内、在2.0-20.0ppm酶蛋白的范围内、在2.4-10.0ppm酶蛋白的范围内、在1.0-5.0ppm酶蛋白的范围内、或在1.0-3.0ppm酶蛋白的范围内。

61.一种具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：

(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％的序列一致性；

(b)由如下的多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长互补体杂交；

(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％的序列一致性；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的片段，该片段具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。

62.如段落61所述的多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的序列一致性。

63.如段落61或62中所述的多肽，其中多肽是由多核苷酸编码的，该多核苷酸在低严格条件下、低-中严格条件下、中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或(ii)(i)的全长互补体杂交。

64.如段落61-63中任一段所述的多肽，该多肽由以下多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性。

65.如段落61-64中任一项所述的多肽，该多肽包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2的成熟多肽或者由其组成。

66.如段落65所述的多肽，其中该成熟多肽是SEQ ID NO:2的氨基酸1至458。

67.如段落61-66中任一段所述的多肽，该多肽是SEQ ID NO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入。

68.如段落67中所述的多肽，该多肽是SEQ ID NO:2的片段，其中该片段具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性。

69.一种编码如段落61-68中任一项所述的多肽的多核苷酸。

70.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包括如段落69所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导多肽在表达宿主内产生的一个或多个控制序列上。

71.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包括如段落70所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽产生的一个或多个控制序列上。

72.一种产生如段落61-68中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：在有益于产生该多肽的条件下培养一种细胞，该细胞处于其野生型形式时产生该多肽。

73.如段落72所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。

74.一种产生具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽的方法，该方法包括：在有益于产生该多肽的条件下培养如段落71所述的宿主细胞。

75.如段落74所述的方法，该方法进一步包括回收该多肽。

76.一种包括如段落61-68中任一项所述的多肽的全培养液配制品或细胞培养组合物。

测定和洗涤剂组合物

洗涤剂组合物

碧浪灵敏性白色与彩色组合物、液体洗涤剂组合物：

水、酒精乙氧基硫酸盐、醇乙氧基化物、氨基氧化物、柠檬酸、C12-18拔顶棕榈仁脂肪酸、蛋白酶、糖苷酶、淀粉酶、乙醇、1,2丙二醇、甲酸钠、氯化钙、氢氧化钠、有机硅乳液、跨硫酸EHDQ(这些成分以递减次序列出)。

WFK IEC-A标准洗涤剂的组合物(粉状)

成分：直链烷基苯磺酸钠8.8％、乙氧基化的脂肪醇C12-18(7EO)4.7％、钠皂3.2％、消泡剂DC2-4248S 3.9％、硅酸铝钠沸石4A 28.3％、碳酸钠11.6％、丙烯酸和马来酸的共聚物的钠盐(Sokalan CP5)2.4％、硅酸钠3.0％、羧甲基纤维素1.2％、Dequest 20662.8％，光学增白剂0.2％、硫酸钠6.5％、蛋白酶0.4％。

标准洗涤剂A组合物(液体)

成分：12％LAS、11％AEO Biosoft N25-7(NI)、7％AEOS(SLES)、6％MPG(丙二醇)、3％乙醇、3％TEA、2.75％可可皂、2.75％大豆皂、2％甘油、2％氢氧化钠、2％柠檬酸钠、1％甲酸钠、0.2％DTMPA和0.2％PCA(所有的百分数都是w/w)

碧浪Actilift组合物(液体)

成分：5％-15％阴离子表面活性剂；<5％非离子型表面活性剂、磷酸盐、肥皂；酶、光学增亮剂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料、α-异甲基紫罗兰酮、香茅醇、香叶醇、芳樟醇。

碧浪Actilift彩色&风格组合物

水、十二烷基苯磺酸钠、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、丙二醇、棕榈仁酸钠、月桂醇醚硫酸钠、MEA十二烷基苯磺酸盐、硫酸化乙氧基化六亚甲基二胺季铵化物、枯烯磺酸钠、香料、PEG/乙酸乙烯酯共聚物、甲酸钠、氢化蓖麻油、二亚乙基三胺五亚甲基膦酸钠、PEG/PPG-10/2丙基庚基醚、丁苯基甲基丙醛、聚乙烯基吡啶-N-氧化物、山梨醇、甘油、乙醇胺、氢氧化钠、α-异甲基紫罗兰酮、蛋白酶、氯化钙、香叶醇、芳樟醇、香茅醇、三丙二醇、糖苷酶、苯并异噻唑啉酮、二甲硅油、糖苷酶、乙酸钠、纤维素酶、着色剂、硬脂酸甘油酯、羟乙基纤维素、二氧化硅。

碧浪Actilift彩色&风格组合物，新包装

成分：水、月桂醇聚醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁酸钠、醇、甲酸钠、硫酸化乙氧基化六亚甲基二胺季铵化物、氢氧化钠、香料、聚乙烯基吡啶-N-氧化物、山梨醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、葡糖苷酶、糖苷酶、乙酸钠、着色剂、纤维素酶。

碧浪Actilift白色&彩色酷洁组合物，新包装

成分：水、月桂醇聚醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁酸钠、醇、甲酸钠、硫酸化乙氧基化六亚甲基二胺季铵化物、氢氧化钠、香料、山梨醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、葡糖苷酶、糖苷酶、乙酸钠、着色剂、纤维素酶。

碧浪灵敏性白色与彩色衣物洗涤剂组合物

成分：水、月桂醇聚醚硫酸钠、丙二醇、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、棕榈仁酸钠、醇、甲酸钠、硫酸化乙氧基化六亚甲基二胺季铵化物、氢氧化钠、山梨醇、氯化钙、蛋白酶、甘油、糖苷酶、乙酸钠、着色剂、纤维素酶、二氧化硅。

碧浪Actilift组合物，普通

水、十二烷基苯磺酸钠、C14-C15Pareth-7、柠檬酸钠、丙二醇、棕榈仁酸钠、月桂醇醚硫酸钠、MEA十二烷基苯磺酸盐、硫酸化乙氧基化六亚甲基二胺季铵化物、枯烯磺酸钠、香料、PEG/乙酸乙烯酯共聚物、甲酸钠、C12-C14Pareth-7、氢化蓖麻油、二亚乙基三胺五亚甲基膦酸钠、PEG/PPG-10/2丙基庚基醚、丁苯基甲基丙醛、荧光增亮剂9、山梨醇、甘油、乙醇胺、氢氧化钠、α-异甲基紫罗兰酮、蛋白酶、氯化钙、香叶醇、芳樟醇、香茅醇、三丙二醇、氯化钠、糖苷酶、苯并异噻唑啉酮、二甲硅油、糖苷酶、乙酸钠、纤维素酶、着色剂、硬脂酸甘油酯、羟乙基纤维素、二氧化硅。

宝莹小&强大洗涤剂组合物(液体)

成分：15％-30％阴离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、5％-15％皂、<5％聚羧酸盐、香料、磷酸盐、光学增亮剂

Fairy非生物制品组合物(液体)

成分：15％-30％阴离子表面活性剂、5％-15％非离子表面活性剂、肥皂、苯并异噻唑啉酮、甲基异噻唑啉酮、香料

标准洗涤剂T组合物(粉末)

成分：11％LAS、2％AS/AEOS、2％肥皂、3％AEO、15.15％碳酸钠、3％硅酸钠、18.75％沸石、0.15％螯合剂、2％柠檬酸钠、1.65％AA/MA共聚物、2.5％CMC和0.5％SRP(所有的百分数都是w/w)。

标准洗涤剂X组合物(粉末)

成分：16.5％LAS、15％沸石、12％二硅酸钠、20％碳酸钠、1％sokalan、35.5％硫酸钠(所有的百分数都是w/w)。

碧浪Actilif组合物(粉末)

成分：15％-30％阴离子表面活性剂、<5％非离子表面活性剂、磷酸盐、聚羧酸盐、沸石；酶、香料、己基肉桂醛。

宝莹Megaperls组合物(粉末)

成分：以下的15％-30％：阴离子表面活性剂、基于氧的漂白剂和沸石，以下的少于5％：非离子表面活性剂、磷酸盐、聚羧酸盐、肥皂、另外成分：香料、己基肉桂醛、水杨酸苄酯、芳樟醇、光学增亮剂、酶和香茅醇。

嘉盛液体，原版：

成分：水、醇乙氧基硫酸盐、二乙二醇、醇乙氧化物、乙醇胺、直链烷基苯磺酸盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、柠檬酸、硼砂、枯烯磺酸钠、丙二醇、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二丙乙基四氨、氢氧化钠、甲酸钠、甲酸钙、二甲硅油、淀粉酶、蛋白酶、Liquitint^TM、氢化蓖麻油、香味。

汰渍液体，原版：

成分：线形烷基苯磺酸酯、丙二醇、柠檬酸、氢氧化钠、硼砂、乙醇胺、乙醇、醇硫酸盐、聚乙烯亚胺乙氧基化物、脂肪酸钠、乙氧基硫酸二季铵盐、蛋白酶、二乙二醇、月桂醇聚醚-9、烷基二甲胺氧化物、香味、淀粉酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、DTPA、甲酸钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、Liquitint^TM蓝、二甲硅油。

液体汰渍，自由和温和型：水、醇乙氧基硫酸钠、丙二醇、硼砂、乙醇、线形烷基苯磺酸钠、盐、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、反式硫酸化和乙氧基化的六亚甲基二胺、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、甲酸钠、烷基硫酸钠、DTPA、氧化胺、甲酸钙、二氨基二苯乙烯二钠、二磺酸盐、淀粉酶、蛋白酶、二甲硅油、苯并异噻唑啉酮

汰渍冷水液体，清香型：水、醇乙氧基硫酸酯、线形烷基苯磺酸酯、二乙二醇、丙二醇、乙醇胺、柠檬酸、硼砂、醇硫酸盐、氢氧化钠、聚乙烯亚胺、乙氧基化物、脂肪酸钠、乙醇、蛋白酶、月桂醇聚醚-9、乙氧基硫酸二季铵盐、月桂基胺氧化物、异丙苯钠、磺酸盐、香味、DTPA、淀粉酶、二钠、二氨基二苯乙烯、二磺酸盐、甲酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钙、聚乙二醇4000、甘露聚糖酶、果胶酶、Liquitint^TM蓝、二甲硅油

汰渍TOTALCARE^TM液体，冷棉：水、醇乙氧基硫酸酯、丙二醇、脂肪酸钠、月桂基三甲基氯化铵、乙醇、氢氧化钠、枯烯磺酸钠、柠檬酸、乙醇胺、二乙二醇、聚醚硅氧烷、硼砂、香味、聚乙烯亚胺乙氧基化物、蛋白酶、月桂醇聚醚-9、

DTPA、聚丙烯酰胺季铵盐氯化物、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钠、Liquitint^TM橙、二丙基乙四胺、二甲硅油、纤维素酶。

