NO333713B1 - Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning - Google Patents

Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning Download PDF

Info

Publication number
NO333713B1
NO333713B1 NO20032464A NO20032464A NO333713B1 NO 333713 B1 NO333713 B1 NO 333713B1 NO 20032464 A NO20032464 A NO 20032464A NO 20032464 A NO20032464 A NO 20032464A NO 333713 B1 NO333713 B1 NO 333713B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
rna
target
double
sirna
dsrna
Prior art date
Application number
NO20032464A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20032464D0 (no
NO20032464L (no
Inventor
Winfried Lendeckel
Matthias Wilm
Thomas Tuschl
Sayda Mahgoub Elbashir
Reinhard Luehrmann
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Europ Lab Molekularbiolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40529293&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO333713(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/US2001/010188 external-priority patent/WO2001075164A2/en
Application filed by Max Planck Gesellschaft, Europ Lab Molekularbiolog filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of NO20032464D0 publication Critical patent/NO20032464D0/no
Publication of NO20032464L publication Critical patent/NO20032464L/no
Publication of NO333713B1 publication Critical patent/NO333713B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/30—Production chemically synthesised

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Dobbelttrådet RNA (dsRNA) induserer sekvensspesifikk posttranskripsjonell geninaktivering i mange organismer med en prosess kjent som RNA-interferens (RNAi). Ved å anvende et Drosophila in vitro-system demonstrerer vi at 19-23 nt korte RNA-fragmenter er de sekvensspesifikke mediatorene av RN Ai De korte, interfererende RNA'ene (siRNA'ene) genereres ved en RNase III-lignende prosessenngsreaksjon fra langt dsRNA. Kjemisk syntetiserte siRNA-duplekser med overhengende 3'ender medierer effektiv mål-RNA kutting i lysatet, og kuttesetet er lokalisert nær senteret til regionen dekket av guide-siRNA'et. Videre tilveiebringer vi bevis for at dsRNA-prosesseringsretningen avgjør hvorvidt sens- eller antisens mål-RNA kan bli kuttet med det dannede siRNP-komplekset.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår sekvens- og strukturelle egenskaper til dobbelttrådede (ds) RNA-molekyler som er nødvendige for å mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer slik som RNA-interferens.
Oppfinnelsen angår således et isolert, dobbelttrådet RNA-molekyl og dets anvendelse, en fremgangsmåte for dets fremstilling, in vitro fremgangsmåte for mediering av målspesifikke RNA interferenser og dens anvendelse, samt farmasøytisk sammensetning, som angitt i innledningen til de selvstendige patentkravene.
Betegnelsen "RNA-interferens" (RNAi) oppstod etter oppdagelsen av at injeksjon av dsRNA inn i nematoden C. elegans fører til spesifikk inaktivering av gener som har høy sekvenshomologi med det leverte dsRNAet (Fire et al., 1998). RNAi ble deretter også observert i insekter, frosker (Oelgeschlager et al., 2000) og andre dyr inkludert mus (Svoboda et al., 2000; Wianny og Zernicka-Goetz, 2000) og forekommer også trolig i menneske. RNAi er nært koblet til den posttranskripsjonelle geninaktiverings (PTGS) -mekanismen for kosuppresjon i planter og undertrykking i sopp (Catalanotto et al., 2000; Cogoni og Macino, 1999; Dalmay et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Mourrain et al., 2000; Smardon et al., 2000) og noen komponenter i RNAi-maskineriet er også nødvendige for posttranskripsjonell inaktivering ved kosuppresjon (Catalanotto et al., 2000; Dernburg et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000). Temaet har også blitt beskrevet nylig (Bass, 2000; Bosherog Labouesse, 2000; Fire, 1999; Plasterk og Ketting, 2000; Sharp, 1999; Sijen og Kooter, 2000), se også hele nummeret av Plant Molecular Biology, vol. 43, utgave 2/3, (2000).
WO 01/75164 beskriver flere typer av RNAi molekyler som er blitt betraktet å være involvert i forskjellige stadier av RNAi sporet. Disse RNAi molekyler er enkelttrådet, korte molekyler, dobbelttrådet lange molekyler og buttendet, dobbelttrådet korte molekyler.
Bass (Cell, vol. 101, side 235-238, 2000) er en artikkel som omtaler en rekke vitenskapelige publikasjoner om RNA interferens (RNAi).
Parrish et. Al (Molecular Cell, vol. 6, side 1077-1087, 2000) beskriver de ulike krav til trigger tråder i RNA interferens.
WO 00/44895 A1 angår et medikament som inneholder minst ett dobbelttrådet oligoribonukleotid (dsRNA) designet til å inhibere ekspresjon av et målgen.
I planter kan innførte transgener, i tillegg til PTGS, også føre til transkripsjonen geninaktivering via RNA-styrt DNA-metylering av cytosiner (se referanser i Wassenegger, 2000). Genomiske mål som er så korte som 30 bp metyleres i planter på en RNA-styrt måte (Pelissier, 2000). DNA-metylering foreligger også i pattedyr.
Den naturlige funksjonen av RNAi og kosuppresjon ser ut til å være beskyttelse av genomet mot invasjon av mobile genetiske elementer slik som retrotransposoner og virus som produserer avvikende RNA eller dsRNA i vertscellen når de blir aktive (Jensen et al., 1999; Ketting et al., 1999; Ratcliff et al., 1999; Tabara et al., 1999) . Spesifikk mRNA-nedbrytning hindrer transposon og virusreplikasjon, selv om noen virus kan overvinne eller hindre denne prosessen ved ekspresjon av proteiner som undertrykker PTGS (Lucy et al., 2000; Voinnet et al., 2000).
dsRNA utløser den spesifikke nedbrytningen av homologe RNAer bare i regionen som har likhet med dsRNAet (Zamore et al., 2000). dsRNAet prosesseres til 21-23 nt RNA-fragmenter og mål-RNA kuttesetene er atskilt 21-23 nt fra hverandre. Det har derfor blitt indikert at 21-23 nt fragmentene er guide-RNAene for målgjenkjennelse (Zamore et al., 2000). Disse korte RNA'ene ble også detektert i ekstrakter fremstilt fra D. melanogaster Schneider 2-celler som ble transfektert med dsRNAfør cellelysering (Hammond et al., 2000), fraksjonene som hadde sekvensspesifikk nukleaseaktivitet inneholdt imidlertid også en stor fraksjon av residualt dsRNA. Rollen 21-23 nt fragmentene har i å guide mRNA-kutting er videre støttet av observasjonen av at 21-23 nt fragmenter isolert fra prosessert dsRNA i en viss grad kan mediere spesifikk mRNA-nedbrytning (Zamore et al., 2000) . RNA-molekyler med lignende størrelse akkumulerer også i plantevev som har PTGS (Hamilton og Baulcombe, 1999).
Her anvender vi det etablerte Drosophila in wfro-systemet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000) for å videre undersøke mekanismen til RNAi. Vi demonstrerer at korte 21 og 22 nt RNA'er, når de er baseparet med 3' overhengende ender, virker som guide-RNAene for sekvensspesifikk mRNA-nedbrytning. Korte 30 bp dsRNA'er kan ikke mediere RNAi i dette systemet, fordi de ikke lenger prosesseres til 21 og 22 nt RNAer. Videre definerte vi mål-RNA kuttesetene i forhold til de 21 og 22 nt korte, interfererende RNAene (siRNAer) og gir bevis for at retningen av dsRNA-prosessering avgjør hvorvidt et sense eller et antisense mål-RNA kan bli kuttet av det dannede siRNP-endonukleasekomplekset. Videre kan siRNA'ene også være viktige verktøy for transkripsjonen modulering, f.eks. inaktivering, av mammalske gener ved å guide DNA-metylering.
Videre eksperimenter i humane in v/Vo-cellekultursystemer (HeLa-celler) viser at dobbelttrådede RNA-molekyler med en lengde på fortrinnsvis fra 19-23 nukleotider har RNAi-aktivitet.
Formålet med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye agenser som kan mediere målspesifikk RNA-interferens, der nevnte agenser har en forbedret effektivitet og sikkerhet sammenlignet med tidligere agenser på området.
Løsningen på dette problemet er tilveiebrakt ved et isolert dobbelttrådet RNA-molekyl, hvor hver RNA-tråd har en lengde fra 19-23 nukleotider og hvor minst én tråd har et 3' overheng med fra 1-3 nukleotider, hvor nevnte RNA-molekyl er i stand til målspesifikk RNA-interferens. Minst én tråd har som nevnt et 3' overheng med fra 1-3 nukleotider, og mest foretrukket 2 nukleotider. Den andre tråden kan være buttendet eller har opp til 6 nukleotider i 3' overheng.
RNA-molekylet er fortrinnsvis et syntetisk RNA-molekyl som er vesentlig fri for kontaminanter forekommende i celleekstrakter, f.eks. fra Drosophila- embryoer. Videre er RNA-molekylet fortrinnsvis vesentlig fri for enhver ikke-mål-spesifikk kontaminant, spesielt ikke-mål-spesifikke RNA-molekyler f.eks. fra kontaminanter forekommende i celleekstrakter.
Videre angår foreliggende oppfinnelse en fremgangsmåte for å fremstille et dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge oppfinnelsen, som omfatter trinnene: a) syntetisere to RNA-tråder som hver har en lengde fra 19-23 nukleotider og hvor minst én har et 3' overheng med fra 1-3 nukleotider, der nevnte RNA-tråder kan
danne et dobbelttrådet RNA-molekyl,
b) kombinere de syntetiserte RNA-trådene under betingelser der et dobbelttrådet RNA molekyl dannes som er i stand til målspesifikk RNA interferens.
Videre angår foreliggende oppfinnelse en in vitro fremgangsmåte for mediering av målspesifikke RNA interferenser i en eukaryot celle, som omfatter trinnene: a) la nevnte celle komme i kontakt med det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge oppfinnelsen under betingelser der målspesifikke RNA interferenser kan
forekomme, og
b) mediere en målspesifikk RNA interferens effektuert av det dobbelttrådede RNAet mot en målnukleinsyre som har en sekvensdel som svarer i alt vesentlig til
det dobbelttrådede RNA'et.
Videre angår foreliggende oppfinnelse anvendelse av in vitro fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for å bestemme funksjonen til et gen i en celle, og angår også anvendelse av in vitro fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for modulering av funksjonen til et gen i en celle.
Videre angår oppfinnelsen anvendelse av et dobbeltrådet RNA molekyl ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et medikament for å modulere funksjonen til et patogen-asssosiert gen som er et viralt gen, og angår også anvendelse av et dobbeltrådet RNA molekyl ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et medikament for å modulere funksjonen til henholdsvis et tumor-assosiert gen og til et gen assosiert med en autoimmun sykdom.
Videre angår oppfinnelsen en farmasøytisk sammensetning som inneholder minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge oppfinnelsen som et aktivt stoff og en farmasøytisk bærer.
Disse og ytterligere trekk ved oppfinnelsen er angitt ved de i kravene anførte trekk.
Overraskende ble det funnet at syntetiske, korte, dobbelttrådede RNA-molekyler med overhengende 3' ender er sekvensspesifikke mediatorer av RNAi og medierer effektiv mål-RNA kutting, der kuttesetet er lokalisert nær senteret til regionen dekket av det guidende, korte RNAet.
Fortrinnsvis har hver tråd av RNA-molekylet en lengde fra 20-22 nukleotider, der lengden av hver tråd kan være lik eller forskjellig. Lengden av 3' overhenget er fra 1-3 nukleotider, der lengden av overhenget kan være lik eller forskjellig for hver tråd. RNA-trådene har fortrinnsvis 3' hydroksylgrupper. 5'-terminalen omfatter fortrinnsvis en fosfat-, difosfat-, trifosfat- eller hydroksylgruppe. De mest effektive dsRNA'ene er sammensatt av to 21 nt tråder som er paret slik at 1-3, spesielt 2 nt 3' overheng er til stede på begge endene av dsRNA'et.
Mål-RNA kuttereaksjonen guidet av siRNA'er er svært sekvensspesifikk. Ikke alle posisjonene til et siRNA bidrar imidlertid like mye til målgjenkjennelse. Feilmatch i senteret av siRNA-dupleksen er mest kritisk og opphever praktisk talt mål-RNA kutting. Derimot bidrar ikke 3' nukleotidet til siRNA-tråden (f.eks. posisjon 21) som er komplementært til det enkelttrådede mål-RNA'et til spesifisitet av målgjenkjennelsen. Videre er ikke sekvensen til det uparede 2-nt 3' overhenget til siRNA-tråden med den samme polariteten som mål-RNA'et kritisk for mål-RNA kutting, ettersom bare antisense siRNA-tråden guider målgjenkjennelse. Fra de enkelttrådede overhengende nukleotidene trenger derfor bare den nest siste posisjonen i antisense-siRNA'et (f.eks. posisjon 20) å matche det målrettede sense mRNAet.
Overraskende har de dobbelttrådede RNA-molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse høy in wVo-stabilitet i serum eller i vekstmedium for cellekulturer. For videre og øke stabiliteten, kan 3' overhengene bli stabilisert mot nedbrytning, f.eks. kan de bli valgt slik at de består av purinnukleotider, spesielt adenosin- eller guanosinnukleotider. Alternativt tolereres substitusjon av pyrimidinnukleotider med modifiserte analoger, f.eks. substitusjon av uridin 2 nt 3' overheng med 2'-deoksytymidin, og affiserer ikke effektiviteten til RNA-interferens. Fraværet av en 2' hydroksyl øker nukleaseresistensen til overhenget i vevsdyrkningsmedium signifikant.
I en spesielt foretrukket utførelsesform ifølge foreliggende oppfinnelse kan RNA-molekylet inneholde minst én modifisert nukleotidanalog. Nukleotidanalogene kan bli plassert i posisjoner hvor den målspesifikke aktiviteten, f.eks. den RNAi-medierende aktiviteten, ikke blir vesentlig påvirket, f.eks. i en region på 5'-enden og/eller 3' enden av det dobbelttrådede RNA-molekylet. Spesielt kan overhengene bli stabilisert ved å inkorporere modifiserte nukleotidanaloger.
Foretrukne nukleotidanaloger velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider. Det bør imidlertid bli registrert at også nukleobasemodifiserte ribonukleotider, dvs. ribonukleotider, inneholdende en ikke-naturlig forekommende nukleobase i stedet for en naturlig forekommende nukleobase slik som uridiner eller cytidiner modifisert på 5-posisjonen, f.eks. 5-(2-amino)propyluridin, 5-bromuridin; adenosiner og guanosiner modifisert på 8-posisjonen, f.eks. 8-bromguanosin; deazanukleotider, f.eks. 7-deaza-adenosin; O- og N-alkylerte nukleotider, f.eks. N6-metyladenosin, er egnet. I foretrukne sukkermodifiserte ribonukleotider byttes 2' OH-gruppen med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR, NH2, NHR, NR2eller CN, der R er Ci-C6alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller 1.1 foretrukne ryggradmodifiserte ribonukleotider byttes fosfoestergruppen koblet til tilgrensende ribonukleotider ut med en modifisert gruppe, f.eks. av fosfotioatgruppe. Det bør bli registrert at modifiseringene ovenfor kan bli kombinert.
Sekvensen til det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse må ha en tilstrekkelig likhet med et nukleinsyremålmolekyl for å mediere målspesifikk RNAi. Fortrinnsvis har sekvensen en likhet på minst 70 % med det ønskede målmolekylet i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Mer foretrukket er likheten minst 85 % og mest foretrukket 100 % i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Likheten av et dobbelttrådet RNA-molekyl med et forhåndsbestemt nukleinsyremålmolekyl, f.eks. et mRNA-målmolekyl, kan bli bestemt som følger:
I = _n_x 100
L
der I er likheten i prosent, n er antallet identiske nukleotider i den dobbelttrådede delen av dsRNA'et og målet, og L er lengden av sekvensoverlappingen mellom den dobbelttrådede delen av dsRNAet og målet.
Alternativt kan likheten av det dobbelttrådede RNA-molekylet i forhold til målsekvensen også bli definert inkludert 3' overhenget, spesielt et overheng med en lengde fra 1-3 nukleotider. I dette tilfellet er sekvenslikheten fortrinnsvis minst minst 70 % og mest foretrukket minst 85 % i forhold til målsekvensen. For eksempel kan nukleotidene fra 3' overhenget og opp til 2 nukleotider fra 5' og/eller 3' terminalen av dobbelttråden bli modifisert uten signifikant tap av aktivitet.
Fremgangsmåter for syntetisering av RNA-molekyler er kjent på området. I denne konteksten henvises det spesielt til kjemiske syntesefremgangsmåter som er beskrevet i Verma og Eckstein (1998).
De enkelttrådede RNAene kan også bli fremstilt med enzymatisk transkripsjon fra syntetiske DNA-templater eller fra DNA-plasmider isolert fra rekombinante bakterier. Typisk anvendes fag RNA-polymeraser slik som T7, T3 eller SP6 RNA-polymerase (Milligan og Uhlenbeck (1989)).
Fortrinnsvis omfatter kontakttrinnet (a) i in vitro fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen innføring av det dobbelttrådede RNA-molekylet i en eukaryot målcelle, f.eks. en isolert eukaryot målcelle, f.eks. i cellekultur. Mer foretrukket omfatter innføringstrinnet en bærermediert levering, f.eks. med liposomale bærere eller med injeksjon.
In vitro fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for å bestemme funksjonen til et gen i en celle eller til og med for modulering av funksjonen til et gen i en celle, som kan mediere RNA-interferens. Cellen er en eukaryot celle eller en cellelinje, f.eks. en plantecelle eller en dyrecelle, slik som en mammalsk celle, f.eks. en embryonal celle, en pluripotent stamcelle, en tumorcelle, f.eks. en teratokarsinomcelle, eller en virusinfisert celle.
Målgenet som RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse er rettet mot kan være assosiert med en patologisk tilstand. For eksempel kan genet være et patogenassosiert gen, f.eks. et viralt gen, et tumorassosiert gen eller et gen assosiert med autoimmun sykdom. Målgenet kan også være et heterologt gen uttrykt i en rekombinant celle eller en genetisk modifisert organisme. Ved å bestemme eller modulere, spesielt inhibere, funksjonen til et slikt gen, kan verdifull informasjon og terapeutiske fordeler i landbruket eller i medisin eller veterinærmedisin bli fremskaffet.
dsRNA'et administreres vanligvis som en farmasøytisk sammensetning. Administreringen kan bli utført med kjente fremgangsmåter, der en nukleinsyre innføres i en ønsket målcelle in vitro eller in vivo. Mye anvendte genoverføringsteknikker omfatter kalsiumfosfat, DEAE-dekstran, elektroporering og mikroinjeksjon og virale metoder (Graham, F. L. og van der Eb, A. J. (1973) Virol. 52, 456; McCutchan, J. H. og Pagano, J. S. (1968), J. Nati. Cancer Inst. 41, 351; Chu, G.et al. (1987), Nucl.Acids Res. 15, 1311; Fraley, R. et al. (1980), J. Biol. Chem. 255, 10431; Capecchi, M. R. (1980), Cell 22, 479). Et nytt tillegg til dette arsenalet av teknikker for innføring av DNA i celler er anvendelse av kationiske liposomer (Felgner, P. L. et al. (1987), Proe. Nati. Acad. Sei USA 84, 7413). Kommersielt tilgjengelige kationiske lipidformuleringer er f.eks. Tfx 50 (Promega) eller Lipofectamin2000 (Life Technologies).
Derfor angår oppfinnelsen også som nevnt ovenfor en farmasøytisk sammensetning inneholdende minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som beskrevet ovenfor som et aktivt stoff og en farmasøytisk bærer. Sammensetningen kan bli anvendt for diagnostiske og terapeutiske applikasjoner innen human medisin eller innen veterinærmedisin.
For diagnostiske eller terapeutiske applikasjoner kan sammensetningen være i form av en løsning, f.eks. en injiserbar løsning, en krem, salve, tablett, suspensjon eller lignende. Sammensetningen kan bli administrert på enhver egnet måte, f.eks. med injeksjon, med oral-, topisk-, nasal- og rektal applikasjon osv. Bæreren kan være enhver egnet farmasøytisk bærer. Fortrinnsvis anvendes en bærer som kan øke RNA-molekylenes evne til å gå inn i målcellene. Egnede eksempler på slike bærere er liposomer, spesielt kationiske liposomer. En videre foretrukket administreringsmåte er injeksjon.
En annen anvendelse av RNAi-fremgangsmåten som er beskrevet er en funksjonell analyse av eukaryote celler eller eukaryote ikke-humane organismer, fortrinnsvis mammalske celler eller organismer og mest foretrukket humane celler, f.eks. cellelinjer slik som HeLa eller 293, eller gnagere, f.eks. rotter og mus. Ved transfeksjon med egnede dobbelttrådede RNA-molekyler som er homologe med et forutbestemt målgen eller DNA-molekyler som koder for et egnet dobbelttrådet RNA-molekyl, kan en spesifikk knockout-fenotype bli oppnådd i en målcelle, f.eks.
i cellekultur eller i en målorganisme. Det er overraskende blitt funnet at nærvær av korte, dobbelttrådede RNA-molekyler ikke resulterer i en interferonrespons fra vertscellen eller vertsorganismen.
Derfor er det ytterligere beskrevet en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som har en målgenspesifikk knockout-fenotype omfattende en minst delvis defekt ekspresjon av minst ett endogent målgen, der nevnte celle eller organisme er transfektert med minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen eller med et DNA som koder for minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen. Det bør bli registrert at det tillates en målspesifikk knockout av flere ulike endogene gener pga. spesifisiteten til RNAi.
Genspesifikke knockout-fenotyper av celler eller ikke-humane organismer, spesielt av humane celler eller ikke-humane pattedyr, kan bli anvendt i analytiske prosedyrer, f.eks. i den funksjonelle og/eller fenotypiske analysen av komplekse fysiologiske prosesser, slik som analyse av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. For eksempel kan man fremstille knockout-fenotypene av humane gener i dyrkede celler som er antatt å være regulatorer av alternative spleiseprosesser. Blant disse genene er spesielt medlemmene av SR-spleisefaktorfamilien, f.eks. ASF/SF2, SC35, SRp20, SRp40 eller SRp55. Videre kan effekten av SR-proteiner på mRNA-profilene av forutbestemte alternativt spleisede gener slik som CD44 bli analysert. Fortrinnsvis utføres analysen med høykapasitetsfremgangsmåter ved å anvende oligonukleotidbaserte brikker.
Ved anvendelse av RNAi-baserte knockout-teknologier, kan ekspresjonen av et endogent målgen bli inhibert i en målcelle eller en målorganisme. Det endogene genet kan bli komplementert med en eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, f.eks. et gen eller et cDNA, som eventuelt kan bli koblet til ytterligere en nukleinsyresekvens som koder for et detekterbart peptid eller polypeptid, f.eks. en affinitetsmarkør, spesielt en multippel affinitetsmarkør. Varianter eller muterte former av målgenet er forskjellige fra det endogene målgenet ved at de koder for et genprodukt som er forskjellig fra det endogene genproduktet på aminosyrenivået med substitusjoner, insersjoner og/eller delesjoner av enkle eller multiple aminosyrer. Variantene eller de muterte formene kan ha den samme biologiske aktiviteten som det endogene målgenet. På den annen side kan varianten eller det muterte målgenet også ha en biologisk aktivitet som er forskjellig fra den biologiske aktiviteten til det endogene målgenet, f.eks. en delvis deletert aktivitet, en fullstendig deletert aktivitet, en økt aktivitet osv.
Komplementasjonen kan bli utført med koekspresjon av polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. et fusjonsprotein omfattende målproteinet og affinitetsmarkøren og det dobbelttrådede RNA-molekylet for delesjon av det endogene genet i målcellen. Denne koekspresjonen kan bli utført ved å anvende en egnet ekspresjonsvektor som uttrykker både polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. det markørmodifiserte målproteinet og det dobbelttrådede RNA-molekylet eller alternativt ved å anvende en kombinasjon av ekspresjonsvektorer. Proteiner og proteinkomplekser som syntetiseres de novo i målcellen vil inneholde det eksogene genproduktet, f.eks. det modifiserte fusjonsproteinet. For å unngå suppresjon av den eksogene genprodukt-ekspresjonen med RNAi-dupleksmolekylet, kan nukleotidsekvensen som koder for den eksogene nukleinsyren bli endret på DNA-nivået (med eller uten å forårsake mutasjoner på aminosyrenivået) i delen av sekvensen som er homolog med det dobbelttrådede RNA-molekylet. Alternativt kan det endogene målgenet bli komplementert med tilsvarende nukleotidsekvenser fra andre arter, f.eks. fra mus.
Foretrukne anvendelser for cellen eller organismen er analysen av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. Spesielt foretrukket utføres en analyse av en variant eller mutant form av ett eller flere målproteiner, der nevnte variant eller mutante former reinnføres i cellen eller organismen med en eksogen målnukleinsyre som beskrevet ovenfor. Kombinasjonen av delesjon av et endogent gen og opprettholdelse ("rescue") ved å anvende mutert mål, f.eks. delvis deletert eksogent mål, har fordeler sammenlignet med anvendelse av en knockout-celle. Videre er denne fremgangsmåten spesielt egnet for identifisering av funksjonelle domener til målproteinet. Ytterligere foretrukket utføres en sammenligning f.eks. av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer og/eller fenotypiske karakteristika til minst to celler eller organismer. Disse organismene velges fra:
(i) en kontrollcelle eller kontrollorganisme uten målgeninhibisjon,
(ii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon og
(iii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon pluss
målgenkomplementasjon med en eksogen målnukleinsyre.
Fremgangsmåten og cellen er også egnet i en prosedyre for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser, f.eks. identifisering av nye farmakologiske agenser fra en samling av testsubstanser og/eller karakterisering av virkningsmekanismer og/eller bivirkninger av kjente farmakologiske agenser.
Et system for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser som virker på minst ett målprotein er beskrevet som omfatter: (a) en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som kan uttrykke
minst ett endogent målgen som koder for nevnte målprotein,
(b) minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av
nevnte minst ene endogene målgen, og
(c) en testsubstans eller en samling av testsubstanser der farmakologiske egenskaper til nevnte testsubstans eller nevnte samling skal bli identifisert og/ellerkarakterisert.
Videre omfatter systemet beskrevet ovenfor fortrinnsvis:
(a) minst én eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, der nevnte eksogene målnukleinsyre er forskjellig fra det endogene målgenet på nukleinsyrenivået, slik at ekspresjon av den eksogene målnukleinsyren blir vesentlig mindre inhibert av det dobbelttrådede RNA-molekylet enn ekspresjon av det endogene målgenet.
Videre kan fremgangsmåten for RNA-knockoutkomplementasjon bli anvendt for å lette opprensing, f.eks. for affinitetsrensing av proteiner eller proteinkomplekser fra eukaryote celler, spesielt mammalske celler og mer spesielt humane celler. I denne utførelsesformen ifølge foreliggende oppfinnelse koder den eksogene målnukleinsyren fortrinnsvis for et målprotein som er koblet til en affinitetsmarkør.
Fremgangsmåten for å lette opprensingen kan bli anvendt for rensing av
høymolekylære proteinkomplekser som fortrinnsvis har en masse på > 150 kD og mer foretrukket på > 500 kD og som eventuelt kan inneholde nukleinsyrer slik som RNA. Spesifikke eksempler er det heterotrimere proteinkomplekset bestående av 20 kD, 60 kD og 90 kD proteinene til U4/U6 snRNP-partikkelen, spleisefaktoren SF3b fra 17S U2 snRNP bestående av fem proteiner med molekylvekt på 14, 49, 120, 145 og 155 kD og 25S U4/U6/U5 tri-snRNP-partikkelen inneholdende U4, U5 og U6 snRNA-molekylene og ca. 30 proteiner med en molekylvekt på ca. 1,7 MD.
Denne fremgangsmåten er egnet for funksjonell proteomanalyse i mammalske celler, spesielt humane celler.
Videre er foreliggende oppfinnelse forklart i mer detalj i de følgende figurene og eksemplene.
Figurtekst
Figur 1: Dobbelttrådet RNA så kort som 38 bp kan mediere RNAi. (A) Grafisk presentasjon av dsRNAer anvendt for å binde Pp-luc mRNA. Tre serier med rettendede dsRNAer som dekker et område på 29 til 504 bp ble fremstilt.
Posisjonen til det første nukleotidet på sensetråden til dsRNA'et er vist i forhold til startkodonet i Pp-luc mRNA (p1). (B) RNA-interferenstest (Tuschl et al., 1999). Forhold mellom mål Pp-luc og kontroll Rr-luc aktivitet ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (sort stolpe). dsRNA'er (5 nM) ble preinkubert i Drosophila-\ y$ at i 15 min ved 25 °C før tilsetning av 7-metyl-guanosin-cap (cap er en beskyttende gruppe på 5' merket ende) Pp-luc og Rr-luc mRNAer (~50 pM). Inkuberingen fortsatte i ytterligere en time og deretter analysert med dual luciferasetest (Promega). Resultatene er gjennomsnittet fra minst fire uavhengige eksperimenter + standardavvik. Figur 2: Et 29 bp dsRNA blir ikke lenger prosessert til 21-23 nt fragmenter. Tidsforløp for 21-23 mer dannelse fra prosessering av internt<32>P-merkede dsRNA'er (5 nM) i Drosophila-\ ysatet. Lengden og kilden til dsRNA'et er angitt. En RNA-størrelsesmarkør (M) har blitt tilsatt i det venstre sporet og fragmentstørrelsene er antydet. Doble bånd på tid null skyldes ufullstendig denaturert dsRNA. Figur 3: Korte dsRNAer kutter mRNA-målmolekylet bare én gang. (A) Denaturerende gelelektroforeser av de stabile 5' kutteproduktene dannet med 1 times inkubering av 10 nM sense- eller antisense-RNA<32>P-merket cap med 10 nM dsRNA'er av p133 serien i Drosophila-\ ysat. Lengdemarkører ble generert ved delvis nuklease T1 -kutting og delvis alkalisk hydrolyse (OH) av det cap-merkede mål-RNA'et. Regionene bundet av dsRNAene er indikert som sorte streker på begge sider. Sekvensen på 20-23 nt mellom de dominerende kuttesetene for det 111 bp lange dsRNA'et er vist. Den horisontale pilen indikerer uspesifikk kutting som ikke skyldes RNAi. (B) Posisjon av kuttesetene på sense og antisense mål-RNAer. Sekvensene til 177 nt sense og 180 nt antisense mål-RNA'ene som har cap er vist i antiparallell retning, slik at komplementære sekvenser står ovenfor hverandre. Regionen bundet av de ulike dsRNA'ene er antydet med forskjellige fargede streker plassert mellom sense- og antisensemålsekvenser. Kutteseter er indikert med sirkler: stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting. Den<32>P-radioaktivt merkede fosfatgruppen er merket med en stjerne. Figur 4: 21 og 22 nt RNA-fragmenter genereres med en RNase lll-lignende mekanisme. (A) Sekvenser på~21 nt RNA'er etter dsRNA-prosessering.~21 nt RNA-fragmenter generert ved dsRNA-prosessering ble klonet i en bestemt retning og sekvensert. Oligoribonukleotider som kom fra sensetråden til dsRNAet er vist som blå linjer, de som kom fra antisensetråden som røde linjer. Tykke streker anvendes hvis den samme sekvensen var til stede i multiple kloner, der antallet til høyre indikerer frekvensen. Mål-RNA kuttesetene mediert av dsRNAet er vist som oransje sirkler, stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting (se Figur 3B). Sirkler på toppen av sensetråden antyder kutteseter i sensemålet, og sirkler på bunnen av dsRNAet indikerer kuttesete i antisensemålet. Opp til fem ekstra nukleotider ble identifisert i~21 nt fragmenter avledet fra 3' endene til dsRNAet. Disse nukleotidene er tilfeldige kombinasjoner av hovedsakelig C-, G- eller A-rester og ble mest sannsynlig tilsatt på en tilfeldig måte (uten templat) i løpet av T7-transkripsjon av trådene som utgjør dsRNA. (B) Todimensjonal TLC-analyse av nukleotidsammensetningen til~21 nt RNAer.~21 nt RNA'ene ble generert ved inkubering av internt radioaktivt merket 504 bp Pp-luc dsRNA i Drosophila-\ ysat, gelrenset og deretter kuttet til mononukleotider med nuklease P1 (øverste rad) eller ribonuklease T2 (nederste rad). dsRNA'et ble radioaktivt merket internt ved transkripsjon i nærvær av én av de indikerte a-<32>P nukleosidtrifosfatene. Radioaktivitet ble detektert med fosforbildeanalyse. Nukleosid 5'-monofosfater, nukleosid 3'-monofosfater, nukleosid 5',3'-difosfater og uorganisk fosfat er indikert som henholdsvis pN, Np, pNp og pi. Sorte sirkler indikerer UV-absorberende flekker fra ikke-radioaktive bærernukleotider. 3',5'-bisfosfatene (røde sirkler) ble identifisert med migrasjon sammen med radioaktivt merkede standarder fremstilt med 5'-fosforylering av nukleosid 3-monofosfater med T4-polynukleotidkinase og y-<32>P-ATP. Figur 5: Syntetiske 21 og 22 nt RNAer medierer mål-RNA kutting. (A) Grafisk presentasjon av kontroll 52 bp dsRNA og syntetiske 21 og 22 nt dsRNA'er. Sensetråden til 21 og 22 nt korte, interfererende RNAer (siRNAer) er vist i blått, antisensetråden i rødt. Sekvensene til siRNAene ble avledet fra de klonede fragmentene til 52 og 111 bp dsRNAer (Figur 4A), bortsett fra 22 nt antisensetråden til dupleks 5. siRNAene i dupleks 6 og 7 var unike for den 111 bp dsRNA-prosesseringsreaksjonen. De to 3' overhengende nukleotidene indikert i grønt foreligger i sekvensen til den syntetiske antisensetråden til dupleks 1 og 3. Begge trådene til kontroll 52 bp dsRNA'et ble fremstilt med in wfro-transkripsjon, og en fraksjon av transkripter kan inneholde vilkårlig 3' nukleotidtilsetning. Mål-RNA kuttesetene styrt av siRNA-dupleksene er indikert som oransje sirkler (se tekst til Figur 4A) og ble bestemt som vist i Figur 5B. (B) Posisjon til kuttesetene på sense og antisense mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. Kontroll 52 bp dsRNA (10 nM) eller 21 og 22 nt RNA-dupleksene 1-7 (100 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,51 ved 25 °C i Drosophila-\ ysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Kuttesetene er indikert i Figur 5A. Regionen bundet av 52 bp dsRNA'et eller sense (s) eller antisense (as) trådene er indikert med de sorte strekene ved siden av gelen. Kuttesetene er alle lokalisert i regionen som er identisk med dsRNAene. For nøyaktig bestemmelse av kuttesetene for antisensetråden ble en gel med lavere prosent anvendt. Figur 6: Lange 3' overheng på korte dsRNA'er inhiberer RNAi. (A) Grafisk presentasjon av 52 bp dsRNA-konstruksjoner. 3' forlengelsene av sense- og antisensetråd er indikert i henholdsvis blått og rødt. De observerte kuttesetene på mål-RNA'ene er vist som oransje sirkler analogt til Figur 4A og ble bestemt som vist i Figur 6B. (B) Posisjon av kuttesetene på sense og antisense mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. dsRNA (10 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,5 t ved 25 °C i Drosophila-\ ysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Hovedkuttesetene er indikert med en horisontal pil og er også vist i Figur 6A. Regionen bundet av 52 bp dsRNAet er vist som sort strek på begge sider av gelen. Figur 7: Foreslått modell for RNAi. RNAi er antatt å begynne med prosessering av dsRNA (sensetråd i sort, antisensetråd i rødt) til hovedsakelig 21 og 22 nt korte, interfererende RNAer (siRNA'er). Korte overhengende 3' nukleotider, hvis de foreligger på dsRNA'et, kan være fordelaktige for prosessering av korte dsRNA'er. De dsRNA-prosesserende proteinene, som trenger å blikarakterisert, er vist som grønne og blå ovaler og sammenstilt på dsRNA'et på asymmetrisk måte. I vår modell er dette vist ved binding av et hypotetisk blått protein eller proteindomene med siRNA-tråden i 3' til 5' retning, mens det hypotetisk grønne proteinet eller proteindomenet alltid er bundet til den motstående siRNA-tråden. Disse proteinene eller en undergruppe forblir assosiert med siRNA-dupleksen og bevarer dens retning som er bestemt ved retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Kun siRNA-sekvensen assosiert med det blå proteinet kan guide kutting av mål-RNA. Endonukleasekomplekset henvises til som lite, interfererende ribonukleoproteinkompleks eller siRNP. Det er antatt heri at endonukleasen som kutter dsRNAet også kan kutte mål-RNA'et, trolig ved midlertidig fjerning av den passive siRNA-tråden som ikke er anvendt for målgjenkjennelse. Mål-RNA'et kuttes deretter i senteret av regionen gjenkjent av det sekvenskomplementære guide-siRNAet. Figur 8: Rapportørkonstruksjoner og siRNA-duplekser. (a) Ildflue (Pp-luc) og Renilla reniformis (Rr-luc) luciferaserapportørgenregionene fra plasmidene pGL2-kontroll, pGL-3-kontroll og pRL-TK (Promega) er vist. SV40-regulatorelementer, HSV-tymidinkinasepromoteren og to introner (linjer) er indikert. Sekvensen til GL3-luciferase er 95 % identisk med GL2, men RL er fullstendig ubeslektet med begge. Luciferaseekspresjon fra pGL2 er omtrent 10 ganger lavere enn fra pGL3 i transfekterte mammalske celler. Regionen bundet av siRNA-dupleksene er indikert som sort strek under den kodende regionen til luciferasegenene. (b) Sense (øvre) og antisense (nedre) sekvenser til siRNA-dupleksene som binder GL2-, GL3- og RL-luciferase er vist. GL2 og GL3 siRNA-dupleksene er bare forskjellige i 3 enkle nukleotidsubstitusjoner (grå boks). Som uspesifikk kontroll ble en dupleks med den inverterte GL2-sekvensen, invGL2, syntetisert. 2 nt 3' overhenget til 2'-deoksytymidin er indikert som TT; uGL2 ligner på GL2 siRNA, men inneholder ribouridin 3' overheng. Figur 9: RNA-interferens med siRNA-duplekser. Forhold av målkontrolluciferase ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); grå stolper indikerer forhold av Photinus pyralis (Pp-luc) GL2- eller GL3-luciferase til Renilla reniformis (Rr-luc) RL-luciferase (venstre akse), hvite stolper indikerer RL til GL2 eller GL3 forhold (høyre akse). Panel a, c, e, g og i beskriver eksperimenter utført med kombinasjonen av pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d, f, h og j med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Cellelinjen anvendt for interferensforsøket er indikert på toppen av hvert stolpediagram. Forholdene av
Pp-luc/Rr-luc for bufferkontrollen (bu) varierte mellom henholdsvis 0,5 og 10 for pGL2/pRL og mellom 0,03 og 1 for pGL3/pRL før normalisering og mellom de ulike cellelinjene som ble testet. De plottede resultatene er gjennomsnitt fra tre uavhengige eksperimenter ± SD. Figur 10: Effekter av 21 nt siRNA, 50 bp og 500 bp dsRNAer på luciferaseekspresjon i HeLa-celler. Den nøyaktige lengden av de lange dsRNA'ene er indikert under stolpene. Panel a, c og e beskriver eksperimenter utført med pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d og f med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Resultatene er gjennomsnitt fra to uavhengige eksperimenter ± SD. (a), (b) Absolutt Pp-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (c), (d) Rr-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (e), (f) Forhold av normaliserte mål i forhold til kontrolluciferase. Forhold av luciferaseaktivitet for siRNA-duplekser ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); luminescensforholdene for 50 eller 500 bp dsRNAer ble normalisert i forhold til de respektive forholdene observert for 50 og 500 bp dsRNA fra humanisert GFP (hG, sorte stolper). Det bør bli registrert at de totale forskjellene i sekvenser mellom de 49 og 484 bp dsRNAene som binder GL2 og GL3 ikke er tilstrekkelig for å gi spesifisitet mellom GL2- og GL3-mål (43 nt sammenhengende likhet i 49 bp segment, 239 nt lengste sammenhengende likhet i 484 bp segment). Figur 11: Variasjon av 3' overhenget til duplekser av 21-nt siRNA'er. (A) Oversikt over den eksperimentelle strategien. Sense mål-mRNA'et som er polyadenylert og har cap er vist, og de relative posisjonene til sense- og antisense-siRNAer er vist. Åtte serier av duplekser, i henhold til de åtte ulike antisensetrådene, ble fremstilt. siRNA-sekvensene og antallet overhengende nukleotider ble forandret i 1-nt trinn.
(B) Normalisert relativ luminescens av målluciferase { Photinus pyralis, Pp-luc) i forhold til kontrolluciferase { Renilla reniformis, Rr-luc) i D. melanogaster-embryolysat i nærvær av 5 nM rettendede dsRNAer. Luminescensforholdene bestemt i nærvær av dsRNA ble normalisert til forholdet fremskaffet for en bufferkontroll (bu, sort stolpe). Normaliserte forhold mindre enn 1 indikerer spesifikk interferens. (C-J) Normaliserte interferensforhold for åtte serier av 21-nt siRNA-duplekser. Sekvensene til siRNA-duplekser er vist over
stolpediagrammene. Hvert panel viser interferensforholdet for et sett av duplekser dannet med et gitt antisenseguide-siRNA og 5 ulike sense-siRNA'er. Antall overhengende nukleotider (3' overheng, positive tall; 5' overheng, negative tall) er indikert på x-aksen. Datapunkter er gjennomsnitt fra minst 3 uavhengige eksperimenter, feilstørrelser representerer standardavvik. Figur 12: Variasjon av lengden til sensetråden av siRNA-duplekser. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. Tre 21-nt antisensetråder ble paret med åtte sense-siRNA'er. siRNA'ene ble forandret i lengde på deres 3' ende. 3' overhenget til antisense-siRNA'et var 1-nt (B), 2-nt (C) eller 3-nt (D), mens sense siRNA-overhenget varierte for hver serie. Sekvensene til siRNA-dupleksene og de tilsvarende interferensforholdene er indikert. Figur 13: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. 21-nt siRNA-dupleksen er identisk i sekvens til den som er vist i Figur 11H eller 12C. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sense siRNAet (B) eller 5' siden av sense siRNAet (C). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er antydet. Figur 14: Substitusjon av 2'-hydroksylgruppene til siRNA-riboserestene. 2'-hydroksylgruppene (OH) i trådene til siRNA-duplekser ble byttet ut med 2'-deoksy (d) eller 2'-0-metyl (Me). 2-nt og 4-nt 2'-deoksysubstitusjoner på 3' endene er indikert som henholdsvis 2-nt d og 4-nt d. Uridinrester ble byttet ut med 2'-deoksy tymidin. Figur 15: Kartlegging av sense og antisense mål-RNA kutting med 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av 32P (stjerne) cap-merkede sense og antisense mål-RNA'er og siRNA-duplekser. Posisjonen til sense og antisense mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (B) Kartlegging av mål-RNA kutteseter. Etter 2 t inkubering av 10 nM mål med 100 nM siRNA-dupleks i D. melanogaster-embryolysat ble det 5' cap-merkede substratet og 5' kutteproduktene bestemt på sekvenseringsgeler. Lengdemarkører ble generert ved delvis RNase T1-kutting (T1) og delvis alkalisk hydrolyse (OH-) av mål-RNA'ene. De tykke strekene til
venstre for bildene indikerer regionen dekket av siRNA-trådene 1 og 5 med den samme retningen som målet.
Figur 16: 5' enden av et guide-siRNA definerer posisjonen for mål-RNA kutting.
(A, B) Grafisk presentasjon av den eksperimentelle strategien. Antisense-siRNA'et varden samme i alle siRNA-duplekser, men sensetråden varierte mellom 18 til 25 nt ved å forandre 3' enden (A) eller 18 til 23 nt ved å forandre 5' enden (B). Posisjonen til sense og antisense mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (C, D) Analyse av mål-RNA kutting ved å anvende cap-merkede sense (øverste panel) eller antisense (nederste panel) mål-RNA'er. Kun de cap-merkede 5' kutteproduktene er vist. Sekvensene til siRNA-dupleksene er indikert, og lengden til sense siRNA-trådene er angitt på toppen av panelet. Kontrollsporet merket med en tankestrek i panel (C) viser mål-RNA inkubert i fravær av siRNAer. Markører var som beskrevet i Figur 15. Pilene i
(D), nederste panel, indikerer mål-RNA kuttesetene som er forskjellige med 1 nt. Figur 17: Sekvensvariasjon av 3' overhenget til siRNA-duplekser. 2-nt 3' overhenget (NN, i grått) ble forandret i sekvens og sammensetning som indikert (T, 2'-deoksytymidin, dG, 2-deoksyguanosin; stjerne, villtype siRNA-dupleks). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Villtypesekvensen er den samme som vist i Figur 14. Figur 18: Sekvensspesifisitet av målgjenkjennelse. Sekvensene til de feilmatchede siRNA-dupleksene er vist, modifiserte sekvenssegmenter eller enkle nukleotider er farget i grått. Referansedupleksen (ref) og siRNA-dupleksene 1 til 7 inneholder 2-deoksytymidin 2-nt overheng. Inaktiveringseffektiviteten til den tymidinmodifiserte referansedupleksen var sammenlignbar med villtypesekvensen (Figur 17). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Figur 19: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sense siRNA'et (A) eller 5' siden av sense siRNA'et (B). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er indikert. For HeLa SS6-celler ble siRNA-duplekser (0,84^g) som binder GL2-luciferase kotransfektert med pGL2-kontroll og pRL-TK
plasmider. For sammenligning er in vitro RNAi-aktivitetene til siRNA-duplekser testet i D. melanogasterAysaX vist.
Eksempel 1
RNA-interferens mediert med små, syntetiske RNA'er
1.1 Eksperimentelle fremgangsmåter
1.1.1 In wfro-RNAi
In wfro-RNAi og lysatfremstillinger ble utført som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Det er avgjørende å anvende ferskt, oppløst kreatinkinase (Roche) for optimal ATP-nydannelse. RNAi-translasjonstestene (Figur 1) ble utført med dsRNA-konsentrasjoner på 5 nM og en forlenget preinkuberingsperiode på 15 min ved 25 °C før tilsetning av in v/fro-transkriberte, 5' cap-merkede og polyadenylerte Pp-luc og Rr-luc rapportør mRNA'er. Inkuberingen fortsatte i 1 time, og den relative mengden av Pp-luc og Rr-luc protein ble analysert ved å anvende dual luciferasetest (Promega) og et Monolight 3010C luminometer (PharMingen).
1.1.2 RNA-syntese
Standard fremgangsmåter ble anvendt for in wfro-transkripsjon av RNA fra PCR-templater som bærer T7- eller SP6-promotersekvenser, se for eksempel (Tuschl et al., 1998). Syntetisk RNA ble fremstilt ved å anvende Expedite RNA-fosforamiditter (Proligo). 3' adapteroligonukleotidet ble syntetisert ved å anvende dimetoksytrityl-1,4-benzendimetanol-suksinyl-aminopropyl-CPG. Oligoribonukleotidene fikk fjernet beskyttelsen i 3 ml av 32 % ammoniakk/etanol (3/1) i 4 timer ved 55 °C (Expedite RNA) eller 16 timer ved 55 °C (3' og 5' adapter DNA/RNA kimæriske oligonukleotider) og deretter desilylert og gelrenset som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1993). RNA-transkripter for dsRNA-fremstilling omfattende lange 3' overheng ble generert fra PCR-templater som inneholdt en T7-promoter i sense- og en SP6-promoter i antisenseretning. Transkripsjonstemplatet for sense og antisense mål-RNA ble PCR-amplifisert med GCG TAATACGACTCACTATAGAACAATTGCTTTTACAG (understreket, T7-promoter) som 5' primer og ATTTAGGTGACACTATAGGCATAAAGAATTGAAGA
(understreket, SP6-promoter) som 3' primer og det lineariserte Pp-luc plasmidet (pGEM-luc sekvens) (Tuschl et al., 1999) som templat; det T7-transkriberte sense-RNA'et var 177 nt langt med Pp-luc sekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet og etterfulgt av 17 nt av komplementet til SP6-promotersekvensen på 3' enden. Transkripter for buttendet dsRNA-dannelse ble fremstilt med transkripsjon fra to ulike PCR-produkter som bare inneholdt en enkel promotersekvens.
dsRNA-hybridisering ble utført ved å anvende en fenol/kloroform ekstraksjon. Ekvimolar konsentrasjon av sense- og antisense-RNA (50 nM til 10^M, avhengig av lengden og tilgjengelig mengde) i 0,3 M NaOAc (pH 6) ble inkubert i 30 s ved 90 °C og deretter ekstrahert ved romtemperatur med et like stort volum av fenol/kloroform, etterfulgt av en kloroformekstraksjon for å fjerne residual fenol. Det resulterende dsRNA'et ble presipitert ved tilsetning av 2,5-3 volumer av etanol. Pelleten ble løst i lyseringsbuffer (100 mM KCI, 30 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 2 mM Mg (OAc)2) og kvaliteten av dsRNAet ble verifisert med standard agarosegelelektroforeser i 1 x TAE-buffer. 52 bp dsRNA'ene med 17 nt og 20 nt 3' overhengene (Figur 6) ble hybridisert ved inkubering i 1 min ved 95 °C, deretter raskt avkjølt til 70 °C og etterfulgt av sakte avkjøling til romtemperatur over en 3 t periode (50^l hybridiseringsreaksjon, 1^M trådkonsentrasjon, 300 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI, pH 7,5). dsRNA'ene ble deretter fenol/kloroform ekstrahert, etanolpresipitert og løst i lyseringsbuffer.
Transkripsjon av internt<32>P-radioaktivt merket RNA anvendt for dsRNA-fremstilling (Figur 2 og 4) ble utført ved å anvende 1 mM ATP, CTP, GTP, 0,1 eller 0,2 mM UTP og 0,2-0,3^M -<3>2P-UTP (3000 Ci/mmol) eller det respektive forholdet for andre radioaktivt merkede nukleosidtrifosfater enn UTP. Merking av cap til mål-RNAene ble utført som tidligere beskrevet. Mål-RNA'ene ble gelrenset etter cap-merking.
1.1.3 Kuttesetekartlegging
Standard RNAi-reaksjoner ble utført med preinkubering av 10 nM dsRNA i 15 min etterfulgt av tilsetning av 10 nM cap-merket mål-RNA. Reaksjonen ble stoppet etter ytterligere 21 (Figur 2A) eller 2,5 t inkubering (Figur 5B og 6B) med proteinase K-behandling (Tuschl et al., 1999). Prøvene ble deretter analysert på 8 eller 10 % sekvenseringsgeler. De 21 og 22 nt syntetiske RNA-dupleksene ble anvendt ved 100 nM endelig konsentrasjon (Figur 5B).
1.1.4 Kloning av -21 nt RNA'er
21 nt RNAene ble dannet med inkubering av radioaktivt merket dsRNA i Drosophila-\ ysat i fravær av mål-RNA (200^l reaksjon, 1 t inkubering, 50 nM dsP111, eller 100 nM dsP52 eller dsP39). Reaksjonsblandingen ble deretter behandlet med proteinase K (Tuschl et al., 1999) og dsRNA-prosesseringsproduktene ble separert på en denaturerende 15 % polyakrylamidgel. Et bånd, inkludert et størrelsesområde på minst 18 til 24 nt, ble skjært ut, eluert inn i 0,3 M NaCI natten over ved 4 °C og i silikonrør. RNAet ble isolert med etanolutfelling og defosforylert (30^l reaksjon, 30 min, 50 °C, 10 U alkalisk fosfatase, Roche). Reaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA'et ble etanolpresipitert. 3' adapteroligonukleotidet (pUUUaaccgcatccttctcx: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA; p, fosfat; x, 4-hydroksymetylbenzyl) ble deretter ligert til det defosforylerte~21 nt RNAet (20^l reaksjon, 30 min, 37 °C, 5^M 3' adapter, 50 mM Tris-HCI, pH 7,6,10 mM MgCI2, 0,2 mM ATP, 0,1 mg/ml acetylert BSA, 15 % DMSO, 25 U T4 RNA-ligase, Amersham-Pharmacia) (Pan og Uhlenbeck, 1992). Ligeringsreaksjonen ble stoppet ved tilsetning av et like stort volum av 8 M urea/50 mM EDTA-stoppblanding og direkte satt på en 15 % gel. Ligeringsutbytter var større enn 50 %. Ligeringsproduktet ble isolert fra gelen og 5'-fosforylert (20^l reaksjon, 30 min, 37 °C, 2 mM ATP, 5 U T4-polynukleotidkinase, NEB). Fosforyleringsreaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA ble isolert med etanolutfelling. Deretter ble 5' adapteren (tactaatacgactcactAAA: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA) ligert til det fosforylerte ligeringsproduktet som beskrevet ovenfor. Det nye ligeringsproduktet ble gelrenset og eluert fra gelbiten i nærvær av revers transkripsjonsprimer (GACTAGCTGGAATTCAAGGATGCGGTTAAA: fet skrift, EcoRI-sete) anvendt som bærer. Revers transkripsjon (15^l reaksjon, 30 min, 42 °C, 150 U Superscript II revers transkriptase, Life Technologies) ble etterfulgt av PCR ved å anvende CAGCCAACGGAATTCATACGACTCACTAAA (fet skrift, EcoRI-sete) som 5' primer og 3' RT-primeren. PCR-produktet ble renset med fenol/kloroform ekstraksjon og etanolpresipitert. PCR-produktet ble deretter kuttet med EcoRI (NEB) og konkatamerisert ved å anvende T4 DNA-ligase (høy konsentrasjon, NEB). Konkatamerer av en størrelse på 200 til 800 bp ble separert på en agarosegel med lavt smeltepunkt, isolert fra gelen med en standard smeltings- og fenolekstraksjonsfremgangsmåte og etanolpresipitert. De uparede
endene ble fylt i ved inkubering med Taq-polymerase under standard betingelser i 15 min ved 72 °C, og DNA-produktet ble ligert direkte inn i pCR2.1-TOPO vektoren ved anvendelse av TOPO TA-kloningstestsettet (Invitrogen). Kolonier ble screenet ved anvendelse av PCR og M13-20 og M13 reverse sekvenseringsprimere. PCR-produkter ble sendt direkte til sekvensering (Sequence Laboratories Gottingen GmbH, Tyskland). Gjennomsnittlig ble fire til fem 21 mer sekvenser fremskaffet pr. klon.
1.1.5 2D-TLC analyse
Nuklease P1-kutting av radioaktivt merkede, gelrensede siRNAerog 2D-TLC ble utført som beskrevet (Zamore et al., 2000). Nuklease T2-kutting ble utført i 10^l reaksjoner i 3 t ved 50 °C i 10 mM ammoniumacetat (pH 4,5) ved anvendelse av 2^g/^l bærer tRNA og 30 U ribonuklease T2 (Life Technologies). Migrasjonen av ikke-radioaktive standarder ble bestemt med UV-lys. Identiteten av nukleosid-3',5'-disfosfater ble bekreftet med migrasjon av T2-kutteproduktene sammen med standarder fremstilt med 5'-<32>P-fosforylering av kommersielle nukleosid 3'-monofosfater ved anvendelse av y-32P-ATP og T4-polynukleotidkinase (resultater er ikke vist).
1.2 Resultater og diskusjon
1.2.1 Lengdekrav for prosessering av dsRNA til 21 og 22 nt RNA-fragmenter Lysat fremstilt fra D. melanogaster syncytiale embryoer rekapitulerer RNAi in vitro og tilveiebringer et nytt verktøy for biokjemisk analyse av mekanismen for RNAi (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). In vitro- og in wVo-analyse av lengdekravene til dsRNA for RNAi har vist at korte dsRNA'er (< 150 bp) er mindre effektive enn lengre dsRNAer i degradering av mål-mRNA (Caplen et al., 2000;
Hammond et al., 2000; Ngo et al., 1998; Tuschl et al., 1999). Årsakene for reduksjon i mRNA-degraderende effektivitet er ikke kjent. Vi undersøkte derfor det nøyaktige lengdekravet til dsRNA for mål-RNA nedbrytning under optimaliserte betingelser i DrosopMa-lysatet (Zamore et al., 2000). Flere serier av dsRNA'er ble syntetisert og rettet mot ildflueluciferase (Pp-luc) rapportør RNA. Den spesifikke suppresjonen av mål-RNA ekspresjon ble monitorert med dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999) (Figur 1A og 1B). Vi detekterte spesifikk inhibisjon av mål-RNA ekspresjon for dsRNAer så korte som 38 bp, men dsRNAer på 29 til 36 bp var ikke effektive i denne prosessen. Effekten var uavhengig av målposisjonen og graden av inhibisjon av Pp-luc mRNA-ekspresjon korrelert med lengden til dsRNA'et, dvs. lange dsRNA'er var mer effektive enn korte dsRNA'er.
Det har blitt antydet at 21-23 nt RNA fragmentene generert ved prosessering av dsRNA'er er mediatorene av RNA-interferens og kosuppresjon (Hamilton og Baulcombe, 1999; Hammond et al., 2000; Zamore et al., 2000). Vi analyserte derfor hastigheten til 21-23 nt fragmentdannelse for en undergruppe av dsRNA'er som varierte i størrelse mellom 501 til 29 bp. Dannelse av 21-23 nt fragmenter i Drosophila-\ ysat (Figur 2) var enkel å detektere for 39 til 501 bp lange dsRNAer, men ble signifikant forsinket for 29 bp dsRNAet. Denne observasjonen sammenfaller med en rolle for 21-23 nt fragmenter i guiding av mRNA-kutting og gir en forklaring for mangelen på RNAi med 30 bp dsRNA'er. Lengdeavhengigheten for 21-23 mer dannelse reflekterer trolig en biologisk relevant kontrollmekanisme for å hindre den uønskede aktiveringen av RNAi med korte, intramolekylære, baseparede strukturer av ordinære cellulære RNAer.
