ES2728168T3 - Moléculas pequeñas de ARN que median en la interferencia de ARN - Google Patents
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Abstract
Molécula de ARN de doble hebra aislada, en la que cada hebra de ARN tiene una longitud de 19-25 nucleótidos y al menos una hebra tiene un saliente 3' de 1-5 nucleótidos, en donde dicha molécula de ARN es capaz de interferencia de ARN específica para una diana.
Description
DESCRIPCIÓN
Moléculas pequeñas de ARN que median en la interferencia de ARN
La presente invención se refiere a la secuencia y las características estructurales de moléculas de ARN de doble hebra (ds) requeridas para mediar en modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana tales como interferencia de ARN y/o metilación de ADN.
El término "interferencia de ARN " (iARN) se acuñó después del descubrimiento de la inyección de ARNds en el nematodo C. elegans conduce a una inactivación específica de genes altamente homólogos en secuencia con el ARNds aportado (Fire y cols., 1998). La iARN también se observó posteriormente en insectos, ranas (Oelgeschlager y cols., 2000) y otros animales incluyendo ratones (Svoboda y cols., 2000; Wianny y Zemicka-Goetz, 2000) y es probable que también exista en el ser humano. La iARN está muy relacionada con el mecanismo de inactivación génica postranscripcional (PTGS) de cosupresión en plantas y represión en hongos (Catalanotto y cols., 2000; Cogoni y Macino, 1999; Dalmay y cols., 2000; Ketting y Plasterk, 2000; Mourrain y cols., 2000; Smardon y cols., 2000) y algunos componentes de la maquinaria de la iARN también son necesarios para la inactivación postranscripcional mediante cosupresión (Catalanotto y cols., 2000; Dernburg y cols., 2000; Ketting y Plasterk, 2000). El asunto también se ha revisado recientemente (Bass, 2000; Bosher y Labouesse, 2000; Fire, 1999; Plasterk y Ketting, 2000; Sharp, 1999; Sijen y Kooter, 2000), véase además toda la edición de Plant Molecular Biology, vol.
43, edición 2/3, (2000).
En las plantas, además de PTGS, los transgenes introducidos también pueden conducir a inactivación génica transcripcional a través de metilación de ADN dirigida por ARN de citosinas (véanse las referencias del Wassenegger, 2000). Dianas genómicas tan cortas como 30 pb se metilan en plantas de un modo dirigido por ARN (Pelissier, 2000). La metilación de ADN también está presente en mamíferos.
La función natural de la iARN y la cosupresión parece ser la protección del genoma contra la invasión por elementos genéticos móviles tales como retrotransposones y virus que producen ARN o ARNds aberrantes en la célula hospedadora cuando se hacen activos (Jensen y cols, 1999; Ketting y cols., 1999; Ratcliff y cols., 1999; Tabara y cols., 1999). La degradación específica de ARNm evitar la replicación de transposones y virus aunque algunos virus son capaces de vencer o evitar este proceso al expresar proteínas que suprimen PTGS (Lucy y cols., 2000; Voinnet y cols., 2000).
El ARNds desencadena la degradación específica de ARN homólogos solo dentro de la región de identidad con el ARNds (Zamore y cols., 2000). El ARNds es procesado hasta fragmentos de ARN de 21-23 nt y los sitios de escisión del ARN diana están separados regularmente 21-23 nt. Por lo tanto, se ha sugerido que los fragmentos de 21-23 nt son los ARN guía para el reconocimiento de la diana (Zamore y cols., 2000). Estos ARN cortos también se detectaron en extractos preparados a partir de células se Schneider 2 de D. melanogaster que se transfectaron con ARNds antes de la lisis celular (Hammond y cols., 2000), sin embargo, las fracciones que desplegaban actividad de nucleasa específica de la secuencia también contenían una fracción grande de ARNds residual. El papel de los fragmentos de 21-23 nt en la escisión de ARNm guía está apoyado adicionalmente por la observación de que los fragmentos de 21-23 nt aislados de ARNds procesado son capaces, hasta algún grado, de mediar en la degradación específica de ARNm (Zamore y cols., 2000). Moléculas de ARN de tamaño similar también se acumulan en tejido vegetal que exhibe PTGS (Hamilton y Baulcombe, 1999).
En la presente, se usa el sistema in vitro de Drosophila establecido (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000) para explorar adicionalmente el mecanismo de iARN. Se demuestra que los ARN cortos de 21 y 22 nt, cuando se someten a apareamiento de bases con extremos salientes 3', actúan como los ARN guía para la degradación de ARNm específica para la secuencia. Los ARNds cortos de 30 pb son incapaces de mediar en la iARN en este sistema debido a que ya no son procesados hasta ARN de 21 y 22 nt. Por otra parte, se definieron los sitios de escisión de ARN diana con relación a ARN interferentes cortos (ARNsi) de 21 y 22 nt y se proporciona una evidencia de que la dirección del procesamiento de ARNds determina si un ARN diana de sentido o antisentido puede ser escindido por el complejo de endonucleasa siRNP producido. Además, los ARNsi también pueden ser herramientas importantes para la modulación transcripcional, p. ej. la inactivación de genes de mamífero al guiar la metilación de ADN
Experimentos adicionales en sistemas de cultivo celular in vivo humanos (células HeLa) muestran que las moléculas de ARN de doble hebra que tienen una longitud preferiblemente de 19-25 nucleótidos tienen actividad de iARN. Así, en contraste con los resultados de Drosophila, también las moléculas de ARN de doble hebra de 24 y 25 nt de longitud son eficaces para la iARN.
El objetivo subyacente a la presente invención es proporcionar nuevos agentes capaces de mediar en la interferencia de ARN específica para una diana u otras modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana tales como metilación de ADN, teniendo dichos agentes una eficacia y una seguridad mejoradas en comparación con agentes de la técnica anterior.
La solución de este problema se proporciona mediante una molécula de ARN de doble hebra aislada, en donde cada hebra de ARN tiene una longitud de 19-25 nucleótidos, particularmente de 19-23 nucleótidos, en donde dicha molécula de ARN es capaz de mediar en modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana, particularmente interferencia de ARN y/o metilación de ADN. Preferiblemente al menos una hebra tiene un saliente 3' de 1-5 nucleótidos, más preferiblemente de 1-3 nucleótidos y lo más preferiblemente 2 nucleótidos. La otra hebra puede ser de extremos romos o tiene un saliente 3' de hasta 6 nucleótidos. Además, si ambas hebras del ARNds tienen exactamente 21 o 22 nt, es posible observar alguna interferencia de ARN cuando ambos extremos son romos (saliente de 0 nt). La molécula de ARN es preferiblemente una molécula de ARN sintética que está sustancialmente libre de contaminantes que se presentan en extractos celulares, p. ej. Procedentes de embriones de Drosophila. Además, la molécula de ARN preferiblemente está sustancialmente libre de contaminantes no específicos para una diana, particularmente moléculas de ARN no específicas para una diana, p. ej. procedentes de contaminantes que están presentes en extractos celulares.
Además, la invención se refiere al uso de moléculas de ARN de doble hebra aisladas, en las que cada hebra de ARN tiene una longitud de 19-25 nucleótidos, para mediar en modificaciones de ácidos nucleicos no específicas para una diana, particularmente iARN, en células de mamífero, particularmente en células humanas.
Sorprendentemente, se encontró que las moléculas de ARN de doble hebra cortas sintéticas, particularmente con extremos 3' salientes, son mediadores específicos para una secuencia de iARN y median en la escisión eficaz de ARN diana, en donde el sitio de escisión está situado en el centro de la región abarcada por el ARN corto de guía.
Preferiblemente, cada hebra de la molécula de ARN tiene una longitud de 20-22 nucleótidos (o 20-25 nucleótidos en células de mamífero), en donde la longitud de cada hebra puede ser igual o diferente. Preferiblemente, la longitud del saliente 3' alcanza de 1-3 nucleótidos, en donde la longitud del saliente puede ser igual o diferente para cada hebra. Las hebras de ARN tienen preferiblemente grupos hidroxilo 3'. El extremo 5' comprende preferiblemente un grupo fosfato, difosfato, trifosfato o hidroxilo. Los ARNds más eficaces están compuestos por dos hebras de 21 que están apareadas de modo que estén presentes salientes 3' de 1-3, particularmente 2 nt, en ambos extremos del ARNds.
La reacción de escisión de ARN diana guiada por ARNsi es altamente específico para una secuencia. Sin embargo, no todas las posiciones de un ARNsi contribuyen igualmente al reconocimiento de la diana. Los desemparejamientos en el centro del dúplex de ARNsi son los más críticos y suprimen esencialmente la escisión del ARN diana. En contraste, el nucleótido 3' de la hebra de ARNsi (p. ej. la posición 21), que es complementaria al ARN diana de una sola hebra, no contribuye a la especificidad del reconocimiento de la diana. Además, la secuencia del saliente 3' de dos 2 nt desapareado de la hebra de ARNsi con la misma polaridad que el ARN diana no es crítica para la escisión del ARN diana ya que solamente la hebra de ARNsi antisentido guía el reconocimiento de la diana. Así, a partir de los nucleótidos salientes de una sola hebra, solo la penúltima posición del ARNsi antisentido (p. ej. la posición 20) necesita emparejarse al ARNm de sentido elegido como diana.
Sorprendentemente, las moléculas de ARN de doble hebra de la presente invención exhiben una alta estabilidad in vivo en suero o en medio de crecimiento para cultivos celulares. A fin de potenciar más la estabilidad, los salientes 3' se pueden estabilizar contra la degradación, p. ej. se pueden seleccionar de modo que consistan en nucleótidos de purina, particularmente nucleótidos de adenosina o guanosina. Alternativamente, la substitución de nucleótidos de pirimidina por análogos modificados, p. ej. la substitución de salientes 3' de 2 nt de uridina por 2'-desoxitimidina es tolerada y no afecta a la eficacia de la interferencia de ARN. La ausencia de un hidroxilo 2' potencia significativamente la resistencia a nucleasa del saliente en medio de cultivo tisular.
En una realización especialmente preferida de la presente invención, la molécula de ARN puede contener al menos un análogo nucleotídico modificado. Los análogos nucleotídicos pueden estar situados en posiciones en las que la actividad específica para una diana, p. ej. la actividad mediadora de iARN, no se ve sustancialmente afectada, p. ej. en una región en el extremo 5' y/o el extremo 3' de la molécula de ARN de doble hebra. Particularmente, los salientes se pueden estabilizar al incorporar análogos nucleotídicos modificados.
Análogos nucleotídicos preferidos se seleccionan de ribonucleótidos modificados en el azúcar o el esqueleto. Sin embargo, se debe apuntar que también son adecuados ribonucleótidos modificados en la nucleobase, es decir ribonucleótidos, que contienen una nucleobase no presente en la naturaleza en lugar de una nucleobase presente en la naturaleza tal como uridinas o citidinas modificadas en la posición 5, p. ej. 5-(2-amino)propiluridina, 5-bromouridina; adenosinas y guanosinas modificadas en la posición 8, p. ej. 8-bromoguanosina; desazanucleótidos, p. ej. 7-desaza-adenosina; nucleótidos alquilados en O y N, p. ej. N6-metiladenosina. En ribonucleótidos modificados en al azúcar preferidos, el grupo 2 OH se reemplaza por un grupo seleccionado de H, OR, R, halo, SH, SR, NH2 , NHR, NR2 o CN, en donde R es alquilo C1-C6, alquenilo o alquinilo y halo es F, Cl, Br o I.
En ribonucleótidos modificados en el esqueleto preferidos, el grupo fosfoéster que conecta con ribonucleótidos adyacentes se reemplaza por un grupo modificado, p. ej. de un grupo fosfotioato. Se debe apuntar que las modificaciones anteriores se pueden combinar.
La secuencia de la molécula de ARN de doble hebra de la presente invención tiene que tener una identidad suficiente con una molécula diana de ácido nucleico a fin de mediar en la iARN y/o la metilación de ADN específicas para una diana. Preferiblemente, la secuencia tiene una identidad de al menos 50%, particularmente de al menos 70%, con la molécula diana deseada en la porción de doble hebra de la molécula de ARN. Más preferiblemente, la identidad es al menos 85% y lo más preferiblemente 100% en la porción de doble hebra de la molécula de ARN. La identidad de una molécula de ARN de doble hebra con una molécula diana de ácido nucleico predeterminada, p. ej. una molécula diana de ARNm, se puede determinar como sigue:
n
! = — X 100
L
en donde I es la identidad en porcentaje, n es el número de nucleótidos idénticos en la porción de doble hebra del ARNds y la diana y L es la longitud del saliente de secuencias de la porción de doble hebra del ARNds y la diana.
Alternativamente, la identidad de la molécula de ARN de doble hebra con la secuencia diana también se puede definir incluyendo el saliente 3', particularmente un saliente que tiene una longitud de 1-3 nucleótidos. En este caso, la identidad de secuencia es preferiblemente al menos 50%, más preferiblemente al menos 70% y lo más preferiblemente al menos 85% con la secuencia diana. Por ejemplo, los nucleótidos desde el saliente 3' y hasta 2 nucleótidos desde el extremo 5' y/o 3' de la doble hebra se pueden modificar sin una pérdida de actividad significativa.
La molécula de ARN de doble hebra de la invención se puede preparar mediante un método que comprende las etapas:
(a) sintetizar dos hebras de ARN que tienen cada una longitud de 19-25, por ejemplo de 19-23 nucleótidos, en donde dichas hebras de ARN son capaces de formar una molécula de ARN de doble hebra, en donde preferiblemente al menos una hebra tiene un saliente 3' de 1-5 nucleótidos.
(b) combinar las hebras de ARN sintetizadas bajo condiciones en las que se forma una molécula de ARN de doble hebra, que es capaz de mediar en modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana, particularmente interferencia de ARN y/o metilación de ADN.
Se conocen en la técnica métodos para sintetizar moléculas de ARN. En este contexto, se refiere particularmente a métodos de síntesis química como los descritos en Verma y Eckstein (1998).
Los ARN de una sola hebra también se pueden preparar mediante la transcripción enzimática a partir de plantillas de ADN sintéticas o a partir de plásmidos de ADN aislados de bacterias recombinantes. Típicamente, se usan ARN polimerasas fágicas tales como ARN polimerasa de T7, T3 o SP6 (Milligan y Uhlenbeck (1989)).
Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un método in vitro para mediar en modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana, particularmente interferencia de ARN y/o metilación de ADN en una célula, que comprende las etapas:
(a) poner en contacto la célula con la molécula de ARN de doble hebra de la invención bajo condiciones en las que se puedan modificaciones de ácidos nucleicos específicas para una diana y
(b) mediar en una modificación de ácido nucleico específica para una diana efectuada por el ARN de doble hebra hacia un ácido nucleico diana que tiene una porción de secuencia sustancialmente correspondiente al ARN de doble hebra.
Preferiblemente, la etapa de contacto (a) comprende introducir la molécula de ARN de doble hebra en una célula diana, p. ej. una célula diana aislada, p. ej. en cultivo celular, un microorganismo unicelular o una célula diana o una pluralidad de células diana dentro de un organismo multicelular. Más preferiblemente, la etapa de introducción comprende un aporte mediado por portador, p. ej. por portadores liposómicos o por inyección.
El método de la invención se puede usar para determinar la función de un gen en una célula o un organismo o incluso para modular la función de un gen en una célula o un organismo, siendo capaz de mediar en la interferencia de ARN. Preferiblemente, la célula es una célula o una línea celular eucariótica, p. ej. una célula vegetal o una célula animal, tal como una célula de mamífero, p. ej. una célula embrionaria, un citoblasto pluripotente, una célula tumoral, p. ej. una célula de teratocarcinoma o una célula infectada con virus. El organismo es preferiblemente un organismo eucariótico, p. ej. una planta o un animal, tal como un mamífero, particularmente un ser humano.
El gen diana al que se dirige la molécula de ARN de la invención puede estar asociado con una afección patológica. Por ejemplo, el gen puede ser un gen asociado a patógenos, p. ej. un gen viral, un gen asociado a tumores o un gen asociado a enfermedades autoinmunitarias. El gen diana también puede ser un gen heterólogo expresado en una
célula recombinante o un organismo genéticamente alterado. Al determinar o modular, particularmente inhibir, la función de este gen, se pueden obtener una información valiosa y beneficios terapéuticos en el campo agrícola o en el campo de la medicina o la medicina veterinaria.
El ARNds se administra habitualmente como una composición farmacéutica. La administración se puede llevar a cabo mediante métodos conocidos, en los que un ácido nucleico se introduce en una célula diana deseada in vitro o in vivo. Técnicas de transferencia génica comúnmente usadas incluyen fosfato cálcico, DEAE-dextrano, electroporación y microinyección y métodos virales (Graham, F.L. y van der Eb, A.J. (1973) Virol. 52, 456; McCutchan, J.H. y Pagano, J.S. (1968), J. Natl. Cancer Inst. 41, 351; Chu, G. y cols (1987), Nucl. Acids Res. 15, 1311; Fraley, R. y cols. (1980), J. Biol. Chem. 255, 10431; Capecchi, M.R. (1980), Cell 22, 479). Una adición reciente a este conjunto de técnicas para la introducción de ADN en células es el uso de liposomas catiónicos (Felgner, P.L. y cols. (1987), Proc. Natl. Acad. Sci USA 84, 7413). Formulaciones lipídicas catiónicas disponibles comercialmente son, p. ej., Tfx 50 (Promega) o Lipofectamin2000 (Life Technologies).
Así, la invención también se refiere a una composición farmacéutica que contiene como un agente activo al menos una molécula de ARN de doble hebra como la descrita anteriormente y un portador farmacéutico. La composición se puede usar para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas en medicina humana o en medicina veterinaria.
Para aplicaciones diagnósticas o terapéuticas, la composición puede estar en la forma de una solución, p. ej. una solución inyectable, una crema, una pomada, un comprimido, una suspensión o similares. La composición se puede administrar de cualquier modo adecuado, p. ej. mediante inyección, mediante aplicación oral, tópica, nasal, rectal, etc. El portador puede ser cualquier portador farmacéutico adecuado. Preferiblemente, se usa un portador que sea capaz de incrementar la eficacia de las moléculas de ARN para entrar en las células diana. Ejemplos adecuados de estos portadores son liposomas, particularmente liposomas catiónicos. Un método de administración más preferido es la inyección.
Una aplicación preferida adicional del método de iARN es un análisis funcional de células eucarióticas, u organismos eucarióticos no humanos, preferiblemente células u organismos mamíferos y lo más preferiblemente células humanas, p. ej. líneas celulares tales como HeLa o 293 o roedores, p. ej. ratas y ratones. Mediante transfección con moléculas de ARN de doble hebra adecuadas que son homólogas a un gen diana predeterminado o moléculas de ADN que codifican una molécula de ARN de doble hebra adecuada, se puede obtener un fenotipo de desactivación específico en una célula diana, p. ej. en un cultivo celular o en un organismo diana. Sorprendentemente, se encontró que la presencia de moléculas de ARN de doble hebra cortas no da como resultado una respuesta de interferones desde la célula hospedadora o el organismo hospedador.
Así, un aspecto adicional de la divulgación es una célula eucariótica o un organismo eucariótico no humano que exhibe un fenotipo de desactivación específico para un gen diana que comprende una expresión al menos parcialmente deficiente de al menos un gen diana endógeno en donde dicha célula u organismo es transfectado con al menos una molécula de ARN de doble hebra capaz de inhibir la expresión de al menos un gen diana endógeno o con un ADN que codifica al menos una molécula de ARN de doble hebra capaz de inhibir la expresión de al menos un gen diana endógeno. Se debe apuntar que la presente invención permite la desactivación específica para la diana de varios genes endógenos diferentes debido a la especificidad de iARN.
Fenotipos de desactivación específicos de un gen de células u organismos no humanos, particularmente de células humanas o mamíferos no humanos se pueden usar en procedimientos analíticos, p. ej. en el análisis funcional y/o fenotípico de procesos fisiológicos complejos tales como el análisis de perfiles de expresión génica y/o proteomas. Por ejemplo, se pueden preparar los fenotipos de desactivación de genes humanos en células cultivadas que se supone que son reguladores de procesos de empalme alternativos. Entre estos genes están particularmente los miembros de la familia de factores de empalme SR, p. ej. ASF/SF2, SC35, SRp20, SRp40 o SRp55. Además, se puede analizar el efecto de proteínas SR sobre los perfiles de ARNm de genes alternativamente sometidos a empalme predeterminados tales como CD44. Preferiblemente, el análisis se lleva a cabo mediante métodos de alto rendimiento usando chips basados en oligonucleótidos.
Usando tecnología de desactivación basadas en iARN, la expresión de un gen diana endógeno se puede inhibir en una célula diana o un organismo diana.
El gen endógeno se puede complementar mediante un ácido nucleico diana exógeno que codifica la proteína diana o una variante o forma mutada de la proteína diana, p. ej. un gen o un ADNc, que opcionalmente se puede fusionar a una secuencia de ácido nucleico adicional que codifica un péptido o polipéptido detectable, p. ej. un marcador de afinidad, particularmente un marcador de afinidad múltiple. Las variantes o formas mutadas del gen diana difieren del gen diana endógeno en que codifican un producto génico que difiere del producto génico endógeno a nivel de los aminoácidos por sustituciones, inserciones y/o eliminaciones de aminoácidos individuales o múltiples. Las variantes o las formas mutadas pueden tener la misma actividad biológica que el gen diana endógeno. Por otra parte, el gen diana variante o mutado también puede tener una actividad biológica, que difiere de la actividad biológica del gen
diana endógeno, p. ej. una actividad parcialmente eliminada, una actividad completamente eliminada, una actividad potenciada, etc.
La complementación se puede efectuar al coexpresar el polipéptido codificado por el ácido nucleico exógeno, p. ej. una proteína de fusión que comprende la proteína diana y el marcador de afinidad y la molécula de ARN de doble hebra para desactivar el gen endógeno en la célula diana. Esta coexpresión se puede efectuar al usar un vector de expresión adecuado que expresa tanto el polipéptido codificado por el ácido nucleico exógeno, p. ej. la proteína diana modificada con marcador, como la molécula de ARN de doble hebra o alternativamente al usar una combinación de vectores de expresión. Las proteínas y los complejos proteínicos que se sintetizan de novo en la célula diana contendrán el producto génico exógeno, p. ej. la proteína de fusión modificada. A fin de evitar la supresión de la expresión del producto génico endógeno por la molécula de dúplex de iARN, la secuencia nucleotídica que codifica el ácido nucleico exógeno se puede alterar a nivel del ADN (con o sin provocar mutaciones a nivel de los aminoácidos) en la parte de la secuencia que es homóloga a la molécula de ARN de doble hebra. Alternativamente, el gen diana endógeno puede estar complementado por las correspondientes secuencias nucleotídicas de otras especies, p. ej. de ratón.
Aplicaciones preferidas para la célula o el organismo de la divulgación son el análisis de perfiles de expresión génica y/o proteomas. En una realización especialmente preferida, se lleva a cabo un análisis de una forma variante o mutante de una o varias proteínas diana, en donde dichas formas variantes o mutantes se reintroducen en la célula o el organismo mediante un ácido nucleico diana exógeno según se describe anteriormente. La combinación de la desactivación de un gen endógeno y el rescate al usar una diana exógena mutada, p. ej. parcialmente eliminada, tiene ventajas en comparación con el uso de una célula desactivada. Además, este método es particularmente adecuado para identificar dominios funcionales de la proteína diana. En una realización preferida adicional, se lleva a cabo una comparación, p. ej. de perfiles de expresión génica y/o proteomas y/o características fenotípicas de al menos dos células u organismos. Estos organismos se seleccionan de:
(i) una célula de control o un organismo de control sin inhibición del gen diana,
(ii) una célula o un organismo con inhibición del gen diana y
(iii) una célula o un organismo con inhibición del gen diana más complementación del gen diana por un ácido nucleico diana exógeno.
El método y la célula de la invención también son adecuados en un procedimiento para identificar y/o caracterizar agentes farmacológicos, p. ej. identificar nuevos agente farmacológicos de una colección de sustancias de prueba y/o caracterizar mecanismos de acción y/o efectos secundarios de agente farmacológicos conocidos.
Así, la presente divulgación también se refiere a un sistema para identificar y/o caracterizar agentes farmacológicos que actúan sobre al menos una proteína diana, que comprende:
(a) una célula eucariótica o un organismo eucariótico no humano capaz de expresar al menos un gen diana endógeno que codifica dicha proteína diana,
(b) al menos una molécula de ARN de doble hebra capaz de inhibir la expresión de dicho al menos un gen diana endógeno, y
(c) una sustancia de prueba o una colección de sustancias de prueba en donde se han de identificar y/o caracterizar las propiedades farmacológicas de dicha sustancia de prueba o dicha colección.
Además, el sistema que se describe anteriormente comprende preferiblemente:
(d) al menos un ácido nucleico diana exógeno que codifica la proteína diana o una forma variante o mutada de la proteína diana en donde dicho ácido nucleico diana exógeno difiere del gen diana endógeno a nivel del ácido nucleico de modo que la expresión del ácido nucleico diana exógeno sea sustancialmente menos inhibida por la molécula de ARN de doble hebra que la expresión del gen diana endógeno.
Por otra parte, el método de complementación por desactivación de ARN se puede usar con propósitos preparativos, p. ej. para la purificación por afinidad de proteínas o complejos proteínicos a partir de células eucarióticas, particularmente células de mamífero y más particularmente células humanas. En esta realización de la divulgación, el ácido nucleico diana exógeno codifica preferiblemente una proteína diana que está fusionada a un marcador de afinidad.
El método preparativo se puede emplear para la purificación de complejos proteínicos de alto peso molecular que preferiblemente tienen una masa de > 150 kD y más preferiblemente de > 500 kD y que opcionalmente pueden contener ácidos nucleicos tales como ARN. Ejemplos específicos son el complejo proteínico heterotrímero que consiste en las proteínas de 20 kD, 60 kD y 90 kD de la partícula U4/U6 snRNP, el factor de empalme SF3b procedente de la 17S U2 snRNP que consiste en 5 proteínas que tienen pesos moleculares de 14, 49, 120, 145 y 155 kD y la partícula 25S U4/U6/U5 tri-snRNP que contiene las moléculas de ARN sn U4, U5 y U6 y aproximadamente 30 proteínas, que tiene un peso molecular de aproximadamente 1,7 MD.
Este método es adecuado para el análisis de proteomas funcionales en células de mamífero, particularmente células humanas.
Además, la presente invención se explica con más detalle en las siguientes figuras y ejemplos.
Leyendas de las figuras
Figura 1: ARN de doble hebra tan corto como 38 pb puede mediar en la iARN.
(A) Representación gráfica de ARNds usados para dirigirse a ARNm de Pp-luc. Se prepararon tres series de ARNds de extremos romos que cubrían un intervalo de 29 a 504 pb. La posición del primer nucleótido de la hebra de sentido del ARNds se indica con relación al codón de inicio de ARNm de Pp-luc (p1). (B) Ensayo de interferencia de ARN (Tuschl y cols., 1999). Las relaciones de actividad de Pp-luc diana a Rr-luc de control se normalizaron hasta un control de tampón (barra negra). Se preincubaron ARNds (5 nM) en lisado de Drosophila durante 15 min a 25°C antes de la adición de ARNm de Pp-luc y Rr-luc con caperuza de 7-metil-guanosina (-50 pM). La incubación se continuó durante otra hora y a continuación se analizó mediante el ensayo de luciferasa doble (Promega). Los datos son el promedio de al menos cuatro experimentos independientes ± desviación estándar.
Figura 2: Un ARNds de 29 pb ya no se procesa hasta fragmentos de 21-23 nt.
Transcurso del tiempo de la formación de 21-23 meros a partir del procesamiento de ARNds marcados con 32P internamente (5 nM) en el lisado de Drosophila. Se indican la longitud y la fuente del ARNds. Un marcador del tamaño de ARN (M) se ha cargado en el carril izquierdo y se indican los tamaños de los fragmentos. Las bandas dobles en el tiempo cero se deben a ARNds desnaturalizado incompletamente.
Figura 3: Los ARNds cortos escinden la diana de ARNm una sola vez.
(A) Electroforesis en gel desnaturalizantes de los productos de escisión 5' estables producidos mediante la incubación de 1 h de ARN de sentido o antisentido 10 nM marcado con 32P en la caperuza con ARNds 10 nM de la serie p133 en lisado de Drosophila. Se generaron marcadores de longitud mediante digestión parcial con nucleasa T1 e hidrólisis alcalina parcial (OH) del ARN diana marcado en la caperuza. Las regiones elegidas como diana por los ARNds se indican como barras negras en ambos lados. Se muestra el espacio de 20-23 nt entre los sitios de escisión predominantes para el ARNds de 111 pb de largo. La flecha horizontal indica escisión inespecífica no debida a iARN. (B) Posición de los sitios de escisión en ARN diana de sentido y antisentido. Las secuencias de los ARN diana de sentido de 177 nt y antisentido de 180 nt con caperuza se representan en orientación antiparalela de modo que las secuencia complementaria sean opuestas entre sí. La región elegida como diana por los diferentes ARNds se indican mediante barras de diferentes colores situadas entre las secuencia diana de sentido y antisentido. Los sitios de escisión se indican mediante círculos: círculo grande para escisión intensa, círculo pequeño para escisión débil. El grupo fosfato radiomarcado por 32P se señala mediante un asterisco.
Figura 4: Fragmentos de ARN de 21 y 22 nt se generan mediante un mecanismo similar a RNasa III.
(A) Secuencias de ARN de ~21 nt después del procesamiento de ARNds. Los fragmentos de ARN de ~21 nt generados por el procesamiento de ARNds se clonaron y secuenciaron direccionalmente. Los oligorribonucleótidos que se originan a partir de la hebra se sentido del ARNds se indican como líneas azules, los que se originan a partir de la hebra antisentido como líneas rojas. Se usan barras gruesas si estaba presente la misma secuencia en múltiples clones, indicando la frecuencia el número de la derecha. Los sitios de escisión de ARN diana mediados por el ARNds están indicados como círculos naranjas, círculo grande para escisión intensa, círculo pequeño para escisión débil (véase la Figura 3B). Los círculos en la parte superior de la hebra de sentido indicaban sitios de escisión dentro de la diana de sentido y los círculos en la parte inferior del ARNds indican un sitio de escisión en la diana antisentido. Se identificaron hasta cinco nucleótidos adicionales en fragmentos de ~21 nt derivados de los extremos 3' del ARNds. Estos nucleótidos son combinaciones aleatorias de residuos predominantemente de C, G o A y se añadieron lo más probablemente de un modo desprovisto de plantilla durante la transcripción por T7 de las hebras constitutivas de ARNds. (B) Análisis bidimensional por TLC de la composición de nucleótidos de ARN de ~21
nt. Los ARN de ~21 nt se generaron mediante la incubación de ARNds de Pp-luc de 504 pb internamente radiomarcado en lisado de Drosophila, se purificaron en gel y a continuación se digirieron hasta mononucleótidos con la nucleasa P1 (fila superior) o la ribonucleasa T2 (fila inferior). El ARNds se radiomarcó internamente mediante transcripción en presencia de uno de los trifosfatos de nucleósido a-32P indicados. La radiactividad se detectó mediante obtención de imágenes en placa de fósforo. Los 5'-monofosfatos de nucleósido, 3'-monofosfatos de nucleósido, 5',3'-difosfatos de nucleósido y el fosfato inorgánico se indican como pN, Np, pNp y pi, respectivamente. Los círculos negros indican puntos de absorción UV procedentes de nucleótidos portadores no radiactivos. Los 3',5'-bisfosfatos (círculos rojos) se identificaron mediante comigración con patrones radiomarcados preparados mediante la 5-fosforilación de 3'-monofosfatos de nucleósido con polinucleótido cinasa de T4 y y-32P-ATP.
Figura 5: ARN de 21 y 22 nt sintético median en la escisión de ARN diana.
(A) Representación gráfica de ARNds de 52 pb de control y ARNds de 21 y 22 nt sintéticos. La hebra de sentido de ARn interferentes cortos (ARNsi) de 21 y 22 nt se muestra en azul, la hebra antisentido en rojo. Las secuencias de los ARNsi se derivaban de los fragmentos clonados de ARNds de 52 y 111 pb (Figura 4A), excepto para la hebra antisentido de 22 nt del dúplex 5. Los ARNsi en el dúplex 6 y 7 eran únicos para la reacción de procesamiento del ARNds de 111 pb. Los dos nucleótidos salientes 3' indicados en verde están presentes en la secuencia de la hebra antisentido sintética de los dúplex 1 y 3. Ambas hebras de los ARNds de 52 pb de control se prepararon mediante transcripción in vitro y una fracción de transcritos puede contener adición de nucleótidos 3' sin plantilla. Los sitios de escisión de ARN diana dirigidos por los dúplex de ARNsi se indican como círculos naranjas (véase la leyenda de la Figura 4A) y se determinaron como se muestra en la Figura 5B. (B) Posición de los sitios de escisión en ARN diana de sentido y antisentido. Las secuencias de ARN diana son como se describen en la Figura 3B. Se incubaron ARNds de 52 pb de control (10 nM) o dúplex de ARN de 21 y 22 nt 1-7 (100 nM) con ARN diana durante 2,5 h a 25°C en lisado de Drosophila. Los productos de escisión 5' estables se resolvieron sobre el gel. Los sitios de escisión se indican en la Figura 5A. La región elegida como diana por el ARNds de 52 pb o las hebras de sentido (s) o antisentido (as) se indican por las barras negras en el lado del gel. Los sitios de escisión están todos situados dentro de la región de identidad de los ARNds. Para la determinación precisa de los sitios de escisión de la hebra antisentido, se usó un porcentaje inferior de gel.
Figura 6: Los salientes 3' largos en ARNds cortos inhiben iARN.
(A) Representación gráfica de construcción de ARNds de 52 pb. Las extensiones 3' de la hebra se sentido y antisentido se indican en azul y rojo, respectivamente. Los sitios de escisión observados en los ARN diana se representan como círculo naranja análogamente a la Figura 4A y se determinaron como se muestra en la Figura 6B. (B) Posición de los sitios de escisión en ARN diana de sentido y antisentido. Las secuencias de ARN diana son como se describen en la Figura 3B. Se incubó ARNds (10 nM) con ARN diana durante 2,5 h a 25°C en lisado de Drosophila. Los productos de escisión 5' estables se resolvieron sobre el gel. Los sitios de escisión principales se indican con una flecha horizontal y también se representan en la Figura 6A. La región elegida como diana por el ARNds de 52 pb se representa como una barra negra a ambos lados del gel.
Figura 7: Modelo propuesto para iARN.