液体汰渍加漂白剂Alternative^TM，生动白和鲜艳、最初以及清洁微风：

水、醇乙氧基硫酸钠、烷基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、脂肪酸钠、乙醇胺、月桂基胺氧化物、硼砂、月桂醇聚醚-9、DTPA、枯烯磺酸钠、甲酸钠、甲酸钙、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、醇硫酸盐、氢氧化钠、乙氧基硫酸二季铵盐、香味、淀粉酶、蛋白酶、甘露聚糖酶、果胶酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、苯并异噻唑啉酮、Liquitint^TM蓝、二甲硅油、二丙基乙四胺。

液体汰渍HE，原味：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、烷基硫酸钠、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯、MEA盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、聚乙烯亚胺、乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、Liquitint^TM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。

汰渍TOTALCARE HE液体，新生雨润(renewing Rain)：水、醇乙氧基硫酸酯、线形烷基苯磺酸酯、醇乙氧化物、柠檬酸、乙醇胺、脂肪酸钠、二乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、硼砂、聚乙烯亚胺乙氧基化物、聚醚硅氧烷、乙醇、蛋白酶、枯烯磺酸钠、乙氧基硫酸二季铵盐、月桂醇聚醚-9、香味、淀粉酶、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钠、甲酸钙、甘露聚糖酶、Liquitint^TM橙、二甲硅油、聚丙烯酰胺季铵盐氯化物、纤维素酶、二丙基乙四胺。

汰渍液体HE自由：水、醇乙氧基硫酸酯、二乙二醇、单乙醇胺柠檬酸、甲酸钠、丙二醇、线形烷基苯磺酸酯、乙醇胺、乙醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、淀粉酶、苯并异噻唑啉、硼砂、甲酸钙、柠檬酸、乙二烯三胺五乙酸钠、二甲硅油、乙氧基硫酸二季铵盐、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、月桂醇聚醚-9、甘露聚糖酶、蛋白酶、枯烯磺酸钠、脂肪酸钠。

汰渍冷水HE液体，清香型：水、醇乙氧基硫酸酯、MEA柠檬酸、醇硫酸盐、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯MEA、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、Liquitint^TM蓝、二甲硅油。

汰渍冷水HE自由液体：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯：钠盐、醇乙氧化物、线形烷基苯磺酸酯：MEA盐、脂肪酸钠、聚乙烯亚胺乙氧基化物、二乙二醇、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、硼砂、蛋白酶、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙醇、枯烯磺酸钠、淀粉酶、柠檬酸、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钠、甲酸钙、二甲硅油。

汰渍简单洁净与清新：水、醇乙氧化物硫酸盐、线形烷基苯磺酸钠/Mea盐、丙二醇、二乙二醇、甲酸钠、乙醇、硼砂、脂肪酸钠、香味、月桂基胺氧化物、DTPA、聚乙烯胺乙氧基化物、甲酸钙、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、二甲硅油、四胺、Liquitint^TM蓝。

汰渍舱，海雾，神秘森林，春天牧场：线形烷基苯磺酸酯、C12-16Pareth-9、丙二醇、醇乙氧基硫酸酯、水、聚乙烯亚胺乙氧基化物、甘油、脂肪酸盐、PEG-136聚乙酸乙烯酯、乙二胺琥珀酸盐、单乙醇胺柠檬酸、亚硫酸氢钠、乙二烯三胺五乙酸钠、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、甲酸钙、甘露聚糖酶、木葡聚糖酶、甲酸钠、氢化蓖麻油、natalase、染料、termamyl、枯草杆菌蛋白酶、苯并异噻唑啉、香料。

汰渍去污笔(Tide to Go)：去离子水、二丙二醇丁基醚、烷基硫酸钠、过氧化氢、乙醇、硫酸镁、烷基二甲基氧化胺、柠檬酸、氢氧化钠、三甲氧基苯甲酸、香味。

汰渍污渍释放液体：水、烷基乙氧基化物、直链烷基苯磺酸盐、过氧化氢、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇胺、二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠、四丁基乙叉基双酚、F&DC黄3、香味。

汰渍污渍释放粉末：过碳酸钠、硫酸钠、碳酸钠、铝硅酸钠、壬酰氧基苯磺酸盐、聚丙烯酸钠、水、烷基苯磺酸钠、DTPA、聚乙二醇、棕榈酸钠、淀粉酶、蛋白酶、修饰的淀粉、FD&C蓝1、香味。

汰渍污渍释放，预处理器喷雾：

水、烷基乙氧基化物、MEA硼酸盐、直链烷基苯磺酸盐、丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、氯化钙酶、蛋白酶、乙醇胺、苯并异噻唑啉酮、淀粉酶、柠檬酸钠、氢氧化钠、香味。

汰渍去污渍橡皮擦：水、烷基氧化胺、二丙二醇苯基醚、过氧化氢、柠檬酸、乙二胺二琥珀酸钠盐、烷基硫酸钠、香味。

汰渍氧化加强：碳酸氢钠、碳酸钠、过碳酸钠、醇乙氧化物、氯化钠、马来酸/丙烯酸共聚物、壬酰氧基苯磺酸盐、硫酸钠、着色剂、乙二烯三胺五乙酸钠盐、水合硅铝酸盐(沸石)、聚乙二醇、烷基苯磺酸钠、棕榈酸钠、淀粉、水、香味。

汰渍污渍释放加强双重Pac：聚乙烯醇袋膜，其中有被包装的液体部分和粉末部分：

液体成分：二丙二醇、乙氧基硫酸二季铵盐、水、甘油、LiquitintTM橙，粉末成分：过碳酸钠、壬酰氧基苯磺酸盐、碳酸钠、硫酸钠、铝硅酸钠、聚丙烯酸钠、烷基苯磺酸钠、马来酸/丙烯酸共聚物、水、淀粉酶、聚乙二醇、棕榈酸钠、修饰的淀粉、蛋白酶、甘油、DTPA、香味。

汰渍超级污渍释放：水、醇乙氧基硫酸钠、直链烷基苯磺酸盐、钠/MEA盐、MEA柠檬酸、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、脂肪酸钠、蛋白酶、硼砂、枯烯磺酸钠、DTPA、香味、淀粉酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甲酸钙、甲酸钠、葡聚糖酶、二甲硅油、Liquitint^TM蓝、甘露聚糖酶。

具有少许

粉状洗涤剂的超级汰渍，四月清新/清洁微风/四月精华：碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、膨润土、水、过碳酸钠、聚丙烯酸钠、硅酸盐、烷基硫酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、DTPA、聚乙二醇4000、硅胶、乙氧基化物、香味、聚氧化乙烯、棕榈酸、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、Liquitint^TM红、FD&C蓝1、纤维素酶。

具有少许Downy清洁微风的超级汰渍：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐：钠/MEA盐、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺、丙氧基乙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、葡聚糖酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、甲酸钠、Liquitint^TM蓝。

具有Downy阳花的超级汰渍：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐：钠/MEA盐、丙二醇、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、聚乙烯亚胺乙氧基化物、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、丙铵丙酰胺、葡聚糖酶、甲酸钠、Liquitint^TM蓝。

具有Downy四月清新/甜蜜梦境的超级汰渍：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、直链烷基苯磺酸盐：钠/MEA盐、丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、乙醇、二乙二醇、聚亚乙基亚胺丙氧基乙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、醇硫酸盐、二甲硅油、香味、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、蛋白酶、亚硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、淀粉酶、葡聚糖酶、

蓖麻油、甲酸钙、MEA、苯乙烯丙烯酯共聚物、丙铵丙酰胺、甲酸钠、Liquitint^TM蓝。

超级汰渍自由粉状洗涤剂：碳酸钠、铝硅酸钠、烷基硫酸盐、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、乙氧基化物、过碳酸钠、聚乙二醇4000、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、纤维素酶。

超级汰渍粉状洗涤剂，清洁微风/春日薰衣草/森林泉：碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、烷基硫酸盐、过碳酸钠、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、棕榈酸、蛋白酶、硅胶、纤维素酶。

超级汰渍HE(高效率)粉状洗涤剂，清洁微风：碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、水、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、聚丙烯酸钠、硅酸盐、过碳酸钠、乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、蛋白酶、硅胶、纤维素酶。

超级汰渍冷水粉状洗涤剂，清香型：碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、过碳酸钠、烷基硫酸盐、线形烷基苯磺酸酯、水、壬酰氧基苯酚酯磺酸、聚丙烯酸钠、硅酸盐、乙氧基化物、聚乙二醇4000、DTPA、香味、Natalase、棕榈酸、蛋白酶、二钠、二氨基二苯乙烯二磺酸盐、FD&C蓝1、硅胶、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。

具有漂白剂粉状洗涤剂的超级汰渍，清洁微风：碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、过碳酸钠、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、

水、硅酸盐、聚丙烯酸钠、乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。

具有Febreeze Freshness^TM粉状洗涤剂的超级汰渍，春日新生：

碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、过碳酸钠、烷基硫酸盐、水、聚丙烯酸钠、硅酸盐、壬酰氧基苯酚酯磺酸、乙氧基化物、聚乙二醇4000、DTPA、香味、纤维素酶、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1。

具有Febreeze Freshness的液体汰渍加-运动HE活跃新鲜：

水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、线形烷基苯磺酸酯：MEA盐、醇乙氧化物、脂肪酸钠、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇、枯烯磺酸钠、硼砂、香味、DTPA、硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、Liquitint^TM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。

汰渍加Febreeze Freshness春日新生：

水、醇乙氧基硫酸钠、直链烷基苯磺酸盐：钠/MEA盐、MEA柠檬酸、

丙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物、香味、乙醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺丙氧基乙氧基化物、蛋白酶、醇硫酸盐、硼砂、脂肪酸钠、DTPA、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、MEA、甘露聚糖酶、葡聚糖酶、甲酸钠、二甲硅油、Liquitint^TM蓝、四胺。

具有Febreeze Freshness的液体汰渍加，运动HE胜利新鲜：水、醇乙氧基硫酸钠、MEA柠檬酸、线形烷基苯磺酸酯、钠盐、线形烷基苯磺酸酯：

MEA盐、醇乙氧化物、脂肪酸钠、丙二醇、二乙二醇、聚乙烯亚胺乙氧基化物丙氧基化物、乙氧基硫酸二季铵盐、乙醇、枯烯磺酸钠、硼砂、香味、

DTPA、硫酸氢钠、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、甘露聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、甲酸钠、甲酸钙、月桂基胺氧化物、Liquitint^TM蓝、二甲硅油/聚二甲基硅酮。

