KR20200071133A - 디스페르신 iii을 함유하는 세정 조성물 - Google Patents

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수잔네 빌란트
슈테판 카르슈텐
토마스 베버
레기나 슈테르
마리안네 쉬멜링
미카엘 드레야
미르코 바이데
크리스티안 오엘렌슈라에거
도로테아 라벤토스 세구라
레베카 바이보르
헨리크 기르츠-한센
릴리안 발트센
예스페르 살로몬
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헨켈 아게 운트 코. 카게아아
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Abstract

본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 특정 세정 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 조성물의 용도 뿐만 아니라 상기 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.

Description

디스페르신 III을 함유하는 세정 조성물
본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 특정 세정 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 조성물의 용도 뿐만 아니라 상기 조성물의 사용 방법에 관한 것이다.
헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 디스페르신, 예컨대 디스페르신 B (DspB)를 포함하며, 이는 글리코시드 히드롤라제 20 패밀리에 속하는 β-N-아세틸글루코사미니다제로 기재된다. WO04061117 A2 (케인 바이오테크, 인크.(Kane Biotech, INC.))는 폴리-N-아세틸글루코사민-생산 박테리아에 의해 유발되는 바이오필름을 감소시키고 방지하기 위한 DspB를 포함하는 조성물의 용도를 기재하고, 케인 등은 의료 장치 상의 바이오필름을 감소시키고 상처 관리를 위한, 디스페르신을 포함하는 조성물의 용도를 기재한다. 바이오필름은 또한 세탁 물품, 예컨대 직물, 다른 경질 표면, 예컨대 식기 세척 기구, 식기 세척기 및 세탁기에도 존재할 수 있으며, 이는 세척 후에도 제거하기 어려운 악취를 유발할 수 있다. 출원 WO9850512 (프록터 및 갬블(Procter and Gamble))는 1종 이상의 헥소사미니다제 효소를 포함하는 세탁 또는 세정 제품을 개시한다. 본 발명은 세제, 및 물품의 심층 세정, 예컨대 세탁 및 세정 공정에 사용하기에 적합한 효소를 제공한다.
본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 글리코시드 히드롤라제 20 패밀리로부터의 헥소사미니다제의 테리바실루스(Terribacillus) 계통군에 속하는 폴리펩티드를 포함하는 세정 조성물, 특히 첨부된 청구범위에 정의된 바와 같은 그의 용도 및 사용 방법을 제공한다.
테리바실루스 계통군이 도 1 및 3에 제시된다. 본원에 기재된 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다. 본 발명은 추가로 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 세정 조성물 및 세정 공정을 위한 그의 용도를 제공한다. 헥소사미니다제 활성을 갖는 본원에 개시된 폴리펩티드는 세탁 및 식기 세척을 비롯한 세정 공정에서 EPS 및/또는 PNAG와 같은 바이오필름 관련 성분의 제거 및/또는 감소와 같은 유익한 특성을 갖는다. 본원에 개시된 폴리펩티드는 글리코시드 히드롤라제 20 패밀리의 특정한 계통군의 상동 서열인 테리바실루스 계통군에 속한다.
본원에 정의된 폴리펩티드를 함유하는 본 발명의 세정 조성물은
(a) 고체, 바람직하게는 과립상, 세탁 세제 조성물이고, 추가로
(a1) 적어도 1종의 제올라이트 빌더를, 바람직하게는 10 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 20-30 wt.-%의 양으로;
(a2) 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.4 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
(a3) 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 100 내지 5000 ppb, 보다 바람직하게는 1000 내지 2000 ppb의 활성 효소의 양으로; 및
(a4) 적어도 1종의 중합체, 바람직하게는 폴리비닐피롤리돈 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 0.3 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(b) 고체 세탁 세제 조성물이고, 추가로
(b1) 적어도 1종의 실리케이트 빌더를, 바람직하게는 2 내지 20 wt.-%, 보다 바람직하게는 5-10 wt.-%의 양으로;
(b2) 임의로 카르복시메틸셀룰로스를, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 4 wt.-%의 양으로;
(b3) 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 0.1 내지 100 ppm, 보다 바람직하게는 0.1 내지 10 ppm의 활성 효소의 양으로;
(b4) 임의로 적어도 1종의 방오 중합체, 바람직하게는 폴리비닐피롤리돈 중합체를, 0.1 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1.0 wt.-%의 양으로; 및
(b5) 표백제, 표백 활성화제 및 표백 촉매를 포함하는 적어도 1종의 표백 시스템을, 바람직하게는 0.1 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 30 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(c) 액체 세탁 세제 조성물이고, 추가로
(c1) 적어도 1종의 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 3 내지 15 wt.-%의 양으로;
(c2) 임의로 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.25 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
(c3) 임의로 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 0.001 내지 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.6 wt.-%의 효소 조성물의 양으로; 및
(c4) 임의로 적어도 1종의 유기 용매, 바람직하게는 글리세롤을, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(d) 단위 투여 형태, 바람직하게는 수용성 필름을 포함하는 파우치의 액체 세탁 세제이고, 추가로
(d1) 물을, 최대 20 wt.-%, 바람직하게는 5 내지 15 wt.-%의 양으로;
(d2) 임의로 적어도 1종의 고미제, 바람직하게는 벤질디에틸(2,6-크실릴카르바모일)-메틸암모늄벤조에이트를, 바람직하게는 0.00001 내지 0.04 wt.-%의 양으로;
(d3) 임의로 적어도 1종의 광학 증백제를, 바람직하게는 0.01 내지 2 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1 wt.-%의 양으로; 및
(d4) 임의로 적어도 1종의 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 7 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(e) 직물 피니셔이고, 추가로
(e1) 적어도 1종의 연화 실리콘, 바람직하게는 아미노-관능화 실리콘을, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
(e2) 바람직하게는 마이크로캡슐 내에 적어도 부분적으로 캡슐화되고, 보다 바람직하게는 멜라민-포름알데히드 마이크로캡슐 내에 적어도 부분적으로 캡슐화된 적어도 1종의 퍼퓸을, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1 wt.-%의 양으로;
(e3) 임의로 폴리쿼터늄 10을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로;
(e4) 임의로 폴리쿼터늄 37을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로;
(e5) 임의로 식물계 에스테르쿼트, 바람직하게는 카놀라계 또는 팜계 에스테르쿼트를, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로; 및
(e6) 임의로 아디프산을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(f) 바람직하게는 pH가 6 미만인 산성 세정제이고, 추가로
(f1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
(f2) 바람직하게는 산, 보다 바람직하게는 HCl 및 포름산으로부터 선택된 적어도 1종의 산성 살생물제; 및
(f3) 적어도 1종의 방오, 발수 또는 물 확산 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(g) 바람직하게는 pH가 6.0 내지 7.5인 중성 세정제이고, 추가로
(g1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
(g2) 바람직하게는 4급 암모늄 화합물 및 알콜로부터 선택된 적어도 1종의 살생물제; 및
(g3) 적어도 1종의 방오, 발수 또는 물 확산 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(h) 바람직하게는 pH가 7.5 초과인 알칼리성 세정제이고, 추가로
(h1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(i) 수동 식기세척제, 바람직하게는 액체 수동 식기세척제이고, 추가로
(i1) 적어도 1종의 음이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 40 wt.-%, 보다 바람직하게는 5 내지 30 wt.-%의 양으로;
(i2) 적어도 1종의 양쪽성 계면활성제, 바람직하게는 베타인을, 바람직하게는 0.1 내지 25 wt.-%, 보다 바람직하게는 1 내지 15 wt.-%의 양으로;
(i3) 적어도 1종의 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 25 wt.-%, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로;
(i4) 바람직하게는 프로테아제, 아밀라제 및 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 효소를, 바람직하게는 최대 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 최대 0.6 wt.-%의 효소 조성물의 양으로 포함하거나; 또는
(j) 자동 식기세척 조성물이고, 추가로
(j1) 시트레이트, 아미노카르복실레이트 및 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 빌더를, 바람직하게는 5 내지 30 wt.-%, 보다 바람직하게는 10 내지 20 wt.-%의 양으로;
(j2) 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.4 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
(j3) 적어도 1종의 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 1 내지 5 wt.-%의 양으로;
(j4) 표백제, 표백 활성화제 및 표백 촉매를 포함하는 적어도 1종의 표백 시스템을, 바람직하게는 0.1 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 30 wt.-%의 양으로; 및
(j5) 술포중합체, 양이온성 중합체 및 폴리아크릴레이트로부터 선택된 적어도 1종의 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 15 wt.-%, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
(k) 추가로
(k1) 적어도 1종의 술포중합체를, 바람직하게는 1 내지 15, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로 포함하고, 이는 바람직하게는 식기세척, 보다 바람직하게는 자동 식기세척 조성물이거나; 또는
(l) 추가로 프로바이오틱스, 바람직하게는 미생물, 포자 또는 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 보조 성분을 포함하거나; 또는
(m) 단위 투여 형태이고, 적어도 2개, 바람직하게는 2, 3, 4 또는 5개의 개별 구획을 포함하거나; 또는
(n) 포스페이트-무함유 조성물이다.
하기에서 "본 발명의 조성물" 또는 "본원에 기재된 바와 같은 조성물"이 언급될 때, 이는 상기 명시된 조성물 (a)-(n)을 의미한다. 또한, 달리 나타내지 않는 한, 개시된 조성물과 관련된 백분율에 대한 모든 언급은 각각의 조성물의 총 중량 대비 wt %에 관한 것이다. 본원에 정의된 바와 같은 폴리펩티드를 함유하는 조성물을 언급할 때, 각각의 조성물은 상기 폴리펩티드 중 적어도 1종을 함유하지만, 이들 중 2종 이상을 또한 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
본 발명의 한 측면에서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(a) 서열식별번호(SEQ ID NO): 2, 4, 6, 13 또는 15의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드;
(b) 1개 이상 (예를 들어, 여러) 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는, 서열식별번호: 2, 4, 6, 13 또는 15의 성숙 폴리펩티드의 변이체; 및
(c) 헥소사미니다제 활성을 갖는 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드의 단편.
본 발명은 또한 글리코시드 히드롤라제 패밀리 20 (GH20, www.cazy.org)에 속하고, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 324에 대해 적어도 60% 서열 동일성; 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 324에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 324에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 324에 대해 적어도 60% 서열 동일성, 또는 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 324에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 촉매 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 상기 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 조성물을 사용한 세정 방법 및 세정 공정에서의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 추가로
a. 물품을 본원에 정의된 바와 같은 폴리펩티드를 포함하는 세제 조성물을 포함하는 세척액에 노출시키는 단계;
b. 임의로 적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및
c. 임의로 물품을 헹구는 단계
를 포함하는 물품의 세정 또는 세탁 방법에 관한 것이며, 여기서 물품은 텍스타일 또는 경질 표면이다.
또한, 물품의 심층 세정을 위한, 서열식별번호: 7, 8, 9, 10, 11의 폴리펩티드 또는 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 상기 정의된 바와 같은 조성물의 용도가 청구된다.
본 발명은 추가로 헥소사미니다제 활성을 갖는 적어도 0.001 ppm 폴리펩티드를 포함하는 상기 정의된 바와 같은 세정 조성물에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가로 본 발명은 물품의 심층-세정을 위한 본 발명의 이러한 조성물의 용도에 관한 것이며, 여기서 물품은 텍스타일이다.
본 발명은 추가로 a) 물품을 본 발명에 따른 세제 조성물을 포함하는 세척액 또는 이와 같은 세제 용액에 노출시키는 단계; b) 임의로 적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및 임의로 물품을 헹구는 단계를 포함하는, 물품을 세정/세탁하는 방법에 관한 것이며, 여기서 물품은 텍스타일 또는 경질 표면이다.
추가로, 본 발명은
(i) 물품의 점착성을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(ii) 물품 상의 얼룩을 전처리하기 위한;
(iii) 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(iv) 물품에의 오염의 부착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(v) 물품의 백색도를 유지하거나, 개선시키기 위한;
(vi) 물품으로부터 악취를 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이며, 여기서 물품은 텍스타일이다.
도 1은 테리바실루스 계통군을 보여주는 계통수이다.
도 2는 본 발명의 폴리펩티드의 정렬이다.
도 3은 본 발명의 폴리펩티드의 계통수이다.
테리바실루스 계통군의 서열의 개관
서열식별번호: 1은 테리바실루스 사카로필루스(Terribacillus saccharophilus)로부터의 전장 폴리펩티드를 코딩하는 DNA이다.
서열식별번호: 2는 서열식별번호: 1로부터 유래된 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 3은 테리바실루스 고리엔시스(Terribacillus goriensis)로부터의 전장 폴리펩티드를 코딩하는 DNA이다.
서열식별번호: 4는 서열식별번호: 3으로부터 유래된 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 5는 테리바실루스 사카로필루스로부터의 전장 폴리펩티드를 코딩하는 DNA이다.
서열식별번호: 6은 서열식별번호: 5로부터 유래된 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 7은 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 8은 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 9는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 10은 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 11은 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 12는 테리바실루스 사카로필루스로부터의 전장 폴리펩티드를 코딩하는 DNA이다.
서열식별번호: 13은 서열식별번호: 12로부터 유래된 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 14는 테리바실루스 사카로필루스로부터의 전장 폴리펩티드를 코딩하는 DNA이다.
서열식별번호: 15는 서열식별번호: 14로부터 유래된 폴리펩티드이다.
서열식별번호: 16은 바실루스 클라우시이(Bacillus clausii) 분비 신호이다.
서열식별번호: 17은 His-태그 서열이다.
서열식별번호: 18은 폴리펩티드 모티프 GXDE이다.
서열식별번호: 19는 폴리펩티드 모티프 [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN]이다.
서열식별번호: 20은 폴리펩티드 모티프 [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA]이다.
서열식별번호: 21은 폴리펩티드 모티프 WND[SQR][IVL][TLVM]이다.
서열식별번호: 22는 폴리펩티드 모티프 QSTL이다.
서열식별번호: 23은 폴리펩티드 모티프 NKFFY이다.
서열식별번호: 24는 폴리펩티드 모티프 NLD[DR]S이다.
정의
디스페르신: 용어 "디스페르신" 및 약어 "Dsp"는 예를 들어 바이오필름에서 발견되는 N-아세틸-글루코사민 중합체 (폴리-N-아세틸글루코사민)의 β-1,6-글리코시드 결합의 가수분해를 촉매하는, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드, EC 3.2.1.을 의미한다.
헥소사미니다제: 용어 "헥소사미니다제"는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 (헥소사미니다제)를 의미하고, 예를 들어 바이오필름에서 발견되는 예를 들어 N-아세틸-D-헥소사민 또는 N-아세틸-글루코사민 중합체의 가수분해를 촉매하는 EC 3.2.1.을 포함한다. 상기 용어는 디스페르신을 포함하고, N-아세틸글루코사미니다제 활성 및 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 용어 "헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드"는 용어 헥소사미니다제와 상호교환가능하게 사용될 수 있고, 유사한 용어 "β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드"는 용어 β-N-아세틸글루코사미니다제와 상호교환가능하게 사용될 수 있다. 본 발명의 목적상, 헥소사미니다제 활성은 검정 1 또는 2에 기재된 절차에 따라 결정된다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성의 적어도 20%, 예를 들어, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%를 갖는다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성의 적어도 20%, 예를 들어, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%를 갖는다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성의 적어도 20%, 예를 들어, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%를 갖는다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성의 적어도 20%, 예를 들어, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%를 갖는다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성의 적어도 20%, 예를 들어, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 100%를 갖는다.
대립유전자 변이체: 용어 "대립유전자 변이체"는 동일한 염색체 유전자좌를 차지하는 유전자의 2개 이상의 대안적 형태 중 임의의 것을 의미한다. 대립유전자 변이는 돌연변이를 통해 자연적으로 발생하고, 집단 내의 다형성을 초래할 수 있다. 유전자 돌연변이는 침묵 (코딩된 폴리펩티드에서 변화가 없음)일 수 있거나, 변경된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩할 수 있다. 폴리펩티드의 대립유전자 변이체는 유전자의 대립유전자 변이체에 의해 코딩된 폴리펩티드이다.
바이오필름: 바이오필름은 임의의 군의 미생물에 의해 생산될 수 있고, 여기서 세포는 서로 점착되어 있거나 또는 표면, 예컨대 텍스타일, 식기 또는 경질 표면 또는 또 다른 종류의 표면에 점착되어 있다. 이들 부착 세포는 세포외 중합체 물질 (EPS)의 자기-생산 매트릭스 내에 빈번하게 매립된다. 바이오필름 EPS는 일반적으로 세포외 DNA, 단백질 및 폴리사카라이드로 구성된 중합체 집성체이다. 바이오필름은 생물 또는 무생물 표면 상에 형성될 수 있다. 바이오필름에서 성장하는 미생물 세포는 동일한 유기체의 플랑크톤 세포와 생리학상 구별되며, 이는 대조적으로 액체 매질 중에서 부유 또는 표류할 수 있는 단일-세포이다. 필름의 조밀하고 보호된 환경은 바이오필름 내에서 사는 박테리아가 다양한 방식으로 협동 및 상호작용하는 것을 가능하게 하기 때문에, 이들은 통상적으로 동일한 종의 플랑크톤 박테리아와 유의하게 상이한 특성을 갖는다. 조밀한 세포외 매트릭스 및 세포의 외부 층은 군집의 내부를 보호하기 때문에, 이러한 환경의 미생물에 대한 한가지 이점은 세제 및 항생제에 대한 증가된 저항성이다. 세탁물 및 경질 표면 상의 바이오필름 생산 박테리아는 하기 종 중에서 발견될 수 있다: 아시네토박터 종(Acinetobacter sp.), 아에로미크로비움 종(Aeromicrobium sp.), 브레분디모나스 종(Brevundimonas sp.), 미크로박테리움 종(Microbacterium sp), 미크로코쿠스 루테우스(Micrococcus luteus), 슈도모나스 종(Pseudomonas sp.), 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus sp.), 스트렙토코쿠스 디스갈락티아에(Streptococcus dysgalactiae), 스타필로코쿠스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스타필로코쿠스 뉴모니아에(Staphylococcus pneumoniae), 스테노트로포모나스 종(Stenotrophomonas sp.), 엔테로박터 종(Enterobacter sp.), 크산토모나스 종(Xanthomonas sp.), 예르시니아 종(Yersinia sp.), 클레브시엘라 종(Klebsiella sp.), 부르크홀데리아 종(Burkholderia sp.), 스테노트로포모나스 종(Stenotrophomonas sp.), 바리오보락스 종(Variovorax sp.), 에스케리키아 종(Escherichia sp.), 랄스토니아 종(Ralstonia sp.), 아크로모박터 종(Achromobacter sp.), 루테이박터 종(Luteibacter sp.), 시트로박터 종(Citrobacter sp.), 크산토모나다세아에 종(Xanthomonadaceae sp.), 할로모나스 종(Halomonas sp.), 보르데텔라 종(Bordetella sp.), 리소박터 종(Lysobacter sp.), 세라티아 종(Serratia sp.), 에스케리키아 종(Escherichia sp.), 아그레가티박터 종(Aggregatibacter sp.), 리스테리아 모노시토게네스(Listeria monocytogenes), 클로스트리디움 디피실레(Clostridium difficile), 미코박테리움 종(Mycobacterium sp.), 네이세리아 고노레아에(Neisseria gonorrheae), 에이치. 인플루엔자에(H. influenzae), 헤모필루스 두크레이이(Haemophilus ducreyi), 헬리코박터 필로리(Helicobacter pylori), 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni) 및 엔테로코쿠스 파에칼리스(Enterococcus faecalis) 뿐만 아니라 진균 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 플라부스(Aspergillus flavus), 푸사리움 솔라니(Fusarium solani), 및 크립토코쿠스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans). 한 측면에서, 바이오필름 성분 예를 들어 폴리-N-아세틸글루코사민 포함 균주는 브레분디모나스 종(Brevundimonas sp.)이다. 한 측면에서, 바이오필름 성분 예를 들어 폴리-N-아세틸글루코사민 포함 균주는 슈도모나스 알칼리필라(Pseudomonas alcaliphila) 또는 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)이다. 한 측면에서, 바이오필름 성분 예를 들어 폴리-N-아세틸글루코사민 포함 균주는 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)이다.
촉매 도메인: 용어 "촉매 도메인"은 효소의 촉매 기구를 함유하는 효소의 영역을 의미한다.
cDNA: 용어 "cDNA"는 진핵 또는 원핵 세포로부터 수득된 성숙, 스플라이싱된 mRNA 분자로부터 역전사에 의해 제조될 수 있는 DNA 분자를 의미한다. cDNA는 상응하는 게놈 DNA에 존재할 수 있는 인트론 서열이 결여되어 있다. 초기의, 1차 RNA 전사체는 성숙 스플라이싱된 mRNA로의 출현 전에, 스플라이싱을 포함한 일련의 단계를 통해 프로세싱되는 mRNA의 전구체이다.
계통군: 공통 조상으로 추적되는 상동성 특색에 기초하여 함께 클러스터링된 폴리펩티드의 군. 폴리펩티드 계통군은 계통수로서 시각화될 수 있고, 계통군은 공통 조상 및 모든 그의 직계 자손으로 이루어진 폴리펩티드 군이다 (도 1). 본 발명의 폴리펩티드는, 예를 들어 모두, 테리바실루스 계통군에 속하고, 이는 도 1 및 3에서 계통수로서 예시된다. 테리바실루스 계통군 또는 테리바실루스의 계통군은 모두 동일한 조상과 관련되고 공통 특성을 공유하는 효소의 군이다. 계통수의 계통군 내의 군 (하위계통군)을 형성하는 폴리펩티드도 또한 공통 특성을 공유할 수 있고, 계통군 내의 다른 폴리펩티드보다 더 밀접하게 관련된다.
코딩 서열: 용어 "코딩 서열"은 폴리펩티드의 아미노산 서열을 직접적으로 구체화하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 코딩 서열의 경계는 일반적으로 개시 코돈, 예컨대 ATG, GTG, 또는 TTG에서 시작하고 정지 코돈, 예컨대 TAA, TAG, 또는 TGA에서 종결되는 오픈 리딩 프레임에 의해 결정된다. 코딩 서열은 게놈 DNA, cDNA, 합성 DNA, 또는 그의 조합일 수 있다.
제어 서열: 용어 "제어 서열"은 본 발명의 성숙 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현을 위해 필요한 핵산 서열을 의미한다. 각각의 제어 서열은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대해 천연 (즉, 동일한 유전자로부터의 것) 또는 외래 (즉, 상이한 유전자로부터의 것)일 수 있거나 또는 서로 천연 또는 외래일 수 있다. 이러한 제어 서열은 리더, 폴리아데닐화 서열, 프로펩티드 서열, 프로모터, 신호 펩티드 서열, 및 전사 종결인자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 최소한, 제어 서열은 프로모터, 및 전사 및 번역 정지 신호를 포함한다. 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 코딩 영역과 제어 서열의 라이게이션을 용이하게 하는 특정 제한 부위를 도입하기 위해 링커가 제어 서열에 제공될 수 있다.
심층 세정: 용어 "심층 세정"은 바이오필름의 성분, 예컨대 EPS 또는 그의 일부, 폴리사카라이드, PNAG (폴리-N-아세틸글루코사민), 단백질, DNA, 오염 또는 바이오필름에 존재하는 다른 성분의 감소 또는 제거를 의미한다.
세제 보조 성분: 세제 보조 성분은 본 발명의 헥소사미니다제와 상이하다. 이들 추가의 보조 성분의 정확한 속성 및 그의 혼입 수준은 조성물의 물리적 형태 및 그것이 사용되는 작업의 속성에 좌우될 것이다. 적합한 보조 물질은 하기 기재된 성분, 예컨대 계면활성제, 빌더, 응집 보조제, 킬레이트화제, 이염 억제제, 효소, 효소 안정화제, 효소 억제제, 촉매 물질, 표백 활성화제, 과산화수소, 과산화수소 공급원, 사전형성된 과산, 중합체 작용제, 점토 오염 제거/재침착방지제, 증백제, 거품 억제제, 염료, 퍼퓸, 구조 탄성화제, 직물 유연제, 캐리어, 굴수성제, 빌더 및 공-빌더, 직물 색조제, 소포제, 분산제, 가공 보조제, 고미제 및/또는 안료를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
세정 및/또는 세제 조성물: 용어 "세정 조성물" 및 "세제 조성물"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 세정하고자 하는 물품, 예컨대 텍스타일 및 경질 표면으로부터 바람직하지 않은 화합물의 제거에 사용되는 조성물을 지칭한다. 세제 조성물은 예를 들어 가정용 세정 및 산업용 세정 둘 다를 위해 텍스타일을 세정하는데 사용될 수 있다. 상기 용어는 목적하는 세정 조성물 및 제품의 형태 (예를 들어, 액체, 겔, 분말, 과립화, 페이스트, 또는 분무 조성물)에 대해 선택된 임의의 물질/화합물을 포괄하고, 세제 조성물 (예를 들어, 액체 및/또는 고체 세탁 세제 및 미분 직물 세제; 직물 청정제; 직물 유연제 (직물 피니셔); 및 텍스타일 및 세탁 프리-스팟터/전처리제)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한, 용어는 수동 및 자동 식기세척 세제 및 경질 표면을 위한 세정 세제를 또한 포함한다. 본원에 기재된 폴리펩티드를 함유하는 것에 더하여, 조성물은 1종 이상의 추가의 효소 (예컨대 프로테아제, 아밀라제, 리파제, 큐티나제, 셀룰라제, 엔도글루카나제, 크실로글루카나제, 펙티나제, 펙틴 리아제, 크산타나제, 퍼옥시다제, 할로퍼옥시게나제, 카탈라제 및 만난아제 또는 그의 임의의 혼합물), 및/또는 세제 보조 성분 예컨대 계면활성제, 빌더, 킬레이트화제 또는 킬레이트화 작용제, 표백 시스템 또는 표백 성분, 중합체, 직물 컨디셔너, 폼 부스터, 비누거품 억제제, 염료, 퍼퓸, 갈화 억제제, 광학 증백제, 살박테리아제, 살진균제, 오염 현탁화제, 부식방지제, 효소 억제제 또는 안정화제, 효소 활성화제, 트랜스퍼라제(들), 가수분해성 효소, 옥시도 리덕타제, 블루잉제 및 형광 염료, 항산화제, 및 가용화제를 함유할 수 있다.
효소 세제력 이익: 용어 "효소 세제력 이익"은 효소가 그러한 효소를 함유하지 않는 동일한 세제와 비교하여 세제에 부가할 수 있는 유리한 효과로서 본원에 정의된다. 효소에 의해 제공될 수 있는 중요한 세제력 이익은 세척 및 또는 세정 후 전혀 보이지 않거나 거의 보이지 않는 오염물을 동반한 얼룩을 제거하는 것, 재부착방지로도 불리는 효과인, 세척 공정에서 방출된 오염물의 재부착을 방지 또는 감소시키는 것, 미백으로도 불리는 효과인, 원래는 백색이었지만 반복적인 사용과 세척 후에 회색빛 또는 황색빛의 외관이 생성된 텍스타일의 백색도를 완전히 또는 부분적으로 회복시키는 것이다. 촉매적 얼룩 제거 또는 오염물의 재부착 방지와 직접적으로 관련되지 않은 텍스타일 관리 이익이 또한 효소 세제력 이익에 중요하다. 이러한 텍스타일 관리 이익의 예는, 이염 억제 또는 역염색방지로도 불리는 효과인, 한 직물에서 또 다른 직물로의 이염 또는 동일한 직물의 또 다른 부분으로의 이염의 방지 또는 감소, 보풀형성방지로도 불리는 효과인, 직물 표면으로부터 돌출되거나 파손된 섬유의 제거에 의한 보풀형성 경향의 감소 또는 이미 존재하는 보풀 또는 솜털의 제거, 직물-부드러움 개선, 직물의 색상 명확화, 및 직물 또는 의류의 섬유에 갇혀 있는 미립자 오염물의 제거이다. 효소적 표백이 추가의 효소 세제력 이익이며, 여기서 촉매 활성은 일반적으로 표백 성분, 예컨대 과산화수소 또는 다른 과산화물의 형성을 촉매하기 위해 사용된다.
발현: 용어 "발현"은 전사, 전사후 변형, 번역, 번역후 변형, 및 분비를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 폴리펩티드의 생산에 수반되는 임의의 단계를 포함한다.
발현 벡터: 용어 "발현 벡터"는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 그의 발현을 제공하는 제어 서열에 작동가능하게 연결된 선형 또는 원형 DNA 분자를 의미한다.
단편: 용어 "단편"은 성숙 폴리펩티드 또는 도메인의 아미노 및/또는 카르복실 말단에 존재하지 않는 1개 이상의 (예를 들어, 여러) 아미노산을 갖는 폴리펩티드 또는 촉매 도메인을 의미하고; 여기서 단편은 헥소사미니다제 활성을 갖는다. 한 측면에서, 단편은 적어도 300개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 300), 적어도 305개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 305), 적어도 310개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 310), 적어도 315개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 315), 또는 적어도 320개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 320)를 함유한다. 한 측면에서, 단편은 적어도 300개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 300), 적어도 305개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 305), 적어도 310개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 310), 적어도 315개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 315), 또는 적어도 320개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 320)를 함유한다. 한 측면에서, 단편은 적어도 300개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 300), 적어도 305개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 305), 적어도 310개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 310), 적어도 315개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 315), 또는 적어도 320개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 320)를 함유한다. 한 측면에서, 단편은 적어도 300개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 300), 적어도 305개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 305), 적어도 310개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 310), 적어도 315개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 315), 또는 적어도 320개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 320)를 함유한다. 한 측면에서, 단편은 적어도 300개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 300), 적어도 305개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 305), 적어도 310개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 310), 적어도 315개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 315), 또는 적어도 320개의 아미노산 잔기 (예를 들어, 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 320)를 함유한다.
숙주 세포: 용어 "숙주 세포"는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물 또는 발현 벡터에 의한 형질전환, 형질감염, 형질도입 등에 감수성인 임의의 세포 유형을 의미한다. 용어 "숙주 세포"는 복제 동안 발생한 돌연변이로 인해 모 세포와 동일하지 않은 모 세포의 임의의 자손을 포괄한다.
단리된: 용어 "단리된"은 자연에서는 존재하지 않는 형태 또는 환경에서의 물질을 의미한다. 단리된 물질의 비제한적 예는 (1) 임의의 비-자연 발생 물질, (2) 자연에서 회합된 자연 발생 성분 중 1종 이상 또는 모두로부터 적어도 부분적으로 제거된, 임의의 효소, 변이체, 핵산, 단백질, 펩티드 또는 보조인자를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 물질; (3) 자연에서 발견되는 물질에 비해 사람의 손에 의해 변형된 임의의 물질; 또는 (4) 자연 회합된 다른 성분에 비해 물질의 양을 증가시킴으로써 변형된 임의의 물질 (예를 들어, 숙주 세포에서의 재조합 생산; 물질을 코딩하는 유전자의 다중 카피; 및 물질을 코딩하는 유전자와 자연 회합된 프로모터보다 더 강력한 프로모터의 사용)을 포함한다. 단리된 물질은 발효 브로쓰 샘플에 존재할 수 있고; 예를 들어, 숙주 세포는 본 발명의 폴리펩티드를 발현하도록 유전자 변형될 수 있다. 그러한 숙주 세포로부터의 발효 브로쓰는 단리된 폴리펩티드를 포함할 것이다.
개선된 세척 성능: 용어 "개선된 세척 성능"은 효소가 없는 동일한 세제 조성물의 세척 성능에 비해, 예를 들어 증가된 얼룩 제거 또는 보다 적은 재침착에 의한, 세제 조성물에서 증가된 세척 성능을 나타내는 효소로서 본원에 정의된다. 용어 "개선된 세척 성능"은 세탁에서의 세척 성능을 포함한다.
세탁: 용어 "세탁"은 가정용 세탁 및 산업용 세탁 둘 다에 관한 것이고, 텍스타일을 본 발명의 세정 또는 세제 조성물을 함유하는 용액으로 처리하는 공정을 의미한다. 세탁 공정은 예를 들어 가정용 또는 산업용 세탁기를 사용하여 예를 들어 수행될 수 있거나, 또는 손으로 수행될 수 있다.
악취: 용어 "악취"는 깨끗한 물품에서의 원하지 않는 냄새를 의미한다. 세정된 물품은 물품에 부착된 악취 없이 신선한 냄새가 나고 깨끗해야 한다. 악취의 한 예는 미생물에 의해 생산될 수 있는 불쾌한 냄새를 갖는 화합물이다. 또 다른 예는 인간 또는 동물과 접촉된 물품에 부착된 땀 또는 신체 냄새일 수 있는 불쾌한 냄새이다. 악취의 또 다른 예는 물품에 점착되는 향신료, 예를 들어 카레 또는 다른 강하게 냄새가 나는 이국 향신료로부터의 냄새일 수 있다.
성숙 폴리펩티드: 용어 "성숙 폴리펩티드"는 번역 및 임의의 번역후 변형, 예컨대 N-말단 프로세싱, C-말단 말단절단, 글리코실화, 인산화 등 후의 그의 최종 형태의 폴리펩티드를 의미한다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 324이고, 서열식별번호: 2의 아미노산 -41 내지 -1은 신호 펩티드이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 7을 갖는 아미노산 서열이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 324이고, 서열식별번호: 4의 아미노산 -25 내지 -1은 신호 펩티드이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 8을 갖는 아미노산 서열이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 324이고, 서열식별번호: 6의 아미노산 -25 내지 -1은 신호 펩티드이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 9을 갖는 아미노산 서열이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 324이고, 서열식별번호: 13의 아미노산 -24 내지 -1은 신호 펩티드이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 10을 갖는 아미노산 서열이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 324이고, 서열식별번호: 15의 아미노산 -24 내지 -1은 신호 펩티드이다. 일부 측면에서, 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 11을 갖는 아미노산 서열이다.
숙주 세포가 동일한 폴리뉴클레오티드에 의해 발현된 2개 이상의 상이한 성숙 폴리펩티드 (즉, 상이한 C-말단 및/또는 N-말단 아미노산을 가짐)의 혼합물을 생산할 수 있다는 것이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 또한, 상이한 숙주 세포는 폴리펩티드를 상이하게 프로세싱하므로, 폴리뉴클레오티드를 발현하는 하나의 숙주 세포는 동일한 폴리뉴클레오티드를 발현하는 또 다른 숙주 세포와 비교하여 상이한 성숙 폴리펩티드 (예를 들어, 상이한 C-말단 및/또는 N-말단 아미노산을 가짐)를 생산할 수 있는 것으로 관련 기술분야에 공지되어 있다.
성숙 폴리펩티드 코딩 서열: 용어 "성숙 폴리펩티드 코딩 서열"은 헥소사미니다제 활성을 갖는 성숙 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 한 측면에서, 성숙 폴리펩티드 코딩 서열은 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 124 내지 1095이고, 서열식별번호: 1의 뉴클레오티드 1 내지 123은 신호 펩티드를 코딩한다. 한 측면에서, 성숙 폴리펩티드 코딩 서열은 서열식별번호: 3의 뉴클레오티드 76 내지 1047이고, 서열식별번호: 3의 뉴클레오티드 1 내지 75는 신호 펩티드를 코딩한다. 한 측면에서, 성숙 폴리펩티드 코딩 서열은 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 76 내지 1047이고, 서열식별번호: 5의 뉴클레오티드 1 내지 75는 신호 펩티드를 코딩한다. 한 측면에서, 성숙 폴리펩티드 코딩 서열은 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 73 내지 1044이고, 서열식별번호: 12의 뉴클레오티드 1 내지 72는 신호 펩티드를 코딩한다. 한 측면에서, 성숙 폴리펩티드 코딩 서열은 서열식별번호: 14의 뉴클레오티드 73 내지 1044이고, 서열식별번호: 14의 뉴클레오티드 1 내지 72는 신호 펩티드를 코딩한다.
핵산 구축물: 용어 "핵산 구축물"은 자연 발생 유전자로부터 단리되거나, 또는 자연에서 달리 존재하지 않거나 또는 합성인 방식으로 핵산의 절편을 함유하도록 변형된, 1개 이상의 제어 서열을 포함하는 단일 가닥 또는 이중 가닥의 핵산 분자를 의미한다.
작동가능하게 연결된: 용어 "작동가능하게 연결된"은 제어 서열이 코딩 서열의 발현을 지시하도록, 제어 서열이 폴리뉴클레오티드의 코딩 서열에 대해 적절한 위치에 놓인 구성을 의미한다.
서열 동일성: 2개의 아미노산 서열 사이 또는 2개의 뉴클레오티드 서열 사이의 관련성은 파라미터 "서열 동일성"에 의해 기재된다.
본 발명의 목적상, 2개의 아미노산 서열 사이의 서열 동일성은 EMBOSS 패키지 (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), 바람직하게는 버전 5.0.0 이후의 니들(Needle) 프로그램에서 구현되는 바와 같은 니들만-분쉬(Needleman-Wunsch) 알고리즘 (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453)을 사용하여 결정된다. 사용되는 파라미터는 갭 오픈 패널티 10, 갭 연장 페널티 0.5, 및 EBLOSUM62 (BLOSUM62의 EMBOSS 버전) 치환 매트릭스이다. "최장 동일성" (-nobrief 옵션을 사용하여 수득됨)으로 라벨링된 니들의 결과는 퍼센트 동일성으로서 사용되고 하기와 같이 계산된다:
(동일한 잔기 x 100)/(정렬의 길이 - 정렬 내의 갭의 총수).
