CN113365664A - 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物 - Google Patents

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Abstract

本公开整体涉及包含含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体‑药物缀合物，以及涉及将这些缀合物用作治疗剂和/或诊断剂的方法。

Description

具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
相关申请的交叉引用
本申请依据35 USC§119(e)要求2018年10月29日提交的美国临时申 请号62/751,945的优先权和权益。本申请的内容据此以引用的方式整体并 入。
背景技术
传统上，药物主要由口服(作为固体丸剂和液体)分配的或作为可注射剂 分配的小分子组成。在过去的三十年间，制剂(即，控制药物递送的途径和/ 或速率且允许治疗剂递送至需要其的位置的组合物)已经变得日益普遍和复 杂。虽然如此，有关新疗法以及其施用机制的发展的许多问题和挑战仍有 待解决。在一些实施方案中，由于许多药物在到达体内所期望的靶标之前 通常会受到部分降解，或者在不同于该靶标的组织中累积，或者具有短半 衰期，因此它们表现出有限的或者降低的效力和治疗效果。
因此，药物递送系统领域的一个目标在于通过可以采用生理学或化学 机制、或它们两者来稳定药物和/或延长半衰期以及控制治疗剂的体内转移 的系统将药物完整地递送至身体的特定靶标区域。
抗体-药物缀合物已经被开发作为靶点特异性治疗剂。已经将针对各种 癌细胞表面抗原的抗体与不同的细胞毒性剂缀合，所述细胞毒性剂包括但 不限于微管蛋白抑制剂(诸如，类美登素、澳瑞他汀和紫杉烷，参见，例如， 美国专利号5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,340,701、 6,372,738、6,436,931、6,596,757和7,276,497)；DNA(诸如加利车霉素、多 柔比星和CC-1065类似物；参见，例如，美国专利号5,475,092、5,585,499、 5,846,545、6,534,660、6,756,397和6,630,579)。在癌症治疗的临床上，已经 对抗体与这些细胞毒性药物中的一些的药物缀合物进行了积极的研究(参见， 例如Ricart，A.D.和Tolcher，A.W.，2007，Nature Clinical Practice，4，245-255；等人，2010，J.Clin.Oncol.，28，2698-2704)。然而，现有的抗体-药物缀 合物已经呈现出一些限制。主要的限制在于它们不能将足够浓度的药物递 送至靶点，这是由于有限数目的被靶向的抗原和/或癌症药物(如澳瑞他汀、 氨甲蝶呤、柔红霉素、类美登素、紫杉烷和长春新碱)的相对温和的细胞毒 性。给定靶抗原的成功ADC开发取决于抗体选择、接头稳定性、细胞毒性药物效力以及接头与抗体的药物缀合方式的优化。
通过共价键将药物部分与抗体缀合通常会产生分子的异质性混合物， 其中药物部分连接于抗体上的多个位点。在一些实施方案中，细胞毒性药 物通常已经通过抗体的赖氨酸或半胱氨酸残基与抗体缀合，从而产生异质 性抗体-药物缀合物混合物。根据反应条件，异质性混合物通常含有0至约 8个药物部分的分布，这些药物部分连接于抗体上的不同位点。分析和制备 方法不足以分离和表征由缀合反应产生的异质性混合物内的这些抗体药物 缀合物种类分子。另外，由于难以控制反应条件，因此缀合过程可以是不 可重现的。因此，需要可重现地产生均质性抗体-药物缀合物，其中抗体药 物缀合物种类分子可以得到表征。
发明内容
本公开的特征在于半胱氨酸工程化的靶向部分-药物缀合物，所述缀合 物表现出高载药量以及与靶抗原的强结合。在一些实施方案中，半胱氨酸 工程化的靶向部分是基于蛋白质的识别分子(PBRM)。
在一些实施方案中，PBRM在缀合之前包含工程化的半胱氨酸。优选 地，在不存在工程化的半胱氨酸的情况下，半胱氨酸工程化的PBRM基本 上维持了PBRM的一个或多个结构或功能特征。
在一些实施方案中，抗体或抗体片段是工程化的抗体或抗体片段。在 一些实施方案中，半胱氨酸工程化的PBRM是半胱氨酸工程化的抗体或抗 体片段。在一些实施方案中，抗体或抗体片段在特定位置处包含工程化的 半胱氨酸，并且对应的野生型抗体或抗体片段在相同位置处不包含半胱氨 酸。
在一些实施方案中，PBRM是具有工程化的半胱氨酸(例如，通过工程 化改造免疫球蛋白引入的半胱氨酸)的免疫球蛋白，并且工程化的半胱氨酸 不干扰PBRM的折叠和组装或者改变PBRM的抗原结合和效应子功能。
在一些实施方案中，在缀合时，PBRM通过工程化的半胱氨酸(例如， 通过工程化的半胱氨酸的硫醇基团)缀合至一种或多种药物(例如，细胞毒性 药物)。在一些实施方案中，接头-药物部分在工程化的半胱氨酸处(例如， 在工程化的半胱氨酸的硫醇基团处)连接至PBRM。在一些实施方案中，在 缀合时，PBRM的一个或多个结构或功能特征基本上得以维持。在一些实 施方案中，PBRM是免疫球蛋白，并且缀合不干扰免疫球蛋白的折叠和组 装或者改变PBRM的抗原结合和效应子功能。在一些实施方案中，缀合物 在接头-药物部分和PBRM之间提供均一的化学计量(例如，最多两个接头- 药物部分被缀合至在每个轻链中具有工程化的半胱氨酸的每个PBRM)。
在一些实施方案中，PBRM是包含工程化的半胱氨酸的IgG1、IgG2a 或IgG2b抗体。在一些实施方案中，PBRM(例如，抗体)在PBRM的一个 或多个位置处包含一个或多个工程化的半胱氨酸，并且允许在那些位置(例 如，轻链-Fab、重链-Fab或重链-Fc中的工程化的半胱氨酸的位置)处的药物 连接。在一些实施方案中，至少一个工程化的半胱氨酸定位于重链中。在 一些实施方案中，至少一个工程化的半胱氨酸定位于轻链中。在一些实施 方案中，PBRM(例如，抗体)在V205C(Kabat编号)处的轻链恒定区中包含 至少一个突变。
在一些方面，本公开涉及包含半胱氨酸工程化的靶向部分和一个或多 个共价键合至所述半胱氨酸工程化的靶向部分的接头-药物部分的缀合物， 其中：
每个接头-药物部分包含多功能接头，所述多功能接头将半胱氨酸工程 化的靶向部分通过每个药物单元的可释放组装单元的中介而连接至一个或 多个药物单元，并且将亲水性基团连接至每个接头-药物部分的药物单元，
其中该可释放组装单元能够靠近由靶向部分靶向的靶位点释放游离药 物，并且
其中所述多功能接头包含在半胱氨酸工程化的靶向部分和亲水性基团 之间的肽部分，其中所述肽部分包含至少两个氨基酸。
在一些方面，本公开涉及包含靶向部分和一个或多个共价键合至所述 半胱氨酸工程化的靶向部分的接头-药物部分的缀合物，其中：
每个接头-药物部分包含多功能接头，所述多功能接头将半胱氨酸工程 化的靶向部分通过每个药物单元的可释放组装单元的中介而连接至一个或 更多个药物单元，并且将多元醇或其衍生物连接至每个接头-药物部分的药 物单元，
其中该可释放组装单元能够靠近由靶向部分靶向的靶位点释放游离药 物。
在一些方面，本公开涉及式(I)的缀合物：
Figure BDA0003135424430000041
其中
a1当存在时是0至1的整数；
a2是1至3的整数；
a3当存在时是0至1的整数；
a4是1至约5的整数；
a5是1至3的整数；
d13是1至约6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中所述PBRM包含工程化的半 胱氨酸；
LP′是将PBRM的工程化的半胱氨酸连接至MP的二价接头部分；其中 对应的单价部分LP包含能够与PBRM的工程化的半胱氨酸形成共价键的官 能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM是键、或者三价或四价接头，并且当LM是键时，a2是1；当LM是 三价接头时，a2是2；或者当LM是四价接头时，a2是3；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure BDA0003135424430000042
表示T1和MA的直接或 间接连接；
D的每次出现独立地是具有≤约5kDa的分子量的治疗剂；以及
LD的每次出现独立地是将D连接至MA的二价接头部分，并包含至少一 个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其预期治疗 效果。
在一些方面，本公开涉及具有式(II)-(V)中的任一者的含肽支架：
Figure BDA0003135424430000051
其中：
a1当存在时是0至1的整数；
a2当存在时是1至3的整数；
a3当存在时是0至1的整数；
a4当存在时是1至约5的整数；
a5当存在时是1至3的整数；
d13是1至约6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中所述PBRM包含工程化的半 胱氨酸；
LP′是将半胱氨酸工程化的PBRM连接至MP的二价接头部分；其中对 应的单价部分LP包含能够与PBRM的工程化的半胱氨酸的官能团形成共价 键的官能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM 当存在时是键、或者三价或四价接头，并且当LM是键时，a2是1； 当LM是三价接头时，a2是2；或者当LM是四价接头时，a2是3；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure BDA0003135424430000061
表示T1和MA的直接或 间接连接；
WD当存在时的每次出现独立地是能够与具有≤约5kDa的分子量的治疗 剂(“D”)的官能团一起形成共价键的官能团；以及
LD的每次出现独立地是将WD或D连接至MA和LD的二价接头部分，并包 含至少一个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其 预期治疗效果。
适用时，本公开的缀合物和支架可以包括以下特征中的一个或更多个。
在一些实施方案中，药物单元和亲水性基团中的每一个以平行取向连 接至多功能接头。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的靶向部分是基于蛋白质的识别 分子(PBRM)。在一些实施方案中，PBRM是抗体或抗体片段。
在一些实施方案中，PBRM在轻链的V205(Kabat编号)处包含工程化 的半胱氨酸。
在一些实施方案中，多功能接头中的肽部分包含三至约十六个氨基酸， 例如，约3个、约4个、约5个、约6个、约7个、约8个、约9个、约 10个、约11个、约12个、约13个、约14个、约15个或约16个氨基酸。
在一些实施方案中，多功能接头中的肽部分包含三至约十个氨基酸， 例如，约3个、约4个、约5个、约6个、约7个、约8个、约9个或约 10个氨基酸。
在一些实施方案中，肽部分包含三至约十个氨基酸，所述氨基酸选自 甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、它们的立体异 构体(例如，异谷氨酸或异天冬氨酸)，以及它们的组合。
在一些实施方案中，肽部分包含至少四个甘氨酸和至少一个丝氨酸。
在一些实施方案中，肽部分包含至少四个甘氨酸、至少一个丝氨酸和 至少一个谷氨酸或异谷氨酸。
在一些实施方案中，肽部分包含至少四个甘氨酸和至少一个谷氨酸。
在一些实施方案中，亲水性基团包含多元醇或其衍生物、聚醚或其衍 生物、或它们的组合。
在一些实施方案中，亲水性基团包含氨基多元醇，例如葡糖胺或二葡 糖胺。
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430000071
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430000072
在一些实施方案中，氨基多元醇是
Figure BDA0003135424430000073
其中
n1是0至约6的整数；
每个R58当存在时独立地是氢或C1-8烷基；
R60是键、C1-6烷基接头或-CHR59-，其中R59是-H、C1-8烷基、环烷基 或芳基烷基；
R61是CH2OR62、COOR62、-(CH2)n2COOR62或被一个或多个羟基取代的 杂环烷基；
R62是H或C1-8烷基；以及
n2是1至约5的整数。
在一些实施方案中，亲水性基团包含
Figure BDA0003135424430000074
其中
n4是1至约25的整数；
每个R63独立地是氢或C1-8烷基；
R64是键或C1-8烷基接头；
R65是H、C1-8烷基或-(CH2)n2COOR62；
R62是H或C1-8烷基；以及
n2是1至约5的整数。
在一些实施方案中，亲水性基团包括聚乙二醇，例如，具有约6至约 24个PEG子单元的聚乙二醇。
在一些实施方案中，亲水性基团包括具有约6至约12个PEG子单元的 聚乙二醇。
在一些实施方案中，亲水性基团包括具有约8至约12个PEG子单元的 聚乙二醇。
在一些实施方案中，L3当存在时包含-X-C1-10亚烷基-C(O)-，其 中X直接连接至LM，其中X是CH2、O或NR5，并且R5是氢、C1-6烷基、 C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或COO-C1-6烷基。
在一些实施方案中，L3当存在时是-NR5-(CH2)v-C(O)-或-CH2-(CH2)v- C(O)-NR5-(CH2)v-C(O)-，其中每个v独立地是1至10的整数(例如，每个v 独立地是1至6、或2至4的整数，或是2)。在一些实施方案中，L3是- NH-(CH2)2-C(O)-或-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)2-C(O)-。
在一些实施方案中，a4是1、2或3。
在一些实施方案中，d13是约1至约6的整数。
在一些实施方案中，d13是约1至约4的整数。
在一些实施方案中，d13是约4至约6的整数。
在一些实施方案中，d13是约2至约4的整数。
在一些实施方案中，d13是约1至约2的整数。
在一些实施方案中，d13是2。
在一些实施方案中，每个MP当存在时独立地是：
Figure BDA0003135424430000081
Figure BDA0003135424430000091
其中
环B是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R1K是离去基团；
R1A是硫保护基；
R2J是氢、脂族、芳基、杂脂族或碳环部分；以及
R3J是C1-6烷基，并且Z1、Z2、Z3和Z7中的每一个独立地是碳或氮原子。
在一些实施方案中，R1K是卤代基或RC(O)O-，其中R是氢、脂族、杂 脂族、碳环或杂环烷基部分。
在一些实施方案中，R1A是
Figure BDA0003135424430000092
Figure BDA0003135424430000093
其中r是1或2，并且Rs1、Rs2和Rs3中的每 一个独立地是氢、脂族部分、杂脂族部分、碳环部分或杂环烷基部分。
在一些实施方案中，每个Wp独立地是
Figure BDA0003135424430000094
在一些实施方案中，MP当存在时是-(Z4)-[(Z5)-(Z6)]z-，其中Z4连接至 LP’或LP并且Z6连接至LM；其中
z是1、2或3；
Z4是：
Figure BDA0003135424430000101
Figure BDA0003135424430000102
其中*表示与LP’或LP的连接，并且**表示与若存在的Z5或Z6的连接， 或当Z5和Z6均不存在时与LM的连接；
b1是0至6的整数；
e1是0至8的整数，
R17是C1-10亚烷基、C1-10杂亚烷基、C3-8环亚烷基、O-(C1-8亚烷基、亚 芳基、-C1-10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚 烷基)-、-(C3-8环亚烷基-C1-10亚烷基-、4元至14元杂环亚烷基、-C1-10亚烷 基-(4元至14元杂环亚烷基)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-、- C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10杂亚烷基-C(＝O)-、-C3-8环亚烷基-C(＝O)-、-O- (C1-8烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-C(＝O)-、-(C3-8环亚烷 基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-4元至14元杂环亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(4 元至14元杂环亚烷基)-C(＝O)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基- C(＝O)-、-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10杂亚烷基-NH-、-C3-8环亚烷基-NH-、-O- (C1-8烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-10亚 烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-NH-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基- NH-、-4元至14元杂环亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(4元至14元杂环亚烷 基)-NH-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-S-、- C1-10杂亚烷基-S-、-C3-8环亚烷基-S-、-O-C1-8烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-10亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-S-、 -(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-、-4元至14元杂环亚烷基-S-、-C1-10亚烷基- (4元至14元杂环亚烷基)-S-或-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-；
每个Z5独立地是不存在、R57-R17或聚醚单元；
每个R57独立地是键、NR23、S或O；
每个R23独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或 COO-C1-6烷基；以及
每个Z6独立地是不存在、-C1-10烷基-R3-、-C1-10烷基-NR5-、-C1-10烷基- C(O)-、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-(C1-10烷基-R3)g1-C1-10烷基-C(O)-；
每个R3独立地是-C(O)-NR5-或-NR5-C(O)-；
每个R5独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或 COO-C1-6烷基；以及
g1是1至4的整数。
在一些实施方案中，MP当存在时是
Figure BDA0003135424430000111
Figure BDA0003135424430000112
Figure BDA0003135424430000121
其中*表示与LP'或LP的连接，并且**表示与LM的连接；
R3是-C(O)-NR5或-NR5-C(O)-；
R4是键或-NR5-(CR20R21)-C(O)-；
R5是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或-COO-C1-6烷基；
R17是C1-10亚烷基、C1-10杂亚烷基、C3-8环亚烷基、O-(C1-8亚烷基、亚 芳基、-C1-10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚 烷基)-、-(C3-8环亚烷基-C1-10亚烷基-、4元至14元杂环亚烷基、-C1-10亚烷 基-(4元至14元杂环亚烷基)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-、- C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10杂亚烷基-C(＝O)-、-C3-8环亚烷基-C(＝O)-、-O- (C1-8烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基 -C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-C(＝O)-、-(C3-8环亚烷 基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-4元至14元杂环亚烷基-C(＝0)-、-C1-10亚烷基-(4 元至14元杂环亚烷基)-C(＝O)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基- C(＝O)-、-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10杂亚烷基-NH-、-C3-8环亚烷基-NH-、-O- (C1-8烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-10亚 烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-NH-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基- NH-、-4元至14元杂环亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(4元至14元杂环亚烷 基)-NH-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-S-、- C1-10杂亚烷基-S-、-C3-8环亚烷基-S-、-O-C1-8烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-10亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-S-、 -(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-、-4元至14元杂环亚烷基-S-、-C1-10亚烷基- (4元至14元杂环亚烷基)-S-或-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-；
每个R20和R21独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、 多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、 多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
每个R23独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或 COO-C1-6烷基；
每个b1独立地是0至6的整数；
e1是0至8的整数；
每个f1独立地是1至6的整数；以及
g2是1至4的整数。
在一些实施方案中，MP当存在时是
Figure BDA0003135424430000131
Figure BDA0003135424430000132
其中*表示与LP'或LP的连接，并且**表示与LM的连接。
在一些实施方案中，LM是键，并且a2是1。
在一些实施方案中，a2是2，并且LM是
Figure BDA0003135424430000141
其中
Figure BDA0003135424430000151
表示与若存在的MP的连接，或当MP不存在时与LP或LP'的连接；
Y1表示与若存在的L3的连接，或当L3不存在时与MA的连接；
R2和R′2各自独立地是氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、 任选取代的C2-6炔基、任选取代的C3-19支链烷基、任选取代的C3-8环烷基、 任选取代的C6-10芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6杂烷基、C1-6烷 氧基、芳氧基、C1-6杂烷氧基、C2-6烷酰基、任选取代的芳基羰基、C2-6烷 氧羰基、C2-6烷酰氧基、芳基羰氧基、任选取代的C2-6烷酰基、任选取代的 C2-6烷酰氧基、任选取代的C2-6取代的烷酰氧基、COOH或COO-C1-6烷基；
c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8中的每一个都是独立地在0和10之间的整 数；以及
d1、d2、d3、d4、d5和d7中的每一个都是独立地在0和10之间的整数。
在一些实施方案中，a2是2，并且LM是：
Figure BDA0003135424430000152
在一些实施方案中，a2是3，并且LM是：
Figure BDA0003135424430000153
Figure BDA0003135424430000161
Figure BDA0003135424430000171
其中：
Figure BDA0003135424430000172
表示与若存在的MP的连接，或当MP不存在时与LP或LP’的连接；
Y1表示与若存在的L3的连接，或当L3不存在时与MA的连接；
R2和R′2各自独立地是氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、 任选取代的C2-6炔基、任选取代的C3-19支链烷基、任选取代的C3-8环烷基、 任选取代的C6-10芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6杂烷基、C1-6烷 氧基、芳氧基、C1-6杂烷氧基、C2-6烷酰基、任选取代的芳基羰基、C2-6烷 氧羰基、C2-6烷酰氧基、芳基羰氧基、任选取代的C2-6烷酰基、任选取代的 C2-6烷酰氧基、任选取代的C2-6取代的烷酰氧基、-COOH或-COO-C1-6烷基；
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7和c8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数；
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7和d8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数；以及
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7和e8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数。
在一些实施方案中，a2是3，并且LM是
Figure BDA0003135424430000181
在一些实施方案中，MA包含含有至少约五个氨基酸的肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有至多约十六个氨基酸的肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有约4个、约5个、约6个、约7个、 约8个、约9个、约10个、约11个、约12个、约13个、约14个、约15 个或约16个氨基酸的肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有至多约十个氨基酸的肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有约4个、约5个、约6个、约7个、 约8个、约9个或约10个氨基酸的肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有约三至约十个氨基酸的肽部分，所述 氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、它 们的立体异构体(例如，异谷氨酸或异天冬氨酸)，以及它们的组合。
在一些实施方案中，MA包含含有至少四个甘氨酸和至少一个丝氨酸的 肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有至少四个甘氨酸和至少一个谷氨酸的 肽部分。
在一些实施方案中，MA包含含有至少四个甘氨酸、至少一个丝氨酸和 至少一个谷氨酸的肽部分。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和半胱氨酸工程化的靶向部分之间的比率在2∶1和4∶1之间或在2∶1和 1∶1之间。PBRM的实例包括，但不限于全长抗体，例如IgG和IgM、抗体 片段例如Fab、scFv、骆驼抗体(camelid)、Fab2等等、小蛋白质以及肽。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约6∶1、约5∶1、约4∶1、约3∶1、约2∶1或约 1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约6∶1、约 5∶1、约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约6∶1、 约5∶1、约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约5∶1、约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约5∶1、约 4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约5∶1、 约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约4∶1、约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约4∶1、约 3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约4∶1、 约3∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，D和PBRM之间的比率或药物单元和靶向部分之 间的比率为约4∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，D和PBRM之间的比率为约4∶1、约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，药物单元和靶向部分之间的比率为约4∶1、约2∶1 或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约6∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约6∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约6∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约4∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约4∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约4∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为约2∶1或约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为约2∶1或约 1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为约2∶1或 约1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为2∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为2∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为2∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率或接头-药物 部分和靶向部分之间的比率为1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率为1∶1。
在一些实施方案中，接头-药物部分和靶向部分之间的比率为1∶1。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物用于制造可用于治疗病症或减 轻病症的严重度的药物，所述病症例如，特征在于细胞的异常生长(例如癌 症)。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物用于制造可用于治疗病症的药 物，所述病症例如，特征在于细胞的异常生长(例如癌症)。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物用于制造可用于减轻病症的严 重度的药物，所述病症例如，特征在于细胞的异常生长(例如癌症)。
在一些实施方案中，药物单元或D被局部递送至特定的靶细胞、组织 或器官。
在一些方面，本公开提供了包含所述缀合物的组合物、其制备方法， 以及其在治疗各种病症(包括，但不限于癌症)中使用的方法。
在一些方面，本公开涉及包含本文描述的支架或缀合物和药学上可接 受的载体的药物组合物。
在一些方面，本公开涉及治疗有需要的受试者的病症的方法，包括向 受试者施用有效量的本文公开的缀合物。
在一些方面，本公开涉及诊断怀疑患有病症的受试者的病症的方法。 所述方法包括向怀疑患有病症的受试者施用有效量的本文描述的缀合物或 进行试验以检测来自受试者样品中的靶抗原/受体，以便确定受试者是否表 达靶抗原或受体。
除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属 领域中普通技术人员通常理解的相同的含义。在说明书中，除非上下文清 楚地另外指出，单数形式也包括复数。尽管类似于或等同于本文描述的那 些的方法和材料可以用于实践或测试本发明，下文描述了合适的方法和材 料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用 并入。本文提及的参考文献并非承认是要求保护的本发明的现有技术。在冲突的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例 仅是例示性的，并且不意欲为限制性的。
本发明的其他特征和优点将从以下详述和权利要求书显而易见。
附图说明
图1展示了如在JIMT-1小鼠肿瘤异种移植模型中测量的曲妥珠单抗-药 物缀合物，即缀合物2、缀合物3和缀合物4的抗肿瘤功效。
图2描绘了在缀合物2、缀合物3和缀合物4施用于小鼠之后测量的 JIMT-1小鼠肿瘤异种移植模型中的缀合药物的暴露。
具体实施方式
本公开提供了新型半胱氨酸工程化的靶向部分-药物缀合物、用于制备 所述缀合物或支架的合成方法、含有它们的药物组合物以及所述缀合物的 各种用途。
定义
本文还更详细地描述了本公开的某些化合物和特定官能团的定义。出 于本公开的目的，化学元素根据元素周期表(CAS版本，Handbook of Chemistry and Physics，第75版，封面插页)中鉴定的，并且特定的官能团通 常如本文所述来定义。此外，有机化学的通用原理以及特定的官能部分和 反应性描述于“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University Science Books， Sausalito：1999中，其全部内容通过引用并入本文。另外，本领域技术普通 人员将理解如本文所述的合成方法利用各种保护基。
在下面的说明书和权利要求书两者中，词语“一个/种”和“该/所述”的使 用应被解释为同时包括单数和复数，除非本文中另有指示或上下文明显地 发生矛盾。除非另有注释，术语“包含”、“具有”、如在“具有化学式”中的 “具有”、“包括”，和“含有”应被解释为开放式术语(即，表示“包括但不限 于”)，允许但不要求包括额外的要素或步骤。在一些实施方案中，具有某些 式的支架包括在所述式中所示的所有构成要素，并还可包括在所述式中没 有显示的额外的构成要素。另外，每当“包含”或另一开放式术语用于实施 方案时，应当理解为可以使用中间术语“基本上由...组成”或封闭式术语 “由...组成”更狭义地要求保护同一实施方案。
如本文所用的，表述“A、B或C中的一个或更多个”、“一个或更多个 A、B或C”、“A、B和C中的一个或更多个”、“一个或更多个A、B和C” 等等可互换使用，并且全部都是指从A、B和/或C中选择，即，一个或更 多个A、一个或更多个B、一个或更多个C或其任意组合。
术语“约”、“大约”或“近似”，当与数值连用时，表示包括值的集合或范 围。在一些实施方案中，“约X”包括为X±25％、±20％、±15％、±10％、 ±5％、±2％、±1％、±0.5％、±0.2％或±0.1％的值的范围，其中X为数值。在 一些实施方案中，术语“约”是指比特定值多或少5％的值的范围。在一些实 施方案中，术语“约”是指比特定值多或少2％的值的范围。在一些实施方案 中，术语“约”是指比特定值多或少1％的值的范围。
除非本文中另有指示，数值范围的列举仅仅旨在充当个别引用落在该 范围内的每一个单独数值的简化方法，并且如果每一个单独数值在本文中 被个别列举，则将其并入说明书中。除非另有注明，本文所用的范围包括 所述范围的二个边界。在一些实施方案中，“x是1和6之间的整数”和“x是 1至6的整数”的表述都表示“x是1、2、3、4、5或6”，即术语“X和Y之 间”和“范围从X至Y”包括X和Y及其之间的整数。
“保护基”：如本文所用的，术语保护基表示特定的官能部分(例如，O、 S或N)被暂时阻隔，以便反应可以在多官能化合物中的另一反应位点选择 性地进行。在优选的实施方案中，保护基以高收率选择性反应，获得对所 计划的反应稳定的受保护的底物；保护基必须通过容易获得的、优选地不 攻击其他官能团的无毒试剂以高收率选择性地除去；保护基形成易于分离 的衍生物(更优选地不产生新的立体异构中心)；并且保护基具有最少的附加 官能度，以避免其他反应位点。如本文中所详述，可以利用氧、硫、氮和 碳保护基。在一些实施方案中，在一些实施方案中，可以利用某些示例性 氧保护基。这些氧保护基包括，但不限于甲基醚类、取代的甲基醚类(例如， MOM(甲氧基甲基醚)、MTM(甲硫基甲基醚)、BOM(苄氧基甲基醚)和 PMBM(对甲氧基苄氧基甲基醚))、取代的乙基醚类、取代的苄基醚类、甲硅烷基醚类(例如，TMS(三甲基硅基醚)、TES(三乙基硅基醚)、TIPS(三异 丙基硅基醚)、TBDMS(叔丁基二甲基硅基醚)、三苄基硅基醚和TBDPS(叔 丁基二苯基硅基醚))、酯类(例如，甲酸酯、乙酸酯、苯甲酸酯(Bz)、三氟乙 酸酯和二氯乙酸酯)、碳酸酯类、环状缩醛类和缩酮类。在某些其他示例性 实施方案中，利用氮保护基。氮保护基以及保护和脱保护的方法是本领域 已知的。氮保护基包括，但不限于，氨基甲酸酯类(包括氨基甲酸甲酯、乙 酯和取代的乙酯(例如，Troc))、酰胺类、环状酰亚胺衍生物、N-烷基和N- 芳基胺类、亚胺衍生物和烯胺衍生物。在另外其他的实施方案中，可以利 用某些示例性硫保护基。硫保护基包括，但不限于如上所述的氧保护基， 以及脂族羧酸(例如，丙烯酸)、马来酰亚胺、乙烯基磺酰基(vinyl sulfonyl) 和任选取代的马来酸。然而，某些其他示例性保护基在本文中进行了详细 描述，应当理解，本公开并不旨在限于这些保护基；而是，可以使用上述 标准容易地鉴定出各种另外的等同保护基，并将其用于本公开中。此外， 各种保护基描述于“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”第三版，Greene，T.W.和Wuts，P.G.编，John Wiley&Sons，New York：1999中，其全部内容 通过引用由此并入。
“离去基团”是指在异裂键裂解时，带着一对电子离开的分子片段。离 去基团可以是阴离子或中性分子。离去基团包括，但不限于卤素离子例如， Cl-、Br-和I-；磺酸酯例如对甲苯磺酸根(“甲苯磺酸根”，TsO-)；和 RC(O)O-，其中R是氢，脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分。
“抗体”指全长抗体或包含免疫球蛋白的抗体的功能片段。所谓“功能片 段”，其表示提供免疫球蛋白或抗体的充分部分，以致该部分与其靶细胞群 体的细胞表面分子(例如人癌胚抗原)有效结合或复合。
免疫球蛋白可使用本领域技术人员已知的技术进行纯化、重组生成、 合成生成，或其组合。虽然IgG抗体内的免疫球蛋白或从IgG抗体衍生的 免疫球蛋白特别完全适合用于本公开的缀合物或支架，但可选择来自任何 种类或亚类的免疫球蛋白，例如IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。合适地，免 疫球蛋白是IgG类，包括但不限于IgG亚类(IgG1、2、3和4)或IgM类， 其能够特异性结合至抗原上的特异性表位。抗体可以是从天然来源或从重 组来源衍生的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫反应性 部分。抗体可以以各种形式存在，包括，例如多克隆抗体、单克隆抗体、 骆驼化(camelize)单域抗体、细胞内抗体(“胞内抗体”)、重组抗体、抗个体遗 传型抗体、域抗体、线性抗体、多重特异性抗体(multispecific antibody)、抗 体片段，例如Fv、Fab、F(ab)2、F(ab)3、Fab’、Fab'-SH、F(ab’)2、单链可 变片段抗体(scFv)、串联/双-scFv、Fc、pfc’、scFvFc(或scFv-Fc)、二硫化物Fv(dsfv)、双特异性抗体(bc-scFv)诸如BiTE抗体；骆驼化抗体、表面重 塑抗体(resurfaced antibody)、人源化抗体、完全人类抗体、单域抗体(sdAb， 也称为
Figure BDA0003135424430000241
)、嵌合抗体、包含至少一个人类恒定区的嵌合抗体、 双亲和性抗体例如双亲和性重新靶向蛋白(DARTTM)、二价(或双价)单链可 变片段(di-scFvs、bi-scFvs)(包括但不限于微小抗体(minibody)、双抗体 (diabody)、三抗体(triabody或tribody)、四抗体(tetrabody)等)，以及多价抗 体。“抗体片段”是指结合至其靶点的免疫球蛋白分子的可变区(即抗原结合 区)的至少一部分。除非另外指明，如本文所用的术语“抗体”是指全长抗体和抗体片段两者。
“基于蛋白质的识别分子”或“PBRM”是指识别和结合至细胞表面标志物 或受体的分子，例如跨膜蛋白、表面固定化蛋白或蛋白多糖。在一些实施 方案中，PBRM包含工程化的半胱氨酸。PBRM的实例包括但不限于，抗 体(例如，曲妥珠单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、贝伐珠单抗、依帕珠单 抗、维妥珠单抗、拉贝珠单抗、B7-H4、B7-H3、CA125、CD33、CXCR2、EGFR、FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4、HER2、NaPi2b、c-Met、间皮 素、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PD-L1、c-Kit、MUC1、 MUC13、Trop-2和抗-5T4)或肽(LHRH受体靶向肽、EC-1肽)、脂笼蛋白， 例如，安堤卡林(anticalin)、蛋白质，例如，干扰素、淋巴因子、生长因子、 集落刺激因子等、肽或肽模拟物等。基于蛋白质的识别分子除了将缀合物 靶向至特定细胞、组织或位点之外，还可以具有某些治疗效果，例如对于 靶细胞或通路的抗增殖(抑制细胞和/或细胞毒素)活性。基于蛋白质的识别 分子包含或可以通过基因工程改造而包含至少一个化学反应性基团，例如- COOH、伯胺、仲胺-NHR、-SH，或化学反应性氨基酸部分或侧链，例如酪氨酸、组氨酸、半胱氨酸或赖氨酸。在一些实施方案中，PBRM可以是 与给定的靶细胞群体的细胞表面分子(例如细胞表面受体或抗原)特异性地结 合或复合的配体(LG)或靶向部分。在配体与其受体特异性结合或复合后， 细胞对配体或配体-药物缀合物的吸收是允许的，然后其被内化进入细胞。 如本文所用的，“特异性结合或复合”或“靶向”细胞表面分子的配体优选经由 分子间力与细胞表面分子缔合。在一些实施方案中，配体可优选以少于约50nM、少于约5nM，或少于500pM的Kd与细胞表面分子缔合。测量配体 与细胞表面分子的结合亲和力的技术是众所周知的；例如，一种合适的技 术被称为表面等离子体共振(SPR)。在一些实施方案中，配体用于靶向，且 当与它递送的药物分离时没有可检测的治疗效果。在一些实施方案中，配 体起着作为靶向部分和作为治疗剂或免疫调节剂两者的功能(例如，增强活 性药物或前药的活性)。