汰渍生动白+鲜艳，原版：

碳酸钠、铝硅酸钠、硫酸钠、线形烷基苯磺酸酯、

过碳酸钠、壬酰氧基苯酚酯磺酸、烷基硫酸盐、水、硅酸盐、聚丙烯酸钠乙氧基化物、聚乙二醇4000、香味、DTPA、棕榈酸、蛋白酶、二氨基二苯乙烯二磺酸钠、硅胶、FD&C蓝1、纤维素酶、烷基醚硫酸盐。

所有酶水平表达为rug活性酶蛋白/100g洗涤剂组合物。

表面活性剂成分获得自巴斯夫公司(BASF)、路德维希港、德国(Lutensol(R))；壳牌化学品公司(Shell Chemicals)，伦敦，英国；斯泰潘公司(Stepan)，诺思菲尔德，III，美国；亨斯曼公司(Huntsman)，盐湖城，犹他州，美国；科莱恩公司(Clariant)，苏尔茨巴赫市，德国(Praepagen(R))。

三聚磷酸钠可以获得自罗地亚公司(Rhodia)、巴黎、法国。

沸石可以获得自工业沸石(英国)有限公司，格雷士，艾塞克斯，英国。柠檬酸和柠檬酸钠可以获得自永本兹劳尔公司(Jungbunzlauer)，巴塞尔，瑞士。NOBS是壬酰基羟苯磺酸钠，由伊士曼公司(Eastman)，贝茨维尔，阿肯色州，美国。TAED是四乙酰乙二胺，在科莱恩有限公司(Clariant GmbH)，祖尔茨巴赫，德国的Peractive(R)品牌下提供。

碳酸钠和碳酸氢钠可以获得自索尔维公司(Solvay)，布鲁塞尔，比利时。

聚丙烯酸酯、聚丙烯酸酯/马来酸酯共聚物可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。

Repel-O-Tex(R)可以获得自罗地亚公司(Rhodia)、巴黎、法国。

Texcare(R)可以获得自科莱恩公司，祖尔茨巴赫，德国。过碳酸钠和碳酸钠可以获得自索尔维公司，休斯顿，德克萨斯州，美国。

乙二胺-N,N’-二琥珀酸的Na盐，(S,S)异构体(EDDS)是通过联合奥泰公司(Octel)，埃尔斯米尔港，英国提供。

羟基乙醇二磷酸盐(HEDP)是由美国陶氏化学公司(Dow Chemical)，米德兰，密歇根州，美国。

酶Savinase(R)、Savinase(R)Ultra、Stainzyme(R)Plus、Lipex(R)、Lipolex(R)、Lipoclean(R)、Celluclean(R)、Carezyme(R)、Natalase(R)、Stainzyme(R)、Stainzyme(R)Plus、Termamyl(R)、Termamyl(R)ultra、和Mannaway(R)可以获得自诺维信公司(Novozymes)，巴格斯瓦德，丹麦。

酶Purafect(R)、FN3、FN4和Optisize可以获得自杰能科国际公司(GenencorInternational Inc.)，帕洛阿尔托，加利福尼亚州，美国。

直接紫9和99可以获得自巴斯夫公司、路德维希港、德国。溶剂紫13可以获得自宁波立兴化工有限公司(Ningbo Lixing Chemical Co.,Ltd.)，宁波，浙江，中国。

增亮剂可以获得自汽巴精化有限公司，巴塞尔，瑞士。除非另外指明，所有百分比和比率都是按重量计计算。除非另外指明，所有百分比和比率都是基于总组合物计算。应当理解的是贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低的数值限度，如同此类较低数值限度在此被明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高的数值限度，如同此类较高数值限度在此被明确写出。本说明书中所给出的每个数值范围将包括落入在这样更宽泛数值范围内的每一狭小的范围，好像这样狭小的数值范围都在这里被书面表达了。

洗涤测定

Terg-O-tometer(TOM)洗涤测定

Tergo-To-Meter(TOM)是一种中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试12种不同洗涤条件。TOM基本上是大型的具有多达12个开放金属烧杯淹没至其中的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的顶部加载型洗涤机器并且在实验期间，它们中的每一者将含有特定洗涤剂/酶系统的溶液并且对玷污的和未玷污的织物测试其性能。通过旋转搅拌臂获得机械应力，该旋转搅拌臂搅拌在每个烧杯内的液体。因为TOM杯子不含盖子，所以有可能在TOM实验期间收回样品并且在洗涤期间在线分析信息。

TOM标准洗涤系统主要用于清洁剂和酶的中等规模测试，在例如US或LA/AP洗涤条件下。在一个TOM实验中，如压载物与污物的比率和织物与洗涤液的比率的因素可以变化。因此，TOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在顶部加载型洗衣机中的更费时的全规模实验之间的联系。

设备：水浴具有12个钢制烧杯并且每个烧杯1个旋转臂，每个烧杯的容量是500mL或1200mL的洗涤剂溶液。温度范围是从5℃至80℃。水浴应当用去离子水填充。转速可以设定为70至120rpm/min。

设定Terg-O-Tometer中的温度并且开始在水浴中旋转。等待温度调整(公差是+/-0,5℃)

应该对所有烧杯进行清洁并且不含微量先前测试物质。

在一个桶中制备具有所希望的量的洗涤剂、温度和水硬度的洗涤溶液。使洗涤剂在磁搅拌10分钟期间溶解。洗涤溶液应该在制备之后30到60分钟之内使用。

向TOM烧杯中添加600ml洗涤溶液

以120rpm开始搅拌，并且任选地向该烧杯添加酶。

将样本撒到烧杯中并且然后是压载加载物。

当样本和压载物添加到烧杯中时开始时间测量。

洗涤35分钟

停止搅动

将洗涤加载物从TOM烧杯转移到一个筛子并且用冷自来水漂洗

分离污物样本与压载加载物。在流动的水下，将污物样本转移到含冷自来水的5L烧杯。保持压载加载物分开地用于即将到来的灭活。

设定计时器为5分钟。

用手温和地压出水并且将测试样本放在覆盖着一张纸的托盘上。在样本的顶部上添加另一张纸。

让布样干燥过夜并且然后用如下所述的Color Eye进行测量。

迷你Launder-O-Meter(迷你LOM)模式洗涤系统

迷你LOM是Launder-O-Meter(LOM)的修饰的迷你洗涤系统，其是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。LOM基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗衣机并且在一次实验过程中，每个试管将包含一种具有特定的有待测试的洗涤剂/酶系统连同在关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。

LOM标准洗涤系统主要用于清洁剂和酶的中等规模测试，在例如欧洲洗涤条件下。在LOM实验中，如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率的因素可以变化。因此，LOM提供了在小规模实验(如AMSA和微型洗涤)与在前面加载型洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。

在迷你LOM中，洗涤是在置于斯图尔特(Stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。

污物的评估

将洗涤性能表示为在460nm处的反射测量值。反射越高，颜色越浅，并能用作对接近白色纺织品程度的评估。为了去除整理产物，将该纺织品预洗涤并且然后测量该纺织品从而为可以与实验布样进行比较的干净纺织品给出参考值。洗涤并漂洗之后，将布样摊开并且允许在室温下风干过夜。洗涤后第二天评估所有的布样。使用具有大孔径的MacbethColor Eye 7000反射式分光光度计进行布样的光反射评价。在没有UV的情况下以入射光进行测量并且取得在460nm处的减弱。

酶测定

测定I：半乳聚糖酶活性测试

在通过加酸水解进行修饰的落叶松木材阿拉伯半乳聚糖上的1,6-β半乳聚糖酶的活性筛选

1,6-半乳聚糖酶活性

使用由莱韦尔(Lever)(分析生物化学(Analytical Biochemistry)47,273-279，1972)研发的比色测定通过还原末端确定该活性。发现该1,6-β半乳聚糖酶产生还原端，该还原端与对-羟基苯甲酸酰肼溶液(PHBAH，西格玛(Sigma))反应，从而产生颜色增加，该颜色增加在用于该测定的条件下与酶活性成比例。下表示出了与单独的底物相比，通过各个吸光度测量的1,6-β半乳聚糖酶的活性。

材料与化学品：

0.1％底物：在水MQ中的落叶松木材阿拉伯半乳聚糖。

活性缓冲液：100mM乙酸，100mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)，在0.01％Triton(浓缩储备100x)中的100mM甘氨酸，1mM CaCl₂，pH 7。

Ka-Na-酒石酸盐/NaOH：用于1l Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液。终止溶液：将PAHBAH(西格玛H-9882)溶解在Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液中至15mg/ml。

样品制备：

在最终浓度为60ppm下，测定该酶β-1,6-半乳聚糖酶(具有属于GH30_5家族的蛋白质ID：P34A98)。在37℃和pH 7下，将仅包含底物、仅包含酶和底物+酶的每个样品孵育1h。孵育后，将这些样品用于还原端、LC-MS和具有脉冲安倍检测(Pulsed AmperometricDetection(HPAEC-PAD))的高效阴离子交换色谱(High Performance Anion ExchangeChromatography)。

如下是针对还原端而言：

将50μl样品转移至PCR-板。

添加50μl活性缓冲液(pH 8)混合物和50μl底物并进行混合。

添加75μl如在材料和方法中描述的终止溶液。

将该混合物在95℃下孵育10min，然后在10℃下孵育1min。

手工转移150μl到新的96孔微滴度板(MTP)，测量在405nm处的吸光度。

对于通过LC-MS测定的活性：

LC-MS/PMP衍生化

LC-MS：使用配备电喷雾离子源(ESI)的LTQ Deca max IonTrap和具有PDA检测器的Accela HPLC系统进行分析。以250μL/min的流速，并且在65℃下，将BEH Acquity CSHC18柱(2.1x 100mm)用于分离。该梯度如下：A：水中的0.15％HCOOH，B：MeCN中的HCOOH；0min17％B，4min 17％B，24min 50％B，25min 95％B，26min 17％B，30min 17％B。注射5μL样品并且UV检测是在245nm下进行。喷雾设置如下所示：毛细管温度275℃，鞘管气流40l/min，和5kV的电压源。

苯基-甲基吡唑啉(PMP)-衍生化：

向合适的小瓶中添加200μL样品(用于HPLC)

添加20μL 4M NaOH(确保pH>9)

添加200μL在甲醇中的0.5M PMP溶液

关闭小瓶并进行混合。在70℃下孵育30min

冷却至室温。添加20μL 4M HCl并混合。添加1ml MQ。

在通过加酸水解进行修饰的落叶松木材阿拉伯半乳聚糖上的1,6-内切-β-半乳聚糖酶的活性筛选

1,6-半乳聚糖酶活性

使用由莱韦尔(Lever)(分析生物化学(Analytical Biochemistry)47,273-279，1972)研发的比色测定通过还原末端确定该活性。发现该1,6-β半乳聚糖酶产生还原端，该还原端与对-羟基苯甲酸酰肼溶液(PHBAH，西格玛(Sigma))反应，从而产生颜色增加，该颜色增加在用于该测定的条件下与酶活性成比例。下表示出了与单独的底物相比，通过各个吸光度测量的1,6-β半乳聚糖酶的活性。