엄격도 조건: 용어 "매우 낮은 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 25% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 45℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
용어 "낮은 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 25% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 50℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
용어 "중간 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 35% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 55℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
용어 "중간-높은 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 35% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 60℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
용어 "높은 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 50% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 65℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
용어 "매우 높은 엄격도 조건"은 적어도 100개의 뉴클레오티드 길이의 프로브, 5X SSPE, 0.3% SDS, 200 마이크로그램/ml 전단 및 변성된 연어 정자 DNA, 및 50% 포름아미드 중 42℃에서의 사전혼성화 및 혼성화, 12 내지 24시간 동안 표준 서던 블롯팅 절차를 따르는 것을 의미한다. 캐리어 물질은 70℃에서 2X SSC, 0.2% SDS를 사용하여 각각 15분 동안 3회 최종 세척된다.
변이체: 용어 "변이체"는 1개 이상의 (예를 들어, 여러) 위치에서 변경, 즉, 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 치환은 위치를 차지하는 아미노산의 상이한 아미노산으로의 대체를 의미하고; 결실은 위치를 차지하는 아미노산의 제거를 의미하고; 삽입은 위치를 차지하는 아미노산에 인접하여 그에 바로 후속하여 아미노산의 부가를 의미한다.
명명법
본 발명의 목적상, 명명법 [IV] 또는 [I/V]는 이 위치의 아미노산이 이소류신 (Ile, I) 또는 발린 (Val, V)일 수 있음을 의미한다. 마찬가지로, 명명법 [LVI] 및 [L/V/I]는 이 위치의 아미노산이 류신 (Leu, L), 발린(Val, V) 또는 이소류신 (Ile, I), 및 본원에 기재된 바와 같은 다른 조합일 수 있음을 의미한다. 추가로 달리 제한되지 않는 한, 아미노산 X는 20개의 천연 아미노산 중 임의의 것일 수 있도록 정의된다.
발명의 상세한 설명
다양한 효소가 세탁에서 사용되어 왔고, 그 중 많은 것은 악취를 제거하는 것과 관련되었다. WO2014/087011은 세탁물 및/또는 텍스타일로부터 악취를 감소시키기 위한 데옥시리보뉴클레아제 (DNase)의 용도를 기재하고, WO9909143은 악취의 감소를 위한 매개자와 조합된 1종 이상의 옥시도리덕타제의 용도를 기재하고, WO2012/112718은 바실루스의 다양한 균주를 사용하여 박테리아에 의해 유발되는 세탁물 악취의 생산을 억제하는 방법을 기재한다. 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드의 GH20 패밀리의 테리바실루스 계통군으로부터의 폴리펩티드를 포함하는 세정, 예를 들어 세제 조성물에 관한 것이다. 또한, 세탁 방법 및 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 용도가 청구된다. 헥소사미니다제 활성을 갖는 GH20 패밀리의 테리바실루스 계통군으로부터의 폴리펩티드는 세척되는 물품 상의 얼룩을 감소시키고 방지하는데 유용하다. 본 발명자들은 놀랍게도 헥소사미니다제 활성을 갖는 GH20 패밀리의 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드가 세탁물 연관 유기 물질, 예를 들어 EPS 및 또는 PNAG의 감소에 유용하다는 것을 발견하였다. WO200406117은 디스페르신, 예를 들어 DspB를 포함하는 조성물을 기재한다. 조성물은 음이온성, 양이온성, 또는 비이온성일 수 있는 세제를 포함할 수 있다. WO9850512는 헥소사미니다제 활성을 갖는 효소를 기재한다. 본 발명의 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖지만, 이들은 DspB 계통군에 속하지 않거나 또는 WO9850512에 기재된 임의의 효소와 관련되지 않는다. 본 발명의 폴리펩티드는 테리바실루스 계통군에 속하고, 따라서 DspB 및 WO9850512에 개시된 것과 별개이다. 따라서 본 발명의 폴리펩티드가 경질 표면 상의 것, 뿐만 아니라 세탁물 내의 유기 물질, 예컨대 바이오필름 성분, 예를 들어 폴리사카라이드, 예를 들어 PNAG (폴리-N-아세틸글루코사민)를 방지, 감소 및/또는 제거하는데 사용될 수 있다는 것은 놀라운 것이다. 세탁과 같은 세정 공정 또는 예를 들어 빌더 및/또는 표백제를 포함하는 세제 조성물에서의 헥소사미니다제의 사용은 관련 기술분야에서 제시된 바 없다. 세정 공정에서 유용하기 위해서는, 효소는 계면활성제, 빌더 및 표백 성분과 같은 세제 성분의 존재 하에서의 안정성을 포함하여, 세탁과 같은 세정 공정의 조건 하에 세제 중에서 그의 작용을 수행할 필요가 있다. 세제의 성분은 헥소사미니다제와 같은 효소의 성능에 유의하게 영향을 미칠 수 있다. 본 출원은 놀랍게도 테리바실루스 계통군에 속하는 폴리펩티드가 세제에서의 매우 통상적인 계면활성제인 계면활성제 선형 알킬벤젠술포네이트 (LAS)의 존재 하에 특히 안정하다는 것을 보여준다. 따라서 테리바실루스에 속하는 폴리펩티드는, 예를 들어 세탁기에서의 텍스타일의 심층 세정에 특히 유용하다.
테리바실루스 계통군의 개관이 도 1에 제공된다. 테리바실루스 계통군은 상동 서열을 포함한다. 성숙 아미노산 서열식별번호: 7, 8 및 9를 갖는 본 발명의 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 니들만-분쉬(Needleman-Wunsch) 알고리즘을 사용하여 쌍으로 정렬될 수 있다 (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453). 이러한 정렬로부터 생성된 퍼센트 동일성을 하기 표 1에 제시한다.
표 1
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표 1은 본 발명의 폴리펩티드가 근접한 서열 관련성을 공유한다는 것을 보여준다. 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드는 디스페르신 계통군의 하위계통군에 속한다. 이들 폴리펩티드는 90% 초과의 쌍별 서열 동일성을 공유하고, 예를 들어 더 멀리 떨어져 있는 DspB 폴리펩티드와 비교하여 서로 더 밀접하게 관련된다 (제시되지 않음).
본 발명의 한 측면은 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 99.8% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 95 %, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본원에 기재된 폴리펩티드는 모두 동일한 계통군, 테리바실루스 계통군 내에 있고, 모두 세제의 존재 하에 심층 세정 특성을 포함한 공통 기능 특색을 갖는다. 본 발명자들은 놀랍게도, 서열식별번호: 7, 8, 9, 10, 11을 갖는 성숙 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드가 특이적 특성을 공유하고, 보다 정확하게는 이러한 계통군에 포함되는 폴리펩티드가 모두 광범위한 계면활성제, 예컨대 LAS와 함께 우수한 심층 세정 효과를 갖고, 따라서 계면활성제가 존재하는 세제, 예컨대 음이온성, 비-이온성, 양이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제를 포함하는 세제에서 특히 유용하다는 것을 발견하였다.
이미 기재된 바와 같이, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 글리코_히드로_20, 예를 들어 GH20의 구조적 도메인을 포함할 수 있다. GH20 도메인을 포함하는 폴리펩티드는 여러 모티프를 포함할 수 있고, 한 예는 테리바실루스 사카로필루스 (서열식별번호: 9) 내의 위치 158 내지 161에 상응하는 위치에 존재하는 GXDE (서열식별번호: 18)이다. 잔기 D 및 E는 GH20의 핵심 촉매 잔기이다 (서열식별번호: 9의 pos 160 및 161). GH20 폴리펩티드는 다수의 별개의 하위-클러스터 또는 계통군으로 분리될 수 있고, 특정 도메인의 예가 하기 열거된다. 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드에 의해 공유되는 추가의 도메인이 확인되었다. 이러한 도메인은 이전에 기재되지 않았고, 도메인은 IAS로 명명되며, 이러한 도메인의 폴리펩티드는, 헥소사미니다제 활성, 예를 들어 PNAG 활성을 갖는 것에 더하여, 서열식별번호: 9의 위치 44 내지 50의 ESYAIAS에 상응하는 특정 모티프, 예를 들어 [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19) 중 1개 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드에 의해 공유되는 또 다른 도메인이 확인되었다. 이러한 도메인은 이전에 기재되지 않았다. 도메인은 WND로 명명되고, 이러한 도메인의 폴리펩티드는 GH20 도메인을 포함하고, 박테리아 기원의 것이고, PNAG 활성을 갖는 것에 더하여 특정 모티프를 포함하는 것을 특징으로 한다. 도메인의 폴리펩티드는 서열식별번호: 9의 pos 156 내지 163에 상응하는 모티프 [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20)를 포함할 수 있고, 여기서 G (서열식별번호: 9의 위치 158에 상응함)는 테리바실루스 계통군에서 완전히 보존되고, 잔기 D 및 E는 GH20의 핵심 촉매 잔기이다 (서열식별번호: 9의 pos 160 및 161). 본 발명의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 또 다른 모티프는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), 서열식별번호: 9의 193 내지 198이고, 여기서 W (서열식별번호: 9의 pos 193)는 활성 부위 포켓의 일부이고 추정상 PNAG 기질의 N-아세틸 기의 결합에 수반된다. 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드는 PNAG 활성을 갖는 박테리아 기원의 WND 도메인 폴리펩티드를 포함하는, QSTL로 명명되는 계통군으로 추가로 세분될 수 있다. 계통군의 폴리펩티드는 서열식별번호: 9의 pos 216 내지 219에 상응하는 모티프 예 QSTL (서열식별번호 22)을 포함하고, 여기서 모든 4개의 아미노산은 QSTL 계통군에서 완전히 보존되고, 추정상 기질 결합에 수반된다. QSTL 계통군의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 또 다른 모티프는 서열식별번호: 9의 273 내지 277의 NKFFY (서열식별번호: 23)이다. QSTL 계통군의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 추가 모티프는 서열식별번호: 9의 204 내지 208의 NLD[DR]S (서열식별번호: 24)이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 GXDE (서열식별번호: 18) 모티프를 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19) 모티프를 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프 [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20)를 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프 QSTL (서열식별번호: 22)을 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프 NKFFY (서열식별번호: 23)를 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프 NLD[DR]S (서열식별번호: 24)를 포함한다. QSTL 계통군에 포함되는 폴리펩티드의 정렬은 도 2에 제시된다.
본 발명의 일부 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18) 또는 [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 일부 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 일부 측면은 하나 이상의 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 폴리펩티드 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 한 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 1개 또는 둘 다의 모티프(들) [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20) 또는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
한 측면은 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 또는 그에 대해 적어도 84 %, 예컨대 적어도 85%, 예컨대 적어도 86%, 예컨대 적어도 87%, 예컨대 적어도 88%, 예컨대 적어도 89%, 예컨대 적어도 90%, 예컨대 적어도 91%, 예컨대 적어도 92%, 예컨대 적어도 93%, 예컨대 적어도 94%, 예컨대 적어도 95%, 예컨대 적어도 96%, 예컨대 적어도 97%, 예컨대 적어도 98%, 예컨대 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 세정 공정에서의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다. 본 발명의 일부 측면은 a) 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세정, 예를 들어 세제 조성물에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 헥소사미니다제 활성을 갖는 적어도 0.001 ppm 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
폴리펩티드의 양은 0.00004-100 ppm의 범위, 예컨대 0.00008-50 ppm의 범위, 0.00001-20의 범위, 0.0002-20 ppm의 범위, 0.0001-50 ppm의 범위, 0.0002-50의 범위, 0.0004-50의 범위, 0.0008-50의 범위, 0.001-50 ppm, 0.01-50 ppm, 바람직하게는 0.0001-50 ppm, 보다 바람직하게는 0.0002-20 ppm, 보다 바람직하게는 0.0002-10 ppm, 보다 바람직하게는 0.001-10 ppm, 가장 바람직하게는 0.002-10 ppm의 범위 내일 수 있다. 본 발명의 헥소사미니다제는 적어도 0.00001 ppm, 예컨대 적어도 0.00002 ppm, 적어도 0.0001 ppm, 적어도 0.0002 ppm, 적어도 0.0005 ppm, 적어도 0.001 ppm, 적어도 0.002 mg ppm, 적어도 0.005 ppm, 적어도 0.01 ppm 또는 적어도 0.02 ppm에 상응하는 양일 수 있다. 조성물은 적어도 0.00008%, 바람직하게는 적어도 0.0000.1 %, 0.00002%, 0.000.1%, 0.0002%, 0.001%, 0.002%, 0.003%, 0.004%, 0.005%, 0.006%, 0.008%, 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9% 또는 1.0% 헥소사미니다제를 포함할 수 있다.
바람직하게는, 폴리펩티드는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성, 예를 들어 PNAG에 대한 활성을 갖는다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성, 예를 들어 PNAG에 대한 활성을 갖고, 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함한다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11에 제시된 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다.
한 측면에서, 폴리펩티드는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성, 예를 들어 PNAG에 대한 활성을 갖고, 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11에 제시된 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는다.
한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 또는 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 9, 또는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 10, 또는 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 또는 서열식별번호: 11, 또는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
조성물은 세정 조성물, 바람직하게는 세탁 또는 식기 세척 조성물이다. 본 발명의 일부 측면은 본 발명의 폴리펩티드 및 추가의 보조 성분을 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물에 관한 것이며, 여기서 보조 성분은 하기 중 하나 이상으로부터 선택된다:
a) 적어도 1종의 빌더,
b) 적어도 1종의 계면활성제, 및
c) 적어도 1종의 표백제 성분.
본 발명의 일부 측면은 a) 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물, 예를 들어 세제 조성물에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 일부 측면은 적어도 0.01 ppm의 활성 효소 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세제 조성물에 관한 것이며, 여기서 효소 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8 또는 서열식별번호: 9 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 일부 측면은 적어도 0.0001 ppm의 활성 효소 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세제 조성물에 관한 것이며, 여기서 효소 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는다.
본원에 정의된 바와 같은 조성물은, 달리 나타내지 않는 한, 0-65 wt%, 약 2 wt% 내지 약 60 wt%, 약 5 wt% 내지 약 50 wt%, 약 5 wt% 내지 약 40 wt%, 약 5 wt% 내지 약 30 wt%, 약 5 wt% 내지 약 20 wt%, 약 5 wt% 내지 약 10 wt%의 음이온성 계면활성제, 양쪽성 및/또는 비-이온성 계면활성제를 포함할 수 있다. 수치와 관련하여 본원에 사용된 "약"은 상기 값 ±10%, 바람직하게는 ±5%를 의미한다. 따라서, "약 5 wt%"는 4.5 내지 5.5 wt%, 바람직하게는 4.75 내지 5.25 wt%를 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, 계면활성제는 일반적으로 비이온성, 음이온성 및/또는 양쪽성 계면활성제 중에서 선택될 수 있다. 일반적으로, 표백-안정성 계면활성제가 바람직하다. 바람직한 음이온성 계면활성제는 술페이트 계면활성제, 및 특히 알킬 에테르 술페이트, 특히 C9-C15 알콜 에테르 술페이트, 바람직하게는 에톡실레이트 또는 혼합 에톡실레이트/프로폭실레이트, 예컨대 1 내지 30 EO를 갖는 것, C12-C15 1급 알콜 에톡실레이트, 예컨대 1 내지 30 EO를 갖는 것, C8-C16 에스테르 술페이트 및 C10-C14 에스테르 술페이트, 예컨대 모노 도데실 에스테르 술페이트이다. 음이온성 계면활성제의 비제한적 예는 술페이트 및 술포네이트, 특히, 선형 알킬벤젠술포네이트 (LAS), 특히 C12-C13 알킬 벤젠 술포네이트, LAS의 이성질체, 분지형 알킬벤젠술포네이트 (BABS), 페닐알칸술포네이트, 알파-올레핀술포네이트 (AOS), 올레핀 술포네이트, 알켄 술포네이트, 알칸-2,3-디일비스 (술페이트), 히드록시알칸술포네이트 및 디술포네이트, 알킬 술페이트 (AS), 예컨대 소듐 도데실 술페이트 (SDS), 지방 알콜 술페이트 (FAS), 1급 알콜 술페이트 (PAS), 알콜 에테르 술페이트 (AES 또는 AEOS 또는 FES, 또한 알콜 에톡시술페이트 또는 지방 알콜 에테르 술페이트로도 공지됨), 2급 알칸술포네이트 (SAS), 파라핀 술포네이트 (PS), 에스테르 술포네이트, 술폰화 지방산 글리세롤 에스테르, 메틸 에스테르 술포네이트 (MES)를 포함한 알파-술포 지방산 메틸 에스테르 (알파-SFMe 또는 SES), 알킬- 또는 알케닐숙신산, 도데세닐/테트라데세닐 숙신산 (DTSA), 아미노산의 지방산 유도체, 술포-숙신산의 디에스테르 및 모노에스테르 또는 지방산의 염 (비누), 및 그의 조합을 포함한다. 음이온성 계면활성제는 바람직하게는 염의 형태로 세제에 첨가된다. 이들 염에서 적합한 양이온은 알칼리 금속 이온, 예컨대 나트륨, 칼륨 및 리튬 및 암모늄 염, 예를 들어 (2-히드록시에틸) 암모늄, 비스(2-히드록시에틸) 암모늄 및 트리스(2-히드록시에틸) 암모늄 염이다. 비이온성 계면활성제의 비제한적 예는 알콜 에톡실레이트 (AE 또는 AEO), 알콜 프로폭실레이트, 프로폭실화 지방 알콜(PFA), 알콕실화 지방산 알킬 에스테르, 예컨대 에톡실화 및/또는 프로폭실화 지방산 알킬 에스테르, 알킬페놀 에톡실레이트 (APE), 노닐페놀 에톡실레이트 (NPE), 알킬폴리글리코시드 (APG), 알콕실화 아민, 지방산 모노에탄올아미드 (FAM), 지방산 디에탄올아미드 (FADA), 에톡실화 지방산 모노에탄올아미드 (EFAM), 프로폭실화 지방산 모노에탄올아미드 (PFAM), 폴리히드록시알킬 지방산 아미드, 또는 글루코사민의 N-아실 N-알킬 유도체 (글루카미드, GA 또는 지방산 글루카미드, FAGA), 뿐만 아니라 상표명 스팬(SPAN) 및 트윈(TWEEN) 하에 입수가능한 제품, 및 그의 조합을 포함한다. 상업적으로 입수가능한 비이온성 계면활성제는 바스프(BASF)로부터의 플루라팍(Plurafac)™, 루텐솔(Lutensol)™ 및 플루로닉(Pluronic)™ 범위, 코그니스(Cognis)로부터의 데히폰(Dehypon)™ 시리즈 및 클라리언트(Clariant)로부터의 게나폴(Genapol)™ 시리즈를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 상기 계면활성제는 바람직하게는 적어도 1종의 알킬 에테르 술페이트를 포함한다. 바람직한 알킬 에테르 술페이트는 하기 화학식 (I)의 것이다:
R1-O-(AO)n-SO3 - X+ (I).
화학식 (I)에서, R1은 선형 또는 분지형, 치환 또는 비치환된 알킬 기, 바람직하게는 선형, 비치환된 알킬 기, 보다 바람직하게는 지방 알콜 모이어티를 나타낸다. 바람직한 R1 모이어티는 데실, 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실, 노나데실, 에이코실 모이어티 및 그의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 짝수의 탄소 원자를 갖는 이들 기가 바람직하다. 특히 바람직한 R1 모이어티는 C10-C18 지방 알콜, 예컨대 코코넛 오일 알콜, 탈로우 지방 알콜, 라우릴, 미리스틸, 세틸 또는 스테아릴 알콜로부터 유래되거나, 또는 C10-C20 옥소알콜로부터 유래된다.
AO는 에틸렌옥시드 (EO) 또는 프로필렌옥시드 (PO) 기, 바람직하게는 에틸렌옥시드 기를 나타낸다. 지수 n은 1 내지 50, 바람직하게는 1 내지 20, 보다 바람직하게는 1 내지 10의 정수를 나타낸다. 특히 바람직하게는, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. X는 1가 양이온 또는 n-가 양이온의 n-가 부분을 나타내고, 바람직한 것은 알칼리 금속 양이온, 특히 Na+ 및 K+, 가장 바람직한 것은 Na+이다. 추가의 양이온 X+는 NH4 +, ½ Zn2+, ½ Mg2+, ½ Ca2+, ½ Mn2+, 및 그의 조합으로부터 선택될 수 있다.
다양한 바람직한 실시양태에서, 세제 조성물은 하기 화학식 (II)의 지방 알콜 에테르 술페이트로부터 선택된 알킬 에테르 술페이트를 포함하며
Figure pct00002
여기서, k = 9 내지 19이고, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 1-7 EO인 C10-16 지방 알콜 에테르 술페이트 (k = 9-15, n = 1-7), 예컨대 1-3, 특히 2 EO인 C12-14 지방 알콜 에테르 술페이트 (k = 11-13, n = 1-3 또는 2), 보다 특히 그의 나트륨 염이 바람직하다. 그의 하나의 구체적 실시양태는 2 EO를 갖는 라우릴 에테르 술페이트 나트륨 염이다. 에톡실화 수준은 평균값이고, 특정 화합물의 경우 정수 또는 분수일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 계면활성제는 적어도 1개의 알킬 벤젠 술포네이트를 포함한다. 상기 알킬 벤젠 술포네이트는 대안적으로 상기 알킬 에테르 술페이트에 또는 바람직하게는 그에 더하여 존재할 수 있다.
예시적인 알킬 벤젠 술포네이트는 선형 및 분지형 알킬 벤젠 술포네이트, 바람직하게는 선형 알킬 벤젠 술포네이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 화합물은 하기 화학식 (III)의 화합물이며
Figure pct00003
여기서, R' 및 R"는 독립적으로 H 또는 알킬이고, 조합되어 9 내지 19개, 바람직하게는 9 내지 15개, 보다 바람직하게는 9 내지 13개의 탄소 원자를 포함한다. 도데실 및 트리데실 벤젠 술포네이트, 특히 그의 나트륨 염이 특히 바람직하다.
추가로 또는 대안적으로, 본 발명의 조성물은 1종 이상의 비이온성 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직한 비이온성 계면활성제는 하기 화학식 (IV)의 것이며
R2-O-(AO)m-H (IV)
여기서, R2는 선형 또는 분지형 치환 또는 비치환된 알킬 모이어티를 나타내고, AO는 에틸렌 옥시드 (EO) 또는 프로필렌 옥시드 (PO) 기를 나타내고, m은 1 내지 50의 정수이다.
화학식 (IV)에서, R2는 바람직하게는 선형 또는 분지형, 치환 또는 비치환된 알킬 기, 바람직하게는 선형, 비치환된 알킬 기, 특히 바람직하게는 지방 알콜 기를 나타낸다. 데실, 운데실, 도데실, 트리데실, 테트라데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실, 옥타데실, 노나데실, 에이코실 기 및 그의 조합으로부터 선택된 R2이 바람직한 기이며, 여기서 짝수의 탄소 원자를 갖는 기가 바람직하다. C12-C18 지방 알콜, 예컨대 코코넛 오일 알콜, 탈로우 오일 알콜, 라우릴, 미리스틸, 세틸 또는 스테아릴 알콜, 또는 C10-C20 옥소알콜로부터 유래된 R2 기가 특히 바람직하다.
AO는 에틸렌옥시드 (EO) 또는 프로필렌옥시드 (PO) 기, 바람직하게는 에틸렌옥시드 기를 나타낸다. 지수 m은 1 내지 50, 바람직하게는 1 내지 20, 보다 바람직하게는 1 내지 6의 정수를 나타낸다. 보다 높은 에톡실화 정도는 점도 및 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있기 때문에, 특히 바람직하게는, m은 1, 2, 3, 4 또는 5, 가장 바람직하게는 3-5이다.
다양한 바람직한 실시양태에서, 세제 조성물은 하기 화학식 (V)의 지방 알콜 에테르로부터 선택된 알킬 에테르를 포함하며
Figure pct00004
여기서, k = 11 내지 19, m= 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다. 1-6 EO인 C12-18 지방 알콜 (화학식 (V)에서 k = 11-17, m = 1-5)이 바람직하다. 보다 바람직한 것은 1-5 EO를 갖는 C12-14 알콜이고, 가장 바람직한 것은 3-5 EO를 갖는 C12-14 알킬 에테르, 특히 5 EO의 라우릴 에테르이다.
세제 조성물은 다른 비이온성 계면활성제, 예컨대 화학식 RO(G)x의 알킬 글루코시드를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 R은 8 내지 22개, 바람직하게는 12 내지 18개의 탄소 원자를 함유하는 1급 선형 또는 2-메틸-분지형 지방족 라디칼이고, G는 글루코스 단위를 나타낸다. 모노글루코시드 및 올리고글루코시드의 분포를 나타내는 올리고머화도 x는 1 내지 10의 수, 바람직하게는 1.2 내지 1.4의 수이다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 적어도 2종의 음이온성 계면활성제, 예를 들어 적어도 1종의 알킬 에테르 술페이트, 및 바람직하게는 적어도 1종의 알킬 벤젠 술포네이트, 및 임의로 알킬 에테르를 포함한다.
적합한 양쪽성 계면활성제는 베타인을 포함한다. 바람직한 베타인은 알킬베타인, 알킬아미도베타인, 이미다졸리늄 베타인, 술포베타인 (INCI 술타인) 및 포스포베타인이다. 적합한 베타인 및 술포베타인의 예는 INCI로 지정된 하기 화합물: 아몬드아미도프로필 베타인, 에프리코탐 이도프로필 베타인, 아보카드아미도프로필 베타인, 바바수아미도프로필 베타인, 베헨아미드 이도프로필 베타인, 베헤닐 베타인, 카놀라 이도프로필 베타인, 카프릴산 / 카프람 이도프로필 베타인, 카르니틴, 세틸 베타인, 코카미도에틸 베타인, 코카미도프로필 베타인, 코캄 이도프로필 히드록시술타인, 코코베타인, 코코-히드록시술타인, 코코 / 올레암 이도프로필 베타인, 코코-술타인, 데실 베타인, 디히드록시에틸 올레일 글리시네이트, 디히드록시에틸 대두 글리시네이트, 디히드록시에틸 스테아릴 글리시네이트, 디히드록시에틸 탈로우 글리시네이트, 디메티콘 프로필 PG 베타인, 에루캄 이도프로필 히드록시술타인, 수소화 탈로우 베타인, 이소스테아람 이도프로필 베타인, 라우람 이도프로필 베타인, 라우릴 베타인, 라우릴 히드록시술타인, 라우릴 술타인, 밀크아미도프로필 베타인, 민캄 이도프로필 베타인, 미리스트아민 이도프로필 베타인, 미리스틸 베타인, 올레암 이도프로필 베타인, 올레암 이도프로필 히드록시술타인, 올레일 베타인, 올리브아미도프로필 베타인, 팔맘 이도프로필 베타인, 팜 이탐 이도프로필 베타인, 팔미토일 카르니틴, 팜 커넬아미도프로필 베타인, 폴리테트라플루오로에틸렌 아세톡시프로필 베타인, 리시놀레암 이도프로필 베타인, 세사미도프로필 베타인, 소이아미도프로필 베타인, 스테아람 이도프로필 베타인, 스테아릴 베타인, 탈로우암 이도프로필 베타인, 탈로우아미도프로필 히드록시술타인, 탈로우 베타인, 탈로우 디히드록시에틸 베타인, 운데실렌아미도프로필 베타인 및 밀 점아미도프로필 베타인이다. 바람직한 베타인은 예를 들어 코카미도프로필 베타인 (코코아미도프로필베타인)이다. 베타인은 식기세척 조성물, 가장 바람직하게는 수동 식기세척 세제 조성물에 특히 바람직하다.
추가의 적합한 계면활성제는 아민 옥시드를 포함한다. 본 발명에 따라 적합한 아민 옥시드는 알킬아민 옥시드, 특히 알킬디메틸아민 옥시드, 알킬아미도아민 옥시드 및 알콕시알킬아민 옥시드를 포함한다. 적합한 아민 옥시드의 예는 INCI로 지정된 하기 화합물: 아몬드 아미도프로필아민 옥시드, 바바수 아미도프로필아민 옥시드, 베헨아민 옥시드, 코카미도프로필 아민 옥시드, 코카미도프로필아민 옥시드, 코카민 옥시드, 코코-모르폴린 옥시드, 데실아민 옥시드, 데실테트라데실아민 옥시드, 디아미노피리미딘 옥시드, 디히드록시에틸 C8-10 알콕시프로필아민 옥시드, 디히드록시에틸 C9-11 알콕시프로필아민 옥시드, 디히드록시에틸 C12-15 알콕시프로필아민 옥시드, 디히드록시에틸 코카민 옥시드, 디히드록시에틸 라우라민 옥시드, 디히드록시에틸 스테아르아민 옥시드, 디히드록시에틸 탈로우아민 옥시드, 수소화 팜핵 아민 옥시드, 수소화 탈로우아민 옥시드, 히드록시에틸 히드록시프로필 C12-15 알콕시프로필아민 옥시드, 이소스테아르아미도프로필아민 옥시드, 이소스테아르아미도프로필 모르폴린 옥시드, 라우람 이도프로필아민 옥시드, 라우라민 옥시드, 메틸 모르폴린 옥시드, 밀크아미도프로필 아민 옥시드, 민크아미도프로필아민 옥시드, 미리스타민 이도프로필아민 옥시드, 미리스타민 옥시드, 미리스틸 / 세틸 아민 옥시드, 올레암 이도프로필아민 옥시드, 올레아민 옥시드, 올리브아미도프로필아민 옥시드, 팔미트아미도프로필아민 옥시드, 팔미타민 옥시드, PEG-3 라우라민 옥시드, 칼륨 디히드록시에틸 코카민 옥시드 포스페이트, 칼륨 트리포스포노메틸아민 옥시드, 세사미도프로필아민 옥시드, 소이아미도프로필아민 옥시드, 스테아람 이도프로필아민 옥시드, 스테아르아민 옥시드, 탈로우아미도프로필아민 옥시드, 탈로우아민 옥시드, 운데실렌아미도프로필아민 옥시드 및 밀 점아미도프로필아민 옥시드이다. 바람직한 아민 옥시드는, 예를 들어, 코카미도프로필아민 옥시드 (코코아미도프로필아민 옥시드)이다.
자동 식기세척 용도를 위해, 저-발포 비이온성 계면활성제, 특히 알콕실화, 특히 에톡실화 저-발포 비이온성 계면활성제가 바람직하게 사용된다. 특히 바람직하게는, 자동 식기세척 세제는 알콕실화 알콜의 군으로부터의 비이온성 계면활성제를 함유한다. 실온 초과의 융점을 갖는 비이온성 계면활성제가 특히 바람직하다. 20℃ 초과, 바람직하게는 25℃ 초과, 보다 바람직하게는 25 내지 60℃, 특히 26.6 내지 43.3℃의 융점을 갖는 비이온성 계면활성제가 특히 바람직하다. 바람직하게 사용되는 계면활성제는 알콕실화 비이온성 계면활성제, 특히 에톡실화 1급 알콜 및 이들 계면활성제와 구조적으로 더 복잡한 계면활성제의 혼합물, 예컨대 폴리옥시프로필렌 / 폴리옥시에틸렌 / 폴리옥시프로필렌 ((PO / EO / PO) 계면활성제)의 군으로부터의 것이다. 이러한 (PO / EO / PO) 비이온성 계면활성제는 또한 우수한 발포 제어를 특징으로 한다. 특히 바람직한 비이온성 계면활성제는 교대 에틸렌 옥시드 및 상이한 알킬렌 옥시드 단위를 함유하는 것이다. 이들 중에서도, 다른 기로부터의 1개의 블록 앞에 1 내지 10개의 EO 또는 AO 기가 이어지는, 교대로 EO-AO-EO-AO 블록을 갖는 계면활성제가 바람직하다. 예시적인 비이온성 계면활성제는 1 내지 4개의 에틸렌 옥시드 단위에 이어 1 내지 4개의 프로필렌 옥시드 단위, 이어서 1 내지 4개의 에틸렌 옥시드 단위에 이어 1 내지 4개의 프로필렌 옥시드 단위를 갖는 C9-알킬 기를 갖는 것이다. 특히 말단-캡핑된, 폴리 (옥시알킬화) 비이온성 계면활성제가 바람직하며, 말단-캡은 1 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 지방족 또는 방향족 탄화수소 라디칼 R이다. 알킬 기는 또한 히드록실 기를 포함할 수 있다. 이들 비이온성 계면활성제의 군은, 예를 들어 C4-22 지방 알콜 (EO)10-50-2-히드록시알킬 에테르, 특히 또한 C8-12 지방 알콜 (EO)22-2-히드록시데실 에테르 및 C4-22 지방 알콜 (EO)40-80-2-히드록시알킬 에테르를 포함한다. 본원에 정의된 바와 같은 조성물은, 달리 나타내지 않는 한, 0-65 wt%, 예를 들어 약 1 wt% 내지 약 65 wt%, 약 5 wt% 내지 약 50 wt%, 바람직하게는 약 40 wt% 내지 65 wt%, 예컨대 50 - 65 wt%, 특히 약 20 wt% 내지 약 65 wt%, 특히 10 wt% 내지 50 wt%의 적어도 1종의 빌더를 포함할 수 있다.
일반적으로 및 달리 나타내지 않는 한, 빌더는 바람직하게는 시트레이트, 카르보네이트, 실리케이트, 알루미노실리케이트 (제올라이트) 및 그의 조합으로부터 선택될 수 있다. 적합한 빌더는 또한 포스포네이트, 폴리포스포네이트, 비카르보네이트, 보레이트 및 추가의 폴리카르복실레이트를 포함한다. 시트레이트 빌더, 예를 들어 시트르산 및 그의 가용성 염 (특히 나트륨 염)은 특히 적합한 수용성 유기 빌더이다. 시트레이트는 제올라이트, 실리케이트, 예컨대 브리테실(BRITESIL) 유형, 및/또는 층상 실리케이트 빌더와 조합되어 사용될 수 있다. 빌더 및/또는 공-빌더는 Ca 및 Mg와 수용성 착물을 형성하는 임의의 킬레이트화제일 수 있다. 세정 세제에 사용하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 빌더 및/또는 공-빌더가 사용될 수 있다. 빌더의 비제한적 예는 제올라이트, 특히 제올라이트 A 또는 P 또는 X, 카르보네이트, 예컨대 탄산나트륨, 가용성 실리케이트, 예컨대 메타규산나트륨, 층상 실리케이트 (예를 들어, 훽스트(Hoechst)로부터의 SKS-6), 및 (카르복시메틸)이눌린 (CMI), 및 그의 조합을 포함한다. 빌더의 추가의 비제한적 예는 아미노카르복실레이트, 아미노폴리카르복실레이트, 및 알킬-또는 알케닐숙신산을 포함한다. 추가의 구체적 예는 2,2',2"-니트릴로트리아세트산 (NTA), 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA), 이미노디숙신산 (IDS), 에틸렌디아민-N,N'-디숙신산 (EDDS), 메틸글리신-N,N-디아세트산 (MGDA), 글루탐산-N,N-디아세트산 (GLDA), 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산, N-(2-히드록시에틸)이미노디아세트산 (EDG), 아스파르트산-N-모노아세트산 (ASMA), 아스파르트산-N,N-디아세트산 (ASDA), 아스파르트산-N-모노프로피온산 (ASMP), 이미노디숙신산 (IDA), N-(술포메틸)아스파르트산 (SMAS), N-(2-술포에틸)-아스파르트산 (SEAS), N-(술포메틸글루탐산 (SMGL), N-(2-술포에틸)-글루탐산 (SEGL), N-메틸이미노디아세트산 (MIDA), 세린-N,N-디아세트산 (SEDA), 이소세린-N,N-디아세트산 (ISDA), 페닐알라닌-N,N-디아세트산 (PHDA), 안트라닐산-N,N-디아세트산 (ANDA), 술파닐산-N,N-디아세트산 (SLDA), 타우린-N,N-디아세트산 (TUDA) 및 N'-(2-히드록시에틸)에틸렌디아민-N,N,N'-트리아세트산 (HEDTA), 디에탄올글리신 (DEG), 및 그의 조합 및 염을 포함한다. 본원에서 사용하기에 적합한 포스포네이트는 1-히드록시에탄-1,1-디포스폰산 (HEDP), 에틸렌디아민테트라키스 (메틸렌포스폰산) (EDTMPA), 디에틸렌트리아민펜타키스 (메틸렌포스폰산) (DTMPA 또는 DTPMPA 또는 DTPMP), 니트릴로트리스 (메틸렌포스폰산) (ATMP 또는 NTMP), 2-포스포노부탄-1,2,4-트리카르복실산 (PBTC), 헥사메틸렌디아민테트라키스 (메틸렌포스폰산) (HDTMP)를 포함한다. HEDP 및 DTPMP가 특히 바람직하다.
적합한 실리케이트는 화학식 NaMSixO2+1*yH2O의 결정질 층상 규산나트륨이고, 여기서 M은 나트륨 또는 H이고, x는 1.9 내지 4의 수이고, y는 0 내지 20의 수이고, x는 바람직하게는 2, 3 또는 4이다. 이러한 실리케이트는 예를 들어 EP-A-0 164 514에 개시된다. M이 나트륨이고, 2 또는 3인 실리케이트가 바람직하다. β- 및 δ-나트륨 디실리케이트 Na2Si2O5*yH2O가 특히 바람직하다.
바람직하지는 않지만, 조성물은 또한 포스페이트, 디포스페이트 (피로포스페이트) 및/또는 트리포스페이트, 예컨대 삼인산나트륨 (STP 또는 STPP)을 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 개시된 모든 조성물은 포스페이트-무함유이고, 즉 의도적으로 첨가된 포스페이트를 함유하지 않고, 특히 포스페이트 함량은 조성물의 총 중량에 비해 1 wt% 미만, 보다 바람직하게는 0.5 wt% 미만, 보다 더 바람직하게는 0.1 wt% 미만인 것이 바람직하다. 대안적 실시양태에서, 본 발명은 또한 일반적으로 본 발명의 폴리펩티드를 함유하는, 포스페이트-무함유 세정 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 본 발명은 따라서 본원에 개시된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 중 임의의 1종 이상을 포함하는 포스페이트-무함유 세정 조성물을 특색으로 한다.
