CN111417725A - 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有甘露聚糖酶活性、催化结构域和碳水化合物结合模块的多肽，以及编码这些多肽、催化结构域和碳水化合物结合模块的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及生产和使用这些多肽、催化结构域、以及碳水化合物结合模块的方法。

Description

具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
序列表的引用
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发明背景
技术领域
本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及产生和使用这些多肽的方法。
背景技术
甘露聚糖是具有β-1,4-连接的D-吡喃甘露糖基残基的主链的多糖，它可以包含半乳糖或乙酰基取代，并且可以在主链中具有葡萄糖残基。参与甘露聚糖降解的主要酶类型是内切-1,4-β-甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)，它水解在甘露聚糖主链中的内部糖苷键。
甘露聚糖是占软木中高达25％的木材干重的一类半纤维素，但是还发现于其他植物材料中，尤其是各种种子中。含甘露聚糖的瓜尔胶在许多食品中用作稳定剂。
因此，在其中需要降解甘露聚糖的应用中使用内切甘露聚糖酶可能是有利的。其中可以使用甘露聚糖酶的实例是在去污剂中，以去除含有甘露聚糖的污渍；在由软木(Várnai等人,(2011)“Synergistic action of xylanase and mannanase improves thetotal hydrolysis of softwood[木聚糖酶和甘露聚糖酶的协同作用改进了软木的完全水解]”,Bioresource tech.[生物资源技术],102(19),第9096–104页)和棕榈仁滤饼(
Figure BDA0002432920140000011
等人,(2010)“Production of ethanol and feed by high dry matterhydrolysis and fermentation of palm kernel press cake[通过棕榈仁滤饼的高干物质水解和发酵生产乙醇和饲料]”,Applied Biochem.Biotech.[应用生物化学和生物技术],161(1-8),第318–32页)生产生物乙醇中，以用于改进动物饲料(Cai等人,(2011),“Acidicβ-mannanase from Penicillium pinophilum C1:Cloning,characterizationand assessment of its potential for animal feed application[来自嗜松青霉C1的酸性β-甘露聚糖酶：克隆、表征及对其用于动物饲料应用的潜力的评估]”,J.Biosci.Bioeng.[生物科学与生物工程杂志],112(6),第551–557页)；以及在咖啡提取物的水解中(Nunes等人,(2006),“Characterization of Galactomannan Derivatives inRoasted Coffee Beverages[烘焙咖啡饮料中半乳甘露聚糖衍生物的表征]”,J.Agricultural Food Chem.[农业化学与食品化学杂志],54(9),第3428–3439页)。
根据CAZy(www.cazy.org)，内切-1,4-β-甘露聚糖酶已经发现于糖苷水解酶家族5、26和113中。本发明提供了具有甘露聚糖酶活性的糖苷水解酶家族26中的多肽和编码这些多肽的多核苷酸，这些多肽在降解不同类型的甘露聚糖方面有高度活性并且因此可以用于前述应用中。
发明内容
本发明涉及选自下组的具有甘露聚糖酶活性的多肽，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少91％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且包含在1至29位置中的一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
本发明进一步涉及包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽的洗涤剂组合物，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少81％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且包含在1至50位置中的一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
本发明进一步涉及包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含如上定义的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且涉及液体组合物，该液体组合物包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽如上定义。本发明进一步涉及该肽在各种应用中的用途，例如降解甘露聚糖，衣物洗涤，洗涤，清洁，饲料，食品，提取咖啡，降解纤维素材料，生产发酵产物、编码本发明多肽的分离的多核苷酸、重组宿主细胞，以及产生本发明多肽的方法。
序列表概述
SEQ ID NO:1是天然的GH26甘露聚糖酶的DNA序列，该甘露聚糖酶包含如从又松类芽孢杆菌(Paenibacillus woosongensis)菌株中分离的CBM35结构域。
SEQ ID NO:2是如从SEQ ID NO:1推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3是分离自又松类芽孢杆菌菌株的、具有CBM35结构域的成熟GH26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4是分离自又松类芽孢杆菌菌株的、缺少CBM35结构域的截短的GH26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5是包含CBM35的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，其中天然分泌信号被去除，并且6xHis标签直接添加在蛋白质的C-末端。
SEQ ID NO:6是如从SEQ ID NO:5推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7是分离自又松类芽孢杆菌菌株的、缺少CBM35结构域的截短的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，并且6xHis标签直接添加在蛋白质的C-末端。
SEQ ID NO:8是如从SEQ ID NO:7推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9是天然的GH26甘露聚糖酶的DNA序列，该甘露聚糖酶包含如从衣氏类芽孢杆菌(Paenibacillus ihumii)菌株中分离的CBM35结构域。
SEQ ID NO:10是如从SEQ ID NO:9推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11是分离自衣氏类芽孢杆菌菌株的、具有CBM35结构域的成熟GH26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12是来自衣氏类芽孢杆菌菌株的、包含CBM35结构域的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，其中天然分泌信号被地衣芽孢杆菌分泌信号替代，并且HPHPHPHP标签直接添加在蛋白质的C-末端。
SEQ ID NO:13是如从SEQ ID NO:12推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:14是克劳氏芽孢杆菌分泌信号的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15是HPHPHPHP标签。
SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18是通过EDMAN降解来自又松类芽孢杆菌菌株的GH26甘露聚糖酶而确定的N-末端序列。
定义
根据详细描述，以下缩写和定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“该(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。因此，例如，提及“一种酶”时包括多种此类酶，且提及“该剂量”时包括本领域技术人员已知的一种或多种剂量及其等同物等。
辅助活性9：术语“辅助活性9”或“AA9”意指分类为溶解性多糖单加氧酶(Quinlan等人,2011,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]208:15079-15084；Phillips等人,2011,ACS Chem.Biol.[ACS化学生物学]6:1399-1406；Lin等人,2012,Structure[结构]20:1051-1061)的多肽。根据Henrissat,1991,Biochem.J.[生物化学杂志]280:309-316以及Henrissat和Bairoch,1996,Biochem.J.[生物化学杂志]316:695-696，AA9多肽之前被分类为糖苷水解酶家族61(GH61)。
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
生物膜：术语“生物膜”意指在表面上，例如纺织品、餐具或硬表面上，细胞彼此粘附在一起的任何群组的微生物。这些粘附细胞经常包埋在细胞外聚合物(EPS)的自身产生的基质内。生物膜EPS是一般由细胞外DNA、蛋白质、和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一有机体的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。
生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个作用是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为，密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。
关于衣物洗涤生物膜生产细菌可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(Acinetobacter sp.)、气微菌属物种(Aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种(Brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(Microbacterium sp.)、滕黄微球菌(Micrococcusluteus)、假单胞菌属物种(Pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)以及寡养单胞菌属物种(Stenotrophomonas sp.)。
碳水化合物结合模块：术语“碳水化合物结合模块”意指提供碳水化合物结合活性的碳水化合物活性酶内的区域(Boraston等人,2004,Biochem.J.[生物化学杂志]383:769-781)。大多数已知的碳水化合物结合模块(CBM)是具有离散折叠的连续氨基酸序列。碳水化合物结合模块(CBM)典型地发现于酶的N-末端处或C-末端的端点处。已知一些CBM具有针对纤维素的特异性。在一个实施例中，该CBM是家族35CBM(Pfam PF16990)，如在TunnicliffeRB,Bolam DN,Pell G,Gilbert HJ,Williamson MP；J Mol Biol.[分子生物学杂志]2005；347:287-296中披露的那些。
催化结构域：术语“催化结构域”意指含有该酶的催化机构的酶的区域。
cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。初始的初级RNA转录物是mRNA的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，之后呈现为成熟的剪接的mRNA。
纤维素分解酶或纤维素酶：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，若干种)酶。此类酶包括一种或多种内切葡聚糖酶、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。用于测量纤维素分解酶活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解酶活性，以及(2)测量个体纤维素分解酶活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如在Zhang等人,2006,Biotechnology Advances[生物技术进展]24:452-481中所述的。可使用不溶性底物，包括沃特曼(Whatman)№1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉花、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解酶活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将沃特曼№1滤纸用作底物的滤纸测定。该测定是由国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)建立的(Ghose,1987,Pure Appl.Chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)。
可以通过测量在以下条件下，由一种或多种纤维素分解酶进行的纤维素材料水解期间，糖的产生/释放的增加来确定纤维素分解酶活性：与没有添加纤维素分解酶蛋白的对照水解相比，1-50mg的纤维素分解酶蛋白/g于预处理的玉米秸秆(PCS)中的纤维素(或其他预处理的纤维素材料)，在适合的温度(如40℃-80℃，例如50℃、55℃、60℃、65℃或70℃)和适合的pH(如4-9，例如，5.0、5.5、6.0、6.5或7.0)下持续3-7天。典型条件为：1ml反应，洗涤或未洗涤的PCS，5％不溶性固形物(干重)，50mM乙酸钠(pH5)，1mM MnSO4，50℃、55℃、或60℃，72小时，通过
Figure BDA0002432920140000061
HPX-87H柱(伯乐实验室有限公司，赫拉克勒斯，加州，美国)进行的糖分析。
嵌合多肽：术语“嵌合多肽”意指具有甘露聚糖酶活性的多肽，其组成是通过将来自具有甘露聚糖酶活性的一种多肽的氨基酸序列替换为一种或多种具有甘露聚糖酶活性的其他多肽的同源位置的氨基酸而产生的。
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由可读框确定，该可读框以起始密码子(例如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(例如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可为基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
洗涤剂组分：本文将术语“洗涤剂组分”定义为意指可以用于洗涤剂组合物中的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是表面活性剂、水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂(foam booster)、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。洗涤剂组合物可以包含一种或多种任何类型的洗涤剂组分。
洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(例如纺织品、餐具和硬表面)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品、餐具以及硬表面，用于家用清洁剂和工业清洁二者。这些术语涵盖经选择用于希望的具体类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁配制品，例如用于玻璃、木材、陶瓷以及金属台面和窗户；地毯清洁剂；炉灶清洁剂；织物清新剂；织物柔软剂；以及纺织品和衣物预去污剂(pre-spotter)，连同餐具洗涤剂)。除了包含本发明的GH9内切葡聚糖酶和/或本发明的黄原胶裂解酶之外，该洗涤剂组合物可以含有一种或多种另外的酶(如淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他的内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶及其组合物，或其任何混合物)和/或组分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶激活剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。
餐具洗涤：术语“餐具洗涤”是指所有形式的洗涤餐具，例如手动或自动化餐具洗涤。洗涤餐具包括但不限于清洁所有形式的餐用器皿，例如盘子、杯子、玻璃杯、碗、所有形式的刀具(如匙、刀、叉)、以及服务用具连同陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
餐具洗涤组合物：术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁硬表面的所有形式的组合物。本发明不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状DNA分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
片段：术语“片段”是指具有不存在于成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端的一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽或催化模块或碳水化合物结合模块；其中该片段具有甘露聚糖酶活性或碳水化合物结合活性。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少90％，例如SEQ ID NO:3的至少448个氨基酸、或SEQ ID NO:4的至少297个氨基酸、如SEQ ID NO:11的至少474个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少92％，例如SEQ ID NO:3的至少458个氨基酸、或SEQ ID NO:4的至少303个氨基酸、或SEQ ID NO:11的至少484个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少94％，例如SEQ IDNO:3的至少468个氨基酸、或SEQ ID NO:4的至少310个氨基酸、或SEQ ID NO:11的至少495个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少96％，例如SEQ ID NO:3的至少478个氨基酸、或SEQ ID NO:4的至少316个氨基酸、或SEQ ID NO:11的至少505个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少98％，例如SEQ ID NO:3的至少488个氨基酸、或SEQ ID NO:4的至少323个氨基酸、或SEQ ID NO:11的至少516个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少99％，例如SEQ ID NO:3的至少493个氨基酸、或SEQ IDNO:4的至少326个氨基酸、或SEQ ID NO:11的至少527个氨基酸。
融合多肽：术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明多核苷酸融合而产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。融合多肽可以进一步包含在两种多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，该位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物学与生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；以及Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]，13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能和遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[世界药物发现]4:35-48。
硬表面清洁：本文将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗、及刀具(例如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
半纤维素分解酶或半纤维素酶：术语“半纤维素分解酶”或“半纤维素酶”意指可对半纤维素材料进行水解的一种或多种(例如，若干种)酶。参见例如，Shallom和Shoham，Current Opinion In Microbiology[微生物学当前观点]，2003,6(3):219-228)。半纤维素酶是植物生物质降解中的关键组分。半纤维素酶的实例包括但不限于：乙酰甘露聚糖酯酶、乙酰木聚糖酯酶、阿拉伯聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、香豆酸酯酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶、葡糖醛酸酯酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、木聚糖酶、以及木糖苷酶。这些酶的底物(半纤维素)是支链和直链多糖的异质性组，这些多糖经由氢键与植物细胞壁中的纤维素微纤维相结合，从而将它们交联成稳健的网络。半纤维素还共价附接至木质素，从而与纤维素一起形成高度复杂的结构。半纤维素的可变结构和组织要求许多酶的协同作用以使其完全降解。半纤维素酶的催化模块是水解糖苷键的糖苷水解酶(GH)，或是水解乙酸或阿魏酸侧基团的酯键的碳水化合物酯酶(CE)。这些催化模块基于其一级序列的同源性，可以分配到GH和CE家族。一些家族(具有总体上类似的折叠)可以进一步分组为宗族(clan)，以字母标记(例如，GH-A)。在碳水化合物活性酶(CAZy)数据库中可得到这些以及其他碳水化合物活性酶的最翔实和最新的分类。可以根据Ghose和Bisaria,1987,Pure&AppI.Chem.[纯粹与应用化学]59:1739-1752，在适合的温度(如40℃-80℃，例如50℃、55℃、60℃、65℃或70℃)以及适合的pH(如4-9，例如5.0、5.5、6.0、6.5、或7.0)测量半纤维素分解酶活性。
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制过程中发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代、以及重组宿主细胞、分离的宿主细胞(例如分离的重组宿主细胞)、异源宿主细胞(例如，不是露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)宿主细胞的宿主细胞)。
杂合多肽：术语“杂合多肽”是指包含来自两个或更多个多肽的结构域的多肽，例如，来自一个多肽的结合结构域和来自另一个多肽的催化结构域。这些结构域可以在N-末端或C-末端融合。
分离的：术语“分离的”是指以在自然界中不存在的形式的物质或处于在自然界中不存在该物质的环境中的该物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质；(2)至少部分地从与它天然相关的一个或多个或所有天然存在的成分中去除的任何物质，包括但不限于：任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子；(3)相对于在自然界中发现的物质经过人为改变的任何物质；或(4)相对于与它天然相关的其他组分通过增加该物质的量(例如，在宿主细胞中的重组生产；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子)而改变的任何物质。
衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用包含本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗衣机进行或可以手动进行。
甘露聚糖酶：术语“甘露聚糖酶”意指具有催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖中的1,4-β-D-甘露糖苷键的水解的甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶活性(EC3.2.1.78)的多肽。甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶的别名是：1,4-β-D-甘露聚糖的甘露聚糖水解酶；内切-1,4-β-甘露聚糖酶；内切-β-1,4-甘露聚糖酶；β-甘露聚糖酶B；β-1,4-甘露聚糖4-甘露聚糖水解酶；内切-β-甘露聚糖酶；和β-D-甘露聚糖酶。出于本发明的目的，可使用如本文实例1中所述的还原端测定来确定甘露聚糖酶活性。在一个方面，本发明的这些多肽具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的成熟多肽的至少50％，例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的甘露聚糖酶活性。
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:3的氨基酸1至498。在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:4的氨基酸1至330。在一个方面，该成熟多肽是SEQ ID NO:11的氨基酸1至527。
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞以不同的方式加工多肽，且因此表达多核苷酸的一种宿主细胞当与表达相同多核苷酸的另一种宿主细胞相比时可产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的C-末端和/或N-末端氨基酸)。
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有甘露聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一个方面，该成熟多肽编码序列是SEQ ID NO:1的核苷酸91至1584或SEQ ID NO:9的核苷酸124至1704。SEQ ID NO:1的核苷酸1至90和SEQ ID NO:9的核苷酸1至123编码信号肽。
恶臭：术语“恶臭”意指在清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净，而没有附着在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，该化合物可以是微生物产生的。另一实例是附着至已经与人类或动物接触的物品的汗水或体味。恶臭的另一实例可以是来自多种香料的气味，例如附着至物品(例如一件纺织品)的咖喱或其他外来香料。测量物品附着恶臭的能力的一个方式是通过使用恶臭测定。
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成包含核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列引导该编码序列的表达。
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件包(The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选6.6.0版或更新版)的尼德尔程序中所实施的尼德曼-翁施算法(Needleman-Wunsch algorithm)(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：
(同一的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核苷酸序列之间的序列同一性，该算法如EMBOSS软件包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，Rice等人,2000,同上)(优选5.0.0版本或更新版本)的尼德尔程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：
(同一的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)
子序列：术语“子序列”意指使一个或多个(例如，若干个)核苷酸从成熟多肽编码序列的5’端和/或3’端缺少的多核苷酸，其中该子序列编码具有甘露聚糖酶活性的片段。
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物(woven)、牛仔布(denim)、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。这些纺织品可以是基于纤维素的，例如天然纤维素，包括棉布、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以是基于非纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物其以及纤维素基的和非纤维素基的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或几种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳香族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污迹的家用衣物。当使用术语织物或衣服时，旨在还包括广义术语纺织品。
变体：术语“变体”意指在一个或多个(若干个)位置处包含改变(即，一个或多个(若干个)氨基酸残基的取代、插入和/或缺失)的具有甘露聚糖酶活性的多肽。取代意指将占据某个位置的氨基酸替换为不同的氨基酸；缺失意指去除占据某个位置的氨基酸；并且插入意指邻近占据某个位置的氨基酸添加1-3个氨基酸。本发明的这些变体具有SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:11的多肽的至少50％，例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的甘露聚糖酶活性。
具体实施方式
具有甘露聚糖酶活性的多肽
在第一方面，本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:4具有至少91％，例如至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达29个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:4长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第一方面的延续中，本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的SEQ ID NO:4的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:4中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:4中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:4中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在第一方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:4的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
这些氨基酸变化可以具有次要性质，即不显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基或羧基末端延伸，如氨基末端甲硫氨酸残基；至多20-25个残基的小接头肽；或通过改变净电荷或另一功能来促进纯化的小延伸，如多组氨酸序列(poly-histidine tract)、抗原性表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及蛋氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。保守取代的其他实例是G至A；A至G、S；V至I、L、A、T、S；I至V、L、M；L至I、M、V；M至L、I、V；P至A、S、N；F至Y、W、H；Y至F、W、H；W至Y、F、H；R至K、E、D；K至R、E、D；H至Q、N、S；D至N、E、K、R、Q；E至Q、D、K、R、N；S至T、A；T至S、V、A；C至S、T、A；N至D、Q、H、S；Q至E、N、H、K、R。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每一残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的甘露聚糖酶活性进行测试以鉴别对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性部位还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学、电子衍射、或光亲和标记，结合对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见，例如de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生物化学学会联盟通讯]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
使用已知的诱变、重组和/或改组方法、随后进行相关的筛选程序可以做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，所述相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625中披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
该多肽可以是杂合多肽或融合多肽。
在第一方面的一个实施例中，本发明第一方面的多肽或变体进一步包含碳水化合物结合模块。在一个实施例中，该碳水化合物结合模块是家族35CBM。在另外的实施例中，本发明的第一方面的多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:3具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽、SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。在另外的实施例中，本发明的第一方面的多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽、SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
在第二方面，本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的多肽，这些多肽与SEQ ID NO:4具有至少87％，例如至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签(如SEQ ID NO:6)；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:3长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的SEQ ID NO:3的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ IDNO:3中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:3的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQID NO:11的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:11长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第二方面的延续中，本发明涉及具有甘露聚糖酶活性的SEQ ID NO:11的变体，该变体包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:11中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQID NO:11中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:11的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
包含具有甘露聚糖酶活性的多肽的洗涤剂组合物
在第三方面，本发明涉及洗涤剂组合物，其包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:4长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第三方面的延续中，本发明涉及洗涤剂组合物，其包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的变体，其中变体包含SEQ ID NO:4的在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ IDNO:4中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:4中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:4中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:3的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
在一个实施例中，本发明第三方面的多肽或变体进一步包含碳水化合物结合模块。在一个实施例中，该碳水化合物结合模块是家族35CBM。在另外的实施例中，本发明第一方面的多肽多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:3具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽、SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:11的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
在一个实施例中，本发明第三方面的多肽或变体进一步包含碳水化合物结合模块。在一个实施例中，该碳水化合物结合模块是家族35 CBM。在另外的实施例中，本发明的第一方面的多肽多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽、SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
在第四方面，本发明涉及洗涤剂组合物，其包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签(如SEQ ID NO:6)；包含SEQ ID NO 3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQID NO:3或SEQ ID NO:11长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或由其组成，或包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:3的氨基酸1至498或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第四方面的延续中，本发明涉及洗涤剂组合物，其包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的变体，其中变体包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:11中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
表面活性剂的实例以及优选的量和表面活性剂在下面的表面活性剂部分中讨论。
在第三或第四方面的任一部分的一个实施例中，该洗涤剂组合物可以进一步包含一种或多种选自下组的组分，该组由以下组成：水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂、漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂、酶稳定剂、酶激活剂、抗氧化剂、以及增溶剂。
在第三或第四方面的任一部分的一个实施例中，该洗涤剂组合物可以进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶。
包含具有甘露聚糖酶活性的多肽的颗粒
在第五方面，本发明涉及包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:4长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第五方面的延续中，本发明涉及包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含SEQ ID NO:4的变体，该变体具有甘露聚糖酶活性和在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:4中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:4中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:4中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:3或SEQID NO:11的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
