BR112019014282A2 - Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso - Google Patents

Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso Download PDF

Info

Publication number
BR112019014282A2
BR112019014282A2 BR112019014282-7A BR112019014282A BR112019014282A2 BR 112019014282 A2 BR112019014282 A2 BR 112019014282A2 BR 112019014282 A BR112019014282 A BR 112019014282A BR 112019014282 A2 BR112019014282 A2 BR 112019014282A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
rnai agent
fact
nucleotides
tape
antisense
Prior art date
Application number
BR112019014282-7A
Other languages
English (en)
Inventor
Li Zhen
Zhu Rui
I Wooddell Christine
Pei Tao
Original Assignee
Arrowhead Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Arrowhead Pharmaceuticals, Inc.
Publication of BR112019014282A2 publication Critical patent/BR112019014282A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/317—Chemical structure of the backbone with an inverted bond, e.g. a cap structure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/322—2'-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/333—Modified A
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/335—Modified T or U
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/336—Modified G
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/343—Spatial arrangement of the modifications having patterns, e.g. ==--==--==--
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/31—Combination therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/81—Protease inhibitors
    • G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • G01N2333/8121—Serpins
    • G01N2333/8125—Alpha-1-antitrypsin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/08—Hepato-biliairy disorders other than hepatitis
    • G01N2800/085—Liver diseases, e.g. portal hypertension, fibrosis, cirrhosis, bilirubin

Abstract

trata-se de agentes de rnai para inibir a expressão do gene de antitripsina alfa-1 (aat), composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso. revelam-se, também, composições farmacêuticas incluindo um ou mais agentes de rnai de aat juntos a um ou mais excipientes capazes de entregar os agentes de rnai a uma célula hepática in vivo. a entrega dos agentes de rnai de aat a células hepáticas in vivo inibe a expressão de gene de aat e trata doenças associadas à deficiência de aat tais como hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose e insuficiência hepática fulminante.