Se predice que la iARN comienza con el procesamiento de ARNds (hebra de sentido en negro, hebra antisentido en rojo) hasta ARN interferentes cortos (ARNsi) predominantemente de 21 y 22 nt. Los nucleótidos 3' salientes cortos, si están presentes en el ARNds, pueden ser beneficiosos para el procesamiento de ARNds cortos. Las proteínas que procesan ARNds, que siguen sin caracterizarse, se representan como óvalos verdes y azules, y se ensamblan en el ARNds de modo asimétrico. En el presente modelo, esto se ilustra mediante la unión de una proteína o dominio proteínico azul hipotético con la hebra de ARNsi en la dirección 3' a 5' mientras que la proteína o el domino proteínico verde hipotético siempre está unido a la hebra de ARNsi opuesta. Estas proteínas o un subgrupo permanecen asociados con el dúplex de ARNsi y conservan su orientación según se determina por la dirección de la reacción de procesamiento de ARNds. Solamente la secuencia de ARNsi asociada con la proteína azul es capaz de guiar la escisión del ARN diana. El complejo con endonucleasa se denomina un complejo ribonucleoproteínico interferente pequeño o siRNP. Se supone en la presente que la endonucleasa que escinde el ARNds también puede escindir el Ar N diana, probablemente al desplazar temporalmente la hebra de ARNsi pasiva no usada para el reconocimiento de la diana. A continuación, el ARN diana se escinde en el centro de la región reconocida por el ARNsi de guía de secuencia complementaria.
Figura 8: Construcciones indicadoras y dúplex de ARNsi.
(a) Se ilustran las regiones de genes indicadores de luciferasa de luciérnaga (Pp-luc) y pensamiento de mar (Rr-luc) procedentes de los plásmidos pGL2-Control, pGL-3-Control y pRL-TK (Promega). Se indican elementos reguladores de SV40, el promotor de timidina cinasa de HSV y dos intrones (líneas). La secuencia de luciferasa GL3 es 95% idéntico a g L2, pero RL es completamente ajena a ambos. La expresión de luciferasa pGL2 es aprox. 10 veces
inferior que la de pGL3 en células de mamífero transfectadas. La región elegida como diana por los dúplex de ARNsi está indicada como una barra negra por debajo de la región codificante de los genes de luciferasa. (b) Se muestran las secuencias de sentido (superior) y antisentido (inferior) de los dúplex del ARNsi que eligen como diana luciferasa GL2, GL3 y RL. Los dúplex de ARNsi de GL2 y GL3 difieren solamente en 3 sustituciones de nucleótidos simples (encerrado en gris). Como control no específico, se sintetizó un dúplex con la secuencia de GL2 invertida, invGL2. El saliente 3' de 2 nt de 2'-desoxitimidina se indica como TT; uGL2 es similar a ARNsi de GL2 pero contiene salientes 3' de ribouridina.
Figura 9: Interferencia de ARN por dúplex de ARNsi.
Las relaciones de luciferasa diana-de control se normalizaron a un control de tampón (bu, barras negras); las barras grises indican relaciones de luciferasa GL2 o GL3 de Photinus pyralis (Pp-luc) a luciferasa RL de Renilla reniformis (Rr-luc) (eje izquierdo), mientras que las barras blancas indican relaciones de RL a GL2 o GL3 (eje derecho). Los paneles a, c, e, g e i describen experimentos realizados con la combinación de plásmidos pGL2-Control y señalizador pRL-TK, los paneles b, d, f, h y j con plásmidos pGL3-Control y señalizador pRL-TK. La línea celular usada para el experimento de interferencia se indica en la parte superior de cada gráfica. Las relaciones de Ppluc/Rr-luc para el control de tampón (bu) variaban entre 0,5 y 10 para pGL2/pRL y entre 0,03 y 1 para pGL3/pRL, respectivamente, antes de la normalización y entre las diversas líneas celulares probadas. Los datos representados se promediaron a partir de tres experimentos independientes ± D.E.
Figura 10: Efectos de ARNsi de 21 nt, ARNds de 50 pb y 500 pb sobre la expresión de luciferasa en células HeLa.
La longitud exacta de los ARNds largos se indica debajo de las barras. Los paneles a, c y e describen experimentos realizados con los plásmidos pGL2-Control y señalizador pRL-TK, los paneles b, d y f con los plásmidos pGL3-Control y señalizador pRL-TK. Los datos se promediaron a partir de dos experimentos independientes ± D.E. (a), (b) Expresión absoluta de Pp-luc, representada en unidades de luminiscencia arbitrarias. (c), (d) expresión de Rr-luc, representada en unidades de luminiscencia arbitrarias. (e), (f) Relaciones de luciferasa diana a control normalizada. Las relaciones de actividad de luciferasa para dúplex de ARNsi se normalizaron hasta un control de tampón (bu, barras negras); las relaciones de luminiscencia para ARNds de 50 o 500 pb se normalizaron hasta las relaciones respectivas observadas para ARNds de 50 y 500 pb a partir de GFP humanizada (hG, barras negras). Se debe apuntar que las diferencias globales en las secuencias entre los ARNds de 49 y 484 pb que eligen como diana GL2 y GL3 no son suficientes para conferir especificidad entre las dianas GL2 y GL3 (identidad ininterrumpida de 43 nt en el segmento de 49 pb, la identidad ininterrumpida más larga de 239 nt en el segmento de 484 pb).
Figura 11: Variación del saliente 3' de dúplex de ARNsi de 21 nt.
(A) Esbozo de la estrategia experimental. Se representa el ARNm diana de sentido con caperuza y poliadenilado y se muestran las posiciones relativas de ARNsi de sentido y antisentido. Se prepararon ocho series de dúplex, según las ochos hebras antisentido diferentes. Las secuencias de ARNsi y el número de nucleótidos salientes se cambiaron en etapas de 1 nt. (B) Luminiscencia relativa normalizada de luciferasa diana (Photinus pyralis, Pp-luc) a luciferasa de control (Renilla reniformis, Rr-luc) en lisado de embriones de D. melanogaster en presencia de 5 nM de ARN de extremos romos. Las relaciones de luminiscencia determinadas en presencia de ARNds se normalizaron hasta la relación obtenida para un control de tampón (bu, barra negra). Relaciones normalizadas menores de 1 indican interferencia específica. (C-J) Relaciones de interferencia normalizadas para ocho series de dúplex de ARNsi de 21 nt. Las secuencias de dúplex de ARNsi se representan encima de los gráficos de barras. Cada panel muestra la relación de interferencia para un grupo de dúplex formados con un ARNsi de guía antisentido y 5 ARNsi de sentido diferentes. El número de nucleótidos salientes (saliente 3', números positivos; salientes 5', números negativos) está indicado en el eje x. Los puntos de datos se promediaron a partir de al menos 3 experimentos independientes, las barras de error representan desviaciones estándar.
Figura 12: Variación de la longitud de la hebra de sentido de dúplex de ARNsi.
(A) Representación gráfica del experimento. Las tres hebras antisentido de 21 nt se aparearon con ocho ARNsi de sentido. Los ARNsi se cambiaron de longitud en su extremo 3'. El saliente 3' del ARNsi antisentido era 1 nt (B), 2 nt (C) o 3 nt (D) mientras que el saliente del ARNsi de sentido se variaba para cada serie. Se indican las secuencias de los dúplex de ARNsi y las correspondientes relaciones de interferencia.
Figura 13: Variación de la longitud de dúplex de ARNsi con salientes 3' de 2 nt conservados.
(A) Representación gráfica del experimento. El dúplex de ARNsi de 21 nt es idéntico en secuencia al mostrado en la Figura 11 H o 12C. Los dúplex de ARNsi se extendieron hasta el lado 3' del ARNsi de sentido (B) o el lado 5' del
ARNsi de sentido (C). Se indican las secuencias de los dúplex de ARNsi y las correspondientes relaciones de interferencia.
Figura 14: Sustitución de los grupos hidroxilo 2' de los residuos de ribosa de ARNsi.
Los grupos 2'hidroxilo (OH) en las hebras de dúplex de ARNsi se reemplazaron por 2'-desoxi (d) o 2-O-metilo (Me). Las sustituciones de 2'-desoxi de 2 nt y 4 nt en los extremos 3' se indican como 2 nt d y 4 nt d, respectivamente. Los residuos de uridina se reemplazaron por 2-desoxitimidina.
Figura 15: Cartografía de la escisión de ARN diana de sentido y antisentido por dúplex de ARNsi de 21 nt con salientes 3' de 2 nt.
(A) Representación gráfica de ARN diana de sentido y antisentido y dúplex de ARNsi marcados en la caperuza (asterisco) de 32P. La posición de la escisión de los ARN diana de sentido y antisentido se indica mediante triángulos por encima y por debajo de los dúplex de ARNsi, respectivamente. (B) Cartografía de sitios de escisión de ARN diana. Después de 2 h de incubación de 10 nM de diana con 100 nM de dúplex de ARNsi en lisado de embriones de D. melanogaster, el sustrato marcado en la caperuza en 5' y los productos de escisión 5' se resolvieron sobre geles de secuenciación. Los marcadores de longitud se generaron mediante digestión parcial con RNasa (T1) e hidrólisis alcalina parcial (OH-) de los ARN diana. Las líneas en negrita a la izquierda de las imágenes indican la región cubierta por las hebras de ARNsi 1 y 5 de la misma orientación que la diana.
Figura 16: El extremo 5' de un ARNsi de guía define la posición de la escisión de ARN diana.
(A, B) Representación gráfica de la estrategia experimental. El ARNsi antisentido era el mismo en todos los dúplex de ARNsi, pero la hebra de sentido se variaba entre 18 y 25 nt al cambiar el extremo 3' (A) o de 18 a 23 nt al cambiar el extremo 5' (B). La posición de la escisión de ARN diana de sentido y antisentido está indicada por triángulos por encima y por debajo de los dúplex de ARNsi, respectivamente. (C, D) Análisis de la escisión de ARN diana usando ARN diana de sentido (panel superior) o antisentido (panel inferior) marcados en la caperuza. Solamente se muestran los productos de escisión 5' marcados en la caperuza. Se indican las secuencias de los dúplex de ARNsi, y la longitud de las hebras de ARNsi de sentido se marca en la parte superior del panel. El carril de control marcado con un guión en el panel (C) muestra ARN diana incubado en ausencia de ARNsi. Los marcadores eran como se describe en la Figura 15. Las flechas en (D), panel inferior, indican los sitios de escisión del ARN diana que difieren en 1 nt.
Figura 17: Variación se secuencia del saliente 3' de dúplex de ARNsi.
El saliente 3' de 2 nt (NN, en gris) se cambió en secuencia y composición como se indica (T, 2'-desoxitimidina, dG, 2'-desoxiguanosina; asterisco, dúplex de ARNsi silvestre). Las relaciones de interferencia normalizadas se determinaron como se describe en la Figura 11. La secuencia silvestre es la misma que la representada en la Figura 14.
Figura 18: Especificidad de secuencia de reconocimiento de diana.
Se muestran las secuencias de los dúplex de ARNsi desemparejados, los segmentos de secuencia modificados o los nucleótidos simples están realzados en gris. El dúplex de referencia (ref) y los dúplex de ARNsi 1 a 7 contienen salientes de 2 nt de 2'-desoxitimidina. La eficacia de desactivación del dúplex de referencia modificado con timidina era comparable con la secuencia silvestre (Figura 17). Las relaciones de interferencia normalizadas se determinaron como se describe en la Figura 11.
Figura 19: Variación de la longitud de dúplex de ARNsi con salientes 3' de 2 nt conservados.
Los dúplex de ARNsi se extendieron hacia el lado 3' del ARNsi de sentido (A) o el lado 5' del ARNsi de sentido (B). Se indican las secuencias de los dúplex de ARNsi y las relaciones de interferencia respectivas. Para células HeLa SS6, los dúplex de ARNsi (0,84 pg) que eligen como diana luciferasa GL2 se transfectaron junto con los plásmidos pGL2-Control y pRL-TK. Para comparación, se indican las actividades de iARN in vitro de los dúplex probados en lisado de D. melanogaster.
Ejemplo 1
Interferencia de ARN mediada por ARN sintéticos pequeños
1.1. Procedimientos experimentales
1.1.1 iARN in vitro
Se realizaron preparaciones de iARN y lisado in vitro como se describe previamente (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000). Es crítico usar creatina cinasa (Roche) disuelta recientemente para la regeneración óptima de ATP. Los ensayos de traducción de iARN (Fig. 1) se realizaron con concentraciones de ARNds de 5 nM y un período de preincubación prolongado de 15 min a 25°C antes de la adición de ARNm indicadores de Pp-luc y Rr-luc transcritos in vitro, con caperuza y poliadenilados. La incubación se continuó durante 1 h y la cantidad relativa de proteína de Pp-luc y Rr-luc se analizó usando el ensayo de luciferasa doble (Promega) y un luminómetro Monolight 3010C (PharMingen).
1.1.2 Síntesis de ARN
Se usaron procedimientos estándar para la transcripción in vitro de ARN procedente de plantillas de PCR que soportan secuencias promotoras de T7 o SP6, véase, por ejemplo (Tuschl y cols., 1998). Se preparó ARN sintético usando fosforamiditas de ARN Expedite (Proligo). El oligonucleótido adaptador 3' se sintetizó usando dimetoxitritil-1,4-bencenodimetanol-succinil-aminopropil-CPG. Los oligorribonucleótidos se desprotegieron en 3 ml de amoníaco al 32%/etanol (3/1) durante 4 h a 55°C (ARN Expedite) o 16 h a 55°C (oligonucleótidos quiméricos de ADN/ARN adaptadores 3' y 5') y a continuación se desililaron y se purificaron en gel como se describe previamente (Tuschl y cols., 1993). Los transcritos de ARN para la preparación de ARNds que incluyen salientes 3' largos se generaron a partir de plantillas de PCR que contenía un promotor de T7 en dirección de sentido y un promotor SP6 en dirección antisentido. La plantilla de transcripción para ARN diana de sentido y antisentido se amplificó por PCR con GCGTAATACGACTCACTATAGAACAATTGCTTTTACAG (subrayado, promotor de T7) como cebador 5' y ATTTAGGTGACACTATAGGCATAAAGAATTGAAGA (subrayado, promotor SP6) como cebador 3' y el plásmido Ppluc linealizado (secuencia de pGEM-luc) (Tuschl y cols., 1999) como plantilla; el ARN de sentido transcrito con T7 tenía 177 nt de longitud y la secuencia Pp-luc entre las pos. 113-273 con relación al codón de inicio y seguido por 17 nt del complemento de la secuencia promotora SP6 en el extremo 3'. Los transcritos para la formación de ARNds de extremos romos se prepararon mediante la transcripción a partir de dos productos de PCR diferentes que solo contenían una única secuencia promotora.
La renaturalización de ARNds se llevó a cabo usando una extracción con fenol/cloroformo. Una concentración equimolar de ARN de sentido y antisentido (de 50 nM a 10 pM, dependiendo de la longitud y la cantidad disponible) en 0,3 M de NaOAc (pH 6) se incubó durante 30 s a 90°C y a continuación se extrajo a temperatura ambiente con un volumen igual de fenol/cloroformo, y seguido por una extracción con cloroformo para retirar el fenol residual. El ARNds resultante se precipitó mediante la adición de 2,5-3 volúmenes de etanol. La pella se disolvió en tampón de lisis (100 mM de Kc I, 30 mM de HEPES-KOH, pH 7,4, 2 mM de Mg(OAc)2) y la calidad del ARNds se verificó mediante electroforesis en gel de agarosa estándar 1 x tampón de TAE. Los ARNds de 52 pb con los salientes 3' de 17 nt y 20 nt (Figura 6) se renaturalizaron al incubar durante 1 min a 95 °C, a continuación se enfriaron rápidamente hasta 70°C y seguido por enfriamiento lento hasta temperatura ambiente a lo largo de un período de 3 h (50 pl de reacción de renaturalización, 1 pM de concentración de hebra, 300 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HCl, pH 7,5). A continuación, los ARNds se extrajeron con fenol/cloroformo, se precipitaron con etanol y se disolved en tampón de lisis.
La transcripción de ARN radiomarcado con 32P internamente usada para la preparación de ARNds (Figuras 2 y 4) se realizó usando 1 mM de ATP, CTP, GTP, 0,1 o 0,2 mM de UTP y 0,2-0,3 pM de 32P-UTP (3000 Ci/mmol), o la relación respectiva para trifosfatos de nucleósido radiomarcados distintos de UTP. El marcaje de la caperuza de los ARN diana se realizó como se describe previamente. Los ARN diana se purificaron en gel después del marcaje de la caperuza.
1.1.3 Cartografía de sitios de escisión
Se realizaron reacciones de iARN estándar al preincubar 10 nM de ARNds durante 15 min seguido por la adición de 10 nM de ARN diana marcado en la caperuza. La reacción se detuvo después de 2 h más (Figura 2A) o 2,5 h de incubación (Figura 5B y 6B) mediante tratamiento con proteinasa K (Tuschl y cols., 1999). A continuación, las muestras se analizaron sobre geles de secuenciación al 8 o 10%. Los dúplex de ARN sintéticos de 21 y 22 nt se usaron en una concentración final de 100 nM (Fig 5B).
1.1.4 Clonación de ARN de ~21 nt
Los ARN de 21 nt se produjeron mediante la incubación de ARNds radiomarcado en lisado de Drosophila en ausencia de ARN diana (200 pl de reacción, 1 h de incubación, 50 nM de dsP111 o 100 nM de dsP52 o dsP39). La mezcla de reacción se trató posteriormente con proteinasa K (Tuschl y cols., 1999) y los productos de procesamiento de ARNds se separaron sobre un gel de poliacrilamida al 15% desnaturalizante. Una banda, que incluía un intervalo de tamaños de al menos 18 a 24 nt, se cortó, se eluyó en 0,3 M de NaCl durante la noche a 4°C y en tubos siliconizados. El ARN se recuperó mediante precipitación con etanol y se desfosforiló (30 pl de reacción, 30 min, 50°C, 10 U de fosfatasa alcalina, Roche). La reacción se detuvo mediante extracción con fenol/cloroformo y el ARN se precipitó con etanol. El oligonucleótido adaptador 3' (pUUUaaccgcatccttctcx: mayúsculas, ARN; minúsculas, ADN; p, fosfato; x, 4-hidroximetilbencilo) se ligó a continuación al ARN de ~21 nt desfosforilado (20 pl de reacción, 30 min, 37°C, 5 pM de adaptador 3', 50 mM de Tris-HCl, pH 7,6, 10 mM de MgCl2, 0,2 mM de ATp, 0,1 mg/ml de BSA acetilada, 15% de DMSO, 25 U de RNA ligasa de T4, Amersham-Pharmacia) (Pan y Uhlenbeck, 1992). La reacción se detuvo mediante la adición de un volumen igual de mezcla de terminación de 8 M de urea/50 mM de EDTA y se cargó directamente sobre un gel al 15%. La ligación da más de 50%. El producto de ligación se recuperó del gel y se fosforiló en 5' (20 pl de reacción, 30 min, 37°C, 2 mM de ATP, 5 U de polinucleótido cinasa de T4, NEB). La reacción de fosforilación se detuvo mediante extracción con fenol/cloroformo y el ARN se recuperó mediante precipitación con etanol. A continuación, el adaptador 5' (tactaatacgactcactAAA: mayúsculas, ARN; minúsculas, ADN) se ligó al producto de ligación fosforilado según se describe anteriormente. El nuevo producto de ligación se purificó en gel y se eluyó del gel de sílice en presencia de cebador de transcripción inversa (GACTAGCTGGAATTCAAGGATGCGGTTAAA: negrita, sitio Eco RI) usado como portador. La transcripción inversa (15 pl de reacción, 30 min, 42°C, 150 U de tanscriptasa inversa Superscript II, Life Technologies) fue seguida por PCR usando como cebador 5' CAGCCAACGGAATTCATACGACTCACTAAA (negrita, sitio Eco RI) y el cebador de RT 3'. El producto de PCR se purificó mediante extracción con fenol/cloroformo y se precipitó con etanol. A continuación, el producto de PCR se digirió con Eco RI (NEB) y se concatamerizó usando ADN ligasa de T4 (alta conc., NEB). Los concatámeros de un intervalo de tamaño de 200 a 800 pb se separaron sobre un gel de agarosa de bajo punto de fusión, se recuperaron del gel mediante una fusión estándar u un procedimiento de extracción con fenol, y se precipitaron con etanol. Los extremos desapareados se rellenaron mediante incubación con polimerasa de Taq bajo condiciones estándar durante 15 min a 72°C y el producto de ADN se ligó directamente en el vector pCR2.1-TOPO usando el estuche de clonación TOPO TA (Invitrogen). Las colonias se cribaron usando PCR y cebadores de secuenciación inversa M13-20 y M13. Los productos de PCR se sometieron directamente a secuenciación personalizada (Sequence Laboratories Gottingen GmbH, Alemania). De media, se obtenían de cuatro a cinco secuencias 21meras por clon.
1.1.5 Análisis de 2D-TLC
La digestión con nucleasa P1 de ARNsi purificados en gel radiomarcados y 2D-TLC se llevó a cabo como se describe (Zamore y cols., 2000). La digestión con nucleasa T2 se realizó en reacciones de 10 pl durante 3 h a 50°C en 10 mM de acetato amónico (pH 4,5) usando 2 pg/pl de ARNt portador y 30 U de ribonucleasa T2 (Life Technologies). La migración de patrones no radiactivos se determinó mediante ensombrecimiento UV. La identidad de 3',5'-difosfatos de nucleósido se confirmó mediante la comigración de los productos de digestión de T2 con patrones preparados mediante fosforilación con 32P en 5' de 3-monofosfatos de nucleósido comerciales usando y-32P-ATP y polinucleótido cinasa de T4 (datos no mostrados).
1.2 Resultados y análisis
1.2.1 Requisitos de longitud para el procesamiento de ARNds hasta fragmentos de ARN de 21 y 22 nt
El lisado preparado a partir de embriones sincitiales de D. melanogaster recapitula iARN in vitro proporcionando una nueva herramienta para el análisis bioquímico del mecanismo de iARN (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000). El análisis in vitro e in vivo de los requisitos de longitud de ARNds para iARN ha revelado que los ARNds cortos (<150 bp) son menos eficaces que los ARNds más largos para degradas ARNm diana (Caplen y cols., 2000; Hammond y cols., 2000; Ngo y cols., 1998); Tuschl y cols., 1999). Las razones de la reducción en la eficacia de degradación de ARNm no se entienden. Por lo tanto, se examinó el requisito de longitud preciso de ARNds para la degradación de ARN diana bajo condiciones optimizadas de en el lisado de Drosophila (Zamore y cols., 2000). Se sintetizaron varias series de ARNds y se dirigieron contra ARN indicador de luciferasa de luciérnaga (Pp-luc). La supresión específica de la expresión de ARN diana se verificó mediante el ensayo de luciferasa doble (Tuschl y cols., 1999) (Figuras 1A and 1B). Se detectó la inhibición específica de la expresión de ARN diana para ARNds tan cortos como 38 pb, pero los ARNds de 29 a 36 pb no eran eficaces en este procedimiento. El efecto era independiente de la posición de la diana y el grado de inhibición de la expresión de ARNm de Pp-luc se correlacionaba con la longitud del ARNds, es decir, los ARNds largos eran más eficaces que los ARNds cortos.
Se ha sugerido que los fragmentos de ARN de 21-23 nt generados mediante el procesamiento de ARNds son los mediadores de la interferencia y la cosupresión de ARN (Hamilton y Baulcombe, 1999; Hammond y cols., 2000;
Zamore y cois., 2000). Por lo tanto, se analizó la velocidad de formación de fragmentos de 21-23 para un subgrupo de ARNds que varían de tamaño entre 501 y 29 pb. La formación de fragmentos de 21-23 nt en lisado de Drosophila (Figura 2) era fácilmente detectable para ARNds de 39 a 501 pb de largo pero se retrasaba significativamente para el ARNds de 29 pb. Esta observación es coherente con un papel de los fragmentos de 21-23 nt en la escisión de ARNm de guía y proporciona una explicación de la falta de iARN por ARNds de 30 pb. Es probable que la dependencia con la longitud de la formación de 21-23 meros refleje un mecanismo de control biológicamente importante para prevenir la activación no deseada de iARN por estructuras con bases apareadas intramoleculares cortas de ARN celulares regulares.
1.2.2 El ARNds de 39 pb media en la escisión de ARN diana en un solo sitio
La adición de ARNds y ARN diana con caperuza en 5' al lisado de Drosophila da como resultado una degradación específica de una secuencia del ARN diana (Tuschl y cols., 1999). El ARNm diana solo se escinde dentro de la región de identidad con el ARNds y muchos de los sitios de escisión de la diana estaban separados por 21-23 nt (Zamore y cols., 2000). Así, se esperaba que un número de sitios de escisión para un ARNds dado correspondiera aproximadamente a la longitud del ARNds dividida por 21. Se cartografiaron los sitios de escisión de la diana en un ARN diana de sentido y antisentido que se radiomarcó en 5' en la caperuza (Zamore y cols., 2000) (Figuras 3A y 3B). Los productos de escisión 5' estables se separaron sobre un gel de secuenciación y la posición de escisión se determinó mediante la comparación con una RNasa T1 parcial y una escalera de hidrólisis alcalina procedente del ARN diana.
De acuerdo con la observación previa (Zamore y cols., 2000), todos los sitios de escisión del ARN diana se situaron dentro de la región de identidad con el ARNds. La diana de sentido o antisentido solo era escindida una vez por ARNds de 39 pb. Cada sitio de escisión estaba situado a 10 nt del extremo 5' de la región cubierta por el ARNds (Figura 3B). El ARNds de 52 pb, que comparte el mismo extremo 5' con el ARNds de 39 pb, produce el mismo sitio de escisión en la diana de sentido, situado a 10 nt del extremo 5' de la región de identidad con el ARNds, además de dos sitios de escisión más débiles 23 y 24 nt aguas abajo del primer sitio. La diana antisentido solo se escindía una vez, de nuevo a 10 nt desde el extremo 5' de la región cubierta por su respectivo ARNds. La cartografía de los sitios de escisión para los ARNds de 38 a 49 pb mostrada en la Figura 1 mostraba que el sitio de escisión primero y predominante siempre estaba situado de 7 a 10 nt agua debajo de la región cubierta por el ARNds (datos no mostrados). Esto sugiere que el punto de escisión de ARN diana está determinado por el extremo del ARNds y podría implicar que el procesamiento hasta 21-23 meros se iniciara desde los extremos del dúplex.
Los sitios de escisión en la diana de sentido y antisentido para el ARNds de 111 pb más largo eran mucho más frecuentes que lo anticipado y la mayoría de ellos aparecen en aglomerados separados por de 20 a 23 nt (Figuras 3A y 3B). Como para los ARNds más cortos, el primer sitio de escisión en la diana de sentido está a 10 nt desde el extremo 5' de la región abarcada por el ARNds, y el primer sitio de escisión en la diana antisentido está situado a 9 nt desde el extremo 5' de la región cubierta por el ARNds. No está claro qué provoca esta escisión desordenada, pero una posibilidad podría ser que los ARNds más largos pudieran no solo ser procesados desde los extremos sino también internamente, o haya algunos determinantes de la especificidad para el procesamiento de ARNds que todavía no se entienden. Algunas irregularidades para el espacio de 21-23 nt también se apuntaron previamente (Zamore y cols., 2000). Para entender mejor la base molecular del procesamiento de ARNds y el reconocimiento de ARN diana, se decidió analizar las secuencias de los fragmentos de 21-23 nt generados por el procesamiento de ARNds de 39, 52 y 111 pb en el lisado de Drosophila.
1.2.3 ARNds es procesado hasta ARN de 21 y 22 nt mediante un mecanismo similar a RNasa III
A fin de caracterizar los fragmentos de ARN de 21-23 nt, se examinaron los extremos 5' y 3' de los fragmentos de ARN. La oxidación con peryodato de ARN de 21-23 nt purificados en gel seguida por ^-eliminación indicaba la presencia de grupos hidroxilo 2' y 3' terminales. Los 21-23 meros también eran sensibles al tratamiento con fosfatasa alcalina, indicando la presencia de un grupo fosfato 5' terminal. La presencia de extremos fosfato 5' e hidroxilo 3' sugiere que el ARNds podría ser procesado por una actividad enzimática similar a RNasa III de E. coli (para las revisiones, véanse (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982)).
La clonación direccional de fragmentos de ARN de 21-23 nt se realizó mediante la ligación de un oligonucleótido adaptador 3' y 5' a los 21-23 meros purificados usando una ARN ligasa de T4. Los productos de ligación se transcribieron inversamente, se amplificaron por PCR, se concatamerizaron, se clonaron y se secuenciaron. Se secuenciaban más de 220 RNA cortos a partir de reacciones de procesamiento de ARNds de los ARNds de 39, 52 y 111 pb (Figura 4A). Se encontró la siguiente distribución de longitudes: 1% de 18 nt, 5% de 19 nt, 12% de 20 nt, 45% de 21 nt, 28% de 22 nt, 6% de 23 nt y 2% de 24 nt. El análisis de secuencia del nucleótido 5' terminal de los fragmentos procesados indicaba que los oligonucleótidos con una guanosina 5' estaban subrepresentados. Esta desviación era introducida lo más probablemente por ARN ligasa de T4 que discrimina frente a guanosina fosforilada 5' como oligonucleótido donante; no se observó una desviación de secuencia significativa en el extremo 3'. Muchos de los fragmentos de ~21 nt derivados de los extremos 3' de la hebra de sentido o antisentido de los dúplex incluyen
nucleótidos 3' que se derivan de la adición sin plantilla de nucleótidos durante la síntesis de ARN usando ARN polimerasa de T7. De forma interesante, también se clonó un número significativo de ARN de ~21 nt de Drosophila endógenos, algunos de ellos a partir de retrotransposones de LTR y no de LTR (datos no mostrados). Esto es coherente con un posible papel de iARN en la desactivación de transposones.
Los ARN de ~21 nt aparecen en grupos aglomerados (Figura 4A) que cubren todas las secuencias de ARNds. Aparentemente, la reacción de procesamiento corta el ARNds al dejar extremos 3' escalonados, otra característica de la escisión con RNasa III. Para el ARNds de 39 pb, se encontraron dos aglomerados de ARN de ~21 nt procedentes de cada hebra constitutiva de ARNds incluyendo los extremos 3' salientes, sin embargo solo se detectaba un sitio de escisión en la diana de sentido y antisentido (Figuras 3A y 3B). Si los fragmentos de ~21 estaban presentes como ARN de guía de una sola hebra en un complejo de media en la degradación de mRNA, se podía suponer que existen al menos dos sitios de escisión de la diana, pero este no era el caso. Esto sugiere que los ARN de ~21 nt pueden estar presentes en forma de doble hebra en el complejo de endonucleasa pero que solo una de las hebras se puede usar para el reconocimiento y la escisión de ARN diana. El uso de solo una de las hebras de ~21 nt para la escisión de la diana puede estar determinado simplemente por la orientación en la que el dúplex de ~21 nt se une al complejo de nucleasa. Esta orientación está definida por la dirección en la que se procesaba el ARNds original.
Los aglomerados ~21 meros para los ARNds de 52 pb y 111 pb están peor definidos en comparación con el ARNds de 39 pb. Los aglomerados se extienden sobre regiones de 25 a 30 nt que representan lo más probablemente varias subpoblaciones distintas de dúplex de ~21 nt y por lo tanto que guían la escisión de la diana en varios sitios próximos. Estas regiones de escisión todavía están separadas predominantemente por intervalos de 20 a 23 nt. Las reglas que determinan cómo se puede procesar ARNds regular hasta fragmentos de ~21 nt no se entienden todavía, pero previamente se observó que el espacio de aprox. 21-23 nt de los sitios de escisión se podía alterar por una marcha de uridinas (Zamore y cols., 2000). La especificidad de la escisión de ARNds por RNasa III de E. coli parece estar principalmente controlada por antideterminantes, es decir, excluyendo algunos pares de bases específicos en posiciones dadas con relación al sitio de escisión (Zhang y Nicholson, 1997).
Para probar si estaba presente una modificación con azúcar, base caperuza en fragmentos de ARN de ~21 nt procesados, se incubó Pp-luc ARNds de 505 pb radiomarcado en lisado durante 1 h, se aislaron los productos de ~21 nt, y se digirió con nucleasa P1 o T2 hasta mononucleótidos. A continuación, la mezcla de nucleótidos se analizó mediante cromatografía en capa fina bidimensional (Figura 4B). Ninguno de los cuatro ribonucleótidos naturales se modificaban según se indica por la digestión de P1 o T2. Previamente, se ha analizado la conversión de adenosina en inosina en los fragmentos de ~21 nt (después de un período de incubación de 2 h) y se ha detectado un pequeño grado (<0,7%) de desaminación (Zamore y cols., 2000); la incubación más corta en lisado (1 h) reducía la fracción de inosina hasta niveles difícilmente detectables. La RNasa T2, que escinde 3' del enlace fosfodiéster, producía 3'-fosfato de nucleósido y 3',5'-difosfato de nucleósido, indicando de ese modo la presencia de un monofosfato 5'-terminal. Se detectaron los cuatro 3',5'-difosfatos de nucleósido y sugieren que el enlace internucleotídico se escindía con poca o ninguna especificidad para una secuencia. En resumen, los fragmentos de ~21 nt no están modificados y se generaron a partir de ARNds de modo que estuvieran presentes 5'-monofosfatos y 3'-hidroxilos en el extremo 5'.
1.2.4 ARN de 21 y 22 nt sintéticos median en la escisión de ARN diana
El análisis de los productos de procesamiento de ARNds indicaba que los fragmentos de ~21 nt se generan mediante una reacción con todas las características de una reacción de escisión con RNasa III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982). La RNasa III hace dos cortes escalonados en ambas hebras del ARNds, dejando un saliente 3' de aproximadamente 2 nt. Se sintetizaron químicamente RNA de 21 y 22 nt, idénticos en secuencia a algunos de los fragmentos de ~21 nt clonados, y los probaron con respecto a su capacidad para mediar en la degradación de ARN diana (Figuras 5A y 5B). Los dúplex de ARN de 21 y 22 nt se incubaron a concentraciones de 100 nM en el lisado, a concentraciones 10 veces superiores que el ARNds de control de 52 pb. Bajo estas condiciones, la escisión de ARN diana es fácilmente detectable. Reducir la concentración de dúplex de 21 y 22 nt desde 100 hasta 10 nM todavía provoca la escisión de ARN diana. Sin embargo, incrementar la concentración del dúplex desde 100 nM hasta 1.000 nM no incrementaba adicionalmente la escisión de la diana, probablemente debido a un factor proteínico limitante dentro del lisado.
En contraste con ARNds de 29 o 30 pb que no mediaban en la iARN, los ARNds de 21 y 22 nt con extremos 3' salientes de 2 a 4 nt mediaban en la degradación eficaz de ARN diana (dúplex 1, 3, 4, 6, Figuras 5A y 5B). Los ARNds de 21 o 22 nt de extremos romos (dúplex 2, 5 y 7, Figuras 5A y 5B) se reducían en su capacidad para degradar la diana e indican que los extremos 3' salientes son críticos para la reconstitución del complejo de ARN-proteína nucleasa. Los salientes de una sola hebra se pueden requerir para la unión de alta afinidad del dúplex de ~ 21 nt a los componentes proteínicos. Un fosfato 5' terminal, aunque presente después del procesamiento de ARNds, no se requería para mediar en la escisión de ARN diana y estaba ausente de los ARN sintéticos cortos.