1.2.2 39 bp dsRNA medierer mål-RNA kutting på et enkelt sete Tilsetning av dsRNA og 5' cap-merket mål-RNA til Drosophila-\ ysatet resulterer i sekvensspesifikk nedbrytning av mål-RNAet (Tuschl et al., 1999). Mål-mRNAet kuttes bare i regionen som har likhet med dsRNAet, og mange av målkuttesetene var separert med 21 -23 nt (Zamore et al., 2000). Derfor var antallet kutteseter for et gitt dsRNA forventet omtrentlig å tilsvare lengden av dsRNA'et dividert med 21. Vi kartla målkuttesetene på et sense- og et antisense mål-RNA som var 5' cap radioaktivt merket (Zamore et al., 2000) (Figur 3A og 3B). Stabile 5' kutteprodukter ble separert på en sekvenseringsgel, og kutteposisjonen ble bestemt ved
sammenligning med en delvis RNase T1 og en alkalisk hydrolysestige fra mål-RNA'et.
I overensstemmelse med den tidligere observasjonen (Zamore et al., 2000) ble alle mål-RNA kutteseter lokalisert i regionen som har likhet med dsRNA'et. Sense-eller antisensemålet ble bare kuttet én gang med 39 bp dsRNA. Hvert kuttesete ble lokalisert 10 nt fra 5' enden av regionen bundet av dsRNA'et (Figur 3B). 52 bp dsRNA'et, som har samme 5' ende som 39 bp dsRNAet, danner det samme kuttesetet på sensemålet, lokalisert 10 ntfra 5' enden til regionen som har likhet med dsRNA'et, i tillegg til to svakere kutteseter 23 og 24 nt nedstrøms for det første setet. Antisensemålet ble bare kuttet én gang, igjen 10 nt fra 5' enden til regionen bundet av dens respektive dsRNA. Kartlegging av kuttesetene for 38 til 49 bp dsRNAene vist i Figur 1 viste at det første og dominerende kuttesetet alltid var lokalisert 7 til 10 nt nedstrøms for regionen bundet av dsRNAet (resultater er ikke vist). Dette antyder at punktet for mål-RNA kutting bestemmes av enden til dsRNA'et og kan antyde at prosessering til 21-23 mer starter fra endene til dupleksen.
Kutteseter på sense- og antisensemål for det lengre 111 bp dsRNAet var mye mer frekvent enn forventet, og de fleste av dem forekommer i clustere separert med 20 til 23 nt (Figur 3A og 3B). Som for de kortere dsRNAene er det første kuttesetet på sensemålet 10 nt fra 5' enden til regionen dekket av dsRNAet; og det første kuttesetet på antisensemålet er lokalisert 9 nt fra 5' enden til region bundet av dsRNAet. Det er ukjent hva som forårsaker denne uregelmessige kuttingen, men én mulighet kan være at lengre dsRNAer ikke bare kan bli prosessert fra endene, men også internt, eller det fins noen spesifisitetsdeterminanter for dsRNA-prosessering som vi enda ikke kjenner til. Noen uregelmessigheter for mellomrommet på 21-23 nt har også blitt beskrevet tidligere (Zamore et al., 2000). For å bedre forstå det molekylære grunnlaget for dsRNA-prosessering og mål-RNA gjenkjennelse, bestemte vi oss for å analysere sekvensene til 21-23 nt fragmentene generert ved prosessering av 39, 52 og 111 bp dsRNAer i Drosophila-\ ysatet.
1.2.3 dsRNA prosesseres til 21 og 22 nt RNA'er med en RNase lll-lignende mekanisme
For å karakterisere 21-23 nt RNA-fragmentene undersøkte vi 5' og 3' terminalene til RNA-fragmentene. Periodatoksidasjon avgelrensede 21-23 nt RNA'er etterfulgt av p-eliminering antydet nærvær av en terminal 2' og 3' hydroksylgruppe. 21-23 mer var også mottakelige for alkalisk fosfatasebehandling, som indikerer nærvær av en 5' terminal fosfatgruppe. Nærværet av 5' fosfat- og 3' hydroksylterminaler antyder at dsRNAet kan bli prosessert av en lignende enzymatisk aktivitet som E. coli RNase III (for oversiktsartikler se (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982)).
Retningsbestemt kloning av 21-23 nt RNA-fragmenter ble utført ved ligering av et 3' og 5' adapteroligonukleotid til renset 21-23 mer ved anvendelse av T4 RNA-ligase. Ligeringsproduktene ble revers transkribert, PCR-amplifisert, konkatamerisert, klonet og sekvensert. Over 220 korte RNAer ble sekvensert fra dsRNA-prosesseringsreaksjoner av 39, 52 og 111 bp dsRNA'ene (Figur 4A). Vi fant den følgende lengdefordelingen: 1 % 18 nt, 5 % 19 nt, 12 % 20 nt, 45 % 21 nt, 28 % 22 nt, 6 % 23 nt og 2 % 24 nukleotider. Sekvensanalyse av 5' terminalnukleotidet til de prosesserte fragmentene antydet at oligonukleotider med en 5' guanosin var underrepresentert. Denne skjevheten ble mest sannsynlig innført av T4 RNA-ligase som diskriminerer mot 5' fosforylert guanosin som donoroligonukleotid; ingen signifikant sekvensskjevhet ble observert på 3' enden. Mange av~21 nt fragmentene avledet fra 3' endene til sense- eller antisensetråden av dupleksene omfatter 3' nukleotider som er avledet fra vilkårlig tilsetning av nukleotider i løpet av RNA-syntese ved anvendelse av 17 RNA-polymerase. Interessant ble et signifikant antall endogene Drosophila~21 nt RNAer også klonet, noen av dem fra LTR og ikke-LTR retrotransposoner (resultater er ikke vist). Dette sammenfaller med en mulig rolle for RNAi i transposoninaktivering.
~21 nt RNA'ene forekommer i grupper (Figur 4A) som dekker hele dsRNA-sekvensene. Tilsynelatende kutter prosesseringsreaksjonen dsRNAet ved å etterlate seg ujevne 3' ender, en annen karakteristikk for RNase III kutting. For 39
bp dsRNA'et ble to clustere av~21 nt RNA'er funnet fra hver dsRNA-tråd omfattende overhengende 3' ender, fortsatt ble bare ett kuttesete detektert på
sense- og antisensemålet (Figur 3A og 3B). Hvis~21 nt fragmentene var til stede som enkelttrådede guide-RNA'er i et kompleks som medierer mRNA-nedbrytning, kunne det antas at minst to målkutteseter forekommer, men dette var ikke tilfelle. Dette antyder at~21 nt RNAene kan foreligge i dobbelttrådet form i endonukleasekomplekset, men at bare én av trådene kan bli anvendt for gjenkjennelse og kutting av mål-RNA. Anvendelse av bare én av~21 nt trådene for målkutting kan bli bestemt av retningen som~21 nt dupleksen er bundet til nukleasekomplekset. Denne retningen er definert av retningen som det opprinnelige dsRNA'et ble prosessert i.
~21 mer clustere for 52 bp og 111 bp dsRNA'et er mindre godt definert sammenlignet med 39 bp dsRNAet. Clusterne er spredt over regioner på 25 til 30 nt som mest sannsynlig representerer flere tydelige subpopulasjoner av~21 nt duplekser og guider derfor målkutting på flere nærliggende seter. Disse kutteregionene er fortsatt vesentlig separert med 20 til 23 nt intervaller. Reglene som bestemmer hvor ordinært dsRNA kan bli prosessert til~21 nt fragmenter er fortsatt ikke kjent, men det ble tidligere observert at avstanden mellom kutteseter på ca. 21-23 nt kan bli endret med en kjøring av uridiner (Zamore et al., 2000). Spesifisiteten til dsRNA-kutting med E. coli RNase III ser ut til å være kontrollert hovedsakelig av antideterminanter, dvs. unntatt noen spesifikke basepar i gitte posisjoner i forhold til kuttesetet (Zhang og Nicholson, 1997).
For å teste om sukker-, base- eller cap-modifisering var til stede i prosesserte -21 nt RNA-fragmenter, inkuberte vi radioaktivt merket 505 bp Pp-luc dsRNA i lysat i 1 time, isolerte~21 nt produktene og kuttet den med P1- eller T2-nuklease til mononukleotider. Nukleotidblandingen ble deretter analysert med 2D tynnsjiktkromatografi (Figur 4B). Ingen av de fire naturlige ribonukleotidene var modifisert som antydet med P1- eller T2-kutting. Vi har tidligere analysert adenosin- til inosinkonversjon i~21 nt fragmentene (etter en 21 inkubering) og detekterte et lite omfang (< 0,7 %) av deaminering (Zamore et al., 2000); kortere inkubering i lysat (1 time) reduserte denne inosinfraksjonen til knapt detekterbare nivåer. RNase T2, som kutter 3' i forhold til fosfodiesterkoblingen, dannet nukleosid 3' fosfat og nukleosid 3',5'-difosfat, og antyder dermed nærvær av et 5'-terminalt monofosfat. Alle fire nukleosid 3',5-difosfatene ble detektert og antyder at internukleotidkoblingen ble kuttet med liten eller ingen sekvensspesifisitet. Altså er~21 nt fragmentene ikke modifisert og ble generert fra dsRNA slik at 5' monofosfater og 3'-hydroksyler var til stede på 5'-enden.
1.2.4 Syntetiske 21 og 22 nt RNA'er medierer mål-RNA kutting Analyse av produktene ved dsRNA-prosessering antydet at~21 nt fragmentene genereres ved en reaksjon med alle karakteristikaene til en RNase III-kuttereaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982). RNase III lager kutt med overheng i dsRNA'et og etterlater seg et 3' overheng på ca. 2 nt. Vi syntetiserte kjemisk 21 og 22 nt RNA'er, som er identiske i sekvens til noen av de klonede~21 nt fragmentene, og testet dem for deres evne til å
mediere mål-RNA nedbrytning (Figur 5A og 5B). 21 og 22 nt RNA-dupleksene ble inkubert ved 100 nM konsentrasjoner i lysatet, en 10 ganger høyere konsentrasjon enn 52 bp kontroll-dsRNA'et. Under disse betingelsene er mål-RNA kutting enkel å detektere. Senkning av konsentrasjonen av 21 og 22 nt dupleksene fra 100 til 10 nM forårsaker fortsatt mål-RNA kutting. Økning av duplekskonsentrasjonen fra 100 nM til 1000 nM øker imidlertid ikke videre målkutting, trolig pga. en begrensende proteinfaktor i lysatet.
I motsetning til 29 eller 30 bp dsRNAer som ikke medierte RNAi, medierte 21 og 22 nt dsRNAene med overhengende 3' ender på 2 til 4 nt effektiv nedbrytning av mål-RNA (dupleksene 1, 3, 4, 6, Figur 5A og 5B). Rettendede 21 eller 22 nt dsRNA'er (dupleksene 2, 5 og 7, Figur 5A og 5B) ble redusert i deres evne til å degradere målet og indikerer at overhengende 3' ender er kritiske for rekonstitusjon av RNA-proteinnukleasekomplekset. De enkelttrådede overhengene kan være nødvendige for høyaffinitetsbinding av -21 nt dupleksen til proteinkomponentene. Et 5' terminalt fosfat, selv om det var til stede etter dsRNA-prosessering, var ikke nødvendig for å mediere mål-RNA kutting og var fraværende i de korte, syntetiske RNA'ene. De syntetiske 21 og 22 nt dupleksene guidet kutting av sense- så vel som antisensemål i regionen bundet av den korte dupleksen. Dette er et viktig resultat tatt i betraktning at et 39 bp dsRNA, som danner to par clustere av -21 nt fragmenter (Figur 2), kuttet sense- eller antisensemål bare én gang og ikke to ganger. Vi tolker dette resultatet ved å antyde at bare én av to tråder foreliggende i -21 nt dupleksen kan guide mål-RNA kutting og at retningen til -21 nt dupleksen i nukleasekomplekset blir bestemt av den opprinnelige retningen til dsRNA-prosessering. Presentasjonen av en allerede perfekt prosessert -21 nt dupleks for in v/fro-systemet tillater imidlertid dannelse av det aktive sekvensspesifikke nukleasekomplekset med to mulige retninger av den symmetriske RNA-dupleksen. Dette resulterer i kutting av sense- så vel som antisensemål i regionen som har likhet med 21 nt RNA-dupleksen.
Målkuttesetet er lokalisert 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som er komplementært til 21 eller 22 nt guidesekvensen, dvs. kuttesetet er nær senter av regionen bundet av 21 eller 22 nt RNAene (Figur 4A og 4B). Forskyving av sensetråden til en 22 nt dupleks med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 3 i Figur 5A) forskjøv bare kuttesetet til antisensemålet med to nukleotider. Forskyving av både sense- og antisensetråd med to nukleotider flyttet begge kutteseter med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 4). Vi spår at det vil bli mulig å utforme et par av 21 eller 22 nt RNA'er for å kutte et mål-RNA på nesten enhver gitt posisjon.
Spesifisiteten til mål-RNA kutting guidet av 21 og 22 nt RNAer synes høy ettersom ingen avvikende kutteseter er detektert (Figur 5B). Det bør imidlertid bli registrert at nukleotidene foreliggende i 3' overhenget til 21 og 22 nt RNA-dupleksen kan bidra mindre til substratgjenkjennelse enn nukleotidene nær kuttesetet. Dette er basert på observasjonen av at det 3' ytterste nukleotidet i 3' overhenget til de aktive dupleksene 1 eller 3 (Figur 5A) ikke er komplementært til målet. En detaljert analyse av spesifisiteten til RNAi kan nå bli enkelt gjennomført ved anvendelse av syntetiske 21 og 22 nt RNAer.
Basert på beviset at syntetiske 21 og 22 nt RNA'er med overhengende 3' ender medierer RNA-interferens, foreslår vi å kalle -21 nt RNA'ene for "korte, interfererende RNAer" eller siRNA'er og det respektive RNA-proteinkomplekset for "en liten, interfererende ribonukleoproteinpartikkel" eller siRNP.
1.2.5 3' Overheng av 20 nt på korte dsRNA'er inhiberer RNAi Vi har vist at korte, rettendede dsRNA'er blir prosessert fra endene til dsRNAet. I løpet av vår studie av lengdeavhengigheten til dsRNA i RNAi har vi også analysert dsRNA'er med 17 til 20 nt overhengende 3' ender, og til vår overraskelse fant vi at de var mindre effektive enn rettendede dsRNAer. Den inhibitoriske effekten av lange 3' ender var spesielt uttalt for dsRNA'er opp til 100 bp, men var mindre dramatisk for lengre dsRNAer. Effekten skyldtes ikke ufullkommen dsRNA-dannelse basert på nativ gelanalyse (resultater er ikke vist). Vi testet om den inhibitoriske effekten av lange, overhengende 3' ender kunne bli anvendt som et verktøy til å styre dsRNA-prosessering til bare én av de to endene av en kort RNA-dupleks.
Vi syntetiserte fire kombinasjoner av 52 bp modell-dsRNA'et, buttendet, 3' forlengelse på bare sensetråden, 3' forlengelse på bare antisensetråden og dobbel 3' forlengelse på begge trådene og kartla mål-RNA kuttesetene etter inkubering i lysat (Figur 6A og 6B). Det første og dominerende kuttesetet til sensemålet ble tapt når 3' enden av antisensetråden til dupleksen ble forlenget og vice versa, det sterke kuttesetet til antisensemålet ble tapt når 3' enden av sensetråden til dupleksen ble forlenget. 3' forlengelser på begge trådene gjorde 52 bp dsRNAet praktisk talt inaktivt. Én forklaring for dsRNA-inaktiveringen ved~20 nt 3' forlengelser kan være assosieringen av enkelttrådede RNA-bindende proteiner som kan interferere med assosieringen av én av de dsRNA-prosesserende faktorene på denne enden. Dette resultatet er også i samsvar med vår modell der bare én av trådene til siRNA-dupleksen i sammensatt siRNP kan guide mål-RNA kutting. Retningen på tråden som guider RNA-kutting er definert av retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Det er sannsynlig at nærvær av 3' ender med overheng kan lette monteringen av prosesseringskomplekset. En blokk på 3' enden av sensetråden vil bare tillate dsRNA-prosessering fra den motstående 3' enden av antisensetråden. Dette igjen genererer siRNP-komplekser der bare antisensetråden til siRNA-dupleksen kan guide kutting av sense mål-RNA. Det samme gjelder for den resiproke situasjonen.
Den mindre uttalte inhibitoriske effekten av lange 3' forlengelser i tilfellet med lengre dsRNAer (> 500 bp, resultater er ikke vist) indikerer at lange dsRNA'er også kan inneholde interne dsRNA-prosesseringssignaler eller kan bli prosessert samtidig pga. assosieringen av multiple kuttefaktorer.
1.2.6 En modell for dsRNA-styrt mRNA-kutting
De nye biokjemiske resultatene oppdaterer modellen for hvordan dsRNA binder mRNA for nedbrytning (Figur 7). Dobbelttrådet RNA blir først prosessert til korte RNA-duplekser som hovedsakelig er 21 og 22 nt lange og har 3' ender med overheng som tilsvarer en RNase lll-lignende reaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1982). Basert på 21-23 nt lengden til de prosesserte RNA-fragmentene har det allerede blitt spekulert i at en RNase lll-lignende aktivitet kan være involvert i RNAi (Bass, 2000). Denne hypotesen støttes videre ved nærvær av 5' fosfater og 3' hydroksyler på terminalene til siRNAene som er observert i RNase lll-reaksjonsprodukter (Dunn, 1982; Nicholson, 1999). Bakteriell RNase III og de eukaryote homologene Rntlp i S. cerevisiae og Padp i S. pombe har blitt vist å delta i prosessering av ribosomalt RNA så vel som sn RNA og snoRNAer (se for eksempel Chanfreau et al., 2000).
Lite er kjent om biokjemien til RNase lll-homologer fra planter, dyr eller menneske. To familier av RNase lll-enzymer har blitt identifisert hovedsakelig med databaseguidet sekvensanalyse eller kloning av cDNAer. Den første RNase III-familien er representert ved det 1327 aminosyre lange D. melanogaster- protemet drosha (Acc. AF116572). C-terminalen er sammensatt av to RNase III og ett dsRNA-bindende domene og N-terminalen har ukjent funksjon. Nære homologer er også funnet i C. elegans (Acc. AF160248) og menneske (Acc. AF189011)
(Filippov et al., 2000; Wu et al., 2000). Drosha-lignende human RNase III ble nylig klonet ogkarakterisert(Wu et al., 2000). Genet er uttrykt i alle humane vev og cellelinjer, og proteinet er lokalisert i kjernen og kjernelegemet i cellen. Basert på resultater fra antisenseinhibisjonsstudier ble det antydet en rolle for dette proteinet i rRNA-prosessering. Den andre klassen er representert av C. e/egans-genet K12H4.8 (Acc. S44849) som koder for et protein som er 1822 aminosyrer langt. Dette proteinet har et N-terminalt RNA-helikasemotiv som er etterfulgt av 2 RNase lll-katalytiske domener og et dsRNA-bindende motiv, lignende drosha RNase III-familien. Det er nære homologer i S. pombe (Acc. Q09884), A. thaliana (Acc. AF187317), D. melanogaster (Acc. AE003740) og menneske (Acc. AB028449)
(Filippov et al., 2000; Jacobsen et al., 1999; Matsuda et al., 2000). Kanskje er K12H4.8 RNase lll/helikasen den sannsynlige kandidaten som er involvert i RNAi.
Genetiske screeninger i C. elegans identifiserte rde-1 og rde-4 som essenseielle for aktivering av RNAi uten en effekt på transposonmobilisering eller kosuppresjon (Dernburg et al., 2000; Grishok et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Tabara et al., 1999). Dette førte til hypotesen om at disse genene er viktige for dsRNA-prosessering, men ikke er involvert i mRNA-målnedbrytning. Funksjonen til begge genene er fortsatt ukjent, rde-1 genproduktet er et medlem av en familie med proteiner som ligner på kaninproteinet elF2C (Tabara et al., 1999), og sekvensen til rde-4 har enda ikke blitt beskrevet. Fremtidig biokjemisk karakterisering av disse proteinene bør avsløre deres molekylære funksjon.
Prosessering til siRNA-dupleksene ser ut til å starte fra endene til begge rettendede dsRNAer eller dsRNA'er med korte (1-5 nt) 3' overheng, og fortsetter i bortimot 21-23 nt trinn. Lange (~20 nt) 3' overhengende ender på korte dsRNAer undertrykker RNAi, muligens via interaksjon med enkelttrådede RNA-bindende proteiner. Undertrykkelsen av RNAi med enkelttrådede regioner som flankerer kort dsRNA og mangelen på siRNA-dannelse fra korte 30 bp dsRNAer kan forklare hvorfor strukturerte regioner som ofte er i mRNA'er ikke fører til aktivering av RNAi.
Uten ønske om å være bundet av teori, antar vi at dsRNA-prosesseringsproteinene eller en undergruppe av disse forblir assosiert med siRNA-dupleksen etter prosesseringsreaksjonen. Retningen til siRNA-dupleksen i forhold til disse proteinene avgjør hvilken av de to komplementære trådene som guider mål-RNA nedbrytning. Kjemisk syntetiserte siRNA-duplekser guider kutting av sense- så vel som antisense mål-RNA ettersom de kan assosiere med proteinkomponentene i hver av de to mulige retningene.
Bemerkelsesverdig funn av at syntetiske 21 og 22 nt siRNA-duplekser kan bli anvendt for effektiv mRNA-nedbrytning tilveiebringer nye verktøy for sekvensspesifikk regulering av genekspresjon i funksjonell genteknologi, så vel som biomedisinske studier. siRNA'ene kan være effektive i mammalske systemer, der lange dsRNA'er ikke kan bli anvendt pga. aktiveringen av PKR-responsen (Clemens, 1997). Derfor representerer siRNA-dupleksene et nytt alternativ til antisense- eller ribozymterapeutika.
Eksempel 2
RNA-interferens i humane vevskulturer
2.1 Fremgangsmåter
2.1.1 RNA-fremstilling
21 nt RNAer ble syntetisert kjemisk ved anvendelse av Expedite RNA-fosforamiditter og tymidinfosforamiditt (Proligo, Tyskland). Syntetiske oligonukleotider fikk fjernet beskyttelsen og gelrenset (Eksempel 1), etterfulgt av Sep-Pak C18 kassett (Waters, Milford, MA, USA) rensing (Tuschl, 1993). siRNA-sekvensene rettet mot GL2- (Acc. X65324) og GL3-luciferase (Acc. U47296) svarte til de kodende regionene 153-173 i forhold til det første nukleotidet i startkodonet, siRNA'er rettet mot RL (Acc. AF025846) svarte til region 119-129 etter startkodonet. Lengre RNAer ble transkribert med T7 RNA-polymerase fra PCR-produkter, etterfulgt av gel- og Sep-Pak rensing. De 49 og 484 bp GL2 eller GL3 dsRNA'ene svarte til henholdsvis posisjon 113-161 og 113-596 i forhold til translasjonsstart; de 50 og 501 bp RL dsRNAene svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618. PCR-templater for dsRNA-syntese rettet mot humanisert GFP (hG) ble amplifisert fra pAD3 (Kehlenbach, 1998), hvorved 50 og 501 bp hG dsRNA svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618 i forhold til startkodonet.
For hybridisering av siRNAer ble 20^M enkelttråder inkubert i hybridiseringsbuffer
(100 mM kaliumacetat, 30 mM HEPES-KOH ved pH 7,4, 2 mM magnesiumacetat)
i 1 min ved 90 °C etterfulgt av 1 time ved 37 °C. 37 °C inkuberingstrinnet ble forlenget natten over for 50 og 500 bp dsRNAene, og disse
hybridiseringsreaksjonene ble utført ved trådkonsentrasjoner på henholdsvis 8,4^M og 0,84^M.
2.1.2 Cellekultur
S2-celler ble ekspandert i Schneiders Drosophila- medlum (Life Technologies) supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin ved 25 °C. 293, NIH/3T3, HeLa S3, COS-7 celler ble dyrket ved 37 °C i Dulbeccos modifiserte Eagles-medium supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin. Celler ble regelmessig fortynnet og dyrket videre for å opprettholde eksponentiell vekst. 24 timer før transfeksjon ved ca. 80 % sammenhengende dekke av celler ble mammalske celler trypsinert og fortynnet 1:5 med ferskt medium uten antibiotika (1-3 x 10<5>celler/ml) og overført til 24-brønners plater (500^l/brønn). S2-celler ble ikke trypsinert før fortynning. Transfeksjon ble utført med Lipofectamin2000-reagens (Life Technologies) som beskrevet av produsenten for adherente cellelinjer. 1,0^g pGL2-kontroll (Promega) eller pGL3-kontroll (Promega), 0,1^g pRL-TK (Promega) og 0,28^g siRNA-dupleks eller dsRNA, formulert inn i liposomer, ble tilsatt pr. brønn; det endelige volumet var 600 jai pr. brønn. Celler ble inkubert 201 etter transfeksjon og fremstod sunne deretter. Luciferaseekspresjon ble deretter monitorert med dual luciferasetest (Promega). Transfeksjonseffektivitet ble bestemt med fluorescensmikroskopi for mammalske cellelinjer etter kotransfeksjon av 1,1 fag hGFP-kodende pAD3 og 0,28^g invGL2 inGL2 siRNA og var 70-90 %. Rapportørplasmider ble amplifisert i XL-1 Blue (Stratagene) og renset ved anvendelse av Qiagen EndoFree Maxi Plasmid-testsettet.
2.2 Resultater og diskusjon
For å teste om siRNAer også kan mediere RNAi i vevskultur, syntetiserte vi 21 nt siRNA-duplekser med symmetriske 2 nt 3' overheng rettet mot rapportørgener som koder for Renilla reniformis og to sekvensvarianter av ildflue { Photinus pyralis, GL2 og GL3) luciferaser (Figur 8a, b). siRNA-dupleksene ble kotransfektert med rapportørplasmidkombinasjonene pGL2/pRL eller pGL3/pRL inn i D. melanogaster Schneider S2-celler eller mammalske celler ved anvendelse av kationiske liposomer. Luciferaseaktiviteter ble bestemt 20 t etter transfeksjon. I alle cellelinjer som ble testet observerte vi spesifikk reduksjon av ekspresjonen av rapportørgenene i nærvær av beslektede siRNA-duplekser (Figur 9a-j). De absolutte luciferaseekspresjonsnivåene var bemerkelsesverdig upåvirket av ikke-beslektede siRNAer, hvilket indikerer fravær av skadelige bivirkninger med 21 nt RNA-duplekser (f.eks. Figur 10a-d for HeLa-celler). I D. melanogaster S2-celler (Figur 9a, b) var den spesifikke inhibisjonen av luciferaser komplett. I mammalske celler, der rapportørgenene ble uttrykt 50- til 100 ganger sterkere, var den spesifikke suppresjonen mindre komplett (Figur 9c-j). GL2-ekspresjon ble redusert 3- til 12-fold, GL3-ekspresjon 9- til 25-fold og RL-ekspresjon 1- til 3-fold i respons til de beslektede siRNAene. For 293-celler var binding av RL-luciferase med RL-siRNA'er ineffektiv, selv om GL2- og GL3-mål responderte spesifikt (Figur 9i, j). Mangelen på reduksjon av RL-ekspresjon i 293-celler kan skyldes dens 5- til 20-fold høyere ekspresjon sammenlignet med enhver annen testet mammalsk cellelinje og/eller begrenset tilgjengelighet av målsekvensen pga. RNA-sekundær struktur eller assosierte proteiner. Ikke desto mindre indikerte spesifikk binding av GL2- og GL3-luciferase med de beslektede siRNA-dupleksene at RNAi også virker 1 293-celler. 2 nt 3' overhenget i alle siRNA-duplekser, bortsett fra uGL2, bestod av (2'-deoksy) tymidin. Substitusjon av uridin med tymidin i 3' overhenget ble godt tolerert i D. melanogaster in wfro-systemet, og sekvensen til overhenget var ikke kritisk for målgjenkjennelse. Tymidinoverhenget ble valgt fordi det angivelig skal øke nukleaseresistens til siRNAer i vevsdyrkningsmediet og i transfekterte celler. Faktisk var det tymidinmodifiserte GL2 siRNAet litt mer effektiv enn det ikke-modifiserte uGL2 siRNA'et i alle cellelinjer som ble testet (Figur 9a, c, e, g, i). Det er tenkelig at videre modifiseringer av de 3' overhengende nukleotidene kan gi ekstra fordeler til levering og stabilitet av siRNA-duplekser.
I kotransfeksjonseksperimenter ble 25 nM siRNA-duplekser med hensyn til det endelige volumet med vevsdyrkningsmedium anvendt (Figur 9, 10). Økning av siRNA-konsentrasjonen til 100 nM økte ikke de spesifikke inaktiveringseffektene, men begynte å affisere transfeksjonseffektivitet pga. konkurranse for liposominnkapsling mellom plasmid-DNA og siRNA (resultater er ikke vist). Reduksjon av siRNA-konsentrasjonen til 1,5 nM reduserte ikke den spesifikke inaktiveringseffekten (resultater er ikke vist), selv om siRNAene nå bare var 2- til 20-fold mer konsentrert enn DNA-plasmidene. Dette antyder at siRNA'er er usedvanlig kraftige reagenser for mediering av geninaktivering og at siRNA'er er effektive ved konsentrasjoner som er flere størrelsesordener under konsentrasjonene anvendt i konvensjonelle antisense- eller ribozymgenrettede eksperimenter.
For å monitorere effekten av lengre dsRNA'er på mammalske celler, ble 50 og 500 bp dsRNAer beslektet med rapportørgenene fremstilt. Som uspesifikk kontroll ble dsRNA'erfra humanisert GFP (hG) (Kehlenbach, 1998) anvendt. Når dsRNAer ble kotransfektert i identiske mengder (ikke konsentrasjoner) som siRNA-dupleksene, ble rapportørgenekspresjonen redusert sterkt og uspesifikt. Denne effekten er vist for HeLa-celler som et representativt eksempel (Figur 10a-d). De absolutte luciferaseaktivitetene ble uspesifikt redusert henholdsvis 10- til 20-fold med 50 bp dsRNA og 20- til 200-fold med 500 bp dsRNA-kotransfeksjon. Lignende uspesifikke effekter ble observert for COS-7 og NIH/3T3 celler. For 293-celler ble en 10- til 20-fold uspesifikk reduksjon bare observert for 500 bp dsRNA'er. Uspesifikk reduksjon i rapportørgenekspresjon med dsRNA > 30 bp var forventet som del av interferonresponsen.
Overraskende, til tross for den sterke, uspesifikke reduksjonen i rapportørgenekspresjon, detekterte vi reproduserbart ekstra sekvensspesifikk, dsRNA-mediert inaktivering. De spesifikke inaktiveringseffektene var imidlertid bare åpenbar når de relative rapportørgenaktivitetene ble normalisert i forhold til hG dsRNA-kontrollene (Figur 10e, f). En 2- til 10-fold spesifikk reduksjon i respons til beslektet dsRNA ble observert, også i de andre tre mammalske cellelinjene som ble testet (resultater er ikke vist). Spesifikke inaktiveringseffekter med dsRNAer (356-1662 bp) ble tidligere rapportert i CHO-K1 celler, men mengdene av dsRNA som var nødvendige for å detektere en 2- til 4-fold spesifikk reduksjon var ca. 20-fold høyere enn i våre eksperimenter (Ui-Tei, 2000). Også CHO-K1 celler ser ut til å mangle interferonresponsen. I en annen rapport ble 293, NIH/3T3 og BHK-21 celler testet for RNAi ved anvendelse av luciferase/lacZ rapportørkombinasjoner og 829 bp spesifikt lacZ- eller 717 bp uspesifikt GFP-dsRNA (Caplen, 2000). Det mislykkede forsøket på å detektere RNAi i dette tilfellet kan skyldes den mindre sensitive luciferase/lacZ-rapportørtesten og lengdeforskjellene mellom mål og kontroll-dsRNA. Samlet antyder våre resultater at RNAi er aktiv i mammalske celler, men at inaktiveringseffekten er vanskelig å detektere, hvis interferonsystemet er aktivert av dsRNA > 30 bp.
I korthet har vi for første gang demonstrert siRNA-mediert geninaktivering i mammalske celler. Anvendelsen av korte siRNA'er er lovende for inaktivering av genfunksjon i human vevskultur og utvikling av genspesifikke terapeutika.
Eksempel 3
Spesifikk inhibisjon av genekspresjon med RNA-interferens
3.1 Materialer og fremgangsmåter
3.1.1 RNA-fremstilling og RNAi-test
Kjemisk RNA-syntese, hybridisering og luciferasebaserte RNAi-tester ble utført som beskrevet i Eksempel 1 eller 2 eller i tidligere publikasjoner (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Alle siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase, og luciferase mRNA-sekvensen var avledet fra pGEM-luc (GenBank acc. X65316) som beskrevet (Tuschl et al., 1999). siRNA-dupleksene ble inkubert i D. melanogaster RNAi/translasjonsreaksjon i 15 min før tilsetning av mRNAer. Translasjonsbaserte RNAi-tester ble minst utført i triplikater.
For kartlegging av kutting av sense mål-RNA, ble et 177-nt transkript generert, som svarer til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet, etterfulgt av 17-nt komplementet til SP6-promotersekvensen. For kartlegging av antisense mål-RNA kutting, ble et 166-nt transkript dannet fra et templat, som ble amplifisert fra plasmidsekvens med PCR ved anvendelse av 5' primer TAATACGACTCACTATAGAGCCCATATCGTTTCATA (T7-promoter understreket) og 3' primer AGAGGATGGAACCGCTGG. Målsekvensen svarer til komplementet til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 50-215 i forhold til startkodonet. Guanylyltransferasemerkning ble utført som tidligere beskrevet (Zamore et al., 2000). For kartlegging av mål-RNA kutting ble 100 nM siRNA-dupleks inkubert med 5 til 10 nM mål-RNA i D. melanogaster- embryolysat under standard betingelser (Zamore et al., 2000) i 2 t ved 25 °C. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 8 volumer av proteinase K-buffer (200 mM Tris-HCI pH 7,5, 25 mM EDTA, 300 mM NaCI, 2 vektprosent/volum natriumdodecylsulfat). Proteinase K (E. M. Merck, løst i vann) ble satt til en endelig konsentrasjon på 0,6 mg/ml. Reaksjonene ble deretter inkubert i 15 min ved 65 °C, ekstrahert med fenol/kloroform/isoamylalkohol (25:24:1) og presipitert med 3 volumer av etanol. Prøver ble overført til 6 % sekvenseringsgeler. Lengdestandarder ble generert ved delvis RNase T1-kutting og delvis basehydrolyse av cap-merkede sense- eller antisense mål-RNA'er.
3.2 Resultater
3.2.1 Variasjon av 3' overhenget i duplekser av 21-nt siRNA'er Som beskrevet ovenfor var 2 eller 3 uparede nukleotider på 3' enden av siRNA-duplekser mer effektive i mål-RNA nedbrytning enn de respektive rettendede dupleksene. For å utføre en mer omfattende analyse av funksjonen til de terminale nukleotidene, syntetiserte vi fem 21-nt sense-siRNA'er, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til mål-RNA'et, og åtte 21-nt antisense-siRNAer, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til målet (Figur 11A). Ved å kombinere sense- og antisense-siRNA'er ble åtte serier av siRNA-duplekser med syntetisk overhengende ender generert som dekker et område på 7-nt 3' overheng til 4-nt 5' overheng. Interferensen av siRNA-duplekser ble målt ved anvendelse av dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase-mRNA, og Renilla reniformis luciferase-mRNA ble anvendt som intern kontroll. Luminescensforholdet mellom mål- og kontrolluciferaseaktivitet ble bestemt i nærvær av siRNA-dupleks og ble normalisert til forholdet observert i fravær av dsRNA. For sammenligning er interferensforholdet av lange dsRNAer (39 til 504 pb) vist i Figur 11B. Interferensforholdene ble bestemt ved konsentrasjoner på 5 nM for lange dsRNAer (Figur 11 A) og ved 100 nM for siRNA-duplekser (Figur 11C-J). 100 nM konsentrasjonene av siRNAer ble valgt, fordi fullstendig prosessering av 5 nM 504 bp dsRNA ville resultere i 120 nM totale siRNA-duplekser.
Evnen 21-nt siRNA-duplekser har til å mediere RNAi er avhengig av antallet overhengende nukleotider eller basepar dannet. Duplekser med fire til seks 3' overhengende nukleotider kunne ikke mediere RNAi (Figur 11 C-F), hvilket også var tilfelle for duplekser med to eller flere 5' overhengende nukleotider (Figur 11 G-J). Dupleksene med 2-nt 3' overheng var mest effektive til å mediere RNA- interferens, skjønt effektiviteten til inaktivering også var sekvensavhengig, og forskjeller opp til 12-fold ble observert for ulike siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (sammenligne Figur 11 D-H). Duplekser med rette ender, 1-nt 5' overheng eller 1- til 3-nt 3' overheng var enkelte ganger funksjonelle. Den lille inaktiveringseffekten observert for siRNA-dupleksen med 7-nt 3' overheng (Figur 11C) kan skyldes en antisenseeffekt av det lange 3' overhenget i stedet for RNAi. Sammenligning av effektiviteten til RNAi mellom lange dsRNA'er (Figur 11B) og de mest effektive 21-nt siRNA-dupleksene (Figur 11E, G, H) antyder at en enkel siRNA-dupleks ved konsentrasjon på 100 nM kan være like effektiv som 5 nM 504 bp dsRNA.
3.2.2 Lengdevariasjon av sense-siRNA'et paret til et uforandret 21-nt antisense-siRNA
For å utforske effekten av siRNA-lengde på RNAi, fremstilte vi tre serier av siRNA-duplekser, ved å kombinere tre 21-nt antisensetråder med åtte, 18- til 25-nt sense tråder. 3' overhenget til antisense-siRNAet ble bestemt til 1, 2 eller 3 nt i hver siRNA-dupleksserie, mens sense-siRNAet ble variert på dets 3' ende (Figur 12A). Uavhengig av lengden til sense-siRNA'et fant vi at duplekser med 2-nt 3' overheng av antisense-siRNA (Figur 12C) var mer aktive enn de med 1- eller 3-nt 3' overheng (Figur 12B, D). I den første serien med 1-nt 3' overheng av antisense-siRNA var duplekser med et 21- og 22-nt sense-siRNA, som henholdsvis bærer et 1- og 2-nt 3' overheng av sense-siRNA, mest aktive. Duplekser med 19- til 25-nt sense-siRNAer var også i stand til å mediere RNA, men i en mindre grad. Likeledes, i den andre serien med 2-nt overheng av antisense-siRNA, var 21-nt siRNA-dupleksen med 2-nt 3' overheng mest aktiv, og enhver annen kombinasjon med de 18- til 25-nt sense-siRNA'ene var aktiv til en signifikant grad. I den siste serien med 3-nt antisense-siRNA 3' overheng var bare dupleksen med et 20-nt sense-siRNA og 2-nt sense 3' overhenget i stand til å redusere mål-RNA ekspresjon. Samlet antyder disse resultatene at siRNA-lengden, så vel som lengden av 3' overhenget, er viktig og at duplekser av 21-nt siRNA'er med 2-nt 3' overheng er optimale for RNAi.
3.2.3 Lengdevariasjon av siRNA-duplekser med et konstant 2-nt 3' overheng
Vi undersøkte deretter effekten av samtidig forandring av lengden til begge siRNA-tråder ved å opprettholde symmetriske 2-nt 3' overheng (Figur 13A). To serier av siRNA-duplekser ble fremstilt inkludert 21-nt siRNA-dupleksen i Figur 11H som referanse. Lengden på dupleksene ble variert mellom 20 til 25 bp, ved å forlenge det baseparede segmentet på 3' enden av sense-siRNA'et (Figur 13B) eller på 3' enden av antisense-siRNAet (Figur 13C). Duplekser av 20 til 23 bp forårsaket spesifikk suppresjon av målluciferaseaktivitet, men 21-nt siRNA-dupleksen var minst 8 ganger mer effektiv enn hvilken som helst av de andre dupleksene. 24- og 25-nt siRNA-duplekser resulterte ikke i noen detekterbar interferens. Sekvensspesifikke effekter var underordnet ettersom variasjoner på begge endene av dupleksen førte til lignende effekter.
3.2.4 2'-Deoksy- og 2'-0-metyl-modifiserte siRNA-duplekser For å vurdere viktigheten av siRNA-riboserestene for RNAi, ble duplekser med 21-nt siRNAer og 2-nt 3' overheng med 2'-deoksy- eller 2'-0-metyl-modifiserte tråder undersøkt (Figur 14). Substitusjon av 2-nt 3' overhengene med 2'-deoksynukleotider hadde ingen effekt, og til og med utbyttingen av to ekstra ribonukleotider nær overhengene i den parede regionen dannet signifikant aktive siRNA'er. Således ble 8 av 42 nt i en siRNA-dupleks byttet ut med DNA-rester uten tap av aktivitet. Fullstendig substitusjon av én eller begge siRNA-trådene med 2'-deoksyrester fjernet imidlertid RNAi, hvilket også var tilfelle for substitusjon med 2'-0-metylrester.
3.2.5 Definisjon av mål-RNA kutteseter
Mål RNA-kutteposisjoner ble tidligere bestemt for 22-nt siRNA-duplekser og for en 21-nt/22-nt dupleks. Det ble funnet at posisjonen for mål-RNA kuttingen var lokalisert i senteret av regionen bundet av siRNA-dupleksen, 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som var komplementært til 21- eller 22-nt siRNA-guidesekvensen. Fem forskjellige 21 nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (Figur 15A) ble inkubert med 5' cap-merket sense eller antisense mål-RNA i D. melanogaster-\ ysat (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). 5' kutteproduktene ble bestemt på sekvenseringsgeler (Figur 15B). Mengden av kuttet sense mål-RNA korrelerer med effektiviteten til siRNA-duplekser bestemt i den translasjonsbaserte testen, og siRNA-dupleksene 1, 2 og 4 (Figur 15B og 11H, G, E) kutter mål-RNA raskere enn dupleksene 3 og 5 (Figur 15B og 11 F, D). Summen av radioaktivitet til 5' kutteproduktet og det tilsatte mål-RNA'et var ikke konstant over tid, og 5' kutteproduktene akkumulerte ikke. Antakelig blir kutteproduktene, når de er frigjort fra siRNA-endonukleasekomplekset, raskt degradert fordi de mangler enten poly(A) halen eller 5'-cap.
Kuttesetene for både sense og antisense mål-RNAer ble lokalisert i midten av regionen dekket av siRNA-dupleksene. Kuttesetene for hvert mål dannet med de 5 ulike dupleksene varierte med 1-nt i henhold til 1-nt forskyvningen av dupleksene langs målsekvensene. Målet ble kuttet nøyaktig 11 nt nedstrøms for målposisjonen komplementær til det 3' ytterste nukleotidet av det sekvenskomplementære guide-siRNA'et (Figur 15A, B).
For å avgjøre hvorvidt 5' eller 3' enden til guide-siRNAet bestemmer mål-RNA kutting, tenkte vi ut den eksperimentelle strategien beskrevet i Figur 16A og B. Et 21-nt antisense-siRNA, som ble holdt uforandret for denne studien, ble paret med sense-siRNAer som var modifisert på enten deres 5' eller 3' ender. Posisjonen til sense og antisense mål-RNA kutting ble bestemt som beskrevet ovenfor. Forandringer i 3' enden av sense-siRNAet, monitorert for 1-nt 5' overheng til 6-nt 3' overheng, påvirket verken posisjonen til sense eller antisense mål-RNA kutting (Figur 16C). Forandringer i 5' enden av sense-siRNA'et affiserte ikke sense mål-RNA kuttingen (Figur 16D, øverste panel), som var forventet fordi antisense-siRNA'et var uforandret. Imidlertid var antisense mål-RNA kuttingen affisert og sterkt avhengig av 5' enden til sense-siRNA'et (Figur 16D, nederste panel). Antisensemålet ble bare kuttet når sense-siRNA'et var 20 eller 21 nt langt og kutteposisjonen forskjellig med 1-nt, hvilket antyder at 5' enden til det målgjenkjennende siRNA'et bestemmer mål-RNA kutting. Posisjonen lokaliseres mellom nukleotid 10 og 11 når man teller i oppstrøms retning fra målnukleotidet paret til det 5' ytterste nukleotidet av guide-siRNAet (se også Figur 15A).
3.2.6 Sekvenseffekter og 2'-deoksysubstitusjoner i 3' overhenget Et 2-nt 3' overheng er foretrukket for siRNA-funksjon. Vi ønsket å vite om sekvensen til de overhengende nukleotidene bidrar til målgjenkjennelse eller om det bare er en egenskap som er nødvendig for rekonstitusjon av
endonukleasekomplekset (RISC eller siRNP). Vi syntetiserte sense- og antisense-siRNA'er med AA, CC, GG, UU og UG 3' overheng og inkluderte 2' deoksymodifiseringene TdG og TT. Villtype-siRNAene inneholdt AA i sense 3' overhenget og UG i antisense 3' overhenget (AA/UG). Alle siRNA-dupleksene var funksjonelle i interferenstesten og reduserte målekspresjon minst 5-fold (Figur 17). De mest effektive siRNA-dupleksene som reduserte målekspresjon mer enn 10-fold var av sekvenstypen NN/UG, NN/UU, NN/TdG og NN/TT (N, hvilket som helst nukleotid). siRNA-duplekser med et antisense-siRNA 3' overheng av AA, CC eller GG var en faktor 2 til 4 mindre aktiv sammenlignet med villtypesekvensen UG eller mutanten UU. Denne reduksjonen i RNAi-effektivitet skyldes sannsynligvis bidraget av det nest siste 3' nukleotidet til sekvensspesifikk målgjenkjennelse, ettersom det 3' terminale nukleotidet ble forandret fra G til U uten effekt.
Forandringer i sekvensen til 3' overhenget av sense-siRNAet viste ikke noen sekvensavhengige effekter, som var forventet fordi sense-siRNAet ikke må bidra til sense mål-mRNA gjenkjennelse.
3.2.7 Sekvensspesifisitet for målgjenkjennelse
For å undersøke sekvensspesifisiteten for målgjenkjennelse, innførte vi sekvensforandringer i de parede segmentene av siRNA-duplekser og bestemte effektiviteten til inaktivering. Sekvensforandringer ble innført ved å invertere korte segmenter med 3- eller 4-nt lengde eller som punktmutasjoner (Figur 18). Sekvensforandringene i én siRNA-tråd ble kompensert i den komplementære siRNA-tråden for å unngå og bringe forstyrrelse i den baseparede siRNA-dupleksstrukturen. Sekvensen til alle 2-nt 3' overhengene var TT (T, 2'-deoksytymidin) for å redusere syntese kostnader. TT/TT referanse siRNA-dupleksen var sammenlignbar i RNAi med villtype siRNA-dupleksen AA/UG (Figur 17). Evnen til å mediere rapportør mRNA-nedbrytning ble kvantifisert ved anvendelse av den translasjonsbaserte luminescenstesten. Duplekser av siRNA'er med inverterte sekvenssegmenter viste dramatisk redusert evne for binding av ildflueluciferaserapportør (Figur 18). Sekvensforandringene lokalisert mellom 3' enden og midten av antisense-siRNAet fjernet fullstendig mål-RNA gjenkjennelse, men mutasjoner nær 5' enden av antisense-siRNAet har en liten grad av inaktivering. Transversjon av A/U baseparet lokalisert direkte ovenfor det antatte mål-RNA kuttesetet, eller ett nukleotid lenger vekk fra det antatte setet, hindret mål-RNA kutting, og indikerer derfor at enkel mutasjon i senteret av en siRNA-dupleks skjelner mellom feilmatchede mål.
3.3 Diskusjon
siRNA'er er verdifulle reagenser for inaktivering av genekspresjon, ikke bare i insektceller, men også i mammalske celler, med et stort potensial for terapeutisk anvendelse. Vi har systematisk analysert de strukturelle determinantene til siRNA-duplekser som er nødvendig for å fremme effektiv mål-RNA nedbrytning i D. me/anogasfer-embryolysat, og tilveiebringer derfor regler for utformingen av de mest effektive siRNA-dupleksene. En perfekt siRNA-dupleks kan inaktivere genekspresjon med en effektivitet som er sammenlignbar med et 500 bp dsRNA, gitt at sammenlignbare mengder av totalt RNA blir anvendt.
3.4 siRNA-brukerveiledning
Effektivt inaktiverende siRNA-duplekser er fortrinnsvis sammensatt av 21-nt antisense-siRNA'er og bør bli valgt for å danne en 19 bp dobbeltheliks med 2-nt 3' overhengende ender. 2'-deoksysubstitusjoner av 2-nt 3' overhengende ribonukleotider affiserer ikke RNAi, men bidrar til å redusere kostnadene av RNA-syntese og kan øke RNAse-resistens av siRNA-duplekser. Mer omfattende 2'-deoksy- eller 2'-0-metylmodifiseringer reduserer imidlertid evnen siRNAer har til å mediere RNAi, trolig ved å interferere med proteinassosiering for siRNAP-montering.
Målgjenkjennelse er en svært sekvensspesifikk prosess mediert av siRNAet som er komplementært til målet. Det 3' ytterste nukleotidet til guide-siRNAet bidrar ikke til spesifisitet av målgjenkjennelse, mens det nest siste nukleotidet av 3' overhenget påvirker mål-RNA kutting, og en mismatch reduserer RNAi 2- til 4-fold. 5' enden av et guide-siRNA virker også mer avgjørende for feilmatchet mål-RNA gjenkjennelse sammenlignet med 3' enden. Nukleotider i senteret av siRNA'et, lokalisert ovenfor mål-RNA kuttesetet, er viktige spesifisitetsdeterminanter, og til og med enkle nukleotidforandringer reduserer RNAi til ikke-detekterbart nivå. Dette antyder at siRNA-duplekser kan være i stand til å skjelne mutante eller polymorfe alleler i genmålrettede eksperimenter, som kan bli en viktig egenskap for fremtidige terapeutiske fremskritt.
Sense og antisense-siRNA'er, når de er assosiert med proteinkomponentene i endonukleasekomplekset eller dets "commitmenf-kompleks, ble antydet å spille forskjellige roller; den relative retningen til siRNA-dupleksen i dette komplekset definerer hvilken tråd som kan bli anvendt for målgjenkjennelse. Syntetiske siRNA-duplekser har dyadisk symmetri med hensyn til den dobbeltheliske strukturen, men ikke med hensyn til sekvens. Assosieringen av siRNA-duplekser med RNAi-proteinene i D. melanogaster-\ ysatet vil føre til dannelse av to asymmetriske komplekser. I slike hypotetiske komplekser er det kirale miljøet forskjellig for sense- og antisense-siRNA og dermed deres funksjon. Forutsigelsen gjelder opplagt ikke for palindrome siRNA-sekvenser eller RNAi-proteiner som kan assosiere som homodimerer. For å begrense sekvenseffekter, som kan affisere forholdet mellom sense- og antisensebindende siRNP'er, foreslår vi å anvende siRNA-sekvenser med identiske 3' overhengende sekvenser. Vi anbefaler å justere sekvensen til overhenget av sense-siRNAet til den antisense 3' overhenget har, fordi sense-siRNA'et ikke har et mål i typiske geninaktiveringseksperimenter. Asymmetri i rekonstitusjon av sense- og antisensekuttende siRNP'er kan være (delvis) ansvarlig for variasjonen i RNAi-effektivitet observert for ulike 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng anvendt i denne studien (Figur 14). Alternativt kan nukleotidsekvensen til målsetet og/eller tilgjengeligheten av mål-RNA strukturen være ansvarlig for variasjonen i effektivitet for disse siRNA-dupleksene.
Referanser
Bass, B. L. (2000). Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Cell 101,235-238.
Bosher, J. M., og Labouesse, M. (2000). RNA interference: genetic wand and genetic watchdog. Nat. Cell Biol. 2, E31-36.
Caplen, N. J., Fleenor, J., Fire, A., og Morgan, R. A. (2000). dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105.
Catalanotto, C, Azzalin, G., Macino, G., og Cogoni, C. (2000). Gene silencing in worms and fungi. Nature 404, 245.
Chanfreau, G., Buckle, M., og Jacquier, A. (2000). Recognition of a conserved class of RNA tetraloops by Saccharomyces cerevisiae Rnase III. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 97, 3142-3147.
Clemens, M. J. (1997). PKR - a protein kinase regulated by double-stranded RNA. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 945-949.
Cogoni, C, og Macino, G. (1999). Homology-dependent gene silencing in plants and fungi: a number of variations on the same theme. Curr. Opin. Microbiol. 2, 657-662.
Dalmay, T., Hamilton, A., Rudd, S., Angell, S., og Baulcombe, D. C. (2000). An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell 101, 543-553.
Dernburg, A. F., Zalevsky, J., Colaiacovo, M. P., og Villeneuve, A. M. (2000). Transgene-mediated cosuppression in the C. elegans germ line. Genes & Dev. 14, 1578-1583.
Dunn, J. J. (1982). Ribonuclease III. I The enzymes, vol 15, del B, P. D. Boyer, red. (New York: Academic Press), s. 485-499.
Filippov, V., Solovyev, V., Filippova, M., og Gill, S. S. (2000). A novel type of RNase III family proteins in eukaryotes. Gene 245, 213-221.
Fire, A. (1999). RNA-triggered gene silencing. Trends Genet. 15, 358-363.
Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., og Mello, C. C.
(1998). Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811.
Grishok, A., Tabara, H., og Mello, C. C. (2000). Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. Science 287, 2494-2497.
Hamilton, A. J., og Baulcombe, D. C. (1999). A species of small antisensee RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science 286, 950-952.
Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D., og Hannon, G. J. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296.
Jacobsen, S. E., Running, M. P., og M., M. E. (1999). Disruption of an
RNA helicase/RNase III gene in Arabidopsis causes unregulated cell division in floral meristems. Development 126, 5231-5243.
Jensen, S., Gassama, M. P., og Heidmann, T. (1999). Tårning of transposable elements by homology-dependent gene silencing. Nat. Genet. 21, 209-212.
Kehlenbach, R. H., Dickmanns, A. & Gerace, L. (1998). Nucleocytoplasmic shuttling factors including Ran and CRM1 mediate nuclear export of NFAT in vitro. J. Cell Biol. 141, 863-874.
Kennerdell, J. R., og Carthew, R. W. (1998). Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell 95, 1017-1026.
Ketting, R. F., Haverkamp, T. H., van Luenen, H. G., og Plasterk, R. H. (1999). Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNaseD. Cell 99, 133-141.
Ketting, R. F., og Plasterk, R. H. (2000). A genetic link between cosuppression and RNA interference in C. elegans. Nature 404, 296-298.
Lucy, A. P., Guo, H. S., Li, W. X., og Ding, S. W. (2000). Suppression of post-transcriptional gene silencing by a plant viral protein localized in the nucleus. EMBO J. 19, 1672-1680.
Matsuda, S., Ichigotani, Y., Okuda, T., Irimura, T., Nakatsugawa, S., og Hamaguchi, M. (2000). Molecular doning and characterization of a novel human gene (HERNA) which encodes a putative RNA-helicase. Biochim. Biophys. Acta 31, 1-2.
Milligan, J. F., og Uhlenbeck, O. C. (1989). Synthesis of small RNAs using 17 RNA polymerase. Methods Enzymol. 180, 51-62.
Mourrain, P., Beclin, C, Elmayan, T., Feuerbach, F., Godon, C, Morel, J. B., Jouette, D., Lacombe, A. M., Nikic, S., Picault, N., Remoue, K., Sanial, M., Vo, T. A., og Vaucheret, H. (2000). Arabidopsis SGS2 and SGS3 genes are required for posttranscriptional gene silencing and natural virus resistance. Cell 101, 533-542.
Ngo, H., Tschudi, C, Gull, K., og Ullu, E. (1998). Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 95, 14687-14692.
Nicholson, A. W. (1999). Function, mechanism and regulation of bacterial ribonucleases. FEMS Microbiol. Rev. 23, 371-390.
Oelgeschlager, M., Larrain, J., Geissert, D., og De Robertis, E. M. (2000). The evolutionarily conserved BMP-binding protein Twisted gastrulation promotes BMP signaling. Nature 405, 757-763.
Pan, T., og Uhlenbeck, O. C. (1992). In vitro selection of RNAs that undergo autolytic cleavage with Pb<2+>. Biochemistry 31, 3887-3895.
Pelissier, T., og Wassenegger, M. (2000). A DNA target of 30 bp is sufficient for RNA-directed methylation. RNA 6, 55-65.
Plasterk, R. H., og Ketting, R. F. (2000). The silence of the genes. Curr. Opin. Genet. Dev. 10, 562-567.
Ratcliff, F. G., MacFarlane, S. A., og Baulcombe, D. C. (1999). Gene Silencing without DNA. RNA-mediated cross-protection between vimses. Plant Cell 11, 1207-1216.
Robertson, H. D. (1990). Escherichia coli ribonuclease III. Methods Enzymol. 81, 189-202.
Robertson, H. D. (1982). Escherichia coli ribonuclease III cleavage sites. Cell 30, 669-672.
Romaniuk, E., McLaughlin, L. W., Nelson, T., og Romaniuk, P. J. (1982). The effect of acceptor oligoribonucleotide sequence on the T4 RNA ligase reaction. Eur J Biochem 125, 639-643.
Sharp, P. A. (1999). RNAi and double-strand RNA. Genes & Dev. 13, 139-141.
Sijen, T., og Kooter, J. M. (2000). Post-transcriptional gene-silencing: RNAs on the attack or on the defense? Bioessays 22, 520-531.
Smardon, A., Spoerke, J., Stacey, S., Klein, M., Mackin, N., og Maine, E. (2000). EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C. elegans. Curr. Biol. 10, 169-178.
Svoboda, P., Stein, P., Hayashi, H., og Schutz, R. M. (2000). Selective reduction of dormant maternal mRNAs in mouse oocytes by RNA interference. Development 127,4147-4156.
Tabara, H., Sarkissian, M., Kelly, W. G., Fleenor, J., Grishok, A., Timmons, L, Fire, A., og Mello, C. C. (1999). The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. Cell 99, 123-132.
Tuschl, T., Ng, M. M., Pieken, W., Benseler, F., og Eckstein, F. (1993). Importance of exocyclic base functional groups of central core guanosines for hammerhead ribozyme activity. Biochemistry 32, 11658-11668.
Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (1998). Selection in vitro of novel ribozymes from a partially randomized U2 and U6 snRNA library. EMBO J. 17, 2637-2650.
Tuschl, T., Zamore, P. D., Lehmann, R., Bartel, D. P., og Sharp, P. A. (1999). Targeted mRNA degradation by double-stranded RNA in vitro. Genes & Dev. 13, 3191-3197.
Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y. & Saigo, K. (2000). Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Letters 479, 79-82.
Verma, S., og Eckstein, F. (1999). Modified oligonucleotides: Synthesis and strategy for users. Annu. Rev. Biochem. 67, 99-134.
Voinnet, O., Lederer, C, og Baulcombe, D. C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell 103, 157-167.
Wassenegger, M. (2000). RNA-directed DNA methylation. Plant Mol. Biol. 43, 203-220.
Wianny, F., og Zernicka-Goetz, M. (2000). Specific interference with gene function by double-stranded RNA in early mouse development. Nat. Cell Bio. 2, 70-75. Wu, H., Xu, H., Miraglia, L. J., og Crooke, S. T. (2000). Human RNase III is a 160 kDa Protein Involved in Preribosomal RNA Processing. J. Biol. Chem. 17, 17.
Yang, D., Lu, H. og Erickson, J. W. (2000) Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in drosophilia embryos. Curr. Biol., 10, 1191-1200.
Zamore, P. D., Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (2000). RNAi: Double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 101, 25-33.
Zhang, K., og Nicholson, A. W. (1997). Regulation of ribonuclease III processing by double-helical sequence antideterminants. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 94, 13437-13441.

