JP2020503070A - α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ＲＮＡｉ剤、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及び使用方法。 - Google Patents

α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）ＲＮＡｉ剤、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及び使用方法。 Download PDF

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Abstract

α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びそれらの使用方法が記載される。インビボで生存細胞にＲｎＡｉ剤を送達できる１つ以上の賦形剤と共に、１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物がまた開示される、インビボで生存細胞へのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の送達は、ＡＡＴ遺伝子発現を阻害し、そしてＡＡＴ欠乏に関連する疾患、例えば慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、経扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症、及び劇症肝不全を治療する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１月１０日に出願された米国仮特許出願第６２ / ４４４，４５２号、２０１７年４月１８日に出願された米国仮特許出願第６２ / ４８６，７２０号、及び２０１７年１２月８日に出願された米国仮特許出願第６２ / ５９６，２３２号からの優先権を主張し、それぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
α−１アンチトリプシン遺伝子発現の阻害のためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、α−１アンチトリプシンＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びそれらの使用方法が本明細書に開示される。
α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ、α１−アンチトリプシン、又はＡ１ＡＴ）欠乏症は、ＡＡＴタンパク質の誤った折り畳み及び肺及び肝疾患をもたらす誤って折り畳まれたタンパク質の不十分な分泌を引起す遺伝性の常染色体共優性遺伝性疾患である。ＡＡＴ欠乏症（ＡＡＴＤ）は、１，５００〜３，５００人の人に約１人の頻度で発生し、そしてほとんどの場合、ヨーロッパ人の祖先を有する人に発症する。
α−１アンチトリプシンは、セルピンスーパーファミリーに属するプロテアーゼ阻害剤である。正常なＡＡＴタンパク質は、主として幹細胞により肝臓で合成され、そして血液中に分泌される循環糖タンパク質プロテアーゼ阻害剤である。ＡＡＴの既知の生理学的機能は、炎症の期間中、非特異的損傷から宿主組織を保護するのに役立つ好中球プロテアーゼを阻害することである。
ＡＡＴＤの最も臨床的に重要な形、小児及び成人の肝疾患に関連する遺伝的疾患及び成人の肺疾患が、Ｚ突然変異により引起される。Ｚ突然変異対立遺伝子（ＰｉＺ）は、単一点突然変異を介して、突然変異Ｚ形ＡＡＴタンパク質（「Ｚ−ＡＡＴタンパク質」）を、細胞内保持を引起す異常折り畳みを起こしやすくする。突然変異Ｚ−ＡＡＴタンパク質モノマーを、「小球」として時々呼ばれる凝集体になるポリマー鎖を形成することができる。誤って折り畳まれたＺ−ＡＡＴタンパク質は、分泌経路を通過するのには無効であり、代わりに、肝細胞の小胞体（ＥＲ）内で重合し、そして蓄積する。ポリマー小球塊は、ＥＲにストレスを与え、そして連続的な肝細胞損傷を引起し、線維症、肝硬変及び肝細胞癌の高められた危険性をもたらす。さらに、循環する抗プロテアーゼ活性の不在が、好中球エラスターゼによる肺の損傷を受けやすくし、結果的に、気腫などの呼吸器合併症の発症をもたらす。
ホモ接合型ＰｉＺＺ遺伝子型を有する個体は、肺疾患をもたらす機能的ＡＡＴの重度の欠乏を有する。精製されたヒトＡＡＴを用いるＡＡＴ増強療法の毎週の使用は、ＡＡＴＤを有する対象においてほぼ正常なＡＡＴの血漿レベルをもたらし、そして罹患個体における肺損傷の予防を助ける。しかしながら、精製されたＡＡＴの投与は内因的に分泌されたＡＡＴの不在により引起される肺損傷を改善するか又はその防止を助けることができるが、ＡＡＴＤ患者は、過剰に異常に折り畳まれたＡＡＴタンパク質の沈着及び蓄積により引起される小胞体肝貯蔵疾患に対して弱いままである。肝細胞における小球コンフォメーションにおける蓄積されたＺ−ＡＡＴタンパク質は、ＡＡＴＤ肝疾患の良く知られた特徴であり、そしてＡＡＴＤを有する個体において、肝細胞損傷及び死及び慢性肝損傷を含む肝損傷の誘発を担当するタンパク質毒性効果を導くと思われる（例えば、D. Lindblad et al., Hepatology 2007, 46: 1228-1235を参照のこと）。ＡＡＴＤ患者はしばしば、肝疾患を発症し、これは乳児でも重症又は致命的に成ることがある。肝臓の損傷の臨床的症状は、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症、さらには劇症肝不全を含む。
ＡＡＴＤによる肝疾患の発症を予防するか、又はその進行を遅延するための臨床的に承認された治療法は現在ない。さらに、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４２７号は、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害できる特定のＲＮＡｉ剤を開示しているが、ＡＡＴ遺伝子の発現を、選択的に、効率的に、そして安全に阻害でき、それにより、Ｚ−ＡＡＴ蓄積関連の肝障害及び線維症を予防し、そして潜在的に逆転させる、改良された効力を有する新規で且つ効果的なＡＡＴ ＲＮＡｉ剤付いての必要性が依然として存在する。同様に、Ｂｒｏｗｎらによる米国特許出願公開第２０１５／００１１６０７号（Ｂｒｏｗｎ ‘６０７）は、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するための種々の配列を開示しており、Ｂｒｏｗｎは、Ｂｒｏｗｎによれば、１９〜２３マーのｓｉＲＮＡ遺伝子に比較して、「効力及び作用期間に関して予想外の効果的結果」をもたらすことが見出されている、より長い二本鎖コンストラクト（ＤｓｉＲＮＡとしてＢｒｏｗｎでは呼ばれる）の使用を教示している（例えば、Ｂｒｏｗｎの‘６０７ 段落［０３７６］を参照のこと）。さらに、Ｂｒｏｗｎ ‘６０７に開示される配列の多くは、本発明に開示される配列に比較して、ＡＡＴ ｍＲＮＡの異なる位置を標的とするよう企画されているＤｓｉＲＮＡコンストラクトにおいて使用されるよう企画されている。そのような差異は、ＡＡＴ ｍＲＮＡに対する異なる結合親和性をもたらし、そして化合物の阻害効果に影響を及ぼすが、一方ではまた、さらなるオフターゲット問題を潜在的にもたらす異なる切断部位を生成する（例えば、図１（ｓｉＲＮＡ介在遺伝子サイレンシングのメカニズムを説明する）のPiotr J. Kamola et al., PLoS Comput Biol, 2015, 11(12):e1004656を参照のこと）。例えば、Ｂｒｏｗｎ‘６０７には、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基又はヌクレオチドがＡＡＴ遺伝子（配列番号１）上の位置１０００から１９ヌクレオチド下流にある位置（３’末端に向かって）と整列されるであろうＲＮＡｉ剤（任意の長さの）の企画を教示も示唆もしていない。別の言い方をすれば、１つのそのような潜在的なＡＡＴ ＲＮＡｉ剤配列を含む例として、Ｂｒｏｗｎ‘６０７には、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基がＡＡＴ遺伝子（配列番号１）上の位置１０１８に対応するＲＮＡｉ剤の企画を教示も示唆もしていない。さらに、Ｂｒｏｗｎ‘６０７には、本明細書に開示される修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤コンストラクトを教示も又は示唆もしていない。
ＡＡＴ遺伝子の発現を選択的且つ効率的に阻害できる新規のＡＡＴ特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書においては、ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー又はトリガーとも呼ばれる）の必要性がある。さらに、ＡＡＴ欠乏症に関連する疾患の治療のための新規ＡＡＴ特異的ＲＮＡｉ剤の組成物の必要性がある。
ＡＡＴＤに起因する肝障害は機能獲得メカニズムを通して生じるので、ＡＡＴ遺伝子発現の阻害は肝臓におけるＺ−ＡＡＴタンパク質の蓄積の防止に有用である。さらに、Ｚ−ＡＡＴポリマー凝集体の減少又は除去は、肝細胞におけるＥＲストレスを減少させ、そして肝細胞損傷の発生の可能性の低減、及び肝細胞損傷及び慢性肝損傷、例えば線維症、肝硬変、肝細胞癌、及びＡＡＴＤにより引起される他の状態及び疾患の治療の支援において、さらなる利点を提供する。ＡＡＴＤ患者の進行性肝疾患の原因として明確に定義されている炎症性Ｚ−ＡＡＴタンパク質の減少は、肝疾患の進行を遅らせたり、又は停止させたり、そして線維性組織の修復を可能にするので、重要である。
一般的に、本開示は、新規のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を用いてインビボで及び／又はインビトロで、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法を特徴とする。さらに、本明細書に記載されるものは、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を用いての関連疾患の治療方法である。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び方法は、ＡＡＴＤにより引起される状態及び疾患、例えば慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、及び劇症肝不全の治療を含む、ＡＡＴＤの治療を提供することができる。本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、対象に投与される場合、Ｚ−ＡＡＴ蓄積関連の肝損傷及び線維症を予防及び／又は逆転させることができる。本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、当業界において知られている任意の適切な方法、例えば皮下注射又は静脈内投与により、対象、例えばヒト又は動物対象に投与され得る。
１つの側面によれば、本開示は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む、α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤を特徴とする。α−１アンチトリプシン遺伝子の発現を阻害できるＲＮＡｉ剤（ここで、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む）、及び少なくとも１つの医薬的に許容できる賦形剤を含む組成物もまた、本明細書に記載されている。
本明細書に記載される各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖及びアンチセンス鎖は、お互い部分的に、実質的に、又は完全に相補的であり得る。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の長さは、それぞれ、１６〜３０ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、１７〜２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立して、２１〜２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立して、２１〜２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖は独立して、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチドの長さである。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さでも、異なる長さでも良い。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴを発現する細胞への送達に基いて、１つ以上のＡＡＴ遺伝子の発現を、インビボで又はインビトロで阻害する。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）、及びアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）を含む。本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＡＡＴ ｍＲＮＡ中の配列に対して少なくとも１６連続ヌクレオチドのコアストレッチに対して少なくとも８５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＴＴ ｍＲＮＡ中の配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３ヌクレオチドの長さである。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＡＴ ｍＲＮＡ及びその対応するセンス鎖中の配列に対して少なくとも１６連続ヌクレオチドのコアストレッチにわたって少なくとも８５％の相補性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ｍＲＮＡ又はその対応するセンス鎖中の配列に対して少なくとも８５％の相補性を有するアンチセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３ヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表１に開示される配列のいずれかの配列を有するＡＡＴ遺伝子の一部を標的とする。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に使用され得るＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びアンチセンス鎖の例は、表２、３、４及び５に提供される。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む二重鎖の例は、表６に提供される。本明細書に開示される特定のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖から成るか、又はそれらに含まれ得る１９ヌクレオチドコアストレッチ配列の例が、表２に提供される。
別の側面によれば、本開示は、対象、例えば哺乳類における肺細胞にＡＡＴ ＲＮＡｉ剤をインビボで送達するための方法を特徴とする。いくつかの実施形態によれば、１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が、当業界において知られている任意のオリゴヌクレオチド送達技法を用いて、標的細胞又は組織に、送達され得る。核酸送達方法は、リポソーム内への封入、イオン導入、又はヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル及び生体接着性微小球などの他のビークルへの組込み、タンパク質ベクター、又はDynamic Polyconjugates (登録商標)（ＤＰＣ）を含むが、但しそれらだけには限定されない（例えば、国際公開第２０００／０５３７２２号、国際公開第２００８／００２２３０９号、国際公開第２０１１／１０４１６９号、及び国際公開第２０１２／０８３１８５号を参照のこと；それぞれ、参照により本明細書に組込まれる）。いくつかの実施形態によれば、送達ビークル、例えばポリマー、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、例えばメリチン又はメリチン様ペプチド、可逆的修飾ポリマーもしくはペプチド、又は脂質が、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤と共に使用され得る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を標的基、例えばアシアロ糖タンパク質受容体リガンドに共有結合させるか、又は共役させることにより、標的細胞又は組織に送達される。いくつかの実施形態によれば、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトース又はガラクトース誘導体クラスターを含むか、それらから成るか、又はそれらから実質的に成る。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ガラクトース誘導体Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドに結合される。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミントリマー又はＮ−アセチル−ガラクトサミンテトラマーを含む。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミントリマー又はＮ−アセチル−ガラクトサミンテトラマーである。ＲＮＡｉ剤を送達するのに有用な例示的な標的基は、例えば米国特許出願第１５／４５２，３２４号及び国際公開第２０１７／１５６１０１２号（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）に開示されている。
標的基は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖の３′又は５′末端に結合され得る。いくつかの実施形態によれば、標的基は、センス鎖の３′又は５′末端に結合される。いくつかの実施形態によれば、標的基は、センス鎖の５′末端に結合される。いくつかの実施形態によれば、標的基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖上のヌクレオチドに内部結合される。いくつかの実施形態によれば、標的基は、リンカーを介してＲＮＡｉ剤に結合される。
リンカーを伴って又は伴わないで、標的基は、表２、３、４及び５に開示されるセンス及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの５′又は３′末端に結合され得る。標的基伴って又は伴わないで、リンカーは、表２、３、４及び５に開示されるセンス及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの５′又は３′末端に連結され得る。
別の側面によれば、本開示は、表６に開示される二重鎖構造を有する１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を特徴とする。
いくつかの実施形態によれば、異なるヌクレオチドを有する少なくとも２つのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の組合せ又はカクテルを含む組成物が本明細書に記載される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上の異なるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、それぞれ別々に且つ独立して標的基に結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上の異なるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、アシアロ糖タンパク質受容体を標的とする１つ以上の成分を含む標的リガンドを含むか、又はそれらから成る標的基にそれぞれ結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上の異なるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上のガラクトース誘導体を含む標的リガンドを含むか、又はそれらから成る標的基にそれぞれ結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上の異なるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドを含むか、又はそれらから成る標的基にそれぞれ結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物に含まれる場合、各ＲＮＡｉ剤は、同じ標的基に独立して結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物に含まれる場合、各ＲＮＡｉ剤は、同じ標的基に独立して結合される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物に含まれる場合、各ＲＮＡｉ剤は、異なる標的基、例えば異なる化学構造を有する標的基に独立して結合される。
いくつかの実施形態によれば、標的基は、さらなるリンカーを使用しないで、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に結合される。いくつかの実施形態によれば、標的基は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤への結合を容易に促進するために存在するリンカーを有するよう企画される。いくつかの実施形態によれば、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物に含まれる場合、２つ以上のＲＮＡｉ剤は、同じリンカーを用いて、それらのそれぞれの標的基に結合され得る。いくつかの実施形態によれば、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物に含まれる場合、２つ以上のＲＮＡｉ剤は、異なるリンカーを用いて、それらのそれぞれの標的基に結合され得る。
別の側面によれば、本開示は、対象におけるα−１アンチトリプシン遺伝子発現を阻害するための方法を特徴とし、核方法は、対象に、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害できる量のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与することを含み、ここで前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤はセンス鎖及びアンチセンス鎖を含む。
治療的有効量の本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、ＡＡＴＤにより引起される状態又は疾患の治療法がまた、本明細書に記載される。本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法が、さらに記載される。
いくつかの実施形態によれば、表２、３又は４における配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＲＮＡｉ剤の治療的有効を対象に投与することを含む、ＡＡＴＤの治療（ＡＡＴＤにより引起される状態又は疾患の治療を含む）のための方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表２、３又は４における配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するための方法が、本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表２、３又は４における配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の治療的有効を対象に投与することを含む、ＡＡＴＤの治療（ＡＡＴＤにより引起される状態又は疾患の治療を含む）のための方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表２、３又は４における配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を含むＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するための方法が、本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表５における配列のいずれかの配列を含むセンス鎖、及び表４における配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の治療的有効を対象に投与することを含む、ＡＡＴＤの治療（ＡＡＴＤにより引起される状態又は疾患の治療を含む）のための方法が本明細書に開示される。