Los dúplex de 21 y 22 nt sintéticos guiaban la escisión de dianas de sentido así como antisentido dentro de la región cubierta por el dúplex corto. Este es un resultado importante considerando que un ARNds de 39 pb, que forma dos pares de agregados de fragmentos de ~21 nt (Fig. 2), escinde la diana de sentido o antisentido solamente una vez y no dos veces. Se interpreta este resultado al sugerir que solo una de las dos hebras presentes en el dúplex de ~21 nt es capaz de guiar la escisión del ARN diana y que la orientación del dúplex de ~21 nt en el complejo de nucleasa está determinada por la dirección inicial del procesamiento de ARNds. Sin embargo, la presentación de un dúplex de ~21 nt ya perfectamente procesado al sistema in vitro no permite la formación del complejo de nucleasa específico para una secuencia activo con dos posibles orientaciones del dúplex de ARN simétrico. Esto da como resultado la escisión de la diana de sentido así como antisentido dentro de la región de identidad con el dúplex de ARN de 21 nt.
El sitio de escisión de la diana está situado 11 o 12 nt aguas abajo del primer nucleótido que es complementario a la secuencia de guía de 21 o 22, es decir el sitio de escisión está cerca del centro de la región cubierta por los ARN de 21 o 22 nt (Figuras 4A y 4B). Desplazar la hebra de sentido de un dúplex de 22 nt en dos nucleótidos (compárense los dúplex 1 y 3 en la Figura 5A) desplazaba es sitio de escisión solo de la diana antisentido en dos nucleótidos. Desplazar la hebra tanto de sentido como antisentido en dos nucleótidos cambiaba ambos sitios de escisión en dos nucleótidos (compárense los dúplex 1 y 4). Se predijo que era posible diseñar un par de ARN de 21 o 22 nt para escindir un ARN diana casi en cualquier posición dada.
La especificidad de la escisión de ARN diana guiada por ARN de 21 y 22 nt parecer exquisita en cuanto a que no se detectan sitios de escisión aberrantes (Figura 5B). Sin embargo, se debe apuntar que los nucleótidos presentes en el saliente 3' del dúplex de ARN de 21 y 22 nt puede contribuir menos al reconocimiento del sustrato que los nucleótidos cercanos al sitio de escisión. Esto se basa en la observación de que el nucleótido más 3' en el saliente 3' de los dúplex activos 1 o 3 (Figura 5A) no es complementario a la diana. Un análisis detallado de la especificidad de iARN se puede efectuar fácilmente ahora usando ARN de 21 y 22 nt simétricos.
Basándose en la evidencia de que los ARN de 21 y 22 nt sintéticos con extremos 3' salientes median en la interferencia de ARN, se propuso llamar a los ARN de ~21 nt "ARN interferentes cortos" o ARNsi y al complejo ARN-proteína respectivo una "partícula ribonucleoproteínica interferente pequeña" o siRNP.
1.2.5 Los salientes 3' de 20 nt en ARNds cortos inhiben iARN
Se ha observado que los ARNds cortos de extremos romos parecen ser procesados desde los extremos del ARNds. Durante el presente estudio de la dependencia con la longitud de ARNds en iARN, también se han analizado ARNds con extremos 3' salientes de 17 a 20 nt y se encontró con sorpresa que eran menos potentes que ARNds de extremos romos. El efecto inhibidor de extremos 3' largos era particularmente pronunciado para ARNds hasta 100 pb pero era menos drástico para ARNds más largos. El efecto no se debía a la formación de ARNds imperfecto basándose en el análisis en gel natural (datos no mostrados). Se probó si el efecto inhibidor de extremos 3' salientes largos se podía usar como una herramienta para dirigir el procesamiento de ARNds solamente hacia uno de los dos extremos de un dúplex de ARN corto.
Se sintetizaron cuatro combinaciones del ARNds modélico de 52 pb, formación de extremos romos, extensión 3' solo en la hebra de sentido, extensión 3' solo en la hebra antisentido y extensión 3' doble en ambas hebras, y cartografía de los sitios de escisión de ARN diana después de la incubación en lisado (Figuras 6A y 6B). El sitio de escisión primero y predominante de la diana de sentido no se perdía cuando se extendía el extremo 3' de la hebra antisentido del dúplex, y viceversa, el sitio de escisión fuerte de la hebra antisentido no se perdía cuando se extendía el extremo 3' de la hebra de sentido del dúplex. Las extensiones 3' en ambas hebras hacían al ARNds de 52 pb virtualmente inactivo. Una explicación de la inactivación de ARNds por extensiones 3' de -20 nt podría ser la asociación de proteínas que se unen a ARN de una sola hebra que podría interferir con la asociación de uno de los factores de procesamiento de ARNds en este extremo. Este resultado también es coherente con el presente modelo en que solo una de las hebras del dúplex de ARNsi en el siRNP ensamblado es capaz de guiar la escisión de ARN diana. La orientación de la hebra que guía la escisión de ARN está definida por la dirección de la reacción de procesamiento de ARNds. Es probable que la presencia de extremos escalonados 3' pueda facilitar el ensamblaje del complejo de procesamiento. Un bloque en el extremo 3' de la hebra de sentido sólo permitirá el procesamiento de ARNds desde el extremo 3' opuesto de la hebra antisentido. Esto genera a su vez complejos de siRNP en los que solo la hebra antisentido del dúplex de ARNsi es capaz de guiar la escisión de ARN diana de sentido. Lo mismo es cierto para la situación inversa.
El efecto inhibidor menos pronunciado de las extensiones 3' largas en el caso de ARNds más largos (>500 pb, datos no mostrados) sugiere que los ARNds largos también pueden contener señales de procesamiento de ARNds internas o se pueden procesar cooperativamente debido a la asociación de múltiples factores de escisión.
1.2.6 Un modelo para la escisión de ARNm dirigida por ARNds
Los nuevos datos bioquímicos actualizan el modelo para cómo el ARNds elige como diana ARNm para la destrucción (Figura 7). El ARN de doble hebra se procesa en primer lugar para acortar dúplex de ARN predominantemente de 21 y 22 nt de longitud y con extremos 3' escalonados de forma similar a una reacción similar a RNasa III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1982). Basándose en la longitud de 21-23 nt de los fragmentos de ARN procesados, se ha especulado que una actividad similar a RNasa III puede estar implicada en iARN (Bass, 2000). Esta hipótesis es apoyada además por la presencia de fosfatos 5' e hidroxilos 3' en los extremos de los ARNsi según se observa en productos de reacción de RNasa III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999). Se ha observado que la RNasa III bacteriana y los homólogos eucarióticos Rnt1p en S. cerevisiae y Pac1p en S. pombe funcionan en el procesamiento de ARN ribosómico así como ARNsn y ARNsno (véase, por ejemplo, Chanfreau y cols., 2000).
Poco se sabe acerca de la bioquímica de homólogos de RNasa III de plantas, animales o seres humanos. Se han identificado dos familias de enzimas RNasa III predominantemente por análisis de secuencias guiados por bases de datos o clonación de ADNc. La primera familia de RNasa III está representada por la proteína de D. melanogaster de 1.327 aminoácidos de largo drosha (Reg. AF116572). El extremo C está compuesto por dos RNasa III y un dominio de unión a ARNds y el extremo N es de función desconocida. También se encuentran homólogos cercanos en C. elegans (Reg. AF160248) y ser humano (Reg. AF189011) (Filippov y cols., 2000; Wu y cols., 2000). La RNasa III humana similar a drosha se clonó y caracterizó recientemente (Wu y cols., 2000). El gen se expresa ubicuamente en tejidos humanos y líneas celulares, y la proteína se localiza en el núcleo y el nucléolo de la célula. Basándose en resultados inferiros de estudios de inhibición antisentido, se sugirió un papel de esta proteína para el procesamiento de rRNA. La segunda clase está representada por el gen de C. elegans K12H4.8 (Reg. S44849) que codifica una proteína de 1.822 aminoácidos de largo. Esta proteína tiene un motivo de ARN helicasa N-terminal que está seguido por 2 dominios catalíticos de 2 RNasa III y un motivo que se une a ARNds, similar a la familia de RNasa III drosha. Hay homólogos cercanos en S. pombe (Reg. Q09884), A. thaliana (Reg. AF187317), D. melanogaster (Reg. AE003740) y ser humano (Reg. a B028449) (Filippov y cols., 2000; Jacobsen y cols., 1999; Matsuda y cols., 2000). Posiblemente, la RNasa III/helicasa K12H4.8 es el candidato probable para estar implicado en la iARN.
Los cribados genéticos en C. elegans identificaron rde-1 y rde-4 como esenciales para la activación de iARN sin un efecto sobre la movilización o cosupresión de transposones (Dernburg y cols., 2000; Grishok y cols., 2000; Ketting y Plasterk, 2000; Tabara y cols., 1999). Esto condujo a la hipótesis de que estos genes son importantes para el procesamiento de ARNds pero no están implicados en la degradación de la diana de ARNm. La función de ambos genes es todavía desconocida, el producto génico rde-1 es un miembro de una familia de proteínas similares a la proteína de conejo eIF2C (Tabara y cols., 1999), y la secuencia de rde-4 no se ha descrito todavía. La caracterización bioquímica futura de estas proteínas debe revelar su función molecular.
El procesamiento hasta los dúplex de ARNsi parece comenzar desde los extremos de ARNds de extremos romos o ARNds con salientes 3' cortos (1-5 nt), y avanza en etapas de aproximadamente 21-23 nt. Los extremos escalonados 3' largos (-20 nt) en ARNds cortos suprimen la iARN, posiblemente a través de la interacción con proteínas de unión a ARN de una sola hebra. La supresión de iARN por regiones de una sola hebra que flanquean ARNds corto y la falta de formación de ARNsi a partir de ARNds cortos de 30 pb pueden explicar por qué las regiones estructuradas encontradas frecuentemente en ARNm no conducen a la activación de iARN.
Sin querer limitarse por una teoría, se supone que las proteínas de procesamiento de ARNds o un subgrupo de estas permanecen asociadas con el dúplex de ARNsi después de la reacción de procesamiento. La orientación del dúplex de ARNsi con relación a estas proteínas determina cuál de las dos hebras complementarias funciona en el guiado de la degradación del ARN diana. Los dúplex de ARNsi químicamente sintetizados guían la escisión del ARN de sentido así como antisentido ya que son capaces de asociarse con los componentes proteínicos en cualquiera de las dos orientación posible.
El hallazgo notable de que los dúplex de ARNsi de 21 y 22 nt sintéticos se pueden usar para la degradación eficaz de ARNm proporciona nuevas herramientas para la regulación específica para una secuencia de la expresión génica en estudios de genómica funcional así como bioquímicos. Los ARNsi pueden ser eficaces en sistemas mamíferos en los que no se pueden usar ARNds largos debido a la activación de la respuesta de PKR (Clemens, 1997). Como tales, los dúplex de ARNsi representan una nueva alternativa a la terapéutica de antisentido o ribozimas.
Ejemplo 2
Interferencia de ARN en cultivos tisulares humanos
2.1 Métodos
2.1.1 Preparación de ARN
Se sintetizaron químicamente ARN de 21 nt usando fosforamiditas de ARN Expedite y fosforamidita de timidina (Proligo, Alemania). Los oligonucleótidos sintéticos se desprotegieron y se purificaron en gel (Ejemplo 1), seguido por purificación en un cartucho Sep-Pak C18 (Waters, Milford, MA, EE. Uu . de A.) (Tuschl, 1993). Las secuencias de ARNsi que eligen como diana g L2 (Reg. X65324) y luciferasa GL3 (Reg. U47296) correspondían a las regiones codificantes 153-173 con relación al primer nucleótido del codón de inicio. Los ARNsi que eligen como diana RL (Reg. AF025846) correspondían a la región 119-129 después del codón de inicio. Los ARN más largos se transcribieron con ARN polimerasa a partir de productos de PCR, seguido por purificación en Sep-Pak. Los ARNds de GL2 o GL3 de 49 y 484 pb correspondían a la posición 113-161 y 113-596, respectivamente, con relación al inicio de la traducción; los ARNds de 50 y 501 pb correspondían a la posición 118-167 y 118-618, respectivamente. Las plantillas de PCR para la síntesis de ARNds que elige como diana GFP humanizada (hG) se amplificaron a partir de pAD3 (Kehlenbach, 1998), con lo que el ARNds de hG de 50 y 501 pb correspondían a la posición 118-167 y 118 618, respectivamente, con respecto al codón de inicio.
Para la renaturalización de ARNsi, 20 pM de hebras simples se incubaron en tampón de renaturalización (100 mM de acetato potásico, 30 mM de HEPES-KOH a pH 7,4, 2 mM de acetato magnésico) durante 1 min a 90°C seguido por 1 h a 37°C. La etapa de incubación a 37°C se prolongó durante la noche para los ARNds de 50 y 500 pb y estas reacciones de renaturalización se realizaron a concentraciones de hebra de 8,4 pM y 0,84 pM, respectivamente.
2.1.2 Cultivo celular
Se propagaron células S2 en medio de Drosophila de Schneider (Life Technologies) complementado con 10% de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina a 25°C. Se hicieron crecer células 293, NIH/3T3, HeLa S3, COS-7 a 37°C en medio de Eagle modificado de Dulbecco complementado con 10% de FBS, 100 unidades/ml de penicilina y 100 pg/ml de estreptomicina. Las células se sometieron a pases regularmente para mantener el crecimiento exponencial. 24 h antes de la transfección a aprox. 80% de confluencia, las células de mamífero se tripsinizaron y se diluyeron 1:5 con medio reciente sin antibióticos (1-3 x 105 células/ml) y se transfirieron a placas de 24 pocillos (500 pl/pocillo). Las células S2 no se tripsinizaron antes de la separación. La transfección se llevó a cabo con reactivo Lipofectamine 2000 (Life Technologies) según se describe por el fabricante para líneas celulares adherentes. Por pocillo, se aplicaron 1,0 pg de pGL2-Control (Promega) o pGL3-Control (Promega), 0,1 pg de pRL-TK (Promega) y 0,28 pg de dúplex de ARNsi o ARNds, formulados en liposomas; el volumen final era 600 pl por pocillo. Las células se incubaron 20 h después de la transfección y parecían sanas posteriormente. La expresión de luciferasa se verificó posteriormente con el ensayo de luciferasa doble (Promega). Las eficacias de transfección se determinaron mediante microscopía de fluorescencia para líneas celulares de mamífero después de la cotransfección de 1,1 pg de pAD3 que codifica hGFP y 0,28 pg de ARNsi de invGL2 inGL2 y eran 70-90%. Los plásmidos indicadores se amplificaron en XL-1 Blue (Stratagene) y se purificaron usando el Qiagen EndoFree Maxi Plasmid Kit.
2.2 Resultados y análisis
Para probar si los ARNsi también son capaces de mediar en iARN en cultivo tisular, se sintetizaron dúplex de ARNsi de 21 nt con salientes 3' de 2 nt simétricos dirigidos contra genes indicadores que codifican luciferasa de pensamiento de mar (Renilla reniformis) y dos variantes de secuencia de luciferasas de luciérnaga (Photinus pyralis, GL2 y GL3) (Fig. 8a, b). Los dúplex de ARNsi se cotransfectaron con las combinaciones de plásmidos indicadores pGL2/pRL o pGL3/pRL en células S2 de Schneider de D. melanogaster o células de mamífero usando liposomas catiónicos. Las actividades de luciferasa se determinaron 20 h después de la transfección. En todas las líneas celulares probadas, se observó una reducción específica de la expresión de los genes indicadores en presencia de dúplex de ARNsi cognados (Fig. 9a-j). Notablemente, los niveles absolutos de expresión de luciferasa no se veían afectados por ARNsi no cognados, indicando la ausencia de efectos secundarios por dúplex de ARN de 21 nt (p. ej. Fig. 10a-d para células HeLa). En células S2 de D. melanogaster (Fig. 9a, b), la inhibición específica de luciferasas era completa. En células de mamífero, en las que los genes indicadores se expresaban de 50 a 100 veces más fuertemente, la supresión específica era menos completa (Fig. 9c-j). La expresión de GL2 se reducía de 3 a 12 veces, la expresión de GL3 de 9 a 25 veces y la expresión de RL de 1 a 3 veces, en respuesta a los ARNsi cognados. Para células 293, la elección como diana de luciferasa RL por ARNsi de RL era ineficaz, aunque las dianas GL2 y GL3 respondían específicamente (Fig. 9i, j). La falta de reducción de expresión de RL en células 293 se puede deber a su expresión de 5 a 20 veces superior en comparación con cualquier otra línea celular de mamífero probada y/o a la accesibilidad limitada de la secuencia diana debido a la estructura secundaria del ARN o las proteínas asociadas. No obstante, la elección como diana específica de luciferasa GL2 y GL3 por los dúplex de ARNsi cognados indicaba que la iARN también está funcionando en células 293.
El saliente 3' de 2 nt en todos los dúplex de ARNsi, excepto para uGL2, estaba compuesto por (2'-desoxi)timidina. La sustitución de uridina por timidina en el saliente 3' era bien tolerada en el sistema in vitro de D. melanogaster y la secuencia del saliente no era crítica para el reconocimiento de la diana. Se eligió el saliente de timidina, debido a que se supone que potencia la resistencia a nucleasa de los ARNsi en el medio de cultivo celular y dentro de células transfectadas. En efecto, el ARNsi de GL2 modificado con timidina era ligeramente más potente que el ARNsi de
uGL2 no modificado en todas las líneas celulares probadas (Fig. 9a, c, e, g, i). Es concebible que modificaciones adicionales de los nucleótidos salientes 3' puedan proporcionar beneficios adicionales al aporte y la estabilidad de dúplex de ARNsi.
En experimentos de cotransfección, se usaron 25 nM de dúplex de ARNsi con respecto al volumen final de medio de cultivo tisular (Fig. 9, 10). Incrementar la concentración de ARNsi hasta 100 nM no potenciaba los efectos de desactivación específicos, pero empezaba a afectar a las eficacias de transfección debido a una competición por la encapsulación liposómica entre ADN plasmídico y ARNsi (datos no mostrados). Disminuir la concentración de ARNsi hasta 1,5 nM no reducía el efecto de desactivación específico (datos no mostrados), aunque los ARNsi solo estuvieran ahora de 2 a 20 veces más concentrados de los plásmidos de ADN. Esto indica que los ARNsi son reactivos extraordinariamente potentes para mediar en la desactivación génica y que los ARNsi son eficaces a concentraciones que son varios órdenes de magnitud menores que las concentraciones aplicadas en experimentos de elección como diana de genes antisentido o de ribozimas convencionales.
A fin de verificar el efecto de ARNds más largos sobre células de mamífero, se prepararon ARNds de 50 y 500 pb cognados a los genes indicadores. Como control no específico, se usaron ARNds procedentes de GFP humanizada (hG) (Kehlenbach, 1998). Cuando los ARNds se cotransfectaban, en cantidades idénticas (no concentraciones) a los dúplex de ARNsi, la expresión del gen indicador se reducía fuertemente e inespecíficamente. Este efecto se ilustra para células HeLa como un ejemplo representativo (Fig. 10a-d). Las actividades absolutas de luciferasa se disminuyeron inespecíficamente de 10 a 20 veces mediante la cotransfección de ARNds de 50 pb y de 20 a 200 veces por ARNds de 500 pb, respectivamente. Se observaron efectos inespecíficos similares para células COS-7 y NIH/3T3. Para células 293, se observó una reducción inespecífica de 10 a 20 veces solamente para ARNds de 500 pb. La reducción inespecífica en la expresión del gen indicador por ARNds > 30 pb se esperaba como parte de la respuesta a interferones.
Sorprendentemente, a pesar de la fuerte disminución inespecífica en la expresión del gen indicador, se detectó reproduciblemente una desactivación adicional mediada por ARNds específica para una secuencia. Sin embargo, los efectos específicos de la desactivación solo eran evidentes cuando las actividades relativas del gen indicador se normalizaban hasta los controles de ARNds de hG (Fig. 10e, f). Además, se observó una reducción específica de 2 a 10 veces en respuesta a ARNds cognado, en las otras tres líneas celulares de mamífero probadas (datos no mostrados). Se presentaron previamente efectos de desactivación específicos con ARNds (356-1662 pb) en células CHO-K1, pero las cantidades de ARNds requeridas para detectar una reducción específica de 2 a 4 veces eran aproximadamente 20 veces superiores que en los presentes experimentos (Ui-Tei, 2000). Además, las células CHO-K1 parecían ser deficientes en la respuesta a interferones. En otro informe, se probaron células 293, NIH/3T3 y BHK-21 con respecto a iARN usando combinaciones de luciferasa/indicador lacZ y ARNds de LacZ de 829 pb o de GFP inespecífico de 717 pb (Caplen, 2000). El fallo para detectar iARN en este caso se puede deber al ensayo menos sensible de luciferasa/indicador lacZ y las diferencias de longitud de ARNds diana y de control. Tomados conjuntamente, los presente resultados indican que la iARN es activa en células de mamífero, pero que el efecto de desactivación es difícil de detectar, si el sistema de interferones es activado por ARNds > 30 bp.
En resumen, se ha demostrado por primera vez la desactivación génica mediada por ARNsi en células de mamífero. El uso de ARNsi cortos es muy prometedor para la inactivación de la función génica en el cultivo tisular humano y el desarrollo de una terapéutica específica de un gen.
Ejemplo 3
Inhibición específica de la expresión génica mediante interferencia de ARN
3.1 Materiales y métodos
3.1.1 Preparación de ARN y ensayo de iARN
Los ensayos de síntesis química de ARN, renaturalización e iARN basado en luciferasa se realizaron como se describe en los Ejemplos 1 o 2 o en publicaciones previas (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000). Todos los dúplex de ARNsi se dirigieron contra luciferasa de luciérnaga, y la secuencia de ARN de luciferasa se derivó de pGEM-luc (reg. GenBank. X65316) según se describe (Tuschl y cols., 1999). Los dúplex de ARNsi se incubaron en reacción de iARN/traducción de D. melanogaster durante 15 min antes de la adición de ARNm. Los ensayos de iARN basados en traducción se realizaron al menos por triplicado.
Para la cartografía de la escisión de ARN diana de sentido, se generó un transcrito de 177 nt, correspondiente a la secuencia de luciferasa de luciérnaga entre las posiciones 113-273 con relación al codón de inicio, seguido por el complemento de 17 nt de la secuencia promotora de SP6. Para la cartografía de la escisión de ARN antisentido, se produjo un transcrito de 166 nt a partir de una plantilla, que se amplificó a partir de la secuencia plasmídica mediante PCR usando el cebador 5' TAATACGACTCa CtA-TAgAg CCCa TATCGTTTCATA (promotor de T7 subrayado) y el
cebador 3' AGAGGATGGAACCGCTGG. La secuencia diana corresponde al complemento de la secuencia de luciferasa de luciérnaga entre las posiciones 50-215 con relación al codón de inicio. Se realizó un marcaje con guanilil transferasa según se describe previamente (Zamore y cols., 2000). Para la cartografía de la escisión de ARN diana, se incubaron 100 nM de dúplex de ARNsi con de 5 a 10 nM de ARN diana en lisado de embriones de D. melanogaster bajo condiciones estándar (Zamore y cols., 2000) durante 2 h a 25°C. La reacción se detuvo mediante la adición de 8 volúmenes de tampón de proteinasa K (200 mM de Tris-HCl pH 7,5, 25 mM de EDTA, 300 mM de NaCl, 2% p/v de dodecilsulfato sódico). Se añadió proteinasa (E.M. Merck, disuelta en agua) hasta una concentración final de 0,6 mg/ml. A continuación, las reacciones se incubaron durante 15 min a 65°C, se extrajeron con fenol/cloroformo/alcohol isoamílico (25:24:1) y se precipitaron con 3 volúmenes de etanol. Las muestras se situaron sobre geles de secuenciación al 6%. Se generaron patrones de longitud con digestión parcial con RNasa T1 e hidrólisis básica parcial de los ARN diana de sentido o antisentido marcados en la caperuza.
3.2 Resultados
3.2.1 Variación del saliente 3' en dúplex de ARNsi de 21 nt
Según se describe anteriormente, 2 o 3 nucleótidos desapareados en el extremo 3' de los dúplex de ARNsi eran más eficaces en la degradación del ARN diana que los respectivos dúplex de extremos romos. Para realizar un análisis más exhaustivo de la función de los nucleótidos terminales, se sintetizaron cinco ARNsi de 21 nt, cada uno presentado por un nucleótido con relación al ARN diana, y ochos ARNsi antisentido de 21 nt, cada uno desplazado un nucleótido con relación a la diana (Figura 11A). Al combinar los ARNsi de sentido y antisentido, se generaron ocho series de dúplex de ARNsi con extremos salientes sintéticos que cubrían un intervalo de saliente 3' de 7 nt a saliente 5' de 4 nt. La interferencia de los dúplex de ARNsi se midió usando el sistema de ensayo de luciferasa doble (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000). Los dúplex de ARNsi se dirigieron contra ARNm de luciferasa de luciérnaga, y se usó ARNm de luciferasa de pensamiento de mar como control interno. La relación de luminiscencia de la actividad de luciferasa diana a control se determinó en presencia de un dúplex de ARNsi y se normalizó a la relación observada en ausencia de ARNds. Para comparación, las relaciones de interferencia de ARNds largos (de 39 a 504 pb) se muestran en la Figura 11 B. Las relaciones de interferencia se determinaron a concentraciones de 5 nM para ARNds largos (Figura 11A) y a 100 nM para dúplex de ARNsi (Figura 11C-J). Se eligieron las concentraciones de 100 nM de ARNsi, debido a que el procesamiento completo de 5 nM de ARNds de 504 pb daría como resultado 120 nM de dúplex de ARNsi totales.
La capacidad de dúplex de ARNsi de 21 nt para mediar en la iARN depende del número de nucleótidos salientes o pares de bases formados. Los dúplex con de cuatro a seis nucleótidos salientes 3' eran incapaces de mediar en la iARN (Figura 11C-F), ya que eran dúplex con dos o más nucleótidos salientes 5' (Figura 11 G-J). Los dúplex con salientes 3' de 2 nt serán los más eficaces para mediar en la interferencia de ARN, aunque la eficacia de la desactivación también dependía de la secuencia, y se observaron interferencias de hasta 12 veces para diferentes dúplex de ARNsi con salientes 3' de 2 nt (compárese la Figura 11D-H). Los dúplex con extremos romos, saliente 5' de 1 nt o salientes 3' de 1 a 3 nt, eran a veces funcionales. El pequeño efecto de desactivación observado para el dúplex de ARNsi con saliente 3' de 7 nt (Figura 11C) se puede deber a un efecto antisentido del saliente 3' largo en vez de deberse a iARN. La comparación de la eficacia de iARN entre ARNds largos (Fig. 11 B) y los dúplex de ARNsi de 21 nt más eficaces (Fig. 11E, G, H) indica que un solo dúplex de ARNsi en una concentración de 100 nM puede ser tan eficaz con 5 nM de ARNds de 504 pb.
3.2.2 Variación de longitud del ARNsi de sentido apareado a un ARNsi antisentido de 21 nt invariante
A fin de investigar el efecto de la longitud del ARNsi sobre la iARN, se prepararon 3 series de dúplex de ARNsi, combinando tres hebras antisentido de 21 nt con ocho hebras de sentido de 18 a 25 nt. El saliente 3' del ARNsi antisentido se fijó hasta 1, 2 o 3 nt en cada serie de dúplex de ARNsi, mientras que el ARNsi de sentido se varió en su extremo 3' (Figura 12A). Independientemente de la longitud del ARNsi de sentido, se encontró que los dúplex con saliente 3' de 2 nt de ARNsi antisentido (Figura 12C) eran más activos que aquellos con saliente 3' de 1 o 3 nt (Figura 12B, D). En la primera serie, con un saliente 3' de 1 nt de ARNsi antisentido, los dúplex con ARNsi de sentido de 21 y 22 nt, que soportaban un saliente 3' de 1 y 2 nt de ARNsi de sentido, respectivamente, eran los más activos. Los dúplex con ARNsi de sentido de 19 a 25 nt también eran capaces de mediar en el ARN, pero hasta un grado menor. De forma similar, en la segunda serie, con un saliente de 2 nt del ARNsi antisentido, el dúplex de ARNsi de 21 nt con saliente 3' de 2 nt era el más activo, y cualquier combinación con los ARNsi de sentido de 18 a 25 nt era activa hasta un grado significativo. En la última serie, con saliente 3' de ARNsi de 3 nt, solamente el dúplex con un ARNsi de sentido de 20 nt y el saliente 3' de sentido de 2 nt era capaz de reducir la expresión del ARN diana. Conjuntamente, estos resultados indican que la longitud del ARNsi así como la longitud del saliente 3' son importantes, y que los dúplex de ARNsi de 21 nt con saliente 3' de 2 nt son óptimos para la iARN.
3.2.3 Variación de la longitud de dúplex de ARNsi con un saliente 3' de 2 nt constante
A continuación, se examinó el efecto de cambiar simultáneamente la longitud de ambas hebras de ARNsi al mantener salientes 3' de 2 nt simétricos (Figura 13A). Se prepararon dos series de dúplex de ARNsi incluyendo el dúplex de ARNsi de 21 nt de la Figura 11 H como referencia. La longitud de los dúplex se varió entre 20 y 25 pb al extender el segmento de bases apareadas en el extremo 3' del ARNsi de sentido (Figura 13B) o en el extremo 3' del ARNsi antisentido (Figura 13C). Los dúplex de 20 a 23 pb provocaban una represión específica de la actividad de luciferasa diana, pero el dúplex de ARNsi de 21 nt era al menos 8 veces más eficaz que cualquiera de los otros dúplex. Los dúplex de ARNsi de 24 y 25 nt no daban como resultado una interferencia detectable. Los efectos específicos para una secuencia eran menores ya que las variaciones en ambos extremos del dúplex producían efectos similares.
3.2.4 Dúplex de ARNsi modificados con 2'-desoxi y 2'-O-metilo
Para determinar la importancia de los residuos de ribosa de ARNsi para la iARN, se examinaron dúplex con ARNsi de 21 nt y salientes 3' de 2 nt con hebras modificadas con 2'-desoxi o 2'-O-metilo (Figura 14). La sustitución de los salientes 3' de 2 nt por 2'-desoxinucleótidos no tenía efecto, e incluso reemplazar dos ribonucleótidos adicionales adyacentes a los salientes en la región apareada producía ARNsi significativamente activos. Así, 8 de 42 nt de un dúplex de ARNsi se reemplazaban por residuos de ADN sin pérdida de actividad. Sin embargo, la sustitución completa de una o ambas hebras de ARNsi por residuos 2'-desoxi suprimía la iARN, como lo hacía la sustitución por residuos 2'-O-metilo.
3.2.5 Definición de sitios de escisión del ARN diana
Las posiciones de escisión del ARN diana se determinaron previamente para dúplex de ARNsi de 22 nt y para un dúplex de 21 nt/22 nt. Se encontró que la posición de la escisión del ARN diana estaba situada en el centro de la región cubierta por el dúplex de ARNsi, 11 o 12 nt aguas abajo del primer nucleótido que era complementario a la secuencia de guía de ARNsi de 21 o 22 nt. Cinco dúplex de ARNsi de 21 nt distintos con saliente 3' de 2 nt (Figura 15A) se incubaron con ARN diana de sentido o antisentido marcado en la caperuza 5' en lisado de D. melanogaster (Tuschl y cols., 1999; Zamore y cols., 2000). Los productos de escisión 5' se resolvieron sobre geles de secuenciación (Figura 15B). La cantidad de ARN diana de sentido escindido se correlaciona con la eficacia de los dúplex de ARNsi determinada en el ensayo basado en traducción, y los dúplex de ARNsi 1, 2 y 4 (Figura 15B y 11 H, G, E) escinden el ARN diana más rápidamente que los dúplex 3 y 5 (Figura 15B y 11 F, D). Notablemente, la suma de radiactividad del producto de escisión 5' y el ARN diana de entrada no era constante a lo largo del tiempo, y los productos de escisión 5' no se acumulaban. Presumiblemente, los productos de escisión, una vez liberados del complejo ARNsi-endonucleasa, son rápidamente degradados debido a la falta de cualquier cola de poli(A) de la caperuza 5'.
Los sitios de escisión para ambos ARN de sentido y antisentido se situaron en el medio de la región abarcada por los dúplex de ARNsi. Los sitios de escisión para cada diana producidos por los 5 dúplex diferentes variaban en 1 nt según el desplazamiento de 1 nt de los dúplex a lo largo de las secuencias diana. Las dianas se escindieron precisamente 11 nt aguas debajo de la posición diana complementaria al nucleótido más 3' del ARNsi de guía complementario a la secuencia (Figura 15A, B).
A fin de determinar si el extremo 5' o el 3' del ARNsi de guía establece la regla para la escisión de ARN diana, se ideó la estrategia experimental esbozada en la Figura 16A y B. Un ARNsi antisentido de 21 nt, que se mantuvo invariante para este estudio, se apareó con ARNsi de sentido que estaban modificados en cualquiera de sus extremos 5' o 3'. La posición de la escisión del ARN diana antisentido se determinó como se describe anteriormente. Los cambios en el extremo 3' del ARNsi de sentido, verificados para el saliente 5' de 1 nt hasta el saliente 3' de 6 nt, no afectaban a la posición de escisión del ARN diana de sentido ni antisentido (Figura 16C). Los cambios en el extremo 5' del ARNsi de sentido no afectaban a la escisión del ARN diana de sentido (Figura 16D, panel superior), lo que se esperaba debido a que el ARNsi antisentido estaba inalterado. Sin embargo, la escisión del ARN diana antisentido se veía afectada y era fuertemente dependiente del extremo 5' del ARNsi de sentido (Figura 16D, panel inferior). La diana antisentido solo se escindía cuando el ARNsi de sentido tenía un tamaño de 20 o 21 nt, y la posición de escisión diferente en 1 nt, sugiriendo que el extremo 5' de ARNsi que reconoce la diana establece la regla para la escisión de ARN. La posición está situada entre el nucleótido 10 y 11 cuando se cuenta en dirección aguas arriba desde el nucleótido diana apareado al nucleótido más 5' del ARNsi de guía (véase además la Figura 15A).