Description

“AGENTES DE RNAI DE ANTITRIPSINA (AAT) ALFA-1, COMPOSIÇÕES INCLUINDO AGENTES DE RNAI DE AAT, E MÉTODOS DE USO”
REFERÊNCIA REMISSIVAAOS PEDIDOS DE DEPÓSITO CORRELATOS [001] O presente pedido reivindica prioridade ao Pedido de Patente Provisório Norte-Americano com Número de Série 62/444.452, depositado em janeiro de 10, 2017, Pedido de Patente Provisório Norte-Americano com Número de Série 62/486.720, depositado em 18 de abril de 2017, e Pedido de Patente Provisório NorteAmericano com Número de Série 62/596.232, depositado em 8 de dezembro de 2017, estando os conteúdos dos mesmos incorporados ao presente documento em suas totalidades a título de referência.
CAMPO DA INVENÇÃO [002] Revelam-se no presente documento agentes de interferência de RNA (RNAi) para inibição de expressão de gene de antitripsina alfa-1, composições que incluem agentes de RNAi de antitripsina alfa-1, e métodos de uso dos mesmo.
FUNDAMENTOS [003] A Deficiência de antitripsina alfa-1 (AAT, antitripsina a1, ou A1AT) é um distúrbio genético condominante autossômico herdado que causa malenovelamento da proteína AAT e secreção fraca da proteína mal-enovelada levando a doenças no pulmão e fígado. A deficiência de AAT (AATD) ocorre com uma frequência de cerca de 1 a cada 1.500 a 3.500 indivíduos e afeta, com maior predominância, pessoas com ancestrais europeus.
[004] A antitripsina alfa-1 é um inibidor de protease pertencente à superfamília das serpinas. A proteína de AAT normal é um inibidor de protease de glicoproteína circulante primariamente sintetizado no fígado por hepatócitos e secretada no sangue. A função fisiológica conhecida de AAT consiste em inibir proteases de neutrófilo, que serve para proteger tecidos hospedeiros de lesões não específicas durante períodos de inflamação.
[005] A forma mais clinicamente significativa de AATD, um distúrbio genético associado à doença hepática em crianças e adultos, e doença pulmonar em
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 14/229
2/159 adultos, é causada pela mutação Z. O alelo mutante Z (PiZ), através de uma mutação de ponto único, produz uma proteína de AAT de forma mutante Z (a proteína “Z-AAT”) propensa a um enovelamento anormal causando retenção intracelular. Os monômeros de proteína Z-AAT mutante são capazes de formar cadeias de polímeros que se acumula em agregados, que são algumas vezes referidos como “glóbulos.” A proteína Z-AAT mal-enovelada é ineficaz em cruzar a trajetória secretória, e, ao invés disso, se polimeriza e se acumula no retículo endoplasmático (ER) de hepatócitos. As massas de glóbulos poliméricos acentuam o ER e acionam lesões de hepatócito contínuas, levando à fibrose, cirrose, e risco aumentado de carcinoma hepatocelular. Ademais, a ausência de atividade anti-protease circulante deixa o pulmão vulnerável a lesões por elastase de neutrófilo, resultando no desenvolvimento de complicações respiratórias tal como enfisema.
[006] Indivíduos com o genótipo PiZZ homozigoto têm deficiência grave de AAT funcional, que leva a doenças pulmonares. O uso semanal de terapia de reforço de AAT, usando AAT humano purificado, resulta em níveis de plasma quase normais de AAT em indivíduos com AATD, e ajuda a evitar danos aos pulmões em indivíduos afetados. No entanto, enquanto a administração de AAT purificado possa melhorar ou ajudar a evitar danos aos pulmões causados pela ausência de AAT endogenamente secretado, pacientes com AATD permanecem vulneráveis a doenças de depósito hepático de retículo endoplasmático causadas pela deposição e acúmulo de proteína de AAT anormalmente enovelada excessiva. A proteína Z-AAT acumulada na conformação de glóbulo em hepatócitos é uma característica bem conhecida de doença hepática AATD e acredita-se que leve a efeitos proteotóxicos que são responsáveis por induzir lesões no fígado, incluindo danos e morte de células hepáticas e lesão crônica do fígado, em indivíduos com AATD. (vide, por exemplo, D. Lindblad et al., Hepatology 2007, 46: 1228-1235). Pacientes com AATD geralmente desenvolvem doenças hepáticas, que podem ser graves ou fatais, mesmo na infância. Apresentações clínicas de lesões no fígado incluem hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose, e insuficiência hepática
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 15/229
3/159 fulminante uniforme.
[007] Atualmente, não existe um tratamento clinicamente aprovado para evitar o princípio ou desacelerar a progressão de doença hepática devido a AATD. Ademais, embora a Publicação de Pedido de Patente n° U.S. 2015/0361427 revele determinados agentes de RNAi capazes de inibir a expressão de um gene de AAT, ainda há uma necessidade por agentes de RNAi de AAT inovadores e eficazes tendo uma potência aperfeiçoada que possa inibir seletiva, eficiente e seguramente a expressão de um gene de AAT, evitando e potencialmente revertendo, assim, a lesão hepática relacionada ao acúmulo de Z-AAT e fibrose. De modo similar, embora a Publicação de Pedido de Patente n° U.S. 2015/0011607 por Brown et al. (“Brown ’607”) revele várias sequências para inibir a expressão de um gene de AAT, Brown ensina o uso de construtos de fita dupla mais longos (referidos por Brown como DsiRNAs), que de acordo com Brown constatou-se que fornecem “resultados eficazes inesperados em termos de potência e duração de ação” conforme comparado a agentes de siRNA 19-23mer. (Vide, por exemplo, Brown ’607 no parágrafo [0376]). Ademais, quaisquer uma das sequências reveladas em Brown ’607 são projetadas para serem usadas em construtos de DsiRNA que são projetados para direcionar diferentes locais de um mRNAde AAT conforme comparado às sequências reveladas na presente invenção. Essas diferenças levam a uma afinidade de ligação diferente ao mRNAde AAT e produz um sítio de divagem diferente, que pode impactar no efeito inibitório do composto, enquanto também leva potencialmente a questões fora de alvo adicionais (vide, por exemplo, Piotr J. Kamola et al., PLoS Comput Biol, 2015, 11 (12):e1004656 na Figura 1 (ilustrando o mecanismo de Silenciamento de Gene mediado por siRNA)). Por exemplo, nenhuma parte em Brown ’607 ensina ou sugere o projeto de um agente de RNAi (ou qualquer comprimento) onde a nucleobase de terminal 5' ou nucleotídeo da fita antissenso seria alinhada à posição que fica 19 nucleotídeos a jusante (em direção à extremidade 3') a partir da posição 1000 em um gene de AAT (SEQ ID NO: 1). De outro modo, e novamente apenas como um exemplo que envolve uma sequência potencial de agente de RNAi de AAT, nenhuma parte em
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 16/229
4/159
Brown ’607 ensina ou sugere o projeto de uma gente de RNAi onde a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso de um agente de RNAi corresponde à posição 1018 em um gene de AAT (SEQ ID NO: 1). Ademais, nenhuma parte em Brown ’607 ensina ou sugere os construtos de agente de RNAi de AAT modificados revelados no presente documento.
SUMÁRIO [008] Há uma necessidade por agentes de interferência de RNA (RNAi) AAT-específico inovadores (também denominado como agente de RNAi, ativador de RNAi, ou ativador) que sejam capazes de inibir seletiva e efetivamente a expressão de um gene de AAT. Ademais, há uma necessidade por composições de agentes de RNAi AAT-específicos inovadores para o tratamento de doenças associadas à deficiência de AAT.
[009] Devido ao fato de lesões hepáticas resultantes de AATD ocorrerem através de um mecanismo de ganho de função, a inibição de expressão de gene de AAT é útil em evitar o acúmulo da proteína Z-AAT no fígado. Ademais, a redução ou remoção de agregados de polímero de Z-AAT reduzem a ênfase de ER em hepatócitos, e oferece vantagens adicionais em reduzir a probabilidade de ocorrência de danos a células hepáticas e auxiliar no tratamento de danos a células hepáticas e lesões crônicas ao fígado como fibrose, cirrose, carcinoma hepatocelular, e outras afecções e doenças causadas por AATD. A redução de proteína de Z-AAT inflamatória, que foi claramente definida como a causa de doença hepática progressiva em pacientes com AATD, é importante visto que pode desacelerar ou cessar a progressão de doença hepática e permitir o reparo de tecido fibrótico.
[010] Em gera, a revelação apresenta agentes de RNAi de AAT inovadores, composições que compreendem os agentes de RNAi de AAT, e métodos para inibir a expressão de um gene de AAT in vivo e/ou in vitro usando agentes de RNAi de AAT e composições que incluem agentes de RNAi de AAT. Ademais, descrevem-se métodos de tratamento de doenças relacionadas a AATD usado os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento e composições que incluem agentes de RNAi de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 17/229
5/159
AAT.
[011] Os agentes de RNAi de AAT e métodos revelados no presente documento podem proporcionar o tratamento de AATD, incluindo o tratamento de afecções e doenças causadas por AATD, tal como hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, e insuficiência hepática fulminante. Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento, quando administrados a um indivíduo, podem evitar e/ou reverter lesões hepáticas relacionadas ao acúmulo de Z-AAT e fibrose. Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento podem ser administrados a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano ou animal, por quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica, tal como injeção subcutânea ou administração intravenosa.
[012] Em um aspecto, a revelação apresenta agentes de RNAi para inibir a expressão de um gene antitripsina alfa-1 (AAT), em que o agente de RNAi compreende uma fita senso e uma fita antissenso. Revelam-se, também, composições que compreendem um agente de RNAi capaz de inibir a expressão de um gene de antitripsina alfa-1, em que o agente de RNAi compreende uma fita senso e uma fita antissenso, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[013] Cada agente de RNAi de AAT descrito no presente documento inclui uma fita senso e uma fita antissenso. A fita senso e a fita antissenso podem ser parcial, substancial ou completamente complementares entre si. O comprimento das fitas senso e antissenso de agente de RNAi descritas no presente documento pode ter de 16 a 30 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm independentemente de 17 a 26 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm independentemente de 21 a 26 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm independentemente de 21 a 24 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e/ou antissenso têm independentemente 16,17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 nucleotídeos de comprimento. As fitas senso e antissenso podem ter o mesmo comprimento ou comprimentos
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 18/229
6/159 diferentes. Os agentes de RNAi descritos no presente documento, mediante a entrega a uma célula que expressa AAT, inibem a expressão de um ou mais genes AAT in vivo ou in vitro.
[014] Um agente de RNAi de AAT inclui uma fita senso (também referida como uma fita passageira), e uma fita antissenso (também referida como uma fita guia). Uma fita senso dos agentes de RNAi de AAT descrita no presente documento inclui uma sequência de nucleotídeo tendo pelo menos 85% de identidade a uma extensão de núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos a uma sequência em um mRNA de AAT. Em algumas modalidades, a extensão de núcleo de fita senso tendo pelo menos 85% de identidade a uma sequência em um mRNA de AAT tem 16, 17,18,19, 20, 21,22 ou 23 nucleotídeos de comprimento. Uma fita antissenso de um agente de RNAi de AAT inclui uma sequência de nucleotídeo tendo pelo menos 85% de complementaridade por uma extensão de núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos a uma sequência em um mRNA de AAT e a fita senso correspondente. Em algumas modalidades, a fita antissenso extensão de núcleo tendo pelo menos 85% de complementaridade a uma sequência em um mRNA de AAT ou a fita senso correspondente tem 16, 17, 18, 19, 20, 21,22 ou 23 nucleotídeos de comprimento.
[015] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento alvejam uma porção de um gene AAT tendo a sequência de qualquer uma das sequências na Tabela 1.
[016] Exemplos de fitas senso e antissenso de agente de RNAi de AAT que podem ser usadas em agentes de RNAi de AAT são proporcionados nas Tabelas 2, 3, 4 e 5. Exemplos de duplexes que incluem um agente de RNAi de AAT são proporcionados na Tabela 6. Exemplos de sequências de extensão de núcleo de 19 nucleotídeos que podem consistir ou podem ser incluídos nas fitas senso e fitas antissenso de determinados agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento, são proporcionados na Tabela 2.
[017] Em outro aspecto, a revelação apresenta métodos para entregar agentes de RNAi de AAT a células hepáticas em um indivíduo, tal como um mamífero,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 19/229
7/159 in vivo. Em algumas modalidades, um ou mais agentes de RNAi de AAT são entregues a células alvo ou tecidos usando qualquer tecnologia de entrega de oligonucleotídeo conhecida na técnica. Os métodos de entrega de ácido nucleico incluem, mas não se limitam a, encapsulação em lipossomas, iontoforese, ou incorporação em outros veículos, tais como hidrogéis, ciclodextrinas, nanocápsulas biodegradáveis, e microesferas bioadesivas, vetores proteináceos, ou Dynamic Polyconjugates™ (DPCs) (vide, por exemplo, WO 2000/053722, WO 2008/0022309, WO 2011/104169 e WO 2012/083185, estando cada urn desses incorporado ao presente documento a título de referência). Em algumas modalidades, um veículo de entrega, tal como um polímero, um polímero antipático, um polímero ativo de membrana, um peptídeo, tal como melitina ou peptídeo tipo melitina, um polímero ou peptídeo reversivelmente modificado, ou um lipídeo, pode ser usado com os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento.
[018] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é entregue a células alvo ou tecidos ligando-se ou conjugando-se covalentemente o agente de RNAi a um grupo de direcionamento tal como um ligante de receptor de asialoglicoproteína. Em algumas modalidades, um ligante de receptor de asialoglicoproteína inclui, consiste em, ou consiste essencialmente em, uma galactose ou grupamento derivado de galactose. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é ligado a um ligante de direcionamento que compreende a N-acetil-galactosamina derivada de galactose. Em algumas modalidades, um grupamento derivado de galactose inclui um trímero de N-acetil-galactosamina ou um tetrâmero de N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, um grupamento de derivado de galactose é um trímero de N-acetil-galactosamina ou um tetrâmero de Nacetil-galactosamina. Grupos de direcionamento exemplificadores úteis para entregar agentes de RNAi são revelados, por exemplo, no Pedido de Patente n° U.S. 15/452.324 e WO 2017/156012, que são incorporados ao presente documento a título de referência em suas totalidades.
[019] Um grupo de direcionamento pode ser ligado à extremidade 3' ou 5'
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 20/229
8/159 de uma fita senso ou uma fita antissenso de um agente de RNAi de AAT. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado à extremidade 3' ou 5' da fita senso. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado à extremidade 5' da fita senso. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado internamente a um nucleotídeo na fita senso e/ou na fita antissenso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado ao agente de RNAi através de um ligante.
[020] Um grupo de direcionamento, com ou sem um ligante, pode ser ligado à extremidade 5' a 3' de qualquer das fitas senso e/ou antissenso reveladas nas Tabelas 2, 3, 4 e 5. Um ligante, com ou sem um grupo de direcionamento, pode ser ligado à extremidade 5' ou 3' de qualquer das fitas senso e/ou antissenso reveladas nas Tabelas 2, 3, 4 e 5.
[021] Em outro aspecto, a revelação apresenta composições que incluem um ou mais agentes de RNAi de AAT que tenham as estruturas duplex reveladas na Tabela 6.
[022] Em algumas modalidades, descrevem-se composições que incluem uma combinação ou coquetel de pelo menos dois agentes de RNAi de AAT tendo diferentes sequências de nucleotídeo. Em algumas modalidades, os dois ou mais agentes de RNAi de AAT diferentes são, cada um, separada e independentemente ligados a grupos de direcionamento. Em algumas modalidades, os dois ou mais agentes de RNAi de AAT diferentes são, cada um, ligados a grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem uma ou mais porções que alvejam um receptor de asialoglicoproteína. Em algumas modalidades, os dois ou mais agentes de RNAi de AAT diferentes são, cada um, ligados a grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem um ou mais derivados de galactose. Em algumas modalidades, os dois ou mais agentes de RNAi de AAT diferentes são, cada um, ligados a grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem uma ou mais N-acetil-galactosaminas. Em algumas modalidades, quando dois ou
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 21/229
9/159 mais agentes de RNAi forem incluídos em uma composição, cada agente de RNAi é independentemente ligado ao mesmo grupo de direcionamento. Em algumas modalidades, quando dois ou mais agentes de RNAi forem incluídos em uma composição, cada agente de RNAi é independentemente ligado a um grupo de direcionamento diferente, tais como grupos de direcionamento tendo diferentes estruturas químicas.
[023] Em algumas modalidades, grupos de direcionamento são ligados aos agentes de RNAi de AAT sem o uso de um ligante adicional. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é projetado tendo um ligante prontamente presente para facilitar a ligação a um agente de RNAi de AAT. Em algumas modalidades, quando dois ou mais agentes de RNAi forem incluídos em uma composição, os dois ou mais agentes de RNAi podem ser ligados a seus respectivos grupos de direcionamento usando os mesmos ligantes. Em algumas modalidades, quando dois ou mais agentes de RNAi forem incluídos em uma composição, os dois ou mais agentes de RNAi são ligados a seus respectivos grupos de direcionamento usando diferentes ligantes.
[024] Em outro aspecto, a revelação apresenta métodos para inibir a expressão de gene de antitripsina alfa-1 em um indivíduo, sendo que o métodos compreendem administrar ao indivíduo uma quantidade de um agente de RNAi de AAT capaz de inibir a expressão de um gene de AAT, em que o agente de RNAi de AAT compreende uma fita senso e uma fita antissenso.
[025] Descrevem-se, também, métodos para o tratamento de uma afecção ou doença causada por AATD, que compreendem administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi descrito no presente documento. Descrevem-se, ainda, métodos para inibir a expressão de um gene de AAT, em que os métodos incluem administrar a uma célula um agente de RNAi de AAT descrito no presente documento.
[026] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para o tratamento de AATD (incluindo o tratamento de uma afecção ou doença causada por AATD), sendo
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 22/229
10/159 que os métodos compreendem administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi tendo uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 4.
[027] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para inibir a expressão de um gene de AAT, sendo que os métodos compreendem administrar a uma célula um agente de RNAi de AAT que inclui uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 4.
[028] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para o tratamento de AATD (incluindo o tratamento de uma afecção ou doença causada por AATD), sendo que os métodos compreendem administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi que inclui uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 5.
[029] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para inibir a expressão de um gene de AAT, em que os métodos incluem administrar a uma célula um agente de RNAi de AAT que inclui uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 5.
[030] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para o tratamento de AATD (incluindo o tratamento de uma afecção ou doença causada por AATD), em que os métodos incluem administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi que inclui uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências na Tabela 5, e uma fita antissenso que compreende qualquer uma das sequências na Tabela 4.
[031] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para inibir a expressão de um gene de AAT, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi que inclui uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências na Tabela 5, e uma fita antissenso que compreende qualquer uma das sequências na Tabela 4.
[032] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para inibir a
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 23/229
11/159 expressão de um gene de AAT, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo um agente de RNAi de AAT que inclui uma fita senso que consiste em uma sequência de nucleobase de qualquer uma das sequências na Tabela 5, e a fita antissenso que consiste em uma sequência de nucleobase de qualquer uma das sequências na Tabela 4. Em outras modalidades, revelam-se métodos para inibir a expressão de um gene de AAT, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo um agente de RNAi de AAT que inclui uma fita senso que consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 5, e a fita antissenso que consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4.
[033] Em algumas modalidades, revelam-se métodos para inibir a expressão de um gene de AAT em uma célula, em que os métodos incluem administrar um ou mais agentes de RNAi de AAT tendo a estrutura duplex apresentada na Tabela 6.
[034] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento têm estruturas que incluem, consistem em, ou consistem essencialmente em, uma estrutura mostrada em qualquer uma dentre a Figura 1, Figura 2, Figura 3, Figura 4, Figura 5, Figura 6, Figura 7 ou Figura 8.
[035] Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento são projetados para alvejar posições específicas em um gene de AAT (SEQ ID NO:1). Conforme definido no presente documento, uma sequência de fita antissenso é projetada para alvejar um gene de AAT em uma dada posição no gene quando a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso for alinhada à posição que está 19 nucleotídeos a jusante (em direção à extremidade 3') a partir da posição no gene ao parear a base ao gene. Por exemplo, conforme ilustrado nas Tabelas 1,2 e 3, uma sequência de fita antissenso projetada para alvejar um gene de AAT na posição 1000 requer que ao parear a base ao gene, a nucleobase de terminal 5’ da fita antissenso é alinhada à posição 1018 do gene de AAT. Conforme fornecido no presente documento, um agente de RNAi de AAT não requer que a nucleobase na posição 1
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 24/229
12/159 (5' 3') da fita antissenso seja complementar ao gene, desde que exista pelo menos
85% de complementaridade (por exemplo, pelo menos 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de complementaridade) da fita antissenso e o gene ao longo de uma sequência de extensão de núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos. Por exemplo, para um agente de RNAi de AAT revelado no presente documento que é projetado para alvejar a posição 1000 de um gene de AAT, a nucleobase de terminal 5’ da fita antissenso do agente de RNAi de AAT deve ser alinhada à posição 1018 do gene; no entanto, a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso pode, mas não é exigida, ser complementar à posição 1018 de um gene de AAT, desde que exista pelo menos 85% de complementaridade (por exemplo, pelo menos 90, 91,92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou 100% de complementaridade) da fita antissenso e do gene ao longo de uma sequência de extensão de núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos. Conforme mostrado, dentre outras coisas, pelos vários exemplos revelados no presente documento, o sítio específico de ligação do gene pela fita antissenso do agente de RNAi de AAT (por exemplo, se o agente de RNAi de AAT for projetado para alvejar um gene de AAT na posição 1000, na posição 1142, ou em alguma outra posição) é altamente importante ao nível de inibição alcançado pelo agente de RNAi de AAT.
[036] Em algumas modalidades, a sequência de fita antissenso é projetada para ter uma posição alvo de sequência 1000 de um gene AAT (SEQ ID NO: 1).
[037] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[038] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 25/229
13/159
AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[039] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[040] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[041] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80), em que todos ou
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 26/229
14/159 substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[042] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 81), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 81), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[043] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 429), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 429), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[044] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO: 430), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO: 430), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[045] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 429), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado, e a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 27/229
15/159 [046] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO: 430), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado, e a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 81), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado.
[047] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 857).
[048] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 885).
[049] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 864).
[050] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 28/229
16/159
RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 866).
[051] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em urn nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 857) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[052] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 885) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[053] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 864) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[054] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 29/229
17/159 (SEQ ID NO: 866) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[055] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04824.
[056] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04825.
[057] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04826.
[058] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04827.
[059] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04828.
[060] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04829.
[061] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04830.
[062] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04831.
[063] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em um duplex AD04832.
[064] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04833.
[065] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04834.
[066] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04835.
[067] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04836.
[068] Em algumas modalidades, o agente RNAi de AAT compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma estrutura de duplex de AD04837.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 30/229
18/159 [069] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80), em que um ou mais nucleotideos consistem em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 80 fica localizado nas posições 1 a 19 (5' -> 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80), em que todos ou substancialmente todos os nucleotideos são nucleotideos modificados, e em que SEQ ID NO: 80 fica localizado nas posições 1 a 19 (5' -> 3') da fita antissenso.
[070] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 81), em que um ou mais nucleotideos consistem em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 81 fica localizado nas posições 1 a 19 (5' -> 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 81), em que todos ou substancialmente todos os nucleotideos são nucleotideos modificados, e em que SEQ ID NO: 81 fica localizado nas posições 1 a 19 (5' -> 3') da fita antissenso.
[071] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende a sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 429), em que um ou mais nucleotideos consistem em um nucleotídeo modificado, e em que a posição 19 de SEQ ID NO: 429 forma um par de base com o nucleotídeo localizado na extremidade 5' terminal da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 429), em que todos ou substancialmente todos os nucleotideos são nucleotideos modificados, e em que a posição 19 de SEQ ID NO: 429 forma um par de base com o nucleotídeo localizado na extremidade 5' terminal da fita antissenso.
[072] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 31/229
19/159 compreende a sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO: 430), em que um ou mais nucleotídeos consistem em um nucleotídeo modificado, e em que a posição 19 de SEQ ID NO: 430 forma um par de base com o nucleotídeo localizado na extremidade 5' terminal da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende a sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO: 430), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que a posição 19 de SEQ ID NO: 430 forma um par de base com o nucleotídeo localizado na extremidade 5' terminal da fita antissenso.
[073] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 794 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 794 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
[074] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 839 fica localizado nas posições 1 a 22 (5' 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 839 fica localizado nas posições 1 a 22 (5' 3') da fita antissenso.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 32/229
20/159 [075] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 800 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 800 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
[076] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 801 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 801 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
[077] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 794 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e em que a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 857).
[078] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 33/229
21/159
UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que pelo menos urn ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 839 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 885).
[079] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 800 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 864).
[080] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 801 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 866).
[081] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em um nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 794 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 857) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[082] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 34/229
22/159
UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em urn nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 839 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 885) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[083] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em urn nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 800 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 864) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[084] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801) diferindo por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos, em que pelo menos um ou mais nucleotídeos consiste em urn nucleotídeo modificado, e em que SEQ ID NO: 801 fica localizado na extremidade 5’ terminal da fita antissenso, e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência de nucleobase de AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 866) diferindo por 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos.
[085] Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento podem incluir um ou mais nucleotídeos modificados. Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento também podem incluir uma ou mais ligações internucleosídeo de fosforotioato.
[086] Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento também podem incluir um ou mais grupos de direcionamento ou grupos de ligação. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT revelados no presente
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 35/229
23/159 documento incluem um ou mais grupos de direcionamento. Em algumas modalidades, os grupos de direcionamento são compostos por um ligante de receptor de asialoglicoproteína. Em algumas modalidades, o ligante de receptor de asialoglicoproteína compreende uma galactose ou grupamento derivado de galactose. Em algumas modalidades, o grupamento derivado de galactose compreende N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, o ligante de direcionamento compreende um trímero de N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é conjugado à fita senso dos agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento.
[087] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu (SEQ ID NO: 913), em que a, c, g e u são 2'O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato, e a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[088] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcusu (SEQ ID NO: 958), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato, e a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[089] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg (SEQ ID NO: 959), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato, e a fita senso é pelo menos substancialmente complementar
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 36/229
24/159 à fita antissenso.
[090] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu (SEQ ID NO: 960), em que a, c, g e u são 2'-Ometil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato, e a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[091] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu (SEQ ID NO: 913) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') cguuuaGfGfCfauguuuaacausu (SEQ ID NO: 1276), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso está uma, duas, ou mais desoxirribose abásica invertida (invAb); e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina.
[092] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcusu (SEQ ID NO: 958) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') gcguuuaGfGfCfauguuuaacausu (SEQ ID NO: 1277), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso está uma, duas, ou mais desoxirribose abásica invertida (invAb); e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui N-acetil
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 37/229
25/159 galactosamina.
[093] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg (SEQ ID NO: 959) e a fita senso de urn agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') cgcguuuaGfGfCfauguuuaaca (SEQ ID NO: 1278), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso está uma, duas, ou mais desoxirribose abásica invertida (invAb); e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina.
[094] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu (SEQ ID NO: 960) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') agcguuuaGfGfCfauguuuaaca (SEQ ID NO: 1279), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso está uma, duas, ou mais desoxirribose abásica invertida (invAb); e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina.
[095] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu (SEQ ID NO: 913) e a fita senso de um agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em (5' 3') (NAG37)s(invAb)scguuuaGfGfCfauguuuaacausu(invAb) (SEQ ID NO: 1028), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente;
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 38/229
26/159
Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; (invAb) é desoxirribose abásica invertida (invAb); e (NAG37) é o ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina tendo a estrutura mostrada na Tabela 7.
[096] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcusu (SEQ ID NO: 958) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') (NAG37)s(invAb)sgcguuuaGfGfCfauguuuaacausu(invAb) (SEQ ID NO: 1030), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; (invAb) é desoxirribose abásica invertida (invAb); e (NAG37) é o ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina tendo a estrutura mostrada na Tabela 7.
[097] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg (SEQ ID NO: 959) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') (NAG37)s(invAb)scgcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) (SEQ ID NO: 1024), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; (invAb) é desoxirribose abásica invertida (invAb); e (NAG37) é o ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina tendo a estrutura mostrada na Tabela 7.
[098] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu (SEQ ID NO: 960) e a fita senso de um agente RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência (5' 3') (NAG37)s(invAb)sagcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) (SEQ ID NO: 1033), em que
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 39/229
27/159 a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; (invAb) é desoxirribose abásica invertida (invAb); e (NAG37) é o ligante de direcionamento que inclui N-acetilgalactosamina tendo a estrutura mostrada na Tabela 7.
[099] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT descritos podem incluir um ou mais grupos de direcionamento tendo a estrutura de (PAZ), (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s, conforme definido na Tabela 7.
[0100] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento incluem um grupo de direcionamento na extremidade 5' da fita senso tendo a estrutura de (PAZ), (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s, conforme definido no presente documento na Tabela 7.
[0101] Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento podem ser incorporados em uma composição que compreende um ou mais agentes de RNAi de AAT revelados e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, as composições reveladas no presente documento compreendem um ou mais agentes de RNAi de AAT revelados e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável é uma composição farmacêutica.
[0102] As composições farmacêuticas compreendem um ou mais agentes de RNAi de AAT podem ser administradas em uma série de formas dependendo se um tratamento local ou sistêmico é desejado. A administração pode ser, mas não se limita a, intravenosa, intraarterial, subcutânea, intraperitoneal, subdérmica (por
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 40/229
28/159 exemplo, através de um dispositivo implantado), e administração intraparenquimal. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento são administrado por injeção subcutânea.
[0103] Em algumas modalidades, as composições compreendem um ou mais agentes de RNAi de AAT revelados e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável pode compreender, ainda, um ou mais terapêuticos ou tratamentos.
[0104] Em algumas modalidades, as composições descritas no presente documento que compreendem um ou mais agentes de RNAi de AAT são embalados em um kit, recipiente, embalagem, dispensador, seringas pré-carregadas ou frascos. Em algumas modalidades, as composições descritas no presente documento são parenteralmente administradas.
[0105] Os agentes de RNAi de AAT e composições que compreendem dos mesmos que são revelados no presente documento podem ser administrados a um indivíduo para inibir a expressão do gene antitripsina alfa-1 no indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano que foi diagnosticado tendo AATD.
[0106] Em algumas modalidades, revelam-se no presente documento métodos para inibir a expressão de um gene AAT em uma célula, sendo que os métodos compreendem administrar um agente de RNAi de AAT que tem uma fita antissenso que seja pelo menos parcialmente complementar à porção de um mRNA de AAT tendo qualquer uma das sequências listadas na Tabela 1.
[0107] Os agentes de RNAi de AAT e composições que compreendem os mesmos revelados no presente documento podem ser administrados a um indivíduo para o tratamento de AATD (incluindo uma afecção ou doença causada por deficiência de antitripsina alfa-1). A afecção ou doença que pode ser tratada, evitada e/ou gerenciada pela administração dos agentes de RNAi de AAT e composições que compreendem os mesmos incluem hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose ou insuficiência hepática fulminante.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 41/229
29/159 [0108] Conforme o uso em questão, os termos “oligonucleotídeo” e “polinucleotídeo” significam um polímero de nucleosídeos ligados, sendo que cada um desses pode ser independentemente modificado ou não modificado.
[0109] Conforme o uso em questão, um “agente de RNAi” ou “ativador de RNAi” significa uma composição que contém uma molécula de oligonucleotídeo de RNA ou tipo RNA (por exemplo, RNA quimicamente modificado) que seja capaz de degradar ou inibir a tradução de transcrições de RNA mensageiro (mRNA) de um mRNAalvo em um modo sequência específico. Conforme o uso em questão, agentes de RNAi podem operar através de um mecanismo de interferência de RNA (isto é, induzir a interferência de RNA através da interação com o maquinário de trajetória de interferência de RNA (complexo de silenciamento RNA-induzido ou RISC) de células de mamíferos), ou através de quaisquer mecanismos ou trajetórias alternativos. Embora acredite-se que agentes de RNAi, conforme o termo usado em questão, operem primariamente através de um mecanismo de interferência de RNA, os agentes de RNAi revelados não são ligados, ou limitados, por qualquer trajetória ou mecanismo de ação particular, agentes de RNAi revelados no presente documento são compostos por uma fita senso e uma fita antissenso, e incluem, sem limitação: RNAs interferentes curtos (siRNAs), RNAs de fita dupla (dsRNA), micro RNAs (miRNAs), RNAs de grampo curto (shRNA), e substratos dicer. A fita antissenso dos agentes de RNAi descritos no presente documento é pelo menos parcialmente complementar ao mRNA sendo alvejado (por exemplo, mRNA de AAT). Os agentes de RNAi podem incluir um ou mais nucleotídeos modificados e/ou uma ou mais ligações não-fosfodiéster.
[0110] Conforme o uso em questão, os termos “silenciar,” “reduzir,” “inibir,” “regular descendentemente,” ou “nocautear” ao referirem à expressão de um dado gene, significam que a expressão do gene, conforme medida pelo nível de RNA transcrito a partir do gene ou nível de polipeptídeo, proteína ou subunidade de proteína traduzido a partir do mRNA em uma célula, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo no qual o gene é transcrito, é reduzido quando a célula, grupo de células,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 42/229
30/159 tecido, órgão, ou indivíduo for tratado com os agentes de RNAi descritos no presente documento conforme comparado a uma segunda célula, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo que não foi ou não tem sido tratado dessa forma.
[0111] Conforme o uso em questão, os termos “sequência” e “sequência de nucleotídeo” significam uma sucessão de ordem de nucleobases ou nucleotídeos, descritos com uma sucessão de letras usando a nomenclatura padrão.
[0112] Conforme o uso em questão, uma “base”, “base de nucleotídeo,” ou “nucleobase,” é um composto heterocíclico de pirimidina ou purina, que é um constituinte padrão de todos os ácidos nucleicos, e inclui as bases que formam os nucleotídeos adenina (A), guanina (G), citosina (C), timina (T) e uracila (U). uma nucleobase pode ser adicionalmente modificada para incluir, sem limitação, bases universais, bases hidrofóbicas, bases promiscuas, bases de tamanho expandido, e bases fluorinadas. Conforme o uso em questão, o termo “nucleotídeo” pode incluir um nucleotídeo modificado (como, por exemplo, uma imitação de nucleotídeo, resíduo abásico (Ab), ou uma porção de substituição substituta).