表５における配列のいずれかの配列を含むセンス鎖及び表４における配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の治療的有効量を対象に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するための方法が、本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表５における配列のいずれかの核酸塩基配列から成るセンス鎖、及び表４における配列のいずれかの核酸塩基配列から成るアンチセンス鎖を含むＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法が、本明細書に開示される。いくつかの実施形態によれば、表５における修飾配列のいずれかの修飾配列から成るセンス鎖、及び表４における修飾配列のいずれかの修飾配列から成るアンチセンス鎖を含むＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法が、本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、表６に示される二重鎖構造を有する１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与することを含む、細胞中のＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するための方法が、本明細書に開示される。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、図１、２、３、４、５、６、７又は８のいずれか１つに示される構造を含むか、それから成るか又はそれから実質的に成る構造を有する。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴ遺伝子（配列番号１）上の特定の位置を標的とするよう企画される。本明細書において定義されるように、アンチセンス鎖の５′末端核酸塩基が、遺伝子と塩基対を形成する場合、遺伝子上の位置から１９ヌクレオチド下流（３′末端に向かって）である位置と整列される場合、アンチセンス鎖配列は、遺伝子上の所定の位置でＡＡＴ遺伝子を標的とするよう企画される。例えば、本明細書における表１、２及び３に示されるように、１０００位でのＡＡＴ遺伝子を標的とするよう企画されたアンチセンス鎖配列は、遺伝子と塩基対を形成する場合、アンチセンス鎖の５′末端核酸塩基がＡＡＴ遺伝子の１０１８位と整列されることを必要とする。本明細書において提供されるように、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％の相補性）及び少なくとも１６個の連続ヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたっての遺伝子が存在する場合、アンチセンス鎖の１位（５′→３′）での核酸塩基が遺伝子に相補的である必要はない。例えば、ＡＡＴ遺伝子の１０００位を標的とするよう企画される、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉについては、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５′末端核酸塩基は、遺伝子の１０１８位と整列されるべきであり；しかしながら、アンチセンス鎖の５′末端核酸塩基は、アンチセンス鎖の少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９又は１００％の相補性）及び少なくとも１６個の連続ヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたっての遺伝子が存在する場合、ＡＡＴ遺伝子の１０１８位に相補的であり得るが、但しそうである必要はない。とりわけ本明細書に開示される種々の例により示されるように、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖による遺伝子の結合の特異的部位（例えば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が１０００位で、１１４２位で、又はその他の位置でＡＡＴ遺伝子を標的とするよう企画されているかどうか）は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤により達成される阻害のレベルにとって非常に重要である。
いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖は、ＡＡＴ遺伝子（配列番号１）の配列標的位置１０００を有するよう企画される。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号４２９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号４２９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＵ (配列番号４３０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＵ (配列番号４３０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ（配列番号４２９）の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＵ (配列番号４３０)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ (配列番号８１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ（配列番号７９４）の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ（配列番号８５７）の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ（配列番号８８５）の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６４)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＡＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６６)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ（配列番号８５７）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８８５)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＣＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＡＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６６)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２４の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２５の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２６の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２７の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２８の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８２９の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３０の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３１の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３２の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３３の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３４の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３５の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３６の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ０４８３７の二重鎖構造を含むか、それから成るか、又はそれから実質的に成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ（配列番号８０）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０がアンチセンス鎖の１〜１９位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ（配列番号８０）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０がアンチセンス鎖の１〜１９位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ（配列番号８１）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８１がアンチセンス鎖の１〜１９位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＡＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧ（配列番号８１）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８１がアンチセンス鎖の１〜１９位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ（配列番号４２９）の核酸塩基配列を含み、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号４２９の１９位が、アンチセンス鎖の５′末端に位置するヌクレオチドと塩基対を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ（配列番号４２９）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての又は実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号４２９の１９位が、アンチセンス鎖の５′末端に位置するヌクレオチドと塩基対を形成する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＵ（配列番号４３０）の核酸塩基配列を含み、ここで１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号４３０の１９位が、アンチセンス鎖の５′末端に位置するヌクレオチドと塩基対を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＵ（配列番号４３０）の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての又は実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号４３０の１９位が、アンチセンス鎖の５′末端に位置するヌクレオチドと塩基対を形成する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくても１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号７９４がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号７９４がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくても１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８３９がアンチセンス鎖の１〜２２位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８３９がアンチセンス鎖の１〜２２位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくても１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８００がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８００がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくても１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０１がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで全ての、又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０１がアンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ（配列番号７９４）の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号７９４がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖がＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８５７)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
くつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８３９がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖がＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８８５)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
くつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８００がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖がＣＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
くつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか、又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０１がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖がＡＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６６)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号７９４がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８５７)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８３９がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８８５)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８００がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＣＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６４)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成り、ここで少なくとも１つ以上のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０１がアンチセンス鎖の５′末端に位置し、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖が、０、１、２又は３個のヌクレオチド異なる、ＡＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６６)の核酸塩基配列を含むか又はそれから成る。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤はまた、１つ以上のホスホロチオエートヌクレオシド間結合も含むことができる。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤はまた、１つ以上の標的基又は結合基も含むことができる。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の標的基を含む。いくつかの実施形態によれば、標的基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドから成る。いくつかの実施形態によれば、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトース又はガラクトース誘導体クラスターを含む。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態によれば、標的リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミントリマーを含む。いくつかの実施形態によれば、標的基は、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖に共役される。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｕｓｕ (配列番号９１３) を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり、そしてセンス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｃｕｓｕ (配列番号９５８) を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり、そしてセンス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｓＣｆｓｇ (配列番号９５９)を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり、そしてセンス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ (配列番号９６０)を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり、そしてセンス鎖は、アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｕｓｕ (配列番号９１３) を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) ｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ（配列番号１２７６）を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１、２又はそれ以上の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｃｕｓｕ (配列番号９５８)を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) ｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ (配列番号１２７７)を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１、２又はそれ以上の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｓＣｆｓｇ (配列番号９５９)を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) ｃｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａ (配列番号１２７８)を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１、２又はそれ以上の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ (配列番号９６０) を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) ａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａ (配列番号１２７９)を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１、２又はそれ以上の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｕｓｕ (配列番号９１３) を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) （ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ(ｉｎｖＡｂ)（配列番号１０２８）を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆脱塩基デオキシリボース（ｉｎｖＡｂ）であり；そして（ＮＡＧ３７）は、本明細書の表７に示される構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｃｕｓｕ (配列番号９５８)を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) （ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ(ｉｎｖＡｂ)（配列番号１０３０）を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆脱塩基デオキシリボース（ｉｎｖＡｂ）であり；そして（ＮＡＧ３７）は、本明細書の表７に示される構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｓＣｆｓｇ (配列番号９５９)を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) （ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｃｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ (ｉｎｖＡｂ)（配列番号１０２４）を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆脱塩基デオキシリボース（ｉｎｖＡｂ）であり；そして（ＮＡＧ３７）は、本明細書の表７に示される構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ (配列番号９６０) を含むか又はそれから成り、そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、配列（５′ →３′) （ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ (ｉｎｖＡｂ)（配列番号１０３３）を含むか又はそれから成り、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆脱塩基デオキシリボース（ｉｎｖＡｂ）であり；そして（ＮＡＧ３７）は、本明細書の表７に示される構造を有するＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書における表７に定義されるような（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つ以上の標的基を含むことができる。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書における表７に定義されるような（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有するセンス鎖の５′末端に１つの標的基を含むことができる。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む組成物中に組込まれ得る。いくつかの実施形態によれば、１つ以上の開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む、本明細書に開示される組成物は、医薬組成物である。
１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、局所治療が望ましいか、又は全身治療が望ましいかに依存して多くの手段で投与され得る。投与は、静脈内投与、動脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、皮下投与（例えば、埋め込み型装置を介して）、及び実質内投与であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載される約組成物は、皮下注射により投与される。
いくつかの実施形態によれば、１つ以上の開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む組成物は、さらに１つ以上の追加の治療薬又は治療剤を含むことができる。
いくつかの実施形態によれば、１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む、本明細書に記載される組成物は、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ、又はバイアルに包装される。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載される組成物は、非経口投与される。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びそれを含む組成物は、対象においてα−１アンチトリプシン遺伝子の発現を阻害するために対象に投与され得る。いくつかの実施形態によれば、対象はヒトである。いくつかの実施形態によれば、対象は、ＡＡＴＤを有すると診断されているヒトである。
いくつかの実施形態によれば、細胞中のＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法が本明細書に開示され、該方法は、表１に列挙される配列のいずれか１つの配列を有するＡＡＴ ｍＲＮＡの一部に対して少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を有するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与することを含む。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びそれを含む組成物は、ＡＡＴＤ（α−１アンチトリプシン）欠乏により引起される状態又は疾患を含む）の治療のために対象に投与され得る。本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びそれを含む組成物の投与により治療、予防及び／又は管理され得る状態の又は疾患は、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、肝扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症、又は劇症肝不全を含む。
本明細書において使用される場合、「オリゴヌクレオチド（oligonucleotide）」又は「ポリヌクレオチド（polynucleotide）」とは、それぞれ独立して修飾されていても又は修飾されていなくても良い連結されたヌクレオシドのポリマーを意味する。