3.2.6 Efectos en la secuencia y sustituciones 2'-desoxi en el saliente 3'
Se prefiere un saliente 3' de 2 nt para la función del ARNsi. Se deseaba saber si la secuencia de los nucleótidos salientes contribuye al reconocimiento de la diana o si solo es una característica requerida para la reconstitución del complejo de endonucleasa (RISC o siRNP). Se sintetizaron ARNsi de sentido y antisentido con salientes 3' de AA, CC, g G, UU y UG e incluían las modificaciones 2'-desoxi TdG y TT. Los ARNsi silvestres contenían AA en el saliente 3' de sentido y UG en el saliente 3' antisentido (AA/UG). Todos los dúplex de ARNsi eran funcionales en el
ensayo de interferencia y reducían la expresión de la diana al menos 5 veces (Figura 17). Los dúplex de ARNsi más eficaces que reducían la expresión de la diana más de 10 veces eran del tipo de secuencia NN/uG, NN/UU, NN/TdG y NN/TT (N, cualquier nucleótido). Los dúplex de ARNsi con un saliente 3' de ARNsi antisentido de AA, CC o GG eran menos activos en un factor de 2 a 4 cuando se comparaban con la secuencia silvestre UG o la UU mutante. Esta reducción en la eficacia de iARN se debe probablemente a la contribución del penúltimo nucleótido 3' con respecto al reconocimiento de la diana específico de una secuencia, ya que el nucleótido 3' terminal se cambiaba de G a U sin efecto.
Los cambios en la secuencia del saliente 3' del ARNsi de sentido no revelaban efectos dependientes de la secuencia, lo que se esperaba debido a que el ARNsi de sentido no debe contribuir al reconocimiento del mRNA diana de sentido.
3.2.7 Especificidad de secuencia del reconocimiento de la diana
A fin de examinar la especificidad de secuencia del reconocimiento de la diana, se introdujeron cambios de secuencia en los segmentos apareados de dúplex de ARNsi y se determinó la eficacia de la desactivación. Los cambios en la secuencia se introdujeron al invertir segmentos cortos de 3 o 4 nt de longitud o como mutaciones puntuales (Figura 18). Los cambios de secuencia en una hebra de ARNsi se compensaron en la hebra de ARNsi complementaria para evitar perturbar la estructura del dúplex de ARNsi con bases apareadas. La secuencia de todos los salientes 3' de 2 nt era TT (T, 2'-desoxitimidina) para reducir los costes de síntesis. El dúplex de ARNsi de referencia TT/TT era comparable en iARN al dúplex de ARNsi silvestre AA/UG (Figura 17). La capacidad para mediar en la destrucción del ARNm indicador se cuantificó usando el ensayo de luminiscencia basado en la traducción. Los dúplex de ARNsi con segmentos de secuencia invertidos mostraban una capacidad drásticamente reducida para elegir como diana el indicador de luciferasa de luciérnaga (Figura 18). Los cambios de secuencia situados entre el extremo 3' y el medio del ARNsi antisentido suprimían completamente el reconocimiento del ARN diana, pero las mutaciones cerca del extremo 5' del ARNsi antisentido exhiben un pequeño grado de desactivación. La transversión del par de bases A/U situado directamente opuesto al sitio de escisión de ARN diana predicho, o un nucleótido alejado del sitio predicho, prevenía la escisión de ARN diana, indicando por lo tanto que una mutación simple dentro del centro de un dúplex de ARNsi discriminan entre dianas desemparejadas.
3.3 Análisis
Los ARNsi son reactivos valiosos para la inactivación de la expresión génica, no solo en células de insecto, sino también en células de mamífero, con un gran potencial de aplicación terapéutica. Se han analizado sistemáticamente los determinantes estructurales de dúplex de ARNsi requeridos para promover la degradación eficaz de ARN diana en lisado de embriones de D. melanogaster, proporcionando así reglas para el diseño de los dúplex de ARNsi más potentes. Un dúplex de ARNsi perfecto es capaz de desactivar la expresión génica con una eficacia comparable a un ARNds de 500 pb, dado que se usan cantidades comparable de ARN total.
3.4 Guía del usuario de ARNsi
Los dúplex de ARNsi eficazmente desactivadores están compuestos preferiblemente por ARNsi antisentido de 21 nt, y se deben seleccionar para formar una doble hélice de 19 pb con extremos salientes 3' de 2 nt. Las sustituciones 2'-desoxi de los ribonucleótidos salientes 3' de 2 nt no afectan a la iARN, pero ayudan a reducir los costes de la síntesis de ARN y pueden potenciar la resistencia a ARNsa de los dúplex de ARNsi. Sin embargo, las modificaciones 2'-desoxi o 2'-O-metilo más intensivas, reducen la capacidad de los ARNsi para mediar en la iARN, probablemente al interferir con la asociación de proteínas para el ensamblaje de ARNsiP.
El reconocimiento de la diana es un proceso muy específico de la secuencia, mediado por el ARNsi complementario a la diana. El nucleótido más 3' del ARNsi guía no contribuye a la especificidad de reconocimiento de la diana, mientras que el penúltimo nucleótido del saliente 3' afecta a la escisión del ARN diana, y un desemparejamiento reduce la iARN de 2 a 4 veces. El extremo 5' de un ARNsi guía también parece más permisivo para el reconocimiento de ARN diana desemparejado cuando se compara con el extremo 3'. Los nucleótidos en el centro del ARNsi, situados opuestos al sitio de escisión del ARN diana, son determinantes de especificidad importantes e incluso cambios de un solo nucleótido reducen la iARN hasta un nivel indetectable. Esto sugiere que los dúplex de ARNsi pueden ser capaces de discriminar alelos mutantes o polimorfos en experimentos de elección como diana de genes, lo que se puede convertir en una característica importante para futuros desarrollos terapéuticos.
Se sugiere que los ARNsi de sentido y antisentido, cuando se asocian con los componentes proteínicos del complejo de endonucleasa o su complejo de compromiso, representan distintos papeles; la orientación relativa del dúplex de ARNsi en este complejo define qué hebra se puede usar para el reconocimiento de la diana. Los dúplex de ARNsi sintéticos tienen simetría de diadas con respecto a la estructura de doble hélice, pero no con respecto a la secuencia. La asociación de dúplex de ARNsi con las proteínas de iARN en el lisado de D. melanogaster conducirá a la formación de dos complejos asimétricos. En estos complejos hipotéticos, el ambiente quiral es distinto para
ARNsi de sentido y antisentido, de ahí su función. La predicción obviamente no se aplica a secuencias de ARNsi palindrómicas, o a proteínas de iARN que se podrían asociar como homodímeros. Para minimizar los efectos de la secuencia, que pueden afectar a la relación de siRNP que eligen como diana sentido o antisentido, se sugiere el uso de secuencias de ARNsi con secuencias salientes 3' idénticas. Se recomendaba ajustar la secuencia del saliente del ARNsi de sentido a la del saliente 3' antisentido, debido a que el ARNsi de sentido no tiene una diana en experimentos de inactivación típicos. La asimetría en la reconstitución siRNP de escisión de sentido y antisentido podría ser (parcialmente) responsable de la variación en la eficacia de iARN observada para diversos dúplex de ARNsi de 21 nt con salientes 3' de 2 nt usado en este estudio (Figura 14). Alternativamente, la secuencia nucleotídica en el sitio diana y/o la accesibilidad de la estructura del ARN diana puede ser responsable de la variación en la eficacia para estos dúplex de ARNsi.
REFERENCIAS
Bass, B. L. (2000). Double-stranded RNA as a témplate for gene silencing. Cell 101, 235-238.
Bosher, J. M. y Labouesse, M. (2000). RNA interference: genetic wand and genetic watchdog. Nat. Cell Biol. 2, E31-36.
Caplen, N. J., Fleenor, J., Fire, A. y Morgan, R. A. (2000). dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105.
Catalanotto, C., Azzalin, G., Macino, G. y Cogoni, C. (2000). Gene silencing in worms and fungi. Nature 404, 245. Chanfreau, G., Buckle, M. y Jacquier, A. (2000). Recognition of a conserved class of RNA tetraloops by Saccharomyces cerevisiae RNase III. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 3142-3147.
Clemens, M. J. (1997). PKR--a protein kinase regulated by double-strand RNA. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 945 949.
Cogoni, C. y Macino, G. (1999). Homology-dependent gene silencing in plants and fungi: a number of variations on the same theme. Curr. Opin. Microbiol. 2, 657-662.
Dalmay, T., Hamilton, A., Rudd, S., Angell, S. y Baulcombe, D. C. (2000). An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell 101, 543-553.
Dernburg, A. F., Zalevsky, J., Colaiacovo, M. P. y Villeneuve, A. M. (2000). Transgene-mediated cosuppression in the C. elegans germ line. Genes & Dev. 14, 1578-1583.
Dunn, J. J. (1982). Ribonuclease III. In The enzymes, vol 15, part B, P. D. Boyer, ed. (Nueva York: Academic Press), pp. 485-499.
Filippov, V., Solovyev, V., Filippova, M. y Gill, S. S. (2000). A novel type of RNase III family proteins in eukaryotes. Gene 245, 213-221.
Fire, A. (1999). RNA-triggered gene silencing. Trends Genet. 15, 358-363.
Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E. y Mello, C. C. (1998). Potent and specific genetic interference by double-strand RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811.
Grishok, A., Tabara, H. y Mello, C. C. (2000). Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. Science 287, 2494-2497.
Hamilton, A. J. y Baulcombe, D. C. (1999). A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science 286, 950-952.
Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D. y Hannon, G. J. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296.
Jacobsen, S. E., Running, M. P. y M., M. E. (1999). Disruption of an RNA helicase/RNase III gene in Arabidopsis causes unregulated cell division in floral meristems. Development 126, 5231-5243.
Jensen, S., Gassama, M. P. y Heidmann, T. (1999). Taming of transposable elements by homology-dependent gene silencing. Nat. Genet. 21, 209-212.
Kehlenbach, R. H., Dickmanns, A. & Gerace, L. (1998). Nucleocytoplasmic shuttling factors including Ran and CRM1 mediate nuclear export of NFAT In vitro. J. Cell Biol. 141, 863-874.
Kennerdell, J. R. y Carthew, R. W. (1998). Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell 95, 1017-1026.
Ketting, R. F., Haverkamp, T. H., van Luenen, H. G. y Plasterk, R. H. (1999). Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNaseD. Cell 99, 133 141.
Ketting, R. F. y Plasterk, R. H. (2000). A genetic link between co-suppression and RNA interference in C. elegans. Nature 404, 296-298.
Lucy, A. P., Guo, H. S., Li, W. X. y Ding, S. W. (2000). Suppression of post-transcriptional gene silencing by a plant viral protein localized in the nucleus. EMBO J. 19, 1672-1680.
Matsuda, S., Ichigotani, Y., Okuda, T., Irimura, T., Nakatsugawa, S. y Hamaguchi, M. (2000). Molecular cloning and characterization of a novel human gene (HERNA) which encodes a putative RNA-helicase. Biochim. Biophys. Acta 31, 1-2.
Milligan, J.F. y Uhlenbeck, O.C. (1989). Synthesis of small RNAs using T7 RNA polymerase. Methods Enzymol. 180, 51-62.
Mourrain, P., Beclin, C., Elmayan, T., Feuerbach, F., Godon, C., Morel, J. B., Jouette, D., Lacombe, A. M., Nikic, S., Picault, N., Remoue, K., Sanial, M., Vo, T. A. y Vaucheret, H. (2000). Arabidopsis SGS2 and SGS3 genes are required for posttranscriptional gene silencing and natural virus resistance. Cell 101, 533-542.
Ngo, H., Tschudi, C., Gull, K. y Ullu, E. (1998). Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 14687-14692.
Nicholson, A. W. (1999). Function, mechanism and regulation of bacterial ribonucleases. FEMS Microbiol. Rev. 23, 371-390.
Oelgeschlager, M., Larrain, J., Geissert, D. y De Robertis, E. M. (2000). The evolutionarily conserved BMP-binding protein Twisted gastrulation promotes BMP signalling. Nature 405, 757-763.
Pan, T. y Uhlenbeck, O. C. (1992). In vitro selection of RNAs that undergo autolytic cleavage with Pb2+. Biochemistry 31, 3887-3895.
Pelissier, T. y Wassenegger, M. (2000). A DNA target of 30 bp is sufficient for RNA-directed methylation. RNA 6, 55 65.
Plasterk, R. H. y Ketting, R. F. (2000). The silence of the genes. Curr. Opin. Genet. Dev. 10, 562-567.
Ratcliff, F. G., MacFarlane, S. A. y Baulcombe, D. C. (1999). Gene Silencing without DNA. RNA-mediated crossprotection between viruses. Plant Cell 11, 1207-1216.
Robertson, H. D. (1990). Escherichia coli ribonuclease III. Methods Enzymol. 181, 189-202.
Robertson, H. D. (1982). Escherichia coli ribonuclease III cleavage sites. Cell 30, 669-672.
Romaniuk, E., McLaughlin, L. W., Neilson, T. y Romaniuk, P. J. (1982). The effect of acceptor oligoribonucleótido sequence on the T4 RNA ligase reaction. Eur J Biochem 125, 639-643.
Sharp, P. A. (1999). RNAi and double-strand RNA. Genes & Dev. 13, 139-141.
Sijen, T. y Kooter, J. M. (2000). Post-transcriptional gene-silencing: RNAs on the attack or on the defense? Bioessays 22, 520-531.
Smardon, A., Spoerke, J., Stacey, S., Klein, M., Mackin, N. y Maine, E. (2000). EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C. elegans. Curr. Biol. 10, 169 178.
Svoboda, P., Stein, P., Hayashi, H. y Schultz, R. M. (2000). Selective reduction of dormant maternal mRNAs in mouse oocytes by RNA interference. Development 127, 4147-4156.
Tabara, H., Sarkissian, M., Kelly, W. G., Fleenor, J., Grishok, A., Timmons, L., Fire, A. y Mello, C. C. (1999). The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. Cell 99, 123-132.
Tuschl, T., Ng, M. M., Pieken, W., Benseler, F. y Eckstein, F. (1993). Importance of exocyclic base functional groups of central core guanosines for hammerhead ribozyme activity. Biochemistry 32, 11658-11668.
Tuschl, T., Sharp, P. A. y Bartel, D. P. (1998). Selection in vitro of novel ribozymes from a partially randomized U2 and U6 snRNA library. EMBO J. 17, 2637-2650.
Tuschl, T., Zamore, P. D., Lehmann, R., Bartel, D. P. y Sharp, P. A. (1999). Targeted mRNA degradation by doublestrand RNA in vitro. Genes & Dev. 13, 3191-3197.
Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y. & Saigo, K. (2000). Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Letters 479, 79-82.
Verma, S. y Eckstein, F. (1999). Modified oligonucleótidos: Synthesis and strategy for users. Annu. Rev. Biochem.
67, 99-134.
Voinnet, O., Lederer, C. y Baulcombe, D. C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell 103, 157-167.
Wassenegger, M. (2000). RNA-directed DNA methylation. Plant Mol. Biol. 43, 203-220.
Wianny, F. y Zemicka-Goetz, M. (2000). Specific interference with gene function by double-strand RNA in early mouse development. Nat. Cell Biol. 2, 70-75.
Wu, H., Xu, H., Miraglia, L. J. y Crooke, S. T. (2000). Human RNase III is a 160 kDa Protein Involved in Preribosomal RNA Processing. J. Biol. Chem. 17, 17.
Yang, D., Lu, H. y Erickson, J.W. (2000) Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in drosophilia embryos. Curr. Biol., 10, 1191-1200.
Zamore, P. D., Tuschl, T., Sharp, P. A. y Bartel, D. P. (2000). RNAi: Double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleótido intervals. Cell 101,25-33.
Zhang, K. y Nicholson, A. W. (1997). Regulation of ribonuclease III processing by double-helical sequence antideterminants. Proc. Natl. Acad. Sci. Us a 94, 13437-13441.
Claims (17)
1. Molécula de ARN de doble hebra aislada, en la que cada hebra de ARN tiene una longitud de 19-25 nucleótidos y al menos una hebra tiene un saliente 3' de 1-5 nucleótidos, en donde dicha molécula de ARN es capaz de interferencia de ARN específica para una diana.
2. La molécula de ARN según la reivindicación 1, en la que el saliente 3' es de 1-3 nucleótidos.
3. La molécula de ARN según una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en la que el saliente 3' está estabilizado contra la degradación.
4. La molécula de ARN según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que contiene al menos un análogo nucleotídico modificado.
5. La molécula de ARN según la reivindicación 4, en la que el análogo nucleotídico modificado se selecciona de ribonucleótidos modificados en el azúcar o el esqueleto.
6. La molécula de ARN según la reivindicación 4 o 5, en la que el análogo nucleotídico es un ribonucleótido modificado en el azúcar, en el que el grupo 2'-OH se reemplaza por un grupo seleccionado de H, OR, R, halo, SH, SR, NH2, NHR, NR2 o CN, en donde R es alquilo C1-C6, alquenilo o alquinilo y halo es F, CI, Br o I o en donde el análogo nucleotídico es un ribonucleótido modificado en el esqueleto que contiene un grupo fosfotioato.
7. La molécula de ARN según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, que tiene una secuencia que tiene una identidad de al menos 70 por ciento con una molécula diana de ARNm predeterminada.
8. Un método para preparar una molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que comprende las etapas:
(a) sintetizar dos hebras de ARN que tienen una longitud de 19-25 nucleótidos, en donde dichas hebras de ARN son capaces de formar una molécula de ARN de doble hebra,
(b) combinar las hebras de ARN sintetizadas bajo condiciones, en las que se forma una molécula de ARN de doble hebra, que es capaz de interferencia de ARN específica para una diana.
9. El método según la reivindicación 8, en el que las hebras de ARN se sintetizan químicamente o en el que las hebras de ARN se sintetizan enzimáticamente.
10. Un método in vitro para mediar en la interferencia de ARN específica para una diana en una célula eucariótica que comprende las etapas:
(a) poner en contacto dicha célula con la molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 bajo condiciones en las que se puede producir interferencia de ARN específica para una diana, y
(b) mediar en una modificación de ácido nucleico específica para una diana efectuada por el ARN de doble hebra hacia un ácido nucleico diana que tiene una porción de secuencia sustancialmente correspondiente al ARN de doble hebra.
11. Uso del método in vitro según la reivindicación 10, para determinar la función de un gen en una célula o para modular la función de un gen en una célula.
12. El uso según la reivindicación 11, en el que el gen está asociado a una afección patológica.
13. Una molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, para el uso como un medicamento para modular la función del gen asociado a un patógeno, p. ej. un gen viral, o un gen asociado a un tumor, o un gen asociado a una enfermedad autoinmunitaria.
14. Composición farmacéutica que contiene como un agente activo al menos una molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un portador farmacéutico, en la que la molécula de ARN de doble hebra es una molécula de ARN sintética, y en donde la composición está libre de contaminantes que están presentes en extractos celulares.
15. Composición farmacéutica que contiene como un agente activo al menos una molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un portador farmacéutico, en la que la molécula de ARN de doble
hebra es una molécula de ARN sintética, y en donde la composición está libre de contaminantes no específicos para una diana.
16. Composición farmacéutica que contiene como un agente activo al menos una molécula de ARN de doble hebra según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un portador farmacéutico, en donde la composición está libre de moléculas de a Rn no específicas para una diana.
17. La composición según la reivindicación 14, 15 o 16, para aplicaciones diagnósticas o para aplicaciones terapéuticas.
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Families Citing this family (1199)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993023569A1 (en) * | 1992-05-11 | 1993-11-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Method and reagent for inhibiting viral replication |
US20030206887A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
US5639647A (en) * | 1994-03-29 | 1997-06-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'-deoxy-2'alkylnucleotide containing nucleic acid |
US7812149B2 (en) | 1996-06-06 | 2010-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US9096636B2 (en) | 1996-06-06 | 2015-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US20040219569A1 (en) * | 1999-07-06 | 2004-11-04 | Fruma Yehiely | Gene identification method |
US20110003879A1 (en) * | 2005-03-11 | 2011-01-06 | Vincent Mark D | Antisense oligonucleotides targeted to the coding region of thymidylate synthase and uses thereof |
SK287538B6 (sk) | 1998-03-20 | 2011-01-04 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Syntetický gén obsahujúci dispergovanú alebo cudzorodú deoxyribonukleovú molekulu, génový konštrukt obsahujúci tento syntetický gén a prípravok obsahujúci tento syntetický gén |
AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
JP2003525017A (ja) * | 1998-04-20 | 2003-08-26 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 遺伝子発現を調節しうる新規な化学組成を有する核酸分子 |
AU776150B2 (en) | 1999-01-28 | 2004-08-26 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US7601494B2 (en) | 1999-03-17 | 2009-10-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion |
EP2275540B1 (en) | 1999-04-09 | 2016-03-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
US6656698B1 (en) * | 1999-06-30 | 2003-12-02 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | 12832, a novel human kinase-like molecule and uses thereof |
US6423885B1 (en) | 1999-08-13 | 2002-07-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) | Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells |
US8128922B2 (en) * | 1999-10-20 | 2012-03-06 | Johns Hopkins University | Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen |
GB9925459D0 (en) * | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
DE10160151A1 (de) * | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
US7179796B2 (en) * | 2000-01-18 | 2007-02-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US8273866B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-09-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA) |
US20080039414A1 (en) * | 2002-02-20 | 2008-02-14 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US8202979B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
US20050032733A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-02-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA) |
US8202846B2 (en) | 2000-03-16 | 2012-06-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Methods and compositions for RNA interference |
US20030084471A1 (en) * | 2000-03-16 | 2003-05-01 | David Beach | Methods and compositions for RNA interference |
CA2403397A1 (en) * | 2000-03-16 | 2001-09-20 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
DK2345742T3 (da) * | 2000-03-30 | 2014-09-15 | Max Planck Ges Zur Förderung Der Wissenschaften E V | RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens |
WO2001075164A2 (en) | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
US20080242627A1 (en) * | 2000-08-02 | 2008-10-02 | University Of Southern California | Novel rna interference methods using dna-rna duplex constructs |
US7662791B2 (en) * | 2000-08-02 | 2010-02-16 | University Of Southern California | Gene silencing using mRNA-cDNA hybrids |
JP5087201B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2012-12-05 | ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ | 抗原に小胞体シャペロンポリペプチドを連結した分子ワクチン |
US20080032942A1 (en) * | 2000-08-30 | 2008-02-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030190635A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-10-09 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA |
US7691821B2 (en) * | 2001-09-19 | 2010-04-06 | University Of South Florida | Inhibition of SHIP to enhance stem cell harvest and transplantation |
US20020165192A1 (en) | 2000-09-19 | 2002-11-07 | Kerr William G. | Control of NK cell function and survival by modulation of ship activity |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
TR200401292T3 (tr) * | 2000-12-01 | 2004-07-21 | Max@Planck@Gesellschaft�Zur�F�Rderung�Der�Wissenschaften | RNAÁgirişimineÁyolÁaçanÁküçükÁRNAÁmolekülleri |
US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US8546143B2 (en) | 2001-01-09 | 2013-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
EP1229134A3 (en) * | 2001-01-31 | 2004-01-28 | Nucleonics, Inc | Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell |
EP1386004A4 (en) * | 2001-04-05 | 2005-02-16 | Ribozyme Pharm Inc | MODULATION OF GENE EXPRESSION ASSOCIATED WITH INFLAMMATORY PROLIFERATION AND GROWTH OF NEURITIES BY METHODS INVOLVING NUCLEIC ACID |
US20070093437A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-04-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of xiap gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US20050164224A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050148530A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-07-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20080161256A1 (en) * | 2001-05-18 | 2008-07-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050187174A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159381A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124566A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050191618A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176666A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159380A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176663A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050288242A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20080188430A1 (en) * | 2001-05-18 | 2008-08-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060211642A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-09-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050153914A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196765A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050282188A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040198682A1 (en) * | 2001-11-30 | 2004-10-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
EP1627061B1 (en) * | 2001-05-18 | 2009-08-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING CHEMICALLY MODIFIED SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050233997A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090299045A1 (en) * | 2001-05-18 | 2009-12-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
US20050164968A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070042983A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-02-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040019001A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20050222066A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060142225A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-06-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cyclin dependent kinase-2 (CDK2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159382A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176024A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030124513A1 (en) * | 2001-05-29 | 2003-07-03 | Mcswiggen James | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV |
US20050124569A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050119212A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050158735A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196781A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030175950A1 (en) * | 2001-05-29 | 2003-09-18 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA |
US20050203040A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050014172A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-01-20 | Ivan Richards | RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050137155A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233344A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2005014811A2 (en) * | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF XIAP GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050143333A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20050261219A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-11-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050048529A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-03-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196767A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA) |
WO2003070983A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROTEIN KINASE C ALPHA (PKC-ALPHA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050287128A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159379A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176664A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070270579A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-11-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040219671A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-11-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050054596A1 (en) * | 2001-11-30 | 2005-03-10 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050256068A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003070750A2 (en) | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc | Rna interference mediated inhibition of hepatitis c virus |
US20050182007A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US7109165B2 (en) * | 2001-05-18 | 2006-09-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20050267058A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA) |
US20050233996A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7517864B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-04-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176025A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060148743A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-07-06 | Vasant Jadhav | RNA interference mediated inhibition of histone deacetylase (HDAC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159378A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164967A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US9994853B2 (en) | 2001-05-18 | 2018-06-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
US20050136436A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050079610A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-04-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050239731A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050209180A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US8008472B2 (en) | 2001-05-29 | 2011-08-30 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
CA2790034A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
US20050019915A1 (en) | 2001-06-21 | 2005-01-27 | Bennett C. Frank | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
DE10133858A1 (de) * | 2001-07-12 | 2003-02-06 | Aventis Pharma Gmbh | Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression |
CA2921821A1 (en) | 2001-07-12 | 2003-01-23 | University Of Massachusetts | In vivo production of small interfering rnas that mediate gene silencing |
PT2280070E (pt) | 2001-07-23 | 2015-10-29 | Univ Leland Stanford Junior | Métodos e composições para inibição mediada por iarn da expressão génica em mamíferos |
US10590418B2 (en) * | 2001-07-23 | 2020-03-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals |
US20090247606A1 (en) * | 2001-08-28 | 2009-10-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition of Adenosine A1 Receptor (ADORA1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
US20030198627A1 (en) * | 2001-09-01 | 2003-10-23 | Gert-Jan Arts | siRNA knockout assay method and constructs |
DE10163098B4 (de) * | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
WO2003035870A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms |
JP2005512976A (ja) * | 2001-10-26 | 2005-05-12 | リボファーマ アーゲー | Rna干渉により線維化疾患を処置するための医薬 |
DE10230996A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms |
US20040248835A1 (en) * | 2001-10-26 | 2004-12-09 | Anja Krebs | Use of a double-stranded ribonucleic acid for treating an infection with a positivestrand rna-virus |
IL161733A0 (en) * | 2001-11-02 | 2005-11-20 | Insert Therapeutics Inc | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
US20040063654A1 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
AU2002348163A1 (en) * | 2001-11-02 | 2003-05-19 | Intradigm Corporation | Therapeutic methods for nucleic acid delivery vehicles |
ES2401326T3 (es) * | 2001-11-21 | 2013-04-18 | Astellas Pharma Inc. | Procedimiento para inhibir la expresión génica |
US20040138163A1 (en) * | 2002-05-29 | 2004-07-15 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050075304A1 (en) * | 2001-11-30 | 2005-04-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070203333A1 (en) * | 2001-11-30 | 2007-08-30 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7294504B1 (en) | 2001-12-27 | 2007-11-13 | Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for DNA mediated gene silencing |
DE60322509D1 (de) * | 2002-01-17 | 2008-09-11 | Univ British Columbia | Bispezifische antisense oligonukleotide die igfbp-2 und igfbp-5 inhibieren und deren verwendung |
DE10202419A1 (de) | 2002-01-22 | 2003-08-07 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens |
GB0201477D0 (en) * | 2002-01-23 | 2002-03-13 | Novartis Forschungsstiftung | Methods of obtaining isoform specific expression in mammalian cells |
US20060009409A1 (en) * | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
ATE508188T1 (de) | 2002-02-01 | 2011-05-15 | Life Technologies Corp | Oligonukleotid-zusammensetzungen mit verbesserter wirksamkeit |
EP1572902B1 (en) * | 2002-02-01 | 2014-06-11 | Life Technologies Corporation | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
US20050096289A1 (en) * | 2002-02-07 | 2005-05-05 | Hans Prydz | Methods and compositions for modulating tissue factor |
US20030157573A1 (en) * | 2002-02-12 | 2003-08-21 | Orna Mor | Use of Axl receptor for diagnosis and treatment of renal disease |
WO2003068961A2 (en) * | 2002-02-13 | 2003-08-21 | Axordia Limited | Method to modify differentiation of pluripotential stem cells |
CA2476530A1 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | City Of Hope | Methods for producing interfering rna molecules in mammalian cells and therapeutic uses for such molecules |
AU2003216265A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF G72 AND D-AMINO ACID OXIDASE (DAAO) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7691999B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-04-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7897752B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7678897B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-03-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090099117A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-04-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
JP2005517423A (ja) * | 2002-02-20 | 2005-06-16 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 短干渉核酸(siNA)を用いるTGF−ベータおよびTGF−ベータレセプター遺伝子の発現のRNA干渉媒介性阻害 |
US7910724B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-03-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003106476A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-12-24 | Sirna Therapeutics, Inc | Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity |
US7667030B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-02-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090137509A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-05-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLIFERATION CELL NUCLEAR ANTIGEN (PCNA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US8013143B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-09-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
EP1432724A4 (en) | 2002-02-20 | 2006-02-01 | Sirna Therapeutics Inc | RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES |
US20050096284A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-05-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7662952B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-02-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090233983A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-09-17 | Sirna Therapeutics Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition of Protein Tyrosine Phosphatase-1B (PTP-1B) Gene Expression Using Short Interfering RNA |
US7935812B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-05-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7928219B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20090192105A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-07-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA) |
AU2003219818A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20090253773A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-10-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20090093439A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-04-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US8067575B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-11-29 | Merck, Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7795422B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-09-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20100240730A1 (en) * | 2002-02-20 | 2010-09-23 | Merck Sharp And Dohme Corp. | RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
JP2005517450A (ja) * | 2002-02-20 | 2005-06-16 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 短干渉核酸(siNA)を用いるRNA干渉媒介性標的発見および標的評価 |