[0113] Conforme o uso em questão, e exceto onde indicado em contrário, o termo “complementar,” quando usado para descrever uma primeira nucleobase ou sequência de nucleotídeo (por exemplo, fita senso de agente de RNAi ou mRNA direcionado) em relação a uma segunda nucleobase ou sequência de nucleotídeo (por exemplo, fita antissenso de agente de RNAi ou um oligonucletídeo antissenso de fita simples), significa a capacidade de um oligonucleotídeo ou polinucleotídeo incluindo a primeira sequência de nucleotídeo de hibridizar (formar ligações de hidrogênio pareadas em base sob condições fisiológicas de mamíferos (ou condições similares in vitro)) e formar um duplex ou estrutura helicoidal dupla sob determinadas condições padrão com um oligonucleotídeo ou polinucleotídeo incluindo a segunda sequência de nucleotídeo. As sequências complementares incluem pares de base de Watson-Crick ou pares de base de não Watson-Crick e incluem nucleotídeos naturais ou modificados ou imitações de nucleotídeo, pelo menos à extensão que as exigências de hibridização anteriores sejam satisfeitas. A identidade ou
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 43/229
31/159 complementaridade de sequência é independente de modificação. Por exemplo, a e Af, conforme definido no presente documento, são complementares a U (ou T) e idênticos a A para os propósitos de determinar a identidade ou complementaridade.
[0114] Conforme o uso em questão, “perfeitamente complementar” ou “totalmente complementar” significa que todas (100%) as nucleobases ou nucleotídeos em uma sequência contígua de um primeiro polinucleotídeo se hibridizarão com o mesmo número de nucleobases ou nucleotídeos em uma sequência contígua de um segundo polinucleotídeo. A sequência contígua pode compreender toda ou parte de uma primeira ou segunda sequência de nucleotídeo.
[0115] Conforme o uso em questão, “parcialmente complementar” significa que em um par hibridizado de sequências de nucleobase, pelo menos, 70%, mas não todas, as bases em uma sequência contígua de um primeiro polinucleotídeo se hibridizarão com o mesmo número de bases em uma sequência contígua de um segundo polinucleotídeo.
[0116] Conforme o uso em questão, “substancialmente complementar” significa que em um par hibridizado de sequências de nucleobase, pelo menos 85%, mas não todas, as bases em uma sequência contígua de um primeiro polinucleotídeo se hibridizará com o mesmo número de bases em uma sequência contígua de um segundo polinucleotídeo. Os termos “complementar,” “totalmente complementar,” “parcialmente complementar,” e “substancialmente complementar” são usados em relação à nucleobase ou correspondência de nucleotídeo entre a fita senso e a fita antissenso de um agente de RNAi, ou entre a fita antissenso de um agente de RNAi e uma sequência de um mRNA de AAT.
[0117] Conforme o uso em questão, o termo “substancialmente idêntico” ou “identidade substancial” conforme aplicado à sequência de ácido nucleico significa que uma sequência de ácido nucleico compreende uma sequência que tenha pelo menos cerca de 85% de identidade de sequência ou mais, por exemplo, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% de identidade, comparada a uma sequência de referência. A porcentagem de identidade de sequência é determinada
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 44/229
32/159 comparando-se duas sequências idealmente alinhadas por uma janela de comparação. A porcentagem é calculada determinando-se o número de posições onde a base de ácido nucleico idêntica ocorre em ambas as sequências para produzir o número de posições correspondidas, dividindo-se o número de posições correspondidas pelo número total de posições na janela de comparação e multiplicando-se o resultado por 100 para produzir a porcentagem de identidade de sequência. As invenções reveladas no presente documento abrangem as sequências de nucleotídeos substancialmente idênticas àquelas reveladas no presente documento.
[0118] Conforme o uso em questão, os termos “tratar,” “tratamento,” e similares, significam os métodos ou etapas adotados para proporcionar atuação ou alívio do número, gravidade e/ou frequência de um ou mais sintomas de uma doença em um indivíduo. Conforme o uso em questão, “tratar” e “tratamento” podem incluir a prevenção, gestão, tratamento profilático, e/ou inibição do número, gravidade, e/ou frequência de um ou mais sintomas de uma doença em um indivíduo.
[0119] Conforme o uso em questão, o sintagma “introduzir em uma célula,” ao se referir a um agente de RNAi, significa entregar funcionalmente o agente de RNAi em uma célula. O sintagma “entrega funcional” significa que entregar o agente de RNAi à célula de modo que permita que o agente de RNAi tenha a atividade biológica esperada, por exemplo, inibição específica à sequência de expressão genética.
[0120] Exceto onde declarado em contrário, o uso do símbolo conforme o uso em questão significa que qualquer grupo ou grupos podem ser ligados ao mesmo que esteja de acordo com o escopo das invenções descritas no presente documento.
[0121] Conforme o uso em questão, o termo “isômeros” se refere a compostos que têm fórmulas moleculares idênticas, mas que difiram na natureza ou na sequência de ligação de seus átomos ou na disposição de seus átomos no espaço.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 45/229
33/159
Os isômeros que diferem na disposição de seus átomos no espaço são denominados “estereoisômero.” Os estereoisômero que não são imagens espelhadas entre si são denominados “diastereoisômeros,” e estereoisômeros que são imagens espelhadas não-superpostas são denominados “enantiômeros,” ou algumas vezes isômeros ópticos. Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é denominado um “centro quiral.” [0122] Conforme o uso em questão, exceto onde especificamente identificado em uma estrutura como tendo uma conformação particular, para cada estrutura onde centros assimétricos estão presentes e, logo, dão origem a enantiômeros, diastereômeros, ou outras configurações estereoisoméricas, cada estrutura revelada no presente documento é destinada a representar todos os isômeros possíveis, incluindo suas formas opticamente puras e racêmicas. Por exemplo, as estruturas reveladas no presente documento são destinadas a abranger misturas de diastereômeros bem como estereoisômero únicos.
[0123] Conforme usado em uma reivindicação, o sintagma “consiste em” exclui qualquer elemento, etapa ou ingrediente não específico na reivindicação. Quando usado em uma reivindicação, o sintagma “consiste essencialmente em” limita o escopo de uma reivindicação aos materiais específicos ou etapas e aqueles que não afetam materialmente as características básicas e inovadoras da invenção reivindicada.
[0124] O indivíduo com conhecimento comum na técnica entendería e avaliaria prontamente que os compostos e composições do presente documento podem ter determinados átomos (por exemplo, átomos N, O ou S) em um estado protonado ou desprotonado, dependendo do ambiente no qual o composto ou composição é colocado. De modo correspondente, conforme o uso em questão, as estruturas reveladas no presente documento consideram que determinados grupos funcionais, como, por exemplo, OH, SH ou NH podem ser protonados ou desprotonados. A revelação do presente documento é destinada a abranger os compostos e composições reveladas independentemente de seu estado de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 46/229
34/159 protonação baseado no ambiente (como pH), conforme seria prontamente entendido pelo indivíduo com conhecimento comum na técnica.
[0125] Exceto onde definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado comumente entendido por um indivíduo com conhecimento comum na técnica. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos e materiais adequados serão descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes, e outras referências mencionadas são incorporadas a título de referência em suas totalidades. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, sobrepujará. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são ilustrativos apenas e não destinados a serem limitantes.
[0126] Outros objetivos, recursos, aspectos e vantagens da invenção se tornarão aparentes a partir da descrição detalhada a seguir, figuras anexas, e das reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0127] As Figuras 1A a 1E representam
AD04828 mostrada como um sal de sódio.
[0128] As Figuras 2A a 2E representam
AD04828 mostrada como um ácido livre.
[0129] As Figuras 3A a 3E representam
AD04831 mostrada como um sal de sódio.
[0130] As Figuras 4A a 4E representam
AD04831 mostrada como um ácido livre.
[0131] As Figuras 5A a 5E representam
AD04836 mostrada como um sal de sódio.
[0132] As Figuras 6A a 6E representam
AD04836 mostrada como um ácido livre.
[0133] As Figuras 7A a 7E representam estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de estrutura química de duplex de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 47/229
35/159
AD04837 mostrada como um sal de sódio.
[0134] As Figuras 8A a 8E representam a estrutura química de duplex de AD04837 mostrada como um ácido livre.
[0135] A Figura 9 é um gráfico de barras que mostra os níveis séricos de AAT (cAAT) de macaco cinomolgo (cyno) normalizados médios em cynos (n=3) seguindo uma administração subcutânea de 3 mg/kg de AD04824, AD04825, AD04826 ou AD04827, de acordo com o Exemplo 4. Os níveis séricos de AAT foram normalizados a valores de pré-tratamento médios. Um erro experimental é mostrado como desvio padrão.
[0136] A Figura 10 é um gráfico de barras que mostra os níveis séricos de cAAT normalizados médios em cynos (n=2 ou n=3) seguindo uma administração subcutânea única de 3 mg/kg de AD04828, AD04836, AD04831 ou AD04837, de acordo com o Exemplo 5. Os níveis séricos de AAT foram normalizados aos valores de pré-tratamento médios. Um erro experimental é mostrado como desvio padrão.
[0137] A Figura 11 é um gráfico de barras que mostra os resultados de uma análise western blot das frações solúveis (monômero Z-AAT) de fígados de camundongos PiZ dosados com solução salina ou agentes de RNAi de AAT NAGconjugados tendo a estrutura de duplex AD04837, dosados por 8 semanas q2w, normalizados ao controle de linha de base, de acordo com o Exemplo 7. Medições individuais de camundongos são mostradas agrupadas por grupo de tratamento, e um erro experimental é mostrado como desvio padrão.
[0138] A Figura 12 é um gráfico de barras que mostra os resultados de uma análise western blot das frações insolúveis (polímero Z-AAT) de fígados de camundongos PiZ dosados com solução salina ou agentes de RNAi de AAT NAGconjugados tendo a estrutura de duplex AD04837, de acordo com o Exemplo 7. Medições individuais de camundongos são mostradas agrupadas por grupo de tratamento, e um erro experimental é mostrado como desvio padrão.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Agentes de RNAi
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 48/229
36/159 [0139] Descrevem-se agentes de RNAi para inibir a expressão de um gene de AAT (referidos no presente documento como agentes de RNAi de AAT ou acionadores de RNAi de AAT). Cada agente de RNAi de AAT compreende uma fita senso e uma fita antissenso. A fita senso e a fita antissenso podem ter de 16 a 30 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso podem ter de 17 a 26 nucleotídeos de comprimento. As fitas senso e antissenso podem ter o mesmo comprimento ou podem ter comprimentos diferentes. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm, cada uma, independentemente de 17 a 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm, cada uma, de 21 a 26 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm, cada uma, de 21 a 24 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem cerca de 19 nucleotídeos de comprimento enquanto a fita antissenso tem cerca de 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem cerca de nucleotídeos de comprimento enquanto a fita antissenso tem cerca de 23 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem 23 nucleotídeos de comprimento e uma fita antissenso tem 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, ambas as fitas senso e antissenso têm, cada uma, de 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem nucleotídeos de comprimento e uma fita antissenso tem 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem 19 nucleotídeos de comprimento e uma fita antissenso tem 21 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso de agente de RNAi têm, cada uma, de independentemente 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 ou 26 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de fita dupla tem um comprimento de duplex de cerca de 16,17, 18, 19, 20, 21,22, 23 ou 24 nucleotídeos.
[0140] Em algumas modalidades, a região de complementaridade perfeita ou substancial entre a fita senso e a fita antissenso tem de 16 a 26 (por exemplo, 16, 17,18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25 ou 26) nucleotídeos de comprimento e ocorre em ou
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 49/229
37/159 próxima à extremidade 5' da fita antissenso (por exemplo, essa região pode ser separada da extremidade 5’ da fita antissenso por 0, 1, 2, 3 ou 4 nucleotideos que não são perfeita ou substancialmente complementares).
[0141] A fita senso e a fita antissenso contêm uma sequência de extensão de núcleo que tem de 16 a 23 nucleobases de comprimento. Uma sequência de extensão de núcleo de fita antissenso é 100% (perfeitamente) complementar ou pelo menos cerca de 85% (substancialmente) complementar a uma sequência de nucleotídeo (algumas vezes referida, por exemplo, como uma sequência alvo) presente em um alvo de mRNA de AAT. A sequência de extensão de núcleo de fita senso é 100% (perfeitamente) complementar ou pelo menos cerca de 85% (substancialmente) complementar a uma sequência de extensão de núcleo na fita antissenso, e, logo, a sequência de extensão de núcleo de fita senso é perfeitamente idêntica ou pelo menos cerca de 85% idêntica a uma sequência de nucleotídeo (sequência alvo) presente no alvo de mRNA de AAT. Uma sequência de extensão de núcleo de fita senso pode ter o mesmo comprimento que uma sequência de núcleo antissenso correspondente ou pode ter um comprimento diferente. Em algumas modalidades, a sequência de extensão de núcleo de fita antissenso tem 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23 nucleotideos de comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de extensão de núcleo de fita senso tem 16, 17, 18, 19, 20, 21,22 ou 23 nucleotideos de comprimento.
[0142] Exemplos de sequências de nucleotideos usadas na formação de agentes de RNAi de AAT são fornecidos nas Tabelas 2, 3, 4 e 5. Exemplos de duplexes de agente de RNAi de AAT, que incluem as sequências de fita senso e fita antissenso nas Tabelas 2, 3, 4 e 5, são mostrados na Tabela 6.
[0143] As fitas senso e antissenso de agente de RNAi de AAT se anelam para formar um duplex. Uma fita senso e uma fita antissenso de um agente de RNAi de AAT podem ser parcial, substancial ou totalmente complementares entre si. Dentro da região de duplex complementar, a sequência de extensão de núcleo de fita senso é pelo menos 85% complementar ou 100% complementar à sequência de extensão
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 50/229
38/159 de núcleo de fita antissenso. Em algumas modalidades, a sequência de extensão de núcleo de fita senso contém uma sequência de pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, ou pelo menos 23 nucleotídeos que seja pelo menos 85% ou 100% complementar a uma sequência de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 ou 23 nucleotídeos correspondente da sequência de extensão de núcleo de fita antissenso (isto é, as sequências de extensão de núcleo senso e antissenso de um agente de RNAi de AAT têm uma região de pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, ou pelo menos 23 nucleotídeos que seja pelo menos 85% pareada em base ou 100% pareada em base.) [0144] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
[0145] A fita senso e/ou a fita antissenso podem, opcional e independentemente, conter 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 nucleotídeos adicionais (extensão) na extremidade 3', na extremidade 5', ou em ambas as extremidades 3' e 5' das sequências de extensão de núcleo. Os nucleotídeos adicionais de fita antissenso, caso presentes, podem ou não ser complementares à sequência correspondente em um mRNA de AAT. Os nucleotídeos adicionais de fita senso, caso presentes, podem ou não ser idênticos à sequência correspondente em um mRNA de AAT. Os nucleotídeos adicionais de fita antissenso, caso presentes, podem ou não ser complementares aos nucleotídeos adicionais da fita senso correspondente, caso presentes.
[0146] Conforme o uso em questão, uma extensão compreende 1,2, 3, 4, 5 ou 6 nucleotídeos na extremidade 5’ e/ou 3’ da sequência de extensão de núcleo de fita senso e/ou sequência de extensão de núcleo de fita antissenso. Os nucleotídeos
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 51/229
39/159 de extensão em uma fita senso podem ou não ser complementares aos nucleotídeos, sejam nucleotídeos de sequência de extensão de núcleo ou nucleotídeos de extensão, na fita antissenso correspondente. De modo oposto, os nucleotídeos de extensão em uma fita antissenso podem ou não ser complementares a nucleotídeos, sejam nucleotídeos de extensão de núcleo ou nucleotídeos de extensão, na fita senso correspondente. Em algumas modalidades, a fita senso e a fita antissenso de um agente de RNAi contêm extensões 3' e 5'. Em algumas modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão 3' pareiam em base de uma fita com um ou mais nucleotídeos de extensão 5' da outra fita. Em outras modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão 3' de uma fita não pareiam em base com um ou mais nucleotídeos de extensão 5' da outra fita. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT tem uma fita antissenso tendo uma extensão 3' e uma fita senso tendo uma extensão 5'.
[0147] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita antissenso tendo uma extensão 3' de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 nucleotídeos de comprimento. Em outras modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita antissenso tendo uma extensão 3' de 1,2 ou 3 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de extensão de fita antissenso compreendem nucleotídeos de uracila ou timidina ou nucleotídeos que sejam complementares à sequência de mRNA de AAT correspondente. Em algumas modalidades, uma extensão de fita antissenso 3' inclui ou consiste em uma ou mais das sequências a seguir, mas não se limita a: AUA, UGCUU, CUG, UG, UGCC, CUGCC, CGU, CUU, UGCCUA, CUGCCU, UGCCU, UGAUU, GCCUAU, T, TT, U, UU (cada uma listada 5' -> 3').
[0148] Em algumas modalidades, a extremidade 3' da fita antissenso pode incluir resíduos abásicos adicionais (Ab). Um “resíduo abásico” ou “sítio abásico” é um nucleotídeo ou nucleosídeo desprovido de uma nucleobase na posição T do açúcar. Em algumas modalidades, Ab ou AbAb podem ser adicionados à extremidade 3' da fita antissenso. Em algumas modalidades, os resíduos abásicos podem ser
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 52/229
40/159 adicionados como resíduos abásicos invertidos (invAb) (vide a Tabela 7). (Vide, por exemplo, F. Czauderna, Nucleic Acids Res., 2003, 31(11), 2705-16).
[0149] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita senso tendo uma extensão 3' de 1,2, 3,4 ou 5 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de extensão de fita senso compreendem nucleotídeos de adenosina, uracila ou timidina, dinucleotídeo AT, ou nucleotídeos que correspondem a nucleotídeos na sequência de mRNA de AAT. Em algumas modalidades, a extensão de fita senso 3' inclui ou consiste em uma das sequências a seguir, mas não se limita a: T, UT, TT, UU, UUT, TTT, ou TTTT (cada uma listada 5' a 3').
[0150] Em algumas modalidades, a extremidade 3' da fita senso pode incluir resíduos abásicos adicionais. Em algumas modalidades, UUAb, UAb ou Ab são adicionadas à extremidade 3' da fita senso. Em algumas modalidades, o um ou mais resíduos abásicos adicionados à extremidade 3' da fita senso são invertidos (invAb). Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos ou sítios abásicos podem ser inseridos entre o ligante de direcionamento e a sequência de nucleobase da fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, a inclusão de um ou mais resíduos abásicos invertidos ou sítios abásicos em ou próximos à extremidade terminal ou extremidades terminais da fita senso de um agente de RNAi permite uma atividade aperfeiçoada ou outras propriedades desejadas de um agente de RNAi.
[0151] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita senso tendo uma extensão 5' de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 nucleotídeos de comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão de fita senso compreendem nucleotídeos de uracila ou adenosina ou nucleotídeos que correspondam a nucleotídeos na sequência de mRNA de AAT. Em algumas modalidades, a extensão de 5' fita senso é uma das sequências a seguir, mas não se limita a: CA, AUAGGC, AUAGG, AUAG, AUA, A, AA, AC, GCA, GGCA, GGC, UAUCA, UAUC, UCA, UAU, U, UU (cada uma listada 5' a 3'). Uma fita senso pode ter uma extensão 3' e/ou uma extensão 5'.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 53/229
41/159 [0152] Em algumas modalidades, a extremidade 5' da fita senso pode incluir um ou mais resíduos abásicos adicionais (por exemplo, (Ab) ou (AbAb)). Em algumas modalidades, o um ou mais resíduos abásicos adicionados à extremidade 5' da fita senso podem ser invertidos (por exemplo, invAb). Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos podem ser inseridos entre o ligante de direcionamento e a sequência de nucleobase da fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, a inclusão de um ou mais resíduos abásicos invertidos em ou próximos à extremidade terminal ou extremidades terminais da fita senso de um agente de RNAi pode permitir uma atividade aperfeiçoada ou outras propriedades desejadas de um agente de RNAi. Em algumas modalidades, um resíduo abásico (desoxirribose) pode ser substituído por um resíduo de ribitol (ribose abásica).
[0153] Em algumas modalidades, a extremidade 3' da sequência de extensão de núcleo de fita antissenso, ou a extremidade 3' da sequência de fita antissenso, podem incluir um resíduo abásico invertido (invAb (vide a Tabela 7)).
[0154] Exemplos de sequências usadas na formação de agentes de RNAi de AAT são proporcionados nas Tabelas 2, 3, 4 e 5. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT inclui uma sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 4. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT inclui a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1-17, 2-15, 2-17, 1-18, 2-18, 1-19, 2-19, 1-20, 2-20, 1-21,2-21, 1 -22, 2-22, 1 -23, 2-23, 1 -24, ou 2-24, de qualquer uma das sequências na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em determinadas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT inclui a sequência de qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 5. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT inclui a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1-18, 1-19, 1-20, 1-21, 1-22, 1-23, 1-24, 2-19, 2-20, 2-21, 2-22, 2-23, 2-24, 3-20, 3-21,3-22, 3-23, 3-24, 4-21,4-22, 4-23, 4-24, 5-22, 5-23, 5-24, 6-23, 6-24, 7-24, de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 54/229
42/159 qualquer uma das sequências nas Tabelas 2, 3 ou 5. Em determinadas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 5.
[0155] Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso dos agentes de RNAi descritos no presente documento contêm o mesmo número de nucleotídeos. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso dos agentes de RNAi descritos no presente documento contêm diferentes números de nucleotídeos. Em algumas modalidades, a extremidade 5' de e a extremidade 3' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade cega. Em algumas modalidades, a extremidade 3' de fita senso e a extremidade 5' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade cega. Em algumas modalidades, ambas as extremidades de um agente de RNAi formam extremidades cegas. Em algumas modalidades, nenhuma extremidade de um agente de RNAi tem extremidade cega. Conforme o uso em questão, uma extremidade cega se refere a uma extremidade de um agente de RNAi de fita dupla no qual os nucleotídeos terminais das duas fitas aneladas são complementares (formam um par de base complementar).
[0156] Em algumas modalidades, a extremidade 5' de fita senso e a extremidade 3' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, a extremidade 3' de fita senso e a extremidade 5' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, ambas as extremidades de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, nenhuma extremidade de um agente de RNAi é uma extremidade desgastada. Conforme o uso em questão, uma extremidade desgastada se refere a uma extremidade de um agente de RNAi de fita dupla no qual os nucleotídeos terminais das duas fitas aneladas formam um par (isto é, não formam um overhang), mas não são complementares (isto é, formam um par não complementar). Conforme o uso em questão, um overhang é uma extensão de um ou mis nucleotídeos não pareados na extremidade de uma fita de um agente de RNAi de fita dupla. Os nucleotídeos não pareados podem estar na
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 55/229
43/159 fita senso ou na fita antissenso, criando overhangs 3' ou 5'. Em algumas modalidades, o agente de RNAi contém: uma extremidade cega e uma extremidade desgastada, uma extremidade cega e uma extremidade overhang 5', uma extremidade cega e uma extremidade overhang 3', uma extremidade desgastada e uma extremidade overhang 5', uma extremidade desgastada e uma extremidade overhang 3', duas extremidades overhang 5', duas extremidades overhang 3', uma extremidade overhang 5' e uma extremidade overhang 3', duas extremidades desgastadas, ou duas extremidades cegas.
[0157] Os nucleotídeos modificados, quando usados e vários construtos de polinucleotídeo ou oligonucleotídeo, podem preservar a atividade do composto em células enquanto ao esmo tempo aumentam a estabilidade sérica desses compostos, e também podem minimizar a possibilidade de ativar uma atividade de interferon em seres humanos mediante administração do construto de polinucleotídeo ou oligonucleotídeo.
[0158] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é preparado ou proporcionado como um sal, sal misto, ou um ácido livre. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é preparado como um sal de sódio. Essas formas estão no escopo das invenções reveladas no presente documento.
Nucleotídeos modificados [0159] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT contém um ou mais nucleotídeos modificados. Conforme o uso em questão, um “nucleotídeo modiicado” é um nucleotídeo diferente de um ribonucleotídeo (2'-hidroxil nucleotídeo). Em algumas modalidades, pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100%) dos nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Conforme o uso em questão, os nucleotídeos modificados incluem, mas não se limitam a, desoxirribonucleotídeos, imitações de nucleotídeo, nucleotídeos abásicos (representados como Ab), nucleotídeos 2'-modificados, nucleotídeos de ligações 3' a 3' (invertidas) (representados no presente documento como invdN, invN,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 56/229
44/159 invn), nucleotídeos compreendendo nucleobase modificada, nucleotídeos em ponte, ácidos nucleicos peptídicos (PNAs), imitações de nucleotídeo 2',3'-seco (análogos de nucleobase destravados, representados no presente documento como Nuna ou NUNA), nucleotídeos travados (representados no presente documento como Nlna ou NLNA), nucleotídeos 3'-O-metóxi (2' internucleosídeo ligado) (representados no presente documento como 3'-OMen), nucleotídeos 2'-F-Arabino (representados no presente documento como NfANA ou Mana), nucleotídeo 5'-Me, 2'-fluoro (representado no presente documento como 5Me-Nf), nucleotídeos morfolinos, desoxirribonucleotídeos de fosfonato de vinila (representados no presente documento como vpdN), nucleotídeos contendo fosfonato de vinila, e nucleotídeos contendo fosfonato de ciclopropila (cPrpN). Nucleotídeos 2'-modificados (isto é, um nucleotídeo com um grupo diferente de um grupo hidroxila n aposição 2' do anel de açúcar de cinco membros) incluem, mas não se limitam a, nucleotídeos 2'-O-metil (representados no presente documento como uma letra minúscula 'ri em uma sequência de nucleotídeo), nucleotídeos 2'-deoxi-2'-fluoro (representados no presente documento como Nf, também representados no presente documento como nucleotídeo 2'-fluoro), nucleotídeos 2'-deoxi (representados no presente documento como dN), nucleotídeos 2'-metoxietil (2'-0-2-metoxiletil) (representados no presente documento como NM ou 2'-MOE), nucleotídeos 2'-amino, e nucleotídeos 2'-alquila. Não é necessário que todas as posições em um dado composto sejam uniformemente modificadas. De modo oposto, mais de uma modificação pode ser incorporada em um único agente de RNAi de AAT ou até mesmo em um único nucleotídeo do mesmo. As fitas senso e fitas antissenso de agente de RNAi de AAT podem ser sintetizadas e/ou modificadas por métodos conhecidos na técnica. A modificação em um nucleotídeo é independente da modificação em outro nucleotídeo.
[0160] As nucleobases modificadas incluem nucleobases sintéticas e naturais, como pirimidinas 5-substituídas, 6-azapirimidinas e purinas N-2, N-6 e 0-6 substituídas, (por exemplo, 2-aminopropiladenina, 5-propiniluracil, ou 5propinilcitosina), 5-metilcitosina (5-me-C), 5-hidroximetil citosina, inosina, xantina,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 57/229
45/159 hipoxantina, 2-aminoadenina, derivados de 6-alquila (por exemplo, 6-metila, 6-etila,
6-isopropila ou 6-n-butila) de adenina e guanina, derivados de 2-alquila (por exemplo, 2-metila, 2-etila, 2-isopropila ou 2-n-butila) e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-tiouracil, 2-tiotimina, 2-tiocitosina, 5-halouracil, citosina, 5-propinil uracil, 5-propinil citosina, 6-azo uracil, 6-azo citosina, 6-azo timina, 5-uracil (pseudouracil),
4-tiouracil, 8-halo, 8-amino, 8-sulfidril, 8-tioalquil, 8-hidroxila e outras adeninas e guaninas 8-substituídas, 5-halo (por exemplo, 5-bromo), 5-trifluorometil, e outras uracilas e citosinas 5-substituidas, 7-metilguanina e 7-metiladenina, 8-azaguanina e 8-azaadenina, 7-deazaguanina, 7-deazaadenina, 3-deazaguanina, e 3deazaadenina.
[0161] Em algumas modalidades, todos ou substancialmente todos os nucleotídeos de um agente de RNAi são nucleotídeos modificados. Conforme o uso em questão, um agente de RNAi onde substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados é um agente de RNAi tendo quatro ou menos (isto é, 0, 1, 2, 3 ou 4) nucleotídeos na fita senso e na fita antissenso sendo ribonucleotídeos (isto é, não modificados). Conforme o uso em questão, uma fita senso onde substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados é uma fita senso tendo dois ou menos (isto é, 0,1 ou 2) nucleotídeos na fita senso sendo ribonucleotídeos. Conforme o uso em questão, uma fita antissenso onde substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados é uma fita antissenso tendo dois ou menos (isto é, 0,1 ou 2) nucleotídeos na fita senso sendo ribonucleotídeos. Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de um agente de RNAi consistem em um ribonucleotídeo.
Ligações de internucleosídeo modificado [0162] Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de um agente de RNAi de AAT são ligados por ligações ou backbones não padrões (isto é, ligações de internucleosídeo modificado ou backbones modificados). As ligações ou backbones de internucleosídeo modificado incluem, mas não se limitam a, grupos 5’-fosforotioato (representados no presente documento como uma letra minúscula “s”), fosforotioatos
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 58/229
46/159 quirais, tiofosfatos, fosforoditioatos, fosfotriésteres, aminoalquil-fosfotriésteres, fosfonatos de alquila (por exemplo, fosfonatos de metila ou fosfonatos de 3'alquileno), fosfonatos quirais, fosfinatos, fosforamidatos (por exemplo, fosforamidato 3'-amino, aminoalquilfosforamidatos, ou tionofosforamidatos), tionoalquil-fosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres, ligações morfolino, boranofosfatos tendo ligações 3'-5' normais, análogos 2'-5' ligados de boranofosfatos, ou boranofosfatos tendo polaridade invertida onde os pares adjacentes de unidades de nucleosídeo são ligados 3'-5' a 5'-3' ou 2'-5' a 5'-2'. Em algumas modalidades, uma ligação ou backbone de internucleosídeo modificado é desprovida de um átomo de fósforo. As ligações de internucleosídeo modificado desprovidas de um átomo de fósforo incluem, mas não se limitam a, ligações inter-açúcar de alquila ou cicloalquila de cadeia curta, heteroátimo misto e ligações inter-açúcar de alquila ou cicloalquila, ou uma ou mais ligações inter-açúcar heteroatômica ou heterocíclica de cadeia curta. Em algumas modalidades, os backbones de internucleosídeo modificado incluem, mas não se limitam a, backbones de siloxano, backbones de sulfeto, backbones de sulfóxido, backbones de sulfona, backbones de formacetil e tioformacetil, backbones de formacetil e tioformacetil de metileno, backbones contendo alceno, backbones de sulfamato, backbones de metileneimino e metileno-hidrazino, backbones de sulfonato e sulfonamida, backbones de amida, e outros backbones tendo componentes N, O, S e CH2 mistos.
[0163] Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de AAT pode conter 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 ligações de fosforotioato, uma fita antissenso de um agente de RNAi de AAT pode conter 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 ligações de fosforotioato, ou tanto a fita senso como a fita antissenso independentemente podem conter 1,2, 3, 4, 5 ou 6 ligações de fosforotioato. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de AAT pode conter 1,2, 3 ou 4 ligações de fosforotioato, uma fita antissenso de um agente de RNAi de AAT pode conter 1,2, 3 ou 4 ligações de fosforotioato, ou tanto a fita senso como a fita antissenso independentemente podem conter 1,2, 3 ou 4 ligações de fosforotioato.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 59/229
47/159 [0164] Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT contém menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato. Em algumas modalidades, as pelo menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato estão entre os nucleotídeos nas posições 1 a 3 a partir da extremidade 3' da fita senso. Em algumas modalidades, as pelo menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato estão entre os nucleotídeos nas posições 1-3, 2-4, 3-5, 4-6, 4-5, ou 6-8 a partir da extremidade 5’ da fita senso. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT contém quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato. Em algumas modalidades, as quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato estão entre os nucleotídeos nas posições 1 a 3 a partir da extremidade 5' da fita antissenso e entre os nucleotídeos nas posições 19-21,20-22, 21-23, 22-24, 23-25, ou 24-26 a partir da extremidade 5'. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT contém pelo menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato na fita senso e três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato na fita antissenso.
[0165] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT contém um ou mais nucleotídeos modificados e uma ou mais ligações de internucleosídeo modificado. Em algumas modalidades, um nucleosídeo 2’-modificado é combinado com uma ligação de internucleosídeo modificado.
Agentes de RNAi de AAT [0166] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT revelados alvejam um gene de AAT em ou próximo às posições do genoma de AAT mostrado na Tabela 1. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de AAT revelado no presente documento inclui uma sequência de extensão de núcleo que seja completa, substancial, ou pelo menos parcialmente complementar a uma sequência de AAT 19-mer alvo revelada na Tabela 1.
Tabela 1. Sequência alvo de mRNA AAT 19-mer (tomada a partir de cDNA de AAT humano, GenBank NM_000295.4 (SEQ ID NO:1))
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 60/229
48/159
SEQ ID NO: Sequências alvo AAT 19-mer (5' -> 3') Posição de genoma correspondente (tomada a partir de SEQ ID NO: 1)
2 CGUUUAGGCAUGUUUAACA 1000-1018
3 AACAGCACCAAUAUCUUCU 469-487
4 AUAUCAUCACCAAGUUCCU 1142-1160
5 AGAUGCUGCCCAGAAGACA 348-366
6 CUGGCACACCAGUCCAACA 454-472
7 UGGCACACCAGUCCAACAG 455-473
8 GCACACCAGUCCAACAGCA 457-475
9 CAGUCCAACAGCACCAAUA 463-481
10 AGUCCAACAGCACCAAUAU 464-482
11 GUCCAACAGCACCAAUAUC 465-483
12 CCAACAGCACCAAUAUCUU 467-485
13 CCCCAGUGAGCAUCGCUAC 491-509
14 GAGCAUCGCUACAGCCUUU 498-516
15 GCAUCGCUACAGCCUUUGC 500-518
16 CAUCGCUACAGCCUUUGCA 501-519
17 UCGCUACAGCCUUUGCAAU 503-521
18 CUACAGCCUUUGCAAUGCU 506-524
19 ACAGCCUUUGCAAUGCUCU 508-526
20 GAAGGCUUCCAGGAACUCC 613-631
21 UAGUGGAUAAGUUUUUGGA 710-728
22 UGUACCACUCAGAAGCCUU 743-761
23 GUACCACUCAGAAGCCUUC 744-762
24 ACACCGAAGAGGCCAAGAA 779-797
25 ACCGAAGAGGCCAAGAAAC 781-799
26 AGGCCAAGAAACAGAUCAA 788-806
27 GGCCAAGAAACAGAUCAAC 789-807
28 GCCAAGAAACAGAUCAACG 790-808
29 UACUCAAGGGAAAAUUGUG 825-843
30 CUCAAGGGAAAAUUGUGGA 827-845
31 UCAAGGGAAAAUUGUGGAU 828-846
32 UUGGUCAAGGAGCUUGACA 847-865
33 AGGAGCUUGACAGAGACAC 854-872
34 AGCUUGACAGAGACACAGU 857-875
35 UUUGCUCUGGUGAAUUACA 877-895
36 AGCGUUUAGGCAUGUUUAA 998-1016
37 GCGUUUAGGCAUGUUUAAC 999-1017
38 UUAGGCAUGUUUAACAUCC 1003-1021
39 UGGGUGCUGCUGAUGAAAU 1045-1063
40 UGCCACCGCCAUCUUCUUC 1074-1092
41 CCUGGAAAAUGAACUCACC 1119-1137
42 CGAUAUCAUCACCAAGUUC 1140-1158
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 61/229
49/159
SEQ ID NO: Sequências alvo AAT 19-mer (5' -> 3') Posição de genoma correspondente (tomada a partir de SEQ ID NO: 1)
43 ACCAAGUUCCUGGAAAAUG 1150-1168
44 UCCAUUACUGGAACCUAUG 1207-1225
45 CCAUUACUGGAACCUAUGA 1208-1226
46 ACUGGAACCUAUGAUCUGA 1213-1231
47 GGAACCUAUGAUCUGAAGA 1216-1234
48 GAACCUAUGAUCUGAAGAG 1217-1235
49 CAGCAAUGGGGCUGACCUC 1269-1287
50 GCAAUGGGGCUGACCUCUC 1271-1289
51 AGAGGAGGCACCCCUGAAG 1299-1317
52 AGGCACCCCUGAAGCUCUC 1304-1322
53 UCUCCAAGGCCGUGCAUAA 1319-1337
54 UCCAAGGCCGUGCAUAAGG 1321-1339
55 CCAAGGCCGUGCAUAAGGC 1322-1340
56 CAAGGCCGUGCAUAAGGCU 1323-1341
57 AAGGCUGUGCUGACCAUCG 1336-1354
58 GGCUGUGCUGACCAUCGAC 1338-1356
59 CUGCUGGGGCCAUGUUUUU 1373-1391
60 GCUGGGGCCAUGUUUUUAG 1375-1393
61 CUGGGGCCAUGUUUUUAGA 1376-1394
62 GGGGCCAUGUUUUUAGAGG 1378-1396
63 GGGCCAUGUUUUUAGAGGC 1379-1397
64 GAGGCCAUACCCAUGUCUA 1393-1411
65 GGCCAUACCCAUGUCUAUC 1395-1413
66 CCCGAGGUCAAGUUCAACA 1417-1435
67 AGGUCAAGUUCAACAAACC 1421-1439
68 CAAGUUCAACAAACCCUUU 1425-1443
69 AGUUCAACAAACCCUUUGU 1427-1445
70 GUUCAACAAACCCUUUGUC 1428-1446
71 UCAACAAACCCUUUGUCUU 1430-1448
72 ACCCUUUGUCUUCUUAAUG 1437-1455
73 CCUUUGUCUUCUUAAUGAU 1439-1457
74 UACCAAGUCUCCCCUCUUC 1467-1485
75 AAGUCUCCCCUCUUCAUGG 1471-1489
76 AGUCUCCCCUCUUCAUGGG 1472-1490
77 UCUCCCCUCUUCAUGGGAA 1474-1492
78 CUCCCCUCUUCAUGGGAAA 1475-1493
79 AUGACAUUAAAGAAGGGUU 1569-1587
[0167] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui uma fita
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 62/229
50/159 antissenso em que a posição 19 da fita antissenso (5' 3') é capaz de formar um par de base com a posição 1 de uma sequência alvo 19-mer revelada na Tabela 1. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui uma fita antissenso em que a posição 1 da fita antissenso (5' 3') é capaz de formar um par de base com a posição 19 da sequência alvo 19-mer revelada na Tabela 1.
[0168] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui uma fita antissenso em que a posição 2 da fita antissenso (5' 3') é capaz de formar um par de base com a posição 18 ad sequência alvo 19-mer revelada na Tabela 1. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui uma fita antissenso em que as posições 2 a 18 da fita antissenso (5' 3') são capazes de formar pares de base em cada uma das respectivas bases complementares localizadas nas posições 18 a 2 da sequência alvo 19-mer revelada na Tabela 1.
[0169] Para os agentes de RNAi revelados no presente documento, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') pode ser perfeitamente complementar ao gene de AAT, ou pode ser não complementar ao gene de AAT. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') é um U, A, ou dT. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') forma um par de base A:U ou U:A com a fita senso.
[0170] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 2-18 ou 2-19 de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em algumas modalidades, uma fita senso de RNAi de AAT compreende a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1-17, 1-18 ou 2-18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
[0171] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é composto por (i) uma fita antissenso que compreende a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 2-18 ou 2-19 de qualquer uma das sequências de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 63/229
51/159 fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4, e (ii) uma fita senso que compreende a sequência de nucleotídeos (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1 -17 ou 1 18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
[0172] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT incluem sequências de nucleotídeo 19-mer de núcleo mostradas na Tabela 2 a seguir.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 64/229
Tabela 2. Sequências de base de extensão de núcleo de fita antissenso e fita senso de agente de RNAi de AAT exemplificadoras (N = qualquer nucleobase)
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
80 UGUUAAACAUGCCUAAACG 429 CGUUUAGGCAUGUUUAACA 1000-1018
81 AGUUAAACAUGCCUAAACG 430 CGUUUAGGCAUGUUUAACU 1000-1018
82 NGUUAAACAUGCCUAAACG 431 CGUUUAGGCAUGUUUAACN 1000-1018
83 NGUUAAACAUGCCUAAACN 432 NGUUUAGGCAUGUUUAACN 1000-1018
84 AGAAGAUAUUGGUGCUGUU 433 AACAGCACCAAUAUCUUCU 469-487
85 UGAAGAUAUUGGUGCUGUU 434 AACAGCACCAAUAUCUUCA 469-487
86 NGAAGAUAUUGGUGCUGUU 435 AACAGCACCAAUAUCUUCN 469-487
87 NGAAGAUAUUGGUGCUGUN 436 NACAGCACCAAUAUCUUCN 469-487
88 AGGAACUUGGUGAUGAUAU 437 AUAUCAUCACCAAGUUCCU 1142-1160
89 UGGAACUUGGUGAUGAUAU 438 AUAUCAUCACCAAGUUCCA 1142-1160
90 NGGAACUUGGUGAUGAUAU 439 AUAUCAUCACCAAGUUCCN 1142-1160
91 NGGAACUUGGUGAUGAUAN 440 NUAUCAUCACCAAGUUCCN 1142-1160
92 UGUCUUCUGGGCAGCAUCU 441 AGAUGCUGCCCAGAAGACA 348-366
93 AGUCUUCUGGGCAGCAUCU 442 AGAUGCUGCCCAGAAGACU 348-366
94 NGUCUUCUGGGCAGCAUCU 443 AGAUGCUGCCCAGAAGACN 348-366
95 NGUCUUCUGGGCAGCAUCN 444 NGAUGCUGCCCAGAAGACN 348-366
96 UGUUGGACUGGUGUGCCAG 445 CUGGCACACCAGUCCAACA 454-472
97 AGUUGGACUGGUGUGCCAG 446 CUGGCACACCAGUCCAACU 454-472
98 NGUUGGACUGGUGUGCCAG 447 CUGGCACACCAGUCCAACN 454-472
99 NGUUGGACUGGUGUGCCAN 448 NUGGCACACCAGUCCAACN 454-472
100 CUGUUGGACUGGUGUGCCA 449 UGGCACACCAGUCCAACAG 455-473
101 UUGUUGGACUGGUGUGCCA 450 UGGCACACCAGUCCAACAA 455-473
102 AUGUUGGACUGGUGUGCCA 451 UGGCACACCAGUCCAACAU 455-473
103 NUGUUGGACUGGUGUGCCA 452 UGGCACACCAGUCCAACAN 455-473
104 NUGUUGGACUGGUGUGCCN 453 NGGCACACCAGUCCAACAN 455-473
52/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 65/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
105 UGCUGUUGGACUGGUGUGC 454 GCACACCAGUCCAACAGCA 457-475
106 AGCUGUUGGACUGGUGUGC 455 GCACACCAGUCCAACAGCU 457-475
107 NGCUGUUGGACUGGUGUGC 456 GCACACCAGUCCAACAGCN 457-475
108 NGCUGUUGGACUGGUGUGN 457 NCACACCAGUCCAACAGCN 457-475
109 UAUUGGUGCUGUUGGACUG 458 CAGUCCAACAGCACCAAUA 463-481
110 AAUUGGUGCUGUUGGACUG 459 CAGUCCAACAGCACCAAUU 463-481
111 NAUUGGUGCUGUUGGACUG 460 CAGUCCAACAGCACCAAUN 463-481
112 NAUUGGUGCUGUUGGACUN 461 NAGUCCAACAGCACCAAUN 463-481
113 AUAUUGGUGCUGUUGGACU 462 AGUCCAACAGCACCAAUAU 464-482
114 UUAUUGGUGCUGUUGGACU 463 AGUCCAACAGCACCAAUAA 464-482
115 NUAUUGGUGCUGUUGGACU 464 AGUCCAACAGCACCAAUAN 464-482
116 NUAUUGGUGCUGUUGGACN 465 NGUCCAACAGCACCAAUAN 464-482
117 GAUAUUGGUGCUGUUGGAC 466 GUCCAACAGCACCAAUAUC 465-483
118 UAUAUUGGUGCUGUUGGAC 467 GUCCAACAGCACCAAUAUA 465-483
119 AAUAUUGGUGCUGUUGGAC 468 GUCCAACAGCACCAAUAUU 465-483
120 NAUAUUGGUGCUGUUGGAC 469 GUCCAACAGCACCAAUAUN 465-483
121 NAUAUUGGUGCUGUUGGAN 470 NUCCAACAGCACCAAUAUN 465-483
122 AAGAUAUUGGUGCUGUUGG 471 CCAACAGCACCAAUAUCUU 467-485
123 UAGAUAUUGGUGCUGUUGG 472 CCAACAGCACCAAUAUCUA 467-485
124 NAGAUAUUGGUGCUGUUGG 473 CCAACAGCACCAAUAUCUN 467-485
125 NAGAUAUUGGUGCUGUUGN 474 NCAACAGCACCAAUAUCUN 467-485
126 GUAGCGAUGCUCACUGGGG 475 CCCCAGUGAGCAUCGCUAC 491-509
127 UUAGCGAUGCUCACUGGGG 476 CCCCAGUGAGCAUCGCUAA 491-509