在一个实施例中，本发明第五方面的多肽或变体进一步包含碳水化合物结合模块。在一个实施例中，该碳水化合物结合模块是家族35CBM。在另外的实施例中，本发明第一方面的多肽多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:2的成熟多肽、SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽、SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
在第六方面，本发明涉及包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签(如SEQ ID NO:6)；包含SEQ ID NO 3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第六方面的延续中，本发明涉及包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，该变体具有甘露聚糖酶活性和在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
如第五方面和第六方面中任一项所述的颗粒可以进一步包含一种或多种配制剂，如在下文配制品部分中所讨论的。优选的配制剂是甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
在第五或第六方面的任一部分的一个实施例中，该颗粒可以进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶。
包含具有甘露聚糖酶活性的多肽的液体配制品
在第七方面，本发明涉及液体组合物，其包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:4相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；包含SEQ IDNO:4的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQ ID NO:4长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第七方面的延续中，本发明涉及液体组合物，其包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的变体，其中变体包含SEQ ID NO:4的在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:4中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQID NO:4中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:4中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第二方面的任一部分的一个实施例中，该多肽(或变体)具有SEQ ID NO:3或SEQID NO:11的甘露聚糖酶活性的至少60％，例如至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％。
在一个实施例中，本发明第七方面的多肽或变体进一步包含碳水化合物结合模块。在一个实施例中，该碳水化合物结合模块是家族35CBM。在另外的实施例中，本发明第一方面的多肽多肽或变体包含催化结构域和CBM，并且与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:2的成熟多肽、SEQ ID NO:2的氨基酸1至498、或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸1至498或由其组成。
在第八方面，本发明涉及液体组合物，其包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。在一个实施例中，这些多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11相差多达50个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
在一个实施例中，该多肽优选地包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列或由其组成；包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的氨基酸序列以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签(如SEQ ID NO:6)；包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列以及1与10个氨基酸之间的N-末端和/或C-末端延伸；或者是其片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有SEQID NO:3或SEQ ID NO:11长度的至少90％，如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:2的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:10的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽包含SEQ IDNO:11的氨基酸1至527或由其组成。在一个实施例中，该多肽已经被分离。
在第八方面的延续中，本发明涉及液体组合物，其包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的变体，其中该变体包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中的一个或多个氨基酸取代、和/或一个或多个氨基酸缺失、和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合。在一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中包含一个或多个氨基酸取代和/或一个或多个氨基酸缺失和/或一个或多个氨基酸插入或其任何组合的位置的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另一个实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中的取代和/或缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在另外的实施例中，在SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11中取代(优选保守取代)的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在本发明的第一方面中描述了氨基酸改变和保守取代的实例。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)，更优选选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)或其任何组合。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含5％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选15％-75％的多元醇，更优选25％-70％的多元醇，更优选35％-65％的多元醇，或最优选40％-60％的多元醇。在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含5％-80％的多元醇，优选15％-75％的多元醇，更优选25％-70％的多元醇，更优选35％-65％的多元醇，或最优选40％-60％的多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)。在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含5％-80％的多元醇，优选15％-75％的多元醇，更优选25％-70％的多元醇，更优选35％-65％的多元醇，或最优选40％-60％的多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇和丙二醇(MPG)。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该配制品进一步包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该防腐剂选自下组，该组由以下组成：苯氧基乙醇、1,2-苯并噻唑啉-3(2H)-酮、山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、苯甲酸钾、甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、季铵盐(如BAC/ADBAC；烷基苄基氯化铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、西曲氯铵)、精油和有机酸或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选0.1％至0.5％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，优选0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选0.1％至0.5％w/w的防腐剂，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：苯氧基乙醇、1,2-苯并噻唑啉-3(2H)-酮、山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该甘露聚糖酶的剂量为0.0001％至10％w/w的液体配制品之间，如0.001％至0.1％w/w多肽、0.01％至1.0％w/w多肽或0.1％至10％w/w多肽。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种配制剂(例如本文描述的那些)，优选地选自以下列表的配制剂，该列表由以下组成：甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、PVA、乙酸盐和磷酸盐，优选地选自以下列表，该列表由以下组成：1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙。
在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品可以进一步包含一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶。
具有甘露聚糖酶活性的多肽的来源
本发明的具有甘露聚糖酶活性的多肽可以从任何属的微生物获得。出于本发明的目的，如本文结合给定来源使用的术语“从……获得”应当意指由多核苷酸编码的多肽是由该来源或由已经插入了来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面，从给定来源获得的多肽被分泌到细胞外。
该多肽可以是真菌多肽。例如，该多肽可以是来自一个门如厚壁菌门(Firmicutes.)内的具有甘露聚糖酶活性的多肽。
在一个方面，该多肽是来自于芽孢杆菌纲(Bacilli)的真菌的甘露聚糖酶，如来自芽孢杆菌目(Bacillales)、来自类芽孢杆菌科(Paenibacillaceae)、来自类芽孢杆菌属(Paenibacillus)或来自又松类芽孢杆菌物种或来自衣氏类芽孢杆菌物种。
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect andimperfect states)，和其他分类学等同物(equivalent)，例如无性型，而与它们已知的种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)、德国微生物和细胞培养物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSMZ)、荷兰菌种保藏中心(Centraalbureau Voor Schimmelcultures，CBS)以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(Agricultural Research Service Patent CultureCollection,Northern Regional Research Center，NRRL)。
可以使用以上提到的探针从其他来源，包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或直接从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)获得的DNA样品鉴定和获得该多肽。用于从天然生境中直接分离微生物和DNA的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一微生物的基因组DNA或cDNA文库或混合的DNA样品来获得编码该多肽的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码多肽的多核苷酸，则可以通过利用本领域普通技术人员已知的技术(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)分离或克隆多核苷酸。
多核苷酸
本发明还涉及编码本发明的多肽的多核苷酸，如本文中所述。在一个实施例中，编码本发明的多肽的多核苷酸已经被分离。
用于分离或克隆多核苷酸的技术是本领域已知的且包括从基因组DNA或cDNA或其组合进行分离。可以例如通过使用熟知的聚合酶链式反应(PCR)或表达文库的抗体筛选来检测具有共有结构特征的克隆DNA片段，实现从基因组DNA克隆多核苷酸。参见例如，Innis等人,1990,PCR:A Guide to Methods and Application[PCR：方法和应用指南],AcademicPress[学术出版社],纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。这些多核苷酸可以克隆自芽孢杆菌属的菌株或来自芽孢杆菌目相关有机体，并且因此，例如可以是该多核苷酸多肽编码区的等位基因变体或物种变体。
核酸构建体
本发明还涉及核酸构建体，这些核酸构建体包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，在与控制序列相容的条件下，该一个或多个控制序列指导该编码序列在适合的宿主细胞中的表达。
可用许多方式操作该多核苷酸以提供多肽的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可以是理想的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可为启动子，即，被宿主细胞识别用于表达编码本发明的多肽的多核苷酸的多核苷酸。该启动子包含介导多肽的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
用于在细菌宿主细胞中指导本发明核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(Agaisse和Lereclus,1994,Molecular Microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(Egon等人,1988,Gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)和原核β-内酰胺酶基因(Villa-Kamaroff等人,1978,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)以及tac启动子(DeBoer等人,1983,Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于Gilbert等人,1980,Scientific American[科学美国人]242:74-94的“Usefulproteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用蛋白]”；和Sambrook等人,1989,同上。在WO 99/43835中公开了串联启动子的实例。
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下各项的基因获得的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢Daria(WO 00/56900)、镶片镰孢Quinn(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶、以及里氏木霉翻译延长因子，以及NA2-tpi启动子(一种修饰的启动子，其来自曲霉属中性α-淀粉酶基因，其中未翻译的前导子由曲霉属丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替代；非限制性实例包括修饰的启动子，其来自黑曲霉中性α-淀粉酶的基因，其中未翻译的前导子由构巢曲霉或米曲霉丙糖磷酸异构酶基因的未翻译的前导子替代)；以及其突变型启动子、截短型启动子、以及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下各项的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由Romanos等人,1992,Yeast[酵母]8:423-488描述。
控制序列也可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的3’-末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)、和大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延伸因子。
酵母宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因中获得的：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)、和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mRNA稳定子区域，其增加所述基因的表达。
适合的mRNA稳定子区的实例从以下获得：苏云金芽孢杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(Hue等人,1995,Journal of Bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mRNA的非翻译区域。该前导子可操作地连接至编码该多肽的多核苷酸的5'-末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下酶的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是一种多腺苷酸化序列，可操作地连接至该多核苷酸的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别为将多腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下酶的基因获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由Guo和Sherman,1995,Mol.CellularBiol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
控制序列也可为编码与多肽的N-末端连接的信号肽并指导多肽进入细胞的分泌途径的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’-端可以固有地含有在翻译阅读框架中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’-端可以包含对编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以单纯地替换天然信号肽编码序列以便增强多肽的分泌。然而，可以使用指导已表达多肽进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从芽孢杆菌NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)和枯草芽孢杆菌prsA的基因获得的信号肽编码序列。另外的信号肽由Simonen和Palva,1993,Microbiological Reviews[微生物评论]57:109-137描述。
用于丝状真菌宿主细胞的有效的信号肽编码序列是从以下酶的基因获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
用于酵母宿主细胞的有用的信号肽从酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶的基因获得。其他的有用的信号肽编码序列由Romanos等人(1992,同上)描述。
控制序列还可以是编码位于多肽的N-末端的前肽的前肽编码序列。所得的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可通过催化裂解或自身催化裂解来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列两者都存在的情况下，该前肽序列位于紧邻多肽的N-末端且该信号肽序列位于紧邻该前肽序列的N-末端。
还可希望的是添加调节序列，该调节序列调节宿主细胞生长相关的多肽的表达。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac、和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用ADH2系统或GAL1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉TAKAα-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶I启动子以及里氏木霉纤维二糖水解酶II启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况中，编码多肽的多核苷酸将与调节序列可操作地连接。
表达载体
本发明还涉及包含本发明的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该多肽的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含所述多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达所述多核苷酸。在产生所述表达载体时，所述编码序列位于所述载体中，这样使得所述编码序列与所述用于表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是可以方便地经受重组DNA程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合入基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总DNA，或可以使用转座子。
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属抗性、对营养缺陷型的原养型等。
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于：ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1和URA3。用于丝状真菌宿主细胞中的选择性标记包括但不限于：adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀酸甲酰胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷酰基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、以及其等同物。优选的用于曲霉细胞中的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于木霉属细胞的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如WO 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一个方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该多肽的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可含有用于指导通过同源重组而整合入宿主细胞基因组中的染色体中的精确位置处的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对和800至10,000个碱基对，该核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合入宿主细胞的基因组中。
为了自主复制，载体还可以另外包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、和pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、和pAMβ1的复制起点。
用于酵母宿主细胞中的复制起点的实例是2微米复制起点、ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合、及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(Gems等人,1991,Gene[基因]98:61-67；Cullen等人,1987,Nucleic Acids Res.[核酸研究]15:9163-9175；WO00/24883)。可以根据WO 00/24883中披露的方法完成AMA1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
可将本发明多核苷酸的多于一个拷贝插入宿主细胞以增加多肽的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或通过包括一个与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得该多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞、以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接以上所述的元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见例如，Sambrook等人,1989,同上)。
宿主细胞
本发明还涉及重组宿主细胞，这些宿主细胞包含可操作地连接至一个或多个控制序列的本发明的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的多肽的产生。将包含多核苷酸的构建体或载体引入到宿主细胞中，这样使得该构建体或载体被维持作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体，如早前所描述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不完全相同的任何亲本细胞子代。宿主细胞的选择将在很大程度上取决于编码该多肽的基因及其来源。
宿主细胞可以是在本发明的多肽的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属(Geobacillus)、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金芽孢杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于类马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌以及马链球菌兽疫亚种细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下来实现：原生质体转化(参见，例如，Chang和Cohen,1979,Mol.Gen.Genet.[分子遗传学与基因组学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，Young和Spizizen,1961，J.Bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或Dubnau和Davidoff-Abelson,1971,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，Shigekawa和Dower,1988,Biotechniques[生物技术]6:742-751)或接合(参见例如，Koehler和Thorne,1987,J.Bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见例如，Hanahan,1983,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，Dower等人,1988,Nucleic Acids Res.[核酸研究]16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，Gong等人,2004,Folia Microbiol.(Praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、接合(参见例如，Mazodier等人,1989,J.Bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，Burke等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可以通过以下方式来实现：电穿孔(参见例如，Choi等人,2006,J.Microbiol.Methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或接合(参见例如，Pinedo和Smets,2005,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可以通过以下方式来实现：天然感受态(natural competence)(参见例如，Perry和Kuramitsu,1981,Infect.Immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，Catt和Jollick,1991,Microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，Buckley等人,1999,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或接合(参见例如，Clewell,1981,Microbiol.Rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核生物，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)以及卵菌门(Oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由Hawksworth等人在以下文献中所定义：Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,CAB International[国际应用生物科学中心],University Press[大学出版社],Cambridge,UK[英国剑桥])。
真菌宿主细胞可以为酵母细胞。如本文所用的“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(Endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(Fungi Imperfecti)(芽孢纲(Blastomycetes))的酵母。由于对酵母的分类将来可能变化，出于本发明的目的，酵母应当按照Biology and Activities of Yeast[酵母的生物学与活性](Skinner,Passmore和Davenport编辑，Soc.App.Bacteriol.Symposium Series No.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁维酵母、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可为丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门(Oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由Hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、女王杜香金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢菌、谷类镰孢菌、库威镰孢菌、大刀镰孢菌、禾谷镰孢菌、禾赤镰孢菌、异孢镰孢菌、合欢木镰孢菌、尖孢镰孢菌、多枝镰孢菌、粉红镰孢菌、接骨木镰孢菌、肤色镰孢菌、拟分枝孢镰孢菌、硫色镰孢菌、圆镰孢菌、拟丝孢镰孢菌、镶片镰孢菌、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序描述于以下文献中：EP 238023,Yelton等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及Christensen等人,1988,Bio/Technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转化镰孢属物种的适合方法由Malardier等人,1989,Gene[基因]78:147-156和WO 96/00787描述。可以使用由如以下文献描述的程序转化酵母：Becker和Guarente,于Abelson,J.N.和Simon，M.I.编辑,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology[酵母遗传学与分子生物学指南],Methods in Enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,AcademicPress,Inc.[学术出版社有限公司],纽约中；Ito等人,1983,J.Bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及Hinnen等人,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]75:1920。
生产方法
本发明还涉及产生本发明多肽的方法(例如，体外或离体的产生方法)，该方法包括：(a)培养细胞，该细胞处于其野生型形式，在有益于产生该多肽的条件下产生该多肽；以及任选地，(b)回收该多肽。在一个方面，该细胞是类芽孢杆菌属细胞。在另一方面，该细胞是又松类芽孢杆菌细胞或衣氏类芽孢杆菌细胞。
本发明还涉及产生本发明的多肽的方法(例如，体外或离体的产生方法)，该方法包括(a)在有益于产生该多肽的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地，(b)回收该多肽。
宿主细胞是在适合使用本领域已知的方法产生多肽的营养培养基中培养的。例如，可以通过摇瓶培养、或在实验室或工业发酵罐中小规模或大规模发酵(包括连续、分批、补料分批或固态发酵)培养细胞，该培养在合适的培养基中并且在允许表达和/或分离多肽的条件下进行。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的目录中)制备。如果多肽被分泌到该营养培养基中，那么可以直接从该培养基中回收该多肽。如果多肽不进行分泌，那么其可以从细胞裂解液中进行回收。
可以使用本领域已知的对于多肽是特异性的方法来检测多肽。这些检测方法包括但不限于：特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定多肽的活性。
可以使用本领域已知的方法来回收多肽。例如，可通过常规方法，包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从营养培养基回收多肽。在一个方面，回收包含多肽的发酵液。
可以通过本领域已知的多种程序纯化多肽以获得基本上纯的多肽，这些程序包括但不限于：色谱法(例如，离子交换、亲和、疏水、色谱聚焦和尺寸排阻)、电泳程序(例如，制备型等电聚焦)、差示溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE、或提取(参见例如，ProteinPurification[蛋白质纯化],Janson和Ryden编辑,VCH Publishers[VCH出版公司],纽约,1989)。
在一替代性方面，不回收多肽，而是将表达该多肽的本发明的宿主细胞用作多肽的来源。
发酵液配制品或细胞组合物
本发明还涉及包含本发明的多肽的发酵液配制品或细胞组合物。该发酵液产物进一步包含在发酵过程中使用的另外的成分，例如像细胞(包括含有编码本发明的多肽的基因的宿主细胞，这些宿主细胞用于产生目的多肽)、细胞碎片、生物质、发酵培养基和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
如本文所用的术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。该发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，该发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
在一个实施例中，发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在一个特定实施例中，第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物；并且该第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐或前述两种或更多种的混合物。
在一个方面，组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
该细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，该细胞杀灭的全培养液或组合物包含用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)生长至饱和、在碳限制条件下孵育以允许蛋白合成之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，例如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过WO 90/15861或WO 2010/096673中所述的方法来产生。
清洁组合物和/或洗涤剂组合物
本发明还涉及包含本发明的甘露聚糖酶的组合物，如清洁组合物和/或洗涤剂组合物。
在一个实施例中，本发明涉及包括本发明的甘露聚糖酶以及适合的表面活性剂的清洁组合物和/或洗涤剂组合物。在一个实施例中，该洗涤剂组合物可以适于具体用途，例如衣物洗涤(特别是家用衣物洗涤)、餐具洗涤或硬表面清洁。
因此，在一个实施例中，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)。在一个实施例中，该多肽具有酶去污益处(即，与不存在酶的相同组合物相比，本发明的酶改善了清洁效果)。
本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，包括适用于预处理有污迹的织物的洗衣添加剂组合物，和漂洗添加的织物软化剂组合物，或配制为用于一般家用硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。本发明的洗涤剂组合物可以应用于硬表面清洁、自动餐具洗涤应用、连同化妆品应用，例如义齿、牙齿、头发及皮肤中。
本发明的洗涤剂组合物可以呈任何便利的形式，如棒状、片剂、粉末、颗粒、糊状或液体。液体洗涤剂可以是水性的，典型地包含至多70％的水和0-30％的有机溶剂，或可以是非水性的。
除非另外指出，本文提供的所有组分或组合物水平参照该组分或组合物的活性水平给出，并且不包括可能存在于可商购来源中的杂质，例如残余溶剂或副产品。
本发明的甘露聚糖酶通常以按组合物重量计0.001％至10％的酶蛋白的水平掺入洗涤剂组合物(舱(pod)/盖子，液体洗涤剂或粉末洗涤剂)中，如按组合物重量计0.001％至0.1％、0.01％至1.0％或0.1％至10％的酶蛋白。
通常将本发明的甘露聚糖酶以如下量掺入洗涤组合物中，这样使得它们在洗涤水中的浓度为0.0001至1ppm酶蛋白，如在洗涤水中的0.0001至0.01ppm、如0.001至0.1ppm或如0.01至1ppm的酶蛋白。
在一些优选实施例中，本文提供的这些洗涤剂组合物典型地被这样配制，使得用于水性清洁操作过程中，洗涤水具有以下pH：从约5.0至约11.5，或在替代实施例中，甚至从约6.0至约10.5，例如从约5至约11、从约5至约10、从约5至约9、从约5至约8、从约5至约7、从约6至约11、从约6至约10、从约6至约9、从约6至约8、从约6至约7、从约7至约11、从约7至约10、从约7至约9或从约7至约8。在一些优选实施例中，颗粒或液体衣物洗涤产品被这样配制，使得洗涤水具有从约5.5至约8的pH。用于将pH控制在推荐的使用水平的技术包括使用缓冲剂、碱、酸等，并且是本领域的普通技术人员熟知的。
酶组分重量基于总蛋白。除非另外指明，所有百分比和比率都是按重量计计算。除非另外指明，所有百分比和比率都是基于总组合物计算。在例示洗涤剂组合物中，通过按总组合物的重量计的纯酶表示酶水平并且除非另外说明，按总组合物的重量计表示洗涤剂成分。
本发明的酶还应用于洗涤剂添加剂产品中。当例如，温度较低，例如温度为约40℃或更低，pH在6与8之间并且洗涤时间较短，例如低于30min时，包含本发明的甘露聚糖酶的洗涤剂添加剂产品理想地适于包括在洗涤过程中。
该洗涤剂添加剂产品可以是本发明的甘露聚糖酶并且优选是一种另外的酶。在一个实施例中，该添加剂被包装于剂型中用于添加至清洁过程中。单一剂量可以包含丸剂、片剂、囊形片(gelcap)或包括粉末和/或液体的其他单一剂量单位。在一些实施例中，包括填料和/或一种或多种载体材料，适合的填料或载体材料包括但不限于硫酸盐、碳酸盐和硅酸盐的各种盐以及滑石、粘土等。在一些实施例中，用于液体组合物的填料和/或载体材料包括水和/或低分子量伯醇和仲醇(包括多元醇和二元醇)。此类醇的实例包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇以及异丙醇。