本明細書において使用される場合、「ＲＮＡｉ剤（ＲＮＡｉ agent）」又は「ＲＮＡｉトリガー（ＲＮＡｉ trigger）」とは、配列特異的態様で、標的ｍＲＭＡのメッセンジャＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写体の翻訳を低減するか又は阻害できるＲＮＡ又はＲＮＡ様（例えば、化学的に修飾されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。本明細書において使用される場合、ＲＮＡｉは、ＲＮＡ干渉メカニズム（すなわち、哺乳類細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘発のサイレンシング複合体又はＲＩＳＣ）との相互作用を通してＲＮＡ干渉を誘発する）を通して、又は任意の他のメカニズム又は経路により作用することができる。ＲＮＡｉ剤は、この用語が本明細書において使用される場合、主にＲＮＡ干渉を通して作用すると思われるが、開示されるＲＮＡｉ剤は、いかなる特定の経路又は作用のメカニズムによっても拘束されず、又はそれに制限されない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖アンチセンス鎖から構成され、そして低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びダイサー基質を含むが、但しそれらだけには制限されない。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的とされるｍＲＮＡ（例えば、ＡＡＴ ｍＲＮＡ）に対して少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／又は１つ以上の非ホスホジエステル結合を含むことができる。
本明細書において使用される場合、用語「サイレンス（Silence）」、「低める(reduce)」、「阻害する（inhibit）」、「ダウンレギュレートすると（down-regulate）」、（「ノックダウンする（knockdown）」とは、所定に遺伝子の発現を言及する場合、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベル、又は遺伝子が転写されている細胞、細胞群、組織、器官又は対象におけるｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチド、タンパク質又はタンパク質サブユニットのレベルにより測定される場合、遺伝子の発現は、治療されていないか又は治療されたことがない第２細胞、細胞群、組織、器官又は対象に比較して、細胞、細胞群、組織、器官又は対象がＲＮＡｉ剤により治療される場合、低められることを意味する。
本明細書において使用される場合、用語「配列（sequence）」及び「ヌクレオチド配列（nucleotide sequence）」とは、標準的命名法を使用して、一連の文字により記載された一連又は連続した核酸塩基又はヌクレオチドを意味する。
本明細書において使用される場合、「塩基（base）」、「ヌクレオチド塩基（nucleotide base）」又は「核酸塩基（nucleobase）」は、すべての核酸の標準的な構成要素である複素環式ピリミジン又はプリン化合物であり、そしてヌクレオチドアデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）及びウラシル（Ｕ）を形成する塩基を含む。核酸塩基はさらに、限定されないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡大塩基及び弗素化塩基を含むよう修飾され得る。本明細書において使用される場合、用語「ヌクレオチド（nucleotide）」は、修飾ヌクレオチド（例えば、ヌクレオチド模倣体、脱塩基残基（Ａｂ）又は代替置換部分）を含むことができる。
本明細書において使用される場合、及び特にことわらない限り、用語「相補的（complementary）」は、第２の核酸塩基又はヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖又は一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）に関して第１の核酸塩基又はヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤センス鎖又は標的ｍＲＮＡ）を記載するために使用される場合、ハイブリダイズし（哺乳類の生理学的条件（又はインビボで類似する条件）下で塩基対水素結合を形成する）、そして第２ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドと、特定の標準条件下で三重又は二重螺旋構造を形成する、第１ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの能力を意味する。相補的配列は、ワトソン−クリック塩基対又は非ワトソン−クリック塩基対を含み、そして少なくとも、上記ハイブリダイゼーション要件が満たされる程度、天然又は修飾ヌクレオチド又はヌクレオチド模倣体を含む。配列同一性又は相補性は、修飾とは無関係である。例えば本明細書において定義されるようなａ及びＡｆは、同一性又は相補性を決定するために、Ｕ（又はＴ）に対して相補的であり、そしてＡと同一である。
本明細書において使用される場合、「完全に相補的（perfectly complementary）」又は「十分に相補的（fully complementary）」とは、第１のポリヌクレオチドの連続配列中のすべて（１００％）の核酸塩基又はヌクレオチドが、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同じ数の核酸塩基又はヌクレオチドとハイブリダイズするであろうことを意味する。連続配列は、第１又は第２のヌクレオチド配列のすべて又は一部を含むであろう。
本明細書において使用される場合、「部分的に相補的（partially complementary）」とは、ハイブリダイズされた核酸塩基配列の対において、第１のポリヌクレオチドの連続配列中の全てではないが、少なくとも７０％の塩基が、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同数の塩基とハイブリダイズするであろうことを意味する。
本明細書において使用される場合、「実質的に相補的（substantially complementary）」とは、ハイブリダイズされた核酸塩基配列の対において、第１のポリヌクレオチドの連続配列中の全てではないが、少なくとも８５％の塩基が、第２のポリヌクレオチドの連続配列中の同数の塩基とハイブリダイズするであろうことを意味する。本明細書における用語「相補的（complementary）」、「十分に相補的（fully complementary）」、「部分的に相補的（partially complementary）及び「実質的に相補的（substantially complementary）」は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、又はＲＮＡi剤のアンチセンス鎖とＡＡＴ ｍＲＮＡの配列との間での核酸塩基又はヌクレオチド一致に関して使用される。
本明細書において使用される場合、核酸配列に適用されるような用語「実質的に同一（substantially identical）」又は「実質的に同一性（substantially identity）」とは、核酸配列が、参照配列に比較して、少なくとも約８５％の配列同一性又はさらに、例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むことを意味する。配列同一性の割合は、比較窓にわたって２つの最適に整列された配列を比較することにより決定される。その割合は、一致した位置の数を得るために両配列において同一の核酸塩基が存在する位置の数を決定し、それらの一致した位置の数を、比較窓における位置の総数で割算し、そしてその結果に１００を掛け算し、配列同一性の割合を得ることにより計算される。本明細書に開示される発明は、本明細書に開示されるそれらのヌクレオチド配列と実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。
本明細書において使用される場合、用語「治療する（treat）」、「治療（treatment）」などは、対象における疾患の１つ以上の症状の数、重症度及び／又は頻度からの救済又はそれらの軽減を提供するために取られる方法又は工程を意味する。本明細書において使用される場合、「治療する」及び「治療」は、対象における疾患の１つ以上の症状の数、重症度及び／又は頻度の予防、管理、予防的治療及び／又は阻害を含むことができる。
本明細書において使用される場合、句「細胞内に導入する（introducing into a cell）」とは、ＲＮＡｉ剤を言及する場合、細胞内にＲＮＡｉ剤を機能的に送達することを意味する。句「機能的送達（functional delivery）」とは、ＲＮＡｉ剤が、予想される生物学的活性、例えば遺伝子発現の配列特異的阻害を有することを可能にする態様で細胞中にＲＮＡｉ剤を送達することを意味する。
特にことわらない限り、本明細書において使用される記号
の使用は、任意の基又は基群が、本明細書に記載される本発明の範囲に従って、それに結合され得ることを意味する。
本明細書において使用される場合、用語「異性体（isomers）」とは、同一の分子式を有するが、しかしそれらの原子の結合の性質又は順序、又はそれらの原子の空間配置において異なる化合物を言及する。それらの原子の空間配置において異なる異性体は、「立体異船体（stereoisomers）」と呼ばれる。互いに鏡像ではない立体異性体は、「ジアステレオ異性体（diastereoisomers）」と呼ばれ、そして重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は、「鏡像異性体（enantiomers）」又は時々、光学異性体と呼ばれる。４つの同一でない置換基に結合される炭素原子は、「キラル中心（chiral center）」と呼ばれる。
本明細書において使用される場合、不斉中心が存在し、そして従って、鏡像異性体、ジアステレオマー又は他の立体異性体配座を生じさせる各構造について、特定の立体配座を有するとして特定の構造で特定されていない限り、本明細書に開示される各構造は、それらの光学的に純粋な形及びラセミ形を含む、そのような全ての可能な異性体を表すことを意図している。例えば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物及び単一の立体異性体を包含することを意図している。
本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、句「から成る（consisting of）」は、特許請求の範囲に特定されない任意の要素、工程又は成分を除外する。本明細書の特許請求の範囲で使用される場合、句「から本質的に成る(consisting essentially of)」は、特許請求の範囲を、特定の材料又は工程、及び特許請求される発明の基本的且つ新規の特徴に実質的に影響を与えないものに限定する。
当業者は、本明細書に開示される化合物及び組成物が、その化合物又は組成物が存在する環境に依存して、プロトン化状態又は脱プロトン化状態での特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ又はＳ原子）を有し得ることを容易に理解及び認識するであろう。従って、本明細書において使用される場合、本明細書に開示される構造は、特定の官能基、例えばＯＨ、ＳＨ又はＮＨがプロトン化又は脱プロトン化され得ることを想定する。本明細書の開示は、当業者に容易に理解されるように、環境（例えば、ｐＨ）に基くプロトン化のそれらの状態にかかわらず、開示された化合物及び組成物を包含することを意図している。
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術的及び科学的用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書中で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参考として組み込まれる。矛盾がある場合は、定義を含む本明細書が優先するものとする。 さらに、材料、方法、及び実施例は例示的なものにすぎず、限定的であることを意図しない。
本発明の他の目的、特徴、態様、及び利点は、以下の詳細な説明、添付の図面、及び特許請求の範囲から明らかになろう。
図１Ａ−１Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図１Ａ−１Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図１Ａ−１Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図１Ａ−１Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図１Ａ−１Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図２Ａ−２Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図２Ａ−２Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図２Ａ−２Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図２Ａ−２Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図２Ａ−２Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８２８の化学的二重鎖構造を示す。
図３Ａ−３Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図３Ａ−３Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図３Ａ−３Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図３Ａ−３Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図３Ａ−３Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図４Ａ−４Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図４Ａ−４Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図４Ａ−４Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図４Ａ−４Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図４Ａ−４Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３１の化学的二重鎖構造を示す。
図５Ａ−５Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図５Ａ−５Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図５Ａ−５Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図５Ａ−５Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図５Ａ−５Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図６Ａ−６Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図６Ａ−６Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図６Ａ−６Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図６Ａ−６Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図６Ａ−６Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３６の化学的二重鎖構造を示す。
図７Ａ−７Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図７Ａ−７Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図７Ａ−７Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図７Ａ−７Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図７Ａ−７Ｅは、ナトリウム塩として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図８Ａ−８Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図８Ａ−８Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図８Ａ−８Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図８Ａ−８Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図８Ａ−８Ｅは、遊離酸として示されたＡＤ０４８３７の化学的二重鎖構造を示す。
図９は、実施例４に従って、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８３６、ＡＤ０４８３１又はＡＤ０４８３７の単一皮下投与後のカニクイザル（ｎ＝３）中の平均の正規化カニクイザルＡＡＴ（ｃＡＡＴ）血清レベルを示す棒グラフである。ＡＡＴ血清レベルは、平均治療前値に対して正規化された。実験誤差は標準偏差として示される。
図１０は、実施例５に従って、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８３６、ＡＤ０４８３１又はＡＤ０４８３７の単一皮下投与後のカニクイザル（ｎ＝２又はｎ＝３）中の平均の正規化カニクイザルｃＡＡＴ血清レベルを示す棒グラフである。ＡＡＴ血清レベルは、平均治療前値に対して正規化された。実験誤差は標準偏差として示される。
図１１は、実施例７に従って、生理食塩水、又は二重鎖構造ＡＤ０４８３７を有するＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のいずれかを投与され、８週間、２週間毎に投与され、ベースライン対照に対して正規化された、ＰｉＺマウスの肝臓からの可溶性画分（Ｚ−ＡＡＴモノマー）のウェスターンブロット分析の結果を示す棒グラフである。個々のマウス測定値は、治療グループによりグループ分けされ、そして実験誤差は標準偏差として示される。
図１２は、実施例７に従って、生理食塩水、又は二重鎖構造ＡＤ０４８３７を有するＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のいずれかを投与された、ＰｉＺマウスの肝臓からの不溶性画分（Ｚ−ＡＡＴモノマー）のウェスターンブロット分析の結果を示す棒グラフである。個々のマウス測定値は、治療グループによりグループ分けされ、そして実験誤差は標準偏差として示される。
ＲＮＡｉ剤：
ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書においては、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤又はＡＡＴ ＲＮＡｉトリガーとも呼ばれる）が、本明細書に記載される。各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、１６−３０ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖は、それぞれ１７〜２６ヌクレオチドの長さであり得る。センス鎖及びアンチセンス鎖は同じ長さでも、又は異なる長さでも良い。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立して、１７−２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立して、２１−２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ独立して、２１−２４ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖は約１９ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖は約２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖は約２１ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖は約２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖は約２３ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖は約２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖及びアンチセンス鎖の両者はそれぞれ２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖は２２ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖は１９ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖は２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤センス及びアンチセンス鎖は、それぞれ独立して、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５又は２６ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約1６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４ヌクレオチドの二重鎖長さを有する。
いくつかの実施形態によれば、センス鎖とアンチセンス鎖との間の完全な又は実質的な相補性の領域は、１６−２６（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５又は２６）ヌクレオチドの長さであり、そしてアンチセンス鎖の５′末端又はその近くに存在する（例えば、この領域は、完全に又は実質的に相補的ではない０、１、２、３又は４個のヌクレオチド、アンチセンス鎖の５′末端から分離され得る）。
センス鎖及びアンチセンス鎖はそれぞれ、１６−２３核酸塩基の長さであるヌクレオチド配列（時々、例えば標的配列と呼ばれる）に対して１００％（完全に）相補的、又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。センスコアストレッチ配列は、アンチセンス鎖におけるコアストレッチ配列に対して、１００％（完全に）相補的であるか、又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、そして従って、センス鎖コアストレッチ配列は、ＡＡｔ ｍＲＮＡ標的に存在するヌクレオチド配列（標的配列）に対して完全に同一であるか、又は少なくとも８５％同一である。センス鎖コアストレッチ配列は、対応するアンチセンスコア配列と同じ長さであり得るか、又は異なる長さでもあり得る。いくつかの実施形態によれば、アンチセンスコアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態によれば、センス鎖コアストレッチ配列は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３ヌクレオチドの長さである。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の形成に使用されるヌクレオチド針悦の例は、表２、３、４及び５に提供される。表２、３、４及び５におけるセンス鎖及びアンチセンス鎖配列を含む、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤二重鎖の例は、表６に示される。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びアンチセンス鎖は、二重鎖を形成するためにアニーリングする。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、又は十分に相補的であり得る。相補的二重鎖領域内で、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンスコアストレッチ配列に対して少なくとも８５％相補的又は１００％相補的である。いくつかの実施形態によれば、センス鎖のコアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２又は２３ヌクレオチド配列に対して、少なくとも少なくとも １６、 少なくとも １７、 少なくとも １８、 少なくとも １９、 少なくとも ２０、 少なくとも ２１、 少なくとも ２２又は 少なくとも ２３のヌクレオチドの配列を含む（すなわち、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖コアストレッチ配列は、少なくとも８５％塩基対合されるか、又は１００％塩基対合される、少なくとも少なくとも １６、 少なくとも １７、 少なくとも １８、 少なくとも １９、 少なくとも ２０、 少なくとも ２１、 少なくとも ２２又は 少なくとも ２３のヌクレオチドの領域を有する）。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、３又は４におけるアンチセンス鎖配列のいずれかと、０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、３又は４におけるセンス鎖配列のいずれかと、０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。
センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、コアストレッチ配列の３′末端、５′末端又は両端で、任意には及び独立して、追加の１、２、３、４、５又は６のヌクレオチド（伸長）を含むことができる。アンチセンス鎖追加ヌクレオチドは、存在するなら、ＡＡT ｍＲＮＡにおける対応する配列に対して相補的であってもなくても良い。センス鎖追加ヌクレオチドは、存在するなら、ＡＡＴ ｍＲＮＡにおける対応する配列に対して同一であってもなくとも良い。アンチセンス鎖追加ヌクレオチドは、存在するなら、対応するセンス鎖追加ヌクレオチドに対して相補的であってもなくても良い。