달리 나타내지 않는 한, 조성물은 또한 중량 기준으로 0-50%, 예컨대 약 5% 내지 약 30%의 세제 공-빌더를 함유할 수 있다. 조성물은 공-빌더를 단독으로, 또는 빌더, 예를 들어 제올라이트 빌더와 조합하여 포함할 수 있다. 공-빌더의 비제한적 예는 폴리아크릴레이트의 단독중합체 또는 그의 공중합체, 예컨대 폴리 (아크릴산) (PAA) 또는 코폴리 (아크릴산/말레산) (PAA/PMA) 또는 폴리아스파르트산을 포함한다. 추가의 예시적인 빌더 및/또는 공-빌더는 예를 들어 WO 09/102854, US 5977053에 기재되어 있다.
공-빌더로서 바람직한 것은 아크릴레이트-함유 수용성 중합체, 예컨대 폴리아크릴산 또는 폴리메타크릴산의 알칼리 금속 염, 예를 들어 용리액으로서 THF를 사용하여 DIN 55672-1:2007-08에 따라 겔 투과 크로마토그래피 (GPC)에 의해 결정된 바와 같은, 600 내지 750,000 g / mol 범위의 분자량 Mw를 갖는 것이다.
바람직한 중합체는 1,000 내지 15,000 g / mol의 분자량 Mw를 갖는 폴리아크릴레이트이고, 보다 바람직한 것은, 그의 용해도로 인해, 분자량 Mw가 1,000 내지 10,000 g / mol, 가장 바람직하게는 1,000 내지 5,000 g / mol인 단쇄 폴리아크릴레이트이다.
본 발명에 사용하기에 바람직한 아크릴레이트는 아크릴산의 중합체의 알칼리 금속 염, 바람직하게는 나트륨 염, 특히 1,000 내지 10,000 g / mol 또는 1,000 내지 5,000 g / mol 범위의 분자량을 갖는 것이다. 적합한 아크릴레이트는, 예를 들어 다우 케미칼(Dow Chemical)로부터 상표명 아쿠솔(Acusol)® 하에 상업적으로 입수가능하다. 또한 아크릴레이트의 공중합체, 특히 아크릴산 및 메타크릴산, 및 아크릴산 또는 메타크릴산 및 말레산의 공중합체가 적합하다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 술포중합체, 바람직하게는 공단량체로서 에틸렌계 불포화 술포네이트/술폰산을 포함하는 공중합체를 포함한다. 알릴 술폰산의 단량체, 예컨대 알릴옥시벤젠 술폰산 및 메트알릴 술폰산이 특히 적합하다. 특히 바람직한 술폰산 기-함유 단량체는 1-아크릴아미도 프로판 술폰산-1, 2-아크릴아미도-2-프로판술폰산, 2-아크릴아미도-2-메틸-1-프로판술폰산, 2-메타크릴아미도-2-메틸-1-프로판술폰산, 3-메타크릴아미도-2-히드록시-프로판술폰산, 알릴술폰산, 메트알릴술폰산, 알릴옥시벤젠술폰산, 메트알릴옥시벤졸술폰사우레, 2-히드록시-3-(2-프로페닐옥시) 프로판술폰산, 2-메틸-2-프로페닐-술폰산, 스티렌술폰산, 비닐술폰산, 3-술포프로필, 3-술포 - 프로필, 술포메타크릴아미드, 술포메틸메타크릴아미드 및 상기 산 또는 그의 수용성 염의 혼합물이다.
술포중합체는 바람직하게는 상기 기재된 단량체의 불포화 카르복실산과의 공중합체이다. 특히 바람직한 불포화 카르복실산은 아크릴산, 메타크릴산, 에타크릴산, 클로로아크릴산, 알파-시아노아크릴산, 크로톤산, 알파-페닐-아크릴산, 말레산, 말레산 무수물, 푸마르산, 이타콘산, 시트라콘산, 메틸렌말론산, 소르브산, 신남산 또는 그의 혼합물이다. 물론 불포화 디카르복실산도 또한 사용가능하다. 아크릴레이트와의, 특히 아크릴산 및 메타크릴산, 및 아크릴산 또는 메타크릴산 및 말레산과의 공중합체가 바람직하다.
이러한 중합체는, 예를 들어, 다우 케미칼로부터 상표명 아쿠솔® 590 또는 아쿠솔® 588 하에 상업적으로 입수가능하다.
본 발명의 한 측면에서, 본 발명의 세정 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 폴리펩티드 및 상기 정의된 바와 같은 적어도 1종의 술포중합체를 포함한다. 이러한 조성물은 바람직하게는 식기세척 조성물이다.
하나의 바람직한 실시양태에서, 빌더는 비-인 기반 빌더, 예컨대 시트르산 및/또는 메틸글리신-N,N-디아세트산 (MGDA) 및/또는 글루탐산-N,N-디아세트산 (GLDA) 및 / 또는 그의 염이다. 본원에 개시된 조성물은, 달리 나타내지 않는 한, 중량 기준으로 0-30%, 예컨대 중량 기준으로 약 1% 내지 약 20%, 예컨대 약 1% 내지 약 10%, 예컨대 약 1% 내지 약 5%, 예컨대 약 10% 내지 약 30%, 예컨대 약 5% 내지 약 10% 또는 예컨대 약 10% 내지 약 20% (wt%)의 표백 시스템을 함유할 수 있다. 세정 세제에 사용하기 위한 관련 기술분야에 공지된 성분을 포함한 임의의 표백 시스템이 사용될 수 있다. 적합한 표백 시스템 성분은 과산화수소 공급원; 과산 공급원; 및 표백 촉매 또는 부스터를 포함한다.
과산화수소의 적합한 공급원은 알칼리 금속 염, 예컨대 과탄산나트륨 및 과붕산나트륨 (통상적으로 1수화물 또는 4수화물) 및 과산화수소-우레아 (1/1)를 비롯한 무기 과염이다.
과산은 (a) 사전형성된 과산으로서 직접 혼입되거나 또는 (b) 세척액 내에서 과산화수소 및 표백 활성화제로부터 계내 형성되거나 (과가수분해) 또는 (c) 세척액 내에서 과산화수소 및 퍼히드롤라제 및 후자를 위한 적합한 기질, 예를 들어 에스테르로부터 계내 형성될 수 있다.
a) 적합한 사전형성된 과산은 퍼옥시카르복실산, 예컨대 퍼옥시벤조산 및 그의 고리-치환 유도체, 퍼옥시-α-나프토산, 퍼옥시프탈산, 퍼옥시라우르산, 퍼옥시스테아르산, ε-프탈이미도퍼옥시카프로산 [프탈이미도퍼옥시헥산산 (PAP)], 및 o-카르복시벤즈아미도퍼옥시카프로산; 지방족 및 방향족 디퍼옥시디카르복실산, 예컨대 디퍼옥시도데칸디오산, 디퍼옥시아젤라산, 디퍼옥시세바스산, 디퍼옥시브라실산, 2-데실디퍼옥시부탄디오산산, 및 디퍼옥시프탈산, -이소프탈산 및 -테레프탈산; 퍼이미드산; 퍼옥시일황산; 퍼옥시이황산; 퍼옥시인산; 퍼옥시규산; 및 상기 화합물의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 언급된 과산은 일부 경우에 적합한 염, 예컨대 알칼리 금속 염 (예를 들어, 옥손(Oxone) ®) 또는 알칼리 토금속 염으로서 최상으로 첨가될 수 있는 것으로 이해된다.
b) 적합한 표백 활성화제는 에스테르, 아미드, 이미드, 니트릴 또는 무수물의 부류에 속하는 것, 및 적용가능한 경우에, 그의 염을 포함한다. 적합한 예는 테트라아세틸에틸렌디아민 (TAED), 나트륨 4-[(3,5,5-트리메틸헥사노일) 옥시] 벤젠-1-술포네이트 (ISONOBS), 나트륨 4-(도데카노일옥시) 벤젠-1-술포네이트 (LOBS), 나트륨 4-(데카노일옥시) 벤젠-1-술포네이트, 4-(데카노일옥시) 벤조산 (DOBA), 나트륨 4-(노나노일옥시) 벤젠-1-술포네이트 (NOBS), 및/또는 WO98/17767에 개시된 것이다. 관심 표백 활성화제의 패밀리가 EP624154에 개시되어 있고, 그러한 패밀리에서 특히 바람직한 것은 아세틸 트리에틸 시트레이트 (ATC)이다. ATC 또는 단쇄 트리글리세리드, 예컨대 트리아세틴은 환경 친화적이라는 이점을 갖는다. 또한, 아세틸 트리에틸 시트레이트 및 트리아세틴은 저장 시 생성물에서 우수한 가수분해 안정성을 가지며, 효율적인 표백 활성화제이다. 마지막으로, ATC는 과가수분해 반응에서 방출된 시트레이트가 빌더로서 기능할 수 있기 때문에 다기능성이다.
표백 시스템은 또한, 표백 촉매 또는 부스터를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 표백 촉매의 일부 비제한적 예는 망가니즈 옥살레이트, 아세트산망가니즈, 망가니즈-콜라겐, 코발트-아민 촉매 및 망가니즈 트리아자시클로노난 (MnTACN) 촉매를 포함하고; 특히 바람직한 것은 망가니즈와 1,4,7-트리메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Me3-TACN) 또는 1,2,4,7-테트라메틸-1,4,7-트리아자시클로노난 (Me4-TACN), 특히 Me3-TACN과의 복합체, 예컨대 이핵 망가니즈 복합체 [(Me3-TACN)Mn(O)3Mn(Me3-TACN)](PF6)2, 및 [2,2',2"-니트릴로트리스 (에탄-1,2-디일아자닐릴리덴-κN-메타닐릴리덴)트리페놀레이토-κ3O]망가니즈(III)이다. 표백 촉매는 또한 다른 금속 화합물, 예컨대 철 또는 코발트 착물일 수 있다.
일부 실시양태에서, 과산의 공급원이 포함되는 경우에, 하기 화학식 중 하나:
Figure pct00005
(iii) 및 그의 혼합물을 갖는 유기 표백 촉매 또는 표백 부스터가 사용될 수 있고; 여기서 각각의 R1은 독립적으로 9 내지 24개의 탄소를 함유하는 분지형 알킬 기 또는 11 내지 24개의 탄소를 함유하는 선형 알킬 기이고, 바람직하게는 각각의 R1은 독립적으로 9 내지 18개의 탄소를 함유하는 분지형 알킬 기 또는 11 내지 18개의 탄소를 함유하는 선형 알킬 기이고, 보다 바람직하게는 각각의 R1은 독립적으로 2-프로필헵틸, 2-부틸옥틸, 2-펜틸노닐, 2-헥실데실, 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 이소노닐, 이소데실, 이소트리데실 및 이소펜타데실로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 예시적인 표백 시스템은 예를 들어 WO2007/087258, WO2007/087244, WO2007/087259, EP1867708 (비타민 K) 및 WO2007/087242에 기재되어 있다. 적합한 광표백제는 예를 들어 술폰화 아연 또는 알루미늄 프탈로시아닌일 수 있다.
한 측면은 물품, 예컨대 텍스타일의 심층-세정을 위한 상기 기재된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.
헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 경질 표면, 텍스타일 및/또는 직물과 같은 물품의 심층 세정을 위해 기재된 조성물에서 사용될 수 있다. 본 발명의 일부 측면에서, 폴리펩티드 예를 들어 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11을 갖는 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예컨대 적어도 70%, 예컨대 적어도 80% 또는 예컨대 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖고, 일부 측면에서 헥소사미니다제 활성은 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성이고, 본 발명의 폴리펩티드는 β-N-아세틸글루코사미니다제이다.
본 발명의 한 측면은 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 세정 공정, 예컨대 세탁 및/또는 식기 세척에서의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성, 바람직하게는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖는다.
본 발명의 한 측면은 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 세정 공정, 예컨대 세탁 및/또는 식기 세척에서의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성, 바람직하게는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖고, 여기서 폴리펩티드는 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함한다.
본 발명의 한 측면은 물품의 심층 세정을 위한, 예를 들어 모티프 GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 또는 둘 다를 포함하는, 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 예를 들어 80%, 85%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 여기서 물품은 텍스타일이다. 본 발명의 한 측면에서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드는 물품의 점착성을 방지, 감소 또는 제거하는데 사용된다. 본 발명의 한 측면에서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드는 텍스타일과 같은 텍스타일 상의 얼룩을 전처리하기 위해 추가로 사용될 수 있다.
본 발명의 한 측면은 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지, 감소 또는 제거하기 위한, 헥소사미니다제 활성을 갖는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.
추가로, 본 발명의 한 측면은 물품에의 오염의 부착을 예방, 감소 또는 제거하기 위한, 헥소사미니다제 활성을 갖는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 물품은 텍스타일이다. 오염이 물품에 부착되지 않으면, 물품은 보다 깨끗해 보인다. 따라서, 본 발명은 추가로 물품의 백색도를 유지 또는 개선시키기 위한, 헥소사미니다제 활성을 갖는 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.
T-셔츠 또는 스포츠웨어와 같은 물품이 사용되는 경우, 이들은 사용자의 신체 및 이들이 사용되는 나머지 환경으로부터의 박테리아에 노출된다. 이는 물품이 세척된 후에도 물품 상에서 악취를 유발할 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 텍스타일 상의 악취의 제거 또는 감소에 관한 것이다. 악취는 불쾌한 냄새를 갖는 화합물을 생산하는 박테리아에 의해 유발될 수 있다. 이러한 불쾌한 냄새 화합물의 한 예는 E-2-노넨알이다. 악취는 여전히 습윤상태인 새로 세척한 텍스타일 상에 존재할 수 있다. 또는 악취는 후속해서 건조된, 새로 세척된 텍스타일 상에 존재할 수 있다. 악취는 또한 세척 후 얼마 동안 저장된, 텍스타일 상에 존재할 수 있다. 본 발명은 습윤 또는 건조 텍스타일로부터의 악취, 예컨대 E-2-노넨알의 감소 또는 제거에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은
(i) 물품의 점착성을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(ii) 물품 상의 얼룩을 전처리하기 위한;
(iii) 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(iv) 물품에의 오염의 부착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한;
(v) 물품의 백색도를 유지하거나, 개선시키기 위한;
(vi) 물품으로부터 악취를 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위한,
예를 들어 1개 이상의 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24)를 포함하는, 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성, 바람직하게는 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖고, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이며, 여기서 물품은 텍스타일이다.
본 발명에 따른 세정, 예를 들어 세제 조성물은 1종 이상의 추가의 성분, 예컨대 적어도 1종의 보조 성분, 예를 들어 세제 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 세제 보조 성분은 계면활성제 및 빌더 및/또는 킬레이트화제, 예컨대 상기 기재된 것을 포함할 수 있다. 보조 성분은 또한 하기 응집 보조제, 이염 억제제, 효소, 효소 안정화제, 효소 억제제, 촉매 물질, 표백 활성화제, 과산화수소, 과산화수소 공급원, 사전형성된 과산, 중합체 분산제, 점토 오염 제거/재침착방지제, 증백제, 거품 억제제, 염료, 퍼퓸, 구조 탄성화제, 직물 유연제, 캐리어, 굴수성제, 빌더 및 공-빌더, 직물 색조제, 소포제, 분산제, 가공 보조제, 고미제 및/또는 안료 중 임의의 것일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드, 및 고미제 및 유기 용매, 예컨대 글리세롤 및 1,2-프로판 디올로부터 선택된 보조 성분 중 임의의 1종 이상을 포함하는 세정 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 세제 보조 성분은 빌더 또는 점토 오염 제거/재침착방지제이다.
한 실시양태에서, 세제 보조 성분은 효소이다. 1종 이상의 효소는 프로테아제, 리파제, 큐티나제, 아밀라제, 카르보히드라제, 셀룰라제, 펙티나제, 만난아제, 아라비나제, 갈락타나제, 크실라나제 및 옥시다제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11의 폴리펩티드를 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드, 또는 헥소사미니다제 활성을 갖고 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더하여, 본 발명의 세정 조성물은 셀룰라제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 셀룰라제는 박테리아 또는 진균 기원의 것을 포함한다. 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 돌연변이체가 포함된다. 적합한 셀룰라제는 속 바실루스, 슈도모나스, 휴미콜라(Humicola), 푸사리움(Fusarium), 티엘라비아(Thielavia), 아크레모니움(Acremonium)으로부터의 셀룰라제, 예를 들어 US 4,435,307, US 5,648,263, US 5,691,178, US 5,776,757 및 WO 89/09259에 개시된 휴미콜라 인솔렌스(Humicola insolens), 미셀리오프토라 써모필라(Myceliophthora thermophila) 및 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum)으로부터 생산된 진균 셀룰라제를 포함한다. 특히 적합한 셀룰라제는 색상 관리 이익을 갖는 알칼리성 또는 중성 셀룰라제이다. 이러한 셀룰라제의 예는 EP 0 495 257, EP 0 531 372, WO 96/11262, WO 96/29397, WO 98/08940에 기재된 셀룰라제이다. 다른 예는 WO 94/07998, EP 0 531 315, US 5,457,046, US 5,686,593, US 5,763,254, WO 95/24471, WO 98/12307 및 PCT/DK98/00299에 기재된 것과 같은 셀룰라제 폴리펩티드이다. 엔도-베타-1,4-글루카나제 활성 (EC 3.2.1.4)을 나타내는 셀룰라제의 예는 WO02/099091에 기재된 것이다. 셀룰라제의 다른 예는 WO96/29397에 기재된 패밀리 45 셀룰라제, 및 특히 WO 02/099091의 서열식별번호: 8의 하기 위치: 2, 4, 7, 8, 10, 13, 15, 19, 20, 21, 25, 26, 29, 32, 33, 34, 35, 37, 40, 42, 42a, 43, 44, 48, 53, 54, 55, 58, 59, 63, 64, 65, 66, 67, 70, 72, 76, 79, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 91, 93, 95, 95d, 95h, 95j, 97, 100, 101, 102, 103, 113, 114, 117, 119, 121, 133, 136, 137, 138, 139, 140a, 141, 143a, 145, 146, 147, 150e, 150j, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160c, 160e, 160k, 161, 162, 164, 165, 168, 170, 171, 172, 173, 175, 176, 178, 181, 183, 184, 185, 186, 188, 191, 192, 195, 196, 200, 및/또는 20에 상응하는 위치 중 1개 이상에서, 바람직하게는 P19A, G20K, Q44K, N48E, Q119H 또는 Q146R 중에서 선택된 치환, 삽입 및/또는 결실을 갖는 그의 폴리펩티드를 포함한다. 상업적으로 입수가능한 셀룰라제는 셀루자임(Celluzyme)™, 셀루클린(Celluclean) 및 케어자임(Carezyme)™ (노보자임스 에이/에스(Novozymes A/S)), 클라지나제(Clazinase)™, 및 퓨라덱스 HA(Puradax HA)™ (제넨코어 인터내셔널 인크.(Genencor International Inc.)), 및 KAC-500(B)™ (카오 코포레이션(Kao Corporation))을 포함한다.
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11의 폴리펩티드를 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드, 또는 헥소사미니다제 활성을 갖고 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더하여, 본 발명의 세정 조성물은 프로테아제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 프로테아제는 박테리아, 진균, 식물, 바이러스 또는 동물 기원, 예를 들어 식물성 또는 미생물 기원의 것을 포함한다. 미생물 기원이 바람직하다. 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 돌연변이체가 포함된다. 이는 알칼리성 프로테아제, 예컨대 세린 프로테아제 또는 메탈로프로테아제일 수 있다. 세린 프로테아제는, 예를 들어 S1 패밀리의 것, 예컨대 트립신, 또는 S8 패밀리의 것, 예컨대 서브틸리신일 수 있다. 메탈로프로테아제 프로테아제는, 예를 들어, 예를 들어 패밀리 M4로부터의 써모리신, 또는 다른 메탈로프로테아제, 예컨대 M5, M7 또는 M8 패밀리로부터의 것일 수 있다. 용어 "서브틸라제"는 문헌 [Siezen et al., Protein Engng. 4 (1991) 719-737 및 Siezen et al. Protein Science 6 (1997) 501-523]에 따른 세린 프로테아제의 하위군을 지칭한다. 세린 프로테아제는 기질과 공유 부가물을 형성하는, 활성 부위에 세린을 갖는 것을 특징으로 하는 프로테아제의 하위군이다. 서브틸라제는 6가지 하위-부문, 즉 서브틸리신 패밀리, 써미타제 패밀리, 프로테이나제 K 패밀리, 란티바이오틱 펩티다제 패밀리, 켁신 패밀리 및 피롤리신 패밀리로 나뉠 수 있다. 서브틸라제의 예는 US7262042 및 WO09/021867에 기재된 바실루스 예컨대 바실루스 렌투스(Bacillus lentus), 비. 알칼로필루스(B. alkalophilus), 비. 서브틸리스, 비. 아밀로리퀘파시엔스(B. amyloliquefaciens), 바실루스 푸밀루스(Bacillus pumilus) 및 바실루스 기브소니이(Bacillus gibsonii)로부터 유래된 것; 및 WO89/06279에 기재된 서브틸리신 렌투스(subtilisin lentus), 서브틸리신 노보(subtilisin Novo), 서브틸리신 칼스버그(subtilisin Carlsberg), 바실루스 리케니포르미스(Bacillus licheniformis), 서브틸리신 BPN', 서브틸리신 309, 서브틸리신 147 및 서브틸리신 168로부터 유래된 것, 및 (WO93/18140)에 기재된 프로테아제 PD138이다. 다른 유용한 프로테아제는 WO92/175177, WO01/016285, WO02/026024 및 WO02/016547에 기재된 것일 수 있다. 트립신-유사 프로테아제의 예는 트립신 (예를 들어 돼지 또는 소 기원의 것) 및 WO89/06270, WO94/25583 및 WO05/040372에 기재된 푸사리움 프로테아제, 및 WO05/052161 및 WO05/052146에 기재된 셀루모나스(Cellumonas)로부터 유래된 키모트립신 프로테아제이다. 추가의 바람직한 프로테아제는 예를 들어 WO95/23221에 기재된 바와 같은 바실루스 렌투스 DSM 5483으로부터의 알칼리성 프로테아제, 및 WO92/21760, WO95/23221, EP1921147 및 EP1921148에 기재된 그의 변이체이다. 메탈로프로테아제의 예는 WO07/044993 (제넨코어 인트.)에 기재된 바와 같이 중성 메탈로프로테아제, 예컨대 바실루스 아밀로리퀘파시엔스로부터 유래된 것이다.
유용한 프로테아제의 예는 WO92/19729, WO96/034946, WO98/20115, WO98/20116, WO99/011768, WO01/44452, WO03/006602, WO04/03186, WO04/041979, WO07/006305, WO11/036263, WO11/036264에 기재된 변이체, 특히 WO2016/001449의 서열식별번호: 1과 비교하여 하기 위치: 3, 4, 9, 15, 24, 27, 42, 55, 59, 60, 66, 74, 85, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 104, 116, 118, 121, 126, 127, 128, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 189, 193, 198, 199, 200, 203, 206, 211, 212, 216, 218, 226, 229, 230, 239, 246, 255, 256, 268 및 269 중 1개 이상에서 치환을 갖는 변이체이며, 여기서 위치는 WO2016/001449의 서열식별번호: 1에 제시된 바실루스 렌투스 프로테아제의 위치에 상응한다. 보다 바람직한 서브틸라제 변이체는 돌연변이: S3T, V4I, S9R, S9E, A15T, S24G, S24R, K27R, N42R, S55P, G59E, G59D, N60D, N60E, V66A, N74D, N85S, N85R, G96S, G96A, S97G, S97D, S97A, S97SD, S99E, S99D, S99G, S99M, S99N, S99R, S99H, S101A, V102I, V102Y, V102N, S104A, G116V, G116R, H118D, H118N, N120S, S126L, P127Q, S128A, S154D, A156E, G157D, G157P, S158E, Y161A, R164S, Q176E, N179E, S182E, Q185N, A188P, G189E, V193M, N198D, V199I, Y203W, S206G, L211Q, L211D, N212D, N212S, M216S, A226V, K229L, Q230H, Q239R, N246K, N255W, N255D, N255E, L256E, L256D T268A 또는 R269H 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 프로테아제 변이체는 바람직하게는 WO2016/001449의 서열식별번호: 1에 제시된 바실루스 렌투스 프로테아제의 변이체 (사비나제(Savinase)®) 또는 WO2016/001449의 서열식별번호: 2에 제시된 바실루스 아밀로리케니파시엔스 프로테아제 (BPN')이다. 프로테아제 변이체는 바람직하게는 WO2016/001449의 서열식별번호: 1 또는 서열식별번호: 2에 대해 적어도 80 % 서열 동일성을 갖는다.
프로테아제 변이체는 WO2004/067737의 서열식별번호: 1의 위치 171, 173, 175, 179, 또는 180에 상응하는 1개 이상의 위치에서 치환을 포함하며, 여기서 상기 프로테아제 변이체는 WO2004/067737의 서열식별번호: 1에 대해 적어도 75%이지만 100% 미만인 서열 동일성을 갖는다.
적합한 상업적으로 입수가능한 프로테아제 효소는 상표명 알칼라제(Alcalase)®, 듀랄라제(Duralase)™, 듀라자임(Durazym)™, 렐라제(Relase)®, 렐라제® 울트라, 사비나제(Savinase)®, 사비나제® 울트라, 프리마제(Primase)®, 폴랄자임(Polarzyme)®, 칸나제(Kannase)®, 리쿠아나제(Liquanase)®, 리쿠아나제® 울트라, 오보자임(Ovozyme)®, 코로나제(Coronase)®, 코로나제® 울트라, 블라제(Blaze)®, 블라제 에비티(Blaze Evity)® 100T, 블라제 에비티® 125T, 블라제 에비티® 150T, 뉴트라제(Neutrase)®, 에벌라제(Everlase)® 및 에스페라제(Esperase)® (노보자임스 에이/에스) 하에 판매되는 것, 상표명 맥사타제(Maxatase)®, 맥사칼(Maxacal)®, 맥사펨(Maxapem)®, 퓨라펙트 Ox(Purafect Ox)®, 퓨라펙트 OxP®, 퓨라맥스(Puramax)®, FN2®, FN3®, FN4®, 엑셀라제(Excellase)®, 엑셀렌즈 P1000(Excellenz P1000)™, 엑셀렌즈 P1250™, 이레이저(Eraser)®, 프레페렌즈 P100(Preferenz P100)™, 퓨라펙트 프라임(Purafect Prime)®, 프레페렌즈 P110™, 에펙텐즈 P1000(Effectenz P1000)™, 퓨라펙트®™, 에펙텐즈 P1050™, 퓨라펙트 Ox®™, 에펙텐즈 P2000™, 퓨라패스트(Purafast)®, 프로페라제(Properase)®, 옵티클린(Opticlean)® 및 옵티마제(Optimase)® (다니스코(Danisco)/듀폰(DuPont)), 악사펨(Axapem)™ (기스트-브로카세스 엔.브이.(Gist-Brocases N.V.)), BLAP (US5352604의 도 29에 제시된 서열) 및 그의 변이체 (헨켈 아게(Henkel AG)) 및 카오(Kao)로부터의 KAP (바실루스 알칼로필루스 서브틸리신) 하에 판매되는 것을 포함한다.
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11의 폴리펩티드를 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 헥소사미니다제 활성을 갖고 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더하여, 본 발명의 세정 조성물은 박테리아 또는 진균 기원의 것을 포함하는 리파제 및 큐티나제를 추가로 포함할 수 있다. 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 돌연변이체 효소가 포함된다. 예는 써모미세스로부터의, 예를 들어 EP258068 및 EP305216에 기재된 바와 같은 티. 라누기노수스(T. lanuginosus) (이전에 휴미콜라 라누기노사로 명명됨)로부터의 리파제, 휴미콜라, 예를 들어 에이치. 인솔렌스로부터의 큐티나제 (WO96/13580), 슈도모나스 (이들 중 일부는 현재 부르크홀데리아(Burkholderia)로 개명됨), 예를 들어 피. 알칼리게네스(P. alcaligenes) 또는 피. 슈도알칼리게네스(P. pseudoalcaligenes) (EP218272), 피. 세파시아(P. cepacia) (EP331376), 피. 종 균주 SD705 (WO95/06720 & WO96/27002), 피. 위스콘시넨시스(P. wisconsinensis) (WO96/12012) 균주로부터의 리파제, GDSL-유형 스트렙토미세스 리파제 (WO10/065455), 마그나포르테 그리세아(Magnaporthe grisea)로부터의 큐티나제 (WO10/107560), 슈도모나스 멘도시나(Pseudomonas mendocina)로부터의 큐티나제 (US5,389,536), 써모비피다 푸스카(Thermobifida fusca)로부터의 리파제 (WO11/084412), 게오바실루스 스테아로써모필루스(Geobacillus stearothermophilus) 리파제 (WO11/084417), 바실루스 서브틸리스로부터의 리파제 (WO11/084599), 및 스트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus) (WO11/150157) 및 에스. 프리스티나에스피랄리스(S. pristinaespiralis) (WO12/137147)로부터의 리파제를 포함한다. 다른 예는 EP407225, WO92/05249, WO94/01541, WO94/25578, WO95/14783, WO95/30744, WO95/35381, WO95/22615, WO96/00292, WO97/04079, WO97/07202, WO00/34450, WO00/60063, WO01/92502, WO07/87508 및 WO09/109500에 기재된 것과 같은 리파제 폴리펩티드이다. 바람직한 상업적 리파제 생성물은 리폴라제(Lipolase)™, 리펙스(Lipex)™; 리폴렉스(Lipolex)™ 및 리포클린(Lipoclean)™ (노보자임스 에이/에스), 루마패스트 (원래 제넨코어로부터의 것) 및 리포맥스 (원래 기스트-브로카데스로부터의 것)를 포함한다. 다른 예는 때때로 아실트랜스퍼라제 또는 퍼히드롤라제로 지칭되는 리파제, 예를 들어 칸디다 안타르크티카(Candida antarctica) 리파제 A와 상동성을 갖는 아실트랜스퍼라제 (WO10/111143), 미코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis)로부터의 아실트랜스퍼라제 (WO05/56782), CE 7 패밀리로부터의 퍼히드롤라제 (WO09/67279), 및 엠. 스메그마티스 퍼히드롤라제의 폴리펩티드, 특히 헌츠만 텍스타일 이펙츠 Pte 리미티드(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)로부터의 상업용 제품 젠틀 파워(Gentle Power) 표백제에 사용되는 S54V 변이체 (WO10/100028)이다.
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11을 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 헥소사미니다제 활성을 갖고 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더하여, 본 발명의 세정 조성물은 본 발명의 폴리펩티드와 함께 사용될 수 있는 아밀라제를 추가로 포함할 수 있다. 아밀라제는 알파-아밀라제 또는 글루코아밀라제일 수 있고, 박테리아 또는 진균 기원의 것일 수 있다. 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 돌연변이체가 포함된다. 아밀라제는, 예를 들어, GB 1,296,839에 보다 상세히 기재된, 바실루스, 예를 들어, 바실루스 리케니포르미스의 특수 균주로부터 수득된 알파-아밀라제를 포함한다. 적합한 아밀라제는 WO 95/10603의 서열식별번호: 3을 갖는 아밀라제 또는 그의 서열식별번호: 3에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 바람직한 폴리펩티드는 WO 94/02597, WO 94/18314, WO 97/43424 및 WO 99/019467의 서열식별번호: 4에 기재되어 있고, 예컨대 하기 위치: 15, 23, 105, 106, 124, 128, 133, 154, 156, 178, 179, 181, 188, 190, 197, 201, 202, 207, 208, 209, 211, 243, 264, 304, 305, 391, 408, 및 444 중 1개 이상에서 치환을 갖는 폴리펩티드이다. 상이한 적합한 아밀라제는 WO 02/010355의 서열식별번호: 6을 갖는 아밀라제 또는 서열식별번호: 6에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 그의 폴리펩티드를 포함한다. 서열식별번호: 6의 바람직한 폴리펩티드는 위치 181 및 182에서 결실 및 위치 193에서 치환을 갖는 것이다. 적합한 다른 아밀라제는 WO 2006/066594의 서열식별번호: 6에 제시된 비. 아밀로리퀘파시엔스로부터 유래된 알파-아밀라제의 잔기 1-33 및 WO 2006/066594의 서열식별번호: 4에 제시된 비. 리케니포르미스 알파-아밀라제의 잔기 36-483을 포함하는 하이브리드 알파-아밀라제 또는 그에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이다. 이러한 하이브리드 알파-아밀라제의 바람직한 폴리펩티드는 하기 위치: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, I201, A209 및 Q264 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. WO 2006/066594의 서열식별번호: 6에 제시된 비. 아밀로리퀘파시엔스로부터 유래된 알파-아밀라제의 잔기 1-33 및 서열식별번호: 4의 잔기 36-483을 포함하는 하이브리드 알파-아밀라제의 가장 바람직한 폴리펩티드는 하기 치환을 갖는 것이다:
M197T;
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S; 또는
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S.
적합한 추가의 아밀라제는 WO 99/019467의 서열식별번호: 6을 갖는 아밀라제 또는 서열식별번호: 6에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 그의 폴리펩티드이다. 서열식별번호: 6의 바람직한 폴리펩티드는 하기 위치: R181, G182, H183, G184, N195, I206, E212, E216 및 K269 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 특히 바람직한 아밀라제는 위치 R181 및 G182, 또는 위치 H183 및 G184에서 결실을 갖는 것이다. 사용될 수 있는 추가의 아밀라제는 WO 96/023873의 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 7을 갖는 것 또는 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 7에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 그의 폴리펩티드이다. 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 3 또는 서열식별번호: 7의 바람직한 폴리펩티드는 하기 위치: 140, 181, 182, 183, 184, 195, 206, 212, 243, 260, 269, 304 및 476 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 보다 바람직한 폴리펩티드는 위치 181 및 182 또는 위치 183 및 184에서 결실을 갖는 것이다. 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 7의 가장 바람직한 아밀라제 폴리펩티드는 위치 183 및 184에서 결실 및 위치 140, 195, 206, 243, 260, 304 및 476 중 1개 이상에서 치환을 갖는 것이다. 사용될 수 있는 다른 아밀라제는 WO 08/153815의 서열식별번호: 2, WO 01/66712의 서열식별번호: 10을 갖는 아밀라제 또는 WO 08/153815의 서열식별번호: 2에 대해 90% 서열 동일성 또는 WO 01/66712의 서열식별번호: 10에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 그의 폴리펩티드이다. WO 01/66712의 서열식별번호: 10의 바람직한 폴리펩티드는 하기 위치: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 및 264 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다.
추가의 적합한 아밀라제는 WO 09/061380의 서열식별번호: 2를 갖는 아밀라제 또는 서열식별번호: 2에 대해 90% 서열 동일성을 갖는 그의 폴리펩티드이다. 서열식별번호: 2의 바람직한 폴리펩티드는 C-말단의 말단절단 및/또는 하기 위치: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 및 G475 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 서열식별번호: 2의 보다 바람직한 폴리펩티드는 하기 위치: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E,R, N272E,R, S243Q,A,E,D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E 및 G475K 중 1개 이상에서 치환 및/또는 위치 R180 및/또는 S181 또는 T182 및/또는 G183에서 결실을 갖는 것이다. 서열식별번호: 2의 가장 바람직한 아밀라제 폴리펩티드는 하기 치환을 갖는 것이고:
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; 또는
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K, 여기서 폴리펩티드는 C-말단 절단되고, 임의로 추가로, 위치 243에서 치환 및/또는 위치 180 및/또는 위치 181에서 결실을 포함한다.
다른 적합한 아밀라제는 WO01/66712의 서열식별번호: 12를 갖는 알파-아밀라제 또는 서열식별번호: 12에 대해 적어도 90% 서열 동일성을 갖는 변이체이다. 바람직한 아밀라제 폴리펩티드는 WO01/66712의 서열식별번호: 12의 하기 위치: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484 중 1개 이상에서 치환, 결실 또는 삽입을 갖는 것이다. 특히 바람직한 아밀라제는 D183 및 G184의 결실을 갖고, 치환 R118K, N195F, R320K 및 R458K를 갖는 폴리펩티드, 및 군: M9, G149, G182, G186, M202, T257, Y295, N299, M323, E345 및 A339로부터 선택된 1개 이상의 위치에서 추가적으로 치환을 갖는 변이체를 포함하고, 가장 바람직한 것은 모든 이들 위치에서 추가적으로 치환을 갖는 변이체이다.
다른 예는 WO2011/098531, WO2013/001078 및 WO2013/001087에 기재된 것과 같은 아밀라제 폴리펩티드이다.
상업적으로 입수가능한 아밀라제는 듀라밀(Duramyl)™, 테르마밀(Termamyl)™, 푼가밀(Fungamyl)™, 스테인자임(Stainzyme)™, 스테인자임 플러스™, 나탈라제(Natalase)™, 리쿠오자임 X(Liquozyme X)™ 및 BAN™ (노보자임스 에이/에스), 및 라피다제(Rapidase)™, 퓨라스타(Purastar)™/에펙텐즈(Effectenz)™, 파워라제(Powerase) 및 프레페렌즈 S100 (제넨코르 인터내셔널 인크./듀폰(DuPont))이다.