在一个特别优选的实施例中，根据本发明的甘露聚糖酶被用于颗粒组合物或液体中，该甘露聚糖酶可以呈胶囊化粒子的形式。在一个实施例中，该胶囊化材料选自下组，该组由以下组成：碳水化合物、天然或合成胶、甲壳素和壳聚糖、纤维素和纤维素衍生物、硅酸盐、磷酸盐、硼酸盐、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蜡及其组合。
根据本发明的组合物典型地包括一种或多种洗涤剂成分。术语洗涤剂组合物包括物品和清洁及处理组合物。除非另外指明，术语清洁组合物包括片、颗粒状或粉末状的全效或“重垢”清洗剂，尤其是衣物洗涤剂；液体、凝胶或糊状的全效清洗剂，尤其是所谓的重垢液类型；液体细薄织物洗涤剂；手洗餐具清洗剂或轻垢餐具清洗剂，尤其是高泡沫型的那些；机洗餐具清洗剂，包括用于居家及机构使用的多种片型、颗粒型、液体型以及冲洗助剂型。该组合物还可以处于单位剂量包装中，包括本领域已知的那些以及水可溶、水不可溶和/或水可渗透的那些。
在清洁和/或洗涤剂组分可能与本发明的甘露聚糖酶不相容的实施例中，可以使用适合方法来分离清洁和/或洗涤剂组分与该甘露聚糖酶(即，彼此不互相接触)，直到这两种组分的组合适当时。此类分隔方法包括任何本领域中已知的适合方法(例如，囊形片，包囊，片剂，以及物理分隔，例如通过使用具有一个或多个隔室的水溶性小袋)。
在一些实施例中，本文所使用的这些酶由以下进行稳定化：为这些酶提供以下离子的成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源，连同其他金属离子(例如，钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))。本发明的洗涤剂组合物的酶还可以使用常规稳定剂，如多元醇(例如，丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸来稳定化，并且可以如描述于例如WO 92/19709和WO 92/19708中配制该组合物。还可以通过添加可逆的酶抑制剂，例如，蛋白类型(如描述于EP 544 777中)或硼酸类型的可逆的酶抑制剂，来稳定本发明的酶。其他酶稳定剂是本领域熟知的，例如肽醛和蛋白质水解物，例如可以使用肽醛或酮来稳定根据本发明的甘露聚糖酶，如描述于WO2005/105826和WO2009/118375中。
如以上提及的，可以根据披露于EP 238 216中的方法制备包含在本发明的洗涤剂组合物中的受保护的酶。
可以用一种或多种试剂来扩充该组合物，用于防止生物膜的形成或去除形成的生物膜。这些试剂可以包括但不限于分散剂、表面活性剂、洗涤剂、其他酶、抗微生物剂以及杀生物剂。
本发明的组合物可以被应用于待用于自动定量装置中的定量元件中。包括本发明的组合物的定量元件可以放置进如WO 2007/052004和WO 2007/0833141中所述的递送筒中。定量元件可以有长形的形状，并且排成形成递送筒的阵列，该递送筒是如在案例WO2007/051989所述的自动定量分配装置的替换物。递送筒被放置在自动定量递送装置中，例如WO 2008/053191中所述的装置。
关于自动定量装置的适合的披露内容可以见于WO 2007/083139、WO 2007/051989、WO 2007/083141、WO 2007/083142和EP 2361964。
呈颗粒的甘露聚糖酶的配制品
无粉尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和US 4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡质包衣材料的实例为具有1000至20000的平均摩尔重量的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有从16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化的壬基苯酚；乙氧基化的脂肪醇，其中该醇含有从12至20个碳原子，并且其中具有15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯以及甘油三酸酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定化。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法来制备。
该甘露聚糖酶可以被配制为颗粒，例如，配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度，不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于www.ip.com公开内容IPCOM000200739D中。
通过使用共颗粒配制酶的另一个实例披露在WO 2013/188331中，其涉及洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含(a)多酶共颗粒；(b)少于10％wt沸石(无水基底)；和(c)少于10％w/w磷酸盐(无水基底)，其中所述酶共颗粒包含从10％至98％w/w水分汇组分，并且该组合物另外包含从20％至80％w/w的洗涤剂水分汇组分。
本发明的一个实施例涉及包含本发明的甘露聚糖酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)构成。
典型地，该颗粒的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，具体是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
该核心可以包括粘合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。
该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
该核心可以由惰性粒子组成，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
该核心的直径可以是20-2000μm，具体地50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，例如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤压、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔出版社]。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，例如：
a)经喷雾干燥的产物，其中将含液体酶的溶液在经喷雾干燥塔中进行雾化以形成小液滴，这些小液滴在其在干燥塔中沉降的过程中干燥以形成含酶的微粒状(particulate)材料。可以用这种方法产生非常小的粒子(Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；Surfactant Science Series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔·德克尔出版社])。
b)层状产品，其中酶作为层涂覆在预形成的惰性核心粒子周围，其中含酶溶液典型地在流化床装置中被雾化，其中预形成的核心粒子被流体化，并且含酶的溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有希望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有希望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于，例如，WO 97/23606中。
c)吸收的核心粒子，其中不是涂覆该酶作为核心周围的层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于WO 97/39116中。
d)挤出或丸粒化的(pelletized)产品，其中将含酶的糊剂压成丸粒(pellet)或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，非常高的挤压压力增加了酶糊剂中的热生成量，其对酶有害(还参见Michael S.Showell(编辑)；Powdered detergents[粉状洗涤剂]；SurfactantScience Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔·德克尔出版社])。
e)颗粒化的产物，其中将含酶的粉末悬浮于熔融的蜡中并且，例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷射到冷却室中，在此液滴快速地固化(Michael S.Showell(编辑)；Powdereddetergents[粉状洗涤剂],Surfactant Science Series[表面活性剂科学系]；1998；第71卷；第140-142页；Marcel Dekker[马塞尔·德克尔出版社])。所获得产物是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产物。此外，US 4,016,040和US 4,713,245是与此技术有关的文献。
f)混合器造粒产物，其中将液体添加到例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并凝聚，并且粒子将构建，形成包含酶的颗粒。此种方法描述于US 4,106,991和有关的文献EP 170360、EP 304332、EP 304331、WO 90/09440和WO 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的具体产品中，将由作为酶的酶、填料和粘合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的T-颗粒(T-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于(Martin Rhodes(编辑)；Principles ofPowder Technology[粉末技术原理]；1990；第10章；John Wiley&Sons[约翰威利父子公司])中。
h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流态化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并粘附到其上并形成颗粒。
i)这些核可进行干燥，如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核心在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1-10％w/w的水。
该酶颗粒/粒子的核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改进储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。该一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他合适的包衣材料，如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于WO 93/07263和WO 97/23606中。
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
该包衣优选是至少0.1μm厚，具体地至少0.5μm、至少1μm或至少5μm。在一个具体的实施例中，包衣的厚度是低于100μm。在一个更具体的实施例中，包衣的厚度是低于60μm。在一个甚至更具体的实施例中，包衣的总厚度是低于40μm。
该包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。层或包衣特别应在厚度上是均匀的。
该包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或粘合剂，例如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
盐包衣按重量w/w计可以包括至少60％的盐，例如，按重量w/w计，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是少于50μm，如少于10μm或少于5μm)中添加。
该盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，具体地具有在20℃下在100g水中至少0.1克的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如，至少1g/100g水，例如，至少5g/100g水。
该盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(少于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐例如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，例如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。具体而言，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，具体地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。该盐包衣可以如在WO 00/01793或WO 2006/034710中所描述。
适合的盐的具体实例是NaCl(CH20℃＝76％)、Na2CO3(CH20℃＝92％)、NaNO3(CH20℃＝73％)、Na2HPO4(CH20℃＝95％)、Na3PO4(CH25℃＝92％)、NH4Cl(CH20℃＝79.5％)、(NH4)2HPO4(CH20℃＝93,0％)、NH4H2PO4(CH20℃＝93.1％)、(NH4)2SO4(CH20℃＝81.1％)、KCl(CH20℃＝85％)、K2HPO4(CH20℃＝92％)、KH2PO4(CH20℃＝96.5％)、KNO3(CH20℃＝93.5％)、Na2SO4(CH20℃＝93％)、K2SO4(CH20℃＝98％)、KHSO4(CH20℃＝86％)、MgSO4(CH20℃＝90％)、ZnSO4(CH20℃＝90％)以及柠檬酸钠(CH25℃＝86％)。其他实例包括NaH2PO4、(NH4)H2PO4、CuSO4、Mg(NO3)2以及乙酸镁。
该盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如描述于WO 99/32595中。具体实例包括无水硫酸钠(Na2SO4)、无水硫酸镁(MgSO4)、七水硫酸镁(MgSO4.7H2O)、七水硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、七水磷酸氢二钠(Na2HPO4.7H2O)、六水硝酸镁(Mg(NO3)2(6H2O))、二水柠檬酸钠以及四水乙酸镁。优选地，作为盐溶液使用该盐，例如使用流化床。
因此，在一个另外的方面，本发明提供了颗粒，其包含：
(a)包含根据本发明的甘露聚糖酶的核心，和
(b)任选地由包围核心的一个或多个层组成的包衣。
其他酶
在一个实施例中，将本发明的甘露聚糖酶与一种或多种酶，例如至少两种酶，更优选至少三种、四种或五种酶组合。优选地，该酶具有不同的底物特异性，例如蛋白分解活性、淀粉分解活性、脂肪分解活性、半纤维素分解活性或果胶分解活性。
洗涤剂添加剂和洗涤剂组合物可以包括一种或多种酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化合物酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶(例如，漆酶)和/或过氧化物酶。
通常，一种或多种所选酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最适pH、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
纤维素酶：适合的纤维素酶包括动物、植物或微生物来源的那些。特别适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括经化学修饰的或蛋白工程化的变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
尤其合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US 5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及WO 1999/001544中的那些纤维素酶变体。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM、和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杰能科国际公司(Genencor International Inc.))、以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
蛋白酶：适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物起源的那些，例如微生物或植物起源。优选微生物起源。包括经化学修饰的或蛋白工程化的变体。它可以是碱性蛋白酶，例如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族的(如胰蛋白酶)或S8家族的(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如M4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据Siezen等人,Protein Engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶的亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，如描述于US 7262042和WO 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)；以及描述于WO 89/06279中的迟缓枯草杆菌蛋白酶(subtilisin lentus)、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(WO 93/18140)中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 92/175177、WO 01/016285、WO 02/026024和WO 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 05/040372中)、以及衍生自纤维单胞菌属(Cellumonas)的糜蛋白酶(描述于WO 05/052161和WO 05/052146中)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在例如WO95/23221中所述)、及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是如WO 07/044993(杰能科国际公司)中所述的中性金属蛋白酶，如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 04/03186、WO 04/041979、WO 07/006305、WO 11/036263、WO 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’进行编号。更优选的蛋白酶变体可以包括以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’进行编号)。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：
Figure BDA0002432920140000531
DuralaseTM、DurazymTM、
Figure BDA00024329201400005315
Ultra、
Figure BDA0002432920140000532
Ultra、
Figure BDA0002432920140000533
Ultra、
Figure BDA0002432920140000534
Ultra、
Figure BDA0002432920140000536
和
Figure BDA0002432920140000535
(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：
Figure BDA0002432920140000537
Figure BDA0002432920140000538
Purafect
Figure BDA0002432920140000539
PreferenzTM、Purafect
Figure BDA00024329201400005310
Purafect
Figure BDA00024329201400005316
Purafect
Figure BDA00024329201400005311
EffectenzTM、
Figure BDA00024329201400005312
Figure BDA00024329201400005313
以及
Figure BDA00024329201400005314
(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))、AxapemTM(吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocases N.V.))、BLAP(序列示于US 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶：适合的脂肪酶包括动物、植物或微生物来源的那些。特别适合的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。包括经化学修饰的或蛋白工程化的变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉属(与嗜热霉属同义)，例如来自如EP 258 068和EP 305 216中描述的疏棉状腐质霉(细毛嗜热霉)或来自如WO 96/13580中描述的特异腐质霉的脂肪酶；假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218 272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、施氏假单胞菌(GB 1,372,034)、萤光假单胞菌、假单胞菌属物种菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(WO 96/12012)；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(Dartois等人,1993,Biochemica et Biophysica Acta[生物化学与生物物理学报],1131:253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(WO 91/16422)。
其他实例是脂酶变体，例如在WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079和WO 97/07202中记载的那些。
优选的可商购脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase UltraTM和LipexTM(诺维信公司)。
淀粉酶：可以与本发明的甘露聚糖酶一起使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括经化学修饰的或蛋白工程化的变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:3的淀粉酶或其与SEQ ID NO:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424和WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ IDNO:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。其他适合的淀粉酶是包括WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209和Q264。包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中所示的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外的合适的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182、或位置H183和G184中具有缺失的那些。可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184处具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中的一个或多个中具有取代的那些。可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列同一性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列同一性的变体。WO 01/66712中SEQ ID NO:10的优选的变体是在以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。另外的合适的淀粉酶是具有WO 09/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:2具有90％序列同一性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是具有C-末端截短和/或在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K，和/或在位置R180和/或S181或T182和/或G183中具有缺失的那些。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中所述变体是C-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。其他合适的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的以下位置中的一个或多个处具有取代、缺失或插入的那些：R28、R118、N174；R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314；R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体，以及在选自下组的一个或多个位置处另外具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339，最优选的是在所有这些位置处另外具有取代的变体。其他实例是淀粉酶变体，如在WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中描述的那些。可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、Stainzyme PlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X和BANTM(来自诺维信公司)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase以及Preferenz S100(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。
过氧化物酶/氧化酶：适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括经化学修饰的或蛋白工程化的变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的那些。
Lechinase/β-葡聚糖酶：适合的lechinase包括细菌或真菌来源的那些。它们可以被化学修饰或蛋白工程化。有用的β-葡聚糖酶的实例包括WO 2015/144824(诺维信公司)以及WO 99/06516(德国汉高公司(Henkel KGAA))中描述的那些。
可商购的过氧化酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加含有所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品为颗粒，特别是如上所述的无粉尘颗粒；液体，特别是稳定化液体；或者浆液。
表面活性剂
典型地，该洗涤剂组合物包含(按该组合物的重量计)一种或多种在以下范围内的表面活性剂：0％至50％，优选从2％至40％，更优选从5％至35％，更优选从7％至30％，最优选从10％至25％，甚至最优选从15％至20％。在一个优选实施例中，该洗涤剂是液体或粉末洗涤剂，包括按重量计小于40％，优选小于30％，更优选小于25％，甚至更优选小于20％的表面活性剂。该组合物可以包含1％至15％，优选从2％至12％、3％至10％，最优选4％至8％，甚至最优选4％至6％的一种或多种表面活性剂。优选的表面活性剂是阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性离子型表面活性剂、两性表面活性剂或其混合物。优选地，该表面活性剂的主要部分是阴离子的。适合的阴离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括脂肪酸羧酸酯(肥皂)，支链、直链和随机链烷基硫酸酯或脂肪醇硫酸酯或伯醇硫酸酯或烷基苯磺酸酯(例如LAS和LAB)或苯基链烷磺酸酯(phenylalknesulfonate)或烯基磺酸酯或烯基苯磺酸酯或烷基乙氧基硫酸酯或脂肪醇醚硫酸酯或α-烯烃磺酸酯或十二烯基/十四烯基(tetradecnyl)琥珀酸。阴离子表面活性剂可以被烷氧基化。该洗涤剂组合物还可以包含从1wt％至10wt％的非离子表面活性剂，优选从2wt％至8wt％，更优选从3wt％至7wt％，甚至更优选少于5wt％的非离子表面活性剂。适合的非离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括醇乙氧基化物、和/或烷基乙氧基化物、和/或烷基酚乙氧基化物、和/或葡糖酰胺(例如脂肪酸N-葡糖基N-甲基酰胺)、和/或烷基多聚葡糖苷和/或单-或二乙醇酰胺或脂肪酸酰胺。该洗涤剂组合物还可以包含从0wt％至10wt％的阳离子表面活性剂，优选从0.1wt％至8wt％，更优选从0.5wt％至7wt％，甚至更优选少于5wt％的阳离子表面活性剂。适合的阳离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括烷基季铵化合物、和/或烷基吡啶鎓化合物和/或烷基季鏻化合物和/或烷基三元硫鎓化合物。该组合物优选包括在洗涤过程中于洗涤液中提供100ppm至5,000ppm表面活性剂的量的表面活性剂。该组合物当与水接触后典型地形成洗涤液，该洗涤液包含0.5g/L至10g/L洗涤剂组合物。许多适合的表面活性化合物是可获得的并且于文献中充分描述，例如由Schwartz、Perry和Berch描述于“Surface-Active Agents and Detergents[表面活性剂与洗涤剂]”,第I卷和第11卷中。
助洗剂
助洗剂的主要作用在于从洗涤溶液中螯合二价金属离子(例如钙离子和镁离子)，该洗涤溶液否则将与表面活性剂系统消极地相互作用。助洗剂还可有效从织物表面去除金属离子和无机污物，从而改进地去除微粒和饮料污渍。助洗剂也是一种碱度来源并且将洗涤水的pH缓冲至9.5至11的水平。缓冲能力也叫做储备碱度，并且应该优选大于4。
本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种洗涤剂助洗剂或助洗剂系统。许多适合的助洗剂系统描述于文献中，例如描述于Powdered Detergents[粉状洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,Marcel Dekker,Inc[马塞尔·德克尔公司]中。按主题组合物的重量计，助洗剂可以包括从0％至60％，优选从5％至45％，更优选从10％至40％，最优选从15％至35％，甚至更优选从20％至30％助洗剂。按主题组合物的重量计，该组合物可以包含从0％至15％，优选从1％至12％、2％至10％，最优选从3％至8％，甚至最优选从4％至6％的助洗剂。
助洗剂包括但不限于聚磷酸盐的碱金属盐、铵盐和链烷醇铵盐(例如，三聚磷酸盐STPP)，碱金属硅酸盐，碱土金属盐和碱金属碳酸盐，铝硅酸盐助洗剂(例如，沸石)以及聚羧酸化合物，醚羟基聚羧酸酯，马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚的共聚物，1,3,5-三羟基苯-2,4,6-三磺酸，和羧基甲氧基琥珀酸，聚乙酸的各种碱金属盐、铵盐和取代的铵盐(如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸)，连同聚羧酸酯，如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧代二琥珀酸(oxydisuccinic acid)、聚马来酸、苯1,3,5-三羧酸、羧基甲氧基琥珀酸及其可溶盐。乙醇胺(MEA、DEA和TEA)也可以有助于液体洗涤剂中的缓冲能力。
漂白剂
本发明的洗涤剂组合物可以包括一种或多种漂白剂。具体而言，粉状洗涤剂可以包括一种或多种漂白剂。适合的漂白剂包括其他光漂白剂、预成型过酸、过氧化氢源、漂白活化剂、过氧化氢、漂白催化剂及其混合物。通常，当使用一种漂白剂时，本发明的组合物可以包括按主题清洁组合物的重量计从约0.1％至约50％或甚至从约0.1％至约25％的漂白剂。适合的漂白剂的实例包括：
(1)其他光漂白剂，例如维生素K3；
(2)预成型过酸：适合的预成型过酸包括但不限于选自下组的化合物，该组由以下组成：过氧羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone)及其混合物。适合的过氧羧酸包括具有化学式R-(C＝O)O-O-M的疏水性和亲水性过酸，其中R是烷基(任选是支链的)，当该过酸是疏水性的，具有从6至14个碳原子或从8至12个碳原子，并且当该过酸是亲水性的，具有少于6个碳原子或甚至少于4个碳原子；并且M是平衡离子，例如钠、钾或氢；
(3)过氧化氢源，例如无机过氧化氢合物盐，包括碱金属盐，如过硼酸盐(通常是一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐及其混合物。在本发明的一方面中，无机过氧化氢合物盐选自下组，该组由以下组成：过硼酸盐、过碳酸盐的钠盐及其混合物。当使用时，无机过氧化氢合物盐典型地以整体组合物的从0.05wt％至40wt％或1wt％至30wt％的量存在并且典型地被掺入进此类组合物中作为可以被包衣的结晶固体。适合的包衣包括无机盐，例如碱金属硅酸盐、碳酸盐或硼酸盐或其混合物，或有机材料，例如水溶性或水分散性聚合物、蜡、油或脂肪皂。有用的漂白组合物描述于美国专利号5,576,282和6,306,812中；
(4)具有R-(C＝O)-L的漂白活化剂，其中R是烷基(任选是支链的)，当该漂白活化剂是疏水性的，具有从6至14个碳原子或从8至12个碳原子，并且当该漂白活化剂是亲水性的，具有少于6个碳原子或甚至少于4个碳原子；并且L是离去基团。适合的离去基团的实例是苯甲酸及其衍生物-尤其是苯磺酸盐。适合的漂白活性剂包括十二烷酰基羟苯磺酸盐(dodecanoyl oxybenzene sulphonate)、癸酰基羟苯磺酸盐、癸酰基羟苯甲酸或其盐、3,5,5-三甲基己酰基羟苯磺酸盐、四乙酰基乙二胺(TAED)和壬酰基羟苯磺酸盐(NOBS)。适合的漂白活性剂还披露于WO 98/17767中。尽管可以使用任何适合的漂白活化剂，但是在本发明的一个方面中，主题清洁组合物可以包括NOBS、TAED或其混合物；以及
(5)能够接受来自过氧酸的氧原子并且将该氧原子转移至可氧化底物的漂白催化剂描述于WO 2008/007319中。适合的漂白催化剂包括但不限于：亚胺鎓(iminium)阳离子及聚离子；亚胺鎓兼性离子；改性的胺；改性的氧化胺；N-磺酰基亚胺；N-膦酰基亚胺；N-酰基亚胺；噻二唑二氧化物；全氟亚胺；环状糖酮及其混合物。该漂白催化剂将典型地以按重量计从0.0005％至0.2％、从0.001％至0.1％或甚至从0.005％至0.05％的水平被包括在该洗涤剂组合物中。
当存在时，基于该组合物，该过酸和/或漂白活化剂通常以从约0.1wt％至约60wt％、从约0.5wt％至约40wt％或甚至从约0.6wt％至约10wt％的量存在于该组合物中。可以将一种或多种疏水性过酸或其前体与一种或多种亲水性过酸或其前体组合使用。
可以对过氧化氢源和过酸或漂白活化剂的量进行选择，以使得可用氧(来自过氧化物源)与过酸的摩尔比是从1:1至35:1，或甚至2:1至10:1。
辅助材料
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不局限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地包含另外的组分，这些另外的组分可以给正在清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。在本发明的组合物中可以使用合适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯衍生物。
优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉基-4苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸盐的二钠盐。
还优选的是荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals and Chemicals)供应。
合适用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
织物调色剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如当配制在洗涤剂组合物中时，可以在织物与包括所述洗涤剂组合物的洗涤液体接触时沉积在所述织物上从而通过可见光吸收来改变所述织物色彩的染料或色素。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(ColourIndex)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如描述于WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1 876 226中。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些污垢释放聚合物帮助从织物，例如棉布和聚酯基织物上去除污垢，特别是从聚酯基织物上去除疏水污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷第7章,Marcel Dekker,Inc[马塞尔·德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和连接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。该核心结构可以包含如WO 2009/087523中详细描述的一个聚烯属烃亚胺结构或一个聚烷醇胺结构。此外，任意接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，例如改性纤维素衍生物，例如EP 1 867 808或WO 2003/040279中描述的那些。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺以及其混合物。合适的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
其他合适的辅助材料包括但不限于防缩剂、防皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构化剂(structurants)和/或结构弹力剂。
在一个方面，该洗涤剂是压缩液体衣物洗涤剂组合物，包含：a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选从20％至80％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、肥皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，从约1％至约30％，优选从5％至30％的水；c)按该组合物的重量计，从约1％至约15％，优选从3％至10％的非氨基官能溶剂；以及d)按该组合物的重量计，从约5％至约20％的性能添加剂，选自螯合剂、污垢释放聚合物、酶及其混合物；其中该压缩液体衣物洗涤剂组合物包括以下中的至少一项：(i)该表面活性剂的阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比为从约1.5:1至约5:1，该表面活性剂包括按该组合物的重量计从约15％至约40％的阴离子表面活性剂并且包括按该组合物的重量计从约5％至约40％的肥皂；(ii)按该组合物的重量计从约0.1％至约10％的增泡剂(suds boosting agent)，选自增泡聚合物、阳离子表面活性剂、兼性离子表面活性剂、氧化胺表面活性剂、两性表面活性剂及其混合物；以及(ii)(i)和(ii)两者。所有成分都描述于WO 2007/130562中。可用于这些洗涤剂配制品中的另外的聚合物描述于WO 2007/149806中。
在另一方面中，该洗涤剂是一种压缩颗粒状(粉状)洗涤剂，包括a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选从15％至60％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、肥皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，从约10％至80％，优选从20％至60％的助洗剂，其中该助洗剂可以是一种选自以下的助洗剂的混合物，i)磷酸盐助洗剂，优选少于20％，更优选少于10％，甚至更优选少于5％的总助洗剂是磷酸盐助洗剂；ii)沸石助洗剂，优选少于20％，更优选少于10％，甚至更优选少于5％的总助洗剂是沸石助洗剂；iii)柠檬酸盐，优选0至5％的总助洗剂是柠檬酸盐助洗剂；iv)聚羧酸盐，优选0至5％的总助洗剂是聚羧酸盐助洗剂；v)碳酸盐，优选0至30％的总助洗剂是碳酸盐助洗剂以及vi)硅酸钠，优选0至20％的总助洗剂是硅酸钠助洗剂；c)按该组合物的重量计，从约0至25％的填料，例如硫酸盐，按该组合物的重量计，优选从1％至15％，更优选从2％至10％，更优选从3％至5％的填料；以及d)按该组合物的重量计，从约0.1％至20％的酶，按该组合物的重量计，优选从1％至15％，更优选从2％至10％的酶。
对于洗涤剂配制者而言重要的污垢和污渍由许多不同物质构成，并且已经开发具有不同底物特异性的一系列不同的酶以用于在涉及衣物和硬表面清洁(例如餐具洗涤)两者中使用。认为这些酶提供酶洗涤益处，因为与不具有酶的同一过程相比，它们在其应用至其中的清洁过程中特异性地改进污渍去除。本领域中已知的去污酶包括以下酶，例如糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、角质酶以及果胶酶。