本明細書において使用される場合、伸長は、センス鎖コアストレッチ配列及び／又はアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５′及び／又は３′末端で１、２、３、４、５又は６のヌクレオチドを含む。センス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖中のヌクレオチド（コアストレッチ配列ヌクレオチド又は伸長ヌクレオチド）に対して相補的であってもなくても良い。逆に、アンチセンス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖中のヌクレオチド（コアストレッチ配列ヌクレオチド又は伸長ヌクレオチド）に対して相補的であってもなくても良い。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンスさの両者は、３′及び５′伸長を含む。いくつかの実施形態によれば、１つの鎖の１つ以上の３′伸長ヌクレオチドは、他の鎖の１つ以上の５′伸長ヌクレオチドと塩基対を形成する。他の実施形態によれば、１つの鎖の１つ以上の３′伸長ヌクレオチドは、他の鎖の１つ以上の５′伸長ヌクレオチドと塩基対を形成しない。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、３′伸長を有するアンチセンス鎖及び５′伸長を有するセンス鎖を有する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５又は６ヌクレオチドの長さの３′伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１、２又は３ヌクレオチドの長さの３′伸長を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態によれば、１つ以上のアンチセンス鎖伸長ヌクレオチドは、ウラシル又はチミジンヌクレオチド、又は対応するＡＡｔ ｍＲＮＡ配列に対して相補的であるヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態によれば、３′アンチセンス鎖伸長は、以下の配列の１つを含むか、又はそれから成るが、但しそれらに限定されない：ＡＵＡ、ＵＧＣＵＵ、ＣＵＧ、ＵＧ、ＵＧＣＣ、ＣＵＧＣＣ、ＣＧＵ、ＣＵＵ、 ＵＧＣＣＵＡ、ＣＵＧＣＣＵ、ＵＧＣＣＵ、ＵＧＡＵＵ、ＧＣＣＵＡＵ、Ｔ、ＴＴ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５′→３′に列挙される）。
いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖の３′末端は、追加の脱塩基残基（Ａｂ）を含むことができる。「脱塩基残基（abasic residue）」又は「脱塩基部位（abasic site）」は、糖の１′位で核酸塩基を欠くヌクレオチド又はヌクレオシドである。いくつかの実施形態によれば、Ａｂ又はＡｂＡｂは、アンチセンス鎖の３′末端に付加され得る（表７を参照のこと）。（例えば、F. Czauderna, Nucleic Acids Res., 2003, 31(11), 2705-16を参照のこと）。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４又は５ヌクレオチドの長さの３′伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態によれば、１つ以上のセンス鎖伸長ヌクレオチドは、アデノシン、ウラシルに又はチミジンヌクレオチド、又はＡＡＴ ｍＲＮＡ配列におけるヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態によれば、３′センス鎖伸長は、以下の配列の１つを含むか又はそれから成るか、但しそれらだけには限定されない：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ又はＴＴＴＴ（それぞれ５′→３′に列挙される）。
いくつかの実施形態によれば、センス鎖の３′末端は追加の脱塩基残基を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ又はＡｂは、センス鎖の３′末端に付加される。いくつかの実施形態によれば、センス鎖の３′末端に付加される１つ以上の脱塩基残基は反転される（ｉｎｖＡｂ）。いくつかの実施形態によれば、１つ以上の反転された脱塩基残基又は脱塩基部位は、標的リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端で又は末端近くの１つ以上の逆脱塩基残基又は脱塩基部位の包含は、ＲＮＡｉ剤の活性又は他の所望の特性の増強を可能にする。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５又は６ヌクレオチドの長さの５′伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態によれば、１つ以上のセンス鎖伸長ヌクレオチドは、ウラシルに又はウラシルヌクレオチド、又はＡＡＴ ｍＲＮＡ配列におけるヌクレオチドに対応するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態によれば、５′センス鎖伸長は、以下の配列の１つである、但しそれらだけには限定されない：ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（それぞれ５′→３′に列挙される）。センス鎖は、３′伸長及び／又は５′伸長を有することができる。
いくつかの実施形態によれば、センス鎖の５′末端は１つ以上の追加の脱塩基残基（例えば、（Ａｂ）又は（ＡｂＡｂ））を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、センス鎖の５′末端に付加される１つ以上の脱塩基残基は反転される（ｉｎｖＡｂ）。いくつかの実施形態によれば、１つ以上の反転された脱塩基残基は、標的リガンドと、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の核酸塩基配列との間に挿入され得る。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端で又は末端近くの１つ以上の逆脱塩基残基の包含は、ＲＮＡｉ剤の活性又は他の所望の特性の増強を可能にする。いくつかの実施形態によれば、脱塩基（デオキシリボース）残基は、リビトール（脱塩基リボース）残基により置換され得る。
いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の３′末端、又はアンチセンス鎖配列の３′末端は、逆脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を含むことができる（表７を参照のこと）。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の形成に使用される配列の例は、表２、３、４及び５に提供される。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４における配列のいずれかの配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４中の配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７、２−１５、２−１７、１−１８、２−１８、１−１９、２−１９、１−２０、２−２０、１−２１、２−２１、１−２２、２−２２、１−２３、２−２３、１−２４又は２−２４を含む。特定の実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表４における修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれらから成る。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５における配列のいずれかの配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５における配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１８、１−１９、１−２０、 １−２１、 １−２２、１−２３、１−２４、２−１９、２−２０、２−２１、２−２２、２−２３、２−２４、３−２０、３−２１、３−２２、３−２３、３−２４、４−２１、４−２２、４−２３、４−２４、５−２２、５−２３、５−２４、６−２３、６−２４、７−２４を含む。特定の実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表５における修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれらから成る。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤センス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、異なった数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５′末端及びアンチセンス鎖３′末端は、平滑未満を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤の両末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端も平滑末端化されない。本明細書において使用される場合、平滑末端とは、２つのアニーリングされた鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補的塩基対を形成する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を言及する。
いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５′末端及びアンチセンス鎖３′末端は、ほつれた末端（frayed end）を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖３′末端及びアンチセンス鎖５′末端は、ほつれた末端を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤の両末端は、ほつれた末端を形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端もほつれた末端ではない。本明細書において使用される場合、ほつれた末端とは、対からの２つのアニーリングされた鎖の末端ヌクレオチド（すなわち、オーバーハングを形成しない）が相補的でない（すなわち、非相補的対を形成する）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を言及する。本明細書において使用される場合、オーバーハングは、二本鎖ＲＮＡｉ剤の１つの鎖の末端での１つ以上の不対ヌクレオチドのストレッチである。不対ヌクレオチドは、センス鎖又はアンチセンス鎖上に存在し得、３′又は５′オーバーハングのいずれかを形成する。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤は、以下を含む：平滑末端及びほつれた末端、平滑末端及び５ 'オーバーハング末端、平滑末端及び３ 'オーバーハング末端、ほつれた末端及び３ 'オーバーハング末端、２つの５ 'オーバーハング末端、２つの３'オーバーハング末端、５ 'オーバーハング末端及び３ 'オーバーハング末端、２つのほつれた末端又は２つの平滑末端。
修飾ヌクレオチドは、種々のポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドコンストラクトに使用される場合、細胞中の化合物の活性を保持すると共に、同時に、それらの化合物の血清安定性も創造し、そしてポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドコンストラクトの投与に基いて、ヒトにおけるインターフェロン活性を活性化する可能性も最小限にできる。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩又は遊離酸として調製又は提供される。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ナトリウム塩として調製される。そのような形は、本明細書に開示される発明の範囲内である。
修飾ヌクレオチド：
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。本明細書において使用される場合、「修飾ヌクレオチド（modified nucleotide）」とは、リボヌクレオチド（２′−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態によれば、少なくとも５０％（例えば、少なくとも ６０％、少なくとも ７０％、少なくとも ８０％、少なくとも ９０％、少なくとも ９５％、少なくとも ９７％、少なくとも ９８％、少なくとも ９９％又は1００％）のヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである。本明細書において使用される場合、修飾ヌクレオチドは、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣体、脱塩基ヌクレオチド（本明細書ではＡｂと表される）、２'−修飾ヌクレオチド、３ '→３'への結合（反転）ヌクレオチド（本明細書ではｉｎｖｄＮ、ｉｎｖＮ、ｉｎｖｎと表す）、修飾核酸塩基含有ヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２'、３'セロヌクレオチド模倣体（本明細書ではＮＵＮＡ又はＮＵＮＡとして表されるロック解除された核酸塩基類似体）、ロックされたヌクレオチド（本明細書ではＮＬＮＡ又はＮＬＮＡと表される）、３'− Ｏ−メトキシ（２ 'ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド（本明細書では３'− ＯＭｅｎと表される）、２'− Ｆ−アラビノヌクレオチド（本明細書中でＮｆＡＮＡ又はＮｆＡＮＡと表される）、５'− Ｍｅ、２'−フルオロヌクレオチド（本明細書では５Ｍｅ − Ｎｆと表される）、モルホリノヌクレオチド、ホスホネートビニルデオキシリボヌクレオチド（本明細書ではｖｐｄＮと表す）、ホスホネートビニル含有ヌクレオチド、およびシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチド（ｃＰｒｐＮ）。２′−修飾ヌクレオチド（すなわち、５員の糖環の２′位でヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：２'−Ｏ−メチルヌクレオチド（本明細書では、ヌクレオチド配列中の小文字の「ｎ」として表される）、２'−デオキシ−２'−フルオロヌクレオチド（本明細書ではＮｆと表され、本明細書では２'−フルオロヌクレオチドとも表される）、２'−デオキシヌクレオチド（本明細書中でｄＮとして表される）、２'−メトキシエチル（２'− Ｏ − ２−メトキシエチル）ヌクレオチド（本明細書ではＮＭ又は２'− ＭＯＥと表される）、２'−アミノヌクレオチド、及び２'−アルキルヌクレオチド。 所定の化合物の全ての位置が均一に修飾される必要はない。逆に、複数の修飾が、単一のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤又はその単一のヌクレオチドにさえ組込まれ得る。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びアンチセンス鎖は、当業界において知られている方法により合成及び／又は修飾され得る。１つのヌクレオチドでの修飾は、別のヌクレオチドの修飾と無関係である。
修飾ヌクレオチドは、合成及び天然核酸塩基、例えば以下を含む：５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、又は５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５ − ｍｅ − Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−アルキル（例えば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、又は６ − ｎ−ブチル）誘導体、２−アルキル（例えば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、又は２ − ｎ−ブチル）並びに他のアデニン及びグアニンのアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及び他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ（例えば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、並びに他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、7−デアザグアニン、7−デアザアデニン、３−デアザグアニン、及び３−デアザアデニン。
いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤の全ての又は実質的に全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、リボヌクレオチド（すなわち、修飾されていない）であるセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方に４個以下（すなわち、０、１、２、３又は４）のヌクレオチドを有するＲＮＡｉ剤である。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるセンス鎖は、リボヌクレオチドであるセンス鎖に２個以下（すなわち、０、１又は２）のヌクレオチドを有するセンス鎖である。本明細書において使用される場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖は、リボヌクレオチドであるセンス鎖に２個以下（すなわち、０、１又は２）のヌクレオチドを有するアンチセンス鎖である。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、リボヌクレオチドである。
修飾ヌクレオシド間結合：
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、非標準的結合又は骨格（すなわち、修飾ヌクレオシド間結合又は修飾骨格）により結合される。修飾ヌクレオシド間結合又は骨格は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：5 '−ホスホロチオエート基（本明細書では小文字の「s」として表す）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホネート（例えば、メチルホスホネート又は３'−アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート（例えば、３'−アミノホスホルアミデート、アミノアルキルホスホルアミデート、またはチオノホスホルアミデート）、チオノアルキル - ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常の3'-5 '結合を有するボラノホスフェート、２’−５'結合したボラノホスフェートの類似体、または逆極性を有するボラノホスフェートここで、隣接するヌクレオシド単位の対は、３'−５'から５'−３'又は２'−５'から５'−２'に結合している。いくつかの実施形態によれば、修飾ヌクレオシド間結合又は骨格は、リン原子を欠いている。リン原子を欠いている修飾ヌクレオシド間結合は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：短鎖アルキル又はシクロアルキル糖間結合、混合されたヘテロ原子及びアルキル又はシクロアルキルの糖間結合、又は１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間結合。いくつかの実施形態によれば、修飾ヌクレオシド間骨格は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファミン酸骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、スルホン酸及びスルホンアミド骨格、アミド骨格、及び混合されたＮ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２成分を有する他の骨格。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、４、５又は６個のホスホロチオエート結合を含み、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５又は６個のホスホロチオエート結合を含み、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、独立して、１、２、３、４、５又は６個のホスホロチオエート結合を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３又は４個のホスホロチオエート結合を含み、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３又は４個のホスホロチオエート結合を含み、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、独立して、１、２、３又は４個のホスホロチオエート結合を含むことができる。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態によれば、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の３′末端から１〜３位でのヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態によれば、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の５′末端から１−３、２−４、３−５、４−６、４−５又は６−８位でのヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態によれば、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５′末端から１−３位でのヌクレオチド間、及びその５′末端から１９−２１、２０−２２、２１−２３、２２−２４、２３−２５又は２４−２６位でのヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合、及びアンチセンス鎖に３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態によれば、２′修飾ヌクレオシドは、修飾ヌクレオシド間結合と組合される。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤：
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表１に示されるＡＡＴゲノム中の位置又はその位置近くでＡＡＴ遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＡＡＴ １９マー配列に対して、十分に、実質的に、又は少なくとも部分的に相補的であるコアストレッチ配列を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで前記アンチセンス鎖の１９位（５′→３′）は、表１に開示される１９マー標的配列の１位と塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで前記アンチセンス鎖の１位（５′→３′）は、表１に開示される１９マー標的配列の１９位と塩基対を形成することができる。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖を含み、ここで前記アンチセンス鎖の２位（５′→３′）は、表１に開示される１９マー標的配列の１８位と塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤はアンチセンス鎖を含み、ここで前記アンチセンス鎖の２〜１８位（５′→３′）は、表１に開示される１９マー標的配列の１８〜２位に位置するそれぞれの相補的塩基のそれぞれと塩基対を形成することができる。
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤に関して、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、ＡＡＴ遺伝子に対して完全に相補的であり得るか、又はＡＡＴ遺伝子に対して非相補的であり得る。いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、Ｕ、Ａ又はｄＴである。いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、センス鎖とＡ：Ｕ又はＵ：Ａ塩基対を形成する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４におけるアンチセンス鎖配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）２−１８又は２−１９を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５におけるセンス鎖配列のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７、１−１８又は２−１８を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２、３又は４におけるアンチセンス鎖のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）２−１８又は２−１９を含むアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）表２、３又は５におけるセンス鎖配列のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７又は１−１８を含むセンス鎖から成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、以下の表２に示されるコア１９マーヌクレオチド配列を含む。
表２又は３におけるヌクレオチド配列を含むか、又はそれらから成るＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びアンチセンス鎖は、修飾ヌクレオチド又は非修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態によれば、表２又は３におけるヌクレオチド配列のいずれかを含むか、又はそれらから成るセンス及びアンチセンス鎖配列を有するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、全て又は実質的に全て修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２又は３におけるアンチセンス鎖配列のいずれかとは、０、１、２又は３個のヌクレオチドにより異なる。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２又は３におけるセンス鎖配列のいずれかとは、０、１、２又は３個のヌクレオチドにより異なる。