材料与化学品：

0.1％底物：在水MQ中的落叶松木材阿拉伯半乳聚糖。

活性缓冲液：100mM乙酸，100mM 2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)，在0.01％Triton(浓缩储备100x)中的100mM甘氨酸，1mM CaCl₂，pH 7。

Ka-Na-酒石酸盐/NaOH：用于1l Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液。终止溶液：将PAHBAH(西格玛H-9882)溶解在Ka-Na-酒石酸盐/NaOH溶液中至15mg/ml。

样品制备：

在最终浓度为60ppm下，测定该酶内切-β-1,6-半乳聚糖酶SEQ ID NO:2。在37℃和pH 7下，将仅包含底物、仅包含酶和底物+酶的每个样品孵育1h。孵育后，将这些样品用于还原端、LC-MS和具有脉冲安倍检测(Pulsed Amperometric Detection(HPAEC-PAD))的高效阴离子交换色谱(High Performance Anion Exchange Chromatography)。

如下是针对还原端而言：

将50μl样品转移至PCR-板。

添加50μl活性缓冲液(pH 8)混合物和50μl底物并进行混合。

添加75μl如在材料和方法中描述的终止溶液。

将该混合物在95℃下孵育10min，然后在10℃下孵育1min。

手工转移150μl到新的96孔微滴度板(MTP)，测量在405nm处的吸光度。

对于通过LC-MS测定的活性：

LC-MS/PMP衍生化

LC-MS：使用配备电喷雾离子源(ESI)的LTQ Deca max IonTrap和具有PDA检测器的Accela HPLC系统进行分析。以250μL/min的流速，并且在65℃下，将BEH Acquity CSHC18柱(2.1x 100mm)用于分离。该梯度如下：A：水中的0.15％HCOOH，B：MeCN中的HCOOH；0min17％B，4min 17％B，24min 50％B，25min 95％B，26min 17％B，30min 17％B。注射5μL样品并且UV检测是在245nm下。喷雾设置如下所示：毛细管温度275℃，鞘管气流40l/min，和5kV的电压源。

苯基-甲基吡唑啉(PMP)-衍生化：

向合适的小瓶中添加200μL样品(用于HPLC)

添加20μL 4M NaOH(确保pH>9)

添加200μL在甲醇中的0.5M PMP溶液

关闭小瓶并进行混合。在70℃下孵育30min

冷却至室温。添加20μL 4M HCl并混合。添加1ml MQ。

针对HPAEC-PAD色谱法：

将样品过滤进HPLC小瓶并经过如下梯度运行：

使用如下方法将样品在PA10柱上运行：气流：0.8ml/min

时间(min)	MQ	NaOH	NaAcO
				0	97	3	0
4,5	90	10	0
				23	22,4	13,6	64
24	8	12	80

采用所有三种方法，我们已经确认SEQ ID NO:2的活性并且显示产生半乳糖和半乳二糖作为主要产物。

实例

实例1

从哈茨木霉O4克隆P34A98GH30多肽编码序列。

通过PCR，从哈茨木霉O4DNA克隆P34A98GH30多肽编码序列。

在20℃下，在1000ml锥形摇瓶中的100ml的YP+2％葡萄糖介质中培养哈茨木霉O45天。通过由衬有

(EMD密理博，比勒利卡，MA，USA)的布氏真空漏斗对培养基进行过滤从这些瓶中收获菌丝。将菌丝冷冻于液氮中并在-80℃储存直至进一步使用。根据制造商的说明书，使用

植物大提试剂盒(Plant Maxi Kit)(凯杰公司(QIAGEN GMBH)，希尔登，德国)分离基因组DNA。

通过Illumina MySeq(Illumina公司，圣迭哥，加利福尼亚州)生产基因组序列信息。根据制造商说明书，将5μg的分离的哈茨木霉基因组DNA用于文库制备和分析。采用300bp配对端策略，文库插入尺寸为200-500bp。针对总计4,300,311,407 300bp的所获得的原始读数，使用一个HiSeq运行的一半。随后将该读数分级为25％，随后修正(提取最长的、具有10或更多Phred-得分的子序列)。使用Idba版本0.18集合这些读数。丢弃短于200bp的叠连群，得到39,391,155bp，N-50为167,714。使用GeneMark.hmm ES版本2.3c调用基因，并且使用由Pfam提供的“GH30”隐马尔可夫模型(Hidden Markov Model)进行该催化结构域的鉴别。使用以下描述的引物(SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4)通过PCR，从哈茨木霉O4基因组DNA，克隆整个编码区的多肽编码序列。

5’-ACACAACTGGGGATCCACCATGCGATCAGCTATTACTCCATCG-3’(SEQ ID NO:3)

5’-AGATCTCGAGAAGCTTATCATTTCAGCACAACACCACT-3’(SEQ ID NO:4)

粗体字母表示哈茨木霉酶编码序列。限制位点是已加下划线的。这些限制位点左方的序列与pDau109的插入位点是同源的(WO 2005/042735)。

In-Fusion^TM优越PCR克隆试剂盒目录号639620

根据制造商说明书(赛墨科技公司)用以下终浓度进行扩增反应(50μl)：

1X Phusion HC缓冲液

200uM dNTP

2.0mM MgCl2

0.5uM的SEQ ID NO:3+4的每种引物。

10ng的哈茨木霉O4基因组DNA。

将PCR反应在

Dual-Block热循环仪(

Dual-Block ThermalCycler)(伯乐公司(BioRad)，美国)中进行孵育，编程为98℃持续2分钟，1个循环；98℃持续10秒钟和72℃持续2分钟，30个循环；以及72℃持续6分钟，1个循环。在去除之前将样品冷却至10℃并且进一步处理。

使用40mM Tris碱、20mM乙酸钠、1mM EDTA二钠(TAE)缓冲液，通过1％琼脂糖凝胶电泳分析5μl的PCR反应观察到一个约1.4bp的主带。根据制造商说明书，直接使用ILLUSTRA^TMGFX^TMPCR DNA和凝胶带纯化试剂盒(ILLUSTRA^TMGFX^TMPCR DNA and Gel BandPurification Kit)(GE医疗公司，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西州，美国)纯化剩余的PCR反应。

将2μg的质粒pDau109用Bam HI和Hind III进行消化，并且在1％琼脂糖凝胶上使用50mM Tris碱-50mM硼酸-1mM EDTA二钠(TBE)缓冲液运行该消化的质粒，以从该限制质粒去除填充片段。通过添加

安全DNA凝胶染液(Safe DNA gel stain)(生命技术公司(Life Technologies Corporation)，格兰德岛(Grand Island)，新泽西州，美国)并且使用470nm波长透照仪将条带可视化。将对应于该限制质粒的条带切下，并且使用ILLUSTRA^TMGFX^TMPCR DNA和凝胶条带纯化试剂盒进行纯化。将该质粒洗脱到10mM Tris pH8.0中，并将其浓度调节至20ng/μl。使用PCR克隆试剂盒(克罗泰克实验室有限公司(Clontech Laboratories,Inc.)，山景城(Mountain View)，加利福尼亚州，美国)以将该1450bp PCR片段克隆到用Bam HI和Hind III(20ng)消化的pDau109中。该

总反应体积是10μl。该

总反应体积是10μl。根据制造商的方案，将该

反应转化进FUSION-BLUE^TM大肠杆菌细胞(克罗泰克实验室有限公司，山景城，加利福尼亚州，美国)中，并且将其铺板在补充有50μg的氨比西林/ml的LB琼脂板上。在37℃下孵育过夜之后，观察到转化菌落在这些补充有50μg氨比西林/ml的LB板上在选择下生长。

选择若干菌落用于通过菌落PCR使用以下所述的pDau109载体引物进行分析。用黄色的接种针(能肯公司(Nunc)A/S，丹麦)从该补充有50μg的氨比西林/ml的LB板上将四个菌落转移到补充有50μg的氨比西林/ml的新的LB板上，并在37℃孵育过夜。

引物8653：5’-GCAAGGGATGCCATGCTTGG-3’(SEQ ID NO:5)

引物8654：5’-CATATAACCAATTGCCCTC-3’(SEQ ID NO:6)

将这三个菌落中的每个直接转移到200μl PCR管中，该PCR管中由5μl的2X赛墨科技公司Dream Taq^TMPCR Master Mix(赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)，罗克福德(Rockford)，伊利诺伊州，美国)、0.5μl的引物8653(10pm/μl)、0.5μl的引物8654(10pm/μl)、以及4μl的去离子水构成。每个菌落PCR在

Dual-Block热循环仪中进行孵育，编程为：在94℃下持续60秒钟，1个循环；在95℃下持续30秒钟，60℃持续45秒钟，72℃持续60秒钟，68℃持续10分钟，和10℃持续10分钟，30个循环。

将4μl的每个完成的PCR反应使用TAE缓冲液提交到1％琼脂糖凝胶电泳。所有四个大肠杆菌转化体都显示1450bp的PCR条带。使用QIAprep质粒小提试剂盒(Spin MiniprepKit)(凯杰公司，希尔登，德国)从这四个菌落的每个中分离质粒DNA。将所得质粒DNA使用一种应用生物系统模型3730自动DNA测序仪使用3.1版BIG-DYE^TM终止子化学(应用生物系统公司(Applied Biosystems，Inc.)，福斯特市(Foster City)，加利福尼亚州，美国)，用引物8653和8654进行测序。一个命名为pKKSC0371-1的质粒

选择质粒pKKSC0371-1，用于转化米曲霉MT3568。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破坏的基因衍生物(WO 2002/40694)，其中通过钝化米曲霉amdS基因来修复pyrG营养缺陷型。根据欧洲专利EP0238023，第14-15页中所描述的方法制备米曲霉MT3568原生质体。

根据制造商说明书(Genomed)，使包含pKKSC0371-1的大肠杆菌3701生长过夜，并且根据制造商说明书使用质粒Midi试剂盒(Genomed JETquick试剂盒，目录号400250，Genomed有限公司，德国)分离pKKSC0371-1的质粒DNA。将纯化的质粒DNA转化进米曲霉MT3568中。根据克里斯滕森等人，1988，生物/技术(Bio/Technology)6:1419-1422中所描述的方法制备米曲霉MT3568原生质体。选择版由以下各项组成：COVE蔗糖与+10mM乙酰胺+15mM CsCl+