在本发明的一个优选方面中，本发明的甘露聚糖酶可以与至少两种酶组合。这些另外的酶详细描述于“其他酶”部分中，更优选是至少三种、四种或五种酶。优选地，这些酶具有不同的底物特异性，例如碳水化合物分解活性(carbolytic activity)、蛋白分解活性、淀粉分解活性、脂肪分解活性、半纤维素分解活性或果胶分解活性。酶组合可以例如是本发明的甘露聚糖酶与另一种去污酶，例如本发明的甘露聚糖酶与蛋白酶、本发明的甘露聚糖酶与丝氨酸蛋白酶、本发明的甘露聚糖酶与淀粉酶、本发明的甘露聚糖酶与纤维素酶、本发明的甘露聚糖酶与脂肪酶、本发明的甘露聚糖酶与角质酶、本发明的甘露聚糖酶与果胶酶、或本发明的甘露聚糖酶与抗再沉积酶。更优选地，本发明的甘露聚糖酶与至少两种其他去污酶组合，例如本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶和淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和脂肪酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶和角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶和果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶和角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶和纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶和半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶和果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶和角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶和纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶和半纤维素酶。甚至更优选地，本发明的甘露聚糖酶可以与至少三种其他去污酶组合，例如本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及半纤维素酶。根据本发明的甘露聚糖酶可以与任何选自非穷尽性列表的酶组合，该列表包括：碳水化合物酶(例如淀粉酶)、半纤维素酶、果胶酶、纤维素酶、黄原胶酶或支链淀粉酶、肽酶、蛋白酶或脂肪酶。
在一个优选实施例中，本发明的甘露聚糖酶与丝氨酸蛋白酶组合，例如S8家族蛋白酶，如
Figure BDA0002432920140000651
在本发明的另一个实施例中，本发明的甘露聚糖酶可以与一种或多种金属蛋白酶组合，例如M4金属蛋白酶，包括
Figure BDA0002432920140000652
或嗜热菌蛋白酶。此类组合可以进一步包含如上概述的其他洗涤剂酶的组合。
该清洁过程或纺织品护理过程可以例如是衣物洗涤过程、餐具洗涤过程或硬表面(例如浴室瓷砖、地板、桌面、排水管、水槽以及脸盆)清洁。衣物洗涤过程可以例如是家庭衣物洗涤，但是它也可以是工业衣物洗涤。此外，本发明涉及用于洗涤织物和/或衣物的方法，其中该方法包括用含有洗涤剂组合物和至少一种本发明的甘露聚糖酶的洗涤溶液处理织物。例如，可以在机器清洁过程中或者在手动洗涤过程中进行清洁过程或纺织品保养过程。洗液可以是例如含有洗涤剂组合物的水性洗液。
经过洗涤、清洁的织物和/或衣物或者本发明的纺织品保养过程可以是常规的可洗涤衣物洗涤，例如家用洗涤。优选地，衣物洗涤的主要部分是衣物和织物，包括针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布。这些织物可以是基于纤维素的，例如天然纤维素，包括棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维或其共混物。这些织物还可以是基于非纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和丝；或者合成聚合物，如尼龙、芳香族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯以及斯潘德克斯弹性纤维(spandex)/弹性纤维；或其共混物以及基于纤维素和基于非纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或几种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻、亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。
最近几年，人们对替换洗涤剂中的组分的兴趣逐渐增加，这源于用可再生生物组分如酶和多肽替换石油化学品而不损害洗涤性能。当洗涤剂组合物的组分改变新酶活性或新酶相比于常用洗涤剂酶(如蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶)具有替代和/或改进的特性时，需要新酶来实现与传统洗涤剂组合物比较时类似或改进的洗涤性能。
典型的洗涤剂组合物包括除酶之外的各种组分，这些组分具有不同的作用，一些组分像表面活性剂降低洗涤剂的表面张力，这允许正在清洁的污渍被提起和分散并随后被洗涤出来，其他组分像漂白系统通常通过氧化去除颜色并且许多漂白剂还具有强杀菌特性，并且用于消毒和灭菌。再其他组分像助洗剂和螯合剂例如通过从液体中去除金属离子来软化洗涤水。
在一个具体实施例中，本发明涉及包含本发明的甘露聚糖酶的组合物在衣物或餐具洗涤中的用途，其中所述酶组合物进一步包含以下中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分。
在本发明的一个优选实施例中，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量相比于在未添加本发明的甘露聚糖酶情况下使用的表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量有所减少。优选地，作为表面活性剂、助洗剂、螯合剂、漂白系统和/或漂白组分的至少一种组分以这样的量存在，该量比该组分在未添加本发明甘露聚糖酶的系统中的量(如这种组分的常规量)少1％、例如少2％、例如少3％、例如少4％、例如少5％、例如少6％、例如少7％、例如少8％、例如少9％、例如少10％、例如少15％、例如少20％、例如少25％、例如少30％、例如少35％、例如少40％、例如少45％、例如少50％。在一个方面，将本发明的甘露聚糖酶用于洗涤剂组合物中，其中所述组合物不含至少一种组分，该组分是表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分和/或聚合物。
洗涤方法
本发明的洗涤剂组合物理想地适用于在衣物洗涤应用中使用。因此，本发明包括用于洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包含根据本发明的洗涤剂组合物的清洁洗衣溶液接触的步骤。该织物可以包括在正常消费者使用条件下能够被清洗的任何织物。该溶液优选具有从约5.5至约8的pH。可以在溶液中按以下浓度使用这些组合物：从约100ppm，优选500ppm至约15,000ppm。水温的范围典型地是从约5℃至约90℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃以及约90℃。水与织物比率典型地是从约1:1至约30:1。
在具体实施例中，在从约5.0至约11.5的pH进行该洗涤方法，或在替代性实施例中，甚至在从约6至约10.5，例如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至约7、约5.5至约11、约5.5至约10、约5.5至约9、约5.5至约8、约5.5.至约7、约6至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6.5至约11、约6.5至约10、约6.5至约9、约6.5至约8、约6.5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9或约7至约8，优选地约5.5至约9，并且更优选地约6至约8的pH进行该洗涤方法。
在具体实施例中，在以下硬度下进行该洗涤方法：从约0°dH至约30°dH，例如约1°dH、约2°dH、约3°dH、约4°dH、约5°dH、约6°dH、约7°dH、约8°dH、约9°dH、约10°dH、约11°dH、约12°dH、约13°dH、约14°dH、约15°dH、约16°dH、约17°dH、约18°dH、约19°dH、约20°dH、约21°dH、约22°dH、约23°dH、约24°dH、约25°dH、约26°dH、约27°dH、约28°dH、约29°dH、约30°dH。在典型欧洲洗涤条件下，硬度是约15°dH，在典型美国洗涤条件下，是约6°dH，并且在典型亚洲洗涤条件下，是约3°dH。
本发明涉及用包含本发明的甘露聚糖酶的洗涤剂组合物清洁织物、餐具或硬表面的方法。
一个优选实施例涉及清洁方法，所述方法包含在适合于清洁物体的条件下将所述物体与包含本发明的甘露聚糖酶的清洁组合物接触的步骤。在一个优选实施例中，该清洁组合物是洗涤剂组合物并且该过程是衣物洗涤或餐具洗涤过程。
仍另一个实施例涉及用于从织物上除去污渍的方法，该方法包括在适合于清洁物体的条件下将所述织物与包含本发明的甘露聚糖酶的组合物接触。
低温用途
本发明的一个实施例涉及进行衣物洗涤、餐具洗涤或工业清洁的方法，该方法包括使有待清洁的表面与本发明的甘露聚糖酶接触，并且其中所述衣物洗涤、餐具洗涤、工业或机构清洁在约40℃或更低的温度下进行。本发明的一个实施例涉及甘露聚糖酶在衣物洗涤、餐具洗涤或清洁过程中的用途，其中衣物洗涤、餐具洗涤、工业清洁中的温度是约40℃或以下。
在另一个实施例中，本发明涉及根据本发明的甘露聚糖酶在除蛋白过程中的用途，其中除蛋白过程中的温度是约40℃或以下。
在以上确定的方法和用途的每一者中，洗涤温度是约40℃或更低，例如约39℃或更低、例如约38℃或更低、例如约37℃或更低、例如约36℃或更低、例如约35℃或更低、例如约34℃或更低、例如约33℃或更低、例如约32℃或更低、例如约31℃或更低、例如约30℃或更低、例如约29℃或更低、例如约28℃或更低、例如约27℃或更低、例如约26℃或更低、例如约25℃或更低、例如约24℃或更低、例如约23℃或更低、例如约22℃或更低、例如约21℃或更低、例如约20℃或更低、例如约19℃或更低、例如约18℃或更低、例如约17℃或更低、例如约16℃或更低、例如约15℃或更低、例如约14℃或更低、例如约13℃或更低、例如约12℃或更低、例如约11℃或更低、例如约10℃或更低、例如约9℃或更低、例如约8℃或更低、例如约7℃或更低、例如约6℃或更低、例如约5℃或更低、例如约4℃或更低、例如约3℃或更低、例如约2℃或更低、例如约1℃或更低。
在另一个优选实施例中，洗涤温度在约5℃-40℃的范围内，例如约5℃-30℃、约5℃-20℃、约5℃-10℃、约10℃-40℃、约10℃-30℃、约10℃-20℃、约15℃-40℃、约15℃-30℃、约15℃-20℃、约20℃-40℃、约20℃-30℃、约25℃-40℃、约25℃-30℃或约30℃-40℃。在特别优选实施例中，洗涤温度是约20℃、约30℃、或约40℃。
动物饲料和饲料添加剂
本发明还涉及包括本发明甘露聚糖酶的动物饲料和动物饲料添加剂。
在一个方面，该动物饲料或动物饲料添加剂包含第一方面或第二方面的多肽和一种或多种选自由维生素、矿物质和氨基酸组成的表的组分。
在一个方面，该动物饲料或动物饲料添加剂包含第五方面或第六方面的颗粒和一种或多种选自由维生素、矿物质和氨基酸组成的表的组分。
在一个方面，该动物饲料或动物饲料添加剂包含第七方面或第八方面的液体配制品和一种或多种选自由维生素、矿物质和氨基酸组成的表的组分。
在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂进一步包含一种或多种另外的酶，这些酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
在一个实施例中，该动物饲料或动物饲料添加剂包含一种或多种微生物，这些微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
应用
本发明的甘露聚糖酶可以用于其中需要降解甘露聚糖的应用。其中可以使用甘露聚糖酶的实例是在从软木和棕榈仁滤饼生产生物乙醇中，用于改进动物饲料以及在咖啡的水解中。此外，瓜尔胶被用于很多食物产品中，并且被用于石油和天然气工业中，所以本发明的甘露聚糖酶可以用于洗涤剂中以除去含甘露聚糖污渍，用于水力压裂以产生从钻孔延伸进入岩层的地下压裂，从而增加岩层可以产生的流体的速率或用于清洁钻孔滤饼。因此甘露聚糖可以用于由钻井孔造成的地下地层的压裂中，或甘露聚糖可以被用作钻孔滤饼中的组分。
在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖。在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的过程。
在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于控制钻井液的粘度。在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于压裂由钻井孔造成的地下地层。
本发明的甘露聚糖酶可用于防止、减少或去除物品的恶臭。因此，在一个实施例中，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于防止、减少或去除物品的恶臭。
本发明的甘露聚糖酶在防止、减少或去除生物膜方面的用途
当物品上存在微生物并且在物品上粘在一起时，生物膜会在纺织品上发展。一些微生物倾向于粘附至物品(如纺织品)的表面上。一些微生物粘附在此类表面上并且在表面上形成生物膜。生物膜可以是粘性的并且粘附的微生物和/或生物膜会是难以去除的。此外，由于生物膜的粘性性质，生物膜粘附污垢。市场上可获得的商业衣物洗涤剂组合物并不去除此类粘附的微生物或生物膜。
本发明涉及第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途，其中该多肽获自真菌来源，并且其中该物品是纺织品。在一个实施例中，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于防止、减少或去除物品的粘性。
本发明的甘露聚糖酶在食品加工和动物饲料方面的用途
几种抗营养因素可能会限制特定植物材料在制备动物饲料和人类食品中的使用。例如，含有寡甘露聚糖(如甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖)的植物材料会降低动物对营养化合物(如矿物质、维生素、糖和脂肪)的可消化性和吸收。具体地，这些负面影响是由于含甘露聚糖的聚合物的高粘度以及含甘露聚糖的聚合物吸收营养化合物的能力。使用降解含甘露聚糖的聚合物的酶，即内切-β-甘露聚糖酶(如本文所述的甘露聚糖酶)，可以降低这些作用，这些酶允许在饲料中包含较高比例的含廉价植物材料的含甘露聚糖的聚合物，从而降低了饲料成本。因此，通过本发明的甘露聚糖酶的活性，含甘露聚糖的聚合物被分解成更简单的糖，这些更简单的糖可以更容易地被同化以提供额外的能量。因此，本发明进一步涉及将本发明的甘露聚糖酶用于食品或动物饲料的加工和/或生产。
因此，本发明涉及包含本发明的甘露聚糖酶的动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品。
本发明进一步涉及用于制备这种动物饲料组合物、和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的方法，该方法包括将本发明的甘露聚糖酶与一种或多种动物饲料成分和/或动物饲料添加剂成分和/或宠物食品成分混合。
此外，本发明还涉及本发明的甘露聚糖酶在制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品中的用途。
本发明的甘露聚糖酶用于降解纤维素材料和/或生产发酵产物的用途
甘露聚糖可以用于降解纤维素材料，用于产生发酵产物并且用于发酵纤维素材料，例如，用于产生发酵产物的方法中，该方法包括：(a)用酶组合物糖化纤维素材料，其中该酶组合物包含第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品；(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；并且(c)从发酵中回收该发酵产物。可以在糖化之前预处理纤维素材料。在一个实施例中，该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
在另一个实施例中，本发明涉及发酵纤维素材料的方法，该方法包括：用一种或多种发酵微生物发酵该纤维素材料，其中将该纤维素材料用酶组合物糖化，该酶组合物包含第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品。可以在糖化之前预处理纤维素材料。在一个实施例中，该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
本发明的甘露聚糖酶用于发酵饮料的用途
在一个方面，本发明涉及制备发酵饮料如啤酒或葡萄酒的方法，该方法包括将第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品与麦芽和/或辅料混合。
另一个方面涉及提供发酵饮料的方法，该方法包括使醪液和/或麦芽汁与第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品接触的步骤。
在本发明的上下文中，术语“发酵饮料”意在包括通过以下方法生产的任何饮料，如葡萄酒或啤酒，该方法包括发酵过程，如微生物、细菌和/或酵母发酵。
在本发明的一个方面，该发酵饮料是啤酒。术语“啤酒”意指包括通过发酵/酿造含淀粉的植物材料生产的任何发酵的麦芽汁。通常，啤酒是由麦芽或辅料或麦芽和辅料的任何组合作为含淀粉的植物材料生产的。如本文所用，术语“麦芽”被理解为任何发芽的谷类谷粒，如发芽的大麦或小麦。
如本文所用，术语“辅料”是指不是麦芽(如大麦或小麦麦芽)的任何含淀粉和/或糖的植物材料。作为辅料的实例，可以提及可用作淀粉来源的材料，例如普通玉米糁、精制玉米糁、制啤酒用研磨酵母、水稻、高粱、精制玉米淀粉、大麦、大麦淀粉、去壳大麦、小麦、小麦淀粉、烘培谷类、谷类片、黑麦、燕麦、马铃薯、树薯、木薯和糖浆(例如玉米糖浆、甘蔗糖浆、转化糖浆、大麦和/或小麦糖浆)等。
如本文所用，术语“醪液”是指任何包含淀粉和/或糖的植物材料如谷粉(例如包括压碎的大麦麦芽、压碎的大麦)和/或其他辅料或其组合的含水浆液，随后与水混合以分离成麦芽汁和废糟。
如本文所用，术语“麦芽汁”是指在淀粉糖化(mashing)期间，对谷粉进行提取后，未发酵的液体流出物(run-off)。
本发明的甘露聚糖酶用于处理咖啡提取物的用途
本发明的甘露聚糖酶也可以用于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖。在某些优选的实施例中，本发明的甘露聚糖酶用于在液体咖啡提取物冷冻干燥期间抑制凝胶形成。提取物粘度的降低减少了干燥期间的能量消耗。在某些其他优选的实施例中，为了减少酶的消耗并避免咖啡提取物的污染，本发明的甘露聚糖酶以固定化形式应用。这种用途还披露于EP 676 145中。
一般而言，在本发明的分离的甘露聚糖酶或其片段或变体的存在下，在适合于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖的条件下孵育咖啡提取物。
因此，在一个实施例中，本发明涉及产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
(b)添加所述咖啡豆水和第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品；
(c)孵育以制造水性咖啡提取物；以及
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
本发明的甘露聚糖酶在烘焙食品中的用途
在另一方面，本发明涉及制备烘焙产品的方法，该方法包括将第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品添加至面团，然后烘烤该面团。
烘焙产品的实例是本领域技术人员众所周知的，并且包括面包、面包卷、千层饼、甜发酵面团、小圆面包、蛋糕、咸饼干、饼干、小面包、华夫饼、威化饼、墨西哥玉米粉圆饼、早餐谷物、挤压制品等。
本发明的甘露聚糖酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中。面包改良剂是含有多种成分的组合物，其改善了面团特性和烘焙产品(例如面包和蛋糕)的质量。面包改良剂通常由于其有益效果(例如面团稳定性以及面包质地和体积)而被添加到工业烘焙过程中。面包改良剂通常含有脂肪和油、以及添加剂(像乳化剂、酶、抗氧化剂、氧化剂、稳定剂和还原剂)。除本发明的甘露聚糖酶外，面包改良剂中也可能存在其他酶，包括淀粉酶、半纤维素酶、淀粉分解复合物、脂肪酶、蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、支链淀粉酶、非淀粉多糖降解酶和氧化还原酶(如葡萄糖氧化酶、脂肪氧合酶或抗坏血酸氧化酶)。
在一个方面，本发明的甘露聚糖酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中，该面包改良剂组合物还包含葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖源，如魔芋胶、瓜尔胶、刺槐豆胶(长角豆(Ceratonia siliqua))、干椰肉粕、象牙坚果甘露聚糖(象牙椰子(Phyteleohas macrocarpa))、海藻甘露聚糖提取物、椰子粕和啤酒酵母的细胞壁(可以是干燥的，或以啤酒酵母提取物的形式使用)。
本发明的另一方面涉及本发明的甘露聚糖酶在面团中用于改善面团耐受性、柔性和粘性的用途。优选地，可以向其中添加本发明的甘露聚糖酶的面团不是纯小麦面粉面团，而是除了纯小麦面粉之外或代替纯小麦面粉，还包含麸皮或燕麦、大米、小米、玉米或豆类面粉。
本发明的又另一方面涉及本发明的任何甘露聚糖酶在面团中用于改善瓤结构(crumb structure)并延缓最终烘焙产品如面包的老化的用途。
本发明的甘露聚糖酶在乳制食品中的用途
在本发明的一个方面，本发明的甘露聚糖酶可以添加到乳或还添加了葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的任何其他乳制品中。典型的葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖源在上文在烘焙方面列出，并包括瓜尔胶或魔芋胶。当在大肠或结肠中以有利的种群密度发现时，本发明的甘露聚糖酶与葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的组合释放甘露聚糖酶水解产物(甘露寡糖(mannooligosaccharide))，该甘露聚糖酶水解产物通过促进通常与良好健康相关的益生菌(特别是双歧杆菌和乳酸杆菌乳酸菌)的选择性生长和增殖来充当可溶性益生元。
在一个方面，本发明涉及制备乳或乳制品的方法，该方法包括向乳或乳制品中添加(a)葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖和(b)第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品。
在本发明的一个方面，在添加到基于乳品的食品中之前或之后，将本发明的甘露聚糖酶与任何葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖组合使用，以产生包含益生元甘露聚糖水解产物的基于乳品的食品。在本发明的另一方面，如此生产的含甘露寡糖的乳制品能够增加有益人肠道菌群中的种群，并且在本发明的又另一方面，基于乳品的食品可包含本发明的甘露聚糖酶以及葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖的任何来源，并且剂量足以用于接种已知在人类大肠中有益的至少一种细菌菌株(如双歧杆菌或乳酸杆菌)。优选地，所述基于乳品的食品是酸奶或乳饮料。
本发明的甘露聚糖酶用于纸浆漂白的用途
本发明的甘露聚糖酶可进一步用于纸浆(例如化学纸浆、半化学纸浆、牛皮纸浆、机械纸浆或通过亚硫酸盐法制备的纸浆)的酶辅助漂白。因此，本发明涉及漂白纸浆的方法，该方法包括将纸浆与第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品一起孵育。
在一些实施例中，纸浆是用氧气、臭氧、过氧化物或过氧酸漂白的无氯纸浆。在一些实施例中，本发明的甘露聚糖酶用于展示出低木质素含量的纸浆的酶辅助漂白，该纸浆是通过改良的制浆方法或连续制浆方法生产的。在一些其他实施例中，本发明的甘露聚糖酶单独使用或优选与木聚糖酶和/或内切葡聚糖酶和/或α-半乳糖苷酶和/或纤维二糖水解酶组合使用。
在下面各段中对本发明进行了进一步的概述：
1.一种具有甘露聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少91％，例如至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个位置中的一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
2.如项目1所述的多肽，其中该多肽进一步包含碳水化合物结合模块(CBM)。
3.如项目2所述的多肽，其中该碳水化合物结合模块是家族35CBM。
4.如项目2至3中任一项所述的多肽，其中该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
5.如项目1所述的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330、SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
6.一种具有甘露聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少87％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(c)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(d)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(e)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(f)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
7.如项目6所述的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、或SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
8.一种组合物，该组合物包含如项目1至7中任一项所述的多肽。
9.包含如项目1至7中任一项所述的多肽和一种或多种选自下组的组分的组合物，该组由以下组成：水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂、漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂、酶稳定剂、酶激活剂、抗氧化剂、以及增溶剂。
10.如项目8至9中任一项所述的组合物，该组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
11.如项目19中所述的组合物，其中该另外的酶选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶、或其任何组合。
12.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
13.如项目12所述的洗涤剂组合物，其中该多肽进一步包含碳水化合物结合模块(CBM)。
14.如项目13所述的洗涤剂组合物，其中该碳水化合物结合模块是家族35CBM。
15.如项目13至14中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
16.如项目12所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330、SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
17.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(c)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(d)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(e)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(f)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
18.如项目17所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、或SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
19.如项目12至18中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种选自下组的组分，该组由以下组成：水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂、漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂、酶稳定剂、酶激活剂、抗氧化剂、以及增溶剂。
20.如项目18至19中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
21.如项目20所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶、或其任何组合。
22.一种包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含具有甘露聚糖酶活性的选自下组的多肽，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
23.如项目22所述的颗粒，其中该多肽进一步包含碳水化合物结合模块(CBM)。
24.如项目23所述的颗粒，其中该碳水化合物结合模块是家族35CBM。
25.如项目23至24中任一项所述的颗粒，其中该多肽与SEQ ID NO:3具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
26.如项目22所述的颗粒，该颗粒包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330、SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
27.一种包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含具有甘露聚糖酶活性的选自下组的多肽，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(c)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(d)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(e)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(f)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
28.如项目27所述的颗粒，该颗粒包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
29.如项目22至28中任一项所述的颗粒，其中该包衣包含盐和/或蜡和/或面粉。
30.如项目22至29中任一项所述的颗粒，该颗粒进一步包含一种或多种另外的酶。
31.如项目30所述的颗粒，其中该另外的酶选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶、或其任何组合。
32.一种液体组合物，该液体组合物包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
33.如项目32所述的液体组合物，其中该多肽进一步包含碳水化合物结合模块(CBM)。
34.如项目33所述的液体组合物，其中该碳水化合物结合模块是家族35CBM。
35.如项目33至34中任一项所述的液体组合物，其中该多肽与SEQ ID NO:3或SEQID NO:11具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
36.如项目32所述的液体组合物，该液体组合物包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330、SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
37.一种液体组合物，该液体组合物包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:9的成熟多肽编码序列具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(c)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(d)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(e)多肽，该多肽包含(a)、(b)或(c)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(f)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有成熟多肽的至少90％的长度。
38.如项目37所述的液体组合物，该液体组合物包含SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498、SEQ ID NO:10的成熟多肽或SEQ ID NO:11的氨基酸1至527或由其组成。
39.如项目32至38中任一项所述的液体配制品，其中该多肽的剂量为0.0001％至10％w/w液体配制品之间。
40.如项目32至39中任一项所述的液体配制品，其中该多元醇的剂量为5％至80％w/w的液体配制品之间。
41.如项目32至40中任一项所述的液体配制品，其中该多元醇选自下组，该组由以下组成：甘油、山梨醇、丙二醇(MPG)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(PEG)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(PPG)或其任何组合。
42.如项目32至41中任一项所述的液体配制品，其中该配制品进一步包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂。
43.如项目42所述的液体配制品，其中该防腐剂选自下组，该组由以下组成：苯氧基乙醇、1,2-苯并噻唑啉-3(2H)-酮、山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、苯甲酸钾、甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、季铵盐(如BAC/ADBAC；烷基苄基氯化铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、西曲氯铵)、精油和有机酸或其任何组合。
44.如项目32至43中任一项所述的液体组合物，该液体组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
45.如项目44中所述的液体组合物，其中该另外的酶选自下组，该组由以下组成：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶和转谷氨酰胺酶、或其任何组合。
46.一种动物饲料或动物饲料添加剂，该动物饲料或动物饲料添加剂包含如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体组合物以及一种或多种选自以下列表的组分，该列表由以下组成：
一种或多种维生素；
一种或多种矿物质；以及
一种或多种氨基酸。
47.如项目46所述的动物饲料或动物饲料添加剂，其中该动物饲料或动物饲料添加剂进一步包含一种或多种另外的酶，这些酶选自下组，该组由以下组成：乙酰木聚糖酯酶、酰基甘油脂肪酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、阿魏酸酯酶、半乳聚糖酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-葡糖苷酶、溶血磷脂酶、溶菌酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶(甘露聚糖酶)、植酸酶、磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶D、蛋白酶、支链淀粉酶、果胶酯酶、三酰基甘油脂肪酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或其任何组合。
48.如项目46至47中任一项所述的动物饲料或动物饲料添加剂，其中该动物饲料或动物饲料添加剂包含一种或多种微生物，这些微生物选自下组，该组由以下组成：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、两歧双歧杆菌、动物双歧杆菌、双歧杆菌属物种、肉食杆菌属物种、丁酸梭菌、梭菌属物种、屎肠球菌、肠球菌属物种、乳杆菌属物种、嗜酸乳杆菌、香肠乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳球菌、乳球菌属物种、明串珠菌属物种、埃氏巨型球菌、巨型球菌属物种、乳酸片球菌、片球菌属物种、特氏丙酸杆菌、丙酸杆菌属物种和链球菌属物种或其任何组合。
49.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的用途。
50.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品用于控制钻井液的粘度的用途。
51.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)的用途。
52.如项目49至51中任一项所述的用途，其中该多肽具有酶洗涤益处。
53.一种用于制备食物或饲料组合物和/或食物或饲料添加剂的方法，该方法包括将如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品与一种或多种食物或饲料和/或食物或饲料添加剂成分混合。
54.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品在制备食物或饲料组合物和/或食物或饲料添加剂和/或食物或饲料中的用途。
55.一种用于降解甘露聚糖，例如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的方法，该方法包括向甘露聚糖施用包含如项目1至7中任一项的组合物、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品。
56.如项目55所述的方法，其中该甘露聚糖在纺织品的表面上或硬表面上，例如餐具洗涤。
57.如项目55所述的方法，其中该甘露聚糖在由钻井孔造成的地下地层的压裂中使用。
58.如项目55所述的方法，其中该甘露聚糖是钻孔滤饼中的组分。
59.一种用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
(b)添加所述咖啡豆水和如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品；
(c)孵育以制造水性咖啡提取物；以及
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
60.一种用于降解纤维素材料的方法，该方法包括：在如项目1至7中任一项所述的具有甘露聚糖酶活性的多肽的存在下，用酶组合物处理该纤维素材料。
61.一种用于产生发酵产物的方法，该方法包括：
(a)用酶组合物糖化纤维素材料，其中该酶组合物包含如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品；
(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；以及
(c)从发酵中回收该发酵产物。
62.如项目60或61中任一项所述的方法，其中对该纤维素材料进行预处理。
63.如项目60至62中任一项所述的方法，其中该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
64.一种发酵纤维素材料的方法，该方法包括：用一种或多种发酵微生物发酵该纤维素材料，其中用酶组合物糖化该纤维素材料，其中该酶组合物包含如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品。
65.如项目64所述的方法，其中在糖化之前对该纤维素材料进行预处理。
66.如项目64至65中任一项所述的方法，其中该酶组合物包含选自下组的一种或多种酶，该组由以下组成：纤维素酶、AA9多肽、半纤维素酶、酯酶、棒曲霉素、木质素分解酶、氧化还原酶、果胶酶、蛋白酶、以及膨胀素。
67.一种编码如项目1至7中任一项所述的多肽的多核苷酸。
68.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如项目67所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽在表达宿主中的产生的一个或多个控制序列。
69.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如项目67所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
70.一种产生如项目1至7中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养细胞，该细胞以其野生型形式产生该多肽；和
(b)回收该多肽。
71.一种产生如项目1至7中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如项目46所述的宿主细胞；和
(b)回收该多肽。
72.一种用编码如项目1至7中任一项所述的多肽的多核苷酸转化的转基因植物、植物部分或植物细胞。
73.一种全培养液配制品或细胞培养组合物，该全培养液配制品或细胞培养组合物包含如项目1至7中任一项所述的多肽。
74.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途。
75.如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品用于防止、减少或去除物品的恶臭。
76.一种制备发酵饮料的方法，该方法包括将如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品与麦芽和/或辅料混合。