US20090253774A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-10-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US9181551B2 (en) | 2002-02-20 | 2015-11-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US7893248B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-02-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090306182A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-12-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MAP KINASE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US8232383B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-07-31 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US7700760B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-04-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US9657294B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US7897753B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
CA2477014A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of tnf and tnf receptor superfamily gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US7683166B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-03-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7683165B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-03-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7928218B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7928220B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US8258288B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-09-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7667029B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-02-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7897757B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090247613A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-10-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF B-CELL CLL/LYMPHOMA-2 (BCL2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20060111312A1 (en) * | 2002-02-22 | 2006-05-25 | The John Hopkins University | Antigene locks and therapeutic uses thereof |
WO2003073991A2 (en) * | 2002-03-01 | 2003-09-12 | Celltech R & D, Inc. | Methods to increase or decrease bone density |
WO2003076592A2 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-18 | Rigel Pharmaceuticals, Inc. | Novel method for delivery and intracellular synthesis of sirna molecules |
US7274703B2 (en) * | 2002-03-11 | 2007-09-25 | 3Com Corporation | Stackable network units with resiliency facility |
AU2003224725A1 (en) * | 2002-03-20 | 2003-10-08 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Hiv therapeutic |
US7357928B2 (en) | 2002-04-08 | 2008-04-15 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Method for the diagnosis and prognosis of malignant diseases |
WO2003087367A2 (en) * | 2002-04-18 | 2003-10-23 | Lynkeus Biotech Gmbh | Means and methods for the specific inhibition of genes in cells and tissue of the cns and/or eye |
ES2465574T3 (es) | 2002-05-03 | 2014-06-06 | Duke University | Un método para regular la expresión génica |
US7199107B2 (en) * | 2002-05-23 | 2007-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
WO2003099227A2 (en) | 2002-05-23 | 2003-12-04 | Ceptyr, Inc. | Modulation of ptp1b signal transduction by rna interference |
AU2003237686A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
US20100075423A1 (en) * | 2002-06-12 | 2010-03-25 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference |
AU2003243541A1 (en) * | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Ambion, Inc. | Methods and compositions relating to labeled rna molecules that reduce gene expression |
US20040248094A1 (en) * | 2002-06-12 | 2004-12-09 | Ford Lance P. | Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression |
JP2005529959A (ja) * | 2002-06-14 | 2005-10-06 | マイラス コーポレイション | 細胞へのポリヌクレオチドの伝達をするための新規な方法 |
WO2004001044A1 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Sinogenomax Company Ltd. | Randomised dna libraries and double-stranded rna libraries, use and method of production thereof |
JP2005537028A (ja) * | 2002-06-26 | 2005-12-08 | ザ ペン ステート リサーチ ファウンデーション | ヒト乳頭腫ウイルス感染症を治療する方法及び材料 |
WO2004002453A1 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Protiva Biotherapeutics Ltd. | Method and apparatus for producing liposomes |
AU2003254334A1 (en) | 2002-07-10 | 2004-02-02 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna-interference by single-stranded rna molecules |
US7148342B2 (en) | 2002-07-24 | 2006-12-12 | The Trustees Of The University Of Pennyslvania | Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis |
US20050042646A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-02-24 | Davidson Beverly L. | RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof |
AU2003260370B2 (en) | 2002-08-05 | 2008-05-22 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
AU2015264957B2 (en) * | 2002-08-05 | 2017-10-26 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering rna molecules |
US20040241854A1 (en) | 2002-08-05 | 2004-12-02 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing |
ES2665274T5 (es) * | 2002-08-05 | 2021-06-30 | Silence Therapeutics Gmbh | Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia |
US20080274989A1 (en) | 2002-08-05 | 2008-11-06 | University Of Iowa Research Foundation | Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof |
EP1389637B1 (en) | 2002-08-05 | 2012-05-30 | Silence Therapeutics Aktiengesellschaft | Blunt-ended interfering RNA molecules |
AU2012216354B2 (en) * | 2002-08-05 | 2016-01-14 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
CA2501719C (en) * | 2002-08-06 | 2013-02-05 | Toray Industries, Inc. | Remedy or preventive for kidney disease and method of diagnosing kidney disease |
JP2005534696A (ja) * | 2002-08-06 | 2005-11-17 | イントラディグム、コーポレイション | 干渉性rnaの導入によるターゲット遺伝子発現のイン・ビボでのダウンレギュレーション方法 |
AU2003261449A1 (en) * | 2002-08-07 | 2004-02-25 | Compositions for rna interference and methods of use thereof | |
US20040029275A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
ES2319894T3 (es) * | 2002-08-14 | 2009-05-14 | Silence Therapeutics Aktiengesellschaft | Uso de la proteina quinasa-n-beta. |
CA2882443C (en) * | 2002-08-21 | 2016-12-13 | The University Of British Columbia | Rnai probes targeting cancer-related proteins |
US7923547B2 (en) * | 2002-09-05 | 2011-04-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060287269A1 (en) * | 2002-09-09 | 2006-12-21 | The Regents Of The University Of California | Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof |
US20080260744A1 (en) | 2002-09-09 | 2008-10-23 | Omeros Corporation | G protein coupled receptors and uses thereof |
US20040138119A1 (en) * | 2002-09-18 | 2004-07-15 | Ingo Tamm | Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis |
US20060257380A1 (en) * | 2002-09-19 | 2006-11-16 | Inst.Nat. De La Sante Et De La Recherche MED | Use of sirnas for gene silencing in antigen presenting cells |
US20050020521A1 (en) | 2002-09-25 | 2005-01-27 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA |
WO2004029213A2 (en) * | 2002-09-28 | 2004-04-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for delivery of short interfering rna and short hairpin rna |
US20060160759A1 (en) * | 2002-09-28 | 2006-07-20 | Jianzhu Chen | Influenza therapeutic |
US20040242518A1 (en) * | 2002-09-28 | 2004-12-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Influenza therapeutic |
US20060240425A1 (en) * | 2002-09-30 | 2006-10-26 | Oncotherapy Science, Inc | Genes and polypeptides relating to myeloid leukemia |
US7422853B1 (en) * | 2002-10-04 | 2008-09-09 | Myriad Genetics, Inc. | RNA interference using a universal target |
JP5449639B2 (ja) * | 2002-11-01 | 2014-03-19 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | HIF−1アルファのsiRNA阻害に関する組成物及び方法 |
US7892793B2 (en) * | 2002-11-04 | 2011-02-22 | University Of Massachusetts | Allele-specific RNA interference |
US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
AU2003291753B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-07-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
WO2004043977A2 (en) * | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2’-fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
WO2004044139A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Parmaceuticals, Inc. | Modified oligonucleotides for use in rna interference |
US9150606B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
DE10322662A1 (de) * | 2002-11-06 | 2004-10-07 | Grünenthal GmbH | Wirksame und stabile DNA-Enzyme |
US7977471B2 (en) * | 2002-11-14 | 2011-07-12 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting TNFα |
US7635770B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-12-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3) |
US8198427B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-06-12 | Dharmacon, Inc. | SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1) |
US9879266B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-01-30 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7619081B2 (en) * | 2002-11-14 | 2009-11-17 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2) |
US7781575B2 (en) | 2002-11-14 | 2010-08-24 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting tumor protein 53 (p53) |
US10920226B2 (en) * | 2002-11-14 | 2021-02-16 | Thermo Fisher Scientific Inc. | siRNA targeting LDHA |
US20080268457A1 (en) * | 2002-11-14 | 2008-10-30 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting forkhead box P3 (FOXP3) |
US7951935B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-05-31 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC) |
US20100113307A1 (en) * | 2002-11-14 | 2010-05-06 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF) |
US9839649B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-12-12 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US20090227780A1 (en) * | 2002-11-14 | 2009-09-10 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting connexin 43 |
US9719094B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting SEC61G |
US9771586B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-09-26 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting ZNF205 |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US9719092B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting CNTD2 |
JP2006507841A (ja) * | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
US7612196B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-11-03 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B) |
US20090005548A1 (en) * | 2002-11-14 | 2009-01-01 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting nuclear receptor interacting protein 1 (NRIP1) |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7691998B2 (en) | 2002-11-14 | 2010-04-06 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62) |
WO2006006948A2 (en) * | 2002-11-14 | 2006-01-19 | Dharmacon, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY |
US7592442B2 (en) * | 2002-11-14 | 2009-09-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2) |
US10011836B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-07-03 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US8163896B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-04-24 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7655785B1 (en) | 2002-11-14 | 2010-02-02 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
CA2506619A1 (en) | 2002-11-18 | 2004-08-19 | Thomas W. Hodge | Cell lines and host nucleic acid sequences related to infectious disease |
US7064337B2 (en) | 2002-11-19 | 2006-06-20 | The Regents Of The University Of California | Radiation detection system for portable gamma-ray spectroscopy |
DE10254214A1 (de) * | 2002-11-20 | 2004-06-09 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz |
JP3839453B2 (ja) * | 2002-11-22 | 2006-11-01 | 株式会社バイオシンクタンク | Rna干渉の標的塩基配列検索方法、rna干渉を生じさせるポリヌクレオチドの塩基配列設計方法、2本鎖ポリヌクレオチドの作製方法、遺伝子の発現抑制方法、塩基配列処理装置、塩基配列処理方法をコンピュータに実行させるプログラム、記録媒体、および、塩基配列処理システム |
WO2004047764A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | University Of Massachusetts | Modulation of hiv replication by rna interference |
JP4526228B2 (ja) * | 2002-11-22 | 2010-08-18 | 隆 森田 | RNAiによる新規治療法および治療剤 |
US20130130231A1 (en) | 2002-11-26 | 2013-05-23 | Isaac Bentwich | Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof |
US7217807B2 (en) | 2002-11-26 | 2007-05-15 | Rosetta Genomics Ltd | Bioinformatically detectable group of novel HIV regulatory genes and uses thereof |
US7696334B1 (en) | 2002-12-05 | 2010-04-13 | Rosetta Genomics, Ltd. | Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene |
US7618948B2 (en) * | 2002-11-26 | 2009-11-17 | Medtronic, Inc. | Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA |
US7829694B2 (en) | 2002-11-26 | 2010-11-09 | Medtronic, Inc. | Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA |
DE60332277D1 (de) * | 2002-11-26 | 2010-06-02 | Univ Massachusetts | Verabreichung von sirnas |
US7605249B2 (en) | 2002-11-26 | 2009-10-20 | Medtronic, Inc. | Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA |
CN1301263C (zh) | 2002-12-18 | 2007-02-21 | 北京昭衍新药研究中心 | 一组抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其应用 |
PT1575517E (pt) | 2002-12-24 | 2012-05-28 | Rinat Neuroscience Corp | Anticorpos anti-ngf e métodos de utilização dos mesmos |
US9498530B2 (en) | 2002-12-24 | 2016-11-22 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same |
EP1590430A4 (en) * | 2003-01-03 | 2009-08-05 | Gencia Corp | SiRNA-mediated post-transcriptional gene silencing of allopecia genes |
AU2004205895B2 (en) | 2003-01-16 | 2009-02-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for siRNA inhibition of ICAM-1 |
US7629323B2 (en) * | 2003-01-21 | 2009-12-08 | Northwestern University | Manipulation of neuronal ion channels |
US20060178297A1 (en) * | 2003-01-28 | 2006-08-10 | Troy Carol M | Systems and methods for silencing expression of a gene in a cell and uses thereof |
US20040147027A1 (en) * | 2003-01-28 | 2004-07-29 | Troy Carol M. | Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof |
US7994149B2 (en) | 2003-02-03 | 2011-08-09 | Medtronic, Inc. | Method for treatment of Huntington's disease through intracranial delivery of sirna |
US7732591B2 (en) | 2003-11-25 | 2010-06-08 | Medtronic, Inc. | Compositions, devices and methods for treatment of huntington's disease through intracranial delivery of sirna |
US20040248839A1 (en) * | 2003-02-05 | 2004-12-09 | University Of Massachusetts | RNAi targeting of viruses |
FR2850971B1 (fr) * | 2003-02-10 | 2006-08-11 | Aventis Pharma Sa | Oligonucleotide antisens inhibant l'expression de la proteine ob-rgrp et procede de detection de composes modifiant l'interaction entre la famille de la proteine ob-rgrp et le recepteur de la leptine |
US20070104688A1 (en) | 2003-02-13 | 2007-05-10 | City Of Hope | Small interfering RNA mediated transcriptional gene silencing in mammalian cells |
US20040162235A1 (en) * | 2003-02-18 | 2004-08-19 | Trubetskoy Vladimir S. | Delivery of siRNA to cells using polyampholytes |
PL379983A1 (pl) | 2003-02-19 | 2006-11-27 | Rinat Neuroscience Corp. | Sposoby leczenia bólu polegające na podaniu antagonisty czynnika wzrostu nerwów i niesteroidowego leku przeciwzapalnego oraz zawierające je kompozycje |
US20060269530A1 (en) * | 2003-02-21 | 2006-11-30 | The Penn State Research Foundation | RNA interference compositions and methods |
WO2004076664A2 (en) * | 2003-02-21 | 2004-09-10 | University Of South Florida | Vectors for regulating gene expression |
JPWO2004076663A1 (ja) * | 2003-02-27 | 2006-06-08 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 哺乳動物細胞におけるdsRNAによるCpG配列へのメチル化誘導 |
EP1597351B1 (en) * | 2003-02-27 | 2012-04-18 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | METHODS AND CONSTRUCTS FOR EVALUATION OF RNAi TARGETS AND EFFECTOR MOLECULES |
AU2004217437B2 (en) * | 2003-03-05 | 2009-11-19 | Senesco Technologies, Inc. | Use of antisense oligonucleotides or siRNA to suppress expression of eIF-5A1 |
EP1604022A2 (en) * | 2003-03-06 | 2005-12-14 | Oligo Engine, Inc. | Modulation of gene expression using dna-rna hybrids |
EP1605978B1 (en) | 2003-03-07 | 2010-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Therapeutic compositions |
AU2004220459B2 (en) * | 2003-03-12 | 2010-08-05 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
DK2141234T3 (en) | 2003-03-21 | 2016-06-20 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Short interfering RNA (siRNA) analogues |
EP1608733B1 (en) * | 2003-04-02 | 2011-12-07 | Dharmacon, Inc. | Modified polynucleotides for use in rna interference |
US20040198640A1 (en) * | 2003-04-02 | 2004-10-07 | Dharmacon, Inc. | Stabilized polynucleotides for use in RNA interference |
ATE536408T1 (de) * | 2003-04-02 | 2011-12-15 | Dharmacon Inc | Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz |
AU2004229519B2 (en) | 2003-04-09 | 2011-07-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | iRNA conjugates |
JP4789208B2 (ja) * | 2003-04-09 | 2011-10-12 | バイオデリバリー サイエンシーズ インターナショナル インコーポレイティッド | タンパク質発現に向けられた渦巻型組成物 |
WO2004092383A2 (en) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF SEVERE ACUTE RESPIRATORY SYNDROME (SARS) VIRUS GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7723509B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-05-25 | Alnylam Pharmaceuticals | IRNA agents with biocleavable tethers |
EP1625138A4 (en) | 2003-04-17 | 2010-06-23 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | PROTECTED MONOMERS |
US8796436B2 (en) | 2003-04-17 | 2014-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified iRNA agents |
EP2669377A3 (en) | 2003-04-17 | 2015-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Modified iRNA agents |
US7851615B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipophilic conjugated iRNA agents |
US8017762B2 (en) | 2003-04-17 | 2011-09-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified iRNA agents |
JP2006523464A (ja) * | 2003-04-18 | 2006-10-19 | ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア | アンジオポエチン1、2、及びそれらの受容体TIE2のsiRNA阻害のための組成物及びその方法 |
WO2005032595A2 (en) * | 2003-04-23 | 2005-04-14 | Georgetown University | Methods and compositions for the inhibition of stat5 in prostate cancer cells |
WO2004098526A2 (en) * | 2003-05-05 | 2004-11-18 | Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein |
JP4884224B2 (ja) | 2003-05-09 | 2012-02-29 | ディアデクサス インコーポレーテッド | Ovr110抗体組成物および使用方法 |
EP1623032A2 (en) | 2003-05-09 | 2006-02-08 | University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education | Small interfering rna libraries and methods of synthesis and use |
WO2004106488A2 (en) * | 2003-05-12 | 2004-12-09 | Potomac Pharmaceuticals, Inc. | Gene expression suppression agents |
US20050148531A1 (en) * | 2003-05-15 | 2005-07-07 | Todd Hauser | Modulation of gene expression using DNA-DNA hybrids |
EP1628993A4 (en) * | 2003-05-16 | 2010-04-07 | Rosetta Inpharmatics Llc | METHOD AND COMPOSITIONS FOR RNA INTERFERENCE |
WO2004100990A1 (ja) | 2003-05-19 | 2004-11-25 | Genecare Research Institute Co., Ltd. | 癌細胞に対するアポトーシス誘導剤 |
JP4623426B2 (ja) * | 2003-05-30 | 2011-02-02 | 日本新薬株式会社 | オリゴ核酸担持複合体、当該複合体を含有する医薬組成物 |
JP4505749B2 (ja) * | 2003-05-30 | 2010-07-21 | 日本新薬株式会社 | Bcl−2の発現抑制をするオリゴ二本鎖RNAとそれを含有する医薬組成物 |
ES2864206T3 (es) * | 2003-06-02 | 2021-10-13 | Univ Massachusetts | Métodos y composiciones para mejorar la eficacia y la especificidad del ARNi |
US7750144B2 (en) * | 2003-06-02 | 2010-07-06 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing |
EP3502252B1 (en) * | 2003-06-02 | 2023-04-05 | University of Massachusetts | Methods and compositions for controlling efficacy of rna silencing |
CN1984921B (zh) * | 2003-06-03 | 2010-06-16 | Isis药物公司 | 存活蛋白表达的调节 |
US20050019918A1 (en) * | 2003-06-03 | 2005-01-27 | Hidetoshi Sumimoto | Treatment of cancer by inhibiting BRAF expression |
US7595306B2 (en) * | 2003-06-09 | 2009-09-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Method of treating neurodegenerative disease |
US8575327B2 (en) | 2003-06-12 | 2013-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing |
DK3604537T3 (da) * | 2003-06-13 | 2022-02-28 | Alnylam Europe Ag | Dobbeltstrenget ribonukleinsyre med forøget effektivitet i en organisme |
EP1486564A1 (de) * | 2003-06-13 | 2004-12-15 | Ribopharma AG | SiRNA mit erhöhter Stabilität in Serum |
EP1644475A4 (en) * | 2003-06-20 | 2009-06-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | DOUBLE-STRAND COMPOSITIONS WITH A 3'-ENDO-MODIFIED STRING FOR USE IN GENE MODULATION |
EP1636342A4 (en) * | 2003-06-20 | 2008-10-08 | Isis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMERIC COMPOUNDS FOR GENE MODULATION |
CN100577680C (zh) * | 2003-07-03 | 2010-01-06 | 宾夕法尼亚大学理事会 | 对Syk激酶表达的抑制 |
US20050256071A1 (en) * | 2003-07-15 | 2005-11-17 | California Institute Of Technology | Inhibitor nucleic acids |
US20050136430A1 (en) * | 2003-07-15 | 2005-06-23 | California Institute Of Technology | Inhibitor nucleic acids |
AU2004257373B2 (en) * | 2003-07-16 | 2011-03-24 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid encapsulated interfering RNA |
WO2005010188A2 (en) * | 2003-07-21 | 2005-02-03 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rnas able to modulate chromatin silencing |
CA2533701A1 (en) | 2003-07-31 | 2005-02-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding rnas |
WO2005019422A2 (en) * | 2003-08-13 | 2005-03-03 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Silencing of tgf-beta receptor type ii expression by sirna |
US7888497B2 (en) | 2003-08-13 | 2011-02-15 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
US7825235B2 (en) * | 2003-08-18 | 2010-11-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression |
WO2005035759A2 (en) * | 2003-08-20 | 2005-04-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1 (HIF1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050136437A1 (en) * | 2003-08-25 | 2005-06-23 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nanoparticles for delivery of nucleic acids and stable double-stranded RNA |
MXPA06002216A (es) * | 2003-08-28 | 2006-04-27 | Novartis Ag | Interferencia de arn doble que tiene extremos romos y modificaciones 3'. |
US8501705B2 (en) * | 2003-09-11 | 2013-08-06 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and materials for treating autoimmune and/or complement mediated diseases and conditions |
US8680063B2 (en) * | 2003-09-12 | 2014-03-25 | University Of Massachusetts | RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders |
WO2005027980A1 (en) * | 2003-09-12 | 2005-03-31 | University Of Massachusetts | Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders |
EP1668130A2 (en) | 2003-09-18 | 2006-06-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eif4e expression |
EP1670955A2 (en) * | 2003-09-22 | 2006-06-21 | Rosetta Inpharmatics LLC. | Synthetic lethal screen using rna interference |
WO2005033310A1 (de) * | 2003-10-01 | 2005-04-14 | Grünenthal GmbH | Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen |
CA2541852A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-05-12 | Quark Biotech, Inc. | Bone morphogenetic protein (bmp) 2a and uses thereof |
EP2361984A1 (en) | 2003-10-09 | 2011-08-31 | E. I. du Pont de Nemours and Company | Gene silencing by using modified micro-RNA molecules |
WO2005045032A2 (en) * | 2003-10-20 | 2005-05-19 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
JP2007527709A (ja) * | 2003-10-23 | 2007-10-04 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 短鎖干渉核酸(siNA)を用いた、RNA干渉を介したGPRA及び/又はAAA1遺伝子発現の阻害 |
CA2543013A1 (en) * | 2003-10-23 | 2005-05-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of nogo and nogo receptor gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
AU2004286261B2 (en) | 2003-10-27 | 2010-06-24 | Merck Sharp & Dohme Llc | Method of designing siRNAs for gene silencing |
US8227434B1 (en) | 2003-11-04 | 2012-07-24 | H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. | Materials and methods for treating oncological disorders |
US20070275918A1 (en) * | 2003-11-07 | 2007-11-29 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Induction of Cellular Senescence by Cdk4 Disruption for Tumor Suppression and Regression |
WO2005047507A1 (en) * | 2003-11-12 | 2005-05-26 | The Austin Research Institute | Dna-carrier conjugate |
US7763592B1 (en) * | 2003-11-20 | 2010-07-27 | University Of South Florida | SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production |
JP2005168485A (ja) * | 2003-11-20 | 2005-06-30 | Tsutomu Suzuki | siRNAの設計方法 |
US7807646B1 (en) | 2003-11-20 | 2010-10-05 | University Of South Florida | SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production |
US20050208658A1 (en) * | 2003-11-21 | 2005-09-22 | The University Of Maryland | RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression |
US20100145038A1 (en) * | 2003-11-24 | 2010-06-10 | Merck & Co., Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
WO2005054494A2 (en) | 2003-11-26 | 2005-06-16 | University Of Massachusetts | Sequence-specific inhibition of small rna function |
JP2007513611A (ja) * | 2003-11-26 | 2007-05-31 | ザ クイーンズ ユニヴァーシティ オブ ベルファスト | 癌治療 |
US20070238676A1 (en) * | 2003-12-04 | 2007-10-11 | Mohapatra Shyam S | Polynucleotides for Reducing Respiratory Syncytial Virus Gene Expression |
CA2548972A1 (en) * | 2003-12-12 | 2005-06-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Treatment of mammals by sirna delivery into mammalian nerve cells |
JPWO2005068630A1 (ja) * | 2003-12-16 | 2007-07-26 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 干渉用二重鎖rna |
US20060134787A1 (en) | 2004-12-22 | 2006-06-22 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA |
CA2551100A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for combined therapy of disease |
US20070161586A1 (en) * | 2004-01-16 | 2007-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Drug for preventing and treating atherosclerosis |
EP1758998B1 (en) * | 2004-01-30 | 2010-12-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases |
EP1713912B1 (en) * | 2004-01-30 | 2013-09-18 | Santaris Pharma A/S | Modified short interfering rna (modified sirna) |
US20070269889A1 (en) * | 2004-02-06 | 2007-11-22 | Dharmacon, Inc. | Stabilized siRNAs as transfection controls and silencing reagents |
US7858769B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-12-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional siNA) |
WO2005078848A2 (en) | 2004-02-11 | 2005-08-25 | University Of Tennessee Research Foundation | Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase dnazymes |
US20060069050A1 (en) * | 2004-02-17 | 2006-03-30 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for mediating gene silencing |
US20050273868A1 (en) * | 2004-02-17 | 2005-12-08 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing RISC activity in vitro and in vivo |
US20070202134A1 (en) * | 2004-02-23 | 2007-08-30 | Kufe Donald W | Muc1 Antagonist Enhancement of Death Receptor Ligand-Induced Apoptosis |
EP1566202A1 (en) * | 2004-02-23 | 2005-08-24 | Sahltech I Göteborg AB | Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis |
EP1958964A3 (en) | 2004-02-24 | 2009-01-07 | The Government of the United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | RAB9A, RAB11A, and modulators thereof related to infectious disease |
US7691823B2 (en) * | 2004-03-05 | 2010-04-06 | University Of Massachusetts | RIP140 regulation of glucose transport |
US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
US20050202075A1 (en) * | 2004-03-12 | 2005-09-15 | Pardridge William M. | Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers |
AU2005222902B2 (en) | 2004-03-12 | 2010-06-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | iRNA agents targeting VEGF |
US20070265220A1 (en) | 2004-03-15 | 2007-11-15 | City Of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA |
EP1742958B1 (en) | 2004-03-15 | 2017-05-17 | City of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna |
US20050208090A1 (en) * | 2004-03-18 | 2005-09-22 | Medtronic, Inc. | Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system |
US20050272682A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-12-08 | Evers Bernard M | SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy |
US7851452B2 (en) * | 2004-03-22 | 2010-12-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of use of bcl-6-derived nucleotides to induce apoptosis |
JP5184077B2 (ja) * | 2004-03-26 | 2013-04-17 | キュリス,インコーポレイテッド | ヘッジホッグシグナリングのrna干渉モジュレーター及びその利用 |
WO2005095622A2 (en) * | 2004-03-26 | 2005-10-13 | Van Andel Research Institute | c-met siRNA ADENOVIRUS VECTORS INHIBIT CANCER CELL GROWTH, INVASION AND TUMORIGENICITY |
JP2005312428A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-11-10 | Keio Gijuku | Skp−2発現抑制を利用した癌の治療 |
WO2005095647A1 (ja) * | 2004-03-31 | 2005-10-13 | Takara Bio Inc. | siRNAのスクリーニング方法 |
KR101147147B1 (ko) | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
EP1737878A2 (en) | 2004-04-05 | 2007-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification |
EP1757306A4 (en) | 2004-04-09 | 2010-05-19 | Genecare Res Inst Co Ltd | AGENT INDUCING APOPTOSIS SPECIFIC TO CARCINOMA CELLS TARGETING A GENE INVOLVED IN STABILIZING CHROMOSOMES |
US20060078902A1 (en) * | 2004-04-15 | 2006-04-13 | Michaeline Bunting | Method and compositions for RNA interference |
MXPA06012076A (es) * | 2004-04-20 | 2007-01-25 | Nastech Pharm Co | Metodos y composiciones para mejorar el suministro de arn bicatenario o un acido nucleico hibrido bicatenario para regular la expresion genetica en celulas de mamifero. |
WO2005105157A2 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-10 | The Trustees Of Columbia University In The City Ofnew York | INHIBITION OF HAIRLESS PROTEIN mRNA |
WO2006078278A2 (en) | 2004-04-27 | 2006-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety |
AU2005247319B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-12-01 | Molecules For Health, Inc. | Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders |
EP1750776A2 (en) | 2004-04-30 | 2007-02-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotides comprising a c5-modified pyrimidine |
US20060040882A1 (en) * | 2004-05-04 | 2006-02-23 | Lishan Chen | Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells |
US7605250B2 (en) * | 2004-05-12 | 2009-10-20 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D |
US20050260214A1 (en) * | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
US20110117088A1 (en) * | 2004-05-12 | 2011-05-19 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of rna interference sequences into targeted cells and tissues |
US20060030003A1 (en) * | 2004-05-12 | 2006-02-09 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
EP1784501B1 (en) | 2004-05-14 | 2015-11-18 | Rosetta Genomics Ltd | VIRAL AND VIRUS ASSOCIATED MicroRNAS AND USES THEREOF |
WO2005110464A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-11-24 | Oregon Health & Science University | Irx5 inhibition as treatment for hyperproliferative disorders |
US7687616B1 (en) | 2004-05-14 | 2010-03-30 | Rosetta Genomics Ltd | Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof |
US10508277B2 (en) | 2004-05-24 | 2019-12-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
JP2008500364A (ja) * | 2004-05-25 | 2008-01-10 | キメラコア, インコーポレイテッド | 自己集合性ナノ粒子薬物送達システム |
US7795419B2 (en) | 2004-05-26 | 2010-09-14 | Rosetta Genomics Ltd. | Viral and viral associated miRNAs and uses thereof |
EP2290071B1 (en) | 2004-05-28 | 2014-12-31 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving microRNA |
US8394947B2 (en) | 2004-06-03 | 2013-03-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Positionally modified siRNA constructs |
EP1602926A1 (en) * | 2004-06-04 | 2005-12-07 | University of Geneva | Novel means and methods for the treatment of hearing loss and phantom hearing |
ATE536418T1 (de) * | 2004-06-07 | 2011-12-15 | Protiva Biotherapeutics Inc | Lipidverkapselte interferenz-rna |
EP1781593B1 (en) * | 2004-06-07 | 2011-12-14 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Cationic lipids and methods of use |
US20060008907A1 (en) * | 2004-06-09 | 2006-01-12 | The Curators Of The University Of Missouri | Control of gene expression via light activated RNA interference |
US20090215860A1 (en) * | 2004-06-17 | 2009-08-27 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for regulating gene transcription |
WO2006012222A2 (en) * | 2004-06-25 | 2006-02-02 | The J. David Gladstone Institutes | Methods of treating smooth muscle cell disorders |
EP1789553B1 (en) | 2004-06-30 | 2014-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotides comprising a non-phosphate backbone linkage |
JP2008504827A (ja) * | 2004-07-02 | 2008-02-21 | プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド | 免疫賦活性siRNA分子およびその使用方法 |
US8143228B2 (en) * | 2004-07-12 | 2012-03-27 | Medical Research Fund Of Tel Aviv Sourasky Medical Center | Agents capable of downregulating an MSF-A dependent HIF-1α and use thereof in cancer treatment |
JP2008522951A (ja) * | 2004-07-19 | 2008-07-03 | ベイラー・カレツジ・オブ・メデイシン | サイトカインシグナル伝達調節物質の調節および免疫療法のための応用 |
WO2006020231A2 (en) * | 2004-07-21 | 2006-02-23 | Medtronic, Inc. | Medical devices and methods for reducing localized fibrosis |
WO2006093526A2 (en) | 2004-07-21 | 2006-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase |
US20060030538A1 (en) * | 2004-07-21 | 2006-02-09 | Medtronic, Inc. | Methods for reducing or preventing localized fibrosis using SiRNA |
EP2484780A1 (en) | 2004-07-23 | 2012-08-08 | The University of North Carolina At Chapel Hill | Methods and materials for determining pain sensibility and predicting and treating related disorders |
AU2005330637B2 (en) | 2004-08-04 | 2012-09-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase |
EP1791567B1 (en) | 2004-08-10 | 2015-07-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chemically modified oligonucleotides |
WO2006020557A2 (en) * | 2004-08-10 | 2006-02-23 | Immusol, Inc. | Methods of using or identifying agents that inhibit cancer growth |
WO2006110161A2 (en) * | 2004-08-13 | 2006-10-19 | University Of Delaware | Method for identification and quantification of short or small rna molecules |
JP4468989B2 (ja) | 2004-08-16 | 2010-05-26 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | Rtp801阻害剤の治療への使用 |
CN105251024A (zh) * | 2004-08-23 | 2016-01-20 | 西伦蒂斯私人股份公司 | 眼病的治疗 |
US20070021366A1 (en) * | 2004-11-19 | 2007-01-25 | Srivastava Satish K | Structural-based inhibitors of the glutathione binding site in aldose reductase, methods of screening therefor and methods of use |
RU2410430C2 (ru) * | 2004-08-31 | 2011-01-27 | Силентис С.А.У. | Способы и композиции для ингибирования экспрессии рецептора p2х7 |
US7323310B2 (en) | 2004-08-31 | 2008-01-29 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Methods and compositions for RNA amplification and detection using an RNA-dependent RNA-polymerase |
US7884086B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays |
EP1793835A4 (en) | 2004-09-10 | 2010-12-01 | Somagenics Inc | SMALL INTERFERING RNA EFFECTIVELY INHIBITING VIRAL GENE EXPRESSION AND METHODS OF USE THEREOF |
US8569374B2 (en) * | 2004-09-16 | 2013-10-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | NADPH oxidase inhibition pharmacotherapies for obstructive sleep apnea syndrome and its associated morbidities |
FI20041204A0 (fi) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | Riikka Lund | Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi |
EP2982754A1 (en) | 2004-09-24 | 2016-02-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of apob and uses thereof |
NZ553987A (en) | 2004-09-28 | 2011-01-28 | Quark Pharmaceuticals Inc | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases |
EP1796686A4 (en) * | 2004-09-30 | 2008-05-14 | Centocor Inc | EMMPRINE ANTAGONISTS AND ITS USES |
EP2336333A1 (en) | 2004-10-21 | 2011-06-22 | Venganza Inc. | Methods and materials for conferring resistance to pests and pathogens of plants |
US7592322B2 (en) * | 2004-10-22 | 2009-09-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof |
US7790878B2 (en) * | 2004-10-22 | 2010-09-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof |
WO2006043014A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-04-27 | Neuregenix Limited | Neuron regeneration |
US20060110440A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-25 | Kiminobu Sugaya | Method and system for biasing cellular development |
CA2584785A1 (en) * | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Schering Corporation | Compositions and methods for short interfering nucleic acid inhibition of nav1.8 |
JP2008520191A (ja) | 2004-10-27 | 2008-06-19 | バンダービルト・ユニバーシティ | 感染に関与する哺乳動物遺伝子 |
US8293253B2 (en) * | 2004-10-28 | 2012-10-23 | Idexx Laboratories, Inc. | Compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
US20060094676A1 (en) * | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Ronit Lahav | Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity |
WO2007001448A2 (en) | 2004-11-04 | 2007-01-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals |
DK2302055T3 (da) * | 2004-11-12 | 2014-10-13 | Asuragen Inc | Fremgangsmåder og sammensætninger involverende miRNA og miRNA-inhibitormolekyler |
US20060105052A1 (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Acar Havva Y | Cationic nanoparticle having an inorganic core |
US8809287B2 (en) * | 2004-11-15 | 2014-08-19 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Compositions and methods for altering Wnt autocrine signaling |
WO2006053430A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of apolipoprotein b |
EP1814899A4 (en) * | 2004-11-18 | 2008-09-03 | Univ Illinois | MULTICISTRONIC SIRNA CONSTRUCTIONS FOR TUMOR INHIBITION |
JP4809240B2 (ja) * | 2004-11-19 | 2011-11-09 | 株式会社ジーンケア研究所 | 癌細胞特異的細胞増殖抑制剤 |
US20060166234A1 (en) * | 2004-11-22 | 2006-07-27 | Barbara Robertson | Apparatus and system having dry control gene silencing compositions |