X-100(50μl/500ml)。在37℃下孵育这些平板。简而言之，将代表3μg的DNA的8μl的质粒DNA添加到100μl的MT3568原生质体中。添加250ul的60％PEG溶液，并且将这些管轻轻地混合，并且在37℃下孵育30分钟。将混合物添加到10ml的预熔化的Cove顶层琼脂糖中(该顶层琼脂糖融化并且然后在被添加到原生质体混合物之前在热水浴中温度平衡至40℃)。然后将合并的混合物涂布于具有10mM乙酰胺的两个Cove-蔗糖选择皮氏平板上。在37℃下孵育这些平板4天。通过在作为碳源的选择乙酰胺上生长来鉴别单个曲霉属转化菌落。将四种米曲霉转化体中的每个接种到96深孔板中补充有2％葡萄糖的750μl的YP培养基和补充有2％麦芽糊精的750μl的YP培养基和补充有DAP4C的750μl的YP培养基中，并在37℃静止孵育4天。同时，将四种转化体再划痕到COVE-2蔗糖琼脂培养基上。

然后根据制造商，使用

10％Bis-Tris SDS凝胶(英杰公司，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)通过SDS-PAGE，针对P34A98GH30多肽的产生，对来自米曲霉转化体的培养液进行分析。对于这些米曲霉转化体中每个，在大约30kDa观察到一个条带。将产生P34A98多肽的一个米曲霉转化体指定为米曲霉EXP09485。

将米曲霉EXP09485在26℃下在包含100ml的DAP4C培养基的1000ml锥形摇瓶中在85rpm搅拌下培养4天。

实例2

来自哈茨木霉O4的P34A98 GH30多肽编码序列的表征。

哈茨木霉O4P34A98GH30多肽基因组编码序列的基因组DNA序列和推导的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2中示出。编码序列是1437bp，包括终止密码子。编码的预测蛋白质是478个氨基酸。使用SignalP程序(尼尔森等人，1997，同上)预测出20个残基的信号肽。成熟蛋白包含458个氨基酸，具有52kDa的分子量和6.4的等电点。在预测的分子量和通过SDS凝胶分析(65kDa)得到的分子量之间的差异最有可能是肽糖基化的结果。

使用尼德曼和翁施算法(尼德曼和翁施，1970，同上)确定氨基酸序列的比较性成对地总体比对，使用空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62矩阵。比对显示，哈茨木霉O4P34A98GH30多肽的推导的氨基酸序列与来自绿色木霉菌SWISSPROT_G9MWQ6的GH30多肽的推导的氨基酸序列具有90.17％一致性(排除空位)。

实例3

在具有添加的污物的液体洗涤剂中的1,6-内切-β-半乳聚糖酶的去粘合性能

生物膜布样的制备

在本实例中使用一种分离自衣物生物膜的短波单胞菌属的菌株。在30℃下，使短波单胞菌属物种在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131；Oxoid有限公司，贝辛斯托克，英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB(胰胨大豆肉汤，胰蛋白胨)中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育16小时。繁殖后，通过离心(西格玛实验室离心机(Sigma Laboratory Centrifuge)6K15)(3000g，在21℃下，7min)沉淀短波单胞菌属并且将其重悬于10mL用milliQ水稀释两次的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMG Labtech)，奥滕贝格(Ortenberg)，德国))测量600nm处的光密度(OD)。将用milliQ水稀释两次的新鲜TSB接种至0.03的OD_600nm，并且将19mL添加到9cm皮氏培养皿(低培养皿NUNC 263991)中，并在培养皿中放置无菌聚酯WFK30A的方块布样(5X 5cm)。伴随振荡(100rpm)在15℃下孵育72h后，将布样从培养皿移除，放置在工作台的薄涂布纸上干燥过夜。

基于上述的洗涤TOM测定的沉积洗涤实验：

将两个干燥的生物膜布样(具有短波单胞菌属物种)与两个示踪布样相混合：每TOM烧杯(在上述洗涤测定下描述的Terg-O-tometer(TOM))使用约7g 50％/50％无菌聚酯WFK30A和无菌棉WFK10A布样。TOM烧杯是用600ml洗涤液进行制备的，该洗涤液是通过添加3.33g/l在水中的标准洗涤剂A进行制备的。向该洗涤液中添加0.7g/L污垢(Pigmentschmutz，09V，wfk，克雷费尔德(Krefeld)，德国)。在Terg-O-Tometer中以150rpm启动转子10min以完成该污物的溶解。停止旋转。每次开始一个烧杯，添加压载物(直到10g的50％棉wfk10A和聚酯wfk30A)加上每个烧杯两个生物膜布样加上5x 5cm聚酯wfk30A和棉10A示踪布样。以110rpm启动在Terge-o-tometer(TOM)中的旋转。在30℃下总共洗涤时间是35min。

实例3的测试条件：

向三个烧杯中添加(0,05ppm；0,1ppm或0,2ppm)1,6内切-β-半乳聚糖酶。平行地，用包含0,20ppm的1,6-β-内切半乳聚糖酶的酶制剂进行测试，连同用内切半乳聚糖酶

(由诺维信A/S供应)进行测试。对照洗涤不添加酶，连同不添加生物膜的洗涤。

漂洗：洗涤后丢弃该洗涤液并将布样在烧杯中漂洗两次，每次5分钟，每次用350ml淡自来水。用手拧这些布样并将每个烧杯的压载物布样丢弃。将示踪物和生物膜布样放置在滤纸上并在黑暗的干燥室内干燥过夜。测量每个布样上的在460nm处的减弱。

结果：

洗涤测试显示在布样上的生物膜能够将脏的微粒污垢粘合在其表面。可以参照没有酶添加的洗涤通过测试的结果对这点进行解释。在这个实验中，将污物添加到洗涤液中并且然后根据其类型和一般的接受度该纺织品上会有沉积。在未添加生物膜洗涤的烧杯中，在聚酯示踪物上我们读取该背景沉积为73Rem_460n单位(洗涤7)。如果生物膜存在于纺织品表面，然后由于粘性会吸收额外的污物。当添加生物膜但不添加任何酶时(洗涤1)，在洗涤中对此进行测量。该生物膜布样的白度到达56Rem_460n单位(洗涤1)，该白度是非常灰的。如果添加0,05ppm 1,6-内切-β-半聚乳糖酶(洗涤4)，然后由于污物吸收，该灰度降低至62Rem_460nm单位，并且增加1,6-内切-β-半聚乳糖酶的剂量至0,10ppm(洗涤3)也增加该白度至64Rem_460n单位，并且以此类推，0,2ppm该酶(洗涤2)增加白度到66Rem_460n单位。当与包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶(0,2ppm)的酶制剂比较该性能时，该酶制剂也抑制该污物沉积至65Rem_460n单位。用内切葡聚糖酶

洗涤对生物膜布样以及粘性生物膜残余物对棉织物的交叉污染的抑制也给出小但看得见的影响。当在0,2ppm时，该半乳聚糖酶也抑制对棉示踪物和聚酯示踪物的交叉污染，这里该聚酯布样是74Rem_460n单位并且该棉示踪物布样是71，这与生物膜不存在于该洗涤中是相同的水平。

实例4

棒状杆菌的生物膜上的酶性能

生物膜布样的制备

在本实例中使用一种分离自衣物生物膜的干燥棒杆菌的一个菌株。在30℃下，使干燥棒杆菌在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131；Oxoid有限公司，贝辛斯托克，英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB(胰胨大豆肉汤，胰蛋白胨)中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育16小时。繁殖后，通过离心(西格玛实验室离心机(Sigma Laboratory Centrifuge)6K15)(3000g，在21℃下，7min)沉淀干燥棒杆菌并且将其重悬于10mL用milliQ水稀释两次的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMG Labtech)，奥滕贝格(Ortenberg)，德国))测量600nm处的光密度(OD)。将用milliQ水稀释两次的新鲜TSB接种至0.03的OD_600nm，并且将19mL添加到9cm皮氏培养皿(低培养皿NUNC263991)中，并在培养皿中放置了无菌聚酯WFK30A的方块布样(5X 5cm)。伴随振荡(100rpm)在30℃下孵育72h后，将布样从培养皿移除，放置在工作台的薄涂布纸上干燥过夜。

如在沉积洗涤实验(如在实例3中描述的)中描述地但用下述条件进行洗涤：向三个烧杯中添加(0,05ppm；0,1ppm或0,2ppm)1,6内切-β-半乳聚糖酶。平行地，用包含0,20ppm的1,6-β-内切半乳聚糖酶的酶制剂进行测试，连同用内切半乳聚糖酶(由诺维信A/S供应)进行测试。对照洗涤不添加酶，连同不添加生物膜的洗涤。如在实施例3中所描述地进行该漂洗。

结果：

洗涤测试显示在布样上的生物膜能够将脏的微粒污垢粘合在其表面。可以参照没有酶添加的洗涤通过测试的结果对这点进行解释。在这个实验中，将污物添加到洗涤液中并且然后根据其类型和一般的接受度该纺织品上会有沉积。在实例3中在未添加生物膜洗涤的烧杯(洗涤7)中，在聚酯示踪物上我们读取该背景沉积位73Rem_460n单位。如果生物膜存在于纺织品表面，然后由于粘性会吸收额外的污物。当添加生物膜但不添加任何酶时(洗涤1)，在洗涤中对此进行测量。该生物膜布样的白度到达61Rem_460n单位(洗涤1)。如果添加0,2ppm 1,6-内切-β-半聚乳糖酶(洗涤2)，然后由于污物吸收，该灰度降低至67Rem_460nm单位，并且增加1,6-内切-β-半聚乳糖酶的剂量至1,0ppm(洗涤3)也增加该白度至70Rem_460n单位。我们与包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶(洗涤4)的酶制剂比较该性能。以3ppm添加的酶制剂也抑制该污物沉积至70Rem_460n单位。用内切葡聚糖酶

洗涤对生物膜布样没有给出看得见的影响。干燥棒杆菌对其他干净的纺织品的交叉污染是非常低的。Celluclean有小的防止对棉的交叉污染的趋势并且处于1,0ppm的1,6内切-β-半乳聚糖酶有小的将交叉污染略还原至聚酯的趋势。对于该酶制剂情况也是这样的。

实例5

如在实例3中描述地进行生物膜布样的制备和沉积洗涤。关于洗涤条件，除了1,6-内切-β-半乳聚糖酶以外，还添加酶(

(SEQ ID NO 7)由诺维信A/S供应)。

在洗涤1中，不添加酶并且这使得生物膜布样的沉积达到61Rem_460n单位的水平。在洗涤2中，添加0,025ppm 1,6-内切-β-半乳聚糖酶，该酶将沉积稍微减少至63Rem_460n单位。在洗涤3中，添加0.1ppm并且这将沉积减少到68Rem_460n单位的水平，这是非常明显的差异。在洗涤4中，添加0.3ppm 1,6-内切-β-半乳聚糖酶，这导致沉积减少至70Rem_460n单位。洗涤5是低半乳聚糖酶剂量og 0,025ppm和50nM

的组合，这将我们在洗涤2(单独地0.025ppm 1,6-内切-β-半乳聚糖酶)中发现的降低从63增加至67Rem_460n单位，并且相同的模式见于6和7中，在6和7中我们添加0,1ppm和0,3ppm半乳聚糖酶以及50nM