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9의 폴리펩티드를 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드, 또는 헥소사미니다제 활성을 갖고 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드에 더하여, 본 발명의 세정 조성물은 식물, 박테리아 또는 진균 기원의 것을 비롯한 퍼옥시다제/옥시다제를 추가로 포함할 수 있다. 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 돌연변이체가 포함된다. 유용한 퍼옥시다제의 예는 코프리누스(Coprinus), 예를 들어 씨. 시네레우스(C. cinereus)로부터의 퍼옥시다제, 및 WO 93/24618, WO 95/10602, 및 WO 98/15257에 기재된 것과 같은 그의 폴리펩티드를 포함한다. 상업적으로 입수가능한 퍼옥시다제는 가드자임(Guardzyme) (노보자임스 에이/에스)을 포함한다.
세정 조성물 효소(들)는, 예를 들어 1종 이상의 효소를 함유하는 개별 첨가제를 첨가하거나, 또는 이들 효소를 포함하는 조합 첨가제를 첨가함으로써 세제 조성물에 포함될 수 있다. 본 발명의 세제 첨가제, 즉 개별 첨가제 또는 조합 첨가제는, 예를 들어, 과립, 액체, 슬러리 등으로서 제제화될 수 있다. 바람직한 세제 첨가제 제제는 과립, 특히 비-산포 과립, 액체, 특히 안정화된 액체, 또는 슬러리이다.
비-산포 과립은, 예를 들어 US 4,106,991 및 4,661,452에 개시된 바와 같이 생성될 수 있고, 임의로 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 코팅될 수 있다. 왁스 코팅 물질의 예는 1000 내지 20000의 평균 몰 중량을 갖는 폴리(에틸렌 옥시드) 생성물 (폴리에틸렌글리콜, PEG); 16 내지 50개의 에틸렌 옥시드 단위를 갖는 에톡실화 노닐페놀; 알콜이 12 내지 20개의 탄소 원자를 함유하고 15 내지 80개의 에틸렌 옥시드 단위가 있는 에톡실화 지방 알콜; 지방 알콜; 지방산; 및 지방산의 모노- 및 디- 및 트리글리세리드이다. 유동층 기술에 의해 적용하기에 적합한 필름-형성 코팅 물질의 예가 GB 1483591에 제공된다. 액체 효소 제제는, 예를 들어, 확립된 방법에 따라 폴리올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 당 또는 당 알콜, 락트산 또는 붕산을 첨가함으로써 안정화될 수 있다. 보호된 효소는 EP 238,216에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 세정/세제 조성물은, 달리 나타내지 않는 한, 또한 중합체를 중량 기준으로 0-10%, 예컨대 0.5-5%, 2-5%, 0.5-2% 또는 0.2-1% 함유할 수 있다. 세제에 사용하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 중합체가 사용될 수 있다. 중합체는 상기 언급된 바와 같은 공-빌더로서 기능할 수 있거나, 또는 재부착방지, 섬유 보호, 방오, 이염 억제, 그리스 세정 및/또는 소포 특성을 제공할 수 있다. 일부 중합체는 상기 언급된 특성 중 1종 초과 및/또는 하기 언급된 모티프 중 1종 초과를 가질 수 있다. 예시적인 중합체는 (카르복시메틸)셀룰로스 (CMC), 폴리(비닐 알콜) (PVA), 폴리(비닐피롤리돈) (PVP), 폴리(에틸렌글리콜) 또는 폴리(에틸렌 옥시드) (PEG), 에톡실화 폴리(에틸렌이민), 카르복시메틸 이눌린 (CMI), 및 폴리카르복실레이트 예컨대 PAA, PAA/PMA, 폴리아스파르트산, 및 라우릴 메타크릴레이트/아크릴산 공중합체, 소수성 변형된 CMC (HM-CMC) 및 실리콘, 테레프탈산 및 올리고머 글리콜의 공중합체, 폴리(에틸렌 테레프탈레이트) 및 폴리(옥시에텐 테레프탈레이트)의 공중합체 (PET-POET), PVP, 폴리(비닐이미다졸) (PVI), 폴리(비닐피리딘-N-옥시드) (PVPO 또는 PVPNO) 및 폴리비닐피롤리돈-비닐이미다졸 (PVPVI)을 포함한다. 추가적 예시적인 중합체는 황산화 폴리카르복실레이트, 폴리에틸렌 옥시드 및 폴리프로필렌 옥시드 (PEO-PPO) 및 디쿼터늄 에톡시 술페이트를 포함한다. 다른 예시적인 중합체가 예를 들어 WO 2006/130575에 개시되어 있다. 상기 언급된 중합체의 염이 또한 고려된다.
본 발명의 세정 조성물은 또한, 세제 조성물 중에 제제화되는 경우에, 직물이 상기 세제 조성물을 포함하는 세척액과 접촉될 때 직물 상에 침착되어 가시 광선의 흡수/반사를 통해 상기 직물의 색조를 변경시킬 수 있는 직물 색조부여제, 예컨대 염료 또는 안료를 포함할 수 있다. 형광 미백제는 자외선에 적용될 경우 적어도 일부 가시 광선을 방출한다. 대조적으로, 직물 색조부여제는 이것이 적어도 일부의 가시 광선 스펙트럼을 흡수하기 때문에 표면의 색조를 변경시킨다. 적합한 직물 색조부여제는 염료 및 염료-점토 접합체를 포함하고, 또한 안료를 포함할 수 있다. 적합한 염료는 소분자 염료 및 중합체 염료를 포함한다. 적합한 소분자 염료는, 예를 들어 WO2005/03274, WO2005/03275, WO2005/03276 및 EP1876226 (본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같은, 다이렉트 블루, 다이렉트 레드, 다이렉트 바이올렛, 애시드 블루, 애시드 레드, 애시드 바이올렛, 베이직 블루, 베이직 바이올렛 및 베이직 레드의 색 지수 (C.I.) 분류에 속하는 염료로 이루어진 군으로부터 선택된 소분자 염료, 또는 그의 혼합물을 포함한다. 세제 조성물은 바람직하게는, 약 0.00003 wt% 내지 약 0.2 wt%, 약 0.00008 wt% 내지 약 0.05 wt%, 또는 심지어 약 0.0001 wt% 내지 약 0.04 wt% 직물 색조부여제를 포함한다. 조성물은 0.0001 wt% 내지 0.2 wt% 직물 색조부여제를 포함할 수 있고, 이는 조성물이 단위 용량 파우치의 형태일 때 특히 바람직할 수 있다. 적합한 색조부여제는 또한, 예를 들어 WO 2007/087257 및 WO2007/087243에 개시되어 있다.
조성물은 추가로, 중량 기준으로 0-10%, 예를 들어 중량 기준으로 0-5%, 예컨대 약 0.5 내지 약 5%, 또는 약 3% 내지 약 5%의 굴수성제를 함유할 수 있다. 세제에 사용하기 위해 관련 기술분야에 공지된 임의의 굴수성제가 사용될 수 있다. 굴수성제의 비제한적 예는 나트륨 벤젠술포네이트, 나트륨 p-톨루엔 술포네이트 (STS), 나트륨 크실렌 술포네이트 (SXS), 나트륨 쿠멘 술포네이트 (SCS), 나트륨 시멘 술포네이트, 아민 옥시드, 알콜 및 폴리글리콜에테르, 나트륨 히드록시나프토에이트, 나트륨 히드록시나프탈렌 술포네이트, 나트륨 에틸헥실 술페이트, 및 그의 조합을 포함한다.
본 발명의 세정 조성물은 또한 분산제를 함유할 수 있다. 특히 분말 세제는 분산제를 포함할 수 있다. 적합한 수용성 유기 물질은 단독- 또는 공-중합체 산 또는 그의 염을 포함하며, 여기서 폴리카르복실산은 2개 이하의 탄소 원자에 의해 서로 분리된 적어도 2개의 카르복실 라디칼을 포함한다. 적합한 분산제는, 예를 들어 문헌 [Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc.]에 기재되어 있다.
세정 조성물은 또한 1종 이상의 이염 억제제를 포함할 수 있다. 적합한 중합체 이염 억제제는 폴리비닐피롤리돈 중합체, 폴리아민 N-옥시드 중합체, N-비닐피롤리돈과 N-비닐이미다졸의 공중합체, 폴리비닐옥사졸리돈 및 폴리비닐이미다졸 또는 그의 혼합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 대상 조성물에 존재할 때, 이염 억제제는 조성물의 중량 기준으로 약 0.0001 % 내지 약 10%, 약 0.01% 내지 약 5% 또는 심지어 약 0.1% 내지 약 3%의 수준으로 존재할 수 있다.
세정 조성물은 바람직하게는 또한, 세정되는 물품에 색조를 부여할 수 있는 추가의 성분, 예컨대 형광 미백제 또는 광학 증백제를 함유할 수 있다. 존재하는 경우에, 증백제는 바람직하게는 약 0.01% 내지 약 0.5%의 수준이다. 세탁 세제 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 형광 미백제가 세탁 조성물에 사용될 수 있다. 가장 통상적으로 사용되는 형광 미백제는 디아미노스틸벤-술폰산 유도체, 디아릴피라졸린 유도체 및 비페닐-디스티릴 유도체의 부류에 속하는 것들이다. 형광 미백제의 디아미노스틸벤-술폰산 유도체 유형의 예는 4,4'-비스[(4-아닐리노-6-디에탄올아미노-s-트리아진-2-일)아미노]스틸벤-2,2'-디술포네이트, 4,4'-비스[(4,6-디아닐리노-s-트리아진-2-일)아미노]스틸벤-2,2'-디술포네이트, 4,4'-비스{4-아닐리노-6-[메틸(2-히드록시에틸)아미노]-s-트리아진-2-일아미노}스틸벤-2,2'-디술포네이트, 4,4'-비스(4-페닐-1,2,3-트리아졸-2-일)스틸벤-2,2'-디술포네이트 및 나트륨 5-(2H-나프토[1,2-d][1,2,3]트리아졸-2-일)-2-[(E)-2-페닐비닐]벤젠술포네이트의 나트륨 염을 포함한다. 바람직한 형광 미백제는 바스프로부터 입수가능한 티노팔(Tinopal) DMS 및 티노팔 CBS이다. 티노팔 DMS는 4,4'-비스[(4-아닐리노-6-모르폴리노-s-트리아진-2-일)아미노]스틸벤-2,2'-디술포네이트의 이나트륨 염이다. 티노팔 CBS는 2,2'-[비페닐-4,4'-디(2,1-에텐디일)]디벤젠-1-술포네이트의 이나트륨 염이다. 인도 뭄바이 소재의 파라마운트 미네랄즈 앤드 케미칼스(Paramount Minerals and Chemicals)에 의해 공급된 상업적으로 입수가능한 파라화이트 KX(Parawhite KX)인 것이 또한 바람직하다. 사용하기에 적합한 다른 형광제는 1-3-디아릴피라졸린 및 7-알킬아미노쿠마린을 포함한다.
적합한 형광 증백제 수준은 약 0.01, 0.05, 약 0.1 또는 심지어 약 0.2 wt%의 하위 수준 내지 0.5 또는 심지어 0.75 wt%의 상위 수준을 포함한다.
세정 조성물은 또한, 직물, 예컨대 면 및 폴리에스테르 기반 직물로부터의 오염물의 제거, 특히 폴리에스테르 기반 직물로부터의 소수성 오염물의 제거를 보조하는 1종 이상의 방오 중합체를 포함할 수 있다. 방오 중합체는, 예를 들어 비이온성 또는 음이온성 테레프탈레이트 기반 중합체, 폴리비닐카프로락탐 및 관련 공중합체, 비닐 그라프트 공중합체, 또는 폴리에스테르 폴리아미드일 수 있고, 예를 들어 문헌 [Chapter 7 in Powdered Detergents, Surfactant science series volume 71, Marcel Dekker, Inc.]을 참조한다. 또 다른 유형의 방오 중합체는 코어 구조와 그러한 코어 구조에 부착된 복수의 알콕실레이트 기를 포함하는 친양쪽성 알콕실화 그리스 세정 중합체이다. 코어 구조는 WO 2009/087523 (본원에 참조로 포함됨)에 상세히 기재된 바와 같은 폴리알킬렌이민 구조 또는 폴리알칸올아민 구조를 포함할 수 있다. 또한 무작위 그라프트 공중합체가 적합한 방오 중합체이다. 적합한 그라프트 공중합체가 WO 2007/138054, WO 2006/108856 및 WO 2006/113314 (본원에 참조로 포함됨)에 보다 상세하게 기재되어 있다. 다른 방오 중합체는 치환된 폴리사카라이드 구조, 특히 치환된 셀룰로스 구조, 예컨대 변형된 셀룰로스 유도체, 예컨대 EP 1867808 또는 WO 2003/040279 (둘 다 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 것이다. 적합한 셀룰로스 중합체는 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 셀룰로스 아미드 및 그의 혼합물을 포함한다. 적합한 셀룰로스 중합체는 음이온성으로 변형된 셀룰로스, 비이온성으로 변형된 셀룰로스, 양이온성으로 변형된 셀룰로스, 쯔비터이온성으로 변형된 셀룰로스, 및 그의 혼합물을 포함한다.
세정 조성물은 또한, 1종 이상의 재부착 방지제, 예컨대 (카르복시메틸) 셀룰로스 (CMC), 폴리(비닐 알콜) (PVA), 아크릴산의 단독중합체, 아크릴산 및 말레산의 공중합체, 및 에톡실화 폴리에틸렌이민을 포함할 수 있다. 상기 방오 중합체 하에 기재된 셀룰로스 기반 중합체가 또한 재부착 방지제로서 기능할 수 있다.
세정 조성물은 또한 1종 이상의 대안적 또는 추가의 보조 물질을 함유할 수 있다. 적합한 보조 물질은 수축 방지제, 주름 방지제, 살박테리아제, 결합제, 캐리어, 염료, 효소 안정화제, 직물 유연제, 충전제, 거품 조절제, 굴수성제, 퍼퓸, 안료, 비누거품 억제제, 용매, 및 액체 세제용 구조화제 및/또는 구조 탄성화제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
세정 조성물은 임의의 편리한 형태, 예를 들어, 바, 균질 정제, 2개 이상의 층을 갖는 정제, 1개 이상의 구획, 예컨대 2개 이상, 바람직하게는 2, 3, 4 또는 5개의 구획을 갖는 파우치, 레귤러 또는 콤팩트 분말, 과립, 페이스트, 겔, 또는 레귤러, 콤팩트 또는 농축 액체일 수 있다.
파우치는 단일 또는 다중구획으로 구성될 수 있다. 이는, 예를 들어 물과 접촉하기 전에 조성물이 파우치로부터 방출되지 않도록 하면서, 조성물을 보유하기에 적합한 임의의 형태, 형상 및 물질일 수 있다. 파우치는 내부 용적을 둘러싸는 수용성 필름으로 만들어진다. 상기 내부 용적은 파우치의 구획들로 나뉠 수 있다. 바람직한 필름은 중합체 물질, 바람직하게는 필름 또는 시트로 성형되는 중합체이다. 바람직한 중합체, 공중합체 또는 그의 유도체는 선택된 폴리아크릴레이트, 및 수용성 아크릴레이트 공중합체, 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 나트륨 덱스트린, 에틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 말토 덱스트린, 폴리 메타크릴레이트, 가장 바람직하게는 폴리비닐 알콜 공중합체 및 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC)이다. 바람직하게는 필름 내의 중합체, 예를 들어 PVA의 수준은 적어도 약 60%이다. 바람직한 평균 분자량은 전형적으로 약 20,000 내지 약 150,000일 것이다. 필름은 또한 가수분해에 의해 분해가능하고 수용성인 중합체 블렌드 예컨대 폴리락티드 및 폴리비닐 알콜 (미국 인디애나주 소재의 모노솔 엘엘씨(MonoSol LLC)에 의해 판매되는 상표 참조 M8630 하에 공지됨) 플러스 글리세롤, 에틸렌 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 그의 혼합물과 같은 가소제를 포함하는 블렌드 조성물일 수 있다. 파우치는 고체 세탁 세정 조성물 또는 부분 성분 및/또는 액체 세정 조성물 또는 수용성 필름에 의해 분리된 부분 성분을 포함할 수 있다. 액체 성분을 위한 구획은 고체를 함유하는 구획과 조성에서 상이할 수 있다: US2009/0011970 A1.
세제 성분은 물 용해성 파우치 또는 상이한 층의 정제 내에서 구획에 의해 서로 물리적으로 분리될 수 있다. 이로써 성분들 사이의 부정적인 저장 상호작용을 피할 수 있다. 각각의 구획의 상이한 용해 프로파일은 또한, 세척 용액에서 선택된 성분의 지연된 용해를 일으킬 수 있다.
단위 투여되지 않는 액체 또는 겔 세제는, 전형적으로 중량 기준으로 적어도 20% 및 최대 95%의 물, 예컨대 최대 약 70%의 물, 최대 약 65%의 물, 최대 약 55%의 물, 최대 약 45%의 물, 최대 약 35%의 물을 함유하는 수성일 수 있다. 비제한적으로, 알칸올, 아민, 디올, 에테르 및 폴리올을 포함하는 다른 유형의 액체가 수성 액체 또는 겔에 포함될 수 있다. 수성 액체 또는 겔 세제는 0-30%의 유기 용매를 함유할 수 있다.
본 발명은 또한 텍스타일 및 직물의 세탁, 예컨대 가정용 세탁 세척 및 산업용 세탁 세척에서 본 발명의 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은
a) 물품을 본 발명에 따른 세제 조성물을 포함하는 세척액 또는 이와 같은 세제 조성물에 노출시키는 단계;
b) 임의로 적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및
c) 임의로 물품을 헹구는 단계
를 포함하는 물품의 세탁 방법에 관한 것이며, 여기서 물품은 텍스타일이다.
본 발명은 또한 바닥, 테이블, 벽, 지붕 등과 같은 경질 표면 뿐만 아니라 자동차 (자동차 세척) 및 식기 (식기 세척)와 같은 경질 물체의 표면을 세정하는데 있어서, 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 한 측면은 헥소사미니다제 활성을 갖고, 임의로 GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 모티프(들)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 세정 공정, 예컨대 세탁 및/또는 경질 표면 세정에서의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11 및 헥소사미니다제 활성을 갖는 그에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
따라서, 본 발명의 한 측면은 헥소사미니다제 활성을 갖고, 임의로 GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24)로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 모티프(들)를 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물의 세정 공정, 예컨대 세탁 및/또는 경질 표면 세정에서의 용도에 관한 것이며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11 및 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 폴리펩티드는 참조 효소에 비해 개선된 심층 세정 특성을 갖는다.
세정 공정 또는 텍스타일 관리 공정은 예를 들어 세탁 공정, 식기세척 공정 또는 욕실 타일, 바닥, 테이블 상단, 배수, 싱크대 및 세면대와 같은 경질 표면의 세정일 수 있다. 세탁 공정은 예를 들어 가정용 세탁일 수 있지만, 또한 산업용 세탁일 수 있다. 또한, 본 발명은 직물 및/또는 가먼트의 세탁 공정에 관한 것이며, 여기서 공정은 세정 조성물 및 본 발명의 적어도 1종의 폴리펩티드를 함유하는 세척액을 사용하여 직물을 처리하는 것을 포함한다. 세정 공정 또는 텍스타일 관리 공정은 예를 들어 기계 세척 공정 또는 수동 세척 공정으로 수행될 수 있다. 세척 용액은 예를 들어 세제 조성물을 함유하는 수성 세척 용액일 수 있다.
따라서, 테리바실루스 계통군에 포함되는 폴리펩티드는 계면활성제를 포함하는 조성물, 예컨대 세제 조성물에 특히 유용하고, 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 세정 공정, 예컨대 세탁 및 식기 세척에 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는, 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 테리바실루스의 계통군의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 7에 제시된 성숙 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산만큼, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개만큼 상이하다.
일부 측면에서, 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는, 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 테리바실루스의 계통군의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 8에 제시된 성숙 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산만큼, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개만큼 상이하다.
일부 측면에서, 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는, 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 테리바실루스의 계통군의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 9에 제시된 성숙 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산만큼, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개만큼 상이하다.
일부 측면에서, 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는, 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 테리바실루스의 계통군의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 10에 제시된 성숙 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산만큼, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개만큼 상이하다.
일부 측면에서, 본 발명은 헥소사미니다제 활성을 갖는, 서열식별번호: 14의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 테리바실루스의 계통군의 1종 이상의 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 11에 제시된 성숙 폴리펩티드와 최대 10개의 아미노산만큼, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개만큼 상이하다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다. 본 발명의 조성물에 사용되는 폴리펩티드는 바람직하게는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열 또는 그의 대립유전자 변이체를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나; 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 그의 단편이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 2의 아미노산 1 내지 324를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다. 본 발명의 조성물에 사용되는 폴리펩티드는 바람직하게는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열 또는 그의 대립유전자 변이체를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나; 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 그의 단편이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 4의 아미노산 1 내지 324를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다. 본 발명의 조성물에 사용되는 폴리펩티드는 바람직하게는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열 또는 그의 대립유전자 변이체를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나; 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 그의 단편이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 6의 아미노산 1 내지 324를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다. 본 발명의 조성물에 사용되는 폴리펩티드는 바람직하게는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열 또는 그의 대립유전자 변이체를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나; 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 그의 단편이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 13의 아미노산 1 내지 324를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다. 본 발명의 조성물에 사용되는 폴리펩티드는 바람직하게는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열 또는 그의 대립유전자 변이체를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나; 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 그의 단편이다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진다. 또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 15의 아미노산 1 내지 324를 포함하거나 또는 이로 이루어진다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 매우 낮은 엄격도 조건, 낮은 엄격도 조건, 중간 엄격도 조건, 중간-높은 엄격도 조건, 높은 엄격도 조건, 또는 매우 높은 엄격도 조건 하에, (i) 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 또는 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열 또는 (ii) (i)의 전장 상보체와 혼성화하는 (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d edition, Cold Spring Harbor, New York), 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 14의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 하위서열, 뿐만 아니라 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드 또는 그의 단편은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 따라 상이한 속 또는 종의 균주로부터 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 확인하고 클로닝하기 위해 핵산 프로브를 설계하는데 사용될 수 있다. 이러한 프로브는 관심 세포의 게놈 DNA 또는 cDNA 내의 상응하는 유전자를 확인하고 단리하기 위해 표준 서던 블롯팅 절차에 따라 관심 세포의 게놈 DNA 또는 cDNA와의 혼성화에 사용될 수 있다. 이러한 프로브는 전체 서열보다 상당히 더 짧을 수 있지만, 적어도 15, 예를 들어, 적어도 25, 적어도 35, 또는 적어도 70개 뉴클레오티드 길이이어야 한다. 바람직하게는, 핵산 프로브는 적어도 100개 뉴클레오티드 길이, 예를 들어, 적어도 200개 뉴클레오티드, 적어도 300개 뉴클레오티드, 적어도 400개 뉴클레오티드, 적어도 500개 뉴클레오티드, 적어도 600개 뉴클레오티드, 적어도 700개 뉴클레오티드, 적어도 800개 뉴클레오티드, 또는 적어도 900개 뉴클레오티드 길이이다. DNA 및 RNA 프로브 둘 다가 사용될 수 있다. 프로브는 전형적으로 상응하는 유전자를 검출하기 위해 (예를 들어, 32P, 3H, 35S, 비오틴 또는 아비딘으로) 라벨링된다. 이러한 프로브는 본 발명에 포괄된다.
이러한 다른 균주로부터 제조된 게놈 DNA 또는 cDNA 라이브러리는 상기 기재된 프로브와 혼성하고 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA에 대해 스크리닝될 수 있다. 이러한 다른 균주로부터의 게놈 또는 다른 DNA는 아가로스 또는 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 또는 다른 분리 기술에 의해 분리될 수 있다. 라이브러리로부터의 DNA 또는 분리된 DNA는 니트로셀룰로스 또는 다른 적합한 캐리어 물질 위로 옮겨져 고정될 수 있다. 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 또는 14 또는 그의 하위서열과 혼성하는 클론 또는 DNA를 확인하기 위해, 캐리어 물질이 서던 블롯에 사용된다.
본 발명의 목적상, 혼성화는 폴리뉴클레오티드가 매우 낮은 내지 매우 높은 엄격도 조건 하에 (i) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 14; (ii) 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 12 또는 서열식별번호: 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열; (iii) 그의 전장 상보체; 또는 (iv) 그의 하위서열에 상응하는 표지된 핵산 프로브와 혼성화하는 것을 나타낸다. 이들 조건 하에 핵산 프로브가 혼성화하는 분자는, 예를 들어, X선 필름 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 검출 수단을 사용하여 검출될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 1의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 3의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 5의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 12의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 서열식별번호: 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열에 대해 적어도 60%, 예를 들어, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 추가 실시양태에서, 폴리펩티드는 단리되었다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 1개 이상의 (예를 들어, 여러) 위치에서 치환, 결실, 및/또는 삽입을 포함하는 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드의 변이체를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 조성물에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11의 성숙 폴리펩티드 내로 도입되는 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입의 수는 최대 10개, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개이다. 아미노산 변화는 경도의 속성일 수 있고, 즉 단백질의 폴딩 및/또는 활성에 유의한 영향을 미치지 않는 보존적 아미노산 치환 또는 삽입; 전형적으로 1-30개 아미노산의 작은 결실; 작은 아미노- 또는 카르복실-말단 연장, 예컨대 아미노-말단 메티오닌 잔기; 20-25개 이하 잔기의 작은 링커 펩티드; 또는 알짜 전하 또는 또 다른 기능, 예컨대 폴리-히스티딘 트랙트, 항원성 에피토프 또는 결합 도메인를 변화시킴으로써 정제를 용이하게 하는 작은 연장일 수 있다. 보존적 치환의 예는 염기성 아미노산 (아르기닌, 리신 및 히스티딘), 산성 아미노산 (글루탐산 및 아스파르트산), 극성 아미노산 (글루타민 및 아스파라긴), 소수성 아미노산 (류신, 이소류신 및 발린), 방향족 아미노산 (페닐알라닌, 트립토판 및 티로신), 및 작은 아미노산 (글리신, 알라닌, 세린, 트레오닌 및 메티오닌)의 군 내이다. 특이적 활성을 일반적으로 변경시키지 않는 아미노산 치환이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [H. Neurath and R.L. Hill, 1979, In, The Proteins, Academic Press, New York]에 기재되어 있다. 통상적인 치환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, 및 Asp/Gly이다.
대안적으로, 아미노산 변화는 폴리펩티드의 물리-화학적 특성을 변경시키는 이러한 속성의 것이다. 예를 들어, 아미노산 변화는 폴리펩티드의 열적 안정성을 개선시키고, 기질 특이성을 변경시키고, pH 최적을 변화시킬 수 있는 것 등이다. 폴리펩티드에서 필수 아미노산은 관련 기술분야에 공지된 절차, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이유발에 따라 확인될 수 있다 (Cunningham and Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). 후자의 기술에서, 단일 알라닌 돌연변이는 분자의 모든 잔기에 도입되고, 생성된 분자는 분자의 활성에 중요한 아미노산 잔기를 확인하기 위해 헥소사미니다제 활성에 대해 시험된다. 또한, 문헌 [Hilton et al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708]을 참조한다. 효소 또는 다른 생물학적 상호작용의 활성 부위는 또한 추정 접촉 부위 아미노산의 돌연변이와 함께, 핵 자기 공명, 결정학, 전자 회절 또는 광친화성 표지화와 같은 기술에 의해 결정되는 바와 같은, 구조의 물리적 분석에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [de Vos et al., 1992, Science 255: 306-312; Smith et al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaver et al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64]을 참조한다. 필수 아미노산의 동일성은 또한 관련 폴리펩티드와의 정렬로부터 추론될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드는 테리바실루스 계통군에 속하는 헥소사미니다제, 예를 들어 디스페르신이다. 테리바실루스 디스페르신은 바이오필름에서 발견될 수 있는 N-아세틸글루코사민 중합체의 β-1,6-글리코시드 연결을 특이적으로 가수분해하는 β-헥소사미니다제이다. 본 발명의 폴리펩티드 (헥소사미니다제)와 상이한 계통군에 속하는 디스페르신 B는 3개의 고도로 보존된 산성 잔기: 잔기 183에서의 아스파르트산 (D183), 잔기 184에서의 글루탐산 (E184), 및 잔기 332에서의 글루탐산 (E332)을 함유한다. 단일 또는 다중 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입은 돌연변이유발, 재조합, 및/또는 셔플링에 이은 관련 스크리닝 절차, 예컨대 문헌 [Reidhaar-Olson and Sauer, 1988, Science 241: 53-57; Bowie and Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156]; WO 95/17413; 또는 WO 95/22625에 개시된 것의 공지된 방법을 사용하여 이루어질 수 있고 시험될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 방법은 오류-유발 PCR, 파지 디스플레이 (예를 들어, 문헌 [Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837]; 미국 특허 번호 5,223,409; WO 92/06204) 및 영역-지정 돌연변이유발 (Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127)을 포함한다. 돌연변이유발/셔플링 방법은 숙주 세포에 의해 발현된 클로닝된, 돌연변이유발된 폴리펩티드의 활성을 검출하기 위해 고처리량, 자동화 스크리닝 방법과 조합될 수 있다 (Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896). 활성 폴리펩티드를 코딩하는 돌연변이유발된 DNA 분자는 숙주 세포로부터 회수될 수 있고, 관련 기술분야의 표준 방법을 사용하여 신속하게 서열분석될 수 있다. 이들 방법은 폴리펩티드 내 중요한 개별 아미노산 잔기의 신속한 결정을 가능하게 한다. 폴리펩티드는 하나의 폴리펩티드의 영역이 또 다른 폴리펩티드의 영역의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 하이브리드 폴리펩티드일 수 있다.
폴리펩티드는 또 다른 폴리펩티드가 본 발명의 폴리펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 융합 폴리펩티드 또는 절단가능한 융합 폴리펩티드일 수 있다. 융합 폴리펩티드는 또 다른 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 융합시키는 것에 의해 생산된다. 융합 폴리펩티드를 생산하는 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 폴리펩티드를 코딩하는 코딩 서열을 인 프레임으로, 융합 폴리펩티드의 발현이 동일한 프로모터(들) 및 종결인자의 제어 하에 있도록 라이게이션하는 것을 포함한다. 융합 폴리펩티드는 또한 인테인 기술을 사용하여 구축될 수 있고, 여기서 번역후 융합 폴리펩티드가 생성된다 (Cooper et al., 1993, EMBO J. 12: 2575-2583; Dawson et al., 1994, Science 266: 776-779). 융합 폴리펩티드는 추가로 2개의 폴리펩티드 사이에 절단 부위를 포함할 수 있다. 융합 단백질의 분비 시, 부위는 절단되어 2개의 폴리펩티드를 방출한다. 절단 부위의 예는 문헌 [Martin et al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 3: 568-576; Svetina et al., 2000, J. Biotechnol. 76: 245-251; Rasmussen-Wilson et al., 1997, Appl. Environ. Microbiol. 63: 3488-3493; Ward et al., 1995, Biotechnology 13: 498-503; and Contreras et al., 1991, Biotechnology 9: 378-381; Eaton et al., 1986, Biochemistry 25: 505-512; Collins-Racie et al., 1995, Biotechnology 13: 982-987; Carter et al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240-248; 및 Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35-48]에 개시된 부위를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드의 공급원
헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 임의의 속의 미생물로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 목적상, 주어진 공급원과 관련하여 본원에 사용된 용어 "로부터 수득된"은 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드가 상기 공급원에 의해 생산되거나, 또는 공급원으로부터의 폴리뉴클레오티드가 삽입된 균주에 의해 생산된다는 것을 의미할 것이다. 한 측면에서, 주어진 공급원으로부터 수득된 폴리펩티드는 세포외 분비된다.
또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 테리바실루스 폴리펩티드, 예를 들어 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득된 폴리펩티드이다. 바람직한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 7에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 테리바실루스 바람직하게는 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득되었다.
또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 테리바실루스 폴리펩티드, 예를 들어 테리바실루스 고리엔시스로부터 수득된 폴리펩티드이다. 바람직한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 8에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 테리바실루스 바람직하게는 테리바실루스 고리엔시스로부터 수득되었다.
또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 테리바실루스 폴리펩티드, 예를 들어 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득된 폴리펩티드이다. 바람직한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 9에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 테리바실루스 바람직하게는 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득되었다.
또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 테리바실루스 폴리펩티드, 예를 들어 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득된 폴리펩티드이다. 바람직한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 10에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 테리바실루스 바람직하게는 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득되었다.
또 다른 측면에서, 폴리펩티드는 테리바실루스 폴리펩티드, 예를 들어 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득된 폴리펩티드이다. 바람직한 측면에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 11에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드이고, 테리바실루스 바람직하게는 테리바실루스 사카로필루스로부터 수득되었다.
상기 언급된 종의 경우, 본 발명은 공지된 종 명칭에 관계없이, 완전한 상태 및 불완전한 상태 둘 다, 및 다른 분류학상 등가물, 예를 들어, 불완전세대를 포괄하는 것으로 이해될 것이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적절한 등가물의 실체를 용이하게 인지할 것이다.
이들 종의 균주는 수많은 컬쳐 콜렉션, 예컨대 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) (ATCC), 도이체 잠룽 폰 미크로오르가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH) (DSMZ), 센트라알부레아우 부르 쉼멜쿨투레스(Centraalbureau Voor Schimmelcultures) (CBS), 및 아그리컬쳐럴 리서치 서비스 페이턴트 컬쳐 콜렉션(Agricultural Research Service Patent Culture Collection), 노던 리져널 리서치 센터(Northern Regional Research Center) (NRRL)에서 대중이 용이하게 접근가능하다.
폴리펩티드는 자연 (예를 들어, 토양, 퇴비, 물 등)으로부터 단리된 미생물 또는 상기-언급된 프로브를 사용하여 천연 물질 (예를 들어, 토양, 퇴비, 물 등)로부터 직접적으로 수득된 DNA 샘플을 포함한 다른 공급원으로부터 확인되고 수득될 수 있다. 천연 서식지로부터 미생물 및 DNA를 직접적으로 단리하는 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 이어서 또 다른 미생물 또는 혼합된 DNA 샘플의 게놈 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 유사하게 스크리닝함으로써 수득될 수 있다. 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 프로브(들)에 의해 검출되면, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술을 사용하여 폴리뉴클레오티드가 단리되고 클로닝될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Sambrook et al., 1989, 상기 문헌] 참조).
핵산 구축물
본 개시내용은 또한, 제어 서열과 상용성인 조건 하에 적합한 숙주 세포에서 코딩 서열의 발현을 지시하는 하나 이상의 제어 서열에 작동가능하게 연결된 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물에 관한 것이다.
폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드의 발현을 제공하기 위해 다양한 방식으로 조작될 수 있다. 벡터 내로의 그의 삽입 전의 폴리뉴클레오티드의 조작은 발현 벡터에 따라 바람직하거나 필요할 수 있다. 재조합 DNA 방법을 이용하여 폴리뉴클레오티드를 변형하는 기술은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
제어 서열은 본 발명의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현을 위해 숙주 세포에 의해 인식되는 폴리뉴클레오티드인 프로모터일 수 있다. 프로모터는 폴리펩티드의 발현을 매개하는 전사 제어 서열을 함유한다. 프로모터는 변이체, 말단절단된 프로모터, 및 하이브리드 프로모터를 포함한, 숙주 세포에서 전사 활성을 나타내는 임의의 폴리뉴클레오티드일 수 있고, 숙주 세포에 대해 동종 또는 이종인 세포외 또는 세포내 폴리펩티드를 코딩하는 유전자로부터 수득될 수 있다.
박테리아 숙주 세포에서 본 발명의 핵산 구축물의 전사를 지시하는데 적합한 프로모터의 예는 바실루스 아밀로리퀘파시엔스 알파-아밀라제 유전자 (amyQ), 바실루스 리케니포르미스 알파-아밀라제 유전자 (amyL), 바실루스 리케니포르미스 페니실리나제 유전자 (penP), 바실루스 스테아로써모필루스 말토제닉 아밀라제 유전자 (amyM), 바실루스 서브틸리스 레반수크라제 유전자 (sacB), 바실루스 서브틸리스 xylA 및 xylB 유전자, 바실루스 투린기엔시스 cryIIIA 유전자 (Agaisse and Lereclus, 1994, Molecular Microbiology 13: 97-107), 이. 콜라이 lac 오페론, 이. 콜라이 trc 프로모터 (Egon et al., 1988, Gene 69: 301-315), 스트렙토미세스 코엘리콜로르 아가라제 유전자 (dagA), 및 원핵 베타-락타마제 유전자 (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 3727-3731), 뿐만 아니라 tac 프로모터 (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 21-25)로부터 수득된 프로모터이다. 추가의 프로모터는 문헌 ["Useful proteins from recombinant bacteria" in Gilbert et al., 1980, Scientific American 242: 74-94; 및 Sambrook et al., 1989, 상기 문헌]에 기재되어 있다. 탠덤 프로모터의 예는 WO 99/43835에 개시되어 있다.
