TW201831686A - α-1抗胰蛋白酶 (AAT) RNAi 藥劑、包含AAT RNAi 藥劑之組合物及使用方法 - Google Patents

α-1抗胰蛋白酶 (AAT) RNAi 藥劑、包含AAT RNAi 藥劑之組合物及使用方法 Download PDF

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Abstract

本發明描述用於抑制α-1抗胰蛋白酶(AAT)基因之表現的RNAi藥劑，包含AAT RNAi藥劑之組合物及使用方法。亦揭示醫藥組合物，其包括一或多種AAT RNAi藥劑與一或多種能夠活體內傳遞RNAi藥劑至肝細胞的賦形劑。AAT RNAi藥劑活體內傳遞至肝細胞提供對AAT基因表現之抑制以及治療與AAT缺乏相關的疾病，諸如慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高、膽汁鬱積、纖維化及爆發性肝衰竭。

Description

α-1抗胰蛋白酶 (AAT) RNAi 藥劑、包含AAT RNAi 藥劑之組合物及使用方法
本文揭示用於抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現之RNA干擾(RNAi)藥劑、包含AAT RNAi藥劑之組合物及其使用方法。
α-1抗胰蛋白酶(AAT，α1-抗胰蛋白酶或A1AT)缺乏為一種遺傳性常染色體顯性遺傳病症，其導致產生α1-抗胰蛋白酶的缺陷，導致肺及肝疾病。AAT缺乏的發生率為每1,500至3,500名個體中約1名。α-1抗胰蛋白酶缺乏最常影響具有歐洲祖先之個人。 α-1抗胰蛋白酶為屬於絲胺酸蛋白酶抑制劑超家族的蛋白酶抑制劑。正常AAT蛋白為一種循環醣蛋白蛋白酶抑制劑，主要在肝臟中由肝細胞合成且分泌至血液中。AAT的已知生理功能為抑制嗜中性白血球蛋白酶，其用以在發炎期間保護宿主組織免於非特異性損傷。 AAT缺陷(AATD)的最具臨床意義的形式為與兒童及成人的肝病以及成人的肺病有關的遺傳病症，其由Z突變引起。Z突變型對偶基因(PiZ)經單點突變使突變Z形式AAT蛋白質(「Z-AAT蛋白質」)容易引起異常摺疊，引起細胞內滯留。突變體Z-AAT蛋白質單體能夠形成聚集成纏結聚集物的聚合物鏈，其有時稱為「液珠」。不溶性Z-AAT蛋白質液珠在穿過分泌路徑時無效，且積聚在肝細胞的內質網(ER)中。聚合液珠物質壓迫ER且引發持續肝細胞損傷，導致纖維化、肝硬化及肝細胞癌風險增加。另外，缺乏循環抗蛋白酶活性使肺容易受到嗜中性白血球彈性蛋白酶的損傷，導致產生呼吸道併發症，諸如肺氣腫。 具有同型接合PiZZ基因型之個體嚴重缺乏功能性AAT，此導致肺病及肝細胞損傷以及肝病。每週使用AAT加強療法，其使用經純化之人類AAT，在患有AATD之個體體內導致幾乎正常的AAT血漿含量，且有助於預防患病個體之肺損傷。然而，儘管投與經純化之AAT可改善或幫助預防由缺乏內源性分泌之AAT引起的肺損傷，但AATD患者仍容易患由沈積及積聚過量異常摺疊AAT蛋白引起的內質網肝臟儲存疾病。肝細胞中液珠構形的積聚之Z-AAT蛋白為AATD肝病的熟知特徵，且咸信其導致患有AATD之個體中負責誘發肝臟損傷(包含肝細胞損傷及死亡及慢性肝臟損傷)的蛋白毒性作用。(D. Lindblad, K. Blomenkamp及J. Teckman, Hepatology 2007, 46: 1228-1235)。AATD患者即使在嬰兒期亦通常產生肝病，其可能是嚴重或致死的。肝臟損傷的臨床表現包含慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高、膽汁鬱積、纖維化及甚至爆發性肝衰竭。 目前沒有臨床批准之治療方法來預防由於AATD引起的肝病的發作或減緩其進展。此外，雖然美國專利申請公開案第2015/0361427號揭示能夠抑制AAT基因表現的RNAi藥劑，但仍需要具有改善之效能的新穎且高效之AAT RNAi藥劑，其能夠選擇性且有效地抑制AAT基因之表現，由此預防及潛在地逆轉Z-AAT積聚相關之肝臟損傷及纖維化。
需要能夠選擇性且高效抑制AAT基因表現的新穎AAT特異性RNA干擾(RNAi)藥劑(在本文中亦稱為RNAi藥劑、RNAi觸發劑或觸發劑)。另外，需要用於治療及預防與AAT缺乏有關的疾病的新穎AAT特異性RNAi藥劑的組合物。 因為AATD導致的肝臟損傷藉由功能獲得機制發生，所以抑制AAT基因表現適用於防止Z-AAT蛋白在肝臟中積聚。另外，Z-AAT聚合物聚集物之減少或移除降低肝細胞中之ER應力，且在降低可能性及幫助預防及治療肝細胞損傷及慢性肝臟損傷，諸如纖維化、肝硬化、肝細胞癌以及由AATD引起的其他病況及疾病時提供額外優勢。已明確定義為AATD患者中進行性肝病之病因的發炎Z-AAT蛋白的減少是重要的，因為其可減緩或中斷肝病進展且允許纖維化組織修復。 本文描述一種新穎AAT RNAi藥劑，包括AAT RNAi藥劑之組合物，以及使用AAT RNAi藥劑及包含AAT RNAi藥劑之組合物活體內及活體外抑制AAT基因表現的方法。本文另外描述使用本文所述之AAT RNAi藥劑及包含AAT RNAi藥劑之組合物治療AATD相關疾病的方法。 本文揭示之AAT RNAi藥劑及方法可提供AATD及由AATD引起的病況及疾病，諸如慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌及爆發性肝衰竭的治療。本文揭示之AAT RNAi藥劑在投與個體時可預防及/或逆轉Z-AAT積聚相關之肝臟損傷及纖維化。本文所述之AAT RNAi藥劑可藉由此項技術中已知之任何適合方法，諸如皮下注射或靜脈內投與，向個體，例如人類或動物個體投與。 本文描述用於抑制α-1抗胰蛋白酶(AAT)基因表現之RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股。本文亦描述包括能夠抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現的RNAi藥劑的組合物，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股，以及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。 本文所述之各AAT RNAi藥劑包含有義股及反義股。有義股及反義股可彼此部分、實質上或完全互補。本文所述之RNAi藥劑有義及反義股之長度各自可為16至30個核苷酸長度。在一些實施例中，有義股及反義股獨立地為17至26個核苷酸長度。在一些實施例中，有義及反義股獨立地為21至26個核苷酸長度。在一些實施例中，有義及反義股獨立地為21至24個核苷酸長度。有義股及反義股可為相同長度或不同長度。本文所述之RNAi藥劑在傳遞至表現AAT之細胞時，活體內或活體外抑制一或多種AAT基因之表現。 AAT RNAi藥劑包含有義股(亦稱為隨從股)及反義股(亦稱為導向股)。本文所述之AAT RNAi藥劑的有義股包含與AAT mRNA中之序列的至少16個連續核苷酸的核心延伸部分具有至少85%一致性的核苷酸序列。在一些實施例中，與AAT mRNA中之序列具有至少85%一致性的有義股核心延伸部分的長度為16、17、18、19、20、21、22或23個核苷酸。AAT RNAi藥劑之反義股包含與AAT mRNA及相應有義股中之序列的至少16個連續核苷酸的核心延伸部分上具有至少85%互補性的核苷酸序列。在一些實施例中，與AAT mRNA或相應有義股中之序列具有至少85%互補性的反義股核心核苷酸延伸部分的長度為16、17、18、19、20、21、22或23個核苷酸。 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑靶向具有表1中所揭示之任何序列的序列的AAT基因的一部分。 可用於AAT RNAi藥劑中之AAT RNAi藥劑有義股及反義股之實例提供於表2、3、4及5中。包含AAT RNAi藥劑之雙螺旋體之實例提供於表6中。可由本文揭示之某些AAT RNAi藥劑的有義股及反義股組成或包含於其中的19個核苷酸核心延伸序列之實例提供於表2中。 本文描述用於活體內傳遞AAT RNAi藥劑至個體(諸如哺乳動物)之肝細胞之方法。在一些實施例中，使用此項技術中已知的任何寡核苷酸傳遞技術將或一多種AAT RNAi藥劑傳遞至目標細胞或組織中。核酸傳遞方法包含(但不限於)藉由囊封於脂質體中、藉由離子電滲或藉由併入其他媒劑中，諸如水凝膠、環糊精、生物可降解奈米膠囊及生物黏附微球體、蛋白質載體或Dynamic Polyconjugates™ (DPC)(參看例如WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO 2011/104169及WO 2012/083185，其中每一者以引用之方式併入本文中)。在一些實施例中，傳遞媒劑，諸如聚合物、兩親性聚合物、膜活性聚合物、肽，諸如蜂毒素或蜂毒素樣肽、可逆修飾之聚合物或肽，或脂質可與本文所揭示之AAT RNAi藥劑一起使用。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑藉由將RNAi藥劑共價鍵聯或結合至靶向基團(諸如去唾液酸醣蛋白受體配位體)傳遞至目標細胞或組織。在一些實施例中，去唾液酸醣蛋白受體配位體包含半乳糖或半乳糖衍生物簇，由其組成或基本上由其組成。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑連接至包括半乳糖衍生物N-乙醯基-半乳糖胺的靶向配位體。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包含N-乙醯基-半乳糖胺三聚體或N-乙醯基-半乳糖胺四聚體。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇為N-乙醯基-半乳糖胺三聚體或N-乙醯基-半乳糖胺四聚體。適用於傳遞RNAi藥劑之實例靶向基團例如揭示於美國專利申請案第15/452,324號及美國專利公開案第US 2017/0253875號中，其以全文引用之方式併入本文中。 靶向基團可連接至AAT RNAi藥劑之有義股或反義股的3'或5'端。在一些實施例中，靶向基團連接至有義股之3'或5'端。在一些實施例中，靶向基團連接至有義股之5'端。在一些實施例中，靶向基團內部連接至RNAi藥劑之有義股及/或反義股上的核苷酸。在一些實施例中，靶向基團經連接子連接至RNAi藥劑。 靶向基團(具有或不具有連接子)可連接至表2、3、4及5中所揭示之有義及/或反義股中之任一者之5'或3'端。連接子在有或無靶向基團之情況下可連接至表2、3、4及5中所揭示之有義股及/或反義股中之任一者的5'或3'端。 在一些實施例中，本文描述組合物，其包含具有表6中所揭示之雙螺旋結構的一或多種AAT RNAi藥劑。 在一些實施例中，本文描述包含至少兩種具有不同核苷酸序列之AAT RNAi藥劑之組合或混合物的組合物。在一些實施例中，兩種或更多種不同AAT RNAi藥劑各自分別且獨立地連接至靶向基團。在一些實施例中，兩種或更多種不同AAT RNAi藥劑各自連接至包含靶向配位體或由靶向配位體組成的靶向基團，該等靶向配位體包含靶向去唾液酸醣蛋白受體的一或多個部分。在一些實施例中，兩種或更多種不同AAT RNAi藥劑各自連接至包含靶向配位體或由靶向配位體組成的靶向基團，該等靶向配位體包含一或多種半乳糖衍生物。在一些實施例中，兩種或更多種不同AAT RNAi藥劑各自連接至包含靶向配位體或由靶向配位體組成的靶向基團，該等靶向配位體包含一或多種N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，當組合物中包含兩種或更多種RNAi藥劑時，各RNAi藥劑獨立地連接至相同靶向基團。在一些實施例中，當組合物中包含兩種或更多種RNAi藥劑時，各RNAi藥劑獨立地連接至不同靶向基團，諸如具有不同化學結構之靶向基團。 在一些實施例中，靶向基團不使用額外連接子即連接至AAT RNAi藥劑。在一些實施例中，靶向基團設計成具有容易存在的連接子以促進與AAT RNAi藥劑的鍵聯。在一些實施例中，當組合物中包含兩種或更多種RNAi藥劑時，該兩種或更多種RNAi藥劑可使用相同連接子連接至其各別靶向基團。在一些實施例中，當組合物中包含兩種或更多種RNAi藥劑時，該兩種或更多種RNAi藥劑使用不同連接子連接至其各別靶向基團。 在另一態樣中，本文描述用於抑制個體體內之α-1抗胰蛋白酶表現之方法，其包括向該個體投與能夠抑制AAT基因表現之量的RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股。 本文亦描述用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病之方法，該方法包括向個體投與治療有效量的如本文所述之RNAi藥劑。另外描述用於抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括投與本文所述之AAT RNAi藥劑。 在一些實施例中，本文揭示用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病的方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之RNAi藥劑，其具有包括表2、3或4中之序列中之任一者之序列的反義股。 在一些實施例中，本文揭示用於抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括投與AAT RNAi藥劑，其包含包括表2、3或4中之序列中之任一者之序列的反義股。 在一些實施例中，本文揭示用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病之方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之RNAi藥劑，其包含包括表2、3或5中之序列中之任一者之序列的有義股。 在一些實施例中，本文揭示用於抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括投與AAT RNAi藥劑，其包含包括表2、3或5中之序列中之任一者之序列的有義股。 在一些實施例中，本文揭示用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病的方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之RNAi藥劑，其包含包括表5中之序列中之任一者之序列的有義股，及包括表4中之序列中之任一者的反義股。 在一些實施例中，本文揭示用於抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之RNAi藥劑，其包含包括表5中之序列中之任一者之序列的有義股，及包括表4中之序列中之任一者之反義股。 在一些實施例中，本文揭示抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括投與AAT RNAi藥劑，該AAT RNAi藥劑包含由表5中之序列中之任一者的核鹼基序列組成的有義股，及由表4中之序列中之任一者的核鹼基序列組成的反義股。在其他實施例中，本文揭示抑制AAT基因表現之方法，該等方法包括投與AAT RNAi藥劑，其包含由表5中經修飾序列中之任一者的經修飾序列組成的有義股，及表4中經修飾序列中之任一者的經修飾序列組成之反義股。 在一些實施例中，本文揭示用於抑制細胞中的AAT基因表現之方法，該等方法包括投與具有表6中闡述之雙螺旋結構之一或多種AAT RNAi藥劑。 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑具有包含圖1、圖2、圖3、圖4、圖5、圖6、圖7或圖8中之任一者中所示之結構的結構，由其組成之結構或基本上由其組成之結構。 本文揭示之AAT RNAi藥劑設計成靶向AAT基因(SEQ ID NO:1)上之特異性位置。如本文所定義，當反義股之5'末端核鹼基與鹼基與基因配對時基因位置下游19個核苷酸的位置(朝向3'末端)比對時，反義股序列設計成靶向基因上的既定位置處之AAT基因。舉例而言，如本文表1、2及3中所繪示，設計成靶向位置1000處之AAT基因的反義股序列在鹼基與基因配對時需要反義股之5'末端核鹼基與AAT基因的位置1018對準。如本文所提供，AAT RNAi藥劑不要求反義股之位置1(5'3')處的核鹼基與基因互補，其限制條件為反義股與基因跨越至少16個連續核苷酸的核心延伸序列存在至少85%互補性。