US7935811B2 (en) | 2004-11-22 | 2011-05-03 | Dharmacon, Inc. | Apparatus and system having dry gene silencing compositions |
US7923207B2 (en) | 2004-11-22 | 2011-04-12 | Dharmacon, Inc. | Apparatus and system having dry gene silencing pools |
JP2008521401A (ja) * | 2004-11-24 | 2008-06-26 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | BCR−ABL融合遺伝子のRNAi調節およびその使用方法 |
JP2008521909A (ja) * | 2004-12-02 | 2008-06-26 | ビー−ブリッジ インターナショナル,インコーポレーテッド | 短鎖干渉rna、アンチセンスポリヌクレオチド、および他のハイブリッド形成化ポリヌクレオチドの設計方法 |
WO2006060779A2 (en) * | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Case Western Reserve University | Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization |
WO2006066158A2 (en) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of mll-af4 and uses thereof |
AU2005316458B2 (en) | 2004-12-17 | 2011-04-07 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Compositions for bacterial mediated gene silencing and methods of using same |
GB0427916D0 (en) * | 2004-12-21 | 2005-01-19 | Astrazeneca Ab | Method |
TWI386225B (zh) | 2004-12-23 | 2013-02-21 | Alcon Inc | 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子(CTGF)RNA干擾(RNAi)抑制技術 |
US20060142228A1 (en) * | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Ambion, Inc. | Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference |
CA2593032C (en) | 2004-12-27 | 2015-12-22 | Silence Therapeutics Ag | Coated lipid complexes and their use |
EP1838875A4 (en) * | 2004-12-30 | 2010-08-25 | Todd M Hauser | COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING GENE EXPRESSION USING SELF-PROTECTED OLIGONUCLEOTIDES |
AU2005322960A1 (en) * | 2005-01-06 | 2006-07-13 | The Johns Hopkins University | RNA interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by DNA and transfected dendritic cell vaccines |
US7964195B2 (en) | 2005-01-07 | 2011-06-21 | Diadexus, Inc. | Ovr110 antibody compositions and methods of use |
CN102600480B (zh) * | 2005-01-07 | 2015-07-22 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | RSV的RNAi调节及其治疗应用 |
WO2006081192A2 (en) * | 2005-01-24 | 2006-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of the nogo-l or nogo-r gene and uses thereof |
WO2006081323A2 (en) * | 2005-01-26 | 2006-08-03 | The Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding mutant oncoprotein antigen and calreticulin |
TW200639253A (en) * | 2005-02-01 | 2006-11-16 | Alcon Inc | RNAi-mediated inhibition of ocular targets |
EP1848805A2 (en) * | 2005-02-14 | 2007-10-31 | HVC Strategic Research Institute, Inc | Pharmaceutical agents for preventing metastasis of cancer |
CN103920142A (zh) | 2005-02-14 | 2014-07-16 | 爱荷华大学研究基金会 | 治疗和诊断年龄相关性黄斑变性的方法和试剂 |
EP2157182A3 (en) | 2005-03-08 | 2012-04-25 | Qiagen GmbH | Modified short interfering RNA |
EP1856259A1 (en) | 2005-03-11 | 2007-11-21 | Alcon Inc. | Rnai-mediated inhibition of frizzled related protein-1 for treatment of glaucoma |
WO2006130201A1 (en) * | 2005-03-14 | 2006-12-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antigene oligomers inhibit transcription |
GB0505081D0 (en) * | 2005-03-14 | 2005-04-20 | Genomica Sau | Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology |
JP4585342B2 (ja) * | 2005-03-18 | 2010-11-24 | 株式会社資生堂 | 不全角化を抑制する物質のスクリーニング方法、同方法によりスクリーニングされた物質及び不全角化を抑制する方法 |
ATE524546T1 (de) * | 2005-03-25 | 2011-09-15 | Medtronic Inc | Verwendung von anti-tnf oder anti-il1-rnai zur unterdrückung der wirkung entzündungsfördernder cytokine zur lokalen schmerzbehandlung |
ES2381201T3 (es) * | 2005-03-31 | 2012-05-24 | Calando Pharmaceuticals, Inc. | Inhibidores de la subunidad 2 de la ribonucleótido-reductasa y utilizaciones de los mismos |
US20090203055A1 (en) * | 2005-04-18 | 2009-08-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for RNA interference with sialidase expression and uses thereof |
US7902352B2 (en) | 2005-05-06 | 2011-03-08 | Medtronic, Inc. | Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression |
EP1885854B1 (en) | 2005-05-06 | 2012-10-17 | Medtronic, Inc. | Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression |
US20070048293A1 (en) * | 2005-05-31 | 2007-03-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Manipulation of PTEN in T cells as a strategy to modulate immune responses |
US9505867B2 (en) * | 2005-05-31 | 2016-11-29 | Ecole Polytechmique Fédérale De Lausanne | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
CA2610267A1 (en) * | 2005-06-01 | 2006-12-07 | Duke University | Method of inhibiting intimal hyperplasia |
CN101213300B (zh) * | 2005-06-01 | 2013-01-23 | 聚加转染股份有限公司 | 用于rna干扰的寡核苷酸及其生物学应用 |
CN100445381C (zh) * | 2005-06-10 | 2008-12-24 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 带有单链polyA尾巴的siRNA分子制备方法和应用 |
US20100266574A1 (en) * | 2005-06-10 | 2010-10-21 | Orna Mor | Oligoribonucleotides and Methods of Use Thereof for Treatment of Fibrotic Conditions and Other Diseases |
US8252756B2 (en) | 2005-06-14 | 2012-08-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
US7838503B2 (en) * | 2005-06-15 | 2010-11-23 | Children's Medical Center Corporation | Methods for extending the replicative lifespan of cells |
FI20050640A0 (fi) * | 2005-06-16 | 2005-06-16 | Faron Pharmaceuticals Oy | Yhdisteitä amiinioksidaasista riippuvien sairauksien tai häiriöiden hoitoon tai estoon |
CN101501055B (zh) * | 2005-06-23 | 2016-05-11 | 贝勒医学院 | 负性免疫调节因子的调节和免疫疗法应用 |
WO2007002718A2 (en) * | 2005-06-27 | 2007-01-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of hif-1 and theraputic uses thereof |
US9133517B2 (en) | 2005-06-28 | 2015-09-15 | Medtronics, Inc. | Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin |
WO2007007317A1 (en) * | 2005-07-07 | 2007-01-18 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Nucleic acid agents for downregulating h19, and methods of using same |
US8703769B2 (en) | 2005-07-15 | 2014-04-22 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Use of EGFR inhibitors to prevent or treat obesity |
EP2204445B1 (de) * | 2005-07-25 | 2013-01-02 | RiboxX GmbH | Verfahren und Kit zur primer-abhängigen Amplifikation heterologer viraler, eukaryontischer oder prokaryontischer RNA |
US20070111227A1 (en) * | 2005-07-28 | 2007-05-17 | Green Pamela J | Small regulatory RNAs and methods of use |
US7919583B2 (en) | 2005-08-08 | 2011-04-05 | Discovery Genomics, Inc. | Integration-site directed vector systems |
US20070213257A1 (en) * | 2005-08-12 | 2007-09-13 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Compositions and methods for complexes of nucleic acids and peptides |
WO2007022470A2 (en) | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating neurological disease |
US20070054873A1 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation |
US8501703B2 (en) | 2005-08-30 | 2013-08-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing |
WO2007030167A1 (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-15 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules |
US20090221673A1 (en) * | 2005-09-13 | 2009-09-03 | Rigby William F C | Compositions and Methods for Regulating RNA Translation via CD154 CA-Dinucleotide Repeat |
EP1931789B1 (en) | 2005-09-20 | 2016-05-04 | BASF Plant Science GmbH | Methods for controlling gene expression using ta-siran |
FR2890859B1 (fr) * | 2005-09-21 | 2012-12-21 | Oreal | Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase |
US8933043B2 (en) * | 2005-09-30 | 2015-01-13 | St. Jude Children's Research Hospital | Methods for regulation of p53 translation and function |
US8168584B2 (en) | 2005-10-08 | 2012-05-01 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof |
US8080534B2 (en) | 2005-10-14 | 2011-12-20 | Phigenix, Inc | Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer |
WO2007048046A2 (en) * | 2005-10-20 | 2007-04-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of filovirus gene expression |
GB0521351D0 (en) * | 2005-10-20 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of TRPV expression levels |
GB0521716D0 (en) * | 2005-10-25 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases |
US8076307B2 (en) * | 2005-10-27 | 2011-12-13 | National University Corporation NARA Institute of Science and Technology | Formation/elongation of axon by inhibiting the expression or function of Singar and application to nerve regeneration |
CN101365801B (zh) | 2005-10-28 | 2013-03-27 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 抑制亨廷顿基因表达的组合物和方法 |
EP1948674A4 (en) | 2005-11-02 | 2009-02-04 | Protiva Biotherapeutics Inc | MODIFIED SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF |
WO2007056326A2 (en) * | 2005-11-04 | 2007-05-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of nav1.8 gene |
WO2007051316A1 (en) * | 2005-11-07 | 2007-05-10 | British Columbia Cancer Agency | Inhibition of autophagy genes in cancer chemotherapy |
CA2626690A1 (en) * | 2005-11-09 | 2007-05-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor v leiden mutant gene |
EP1957648B1 (en) * | 2005-11-17 | 2014-04-23 | Board of Regents, The University of Texas System | Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal dna |
US8916530B2 (en) | 2005-11-18 | 2014-12-23 | Gradalis, Inc. | Individualized cancer therapy |
US8603991B2 (en) | 2005-11-18 | 2013-12-10 | Gradalis, Inc. | Individualized cancer therapy |
US20080125384A1 (en) * | 2005-11-21 | 2008-05-29 | Shuewi Yang | Simultaneous silencing and restoration of gene function |
JP4901753B2 (ja) * | 2005-11-24 | 2012-03-21 | 学校法人自治医科大学 | プロヒビチン2(phb2)のミトコンドリア機能 |
WO2007070682A2 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Massachusetts Institute Of Technology | System for screening particles |
MX2008008302A (es) * | 2005-12-22 | 2009-01-21 | Exegenics Inc | Composiciones y metodos para regular el sistema de complemento. |
AR057252A1 (es) * | 2005-12-27 | 2007-11-21 | Alcon Mfg Ltd | Inhibicion de rho quinasa mediada por arni para el tratamiento de trastornos oculares |
US8673873B1 (en) * | 2005-12-28 | 2014-03-18 | Alcon Research, Ltd. | RNAi-mediated inhibition of phosphodiesterase type 4 for treatment of cAMP-related ocular disorders |
CN101437933B (zh) | 2005-12-28 | 2013-11-06 | 斯克里普斯研究所 | 作为药物靶标的天然反义和非编码的rna转录物 |
US8058252B2 (en) * | 2005-12-30 | 2011-11-15 | Institut Gustave Roussy | Use of inhibitors of scinderin and/or ephrin-A1 for treating tumors |
KR20080094064A (ko) * | 2006-01-17 | 2008-10-22 | 바이오렉스 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | 식물에서 n-글리칸의 인간화 및 최적화 조성물 및 방법 |
US20090060921A1 (en) * | 2006-01-17 | 2009-03-05 | Biolex Therapeutics, Inc. | Glycan-optimized anti-cd20 antibodies |
US20120208824A1 (en) | 2006-01-20 | 2012-08-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | ROS Kinase in Lung Cancer |
US7825099B2 (en) | 2006-01-20 | 2010-11-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes |
WO2009051846A2 (en) | 2007-10-18 | 2009-04-23 | Cell Signaling Technology, Inc. | Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma |
NL2000439C2 (nl) | 2006-01-20 | 2009-03-16 | Quark Biotech | Therapeutische toepassingen van inhibitoren van RTP801. |
JP5554925B2 (ja) | 2006-01-20 | 2014-07-23 | セル・シグナリング・テクノロジー・インコーポレイテツド | ヒト非小細胞肺癌における転座及び変異体rosキナーゼ |
US20070259827A1 (en) * | 2006-01-25 | 2007-11-08 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for enhancing discriminatory RNA interference |
DK1984382T3 (da) * | 2006-01-27 | 2012-09-03 | Santaris Pharma As | LNA modificerede fosforthiolerede oligonukleotider |
US8229398B2 (en) * | 2006-01-30 | 2012-07-24 | Qualcomm Incorporated | GSM authentication in a CDMA network |
WO2007091269A2 (en) * | 2006-02-08 | 2007-08-16 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | NOVEL TANDEM siRNAS |
US7910566B2 (en) | 2006-03-09 | 2011-03-22 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA |
FI20060246A0 (fi) | 2006-03-16 | 2006-03-16 | Jukka Westermarck | Uusi kasvua stimuloiva proteiini ja sen käyttö |
US20100056441A1 (en) * | 2006-03-17 | 2010-03-04 | Costa Robert H | Method for Inhibiting Angiogenesis |
US8329888B2 (en) | 2006-03-23 | 2012-12-11 | Santaris Pharma A/S | Small internally segmented interfering RNA |
FR2898908A1 (fr) | 2006-03-24 | 2007-09-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence |
WO2007111998A2 (en) * | 2006-03-24 | 2007-10-04 | Novartis Ag | Dsrna compositions and methods for treating hpv infection |
WO2007115047A2 (en) * | 2006-03-29 | 2007-10-11 | Senesco Technologies, Inc. | Inhibition of hiv replication and expression of p24 with eif-5a |
ES2776100T3 (es) | 2006-03-31 | 2020-07-29 | Massachusetts Inst Technology | Sistema para el suministro dirigido de agentes terapéuticos |
NZ571568A (en) | 2006-03-31 | 2010-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Double-stranded RNA molecule compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene |
EP2007891A2 (en) * | 2006-04-06 | 2008-12-31 | DKFZ Deutsches Krebsforschungszentrum | Method to inhibit the propagation of an undesired cell population |
EP2010226B1 (en) | 2006-04-07 | 2014-01-15 | The Research Foundation of State University of New York | Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency |
US9044461B2 (en) | 2006-04-07 | 2015-06-02 | The Research Foundation Of State University Of New York | Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency |
AU2007348315A1 (en) * | 2006-04-07 | 2008-09-12 | Chimeros, Inc. | Compositions and methods for treating B- cell malignancies |
EP2371957A1 (en) * | 2006-04-12 | 2011-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to hepcidin |
CN101460634A (zh) * | 2006-04-13 | 2009-06-17 | 康乃尔研究基金会有限公司 | 用于靶向c-rel的方法和组合物 |
EP2012815A4 (en) * | 2006-04-14 | 2009-12-09 | Massachusetts Inst Technology | IDENTIFICATION AND MODULATION OF MOLECULAR PATHWAYS THAT INDUCE THE PLASTICITY OF THE NERVOUS SYSTEM |
EP2447360A1 (en) | 2006-04-14 | 2012-05-02 | Cell Signaling Technology, Inc. | Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors |
WO2007127919A2 (en) | 2006-04-28 | 2007-11-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the jc virus |
GB0608838D0 (en) | 2006-05-04 | 2006-06-14 | Novartis Ag | Organic compounds |
CN103614375A (zh) | 2006-05-11 | 2014-03-05 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法 |
WO2007133807A2 (en) | 2006-05-15 | 2007-11-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymers for functional particles |
US20090130212A1 (en) * | 2006-05-15 | 2009-05-21 | Physical Pharmaceutica, Llc | Composition and improved method for preparation of small particles |
US20070269892A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-22 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | FORMULATIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY dsRNA |
CA2652770A1 (en) * | 2006-05-19 | 2007-11-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of aha and therapeutic uses thereof |
AU2007253694A1 (en) * | 2006-05-19 | 2007-11-29 | The Scripps Research Institute | Treatment of protein misfolding |
WO2007137220A2 (en) * | 2006-05-22 | 2007-11-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of ikk-b gene |
US9273356B2 (en) | 2006-05-24 | 2016-03-01 | Medtronic, Inc. | Methods and kits for linking polymorphic sequences to expanded repeat mutations |
US20070275923A1 (en) * | 2006-05-25 | 2007-11-29 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY |
GB0610542D0 (en) * | 2006-05-26 | 2006-07-05 | Medical Res Council | Screening method |
US8598333B2 (en) * | 2006-05-26 | 2013-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SiRNA silencing of genes expressed in cancer |
EP2026843A4 (en) | 2006-06-09 | 2011-06-22 | Quark Pharmaceuticals Inc | THERAPEUTIC USES OF RTP801L INHIBITORS |
US7915399B2 (en) * | 2006-06-09 | 2011-03-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
ES2390499T3 (es) * | 2006-06-12 | 2012-11-13 | Opko Pharmaceuticals, Llc | Composiciones y métodos para la inhibición de la angiogénesis por sirna |
US9200275B2 (en) * | 2006-06-14 | 2015-12-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods and compositions for regulating cell cycle progression |
US9381477B2 (en) | 2006-06-23 | 2016-07-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Microfluidic synthesis of organic nanoparticles |
WO2008008719A2 (en) * | 2006-07-10 | 2008-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the myc gene |
GB0613753D0 (en) * | 2006-07-11 | 2006-08-23 | Norwegian Radium Hospital Res | Method |
DK2447275T3 (en) | 2006-07-13 | 2015-06-29 | Univ Iowa Res Found | Methods and reagents for the treatment of age-related macular degeneration |
JP4756271B2 (ja) * | 2006-07-18 | 2011-08-24 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | ガン細胞の老化、アポトーシス誘導剤 |
EP2049658A2 (en) * | 2006-07-21 | 2009-04-22 | Silence Therapeutics AG | Means for inhibiting the expression of protein kinase 3 |
US20080039415A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Gregory Robert Stewart | Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders |
WO2008024844A2 (en) * | 2006-08-22 | 2008-02-28 | The Johns Hopkins University | Anticancer combination therapies |
DE102006039479A1 (de) | 2006-08-23 | 2008-03-06 | Febit Biotech Gmbh | Programmierbare Oligonukleotidsynthese |
US7872118B2 (en) * | 2006-09-08 | 2011-01-18 | Opko Ophthalmics, Llc | siRNA and methods of manufacture |
CA2663878A1 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
CA2663962A1 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | Mir-15, mir-26, mir-31,mir-145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216, mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
AU2007299629C1 (en) | 2006-09-21 | 2012-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the HAMP gene |
US8252755B2 (en) | 2006-09-22 | 2012-08-28 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference |
JP2010505897A (ja) * | 2006-10-11 | 2010-02-25 | マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ | インフルエンザターゲット |
US8299040B2 (en) * | 2006-10-18 | 2012-10-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for treating cancer targeting transglutaminase |
JP2010507387A (ja) * | 2006-10-25 | 2010-03-11 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | 新規のsiRNAおよびその使用方法 |
EP2061901A2 (en) | 2006-10-31 | 2009-05-27 | Noxxon Pharma AG | Methods for detection of a single- or double-stranded nucleic acid molecule |
CA2667971C (en) | 2006-11-01 | 2017-04-18 | Gary Weisinger | Adipocyte-specific constructs and methods for inhibiting platelet-type 12 lipoxygenase expression |
US9375440B2 (en) | 2006-11-03 | 2016-06-28 | Medtronic, Inc. | Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity |
US8324367B2 (en) | 2006-11-03 | 2012-12-04 | Medtronic, Inc. | Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity |
US8252526B2 (en) * | 2006-11-09 | 2012-08-28 | Gradalis, Inc. | ShRNA molecules and methods of use thereof |
US8758998B2 (en) | 2006-11-09 | 2014-06-24 | Gradalis, Inc. | Construction of bifunctional short hairpin RNA |
US8906874B2 (en) | 2006-11-09 | 2014-12-09 | Gradalis, Inc. | Bi-functional shRNA targeting Stathmin 1 and uses thereof |
US7819842B2 (en) | 2006-11-21 | 2010-10-26 | Medtronic, Inc. | Chronically implantable guide tube for repeated intermittent delivery of materials or fluids to targeted tissue sites |
US8034921B2 (en) * | 2006-11-21 | 2011-10-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof |
US7988668B2 (en) | 2006-11-21 | 2011-08-02 | Medtronic, Inc. | Microsyringe for pre-packaged delivery of pharmaceuticals |
EP2087912B1 (en) * | 2006-11-22 | 2017-05-10 | The University of Tokyo | Sirna carrier using disulfide-bridged polymeric micelle |
JP5391073B2 (ja) | 2006-11-27 | 2014-01-15 | ディアデクサス インコーポレーテッド | Ovr110抗体組成物および使用方法 |
EP2431053A1 (en) | 2006-11-27 | 2012-03-21 | Patrys Limited | Novel glycosylated peptide target in neoplastic cells |
US20080171719A1 (en) * | 2006-11-28 | 2008-07-17 | Alcon Manufacturing, Ltd. | RNAi-MEDIATED INHIBITION OF AQUAPORIN 1 FOR TREATMENT OF IOP-RELATED CONDITIONS |
WO2008067526A2 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | University Of Southern California Usc Stevens | Compositions and methods of sphingosine kinase inhibitors in radiation therapy of various cancers |
CA2671294A1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
CA2671299A1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Functions and targets of let-7 micro rnas |
CN101563458A (zh) * | 2006-12-14 | 2009-10-21 | 诺瓦提斯公司 | 治疗肌肉和心血管病症的组合物和方法 |
CA2671270A1 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-17 | Asuragen, Inc. | Mir-16 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
US7754698B2 (en) * | 2007-01-09 | 2010-07-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of FR-alpha expression |
US9896511B2 (en) | 2007-01-10 | 2018-02-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies |
CA2674683A1 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-24 | The Burnham Institute For Medical Research | Compositions and methods for treatment of colorectal cancer |
CA2712056C (en) | 2007-01-16 | 2016-06-21 | The University Of Queensland | Method of inducing an immune response |
US7928083B2 (en) * | 2007-01-16 | 2011-04-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | H19 silencing nucleic acid agents for treating rheumatoid arthritis |
US20080171906A1 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-17 | Everaerts Frank J L | Tissue performance via hydrolysis and cross-linking |
EP2121717A4 (en) * | 2007-01-17 | 2013-05-29 | Inst Rech S Cliniques De Montreal | NUCLEOSIDIC AND NUCLEOTIDE ANALOGS WITH QUATERNARY CARBON CENTERS AND METHODS OF USE THEREOF |
US8455188B2 (en) | 2007-01-26 | 2013-06-04 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Modification of exosomal components for use as a vaccine |
US20100196403A1 (en) * | 2007-01-29 | 2010-08-05 | Jacob Hochman | Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance |
US20100183696A1 (en) * | 2007-01-30 | 2010-07-22 | Allergan, Inc | Treating Ocular Diseases Using Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Delta Antagonists |
MX2009008470A (es) | 2007-02-09 | 2009-11-26 | Univ Northwestern | Particulas para detectar objetivos intracelulares. |
US9217129B2 (en) | 2007-02-09 | 2015-12-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Oscillating cell culture bioreactor |
DE102007008596B4 (de) * | 2007-02-15 | 2010-09-02 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von PNA und siRNA, Verfahren zu deren zellspezifischen Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung |
WO2008103643A1 (en) * | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Monsanto Technology, Llc | Invertebrate micrornas |
JP2010518880A (ja) | 2007-02-26 | 2010-06-03 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | Rtp801のインヒビター及びその疾患の治療における使用 |
WO2008104978A2 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Novel sirna structures |
WO2008109034A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modulating pdx-1 with pcif1, methods and uses thereof |
CA2679339A1 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting wnt gene expression and uses thereof |
WO2008109357A1 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof |
US9085638B2 (en) | 2007-03-07 | 2015-07-21 | The Johns Hopkins University | DNA vaccine enhancement with MHC class II activators |
US20080260765A1 (en) * | 2007-03-15 | 2008-10-23 | Johns Hopkins University | HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof |
US7812002B2 (en) | 2007-03-21 | 2010-10-12 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer |
JP5759673B2 (ja) | 2007-03-21 | 2015-08-05 | ブルックヘブン サイエンス アソシエイツ,エルエルシー | 組み合わされたヘアピン−アンチセンス組成物および発現を調節するための方法 |
PE20090064A1 (es) * | 2007-03-26 | 2009-03-02 | Novartis Ag | Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende |
AP3018A (en) * | 2007-03-29 | 2014-10-31 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for inhibiting expressionof a gene from the ebola |
EP2136788B1 (en) | 2007-03-30 | 2011-10-26 | Bind Biosciences, Inc. | Cancer cell targeting using nanoparticles |
WO2008124634A1 (en) | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymer-encapsulated reverse micelles |
JP2010523595A (ja) | 2007-04-04 | 2010-07-15 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | ポリ(アミノ酸)ターゲッティング部分 |
CA2683063A1 (en) * | 2007-04-09 | 2008-10-16 | Chimeros, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
WO2008122314A1 (de) | 2007-04-10 | 2008-10-16 | Qiagen Gmbh | Rna-interferenz tags |
CN101686939B (zh) * | 2007-04-17 | 2013-03-27 | 巴克斯特国际公司 | 用于肺部投送的核酸微粒 |
AU2008242583B2 (en) | 2007-04-23 | 2013-10-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycoconjugates of RNA interference agents |
WO2008143774A2 (en) * | 2007-05-01 | 2008-11-27 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy |
EP2155860B1 (en) | 2007-05-03 | 2014-08-27 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Multipotent stem cells and uses thereof |
JP5296328B2 (ja) * | 2007-05-09 | 2013-09-25 | 独立行政法人理化学研究所 | 1本鎖環状rnaおよびその製造方法 |
US20090053140A1 (en) * | 2007-05-15 | 2009-02-26 | Roderick Euan Milne Scott | METHODS OF IDENTIFYING GENES INVOLVED IN MEMORY FORMATION USING SMALL INTERFERING RNA(siRNA) |
BRPI0811625A2 (pt) * | 2007-05-15 | 2014-11-11 | Helicon Therapeutics Inc | Métodos de tratamento de distúrbios cognitivos através da inibição da gpr12 |
US20090131354A1 (en) * | 2007-05-22 | 2009-05-21 | Bader Andreas G | miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
MY153691A (en) | 2007-05-22 | 2015-03-13 | Arcturus Therapeutics Inc | Hydroxymethyl substituted rna oligonucleotides and rna complexes |
AU2008259907B2 (en) | 2007-05-30 | 2014-12-04 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
AU2008287542C1 (en) | 2007-06-01 | 2015-01-22 | The Trustees Of Princeton University | Treatment of viral infections by modulation of host cell metabolic pathways |
EP2172547B1 (en) | 2007-06-11 | 2016-01-06 | Takara Bio Inc. | Method for expression of specific gene |
US20100273854A1 (en) * | 2007-06-15 | 2010-10-28 | Hagar Kalinski | Compositions and methods for inhibiting nadph oxidase expression |
AR066984A1 (es) * | 2007-06-15 | 2009-09-23 | Novartis Ag | Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia) |
DK2170403T3 (da) | 2007-06-27 | 2014-06-16 | Quark Pharmaceuticals Inc | Sammensætninger og fremgangsmåder til hæmning af ekspressionen af proapoptotiske gener |
EP3456357A1 (en) | 2007-06-29 | 2019-03-20 | Stelic Institute Of Regenerative Medicine, Stelic Institute & Co. | Method of fixing and expressing physiologically active substance |
US20100184823A1 (en) * | 2007-07-05 | 2010-07-22 | Mark Aron Labow | dsRNA For Treating Viral Infection |
ES2423182T3 (es) * | 2007-07-10 | 2013-09-18 | Neurim Pharmaceuticals (1991) Ltd. | Variantes de unión CD44 en las enfermedades neurodegenerativas |
US8828960B2 (en) * | 2007-07-17 | 2014-09-09 | Idexx Laboratories, Inc. | Amino acid vitamin ester compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
JP2009033986A (ja) * | 2007-07-31 | 2009-02-19 | Sumitomo Chemical Co Ltd | RNA干渉による遺伝子発現抑制のためのターゲット遺伝子としてのcar遺伝子の使用 |
US9526707B2 (en) | 2007-08-13 | 2016-12-27 | Howard L. Elford | Methods for treating or preventing neuroinflammation or autoimmune diseases |
US8501929B2 (en) * | 2007-08-17 | 2013-08-06 | Biochrom Pharma Inc. | PTHrP, its isoforms and antagonist thereto in the diagnosis and treatment of disease |
ES2873350T3 (es) | 2007-08-27 | 2021-11-03 | 1Globe Health Inst Llc | Composiciones de ARN interferente asimétrico y usos de las mismas |
CA2747020A1 (en) * | 2007-08-30 | 2009-03-05 | Virexx Medical Corp. | Antigenic compositions and use of same in the targeted delivery of nucleic acids |
WO2009032364A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-12 | Ghc Research Development Corporation | Activation of nuclear factor-kappa b |
WO2009033027A2 (en) | 2007-09-05 | 2009-03-12 | Medtronic, Inc. | Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain |
JP5049713B2 (ja) * | 2007-09-14 | 2012-10-17 | 株式会社コナミデジタルエンタテインメント | ゲームシステム並びにこれを構成するゲーム装置及び課題報知装置 |
WO2009036368A2 (en) * | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Nitto Denko Corporation | Drug carriers |
WO2009036332A1 (en) | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof |
EP2548962B1 (en) | 2007-09-19 | 2016-01-13 | Applied Biosystems, LLC | Sirna sequence-independent modification formats for reducing off-target phenotypic effects in rnai, and stabilized forms thereof |
EP2197454A4 (en) * | 2007-09-25 | 2012-07-04 | Idexx Lab Inc | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE ADMINISTRATION OF OLIGONUCLEOTIDES |
US20100136026A1 (en) * | 2007-09-26 | 2010-06-03 | Kerr William G | Ship Inhibition to Direct Hematopoietic Stem Cells and Induce Extramedullary Hematopoiesis |
US20120082659A1 (en) * | 2007-10-02 | 2012-04-05 | Hartmut Land | Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations |
JP5646997B2 (ja) | 2007-10-03 | 2014-12-24 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドQuark Pharmaceuticals,Inc. | 新規siRNA構造 |
WO2009046397A2 (en) * | 2007-10-04 | 2009-04-09 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Modulating gene expression with agrna and gapmers targeting antisense transcripts |
US10736848B2 (en) | 2007-10-12 | 2020-08-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Vaccine nanotechnology |
US8097712B2 (en) | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
US20100098664A1 (en) * | 2007-11-28 | 2010-04-22 | Mathieu Jean-Francois Desclaux | Lentiviral vectors allowing RNAi mediated inhibition of GFAP and vimentin expression |
WO2009082593A2 (en) * | 2007-11-30 | 2009-07-02 | Baylor College Of Medicine | Dendritic cell vaccine compositions and uses of same |
WO2009070805A2 (en) * | 2007-12-01 | 2009-06-04 | Asuragen, Inc. | Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
EP2268664B1 (en) | 2007-12-03 | 2017-05-24 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Doc1 compositions and methods for treating cancer |
AU2008333811B2 (en) * | 2007-12-04 | 2014-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
CA2708171C (en) * | 2007-12-04 | 2018-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Folate conjugates |
EP2245159A2 (en) | 2007-12-10 | 2010-11-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor vii gene |
US8614311B2 (en) | 2007-12-12 | 2013-12-24 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof |
US20110105584A1 (en) * | 2007-12-12 | 2011-05-05 | Elena Feinstein | Rtp80il sirna compounds and methods of use thereof |
US20090238772A1 (en) | 2007-12-13 | 2009-09-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for prevention or treatment of rsv infection |
US20090176729A1 (en) * | 2007-12-14 | 2009-07-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating neurodegenerative disease |
US7845686B2 (en) * | 2007-12-17 | 2010-12-07 | S & B Technical Products, Inc. | Restrained pipe joining system for plastic pipe |
KR100949791B1 (ko) * | 2007-12-18 | 2010-03-30 | 이동기 | 오프-타겟 효과를 최소화하고 RNAi 기구를 포화시키지않는 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 |
WO2009086156A2 (en) * | 2007-12-21 | 2009-07-09 | Asuragen, Inc. | Mir-10 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
WO2009090639A2 (en) * | 2008-01-15 | 2009-07-23 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Sirna compounds and methods of use thereof |
CA2713379A1 (en) * | 2008-01-31 | 2009-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Optimized methods for delivery of dsrna targeting the pcsk9 gene |
WO2009100430A2 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-13 | Asuragen, Inc | miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS |
US8188060B2 (en) | 2008-02-11 | 2012-05-29 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation |
WO2009102427A2 (en) | 2008-02-11 | 2009-08-20 | Rxi Pharmaceuticals Corp. | Modified rnai polynucleotides and uses thereof |
US7977321B2 (en) * | 2008-02-12 | 2011-07-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Small interfering RNAs targeting feline herpes virus |
EP2250266A2 (en) | 2008-02-12 | 2010-11-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of cd45 gene |
DE102009043743B4 (de) | 2009-03-13 | 2016-10-13 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Zellspezifisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA sowie Applikationskits zu deren Herstellung und Verwendung |
WO2009103010A2 (en) * | 2008-02-13 | 2009-08-20 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Alpha-synuclein kinase |
WO2009103067A2 (en) * | 2008-02-14 | 2009-08-20 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods to treat asthma |
CA2716793A1 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes |
EP2268832A2 (en) * | 2008-03-06 | 2011-01-05 | Asuragen, INC. | Microrna markers for recurrence of colorectal cancer |
WO2009117418A2 (en) * | 2008-03-17 | 2009-09-24 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Identification of micro-rnas involved in neuromuscular synapse maintenance and regeneration |
EP2268316A4 (en) * | 2008-03-20 | 2011-05-25 | Quark Pharmaceuticals Inc | NEW SIRNA COMPOUNDS FOR INHIBITING RTP801 |
WO2009154835A2 (en) * | 2008-03-26 | 2009-12-23 | Asuragen, Inc. | Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer |
EP2105145A1 (en) * | 2008-03-27 | 2009-09-30 | ETH Zürich | Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides |
US9040492B2 (en) * | 2008-03-31 | 2015-05-26 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Double-stranded lipid-modified RNA having high RNA interference effect |
TWI348916B (en) * | 2008-04-03 | 2011-09-21 | Univ Nat Taiwan | A novel treatment tool for cancer: rna interference of bcas2 |
WO2009126726A1 (en) * | 2008-04-08 | 2009-10-15 | Asuragen, Inc | Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv) |
EP2274425A2 (en) | 2008-04-11 | 2011-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
US8309614B2 (en) * | 2008-04-11 | 2012-11-13 | Cedars-Sinai Medical Center | Poly(beta malic acid) with pendant leu-leu-leu tripeptide for effective cytoplasmic drug delivery |
AU2009238175C1 (en) | 2008-04-15 | 2023-11-30 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipid formulations for nucleic acid delivery |
WO2009144704A2 (en) * | 2008-04-15 | 2009-12-03 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | siRNA COMPOUNDS FOR INHIBITING NRF2 |
US20090285861A1 (en) * | 2008-04-17 | 2009-11-19 | Tzyy-Choou Wu | Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods |
WO2009129465A2 (en) | 2008-04-17 | 2009-10-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of xbp-1 gene |
USRE48948E1 (en) | 2008-04-18 | 2022-03-01 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Clonidine compounds in a biodegradable polymer |
WO2009129616A1 (en) | 2008-04-21 | 2009-10-29 | Tissue Regeneration Therapeutics, Inc. | Genetically modified human umbilical cord perivascular cells for prophylaxis against or treatment of biological or chemical agents |
US8324366B2 (en) | 2008-04-29 | 2012-12-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins |
WO2009134443A2 (en) * | 2008-05-02 | 2009-11-05 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Rna-induced translational silencing and cellular apoptosis |
WO2009137807A2 (en) | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Asuragen, Inc. | Compositions and methods related to mirna modulation of neovascularization or angiogenesis |
US20090291073A1 (en) * | 2008-05-20 | 2009-11-26 | Ward Keith W | Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same |
US20100009451A1 (en) * | 2008-05-30 | 2010-01-14 | Sigma Aldrich Company | Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid |
EP2297322A1 (en) | 2008-06-04 | 2011-03-23 | The Board of Regents of The University of Texas System | Modulation of gene expression through endogenous small rna targeting of gene promoters |
US20090305611A1 (en) * | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Flow International Corporation | Device and method for improving accuracy of a high-pressure fluid jet apparatus |
WO2009147684A2 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of ear disorders |
EP2235177B1 (en) * | 2008-06-13 | 2012-07-18 | RiboxX GmbH | Method for enzymatic synthesis of chemically modified rna |
WO2010005741A1 (en) * | 2008-06-16 | 2010-01-14 | Georgia Tech Research Corporation | Nanogels for cellular delivery of therapeutics |
TWI455944B (zh) | 2008-07-01 | 2014-10-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 雙股多核苷酸 |
US20110184046A1 (en) * | 2008-07-11 | 2011-07-28 | Dinah Wen-Yee Sah | Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of GSK-3 Genes |
WO2010008562A2 (en) | 2008-07-16 | 2010-01-21 | Recombinetics | Methods and materials for producing transgenic animals |
WO2010008582A2 (en) | 2008-07-18 | 2010-01-21 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Phagocytic cell drug delivery system |
US8039658B2 (en) * | 2008-07-25 | 2011-10-18 | Air Products And Chemicals, Inc. | Removal of trace arsenic impurities from triethylphosphate (TEPO) |
US8212019B2 (en) * | 2008-07-30 | 2012-07-03 | University Of Massachusetts | Nucleic acid silencing sequences |
EP2326351B1 (en) | 2008-08-19 | 2017-12-27 | Nektar Therapeutics | Conjugates of small-interfering nucleic acids |
EP3081648A1 (en) * | 2008-08-25 | 2016-10-19 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof |
WO2011028218A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Process for triphosphate oligonucleotide synthesis |
MX2011002731A (es) | 2008-09-15 | 2011-04-26 | Childrens Medical Center | Modulacion de bcl11a para tratamiento de hemoglobinopatias. |