사상 진균 숙주 세포에서 본 발명의 핵산 구축물의 전사를 지시하는데 적합한 프로모터의 예는 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans) 아세타미다제, 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger) 중성 알파-아밀라제, 아스페르길루스 니거 산 안정 알파-아밀라제, 아스페르길루스 니거 또는 아스페르길루스 아와모리(Aspergillus awamori) 글루코아밀라제 (glaA), 아스페르길루스 오리자에(Aspergillus oryzae) TAKA 아밀라제, 아스페르길루스 오리자에 알칼리성 프로테아제, 아스페르길루스 오리자에 트리오스 포스페이트 이소머라제, 푸사리움 옥시스포룸(Fusarium oxysporum) 트립신-유사 프로테아제 (WO 96/00787), 푸사리움 베네나툼(Fusarium venenatum) 아밀로글루코시다제 (WO 00/56900), 푸사리움 베네나툼 다리아(Daria) (WO 00/56900), 푸사리움 베네나툼 쿠인(Quinn) (WO 00/56900), 리조뮤코르 미에헤이(Rhizomucor miehei) 리파제, 리조뮤코르 미에헤이 아스파르트산 프로테이나제, 트리코더마 레에세이(Trichoderma reesei) 베타-글루코시다제, 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 I, 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 II, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 I, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 II, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 III, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 V, 트리코더마 레에세이 크실라나제 I, 트리코더마 레에세이 크실라나제 II, 트리코더마 레에세이 크실라나제 III, 트리코더마 레에세이 베타-크실로시다제, 및 트리코더마 레에세이 번역 신장 인자에 대한 유전자로부터 수득된 프로모터, 뿐만 아니라 NA2-tpi 프로모터 (비번역 리더가 아스페르길루스 트리오스 포스페이트 이소머라제 유전자로부터의 비번역 리더에 의해 대체된, 아스페르길루스 중성 알파-아밀라제 유전자로부터 변형된 프로모터; 비제한적 예는 비번역 리더가 아스페르길루스 니둘란스 또는 아스페르길루스 오리자에 트리오스 포스페이트 이소머라제 유전자로부터의 비번역 리더에 의해 대체된, 아스페르길루스 니거 중성 알파-아밀라제 유전자로부터 변형된 프로모터를 포함함); 및 그의 변이체, 말단절단된 프로모터, 및 하이브리드 프로모터이다. 다른 프로모터가 미국 특허 번호 6,011,147에 기재되어 있다.
효모 숙주에서, 유용한 프로모터는 사카로미세스 세레비지아에 엔올라제 (ENO-1), 사카로미세스 세레비지아에 갈락토키나제 (GAL1), 사카로미세스 세레비지아에 알콜 데히드로게나제/글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제 (ADH1, ADH2/GAP), 사카로미세스 세레비지아에 트리오스 포스페이트 이소머라제 (TPI), 사카로미세스 세레비지아에 메탈로티오네인 (CUP1), 및 사카로미세스 세레비지아에 3-포스포글리세레이트 키나제에 대한 유전자로부터 수득된다. 효모 숙주 세포를 위한 다른 유용한 프로모터는 문헌 [Romanos et al., 1992, Yeast 8: 423-488]에 기재되어 있다.
제어 서열은 또한 숙주 세포에 의해 전사를 종결하도록 인식되는 전사 종결인자일 수 있다. 종결인자는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 3'-말단에 작동가능하게 연결된다. 숙주 세포에서 기능적인 임의의 종결인자가 본 발명에 사용될 수 있다.
박테리아 숙주 세포를 위한 바람직한 종결인자는 바실루스 클라우시이 알칼리성 프로테아제 (aprH), 바실루스 리케니포르미스 알파-아밀라제 (amyL), 및 에스케리키아 콜라이 리보솜 RNA (rrnB)에 대한 유전자로부터 수득된다.
사상 진균 숙주 세포를 위한 바람직한 종결인자는 아스페르길루스 니둘란스 아세트아미다제, 아스페르길루스 니둘란스 안트라닐레이트 신타제, 아스페르길루스 니거 글루코아밀라제, 아스페르길루스 니거 알파-글루코시다제, 아스페르길루스 오리자에 TAKA 아밀라제, 푸사리움 옥시스포룸 트립신-유사 프로테아제, 트리코더마 레에세이 베타-글루코시다제, 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 I, 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 II, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 I, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 II, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 III, 트리코더마 레에세이 엔도글루카나제 V, 트리코더마 레에세이 크실라나제 I, 트리코더마 레에세이 크실라나제 II, 트리코더마 레에세이 크실라나제 III, 트리코더마 레에세이 베타-크실로시다제, 및 트리코더마 레에세이 번역 신장 인자에 대한 유전자로부터 수득된다. 효모 숙주 세포를 위한 바람직한 종결인자는 사카로미세스 세레비지아에 엔올라제, 사카로미세스 세레비지아에 시토크롬 C (CYC1), 및 사카로미세스 세레비지아에 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제에 대한 유전자로부터 수득된다. 효모 숙주 세포를 위한 다른 유용한 종결인자는 문헌 [Romanos et al., 1992, 상기 문헌]에 기재되어 있다. 제어 서열은 또한 유전자의 발현을 증가시키는, 프로모터의 하류 및 유전자의 코딩 서열의 상류의 mRNA 안정화 영역일 수 있다. 적합한 mRNA 안정화 영역의 예는 바실루스 투린기엔시스 cryIIIA 유전자 (WO 94/25612) 및 바실루스 서브틸리스 SP82 유전자 (Hue et al., 1995, Journal of Bacteriology 177: 3465-3471)로부터 수득된다. 제어 서열은 또한 숙주 세포에 의한 번역에 중요한 mRNA의 비번역 영역인 리더일 수 있다. 리더는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 5'-말단에 작동가능하게 연결된다. 숙주 세포에서 기능적인 임의의 리더가 사용될 수 있다. 사상 진균 숙주 세포를 위한 바람직한 리더는 아스페르길루스 오리자에 TAKA 아밀라제 및 아스페르길루스 니둘란스 트리오스 포스페이트 이소머라제에 대한 유전자로부터 수득된다. 효모 숙주 세포를 위한 적합한 리더는 사카로미세스 세레비지아에 엔올라제 (ENO-1), 사카로미세스 세레비지아에 3-포스포글리세레이트 키나제, 사카로미세스 세레비지아에 알파-인자, 및 사카로미세스 세레비지아에 알콜 데히드로게나제/글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제 (ADH2/GAP)에 대한 유전자로부터 수득된다. 제어 서열은 또한 폴리뉴클레오티드의 3'-말단에 작동가능하게 연결되어, 전사되었을 때 숙주 세포에 의해 전사된 mRNA에 폴리아데노신 잔기를 부가하는 신호로서 인식되는 서열인 폴리아데닐화 서열일 수 있다. 숙주 세포에서 기능적인 임의의 폴리아데닐화 서열이 사용될 수 있다. 사상 진균 숙주 세포를 위한 바람직한 폴리아데닐화 서열은 아스페르길루스 니둘란스 안트라닐레이트 신타제, 아스페르길루스 니거 글루코아밀라제, 아스페르길루스 니거 알파-글루코시다제 아스페르길루스 오리자에 TAKA 아밀라제, 및 푸사리움 옥시스포룸 트립신-유사 프로테아제에 대한 유전자로부터 수득된다. 효모 숙주 세포에 유용한 폴리아데닐화 서열은 문헌 [Guo and Sherman, 1995, Mol. Cellular Biol. 15: 5983-5990]에 기재되어 있다.
제어 서열은 또한 폴리펩티드의 N-말단에 연결된 신호 펩티드를 코딩하고, 폴리펩티드를 세포의 분비 경로로 지시하는 신호 펩티드 코딩 영역일 수 있다. 폴리뉴클레오티드의 코딩 서열의 5'-말단은 폴리펩티드를 코딩하는 코딩 서열의 절편과 번역 리딩 프레임으로 자연적으로 연결된 신호 펩티드 코딩 서열을 고유하게 함유할 수 있다. 대안적으로, 코딩 서열의 5'-말단은 코딩 서열에 외래인 신호 펩티드 코딩 서열을 함유할 수 있다. 외래 신호 펩티드 코딩 서열은 코딩 서열이 신호 펩티드 코딩 서열을 자연적으로 함유하지 않는 경우에 필요할 수 있다. 대안적으로, 외래 신호 펩티드 코딩 서열은 폴리펩티드의 분비를 증진시키기 위해 천연 신호 펩티드 코딩 서열을 간단하게 대체할 수 있다. 그러나, 발현된 폴리펩티드를 숙주 세포의 분비 경로로 지시하는 임의의 신호 펩티드 코딩 서열이 사용될 수 있다.
박테리아 숙주 세포를 위한 효과적인 신호 펩티드 코딩 서열은 바실루스 NCIB 11837 말토제닉 아밀라제, 바실루스 리케니포르미스 서브틸리신, 바실루스 리케니포르미스 베타-락타마제, 바실루스 스테아로써모필루스 알파-아밀라제, 바실루스 스테아로써모필루스 중성 프로테아제 (nprT, nprS, nprM), 및 바실루스 서브틸리스 prsA에 대한 유전자로부터 수득된 신호 펩티드 코딩 서열이다. 추가의 신호 펩티드가 문헌 [Simonen and Palva, 1993, Microbiological Reviews 57: 109-137]에 기재되어 있다. 사상 진균 숙주 세포를 위한 효과적인 신호 펩티드 코딩 서열은 아스페르길루스 니거 중성 아밀라제, 아스페르길루스 니거 글루코아밀라제, 아스페르길루스 오리자에 TAKA 아밀라제, 휴미콜라 인솔렌스 셀룰라제, 휴미콜라 인솔렌스 엔도글루카나제 V, 휴미콜라 라누기노사 리파제, 및 리조뮤코르 미에헤이 아스파르트산 프로테이나제에 대한 유전자로부터 수득된 신호 펩티드 코딩 서열이다. 효모 숙주 세포에 유용한 신호 펩티드는 사카로미세스 세레비지아에 알파-인자 및 사카로미세스 세레비지아에 인버타제에 대한 유전자로부터 수득된다. 다른 유용한 신호 펩티드 코딩 서열은 문헌 [Romanos et al., 1992, 상기 문헌]에 기재되어 있다.
제어 서열은 또한 폴리펩티드의 N-말단에 위치하는 프로펩티드를 코딩하는 프로펩티드 코딩 서열일 수 있다. 생성된 폴리펩티드는 전구효소 또는 프로폴리펩티드 (또는 일부 경우에 지모겐)로 공지된다. 프로폴리펩티드는 일반적으로 불활성이고, 프로폴리펩티드로부터 프로펩티드의 촉매적 또는 자가촉매적 절단에 의해 활성 폴리펩티드로 전환될 수 있다. 프로펩티드 코딩 서열은 바실루스 서브틸리스 알칼리성 프로테아제 (aprE), 바실루스 서브틸리스 중성 프로테아제 (nprT), 미셀리오프토라 써모필라 락카제 (WO 95/33836), 리조뮤코르 미에헤이 아스파르트산 프로테이나제, 및 사카로미세스 세레비지아에 알파-인자에 대한 유전자로부터 수득될 수 있다.
신호 펩티드 및 프로펩티드 서열 둘 다가 존재하는 경우에, 프로펩티드 서열은 폴리펩티드의 N-말단 다음에 위치하고 신호 펩티드 서열은 프로펩티드 서열의 N-말단 다음에 위치한다.
또한, 숙주 세포의 성장과 관련하여 폴리펩티드의 발현을 조절하는 조절 서열을 부가하는 것이 바람직할 수 있다. 조절 서열의 예는, 조절 화합물의 존재를 포함한 화학적 또는 물리적 자극에 반응하여 유전자의 발현이 켜지거나 꺼지도록 하는 서열이다. 원핵 시스템의 조절 서열은 lac, tac, 및 trp 오퍼레이터 시스템을 포함한다. 효모에서, ADH2 시스템 또는 GAL1 시스템이 사용될 수 있다. 사상 진균에서, 아스페르길루스 니거 글루코아밀라제 프로모터, 아스페르길루스 오리자에 TAKA 알파-아밀라제 프로모터, 및 아스페르길루스 오리자에 글루코아밀라제 프로모터, 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 I 프로모터, 및 트리코더마 레에세이 셀로비오히드롤라제 II 프로모터가 사용될 수 있다. 조절 서열의 다른 예는 유전자 증폭을 가능하게 하는 서열이다. 진핵 시스템에서, 이들 조절 서열은 메토트렉세이트의 존재 하에 증폭되는 디히드로폴레이트 리덕타제 유전자, 및 중금속에 의해 증폭되는 메탈로티오네인 유전자를 포함한다. 이들 경우에, 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 조절 서열과 작동가능하게 연결될 것이다.
발현 벡터
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드, 프로모터, 및 전사 및 번역 정지 신호를 포함하는 재조합 발현 벡터에 관한 것이다. 다양한 뉴클레오티드 및 제어 서열이 함께 연결되어 재조합 발현 벡터를 생산할 수 있고, 이는 1개 이상의 편리한 제한 부위를 포함하여 이러한 부위에서 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 삽입 또는 치환을 가능하게 할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오티드는 발현에 적절한 벡터 내로 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물을 삽입함으로써 발현될 수 있다. 발현 벡터를 생성하는데 있어서, 코딩 서열은 코딩 서열이 발현에 적절한 제어 서열과 작동가능하게 연결되도록 벡터 내에 위치한다.
재조합 발현 벡터는 재조합 DNA 절차에 편리하게 적용될 수 있고 폴리뉴클레오티드의 발현을 일으킬 수 있는 임의의 벡터 (예를 들어, 플라스미드 또는 바이러스)일 수 있다. 벡터의 선택은 전형적으로 벡터가 도입될 숙주 세포와 벡터의 상용성에 좌우될 것이다. 벡터는 선형 또는 닫힌 원형 플라스미드일 수 있다.
벡터는 그의 복제가 염색체 복제와 독립적인 자율 복제 벡터, 즉, 염색체외 실체로서 존재하는 벡터, 예를 들어, 플라스미드, 염색체외 요소, 미니염색체, 또는 인공 염색체일 수 있다. 벡터는 자가-복제를 보장하는 임의의 수단을 함유할 수 있다. 대안적으로, 벡터는 숙주 세포 내로 도입되는 경우 게놈 내로 통합되고, 통합된 염색체(들)과 함께 복제되는 것일 수 있다. 또한, 단일 벡터 또는 플라스미드, 또는 숙주 세포의 게놈 내로 도입될 전체 DNA를 함께 함유하는 2개 이상의 벡터 또는 플라스미드, 또는 트랜스포손이 사용될 수 있다.
벡터는 바람직하게는, 형질전환된, 형질감염된, 형질도입된 등의 세포의 용이한 선택을 가능하게 하는 1개 이상의 선택 마커를 함유한다. 선택 마커는 그의 생성물이 살생물제 또는 바이러스 저항성, 중금속에 대한 저항성, 영양요구체에 대한 원영양성 등을 제공하는 유전자이다.
박테리아 선택 마커의 예는 바실루스 리케니포르미스 또는 바실루스 서브틸리스 dal 유전자, 또는 항생제 저항성 예컨대 암피실린, 클로람페니콜, 카나마이신, 네오마이신, 스펙티노마이신 또는 테트라시클린 저항성을 부여하는 마커이다. 효모 숙주 세포에 적합한 마커는 ADE2, HIS3, LEU2, LYS2, MET3, TRP1, 및 URA3을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 사상 진균 숙주 세포에 사용하기 위한 선택 마커는 adeA (포스포리보실아미노이미다졸-숙시노카르복스아미드 신타제), adeB (포스포리보실-아미노이미다졸 신타제), amdS (아세타미다제), argB (오르니틴 카르바모일트랜스퍼라제), bar (포스피노트리신 아세틸트랜스퍼라제), hph (히그로마이신 포스포트랜스퍼라제), niaD (니트레이트 리덕타제), pyrG (오로티딘-5'-포스페이트 데카르복실라제), sC (술페이트 아데닐트랜스퍼라제), 및 trpC (안트라닐레이트 신타제), 뿐만 아니라 그의 등가물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 아스페르길루스 세포에 사용하기에 바람직한 것은 아스페르길루스 니둘란스 또는 아스페르길루스 오리자에 amdS 및 pyrG 유전자 및 스트렙토미세스 히그로스코피쿠스 bar 유전자이다. adeA, adeB, amdS, hph, 및 pyrG 유전자가 트리코더마 세포에 사용하기에 바람직하다.
선택 마커는 WO 2010/039889에 기재된 바와 같은 이중 선택 마커 시스템일 수 있다. 한 측면에서, 이중 선택 마커는 hph-tk 이중 선택 마커 시스템이다.
벡터는 바람직하게는 벡터가 숙주 세포의 게놈 내로 통합되게 하거나 또는 벡터가 게놈과 독립적으로 세포 내에서 자율 복제되게 하는 요소(들)를 함유한다.
숙주 세포 게놈 내로의 통합을 위해, 벡터는 상동 또는 비-상동 재조합에 의한 게놈 내로의 통합을 위해 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 서열 또는 벡터의 임의의 다른 요소에 의존할 수 있다. 대안적으로, 벡터는 염색체(들)의 정확한 위치(들)에서의 숙주 세포의 게놈 내로의 상동 재조합에 의한 통합을 지시하는 추가의 폴리뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 정확한 위치에서의 통합 가능성을 증가시키기 위해, 통합 요소는 상동 재조합의 확률을 증진시키도록 상응하는 표적 서열과 높은 정도의 서열 동일성을 갖는 충분한 개수의 핵산, 예컨대 100 내지 10,000개 염기 쌍, 400 내지 10,000개 염기 쌍, 및 800 내지 10,000개 염기 쌍을 함유해야 한다. 통합 요소는 숙주 세포의 게놈 내의 표적 서열과 상동인 임의의 서열일 수 있다. 또한, 통합 요소는 비-코딩 또는 코딩 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 한편, 벡터는 비-상동 재조합에 의해 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있다.
자율 복제를 위해, 벡터는 벡터가 해당 숙주 세포 내에서 자율 복제할 수 있게 하는 복제 기점을 추가로 포함할 수 있다. 복제 기점은 세포에서 기능하는 자율 복제를 매개하는 임의의 플라스미드 복제자일 수 있다. 용어 "복제 기점" 또는 "플라스미드 복제자"는 플라스미드 또는 벡터가 생체내 복제할 수 있게 하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다.
박테리아 복제 기점의 예는 이. 콜라이에서의 복제를 가능하게 하는 플라스미드의 복제 기점 pBR322, pUC19, pACYC177, 및 pACYC184, 및 바실루스에서의 복제를 가능하게 하는 pUB110, pE194, pTA1060, 및 pAMβ1이다.
효모 숙주 세포에서 사용하기 위한 복제 기점의 예는 2 마이크로미터 복제 기점, ARS1, ARS4, ARS1 및 CEN3의 조합, 및 ARS4 및 CEN6의 조합이다.
사상 진균 세포에 유용한 복제 기점의 예는 AMA1 및 ANS1이다 (Gems et al., 1991, Gene 98: 61-67; Cullen et al., 1987, Nucleic Acids Res. 15: 9163-9175; WO 00/24883). AMA1 유전자의 단리 및 상기 유전자를 포함하는 플라스미드 또는 벡터의 구축은 WO 00/24883에 개시된 방법에 따라 달성될 수 있다.
본 발명의 1개 초과의 카피의 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 삽입하여 폴리펩티드의 생산을 증가시킬 수 있다. 폴리뉴클레오티드의 카피수의 증가는 서열의 적어도 1개의 추가의 카피를 숙주 세포 게놈 내로 통합시킴으로써, 또는 증폭가능한 선택 마커 유전자를 폴리뉴클레오티드와 함께 포함시킴으로써 수득될 수 있고, 여기서 선택 마커 유전자의 증폭된 카피를 함유하고 이에 의해 폴리뉴클레오티드의 추가의 카피를 함유하는 세포는 적절한 선택 작용제의 존재 하에 세포를 배양함으로써 선택될 수 있다.
본 발명의 재조합 발현 벡터를 구축하기 위해 상기 기재된 요소를 라이게이션하는데 사용되는 절차는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [Sambrook et al., 1989, 상기 문헌] 참조).
숙주 세포
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드의 생산을 지시하는 하나 이상의 제어 서열에 작동가능하게 연결된 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 숙주 세포에 관한 것이다. 폴리뉴클레오티드를 포함하는 구축물 또는 벡터는 구축물 또는 벡터가 앞서 기재된 바와 같이 염색체 구성요소로서 또는 자기-복제 염색체외 벡터로서 유지되도록 숙주 세포 내로 도입된다. 용어 "숙주 세포"는 복제 동안 발생하는 돌연변이로 인해 모 세포와 동일하지 않은 모 세포의 임의의 자손을 포괄한다. 숙주 세포의 선택은 대부분 폴리펩티드를 코딩하는 유전자 및 그의 공급원에 좌우될 것이다.
숙주 세포는 본 발명의 폴리펩티드의 재조합 생산에 유용한 임의의 세포, 예를 들어 원핵세포 또는 진핵세포일 수 있다.
원핵 숙주 세포는 임의의 그람-양성 또는 그람-음성 박테리아일 수 있다. 그람-양성 박테리아는 바실루스, 클로스트리디움, 엔테로코쿠스, 게오바실루스, 락토바실루스, 락토코쿠스, 오세아노바실루스, 스타필로코쿠스, 스트렙토코쿠스 및 스트렙토미세스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 그람-음성 박테리아는 캄필로박터, 이. 콜라이, 플라보박테리움, 푸소박테리움, 헬리코박터, 일리오박터, 네이세리아, 슈도모나스, 살모넬라 및 우레아플라스마를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
박테리아 숙주 세포는 바실루스 알칼로필루스, 바실루스 알티투디니스, 바실루스 아밀로리퀘파시엔스, B. 아밀로리퀘파시엔스 아종 플란타룸, 바실루스 브레비스, 바실루스 시르쿨란스, 바실루스 클라우시이, 바실루스 코아굴란스, 바실루스 피르무스, 바실루스 라우투스, 바실루스 렌투스, 바실루스 리케니포르미스, 바실루스 메가테리움, 바실루스 메틸로트로피쿠스, 바실루스 푸밀루스, 바실루스 사펜시스, 바실루스 스테아로써모필루스, 바실루스 서브틸리스 및 바실루스 투린기엔시스 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 임의의 바실루스 세포일 수 있다.
박테리아 숙주 세포는 또한 스트렙토코쿠스 에퀴시밀리스, 스트렙토코쿠스 피오게네스, 스트렙토코쿠스 우베리스, 및 스트렙토코쿠스 에퀴 아종 주에피데미쿠스 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 임의의 스트렙토코쿠스 세포일 수 있다.
박테리아 숙주 세포는 또한 스트렙토미세스 아크로모게네스, 스트렙토미세스 아베르미틸리스, 스트렙토미세스 코엘리콜로르, 스트렙토미세스 그리세우스 및 스트렙토미세스 리비단스 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 임의의 스트렙토미세스 세포일 수 있다.
DNA의 바실루스 세포 내로의 도입은 원형질체 형질전환 (예를 들어, 문헌 [Chang and Cohen, 1979, Mol. Gen. Genet. 168: 111-115] 참조), 적격 세포 형질전환 (예를 들어, 문헌 [Young and Spizizen, 1961, J. Bacteriol. 81: 823-829, 또는 Dubnau and Davidoff-Abelson, 1971, J. Mol. Biol. 56: 209-221] 참조), 전기천공 (예를 들어, 문헌 [Shigekawa and Dower, 1988, Biotechniques 6: 742-751] 참조), 또는 접합 (예를 들어, 문헌 [Koehler and Thorne, 1987, J. Bacteriol. 169: 5271-5278] 참조)에 의해 이루어질 수 있다. DNA의 이. 콜라이 세포 내로의 도입은 원형질체 형질전환 (예를 들어, 문헌 [Hanahan, 1983, J. Mol. Biol. 166: 557-580] 참조) 또는 전기천공 (예를 들어, 문헌 [Dower et al., 1988, Nucleic Acids Res. 16: 6127-6145] 참조)에 의해 이루어질 수 있다. DNA의 스트렙토미세스 세포 내로의 도입은 원형질체 형질전환, 전기천공 (예를 들어, 문헌 [Gong et al., 2004, Folia Microbiol. (Praha) 49: 399-405] 참조), 접합 (예를 들어, 문헌 [Mazodier et al., 1989, J. Bacteriol. 171: 3583-3585] 참조), 또는 형질도입 (예를 들어, 문헌 [Burke et al., 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 6289-6294] 참조)에 의해 이루어질 수 있다. DNA의 슈도모나스 세포 내로의 도입은 전기천공 (예를 들어, 문헌 [Choi et al., 2006, J. Microbiol. Methods 64: 391-397] 참조) 또는 접합 (예를 들어, 문헌 [Pinedo and Smets, 2005, Appl. Environ. Microbiol. 71: 51-57] 참조)에 의해 이루어질 수 있다. DNA의 스트렙토코쿠스 세포 내로의 도입은 천연 적격성 (예를 들어, 문헌 [Perry and Kuramitsu, 1981, Infect. Immun. 32: 1295-1297] 참조), 원형질체 형질전환 (예를 들어, 문헌 [Catt and Jollick, 1991, Microbios 68: 189-207] 참조), 전기천공 (예를 들어, 문헌 [Buckley et al., 1999, Appl. Environ. Microbiol. 65: 3800-3804] 참조), 또는 접합 (예를 들어, 문헌 [Clewell, 1981, Microbiol. Rev. 45: 409-436] 참조)에 의해 이루어질 수 있다. 그러나, DNA를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다.
숙주 세포는 또한 진핵생물, 예컨대 포유동물, 곤충, 식물, 또는 진균 세포일 수 있다.
숙주 세포는 진균 세포일 수 있다. 본원에 사용된 "진균"은 문 아스코미코타(Ascomycota), 바시디오미코타(Basidiomycota), 키트리디오미코타(Chytridiomycota), 및 지코미코타(Zygomycota) 뿐만 아니라 오오미코타(Oomycota) 및 모든 불완전 진균 (문헌 [Hawksworth et al., In, Ainsworth and Bisby's Dictionary of The Fungi, 8th edition, 1995, CAB International, University Press, Cambridge, UK]에 정의된 바와 같음)을 포함한다.
진균 숙주 세포는 효모 세포일 수 있다. 본원에서 사용된 "효모"는 자낭포자 효모 (엔도미세탈레스(Endomycetales)), 담자균 효모, 및 불완전 균류 (블라스토미세테스(Blastomycetes))에 속하는 효모를 포함한다. 효모의 분류는 향후 바뀔 수 있기 때문에, 본 발명의 목적상, 효모는 문헌 [Biology and Activities of Yeast (Skinner, Passmore, and Davenport, editors, Soc. App. Bacteriol. Symposium Series No. 9, 1980)]에 기재된 바와 같이 정의될 것이다.
효모 숙주 세포는 칸디다, 한세눌라(Hansenula), 클루이베로미세스, 피키아, 사카로미세스, 쉬조사카로미세스 또는 야로위아 세포, 예컨대 클루이베로미세스 락티스(Kluyveromyces lactis), 사카로미세스 칼스베르겐시스, 사카로미세스 세레비지아에, 사카로미세스 디아스타티쿠스, 사카로미세스 도우글라시이, 사카로미세스 클루이베리, 사카로미세스 노르벤시스, 사카로미세스 오비포르미스 또는 야로위아 리폴리티카 세포일 수 있다.
진균 숙주 세포는 사상 진균 세포일 수 있다. "사상 진균"은 하위부문 유미코타(Eumycota) 및 오오미코타의 모든 사상 형태를 포함한다 (문헌 [Hawksworth et al., 1995, 상기 문헌]에 정의된 바와 같음). 사상 진균은 일반적으로 키틴, 셀룰로스, 글루칸, 키토산, 만난, 및 다른 복합 폴리사카라이드로 구성된 균사체 벽을 특징으로 한다. 영양 성장은 균사 신장에 의하고, 탄소 이화작용은 편성 호기성이다. 대조적으로, 효모 예컨대 사카로미세스 세레비지아에에 의한 영양 성장은 단세포 엽상체의 출아에 의하고, 탄소 이화작용은 발효적일 수 있다.
사상 진균 숙주 세포는 아크레모니움, 아스페르길루스, 아우레오바시디움, 브제르칸데라(Bjerkandera), 세리포리옵시스, 크리소스포리움, 코프리누스(Coprinus), 코리올루스(Coriolus), 크립토코쿠스, 필로바시디움, 푸사리움, 휴미콜라, 마그나포르테, 뮤코르, 미셀리오프토라, 네오칼리마스틱스, 뉴로스포라, 파에실로미세스, 페니실리움, 파네로카에테, 플레비아, 피로미세스, 플레우로투스, 쉬조필룸, 탈라로미세스, 써모아스쿠스, 티엘라비아, 톨리포클라디움, 트라메테스 또는 트리코더마 세포일 수 있다.
예를 들어, 사상 진균 숙주 세포는 아스페르길루스 아와모리, 아스페르길루스 포에티두스, 아스페르길루스 푸미가투스, 아스페르길루스 자포니쿠스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니거, 아스페르길루스 오리자에, 브제르칸데라 아두스타(Bjerkandera adusta), 세리포리옵시스 아네이리나(Ceriporiopsis aneirina), 세리포리옵시스 카레기에아(Ceriporiopsis caregiea), 세리포리옵시스 길베스켄스(Ceriporiopsis gilvescens), 세리포리옵시스 판노신타(Ceriporiopsis pannocinta), 세리포리옵시스 리불로사(Ceriporiopsis rivulosa), 세리포리옵시스 수브루파(Ceriporiopsis subrufa), 세리포리옵시스 수브베르미스포라(Ceriporiopsis subvermispora), 크리소스포리움 이놉스, 크리소스포리움 케라티노필룸, 크리소스포리움 룩크노웬세, 크리소스포리움 메르다리움, 크리소스포리움 판니콜라, 크리소스포리움 퀸스란디쿰, 크리소스포리움 트로피쿰, 크리소스포리움 조나툼, 코프리누스 시네레우스(Coprinus cinereus), 코리올루스 히르수투스(Coriolus hirsutus), 푸사리움 박트리디오이데스, 푸사리움 세레알리스, 푸사리움 크루크웰렌세, 푸사리움 쿨모룸, 푸사리움 그라미네아룸, 푸사리움 그라미눔, 푸사리움 헤테로스포룸, 푸사리움 네군디, 푸사리움 옥시스포룸, 푸사리움 레티쿨라툼, 푸사리움 로세움, 푸사리움 삼부시눔, 푸사리움 사르코크로움, 푸사리움 스포로트리키오이데스, 푸사리움 술푸레움, 푸사리움 토루로숨, 푸사리움 트리코테키오이데스, 푸사리움 베네나툼, 휴미콜라 인솔렌스, 휴미콜라 라누기노사, 뮤코르 미에헤이, 미셀리오프토라 써모필라, 뉴로스포라 크라사, 페니실리움 푸르푸로게눔, 파네로카에테 크리소스포리움, 플레비아 라디아타(Phlebia radiata), 플레우로투스 에린기이(Pleurotus eryngii), 티엘라비아 테레스트리스, 트라메테스 빌로사(Trametes villosa), 트라메테스 베르시콜로르(Trametes versicolor), 트리코더마 하르지아눔, 트리코더마 코닌기이, 트리코더마 롱기브라키아툼, 트리코더마 레에세이 또는 트리코더마 비리데 세포일 수 있다.
진균 세포는 원형질체 형성, 원형질체의 형질전환, 및 세포벽의 재생을 수반하는 공정에 의해 그 자체로 공지된 방식으로 형질전환될 수 있다. 아스페르길루스 및 트리코더마 숙주 세포의 형질전환에 적합한 절차는 EP 238023, 문헌 [Yelton et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 1470-1474, 및 Christensen et al., 1988, Bio/Technology 6: 1419-1422]에 기재되어 있다. 푸사리움 종을 형질전환시키는데 적합한 방법은 문헌 [Malardier et al., 1989, Gene 78: 147-156], 및 WO 96/00787에 기재되어 있다. 효모는 문헌 [Becker and Guarente, In Abelson, J.N. and Simon, M.I., editors, Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology, Volume 194, pp 182-187, Academic Press, Inc., New York; Ito et al., 1983, J. Bacteriol. 153: 163; 및 Hinnen et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1920]에 기재된 절차를 사용하여 형질전환될 수 있다.
생산 방법
본 개시내용은 또한 (a) 그의 야생형 형태에서 폴리펩티드를 생산하는 세포를, 폴리펩티드의 생산에 도움이 되는 조건 하에 배양하는 단계; 및 임의로, (b) 폴리펩티드를 회수하는 단계를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드를 생산하는 방법에 관한 것이다. 한 측면에서, 세포는 테리바실루스 세포이다. 또 다른 측면에서, 세포는 테리바실루스 사카로필루스 세포이다. 한 측면에서, 세포는 테리바실루스 세포이다. 또 다른 측면에서, 세포는 테리바실루스 고리엔시스 세포이다.
본 개시내용은 또한 (a) 본원에 기재된 바와 같은 재조합 숙주 세포를, 폴리펩티드의 생산에 도움이 되는 조건 하에 배양하는 단계; 및 임의로, (b) 폴리펩티드를 회수하는 단계를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드를 생산하는 방법에 관한 것이다.
숙주 세포는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 폴리펩티드의 생산에 적합한 영양 배지에서 배양된다. 예를 들어, 세포는 적합한 배지에서 폴리펩티드의 발현 및/또는 단리를 가능하게 하는 조건 하에, 진탕 플라스크 배양, 또는 실험실 또는 산업용 발효기에서의 소규모 또는 대규모 발효 (연속, 회분식, 유가식 또는 고체 상태 발효 포함)에 의해 배양될 수 있다. 배양은 탄소 및 질소 공급원 및 무기 염을 포함하는 적합한 영양 배지에서, 관련 기술분야에 공지된 절차를 사용하여 이루어진다. 적합한 배지는 상업적 공급업체로부터 입수가능하거나, 또는 (예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션의 카탈로그에) 공개된 조성에 따라 제조될 수 있다. 폴리펩티드가 영양 배지로 분비되면, 폴리펩티드는 배지로부터 직접 회수될 수 있다. 폴리펩티드가 분비되지 않으면, 이는 세포 용해물로부터 회수될 수 있다.
폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드에 특이적인 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 이들 검출 방법은 특이적 항체의 사용, 효소 생성물의 형성, 또는 효소 기질의 소멸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 효소 검정은 폴리펩티드의 활성을 결정하는데 사용될 수 있다.
폴리펩티드는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 회수될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드는 수집, 원심분리, 여과, 추출, 분무-건조, 증발 또는 침전을 포함하나 이에 제한되지는 않는 통상적인 절차에 의해 영양 배지로부터 회수될 수 있다. 한 측면에서, 폴리펩티드를 포함하는 발효 브로쓰가 회수된다.
폴리펩티드는 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화도, 소수성, 크로마토포커싱, 및 크기 배제), 전기영동 절차 (예를 들어, 정제용 등전 포커싱), 시차 용해도 (예를 들어, 황산암모늄 침전), SDS-PAGE 또는 추출 (예를 들어, 문헌 [Protein Purification, Janson and Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989] 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 다양한 절차에 의해 정제되어 실질적으로 순수한 폴리펩티드를 수득할 수 있다.
대안적 측면에서, 폴리펩티드는 회수되지 않지만, 오히려 폴리펩티드를 발현하는 본 발명의 숙주 세포가 폴리펩티드의 공급원으로서 사용된다.
세제 생성물 제제
세정 조성물은 임의의 편리한 형태, 예를 들어, 바, 균질 정제, 2개 이상의 층을 갖는 정제, 1개 이상의 구획을 갖는 파우치, 레귤러 또는 콤팩트 분말, 과립, 페이스트, 겔, 또는 레귤러, 콤팩트 또는 농축 액체일 수 있다. 파우치는 단일 또는 다중구획으로 구성될 수 있다. 이는, 예를 들어 물과 접촉하기 전에 조성물이 파우치로부터 방출되지 않도록 하면서, 조성물을 보유하기에 적합한 임의의 형태, 형상 및 물질일 수 있다. 파우치는 내부 용적을 둘러싸는 수용성 필름으로 만들어진다. 상기 내부 용적은 파우치의 구획들로 나뉠 수 있다. 바람직한 필름은 중합체 물질, 바람직하게는 필름 또는 시트로 성형되는 중합체이다. 바람직한 중합체, 공중합체 또는 그의 유도체는 선택된 폴리아크릴레이트, 및 수용성 아크릴레이트 공중합체, 메틸 셀룰로스, 카르복시 메틸 셀룰로스, 나트륨 덱스트린, 에틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스, 말토 덱스트린, 폴리 메타크릴레이트, 가장 바람직하게는 폴리비닐 알콜 공중합체 및 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (HPMC)이다. 바람직하게는 필름 내의 중합체, 예를 들어 PVA의 수준은 적어도 약 60%이다. 바람직한 평균 분자량은 전형적으로 약 20,000 내지 약 150,000일 것이다. 필름은 또한 가수분해에 의해 분해가능하고 수용성인 중합체 블렌드 예컨대 폴리락티드 및 폴리비닐 알콜 (미국 인디애나주 소재의 모노솔 엘엘씨에 의해 판매되는 상표 참조 M8630 하에 공지됨) 플러스 글리세롤, 에틸렌 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨 및 그의 혼합물과 같은 가소제를 포함하는 블렌드 조성물일 수 있다. 파우치는 고체 세탁 세정 조성물 또는 부분 성분 및/또는 액체 세정 조성물 또는 수용성 필름에 의해 분리된 부분 성분을 포함할 수 있다. 액체 성분을 위한 구획은 고체를 함유하는 구획과 조성에서 상이할 수 있다: US2009/0011970 A1.
세제 성분은 물 용해성 파우치 또는 상이한 층의 정제 내에서 구획에 의해 서로 물리적으로 분리될 수 있다. 이로써 성분들 사이의 부정적인 저장 상호작용을 피할 수 있다. 각각의 구획의 상이한 용해 프로파일은 또한, 세척 용액에서 선택된 성분의 지연된 용해를 일으킬 수 있다.
단위 투여되지 않는 액체 또는 겔 세제는, 전형적으로 중량 기준으로 적어도 20% 및 최대 95%의 물, 예컨대 최대 약 70%의 물, 최대 약 65%의 물, 최대 약 55%의 물, 최대 약 45%의 물, 최대 약 35%의 물을 함유하는 수성일 수 있다. 비제한적으로, 알칸올, 아민, 디올, 에테르 및 폴리올을 포함하는 다른 유형의 액체가 수성 액체 또는 겔에 포함될 수 있다. 수성 액체 또는 겔 세제는 0-30%의 유기 용매를 함유할 수 있다.