如本文所用，“工程化的半胱氨酸”是指存在于半胱氨酸工程化的靶向 部分(例如，半胱氨酸工程化的PBRM)中的半胱氨酸氨基酸。在一些实施方 案中，通过用半胱氨酸氨基酸置换对应的亲本靶向部分(例如，亲本PBRM) 中的非半胱氨酸氨基酸，将半胱氨酸氨基酸引入半胱氨酸工程化的靶向部 分。在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的靶向部分是半胱氨酸工程化的 抗体或抗体片段，并且通过用半胱氨酸氨基酸置换对应的亲本抗体或抗体 片段中的非半胱氨酸氨基酸(例如，在轻链恒定区的V205C(Kabat编号)处) 来引入半胱氨酸氨基酸。在一些实施方案中，置换是通过突变实现的。
如本文所用，“亲本靶向部分”是指在工程化过程(例如，引入工程化的 半胱氨酸的工程化过程)之前，半胱氨酸工程化的靶向部分的对应的靶向部 分。应当理解，亲本靶向部分可以是野生型、突变的或合成的。
如本文所用，“基于亲本蛋白质的识别分子”或“亲本PBRM”是指在工 程化过程(例如，引入工程化的半胱氨酸的工程化过程)之前，半胱氨酸工程 化的基于蛋白质的识别分子的对应的基于蛋白质的识别分子。应当理解， 亲本PBRM(例如，亲本抗体或抗体片段)可以是野生型、突变的或合成的。
如本文所用，“半胱氨酸工程化的”是指靶向部分(例如，PBRM(例如， 抗体或抗体片段))的特征为包括至少一个工程化的半胱氨酸。
如本文所用的“生物相容的”旨在描述当与体液或活细胞或组织接触时 施加最小的破坏效应或宿主反应效应的化合物。因此，如本文所用的生物 相容的基团是指脂族、环烷基、杂脂族、杂环烷基、芳基或杂芳基部分， 其落在以上和本文所定义的术语生物相容的定义之内。如本文所用的术语 “生物相容性”也被认为表示呈现出与识别蛋白(例如，天然存在的抗体、细 胞蛋白、细胞和生物系统的其他组分)之间最少的相互作用的化合物，除非此类相互作用是特别合意的。因此，特别旨在引起上述最少的相互作用的 物质和官能团(例如，药物和前药)被认为是生物相容的。优选地(除了旨在 作为细胞毒性的化合物，例如抗肿瘤剂以外)，若有下列情形，则化合物是 “生物相容的”：将该化合物以与预期的全身性体内浓度类似的浓度体外添 加至正常的细胞时，在等同于该化合物的体内半衰期(例如，50％的体内施 用的化合物被消除/清除所需的时间周期)的时间内导致小于或等于1％的细 胞死亡，以及所述化合物的体内施用诱发最少的和医学上可接受的炎症、 异物反应、免疫毒性、化学毒性和/或其他此类不良反应。在上述句子中， 术语“正常细胞”是指不意欲被受试化合物破坏或者另外显著影响的细胞。
“生物可降解的”：如本文所用的，“生物可降解的”化合物或部分是当被 细胞摄入时能够通过溶酶体的或其他化学机制或者通过水解作用分解为能 够被细胞再使用或者处理而不会对细胞产生显著的毒性效应的组分的那些 化合物或部分。如本文所用的术语“生物可裂解的”具有与“生物可降解的”相 同的含义。降解片段优选导致少量或不引起器官或细胞过负荷或者由此类 过负荷造成的病理过程或其他的体内不良反应。生物降解过程的实例包括 酶法和非酶法水解、氧化以及还原。适合于本文所描述的生物可降解的缀 合物(或其组分，例如含肽支架以及支架与抗体或药物分子之间的接头)的非 酶法水解的条件例如包括使该生物可降解的缀合物在溶酶体细胞内区室的 温度和pH下暴露于水。一些缀合物(或其组分，例如含肽支架以及支架与 抗体或药物分子之间的接头)的生物降解还可以在细胞外得到提高，例如， 在动物身体的低pH区域(例如，发炎区域)，在活化的巨噬细胞或其他释放 降解促进因子的细胞的近邻。本文公开的缀合物或支架的完整性可以例如 通过尺寸排阻HPLC来测量。虽然在一些情况下，较快的降解是优选的， 但是通常可能更合意的是，本文公开的缀合物或支架在细胞内降解的速率 不超过新陈代谢或细胞排泄其片段的速率。在优选的实施方案中，本文公 开的缀合物或支架的生物降解副产物是生物相容的。
“生物利用度”：术语“生物利用度”是指施用给受试者的给定量的药物或 化合物的全身性利用度(即，血液/血浆水平)。生物利用度是绝对术语，其 表示药物或化合物由所施用的剂型到达体循环的时间(速率)和总量(程度)两 者的量度。
“亲水的”：术语“亲水的”基本上无异于该术语在本领域中的通常含义， 并且表示含有可电离的、极性的、或可极化的原子或者另外可以被水分子 溶剂化的化学部分。因此，如本文所用的亲水部分或基团是指落入如上所 定义的术语亲水的的定义之内的脂族、环烷基、杂脂族、杂环烷基、芳基 或杂芳基部分。适合的具体的亲水有机部分的实例包括(但不局限于)包含在 约1至12个原子之间范围内的原子的链的脂族或杂脂族基团、羟基、羟烷基、胺、羧基、酰胺、羧酸酯、硫酯、醛、硝酰基、异硝酰基、亚硝基、 羟基胺、巯基烷基、杂环、氨基甲酸酯、羧酸及其盐、磺酸及其盐、磺酸 酯、磷酸及其盐、磷酸酯、聚二醇醚、聚胺、聚羧酸酯、聚酯、聚硫酯、 多元醇及其衍生物。在一些实施方案中，亲水的取代基包括羧基基团(COOH)、醛基团(CHO)、酮基团(COC1-4烷基)、羟甲基(CH2OH)或二醇(例 如，CHOH-CH2OH或CH-(CH2OH)2)、NH2、F、氰基、SO3H、PO3H等等。
本文公开的化合物(包括药物、缀合物和支架)的亲水性可以通过水合能 的测定来直接测定，或者通过二个液相之间的考察，或者通过HIC色谱法 或通过在具有已知疏水性的固相(例如，C4或C18)上的色谱法来测定。
“生理条件”：如本文所用的短语“生理条件”涉及在活组织的细胞外流体 中可能遇到的化学(例如，pH、离子强度)和生物化学(例如，酶浓度)条件的 范围。对于大多数正常组织而言，生理学pH范围从约7.0至7.4。循环血 浆和正常的间质液代表正常生理学条件的典型实例。
“多糖”、“碳水化合物”或“寡糖”：术语“多糖”、“碳水化合物”或“寡糖” 是本领域已知的，并且通常是指具有化学式(CH2O)n(其中通常n＞2)的物质， 及其衍生物。碳水化合物是多羟基醛或多羟基酮，或者通过简单的化学转 化(例如水解、氧化或还原)变为此类物质。典型地，碳水化合物以环状缩醛 或缩酮的形式存在(例如，葡萄糖或果糖)。这些环状单元(单糖)可以互相连 接以形成具有少数单糖单元的分子(寡糖)或具有数个单糖单元的分子(多糖)。 通常，带有明确定义的数目、种类和定位的单糖单元的碳水化合物被称为 寡糖，而由具有可变数目和/或定位的单糖单元的分子的混合物组成的碳水 化合物被称为多糖。术语“多糖”、“碳水化合物”和“寡糖”在本文中可互换使 用。多糖可以包括天然的糖(例如，葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、阿拉 伯糖、核糖和木糖)和/或天然存在的糖的衍生物(例如，2′-氟代核糖、2′-脱 氧核糖和己糖)。
“药物”：如本文所用的，术语“药物”是指为生物学活性的并在施用给有 需要的受试者后提供所需生理学作用的化合物(例如，活性药物成分)。
“前药”：如本文所用的术语“前药”是指活性药物的前体，即可转化为活 性药物的化合物。典型地，此类前药经受体内加工，这使药物转化为生理 学活性形式。在一些情况下，前药本身可具有所需生理学作用。所需生理 学作用可以是例如治疗性的、细胞毒性的、免疫调节的等。
“细胞毒性的”：如本文所用的术语“细胞毒性的”表示对细胞或选择的细 胞群体(例如，癌细胞)为毒性的。毒性作用可导致细胞死亡和/或溶胞作用。 在某些情况下，毒性作用可以是对细胞的亚致死破坏作用，例如减慢或阻 止细胞生长。为了获得细胞毒性作用，药物或前药可选自DNA损伤剂、微 管破坏剂，或细胞毒性蛋白质或多肽等。
“抑制细胞的”：如本文所用的术语“抑制细胞的”是指抑制或阻止细胞生 长和/或增殖的药物或其他化合物。
“小分子”：如本文所用的，术语“小分子”是指或者天然存在或者人工产 生(例如经由化学合成)的具有相对较低的分子量的分子。优选的小分子是生 物学活性的，以便其在动物，优选哺乳动物，更优选人类体内产生局部性 或全身性作用。在某些优选的实施方案中，该小分子是药物并且该小分子 被称为“药物分子”或“药物”或“治疗剂”。在一些实施方案中，药物分子具有 小于或等于约5kDa的MW。在其他实施方案中，药物分子具有小于或等于 约1.5kDa的MW。在实施方案中，药物分子选自长春花生物碱、奥瑞他汀、 倍癌霉素、激酶抑制剂、MEK抑制剂、KSP抑制剂、PI3激酶抑制剂、卡 奇霉素、SN38、喜树碱、拓扑异构酶抑制剂、非天然喜树碱、蛋白质合成 抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000291
类美登素、DNA-结 合药物、DNA嵌入药物、NAMPT抑制剂、微管溶素、免疫调节化合物及 其类似物。优选地，虽然非必要，该药物是已经被适当的政府机关或团体 (例如FDA)认定为安全且有效使用的那种。在一些实施方案中，根据FDA 的21 C.F.R.§§330.5、331至361、和440至460列举的供人类使用的药物； 根据FDA的21 C.F.R.§§500至589列举的供兽医使用的药物(通过引用并 入本文)都被视为适合于本文公开的方法、缀合物和支架。可用于实施本发 明的药物分子的类别包括，但不限于，抗癌物质、放射性核素、维生素、 抗AIDS物质、抗生素、免疫抑制剂、免疫调节化合物、抗病毒物质、酶抑 制剂、神经毒素、阿片类、安眠药、抗组胺剂、润滑剂、镇静剂、抗惊厥 药、肌肉松弛剂和抗帕金森症物质、解痉药和肌肉收缩剂(包括通道阻断剂)、 缩瞳药和抗胆碱能药、抗青光眼化合物、抗寄生虫和/或抗原虫化合物、细 胞-细胞外基质相互作用调节剂(包括细胞生长抑制剂和抗粘合分子)、血管 舒张剂、DNA，RNA或蛋白质合成的抑制剂、抗高血压剂、镇痛剂、解热 剂、甾体和非甾体抗炎剂、抗血管生成因子、抗分泌因子、抗凝血剂和/或 抗血栓形成剂、局部麻醉剂、眼药、前列腺素、抗抑郁剂、抗精神病物质、 镇吐剂、显像剂。许多大分子也是药物，并且此类大分子可用于本文描述的缀合物和其他构建体。合适的大分子的实例包括，例如，基于氨基酸的 分子。基于氨基酸的分子可包含，例如，肽、多肽、酶、抗体、免疫球蛋 白或其功能片段等。
适用于本公开的类别和特定药物的较为完整(虽然并不详尽)列表可见于 AxelKleemann和Jurgen Engel编著的“Pharmaceutical Substances：Syntheses， Patents，Applications”，Thieme Medical Publishing，1999和Susan Budavari等 人编辑的“MerckIndex：An Encyclopedia of Chemicals，Drugs，and Biologicals”， CRC Press，1996，这两者均以引用的方式并入本文。在优选的实施方案中， 在本公开中使用的药物是对靶细胞或通路具有抗增殖(抑制细胞和/或细胞毒 性)活性的治疗剂。药物可以具有化学反应性基团，例如-COOH、伯胺、仲 胺-NHR、-OH、-SH、-C(O)H、-C(O)R、-C(O)NHR2b、C(S)OH、- S(O)2OR2b、-P(O)2OR2b、-CN、-NC或-ONO，其中R为脂族、杂脂族、碳 环或杂环烷基部分并且R2b为氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环部分。
如本文所用的“活性形式”是指在体内或体外呈现出预期的药物功效的 化合物形式。特别地，当旨在通过本公开的缀合物递送的药物分子从该缀 合物中释放时，该活性形式可以是药物本身或其衍生物，其呈现出预期的 治疗性质。药物从该缀合物中的释放可以通过将该药物附接至本公开的支 架或缀合物的接头的生物可降解的键的裂解而实现。因此，活性药物衍生 物可包含该接头的一部分。
“诊断标签”：如本文所用的，术语诊断标签是指可以使用本领域中己 知的分析法在体内或体外检测的物质组合物的原子、原子团、部分或官能 团、纳米晶体或其他的离散单元。当与本公开的缀合物结合时，此类诊断 标签容许在体内监测该缀合物。可选地或额外地，包括诊断标签的构建体 和组合物可以用于监测生物学功能或结构。诊断标签的实例包括，但不限 于，可以用于医学诊断过程的标签，例如用于γ闪烁照相术和正电子发射 断层显像术(PET)的放射性同位素(放射性核素)；用于核磁共振成像(MRI)的 造影剂(例如顺磁原子和超顺磁纳米晶体)；用于计算机断层显像术和其他基 于X-射线的成像方法的造影剂；用于基于超声波的诊断方法(超声波扫描术) 的试剂；用于中子活化法的试剂(例如，硼、钆)；用于各种光学过程的荧光 团；以及可以发射、反射、吸收、散射或以其他方式影响电磁场或波(例如， γ-射线、X-射线、无线电波、微波、光)、粒子(例如α粒子、电子、正电子、中子、质子)或其他形式的辐射(例如超声波)的普通部分。
“动物”：如本文所用的，术语动物是指在任何发展阶段的人类以 及非人动物，包括，例如哺乳动物、鸟类、爬行动物、两栖动物、鱼 类、蠕虫类和单细胞类。细胞培养物和活组织样品被认为是复数动物。 优选地，非人动物为哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、 猴、狗、猫、灵长类动物或猪)。动物可以是转基因动物。术语“受试 者”涵盖动物。
“有效量”：通常，当提及活性剂或药物递送装置时，术语“有效量”是指 引起所需的生物学应答所必需的量。本领域技术人员将理解的是，药剂或 装置的有效量可以随着此类因素而改变：如所需的生物学终点、待递送的 药剂、包封基质的组成、靶组织等在一些实施方案中，含有待递送以免疫 个体的抗原的微粒的有效量是导致足以防止具有所施用抗原的生物体感染 的免疫应答的量。
如本文所用的“天然氨基酸”是指在天然存在的蛋白质中发现的常见的 天然存在的L-氨基酸中的任一者，例如甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸 (Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸 (His)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸 (Tyr)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨 酰胺(Gln)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)，或其立体异构体，例如异谷氨 酸(iGlu)或异天冬氨酸(iAsp)。除非另有指定，提及氨基酸包括氨基酸本身 及其立体异构体。在一些实施方案中，术语“谷氨酸”包括Glu和iGlu两者， 而术语“天冬氨酸”包括Asp和iAsp两者。
如本文所用的“非天然氨基酸”是指不是天然氨基酸的任何氨基酸。这 包括例如，包含α-、β-、γ-、D-、L-氨基酰基残基的氨基酸。更普遍地，非 天然氨基酸包含通式
Figure BDA0003135424430000311
的残基，其中侧链R不是自然中存在的氨 基酸侧链。示例性非天然氨基酸包括，但不限于肌氨酸(N-甲基甘氨酸)、瓜 氨酸(cit)、高瓜氨酸、β-脲基丙氨酸、硫代瓜氨酸、羟基脯氨酸、别苏氨酸、 六氢吡啶羧酸(高脯氨酸)、α-氨基异丁酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、 别-异亮氨酸、正亮氨酸、α-甲基亮氨酸、环己基甘氨酸、β-环己基丙氨酸、 β-环戊基丙氨酸、α-甲基脯氨酸、苯基甘氨酸、α-甲基苯丙氨酸和及高苯丙 氨酸。
应当理解，如本文所用，“H”、“-H”或“氢”可互换使用以指代氢原子。
如本文所用的“烷基”本身或作为另一术语的一部分是指具有指定数目 的碳原子的经取代或未经取代的直链或支链、饱和或不饱和烃(例如“-C1-8烷 基”或“-C1-10烷基”分别是指具有1至8个碳原子或1至10个碳原子的烷基)。 当未指定碳原子数目时，烷基具有1至8个碳原子。代表性直链“-C1-8烷基” 基团包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、- 正庚基和-正辛基；而支链-C1-8烷基包括，但不限于-异丙基、-仲丁基、-异 丁基、-叔丁基、-异戊基和-2-甲基丁基；不饱和-C2-8烷基包括，但不限于- 乙烯基、-烯丙基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-异丁烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯 基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2，3-二甲基-2-丁烯基、-1-己基、 2-己基、-3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基、- 2-戊炔基和-3-甲基-1-丁炔基。在一些实施方案中，烷基未经取代。烷基可 经一个或更多个基团取代。在其他方面，烷基将为饱和的。
如本文所用的“亚烷基”本身或作为另一术语的一部分是指具有规定数 目的碳原子(典型地1-10个碳原子)且具有通过从亲本烷烃的相同或两个不 同碳原子移除两个氢原子而得到的两个单价基团中心的经取代或未经取代 的、饱和或不饱和的、支链或直链或环状烃基团。典型的亚烷基包括但不 限于：亚甲基(-CH2-)、1，2-乙基(-CH2CH2-)、1，3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1，4- 丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等等。在一些实施方案中，亚烷基为支链或直链烃(即，其不是环状烃)。在本文提供的任何实施方案中，亚烷基可以是饱和亚 烷基。
如本文所用的“芳基”本身或作为另一术语的一部分表示具有6-20个碳 (优选6-14个碳)原子的经取代或未经取代的单价碳环芳族烃基团，其通过 从亲本芳环系统的单个碳原子移除一个氢原子而得到。一些芳基以如“Ar” 的示例性结构表示。典型的芳基包括，但不限于衍生自苯、经取代的苯、 萘、蒽、联苯等等的基团。示例性芳基为苯基。
如本文所用的“亚芳基”本身或作为另一术语的一部分是如上所定义的 芳基，其中芳基氢原子中的一个被键替换(即，其为二价的)且可呈如以下结 构中所示的邻位、间位或对位取向，以苯基作为示例性基团：
Figure BDA0003135424430000331
在一些实施方案中，例如，当多功能接头或药物单元包含亚芳基时， 该亚芳基是如上所定义的芳基，其中芳基的氢原子中的一个或两个被键替 换(即，该亚芳基可以是二价的或三价的)。
如本文所用的“杂环”本身或作为另一术语的部分是指单价取代或未取 代的芳族(“杂芳基”)或非芳族(“杂环烷基”)单环、双环、三环或四环系统， 具有一定数目的(例如，3至8个或C3-8)碳原子(也称为环成员)和独立地选 自N、O、P或S的一至四个杂原子环成员，并通过从母环系统的环原子除 去一个氢原子而得。杂环上的一个或更多个N、C或S原子可以被氧化。 包含杂原子的环可以是芳族环或非芳族环。除非另有说明，杂环在任何杂 原子或碳原子处连接到其侧基，得到稳定的结构。杂环(例如，C3-8杂环)的 代表性实例包括，但不限于吡咯烷基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、 四氢呋喃基、四氢吡喃基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并吡唑 基、吡咯基、苯硫基(噻吩)、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、 吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噻唑基和异噁唑基。
当在本文中使用时，“杂环基(heterocyclo或Heterocyclo-)”是指上文定 义的杂环基团(例如，C3-8杂环)，其中该杂环的一个或更多个额外的氢原子 被键替换(即，它是多价的，例如二价或三价的)。在一些实施方案中，当亲 水基团、多功能接头或接头-药物部分包含杂环基时，该杂环基是上文定义 的杂环基团，其中该杂环基团的氢原子中的一个或两个被键替换(即，该杂 环基可以是二价的或三价的)。
当在本文中使用时，“碳环”本身或作为另一术语的一部分为通过从母 环系统的环原子除去一个氢原子而获得的具有一定数目的(例如，3至8个 或C3-8)碳原子(也称为环成员)的单价的、经取代的或未经取代的、芳族的 (“芳基”)或饱和或不饱和的非芳族的(“环烷基”)单环、双环、三环或四环碳 环系统。碳环可以是3-、4-、5-、6-、7-、或8-元的。代表性C3-8碳环包括， 但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、苯基、1，3-环己二烯基、1，4-环己二烯基、环庚基、1，3-环庚二烯基、1，3，5-环 庚三烯基、环辛基和环辛二烯基。
当在本文中使用时，“碳环基(Carbocyclo或Carbocyclo-)”本身或作为 另一术语的一部分是指上文定义的C3-8碳环基团，其中该碳环基团的另一 个氢原子被键替换(即，它是二价的)。在选择实施方案中，例如，当亲水基 团、多功能接头或接头-药物部分包含碳环基时，该碳环基是上文定义的碳 环基团，其中该碳环基团的氢原子中的一个或两个被键替换(即，该碳环基 可以是二价的或三价的)。
当在本文中使用时，“杂烷基”本身或与另一术语组合，除非另外陈述， 表示完全饱和的或含有1至3个不饱和度的由所述数目碳原子及一至十个、 优选一至三个选自O、N、Si及S的杂原子组成的稳定的直链或支链烃，或 其组合，且其中氮和硫原子可以任选被氧化，且氮杂原子可以任选被季铵 化。杂原子O、N及S可以位于杂烷基的任何内部位置处或位于烷基与分 子的其余部分连接的位置处。杂原子Si可以位于杂烷基的任何位置处，包 括烷基与分子的其余部分连接的位置。实例包括-CH2-CH2-O-CH3、-CH2- CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)- CH3、-NH-CH2-CH2-NH-C(O)-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O- CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-O-CH3和-CH＝CH-N(CH3)-CH3。最多两个杂 原子可以是连续的，诸如例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。在优选的 实施方案中，C1-4杂烷基或杂亚烷基具有1至4个碳原子和1或2个杂原子， 且C1-3杂烷基或杂亚烷基具有1至3个碳原子和1或2个杂原子。在一些 方面中，杂烷基或杂亚烷基是饱和的。
当在本文中使用时，“杂亚烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是 指衍生自杂烷基的二价基团(如上所讨论)，例如-CH2-CH2-S-CH2-CH2-和- CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-。对于杂亚烷基，杂原子还可占据任一或两个链 末端。此外，对于亚烷基和杂亚烷基连接基团，并不暗示连接基团的取向。 在选择实施方案中，例如，当亲水基团、多功能接头或接头-药物部分包含 杂亚烷基时，该杂亚烷基是上文定义的杂烷基，其中该杂烷基的氢原子中 的一个或两个被键替换(即，该杂亚烷基可以是二价的或三价的)。
当在本文中使用时，“任选取代”表示化学部分(例如烷基、杂烷基、碳 环和杂环等)被取代或未被取代。除非另有说明，本文中公开的化学部分是 任选取代的。当化学部分被取代时，一个或更多个氢原子各自独立地被取 代基替换。典型的取代基包括但不限于-X’、-R’、-O、-OR’、-SR’、-S-、- N(R’)2、-N(R’)3、＝NR’、-C(X’)3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、- NO、-NO2、＝N2、-N3、-NR’C(＝O)R’、-C(＝O)R’、-C(＝O)N(R’)2、-SO3 -、- SO3H、-S(＝O)2R’、-OS(＝O)2OR’、-S(＝O)2NR’、-S(＝O)R’、-OP(＝O)(OR’)2、 -P(＝O)(OR’)2、-PO3 -、-PO3H2、-AsO2H2、-C(＝O)R’、-C(＝O)X’、-C(＝S)R’、 -CO2R’、-CO2 -、-C(＝S)OR’、C(＝O)SR’、C(＝S)SR’、C(＝O)N(R’)2、 C(＝S)N(R’)2或C(＝NR’)N(R’)2，其中每个X′独立地是卤素：-F、-Cl、-Br或 -I；每个R’独立地是-H、-C1-20烷基、-C6-20芳基、-C3-C14杂环、保护基或前 药部分。典型的取代基还包括氧代(＝O)。
如本文所用的“接头-药物部分”是指本文公开的缀合物的非靶向部分的 部分。接头-药物部分的接头组分具有释放机制，其被称为可释放组装单元， 插在多功能接头和药物单元之间。
如本文所用的“多功能接头”是指连接一个或多个亲水性基团、一个或 多个药物单元和靶向部分(例如，PBRM)以形成如本文公开的缀合物或支架 的接头。这些组分与多功能接头的连接可以是平行的或串联的。在一些实 施方案中，多功能接头包含介于靶向部分和亲水基团之间的肽部分，其中 该肽部分包括至少两个氨基酸。在其他实施方案中，当亲水基团是多元醇 或其衍生物时，多功能接头不必包含具有至少两个氨基酸的肽部分。在其他实施方案中，当亲水基团是葡糖基胺、二葡糖基胺、三葡糖基胺或其衍 生物时，多功能接头不必包含具有至少两个氨基酸的肽部分。
如本文使用的短语“平行取向”、“平行布置”、“平行连接”或类似术语是 指以下构型：其中平行布置或平行取向或平行连接的组分以使得各自具有 一个拴在多功能接头上的末端和一个游离末端的方式与多功能接头连接。 本文中使用的术语“平行”不用于表示两个组分在空间上并排或者在贯穿一 些或它们的整个长度上在它们之间具有相同的距离。在其中平行取向的组 分本身是分支的并因此具有多个末端的情况下，其仍仅具有一个拴系的末 端。在一些实施方案中，仅那些要求为给定的接头-药物部分掩蔽疏水性的 亲水基团是与药物单元平行取向的，这不必要求所有的与多功能接头连接 的药物单元和亲水基团都彼此平行取向。在其他实施方案中，所有的与多 功能接头连接的药物单元和亲水基团都彼此平行取向。
短语“串联取向”或“串联布置”或“串联连接”或类似术语是指本公开的缀 合物或支架中的组分的以下构型：其中串联取向的组分以使得其具有两个 拴系的末端的方式连接，其中各末端与本公开的缀合物或支架的不同组分 连接。在一些实施方案中，一个或多个(OCH2CH2)子单元(其特征在于PEG 单元或子单元)插在药物单元和靶向部分之间。
如本文使用的“游离药物”是指未直接或间接地共价连接至亲水性基团 或至配体单元的降解产物的药物部分的生物学活性形式。游离药物可以指 药物，如同其经由释放机制从多功能接头裂解后即刻存在的那样，其通过 接头-药物部分中的可释放组装单元提供，或是指随后的细胞内转化或代谢。 在一些方面中，游离药物将具有H-D形式或可作为带电部分存在。游离药 物是药理学活性种类，其可以发挥所需的生物学效应。在一些方面中，药 理学活性种类可以不是母体药物，并可以包括接头组分，药物通过该组分 连接至靶向部分，所述接头组分还未经受随后的细胞内代谢。
疏水性可以使用clogP来量度。clogP定义为辛醇/水分配系数(包括隐 含的氢)的log，并且可以使用来自Chemical Computing集团的程序MOETM进行计算(使用Wildman，S.A.，Crippen，G.M.；Prediction of Physiochemical Parameters by AtomicContributions；J.Chem.Inf.Comput.Sci.39 No.5 (1999)868-873计算clogP值)。
在一些实施方案中，本公开提供靶向部分-药物缀合物组合物，其包含 靶向部分-药物缀合物的群体。靶向部分-药物缀合物包含靶向部分单元和多 个与其连接的接头-药物部分。优选地，缀合物中每个靶向部分平均存在约 2个至约6个、约2个至约4个、或约1个至约2个接头-药物部分(例如， 式(I)的d13)。与靶向部分的示例性连接经由硫醚键。靶向部分上的示例性缀 合位点是获自链间二硫化物残基的还原的硫醇基和/或被引入靶向部分中的 含硫醇的残基(例如引入的半胱氨酸)。连接可以是例如经由得自链间二硫化 物和0至8个引入的半胱氨酸残基的硫醇残基。
除非另有说明，如本文所用的聚合物的“分子量”或“MW”是指重均分子 量。
本公开意欲包括本化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具 有相同的原子序数但不同的质量数的那些原子。通过一般实例，但不限制 的方式，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括13C和14C。
本公开的化合物、支架或缀合物可以以一种以上的异构体形式存在。 应当理解，当本文描述化合物、支架或缀合物时，本公开涉及化合物、支 架或缀合物的所有异构体。在适用的情况下，此类公开涉及区域异构体、 旋光异构体和互变异构体。在一些实施方案中，旋光异构体包括对映异构 体、非对映异构体、手性异构体和非手性异构体。在一些实施方案中，旋 光异构体包括分离的旋光异构体以及旋光异构体的混合物，包括外消旋和 非外消旋混合物。异构体可以是分离形式或与一种或多种其他异构体的混 合物。除非另外指明，否则本文所述的任何化合物、支架或缀合物是指化 合物、支架或缀合物的每种异构体，或其任何混合物。当将化合物、支架 或缀合物描绘为特定的异构体时，应当理解，本公开不限于特定的异构体， 而是可以将特定的异构体称为任选的实施方案。
在一些实施方案中，本公开的化合物、支架或缀合物可以作为顺式和/ 或反式异构体存在。除非另外指明，否则本文所述的任何化合物、支架或 缀合物是指化合物、支架或缀合物的顺式异构体或反式异构体，以及它们 的任何混合物。当将化合物、支架或缀合物描绘为顺式或反式异构体时， 应当理解，本公开不限于特定的顺式或反式异构体，而是可以将特定的顺 式或反式异构体称为任选的实施方案。
在一些实施方案中，本公开的化合物、支架或缀合物可以作为区域异 构体存在。除非另外指明，否则本文所述的任何化合物、支架或缀合物是 指化合物、支架或缀合物的每个区域异构体，或其任何混合物。当将化合 物、支架或缀合物描绘为特定的区域异构体时，应当理解，本公开不限于 特定的区域异构体，而是可以将特定的区域异构体称为任选的实施方案。 对本公开的化合物、支架或缀合物的叙述或描绘，没有具体的立体构型名称，或具有少于所有手性中心的名称，旨在包括对于此类未指定的手性中 心而言，外消旋物、外消旋混合物、化合物的每个单独的对映异构体、非 对映异构体混合物和每个单独的非对映异构体，其中由于存在一个或多个 不对称中心，这种形式是可能的。
缀合物和含肽支架
在一些方面，本公开涉及具有基于蛋白质的识别分子(PBRM)的式(I)的 缀合物：
Figure BDA0003135424430000381
其中
a1当存在时是0至1的整数；
a2是1至3的整数；
a3当存在时是0至1的整数；
a4是1至约5的整数；
a5是1至3的整数；
d13是1至约6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中PBRM包含工程化的半胱氨 酸；
LP′是将PBRM的工稃化的半胱氨酸连接至MP的二价接头部分；其中 对应的单价部分LP含有能够与PBRM的工程化的半胱氨酸形成共价键的官 能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM是键、或者三价或四价接头，并且当LM是键时，a2是1；当LM是 三价接头时，a2是2；或者当LM是四价接头时，a2是3；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure BDA0003135424430000382
表示T1和MA的直接或 间接连接；
D的每次出现独立地是具有≤约5kDa的分子量的治疗剂；以及
LD的每次出现独立地是将D连接至MA的二价接头部分，并包含至少一 个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其预期治疗 效果。
在一些方面，本公开涉及具有式(II)-(V)中的任一者的含肽支架：
Figure BDA0003135424430000391
其中
a1当存在时是0至1的整数；
a2当存在时是3；
a3当存在时是0至1的整数；
a4当存在时是1至约5的整数；
a5当存在时是1至3的整数；
d13是1至约6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中所述PBRM包含工程化的半 胱氨酸；
LP′是将PBRM的工程化的半胱氨酸连接至MP的二价接头部分；其中 对应的单价部分LP含有能够与PBRM的工程化的半胱氨酸形成共价键的官 能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM当存在时是键、或者三价或四价接头，并且当LM是键时，a2是1； 当LM是三价接头时，a2是2；或者当LM是四价接头时，a2是3；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure BDA0003135424430000401
表示T1和MA的直接或 间接连接；
WD的每次出现独立地是能够与具有≤约5kDa的分子量的治疗剂(“D”) 的官能团一起形成共价键的官能团；以及
LD的每次出现独立地是将WD或D连接至MA和LD的二价接头部分，并包 含至少一个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其 预期治疗效果。
适用时，本公开的缀合物和支架可以包括以下特征中的一个或更多个。
在一些实施方案中，d13是约1至约6的整数(例如，d13是1、2、3、4、 5或6)。
在一些实施方案中，d13是约2至约6的整数(例如，d13是2、3、4、5 或6)。
在一些实施方案中，d13是约4至约6的整数(例如，d13是4、5或6)。
在一些实施方案中，d13是约1至约4的整数(例如，d13是1、2、3或 4)。
在一些实施方案中，d13是约2至约4的整数(例如，d13是2、3或4)。
在一些实施方案中，d13是约3至约4的整数。
在一些实施方案中，d13是约1至约2的整数。
在一些实施方案中，d13是1。在一些实施方案中，d13是2。在一些实 施方案中，d13是3。在一些实施方案中，d13是4。在一些实施方案中，d13是5。在一些实施方案中，d13是6。
在一些实施方案中，L3当存在时包含-X-C1-10亚烷基-C(O)-，其 中X直接连接至LM，其中X是CH2、O或NR5，并且R5是氢、C1-6烷基、 C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或COO-C1-6烷基。
在一些实施方案中，L3是-NR5-(CH2)v-C(O)-或-CH2-(CH2)v-C(O)-NR5- (CH2)v-C(O)-，其中每个v独立地是1至10的整数。在一些实施方案中，L3当存在时是-NH-(CH2)2-C(O)-或-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)2-C(O)-。
在一些实施方案中，每个v独立地是1至6、或2至4的整数，或者v 为2。
在一些实施方案中，a4是1。
在一些实施方案中，a4是2。在一些实施方案中，a4是3。在一些实施 方案中，a4是4。
在一些实施方案中，a4是5。
LP’
在一些实施方案中，LP'是将PBRM的工程化的半胱氨酸连接至MP的 二价接头部分，其中相应的单价部分为LP。
在一些实施方案中，LP是当未连接至PBRM的工程化的半胱氨酸时LP’ 的相应的单价基团。在一些实施方案中，LP包括末端基团WP，其中每个 WP独立地是：
Figure BDA0003135424430000411
Figure BDA0003135424430000421
其中
环B是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R1K是离去基团；
R1A是硫保护基；
R2J是氢、脂族、芳基、杂脂族或碳环部分；以及
R3J是C1-6烷基，并且Z1、Z2、Z3和Z7中的每一个独立地是碳或氮原子。
在一些实施方案中，每个R1K是卤代基或RC(O)O-，其中R是氢、脂 族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分。
在一些实施方案中，每个R1A独立地是
Figure BDA0003135424430000422
Figure BDA0003135424430000423
其中r是1或2，并且Rs1、Rs2和Rs3中的每 一个是氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分。
在一些实施方案中，WP是
Figure BDA0003135424430000424
在一些实施方案中，WP是
Figure BDA0003135424430000425
在一些实施方案中，当WP是
Figure BDA0003135424430000426
时，LP’包含
Figure BDA0003135424430000427
在一些实施方案中，WP是
Figure BDA0003135424430000431
其中Xa和Xb中的一个是H，且 另一个是马来酰亚胺基封闭部分。在一些实施方案中，马来酰亚胺基封闭 化合物(即，可以与马来酰亚胺反应以将其转化成琥珀酰亚胺的化合物)可以 用于使例如接头-药物部分和PBRM(例如，PBRM的工程化的半胱氨酸)之 间的反应猝灭，并且马来酰亚胺基封闭部分是指在转化后与琥珀酰亚胺连 接的化学部分。在一些实施方案中，马来酰亚胺基封闭部分是在马来酰亚 胺基与具有式(II’)的含巯基的化合物反应后能够共价连接至两个烯烃碳原子 之一的部分：
R90-(CH2)d-SH
(II’)
其中：
R90是NHR91、OH、COOR93、CH(NHR91)COOR93，或取代的苯基基团；
R93是氢或C1-4烷基；
R91是氢、CH3或CH3CO；以及
d是1至3的整数。
在一些实施方案中，马来酰亚胺基封闭化合物可以是半胱氨酸、N-乙 酰基半胱氨酸、半胱氨酸甲基酯、N-甲基半胱氨酸、2-巯基乙醇、3-巯基丙 酸、2-巯基乙酸、巯基甲醇(即，HOCH2SH)、苄基硫醇(其中苯基被一个或 多个亲水取代基任选取代)或3-氨基丙烷-1-硫醇。在一些实施方案中，苯基 上的一个或多个亲水取代基包括OH、SH、甲氧基、乙氧基、COOH、 CHO、COC1-4烷基、NH2、F、氰基、SO3H、PO3H等。
在一些实施方案中，马来酰亚胺基封闭基团是-S-(CH2)d-R90，其中，
R90是OH、COOH或CH(NHR91)COOR93；
R93是氢或CH3；
R91是氢或CH3CO；以及
d是1或2。
在一些实施方案中，马来酰亚胺基封闭基团是-S-CH2-CH(NH2)COOH。
延伸单元MP
在一些实施方案中，MP当存在时是-(Z4)-[(Z5)-(Z6)]z-，其中Z4连接至 LP’或LP并且Z6连接至LM；其中
z是1、2或3；
Z4是：
Figure BDA0003135424430000441
Figure BDA0003135424430000442
Figure BDA0003135424430000443
其中*表示与LP’或LP的连接， 并且**表示与若存在的Z5或Z6的连接，或当Z5和Z6均不存在时与LM的 连接；
b1是0至6的整数；
e1是0至8的整数；
R17是C1-10亚烷基、C1-10杂亚烷基、C3-8环亚烷基、O-(C1-8亚烷基、亚 芳基、-C1-10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚 烷基)-、-(C3-8环亚烷基-C1-10亚烷基-、4元至14元杂环亚烷基、-C1-10亚烷 基-(4元至14元杂环亚烷基)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-、- C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10杂亚烷基-C(＝O)-、-C3-8环亚烷基-C(＝O)-、-O- (C1-8烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-C(＝O)-、-(C3-8环亚烷 基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-4元至14元杂环亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(4 元至14元杂环亚烷基)-C(＝O)-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基- C(＝O)-、-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10杂亚烷基-NH-、-C3-8环亚烷基-NH-、-O- (C1-8烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-10亚 烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-NH-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基- NH-、-4元至14元杂环亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(4元至14元杂环亚烷 基)-NH-、-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-S-、- C1-10杂亚烷基-S-、-C3-8环亚烷基-S-、-O-C1-8烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-10亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-S-、 -(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-、-4元至14元杂环亚烷基-S-、-C1-10亚烷基- (4元至14元杂环亚烷基)-S-或-(4元至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-；
每个Z5独立地是不存在、R57-R17或聚醚单元；
每个R57独立地是键、NR23、S或O；
每个R23独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或 COO-C1-6烷基；
每个Z6独立地是不存在、-C1-10烷基-R3-、-C1-10烷基-NR5-、-C1-10烷基- C(O)-、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-(C1-10烷基-R3)g1-C1-10烷基-C(O)-；
每个R3独立地是-C(O)-NR5-或-NR5-C(O)-；
每个R5独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或 COO-C1-6烷基；以及
g1是1至4的整数。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000451
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000452
其中b1为1或4。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000453
其中b1为1。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000461
其中b1为4。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000462
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000463
例如，其中b1为4。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000464
例如，其中b1为0。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000465
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000466
在一些实施方案中，b1为0。在一些实施方案中，R66中的一个是O， 另一个是NH。
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000467
在一些实施方案中，Z4为
Figure BDA0003135424430000468
在一些实施方案中，每个Z5独立地是聚亚烷基二醇(PAO)，包括但不 限于，低级环氧烷烃的聚合物(例如，环氧乙烷的聚合物，例如环氧丙烷、 聚丙二醇、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物以及其嵌段共聚 物)。在一些实施方案中，聚亚烷基二醇是聚乙二醇(PEG)，包括但不限于 多分散PEG、单分散PEG和离散PEG。在一些实施方案中，多分散PEG 是尺寸和分子量的非均质混合物，而单分散PEG由非均质混合物纯化而来， 并因此提供单一链长和分子量。在一些实施方案中，PEG单元是离散的 PEG。在一些实施方案中，离散的PEG单元提供具有限定和特定链长的单 一分子。在一些实施方案中，PEG是mPEG。