舉例而言，對於設計成靶向AAT基因之位置1000的本文揭示之AAT RNAi藥劑，AAT RNAi藥劑的反義股的5'末端核鹼基必須與基因的位置1018對準；然而，反義股之5'末端核鹼基可以但並非必須與AAT基因的位置1018互補，其限制條件為反義股與基因跨越至少16個連續核苷酸的核心延伸序列存在至少85%互補性。如尤其本文揭示之各種實例所示，基因藉由AAT RNAi藥劑之反義股的特異性結合位點(例如不管AAT RNAi藥劑是設計成靶向位置1000處、位置1142處或一些其他位置處的AAT基因)對AAT RNAi藥劑實現的抑制程度極其重要。 在一些實施例中，反義股序列設計成具有靶向AAT 基因(SEQ ID NO: 1)之位置1000的序列。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO: 80)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:80)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:81)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:81)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:429)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:429)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO:430)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO:430)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACA ( SEQ ID NO :429)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:80)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO:430)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之反義股包括AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:81)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)之核鹼基序列或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG ( SEQ ID NO :800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG ( SEQ ID NO :800)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO :801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:857)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:885)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO:800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:864)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:866)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:857)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:885)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO:800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:864)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:866)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04824雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04825之雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04826之雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04827之雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04828雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04829雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04830雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04831雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括雙螺旋體AD04832，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04833雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04834雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04835雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04836雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括AD04837雙螺旋結構，由其組成或基本上由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:80)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO:80位於反義股之位置1至19 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括UGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:80)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 80位於反義股之位置1至19 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:81)之核鹼基序列或由其組成，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 81位於反義股之位置1至19 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括AGUUAAACAUGCCUAAACG (SEQ ID NO:81)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO:81位於反義股之位置1至19 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:429)之核鹼基序列，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 429之位置19與位於反義股之5'末端的核苷酸形成鹼基對。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:429)之核鹼基序列或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 429之位置19與位於反義股之5'末端處的核苷酸形成鹼基對。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO:430)之核鹼基序列，其中一或多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO:430之位置19與位於反義股之5'末端處的核苷酸形成鹼基對。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACU (SEQ ID NO:430)之核鹼基序列，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO:430之位置19與位於反義股之5'末端處的核苷酸形成鹼基對。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 794位於反義股之位置1至21 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 794位於反義股之位置1至21 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 839位於反義股之位置1至22 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 839位於反義股之位置1至22 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列 UGUUAAACAUGCCUAAACGCG(SEQ ID NO:800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 800位於反義股之位置1至21 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO:800)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 800位於反義股之位置1至21 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 801位於反義股之位置1至21 (5'3')處。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中全部或實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 801位於反義股之位置1至21 (5'3')處。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且且其中SEQ ID NO:794位於反義股之5'末端處，且其中AAT RNAi藥劑之有義股包括CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:857)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 839位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:885)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO:800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 800位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:864)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 801位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:866)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括核鹼基序列區別為0、1、2或3個核苷酸的UGUUAAACAUGCCUAAACGUU (SEQ ID NO:794)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 794位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸之CGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:857)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCUU (SEQ ID NO:839)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 839位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的GCGUUUAGGCAUGUUUAACAUU (SEQ ID NO:885)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCG (SEQ ID NO:800)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 800位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的CGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:864)之核鹼基序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之反義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的核鹼基序列UGUUAAACAUGCCUAAACGCU (SEQ ID NO:801)或由其組成，其中至少一種或更多種核苷酸為經修飾之核苷酸，且其中SEQ ID NO: 801位於反義股之5'末端處，且AAT RNAi藥劑之有義股包括區別為0、1、2或3個核苷酸的AGCGUUUAGGCAUGUUUAACA (SEQ ID NO:866)之核鹼基序列或由其組成。 本文所述之AAT RNAi藥劑可包含一或多種經修飾之核苷酸。本文所述之AAT RNAi藥劑亦可包含一或多種硫代磷酸酯核苷間鍵。 本文所述之AAT RNAi藥劑亦可包括一或多種靶向基團或連接基團。在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑包括一或多種靶向基團。在一些實施例中，靶向基團包括去唾液酸醣蛋白受體配位體。在一些實施例中，去唾液酸醣蛋白受體配位體包括半乳糖或半乳糖衍生物簇。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，靶向配位體包括N-乙醯基-半乳糖胺三聚物。在一些實施例中，靶向基團結合至本文揭示之AAT RNAi藥劑的有義股。 在一些實施例中，本文所述之AAT RNAi藥劑可包含一或多種靶向基團，其具有結構(PAZ)、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。 在一些實施例中，本文所述之AAT RNAi藥劑包含有義股之5'末端處的一個靶向基團，其具有結構(PAZ)、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。 本文揭示之AAT RNAi藥劑可併入至包括一或多種所揭示之AAT RNAi藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑的組合物中。在一些實施例中，包括一或多種所揭示之AAT RNAi藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑的本文揭示之組合物為醫藥組合物。 包括一或多種AAT RNAi藥劑之醫藥組合物可以多種方式投與，視需要局部抑或全身性治療而定。投與可為(但不限於)靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內、真皮下(例如經植入裝置)及腦實質內投與。在一些實施例中，藉由皮下注射投與本文所述之醫藥組合物。 在一些實施例中，包括一或多種所揭示之AAT RNAi藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑的組合物可進一步包括一或多種額外療法或治療。 