액체 또는 겔 세제는 비-수성일 수 있다.
세탁 비누 바
본원에 개시된 폴리펩티드는 세탁 비누 바에 첨가될 수 있고, 세탁물, 직물 및/또는 텍스타일을 손 세척하는데 사용될 수 있다. 용어 세탁 비누 바는 세탁 바, 비누 바, 콤보 바, 합성세제 바 및 세제 바를 포함하며, 본원에 사용된 용어 "세정 조성물" 또는 "세제 조성물"은 또한 이러한 비누 바를 포함한다. 바의 유형은 통상적으로 이들이 함유하는 계면활성제의 유형에 있어서 상이하고, 용어 세탁 비누 바는 지방산으로부터의 비누 및/또는 합성 비누를 함유하는 것을 포함한다. 세탁 비누 바는 실온에서 고체이고 액체, 겔 또는 분말이 아닌 물리적 형태를 갖는다. 용어 고체는 시간의 경과에 따라 유의하게 변하지 않는 물리적 형태로서 정의되고, 즉 고체 물체 (예를 들어, 세탁 비누 바)가 용기 내부에 놓이면, 고체 물체는 그것이 놓인 용기를 채우기 위해 변화되지 않는다. 바는 전형적으로 바 형태의 고체이지만 원형 또는 타원형과 같은 다른 고체 형상일 수 있다. 세탁 비누 바는 1종 이상의 추가의 효소, 프로테아제 억제제, 예컨대 펩티드 알데히드 (또는 히드로술파이트 부가물 또는 헤미아세탈 부가물), 붕산, 보레이트, 보락스 및/또는 페닐보론산 유도체, 예컨대 4-포르밀페닐보론산, 1종 이상의 비누 또는 합성 계면활성제, 폴리올, 예컨대 글리세린, pH 제어 화합물, 예컨대 지방산, 시트르산, 아세트산 및/또는 포름산, 및/또는 1가 양이온 및 유기 음이온의 염을 함유할 수 있고, 여기서 1가 양이온은 예를 들어 Na+, K+ 또는 NH4 +일 수 있고, 유기 음이온은 예를 들어 포르메이트, 아세테이트, 시트레이트 또는 락테이트일 수 있으므로, 1가 양이온 및 유기 음이온의 염은, 예를 들어 포름산나트륨일 수 있다. 세탁 비누 바는 또한, 착물화제, 예컨대 EDTA 및 HEDP, 퍼퓸 및/또는 상이한 유형의 충전제, 계면활성제, 예를 들어 음이온성 합성 계면활성제, 빌더, 중합체 방오 작용제, 세제 킬레이트화제, 안정화제, 충전제, 염료, 착색제, 이염 억제제, 알콕실화 폴리카르보네이트, 비누거품 억제제, 구조화제, 결합제, 침출제, 표백 활성화제, 점토 오염물 제거제, 재부착 방지제, 중합체 분산제, 증백제, 직물 유연제, 퍼퓸 및/또는 관련 기술분야에 공지된 다른 화합물을 함유할 수 있다. 세탁 비누 바는 통상적인 세탁 비누 바 제조 장비, 예컨대 비제한적으로 혼합기, 플로더, 예를 들어 2개의 단계의 진공 플로더, 압출기, 커터, 로고-스탬퍼, 냉각 터널 및 포장기에서 가공될 수 있다. 본 발명은 임의의 단일 방법에 의해 세탁 비누 바를 제조하는 것에 제한되지 않는다. 프리믹스는 공정의 상이한 단계에서 비누에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 비누, 헥소사미니다제, 임의로 1종 이상의 추가의 효소, 프로테아제 억제제, 및 1가 양이온과 유기 음이온의 염을 함유하는 프리믹스가 제조될 수 있고, 이어서 혼합물은 플로드된다. 헥소사미니다제 및 임의적인 추가의 효소는, 예를 들어 액체 형태로 프로테아제 억제제와 동시에 첨가될 수 있다. 혼합 단계 및 플로딩 단계 외에, 상기 공정은 밀링, 압출, 커팅, 스탬핑, 냉각 및/또는 포장 단계를 추가로 포함할 수 있다.
공동-과립 효소의 제제
본원에 개시된 폴리펩티드는 과립으로서, 예를 들어 1종 이상의 효소를 조합한 공동-과립으로서 과립으로서 제제화될 수 있다. 이어서, 각각의 효소는 세제 내에 보다 균일한 효소 분포를 보장하는 보다 많은 과립으로 존재할 것이다. 이는 또한 상이한 입자 크기로 인한 상이한 효소의 물리적 분리를 감소시킨다. 세제 산업용 다중-효소 공동-과립을 제조하는 방법은 IP.com 개시내용 IPCOM000200739D에 개시되어 있다. 공동-과립을 사용한 효소의 제제화의 또 다른 예는 WO 2013/188331에 개시되어 있으며, 이는 (a) 다중-효소 공동-과립; (b) 10 wt 미만의 제올라이트 (무수 기준); 및 (c) 10 wt 미만의 포스페이트 염 (무수 기준)을 포함하는 세제 조성물에 관한 것이고, 여기서 상기 효소 공동-과립은 10 내지 98 wt%의 수분 싱크 성분을 포함하고, 조성물은 추가적으로 20 내지 80 wt%의 세제 수분 싱크 성분을 포함한다.
다중-효소 공동-과립은 헥소사미니다제, 및 리파제, 셀룰라제, 크실로글루카나제, 퍼히드롤라제, 퍼옥시다제, 리폭시게나제, 락카제, 헤미셀룰라제, 프로테아제, 셀로비오스 데히드로게나제, 크실라나제, 포스포 리파제, 에스테라제, 큐티나제, 펙티나제, 만난아제, 펙테이트 리아제, 케라티나제, 리덕타제, 옥시다제, 페놀옥시다제, 리그니나제, 풀루라나제, 탄나제, 펜토사나제, 리케나제 글루카나제, 아라비노시다제, 히알루로니다제, 콘드로이티나제, 아밀라제, 및 그의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 효소를 포함할 수 있다.
개시내용은 하기 단락에서 추가로 요약된다:
1. 물품의 심층 세정을 위한, 바람직하게는 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물의 용도이며, 여기서 물품은 텍스타일인 용도.
2. 단락 1에 있어서, 물품의 점착성을 방지, 감소 또는 제거하기 위한 용도.
3. 단락 1 또는 2에 있어서, 물품 상의 얼룩을 전처리하기 위한 용도.
4. 단락 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지, 감소 또는 제거하기 위한 용도.
5. 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 물품에의 오염의 부착을 방지, 감소 또는 제거하기 위한 용도.
6. 이전 단락 중 어느 하나에 있어서, 물품의 백색도를 유지 또는 개선시키기 위한 용도.
7. 이전 단락 중 어느 하나에 있어서, 악취가 물품으로부터 감소되거나 제거되는 것인 용도.
8. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 표면이 텍스타일 표면인 용도.
9. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 텍스타일이 면, 면/폴리에스테르, 폴리에스테르, 폴리아미드, 폴리아크릴 및/또는 실크로 제조된 것인 용도.
10. 이전 단락 중 어느 하나에 있어서, 폴리펩티드가 단락 47-61의 폴리펩티드인 용도.
11. 바람직하게는 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드 및 보조 성분을 포함하는 조성물.
12. 단락 11에 있어서, 폴리펩티드가 단락 47-61의 폴리펩티드인 조성물.
13. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 세제 보조 성분이 계면활성제, 빌더, 응집 보조제, 킬레이트화제, 이염 억제제, 효소, 효소 안정화제, 효소 억제제, 촉매 물질, 표백 활성화제, 과산화수소, 과산화수소 공급원, 사전형성된 과산, 중합체 분산제, 점토 오염 제거/재침착방지제, 증백제, 거품 억제제, 염료, 퍼퓸, 구조 탄성화제, 직물 유연제, 캐리어, 굴수성제, 빌더 및 공-빌더, 직물 색조제, 소포제, 분산제, 가공 보조제, 고미제 및/또는 안료로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
14. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 바람직하게는 선형 알킬벤젠술포네이트 (LAS), LAS의 이성질체, 분지형 알킬벤젠술포네이트 (BABS), 페닐알칸술포네이트, 알파-올레핀술포네이트 (AOS), 올레핀 술포네이트, 알켄 술포네이트, 알칸-2,3-디일비스 (술페이트), 히드록시알칸술포네이트 및 디술포네이트, 알킬 술페이트 (AS), 예컨대 소듐 도데실 술페이트 (SDS), 지방 알콜 술페이트 (FAS), 1급 알콜 술페이트 (PAS), 알콜 에테르술페이트 (AES 또는 AEOS 또는 FES), 2급 알칸술포네이트 (SAS), 파라핀 술포네이트 (PS), 에스테르 술포네이트, 술폰화 지방산 글리세롤 에스테르, 메틸 에스테르 술포네이트 (MES)를 포함한 알파-술포 지방산 메틸 에스테르 (알파-SFMe 또는 SES), 알킬- 또는 알케닐숙신산, 도데세닐/테트라데세닐 숙신산 (DTSA), 아미노산의 지방산 유도체, 술포-숙신산의 디에스테르 및 모노에스테르 또는 지방산의 염 (비누), 및 그의 조합으로부터 선택된, 약 5 wt% 내지 약 50 wt%, 약 5 wt% 내지 약 40 wt% , 약 5 wt% 내지 약 30 wt% , 약 5 wt% 내지 약 20 wt%, 약 5 wt% 내지 약 10 wt% 음이온성 계면활성제를 포함하는 조성물.
15. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 바람직하게는 시트르산, 메틸글리신-N,N-디아세트산 (MGDA) 및/또는 글루탐산-N,N-디아세트산 (GLDA) 및 그의 혼합물로부터 선택된, 약 10 wt% 내지 약 50 wt%의 적어도 1종의 빌더를 포함하는 조성물.
16. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드 및 그에 대해 적어도 60%, 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
17. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 7의 아미노산 서열이거나, 또는 그에 대해 적어도 60% 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 조성물.
18. 단락 11 내지 16 중 어느 한 단락에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 8의 아미노산 서열이거나, 또는 그에 대해 적어도 60 % 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 조성물.
19. 단락 11 내지 16 중 어느 한 단락에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 9의 아미노산 서열이거나, 또는 그에 대해 적어도 60 % 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 조성물.
20. 단락 11 내지 16 중 어느 한 단락에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 10의 아미노산 서열이거나, 또는 그에 대해 적어도 60 % 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 조성물.
21. 단락 11 내지 16 중 어느 한 단락에 있어서, 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드가 서열식별번호: 11의 아미노산 서열이거나, 또는 그에 대해 적어도 60 % 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드인 조성물.
22. 이전 단락 중 어느 하나에 있어서, 약 5 wt% 내지 약 40 wt%의 비이온성 계면활성제, 및 약 0 wt% 내지 약 5 wt%의 음이온성 계면활성제를 포함하는 조성물.
23. 단락 22에 있어서, 비이온성 계면활성제가 알콜 에톡실레이트 (AE 또는 AEO), 알콜 프로폭실레이트, 프로폭실화 지방 알콜(PFA), 알콕실화 지방산 알킬 에스테르, 예컨대 에톡실화 및/또는 프로폭실화 지방산 알킬 에스테르, 알킬페놀 에톡실레이트 (APE), 노닐페놀 에톡실레이트 (NPE), 알킬폴리글리코시드 (APG), 알콕실화 아민, 지방산 모노에탄올아미드 (FAM), 지방산 디에탄올아미드 (FADA), 에톡실화 지방산 모노에탄올아미드 (EFAM), 프로폭실화 지방산 모노에탄올아미드 (PFAM), 폴리히드록시알킬 지방산 아미드, 또는 글루코사민의 N-아실 N-알킬 유도체 (글루카미드, GA 또는 지방산 글루카미드, FAGA) 및 그의 조합으로부터 선택된 것인 조성물.
24. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 프로테아제, 리파제, 큐티나제, 아밀라제, 카르보히드라제, 셀룰라제, 펙티나제, 만난아제, 아라비나제, 갈락타나제, 크실라나제 및 옥시다제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 효소를 추가로 포함하는 조성물.
25. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 효소가 동물, 식물성 또는 미생물 기원의 프로테아제인 조성물.
26. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 프로테아제가 화학적으로 변형되거나 단백질 조작된 것인 조성물.
27. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 프로테아제가 세린 프로테아제 또는 메탈로프로테아제, 바람직하게는 알칼리성 미생물 프로테아제 또는 트립신-유사 프로테아제인 조성물.
28. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 프로테아제가 바실루스, 예를 들어 서브틸리신 노보, 서브틸리신 칼스버그, 서브틸리신 309, 서브틸리신 147, 서브틸리신 168, 소 기원의 트립신, 돼지 기원의 트립신 및 푸사리움 프로테아제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
29. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 아시네토박터 종, 아에로미크로비움 종, 브레분디모나스 종, 미크로박테리움 종, 미크로코쿠스 루테우스, 슈도모나스 종, 스타필로코쿠스 에피더미디스, 스타필로코쿠스 아우레우스 및 스테노트로포모나스 종으로 이루어진 군으로부터 선택된 박테리아로부터의 EPS의 표면에의 부착을 감소시킬 수 있거나, 또는 이들이 부착된 표면으로부터 박테리아를 방출할 수 있는 조성물.
30. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 바, 균질 정제, 2개 이상의 층을 갖는 정제, 1개 이상의 구획을 갖는 파우치, 레귤러 또는 콤팩트 분말, 과립, 페이스트, 겔, 또는 레귤러, 콤팩트 또는 농축 액체인 조성물.
31. 이전 조성물 단락 중 어느 하나에 있어서, 액체 세제, 분말 세제 및 과립 세제 조성물로부터 선택된 세정 조성물인 조성물.
32.
a. 물품을 단락 46-56의 폴리펩티드를 포함하는 세척액 또는 단락 11-31 중 어느 하나에 따른 조성물에 노출시키는 단계;
b. 적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및
c. 임의로 물품을 헹구는 단계
를 포함하는 물품을 세탁하는 방법이며, 여기서 물품은 텍스타일인 방법.
33. 물품을 심층 세정하는 방법이며, 여기서 물품은 바람직하게는 텍스타일이고, 상기 방법은 물품을 바람직하게는 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23) 또는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는 세척액에 노출시키는 것을 포함하며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11에 제시된 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
34. 단락 32 또는 33에 있어서, 세척액의 pH가 1 내지 11의 범위인 방법.
35. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 세척액의 pH가 5.5 내지 11의 범위, 예컨대 7 내지 9의 범위, 7 내지 8의 범위, 또는 7 내지 8.5의 범위인 방법.
36. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 세척액의 온도가 5℃ 내지 95℃의 범위, 또는 10℃ 내지 80℃의 범위, 10℃ 내지 70℃의 범위, 10℃ 내지 60℃의 범위, 10℃ 내지 50℃의 범위, 15℃ 내지 40℃의 범위, 20℃ 내지 40℃의 범위, 15℃ 내지 30℃의 범위, 또는 20℃ 내지 30℃의 범위인 방법.
37. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 세척액의 온도가 약 20℃ 내지 약 40℃인 방법.
38. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 세척액의 온도가 약 15℃ 내지 약 30℃인 방법.
39. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 물품 상에 존재하는 얼룩이 단락 46-60의 폴리펩티드 또는 단락 11-31 중 어느 하나에 따른 세제 조성물로 전처리되는 것인 방법.
40. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 물품의 점착성이 감소되는 것인 방법.
41. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 오염의 재침착이 감소되는 것인 방법.
42. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 물품에의 오염의 부착이 감소되거나 제거되는 것인 방법.
43. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 물품의 백색도가 유지되거나 개선되는 것인 방법.
44. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 악취가 물품으로부터 감소되거나 제거되는 것인 방법.
45. 이전 방법 단락 중 어느 하나에 있어서, 세척액 중의 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드의 농도가 세척액 리터당 적어도 0.001 mg의 폴리펩티드, 예컨대 적어도 0.05 mg의 단백질, 또는 적어도 1.0 mg의 단백질, 또는 적어도 1.5 mg의 단백질이고, 임의로 세척액 중의 폴리펩티드의 농도가 세척액 리터당 0.0002 mg/L 내지 2 mg/L, 예컨대 0.002 mg/L 내지 2 mg/L, 예컨대 0.2 mg/L 내지 2 mg/L의 범위 또는 0.00001 mg/L 내지 10 mg/L의 범위 또는 0.0001 mg/L 내지 10 mg/L의 범위, 또는 0.001 mg/L 내지 10 mg/L의 범위, 또는 0.01 mg/L 내지 10 mg/L의 범위이고, 임의로 본 발명의 폴리펩티드의 농도가 총 세제 농도 중 0.00001% 내지 2 wt%, 예컨대 0.0001 내지 0.1 wt%, 예컨대 0.0005 내지 0.1 wt%, 예컨대 0.001 내지 0.1 wt%, 예컨대 0.001 내지 0.5 wt%, 예컨대 0.002 내지 0.5 wt% 또는 0.0002 내지 0.09 wt%인 방법.
46.
a. 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 또는 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드;
b. 저 엄격도 조건 하에
i. 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 또는 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열,
ii. 그의 cDNA 서열, 또는
iii. (i) 또는 (ii)의 전장 상보체
와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드;
c. 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 또는 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열 또는 그의 cDNA 서열에 대해 적어도 60% 예를 들어 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드;
d. 1개 이상의 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11의 성숙 폴리펩티드의 변이체; 및
e. 헥소사미니다제 활성을 갖는 (a), (b), (c), 또는 (d)의 폴리펩티드의 단편; 및
f. 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 폴리펩티드
로 이루어진 군으로부터 선택된 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드.
47. 단락 46에 있어서, 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드에 대해, 또는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11에 제시된 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
48. 단락 46 또는 47에 있어서, 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 7에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
49. 단락 46 또는 47에 있어서, 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 8에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
50. 단락 46 또는 47에 있어서, 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 9에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
51. 단락 46 또는 47에 있어서, 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 10에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
52. 단락 46 또는 47에 있어서, 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드 또는 서열식별번호: 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드.
53. 단락 46 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 낮은 엄격도 조건, 낮은-중간 엄격도 조건, 중간 엄격도 조건, 중간-높은 엄격도 조건, 높은 엄격도 조건, 또는 매우 높은 엄격도 조건 하에
ii. 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 또는 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열,
iii. 그의 cDNA 서열, 또는
iv. (i) 또는 (ii)의 전장 상보체
와 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드.
54. 단락 46 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 1, 3, 5, 12, 14의 성숙 폴리펩티드 코딩 서열 또는 그의 cDNA 서열에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리펩티드.
55. 단락 46 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11 또는 서열식별번호: 2, 서열식별번호: 4, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드.
56. 단락 46 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 1개 이상의 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는, 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 또는 서열식별번호: 11의 변이체인 폴리펩티드.
57. 단락 46 내지 56 중 어느 하나에 따른 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
58. 발현 숙주에서 폴리펩티드의 생산을 지시하는 1개 이상의 제어 서열에 작동가능하게 연결된 단락 57의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구축물 또는 발현 벡터.
59. 폴리펩티드의 생산을 지시하는 1개 이상의 제어 서열에 작동가능하게 연결된 단락 57의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 숙주 세포.
60. 그의 야생형 형태에서 폴리펩티드를 생산하는 세포를, 폴리펩티드의 생산에 도움이 되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, 단락 46-56 중 어느 하나의 폴리펩티드를 생산하는 방법.
61. 단락 60에 있어서, 폴리펩티드를 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
62. 단락 59의 숙주 세포를, 폴리펩티드의 생산에 도움이 되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, 단락 46-56 중 어느 하나의 폴리펩티드를 생산하는 방법.
63. 단락 62에 있어서, 폴리펩티드를 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
64. 단락 57의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하며, 여기서 유전자는 신호 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대해 외래인 것인, 핵산 구축물 또는 발현 벡터.
65. 단락 57의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하며, 여기서 유전자는 신호 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대해 외래인 것인, 재조합 숙주 세포.
66. 단락 62의 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하며, 여기서 유전자는 신호 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 대해 외래인 것인 재조합 숙주 세포를, 단백질의 생산에 도움이 되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, 단백질을 생산하는 방법.
67. 단락 66에 있어서, 단백질을 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
68. 단락 65에 있어서, 제2 관심 폴리펩티드; 바람직하게는 관심 효소; 보다 바람직하게는 관심 분비 효소; 보다 더 바람직하게는 히드롤라제, 이소머라제, 리가제, 리아제, 옥시도리덕타제 또는 트랜스퍼라제; 및 가장 바람직하게는 알파-갈락토시다제, 알파-글루코시다제, 아미노펩티다제, 아밀라제, 아스파라기나제, 베타-갈락토시다제, 베타-글루코시다제, 베타-크실로시다제, 카르보히드라제, 카르복시펩티다제, 카탈라제, 셀로비오히드롤라제, 셀룰라제, 키티나제, 큐티나제, 시클로덱스트린 글리코실트랜스퍼라제, 데옥시리보뉴클레아제, 엔도글루카나제, 에스테라제, 녹색 형광 단백질, 글루카노-트랜스퍼라제, 글루코아밀라제, 인버타제, 락카제, 리파제, 만노시다제, 뮤타나제, 옥시다제, 펙틴용해 효소, 퍼옥시다제, 피타제, 폴리페놀옥시다제, 단백질분해 효소, 리보뉴클레아제, 트랜스글루타미나제 또는 크실라나제인 분비 효소를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하는 재조합 숙주 세포.
69. 단락 65에 있어서, 제2 관심 폴리펩티드가 숙주 세포에 이종 또는 상동인 재조합 숙주 세포.
70. 단락 65 또는 68에 있어서, 진균 숙주 세포; 바람직하게는 사상 진균 숙주 세포; 보다 바람직하게는 아크레모니움, 아스페르길루스, 아우레오바시디움, 브제르칸데라, 세리포리옵시스, 크리소스포리움, 코프리누스, 코리올루스, 크립토코쿠스, 필로바시디움(Filobasidium), 푸사리움, 휴미콜라, 마그나포르테, 뮤코르, 미셀리오프토라, 네오칼리마스틱스, 뉴로스포라, 파에실로미세스, 페니실리움, 파네로카에테, 플레비아, 피로미세스, 플레우로투스, 쉬조필룸, 탈라로미세스, 써모아스쿠스, 티엘라비아, 톨리포클라디움, 트라메테스, 또는 트리코더마 세포; 가장 바람직하게는 아스페르길루스 아와모리, 아스페르길루스 포에티두스, 아스페르길루스 푸미가투스, 아스페르길루스 자포니쿠스, 아스페르길루스 니둘란스, 아스페르길루스 니거, 아스페르길루스 오리자에, 브제르칸데라 아두스타, 세리포리옵시스 아네이리나, 세리포리옵시스 카레기에아, 세리포리옵시스 길베스켄스, 세리포리옵시스 판노신타, 세리포리옵시스 리불로사, 세리포리옵시스 수브루파, 세리포리옵시스 수브베르미스포라, 크리소스포리움 이놉스, 크리소스포리움 케라티노필룸, 크리소스포리움 룩크노웬세, 크리소스포리움 메르다리움, 크리소스포리움 판니콜라, 크리소스포리움 퀸스란디쿰, 크리소스포리움 트로피쿰, 크리소스포리움 조나툼, 코프리누스 시네레우스, 코리올루스 히르수투스, 푸사리움 박트리디오이데스, 푸사리움 세레알리스, 푸사리움 크루크웰렌세, 푸사리움 쿨모룸, 푸사리움 그라미네아룸, 푸사리움 그라미눔, 푸사리움 헤테로스포룸, 푸사리움 네군디, 푸사리움 옥시스포룸, 푸사리움 레티쿨라툼, 푸사리움 로세움, 푸사리움 삼부시눔, 푸사리움 사르코크로움, 푸사리움 스포로트리키오이데스, 푸사리움 술푸레움, 푸사리움 토루로숨, 푸사리움 트리코테키오이데스, 푸사리움 베네나툼, 휴미콜라 인솔렌스, 휴미콜라 라누기노사, 뮤코르 미에헤이, 미셀리오프토라 써모필라, 뉴로스포라 크라사, 페니실리움 푸르푸로게눔, 파네로카에테 크리소스포리움, 플레비아 라디아타, 플레우로투스 에린기이, 티엘라비아 테레스트리스, 트라메테스 빌로사, 트라메테스 베르시콜로르, 트리코더마 하르지아눔, 트리코더마 코닌기이, 트리코더마 롱기브라키아툼, 트리코더마 레에세이, 또는 트리코더마 비리데 세포인 재조합 숙주 세포.
71. 단락 65 또는 68에 있어서, 박테리아 숙주 세포; 바람직하게는 원핵 숙주 세포; 보다 바람직하게는 그람-양성 숙주 세포; 보다 더 바람직하게는 바실루스, 클로스트리디움, 엔테로코쿠스, 게오바실루스, 락토바실루스, 락토코쿠스, 오세아노바실루스, 스타필로코쿠스, 스트렙토코쿠스 또는 스트렙토미세스 숙주 세포; 및 가장 바람직하게는 바실루스 알칼로필루스, 바실루스 아밀로리퀘파시엔스, 바실루스 브레비스, 바실루스 시르쿨란스, 바실루스 클라우시이, 바실루스 코아굴란스, 바실루스 피르무스, 바실루스 라우투스, 바실루스 렌투스, 바실루스 리케니포르미스, 바실루스 메가테리움, 바실루스 푸밀루스, 바실루스 스테아로써모필루스, 바실루스 서브틸리스, 및 바실루스 투린기엔시스 숙주 세포인 재조합 숙주 세포.
72. 단락 32-45 중 어느 하나의 방법에 따라 세탁된 물품.
일부 바람직한 실시양태는 하기 단락에 요약된다:
1. 조성물의 그램당 활성 효소의 적어도 0.01 mg을 포함하는, 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물이며, 여기서 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드는 서열식별번호: 2, 4 및 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 세정 조성물.
2. 단락 1에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 2, 4 및 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 것인 조성물.
3. 단락 1 또는 2에 있어서, 서열식별번호: 7, 또는 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드, 또는 서열식별번호: 9, 또는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진 조성물.
4. 단락 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 세탁 또는 식기 세척 조성물인 조성물.
5. 단락 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 최대 약 50 wt%, 약 5 wt% 내지 약 40 wt%, 약 5 wt% 내지 약 30 wt%, 약 5 wt% 내지 약 20 wt%, 약 5 wt% 내지 약 10 wt% 음이온성 계면활성제를 포함하는 조성물.
6. 단락 5에 있어서, 약 5 wt% 내지 약 50 wt%, 약 5 wt% 내지 약 40 wt%, 약 5 wt% 내지 약 30 wt%, 약 5 wt% 내지 약 20 wt%, 약 5 wt% 내지 약 10 wt% 비이온성 계면활성제를 포함하는 조성물.
7. 물품의 심층-세정을 위한 단락 1 내지 6 중 어느 하나의 조성물의 용도이며, 여기서 물품은 텍스타일인 용도.
8.
물품을 서열식별번호: 2, 4 및 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드를 포함하는 세척액 또는 단락 1 내지 6 중 어느 하나에 따른 세제 조성물에 노출시키는 단계;
적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및
임의로 물품을 헹구는 단계
를 포함하는 물품을 세탁하기 위한 세탁 방법이며, 여기서 물품은 텍스타일인 방법.
9. 세정 공정, 예컨대 세탁 및/또는 식기 세척에서의, 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물의 용도이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖는 것인 용도.
10. 물품의 심층 세정을 위한, 테리바실루스 계통군의 폴리펩티드를 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 세정 조성물의 용도이며, 여기서 폴리펩티드는 헥소사미니다제 활성을 갖고, 여기서 물품은 텍스타일인 용도.
11. 단락 9에 있어서, 물품의 점착성을 방지, 감소 또는 제거하기 위한 용도.
12. 단락 9 또는 10에 있어서, 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지, 감소 또는 제거하기 위한 용도.
13. 이전 단락 중 어느 하나에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 2, 4 및 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 및 적어도 1종의 보조 성분으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
14. 단락 13에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 2, 4 및 6의 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 것인 용도.
본 명세서 전반에 걸쳐 주어진 모든 최대 수치 제한은, 보다 낮은 수치 제한이 본원에 명백하게 기재된 바와 같이, 모든 보다 낮은 수치 제한을 포함한다는 것을 이해해야 한다. 본 명세서 전반에 걸쳐 주어진 모든 최소 수치 제한은, 보다 높은 수치 제한이 본원에 명백하게 기재된 바와 같이, 모든 보다 높은 수치 제한을 포함할 것이다. 본 명세서 전반에 걸쳐 주어진 모든 수치 범위는, 보다 좁은 수치 범위가 모두 본원에 명백하게 기재된 바와 같이, 이러한 보다 넓은 수치 범위 내에 속하는 모든 보다 좁은 수치 범위를 포함할 것이다.
검정
세척 검정
미니 세탁기-O-미터(Mini Launder-O-Meter) (미니LOM) 모델 세척 시스템
미니LOM은 스튜어트 회전장치 내에 놓인 50 ml 시험 튜브에서 세척을 수행하는 미니 세척 시스템이다. 각각의 튜브는 하나의 소형 세척기를 시뮬레이션하고, 실험 동안 각각은 시험 대상인 오염된 직물 및 오염되지 않은 직물과 함께, 시험하고자 하는 특정 세제/효소 시스템의 용액을 함유할 것이다. 기계적 응력은 회전 (전형적으로 20rpm)을 통해 달성되고, 온도는 가열 캐비넷/실에 회전기를 배치함으로써 제어된다.
터그-O-투미터(Terg-O-toMeter) (TOM) 세척 검정
터그-O-투미터 (TOM)는 12개의 상이한 세척 조건을 동시에 시험하기 위해 적용될 수 있는 중간 규모 모델 세척 시스템이다. TOM은 기본적으로 최대 12개의 개방 금속 비커가 담겨있는 대형 온도 제어 수조이다. 각각의 비커는 1개의 소형 상단 적재 스타일 세척기를 구성하고, 실험 동안 그의 각각은 그의 성능이 시험 대상인 특정 세제/효소 시스템의 용액 및 오염된 직물 및 오염되지 않은 직물을 함유할 것이다. 기계적 응력은 각각의 비커 내에서 액체를 교반하는 회전 교반 아암에 의해 달성된다. TOM 비커는 뚜껑을 갖지 않기 때문에, TOM 실험 동안 샘플을 회수하는 것, 및 세척 동안 온-라인으로 정보를 검정하는 것이 가능하다.
TOM 모델 세척 시스템은 주로 US 또는 LA/AP 세척 조건에서 세제 및 효소를 중간 규모로 시험하는데 사용된다. TOM 실험에서, 밸러스트 대 오염 비 및 직물 대 세척액 비와 같은 인자는 달라질 수 있다. 따라서, TOM은 소규모 실험, 예컨대, AMSA 및 미니-세척, 및 상단 적재 세척기에서의 보다 시간 소모적인 실규모 실험 사이의 연결을 제공한다. 장비: 12개의 스틸 비커 및 비커당 1개의 회전 아암을 갖고 500 또는 1200mL의 세제 용액 용량을 갖는 수조. 온도는 5 내지 80℃의 범위이다. 수조는 탈이온수로 채워져야 한다. 회전 속도는 최대 70 내지 120 rpm/분까지 설정될 수 있다. 터그-O-투미터에서 온도를 설정하고, 수조에서 회전을 시작한다. 온도가 조정되기를 기다린다 (허용은 ± 0.5℃임). 모든 비커는 깨끗하고 미량의 선행 시험 물질도 없어야 한다. 목적하는 양의 세제, 온도 및 물 경도를 갖는 세척 용액을 버킷에서 제조하였다. 세제를 10분 동안의 자석 교반 동안 용해되게 하였다. 제조 후 30 내지 60분 내에 세척 용액을 사용하여야 한다. 800ml 세척 용액을 TOM 비커에 첨가하였다. 세척 용액을 120rpm에서 교반하고, 임의로 1종 이상의 효소를 비커에 첨가하였다. 견본을 비커에 뿌리고, 이어서 밸러스트를 적재한다. 시간 측정은 견본 및 밸러스트가 비커에 첨가될 때 시작된다. 견본을 20분 동안 세척한 후 교반을 종결시켰다. 이어서, TOM 비커로부터 체로 세척 적재물을 옮기고, 차가운 수돗물로 헹구었다. 오염된 견본을 밸러스트 적재물로부터 분리하였다. 오염 견본을 5분 동안 흐르는 물 하에 차가운 수돗물이 담긴 5L 비커로 옮겼다. 밸러스트 적재물은 생성될 불활성화를 위해 개별적으로 유지시켰다. 손으로 견본으로부터 물을 부드럽게 눌러빼고, 종이로 덮인 트레이에 놓았다. 또 다른 종이를 견본의 상부에 놓았다. 견본을 밤새 건조되게 한 후, 예컨대 본원에 기재된 바와 같은 컬러 아이(Color Eye)를 사용하여 색상 강도를 측정함으로써 견본을 분석에 적용하였다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 기재되며, 이는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되서는 안된다.
검정
검정 1: 헥소사미니다제 활성
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 및 서열식별번호: 9를 갖는 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성을 기질로서 4-니트로페닐 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich))를 사용하여 결정하였다. 효소 반응을 하기 조건: 50 mM 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 pH 6 완충제, 1.5 mg/ml 4-니트로페닐 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 및 20 μg/ml 정제된 효소 샘플을 사용하여 100 μl의 총 반응 부피로 96 웰 편평 바닥 폴리스티렌 마이크로타이터 플레이트 (써모 사이언티픽)에서 삼중으로 수행하였다. 효소가 없는 블랭크 샘플을 병행하여 실행하였다. 반응은 써모믹서 컴포트(Thermomixer comfort) (에펜도르프(Eppendorf))에서 37℃에서 수행하였다. 10분 인큐베이션한 후, 1 M NaOH 5 μl를 각각의 반응 혼합물에 첨가하여 효소적 반응을 정지시켰다. 4-니트로페닐 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 기질의 효소적 가수분해로 인해 방출된 4-니트로페놀레이트 이온의 형성을 추정하기 위해 폴라스타(POLARstar) 오메가 플레이트 판독기 (비엠지 랩테크(BMG LABTECH))를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 판독하였다. 결과를 하기 표에 요약하였다. 표는 삼중으로 수행된 각각의 반응에 대해 405 nm에서 측정한 평균 흡광도를 보여준다. 흡광도는 효소가 없는 블랭크와 비교하여 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9를 사용하여 수행한 반응에서 보다 높은 것으로 관찰되었고, 이는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9가 헥소사미니다제 활성을 나타낸다는 것을 입증한다.
표 2. 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8 및 서열식별번호: 9의 헥소사미니다제 활성.
Figure pct00006
검정 2: 헥소사미니다제 활성
서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10을 갖는 성숙 폴리펩티드의 헥소사미니다제 활성을 기질로서 4-메틸움벨리페릴 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 (시그마-알드리치)를 사용하여 결정하였다. 효소 반응을 하기 조건: 20 mM 3-모르폴리노프로판-1-술폰산 pH 7 완충제, 5 mM 4-메틸움벨리페릴 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 및 20 nM 정제된 효소 샘플을 사용하여 200 μl의 총 반응 부피로 96 웰 편평 바닥 폴리스티렌 마이크로타이터 플레이트 (써모 사이언티픽)에서 삼중으로 수행하였다. 효소가 없는 블랭크 샘플을 병행하여 실행하였다. 반응을 주위 온도 20-25℃에서 수행하였다. 효소 및 기질의 혼합 직후 스펙트라맥스 M2e(SpectraMax M2e) 플레이트 판독기를 사용하여 반응 동역학을 추적하였다. 여기 파장을 368 nm로 설정하고, 448 nm에서 형광 방출 판독을 수행하였다. 반응을 30분 동안 60초 간격으로 추적하였다. 형광 신호의 증가를 사용하여 4-메틸움벨리페릴 N-아세틸-β-D-글루코사미니드 기질의 효소적 가수분해로 인해 방출된 4-메틸움벨리페릴 이온의 형성을 추정하였다. 결과를 하기 표에 요약하였다. 표는 삼중으로 수행된 각각의 반응에 대해 368 nm에서의 여기 및 448 nm에서의 형광 방출을 사용하여 분당 상대 형광 단위 (RFU/분)로서 측정된 반응의 평균 초기 속도를 보여준다. 반응 초기 속도는 효소가 없는 블랭크와 비교하여 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10을 사용하여 수행한 반응에서 보다 높은 것으로 관찰되었고, 이는 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10이 헥소사미니다제 활성을 나타낸다는 것을 입증한다.
표 3. 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 및 서열식별번호: 10의 헥소사미니다제 활성. Δ 반응 초기 속도 (RFU/분) = (반응 초기 속도샘플 -반응 초기 속도블랭크)
Figure pct00007
실시예
실시예 1 헥소사미니다제의 발현 및 클로닝
서열식별번호: 2로 구성된 폴리펩티드를 갖는 헥소사미니다제를 코딩하는 DNA는 1969년에 ATCC로부터 수득한 (ATCC12327) 테리바실루스 사카로필루스 균주로부터 단리되었다. 서열식별번호: 4 및 6으로 구성된 폴리펩티드를 갖는 헥소사미니다제를 코딩하는 DNA는 미국에서 수집한 환경 토양 샘플로부터 단리된, 테리바실루스 고리엔시스 및 테리바실루스 사카로필루스 박테리아 균주로부터 각각 단리되었다. 서열식별번호: 13 및 15로 구성된 폴리펩티드를 갖는 헥소사미니다제를 코딩하는 DNA는 미국에서 수집한 환경 토양 샘플로부터 단리된, 2종의 테리바실루스 사카로필루스 균주로부터 후속 단리되었다. 4종의 테리바실루스 사카로필루스 균주 및 테리바실루스 고리엔시스 균주로부터의 염색체 DNA를 QIAamp DNA 혈액 미니 키트 (퀴아젠(Qiagen), 독일 힐덴)에 의해 단리하고, 일루미나 기술을 사용하여 전체 게놈 서열분석에 적용하였다. 게놈 서열을 글리코실 히드롤라제 도메인 (GH20, www.cazy.org)을 갖는 단백질 서열에 대해 분석하였다. 3개의 GH20 유전자 및 상응하는 서열 서열식별번호: 1, 3, 5, 12 및 14가 테리바실루스 사카로필루스 및 테리바실루스 고리엔시스 균주로부터 확인되었다. 헥소사미니다제의 성숙 펩티드 서열을 코딩하는 코돈 최적화된 합성 DNA를 회사 진아트(Geneart)에 주문하였다. 성숙 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된다.