77.一种制备发酵饮料的方法，该方法包括使醪液和/或麦芽汁与如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品接触。
78.如项目76至77中任一项所述的方法，其中该发酵饮料是葡萄酒或啤酒。
79.一种制备烘焙产品的方法，该方法包括将如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品与面团混合，然后烘烤该面团。
80.一种改善面团耐受性、柔性和/或粘性的方法，该方法包括将如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品与该面团混合。
81.一种改善瓤结构并延缓最终烘焙产品老化的方法，该方法包括将如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品与该面团混合，然后烘烤该面团。
82.一种制备乳或乳制品的方法，该方法包括向该乳或乳制品中添加
(a)葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖；和
(b)如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品。
83.一种漂白纸浆的方法，该方法包括将该纸浆与如项目1至7中任一项所述的多肽、如项目8至11中任一项所述的组合物、如项目12至21中任一项所述的洗涤剂组合物、如项目22至31中任一项所述的颗粒或如项目32至45中任一项所述的液体配制品一起孵育，至面团。
通过以下实例进一步描述本发明，但不应将其理解为对本发明范围的限制。
实例
菌株
编码GH26甘露聚糖酶基因的DNA分离自又松类芽孢杆菌，该又松类芽孢杆菌从2007年或之前在丹麦收集的土壤样品中分离。
将来自该菌株的染色体DNA使用Illumina技术进行全基因组测序。分析基因组序列中具有糖基水解酶家族26结构域(根据CAZY的定义)的蛋白质序列，并在该基因组中鉴定出GH26甘露聚糖酶基因。
材料
用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。
实例1：还原端测定
为了估计在底物水解后的甘露糖产率，使用了由Lever(1972),Anal.Biochem.[分析生物化学]47:273-279开发的还原端测定。该测定是基于4-羟基苯甲酸酰肼，它在碱性条件下与糖的还原端反应。产物是强黄色阴离子，在410nm吸收。
方法
在PAHBAH缓冲液中将4-羟基苯酰肼(PAHBAH)(西格玛公司(Sigma)，H9882)稀释至15mg/ml的浓度。PAHBAH缓冲液含有：50g/L K-Na-酒石酸盐(默克公司(Merck)，1.08087)和20g/L氢氧化钠(西格玛公司，S8045)。就在使用前制成这一PAHBAH混合物。
在96孔PCR板(赛默科技公司(Thermo Scientific))中混合70μl PAHBAH混合物和MiliQ水。添加来自水解实验的样品。样品和MiliQ总是达到150μl的总体积，但是样品的稀释度不同。用粘性PCR密封箔片(赛默科技公司)密封该板。在PTC-200热循环仪(MJ研究公司(MJ Research))中将板在95℃孵育10min，冷却并且保持在10℃持续1min。将100μl样品转移至平底96孔微量滴定板(NuncTM)中，并且在SpectraMax 190吸光度酶标仪(分子装置公司(Molecular Devices))上，在405nm测量显色。将结果与甘露糖标准品进行比较，这些甘露糖标准品已经经历了与其进行比较的样品相同的处理和稀释。
实例2：来自又松类芽孢杆菌的GH26β-1,4-甘露聚糖酶的克隆和表达。
编码来自又松类芽孢杆菌的GH26甘露聚糖酶的基因(SEQ ID NO:1)被表达为包括GH26结构域和CBM35结构域的全长版本以及不具有CBM35结构域的截短版本。两种形式均表示为具有6xHis标签(直接添加到蛋白质的C-末端)的细胞内酶。将这些构建体制备为线性整合构建体，其中这些基因通过PCR在两个枯草芽孢杆菌同源染色体区域之间与强启动子和氯霉素抗性标记进行融合。通过SOE PCR进行融合(Horton,R.M.,Hunt,H.D.,Ho,S.N.,Pullen,J.K.和Pease,L.R.(1989)Engineering hybrid genes without the use ofrestriction enzymes,gene splicing by overlap extension Gene[不使用限制酶，使用重叠延伸剪接术工程化杂合基因]Gene[基因]77:61-68)。专利申请WO 2003095658中也描述了SOE PCR方法。在三联启动子系统(如WO 99/43835中所描述)的控制下表达这些基因，该启动子系统由包含稳定化序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)的启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)的启动子和苏云金芽孢杆菌cryIIIA启动子组成。将线性PCR构建体转化到枯草芽孢杆菌中。在每ml补充有6μg氯霉素的LB板上选择转化体。在30℃下在250rpm震荡下，将来自含有整合表达构建体的每个构建体的重组枯草芽孢杆菌克隆在3L烧瓶中培养3天，该烧瓶含有500ml基于酵母提取物的培养基。将每种培养液以20,000x g离心20分钟，并且将上清液小心地与丸粒化材料倾析分开。使用配备有0.2μm过滤器的过滤装置(乐基因公司(Nalgene))过滤每种上清液以去除任何细胞碎片。如实例3所述从过滤的上清液中纯化酶。
通过用克劳氏芽孢杆菌分泌信号(具有以下氨基酸序列：MKKPLGKIVASTALLISVAFSSSIASA，SEQ ID NO:14)代替基因天然分泌信号来表达编码来自衣氏类芽孢杆菌的GH26甘露聚糖酶的基因(SEQ ID NO:9)，并且在蛋白质的C-末端直接添加HPHPHPHP(SEQ ID NO:15)-标签。如以上关于来自又松类芽孢杆菌的GH26甘露聚糖酶所描述地进行含酶上清液的构建、转化、培养和收获。
实例3：GH26甘露聚糖酶的纯化
将表达GH26甘露聚糖酶的两个重组体按以下方式纯化：将上清液的pH用3M Tris调节至pH 8，静置1小时，并且然后使用配备有0.2μm过滤器的过滤装置(乐基因公司)过滤。将过滤的上清液应用到5ml HisTrapTMExcel柱(GE医疗集团生命科学部(GE HealthcareLife Sciences))上，将该柱用5个柱体积(CV)的50mM Tris/HCl pH 8预平衡。通过用8CV的50mM Tris/HCl pH 8洗涤该柱来洗脱未结合的蛋白质。用50mM HEPES pH 7-10mM咪唑洗脱甘露聚糖酶，并通过在280nm处的吸光度监测洗脱。将洗脱的甘露聚糖酶在HiPrepTM26/10脱盐柱(GE医疗集团生命科学部)上脱盐，将该柱用3CV的50mM HEPES pH 7-100mM NaCl预平衡。使用相同的缓冲液，以10ml/分钟的流速从该柱洗脱甘露聚糖酶。选择相关级分，并且使用4％-12％Bis-Tris凝胶(英杰公司(Invitrogen))和2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)SDS-PAGE运行缓冲液(英杰公司)，基于色谱图和SDS-PAGE分析进行合并。将凝胶用InstantBlue(诺韦新公司(Novexin))染色，并使用miliQ水脱色。通过在280nm处的吸光度确定纯化的酶的浓度，以给出又松类芽孢杆菌全长甘露聚糖酶(SEQ ID NO：6)、又松类芽孢杆菌截短的甘露聚糖酶(SEQ ID NO：8)和衣氏类芽孢杆菌甘露聚糖酶(SEQ ID NO：13)的浓度。
GH26甘露聚糖酶(氨基酸SEQ ID NO：6)的特征
通过EDMAN降解而确定的N-末端序列是：MNMEGTP(SEQ ID NO：16)。该样品与另外2个正在检测的序列NMEGTPS(SEQ ID NO：17)和MEGTPSV(SEQ ID NO：18)异源。
通过完整分子量分析而确定的分子量是56577.0Da。
成熟序列(来自EDMAN N-末端测序数据和完整MS数据)：
Figure BDA0002432920140000921
(SEQ ID NO：6的氨基酸1-504)
来自这一成熟序列的计算的分子量是56579.6Da。
实例4：胡芦巴胶(fenugreek gum)的制备
根据修改的程序提取胡芦巴胶(Brummer，Y.等人Food Hydrocolloids[食品用亲水胶体]2003，17，229-236)。
用70℃的温暖庚烷(880mL)提取124g在当地超市购买(但也可在线购买)的研磨的胡芦巴种子，持续60min，以去除非极性脂质。抽滤后，将残留物在60℃下用96％乙醇(760mL)萃取150min，以去除极性脂质。抽滤后，将残余物悬浮在1,200g 60∶40(w/w：720∶480g)的乙醇∶水混合物中，并在环境温度下搅拌60min以去除糖和盐。抽滤后，将残留物在环境温度下干燥过夜。
在5℃-10℃的1,700g离子交换水中，从50.0g脱脂的胡芦巴种子提取胡芦巴半乳甘露聚糖，持续120min。将所得浆液离心(14,000g，持续20min)。将上清液在96％乙醇中沉淀至最终浓度为50％(w/w)。将所得的凝结物压入悬浮在96％乙醇中，以利于去除水。此后，将所得纤维在环境温度下干燥过夜。总产率为18％。
实例5：GH26甘露聚糖酶的底物特异性
胡芦巴胶和瓜尔胶都是半乳甘露聚糖。胡芦巴胶是半乳甘露聚糖的最大替代物，并且如实例4中所述制备。瓜尔胶被替代较少，购自美国Megazyme公司。
在pH 7.5的磷酸盐缓冲液中制备2.5mg/mL的半乳甘露聚糖溶液，并在30℃下用0.25mg/L甘露聚糖酶或不加酶(空白)孵育30min。Mannaway是可从诺维信公司(贝格斯维德
Figure BDA0002432920140000932
丹麦)获得的可商购甘露聚糖酶。然后如实例1所述测量还原端。
通过减去空白样品(不添加酶，即纯半乳甘露聚糖溶液，在30℃下孵育30min)，计算出405nm处的光密度差(ΔOD)，数据示于下表1中。
表1.从不同底物释放的还原端
Figure BDA0002432920140000931
来自又松类芽孢杆菌的GH26甘露聚糖酶(SEQ ID NO:6)在水解胡芦巴胶和瓜尔胶方面优于商业产品Mannaway。
实例6：使用AMSA的GH26甘露聚糖酶的洗涤性能
使用自动机械应力测定(AMSA)来评估衣物洗涤过程中的洗涤性能。使用AMSA，可以检査大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。AMSA板具有许多用于测试溶液的槽和盖子，盖子针对所有槽开口强力挤压衣物洗涤样品(待洗涤的纺织品)。在洗涤时间期间，板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈摇动以使测试溶液与纺织品接触并以规则的、周期性摆动方式施加机械应力。
以洗涤过的纺织品的色彩亮度测量洗涤性能。也可以将亮度表示为当用白光照射样品时从样品反射的光的强度。当样品受到污染时，反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用来衡量洗涤性能。
使用专业平板扫描仪(Kodak iQsmart，柯达公司(Kodak)，Midtager 29，DK-2605布隆德比
Figure BDA0002432920140000944
丹麦)进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
为了从扫描的图像中提取光强度的值，将来自图像的24-位像素值转化为红色、绿色以及蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)：
Figure BDA0002432920140000941
如描述于用于衣物洗涤方法中的自动机械应力测定(AMSA)进行这些实验，使用1个循环洗涤程序以及表2中指定的实验条件。
表2：AMSA洗涤试验的条件
Figure BDA0002432920140000942
表3给出了模型T洗涤剂的组成，表4给出了模型B洗涤剂的组成。
表3：模型T洗涤剂的组成
Figure BDA0002432920140000943
Figure BDA0002432920140000951
表4：模型B洗涤剂的组成
成分(缩写) 说明 重量％
LAS (C10-C13)烷基苯磺酸 7.20
SLES 月桂基乙醚硫酸钠 10.58
大豆皂 2.75
椰油皂 2.75
AEO 醇乙氧基化物 6.60
NaOH 氢氧化钠 1.05
乙醇 2.70
异丙醇 0.30
MPG 单丙二醇 6.00
甘油 1.71
TEA 三乙醇胺 3.33
甲酸钠 1.00
柠檬酸钠 2.00
DTMPA 二亚乙基三胺五(亚甲基)五(膦酸)，七钠盐 0.48
PCA 聚羧酸型聚合物，钠盐 0.46
苯氧乙醇 0.50
离子交换水 50.59
通过向测试系统中添加CaCl2、MgCl2及NaHCO3来调节水硬度。洗涤后，将纺织品在自来水中冲洗并风干。使用了两种类型的小块布样；这些是商业测试材料C-S-43(在棉布上的瓜尔胶与炭黑)和C-S-73(在棉布上的刺槐豆胶与炭黑)，它们从荷兰的测试材料BV中心(Center for Testmaterials BV)(Stoomloggerweg 11，3133KT弗拉尔丁恩(Vlaardingen))获得。
表5至表8给出了在两种不同温度和两种不同洗涤剂组合物下每种酶的两种剂量的结果。每个数字都是通过减去洗涤剂空白而计算出的Δ强度(ΔInt)。每次测量均为AMSA设置中最少2个独立孔的平均值。
表5：在20℃下模型洗涤剂B对瓜尔胶小块布样C-S-43的AMSA洗涤结果
Figure BDA0002432920140000961
表6：在40℃下模型洗涤剂B对瓜尔胶小块布样C-S-43的AMSA洗涤结果
Figure BDA0002432920140000962
表7：在20℃下模型洗涤剂T对瓜尔胶小块布样C-S-43的AMSA洗涤结果
Figure BDA0002432920140000963
表8：在40℃下模型洗涤剂T对瓜尔胶小块布样C-S-43上的AMSA洗涤结果
Figure BDA0002432920140000971
在20℃和40℃下，来自又松类芽孢杆菌的全长GH26甘露聚糖酶(SEQ ID NO:6)在去除瓜尔胶方面均表现优异，在模型洗涤剂B和模型洗涤剂T中的性能是商业酶Mannaway的两倍。
实例7：使用Terg-O-tometer洗涤试验的GH26甘露聚糖酶的洗涤性能
terg-o-tometer是工业标准。在水浴温度受控的环境中孵育1L洗涤溶液。在向每个烧杯中添加1L之前，将溶液混合5min。烧杯中的温度经测量为20.0℃。将洗涤和漂洗的小块布样在干燥箱中干燥过夜，并如下表9所示进行测量。
表9：Terg-O-tometer洗涤试验的条件
测试溶液 模型B洗涤剂1g/L
测试溶液体积 1L
pH 模型B，未经调整
洗涤时间 30分钟
温度 20℃
水硬度 15°dH
Ca<sup>2+</sup>:Mg<sup>2+</sup>:CO<sub>3</sub><sup>2-</sup>比率 4:1:7.5
机械作用 120rpm
酶剂量 0.05mg/L
在这里，所使用的污渍是由荷兰的测试材料BV中心(Stoomloggerweg 11，3133 KT弗拉尔丁恩)提供的食品污渍和技术污渍的组合(见表10)。
表10：用于Terg-o-tometer洗涤试验的污渍
材料 来源
KC-H033巧克力冰淇淋与瓜尔胶 CFT
C-S-43瓜尔胶 CFT
C-S-73刺槐豆胶 CFT
洗涤性能表示为Δ反射率(remission)值(ΔRem)。洗涤并漂洗之后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。使用具有大孔径的Macbeth Color Eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有UV的情况下进行测量并且提取460nm处的反射。用ColorEye 2测量干小块布样。通过3层(来自同一烧杯的相同类型的小块布样中的3块)进行小孔径测量，在标有烧杯号和小块布样号的正面的每个小块布样上进行2次测量。通过从洗涤的小块布样的反射值中减去对照的小块布样的反射值来计算单个小块布样的反射值。对于每种污渍，通过取得来自用酶洗涤的小块布样的测量值并且与来自未用酶洗涤的小块布样的测量值相减来计算酶效果。总酶性能以单个ΔRem酶的平均值计算，并显示在下表11中。
表11：Terg-o-tometer洗涤结果
污渍 Mannaway SEQ ID NO:6
KC-H033 Vienetta 9 9
C-S-43瓜尔胶 4 8
C-S-73刺槐豆胶 9 9
来自又松类芽孢杆菌的全长GH26甘露聚糖酶(SEQ ID NO:6)对Vienetta和刺槐豆胶污渍的性能与商业酶Mannaway一样，并且在去除瓜尔胶污渍方面表现优异，性能是Mannaway的两倍。
实例8：使用AMSA的GH26甘露聚糖酶的洗涤性能
如实例6中所述并且按表12中指定的实验条件进行实验。
表12：AMSA洗涤试验的条件
测试溶液 模型O洗涤剂2g/L
测试溶液体积 160μL
pH 模型O，未经调整的pH
酶浓度 0.25mg/L
洗涤时间 20分钟
温度 20℃
水硬度 15°dH
Ca<sup>2+</sup>:Mg<sup>2+</sup>:CO<sub>3</sub><sup>2-</sup>比率 4:1:7.5
表13给出了模型O洗涤剂的组成。结果显示在表14中。
表13：模型O洗涤剂的组成
成分(缩写) 说明 重量％
LAS (C10-C13)烷基苯磺酸钠 4.00
SLES 月桂基乙醚硫酸钠 8.00
大豆皂 1.00
AEO 醇乙氧基化物 4.00
TEA 三乙醇胺 0.40
柠檬酸钠 柠檬酸三钠二水合物 2.00
氯化钙 二水氯化钙 0.02
离子交换水 80.58
表14：模型O洗涤剂对瓜尔胶小块布样C-S-43的AMSA洗涤结果
Figure BDA0002432920140000991
来自衣氏类芽孢杆菌的全长GH26甘露聚糖酶(SEQ ID NO:13)在去除瓜尔胶方面表现优异，性能几乎是商业酶Mannaway的两倍。
实例9：使用Terg-O-tometer洗涤试验的GH26甘露聚糖酶的洗涤性能
如实例7中所述并且按表15中指定的实验条件进行实验。
表15：Terg-O-tometer洗涤试验的条件
测试溶液 模型A洗涤剂3.3g/L
测试溶液体积 1L
pH 模型A，未经调整
洗涤时间 30分钟
温度 20℃
水硬度 15°dH
Ca<sup>2+</sup>:Mg<sup>2+</sup>:CO<sub>3</sub><sup>2-</sup>比率 4:1:7.5
机械作用 120rpm
酶剂量 0.6mg/L
表16给出了模型A洗涤剂的组成。结果显示在表17中。
表16：模型A洗涤剂的组成
Figure BDA0002432920140001001
表17：模型O洗涤剂对瓜尔胶小块布样C-S-43的Terg-o-tometer洗涤结果
Figure BDA0002432920140001002
相对于商业酶Mannaway，来自又松类芽孢杆菌的全长(SEQ ID NO:6)以及截短(SEQ ID NO:8)的GH26甘露聚糖酶在去除瓜尔胶方面均表现优越。
本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面旨在作为本发明若干方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域的技术人员而言将根据前述说明而变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
<130> 14623-WO-PCT
<160> 18
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 1587
<212> DNA
<213> 又松类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1584)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(90)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (91)..(1584)
<400> 1
atg gtt ttg tta tgc atg ata att ctg atg gga atg tct ggt tca gct 48
Met Val Leu Leu Cys Met Ile Ile Leu Met Gly Met Ser Gly Ser Ala
-30 -25 -20 -15
gct tca ata gcc gat gct tct tca acc gga caa gtt gct ctc atg aat 96
Ala Ser Ile Ala Asp Ala Ser Ser Thr Gly Gln Val Ala Leu Met Asn
-10 -5 -1 1
atg gaa ggc acg cca tct gtc agt ccg act aac agc ata acg gtt act 144
Met Glu Gly Thr Pro Ser Val Ser Pro Thr Asn Ser Ile Thr Val Thr
5 10 15
ttt gct aat gcg gtg tta gaa ggt tac ggt atc gag aaa cgc ggt tct 192
Phe Ala Asn Ala Val Leu Glu Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg Gly Ser
20 25 30
gtc aaa gaa gac gat gat act ttg tat gac ggt gaa ggc tat atc tct 240
Val Lys Glu Asp Asp Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Tyr Ile Ser
35 40 45 50
tac ttt ttt gat gaa att gga ggc gct gca gaa ccc gtc ggc agt gca 288
Tyr Phe Phe Asp Glu Ile Gly Gly Ala Ala Glu Pro Val Gly Ser Ala
55 60 65
gct ttt act gtg gac gct gcg aaa gct ggg ctg tat gag ctg agt tta 336
Ala Phe Thr Val Asp Ala Ala Lys Ala Gly Leu Tyr Glu Leu Ser Leu
70 75 80
ggc tac tac atc ccc gaa ggc tac ggg gat aaa gtg acc cgt ata cag 384
Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Arg Ile Gln
85 90 95
att aat ggt gaa ggc acc gga gag ctg aca ttg gat gcg ccg gca gca 432
Ile Asn Gly Glu Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Ala Pro Ala Ala
100 105 110
ggt acg gtt cgt gct gag aaa atg gtc agt aag gtg ctg ctg aac gca 480
Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu Asn Ala
115 120 125 130
ggc agc aat aca atc caa att atg cgc gga tgg ggt tac tac ggc att 528
Gly Ser Asn Thr Ile Gln Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr Gly Ile
135 140 145
gag cat atc aag ctt gca ccc gcg aat gaa gca cca ccc agt aac aag 576
Glu His Ile Lys Leu Ala Pro Ala Asn Glu Ala Pro Pro Ser Asn Lys
150 155 160
ctg aat gca gag gac agc atc agg act ggc aca ttg aac aat ccc gaa 624
Leu Asn Ala Glu Asp Ser Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn Pro Glu
165 170 175
gcg aca gct gag gcc aga gcg cta atg aac tac ttg ctc agc cag tat 672
Ala Thr Ala Glu Ala Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr
180 185 190
gga caa aaa att atc tct gga cag cag acg ctt gaa gat gtg gag tgg 720
Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val Glu Trp
195 200 205 210
atc aag cag cag aca ggc aaa tat cca gcg att ttc tct aca gac ttg 768
Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu
215 220 225
atg gat tac tcc cct tcc cgc gtg gat cat gga gcc tcc tcc act gag 816
Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser Thr Glu
230 235 240
gtc gag aag atg atc gaa tgg tac aaa cgc ggt ggt att gtg tct tta 864
Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu
245 250 255
tgc tgg cac tgg aat gcc ccg aag gga atc ggc ggc aat gag cct ggc 912
Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly
260 265 270
aac gag tgg tgg cga ggc ttc tac act gaa ttt aca acc ttt gat gtg 960
Asn Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val
275 280 285 290
gaa tat gct ctt aat cat ccg gat tct gag gac tac cag ctc ctg atc 1008
Glu Tyr Ala Leu Asn His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile
295 300 305
cgg gac att gac gcc atc gca gtt cag ttg aag cga ttg cag gag gcg 1056
Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Glu Ala
310 315 320
aac gtg cct gtg tta tgg cga ccc ctg cac gag gca gag ggc acc tgg 1104
Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Thr Trp
325 330 335
ttt tgg tgg gga gca aaa ggg ccc gag ccg gcg aaa cag ctc tat cgt 1152
Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg
340 345 350
tta atg tat gat cgg tta acc aat gat cat aag ctg aac aat ctg att 1200
Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn Leu Ile
355 360 365 370
tgg gtg tgg aac tcc gag aaa aag gat tgg tat ccg gga gat gat gtc 1248
Trp Val Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val
375 380 385
gta gat atg gta agc gtt gat atc tac aac cct gca ggc gac tat aat 1296
Val Asp Met Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp Tyr Asn
390 395 400
ccg agc atc gca aaa tat gaa gcg ctt gta tct ttg gcg gac aac aag 1344
Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp Asn Lys
405 410 415
aag atg gct gca cta gcg gag aat ggg cct att ccg gat ccg gat gct 1392
Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala
420 425 430
ctt cag gag tac ggc gcc gac tgg agc ttc ttt agt acc tgg acc ggc 1440
Leu Gln Glu Tyr Gly Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly
435 440 445 450
gac tac atc agg gat ggc aag aca aat acg ata gaa cat ttg aag aag 1488
Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu Lys Lys
455 460 465
gta tat caa cac gat tac gtc att act ctc gac gaa ctc ccg gca gac 1536
Val Tyr Gln His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp
470 475 480
tgt act cca atc ttg atg ata agg caa aga atg gtg aat cag cag gga 1584
Cys Thr Pro Ile Leu Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln Gln Gly
485 490 495
tga 1587
<210> 2
<211> 528
<212> PRT
<213> 又松类芽孢杆菌
<400> 2
Met Val Leu Leu Cys Met Ile Ile Leu Met Gly Met Ser Gly Ser Ala
-30 -25 -20 -15
Ala Ser Ile Ala Asp Ala Ser Ser Thr Gly Gln Val Ala Leu Met Asn
-10 -5 -1 1
Met Glu Gly Thr Pro Ser Val Ser Pro Thr Asn Ser Ile Thr Val Thr
5 10 15
Phe Ala Asn Ala Val Leu Glu Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg Gly Ser
20 25 30
Val Lys Glu Asp Asp Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Tyr Ile Ser
35 40 45 50
Tyr Phe Phe Asp Glu Ile Gly Gly Ala Ala Glu Pro Val Gly Ser Ala
55 60 65
Ala Phe Thr Val Asp Ala Ala Lys Ala Gly Leu Tyr Glu Leu Ser Leu
70 75 80
Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Arg Ile Gln
85 90 95
Ile Asn Gly Glu Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Ala Pro Ala Ala
100 105 110
Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu Asn Ala
115 120 125 130
Gly Ser Asn Thr Ile Gln Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr Gly Ile
135 140 145
Glu His Ile Lys Leu Ala Pro Ala Asn Glu Ala Pro Pro Ser Asn Lys
150 155 160
Leu Asn Ala Glu Asp Ser Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn Pro Glu
165 170 175
Ala Thr Ala Glu Ala Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr
180 185 190
Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val Glu Trp
195 200 205 210
Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu
215 220 225
Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser Thr Glu
230 235 240
Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu
245 250 255
Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly
260 265 270
Asn Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val
275 280 285 290
Glu Tyr Ala Leu Asn His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile
295 300 305
Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Glu Ala
310 315 320
Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Thr Trp
325 330 335
Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg
340 345 350
Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn Leu Ile
355 360 365 370
Trp Val Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val
375 380 385
Val Asp Met Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp Tyr Asn
390 395 400
Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp Asn Lys
405 410 415
Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala
420 425 430
Leu Gln Glu Tyr Gly Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly
435 440 445 450
Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu Lys Lys
455 460 465
Val Tyr Gln His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp
470 475 480
Cys Thr Pro Ile Leu Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln Gln Gly
485 490 495
<210> 3
<211> 498
<212> PRT
<213> 又松类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(498)
<400> 3
Met Asn Met Glu Gly Thr Pro Ser Val Ser Pro Thr Asn Ser Ile Thr
1 5 10 15
Val Thr Phe Ala Asn Ala Val Leu Glu Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg
20 25 30
Gly Ser Val Lys Glu Asp Asp Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Tyr
35 40 45
Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Ile Gly Gly Ala Ala Glu Pro Val Gly
50 55 60
Ser Ala Ala Phe Thr Val Asp Ala Ala Lys Ala Gly Leu Tyr Glu Leu
65 70 75 80
Ser Leu Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Arg
85 90 95
Ile Gln Ile Asn Gly Glu Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Ala Pro
100 105 110
Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu
115 120 125
Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Gln Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr
130 135 140
Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Ala Pro Ala Asn Glu Ala Pro Pro Ser
145 150 155 160
Asn Lys Leu Asn Ala Glu Asp Ser Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn
165 170 175
Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser
180 185 190
Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val
195 200 205
Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr
210 215 220
Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser
225 230 235 240
Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val
245 250 255
Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu
260 265 270
Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe
275 280 285
Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu
290 295 300
Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln
305 310 315 320
Glu Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly
325 330 335
Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu
340 345 350
Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn
355 360 365
Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp
370 375 380
Asp Val Val Asp Met Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp
385 390 395 400
Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp
405 410 415
Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro
420 425 430
Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp
435 440 445
Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu
450 455 460
Lys Lys Val Tyr Gln His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro
465 470 475 480
Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln
485 490 495
Gln Gly
<210> 4
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 从又松类芽孢杆菌野生型分离的、缺少CBM35结构域的截短的GH26甘露聚糖酶
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(330)
<400> 4
Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala Arg
1 5 10 15
Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser
20 25 30
Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly
35 40 45
Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu
65 70 75 80
Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala
85 90 95
Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg Gly
100 105 110
Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn His
115 120 125
Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile
130 135 140
Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Glu Ala Asn Val Pro Val Leu Trp
145 150 155 160
Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys
165 170 175
Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu
180 185 190
Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser Glu
195 200 205
Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val Val Asp Met Val Ser Val
210 215 220
Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr
225 230 235 240
Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala
245 250 255
Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly Ala
260 265 270
Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly
275 280 285
Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu Lys Lys Val Tyr Gln His Asp Tyr
290 295 300
Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu Met
305 310 315 320
Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln Gln Gly
325 330
<210> 5
<211> 1515
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 包含CBM35的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，其中天然分泌信号被去除，并且6xHis标签直接 添加在蛋白质的C-末端
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1512)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(1512)
<400> 5
atg aat atg gaa ggc acg cca tct gtc agt ccg act aac agc ata acg 48
Met Asn Met Glu Gly Thr Pro Ser Val Ser Pro Thr Asn Ser Ile Thr
1 5 10 15
gtt act ttt gct aat gcg gtg tta gaa ggt tac ggt atc gag aaa cgc 96
Val Thr Phe Ala Asn Ala Val Leu Glu Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg
20 25 30
ggt tct gtc aaa gaa gac gat gat act ttg tat gac ggt gaa ggc tat 144
Gly Ser Val Lys Glu Asp Asp Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Tyr
35 40 45
atc tct tac ttt ttt gat gaa att gga ggc gct gca gaa ccc gtc ggc 192
Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Ile Gly Gly Ala Ala Glu Pro Val Gly
50 55 60
agt gca gct ttt act gtg gac gct gcg aaa gct ggg ctg tat gag ctg 240
Ser Ala Ala Phe Thr Val Asp Ala Ala Lys Ala Gly Leu Tyr Glu Leu
65 70 75 80
agt tta ggc tac tac atc ccc gaa ggc tac ggg gat aaa gtg acc cgt 288
Ser Leu Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Arg
85 90 95
ata cag att aat ggt gaa ggc acc gga gag ctg aca ttg gat gcg ccg 336
Ile Gln Ile Asn Gly Glu Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Ala Pro
100 105 110
gca gca ggt acg gtt cgt gct gag aaa atg gtc agt aag gtg ctg ctg 384
Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu
115 120 125
aac gca ggc agc aat aca atc caa att atg cgc gga tgg ggt tac tac 432
Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Gln Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr
130 135 140
ggc att gag cat atc aag ctt gca ccc gcg aat gaa gca cca ccc agt 480
Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Ala Pro Ala Asn Glu Ala Pro Pro Ser
145 150 155 160
aac aag ctg aat gca gag gac agc atc agg act ggc aca ttg aac aat 528
Asn Lys Leu Asn Ala Glu Asp Ser Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn
165 170 175
ccc gaa gcg aca gct gag gcc aga gcg cta atg aac tac ttg ctc agc 576
Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser
180 185 190
cag tat gga caa aaa att atc tct gga cag cag acg ctt gaa gat gtg 624
Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val
195 200 205
gag tgg atc aag cag cag aca ggc aaa tat cca gcg att ttc tct aca 672
Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr
210 215 220
gac ttg atg gat tac tcc cct tcc cgc gtg gat cat gga gcc tcc tcc 720
Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser
225 230 235 240
act gag gtc gag aag atg atc gaa tgg tac aaa cgc ggt ggt att gtg 768
Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val
245 250 255
tct tta tgc tgg cac tgg aat gcc ccg aag gga atc ggc ggc aat gag 816
Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu
260 265 270
cct ggc aac gag tgg tgg cga ggc ttc tac act gaa ttt aca acc ttt 864
Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe
275 280 285
gat gtg gaa tat gct ctt aat cat ccg gat tct gag gac tac cag ctc 912
Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu
290 295 300
ctg atc cgg gac att gac gcc atc gca gtt cag ttg aag cga ttg cag 960
Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln
305 310 315 320
gag gcg aac gtg cct gtg tta tgg cga ccc ctg cac gag gca gag ggc 1008
Glu Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly
325 330 335
acc tgg ttt tgg tgg gga gca aaa ggg ccc gag ccg gcg aaa cag ctc 1056
Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu
340 345 350
tat cgt tta atg tat gat cgg tta acc aat gat cat aag ctg aac aat 1104
Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn
355 360 365
ctg att tgg gtg tgg aac tcc gag aaa aag gat tgg tat ccg gga gat 1152
Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp
370 375 380
gat gtc gta gat atg gta agc gtt gat atc tac aac cct gca ggc gac 1200
Asp Val Val Asp Met Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp
385 390 395 400
tat aat ccg agc atc gca aaa tat gaa gcg ctt gta tct ttg gcg gac 1248
Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp
405 410 415
aac aag aag atg gct gca cta gcg gag aat ggg cct att ccg gat ccg 1296
Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro
420 425 430
gat gct ctt cag gag tac ggc gcc gac tgg agc ttc ttt agt acc tgg 1344
Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp
435 440 445
acc ggc gac tac atc agg gat ggc aag aca aat acg ata gaa cat ttg 1392
Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu
450 455 460
aag aag gta tat caa cac gat tac gtc att act ctc gac gaa ctc ccg 1440
Lys Lys Val Tyr Gln His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro
465 470 475 480
gca gac tgt act cca atc ttg atg ata agg caa aga atg gtg aat cag 1488
Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln
485 490 495
cag gga cat cat cac cat cac cac taa 1515
Gln Gly His His His His His His
500
<210> 6
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Met Asn Met Glu Gly Thr Pro Ser Val Ser Pro Thr Asn Ser Ile Thr
1 5 10 15
Val Thr Phe Ala Asn Ala Val Leu Glu Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg
20 25 30
Gly Ser Val Lys Glu Asp Asp Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Glu Gly Tyr
35 40 45
Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Ile Gly Gly Ala Ala Glu Pro Val Gly
50 55 60
Ser Ala Ala Phe Thr Val Asp Ala Ala Lys Ala Gly Leu Tyr Glu Leu
65 70 75 80
Ser Leu Gly Tyr Tyr Ile Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Arg
85 90 95
Ile Gln Ile Asn Gly Glu Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Ala Pro
100 105 110
Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu
115 120 125
Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Gln Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr
130 135 140
Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Ala Pro Ala Asn Glu Ala Pro Pro Ser
145 150 155 160
Asn Lys Leu Asn Ala Glu Asp Ser Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn
165 170 175
Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser
180 185 190
Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val
195 200 205
Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr
210 215 220
Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser
225 230 235 240
Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val
245 250 255
Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu
260 265 270
Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe
275 280 285
Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu
290 295 300
Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln
305 310 315 320
Glu Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly
325 330 335
Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu
340 345 350
Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn
355 360 365
Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp
370 375 380
Asp Val Val Asp Met Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp
385 390 395 400
Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp
405 410 415
Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro
420 425 430
Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp
435 440 445
Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu
450 455 460
Lys Lys Val Tyr Gln His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro
465 470 475 480
Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln
485 490 495
Gln Gly His His His His His His
500
<210> 7
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 缺少CBM35结构域的截短的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，并且6xHis标签
直接添加在蛋白质的C-末端
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1011)
<400> 7
atg atc agg act ggc aca ttg aac aat ccc gaa gcg aca gct gag gcc 48
Met Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala
1 5 10 15
aga gcg cta atg aac tac ttg ctc agc cag tat gga caa aaa att atc 96
Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile
20 25 30
tct gga cag cag acg ctt gaa gat gtg gag tgg atc aag cag cag aca 144
Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr
35 40 45
ggc aaa tat cca gcg att ttc tct aca gac ttg atg gat tac tcc cct 192
Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro
50 55 60
tcc cgc gtg gat cat gga gcc tcc tcc act gag gtc gag aag atg atc 240
Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile
65 70 75 80
gaa tgg tac aaa cgc ggt ggt att gtg tct tta tgc tgg cac tgg aat 288
Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn
85 90 95
gcc ccg aag gga atc ggc ggc aat gag cct ggc aac gag tgg tgg cga 336
Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg
100 105 110
ggc ttc tac act gaa ttt aca acc ttt gat gtg gaa tat gct ctt aat 384
Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn
115 120 125
cat ccg gat tct gag gac tac cag ctc ctg atc cgg gac att gac gcc 432
His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala
130 135 140
atc gca gtt cag ttg aag cga ttg cag gag gcg aac gtg cct gtg tta 480
Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Glu Ala Asn Val Pro Val Leu
145 150 155 160
tgg cga ccc ctg cac gag gca gag ggc acc tgg ttt tgg tgg gga gca 528
Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala
165 170 175
aaa ggg ccc gag ccg gcg aaa cag ctc tat cgt tta atg tat gat cgg 576
Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg
180 185 190
tta acc aat gat cat aag ctg aac aat ctg att tgg gtg tgg aac tcc 624
Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser
195 200 205
gag aaa aag gat tgg tat ccg gga gat gat gtc gta gat atg gta agc 672
Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val Val Asp Met Val Ser
210 215 220
gtt gat atc tac aac cct gca ggc gac tat aat ccg agc atc gca aaa 720
Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys
225 230 235 240
tat gaa gcg ctt gta tct ttg gcg gac aac aag aag atg gct gca cta 768
Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu
245 250 255
gcg gag aat ggg cct att ccg gat ccg gat gct ctt cag gag tac ggc 816
Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly
260 265 270
gcc gac tgg agc ttc ttt agt acc tgg acc ggc gac tac atc agg gat 864
Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp
275 280 285
ggc aag aca aat acg ata gaa cat ttg aag aag gta tat caa cac gat 912
Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu Lys Lys Val Tyr Gln His Asp
290 295 300
tac gtc att act ctc gac gaa ctc ccg gca gac tgt act cca atc ttg 960
Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu
305 310 315 320
atg ata agg caa aga atg gtg aat cag cag gga cat cat cac cat cac 1008
Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln Gln Gly His His His His His
325 330 335
cac taa 1014
His
<210> 8
<211> 337
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Met Ile Arg Thr Gly Thr Leu Asn Asn Pro Glu Ala Thr Ala Glu Ala
1 5 10 15
Arg Ala Leu Met Asn Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile
20 25 30
Ser Gly Gln Gln Thr Leu Glu Asp Val Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr
35 40 45
Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro
50 55 60
Ser Arg Val Asp His Gly Ala Ser Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile
65 70 75 80
Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn
85 90 95
Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly Asn Glu Trp Trp Arg
100 105 110
Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val Glu Tyr Ala Leu Asn
115 120 125
His Pro Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala
130 135 140
Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Glu Ala Asn Val Pro Val Leu
145 150 155 160
Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Thr Trp Phe Trp Trp Gly Ala
165 170 175
Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg
180 185 190
Leu Thr Asn Asp His Lys Leu Asn Asn Leu Ile Trp Val Trp Asn Ser
195 200 205
Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val Val Asp Met Val Ser
210 215 220
Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Gly Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys
225 230 235 240
Tyr Glu Ala Leu Val Ser Leu Ala Asp Asn Lys Lys Met Ala Ala Leu
245 250 255
Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala Leu Gln Glu Tyr Gly
260 265 270
Ala Asp Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp
275 280 285
Gly Lys Thr Asn Thr Ile Glu His Leu Lys Lys Val Tyr Gln His Asp
290 295 300
Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp Cys Thr Pro Ile Leu
305 310 315 320
Met Ile Arg Gln Arg Met Val Asn Gln Gln Gly His His His His His
325 330 335
His
<210> 9
<211> 1704
<212> DNA
<213> 衣氏类芽孢杆菌
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1704)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(123)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (124)..(1704)
<400> 9
atg aaa gca atg tct aac ctt ctt gta gct gcg gag cag cgc aaa cgt 48
Met Lys Ala Met Ser Asn Leu Leu Val Ala Ala Glu Gln Arg Lys Arg
-40 -35 -30
cgc ttc agc atc ttt ctt ttc tgt ttc gta atc ctt gct gga act tac 96
Arg Phe Ser Ile Phe Leu Phe Cys Phe Val Ile Leu Ala Gly Thr Tyr
-25 -20 -15 -10
gga tca gcg gca cct atc gcg gac gct agc tct gca ctt cct gac acg 144
Gly Ser Ala Ala Pro Ile Ala Asp Ala Ser Ser Ala Leu Pro Asp Thr
-5 -1 1 5
gtt gta aaa gag gct cct tct gct tct cct act aac ggc atc aca gta 192
Val Val Lys Glu Ala Pro Ser Ala Ser Pro Thr Asn Gly Ile Thr Val
10 15 20
aca ttt gct gac gct gtt ctt act gga tac ggc atc gag aaa cgc ggt 240
Thr Phe Ala Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg Gly
25 30 35
tct gta aag gag aac gag gac acg ctt tac gac ggc aaa ggt tac atc 288
Ser Val Lys Glu Asn Glu Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Lys Gly Tyr Ile
40 45 50 55
tca tac ttc ttc gac gag gac gct aac gct gct gag cct gtt ggc tct 336
Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Asp Ala Asn Ala Ala Glu Pro Val Gly Ser
60 65 70
gct aca ttc act gtt gac gta gcg gaa gct ggc ctt tac aaa ctt tca 384
Ala Thr Phe Thr Val Asp Val Ala Glu Ala Gly Leu Tyr Lys Leu Ser
75 80 85
ctt ggc tac tat ctt cct gag ggc tat ggc gac aaa gtt act tct atc 432
Leu Gly Tyr Tyr Leu Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Ser Ile
90 95 100
gag atc aat ggc gca ggt aca gga gag ctt aca ctt gac gag cct gct 480
Glu Ile Asn Gly Ala Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Glu Pro Ala
105 110 115
gcc ggt act gtt cgc gct gag aaa atg gtt tca aaa gtt ctt ctt aac 528
Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu Asn
120 125 130 135
gca ggc agc aac aca atc aaa atc atg cgt ggt tgg ggc tat tac ggc 576
Ala Gly Ser Asn Thr Ile Lys Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr Gly
140 145 150
atc gag cac atc aaa ctt gag cct gct ggc gca gca tca tct tca aac 624
Ile Glu His Ile Lys Leu Glu Pro Ala Gly Ala Ala Ser Ser Ser Asn
155 160 165
aag ctt gct gct gag gac ggt cct atg aca ggc gca ctt aac aac cct 672
Lys Leu Ala Ala Glu Asp Gly Pro Met Thr Gly Ala Leu Asn Asn Pro
170 175 180
gag gct aca cct gag gct cgc gca ctt atg gac tat ctt ctt tct cag 720
Glu Ala Thr Pro Glu Ala Arg Ala Leu Met Asp Tyr Leu Leu Ser Gln
185 190 195
tac ggc cag aaa atc atc tct ggt caa caa act atc gag gac atc gag 768
Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Ile Glu Asp Ile Glu
200 205 210 215
tgg atc aaa caa caa aca ggc aag tat cct gct atc ttc agc acg gac 816
Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp
220 225 230
ctt atg gac tat tca cct tct cgc atc gag aat ggc gca tct tct act 864
Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Ile Glu Asn Gly Ala Ser Ser Thr
235 240 245
gag gtt gag aaa atg atc gag tgg tac aaa cgc ggt ggc atc gtt tca 912
Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser
250 255 260
ctt tgt tgg cac tgg aac gct cct aag gga atc ggt ggc aac gag cct 960
Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro
265 270 275
ggt cat gag tgg tgg cgt ggc ttc tat acg gag ttt acg acg ttc gac 1008
Gly His Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp
280 285 290 295
gtt gag ttt gca ctt aac cat tta gac agc gag gac tac caa ctt ctt 1056
Val Glu Phe Ala Leu Asn His Leu Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu
300 305 310
atc cgc gac atc gac gcc atc gct gtt cag ctt aaa cgc ctt caa gac 1104
Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Asp
315 320 325
gct aac gta cct gtt ctt tgg cgt cct ctt cac gag gca gag gga ggc 1152
Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Gly
330 335 340
tgg ttc tgg tgg gga gcg aaa ggt cct gag cct gca aaa caa ctt tat 1200
Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr
345 350 355
cgc ctt atg tat gac cgc ctt aca cac gac cat aac ctt aac aac ctt 1248
Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr His Asp His Asn Leu Asn Asn Leu
360 365 370 375
atc tgg atc tgg aac agc gag aag aaa gac tgg tac cct ggt gac gac 1296
Ile Trp Ile Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp
380 385 390
gtt gta gac atc gta tct gta gac atc tac aac cct gct gag gac tac 1344
Val Val Asp Ile Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Glu Asp Tyr
395 400 405
aac cct tct atc gcg aaa tac gag ggc ctt gtt tca ctt gta aac ggc 1392
Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Gly Leu Val Ser Leu Val Asn Gly
410 415 420
aag aaa atg gca gct ctt gca gag aat ggc cct atc cct gac cct gac 1440
Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp
425 430 435
gct ctt caa gca tat ggc gct gag tgg agc ttc ttt tca act tgg aca 1488
Ala Leu Gln Ala Tyr Gly Ala Glu Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr
440 445 450 455
ggc gac tat atc cgc gac gga aaa act aac act atg gag cat ctt aag 1536
Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Met Glu His Leu Lys
460 465 470
aag gta tac cat cat gac tac gta atc act ctt gac gag ctt cct gcc 1584
Lys Val Tyr His His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala
475 480 485
gac ctt tac gct aac cca gag ttt gag gct gag aac ggt gag tca gcg 1632
Asp Leu Tyr Ala Asn Pro Glu Phe Glu Ala Glu Asn Gly Glu Ser Ala
490 495 500
gga atg act cgc gct aac ggt cag gag tct cac tct aaa ggt ggc tac 1680
Gly Met Thr Arg Ala Asn Gly Gln Glu Ser His Ser Lys Gly Gly Tyr
505 510 515
act act ggc atg gag cct aag aac 1704
Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Asn
520 525
<210> 10
<211> 568
<212> PRT
<213> 衣氏类芽孢杆菌
<400> 10
Met Lys Ala Met Ser Asn Leu Leu Val Ala Ala Glu Gln Arg Lys Arg
-40 -35 -30
Arg Phe Ser Ile Phe Leu Phe Cys Phe Val Ile Leu Ala Gly Thr Tyr
-25 -20 -15 -10
Gly Ser Ala Ala Pro Ile Ala Asp Ala Ser Ser Ala Leu Pro Asp Thr
-5 -1 1 5
Val Val Lys Glu Ala Pro Ser Ala Ser Pro Thr Asn Gly Ile Thr Val
10 15 20
Thr Phe Ala Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Gly Ile Glu Lys Arg Gly
25 30 35
Ser Val Lys Glu Asn Glu Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Lys Gly Tyr Ile
40 45 50 55
Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Asp Ala Asn Ala Ala Glu Pro Val Gly Ser
60 65 70
Ala Thr Phe Thr Val Asp Val Ala Glu Ala Gly Leu Tyr Lys Leu Ser
75 80 85
Leu Gly Tyr Tyr Leu Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr Ser Ile
90 95 100
Glu Ile Asn Gly Ala Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Glu Pro Ala
105 110 115
Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu Leu Asn
120 125 130 135
Ala Gly Ser Asn Thr Ile Lys Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr Gly
140 145 150
Ile Glu His Ile Lys Leu Glu Pro Ala Gly Ala Ala Ser Ser Ser Asn
155 160 165
Lys Leu Ala Ala Glu Asp Gly Pro Met Thr Gly Ala Leu Asn Asn Pro
170 175 180
Glu Ala Thr Pro Glu Ala Arg Ala Leu Met Asp Tyr Leu Leu Ser Gln
185 190 195
Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Ile Glu Asp Ile Glu
200 205 210 215
Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp
220 225 230
Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Ile Glu Asn Gly Ala Ser Ser Thr
235 240 245
Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser
250 255 260
Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro
265 270 275
Gly His Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp
280 285 290 295
Val Glu Phe Ala Leu Asn His Leu Asp Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu
300 305 310
Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu Gln Asp
315 320 325
Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu Gly Gly
330 335 340
Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr
345 350 355
Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr His Asp His Asn Leu Asn Asn Leu
360 365 370 375
Ile Trp Ile Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp
380 385 390
Val Val Asp Ile Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Glu Asp Tyr
395 400 405
Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Gly Leu Val Ser Leu Val Asn Gly
410 415 420
Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp
425 430 435
Ala Leu Gln Ala Tyr Gly Ala Glu Trp Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr
440 445 450 455
Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Met Glu His Leu Lys
460 465 470
Lys Val Tyr His His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala
475 480 485
Asp Leu Tyr Ala Asn Pro Glu Phe Glu Ala Glu Asn Gly Glu Ser Ala
490 495 500
Gly Met Thr Arg Ala Asn Gly Gln Glu Ser His Ser Lys Gly Gly Tyr
505 510 515
Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Asn
520 525
<210> 11
<211> 527
<212> PRT
<213> 衣氏类芽孢杆菌
<220>
<221> 成熟肽
<222> (1)..(527)
<400> 11
Ser Ser Ala Leu Pro Asp Thr Val Val Lys Glu Ala Pro Ser Ala Ser
1 5 10 15
Pro Thr Asn Gly Ile Thr Val Thr Phe Ala Asp Ala Val Leu Thr Gly
20 25 30
Tyr Gly Ile Glu Lys Arg Gly Ser Val Lys Glu Asn Glu Asp Thr Leu
35 40 45
Tyr Asp Gly Lys Gly Tyr Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Asp Ala Asn
50 55 60
Ala Ala Glu Pro Val Gly Ser Ala Thr Phe Thr Val Asp Val Ala Glu
65 70 75 80
Ala Gly Leu Tyr Lys Leu Ser Leu Gly Tyr Tyr Leu Pro Glu Gly Tyr
85 90 95
Gly Asp Lys Val Thr Ser Ile Glu Ile Asn Gly Ala Gly Thr Gly Glu
100 105 110
Leu Thr Leu Asp Glu Pro Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met
115 120 125
Val Ser Lys Val Leu Leu Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Lys Ile Met
130 135 140
Arg Gly Trp Gly Tyr Tyr Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Glu Pro Ala
145 150 155 160
Gly Ala Ala Ser Ser Ser Asn Lys Leu Ala Ala Glu Asp Gly Pro Met
165 170 175
Thr Gly Ala Leu Asn Asn Pro Glu Ala Thr Pro Glu Ala Arg Ala Leu
180 185 190
Met Asp Tyr Leu Leu Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln
195 200 205
Gln Thr Ile Glu Asp Ile Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr
210 215 220
Pro Ala Ile Phe Ser Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Ile
225 230 235 240
Glu Asn Gly Ala Ser Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr
245 250 255
Lys Arg Gly Gly Ile Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys
260 265 270
Gly Ile Gly Gly Asn Glu Pro Gly His Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr
275 280 285
Thr Glu Phe Thr Thr Phe Asp Val Glu Phe Ala Leu Asn His Leu Asp
290 295 300
Ser Glu Asp Tyr Gln Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val
305 310 315 320
Gln Leu Lys Arg Leu Gln Asp Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro
325 330 335
Leu His Glu Ala Glu Gly Gly Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro
340 345 350
Glu Pro Ala Lys Gln Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr His
355 360 365
Asp His Asn Leu Asn Asn Leu Ile Trp Ile Trp Asn Ser Glu Lys Lys
370 375 380
Asp Trp Tyr Pro Gly Asp Asp Val Val Asp Ile Val Ser Val Asp Ile
385 390 395 400
Tyr Asn Pro Ala Glu Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Gly
405 410 415
Leu Val Ser Leu Val Asn Gly Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn
420 425 430
Gly Pro Ile Pro Asp Pro Asp Ala Leu Gln Ala Tyr Gly Ala Glu Trp
435 440 445
Ser Phe Phe Ser Thr Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr
450 455 460
Asn Thr Met Glu His Leu Lys Lys Val Tyr His His Asp Tyr Val Ile
465 470 475 480
Thr Leu Asp Glu Leu Pro Ala Asp Leu Tyr Ala Asn Pro Glu Phe Glu
485 490 495
Ala Glu Asn Gly Glu Ser Ala Gly Met Thr Arg Ala Asn Gly Gln Glu
500 505 510
Ser His Ser Lys Gly Gly Tyr Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Asn
515 520 525
<210> 12
<211> 1689
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自衣氏类芽孢杆菌的、包含CBM35结构域的GH26甘露聚糖酶的构建体DNA序列，其中天然分泌信号被地衣芽孢杆菌分泌信号替代，并且HPHPHPHP标签直接添加在C-末端
<220>
<221> CDS
<222> (1)..(1686)
<220>
<221> 信号肽
<222> (1)..(81)
<220>
<221> 成熟肽
<222> (82)..(1686)
<400> 12
atg aag aaa ccg ttg ggg aaa att gtc gca agc acc gca cta ctc att 48
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
-25 -20 -15
tct gtt gct ttt agt tca tcg ata gca tca gca agc tct gca ctt cct 96
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ser Ser Ala Leu Pro
-10 -5 -1 1 5
gac acg gtt gta aaa gag gct cct tct gct tct cct act aac ggc atc 144
Asp Thr Val Val Lys Glu Ala Pro Ser Ala Ser Pro Thr Asn Gly Ile
10 15 20
aca gta aca ttt gct gac gct gtt ctt act gga tac ggc atc gag aaa 192
Thr Val Thr Phe Ala Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Gly Ile Glu Lys
25 30 35
cgc ggt tct gta aag gag aac gag gac acg ctt tac gac ggc aaa ggt 240
Arg Gly Ser Val Lys Glu Asn Glu Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Lys Gly
40 45 50
tac atc tca tac ttc ttc gac gag gac gct aac gct gct gag cct gtt 288
Tyr Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Asp Ala Asn Ala Ala Glu Pro Val
55 60 65
ggc tct gct aca ttc act gtt gac gta gcg gaa gct ggc ctt tac aaa 336
Gly Ser Ala Thr Phe Thr Val Asp Val Ala Glu Ala Gly Leu Tyr Lys
70 75 80 85
ctt tca ctt ggc tac tat ctt cct gag ggc tat ggc gac aaa gtt act 384
Leu Ser Leu Gly Tyr Tyr Leu Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr
90 95 100
tct atc gag atc aat ggc gca ggt aca gga gag ctt aca ctt gac gag 432
Ser Ile Glu Ile Asn Gly Ala Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Glu
105 110 115
cct gct gcc ggt act gtt cgc gct gag aaa atg gtt tca aaa gtt ctt 480
Pro Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu
120 125 130
ctt aac gca ggc agc aac aca atc aaa atc atg cgt ggt tgg ggc tat 528
Leu Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Lys Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr
135 140 145
tac ggc atc gag cac atc aaa ctt gag cct gct ggc gca gca tca tct 576
Tyr Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Glu Pro Ala Gly Ala Ala Ser Ser
150 155 160 165
tca aac aag ctt gct gct gag gac ggt cct atg aca ggc gca ctt aac 624
Ser Asn Lys Leu Ala Ala Glu Asp Gly Pro Met Thr Gly Ala Leu Asn
170 175 180
aac cct gag gct aca cct gag gct cgc gca ctt atg gac tat ctt ctt 672
Asn Pro Glu Ala Thr Pro Glu Ala Arg Ala Leu Met Asp Tyr Leu Leu
185 190 195
tct cag tac ggc cag aaa atc atc tct ggt caa caa act atc gag gac 720
Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Ile Glu Asp
200 205 210
atc gag tgg atc aaa caa caa aca ggc aag tat cct gct atc ttc agc 768
Ile Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser
215 220 225
acg gac ctt atg gac tat tca cct tct cgc atc gag aat ggc gca tct 816
Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Ile Glu Asn Gly Ala Ser
230 235 240 245
tct act gag gtt gag aaa atg atc gag tgg tac aaa cgc ggt ggc atc 864
Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile
250 255 260
gtt tca ctt tgt tgg cac tgg aac gct cct aag gga atc ggt ggc aac 912
Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn
265 270 275
gag cct ggt cat gag tgg tgg cgt ggc ttc tat acg gag ttt acg acg 960
Glu Pro Gly His Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr
280 285 290
ttc gac gtt gag ttt gca ctt aac cat tta gac agc gag gac tac caa 1008
Phe Asp Val Glu Phe Ala Leu Asn His Leu Asp Ser Glu Asp Tyr Gln
295 300 305
ctt ctt atc cgc gac atc gac gcc atc gct gtt cag ctt aaa cgc ctt 1056
Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu
310 315 320 325
caa gac gct aac gta cct gtt ctt tgg cgt cct ctt cac gag gca gag 1104
Gln Asp Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu
330 335 340
gga ggc tgg ttc tgg tgg gga gcg aaa ggt cct gag cct gca aaa caa 1152
Gly Gly Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln
345 350 355
ctt tat cgc ctt atg tat gac cgc ctt aca cac gac cat aac ctt aac 1200
Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr His Asp His Asn Leu Asn
360 365 370
aac ctt atc tgg atc tgg aac agc gag aag aaa gac tgg tac cct ggt 1248
Asn Leu Ile Trp Ile Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly
375 380 385
gac gac gtt gta gac atc gta tct gta gac atc tac aac cct gct gag 1296
Asp Asp Val Val Asp Ile Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Glu
390 395 400 405
gac tac aac cct tct atc gcg aaa tac gag ggc ctt gtt tca ctt gta 1344
Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Gly Leu Val Ser Leu Val
410 415 420
aac ggc aag aaa atg gca gct ctt gca gag aat ggc cct atc cct gac 1392
Asn Gly Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp
425 430 435
cct gac gct ctt caa gca tat ggc gct gag tgg agc ttc ttt tca act 1440
Pro Asp Ala Leu Gln Ala Tyr Gly Ala Glu Trp Ser Phe Phe Ser Thr
440 445 450
tgg aca ggc gac tat atc cgc gac gga aaa act aac act atg gag cat 1488
Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Met Glu His
455 460 465
ctt aag aag gta tac cat cat gac tac gta atc act ctt gac gag ctt 1536
Leu Lys Lys Val Tyr His His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu
470 475 480 485
cct gcc gac ctt tac gct aac cca gag ttt gag gct gag aac ggt gag 1584
Pro Ala Asp Leu Tyr Ala Asn Pro Glu Phe Glu Ala Glu Asn Gly Glu
490 495 500
tca gcg gga atg act cgc gct aac ggt cag gag tct cac tct aaa ggt 1632
Ser Ala Gly Met Thr Arg Ala Asn Gly Gln Glu Ser His Ser Lys Gly
505 510 515
ggc tac act act ggc atg gag cct aag aac cat ccg cac cct cat cca 1680
Gly Tyr Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Asn His Pro His Pro His Pro
520 525 530
cac ccg taa 1689
His Pro
535
<210> 13
<211> 562
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
-25 -20 -15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala Ser Ser Ala Leu Pro
-10 -5 -1 1 5
Asp Thr Val Val Lys Glu Ala Pro Ser Ala Ser Pro Thr Asn Gly Ile
10 15 20
Thr Val Thr Phe Ala Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Gly Ile Glu Lys
25 30 35
Arg Gly Ser Val Lys Glu Asn Glu Asp Thr Leu Tyr Asp Gly Lys Gly
40 45 50
Tyr Ile Ser Tyr Phe Phe Asp Glu Asp Ala Asn Ala Ala Glu Pro Val
55 60 65
Gly Ser Ala Thr Phe Thr Val Asp Val Ala Glu Ala Gly Leu Tyr Lys
70 75 80 85
Leu Ser Leu Gly Tyr Tyr Leu Pro Glu Gly Tyr Gly Asp Lys Val Thr
90 95 100
Ser Ile Glu Ile Asn Gly Ala Gly Thr Gly Glu Leu Thr Leu Asp Glu
105 110 115
Pro Ala Ala Gly Thr Val Arg Ala Glu Lys Met Val Ser Lys Val Leu
120 125 130
Leu Asn Ala Gly Ser Asn Thr Ile Lys Ile Met Arg Gly Trp Gly Tyr
135 140 145
Tyr Gly Ile Glu His Ile Lys Leu Glu Pro Ala Gly Ala Ala Ser Ser
150 155 160 165
Ser Asn Lys Leu Ala Ala Glu Asp Gly Pro Met Thr Gly Ala Leu Asn
170 175 180
Asn Pro Glu Ala Thr Pro Glu Ala Arg Ala Leu Met Asp Tyr Leu Leu
185 190 195
Ser Gln Tyr Gly Gln Lys Ile Ile Ser Gly Gln Gln Thr Ile Glu Asp
200 205 210
Ile Glu Trp Ile Lys Gln Gln Thr Gly Lys Tyr Pro Ala Ile Phe Ser
215 220 225
Thr Asp Leu Met Asp Tyr Ser Pro Ser Arg Ile Glu Asn Gly Ala Ser
230 235 240 245
Ser Thr Glu Val Glu Lys Met Ile Glu Trp Tyr Lys Arg Gly Gly Ile
250 255 260
Val Ser Leu Cys Trp His Trp Asn Ala Pro Lys Gly Ile Gly Gly Asn
265 270 275
Glu Pro Gly His Glu Trp Trp Arg Gly Phe Tyr Thr Glu Phe Thr Thr
280 285 290
Phe Asp Val Glu Phe Ala Leu Asn His Leu Asp Ser Glu Asp Tyr Gln
295 300 305
Leu Leu Ile Arg Asp Ile Asp Ala Ile Ala Val Gln Leu Lys Arg Leu
310 315 320 325
Gln Asp Ala Asn Val Pro Val Leu Trp Arg Pro Leu His Glu Ala Glu
330 335 340
Gly Gly Trp Phe Trp Trp Gly Ala Lys Gly Pro Glu Pro Ala Lys Gln
345 350 355
Leu Tyr Arg Leu Met Tyr Asp Arg Leu Thr His Asp His Asn Leu Asn
360 365 370
Asn Leu Ile Trp Ile Trp Asn Ser Glu Lys Lys Asp Trp Tyr Pro Gly
375 380 385
Asp Asp Val Val Asp Ile Val Ser Val Asp Ile Tyr Asn Pro Ala Glu
390 395 400 405
Asp Tyr Asn Pro Ser Ile Ala Lys Tyr Glu Gly Leu Val Ser Leu Val
410 415 420
Asn Gly Lys Lys Met Ala Ala Leu Ala Glu Asn Gly Pro Ile Pro Asp
425 430 435
Pro Asp Ala Leu Gln Ala Tyr Gly Ala Glu Trp Ser Phe Phe Ser Thr
440 445 450
Trp Thr Gly Asp Tyr Ile Arg Asp Gly Lys Thr Asn Thr Met Glu His
455 460 465
Leu Lys Lys Val Tyr His His Asp Tyr Val Ile Thr Leu Asp Glu Leu
470 475 480 485
Pro Ala Asp Leu Tyr Ala Asn Pro Glu Phe Glu Ala Glu Asn Gly Glu
490 495 500
Ser Ala Gly Met Thr Arg Ala Asn Gly Gln Glu Ser His Ser Lys Gly
505 510 515
Gly Tyr Thr Thr Gly Met Glu Pro Lys Asn His Pro His Pro His Pro
520 525 530
His Pro
535
<210> 14
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Met Lys Lys Pro Leu Gly Lys Ile Val Ala Ser Thr Ala Leu Leu Ile
1 5 10 15
Ser Val Ala Phe Ser Ser Ser Ile Ala Ser Ala
20 25
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
His Pro His Pro His Pro His Pro
1 5
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Met Asn Met Glu Gly Thr Pro
1 5
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Asn Met Glu Gly Thr Pro Ser
1 5
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Met Glu Gly Thr Pro Ser Val

Claims (16)

1.一种具有甘露聚糖酶活性的多肽，该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少91％，例如至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且包含在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29个位置中的一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
2.如权利要求1所述的多肽，其中该多肽进一步包含碳水化合物结合模块(CBM)。
3.一种具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11具有至少81％，例如至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:11的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49 或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
4.如权利要求1所述的多肽，该多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸1至330、SEQ ID NO:2的成熟多肽或SEQ ID NO:3的氨基酸1至498或由其组成。
5.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含表面活性剂和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:3具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
6.一种包含核心粒子和一个或多个包衣的颗粒，其中该颗粒包含具有甘露聚糖酶活性的选自下组的多肽，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
7.一种液体组合物，该液体组合物包含多元醇和具有甘露聚糖酶活性的多肽，其中该多肽选自下组，该组由以下组成：
(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:4具有至少81％，例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性；
(b)SEQ ID NO:4的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个位置中包含一个或多个取代、和/或一个或多个缺失、和/或一个或多个插入或其任何组合；
(c)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及N-末端和/或C-末端His-标签和/或HQ-标签；
(d)多肽，该多肽包含(a)或(b)的多肽以及多至10个氨基酸，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的N-末端和/或C-末端延伸；以及
(e)(a)或(b)的多肽的片段，该片段具有甘露聚糖酶活性并且具有该成熟多肽的至少90％的长度。
8.如权利要求1至4中任一项所述的多肽、如权利要求5所述的洗涤剂组合物、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)的用途。
9.一种制备食物或饲料组合物和/或食物或饲料添加剂的方法，该方法包括将如权利要求1至4中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物与一种或多种食物或饲料和/或食物或饲料添加剂成分混合。
10.一种用于降解甘露聚糖，例如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的方法，该方法包括向甘露聚糖施用如权利要求1至4中任一项所述的多肽、如权利要求5所述的洗涤剂组合物、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物。
11.一种用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
(b)添加所述咖啡豆水和如权利要求1至4中任一项所述的多肽、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物；
(c)孵育以制造水性咖啡提取物；以及
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
12.一种用于降解纤维素材料的方法，该方法包括：在如权利要求1至4中任一项所述的具有甘露聚糖酶活性的多肽、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物的存在下，用酶组合物处理该纤维素材料。
13.一种用于产生发酵产物的方法，该方法包括：
(a)在如权利要求1至4中任一项所述的具有甘露聚糖酶活性的多肽、如权利要求6所述的颗粒或如权利要求7所述的液体组合物的存在下，用酶组合物糖化纤维素材料；
(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；以及
(c)从发酵中回收该发酵产物。
14.一种编码如权利要求1至4中任一项所述的多肽的多核苷酸。
15.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞包含如权利要求14所述的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至指导该多肽的产生的一个或多个控制序列。
16.一种产生如权利要求1至4中任一项所述的多肽的方法，该方法包括：
(a)在有益于产生该多肽的条件下培养如权利要求15所述的宿主细胞；和
(b)回收该多肽。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021152123A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
WO2021152120A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
WO2023247348A1 (en) 2022-06-21 2023-12-28 Novozymes A/S Mannanase variants and polynucleotides encoding same
WO2023247514A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Novozymes A/S Recombinant mannanase expression

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999064619A2 (en) * 1998-06-10 1999-12-16 Novozymes A/S Novel mannanases
WO2001062903A1 (en) * 2000-02-24 2001-08-30 Novozymes A/S Family 44 xyloglucanases
CN101089185A (zh) * 2006-06-16 2007-12-19 罗科 一种新的β-甘露聚糖酶基因及其重组酶的生产方法
WO2016054176A1 (en) * 2014-09-30 2016-04-07 Danisco Us Inc Compositions comprising beta-mannanase and methods of use
CN105916985A (zh) * 2013-09-19 2016-08-31 诺维信公司 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
CN107002056A (zh) * 2014-09-05 2017-08-01 诺维信公司 碳水化合物结合模块变体以及编码它们的多核苷酸

Family Cites Families (155)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1296839A (zh) 1969-05-29 1972-11-22
US4016040A (en) 1969-12-10 1977-04-05 Colgate-Palmolive Company Preparation of enzyme-containing beads
GB1372034A (en) 1970-12-31 1974-10-30 Unilever Ltd Detergent compositions
GB1483591A (en) 1973-07-23 1977-08-24 Novo Industri As Process for coating water soluble or water dispersible particles by means of the fluid bed technique
GB1590432A (en) 1976-07-07 1981-06-03 Novo Industri As Process for the production of an enzyme granulate and the enzyme granuate thus produced
DK187280A (da) 1980-04-30 1981-10-31 Novo Industri As Ruhedsreducerende middel til et fuldvaskemiddel fuldvaskemiddel og fuldvaskemetode
DK263584D0 (da) 1984-05-29 1984-05-29 Novo Industri As Enzymholdige granulater anvendt som detergentadditiver
US4713245A (en) 1984-06-04 1987-12-15 Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated Granule containing physiologically-active substance, method for preparing same and use thereof
EP0218272B1 (en) 1985-08-09 1992-03-18 Gist-Brocades N.V. Novel lipolytic enzymes and their use in detergent compositions
EG18543A (en) 1986-02-20 1993-07-30 Albright & Wilson Protected enzyme systems
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
US5989870A (en) 1986-04-30 1999-11-23 Rohm Enzyme Finland Oy Method for cloning active promoters
DE3750450T2 (de) 1986-08-29 1995-01-05 Novo Industri As Enzymhaltiger Reinigungsmittelzusatz.