在一些實施例中，包括一或多種AAT RNAi藥劑的本文所述之組合物可封裝於套組、容器、藥包、分配器、預填藥注射器或小瓶中。在一些實施例中，本文所述之組合物可非經腸投與。 可向個體投與本文揭示之AAT RNAi藥劑及包括其之組合物來抑制個體中α-1抗胰蛋白酶基因之表現。在一些實施例中，個體為人類。在一些實施例中，個體為已診斷患有AATD之人類。 在一些實施例中，本文揭示用於抑制AAT基因於細胞中之表現的方法，該等方法包括投與AAT RNAi藥劑，其具有與具有表1中所列之序列中之任一者的AAT mRNA之部分至少部分互補的反義股。 可向個體投與本文揭示之AAT RNAi藥劑及包括其之組合物用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病。可藉由投與本文揭示之AAT RNAi藥劑及包括其之組合物治療、預防或管理的病況或疾病包含慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高、膽汁鬱積、纖維化或爆發性肝衰竭。 如本文所用，術語「寡核苷酸」及「聚核苷酸」意謂所連接之核苷之聚合物，其中每一者可獨立地經修飾或未經修飾。 如本文所用，「RNAi藥劑」或「RNAi觸發劑」意謂含有RNA或RNA類(例如經化學修飾之RNA)寡核苷酸分子之組合物，其能夠以序列特異性方式降低或抑制目標mRNA之信使RNA(mRNA)轉錄物之轉譯。如本文所用，RNAi藥劑可經RNA干擾機制(即經與哺乳動物細胞之RNA干擾路徑機制(RNA誘導之沉默複合物或RISC)之相互相用誘導RNA干擾)或藉由任何替代性機制或路徑來起作用。儘管咸信RNAi藥劑(如該術語在本文中所使用)主要經由RNA干擾機制起作用，但所揭示之RNAi藥劑不藉由任何特定路徑或作用機制結合或受限於任何特定路徑或作用機制。本文中所揭示之RNAi藥劑包括有義股及反義股，且包含(但不限於)：短干擾型RNA (siRNA)、雙股RNA (dsRNA)、微型RNA (miRNAs)、短髮夾型RNA (shRNA)及內切酶受質。本文所述之RNAi藥劑之反義股與所靶向之mRNA (例如AAT mRNA)至少部分互補。RNAi藥劑可包括經修飾之核苷酸及/或一或多種非磷酸二酯鍵。 如本文所用，當參考既定基因之表現時，術語「沉默」、「降低」、「抑制」、「下調」或「基因表現阻斷」意謂當用本文所述之RNAi藥劑治療細胞、細胞群、組織、器官或個體時，與未經歷該治療之第二細胞、細胞群、組織、器官或個體相比，基因之表現降低，如藉由其中基因經轉錄之細胞、組織、器官或個體群中自基因轉錄之RNA含量或多肽含量、自mRNA轉譯之蛋白質或蛋白質子單元之含量所量測。 如本文所用，術語「序列」或「核苷酸序列」意謂使用標準命名法用一連串字母描述的核鹼基或核苷酸的連續或順序。 如本文所用，「核苷酸鹼基」或「核鹼基」為雜環嘧啶或嘌呤化合物，其為所有核酸之標準成分，且包含形成核苷酸腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)及尿嘧啶(U)之鹼基。核鹼基可進一步經修飾以包含(但不限於)通用鹼基、疏水性鹼基、混雜鹼基、尺寸擴展鹼基及氟化鹼基。 如本文所用且除非另外指示，否則術語「互補」在用於相對於第二核苷酸序列(例如RNAi藥劑反義股或單股反義寡核苷酸)描述第一核苷酸序列(例如RNAi藥劑有義股或所靶向之mRNA)時，意謂包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸在某些標準條件下與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或聚核苷酸雜交(在哺乳動物生理學條件(或類似的活體外條件下)形成鹼基對氫鍵)及形成雙螺旋或雙螺旋結構之能力。至少在滿足以上雜交要求之範圍內，互補序列包含瓦生-克里克鹼基對(Watson-Crick base pairs)或非瓦生-克里克鹼基對且包含天然或經修飾之核苷酸或核苷酸模擬物。序列一致性或互補性與修飾無關。出於測定一致性或互補性之目的，例如a及Af與U (或T)互補且與A一致。 如本文所用，「完美互補」或「完全互補」意謂第一聚核苷酸之相鄰序列中之所有(100%)鹼基將與第二聚核苷酸之相鄰序列中之相同數目的鹼基雜交。相鄰序列可包括第一或第二核苷酸序列的全部或一部分。 如本文所用，「部分互補」意謂在雜交之核鹼基序列對中，第一聚核苷酸之相鄰序列中之至少70%(但並非所有)的鹼基將與第二聚核苷酸之相鄰序列中之相同數目的鹼基雜交。 如本文所用，「實質上互補」意謂在雜交之核鹼基序列對中，第一聚核苷酸之連續序列中之至少85%(但並非所有)的鹼基將與第二聚核苷酸之連續序列中之相同數目的鹼基雜交。本文之術語「互補」、「完全互補」、「部分互補」及「實質上互補」可關於RNAi藥劑之有義股及反義股之間或RNAi藥劑之反義股與AAT mRNA之序列之間的鹼基匹配使用。 如本文所用，應用於核酸序列之術語「實質上相同」或「實質上一致」意謂核酸序列包括與參考序列相比具有至少約85%序列一致性或更高，較佳至少90%、至少95%或至少99%一致性的序列。序列一致性之百分比係藉由在比較窗口內比較兩個最佳比對序列來測定。藉由如下步驟計算百分比：測定兩個序列中存在之一致核酸鹼基的位置數，得到匹配位置數，將匹配位置數除以比較窗中之總位置數且將結果乘以100，得到序列一致性百分比。本文揭示之發明涵蓋與本文揭示者實質上一致的核苷酸序列。 如本文所用，術語「治療」及其類似術語意謂用於提供個體中疾病之一或多種症狀之發生次數、嚴重程度及/或發生頻率的減輕或緩解之方法或步驟。 如本文所用，當提及RNAi藥劑時，「向細胞中引入」一詞意謂將RNAi藥劑功能性傳遞至細胞中。「功能性傳遞」一詞意謂以使RNAi藥劑能夠具有預期生物活性(例如序列特異性抑制基因表現)的方式將RNAi藥劑傳遞至細胞。 除非另外說明，否則使用如本文所用之符號意謂根據本文所述的發明之範疇任何基團可與其連接。 如本文所用，術語「異構體」係指具有相同分子式，但在性質或其原子結合序列或空間中其原子之配置方面不同的化合物。原子空間排列方面存在不同之異構體稱為「立體異構體」。彼此不為鏡像之立體異構體稱為「非對映異構體」且不重疊鏡像之立體異構體稱為「對映異構體」或有時稱為光學異構體。結合於四個不相同的取代基之碳原子稱為「對掌性中心」。 如本文所用，除非在結構中特定鑑別為具有特定構形，否則對於其中存在不對稱中心且因此產生對映異構體、非對映異構體或其他立體異構配置之每個結構，本文中所揭示之每個結構意欲表示所有此類有可能的異構體，包含其光學純及外消旋形式。舉例而言，本文中所揭示之結構意欲涵蓋非對映異構體之混合物以及單一立體異構體。 如在本發明申請專利範圍中所使用，片語「由……組成」不包含申請專利範圍中未說明的任何元件、步驟或成分。當用於本發明之申請專利範圍時，「基本上由……組成」一詞將申請專利範圍之範疇限制於規定材料或步驟及實質上不影響本發明之基礎及新穎特徵的材料或步驟。 熟習此項技術者將容易理解及瞭解，本文揭示之化合物及組合物可具有質子化或去質子化狀態的某些原子(例如N，O或S原子)，此取決於化合物或組合物的放置放置。因此，如本文所用，本文所揭示之結構涵蓋可經質子化或去質子化之某些官能團，諸如OH、SH或NH。本文中之揭示內容意欲涵蓋本發明化合物及組合物而與其基於環境(諸如pH值)之質子化狀態無關，如一般熟習此項技術者可容易地理解。 除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習此項技術者通常理解相同之含義。儘管類似或等效於本文所述之彼等方法及材料可用於實踐或測試本發明，但合適的方法及材料描述如下。本文提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考案均以全文引用的方式併入本文中。倘若有衝突，本說明書(包含定義)將占主導。另外，本文所述之材料、方法及實例僅為說明性的且並不欲作為限制。 本發明之其他目標、特徵、態樣及優勢自以下實施方式、附圖及申請專利範圍將變得顯而易知。
本文描述用於抑制AAT 基因之表現的RNAi藥劑(本文中稱為AAT RNAi藥劑或AAT RNAi觸發劑)。各AAT RNAi藥劑包括有義股及反義股。有義股及反義股之長度各自可為16至30個核苷酸。在一些實施例中，有義及反義股之長度各自可為17至26個核苷酸。有義股及反義股可為相同長度或其可為不同長度。在一些實施例中，有義及反義股之長度各自獨立地為17-21個核苷酸。在一些實施例中，有義與反義股各自為21-26個核苷酸長度。在一些實施例中，有義股長度為約19個核苷酸，而反義股長度為約21個核苷酸。在一些實施例中，有義股長度為約21個核苷酸，而反義股長度為約23個核苷酸。在一些實施例中，有義股長度為23個核苷酸且反義股長度為21個核苷酸。在一些實施例中，有義股及反義股各自為26個核苷酸長。在一些實施例中，有義股長度為22個核苷酸且反義股長度為21個核苷酸。在一些實施例中，有義股長度為19個核苷酸且反義股長度為21個核苷酸。在一些實施例中，RNAi藥劑有義及反義股之長度各自獨立地為17、18、19、20、21、22、23、24、25或26個核苷酸。在一些實施例中，雙股RNAi藥劑具有約16、17、18、19、20、21、22、23或24個核苷酸之雙螺旋長度。有義股與反義股之間的此完美或實質性互補性區域的長度通常為15-26個(例如15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26個)核苷酸，且存在於反義股之5'端或其附近(例如，此區域可與反義股之5'端間隔0、1、2、3或4個不完美或實質上互補之核苷酸)。 有義股及反義股各自含有長度為16至23個核鹼基之核心延伸序列。反義股核心延伸序列與AAT mRNA目標中存在的核苷酸序列(有時例如稱為目標序列)100% (完全)互補或至少約85% (實質上)互補。有義股核心延伸序列與反義股中的核心延伸序列100%(完全)互補或至少約85%(實質上)互補，且因此有義股核心延伸序列與AAT mRNA目標中存在之核苷酸序列(目標序列)完全一致或至少約85%一致。有義股核心延伸序列可具有與相應反義核心序列相同的長度或其可為不同長度。在一些實施例中，反義股核心延伸序列之長度為16、17、18、19、20、21、22或23個核苷酸。在一些實施例中，有義股核心延伸序列之長度為16、17、18、19、20、21、22或23個核苷酸。 用於形成AAT RNAi藥劑之核苷酸序列之實例提供於表2、3、4及5中。包含表2、3、4及5中之有義股及反義股序列的AAT RNAi藥劑雙螺旋體之實例顯示於表6中。 AAT RNAi藥劑有義及反義股黏接形成雙螺旋體。AAT RNAi藥劑之有義股及反義股與彼此部分、實質上或完全互補。在互補雙螺旋區內，有義股核心延伸序列與反義核心延伸序列至少85%互補或100%互補。在一些實施例中，有義股核心延伸序列含有與反義股核心延伸序列的相應16、17、18、19、20、21、22或23個核苷酸序列至少85%或100%互補的至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22或至少23個核苷酸的序列(即AAT RNAi藥劑的有義及反義核心延伸序列具有至少85%鹼基配對或100%鹼基配對的至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22或至少23個核苷酸的區域)。 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的反義股與表2、表3或表4中之反義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的有義股與表2、表3或表5中的有義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。 有義股及/或反義股在核心延伸序列的3'端、5'端處或3'及5'端兩者處可視情況及獨立地含有額外1、2、3、4、5或6個核苷酸(延伸)。若存在，則反義股額外核苷酸可與或不與AAT mRNA中之相應序列互補。若存在，則有義股額外核苷酸可與或不與AAT mRNA中之相應序列一致。則反義股額外核苷酸(若存在)可與或不與相應有義股的額外核苷酸(若存在)互補。 如本文所用，延伸部分包括有義股核心延伸序列及/或反義股核心延伸序列之5'及/或3'端處之1、2、3、4、5或6個核苷酸。有義股上的延伸核苷酸可與或不與相應反義股中之核苷酸(核心延伸序列核苷酸或延伸核苷酸)互補。相反，反義股上的延伸核苷酸可與或不與相應有義股中之核苷酸(核心延伸序列核苷酸或延伸核苷酸)互補。在一些實施例中，RNAi劑之有義股與反義股含有3'及5'延伸部分。在一些實施例中，一個股之一或多個3'延伸核苷酸與另一股之一或多個5'延伸核苷酸鹼基配對。在其他實施例中，一個股之一或多個3'延伸核苷酸不與另一股之一或多個5'延伸核苷酸鹼基配對。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑具有含有3'延伸部分的反義股及含有5'延伸部分的有義股。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1、2、3、4、5或6個核苷酸的3'延伸部分的反義股。在其他實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1、2或3個核苷酸的3'延伸部分之反義股。在一些實施例中，一或多個反義股延伸核苷酸包括尿嘧啶或胸苷核苷酸或與相應AAT mRNA序列互補的核苷酸。在一些實施例中，3'反義股延伸部分包含(但不限於)以下序列中之一者或由其組成：AUA、UGCUU、CUG、UG、UGCC、CUGCC、CGU、CUU、UGCCUA、CUGCCU、UGCCU、UGAUU、GCCUAU、T、TT、U、UU (各自5'至3'列出)。 在一些實施例中，反義股之3'端可包含額外無鹼基位點(Ab)。「無鹼基位點」為在糖的1'位置處不具有核鹼基的核苷酸或核苷。在一些實施例中，Ab或AbAb可添加至反義股之3'端。在一些實施例中，無鹼基位點可作為反向無鹼基位點(參看表7)添加。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1、2、3、4或5個核苷酸的5'延伸部分的反義股。在其他實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1或2個核苷酸的5'延伸部分之反義股。在一些實施例中，一或多個反義股延伸核苷酸包括尿嘧啶或胸苷核苷酸或與相應AAT mRNA序列互補的核苷酸。在一些實施例中，5'反義股延伸部分包含(但不限於)以下序列中之一者或由其組成：UA、TU、U、T、UU、TT、CUC (各自5'至3'列出)。反義股可具有上述3'延伸部分中之任一者與所述5'反義股延伸部分(若存在)中之任一者之組合。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1、2、3、4或5個核苷酸的3'延伸部分的有義股。在一些實施例中，一或多個有義股延伸核苷酸包括腺苷、尿嘧啶或胸苷核苷酸、AT二核苷酸，或與AAT mRNA序列中之核苷酸對應的核苷酸。在一些實施例中，3'有義股延伸部分包含(但不限於)以下序列中之一者或由其組成：T、UT、TT、UU、UUT、TTT、或TTTT (各自5'至3'列出)。 在一些實施例中，有義股之3'端可包含額外無鹼基位點。在一些實施例中，UUAb、UAb或Ab可添加至有義股之3'端。在一些實施例中，添加至有義股之3'端之一或多個無鹼基位點可為反向的(invAb)。在一些實施例中，可在靶向配位體與RNAi藥劑之有義股之核鹼基序列之間插入一或多個反向無鹼基位點。在一些實施例中，在RNAi藥劑之有義股之末端或其附近包括一或多個反向無鹼基位點可允許增強RNAi藥劑之活性或其他所需特性。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有長度為1、2、3、4、5或6個核苷酸的5'延伸部分的有義股。在一些實施例中，一或多個有義股延伸核苷酸包括尿嘧啶或腺苷核苷酸或與AAT mRNA序列中之核苷酸對應的核苷酸。在一些實施例中，有義股5'延伸部分可為(但不限於)以下序列中之一者：CA、AUAGGC、AUAGG、AUAG、AUA、A、AA、AC、GCA、GGCA、GGC、UAUCA、UAUC、UCA、UAU、U、UU (各自5'至3'列出)。有義股可具有3'延伸部分及/或5'延伸部分。 在一些實施例中，有義股之5'端可包含一或多種額外無鹼基位點(例如(Ab)或(AbAb))。在一些實施例中，添加至有義股之5'端之一或多個無鹼基位點可為反向的(例如invAb)。