표 4
Figure pct00008
실시예 2: 헥소사미니다제의 클로닝 및 발현
헥소사미니다제의 성숙 펩티드 서열 또는 헥소사미니다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 코돈 최적화된 합성 유전자를 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시한다. 서열을 WO 12/025577에 기재된 바와 같이 바실루스 발현 벡터 내로 삽입하였다. 간략하게, 헥소사미니다제 유전자의 성숙 펩티드를 코딩하는 DNA를 바실루스 클라우시이(Bacillus clausii) 분비 신호 (BcSP; 하기 아미노산 서열: MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA (서열식별번호: 16)를 가짐)에 인 프레임으로 클로닝하였다. BcSP는 유전자 내의 천연 분비 신호를 대체하였다. BcSP 서열의 하류에, 정제 공정을 용이하게 하기 위해 친화성 태그 서열을 도입하였다 (His-태그; 하기 아미노산 서열: HHHHHHPR (서열식별번호: 17)을 가짐). 따라서 발현된 유전자는 BcSP 서열에 이어서 His-태그 서열, 이어서 성숙 야생형 GH20 서열, 즉 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11을 갖는 폴리펩티드를 포함하였다. 최종 발현 플라스미드 (BcSP-His-태그-GH20)로 바실루스 서브틸리스 발현 숙주를 형질전환시켰다. GH20 BcSP-융합 유전자는 형질전환 시 상동 재조합에 의해 바실루스 서브틸리스 숙주 세포 게놈 내로 통합되었다.
삼중 프로모터 시스템의 제어 하에 유전자 구축물을 발현시켰다 (WO 99/43835에 기재된 바와 같음). 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제를 코딩하는 유전자를 마커로서 사용하였다 (문헌 [Diderichsen et al., 1993, Plasmid 30: 312-315]에 기재된 바와 같음). 형질전환체를 ml당 6 마이크로그램의 클로람페니콜이 보충된 LB 배지 한천 상에서 선택하였다. GH20 발현 구축물을 함유하는 1개의 재조합 바실루스 서브틸리스 클론을 선택하고, 회전 진탕 테이블 상에서 100 ml 효모 추출물-기반 배지를 각각 함유하는 500 ml 배플 삼각 플라스크에서 배양하였다. 30℃ 내지 37℃에서의 3-5일의 배양 시간 후, 원심분리에 의해 효소 함유 상청액을 수거하고, 효소를 His-태그 정제에 의해 정제하였다.
실시예 3: His 태그 정제 방법
His-태그부착된 GH20 헥소사미니다제 효소를 5 mL HisTrap 엑셀 칼럼 (지이 헬스케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences)) 상에서 금속 이온으로서 Ni2+를 사용하여 고정화된 금속 크로마토그래피 (IMAC)에 의해 정제하였다. pH 7에서 정제를 수행하였고, 결합된 단백질을 이미다졸로 용리시켰다. 정제된 효소의 순도를 SDS-PAGE에 의해 점검하고, 50mM HEPES, 100mM NaCl pH7.0 중에서의 완충제 교환 후 흡광도 280 nm에 의해 효소의 농도를 결정하였다.
실시예 4: 바이오필름 검정
스타필로코쿠스 아우레우스는 이니고 라사(Inigo Lasa)가 호의로 제공하였다 (Valle et al., Mol Microbiol.2003 May; 48 (4):1075-87). 균주를 트립티카제 대두 한천 (TSA) 상에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 다음날, 단일 콜로니를 15 ml 트립티카제 대두 브로쓰 (TSB)로 옮기고, 진탕 하에 37℃에서 5시간 동안 인큐베이션하였다. 배양물을 TSB+1% 글루코스 중에 1:100으로 희석하고, 100 μL의 박테리아 현탁액을 96-웰 마이크로타이터 플레이트 (써모 사이언티픽, 눈클론 델타 서페이스(Nunclon Delta Surface), cat # 167008)의 각각의 웰로 옮기고, 진탕 없이 37℃에서 24시간 인큐베이션하였다. 상청액을 흡인하고, 웰을 100 μL의 0.9% 염화나트륨으로 세척하고, 경수 또는 0 (대조군) 또는 20, 10, 5, 2.5, 1.25, 0.62, 0.31, 0.16, 0.08, 0.04, 0.02 및 0.01 μg/mL의 효소 (서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11을 갖는 성숙 폴리펩티드)를 함유하는 3.3 gr/L 모델 세제 A 100 μL로 채웠다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 웰을 물로 세척하고, 100 μL의 0.095% 크리스탈 바이올렛 용액 (시그마 V5265)으로 15분 동안 염색하였다. 이어서, 웰을 100 μL 물로 2회 헹구고, 건조시키고, 플레이트를 스캐닝하였다.
세제의 존재 및 부재 하에 1시간 인큐베이션 후 에스. 아우레우스 바이오필름의 가시적 형성을 감소시킬 수 있는 각각의 효소의 최저 농도를 결정하였다 (표 5 참조). 모든 효소를 이중으로 검정하였고, 유사한 결과를 가졌다.
표 5. 경수 또는 모델 세제 A 중에서 1시간 인큐베이션 후 에스. 아우레우스의 가시적 형성을 감소시킬 수 있는 효소의 최소 농도.
Figure pct00009
실시예 5: 액체 모델 세제에서의 헥소사미니다제의 심층-세정
스타필로코쿠스 아우레우스 15981 (이니고 라사의 선물 (Valle et al., Mol Microbiol.2003 May; 48 (4):1075-87))을 본 실시예에서 모델 미생물로서 사용하였다. 에스. 아우레우스를 트립톤 대두 한천 (TSA) (pH 7.3) (CM0131; 옥소이드 리미티드(Oxoid Ltd), 영국 베이싱스토크) 상에 재스트리킹하고, 1일 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 단일 콜로니를 10 mL의 TSB에 접종하고, 배양물을 진탕시키면서 (200 rpm) 37℃에서 16시간 동안 인큐베이션하였다. 증식 후, 에스. 아우레우스 배양물을 신선한 TSB + 1% 글루코스 (24563; 로케뜨 프레레스(Roquette Freres)) 중에 희석하고 (1:100), 2 mL 분취물을 12-웰 폴리스티렌 편평-바닥 마이크로플레이트 (3512; 코스타(Costar), 코닝 인코포레이티드(Corning Incorporated), 미국 뉴욕주 코닝)의 웰에 첨가하였고, 여기에 멸균 폴리에스테르 (WFK30A)의 둥근 견본 (직경 2 cm)을 넣었다. 멸균 TSB + 1% 글루코스를 대조군 웰에 첨가하였다. 37℃에서 48시간 후 (정적 인큐베이션), 견본을 15°dH 물로 2회 헹구었다. 5개의 헹군 견본 (멸균 또는 에스. 아우레우스가 있는 것)을 50 mL의 시험 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33g/L의 액체 모델 A 세제를 갖는 0.2 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 갖는 15°dH 물) 및 0.2 ppm 효소 (서열식별번호: 7, 8 및 9를 갖는 성숙 폴리펩티드)를 각각의 튜브에 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 세척액을 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 37℃에서 20 rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다.
색차 (L) 값을 핸드헬드 미놀타(Handheld Minolta) CR-300을 사용하여 측정하고, 표 6에 나타내었다. 델타 값 (L(효소 존재 하에 세척한 견본) -L(효소 부재 하에 세척한 견본))을 또한 나타내었다.
표 6. 모델 세제 A에서의 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
Figure pct00010
결과는 헥소사미니다제가 모델 세제 A에서 심층-세정 특성을 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 6: 액체 모델 세제에서의 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
스타필로코쿠스 아우레우스 바이오필름을 실시예 5에 기재된 바와 같이 텍스타일 견본 (wfk30A) 상에서 성장시켰다. 멸균 배지를 사용하여 인큐베이션한 견본을 대조군으로서 포함시켰다. 헥소사미니다제의 심층-세정 특성을 시험하기 위해, 5개의 헹군 견본 (멸균 또는 에스. 아우레우스가 있는 것)을 50 mL 원추형 원심분리 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33 g/L의 액체 모델 A 세제를 갖는 0.2 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 갖는 15°dH 물) 및 0.2 ppm (또는 2 ppm) 효소를 각각의 튜브에 첨가하였다. 대조군에는 어떠한 효소도 첨가하지 않았다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 두고, 1시간 동안 37℃에서 20 rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다.
색차 (L) 값을 핸드헬드 미놀타 CR-300을 사용하여 측정하고, 상대 세척 효율을 계산하고 ((L효소 존재 - L효소 부재) /(L 멸균 견본 -L효소 부재)* 100), 표 7에 나타내었다.
표 7. 에스. 아우레우르 바이오필름 견본에 대한 액체 모델 세제에서의 백분율 세척 효율
Figure pct00011
이전의 실시예와 조합하면, 결과는 본 발명의 모든 폴리펩티드가 효소를 포함하지 않는 샘플과 비교하여 심층 세정 특성을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예 7: 슈도모나스 플루오레센스 바이오필름 견본에 대한 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
아이슬란드로부터의 슈도모나스 플루오레센스 분리주를 본 실시예에서 모델 미생물로서 사용하였다. 슈도모나스 플루오레센스를 트립톤 대두 한천 (TSA) (pH 7.3) (CM0131; 옥소이드 리미티드, 영국 베이싱스토크) 상에 재스트리킹하고, 3일 동안 주위 온도에서 인큐베이션하였다. 단일 콜로니를 10 mL의 TSB에 접종하고, 배양물을 진탕시키면서 (테트라맥스 1000, 460rpm) 주위 온도에서 16시간 동안 인큐베이션하였다. 증식 후, 배양물을 신선한 TSB 중에 희석하고 (1:100), 1.65 mL 분취물을 12-웰 폴리스티렌 편평-바닥 마이크로플레이트 (3512; 코스타, 코닝 인코포레이티드, 미국 뉴욕주 코닝)의 웰에 첨가하였고, 여기에 멸균 텍스타일 (WFK20A)의 둥근 견본 (직경 2 cm)을 넣었다. 멸균 TSB를 대조군 웰에 첨가하였다. 주위 온도에서 48시간 인큐베이션한 후 (정적), 견본을 0.9% (w/v) NaCl로 2회 헹구었다. 5개의 헹군 견본 (멸균 또는 피. 플루오레센스 바이오필름이 있는 것)을 50 mL의 시험 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33g/L의 액체 모델 A 세제를 갖는 0.2 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 갖는 15°dH 물) 및 0.2ppm 또는 2 ppm 효소(들)를 각각의 튜브에 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 세척액을 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 30℃에서 20rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다.
디지아이(DigiEYE) 색 측정 및 니콘(Nikon) D90 디지털 카메라가 장착된 영상화 시스템 (베리비드(VeriVide))을 사용하여 삼색자극 광 강도 (Y) 값을 측정하였고, 표 8에 나타내었다. 델타 값 (Y(효소 존재 하에 세척한 견본) -Y(효소 부재 하에 세척한 견본))을 또한 나타내었다.
표 8. 텍스타일 상의 피. 플루오레센스 바이오필름에 대한 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
Figure pct00012
실시예 8 상이한 미생물로부터의 EPS에 대한 액체 모델 세제에서의 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
바이오필름 세포외 중합체 물질 (EPS)의 조 추출물을 스타필로코쿠스 아우레우스 15981 (이니고 라사의 선물 (Valle, J., A. Toledo-Arana, C. Berasain, J. M. Ghigo, B. Amorena, J. R. Penades, and I. Lasa. 2003, Mol. Microbiol. 48:1075-1087), 스타필로코쿠스 콘니이(Staphylococcus cohnii) (텍스타일 분리주, 덴마크, O437F4), 슈도모나스 플루오레센스 (아이슬란드로부터의 분리주) 및 아시네토박터 루오피이 (덴마크로부터의 텍스타일 분리주)로부터 제조하였다. 에스. 아우레우스의 경우, 추출물은 하기와 같이 제조하였다: 균주를 트립톤 대두 한천 (TSA) (pH 7.3) (CM0131; 옥소이드 리미티드, 영국 베이싱스토크) 상에 재스트리킹하고, 3일 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 500 mL의 TSB + 1% 글루코스 (24563; 로케뜨 프레레스)를 접종하고, 50 ml 원추형 원심분리 튜브 (339652; 써모 사이언티픽 눈크) 내로 분취하고 (각각 33 ml), 진탕시키면서 (200 rpm) 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 원심분리 (10분, 6000g, 25℃)에 의해 펠릿화하고, 풀링하고, 총 5 ml 3M NaCl 중에 재현탁시켰다. 현탁액을 격렬하게 볼텍싱하고, 15분 동안 주위 온도에서 인큐베이션하여 표면-회합 EPS를 추출하였다. 이어서, 세포를 재-펠릿화하고 (10분, 5000 g, 25℃), EPS-함유 상청액을 회수하였다. 상청액을 2회 멸균 여과하고 (0.45 μm, 이어서 0.2 μm), 멸균성에 대해 시험하고, 추가 사용 시까지 -20℃에서 저장하였다.
에스. 코니이 분리주를 TSA 상에 재스트리킹하고, 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하고, 이를 사용하여 밤샘 배양물 (10 ml TSB + 1% 글루코스, 37℃, 200rpm에서 인큐베이션)을 접종시켰다. 이어서, 이 배양물을 벤트 캡이 달린 코닝® 셀바인드(CellBIND)® 225cm2 각진 목 세포 배양 플라스크 (제품 #3293) 내의 250ml 신선한 배지 (TSB + 1% 글루코스) 중에 희석하고 (1:100), 플라스크를 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 바이오필름 배양물을 원심분리 (10분, 8000g, 25℃)에 의해 펠릿화하고, 2.5ml 3M NaCl 중에 재현탁시키고, 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 재-펠릿화하고 (10분, 5000 g, 25℃), EPS-함유 상청액을 회수하고, 멸균 여과하고 (0.20 μm, 16534-K, 미니사르트(Minisart), 사르토리우스 스테딤(Sartorius Stedim)), 사용 시까지 -20℃에서 저장하였다.
피. 플루오레센스를 TSA 상에 재스트리킹하고, 1일 동안 20℃에서 인큐베이션하였다. 균주를 10 mL의 TSB에 접종하고, 배양물을 20℃에서 16시간 동안 정적으로 인큐베이션하였다. 증식 후, 배양물을 400ml M63 보충된 배지 (15mM (NH4)2SO4, 100mM KH2PO4 , 1.8μM FeSO4, 1mM MgSO4.7H2O, 0.4% (w/v) 글리세롤, 0.2% (w/v) 카사미노산 및 0.0001% (w/v) 티아민) 중에 희석하고 (1:100), 벤트 캡이 달린 코닝® 셀바인드® 225cm2 각진 목 세포 배양 플라스크에 첨가하고, 20℃에서 3일 동안 정적으로 인큐베이션하였다. 이어서 바이오필름 배양물을 원심분리에 의해 펠릿화하고 (10분, 8000g, 25℃), 세포를 4ml 3M NaCl 중에 재현탁시키고, 30℃에서 30분 동안 인큐베이션하여 표면-회합 EPS를 추출하였다. 이어서, 원심분리 (10분, 5000g, 25℃) 후 수득된 EPS-함유 상청액을 멸균 여과하고, 추가까지 -20℃에서 저장하였다.
에이. 루오피이로부터의 조 EPS 추출물은 다음과 같이 제조하였다: 균주를 TSA 플레이트 상에 재스트리킹하고, 3일 동안 30℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 10ml LB 배지 (L3152, 플루카)를 단일 콜로니로 접종하고, 30℃, 200rpm에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 배양물을 300ml의 신선한 LB 중에 희석하고 (1:100), 벤트 캡이 달린 코닝® 셀바인드® 225cm2 각진 목 세포 배양 플라스크에 첨가하고, 30℃에서 4일 동안 정적으로 인큐베이션하였다. 이어서 바이오필름 배양물을 원심분리에 의해 펠릿화하고 (10분, 8000g, 25℃), 펠릿을 총 3ml 3M NaCl 중에 재현탁시키고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 원심분리(10분, 5000g, 25℃) 후 수득한 EPS-함유 상청액을 멸균 여과하고 (0.20μm, 16534-K, 미니사르트, 사르토리우스 스테딤), 사용 시까지 -20℃에서 저장하였다.
세척 성능 시험을 위해, 상이한 조 EPS 추출물 50ul 분취물을 멸균 텍스타일 견본 (WFK20A) 상에 스폿팅하고, 15분 동안 주위 온도에서 인큐베이션하였다. 견본 (멸균 또는 EPS가 있는 것)을 50 mL 시험 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33g/L의 액체 모델 A 세제를 갖는 0.2 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 갖는 15°dH 물) 및 0.2 μg/ml 또는 2 μg/ml 효소를 각각의 튜브에 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 세척액을 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 37℃에서 20rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다. 디지아이 색 측정 및 니콘 D90 디지털 카메라가 장착된 영상화 시스템 (베리비드)을 사용하여 삼색자극 광 강도 (Y) 값을 측정하였고, 표 9에 나타내었다.
델타 값 (Y(효소 존재 하에 세척한 견본) -Y(효소 부재 하에 세척한 견본)) 및 상대 세척 효율 값 ((L효소 존재-L효소 부재) /(L멸균 견본- L효소 부재)* 100)을 또한 나타내었다.
표 9. 상이한 미생물로부터의 EPS에 대한 액체 모델 세제에서의 서열식별번호: 9에 제시된 헥소사미니다제의 심층-세정 효과
Figure pct00013
데이터는 헥소사미니다제가 그람-양성 및 그람-음성 박테리아 둘 다를 비롯한 다양한 미생물로부터의 바이오필름 EPS에 대해 심층-세정 특성을 보여준다는 것을 명백하게 보여준다.
실시예 9: 액체 모델 세제에서의 헥소사미니다제의 악취 감소
EPS를 예를 들어 실시예 8에 기재된 바와 같이 정제하였다. 정제 후, EPS의 50 μl 분취물을 12-웰 폴리스티렌 편평-바닥 마이크로플레이트 (3512; 코스타, 코닝 인코포레이티드, 미국 뉴욕주 코닝)의 웰에 첨가하였고, 여기에 멸균 텍스타일 (WFK30A)의 둥근 견본 (직경 2 cm)을 넣었다. 견본을 15분 동안 인큐베이션한 후 (정적 인큐베이션) 진행하였다. 6개의 견본을 50 mL의 시험 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33 g/L 액체 모델 A 세제를 갖는 15°dH 물) 및 0.2 ppm, 2.0 ppm 또는 20.0 ppm 효소 (서열식별번호: 9)를 각각의 튜브에 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 세척액을 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 37℃에서 20 rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 20 mL 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다.
냄새 챔버 설정 및 전자 코를 사용한 텍스타일 상의 휘발성 물질의 분석
기체상 휘발성 물질의 결합을 시험하기 위해, 모든 건조된 견본을 정사각형 플라스틱 박스 (30.7cm x 21.9cm x 6.0cm - 내부 측정) 내에 무작위로 분포시켰다. 10mL 유리 비커 중심 위치에, 다양한 알데히드 (펜타날 160mM, 헥산알 40mM, 헵탄알 80mM, (E)-2-헵텐알 20mM, 옥탄알 30mM, 노난알 10mM, 데칸알 8mM, (E)-2-데센알 10mM 및 (E,E)-2-데카디엔알 12mM - 모든 화학물질은 시그마-알드리치로부터 구입함)의 혼합물 5mL를 첨가하였다. 냄새 챔버를 뚜껑으로 닫고, 파라필름(Parafilm)®으로 랩핑하였다. 견본을 실온에서 16시간 동안 인큐베이션한 후, 개별적으로 20 mL GC-MS 바이알 (미크로랩 오르후스 에이/에스(Mikrolab Aarhus A/S), 덴마크 오르후스)의 바닥에 두고, 실리콘 스크류 상부 뚜껑 (미크로랩 오르후스 에이/에스, 덴마크 오르후스)으로 캡핑하였다. 각각의 샘플로부터 5 mL 헤드스페이스를, 40℃에서 20분 인큐베이션한 후, 프랑스 알파 M.O.S.(Alpha M.O.S.)로부터의 헤라클레스 II(Heracles II) 전자 코 (2개의 FID를 갖는 이중 칼럼 기체 크로마토그래프, 칼럼 1: 레스텍(Restek) MXT-5 10m x 0.18mm x 0.2μm 및 칼럼 2: 레스텍 MXT-1701 10m x 0.18mm x 0.2μm)에서 분석하였다. 샘플을 무작위 순서로 실행시켰다.
표 10. 모델 A 모델 세제에서의 헥소사미니다제에 의한 악취 제거.
Figure pct00014
결과는 헥소사미니다제가 모델 세제 A에서 악취 감소 특성을 나타낸다는 것을 보여준다.
실시예 10: 상이한 세제에서의 헥소사미니다제의 심층-세정
조 EPS (세포외 중합체 물질) 추출물을 실시예 8에 기재된 바와 같이 슈도모나스 플루오레센스 (아이슬란드로부터의 분리주)로부터 제조하였다. 세척 성능 시험을 위해, 이 추출물의 50ul 분취물을 멸균 텍스타일 견본 (WFK20A) 상에 스폿팅하고, 15분 동안 주위 온도에서 침지하도록 두었다. 견본 (멸균 또는 EPS가 있는 것)을 50 mL 원추형 원심분리 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (0.2 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 갖고 세제 (3.33 g/L 액체 모델 A 세제, 2.0 g/L 모델 N 또는 4.6 g/L 퍼실 유니버셜 겔(Persil Universal Gel)®을 갖는 15°dH 물)을 첨가하였다. 효소를 최종 농도 0.2 μg/ml로 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 튜브를 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 37℃에서 20rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다. 디지아이 색 측정 및 니콘 D90 디지털 카메라가 장착된 영상화 시스템 (베리비드)을 사용하여 삼색자극 광 강도 (Y) 값을 측정하였고, 표 11에 나타내었다.
델타 값 (Y(효소 존재 하에 세척한 견본) -Y(효소 부재 하에 세척한 견본))을 또한 나타내었다.
표 11. 피. 플루오레센스 EPS 견본에 대한 상이한 세제에서의 헥소사미니다제의 심층-세정
Figure pct00015
실시예 11: TOM에서의 세척 성능
조 EPS 추출물을 실시예 8에 기재된 바와 같이 슈도모나스 플루오레센스 (아이슬란드로부터의 분리주)로부터 제조하였다. 사용 전에 추출물을 멸균 여과하고, 100ul 분취물을 텍스타일 견본 (wfk20A (폴리에스테르/면 믹스 (65 %/35 %)), 50mm x 50mm) 상에 스폿팅하고, 10분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 터그-o-투미터 세척을 하기와 같이 수행하였다: 0.4 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치) 및 3.33 g/L 액체 모델 세제 A를 칭량하고, 세척 전 1시간 동안 침지하도록 두었다. 이어서, 더러운 세제를 TOM 비커 내의 1000ml 예비-가온된 경수 (15°dH)에 첨가하고, 10분 동안 용해되게 하였다 (최대 교반). 이어서, 교반 수준을 90rpm으로 감소시키고, 텍스타일 견본 (총 10g 텍스타일/비커에 도달하도록 2개의 EPS 견본 뿐만 아니라 밸러스트 물질 (wfk10A, wfk30A))을 첨가하고, 효소 (0.2 ppm)의 존재 또는 부재 하에 30℃에서 35분 동안 세척하였다. 세척 후, 모든 견본을 수돗물에서 2회 헹구고, 여과지 상에서 밤새 건조시켰다. 완화 (REM460nm) 값을 맥베쓰 컬러-아이 7000(Macbeth Color-Eye 7000) (CE7000)을 사용하여 측정하고, 표 12에 나타내었다.
델타 값 (REM460nm (효소 존재 하에 세척한 견본) - REM460nm (효소 부재 하에 세척한 견본))을 또한 나타내었다.
표 12: TOM에서 세척된, EPS 견본에 대한 헥소사미니다제의 심층-세정 특성
Figure pct00016
실시예 12: 전체 규모 세척에서의 세척 성능
조 EPS 추출물을 실시예 8에 기재된 바와 같이 슈도모나스 플루오레센스 (아이슬란드로부터의 분리주)로부터 제조하였다. 추출물을 중간에서 잘라낸 사전세척한 T-셔츠 (앤빌(Anvil) 지속가능 t-셔츠 (50% 폴리에스테르/50% 면)) 상에 스폿팅하고 (200μl 분취물), 스폿이 실온에서 30분 동안 건조되도록 한 후 세척하였다. T-셔츠의 2개의 절반부를 독립적으로 밀레 세탁 세척기 (밀레 소프트트로닉(Miele Softtronic), W2245)에서 수돗물 및 3.33 g/L 액체 모델 A 세제 중의 0.16 g/L 산화철 (III) 나노분말 (544884; 시그마-알드리치)을 사용하여 세척하였다. 40℃ 색상 프로그램을 사용하였다 (실행 시간 1시간 26분). 세척한 후, T-셔츠의 2개의 절반부를 밤새 실온에서 널어서-건조시켰다. 완화 (REM460nm) 값을 맥베쓰 컬러-아이 7000 (CE7000)을 사용하여 측정하고, 표 13에 나타내었다. 델타 값 (REM460nm (효소 존재 하에 세척한 견본) - REM460nm (효소 부재 하에 세척한 견본))을 또한 나타내었다.
표 13. 전체-규모 세척기에서의 헥소사미니다제의 심층-세정
Figure pct00017
실시예 13: 형광 WGA-알렉사플루오르488 검정을 사용한 EPS 가수분해 측정
아이슬란드로부터 단리된 슈도모나스 플루오레센스 균주를 본 실시예에서 모델 미생물로서 사용하였다. 슈도모나스 플루오레센스 균주를 트립톤 대두 한천 (TSA) (pH 7.3) (CM0131; 옥소이드 리미티드, 영국 베이싱스토크) 상에 재스트리킹하고, 1일 동안 23℃에서 인큐베이션하였다. 균주를 10 mL의 TSB에 접종하고, 배양물을 진탕시키면서 23℃에서 16시간 동안 인큐베이션하였다. 밤샘 배양물을 200ml M63 보충된 배지 (15mM (NH4)2SO4, 100mM KH2PO4, 1.8μM FeSO4, 1mM MgSO4.7H2O, 0.4% (w/v) 글리세롤, 0.2% (w/v) 카사미노산 및 0.0001% (w/v) 티아민) 중에 희석하고 (1:100), 벤트 캡이 달린 코닝® 셀바인드® 225cm2 각진 목 세포 배양 플라스크 (제품 #3293)에 첨가하고, 23℃에서 5일 동안 정적으로 인큐베이션하였다. 이어서 각각의 바이오필름 배양물을 4개의 50ml 팔콘 튜브 (코닝 #430820)로 옮기고, 원심분리에 의해 펠릿화하고 (10분, 8000 g, 25℃), 상청액을 완전히 폐기하였다. 4개의 팔콘 각각으로부터의 잔류 펠릿을 0.450 ml 3M NaCl 중에 재현탁시켜 표면-회합된 EPS (세포외 중합체 물질)를 추출하고, 1개의 시험 튜브 (5ml, 에펜도르프 #0030119401) 내에 풀링하였다. 현탁액을 10분 동안 25℃에서 5000 g에서 원심분리하고, 1.8 ml 상청액을 EPS 분획으로서 새로운 시험 튜브로 옮기고, 추가 사용 시까지 -20℃에서 저장하였다 (조 EPS로 지칭됨). 조 EPS의 150 μl 분취물을 3개의 에펜도르프 튜브에 분배하고, 80 ppm의 서열식별번호: 9를 함유하는 효소 용액 150 ul 또는 50 mM Hepes100mM NaCl 완충제 단독과 혼합하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 50ul 분취물 샘플을 각각의 튜브로부터 회수한 다음, 눈크 맥시소르프 블랙 마이크로타이터 플레이트 (써모사이언티픽 #437111)의 웰에 첨가하였고, 여기에 멸균 사전세척한 견본 (wfk 20A, 폴리에스테르/면 65%/35%)의 둥근 견본을 넣었다. 플레이트를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 상청액을 각각의 웰로부터 제거하고, 견본을 100ul 물로 세척하였다. 다음으로, 50ul의 WGA-알렉사 플루오르488 염료 (10ug/ml; 여기/방출 최대치 ~495/519 nm; 써모 피셔 사이언티픽, #W11261)를 각각의 웰에 첨가하였다. 알렉사 플루오르® 488 WGA는 시알산 및 N-아세틸글루코사미닐 잔기에 결합한다. 플레이트를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 최종적으로 100 ul 물로 세척하고, 스펙트라맥스 M3 기기에서 측정하였다. 효소 용액 및 완충제 대조군과 혼합된 조 EPS에 상응하는 3개의 샘플 각각을 8개의 웰에 넣은 8개의 견본에 대해 시험하였다. 표준 편차를 포함한 수득된 측정치를 하기 표 14에 열거하였다.
표 14. 완충제 또는 서열식별번호: 9로 처리된 피. 플루오레센스 균주로부터의 조 EPS의, WGA-알렉사 플루오르488 염료를 사용한 형광 측정
Figure pct00018
형광 측정으로부터의 결과는 피. 플루오레센스 균주로부터의 EPS 추출물이 WGA-알렉사 플루오르488로 표지되었음을 보여주었고, 이는 EPS가 N-아세틸글루코사미닐 잔기를 함유하고, 헥소사미니다제 (서열식별번호: 9) 가수분해에 감수성이라는 것을 시사한다.
실시예 14: 세척된 EPS 견본의 밀 배아 응집소 (WGA)-염색
조 EPS 추출물을 스타필로코쿠스 아우레우스 15981 (이니고 라사의 선물 (Valle, J., A. Toledo-Arana, C. Berasain, J. M. Ghigo, B. Amorena, J. R. Penades, and I. Lasa. 2003, Mol. Microbiol. 48:1075-1087))로부터 실시예 8에 기재된 바와 같이 약간의 변형을 가하여 제조하였다: 배양물을 TSB + 1% 글루코스 중에서 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션한 후, EPS를 추출하였다. 세척을 위해, EPS의 100ul 분취물을 멸균 텍스타일 견본 (사전세척한 wfk20A 텍스타일, 65% 폴리에스테르/35% 면) 상에 스폿팅하고, 20분 동안 주위 온도에서 인큐베이션하였다. 견본 (멸균 또는 EPS가 있는 것)을 50 mL 시험 튜브에 넣고, 10 mL의 세척액 (3.33g/L 액체 모델 A 세제를 갖는 15°dH 물) 및 20 μg/ml 효소를 각 튜브에 첨가하였다. 효소를 함유하지 않는 세척액을 대조군으로서 포함시켰다. 시험 튜브를 스튜어트 회전장치에 넣고, 1시간 동안 37℃에서 20rpm에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세척액을 제거하고, 견본을 15°dH 물로 2회 헹구고, 12-웰 폴리스티렌 편평-바닥 마이크로플레이트 (3512; 코스타, 코닝 인코포레이티드, 미국 뉴욕주 코닝)에 넣었다. 이어서, 견본을 알렉사 플루오르® 488 접합된 밀 배아 응집소 (WGA) (1X PBS 중 10 μg/ml)로 실온에서 30분 동안 염색하고, 1X PBS로 2회 헹구고, BMG 클라리오스타(BMG CLARIOstar) 마이크로플레이트 판독기 (여기 488nm, 방출 525nm)에서 웰-스캐닝에 의해 측정하였다. 형광 강도 값을 표 15에 제시한다.
대조군과 비교하여 상대 기질 제거 (FIU효소 존재 - FIU효소 부재)를 또한 제시한다.
표 15. 헥소사미니다제 (서열식별번호: 9)의 존재 또는 부재 하에 세척된 EPS 견본의 밀 배아 응집소 (WGA)-염색
Figure pct00019
WGA 렉틴이 N-아세틸글루코사미닐 잔기에 대해 친화도를 갖는 경우, 결과는 헥소사미니다제 처리가 세척 동안 텍스타일로부터 기질 제거를 개선시킨다는 것을 보여준다.
실시예 15: 계통군 및 계통수의 구축
글리코_히드로_20 도메인은 헥소사미니다제, 예를 들어 PNAG 활성을 갖는 본 발명의 폴리펩티드를 포함하고, WND 도메인 뿐만 아니라 클러스터, 예컨대 계통군을 포함한다.
PFAM (PF00728, Pfam version 31.0 Finn (2016). Nucleic Acids Research, Database Issue 44:D279-D285)에 정의된 바와 같이, 글리코_히드로_20 도메인을 함유하는 폴리펩티드 서열의 계통수를 구축하였다. 적어도 1개의 글리코_히드로_20 도메인을 함유하는 성숙 폴리펩티드 서열의 다중 정렬로부터 계통수를 구축하였다. MUSCLE 알고리즘 버전 3.8.31 (Edgar, 2004. Nucleic Acids Research 32(5): 1792-1797)을 사용하여 서열을 정렬하고, 패스트트리 버전 2.1.8 (Price et al., 2010, PloS one 5(3))을 사용하여 계통수를 구축하고, iTOL (Letunic & Bork, 2007. Bioinformatics 23(1): 127-128)을 사용하여 시각화하였다. 글리코_히드로_20 도메인을 함유하는 폴리펩티드 서열은 여러 모티프를 포함하며; 한 예는 테리바실루스 사카로필루스 (서열식별번호: 9)에서 위치 158 내지 161에 존재하는 GXDE (서열식별번호: 18)이다. 잔기 D 및 E는 글리코_히드로_20 효소의 핵심 촉매 잔기이다 (서열식별번호: 9의 위치 160 내지 161).
글리코_히드로_20의 폴리펩티드는 하기 열거된 바와 같이 다수의 별개의 하위-클러스터 또는 계통군으로 분리될 수 있다. 각 계통군에 대한 별개의 모티프는 하기 상세히 기재되어 있다.
IAS 도메인의 생성
바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드에 의해 공유되는 도메인이 확인되었다. 이러한 도메인은 이전에 기재되지 않았다. 도메인은 IES로 명명되고, 이러한 도메인의 폴리펩티드는 박테리아 기원의 글리코_히드로_20 도메인 폴리펩티드를 포함하고, PNAG 활성을 갖는 것에 더하여 특정 모티프를 포함하는 것을 특징으로 한다. 도메인의 폴리펩티드는 서열식별번호: 9의 위치 44 내지 50의 ESYAIAS에 상응하는, 모티프 예 [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19)를 포함한다.
WND 도메인의 생성
바람직하게는 본 발명의 폴리펩티드에 의해 공유되는 도메인이 확인되었다. 이러한 도메인은 이전에 기재되지 않았다. 도메인은 WND로 명명되고, 이러한 도메인의 폴리펩티드는 박테리아 기원의 글리코_히드로_20 도메인 폴리펩티드를 포함하고, PNAG 활성을 갖는 것에 더하여 특정 모티프를 포함하는 것을 특징으로 한다. 도메인의 폴리펩티드는 서열식별번호: 9의 pos 156 내지 163에 상응하는 모티프 예 [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20)를 포함하고, 여기서 G 및 DE (서열식별번호: 9의 위치 158 및 160-161에 상응함)는 DSP3 계통군에서 완전히 보존되고, 활성 부위의 일부이다. 잔기 D 및 E는 글리코_히드로_20 효소의 핵심 촉매 잔기이다 (서열식별번호: 9의 위치 160 내지 161). WND 도메인의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 또 다른 모티프는 WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), 서열식별번호: 9의 193 내지 198이고, 여기서 W (서열식별번호: 9의 pos 193)는 활성 부위 포켓의 일부이고 추정상 PNAG 기질의 N-아세틸 기의 결합에 수반된다.
QSTL 계통군의 생성
QSTL 계통군은 헥소사미니다제 예를 들어 PNAG 활성을 갖는, 박테리아 기원의 WND 도메인 폴리펩티드를 포함한다. 계통군의 폴리펩티드는 서열식별번호: 9의 pos 216 내지 219에 상응하는 모티프 예 QSTL (서열식별번호 22)을 포함하고, 여기서 모든 4개의 아미노산은 QSTL 계통군에서 완전히 보존된다. 모티프는 효소의 TIM 배럴 구조의 추정 "뚜껑"의 일부이고, 추정상 기질 결합에 수반된다. QSTL 계통군의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 또 다른 모티프는 서열식별번호: 9의 273 내지 277의 NKFFY (서열식별번호: 23)이다. QSTL 계통군의 폴리펩티드에 포함될 수 있는 추가 모티프는 서열식별번호: 9의 아미노산 204 내지 208에 상응하는 NLD[DR]S (서열식별번호: 24)이다.
본 발명의 폴리펩티드의 정렬이 도 2에 제시된다. 본 발명의 폴리펩티드의 계통수가 도 3에 제시된다.