US10138485B2 (en) | 2008-09-22 | 2018-11-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Neutral nanotransporters |
AU2009298802A1 (en) | 2008-09-23 | 2010-04-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition |
JP5529142B2 (ja) | 2008-09-25 | 2014-06-25 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 血清アミロイドa遺伝子の発現を阻害するための脂質製剤組成物および方法 |
US8592570B2 (en) | 2008-10-06 | 2013-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of an RNA from West Nile virus |
US8802646B2 (en) * | 2008-10-08 | 2014-08-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting the activity of ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease |
US9388413B2 (en) | 2008-10-08 | 2016-07-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
WO2010042292A1 (en) * | 2008-10-08 | 2010-04-15 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease |
US9388414B2 (en) | 2008-10-08 | 2016-07-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
US9149492B2 (en) | 2008-10-08 | 2015-10-06 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease |
AU2009303345B2 (en) | 2008-10-09 | 2015-08-20 | Arbutus Biopharma Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
US8277812B2 (en) | 2008-10-12 | 2012-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen |
US8343498B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics |
US8591905B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-11-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Nicotine immunonanotherapeutics |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
WO2010045384A2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-04-22 | Somagenics Inc. | Short hairpin rnas for inhibition of gene expression |
US9458472B2 (en) * | 2008-10-15 | 2016-10-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Detection and destruction of cancer cells using programmed genetic vectors |
US8168775B2 (en) | 2008-10-20 | 2012-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
US20100168205A1 (en) * | 2008-10-23 | 2010-07-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and Compositions for Prevention or Treatment of RSV Infection Using Modified Duplex RNA Molecules |
WO2010046889A1 (en) * | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof |
HUE037082T2 (hu) | 2008-11-10 | 2018-08-28 | Arbutus Biopharma Corp | Új lipidek és készítmények terápiás hatóanyagok szállítására |
US20100179213A1 (en) * | 2008-11-11 | 2010-07-15 | Mirna Therapeutics, Inc. | Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells |
ES2543987T3 (es) * | 2008-11-13 | 2015-08-26 | Modgene, Llc | Reducción de la carga de amiloide beta en tejido no cerebral |
WO2010059226A2 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of map4k4 through rnai |
JP2012509331A (ja) | 2008-11-21 | 2012-04-19 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | がんの治療のための併用療法 |
AU2009316286B2 (en) | 2008-11-24 | 2016-05-26 | Northwestern University | Polyvalent RNA-nanoparticle compositions |
EP2191834A1 (en) * | 2008-11-26 | 2010-06-02 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Compositions and methods for treating retrovirus infections |
BRPI0922355A8 (pt) | 2008-12-03 | 2017-12-12 | Marina Biotech Inc | Ácidos nucléicos, métodos para reduzir a expressão de um gene em uma célula in vitro, uso do ácido nucléico, complexo de rna e uso do complexo de rna |
SG171952A1 (en) | 2008-12-04 | 2011-07-28 | Opko Ophthalmics Llc | Compositions and methods for selective inhibition of pro-angiogenic vegf isoforms |
US20100291188A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-11-18 | Musc Foundation For Research Development | Periostin Inhibitory Compositions for Myocardial Regeneration, Methods of Delivery, and Methods of Using Same |
SI2376535T1 (sl) | 2008-12-09 | 2017-07-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Protitelesa anti-pd-l1 in njihova uporaba za izboljšanje funkcije celic t |
AU2009324534B2 (en) * | 2008-12-10 | 2015-07-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | GNAQ targeted dsRNA compositions and methods for inhibiting expression |
US8664188B2 (en) * | 2008-12-11 | 2014-03-04 | Xiangxue Group (Hong Kong) Company Limited | siRNA compositions and methods for potently inhibiting viral infection |
EP2377934A4 (en) * | 2008-12-12 | 2012-09-26 | Kureha Corp | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF TUMOR AND ASTHMA |
WO2010077894A2 (en) | 2008-12-16 | 2010-07-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation |
WO2010080452A2 (en) | 2008-12-18 | 2010-07-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | siRNA COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOF |
AU2009330859B2 (en) | 2008-12-26 | 2013-06-20 | Samyang Holdings Corporation | Pharmaceutical composition containing an anionic drug, and a production method therefor |
WO2010078536A1 (en) | 2009-01-05 | 2010-07-08 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of pcsk9 through rnai |
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
WO2010083532A1 (en) * | 2009-01-19 | 2010-07-22 | The Research Foundaton Of State University Of New York | Fatty acid binding proteins as drug targets for modulation of endocannabinoids |
AU2010206143A1 (en) * | 2009-01-20 | 2011-08-25 | Life Sciences Research Partners Vzw | PHD2 inhibition for blood vessel normalization, and uses thereof |
WO2010083615A1 (en) | 2009-01-26 | 2010-07-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression |
CA2750459A1 (en) * | 2009-02-03 | 2010-08-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compositions and methods for inhibiting expression of ptp1b genes |
US9745574B2 (en) | 2009-02-04 | 2017-08-29 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
US9364477B2 (en) | 2009-02-12 | 2016-06-14 | Cell Signaling Technology, Inc. | Mutant ROS expression in human cancer |
US20120041049A1 (en) * | 2009-02-24 | 2012-02-16 | Riboxx Gmbh | Design of small-interfering rna |
AU2010221419B2 (en) | 2009-03-02 | 2015-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid chemical modifications |
AU2010226604A1 (en) * | 2009-03-19 | 2011-10-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of BTB and CNC homology 1, basic leucine zipper transcription factor 1 (Bach 1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) sequence listing |
JP5830460B2 (ja) | 2009-03-23 | 2015-12-09 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドQuark Pharmaceuticals,Inc. | 癌および線維性疾患を治療する化合物、組成物、および方法 |
US20100239632A1 (en) | 2009-03-23 | 2010-09-23 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue |
WO2010120874A2 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Chimeros, Inc. | Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same |
EP2421972A2 (en) * | 2009-04-24 | 2012-02-29 | The Board of Regents of The University of Texas System | Modulation of gene expression using oligomers that target gene regions downstream of 3' untranslated regions |
US8367350B2 (en) | 2009-04-29 | 2013-02-05 | Morehouse School Of Medicine | Compositions and methods for diagnosis, prognosis and management of malaria |
BRPI1007708A2 (pt) | 2009-05-05 | 2020-08-18 | Beeologics Inc | agente do ácido nucleico isolado, construção de ácido nucleico, ácido nucleico isolado, composição ingerível pelas abelhas, método para reduzir a susceptibilidade de uma abelha a infecção por nosema e método para reduzir a susceptibilidade das abelhas melíferas à infecçção por nosema |
US8933049B2 (en) * | 2009-05-05 | 2015-01-13 | Medical Diagnostic Laboratories, Llc | Repressor on IFN-λ promoter and siRNA against ZEB1 and BLIMP-1 to increase IFN-λ gene activity |
WO2010129791A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-11 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Rna targeting in alpha-synucleinopathies |
SG176099A1 (en) * | 2009-05-15 | 2011-12-29 | Hoffmann La Roche | Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (gcr) genes |
US20120114710A1 (en) * | 2009-05-18 | 2012-05-10 | Lynn Kirkpatrick | Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto |
WO2011019423A2 (en) | 2009-05-20 | 2011-02-17 | Schering Corporation | Modulation of pilr receptors to treat microbial infections |
WO2010135669A1 (en) * | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Sabiosciences Corporation | Arrays and methods for reverse genetic functional analysis |
WO2010141511A2 (en) | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof |
WO2010140024A1 (en) * | 2009-06-03 | 2010-12-09 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Methods for diagnosing and treating a renal disease in an individual |
BRPI1012003A2 (pt) | 2009-06-05 | 2015-09-22 | Univ Florida | "isolamento e supressão direcionada de genes biossintéticos de lignina da cana-de-açúcar" |
WO2010144336A2 (en) | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating chronic kidney disease |
DK2440183T3 (en) | 2009-06-10 | 2018-10-01 | Arbutus Biopharma Corp | Improved lipid formulation |
WO2010144058A1 (en) | 2009-06-10 | 2010-12-16 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Virus induced gene silencing (vigs) for functional analysis of genes in cotton. |
US9051567B2 (en) | 2009-06-15 | 2015-06-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA |
EA201270019A1 (ru) | 2009-06-15 | 2012-06-29 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | Двуцепочечная рнк, включенная в липидный состав и мишенью которой является ген pcsk9 |
US20100324124A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods relating to DNA-based particles |
US20100323018A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Branched DNA/RNA monomers and uses thereof |
GB0910723D0 (en) | 2009-06-22 | 2009-08-05 | Sylentis Sau | Novel drugs for inhibition of gene expression |
US9018187B2 (en) | 2009-07-01 | 2015-04-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
CA2767127A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors |
WO2011000106A1 (en) | 2009-07-01 | 2011-01-06 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Improved cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
EP2454371B1 (en) | 2009-07-13 | 2021-01-20 | Somagenics, Inc. | Chemical modification of small hairpin rnas for inhibition of gene expression |
EP2456790A1 (en) | 2009-07-20 | 2012-05-30 | Bristol-Myers Squibb Company | Combination of anti-ctla4 antibody with diverse therapeutic regimens for the synergistic treatment of proliferative diseases |
US8716464B2 (en) * | 2009-07-20 | 2014-05-06 | Thomas W. Geisbert | Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression |
WO2011020024A2 (en) | 2009-08-13 | 2011-02-17 | The Johns Hopkins University | Methods of modulating immune function |
WO2011020023A2 (en) | 2009-08-14 | 2011-02-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus |
RU2016133412A (ru) | 2009-08-24 | 2018-12-10 | Фидженикс, Инк. | Целенаправленное воздействие на pax2 для лечения рака молочной железы |
WO2011031600A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic disease |
WO2011032100A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Inhibitors of kshv vil6 and human il6 |
EP2295543A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-16 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Method for the preparation of an influenza virus |
CN107519133A (zh) | 2009-09-15 | 2017-12-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 脂质配制的组合物及抑制Eg5和VEGF基因的表达的方法 |
WO2011035065A1 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Nektar Therapeutics | Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids |
WO2011038031A1 (en) | 2009-09-22 | 2011-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dual targeting sirna agents |
WO2011038160A2 (en) * | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer |
US20150025122A1 (en) | 2009-10-12 | 2015-01-22 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
CN102666879B (zh) | 2009-10-30 | 2016-02-24 | 西北大学 | 模板化的纳米缀合物 |
US9101643B2 (en) | 2009-11-03 | 2015-08-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (TTR) |
US9799416B2 (en) * | 2009-11-06 | 2017-10-24 | Terrapower, Llc | Methods and systems for migrating fuel assemblies in a nuclear fission reactor |
CN102666856B (zh) | 2009-11-08 | 2016-04-06 | 夸克制药公司 | 定向至RhoA靶基因的双链RNA化合物在制造治疗神经性疼痛的药物中的用途 |
US9260517B2 (en) | 2009-11-17 | 2016-02-16 | Musc Foundation For Research Development | Human monoclonal antibodies to human nucleolin |
CA2776568A1 (en) | 2009-11-26 | 2011-06-03 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Sirna compounds comprising terminal substitutions |
US9687550B2 (en) | 2009-12-07 | 2017-06-27 | Arbutus Biopharma Corporation | Compositions for nucleic acid delivery |
US8778904B2 (en) | 2009-12-09 | 2014-07-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the CNS |
TWI465238B (zh) * | 2009-12-09 | 2014-12-21 | Nitto Denko Corp | Hsp47表現之調節 |
WO2011072240A1 (en) | 2009-12-10 | 2011-06-16 | Cedars-Sinai Medical Center | Drug delivery of temozolomide for systemic based treatment of cancer |
EP2336171A1 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Novel targets for the treatment of proliferative diseases |
WO2011084357A1 (en) | 2009-12-17 | 2011-07-14 | Schering Corporation | Modulation of pilr to treat immune disorders |
US8293718B2 (en) | 2009-12-18 | 2012-10-23 | Novartis Ag | Organic compositions to treat HSF1-related diseases |
ES2749426T3 (es) | 2009-12-18 | 2020-03-20 | Univ British Columbia | Métodos y composiciones para administración de ácidos nucleicos |
US8933046B2 (en) | 2009-12-23 | 2015-01-13 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. | Influenza targets |
KR101548567B1 (ko) | 2009-12-23 | 2015-09-01 | 그래댈리스, 인코포레이티드 | 푸린―녹다운 및 gm―csf―증강된 (fang) 암 백신 |
US20130023578A1 (en) | 2009-12-31 | 2013-01-24 | Samyang Biopharmaceuticals Corporation | siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same |
WO2011084193A1 (en) | 2010-01-07 | 2011-07-14 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs |
TW201124159A (en) * | 2010-01-07 | 2011-07-16 | Univ Nat Cheng Kung | Small interference RNA molecule and applications thereof |
DK2524039T3 (en) * | 2010-01-11 | 2018-03-12 | Curna Inc | TREATMENT OF GENDER HORMON-BINDING GLOBULIN (SHBG) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTS TO SHBG |
WO2011088058A1 (en) * | 2010-01-12 | 2011-07-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expressions of factor vii and pten genes |
DE102010004957A1 (de) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Universitätsklinikum Jena, 07743 | Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung |
US9198972B2 (en) | 2010-01-28 | 2015-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s) |
WO2011094580A2 (en) | 2010-01-28 | 2011-08-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chelated copper for use in the preparation of conjugated oligonucleotides |
WO2011094546A2 (en) | 2010-01-29 | 2011-08-04 | St. Jude Children's Research Hospital | Oligonucleotides which inhibit p53 induction in response to cellular stress |
MX2012009318A (es) | 2010-02-10 | 2012-09-07 | Novartis Ag | Metodos y compuestos para el crecimiento muscular. |
US9186370B2 (en) | 2010-03-19 | 2015-11-17 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
KR20180044433A (ko) | 2010-03-24 | 2018-05-02 | 알엑스아이 파마슈티칼스 코포레이션 | 진피 및 섬유증성 적응증에서의 rna 간섭 |
US9095504B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-08-04 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA interference in ocular indications |
RU2615143C2 (ru) | 2010-03-24 | 2017-04-04 | Адвирна | Самодоставляющие PHKi соединения уменьшенного размера |
US8455455B1 (en) | 2010-03-31 | 2013-06-04 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever |
WO2011123621A2 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides |
US20130260460A1 (en) | 2010-04-22 | 2013-10-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides |
US9725479B2 (en) | 2010-04-22 | 2017-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-end derivatives |
WO2011133658A1 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Boston Medical Center Corporation | Compositions and methods for targeting and delivering therapeutics into cells |
WO2011133876A2 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
WO2011139917A1 (en) | 2010-04-29 | 2011-11-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of transthyretin expression |
WO2011137363A1 (en) | 2010-04-30 | 2011-11-03 | Allergan, Inc. | Novel treatment for age related macular degeneration and ocular ischemic disease associated with complement activation by targeting 5-lipoxygenase |
WO2011140173A1 (en) | 2010-05-04 | 2011-11-10 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Detection and treatment of fibrosis |
US8563243B2 (en) * | 2010-05-12 | 2013-10-22 | University Of South Carolina | Methods for affecting homology-directed DNA double stranded break repair |
AU2011258156B2 (en) | 2010-05-26 | 2016-11-24 | Selecta Biosciences, Inc. | Multivalent synthetic nanocarrier vaccines |
EP2390327A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-11-30 | Sylentis S.A. | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
DE102010022937A1 (de) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Universitätsklinikum Jena | Zellspezifisch aktivierbare biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA, Verfahren zu deren Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung |
WO2011163121A1 (en) | 2010-06-21 | 2011-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery |
CA2801928C (en) | 2010-06-24 | 2018-04-10 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded rna compounds to rhoa and use thereof |
WO2012000104A1 (en) | 2010-06-30 | 2012-01-05 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Non-liposomal systems for nucleic acid delivery |
US20130202652A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-08-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of active agents |
WO2012016184A2 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of active agents |
US20120101108A1 (en) | 2010-08-06 | 2012-04-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer |
EP3372684B1 (en) | 2010-08-24 | 2020-10-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | Single-stranded rnai agents containing an internal, non-nucleic acid spacer |
WO2012041959A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | University Of Zurich | Treatment of b-cell lymphoma with microrna |
WO2013052006A1 (en) * | 2010-10-07 | 2013-04-11 | Agency For Science, Technology And Research (A*Star) | Parp-1 inhibitors |
WO2012051491A1 (en) | 2010-10-14 | 2012-04-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary National Institutes Of Health | Compositions and methods for controlling neurotropic viral pathogenesis by micro-rna targeting |
JP5795072B2 (ja) * | 2010-10-22 | 2015-10-14 | ソンギュングヮン ユニバーシティ ファウンデーション フォー コーポレート コラボレーション | Rna干渉を誘導する核酸分子及びその用途 |
WO2012058210A1 (en) | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA) |
WO2012071436A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Genentech, Inc. | Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants |
CA2818024C (en) | 2010-12-06 | 2019-09-24 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications |
WO2012102793A2 (en) | 2010-12-10 | 2012-08-02 | Zirus, Inc. | Mammalian genes involved in toxicity and infection |
US9617542B2 (en) * | 2010-12-14 | 2017-04-11 | The United States of America, as representd by The Secretary of Agriculture | Lepidopteran moth control using double-stranded RNA constructs |
US9623041B2 (en) | 2010-12-30 | 2017-04-18 | Cedars-Sinai Medical Center | Polymalic acid-based nanobiopolymer compositions |
BR112013017585A2 (pt) | 2011-01-10 | 2020-11-24 | The Regents Of The University Of Michigan | inibidor do fator de células-tronco |
AU2012207606B2 (en) | 2011-01-11 | 2017-02-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Pegylated lipids and their use for drug delivery |
DE102011009470A1 (de) | 2011-01-21 | 2012-08-09 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Biologisch wirksame Nukleotid-Moleküle zur gezielten Abtötung von Zellen, Verwendung derselben sowie Applikationskit |
WO2012106508A1 (en) | 2011-02-02 | 2012-08-09 | Pfizer Inc. | Method of treating keloids or hypertrophic scars using antisense compounds targeting connective tissue growth factor (ctgf) |
EP2670849A1 (en) | 2011-02-03 | 2013-12-11 | Mirna Therapeutics, Inc. | Synthetic mimics of mir-124 |
CN103562387A (zh) * | 2011-03-03 | 2014-02-05 | 夸克医药公司 | Toll样受体途径的寡核苷酸调剂 |
US9796979B2 (en) | 2011-03-03 | 2017-10-24 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway |
US9233121B2 (en) * | 2011-03-11 | 2016-01-12 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Compositions and methods for the treatment of cancer |
RU2013145890A (ru) | 2011-03-15 | 2015-04-20 | Юниверсити Оф Юта Рисерч Фаундейшн | Способы диагностики и лечения сосудисто-ассоциированной макулопатии и ее симптомов |
WO2012135696A2 (en) * | 2011-04-01 | 2012-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
CA2832073A1 (en) | 2011-04-12 | 2012-10-18 | Terrence R. Burke | Peptide mimetic ligands of polo-like kinase 1 polo box domain and methods of use |
AU2012242642A1 (en) | 2011-04-13 | 2013-05-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
CA2833269C (en) | 2011-04-15 | 2020-04-14 | Molecular Transfer, Inc. | Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells |
US8716257B2 (en) * | 2011-04-15 | 2014-05-06 | Sutter West Bay Hospitals | CMV gene products promote cancer stem cell growth |
KR20140104344A (ko) | 2011-05-20 | 2014-08-28 | 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 시크리터리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비시스 | T 세포 매개성 질병의 병증을 개선하기 위한 tl1a-dr3의 상호작용의 차단 및 그것의 항체 |
EP2714094B1 (en) | 2011-06-02 | 2016-02-24 | The University of Louisville Research Foundation, Inc. | Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles |
MX345095B (es) | 2011-06-21 | 2017-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de arni similares a angiopoyetina 3 (angptl3) y metodos para su uso. |
KR102540778B1 (ko) | 2011-06-21 | 2023-06-07 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아포리포단백질 c-iii(apoc3) 유전자의 발현 억제를 위한 조성물 및 방법 |
US9068184B2 (en) | 2011-06-21 | 2015-06-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein C (PROC) genes |
EP2723861A4 (en) | 2011-06-21 | 2014-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING HEPCIDINE ANTIMICROBIAL PEPTIDE (HAMP) OR THE ASSOCIATED GENE EXPRESSION |
WO2013003697A1 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Trustees Of Boston University | Method for controlling tumor growth, angiogenesis and metastasis using immunoglobulin containing and proline rich receptor-1 (igpr-1) |
WO2013001372A2 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | University Of Oslo | Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells |
ES2592628T3 (es) | 2011-07-06 | 2016-11-30 | Sykehuset Sorlandet Hf | Terapia dirigida al receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) |
WO2013006861A1 (en) | 2011-07-07 | 2013-01-10 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Sorghum grain shattering gene and uses thereof in altering seed dispersal |
US8853181B2 (en) * | 2011-07-21 | 2014-10-07 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Fidgetin-like 2 as a target to enhance wound healing |
US9120858B2 (en) | 2011-07-22 | 2015-09-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the B12-transcobalamin receptor |
DE102011118024A1 (de) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Technische Universität Dresden | Inhibitor der Expression der Pro-Caspase 1 |
EP4008786A3 (en) | 2011-09-06 | 2022-08-03 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
JP2014527072A (ja) | 2011-09-09 | 2014-10-09 | バイオメド リアルティー, エル.ピー. | ウイルスタンパク質の集合を制御するための方法および組成物 |
WO2013040251A2 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Asurgen, Inc. | Methods and compositions involving mir-135b for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease |
WO2013049389A1 (en) | 2011-09-27 | 2013-04-04 | Yale University | Compositions and methods for transient expression of recombinant rna |
US9701623B2 (en) | 2011-09-27 | 2017-07-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Di-aliphatic substituted pegylated lipids |
PT3597644T (pt) | 2011-10-18 | 2021-11-03 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Lípidos catiónicos de amina e suas utilizações |
WO2013070821A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-16 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system |
US9006199B2 (en) * | 2011-11-14 | 2015-04-14 | Silenseed Ltd. | Methods and compositions for treating prostate cancer |
KR102263352B1 (ko) | 2011-11-18 | 2021-06-11 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스티레틴(TTR) 관련 질병을 치료하기 위한 RNAi 제제, 조성 및 그의 사용방법 |
WO2013082529A1 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Yale University | Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery |
CN104080480A (zh) | 2012-01-01 | 2014-10-01 | 奇比艾企业有限公司 | 用于选择性递送治疗剂和诊断剂的endo180靶向微粒 |
US9464291B2 (en) * | 2012-01-06 | 2016-10-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
US10023862B2 (en) | 2012-01-09 | 2018-07-17 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases |
CA2858630A1 (en) | 2012-01-12 | 2013-07-18 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for treating hearing and balance disorders |
US20150126438A1 (en) | 2012-01-24 | 2015-05-07 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Novel ChREBP Isoforms and Methods Using the Same |
WO2013138456A1 (en) | 2012-03-14 | 2013-09-19 | University Of Central Florida Research Foundation, Inc. | Lim kinasemodulating agents for neurofibromatoses therapy and methods for screening for same |
US20150031750A1 (en) | 2012-03-15 | 2015-01-29 | The Scripps Research Institute | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
DK2838998T3 (en) | 2012-04-18 | 2018-01-15 | Cell Signaling Technology Inc | EGFR AND ROS1 IN CANCER |
US9980942B2 (en) | 2012-05-02 | 2018-05-29 | Children's Hospital Medical Center | Rejuvenation of precursor cells |
US20150299696A1 (en) | 2012-05-02 | 2015-10-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS |
CN108148838A (zh) | 2012-05-22 | 2018-06-12 | 奥利克斯医药有限公司 | 具有细胞内穿透能力的诱导rna干扰的核酸分子及用途 |
EP2867368B1 (en) | 2012-07-06 | 2022-01-12 | Institut Gustave Roussy | Simultaneous detection of cannibalism and senescence as prognostic marker for cancer |
WO2014018375A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-30 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods |
WO2014036427A1 (en) * | 2012-08-31 | 2014-03-06 | The General Hospital Corporation | Biotin complexes for treatment and diagnosis of alzheimer's disease |
GB201215857D0 (en) | 2012-09-05 | 2012-10-24 | Sylentis Sau | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
BR112015004452A2 (pt) | 2012-09-05 | 2017-08-08 | Sylentis Sau | sirna e seu uso em métodos e composições para o tratamento e/ou prevenção de condições oculares |
BR112015004747A2 (pt) | 2012-09-12 | 2017-11-21 | Quark Pharmaceuticals Inc | moléculas oligonucleotídicas de fita dupla para p53 e métodos de uso das mesmas |
DK2895608T3 (en) | 2012-09-12 | 2019-01-21 | Quark Pharmaceuticals Inc | DOUBLE-STRENGTHED OIGONUCLEOTIDE MOLECULES FOR P53 AND PROCEDURES FOR USING IT |
DK2897620T3 (da) | 2012-09-21 | 2020-08-17 | Intensity Therapeutics Inc | Fremgangsmåde til behandling af cancer |
WO2014055624A1 (en) * | 2012-10-02 | 2014-04-10 | The General Hospital Corporation D/B/A Massachusetts General Hospital | Methods relating to dna-sensing pathway related conditions |
WO2014055825A1 (en) | 2012-10-04 | 2014-04-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | A formulation of mycobacterial components as an adjuvant for inducing th17 responses |
WO2014068072A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-08 | Institut Gustave-Roussy | Identification, assessment and therapy of essential thrombocythemia with resistance to jak2 inhibitors |
WO2014076137A1 (en) | 2012-11-13 | 2014-05-22 | Lötvall Jan | Delivery of therapeutic agent |
DE102012022596B4 (de) | 2012-11-15 | 2017-05-04 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Neue zellspezifisch wirksame Nukleotid-Moleküle und Applikationskit zu deren Anwendung |
DK2920201T3 (da) | 2012-11-15 | 2020-04-14 | Apellis Pharmaceuticals Inc | Langtidsvirkende compstatin-analoger og relaterede sammensætninger og fremgangsmåder |
SG11201504038XA (en) | 2012-11-27 | 2015-06-29 | Childrens Medical Center | Targeting bcl11a distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction |
WO2014093688A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | 1Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for functional nucleic acid delivery |
AU2013362134B2 (en) | 2012-12-21 | 2018-07-05 | Sykehuset Sorlandet Hf | EGFR targeted therapy of neurological disorders and pain |
US9206423B2 (en) * | 2012-12-30 | 2015-12-08 | The Regents Of The University Of California | Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork |
WO2014113541A1 (en) | 2013-01-16 | 2014-07-24 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Attenuated chlamydia vaccine |
DE102013003869B4 (de) | 2013-02-27 | 2016-11-24 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung |
KR102205278B1 (ko) | 2013-03-14 | 2021-01-22 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | 음이온성 약제를 제형화하는 방법 |
WO2014150751A2 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Novartis Ag | Biomarkers associated with brm inhibition |
EP2968263A2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Genentech, Inc. | Treating th2-mediated diseases by inhibition of bromodomain-comprising proteins brd7 and brd9 |
US10308687B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-06-04 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof |
US9937231B2 (en) | 2013-03-27 | 2018-04-10 | The General Hospital Corporation | Methods and agents for treating Alzheimer's disease |
AU2014265142A1 (en) | 2013-05-17 | 2015-12-24 | Medimmune, Llc | Receptors for B7-H4 |
WO2014205511A1 (en) | 2013-06-25 | 2014-12-31 | University Of Canberra | Methods and compositions for modulating cancer stem cells |
TW201534578A (zh) | 2013-07-08 | 2015-09-16 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 新穎脂質 |
WO2015006554A1 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Therapeutic antibodies and uses thereof |
RU2703498C2 (ru) | 2013-07-19 | 2019-10-17 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Композиции и способы борьбы с leptinotarsa |
WO2015013510A1 (en) | 2013-07-25 | 2015-01-29 | Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Epfl | High aspect ratio nanofibril materials |
WO2015015498A1 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Qbi Enterprises Ltd. | Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds |
EP3027222A1 (en) | 2013-07-31 | 2016-06-08 | QBI Enterprises Ltd. | Sphingolipid-polyalkylamine-oligonucleotide compounds |
JP6652922B2 (ja) | 2013-08-28 | 2020-02-26 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | プレカリクレイン(pkk)発現の調節 |
EP3791862A1 (en) | 2013-09-11 | 2021-03-17 | Eagle Biologics, Inc. | Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents |
US10124001B2 (en) | 2013-09-18 | 2018-11-13 | University Of Canberra | Stem cell modulation II |
WO2015050871A2 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Novartis Ag | Organic compounds to treat hepatitis b virus |
CA3188691A1 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Novartis Ag | 3'end caps for rnai agents for use in rna interference |
EP2865756A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene. |
EP2865757A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene. |
EP2865758A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene |
CA2929574A1 (en) | 2013-11-11 | 2015-05-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (sina) conjugated to a lipophilic moiety |
EP3071590A4 (en) | 2013-11-21 | 2017-07-19 | SeNA Research, Inc. | Methods for structural determination of selenium derivatized nucleic acid complexes |
EP3079707A4 (en) | 2013-12-02 | 2017-10-18 | RXi Pharmaceuticals Corporation | Immunotherapy of cancer |
EP3077511A4 (en) | 2013-12-06 | 2017-07-05 | Dicerna Pharmaceuticals Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (ttr) by double-stranded rna |
CN104830906B (zh) | 2014-02-12 | 2018-09-04 | 北京维通达生物技术有限公司 | 一种重编程获得功能性人肝脏实质细胞的方法 |
US10011837B2 (en) | 2014-03-04 | 2018-07-03 | Sylentis Sau | SiRNAs and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
KR102228828B1 (ko) | 2014-03-11 | 2021-03-16 | 셀렉티스 | 동종이형 이식에 양립성인 t-세포들을 만들어내는 방법 |
DK3119887T3 (da) * | 2014-03-20 | 2019-05-20 | Oommen Varghese | Forbedrede korte interfererende ribonukleinsyremolekyler |
US9856475B2 (en) | 2014-03-25 | 2018-01-02 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Formulations for treating amyloidosis |
JP6771387B2 (ja) | 2014-03-25 | 2020-10-21 | アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. | 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的unaオリゴマー |
CN106460025A (zh) | 2014-03-25 | 2017-02-22 | 阿克丘勒斯治疗公司 | 在基因沉默中具有降低的脱靶效应的una寡聚物 |
EP3757214B1 (en) | 2014-04-01 | 2022-06-15 | Biogen MA Inc. | Compositions for modulating sod-1 expression |
WO2015153339A2 (en) | 2014-04-01 | 2015-10-08 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
JP6514717B2 (ja) | 2014-04-25 | 2019-05-15 | ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | 異常ヘモグロビン症を治療するための組成物および方法 |
EP3137119B1 (en) | 2014-04-28 | 2020-07-01 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating cancer using a nucleic acid targeting mdm2 |
MX2016014140A (es) | 2014-05-01 | 2017-09-15 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para modular la expresion de pkk. |
CA2947494C (en) | 2014-05-02 | 2020-10-20 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation |
US9937270B2 (en) | 2014-05-12 | 2018-04-10 | The John Hopkins University | Engineering synthethic brain penetrating gene vectors |
WO2015175545A1 (en) | 2014-05-12 | 2015-11-19 | The Johns Hopkins University | Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers |
WO2015184105A1 (en) | 2014-05-29 | 2015-12-03 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting acat1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
CN106535876B (zh) | 2014-06-04 | 2020-09-11 | 埃克西奎雷股份有限公司 | 免疫调节剂通过脂质体球形核酸的多价递送以用于预防或治疗应用 |
CN104120127B (zh) * | 2014-07-01 | 2016-09-21 | 清华大学 | 分离的寡核苷酸及其应用 |
RU2021123470A (ru) | 2014-07-29 | 2021-09-06 | Монсанто Текнолоджи Ллс | Композиции и способы борьбы с насекомыми-вредителями |
US20170348402A1 (en) | 2014-07-30 | 2017-12-07 | The Research Foundation For The State University Of New York | System and method for delivering genetic material or protein to cells |
WO2016023974A1 (de) | 2014-08-14 | 2016-02-18 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Peptid zur verwendung in der reduktion von nebenwirkungen in form von immunstimulatorischen reaktionen/effekten |
AU2015309686B2 (en) | 2014-08-25 | 2020-05-14 | Epiaxis Therapeutics Pty Ltd | Compositions for modulating cancer stem cells and uses therefor |
PL3185957T3 (pl) | 2014-08-29 | 2022-11-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patisiran do zastosowania w leczeniu amyloidozy związanej z transtyretyną |
CN107073294A (zh) | 2014-09-05 | 2017-08-18 | 阿克赛医药公司 | 使用靶向tyr或mmp1的核酸治疗老化和皮肤病症的方法 |
KR102617137B1 (ko) | 2014-09-15 | 2023-12-27 | 칠드런'즈 메디컬 센터 코포레이션 | 히스톤 h3-리신 트리메틸화를 제거함으로써 체세포 핵 이식(scnt) 효율을 증가시키는 방법 및 조성물 |
RU2017110868A (ru) | 2014-09-25 | 2018-10-25 | Колд Спринг Харбор Лаборатори | Лечение синдрома ретта |
SG11201702614SA (en) | 2014-10-01 | 2017-04-27 | Eagle Biolog Inc | Polysaccharide and nucleic acid formulations containing viscosity-lowering agents |
WO2016057693A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide |
WO2016057898A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of cancer using tlr9 agonist with checkpoint inhibitors |
JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
US10538762B2 (en) * | 2014-10-14 | 2020-01-21 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Allele selective inhibition of mutant C9orf72 foci expression by duplex RNAS targeting the expanded hexanucleotide repeat |
EP3209794A1 (en) | 2014-10-22 | 2017-08-30 | Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development | Modulating adipose tissue and adipogenesis |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
EP3218497A1 (en) | 2014-11-12 | 2017-09-20 | NMC Inc. | Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same |
EP3221451A1 (en) | 2014-11-17 | 2017-09-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof |
WO2016081621A1 (en) | 2014-11-18 | 2016-05-26 | Yale University | Formulations for targeted release of agents under low ph conditions and methods of use thereof |
JP2017537619A (ja) | 2014-11-21 | 2017-12-21 | ノースウェスタン ユニバーシティ | 球状核酸ナノ粒子複合体の配列特異的細胞内取込 |
US20190002876A1 (en) * | 2014-12-09 | 2019-01-03 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Compositions and methods for treatment of friedreich's ataxia |
US10792299B2 (en) | 2014-12-26 | 2020-10-06 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
US10264976B2 (en) | 2014-12-26 | 2019-04-23 | The University Of Akron | Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging |
US20180002702A1 (en) | 2014-12-26 | 2018-01-04 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
WO2016118762A1 (en) | 2015-01-22 | 2016-07-28 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
WO2016161299A1 (en) | 2015-04-01 | 2016-10-06 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Therapeutic una oligomers and uses thereof |