当提及PEG单元时，如本文所用的子单元是指具有式
Figure BDA0003135424430000471
的聚乙二醇子单元。在一些此类实施方案中，PEG单元包含多个PEG子单 元。
在一些实施方案中，当z是2或3时，至少一个Z5是聚亚烷基二醇 (PAO)，例如，PEG单元。
在一些实施方案中，当z是2时，至少一个Z5是聚亚烷基二醇(PAO)， 例如，PEG单元。
在一些实施方案中，当z是3时，至少一个Z5是聚亚烷基二醇(PAO)， 例如，PEG单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含1至6个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含1至4个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含1至3个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含1个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含2个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含3个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含4个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含5个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含6个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含一个或多个通过PEG连接单元连接 在一起的PEG子单元。在一些实施方案中，连接重复的CH2CH2O-子单元 的一个或多个链的PEG连接单元是Z6。在一些实施方案中，Z6是-C1-10烷 基-R3-、-C2-10烷基-NH-、-C2-10烷基-C(O)-、-C2-10烷基-O-或-C1-10烷基-S， 其中R3是-C(O)-NR5-或-NR5-C(O)-。
在一些实施方案中，PEG连接单元是-C1-10烷基-C(O)-NH-或-C1-10烷基- NH-C(O)-。在一些实施方案中，PEG连接单元是-C1-10烷基-C(O)-NH-。在 一些实施方案中，PEG连接单元是-C1-10烷基-NH-C(O)-。
在一些实施方案中中，PEG连接单元是-(CH2)2-C(O)-NH-。
在一些实施方案中，每个Z5不存在。
在一些实施方案中，当z为2或3时，至少一个Z5不存在。
在一些实施方案中，当z为2时，至少一个Z5不存在。在一些实施方 案中，当z为3时，至少一个Z5不存在。
在一些实施方案中，每个Z5是-(CH2-CH2-O-)2-。
在一些实施方案中，当z为2或3时，至少一个Z5是-(CH2-CH2-O-)2-。 在一些实施方案中，当z为2时，至少一个Z5是-(CH2-CH2-O-)2-。在一些 实施方案中，当z为3时，至少一个Z5是-(CH2-CH2-O-)2-。
在一些实施方案中，每个Z5独立地是R57-R17。在一些实施方案中，每 个Z5独立地是R17、NHR17、OR17或SR17。
在一些实施方案中，当z为2或3时，至少一个Z5为R57-R17(例如， R17、NHR17、OR17或SR17)。
在一些实施方案中，当z为2时，至少一个Z5为R57-R17(例如，R17、 NHR17、OR17或SR17)。在一些实施方案中，当z为3时，至少一个Z5为 R57-R17(例如，R17、NHR17、OR17或SR17)。
在一些实施方案中，每个Z6不存在。
在一些实施方案中，当z为2或3时，至少一个Z6不存在。
在一些实施方案中，当z为2时，至少一个Z6不存在。在一些实施方 案中，当z为3时，至少一个Z6不存在。
在一些实施方案中，Z5和Z6中的至少一个并非不存在。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-C1-10烷基-R3-、-C1-10烷基-NH-、 -C1-10烷基-C(O)-、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-(C1-10烷基-R3)g1-C1-10烷基 -C(O)-。在一些实施方案中，g1是1至4的整数。
在一些实施方案中，当z为2或3时，至少一个Z6为-C1-10烷基-R3-、- C1-10烷基-NH-、-C1-10烷基-C(O)-、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-(C1-10烷 基-R3)g1-C1-10烷基-C(O)-。在一些实施方案中，g1是1至4的整数。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-C2-10烷基-C(O)-(例如，-(CH2)2- C(O)-)。
在一些实施方案中，至少一个Z6是-C2-10烷基-C(O)-(例如，-(CH2)2- C(O)-)。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-C2-10烷基-R3-C2-10烷基-C(O)-(例 如，-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)2-C(O)-)。
在一些实施方案中，至少一个Z6是-C2-10烷基-R3-C2-10烷基-C(O)-(例如， -(CH2)2-C(O)NH-(CH2)2-C(O)-)。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-(C2-10烷基-R3)g1-C2-10烷基-C(O)- (例如，-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)2-NHC(O)-(CH2)-C(O)-)。
在一些实施方案中，至少一个Z6是-(C2-10烷基-R3)g1-C2-10烷基-C(O)-(例 如，-(CH2)2-C(O)NH-(CH2)2-NHC(O)-(CH2)-C(O)-)或-(CH2)2-NH-C(O)- (CH2)2-C(O)-NH-(CH2)-C(O)-。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-(CH2)2-NH-C(O)-(CH2)2-C(O)- NH-CH2-C(O)-。
在一些实施方案中，每个Z6独立地是-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)2-NH- C(O)-(CH2)-C(O)-或-(CH2)2-NH-C(O)-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)-C(O)-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-不存在。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是键。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-C(O)-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-C(O)-NH- (CH2CH2O)2-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-C(O)-NH- (CH2)-C(O)-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-NH-C(O)-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-NH-C(O)- (CH2)2-C(O)-NH-(CH2)-C(O)-。
在一些实施方案中，-[(Z5)-(Z6)]z-是-(CH2CH2O)2-(CH2)2-C(O)-NH- (CH2CH2O)2-(CH2)2-NH-C(O)-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)-C(O)-。
在一些实施方案中，MP当存在时是
Figure BDA0003135424430000501
其中*表示与LP'或LP的连接，并且**表示与LM的连接；以及
R3、R5、R17和R23如本文所定义；
R4是键或-NR5-(CR20R21)-C(O)-；
每个R20和R21独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、 多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、 多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
每个b1独立地是0至6的整数；
e1是0至8的整数；
每个f1独立地是1至6的整数；以及
g2是1至4的整数。
在一些实施方案中，b1为1。
在一些实施方案中，b1为0。
在一些实施方案中，每个f1独立地是1或2。在一些实施方案中，f1为 1。
在一些实施方案中，f1为2。
在一些实施方案中，g2为1或2。在一些实施方案中，g2为1。
在一些实施方案中，g2为2。
在一些实施方案中，R17是未取代的。
在一些实施方案中，R17是任选取代的。
在一些实施方案中，R17是取代的。
在一些实施方案中，R17任选地被基本单元取代，例如-(CH2)xNH2、- (CH2)xNHRa和-(CH2)xN(Ra)2，其中x是1-4的整数，并且每个Ra独立地选 自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或两个Ra基团与它们所连接的氮结合形成氮 杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基。
在一些实施方案中，R17被基本单元取代，例如-(CH2)xNH2、- (CH2)xNHRa和-(CH2)xN(Ra)2，其中x是1-4的整数，并且每个Ra独立地选 自C1-6烷基和C1-6卤代烷基，或两个Ra基团与它们所连接的氮结合形成氮 杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基。
在一些实施方案中，R17是-C2-5亚烷基-C(＝O)-，其中亚烷基任选地被 基本单元取代，例如-(CH2)xNH2、-(CH2)xNHRa和-(CH2)xN(Ra)2，其中x和 Ra如本文所定义。
在一些实施方案中，R17是-C2-5亚烷基-C(＝O)-，其中亚烷基被基本单 元取代，例如-(CH2)xNH2、-(CH2)xNHRa和-(CH2)xN(Ra)2，其中x和Ra如本 文所定义。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000511
Figure BDA0003135424430000521
Figure BDA0003135424430000522
其中*表示与LP’或LP的连接，并且**表示与LM的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000523
其中*表示与LP’或LP的连接，并且**表示与 LM的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000524
其中*表示与LP’或LP的连接，并且**表示与LM的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000525
其中 *表示与LP’或LP的连接，并且**表示与LM或MA的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000526
其中*表 示与LP’或LP的连接，并且**表示与LM或MA的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000531
其中*表示 与LP'或LP的连接，并且**表示与LM或MA的连接。
在一些实施方案中，MP当存在时是：
Figure BDA0003135424430000532
其中*表示与LP'或LP的连接， 并且**表示与LM或MA的连接。
LM
在一些实施方案中，LM是键或多臂接头(例如，三价或四价或具有3或 4个臂)，其中各臂可能是相同的或不同的。
在一些实施方案中，LM是键或多臂接头(例如，四价或具有4个臂；或 者三价具有3个臂)，其中每个臂可以相同或不同。
应当理解，如本文所用，术语“臂”，是指(1)与MP(当存在时)连接，或 者与LP或LP”连接(当MP不存在时)，或者(2)与L3(当存在时)连接，或者与 MA连接(当L3不存在时)的LM的一部分；
在一些实施方案中，a2是2，并且LM是
Figure BDA0003135424430000533
Figure BDA0003135424430000541
其中：
Figure BDA0003135424430000542
表示与若存在的MP的连接，或当MP不存在时与LP或LP’的连接；
Y1表示与若存在的L3的连接，或当L3不存在时与MA的连接；
R2和R′2各自独立地是氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、 任选取代的C2-6炔基、任选取代的C3-19支链烷基、任选取代的C3-8环烷基、 任选取代的C6-10芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6杂烷基、C1-6烷 氧基、芳氧基、C1-6杂烷氧基、C2-6烷酰基、任选取代的芳基羰基、C2-6烷 氧羰基、C2-6烷酰氧基、芳基羰氧基、任选取代的C2-6烷酰基、任选取代的 C2-6烷酰氧基、任选取代的C2-6取代的烷酰氧基、COOH或COO-C1-6烷基；
c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8中的每一个都是独立地在0和10之间的整 数；以及
d1、d2、d3、d4、d5和d7中的每一个都是独立地在0和10之间的整数。
在一些实施方案中，a2是2，并且LM是
Figure BDA0003135424430000551
在一些实施方案中，a2是2，并且LM是
Figure BDA0003135424430000552
在一些实施方案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是0或1。
在一些实施方案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10。
在一些实施方案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是0、1或 2。
在一些实施方案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是0。在一 些实施方案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是1。在一些实施方 案中，c1、c2、c3、c4、c5、c7和c8各自独立地是2。
在一些实施方案中，d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是0或1。
在一些实施方案中，d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是1、2、3、4、 5、6、7、8、9或10。
在一些实施方案中，d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是1、2、3或 4。
在一些实施方案中，d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是1。在一些 实施方案中，d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是2。在一些实施方案中， d1、d2、d3、d4、d5和d7各自独立地是3。在一些实施方案中，d1、d2、d3、 d4、d5和d7各自独立地是4。
在一些实施方案中，R2和R′2各自独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、 C3-8环烷基、COOH或COO-C1-6烷基；
在一些实施方案中，R2和R′2各自独立地是氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，R2和R′2各自独立地是氢。
在一些实施方案中，R2和R′2各自独立地是C1-6烷基。
在一些实施方案中，LM是：
Figure BDA0003135424430000561
Figure BDA0003135424430000571
在一些实施方案中，a2是3，并且LM是
Figure BDA0003135424430000572
Figure BDA0003135424430000581
Figure BDA0003135424430000591
其中：
Figure BDA0003135424430000592
表示与若存在的MP的连接，或当MP不存在时与LP或LP'的连接；
Y1表示与若存在的L3的连接，或当L3不存在时与MA的连接；
R2和R′2各自独立地是氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、 任选取代的C2-6炔基、任选取代的C3-19支链烷基、任选取代的C3-8环烷基、 任选取代的C6-10芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6杂烷基、C1-6烷 氧基、芳氧基、C1-6杂烷氧基、C2-6烷酰基、任选取代的芳基羰基、C2-6烷 氧羰基、C2-6烷酰氧基、芳基羰氧基、任选取代的C2-6烷酰基、任选取代的 C2-6烷酰氧基、任选取代的C2-6取代的烷酰氧基、COOH或COO-C1-6烷基；
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7和c8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数；
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7和d8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数；以及
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7和e8中的每一个都是独立地在0和10之间 的整数。
在一些实施方案中，a2是3，并且LM是
Figure BDA0003135424430000601
在一些实施方案中，a2是3，并且LM是
Figure BDA0003135424430000602
在一些实施方案中，-LM-(L3)a2-是
Figure BDA0003135424430000603
Figure BDA0003135424430000604
在一些实施方案中，a2是2，并且LM选自
Figure BDA0003135424430000611
其中
Figure BDA0003135424430000612
表示本公开的缀合物或其中间体内的连接位点；
R110是：
Figure BDA0003135424430000613
Figure BDA0003135424430000621
其中*表示与标记为x的碳的连接，且
Figure BDA0003135424430000622
表示三个连接位点之一；
R100独立选自氢和-C1-3烷基；
Y是N或CH；
Y’的每次出现独立地选自NH、O或S；以及
c’的每次出现独立地是1至10的整数。
在一些实施方案中，R100独立地选自氢和CH3。
在一些实施方案中，R100独立地是氢。
在一些实施方案中，R100独立地是CH3。
在一些实施方案中，Y是N。
在一些实施方案中，Y是CH。
在一些实施方案中，R100是H或CH3。
在一些实施方案中，R100是H。在一些实施方案中，R100是CH3。
在一些实施方案中，各c’独立地是1至3的整数。
在一些实施方案中，R110不是
Figure BDA0003135424430000631
在一些实施方案中，其中AA单元具有两个连接位点(即，末端药物单 元)，以上显示的连接位点之一可以例如被H、OH或C1-3未取代烷基替换。
在一些实施方案中，当LM是多臂接头并且还未连接至延伸单元MP时， WM是LM的末端，且WM的每次出现独立地是氢、保护基、离去基团、或 能够通过形成共价键将LM连接至MP的官能团。在一些实施方案中，WM是胺保护基。在一些实施方案中，WM是BOC。
在一些实施方案中，WM是胺保护基，并且LM是
Figure BDA0003135424430000632
在一些实施方案中，WM是BOC，并且LM是
Figure BDA0003135424430000633
在一些实施方案中，WM是胺保护基，并且LM是
Figure BDA0003135424430000634
在一些实施方案中，WM是BOC，并且LM是
Figure BDA0003135424430000641
在一些实施方案中，WM包含胺基团，其中w是1至6的整数。
在一些实施方案中，WM包含-C(O)-(CH2)w-NH2，其中w是1至6的整 数。
在一些实施方案中，WM是-C(O)-CH2-NH2。
在一些实施方案中，WM是 -C(O)-CH2-NH2，并而LM是
Figure BDA0003135424430000642
在一些实施方案中，WM是-C(O)-CH2-NH2，并而LM是
Figure BDA0003135424430000643
在一些实施方案中，WM是氢。
L3
在一些实施方案中，每个L3当存在时是含羰基部分。
在一些实施方案中，每个L3当存在时独立地是*-C1-12烷基-C(O)-**或*- NH-C1-12烷基-C(O)-**，其中：
*表示与另一个L3(当存在时)或LM连接；以及
**表示与另一个L3(当存在时)或MA连接；
在一些实施方案中，至少一个L3是*-C1-12烷基-C(O)-**，其中：
*表示与另一个L3(当存在时)或LM连接；以及
**表示与另一个L3(当存在时)或MA连接；
在一些实施方案中，至少一个L3是*-CH2CH2-C(O)-**，其中：
*表示与另一个L3(当存在时)或LM连接；以及
**表示与另一个L3(当存在时)或MA连接；
在一些实施方案中，(L3)a3是*-CH2CH2-C(O)-**，其中：
*表示与LM连接；以及
**表示与MA连接。
在一些实施方案中，至少一个L3是*-NH-C1-12烷基-C(O)-**，其中：
*表示与另一个L3(当存在时)或LM连接；以及
**表示与另一个L3(当存在时)或MA连接；
在一些实施方案中，至少一个L3是*-NH-CH2CH2-C(O)-**，其中：
*表示与另一个L3(当存在时)或LM连接；以及
**表示与另一个L3(当存在时)或MA连接；
在一些实施方案中，至少一个L3是*-NH-CH2CH2-C(O)-**，其中：
*表示与LM连接；以及
**表示与MA连接。
在一些实施方案中，a3为2或更大，至少一个L3是*-C1-12烷基-C(O)-**， 并且至少一个L3是*-NH-C1-12烷基-C(O)-**。
在一些实施方案中，(L3)a3是*-CH2CH2-C(O)-NH-CH2CH2-C(O)-**，其 中：
*表示与LM连接；以及
**表示与MA连接。
在一些实施方案中，(L3)a3是*NH-CH2CH2-C(O)-CH2CH2-C(O)-**，其 中：
*表示与LM连接；以及
**表示与MA连接。
MA
在一些实施方案中，MA是能够将一种或更多种药物和一个或多个亲水 性基团连接至LP或LP'的接头部分。在一些实施方案中，MA包含具有至少 两个氨基酸(AA)的肽部分。
在一些实施方案中，肽部分是能够与-LD-D单元形成共价键并允许连接 多种药物的部分。在一些实施方案中，肽部分包含单一AA单元或具有两 个或更多个AA单元(例如，2至10个，2至6个，或者2、3、4、5或6个)， 其中AA单元各自独立地是天然或非天然氨基酸、氨基醇、氨基醛、二胺、 或多胺、或其组合。在一些实施方案中，为了具有所需数目的连接，至少 一个AA单元将具有官能化侧链，以提供-LD-D单元的连接。在一些实施方 案中，示例性官能化AA单元(例如，氨基酸、氨基醇或氨基醛)包括，例如， 叠氮基或炔烃官能化AA单元(例如，经改性以具有叠氮基或炔基的氨基酸、 氨基醇或氨基醛)。在一些实施方案中，叠氮基团或炔烃基团用于使用点击 化学的连接。
在一些实施方案中，肽部分具有2至12个AA单元。
在一些实施方案中，肽部分具有2至10个AA单元。
在一些实施方案中，肽部分具有2至6个AA单元。
在另外一些实施方案中，肽部分具有2、3、4、5或6个AA单元。
在另外一些实施方案中，肽部分具有2个AA单元。在另外一些实施 方案中，肽部分具有3个AA单元。在另外一些实施方案中，肽部分具有4 个AA单元。在另外一些实施方案中，肽部分具有5个AA单元。在另外一 些实施方案中，肽部分具有6个AA单元。
在一些实施方案中，AA单元具有三个连接位点(例如，用于连接至LM、 亲水性基团或另一AA单元，和连接至-LD-D单元)。在一些实施方案中， AA单元具有下式：
Figure BDA0003135424430000661
其中
Figure BDA0003135424430000662
表示本公开的缀合物或其中间体内的连接位 点；并且R100和R110如本文所定义。
在一些实施方案中，AA单元具有两个连接位点(即，末端单元)，并且 以上显示的连接位点之一可以例如被H、OH或未取代的C1-3烷基替换。
在一些实施方案中，肽部分包含至少两个具有下式的AA单元：
Figure BDA0003135424430000671
其中：
每个R111独立地是H、对羟基苄基、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、 -CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、- CH2CH2CONH2、 -CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、 -(CH2)3NHCHO、 -(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2，-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、- (CH2)3NHCONH2、 -(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲 基-、 4-吡啶基甲基、
Figure BDA0003135424430000672
Figure BDA0003135424430000673
Figure BDA0003135424430000674
表示缀合物或其中间体内的连接位点；以及
R100和R110如本文所定义。
在一些实施方案中，肽部分包含至少两个AA单元，例如，如下所示 的半胱氨酸-丙氨酸：
Figure BDA0003135424430000681
其 中
Figure BDA0003135424430000682
和*表示缀合物或其中间体内的连接位点。在一些实施方案中，*表示- LD-D单元或亲水性基团的连接位点。在一些实施方案中，羰基旁边的
Figure BDA0003135424430000683
表示 -LD-D单元或亲水性基团的连接位点。在一些实施方案中，胺基旁边的
Figure BDA0003135424430000684
表 示-LD-D单元或亲水性基团的连接位点。在一些实施方案中，
Figure BDA0003135424430000685
和*中的一个 或两个表示一个或多个-LD-D单元或一个或多个亲水性基团的连接位点。
在一些实施方案中，肽部分包含至少两个AA单元，其提供两个连接 位点，例如，如下所示的半胱氨酸-丙氨酸：
Figure BDA0003135424430000686
其中
Figure BDA0003135424430000687
和*表示缀合物或其中间体内的连接位点。在一些实施方案中，*表示- LD-D单元或亲水性基团的连接位点。在一些实施方案中，
Figure BDA0003135424430000688
表示-LD-D单元 或亲水性基团的连接位点。
在一些实施方案中，肽部分的一个或多个AA单元(例如，氨基酸、氨 基醇、氨基醛或多胺)可以被如本文所述的任选取代的C1-20杂亚烷基(例如， 任选取代的C1-12杂亚烷基)、任选取代的C3-8杂环基、任选取代的C6-14亚芳 基或任选取代的C3-8碳环基替换。在一些实施方案中，任选取代的杂亚烷 基、杂环、亚芳基或碳环基可以具有一个或多个官能团，用于缀合物或其 中间体内的连接。在一些实施方案中，合适的取代基包括但不限于(＝O)、- R1C、-R1B、-OR1B、-SR1B、-N(R1B)2、-N(R1B)3、＝NR1B、C(R1C)3、CN、 OCN、SCN、N＝C＝O、NCS、NO、NO2、＝N2、N3、NR1BC(＝O)R1B、- C(＝O)R1B、-C(＝O)N(R1B)2、SO3 -、SO3H、S(＝O)2R1B、-OS(＝O)2OR1B、-S(＝O)2NR1B、-S(＝O)R1B、-OP(＝O)(OR1B)2、-P(＝O)(OR1B)2、PO3 -、PO3H2、 AsO2H2、C(＝O)R1B、C(＝O)R1C、C(＝S)R1B、CO2R1B、CO2-、C(＝S)OR1B、 C(＝O)SR1B、C(＝S)SR1B、C(＝O)N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2和C(＝NR1B)N(R1B)2， 其中每个R1C独立地是卤素(例如，-F、-Cl、-Br或-I)，并且每个R1B独立地 是-H、C1-20烷基、C6-20芳基、C3-14杂环、保护基或前药部分。
在一些实施方案中，杂亚烷基、杂环、亚芳基或碳环基的一个或多个 取代基选自(＝O)、R1C、R1B、OR1B、SR1B和N(R1B)2。
在一些实施方案中，肽部分可以是直链或支链部分：在一些实施方案 中，肽部分可以是具有下式的直链或支链部分：
Figure BDA0003135424430000691
其中：
每个BB’独立地是氨基酸、任选取代的C1-20杂亚烷基(例如，任选取代 的C1-12杂亚烷基)、任选取代的C3-8杂环基、任选取代的C6-14亚芳基或任 选取代的C3-8碳环基；
d12是1至10的整数；以及
Figure BDA0003135424430000692
表示缀合物或其中间体内的共价连接位点。
在一些实施方案中，d12是2至10的整数。
在一些实施方案中，d12是2至6的整数。
在一些实施方案中，d12是4、5或6的整数。
在一些实施方案中，d12是5或6的整数。
在一些实施方案中，d12是4。在一些实施方案中，d12是5。在一些实 施方案中，d12是6。
在一些实施方案中，任选取代的杂亚烷基、杂环、亚芳基或碳环基具 有用于BB’子单元之间的连接和/或用于本文公开的缀合物或其中间体内的 连接的官能团。
在一些实施方案中，肽部分包含不超过2个任选取代的C1-20杂亚烷基、 任选取代的C3-18杂环基、任选取代的C6-14亚芳基或任选取代的C3-8碳环基。
在一些实施方案中，肽部分包含2个任选取代的C1-20杂亚烷基、任选 取代的C3-18杂环基、任选取代的C6-14亚芳基或任选取代的C3-8碳环基。
在其他实施方案中，肽部分包含不超过1个任选取代的C1-20杂亚烷基、 任选取代的C3-18杂环基、任选取代的C6-14亚芳基或任选取代的C3-8碳环基。
在其他实施方案中，肽部分包含1个任选取代的C1-20杂亚烷基、任选 取代的C3-18杂环基、任选取代的C6-14亚芳基或任选取代的C3-8碳环基。
在其他实施方案中，任选取代的杂亚烷基、杂环、亚芳基或碳环基将 具有用于BB’子单元之间的连接和/或用于本文公开的缀合物或其中间体内 的连接的官能团。
在一些实施方案中，至少一个BB'是氨基酸。在一些实施方案中，氨基 酸可以是α-、β-或γ-氨基酸，其可以是天然或非天然的。该氨基酸可以是 D或L异构体。
在一些实施方案中，肽部分内的或与缀合物、其中间体或支架的其他 组分的连接可以例如经由氨基、羧基或其他官能团。在一些实施方案中， 肽部分内的或与缀合物的其他组分的连接可以例如经由氨基、羧基或其他 官能团。在一些实施方案中，肽部分的各氨基酸可以独立地是含巯基的氨 基酸的D或L异构体。在一些实施方案中，肽部分的各氨基酸可以独立地 是含巯基的氨基酸的D异构体。在一些实施方案中，肽部分的各氨基酸可 以独立地是含巯基的氨基酸的L异构体。含巯基的氨基酸可以为例如半胱 氨酸、高半胱氨酸或青霉胺。
在一些实施方案中，构成肽部分的各氨基酸可以独立地是以下氨基酸 的L-或D-异构体：丙氨酸(包括β-丙氨酸)、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、 半胱氨酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮 氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、色氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、 青霉胺、氨基链炔酸(aminoalkynoic acid)、氨基链烷二酸(aminoalkanedioic acid)、杂环基羧酸、瓜氨酸、施德丁(statme)、二氨基链烷酸、其立体异构 体(例如，异天冬氨酸和异谷氨酸)，或其衍生物。
在一些实施方案中，构成肽部分的各氨基酸独立地是半胱氨酸、高半 胱氨酸、青霉胺、鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、 丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、硒代半胱氨酸、脯氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、 亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丙氨酸或其立体异构体(例如，异天冬氨酸和 异谷氨酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含单肽、二肽、三肽、四肽或五肽。
在一些实施方案中，肽部分包含至少约五个氨基酸(例如，5、6、7、8、 9或10个氨基酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含最多约十个氨基酸。
在一些实施方案中，肽部分包含五肽。
在一些实施方案中，构成肽部分的各氨基酸独立地是甘氨酸、丝氨酸、 谷氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸。
在一些实施方案中，肽部分包含至少四个甘氨酸和至少一个丝氨酸， 例如(甘氨酸)4和丝氨酸，其中丝氨酸在沿着肽链的任何位置处，例如，(丝 氨酸)-(甘氨酸)4；(甘氨酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)3；(甘氨酸)2-(丝氨酸)-(甘氨 酸)2；(甘氨酸)3-(丝氨酸)-(甘氨酸)；或(甘氨酸)4-(丝氨酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)4-(丝氨酸)或(丝氨酸)-(甘氨 酸)4。在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)4-(丝氨酸)。在一些实施方案 中，肽部分包含(丝氨酸)-(甘氨酸)4。
在一些实施方案中，肽部分包含至少四个甘氨酸和至少一个谷氨酸， 例如(甘氨酸)4和谷氨酸，其中谷氨酸在沿着肽链的任何位置处，例如，(谷 氨酸)-(甘氨酸)4；(甘氨酸)-(谷氨酸)-(甘氨酸)3；(甘氨酸)2-(谷氨酸)-(甘氨 酸)2；(甘氨酸)3-(谷氨酸)-(甘氨酸)；或(甘氨酸)4-(谷氨酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含(谷氨酸)-(甘氨酸)4；或(甘氨酸)4-(谷氨 酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4-(丝氨酸)，其中 丝氨酸在沿着肽链的任何位置处，例如，(β-丙氨酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)4；(β-丙氨酸)-(甘氨酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)3；(β-丙氨酸)-(甘氨酸)2-(丝氨酸)-(甘 氨酸)2；(β-丙氨酸)-(甘氨酸)3-(丝氨酸)-(甘氨酸)；或(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4- (丝氨酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)4-(丝氨酸)-(谷氨酸)，其中丝 氨酸在沿着肽链的任何位置处，例如，(丝氨酸)-(甘氨酸)4-(谷氨酸)；(甘氨 酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)3-(谷氨酸)；(甘氨酸)2-(丝氨酸)-(甘氨酸)2-(谷氨酸)； (甘氨酸)3-(丝氨酸)-(甘氨酸)-(谷氨酸)；或(甘氨酸)4-(丝氨酸)-(谷氨酸)。在 一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4-(丝氨酸)-(谷氨酸)，其 中丝氨酸在沿着肽链的任何位置处，例如，(β-丙氨酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)4- (谷氨酸)；(β-丙氨酸)-(甘氨酸)-(丝氨酸)-(甘氨酸)3-(谷氨酸)；(β-丙氨酸)-(甘 氨酸)2-(丝氨酸)-(甘氨酸)2-(谷氨酸)；(β-丙氨酸)-(甘氨酸)3-(丝氨酸)-(甘氨 酸)-(谷氨酸)；或(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4-(丝氨酸)-(谷氨酸)。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)1-4-(丝氨酸)，其中：
肽部分通过一个甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过丝氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)1-4-(丝氨酸)，其中：
肽部分通过丝氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过甘氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000721
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)-(丝氨酸)，
其中：
肽部分通过甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过丝氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000731
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)4-(丝氨酸)，其中：
肽部分通过一个甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过丝氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000732
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(丝氨酸)-(甘氨酸)4，其中：
肽部分通过丝氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过一个甘氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000741
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000742
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)1-4-(丝氨酸)，其中：
肽部分通过β-丙氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过丝氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000743
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4-(丝氨酸)，
其中：
肽部分通过β-丙氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过丝氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过丝氨酸连接至LD(当存在时)。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000751
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)1-4-(丝氨酸)，
其中：
肽部分通过一个甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过谷氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)1-4-(谷氨酸，其中：
肽部分通过谷氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过甘氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000752
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)-(谷氨酸)，其中：
肽部分通过甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过谷氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000761
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(甘氨酸)4-(谷氨酸)，其中：
肽部分通过一个甘氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过谷氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000762
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(谷氨酸)-(甘氨酸)4，
其中：
肽部分通过谷氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过一个甘氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000771
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000772
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)1-4-(丝氨酸)，
其中：
肽部分通过β-丙氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过谷氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000781
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，肽部分包含(β-丙氨酸)-(甘氨酸)4-(谷氨酸)，
其中：
肽部分通过β-丙氨酸连接至L3(当存在时)，或LM(当L3不存在时)；
肽部分通过谷氨酸连接至T1(当存在时)；以及
肽部分通过谷氨酸连接至LD(当存在时)；
在一些实施方案中，肽部分包含
Figure BDA0003135424430000782
其中：
*表示与L3(当存在时)的连接，或与LM(当L3不存在时)的连接；
**表示与T1(当存在时)的连接，或与-OH(当T1不存在时)的连接；以 及
***表示与LD(当存在时)的连接，或与-OH(当LD不存在时)的连接。
在一些实施方案中，当至少一个亲水性基团(或T1)是多元醇或其衍生 物(例如，氨基多元醇)、葡糖基胺、二葡糖基胺或三葡糖基胺时，MA不必 包含肽部分，例如MA包含如本文针对LM所列的那些多臂接头。在一些实 施方案中，MA包含以下中的一个或多个：
Figure BDA0003135424430000791
Figure BDA0003135424430000792
以及
Figure BDA0003135424430000793
其中：
Figure BDA0003135424430000794