这两次洗涤分别将沉积降低至71和72Rem_460n单位，这些数据接近于如见于实例3中洗涤7的干净的聚酯示踪物的背景沉积。这表明1,6-内切-β-半乳聚糖酶洗涤性能能够通过添加Savinase被加强。

实例6

生物膜布样的制备

在本实例中使用一种分离自衣物生物膜的短波单胞菌属的菌株。在30℃下，使短波单胞菌属物种在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131；Oxoid有限公司，贝辛斯托克，英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育16小时。繁殖后，通过离心(西格玛实验室离心机(SigmaLaboratory Centrifuge)6K15)(3000g，在21℃下，7min)沉淀短波单胞菌属并且将其重悬于10mL用milliQ水稀释两次的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMGLabtech)，奥滕贝格(Ortenberg)，德国))测量600nm处的光密度(OD)。将用milliQ水稀释两次的新鲜TSB接种至0.03的OD_600nm，并且将19mL添加到9cm皮氏培养皿(低培养皿NUNC263991)中，并在培养皿中放置无菌聚酯WFK30A的方块布样(5X 5cm)。伴随振荡(100rpm)在15℃下孵育72h后，将布样从培养皿移除，放置在工作台的薄涂布纸上干燥过夜。

洗涤实验：

将两个干燥的生物膜布样(具有短波单胞菌属物种)与两个示踪布样相混合：每TOM烧杯使用约7g 50％/50％无菌聚酯WFK30A和无菌棉WFK10A布样，总共10g纺织品。TOM烧杯是用600ml洗涤液进行制备的，该洗涤液是通过添加3.33g/l在水中的标准洗涤剂A进行制备的。向该洗涤液中添加0.7g/L污垢(Pigmentschmutz，09V，wfk，克雷费尔德(Krefeld)，德国)。在Terg-O-Tometer中以150rpm启动转子10min以完成该污物的溶解。停止旋转。每次开始一个烧杯，添加压载物(直到10g的50％棉wfk10A和聚酯wfk30A)加上每个烧杯两个生物膜布样加上3.5x 3.5cm聚酯wfk30A和棉10A示踪布样。以110rpm启动在Terge-o-tometer(TOM)中的旋转。在30℃下总的洗涤时间是35min。向两个烧杯中添加(1.0ppm和0.5ppm)酶制剂，一个烧杯洗涤中添加漂白剂(0.09g TAED(N,N,N',N'-四乙酰乙二胺，Cas No.10543-57-4，奥德里奇公司(Aldrich))再加0.407g NaHCO₃(过氧水合碳酸钠，CAS No 15630-89-4))，一个烧杯中添加1.0ppm酶制剂再加漂白剂，另一个烧杯中添加0.5ppm酶制剂再加漂白剂。对照洗涤不添加酶，连同不添加生物膜布样的洗涤。

洗涤后丢弃该洗涤液并将布样在烧杯中漂洗两次，每次5分钟，每次用350ml淡自来水。用手拧这些布样并将每个烧杯中的压载物布样在贴有标签的洗涤袋里干燥。将示踪物和生物膜布样放置在滤纸上并在黑暗的干燥室内干燥过夜。测量每个布样上的在460nm处的减弱。丢弃这些生物膜布样。

第二天用针对每个烧杯的相同的条件启动新的洗涤。再次使用每个洗涤条件的示踪物，加上wfk30A以及wfk10A的两个新的示踪物，加上具有添加的短波单胞菌属的新的新鲜的生物膜布样。重新使用先前的大多数的压载物。从压载物的重量中减去新的示踪物的重量–这表示用于每个洗涤周期中的纺织品的总量是恒定的(10克)。重复这些洗涤条件9次。

测量棉示踪布样wfk10A的减弱。

在开始试验前，对这些棉示踪物进行预洗涤以去除纺织品整理材料。这给出74Rem_460n单位的460nm处的减弱。所有的洗涤是如实例3中描述的沉积洗涤那样完成的。烧杯1的洗涤条件是，存在生物膜但不存在酶和漂白剂。当把这些条件进行10次时，这些棉示踪物引起wfk10A棉示踪物上的白度从74Rem_460n单位下降到48Rem_460n单位。

在烧杯7中，在10次重复的洗涤中的任何一次，我们都没有添加生物膜布样或酶或漂白剂。这显示该背景沉积是干净的纺织品。10次洗涤周期之后，该背景沉积在57Rem_460n单位上。与烧杯1相比，由于生物膜材料与在烧杯1中的示踪布样的污物的交叉污染，10次洗涤周期后，棉示踪物上存在9Rem_460n单位差异。

在烧杯5的条件下，将生物膜布样、0,5ppm包含1,6-β-内切-半乳聚糖酶的酶制剂添加至每个洗涤周期，不添加漂白剂。这将棉示踪物上的沉积降低至53Rem_460n单位。

10个洗涤周期后，烧杯6的条件(生物膜、无漂白剂、1ppm酶制剂)将沉积降低至55Rem_460n单位。烧杯10的条件(无生物膜、无漂白剂、1ppm酶制剂)测试酶是否能影响该背景沉积(以烧杯1的条件测量)。该结果显示在不存在生物膜的情况下添加酶不会对棉示踪物的沉积产生任何差异。在烧杯条件1和条件5和6之间的棉示踪物上的沉积的差异是由于生物膜基质的酶的去粘合作用。据信，在洗涤过程中，生物膜基质片游离于生物膜布样的生物膜表面并且当它沉积于示踪物上的纺织品表面时它也会从洗涤溶液抽出污物。该实验显示该酶制剂可以将沉积降低至没有生物膜洗涤的水平(烧杯条件7)。从洗涤周期到洗涤周期，不同的洗涤条件的终点反映了近似的沉积模式。烧杯2的条件(生物膜布样、漂白剂、无酶)显示，10次洗涤后棉示踪物的的沉积产生50Rem_460n单位，这一数据稍微低于烧杯1的条件(生物膜布样、无漂白剂和无酶)但远不如该酶制剂给出的降低。如果我们如在烧杯条件3和4中做的那样将漂白剂和酶制剂组合起来，我们看见了协同作用。对于条件3，沉积至棉示踪物的还原降低至57Rem_460n单位。这与条件7的烧杯的结果相似，在条件7中不存在生物膜。与烧杯条件7相比，更高的酶制剂与漂白剂一起(烧杯条件4)给出稍微的增加。这与烧杯条件9(无生物膜、无酶、漂白剂)和10(无生物膜、1ppm酶、漂白剂)中发生的相似。烧杯5和6显示该酶所能单独做到的(在高和低剂量时53和55个rem单位)并且烧杯2显示漂白剂所能单独做到的(50个rem单位)。如果漂白剂和半乳聚糖酶的功能是累加的，在洗涤中我们本应预期结果如55和57个减弱单位(对于高的和低的酶剂量)，虽然在这个洗涤中它们是组合的，但是实际上我们得到了57个59个减弱单位(对于低的和高的酶剂量)，这是协同的结果。条件9的烧杯显示漂白在背景沉积上对干净的纺织品有小的抑制，其中无论有酶存在(条件10)或没有酶存在，持续这种抑制。这表示漂白剂可以对污物有影响以至于污物不会以相同的程度沉积。也表示该酶制剂和漂白剂能通过不同的机制抑制沉积。

实例7

经过两次洗涤，包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂在液体洗涤剂中的深层清洁性能

在本实例中使用一种分离自衣物的短波单胞菌属的菌株。在30℃下，使短波单胞菌属物种在胰胨豆胨琼脂(TSA)(pH 7.3)(CM0131；Oxoid有限公司，贝辛斯托克，英国)上预生长2-5天。将来自一个单菌落的满环物转移至10mL的TSB中并且伴随振荡(240rpm)于30℃下孵育16小时。繁殖后，通过离心(西格玛实验室离心机(Sigma Laboratory Centrifuge)6K15)(3000g，在21℃下，7min)沉淀短波单胞菌属并且将其重悬于10mL用milliQ水稀释两次的TSB中。使用分光计(POLARstar Omega(BMG莱伯泰科(BMG Labtech)，奥滕贝格(Ortenberg)，德国))测量600nm处的光密度(OD)。将用milliQ水稀释两次的新鲜TSB接种至0.03的OD_600nm，并且将1.6mL添加到12孔的聚苯乙烯平-底微板的各孔(3512；康宁公司(Corning Incorporated)，康宁(Corning)，纽约州(NY)，美国)，在该微板中放置无菌聚酯WFK30A的圆形布样(直径2cm)。伴随振荡(100rpm)在15℃下，分别孵育24h和72h后，将布样用0.9％(w/v)NaCl漂洗两次。

在洗涤1中，将五个具有短波单胞菌属物种的漂洗过的布样与在50ml测试管中的五个无菌聚酯WFK30A布样混合(在上述洗涤测定mini-LOM中)并向混合物中添加10ml洗涤液，该洗涤液是通过添加3.33g/l在水中的标准洗涤剂A和包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶(0.3ppm)的酶制剂进行制备的。平行进行具有标准洗涤剂A的但不添加包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂的洗涤。在30℃下，将测试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中1小时。用自来水将样布漂洗两次并在过滤纸上干燥过夜。

在洗涤2中，将五个干燥的布样在50ml测试管中洗涤，向其中添加10ml洗涤液，该洗涤液是通过添加3.33g/l在水中的标准洗涤剂A和0.7g/L污垢(Pigmentschmutz，09V，wfk，克雷费尔德(Krefeld)，德国)进行制备的。在30℃下，将测试管置于斯图尔特(Stuart)旋转器中1小时。用自来水将样布漂洗两次并在过滤纸上干燥过夜。

使用Color Eye(Macbeth Color Eye 7000反射分光光度计)测量缓解(L值)。在入射光中没有UV的情况下进行测量并且从CIE Lab色空间中提取L值。数据表示为ΔL值，意指用包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂洗涤的布样的L值减去不用包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂洗涤的布样的L值。