本明細書において使用される場合、表２に開示される配列に列挙される各Ｎヌクレオチドは独立して、選択され得る。いくつかの実施形態によれば、表２に開示される配列に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置でのＮヌクレオチドに対して相補的である核酸塩基を有する。いくつかの実施形態によれば、表２に開示される配列に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置でのＮヌクレオチドに対して相補的でない核酸塩基を有する。いくつかの実施形態によれば、表２に開示される配列に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置でのＮヌクレオチドと同じである核酸塩基を有する。いくつかの実施形態によれば、表２に開示される配列に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置でのＮヌクレオチドとは異なる核酸塩基を有する。
特定の修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びアンチセンス鎖が、表４及び表５に提供される。修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖、並びにそれらの根底にある末修飾核酸塩基配列は、表４に提供される。修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖、並びにそれらの根底にある末修飾核酸塩基配列は、表５に提供される。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の形成においては、上記表４及び５、並びに表２及び３に列挙される各末修飾配列中の各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであり得る。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖とアンチセンス鎖とをアニーリングすることにより形成される。表２、３又は５に列挙される配列を含むセンス鎖は、表２、３又は４に列挙される配列を含む任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズされ得、但しそれらの２つの配列は、連続１６、１７、１８、１９、２０又は２１のヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件とする。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４における配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表２又は３における配列のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖の核酸塩基配列を有する二重鎖を含むか、又はそれらから成る。
修飾ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖の例が、表４に提供される。修飾ヌクレオチドを含むセンス鎖の例が、表５に提供される。
表４及び５において使用される場合、以下の表記は、修飾ヌクレオチド、標的基、及び連結基を示すために使用される。当業者は、特にことわらない限り、オリゴヌクレオチドに存在する場合、モノマーは５′−３′−ホスホジエステル結合により互いに結合されることを容易に理解するであろう：
Ａ ＝アデノシン−３'−ホスフェート。
Ｃ ＝シチジン−３'−ホスフェート。
Ｇ ＝グアノシン−３'−ホスフェート。
Ｕ ＝ウリジン−３'−ホスフェート
ｎ ＝任意の２'−ＯＭｅ修飾ヌクレオチド
ａ ＝ ２'− Ｏ−メチルアデノシン−３'−ホスフェート
ａｓ ＝ ２'−Ｏ−メチルアデノシン−３'−ホスホロチオエート
ｃ ＝ ２'− Ｏ−メチルシチジン−３'−ホスフェート
ｃｓ ＝ ２'− Ｏ−メチルシチジン−３'−ホスホロチオエート
ｇ ＝ ２'− Ｏ−メチルグアノシン−３'−ホスフェート
ｇｓ ＝ ２'− Ｏ−メチルグアノシン−３'−ホスホロチオエート
ｔ ＝ ２'− Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３'−ホスフェート
ｔｓ ＝ ２'− Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３'−ホスホロチオエート
ｕ ＝ ２'− Ｏ−メチルウリジン−３'−ホスフェート
us ＝ ２'−Ｏ−メチルウリジン−３'−ホスホロチオエート
Ｎｆ ＝任意の２'−フルオロ修飾ヌクレオチド
Ａｆ ＝ ２'−フルオロアデノシン−３'−ホスフェート
Ａｆｓ ＝ ２'−フルオロアデノシン−３'−ホスホロチオエート
Ｃｆ ＝ ２'−フルオロシチジン−３'−ホスフェート
Ｃｆｓ ＝ ２'−フルオロシチジン−３'−ホスホロチオエート
Ｇｆ ＝ ２'−フルオログアノシン−３'−ホスフェート
Ｇｆｓ ＝ ２'−フルオログアノシン−３'−ホスホロチオエート
Ｔｆ ＝ ２'−フルオロ−５'−メチルウリジン−３'−ホスフェート
Ｔｆｓ ＝ ２'−フルオロ−５'−メチルウリジン−３'−ホスホロチオエート
Ｕｆ ＝ ２'−フルオロウリジン−３'−ホスフェート
Ｕｆｓ ＝ ２'−フルオロウリジン−３'−ホスホロチオエート
ｄＮ ＝任意の2'-デオキシリボヌクレオチド
ｄＴ ＝ ２'−デオキシチミジン−３'−ホスフェート
ＮＵＮＡ ＝ ２ '、３'−セコヌクレオチド模倣体（ロック解除核酸塩基類似体）−３'−リン酸塩
ＮＵＮＡＳ ＝ ２ '、３'−セコヌクレオチド模倣体（ロック解除核酸塩基類似体）−３'−ホスホロチオエート
ＵＵＮＡ ＝ ２ '、３'−セコ − ウリジン-3'-リン酸
ＵＵＮＡＳ ＝ ２ '、３'−セコ−ウリジン−３'−ホスホロチオエート
ａ＿２Ｎ ＝表7を参照
ａ＿２Ｎｓ ＝表7を参照
ｐｕ＿２Ｎ ＝表7を参照
ｐｕ＿２Ｎｓ ＝表7を参照
Ｎｐｕ ＝表7を参照
Ｎｕｓ ＝表7を参照
ＮＬＮＡ ＝ロックドヌクレオチド
ＮｆＡＮＡ ＝ ２'−Ｆ−アラビノヌクレオチド
ＮＭ ＝ ２'−メトキシエチルヌクレオチド
ＡＭ ＝ ２'−メトキシエチルアデノシン−３'−ホスフェート
ＡＭｓ ＝ ２'−メトキシエチルアデノシン−３'−ホスホロチオエート
ＴＭ ＝ ２'−メトキシエチルチミジン−３'−ホスフェート
ＴＭｓ ＝ ２'−メトキシエチルチミジン−３'−ホスホロチオエート
Ｒ ＝リビトール
（ｉｎｖｄＮ）＝任意の逆デオキシリボヌクレオチド（３'− ３ '結合ヌクレオチド）
（ｉｎｖＡｂ）＝逆（３'− ３ '結合）脱塩基デオキシリボヌクレオチド、表７参照。
（ｉｎｖＡｂ）ｓ ＝逆（３'− ３ '結合）脱塩基デオキシリボヌクレオチド−５'−ホスホロチオエート、表7参照
（ｉｎｖｎ）＝任意の逆２'− ＯＭｅヌクレオチド（３'− ３ '結合ヌクレオチド）
ｓ ＝ホスホロチオエート結合
ｖｐｄＮ ＝ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド
（５Ｍｅ − Ｎｆ）＝ ５'− Ｍｅ、２'−フルオロヌクレオチド
ｃＰｒｐ ＝シクロプロピルホスホネート、表７参照。
ｅｐＴｃＰｒ ＝表7を参照
ｅｐＴＭ ＝表7を参照
（Ｃｈｏｌ−ＴＥＧ）＝表７参照
（ＴＥＧ−ビオチン）＝表７参照。
（ＰＥＧ − Ｃ３ − ＳＳ）＝表７参照
（Ａｌｋ−ＳＳ−Ｃ６）＝表７を参照
（Ｃ６ − ＳＳ − Ａｌｋ）＝表７参照
（Ｃ６ − ＳＳ − Ａｌｋ − Ｍｅ）＝表７参照
当業者は、所定のオリゴヌクレオチド配列の３′末端での末端ヌクレオチドは、典型的には、エクスビボで、リン酸部の代わりに、所定のモノマーのそれぞれの３′位でヒドロキシル（−ＯＨ）基を有することを容易に理解するであろう。本明細書において、特にことわらない限り、当業者のそのような理解は、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤、及びＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の組成物を記載する場合に使用される。
標的基及び結合基は、以下を含み、それらの化学構造は以下の表７に提供される：（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓ。各センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、配列５′及び／又は３′末端に共役結合される、上記に列挙される任意の標的基又は結合基、並びに他の標的基又は結合基を有することができる。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖とアンチセンス鎖とをアニーリングすることにより形成される。表２、３又は５に列挙される配列を含むセンス鎖は、表２、３又は４に列挙される配列を含む任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズされ得、但しそれらの２つの配列は、連続１６、１７、１８、１９、２０又は２１のヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件とする。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表４におけるアンチセンス鎖のいずかと、０、１、２又は３個のヌクレオチド、異なる。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表５におけるセンス鎖のいずかと、０、１、２又は３個のヌクレオチド、異なる。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４における配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４における配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７、２−１７、１−１８、２−１８、１−１９、２−１９、１−２０、２−２０、１−２１、２−２１、１−２２、２−２２、１−２３、２−２３、１−２４又は２−２４を含む。特定の実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表４における修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれらから成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５における配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５における配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７、２−１７、３−１７、４−１７、１−１８、２−１８、３−１８、４−１８、１−１９、２−１９、３−１９、４−１９、１−２０、 ２−２０、３−２０、４−２０、１−２１、２−２１、３−２１、４−２１、１−２２、２−２２、３−２２、４−２２、１−２３、２−２３、３−２３、４−２３、１−２４、２−２４、３−２４又は４−２４を含む。特定の実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表４における修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれらから成る。
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に関して、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、ＡＡＴ遺伝子に対して完全に相補的であり得るか、又はＡＡＴ遺伝子に対して非相補的であり得る。いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、Ｕ、Ａ又はｄＴ（又はＵ、Ａ又はｄＴの修飾バーション）である。いくつかの実施形態によれば、アンチセンス鎖の１位（５′末端→３′末端）でのヌクレオチドは、センス鎖とＡ：Ｕ又はＵ：Ａ塩基対を形成する。）
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２、３又は４におけるアンチセンス鎖配列のいずれかのヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）２−１８又は２−１９を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２、３又は５におけるセンス鎖配列のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７又は１−１８を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２、３又は４におけるアンチセンス鎖のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）２−１８又は２−１９を含むアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）表２、３又は５におけるセンス鎖配列のいずれかの配列のヌクレオチド配列（５′末端→３′末端）１−１７又は１−１８を含むセンス鎖を含む。
表２、３又は５に列挙される配列を含むセンス鎖は、表２、３又は５に列挙される配列を含む任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズされ得、但し前記２つの配列は、連続１６、１７、１８、１９、２０又は２１のヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％相補性の領域を有することを条件とする。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表５における修飾配列のいずれかの修飾配列から成るセンス鎖、及び表４における修飾配列のいずれかの修飾配列から成るアンチセンス鎖を有する。代表的な配列対合は、表６に示される二重鎖識別番号により例示される。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかを含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかから成る。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖ヌクレオチド配列、及びセンス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合される標的基及び／又は結合基を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提供される二重鎖識別番号のいずれかにより表される二重鎖のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列、及びセンス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合される標的基及び／又は結合基を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表２、３又は６のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、そしてアシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的基を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表２又は５のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、そしてさらに以下から成る群から選択された標的基を含む：（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓ。いくつかの実施形態によれば、標的基は、表７に定義されるような（ＮＡＧ２５）又は（ＮＡＧ２５）ｓである。他の実施形態によれば、標的基は、表７に定義されうるような（ＮＡＧ３７）又は（ＮＡＧ３７）ｓである。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表６の二重鎖のいずれかのアンチセンス鎖及び／又はセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表６の二重鎖のいずれかのアンチセンス鎖及び／又はセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、そしてアシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的基を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表６における二重鎖のいずれかの二重鎖構造を含む。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表６における二重鎖のいずれかの二重鎖構造から成る。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩又は遊離酸として調製されるか、又は提供される。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴ遺伝子を発現する細胞への送達に基いて、インビボで、１つ以上のＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するか又はノックダウンする。
標的基、結合基及び送達ビークル：
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、標的基、結合基、送達ポリマー又は送達ビークルを含む（但し、それらだけには限定されない）１つ以上の非ヌクレオチド基に共役結合される。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達又は付着を増強することができる。標的基及び結合基の例は、表７に提供される。非ヌクレオチド基は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの３′及び／又は５′末端に共有結合され得る。いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３′及び／又は５′末端に結合される非ヌクレオチド基を含む。いくつかの実施形態によれば、非ヌクレオチド基は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖の５′末端に結合される。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基を介してＲＮＡｉ剤に直接的に又は間接的に結合され得る。いくつかの実施形態によれば、非ヌクレオチド基は、不安定な、切断可能な又は可逆的な結合又はリンカーを介してＲＮＡｉ剤に結合される。
いくつかの実施形態によれば、非ヌクレオチド基は、それが結合しているＲＮＡｉ剤又は共役体の薬物動態学的特性又は体内分布特性を増強し、ＲＮＡｉ剤又は共役体の細胞又は組織特異的分布及び細胞特異的取り込みを改善する。いくつかの実施形態によれば、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
標的基又は標的部分は、それらが結合される共役体又はＲＮＡｉ剤の薬物動態学的特性又は体内分布特性を増強し、共役体又はＲＮＡｉ剤の細胞特異的分布／及び細胞特異的取り込みを改善する。標的基は、それが向けられる標的に対して、一価、二価、三価、四価であり得るか、又はより高い価数を有する。代表的標的基は、細胞表面分子に対して親和性のある化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、及び細胞表面分子に対して親和性を有する抗体を含むが、但しそれらだけには限定されない。いくつかの実施形態によれば、標的基は、リンカー、例えばＰＥＧリンカー、又はいくつかの場合、リンカーとして作用できる、１、２又は３個の脱塩基及び／又はリビトール（脱塩基リボース）残基を用いて、ＲＮＡｉ剤に結合される。いくつかの実施形態によれば、標的基は、ガラクトース誘導体クラスターを含む。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、５′末端で、アミン基などの反応基を有するよう合成され得る。反応基が、続いて、当業界において典型的な方法を用いて標的基を結合するために使用され得る。
いくつかの実施形態によれば、標的基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。いくつかの実施形態によれば、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つ以上のガラクトース誘導体を含むか、又はそれらから成る。本明細書において使用される場合、用語ガラクトース誘導体は、ガラクトース、及びガラクトースの親和性と同等か又はそれ以上である、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有するガラクトースの誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル − ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル − ガラクトサミン、Ｎ−(n)−ブタノイルガラクトサミン、及びＮ−イソ - ブタノイルガラクトサミン（例えば、S.T. Iobst and K. Drickamer, J.B.C., 1996, 271, 6686を参照のこと）。肝臓へのオリゴヌクレオチド及び他の分子のインビボ標的化のために有用である、ガラクトース誘導体及びガラクトース誘導体のクラスターは、当業界において知られている（例えば、Baenziger and Fiete, 1980, Cell, 22, 611-620; Connolly et al., 1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945を参照のこと）。
ガラクトース誘導体は、肝細胞の表面上に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体へのそれらの結合を介してインビボで肝細胞に分子を標的化するために使用されて来た。アシアロ糖タンパク質受容体へのアシアロ糖タンパク質受容体リガンドの結合は、肝細胞への細胞特異的標的化及び肝細胞への分子のエンドサイトーシスを促進する。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、単量体（例えば、単一のガラクトース誘導体を有する）、又は多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）であり得る。ガラクトース誘導体又はガラクトース誘導体クラスターは、当業界において知られている方法を用いて、ＲＮＡｉ剤のセンス又はアンチセンス鎖の３′又は５′末端に結合され得る。標的基、例えばガラクトース誘導体クラスターの調製は、例えば米国特許出願第１５／４５２，３２４号及び米国特許公開第ＵＳ２０１７／０２５３８７５号に記載されており、その両方の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組込まれる。
本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体クラスターは、２〜４個の末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素を介して分子に結合される。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体トリマー（また、三本鎖ガラクトース誘導体又は三価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、３個のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体は、ガラクトース誘導体テトラマー（また、四本鎖ガラクトース誘導体又は四価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、４個のＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体トリマーは、３つのガラクトース誘導体を含み、それぞれは、中心分岐点に結合される。本明細書において使用される場合、ガラクトース誘導体テトラマーは、４つのガラクトース誘導体を含み、それぞれは、中心分岐点に結合される。ガラクトース誘導体は、糖のＣ−１炭素を介して中心分岐点に結合される。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体は、リンカー又はスペーサーを介して分岐点に結合される。いくつかの実施形態によれば、リンカー又はスペーサーは、ＰＥＧ基などの柔軟な親水性スペーサーである。（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号；Biessen et al. J. Med. Chem. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546を参照のこと）。いくつかの実施形態によれば、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、３つのガラクトース誘導体の結合を可能にし、そしてさらに、ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合を可能にする任意の小分子であり得る。分岐点群の例は、ジ−リシン又はジ−グルタメートである。ＲＮＡｉ剤への分岐点の結合は、リンカー又はスペーサーを介して生じ得る。いくつかの実施形態によれば、リンカー又はスペーサーは、柔軟な親水性スペーサー、例えばこれだけには限定されないが、ＰＥＧスペーサーを含む。いくつかの実施形態によれば、リンカーは、剛性リンカー、例えば環状基を含む。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含むか又はそれらから成る。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミンテトラマーであり得る、ガラクトース誘導体テトラマーから成る。
本開示の実施形態は、インビボで、生存細胞へのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の送達のための医薬組成物を含む。そのような医薬組成物は、例えばガラクトース誘導体クラスターに共役結合されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含むことができる。いくつかの実施形態によれば、ガラクトース誘導体クラスターは、例えばＮ−アセチル−ガラクトサミントリマーであり得るガラクトース誘導体トリマー、又は例えばＮ−アセチル−ガラクトサミンテトラマーであり得るガラクトース誘導体テトラマーから成る。