在一些實施例中，可在靶向配位體與RNAi藥劑之有義股之核鹼基序列之間插入一或多個反向無鹼基位點。在一些實施例中，在RNAi藥劑之有義股之末端或其附近包括一或多個反向無鹼基位點可允許增強RNAi藥劑之活性或其他所需特性。 在一些實施例中，反義股核心延伸序列之3'端或反義股序列之3'端可包含反向無鹼基位點(invAb (參看表7))。在一些實施例中，反義核心延伸部分之5'端或反義股序列之5'端可包含反向無鹼基位點。在一些實施例中，反義股核心延伸序列之3'及5'端皆可包含反向無鹼基位點。在一些實施例中，反義股序列之3'及5'端皆可包含反向無鹼基位點。 用於形成AAT RNAi藥劑之序列之實例提供於表2、3、4及5中。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包含表2、3或4中之序列中之任一者的序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股(自5'端3'端)包含表2、表3或表4中之序列中之任一者的核苷酸1-17、2-15、2-17、1-18、2-18、1-19、2-19、1-20、2-20、1-21、2-21、1-22、2-22、1-23、2-23、1-24、2-24、1-25、2-25、1-26或2-26的序列。在某些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表4中之經修飾之序列中之任一者的經修飾之序列或由其組成。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股包含表2、3或5中之序列中之任一者的序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股(自5'端3'端)包含表2、3或5中之序列中之任一者的核苷酸1-18、1-19、1-20、1-21、1-22、1-23、1-24、1-25、1-26、2-19、2-20、2-21、2-22、2-23、2-24、2-25、2-26、3-20、3-21、3-22、3-23、3-24、3-25、3-26、4-21、4-22、4-23、4-24、4-25、4-26、5-22、5-23、5-24、5-25、5-26、6-23、6-24、6-25、6-26、7-24、7-25、7-25、8-25、8-26的序列。在某些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股包括表5中經修飾之序列中之任一者的經修飾之序列或由其組成。 在一些實施例中，本文所述之RNAi藥劑之有義及反義股含有相同數目之核苷酸。在一些實施例中，本文所述之RNAi藥劑的有義及反義股含有不同數目之核苷酸。在一些實施例中，RNAi藥劑之有義股5'端及反義股3'端形成鈍端。在一些實施例中，RNAi藥劑之有義股3'端及反義股5'端形成鈍端。在一些實施例中，RNAi藥劑之兩端皆形成鈍端。在一些實施例中，RNAi藥劑之末端皆非鈍端。如本文所用，鈍端係指雙RNAi藥劑之一端，其中兩個所黏接股之末端核苷酸互補(形成互補鹼基對)。在一些實施例中，RNAi藥劑之有義股5'端及反義股3'端形成磨損端。在一些實施例中，RNAi藥劑之有義股3'端及反義股5'端形成磨損端。在一些實施例中，RNAi藥劑之兩端皆形成磨損端。在一些實施例中，RNAi藥劑之末端皆非磨損端。如本文所用，磨損端係指雙股RNAi藥劑之一端，其中兩個黏接股之末端核苷酸形成對(亦即不形成突出端)，但並不互補(亦即形成非互補對)。如本文所用，突出端為位於雙股RNAi藥劑之一個股之末端的一或多個不成對核苷酸之延伸部分。不成對核苷酸可位於有義股或反義股上，產生3'或5'突出端。在一些實施例中，RNAi藥劑含有:鈍端及磨損端、鈍端及5'突出端、鈍端及3'突出端、磨損端及5'突出端、磨損端及3'突出端、兩個5'突出端、兩個3'突出端、5'突出端及3'突出端、兩個磨損端或兩個鈍端。 核苷酸鹼基(或核鹼基)為雜環嘧啶或嘌呤化合物，其為所有核酸的成分且包含腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)及尿嘧啶(U)。如本文所用，術語「核苷酸」可包含經修飾之核苷酸(諸如核苷酸模擬物、無鹼基位點(Ab)或替代性置換部分)。當用於多種聚核苷酸或寡核苷酸構築體中時，經修飾之核苷酸可保存細胞中化合物之活性，同時增加此等化合物之血清穩定性，且亦可最小化在投與聚核苷酸或寡核苷酸構築體時人類中活化干擾素活性之可能性。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑製備或提供成鹽、混合鹽或游離酸。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑製備為鈉鹽。此類形式屬於本文中所揭示之發明範疇內。 經修飾之核苷酸 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑含有一或多種經修飾之核苷酸。如本文所用，「經修飾之核苷酸」為除核糖核苷酸(2'-羥基核苷酸)以外之核苷酸。在一些實施例中，至少50% (例如至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)核苷酸為經修飾之核苷酸。如本文所用，經修飾之核苷酸包含(但不限於)：去氧核糖核苷酸、核苷酸模擬物、無鹼基核苷酸(本文中表示為Ab)、2'-經修飾之核苷酸、3'至3'鍵(反向)核苷酸(本文中表示為invdN、invN、invn、invAb)、包括經修飾之核鹼基的核苷酸、橋接核苷酸、肽核酸(PNA)、2',3'開環核苷酸模擬物(解鎖核鹼基類似物，本文中表示為NUNA 或NUNA)、鎖定核苷酸(本文中表示為NLNA 或NLNA)、3'-O-甲氧基(2'核苷間鍵聯)核苷酸(本文中表示為3'-OMen)、2'-F-阿糖核苷酸(本文中表示為NfANA或NfANA )、5'-Me、2'-氟基核苷酸(本文中表示為5Me-Nf)、嗎啉基核苷酸、膦酸乙烯酯去氧核糖核苷酸(本文中表示為vpdN)、含有膦酸乙烯酯之核苷酸及含有膦酸環丙酯之核苷酸(cPrpN)。2'-經修飾之核苷酸(即在五員糖環之2'位置處具有除羥基以外之基團的核苷酸)包含(但不限於)2'-O-甲基核苷酸(本文表示為核苷酸序列中的小寫字母『n』)、2'-去氧-2'-氟核苷酸(本文表示為Nf，本文亦表示為2'-氟核苷酸)、2'-去氧核苷酸(本文表示為dN)、2'-甲氧基乙基(2'-O-2-甲氧基乙基)核苷酸(本文表示為NM或2'-MOE)、2'-胺基核苷酸及2'-烷基核苷酸。既定化合物之所有位置無需經均一修飾。相對而言，超過一種修飾可在單一AAT RNAi藥劑或甚至其單個核苷酸中併入。AAT RNAi藥劑有義股及反義股可藉由此項技術中已知之方法合成及/或修飾。一個核苷酸處之修飾獨立於另一個核苷酸處之修飾。 經修飾之核鹼基包含合成及天然核鹼基，諸如5-經取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶及經N-2、N-6及O-6取代之嘌呤(例如2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶或5-丙炔基胞嘧啶)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)、5-羥基甲基胞嘧啶、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、腺嘌呤及鳥嘌呤之6-烷基(例如6-甲基、6-乙基、6-異丙基或6-正丁基)衍生物、腺嘌呤及鳥嘌呤之2-烷基(例如2-甲基、2-乙基、2-異丙基或2-正丁基)及其他烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶、2-硫基胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶、胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫氫基、8-硫烷基、8-羥基及其他8-經取代之腺嘌呤及鳥嘌呤、5-鹵基(例如5-溴)、5-三氟甲基及其他5-經取代之尿嘧啶及胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤及8-氮雜腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤及3-去氮腺嘌呤。 在一些實施例中，RNAi藥劑之全部或基本上全部核苷酸為經修飾之核苷酸。如本文所用，實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸的RNAi藥劑係在有義股及反義股中存在四個或更少的(亦即0、1、2、3或4個)核苷酸為核糖核苷酸的RNAi藥劑。如本文所用，實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸的有義股係在有義股中存在兩個或更少的(亦即0、1或2個)核苷酸為核糖核苷酸的有義股。如本文所用，實質上全部核苷酸為經修飾之核苷酸的反義有義股係在有義股中存在兩個或更少的(亦即0、1或2個)核苷酸為核糖核苷酸的反義股。在一些實施例中，RNAi藥劑之一或多個核苷酸為核糖核苷酸。 經修飾之核苷間鍵 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之一或多個核苷酸藉由非標準鍵或主鏈(即經修飾之核苷間鍵或經修飾之主鏈)連接。經修飾之核苷間鍵或主鏈包含(但不限於)5'-硫代磷酸酯基(本文中表示為小寫字母「s」)、對掌性硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基-磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如膦酸甲酯或3'-伸烷基膦酸酯)、對掌性膦酸酯、亞膦酸酯、胺基磷酸酯(例如3'-胺基胺基磷酸酯、胺基烷基胺基磷酸酯或硫羰基胺基磷酸酯)、硫羰基烷基-膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、N-嗎啉基鍵、具有正常3'-5'鍵之硼烷磷酸酯、硼烷磷酸酯之2'-5'連接之類似物或具有反向極性之硼烷磷酸酯，其中相鄰核苷單元對使3'-5'連接至5'-3'或使2'-5'連接至5'-2'。在一些實施例中，經修飾之核苷間鍵或主鏈不具有磷原子。不具有磷原子之經修飾之核苷間鍵包含(但不限於)短鏈烷基或環烷基糖間鍵、混合雜原子及烷基或環烷基糖間鍵、或一或多個短鏈雜原子或雜環糖間鍵。在一些實施例中，經修飾之核苷間主鏈包含(但不限於)矽氧烷主鏈、硫醚主鏈、亞碸主鏈、碸主鏈、甲醯基及硫甲醯基主鏈、亞甲基甲醯基及硫甲醯基主鏈、含有烯烴之主鏈、胺基磺酸酯主鏈、亞甲基亞胺基及亞甲基肼基主鏈、磺酸酯及磺醯胺主鏈、醯胺主鏈及其他具有混合N、O、S及CH2 組分之主鏈。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股可含有1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯鍵，AAT RNAi藥劑之反義股可含有1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯鍵，或有義股及反義股皆可獨立地含有1、2、3、4、5或6個硫代磷酸酯鍵。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑之有義股可含有1、2、3或4個硫代磷酸酯鍵，AAT RNAi藥劑之反義股可含有1、2、3或4個硫代磷酸酯鍵，或有義股及反義股皆可獨立地含有1、2、3或4個硫代磷酸酯鍵。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股含有至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵。在一些實施例中，至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵位於自有義股之3'端之位置1-3處的核苷酸之間。在一些實施例中，至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵介於自有義股之5'端之位置1-3、2-4、3-5、4-6、4-5或6-8處的核苷酸之間。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股含有四個硫代磷酸酯核苷間鍵。在一些實施例中，四個硫代磷酸酯核苷間鍵介於相對於有義股之5'端之位置1-3的核苷酸之間及相對於5'端之位置19-21、20-22、21-23、22-24、23-25或24-26的核苷酸之間。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑含有有義股中之至少兩個硫代磷酸酯核苷間鍵及反義股中之三個或四個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑含有一或多種經修飾之核苷酸及一或多種經修飾之核苷間鍵。在一些實施例中，2'-經修飾之核苷與經修飾之核苷間鍵組合。 AAT RNAi藥劑 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑靶向表1中所示的AAT基因組之位置處或附近的AAT基因。在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的反義股包含與表1中所揭示之目標AAT 19-mer序列完全、實質上或至少部分互補之核心延伸序列。表 1 . AAT 19-mer mRNA目標序列(獲自人類AAT cDNA，GenBank NM_000295.4 (SEQ ID NO:1))。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含反義股的位置19 (5'3')能夠與表1中所揭示之19-mer目標序列的位置1形成鹼基對的反義股。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含反義股的位置1 (5'3')能夠與表1中所揭示之19-mer目標序列的位置19形成鹼基對的反義股。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含反義股的位置2 (5'3')能夠與表1中所揭示之19-mer目標序列的位置18形成鹼基對的反義股。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含反義股的位置2至18 (5'3')能夠與表1中所揭示之19-mer目標序列的位置18至2處的對應互補鹼基中之每一者形成鹼基對的反義股。 對於本文揭示之RNAi藥劑，反義股的位置1處之核苷酸(5'端3'端)可與AAT基因完美互補，或可與AAT基因非互補。在一些實施例中，反義股(5'端3'端)之位置1處的核苷酸為U、A或dT。在一些實施例中，反義股(5'端3'端)之位置1處的核苷酸與有義股形成A:U或U:A鹼基對。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表2、表3或表4中之反義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 2-18或2-19。在一些實施例中，AAT RNAi有義股包括表2、表3或表5中之有義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17或1-18。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括(i)包括表2、表3或表4中之反義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 2-18或2-19的反義股，及(ii)包括表2、表3或表5中之有義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17或1-18的有義股。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含下表2中所示之核心19-mer核苷酸序列。表 2 . 實例AAT RNAi藥劑反義股及有義股核心延伸鹼基序列(N =任何核鹼基)。 表 3 . 額外AAT RNAi藥劑反義股及有義股鹼基序列。 包括表2或表3中之核苷酸序列或由其組成之AAT RNAi藥劑有義股及反義股可為經修飾之核苷酸或未經修飾之核苷酸。