表示本公开的缀合物或其中间体内的连接位点；并且R100和R110如本 文所定义。
在一些实施方案中，R110是：
Figure BDA0003135424430000795
Figure BDA0003135424430000801
其中*表示与标记为x的碳的连接，且
Figure BDA0003135424430000802
表示三个连接位点之一。
在一些实施方案中，R100独立地选自氢和CH3。
在一些实施方案中，R100独立地是氢。在一些实施方案中，R100独立地 是CH3。
在一些实施方案中，Y是N。在一些实施方案中，Y是CH。
在一些实施方案中，R100是H或CH3。在一些实施方案中，R100是H。 在一些实施方案中，R100是CH3。
在一些实施方案中，各c’独立地是1至3的整数。
在一些实施方案中，R110不是
Figure BDA0003135424430000803
LD和WD在一些实施方案中，LD的每次出现独立地是将D连接至MA的二价接头部分，并包含至少一个可裂解的键，使得当该键断裂时，D以 活性形式释放以用于其预期治疗效果。
在一些实施方案中，LD是可释放组装单元的组分。在其他实施方案中， LD是可释放组装单元。
在一些实施方案中，LD包含一个可裂解键。
在一些实施方案中，LD包含多个可裂解位点或键。
在一些实施方案中，用于形成可裂解键的官能团可以包括，例如，用 于形成二硫键的巯基、用于形成腙键的醛、酮或肼基团、用于形成肟键的 羟基胺基团、用于形成肽键的羧基或氨基、用于形成酯键的羧基或羟基， 以及用于形成糖苷键的糖。在一些实施方案中，LD包含可通过二硫化物交 换裂解的二硫键、可在酸性pH下裂解的酸不稳定键，和/或可通过水解酶 (例如，肽酶、酯酶和葡萄糖醛酸酶)裂解的键。在一些实施方案中，LD包 含氨基甲酸酯键(即，-O-C(O)-NR-，其中R是H或烷基等等)。
在一些实施方案中，LD中的可裂解键的结构和顺序可以使得该键通过 存在于靶位点处的酶的作用进行裂解。在其他实施方案中，可裂解键可通 过其他机制进行裂解。
在一些实施方案中，LD中的可裂解键的结构和顺序可以使得该键通过 存在于靶位点处的酶的作用进行裂解。在其他实施方案中，可裂解键可通 过其他机制进行裂解。
在一些实施方案中，可裂解键可以通过一种或更多种酶(包括肿瘤相关 蛋白酶)酶促裂解，以释放药物单元或D，其中本公开的缀合物、或中间体、 或其支架在释放后在体内质子化以提供药物单元或D。
在一些实施方案中，LD可包含一个或多个氨基酸。在一些实施方案中， LD中的各氨基酸可以是天然或非天然的和/或D-或L-异构体，条件是存在 可裂解键。在一些实施方案中，LD包含α-、β-或γ-氨基酸，其可以是天然 或非天然的。在一些实施方案中，LD以连续顺序包含1至12个(例如，1至 6个，或1至4个，或1至3个，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 或12个)氨基酸。
在一些实施方案中，LD可以仅包含天然氨基酸。在一些实施方案中， LD可以仅包含非天然氨基酸。在一些实施方案中，LD可以包含与非天然氨 基酸连接的天然氨基酸。在一些实施方案中，LD可以包含与天然氨基酸的 D-异构体连接的天然氨基酸。在一些实施方案中，LD包含二肽，例如-Val- Cit-、-Phe-Lys-或-Val-Ala-。
在一些实施方案中，LD包含单肽、二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、 七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元。
在一些实施方案中，LD包含肽(例如，1至12个氨基酸的肽)，其与药 物单元直接缀合。在一些此类实施方案中，所述肽为单一氨基酸或二肽。 在一些此类实施方案中，所述肽为单一氨基酸。在一些此类实施方案中， 所述肽为二肽。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸独立地选自丙氨酸、β-丙氨酸、 精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯 丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、 色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硒代半胱氨酸、鸟氨酸、青霉胺、 氨基链烷酸、氨基链炔酸、氨基链烷二酸、氨基苯甲酸、氨基杂环基链烷 酸、杂环基羧酸、瓜氨酸、施德丁、二氨基链烷酸及其衍生物。
在一些实施方案中，每个氨基酸独立地选自丙氨酸、β-丙氨酸、精氨 酸、天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨 酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色 氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、瓜氨酸和硒代半胱氨酸。
在一些实施方案中，各氨基酸独立地选自丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、 天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、 赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、 缬氨酸、瓜氨酸及其衍生物。
在一些实施方案中，各氨基酸选自蛋白氨基酸或非蛋白氨基酸。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸可以独立地选自以下氨基酸的L- 或D-异构体：丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、半胱氨 酸、组氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、 甲硫氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨酸、色氨酸、脯氨酸、鸟氨酸、青霉胺、 氨基链炔酸、氨基链烷二酸、杂环基羧酸、瓜氨酸、施德丁、二氨基链烷 酸、缬氨酸、瓜氨酸及其衍生物。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸独立地是半胱氨酸、高半胱氨酸、 青霉胺、鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、 天冬氨酸、谷氨酸、硒代半胱氨酸、脯氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、 甲硫氨酸、缬氨酸、瓜氨酸或丙氨酸。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸独立地选自以下氨基酸的L-异构 体：丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘氨酸、 谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨 酸、异亮氨酸、色氨酸、瓜氨酸和缬氨酸。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸独立地选自以下氨基酸的D-异构 体：丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘氨酸、 谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、苏氨 酸、异亮氨酸、色氨酸、瓜氨酸和缬氨酸。
在一些实施方案中，LD中的每个氨基酸独立地是以下氨基酸的L或D- 异构体：丙氨酸、β-丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、组氨酸、甘 氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丝氨酸、酪氨酸、 苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、瓜氨酸或缬氨酸。
在一些实施方案中，LD中的各氨基酸是丙氨酸、β-丙氨酸、谷氨酸、 异谷氨酸、异天冬氨酸、缬氨酸、瓜氨酸或天冬氨酸。
在一些实施方案中，LD包含β-丙氨酸。在一些实施方案中，LD包含(β- 丙氨酸)-(丙氨酸)。在一些实施方案中，LD包含(β-丙氨酸)-(谷氨酸)。在一 些实施方案中，LD包含(β-丙氨酸)-(异谷氨酸)。在一些实施方案中，LD包 含(β-丙氨酸)-(天冬氨酸)。在一些实施方案中，LD包含(β-丙氨酸)-(异天冬 氨酸)。在一些实施方案中，LD包含(β-丙氨酸)-(缬氨酸)。在一些实施方案 中，LD包含(β-丙氨酸)-(缬氨酸)-(丙氨酸)。在一些实施方案中，LD包含(β- 丙氨酸)-(丙氨酸)-(丙氨酸)。在一些实施方案中，LD包含(β-丙氨酸)-(缬氨 酸)-(瓜氨酸)。
在一些实施方案中，除了一个或更多个氨基酸以外，LD包含氨基甲酸 酯键。
在一些实施方案中，LD可以经设计和优化对于通过特定的酶进行酶促 裂解的选择性。在一些实施方案中，特定的酶是肿瘤相关蛋白酶。
在一些实施方案中，LD包含其裂解通过组织蛋白酶B、C和D或胞浆 素蛋白酶催化的键。
在一些实施方案中，LD包含糖可裂解位点。在一些实施方案中，LD包 含经由氧糖苷键连接至自牺牲(self-immolative)基团的糖部分(Su)。在一些实 施方案中，“自牺牲基团”可以是能够将三个间隔的化学部分(即，糖部分(经 由糖苷键)、药物单元(直接或间接)和MA(直接或间接))共价连接在一起的 三官能化学部分。在一些实施方案中，糖苷键可以在靶位点处裂解以引发 导致药物释放的自牺牲反应次序。
在一些实施方案中，LD包含具有下式的经由糖苷键(-O′-)连接至自牺牲 基团(K)的糖部分(Su)：
Figure BDA0003135424430000841
其中自牺牲基团(K)与药物单元(直接或间接)形成共价键 并还与MA(直接或间接)形成共价键。在一些实施方案中，自牺牲基团的实 例描述于例如WO 2015/057699中，其内容通过引用以其全部由此并入。
在一些实施方案中，当不连接至药物或在连接至药物之前，LD包含官 能团WD。在一些实施方案中，每个WD可独立地是针对WP所列的官能团。 在一些实施方案中，每个WD独立地是
Figure BDA0003135424430000842
Figure BDA0003135424430000851
其中R1A是硫保护基，环A和环B中的每一个独立地是环烷基或杂环 烷基；RW是脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分；环D是杂环烷基；R1J是氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分；并且R1K是离去基团(例如， 卤化物或RC(O)O-，其中R是氢、脂族、杂脂族、碳环或杂环烷基部分)。
在一些实施方案中，WD是
Figure BDA0003135424430000861
在一些实施方案中，WD是
Figure BDA0003135424430000862
其中Xa和Xb中的一个是H，且 另一个是马来酰亚胺基封闭部分。
在一些实施方案中，WD是
Figure BDA0003135424430000863
治疗剂、药物单元或D
在一些实施方案中，治疗剂是分子量≤约5kDa的小分子。在一些实施 方案中，治疗剂是分子量≤约4kDa的小分子。在一些实施方案中，治疗剂 是分子量≤约3kDa的小分子。在一些实施方案中，治疗剂是分子量≤约 1.5kDa的小分子。在一些实施方案中，治疗剂是分子量≤约1kDa的小分子。
在一些实施方案中，治疗剂具有约小于1nM的IC50。在一些实施方案 中，治疗剂具有小于1nM的IC50。
在一些实施方案中，治疗剂具有约大于1nM的IC50，例如，治疗剂具 有约1至50nM的IC50。
在一些实施方案中，治疗剂具有约大于1nM的IC50。在一些实施方案 中，治疗剂具有约1至50nM的IC50。
在一些实施方案中，治疗剂具有大于1nM的IC50，例如，治疗剂具有 1至50nM的IC50。
在一些实施方案中，治疗剂具有大于1nM的IC50。在一些实施方案中， 治疗剂具有1至50nM的IC50。
在一些实施方案中，一些具有大于约1nM的IC50的治疗剂(例如，“不 太有效的药物”)不适于使用本领域公认的缀合技术与抗体缀合。不希望受理 论束缚，此类治疗剂的效力对于使用常规技术用于靶向抗体-药物缀合物而 言是不充分的，因为药物的足够拷贝(即，超过8)不能使用本领域公认的技 术缀合，而不导致缀合物的减少的药代动力学和生理化学性质。然而这些 不太有效的药物的足够高的载荷可以使用本文描述的缀合策略实现，从而 导致高载荷的治疗剂，同时维持合意的药代动力学和生理化学性质。因此， 本公开还涉及包括抗体、支架和至少八个治疗剂部分的抗体-药物缀合物， 其中治疗剂具有大于约1nM的IC50。
在本公开中使用的小分子治疗剂(例如，能够经由本公开的接头连接至 靶向部分的抗增殖(细胞毒性和抑制细胞)剂)包括细胞毒性化合物(例如，广 谱)、血管生成抑制剂、细胞周期进展抑制剂、PI3K/m-TOR/AKT通路抑制 剂、MAPK信号传导通路抑制剂、激酶抑制剂、蛋白质伴侣抑制剂、 HDAC抑制剂、PARP抑制剂、烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂、微管溶素、免疫调节化合物、Wnt/Hedgehog信号传导通路抑制剂和RNA 聚合酶抑制剂。
广谱细胞毒素包括，但不限于DNA-结合、嵌入或烷基化药物、微管稳 定剂和去稳定剂、铂化合物、拓扑异构酶I抑制剂和蛋白质合成抑制剂。
示例性DNA-结合、嵌入或烷基化药物包括CC-1065及其类似物、蒽 环类抗生素(阿霉素、表柔比星、伊达比星、柔红霉素、奈莫柔比星及其衍 生物、PNU-159682)、双萘二甲酰亚胺(bisnapththalimide)化合物，例如依利 萘法德(LU79553)及其类似物、烷基化剂，例如卡奇霉素、放线菌素D、丝 裂霉素、吡咯并苯并二氮杂草等等。示例性CC-1065类似物包括倍癌霉素 SA、倍癌霉素A、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素B1、倍癌霉素 B2、倍癌霉素D、DU-86、KW-2189、阿多来新、比折来新、卡折来新、 裂环-阿多来新，和相关的类似物和前药形式，其实例描述于美国专利号 5,475,092；5,595,499；5,846,545；6,534,660；6,586,618；6,756,397；和 7,049,316中。阿霉素及其类似物包括描述于美国专利号6,630,579中的那些。 卡奇霉素包括，例如烯二炔类，例如埃斯波霉素，和描述于美国专利号 5,714,586和5,739,116中的那些。倍癌霉素包括美国专利号5,070,092；5,101,038；5,187,186；6,548,530；6,660,742；和7,553,816 B2；以及Li等 人，Tet Letts.，50：2932-2935(2009)中描述的那些。
吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000881
(PBD)及其类似物包括Denny，Exp.Opin.Ther. Patents.，10(4)：459-474(2000)以及Antonow和Thurston，Chem Rev.，2815- 2864(2010)中描述的那些。
示例性微管稳定剂和去稳定剂包括紫杉烷化合物，例如紫杉醇、多西 他赛、替司他赛和卡巴兹它赛(carbazitaxel)；类美登素、奥瑞他汀及其类似 物、长春花生物碱衍生物、埃坡霉素和念珠藻环肽。
示例性类美登素或类美登素类似物包括美登醇和美登醇类似物，美登 素或DM-1和DM-4为描述于美国专利号5,208,020；5,416,064；6,333.410； 6,441,163；6,716,821；RE39,151；和7,276,497中描述的那些。在一些实施 方案中，细胞毒性剂为类美登素，另一组抗微管蛋白剂(ImmunoGen，Inc.； 还参见Chari等人，1992，Cancer Res.52：127-131)，类美登素或类美登素类似 物。合适的类美登素的实例包括美登醇和美登醇类似物。合适的类美登素 在美国专利号4,424,219；4,256,746；4,294,757；4,307,016；4,313,946； 4,315,929；4,331,598；4,361,650；4,362,663；4,364,866；4,450,254； 4,322,348；4,371,533；6,333,410；5,475,092；5,585,499；和5,846,545中公 开。
示例性奥瑞他汀包括奥瑞他汀E(也称为多拉司他汀-10的衍生物)、奥 瑞他汀EB(AEB)、奥瑞他汀EFP(AEFP)、单甲基奥瑞他汀E(MMAE)、单 甲基奥瑞他汀F(MMAF)、奥瑞他汀F、奥瑞他汀F苯二胺(AFP)、奥瑞他 汀F羟丙基酰胺(AF-HPA)、单甲基奥瑞他汀F羟丙基酰胺(MMAF-HPA)和 多拉司他汀。合适的澳瑞他汀也描述于美国公开号2003/0083263、 2011/0020343和2011/0070248；PCT申请公开号WO 09/117531、WO 2005/081711、WO 04/010957；WO 02/088172；和WO 01/24763，以及美国 专利号7,498,298；6,884,869；6,323,315；6,239,104；6,124,431；6,034,065； 5,780,588；5,767,237；5,665,860；5,663,149；5,635,483；5,599,902； 5,554,725；5,530,097；5,521,284；5,504,191；5,410,024；5,138,036；5,076,973；4,986,988；4,978,744；4,879,278；4,816,444；和4,486,414中， 这些专利的公开内容全文以引用的方式并入本文。
示例性长春花生物碱类包括长春新碱、长春碱、长春地辛和诺维本(长 春瑞滨)。可以在本公开中使用的合适的长春花生物碱类还公开于美国公开 号2002/0103136和2010/0305149，以及美国专利号7,303,749 B1中，其公 开内容通过引用以其全部并入本文。
示例性埃坡霉素化合物包括埃坡霉素A、B、C、D、E和F，及其衍生 物。合适的埃坡霉素化合物及其衍生物描述于，例如，美国专利号 6,956,036；6,989,450；6,121,029；6,117,659；6,096,757；6,043,372； 5,969,145；和5,886,026；和WO 97/19086；WO 98/08849；WO98/22461； WO 98/25929；WO 98/38192；WO 99/01124；WO 99/02514；WO 99/03848； WO 99/07692；WO 99/27890；和WO 99/28324中；这些专利的公开内容全 文以引用的方式并入本文。
示例性念珠藻环肽化合物描述于美国专利号6,680,311和6,747,021中。
示例性铂化合物包括顺铂
Figure BDA0003135424430000891
卡铂
Figure BDA0003135424430000892
奥 沙利铂
Figure BDA0003135424430000893
异丙铂、奥马铂和四铂。
可以选择另外的其他种类的化合物或具有这些或其他细胞毒性的作用 模式的化合物，包括，例如丝裂霉素C、丝裂霉素A、柔红霉素、多柔比 星、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、氨基蝶呤、博来霉素、1- (氯甲基)-2，3-二氢-1H-苯并[e]吲哚-5-醇、吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000894
(PBD)聚酰胺 及其二聚体。其他合适的细胞毒性剂包括，例如，嘌呤霉素、托泊替康、 根霉素、棘霉素、风车子抑碱、纺锤菌素、雌莫司汀、念珠藻环肽、西马 多丁、淅皮海绵内酯、艾榴素和米托蒽醌。
示例性拓扑异构酶I抑制剂包括喜树碱、喜树碱衍生物、喜树碱类似物 和非天然喜树碱，例如，CPT-11(伊立替康)、SN-38、GI-147211C、托泊替 康、9-氨基喜树碱、7-羟甲基喜树碱、7-氨甲基喜树碱、10-羟基喜树碱、 (20S)-喜树碱、卢比替康、吉马替康、卡瑞尼特辛(karenitecin)、席拉替康 (silatecan)、勒托替康、依沙替康、二氟替康、贝洛替康、勒托替康和 S39625。可以在本公开中使用的其他喜树碱化合物包括在例如，J.Med. Chem.，29：2358-2363(1986)；J.Med.Chem.，23：554(1980)；J.Med.Chem.， 30：1774(1987)中描述的那些。
血管生成抑制剂包括，但不限于MetAP2抑制剂、VEGF抑制剂、 PIGF抑制剂、VEGFR抑制剂、PDGFR抑制剂、MetAP2抑制剂。示例性VEGFR和PDGFR抑制剂包括索拉非尼(Nexavar)、舒尼替尼(Sutent)和伐他 拉尼。示例性MetAP2抑制剂包括烟曲霉醇(fumagillol)类似物，表示包括夫 马洁林核结构的任何化合物，包括烟曲霉胺(fumagillamine)，其抑制 MetAP-2将NH2-末端甲硫氨酸从蛋白质中除去的能力，如于Rodeschini等 人，J.Org.Chem.，69，357-373，2004和Liu等人，Science 282，1324-1327，1998 中所述。“烟曲霉醇类似物”的非限制性实例在J.Org.Chem.，69，357，2004；J.Org.Chem.，70，6870，2005；欧洲专利申请0 354 787；J.Med.Chem.，49， 5645，2006；Bioorg.Med.Chem.，11，5051，2003；Bioorg.Med.Chem.，14，91， 2004；Tet.Lett.40，4797，1999；WO99/61432；美国专利号6,603,812； 5,789,405；5,767,293；6,566,541；和6,207,704中公开。
示例性细胞周期进展抑制剂包括CDK抑制剂，例如，BMS-387032和 PD0332991；Rho-激酶抑制剂，例如GSK429286；检查点激酶抑制剂，例 如，AZD7762；极光激酶抑制剂，例如，AZD1152、MLN8054和 MLN8237；PLK抑制剂，例如，BI 2536，BI6727(伏拉塞替(Volasertib))、 GSK461364、ON-01910(Estybon)；和KSP抑制剂，例如，SB 743921、SB715992(伊匹尼塞)、MK-0731、AZD8477、AZ3146和ARRY-520。
示例性PI3K/m-TOR/AKT信号传导通路抑制剂包括磷酸肌醇3-激酶 (PI3K)抑制剂、GSK-3抑制剂、ATM抑制剂、DNA-PK抑制剂和PDK-1抑 制剂。
示例性PI3激酶抑制剂公开于美国专利号6,608,053中，并包括 BEZ235、BGT226、BKM120、CAL101、CAL263、脱甲绿胶酶素、GDC- 0941、GSK615、IC87114、LY294002、Palomid529、哌立福辛、PI-103、 PF-04691502、PX-866、SAR245408、SAR245409、SF1126、渥曼青霉素、 XL147和XL765。
示例性AKT抑制剂包括，但不限于AT7867。
示例性MAPK信号传导通路抑制剂包括MEK、Ras、JNK、B-Raf和 p38 MAPK抑制剂。
示例性MEK抑制剂公开于美国专利号7,517,994中，并包括GDC- 0973、GSK1120212、MSC1936369B、AS703026、RO5126766和 RO4987655、PD0325901、AZD6244、AZD8330以及GDC-0973。
示例性B-raf抑制剂包括CDC-0879，PLX-4032和SB590885。
示例性B p38 MAPK抑制剂包括BIRB 796、LY2228820和SB 202190。
受体酪氨酸激酶(RTK)是细胞表面受体，其经常与信号传导通路有关， 所述信号传导通路刺激癌细胞的不受控制的增殖和新血管生成。已经鉴定 出许多RTK，其过度表达或具有突变而导致受体的组成性活化，包括但不 限于VEGFR、EGFR、FGFR、PDGFR、EphR和RET受体家族受体。示例 性的特异性RTK靶包括ErbB2、FLT-3、c-Kit和c-Met。
示例性ErbB2受体(EGFR家族)的抑制剂包括，但不限于AEE788 (NVP-AEE 788)、BIBW2992(阿法替尼)、拉帕替尼、厄洛替尼(得舒缓 (Tarceva))和吉非替尼(易瑞沙(Iressa))。
示例性的靶向多于一个信号传导通路的RTK抑制剂(多靶标激酶抑制剂) 包括AP24534(泊那替尼)，其靶向FGFR、FLT-3、VEGFR-PDGFR和Bcr- Abl受体；ABT-869(里尼凡尼(Linifanib))，其靶向FLT-3和VEGFR- PDGFR受体；AZD2171，其靶向VEGFR-PDGFR、Flt-1和VEGF受体； CHR-258(多韦替尼)，其靶向VEGFR-PDGFR、FGFR、Flt-3和c-Kit受体； 舒尼替尼(Sutent)，其靶向VEGFR、PDGFR、KIT、FLT-3和CSF-IR；索 拉非尼(Nexavar)和伐他拉尼，其靶向VEGFR、PDGFR以及在Raf/Mek/Erk 通路中的细胞内丝氨酸/苏氨酸激酶。
示例性蛋白质伴侣抑制剂包括HSP90抑制剂。示例性HSP90抑制剂包 括17AAG衍生物、BIIB021、BIIB028、SNX-5422、NVP-AUY-922和KW- 2478。
示例性HDAC抑制剂包括贝林司他(Belinostat)(PXD101)、CUDC-101、 佐西司他(Droxinostat)、ITF2357(奇维司他(Givinostat)、加维司他 (Gavinostat))、JNJ-26481585、LAQ824(NVP-LAQ824、达西司他 (Dacinostat))、LBH-589(帕比司他)、MC1568、MGCD0103(莫西司他 (Mocetinostat))、MS-275(恩替司他(Entinostat))、PCI-24781、Pyroxamide (NSC 696085)、SB939、曲古抑菌素A和伏立诺他(SAHA)。
示例性PARP抑制剂包括依尼帕尼(iniparib)(BSI 201)、奥拉帕尼 (olaparib)(AZD-2281)，ABT-888(凡立帕尼(Veliparib))、AG014699、CEP 9722、MK 4827、KU-0059436(AZD2281)、LT-673、3-氨基苯甲酰胺、A- 966492和AZD2461。
示例性NAMPT抑制剂包括FK866(APO866)和CHS828、GPP78、 GMX1778(CHS828)、STF-118804、STF-31、CB 300919、CB 30865、 GNE-617、IS001、TP201565、Nampt-IN-1、P7C3、MPC-9528、CB30865、 MPI0479883以及(E)-N-(5-((4-(((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)(异丙基)氨基)甲基)苯 基)氨基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺。
示例性Wnt/Hedgehog信号传导通路抑制剂包括维莫德吉(vismodegib) (RG3616/GDC-0449)、环巴胺(11-去氧芥芬胺)(Hedgehog通路抑制剂)和 XAV-939(Wnt通路抑制剂)。
示例性RNA聚合酶抑制剂包括鹅膏蕈毒素。示例性鹅膏毒素包括α-鹅 膏毒环肽、β-鹅膏毒环肽、γ-鹅膏毒环肽、ε-鹅膏毒环肽、鹅膏无毒环肽、 鹅膏毒肽羧酸(amanullicacid)、鹅膏毒肽酰胺(amaninamide)、鹅膏素和鹅膏 无毒环肽原(proamanullin)。
示例性的蛋白质合成抑制剂包括单端孢霉烯化合物。
在一些实施方案中，所述药物是拓扑异构酶抑制剂(例如，非天然喜树 碱化合物)、长春花生物碱、激酶抑制剂(例如，PI3激酶抑制剂(GDC-0941 和PI-103))、MEK抑制剂、KSP抑制剂、RNA聚合酶抑制剂、蛋白质合成 抑制剂、PARP抑制剂、NAMPT抑制剂、微管溶素、免疫调节化合物、多 西他赛、紫杉醇、多柔比星、倍癌霉素、奥瑞他汀、多拉司他汀、卡奇霉素、托泊替康、SN38、喜树碱、依沙替康、奈莫柔比星及其衍生物、PNU- 159682、CC1065、依利萘法德、单端孢霉烯、吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000921
类美 登素、DNA-结合药物或铂化合物，及其类似物。在特定的实施方案中，所 述药物为SN-38的衍生物、喜树碱、托泊替康、依沙替康、卡奇霉素、奈 莫柔比星、PNU-159682、蒽环类抗生素、类美登素、紫杉烷、单端孢霉烯、CC1065、依利萘法德、长春地辛、长春碱、PI-103、AZD 8330、多拉司他 汀、奥瑞他汀E、奥瑞他汀F、倍癌霉素化合物、伊匹尼塞、吡咯并苯并二 氮杂
Figure BDA0003135424430000922
ARRY-520及其立体异构体、等排物和类似物。
在一些实施方案中，药物是(a)澳瑞他汀化合物；(b)加利车霉素化合物； (c)倍癌霉素化合物；(d)SN38，(e)吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000923
(f)长春花化合物； (g)微管溶素化合物；(h)非天然喜树碱化合物；(i)美登木素化合物；(j)DNA 结合药物；(k)激酶抑制剂；(l)MEK抑制剂；(m)KSP抑制剂；(n)拓扑异构 酶抑制剂；(o)DNA烷基化药物；(p)RNA聚合酶；(q)PARP抑制剂；(r) NAMPT抑制剂；(s)拓扑异构酶抑制剂；(t)蛋白质合成抑制剂；(u)DNA结合药物；(v)DNA嵌入药物；或(w)免疫调节化合物的衍生物。
在一些实施方案中，药物是澳瑞他汀化合物的衍生物。在一些实施方 案中，药物是加利车霉素化合物的衍生物。在一些实施方案中，药物是倍 癌霉素化合物的衍生物。在一些实施方案中，药物是SN38的衍生物。在一 些实施方案中，药物是吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430000931
的衍生物。在一些实施方案中， 药物是长春花化合物的衍生物。在一些实施方案中，药物是微管溶素化合 物的衍生物。在一些实施方案中，药物是非天然喜树碱化合物的衍生物。 在一些实施方案中，药物是美登木素化合物的衍生物。在一些实施方案中， 药物是DNA结合药物的衍生物。在一些实施方案中，药物是激酶抑制剂的 衍生物。在一些实施方案中，药物是MEK抑制剂的衍生物。在一些实施方 案中，药物是KSP抑制剂的衍生物。在一些实施方案中，药物是拓扑异构 酶抑制剂的衍生物。在一些实施方案中，药物是DNA烷基化药物的衍生物。在一些实施方案中，药物是RNA聚合酶的衍生物。在一些实施方案中，药 物是PARP抑制剂的衍生物。在一些实施方案中，药物是NAMPT抑制剂 的衍生物。在一些实施方案中，药物是拓扑异构酶抑制剂的衍生物。在一 些实施方案中，药物是蛋白质合成抑制剂的衍生物。在一些实施方案中， 药物是DNA结合药物的衍生物。在一些实施方案中，药物是DNA嵌入药 物的衍生物。在一些实施方案中，药物是免疫调节化合物的衍生物。
在一些实施方案中，在本公开中使用的药物是两种或更多种药物的组 合，诸如，例如PI3激酶抑制剂和MEK抑制剂；广谱细胞毒性化合物和铂 化合物；PARP抑制剂、NAMPT抑制剂和铂化合物；广谱细胞毒性化合物 和PARP抑制剂。
在另外一些实施方案中，本公开中使用的药物是奥瑞他汀F-羟丙基酰 胺-L-丙氨酸。
在一些实施方案中，长春花生物碱是式(V1)的化合物：
Figure BDA0003135424430000941
其中：
R14是氢、-C(O)-C1-3烷基或-C(O)-氯取代的C1-3烷基；
R15是氢、-CH3或-CHO；
当独立考虑R17和R18时，R18是氢，并且R16或R17的任一个是乙基， 另一个是羟基；
当R17和R18与它们连接的碳在一起以形成环氧环时，R16是乙基；
R19是-H、OH、氨基基团、C1-8烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R20和R21中的每一个独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是氢或X2和NR77形成含氮的杂环部分；
R82是-NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
长春花生物碱的其他实例描述于US8524214B2和US 2002/0103136中。
在一些实施方案中，式(V1)的长春花生物碱是式(VI1)的化合物：
Figure BDA0003135424430000951
其中：
R40是氢、-OH、-NH2或下列结构中的任何种：
Figure BDA0003135424430000952
Figure BDA0003135424430000961
其中：
a是1至6的整数；
g是2至6的整数；以及
c是0至3的整数。
在一些实施方案中，在式(VI1)中，R40是
Figure BDA0003135424430000962
Figure BDA0003135424430000963
Figure BDA0003135424430000971
在一些实施方案中，R40是
Figure BDA0003135424430000972
在一些实施方案中，R40是
Figure BDA0003135424430000973
在一些实施方案中，R40是
Figure BDA0003135424430000974
在一些实施方案中，R40是
Figure BDA0003135424430000975
在一些实施方案中，式(VI1)的化合物是式(VIa)、(VIb)、(VIc)、(VId)、 (VIe)或(VIf)的化合物：
Figure BDA0003135424430000976
Figure BDA0003135424430000981
Figure BDA0003135424430000991
在一些实施方案中，拓扑异构酶抑制剂为式(VII1)的喜树碱化合物：
Figure BDA0003135424430001001
其中：
R24是-H、-Cl、-F、-OH或烷基；或R24和R25可在一起以形成任选取 代的五或六元环；
R25是-H、-F、-OH、-CH3、-CH＝N-O-叔丁 基、-CH2CH2Si(CH3)3、-Si((CH3)2)-叔丁基或-O-C(O)-R29；
R29是-NH2、-R28-C1-6烷基-R22、5至12元杂环烷基、R28-C5-12杂环烷 基-C1-6烷基-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳基-C1-6烷基-R22；或R29是如本文所 定义的R47；
R26是-H、-CH2-N(CH3)2、NH2或NO2；
R27是-H、乙基、N-甲基哌啶、环烷 基、-CH2OH、-CH2CH2NHCH(CH3)2或-N-4-甲基环己胺；
R79是-H或-C(O)-R28-[C(R20R21)]a-R22；
R20和R21中的每一个独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
或者R26和R27当与它们连接的两个碳原子以及连接该两个碳原子的第 三个碳原子在一起时，形成任选取代的六元环；
R28不存在，是NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；
f是1至12的整数；
u是0或1的整数；以及
w是0或1的整数；
前提是式(VII1)的化合物必须含有R29和R79中的至少一个。
在一些实施方案中，式(VII1)的喜树碱化合物为式(VIII1)、(VIIIa)或 (VIIIb)，或式(XXV)或(XXVa)的化合物：
Figure BDA0003135424430001011
Figure BDA0003135424430001021
其中：
R30是-NH2、-R28-[C(R20R21)]a-R22、-R28-C1-6烷基-R22、5至12元杂环烷 基、R28-C5-12杂环烷基-C1-6烷基-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳基-C1-6烷基-R22；
R28不存在，是NR23或氧；
R20和R21中的每一个独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NR23)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，R30是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001031
Figure BDA0003135424430001032
以及
Figure BDA0003135424430001033
其中：
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；以及
g是2至6的整数。
在一个实施方案中，在式(VII1)中，R30是：
Figure BDA0003135424430001041
在一些实施方案中，式(VII1)的化合物是式(VIIa)、(VIIb)、(VIIc)、 (VIId)、(VIIe)、(VIIf)、(VIIg)、(VIIh)、(VIIi)或(VIIj)的化合物：
Figure BDA0003135424430001042
Figure BDA0003135424430001051
Figure BDA0003135424430001061
Figure BDA0003135424430001071
在一些实施方案中，PI3激酶抑制剂为式(IX1)的化合物：
Figure BDA0003135424430001072
其中
R47是氨基基团、-R9-[C(R20R21)]a-R10、-R9-C5-12杂环烷基-C1-6烷基-R10、 5元至12元杂环烷基或-R9-C6-10芳基；
R20和R21中的每一个独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R10是-OH、-NHR83、-N-(R83)R11、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c- C(H)(R23)-N(H)(R23)、-R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)、-R82-(C(O)- CH(X2)-NH)d-R77或-R82-C(O)-[C(R20R21)]a-R82-R83；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
R9不存在，是N-(R83)或氧；
R83是-H或CH3；以及
R11是：
Figure BDA0003135424430001081
每个R12独立地是氢、氯化物、-CH3或-OCH3；
R13是-H或-C(O)-(CH2)d-(O-CH2-CH2)f-NH2；
R82是-NR23或氧；
X4是赖氨酸、精氨酸、瓜氨酸、丙氨酸或甘氨酸的侧链；
X5是苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或色氨酸的侧链；
每个X6和X7独立地是甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸或脯氨酸的 侧链；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；
f是1至12的整数；以及
各u独立地是0或1的整数；
或R11是-Yu-Wq-R88，
其中：
Y是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001082
在其每一个中，Y的末端NR83基团邻近于R88；
R83是-H或CH3；
每个W是氨基酸单元；
每个R12’独立地是卤素、-C1-8烷基、-O-C1-8烷基、硝基或氰基；
R88是-H或-C(O)-(CH2)ff-(NH-C(O))aa-E-(CH2)bb-R85；
R85是NH2或OH；
E是-CH2-或-CH2CH2O-；
u是0或1的整数；
q是0至12的整数；
aa是0或1的整数；
bb是0或2的整数；
ff是0至10的整数；
h是0至4的整数；
j是0至12的整数；以及
当E是-CH2-时，bb为0，j为0至10的整数；并且当E是-CH2CH2-O-时， bb为2，j为1至12的整数；
或R11是：
Figure BDA0003135424430001091
其中：
R83是-H或CH3；
R84是C1-6烷基或C6-10芳基；
每个R12’独立地是卤素、-C1-8烷基、-O-C1-8烷基、硝基或氰基；
h是0至4的整数；以及
u是0或1的整数。
在一些实施方案中，R11是：
Figure BDA0003135424430001101
其中：
每个R12独立地是氯化物、-CH3或-OCH3；
R88是-H或-C(O)-(CH2)ff-(CH2-CH2O)j-CH2-CH2-NH2；
R82是-NR23或氧；
X4是赖氨酸、精氨酸、瓜氨酸、丙氨酸或甘氨酸的侧链；
X5是苯丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或色氨酸的侧链；
每个X6和X7独立地是甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、缬氨酸或脯氨酸的 侧链；
ff是1至3的整数；
j是1至12的整数；
h是0至4的整数；以及
各u独立地是0或1的整数。
在一些实施方案中，
Figure BDA0003135424430001102
是 瓜氨酸-缬氨酸；赖氨酸-苯丙氨酸；瓜氨酸-苯丙氨酸；瓜氨酸-亮氨酸；瓜 氨酸-缬氨酸-甘氨酸-甘氨酸；甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸-甘氨酸；缬氨酸； 脯氨酸；亮氨酸；或异亮氨酸。
在一些实施方案中，R11是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001103
Figure BDA0003135424430001111
Figure BDA0003135424430001121
在一些实施方案中，R47是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001122
Figure BDA0003135424430001131
Figure BDA0003135424430001141
其中：
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；以及
g是2至6的整数。
在一些实施方案中，奥瑞他汀为式(X)的化合物：
Figure BDA0003135424430001142
其中：
R31和R32中的每一个独立地是-H或C1-8烷基，并且R31和R32中的至多 一个是-H；
R33是-H、C1-8烷基、C3-8碳环、C6-10芳基、C1-8烷基-C6-10芳基、X1- (C3-8碳环)、C3-8杂环或X1-(C3-8杂环)；
R34是-H、C1-8烷基、C3-8碳环、C6-10芳基、X1-C6-10芳基、X1-(C3-8碳 环)、C3-8杂环或X1-(C3-8杂环)；
R35是-H或甲基；
或R34和R35与它们连接的碳原子一起形成具有式-(CR55R41)b-的碳环， 其中R55和R41中的每一个独立地是-H或C1-8烷基且b是3至7的整数；
R36是-H或C1-8烷基；
R37是-H、C1-8烷基、C3-8碳环、C6-10芳基、-X1-C6-10芳基、-X1-(C3-8碳 环)、C3-8杂环或-X1-(C3-8杂环)；
每个R38独立地是-H、OH、C1-8烷基、C3-8碳环或O-(C1-8烷基)；
R53是：
Figure BDA0003135424430001151
或R54；
R39是-H、C1-8烷基、C6-10芳基、-X1-C6-10芳基、C3-8碳环、C3-8杂环、- X1-C3-8杂环、-C1-8亚烷基-NH2或(CH2)2SCH3；
每个X1独立地是C1-10亚烷基或C3-10亚环烷基；
R44是-H或C1-8烷基；
R45是X3-R42或NH-R19；
X3是O或S；
R19是-H、OH、氨基基团、C1-8烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R42是氨基基团、C1-6烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R20和R21中的每一个独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
R54是-C(R56)2--C(R56)2-C6-10芳基、-C(R56)2--C(R56)2-C3-8杂环或- C(R56)2--C(R56)2-C3-8碳环；
R56独立地选自H、OH、C1-8烷基、C3-8碳环、-O-C1-8烷基、-O-C(O)- R29和-O-R23-O-C1-6烷基-NH2；