Claims (21)

1. Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl,karakterisert vedat hver RNA-tråd har en lengde fra 19-23 nukleotider og hvor minst én tråd har et 3'- overheng med fra 1-3 nukleotider, der nevnte RNA-molekyl er i stand til målspesifikk RNA interferens.
2. RNA-molekyl ifølge krav 1, hvor hver tråd har en lengde fra 20-22 nukleotider.
3. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1 eller 2, hvor 3'- overhenget er stabilisert mot nedbrytning.
4. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-3, som inneholder minst én modifisert nukleotidanalog.
5. RNA-molekyl ifølge krav 4, hvor den modifiserte nukleotidanalogen velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider.
6. RNA-molekyl ifølge krav 4 eller 5, hvor nukleotidanalogen er et sukkermodifisert ribonukleotid, der 2'-OH gruppen er byttet ut med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR<1>, NH2, NHR, NR2eller CN, der R er CrC6alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller I.
7. RNA-molekyl ifølge krav 4 eller 5, hvor nukleotidanalogen er et ryggradmodifisert ribonukleotid inneholdende en fosfotioatgruppe.
8. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-7, som har en sekvens som har en likhet på minst 70 prosent i forhold til et forutbestemt mRNA-målmolekyl.
9. Fremgangsmåte for å fremstille et dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8,karakterisert vedat den omfatter trinnene: a) syntetisere to RNA-tråder som hver har en lengde fra 19-23 nukleotider og hvor minst én har et 3'- overheng med fra 1-3 nukleotider, der nevnte RNA-tråder kan danne et dobbelttrådet RNA-molekyl, b) kombinere de syntetiserte RNA-trådene under betingelser der et dobbelttrådet RNA molekyl dannes som er i stand til målspesifikk RNA interferens.
10. Fremgangsmåten ifølge krav 9, hvor RNA-trådene syntetiseres kjemisk.
11. Fremgangsmåten ifølge krav 9, hvor RNA-trådene syntetiseres enzymatisk.
12. In vitro fremgangsmåte for mediering av målspesifikke RNA interferenser i en eukaryot celle,karakterisert vedat den omfatter trinnene: a) la nevnte celle komme i kontakt med det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge ethvert av kravene 1-8 under betingelser der målspesifikke RNA interferenser kan forekomme, og b) mediere en målspesifikk RNA interferens effektuert av det dobbelttrådede RNA'et mot en målnukleinsyre som har en sekvensdel som svarer i alt vesentlig til det dobbelttrådede RNA'et.
13. Anvendelse av in vitro fremgangsmåten ifølge krav 12 for å bestemme funksjonen til et gen i en celle.
14. Anvendelse av in vitro fremgangsmåten ifølge krav 12 for modulering av funksjonen til et gen i en celle.
15. Anvendelse ifølge krav 13 eller 14, der genet er assosiert med en patologisk tilstand.
16. Anvendelse av et dobbeltrådet RNA molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8 for fremstilling av et medikament for å modulere funksjonen til et patogen-assosiert gen som er et viralt gen.
17. Anvendelse av et dobbeltrådet RNA molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8 for fremstilling av et medikament for å modulere funksjonen til et tumor-assosiert gen.
18. Anvendelse av et dobbeltrådet RNA molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8 for fremstilling av et medikament for å modulere funksjonen til et gen assosiert med en autoimmun sykdom.
19. Farmasøytisk sammensetning,karakterisert vedat den inneholder minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1 -8 som et aktivt stoff og en farmasøytisk bærer.
20. Sammensetning ifølge krav 19, som er for diagnostiske applikasjoner.
21. Sammensetning ifølge krav 19, som er for terapeutiske applikasjoner.
NO20032464A 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning NO333713B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP00126325 2000-12-01
US27966101P 2001-03-30 2001-03-30
PCT/US2001/010188 WO2001075164A2 (en) 2000-03-30 2001-03-30 Rna sequence-specific mediators of rna interference
PCT/EP2001/013968 WO2002044321A2 (en) 2000-12-01 2001-11-29 Rna interference mediating small rna molecules

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20032464D0 NO20032464D0 (no) 2003-05-30
NO20032464L NO20032464L (no) 2003-07-21
NO333713B1 true NO333713B1 (no) 2013-09-02

Family

ID=40529293

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032464A NO333713B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning
NO20130246A NO335426B1 (no) 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20130246A NO335426B1 (no) 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin

Country Status (28)

Country Link
US (25) US20040259247A1 (no)
EP (3) EP1873259B1 (no)
JP (5) JP4095895B2 (no)
KR (2) KR100872437B1 (no)
CN (1) CN100523215C (no)
AT (1) ATE373724T2 (no)
AU (3) AU2002235744B8 (no)
BR (1) BRPI0115814B8 (no)
CA (1) CA2429814C (no)
CY (1) CY1119062T1 (no)
CZ (2) CZ302719B6 (no)
DE (1) DE60130583T3 (no)
DK (2) DK1407044T4 (no)
ES (2) ES2728168T3 (no)
HK (4) HK1110631A1 (no)
HU (1) HU230458B1 (no)
IL (3) IL155991A0 (no)
LT (1) LTPA2021005I1 (no)
MX (1) MXPA03004836A (no)
NO (2) NO333713B1 (no)
NZ (1) NZ525888A (no)
PL (1) PL218876B1 (no)
PT (1) PT1407044E (no)
RU (2) RU2322500C2 (no)
SI (1) SI1407044T2 (no)
TR (1) TR200401292T3 (no)
WO (1) WO2002044321A2 (no)
ZA (1) ZA200303929B (no)