128 AUAGCGAUGCUCACUGGGG 477 CCCCAGUGAGCAUCGCUAU 491-509
129 NUAGCGAUGCUCACUGGGG 478 CCCCAGUGAGCAUCGCUAN 491-509
130 NUAGCGAUGCUCACUGGGN 479 NCCCAGUGAGCAUCGCUAN 491-509
131 AAAGGCUGUAGCGAUGCUC 480 GAGCAUCGCUACAGCCUUU 498-516
132 UAAGGCUGUAGCGAUGCUC 481 GAGCAUCGCUACAGCCUUA 498-516
53/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 66/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
133 NAAGGCUGUAGCGAUGCUC 482 GAGCAUCGCUACAGCCUUN 498-516
134 NAAGGCUGUAGCGAUGCUN 483 NAGCAUCGCUACAGCCUUN 498-516
135 GCAAAGGCUGUAGCGAUGC 484 GCAUCGCUACAGCCUUUGC 500-518
136 UCAAAGGCUGUAGCGAUGC 485 GCAUCGCUACAGCCUUUGA 500-518
137 ACAAAGGCUGUAGCGAUGC 486 GCAUCGCUACAGCCUUUGU 500-518
138 NCAAAGGCUGUAGCGAUGC 487 GCAUCGCUACAGCCUUUGN 500-518
139 NCAAAGGCUGUAGCGAUGN 488 NCAUCGCUACAGCCUUUGN 500-518
140 UGCAAAGGCUGUAGCGAUG 489 CAUCGCUACAGCCUUUGCA 501-519
141 AGCAAAGGCUGUAGCGAUG 490 CAUCGCUACAGCCUUUGCU 501-519
142 NGCAAAGGCUGUAGCGAUG 491 NAUCGCUACAGCCUUUGCN 501-519
143 NGCAAAGGCUGUAGCGAUN 492 NAUCGCUACAGCCUUUGCN 501-519
144 AUUGCAAAGGCUGUAGCGA 493 UCGCUACAGCCUUUGCAAU 503-521
145 UUUGCAAAGGCUGUAGCGA 494 UCGCUACAGCCUUUGCAAA 503-521
146 NUUGCAAAGGCUGUAGCGA 495 UCGCUACAGCCUUUGCAAN 503-521
147 NUUGCAAAGGCUGUAGCGN 496 NCGCUACAGCCUUUGCAAN 503-521
148 AGCAUUGCAAAGGCUGUAG 497 CUACAGCCUUUGCAAUGCU 506-524
149 UGCAUUGCAAAGGCUGUAG 498 CUACAGCCUUUGCAAUGCA 506-524
150 NGCAUUGCAAAGGCUGUAG 499 CUACAGCCUUUGCAAUGCN 506-524
151 NGCAUUGCAAAGGCUGUAN 500 NUACAGCCUUUGCAAUGCN 506-524
152 AGAGCAUUGCAAAGGCUGU 501 ACAGCCUUUGCAAUGCUCU 508-526
153 UGAGCAUUGCAAAGGCUGU 502 ACAGCCUUUGCAAUGCUCA 508-526
154 NGAGCAUUGCAAAGGCUGU 503 ACAGCCUUUGCAAUGCUCN 508-526
155 NGAGCAUUGCAAAGGCUGU 504 NCAGCCUUUGCAAUGCUCN 508-526
156 GGAGUUCCUGGAAGCCUUC 505 GAAGGCUUCCAGGAACUCC 613-631
157 UGAGUUCCUGGAAGCCUUC 506 GAAGGCUUCCAGGAACUCA 613-631
158 AGAGUUCCUGGAAGCCUUC 507 GAAGGCUUCCAGGAACUCU 613-631
159 NGAGUUCCUGGAAGCCUUC 508 GAAGGCUUCCAGGAACUCN 613-631
160 NGAGUUCCUGGAAGCCUUN 509 NAAGGCUUCCAGGAACUCN 613-631
54/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 67/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
161 UCCAAAAACUUAUCCACUA 510 UAGUGGAUAAGUUUUUGGA 710-728
162 ACCAAAAACUUAUCCACUA 511 UAGUGGAUAAGUUUUUGGU 710-728
163 NCCAAAAACUUAUCCACUA 512 UAGUGGAUAAGUUUUUGGN 710-728
164 NCCAAAAACUUAUCCACUN 513 NAGUGGAUAAGUUUUUGGN 710-728
165 AAGGCUUCUGAGUGGUACA 514 UGUACCACUCAGAAGCCUU 743-761
166 UAGGCUUCUGAGUGGUACA 515 UGUACCACUCAGAAGCCUA 743-761
167 NAGGCUUCUGAGUGGUACA 516 UGUACCACUCAGAAGCCUN 743-761
168 NAGGCUUCUGAGUGGUACN 517 NGUACCACUCAGAAGCCUN 743-761
169 GAAGGCUUCUGAGUGGUAC 518 GUACCACUCAGAAGCCUUC 744-762
170 UAAGGCUUCUGAGUGGUAC 519 GUACCACUCAGAAGCCUUA 744-762
171 AAAGGCUUCUGAGUGGUAC 520 GUACCACUCAGAAGCCUUU 744-762
172 NAAGGCUUCUGAGUGGUAC 521 GUACCACUCAGAAGCCUUN 744-762
173 NAAGGCUUCUGAGUGGUAN 522 NUACCACUCAGAAGCCUUN 744-762
174 UUCUUGGCCUCUUCGGUGU 523 ACACCGAAGAGGCCAAGAA 779-797
175 AUCUUGGCCUCUUCGGUGU 524 ACACCGAAGAGGCCAAGAU 779-797
176 NUCUUGGCCUCUUCGGUGU 525 ACACCGAAGAGGCCAAGAN 779-797
177 NUCUUGGCCUCUUCGGUGN 526 NCACCGAAGAGGCCAAGAN 779-797
178 GUUUCUUGGCCUCUUCGGU 527 ACCGAAGAGGCCAAGAAAC 781-799
179 UUUUCUUGGCCUCUUCGGU 528 ACCGAAGAGGCCAAGAAAA 781-799
180 AUUUCUUGGCCUCUUCGGU 529 ACCGAAGAGGCCAAGAAAU 781-799
181 NUUUCUUGGCCUCUUCGGU 530 ACCGAAGAGGCCAAGAAAN 781-799
182 NUUUCUUGGCCUCUUCGGN 531 NCCGAAGAGGCCAAGAAAN 781-799
183 UUGAUCUGUUUCUUGGCCU 532 AGGCCAAGAAACAGAUCAA 788-806
184 AUGAUCUGUUUCUUGGCCU 533 AGGCCAAGAAACAGAUCAU 788-806
185 NUGAUCUGUUUCUUGGCCU 534 AGGCCAAGAAACAGAUCAN 788-806
186 NUGAUCUGUUUCUUGGCCN 535 NGGCCAAGAAACAGAUCAN 788-806
187 GUUGAUCUGUUUCUUGGCC 536 GGCCAAGAAACAGAUCAAC 789-807
188 UUUGAUCUGUUUCUUGGCC 537 GGCCAAGAAACAGAUCAAA 789-807
55/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 68/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
189 AUUGAUCUGUUUCUUGGCC 538 GGCCAAGAAACAGAUCAAU 789-807
190 NUUGAUCUGUUUCUUGGCC 539 GGCCAAGAAACAGAUCAAN 789-807
191 NUUGAUCUGUUUCUUGGCN 540 NGCCAAGAAACAGAUCAAN 789-807
192 CGUUGAUCUGUUUCUUGGC 541 GCCAAGAAACAGAUCAACG 790-808
193 UGUUGAUCUGUUUCUUGGC 542 GCCAAGAAACAGAUCAACA 790-808
194 AGUUGAUCUGUUUCUUGGC 543 GCCAAGAAACAGAUCAACU 790-808
195 NGUUGAUCUGUUUCUUGGC 544 GCCAAGAAACAGAUCAACN 790-808
196 NGUUGAUCUGUUUCUUGGN 545 NCCAAGAAACAGAUCAACN 790-808
197 CACAAUUUUCCCUUGAGUA 546 UACUCAAGGGAAAAUUGUG 825-843
198 UACAAUUUUCCCUUGAGUA 547 UACUCAAGGGAAAAUUGUA 825-843
199 AACAAUUUUCCCUUGAGUA 548 UACUCAAGGGAAAAUUGUU 825-843
200 NACAAUUUUCCCUUGAGUA 549 UACUCAAGGGAAAAUUGUN 825-843
201 NACAAUUUUCCCUUGAGUN 550 NACUCAAGGGAAAAUUGUN 825-843
202 UCCACAAUUUUCCCUUGAG 551 CUCAAGGGAAAAUUGUGGA 827-845
203 ACCACAAUUUUCCCUUGAG 552 CUCAAGGGAAAAUUGUGGU 827-845
204 NCCACAAUUUUCCCUUGAG 553 CUCAAGGGAAAAUUGUGGN 827-845
205 NCCACAAUUUUCCCUUGAN 554 NUCAAGGGAAAAUUGUGGN 827-845
206 AUCCACAAUUUUCCCUUGA 555 UCAAGGGAAAAUUGUGGAU 828-846
207 UUCCACAAUUUUCCCUUGA 556 UCAAGGGAAAAUUGUGGAA 828-846
208 NUCCACAAUUUUCCCUUGA 557 UCAAGGGAAAAUUGUGGAN 828-846
209 NUCCACAAUUUUCCCUUGN 558 NCAAGGGAAAAUUGUGGAN 828-846
210 UGUCAAGCUCCUUGACCAA 559 UUGGUCAAGGAGCUUGACA 847-865
211 AGUCAAGCUCCUUGACCAA 560 UUGGUCAAGGAGCUUGACU 847-865
212 NGUCAAGCUCCUUGACCAA 561 NUGGUCAAGGAGCUUGACA 847-865
213 NGUCAAGCUCCUUGACCAA 562 NUGGUCAAGGAGCUUGACN 847-865
214 GUGUCUCUGUCAAGCUCCU 563 AGGAGCUUGACAGAGACAC 854-872
215 UUGUCUCUGUCAAGCUCCU 564 AGGAGCUUGACAGAGACAA 854-872
216 AUGUCUCUGUCAAGCUCCU 565 AGGAGCUUGACAGAGACAU 854-872
56/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 69/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
217 NUGUCUCUGUCAAGCUCCU 566 AGGAGCUUGACAGAGACAN 854-872
218 NUGUCUCUGUCAAGCUCCN 567 NGGAGCUUGACAGAGACAN 854-872
219 ACUGUGUCUCUGUCAAGCU 568 AGCUUGACAGAGACACAGU 857-875
220 UCUGUGUCUCUGUCAAGCU 569 AGCUUGACAGAGACACAGA 857-875
221 NCUGUGUCUCUGUCAAGCU 570 AGCUUGACAGAGACACAGN 857-875
222 NCUGUGUCUCUGUCAAGCN 571 NGCUUGACAGAGACACAGN 857-875
223 UGUAAUUCACCAGAGCAAA 572 UUUGCUCUGGUGAAUUACA 877-895
224 AGUAAUUCACCAGAGCAAA 573 UUUGCUCUGGUGAAUUACU 877-895
225 NGUAAUUCACCAGAGCAAA 574 UUUGCUCUGGUGAAUUACN 877-895
226 NGUAAUUCACCAGAGCAAN 575 NUUGCUCUGGUGAAUUACN 877-895
227 UUAAACAUGCCUAAACGCU 576 AGCGUUUAGGCAUGUUUAA 998-1016
228 AUAAACAUGCCUAAACGCU 577 AGCGUUUAGGCAUGUUUAU 998-1016
229 NUAAACAUGCCUAAACGCU 578 AGCGUUUAGGCAUGUUUAN 998-1016
230 NUAAACAUGCCUAAACGCN 579 NGCGUUUAGGCAUGUUUAN 998-1016
231 GUUAAACAUGCCUAAACGC 580 GCGUUUAGGCAUGUUUAAC 999-1017
232 UUUAAACAUGCCUAAACGC 581 GCGUUUAGGCAUGUUUAAA 999-1017
233 AUUAAACAUGCCUAAACGC 582 GCGUUUAGGCAUGUUUAAU 999-1017
234 NUUAAACAUGCCUAAACGC 583 GCGUUUAGGCAUGUUUAAN 999-1017
235 NUUAAACAUGCCUAAACGN 584 NCGUUUAGGCAUGUUUAAN 999-1017
236 GGAUGUUAAACAUGCCUAA 585 UUAGGCAUGUUUAACAUCC 1003-1021
237 UGAUGUUAAACAUGCCUAA 586 UUAGGCAUGUUUAACAUCA 1003-1021
238 AGAUGUUAAACAUGCCUAA 587 UUAGGCAUGUUUAACAUCU 1003-1021
239 NGAUGUUAAACAUGCCUAA 588 UUAGGCAUGUUUAACAUCN 1003-1021
240 NGAUGUUAAACAUGCCUAN 589 NUAGGCAUGUUUAACAUCN 1003-1021
241 AUUUCAUCAGCAGCACCCA 590 UGGGUGCUGCUGAUGAAAU 1045-1063
242 UUUUCAUCAGCAGCACCCA 591 UGGGUGCUGCUGAUGAAAA 1045-1063
243 NUUUCAUCAGCAGCACCCA 592 UGGGUGCUGCUGAUGAAAN 1045-1063
244 NUUUCAUCAGCAGCACCCN 593 NGGGUGCUGCUGAUGAAAN 1045-1063
57/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 70/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
245 GAAGAAGAUGGCGGUGGCA 594 UGCCACCGCCAUCUUCUUC 1074-1092
246 UAAGAAGAUGGCGGUGGCA 595 UGCCACCGCCAUCUUCUUA 1074-1092
247 AAAGAAGAUGGCGGUGGCA 596 UGCCACCGCCAUCUUCUUU 1074-1092
248 NAAGAAGAUGGCGGUGGCA 597 UGCCACCGCCAUCUUCUUN 1074-1092
249 NAAGAAGAUGGCGGUGGCN 598 NGCCACCGCCAUCUUCUUN 1074-1092
250 GGUGAGUUCAUUUUCCAGG 599 CCUGGAAAAUGAACUCACC 1119-1137
251 UGUGAGUUCAUUUUCCAGG 600 CCUGGAAAAUGAACUCACA 1119-1137
252 AGUGAGUUCAUUUUCCAGG 601 CCUGGAAAAUGAACUCACU 1119-1137
253 NGUGAGUUCAUUUUCCAGG 602 CCUGGAAAAUGAACUCACN 1119-1137
254 NGUGAGUUCAUUUUCCAGN 603 NCUGGAAAAUGAACUCACN 1119-1137
255 GAACUUGGUGAUGAUAUCG 604 CGAUAUCAUCACCAAGUUC 1140-1158
256 UAACUUGGUGAUGAUAUCG 605 CGAUAUCAUCACCAAGUUA 1140-1158
257 AAACUUGGUGAUGAUAUCG 606 CGAUAUCAUCACCAAGU U U 1140-1158
258 NAACUUGGUGAUGAUAUCG 607 CGAUAUCAUCACCAAGU U N 1140-1158
259 NAACUUGGUGAUGAUAUCN 608 NGAUAUCAUCACCAAGUUN 1140-1158
260 CAUUUUCCAGGAACUUGGU 609 ACCAAGUUCCUGGAAAAUG 1150-1168
261 UAUUUUCCAGGAACUUGGU 610 ACCAAGUUCCUGGAAAAUA 1150-1168
262 AAUUUUCCAGGAACUUGGU 611 ACCAAGUUCCUGGAAAAUU 1150-1168
263 NAUUUUCCAGGAACUUGGU 612 ACCAAGUUCCUGGAAAAUN 1150-1168
264 NAUUUUCCAGGAACUUGGN 613 NCCAAGUUCCUGGAAAAUN 1150-1168
265 CAUAGGUUCCAGUAAUGGA 614 UCCAUUACUGGAACCUAUG 1207-1225
266 UAUAGGUUCCAGUAAUGGA 615 UCCAUUACUGGAACCUAUA 1207-1225
267 AAUAGGUUCCAGUAAUGGA 616 UCCAUUACUGGAACCUAUU 1207-1225
268 NAUAGGUUCCAGUAAUGGA 617 UCCAUUACUGGAACCUAUN 1207-1225
269 NAUAGGUUCCAGUAAUGGN 618 NCCAUUACUGGAACCUAUN 1207-1225
270 UCAUAGGUUCCAGUAAUGG 619 CCAUUACUGGAACCUAUGA 1208-1226
271 ACAUAGGUUCCAGUAAUGG 620 CCAUUACUGGAACCUAUGU 1208-1226
272 NCAUAGGUUCCAGUAAUGG 621 CCAUUACUGGAACCUAUGN 1208-1226
58/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 71/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
273 NCAUAGGUUCCAGUAAUGN 622 NCAUUACUGGAACCUAUGN 1208-1226
274 UCAGAUCAUAGGUUCCAGU 623 ACUGGAACCUAUGAUCUGA 1213-1231
275 ACAGAUCAUAGGUUCCAGU 624 ACUGGAACCUAUGAUCUGU 1213-1231
276 NCAGAUCAUAGGUUCCAGU 625 ACUGGAACCUAUGAUCUGN 1213-1231
277 NCAGAUCAUAGGUUCCAGN 626 NCUGGAACCUAUGAUCUGN 1213-1231
278 UCUUCAGAUCAUAGGUUCC 627 GGAACCUAUGAUCUGAAGA 1216-1234
279 ACUUCAGAUCAUAGGUUCC 628 GGAACCUAUGAUCUGAAGU 1216-1234
280 NCUUCAGAUCAUAGGUUCC 629 GGAACCUAUGAUCUGAAGN 1216-1234
281 NCUUCAGAUCAUAGGUUCN 630 NGAACCUAUGAUCUGAAGN 1216-1234
282 CUCUUCAGAUCAUAGGUUC 631 GAACCUAUGAUCUGAAGAG 1217-1235
283 UUCUUCAGAUCAUAGGUUC 632 GAACCUAUGAUCUGAAGAA 1217-1235
284 AUCUUCAGAUCAUAGGUUC 633 GAACCUAUGAUCUGAAGAU 1217-1235
285 NUCUUCAGAUCAUAGGUUC 634 GAACCUAUGAUCUGAAGAG 1217-1235
286 NUCUUCAGAUCAUAGGUUN 635 NAACCUAUGAUCUGAAGAN 1217-1235
287 GAGGUCAGCCCCAUUGCUG 636 CAGCAAUGGGGCUGACCUC 1269-1287
288 UAGGUCAGCCCCAUUGCUG 637 CAGCAAUGGGGCUGACCUA 1269-1287
289 AAGGUCAGCCCCAUUGCUG 638 CAGCAAUGGGGCUGACCUU 1269-1287
290 NAGGUCAGCCCCAUUGCUG 639 CAGCAAUGGGGCUGACCUN 1269-1287
291 NAGGUCAGCCCCAUUGCUN 640 NAGCAAUGGGGCUGACCUN 1269-1287
292 GAGAGGUCAGCCCCAUUGC 641 GCAAUGGGGCUGACCUCUC 1271-1289
293 UAGAGGUCAGCCCCAUUGC 642 GCAAUGGGGCUGACCUCUA 1271-1289
294 AAGAGGUCAGCCCCAUUGC 643 GCAAUGGGGCUGACCUCUU 1271-1289
295 NAGAGGUCAGCCCCAUUGC 644 GCAAUGGGGCUGACCUCUN 1271-1289
296 NAGAGGUCAGCCCCAUUGN 645 NCAAUGGGGCUGACCUCUN 1271-1289
297 CUUCAGGGGUGCCUCCUCU 646 AGAGGAGGCACCCCUGAAG 1299-1317
298 UUUCAGGGGUGCCUCCUCU 647 AGAGGAGGCACCCCUGAAA 1299-1317
299 AUUCAGGGGUGCCUCCUCU 648 AGAGGAGGCACCCCUGAAU 1299-1317
300 NUUCAGGGGUGCCUCCUCU 649 AGAGGAGGCACCCCUGAAN 1299-1317
59/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 72/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
301 NUUCAGGGGUGCCUCCUCN 650 NGAGGAGGCACCCCUGAAN 1299-1317
302 GAGAGCUUCAGGGGUGCCU 651 AGGCACCCCUGAAGCUCUC 1304-1322
303 UAGAGCUUCAGGGGUGCCU 652 AGGCACCCCUGAAGCUCUA 1304-1322
304 AAGAGCUUCAGGGGUGCCU 653 AGGCACCCCUGAAGCUCUU 1304-1322
305 NAGAGCUUCAGGGGUGCCU 654 AGGCACCCCUGAAGCUCUN 1304-1322
306 NAGAGCUUCAGGGGUGCCN 655 NGGCACCCCUGAAGCUCUN 1304-1322
307 UUAUGCACGGCCUUGGAGA 656 UCUCCAAGGCCGUGCAUAA 1319-1337
308 AUAUGCACGGCCUUGGAGA 657 UCUCCAAGGCCGUGCAUAU 1319-1337
309 NUAUGCACGGCCUUGGAGA 658 UCUCCAAGGCCGUGCAUAN 1319-1337
310 NUAUGCACGGCCUUGGAGN 659 NCUCCAAGGCCGUGCAUAN 1319-1337
311 CCUUAUGCACGGCCUUGGA 660 UCCAAGGCCGUGCAUAAGG 1321-1339
312 UCUUAUGCACGGCCUUGGA 661 UCCAAGGCCGUGCAUAAGA 1321-1339
313 ACUUAUGCACGGCCUUGGA 662 UCCAAGGCCGUGCAUAAGU 1321-1339
314 NCUUAUGCACGGCCUUGGA 663 UCCAAGGCCGUGCAUAAGN 1321-1339
315 NCUUAUGCACGGCCUUGGN 664 NCCAAGGCCGUGCAUAAGN 1321-1339
316 GCCUUAUGCACGGCCUUGG 665 CCAAGGCCGUGCAUAAGGC 1322-1340
317 UCCUUAUGCACGGCCUUGG 666 CCAAGGCCGUGCAUAAGGA 1322-1340
318 ACCUUAUGCACGGCCUUGG 667 CCAAGGCCGUGCAUAAGGU 1322-1340
319 NCCUUAUGCACGGCCUUGG 668 CCAAGGCCGUGCAUAAGGN 1322-1340
320 NCCUUAUGCACGGCCUUGN 669 NCAAGGCCGUGCAUAAGGN 1322-1340
321 AGCCUUAUGCACGGCCUUG 670 CAAGGCCGUGCAUAAGGCU 1323-1341
322 UGCCUUAUGCACGGCCUUG 671 CAAGGCCGUGCAUAAGGCA 1323-1341
323 NGCCUUAUGCACGGCCUUG 672 CAAGGCCGUGCAUAAGGCN 1323-1341
324 NGCCUUAUGCACGGCCUUN 673 NAAGGCCGUGCAUAAGGCN 1323-1341
325 CGAUGGUCAGCACAGCCUU 674 AAGGCUGUGCUGACCAUCG 1336-1354
326 UGAUGGUCAGCACAGCCUU 675 AAGGCUGUGCUGACCAUCA 1336-1354
327 AGAUGGUCAGCACAGCCUU 676 AAGGCUGUGCUGACCAUCU 1336-1354
328 NGAUGGUCAGCACAGCCUU 677 AAGGCUGUGCUGACCAUCN 1336-1354
60/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 73/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
329 NGAUGGUCAGCACAGCCUN 678 NAGGCUGUGCUGACCAUCN 1336-1354
330 GUCGAUGGUCAGCACAGCC 679 GGCUGUGCUGACCAUCGAC 1338-1356
331 UUCGAUGGUCAGCACAGCC 680 GGCUGUGCUGACCAUCGAA 1338-1356
332 AUCGAUGGUCAGCACAGCC 681 GGCUGUGCUGACCAUCGAU 1338-1356
333 NUCGAUGGUCAGCACAGCC 682 GGCUGUGCUGACCAUCGAN 1338-1356
334 NUCGAUGGUCAGCACAGCN 683 NGCUGUGCUGACCAUCGAN 1338-1356
335 AAAAACAUGGCCCCAGCAG 684 CUGCUGGGGCCAUGUUUUU 1373-1391
336 UAAAACAUGGCCCCAGCAG 685 CUGCUGGGGCCAUGUUUUA 1373-1391
337 NAAAACAUGGCCCCAGCAG 686 CUGCUGGGGCCAUGUUUUN 1373-1391
338 NAAAACAUGGCCCCAGCAN 687 NUGCUGGGGCCAUGUUUUN 1373-1391
339 CUAAAAACAUGGCCCCAGC 688 GCUGGGGCCAUGUUUUUAG 1375-1393
340 UUAAAAACAUGGCCCCAGC 689 GCUGGGGCCAUGUUUUUAA 1375-1393
341 AUAAAAACAUGGCCCCAGC 690 GCUGGGGCCAUGUUUUUAU 1375-1393
342 NUAAAAACAUGGCCCCAGC 691 GCUGGGGCCAUGUUUUUAN 1375-1393
343 NUAAAAACAUGGCCCCAGN 692 NCUGGGGCCAUGUUUUUAN 1375-1393
344 UCUAAAAACAUGGCCCCAG 693 CUGGGGCCAUGUUUUUAGA 1376-1394
345 ACUAAAAACAUGGCCCCAG 694 CUGGGGCCAUGUUUUUAGU 1376-1394
346 NCUAAAAACAUGGCCCCAG 695 CUGGGGCCAUGUUUUUAGN 1376-1394
347 NCUAAAAACAUGGCCCCAN 696 NUGGGGCCAUGUUUUUAGN 1376-1394
348 CCUCUAAAAACAUGGCCCC 697 GGGGCCAUGUUUUUAGAGG 1378-1396
349 UCUCUAAAAACAUGGCCCC 698 GGGGCCAUGUUUUUAGAGA 1378-1396
350 ACUCUAAAAACAUGGCCCC 699 GGGGCCAUGUUUUUAGAGU 1378-1396
351 NCUCUAAAAACAUGGCCCC 700 GGGGCCAUGUUUUUAGAGN 1378-1396
352 NCUCUAAAAACAUGGCCCN 701 NGGGCCAUGUUUUUAGAGN 1378-1396
353 GCCUCUAAAAACAUGGCCC 702 GGGCCAUGUUUUUAGAGGC 1379-1397
354 UCCUCUAAAAACAUGGCCC 703 GGGCCAUGUUUUUAGAGGA 1379-1397
355 ACCUCUAAAAACAUGGCCC 704 GGGCCAUGUUUUUAGAGGU 1379-1397
356 NCCUCUAAAAACAUGGCCC 705 GGGCCAUGUUUUUAGAGGN 1379-1397
61/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 74/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
357 NCCUCUAAAAACAUGGCCN 706 NGGCCAUGUUUUUAGAGGN 1379-1397
358 UAGACAUGGGUAUGGCCUC 707 GAGGCCAUACCCAUGUCUA 1393-1411
359 AAGACAUGGGUAUGGCCUC 708 GAGGCCAUACCCAUGUCUU 1393-1411
360 NAGACAUGGGUAUGGCCUC 709 GAGGCCAUACCCAUGUCUN 1393-1411
361 NAGACAUGGGUAUGGCCUN 710 NAGGCCAUACCCAUGUCUN 1393-1411
362 GAUAGACAUGGGUAUGGCC 711 GGCCAUACCCAUGUCUAUC 1395-1413
363 UAUAGACAUGGGUAUGGCC 712 GGCCAUACCCAUGUCUAUA 1395-1413
364 AAUAGACAUGGGUAUGGCC 713 GGCCAUACCCAUGUCUAUU 1395-1413
365 NAUAGACAUGGGUAUGGCC 714 GGCCAUACCCAUGUCUAUN 1395-1413
366 NAUAGACAUGGGUAUGGCN 715 NGCCAUACCCAUGUCUAUN 1395-1413
367 UGUUGAACUUGACCUCGGG 716 CCCGAGGUCAAGUUCAACA 1417-1435
368 AGUUGAACUUGACCUCGGG 717 CCCGAGGUCAAGUUCAACU 1417-1435
369 NGUUGAACUUGACCUCGGG 718 CCCGAGGUCAAGUUCAACN 1417-1435
370 NGUUGAACUUGACCUCGGN 719 NCCGAGGUCAAGUUCAACN 1417-1435
371 GGUUUGUUGAACUUGACCU 720 AGGUCAAGUUCAACAAACC 1421-1439
372 UGUUUGUUGAACUUGACCU 721 AGGUCAAGUUCAACAAACA 1421-1439
373 AGUUUGUUGAACUUGACCU 722 AGGUCAAGUUCAACAAACU 1421-1439
374 NGUUUGUUGAACUUGACCU 723 AGGUCAAGUUCAACAAACN 1421-1439
375 NGUUUGUUGAACUUGACCN 724 NGGUCAAGUUCAACAAACN 1421-1439
376 AAAGGGUUUGUUGAACUUG 725 CAAGUUCAACAAACCCUUU 1425-1443
377 UAAGGGUUUGUUGAACUUG 726 CAAGUUCAACAAACCCUUA 1425-1443
378 NAAGGGUUUGUUGAACUUG 727 CAAGUUCAACAAACCCUUN 1425-1443
379 NAAGGGUUUGUUGAACUUN 728 NAAGUUCAACAAACCCUUN 1425-1443
380 ACAAAGGGUUUGUUGAACU 729 AGUUCAACAAACCCUUUGU 1427-1445
381 UCAAAGGGUUUGUUGAACU 730 AGUUCAACAAACCCUUUGA 1427-1445
382 NCAAAGGGUUUGUUGAACU 731 AGUUCAACAAACCCUUUGN 1427-1445
383 NCAAAGGGUUUGUUGAACN 732 NGUUCAACAAACCCUUUGN 1427-1445
384 GACAAAGGGUUUGUUGAAC 733 GUUCAACAAACCCUUUGUC 1428-1446
62/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 75/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
385 UACAAAGGGUUUGUUGAAC 734 GUUCAACAAACCCUUUGUA 1428-1446
386 AACAAAGGGUUUGUUGAAC 735 GUUCAACAAACCCUUUGUU 1428-1446
387 NACAAAGGGUUUGUUGAAC 736 GUUCAACAAACCCUUUGUN 1428-1446
388 NACAAAGGGUUUGUUGAAN 737 NUUCAACAAACCCUUUGUN 1428-1446
389 AAGACAAAGGGUUUGUUGA 738 UCAACAAACCCUUUGUCUU 1430-1448
390 UAGACAAAGGGUUUGUUGA 739 UCAACAAACCCUUUGUCUA 1430-1448
391 NAGACAAAGGGUUUGUUGA 740 UCAACAAACCCUUUGUCUN 1430-1448
392 NAGACAAAGGGUUUGUUGN 741 NCAACAAACCCUUUGUCUN 1430-1448
393 CAUUAAGAAGACAAAGGGU 742 ACCCUUUGUCUUCUUAAUG 1437-1455
394 UAUUAAGAAGACAAAGGGU 743 ACCCUUUGUCUUCUUAAUA 1437-1455
395 AAUUAAGAAGACAAAGGGU 744 ACCCUUUGUCUUCUUAAUU 1437-1455
396 NAUUAAGAAGACAAAGGGU 745 ACCCUUUGUCUUCUUAAUN 1437-1455
397 NAUUAAGAAGACAAAGGGN 746 NCCCUUUGUCUUCUUAAUN 1437-1455
398 AUCAUUAAGAAGACAAAGG 747 CCUUUGUCUUCUUAAUGAU 1439-1457
399 U UCAU UAAGAAGACAAAGG 748 CCUUUGUCUUCUUAAUGAA 1439-1457
400 NUCAUUAAGAAGACAAAGG 749 CCUUUGUCUUCUUAAUGAN 1439-1457
401 N U CAU UAAGAAGACAAAG N 750 NCUUUGUCUUCUUAAUGAN 1439-1457
402 GAAGAGGGGAGACUUGGUA 751 UACCAAGUCUCCCCUCUUC 1467-1485
403 UAAGAGGGGAGACUUGGUA 752 UACCAAGUCUCCCCUCUUA 1467-1485
404 AAAGAGGGGAGACUUGGUA 753 UACCAAGUCUCCCCUCUUU 1467-1485
405 NAAGAGGGGAGACUUGGUA 754 UACCAAGUCUCCCCUCUUN 1467-1485
406 NAAGAGGGGAGACUUGGUN 755 NACCAAGUCUCCCCUCUUN 1467-1485
407 CCAUGAAGAGGGGAGACUU 756 AAGUCUCCCCUCUUCAUGG 1471-1489
408 UCAUGAAGAGGGGAGACUU 757 AAGUCUCCCCUCUUCAUGA 1471-1489
409 ACAUGAAGAGGGGAGACUU 758 AAGUCUCCCCUCUUCAUGU 1471-1489
410 NCAUGAAGAGGGGAGACUU 759 AAGUCUCCCCUCUUCAUGN 1471-1489
411 NCAUGAAGAGGGGAGACUN 760 NAGUCUCCCCUCUUCAUGN 1471-1489
412 CCCAUGAAGAGGGGAGACU 761 AGUCUCCCCUCUUCAUGGG 1472-1490
63/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 76/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5’ - 3’) (19-mers) SEQ ID NO: Sequência de base senso (5’ - 3’) (19-mers) Posição de genoma de SEQ ID NO: 1
413 UCCAUGAAGAGGGGAGACU 762 AGUCUCCCCUCUUCAUGGA 1472-1490
414 ACCAUGAAGAGGGGAGACU 763 AGUCUCCCCUCUUCAUGGU 1472-1490
415 NCCAUGAAGAGGGGAGACU 764 AGUCUCCCCUCUUCAUGGN 1472-1490
416 NCCAUGAAGAGGGGAGACN 765 NGUCUCCCCUCUUCAUGGN 1472-1490
417 UUCCCAUGAAGAGGGGAGA 766 UCUCCCCUCUUCAUGGGAA 1474-1492
418 AUCCCAUGAAGAGGGGAGA 767 UCUCCCCUCUUCAUGGGAU 1474-1492
419 NUCCCAUGAAGAGGGGAGA 768 UCUCCCCUCUUCAUGGGAN 1474-1492
420 NUCCCAUGAAGAGGGGAGN 769 NCUCCCCUCUUCAUGGGAN 1474-1492
421 UUUCCCAUGAAGAGGGGAG 770 CUCCCCUCUUCAUGGGAAA 1475-1493
422 AUUCCCAUGAAGAGGGGAG 771 CUCCCCUCUUCAUGGGAAU 1475-1493
423 NUUCCCAUGAAGAGGGGAG 772 CUCCCCUCUUCAUGGGAAN 1475-1493
424 NUUCCCAUGAAGAGGGGAN 773 NUCCCCUCUUCAUGGGAAN 1475-1493
425 AACCCUUCUUUAAUGUCAU 774 AUG ACAU U AAAGAAGGG U U 1569-1587
426 UACCCUUCUUUAAUGUCAU 775 AUGACAUUAAAGAAGGGUA 1569-1587
427 NACCCUUCUUUAAUGUCAU 776 AUG ACAU U AAAGAAGGG U N 1569-1587
428 NACCCUUCUUUAAUGUCAN 777 NUGACAUUAAAGAAGGGUN 1569-1587
64/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 77/229
Tabela 3. Sequências de base de fita antissenso e fi a senso de RNAi de AAT exemplificadoras
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5' -> 3')
778 779 780 781 782 783 783 784 785 786 787 788 789 790 791 792 793 794 795 796 797 798 791 792 799 800 801 GGAACUUGGUGAUGAUAU GAUCAUAGGUUCCAGUAA ACAGCCUUAUGCACGGCC UCGAUGGUCAGCACAGCC CAAAGGGUUUGUUGAACU TGGAACUUGGUGAUGAUAUTT TGGAACUUGGUGAUGAUAUTT TGGAACUUGGUGAUGAUAUCGUG ACUUGGUGAUGAUAUTT TGGAACTTGGTGATGATAI I I UUUAAACAUGCCUAAACGCUU UGCAUUGCCCAGGUAUUUCUU UGGAACUUGGUGAUGAUAUUU UGAUCAUAGGUUCCAGUAAUU UACAGCCUUAUGCACGGCCUU UUCGAUGGUCAGCACAGCCUU UCAAAGGGUUUGUUGAACUUU UGUUAAACAUGCCUAAACGUU UUUAAACGUGCCUAAACGCUG UGCAUUGCCCAGGUAUUUCAG UGGAACUUGGUGAUGAUAUCG UGAUCAUAGGUUCCAGUAAUG UACAGCCUUAUGCACGGCCUU UUCGAUGGUCAGCACAGCCUU UCAAAGGGUUUGUUGAACUUG UGUUAAACAUGCCUAAACGCG UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 78/229
SEQ ID NO: Sequência de base senso (5' -> 3')
840 841 842 843 844 845 846 847 848 849 850 851 852 853 854 855 856 857 858 859 847 860 861 862 863 864 857 AUAUCAUCACCAAGUUCC UUACUGGAACCUAUGAUC GGCCGUGCAUAAGGCUGU GGCUGUGCUGACCAUCGA AGUUCAACAAACCCUUUG UAUAUAUCAUCACCAAGUUCCAT AUAUCAUCACCAAGUUCCAT CGAUAUCAUCACCAAGUUCCA UAUCAUCACCAAGUUCCAT TATATATCATCACCAAGTTCCAT GCGUUUAGGCAUGUUUAAAUU GAAAUACCUGGGCAAUGCAUU AUAUCAUCACCAAGUUCCAUU UUACUGGAACCUAUGAUCAUU GGCCGUGCAUAAGGCUGUAUU GGCUGUGCUGACCAUCGAAUU AGUUCAACAAACCCUUUGAUU CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU CAGCGUUUAGGCAUGUUUAAA CUGAAAUACCUGGGCAAUGCA CGAUAUCAUCACCAAGUUCCA CAUUACUGGAACCUAUGAUCA AAGGCCGUGCAUAAGGCUGUA AAGGCUGUGCUGACCAUCGAA CAAGUUCAACAAACCCUUUGA CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
65/159
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5' -> 3')
794 801 794 801 802 803 804 804 803 805 806 807 808 808 809 810 811 812 812 813 814 815 816 816 817 818 819 820 820 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU UGUUAAACAUGCCUAAACGCU UGUUAAACAUGCCUAAACGUU UGUUAAACAUGCCUAAACGCU UGUUAAACAUGCCUAAACGCUUC UGCUGUUGGACUGGUGUGCUU UGCUGUUGGACUGGUGUGCCA UGCUGUUGGACUGGUGUGCCA UGCUGUUGGACUGGUGUGCUU UGCUGUUGGACUGGUGUGCCAUU UGCUGUUGGACUGGUGUGCCAGC UAAGGCUUCUGAGUGGUACUU UAAGGCUUCUGAGUGGUACAA UAAGGCUUCUGAGUGGUACAA UAAGGCUUCUGAGUGGUACAACU GAAGGCUUCUGAGUGGUACUU AAGACAAAGGGUUUGUUGAUU AAGACAAAGGGUUUGUUGAAC AAGACAAAGGGUUUGUUGAAC UAGACAAAGGGUUUGUUGAAC AAGACAAAGGGUUUGUUGAACUU UAGACAUGGGUAUGGCCUCUU UAGACAUGGGUAUGGCCUCUA UAGACAUGGGUAUGGCCUCUA UAGACAUGGGUAUGGCCUCUAAA UAGACAUGGGUAUGGCCUCUAUU UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUU UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUC UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUC
SEQ ID NO: 1265 1265 865 866 866 1266 1266 867 868 867 867 1267 1267 869 869 1268 1269 1269 870 871 870 1270 1270 872 872 872 1271 1271 873
Sequência de base senso (5' —> 3') CGUUUAGGCAUGUUUAACA CGUUUAGGCAUGUUUAACA AACGUUUAGGCAUGUUUAACA AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA GCACACCAGUCCAACAGCA GCACACCAGUCCAACAGCA UGGCACACCAGUCCAACAGCA AAGCACACCAGUCCAACAGCA UGGCACACCAGUCCAACAGCA UGGCACACCAGUCCAACAGCA GUACCACUCAGAAGCCUUA GUACCACUCAGAAGCCUUA UUGUACCACUCAGAAGCCUUA
UUGUACCACUCAGAAGCCUUA GUACCACUCAGAAGCCUUC UCAACAAACCCUUUGUCUU UCAACAAACCCUUUGUCUU GUUCAACAAACCCUUUGUCUU GUUCAACAAACCCUUUGUCUA GUUCAACAAACCCUUUGUCUU GAGGCCAUACCCAUGUCUA GAGGCCAUACCCAUGUCUA UAGAGGCCAUACCCAUGUCUA UAGAGGCCAUACCCAUGUCUA UAGAGGCCAUACCCAUGUCUA GGCCAAGAAACAGAUCAAA GGCCAAGAAACAGAUCAAA GAGGCCAAGAAACAGAUCAAA
66/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 79/229
SEQ ID NO: Sequência de base antissenso (5' -> 3')
821 822 823 824 825 826 827 828 829 830 831 832 833 834 835 835 836 836 837 838 839 839 800 801 838 UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUCUU UGUUGGACUGGUGUGCCAGUU UGUUGGACUGGUGUGCCAGCU UGUUGGACUGGUGUGCCAGCUGG UGUUGGACUGGUGUGCCAGCUG AAAGGGUUUGUUGAACUUGUU AAAGGGUUUGUUGAACUUGAC UAAGGGUUUGUUGAACUUGACCU UAAGGGUUUGUUGAACUUGAC UAUUGGUGCUGUUGGACUGUU UAUUGGUGCUGUUGGACUGGU UAUUGGUGCUGUUGGACUGGUU UUGUUGGACUGGUGUGCCAG UUGUUGGACUGGUGUGCCAGCU UAUAGACAUGGGUAUGGCCUC UAUAGACAUGGGUAUGGCCUC UCAAAGGGUUUGUUGAACUUGAC UCAAAGGGUUUGUUGAACUUGAC UUAUUGGUGCUGUUGGACUGG UGUUAAACAUGCCUAAACGC UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU UGUUAAACAUGCCUAAACGCG UGUUAAACAUGCCUAAACGCU UGUUAAACAUGCCUAAACGC
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 80/229
SEQ ID NO: Sequência de base senso (5' -> 3')
873 1272 874 874 875 1273 876 877 877 1274 878 879 880 880 1275 881 882 863 883 884 884 885 886 887 885 GAGGCCAAGAAACAGAUCAAA CUGGCACACCAGUCCAACA AGCUGGCACACCAGUCCAACA AGCUGGCACACCAGUCCAACA GCUGGCACACCAGUCCAACA CAAGUUCAACAAACCCUUU GUCAAGUUCAACAAACCCUUU GUCAAGUUCAACAAACCCUUA GUCAAGUUCAACAAACCCUUA CAGUCCAACAGCACCAAUA ACCAGUCCAACAGCACCAAUA CCAGUCCAACAGCACCAAUA CUGGCACACCAGUCCAACAA CUGGCACACCAGUCCAACAA GGCCAUACCCAUGUCUAUA GAGGCCAUACCCAUGUCUAUA GUCAAGUUCAACAAACCCUUUGA CAAGUUCAACAAACCCUUUGA CCAGUCCAACAGCACCAAUAA GCGUUUAGGCAUGUUUAACA GCGUUUAGGCAUGUUUAACA GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU CGCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU AGCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
67/159
68/159 [0173] As fitas senso e fitas antissenso de agente de RNAi de AAT que compreendem ou consistem em sequências de nucleotídeo na Tabela 2 ou Tabela 3 podem ser nucleotídeos modificados ou nucleotídeos não modificados. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT tendo as sequências de fita senso e antissenso que compreendem ou consistem em qualquer uma das sequências de nucleotídeo na Tabela 2 ou Tabela 3 são todos ou substancialmente todos nucleotídeos modificados.
[0174] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere e 0,1,2 ou 3 nucleotídeos em relação à qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere em 0, 1,2 ou 3 nucleotídeos em relação à qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 3.
[0175] Conforme o uso em questão, cada N listado em uma sequência revelada na Tabela 2 pode ser independentemente selecionado. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência revelada na Tabela 2 tem uma nucleobase que seja complementar ao nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência revelada na Tabela 2 tem uma nucleobase que não é complementar ao nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência revelada na Tabela 2 tem uma nucleobase que é igual ao nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência revelada na Tabela 2 tem uma nucleobase que é diferente do nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita.
[0176] Determinadas fitas senso e antissenso de agente de RNAi de AAT modificadas são proporcionadas na Tabela 4 e Tabela 5. As fitas antissenso de agente de RNAi de AAT modificadas, bem como suas sequências de nucleobase não modificadas subjacentes, são proporcionadas na Tabela 4. As fitas senso de agente de RNAi de AAT modificadas, bem como suas sequências não modificadas
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 81/229
69/159 subjacentes, são proporcionadas na Tabela 5. Na formação de agentes de RNAi de AAT, cada um dos nucleotídeos em cada uma das sequências não modificadas listadas nas Tabelas 4 e 5, bem como na Tabela 2 e Tabela 3, acima, pode ser um nucleotídeo modificado.
[0177] Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento são formados anelando-se uma fita antissenso com uma fita senso. Uma fita senso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5 pode ser hibridizada à qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4 desde que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade por uma sequência contígua de 16,17,18,19, 20 ou 21 nucleotídeos.
[0178] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4.
[0179] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em um duplex tendo a sequência de nucleobases da fita senso e a fita antissenso de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 3.
[0180] Exemplos de nucleotídeos modificados contendo fitas antissenso são proporcionados na Tabela 4. Exemplos de nucleotídeos modificados contendo fitas senso são proporcionados na Tabela 5.
[0181 ] Conforme usado nas Tabelas 4 e 5, as notações a seguir são usadas para indicar nucleotídeos modificados, grupos de direcionamento, e grupos de ligação. Conforme o indivíduo com conhecimento comum na técnica prontamente entendería, exceto onde indicado em contrário pela sequência, que quando presentes em um oligonucleotídeo, os monômeros são mutuamente ligados por ligações fosfodiéster 5’-3’:
A = adenosina-3'-fosfato;
C = citidina-3'-fosfato;
G = guanosina-3'-fosfato;
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 82/229
70/159
U = uridina-3'-fosfato n = qualquer nucleotídeo 2'-OMe modificado a = 2'-0-metiladenosina-3'-fosfato as = 2'-0-metiladenosina-3'-fosforotioato c = 2'-0-metilcitidina-3'-fosfato cs = 2'-0-metilcitidina-3'-fosforotioato g = 2'-0-metilguanosina-3'-fosfato gs = 2'-0-metilguanosina-3'-fosforotioato t = 2'-0-metil-5-metiluridina-3'-fosfato ts = 2'-0-metil-5-metiluridina-3'-fosforotioato u = 2'-0-metiluridina-3'-fosfato us = 2'-0-metiluridina-3'-fosforotioato
Nf = qualquer nucleotídeo 2'-fluoro modificado
Af = 2'-fluoroadenosina-3'-fosfato
Afs = 2'-fluoroadenosina-3'-fosporotioato
Cf = 2'-fluorocitidina-3'-fosfato
Cfs = 2'-fluorocitidina-3'-fosforotioato
Gf = 2'-fluoroguanosina-3'-fosfato
Gfs = 2'-fluoroguanosina-3'-fosforotioato
Tf = 2'-fluoro-5'-metiluridina-3'-fosfato
Tfs = 2'-fluoro-5'-metiluridina-3'-fosforotioato
Uf = 2'-fluorouridina-3'-fosfato
Ufs = 2'-fluorouridina-3'-fosforotioato dN = qualquer 2'-deoxirribonucleotideo dT = 2'-deoxitimidina-3'-fosfato
Nuna = imitações de nucleotídeo 2',3'-seco (análogos de nucleobase destravados)-3'-Fosfato
Nunas = imitações nucleotídeo 2',3'-seco (análogos de nucleobase destravados)-3'-fosforotioato
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 83/229
71/159
Uuna = 2',3'-seco-uridina-3'-fosfato
Uunas = 2',3'-seco-uridina-3'-fosforotioato a_2N = vide a Tabela 7 a_2Ns = vide a Tabela 7 pu_2N = vide a Tabela 7 pu_2Ns = vide a Tabela 7
Npu = vide a Tabela 7
Nus = vide a Tabela 7
Nlna= nucleotídeo travado
Níana = nucleotídeo 2'-F-Arabino
NM = nucleotídeo 2'-metoxietil
AM = 2'-metoxietiladenosina-3'-fosfato
AMs = 2'-metoxietiladenosina-3'-fosforotioato
TM = 2'-metoxietiltimidina-3'-fosfato
TMs = 2'-metoxietiltimidina-3'-fosforotioato
R = ribitol (invdN) = qualquer desoxirribonucleotídeo (nucleotídeo 3'-3' ligado) invertido (invAb) = desoxirribonucleotídeo invertido abásico (3'-3' ligado), vide a Tabela 7 (invAb)s = desoxirribonucleotídeo-5'-fosforotioato invertido abásico (3'-3' ligado), vide a Tabela 7 (invn) = qualquer nucleotídeo 2'-OMe invertido (nucleotídeo 3'-3' ligado) s = ligação de fosforotioato vpdN = vinil fosfonato desoxirribonucleotídeo (5Me-Nf) = 2'-fluoro nucleotídeo 5'-Me cPrp = ciclopropil fosfonato, vide a Tabela 7 epTcPr = vide a Tabela 7 epTM = vide a Tabela 7 (Chol-TEG) = vide a Tabela 7
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 84/229
72/159 (TEG-Biotin) = vide a Tabela 7 (PEG-C3-SS) = vide a Tabela 7 (Alk-SS-C6) = vide a Tabela 7 (C6-SS-Alk) = vide a Tabela 7 (C6-SS-Alk-Me) = vide a Tabela 7 [0182] O indivíduo com conhecimento comum na técnica entendería prontamente que o nucleotídeo terminal na extremidade 3' e de uma dada sequência de oligonucleotídeo tipicamente teria um grupo hidroxila a (-OH) na respectiva posição 3' do dado monômero ao invés de uma porção de fosfato ex vivo. Exceto onde expressamente indicado em contrário, essas compreensões do indivíduo com conhecimento comum na técnica são usadas ao descrever os agentes de RNAi de AAT e composições de agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento.
[0183] Grupos de direcionamento e grupos de ligação incluem os seguintes, aos quais suas estruturas químicas são proporcionadas abaixo na Tabela 7: (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s. Cada fita senso e/ou fita antissenso pode ter quaisquer grupos de direcionamento ou grupos de ligação listados acima, bem como outros grupos de direcionamento ou ligação, conjugados à extremidade 5' e/ou 3' da sequência.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 85/229
Tabela 4. Sequências de fita antissenso de agente de RNAi de AAT
ID de antissenso: fita SEQ NO. ID Sequência antissenso (modificada) (5’ - 3’) SEQ NO. ID Sequência de base subjacentes (5’ - 3’)
AM00516-AS 888 dTGfgAfaCfUunaUfgGfuGfaUfgAfuAfudTsdT 783 TGGAACUUGGUGAUGAUAUTT
AM02129-AS 889 dTsGfsgAfaCfUunaUfgGfuGfaUfgAfuAfudTsdT 783 TGGAACUUGGUGAUGAUAUTT
AM02130-AS 890 dTsGfsgAfaCfUunaUfgGfuGfaUfgAfuAfuCfgsus g 784 TGGAACUUGGUGAUGAUAUCGUG
AM04786-AS 891 aCfUunaUfgGfuGfaUfgAfuAfudTsdT 785 ACUUGGUGAUGAUAUTT
AM05303-AS 892 dTdGdGdAdAdCdTdTdGdGdTdGdAdTdGdAdT dAdTdTsdT 786 TGGAACTTGGTGATGATAI I I
AM05643-AS 893 usUfsusAfaAfcAfUfGfcCfuAfaAfcGfcusu 787 UUUAAACAUGCCUAAACGCUU
AM05645-AS 894 usGfscsAfu UfgCfCfCfaGfgUfaUfu Ufcusu 788 UGCAUUGCCCAGGUAUUUCUU
AM05647-AS 895 usGfsgsAfaCfuUfGfGfuGfaUfgAfuAfuusu 789 UGGAACUUGGUGAUGAUAUUU
AM05649-AS 896 usGfsasUfcAfuAfGfGfuucCfaGfuAfausu 790 UGAUCAUAGGUUCCAGUAAUU
AM05651-AS 897 usAfscsAfgCfcUfUfAfuGfcAfcGfgCfcusu 791 UACAGCCUUAUGCACGGCCUU
AM05653-AS 898 usUfscsGfaUfgGfUfCfaGfcAfcAfgCfcusu 792 UUCGAUGGUCAGCACAGCCUU
AM05655-AS 899 usCfsasAfaGfgGfUfUfuGfuUfgAfaCfuusu 793 UCAAAGGGUUUGUUGAACUUU
AM05657-AS 900 usGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
AM05659-AS 901 usUfuAfaAfcgugcCfuAfaAfcGfcsUfsg 795 UUUAAACGUGCCUAAACGCUG
AM05661-AS 902 usGfscAfuUfgcccaGfgUfaUfuUfcsAfsg 796 UGCAUUGCCCAGGUAUUUCAG
AM05663-AS 903 usGfsgAfaCfuugguGfaUfgAfuAfusCfsg 797 UGGAACUUGGUGAUGAUAUCG
AM05665-AS 904 usGfsaUfcAfuagguUfcCfaGfuAfasUfsg 798 UGAUCAUAGGUUCCAGUAAUG
AM05667-AS 905 usAfscAfgCfcuuauGfcAfcGfgCfcsUfsu 791 UACAGCCUUAUGCACGGCCUU
AM05669-AS 906 usUfscGfaUfggucaGfcAfcAfgCfcsUfsu 792 UUCGAUGGUCAGCACAGCCUU
AM05671-AS 907 usCfsaAfaGfgguuuGfuUfgAfaCfusUfsg 799 UCAAAGGGUUUGUUGAACUUG
AM05673-AS 908 usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgsCfsg 800 UGUUAAACAUGCCUAAACGCG
AM05677-AS 909 usUfsuAfaAfcgugcCfuAfaAfcGfcsUfsg 795 UUUAAACGUGCCUAAACGCUG
AM05884-AS 910 vpusGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
73/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 86/229
ID de antissenso: fita SEQ NO. ID Sequência antissenso (modificada) (5’ - 3’) SEQ NO. ID Sequência de base subjacentes (5’ - 3’)
AM05885-AS 911 cPrpusGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
AM05886-AS 912 usGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgcsu 801 UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
AM05887-AS 913 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
AM05888-AS 914 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcsu 801 UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
AM05889-AS 915 usGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgCfsu 801 UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
AM05890-AS 916 usGfsusUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgCfuusc 802 UGUUAAACAUGCCUAAACGCUUC
AM05891-AS 917 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgCfsu 801 UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
AM05892-AS 918 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgCfuusc 802 UGUUAAACAUGCCUAAACGCUUC
AM05900-AS 919 cPrpusGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgsCfsg 800 UGUUAAACAUGCCUAAACGCG
AM05901-AS 920 usGfsgsAfaCfUunaUfGfGfuGfaUfgAfuAfuusu 789 UGGAACUUGGUGAUGAUAUUU
AM05954-AS 921 usGfscsUfgUfuggacUfgGfuGfuGfcusu 803 UGCUGUUGGACUGGUGUGCUU
AM05955-AS 922 usGfscsUfgUfuggacUfgGfuGfuGfccsa 804 UGCUGUUGGACUGGUGUGCCA
AM05956-AS 923 usGfscsUfgUfuggacUfgGfuGfuGfccausu 805 UGCUGUUGGACUGGUGUGCCAUU
AM05957-AS 924 usGfscsUfgUfuggacUfgGfuGfuGfccagsc 806 UGCUGUUGGACUGGUGUGCCAGC
AM05961-AS 925 usAfsasGfgCfuUfcUfgAfgUfgGfuAfcusu 807 UAAGGCUUCUGAGUGGUACUU
AM05962-AS 926 usAfsasGfgCfuUfcUfgAfgUfgGfuAfcasa 808 UAAGGCUUCUGAGUGGUACAA
AM05963-AS 927 usAfsasGfgCfuUfcUfgAfgUfgGfuAfcaacsu 809 UAAGGCUUCUGAGUGGUACAACU
AM05964-AS 928 gsAfsasGfgCfuUfcUfgAfgUfgGfuAfcusu 810 GAAGGCUUCUGAGUGGUACUU
AM05969-AS 929 asAfsgsAfcAfaAfgGfgUfuUfgUfuGfausu 811 AAGACAAAGGGUUUGUUGAUU
AM05970-AS 930 asAfsgsAfcAfaAfgGfgUfuUfgUfuGfaasc 812 AAGACAAAGGGUUUGUUGAAC
AM05973-AS 931 usAfsgsAfcAfaAfgGfgUfuUfgUfuGfaasc 813 UAGACAAAGGGUUUGUUGAAC
AM05974-AS 932 asAfsgsAfcAfaAfgGfgUfuUfgUfuGfaacusu 814 AAGACAAAGGGUUUGUUGAACUU
AM05976-AS 933 usAfsgsAfcAfuGfgGfuAfuGfgCfcUfcusu 815 UAGACAUGGGUAUGGCCUCUU
AM05977-AS 934 usAfsgsAfcAfuGfgGfuAfuGfgCfcUfcusa 816 UAGACAUGGGUAUGGCCUCUA
AM05979-AS 935 usAfsgsAfcAfuGfgGfuAfuGfgCfcUfcuaasa 817 UAGACAUGGGUAUGGCCUCUAAA
AM05980-AS 936 usAfsgsAfcAfuGfgGfuAfuGfgCfcUfcuausu 818 UAGACAUGGGUAUGGCCUCUAUU
74/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 87/229
ID de antissenso: fita SEQ NO. ID Sequência antissenso (modificada) (5’ - 3’) SEQ NO. ID Sequência de base subjacentes (5’ - 3’)
AM05982-AS 937 usUfsusGfaUfcUfgUfuUfcUfuGfgCfcusu 819 UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUU
AM05983-AS 938 usUfsusGfaUfcUfgUfuUfcUfuGfgCfcusc 820 UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUC
AM05985-AS 939 usUfsusGfaUfcUfgUfuUfcUfuGfgCfcucusu 821 UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUCUU
AM05987-AS 940 usGfsusUfgGfacuggUfgUfgCfcAfgusu 822 UGUUGGACUGGUGUGCCAGUU
AM05989-AS 941 usGfsusUfgGfacuggUfgUfgCfcAfgcsu 823 UGUUGGACUGGUGUGCCAGCU
AM05990-AS 942 usGfsusUfgGfacuggUfgUfgCfcAfgcugsg 824 UGUUGGACUGGUGUGCCAGCUGG
AM05992-AS 943 usGfsusUfgGfacuggUfgUfgCfcAfgcusg 825 UGUUGGACUGGUGUGCCAGCUG
AM05994-AS 944 asAfsasGfgGfu Uf uGfu UfgAfaCfu Ufgusu 826 AAAGGGUUUGUUGAACUUGUU
AM05996-AS 945 asAf sasGfgGf u Uf uGf u UfgAfaCfu Ufgasc 827 AAAGGGUUUGUUGAACUUGAC
AM05998-AS 946 usAfsasGfgGfu Uf uGfu UfgAfaCfu Ufgaccsu 828 UAAGGGUUUGUUGAACUUGACCU
AM05999-AS 947 usAfsasGfgGfu Uf uGfu UfgAfaCfu Ufgasc 829 UAAGGGUUUGUUGAACUUGAC
AM06124-AS 948 usAfsusUfgGfuGfcUfgUfuGfgAfcUfgusu 830 UAUUGGUGCUGUUGGACUGUU
AM06125-AS 949 usAfsusUfgGfuGfcUfgUfuGfgAfcUfggsu 831 UAUUGGUGCUGUUGGACUGGU
AM06126-AS 950 usAfsusUfgGfuGfcUfgUfuGfgAfcUfggusu 832 UAUUGGUGCUGUUGGACUGGUU
AM06130-AS 951 usUfsgsUfuGfgacugGfuGfuGfcCfasg 833 UUGUUGGACUGGUGUGCCAG
AM06131 -AS 952 usUfsgsUfuGfgacugGfuGfuGfcCfagcsu 834 UUGUUGGACUGGUGUGCCAGCU
AM06133-AS 953 usAfsusAfgAfcAfuGfgGfuAfuGfgCfcusc 835 UAUAGACAUGGGUAUGGCCUC
AM06134-AS 954 usAfsusAfgAfcauggGfuAfuGfgCfcusc 835 UAUAGACAUGGGUAUGGCCUC
AM06137-AS 955 usCfsasAfaGfgGfuUfuGfuUfgAfaCfuugasc 836 UCAAAGGGUUUGUUGAACUUGAC
AM06140-AS 956 usUfsasUfuGfgugcuGfuUfgGfaCfugsg 837 UUAUUGGUGCUGUUGGACUGG
AM06227-AS 957 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsc 838 UGUUAAACAUGCCUAAACGC
AM06228-AS 958 usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcusu 839 UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU
AM06234-AS 959 usGfsuUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg 800 UGUUAAACAUGCCUAAACGCG
AM06235-AS 960 usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu 801 UGUUAAACAUGCCUAAACGCU
AM06237-AS 961 usGfsuUfaAfaCfAfUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg 800 UGUUAAACAUGCCUAAACGCG
AM06238-AS 962 NpusGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
75/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 88/229
ID de antissenso: fita SEQ NO. ID Sequência antissenso (modificada) (5’ - 3’) SEQ NO. ID Sequência de base subjacentes (5’ - 3’)
AM06261-AS 963 NusGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu 794 UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
Tabela 5. Sequências de fita senso de agente e RNAi de AAT
ID de fita SEQ senso: ID NO. Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
AM01887SS 964 (Chol-TEG)uAuAfuAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(invdT)(TEGBiotin) 845 UAUAUAUCAUCACCAAGUUCCAT
AM01888SS 965 (Chol-TEG)uAuAfuAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(invdT)(PEGC3-SS) 845 UAUAUAUCAUCACCAAGUUCCAT
AM01855SS 966 (Alk-SS-C6)AfuAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(invdT) 846 AUAUCAUCACCAAGUUCCAT
AM02132SS 967 CfsgsAfuAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(C6-SS-Alk) 847 CGAUAUCAUCACCAAGUUCCA
AM02390SS 968 CfsgsAfuAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(C6-SS-Alk-Me) 847 CGAUAUCAUCACCAAGUUCCA
AM04785SS 969 uAfuCfaUfcAfcCfaAfgUfuCfcAf(invdT) 848 UAUCAUCACCAAGUUCCAT
AM05304SS 970 (Chol- TEG)dTdAdTdAdTdAdTdCdAdTdCdAdCdCdAdAdGdTdTdCdC sdA(invdT)(TEG-Biotin) 849 TATATATCATCACCAAGTTCCAT
AM05599SS 971 (Chol- TEG)dTdAdTdAdTdAdTdCdAdTdCdAdCdCdAdAdGdTdTdCdC sdA(invdT) 849 TATATATCATCACCAAGTTCCAT
AM05642SS 972 (NAG25) (invAb)GfcGfu Ufu AfGfGfcAfuGfu Ufu Afaausu (invAb) 850 GCGUUUAGGCAUGUUUAAAUU
AM05644- 973 (NAG25)(invAb)GfaAfaUfaCfCfUfgGfgCfaAfuGfcausu(invAb) 851 GAAAUACCUGGGCAAUGCAUU
76/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 89/229
ID de fita SEQ Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
senso: ID NO.
SS
AM05646SS 974 (NAG25)(invAb)AfuAfuCfaUfCfAfcCfaAfgUfuCfcausu(invAb) 852 AUAUCAUCACCAAGUUCCAUU
AM05648SS 975 (NAG25)(invAb)UfuAfcUfgGfAfAfcCfuAfuGfaUfcausu(invAb) 853 UUACUGGAACCUAUGAUCAUU
AM05650SS 976 (NAG25)(invAb)GfgCfcGfuGfCfAfuAfaGfgCfuGfuausu(invAb) 854 GGCCGUGCAUAAGGCUGUAUU
AM05652SS 977 (NAG25)(invAb)GfgCfuGfuGfCfUfgAfcCfaUfcGfaausu(invAb) 855 GGCUGUGCUGACCAUCGAAUU
AM05654SS 978 (NAG25)(invAb)AfgUfuCfaAfCfAfaAfcCfcUfuUfgausu(invAb) 856 AGUUCAACAAACCCUUUGAUU
AM05656SS 979 (NAG25)(invAb)CfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcausu(invAb) 857 CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
AM05658SS 980 (NAG25)scsagcguuuAfGfGfcauguuuaasa(invAb) 858 CAGCGUUUAGGCAUGUUUAAA
AM05660SS 981 (NAG25)scsugaaauaCfCfUfgggcaaugcsa(invAb) 859 CUGAAAUACCUGGGCAAUGCA
AM05662SS 982 (NAG25)scsgauaucaUfCfAfccaaguuccsa(invAb) 847 CGAUAUCAUCACCAAGUUCCA
AM05664SS 983 (NAG25)scsauuacugGfAfAfccuaugaucsa(invAb) 860 CAUUACUGGAACCUAUGAUCA
AM05666SS 984 (NAG25)sasaggccguGfCfAfuaaggcugusa(invAb) 861 AAGGCCGUGCAUAAGGCUGUA
AM05668SS 985 (NAG25)sasaggcuguGfCfUfgaccaucgasa(invAb) 862 AAGGCUGUGCUGACCAUCGAA
AM05670SS 986 (NAG25)scsaaguucaAfCfAfaacccuuugsa(invAb) 863 CAAGUUCAACAAACCCUUUGA
77/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 90/229
ID de fita SEQ Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
senso: ID NO.
AM05672SS 987 (NAG25)scsgcguuuaGfGfCfauguuuaacsa(invAb) 864 CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05658SS 988 (NAG25)scsagcguuuAfGfGfcauguuuaasa(invAb) 858 CAGCGUUUAGGCAUGUUUAAA
AM05893SS 989 (NAG25)s(invAb)scguuuaGfGfCfauguuuaacausu(invAb) 857 CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
AM05894SS 990 (NAG25)s(invAb)sCfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcas(invAb) 429 CGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05895SS 991 (NAG25)s(invAb)scguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 429 CGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05896SS 992 (NAG25)s(invAb)saaCfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcas(invAb) 865 AACGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05897SS 993 (NAG25)s(invAb)sagCfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcas(invAb) 866 AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05898SS 994 (NAG25)s(invAb)saacguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 865 AACGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05899SS 995 (NAG25)s(invAb)sagcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 866 AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM05958SS 996 (NAG37)s(invAb)sgcacacCfAfGfuccaacagcas(invAb) 454 GCACACCAGUCCAACAGCA
AM05959SS 997 (NAG37)s(invAb)suggcacacCfAfGfuccaacagcas(invAb) 867 UGGCACACCAGUCCAACAGCA
AM05960SS 998 (NAG37)s(invAb)saagcacacCfAfGfuccaacagcas(invAb) 868 AAGCACACCAGUCCAACAGCA
AM05965SS 999 (NAG37)s(invAb)sguaccaCfUfCfagaagccuuas(invAb) 519 GUACCACUCAGAAGCCUUA
AM05966SS 1000 (NAG37)s(invAb)suuguaccaCfUfCfagaagccuuas(invAb) 869 UUGUACCACUCAGAAGCCUUA
78/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 91/229
ID de fita SEQ Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
senso: ID NO.
AM05967SS 1001 (NAG37)s(invAb)sguaccaCfUfCfagaagccuucs(invAb) 518 GUACCACUCAGAAGCCUUC
AM05968SS 1002 (NAG37)s(invAb)sucaacaAfAfCfccuuugucuus(invAb) 738 UCAACAAACCCUUUGUCUU
AM05971SS 1003 (NAG37)s(invAb)sguucaacaAfAfCfccuuugucuus(invAb) 870 GUUCAACAAACCCUUUGUCUU
AM05972SS 1004 (NAG37)s(invAb)sguucaacaAfAfCfccuuugucuas(invAb) 871 GUUCAACAAACCCUUUGUCUA
AM05975SS 1005 (NAG37)s(invAb)sgaggccAfUfAfcccaugucuas(invAb) 707 GAGGCCAUACCCAUGUCUA
AM05978SS 1006 (NAG37)s(invAb)suagaggccAfUfAfcccaugucuas(invAb) 872 UAGAGGCCAUACCCAUGUCUA
AM05981SS 1007 (NAG37)s(invAb)sggccaaGfAfAfacagaucaaas(invAb) 537 GGCCAAGAAACAGAUCAAA
AM05984SS 1008 (NAG37)s(invAb)sgaggccaaGfAfAfacagaucaaas(invAb) 873 GAGGCCAAGAAACAGAUCAAA
AM05986SS 1009 (NAG37)s(invAb)scuggcaCfAfCfcaguccaacas(invAb) 445 CUGGCACACCAGUCCAACA
AM05988SS 1010 (NAG37)s(invAb)sagcuggcaCfAfCfcaguccaacas(invAb) 874 AGCUGGCACACCAGUCCAACA
AM05991SS 1011 (NAG37)s(invAb)sgcuggcaCfAfCfcaguccaacas(invAb) 875 GCUGGCACACCAGUCCAACA
AM05993SS 1012 (NAG37)s(invAb)scaaguuCfAfAfcaaacccuuus(invAb) 725 CAAGUUCAACAAACCCUUU
AM05995SS 1013 (NAG37)s(invAb)sgucaaguuCfAfAfcaaacccuuus(invAb) 876 GUCAAGUUCAACAAACCCUUU
AM05997SS 1014 (NAG37)s(invAb)sgucaaguuCfAfAfcaaacccuuas(invAb) 877 GUCAAGUUCAACAAACCCUUA
79/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 92/229
ID de fita SEQ Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
senso: ID NO.
AM06127SS 1015 (NAG37)s(invAb)scaguccAfAfCfagcaccaauas(invAb) 458 CAGUCCAACAGCACCAAUA
AM06128SS 1016 (NAG37)s(invAb)saccaguccAfAfCfagcaccaauas(invAb) 878 ACCAGUCCAACAGCACCAAUA
AM06129SS 1017 (NAG37)s(invAb)sccaguccAfAfCfagcaccaauas(invAb) 879 CCAGUCCAACAGCACCAAUA
AM06132SS 1018 (NAG37)s(invAb)scuggcacAfCfCfaguccaacaas(invAb) 880 CUGGCACACCAGUCCAACAA
AM06135SS 1019 (NAG37)s(invAb)sggccauAfCfCfcaugucuauas(invAb) 712 GGCCAUACCCAUGUCUAUA
AM06136SS 1020 (NAG37)s(invAb)sgaggccauAfCfCfcaugucuauas(invAb) 881 GAGGCCAUACCCAUGUCUAUA
AM06138SS 1021 (NAG37)s(invAb)sgucaaguucaAfCfAfaacccuuugas(invAb) 882 GUCAAGUUCAACAAACCCUUUGA
AM06139SS 1022 (NAG37)s(invAb)scaaguucaAfCfAfaacccuuugas(invAb) 863 CAAGUUCAACAAACCCUUUGA
AM06141SS 1023 (NAG37)s(invAb)sccaguccaAfCfAfgcaccaauaas(invAb) 883 CCAGUCCAACAGCACCAAUAA
AM06195SS 1024 (NAG37)s(invAb)scgcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 864 CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06223SS 1025 (NAG37)s(invAb)scguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 429 CGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06224SS 1026 (NAG37)s(invAb)scsgcguuuaGfGfCfauguuuaacsa(invAb) 864 CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06225SS 1027 (NAG37)s(invAb)sagCfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcas(invAb) 866 AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06226SS 1028 (NAG37)s(invAb)scguuuaGfGfCfauguuuaacausu(invAb) 857 CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