R29是氨基基团、5至12元杂环烷基、-R28-C1-6烷基-R22、R28-C5-12杂环 烷基-C1-6烷基-R22、-[C(R20R21)]a-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳基-C1-6烷基-R22； 或R29是如本文所定义的R47；
R28不存在，是NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，在式(X)的奥瑞斯他汀化合物中：
R39是苄基或
Figure BDA0003135424430001161
以及
R44是氢。
在一些实施方案中，奥瑞他汀为式(Xa)的化合物：
Figure BDA0003135424430001162
其中：
R33至R38和R44如本文所定义，
R31和R32之一是氢或C1-8烷基，而另一个是：
Figure BDA0003135424430001163
其中：
R83是-H或CH3；
R84是C1-6烷基或C6-10芳基；
每个R12’独立地是卤素、-C1-8烷基、-O-C1-8烷基、硝基或氰基；
h是0至4的整数；
u是0或1的整数；
R53是：
Figure BDA0003135424430001171
或R54
R39是H、C1-8烷基、C6-10芳基、-X1-C6-10芳基、C3-8碳环、C3-8杂环、- X1-C3-8杂环、-C1-8亚烷基-NH2或(CH2)2SCH3，
每个X1独立地是C1-10亚烷基或C3-10亚环烷基；
R45是X3-R42或NH-R19；
X3是O或S；
R19是-H、OH、氨基基团、C1-8烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R42是-H、氨基基团、C1-6烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R20和R21中的每一个独立地是氢、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(O-CH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
R54是-C(R56)2--C(R56)2-C6-10芳基、-C(R56)2--C(R56)2-C3-8杂环或- C(R56)2--C(R56)2-C3-8碳环；
R56独立地选自H、OH、C1-8烷基、C3-8碳环、-O-C1-8烷基、-O-C(O)- R29和-O-R23-O-C1-6烷基-NH2；
R29是氨基基团、5至12元杂环烷基、-R28-C1-6烷基-R22、R28-C5-12杂环 烷基-C1-6烷基-R22、-[C(R20R21)]a-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳基-C1-6烷基-R22； 或R29是如本文所定义的R47；
R28不存在，是NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，式(Xa)的奥瑞他汀化合物为式(XIa)或式(XIb)的化 合物：
Figure BDA0003135424430001181
其中：
R92是：
Figure BDA0003135424430001182
并且
R83是氢或CH3。
在一些实施方案中，式(X)的奥瑞他汀为式(XI)、式(XII)或式(XIII)的化 合物：
其中式(XI)的化合物是：
Figure BDA0003135424430001191
其中R31是H或CH3，且R42是-CH3或下列结构的任何一个：
Figure BDA0003135424430001192
Figure BDA0003135424430001201
其中：
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；以及
g是2至6的整数；
其中式(XII)的化合物是：
Figure BDA0003135424430001202
其中R31是H或CH3且R40是氢、-OH、-NH2或下列结构中的任何种：
Figure BDA0003135424430001203
Figure BDA0003135424430001211
其中：
a是1至6的整数；
g是2至6的整数；以及
c是0至3的整数；
其中式(XIII)的化合物是：
Figure BDA0003135424430001221
其中：
R31是H或CH3；
R29是氨基基团、5至12元杂环烷基、-R28-C1-6烷基-R22、R28-C5-12杂环 烷基-C1-6烷基-R22、-R28-[C(R20R21)]a-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳基-C1-6烷基 -R22；或R29是如本文所定义的R47；
R20和R21中的每一个独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
R28不存在，是NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，在式(XII)中，R40是
Figure BDA0003135424430001222
Figure BDA0003135424430001223
Figure BDA0003135424430001231
在一些实施方案中，式(XII)的化合物为式(XIIa)、(XIIb)、(XIIc)、 (XIId)、(XIIe)、(XIIf)、(XIIg)或(XIIh)的化合物：
Figure BDA0003135424430001232
Figure BDA0003135424430001241
Figure BDA0003135424430001251
在一些实施方案中，在式(XIII)的化合物中，R29是-NH2、5元杂环烷基、 -R28-C1-6烷基-R22、R28-C5-12杂环烷基-C1-6烷基-R22或-R28-C1-6烷基-C6-12芳 基-C1-6烷基-R22；或R29是如本文所定义的R47；
R28不存在，是NR23或氧；
R22是-OH、-NHR23、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，R29是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001261
Figure BDA0003135424430001271
Figure BDA0003135424430001281
其中：
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；以及
g是2至6的整数。
在一些实施方案中，MEK抑制剂为式(XIV)的化合物：
Figure BDA0003135424430001282
其中：
R43是-H或-R46-R47；
R20和R21中的每一个独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
R46是-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NH-或不存在；
R47如本文所定义；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
MEK抑制剂的其他实例公开于US 7,517,994 B2中。
在一些实施方案中，R43是-C(O)-(CH2)a-NH2或-C(O)-C(H)(CH3)- (CH2)c-NH2；其中a是1至6的整数；并且c是0至3的整数。
在一些实施方案中，倍癌霉素化合物为式(XV)的化合物：
Figure BDA0003135424430001291
其中：
R47如本文所定义；
R48是氢、-COOC1-6烷基、-COOH、-NH2或-CH3；
R49是Cl、Br或-OH；
R50是-H、-OCH3、
Figure BDA0003135424430001301
R51和R52中的每一个独立地是-H或-OCH3；以及
环AA是苯环或吡咯环。
倍癌霉素化合物的其他实例公开于US 7,553,816中。
在一些实施方案中，式(XV)的倍癌霉素化合物为式(XVI)、(XVII)、 (XVIII)或(XIX)的化合物：
Figure BDA0003135424430001302
Figure BDA0003135424430001311
其中：
R49是Cl、Br或-OH；以及
R47如本文所定义。
在一些实施方案中，倍癌霉素化合物是式(XX)或(XXI)的倍癌霉素SA 化合物：
Figure BDA0003135424430001321
其中：
R42是C1-6烷基氨基或-[C(R20R21)]a-R22；
R20和R21中的每一个独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
R22是-OH、-NH2、-COOH、-R82-C(O)(CH2)c-C(H)(R23)-N(H)(R23)、- R82-C(O)(CH2)d-(OCH2-CH2)f-N(H)(R23)或-R82-(C(O)-CH(X2)-NH)d-R77；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或- COO-C1-6烷基；
X2是天然或非天然氨基酸的侧链；
R77是-H或X2，并且NR77形成含氮环状化合物；
R82是-NR23或氧；
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；
d是1至3的整数；以及
f是1至12的整数。
在一些实施方案中，R42是下列结构中的任何一个：
Figure BDA0003135424430001331
Figure BDA0003135424430001341
其中：
a是1至6的整数；
g是2至6的整数；以及
c是0至3的整数。
在一些实施方案中，KSP抑制剂化合物为式(XXVI)的化合物：
Figure BDA0003135424430001342
其中R30如本文所定义。
在一些实施方案中，R30是：
Figure BDA0003135424430001343
Figure BDA0003135424430001351
其中：
a是1至6的整数；
c是0至3的整数；以及
g是2至6的整数。
在一些实施方案中，倍癌霉素化合物是倍癌霉素A、倍癌霉素B1、倍 癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、CC-1065、阿多来 新、比折来新或卡折来新。适合于本公开的缀合物、支架和方法的额外的 倍癌霉素化合物描述于US 5101038中。
在一些实施方案中，KSP抑制剂化合物为式(XXVII)、(XXVIII)或 (XXIX)的化合物：
Figure BDA0003135424430001352
其中：
R51是键、-C(O)-(CH2)-C(O)NH-(CH2)2-NH-、-C(O)-(CH2O-CH2)- C(O)NH-(CH2)2-NH-，或R11如本文所定义。
治疗剂领域的技术人员将容易理解，本文描述的每一种治疗剂都能够 以这样一种方式被修饰，即所得的化合物仍保持原始化合物的特异性和/或 活性。技术人员还将理解，这些化合物中的许多种可用于代替本文描述的 治疗剂。因此，本文中公开的治疗剂包括本文描述的化合物的类似物和衍 生物。
下表A提供适合于缀合以形成本公开的抗体-药物缀合物或携带药物的 支架的治疗剂及其衍生物的更多实例。还提供了某些化合物的光谱数据(表 中的ND指“未检测到”)。当药物在体外或在体内从缀合物中释放出来时， 这些实例也可以是该药物的活性形式。
表A
Figure BDA0003135424430001361
Figure BDA0003135424430001362
Figure BDA0003135424430001371
Figure BDA0003135424430001372
Figure BDA0003135424430001373
Figure BDA0003135424430001374
Figure BDA0003135424430001375
Figure BDA0003135424430001376
Figure BDA0003135424430001381
Figure BDA0003135424430001391
Figure BDA0003135424430001392
Figure BDA0003135424430001393
Figure BDA0003135424430001401
Figure BDA0003135424430001402
Figure BDA0003135424430001403
Figure BDA0003135424430001404
Figure BDA0003135424430001411
Figure BDA0003135424430001421
Figure BDA0003135424430001422
Figure BDA0003135424430001431
亲水性基团或T1
在一些实施方案中，本公开的缀合物或支架中包括的亲水性基团是水 溶性且基本上非抗原性的聚合物。亲水基团的实例包括，但不限于多元醇、 聚醚、聚阴离子、聚阳离子、多磷酸、多胺、多糖、多羟基化合物、聚赖 氨酸及其衍生物。在一些实施方案中，亲水性基团的一端可以被官能化， 使得其可以借助非裂解键或经由可裂解键共价连接至多功能接头或MA接头 (例如，连接至MA接头中的氨基酸)。在一些实施方案中，官能化可以例如 经由胺、硫醇、NHS酯、马来酰亚胺、炔、叠氮化物、羰基或其他官能团。 在一些实施方案中，亲水性基团的另一个或多个末端将是游离的，并且是 未栓系的。在一些实施方案中，“未栓系的”表示亲水性基团将不会与另一 部分连接，该部分例如为D或药物单元、可释放组装单元或本公开的缀合 物或支架的其他组分。在一些实施方案中，亲水性基团的游离的且未拴系的末端可以包括甲氧基、羧酸、醇或其他合适的官能团。在一些实施方案 中，甲氧基、羧酸、醇或其他合适的官能团用作亲水性基团的一个或多个 末端的盖。
在一些实施方案中，可裂解键是指当在血浆中循环时对裂解基本不敏 感但在细胞内或肿瘤内环境中对裂解敏感的键。在一些实施方案中，非裂 解键是在任何生物环境中都对裂解基本不敏感的键。在一些实施方案中， 腙的化学水解、二硫化物的还原以及肽键或糖苷键的酶解是可裂解键的实 例。在一些实施方案中，亲水性基团的示例性连接是经由酰胺键、醚键、 酯键、腙键、肟键、二硫键、肽键或三唑键。在一些实施方案中，亲水性 基团与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基酸)的连接是经由 酰胺键。
在其中本公开的缀合物或支架包含多于一个亲水性基团的一些实施方 案中，多个亲水性基团可以是相同的或不同的化学部分(例如，具有不同分 子量、子单元数目或化学结构的亲水性基团)。在一些实施方案中，多个亲 水性基团可以在单一连接点或不同连接点处与多功能接头或MA接头连接。
在一些实施方案中，亲水性基团的添加可能对于所得的缀合物的药代 动力学具有两种潜在的影响。在一些实施方案中，所期望的影响是清除率 降低(以及随之的暴露增加)，其由药物或药物-接头的暴露的疏水元件导致 的非特异性相互作用的减少所引起。在一些实施方案中，不期望的影响是 可能由缀合物的分子量增加所引起的分布体积和分布率的降低。在一些实 施方案中，增加亲水性基团的分子量会增加缀合物的流体动力学半径，导 致扩散性降低，其可能会降低缀合物渗透进入肿瘤的能力。因为这两种竞 争性的药代动力学作用，所以合意的可以是使用足够大的亲水性基团来降 低缀合物清除率，从而增加血浆暴露，但不要大到会大大降低其扩散性， 这可能会降低缀合物到达预期的靶细胞群体的能力。
在一些实施方案中，亲水基团包括但不限于糖醇(也称为多元醇 (polyalcohol，polyhydric alcohol，alditol或glycitol)，例如肌醇、甘油、赤藓 糖醇、苏糖醇、阿糖醇、木糖醇、核糖醇、半乳糖醇、甘露糖醇、山梨糖 醇等等)或其衍生物(例如，氨基多元醇)、碳水化合物(例如，糖)、聚乙烯醇、 基于碳水化合物的聚合物(例如，右旋糖酐)、羟丙基甲基丙烯酰胺(HPMA)、 聚环氧烷、和/或其共聚物。
在一些实施方案中，亲水性基团包含多个羟基(“-OH”)，例如并入单糖、 寡糖、多糖等等的部分。在一些实施方案中，亲水性基团包括多个- (CR58OH)-基团，其中R58是-H或C1-8烷基。
在一些实施方案中，亲水性基团包含一个或多个以下式
Figure BDA0003135424430001451
的片段，其中：
n1是0至约6的整数；
每个R58独立地是-H或C1-8烷基；
R60是键、C1-6烷基接头或-CHR59-，其中R59是-H、C1-8烷基、环烷基 或芳基烷基；
R61是CH2OR62、COOR62、-(CH2)n2COOR62或被一个或多个羟基取代的 杂环烷基；
R62是-H或C1-8烷基；以及
n2是1至约5的整数。
在一些实施方案中，R58是-H；R60是键或C1-6烷基接头；n1是1至约6 的整数；并且R61是CH2OH或COOH。在一些实施方案中，R58是-H；R60是-CHR59-；n1为0；并且R61是被一个或多个羟基取代的杂环烷基，例如 单糖。
在一些实施方案中，亲水性基团包含葡糖基胺、二胺或三胺。
在一些实施方案中，亲水性基团包含以下片段或其立体异构体中的一 种或更多种：
Figure BDA0003135424430001452
Figure BDA0003135424430001461
其中：
R59是-H、C1-8烷基、环烷基或芳基烷基；
n1是1至约6的整数；
n2是1至约5的整数；以及
n3是约1至约3的整数。
应理解，本文中考虑亲水基团的所有立体化学形式。例如，在上式中， 亲水基团可衍生自核糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖或其他糖，并保 留这些分子上存在的悬吊的羟基和烷基的立体化学排列。在一些实施方案 中，应理解，在前述式中，还考虑各种脱氧化合物。例示性地，适用时， 针对亲水基团考虑以下特征中的一个或更多个：
在一些实施方案中，n3为2或3。
在一些实施方案中，n1为1、2或3。
在一些实施方案中，n2为1。
在一些实施方案中，R59是氢。
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430001471
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430001472
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430001473
在一些实施方案中，亲水性基团包含
Figure BDA0003135424430001474
其中
n4是1至约25的整数；
每个R63独立地是-H或C1-8烷基；
R64是键或C1-8烷基接头；
R65是-H、C1-8烷基或-(CH2)n2COOR62；
R62是-H或C1-8烷基；以及
n2是1至约5的整数。
在一些实施方案中，亲水性基团包含：
Figure BDA0003135424430001475
在一些实施方案中，n4是约2至约20、约4至约16、约6至约12或约 8至约12的整数。
在一些实施方案中，n4是约2至约20的整数。在一些实施方案中，n4是约4至约16的整数。在一些实施方案中，n4是约6至约12的整数。在一 些实施方案中，n4是约8至约12的整数。
在一些实施方案中，n4为6、7、8、9、10、11或12。
在一些实施方案中，亲水性基团包含聚醚，例如聚亚烷基二醇(PAO)。 PAO包括但不限于，低级环氧烷的聚合物，特别是环氧乙烷的聚合物，例 如环氧丙烷、聚丙二醇、聚乙二醇(PEG)、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物以 及其嵌段共聚物。在其他实施方案中，聚亚烷基二醇是聚乙二醇(PEG)，包 括但不限于多分散PEG、单分散PEG和离散PEG。多分散PEG是尺寸和 分子量的非均质混合物，而单分散PEG通常由非均质混合物纯化而来，并 因此提供单一链长和分子量。在一些实施方案中，PEG单元是提供具有限 定和特定链长的单一分子的离散PEG。在一些实施方案中，聚乙二醇是 mPEG。
在一些实施方案中，亲水性基团包含PEG单元，该PEG单元包含一个 或多个PEG链。PEG链可以连接在一起，例如，以线型、分支或星形构型 连接。除了包含重复的PEG子单元之外，PEG单元还可包含非PEG材料 (例如，用于促进多个PEG链彼此缀合或用于促进与氨基酸的缀合)。非 PEG材料是指PEG链中的原子不是重复的-CH2CH2O-子单元的一部分。在 一些实施方案中，PEG链可以包含两个经由非PEG元件彼此连接的单体 PEG链。在一些实施方案中，PEG单元可以包含两个与连接至氨基酸的中 心核相连的线型PEG链(即，PEG单元本身是支化的)。
PEG单元可经由反应性基团与多功能接头或MA接头(例如，与MA接 头中的氨基酸)共价连接。反应性基团是活化的PEG分子可能与之连接的那 些基团(例如，游离的氨基或羧基)。在一些实施方案中，N-末端氨基酸和赖 氨酸(K)具有游离氨基；C-末端氨基酸残基具有游离羧基。巯基(例如，如在 半胱氨酸残基上发现的)也可用作连接PEG用的反应性基团。
在一些实施方案中，PEG单元可通过使用具有不同的反应性部分的甲 氧基化PEG(″mPEG″)与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基 酸)连接，所述反应性部分包括，但不限于琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(SS)、琥 珀酰亚胺基碳酸酯(SC)、mPEG-亚氨酸酯、对硝基苯基碳酸酯(NPC)、琥珀 酰亚胺基丙酸酯(SPA)和氰尿酰氯。mPEG的实例包括，但不限于mPEG-琥 珀酰亚胺基琥珀酸酯(mPEG-SS)、mPEG2-琥珀酰亚胺基琥珀酸酯(mPEG2- SS)、mPEG-琥珀酰业胺基碳酸酯(mPEG-SC)、mPEG2-琥珀酰业胺基碳酸酯 (mPEG2-SC)、mPEG-亚氨酸酯、mPEG-对硝基苯基碳酸酯(mPEG-NPC)、 mPEG-亚氨酸酯、mPEG2-对硝基苯基碳酸酯(mPEG2-NPC)、mPEG-琥珀酰 亚胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、mPEG2-琥珀酰亚胺基丙酸酯(mPEG2-SPA)、 mPEG-N-羟基-琥珀酰亚胺(mPEG-NHS)、mPEG2-N-羟基-琥珀酰亚胺 (mPEG2-NHS)、mPEG-氰尿酰氯、mPEG2-氰尿酰氯、mPEG2-赖氨醇-NPC 和mPEG2-Lys-NHS。可以使用多种多样的PEG种类，并且可以使用基本上 任何合适的反应性PEG试剂。在一些实施方案中，反应性PEG试剂将导致 在与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基酸)连接后形成氨基 甲酸酯键或酰胺键。反应性PEG试剂包括但不限于：mPEG2-N-羟基-琥珀 酰亚胺(mPEG2-NHS)、双官能PEG丙醛(mPEG2-ALD)、多臂PEG、含马来 酰亚胺的PEG(mPEG(MAL)2、mPEG2(MAL))、mPEG-NH2、mPEG-琥珀酰 亚胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、mPEG丁酸的琥珀酰亚胺(mPEG-SBA)、mPEG-硫酯、mPEG-双酯、mPEG-BTC、mPEG-ButyrALD、mPEG-乙醛二 乙基乙缩醛(mPEG-ACET)、杂官能PEG(例如，NH2-PEG-COOH、Boc- PEG-NHS、Fmoc-PEG-NHS、NHS-PEG-乙烯基砜(NHS-PEG-VS)或NHS- PEG-MAL)、PEG丙烯酸酯(ACRL-PEG-NHS)、PEG-磷脂(例如，mPEG- DSPE)、SUNBRITETM系列的多臂PEG，包括通过本领域技术人员所选化 学物质活化的基于甘油的PEG、任何经SUNBRITE活化的PEG(包括但不 限于羧基-PEG、对NP-PEG、三氟乙磺酰基-PEG、醛PEG、缩醛-PEG、氨 基-PEG、巯基-PEG、马来酰亚胺基-PEG、羟基-PEG-胺、氨基-PEG-COOK羟基-PEG-醛、羧酸酐型-PEG、官能化的PEG-磷脂和其他类似的和/或合适 的反应性PEG。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少6个子单元、至少7个子单元、 至少8个子单元、至少9个子单元、至少10个子单元、至少11个子单元、 至少12个子单元、至少13个子单元、至少14个子单元、至少15个子单 元、至少16个子单元、至少17个子单元、至少18个子单元、至少19个 子单元、至少20个子单元、至少21个子单元、至少22个子单元、至少23 个子单元或至少24个子单元。在一些此类实施方案中，PEG单元包含不超 过约72个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少6个子单元、至少7个子单元、 至少8个子单元、至少9个子单元、至少10个子单元、至少11个子单元、 至少12个子单元、至少13个子单元、至少14个子单元、至少15个子单 元、至少16个子单元、至少17个子单元、至少18个子单元、至少19个 子单元或至少20个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少6个子单元、至少7个子单元、 至少8个子单元、至少9个子单元、至少10个子单元、至少11个子单元、 至少12个子单元、至少13个子单元、至少14个子单元、至少15个子单 元、至少16个子单元、至少17个子单元或至少18个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少6个子单元、至少7个子单元、 至少8个子单元、至少9个子单元、至少10个子单元、至少11个子单元 或至少12个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少8个子单元、至少9个子单元、 至少10个子单元、至少11个子单元或至少12个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含至少6个子单元、至少7个子单元 或至少8个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元包含一条或更多条线型PEG链，该线型 PEG链各自具有至少2个子单元、至少3个子单元、至少4个子单元、至 少5个子单元、至少6个子单元、至少7个子单元、至少8个子单元、至 少9个子单元、至少10个子单元、至少11个子单元、至少12个子单元、 至少13个子单元、至少14个子单元、至少15个子单元、至少16个子单 元、至少17个子单元、至少18个子单元、至少19个子单元、至少20个 子单元、至少21个子单元、至少22个子单元、至少23个子单元或至少24 个子单元。在一些实施方案中，PEG单元包含组合总计至少6个子单元、 至少8个、至少10个子单元或至少12个子单元。在一些此类实施方案中， PEG单元包含不超过总共约72个子单元的组合。在一些此类实施方案中， PEG单元包含不超过总共约36个子单元的组合。
在一些实施方案中，PEG单元包含总共4至72个、4至60个、4至48 个、4至36个或4至24个子单元；5至72个、5至60个、5至48个、5至 36个或5至24个子单元；6至72个、6至60个、6至48个、6至36个或 6至24个子单元；7至72个、7至60个、7至48个、7至36个或7至24 个子单元；8至72个、8至60个、8至48个、8至36个或8至24个子单 元；9至72个、9至60个、9至48个、9至36个或9至24个子单元；10 至72个、10至60个、10至48个、10至36个或10至24个子单元；11至72个、11至60个、11至48个、11至36个或11至24个子单元；12至72 个、12至60个、12至48个、12至36个或12至24个子单元；13至72个、 13至60个、13至48个、13至36个或13至24个子单元；14至72个、14 至60个、14至48个、14至36个或14至24个子单元；15至72个、15至 60个、15至48个、15至36个或15至24个子单元；16至72个、16至60 个、16至48个、16至36个或16至24个子单元；17至72个、17至60个、 17至48个、17至36个或17至24个子单元；18至72个、18至60个、18 至48个、18至36个或18至24个子单元；19至72个、19至60个、19至 48个、19至36个或19至24个子单元；20至72个、20至60个、20至48 个、20至36个或20至24个子单元；21至72个、21至60个、21至48个、 21至36个或21至24个子单元；22至72个、22至60个、22至48个、22至36个或22至24个子单元；23至72个、23至60个、23至48个、23至 36个或23至24个子单元；或24至72个、24至60个、24至48个、24至 36个子单元的组合。
在一些实施方案中，PEG单元包含一个或多个线性PEG链，所述线性 PEG链具有总共4至72个、4至60个、4至48个、4至36个或4至24个 子单元；5至72个、5至60个、5至48个、5至36个或5至24个子单元； 6至72个、6至60个、6至48个、6至36个或6至24个子单元；7至72 个、7至60个、7至48个、7至36个或7至24个子单元；8至72个、8至 60个、8至48个、8至36个或8至24个子单元；9至72个、9至60个、9 至48个、9至36个或9至24个子单元；10至72个、10至60个、10至48 个、10至36个或10至24个子单元；11至72个、11至60个、11至48个、 11至36个或11至24个子单元；12至72个、12至60个、12至48个、12 至36个或12至24个子单元；13至72个、13至60个、13至48个、13至 36个或13至24个子单元；14至72个、14至60个、14至48个、14至36 个或14至24个子单元；15至72个、15至60个、15至48个、15至36个 或15至24个子单元；16至72个、16至60个、16至48个、16至36个或 16至24个子单元；17至72个、17至60个、17至48个、17至36个或17 至24个子单元；18至72个、18至60个、18至48个、18至36个或18至 24个子单元；19至72个、19至60个、19至48个、19至36个或19至24 个子单元；20至72个、20至60个、20至48个、20至36个或20至24个 子单元；21至72个、21至60个、21至48个、21至36个或21至24个子单元；22至72个、22至60个、22至48个、22至36个或22至24个子单 元；23至72个、23至60个、23至48个、23至36个或23至24个子单元； 或24至72个、24至60个、24至48个、24至36个子单元的组合。
在一些实施方案中，PEG单元是衍生的线型单PEG链，该链具有至少 2个子单元、至少3个子单元、至少4个子单元、至少5个子单元、至少6 个子单元、至少7个子单元、至少8个子单元、至少9个子单元、至少10 个子单元、至少11个子单元、至少12个子单元、至少13个子单元、至少 14个子单元、至少15个子单元、至少16个子单元、至少17个子单元、至 少18个子单元、至少19个子单元、至少20个子单元、至少21个子单元、 至少22个子单元、至少23个子单元或至少24个子单元。
在一些实施方案中，PEG单元是衍生化直链单PEG链，所述衍生化直 链单PEG链具有6至72个、6至60个、6至48个、6至36个或6至24个 子单元；7至72个、7至60个、7至48个、7至36个或7至24个子单元； 8至72个、8至60个、8至48个、8至36个或8至24个子单元；9至72 个、9至60个、9至48个、9至36个或9至24个子单元；10至72个、10 至60个、10至48个、10至36个或10至24个子单元；11至72个、11至 60个、11至48个、11至36个或11至24个子单元；12至72个、12至60 个、12至48个、12至36个或12至24个子单元；13至72个、13至60个、 13至48个、13至36个或13至24个子单元；14至72个、14至60个、14 至48个、14至36个或14至24个子单元；15至72个、15至60个、15至 48个、15至36个或15至24个子单元；16至72个、16至60个、16至48个、16至36个或16至24个子单元；17至72个、17至60个、17至48个、 17至36个或17至24个子单元；18至72个、18至60个、18至48个、18 至36个或18至24个子单元；19至72个、19至60个、19至48个、19至 36个或19至24个子单元；20至72个、20至60个、20至48个、20至36 个或20至24个子单元；21至72个、21至60个、21至48个、21至36个 或21至24个子单元；22至72个、22至60个、22至48个、22至36个或 22至24个子单元；23至72个、23至60个、23至48个、23至36个或23 至24个子单元；或24至72个、24至60个、24至48个、24至36个子单 元。
在一些实施方案中，PEG单元是衍生化直链单PEG链，所述衍生化直 链单PEG链具有2至72个、2至60个、2至48个、2至36个或2至24个 子单元；2至72个、2至60个、2至48个、2至36个或2至24个子单元； 3至72个、3至60个、3至48个、3至36个或3至24个子单元；3至72 个、3至60个、3至48个、3至36个或3至24个子单元；4至72个、4至 60个、4至48个、4至36个或4至24个子单元；或5至72个、5至60个、 5至48个、5至36个或5至24个子单元。
在一些实施方案中，直链PEG单元是：
Figure BDA0003135424430001531
其中；
Figure BDA0003135424430001532
表示与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基酸)连接的位 点；
Y71是PEG连接单元；
Y72是PEG封端单元；
Y73是PEG缀合单元(即，用于将多个PEG子单元链缀合在一起)；
d9是2至72的整数；
每个d10独立地是1至72的整数。
d11是2至5的整数。
在一些实施方案中，d9是2至72的整数。在一些实施方案中，d9是4 至72的整数。在一些实施方案中，d9是6至72、8至72、10至72、12至 72或6至24的整数。
在一些实施方案中，d9是6至72的整数。在一些实施方案中，d9是8 至72的整数。在一些实施方案中，d9是10至72的整数。在一些实施方案 中，d9是12至72的整数。在一些实施方案中，d9是6至24的整数。
在一些实施方案中，PEG单元中存在至少6个PEG子单元。在一些实 施方案中，PEG单元中存在不超过72个或不超过36个PEG子单元。
在一些实施方案中，PEG单元中存在至少8个PEG子单元。在一些实 施方案中，PEG单元中存在至少10个PEG子单元。在一些实施方案中， PEG单元中存在至少12个PEG子单元。
在一些实施方案中，d9是8或约8、12或约12、24或约24。
在一些实施方案中，每个Y72独立地是-C1-10烷基、-C2-10烷基-CO2H、- C2-10烷基-OH、-C2-10烷基-NH2、-C2-10烷基-NH(C1-3烷基)或C2-10烷基-N(C1-3烷基)2。
在一些实施方案中，Y72是-C1-10烷基、-C2-10烷基-CO2H、-C2-10烷基- OH或-C2-10烷基-NH2。
在一些实施方案中，PEG缀合单元是PEG单元的一部分，并且是用于 连接两条或更多条重复的CH2CH2O-子单元的链的非PEG材料。在一些实 施方案中，PEG缀合单元Y73是-C2-10烷基-C(O)-NH-、-C2-10烷基-NH-C(O)-、 -C2-10烷基-NH-、-C2-10烷基-C(O)-、-C2-10烷基-O-或-C2-10烷基-S-。
在一些实施方案中，每个Y73独立地是-C1-10烷基-C(O)-NH-、-C1-10烷 基-NH-C(O)-、-C2-10烷基-NH-、-C2-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-C1-10烷基- NH-。
在一些实施方案中，PEG连接单元是PEG单元的一部分，并且用于将 PEG单元连接至多功能接头或MA接头(例如，连接至MA接头中的氨基酸)。 在一些实施方案中，氨基酸具有与PEG单元形成键的官能团。在一些实施 方案中，用于PEG单元与氨基酸连接的官能团包括用于形成二硫键或硫酯 键的巯基、用于形成腙键的醛、酮或或肼基团、用于形成肟键的羟基胺基 团、用于形成肽键的羧基或氨基、用于形成酯键的羧基或羟基、用于形成 磺酰胺键的磺酸、用于形成氨基甲酸酯键的醇以及用于形成磺酰胺键或氨 基甲酸酯键或酰胺键的胺。在一些实施方案中，PEG单元可以例如经由二 硫键、硫酯键、腙键、肟键、肽键、酯键、磺酰胺键、氨基甲酸酯键或酰 胺键与氨基酸连接。在一些实施方案中，用于连接PEG单元的反应可以是 环加成、加成、加成/消除或取代反应，或当适用时其组合。
在一些实施方案中，PEG连接单元Y71是键、-C(O)-、-O-、-S-、-S(O)-、 -S(O)2-、-NR5-、-C(O)O-、-C(O)-G1-10烷基、-C(O)-C1-10烷基-O-、-C(O)-C1-10烷基-CO2-、-C(O)-G1-10烷基-NR5-、-C(O)-C1-10烷基-S-、-C(O)-C1-10烷基- C(O)-NR5-、-C(O)-C1-10烷基-NR5-C(O)-、-C1-10烷基、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-CO2-、-C1-10烷基-NR5-、-C1-10烷基-S-、-C1-10烷基-C(O)-NR5-、-C1-10烷基-NR5-C(O)-、-CH2CH2SO2-C1-10烷基-、-CH2C(O)-C1-10烷基-、＝N-(O或 N)-C1-10烷基-O-、＝N-(O或N)-C1-10烷基-NR5-、＝N-(O或N)-C1-10烷基-CO2-、 ＝N-(O或N)-C1-10烷基-S-、
Figure BDA0003135424430001551
在一些实施方案中，Y71是-NH-、-C(O)-、三唑基、-S-或马来酰亚胺基 例如
Figure BDA0003135424430001552
其中
Figure BDA0003135424430001553
表示与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基酸)的连接，且*表示PEG单元内的连接位点。
线型PEG单元的实例包括：
Figure BDA0003135424430001554
Figure BDA0003135424430001561
其中
Figure BDA0003135424430001562
表示与多功能接头或MA接头(例如，与MA接头中的氨基酸)的连 接，且每个d9独立地是4至24、6至24、8至24、10至24、12至24、14 至24或16至24的整数。
在一些实施方案中，d9为约8、约12或约24。
在一些实施方案中，PEG单元为约300Da至约5kDa；从约300Da至约 4kDa；从约300Da至约3kDa；从约300Da至约2kDa；或从约300Da至约 1kDa。在一些实施方案中，PEG单元具有至少6个子单元或至少8、10或 12个子单元。在一些实施方案中，PEG单元具有至少6个子单元或至少8、 10或12个子单元，但不超过72个子单元。在一些实施方案中，PEG单元 具有至少6个子单元或至少8、10或12个子单元，但不超过36个子单元。
在一些实施方案中，合适的聚乙二醇可具有在聚合物分子各末端的游 离羟基，或可具有一个被低级烷基(例如，甲基)醚化的羟基。在一些实施方 案中，适合用于实践本公开的是具有可酯化羧基的聚乙二醇的衍生物。在 一些实施方案中，聚乙二醇以商品名PEG市售可得，其通常作为由平均分 子量表征的聚合物的混合物。在一些实施方案中，聚乙二醇具有约300至 约5000的平均分子量。在一些实施方案中，聚乙二醇具有约600至约1000的平均分子量。
在一些实施方案中，适用于本文公开的缀合物、支架和方法的亲水性 基团的实例可见于例如US 8,367,065第13栏；US 8524696第6栏；WO2015/057699和WO 2014/062697，这些专利中的每一个的内容据此以引 用的方式整体并入。
半胱氨酸工程化的靶向部分
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的靶向部分将包含肽接头的缀合 物导向至特定的组织、细胞或细胞内的位置。在一些实施方案中，半胱氨 酸工程化的靶向部分包含工程化的半胱氨酸。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的靶向部分是基于蛋白质的识别 分子(PBRM)。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子将包含 肽接头的缀合物导向至特定的组织、细胞或细胞内的位置。在一些实施方 案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子可以指导培养物中的或完 整的有机体中的或两者中的缀合物。在每一种情况下，半胱氨酸工程化的 基于蛋白质的识别分子可以具有配体，该配体存在于靶细胞的细胞表面上， 并且以有效的特异性、亲和性和亲和力与该配体结合。在一些实施方案中， 半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子将缀合物靶向至除了肝脏以外的 组织。在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子将缀 合物靶向至特定的组织例如肝脏、肾脏、肺或胰脏。半胱氨酸工程化的基 于蛋白质的识别分子可以将缀合物靶向至靶细胞(例如癌细胞)，例如在细胞 (例如癌细胞)上表达的受体、基质组织或与癌症有关的蛋白质(例如肿瘤抗 原)。或者，可以靶向包含肿瘤维管结构的细胞。半胱氨酸工程化的基于蛋 白质的识别分子可以将缀合物导向至特定类型的细胞，例如特定靶向至肝 脏中的肝细胞而非枯氏细胞。在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于 蛋白质的识别分子可以将缀合物导向至网状内皮或淋巴系统的细胞，或导 向至专业的吞噬细胞，例如巨噬细胞或嗜酸性粒细胞。在一些实施方案中， 缀合物本身也可以是有效的递送系统，无需特定的靶向。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子可以将 缀合物靶向至细胞内的位置，例如细胞核、细胞质或内体。在一些实施方 案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子可以增强与受体的细胞结 合，或细胞质至细胞核的运输，以及细胞核进入内体或其他细胞内囊泡或 从内体或其他细胞内囊泡中释放。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是抗体、 抗体片段、蛋白质、肽或肽模拟物。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是抗体。 在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是抗体片段。 在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是蛋白质。 在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是肽。在一 些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子是肽模拟物。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的抗体或抗体片段是其中相应的 亲本抗体或抗体片段(例如，相应的野生型抗体或抗体片段)的一个或多个氨 基酸被半胱氨酸(例如，工程化的半胱氨酸)取代的抗体或抗体片段。在一些 实施方案中，亲本抗体或抗体片段可以是野生型或突变的。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的抗体或抗体片段可以是突变的 抗体或抗体片段。在一些实施方案中，将本领域已知的单克隆抗体工程化 以形成半胱氨酸工程化的抗体。在一些实施方案中，将本领域已知的抗体 片段(例如，Fab抗体片段)工程化以形成半胱氨酸工程化的抗体片段(例如， 半胱氨酸工程化的Fab抗体片段)。在一些实施方案中，Fab的单位点突变 在Fab中给出单个半胱氨酸工程化的残基，而由于IgG抗体的二聚性质，抗体中的单位点突变在所得抗体中产生两个半胱氨酸工程化的氨基酸。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的抗体或抗体片段保留了其相应 的野生型抗体或抗体片段的抗原结合能力。在一些实施方案中，半胱氨酸 工程化的抗体或抗体片段能够结合其相应的野生型抗体或抗体片段的一种 或多种抗原。
在一些实施方案中，工程化的半胱氨酸不是链内或链间二硫单元的一 部分。在一些实施方案中，工程化的半胱氨酸包含与亲电子官能团反应的 游离硫醇基。在一些实施方案中，抗体或抗体片段表面上的工程化的半胱 氨酸(例如，它们的游离硫醇基)可允许抗体或抗体片段与包含硫醇反应性基 团(例如，马来酰亚胺或卤代乙酰)的接头-药物部分缀合。