在一些實施例中，具有包括表2或表3中的核苷酸序列中之任一者或由其組成之有義股及反義股序列之AAT RNAi藥劑為全部或實質上全部經修飾之核苷酸。 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的反義股與表2或表3中之反義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的有義股與表2或表3中的有義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。 如本文所用，表2中所揭示之序列中所列之各N可獨立地選擇。在一些實施例中，表2中所揭示之序列中所列的N核苷酸具有與另一股上對應位置的N核苷酸互補的核鹼基。在一些實施例中，表2中所揭示之序列中所列的N核苷酸具有與另一股上對應位置的N核苷酸不互補的核鹼基。在一些實施例中，表2中所揭示之序列中所列的N核苷酸具有與另一股上對應位置的N核苷酸相同的核鹼基。在一些實施例中，表2中所揭示之序列中所列的N核苷酸具有與另一股上對應位置的N核苷酸不同的核鹼基。 特定經修飾之AAT RNAi藥劑有義及反義股提供於表4及表5中。經修飾之AAT RNAi藥劑反義股以及其基礎未經修飾的核鹼基序列提供於表4中。經修飾之AAT RNAi藥劑有義股以及其基礎未經修飾的序列提供於表5中。在形成AAT RNAi藥劑時，表4及5以及上文表2及表3中所列之未經修飾之序列中之每一者中的各核苷酸可為經修飾之核苷酸。 本文所述之AAT RNAi藥劑藉由反義股與有義股黏接而形成。含有表2、表3或表5中所列序列之有義股可與含有表2、表3或表4所列序列之任何反義股雜交，只要兩個序列在連續16、17、18、19、20或21個核苷酸序列上具有至少85%互補之區域。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表2、表3或表4中的序列中之任一者之核苷酸序列。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑製備或提供成鹽、混合鹽或游離酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有表2或表3中之序列中之任一者的有義股及反義股的核鹼基序列的雙螺旋體。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑由具有表2或表3中之序列中之任一者的有義股及反義股之核鹼基序列的雙螺旋體組成。 含有經修飾之核苷酸之反義股之實例提供於表4中。含有經修飾之核苷酸之有義股之實例提供於表5中。 如表4及5中所用，使用以下記法指示經修飾之核苷酸、靶向基團及連接基團。如一般技術者容易理解，除非序列另外指示，否則當存在於寡核苷酸中時，單體藉由5'-3'磷酸二酯鍵彼此連接。 A = 腺苷-3'-磷酸酯； C = 胞苷-3'-磷酸酯； G = 鳥苷-3'-磷酸酯； U = 尿苷-3'-磷酸酯 I = 肌苷-3'-磷酸酯 n = 任何2'-OMe修飾之核苷酸 a = 2'-O-甲基腺苷-3'-磷酸酯 as = 2'-O-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯 c = 2'-O-甲基胞苷-3'-磷酸酯 cs = 2'-O-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯 g = 2'-O-甲基鳥苷-3'-磷酸酯 gs = 2'-O-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯 t = 2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-磷酸酯 ts = 2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯 u = 2'-O-甲基尿苷-3'-磷酸酯 us = 2'-O-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯 i = 2'-O-甲基肌苷-3'-磷酸酯 is = 2'-O-甲基肌苷-3'-硫代磷酸酯 Nf = 任何2'-氟修飾之核苷酸 Af = 2'-氟腺苷-3'-磷酸酯 Afs = 2'-氟腺苷-3'-硫代磷酸酯 Cf = 2'-氟胞苷-3'-磷酸酯 Cfs = 2'-氟胞苷-3'-硫代磷酸酯 Gf = 2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯 Gfs = 2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯 Tf = 2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-磷酸酯 Tfs = 2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯 Uf = 2'-氟尿苷-3'-磷酸酯 Ufs = 2'-氟尿苷-3'-硫代磷酸酯 dN = 任何2'-去氧核糖核苷酸 dT = 2'-去氧胸苷-3'-磷酸酯 NUNA = 2',3'-開環核苷酸模擬物(解鎖核鹼基類似物)-3'-磷酸酯 NUNA s = 2',3'-開環核苷酸模擬物(解鎖核鹼基類似物)-3'-硫代磷酸酯 UUNA = 2',3'-開環-尿苷-3'-磷酸酯 UUNA s= 2',3'-開環-尿苷-3'-硫代磷酸酯 a_2N = 參看表7 a_2Ns = 參看表7 pu_2N = 參看表7 pu_2Ns = 參看表7 Npu = 參看表7 Nus = 參看表7 NLNA = 鎖定核苷酸 NfANA = 2'-F-阿糖核苷酸 NM = 2'-甲氧基乙基核苷酸 AM = 2'-甲氧基乙基腺苷-3'-磷酸酯 AMs = 2'-甲氧基乙基腺苷-3'-硫代磷酸酯 TM = 2'-甲氧基乙基胸苷-3'-磷酸酯 TMs = 2'-甲氧基乙基胸苷-3'-硫代磷酸酯 R = 核糖醇 (invdN) = 任何反向去氧核糖核苷酸(3'-3'連接型核苷酸) (invAb) = 反向(3'-3'連接型)無鹼基去氧核糖核苷酸，參看表7 (invAb)s = 反向(3'-3'連接型)無鹼基去氧核糖核苷酸-5'-硫代磷酸酯，參看表7 (invn) = 任何反向2'-OMe核苷酸(3'-3'連接型核苷酸) s = 硫代磷酸酯鍵 vpdN = 乙烯基膦酸酯去氧核糖核苷酸 (5Me-Nf) = 5'-Me, 2'-氟核苷酸 cPrp = 環丙基膦酸酯，參看表7 epTcPr = 參看表7 epTM = 參看表7 (Chol-TEG) = 參看表7 (TEG-Biotin) = 參看表7 (PEG-C3-SS) = 參看表7 (Alk-SS-C6) = 參看表7 (C6-SS-Alk) = 參看表7 (C6-SS-Alk-Me) = 參看表7 個人或一般技術者將容易理解，既定寡核苷酸序列之3'端處的末端核苷酸將通常具有既定單體之各別3'位置處的羥基(-OH)而非離體磷酸酯部分。本文中除非另外明確指示，否則在描述本文揭示之AAT RNAi藥劑及AAT RNAi藥劑之組合物時使用一般技術者之此類理解。 靶向基團及連接基團包含以下，其化學結構提供於以下表7中：(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。各有義股及/或反義股可具有上文所列舉之任何靶向基團或連接基團，以及其他靶向或連接基團，其結合於序列之5'及/或3'端。表 4 . AAT RNAi藥劑反義股序列。 表 5 . AAT RNAi藥劑有義股序列。 本文所述之AAT RNAi藥劑藉由反義股與有義股黏接而形成。含有表2、表3或表5中所列序列之有義股可與含有表2、表3或表4所列序列之任何反義股雜交，只要兩個序列在連續16、17、18、19、20或21個核苷酸序列上具有至少85%互補之區域。 在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的反義股與表4中之反義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。在一些實施例中，本文揭示之AAT RNAi藥劑的有義股與表5中的有義股序列中之任一者區別0、1、2或3個核苷酸。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表2、表3或表4中的序列中之任一者之核苷酸序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表2、表3或表4中之序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17、2-17、1-18、2-18、1-19、2-19、1-20、2-20、1-21、2-21、1-22、2-22、1-23、2-23、1-24、2-24、1-25、2-25、1-26或2-26。在某些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表4中之經修飾之序列中之任一者的經修飾之序列或由其組成。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股包括表2、表3或表5中的序列中之任一者之核苷酸序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股包括表2、表3或表5中之序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17、2-17、3-17、4-17、1-18、2-18、3-18、4-18、1-19、2-19、3-19、4-19、1-20、2-20、3-20、4-20、1-21、2-21、3-21、4-21、1-22、2-22、3-22、4-22、1-23、2-23、3-23、4-23、1-24、2-24、3-24、4-24、1-25、2-25、3-25、4-25、1-26、2-26、3-26或4-26。在某些實施例中，AAT RNAi藥劑有義股包括表5中經修飾之序列中之任一者的經修飾之序列或由其組成。 對於本文揭示之AAT RNAi藥劑，反義股的位置1處之核苷酸(5'端3'端)可與AAT基因完美互補，或可與AAT基因非互補。在一些實施例中，反義股(5'端3'端)的位置1處之核苷酸為U、A或dT (或其經修飾之型式)。在一些實施例中，反義股(5'端3'端)的位置1處之核苷酸與有義股形成A:U或U:A鹼基對。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑反義股包括表2、表3或表4中之反義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 2-18或2-19。在一些實施例中，AAT RNAi有義股包括表2、表3或表5中之有義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17或1-18。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包含(i)包括表2、表3或表4中之反義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 2-18或2-19的反義股，及(ii)包括表2、表3或表5中之有義股序列中之任一者的核苷酸序列(5'端3'端) 1-17或1-18的有義股。 含有表2、表3或表5中所列序列之有義股可與含有表2、表3或表5所列序列之任何反義股雜交，只要兩個序列在連續16、17、18、19、20或21個核苷酸序列上具有至少85%互補之區域。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑具有由表5中之經修飾之序列中之任一者的經修飾序列組成的有義股，及由表4中之經修飾之序列中之任一者的經修飾序列組成的反義股。代表性序列對由表6中展示之雙螺旋ID編號例示。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑由本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體組成。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體的有義股及反義股核苷酸序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體的有義股及反義股核苷酸序列及靶向基團及/或連接基團，其中靶向基團及/或連接基團與有義股或反義股共價連接(即結合)。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體的有義股及反義股經修飾之核苷酸序列。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括本文提供之雙螺旋ID編號中之任一者表示的任何雙螺旋體的有義股及反義股經修飾之核苷酸序列及靶向基團及/或連接基團，其中靶向基團及/或連接基團與有義股或反義股共價連接。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括具有表2、表3或表6之反義股/有義股雙螺旋體之任一者之核苷酸序列之反義股及有義股，且包括去唾液酸醣蛋白受體配位體靶向基團。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括反義股及有義股，其具有表2或表5之反義股/有義股雙螺旋體中之任一者之核苷酸序列，且進一步包括選自由以下組成之群的靶向基團：(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。在一些實施例中，靶向基團為(NAG25)或(NAG25)s。在其他實施例中，靶向基團為(NAG37)或(NAG37)s。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括反義股及有義股，其具有表6之雙螺旋體中之任一者之反義股及/或有義股核苷酸序列中之任一者的經修飾之核苷酸序列。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括反義股及有義股，其具有表6之雙螺旋體中之任一者之反義股及/或有義股核苷酸序列中之任一者的經修飾之核苷酸序列，且包括去唾液酸醣蛋白受體配位體靶向基團。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑包括表6中之雙螺旋體中之任一者的雙螺旋結構。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑由表6中之雙螺旋體中之任一者的雙螺旋結構組成。表 6 . 藉由相應有義及反義股之雙螺旋ID編號鑑別之AAT RNAi藥劑。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑製備或提供成鹽、混合鹽或游離酸。本文所述之RNAi藥劑在傳遞至表現AAT基因之細胞時，活體內抑制或阻斷一或多種AAT基因之表現。 靶向基團、連接基團及傳遞媒劑 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑結合至一或多個非核苷酸基團，包含(但不限於)靶向基團、連接基團、傳遞聚合物或傳遞媒劑。非核苷酸基團可促進RNAi藥劑之靶向、傳遞或附接。靶向基團及連接基團之實例提供於表7中。非核苷酸基團可共價連接至有義股及/或反義股之3'端及/或5'端。在一些實施例中，AAT RNAi藥劑含有連接至有義股之3'及/或5'端的非核苷酸基團。在一些實施例中，非核苷酸基團連接至AAT RNAi藥劑有義股之5'端。非核苷酸基團可經連接子/連接基團直接或間接連接至RNAi藥劑。在一些實施例中，非核苷酸基團經不穩定、可裂解或可逆鍵或連接子連接至RNAi藥劑。 在一些實施例中，非核苷酸基團增強RNAi藥劑或附接至其之結合物之藥代動力學特性或生物分佈特性，以改良RNAi藥劑或結合物之細胞特異性或組織特異性分佈及細胞特異性攝取。在一些實施例中，非核苷酸基團提高RNAi藥劑之胞吞作用。 靶向基團或靶向部分可增強其所連接的結合物或RNAi藥劑的藥物動力學或生物分佈特性以提高結合物或RNAi藥劑的細胞特異性分佈及細胞特異性攝取。靶向基團可為單價、二價、三價、四價或對其所針對的目標具有更高的價數。代表性靶向基團包含(但不限於)對細胞表面分子、細胞受體配位體、半抗原、抗體、單株抗體、抗體片段及對細胞表面分子具有親和力之抗體模擬物具有親和力的化合物。