Families Citing this family (1213)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2135646A1 (en) * 1992-05-11 1993-11-25 Kenneth G. Draper Method and reagent for inhibiting viral replication
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5639647A (en) * 1994-03-29 1997-06-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'-deoxy-2'alkylnucleotide containing nucleic acid
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20040219569A1 (en) * 1999-07-06 2004-11-04 Fruma Yehiely Gene identification method
US20110003879A1 (en) * 2005-03-11 2011-01-06 Vincent Mark D Antisense oligonucleotides targeted to the coding region of thymidylate synthase and uses thereof
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
CA2513336A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd. Control of gene expression in a non-human eukaryotic cell, tissue or organ
WO1999054459A2 (en) * 1998-04-20 1999-10-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
AU776150B2 (en) 1999-01-28 2004-08-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US7601494B2 (en) 1999-03-17 2009-10-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion
ES2571230T3 (es) 1999-04-09 2016-05-24 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US6656698B1 (en) * 1999-06-30 2003-12-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 12832, a novel human kinase-like molecule and uses thereof
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
US8128922B2 (en) 1999-10-20 2012-03-06 Johns Hopkins University Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
DE10160151A1 (de) * 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US7179796B2 (en) * 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US8273866B2 (en) 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20080039414A1 (en) * 2002-02-20 2008-02-14 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
WO2002081628A2 (en) * 2001-04-05 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth, using nucleic acid based technologies
US20030084471A1 (en) * 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
EP1272630A2 (en) 2000-03-16 2003-01-08 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
US8202846B2 (en) 2000-03-16 2012-06-19 Cold Spring Harbor Laboratory Methods and compositions for RNA interference
DK2360253T3 (da) * 2000-03-30 2014-06-16 Whitehead Biomedical Inst Fremgangsmåde til fremstilling af knockdown-celler eller knockdown-organismer ved hjælp af RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens og anvendelser deraf
KR20080023768A (ko) 2000-03-30 2008-03-14 화이트헤드 인스티튜트 포 바이오메디칼 리서치 Ｒｎａ 간섭의 ｒｎａ 서열 특이적인 매개체
US20080242627A1 (en) * 2000-08-02 2008-10-02 University Of Southern California Novel rna interference methods using dna-rna duplex constructs
US7662791B2 (en) * 2000-08-02 2010-02-16 University Of Southern California Gene silencing using mRNA-cDNA hybrids
AU2001278117A1 (en) * 2000-08-03 2002-02-18 Johns Hopkins University Molecular vaccine linking an endoplasmic reticulum chaperone polypeptide to an antigen
US20030190635A1 (en) * 2002-02-20 2003-10-09 Mcswiggen James A. RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA
US20080032942A1 (en) * 2000-08-30 2008-02-07 Mcswiggen James RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20020165192A1 (en) * 2000-09-19 2002-11-07 Kerr William G. Control of NK cell function and survival by modulation of ship activity
WO2009042910A2 (en) * 2007-09-26 2009-04-02 University Of South Florida Ship inhibition to direct hematopoietic stem cells and induce extramedullary hematopoiesis
US7691821B2 (en) * 2001-09-19 2010-04-06 University Of South Florida Inhibition of SHIP to enhance stem cell harvest and transplantation
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
WO2002044321A2 (en) 2000-12-01 2002-06-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
US8546143B2 (en) 2001-01-09 2013-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
EP1229134A3 (en) * 2001-01-31 2004-01-28 Nucleonics, Inc Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
US20050159378A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050282188A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050048529A1 (en) * 2002-02-20 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050191618A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176664A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050137155A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050079610A1 (en) * 2001-05-18 2005-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050187174A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164224A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222066A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153914A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050209180A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7109165B2 (en) * 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US20030175950A1 (en) * 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
US20050203040A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050143333A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050233344A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1627061B1 (en) * 2001-05-18 2009-08-12 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING CHEMICALLY MODIFIED SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050159382A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080161256A1 (en) * 2001-05-18 2008-07-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2005078097A2 (en) * 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING MULTIFUNCTIONAL SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (Multifunctional siNA)
US20050159381A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070093437A1 (en) * 2001-05-18 2007-04-26 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of xiap gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US20050261219A1 (en) * 2001-05-18 2005-11-24 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233996A1 (en) * 2002-02-20 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196781A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040219671A1 (en) * 2002-02-20 2004-11-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050287128A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060211642A1 (en) * 2001-05-18 2006-09-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040198682A1 (en) * 2001-11-30 2004-10-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7517864B2 (en) 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080188430A1 (en) * 2001-05-18 2008-08-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050182007A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050054596A1 (en) * 2001-11-30 2005-03-10 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233997A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124569A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176666A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050267058A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA)
US20030124513A1 (en) * 2001-05-29 2003-07-03 Mcswiggen James Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV
US20050158735A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176663A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164968A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003070983A1 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Sirna Therapeutics, Inc RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROTEIN KINASE C ALPHA (PKC-ALPHA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050119212A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050256068A1 (en) 2001-05-18 2005-11-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003070743A1 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF G72 AND D-AMINO ACID OXIDASE (DAAO) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050136436A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176024A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124566A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159380A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2005014811A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF XIAP GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20070270579A1 (en) * 2001-05-18 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164967A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060142225A1 (en) * 2001-05-18 2006-06-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin dependent kinase-2 (CDK2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050288242A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159379A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196765A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070042983A1 (en) * 2001-05-18 2007-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20050196767A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA)
US20050014172A1 (en) 2002-02-20 2005-01-20 Ivan Richards RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060148743A1 (en) * 2001-05-18 2006-07-06 Vasant Jadhav RNA interference mediated inhibition of histone deacetylase (HDAC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050239731A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176025A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090299045A1 (en) * 2001-05-18 2009-12-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US8008472B2 (en) 2001-05-29 2011-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050019915A1 (en) * 2001-06-21 2005-01-27 Bennett C. Frank Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
CA2790034A1 (en) 2001-06-21 2003-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
BR0211111A (pt) 2001-07-12 2004-06-22 Univ Massachusetts Molécula de ácido nucleico isolada, vetor, célula hospedeira, transgene, precursor de rna engenheirado, animal transgênico não humano, e, método de induzir a interferência de ácido ribonucleico de um gene alvo em uma célula
DE10133858A1 (de) * 2001-07-12 2003-02-06 Aventis Pharma Gmbh Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression
ATE556720T1 (de) * 2001-07-23 2012-05-15 Univ Leland Stanford Junior Verfahren und zusammensetzungen zur rnai vermittelten inhibierung der genexpression in säugetieren
US10590418B2 (en) 2001-07-23 2020-03-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
US20090247606A1 (en) * 2001-08-28 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Adenosine A1 Receptor (ADORA1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US20030198627A1 (en) * 2001-09-01 2003-10-23 Gert-Jan Arts siRNA knockout assay method and constructs
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
WO2003035870A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms
DE10230996A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms
JP2005506087A (ja) * 2001-10-26 2005-03-03 リボファーマ アーゲー プラス鎖ｒｎａウイルスによる感染症を処置するための２本鎖リボ核酸の使用
WO2003035083A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung einer fibrotischen erkrankung durch rna interferenz
AU2002348163A1 (en) * 2001-11-02 2003-05-19 Intradigm Corporation Therapeutic methods for nucleic acid delivery vehicles
US20040063654A1 (en) * 2001-11-02 2004-04-01 Davis Mark E. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
EP2325193A3 (en) * 2001-11-02 2012-05-02 Insert Therapeutics, Inc. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
CA2467936C (en) * 2001-11-21 2013-11-05 Mitsubishi Chemical Corporation Method of inhibiting gene expression
US20070203333A1 (en) * 2001-11-30 2007-08-30 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040138163A1 (en) * 2002-05-29 2004-07-15 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050075304A1 (en) * 2001-11-30 2005-04-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7294504B1 (en) 2001-12-27 2007-11-13 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for DNA mediated gene silencing
ATE402999T1 (de) * 2002-01-17 2008-08-15 Univ British Columbia Bispezifische antisense oligonukleotide die igfbp-2 und igfbp-5 inhibieren und deren verwendung
DE10202419A1 (de) 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
GB0201477D0 (en) * 2002-01-23 2002-03-13 Novartis Forschungsstiftung Methods of obtaining isoform specific expression in mammalian cells
WO2003064625A2 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Sequitur, Inc. Oligonucleotide compositions with enhanced efficiency
US20030166282A1 (en) * 2002-02-01 2003-09-04 David Brown High potency siRNAS for reducing the expression of target genes
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
US20050096289A1 (en) * 2002-02-07 2005-05-05 Hans Prydz Methods and compositions for modulating tissue factor
AU2003223172A1 (en) * 2002-02-12 2003-09-04 Quark Biotech, Inc. Use of the axl receptor for diagnosis and treatment of renal disease
WO2003068961A2 (en) * 2002-02-13 2003-08-21 Axordia Limited Method to modify differentiation of pluripotential stem cells
ES2312753T5 (es) 2002-02-14 2012-12-13 City Of Hope Procedimientos para producir moléculas de ARN de interferencia en células de mamífero y usos terapéuticos para tales moléculas
US7662952B2 (en) * 2002-02-20 2010-02-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20100240730A1 (en) * 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US7683166B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003211058A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED TARGET DISCOVERY AND TARGET VALIDATION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
AU2003220136A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TGF-BETA AND TGF-BETA RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7897753B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928219B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20090099117A1 (en) 2002-02-20 2009-04-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
EP1478730A4 (en) * 2002-02-20 2006-01-25 Sirna Therapeutics Inc INTERFERENCE RNA-INDUCED INHIBITION OF THE GENE EXPRESSION OF SUPERFAMILY TFN AND TFN RECEPTOR SUPERFAMILY USING SHORT INTERFERENCE NUCLEIC ACID (SINA)
US7928218B2 (en) * 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8232383B2 (en) * 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7700760B2 (en) 2002-02-20 2010-04-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7795422B2 (en) 2002-02-20 2010-09-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7691999B2 (en) * 2002-02-20 2010-04-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090137509A1 (en) * 2002-02-20 2009-05-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLIFERATION CELL NUCLEAR ANTIGEN (PCNA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090093439A1 (en) * 2002-02-20 2009-04-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7667029B2 (en) * 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US8067575B2 (en) 2002-02-20 2011-11-29 Merck, Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090253774A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7683165B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003106476A1 (en) * 2002-02-20 2003-12-24 Sirna Therapeutics, Inc Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity
US20090253773A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7897752B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667030B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1432724A4 (en) * 2002-02-20 2006-02-01 Sirna Therapeutics Inc RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES
US20050096284A1 (en) * 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928220B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897757B2 (en) * 2002-02-20 2011-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7910724B2 (en) * 2002-02-20 2011-03-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090247613A1 (en) * 2002-02-20 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF B-CELL CLL/LYMPHOMA-2 (BCL2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
GB2397062B (en) * 2002-02-20 2005-06-15 Sirna Therapeutics Inc RNA interference mediated inhibition of hepatitis c virus (HCV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090233983A1 (en) * 2002-02-20 2009-09-17 Sirna Therapeutics Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Protein Tyrosine Phosphatase-1B (PTP-1B) Gene Expression Using Short Interfering RNA
US20090192105A1 (en) 2002-02-20 2009-07-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA)
EP1501853A4 (en) * 2002-02-20 2005-11-16 Sirna Therapeutics Inc RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION OF AN EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS
US7678897B2 (en) 2002-02-20 2010-03-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8258288B2 (en) 2002-02-20 2012-09-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7893248B2 (en) 2002-02-20 2011-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8013143B2 (en) * 2002-02-20 2011-09-06 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090306182A1 (en) * 2002-02-20 2009-12-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MAP KINASE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7935812B2 (en) 2002-02-20 2011-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003219900A1 (en) * 2002-02-22 2003-09-09 James R. Eshleman Antigene locks and therapeutic uses thereof
EP2277522B1 (en) * 2002-03-01 2012-11-21 UCB Manufacturing, Inc. Methods for increasing or decreasing bone density and identifying molecules
WO2003076592A2 (en) * 2002-03-06 2003-09-18 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of sirna molecules
US7274703B2 (en) * 2002-03-11 2007-09-25 3Com Corporation Stackable network units with resiliency facility
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US7357928B2 (en) 2002-04-08 2008-04-15 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Method for the diagnosis and prognosis of malignant diseases
AU2003224087B2 (en) 2002-04-18 2009-03-05 Opko Pharmaceuticals, Llc. Means and methods for the specific inhibition of genes in cells and tissue of the CNS and/or eye
WO2003093441A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Duke University A method of regulating gene expression
US20040009946A1 (en) 2002-05-23 2004-01-15 Ceptyr, Inc. Modulation of PTP1B expression and signal transduction by RNA interference
US7199107B2 (en) * 2002-05-23 2007-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
AU2003237686A1 (en) * 2002-05-24 2003-12-12 Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Rna interference mediating small rna molecules
WO2003106630A2 (en) * 2002-06-12 2003-12-24 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20100075423A1 (en) * 2002-06-12 2010-03-25 Life Technologies Corporation Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20040248094A1 (en) * 2002-06-12 2004-12-09 Ford Lance P. Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression
WO2003106636A2 (en) * 2002-06-14 2003-12-24 Mirus Corporation Novel methods for the delivery of polynucleotides to cells
WO2004001044A1 (en) * 2002-06-21 2003-12-31 Sinogenomax Company Ltd. Randomised dna libraries and double-stranded rna libraries, use and method of production thereof
JP2005537028A (ja) * 2002-06-26 2005-12-08 ザ　ペン　ステート　リサーチ　ファウンデーション ヒト乳頭腫ウイルス感染症を治療する方法及び材料
DK1519714T3 (da) 2002-06-28 2011-01-31 Protiva Biotherapeutics Inc Fremgangsmåde og apparat til fremstilling af liposomer
EP1520022B1 (en) * 2002-07-10 2015-07-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna-interference by single-stranded rna molecules
US7148342B2 (en) * 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
EP1389637B1 (en) 2002-08-05 2012-05-30 Silence Therapeutics Aktiengesellschaft Blunt-ended interfering RNA molecules
US20040241854A1 (en) 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
PT2258847T (pt) * 2002-08-05 2017-06-22 Silence Therapeutics Gmbh Outras novas formas de moléculas de arn de interferência
AU2012216354B2 (en) * 2002-08-05 2016-01-14 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering RNA molecules
US20050042646A1 (en) 2002-08-05 2005-02-24 Davidson Beverly L. RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
DK3222724T3 (en) 2002-08-05 2018-12-03 Silence Therapeutics Gmbh ADDITIONALLY UNKNOWN FORMS OF INTERFERRING RNA MOLECULES
US20080274989A1 (en) 2002-08-05 2008-11-06 University Of Iowa Research Foundation Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof
AU2015264957B2 (en) * 2002-08-05 2017-10-26 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering rna molecules
CA2501719C (en) * 2002-08-06 2013-02-05 Toray Industries, Inc. Remedy or preventive for kidney disease and method of diagnosing kidney disease
WO2004013310A2 (en) * 2002-08-06 2004-02-12 Intradigm Corporation Methods of down regulating target gene expression in vivo by introduction of interfering rna
US8729036B2 (en) 2002-08-07 2014-05-20 University Of Massachusetts Compositions for RNA interference and methods of use thereof
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
CA2495072A1 (en) * 2002-08-14 2004-03-11 Atugen Ag Use of protein kinase n beta
AU2003258426B2 (en) * 2002-08-21 2008-04-10 The University Of British Columbia RNAi probes targeting cancer-related proteins
US7923547B2 (en) * 2002-09-05 2011-04-12 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20060287269A1 (en) * 2002-09-09 2006-12-21 The Regents Of The University Of California Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof
US20080260744A1 (en) 2002-09-09 2008-10-23 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
US20040138119A1 (en) * 2002-09-18 2004-07-15 Ingo Tamm Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis
US20060257380A1 (en) * 2002-09-19 2006-11-16 Inst.Nat. De La Sante Et De La Recherche MED Use of sirnas for gene silencing in antigen presenting cells
AU2003282877B9 (en) 2002-09-25 2011-05-12 University Of Massachusetts In Vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA
US20040242518A1 (en) * 2002-09-28 2004-12-02 Massachusetts Institute Of Technology Influenza therapeutic
US20060160759A1 (en) * 2002-09-28 2006-07-20 Jianzhu Chen Influenza therapeutic
WO2004028471A2 (en) * 2002-09-28 2004-04-08 Massachusetts Institute Of Technology Influenza therapeutic
US20060240425A1 (en) * 2002-09-30 2006-10-26 Oncotherapy Science, Inc Genes and polypeptides relating to myeloid leukemia
US7422853B1 (en) * 2002-10-04 2008-09-09 Myriad Genetics, Inc. RNA interference using a universal target
AU2003291678B2 (en) 2002-11-01 2009-01-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha
US7892793B2 (en) 2002-11-04 2011-02-22 University Of Massachusetts Allele-specific RNA interference
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US9150606B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
EP1560840B1 (en) 2002-11-05 2015-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US9150605B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004043978A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
DE10322662A1 (de) * 2002-11-06 2004-10-07 Grünenthal GmbH Wirksame und stabile DNA-Enzyme
US7951935B2 (en) 2002-11-14 2011-05-31 Dharmacon, Inc. siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC)
US20080268457A1 (en) * 2002-11-14 2008-10-30 Dharmacon, Inc. siRNA targeting forkhead box P3 (FOXP3)
US7691998B2 (en) * 2002-11-14 2010-04-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62)
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US8198427B1 (en) 2002-11-14 2012-06-12 Dharmacon, Inc. SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1)
US10011836B2 (en) 2002-11-14 2018-07-03 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9719094B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting SEC61G
US7635770B2 (en) * 2002-11-14 2009-12-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3)
US7619081B2 (en) 2002-11-14 2009-11-17 Dharmacon, Inc. siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2)
US9879266B2 (en) 2002-11-14 2018-01-30 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US7612196B2 (en) * 2002-11-14 2009-11-03 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B)
US9839649B2 (en) 2002-11-14 2017-12-12 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US7592442B2 (en) 2002-11-14 2009-09-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2)
US8163896B1 (en) 2002-11-14 2012-04-24 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
WO2006006948A2 (en) * 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
US9719092B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting CNTD2
US20090227780A1 (en) * 2002-11-14 2009-09-10 Dharmacon, Inc. siRNA targeting connexin 43
US20090005548A1 (en) * 2002-11-14 2009-01-01 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nuclear receptor interacting protein 1 (NRIP1)
US9771586B2 (en) 2002-11-14 2017-09-26 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting ZNF205
US20100113307A1 (en) * 2002-11-14 2010-05-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF)
US7977471B2 (en) * 2002-11-14 2011-07-12 Dharmacon, Inc. siRNA targeting TNFα
US10920226B2 (en) * 2002-11-14 2021-02-16 Thermo Fisher Scientific Inc. siRNA targeting LDHA
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US7781575B2 (en) 2002-11-14 2010-08-24 Dharmacon, Inc. siRNA targeting tumor protein 53 (p53)
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
EP2305813A3 (en) * 2002-11-14 2012-03-28 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
US7927793B2 (en) 2002-11-18 2011-04-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Cell lines and host nucleic acid sequences related to infectious disease
US7064337B2 (en) 2002-11-19 2006-06-20 The Regents Of The University Of California Radiation detection system for portable gamma-ray spectroscopy
DE10254214A1 (de) * 2002-11-20 2004-06-09 Beiersdorf Ag Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
JP4526228B2 (ja) * 2002-11-22 2010-08-18 隆 森田 ＲＮＡｉによる新規治療法および治療剤
CN101914532A (zh) * 2002-11-22 2010-12-15 生物智囊团株式会社 Rna干扰的目标碱基序列的搜索方法
US7696334B1 (en) 2002-12-05 2010-04-13 Rosetta Genomics, Ltd. Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene
US7790867B2 (en) 2002-12-05 2010-09-07 Rosetta Genomics Inc. Vaccinia virus-related nucleic acids and microRNA
US20130130231A1 (en) 2002-11-26 2013-05-23 Isaac Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
US7829694B2 (en) 2002-11-26 2010-11-09 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US7618948B2 (en) 2002-11-26 2009-11-17 Medtronic, Inc. Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA
US7605249B2 (en) 2002-11-26 2009-10-20 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
CA2506714A1 (en) * 2002-11-26 2004-06-10 University Of Massachusetts Delivery of sirnas
CN1301263C (zh) 2002-12-18 2007-02-21 北京昭衍新药研究中心 一组抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其应用
US9498530B2 (en) 2002-12-24 2016-11-22 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same
SI1575517T1 (sl) 2002-12-24 2012-06-29 Rinat Neuroscience Corp Protitelesa proti ĺ˝iväśnemu rastnemu dejavniku in metode njihove uporabe
WO2004063331A2 (en) * 2003-01-03 2004-07-29 Gencia Corporation SiRNA MEDIATED POST-TRANSRIPTIONAL GENE SILENCING OF GENES INVOLVED IN ALOPECIA
ATE477337T1 (de) * 2003-01-16 2010-08-15 Univ Pennsylvania Zusammensetzungen und verfahren zur sirna-hemmung von icam-1
US7629323B2 (en) * 2003-01-21 2009-12-08 Northwestern University Manipulation of neuronal ion channels
US20040147027A1 (en) * 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
US20060178297A1 (en) * 2003-01-28 2006-08-10 Troy Carol M Systems and methods for silencing expression of a gene in a cell and uses thereof
US7994149B2 (en) 2003-02-03 2011-08-09 Medtronic, Inc. Method for treatment of Huntington's disease through intracranial delivery of sirna
US7732591B2 (en) 2003-11-25 2010-06-08 Medtronic, Inc. Compositions, devices and methods for treatment of huntington's disease through intracranial delivery of sirna
US20040248839A1 (en) * 2003-02-05 2004-12-09 University Of Massachusetts RNAi targeting of viruses
FR2850971B1 (fr) * 2003-02-10 2006-08-11 Aventis Pharma Sa Oligonucleotide antisens inhibant l'expression de la proteine ob-rgrp et procede de detection de composes modifiant l'interaction entre la famille de la proteine ob-rgrp et le recepteur de la leptine
US20070104688A1 (en) 2003-02-13 2007-05-10 City Of Hope Small interfering RNA mediated transcriptional gene silencing in mammalian cells
US20040162235A1 (en) * 2003-02-18 2004-08-19 Trubetskoy Vladimir S. Delivery of siRNA to cells using polyampholytes
ATE491444T1 (de) 2003-02-19 2011-01-15 Rinat Neuroscience Corp Verfahren zur behandlung von schmerzen durch verabreichung eines nervenwachstumsfaktor- antagonisten und eines nsaid und diese enthaltende zusammensetzung
WO2005017127A2 (en) * 2003-02-21 2005-02-24 The Penn State Research Foundation Rna interference compositions and methods
WO2004076664A2 (en) * 2003-02-21 2004-09-10 University Of South Florida Vectors for regulating gene expression
WO2004076629A2 (en) 2003-02-27 2004-09-10 Nucleonics Inc. METHODS AND CONSTRUCTS FOR EVALUATION OF RNAi TARGETS AND EFFECTOR MOLECULES
CN1780913A (zh) * 2003-02-27 2006-05-31 独立行政法人产业技术总合研究所 哺乳动物细胞中dsRNA诱导CpG序列甲基化
NZ542665A (en) * 2003-03-05 2008-05-30 Senesco Technologies Inc Use of antisense oligonucleotides or siRNA to suppress expression of eIF-5A1
EP1604022A2 (en) * 2003-03-06 2005-12-14 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-rna hybrids
EP2216407B1 (en) 2003-03-07 2016-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic compositions
JP2006521111A (ja) * 2003-03-12 2006-09-21 バスジーン セラピューティクス， インコーポレイテッド 血管形成及び腫瘍増殖阻害用ポリペプチド化合物及びその応用
EP2141234B1 (en) † 2003-03-21 2016-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Short Interfering RNA (siRNA) Analogues
EP1608733B1 (en) * 2003-04-02 2011-12-07 Dharmacon, Inc. Modified polynucleotides for use in rna interference
US20040198640A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-07 Dharmacon, Inc. Stabilized polynucleotides for use in RNA interference
ATE536408T1 (de) * 2003-04-02 2011-12-15 Dharmacon Inc Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz
CA2521464C (en) 2003-04-09 2013-02-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna conjugates
JP4789208B2 (ja) 2003-04-09 2011-10-12 バイオデリバリー サイエンシーズ インターナショナル インコーポレイティッド タンパク質発現に向けられた渦巻型組成物
US20070270360A1 (en) * 2003-04-15 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. Rna Interference Mediated Inhibition of Severe Acute Respiratory Syndrome (Sars) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
AU2004232964B2 (en) 2003-04-17 2011-09-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Protected monomers
EP2666858A1 (en) 2003-04-17 2013-11-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US8017762B2 (en) 2003-04-17 2011-09-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
US8796436B2 (en) 2003-04-17 2014-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
JP2006523464A (ja) * 2003-04-18 2006-10-19 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア アンジオポエチン１、２、及びそれらの受容体ＴＩＥ２のｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及びその方法
WO2005032595A2 (en) * 2003-04-23 2005-04-14 Georgetown University Methods and compositions for the inhibition of stat5 in prostate cancer cells
WO2004098526A2 (en) * 2003-05-05 2004-11-18 Johns Hopkins University Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein
EP1633784B1 (en) 2003-05-09 2011-07-13 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
JP2007502129A (ja) 2003-05-09 2007-02-08 ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション 短鎖干渉ｒｎａライブラリーならびに合成および使用の方法
AU2003241409A1 (en) * 2003-05-12 2005-01-21 Potomac Pharmaceuticals, Inc. Gene expression suppression agents
WO2004104199A2 (en) * 2003-05-15 2004-12-02 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-dna hybrids
JP2006525811A (ja) * 2003-05-16 2006-11-16 ロゼッタ インファーマティクス エルエルシー Ｒｎａ干渉の方法と組成物
JP4299299B2 (ja) * 2003-05-19 2009-07-22 株式会社ジーンケア研究所 癌細胞に対するアポトーシス誘導剤
JP4505749B2 (ja) * 2003-05-30 2010-07-21 日本新薬株式会社 Ｂｃｌ−２の発現抑制をするオリゴ二本鎖ＲＮＡとそれを含有する医薬組成物
JP4623426B2 (ja) * 2003-05-30 2011-02-02 日本新薬株式会社 オリゴ核酸担持複合体、当該複合体を含有する医薬組成物
ES2864206T3 (es) 2003-06-02 2021-10-13 Univ Massachusetts Métodos y composiciones para mejorar la eficacia y la especificidad del ARNi
US7750144B2 (en) * 2003-06-02 2010-07-06 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing
DK1633767T3 (en) * 2003-06-02 2019-03-25 Univ Massachusetts METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING
BRPI0410886A (pt) * 2003-06-03 2006-07-04 Isis Pharmaceuticals Inc composto de filamento duplo, composição farmacêutica, sal farmaceuticamente aceitável, métodos de modificação do ácido nucleico que codifica a survivina humana, de inibição da expressão da suvivina em células ou tecidos, e de tratamento de uma condição associada com a expressão ou superexpressão da suvivina, e, oligonucleotìdeo de rnai de filamento único
US20050019918A1 (en) * 2003-06-03 2005-01-27 Hidetoshi Sumimoto Treatment of cancer by inhibiting BRAF expression
US7595306B2 (en) * 2003-06-09 2009-09-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Method of treating neurodegenerative disease
US8575327B2 (en) 2003-06-12 2013-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
AU2004263830B2 (en) 2003-06-13 2008-12-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
EP1486564A1 (de) * 2003-06-13 2004-12-15 Ribopharma AG SiRNA mit erhöhter Stabilität in Serum
EP1644475A4 (en) * 2003-06-20 2009-06-03 Isis Pharmaceuticals Inc DOUBLE-STRAND COMPOSITIONS WITH A 3'-ENDO-MODIFIED STRING FOR USE IN GENE MODULATION
WO2005044976A2 (en) * 2003-06-20 2005-05-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for use in gene modulation
WO2005007623A2 (en) * 2003-07-03 2005-01-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibition of syk kinase expression
EP1649019A2 (en) * 2003-07-15 2006-04-26 California Institute Of Technology Improved inhibitor nucleic acids
US20050256071A1 (en) * 2003-07-15 2005-11-17 California Institute Of Technology Inhibitor nucleic acids
EP2567693B1 (en) * 2003-07-16 2015-10-21 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid encapsulated interfering RNA
WO2005010188A2 (en) * 2003-07-21 2005-02-03 Whitehead Institute For Biomedical Research Rnas able to modulate chromatin silencing
US7683036B2 (en) 2003-07-31 2010-03-23 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs
US7888497B2 (en) 2003-08-13 2011-02-15 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
WO2005019422A2 (en) * 2003-08-13 2005-03-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Silencing of tgf-beta receptor type ii expression by sirna
US7825235B2 (en) * 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
WO2005035759A2 (en) * 2003-08-20 2005-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1 (HIF1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050136437A1 (en) * 2003-08-25 2005-06-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nanoparticles for delivery of nucleic acids and stable double-stranded RNA
WO2005021749A1 (en) * 2003-08-28 2005-03-10 Novartis Ag Interfering rna duplex having blunt-ends and 3’-modifications
US8501705B2 (en) * 2003-09-11 2013-08-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and materials for treating autoimmune and/or complement mediated diseases and conditions
EP2821085B1 (en) * 2003-09-12 2020-04-29 University of Massachusetts Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders
US8680063B2 (en) 2003-09-12 2014-03-25 University Of Massachusetts RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders
US7425544B2 (en) 2003-09-18 2008-09-16 Eli Lilly And Company Modulation of eIF4E expression
JP2007505634A (ja) * 2003-09-22 2007-03-15 ロゼッタ インファーマティクス エルエルシー Ｒｎａ干渉を用いる合成致死スクリーニング
WO2005033310A1 (de) * 2003-10-01 2005-04-14 Grünenthal GmbH Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen
JP2007517498A (ja) * 2003-10-07 2007-07-05 アステラス製薬株式会社 骨形態形成タンパク質（ｂｍｐ）２ａ及びその使用
US20060218673A9 (en) 2003-10-09 2006-09-28 E.I. Du Pont De Nemours And Company Gene silencing
WO2005045032A2 (en) * 2003-10-20 2005-05-19 Sima Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
EP1675953A2 (en) * 2003-10-23 2006-07-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF RAS GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
EP1694838A2 (en) * 2003-10-23 2006-08-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GPRA AND AAA1 GENE EXPRESSION USING SHORT NUCLEIC ACID (siNA)
US7962316B2 (en) 2003-10-27 2011-06-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Method of designing siRNAs for gene silencing
US8227434B1 (en) 2003-11-04 2012-07-24 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. Materials and methods for treating oncological disorders
WO2005047504A1 (en) * 2003-11-07 2005-05-26 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Induction of cellular senescence by cdk4 disruption for tumor suppression and regression
US20070258993A1 (en) * 2003-11-12 2007-11-08 The Austin Research Institute Dna-Carrier Conjugate
US7807646B1 (en) * 2003-11-20 2010-10-05 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
US7763592B1 (en) * 2003-11-20 2010-07-27 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
JP2005168485A (ja) * 2003-11-20 2005-06-30 Tsutomu Suzuki ｓｉＲＮＡの設計方法
US20050208658A1 (en) * 2003-11-21 2005-09-22 The University Of Maryland RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression
US20100145038A1 (en) * 2003-11-24 2010-06-10 Merck & Co., Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
GB2424887B (en) 2003-11-26 2008-05-21 Univ Massachusetts Sequence-specific inhibition of small RNA function
JP2007513611A (ja) * 2003-11-26 2007-05-31 ザ クイーンズ ユニヴァーシティ オブ ベルファスト 癌治療
WO2005056021A1 (en) 2003-12-04 2005-06-23 University Of South Florida Polynucleotides for reducing respiratory syncytial virus gene expression
WO2005059135A2 (en) * 2003-12-12 2005-06-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Treatment of mammals by sirna delivery into mammalian nerve cells
JPWO2005068630A1 (ja) * 2003-12-16 2007-07-26 独立行政法人産業技術総合研究所 干渉用二重鎖ｒｎａ
US20060134787A1 (en) 2004-12-22 2006-06-22 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA
EP1711172A4 (en) * 2003-12-23 2008-07-16 Univ Pennsylvania COMPOSITIONS AND METHODS FOR COMBINATION THERAPY OF ILLNESSES
WO2005067971A1 (ja) * 2004-01-16 2005-07-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited 動脈硬化の予防・治療用医薬
WO2005073378A1 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Santaris Pharma A/S MODIFIED SHORT INTERFERING RNA (MODIFIED siRNA)
EP2330111A3 (en) 2004-01-30 2011-08-17 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases
WO2005078094A2 (en) * 2004-02-06 2005-08-25 Dharmacon, Inc. Stabilized rnas as transfection controls and silencing reagents
US20060019914A1 (en) 2004-02-11 2006-01-26 University Of Tennessee Research Foundation Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase DNAzymes
US20050273868A1 (en) * 2004-02-17 2005-12-08 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing RISC activity in vitro and in vivo
WO2005079533A2 (en) * 2004-02-17 2005-09-01 University Of Massachusetts Methods and compositions for mediating gene silencing
EP1566202A1 (en) * 2004-02-23 2005-08-24 Sahltech I Göteborg AB Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
US20070202134A1 (en) * 2004-02-23 2007-08-30 Kufe Donald W Muc1 Antagonist Enhancement of Death Receptor Ligand-Induced Apoptosis
EP1958964A3 (en) 2004-02-24 2009-01-07 The Government of the United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services RAB9A, RAB11A, and modulators thereof related to infectious disease
WO2006074418A2 (en) 2005-01-07 2006-07-13 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
US7691823B2 (en) * 2004-03-05 2010-04-06 University Of Massachusetts RIP140 regulation of glucose transport
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
US7947659B2 (en) 2004-03-12 2011-05-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA agents targeting VEGF
US20050202075A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-15 Pardridge William M. Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers
US20070265220A1 (en) * 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
EP1742958B1 (en) * 2004-03-15 2017-05-17 City of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna
US20050208090A1 (en) * 2004-03-18 2005-09-22 Medtronic, Inc. Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system
US7851452B2 (en) * 2004-03-22 2010-12-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of use of bcl-6-derived nucleotides to induce apoptosis
US20050272682A1 (en) * 2004-03-22 2005-12-08 Evers Bernard M SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy
US7872117B2 (en) * 2004-03-26 2011-01-18 Van Andel Research Institute c-met siRNA adenovirus vectors inhibit cancer cell growth, invasion and tumorigenicity
ES2707393T3 (es) * 2004-03-26 2019-04-03 Curis Inc Moduladores de interferencia de ARN de señalización de hedgehog y usos de los mismos
JP2005312428A (ja) * 2004-03-31 2005-11-10 Keio Gijuku Ｓｋｐ−２発現抑制を利用した癌の治療
JPWO2005095647A1 (ja) * 2004-03-31 2008-02-21 タカラバイオ株式会社 ｓｉＲＮＡのスクリーニング方法
KR101147147B1 (ko) * 2004-04-01 2012-05-25 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Ｒｎａ 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드
WO2005097817A2 (en) 2004-04-05 2005-10-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification
EP2495324B1 (en) 2004-04-09 2015-03-04 Genecare Research Institute Co., Ltd Cancer cell-specific apoptosis-inducing agents that target chromosome stabilization-associated genes
US20060078902A1 (en) * 2004-04-15 2006-04-13 Michaeline Bunting Method and compositions for RNA interference
MXPA06012076A (es) * 2004-04-20 2007-01-25 Nastech Pharm Co Metodos y composiciones para mejorar el suministro de arn bicatenario o un acido nucleico hibrido bicatenario para regular la expresion genetica en celulas de mamifero.
AU2005238034A1 (en) 2004-04-23 2005-11-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Inhibition of hairless protein mRNA
EP1768998A2 (en) 2004-04-27 2007-04-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
AU2005247319B2 (en) 2004-04-28 2011-12-01 Molecules For Health, Inc. Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders
EP3034510A1 (en) 2004-04-30 2016-06-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotides comprising a c5-modified pyrimidine
US20060040882A1 (en) * 2004-05-04 2006-02-23 Lishan Chen Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells
US20060030003A1 (en) * 2004-05-12 2006-02-09 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
US7605250B2 (en) 2004-05-12 2009-10-20 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D
US20110117088A1 (en) * 2004-05-12 2011-05-19 Simon Michael R Composition and method for introduction of rna interference sequences into targeted cells and tissues
US20050260214A1 (en) * 2004-05-12 2005-11-24 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
CA2566519C (en) 2004-05-14 2020-04-21 Rosetta Genomics Ltd. Micrornas and uses thereof
US7687616B1 (en) 2004-05-14 2010-03-30 Rosetta Genomics Ltd Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof
WO2005110464A2 (en) * 2004-05-14 2005-11-24 Oregon Health & Science University Irx5 inhibition as treatment for hyperproliferative disorders
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
JP2008500364A (ja) * 2004-05-25 2008-01-10 キメラコア， インコーポレイテッド 自己集合性ナノ粒子薬物送達システム
US7795419B2 (en) 2004-05-26 2010-09-14 Rosetta Genomics Ltd. Viral and viral associated miRNAs and uses thereof
EP2471923B1 (en) 2004-05-28 2014-08-20 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving microRNA
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
EP1602926A1 (en) 2004-06-04 2005-12-07 University of Geneva Novel means and methods for the treatment of hearing loss and phantom hearing
AU2005252273B2 (en) * 2004-06-07 2011-04-28 Arbutus Biopharma Corporation Lipid encapsulated interfering RNA
ATE537263T1 (de) * 2004-06-07 2011-12-15 Protiva Biotherapeutics Inc Kationische lipide und verwendungsverfahren
US20060008907A1 (en) * 2004-06-09 2006-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Control of gene expression via light activated RNA interference
WO2006085942A2 (en) * 2004-06-17 2006-08-17 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for regulating gene transcription
US20060051815A1 (en) * 2004-06-25 2006-03-09 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating smooth muscle cell disorders
CA2572151A1 (en) 2004-06-30 2006-08-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a non-phosphate backbone linkage
CA2572439A1 (en) * 2004-07-02 2006-01-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Immunostimulatory sirna molecules and uses therefor
WO2006038208A2 (en) 2004-07-12 2006-04-13 Medical Research Fund Of Tel Aviv Sourasky Medical Center Agents capable of downregulating an msf-a - dependent hif-1α and use thereof in cancer treatment
WO2006112869A2 (en) * 2004-07-19 2006-10-26 Baylor College Of Medicine Modulation of cytokine signaling regulators and applications for immunotherapy
CA2573671A1 (en) * 2004-07-21 2006-02-23 Medtronic, Inc. Methods for reducing or preventing localized fibrosis using sirna