標的基は、表７に定義されるような以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：（ＰＡＺ）、（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓ。ガラクトースクラスター標的リガンドを含む他の標的基は、当業界において知られている。
いくつかの実施形態によれば、結合基は、ＲＮＡｉ剤に共役結合される。結合基は、標的基又は、送達ポリマー又は送達ビークルへの剤の共有結合を促進する。結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖又はアンチセンス鎖の３′又は５′末端に連結され得る。いくつかの実施形態によれば、結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖に連結される。いくつかの実施形態によれば、結合基はＲＮＡｉ剤センス鎖の５′又は３′末端に共役結合される。いくつかの実施形態によれば、結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖の５′又は３′末端に共役結合される。結合基の例は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：一級アミン及びアルキンなどの反応性基、アルキル基、脱塩基ヌクレオチド、リビトール（脱塩基リボース）及び／又はＰＥＧ基。
リンカー又は結合基は、１つの化学基（例えば、ＲＮＡｉ剤）又は目的のセグメントを、別の化学基（例えば、標的基又は送達ポリマー）又は目的のセグメントに、１つ以上の共有結合を介して連結する２つの原子間の結合である。不安定結合（linkage）は、不安定結合（bond）を含む。結合は、２つの結合される原子間の距離を増大するスペーサーを、任意には含むことができる。スペーサーはさらに、結合に、柔軟性及び／又は長さを加えることができる。スペーサーは、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アルキル基及びアルケニル基を含むことができるが、但しそれらだけには限定されず；それらのそれぞれは、１つ以上のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド及び糖類を含むことができる。スペーサー基は、当業界においては周知であり、そして上記のリストは、説明の範囲を限定することを意味するものではない。
表２、３、４又は５に列挙されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ヌクレオチド配列のいずれも、修飾されているかどうかにかかわらず、３′又は５′標的基又は結合基を含むことができる。３′又は５′標的基又は結合基を含む表４又は５に列挙されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤配列の何れも、あるいは３′又は５′標的基又は結合基を含むことができず、又はそれらに限定されないが、表７に示されるそれらを含む、異なる３′又は５′標的基又は結合基を含むことができる。表２、３又は６に列挙されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤二重鎖のいずれも、修飾されているかどうかにかかわらず、それらに限定されないが、表７に示されるそれらを含む、標的基又は結合基をさらに含むことができ、そして標的基又は結合基は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤二重鎖のセンス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの３′又は５′末端に結合され得る。
標的基及び結合基の例は、表７に提供される。表５は、５′又は３′末端に結合される標的基又は結合基を有するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤センス鎖のいくつかの実施形態を提供する。
表７における上記各構造体においては、ＮＡＧは、本明細書に提供される上記構造体及び説明を考慮して添付されることは当業者により理解されるように、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン又は別のアシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。例えば、いくつかの実施形態によれば、表７に提供される構造体中のＮＡＧは以下の構造により表される：
各（ＮＡＧｘ）は、リン酸基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、及び（ＮＡＧ３１）のように）、又はホスホロチオエート基、（（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、又は（ ＮＡＧ３７）s）、又は他の連結基を介してＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に結合され得る：
当業者において知られている他の結合基が使用され得る。
いくつかの実施形態によれば、送達ビークルは、ＲＮＡｉ剤を細胞又は組織に送達するために使用され得る。送達ビークルは、ＲＮＡｉの細胞又は組織への送達を改善する化合物である。送達ビークルは以下を含むか、又はそれらから成るが、但しそれらだけには限定されない：ポリマー、例えば両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に修飾されたポリマー又はペプチド、又は可逆的に修飾された膜活性ポリアミン。いくつかの実施形態によれば、ＲＮＡｉ剤は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ、又は当業界において入手できる他の送達システムと組合わされ得る。ＲＮＡｉ剤はまた、標的基、脂質（コレステロール及びコレステリル誘導体を含むが、但しそれらだけには限定されない）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例えば、国際公開第２０００/０５３７２２号、国際公開第２００８/００２２３０９号、国際公開第２０１１/１０４１６９号及び国際公開第２０１２/０８３１８５号、国際公開第２０１３/０３２８２９号、国際公開第２０１３/１５８１４１号を参照のこと、それらはそれぞれ参照により本明細書に組込まれる）、又は当業界において入手できる他の送達システムに化学的に共役結合され得る。
医薬組成物及び製剤：
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、医薬組成物又は製剤として調製され得る。いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は、少なくとも１つのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む。医薬組成物は、標的細胞、細胞群、組織又は生物における標的ｍＲＮＡの発現の阻害において特に有用である。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、又は標的遺伝子の発現の阻害から利益を得るであろう疾患又は障害を有する対象を治療するために使用され得る。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低下、又は標的遺伝子の発現の阻害から利益を得るであろう疾患又は障害を発症する危険性がある対象を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるような標的リガンドに結合されるＡＡＴ ＲＮＡ剤を、治療されるべき対象に投与する方法が包含される。いくつかの実施形態によれば、１つ以上の医薬的に許容できる賦形剤（ビークル、担体、希釈剤及び／又は送達ポリマーを含む）が、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加され、それにより、ヒトを含む対象へのインビボ送達のために適切な医薬製剤を形成する。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物、及び治療的有効量の本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、対象に投与することを含む方法は、細胞、細胞群、組織又は対象における標的ｍＲＮＡのレベルを低め、それにより、対象におけるＡＡＴｍＲＮＡの発現を阻害する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む、記載される医薬組成物は、ＡＡＴＤを有する対象、例えば慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症、さらには劇症肝不全における臨床症状の治療又は管理のために使用される。いくつかの実施形態によれば、治療的に又は予防的に有効な量の１つ以上の医薬組成物は、そのような治療の必要な対象に投与される。いくつかの実施形態によれば、開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の投与は、対象における疾患の症状の数、重症度及び／又は頻度を低めるために使用され得る。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む、記載される医薬組成物は、ＡＡＴ ｍＲＮＡの発現の低減又は阻害から利益を得る疾患又は障害を有する対象中の少なくとも１つの症状を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態によれば、対象は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む１つ以上の医薬組成物の治療的有効量を投与され、それにより、症状が治療される。他の実施形態によれば、対象は、治療的有効量の１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与され、それにより、少なくとも１つの症状が予防される。
投与経路は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が身体と接触される経路である。一般的に、哺乳類の治療のために薬剤及び核酸を投与する方法は、当業者において良く知られており、そして本明細書に記載される組成物の投与に適用され得る。本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、特定の経路に適切に合わせられた調製物中の任意の適切な経路を介して投与され得る。従って、本明細書に記載される医薬組成物は、注射、例えば静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、又は腹腔内駐車により投与され得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載される医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。
本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、当業界において知られているオリゴヌクレオチド送達技法を用いて、細胞、細胞群、組織又は対象に送達され得る。一般的に核酸分子を送達するために（インビトロ又はインビボ）当業界において認識される任意の適切な方法は、本明細書に記載される組成物と共に使用するために適合され得る。例えば、送達は、局所投与（例えば、直接注射、移植、又は局所投与）、全身投与、又は頭蓋内（例えば、脳室内、実質内および髄腔内）、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）を含む、皮下、静脈内、腹腔内、又は非経口経路、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、経鼻、経口、直腸、又は局所（口腔内及び舌下を含む）投与によってであり得る。特定の実施形態によれば、組成物は、皮下又は静脈内に注入又は注射により投与される。
従って、いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の医薬的に許容できる賦形剤を含む。本明細書に記載される医薬組成物は、対象への投与のために製剤化される。
本明細書で使用される場合、医薬組成物又は医薬は、薬理学的有効量の少なくとも１つの記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び１つ以上の医薬的に許容できる賦形剤を含む。医薬的に許容できる賦形剤は、薬剤送達システムに意図的に含まれる活性医薬成分（ＡＰＩ、治療用製品、例えばＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図された投与量で治療効果を発揮しないか、又は発揮することを意図していない。賦形剤は、ａ)製造中の薬物送達システムの処理を助け、ｂ）ＡＰＩの安定性、生物学的利用能又は患者の許容性を保護し、支持し、又は増強し、ｃ）製品同定を補助し、そして／又はｄ）保管又は使用中、ＡＰＩの送達の全体的な安定性、有効性、他の任意の属性を増強するために作用することができる。医薬的に許容できる賦形剤は、不活性物質であってもなくても良い。
賦形剤は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：吸収促進剤、粘着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、エクステンダー、増量剤、香料、流動促進剤、保湿剤、滑剤、油、ポリマー、防腐剤、食塩水、塩、溶媒、糖、懸濁剤、徐放性マトリックス、甘味料、増粘剤、等張化剤、ビヒクル、撥水剤、及び湿潤剤。
注射使用のために適切な医薬組成物は、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与の場合、適切な担体は、生理食塩水、静菌水、Cremophor (登録商標)ELTM (BASF、Parsippany, NJ)又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。それは、製造及び貯蔵の条件下で安定すべきであり、そして細菌及び菌類のような微生物の汚染作用に対して保護されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール）、及びそれらの適切な混合物を含む、溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーチングの使用により、分散液の場合、必要とされる粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール及び塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによりもたらされ得る。
滅菌注射用溶液は、必要とされる量の活性化合物を、必要に応じて、上記に列挙された成分の１つ又は組合せと共に適切な溶媒中に組込み、続いて濾過滅菌することにより調製され得る。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒体及び上記に列挙されたそれらからの必要とされる他の成分を含む滅菌ビークル中に組込むことにより調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、活性成分及び任意の追加の所望する成分の粉末を、その滅菌濾過された溶液から得る、真空乾燥及び凍結乾燥を含む。
関節内投与のために適切な製剤は、微結晶性形態、例えば水性微結晶性懸濁液の形態であり得る薬物の無菌水性調製物の形態であり得る。リポソーム製剤又は生分解性ポリマー系もまた、関節内投与及び眼投与の両方のための薬物を提供するために使用され得る。
治療化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む制御された放出製剤などの、身体からの急速な排泄に対して化合物を保護するであろう担体と共に調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。そのような製剤の調製方法は、当業者に明らかであろう。リポソーム懸濁液もまた、医薬的に許容できる担体として使用され得る。それらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように、当業者に知られている方法に従って調製され得る。
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、投与の容易さ及び投与量の均一性のために投与単位形で組成物中に処方され得る。投与単位形は、治療される対象のための単位投与量として適合された物理的に別々の単位を言及し；各単位は、必要とされる医薬学的担体と共に、所望する治療効果を生じるよう計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の投与単位系は、活性化合物の独特の特徴及び達成されるべき治療効果、並びに個体の治療のためのそのような活性化合物を調合する技術分野に固有の制限により決定され、そして直接左右される。
医薬組成物は、医薬組成物に一般的に見出される他の追加の成分を含むことができる。そのような追加の成分は、以下を含むが、但しそれらだけには限定されない：抗掻痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、または抗炎症薬（例えば、抗ヒスタミン薬、ジフェンヒドラミンなど）。本明細書で定義されたＲＮＡｉ剤を発現するか又は含む、細胞、組織又は単離された器官が、「医薬組成物」として使用され得ることもまた想定される。本明細書において使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療的有効量」又は単に、「有効量」とは、薬理学的、治療的又は予防的結果を生じるためのＲＮＡi剤の量を言及する。
一般的に、有効量の活性化合物は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば約１．０〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内であろう。いくつかの実施形態によれば、有効量の活性化合物は、投与当たり約０．２５〜約５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であろう。いくつかの実施形態によれば、有効量の活性成分は、投与当たり約０．５〜約４ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であろう。投与される量はまた、患者の全体的な健康状態、送達される化合物の相対的生物学的有効性、薬物の処方、製剤中の賦形剤の存在及び種類、及び投与経路などの変数にも依存すると思われる。また、ある場合、投与される初期用量は、上記の上限レベルを超えて高められ、所望の血中レベル又は組織レベルを急速に達成し、又はある場合、初期用量は最適量よりも少なくて良い。
疾患の治療のため、又は疾患の治療のための医薬又は組成物の形成のために、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む、本明細書に記載される医薬組成物は、賦形剤、又は以下を含む第２の治療剤又は治療と組合される：第２又は他のＲＮＡｉ剤、小分子薬物、抗体、抗体フラグメント、ペプチド及び／又はアプタマー（但し、それらだけには限定されない）。
記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、医薬的に許容できる賦形剤又はアジュバントに添加される場合、キット、容器、パック又はディスペンサーに包装され得る。本明細書に記載される医薬組成物は、予め充填された注射器又はバイアルに包装され得る。
治療方法及び発現の阻害：
本明細書に開示されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、その化合物の投与から利益を得るであろう疾患又は障害を有する対象（例えば、ヒト又は他の哺乳類）を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態によれば、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴＤ、又はＡＡＴ ｍＲＮＡの発現の減少又は阻害から利益を得るであろう、症状、疾患又は障害、例えばＡＡＴＤ肝疾患を有する対象を治療するために使用され得る。対象は、治療的有効量のいずれか１つ以上の本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与される。対象は、ヒト、又は患者であり得る。対象は、成人、青年、子供又は乳児であり得る。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む記載される医薬組成物は、疾患、例えばＡＡＴＤの治療的処置のための方法を提供するために使用され得る。そのような方法は、本明細書に記載される医薬組成物のヒト又は動物への投与を含む。
いくつかの実施形態によれば、本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴＤに関連する症状、疾患又は障害を含む、ＡＡＴＤを有する対象を治療するために使用される。ＡＡＴＤ肝疾患又は障害は、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、経扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症及び劇症肝不全を含むが、但しそれらだけには限定されない。いくつかの実施形態によれば、記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴＤを有する対象における少なくとも１つの症状を治療するために使用される。対象は、治療的有効量の１つ以上の記載されるＲＮＡｉ剤を投与される。
特定の実施形態によれば、本発明は、本明細書に記載されるいずれかのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるＡＡＴＤの治療方法を提供する。
いくつかの実施形態によれば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴＤ肝疾患又は障害を有する対象の臨床学的症状を治療するか又は管理するために使用される。対象は、治療的有効量の本明細書に記載される１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤又はＡＡＴ ＲＮＡｉ剤含有組成物を投与される。いくつかの実施形態によれば、前記方法は、本明細書に記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を、治療されるべき対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態によれば、記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される対象におけるＡＡＴ遺伝子の遺伝子発現レベル及び／又はｍＲＮＡレベルが、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象、又はＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上低められる。対象における遺伝子発現レベル及び／又はｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞群及び／又は組織において低められる。
いくつかの実施形態によれば、記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される対象におけるＡＡＴのタンパク質レベルが、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象、又はＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上低められる。対象におけるタンパク質レベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液及び／又は他の体液において低められる。
いくつかの実施形態によれば、記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与されるAATDを有する対象におけるＺ−ＡＡＴポリマータンパク質レベルが、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象、又はＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上低められる。いくつかの実施形態によれば、記載されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される対象におけるＺ−ＡＡＴポリマータンパク質レベルが、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象、又はＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％以上低められる。
ＡＡＴ遺伝子発現、ＡＡＴ ｍＲＮＡ又はＡＡＴタンパク質レベルの低下は、当業界において知られている一般方法により評価され、そして定量化され得る。本明細書に開示される実施例は、ＡＡＴ遺伝子発現の阻害及びＡＡＴタンパク質レベルの低下を評価するための一般的に知られている方法を示す。ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルの及び／又はタンパク質レベル（Ｚ−ＡＡＴポリマー及び／又はモノマーを含む）の低下又は減少は、ＡＡＴの低下又は減少、又はＡＡＴの発現の阻害又は低下として、本明細書においては集合的に言及される。
細胞及び組織、及び非ヒト生物：
本明細書に記載されうるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つを含む、細胞、組織及び非ヒト生物が企画される。細胞、組織又は非ヒト生物は、ＲＮＡｉ剤を細胞、組織又は非ヒト生物に送達することにより製造される。
上記で提供された実施形態及び項目は以下の非制限的な例を用いて説明される。
実施例１．ＲＮＡｉ剤配列の同定及びＲＮＡｉ剤の合成：
ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するためのリード配列を同定するための選択工程は、ＡＡＴ遺伝子の変異体にわたる保存配列（配列番号１）を同定するためのインシリコ方法で開始した。ＡＡＴ配列を、ヒトＡＡＴの既知変異体において相補的配列を有する１９ヌクレオチド配列についてバイオインフォマティクスを用いて、最初にスクリーニングした。製造上の問題を有することが知られている配列、及び既知パラメーターに基いて低いＲＮＡｉ活性を有すると予測されるそれらの配列を排除した。次に、配列を、異種間反応性分析にゆだね、カニクイザルＡＡＴと交差反応するであろう候補体を選択した。配列をまた、ヒト及びカニクイザルゲノムに対するオフターゲット効果を回避するための特異性についても評価した。１９マーの１１５配列ファミリーを、候補体として選択した。
本明細書の表６における二重鎖を、次の手順に従って合成した。