可以理解的是，用半胱氨酸取代抗体或抗体片段中的一个或多个非半 胱氨酸氨基酸可以产生一个或多个工程化的半胱氨酸作为可用的缀合位点。 在一些实施方案中，通过用半胱氨酸取代抗体或抗体片段中的非半胱氨酸 氨基酸，反应性硫醇基团被定位为抗体或抗体片段的可及位点，并且可以 用于使抗体或抗体片段与其他部分(例如，药物部分或接头-药物部分)缀合， 并产生本公开的缀合物。在一些实施方案中，亲本抗体或抗体片段的轻链 的V205(Kabat编号)处的氨基酸被半胱氨酸取代。在一些实施方案中，半 胱氨酸工程化的抗体可以如例如美国专利号7,521,541中所述产生。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子包含工 程化的半胱氨酸，并且半胱氨酸工程化的基于蛋白质的识别分子通过经由 工程化的半胱氨酸的巯基和接头-药物部分的官能团形成共价键而与接头-药 物部分缀合。
在一些实施方案中，示例性的半胱氨酸工程化的抗体或来源于对于细 胞表面标志物具有特异性的Fab、Fab2、scFv或骆驼抗体重链片段的抗体 包括但不限于5T4、AOC3、ALK、AXL、C242、C4.4a、CA-125、CCL11、 CCR 5、CD2、CD3、CD4、CD5、CD15、CA15-3、CD18、CD19、CA19- 9、CDH6、CD20、CD22、CD23、CD25、CD28、CD30、CD31、CD33、 CD37、CD38、CD40、CD41、CD44、CD44v6、CD51、CD52、CD54、 CD56、CD62E、CD62P、CD62L、CD70、CD74、CD79-B、CD80、CD125、 CD138、CD141、CD147、CD152、CD 154、CD326、CEA、CEACAM-5、 凝血因子、CTLA-4、CXCR2、EGFR(HER1)、ErbB1、ErbB2、ErbB3、 EpCAM、EPHA2、EPHB2、EPHB4、FGFR(即FGFR1、FGFR2、FGFR3、 FGFR4)、FLT3、叶酸受体、FAP、GD2、GD3、GPNMB、GCC (GUCY2C)、HGF、HER2、HER3、HMI.24、ICAM、ICOS-L、IGF-1受体、 VEGFR1、EphA2、TRPV1、CFTR、gpNMB、CA9、Cripto、c-KIT、c- MET、ACE、APP、肾上腺素能受体-β2、封闭蛋白3、LIV1、LY6E、间皮 素、MUC1、MUC13、NaPi2b、NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、 NOTCH4、RON、ROR1、PD-L1、PD-L2、PTK7、B7-H3、B7-B4、IL-2 受体、IL-4受体、IL-13受体、TROP-2、卷曲蛋白-7、整合素(包括α4、αvβ3、 αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α4β7、α5β1、α6β4、αIIbβ3整合素)、IFN-α、IFN-γ、 IgE、IgE、IGF-1受体、IL-1、IL-12、IL-23、IL-13、IL-22、IL-4、IL-5、 IL-6、干扰素受体、ITGB2(CD18)、LFA-1(CD11a)、L-选择素(CD62L)、 粘蛋白、肌肉生长抑制素、NCA-90、NGF、PDGFRα、磷脂酰丝氨酸、前 列腺癌细胞、铜绿假单胞菌、狂犬病、RANKL、呼吸道合胞病毒、恒河猴 因子、SLAMF7、鞘氨醇-1-磷酸、TAG-72、T细胞受体、腱生蛋白C、TGF-1、TGF-β2、TGF-β、TNF-α、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原 CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR2、波形蛋白等等。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的抗体或者来源于对于细胞表面 标志物具有特异性的Fab、Fab2、scFv或骆驼抗体重链片段的半胱氨酸工 程化的抗体包括CA-125、C242、CD3、CD19、CD22、CD25、CD30、 CD31、CD33、CD37、CD40、CD44、CD51、CD54、CD56、CD62E、CD62P、CD62L、CD70、CD138、CD141、CD326、CEA、CTLA-4、 EGFR(HER1)、ErbB2、ErbB3、FAP、叶酸受体、IGF-1受体、GD3、 GPNMB、HGF、HER2、VEGF-A、VEGFR2、VEGFR1、EphA2、EpCAM、 5T4、TAG-72、腱生蛋白C、TRPV1、CFTR、gpNMB、CA9、Cripto、 ACE、APP、PDGFRα、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、肾上腺素能受体- β2、紧密连结蛋白3、粘蛋白、MUC1、NaPi2b、B7H3、B7H4、C4.4a、 CEACAM-5、MUC13、TROP-2、卷曲蛋白-7、间皮素、IL-2受体、IL-4受 体、IL-13受体和整联蛋白(包括αvβ3、αvβ5、αvβ6、α1β4、α4β1、α5β1、α6β4整联蛋白)、腱生蛋白C、TRAIL-R2和波形蛋白。
示例性的半胱氨酸工程化的抗体包括3F8、阿巴伏单抗(abagovomab)、 阿昔单抗
Figure BDA0003135424430001601
阿达木单抗
Figure BDA0003135424430001602
阿德木单抗 (adecatumumab)、阿非莫单抗、阿夫土珠单抗(afutuzumab)、阿拉昔单抗 (alacizumab)、ALD518、阿仑单抗
Figure BDA0003135424430001603
阿妥莫单抗、阿马昔单 抗、麻安莫单抗、安芦珠单抗(anrukinzumab)、阿泊珠单抗、阿西莫单抗 (CEA-SCAN)、阿塞珠单抗、阿立珠单抗(atlizumab)(托西珠单抗 (tocilizumab)、安挺乐(Actemra)、RoActemra)、阿托木单抗、巴匹珠单抗、 巴利昔单抗(Simulect)、巴土昔单抗、贝妥莫单抗
Figure BDA0003135424430001604
贝利 木单抗
Figure BDA0003135424430001605
班拉珠单抗(benralizumab)、柏替莫单抗、贝索单抗
Figure BDA0003135424430001606
贝伐单抗
Figure BDA0003135424430001607
比西单抗
Figure BDA0003135424430001608
比伐 单抗、柏纳妥莫单抗(blinatumomab)、本妥昔单抗(brentuximab)、布里金单 抗(briakinumab)、坎金单抗(canakinumab)(ILARIS)、坎妥珠单体 (cantuzumab)、卡罗单抗、卡妥索单抗
Figure BDA0003135424430001609
CC49、西利珠单抗、 赛妥珠单抗、西妥昔单抗
Figure BDA00031354244300016010
西他土珠单抗(citatuzumab)、西妥 木单抗(cixutumumab)、克立昔单抗、克利凡珠单抗(clivatuzumab)、可纳木 单抗(conatumumab)、CR6261、达西珠单抗(dacetuzumab)、达克珠单抗
Figure BDA0003135424430001611
达雷木单抗(daratumumab)、地舒单抗
Figure BDA0003135424430001612
地莫单抗、 朵利莫单抗(dorlimomab)、朵利珠单抗、依美昔单抗、依库珠单抗(SOLIRIS)、埃巴单抗、依决洛单抗
Figure BDA0003135424430001613
依法珠单抗
Figure BDA0003135424430001614
依夫单抗
Figure BDA0003135424430001615
依洛珠单抗(elotuzumab)、艾西莫 单抗、恩莫单抗、依匹莫单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗(erlizumab)、厄妥 韦单抗(ertumaxomab)
Figure BDA0003135424430001616
伊瑞西珠单抗(etaracizumab)
Figure BDA0003135424430001617
艾韦单抗、法索单抗
Figure BDA0003135424430001618
法拉莫单抗、法乐 特珠单抗(farletuzumab)、非韦珠单抗、非扎奴单抗(fezakinumab)、斐济木单 抗(figitumumab)、芳妥珠单抗(HuZAF)、夫瑞韦如单抗(foravirumab)、夫苏 木单抗(fresolimumab)、加利昔单抗(galiximab)、更汀芦单抗(gantenerumab)、 加维莫单抗(gavilimomab)、吉妥珠单抗、吉伦昔单抗(girentuximab)、格雷 木单抗(glembatumumab)、戈利木单抗
Figure BDA0003135424430001619
戈利昔单抗、艾巴珠单 抗(ibalizumab)、替伊莫单抗、伊戈伏单抗(INDIMACIS-125)、英西单抗
Figure BDA00031354244300016110
英夫利昔单抗
Figure BDA00031354244300016111
英妥木单抗(intetumumab)、 伊诺莫单抗、伊珠单抗、伊匹木单抗、伊妥木单抗、凯利昔单抗、拉贝珠单抗(CEA-CIDE)、拉贝布瑞奇珠单抗(lebrikizumab)、来马索单抗 (lemalesomab)、乐地单抗、来沙木单抗、利韦单抗、林妥珠单抗、鲁卡木 单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗、马帕木单抗、马司莫单抗、马妥珠单抗、 美泊利单抗
Figure BDA00031354244300016112
美替木单抗、米拉土珠单抗(milatuzumab)、明 瑞莫单抗、米妥莫单抗、莫罗木单抗、莫他珠单抗(NUMAX)、莫罗单抗-CD3(ORTHOCLONE OKT3)、那可单抗(nacolomab)、那莫单抗 (naptumomab)、那他珠单抗
Figure BDA00031354244300016113
奈巴库单抗、奈西木单抗 (necitumumab)、奈瑞莫单抗、尼妥珠单抗
Figure BDA00031354244300016114
诺莫单抗、奥瑞 珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗
Figure BDA00031354244300016115
奥拉木单抗(olaratumab)、 奥马珠单抗
Figure BDA00031354244300016116
翁特珠单抗(ontecizumab)、奥普珠单抗(oportuzumab)、奥戈伏单抗
Figure BDA00031354244300016117
奥特希珠单抗(otelixizumab)、帕 昔单抗、帕利珠单抗
Figure BDA00031354244300016118
帕尼单抗(VECTIBIX)、帕诺库单抗 (panobacumab)、帕考珠单抗、沛土莫单抗(pemtumomab)
Figure BDA00031354244300016119
培妥珠单抗
Figure BDA00031354244300016120
培克珠单抗、平妥单抗(pintumomab)、普立昔 单抗、普立木单抗、PRO 140、雷韦单抗(rafivirumab)、雷莫芦单抗、雷珠 单抗
Figure BDA00031354244300016121
雷昔库单抗、瑞加韦单抗、瑞利珠单抗、利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗
Figure BDA0003135424430001621
若巴木单抗(robatumumab)、罗利 珠单抗(rontalizumab)、罗维珠单抗
Figure BDA0003135424430001622
鲁利单抗
Figure BDA0003135424430001623
沙妥莫单抗喷地肽、司韦单抗、西罗珠单抗、西法木单抗 (sifalimumab)、丝妥昔单抗(siltuximab)、西利珠单抗、索岚珠单抗 (solanezumab)、索西珠单抗(sonepcizumab)、松妥珠单抗、司他莫单抗、硫 索单抗
Figure BDA0003135424430001624
替拉珠单抗
Figure BDA0003135424430001625
替塞坦、他度珠单抗、 他利珠单抗、他尼珠单抗(tanezumab)、帕他普莫单抗(taplitumomab paptox)、 替非珠单抗
Figure BDA0003135424430001626
替莫单抗、替妥莫单抗(tenatumomab)、替奈昔单 抗、替利珠单抗(teplizumab)、TGN1412、替西木单抗(tremelimumab)、替加 珠单抗(tigatuzumab)、TNX-650、托西珠单抗(阿立珠单抗、安挺乐
Figure BDA0003135424430001627
托利珠单抗、托西莫单抗
Figure BDA0003135424430001628
曲妥珠单抗
Figure BDA0003135424430001629
翠每莫单抗(tremelimumab)、土可珠单抗(tucotuzumab)、 妥韦单抗、乌珠单抗、优特克单抗(ustekinumab)
Figure BDA00031354244300016210
伐利昔单抗、 维多珠单抗(vedolizumab)、维妥珠单抗(veltuzumab)、维帕莫单抗(vepalimomab)、维西珠单抗(visilizumab)
Figure BDA00031354244300016211
伏洛昔单抗
Figure BDA00031354244300016212
伏妥莫单抗、扎芦木单抗(HuMEX-EGFr)、扎木单抗 (HuMAX-CD4)、齐拉木单抗(ziralimumab)和佐莫单抗。
在一些实施方案中，将半胱氨酸工程化的抗体导向至以下细胞表面标 志物：5T4、CA-125、CEA、CDH6、CD3、CD19、CD20、CD22、CD30、 CD33、CD40、CD44、CD51、CTLA-4、CEACAM5、EpCAM、HER2、 EGFR(HER1)、FAP、叶酸受体、GCC(GUCY2C)、HGF、整联蛋白αvβ3、 整联蛋白α5β1、IGF-1受体、GD3、GPNMB、粘蛋白、LIV1、LY6E、间皮 素、MUC1、MUC13、PTK7、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、PDGFRα、 TAG-72、腱生蛋白C、TRAIL-R2、VEGF-A和VEGFR2。在该实施方案中，抗体是阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿拉昔单抗、阿妥莫单抗、麻安莫单抗、 阿西莫单抗、巴土昔单抗、贝伐单抗
Figure BDA00031354244300016213
比伐单抗、柏纳妥莫单 抗、本妥昔单抗、坎妥珠单体、卡妥索单抗、卡罗单抗、西妥昔单抗、西 他土珠单抗、克利凡珠单抗、可纳木单抗、达西珠单抗、依决洛单抗、依 帕珠单抗、厄妥韦单抗、伊瑞西珠单抗、法乐特珠单抗、斐济木单抗、吉 妥珠单抗、格雷木单抗、替伊莫单抗、伊戈伏单抗、英妥木单抗、伊珠单 抗、拉贝珠单抗、来沙木单抗、林妥珠单抗、鲁卡木单抗、马妥珠单抗、 米妥莫单抗、伊那莫单抗(naptumomabestafenatox)、奈西木单抗、奥普珠单 抗、奥戈伏单抗、帕尼单抗、沛土莫单抗、培妥珠单抗、普立木单抗、利 妥昔单抗
Figure BDA0003135424430001631
利妥木单抗、若巴木单抗、沙妥莫单抗、西罗珠单 抗、他普莫单抗(taplitumomab)、替妥莫单抗、替妥莫单抗、替西木单抗(翠 每莫单抗)、替加珠单抗、曲妥珠单抗
Figure BDA0003135424430001632
托西莫单抗、翠每 莫单抗、土可珠单抗西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、伏洛昔单抗和 扎芦木单抗。
在特定的实施方案中，就HER2而言，导向至细胞表面标志物的抗体 是培妥珠单抗或曲妥珠单抗，而就EGFR(HER1)而言，抗体是西妥昔单抗 或帕尼单抗；并且就CD20而言，抗体是利妥昔单抗，并且就VEGF-A而 言是贝伐单抗，并且就CD-22而言，抗体是依帕珠单抗或维妥珠单抗，并 且就CEA而言，抗体是拉贝珠单抗。
示例性半胱氨酸工程化的肽或肽模拟物包括整联蛋白靶向肽(RGD肽)、 LHRH受体靶向肽、ErbB2(HER2)受体靶向肽、前列腺特异性膜结合抗原 (PSMA)靶向肽、脂蛋白受体LRP1靶向肽、ApoE蛋白质衍生的肽、ApoA 蛋白质肽、生长激素抑制素受体靶向肽、蝎氯毒素衍生的肽以及蛙皮素。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的肽或肽模拟物是LHRH受体靶 向肽和ErbB2(HER2)受体靶向肽。
示例性半胱氨酸工程化的蛋白质包括胰岛素、转铁蛋白、纤维蛋白原-γ 片段、血小板反应蛋白、紧密连接蛋白、载脂蛋白E、Affibody分子，例如 ABY-025、锚蛋白重复蛋白质、锚蛋白样重复蛋白和合成肽。
在一些实施方案中，蛋白质-药物缀合物包含广谱细胞毒素与细胞表面 标志物的组合，就HER2而言，例如培妥珠单抗或曲妥珠单抗；对于EGFR 而言，为例如西妥昔单抗和帕尼单抗；就CEA而言，为例如拉贝珠单抗； 就CD20而言，为例如利妥昔单抗；就VEGF-A而言，为例如贝伐单抗； 或就CD-22而言，为例如依帕珠单抗或维妥珠单抗。
在一些实施方案中，在本公开中使用的蛋白质-药物缀合物或蛋白质缀 合物包括两种或更多种基于蛋白质的识别分子的组合，例如，导向至肿瘤 细胞上的EGF受体(EGFR)和T细胞上的CD3和CD28的双特异性抗体的 组合；抗体或衍生自Fab、Fab2、scFv或骆驼抗体重链片段的抗体与肽或 肽模拟物的组合；抗体或衍生自Fab、Fab2、scFv或骆驼抗体重链片段的 抗体与蛋白质的组合；两种双特异性抗体例如CD3 x CD19加CD28 x CD22 双特异性抗体的组合。
在一些实施方案中，在本公开中使用的半胱氨酸工程化的蛋白质-药物 缀合物或半胱氨酸工程化的蛋白质缀合物包含基于蛋白质的识别分子，其 为对抗抗原的抗体，例如，曲妥珠单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、贝伐 单抗、依帕珠单抗、维妥珠单抗、拉贝珠单抗、B7-H4、B7-H3、CA125、 CDH6、CD33、CXCR2、CEACAM5、EGFR、FGFR1、FGFR2、FGFR3、 FGFR4、GCC(GUCY2C)、HER2、LIV1、LY6E、NaPi2b、c-Met、间皮素、 NOTCH1、NOTCH2、NOTCH3、NOTCH4、PD-L1、PTK7、c-Kit、MUC1、 MUC13。和5T4。
在一些实施方案中，本公开的半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物或 半胱氨酸工程化的蛋白质缀合物包含基于蛋白质的识别分子，其为对抗 5T4的抗体，例如人源化抗-5T4 scFvFc抗体。
合适的5T4靶向配体或免疫球蛋白的实例包括市售可得的，或已经描 述于专利或非专利文献，例如US 8,044,178、US 8,309,094、US 7,514,546、 EP1036091(作为TroVaxTM，Oxford Biomedica市售可得)、EP2368914A1、 WO 2013041687 A1(Amgen)、US 2010/0173382和P.Sapra等人，Mol. Cancer Ther.2013，12：38-47中的那些。抗-5T4抗体公开于2013年9月13号 提交的美国临时申请号61/877,439和2013年6月17号提交的美国临时申请号61/835,858中。每一篇专利文件和科学出版物的内容通过引用以其全 部并入本文。
如本文所用的，术语“5T4抗原结合部分”是指能够选择性地结合5T4抗 原的多肽序列。在示例性缀合物中，5T4抗原结合部分通常包含由抗-5T4 抗体改造的单链scFv-Fc形式。单链可变片段(scFv-Fc)为免疫球蛋白的重链 (VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白，其与接头肽连接，并且还连接于包含 抗体的铰链区和CH2和CH3区的Fc区(抗体部分彼此或与其他肽序列的任 何此类组合有时在本文中被称为“免疫融合”分子)。在此类scFvFc分子内， scFv片段可以通过接头肽以C-末端连接于Fc片段的N-末端。
在一些实施方案中，本公开的半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物或 半胱氨酸工程化的蛋白质缀合物包含基于蛋白质的识别分子，其为Her-2或 NaPi2b抗体。
例如，适合于本公开的缀合物或支架的Her-2抗体包含：含有氨基酸序 列FTFSSYSMN(SEQ ID NO：25)的可变重链互补决定区1(CDRH1)；含有 氨基酸序列YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO：26)的可变重链互补决定 区2(CDRH2)；含有氨基酸序列GGHGYFDL(SEQ ID NO：27)的可变重链 互补决定区3(CDRH3)；含有氨基酸序列RASQSVSSSYLA(SEQ ID NO： 28)的可变轻链互补决定区1(CDRL1)；含有氨基酸序列GASSRAT(SEQ ID NO：21)的可变轻链互补决定区2(CDRL2)；以及含有氨基酸序列 QQYHHSPLT(SEQID NO：29)的可变轻链互补决定区3(CDRL3)(参见，例 如2107年8月22日公布的US 9,738,720)。
在一些实施方案中，适合于本公开的缀合物或支架的NaPi2b抗体包含： 含有氨基酸序列SASQDIGNFLN(SEQ ID NO：8)的可变轻链互补决定区1 (CDRL1)；含有氨基酸序列YTSSLYS(SEQ ID NO：9)的可变轻链互补决定 区2(CDRL2)；含有氨基酸序列QQYSKLPLT(SEQID NO：10)的可变轻链 互补决定区3(CDRL3)；含有氨基酸序列GYTFTGYNIH(SEQ ID NO：5)的 可变重链互补决定区1(CDRH1)；含有氨基酸序列 AIYPGNGDTSYKQKFRG(SEQ ID NO：6)的可变重链互补决定区2 (CDRH2)；以及含有氨基酸序列GETARATFAY(SEQ ID NO：7)的可变重链 互补决定区3(CDRH3)(参见，例如2017年3月13日提交的共同未决申请 US15/457,574)。
半胱氨酸工程化的PBRM-药物缀合物
在一些实施方案中，本公开的缀合物包含一次或更多次出现的D，其中 D为治疗剂，例如药物，其中一次或更多次出现的D可以是相同或不同的。
在一些实施方案中，一次或多次出现的半胱氨酸工程化的PBRM的工 程化的半胱氨酸(例如，在轻链V205C处)连接至接头-药物部分，其中一次 或多次出现的半胱氨酸工程化的PBRM可以是相同或不同的。在一些实施 方案中，包含一次或更多次出现的D的一个或多个接头-药物部分连接至一 个半胱氨酸工程化的PBRM(例如，半胱氨酸工程化的抗体)。
在一些实施方案中，D是(a)澳瑞他汀化合物；(b)加利车霉素化合物； (c)倍癌霉素化合物；(d)SN38；(e)吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001651
(f)长春花化合物； (g)微管溶素化合物；(h)非天然喜树碱化合物；(i)美登木素化合物；(j)DNA 结合药物；(k)激酶抑制剂；(l)MEK抑制剂；(m)KSP抑制剂；(n)拓扑异构 酶抑制剂；(o)DNA烷基化药物；(p)RNA聚合酶；(q)PARP抑制剂；(r) NAMPT抑制剂；(s)拓扑异构酶抑制剂；(t)蛋白质合成抑制剂；(u)DNA结 合药物；(v)DNA嵌入药物；或(w)免疫调节化合物的衍生物。
在一些实施方案中，D是(a)澳瑞他汀化合物；(b)加利车霉素化合物； (c)倍癌霉素化合物；(d)拓扑异构酶抑制剂；(e)吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001661
化合物； (f)长春花化合物；(g)蛋白质合成抑制剂；(h)RNA聚合酶抑制剂；(i)微管 蛋白结合化合物；或(j)NAMPT抑制剂或它们的类似物。
在一些实施方案中，D是(a)澳瑞他汀化合物；(b)加利车霉素化合物； (c)倍癌霉素化合物；(d)喜树碱化合物；(e)吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001662
化合物；或 (f)长春花化合物；或它们的类似物。
在一些实施方案中，奥瑞他汀化合物是奥瑞他汀、多拉司他汀、单甲 基奥瑞他汀E(MMAE)、单甲基奥瑞他汀F(MMAF)、奥瑞他汀F、AF- HPA、MMA-HPA或苯二胺(AFP)。
在一些实施方案中，倍癌霉素或其类似物是倍癌霉素A、倍癌霉素B1、 倍癌霉素B2、倍癌霉素C1、倍癌霉素C2、倍癌霉素D、倍癌霉素SA、 CC-1065、阿多来新、比折来新，或卡折来新。
在一些实施方案中，喜树碱化合物是喜树碱、CPT-11(伊立替康)、SN- 38或托泊替康。
在一些实施方案中，吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001663
化合物是吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001664
单体、对称的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001665
二聚体或不对称的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003135424430001666
二聚体。
本公开的PBRM-药物缀合物包含具有以下分子量的半胱氨酸工程化的 PBRM：约40kDa或更大(例如，约60kDa或更大、约80kDa或更大、约 100kDa或更大、约120kDa或更大、约140kDa或更大、约160kDa或更大、 约180kDa或更大、或约200kDa或更大，或约40-200kDa、约40-180kDa、 约40-140kDa、约60-200kDa、约60-180kDa、约60-140kDa、约80-200kDa、 约80-180kDa、约80-140kDa、约100-200kDa、约100-180kDa或约100- 140kDa)。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的PBRM具有约40kDa或更大(例 如，约60kDa或更大、约80kDa或更大、约100kDa或更大、约120kDa或 更大、约140kDa或更大、约160kDa或更大、约180kDa或更大、或约200kDa或更大，或约40-200kDa、约40-180kDa、约40-140kDa、约60- 200kDa、约60-180kDa、约60-140kDa、约80-200kDa、约80-180kDa、约 80-140kDa、约100-200kDa、约100-180kDa或约100-140kDa)的分子量，并 具有巯基(即，-SH或硫醇)基团。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为10或更小(例如，2或更小)。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有约40kDa或更大(例如，约60kDa或更大、约80kDa 或更大、约100kDa或更大、约120kDa或更大、约140kDa或更大、约 160kDa或更大、或约180kDa或更大；或约40-200kDa、约40-180kDa、约 40-140kDa、约60-200kDa、约60-180kDa、约60-140kDa、约80-200kDa、 约80-180kDa、约80-140kDa、约100-200kDa、约100-180kDa、或约100- 140kDa)的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有约40kDa至约200kDa的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有约40kDa至约80kDa的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有40kDa至200kDa的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，PBRM具 有40kDa至80kDa的分子量。
在一些实施方案中，在该分子量范围内的半胱氨酸工程化的PBRM包 括，但不限于例如抗体片段，诸如，例如Fab。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有约60kDa至约120kDa的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有60kDa至120kDa的分子量。
在一些实施方案中，在该分子量范围内的PBRM包括，但不限于例如 骆驼抗体、Fab2、scFvFc等等。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有约140kDa至约180kDa的分子量。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有140kDa至180kDa的分子量。
在一些实施方案中，在该分子量范围内的PBRM包括，但不限于例如 全长抗体，例如IgG、IgM。
在一些实施方案中，本文描述的这些半胱氨酸工程化的靶向配体、接 头和药物或前药片段可以例如根据所公开的技术和方法组装成本公开的缀 合物或支架。下文通过非限制性举例方式描述本公开的治疗和靶向缀合物 以及制造它们的方法。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为2或更小。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为2。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为1。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为4或更小。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为4。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为3。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为6或更小。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为6。
在一些实施方案中，在接头-药物部分和半胱氨酸工程化的PBRM之间 形成的硫键的总数(或连接点的总数)为5。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约1∶1和约 2∶1之间。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约1∶1和约 4∶1之间。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约1∶1和约 6∶1之间。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约2∶1和约 4∶1之间。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约2∶1和约 6∶1之间。
在一些实施方案中，接头-药物部分和PBRM之间的比率在约4∶1和约 6∶1之间。
在一些实施方案中，本公开还涉及包含至少两个部分的接头-药物部分， 其中每一个部分都能够缀合至PBRM中轻链V205C处的硫醇基，以便形成 半胱氨酸工程化的蛋白质-接头-药物缀合物。
在一些实施方案中，PBRM的一个或多个工程化的半胱氨酸的一个或 多个硫醇基团通过还原蛋白质来产生。PBRM的一个或多个工程化的半胱 氨酸的一个或多个硫醇基可以随后与一个或多个接头-药物部分反应，所述 接头-药物部分能够缀合至来自工程化的半胱氨酸的硫醇基，以便使半胱氨 酸工程化的PBRM与接头-药物部分缀合。在一些实施方案中，连接至半胱氨 酸工程化的PBRM的至少两个部分是马来酰亚胺基团。
在一些实施方案中，可以通过用还原剂(诸如DTT(克莱兰氏试剂，二 硫苏糖醇)或TCEP(三(2-羧乙基)膦盐酸盐))处理来活化半胱氨酸工程化的抗 体与接头-药物部分的缀合。在一些实施方案中，可以用过量的TCEP还原 全长的半胱氨酸工程化的单克隆抗体，以还原二硫键(例如，在新引入的工 程化的半胱氨酸和相应的亲本抗体中存在的半胱氨酸之间)，从而产生还原 形式的抗体。成对的半胱氨酸残基之间的链间二硫键可在部分氧化条件下 重整，例如，稀硫酸铜(CuSO4)水溶液或本领域已知的其他氧化剂。这种温 和的部分再氧化步骤可以允许以高保真度有效地形成链内二硫化物。新引 入的和未配对的工程化的半胱氨酸可能仍然可用于与接头-药物部分反应以 形成本公开的抗体缀合物。在一些实施方案中，添加过量的接头-药物部分 以实现缀合并形成半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物，并且纯化缀合混合 物以除去过量的接头-药物中间体和其他杂质。
在一些实施方案中，用于缀合的半胱氨酸工程化的PBRM中的工程化 的半胱氨酸的游离硫醇基团衍生自天然蛋白质的轻链V205C(Kabat编号)处 的半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，为了接头-药物部分的缀合，半胱氨酸工程化的 PBRM具有40kDa或更大(例如，60kDa或更大、80kDa或更大、或100kDa 或更大、120kDa或更大、140kDa或更大、160kDa或更大或180kDa或更大) 的分子量。在一些实施方案中，每个接头-药物部分的半胱氨酸工程化的 PBRM的比率在约1∶1和约1∶6之间；在约1∶1和约1∶5之间；在约1∶1和约 1∶4之间；在约1∶1和约1∶3之间；或在约1∶1和约1∶2之间。
在该分子量范围内的PBRM包括，但不限于例如全长抗体，例如IgG、 IgM。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，半胱氨酸 工程化的PBRM具有60kDa至120kDa的分子量。在一些实施方案中，每 个接头-药物部分的PBRM的比率在约1∶1和约1∶6之间；在约1∶1和约1∶5 之间；在约1∶1和约1∶4之间；在约1∶1和约1∶3之间；或在约1∶1和约1∶2 之间。
在该分子量范围内的半胱氨酸工程化的PBRM包括，但不限于例如抗 体片段，例如Fab2、scFcFv和骆驼抗体。
在一些实施方案中，为了与一个或多个接头-药物部分缀合，PBRM具 有40kDa至80kDa的分子量。在一些实施方案中，每个接头-药物部分的 PBRM的比率在约1∶1和约1∶6之间；在约1∶1和约1∶5之间；在1∶1和约 1∶4之间；在约1∶1和约1∶3之间，或在约1∶1和约1∶2之间。
在一些实施方案中，在该分子量范围内的半胱氨酸工程化的PBRM包 括，但不限于例如抗体片段，诸如Fab。
在一些实施方案中，本公开的特征在于用于与半胱氨酸工程化的基于 蛋白质的识别分子(PBRM)和/或治疗剂(D)缀合的支架，例如，本文公开的 式(II)-(XXIX)中任一个的支架。
在一些实施方案中，本文描述的携带药物的支架(即，未连接至半胱氨 酸工程化的PBRM)各自通常具有1的多分散指数(PDI)。
本文公开的缀合物和支架可以通过广泛渗滤法(extensive diafiltration)来纯化(即，除去任何起始原料)。若有必要，可以进行通过尺寸排阻色谱法的 额外的纯化，以除去任何聚集的缀合物。通常，如通过SEC所测定，纯化 的缀合物通常含有小于5％(例如，＜2％w/w)的聚集缀合物；如通过RP- HPLC所测定，小于0.5％(例如，＜0.1％w/w)的游离(未缀合的)药物；如通 过SEC所测定，小于1％的含药物携带肽的支架，以及通过HIC-HPLC所 测定，小于2％(例如，＜1％w/w)的未缀合的半胱氨酸工程化的PBRM。
下表B和C分别提供了本公开的携带药物的含肽支架和缀合物的实施 例。
表B
结构
Figure BDA0003135424430001711
结构
Figure BDA0003135424430001721
结构
Figure BDA0003135424430001731
结构
Figure BDA0003135424430001741
结构
Figure BDA0003135424430001751
结构
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结构
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结构
Figure BDA0003135424430001781
结构
Figure BDA0003135424430001791
结构
Figure BDA0003135424430001801
表C
结构
结构
Figure BDA0003135424430001811
结构
Figure BDA0003135424430001821
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结构
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结构
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结构
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结构
Figure BDA0003135424430001891
结构
Figure BDA0003135424430001901
结构
Figure BDA0003135424430001911
结构
Figure BDA0003135424430001921
结构
Figure BDA0003135424430001931
应当理解，XMT-1535的序列和结构可见于PCT申请号 PCT/US2017/022155和美国申请号15/457,574，它们的全部内容以引用的方 式并入本文。
在一些实施方案中，PBRM是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，PBRM 是XMT-1535。
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式(XXX) 的缀合物：
Figure BDA0003135424430001932
其中每个RA是
Figure BDA0003135424430001941
在其他实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式(XXX) 的缀合物：
Figure BDA0003135424430001942
其中每个RA是
Figure BDA0003135424430001951
Figure BDA0003135424430001961
Figure BDA0003135424430001971
Figure BDA0003135424430001981
Figure BDA0003135424430001991
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430001992
在一些实施方案中，蛋白质-药物缀合物具有式(XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002001
在一些实施方案中，蛋白质-药物缀合物具有式(XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002002
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002011
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002021
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002022
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002031
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是：
Figure BDA0003135424430002032
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物具有式 (XXX)，其中每个RA是
Figure BDA0003135424430002041
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式(XXXI- 1)、(XXXI-2)、(XXXI-3)或(XXXI-4)的缀合物：
Figure BDA0003135424430002042
Figure BDA0003135424430002051
在一些实施方案中，蛋白质-药物缀合物是式(XXXII)的缀合物：
Figure BDA0003135424430002052
其中每个RB是：
Figure BDA0003135424430002053
Figure BDA0003135424430002061
在一些实施方案中，在蛋白质-药物缀合物是式(XXXI-1)、(XXXI-2)、 (XXXI-3)、(XXXI-4)或(XXXII)的缀合物中，变量-LD-D是：
Figure BDA0003135424430002062
Figure BDA0003135424430002071
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式 (XXXIII-1)、(XXXIII-2)、(XXXXIII-3)、或(XXXIII-4)的缀合物：
Figure BDA0003135424430002081
Figure BDA0003135424430002091
Figure BDA0003135424430002101
Figure BDA0003135424430002111
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式 (XXXIII-6)、(XXXIII-7)、(XXXXIII-8)或(XXXIII-9)的缀合物：
Figure BDA0003135424430002112
Figure BDA0003135424430002121
Figure BDA0003135424430002131
在一些实施方案中，半胱氨酸工程化的蛋白质-药物缀合物是式 (XXXIII-5)的缀合物：
Figure BDA0003135424430002132
Figure BDA0003135424430002141
其中PBRM是半胱氨酸工程化的PBRM，并且d13如本文所定义。
药物组合物
还包括药物组合物，其包含在可接受的载体例如稳定剂、缓冲剂等等 中的一种或更多种如本文所公开的缀合物。通过标准方式，在含有或不含 用以形成药物组合物的稳定剂、缓冲剂等等的情况下，可以施用缀合物并 将其引入受试者体内。施用可以是局部施用(包括眼部施用以及施用至粘膜， 包括阴道递送和直肠递送)；肺部施用，例如通过粉剂或气雾剂的吸入或吹 入，包括借助于喷雾器；气管内施用；鼻内施用；表皮和透皮施用；口服施用或肠胃外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输液， 或者颅内施用，例如，鞘内施用或脑室内施用。可以配制该缀合物并用作 用于可注射施用的无菌溶液剂和/或混悬剂；用于在注射/输液之前重构的冻 干粉剂；局部组合物；用于口服施用的片剂、胶囊剂或酏剂；或者用于直 肠施用的栓剂；以及本领域中已知的其他组合物。
药物组合物或制剂是指呈适合于施用(例如，全身性施用)至细胞或受试 者(包括例如人)的形式的组合物或制剂。合适的形式部分取决于用途或进入 的途径，例如口服、吸入、透皮或通过注射/输液。此类形式不应防止组合 物或制剂到达靶细胞(即，希望药物递送至的细胞)。在一些实施方案中，注 射至血流中的药物组合物应当是可溶性的。其他的因素是本领域中已知的， 并包括下列考虑，例如毒性和防止组合物或制剂发挥其功效的形式。
所谓“全身性施用”表示缀合物在血流中的体内全身性吸收或累积，接 着分布到整个身体。导致全身性吸收的施用途径包括，但不限于：静脉内 施用、皮下施用、腹膜内施用、吸入施用、口服施用、肺内施用和肌内施 用。这些施用途径中的每一个都将缀合物暴露于可接近的病变组织。活性 剂进入循环的速率已显示是分子量或尺寸的函数。通过PBRM的特异性， 使用本公开的缀合物可以将药物递送定位在某些细胞，例如癌细胞。
“药学上可接受的制剂”表示可使缀合物有效分布于最适合于所希望的 其活性的身体部位中的组合物或制剂。在一些实施方案中，有效的递送在 通过网状内皮系统的清除或可以导致效力或毒性降低的脱靶结合产生之前 发生。适合于与缀合物一起配制的试剂的非限制性实例包括：P-糖蛋白质 抑制剂(例如Pluronic P85)，其可以增强活性剂进入CNS；生物可降解的聚 合物，例如在脑内移植之后用于持续释放递送的聚(DL-丙交酯-乙交酯)共聚 物微球；以及负载纳米粒子，例如由聚氰基丙烯酸丁酯制成的负载纳米粒 子，其可以递送活性剂穿越血脑屏障并可以改变神经元摄取机制。