JP2008507341A (ja) * 2004-07-21 2008-03-13 メドトロニック，インコーポレイティド 限局性繊維症を低減するための医療装置及び方法
WO2006093526A2 (en) 2004-07-21 2006-09-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
WO2007001324A2 (en) 2004-07-23 2007-01-04 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and materials for determining pain sensitivity and predicting and treating related disorders
EP1913011B1 (en) 2004-08-04 2016-11-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase
WO2006020557A2 (en) * 2004-08-10 2006-02-23 Immusol, Inc. Methods of using or identifying agents that inhibit cancer growth
EP2990410A1 (en) 2004-08-10 2016-03-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
US20060063181A1 (en) * 2004-08-13 2006-03-23 Green Pamela J Method for identification and quantification of short or small RNA molecules
MX2007002043A (es) 2004-08-16 2007-10-11 Quark Biotech Inc Usos terapeuticos de los inhibidores del rtp801.
AU2005276245C1 (en) 2004-08-23 2015-02-26 Sylentis S.A.U. Treatment of eye disorders characterized by an elevated introacular pressure by siRNAs
US20070021366A1 (en) * 2004-11-19 2007-01-25 Srivastava Satish K Structural-based inhibitors of the glutathione binding site in aldose reductase, methods of screening therefor and methods of use
EP1789551A2 (en) * 2004-08-31 2007-05-30 Sylentis S.A.U. Methods and compositions to inhibit p2x7 receptor expression
WO2006026738A2 (en) 2004-08-31 2006-03-09 Qiagen North American Holdings, Inc. Methods and compositions for rna amplification and detection using an rna-dependent rna-polymerase
US7884086B2 (en) * 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
WO2006031901A2 (en) 2004-09-10 2006-03-23 Somagenics, Inc. SMALL INTERFERING RNAs THAT EFFICIENTLY INHIBIT VIRAL GENE EXPRESSION AND METHODS OF USE THEREOF
FI20041204A0 (fi) 2004-09-16 2004-09-16 Riikka Lund Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi
WO2006033965A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nadph oxidase inhibition pharmacotherapies for obstructive sleep apnea syndrome and its associated morbidities
NZ583290A (en) 2004-09-24 2011-05-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai modulation of apob and uses thereof
CA2580126C (en) 2004-09-28 2014-08-26 Quark Biotech, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases
WO2006039343A2 (en) * 2004-09-30 2006-04-13 Centocor, Inc. Emmprin antagonists and uses thereof
CA2584960A1 (en) 2004-10-21 2006-05-04 Charles L. Niblett Methods and materials for conferring resistance to pests and pathogens of plants
US20060110440A1 (en) * 2004-10-22 2006-05-25 Kiminobu Sugaya Method and system for biasing cellular development
US7790878B2 (en) * 2004-10-22 2010-09-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
US20060089324A1 (en) * 2004-10-22 2006-04-27 Sailen Barik RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
WO2006043014A1 (en) * 2004-10-22 2006-04-27 Neuregenix Limited Neuron regeneration
EP1812597A2 (en) 2004-10-27 2007-08-01 Vanderbilt University Mammalian genes involved in infection
CN102352355A (zh) * 2004-10-27 2012-02-15 先灵公司 抑制Nav1.8的短干扰核酸组合物和方法
AU2005302554A1 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 Idexx Laboratories, Inc. Compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
US20060094676A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Ronit Lahav Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity
US9492400B2 (en) 2004-11-04 2016-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
ES2503765T3 (es) 2004-11-12 2014-10-07 Asuragen, Inc. Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN
US20060105052A1 (en) * 2004-11-15 2006-05-18 Acar Havva Y Cationic nanoparticle having an inorganic core
JP2008520583A (ja) * 2004-11-15 2008-06-19 マウント シナイ スクール オブ メディスン オブ ニューヨーク ユニバーシティー Ｗｎｔ自己分泌シグナル伝達を改変するための組成物および方法
EP2199298A1 (en) * 2004-11-17 2010-06-23 Protiva Biotherapeutics Inc. Sirna silencing of Apolipoprotein B
CA2587854C (en) * 2004-11-18 2014-01-21 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Multicistronic sirna constructs to inhibit tumors
EP1816194A4 (en) * 2004-11-19 2009-02-18 Genecare Res Inst Co Ltd CANCER-SPECIFIC PROLIFERATION INHIBITORS
US7923206B2 (en) * 2004-11-22 2011-04-12 Dharmacon, Inc. Method of determining a cellular response to a biological agent
US7923207B2 (en) 2004-11-22 2011-04-12 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing pools
US7935811B2 (en) 2004-11-22 2011-05-03 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing compositions
JP2008521401A (ja) * 2004-11-24 2008-06-26 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子のＲＮＡｉ調節およびその使用方法
JP2008521909A (ja) * 2004-12-02 2008-06-26 ビー−ブリッジ インターナショナル，インコーポレーテッド 短鎖干渉ｒｎａ、アンチセンスポリヌクレオチド、および他のハイブリッド形成化ポリヌクレオチドの設計方法
US20060165667A1 (en) * 2004-12-03 2006-07-27 Case Western Reserve University Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization
CA2590768A1 (en) * 2004-12-14 2006-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of mll-af4 and uses thereof
KR100967868B1 (ko) 2004-12-17 2010-07-05 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 박테리아 매개 유전자 침묵을 위한 조성물 및 이것을이용하는 방법
GB0427916D0 (en) * 2004-12-21 2005-01-19 Astrazeneca Ab Method
TWI386225B (zh) 2004-12-23 2013-02-21 Alcon Inc 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子（ＣＴＧＦ）ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）抑制技術
US20060142228A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 Ambion, Inc. Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference
EP1830888B1 (en) 2004-12-27 2015-08-05 Silence Therapeutics GmbH Lipid complexes coated with peg and their use
BRPI0519690A2 (pt) * 2004-12-30 2009-03-03 Todd M Hauser composiÇÕes e mÉtodos para modular a expressço de genes usando oligonucleotÍdeos autoprotegidos
AU2005322960A1 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 The Johns Hopkins University RNA interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by DNA and transfected dendritic cell vaccines
EP2230304B1 (en) * 2005-01-07 2012-03-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc. RNAI modulation of RSV and therapeutic uses thereof
WO2006081192A2 (en) * 2005-01-24 2006-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of the nogo-l or nogo-r gene and uses thereof
JP2008528004A (ja) * 2005-01-26 2008-07-31 ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー 突然変異癌タンパク質抗原およびカルレティキュリンをコードするプラスミドを用いる抗癌ｄｎａワクチン
TW200639253A (en) * 2005-02-01 2006-11-16 Alcon Inc RNAi-mediated inhibition of ocular targets
US20080070857A1 (en) * 2005-02-14 2008-03-20 Jun Nishihira Pharmaceutical Agents for Preventing Metastasis of Cancer
CN103920142A (zh) 2005-02-14 2014-07-16 爱荷华大学研究基金会 治疗和诊断年龄相关性黄斑变性的方法和试剂
US8859749B2 (en) 2005-03-08 2014-10-14 Qiagen Gmbh Modified short interfering RNA
US7947660B2 (en) 2005-03-11 2011-05-24 Alcon, Inc. RNAi-mediated inhibition of frizzled related protein-1 for treatment of glaucoma
WO2006130201A1 (en) * 2005-03-14 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Antigene oligomers inhibit transcription
GB0505081D0 (en) * 2005-03-14 2005-04-20 Genomica Sau Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology
JP4585342B2 (ja) * 2005-03-18 2010-11-24 株式会社資生堂 不全角化を抑制する物質のスクリーニング方法、同方法によりスクリーニングされた物質及び不全角化を抑制する方法
EP1877556B1 (en) * 2005-03-25 2011-09-14 Medtronic, Inc. Use of anti-tnf or anti-il1 rnai to suppress pro- inflammatory cytokine actions locally to treat pain
CA2603730A1 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US20090203055A1 (en) * 2005-04-18 2009-08-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for RNA interference with sialidase expression and uses thereof
EP1885854B1 (en) 2005-05-06 2012-10-17 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
EP2298829B1 (en) * 2005-05-31 2017-09-20 École Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
US20070048293A1 (en) * 2005-05-31 2007-03-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Manipulation of PTEN in T cells as a strategy to modulate immune responses
DK1888749T3 (en) 2005-06-01 2015-01-05 Polyplus Transfection Oligonucleotides for RNA interference and their biological applications
US20100286228A1 (en) * 2005-06-01 2010-11-11 Duke University Method of inhibiting intimal hyperplasia
CN100445381C (zh) * 2005-06-10 2008-12-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 带有单链polyA尾巴的siRNA分子制备方法和应用
WO2006131925A2 (en) * 2005-06-10 2006-12-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases
WO2006138145A1 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
US7838503B2 (en) * 2005-06-15 2010-11-23 Children's Medical Center Corporation Methods for extending the replicative lifespan of cells
FI20050640A0 (fi) * 2005-06-16 2005-06-16 Faron Pharmaceuticals Oy Yhdisteitä amiinioksidaasista riippuvien sairauksien tai häiriöiden hoitoon tai estoon
CN101501055B (zh) * 2005-06-23 2016-05-11 贝勒医学院 负性免疫调节因子的调节和免疫疗法应用
CA2608964A1 (en) * 2005-06-27 2007-01-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of hif-1 and therapeutic uses thereof
US9133517B2 (en) 2005-06-28 2015-09-15 Medtronics, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
AU2006267841B2 (en) * 2005-07-07 2011-12-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Nucleic acid agents for downregulating H19, and methods of using same
WO2007011702A2 (en) 2005-07-15 2007-01-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of egfr inhibitors to prevent or treat obesity
CN101228268A (zh) * 2005-07-25 2008-07-23 德累斯顿工业大学 Rna扩增和/或rna标记用的rna依赖的rna聚合酶，方法及试剂盒
WO2007014370A2 (en) * 2005-07-28 2007-02-01 University Of Delaware Small regulatory rnas and methods of use
US7919583B2 (en) 2005-08-08 2011-04-05 Discovery Genomics, Inc. Integration-site directed vector systems
US20070213257A1 (en) * 2005-08-12 2007-09-13 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for complexes of nucleic acids and peptides
WO2007022506A2 (en) * 2005-08-18 2007-02-22 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating neurological disease
US20070054873A1 (en) * 2005-08-26 2007-03-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation
WO2007028065A2 (en) 2005-08-30 2007-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
WO2007030167A1 (en) * 2005-09-02 2007-03-15 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules
US20090221673A1 (en) * 2005-09-13 2009-09-03 Rigby William F C Compositions and Methods for Regulating RNA Translation via CD154 CA-Dinucleotide Repeat
EP1931789B1 (en) 2005-09-20 2016-05-04 BASF Plant Science GmbH Methods for controlling gene expression using ta-siran
FR2890859B1 (fr) 2005-09-21 2012-12-21 Oreal Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase
WO2007041213A2 (en) * 2005-09-30 2007-04-12 St. Jude Children's Research Hospital Methods for regulation of p53 translation and function
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
US8080534B2 (en) 2005-10-14 2011-12-20 Phigenix, Inc Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer
GB0521351D0 (en) * 2005-10-20 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of TRPV expression levels
WO2007048046A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Sirna silencing of filovirus gene expression
GB0521716D0 (en) * 2005-10-25 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases
JP4952944B2 (ja) * 2005-10-27 2012-06-13 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 Ｓｉｎｇａｒの発現または機能の抑制による神経軸索の形成・伸長と神経再生への応用
CN101365801B (zh) 2005-10-28 2013-03-27 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制亨廷顿基因表达的组合物和方法
US8101741B2 (en) * 2005-11-02 2012-01-24 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
AU2006311725B2 (en) * 2005-11-04 2011-11-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of NAV1.8 gene
CA2628477A1 (en) * 2005-11-07 2007-05-10 Bc Cancer Agency Inhibition of autophagy genes in cancer chemotherapy
CA2626690A1 (en) * 2005-11-09 2007-05-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor v leiden mutant gene
EP2641970B1 (en) * 2005-11-17 2014-12-24 Board of Regents, The University of Texas System Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal DNA
US8603991B2 (en) 2005-11-18 2013-12-10 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US8916530B2 (en) 2005-11-18 2014-12-23 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US20080125384A1 (en) * 2005-11-21 2008-05-29 Shuewi Yang Simultaneous silencing and restoration of gene function
JP4901753B2 (ja) * 2005-11-24 2012-03-21 学校法人自治医科大学 プロヒビチン２（ｐｈｂ２）のミトコンドリア機能
WO2007070682A2 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
MX2008008302A (es) * 2005-12-22 2009-01-21 Exegenics Inc Composiciones y metodos para regular el sistema de complemento.
AR057252A1 (es) * 2005-12-27 2007-11-21 Alcon Mfg Ltd Inhibicion de rho quinasa mediada por arni para el tratamiento de trastornos oculares
WO2007087113A2 (en) * 2005-12-28 2007-08-02 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets
US8673873B1 (en) * 2005-12-28 2014-03-18 Alcon Research, Ltd. RNAi-mediated inhibition of phosphodiesterase type 4 for treatment of cAMP-related ocular disorders
EP1973574B1 (en) * 2005-12-30 2014-04-02 Institut Gustave Roussy Use of inhibitors of scinderin and/or of ephrin-a1 for treating tumors
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
CA2637252A1 (en) * 2006-01-17 2007-07-26 Biolex Therapeutics, Inc. Plants and plant cells having inhibited expression of .alpha.1,3-fucosyltransferase and .beta.1,2-xylosyltransferase
US20120208824A1 (en) 2006-01-20 2012-08-16 Cell Signaling Technology, Inc. ROS Kinase in Lung Cancer
EP3360965A1 (en) 2006-01-20 2018-08-15 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma
DOP2007000015A (es) 2006-01-20 2007-08-31 Quark Biotech Inc Usos terapéuticos de inhibidores de rtp801
US7825099B2 (en) 2006-01-20 2010-11-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes
WO2007087451A2 (en) * 2006-01-25 2007-08-02 University Of Massachusetts Compositions and methods for enhancing discriminatory rna interference
EP1984382B1 (en) * 2006-01-27 2012-08-15 Santaris Pharma A/S Lna modified phosphorothiolated oligonucleotides
US8229398B2 (en) * 2006-01-30 2012-07-24 Qualcomm Incorporated GSM authentication in a CDMA network
WO2007091269A2 (en) * 2006-02-08 2007-08-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. NOVEL TANDEM siRNAS
US7910566B2 (en) 2006-03-09 2011-03-22 Quark Pharmaceuticals Inc. Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA
FI20060246A0 (fi) 2006-03-16 2006-03-16 Jukka Westermarck Uusi kasvua stimuloiva proteiini ja sen käyttö
WO2007109609A2 (en) * 2006-03-17 2007-09-27 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method for inhibiting angiogenesis
CA2644347C (en) 2006-03-23 2017-05-30 Santaris Pharma A/S Small internally segmented interfering rna
FR2898908A1 (fr) 2006-03-24 2007-09-28 Agronomique Inst Nat Rech Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence
MX2008012173A (es) * 2006-03-24 2008-10-03 Novartis Ag Composiciones de arnds y métodos para el tratamiento de infecciones por el virus de papiloma humano (hpv).
WO2007115047A2 (en) * 2006-03-29 2007-10-11 Senesco Technologies, Inc. Inhibition of hiv replication and expression of p24 with eif-5a
KR101362681B1 (ko) 2006-03-31 2014-02-13 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｅｇ5 유전자의 발현을 억제하는 조성물 및 억제 방법
JP2009534309A (ja) 2006-03-31 2009-09-24 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 治療剤の標的化送達のためのシステム
EP2007891A2 (en) * 2006-04-06 2008-12-31 DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum Method to inhibit the propagation of an undesired cell population
EP2010226B1 (en) 2006-04-07 2014-01-15 The Research Foundation of State University of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
ATE460922T1 (de) * 2006-04-07 2010-04-15 Chimeros Inc Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von b-zellen-malignomen
US9044461B2 (en) 2006-04-07 2015-06-02 The Research Foundation Of State University Of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
WO2007120883A2 (en) * 2006-04-12 2007-10-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to hepcidin
US20100055116A1 (en) * 2006-04-13 2010-03-04 Liou Hsiou-Chi Methods and Compositions for Targeting c-Rel
SI2450437T1 (sl) 2006-04-14 2017-12-29 Cell Signaling Technology Inc. Okvarjenost genov in mutantna ALK kinaza v človeških solidnih tumorjih
US8969295B2 (en) * 2006-04-14 2015-03-03 Massachusetts Institute Of Technology Identifying and modulating molecular pathways that mediate nervous system plasticity
EP2013222B1 (en) * 2006-04-28 2013-02-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the jc virus
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
CN103614375A (zh) 2006-05-11 2014-03-05 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法
JP5630998B2 (ja) 2006-05-15 2014-11-26 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 機能的粒子のためのポリマー
US20090130212A1 (en) * 2006-05-15 2009-05-21 Physical Pharmaceutica, Llc Composition and improved method for preparation of small particles
US20070269892A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-22 Nastech Pharmaceutical Company Inc. FORMULATIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY dsRNA
MX2008014437A (es) * 2006-05-19 2008-11-27 Scripps Research Inst Tratamiento de desplegamiento de proteinas.
BRPI0712034A2 (pt) * 2006-05-19 2012-01-10 Alnylam Pharmaceuticals Inc modulação de rnai de aha e usos terapêuticos do mesmo
US7888498B2 (en) * 2006-05-22 2011-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of IKK-B gene
US9273356B2 (en) 2006-05-24 2016-03-01 Medtronic, Inc. Methods and kits for linking polymorphic sequences to expanded repeat mutations
US20070275923A1 (en) * 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
US8598333B2 (en) * 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
GB0610542D0 (en) * 2006-05-26 2006-07-05 Medical Res Council Screening method
US7915399B2 (en) * 2006-06-09 2011-03-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
EP2026843A4 (en) 2006-06-09 2011-06-22 Quark Pharmaceuticals Inc THERAPEUTIC USES OF RTP801L INHIBITORS
ES2390499T3 (es) * 2006-06-12 2012-11-13 Opko Pharmaceuticals, Llc Composiciones y métodos para la inhibición de la angiogénesis por sirna
US9200275B2 (en) * 2006-06-14 2015-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods and compositions for regulating cell cycle progression
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
US8124752B2 (en) * 2006-07-10 2012-02-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the MYC gene
GB0613753D0 (en) 2006-07-11 2006-08-23 Norwegian Radium Hospital Res Method
ATE551350T1 (de) 2006-07-13 2012-04-15 Univ Iowa Res Found Verfahren und reagenzien zur behandlung und diagnose von gefässerkrankungen und altersbedingter makuladegeneration
JP4756271B2 (ja) * 2006-07-18 2011-08-24 独立行政法人産業技術総合研究所 ガン細胞の老化、アポトーシス誘導剤
EP2546337A1 (en) * 2006-07-21 2013-01-16 Silence Therapeutics AG Means for inhibiting the expression of protein kinase 3
US20080039415A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Gregory Robert Stewart Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders
WO2008024844A2 (en) * 2006-08-22 2008-02-28 The Johns Hopkins University Anticancer combination therapies
DE102006039479A1 (de) 2006-08-23 2008-03-06 Febit Biotech Gmbh Programmierbare Oligonukleotidsynthese
US7872118B2 (en) * 2006-09-08 2011-01-18 Opko Ophthalmics, Llc siRNA and methods of manufacture
AU2007299748A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. miR-15, miR-26, miR -31,miR -145, miR-147, miR-188, miR-215, miR-216 miR-331, mmu-miR-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2008036741A2 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
AU2007299629C1 (en) 2006-09-21 2012-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the HAMP gene
WO2008036841A2 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Dharmacon, Inc. Tripartite oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference
US20110150897A1 (en) * 2006-10-11 2011-06-23 Meyer Thomas F Influenza targets
WO2008063760A2 (en) * 2006-10-18 2008-05-29 The University Of Texas M.D. Anderson Cancer Center Methods for treating cancer targeting transglutaminase
JP2010507387A (ja) 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
WO2008052774A2 (en) 2006-10-31 2008-05-08 Noxxon Pharma Ag Methods for detection of a single- or double-stranded nucleic acid molecule
CA2667971C (en) 2006-11-01 2017-04-18 Gary Weisinger Adipocyte-specific constructs and methods for inhibiting platelet-type 12 lipoxygenase expression
US9375440B2 (en) 2006-11-03 2016-06-28 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US8324367B2 (en) 2006-11-03 2012-12-04 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US8252526B2 (en) * 2006-11-09 2012-08-28 Gradalis, Inc. ShRNA molecules and methods of use thereof
US8906874B2 (en) 2006-11-09 2014-12-09 Gradalis, Inc. Bi-functional shRNA targeting Stathmin 1 and uses thereof
US8758998B2 (en) 2006-11-09 2014-06-24 Gradalis, Inc. Construction of bifunctional short hairpin RNA
US7819842B2 (en) 2006-11-21 2010-10-26 Medtronic, Inc. Chronically implantable guide tube for repeated intermittent delivery of materials or fluids to targeted tissue sites
US8034921B2 (en) * 2006-11-21 2011-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof
US7988668B2 (en) 2006-11-21 2011-08-02 Medtronic, Inc. Microsyringe for pre-packaged delivery of pharmaceuticals
WO2008062909A1 (fr) * 2006-11-22 2008-05-29 The University Of Tokyo Support d'arnsi sensible à l'environnement utilisant une micelle polymérique à pont disulfure
EP2101813B1 (en) 2006-11-27 2014-04-02 Patrys Limited Novel glycosylated peptide target in neoplastic cells
JP5391073B2 (ja) 2006-11-27 2014-01-15 ディアデクサス インコーポレーテッド Ｏｖｒ１１０抗体組成物および使用方法
WO2008067373A2 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 Alcon Research, Ltd. RNAi-MEDIATED INHIBITION OF AQUAPORIN 1 FOR TREATMENT OF IOP-RELATED CONDITIONS
WO2008067560A2 (en) * 2006-11-30 2008-06-05 University Of Southern California Compositions and methods of sphingosine kinase inhibitors for use thereof in cancer therapy
CN101675165A (zh) * 2006-12-08 2010-03-17 奥斯瑞根公司 Let-7微小rna的功能和靶标
CA2671294A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US20100280094A1 (en) * 2006-12-14 2010-11-04 Novartis Ag Compositions and methods to treat muscular & cardiovascular disorders
US20090175827A1 (en) * 2006-12-29 2009-07-09 Byrom Mike W miR-16 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
US7754698B2 (en) * 2007-01-09 2010-07-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of FR-alpha expression
US9896511B2 (en) 2007-01-10 2018-02-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies
CA2925983A1 (en) 2007-01-16 2008-07-24 The University Of Queensland Method of inducing an immune response
US20080171906A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-17 Everaerts Frank J L Tissue performance via hydrolysis and cross-linking
US20090074785A1 (en) * 2007-01-16 2009-03-19 Smith Jeffrey W Compositions and methods for treatment of colorectal cancer
ATE548454T1 (de) * 2007-01-16 2012-03-15 Yissum Res Dev Co Nukleinsäurewirkstoffe zur stilllegung von h19 zwecks behandlung rheumatoider arthritis
WO2008087558A2 (en) * 2007-01-17 2008-07-24 Institut De Recherches Cliniques De Montreal Nucleoside and nucleotide analogues with quaternary carbon centers and methods of use
CA2676143A1 (en) 2007-01-26 2008-07-31 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Modification of exosomal components for use as a vaccine
US20100196403A1 (en) * 2007-01-29 2010-08-05 Jacob Hochman Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance
WO2008094860A2 (en) * 2007-01-30 2008-08-07 Allergan, Inc. Treating ocular diseases using peroxisome proliferator-activated receptor delta antagonists
CA2691066C (en) 2007-02-09 2018-07-31 Northwestern University Particles for detecting intracellular targets
WO2008098165A2 (en) 2007-02-09 2008-08-14 Massachusetts Institute Of Technology Oscillating cell culture bioreactor
DE102007008596B4 (de) * 2007-02-15 2010-09-02 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von PNA und siRNA, Verfahren zu deren zellspezifischen Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
EP2115141A4 (en) 2007-02-20 2010-08-04 Monsanto Technology Llc INVERTEBRA MICRO-RNA
WO2008106102A2 (en) 2007-02-26 2008-09-04 Quark Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of rtp801 and their use in disease treatment
US20100292301A1 (en) * 2007-02-28 2010-11-18 Elena Feinstein Novel sirna structures
US9018163B2 (en) * 2007-03-02 2015-04-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modulating PDX-1 with PCIF1, methods and uses thereof
WO2008109357A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof
CA2679339A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting wnt gene expression and uses thereof
US9085638B2 (en) 2007-03-07 2015-07-21 The Johns Hopkins University DNA vaccine enhancement with MHC class II activators
US20080260765A1 (en) * 2007-03-15 2008-10-23 Johns Hopkins University HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof
US7812002B2 (en) 2007-03-21 2010-10-12 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer
JP5759673B2 (ja) 2007-03-21 2015-08-05 ブルックヘブン サイエンス アソシエイツ，エルエルシー 組み合わされたヘアピン−アンチセンス組成物および発現を調節するための方法
PE20090064A1 (es) * 2007-03-26 2009-03-02 Novartis Ag Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende
EP2905336A1 (en) 2007-03-29 2015-08-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124632A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Amphiphilic compound assisted nanoparticles for targeted delivery
CA2683063A1 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
JP5258874B2 (ja) 2007-04-10 2013-08-07 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｒｎａ干渉タグ
JP5744513B2 (ja) * 2007-04-17 2015-07-08 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 肺送達のための核酸微小粒子
US8877917B2 (en) * 2007-04-23 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
WO2008143774A2 (en) * 2007-05-01 2008-11-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy
WO2008137115A1 (en) 2007-05-03 2008-11-13 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
JP5296328B2 (ja) * 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
KR20100029079A (ko) * 2007-05-15 2010-03-15 헬리콘 테라퓨틱스 인코퍼레이티드 Ｇｐｒ12의 저해로 인지 질환을 치료하는 방법
US20090053140A1 (en) * 2007-05-15 2009-02-26 Roderick Euan Milne Scott METHODS OF IDENTIFYING GENES INVOLVED IN MEMORY FORMATION USING SMALL INTERFERING RNA(siRNA)
US20090131354A1 (en) * 2007-05-22 2009-05-21 Bader Andreas G miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
US8314227B2 (en) 2007-05-22 2012-11-20 Marina Biotech, Inc. Hydroxymethyl substituted RNA oligonucleotides and RNA complexes
AU2008259907B2 (en) 2007-05-30 2014-12-04 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
CN101820757A (zh) 2007-06-01 2010-09-01 普林斯顿大学托管委员会 通过调节宿主细胞代谢途径治疗病毒感染
EP2172547B1 (en) * 2007-06-11 2016-01-06 Takara Bio Inc. Method for expression of specific gene
US20100273854A1 (en) * 2007-06-15 2010-10-28 Hagar Kalinski Compositions and methods for inhibiting nadph oxidase expression
AR066984A1 (es) * 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
ES2474176T3 (es) 2007-06-27 2014-07-08 Quark Pharmaceuticals, Inc. Composiciones y métodos para inhibir la expresión de genes pro-apopt�ticos
EP3895737A1 (en) * 2007-06-29 2021-10-20 Stelic Institute Of Regenerative Medicine, Stelic Institute & Co. Method of fixing and expressing physiologically active substance
US20100184823A1 (en) * 2007-07-05 2010-07-22 Mark Aron Labow dsRNA For Treating Viral Infection
CN101821407B (zh) 2007-07-10 2013-09-18 纽瑞姆制药（1991）有限公司 神经退行性疾病中的cd44剪接变体
US8828960B2 (en) * 2007-07-17 2014-09-09 Idexx Laboratories, Inc. Amino acid vitamin ester compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
JP2009033986A (ja) * 2007-07-31 2009-02-19 Sumitomo Chemical Co Ltd ＲＮＡ干渉による遺伝子発現抑制のためのターゲット遺伝子としてのｃａｒ遺伝子の使用
US9526707B2 (en) 2007-08-13 2016-12-27 Howard L. Elford Methods for treating or preventing neuroinflammation or autoimmune diseases
US8501929B2 (en) * 2007-08-17 2013-08-06 Biochrom Pharma Inc. PTHrP, its isoforms and antagonist thereto in the diagnosis and treatment of disease
US9328345B2 (en) 2007-08-27 2016-05-03 1 Globe Health Institute Llc Compositions of asymmetric interfering RNA and uses thereof
NZ584306A (en) * 2007-08-30 2012-10-26 Paladin Labs Inc Antigenic compositions and use of same in the targeted delivery of nucleic acids
WO2009032364A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-12 Ghc Research Development Corporation Activation of nuclear factor-kappa b
WO2009033027A2 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Medtronic, Inc. Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain
WO2009036332A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Asuragen, Inc. Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof
JP5049713B2 (ja) * 2007-09-14 2012-10-17 株式会社コナミデジタルエンタテインメント ゲームシステム並びにこれを構成するゲーム装置及び課題報知装置
US8003621B2 (en) * 2007-09-14 2011-08-23 Nitto Denko Corporation Drug carriers
EP2548962B1 (en) 2007-09-19 2016-01-13 Applied Biosystems, LLC Sirna sequence-independent modification formats for reducing off-target phenotypic effects in rnai, and stabilized forms thereof
WO2009042625A1 (en) * 2007-09-25 2009-04-02 Idexx Laboratories, Inc. Pharmaceutical compositions for administering oligonucleotides
EP2644594B1 (en) 2007-09-28 2017-08-23 Pfizer Inc Cancer Cell Targeting Using Nanoparticles
US20120082659A1 (en) * 2007-10-02 2012-04-05 Hartmut Land Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations
CN103898110A (zh) * 2007-10-03 2014-07-02 夸克制药公司 新siRNA结构
EP2205746A4 (en) * 2007-10-04 2010-12-22 Univ Texas MODULATION OF GENE EXPRESSION WITH AGRNA AND GAPS WITH ANTISENSE TRANSCRIPTS AS A TARGET
AU2008314647B2 (en) 2007-10-12 2013-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
ES2576650T3 (es) 2007-10-18 2016-07-08 Cell Signaling Technology, Inc. Translocación y ROS quinasa mutante en el carcinoma pulmonar no microcítico humano
US8097712B2 (en) * 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
US20100098664A1 (en) * 2007-11-28 2010-04-22 Mathieu Jean-Francois Desclaux Lentiviral vectors allowing RNAi mediated inhibition of GFAP and vimentin expression
EP2222344A4 (en) * 2007-11-30 2012-11-07 Baylor College Medicine DENDRITIC CELL VACCINE COMPOSITIONS AND USES THEREOF
WO2009070805A2 (en) 2007-12-01 2009-06-04 Asuragen, Inc. Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2010070380A2 (en) 2007-12-03 2010-06-24 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health Of Human Services, National Institutes Of Health Doc1 compositions and methods for treating cancer
CA3043911A1 (en) 2007-12-04 2009-07-02 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
CA2708171C (en) * 2007-12-04 2018-02-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Folate conjugates
AU2008335202A1 (en) 2007-12-10 2009-06-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of Factor VII gene
US20110105584A1 (en) * 2007-12-12 2011-05-05 Elena Feinstein Rtp80il sirna compounds and methods of use thereof
US8614311B2 (en) 2007-12-12 2013-12-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof
US20090238772A1 (en) 2007-12-13 2009-09-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of rsv infection
US20090176729A1 (en) * 2007-12-14 2009-07-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method of treating neurodegenerative disease
US7845686B2 (en) * 2007-12-17 2010-12-07 S & B Technical Products, Inc. Restrained pipe joining system for plastic pipe
KR100949791B1 (ko) * 2007-12-18 2010-03-30 이동기 오프-타겟 효과를 최소화하고 ＲＮＡｉ 기구를 포화시키지않는 신규한 ｓｉＲＮＡ 구조 및 그 용도
US20090192114A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-30 Dmitriy Ovcharenko miR-10 Regulated Genes and Pathways as Targets for Therapeutic Intervention
WO2009090639A2 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Quark Pharmaceuticals, Inc. Sirna compounds and methods of use thereof
AU2009241591A1 (en) * 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of DSRNA targeting the PCSK9 gene
US20090263803A1 (en) * 2008-02-08 2009-10-22 Sylvie Beaudenon Mirnas differentially expressed in lymph nodes from cancer patients
US8188060B2 (en) 2008-02-11 2012-05-29 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation
CN102016036B (zh) 2008-02-11 2015-04-08 阿克赛医药公司 经修饰的RNAi多核苷酸及其用途
US7977321B2 (en) * 2008-02-12 2011-07-12 University Of Tennessee Research Foundation Small interfering RNAs targeting feline herpes virus
EP2250266A2 (en) 2008-02-12 2010-11-17 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of cd45 gene
DE102009043743B4 (de) 2009-03-13 2016-10-13 Friedrich-Schiller-Universität Jena Zellspezifisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA sowie Applikationskits zu deren Herstellung und Verwendung
EP2247748A2 (en) * 2008-02-13 2010-11-10 Elan Pharma International Limited Alpha-synuclein kinase
WO2009103067A2 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods to treat asthma
AU2009221775B2 (en) 2008-03-05 2015-05-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes
US20090233297A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-17 Elizabeth Mambo Microrna markers for recurrence of colorectal cancer
CN102036689B (zh) * 2008-03-17 2014-08-06 得克萨斯系统大学董事会 神经肌肉突触维持和再生中涉及的微小rna的鉴定
US20110028531A1 (en) * 2008-03-20 2011-02-03 Elena Feinstein Novel sirna compounds for inhibiting rtp801
EP2271757A2 (en) * 2008-03-26 2011-01-12 Asuragen, INC. Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer
EP2105145A1 (en) * 2008-03-27 2009-09-30 ETH Zürich Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides
JP5906508B2 (ja) * 2008-03-31 2016-04-20 国立研究開発法人産業技術総合研究所 Ｒｎａ干渉効果が高い２本鎖脂質修飾ｒｎａ
TWI348916B (en) * 2008-04-03 2011-09-21 Univ Nat Taiwan A novel treatment tool for cancer: rna interference of bcas2
US20090258928A1 (en) * 2008-04-08 2009-10-15 Asuragen, Inc. Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv)
JP5788312B2 (ja) 2008-04-11 2015-09-30 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 標的リガンドをエンドソーム分解性成分と組み合わせることによる核酸の部位特異的送達
ES2710463T3 (es) * 2008-04-11 2019-04-25 Cedars Sinai Medical Center Acido poli(beta málico) con tripéptido colgante Leu-Leu-Leu para la administración eficaz del fármaco citoplasmático
HUE034483T2 (en) 2008-04-15 2018-02-28 Protiva Biotherapeutics Inc New lipid preparations for introducing a nucleic acid
US8278287B2 (en) * 2008-04-15 2012-10-02 Quark Pharmaceuticals Inc. siRNA compounds for inhibiting NRF2
WO2009129465A2 (en) * 2008-04-17 2009-10-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of xbp-1 gene
US20090285861A1 (en) * 2008-04-17 2009-11-19 Tzyy-Choou Wu Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods
USRE48948E1 (en) 2008-04-18 2022-03-01 Warsaw Orthopedic, Inc. Clonidine compounds in a biodegradable polymer
AU2009240738B2 (en) 2008-04-21 2014-09-11 Tissue Regeneration Therapeutics, Inc. Genetically modified human umbilical cord perivascular cells for prophylaxis against or treatment of biological or chemical agents
US8324366B2 (en) 2008-04-29 2012-12-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins
US8173616B2 (en) * 2008-05-02 2012-05-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. RNA-induced translational silencing and cellular apoptosis
US8258111B2 (en) 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
US20090291073A1 (en) * 2008-05-20 2009-11-26 Ward Keith W Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same
WO2009146417A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-03 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid
CA2726052A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small rna targeting of gene promoters
US20090305611A1 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Flow International Corporation Device and method for improving accuracy of a high-pressure fluid jet apparatus
US8431692B2 (en) 2008-06-06 2013-04-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of ear disorders
EP2235177B1 (en) * 2008-06-13 2012-07-18 RiboxX GmbH Method for enzymatic synthesis of chemically modified rna
WO2010005741A1 (en) * 2008-06-16 2010-01-14 Georgia Tech Research Corporation Nanogels for cellular delivery of therapeutics
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
US20110184046A1 (en) * 2008-07-11 2011-07-28 Dinah Wen-Yee Sah Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of GSK-3 Genes
WO2010008562A2 (en) 2008-07-16 2010-01-21 Recombinetics Methods and materials for producing transgenic animals
WO2010008582A2 (en) 2008-07-18 2010-01-21 Rxi Pharmaceuticals Corporation Phagocytic cell drug delivery system
US8039658B2 (en) * 2008-07-25 2011-10-18 Air Products And Chemicals, Inc. Removal of trace arsenic impurities from triethylphosphate (TEPO)
US8212019B2 (en) * 2008-07-30 2012-07-03 University Of Massachusetts Nucleic acid silencing sequences
EP2326351B1 (en) 2008-08-19 2017-12-27 Nektar Therapeutics Conjugates of small-interfering nucleic acids
US8252762B2 (en) * 2008-08-25 2012-08-28 Excaliard Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof
WO2011028218A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process for triphosphate oligonucleotide synthesis
ES2738980T3 (es) * 2008-09-15 2020-01-28 Childrens Medical Ct Corp Modulación de BCL11A para el tratamiento de hemoglobinopatías
EP3336188B1 (en) 2008-09-22 2020-05-06 Phio Pharmaceuticals Corp. Reduced size self-delivering rnai compounds
EP3587434A1 (en) 2008-09-23 2020-01-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with click components for conjugation with ligands
EP3109321B1 (en) 2008-09-25 2019-05-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene
EP2344638A1 (en) * 2008-10-06 2011-07-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of an rna from west nile virus
WO2010042292A1 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease
US8802646B2 (en) * 2008-10-08 2014-08-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
US9388414B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
US9149492B2 (en) 2008-10-08 2015-10-06 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
US9388413B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
EP2350043B9 (en) 2008-10-09 2014-08-20 TEKMIRA Pharmaceuticals Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8591905B2 (en) 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
US8283460B2 (en) * 2008-10-15 2012-10-09 Somagenics, Inc. Short hairpin RNAs for inhibition of gene expression
US9458472B2 (en) * 2008-10-15 2016-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Detection and destruction of cancer cells using programmed genetic vectors
SI2344639T1 (sl) 2008-10-20 2015-09-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sestavki in postopki inhibicije izražanja transtiretina
US20110190380A1 (en) * 2008-10-23 2011-08-04 Elena Feinstein Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof
US20100168205A1 (en) * 2008-10-23 2010-07-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and Compositions for Prevention or Treatment of RSV Infection Using Modified Duplex RNA Molecules
SG10201901089TA (en) 2008-11-10 2019-03-28 Arbutus Biopharma Corp Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
WO2010056737A2 (en) * 2008-11-11 2010-05-20 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and compositions involving mirnas in cancer stem cells
MX2011004891A (es) * 2008-11-13 2011-10-06 Modgene Llc Modificacion de la carga de beta amiloide en el tejido no cerebral.
WO2010059226A2 (en) 2008-11-19 2010-05-27 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of map4k4 through rnai
JP2012509331A (ja) 2008-11-21 2012-04-19 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド がんの治療のための併用療法
EP3335705A1 (en) 2008-11-24 2018-06-20 Northwestern University Polyvalent rna-nanoparticle compositions
EP2191834A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Compositions and methods for treating retrovirus infections
CN102239259A (zh) 2008-12-03 2011-11-09 玛瑞纳生物技术有限公司 UsiRNA复合物
JP5832293B2 (ja) 2008-12-04 2015-12-16 オプコ ファーマシューティカルズ、エルエルシー 血管新生促進ｖｅｇｆイソ型を選択的に抑制する組成物および方法
US20100291188A1 (en) * 2008-12-04 2010-11-18 Musc Foundation For Research Development Periostin Inhibitory Compositions for Myocardial Regeneration, Methods of Delivery, and Methods of Using Same
CN102245640B (zh) 2008-12-09 2014-12-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途
NZ593618A (en) 2008-12-10 2013-02-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
US8664188B2 (en) * 2008-12-11 2014-03-04 Xiangxue Group (Hong Kong) Company Limited siRNA compositions and methods for potently inhibiting viral infection
EP2377934A4 (en) * 2008-12-12 2012-09-26 Kureha Corp PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF TUMOR AND ASTHMA
WO2010077894A2 (en) 2008-12-16 2010-07-08 Bristol-Myers Squibb Company Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation
WO2010080452A2 (en) 2008-12-18 2010-07-15 Quark Pharmaceuticals, Inc. siRNA COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOF
AU2009330859B2 (en) 2008-12-26 2013-06-20 Samyang Holdings Corporation Pharmaceutical composition containing an anionic drug, and a production method therefor
US9493774B2 (en) 2009-01-05 2016-11-15 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of PCSK9 through RNAi
US20100233270A1 (en) 2009-01-08 2010-09-16 Northwestern University Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles
US8980820B2 (en) * 2009-01-19 2015-03-17 The Research Foundation For The State University Of New York Fatty acid binding proteins as drug targets for endocannabinoids
AU2010206143A1 (en) * 2009-01-20 2011-08-25 Life Sciences Research Partners Vzw PHD2 inhibition for blood vessel normalization, and uses thereof
US9023820B2 (en) 2009-01-26 2015-05-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein C-III expression
AU2010211133A1 (en) * 2009-02-03 2011-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for inhibiting expression of PTP1B genes
US9745574B2 (en) 2009-02-04 2017-08-29 Rxi Pharmaceuticals Corporation RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
SI2881402T1 (sl) 2009-02-12 2017-12-29 Cell Signaling Technology, Inc. Ekspresija mutantnega ros pri humanem raku jeter
CN102333869A (zh) * 2009-02-24 2012-01-25 里博克斯艾克斯有限公司 小干扰rna的改进设计
AU2010221419B2 (en) 2009-03-02 2015-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
JP2012520684A (ja) * 2009-03-19 2012-09-10 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いたＢＴＢａｎｄＣＮＣＨｏｍｏｌｏｇｙ１（塩基性ロイシンジッパー転写因子１）（Ｂａｃｈ１）遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害
US20100239632A1 (en) 2009-03-23 2010-09-23 Warsaw Orthopedic, Inc. Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue
WO2010111198A1 (en) 2009-03-23 2010-09-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compounds compositions and methods of treating cancer and fibrotic diseases
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
WO2010124231A2 (en) * 2009-04-24 2010-10-28 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression using oligomers that target gene regions downstream of 3' untranslated regions
US8367350B2 (en) 2009-04-29 2013-02-05 Morehouse School Of Medicine Compositions and methods for diagnosis, prognosis and management of malaria
US8933049B2 (en) * 2009-05-05 2015-01-13 Medical Diagnostic Laboratories, Llc Repressor on IFN-λ promoter and siRNA against ZEB1 and BLIMP-1 to increase IFN-λ gene activity
EP2427180B1 (en) 2009-05-05 2016-04-13 Beeologics Inc. Prevention and treatment of nosema disease in bees
WO2010129791A1 (en) 2009-05-06 2010-11-11 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Rna targeting in alpha-synucleinopathies
CA2759838A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (gcr) genes
US20120114710A1 (en) * 2009-05-18 2012-05-10 Lynn Kirkpatrick Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto
EP2432499A2 (en) 2009-05-20 2012-03-28 Schering Corporation Modulation of pilr receptors to treat microbial infections
US20100304995A1 (en) * 2009-05-22 2010-12-02 Li Shen Arrays and Methods for Reverse Genetic Functional Analysis
CN102575252B (zh) 2009-06-01 2016-04-20 光环生物干扰疗法公司 用于多价rna干扰的多核苷酸、组合物及其使用方法
US20120083519A1 (en) * 2009-06-03 2012-04-05 Djillali Sahali Methods For Diagnosing And Treating A Renal Disease In An Individual
CA2764503A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Isolation and targeted suppression of lignin biosynthetic genes from sugarcane
US8637482B2 (en) 2009-06-08 2014-01-28 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating chronic kidney disease
HUE056773T2 (hu) 2009-06-10 2022-03-28 Arbutus Biopharma Corp Továbbfejlesztett lipid készítmény
WO2010144058A1 (en) 2009-06-10 2010-12-16 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Virus induced gene silencing (vigs) for functional analysis of genes in cotton.
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
US8273869B2 (en) 2009-06-15 2012-09-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsRNA targeting the PCSK9 gene
US20100324124A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods relating to DNA-based particles
US20100323018A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Branched DNA/RNA monomers and uses thereof