合成：
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス及びアンチセンス鎖を、オリゴヌクレオチド合成に使用される固相上で、ホスホルアミダイト技法に従って合成した。規模に依存して、MerMade96E（登録商標）(Bioautomation)又は MerMade12（登録商標）(Bioautomation)のいずれかを使用した。合成を、制御細孔ガラス（ＣＰＧ、５００Å又は６００Å、Prime Synthesis, Aston, PA, USAから入手される）から製造された固体支持体上で行った。すべてのＲＮＡ及び２′−修飾ＲＮＡホスホルアミダイトを、Thermo Fisher Scientific (Milwaukee, WI, USA)から購入した。特に、以下の２′−Ｏ−メチルホスホルアミダイトを用いた：（５'− Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２' − Ｏ−メチル - アデノシン−３' − Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル - アミノ）ホスホルアミダイト、５'− Ｏ−ジメトキシ − トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２' − Ｏ−メチル - シチジン−３' − Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル - アミノ）ホスホルアミダイト、５'− Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２' − Ｏ−メチル − グアノシン−３' − Ｏ−（２−シアノ - エチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト、及び５'−Ｏ−ジメトキシ − トリチル−２' − Ｏ−メチルウリジン−３' − Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト。２’−デオキシ−２′−フルオロ−ホスホルアミダイトは、２′−Ｏ−メチルＲＮＡアミダイトと同じ保護基を担持した。以下のＵＮＡホスホルアミダイトを使用した：５ ' − （４，４'−ジメトキシトリチル）−Ｎ−ベンゾイル−２'、３'−セコ − アデノシン、２'−ベンゾイル−３ ' − ［（２−シアノエチル） − （Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル）］ − リン酸アミダイト、５ '−（４，４'−ジメトキシトリチル）−Ｎ−アセチル−２'、３'−セコ − シトシン、２'−ベンゾイル−３ ' − ［（２−シアノエチル） − （Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル）］ − ホスホルアミダイト、５ ' − （４，４'−ジメトキシトリチル）−Ｎ−イソブチリル−２'、３'−セコ − グアノシン、２'−ベンゾイル−３ ' − ［（２−シアノエチル） − （Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル）］ − ホスホルアミダイト、及び５ ' − （４，４'−ジメトキシ − トリチル）−２'、３'−セコ − ウリジン、２'−ベンゾイル−３ ' − ［（２−シアノエチル） − （Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル）］ − ホスホルアミダイト。
標的リガンド含有ホスホルアミダイトを、無水ジクロロメタン又は無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、他の全てのアミダイトを無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、そして分子節（３Å）を添加した。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）又は５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）を、活性化剤溶液として使用した。カップリング時間は１０分（ＲＮＡ）、１５分（標的リガンド）、９０秒（２'ＯＭｅ）、および６０秒（２'Ｆ）であった。ホスホロチオエ−ト結合を導入するために、無水アセトニトリル中、３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン(ＰＯＳ, PolyOrg, Inc., Leominster, MA, USAから入手された)の１００ｍＭ溶液を使用した。
支持体結合オリゴマ−の開裂及び脱保護：
固相合成の終了の後、乾燥された固体支持体を、水中、４０重量％メチルアミン及び２８％水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）の１：１容量の溶液により３０℃で２時間、処理した。その溶液を蒸発し、そして固形残渣を、水中で再構成した（下記参照のこと）。
精製；
粗オリゴマ−を、TKSgel SuperQ-5PW 13uカラム 及びShimadzu LC-8システムを用いて、アニオン交換ＨＰＬＣにより精製した。緩衝液Ａは、２０ ｍＭ のトリス、 ５ ｍＭ のＥＤＴＡ、 ｐＨ ９．０であり、そして２０％アセトニトリルを含み、そして緩衝液Ｂは、１．５Ｍの塩化ナトリウムの添加により、緩衝液Ａと同じであった。２６０ｎｍでのＵＶトレ−スを記録した。適切な画分をプ−ルし、次に１００ｍＭの炭酸水素アンモニウム、ｐＨ６．７及び２０％アセトニトリルのランニング緩衝液を含むＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５媒体を充填されたGE Healthcare XK 16/40カラムを用いて、サイズ排除ＨＰＬＣ上で泳動した。
アニ−リング：
相補鎖を、０．２×ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、１×、Corning, Cellgro）において等モルのＲＮＡ溶液（センス及びアンチセンス）を組合すことにより混合し、ＲＮＡｉ剤を形成した。この溶液を、７０℃のサ−モミキサ−に入れ、９５℃に加熱し、９５℃で５分間、保持し、そして室温にゆっくりと冷却した。いくつかのＲＮＡｉ剤を凍結乾燥し、そして１５〜−２５℃で貯蔵した。二重鎖濃度、０．２×ＰＢＳ中、ＵＶ−Ｖｉｓ分光計上で溶液吸光度を測定することにより決定した。次に、２６０ｎｍでの溶液吸光度に、換算係数及び希釈係数を掛け算し、二重鎖濃度を決定した。特にことわらない限り、すべての換算係数は、０．０３７ｍｇ／（ｍｌ・ｃｍ）であった。いくつかの実験に関して、換算係数を、実験的に決定された消衰係数から計算した。
実施例２．ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビトロ試験
候補配列二重鎖を、インビトロで試験した。以下の表８に示されるように、アンチセンス鎖配列及びセンス鎖配列をアニーリングし、インビトロ試験のための２１マー鎖（各３′末端上に１９塩基対及びジヌクレオチドＵＵオーバーハングを有する）の二重鎖を形成した：
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、ヒト肝細胞癌系であるＨｅｐ３Ｂ細胞のトランスフェクションにより評価した。細胞を、９６ウェルフォーマットでウェル当たり約１０，０００細胞でプレートし、そして１１５のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤二重鎖のそれぞれを、LipoFectamine RNAiMax (Thermo Fisher)トランスフェクション試薬を用いて、３種の濃度（１０ｎＭ、1ｎＭ及び０．１ｎＭ）でトランスフェクトした。１１５のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のそれぞれの相対的発現を、表９に示すように、ＡＡＴ ｍＲＮＡの発現レベルを内因性対照に比較することによりｑＲＴ−ＰＣＲにより決定し、そして未処理のＨｅｐ３Ｂ細胞に対して正規化した（ΔΔCT 分析）。
実施例３．ＰｉＺマウスにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
トランスジェニックＰｉＺマウスモデル（ＰｉＺマウス）を用いて、インビボでＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を評価した。ＰｉＺマウスは、ヒトＰｉＺ ＡＡＴ変異体対立遺伝子を有し、そしてヒトＡＡＴＤをモデアル化する（Carlson et al., Journal of Clinical Investigation 1989）。
ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、医薬的に許容できる生理食塩水緩衝液中で調製し、そしてＰｉＺマウスに投与し、ＡＡＴ遺伝子発現のノックダウンを評価した。１日目、各マウスは、肩の間の背中のゆるい皮膚に、５．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のいずれかのＡＤ０４４４６、ＡＤ０４４４７、ＡＤ０４４４８、ＡＤ０４４４９、ＡＤ０４４５０、ＡＤ０４４５１、 ＡＤ０４４５４、ＡＤ０４４５５、ＡＤ０４４５６、ＡＤ０４４５７、ＡＤ０４４５８又は ＡＤ０４４５９の１回の皮下（ＳＱ）投与を受けた。（修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＮＡＧリガンド構造については、表４−７を参照のこと）。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４５１及びＡＤ０４４５９は、１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含み；ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４４６及びＡＤ０４４５４は、１１４２位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含み；ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４４７及びＡＤ０４４５５は、１２１１位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含み；ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４４８及びＡＤ０４４５６は、１３２６位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含み；ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４４９及びＡＤ０４４５７は、１３３８位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含み；そしてＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４５０及びＡＤ０４４５８は、１４２７位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含む。（また、表１及び２も参照のこと）。３匹のマウスに、各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与した（ｎ＝３）。
血漿サンプルを採取し、そして１日目（投与前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目及び３６日目にＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）タンパク質レベルについて分析した。ＡＡＴレベルを１日目（投与前）のＡＡＴ血漿レベルに対して正規化した。タンパク質レベルを、製造業者の推薦に従って市販のＥＬＩＳＡキットにより血漿中の循環ヒトＺ−ＡＡＴレベルを定量化することにより測定した。各ＲＮＡｉ剤についての平均正規化ＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）レベルを、以下の表１０に報告する。
上記表１０におけるデータから示されるように、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤Ｄ０４４４７は、ＡＡＴタンパク質の低下を本質的に示さなかったが、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０４４５８（１４２７位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするよう企画された修飾ヌクレオチド配列を含む）及びＡＤ０４４５９（１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするよう企画された修飾ヌクレオチド配列を含む）は、すべての時点にわたってＡＡＴタンパク質の実質的な低下を示した。例えば、ＡＤ０４４５８は、８日目に約６９％（０．３０８）；１５日目に約８３％（０．１７４）及び２２日目に約８２％（０．１７７）のノックダウンを示した。さらに、例えば、ＡＤ０４４５９は、８日目に約７４％（０．２５６）、１５日目に約８７％（０．１３４）及び２２日目に約８３％（０．１７４）のノックダウンを示した。
実施例４．カニクイザルにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
当業界において皮下（ＳＣ）注射として知られているように、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を製造し、そして医薬的に許容できる生理食塩水緩衝液中で組合した。1日目、カニクイザル（Macaca fascicularis）霊長類（「カニクイザル」は「サル」と呼ばれる）に、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８２４、ＡＤ０４８２５、ＡＤ０４８２６又はＡＤ０４８２７を、皮下注射した（修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＮＡＧリガンド構造については、表４−７を参照のこと）。それらのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするよう企画された修飾ヌクレオチド配列を含み、そしてカニクイザルと交差反応した。各グループ中の３匹のサルを試験した（ｎ＝３）
処置されたカニクイザルからの血清サンプルを、−７日目及び１日目（投与前）、並びに８、１５、２２及び２９日目に採取し、ノックダウンをモニターした。３６日目、ＡＤ０４８２５及びＡＤ０４８２６を注射されたカニクイザルについて測定した。提示された時点で、血液サンプルを採取し、そしてカニクイザルＡＡＴ（ｃＡＡＴ）について分析した。血液を大静脈から採取した。ｃＡＡＴレベルを、製造業者の推薦に従って、Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics)上で決定した。それぞれの時点での各動物についてのＡＡＴレベルを、その動物における発現の治療前レベル（−７日目及び1日目（投与前）の平均）で割算し、「投与前に対して正規化された」発現比を決定した。
各それぞれのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤による処理の後の正規化されたカニクイザルＡＡＴ（ｃＡＡＴ）タンパク質レベルを、以下の表１１に報告する。
それぞれの処理グループのそれぞれについての平均正規化ｃＡＡＴレベルを、図９の棒グラフに示す。上記表１１及び図９に示されるように、試験された各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、測定されたすべての時点にわたってカニクイザルにおいてｃＡＡＴの実質的なノックダウンを示した。
実施例５．カニクイザルにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
当業界において皮下（ＳＣ）注射として知られているように、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を製造し、そして医薬的に許容できる生理食塩水緩衝液中で組合した。1日目、カニクイザル（Macaca fascicularis）霊長類に、３ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８３１、ＡＤ０４８３６又はＡＤ０４８３７を、皮下注射した（修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＮＡＧリガンド構造については、表４−７を参照のこと）。それらのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするよう企画された修飾ヌクレオチド配列を含み、そしてカニクイザルと交差反応した。各グループ中の３匹のサルを、ＡＤ０４８２８及びＡＤ０４８３１について試験し（ｎ＝３）、そして各グループ中の２匹のサルを、ＡＤ０４８３６及びＡＤ０４８３７について試験した（ｎ＝２）。
処置されたカニクイザルからの血清サンプルを、−３５日目及び１日目（投与前）、並びに８、１５、２１及び２９日目に採取し、ノックダウンをモニターした。提示された時点で、血液サンプルを採取し、そしてｃＡＡＴについて分析した。血液を大静脈から採取した。ｃＡＡＴレベルを、製造業者の推薦に従って、Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics)上で決定した。それぞれの時点での各動物についてのｃＡＡＴレベルを、その動物における発現の治療前レベル（−３５日目及び1日目（投与前）の平均）で割算し、「投与前に対して正規化された」発現比を決定した。
各それぞれのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤による処理の後の正規化されたカニクイザルＡＡＴ（ｃＡＡＴ）タンパク質レベルを、以下の表１２に報告する。
それぞれの処理グループのそれぞれについての平均正規化ｃＡＡＴレベルを、図１０の棒グラフに示す。上記表１２及び図１０の棒グラフに示されるように、試験された各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、測定されたすべての時点にわたってカニクイザルにおいてｃＡＡＴの実質的なノックダウンを示した。
実質例６．カニクイザルにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
実施例３に示されるようなトランスジェニックＰｉＺマウスモデル（ＰｉＺマウス）を用いて、インビボでＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を評価した。ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、医薬的に許容できる生理食塩水緩衝液中で調製し、そしてＰｉＺマウスに投与し、ＡＡＴ遺伝子発現のノックダウンを評価した。１日目、各マウスは、肩の間の背中のゆるい皮膚に、２．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のいずれかのＡＤ０４８２４、ＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８２９、ＡＤ０４８３０、ＡＤ０４８３１、ＡＤ０４８３２、ＡＤ０４８３３、ＡＤ０４８３４、ＡＤ０４８３６、ＡＤ０４８３７、ＡＤ０４８３８、ＡＤ０４８３９又はＡＤ０４８５７の１回の皮下（ＳＱ）投与を受けた。（修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＮＡＧリガンド構造については、表４−７を参照のこと）。この研究におけるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的化するよう企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含んだ。（また、表１及び２を参照のこと）。３匹のマウスに、各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与した（ｎ＝３）。
血漿サンプルを採取し、そして−２日目、１日目（投与前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目及び３６日目にＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）タンパク質レベルについて分析した。ＡＡＴレベルを１日目（投与前）のＡＡＴ血漿レベルに対して正規化した。タンパク質レベルを、製造業者の推薦に従って市販のＥＬＩＳＡキットにより血漿中の循環ヒトＺ−ＡＡＴレベルを定量化することにより測定した。各ＲＮＡｉ剤についての平均正規化ＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）レベルを、以下の表１３に報告する。
上記表１３におけるデータから示されるように、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のそれぞれは、少なくとも２９日目までにＡＡＴタンパク質の実質的低下を示した。例えば、１５日目、試験された各ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、治療前のレベルに比較して、少なくとも７０％のタンパク質のノックダウンを達成し、複数のグループでは、９０％以上のノックダウンを達成した。
実施例７．カニクイザルにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
実施例３に記載されるトランスジェニックＰｉＺマウスモデルを使用した。各マウスは、研究の開始で、生後５週目であった。ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を、医薬的に許容できる生理食塩水緩衝液中で調製し、そしてＰｉＺマウスに投与し、ＡＡＴ遺伝子発現のノックダウンを評価した。１日目から開始して、各マウスに、４．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）の以下のものを、肩の間の背中のゆるい皮膚に皮下（ＳＱ）用量ｑ２ｗ（すなわち、２週ごとに１回の注射、合計４回の注射）を投与した：（１）生理食塩ビークル；（２）ＡＤ０４８３７（修飾ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＮＡＧリガンド構造については表４−７を参照のこと）、これは、前述のように、１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするように企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含む；又は（３）負の対照として使用される、ＨＢＶ遺伝子を標的とするヌクレオチド配列を含むＮＡＧ−結合ＲＮＡi剤。生理食塩ビークルグループ、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤グループ、及びＨＢＶ ＲＮＡｉ剤グループの一回の皮下注射を、１、１５、２９及び４３日目に行った。７匹のマウスに、生理食塩ビークルをｑ２ｗ投与し（グループ１）；９匹のマウスに、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤をｑ２ｗ投与し（グループ２）；そして６匹のマウスに、ＨＢＶ ＲＮＡi剤をｑ２ｗ投与した（グループ３）。３つの処置グループ中のマウスを、５７日目（生後１３週）に屠殺した。処置グループに加えて、７匹のマウスを、研究の第１週（すなわち、生後５週のマウス）に屠殺し、ベースライン対照として役立てた。
血漿サンプルを採取し、そして１日目（投与前）、８日目、１５日目、２２日目、２９日目及び３６日目に全てのグループのＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）タンパク質レベルについて分析した。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤グループ及び生理食塩水ビークルグループについての追加のサンプルを、４３、５０及び５７日目に採取した。ＡＡＴレベルを１日目（投与前）のＡＡＴ血漿レベルに対して正規化した。タンパク質レベルを、製造業者の推薦に従って市販のＥＬＩＳＡキットにより血漿中の循環ヒトＺ−ＡＡＴレベルを定量化することにより測定した。生理食塩水ビークル及び各ＲＮＡｉ剤についての平均正規化ＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）レベルを、以下の表１４に報告する。
上記表１４におけるデータから示されるように、ＨＢＶ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴ阻害を本質的に示さない負の対照として都合よく機能した。さらに、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤（ＡＤ０９８３７）は、すべての時点で、生理食塩水及びＨＢＶ ＲＮＡi剤の負の対照と比較して、有意な発現のノックダウンを達成した。ｑ２ｗの投与において、実施例７におけるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、３６日目、約９６％のＡＡＴタンパク質のノックダウンを示し（０．０４０）、そして５７日目まで、同様のレベルのノックダウンを維持した。
血清ＡＡＴレベルのモニターリングに加えて、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤（ＡＤ０４８３７）により処置されたＰｉＺマウスからの均質肝臓組織をさらに分析し、可溶性Ｚ−ＡＡＴ（主にモノマータンパク質であると予想される）及び不溶性Ｚ−ＡＡＴポリマー（ポリマータンパク質であると予想される）の両方が効果的に低められたかどうかを決定した。修正されたウェスターンブロットプロトコルを使用して、以前に記載され、そして当業界において知られているように、非変性条件下で可溶性及び不溶性Ｚ−ＡＡＴ画分を分離した（例えば、Mueller et al., Molecular Therapy, March 2012, 20(3): 590-600を参照のこと）。
ウェスターンブロットを調製し、屠殺されたマウスの特定肝臓を試験した。特に、以下の肝臓を試験した：（ｉ）６匹のベースラインマウス；（ii）５匹のＡＡＴ ＲＮＡ剤マウス；及び（iii）４匹の生理食塩水マウス。（ウェスターンブロット分析のために使用されるゲルは、１５ウェルを含んだ）。このウェスターンブロットのために使用された動物のためのサンプルを、種々のグループからランダムに選択した。図１１及び１２は、ウェスターンブロット分析から定量化されたＺ−ＡＡＴポリマー及びＺ−ＡＡＴモノマーレベルを反映する棒グラフを示す。
モノマータンパク質レベルを報告する図１１における棒グラフから見られるように、ベースラインと比較した場合、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与された各マウスは、全ての時点にわたって、ＡＡＴモノマータンパク質に有意な低下を示し、このことは、遺伝子の有意な阻害を示唆した。さらに、ポリマータンパク質レベルを報告する図１２に示されるように、生理食塩水ビークルにより処置された動物は、８週間後、ポリマーＡＡＴ負荷が上昇し続けた。逆に、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤により処置された動物は、ベースライン（生後５週）マウスに比較して、８週間にわたって約５０％のポリマー量の低下を示し、このことは、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤（ＡＤ０９８３７）の投与がポリマーＡＡＴタンパク質の産生を防止し、そして潜在的に逆転させ得ることを示唆する。
実施例８．カニクイザルにおけるＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のインビボ試験
実施例３に記載されるトランスジェニックＰｉＺマウスモデルを用いて、インビボでＲＮＡｉ剤を評価した。各マウスは、１日目、肩の間の背中のゆるい皮層に、以下のいずれかの１回の皮下（ＳＱ）投与を受けた：（１）生理食塩水；（２）１．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８３７のＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤（１０００位でのＡＡＴ遺伝子（配列番号１）を標的とするよう企画された修飾ヌクレオチドアンチセンス鎖配列を含む）；（３）２．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８３７；（４）４．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８３７；又は（５）８．０ｍｇ／ｋｇのＡＤ０４８３７。四匹の動物に、グループ１（生理食塩水）を投与し、そして４匹全てを、４３日目に屠殺した。１５匹の動物に、グループ２、３、４及び５のそれぞれを投与し、そして各グループからの３匹の動物、それぞれ、８、１５、２２、２９及び４３日目に屠殺した。
血漿サンプルを採取し、そして全てのグループについて、ＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）タンパク質レベルを、１日目（投与前）、８、１５、２２、２９、３６（及び４３日目に分析した。屠殺されたマウスに関して、心臓穿刺を、Ｚ−ＡＡＴタンパク質レベル評価（２００μｌの血漿）のための血清単離のために行った。ＡＡＴレベルを、１日目（投与前）のＡＡＴ血漿レベルに対して正規化した。タンパク質のレベルを、製造業者の推薦に従って市販のＥＬＩＳＡキットにより血漿中の循環ヒト−ＡＡＴレベルを定量化することにより測定した。生理食塩水ビークル及び各ＲＮＡｉ剤投与グループについての平均正規化ＡＡＴ（Ｚ−ＡＡＴ）レベルを、以下の表１５に報告する。
上記表１５におけるデータから示されるように、ＮＡＧ結合ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、試験された全ての投与レベルで測定された全ての時点にわたって、生理食塩水に比較して、有意な発現のノックダウンを達成した。
さらに、ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルをまた、それぞれ各時点で、屠殺されたマウスについても評価した。上記のように、グループ２〜５（すなわち、ＲＮＡｉ剤グループ）について、３匹のマウスを、８、１５、２２、２９及び４３日目それぞれで屠殺し；そしてグループ１については、４匹のマウス全てを、４３日目に屠殺した。左側肝葉の半分を回収し、そしてＲＮＡ単離のために液体窒素中で急速凍結した。
上記表１６に示されるように、相対的なＡＡＴ ｍＲＮＡ発現レベルは、生理食塩水ビークルと比較して、測定された全ての時点にわたって有意に低められた。例えば、１５日目、グループ２（１．０ｍｇ／ｋｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）は、ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルの約５８％の低下を示し（０．４１９）；グループ３（２．０ｍｇ／ｋｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）は、ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルの約６７％の低下を示し（０．３２７）；グループ４（４．０ｍｇ／ｋｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）は、ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルの約８４％の低下を示し（０．１６１）；そしてグループ５（８．０ｍｇ／ｋｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）は、ＡＡＴ ｍＲＮＡレベルの約９４％の低下を示し（０．０５５）。
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と共に説明してきたが、前述の説明は例示を意図したものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではない。他の側面、利点、及び修飾は以下の特許請求の範囲内にある。

Claims (66)

  1. α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、前記アンチセンス鎖が表２、３又は４のいずれかのアンチセンス鎖配列のヌクレオチド２〜１８を含み、そして前記センス鎖が前記アンチセンス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である、ＲＮＡｉ剤。
  2. α−１アンチトリプシン（ＡＡＴ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が表２、３又は４のいずれかのセンス鎖配列のヌクレオチド２〜１８を含み、そして前記アンチセンス鎖が前記センス鎖に対して少なくとも実質的に相補的である、ＲＮＡｉ剤。
  3. 前記アンチセンス鎖が、表２、３又は４のいずれかのアンチセンス鎖配列のヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  4. 前記センス鎖が、表２、３又は４のいずれかのアンチセンス鎖配列のヌクレオチド配列を含む、請求項２に記載のＲＮＡｉ剤。
  5. 前記センス鎖が、表４のいずれかのセンス鎖配列のヌクレオチド配列を含み、そして前記アンチセンス鎖が、表５のいずれかのアンチセンス鎖配列のヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  6. 前記ＲＮＡｉ剤が少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  7. 前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、２'− Ｏ−メチルヌクレオチド、２'−フルオロヌクレオチド、２'−デオキシヌクレオチド、２ '、３'−セコヌクレオチド模倣物、ロックドヌクレオチド、２'−Ｆ−アラビノヌクレオチド、２'−メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆ヌクレオチド、逆脱塩基ヌクレオチド、逆２'−ＯＭｅヌクレオチド、逆２‘−デオキシヌクレオチド、２’−アミノ修飾ヌクレオチド、２‘−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド、及び３’−ＯＭｅヌクレオチドから成る群から選択される、請求項６に記載のＲＮＡｉ剤。
  8. 前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  9. 前記センス鎖が、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  10. 前記アンチセンス鎖が、１、２、３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  11. 前記センス鎖及びアンチセンス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  12. 前記センス鎖が、３０ヌクレオチド以下の長さであり、そして前記アンチセンス鎖が３０ヌクレオチド以下の長さである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  13. 前記センス鎖が、２４ヌクレオチド以下の長さであり、そして前記アンチセンス鎖が２４ヌクレオチド以下の長さである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  14. 前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ１８〜２４ヌクレオチドの長さである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  15. 前記センス鎖及びアンチセンス鎖が、それぞれ２１ヌクレオチドの長さである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  16. 前記ＲＮＡｉ剤が２つの平滑末端を有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  17. 前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、そしてさらに、１つ以上の標的基又は連結基を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  18. 前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、そしてさらに、１つ以上の標的基又は連結基を含み、そして前記標的基又は連結基が表７に表される構造のいずれかの構造を有する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  19. 前記１つ以上の標的基又は連結基が前記センス鎖に共役されている、請求項１８に記載のＲＮＡｉ剤。
  20. 前記ＲＮＡｉ剤が、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む標的基を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  21. 前記アシアロ糖タンパク質受容体リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項２０に記載のＲＮＡｉ剤。
  22. 前記アシアロ糖タンパク質受容体リガンドが、Ｎ−アセチル−ガラクトサミントリマーを含む、請求項２１に記載のＲＮＡｉ剤。
  23. 前記ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含み、そしてさらに、１つ以上の標的基を含み、前記標的基が、下記：（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓから成る群から選択された構造を有する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  24. 前記ＲＮＡｉ剤が、センス鎖の５′末端に共役される標的基を含む、請求項１〜２３のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  25. 前記ＲＮＡｉ剤が、表６における二重鎖のいずれかの構造を有する二重鎖を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖から成る、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉ剤。
  26. 前記ＲＮＡｉ剤が、下記：ＡＤ０４８２４、ＡＤ０４８２５、ＡＤ０４８２６、ＡＤ０４８２７、ＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８２９、ＡＤ０４８３０、ＡＤ０４８３１、ＡＤ０４８３２、ＡＤ０４８３３、ＡＤ０４８３４、ＡＤ０４８３５、ＡＤ０４８３６及びＡＤ０４８３７から成る群から選択される二重鎖構造を有する、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉ剤。
  27. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)を含み、ここで前記アンチセンス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして前記センス鎖が配列(５′ →３′) ＡＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６６)を含み、ここで前記センス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  28. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′)ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)を含み、ここで前記アンチセンス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして前記センス鎖が配列(５′ →３′) ＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８５７)を含み、ここで前記センス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  29. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)を含み、ここで前記アンチセンス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして前記センス鎖が配列(５′ →３′) ＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡＵＵ (配列番号８８５)を含み、ここで前記センス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  30. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)を含み、ここで前記アンチセンス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、そして前記センス鎖が配列(５′ →３′) ＣＧＣＧＵＵＵＡＧＧＣＡＵＧＵＵＵＡＡＣＡ (配列番号８６４)を含み、ここで前記センス鎖の全て又は実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  31. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵ (配列番号８０１)を含み、ここで前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８０１が前記アンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  32. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ (配列番号９６０)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合である、請求項３１に記載のＲＮＡｉ剤。
  33. 前記センス鎖が配列(５′ →３′) ａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａ (配列番号１２７９)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１又は２個の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）及び／又は１、２、３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである、請求項３２に記載のＲＮＡｉ剤。
  34. 前記ＲＮＡｉ剤がＡＤ０４８３７ (配列対番号: ９６０/１０３３)の二重鎖構造を有する、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
  35. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＵＵ (配列番号７９４)を含み、ここで前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号７９４が前記アンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  36. 前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｕｓｕ (配列番号９１３)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合である、請求項３５に記載のＲＮＡｉ剤。
  37. 前記センス鎖が配列(５′ →３′) ｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ (配列番号１２７６)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１又は２個の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）及び／又は１、２、３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである、請求項３６に記載のＲＮＡｉ剤。
  38. 前記ＲＮＡｉ剤がＡＤ０４８２８ (配列対番号: ９１３/１０２８)の二重鎖構造を有する、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
  39. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＵＵ (配列番号８３９)を含み、ここで前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８３９が前記アンチセンス鎖の１〜２２位（５′→３′）に位置する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  40. 前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕｓＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｃｕｓｕ (配列番号９５８)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合である、請求項３９に記載のＲＮＡｉ剤。
  41. 前記センス鎖が配列(５′ →３′) ｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｕｓｕ (配列番号１２７７)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１又は２個の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）及び／又は１、２、３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである、請求項４０に記載のＲＮＡｉ剤。
  42. 前記ＲＮＡｉ剤がＡＤ０４８３１ (配列対番号: ９５８/１０３０)の二重鎖構造を有する、請求項４１に記載のＲＮＡｉ剤。
  43. 前記アンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ＵＧＵＵＡＡＡＣＡＵＧＣＣＵＡＡＡＣＧＣＧ (配列番号８００)を含み、ここで前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては修飾ヌクレオチドであり、そして配列番号８００が前記アンチセンス鎖の１〜２１位（５′→３′）に位置する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  44. 前記ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が配列(５′ →３′) ｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａＣｆａＵｆｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇｓＣｆｓｇ (配列番号９５９)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合である、請求項４３に記載のＲＮＡｉ剤。
  45. 前記センス鎖が配列(５′ →３′) ｃｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａ (配列番号１２７８)を含み、ここでａ、ｃ、ｇ及びｕはそれぞれ、２′−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ及びＵｆはそれぞれ、２′−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン又はウリジンであり；そしてｓはホスホロチオエート結合であり；センス鎖上に任意に存在するものは、１又は２個の逆塩基性デオキシリボース残基（ｉｎｖＡｂ）及び／又は１、２、３又は４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；そしてセンス鎖の５′末端に任意に結合されるものは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的リガンドである、請求項４４に記載のＲＮＡｉ剤。
  46. 前記ＲＮＡｉ剤がＡＤ０４８３６ (配列対番号: ９５９/１０２４)の二重鎖構造を有する、請求項４５に記載のＲＮＡｉ剤。
  47. 請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤、及び少なくとも１つの医薬的に許容できる賦形剤を含む組成物。
  48. １つ以上の追加の治療薬又は治療法をさらに含む、請求項４７に記載の組成物。
  49. 前記組成物が、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ又はバイアルに包装される、請求項４７又は４８に記載の組成物。
  50. 前記組成物が、皮下注射による投与のために処方される、請求項４７〜４９のいずれか１項に記載の組成物。
  51. 前記組成物が、下記：ＡＤ０４８２４、ＡＤ０４８２５、ＡＤ０４８２６、ＡＤ０４８２７、ＡＤ０４８２８、ＡＤ０４８２９、ＡＤ０４８３０、ＡＤ０４８３１、ＡＤ０４８３２、ＡＤ０４８３３、ＡＤ０４８３４、ＡＤ０４８３５、ＡＤ０４８３６及びＡＤ０４８３７から成る群から選択される構造を有する１つ以上の二重鎖を含む、請求項４７に記載の組成物。
  52. 有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤を投与することを含む、細胞におけるＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法。
  53. 有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤又は請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象におけるＡＡＴ遺伝子の発現を阻害する方法。
  54. 治療的有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤又は請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物を、その必要な大賞に投与することを含む、α−１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療方法。
  55. 治療的有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤又は請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物を、その必要な大賞に投与することを含む、α−１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）により引起される状態又は疾患の治療方法。
  56. 前記ＡＡＴにより引起される状態又は疾患が肺疾患である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記肺疾患が、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、肝扁桃炎、胆汁鬱滞、線維症、又は劇症肝不全である、請求項５６に記載の方法。
  58. 有効量の請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤又は請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物を対象に投与することを含む、ベースライン治療前レベルと比較して、対象における不溶性ＡＡＴのレベルを減じるか又は低める方法。
  59. 前記ＲＮＡｉ剤が対象に皮下投与される、請求項５２〜５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 対象における血清ＡＡＴタンパク質レベル（可溶性及び／又は不溶性）、又はＡＡＴ ｍＲＮＡレベルを測定することをさらに含む、請求項５２〜５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記対象における血清ＡＡＴタンパク質レベル（可溶性及び／又は不溶性）、及び/又はＡＡＴ ｍＲＮＡレベルが、低められる、請求項５２〜６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 対象の治療方法への使用のための請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  63. ＡＡＴＤを有する対象の治療方法への使用のための請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
  64. 対象の治療方法への使用のための請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
  65. ＡＡＴＤを有する対象の治療方法への使用のための請求項４７〜５１のいずれか１項に記載の組成物。
  66. 細胞におけるＡＡＴ ｍＲＮＡの発現の阻害への使用のための請求項１〜４６のいずれか１項に記載のＲＮＡｉ剤。
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