CA2982450A1 (en) | 2015-04-13 | 2016-10-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof |
US20180126014A1 (en) | 2015-04-15 | 2018-05-10 | Yale University | Compositions for enhancing delivery of agents across the blood brain barrier and methods of use thereof |
CA3020885A1 (en) | 2015-05-05 | 2016-11-10 | Mohammad Tariq MALIK | Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles as radio-sensitizers and mri and/or x-ray contrast agents |
ES2835861T3 (es) | 2015-05-08 | 2021-06-23 | Childrens Medical Ct Corp | Direccionamiento de regiones funcionales del potenciador de BCL11A para la reinducción de hemoglobina fetal |
CA3026154A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | The University Of Queensland | Mobilizing agents and uses therefor |
BR112017026467A2 (pt) | 2015-06-10 | 2018-09-11 | Univ Texas | uso de exossomos para o tratamento de doença |
JP6983066B2 (ja) * | 2015-06-30 | 2021-12-17 | 忠三 岸本 | 新規な肺疾患治療剤および/またはそのスクリーニング方法 |
JP6983752B2 (ja) | 2015-07-06 | 2021-12-17 | フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーションPhio Pharmaceuticals Corp. | スーパーオキシドディスムターゼ1(sod1)を標的とする核酸分子 |
WO2017007825A1 (en) | 2015-07-06 | 2017-01-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
WO2017011276A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2) |
WO2017015671A1 (en) | 2015-07-23 | 2017-01-26 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions for treating amyloidosis |
LT3329002T (lt) | 2015-07-31 | 2021-01-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transtiretino (ttr) irnr kompozicijos ir jų naudojimo būdai, skirti naudoti su ttr susijusių ligų gydymui arba prevencijai |
MX2018002090A (es) | 2015-08-24 | 2018-09-12 | Halo Bio Rnai Therapeutics Inc | Nanoparticulas de polinucleótido para modulación de expresión génica y sus usos. |
MA44908A (fr) | 2015-09-08 | 2018-07-18 | Sylentis Sau | Molécules d'arnsi et leur utilisation dans des procédés et des compositions pour inhiber l'expression du gène nrarp |
GB201516685D0 (en) * | 2015-09-21 | 2015-11-04 | Varghese Oommen P And Oommen Oommen P | Nucleic acid molecules with enhanced activity |
US10086063B2 (en) | 2015-09-23 | 2018-10-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods of making and using live attenuated viruses |
US10548959B2 (en) | 2015-09-23 | 2020-02-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for modified dendrimer nanoparticle delivery |
US10383935B2 (en) | 2015-09-23 | 2019-08-20 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods of making and using live attenuated viruses |
JP2018535655A (ja) | 2015-09-29 | 2018-12-06 | アムジエン・インコーポレーテツド | Asgr阻害剤 |
JOP20210043A1 (ar) * | 2015-10-01 | 2017-06-16 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa |
CN117503905A (zh) | 2015-10-07 | 2024-02-06 | 阿佩利斯制药有限公司 | 给药方案 |
CA3002744A1 (en) | 2015-10-19 | 2017-04-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna |
KR20180071362A (ko) | 2015-11-16 | 2018-06-27 | 올릭스 주식회사 | MyD88 또는 TLR3을 타겟팅하는 RNA 복합체를 이용한 연령-관련 황반 변성의 치료 |
WO2017095751A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Partikula Llc | Compositions and methods for modulating cancer cell metabolism |
US11299537B2 (en) | 2015-12-10 | 2022-04-12 | Fibrogen, Inc. | Methods for treatment of motor neuron diseases |
NZ743320A (en) | 2015-12-18 | 2019-03-29 | Samyang Biopharmaceuticals | Method for preparing polymeric micelle containing anionic drug |
BR102017001164A2 (pt) | 2016-01-26 | 2019-03-06 | Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária | Composições de rna de fita dupla para controle de diaphorina citri e métodos de uso. |
CA3011894A1 (en) | 2016-01-31 | 2017-08-03 | University Of Massachusetts | Branched oligonucleotides |
CN108779463B (zh) | 2016-02-02 | 2022-05-24 | 奥利克斯医药有限公司 | 使用靶向IL4Rα、TRPA1或F2RL1的RNA复合物治疗特应性皮炎和哮喘 |
WO2017134526A1 (en) | 2016-02-02 | 2017-08-10 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of angiogenesis-associated diseases using rna complexes that target angpt2 and pdgfb |
AU2017224113B2 (en) | 2016-02-25 | 2022-04-21 | Applied Biological Laboratories, Inc. | Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants |
US20170360815A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-12-21 | Applied Biological Laboratories, Inc. | Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants |
CN109072240A (zh) | 2016-02-26 | 2018-12-21 | 耶鲁大学 | 使用piRNA诊断和治疗癌症的组合物和方法 |
US20210189062A1 (en) | 2016-03-01 | 2021-06-24 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery |
EP3423568A4 (en) | 2016-03-04 | 2019-11-13 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | METHOD AND COMPOSITIONS FOR EX-VIVO REPRODUCTION OF VERY SMALL EMBRYONAL STEM CELLS (VSELS) |
KR102515329B1 (ko) | 2016-03-07 | 2023-03-29 | 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 | 치료용 화합물을 위한 표적화 리간드 |
US10947317B2 (en) | 2016-03-15 | 2021-03-16 | Mersana Therapeutics, Inc. | NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
MA45469A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations |
WO2017173453A1 (en) | 2016-04-01 | 2017-10-05 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications |
MA45328A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci |
MA45349A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques egfr et leurs utilisations |
MA45470A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques kras et leurs utilisations |
CN108602849B (zh) | 2016-04-06 | 2022-10-21 | 俄亥俄州国家创新基金会 | 用于通过rna纳米技术将治疗剂特异性递送至细胞的rna配体展示外来体 |
CA3020487C (en) | 2016-04-11 | 2022-05-31 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of idiopathic pulmonary fibrosis using rna complexes that target connective tissue growth factor |
KR102353847B1 (ko) * | 2016-04-14 | 2022-01-21 | 베니텍 바이오파마 리미티드 | 안구인두 근이영양증(opmd)의 치료용 시약 및 이의 용도 |
EP3448997B1 (en) | 2016-04-27 | 2020-10-14 | Massachusetts Institute of Technology | Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof |
WO2017197128A1 (en) | 2016-05-11 | 2017-11-16 | Yale University | Poly(amine-co-ester) nanoparticles and methods of use thereof |
KR101916652B1 (ko) | 2016-06-29 | 2018-11-08 | 올릭스 주식회사 | 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도 |
RU2758007C2 (ru) | 2016-06-30 | 2021-10-25 | Онкорус, Инк. | Доставка терапевтических полипептидов посредством псевдотипированных онколитических вирусов |
RU2627179C1 (ru) * | 2016-07-28 | 2017-08-03 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ИНТЕРФЕРОНА λ, ИНТЕРЛЕЙКИНА IL23 И ПРОТИВОВИРУСНОГО БЕЛКА MxA |
US20190367930A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-12-05 | Danmarks Tekniske Universitet | Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides |
CN110087665A (zh) | 2016-08-03 | 2019-08-02 | H·李·莫菲特癌症中心与研究所公司 | Tlr9靶向治疗 |
US11364304B2 (en) | 2016-08-25 | 2022-06-21 | Northwestern University | Crosslinked micellar spherical nucleic acids |
EP4101859A1 (en) | 2016-09-02 | 2022-12-14 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | 4'-oxymethylphosphonate nucleotide analogs and oligonucleotides comprising the same |
US10294474B2 (en) | 2016-09-02 | 2019-05-21 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Targeting ligands |
US10933081B2 (en) | 2016-09-21 | 2021-03-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Myostatin iRNA compositions and methods of use thereof |
JP7129702B2 (ja) * | 2016-09-29 | 2022-09-02 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
WO2018098352A2 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | Jun Oishi | Targeting kras induced immune checkpoint expression |
US11135307B2 (en) | 2016-11-23 | 2021-10-05 | Mersana Therapeutics, Inc. | Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates |
EP3551641A4 (en) | 2016-12-08 | 2021-01-13 | University of Utah Research Foundation | STAUFEN1 ACTIVE SUBSTANCES AND RELATED PROCEDURES |
WO2018112470A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Co-delivery of nucleic acids for simultaneous suppression and expression of target genes |
BR112019014282A2 (pt) | 2017-01-10 | 2020-03-03 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso |
KR20190108167A (ko) * | 2017-02-10 | 2019-09-23 | 성균관대학교산학협력단 | Rna 간섭을 위한 긴 이중가닥 rna |
DE102017103383A1 (de) | 2017-02-20 | 2018-08-23 | aReNA-Bio GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr. Heribert Bohlen, 50733 Köln) | System und Verfahren zur Zelltyp-spezifischen Translation von RNA-Molekülen in Eukaryoten |
WO2018152524A1 (en) * | 2017-02-20 | 2018-08-23 | Northwestern University | Toxic rnai active seed sequences for killing cancer cells |
TW201834697A (zh) | 2017-02-28 | 2018-10-01 | 美商梅爾莎納醫療公司 | Her2標靶抗體-藥物結合物之組合療法 |
US11261441B2 (en) | 2017-03-29 | 2022-03-01 | Bluebird Bio, Inc. | Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies |
MX2019012033A (es) | 2017-04-07 | 2019-12-05 | Apellis Pharmaceuticals Inc | Regímenes de dosificación y composiciones y métodos relacionados. |
ES2957464T3 (es) | 2017-04-14 | 2024-01-19 | Univ Arizona | Composiciones y métodos para tratar fibrosis pulmonar |
US11324820B2 (en) | 2017-04-18 | 2022-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection |
WO2018209270A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas) |
WO2018218135A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | The Children's Medical Center Corporation | Bcl11a guide delivery |
CA3064590A1 (en) * | 2017-06-23 | 2018-12-27 | University Of Massachusetts | Two-tailed self-delivering sirna and related methods |
EP3649240A4 (en) | 2017-07-06 | 2021-07-07 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNAI ALPHA-ENaC GENE EXPRESSION INHIBITION AGENTS AND METHODS OF USE |
AU2018301829A1 (en) | 2017-07-13 | 2020-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for inhibition of HAO1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase) gene expression |
US11110114B2 (en) | 2017-07-17 | 2021-09-07 | Oxford University Innovation Limited | Dinucleotides |
US11104700B2 (en) | 2017-07-17 | 2021-08-31 | Oxford University Innovation Limited | Oligonucleotides |
CN111107853A (zh) | 2017-09-11 | 2020-05-05 | 箭头药业股份有限公司 | 用于抑制载脂蛋白C-III (APOC3)的表达的RNAi试剂和组合物 |
MA50267A (fr) | 2017-09-19 | 2020-07-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions et méthodes de traitement de l'amylose médiée par la transthyrétine (ttr) |
WO2019068326A1 (en) | 2017-10-05 | 2019-04-11 | Université D'aix-Marseille | INHIBITORS OF LSD1 FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CARDIOMYOPATHIES |
MX2020004060A (es) | 2017-10-20 | 2020-07-21 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Metodos para el tratamiento de infeccion de hepatitis b. |
US10953036B2 (en) | 2017-11-20 | 2021-03-23 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods of modulating HIF-2A to improve muscle generation and repair |
US11638760B2 (en) | 2017-11-27 | 2023-05-02 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
EP3717646A4 (en) | 2017-12-01 | 2021-12-01 | The Texas A&M University System | ANTISENSE TREATMENT OF ANGELMAN'S SYNDROME |
MX2020005860A (es) | 2017-12-06 | 2020-09-09 | Avidity Biosciences Inc | Composiciones y metodos de tratamiento de atrofia muscular y distrofia miotonica. |
CN111757757A (zh) | 2017-12-21 | 2020-10-09 | 梅尔莎纳医疗公司 | 吡咯并苯并二氮呯抗体共轭物 |
EP3728281A1 (en) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chirally-enriched double-stranded rna agents |
US10960086B2 (en) | 2017-12-28 | 2021-03-30 | Augusta University Research Institute, Inc. | Aptamer compositions and methods of use thereof |
WO2019133847A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Oncorus, Inc. | Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides |
AU2019205904A1 (en) | 2018-01-05 | 2020-06-18 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Reducing beta-catenin and IDO expression to potentiate immunotherapy |
US11661603B2 (en) | 2018-01-16 | 2023-05-30 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting ALDH2 expression |
CR20200346A (es) | 2018-02-09 | 2020-10-19 | Genentech Inc | Oligonucleótidos para modular la expresión de tmem106b |
EP3790990A1 (en) | 2018-05-07 | 2021-03-17 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Quality control of lna oligonucleotide therapeutics using massively parallel sequencing |
EP3791180A1 (en) | 2018-05-10 | 2021-03-17 | The University Of Manchester | Methods for assessing macular degeneration |
US11946046B2 (en) * | 2018-06-14 | 2024-04-02 | University Of Utah Research Foundation | Staufen1 regulating agents and associated methods |
JP2021533767A (ja) | 2018-08-13 | 2021-12-09 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | B型肝炎ウイルス(HBV)dsRNA物質組成物およびその使用方法 |
EP3846797A4 (en) | 2018-09-04 | 2022-06-08 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | USE OF DELTA-TOCOTRIENOL FOR THE TREATMENT OF CANCER |
WO2020051507A1 (en) | 2018-09-06 | 2020-03-12 | The Broad Institute, Inc. | Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery |
CN113365664A (zh) | 2018-10-29 | 2021-09-07 | 梅尔莎纳医疗公司 | 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物 |
CA3128059A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-20 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting expression of cyp27a1 |
MX2021011928A (es) | 2019-03-29 | 2022-01-04 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con kras. |
WO2020206350A1 (en) | 2019-04-04 | 2020-10-08 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system |
US11814464B2 (en) | 2019-04-29 | 2023-11-14 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymers and polyplexes with modified end groups and methods of use thereof |
US20220177880A1 (en) | 2019-05-03 | 2022-06-09 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Double-stranded nucleic acid inhibitor molecules with shortened sense strands |
US20200369759A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Fibrogen, Inc. | Methods of treatment of muscular dystrophies |
MX2022000045A (es) | 2019-06-26 | 2022-04-20 | Biorchestra Co Ltd | Nanoparticulas micelares y sus usos. |
CA3149421A1 (en) | 2019-08-30 | 2021-03-04 | Yale University | Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells |
US20220378920A1 (en) | 2019-09-10 | 2022-12-01 | Daiichi Sankyo Company, Limited | CONJUGATE OF GalNAc-OLIGONUCLEOTIDE FOR DELIVERY TO LIVER AND MANUFACTURING METHOD THEREOF |
JP2022551269A (ja) | 2019-10-02 | 2022-12-08 | ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 最小フッ素含有量を用いた低分子干渉rnaの化学修飾 |
US11017851B1 (en) | 2019-11-26 | 2021-05-25 | Cypress Semiconductor Corporation | Silicon-oxide-nitride-oxide-silicon based multi level non-volatile memory device and methods of operation thereof |
AU2020415322A1 (en) | 2019-12-24 | 2022-06-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting HBV and/or an immune modulator for treatment of HBV |
TW202137987A (zh) | 2019-12-24 | 2021-10-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 用於治療hbv之靶向hbv的治療性寡核苷酸及tlr7促效劑之醫藥組合 |
JP2023511274A (ja) | 2020-01-14 | 2023-03-17 | シンセカイン インコーポレイテッド | Il2オルソログおよび使用法 |
WO2021150300A1 (en) | 2020-01-22 | 2021-07-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Inducible tissue constructs and uses thereof |
WO2021173965A1 (en) | 2020-02-28 | 2021-09-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Identification of variable influenza residues and uses thereof |
JP7398007B2 (ja) | 2020-03-18 | 2023-12-13 | ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Angptl3発現を阻害する組成物及び方法 |
JP2023537798A (ja) | 2020-03-19 | 2023-09-06 | アビディティー バイオサイエンシーズ,インク. | 顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを処置するための組成物および方法 |
WO2021195469A1 (en) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating muscle dystrophy |
CN115997008A (zh) | 2020-04-22 | 2023-04-21 | 艾欧凡斯生物治疗公司 | 协调用于患者特异性免疫疗法的细胞的制造的系统和方法 |
US20230233693A1 (en) | 2020-06-19 | 2023-07-27 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymers with modified end groups and enhanced pulmonary delivery |
WO2021255262A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Sylentis Sau | siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES |
US20220031633A1 (en) | 2020-07-28 | 2022-02-03 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery |
TW202221120A (zh) | 2020-08-04 | 2022-06-01 | 美商黛瑟納製藥公司 | 用於治療代謝症候群之組成物及方法 |
WO2022031847A2 (en) | 2020-08-04 | 2022-02-10 | Dicerna Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting plp1 expression |
EP4192505A1 (en) | 2020-08-04 | 2023-06-14 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Systemic delivery of oligonucleotides |
IL300340A (en) | 2020-08-05 | 2023-04-01 | Hoffmann La Roche | Treatment with oligonucleotides in hepatitis B patients |
IL300338A (en) | 2020-08-05 | 2023-04-01 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for inhibiting the expression of LPA |
EP4204002A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-07-05 | Yale University | Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells |
EP3964204A1 (en) | 2020-09-08 | 2022-03-09 | Université d'Aix-Marseille | Lsd1 inhibitors for use in the treatment and prevention of fibrosis of tissues |
EP4214515A1 (en) | 2020-09-16 | 2023-07-26 | Complement Therapeutics Limited | Complementome assay |
JP2023553343A (ja) | 2020-11-25 | 2023-12-21 | アカゲラ・メディスンズ,インコーポレイテッド | 核酸を送達するための脂質ナノ粒子および関連する使用方法 |
CN117295753A (zh) | 2020-12-04 | 2023-12-26 | 基那奥生物公司 | 用于将核酸递送到细胞的组合物和方法 |
EP4015634A1 (en) | 2020-12-15 | 2022-06-22 | Sylentis, S.A.U. | Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases |
IL305418A (en) | 2021-03-04 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them |
CN117202894A (zh) | 2021-03-31 | 2023-12-08 | 胭脂红治疗私人有限公司 | 负载至少两个不同核酸的细胞外囊泡 |
US20220340909A1 (en) | 2021-04-12 | 2022-10-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk) |
WO2022221430A1 (en) | 2021-04-14 | 2022-10-20 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating pnpla3 expression |
US11578329B2 (en) | 2021-04-19 | 2023-02-14 | Novo Nordisk A/S | Compositions and methods for inhibiting nuclear receptor subfamily 1 group H member 3 (NR1H3) expression |
JP7463621B2 (ja) | 2021-05-28 | 2024-04-08 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | ミトコンドリアアミドキシム還元成分1(marc1)発現を阻害するための組成物および方法 |
CA3221923A1 (en) | 2021-05-29 | 2022-12-08 | 1Globe Health Institute Llc | Short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof |
EP4347829A1 (en) | 2021-05-29 | 2024-04-10 | 1Globe Health Institute LLC | Asymmetric short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof |
EP4359539A1 (en) | 2021-06-23 | 2024-05-01 | University Of Massachusetts | Optimized anti-flt1 oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders |
WO2023014677A1 (en) | 2021-08-03 | 2023-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof |
CA3229305A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Vib Vzw | Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression |
TW202308660A (zh) | 2021-08-25 | 2023-03-01 | 美商戴瑟納製藥股份有限公司 | 用於抑制α-1抗胰蛋白酶表現之組合物及方法 |
CA3232054A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | Kannan Rangaramanujam | Dendrimer conjugates of small molecule biologics for intracellular delivery |
AU2022384619A1 (en) | 2021-11-11 | 2024-04-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical combinations for treatment of hbv |
EP4340893A1 (en) | 2021-11-19 | 2024-03-27 | KIST (Korea Institute of Science and Technology) | Therapeutic compounds for red blood cell-mediated delivery of an active pharmaceutical ingredient to a target cell |
US20230272393A1 (en) | 2021-12-01 | 2023-08-31 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating apoc3 expression |
WO2023118546A2 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | METHODS AND MOLECULES FOR RNA INTERFERENCE (RNAi) |
WO2023159189A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | Yale University | Branched poly(amine-co-ester) polymers for more efficient nucleic expression |
GB202203627D0 (en) | 2022-03-16 | 2022-04-27 | Univ Manchester | Agents for treating complement-related disorders |
WO2023192872A1 (en) | 2022-03-28 | 2023-10-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Rna scaffolded wireframe origami and methods thereof |
GB202204884D0 (en) | 2022-04-04 | 2022-05-18 | Fondo Ricerca Medica S R I | Sirna targeting kcna1 |
US20230374522A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-11-23 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating scap activity |
WO2023220349A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting mapt expression |
US20230416743A1 (en) | 2022-05-13 | 2023-12-28 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting snca expression |
TW202400193A (zh) | 2022-06-24 | 2024-01-01 | 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 | 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶6(tmprss6)表現的組成物及方法 |
WO2024040041A1 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of activity of rnai molecules |
WO2024081736A2 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Yale University | Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies |
Family Cites Families (136)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2003006A (en) * | 1933-04-11 | 1935-05-28 | Michelson Barnett Samuel | Water tank cover |
US4469863A (en) * | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US5208149A (en) * | 1983-10-20 | 1993-05-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures |
GB8704365D0 (en) * | 1987-02-25 | 1987-04-01 | Exxon Chemical Patents Inc | Zeolite l preparation |
IE66830B1 (en) | 1987-08-12 | 1996-02-07 | Hem Res Inc | Topically active compositions of double-stranded RNAs |
US5712257A (en) * | 1987-08-12 | 1998-01-27 | Hem Research, Inc. | Topically active compositions of mismatched dsRNAs |
US5703055A (en) * | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
EP0942000B1 (en) * | 1989-10-24 | 2004-06-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-Modified oligonucleotides |
US5457189A (en) * | 1989-12-04 | 1995-10-10 | Isis Pharmaceuticals | Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus |
US5670633A (en) * | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
JP2580091B2 (ja) | 1990-01-11 | 1997-02-12 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | Rna活性および遺伝子発現を検出および変調するための組成物および方法 |
US5514577A (en) * | 1990-02-26 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses |
DE552178T1 (de) * | 1990-10-12 | 1994-02-03 | Max Planck Gesellschaft | Abgeänderte ribozyme. |
FR2675803B1 (fr) | 1991-04-25 | 1996-09-06 | Genset Sa | Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications. |
WO1994008003A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-04-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE |
FR2685346B1 (fr) * | 1991-12-18 | 1994-02-11 | Cis Bio International | Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications. |
EP0635023B1 (en) | 1992-03-05 | 2002-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Covalently cross-linked oligonucleotides |
US5792751A (en) * | 1992-04-13 | 1998-08-11 | Baylor College Of Medicine | Tranformation of cells associated with fluid spaces |
US20030171311A1 (en) * | 1998-04-27 | 2003-09-11 | Lawrence Blatt | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection |
US5693535A (en) * | 1992-05-14 | 1997-12-02 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | HIV targeted ribozymes |
US20030206887A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030068301A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-04-10 | Kenneth Draper | Method and reagent for inhibiting hepatitis B virus replication |
US20040054156A1 (en) * | 1992-05-14 | 2004-03-18 | Kenneth Draper | Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication |
ATE171210T1 (de) * | 1992-07-02 | 1998-10-15 | Hybridon Inc | Selbststabilisierte oligonukleotide als therapeutika |
US5652355A (en) | 1992-07-23 | 1997-07-29 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
WO1994015645A1 (en) | 1992-12-31 | 1994-07-21 | Texas Biotechnology Corporation | Antisense molecules directed against genes of the raf oncogene family |
US6056704A (en) | 1993-03-03 | 2000-05-02 | Ide; Masatake | Foot-pressure massage stand |
EP0616026A1 (en) | 1993-03-19 | 1994-09-21 | The Procter & Gamble Company | Concentrated cleaning compositions |
JP2798305B2 (ja) * | 1993-06-23 | 1998-09-17 | ジェネシス ファーマ インコーポレイテッド | アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびヒト免疫不全ウイルス感染におけるその使用 |
FR2710074B1 (fr) | 1993-09-15 | 1995-12-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Gène GRB3-3, ses variants et leurs utilisations. |
US5624803A (en) * | 1993-10-14 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom |
US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
AU689182B2 (en) | 1993-11-16 | 1998-03-26 | Genta Incorporated | Chimeric oligonucleoside compounds |
US5578716A (en) * | 1993-12-01 | 1996-11-26 | Mcgill University | DNA methyltransferase antisense oligonucleotides |
US5908779A (en) * | 1993-12-01 | 1999-06-01 | University Of Connecticut | Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA |
WO1995030746A1 (en) * | 1994-05-10 | 1995-11-16 | The General Hospital Corporation | Antisense inhibition of hepatitis c virus |
US6057153A (en) * | 1995-01-13 | 2000-05-02 | Yale University | Stabilized external guide sequences |
US5674683A (en) | 1995-03-21 | 1997-10-07 | Research Corporation Technologies, Inc. | Stem-loop and circular oligonucleotides and method of using |
US5624808A (en) * | 1995-03-28 | 1997-04-29 | Becton Dickinson And Company | Method for identifying cells committed to apoptosis by determining cellular phosphotyrosine content |
JP4335310B2 (ja) | 1995-06-07 | 2009-09-30 | ザ ユニバーシティ オブ ブリティッシュ コロンビア | 疎水性脂質−核酸複合中間体を通して調製される脂質−核酸粒子、及び遺伝子移送のための使用 |
WO1997011170A1 (en) * | 1995-09-20 | 1997-03-27 | Worcester Foundation For Biomedical Research | Antisense oligonucleotide chemotherapy for benign hyperplasia or cancer of the prostate |
US5998203A (en) * | 1996-04-16 | 1999-12-07 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures |
TR199801581T2 (xx) | 1996-02-14 | 1998-10-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | �ekerle de�i�tirilmi� bo�luklu oligon�kleotid'ler. |
AU2733697A (en) | 1996-04-17 | 1997-11-07 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vegf/vpf) expression |
DE19618797C2 (de) | 1996-05-10 | 2000-03-23 | Bertling Wolf | Vehikel zum Transport molekularer Substanz |
US20040266706A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-12-30 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US5898031A (en) * | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
DE19631919C2 (de) | 1996-08-07 | 1998-07-16 | Deutsches Krebsforsch | Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur |
US6225290B1 (en) * | 1996-09-19 | 2001-05-01 | The Regents Of The University Of California | Systemic gene therapy by intestinal cell transformation |
EP0972015B1 (en) * | 1996-10-04 | 2006-06-07 | Derek Nigel John Hart | Enzyme having s-adenosyl-l-homocysteine hydrolase (ahcy) type activity |
US5814500A (en) * | 1996-10-31 | 1998-09-29 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Delivery construct for antisense nucleic acids and methods of use |
JP4427639B2 (ja) | 1996-12-12 | 2010-03-10 | イスム リサーチ ディベロップメント カンパニー オブ ザ ヘブライ ユニバーシティ オブ エルサレム | 合成アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド類およびそれらを含む医薬組成物 |
US20030064945A1 (en) * | 1997-01-31 | 2003-04-03 | Saghir Akhtar | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors |
GB9703146D0 (en) * | 1997-02-14 | 1997-04-02 | Innes John Centre Innov Ltd | Methods and means for gene silencing in transgenic plants |
US6218142B1 (en) * | 1997-03-05 | 2001-04-17 | Michael Wassenegger | Nucleic acid molecules encoding polypeptides having the enzymatic activity of an RNA-directed RNA polymerase (RDRP) |
GB9710475D0 (en) | 1997-05-21 | 1997-07-16 | Zeneca Ltd | Gene silencing |
IL135000A0 (en) | 1997-09-12 | 2001-05-20 | Exiqon As | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleotide analogues |
AU9319398A (en) | 1997-09-19 | 1999-04-05 | Sequitur, Inc. | Sense mrna therapy |
GB9720148D0 (en) | 1997-09-22 | 1997-11-26 | Innes John Centre Innov Ltd | Gene silencing materials and methods |
US6506559B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6475726B1 (en) * | 1998-01-09 | 2002-11-05 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Method for identifying validated target and assay combinations for drug development |
AUPP249298A0 (en) * | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
SK287538B6 (sk) | 1998-03-20 | 2011-01-04 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Syntetický gén obsahujúci dispergovanú alebo cudzorodú deoxyribonukleovú molekulu, génový konštrukt obsahujúci tento syntetický gén a prípravok obsahujúci tento syntetický gén |
US20040214330A1 (en) * | 1999-04-07 | 2004-10-28 | Waterhouse Peter Michael | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
ATE507299T1 (de) | 1998-04-08 | 2011-05-15 | Commw Scient Ind Res Org | Verfahren und mittel zum erhalt von veränderten phänotypen |
JP2003525017A (ja) | 1998-04-20 | 2003-08-26 | リボザイム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 遺伝子発現を調節しうる新規な化学組成を有する核酸分子 |
AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
GB9827152D0 (en) | 1998-07-03 | 1999-02-03 | Devgen Nv | Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition |
AU1408300A (en) | 1998-11-24 | 2000-06-13 | Hisamitsu Pharmaceutical Co. Inc. | Hiv infection inhibitors |
WO2000032619A1 (en) | 1998-11-30 | 2000-06-08 | Ribogene, Inc. | Methods and compositions for identification of inhibitors of ribosome assembly |
US6939712B1 (en) | 1998-12-29 | 2005-09-06 | Impedagen, Llc | Muting gene activity using a transgenic nucleic acid |
AU776150B2 (en) * | 1999-01-28 | 2004-08-26 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
EP2363478B1 (en) | 1999-04-21 | 2019-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences |
US20040002153A1 (en) * | 1999-07-21 | 2004-01-01 | Monia Brett P. | Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds |
GB9925459D0 (en) * | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
GB9927444D0 (en) | 1999-11-19 | 2000-01-19 | Cancer Res Campaign Tech | Inhibiting gene expression |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
DE10100586C1 (de) * | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
RU2164944C1 (ru) * | 1999-12-09 | 2001-04-10 | Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН | Способ изменения генетических свойств организма |
US8202979B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
WO2001068826A2 (en) | 2000-03-14 | 2001-09-20 | Syngenta Participations Ag | Protoporphyrinogen oxidase ('protox') genes |
US20030084471A1 (en) * | 2000-03-16 | 2003-05-01 | David Beach | Methods and compositions for RNA interference |
CA2403397A1 (en) * | 2000-03-16 | 2001-09-20 | Genetica, Inc. | Methods and compositions for rna interference |
DK2345742T3 (da) | 2000-03-30 | 2014-09-15 | Max Planck Ges Zur Förderung Der Wissenschaften E V | RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens |
WO2001075164A2 (en) | 2000-03-30 | 2001-10-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
US20100305186A1 (en) | 2000-05-30 | 2010-12-02 | Johnson & Johnson Research Pty Limited | Methods for mediating gene suppression |
WO2003103600A2 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-18 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites |
TR200401292T3 (tr) * | 2000-12-01 | 2004-07-21 | Max@Planck@Gesellschaft�Zur�F�Rderung�Der�Wissenschaften | RNAÁgirişimineÁyolÁaçanÁküçükÁRNAÁmolekülleri |
JP2004520047A (ja) | 2000-12-08 | 2004-07-08 | インヴィトロジェン コーポレーション | 組換え型核酸分子を迅速に作製するための組成物と方法 |
WO2002059300A2 (en) | 2000-12-28 | 2002-08-01 | J & J Research Pty Ltd | Double-stranded rna-mediated gene suppression |
US7423142B2 (en) * | 2001-01-09 | 2008-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
WO2003035869A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens |
EP1229134A3 (en) * | 2001-01-31 | 2004-01-28 | Nucleonics, Inc | Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell |
JP2004532022A (ja) * | 2001-03-26 | 2004-10-21 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | B型肝炎ウイルスおよびc型肝炎ウイルスの複製のオリゴヌクレオチド媒介性阻害 |
US20040019001A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20030124513A1 (en) * | 2001-05-29 | 2003-07-03 | Mcswiggen James | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV |
US20040006035A1 (en) * | 2001-05-29 | 2004-01-08 | Dennis Macejak | Nucleic acid mediated disruption of HIV fusogenic peptide interactions |
ATE262768T1 (de) | 2001-06-01 | 2004-04-15 | Mobilkom Austria Ag & Co Kg | Verfahren zur bestimmung des standortes einer mobilstation in einem mobilfunksystem |
US20030140362A1 (en) * | 2001-06-08 | 2003-07-24 | Dennis Macejak | In vivo models for screening inhibitors of hepatitis B virus |
EP2428571B1 (en) * | 2001-09-28 | 2018-07-18 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | MicroRNA molecules |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
US20040121348A1 (en) * | 2001-10-26 | 2004-06-24 | Ribopharma Ag | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
DE10230997A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels |
US20040248835A1 (en) * | 2001-10-26 | 2004-12-09 | Anja Krebs | Use of a double-stranded ribonucleic acid for treating an infection with a positivestrand rna-virus |
DE10154113A1 (de) | 2001-11-03 | 2003-05-15 | Opel Adam Ag | Frontstruktur eines Kraftfahrzeuges |
DE10202419A1 (de) * | 2002-01-22 | 2003-08-07 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens |
EP1572902B1 (en) | 2002-02-01 | 2014-06-11 | Life Technologies Corporation | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
CA2476530A1 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | City Of Hope | Methods for producing interfering rna molecules in mammalian cells and therapeutic uses for such molecules |
WO2003076592A2 (en) * | 2002-03-06 | 2003-09-18 | Rigel Pharmaceuticals, Inc. | Novel method for delivery and intracellular synthesis of sirna molecules |
AU2003224725A1 (en) * | 2002-03-20 | 2003-10-08 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Hiv therapeutic |
US20030180756A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Yang Shi | Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression |
US20040053876A1 (en) * | 2002-03-26 | 2004-03-18 | The Regents Of The University Of Michigan | siRNAs and uses therof |
AU2003237686A1 (en) | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
AU2003243541A1 (en) | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Ambion, Inc. | Methods and compositions relating to labeled rna molecules that reduce gene expression |
AU2003254334A1 (en) | 2002-07-10 | 2004-02-02 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna-interference by single-stranded rna molecules |
AU2003260370B2 (en) | 2002-08-05 | 2008-05-22 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
US20040241854A1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-12-02 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing |
AU2003261449A1 (en) * | 2002-08-07 | 2004-02-25 | Compositions for rna interference and methods of use thereof | |
WO2004027030A2 (en) | 2002-09-18 | 2004-04-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Efficient reduction of target rna’s by single- and double-stranded oligomeric compounds |
US20050020521A1 (en) | 2002-09-25 | 2005-01-27 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable siRNA |
WO2004044139A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Parmaceuticals, Inc. | Modified oligonucleotides for use in rna interference |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
AU2003295539A1 (en) | 2002-11-15 | 2004-06-15 | University Of Massachusetts | Allele-targeted rna interference |
WO2004047764A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | University Of Massachusetts | Modulation of hiv replication by rna interference |
US20040224328A1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-11-11 | Hans Prydz | siRNA screening method |
WO2004063375A1 (en) | 2003-01-15 | 2004-07-29 | Hans Prydz | OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE |
WO2004065600A2 (en) | 2003-01-17 | 2004-08-05 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference by palindromic or modified rna molecules |
DE602004030315D1 (de) | 2003-01-17 | 2011-01-13 | Max Planck Gesellschaft | Induzierbare sirna expressionskonstrukte zur gezielten genabschaltung |
EP1592791A2 (en) | 2003-02-10 | 2005-11-09 | National Institute of Advanced Industrial Science and Technology | Regulation of gene expression by dna interference |
CN1750752A (zh) * | 2003-02-19 | 2006-03-22 | 联邦科学和工业研究组织 | 使用短dsRNA序列在植物中进行有效的基因沉默 |
EP3502252B1 (en) | 2003-06-02 | 2023-04-05 | University of Massachusetts | Methods and compositions for controlling efficacy of rna silencing |
US6998203B2 (en) * | 2003-08-01 | 2006-02-14 | Intel Corporation | Proximity correcting lithography mask blanks |
CN102600480B (zh) | 2005-01-07 | 2015-07-22 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | RSV的RNAi调节及其治疗应用 |
WO2013009634A2 (en) | 2011-07-08 | 2013-01-17 | Inteva Products Llc. | Method for stitching vehicle interior components and components formed from the method |
-
2001
- 2001-11-29 TR TR2004/01292T patent/TR200401292T3/xx unknown
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2006
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2007
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2009
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