本文还包括为了储存或施用而制备的药物组合物，其包含在药学上可 接受的载体或稀释剂中的药学上有效的量的合意的缀合物。用于治疗用途 的可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂是药学领域中众所周知的。在一些实 施方案中，可以提供缓冲剂、防腐剂、填充剂、分散剂、稳定剂、染料。 此外，可以使用抗氧化剂和助悬剂。合适的载体、稀释剂和/或赋形剂的实 例包括，但不限于：(1)杜伯科(Dulbecco)磷酸盐缓冲盐水，pH约为6.5， 其将含有约1mg/ml至25mg/ml的人血清白蛋白，(2)0.9％的盐水(0.9％w/v NaCl)，和(3)5％(w/v)的右旋糖。
如本文所用，术语“药学上有效的量”是指治疗、缓解或预防已鉴定的 疾病或症状，或者呈现出可检测到的治疗或抑制效果的药剂的量。该效果 可以通过本领域中已知的任何分析方法检测。对于受试者的精确的有效量 将取决于受试者的体重、尺寸和健康状况；病症的性质和程度；以及选择 用来施用的治疗剂或治疗剂的组合。对于给定状况的药学上有效的量可以 通过在临床医生的技术和判断范围内的常规实验来确定。在优选的方面中， 该疾病或病症可以通过基因沉默来治疗。
对于任何缀合物而言，药学上有效的量最初可以在细胞培养分析(例如， 肿瘤细胞的培养分析)中或在动物模型(通常为大鼠、小鼠、兔、狗或猪)中 估测。动物模型也可以用于确定适当的浓度范围和施用途径。然后，此类 信息可以用于确定人类施用的有用剂量和途径。通过细胞培养或实验动物 中的标准药学流程可以确定治疗和/或预防效力和毒性，例如，ED50(在50％ 的群体内治疗有效的剂量)和LD50(对于50％的群体致死的剂量)。毒性效果 和治疗和/或预防效果之间的剂量比是治疗指数，并且其可以表示为比率 LD50/ED50。优选呈现出大的治疗指数的药物组合物。取决于所采用的剂型、 患者的敏感度和施用途径，剂量可在该范围内变化。
在一些实施方案中，可以使用Cell titer Glo，评价药物或其衍生物、药 物-缀合物或PBRM-药物缀合物在几种细胞系中抑制肿瘤生长的能力。剂量 反应曲线可以使用SoftMax Pro软件生成，而IC50值可以由四参数曲线拟合 来确定。采用的细胞系可以包括为PBRM的靶标的那些细胞系以及包含在 测试缀合物中的不为PBRM的靶标的对照细胞系。
在一些实施方案中，配制缀合物用于通过注射胃肠外施用，包括使用 常规的导管插入术或输液。注射用制剂可以以单位剂型形式呈现，例如， 与添加的防腐剂一起在安瓿或多剂量容器中。缀合物可以在无菌介质中经 肠胃外施用。取决于所使用的媒介和浓度，缀合物可以悬浮于或溶解于媒 介中。有利地，佐剂例如局部麻醉剂、防腐剂以及缓冲剂可以溶解于媒介 中。如本文所用的术语“胃肠外”包括经皮、皮下、血管内(例如，静脉内)、 肌内或鞘内注射或输液技术等等。此外，这里提供了药物制剂，其包含缀 合物和药学上可接受的载体。可以给出与一种或更多种非毒性药学上可接 受的载体和/或稀释剂和/或佐剂，以及(如果需要)其他活性成分结合的一种 或更多种缀合物。
无菌可注射制剂也可以是在无毒性的、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂 中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如作为在1，3-丁二醇中的溶液剂。在 可接受的媒介和溶剂中，可以采用的有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶 液。此外，无菌的、非挥发性油类通常用作溶剂或悬浮介质。出于该目的， 可采用无刺激性的非挥发性油，其包括合成的单甘油酯或甘油二酯。此外， 脂肪酸(例如油酸)可用于制备可注射剂。
本文描述的缀合物和组合物可以以适当的形式施用，优选肠胃外施用， 更优选静脉内施用。就肠胃外施用而言，该缀合物或组合物可以是水性或 非水性无菌溶液剂、混悬剂或乳剂。丙二醇、植物油和可注射的有机酯， 例如油酸乙酯，可用作溶剂或媒介。该组合物也可以含有佐剂、乳化剂或 分散剂。
等级在约0.001mg/kg体重/天和约140mg/kg体重/天之间的剂量水平可 用于治疗如上指出的病症(每个受试者在约0.05mg和约7g/天之间)。在一些 实施方案中，施用给患者的剂量在约0.001mg/kg至约100mg/kg受试者体 重之间。在一些实施方案中，施用给患者的剂量在约0.01mg/kg至约15 mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用给患者的剂量在约0.1 mg/kg和约15mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施用给患者的 剂量在约0.1mg/kg和约20mg/kg受试者体重之间。在一些实施方案中，施 用的剂量在约0.1mg/kg至约5mg/kg或约0.1mg/kg至约10mg/kg受试者 体重之间。在一些实施方案中，施用的剂量在约1mg/kg至约15mg/kg受 试者体重之间。在一些实施方案中，施用的剂量在约1mg/kg至约10 mg/kg受试者体重之间。可以与载体材料组合以产生单剂型的缀合物的量根 据受治疗的宿主和特定的施用模式而变化。剂量单位形式可以通常含有在 约0.001mg和约100mg之间；在约0.01mg和约75mg之间；或在约0.01mg 和约50mg之间；或在约0.01mg和约25mg之间；的缀合物。
对于静脉内施用，剂量水平可以包括在上文段落中描述的范围，或约 0.01mg至约200mg缀合物/kg动物体重。在一个方面，该组合物可以包含 约1至约100mg缀合物/kg动物体重。在一些方面，施用的量将在约 0.1mg/kg至约25mg化合物/kg体重的范围内。
在一些实施方案中，可以如下施用缀合物。该缀合物可以作为静脉注 射每天提供，持续约5天，作为大丸剂每天提供，持续约5天，或者作为 连续输液提供，持续约5天。
或者，缀合物可以每周施用一次，持续六周或更长时间。作为另一种 替代方案，缀合物可以每两周或三周施用一次。给定的大丸剂剂量是在约 50至约400mL的生理盐水中，其中可以添加约5至约10mL的人血清白蛋 白。在每24小时期间内，给定的连续输液是在约250至约500mL的生理盐 水中，其中可以添加约25至约50mL的人血清白蛋白。
在一些实施方案中，在治疗后约一周至约四周，患者可接受第二次疗 程。如果临床状况允许，有关施用途径、赋形剂、稀释剂、剂量和时间的 特定临床方案可以由本领域技术人员来确定。
在一些实施方案中，治疗有效量可以基于另一个规律的时间表，即， 每天、每周、每月或每年，或基于具有不同的施用天数、周数、月数等的 不规律的时间表来提供。或者，待施用的治疗有效量可以变化。在一些实 施方案中，对于首次剂量而言，治疗有效量高于一种或更多种后续剂量的 治疗有效量。在一些实施方案中，对于首次剂量而言，治疗有效量低于一 种或更多种后续剂量的治疗有效量。等效剂量可以经各种时间段施用，包 括但不限于，约每2小时、约每6小时、约每8小时、约每12小时、约每 24小时、约每36小时、约每48小时、约每72小时、约每周、约每2周、 约每3周、约每月和约每2月。与完整的疗程对应的剂量的数量和频率将 根据有关监管机构的建议和卫生保健专业人员的判断来确定。本文描述的 治疗有效量是指在给定时间段内施用的总量；即，如果施用超过一种本文 描述的不同的缀合物，治疗有效量对应于施用的总量。要理解的是，对于 特定受试者的特定剂量水平取决于多种因素，包括具体缀合物的活性、年 龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径、和排泄速 率、与其他活性剂的组合以及经历治疗的具体疾病的严重性。
在一些实施方案中，本文公开的缀合物的治疗有效量通常涉及实现治 疗目标所需的量。如上所述，这可以是抗体与其靶抗原之间的结合相互作 用，在某些情况下，这会干扰靶行使功能。需要施用的量还将取决于抗体 对其特异性抗原的结合亲和力，并且还将取决于被施用的抗体从被施用其 的其他受试者的自由体积中消耗的速率。通过非限制性举例方式，本文公 开的缀合物的治疗有效剂量的常见范围可以是约0.1mg/kg体重至约50mg/kg体重、约0.1mg/kg体重至约100mg/kg体重或约0.1mg/kg体重至约 150mg/kg体重。常见的给药频率范围可以是，例如，每天两次至每月一次 (例如，每天一次，每周一次；每隔一周一次；每3周一次或每月一次)。在 一些实施方案中，本文公开的缀合物可以以下列剂量施用：(例如，作为每 周一次剂量、每2周一次剂量、每3周一次剂量或每月一次剂量)约0.1mg/kg至约20mg/kg(例如，0.2mg/kg、0.5mg/kg、0.67mg/kg、1mg/kg、 2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、 10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、 17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg或20mg/kg)。在一些实施方案中，本文公开 的缀合物可以以下列剂量施用：(例如，作为每周一次剂量、每2周一次剂 量、每3周一次剂量或每月一次剂量)约0.1mg/kg至约20mg/kg(例如， 0.2mg/kg、0.5mg/kg、0.67mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、 5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、 12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、19mg/kg或20mg/kg)，用于治疗癌症。
为施用给非人动物，也可以将缀合物添加至动物饲料或饮用水中。可 能便利的是，配制动物饲料和饮用水，以便动物随着其饮食摄取治疗适当 量的缀合物。还可能便利的是，作为用于添加至饲料或饮用水中的预混合 料提供缀合物。
也可以将缀合物与其他治疗化合物组合施用给受试者，以增加整体的 治疗效果。使用多种化合物来治疗病症可以增加有利的效果，同时降低副 作用的出现。在一些实施方案中，将缀合物与化学治疗剂组合使用，所述 化学治疗剂例如公开于美国专利号7,303,749中的那些。在其他实施方案中， 化学治疗剂包括但不限于来曲唑、奥沙利铂、多西他赛、5-FU、拉帕替尼、 卡培他滨、亚叶酸钙、厄洛替尼、培妥珠单抗、贝伐单抗和吉西他滨。本 公开还提供药物试剂盒，其包括一个或更多个容器，其填充有一种或更多 种本公开的缀合物和/或组合物，包括一种或更多种化学治疗剂。此类试剂 盒也可以包括，例如，其他化合物和/或组合物、用于施用该化合物和/或组 合物的装置以及以管理药品或生物制品的生产、使用和销售的政府机构所 规定的形式书写的说明书。本文描述的组合物可被包装为单次剂量或用于 连续的或周期性的间断施用。对于连续施用，药物包或试剂盒可包含在每 个剂量单位(例如，上述或在药物递送中利用的溶液或其他单位)中的缀合物， 和任选的针对每日、每周或每月施用剂量，针对预定的时间长度或如处方 规定的说明书。如果需要改变组合物、组合物的各组分的浓度，或组合物 内缀合物或药剂随时间推移的相对比率，药物包或试剂盒可含有提供所需 可变性的一系列剂量单位。
本领域已知用于分配周期性口服使用的药剂的众多药物包或试剂盒。 在一些实施方案中，药物包具有针对每个时期的指示。在一些实施方案中， 药物包为有标签的泡罩包装、标度分配器包装或瓶。试剂盒的包装装置本 身可搭配活动以用于施用，例如注射器、移液管、滴眼器或其他此类装置， 制剂可从这些装置施用于身体的受侵袭区域、注射到受试者体内或甚至施 加于试剂盒的其他组分和与试剂盒的其他组分混合。
使用方法
治疗方法
在一些实施方案中，本公开的蛋白质-药物缀合物用于治疗动物的方法。 在一些实施方案中，本公开的蛋白质-药物缀合物用于治疗哺乳动物的方法。 在一些实施方案中，本公开的蛋白质-药物缀合物用于治疗人类(例如，男性、 女性、婴儿、儿童或成人)的方法。在一些实施方案中，本公开的缀合物可 用于治疗动物的方法，其包括将本公开的生物可降解的、生物相容性的缀 合物施用给动物。在一些实施方案中，本公开的缀合物可以可溶性的线型 聚合物、共聚物、缀合物、胶体、颗粒、凝胶、固体物品、纤维、膜等形 式进行施用。本文公开的生物可降解的、生物相容性的缀合物可以在药物 控释系统、用于低侵入性手术操作的制剂等中用作药物载体和药物载体组 分。药物制剂可以是可注射的、可植入的等。
在一些实施方案中，本公开提供在有需要的受试者中治疗疾病或病症 的方法，其包括向受试者施用有效量的至少一种本公开的缀合物；其中所 述缀合物在生物降解时释放一种或更多种治疗剂。
在一些实施方案中，可用缀合物治疗的特殊种类的癌症包括但不限于： (1)实体瘤，包括但不限于纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨 原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、 滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、结肠直肠 癌、肾癌、胰癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、喉癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、 乳突癌、乳突状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌胆管 癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯瘤、子宫颈癌、子宫癌、 睾丸痛、小细胞肺痛、非小细胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神经胶质 瘤、胶质母细胞瘤、多形性星状细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室 管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、寡枝神经胶质细胞瘤、脑 脊膜瘤、皮肤癌、黑色素瘤、成神经细胞瘤和视网膜母细胞瘤；(2)血载性 癌，包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病″ALL″、急性成淋巴B-细胞白 血病、急性成淋巴T-细胞白血病、急性成髓细胞性白血病″AML″、急性前 髓细胞性白血病″APL″、急性成单核细胞性白血病、急性红血球性白血病、 急性成巨核细胞性白血病、急性髓单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性 白血病、急性未分化性白血病、慢性髓细胞性白血病″CML″、慢性淋巴细 胞性白血病″CLL″、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、急性和慢性白血病，例 如，成淋巴细胞性髓细胞源性白血病和淋巴细胞性髓细胞性白血病；和(3) 淋巴瘤例如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、沃尔丹斯特 伦巨球蛋白血症、重链病和真性红血球增多症。
在一些实施方案中，缀合物可以体外、体内和/或离体施用，以治疗患 有以下癌症的患者和/或调节患有以下癌症的患者内的选定细胞群体的生长： 肛门癌、星形细胞瘤、白血病、淋巴瘤、头颈癌、肝癌、睾丸癌、子宫颈 癌、肉瘤、血管瘤、食道癌、眼癌、咽癌、口部癌、间皮瘤、皮肤癌、骨 髓瘤、口腔癌、直肠癌、喉癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、前列 腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌或胃癌。
在一些实施方案中，癌症选自乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、 前列腺癌和卵巢癌。
在一些实施方案中，癌症选自卵巢癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、乳头 状甲状腺癌、子宫内膜癌、乳头状透明细胞肾细胞癌、胆管癌、乳腺癌、 肾癌、宫颈癌和唾液管癌。
在一些实施方案中，缀合物可以体外、体内和/或离体施用，以治疗、 预防某些病状或病症(例如，癌症)、降低其发展的风险和/或延迟其发病。 在一些实施方案中，本公开的缀合物可用于治疗、预防选自以下癌症、延 迟其的发展或以其他方式改善其症状：肛门癌、星形细胞瘤、白血病、淋 巴瘤、头颈癌、肝癌、睾丸癌、子宫颈癌、肉瘤、血管瘤、食道癌、眼癌、 咽癌、口部癌、间皮瘤、皮肤癌、骨髓瘤、口腔癌、直肠癌、喉癌、膀胱 癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、 结肠痛、胰腺痛、肾痛、胃痛、乳头状甲状腺痛、子宫内膜癌、乳头状肾 细胞癌、胆管癌和唾液管癌。
在一些实施方案中，缀合物可以体外、体内和/或离体施用，以治疗自 身免疫性疾病，例如全身性狼疮、类风湿性关节炎、牛皮癣和多发性硬化； 移植物排斥，例如肾移植排斥、肝移植排斥、肺移植排斥、心脏移植排斥 和骨髓移植排斥；移植物抗宿主疾病；病毒感染，例如CMV感染、HIV感 染和AIDS；以及寄生虫感染，例如贾第鞭毛虫病、变形虫病、血吸虫病等 等。
在一些实施方案中，缀合物也可以用于制备可用于治疗病症或减轻病 症严重性的药物，所述病症例如特征为细胞的异常生长(例如，癌症)。
在一些实施方案中，将治疗剂局部递送至特定的靶细胞、组织或器官。
在一些实施方案中，在实施本公开的方法时，缀合物还包含诊断标签 或与其结合。在一些实施方案中，诊断标签选自：用于γ闪烁扫描法和正 电子发射断层扫描(PET)的放射性药物或放射性同位素；用于磁共振成像 (MRI)的造影剂；用于计算机断层照相术的造影剂；用于X-射线成像法的 造影剂；用于超声波诊断方法的试剂；用于中子活化法的试剂；可以反射、 散射或影响X-射线、超声波、无线电波和微波的部分以及荧光团。在一些 实施方案中，缀合物在体内进一步受到监测。
诊断标签的实例包括，但不限于，用于γ闪烁扫描法和正电子发射断 层扫描(PET)的诊断用放射性药物或放射性同位素；用于磁共振成像(MRI) 的造影剂(例如顺磁原子和超顺磁纳米晶体)；用于计算机断层照相术的造影 剂；用于X-射线成像法的造影剂；用于超声波诊断方法的试剂；用于中子 活化法的试剂；以及可以反射、散射或影响X-射线、超声波、无线电波和 微波的部分；各种光学过程中的荧光团等。诊断用放射性药物包括发射γ- 射线的放射性核素，例如，铟-111、锝-99m和碘-131等。用于MRI(磁共振 成像)的造影剂包括磁性化合物，例如顺磁离子、铁、锰、钆、镧系元素、 有机顺磁部分以及超顺磁性、铁磁性和反铁磁性化合物，例如氧化铁胶体、 铁氧体胶体等。用于计算机断层照相术和其他基于X-射线的成像方法的造 影剂包括吸收X-射线的化合物，例如碘、钡等。用于基于超声波的方法的 造影剂包括可以吸收、反射和散射超声波的化合物，例如乳液、晶体、气 泡等。还有其他的实例包括用于中子活化法的物质，例如硼和钆。此外， 可以采用可反射、折射、散射或以其他方式影响X-射线、超声波、无线电 波、微波和其他可用于诊断过程的射线的标签。荧光标签可以用于光成像。 在一些实施方案中，修饰剂包含顺磁离子或基团。
在一些实施方案中，本公开提供治疗受试者的疾病或病症的方法，其 包括制备至少一种本公开的缀合物的水性制剂并且将所述制剂肠胃外注射 至受试者。
在一些实施方案中，本公开提供治疗受试者的疾病或病症的方法，其 包括制备包含至少一种本公开的缀合物的植入物并将所述植入物植入受试 者中。在某些示例性的实施方案中，该植入物是生物可降解的凝胶基质。
在一些实施方案中，本公开提供用于治疗有需要的动物的方法，其包 括根据上述方法施用缀合物。
在一些实施方案中，本公开提供用于引发动物的免疫应答的方法，其 包括施用如上述方法中的缀合物。
在一些实施方案中，本公开提供诊断动物的疾病的方法，其包括下列 步骤：
施用如上述方法中的缀合物，其中所述缀合物包含可检测的分子；以 及
检测该可检测的分子。
在一些实施方案中，非侵入性地进行检测该可检测的分子的步骤。在 一些实施方案中，使用合适的成像装置进行检测该可检测的分子的步骤。
在一些实施方案中，用于治疗动物的方法包括向动物施用作为用于已 经由此除去肿瘤或生长的外科伤口的填塞物的本公开的生物可降解的、生 物相容性的缀合物。该生物可降解的、生物相容性的缀合物填塞物将在恢 复期间取代肿瘤部位并且随着伤口的愈合而降解和消散。
在一些实施方案中，该缀合物与诊断标签结合用于体内监测。
上文描述的缀合物可以用于动物的治疗性、预防性和分析性(诊断性)治 疗。该缀合物通常计划在胃肠外施用，但是在一些情况下，可以通过其他 途径施用。
在一些实施方案中，可溶性或胶体状缀合物经静脉内施用。在一些实 施方案中，可溶性或胶体状缀合物经由局部(例如，皮下、肌内)注射施用。 在一些实施方案中，固体缀合物(例如，颗粒、植入物、药物递送系统)经由 植入或注射施用。
在一些实施方案中，施用包含可检测的标签的缀合物以研究动物体内 标签分布的格局和动力学。
在一些实施方案中，本文所公开的任何一种或更多种缀合物可以用于 实施本文描述的任何方法。
本文描述的缀合物的药物组合物可以与施用说明书一起包含在容器、 包装或分配器中。
在一些实施方案中，该组合物还可以含有多于一种如所治疗的特定适 应症所必需的活性化合物，优选具有不会不利地彼此影响的互补活性的那 些活性化合物。或者或另外，该组合物可以包含增强其功能的药剂，例如 细胞毒性剂、细胞因子、化学治疗剂或生长抑制剂。此类分子合适地以对 预期目的有效的量存在于组合中。
在一些实施方案中，活性化合物(例如，本公开的缀合物或药物)在组合 疗法中施用，即与可用于治疗病理状况或病症的其他药剂(例如治疗剂)组合， 所述病理状况或病症例如各种形式的癌症、自身免疫病症和炎性疾病。在 该上下文中，术语“组合”表示基本上同时(同时地或连续地)给予药剂。如果 连续给予，在开始施用第二种化合物时，则两种化合物中的第一种优选仍 可以在治疗部位检测到有效浓度。
在一些实施方案中，组合疗法可以包括一种或更多种本文公开的缀合 物，其与一种或更多种额外的抗体(其可以与用于形成该缀合物的抗体相同 或可以是不同的抗体)共同配制和/或共同施用。
在一些实施方案中，组合疗法可以包括一种或更多种治疗剂和/或佐剂。 在一些实施方案中，额外的治疗剂是小分子抑制剂、另一种基于抗体的疗 法、基于多肽或肽的疗法、基于核酸的疗法和/或其他生物制剂。
在一些实施方案中，额外的治疗剂是细胞毒性剂、化学治疗剂、生长 抑制剂、血管生成抑制剂、PARP(聚(ADP)-核糖聚合酶)抑制剂、烷基化剂、 抗代谢物、抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞毒性抗生素、任何其他核 酸损伤剂或免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，用于治疗癌症的治疗 剂包括但不限于：铂化合物(例如顺铂或卡铂)；紫杉烷(例如紫杉醇或多西 他赛)；拓扑异构酶抑制剂(例如伊立替康或拓普替康)；蒽环类抗生素(例如多柔比星
Figure BDA0003135424430002241
或脂质体多柔比星
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)；抗代谢物(例如， 吉西他滨、培美曲塞)；环磷酰胺；长春瑞滨
Figure BDA0003135424430002243
六甲基密胺； 异环磷酰胺(ifosfamide)；依托泊苷(etoposide)；血管生成抑制剂(例如贝伐单 抗
Figure BDA0003135424430002244
)、沙利度胺、TNP-470、血小板因子4、干扰素或内皮抑素)； PARP抑制剂(例如，Olaparib(LynparzaTM))；免疫检查点抑制剂，例如靶向 PD-1或PD-L的单克隆抗体((派姆单抗
Figure BDA0003135424430002245
阿特朱单抗 (MPDL3280A)或纳武单抗
Figure BDA0003135424430002246
)或CTA-4(伊匹单抗
Figure BDA0003135424430002247
激酶抑 制剂(例如索拉非尼或厄洛替尼)、蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米或卡非佐 米)、免疫调节剂(例如来那度胺或IL-2)、放射剂、ALK抑制剂(例如克唑替 尼(Xalkori)、色瑞替尼(Zykadia)、艾乐替尼(Alecensa)、dalantercept(ACE- 041)、布格替尼(AP26113)、恩曲替尼(NMS-E628)、PF-06463922 TSR-011、 CEP-37440和X-396)和/或其生物类似产品和/或其组合。其他合适的药剂包 括本领域技术人员认为是护理标准的药剂和/或本领域技术人员众所周知的 化学治疗剂。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CTLA-4的抑制剂。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的抗体。在一些实施方案 中，免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的单克隆抗体。在其他实施方案中， 免疫检查点抑制剂是针对CTLA-4的人或人源化抗体。在一些实施方案中， 抗-CTLA-4抗体阻断CTLA-4与抗原呈递细胞上表达的CD80(B7-1)和/或 CD86(B7-2)的结合。示例性的抗CTLA-4的抗体包括但不限于Bristol MeyersSquibb的抗-CTLA-4抗体伊匹单抗(也称为
Figure BDA0003135424430002251
MDX-010、 BMS-734016和MDX-101)；抗-CTLA4抗体，来自Millipore的克隆9H10； Pfizer的曲美木单抗(CP-675，206，ticilimumab)；和来自Abeam的抗-CTLA4 抗体克隆BNI3。
在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是在以下任何专利公开(通过引用 并入本文)中公开的抗-CTLA-4抗体：WO 2001014424；WO 2004035607； US2005/0201994；EP 1212422B1；W02003086459；WO2012120125； WO2000037504；WO2009100140；W0200609649；WO2005092380； WO2007123737；WO2006029219；WO20100979597；W0200612168；和WO1997020574。另外的CTLA-4抗体描述于美国专利号5,811,097、 5,855,887、6,051,227和6,984,720；PCT公开号WO 01/14424和WO 00/37504；以及美国公开号2002/0039581和2002/086014；和/或美国专利 号5,977,318、6,682,736、7,109,003和7,132,281中，这些专利以引用的方 式并入本文。在一些实施方案中，抗-CTLA-4抗体是例如在以下中公开的 那些：WO 98/42752；美国专利号6,682,736和6,207,156；Hurwitz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95(17)：10067-10071(1998)；Camacho等人，J. Clin.Oncol.，22(145)：Abstract No.2505(2004)(抗体CP-675206)；Mokyr等 人，Cancer Res.，58：5301-5304(1998)(以引用的方式并入本文)。
在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是如WO 1996040915中公开的 CTLA-4配体。
在一些实施方案中，CTLA-4抑制剂是CTLA-4表达的核酸抑制剂。在 一些实施方案中，抗CTLA4 RNAi分子可以采取由Mello和Fire在PCT公 开号WO 1999/032619和WO 2001/029058；美国公开号2003/0051263、 2003/0055020、2003/0056235、2004/265839、2005/0100913、2006/0024798、 2008/0050342、2008/0081373、2008/0248576和2008/055443；和/或美国专 利号6,506,559、7,282,564、7,538,095和7,560,438中描述的分子的形式(以 引用的方式并入本文)。在一些情况下，抗-CTLA4 RNAi分子采用由Tuschl 在欧洲专利号EP1309726(通过引用并入本文)中描述的双链RNAi分子的形 式。在一些情况下，抗-CTLA4RNAi分子采用由Tuschl在美国专利号 7,056,704和7,078,196(通过引用并入本文)中描述的双链RNAi分子的形式。 在一些实施方案中，CTLA4抑制剂是PCT公开号WO2004081021中描述的 适体。
另外，本公开的抗CTLA4 RNAi分子可以采用由Crooke在美国专利号 5,898,031、6,107,094、7,432,249和7,432,250以及欧洲申请号EP 0928290(通过引用并入本文)中描述的RNA分子形式。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实 施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的抗体。在一些实施方案中， 免疫检查点抑制剂是针对PD-L1的单克隆抗体。在一些实施方案中，免疫 检查点抑制剂是针对PD-L1的人或人源化抗体。在一些实施方案中，免疫 检查点抑制剂降低一种或更多种免疫检查点蛋白(例如PD-L1)的表达或活性。 在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂减少PD-1和PD-L1之间的相互作用。 示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例如，抗PD-L1抗体)、RNAi分子(例如， 抗-PD-L1 RNAi)、反义分子(例如抗PD-L1反义RNA)、显性失活蛋白质(例 如显性失活PD-L1蛋白质)和小分子抑制剂。抗体包括单克隆抗体、人源化 抗体、去免疫抗体和Ig融合蛋白。示例性的抗PD-L1抗体包括克隆EH12。 示例性的针对PD-L1的抗体包括：Genentech的MPDL3280A(RG7446)；来自BioXcell的抗小鼠PD-L1抗体克隆10F.9G2(Cat#BE0101)；来自Bristol- Meyer′sSquibb的抗PD-L1单克隆抗体MDX-1105(BMS-936559)和BMS- 935559；MSB0010718C；小鼠抗PD-L1克隆29E.2A3；和AstraZeneca的 MEDI4736。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是在以下任何专利公开(通 过引用并入本文)中公开的抗PD-L1抗体：WO2013079174；CN101104640； WO2010036959；WO2013056716；WO2007005874；WO2010089411；WO2010077634；WO2004004771；WO2006133396；W0201309906；US 20140294898、WO2013181634或WO2012145493。
在一些实施方案中，PD-L1抑制剂是PD-L1表达的核酸抑制剂。在一 些实施方案中，PD-L1抑制剂公开于以下专利公开(通过引用并入本文)之一 中：WO2011127180或WO2011000841。在一些实施方案中，PD-L1抑制剂 是雷帕霉素。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L2的抑制剂。在一些实 施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的抗体。在一些实施方案中， 免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的单克隆抗体。在其他或额外的实施方案 中，免疫检查点抑制剂是针对PD-L2的人或人源化抗体。在一些实施方案 中，免疫检查点抑制剂降低一种或更多种免疫检查点蛋白(例如PD-L2)的表 达或活性。在其他实施方案中，免疫检查点抑制剂减少PD-1和PD-L2之间 的相互作用。示例性免疫检查点抑制剂包括抗体(例和，抗PD-L2抗体)、 RNAi分子(例如，抗PD-L2 RNAi)、反义分子(例如，抗PD-L2反义RNA)、 显性失活蛋白质(例如，显性失活的PD-L2蛋白质)和小分子抑制剂。抗体 包括单克隆抗体、人源化抗体、去免疫抗体和Ig融合蛋白。
在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是GlaxoSmithKline的AMP-224 (Amplimmune)。在一些实施方案中，PD-L2抑制剂是rHIgM12B7。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是PD-L1的抑制剂。在一些实 施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。在一些实施方案中，免 疫检查点抑制剂是针对PD-1的单克隆抗体。在一些实施方案中，免疫检查 点抑制剂是针对PD-1的人或人源化抗体。在一些实施方案中，美国专利号 7,029,674、6,808,710或美国专利申请号20050250106和20050159351中公 开的PD-1生物活性抑制剂(或其配体)可以用于本文提供的组合中。示例性 的针对PD-1的抗体包括：来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆J43(Cat #BE0033-2)；来自BioXcell的抗小鼠PD-1抗体克隆RMP1-14(Cat #BE0146)；小鼠抗PD-1抗体克隆EH12；Merck的M-3475抗小鼠PD-1抗 体(
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派姆单抗、lambrolizumab、h409A1 1)；和AnaptysBio的抗 PD-1抗体，称为ANB011；抗体MDX-1 106(ONO-4538)；Bristol-MyersSquibb的人IgG4单克隆抗体纳武单抗(
Figure BDA0003135424430002272
BMS-936558、MDX1106)； AstraZeneca的AMP-514和AMP-224；以及Pidiiizumab(CT-011或hBAT-1)， CureTech Ltd.。
另外的示例性抗PD-1抗体由Goldberg等人，Blood 1 10(1)：186-192 (2007)、Thompson等人，Clin.Cancer Res.13(6)：1757-1761(2007)和 Korman等人，国际申请号PCT/JP2006/309606(公开号WO 2006/121168 A1) 描述，其各自通过引用明确并入本文。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是 在以下任何专利公开(通过引用并入本文)中公开的抗PD-1抗体：W0014557；WO2011110604；WO2008156712；US2012023752；WO2011110621；WO2004072286；WO2004056875；WO20100036959；WO2010029434； WO201213548；WO2002078731；WO2012145493；WO2010089411； WO2001014557；WO2013022091；WO2013019906；WO2003011911； US20140294898；和WO2010001617。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是如W0200914335(通过引用并入本 文)中所公开的PD-1结合蛋白。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是如WO2013132317(通过引用并入 本文)中所公开的PD-1的拟肽抑制剂。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是抗小鼠PD-1mAb：克隆J43， BioXCell(WestLebanon，N.H.)。
在一些实施方案中，PD-1抑制剂是PD-L1蛋白、PD-L2蛋白或片段， 以及在临床研究中测试的用于治疗某些恶性肿瘤的抗体MDX-1 106(ONO- 4538)(Brahmer等人，J ClinOncol.2010 28(19)：3167-75，2010年6月1日电 子出版)。如上所讨论的，技术人员可以基于PD-1和PD-L1/PD-L2之间相 互作用的已知结构域容易地鉴定和制备其他阻断抗体。在一些实施方案中， 对应于PD-1或PD-L1/PD-L2的IgV区域(或该区域的一部分)的肽可以用作抗原以使用本领域众所周知的方法来开发阻断抗体。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是IDO1的抑制剂。在一些实施 方案中，免疫检查点抑制剂是针对IDO1的小分子。示例性的针对IDO1的 小分子包括：Incyte的INCB024360、NSC-721782(也称为1-甲基-D-色氨酸) 和Bristol Meyers Squibb的F001287。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是LAG3(CD223)的抑制剂。在 一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的抗体。在一些实施方 案中，免疫检查点抑制剂是针对LAG3的单克隆抗体。在一些实施方案中， 免疫检查点抑制剂是针对LAG3的人或人源化抗体。在一些实施方案中， 针对LAG3的抗体阻断LAG3与主要组织相容性复合物(MHC)II类分子的 相互作用。示例性的针对LAG3的抗体包括：来自eBioscience的抗-Lag-3 抗体克隆eBioC9B7W(C9B7W)；来自LifeSpan Biosciences的抗Lag3抗体 LS-B2237；来自Immutep的IMP321(ImmuFact)；抗-Lag3抗体BMS- 986016；和LAG-3嵌合抗体A9H12。在一些实施方案中，抗LAG3抗体是 在以下任何专利公开(通过引用并入本文)中公开的抗LAG3抗体：WO2010019570；WO2008132601；或WO2004078928。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3(也称为HAVCR2) 的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的单克隆抗体。 在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对TIM3的人或人源化抗体。在 一些实施方案中，针对TIM3的抗体阻断TIM3与半乳凝素-9(Gal 9)的相互 作用。在一些实施方案中，抗TIM3抗体是在以下任何专利公开(通过引用 并入本文)中公开的抗TIM3抗体：WO2013006490；W0201155607；WO2011159877；或W0200117057。在一些实施方案中，TIM3抑制剂是 WO2009052623中公开的TIM3抑制剂。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对B7-H3的抗体。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是MGA271。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对MR的抗体。在一些实 施方案中，免疫检查点抑制剂是利丽单抗(IPH2101)。在一些实施方案中， 针对MR的抗体阻断KIR与HLA的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD137(也称为4-1BB 或TNFRSF9)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是乌瑞鲁单抗 (BMS-663513，Bristol-MyersSquibb)、PF-05082566(抗-4-1BB、PF-2566， Pfizer)或XmAb-5592(Xencor)。在一些实施方案中，抗CD137抗体是美国 公开申请号US 2005/0095244中公开的抗体；已授权的美国专利号 7,288,638中公开的抗体(例如20H4.9-IgG4[1007或BMS-663513]或20H4.9- IgG1[BMS-663031])；已授权的美国专利号6,887,673中公开的抗体[4E9或 BMS-554271]；已授权的美国专利号7,214,493中公开的抗体；已授权的美 国专利号6,303,121中公开的抗体；已授权的美国专利号6,569,997中公开 的抗体；已授权的美国专利号6,905,685中公开的抗体；已授权的美国专利 号6,355,476中公开的抗体；已授权的美国专利号6,362,325中公开的抗体 [1D8或BMS-469492；3H3或BMS-469497；或3E1]；已授权的美国专利号 6,974,863中公开的抗体(例如53A2)；或已授权的美国专利号6,210,669中公 开的抗体(例如1D8、3B8或3E1)。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂 是WO 2014036412中公开的那种。在一些实施方案中，针对CD137的抗体 阻断CD137与CD137L的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PS的抗体。在一些实施 方案中，免疫检查点抑制剂是巴维昔单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD52的抗体。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是阿仑单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD30的抗体。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是本妥昔单抗(brentuximab vedotin)。在一 些实施方案中，针对CD30的抗体阻断CD30与CD30L的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD33的抗体。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是吉妥珠单抗奥佐米星。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD20的抗体。在一些 实施方案中，免疫检查点抑制剂是替伊莫单抗。在一些实施方案中，免疫 检查点抑制剂是奥法木单抗。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是利 妥昔单抗。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是托西莫单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对CD27(也称为TNFRSF7) 的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是CDX-1127(Celldex Therapeutics)。在一些实施方案中，针对CD27的抗体阻断CD27与CD70 的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对OX40(也称为TNFRSF4 或CD134)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗OX40小鼠 IgG。在一些实施方案中，针对0×40的抗体阻断OX40与OX40L的相互作 用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对糖皮质激素诱导的肿瘤 坏死因子受体(GITR)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是 TRX518(GITR，Inc.)。在一些实施方案中，针对GITR的抗体阻断GITR与 GITRL的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对可诱导T-细胞共刺激因 子(ICOS，也称为CD278)的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂 是MEDI570(MedImmune，LLC)或AMG557(Amgen)。在一些实施方案中， 针对ICOS的抗体阻断ICOS与ICOSL和/或B7-H4的相互作用。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对BTLA(CD272)、CD160、 2B4、LAIR1、TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM的抑制剂。 如本文其他地方所述，免疫检查点抑制剂可以是一种或更多种结合蛋白、 与免疫检查点分子结合的抗体(或其片段或变体)，下调免疫检查点分子的表 达的核酸，或与免疫检查点分子结合的任何其他分子(即小有机分子、肽模 拟物、适体等)。在一些实施方案中，BTLA(CD272)的抑制剂是HVEM。在 一些情况中，CD160的抑制剂是HVEM。在一些实施方案中，2B4的抑制 剂是CD48。在一些实施方案中，LAIR1的抑制剂是胶原蛋白。在一些实施 方案中，TIGHT的抑制剂是CD112、CD113或CD155。在一些实施方案中， CD28的抑制剂是CD80或CD86。在一些实施方案中，LIGHT的抑制剂是HVEM。在一些实施方案中，DR3的抑制剂是TL1A。在一些实施方案中， CD226的抑制剂是CD155或CD112。在一些实施方案中，CD2的抑制剂是 CD48或CD58。在一些实施方案中，SLAM是自我抑制的且SLAM的抑制 剂是SLAM。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制检查点蛋白，其包括但不 限于CTLA4(细胞毒性T-淋巴细胞抗原4，也称为CD152)、PD-L1(程序性 细胞死亡1配体1，也称为CD274)、PDL2(程序性细胞死亡蛋白2)、PD- 1(程序性细胞死亡蛋白1，也称为CD279)、B-7家族配体(B7-H1、B7-H3、 B7-H4)、BTLA(B和T淋巴细胞弱化子，也称为CD272)、HVEM、 TIM3(T细胞膜蛋白3)、GAL9、LAG-3(淋巴细胞激活基因-3；CD223)、 VISTA、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白受体)、2B4(也称为CD244)、CD160、 CGEN-15049、CHK1(检查点激酶1)、CHK2(检查点激酶2)、A2aR(腺苷 A2a受体)、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、 CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、HAVCR2、HVEM、IDO1(吲哚胺 2，3-双加氧酶1)、IDO2(吲哚胺2，3-双加氧酶2)、ICOS(可诱导T细胞共刺 激因子)、LAIR1、LIGHT(也称为TNFSF14、TNF家族成员)、MARCO(具 有胶原结构的巨噬细胞受体)、OX40(也称为肿瘤坏死因子受体超家族，成 员4，TNFRSF4和CD 134)及其配体OX40L(CD252)、SLAM、TIGHT、 VTCN1或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂与检查点蛋白的配体相互作用， 所述检查点蛋白包括：CTLA-4、PDLl、PDL2、PDl、BTLA、HVEM、 TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、 CHK1、CHK2、A2aR、B-7家族配体、CD2、CD27、CD28、CD30、CD40、CD70、CD80、CD86、CD137、CD226、CD276、DR3、GITR、HAVCR2、 HVEM、IDO1、IDO2、ICOS(可诱导T细胞共刺激因子)、LAIR1、LIGHT、 MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体)、OX-40、SLAM、TIGHT、VTCN1或其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制包括CTLA-4、PDL1、PD1 或其组合的检查点蛋白。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂抑制包括CTLA-4和PD1或其 组合的检查点蛋白。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂包括派姆单抗(MK-3475)、纳武 单抗(BMS-936558)、皮地利珠单抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1 105、度 伐鲁单抗(MEDI4736)、MPDL3280A、BMS-936559、IPH2101、TSR-042、 TSR-022、伊匹单抗、利丽单抗、阿特朱单抗、阿维单抗、曲美木单抗或其 组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是纳武单抗(BMS-936558)、伊 匹单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、曲美木单抗、度伐鲁单抗、阿维单抗或 其组合。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是帕博利珠单抗。