在一些實施例中，使用連接子(諸如PEG連接子或一個、兩個或三個無鹼基及/或核糖醇(無鹼基核糖)基團)使靶向基團連接至RNAi藥劑。在一些實施例中，靶向基團包括半乳糖衍生物簇。 本文所述的AAT RNAi藥劑可合成為在5'-末端具有反應性基團，諸如胺基。反應性基團可用於隨後使用此項技術中典型之方法連接靶向基團。 在一些實施例中，靶向基團包括去唾液酸醣蛋白受體配位體。在一些實施例中，去唾液酸醣蛋白受體配位體包含一或多種半乳糖衍生物或由其組成。如本文所用，術語半乳糖衍生物包含半乳糖及對去唾液酸醣蛋白受體之親和力等於或大於半乳糖的半乳糖衍生物。半乳糖衍生物包含(但不限於)：半乳糖、半乳糖胺、N-甲醯基半乳糖胺、N-乙醯基-半乳糖胺、N-丙醯基-半乳糖胺、N-正丁醯基-半乳糖胺及N-異丁醯基半乳糖胺(參看例如：Iobst, S. T.及Drickamer, K.J.B.C. 1996,271 , 6686)。適用於將寡核苷酸及其他分子活體內靶向肝臟之半乳糖衍生物及半乳糖衍生物簇為此項技術中已知的(參看例如Baenziger及Fiete，1980，Cell, 22, 611-620; Connolly等人，1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945)。半乳糖衍生物已藉由其結合於肝細胞表面上所表現之去唾液酸醣蛋白受體而用於將分子活體內靶向肝細胞。去唾液酸醣蛋白受體配位體至去唾液酸醣蛋白受體之結合促進細胞特異性靶向肝細胞及分子至肝細胞中之胞吞作用。去唾液酸醣蛋白受體配位體可為單體(例如具有單個半乳糖衍生物)或多聚體(例如具有多個半乳糖衍生物)。半乳糖衍生物或半乳糖衍生物簇可使用此項技術中已知之方法連接至RNAi藥劑之有義股或反義股的3'或5'端。靶向基團(諸如半乳糖衍生物簇)之製備描述於例如美國專利申請案第15/452,324號及美國專利公開案第US 2017/0253875號中，其兩者之內容以全文引用之方式併入本文中。 如本文所用，半乳糖衍生物簇包括具有兩個至四個末端半乳糖衍生物的分子。末端半乳糖衍生物經其C-1碳連接至分子。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇為半乳糖衍生物三聚體(亦稱為三觸角型半乳糖衍生物或三價半乳糖衍生物)。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括三個N-乙醯基-半乳糖胺。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇為半乳糖衍生物四聚體(亦稱為四觸角型半乳糖衍生物或四價半乳糖衍生物)。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括四個N-乙醯基-半乳糖胺。 如本文中所使用，半乳糖衍生物三聚體含有各自連接至中央分支點的三種半乳糖衍生物。如本文所用，半乳糖衍生物四聚體含有各自連接至中央分支點的四種半乳糖衍生物。半乳糖衍生物可經醣中之C-1碳連接至中央分支點。在一些實施例中，半乳糖衍生物經連接子或間隔子連接至分支點。在一些實施例中，連接子或間隔子為可撓性親水性間隔子，諸如PEG基團(參看例如美國專利案第5,885,968號；Biessen等人，J. Med. Chem. 1995.第39卷.第1538-1546頁)。在一些實施例中，PEG間隔子為PEG3 間隔子。分支點可為允許三種半乳糖衍生物連接且進一步允許分支點連接至RNAi藥劑的任何小分子。分支點基團之實例為二離胺酸或二麩胺酸。分支點至RNAi藥劑的連接可經連接子或間隔子發生。在一些實施例中，連接子或間隔子包括可撓性親水性間隔子，諸如(但不限於) PEG間隔子。在一些實施例中，連接子包括剛性連接子，諸如環狀基團。在一些實施例中，半乳糖衍生物包括N-乙醯基-半乳糖胺或由其組成。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括半乳糖衍生物四聚體，其可為例如N-乙醯基-半乳糖胺四聚體。 在一些實施例中，描述用於將AAT RNAi藥劑活體內傳遞至肝細胞的醫藥組合物。此類醫藥組合物可包含例如結合至半乳糖衍生物簇之AAT RNAi藥劑。在一些實施例中，半乳糖衍生物簇包括半乳糖衍生物三聚體，其可為例如N-乙醯基-半乳糖胺三聚體，或半乳糖衍生物四聚體，其可為例如N-乙醯基-半乳糖胺四聚體。 靶向基團包含(但不限於)(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)及(NAG39)s。其他靶向基團(包含半乳糖簇靶向配位體)為此項技術中已知的。 在一些實施例中，連接基團結合於RNAi藥劑。連接基團有助於藥劑共價連接至靶向基團或傳遞聚合物或傳遞媒劑。連接基團可鍵聯至RNAi藥劑有義股或反義股之3'或5'端。在一些實施例中，連接基團連接至RNAi藥劑有義股。在一些實施例中，連接基團結合至RNAi藥劑有義股之5'或3'端。在一些實施例中，連接基團結合至RNAi藥劑有義股的5'端。連接基團之實例包含(但不限於)：反應性基團，諸如一級胺及炔烴、烷基、無鹼基核苷、核糖醇(無鹼基核糖)及/或PEG基團。 連接子或連接基團為兩個原子之間的連接，其使一個相關化學基團(諸如RNAi藥劑)或區段經一或多個共價鍵連接至另一個相關化學基團(諸如靶向基團或傳遞聚合物)或區段。不穩定鍵聯含有不穩定鍵。鍵聯可視情況包含使兩個所連接原子之間距離增加的間隔子。間隔子可進一步增加鍵聯之可撓性及/或長度。間隔子可包含(但不限於)烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基及芳炔基；其中之每一者可含有一或多個雜原子、雜環、胺基酸、核苷酸及醣類。間隔基團為此項技術中所熟知的且前述清單不打算限制本發明之範疇。 表2、3、4或5中所列之AAT RNAi藥劑核苷酸序列中之任一者不管經修飾或未經修飾，均可含有3'或5'靶向基團或連接基團。表4或5中所列之含有3'或5'靶向基團或連接基團的AAT RNAi藥劑中之任一者可替代地不含有3'或5'靶向基團或連接基團，或可含有不同3'或5'靶向基團或連接基團，包含(但不限於)表7中描繪者。表2、表3或表6中所列之AAT RNAi藥劑雙螺旋體中之任一者不管經修飾或未經修飾，均可進一步包括靶向基團或連接基團(包含(但不限於)表7中描繪者)，且靶向基團或連接基團可附接至AAT RNAi藥劑雙螺旋體之有義股或反義股之3'或5'末端。 靶向基團及連接基團之實例提供於表7中。表5提供AAT RNAi藥劑有義股之若干實施例，其具有連接至5'或3'端的靶向基團或連接基團。表 7 .表示各種經修飾之核苷酸、靶向基團及連接基團之結構。 在表7中的上述結構之每一者中，NAG包括N-乙醯基-半乳糖胺或如熟習此項技術者鑒於上述結構及本文提供之描述將理解打算附接的另一去唾液酸醣蛋白受體配體。舉例而言，在一些實施例中，表7中提供之結構中之NAG由以下結構表示：(N-乙醯基-半乳糖胺) 各(NAGx)可經磷酸酯基(如(NAG25)、(NAG30)及(NAG31)中)或硫代磷酸酯基(如(NAG25)s、(NAG29)s、(NAG30)s、(NAG31)s或(NAG37)s)或另一連接基團連接至AAT RNAi藥劑。 磷酸酯基 硫代磷酸酯基 可使用此項技術中已知的其他連接基團。 傳遞媒劑 在一些實施例中，傳遞媒劑可用於將RNAi藥劑傳遞至細胞或組織中。傳遞媒劑為改良RNAi藥劑至細胞或組織之傳遞的化合物。傳遞媒劑可包含(但不限於)以下或由其組成：聚合物，諸如兩性聚合物、膜活性聚合物、肽、蜂毒素肽、蜂毒素樣肽(MLP)、脂質、經可逆修飾之聚合物或肽或經可逆修飾之膜活性多元胺。 在一些實施例中，RNAi藥劑可與脂質、奈米粒子、聚合物、脂質體、微胞、DPC或此項技術中可用之其他傳遞系統組合。RNAi藥劑亦可經化學結合至靶向基團、脂質(包含(但不限於)膽固醇及膽固醇基衍生物)、奈米粒子、聚合物、脂質體、微胞、DPC(參看(例如)WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO 2011/104169及WO 2012/083185、WO 2013/032829、WO 2013/158141，該等專利中之每一者以引用之方式併入本文中)或此項技術中可利用之其他傳遞系統。 醫藥組合物及調配物 本文揭示之AAT RNAi藥劑可製備為醫藥組合物或調配物。在一些實施例中，醫藥組合物包含至少一種AAT RNAi藥劑。此等醫藥組合物尤其適用於抑制目標細胞、細胞群、組織或生物體中之目標mRNA之表現。醫藥組合物可用於治療患有將受益於目標mRNA之含量降低或抑制目標基因之表現的疾病或病症之個體。醫藥組合物可用於治療具有發生將受益於目標mRNA之含量降低或抑制目標基因之表現的疾病或病症之風險之個體。在一個實施例中，該方法包含向待治療之個體投與連接至如本文所述之靶向配位體的AAT RNAi藥劑。在一些實施例中，向包含AAT RNAi藥劑之醫藥組合物添加一或多種醫藥學上可接受之賦形劑(包含媒劑、載劑、稀釋劑及/或傳遞聚合物)，由此形成適於活體內傳遞至個體(包含人類)的藥物調配物。 本文揭示之包含AAT RNAi藥劑之醫藥組合物及方法可降低細胞、細胞群、細胞群、組織或個體中目標mRNA之含量，包含向個體投與治療有效量之本文所述之AAT RNAi藥劑，由此抑制個體體內AAT mRNA之表現。在一些實施例中，個體此前已鑑別為目標細胞或組織中的目標基因病原性上調。 在一些實施例中，使用所述包含AAT RNAi藥劑之醫藥組合物治療或管理與AATD相關之臨床表現。在一些實施例中，向需要此類治療、預防或管理之個體投與治療有效量之一或多種醫藥組合物。在一些實施例中，投與所揭示之任何AAT RNAi藥劑可用於降低個體體內疾病症狀之數目、嚴重程度及/或頻率。 包含AAT RNAi藥劑之所述醫藥組合物可用於治療患有將受益於降低或抑制AAT mRNA表現之疾病或病症之個體的至少一種症狀。在一些實施例中，向個體投與治療有效量之一或多種包含AAT RNAi藥劑之醫藥組合物，由此治療症狀。在其他實施例中，向個體投與預防有效量之一或多種AAT RNAi藥劑，由此預防至少一種症狀。 投與途徑為AAT RNAi藥劑與身體接觸之路徑。一般而言，投與藥物及核酸以便治療哺乳動物的方法在此項技術中已熟知且可應用於本文所述之組合物投與。本文所揭示之AAT RNAi藥劑可以根據特定路徑適當定製的製劑形式經由任何適合的途徑投與。因此，本文描述之醫藥組合物可藉由注射(例如靜脈內、肌肉內、皮內、皮下、關節內或腹膜內)來投與。在一些實施例中，經皮下注射投與本文所述之醫藥組合物。 包含本文所述的AAT RNAi藥劑之醫藥組合物可使用此項技術中已知的寡核苷酸傳遞技術傳遞至細胞、細胞群、組織或個體。大體而言，此項技術中公認用於傳遞核酸分子(活體外或活體內)之任何適合方法可適於與本文描述之組合物一起使用。舉例而言，傳遞可藉由以下實現：局部投與(例如直接注射、植入或表面投與)、全身性投與或皮下、靜脈內、腹膜內或非經腸途徑，包含顱內(例如腦室內、腦實質內及鞘內)、肌肉內、經皮、呼吸道(氣霧劑)、經鼻、經口、經直腸或表面(包括經頰及舌下)投與。在某些實施例中，組合物藉由皮下或靜脈內輸注或注射投與。 因此，在一些實施例中，本文中描述之醫藥組合物可包括一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。在一些實施例中，本文中所描述之醫藥組合物可經調配以用於投與個體。 如本文所用，醫藥組合物或藥劑包含藥理學有效量之所描述之AAT RNAi劑中之至少一者及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑(賦形劑)為除活性醫藥成分(API、治療性產品，例如AAT RNAi藥劑)以外，藥物傳遞系統中刻意包含之物質。賦形劑在預定劑量下不發揮或打算發揮治療作用。賦形劑可用於a)在製造期間輔助加工藥物傳遞系統，b)保護、支持或增強API之穩定性、生物可用性或患者接受性，c)有助於產品鑑別，及/或d)在儲存或使用期間增強API傳遞之總體安全性、有效性之任何其他屬性。醫藥學上可接受之賦形劑可為或可不為惰性物質。 賦形劑包含(但不限於)：吸收增強劑、抗黏劑、抗起泡劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、塗佈劑、顏料、傳遞增強劑、聚葡萄糖、右旋糖、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增量劑、填充劑、調味劑、滑動劑、保濕劑、潤滑劑、油狀物、聚合物、防腐劑、生理食鹽水、鹽、溶劑、糖類、懸浮劑、持續釋放型基質、甜味劑、增稠劑、張力劑、媒劑、驅水劑及濕潤劑。 適於可注射用途之醫藥組合物包含無菌水溶液(其中可溶於水)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。對於靜脈內投與，適合載劑包含生理食鹽水、抑菌水、Cremophor ELTM (BASF, Parsippany, N.J.)或磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)。其應在製造及儲存條件下穩定，且應保護其免遭微生物(諸如細菌及真菌)之污染作用。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇及液態聚乙二醇)之溶劑或分散介質及其適合混合物。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣、在分散液之情況下藉由維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。在許多情況下，組合物中將較佳包含等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)及氯化鈉。可藉由將延遲吸收之藥劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)包含在組合物中來實現可注射組合物之延伸吸收。 無菌可注射溶液可藉由如下方法製備：將所需量之活性化合物與上文所列舉之成分中之一者或組合一起併入適當溶劑中，視需要隨後進行過濾滅菌。一般而言，分散液係藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及上文所列舉之彼等成分之所需其他成分的無菌媒介中來製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌散劑之情況下，製備方法包含真空乾燥及冷凍乾燥，其產生活性成分加來自其先前無菌過濾溶液之任何其他所需成分的散劑。 適用於關節內投藥之調配物可呈藥物之無菌水性製劑形式，其可呈微晶形式，例如呈水性微晶懸浮液形式。脂質調配物或可生物降解聚合物系統亦可用於使藥物用於關節內及經眼投藥。 活性化合物可用將防止化合物自體內快速排除的載劑製備，諸如控制釋放型調配物，包含植入物及微囊封傳遞系統。可使用可生物降解、生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。用於製備此類調配物之方法將為一般熟習此項技術者顯而易見的。亦可使用脂質體懸浮液作為醫藥學上可接受之載劑。此等物質可根據熟習此項技術者已知之方法製備，例如美國專利第4,522,811號中所描述。 AAT RNAi藥劑可在組合物中以單位劑型形式調配以便於投與及給藥均勻性。單位劑型係指適合作為單一劑量用於待治療個體之實體上離散單位；各單位含有與所需醫藥載劑結合，經計算以產生所要治療效果的預定數量之活性化合物。本發明之單位劑型之規格由以下因素規定且直接取決於以下因素：活性化合物之獨特特徵及欲實現之治療效果，以及混配此類用於治療個體之活性化合物之領域中固有之限制。 醫藥組合物可含有通常見於醫藥組合物中之其他額外組分。此類額外組分包含(但不限於)：止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑或消炎劑(例如抗組胺劑、苯海拉明等)。亦設想表現或包括本文中定義之RNAi藥劑的細胞、組織或經分離之器官可用作「醫藥組合物」。如本文所用，「藥理學有效量」、「治療有效量」或簡稱「有效量」係指可產生藥理學、治療性或預防性結果之RNAi藥劑之量。 一般而言，有效量之活性化合物將在約0.1至約100 mg/kg體重/天，例如約1.0至約50 mg/kg體重/天範圍內。在一些實施例中，活性化合物之有效量將在每次劑量約0.25至約5 mg/kg體重範圍內。在一些實施例中，活性成分之有效量將在每劑量約0.5至約4 mg/kg體重範圍內。投與量亦可取決於諸如患者之整體健康狀況、所傳遞之化合物之相關生物學功效、藥物之調配物、調配物中賦形劑之存在及類型及投藥途徑等變數。此外，應理解可提高所投與之初始劑量以超出以上上限含量而快速獲得所述血液含量或組織含量或初始劑量可小於最佳值。 