80/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 93/229
ID de fita SEQ senso: ID NO. Sequência senso (modificada) (5’ - 3’) SEQ ID NO. Sequência de base subjacente (5’ - 3’)
AM06229SS 1029 (NAG37)s(invAb)sgcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 884 GCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06230SS 1030 (NAG37)s(invAb)sgcguuuaGfGfCfauguuuaacausu(invAb) 885 GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
AM06231SS 1031 (NAG37)s(invAb)scgcguuuaGfGfCfauguuuaacsausu(invAb) 886 CGCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
AM06232SS 1032 (NAG37)s(invAb)sagCfgUfuUfaGfGfCfaUfgUfuUfaAfcausu(invA b) 887 AGCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU
AM06236SS 1033 (NAG37)s(invAb)sagcguuuaGfGfCfauguuuaacas(invAb) 866 AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
AM06239SS 1034 (NAG37)s(invAb)scgcguuuaGfGfCfauguuuaacsas(invAb) 864 CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA
81/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 94/229
82/159 [0184] Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento são formados anelando-se uma fita antissenso com uma fita senso. Uma fita senso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5 pode ser hibridizada à qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4, desde que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade por uma sequência contígua de 16,17,18,19, 20 ou 21 nucleotídeos.
[0185] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos em relação a qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 4. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de AAT revelada no presente documento difere por 0, 1, 2 ou 3 nucleotídeos em relação a qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 5.
[0186] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende uma sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1 -17, 2-17, 1 -18, 2-18, 1 -19, 2-19, 1 -20, 2-20, 1 -21, 2-21,1 -22, 2-22,1 -23, 2-23,1 -24 ou 2-24, de qualquer uma das sequências na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em determinadas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4.
[0187] Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1-17, 2-17, 3-17, 4-17, 1-18, 2-18, 3-18, 4-18, 1-19, 2-19, 3-19, 4-19, 1-20, 2-20, 3-20, 4-20, 1-21, 2-21, 3-21,4-21, 1-22, 2-22, 3-22, 4-22, 1-23, 2-23, 323, 4-23, 1-24, 2-24, 3-24, ou 4-24 de qualquer uma das sequências na Tabela 2,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 95/229
83/159
Tabela 3 ou Tabela 5. Em determinadas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de AAT compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 5.
[0188] Para os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') pode ser perfeitamente complementar a um gene de AAT, ou pode ser não complementar a um gene de AAT. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') é um U, A ou dT (ou uma versão modificada de U, A ou dT). Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (a partir da extremidade 5' extremidade 3') forma um par de base A:U ou U:A com a fita senso.
[0189] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 2-18 ou 2-19 de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4. Em algumas modalidades, uma fita senso de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1 -17 ou 1 -18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
[0190] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui (i) uma fita antissenso que compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 2-18 ou 2-19 de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4, e (ii) uma fita senso que compreende as sequências de nucleotídeo (a partir da extremidade 5' extremidade 3') 1-17 ou 1 -18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
[0191 ] Uma fita senso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5 pode ser hibridizada à qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5, desde que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade por uma sequência de 16, 17, 18,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 96/229
84/159
19, 20 ou 21 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o agente de RNAi de AAT tem uma fita senso que consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 5, e uma fita antissenso que consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4. Os pareamentos de sequência representativos são exemplificados pelos nos de ID de Duplex mostrados na Tabela 6.
[0192] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nos de ID de Duplex apresentados no presente documento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT consiste em qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nos de ID de Duplex apresentados no presente documento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um do nos de ID de Duplex apresentados no presente documento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui as sequências de nucleotídeo de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nos de ID de Duplex apresentados no presente documento e um grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação, em que o grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação é covalentemente ligado (isto é, conjugado) à fita senso ou à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT inclui as sequências de nucleotídeo modificadas de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nos de ID de Duplex apresentados no presente documento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende as sequências de nucleotídeo modificadas de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nos de ID de Duplex apresentados no presente documento e um grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação, em que o grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação é covalentemente ligado à fita senso ou à fita antissenso.
[0193] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 97/229
85/159 uma fita antissenso e uma fita senso tendo as sequências de nucleotídeo de qualquer um dos duplexes de fita antissenso/fita senso da Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 6, e compreende um grupo de direcionamento de ligante de receptor de asialoglicoproteína.
[0194] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo as sequências de nucleotídeo de qualquer um dos duplexes de fita antissenso/fita senso da Tabela 2 ou Tabela 5, e compreende, ainda, um grupo de direcionamento selecionado a partir do grupo que consiste em (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é (NAG25) ou (NAG25)s conforme definido na Tabela 7. Em outras modalidades, o grupo de direcionamento é (NAG37) ou (NAG37)s conforme definido na Tabela 7.
[0195] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo a sequência de nucleotídeo modificada de qualquer uma das sequências de nucleotídeos de fita antissenso e/ou fita senso de qualquer um do duplexes da Tabela 6.
[0196] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo uma sequência de nucleotídeo modificada de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de fita antissenso e/ou fita senso de qualquer um dos duplexes ad Tabela 6, e compreende um grupo de direcionamento de ligante de receptor de asialoglicoproteína.
[0197] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT compreende a estrutura de duplex de qualquer um dos duplexes na Tabela 6.
[0198] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT consiste em uma estrutura de duplex de qualquer um dos duplexes na Tabela 6.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 98/229
86/159
Tabela 6. Agentes de RNAi de AAT identificados por n° de ID de Duplex com fitas senso e antissenso correspondentes
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 99/229
87/159
ID de duplex ID de fita antissenso ID de fita senso
AD01131 AM00516AS AM01887SS
AD01132 AM00516AS AM01888SS
AD01174 AM00516AS AM01855SS
AD01286 AM02129AS AM01855SS
AD01287 AM02130AS AM02132SS
ADO1442 AM02130AS AM02390SS
AD03752 AM04786AS AM04785SS
AD04156 AM05303AS AM05304SS
AD04406 AM05303AS AM05599SS
AD04444 AM05643AS AM05642SS
AD04445 AM05645AS AM05644SS
AD04446 AM05647AS AM05646SS
AD04447 AM05649AS AM05648SS
AD04448 AM05651AS AM05650SS
AD04449 AM05653AS AM05652SS
AD04450 AM05655AS AM05654SS
AD04451 AM05657AS AM05656SS
AD04452 AM05659AS AM05658SS
AD04453 AM05661AS AM05660SS
AD04454 AM05663AS AM05662SS
AD04455 AM05665AS AM05664SS
AD04456 AM05667AS AM05666SS
AD04457 AM05669AS AM05668SS
AD04458 AM05671- AM05670-
ID de ID de fita ID de fita
duplex antissenso senso
AS SS
AD04459 AM05673AS AM05672SS
AD04464 AM05677AS AM05658SS
AD04601 AM05884AS AM05656SS
AD04602 AM05885AS AM05656SS
AD04603 AM05886AS AM05656SS
AD04604 AM05887AS AM05893SS
AD04605 AM05888AS AM05893SS
AD04606 AM05657AS AM05894SS
AD04607 AM05886AS AM05894SS
AD04608 AM05887AS AM05895SS
AD04609 AM05888AS AM05895SS
AD04610 AM05657AS AM05896SS
AD04611 AM05889AS AM05897SS
AD04612 AM05890AS AM05897SS
AD04613 AM05887AS AM05898SS
AD04614 AM05891AS AM05899SS
AD04615 AM05892AS AM05899SS
AD04616 AM05900AS AM05672SS
AD04617 AM05901AS AM05646SS
AD04652 AM05954AS AM05958SS
AD04653 AM05955AS AM05958SS
AD04654 AM05955AS AM05959SS
AD04655 AM05954AS AM05960SS
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 100/229
88/159
ID de ID de fita ID de fita
duplex antissenso senso
AD04656 AM05956AS AM05959SS
AD04657 AM05957AS AM05959SS
AD04658 AM05961AS AM05965SS
AD04659 AM05962AS AM05965SS
AD04660 AM05962AS AM05966SS
AD04661 AM05963AS AM05966SS
AD04662 AM05964AS AM05967SS
AD04663 AM05969AS AM05968SS
AD04664 AM05970AS AM05968SS
AD04665 AM05970AS AM05971SS
AD04666 AM05973AS AM05972SS
AD04667 AM05974AS AM05971SS
AD04668 AM05976AS AM05975SS
AD04669 AM05977AS AM05975SS
AD04670 AM05977AS AM05978SS
AD04671 AM05979AS AM05978SS
AD04672 AM05980AS AM05978SS
AD04673 AM05982AS AM05981SS
AD04674 AM05983AS AM05981SS
AD04675 AM05983AS AM05984SS
AD04676 AM05985AS AM05984SS
AD04677 AM05987AS AM05986SS
AD04678 AM05989AS AM05988SS
AD04679 AM05990- AM05988-
ID de duplex ID de fita antissenso ID de fita senso
AS SS
AD04680 AM05992AS AM05991SS
AD04681 AM05994AS AM05993SS
AD04682 AM05996AS AM05995SS
AD04683 AM05998AS AM05997SS
AD04684 AM05999AS AM05997SS
AD04761 AM06124AS AM06127SS
AD04762 AM06125AS AM06128SS
AD04763 AM06126AS AM06129SS
AD04764 AM06130AS AM06132SS
AD04765 AM06131AS AM06132SS
AD04766 AM06133AS AM06135SS
AD04767 AM06134AS AM06136SS
AD04768 AM06137AS AM06138SS
AD04769 AM06137AS AM06139SS
AD04770 AM06140AS AM06141SS
AD04805 AM05673AS AM06195SS
AD04824 AM05887AS AM06223SS
AD04825 AM05900AS AM06224SS
AD04826 AM05889AS AM06225SS
AD04827 AM05888AS AM06223SS
AD04828 AM05887AS AM06226SS
AD04829 AM06227AS AM06229SS
AD04830 AM06228AS AM06229SS
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 101/229
89/159
ID de ID de fita ID de fita
duplex antissenso senso
AD04831 AM06228AS AM06230SS
AD04832 AM05673AS AM06231SS
AD04833 AM05889AS AM06232SS
AD04834 AM06227AS AM06230SS
AD04836 AM06234AS AM06195SS
AD04837 AM06235AS AM06236SS
AD04838 AM06237AS AM06239SS
AD04839 AM05673AS AM06239SS
AD04840 AM06238AS AM06223SS
AD04857 AM06261AS AM06223SS
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 102/229
90/159 [0199] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é preparado ou proporcionado como um sal, sal misto ou um ácido livre. Os agentes de RNAi descritos no presente documento, mediante entrega a uma célula que expressa um gene de AAT, inibem ou nocauteiam a expressão de um ou mais genes de AAT in vivo.
Grupos de direcionamento, grupos de ligação e veículos de entrega [0200] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT é conjugado a um ou mais grupos não nucleotídeos incluindo, sem limitação, um grupo de direcionamento, grupo de ligação, polímero de entrega ou um veículo de entrega. O grupo não nucleotídeo pode acentuar o direcionamento, entrega ou ligação do agente de RNAi. Exemplos de grupos de direcionamento e grupos de ligação são fornecidos na Tabela 7. O grupo não nucleotídeo pode ser covalentemente ligado à extremidade 3' e/ou 5' da fita senso e/ou fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de AAT contém um grupo não nucleotídeo ligado à extremidade 3' e/ou 5' da fita senso. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo é ligado à extremidade 5' de um fita senso de agente de RNAi de AAT. Um grupo não nucleotídeo pode ser direta ou indiretamente ligado ao agente de RNAi através de um ligante/grupo de ligação. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo é ligado ao agente de RNAi através de uma ligação ou ligante lábil, clivável ou reversível.
[0201] Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo aperfeiçoa as propriedades farmacocinéticas ou de biodistribuição de um agente de RNAi ou conjugado ao qual é ligado para aperfeiçoar a distribuição célula-específica ou tecido-específica e absorção célula-específica do agente de RNAi pu conjugado. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo aperfeiçoa a endocitose do agente de RNAi.
[0202] Os grupos de direcionamento ou porções de direcionamento
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 103/229
91/159 podem acentuar as propriedades farmacocinéticas ou de biodistribuição de um conjugado ou agente de RNAi ao qual eles são ligados para aperfeiçoar a distribuição célula-específica e absorção célula-específica do conjugado ou agente de RNAi. Um grupo de direcionamento pode ser monovalente, divalente, trivalente, tetravalente, ou ter uma valência superior para o alvo ao qual é direcionado. Grupos de direcionamento representativos incluem, sem limitação, compostos com afinidade a moléculas de superfície celular, ligantes receptores de célula, haptenos, anticorpos, anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpo, e imitações de anticorpo com afinidade a moléculas de superfície celular. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado a um agente de RNAi usando um ligante, como um ligante PEG ou um, dois ou três resíduos abásicos e/ou ribitol (ribose abásica), que, em alguns casos, podem servir como ligantes. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento compreende um grupamento de derivado de galactose.
[0203] Os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento podem ser sintetizados tendo um grupo reativo, tal como um gripo amina, na terminação 5'. O grupo reativo pode ser usado para ligar subsequentemente um grupo de direcionamento usando métodos típicos na técnica.
[0204] Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento compreende um ligante de receptor de asialoglicoproteína. Em algumas modalidades, um ligante de receptor de asialoglicoproteína inclui ou consiste em um ou mais derivados de galactose. Conforme o uso em questão, o termo derivado de galactose inclui galactose e derivados de galactose com afinidade pelo receptor de asialoglicoproteína que seja igual ou maior que aquele de galactose. Os derivados de galactose incluem, mas não se limitam a: galactose, galactosamina, N-formilgalactosamina, N-acetil-galactosamina, N-propionil-galactosamina, N-nbutanoil-galactosamina, e N-iso-butanoilgalactosamina (vide, por exemplo: S.T
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 104/229
92/159 lobst and K. Drickamer, J.B.C., 1996, 271, 6686). Derivados de galactose, e grupamentos de derivados de galactose, que sejam úteis para direcionamento in vivo de oligonucleotídeos e outras moléculas ao fígado são conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Baenziger and Fiete, 1980, Cell, 22, 611-620; Connolly et al., 1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945).
[0205] Derivados de galactose foram usados para direcionar moléculas a hepatócitos in vivo através de sua ligação ao receptor de asialoglicoproteína expresso sobre a superfície de hepatócitos. A ligação dos ligantes de receptor de asialoglicoproteína aos receptores de asialoglicoproteína facilita o direcionamento célula-específico a hepatócitos e endocitose da molécula em hepatócitos. Os ligantes de receptor de asialoglicoproteína podem ser monoméricos (por exemplo, tendo um derivado de galactose único) ou multimérico (por exemplo, tendo múltiplos derivados de galactose). O derivado de galactose ou grupamento de derivado de galactose pode ser ligado à extremidade 3' ou extremidade 5' da fita senso ou antissenso do agente de RNAi usando métodos conhecidos na técnica. A preparação de grupos de direcionamento, como grupamentos de derivado de galactose, é descrita, por exemplo, no Pedido de Patente com Número de Série U.S. 15/452.324 e Publicação de Patente n° U.S. 2017/0253875, estando os conteúdos de ambos incorporados ao presente documento a título de referência em sua totalidade.
[0206] Conforme o uso em questão, um grupamento de derivado de galactose compreende uma molécula tendo dois a quatro derivados de galactose terminal. Um derivado de galactose terminal é ligado a uma molécula através de seu carbono C-1. Em algumas modalidades, o grupamento de derivado de galactose é um trímero de derivado de galactose (também referido como um derivado de galactose tri-antenário ou derivado de galactose trivalente). Em algumas modalidades, o grupamento de derivado de galactose compreende N
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 105/229
93/159 acetil-galactosaminas. Em algumas modalidades, o grupamento de derivado de galactose compreende três N-acetil-galactosaminas. Em algumas modalidades, ο grupamento de derivado de galactose é um tetrâmero de derivado de galactose (também referido como derivado de galactose tetra-antenário ou derivado de galactose tetravalente). Em algumas modalidades, o grupamento de derivado de galactose compreende quatro N-acetil-galactosaminas.
[0207] Conforme o uso em questão, um trímero de derivado de galactose contém três derivados de galactose, cada um ligado a um ponto de ramificação central. Conforme o uso em questão, um tetrâmero de derivado de galactose contém quatro derivados de galactose, cada um ligado a um ponto de ramificação central. Os derivados de galactose podem ser ligados ao ponto de ramificação central através dos carbonos C-1 dos sacarídeos. Em algumas modalidades, os derivados de galactose são ligados ao ponto de ramificação através dos ligantes ou espaçadores. Em algumas modalidades, o ligante ou espaçador é um espaçador hidrofílico flexível, como um grupo PEG (vide, por exemplo, a Patente n° U.S. 5.885.968; Biessen et al. J. Med. Chem. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546). Em algumas modalidades, o espaçador PEG é um espaçador PEG3. O ponto de ramificação pode ser qualquer molécula pequena que permita a ligação de três derivados de galactose e permita adicionalmente a ligação do ponto de ramificação ao agente de RNAi. Um exemplo do grupo de ponto de ramificação é uma di-lisina ou di-glutamato. A ligação do ponto de ramificação ao agente de RNAi pode ocorrer através de um ligante ou espaçador. Em algumas modalidades, 0 ligante ou espaçador compreende um espaçador hidrofílico flexível, como, sem limitação, um espaçador PEG. Em algumas modalidades, 0 ligante compreende um ligante rígido, como um grupo cíclico. Em algumas modalidades, um derivado de galactose compreende ou consiste em N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, 0 grupamento de derivado de galactose é composto por um
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 106/229
94/159 tetrâmero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um tetrâmero de N-acetil-galactosamina.
[0208] As modalidades da presente revelação incluem composições farmacêuticas para entregar um agente de RNAi de AAT a uma célula do fígado in vivo. Essas composições farmacêuticas podem incluir, por exemplo, um agente de RNAi de AAT conjugado a um grupamento de derivado de galactose. Em algumas modalidades, o grupamento de derivado de galactose é composto por um trímero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um trímero de N-acetilgalactosamina, ou tetrâmero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um tetrâmero de N-acetil-galactosamina.
[0209] Os grupos de direcionamento incluem, mas não se limitam a, (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), e (NAG39)s conforme definido na Tabela 7. Outros grupos de direcionamento, incluindo ligantes de direcionamento de grupamento de galactose, são conhecidos na técnica.
[0210] Em algumas modalidades, um grupo de ligação é conjugado ao agente de RNAi. O grupo de ligação facilita a ligação covalente do agente a um grupo de direcionamento ou polímero de entrega ou veículo de entrega. O grupo de ligação pode ser ligado à extremidade 3' ou 5' do da fita senso ou fita antissenso de agente de RNAi. Em algumas modalidades, o grupo de ligação é ligado à fita senso de agente de RNAi. Em algumas modalidades, o grupo de ligação é conjugado à extremidade 5' ou 3' de uma fita senso de agente de RNAi. Em algumas modalidades, um grupo de ligação é conjugado à extremidade 5' de uma
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 107/229
95/159 fita senso de agente de RNAi. Exemplos de grupos de ligação podem incluir, mas não se limitam a: grupos reativos como aminas primárias e alquinos, grupos alquila, nucleotídeos abásicos, ribitol (ribose abásica), e/ou grupos PEG.
[0211] Um ligante ou grupo de ligação é uma conexão entre dois átomos que se ligam a um gripo químico (como um agente de RNAi) ou segmento de interesse a outro grupo químico (como um grupo de direcionamento ou polímero de entrega) ou segmento de interesse através de uma ou ligações covalentes. Uma ligação lábil contém uma união lábil. Uma ligação pode incluir opcionalmente um espaçador que aumenta a distância entre os dois átomos unidos. Um espaçador pode adicionar, ainda, flexibilidade e/ou comprimento à ligação. Os espaçadores podem incluir, mas não se limitam a, grupos alquila, grupos alquenila, grupos alquinila, grupos arila, grupos aralquila, grupos aralquenila, e grupos aralquinila; sendo que cada um desses pode conter um ou mais heteroátomos, heterociclos, aminoácidos, nucleotídeos, e sacarídeos. Grupos espaçadores são bem conhecidos na técnica e a lista precedente não é destinada a limitar o escopo da descrição.
[0212] Qualquer uma das sequências de nucleotídeo de agentes de RNAi de AAT listadas nas Tabelas 2, 3, 4 ou 5, se modificadas ou não modificadas, pode conter grupos de direcionamento ou grupos de ligação 3' ou 5'. Qualquer uma das sequências de agente de RNAi de AAT listadas nas Tabelas 4 ou 5 que contém um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5', pode alternativamente não conter um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5', ou pode conter um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5' diferente incluindo, sem limitação, aqueles descritos na Tabela 7. Qualquer um dos duplexes de agente de RNAi de AAT listados na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 6, sejam modificados ou não modificados, pode compreender, ainda, um grupo de direcionamento ou grupo de ligação, que inclui, mas não se limita a, aquele descrito na Tabela 7, e o grupo de
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 108/229
96/159 direcionamento ou grupo de ligação pode ser ligado à terminação 3' ou 5' da fita senso ou fita antissenso do duplex de agente de RNAi de AAT.
[0213] Exemplos de grupos de direcionamento e grupos de ligação são proporcionados na Tabela 7. A Tabela 5 proporciona diversas modalidades das fitas senso de agente de RNAi de AAT tendo um grupo de direcionamento ou grupo de ligação ligado à extremidade 5' ou 3'.
Tabela 7. Estruturas que representam vários nucleotídeos modificados,
Figure BR112019014282A2_D0001
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 109/229
97/159
Figure BR112019014282A2_D0002
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 110/229
98/159
Figure BR112019014282A2_D0003
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 111/229
99/159
Figure BR112019014282A2_D0004
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 112/229
100/159
Figure BR112019014282A2_D0005
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 113/229
101/159
Figure BR112019014282A2_D0006
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 114/229
102/159
Figure BR112019014282A2_D0007
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 115/229
103/159
Figure BR112019014282A2_D0008
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 116/229
104/159
Figure BR112019014282A2_D0009
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 117/229
105/159
Figure BR112019014282A2_D0010
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 118/229
106/159
Figure BR112019014282A2_D0011
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 119/229
107/159
Figure BR112019014282A2_D0012
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 120/229
108/159
Figure BR112019014282A2_D0013
Figure BR112019014282A2_D0014
Figure BR112019014282A2_D0015
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 121/229
109/159
Figure BR112019014282A2_D0016
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 122/229
110/159
Figure BR112019014282A2_D0017
Figure BR112019014282A2_D0018
(NAG34)s
Figure BR112019014282A2_D0019
(NAG35)________________________
Η
Figure BR112019014282A2_D0020
(NAG35)s
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 123/229
111/159
Figure BR112019014282A2_D0021
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 124/229
112/159
Figure BR112019014282A2_D0022
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 125/229
113/159
Figure BR112019014282A2_D0023
[0214] Em cada uma das estruturas anteriores na Tabela 7, NAG compreende uma N-acetil-galactosamina ou outro ligante de receptor de asialoglicoproteína, conforme seria compreendido por um indivíduo com conhecimento comum na técnica a ser ligado tendo em vista as estruturas anteriores e a descrição proporcionada no presente documento. Por exemplo, em algumas modalidades, NAG nas estruturas proporcionadas na Tabela 7 é representado pela estrutura a seguir:
Figure BR112019014282A2_D0024
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 126/229
114/159 (N-acetil-galactosamina) [0215] Cada (NAGx) pode ser ligado a um agente de RNAi de AAT através de um grupo de fosfato (conforme em (NAG25), (NAG30) e (NAG31)), ou um grupo de fosforotioato, (conforme em (NAG25)s, (NAG29)s, (NAG30)s, (NAG31)s, ou (NAG37)s), ou outro grupo de ligação.
Figure BR112019014282A2_D0025
Grupo de Fosfato Grupo de Fosforotioato [0216] Outros grupos de ligação conhecidos na técnica podem ser usados.
[0217] Em algumas modalidades, um veículo de entrega pode ser usado para entregar um agente de RNAi a uma célula ou tecido. Um veículo de entrega é um composto que aperfeiçoa a entrega do agente de RNAi a uma célula ou tecido. Um veículo de entrega pode incluir, ou consistir em, sem limitação: um polímero, tal como um polímero antipático, um polímero ativo de membrana, um peptídeo, um peptídeo de melitina, um peptídeo tipo melitin (MLP), um lipídeo, um polímero ou peptídeo reversivelmente modificado, ou uma poliamina ativa de membrana reversivelmente modificada. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi podem ser combinados com lipídeos, nanopartículas, polímeros, lipossomas, micelas, DPCs ou outros sistemas de entrega disponíveis na técnica. Os agentes de RNAi também podem ser quimicamente conjugados a grupos de direcionamento, lipídeos (incluindo, sem limitação, derivados de colesterol e colesteril), nanopartículas, polímeros, lipossomas, micelas, DPCs (vide, por exemplo, WO 2000/053722, WO 2008/0022309, WO 2011/104169 e WO 2012/083185, WO 2013/032829, WO 2013/158141, estando cada um desses incorporado ao presente documento a título de referência), ou outros sistemas de entrega disponíveis na técnica.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 127/229
115/159
Composições e formulações farmacêuticas [0218] Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento podem ser preparados como composições ou formulações farmacêuticas. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas incluem pelo menos um agente de RNAi de AAT. Essas composições farmacêuticas são particularmente úteis na inibição da expressão do mRNA alvo em uma célula alvo, um grupo de células, um tecido, ou um organismo. As composições farmacêuticas podem ser usadas para tratar um indivíduo com uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da redução do nível do mRNA alvo, ou inibição na expressão do gene alvo. As composições farmacêuticas podem ser usadas para tratar um indivíduo em risco de desenvolver uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da redução do nível do mRNA alvo ou uma inibição na expressão do gene alvo. Em uma modalidade, o método inclui administrar um agente de RNAi de AAT ligado a um ligante de direcionamento conforme descrito no presente documento, a um indivíduo a ser tratado. Em algumas modalidades, um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo veículos, carreadores, diluentes, e/ou polímeros de entrega) são adicionados às composições farmacêuticas incluindo um agente de RNAi de AAT, formando, assim, uma formulação farmacêutica adequada para entrega in vivo a um indivíduo, incluindo um ser humano.
[0219] As composições farmacêuticas que incluem um agente de RNAi de AAT e métodos revelados no presente documento reduzem o nível do mRNA alvo em uma célula, grupo de células, grupo de células, tecido, ou indivíduo, incluindo: administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de AAT descrito no presente documento, inibindo, assim, a expressão de mRNA de AAT no indivíduo.
[0220] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas incluindo um agente de RNAi de AAT são usadas para tratar ou gerenciar
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 128/229
116/159 apresentações clínicas em um indivíduo com AATD, tal como hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose, e insuficiência hepática fulminante uniforme. Em algumas modalidades, uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de uma ou mais composições farmacêuticas é administrada a um indivíduo em necessidade desse tratamento. Em algumas modalidades, a administração de qualquer um dos agentes de RNAi de AAT revelados pode ser usada para reduzir o número, gravidade, e/ou frequência de sintomas de umas doença em um indivíduo.
[0221] As composições farmacêuticas descritas incluindo um agente de RNAi de AAT podem ser usadas para tratar pelo menos um sintoma em um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da redução ou inibição na expressão de mRNA de AAT. Em algumas modalidades, o indivíduo é administrado com uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ou mais composições farmacêuticas incluindo um agente de RNAi de AAT tratando, assim, o sintoma. Em outras modalidades, o indivíduo é administrado com uma quantidade profilaticamente eficaz de um ou mais agentes de RNAi de AAT, evitando, assim, o pelo menos um sintoma.
[0222] A rota de administração é a trajetória pela qual um agente de RNAi de AAT é colocado em contato com o corpo. Em geral, métodos de administração de fármacos e ácidos nucleicos de um mamífero são bem conhecidos na técnica e podem ser aplicados à administração das composições descritas no presente documento. Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento podem ser administrados através de qualquer rota adequada em uma preparação apropriadamente adaptada à rota particular. Logo, as composições farmacêuticas descritas no presente documento podem ser administradas por injeção, por exemplo, intravenosa, intramuscular, intracutânea, subcutânea, intraarticular ou intraperitonealmente. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 129/229
117/159 descritas no presente documento são administradas através de injeção subcutânea.
[0223] As composições farmacêuticas incluindo um agente de RNAi de AAT descrito no presente documento podem ser e entregues a uma célula, grupo de células, tecido, ou indivíduo usando tecnologias de entrega de oligonucleotídeo conhecidos na técnica. Em geral, qualquer método adequado reconhecido na técnica para entregar uma molécula de ácido nucleico (in vitro ou in vivo) pode ser adaptado para uso com as composições descritas no presente documento. Por exemplo, a entrega pode ser por administração local, (por exemplo, injeção direta, implante, ou administração tópica), administração sistêmica, ou rotas subcutâneas, intravenosas, intraperitoneais ou parenterais, incluindo administração intracraniana (por exemplo, intraventricular, intraparenquimal e intratecal), intramuscular, transdérmica, vias aéreas (aerossol), nasal, oral, retal, ou tópica (incluindo bucal e sublingual). Em determinadas modalidades, as composições são administradas por infusão ou injeção subcutânea ou intravenosa.
[0224] De modo correspondente, em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas no presente documento compreendem um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. As composições farmacêuticas descritas no presente documento são formuladas para administração a um indivíduo.
[0225] Conforme o uso em questão, a composição farmacêutica ou medicamento inclui uma quantidade farmacologicamente eficaz de pelo menos um dos agentes de RNAi de AAT descritos e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis (excipientes) são substâncias diferentes do Ingrediente Farmacêutico Ativo (API, produto terapêutico, por exemplo, agente de RNAi de AAT) que sejam intencionalmente incluídos no sistema de entrega de fármacos. Excipientes não
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 130/229
118/159 exercem nem são destinados a exercer um efeito terapêutico na dosagem destinada. Os excipientes podem agir para a) auxiliar no processamento do sistema de entrega de fármaco durante a fabricação, b) proteger, suportar ou acentuar a estabilidade, biodisponibilidade ou aceitabilidade do paciente do API, c) auxiliar na identificação do produto, e/ou d) acentuar qualquer outro atributo da segurança geral, eficácia, de entrega do API durante armazenamento ou uso. Um excipiente farmaceuticamente aceitável pode, ou não, ser uma substância inerte.
[0226] Os excipientes incluem, mas não se limitam a: acentuadores de absorção, antiaderentes, agentes antiespumação, antioxidantes, aglutinantes, agentes de tamponamento, carreadores, agentes de revestimento, cores, acentuadores de entrega, polímeros de entrega, dextrano, dextrose, diluentes, desintegrantes, emulsificantes, extensores, cargas, flavorizantes, glidantes, umectantes, lubrificantes, óleos, polímeros, conservantes, solução salina, sais, solventes, açúcares, agentes de suspensão, matrizes de liberação sustentada, adoçantes, agentes espessantes, agentes de tonicidade, veículos, agentes repelentes de água, e agentes umectantes.
[0227] As composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersão. Para administração intravenosa, carreadores adequados incluem solução salina fisiológica, água bacteriostática, Cremophor® ELTM (BASF, Parsippany, NJ, EUA) ou solução salina tamponada de fosfato (PBS). Devem ser estáveis sob as condições de fabricação e armazenamento e devem ser preservados contra a ação contaminante de microrganismos como bactérias e fungos. O carregador pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez apropriada pode ser
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 131/229
119/159 mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, polialcoois como manitol, sorbitol, e cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser provocada incluindo-se na composição um agente que retarde a absorção, por exemplo, monostearato de alumínio e gelatina.
[0228] Soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas incorporandose o composto ativo na quantidade exigida em um solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido por esterilização por filtração. Em geral, as dispersões são preparadas incorporando-se o composto ativo em um veículo estéril, que contém um meio de dispersão básica e os outros ingredientes necessários a partir daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, métodos de preparação incluem secagem a vácuo e secagem por congelamento que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional a partir de uma solução previamente filtrada estéril do mesmo.
[0229] As formulações adequadas para administração intra-articular podem estar sob a forma de uma preparação aquosa estéril do fármaco que pode estar sob a forma microcristalina, por exemplo, sob a forma de uma suspensão microcristalina aquosa. As formulações lipossomais ou sistemas de polímero biodegradáveis também podem ser usados para apresentar o fármaco para administração intra-articular e oftálmica.
[0230] Os compostos ativos podem ser preparados com carreadores que protegerão o composto contra eliminação rápida a partir do corpo, tal como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de entrega microencapsulados. Polímeros biodegradáveis, biocompatíveis podem ser usados,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 132/229
120/159 tal como acetato de vinil etileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, e ácido polilático. Métodos para preparação dessas formulações ficarão aparentes aos indivíduos versados na técnica. As suspensões lipossomais também podem ser usadas como carreadores farmaceuticamente aceitáveis. Esses podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos aos indivíduos versados na técnica, por exemplo, conforme descrito na Patente n° U.S. 4.522.811.
[0231] Os agentes de RNAi de AAT podem ser formulados em composições em forma unitária de dosagem para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma unitária de dosagem se refere a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; sendo que cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação ao carreador farmacêutico necessário. A especificação para as formas unitárias de dosagem da revelação são ditadas, e diretamente dependentes, pelas características exclusivas do composto ativo e os efeito terapêutico a ser alcançado, e as limitações inerentes na técnica de compor esse composto ativo para o tratamento de indivíduos.
[0232] Uma composição farmacêutica pode conter outros componentes adicionais comumente encontrados em composições farmacêuticas. Esses componentes adicionais incluem, mas não se limitam a: anti-pruríticos, adstringentes, anestésicos locais, ou agentes anti-inflamatórios (por exemplo, antihistamina, difen-hidramina, etc.). Imagina-se, também, que células, tecidos ou órgãos isolados que expressam ou compreendem os agentes de RNAi aqui definidos também podem ser usados como “composições farmacêuticas.” Conforme o uso em questão, “quantidade farmacologicamente eficaz,” “quantidade terapeuticamente eficaz,” ou simplesmente “quantidade eficaz” se referem à quantidade de um agente de RNAi para produzir um resultado farmacológico,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 133/229
121/159 terapêutico ou preventivo.
[0233] Em geral, uma quantidade eficaz de um composto ativo estará na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal/dia, por exemplo, de cerca de 1,0 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto ativo estará na faixa de cerca de 0,25 a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um ingrediente ativo estará na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 4 mg/kg de peso corporal por dose. A quantidade administrada também provavelmente dependerá dessas variáveis como a situação de saúde geral do paciente, a eficácia biológica relativa do composto entregue, a formulação do fármaco, a presença e tipos de excipientes na formulação, e a rota de administração. Da mesma forma, deve-se compreender que a dosagem inicial administrada pode, em alguns casos, ser aumentada além do nível superior para alcançar rapidamente o nível de sangue desejado ou nível de tecido, ou a dosagem inicial pode, em alguns casos, ser menor que a ideal.
[0234] Para o tratamento de uma doença ou para formação de um medicamento ou composição para tratamento de uma doença, as composições farmacêuticas descritas no presente documento incluindo um agente de RNAi de AAT podem ser combinadas com um excipiente ou com um segundo agente terapêutico ou tratamento incluindo, sem limitação: um segundo ou outro agente de RNAi, um fármaco de molécula pequena, um anticorpo, um fragmento de anticorpo, peptídeo e/ou aptâmero.
[0235] Os agentes de RNAi de AAT descritos, quando adicionados a excipientes farmaceuticamente aceitáveis ou adjuvantes, podem ser embalados em kits, recipientes, pacotes ou dispensadores. As composições farmacêuticas descritas no presente documento podem ser embaladas em seringas ou frascos pré-carregados.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 134/229
122/159
Métodos de tratamento e inibição de expressão [0236] Os agentes de RNAi de AAT revelados no presente documento podem ser usados para tratar um indivíduo (por exemplo, um ser humano ou outro mamífero) tendo uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da administração do composto. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi revelados no presente documento podem ser usados para tratar um indivíduo (por exemplo, um ser humano) tendo AATD, ou sintomas, doenças, ou distúrbios que se beneficiariam da redução ou inibição na expressão de mRNA de AAT, tal como doença hepática AATD. O indivíduo é administrado com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento. O indivíduo pode ser um ser humano, paciente, ou paciente humano. O indivíduo pode ser um adulto, adolescente, criança ou bebê. As composições farmacêuticas descritas incluindo um agente de RNAi de AAT podem ser usadas para proporcionar métodos para o tratamento terapêutico de doenças, como AATD. Esses métodos incluem a administração de uma composição farmacêutica descrita no presente documento a um ser humano ou animal.
[0237] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento são usados para tratar um indivíduo com AATD, incluindo sintomas, doenças ou distúrbios relacionados a AATD. Doenças ou distúrbios hepáticos de AATD incluem, mas não se limitam a, hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose e insuficiência hepática fulminante. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT descritos são usados para tratar pelo menos um sintoma em um indivíduo tendo AATD. O indivíduo é administrado com uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um ou mais dos agentes de RNAi descritos.
[0238] Em determinadas modalidades, a presente invenção proporciona métodos para tratamento de AATD em um paciente em necessidade do mesmo,
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 135/229
123/159 que compreende administrar ao paciente qualquer um dos agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento.
[0239] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de AAT são usados para tratar ou gerenciar uma apresentação clínica de um indivíduo com uma doença ou distúrbio hepático AATD. O indivíduo é administrado com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos agentes de RNAi de AAT ou composições contendo agente de RNAi de AAT descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o método compreende administrar uma composição que compreende um agente de RNAi de AAT descrito no presente documento a um indivíduo a ser tratado.
[0240] Em algumas modalidades, o nível de expressão genética e/ou nível de mRNA de um gene de AAT em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de AAT descrito é administrado é reduzido por ao menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais de 99% em relação apo indivíduo antes de ser administrado com um agente de RNAi de AAT ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de AAT. O nível de expressão genética e/ou nível de mRNA no indivíduo é reduzido em uma célula, grupo de células, e/ou tecido do indivíduo.
[0241] Em algumas modalidades, o nível de proteína de AAT em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de AAT descrito foi administrado é reduzido em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais que 99% em relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de AAT ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de AAT. O nível de proteína no indivíduo é reduzido em uma célula, grupo de células, tecido, sangue, e/ou outro fluido do indivíduo.
[0242] Em algumas modalidades, o nível de proteína de polímero Z-AAT
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 136/229
124/159 em um indivíduo tendo AATD ao qual um agente de RNAi de AAT descrito foi administrado é reduzido em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais que 99% em relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de AAT ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de AAT. Em algumas modalidades, p nível de proteína de polímero Z-AAT em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de AAT descrito foi administrado é reduzido em pelo menos cerca de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais que 99% em relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de AAT ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de AAT.