在整个说明书中，在化合物、支架和组合物被描述为具有、包括或包 含特定组分的地方，设想该组合物也基本上由所列举的组分组成，或者由 所列举的组分组成。类似地，在方法或过程被描述为具有、包括或包含特 定过程步骤的地方，该过程也基本上由所列举的过程步骤组成，或者由所 列举的过程步骤组成。此外，应理解的是，步骤的顺序或者执行某些动作 的顺序并不重要，只要本发明仍然可操作。此外，可以同时进行两个或更 多个步骤或动作。
本文描述的所有方法可以任何合适的次序进行，除非本文中另有指示 或上下文另外清楚地否定。本文中提供的任何和所有的实施例或示例性语 言(例如，“例如”)的使用仅旨在更好地例示本发明并且不应被解释为是对权 利要求范围的限制，除非另外明确地声称。说明书中的语言都不应被解释 为指示任何未要求保护的元素对于要求保护的内容是必需的。
合成方法
任何可利用的技术都可以用于制备缀合物或其组合物，以及可用于制 备它们的中间体和组分(例如，支架)。在一些实施方案中，可以使用半合成 和全合成方法。
产生本文公开的缀合物或支架的一般方法在以下方案1和2中以及在 共同待审的US 15/819,650中进行了说明，其公开内容全文并入本文。除非 另外指明，否则这些方案中的变量(例如，MP、MA、L3、WD、WM、LD和 LP′等)具有与本文所述相同的定义。
方案1
Figure BDA0003135424430002331
方案2
Figure BDA0003135424430002341
其中PBRM是半胱氨酸工程化的PBRM
本公开的合成过程可以包容多种多样的官能团；因此，可以使用各种 取代的起始原料。该过程通常在整个过程的终点或接近终点处提供所需的 最终化合物，虽然在某些情况下，可能合意的是将该化合物进一步转化为 其药学上可接受的盐、酯或前药。
用于本公开的缀合物的药物化合物可以各种方式，使用市售可得的起 始原料、文献中已知的化合物或由容易制备的中间体，通过采用本领域技 术人员已知的或本领域技术人员鉴于本文的教导将明显可得知的标准合成 方法和程序来制备。用于有机分子制备和官能团转换和操控的标准合成方 法和程序可以获自相关的科学文献或本领域的标准教科书。虽然不限于任 何一种或几种来源，但经典著作诸如Smith，M.B.，March，J.，March’sAdvanced Organic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，第5版， JohnWiley&Sons：New York，2001；和Greene，T.W.，Wuts，P.G.M.， Protective Groups inOrganic Synthesis，第3版，John Wiley&Sons：New York， 1999(以引用的方式并入本文)是本领域的技术人员已知的有用且公认的有 机合成参考教科书。以下合成方法的描述打算用作例示而非限制用于制备 本公开的化合物的一般程序。
本公开的缀合物和包含于其中的药物化合物可以通过本领域技术人员 熟悉的各种方法进行制备。具有本文所描述的各化学式的本公开的缀合物 或化合物可以根据下列程序，由市售可得的起始原料或使用文献程序可以 制备的起始原料来制备。这些程序显示了本公开的代表性缀合物的制备。
一旦被生产出来，通过上述方法设计、选择和/或优化的缀合物就可以 使用本领域技术人员已知的各种试验进行表征，以确定该缀合物是否具有 生物活性。在一些实施方案中，可以通过常规的试验包括，但不限于如下 文所描述的那些试验来表征该缀合物，以确定它们是否具有预期的活性、 结合活性和/或结合特异性。
此外，高通量筛选可以用于加速使用此类试验的分析。因此，使用本 领域中已知的技术，有可能对本文所描述的缀合物分子的活性进行快速筛 选。用于进行高通量筛选的一般方法学描述于，例如Devlin(1998)High Throuthput Screening，Marcel Dekker和美国专利号5,763,263中。高通量试 验可以使用一种或更多种不同的试验技术，包括但不限于下文描述的那些。
本文所引用的所有出版物和专利文件都通过引用并入本文，就如同将 此类出版物或文件中的每一个被明确地且个别地指定为通过引用并入本文 一样。出版物和专利文件的引用不意欲承认任何一者作为相关的现有技术， 也不构成任何对于其内容或日期的承认。本发明既已通过书面的说明书加 以描述，本领域技术人员将会认识到，本发明可以各种实施方案加以实施 并且上述说明以及下列实施例是出于例示的目的，而并非对随附的权利要 求加以限制。
实施例
以下工作实施例是接头、药物分子和抗体或抗体片段，及其制备方法 的例示。这些不意欲进行限制，并且本领域技术人员将容易理解可利用其 他试剂或方法。
缩写
下列缩写用于后续的反应方案和合成实施例。该列表并不意味着是本 申请中所使用的缩写的全部清单，因为有机合成领域的技术人员容易理解 的额外的标准缩写也可以用于合成方案和实施例。
缩写：
EDTA 乙二胺四乙酸
TEAA 三乙基铵乙酸盐
TCEP 三[2-羧乙基]膦
MI 马来酰亚胺或马来酰亚胺基
PDI 多分散指数
RP-HPLC 反相高效液相色谱
SEC 尺寸排阻色谱
WCX 弱阳离子交换色谱
通用信息
半胱氨酸工程化的曲妥珠单抗购自GenScript。
肿瘤生长抑制(％TGI)定义为治疗组和对照组之间的中值肿瘤体积(MTV) 差异的百分数。
根据研究期间观察到的肿瘤大小的消退响应的发生率和幅度来确定治 疗效果。治疗可能引起动物中肿瘤的部分消退(PR)或完全消退(CR)。在PR 响应中，在研究过程中三次连续测量的肿瘤体积为其第1天体积的50％或 更少，并且对于这三次测量中的一次或更多次而言，肿瘤体积等于或大于 13.5mm3。在CR响应中，在研究过程中三次连续测量的肿瘤体积小于13.5 mm3。将在研究结束时具有CR响应的动物额外分类为无肿瘤存活者(TFS)。监控动物的消退响应。
在Phenomenex Gemini 5μm
Figure BDA0003135424430002361
250x10mm，5μm半制备柱上实施 HPLC纯化。
尽可能通过色谱法定量确定缀合物的药物含量。
在280nm使用分光光度法或通过ELISA测定蛋白质-聚合物-药物缀合 物的蛋白质含量。
抗体-聚合物-药物缀合物、携带药物的聚合物支架或携带抗体的聚合物 支架可以通过广泛的渗滤进行纯化(即，除去残余的未反应药物、抗体或聚 合物起始材料)。如果必要，可以进行通过尺寸排阻色谱法的额外的纯化， 以除去任何聚集的抗体-聚合物-药物缀合物。通常，如通过SEC所测定， 纯化的抗体-聚合物-药物缀合物通常含有＜5％(例如，＜2％w/w)的聚集的抗 体-聚合物-药物缀合物；如通过RP-HPLC或LC-MS/MS测定的＜0.5％(w/w) (例如，＜0.1％w/w)游离的(未缀合的)药物；如通过SEC和/或RP-HPLC测 定的＜1％(w/w)游离的聚合物-药物缀合物，以及如通过HIC-HPLC和/或 WCX HPLC测定的＜2％(w/w)(例如，＜1％w/w)未缀合的抗体或抗体片段。 使用文献中描述的程序来制备还原的或部分还原的抗体，参见，例如， Francisco等人，Blood 102(4)：1458-1465(2003)。总药物(缀合的和未缀合的) 浓度通过RP-HPLC或由CE-SDS所测量的DAR反演计算来确定。
RP-HPLC或CE-SDS用于表征PBRM-聚合物-药物缀合物中的半胱氨 酸生物缀合位点的特异性和分布。结果给出PBRM的重(H)链和轻(L)链上 的药物-聚合物缀合物的位置分布。
为了测定游离药物在生物样品中的浓度，用乙腈处理酸化的样品。提 取游离药物并分析乙腈上清液。为了测定非临床样品中缀合的AF-HPA的 浓度，使样品经受彻底的碱性水解，接着使用抗-IgG1抗体磁珠进行免疫捕 获。用LC-MS/MS分析含有释放的AF-HPA的乙腈上清液。免疫捕获后使 用胰蛋白酶消化后的独特肽通过抗-IgG1抗体利用LC-MS/MS测量非临床 样品中的总抗体。对于临床样品，可以使用相同的步骤，只是将抗独特型 抗体用于免疫捕获，以避免内源性抗体的干扰。
通过使用C-4柱、乙腈梯度和UV检测的RP-HPLC进行游离的AF和 AF-HPA的分析。将峰面积进行积分并与AF和AF-HPA标准物进行比较。 该方法用于血浆和组织匀浆中的AF-HPA和AF的定量，并且在0.1至 150ng/mL的浓度范围内是线性的。用NaOH水解后释放的总药物(AF-HPA) 在相同的条件下进行测量，动态范围是1ng/mL至5000ng/mL。总抗体标 准物范围为0.1μg/mL至100μg/mL。
PBRM-聚合物-药物缀合物的疏水性通过在配备二极管阵列检测器 (DAD)的Shimadzu Prominence HPLC系统上通过疏水相互作用色谱法(HIC) 来确定。TSKgel丁基NPR柱(4.6mm×3.5cm，2.5μm粒径)在这些分析中保 持在35℃下。流动相A由1.5M硫酸铵、25mM磷酸钠，pH7.0组成，而 流动相B由25mM磷酸钠、10％异丙醇，pH7.0组成。用流动相B在0-100％ 的线性梯度进行梯度分离，历时25分钟，然后用100％流动相B分离5分 钟，然后在5分钟内回到100％A。流速为1mL/min。样品注射范围为～10 至100μg。
通过水解，然后通过RP-HPLC确定药物与抗体的比率(DAR)。对抗体- p-药物缀合物进行彻底的碱性水解，并且在Shimadzu LC-20AD上通过RP- HPLC分析释放的AF-HPA。将计算出的游离药物浓度归一化为ADC抗体 含量，以确定DAR。
实施例1：随机曲妥珠单抗缀合物2(DAR 13.3)的合成
Figure BDA0003135424430002391
向在TEAA缓冲液(50mM，1mM EDTA，pH7，3.04mL)中的曲妥珠单抗 的溶液(23mg，0.156μmol)中添加TCEP(0.100mg，0.349μmol)的溶液，并将 所得的混合物在室温下温育1小时。将反应混合物用TEAA缓冲液(0.29mL) 稀释。随后缓慢添加支架1(9.1mg，1.40μmol，如US 15/819,650中所述进 行制备)在1.0mL TEAA缓冲液中的溶液，同时剧烈搅拌反应混合物。将反 应混合物在室温下搅拌1h。添加半胱氨酸(0.95mg，7.84μmol)，并将反应 混合物搅拌30分钟。粗产物通过WCX纯化，得到缀合物2(11.8mg，51％ 收率)。纯化的缀合物具有13.3的药物与曲妥珠单抗比率，如通过水解，然 后通过RP-HPLC所测定。
实施例2：随机曲妥珠单抗缀合物3(DAR 6.4)的合成
Figure BDA0003135424430002401
向在TEAA缓冲液(50mM，1mM EDTA，pH7，0.831mL)中的曲妥珠单抗 的溶液(40mg，0.275μmol)中添加TCEP-HCl(0.118mg，0.413μmol)的溶液。 添加在DMA中的支架1(10.7mg/mL，1.65mM，如US 15/819,650中所述制 备)溶液，并将所得混合物在室温下温育1h。添加L-半胱氨酸(16mg/mL， 132mM)，并将反应混合物搅拌30分钟。通过HIC色谱法纯化粗反应混合物，得到缀合物3(6.7mg，11％收率)。纯化的缀合物具有6.4的药物与曲妥 珠单抗比率，如通过水解，然后通过RP-HPLC所测定。
实施例3：半胱氨酸工程化的曲妥珠单抗缀合物4(DAR 6.6)的合成
Figure BDA0003135424430002411
向半胱氨酸工程化的轻链曲妥珠单抗L205C(30mg，0.21μmol)的溶液 中，添加缀合缓冲液(25mM HEPES，25mM NaCl，1mM EDTA，pH8， 5.84mL，5.14mg/mL)TCEP-HCl(0.573mg，2.1μmol)溶液，将所得的混合物 在37℃下振荡4小时。通过添加溶解在反应缓冲液(8.71mg/mL，50mM)中 的脱氢抗坏血酸(dhAA)将链间二硫化物再氧化，并将混合物在室温下旋转 2h。添加在DMSO中的支架1(6.4mg/mL，1mM，如US 15/819,650中所述 制备)溶液，并将所得混合物在室温下搅拌1.5h。用1M乙酸将混合物的pH 调节至～5.1，并将粗产物通过HPLC纯化，得到缀合物4(5.9mg，12％收 率)。纯化的缀合物具有6.6的药物与曲妥珠单抗比率，如通过水解，然后 通过RP-HPLC所测定。
实施例4：用于PBRM-药物缀合物的细胞活力测定
使用CellTiter-
Figure BDA0003135424430002412
(Promega Corp)针对缀合物在体外肿瘤细胞系中的 抗增殖性质对其进行评估。将SKBR3细胞(HER2表达细胞)、JIMT-1细胞(HER2中等表达水平的细胞)以每孔5,000个细胞的密度接种于黑壁96孔板 中，并使其在37℃下在湿润的5％CO2环境中贴壁生长过夜，并进行铺板。 于室温下，将CellTiter-
Figure BDA0003135424430002422
试剂添加至各孔中，并在10分钟之后使用 SpectraMax M5平板读取器(Molecular Devices)测量发光信号。使用Graphpad Prism软件生成剂量响应曲线。由四参数曲线拟合确定IC50值。
表I给出了PBRM-药物缀合物：缀合物2、缀合物3和缀合物4的抗增 殖性质的说明性结果。
表I
Figure BDA0003135424430002421
如表I中所示，PBRM-药物缀合物显示在被测细胞系中的活性。
实施例5：对施用PBRM-药物缀合物的肿瘤生长响应。
使雌性CB-17 SCID小鼠皮下接种JIMT1细胞(各组n＝10)。肿瘤植入后 12天，将小鼠随机分为平均肿瘤体积相等的组。测试化合物或媒介作为第 1天单次剂量IV给药。使用数显卡尺，在图1中指示时间处测量肿瘤尺寸。 计算肿瘤体积并将其用于确定肿瘤生长的延迟。当肿瘤的尺寸达到 1000mm3时，处死小鼠。对于各组而言，肿瘤体积以平均值±SEM的形式 记录。
图1提供了在皮下接种JIMT-1细胞(各组n＝10)的小鼠中，作为第1天 单剂量静脉内施用媒介物和曲妥珠单抗-药物缀合物(缀合物2，实施例1； 缀合物3，实施例2；和缀合物4，实施例3；各自的有效负载为 0.066mg/kg)之后(肿瘤移植后12天)的肿瘤响应的结果。结果显示，在第 130天剂量为0.066mg/kg时，缀合物2导致2例部分反应、8例完全反应和 2例无肿瘤幸存者，缀合物3导致10例完全反应和6例无肿瘤幸存者，缀 合物4导致10例完全反应。
实施例6.PBRM-聚合物药物缀合物施用后的小鼠暴露
使雌性CB-17 SCID小鼠皮下接种JIMT1细胞(各组n＝10)。肿瘤植入后 12天，将小鼠随机分为平均肿瘤体积相等的组。给小鼠静脉内注射媒介物 (n＝3)或PBRM-聚合物-药物缀合物(n＝6)，缀合物2，实施例1；缀合物3， 实施例2；和缀合物4，实施例3；各自的有效负载为0.199mg/kg。在给药 后10分钟、24小时、96小时、168小时和336小时收集血浆。在给药前1 天和在给药的第1天、第7天和第14天测量体重。观察所有动物在整个14 天时期的死亡率或发病率。
通过LC-MS/MS分析确定缀合的AF-HPA浓度。图2描绘了缀合物2、 缀合物3和缀合物4的暴露数据。结果表明，缀合物4导致缀合的AF-HPA 的最高暴露。
本说明书中所引用的所有出版物，包括，例如，非专利文献、专利申 请和专利出于所有目的都通过引用并入本文。本发明可以在不偏离其精神 或必要特性的情况下，以其他的具体形式体现。因此，就所有方面而言， 上述实施方案均被视为示例性的而非限制本文所描述的发明。因而，本发 明的范围由随附的权利要求书而非上述说明书来指定，并且落入权利要求 书中的等同意义和范围内的所有变化都意欲囊括于其中。

Claims (48)

1.一种缀合物，所述缀合物包含半胱氨酸工程化的靶向部分和一个或多个共价键合至所述靶向部分的接头-药物部分，其中：
每个接头-药物部分包括多功能接头，所述多功能接头将所述半胱氨酸工程化的靶向部分通过每个药物单元的可释放组装单元的中介而连接至一个或多个药物单元，并且将亲水性基团连接至每个接头-药物部分的所述药物单元，其中所述可释放组装单元能够在靠近由所述半胱氨酸工程化的靶向部分靶向的靶点时释放游离的药物，并且
其中所述多功能接头包含在所述半胱氨酸工程化的靶向部分和所述亲水性基团之间的肽部分，其中所述肽部分包含至少两个氨基酸。
2.如权利要求1所述的缀合物，其中所述半胱氨酸工程化的靶向部分包含连接至所述多功能接头的半胱氨酸。
3.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述半胱氨酸工程化的靶向部分是基于蛋白质的识别分子(PBRM)。
4.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述PBRM是抗体或抗体片段。
5.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述PBRM是包含轻链V205C的抗体或抗体片段，并且所述PBRM通过所述轻链V205C连接至所述多功能接头。
6.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述肽部分包含三至约十个氨基酸。
7.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述肽部分包含至少四个氨基酸或至少五个氨基酸。
8.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水性基团包含聚醚或其衍生物。
9.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水性基团包含
Figure FDA0003135424420000011
其中
n4是1至约25的整数；
每个R63独立地是-H或C1-8烷基；
R64是键或c1-8烷基接头；
R65是-H、C1-8烷基或-(CH2)n2COOR62；
R62是-H或C1-8烷基；以及
n2是1至约5的整数。
10.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水基团包含聚乙二醇。
11.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水性基团包含具有约6至约24个PEG子单元的聚乙二醇。
12.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水性基团包含具有约6至约12个PEG子单元的聚乙二醇。
13.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中所述亲水性基团包含具有约8至约12个PEG子单元的聚乙二醇。
14.一种缀合物，所述缀合物包含半胱氨酸工程化的靶向部分和一个或多个共价键合至所述靶向部分的接头-药物部分，其中
每个接头-药物部分包括多功能接头，所述多功能接头将所述半胱氨酸工程化的靶向部分通过每个药物单元的可释放组装单元的中介而连接至一个或多个药物单元，并且将多元醇或其衍生物连接至每个接头-药物部分的所述药物单元，其中所述可释放组装单元能够在靠近由所述半胱氨酸工程化的靶向部分靶向的靶点时释放游离的药物。
15.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其具有式(I)：
Figure FDA0003135424420000021
其中
a1当存在时是0至1的整数；
a2是3；
a3当存在时是0至1的整数；
a4是1至约5的整数；
a5是1至3的整数；
d13是1至约6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中所述PBRM包含工程化的半胱氨酸；
LP′是将所述PBRM的所述工程化的半胱氨酸连接至MP的二价接头部分；其中对应的单价部分LP含有能够与所述PBRM的所述工程化的半胱氨酸的官能团形成共价键的官能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM是四价接头；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure FDA0003135424420000031
表示T1和MA的直接或间接连接；
D的每次出现独立地是具有≤约5kDa的分子量的治疗剂；以及
LD的每次出现独立地是将D连接至MA的二价接头部分，并包含至少一个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其预期治疗效果。
16.一种含肽支架，所述含肽支架具有式(II)-(V)中的任一者：
Figure FDA0003135424420000032
Figure FDA0003135424420000041
其中：
a1当存在时是0至1的整数；
a2当存在时是3；
a3当存在时是0至1的整数；
a4当存在时是1至约5的整数；
a5当存在时是1至3的整数；
d13是1至6的整数；
PBRM表示基于蛋白质的识别分子，其中所述PBRM包含工程化的半胱氨酸；
LP′是将所述PBRM的所述工程化的半胱氨酸连接至MP的二价接头部分；其中对应的单价部分LP含有能够与所述PBRM的所述工程化的半胱氨酸的官能团形成共价键的官能团WP；
MP当存在时是延伸单元；
LM是四价接头，a2是3；
L3当存在时是含羰基部分；
MA包含含有至少两个氨基酸的肽部分；
T1是亲水性基团，并且在T1和MA之间的
Figure FDA0003135424420000042
表示T1和MA的直接或间接连接；
WD的每次出现独立地是能够与具有≤约5kDa的分子量的治疗剂(“D”)的官能团一起形成共价键的官能团；以及
LD的每次出现独立地是将WD或D连接至MA和LD的二价接头部分，并包含至少一个可裂解的键，使得当所述键断裂时，D以活性形式释放以用于其预期治疗效果。
17.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中所述PBRM是包含轻链V205C的抗体或抗体片段，并且其中所述PBRM通过所述轻链V205C连接至LP′。
18.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中L3当存在时包含-X-C1-10亚烷基-C(O)-，其中X直接连接至LM，其中X是CH2、O或NR5，并且R5是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或COO-C1-6烷基。
19.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中L3当存在时是-NR5-(CH2)v-C(O)-或-CH2-(CH2)v-C(o)-NR5-(CH2)v-C(O)-，其中每个v独立地是1至10的整数。
20.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中L3当存在时是-NH-(CH2)2-C(O)-或-(CH2)2-C(O)-NH-(CH2)2-C(O)-。
21.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中各v独立地是1至6、或2至4的整数，或是2。
22.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中a4是1、2或3。
23.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中d13是2、4或6。
24.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中每个WP当存在时独立地是：
Figure FDA0003135424420000051
Figure FDA0003135424420000061
其中
环B是环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基；
R1K是离去基团；
R1A是硫保护基；
R2J是-H、脂族部分、芳基部分、杂脂族部分或碳环部分；以及
R3J是C1-6烷基，并且Z1、Z2、Z3和Z7中的每一个独立地是碳或氮原子。
25.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中R1K是卤代基或RC(O)O-，其中R是-H、脂族部分、杂脂族部分、碳环部分或杂环烷基部分。
26.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中R1A是
Figure FDA0003135424420000062
其中r是1或2，并且Rs1、Rs2和Rs3中的每一个是-H、脂族部分、杂脂族部分、碳环部分或杂环烷基部分。
27.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MP当存在时是-(Z4)-[(Z5)-(Z6)]z-，其中Z4连接至LP’或LP并且Z6连接至LM；其中
z是1、2或3；
Z4是：(1)
Figure FDA0003135424420000071
(2)
Figure FDA0003135424420000072
(3)
Figure FDA0003135424420000073
(4)
Figure FDA0003135424420000074
(5)R17、(6)
Figure FDA0003135424420000075
(7)
Figure FDA0003135424420000076
(8)
Figure FDA0003135424420000077
(9)
Figure FDA0003135424420000078
(10)
Figure FDA0003135424420000079
或(11)
Figure FDA00031354244200000710
其中*表示与LP’或LP的连接，并且**表示与若存在的Z5或Z6的连接或当Z5和Z6均不存在时与LM的连接；
b1是0至6的整数；
e1是0至8的整数，
R17是C1-10亚烷基、C1-10杂亚烷基、C3-8环亚烷基、O-(C1-8亚烷基、亚芳基、-C1-10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-、-(C3-8环亚烷基-C1-10亚烷基-、4至14元杂环亚烷基、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10杂亚烷基-C(＝O)-、-C3-8环亚烷基-C(＝O)-、-O-(C1-8烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-10业烷基-C(＝O)-、-C1-10业烷基-(C3-8环业烷基)-C(＝O)-、-(C3-8环业烷基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-4至14元杂环亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-C(＝O)-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10杂亚烷基-NH-、-C3-8环亚烷基-NH-、-O-(C1-8烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-NH-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-4至14元杂环亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-NH-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-S-、-C1-10杂亚烷基-S-、-C3-8环亚烷基-S-、-O-C1-8烷基)-S-、-亚芳基-S-、-C1-10亚烷基-亚芳基-S-、-亚芳基-C1-10亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-S-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-、-4至14元杂环亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-S-或-(4至14元杂环亚烷基)-C1-C10亚烷基-S-；
每个Z5独立地是不存在、R57-R17或聚醚单元；
每个R57独立地是键、NR23、S或O；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或-COO-C1-6烷基；以及
每个Z6独立地是不存在、-C1-10烷基-R3-、-C1-10烷基-NR5-、-C1-10烷基-C(O)-、-C1-10烷基-O-、-C1-10烷基-S-或-(C1-10烷基-R3)g1-C1-10烷基-C(O)-；
每个R3独立地是-C(O)-NR5-或-NR5-C(O)-；
每个R5独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、COOH或COO-C1-6烷基；以及
g1是1至4的整数。
28.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MP当存在时是(1)
Figure FDA0003135424420000081
(2)
Figure FDA0003135424420000082
(3)
Figure FDA0003135424420000083
(4)
Figure FDA0003135424420000084
(5)R17、(6)
Figure FDA0003135424420000085
(7)
Figure FDA0003135424420000086
(8)
Figure FDA0003135424420000087
(9)
Figure FDA0003135424420000088
(10)
Figure FDA0003135424420000091
(11)
Figure FDA0003135424420000092
(12)
Figure FDA0003135424420000093
(13)
Figure FDA0003135424420000094
或(14)
Figure FDA0003135424420000095
其中*表示与LP'或LP的连接，并且**表示与LM的连接；
R3是-C(O)-NR5或-NR5-C(O)-；
R4是键或-NR5-(CR20R21)-C(O)-；
R5是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或-COO-C1-6烷基；
R17是C1-10亚烷基、C1-10杂亚烷基、C3-8环亚烷基、O-(C1-8亚烷基、亚芳基、-C1-10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-、-(C3-8环亚烷基-C1-10亚烷基-、4至14元杂环亚烷基、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-、-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10杂亚烷基-C(＝O)-、-C3-8环亚烷基-C(＝O)-、-O-(C1-8烷基)-C(＝O)-、-亚芳基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-亚芳基-C(＝O)-、-亚芳基-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-C(＝O)-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-4至14元杂环亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-C(＝O)-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-C(＝O)-、-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10杂亚烷基-NH-、-C3-8环亚烷基-NH-、-O-(C1-8烷基)-NH-、-亚芳基-NH-、-C1-10亚烷基-亚芳基-NH-、-亚芳基-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-NH-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-4至14元杂环亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-NH-、-(4至14元杂环亚烷基)-C1-10亚烷基-NH-、-C1-10亚烷基-S-、-C1-10杂亚烷基-S-、-C3-8环业烷基-S-、-O-C1-8烷基)-S-、-业芳基-S-、-C1-10业烷基-业芳基-S-、-业芳基-C1-10亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(C3-8环亚烷基)-S-、-(C3-8环亚烷基)-C1-10亚烷基-S-、-4至14元杂环亚烷基-S-、-C1-10亚烷基-(4至14元杂环亚烷基)-S-或-(4至14元杂环亚烷基)-C1-C10亚烷基-S-；
每个R20和R21独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、羟基化的C6-10芳基、多羟基化的C6-10芳基、5至12元杂环、C3-8环烷基、羟基化的C3-8环烷基、多羟基化的C3-8环烷基或者天然或非天然氨基酸的侧链；
每个R23独立地是-H、C1-6烷基、C6-10芳基、C3-8环烷基、-COOH或-COO-C1-6烷基；
每个b1独立地是0至6的整数；
e1是0至8的整数；
每个f1独立地是1至6的整数；以及
g2是1至4的整数。
29.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MP当存在时是(1)
Figure FDA0003135424420000101
(2)
Figure FDA0003135424420000102
(3)
Figure FDA0003135424420000103
(4)
Figure FDA0003135424420000104
(5)
Figure FDA0003135424420000105
(6)
Figure FDA0003135424420000106
(7)
Figure FDA0003135424420000107
(8)
Figure FDA0003135424420000108
或(9)
Figure FDA0003135424420000109
其中*表示与LP'或LP的连接，并且**表示与LM的连接。
30.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中a2是3，并且LM是：
Figure FDA0003135424420000111
Figure FDA0003135424420000121
Figure FDA0003135424420000131
其中：
Figure FDA0003135424420000132
表示与若存在的MP的连接，或当MP不存在时与LP或LP'的连接；
Y1表示与若存在的L3的连接，或当L3不存在时与MA的连接；
R2和R′2各自独立地是氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C2-6烯基、任选取代的C2-6炔基、任选取代的C3-19支链烷基、任选取代的C3-8环烷基、任选取代的C6-10芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的C1-6杂烷基、C1-6烷氧基、芳氧基、C1-6杂烷氧基、C2-6烷酰基、任选取代的芳基羰基、C2-6烷氧羰基、C2-6烷酰氧基、芳基羰氧基、任选取代的C2-6烷酰基、任选取代的C2-6烷酰氧基、任选取代的C2-6取代的烷酰氧基、-COOH或-COO-C1-6烷基；
c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7和c8中的每一个都是独立地在0和10之间的整数；
d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7和d8中的每一个都是独立地在0和10之间的整数；以及
e1、e2、e3、e4、e5、e6、e7和e8中的每一个都是独立地在0和10之间的整数。
31.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中a2是3，并且LM是
Figure FDA0003135424420000133
32.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有至少约五个氨基酸的肽部分。
33.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有至多约十个氨基酸的肽部分。
34.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有三至约十个氨基酸的肽部分，所述氨基酸选自甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、半胱氨酸及其组合。
35.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有至少四个甘氨酸和至少一个丝氨酸的肽部分。
36.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有至少四个甘氨酸和至少一个谷氨酸的肽部分。
37.如前述权利要求中任一项所述的缀合物或支架，其中MA包含含有至少四个甘氨酸、至少一个丝氨酸和至少一个谷氨酸的肽部分。
38.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其具有式(XXX)：
Figure FDA0003135424420000141
其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000142
39.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其具有式(XXX)：
Figure FDA0003135424420000151
其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000152
Figure FDA0003135424420000161
Figure FDA0003135424420000171
40.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000181
41.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000182
42.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000191
43.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000192
44.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000201
45.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其中每个RA是
Figure FDA0003135424420000202
46.如前述权利要求中任一项所述的缀合物，其具有式(XXXIII-5)：
Figure FDA0003135424420000203
Figure FDA0003135424420000211
其中PBRM是包含轻链V205C的抗体或抗体片段，并且d13是1至2的整数。
47.一种药物组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的缀合物和药学上可接受的载体。
48.一种治疗有需要的受试者的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如前述权利要求中任一项所述的缀合物。
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