실시예 16: 상이한 세제를 사용한 회색화 시험
액체 세제 (퍼실 유니버셜 겔 2017 제제, 헨켈)를 탈이온수 중 0.5 wt.-%의 농도로 사용하였다. 사용된 효소는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 가졌고, 0.5 mg/L의 농도로 첨가되었다. 면을 포함한 상이한 텍스타일, 뿐만 아니라 박테리아 바이오필름으로 오염된 텍스타일을 세탁기 O 미터 (LOM)에서, 제조된 세척액으로 30℃에서 30분 동안 세척하였다. 스펙트럼 광도측정법에 의해 백색도 및 회색화를 각각, 1, 2, 3 및 4회 세척 후 효소의 부재 하의 참조 예 vs. 효소의 존재 하의 예 사이의 차이 (y 값)로서 결정하였다. 결과는 다음과 같았다 (보다 높은 값은 보다 낮은 회색화를 나타냄).
Figure pct00020
다른 액체 세제 (퍼실 파워 믹스 캡(Persil Power Mix Cap); 스피 겔 앤드 딕산(Spee Gel and Dixan), 모두 헨켈)를 사용하여 동일한 실험을 반복하였다.
결과는 다음과 같았다:
퍼실 파워 믹스 캡
Figure pct00021
스피 겔
Figure pct00022
딕산
Figure pct00023
시험된 효소는 시험된 모든 세제 매트릭스에서 텍스타일의 회색화와 관련하여 유의한 개선을 나타내었다.
SEQUENCE LISTING <110> Henkel AG & Co. KGaA <120> CLEANING COMPOSITIONS CONTAINING DISPERSINS III <130> PT034978WO <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1095 <212> DNA <213> Terribacillus saccharophilus <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(123) <220> <221> CDS <222> (1)..(1095) <220> <221> mat_peptide <222> (124)..(1095) <400> 1 atg gta tct cgc acg atg ctt ttc atc aag cgc gag aag ggc aag acg 48 Met Val Ser Arg Thr Met Leu Phe Ile Lys Arg Glu Lys Gly Lys Thr -40 -35 -30 gtt ctt atc aag ttc ctt tct atc acg aca gta tct atc ctt ctt ttc 96 Val Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 ctt acg atg gcg aac act gcg caa gcg caa gac caa gag aag ggc atc 144 Leu Thr Met Ala Asn Thr Ala Gln Ala Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 aca atc gac atc tct cgc aag tac tac agc atc aag acg ctt aag gcg 192 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Lys Thr Leu Lys Ala 10 15 20 atc gtt gac gag atc tca gcg aat ggt ggc gac tac ctt caa ctt cac 240 Ile Val Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 ttc tct gac aac gag agc tac gcg atc gcg tct gag ttc ctt ggc caa 288 Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 aac tct gag aac cca aac tct gcg tac ctt aca aag aag gag ctt ctt 336 Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Ala Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 tca ctt atc gcg tac tct aac gac cgc aac atc atg gtt atc ccg gac 384 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 atc gac ctt cct gcg cac tca aag ggc tgg ctt aac atc atg aag gag 432 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu 90 95 100 aag gac tct ggc ctt tac aca gac atc gta act gac tac tca gaa gac 480 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 act ctt gac tac cac aac aac gcg gtt gcg ctt tac acg gcg aac caa 528 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 ctt ctt gac gag gtt ctt gac ctt ttc tac caa cct aag ttt gct ggc 576 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 aag caa cgc atc gtt ctt ggt ggc gac gag gtt cct ggc tct ggt gcg 624 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala 155 160 165 cac caa act gac ttc atc cgc ttc atg aac cag atc gcg aag aca gcg 672 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Ala Lys Thr Ala 170 175 180 aag gcg tct aac tac gag cca caa atg tgg aac gac agc atc act cct 720 Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 gag ggc atc caa aac ctt gac cgc tct ttc tct atc ctt tac tgg aag 768 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 caa tca acg ctt tca aat ggt gcg caa tct ctt gac gta caa gac ttc 816 Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln Ser Leu Asp Val Gln Asp Phe 220 225 230 gag gag aac ggc ctt tca gtt tac aac tac aac gct tac agc ctt tac 864 Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 ttc ctt cct agc act cgc ttc acg caa gag gac atc acg gag caa atc 912 Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 gac tac atg aag tgg gcg tat gcg tac aac aag ttc ttc tac atc tct 960 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 gac tac tac aag caa gta gac aca cca aac gta aag ggc tca tct ctt 1008 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Pro Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 gta ttc tgg ggt gag cac gcg aac gac ctt tct caa gag ggc ctt ctt 1056 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 aag caa gag aag cca ctt atc caa aac ttc ctt ggc ctt 1095 Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Gly Leu 315 320 <210> 2 <211> 365 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 2 Met Val Ser Arg Thr Met Leu Phe Ile Lys Arg Glu Lys Gly Lys Thr -40 -35 -30 Val Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 Leu Thr Met Ala Asn Thr Ala Gln Ala Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Lys Thr Leu Lys Ala 10 15 20 Ile Val Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Ala Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu 90 95 100 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala 155 160 165 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Ala Lys Thr Ala 170 175 180 Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln Ser Leu Asp Val Gln Asp Phe 220 225 230 Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Pro Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Gly Leu 315 320 <210> 3 <211> 1047 <212> DNA <213> Terribacillus goriensis <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(75) <220> <221> CDS <222> (1)..(1047) <220> <221> mat_peptide <222> (76)..(1047) <400> 3 atg ctt atc aag ttc ctt tct atc acg aca gtt tca atc ctt ctt ttc 48 Met Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 ctt acg atg tct aac act gcg caa gcg caa gac caa gag aag ggc atc 96 Leu Thr Met Ser Asn Thr Ala Gln Ala Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 aca atc gac atc tct cgc aag tac tac tct atc gag aca ctt aag tct 144 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Glu Thr Leu Lys Ser 10 15 20 atc atc gac gag atc tca gcg aat ggt ggc gac tac ctt caa ctt cat 192 Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 ttc tct gac aac gag cgc tac gcg atc gcg tca gag ttc ctt ggc caa 240 Phe Ser Asp Asn Glu Arg Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 aac ggc gag aac cca aac tct act tac ctt aca aag aag gag ctt ctt 288 Asn Gly Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 tct ctt atc gcg tac tct aac gac cgc gac atc atg gta atc cca gac 336 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asp Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 atc gac ctt cca gcg cat tct cgt ggc tgg ctt aac atc atg aag gag 384 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu 90 95 100 aag gac tca ggc ctt tac act gac atc gta acg gac tac tct gag gac 432 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 aca ctt gac tac cat aac aac gct gta gcg ctt tac aca gca aac caa 480 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 ctt ctt gac gag gta ctt gac ctt ttc tac caa ccg aag ttt gct ggc 528 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 aag cag cgc atc gta ctt ggt ggc gac gag gtt cct ggc tct ggc gta 576 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Val 155 160 165 cac cag act gac ttc atc cgc ttc atg aac caa atc gcg gag act gcg 624 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Ala Glu Thr Ala 170 175 180 aag gct tct aac tac aag cca caa atg tgg aac gac tct atc aca cct 672 Lys Ala Ser Asn Tyr Lys Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 gag ggc atc caa aac ctt gac cgc tca ttc tct atc ctt tac tgg aag 720 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 caa tct aca ctt agc aat ggt gcg caa ggc ctt gac gta caa gac ttc 768 Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln Gly Leu Asp Val Gln Asp Phe 220 225 230 gag gag aac ggc ctt agc gtt tac aac tac aat gcg tac tca ctt tac 816 Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 ttc ctt cct gcg aca cgc ttc act caa gag gac atc act gag caa atc 864 Phe Leu Pro Ala Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 gac tac atg aag tgg gcg tat gcg tac aac aag ttc ttc tac atc tct 912 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 gac tac tac aag caa gta gac aca agc aac gtt aag ggc tct tct ctt 960 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 gta ttc tgg ggt gag cat gcg aac gac ctt agc caa gag ggc ctt ctt 1008 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 aag caa gag aag cca ctt atc caa aac ttc ctt ggc ctt 1047 Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Gly Leu 315 320 <210> 4 <211> 349 <212> PRT <213> Terribacillus goriensis <400> 4 Met Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 Leu Thr Met Ser Asn Thr Ala Gln Ala Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Glu Thr Leu Lys Ser 10 15 20 Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 Phe Ser Asp Asn Glu Arg Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 Asn Gly Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asp Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu 90 95 100 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Val 155 160 165 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Ala Glu Thr Ala 170 175 180 Lys Ala Ser Asn Tyr Lys Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln Gly Leu Asp Val Gln Asp Phe 220 225 230 Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 Phe Leu Pro Ala Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Gly Leu 315 320 <210> 5 <211> 1047 <212> DNA <213> Terribacillus saccharophilus <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(75) <220> <221> CDS <222> (1)..(1047) <220> <221> mat_peptide <222> (76)..(1047) <400> 5 atg ctt atc aag ttc ctt tct atc act aca gtt tct atc ctt ctt ttc 48 Met Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 ctt aca atg gcg aac act gcg caa gcg aag gac caa gag aag ggc atc 96 Leu Thr Met Ala Asn Thr Ala Gln Ala Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 act atc gac atc tca cgc aag tac tac tct atc ggc act ctt aaa gcg 144 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala 10 15 20 atc gta gac gag atc aac gcg aat ggt ggc gac tac ctt caa ctt cac 192 Ile Val Asp Glu Ile Asn Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 ttc tct gac aac gag tca tac gcg atc gcg tca gag ttc ctt ggc caa 240 Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 aac agc gag aac cca aac agc act tac ctt aca aag aag gag ctt ctt 288 Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 tca ctt atc gcg tac agc aac gac cgc aac atc atg gta atc cca gac 336 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 atc gac ctt cct gcg cac tca aag ggc tgg ctt aac gta atg aag gag 384 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly Trp Leu Asn Val Met Lys Glu 90 95 100 aag gac tct ggc ctt tac aca gac atc gtt aca gac tac agc gag gac 432 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 aca ctt gac tac cac aac aat gct gct gcg ctt tac act gcg aac caa 480 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Ala Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 ctt ctt gac gag gta ctt gac ctt ttc tac caa cca aag ttt gct ggc 528 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 aag caa cgc atc gtt ctt ggt ggc gac gag gta cca ggc tct ggt gcg 576 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala 155 160 165 cac caa aca gac ttc atc cgc ttc atg aac caa atc gac gag act gcg 624 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Asp Glu Thr Ala 170 175 180 aag gcg tca aac tac gag cca caa atg tgg aac gac tct atc aca cca 672 Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 gag ggc atc caa aac ctt gac cgc tca ttc agc atc ctt tac tgg aag 720 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 caa tct act ctt agc tct ggt gcg caa ggc ctt gac gta caa aac ttc 768 Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Ala Gln Gly Leu Asp Val Gln Asn Phe 220 225 230 gag gag aag ggc ttc tct gtt tac aac tac aat gcg tac tct ctt tac 816 Glu Glu Lys Gly Phe Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 ttc ctt cct tct aca cgc ttc act cag gag gac atc acg gag caa atc 864 Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 gac tac atg aag tgg gcg tat gcg tac aac aag ttc ttc tac atc tca 912 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 gac tac tac aag caa gta gac acg agc aac gta aag ggc agc tca ctt 960 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 gtt ttc tgg ggt gag cac gcg aac gac ctt tct caa gag ggc ctt ctt 1008 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 gag caa gag aag cca ctt atc caa aac ttc ctt tct ctt 1047 Glu Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Ser Leu 315 320 <210> 6 <211> 349 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 6 Met Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe -25 -20 -15 -10 Leu Thr Met Ala Asn Thr Ala Gln Ala Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile -5 -1 1 5 Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala 10 15 20 Ile Val Asp Glu Ile Asn Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His 25 30 35 Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln 40 45 50 55 Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu 60 65 70 Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Met Val Ile Pro Asp 75 80 85 Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly Trp Leu Asn Val Met Lys Glu 90 95 100 Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp 105 110 115 Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Ala Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln 120 125 130 135 Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly 140 145 150 Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala 155 160 165 His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met Asn Gln Ile Asp Glu Thr Ala 170 175 180 Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro 185 190 195 Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys 200 205 210 215 Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Ala Gln Gly Leu Asp Val Gln Asn Phe 220 225 230 Glu Glu Lys Gly Phe Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr 235 240 245 Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile 250 255 260 Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser 265 270 275 Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu 280 285 290 295 Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu 300 305 310 Glu Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn Phe Leu Ser Leu 315 320 <210> 7 <211> 324 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 7 Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr 1 5 10 15 Ser Ile Lys Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly 20 25 30 Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile 35 40 45 Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Ala Tyr 50 55 60 Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg 65 70 75 80 Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly 85 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300 Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn 305 310 315 320 Phe Leu Gly Leu <210> 8 <211> 324 <212> PRT <213> Terribacillus goriensis <400> 8 Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr 1 5 10 15 Ser Ile Glu Thr Leu Lys Ser Ile Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly 20 25 30 Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Arg Tyr Ala Ile 35 40 45 Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Gly Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr 50 55 60 Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg 65 70 75 80 Asp Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly 85 90 95 Trp Leu Asn Ile Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile 100 105 110 Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Val 115 120 125 Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe 130 135 140 Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp 145 150 155 160 Glu Val Pro Gly Ser Gly Val His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met 165 170 175 Asn Gln Ile Ala Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Lys Pro Gln Met 180 185 190 Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser 195 200 205 Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln 210 215 220 Gly Leu Asp Val Gln Asp Phe Glu Glu Asn Gly Leu Ser Val Tyr Asn 225 230 235 240 Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ala Thr Arg Phe Thr Gln 245 250 255 Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr 260 265 270 Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser 275 280 285 Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp 290 295 300 Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Lys Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn 305 310 315 320 Phe Leu Gly Leu <210> 9 <211> 324 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 9 Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr 1 5 10 15 Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile Val Asp Glu Ile Asn Ala Asn Gly 20 25 30 Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile 35 40 45 Ala Ser Glu Phe Leu Gly Gln Asn Ser Glu Asn Pro Asn Ser Thr Tyr 50 55 60 Leu Thr Lys Lys Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg 65 70 75 80 Asn Ile Met Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly 85 90 95 Trp Leu Asn Val Met Lys Glu Lys Asp Ser Gly Leu Tyr Thr Asp Ile 100 105 110 Val Thr Asp Tyr Ser Glu Asp Thr Leu Asp Tyr His Asn Asn Ala Ala 115 120 125 Ala Leu Tyr Thr Ala Asn Gln Leu Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe 130 135 140 Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp 145 150 155 160 Glu Val Pro Gly Ser Gly Ala His Gln Thr Asp Phe Ile Arg Phe Met 165 170 175 Asn Gln Ile Asp Glu Thr Ala Lys Ala Ser Asn Tyr Glu Pro Gln Met 180 185 190 Trp Asn Asp Ser Ile Thr Pro Glu Gly Ile Gln Asn Leu Asp Arg Ser 195 200 205 Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln Ser Thr Leu Ser Ser Gly Ala Gln 210 215 220 Gly Leu Asp Val Gln Asn Phe Glu Glu Lys Gly Phe Ser Val Tyr Asn 225 230 235 240 Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Thr Arg Phe Thr Gln 245 250 255 Glu Asp Ile Thr Glu Gln Ile Asp Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr 260 265 270 Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Gln Val Asp Thr Ser 275 280 285 Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Val Phe Trp Gly Glu His Ala Asn Asp 290 295 300 Leu Ser Gln Glu Gly Leu Leu Glu Gln Glu Lys Pro Leu Ile Gln Asn 305 310 315 320 Phe Leu Ser Leu <210> 10 <211> 324 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 10 Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr 1 5 10 15 Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly 20 25 30 Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile 35 40 45 Ala Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser Ser Glu Asn Thr Asn Asn Thr Tyr 50 55 60 Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys 65 70 75 80 Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly 85 90 95 Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile 100 105 110 Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val 115 120 125 Ala Leu Asp Thr Val Asn 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Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln 210 215 220 Ser Leu Glu Val Gln Asp Phe Glu Asp Trp Asp Phe Pro Val Tyr Asn 225 230 235 240 Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe Leu Pro Ser Ile Arg Phe Thr Asp 245 250 255 Glu Asp Ile Thr Glu Gln Met Asn Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr 260 265 270 Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp Tyr Tyr Lys Ser Val Asp Ala Ser 275 280 285 Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp 290 295 300 Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu Gln Glu Leu Pro Leu Ile Lys Lys 305 310 315 320 Phe Leu Ser Leu <210> 12 <211> 1047 <212> DNA <213> Terribacillus saccharophilus <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(72) <220> <221> mat_peptide <222> (73)..(1044) <400> 12 ttg ttt aaa att ctt tcc att aca gca ctt ggt atg att cta ttt ctg 48 Leu Phe Lys Ile Leu Ser Ile Thr Ala Leu Gly Met Ile Leu Phe Leu -20 -15 -10 act atg tcg aat aca gtt caa gcc cag gat caa gaa aaa gga att aca 96 Thr Met Ser Asn Thr Val Gln Ala Gln Asp Gln Glu Lys Gly Ile Thr -5 -1 1 5 atc gat att tcg agg aaa cac tat act gtt gaa aca ctg aaa agc ctt 144 Ile Asp Ile Ser Arg Lys His Tyr Thr Val Glu Thr Leu Lys Ser Leu 10 15 20 gta gat gaa ata agc tat aat ggc ggg aac tac gta cag ctg cat ttt 192 Val Asp Glu Ile Ser Tyr Asn Gly Gly Asn Tyr Val Gln Leu His Phe 25 30 35 40 tcc gat aat gag aat tat gct ata gct tct gaa tat ctt ggt cag agc 240 Ser Asp Asn Glu Asn Tyr Ala Ile Ala Ser Glu Tyr Leu Gly Gln Ser 45 50 55 agt gag aat acc aat aat aca tat ttg acg aaa aat gaa ctt cta tca 288 Ser Glu Asn Thr Asn Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Asn Glu Leu Leu Ser 60 65 70 tta ata gca tat agt aat gat aaa gat ata ctg gtc att cct gat att 336 Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Lys Asp Ile Leu Val Ile Pro Asp Ile 75 80 85 gat ctg ccg gcg cac tcc aag ggg tgg ctg gaa tta atc aaa aag aaa 384 Asp Leu Pro Ala His Ser Lys Gly Trp Leu Glu Leu Ile Lys Lys Lys 90 95 100 gat gtg aag tta tat aat gac atc gta acg gat tac agc gaa gag aca 432 Asp Val Lys Leu Tyr Asn Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Glu Glu Thr 105 110 115 120 ctg gat tat tat gat aat aga gtc gca ttg gat act gtg aat cag ctg 480 Leu Asp Tyr Tyr Asp Asn Arg Val Ala Leu Asp Thr Val Asn Gln Leu 125 130 135 ttg gat gaa gtg ctt gat ttg ttt tat cag cca aaa ttc gaa gga aaa 528 Leu Asp Glu Val Leu Asp Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Glu Gly Lys 140 145 150 caa aga ata gtg ctt ggc ggg gat gaa gta tcg gga agt gaa gtg cat 576 Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Ser Gly Ser Glu Val His 155 160 165 cag ttg gat ttt att gat ttt atg aat cag att gcc agt aca gtc aaa 624 Gln Leu Asp Phe Ile Asp Phe Met Asn Gln Ile Ala Ser Thr Val Lys 170 175 180 gaa agc aaa tat gaa ccg caa atg tgg aat gac agc atc acg tca gaa 672 Glu Ser Lys Tyr Glu Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ser Glu 185 190 195 200 gga ata gcg aac ttg gac gat agc ttt tcc atc ctc tat tgg cag caa 720 Gly Ile Ala Asn Leu Asp Asp Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Gln Gln 205 210 215 agt aca ctt tcc agc gga gaa gaa agc ttg aat gtg gag gac ttt gaa 768 Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu Ser Leu Asn Val Glu Asp Phe Glu 220 225 230 aac tgg ggt ttc tcc gta tat aac tat aat gca tat tct ttg tac ttc 816 Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe 235 240 245 tta cca tca aac ggg ttt aca cag gaa gat atc aat gag cag atg gat 864 Leu Pro Ser Asn Gly Phe Thr Gln Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp 250 255 260 tat atg aat tgg gct tat gcg cat aat aaa ttt ttc tat att tca gat 912 Tyr Met Asn Trp Ala Tyr Ala His Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp 265 270 275 280 tac tat cat gcg gtg gaa act tct aat gta aaa ggt tca agt ctg acc 960 Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr 285 290 295 ttt tgg ggc gaa cat gca act gac ttg agc caa aag aaa tta tta aag 1008 Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp Leu Ser Gln Lys Lys Leu Leu Lys 300 305 310 caa gag ctg cct ttg ata aga cat tat ctg aac ttg taa 1047 Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His Tyr Leu Asn Leu 315 320 <210> 13 <211> 348 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 13 Leu Phe Lys Ile Leu Ser Ile Thr Ala Leu Gly Met Ile Leu Phe Leu -20 -15 -10 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Asp Asp Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Gln Gln 205 210 215 Ser Thr Leu Ser Ser Gly Glu Glu Ser Leu Asn Val Glu Asp Phe Glu 220 225 230 Asn Trp Gly Phe Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe 235 240 245 Leu Pro Ser Asn Gly Phe Thr Gln Glu Asp Ile Asn Glu Gln Met Asp 250 255 260 Tyr Met Asn Trp Ala Tyr Ala His Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp 265 270 275 280 Tyr Tyr His Ala Val Glu Thr Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr 285 290 295 Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp Leu Ser Gln Lys Lys Leu Leu Lys 300 305 310 Gln Glu Leu Pro Leu Ile Arg His Tyr Leu Asn Leu 315 320 <210> 14 <211> 1047 <212> DNA <213> Terribacillus saccharophilus <220> <221> CDS <222> (1)..(1044) <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(72) <220> <221> mat_peptide <222> (73)..(1044) <400> 14 ttg att aaa ttt ctt tct att aca aca gtt agt ata ctc tta ttt cta 48 Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe Leu -20 -15 -10 act atg gcg aat aca gta cat gca aag gat caa gag aaa ggg att tca 96 Thr Met Ala Asn Thr Val His Ala Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Ser -5 -1 1 5 atc gat att tcg aga aaa tat tat tct atc gga aca tta aaa gca att 144 Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile 10 15 20 ata gat gaa ata agt gca aat ggc gga gac tac tta cag ctg cat ttt 192 Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe 25 30 35 40 tca gat aat gag agc tat gca att gct tct gac tat ctt ggt cag atc 240 Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Asp Tyr Leu Gly Gln Ile 45 50 55 agt gat act cct aac aat aca tac tta acg aaa aat gat ctt tta tca 288 Ser Asp Thr Pro Asn Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Asn Asp Leu Leu Ser 60 65 70 ctt ata gca tat agc aat gat aga aat ata ctg atc att ccc gat atg 336 Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Leu Ile Ile Pro Asp Met 75 80 85 gat cta cct gcg cat tcc aga ggc tgg ttg gag tta atg aaa gtg aaa 384 Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly Trp Leu Glu Leu Met Lys Val Lys 90 95 100 gat aga gaa tta tat act gac att gta acg gat tac agt aac gag aca 432 Asp Arg Glu Leu Tyr Thr Asp Ile Val 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Gly Ala Gln Ser Leu Glu Val Gln Asp Phe Glu 220 225 230 gac tgg gat ttt ccc gta tat aac tat aat gca tat tct tta tat ttc 816 Asp Trp Asp Phe Pro Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe 235 240 245 tta cct tcc atc cgt ttt acc gat gaa gat ata aca gag cag atg aac 864 Leu Pro Ser Ile Arg Phe Thr Asp Glu Asp Ile Thr Glu Gln Met Asn 250 255 260 tat atg aaa tgg gct tat gca tat aat aaa ttt ttc tat att tca gat 912 Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp 265 270 275 280 tac tat aag tcg gtg gac gca tct aac gta aaa ggg tct agc ttg acc 960 Tyr Tyr Lys Ser Val Asp Ala Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr 285 290 295 ttt tgg ggt gaa cac gca act gac tta agc caa gag gaa ttg ctt gag 1008 Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu 300 305 310 caa gaa ctg cct tta ata aaa aaa ttc tta agc tta taa 1047 Gln Glu Leu Pro Leu Ile Lys Lys Phe Leu Ser Leu 315 320 <210> 15 <211> 348 <212> PRT <213> Terribacillus saccharophilus <400> 15 Leu Ile Lys Phe Leu Ser Ile Thr Thr Val Ser Ile Leu Leu Phe Leu -20 -15 -10 Thr Met Ala Asn Thr Val His Ala Lys Asp Gln Glu Lys Gly Ile Ser -5 -1 1 5 Ile Asp Ile Ser Arg Lys Tyr Tyr Ser Ile Gly Thr Leu Lys Ala Ile 10 15 20 Ile Asp Glu Ile Ser Ala Asn Gly Gly Asp Tyr Leu Gln Leu His Phe 25 30 35 40 Ser Asp Asn Glu Ser Tyr Ala Ile Ala Ser Asp Tyr Leu Gly Gln Ile 45 50 55 Ser Asp Thr Pro Asn Asn Thr Tyr Leu Thr Lys Asn Asp Leu Leu Ser 60 65 70 Leu Ile Ala Tyr Ser Asn Asp Arg Asn Ile Leu Ile Ile Pro Asp Met 75 80 85 Asp Leu Pro Ala His Ser Arg Gly Trp Leu Glu Leu Met Lys Val Lys 90 95 100 Asp Arg Glu Leu Tyr Thr Asp Ile Val Thr Asp Tyr Ser Asn Glu Thr 105 110 115 120 Leu Asp Tyr His Asn Asn Thr Asp Ala Leu Asn Thr Ala Asn Gln Leu 125 130 135 Leu Asn Glu Ile Leu Glu Leu Phe Tyr Gln Pro Lys Phe Ala Gly Lys 140 145 150 Gln Arg Ile Val Leu Gly Gly Asp Glu Val Pro Gly Ser Glu Ile His 155 160 165 Gln Leu Asp Phe Ile Arg Phe Ile Asn Gln Ile Ala Ser Thr Ala Lys 170 175 180 Ala Ser Asn Tyr Ala Pro Gln Met Trp Asn Asp Ser Ile Thr Ala Glu 185 190 195 200 Gly Ile Gln Asn Leu Asp Lys Ser Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Lys Gln 205 210 215 Ser Thr Leu Ser Asn Gly Ala Gln Ser Leu Glu Val Gln Asp Phe Glu 220 225 230 Asp Trp Asp Phe Pro Val Tyr Asn Tyr Asn Ala Tyr Ser Leu Tyr Phe 235 240 245 Leu Pro Ser Ile Arg Phe Thr Asp Glu Asp Ile Thr Glu Gln Met Asn 250 255 260 Tyr Met Lys Trp Ala Tyr Ala Tyr Asn Lys Phe Phe Tyr Ile Ser Asp 265 270 275 280 Tyr Tyr Lys Ser Val Asp Ala Ser Asn Val Lys Gly Ser Ser Leu Thr 285 290 295 Phe Trp Gly Glu His Ala Thr Asp Leu Ser Gln Glu Glu Leu Leu Glu 300 305 310 Gln Glu Leu Pro Leu Ile Lys Lys Phe Leu Ser Leu 315 320 <210> 16 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Bacillus clausii signal peptide <400> 16 Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile 1 5 10 15 Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala 20 25 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> His-tag <400> 17 His His His His His His Pro Arg 1 5 <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> motif <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa = any natural amino acids <400> 18 Gly Xaa Asp Glu 1 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> motif <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa = E (Glu) or Q (Gln) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa = N (Asn) or R (Arg) or S (Ser) or H (His) or A (Ala) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa = Y (Tyr) or V (Val) or F (Phe) or L (Leu) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa = A(Ala) or G(Gly) or S (Ser) or T (Thr) or C (Cys) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa = I (Ile) or V (Val) or L (Leu) or F (Phe) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa = E (Glu) or A (Ala) or Q (Gln) or Y (Tyr) or N (Asn) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa = S (Ser) or N (Asn) <400> 19 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> motif <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa = V (Val) or I (Ile) or M (Met) 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(4)..(4) <223> Xaa = D (Asp) or R (Arg) <400> 24 Asn Leu Asp Xaa Ser 1 5

Claims (10)

  1. 헥소사미니다제 활성을 갖는 적어도 0.001 ppm 폴리펩티드를 포함하는 세정 조성물이며, 여기서 폴리펩티드는 서열식별번호: 7, 8, 9, 10 및 11에 제시된 성숙 폴리펩티드에 대해 적어도 60% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 조성물은
    (a) 고체, 바람직하게는 과립상, 세탁 세제 조성물이고, 추가로
    (a1) 적어도 1종의 제올라이트 빌더를, 바람직하게는 10 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 20-30 wt.-%의 양으로;
    (a2) 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.4 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
    (a3) 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 100 내지 5000 ppb, 보다 바람직하게는 1000 내지 2000 ppb의 활성 효소의 양으로; 및
    (a4) 적어도 1종의 중합체, 바람직하게는 폴리비닐피롤리돈 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 0.3 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (b) 고체 세탁 세제 조성물이고, 추가로
    (b1) 적어도 1종의 실리케이트 빌더를, 바람직하게는 2 내지 20 wt.-%, 보다 바람직하게는 5-10 wt.-%의 양으로;
    (b2) 임의로 카르복시메틸셀룰로스를, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 4 wt.-%의 양으로;
    (b3) 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 0.1 내지 100 ppm, 보다 바람직하게는 0.1 내지 10 ppm의 활성 효소의 양으로;
    (b4) 임의로 적어도 1종의 방오 중합체를, 0.1 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1.0 wt.-%의 양으로; 및
    (b5) 표백제, 표백 활성화제 및 표백 촉매를 포함하는 적어도 1종의 표백 시스템을, 바람직하게는 0.1 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 30 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (c) 액체 세탁 세제 조성물이고, 추가로
    (c1) 적어도 1종의 계면활성제, 바람직하게는 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 3 내지 15 wt.-%의 양으로;
    (c2) 임의로 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.25 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
    (c3) 임의로 적어도 1종의 추가의 효소, 바람직하게는 셀룰라제를, 바람직하게는 0.001 내지 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.6 wt.-%의 효소 조성물의 양으로; 및
    (c4) 임의로 적어도 1종의 유기 용매, 바람직하게는 글리세롤을, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (d) 단위 투여 형태, 바람직하게는 수용성 필름을 포함하는 파우치의 액체 세탁 세제이고, 추가로
    (d1) 물을, 최대 20 wt.-%, 바람직하게는 5 내지 15 wt.-%의 양으로;
    (d2) 임의로 적어도 1종의 고미제, 바람직하게는 벤질디에틸(2,6-크실릴카르바모일)-메틸암모늄벤조에이트를, 바람직하게는 0.00001 내지 0.04 wt.-%의 양으로;
    (d3) 임의로 적어도 1종의 광학 증백제를, 바람직하게는 0.01 내지 2 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 1 wt.-%의 양으로; 및
    (d4) 임의로 적어도 1종의 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 7 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (e) 직물 피니셔이고, 추가로
    (e1) 적어도 1종의 연화 실리콘, 바람직하게는 아미노-관능화 실리콘을, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
    (e2) 바람직하게는 마이크로캡슐 내에 적어도 부분적으로 캡슐화되고, 보다 바람직하게는 멜라민-포름알데히드 마이크로캡슐 내에 적어도 부분적으로 캡슐화된 적어도 1종의 퍼퓸을, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 1 wt.-%의 양으로;
    (e3) 임의로 폴리쿼터늄 10을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로;
    (e4) 임의로 폴리쿼터늄 37을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로;
    (e5) 임의로 식물계 에스테르쿼트, 바람직하게는 카놀라계 또는 팜계 에스테르쿼트를, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로; 및
    (e6) 임의로 아디프산을, 0.1 내지 20 wt.-%, 바람직하게는 0.1 내지 13 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (f) 바람직하게는 pH가 6 미만인 산성 세정제이고, 추가로
    (f1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
    (f2) 바람직하게는 산, 보다 바람직하게는 HCl 및 포름산으로부터 선택된 적어도 1종의 산성 살생물제; 및
    (f3) 적어도 1종의 방오, 발수 또는 물 확산 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (g) 바람직하게는 pH가 6.0 내지 7.5인 중성 세정제이고, 추가로
    (g1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로;
    (g2) 바람직하게는 4급 암모늄 화합물 및 알콜로부터 선택된 적어도 1종의 살생물제; 및
    (g3) 적어도 1종의 방오, 발수 또는 물 확산 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 3 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (h) 바람직하게는 pH가 7.5 초과인 알칼리성 세정제이고, 추가로
    (h1) 식물계 또는 생물계 계면활성제를, 바람직하게는 각각 0.1 내지 5, 보다 바람직하게는 각각 0.1 내지 2 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (i) 수동 식기세척제, 바람직하게는 액체 수동 식기세척제이고, 추가로
    (i1) 적어도 1종의 음이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 40 wt.-%, 보다 바람직하게는 5 내지 30 wt.-%의 양으로;
    (i2) 적어도 1종의 양쪽성 계면활성제, 바람직하게는 베타인을, 바람직하게는 0.1 내지 25 wt.-%, 보다 바람직하게는 1 내지 15 wt.-%의 양으로;
    (i3) 적어도 1종의 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 25 wt.-%, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로;
    (i4) 바람직하게는 프로테아제, 아밀라제 및 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 추가의 효소를, 바람직하게는 최대 1 wt.-%, 보다 바람직하게는 최대 0.6 wt.-%의 효소 조성물의 양으로 포함하거나; 또는
    (j) 자동 식기세척 조성물이고, 추가로
    (j1) 시트레이트, 아미노카르복실레이트 및 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 빌더를, 바람직하게는 5 내지 30 wt.-%, 보다 바람직하게는 10 내지 20 wt.-%의 양으로;
    (j2) 적어도 1종의 포스포네이트 빌더를, 바람직하게는 0.1 내지 5 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.4 내지 1.5 wt.-%의 양으로;
    (j3) 적어도 1종의 비이온성 계면활성제를, 바람직하게는 0.1 내지 10 wt.-%, 보다 바람직하게는 1 내지 5 wt.-%의 양으로;
    (j4) 표백제, 표백 활성화제 및 표백 촉매를 포함하는 적어도 1종의 표백 시스템을, 바람직하게는 0.1 내지 50 wt.-%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 30 wt.-%의 양으로;
    (j5) 술포중합체, 양이온성 중합체 및 폴리아크릴레이트로부터 선택된 적어도 1종의 중합체를, 바람직하게는 0.01 내지 15 wt.-%, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로 포함하거나; 또는
    (k) 추가로
    (k1) 적어도 1종의 술포중합체를, 바람직하게는 1 내지 15, 보다 바람직하게는 2 내지 10 wt.-%의 양으로 포함하고, 이는 바람직하게는 식기세척, 보다 바람직하게는 자동 식기세척 조성물이거나; 또는
    (l) 추가로 프로바이오틱스, 바람직하게는 미생물, 포자 또는 그의 조합으로부터 선택된 적어도 1종의 보조 성분을 포함하거나; 또는
    (m) 단위 투여 형태, 바람직하게는 파우치이고, 적어도 2개, 바람직하게는 2, 3, 4 또는 5개의 개별 구획을 포함하거나; 또는
    (n) 포스페이트-무함유 조성물인
    조성물.
  2. 제1항에 있어서, 폴리펩티드가 N-아세틸글루코사미니다제 활성 및/또는 β-N-아세틸글루코사미니다제 활성을 갖는 것인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 폴리펩티드가 모티프(들) GXDE (서열식별번호: 18), [EQ][NRSHA][YVFL][AGSTC][IVLF][EAQYN][SN] (서열식별번호: 19), [VIM][LIV]G[GAV]DE[VI][PSA] (서열식별번호: 20), WND[SQR][IVL][TLVM] (서열식별번호: 21), QSTL (서열식별번호: 22), NKFFY (서열식별번호: 23), NLD[DR]S (서열식별번호: 24) 중 1개 이상을 포함하는 것인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 7, 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10 및 서열식별번호: 11에 제시된 폴리펩티드에 대해 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 것인 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 7, 또는 서열식별번호: 2의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 8, 또는 서열식별번호: 4의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 9, 또는 서열식별번호: 6의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 서열식별번호: 10, 또는 서열식별번호: 13의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어지거나, 또는 서열식별번호: 11, 또는 서열식별번호: 15의 성숙 폴리펩티드를 포함하거나 또는 이로 이루어진 것인 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 세탁 또는 식기 세척 조성물인 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 (a), (b), (d), (k), (l), (m) 및 (n)으로부터 선택되고, 추가로 최대 50 wt%, 약 5 wt% 내지 약 40 wt%, 약 5 wt% 내지 약 30 wt%, 약 5 wt% 내지 약 20 wt% 또는 약 5 wt% 내지 약 10 wt%의 적어도 1종의 계면활성제를 포함하고, 여기서 계면활성제는 바람직하게는 음이온성 및/또는 비이온성인 조성물.
  8. 물품의 심층-세정을 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물의 용도이며,
    여기서 물품은 텍스타일인 용도.
  9. a) 물품을 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 세정 조성물을 포함하는 세척액에 노출시키는 단계;
    b) 임의로 적어도 1회의 세척 사이클을 완료하는 단계; 및
    c) 임의로 물품을 헹구는 단계
    를 포함하는 물품을 세정, 바람직하게는 세탁하는 방법이며,
    여기서 물품은 텍스타일 또는 경질 표면인 방법.
  10. (i) 물품의 점착성을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위해;
    (ii) 물품 상의 얼룩을 전처리하기 위해;
    (iii) 세척 사이클 동안 오염의 재침착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위해;
    (iv) 물품에의 오염의 부착을 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위해;
    (v) 물품의 백색도를 유지하거나, 개선시키기 위해; 또는
    (vi) 물품으로부터 악취를 방지하거나, 감소시키거나, 제거하기 위해;
    물품을 세정, 바람직하게는 심층 세정, 또는 컨디셔닝하기 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 조성물의 용도이며,
    여기서 물품은 텍스타일인 용도.
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