[0243] Uma redução na expressão de gene de AAT, mRNA de AAT, ou níveis de proteína AAT pode ser avaliada e quantificada por métodos gerais conhecidos na técnica. Os exemplos revelados no presente documento apresentam métodos genericamente conhecidos para avaliar a inibição de expressão de gene de AAT e redução em níveis de proteína AAT. A redução ou diminuição no nível de mRNA de AAT e/ou nível de proteína (incluindo polímero e/ou monômero Z-AAT) são coletivamente referidos no presente documento como uma redução ou diminuição em AAT ou inibição ou redução da expressão de AAT.
Células e tecidos e organismos não humanos [0244] Células, tecidos e organismos não humanos que incluem pelo menos um dos agentes de RNAi de AAT descritos no presente documento são contemplados. A célula, tecido ou organismo não humano é produzida entregandose o agente de RNAi à célula, tecido ou organismo não humano.
[0245] As modalidades e itens proporcionados acima serão agora ilustrados nos exemplos não limitantes a seguir.
Exemplos
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 137/229
125/159
Exemplo 1. Identificação de sequências de agente de RNAi e síntese de agentes de RNAi [0246] Um processo de seleção para identificar sequências líder para inibir a expressão do gene de AAT começa com métodos in silico para identificar as sequências conservadas por variantes de um gene de AAT (SEQ ID NO: 1). A sequência de AAT foi inicialmente tríada usando bioinformática para sequência de 19 nucleotídeos tendo uma sequência complementar em variantes conhecidas de AAT humano. As sequências conhecidas por terem desafios de fabricação e aquelas previstas como tendo uma atividade de RNAi fraca com base em parâmetros conhecidos foram eliminadas. As sequências foram, então, submetidas a uma análise de reatividade de espécie cruzada para selecionar candidatos que reagiríam cruzadamente com AAT de macaco cinomolgo. As sequências também foram avaliadas por especificidade para evitar efeitos fora de alvo contra os genomas de humanos e macacos cinomolgos. Cento e quinze (115) famílias de sequência de 19-mers foram selecionadas como candidatos.
[0247] Os duplexes na Tabela 6 foram sintetizados de acordo com os procedimentos a seguir:
Síntese [0248] As fitas senso e antissenso dos agentes de RNAi de AAT foram sintetizadas de acordo com a tecnologia de fosforamidita em fase sólida usada na síntese de oligonucleotídeos. Dependendo da escala, utilizou-se MerMade96E® (Bioautomation) ou MerMade12® (Bioautomation). As sínteses foram realizadas em um suporte sólido feito de vidro poroso controlado (CPG, 500 Â ou 600Â, obtido junto a Prime Synthesis, Aston, PA, EUA). Todas as fosforamiditas de RNA e RNA 2'-modificado foram adquiridas junto a Thermo Fisher Scientific (Milwaukee, Wl, EUA). De modo específico, as 2'-O-metil fosforamiditas a seguir foram usadas: (5'0-dimetoxitritil-N6-(benzoil)-2'-0-metil-adenosina-3'-0-(2-cianoetil-N,N
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 138/229
126/159 diisopropilamino) fosforamidita, 5'-0-dimetoxi-tritil-N4-(acetil)-2'-0-metil-citidina-3'0-(2-cianoethil-N,N-diisopropil-amino) fosforamidita, (5'-0-dimetoxitritil-N2(isobutiril)-2'-0-metil-guanosina-3'-0-(2-ciano-etil-N,Ndiisopropilamino)fosforamidita, e 5'-0-dimetoxi-tritil-2'-0-metil-uridina-3'-0-(2cianoetil-N,N-diisopropilamino)fosforamidita. As 2'-deoxi-2'-fluoro-fosforamiditas portaram os mesmos grupos de proteção que as 2'-O-metil RNA amiditas. As fosforamiditas UNA a seguir foram usadas: 5'-(4,4'-Dimetoxitritil)-N-benzoil-2',3'seco-adenosina, 2'-benzoil-3'-[(2-cianoetil)-(N,N-diisopropil)]-fosforamidita, 5'-(4,4'-Dimetoxitritil)-N-acetil-2',3'-seco-citosina, 2'-benzoil-3'-[(2-cianoetil)-(N,Ndiiso-propil)]-fosforamidita, 5'-(4,4'-Dimetoxitritil)-N-isobutiril-2',3'-seco-guanosina, 2'-benzoil-3'-[(2-cianoetil)-(N,N-diisopropil)]-fosforamidita, e 5'-(4,4'-Dimetoxi-tritil)2',3'-seco-uridina, 2'-benzoil-3'-[(2-cianoetil)-(N,N- diiso-propil)]-fosforamidita.
[0249] Fosforamiditas contendo ligante de direcionamento em diclorometano anidro ou acetonitrila anidro (50 mM), enquanto todas as outras amiditas foram dissolvidas em acetonitrila anidro (50 mM) e peneiras moleculares (3Â) foram adicionadas. 5-Benziltio-1 H-tetrazola (BTT, 250 mM em acetonitrila) ou
5-Etiltio-1 H-tetrazola (ETT, 250 mM em acetonitrila) foi usado como solução ativadora. Os tempos de acoplamento foram 10 min (RNA), 15 min (ligante de direcionamento), 90 s (2'OMe), e 60 s (2'F). A fim de introduzir ligações de fosforotioato, uma solução de 100 mM de 3-fenil 1,2,4-ditiazolina-5-ona (POS, obtido junto a PolyOrg, Inc., Leominster, MA, EUA) em Acetonitrila anidro foi empregada.
Clivagem e desproteção de oligômeros de ligação de suporte.
[0250] Após a finalização da síntese de fase sólida, o suporte sólido seco foi tratado com uma solução de volume 1:1 de 40%, em peso, de metilamina em água e solução de hidróxido de amônio a 28% (Aldrich) por duas horas a 30°C. A solução foi evaporada e o resíduo sólido foi reconstituído em água (vide abaixo).
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 139/229
127/159
Purificação [0251] Os oligômeros brutos foram purificados por HPLC de troca aniônica usando uma coluna TKSgel SuperQ-5PW 13u e um sistema Shimadzu LC-8. O tampão A era 20 mM Tris, 5 mM EDTA, pH 9,0 e continha Acetonitrila a 20% e o tampão B era igual ao tampão A com a adição de 1,5 M de cloreto de sódio. Vestígios de UV em 260 nm foram registrados. Frações apropriadas foram agrupadas e, em seguida, executadas em HPLC por exclusão de tamanho usando uma coluna GE Healthcare XK 16/40 embalada com um meio Sephadex G-25 com um tampão em execução de 100mM de bicarbonato amônio, pH 6,7 e Acetonitrila a 20%.
Anelamento [0252] As fitas complementares foram misturadas combinando-se soluções de RNA equimolares (senso e antissenso) em 0,2 x PBS (solução salina tamponada de fosfato, 1 x, Corning, Cellgro) para formar os agentes de RNAi. Essa solução foi colocada em um termomisturador a 70°C, aquecida a 95°C, mantida a 95°C durante 5 minutos, e resfriada até a temperatura ambiente lentamente. Alguns agentes de RNAi foram liofilizados e armazenados a -15 a -25°C. A concentração de duplex foi determinada medindo-se a absorbância de solução em um espectrômetro UV-Vis em 0,2x PBS. A absorbância de solução a 260 nm foi, então, multiplicada por um fator de conversão e o fator de diluição para determinar a concentração de duplex. Exceto onde declarado em contrário, todos os fatores de conversão eram 0,037 mg/(mL cm). Para alguns experimentos, um fator de conversão foi calculado a partir de um coeficiente de extinção experimentalmente determinado.
Exemplo 2. Teste in vitro de agentes de RNAi de AAT [0253] Os duplexes de sequência candidata foram testados in vitro. As sequências de fita antissenso e sequências de fita senso foram aneladas para
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 140/229
128/159 formar duplexes de fitas 21-mer (tendo 19 pares de base e urn overhang UU de dinucleotídeo em cada extremidade 3') para teste in vitro, conforme mostrado na Tabela 8 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 141/229 ências de
Tabela 8.
de RNAi de AAT no
SEQ ID Sequência antissenso SEQ ID Sequência senso No de ID
NO: (5’ 3’) NO: _____(5' - 3')_________________________________ de Duplex
1035
1036
1037
1038
1039
1040
1041
1042
1043
1044
1045
1046
1047
1048
1049
1050
1051
1052
1053
1054
1055
1056
1057
1058
1059
1060
AGAAGAUAUUGGUGCUGUUUU
AGGAACUUGGUGAUGAUAUUU
UGUCUUCUGGGCAGCAUCUUU
UGUUGGACUGGUGUGCCAGUU
CUGUUGGACUGGUGUGCCAUU
UGCUGUUGGACUGGUGUGCUU
UAUUGGUGCUGUUGGACUGUU
AUAUUGGUGCUGUUGGACUUU
GAUAUUGGUGCUGUUGGACUU
AAGAUAUUGGUGCUGUUGGUU
GUAGCGAUGCUCACUGGGGUU
AAAGGCUGUAGCGAUGCUCUU
GCAAAGGCUGUAGCGAUGCUU
UGCAAAGGCUGUAGCGAUGUU
AUUGCAAAGGCUGUAGCGAUU
AGCAUUGCAAAGGCUGUAGUU
AGAGCAUUGCAAAGGCUGUUU
GGAGUUCCUGGAAGCCUUCUU
UCCAAAAACUUAUCCACUAUU
AAGGCUUCUGAGUGGUACAUU
GAAGGCUUCUGAGUGGUACUU
UUCUUGGCCUCUUCGGUGUUU
GUUUCUUGGCCUCUUCGGUUU
UUGAUCUGUUUCUUGGCCUUU
GUUGAUCUGUUUCUUGGCCUU
CGUUGAUCUGUUUCUUGGCUU
1150
1151
1152
1153
1154
1155
1156
1157
1158
1159
1160
1161
1162
1163
1164
1165
1166
1167
1168
1169
1170
1171
1172
1173
1174
1175
AACAGCACCAAUAUCUUCUUU AUAUCAUCACCAAGUUCCUUU AGAUGCUGCCCAGAAGACAUU CUGGCACACCAGUCCAACAUU UGGCACACCAGUCCAACAGUU GCACACCAG UCCAACAGCAU U CAGUCCAACAGCACCAAUAUU AG UCCAACAGCACCAAUAU U U GUCCAACAGCACCAAUAUCUU CCAACAGCACCAAUAUCUUUU CCCCAGUGAGCAUCGCUACUU GAGCAUCGCUACAGCCUUUUU GCAUCGCUACAGCCUUUGCUU CAUCGCUACAGCCUUUGCAUU UCGCUACAGCCUUUGCAAUUU CUACAGCCUUUGCAAUGCUUU ACAGCCUUUGCAAUGCUCUUU GAAGGCUUCCAGGAACUCCUU UAGUGGAUAAGUUUUUGGAUU UGUACCACUCAGAAGCCUUUU GUACCACUCAGAAGCCUUCUU ACACCGAAGAGGCCAAGAAU U ACCGAAGAGGCCAAGAAACUU AGGCCAAGAAACAGAUCAAUU
GGCCAAGAAACAGAUCAACUU GCCAAGAAACAGAUCAACGUU
D1
D2
D3
D4
D5
D6
D7
D8
D9
D10
D11
D12
D13
D14
D15
D16
D17
D18
D19
D20
D21
D22
D23
D24
D25
D26
129/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 142/229
ID Sequência antissenso (5' - 3')_____________________________
CACAAUUUUCCCUUGAGUAUU
UCCACAAUUUUCCCUUGAGUU
AUCCACAAUUUUCCCUUGAUU
UGUCAAGCUCCUUGACCAAUU
GUGUCUCUGUCAAGCUCCUUU
ACUGUGUCUCUGUCAAGCUUU
UGUAAUUCACCAGAGCAAAUU
UUAAACAUGCCUAAACGCUUU
GUUAAACAUGCCUAAACGCUU
UGUUAAACAUGCCUAAACGUU
GGAUGUUAAACAUGCCUAAUU
AUUUCAUCAGCAGCACCCAUU
GAAGAAGAUGGCGGUGGCAUU
GGUGAGUUCAUUUUCCAGGUU
GAACUUGGUGAUGAUAUCGUU
CAUUUUCCAGGAACUUGGUUU
CAUAGGUUCCAGUAAUGGAUU
UCAUAGGUUCCAGUAAUGGUU
UCAGAUCAUAGGUUCCAGUUU
UCUUCAGAUCAUAGGUUCCUU
CUCUUCAGAUCAUAGGUUCUU
GAGGUCAGCCCCAUUGCUGUU
GAGAGGUCAGCCCCAUUGCUU
CUUCAGGGGUGCCUCCUCUUU
GAGAGCUUCAGGGGUGCCUUU
UUAUGCACGGCCUUGGAGAUU
CCUUAUGCACGGCCUUGGAUU
GCCUUAUGCACGGCCUUGGUU
SEQ NO: ID Sequência senso (5’ - 3’) No de ID de Duplex
1176 UACUCAAGGGAAAAUUGUGUU D27
1177 CUCAAGGGAAAAUUGUGGAUU D28
1178 UCAAGGGAAAAUUGUGGAUUU D29
1179 UUGGUCAAGGAGCUUGACAUU D30
1180 AGGAGCUUGACAGAGACACUU D31
1181 AGCUUGACAGAGACACAGUUU D32
1182 UUUGCUCUGGUGAAUUACAUU D33
1183 AGCGUUUAGGCAUGUUUAAUU D34
1184 GCGUUUAGGCAUGUUUAACUU D35
1185 CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU D36
1186 UUAGGCAUGUUUAACAUCCUU D37
1187 UGGGUGCUGCUGAUGAAAUUU D38
1188 UGCCACCGCCAUCUUCUUCUU D39
1189 CCUGGAAAAUGAACUCACCUU D40
1190 CGAUAUCAUCACCAAGUUCUU D41
1191 ACCAAGUUCCUGGAAAAUGUU D42
1192 UCCAUUACUGGAACCUAUGUU D43
1193 CCAUUACUGGAACCUAUGAUU D44
1194 ACUGGAACCUAUGAUCUGAUU D45
1195 GGAACCUAUGAUCUGAAGAUU D46
1196 GAACCUAUGAUCUGAAGAGUU D47
1197 CAGCAAUGGGGCUGACCUCUU D48
1198 GCAAUGGGGCUGACCUCUCUU D49
1199 AGAGGAGGCACCCCUGAAGUU D50
1200 AGGCACCCCUGAAGCUCUCU U D51
1201 UCUCCAAGGCCGUGCAUAAUU D52
1202 UCCAAGGCCGUGCAUAAGGUU D53
1203 CCAAGGCCGUGCAUAAGGCUU D54
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 143/229
ID Sequência antissenso (5' - 3')_____________________________
AGCCUUAUGCACGGCCUUGUU CGAUGGUCAGCACAGCCUUUU GUCGAUGGUCAGCACAGCCUU AAAAACAUGGCCCCAGCAGUU CUAAAAACAUGGCCCCAGCUU UCUAAAAACAUGGCCCCAGUU CCUCUAAAAACAUGGCCCCUU GCCUCUAAAAACAUGGCCCUU UAGACAUGGGUAUGGCCUCUU GAUAGACAUGGGUAUGGCCUU UGUUGAACUUGACCUCGGGUU GGUUUGUUGAACUUGACCUUU AAAGGGUUUGUUGAACUUGUU ACAAAGGGUUUGUUGAACUUU GACAAAGGGUUUGUUGAACUU AAGACAAAGGGUUUGUUGAUU CAU UAAGAAGACAAAGGG U U U AUCAU UAAGAAGACAAAGG U U
GAAGAGGGGAGACUUGGUAUU CCAUGAAGAGGGGAGACUUUU CCCAUGAAGAGGGGAGACUUU U UCCCAUGAAGAGGGGAGAU U UUUCCCAUGAAGAGGGGAGUU AACCCUUCUUUAAUGUCAUUU UUGUUGGACUGGUGUGCCAUU UAUAUUGGUGCUGUUGGACUU UUAGCGAUGCUCACUGGGGUU UCAAAGGCUGUAGCGAUGCUU
SEQ NO: ID Sequência senso (5’ - 3’) No de ID de Duplex
1204 CAAGGCCGUGCAUAAGGCUUU D55
1205 AAGGCUGUGCUGACCAUCGUU D56
1206 GGCUGUGCUGACCAUCGACUU D57
1207 CUGCUGGGGCCAUGUUUUUUU D58
1208 GCUGGGGCCAUGUUUUUAGUU D59
1209 CUGGGGCCAUGUUUUUAGAUU D60
1210 GGGGCCAUGUUUUUAGAGGUU D61
1211 GGGCCAUGUUUUUAGAGGCUU D62
1212 GAGGCCAUACCCAUGUCUAUU D63
1213 GGCCAUACCCAUGUCUAUCUU D64
1214 CCCGAGGUCAAGUUCAACAUU D65
1215 AGGUCAAGUUCAACAAACCUU D66
1216 CAAGUUCAACAAACCCUUUUU D67
1217 AGUUCAACAAACCCUUUGUUU D68
1218 GUUCAACAAACCCUUUGUCUU D69
1219 UCAACAAACCCUUUGUCUUUU D70
1220 ACCCUUUGUCUUCUUAAUGUU D71
1221 CCUUUGUCUUCUUAAUGAUUU D72
1222 UACCAAGUCUCCCCUCUUCUU D73
1223 AAGUCUCCCCUCUUCAUGGUU D74
1224 AGUCUCCCCUCUUCAUGGGUU D75
1225 UCUCCCCUCUUCAUGGGAAUU D76
1226 CUCCCCUCUUCAUGGGAAAUU D77
1227 AUG ACAU U AAAGAAGGG U U U U D78
1228 UGGCACACCAGUCCAACAAUU D79
1229 GUCCAACAGCACCAAUAUAUU D80
1230 CCCCAGUGAGCAUCGCUAAUU D81
1231 GCAUCGCUACAGCCUUUGAUU D82
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 144/229
ID Sequência antissenso (5' - 3')_____________________________
UGAGUUCCUGGAAGCCUUCUU
UAAGGCUUCUGAGUGGUACUU
UUUUCUUGGCCUCUUCGGUUU
UUUGAUCUGUUUCUUGGCCUU
UGUUGAUCUGUUUCUUGGCUU
UACAAUUUUCCCUUGAGUAUU
UUGUCUCUGUCAAGCUCCUUU
UUUAAACAUGCCUAAACGCUU
UGAUGUUAAACAUGCCUAAUU
UAAGAAGAUGGCGGUGGCAUU
UGUGAGUUCAUUUUCCAGGUU
UAACUUGGUGAUGAUAUCGUU
UAUUUUCCAGGAACUUGGUUU
UAUAGGUUCCAGUAAUGGAUU
UUCUUCAGAUCAUAGGUUCUU
UAGGUCAGCCCCAUUGCUGUU
UAGAGGUCAGCCCCAUUGCUU
UUUCAGGGGUGCCUCCUCUUU
UAGAGCUUCAGGGGUGCCUUU
UCUUAUGCACGGCCUUGGAUU
UCCUUAUGCACGGCCUUGGUU
UGAUGGUCAGCACAGCCUUUU
UUCGAUGGUCAGCACAGCCUU
UUAAAAACAUGGCCCCAGCUU
UCUCUAAAAACAUGGCCCCUU
UCCUCUAAAAACAUGGCCCUU
UAUAGACAUGGGUAUGGCCUU
UGUUUGUUGAACUUGACCUUU
SEQ NO: ID Sequência senso (5’ - 3’) No de ID de Duplex
1232 GAAGGCUUCCAGGAACUCAUU D83
1233 GUACCACUCAGAAGCCUUAUU D84
1234 ACCGAAGAGGCCAAGAAAAU U D85
1235 GGCCAAGAAACAGAUCAAAUU D86
1236 GCCAAGAAACAGAUCAACAU U D87
1237 UACUCAAGGGAAAAUUGUAUU D88
1238 AGGAGCUUGACAGAGACAAUU D89
1239 GCGUUUAGGCAUGUUUAAAUU D90
1240 UUAGGCAUGUUUAACAUCAUU D91
1241 UGCCACCGCCAUCUUCUUAUU D92
1242 CCUGGAAAAUGAACUCACAUU D93
1243 CGAUAUCAUCACCAAGU UAU U D94
1244 ACCAAGUUCCUGGAAAAUAUU D95
1245 UCCAUUACUGGAACCUAUAUU D96
1246 GAACCUAUGAUCUGAAGAAUU D97
1247 CAGCAAUGGGGCUGACCUAUU D98
1248 GCAAUGGGGCUGACCUCUAUU D99
1249 AGAGGAGGCACCCCUGAAAUU D100
1250 AGGCACCCCUGAAGCUCUAUU D101
1251 UCCAAGGCCGUGCAUAAGAUU D102
1252 CCAAGGCCGUGCAUAAGGAUU D103
1253 AAGGCUGUGCUGACCAUCAUU D104
1254 GGCUGUGCUGACCAUCGAAUU D105
1255 GCUGGGGCCAUGUUUUUAAUU D106
1256 GGGGCCAUGUUUUUAGAGAUU D107
1257 GGGCCAUGUUUUUAGAGGAUU D108
1258 GGCCAUACCCAUGUCUAUAUU D109
1259 AGGUCAAGUUCAACAAACAUU D110
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 145/229
SEQ NO: ID Sequência antissenso (5’ - 3’) SEQ NO: ID Sequência senso (5’ - 3’) No de ID de Duplex
1145 UACAAAGGGUUUGUUGAACUU 1260 GUUCAACAAACCCUUUGUAUU D111
1146 UAU UAAGAAGACAAAGGG U U U 1261 ACCCUUUGUCUUCUUAAUAUU D112
1147 UAAGAGGGGAGACUUGGUAUU 1262 UACCAAGUCUCCCCUCUUAUU D113
1148 UCAUGAAGAGGGGAGACUUUU 1263 AAGUCUCCCCUCUUCAUGAUU D114
1149 UCCAUGAAGAGGGGAGACUUU 1264 AGUCUCCCCUCUUCAUGGAUU D115
133/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 146/229
134/159 [0254] Os agentes de RNAi de AAT foram avaliados por transfecção de células Hep3B, uma linhagem de carcinoma hepatocelular humano. As células foram colocadas em placas em ~10.000 células por placa em formato de 96 poços, e cada um dos 115 duplexes de agente de RNAi de AAT foi transfectado em três concentrações (10 nM, 1 nM e 0,1 nM), usando o reagente de transfecção LipoFectamine RNAiMax (Thermo Fisher). A expressão relativa de cada um dos 115 agentes de RNAi de AAT foi determinada por qRT-PCR comparando-se os níveis de expressão de mRNA de AAT a um controle endógeno, e normalizado a células Hep3B não tratadas (análise ΔΔΟτ), conforme mostrado na Tabela 9.
Tabela 9. Dados in vitro de Duplexes do Exemplo 2
n° de ID de Duplex Exp. Rel. Exp. Rel. Exp. Rel.
(da Tabela 8) Médio 10 Médio 1 nM Médio 0,1
nM nM
D1 1,037 0,896 0,709
D2 0,068 0,089 0,381
D3 0,046 0,064 0,403
D4 0,075 0,090 0,391
D5 0,408 0,424 0,743
D6 0,018 0,032 0,347
D7 0,069 0,125 0,666
D8 0,092 0,193 0,794
D9 0,206 0,228 0,839
D10 0,023 0,032 0,235
D11 0,309 0,522 0,894
D12 0,049 0,092 0,732
D13 0,549 0,665 0,955
D14 0,531 0,654 0,934
D15 0,108 0,197 0,820
D16 0,558 0,516 0,834
D17 0,626 0,606 0,841
D18 0,668 0,703 0,778
D19 0,624 0,803 0,785
D20 0,071 0,080 0,506
D21 0,022 0,037 0,345
D22 0,086 0,127 0,588
D23 0,175 0,238 0,893
D24 0,134 0,078 0,368
D25 0,056 0,075 0,687
D26 0,122 0,196 0,756
D27 0,517 0,560 0,846
D28 0,801 0,838 0,884
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 147/229
135/159
n° de ID de Duplex Exp. Rei. Exp. Rei. Exp. Rei.
(da Tabela 8) Médio 10 Médio 1 nM Médio 0,1
nM nM
D29 0,820 0,870 0,903
D30 0,558 0,632 0,879
D31 1,112 1,110 0,922
D32 0,246 0,359 1,041
D33 0,107 0,355 0,967
D34 0,096 0,170 0,962
D35 0,317 0,552 0,949
D36 0,064 0,134 0,873
D37 0,463 1,005 1,006
D38 0,428 0,688 0,486
D39 0,730 0,918 1,258
D40 0,059 0,067 0,912
D41 0,093 0,095 0,952
D42 0,582 0,665 0,944
D43 0,196 0,283 1,004
D44 0,195 0,278 0,860
D45 0,053 0,103 0,817
D46 0,082 0,127 1,034
D47 0,089 0,156 0,821
D48 0,735 0,695 0,838
D49 0,604 0,610 0,838
D50 0,543 0,633 0,806
D51 0,114 0,144 0,775
D52 0,108 0,203 0,836
D53 1,062 0,836 0,931
D54 0,091 0,274 1,081
D55 0,526 0,623 0,914
D56 0,500 0,588 0,884
D57 0,049 0,126 0,797
D58 0,198 0,302 0,917
D59 0,732 0,745 0,953
D60 0,389 0,580 0,897
D61 0,585 0,624 1,802
D62 0,174 0,215 1,115
D63 0,093 0,074 0,917
D64 0,133 0,133 1,055
D65 0,395 0,362 0,986
D66 0,054 0,055 1,083
D67 0,105 0,118 1,018
D68 0,106 0,122 1,290
D69 0,201 0,194 1,062
D70 0,050 0,048 0,709
D71 0,231 0,216 0,767
D72 0,046 0,030 0,737
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 148/229
136/159
n° de ID de Duplex Exp. Rel. Exp. Rel. Exp. Rel.
(da Tabela 8) Médio 10 Médio 1 nM Médio 0,1
nM nM
D73 0,521 0,423 0,782
D74 0,479 0,467 0,694
D75 0,531 0,583 0,794
D76 0,210 0,285 0,924
D77 0,152 0,181 0,803
D78 0,425 0,485 0,703
D79 0,120 0,127 0,711
D80 0,203 0,167 0,672
D81 0,477 0,402 0,611
D82 0,540 0,489 0,661
D83 0,315 0,316 0,838
D84 0,135 0,118 0,375
D85 0,209 0,270 1,050
D86 0,120 0,136 0,928
D87 0,172 0,207 1,056
D88 0,218 0,308 1,006
D89 0,605 0,643 0,925
D90 0,205 0,259 0,927
D91 0,594 1,097 1,052
D92 0,337 0,887 1,015
D93 0,068 0,503 0,864
D94 0,067 0,475 0,811
D95 0,186 0,770 0,931
D96 0,062 0,389 0,550
D97 0,066 0,470 0,896
D98 0,567 0,998 1,044
D99 0,451 1,092 1,359
D100 0,292 0,745 0,875
D101 0,049 0,320 0,659
D102 0,313 0,799 0,732
D103 0,068 0,541 0,630
D104 0,077 0,552 0,682
D105 0,071 0,355 0,459
D106 1,179 1,117 1,076
D107 0,328 0,597 0,876
D108 0,125 0,467 0,573
D109 0,141 0,545 0,753
D110 0,076 0,497 0,778
D111 0,132 0,511 0,634
D112 0,216 0,586 0,784
D113 0,462 0,687 1,021
D114 0,507 0,792 1,170
D115 0,259 0,797 1,027
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 149/229
137/159
Exemplo 3. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em camundongos PiZ.
[0255] Um modelo de camundongo PiZ transgênico (camundongos PiZ) foi usado para avaliar agentes de RNAi de AAT in vivo. Os camundongos PiZ abrigam o alelo mutante de PiZ AAT humano e o AATD humano modelo (Carlson et al., Journal of Clinical Investigation 1989).
[0256] Os agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados foram preparados e um tampão salino farmaceuticamente aceitável e administrados a camundongos PiZ para avaliar o nocaute da expressão de gene de AAT. No dia 1, cada camundongo recebeu uma dose subcutânea única (SQ) na pele flácida no dorso entre os ombros de 5,0 mg/kg (mpk) de AD04446, AD04447, AD04448, AD04449, AD04450, AD04451, AD04454, AD04455, AD04456, AD04457, AD04458, ou AD04459. (Vide as Tabelas 4-7 para os agentes de RNAi de AAT modificados e estruturas de ligante NAG). Os agentes de RNAi de AAT AD04451 e AD04459 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000; os agentes de RNAi de AAT AD04446 e AD04454 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1142; os agentes de RNAi de AAT AD04447 e AD04455 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1211; os agentes de RNAi de AAT AD04448 e AD04456 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1326; os agentes de RNAi de AAT AD04449 e AD04457 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1338; e os agentes de RNAi de AAT AD04450 e AD04458 incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1427. (Vide
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 150/229
138/159 também as Tabelas 1 e 2). Três camundongos foram dosados com cada agente de RNAi de AAT (n = 3).
[0257] Amostras de plasma foram colhidas e analisadas para determinação dos níveis de proteína de AAT (Z-AAT) no dia 1 (pré-dose), dia 8, dia 15, dia 22, dia 29 e dia 36. Os níveis de AAT foram normalizados aos níveis de plasma de AAT do dia 1 (pré-dose). Os níveis de proteína foram medidos quantificando-se os níveis de Z-AAT humano circulantes em plasma por um kit ELISA comercialmente disponível de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de AAT (Z-AAT) normalizados médios para cada agente de RNAi são reportados na Tabela 10 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 151/229
Tabela 10. Proteína ATT normalizada média (normalizada a pré-tratamento) do Exemplo 3
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36
ID de grupo AAT Médio Desvio Padrão (+/-) AAT Médio Desvio Padrão (+/-) AAT Médio Desvio Padrão (+/-) AAT Médio Desvio Padrão (+/-) AAT Médio Desvio Padrão (+/-)
Grupo 1 mg/kg AD04447) (5,0 1,010 0,256 1,050 0,108 1,451 0,137 1,145 0,154 1,117 0,080
Grupo 2 mg/kg AD04448) (5,0 0,884 0,262 0,866 0,276 1,306 0,112 1,147 0,119 1,076 0,172
Grupo 3 mg/kg AD04449) (5,0 0,909 0,060 0,969 0,152 1,290 0,185 1,290 0,201 1,245 0,106
Grupo 4 mg/kg AD04450) (5,0 0,595 0,083 0,799 0,131 1,099 0,256 1,090 0,346 1,229 0,444
Grupo 5 mg/kg AD04451) (5,0 0,282 0,006 0,525 0,020 1,358 0,188 1,767 0,325 1,586 0,297
Grupo 6 mg/kg AD04455) (5,0 0,656 0,126 0,639 0,039 0,741 0,089 0,738 0,235 0,819 0,156
Grupo 7 mg/kg AD04456) (5,0 0,605 0,129 0,469 0,036 0,717 0,105 0,662 0,097 0,875 0,195
Grupo 8 mg/kg AD04457) (5,0 0,501 0,108 0,663 0,091 1,031 0,324 1,176 0,368 1,603 0,597
Grupo 9 (5,0 0,308 0,081 0,174 0,031 0,177 0,010 0,211 0,010 0,345 0,041
139/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 152/229
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36
ID de grupo AAT Médio Desvio Padrão _ AAT Médio Desvio Padrão _ AAT Médio Desvio Padrão _ AAT Médio Desvio Padrão _ AAT Médio Desvio Padrão _
mg/kg AD04458)
Grupo 10 (5,0 mg/kg AD04459) 0,256 0,021 0,134 0,045 0,174 0,084 0,234 0,174 0,315 0,336
Grupo 11 (5,0 mg/kg AD04446) 0,686 0,178 0,739 0,130 0,973 0,263 0,955 0,107 0,885 0,119
Grupo 12 (5,0 mg/kg AD04454) 0,338 0,014 0,361 0,105 0,602 0,252 0,729 0,266 0,970 0,245
140/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 153/229
141/159 [0258] Conforme mostrado a partir dos dados na Tabela 10, acima, enquanto o agente de RNAi de AAT AD04447 mostrou essencialmente nenhuma redução em proteína de AAT, os agentes de RNAi de AAT AD04458 (que incluíam uma sequência de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1427) e AD04459 (que incluía uma sequência de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000) mostrou uma redução substancial em proteína de AAT em todos os pontos de tempo. Por exemplo, AD04458 mostrou nocaute de aproximadamente 69% no dia 8 (0,308); aproximadamente 83% no dia 15 (0,174), e aproximadamente 82% no dia 22 (0,177). Adicionalmente, por exemplo, AD04459 mostrou um nocaute de aproximadamente 74% no dia 8 (0,256), aproximadamente 87% no dia 15 (0,134) e aproximadamente 83% no dia 22 (0,174).
Exemplo 4. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em macacos cinomolgos [0259] Os agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados foram produzidos e combinados em um tampão salino farmaceuticamente aceitável conforme conhecido na técnica para injeção subcutânea (SC). No dia 1, primatas macacos cinomolgos (Macaca fascicularis) (referidos no presente documento como “cynos” ou “macacos”) foram injetados subcutaneamente com 3 mg/kg de AD04824, AD04825, AD04826 ou AD04827 (vide as Tabelas 4 a 7 para os agentes de RNAi de AAT modificados e estruturas de ligante de NAG). Cada um desses agentes de RNAi de AAT incluía uma sequência de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000, e era reativo cruzadamente com cynos. Três macacos em cada grupo foram testados (n=3).
[0260] Amostras de soro de macacos cinomolgos tratado foram coletadas no dia 7 e no dia 1 (pré-dose), e nos dias 8,15, 22 e 29 para monitorar um nocaute. No dia 36 também foi medido para cynos que foram injetados com AD04825 e AD04826. Nos pontos de tempo indicados, amostras de sangue foram colhidas e
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 154/229
142/159 analisadas para AAT de macaco cinomolgo (cAAT). O sangue foi coletado a partir da veia femoral. Níveis de cAAT foram determinados em um Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics) de acordo com as recomendações do fabricante. Níveis de AAT para cada animal em um respectivo ponto de tempo foram divididos pelo nível de pré-tratamento (média do dia -7 e dia 1 (pré-dose)) de expressão em tal animal para determinar a razão da expressão “entre normalizado e pré-dose.” [0261] Os níveis de proteína de AAT (cAAT) de macaco cinomolgo normalizados após o tratamento com cada respectivo agente de RNAi de AAT são reportados na Tabela 11 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 155/229
Tabela 11. Proteína de cAAT normalizada (entre normalizada e pré-tra tamento) do Exemplo 4 em macacos cinomolgos
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36
ID de Grupo cAAT cAAT cAAT cAAT cAAT
Grupo 1, Cyno A (3,0 mg/kg AD04824) 0,62 0,52 0,45 0,52
Grupo 1, Cyno B (3,0 mg/kg AD04824) 0,60 0,36 0,32 0,32
Grupo 1, Cyno C (3,0 mg/kg AD04824) 0,62 0,44 0,41 0,41
Grupo 2, Cyno A (3,0 mg/kg AD04825) 0,58 0,33 0,24 0,24 0,22
Grupo 2, Cyno B (3,0 mg/kg AD04825) 0,58 0,38 0,27 0,25 0,27
Grupo 2, Cyno C (3,0 mg/kg AD04825) 0,79 0,58 0,43 0,43 0,44
Grupo 3, Cyno A (3,0 mg/kg AD04826) 0,75 0,59 0,44 0,42 0,38
Grupo 3, Cyno B (3,0 mg/kg AD04826) 0,66 0,43 0,30 0,26 0,24
Grupo 3, Cyno C (3,0 mg/kg AD04826) 0,62 0,36 0,27 0,25 0,25
Grupo 4, Cyno A (3,0 mg/kg AD04827) 0,57 0,38 0,26 0,26
Grupo 4, Cyno B (3,0 mg/kg AD04827) 0,61 0,37 0,34 0,34
Grupo 4, Cyno C (3,0 mg/kg AD04827) 0,66 0,43 0,41 0,39
143/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 156/229
144/159 [0262] Os níveis de cAAT normalizados médios para cada um dos respectivos grupos de tratamento são mostrados no gráfico de barras da Figura 9. Conforme ilustrado na Tabela 11, acima, e na Figura 9, cada um dos agentes de RNAi de AAT testado mostrou um nocaute substancial de cAAT em macacos cinomolgos em todos os pontos de tempo medidos.
Exemplo 5. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em macacos cinomolgos [0263] Os agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados foram produzidos e combinados em um tampão salino farmaceuticamente aceitável conforme conhecido na técnica para injeção subcutânea (SC). No dia 1, primatas macaco cinomolgo (Macaca fascicularis) foram injetados subcutaneamente com 3 mg/kg de AD04828, AD04831, AD04836 ou AD04837 (vide as Tabelas 4 a 7 para os agentes de RNAi de AAT modificados e estruturas de ligante de NAG). Cada um desses agentes de RNAi de AAT incluía uma sequência de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000, e era reativo cruzadamente com cynos. Três macacos em cada grupo foram testados (n=3) para AD04828 e AD04831, e dois macacos em cada grupo foram testados (n=2) paraAD04836 e AD04837.
[0264] Amostras de soro de cynos tratados foram colhidas no dia -35 e dia 1 (pré-dose), e nos dias 8, 15, 21 e 29 para monitorar um nocaute. Nos pontos de tempo indicados, amostras de sangue foram coletadas e analisadas para cAAT. O sangue foi coletado a partir da veia femoral. Os níveis de cAAT foram determinados em um Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics) de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de cAAT para cada animal em urn respectivo ponto de tempo foram divididos pelo nível de pré-tratamento (média do dia -35 e dia 1 (pré-dose)) de expressão em tal animal para determinar a razão da expressão “entre normalizado e pré-tratamento”.
[0265] Os níveis de proteína de AAT (cAAT) de macaco cinomolgo
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 157/229
145/159 normalizados após o tratamento com cada respectivo agente de RNAi de AAT são reportados na Tabela 12 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 158/229
Tabela 12. Proteína de AAT normalizada (entre normalizada e pré-tratamento) do Exemplo 5 em macacos cinomolgos
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29
ID de Grupo cAAT cAAT cAAT cAAT
Grupo 1, Cyno A (3,0 mg/kg AD04828) 0,60 0,32 0,25 0,23
Grupo 1, Cyno B (3,0 mg/kg AD04828) 0,67 0,59 0,61 0,76
Grupo 1, Cyno C (3,0 mg/kg AD04828) 0,51 0,35 0,29 0,29
Grupo 2, Cyno A (3,0 mg/kg AD04831) 0,68 0,43 0,32 0,28
Grupo 2, Cyno B (3,0 mg/kg AD04831) 0,71 0,49 0,47 0,44
Grupo 2, Cyno C (3,0 mg/kg AD04831) 0,61 0,43 0,34 0,30
Grupo 3, Cyno A (3,0 mg/kg AD04836) 0,61 0,37 0,27 0,23
Grupo 3, Cyno B (3,0 mg/kg AD04836) 0,67 0,43 0,32 0,27
Grupo 4, Cyno A (3,0 mg/kg AD04837) 0,65 0,40 0,28 0,24
Grupo 4, Cyno B (3,0 mg/kg AD04837) 0,55 0,29 0,20 0,17
146/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 159/229
147/159 [0266] Os níveis de cAAT normalizados médios para cada um dos respectivos grupos de tratamento são mostrados no gráfico de barras da Figura 10. Conforme mostrado anteriormente na Tabela 12, bem como no gráfico de barras da Figura 10, cada um dos agentes de RNAi de AAT testados mostrou um nocaute substancial de cAAT em macacos cinomolgos em todos os pontos de tempo medidos.
Exemplo 6. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em camundongo sPiZ [0267] O modelo de camundongo PiZ transgênico (camundongos PiZ) conforme apresentado no Exemplo 3 foi usado para avaliar agentes de RNAi de AAT in vivo. Os agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados foram preparados em um tampão salino farmaceuticamente aceitável e administrado a camundongos PiZ para avaliar um nocaute de expressão de gene de AAT. No dia 1, cada camundongo recebeu uma dose subcutânea única (SQ) na pele flácida do dorso entre os ombros de 2,0 mg/kg (mpk) de AD04824, AD04828, AD04829, AD04830, AD04831, AD04832, AD04833, AD04834, AD04836, AD04837, AD04838, AD04839 ou AD04857. (Vide as Tabelas 4 a 7 para os agentes de RNAi de AAT modificados e estruturas de ligante de NAG). Cada um dos agentes de RNAi de AAT nesse estudo incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000. (Vide também as Tabelas 1 e 2). Três camundongos foram dosados com cada agente de RNAi de AAT (n = 3).
[0268] Amostras de plasma foram colhidas e analisadas para determinação de níveis de proteína de AAT (Z-AAT) nos dias -2, dia 1 (pré-dose), dia 8, dia 15, dia 22, dia 29 e dia 36. Os níveis de AAT foram normalizados aos níveis de plasma de AAT (pré-dose) do dia 1. Os níveis de proteína foram medidos quantificando-se os níveis de Z-AAT humano circulantes em plasma por um kit ELISA comercialmente disponível de acordo com as recomendações do fabricante.
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 160/229
148/159
Os níveis de AAT (Z-AAT) normalizados médios para cada agente de RNAi são reportados na Tabela 13 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 161/229
Tabela 13. Proteína de AAT normalizada média (entre normalizada e pré-tratamento) do Exemplo 6
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36
ID de Grupo AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _
Grupo 1 (2,0 mg/kg AD04824) 0,105 0,036 0,140 0,067 0,204 0,108 0,313 0,104 0,437 0,229
Grupo 2 (2,0 mg/kg AD04828) 0,141 0,055 0,236 0,111 0,304 0,138 0,624 0,289 0,814 0,139
Grupo 3 (2,0 mg/kg AD04829) 0,109 0,072 0,119 0,102 0,140 0,119 0,141 0,116 0,179 0,145
Grupo 4 (2,0 mg/kg AD04830) 0,147 0,095 0,190 0,148 0,307 0,192 0,521 0,424 0,547 0,202
Grupo 5 (2,0 mg/kg AD04831) 0,154 0,104 0,215 0,171 0,449 0,375 0,701 0,519 0,584 0,418
Grupo 6 (2,0 mg/kg AD04832) 0,088 0,032 0,089 0,048 0,090 0,046 0,117 0,071 0,193 0,131
Grupo 7 (2,0 mg/kg AD04833) 0,168 0,029 0,282 0,047 0,448 0,048 0,748 0,223 1,361 0,346
Grupo 8 (2,0 mg/kg AD04834) 0,159 0,037 0,255 0,159 0,470 0,315 0,662 0,346 0,728 0,141
Grupo 9 (2,0 0,108 0,035 0,070 0,024 0,083 0,032 0,090 0,035 0,168 0,078
149/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 162/229
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36
ID de Grupo AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _ AAT médio Desvio Padrão _
mg/kg AD04836)
Grupo 10 (2,0 mg/kg AD04837) 0,157 0,071 0,209 0,104 0,242 0,097 0,417 0,198 0,550 0,193
Grupo 11 (2,0 mg/kg AD04838) 0,106 0,017 0,099 0,022 0,108 0,039 0,158 0,072 0,188 0,050
Grupo 12 (2,0 mg/kg AD04839) 0,096 0,026 0,069 0,019 0,089 0,036 0,120 0,038 0,186 0,083
Grupo 12 (2,0 mg/kg AD04857) 0,272 0,130 0,302 0,145 0,478 0,187 0,815 0,436 1,772 1,412
150/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 163/229
151/159 [0269] Conforme mostrado a partir dos dados na Tabela 13, acima, cada um dos agentes de RNAi de AAT mostrou uma redução substancial em proteína de AAT ao longo pelo menos do dia 29. Por exemplo, no dia 15, cada um dos agentes de RNAi de AAT testado alcançou pelo menos aproximadamente 70% de nocaute de proteína comparada aos níveis de pré-tratamento, com múltiplos grupos alcançando 90% ou um nocaute melhor.
Exemplo 7. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em camundongos PiZ [0270] O modelo de camundongo PiZ transgênico descrito no Exemplo 3 foi usado. Cada camundongo tinha 5 semanas de idade no início do estudo. Os agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados foram preparados em um tampão salino farmaceuticamente aceitável e administrado a camundongos PiZ para avaliar um nocaute de expressão de gene de AAT. Iniciando no dia 1, cada camundongo recebeu uma dose subcutânea (SQ) q2w (isto é, uma injeção a cada duas semanas, para um total de 4 injeções) na pele flácida do dorso entre os ombros de 4,0 mg/kg (mpk) de: (1) veículo salino; (2) AD04837 (vide as Tabelas 4 a 7 para o agente de RNAi de AAT modificado e estruturas de ligante de NAG), que conforme notado previamente incluíam uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000; ou (3) um agente de RNAi NAG-conjugado que incluía uma sequência de nucleotídeo direcionando o gene HBV, a ser usado como um controle negativo. Injeções subcutâneas únicas para o grupo de veículo salino, grupo de agente de RNAi de AAT, e grupo de agente de RNAi de HBV foram realizadas nos dias 1,15, 29 e 43. Sete (7) camundongos foram dosados q2w com o veículo salino (Grupo 1); nove (9) camundongos foram dosados q2w com o agente de RNAi de AAT (Grupo 2); e seis (6) camundongos foram dosados com o agente de RNAi de HBV (Grupo 3). Os camundongos nos três grupos de tratamento foram sacrificados no dia 57 (13 semanas de idade). Além dos grupos de tratamento, sete (7)
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 164/229
152/159 camundongos foram sacrificados na semana 1 no estudo (isto é, 5 semanas de idade) para servir como um controle de linha de base.
[0271] Amostras de plasma foram colhidas e analisadas para níveis de proteína de AAT (Z-AAT) no dia 1 (pré-dose), dia 8, dia 15, dia 22, dia 29 e dia 36 para todos os grupos. Amostras adicionais para o grupo de agente de RNAi de AAT e o grupo de veículo salino foram coletadas no dia 43, dia 50 e dia 57. Níveis de AAT foram normalizados aos níveis de plasma de AAT (pré-dose) do dia 1. Os níveis de proteína foram medidos quantificando-se níveis de Z-AAT humano circulantes em plasma por um kit ELISA comercialmente disponível de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de AAT (Z-AAT) normalizados médios para o veículo salino e cada agente de RNAi são reportados na Tabela 14 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 165/229
Tabela 14. Proteína de AAT normalizada média (entre normalizada e pré-tratamento) do Exemplo 7
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29
ID de Grupo AAT médio Desvio Padrão J±A)____ AAT médio Desvio Padrão J±A)____ AAT médio Desvio Padrão J±A)____ AAT médio Desvio Padrão J±A)_____
Grupo 1 (veículo salino) (n=7) 0,876 0,172 1,264 0,386 1,234 0,457 1,319 0,453
Grupo 2 (AD04837) (n=9) 0,139 0,050 0,146 0,064 0,067 0,029 0,072 0,038
Grupo 3 (HBV agente de RNAi negative control) (n=6) 1,212 0,360 1,019 0,201 1,540 0,155 1,585 0,640
Dia 36 Dia 43 Dia 50 Dia 57
Grupo ID AAT médio Desvio Padrão J±A)____ AAT médio Desvio Padrão J±A)___ AAT médio Desvio Padrão J±A)____ AAT médio Desvio Padrão J±A)_____
Grupo 1 (veículo salino) (n=7) 1,267 0,491 1,441 0,416 1,172 0,340 1,058 0,299
Grupo 2 (AD04837) (n=9) 0,040 0,011 0,051 0,020 0,034 0,007 0,038 0,009
Grupo 3 (HBV agente de RNAi negative control) (n=6) 1,665 0,476 1,943 0,221 1,580 0,491 2,001 0,770
153/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 166/229
154/159 [0272] Conforme mostrado a partir dos dados na Tabela 14, acima, o agente de RNAi de HBV foi realizado com sucesso como um controle negativo mostrando essencialmente nenhuma inibição de AAT. Ademais, o agente de RNAi de AAT NAG-conjugado (AD04837) alcançou um nocaute significativo de expressão comparado à solução salina e controle negativo de agente de RNAi de HBV em todos os pontos de tempo. Na dosagem de q2w, o agente de RNAi de AAT no Exemplo 7 mostrou um nocaute de aproximadamente 96% de proteína de AAT dia 36 (0,040) e manteve um nível similar de nocaute até o dia 57.
[0273] Além de monitorar os níveis de AAT séricos, tecido hepático homogeneizado de camundongos PiZ tratados com agente de RNAi de AAT NAGconjugado (AD04837) foi adicionalmente analisado para determinar se polímeros Z-AAT solúveis (que se espera ser proteína predominantemente monomérica), e polímeros insolúveis de Z-AAT (que se espera ser proteína polimérica) foram efetivamente reduzidos. Um protocolo western blot modificado foi usado para separar as frações Z-AAT solúveis e insolúveis sob condições de não desnaturação conforme previamente descrito e conhecido na técnica (vide, por exemplo, Mueller et al., Molecular Therapy, março de 2012, 20(3): 590-600).
[0274] Um western blot foi preparado para examinar determinados fígados dos camundongos sacrificados. De modo específico, os fígados foram examinados de (i) 6 camundongos de linha de base; (ii) 5 camundongos de agente de RNAi de AAT; e (iii) 4 camundongos de solução salina. (Os géis usados para a análise western blot incluíram 15 poços). As amostras para os animais usados para esse western blot foram aleatoriamente selecionadas a partir de vários grupos. As Figuras 11 e 12 mostram gráficos de barras que refletem os níveis de polímero ZAAT e monômero Z-AAT quantificados a partir da análise western blot.
[0275] Conforme observado a partir do gráfico de barras na Figura 11, que reporta os níveis de proteína monomérica, quando comparados à linha de base cada um dos camundongos dosados com agente de RNAi de AAT mostrou uma
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 167/229
155/159 redução significativa em proteína monomérica de AAT em todos os pontos de tempo, indicando uma inibição significativa do gene. Ademais, conforme mostrado na Figura 12, que reporta os níveis de proteína polimérica, os animais tratados com o veículo salino continuaram a ter um encargo de AAT polimérico aumentado após 8 semanas. De modo oposto, os animais tratados com agente de RNAi de AAT mostraram uma redução em ônus polimérico de aproximadamente 50% ao longo do curso de 8 semanas conforme comparado a camundongos de linha de base (5 semanas de idade), indicando que a administração de agente de RNAi de AAT NAG-conjugado (AD04837) é capaz de evitar e potencialmente reverter a produção de proteína de AAT polimérica.
Exemplo 8. Teste in vivo de agentes de RNAi de AAT NAG-conjugados em camundongos PiZ [0276] O modelo de camundongo PiZ transgênico descrito no Exemplo 3 foi usado para avaliar agentes de RNAi in vivo. Cada camundongo recebeu uma dose subcutânea única (SQ) no dia 1 na pele flácida do dorso entre os ombros de: (1) solução salina; (2) 1,0 mg/kg do agente de RNAi de AAT NAG-conjugado de AD04837 (que inclui uma sequência de fita antissenso de nucleotídeo modificado projetada para alvejar um gene de AAT (SEQ ID NO: 1) na posição 1000); (3) 2,0 mg/kg de AD04837; (4) 4,0 mg/kg de AD04837; ou (5) 8,0 mg/kg de AD04837. Quatro animais foram dosados no grupo 1 (solução salina), e todos os quatro foram sacrificados no dia 43. Quinze (15) animais foram dosados em cada um dos grupos 2, 3, 4 e 5, e 3 animais de cada grupo foram sacrificados no dia 8, dia 15, dia 22, dia 29 e dia 43, respectivamente.
[0277] Amostras de plasma foram colhidas e analisadas para níveis de proteína de AAT (Z-AAT) no dia 1 (pré-dose), dia 8, dia 15, dia 22, dia 29, dia 36 e dia 43 para todos os grupos. Para os camundongos sacrificados, bastões cardíacos foram realizados para isolamento sérico para avaliação de nível de proteína Z-AAT (200 pl de plasma). Os níveis de AAT foram normalizados aos
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 168/229
156/159 níveis de plasma de AAT (pré-dose) do dia 1. Os níveis de proteína foram medidos quantificando-se os níveis de Z-AAT humano circulantes em plasma por um kit ELISA comercialmente disponível de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de AAT (Z-AAT) normalizados médios para o veículo salino e cada grupo de dosagem de agente de RNAi são reportados na Tabela 15 a seguir:
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 169/229
Tabela 15. Proteína de AAT normalizada média (entre normalizada e pré-tratamento) do Exemplo 8.
Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29
ID de Grupo AAT médio Desvio Padrão (+/-) AAT médio Desvio Padrão (+/-) AAT médio Desvio Padrão (+/-) AAT médio Desvio Padrão (+/-)
Grupo 1 (veículo salino) 1,240 0,633 1,037 0,256 0,884 0,229 0,857 0,286
Grupo 2 (1,0 mg/kg AD04837) 0,266 0,100 0,250 0,107 0,259 0,060 0,412 0,191
Grupo 3 (2,0 mg/kg AD04837) 0,170 0,102 0,162 0,132 0,199 0,161 0,511 0,514
Grupo 4 (4,0 mg/kg AD04837) 0,051 0,015 0,038 0,010 0,051 0,021 0,110 0,045
Grupo 5 (8,0 mg/kg AD04837) 0,030 0,011 0,025 0,010 0,040 0,024 0,063 0,030
Dia 36 Dia 43
Grupo 1 (veículo salino) 1,485 0,431 0,932 0,243
Grupo 2 (1,0 mg/kg AD04837) 0,791 0,207 0,560 0,111
Grupo 3 (2,0 mg/kg AD04837) 0,600 0,140 0,595 0,217
Grupo 4 (4,0 mg/kg AD04837) 0,156 0,008 0,148 0,022
Grupo 5 (8,0 mg/kg AD04837) 0,239 0,183 0,202 0,119
157/159
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 170/229
158/159 [0278] Conforme mostrado a partir dos dados na Tabela 15, acima, o agente de RNAi de AAT NAG-conjugado alcançou um nocaute significativo de expressão comparado à solução salina em todos os pontos de tempo medidos em todos os níveis de dosagem testados.
[0279] Além disso, níveis de mRNA de AAT também foram avaliados para os camundongos sacrificados em cada respectivo ponto de tempo. Conforme descrito anteriormente, para Grupos 2 a 5 (isto é, os grupos de agente de RNAi), 3 camundongos foram sacrificados em cada um dos dias 8, 15, 22, 29 e 43; e para o Grupo 1, todos os 4 camundongos foram sacrificados no dia 43. A metade do lobo lateral esquerdo do fígado foi coletada e congelada instantaneamente em nitrogênio líquido para isolamento de RNA.
Tabela 16. Níveis de mRNA de AAT relativos em camundongos PiZ seguindo a administração de uma injeção SQ única de solução salina ou agente de RNAi de AAT
Grupo de tratamento Dia Animais Expressão de mRNA relativa média Variância baixa Variância alta
Grupo 1 (veículo salino) 43 n=4 1,000 0,071 0,076
Grupo 2 (1,0 mg/kg AD04837) 8 n=3 0,412 0,080 0,099
15 n=3 0,419 0,037 0,040
22 n=3 0,483 0,066 0,076
29 n=3 0,696 0,069 0,076
43 n=3 0,813 0,103 0,118
Grupo 3 (2,0 mg/kg AD04837) 8 n=3 0,272 0,101 0,160
15 n=3 0,235 0,039 0,046
22 n=3 0,327 0,099 0,141
29 n=3 0,587 0,155 0,210
43 n=3 0,845 0,123 0,145
Grupo 4 (4,0 mg/kg AD04837) 8 n=3 0,129 0,025 0,031
15 n=3 0,161 0,017 0,020
22 n=3 0,222 0,048 0,061
29 n=3 0,247 0,067 0,093
Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 171/229
159/159
Grupo de tratamento Dia Animais Expressão de mRNA relativa média Variância baixa Variância alta
43 n=3 0,454 0,051 0,057
Grupo 5 (8,0 mg/kg AD04837) 8 n=3 0,078 0,013 0,015
15 n=3 0,055 0,014 0,019
22 n=3 0,077 0,009 0,010
29 n=3 0,116 0,038 0,056
43 n=3 0,332 0,122 0,193
[0280] Conforme mostrado na Tabela 16, acima, níveis de expressão de mRNA de AAT relativos foram significativamente reduzidos em todos os pontos de tempo medidos comparados ao veículo salino. Por exemplo, no dia 15, o Grupo 2 (1,0 mg/kg de agente de RNAi de AAT) mostrou aproximadamente 58% de redução de níveis de mRNA de AAT (0,419); Grupo 3 (2,0 mg/kg de agente de RNAi de AAT) mostrou aproximadamente 67% de redução de níveis de mRNA de AAT (0,327); o Grupo 4 (4,0 mg/kg de agente de RNAi de AAT) mostrou aproximadamente 84% de redução de níveis de mRNA de AAT (0,161); e o Grupo 5 (8,0 mg/kg de agente de RNAi de AAT) mostrou aproximadamente 94% de redução de níveis de mRNA de ZAAT (0,055) mediante uma dose de SQ única no dia 1.
Outras modalidades [0281 ] Deve-se compreender que embora a invenção tenha sido descrita em conjunto com a descrição detalhada, a descrição anterior é destinada a ilustrar e não limitar o escopo da invenção, que é definida pelo escopo das reivindicações anexas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão dentro do escopo das reivindicações a seguir.

Claims (65)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Agente de RNAi para inibir a expressão de um gene de antitripsina alfa-1 (AAT), CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende uma fita senso e uma fita antissenso, em que a fita antissenso compreende nucleotídeos 2-18 de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
  2. 2. Agente de RNAi para inibir a expressão de um gene de antitripsina alfa-1 (AAT), CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende uma fita senso e uma fita antissenso, em que a fita senso compreende nucleotídeos 2-18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5, e em que a fita antissenso é pelo menos substancialmente complementar à fita senso.
  3. 3. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4.
  4. 4. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2, Tabela 3 ou Tabela 5.
  5. 5. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 4, e a fita antissenso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 5.
  6. 6. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende pelo menos um nucleotídeo modificado.
  7. 7. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que o pelo menos um nucleotídeo modificado é selecionado a partir do grupo
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 173/229
    2/11 que consiste em: nucleotídeo 2'-O-metil, nucleotídeo 2'-Fluoro, nucleotídeo 2'-deoxi, imitação de nucleotídeo 2',3'-seco, nucleotídeo travado, nucleotídeo 2'-F-Arabino, nucleotídeo 2'-metoxietil, nucleotídeo abásico, ribitol, nucleotídeo invertido, nucleotídeo abásico invertido, nucleotídeo 2'-OMe invertido, nucleotídeo 2'-deoxi invertido, nucleotídeo 2'-amino-modificado, nucleotídeo 2'-alquil-modificado, nucleotídeo morfolino, desoxirribonucleotídeo de fosfonato de vinila e nucleotídeo 3'-OMe.
  8. 8. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende pelo menos uma ligação de internucleosídeo de fosforotioato.
  9. 9. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende pelo menos uma ligação de internucleosídeo de fosforotioato.
  10. 10. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso contém uma, duas, três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato.
  11. 11. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso e da fita antissenso são nucleotídeos modificados.
  12. 12. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso não tem mais de 30 nucleotídeos de comprimento, e a fita antissenso não tem mais de 30 nucleotídeos de comprimento.
  13. 13. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso não tem mais de 24 nucleotídeos de comprimento, e a fita antissenso não tem mais de 24 nucleotídeos de comprimento.
  14. 14. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso e a fita antissenso têm, cada uma,
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 174/229
    3/11 entre 18 e 24 nucleotídeos de comprimento.
  15. 15. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso e a fita antissenso têm, cada uma, 21 nucleotídeos de comprimento.
  16. 16. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem duas extremidades cegas.
  17. 17. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende pelo menos um nucleotídeo modificado e compreende, ainda, um ou mais grupos de direcionamento ou grupos de ligação.
  18. 18. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende pelo menos um nucleotídeo modificado e compreende, ainda, um ou mais grupos de direcionamento ou grupos de ligação, e em que os grupos de direcionamento ou grupos de ligação têm a estrutura de qualquer uma das estruturas representadas na Tabela 7.
  19. 19. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que um ou mais grupos de direcionamento ou grupos de ligação são conjugados à fita senso.
  20. 20. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende um grupo de direcionamento que inclui um ligante de receptor de asialoglicoproteína.
  21. 21. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o ligante de receptor de asialoglicoproteína compreende N-acetilgalactosamina.
  22. 22. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o ligante de receptor de asialoglicoproteína compreende um trímero de N-acetil-galactosamina.
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 175/229
    4/11
  23. 23. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende pelo menos um nucleotídeo modificado e compreende, ainda, um ou mais grupos de direcionamento, em que o grupo de direcionamento tem uma estrutura selecionada a partir do grupo que consiste em: (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s.
  24. 24. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi compreende um grupo de direcionamento que é conjugado à extremidade terminal 5’ da fita senso.
  25. 25. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi composto por uma fita senso e fita antissenso formando um duplex tendo uma estrutura de qualquer um dos duplexes na Tabela 6.
  26. 26. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem a estrutura de duplex selecionada a partir do grupo que consiste em: AD04824, AD04825, AD04826, AD04827, AD04828, AD04829, AD04830, AD04831, AD04832, AD04833, AD04834, AD04835, AD04836 e AD04837.
    2.1. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5'3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita antissenso são nucleotídeos modificados, e em que a fita senso compreende a sequência (5'3')
    AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 866), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso são nucleotídeos modificados.
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 176/229
    5/11
  27. 28. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5'3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita antissenso são nucleotídeos modificados, e em que a fita senso compreende a sequência (5'3')
    CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 857), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso são nucleotídeos modificados.
  28. 29. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5'3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos da fita antissenso são nucleotídeos modificados, e em que a fita senso compreende a sequência (5'3')
    GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO: 885), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso são nucleotídeos modificados.
  29. 30. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5'3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita antissenso são nucleotídeos modificados, e em que a fita senso compreende a sequência (5'3')
    CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO: 864), em que todosou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso são nucleotídeos modificados.
  30. 31. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5'3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO: 801), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 801 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
  31. 32. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 177/229
    6/11 pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência de nucleotídeo (5' 3') usGfsuUfaAfacaugCfcUfaAfaCfgCfsu (SEQ ID NO: 960), em que a, c, g e u são 2'-Ometil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato.
  32. 33. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende a sequência (5' 3') agcguuuaGfGfCfauguuuaaca (SEQ ID NO: 1279), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso se encontram um ou dois resíduos de desoxirribose abásica invertida (invAb) e/ou uma, duas, três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato; e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui Nacetil-galactosamina.
  33. 34. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem a estrutura de duplex de AD04837 (SEQ ID PAIR NOs: 960/1033).
  34. 35. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5' 3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO: 794), em que todos ou substancialmente todos os nucleotideos são nucleotideos modificados, e em que SEQ ID NO: 794 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
  35. 36. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 35, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso do agente de RNAi compreende a sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgusu (SEQ ID NO: 913), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 178/229
    7/11 são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato.
  36. 37. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende a sequência (5' 3') cguuuaGfGfCfauguuuaacausu (SEQ ID NO: 1276), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso se encontram um ou dois resíduos de desoxirribose abásica invertida (invAb) e/ou uma, duas, três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato; e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui Nacetil-galactosamina.
  37. 38. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem a estrutura de duplex de AD04828 (SEQ ID PAIR NOs: 913/1028).
  38. 39. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5' 3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO: 839), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 839 fica localizado nas posições 1 a 22 (5' 3') da fita antissenso.
  39. 40. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 39, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso do agente de RNAi compreende a sequência (5' 3') usGfsusUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgcusu (SEQ ID NO: 958), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato.
  40. 41. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 179/229
    8/11 pelo fato de que a fita senso compreende a sequência (5' 3') gcguuuaGfGfCfauguuuaacausu (SEQ ID NO: 1277), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso se encontram um ou dois resíduos de desoxirribose abásica invertida (invAb) e/ou uma, duas, três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato; e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui Nacetil-galactosamina.
  41. 42. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem a estrutura de duplex de AD04831 (SEQ ID PAIR NOs: 958/1030).
  42. 43. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência (5' 3')
    UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO: 800), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que SEQ ID NO: 800 fica localizado nas posições 1 a 21 (5' 3') da fita antissenso.
  43. 44. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 43, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita antissenso do agente de RNAi compreende a sequência (5' 3') usGfsuUfaAfaCfaUfgCfcUfaAfaCfgsCfsg (SEQ ID NO: 959), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; e s é uma ligação de fosforotioato.
  44. 45. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADO pelo fato de que a fita senso compreende a sequência (5' 3') cgcguuuaGfGfCfauguuuaaca (SEQ ID NO: 1278), em que a, c, g e u são 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf e Uf são 2'-fluoro
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 180/229
    9/11 adenosina, citidina, guanosina ou uridina, respectivamente; s é uma ligação de fosforotioato; em que opcionalmente presente na fita senso se encontram um ou dois resíduos de desoxirribose abásica invertida (invAb) e/ou uma, duas, três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato; e em que opcionalmente ligado à extremidade 5' terminal da fita senso é um ligante de direcionamento que inclui Nacetil-galactosamina.
  45. 46. Agente de RNAi, de acordo com a reivindicação 45, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi tem a estrutura de duplex de AD04836 (SEQ ID PAIR NOs: 959/1024).
  46. 47. Composição, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende o agente de RNAi conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 46, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
  47. 48. Composição, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende, ainda, um ou mais terapêuticos ou tratamentos adicionais.
  48. 49. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 48, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição é embalada em um kit, recipiente, embalagem, dispensador, seringas pré-carregadas ou frascos.
  49. 50. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição é formulada para administração por injeção subcutânea.
  50. 51. Composição, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADA pelo fato de que a composição inclui um ou mais duplexes tendo a estrutura selecionada a partir do grupo que consiste em: AD04824, AD04825, AD04826, AD04827, AD04828, AD04829, AD04830, AD04831, AD04832, AD04833, AD04834, AD04835, AD04836 e AD04837.
  51. 52. Método para inibir a expressão de um gene de AAT em uma célula, CARACTERIZADO pelo fato de que o método compreende administrar uma
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 181/229
    10/11 quantidade eficaz de um agente de RNAi conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 46.
  52. 53. Método para inibir a expressão de um gene de AAT em um indivíduo, CARACTERIZADO pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente de RNAi conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 46 ou uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 47 a 51.
  53. 54. Método para o tratamento de deficiência de antitripsina alfa-1 (AATD), CARACTERIZADO pelo fato de que o método compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 46 ou uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 47 a 51.
  54. 55. Método para o tratamento de uma afecção ou doença causada por deficiência de antitripsina alfa-1 (AATD), CARACTERIZADO pelo fato de que o método compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 46 ou uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 47 a 51.
  55. 56. Método, de acordo com a reivindicação 55, CARACTERIZADO pelo fato de que a afecção ou doença causada por AAT é uma doença hepática.
  56. 57. Método, de acordo com a reivindicação 56, CARACTERIZADO pelo fato de que a doença hepática é hepatite crônica, cirrose, carcinoma hepatocelular, transaminite, colestase, fibrose ou insuficiência hepática fulminante.
  57. 58. Método para diminuir ou reduzir o nível de proteína de AAT insolúvel em um indivíduo comparado a níveis de pré-tratamento de linha de base, CARACTERIZADO pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente de RNAi conforme definido em qualquer uma
    Petição 870190064777, de 10/07/2019, pág. 182/229
    11/11 das reivindicações 1 a 46 ou uma composição conforme definida em qualquer uma das reivindicações 47 a 51.
  58. 59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 58, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de RNAi é administrado ao indivíduo subcutaneamente.
  59. 60. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 59, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende, ainda, medir os níveis séricos de proteína de AAT (solúveis e/ou insolúveis) ou níveis de mRNA de AAT no indivíduo.
  60. 61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 60, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis séricos de proteína de AAT (solúveis e/ou insolúveis) e/ou os níveis de mRNA de AAT no indivíduo são diminuídas.
  61. 62. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, CARACTERIZADO pelo fato de que serve para uso em um método para tratamento de um indivíduo.
  62. 63. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, CARACTERIZADO pelo fato de que serve para uso em um método para tratamento de um indivíduo tendo AATD.
  63. 64. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 51, CARACTERIZADA pelo fato de serve para uso em um método para tratamento de um indivíduo.
  64. 65. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 51, CARACTERIZADA pelo fato de serve para uso em um indivíduo tendo AATD.
  65. 66. Agente de RNAi, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, CARACTERIZADO pelo fato de serve para uso na inibição de expressão de mRNA de AAT em uma célula.
BR112019014282-7A 2017-01-10 2018-01-10 Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso BR112019014282A2 (pt)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762444452P 2017-01-10 2017-01-10
US62/444,452 2017-01-10
US201762486720P 2017-04-18 2017-04-18
US62/486,720 2017-04-18
US201762596232P 2017-12-08 2017-12-08
US62/596,232 2017-12-08
PCT/US2018/013102 WO2018132432A1 (en) 2017-01-10 2018-01-10 Alpha-1 antitrypsin (aat) rnai agents, compositions including aat rnai agents, and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BR112019014282A2 true BR112019014282A2 (pt) 2020-03-03