该表显示包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂的深度清洁作用

实例8

在MiniLOM洗涤中包含1,6-内切-β-半乳聚糖酶的酶制剂的性能

生物膜布样的制备

为了生物膜的制备，将泡囊短波单胞菌菌株从-80℃冷冻培养物中取出并铺在TSA(胰胨豆胨琼脂)板上。3天后，将4个具有10mL TSB(胰胨豆胨琼脂)(来自Oxoid)的管用来自这些板的细菌培养物进行接种。在30℃下伴随200rpm振荡将它们孵育过夜之前通过漩涡混合机将TSB管充分混合。然后将过夜培养物收集在50ml离心管中并在3000rpm下离心5min。丢弃上清液并将每管球粒溶解于5ml TSB(总共20ml)。在艾本德管中，将150ml培养物用1350μl 100％TSB稀释10X。通过取出500μl该10X稀释液到在艾本德管中的500μl 100％TSB中，制成20X稀释液。将4x 100μL的10x和20x稀释液以及空白(100％TSB)添加至96布罗德

nunc微滴度板。在600nm处在弗罗欧斯达欧米茄(Fluostar Omega)上测量该板，确保这些稀释液之一低于0.6。确定过夜培养物的OD600，并在50％TSB中稀释至0.03的OD。将预洗涤的Wfk 30A PO(标准聚酯WFK 30A(WFK))切成直径为2cm的圆形布样并放置在高压釜袋中，并用121℃在赛斯太克(Systec)高压釜上的“液体程序”上进行高压蒸汽处理15min，并且然后在打开前将其冷却至80℃。用无菌的镊子将无菌的30A(标准聚酯WFK 30A(WFK))布样转移至在12孔微滴度板中的每孔中。将1.62ml稀释的O/N培养物添加至每孔。将布样在15℃下，在英诺华(Innova)2100平台振荡器上以70rpm振荡下，孵育过夜。孵育24h后，将这些布样在3ml0.9％NaCL中漂洗2x。漂洗后，将这些布样立即用于洗涤试验。PO(聚酯)示踪物的制备方法：将预洗涤的Wfk 30A(标准聚酯WFK 30A(WFK))切成直径为2cm的圆形布样。用剪刀切口对这些布样进行标记以将它们从洗涤后1天的生物膜布样中区分开。

“脏物洗涤剂”的制备：在称量船中称量3.33g标准A洗涤剂，在标准A洗涤剂的顶部添加0.7g，添加09V(来自wfk测试织物有限公司(wfk Testgewebe GmbH，Christenfeld 10，D-41379Brüggen，德国)的09V标准颜料污垢)颜料污垢。使用用后可弃手套在通风柜中完成这一步。将该称重船添加到1L的15°dH水中。将该污垢以最大的速度溶解至少10分钟，以完全溶解该污垢。

洗涤方法

打开加热柜至30℃。根据“脏物洗涤剂”的制备方法制备1l脏物洗涤剂。倒入50mL塑料管中，其中每个管代表一次洗涤，将五个如上描述地制备的圆形(2cm直径)生物膜布样添加到烧杯中。将五个圆形(2cm直径)干净的PO(聚酯)片添加到每个管中。制备酶并保持在冰上。将10ml“脏物洗涤剂”(参见制备方法)添加到第一个管中并随后立即添加酶。然后给该管加盖，并将该管放置在Mini-LOM旋转器(斯图尔特(Stuart)旋转器SB3)上。MiniLOM旋转器的旋转速度是20rpm。当把第一个管放置在Mini-LOM旋转器上时，就开始该洗涤的时间测量。然后添加脏物洗涤剂和酶到其他管中，并放置在该旋转器上。当把所有的管添加到该旋转器上时，从给第一个管加盖的时间开始，将旋转器放置在30℃加热柜中60分钟。通过将该旋转器从加热柜移除并将其放置在运行旋转的操作桌上完成漂洗程序。取出1号管，并丢弃洗涤水，将这些布样留在管中。将20ml 15°dH添加到管中，并将其添加回该旋转器。然后在试验中的所有测试管都完成这一过程。在环境室温下完成漂洗10分钟。重复以上描述的步骤完成第二次漂洗。第二次洗涤后，将布样从每个管中移除并将布样添加到纸块上并在室温下在黑暗中干燥过夜。通过在瑞宇外德(VeriVide)上给布样照相完成评估并通过软件数码眼(Digieye)V2.62进行分析。使用Y-值来显示数据。

其中Y是以三色刺激值度量的深浅信号。

纺织品预洗涤程序：

使用米勒索芙特月尼克(Miele Softtronic)W2245洗衣机用预洗涤准备纺织品。来自WFK的73.36g ECE-2色快速洗涤剂，没有CMC的版本，称出光学增亮剂和酶到洗涤球中。在洗涤剂之后，将2,8g可商购的淀粉酶

12L(诺维信公司)和3.5g可商购的纤维素酶(诺维信公司)4500T添加到该洗涤球中并将该球放置在该滚筒的底部。将纺织品切成1.0x 1.0米并将该加载物进行填充直到3.0kg具有50％/50％PO/棉混合的压载物品(枕头套、衬衣和茶巾)并放置进该机器中。将15°dH Ca/Mg/CO3(比为4:1:7.5)的水用于洗涤。在40℃使用针对棉洗涤的标准洗涤程序。这次洗涤之后是另一个使用相同的程序、温度、水硬度、洗涤剂和

12L(可从诺维信公司商购)剂量的预洗涤，但这次没有

然后这次洗涤之后是另一个洗涤周期，该洗涤周期使用和其他两个预洗涤相同的条件，并且现在不考虑所有的酶。最后一次洗涤后将纺织品在室温下在作业线上干燥过夜。现在该纺织品准备好作为示踪物和生物膜材料使用。

剂量：

将来自哈茨木霉的1,6-内切-β-半乳聚糖酶(GH30_5)以0.5、2.0、5.0和10.0mgep/L的反应剂量使用，并与不添加酶的洗涤进行比较。

上表显示在脏物洗涤剂中，对洗涤生物膜有着非常独特的作用。

当来自哈茨木霉的1,6-β-内切-半乳聚糖酶存在于洗涤中时，该酶对于依赖于该剂量的6-9Y值的生物膜具有显著的去粘合能力。通过人眼就能清楚地区分2的Y-值。在0、5和2mg ep/L的8-9Y值之间有一个最大反应。在这种情况下，添加更高的酶浓度不能给出更高的反应但是洗涤的最大白度几乎达到2mg ep/L。生物膜供体布样和示踪物之间的污垢和生物膜材料的转移是非常有限的，并且用酶的洗涤性能相对应地低。ΔY-值在标准差范围内。

干净的预洗涤的PO(聚酯)具有88的Y-值。这种纺织品尚未在脏物洗涤剂中洗涤，并且具有对于这种纺织品的最大的白度属性。当我们将在脏物洗涤剂中洗涤的示踪物与存在的生物膜供体布样相比较时，污物吸收是7个rem单位。将这些示踪物与包含供体布样的生物膜一起洗涤。在洗涤过程中，有细菌和生物膜的交叉污染。在洗涤中用脏物洗涤剂，通过污物吸收可以看到交叉污染。

洗涤实例1

洗涤实例2：本次洗涤以与实例1相同的方式完成，但是酶剂量为1mg ep/L和10mgep/L。在实例1和实例2之间的空白值显示在这两个批次之间有4个Y-值的差异。这也在洗涤结果中被反映出来。在实例2中酶处理过的布样的Y的绝对值是相似的，但是该ΔY低4个Y单位。原因是在实例2中的生物膜不够成熟。该1,6-内切-β-半乳聚糖酶在两个剂量下都能给出良好的洗涤益处。10mgep/L比1mg ep/L给出约双倍的Y-值。示踪物的性能在STDEV内，因此不能被解释。

洗涤实例2

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 洗涤剂组合物

<130> 12910-WO-PCT

<140> -

<141> 2015-06-04

<160> 8

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 1437

<212> DNA

<213> 哈茨木霉

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(1434)

<220>

<221> 信号肽

<222> (1)..(60)

<220>

<221> 成熟肽

<222> (61)..(1434)