GB0910723D0 (en) 2009-06-22 2009-08-05 Sylentis Sau Novel drugs for inhibition of gene expression
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
WO2011000107A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8871730B2 (en) 2009-07-13 2014-10-28 Somagenics Inc. Chemical modification of short small hairpin RNAs for inhibition of gene expression
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
AU2009350151B2 (en) 2009-07-20 2015-07-16 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with diverse therapeutic regimens for the synergistic treatment of proliferative diseases
WO2011020024A2 (en) 2009-08-13 2011-02-17 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
AP2015008874A0 (en) 2009-08-14 2015-11-30 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus
CN102481379A (zh) 2009-08-24 2012-05-30 菲吉尼克斯公司 靶向pax2用于治疗乳腺癌
ES2655079T3 (es) 2009-09-10 2018-02-16 Merck Sharp & Dohme Corp. Uso de antagonistas de IL-33 para tratar enfermedades fibróticas
EP2295543A1 (en) 2009-09-11 2011-03-16 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Method for the preparation of an influenza virus
WO2011032100A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of kshv vil6 and human il6
WO2011034798A1 (en) 2009-09-15 2011-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes
US8916693B2 (en) 2009-09-17 2014-12-23 Nektar Therapeutics Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids
US9187746B2 (en) 2009-09-22 2015-11-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual targeting siRNA agents
US9222086B2 (en) * 2009-09-23 2015-12-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer
US20150025122A1 (en) 2009-10-12 2015-01-22 Larry J. Smith Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
CN102666879B (zh) 2009-10-30 2016-02-24 西北大学 模板化的纳米缀合物
US9101643B2 (en) 2009-11-03 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (TTR)
US9799416B2 (en) * 2009-11-06 2017-10-24 Terrapower, Llc Methods and systems for migrating fuel assemblies in a nuclear fission reactor
CN102666856B (zh) 2009-11-08 2016-04-06 夸克制药公司 定向至RhoA靶基因的双链RNA化合物在制造治疗神经性疼痛的药物中的用途
US9260517B2 (en) 2009-11-17 2016-02-16 Musc Foundation For Research Development Human monoclonal antibodies to human nucleolin
JP2013511990A (ja) 2009-11-26 2013-04-11 クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド 末端置換を含むｓｉＲＮＡ化合物
WO2011071860A2 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions for nucleic acid delivery
CN106701758B (zh) * 2009-12-09 2020-02-07 日东电工株式会社 Hsp47表达的调节
WO2011072091A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the cns
WO2011072240A1 (en) 2009-12-10 2011-06-16 Cedars-Sinai Medical Center Drug delivery of temozolomide for systemic based treatment of cancer
EP2336171A1 (en) 2009-12-11 2011-06-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel targets for the treatment of proliferative diseases
WO2011084357A1 (en) 2009-12-17 2011-07-14 Schering Corporation Modulation of pilr to treat immune disorders
AU2010330814B2 (en) 2009-12-18 2017-01-12 Acuitas Therapeutics Inc. Methods and compositions for delivery of nucleic acids
KR101605932B1 (ko) * 2009-12-18 2016-03-24 노파르티스 아게 Ｈｓｆ1-관련 질환을 치료하기 위한 유기 조성물
SG181823A1 (en) 2009-12-23 2012-07-30 Max Planck Gesellschaft Influenza targets
SG10201606680QA (en) 2009-12-23 2016-10-28 Gradalis Inc Furin-knockdown and gm-csf-augmented (fang) cancer vaccine
US20130023578A1 (en) 2009-12-31 2013-01-24 Samyang Biopharmaceuticals Corporation siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same
TW201124159A (en) * 2010-01-07 2011-07-16 Univ Nat Cheng Kung Small interference RNA molecule and applications thereof
WO2011084193A1 (en) 2010-01-07 2011-07-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs
US9200277B2 (en) * 2010-01-11 2015-12-01 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (SHBG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to SHBG
WO2011088058A1 (en) * 2010-01-12 2011-07-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expressions of factor vii and pten genes
DE102010004957A1 (de) 2010-01-14 2011-07-21 Universitätsklinikum Jena, 07743 Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
WO2011094580A2 (en) 2010-01-28 2011-08-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chelated copper for use in the preparation of conjugated oligonucleotides
US8722641B2 (en) 2010-01-29 2014-05-13 St. Jude Children's Research Hospital Oligonucleotides which inhibit p53 induction in response to cellular stress
CN102770767A (zh) 2010-02-10 2012-11-07 诺瓦提斯公司 用于肌肉生长的方法和组合物
AU2011227050B2 (en) * 2010-03-19 2016-12-08 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
RU2615143C2 (ru) 2010-03-24 2017-04-04 Адвирна Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера
CN106074591B (zh) 2010-03-24 2020-01-14 菲奥医药公司 眼部症候中的rna干扰
IL265674B2 (en) 2010-03-24 2024-05-01 Phio Pharm Corp Rana disorder in cutaneous and fibrotic symptoms
US8455455B1 (en) 2010-03-31 2013-06-04 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
WO2011133658A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Boston Medical Center Corporation Compositions and methods for targeting and delivering therapeutics into cells
US20130260460A1 (en) 2010-04-22 2013-10-03 Isis Pharmaceuticals Inc Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
PT2563920T (pt) 2010-04-29 2017-05-26 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulação da expressão de transtirretina
WO2011137363A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Allergan, Inc. Novel treatment for age related macular degeneration and ocular ischemic disease associated with complement activation by targeting 5-lipoxygenase
AU2011248184B2 (en) 2010-05-04 2015-12-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Detection and treatment of fibrosis
US8563243B2 (en) * 2010-05-12 2013-10-22 University Of South Carolina Methods for affecting homology-directed DNA double stranded break repair
EP2575773A4 (en) 2010-05-26 2014-06-25 Selecta Biosciences Inc SYNTHETIC NANOTRÄGERKOMBINATIONSIMPFSTOFFE
EP2390327A1 (en) 2010-05-27 2011-11-30 Sylentis S.A. siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
DE102010022937A1 (de) 2010-06-04 2011-12-08 Universitätsklinikum Jena Zellspezifisch aktivierbare biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA, Verfahren zu deren Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
CN103097534B (zh) 2010-06-24 2017-07-28 夸克制药公司 针对rhoa的双链rna化合物及其用途
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US20130323269A1 (en) 2010-07-30 2013-12-05 Muthiah Manoharan Methods and compositions for delivery of active agents
US20130202652A1 (en) 2010-07-30 2013-08-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
US20120101108A1 (en) 2010-08-06 2012-04-26 Cell Signaling Technology, Inc. Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer
JP6106085B2 (ja) 2010-08-24 2017-03-29 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 内部非核酸スペーサーを含む一本鎖ＲＮＡｉ剤
WO2012041959A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 University Of Zurich Treatment of b-cell lymphoma with microrna
US20140315973A1 (en) * 2010-10-07 2014-10-23 Agency For Science, Technology And Research Parp-1 inhibitors
WO2012051491A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary National Institutes Of Health Compositions and methods for controlling neurotropic viral pathogenesis by micro-rna targeting
CN103328633B (zh) * 2010-10-22 2018-07-10 成均馆大学校产学协力团 诱导rna干扰的核酸分子及其用途
ES2663009T3 (es) 2010-10-29 2018-04-10 Sirna Therapeutics, Inc. Inhibición de la expresión génica mediada por interferencia por ARN utilizando ácidos nucleicos de interferencia cortos (ANic)
WO2012071436A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Genentech, Inc. Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants
WO2012078536A2 (en) 2010-12-06 2012-06-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications
US10202615B2 (en) 2010-12-10 2019-02-12 Vanderbilt University Mammalian genes involved in toxicity and infection
US9617542B2 (en) * 2010-12-14 2017-04-11 The United States of America, as representd by The Secretary of Agriculture Lepidopteran moth control using double-stranded RNA constructs
US9623041B2 (en) 2010-12-30 2017-04-18 Cedars-Sinai Medical Center Polymalic acid-based nanobiopolymer compositions
DE112012000439T5 (de) 2011-01-10 2014-04-30 The Regents Of The University Of Michigan Stammzellfaktor-Inhibitor
US20150018408A1 (en) 2013-07-10 2015-01-15 The Regents Of The University Of Michigan Therapeutic antibodies and uses thereof
EP3202760B1 (en) 2011-01-11 2019-08-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
DE102011009470A1 (de) 2011-01-21 2012-08-09 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Nukleotid-Moleküle zur gezielten Abtötung von Zellen, Verwendung derselben sowie Applikationskit
JP6177692B2 (ja) 2011-02-02 2017-08-09 エクスカリアード・ファーマシューティカルズ，インク 結合組織増殖因子（ｃｔｇｆ）をターゲティングするアンチセンス化合物を用いた、ケロイドまたは肥厚性瘢痕の治療法
US9222085B2 (en) 2011-02-03 2015-12-29 Mirna Therapeutics, Inc. Synthetic mimics of MIR-124
SG193280A1 (en) 2011-03-03 2013-10-30 Quark Pharmaceuticals Inc Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
US9796979B2 (en) 2011-03-03 2017-10-24 Quark Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
WO2012125554A2 (en) * 2011-03-11 2012-09-20 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for the treatment of cancer
RU2013145890A (ru) 2011-03-15 2015-04-20 Юниверсити Оф Юта Рисерч Фаундейшн Способы диагностики и лечения сосудисто-ассоциированной макулопатии и ее симптомов
WO2012135696A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 University Of South Alabama Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer
JP2014511877A (ja) 2011-04-12 2014-05-19 ザ・ガバメント・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ・アズ・リプリゼンテッド・バイ・ザ・セクレタリー・デパートメント・オブ・ヘルス・アンド・ヒューマン・サービシーズ ポロ様キナーゼ１ポロ−ボックスドメインのペプチド模倣リガンド及び使用方法
AU2012242642A1 (en) 2011-04-13 2013-05-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US8716257B2 (en) * 2011-04-15 2014-05-06 Sutter West Bay Hospitals CMV gene products promote cancer stem cell growth
CA2833269C (en) 2011-04-15 2020-04-14 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
KR20140104344A (ko) 2011-05-20 2014-08-28 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 시크리터리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비시스 Ｔ 세포 매개성 질병의 병증을 개선하기 위한 ｔｌ１ａ-ｄｒ３의 상호작용의 차단 및 그것의 항체
EP3011974B1 (en) 2011-06-02 2018-08-08 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles
WO2012177921A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Compositions and methods for inhibiting hepcidin antimicrobial peptide (hamp) or hamp-related gene expression
KR20230084331A (ko) 2011-06-21 2023-06-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 아포리포단백질 c-iii(apoc3) 유전자의 발현 억제를 위한 조성물 및 방법
SG10201913683WA (en) 2011-06-21 2020-03-30 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
EP2723351B1 (en) 2011-06-21 2018-02-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes
US20140227293A1 (en) 2011-06-30 2014-08-14 Trustees Of Boston University Method for controlling tumor growth, angiogenesis and metastasis using immunoglobulin containing and proline rich receptor-1 (igpr-1)
WO2013001372A2 (en) 2011-06-30 2013-01-03 University Of Oslo Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells
LT2729173T (lt) 2011-07-06 2016-10-10 Sykehuset Sorlandet Hf Egfr taikinių terapija
WO2013006861A1 (en) 2011-07-07 2013-01-10 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Sorghum grain shattering gene and uses thereof in altering seed dispersal
US8853181B2 (en) 2011-07-21 2014-10-07 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Fidgetin-like 2 as a target to enhance wound healing
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
DE102011118024A1 (de) 2011-08-01 2013-02-07 Technische Universität Dresden Inhibitor der Expression der Pro-Caspase 1
WO2013034653A1 (en) 2011-09-06 2013-03-14 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. The mirna-212/132 family as a therapeutic target
AU2012305714A1 (en) 2011-09-09 2014-03-27 Biomed Realty, L.P. Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins
WO2013040251A2 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Asurgen, Inc. Methods and compositions involving mir-135b for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease
AU2012315965A1 (en) 2011-09-27 2014-04-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted PEGylated lipids
WO2013049389A1 (en) 2011-09-27 2013-04-04 Yale University Compositions and methods for transient expression of recombinant rna
PT3597644T (pt) 2011-10-18 2021-11-03 Dicerna Pharmaceuticals Inc Lípidos catiónicos de amina e suas utilizações
EP2776565A1 (en) 2011-11-08 2014-09-17 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system
US9006199B2 (en) 2011-11-14 2015-04-14 Silenseed Ltd. Methods and compositions for treating prostate cancer
WO2013075035A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Alnylam Pharmaceuticals Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
CA2858336A1 (en) 2012-01-01 2013-07-04 Qbi Enterprises Ltd. Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents
WO2013103401A1 (en) * 2012-01-06 2013-07-11 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
AU2013208720A1 (en) 2012-01-09 2014-07-24 Arrowhead Research Corporation RNAi agents to treat Beta-Catenin related diseases
RU2014125496A (ru) 2012-01-12 2016-02-27 Кварк Фармасьютикалс, Инк. Комбинированная терапия для лечения нарушений слуха и равновесия
WO2013112458A1 (en) 2012-01-24 2013-08-01 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Novel chrebp isoforms and methods using the same
EP2825209B1 (en) 2012-03-14 2018-08-29 University of Central Florida Research Foundation, Inc. Neurofibromatoses therapeutic agents and screening for same
CN110438125A (zh) 2012-03-15 2019-11-12 科纳公司 通过抑制脑源神经营养因子(bdnf)的天然反义转录物治疗bdnf相关疾病
HUE037856T2 (hu) 2012-04-18 2018-09-28 Cell Signaling Technology Inc EGFR és ROS1 rákban
EP3919620A1 (en) 2012-05-02 2021-12-08 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
US9980942B2 (en) 2012-05-02 2018-05-29 Children's Hospital Medical Center Rejuvenation of precursor cells
CN108148838A (zh) 2012-05-22 2018-06-12 奥利克斯医药有限公司 具有细胞内穿透能力的诱导rna干扰的核酸分子及用途
US9726661B2 (en) 2012-07-06 2017-08-08 Institut Gustave-Roussy Simultaneous detection of cannibalism and senescence as prognostic marker for cancer
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
EP3441467A3 (en) 2012-08-31 2019-04-24 The General Hospital Corporation Biotin complexes for treatment and diagnosis of alzheimer's disease
SG11201501385UA (en) 2012-09-05 2015-03-30 Sylentis Sau Sirna and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
GB201215857D0 (en) 2012-09-05 2012-10-24 Sylentis Sau siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
CN104619844A (zh) 2012-09-12 2015-05-13 夸克制药公司 靶向p53的双链寡核苷酸分子及其使用方法
AU2013315524B2 (en) 2012-09-12 2019-01-31 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to p53 and methods of use thereof
SG11201501850VA (en) 2012-09-21 2015-04-29 Intensity Therapeutics Inc Method of treating cancer
WO2014055624A1 (en) * 2012-10-02 2014-04-10 The General Hospital Corporation D/B/A Massachusetts General Hospital Methods relating to dna-sensing pathway related conditions
WO2014055825A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services A formulation of mycobacterial components as an adjuvant for inducing th17 responses
WO2014068072A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 Institut Gustave-Roussy Identification, assessment and therapy of essential thrombocythemia with resistance to jak2 inhibitors
WO2014076137A1 (en) * 2012-11-13 2014-05-22 Lötvall Jan Delivery of therapeutic agent
DE102012022596B4 (de) 2012-11-15 2017-05-04 Friedrich-Schiller-Universität Jena Neue zellspezifisch wirksame Nukleotid-Moleküle und Applikationskit zu deren Anwendung
EP3660033B9 (en) 2012-11-15 2022-06-22 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Long-acting compstatin analogs and related compositions and methods
SG10202110062SA (en) 2012-11-27 2021-11-29 Childrens Medical Center Targeting Bcl11a Distal Regulatory Elements for Fetal Hemoglobin Reinduction
WO2014093688A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 1Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for functional nucleic acid delivery
BR112015013849A2 (pt) 2012-12-21 2017-07-11 Sykehuset Soerlandet Hf terapia direcionada a egfr de distúrbios neurológicos e dor
US9206423B2 (en) * 2012-12-30 2015-12-08 The Regents Of The University Of California Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork
US10258682B2 (en) 2013-01-16 2019-04-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Attenuated chlamydia vaccine
DE102013003869B4 (de) 2013-02-27 2016-11-24 Friedrich-Schiller-Universität Jena Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung
KR102205278B1 (ko) 2013-03-14 2021-01-22 다이서나 파마수이티컬, 인크. 음이온성 약제를 제형화하는 방법
RU2015144185A (ru) * 2013-03-15 2017-04-26 Дженентек, Инк. Лечение заболеваний, опосредованных тh2, путем ингибирования бромодоменов
WO2014152391A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof
WO2014150751A2 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Novartis Ag Biomarkers associated with brm inhibition
EP3708184A1 (en) 2013-03-27 2020-09-16 The General Hospital Corporation Methods and agents for treating alzheimer s disease
AU2014265142A1 (en) 2013-05-17 2015-12-24 Medimmune, Llc Receptors for B7-H4
JP6802063B2 (ja) 2013-06-25 2020-12-16 エピアクシス セラピューティクス プロプライエタリー リミテッド 癌幹細胞を調節するための方法および組成物
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
EP3030663B1 (en) 2013-07-19 2019-09-04 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling leptinotarsa
US10711106B2 (en) 2013-07-25 2020-07-14 The University Of Chicago High aspect ratio nanofibril materials
CN105452465B (zh) 2013-07-31 2019-06-21 奇比艾企业有限公司 鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物
EP3027223A1 (en) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds
EP3715457A3 (en) * 2013-08-28 2020-12-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of prekallikrein (pkk) expression
RU2675824C2 (ru) 2013-09-11 2018-12-25 Игл Байолоджикс, Инк. Жидкие белковые составы, содержащие ионные жидкости
AU2014324092B2 (en) 2013-09-18 2020-02-06 Epiaxis Therapeutics Pty Ltd Stem cell modulation II
CN105792832B (zh) 2013-10-04 2021-03-23 诺华股份有限公司 用于治疗乙肝病毒的有机化合物
CA3188691A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Novartis Ag 3'end caps for rnai agents for use in rna interference
EP2865756A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene.
EP2865758A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene
EP2865757A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene.
EP3068407A1 (en) 2013-11-11 2016-09-21 Sirna Therapeutics, Inc. Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (sina) conjugated to a lipophilic moiety
EP3071590A4 (en) 2013-11-21 2017-07-19 SeNA Research, Inc. Methods for structural determination of selenium derivatized nucleic acid complexes
JP6772062B2 (ja) 2013-12-02 2020-10-21 フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションＰｈｉｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐ． 癌の免疫療法
US10150965B2 (en) 2013-12-06 2018-12-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
CN104830906B (zh) 2014-02-12 2018-09-04 北京维通达生物技术有限公司 一种重编程获得功能性人肝脏实质细胞的方法
US10011837B2 (en) 2014-03-04 2018-07-03 Sylentis Sau SiRNAs and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
ES2978312T3 (es) 2014-03-11 2024-09-10 Cellectis Método para generar linfocitos T compatibles para trasplante alogénico
US20170137808A1 (en) * 2014-03-20 2017-05-18 Oommen Varghese Improved small interfering ribonucleic acid molecules
JP6771387B2 (ja) 2014-03-25 2020-10-21 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的ｕｎａオリゴマー
CA2946719C (en) 2014-03-25 2023-09-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Una oligomers having reduced off-target effects in gene silencing
US9856475B2 (en) 2014-03-25 2018-01-02 Arcturus Therapeutics, Inc. Formulations for treating amyloidosis
WO2015153800A2 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating sod-1 expression
BR112016022711A2 (pt) 2014-04-01 2017-10-31 Monsanto Technology Llc composições e métodos para controle de pragas de inseto
SG10201809290SA (en) 2014-04-25 2019-01-30 Childrens Medical Ct Corp Compositions and Methods to Treating Hemoglobinopathies
US11279934B2 (en) 2014-04-28 2022-03-22 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN
US10294477B2 (en) 2014-05-01 2019-05-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating PKK expression
EP3137054B1 (en) 2014-05-02 2021-07-07 Research Institute at Nationwide Children's Hospital Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation
JP6763780B2 (ja) 2014-05-12 2020-09-30 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 合成脳浸透遺伝子ベクターの操作
WO2015175545A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 The Johns Hopkins University Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers
WO2015184105A1 (en) 2014-05-29 2015-12-03 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting acat1 in the treatment of neurodegenerative diseases
CA2953216C (en) 2014-06-04 2020-12-22 Exicure, Inc. Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
CN104120127B (zh) * 2014-07-01 2016-09-21 清华大学 分离的寡核苷酸及其应用
RU2021123470A (ru) 2014-07-29 2021-09-06 Монсанто Текнолоджи Ллс Композиции и способы борьбы с насекомыми-вредителями
US20170348402A1 (en) 2014-07-30 2017-12-07 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
US20200230251A1 (en) 2014-08-14 2020-07-23 Friedrich-Schiller-Universitaet Jena Peptide for use in the reduction of side effects in the form of immunostimulatory reactions/effects
WO2016029262A1 (en) 2014-08-25 2016-03-03 University Of Canberra Compositions for modulating cancer stem cells and uses therefor
ES2928500T3 (es) 2014-08-29 2022-11-18 Alnylam Pharmaceuticals Inc Patisirán para su uso en el tratamiento de amiloidosis mediada por transtiretina
CN107073294A (zh) 2014-09-05 2017-08-18 阿克赛医药公司 使用靶向tyr或mmp1的核酸治疗老化和皮肤病症的方法
KR102473092B1 (ko) 2014-09-15 2022-12-01 칠드런'즈 메디컬 센터 코포레이션 히스톤 h3-리신 트리메틸화를 제거함으로써 체세포 핵 이식(scnt) 효율을 증가시키는 방법 및 조성물
AU2015320748A1 (en) 2014-09-25 2017-04-20 Cold Spring Harbor Laboratory Treatment of Rett Syndrome
KR102497368B1 (ko) 2014-10-01 2023-02-10 이글 바이올로직스 인코포레이티드 점도-저하제를 함유하는 폴리삭카라이드 및 핵산 제형
US20170304459A1 (en) 2014-10-10 2017-10-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide
WO2016057898A1 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Idera Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cancer using tlr9 agonist with checkpoint inhibitors
JOP20200115A1 (ar) 2014-10-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات))
WO2016060919A1 (en) * 2014-10-14 2016-04-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Allele selective inhibition of mutant c9orf72 foci expression by duplex rnas targeting the expanded hexanucleotide repeat
US20180009903A1 (en) 2014-10-22 2018-01-11 Katholieke Universiteit Leuven Ku Leuven Research & Development Modulating adipose tissue and adipogenesis
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
EP3218497A1 (en) 2014-11-12 2017-09-20 NMC Inc. Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same
AU2015350120B2 (en) 2014-11-17 2021-05-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein C3 (APOC3) iRNA compositions and methods of use thereof
WO2016081621A1 (en) 2014-11-18 2016-05-26 Yale University Formulations for targeted release of agents under low ph conditions and methods of use thereof
AU2015349680A1 (en) 2014-11-21 2017-06-08 Northwestern University The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
WO2016094374A1 (en) * 2014-12-09 2016-06-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and mentods for treatment of friedreich's ataxia
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US20180002702A1 (en) * 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
EP3256589B1 (en) 2015-01-22 2021-12-22 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling leptinotarsa
JP6830441B2 (ja) 2015-04-01 2021-02-17 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 治療上のｕｎａオリゴマーおよびその使用
CN115927335A (zh) 2015-04-13 2023-04-07 阿尔尼拉姆医药品有限公司 类血管生成素3（ANGPTL3）iRNA组合物及其使用方法
WO2016168197A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Yale University Compositions for enhancing delivery of agents across the blood brain barrier and methods of use thereof
EP3291839A1 (en) 2015-05-05 2018-03-14 The University of Louisville Research Foundation, Inc. Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles as radio-sensitizers and mri and/or x-ray contrast agents
US11572543B2 (en) 2015-05-08 2023-02-07 The Children's Medical Center. Corporation Targeting BCL11A enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction
AU2016269839B2 (en) 2015-06-03 2021-07-08 The University Of Queensland Mobilizing agents and uses therefor
EP3307890A1 (en) 2015-06-10 2018-04-18 Board of Regents, The University of Texas System Use of exosomes for the treatment of disease
JP6983066B2 (ja) 2015-06-30 2021-12-17 忠三 岸本 新規な肺疾患治療剤および／またはそのスクリーニング方法
EP3862005A1 (en) 2015-07-06 2021-08-11 Phio Pharmaceuticals Corp. Nucleic acid molecules targeting superoxide dismutase 1 (sod1)
WO2017007825A1 (en) 2015-07-06 2017-01-12 Rxi Pharmaceuticals Corporation Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach
AU2016294347B2 (en) 2015-07-10 2022-07-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (DGAT2)
WO2017015671A1 (en) 2015-07-23 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions for treating amyloidosis
SI3329002T1 (sl) 2015-07-31 2021-02-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sestavki transtiretin (TTR) IRNA in sestavki in postopki njihove uporabe za zdravljenje ali preprečevanje s TTR povezanih bolezni
US10633653B2 (en) 2015-08-14 2020-04-28 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
MX2018002090A (es) 2015-08-24 2018-09-12 Halo Bio Rnai Therapeutics Inc Nanoparticulas de polinucleótido para modulación de expresión génica y sus usos.
MA44908A (fr) 2015-09-08 2018-07-18 Sylentis Sau Molécules d'arnsi et leur utilisation dans des procédés et des compositions pour inhiber l'expression du gène nrarp
GB201516685D0 (en) * 2015-09-21 2015-11-04 Varghese Oommen P And Oommen Oommen P Nucleic acid molecules with enhanced activity
CA2999916C (en) 2015-09-23 2021-07-20 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for modified dendrimer nanoparticle vaccine delivery
US10086063B2 (en) 2015-09-23 2018-10-02 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
US10383935B2 (en) 2015-09-23 2019-08-20 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
US10358497B2 (en) 2015-09-29 2019-07-23 Amgen Inc. Methods of treating cardiovascular disease with an ASGR inhibitor
JOP20210043A1 (ar) 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
EP3359555B1 (en) 2015-10-07 2023-12-20 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens
US11021707B2 (en) 2015-10-19 2021-06-01 Phio Pharmaceuticals Corp. Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding RNA
WO2017085550A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of age-related macular degeneration using rna complexes that target myd88 or tlr3
WO2017095751A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Partikula Llc Compositions and methods for modulating cancer cell metabolism
EP3386544B1 (en) 2015-12-10 2020-11-25 Fibrogen, Inc. Methods for treatment of motor neuron diseases
CN108366964B (zh) 2015-12-18 2022-04-08 三养控股公司 制备含阴离子药物的聚合物胶束的方法
BR102017001164A2 (pt) 2016-01-26 2019-03-06 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária Composições de rna de fita dupla para controle de diaphorina citri e métodos de uso.
JP2019503394A (ja) 2016-01-31 2019-02-07 ユニバーシティ・オブ・マサチューセッツＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ 分岐オリゴヌクレオチド
US10358648B2 (en) 2016-02-02 2019-07-23 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of atopic dermatitis and asthma using RNA complexes that target IL4Rα, TRPA1, or F2RL1
US10519449B2 (en) 2016-02-02 2019-12-31 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of angiogenesis-associated diseases using RNA complexes that target ANGPT2 and PDGFB
US20170360815A1 (en) 2016-02-25 2017-12-21 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
CA3014764A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
WO2017147594A1 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Yale University COMPOSITIONS AND METHODS OF USING piRNAS IN CANCER DIAGNOSTICS AND THERAPEUTICS
US20210189062A1 (en) 2016-03-01 2021-06-24 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery
WO2017152073A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods and compositions for ex vivo expansion of very small embryonic-like stem cells (vsels)
EP3426261A4 (en) 2016-03-07 2020-03-25 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. TARGETED LIGANDS FOR THERAPEUTIC CONNECTIONS
MX2018011204A (es) 2016-03-15 2019-03-07 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco dirigidos a napi2b y sus metodos de uso.
MA45469A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
MA45470A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques kras et leurs utilisations
MA45349A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques egfr et leurs utilisations
US20190117799A1 (en) 2016-04-01 2019-04-25 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications
CN108602849B (zh) 2016-04-06 2022-10-21 俄亥俄州国家创新基金会 用于通过rna纳米技术将治疗剂特异性递送至细胞的rna配体展示外来体
JP7049262B2 (ja) 2016-04-11 2022-04-06 オリックス ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 結合組織成長因子を標的とするｒｎａ複合体を用いた特発性肺胞線維症の治療
BR112018071186A8 (pt) 2016-04-14 2023-03-28 Benitec Biopharma Ltd Rna, pluralidade de rnas, construto de interferência por rna dirigida por dna, composição, método para inibir a expressão de uma proteína, método para tratar distrofia muscular oculofaríngea e kit
US11410746B2 (en) 2016-04-27 2022-08-09 Massachusetts Institute Of Technology Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof
WO2017197128A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Yale University Poly(amine-co-ester) nanoparticles and methods of use thereof
KR101916652B1 (ko) 2016-06-29 2018-11-08 올릭스 주식회사 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도
EP3478321A4 (en) 2016-06-30 2020-04-22 Oncorus, Inc. PSEUDOTYPIZED ONCOLYTIC VIRAL ADMINISTRATION OF THERAPEUTIC POLYPEPTIDES
RU2627179C1 (ru) * 2016-07-28 2017-08-03 федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ИНТЕРФЕРОНА λ, ИНТЕРЛЕЙКИНА IL23 И ПРОТИВОВИРУСНОГО БЕЛКА MxA
EP3519582A1 (en) 2016-07-29 2019-08-07 Danmarks Tekniske Universitet Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides
EP3496736A4 (en) 2016-08-03 2020-05-13 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. THERAPEUTICS AGAINST TLR9
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
CN116832169A (zh) 2016-09-02 2023-10-03 箭头药业股份有限公司 靶向配体
CA3033756A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. 4'-phosphate analogs and oligonucleotides comprising the same
EP3516062A1 (en) 2016-09-21 2019-07-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Myostatin irna compositions and methods of use thereof
JP7129702B2 (ja) * 2016-09-29 2022-09-02 国立大学法人 東京医科歯科大学 オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
EP3551641A4 (en) 2016-12-08 2021-01-13 University of Utah Research Foundation STAUFEN1 ACTIVE SUBSTANCES AND RELATED PROCEDURES
US20200085758A1 (en) 2016-12-16 2020-03-19 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Co-delivery of nucleic acids for simultaneous suppression and expression of target genes
AU2018208505B2 (en) 2017-01-10 2024-03-07 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Alpha-1 antitrypsin (AAT) RNAi agents, compositions including AAT RNAi agents, and methods of use
JP7424728B2 (ja) 2017-02-10 2024-01-30 オリック パルマセゥティカルズ インコーポレイテッド Ｒｎａ干渉のための長鎖の二本鎖ｒｎａ
US11613754B2 (en) * 2017-02-20 2023-03-28 Northwestern University Toxic RNAi active seed sequences for killing cancer cells
DE102017103383A1 (de) 2017-02-20 2018-08-23 aReNA-Bio GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr. Heribert Bohlen, 50733 Köln) System und Verfahren zur Zelltyp-spezifischen Translation von RNA-Molekülen in Eukaryoten
WO2018160538A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
US11261441B2 (en) 2017-03-29 2022-03-01 Bluebird Bio, Inc. Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies
CA3059304A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens and related compositions and methods
EP3610018B1 (en) 2017-04-14 2023-06-07 Arizona Board of Regents on Behalf of the University of Arizona Compositions and methods for treating pulmonary fibrosis
US11324820B2 (en) 2017-04-18 2022-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection
US11433131B2 (en) 2017-05-11 2022-09-06 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (SNAs)
WO2018218135A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 The Children's Medical Center Corporation Bcl11a guide delivery
WO2018236995A2 (en) * 2017-06-20 2018-12-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. METHODS FOR MODULATING REGULATORY T LYMPHOCYTES, REGULATORY B LYMPHOCYTES AND IMMUNE RESPONSES USING AVRIL-TACI INTERACTION MODULATORS
EP3642341A4 (en) * 2017-06-23 2021-06-16 University Of Massachusetts TWO-DAY SELF-RELEASING SIRNA AND RELATED PROCEDURES
US10590416B2 (en) 2017-07-06 2020-03-17 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents for inhibiting expression of alpha-ENaC and methods of use
AU2018301829B2 (en) 2017-07-13 2024-08-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibition of HAO1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase) gene expression
US11110114B2 (en) 2017-07-17 2021-09-07 Oxford University Innovation Limited Dinucleotides
US11104700B2 (en) 2017-07-17 2021-08-31 Oxford University Innovation Limited Oligonucleotides
JOP20200054A1 (ar) 2017-09-11 2020-03-10 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi وتركيبات لتثبيط تعبير صَميمُ البروتينِ الشَّحْمِيّ C-III (APOC3)
WO2019060442A1 (en) 2017-09-19 2019-03-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATMENT OF TRANSTHYRETIN MEDIATED AMYLOSIS (TTR)
WO2019068326A1 (en) 2017-10-05 2019-04-11 Université D'aix-Marseille INHIBITORS OF LSD1 FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CARDIOMYOPATHIES
EP4197544A1 (en) 2017-10-20 2023-06-21 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hepatitis b infection
EP3713644B1 (en) 2017-11-20 2024-08-07 University of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for modulating hif-2a to improve muscle generation and repair
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP4328306A2 (en) * 2017-12-01 2024-02-28 The Texas A&M University System Angelman syndrome antisense treatment
MX2020005860A (es) 2017-12-06 2020-09-09 Avidity Biosciences Inc Composiciones y metodos de tratamiento de atrofia muscular y distrofia miotonica.
EP3728281A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chirally-enriched double-stranded rna agents
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
US10960086B2 (en) 2017-12-28 2021-03-30 Augusta University Research Institute, Inc. Aptamer compositions and methods of use thereof
WO2019133847A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Oncorus, Inc. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
KR20200106513A (ko) 2018-01-05 2020-09-14 다이서나 파마수이티컬, 인크. 면역요법을 강화시키기 위하여 베타-카테닌 및 ido 발현의 감소
WO2019143621A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting aldh2 expression
KR20200108315A (ko) 2018-02-09 2020-09-17 제넨테크, 인크. Tmem106b의 발현을 조절하기 위한 올리고뉴클레오티드
EP3790991A1 (en) 2018-05-07 2021-03-17 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Massively parallel discovery methods for oligonucleotide therapeutics
EP3791180A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 The University Of Manchester Methods for assessing macular degeneration
JP7512207B2 (ja) 2018-05-24 2024-07-08 サーナオミクス インコーポレイテッド 核酸治療薬のための調節可能な共カップリングポリペプチドナノ粒子送達系の組成物および方法
US11946046B2 (en) * 2018-06-14 2024-04-02 University Of Utah Research Foundation Staufen1 regulating agents and associated methods
BR112021001613A2 (pt) 2018-08-13 2021-05-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. agentes de ácido ribonucleico de fita dupla, célula, composições farmacêuticas, métodos de inibição da expressão gênica, de inibição da replicação e de tratar um sujeito, métodos para reduzir o nível de um antígeno e para reduzir a carga viral e uso de um agente de dsrna
WO2020051231A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute Inc. Use of delta-tocotrienol for treating cancer
US20210317479A1 (en) 2018-09-06 2021-10-14 The Broad Institute, Inc. Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery
JP2022513400A (ja) 2018-10-29 2022-02-07 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド ペプチド含有リンカーを有するシステイン操作抗体－薬物コンジュゲート
BR112021015651A2 (pt) 2019-02-12 2021-10-05 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Métodos e composições para inibir a expressão de cyp27a1
JP2022527108A (ja) 2019-03-29 2022-05-30 ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｋｒａｓ関連疾患または障害の治療のための組成物及び方法
EP3947683A1 (en) 2019-04-04 2022-02-09 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system
US11814464B2 (en) 2019-04-29 2023-11-14 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers and polyplexes with modified end groups and methods of use thereof
CN113795581A (zh) 2019-05-03 2021-12-14 迪克纳制药公司 具有缩短的有义链的双链核酸抑制剂分子
US20200369759A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Fibrogen, Inc. Methods of treatment of muscular dystrophies
KR102658962B1 (ko) 2019-06-26 2024-04-23 주식회사 바이오오케스트라 미셀 나노입자 및 이의 용도
AU2020329155A1 (en) 2019-08-09 2022-03-10 University Of Massachusetts Chemically modified oligonucleotides targeting SNPs
JP2022546699A (ja) 2019-08-30 2022-11-07 イェール ユニバーシティー 核酸を細胞に送達するための組成物および方法
EP4029520A4 (en) 2019-09-10 2024-05-29 Daiichi Sankyo Company, Limited GALNAC-OLIGONUCLEOTIDE CONJUGATE FOR TARGETED DELIVERY TO THE LIVER AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME
EP4038191A1 (en) 2019-10-02 2022-08-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of small interfering rna with minimal fluorine content
US11017851B1 (en) 2019-11-26 2021-05-25 Cypress Semiconductor Corporation Silicon-oxide-nitride-oxide-silicon based multi level non-volatile memory device and methods of operation thereof
EP4081217A1 (en) 2019-12-24 2022-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting hbv and/or an immune modulator for treatment of hbv
TW202137987A (zh) 2019-12-24 2021-10-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於治療ｈｂｖ之靶向ｈｂｖ的治療性寡核苷酸及ｔｌｒ７促效劑之醫藥組合
MX2022008772A (es) 2020-01-14 2022-10-07 Synthekine Inc Ortologos de il2 y metodos de uso.
US20210222128A1 (en) 2020-01-22 2021-07-22 Massachusetts Institute Of Technology Inducible tissue constructs and uses thereof
US11642407B2 (en) 2020-02-28 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
CN116096889A (zh) 2020-03-18 2023-05-09 迪克纳制药公司 用于抑制angptl3表达的组合物和方法
JP2023537798A (ja) 2020-03-19 2023-09-06 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを処置するための組成物および方法
US11446387B2 (en) 2020-03-27 2022-09-20 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle dystrophy
CN115997008A (zh) 2020-04-22 2023-04-21 艾欧凡斯生物治疗公司 协调用于患者特异性免疫疗法的细胞的制造的系统和方法
WO2021255262A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Sylentis Sau siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES
WO2021257262A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers with modified end groups and enhanced pulmonary delivery
US20220031633A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Yale University Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery
TW202221120A (zh) 2020-08-04 2022-06-01 美商黛瑟納製藥公司 用於治療代謝症候群之組成物及方法
AU2021321430A1 (en) 2020-08-04 2023-03-02 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting PLP1 expression
WO2022031433A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Systemic delivery of oligonucleotides
CA3190794A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Soren Ottosen Oligonucleotide treatment of hepatitis b patients
KR20230043912A (ko) 2020-08-05 2023-03-31 다이서나 파마수이티컬, 인크. Lpa 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법
AU2021331785A1 (en) 2020-08-31 2023-03-30 Gennao Bio, Inc. Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
EP3964204A1 (en) 2020-09-08 2022-03-09 Université d'Aix-Marseille Lsd1 inhibitors for use in the treatment and prevention of fibrosis of tissues
EP4214515A1 (en) 2020-09-16 2023-07-26 Complement Therapeutics Limited Complementome assay
EP4251170A1 (en) 2020-11-25 2023-10-04 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
CN117295753A (zh) 2020-12-04 2023-12-26 基那奥生物公司 用于将核酸递送到细胞的组合物和方法
EP4015634A1 (en) 2020-12-15 2022-06-22 Sylentis, S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases
IL305414A (en) 2021-03-04 2023-10-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them
WO2022211740A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Carmine Therapeutics Pte. Ltd. Extracellular vesicles loaded with at least two different nucleic acids
WO2022218941A2 (en) 2021-04-12 2022-10-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk)
MX2023012216A (es) 2021-04-14 2023-10-26 Dicerna Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion de pnpla3.
WO2022223515A2 (en) 2021-04-19 2022-10-27 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for inhibiting nuclear receptor subfamily 1 group h member 3 (nr1h3) expression
WO2022248665A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for inhibiting mitochondria amidoxime reducing component 1 (marc1) expression
EP4347828A1 (en) 2021-05-29 2024-04-10 1Globe Health Institute LLC Short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof
CN117858946A (zh) 2021-05-29 2024-04-09 强新科技国际研究院 作为新型基因沉默技术的非对称短双链体dna及其应用
CN117677699A (zh) 2021-06-23 2024-03-08 马萨诸塞大学 用于治疗先兆子痫和其他血管生成病症的优化抗flt1寡核苷酸化合物
KR20240042004A (ko) 2021-08-03 2024-04-01 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴(TTR) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
WO2023021046A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Vib Vzw Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression
US20230107967A1 (en) 2021-08-25 2023-04-06 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting alpha-1 antitrypsin expression
CN118043076A (zh) 2021-09-21 2024-05-14 约翰霍普金斯大学 用于细胞内递送的小分子生物制剂的树枝状大分子缀合物
MX2024005399A (es) 2021-11-11 2024-05-23 Hoffmann La Roche Combinaciones farmaceuticas para el tratamiento de hbv.
US20240043846A1 (en) 2021-11-19 2024-02-08 Kist (Korea Institute Of Science And Technology) Therapeutic Compounds for Red Blood Cell-Mediated Delivery of an Active Pharmaceutical Ingredient to a Target Cell
CN118355120A (zh) 2021-12-01 2024-07-16 迪克纳制药公司 用于调节apoc3表达的组合物和方法
WO2023118546A2 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh METHODS AND MOLECULES FOR RNA INTERFERENCE (RNAi)
WO2023159189A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Yale University Branched poly(amine-co-ester) polymers for more efficient nucleic expression
GB202203627D0 (en) 2022-03-16 2022-04-27 Univ Manchester Agents for treating complement-related disorders
WO2023192872A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Rna scaffolded wireframe origami and methods thereof
GB202204884D0 (en) 2022-04-04 2022-05-18 Fondo Ricerca Medica S R I Sirna targeting kcna1
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
US20230374522A1 (en) 2022-04-15 2023-11-23 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating scap activity
TW202400792A (zh) 2022-05-12 2024-01-01 美商戴瑟納製藥股份有限公司 用於抑制ｍａｐｔ表現之組合物及方法
US20230416743A1 (en) 2022-05-13 2023-12-28 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting snca expression
WO2023230587A2 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and methods of use thereof
TW202400193A (zh) 2022-06-24 2024-01-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶６（ｔｍｐｒｓｓ６）表現的組成物及方法
WO2024040041A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Regulation of activity of rnai molecules
WO2024081736A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Yale University Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies
WO2024107993A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Stat3 targeting oligonucleotides and uses thereof
WO2024108217A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
WO2024112571A2 (en) 2022-11-21 2024-05-30 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
GB202219829D0 (en) 2022-12-29 2023-02-15 Ivy Farm Tech Limited Genetically manipulated cells
WO2024151877A2 (en) 2023-01-11 2024-07-18 Engage Biologics Inc. Non-viral expression systems and methods of use thereof
WO2024175588A1 (en) 2023-02-21 2024-08-29 Vib Vzw Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression
WO2024175586A2 (en) 2023-02-21 2024-08-29 Vib Vzw Inhibitors of synaptogyrin-3 expression
WO2024206405A2 (en) 2023-03-28 2024-10-03 Kist (Korea Institute Of Science And Technology) Therapeutic compounds for inhibiting and reducing the expression of cell surface proteins