為了治療疾病或形成用於治療疾病的藥劑或組合物，本文所述之包含AAT RNAi藥劑的醫藥組合物可與賦形劑或第二治療劑或治療組合，包含(但不限於)：第二或其他RNAi藥劑、小分子藥物、抗體、抗體片段、肽及/或適體。 當添加至醫藥學上可接受之賦形劑或佐劑中時，所描述之AAT RNAi藥劑可封裝於套組、容器、藥包或分配器中。本文中所描述之醫藥組合物可封裝於預填充針筒或小瓶中。 治療方法及表現抑制 本文揭示之AAT RNAi藥劑可用於治療患有將受益於投與化合物之疾病或病症的個體(例如人類或其他哺乳動物)。在一些實施例中，本文揭示之RNAi藥劑可用於治療患有將受益於降低或抑制AAT mRNA表現之疾病或病症的個體(例如人類)。向個體投與治療有效量之本文所述的AAT RNAi藥劑中之任何一或多者。個體可為人類、患者或人類患者。個體可為成年人、青年、兒童或嬰兒。包含AAT RNAi藥劑的所描述之醫藥組合物可用於提供治療性治療疾病之方法。此類方法包含向人類或動物投與本文中所描述之醫藥組合物。 在一些實施例中，本文所述的AAT RNAi藥劑用於治療患有AAT相關疾病或病症之個體。「AAT相關疾病或病症」係指AAT表現程度經改變或升高的AAT表現程度與產生病況、疾病或病症之風險增加有關的病況、疾病或病症。AAT相關疾病或病症包含(但不限於)慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高、膽汁鬱積、纖維化及甚至爆發性肝衰竭。在一些實施例中，所描述之AAT RNAi藥劑用於治療患有AAT相關疾病或病症之個體的至少一種症狀。向個體投與治療有效量之所描述之RNAi藥劑中之任何一或多者。 在一些實施例中，AAT RNAi藥劑用於治療或管理患有AAT相關疾病或病症之個體的臨床表現。向個體投與治療有效量之本文所述之AAT RNAi藥劑或含有AAT RNAi藥劑之組合物中之一或多者。在一些實施例中，該方法包括向打算治療之個體投與本文所述的包括AAT RNAi藥劑之組合物。 在一些實施例中，相對於投與AAT RNAi藥劑之前的個體或未接收AAT RNAi藥劑之個體，投與所描述之AAT RNAi藥劑的個體中AAT基因之基因表現程度及/或mRNA含量降低至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%。在個體之細胞、細胞群及/或組織中，個體之基因表現程度及/或mRNA含量可降低。在一些實施例中，相對於投與AAT RNAi藥劑之前的個體或未接收AAT RNAi藥劑之個體，已投與所描述之AAT RNAi藥劑的個體之AAT蛋白質含量降低至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%。在個體之細胞、細胞群、組織、血液及/或其他體液中，個體之蛋白含量可降低。基因表現、mRNA或蛋白質含量之減少可藉由此項技術中已知之任何方法來評定。AAT mRNA含量及/或蛋白質含量之減少或降低在本文中統稱為AAT之減少或降低或抑制或降低AAT之表現。 細胞及組織及非人類生物體 涵蓋包含至少一種本文所述的AAT RNAi藥劑之細胞、組織及非人類生物體。藉由將RNAi藥劑傳遞至細胞、組織或非人類生物體來製得細胞、組織或非人類生物體。 上文所提供的實施例及項目現藉由以下非限制性實例說明。實例 實例 1 . 鑑別 RNAi 藥劑序列及合成 RNAi 藥劑 用於鑑別用以抑制AAT基因表現的前導序列的選擇方法開始於電子雜交方法以鑑別AAT基因(SEQ ID NO：1)變異體的保守序列。最初使用生物信息學篩選AAT序列，用於在人類AAT的已知變異體中具有互補序列的19個核苷酸的序列。已知具有製造難題的序列及基於已知參數預測RNAi活性差的序列被消除。接著對序列進行跨物種反應性分析以選擇將與食蟹獼猴AAT交叉反應的候選物。亦評估序列的特異性以避免針對人類及食蟹獼猴基因組的脫靶效應。選擇19-mer的一百一十五(115)序列家族作為可能候選物。 下文簡單描述用於本文所揭示之AAT RNAi藥劑的合成程序：合成 . 根據寡核苷酸合成中使用之固相上的胺基磷酸酯技術合成AAT RNAi藥劑之有義及反義股。視規模而定，使用MerMade96E® (Bioautomation)或MerMade12® (Bioautomation)。在由受控微孔玻璃(CPG, 500 Å或600Å，自Prime Synthesis, Aston, PA, USA獲得)製成之固體載體上進行合成。所有RNA及2'-經修飾之RNA胺基磷酸酯係購自Thermo Fisher Scientific (Milwaukee, WI, USA)。特定言之，使用以下2'-O-甲基胺基磷酸酯：(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N6 -(苯甲醯基)-2'-O-甲基-腺苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)胺基磷酸酯、5'-O-二甲氧基-三苯甲基-N4 -(乙醯基)-2'-O-甲基-胞苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)胺基磷酸酯、(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N2 -(異丁醯基)-2'-O-甲基-鳥苷-3'-O-(2-氰基-乙基-N,N-二異丙基胺基)胺基磷酸酯及5'-O-二甲氧基-三苯甲基-2'-O-甲基尿苷-3'-O-(2-氰基乙基-N,N-二異丙基胺基)胺基磷酸酯。2'-去氧-2'-氟-胺基磷酸酯帶有與2'-O-甲基RNA胺基酸酯相同之保護基。使用以下UNA胺基磷酸酯：5'-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N-苯甲醯基-2',3'-開環-腺苷、2'-苯甲醯基-3'-[(2-氰基乙基)-(N,N-二異丙基)]-胺基磷酸酯、5'-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N-乙醯基-2',3'-開環-胞嘧啶、2'-苯甲醯基-3'-[(2-氰基乙基)-(N,N-二異丙基)]-胺基磷酸酯、5'-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N-異丁醯基-2',3'-開環-鳥苷、2'-苯甲醯基-3'-[(2-氰基乙基)-(N,N-二異丙基)]-胺基磷酸酯及5'-(4,4'-二甲氧基-三苯甲基)-2',3'-開環-尿苷、2'-苯甲醯基-3'-[(2-氰基乙基)-(N,N-二異丙基)]-胺基磷酸酯。含有胺基磷酸酯之靶向配位體溶解於無水二氯甲烷或無水乙腈(50 mM)中，同時所有其他胺基酸酯溶解於無水乙腈(50 mM)中且添加分子篩(3Å)。使用5-苯甲硫基-1H-四唑(BTT，乙腈中250 mM)或5-乙基硫基-1H-四唑(ETT，乙腈中250 mM)作為活化劑溶液。偶合時間為10分鐘(RNA)、15分鐘(靶向配位體)、90秒(2'OMe)及60秒(2'F)。為了引入硫代磷酸酯鍵，使用3-苯基1,2,4-二噻唑啉-5-酮(POS，自PolyOrg, Inc., Leominster, MA, USA獲得)於無水乙腈中之100 mM溶液。載體結合之寡聚物的裂解及脫除保護基 . 完成固相合成之後，在30℃下用40重量%甲胺水溶液與28%氫氧化銨溶液(Aldrich)之1:1體積溶液處理乾燥之固體載體兩小時。將溶液蒸發且固體殘餘物於水中復原(參看下文)。純化 . 使用TKSgel SuperQ-5PW 13u管柱及Shimadzu LC-8系統，藉由陰離子交換HPLC純化粗寡聚物。緩衝液A為20 mM Tris、5 mM EDTA，pH 9.0且含有20%乙腈，且緩衝液B在添加1.5 M氯化鈉的情況下與緩衝液A相同。在260 nm下記錄UV痕量。接著使適當溶離份在尺寸排阻型HPLC上流動，其使用裝填有Sephadex G25介質之GE Healthcare XK 16/40管柱，使用100 mM碳酸氫銨(pH 6.7)及20%乙腈之操作緩衝液。黏接 . 藉由將等莫耳濃度RNA溶液(有義股及反義股)在0.2×PBS (磷酸鹽緩衝生理鹽水，1×，Corning, Cellgro)中組合來使互補股混合以形成RNAi藥劑。將此溶液置於70℃熱混合器中，加熱至95℃，在95℃下保持5分鐘且緩慢冷卻至室溫。將一些RNAi藥劑凍乾且在-15至-25℃下儲存。藉由UV-Vis光譜儀量測0.2× PBS中之溶液吸光度來測定雙螺旋體濃度。接著將260 nm溶液吸光度乘以換算因數及稀釋因數以測定雙螺旋濃度。除非另外規定，否則所有換算因數為0.037 mg/(mL∙cm)。對於一些實驗，換算因數係利用實驗測定的消光係數計算。實例 2 . AAT RNAi 藥劑之活體外測試 活體外測試候選序列雙螺旋體。反義股序列及有義股序列黏接形成21-mer股之雙螺旋體(具有19個鹼基對及各3'端上的二核苷酸UU懸垂物)用於活體外測試，如下表8中所示：表 8 . 實例2中AAT RNAi藥劑之序列。 AAT RNAi藥劑之評估藉由轉染人類肝細胞癌系Hep3B細胞來進行。細胞以約10,000個細胞/孔塗鋪於96孔結構中，且使用LipoFectamine RNAiMax(Thermo Fisher)轉染劑以三種濃度(10 nM、1 nM及0.1 nM)轉染115個AAT RNAi藥劑雙螺旋體中之每一者。如表9中所示，藉由比較AAT mRNA與內源性對照組的表現程度，且對未處理之Hep3B細胞進行標準化(ΔΔCT 分析)，藉由qRT -PCR測定115個AAT RNAi藥劑中每一者之相對表現。表 9 .來自實例2之候選雙螺旋體的活體外資料。 實例 3 . PiZ 小鼠中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 。 使用轉殖基因PiZ小鼠模型(PiZ小鼠)活體內評估RNAi藥劑。PiZ小鼠攜帶人類PiZ AAT突變型對偶基因及模型人類AATD(Carlson等人, Journal of Clinical Investigation 1989)。NAG-結合之AAT RNAi藥劑在醫藥學上可接受之生理食鹽水緩衝液中製備且投與PiZ小鼠以評估AAT基因表現的基因表現阻斷。第1天，每隻小鼠在肩部之間鬆弛背部皮膚處接收單次皮下(SQ)給予5.0 mg/kg (mpk)以下中之任一者：AD04446、AD04447、AD04448、AD04449、AD04450、AD04451、AD04454、AD04455、AD04456、AD04457、AD04458或AD04459。(參看針對經修飾之AAT RNAi藥劑及NAG配位體結構的表4-7)。AAT RNAi藥劑AD04451及AD04459包含經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；AAT RNAi藥劑AD04446及AD04454包含經設計以靶向位置1142處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；AAT RNAi藥劑AD04447及AD04455包含經設計以靶向位置1211處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；AAT RNAi藥劑AD04448及AD04456包含經設計以靶向位置1326處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；AAT RNAi藥劑AD04449及AD04457包含經設計以靶向位置1338處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；且AAT RNAi藥劑AD04450及AD04458包含經設計以靶向位置1427處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列。(亦參看表1及2)。三隻小鼠給予各AAT RNAi藥劑(n = 3)。 抽取血漿樣品且分析第1天(給藥前)、第8天、第15天、第22天、第29天及第36天的AAT (Z-AAT)蛋白質含量。AAT含量根據第1天(給藥前) AAT血漿含量標準化。藉由ELISA套組定量血漿中之循環人類Z-AAT含量來量測蛋白質含量。各RNAi藥劑之平均標準化AAT (Z-AAT)含量報導於下表10中：表 10 . 來自實例3之平均標準化AAT蛋白質(根據治療前標準化)。 如上文表10中之資料所示，儘管AAT RNAi藥劑AD04447基本上不顯示AAT蛋白質減少，但AAT RNAi藥劑AD04458(其包含經設計以靶向位置1427處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸序列)及AD04459(其包含經設計以靶向位置1000處的AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸序列)在所有時間點均顯示AAT蛋白質顯著減少。舉例而言，AD04458顯示第8天約69%基因表現阻斷(0.308)；第15天約83% (0.174)，及第22天約82% (0.177)。另外，舉例而言，AD04459顯示第8天約74%基因表現阻斷(0.256)；第15天約87% (0.134)，及第22天約83% (0.174)。實例 4 . 食蟹獼猴中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 製備NAG結合之AAT RNAi藥劑且將其在此項技術中已知的用於皮下(SC)注射的醫藥學上可接受之生理食鹽水緩衝液中合併。第1天，食蟹獼猴(食蟹猴)靈長類動物(在本文中稱為「cyno」或「猴」)皮下注射3 mg/kg AD04824、AD04825、AD04826或AD04827中之任一者。(參看針對經修飾之AAT RNAi藥劑及NAG配位體結構之表4-7)。此等AAT RNAi藥劑中之每一者均包含經修飾之核苷酸序列，其經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)，且與cyno具有交叉反應性。每組測試三隻猴(n=3)。 在第-7天及第1天(給藥前)以及第8天、第15天、第22天及第29天自經治療之食蟹獼猴取血清樣品以監測基因表現阻斷。第36天亦對注射AD04825及AD04826之cyno量測。在指定時間點，抽取血液樣品且分析食蟹獼猴AAT (cAAT)。自股靜脈收集血液。根據製造商建議在Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics)上測定cAAT含量。將各動物在相應時間點的AAT含量除以該動物的治療前表現程度(第-7天及第1天(給藥前)的平均值)，以測定「根據給藥前標準化之」表現比率。 在下表11中報導用各相應AAT RNAi藥劑處理後的平均標準化食蟹獼猴AAT (cAAT)蛋白質含量：表 11 . 來自實例4之食蟹獼猴的平均標準化cAAT蛋白質(根據治療前標準化)。 相應處理組中之每一者的平均標準化cAAT含量顯示於圖9之柱狀圖中。如上文表11及圖9中所示，測試AAT RNAi藥劑中之每一者顯示在所有量測時間點食蟹獼猴中cAAT實質上基因表現阻斷。實例 5 . 食蟹獼猴中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 製備NAG結合之AAT RNAi藥劑且將其在此項技術中已知的用於皮下(SC)注射的醫藥學上可接受之生理食鹽水緩衝液中合併。第1天，將3 mg/kg AD04828、AD04831、AD04836或AD04837皮下注射至食蟹獼猴(食蟹猴)靈長類動物中。(參看針對經修飾之AAT RNAi藥劑及NAG配位體結構之表4-7)。此等AAT RNAi藥劑中之每一者均包含經修飾之核苷酸序列，其經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)，且與cyno具有交叉反應性。每組中三隻猴針對AD04828及AD04831進行測試(n=3)，且每組中兩隻猴針對AD04836及AD04837進行測試(n=2)。 在第-35天及第1天(給藥前)以及第8天、第15天、第21天及第29天自經治療之cyno取血清樣品以監測基因表現阻斷。在指定時間點，取血液樣品且分析cAAT。自股靜脈收集血液。根據製造商建議在Cobas Integra 400 Plus (Roche Diagnostics)上測定cAAT含量。將各動物在相應時間點的cAAT含量除以該動物的治療前表現程度(第-35天及第1天(給藥前)的平均值)，以測定「根據給藥前標準化之」表現比率。 在下表12中報導用各相應AAT RNAi藥劑處理後的平均標準化食蟹獼猴AAT (cAAT)蛋白質含量：表 12 . 來自實例5之食蟹獼猴的平均標準化AAT蛋白質(根據治療前標準化)。 相應處理組中之每一者的平均標準化cAAT含量顯示於圖10之柱狀圖中。所測試之AAT RNAi藥劑中之每一者顯示在所有量測時間點食蟹獼猴中cAAT實質上基因表現阻斷。實例 6 . PiZ 小鼠中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 使用實例3中所闡述之轉殖基因PiZ小鼠模型(PiZ小鼠)活體內評估AAT RNAi藥劑。NAG-結合之AAT RNAi藥劑在醫藥學上可接受之生理食鹽水緩衝液中製備且投與PiZ小鼠以評估AAT基因表現的基因表現阻斷。第1天，每隻小鼠在肩部之間鬆弛背部皮膚處接收單次皮下(SQ)給予2.0 mg/kg (mpk)以下中之任一者：AD04824、AD04828、AD04829、AD04830、AD04831、AD04832、AD04833、AD04834、AD04836、AD04837、AD04838、AD04839或AD04857。(參看針對經修飾之AAT RNAi藥劑及NAG配位體結構的表4-7)。此研究中之AAT RNAi藥劑中之每一者包含經修飾之核苷酸反義股序列，其經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)。(亦參看表1及2)。三隻小鼠給予各AAT RNAi藥劑(n = 3)。 抽取血漿樣品且分析第-2天、第1天(給藥前)、第8天、第15天、第22天、第29天及第36天的AAT (Z-AAT)蛋白質含量。AAT含量根據第1天(給藥前) AAT血漿含量標準化。藉由ELISA套組定量血漿中之循環人類Z-AAT含量來量測蛋白質含量。各RNAi藥劑之平均標準化AAT (Z-AAT)含量報導於下表13中：表 13 . 來自實例6之平均標準化AAT蛋白質(根據治療前標準化)。 如自上文表13中之資料所示，AAT RNAi藥劑中之每一者顯示直至至少第29天AAT蛋白質實質上減少。舉例而言，在第15天，與治療前水準相比，每種所測試之AAT RNAi藥劑實現至少約70%蛋白質基因表現阻斷，其中多個組實現90%或更佳之基因表現阻斷。實例 7 . PiZ 小鼠中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 使用實例3中所述之轉殖基因PiZ小鼠模型。各小鼠在研究開始時5週大。自第1天開始，各小鼠在肩部之間鬆弛背部皮膚處接收皮下(SQ)劑量q2w(即每兩週注射一次，共4次注射)4.0 mg/kg(mpk)以下中之任一者：(1)生理食鹽水媒劑；(2)實例5中使用之AAT RNAi藥劑，其包含經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義鏈序列；或(3)包含靶向HBV基因之序列的RNAi藥劑，用作陰性對照。在第1天、第15天、第29天及第43天進行生理食鹽水媒劑、AAT RNAi藥劑及HBV RNAi藥劑組的單次皮下注射。七(7)隻小鼠用生理食鹽水媒劑給藥q2w (第1組)；九(9)隻小鼠用AAT RNAi藥劑給藥q2w (第2組)；且六(6)隻小鼠用HBV RNAi藥劑給藥(第3組)。三個處理組中的小鼠在第57天(13週大)處死。除了處理組之外，七(7)隻小鼠在研究第1週處死(即5週大小鼠)用作基線對照組。 抽取血漿樣品且在第1天(給藥前)、第8天、第15天、第22天、第29天及第36天分析全部組的AAT (Z-AAT)蛋白質含量。在第43天、第50天及第57天抽取AAT RNAi藥劑組及生理食鹽水媒劑組的額外樣品。AAT含量根據第1天(給藥前) AAT血漿含量標準化。藉由ELISA套組定量血漿中之循環人類Z-AAT含量來量測蛋白質含量。生理食鹽水媒劑及各RNAi藥劑之平均標準化AAT (Z-AAT)含量在下表14中報導：表 14 .來自實例7之平均標準化AAT蛋白質(根據治療前標準化)。 如自上表14中的資料所示，HBV RNAi藥劑作為陰性對照成功地進行，顯示基本上無AAT抑制。此外，與所有時間點之生理食鹽水及HBV RNAi藥劑陰性對照相比，AAT RNAi藥劑實現顯著基因表現阻斷。在給予q2w時，實例7中之AAT RNAi藥劑顯示在第36天約96% AAT蛋白質基因表現阻斷(0.040)且直至第57天保持相似阻斷基因表現水準。 除了監測血清AAT含量之外，進一步分析來自用AAT RNAi藥劑處理的PiZ小鼠的均質化肝臟組織，以確定是否可溶性Z-AAT (其預期主要為單體蛋白質)及Z-AAT的不溶性聚合物(其預期為聚合蛋白質)有效減少。如先前所述(Mueller等人. Molecular Therapy 2012)，使用經改良的西方墨點方案在非變性條件下分離可溶性及不溶性Z-AAT部分。 製備西方墨點來檢查處死之小鼠的某些肝臟。特定言之，檢查(i)6隻基線小鼠；(ii)5隻AAT RNAi藥劑小鼠；及(iii)4隻生理食鹽水小鼠的肝臟。(用於西方墨點分析之凝膠包含15個孔)。用於此西方墨點之動物樣品隨機選自多個組。圖11及12顯示反映自西方墨點分析定量之Z-AAT聚合物及Z-AAT單體含量的柱狀圖。 如自報導單體蛋白質含量之圖11所見，當與基線相比時，給予AAT RNAi藥劑的每一隻小鼠顯示AAT單體蛋白質在所有時間點顯著減少，表明顯著基因抑制。另外，如報導聚合蛋白質含量之圖12中所示，用生理食鹽水媒劑處理之動物在8週之後繼續具有增加的聚合AAT負荷。相對而言，與基線(5週大)小鼠相比，用AAT RNAi藥劑處理之動物顯示在8週的過程中聚合物負荷減少約50%，表明AAR RNAi藥劑能夠預防及潛在地逆轉聚合AAT蛋白質的產生。實例 8 . PiZ 小鼠中 NAG 結合之 AAT RNAi 藥劑的活體內測試 為了活體內評估RNAi藥劑，使用實例3中所述之轉殖基因PiZ小鼠模型。各小鼠在第1天在肩部之間鬆弛背部皮膚處接收單次皮下(SQ)劑量的以下任一者：(1)生理食鹽水；(2)1.0 mg/kg實例5中使用的AAT RNAi藥劑，其包含經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；(3)2.0 mg/kg實例5中使用的AAT RNAi藥劑，其包含經設計以靶向位置1000處之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；(4)4.0 mg/kg實例5中使用之AAT RNAi藥劑，其包含經設計以靶向位置1000之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列；或(5) 8.0 mg/kg實例5中使用之AAT RNAi藥劑，其包含經設計以靶向位置1000之AAT基因(SEQ ID NO: 1)的經修飾之核苷酸反義股序列。第1組中四(4)隻動物給藥(生理食鹽水)，且全部四隻在第43天處死。第2組、第3組、第4組及第5組中之每一組中十五(15)隻動物給藥，且在第8天、第15天、第22天、第29天及第43天處死每組3隻動物。 抽取血漿樣品且在第1天(給藥前)、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天及第43天分析全部組的AAT (Z-AAT)蛋白質含量。對於處死之小鼠，對心臟棒進行血清分離用於Z-AAT蛋白質含量評定(200 μl血漿)。AAT含量根據第1天(給藥前) AAT血漿含量標準化。藉由ELISA套組定量血漿中之循環人類Z-AAT含量來量測蛋白質含量。生理食鹽水媒劑及各RNAi藥劑之平均標準化AAT (Z-AAT)含量在下表中報導：表 15 . 來自實例8之平均標準化血漿AAT蛋白質(根據治療前標準化)。 如上表15中之資料所示，與所有量測時間點之生理食鹽水相比，所測試之AAT RNAi藥劑實現顯著基因表現阻斷。 另外，亦評定各相應時間點處死之小鼠的AAT mRNA含量。如上文所述，對於第2組至第5組(即RNAi藥劑組)，在第8天、第15天、第22天、第29天及第43天的每一天處死3隻小鼠；對於第1組，所有4隻小鼠在第43天處死。收集左半肝葉的一半且在液氮中快速冷凍用語RNA分離。表 16 . 投與生理食鹽水或AAT RNAi藥劑的單次SQ注射之後PiZ小鼠體內之相對AAT mRNA含量。 如上表16中所示，與生理食鹽水媒劑相比，全部量測時間點之相對AAT mRNA表現程度顯著降低。舉例而言，在第15天，第2組(1.0 mg/kg AAT RNAi藥劑)顯示AAT mRNA含量降低約58%(0.419)；第3組(2.0 mg/kg AAT RNAi藥劑)顯示AAT mRNA含量降低約67%(0.327)；第4組(4.0 mg/kg AAT RNAi藥劑)顯示AAT mRNA含量降低約84%(0.161)；及第5組(8.0 mg/kg AAT RNAi藥劑)在第1天在單次SQ劑量下顯示Z-AAT mRNA含量降低約94%(0.055)。其他實施例 應理解，儘管本發明已結合其實施方式描述，但前述描述打算說明且不限制本發明之範疇，本發明之範疇係由隨附申請專利範圍之範疇界定。其他態樣、優勢及修正在以下申請專利範圍之範疇內。
圖 1 表示顯示為鈉鹽的AD04828之化學雙螺旋結構。圖 2 表示顯示為游離酸之AD04828的化學雙螺旋結構。圖 3 表示顯示為鈉鹽之AD04831的化學雙螺旋結構。圖 4 表示顯示為游離酸之AD04831的化學雙螺旋結構。圖 5 表示顯示為鈉鹽之AD04836的化學雙螺旋結構。圖 6 表示顯示為游離酸之AD04836的化學雙螺旋結構。圖 7 表示顯示為鈉鹽之AD04837的化學雙螺旋結構。圖 8 表示顯示為游離酸之AD04837的化學雙螺旋結構。圖 9 為顯示根據實例4，在單次皮下投與3 mg/kg AD04824、AD04825、AD04826或AD04827中之任一者之後，食蟹獼猴(cyno)(n=3)中的平均標準化cyno AAT (cAAT)血清含量的柱狀圖。AAT血清含量根據治療前平均值標準化。實驗誤差係以標準差顯示。圖 10 為顯示根據實例5，在單次皮下投與3 mg/kg AD04828、AD04836、AD04831或AD04837中之任一者之後，cynos(n=2或n=3)中的平均標準化cAAT血清含量的柱狀圖。AAT血清含量根據治療前平均值標準化。實驗誤差係以標準差顯示。圖 11 為顯示根據實例7，來自用生理食鹽水或AAT RNAi藥劑(給藥8週，q2w，根據基線對照組標準化)給藥的PiZ小鼠之肝臟的可溶性部分(Z-AAT單體)的西方墨點分析結果的柱狀圖。個別小鼠量測結果顯示分為治療組，且實驗誤差顯示為標準差。圖 12 為顯示根據實例7，來自用生理食鹽水或AAT RNAi藥劑給藥的PiZ小鼠之肝臟的不溶性部分(Z-AAT單體)的西方墨點分析結果的柱狀圖。個別小鼠量測結果顯示分為治療組，且實驗誤差顯示為標準差。

Claims (30)

  1. 一種用於抑制α-1抗胰蛋白酶(AAT)基因之表現的RNA干擾(RNAi)藥劑，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股，且該反義股包括表1、表2或表3中之反義股序列中之任一者的核苷酸2-18之鹼基序列，且該有義股至少部分與該反義股互補。
  2. 一種用於抑制α-1抗胰蛋白酶(AAT)基因之表現的RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股，且該有義股包括表1、表2或表3中之有義股序列中之任一者的核苷酸2-18的鹼基序列，且該反義股至少部分與該有義股互補。
  3. 如請求項1或請求項2之RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括至少一種經修飾之核苷酸。
  4. 如請求項1至3中任一項之RNAi藥劑，其中該至少一種經修飾之核苷酸係選自由以下組成之群：2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸、2'-去氧核苷酸、2',3'-斷核苷酸模擬物、鎖定核苷酸、2'-F-阿糖核苷酸、2'-甲氧基乙基核苷酸、無鹼基核糖、核糖醇、反向核苷酸、反向無鹼基核苷酸、反向2'-OMe核苷酸、反向2'-去氧核苷酸、2'-胺基修飾之核苷酸、2'-烷基修飾之核苷酸、嗎啉基核苷酸、乙烯基膦酸酯去氧核糖核苷酸及3'-OMe核苷酸。
  5. 如請求項1至4中任一項之RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵。
  6. 如請求項1至5中任一項之RNAi藥劑，其中該有義股包括至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵。
  7. 如請求項1至6中任一項之RNAi藥劑，其中該反義股含有一、二、三或四個硫代磷酸酯核苷間鍵。
  8. 如請求項1至7中任一項之RNAi藥劑，其進一步包括一或多種靶向基團或連接基團。
  9. 如請求項8之RNAi藥劑，其中該等靶向基團或連接基團具有表7中呈現之結構。
  10. 如請求項9之RNAi藥劑，其中該一或多種靶向基團或連接基團結合至該有義股。
  11. 如請求項8至10中任一項之RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括靶向基團，其包含去唾液酸醣蛋白受體配位體。
  12. 如請求項11之RNAi藥劑，其中該去唾液酸醣蛋白受體配位體包括N-乙醯基-半乳糖胺。
  13. 如請求項8至12中任一項之RNAi藥劑，其中該靶向基團具有選自由以下組成之群的結構：(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。
  14. 如請求項12之RNAi藥劑，其中該去唾液酸醣蛋白受體配位體包括N-乙醯基-半乳糖胺三聚物。
  15. 如請求項1之RNAi藥劑，其中該反義股包括表4中之該等經修飾之反義股序列中之任一者之核苷酸序列。
  16. 如請求項1或請求項15之RNAi藥劑，其中該有義股包括表5中之該等經修飾之有義股序列中之任一者之核苷酸序列。
  17. 如請求項1或請求項2中任一項之RNAi藥劑，其中該有義股包括表1、表2或表5中該有義股核苷酸序列中之任一者之核苷酸1-18的核苷酸序列。
  18. 如請求項1或請求項2中任一項之RNAi藥劑，其中該RNAi藥劑包括有義股及反義股，形成具有表6中之雙螺旋體中之任一者之結構的雙螺旋體。
  19. 一種組合物，其包括如請求項1至18中任一項之RNAi藥劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
  20. 如請求項19之組合物，其進一步包括一或多種額外治療劑或治療。
  21. 如請求項19至20中任一項之組合物，其中該組合物封裝於套組、容器、藥包、分配器、預填藥注射器或小瓶中。
  22. 如請求項19至21中任一項之組合物，其中該組合物藉由皮下注射投與。
  23. 如請求項19之組合物，其中該組合物包含一或多種雙螺旋體，其具有選自由以下組成之群的結構：AD04824、AD04825、AD04826、AD04827、AD04828、AD04829、AD04830、AD04831、AD04832、AD04833、AD04834、AD04835、AD04836及AD04837。
  24. 一種用於抑制AAT基因之表現的方法，該方法包括投與有效量的如請求項1至18中任一項之RNAi藥劑。
  25. 一種用於個體體內之AAT基因之表現的方法，該方法包括向該個體投與有效量的如請求項1至18中任一項之RNAi藥劑。
  26. 一種用於抑制個體體內α-1抗胰蛋白酶表現之方法，該方法包括向該個體投與有效量的如請求項19至23中任一項之組合物。
  27. 一種用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏(AATD)引起之病況或疾病之方法，該方法包括向個體投與治療有效量的如請求項1至18中任一項之RNAi藥劑。
  28. 一種用於治療、預防或管理由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病的方法，該方法包括向個體投與治療有效量的如請求項19至23中任一項之組合物。
  29. 如請求項27或請求項28之方法，其中該由α-1抗胰蛋白酶缺乏引起之病況或疾病為慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌、轉胺酶升高、膽汁積鬱積、纖維化或爆發性肝衰竭。
  30. 一種降低個體體內聚合AAT蛋白質含量之方法，該方法包括向該個體投與有效量的如請求項1至18中任一項之RNAi藥劑或有效量的如請求項19至23中任一項之組合物。
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