<400> 1

atg cga tca gct att act cca tcg tta gcc ctt gct ctg ctg tcc caa 48

Met Arg Ser Ala Ile Thr Pro Ser Leu Ala Leu Ala Leu Leu Ser Gln

-20 -15 -10 -5

aca gct ggg gcc gat aca aca ctt tcc att gat ccc acc tct aat tgg 96

Thr Ala Gly Ala Asp Thr Thr Leu Ser Ile Asp Pro Thr Ser Asn Trp

-1 1 5 10

ggt acg tgg gaa ggc tgg ggt gta tct ctt gct tgg tgg gcg aaa gcc 144

Gly Thr Trp Glu Gly Trp Gly Val Ser Leu Ala Trp Trp Ala Lys Ala

15 20 25

ttt ggc aac cga gat gac cta gcc aat gtc ttt ttc act agg aac aac 192

Phe Gly Asn Arg Asp Asp Leu Ala Asn Val Phe Phe Thr Arg Asn Asn

30 35 40

caa gtc atc aat ggc cag aac ctg ccg ggc ttg ggc ttc aac att gct 240

Gln Val Ile Asn Gly Gln Asn Leu Pro Gly Leu Gly Phe Asn Ile Ala

45 50 55 60

cgg tac aat gcc ggc gca tgc agc acc aac acg tat aat ggc tcc agt 288

Arg Tyr Asn Ala Gly Ala Cys Ser Thr Asn Thr Tyr Asn Gly Ser Ser

65 70 75

atg gta gtc tcg tcg agt atc aag ccg tct cgg cag gtt gat ggt tac 336

Met Val Val Ser Ser Ser Ile Lys Pro Ser Arg Gln Val Asp Gly Tyr

80 85 90

tgg ctc gat tgg gcc agc acc gac cct gct tca tcc agc tgg aac tgg 384

Trp Leu Asp Trp Ala Ser Thr Asp Pro Ala Ser Ser Ser Trp Asn Trp

95 100 105

aat gtc gat gcc aac cag cga gcg atg tta caa aag gcc aaa gca aac 432

Asn Val Asp Ala Asn Gln Arg Ala Met Leu Gln Lys Ala Lys Ala Asn

110 115 120

ggt gca aac atc ttt gag ctc ttc tcc aac tcg cct atg tgg tgg atg 480

Gly Ala Asn Ile Phe Glu Leu Phe Ser Asn Ser Pro Met Trp Trp Met

125 130 135 140

tgc ctg aat cat aat ccg tcg gga agc ggc tcg agt gat aac ctt cag 528

Cys Leu Asn His Asn Pro Ser Gly Ser Gly Ser Ser Asp Asn Leu Gln

145 150 155

tca tgg aac tac caa aat cac gct gtt tat ctt gcc aat att gct caa 576

Ser Trp Asn Tyr Gln Asn His Ala Val Tyr Leu Ala Asn Ile Ala Gln

160 165 170

cat gct caa caa aat tgg gga atc cag ttt cag tca gtc gag gct ttt 624

His Ala Gln Gln Asn Trp Gly Ile Gln Phe Gln Ser Val Glu Ala Phe

175 180 185

aac gag cct tcg tcg ggc tgg gga cct acc ggt aca caa gaa ggc tgc 672

Asn Glu Pro Ser Ser Gly Trp Gly Pro Thr Gly Thr Gln Glu Gly Cys

190 195 200

cat ttt gcg gta tca acg atg gct acg gtt atc ggt tac ttg aac act 720

His Phe Ala Val Ser Thr Met Ala Thr Val Ile Gly Tyr Leu Asn Thr

205 210 215 220

gag ctt gcg caa cgt gga cta tca tca ttt att tct gca tca gat gaa 768

Glu Leu Ala Gln Arg Gly Leu Ser Ser Phe Ile Ser Ala Ser Asp Glu

225 230 235

aca agt tac gac ctg gcc ata tca act tgg cag ggc cta ggc agc tct 816

Thr Ser Tyr Asp Leu Ala Ile Ser Thr Trp Gln Gly Leu Gly Ser Ser

240 245 250

gcc cag aac gct gtg aag cgt gtc aat gtt cat ggc tac cag ggc ggc 864

Ala Gln Asn Ala Val Lys Arg Val Asn Val His Gly Tyr Gln Gly Gly

255 260 265

ggc gga cga cgt gat acg ctt tat agc ctt gta agt caa gcc ggg aag 912

Gly Gly Arg Arg Asp Thr Leu Tyr Ser Leu Val Ser Gln Ala Gly Lys

270 275 280

aga ctg tgg aac agt gaa tat ggc gat gca gat gca agt gga aaa tcg 960

Arg Leu Trp Asn Ser Glu Tyr Gly Asp Ala Asp Ala Ser Gly Lys Ser

285 290 295 300

atg tat aca aat ctg ctc ctt gat ttt acc tgg ctc cac cct acc gct 1008

Met Tyr Thr Asn Leu Leu Leu Asp Phe Thr Trp Leu His Pro Thr Ala

305 310 315

tgg gta tac tgg cag gca att gac ggt tca ggt tgg gga ctc atc gtt 1056

Trp Val Tyr Trp Gln Ala Ile Asp Gly Ser Gly Trp Gly Leu Ile Val

320 325 330

ggc gat aat gat cag ttg acg ctt tca tcc gca agc act aag tac ttt 1104

Gly Asp Asn Asp Gln Leu Thr Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Tyr Phe

335 340 345

gta ctg gcg caa tta act cgc cat atc agg ccc ggc atg cag atc ttg 1152

Val Leu Ala Gln Leu Thr Arg His Ile Arg Pro Gly Met Gln Ile Leu

350 355 360

acc acc cct gat ggt aac act gtc gct gct tac gac tct ggc tct caa 1200

Thr Thr Pro Asp Gly Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asp Ser Gly Ser Gln

365 370 375 380

aag ctc gtc att gtt gct gca aac tgg ggc agt gct cag act atc acc 1248

Lys Leu Val Ile Val Ala Ala Asn Trp Gly Ser Ala Gln Thr Ile Thr

385 390 395

ttt gat ctt act cgt gct aag act gct ggc agt aat ggt gca aca gtg 1296

Phe Asp Leu Thr Arg Ala Lys Thr Ala Gly Ser Asn Gly Ala Thr Val

400 405 410

cca cga tgg agc acc caa aca agt ggt ggg gac caa tac aag agc tat 1344

Pro Arg Trp Ser Thr Gln Thr Ser Gly Gly Asp Gln Tyr Lys Ser Tyr

415 420 425

tcg gat aca aag atc aat aac ggg aaa ttc tct gtg tct ttt tct act 1392

Ser Asp Thr Lys Ile Asn Asn Gly Lys Phe Ser Val Ser Phe Ser Thr

430 435 440

gga caa gtg cag aca ttt gag att agt ggt gtt gtg ctg aaa tga 1437

Gly Gln Val Gln Thr Phe Glu Ile Ser Gly Val Val Leu Lys

445 450 455

<210> 2

<211> 478

<212> PRT

<213> 哈茨木霉

<400> 2

Met Arg Ser Ala Ile Thr Pro Ser Leu Ala Leu Ala Leu Leu Ser Gln

-20 -15 -10 -5

Thr Ala Gly Ala Asp Thr Thr Leu Ser Ile Asp Pro Thr Ser Asn Trp

-1 1 5 10

Gly Thr Trp Glu Gly Trp Gly Val Ser Leu Ala Trp Trp Ala Lys Ala

15 20 25

Phe Gly Asn Arg Asp Asp Leu Ala Asn Val Phe Phe Thr Arg Asn Asn

30 35 40

Gln Val Ile Asn Gly Gln Asn Leu Pro Gly Leu Gly Phe Asn Ile Ala

45 50 55 60

Arg Tyr Asn Ala Gly Ala Cys Ser Thr Asn Thr Tyr Asn Gly Ser Ser

65 70 75

Met Val Val Ser Ser Ser Ile Lys Pro Ser Arg Gln Val Asp Gly Tyr

80 85 90

Trp Leu Asp Trp Ala Ser Thr Asp Pro Ala Ser Ser Ser Trp Asn Trp

95 100 105

Asn Val Asp Ala Asn Gln Arg Ala Met Leu Gln Lys Ala Lys Ala Asn

110 115 120

Gly Ala Asn Ile Phe Glu Leu Phe Ser Asn Ser Pro Met Trp Trp Met

125 130 135 140

Cys Leu Asn His Asn Pro Ser Gly Ser Gly Ser Ser Asp Asn Leu Gln

145 150 155

Ser Trp Asn Tyr Gln Asn His Ala Val Tyr Leu Ala Asn Ile Ala Gln

160 165 170

His Ala Gln Gln Asn Trp Gly Ile Gln Phe Gln Ser Val Glu Ala Phe

175 180 185

Asn Glu Pro Ser Ser Gly Trp Gly Pro Thr Gly Thr Gln Glu Gly Cys

190 195 200

His Phe Ala Val Ser Thr Met Ala Thr Val Ile Gly Tyr Leu Asn Thr

205 210 215 220

Glu Leu Ala Gln Arg Gly Leu Ser Ser Phe Ile Ser Ala Ser Asp Glu

225 230 235

Thr Ser Tyr Asp Leu Ala Ile Ser Thr Trp Gln Gly Leu Gly Ser Ser

240 245 250

Ala Gln Asn Ala Val Lys Arg Val Asn Val His Gly Tyr Gln Gly Gly

255 260 265

Gly Gly Arg Arg Asp Thr Leu Tyr Ser Leu Val Ser Gln Ala Gly Lys

270 275 280

Arg Leu Trp Asn Ser Glu Tyr Gly Asp Ala Asp Ala Ser Gly Lys Ser

285 290 295 300

Met Tyr Thr Asn Leu Leu Leu Asp Phe Thr Trp Leu His Pro Thr Ala

305 310 315

Trp Val Tyr Trp Gln Ala Ile Asp Gly Ser Gly Trp Gly Leu Ile Val

320 325 330

Gly Asp Asn Asp Gln Leu Thr Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Tyr Phe

335 340 345

Val Leu Ala Gln Leu Thr Arg His Ile Arg Pro Gly Met Gln Ile Leu

350 355 360

Thr Thr Pro Asp Gly Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asp Ser Gly Ser Gln

365 370 375 380

Lys Leu Val Ile Val Ala Ala Asn Trp Gly Ser Ala Gln Thr Ile Thr

385 390 395

Phe Asp Leu Thr Arg Ala Lys Thr Ala Gly Ser Asn Gly Ala Thr Val

400 405 410

Pro Arg Trp Ser Thr Gln Thr Ser Gly Gly Asp Gln Tyr Lys Ser Tyr

415 420 425

Ser Asp Thr Lys Ile Asn Asn Gly Lys Phe Ser Val Ser Phe Ser Thr

430 435 440

Gly Gln Val Gln Thr Phe Glu Ile Ser Gly Val Val Leu Lys

445 450 455

<210> 3

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 3

acacaactgg ggatccacca tgcgatcagc tattactcca tcg 43

<210> 4

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物

<400> 4

agatctcgag aagcttatca tttcagcaca acaccact 38

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物 8653

<400> 5

gcaagggatg ccatgcttgg 20

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 引物 8654

<400> 6

catataacca attgccctc 19

<210> 7

<211> 269

<212> PRT

<213> 迟缓芽孢杆菌（枯草杆菌蛋白酶 309）

<400> 7

Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala

1 5 10 15

His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp

20 25 30

Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser

35 40 45

Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr

50 55 60

His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu

65 70 75 80

Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala

85 90 95

Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala

100 105 110

Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser

115 120 125

Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly

130 135 140

Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln

165 170 175

Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile

180 185 190

Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr

195 200 205

Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile

225 230 235 240

Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu

245 250 255

Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg

260 265

<210> 8

<211> 275

<212> PRT

<213> 解淀粉芽孢杆菌

<400> 8

Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu

1 5 10 15

His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp

20 25 30

Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala

35 40 45

Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His

50 55 60

Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly

65 70 75 80

Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu

85 90 95

Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu

100 105 110

Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly

115 120 125

Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala

130 135 140

Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly

145 150 155 160

Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala

165 170 175

Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val

180 185 190

Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr

195 200 205

Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Tyr Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser

210 215 220

Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn

225 230 235 240

Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys

245 250 255

Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala

260 265 270

Ala Ala Gln

275

Claims (14)

1.具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途，其中该物品是纺织品、餐具或硬表面。

2.根据权利要求1所述的用途，用于防止、减少或去除物品的粘性。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除洗涤循环过程中污垢的再沉积。

4.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，用于防止、减少或去除污垢在物品上的附着。

5.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，用于维持或改进该物品的白度。

6.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中通过组合的使用具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽和漂白系统。

7.根据权利要求6所述的用途，其中该漂白系统选自下组，该组由以下各项组成：四乙酰基乙二胺（TAED）、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯-1-磺酸钠（ISONOBS）、4-(十二酰基氧基)苯-1-磺酸盐（LOBS）、4-(癸酰基氧基)苯-1-磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐（DOBS或DOBA）、4-(壬酰基氧基)苯-1-磺酸盐（NOBS）、6-(苯二甲酰亚氨基)过氧己酸（PAP）、NaHCO₃和/或其混合物。

8.根据权利要求6所述的用途，其中该漂白系统包含选自下组的漂白催化剂，该组由具有以下化学式的有机催化剂组成：

(iii) 及其混合物；

其中每个R¹独立地是包含从9到24个碳的支链烷基或包含从11到24个碳的直链烷基，其中每个R¹独立地是包含从9到18个碳的支链烷基或包含从11到18个碳的直链烷基，或其中每个R¹独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基以及异十五烷基。

9.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中将该具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽与蛋白酶一起使用。

10.根据权利要求9所述的用途，其中该蛋白酶加强具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽。

11.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中该具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽获得自真菌来源。

12.根据权利要求11所述的用途，其中该多肽获得自木霉属。

13.根据权利要求12所述的用途，其中该多肽获得自哈茨木霉。

14.根据权利要求13所述的用途，其中该多肽是具有内切-β-1,6-半乳聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下各项组成：

(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO: 2的成熟多肽具有至少99%的序列一致性；以及

(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO: 1的成熟多肽编码序列具有至少99%的序列一致性。