Family Cites Families (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003006A (en) * 1933-04-11 1935-05-28 Michelson Barnett Samuel Water tank cover
US4469863A (en) * 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5208149A (en) * 1983-10-20 1993-05-04 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures
GB8704365D0 (en) * 1987-02-25 1987-04-01 Exxon Chemical Patents Inc Zeolite l preparation
US5712257A (en) * 1987-08-12 1998-01-27 Hem Research, Inc. Topically active compositions of mismatched dsRNAs
IE66830B1 (en) 1987-08-12 1996-02-07 Hem Res Inc Topically active compositions of double-stranded RNAs
US5703055A (en) * 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
ATE269870T1 (de) * 1989-10-24 2004-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc 2'-modifizierte oligonukleotide
US5457189A (en) * 1989-12-04 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus
CA2073500C (en) 1990-01-11 2008-03-25 Phillip Dan Cook Compositions and methods for detecting and modulating rna activity and gene expression
US5670633A (en) * 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5514577A (en) * 1990-02-26 1996-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses
WO1992007065A1 (en) * 1990-10-12 1992-04-30 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Modified ribozymes
FR2675803B1 (fr) 1991-04-25 1996-09-06 Genset Sa Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications.
WO1994008003A1 (en) * 1991-06-14 1994-04-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE
FR2685346B1 (fr) * 1991-12-18 1994-02-11 Cis Bio International Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications.
DE69331543T2 (de) 1992-03-05 2002-09-26 Isis Pharmaceutical, Inc. Kovalent vernetzte oligonukleotide
US5792751A (en) * 1992-04-13 1998-08-11 Baylor College Of Medicine Tranformation of cells associated with fluid spaces
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5693535A (en) * 1992-05-14 1997-12-02 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. HIV targeted ribozymes
US20030068301A1 (en) * 1992-05-14 2003-04-10 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B virus replication
US20040054156A1 (en) * 1992-05-14 2004-03-18 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication
US20030171311A1 (en) * 1998-04-27 2003-09-11 Lawrence Blatt Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection
NZ255028A (en) 1992-07-02 1997-03-24 Hybridon Inc Antisense oligonucleotides resistant to nucleolytic degradation
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
WO1994015645A1 (en) 1992-12-31 1994-07-21 Texas Biotechnology Corporation Antisense molecules directed against genes of the raf oncogene family
US6056704A (en) 1993-03-03 2000-05-02 Ide; Masatake Foot-pressure massage stand
EP0616026A1 (en) 1993-03-19 1994-09-21 The Procter & Gamble Company Concentrated cleaning compositions
KR960703170A (ko) * 1993-06-23 1996-06-19 알버트 디. 프리센. 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 인간면역결핍바이러스감염에서 그것의 치료적이용(antisense oligonucleotides and therapeutic use thereof in human immunodeficiency virus infection)
FR2710074B1 (fr) 1993-09-15 1995-12-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Gène GRB3-3, ses variants et leurs utilisations.
US5624803A (en) * 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
WO1995013834A1 (en) 1993-11-16 1995-05-26 Genta, Incorporated Chimeric oligonucleoside compounds
US5908779A (en) * 1993-12-01 1999-06-01 University Of Connecticut Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA
US5578716A (en) * 1993-12-01 1996-11-26 Mcgill University DNA methyltransferase antisense oligonucleotides
EP0759979A4 (en) * 1994-05-10 1999-10-20 Gen Hospital Corp ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES INHIBITION OF HEPATITIS C VIRUS
US6057153A (en) * 1995-01-13 2000-05-02 Yale University Stabilized external guide sequences
US5674683A (en) 1995-03-21 1997-10-07 Research Corporation Technologies, Inc. Stem-loop and circular oligonucleotides and method of using
US5624808A (en) * 1995-03-28 1997-04-29 Becton Dickinson And Company Method for identifying cells committed to apoptosis by determining cellular phosphotyrosine content
CA2222328C (en) 1995-06-07 2012-01-10 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
EP0851919A1 (en) * 1995-09-20 1998-07-08 University of Massachusetts Worcester Antisense oligonucleotide chemotherapy for benign hyperplasia or cancer of the prostate
US5998203A (en) * 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
AU725262B2 (en) 1996-02-14 2000-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar-modified gapped oligonucleotides
WO1997039120A2 (en) 1996-04-17 1997-10-23 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vefg/vpf) expression
DE19618797C2 (de) 1996-05-10 2000-03-23 Bertling Wolf Vehikel zum Transport molekularer Substanz
US20040266706A1 (en) 2002-11-05 2004-12-30 Muthiah Manoharan Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
DE19631919C2 (de) 1996-08-07 1998-07-16 Deutsches Krebsforsch Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur
US6225290B1 (en) * 1996-09-19 2001-05-01 The Regents Of The University Of California Systemic gene therapy by intestinal cell transformation
EP0972015B1 (en) * 1996-10-04 2006-06-07 Derek Nigel John Hart Enzyme having s-adenosyl-l-homocysteine hydrolase (ahcy) type activity
US5814500A (en) * 1996-10-31 1998-09-29 The Johns Hopkins University School Of Medicine Delivery construct for antisense nucleic acids and methods of use
IL130162A (en) 1996-12-12 2008-03-20 Yissum Res Dev Co Synthetic antisense oligodeoxynucleotides and pharmaceutical compositions containing them
US20030064945A1 (en) * 1997-01-31 2003-04-03 Saghir Akhtar Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors
GB9703146D0 (en) * 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
US6218142B1 (en) * 1997-03-05 2001-04-17 Michael Wassenegger Nucleic acid molecules encoding polypeptides having the enzymatic activity of an RNA-directed RNA polymerase (RDRP)
GB9710475D0 (en) 1997-05-21 1997-07-16 Zeneca Ltd Gene silencing
EP2341058A3 (en) 1997-09-12 2011-11-23 Exiqon A/S Oligonucleotide Analogues
EP2292771A3 (en) 1997-09-19 2011-07-27 Life Technologies Corporation Sense mRNA therapy
GB9720148D0 (en) * 1997-09-22 1997-11-26 Innes John Centre Innov Ltd Gene silencing materials and methods
US6506559B1 (en) * 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US6475726B1 (en) * 1998-01-09 2002-11-05 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Method for identifying validated target and assay combinations for drug development
CA2513336A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd. Control of gene expression in a non-human eukaryotic cell, tissue or organ
AUPP249298A0 (en) * 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
US20040214330A1 (en) * 1999-04-07 2004-10-28 Waterhouse Peter Michael Methods and means for obtaining modified phenotypes
EP2267138B1 (en) 1998-04-08 2016-06-08 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization Methods and means for obtaining modified phenotypes
WO1999054459A2 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
GB9827152D0 (en) 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
AU1408300A (en) 1998-11-24 2000-06-13 Hisamitsu Pharmaceutical Co. Inc. Hiv infection inhibitors
WO2000032619A1 (en) 1998-11-30 2000-06-08 Ribogene, Inc. Methods and compositions for identification of inhibitors of ribosome assembly
US6939712B1 (en) 1998-12-29 2005-09-06 Impedagen, Llc Muting gene activity using a transgenic nucleic acid
AU776150B2 (en) * 1999-01-28 2004-08-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
CN1375004A (zh) 1999-04-21 2002-10-16 惠氏公司 抑制多核苷酸序列的功能的方法和组合物
US20040002153A1 (en) * 1999-07-21 2004-01-01 Monia Brett P. Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10160151A1 (de) 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
RU2164944C1 (ru) * 1999-12-09 2001-04-10 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН Способ изменения генетических свойств организма
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
AU2001260114A1 (en) 2000-03-14 2001-09-24 Syngenta Participations Ag Protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes
US20030084471A1 (en) * 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
EP1272630A2 (en) * 2000-03-16 2003-01-08 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
DK2360253T3 (da) 2000-03-30 2014-06-16 Whitehead Biomedical Inst Fremgangsmåde til fremstilling af knockdown-celler eller knockdown-organismer ved hjælp af RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens og anvendelser deraf
KR20080023768A (ko) 2000-03-30 2008-03-14 화이트헤드 인스티튜트 포 바이오메디칼 리서치 Ｒｎａ 간섭의 ｒｎａ 서열 특이적인 매개체
CA2410947A1 (en) 2000-05-30 2001-12-06 Johnson & Johnson Research Pty Limited Methods for mediating gene suppresion by using factors that enhance rnai
WO2003103600A2 (en) 2002-06-05 2003-12-18 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
WO2002044321A2 (en) * 2000-12-01 2002-06-06 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
CA2430886A1 (en) 2000-12-08 2002-08-08 Invitrogen Corporation Compositions and methods for rapidly generating recombinant nucleic acid molecules
EP1354038A2 (en) 2000-12-28 2003-10-22 J &amp; J Research Pty Ltd Double-stranded rna-mediated gene suppression
US7423142B2 (en) * 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
WO2003035869A1 (de) 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens
EP1229134A3 (en) * 2001-01-31 2004-01-28 Nucleonics, Inc Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
CA2442092A1 (en) * 2001-03-26 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
US20030124513A1 (en) * 2001-05-29 2003-07-03 Mcswiggen James Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV
US20040006035A1 (en) * 2001-05-29 2004-01-08 Dennis Macejak Nucleic acid mediated disruption of HIV fusogenic peptide interactions
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
DE50101770D1 (de) 2001-06-01 2004-04-29 Mobilkom Austria Ag & Co Kg Wi Verfahren zur Bestimmung des Standortes einer Mobilstation in einem Mobilfunksystem
US20030140362A1 (en) * 2001-06-08 2003-07-24 Dennis Macejak In vivo models for screening inhibitors of hepatitis B virus
EP2428571B1 (en) * 2001-09-28 2018-07-18 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. MicroRNA molecules
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
JP2005506087A (ja) * 2001-10-26 2005-03-03 リボファーマ アーゲー プラス鎖ｒｎａウイルスによる感染症を処置するための２本鎖リボ核酸の使用
US20040121348A1 (en) * 2001-10-26 2004-06-24 Ribopharma Ag Compositions and methods for treating pancreatic cancer
DE10230997A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels
DE10154113A1 (de) 2001-11-03 2003-05-15 Opel Adam Ag Frontstruktur eines Kraftfahrzeuges
DE10202419A1 (de) * 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
US20030166282A1 (en) 2002-02-01 2003-09-04 David Brown High potency siRNAS for reducing the expression of target genes
ES2312753T5 (es) * 2002-02-14 2012-12-13 City Of Hope Procedimientos para producir moléculas de ARN de interferencia en células de mamífero y usos terapéuticos para tales moléculas
WO2003076592A2 (en) * 2002-03-06 2003-09-18 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of sirna molecules
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US20030180756A1 (en) * 2002-03-21 2003-09-25 Yang Shi Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression
US20040053876A1 (en) * 2002-03-26 2004-03-18 The Regents Of The University Of Michigan siRNAs and uses therof
AU2003237686A1 (en) 2002-05-24 2003-12-12 Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Rna interference mediating small rna molecules
WO2003106630A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
EP1520022B1 (en) 2002-07-10 2015-07-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna-interference by single-stranded rna molecules
US20040241854A1 (en) * 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
DK3222724T3 (en) 2002-08-05 2018-12-03 Silence Therapeutics Gmbh ADDITIONALLY UNKNOWN FORMS OF INTERFERRING RNA MOLECULES
US8729036B2 (en) * 2002-08-07 2014-05-20 University Of Massachusetts Compositions for RNA interference and methods of use thereof
AU2003273336A1 (en) * 2002-09-18 2004-04-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Efficient reduction of target rna's by single- and double-stranded oligomeric compounds
AU2003282877B9 (en) 2002-09-25 2011-05-12 University Of Massachusetts In Vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA
EP1560840B1 (en) 2002-11-05 2015-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
EP2305813A3 (en) 2002-11-14 2012-03-28 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
US20040214198A1 (en) 2002-11-15 2004-10-28 University Of Massachusetts Allele-targeted RNA interference
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
WO2004063375A1 (en) 2003-01-15 2004-07-29 Hans Prydz OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE
US20040224328A1 (en) * 2003-01-15 2004-11-11 Hans Prydz siRNA screening method
WO2004065600A2 (en) 2003-01-17 2004-08-05 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference by palindromic or modified rna molecules
EP2314687B1 (en) 2003-01-17 2017-12-27 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Inducible small interfering rna (sirna) expression constructs for targeted gene silencing
WO2004076622A2 (en) 2003-02-10 2004-09-10 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology Regulation of gene expression by dna interference
US20040231016A1 (en) * 2003-02-19 2004-11-18 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization Efficient gene silencing in plants using short dsRNA sequences
DK1633767T3 (en) 2003-06-02 2019-03-25 Univ Massachusetts METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING
US6998203B2 (en) * 2003-08-01 2006-02-14 Intel Corporation Proximity correcting lithography mask blanks
EP2230304B1 (en) 2005-01-07 2012-03-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc. RNAI modulation of RSV and therapeutic uses thereof
WO2013009634A2 (en) 2011-07-08 2013-01-17 Inteva Products Llc. Method for stitching vehicle interior components and components formed from the method