NZ221627A (en) 1986-09-09 1993-04-28 Genencor Inc Preparation of enzymes, modifications, catalytic triads to alter ratios or transesterification/hydrolysis ratios
DK435587D0 (da) 1987-08-21 1987-08-21 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et enzymholdigt granulat
DK435687D0 (da) 1987-08-21 1987-08-21 Novo Industri As Enzymholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf
ES2076939T3 (es) 1987-08-28 1995-11-16 Novo Nordisk As Lipasa recombinante de humicola y procedimiento para la produccion de lipasas recombinantes de humicola.
JPS6474992A (en) 1987-09-16 1989-03-20 Fuji Oil Co Ltd Dna sequence, plasmid and production of lipase
ATE129523T1 (de) 1988-01-07 1995-11-15 Novo Nordisk As Spezifische protease.
DK6488D0 (da) 1988-01-07 1988-01-07 Novo Industri As Enzymer
JP3079276B2 (ja) 1988-02-28 2000-08-21 天野製薬株式会社 組換え体ｄｎａ、それを含むシュードモナス属菌及びそれを用いたリパーゼの製造法
EP0406314B1 (en) 1988-03-24 1993-12-01 Novo Nordisk A/S A cellulase preparation
US5776757A (en) 1988-03-24 1998-07-07 Novo Nordisk A/S Fungal cellulase composition containing alkaline CMC-endoglucanase and essentially no cellobiohydrolase and method of making thereof
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
DK78089D0 (da) 1989-02-20 1989-02-20 Novo Industri As Detergentholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf
DK78189D0 (da) 1989-02-20 1989-02-20 Novo Industri As Enzymholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf
EP0477280B1 (en) 1989-06-13 1996-09-11 Genencor International, Inc. A method for killing cells without cell lysis
GB8915658D0 (en) 1989-07-07 1989-08-23 Unilever Plc Enzymes,their production and use
DK0493398T3 (da) 1989-08-25 2000-05-22 Henkel Research Corp Alkalisk, proteolytisk enzym og fremgangsmåde til fremstilling deraf
DK0528828T4 (da) 1990-04-14 1998-08-31 Genencor Internat Gmbh Alkaliske bacillus-lipaser, DNA-sekvenser, der koder herfor, og bacilli der producerer sådanne lipaser
EP0531372B2 (en) 1990-05-09 2004-04-14 Novozymes A/S A cellulase preparation comprising an endoglucanase enzyme
DK115890D0 (da) 1990-05-09 1990-05-09 Novo Nordisk As Enzym
DK204290D0 (da) 1990-08-24 1990-08-24 Novo Nordisk As Enzymatisk detergentkomposition og fremgangsmaade til enzymstabilisering
AU657278B2 (en) 1990-09-13 1995-03-09 Novo Nordisk A/S Lipase variants
IL99552A0 (en) 1990-09-28 1992-08-18 Ixsys Inc Compositions containing procaryotic cells,a kit for the preparation of vectors useful for the coexpression of two or more dna sequences and methods for the use thereof
DE69133035T2 (de) 1991-01-16 2003-02-13 Procter & Gamble Kompakte Waschmittelzusammensetzungen mit hochaktiven Cellulasen
DK58491D0 (da) 1991-04-03 1991-04-03 Novo Nordisk As Hidtil ukendte proteaser
HU213044B (en) 1991-04-30 1997-01-28 Procter & Gamble Built liquid detergents with boric-polyol complex to inhibit proteolytic enzyme with additives improving detergent effect
EP0511456A1 (en) 1991-04-30 1992-11-04 The Procter & Gamble Company Liquid detergents with aromatic borate ester to inhibit proteolytic enzyme
DE69226182T2 (de) 1991-05-01 1999-01-21 Novo Nordisk As Stabilisierte enzyme und waschmittelzusammensetzungen
US5340735A (en) 1991-05-29 1994-08-23 Cognis, Inc. Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability
US5879920A (en) 1991-10-07 1999-03-09 Genencor International, Inc. Coated enzyme-containing granule
EP0610321B1 (en) 1991-10-07 2001-12-12 Genencor International, Inc. Coated enzyme containing granule
DK28792D0 (da) 1992-03-04 1992-03-04 Novo Nordisk As Nyt enzym
DK72992D0 (da) 1992-06-01 1992-06-01 Novo Nordisk As Enzym
DK88892D0 (da) 1992-07-06 1992-07-06 Novo Nordisk As Forbindelse
ES2334590T3 (es) 1992-07-23 2010-03-12 Novozymes A/S Alfa-amilasa mutante, detergente y agente de lavado de vajilla.
JP3681750B2 (ja) 1992-10-06 2005-08-10 ノボザイムス アクティーゼルスカブ セルラーゼ変異体
PL310326A1 (en) 1993-02-11 1995-12-11 Genencor Int Novel oxidation-stable mutants of alpha-amylase as well as detergent and starch liquefaction compositions containing them
JP3618748B2 (ja) 1993-04-27 2005-02-09 ジェネンコー インターナショナル インコーポレイテッド 洗剤に使用する新しいリパーゼ変異体
FR2704860B1 (fr) 1993-05-05 1995-07-13 Pasteur Institut Sequences de nucleotides du locus cryiiia pour le controle de l'expression de sequences d'adn dans un hote cellulaire.
DK52393D0 (zh) 1993-05-05 1993-05-05 Novo Nordisk As
JP2859520B2 (ja) 1993-08-30 1999-02-17 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物
EP0722490B2 (en) 1993-10-08 2013-10-23 Novozymes A/S Amylase variants
KR100338786B1 (ko) 1993-10-13 2002-12-02 노보자임스 에이/에스 H2o2-안정한퍼록시다제변이체
JPH07143883A (ja) 1993-11-24 1995-06-06 Showa Denko Kk リパーゼ遺伝子及び変異体リパーゼ
DE4343591A1 (de) 1993-12-21 1995-06-22 Evotec Biosystems Gmbh Verfahren zum evolutiven Design und Synthese funktionaler Polymere auf der Basis von Formenelementen und Formencodes
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
MX9603542A (es) 1994-02-22 1997-03-29 Novo Nordisk As Metodo para preparar una variante de una enzima lipolitica.
DK1921148T3 (da) 1994-02-24 2011-09-26 Henkel Ag & Co Kgaa Forbedret enzymer og detergenter indeholdende disse
DK0749473T3 (da) 1994-03-08 2006-02-27 Novozymes As Hidtil ukendte alkaliske cellulaser
ATE183886T1 (de) 1994-04-07 1999-09-15 Nestle Sa Hydrolyse von kaffee mit immobilisierter beta- mannanase
US6017866A (en) 1994-05-04 2000-01-25 Genencor International, Inc. Lipases with improved surfactant resistance
KR970703426A (ko) 1994-06-03 1997-07-03 제임스 쉐한 정제된 Myceliophthora 락카제 및 그것을 암호화 하는 핵산(PURIFIED MYCELIOPHTHORA LACCASES AND NUCLEIC ACIDS ENCODING SAME)
AU2884595A (en) 1994-06-20 1996-01-15 Unilever Plc Modified pseudomonas lipases and their use
WO1996000292A1 (en) 1994-06-23 1996-01-04 Unilever N.V. Modified pseudomonas lipases and their use
CN101659926A (zh) 1994-06-30 2010-03-03 诺沃奇梅兹有限公司 非毒性、非产毒性、非致病性镰孢属表达系统及所用启动子和终止子
EP1995303A3 (en) 1994-10-06 2008-12-31 Novozymes A/S Enzyme preparation with endoglucanase activity
BE1008998A3 (fr) 1994-10-14 1996-10-01 Solvay Lipase, microorganisme la produisant, procede de preparation de cette lipase et utilisations de celle-ci.
US5827719A (en) 1994-10-26 1998-10-27 Novo Nordisk A/S Enzyme with lipolytic activity
AR000862A1 (es) 1995-02-03 1997-08-06 Novozymes As Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del
JPH08228778A (ja) 1995-02-27 1996-09-10 Showa Denko Kk 新規なリパーゼ遺伝子及びそれを用いたリパーゼの製造方法
CN101173263A (zh) 1995-03-17 2008-05-07 诺沃奇梅兹有限公司 新的内切葡聚糖酶
BR9608149B1 (pt) 1995-05-05 2012-01-24 processos para efetuar mutação no dna que codifica uma enzima de subtilase ou sua pré- ou pré-pró-enzima e para a manufatura de uma enzima de subtilase mutante.
ATE282087T1 (de) 1995-07-14 2004-11-15 Novozymes As Modifiziertes enzym mit lipolytischer aktivität
EP0851913B1 (en) 1995-08-11 2004-05-19 Novozymes A/S Novel lipolytic enzymes
US5576282A (en) 1995-09-11 1996-11-19 The Procter & Gamble Company Color-safe bleach boosters, compositions and laundry methods employing same
ATE291082T1 (de) 1996-04-12 2005-04-15 Novozymes As Enzymhaltige granulatkörner sowie verfahren zu deren herstellung
US5763385A (en) 1996-05-14 1998-06-09 Genencor International, Inc. Modified α-amylases having altered calcium binding properties
WO1998008940A1 (en) 1996-08-26 1998-03-05 Novo Nordisk A/S A novel endoglucanase
EP0937138B1 (en) 1996-09-17 2006-04-26 Novozymes A/S Cellulase variants
CN1232384A (zh) 1996-10-08 1999-10-20 诺沃挪第克公司 作为染料前体的二氨基苯甲酸衍生物
CA2268772C (en) 1996-10-18 2008-12-09 The Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising an amylolytic enzyme and a cationic surfactant
KR100561826B1 (ko) 1996-11-04 2006-03-16 노보자임스 에이/에스 섭틸라제 변종과 조성물
AU4773197A (en) 1996-11-04 1998-05-29 Novo Nordisk A/S Subtilase variants and compositions
CN1262632C (zh) 1997-03-07 2006-07-05 普罗格特-甘布尔公司 含有金属漂白催化剂和漂白活化剂和/或有机过羧酸的漂白组合物
EP1002061A1 (en) 1997-07-04 2000-05-24 Novo Nordisk A/S FAMILY 6 ENDO-1,4-$g(b)-GLUCANASE VARIANTS AND CLEANING COMPOSIT IONS CONTAINING THEM
DE19732749A1 (de) 1997-07-30 1999-02-04 Henkel Kgaa Glucanasehaltiges Waschmittel
US6376445B1 (en) * 1997-08-14 2002-04-23 Procter & Gamble Company Detergent compositions comprising a mannanase and a protease
ATE385254T1 (de) 1997-08-29 2008-02-15 Novozymes As Proteasevarianten und zusammensetzungen
US6187576B1 (en) 1997-10-13 2001-02-13 Novo Nordisk A/S α-amylase mutants
EP1042443B1 (en) 1997-12-20 2006-11-02 Genencor International, Inc. Granule with hydrated barrier material
US5955310A (en) 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
DK1092007T3 (da) 1998-06-30 2004-04-05 Novozymes As Ny forbedret enzymholdig granule
JP5043254B2 (ja) 1998-10-26 2012-10-10 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 糸状面細胞内の問題のｄｎａライブラリーの作製及びスクリーニング
EP2278016B1 (en) 1999-03-22 2012-09-26 Novozymes Inc. Promoter sequences derived from Fusarium Venenatum and uses thereof
EP1214426A2 (en) 1999-08-31 2002-06-19 Novozymes A/S Novel proteases and variants thereof
CA2394971C (en) 1999-12-15 2016-01-19 Novozymes A/S Subtilase variants having an improved wash performance on egg stains
CN101532001A (zh) 2000-03-08 2009-09-16 诺维信公司 具有改变的特性的变体
AU2001278415A1 (en) 2000-08-01 2002-02-13 Novozymes A/S Alpha-amylase mutants with altered stability
CN1337553A (zh) 2000-08-05 2002-02-27 李海泉 地下观光游乐园
CA2419896C (en) 2000-08-21 2014-12-09 Novozymes A/S Subtilase enzymes
DK200101090A (da) 2001-07-12 2001-08-16 Novozymes As Subtilase variants
GB0127036D0 (en) 2001-11-09 2002-01-02 Unilever Plc Polymers for laundry applications
DE10162728A1 (de) 2001-12-20 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14393) und Wasch-und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
WO2003095658A1 (en) 2002-05-07 2003-11-20 Novozymes A/S Homologous recombination into bacterium for the generation of polynucleotide libraries
US20060228791A1 (en) 2002-06-26 2006-10-12 Novozymes A/S Subtilases and subtilase variants having altered immunogenicity
TWI319007B (en) 2002-11-06 2010-01-01 Novozymes As Subtilase variants
GB0314211D0 (en) 2003-06-18 2003-07-23 Unilever Plc Laundry treatment compositions
GB0314210D0 (en) 2003-06-18 2003-07-23 Unilever Plc Laundry treatment compositions
CA2529726A1 (en) 2003-06-18 2005-01-13 Unilever Plc Laundry treatment compositions
JP4880469B2 (ja) 2003-10-23 2012-02-22 ノボザイムス アクティーゼルスカブ 洗剤中で改良された安定性を有するプロテアーゼ
US8535927B1 (en) 2003-11-19 2013-09-17 Danisco Us Inc. Micrococcineae serine protease polypeptides and compositions thereof
WO2005105826A1 (ja) 2004-04-28 2005-11-10 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai チロペプチンａ類縁体
DE09171238T1 (de) 2004-09-27 2010-04-29 Novozymes A/S Enzymgranulat
WO2006066594A2 (en) 2004-12-23 2006-06-29 Novozymes A/S Alpha-amylase variants
MX292760B (es) 2005-04-15 2011-11-28 Procter & Gamble Composiciones detergentes liquidas para lavanderia con polimeros de polietilenimina modificada y enzima lipasa.
MX2007012612A (es) 2005-04-15 2008-01-11 Basf Ag Polialquileniminas alcoxiladas solubles en agua anfifilicas con un bloque de oxido de polietileno interno y un bloque de oxido de polipropileno externo.
EP2385111B1 (en) 2005-07-08 2016-09-07 Novozymes A/S Subtilase variants
US20080293610A1 (en) 2005-10-12 2008-11-27 Andrew Shaw Use and production of storage-stable neutral metalloprotease
GB0522659D0 (en) 2005-11-07 2005-12-14 Reckitt Benckiser Nv Delivery cartridge
AU2006310374A1 (en) 2005-11-07 2007-05-10 Reckitt Benckiser N.V. Dosage element
EP1976422A1 (en) 2006-01-21 2008-10-08 Reckitt Benckiser N.V. Multi-dosing detergent delivery device
CA2633111A1 (en) 2006-01-21 2007-07-26 Reckitt Benckiser N.V. Dosage element and chamber
US20090170743A1 (en) 2006-01-21 2009-07-02 Reckitt Benckiser N.V. Article
US20080015135A1 (en) 2006-05-05 2008-01-17 De Buzzaccarini Francesco Compact fluid laundry detergent composition
DE602007007945D1 (de) 2006-05-31 2010-09-02 Basf Se Amphiphile pfropfpolymere auf basis von polyalkylenoxiden und vinylestern
DE202006009003U1 (de) 2006-06-06 2007-10-25 BROSE SCHLIEßSYSTEME GMBH & CO. KG Kraftfahrzeugschloß
JP2009542896A (ja) 2006-06-19 2009-12-03 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 低い多分散度のポリアクリル酸系ポリマーを有する液体洗剤組成物
ATE503011T1 (de) 2006-07-07 2011-04-15 Procter & Gamble Waschmittelzusammensetzungen
IN2014DN03452A (zh) 2006-07-07 2015-07-10 Procter & Gamble
GB0621574D0 (en) 2006-10-30 2006-12-06 Reckitt Benckiser Nv Multi-dosing detergent delivery device
BRPI0812037A2 (pt) 2007-05-30 2014-10-14 Danisco Us Inc Genecor Division Variantes de uma alfa-amilase com níveis de produção aperfeiçoados em processos de fermentação
DE102007038031A1 (de) 2007-08-10 2009-06-04 Henkel Ag & Co. Kgaa Mittel enthaltend Proteasen
KR20100088675A (ko) 2007-11-05 2010-08-10 다니스코 유에스 인크. 변경된 특성을 지닌 바실러스 종 ｔｓ-23 알파-아밀라아제의 변이체
ES2568784T5 (es) 2008-01-04 2023-09-13 Procter & Gamble Una composición detergente para lavado de ropa que comprende glicosil hidrolasa
RU2510662C2 (ru) 2008-03-26 2014-04-10 Новозимс А/С Стабилизированные жидкие ферментные композиции
WO2009143481A1 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Paenibacillus ssp. and methods for fermentation of lignocellulosic materials
JP2012504390A (ja) 2008-09-30 2012-02-23 ノボザイムス，インコーポレイティド 糸状菌細胞におけるポジティブ及びネガティブ選択遺伝子の使用方法
KR20110124242A (ko) 2009-02-20 2011-11-16 다니스코 유에스 인크. 발효 브로쓰 제형물
AU2010299799B2 (en) 2009-09-25 2015-10-29 Novozymes A/S Subtilase variants
MX2012003387A (es) 2009-09-25 2012-04-10 Novozymes As Uso de variantes de proteasa.
EP3404087A1 (en) 2010-02-10 2018-11-21 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with high stability in presence of a chelating agent
PL2361964T3 (pl) 2010-02-25 2013-05-31 Procter & Gamble Kompozycja detergentu
US20140135252A1 (en) * 2011-04-29 2014-05-15 Danisco Us Inc. Detergent compositions containing geobacillus tepidamans mannanase and methods of use thereof
US8802388B2 (en) * 2011-04-29 2014-08-12 Danisco Us Inc. Detergent compositions containing Bacillus agaradhaerens mannanase and methods of use thereof
KR20140056237A (ko) 2011-06-30 2014-05-09 노보자임스 에이/에스 알파-아밀라제 변이체
CN112662734A (zh) 2011-06-30 2021-04-16 诺维信公司 用于筛选α-淀粉酶的方法
EP2674475A1 (en) 2012-06-11 2013-12-18 The Procter & Gamble Company Detergent composition
WO2015144824A1 (en) 2014-03-27 2015-10-01 Novozymes A/S Beta-glucanase variants and polynucleotides encoding same
KR101718908B1 (ko) * 2014-10-17 2017-03-22 주식회사 씨티씨바이오 신규 만난아제 및 이의 용도
CN108603183B (zh) * 2015-11-05 2023-11-03 丹尼斯科美国公司 类芽孢杆菌属物种和芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶
WO2019068715A1 (en) * 2017-10-02 2019-04-11 Novozymes A/S POLYPEPTIDES HAVING MANNANASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING THESE POLYPEPTIDES
US11866748B2 (en) * 2017-10-24 2024-01-09 Novozymes A/S Compositions comprising polypeptides having mannanase activity
JP2023507760A (ja) * 2019-12-23 2023-02-27 ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー 酵素を含む組成物

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999064619A2 (en) * 1998-06-10 1999-12-16 Novozymes A/S Novel mannanases
WO2001062903A1 (en) * 2000-02-24 2001-08-30 Novozymes A/S Family 44 xyloglucanases
CN101089185A (zh) * 2006-06-16 2007-12-19 罗科 一种新的β-甘露聚糖酶基因及其重组酶的生产方法
CN105916985A (zh) * 2013-09-19 2016-08-31 诺维信公司 具有甘露聚糖酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸
CN107002056A (zh) * 2014-09-05 2017-08-01 诺维信公司 碳水化合物结合模块变体以及编码它们的多核苷酸
WO2016054176A1 (en) * 2014-09-30 2016-04-07 Danisco Us Inc Compositions comprising beta-mannanase and methods of use

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI: "hypothetical protein [Paenibacillus ihumii]" *

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