Family

ID=62782328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112019014282-7A BR112019014282A2 (pt) 2017-01-10 2018-01-10 Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso

Country Status (15)

Country Link
US (3) US10450565B2 (pt)
EP (1) EP3568482A4 (pt)
JP (2) JP7258773B2 (pt)
KR (1) KR20190098748A (pt)
CN (1) CN110268060A (pt)
AU (1) AU2018208505B2 (pt)
BR (1) BR112019014282A2 (pt)
CA (1) CA3045045A1 (pt)
IL (2) IL310548A (pt)
JO (1) JOP20180003B1 (pt)
MX (1) MX2019008252A (pt)
TW (1) TWI826365B (pt)
UY (1) UY37565A (pt)
WO (1) WO2018132432A1 (pt)
ZA (2) ZA201903348B (pt)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012178033A2 (en) * 2011-06-23 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment
BR112015029139B1 (pt) 2013-05-22 2022-07-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Agente de rnai de fita dupla para inibição da expressão de serpina1 em uma célula, seus usos, bem como composição farmacêutica e método in vitro de inibição da expressão de serpina1 em uma célula
TWI727009B (zh) * 2016-03-07 2021-05-11 美商愛羅海德製藥公司 治療性化合物之標靶性配體
CA3023764A1 (en) * 2016-06-06 2017-12-14 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. 5'-cyclo-phosphonate modified nucleotides
UY37145A (es) * 2016-09-02 2019-08-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Ligandos de direccionamiento
TWI788312B (zh) 2016-11-23 2023-01-01 美商阿尼拉製藥公司 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
KR20190098748A (ko) * 2017-01-10 2019-08-22 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 알파-1 항트립신 (AAT) RNAi 작용제, AAT RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 사용 방법
CN110520531A (zh) 2017-04-05 2019-11-29 赛伦斯治疗有限责任公司 产品和组合物
CN108931653A (zh) * 2018-08-31 2018-12-04 广州华澳生物科技有限公司 一种α1- 抗胰蛋白酶免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN113164509A (zh) * 2018-09-19 2021-07-23 箭头药业股份有限公司 用于抑制17β-HSD 13型(HSD17B13)表达的RNAi试剂、其组合物和使用方法
JP2023501020A (ja) * 2018-12-28 2023-01-18 サーナオミクス インコーポレイテッド 治療用分子の標的化送達
CN114222820A (zh) * 2019-06-06 2022-03-22 箭头药业股份有限公司 用于治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)的方法
JPWO2021153687A1 (pt) * 2020-01-30 2021-08-05
JP2023541170A (ja) 2020-09-15 2023-09-28 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｚ－ａａｔタンパク質のレベルを低下させる方法
AU2022215065A1 (en) * 2021-01-30 2023-07-27 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
WO2022162161A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
WO2024062413A1 (en) * 2022-09-21 2024-03-28 Janssen Biotech, Inc. Novel stabilized nucleoside phosphates and analogues thereof

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
AU598946B2 (en) 1987-06-24 1990-07-05 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
WO1991006556A1 (en) 1989-10-24 1991-05-16 Gilead Sciences, Inc. 2' modified oligonucleotides
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5212295A (en) 1990-01-11 1993-05-18 Isis Pharmaceuticals Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
AU2916292A (en) 1991-10-24 1993-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
WO1997044348A1 (en) 1996-05-17 1997-11-27 Thomas Jefferson University Ribozyme-mediated gene replacement
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
DE69829760T3 (de) 1997-09-12 2016-04-14 Exiqon A/S Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga
FR2774379B1 (fr) 1998-01-30 2002-03-29 Groupe Limagrain Holding Procede de production, par des cellules vegetales, d'alpha 1-antitrypsine et de ses variantes, et produits contenant l'alpha-antitrypsine ainsi obtenue
US6271358B1 (en) 1998-07-27 2001-08-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. RNA targeted 2′-modified oligonucleotides that are conformationally preorganized
CN1273478C (zh) 1999-02-12 2006-09-06 三共株式会社 新型核苷及低聚核苷酸类似物
AU767195B2 (en) 1999-03-10 2003-11-06 Phogen Limited Delivery of substances to cells
PT1309726E (pt) 2000-03-30 2010-03-08 Whitehead Biomedical Inst Mediadores de interferência por rna específicos de sequência de rna
DK2813582T3 (en) 2000-12-01 2017-07-31 Max-Planck-Gesellschaft Zur Förderung Der Wss E V Small RNA molecules that mediate RNA interference
US20050137153A1 (en) * 2002-02-20 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of alpha-1 antitrypsin (AAT) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003207708A1 (en) 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of map kinase genes
EP2305813A3 (en) 2002-11-14 2012-03-28 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
EP2141234B1 (en) 2003-03-21 2016-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Short Interfering RNA (siRNA) Analogues
WO2005070948A1 (en) 2004-01-23 2005-08-04 Intronn, Inc. Correction of alpha-1-antitrypsin genetic defects using spliceosome mediated rna trans splicing
JP5243789B2 (ja) 2004-03-15 2013-07-24 シティ・オブ・ホープ 二本鎖ｒｎａによる遺伝子発現の特異的阻害のための方法及び組成物
US8765700B2 (en) 2004-10-20 2014-07-01 Antisense Therapeutics Ltd. Topical administrations of antisense compounds to VLA-4 for the treatment of respiratory conditions
US9150882B2 (en) 2006-01-31 2015-10-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Self-complementary parvoviral vectors, and methods for making and using the same
CN102614528B (zh) 2006-08-18 2014-02-26 箭头研究公司 用于体内递送多核苷酸的多缀合物
US20100048680A1 (en) 2007-01-11 2010-02-25 University Of Florida Research Foundation Inc. Alpha-1-Antitrypsin Variants and Uses Thereof
CA2687850C (en) 2007-05-22 2017-11-21 Mdrna, Inc. Oligomers for therapeutics
EP4074344A1 (en) 2007-12-04 2022-10-19 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
MX2010010303A (es) 2008-03-20 2010-10-20 Quark Pharmaceuticals Inc Nuevos compuestos de acido ribonucleico de pequeña interferencia para inhibir rtp801.
US8513207B2 (en) 2008-12-18 2013-08-20 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Extended dicer substrate agents and methods for the specific inhibition of gene expression
US20100249214A1 (en) 2009-02-11 2010-09-30 Dicerna Pharmaceuticals Multiplex dicer substrate rna interference molecules having joining sequences
SG183374A1 (en) 2010-02-24 2012-09-27 Arrowhead Res Corp Compositions for targeted delivery of sirna
US20120108799A1 (en) 2010-09-07 2012-05-03 Integrated Dna Technologies, Inc. Modifications for Antisense Compounds
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
KR20130108655A (ko) 2010-12-29 2013-10-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 핵산의 세포내 전달을 위한 소분자 접합체
WO2012178033A2 (en) * 2011-06-23 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment
CN104024328A (zh) 2011-08-26 2014-09-03 箭头研究公司 用于体内核酸递送的聚(乙烯基酯)聚合物
WO2013142514A1 (en) 2012-03-19 2013-09-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression
KR20150001710A (ko) 2012-04-18 2015-01-06 애로우헤드 리서치 코오포레이션 Ｉｎ Ｖｉｖｏ 핵산 전달용 폴리(아크릴레이트) 고분자
BR112015029139B1 (pt) 2013-05-22 2022-07-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc Agente de rnai de fita dupla para inibição da expressão de serpina1 em uma célula, seus usos, bem como composição farmacêutica e método in vitro de inibição da expressão de serpina1 em uma célula
WO2014197524A2 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Serpin Pharma, Llc Peptide therapy for treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency and associated pathologies
DK3444350T3 (da) 2013-07-03 2022-02-07 Dicerna Pharmaceuticals Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til specifik hæmning af alpha-1 antitrypsin ved dobbeltstrenget rna
WO2015188197A2 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Solstice Biologics, Ltd. Polynucleotide constructs having bioreversible and non-bioreversible groups
TW201620526A (zh) 2014-06-17 2016-06-16 愛羅海德研究公司 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法
US10130651B2 (en) * 2015-08-07 2018-11-20 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi Therapy for Hepatitis B Virus Infection
WO2017139616A1 (en) 2016-02-10 2017-08-17 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Methods of treatment for alpha-1 antitrypsin deficiency
TWI727009B (zh) 2016-03-07 2021-05-11 美商愛羅海德製藥公司 治療性化合物之標靶性配體
EP3469083A1 (en) 2016-06-10 2019-04-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COMPLEMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH)
UY37145A (es) 2016-09-02 2019-08-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Ligandos de direccionamiento
TWI788312B (zh) 2016-11-23 2023-01-01 美商阿尼拉製藥公司 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
KR20190098748A (ko) 2017-01-10 2019-08-22 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 알파-1 항트립신 (AAT) RNAi 작용제, AAT RNAi 작용제를 포함하는 조성물, 및 사용 방법
SE540888C2 (en) 2017-06-19 2018-12-11 Hepgene Medical Ab Novel nucleic acid molecules and their use in therapy
CN114222820A (zh) 2019-06-06 2022-03-22 箭头药业股份有限公司 用于治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)的方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018132432A1 (en) 2018-07-19
IL267959A (en) 2019-09-26
UY37565A (es) 2018-07-31
JP2023076634A (ja) 2023-06-01
CN110268060A (zh) 2019-09-20
US11884920B2 (en) 2024-01-30
TWI826365B (zh) 2023-12-21
WO2018132432A8 (en) 2019-07-04
US20220170015A1 (en) 2022-06-02
JOP20180003B1 (ar) 2022-09-15
JOP20180003A1 (ar) 2019-01-30
CA3045045A1 (en) 2018-07-19
AU2018208505A1 (en) 2019-06-20
JP7258773B2 (ja) 2023-04-17
MX2019008252A (es) 2019-09-06
AU2018208505B2 (en) 2024-03-07
IL310548A (en) 2024-03-01
TW201831686A (zh) 2018-09-01
ZA201903348B (en) 2020-09-30
KR20190098748A (ko) 2019-08-22
US11203756B2 (en) 2021-12-21
JP2020503070A (ja) 2020-01-30
EP3568482A4 (en) 2020-12-16
US10450565B2 (en) 2019-10-22
EP3568482A1 (en) 2019-11-20
ZA202002652B (en) 2022-12-21
IL267959B1 (en) 2024-03-01
US20200208149A1 (en) 2020-07-02
US20180195069A1 (en) 2018-07-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11884920B2 (en) Alpha-1 antitrypsin (AAT) RNAi agents, compositions including AAT RNAi agents, and methods of use
TWI811238B (zh) 用於抑制脂蛋白元C-III(APOC3)表現之RNAi試劑及組合物
TWI823866B (zh) 用於抑制類血管生成素蛋白-3(ANGPTL3)表現的RNAi藥劑及組合物及使用方法
JP2023036613A (ja) 第ｘｉｉ因子遺伝子発現を阻害するための組成物および方法
BR112021005137A2 (pt) agentes rnai para inibir a expressão de 17beta-hsd tipo 13 (hsd17b13), suas composições e métodos de uso
CA2979703A1 (en) Compositions and methods for inhibiting gene expression of factor xii
US20210301294A1 (en) RNAi Agents For Inhibiting Expression Of PNPLA3, Pharmaceutical Compositions Thereof, And Methods Of Use
TW201918555A (zh) 用於抑制去唾液酸醣蛋白受體1表現之RNAi試劑及組合物
JP7473472B2 (ja) アシアロ糖タンパク質受容体１の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤および組成物
EA044871B1 (ru) СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи АЛЬФА-1-АНТИТРИПСИНА (AAT), КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ СРЕДСТВА ДЛЯ РНКи AAT, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
JP2024516096A (ja) 終末糖化産物受容体の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤、その組成物、及び使用方法
OA19513A (en) RNAI agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein C-lll (APOC3).

Legal Events

Date Code Title Description
B350 Update of information on the portal [chapter 15.35 patent gazette]