Also Published As

Publication number Publication date
RU2007131270A (ru) 2009-02-27
US8372968B2 (en) 2013-02-12
HK1110631A1 (en) 2008-07-18
US20110027883A1 (en) 2011-02-03
HU230458B1 (hu) 2016-07-28
RU2322500C2 (ru) 2008-04-20
EP1873259B1 (en) 2012-01-25
AU2007203385B2 (en) 2010-05-20
AU2010212438A2 (en) 2010-09-23
ATE373724T2 (de) 2007-10-15
JP6189576B2 (ja) 2017-08-30
PL218876B1 (pl) 2015-02-27
JP4494392B2 (ja) 2010-06-30
US20110065773A1 (en) 2011-03-17
IL155991A (en) 2013-06-27
US20110020234A1 (en) 2011-01-27
US8933044B2 (en) 2015-01-13
AU2010212438B2 (en) 2013-05-09
NZ525888A (en) 2006-04-28
ES2215494T1 (es) 2004-10-16
US20100292456A1 (en) 2010-11-18
CY1119062T1 (el) 2018-01-10
JP2004526422A (ja) 2004-09-02
KR100909681B1 (ko) 2009-07-29
DE60130583D1 (de) 2007-10-31
CA2429814C (en) 2014-02-18
US10633656B2 (en) 2020-04-28
US8778902B2 (en) 2014-07-15
HUP0302557A3 (en) 2005-12-28
WO2002044321A3 (en) 2003-10-23
US7078196B2 (en) 2006-07-18
MXPA03004836A (es) 2005-09-08
US20110054159A1 (en) 2011-03-03
PL365784A1 (en) 2005-01-10
US20110306651A1 (en) 2011-12-15
NO20032464D0 (no) 2003-05-30
NO20130246L (no) 2003-07-21
EP2348133B1 (en) 2014-07-16
CZ302719B6 (cs) 2011-09-21
EP1407044B1 (en) 2007-09-19
ZA200303929B (en) 2004-07-19
HUP0302557A2 (hu) 2003-10-28
LTPA2021005I1 (no) 2021-06-10
PT1407044E (pt) 2008-01-02
US20100010207A1 (en) 2010-01-14
SI1407044T1 (sl) 2008-04-30
CA2429814A1 (en) 2002-06-06
AU2002235744B8 (en) 2007-06-28
CN100523215C (zh) 2009-08-05
US8853384B2 (en) 2014-10-07
HK1204798A1 (en) 2015-12-04
DK1407044T4 (en) 2017-12-04
US9567582B2 (en) 2017-02-14
JP6325974B2 (ja) 2018-05-16
EP1873259A1 (en) 2008-01-02
AU2007203385A1 (en) 2007-08-09
ES2215494T3 (es) 2008-04-01
US20040259247A1 (en) 2004-12-23
US20110014123A1 (en) 2011-01-20
EP2348133A1 (en) 2011-07-27
US20100316703A1 (en) 2010-12-16
US8993745B2 (en) 2015-03-31
US20050026278A1 (en) 2005-02-03
KR100872437B1 (ko) 2008-12-05
JP2009284915A (ja) 2009-12-10
JP2015061534A (ja) 2015-04-02
US8895718B2 (en) 2014-11-25
CZ2011452A3 (no) 2003-10-15
US20150141492A1 (en) 2015-05-21
KR20040012686A (ko) 2004-02-11
CZ20031839A3 (cs) 2003-10-15
JP5749892B2 (ja) 2015-07-15
BRPI0115814B8 (pt) 2021-05-25
US20070093445A1 (en) 2007-04-26
DK1407044T3 (da) 2008-01-28
ES2728168T3 (es) 2019-10-22
ES2215494T5 (es) 2017-12-28
US8796016B2 (en) 2014-08-05
US8895721B2 (en) 2014-11-25
JP2007111053A (ja) 2007-05-10
NO20032464L (no) 2003-07-21
NO335426B1 (no) 2014-12-15
US20090155174A1 (en) 2009-06-18
US20110065109A1 (en) 2011-03-17
US20110070162A1 (en) 2011-03-24
EP1407044A2 (en) 2004-04-14
IL207727A (en) 2014-04-30
US20050234007A1 (en) 2005-10-20
SI1407044T2 (en) 2018-03-30
US20050234006A1 (en) 2005-10-20
US20040229266A1 (en) 2004-11-18
RU2470073C2 (ru) 2012-12-20
HK1139433A1 (en) 2010-09-17
DK2813582T3 (en) 2017-07-31
HK1139181A1 (en) 2010-09-10
US7056704B2 (en) 2006-06-06
KR20080069602A (ko) 2008-07-28
BRPI0115814B1 (pt) 2019-10-15
JP4095895B2 (ja) 2008-06-04
BR0115814A (pt) 2004-03-23
CZ308053B6 (cs) 2019-11-27
US8362231B2 (en) 2013-01-29
US20110112283A1 (en) 2011-05-12
IL155991A0 (en) 2003-12-23
JP2010131031A (ja) 2010-06-17
AU2010212438A1 (en) 2010-09-09
EP1407044B2 (en) 2017-11-15
TR200401292T3 (tr) 2004-07-21
US8765930B2 (en) 2014-07-01
US8445237B2 (en) 2013-05-21
US20170327822A1 (en) 2017-11-16
US20200299693A1 (en) 2020-09-24
US20080269147A1 (en) 2008-10-30
AU2002235744B2 (en) 2007-04-19
DE60130583T2 (de) 2008-06-12
AU3574402A (en) 2002-06-11
CN1568373A (zh) 2005-01-19
US20040259248A1 (en) 2004-12-23
DE60130583T3 (de) 2018-03-22
US20130125259A1 (en) 2013-05-16
US8329463B2 (en) 2012-12-11
WO2002044321A2 (en) 2002-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200299693A1 (en) Rna interference mediating small rna molecules
EP2351852B1 (en) RNA interference mediating small RNA molecules
AU2014250627B2 (en) Rna interference mediating small rna molecules
AU2013201799B2 (en) Rna interference mediating small rna molecules
Class et al. Patent application title: RNA INTERFERENCE MEDIATING SMALL RNA MOLECULES Inventors: Thomas Tuschl (New York, NY, US) Sayda Mahgoub Elbashir (Cambridge, MA, US) Winfried Lendeckel (Hohengandern, DE) Assignees: Max-Planck-Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired