CN113164509A - 用于抑制17β-HSD 13型(HSD17B13)表达的RNAi试剂、其组合物和使用方法 - Google Patents

用于抑制17β-HSD 13型(HSD17B13)表达的RNAi试剂、其组合物和使用方法 Download PDF

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Abstract

本公开内容涉及能够抑制17β‑羟基类固醇脱氢酶13型(HSD17B13或17β‑HSD13)基因表达的RNAi试剂，例如双链RNAi试剂。还公开的是包括HSD17B13 RNAi试剂的药物组合物及其使用方法。本文公开的HSD17B13 RNAi试剂可以与靶向配体缀合，以促进对细胞包括肝细胞的递送。HSD17B13 RNAi试剂在体内的递送提供了HSD17B13基因表达的抑制。RNAi试剂可以用于治疗与HSD17B13有关的疾病和病症的方法中，所述疾病和病症包括非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化、以及酒精性肝病或非酒精性肝病，包括肝硬化。

Description

用于抑制17β-HSD 13型(HSD17B13)表达的RNAi试剂、其组合 物和使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年8月22日提交的美国临时专利申请序列号62/890,220、于2018年11月30日提交的美国临时专利申请序列号62/773,707、以及于2018年9月19日提交的美国临时专利申请序列号62/733,320的优先权，所述美国临时专利申请各自的内容整体引入本文作为参考。
序列表
本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式提交，并且在此整体引入作为参考。ASCII副本命名为30667-WO_SEQLIST.txt，且大小为75 kb。
技术领域
本公开内容涉及用于抑制17β-羟基类固醇脱氢酶13型基因表达的RNA干扰(RNAi)试剂，例如双链RNAi试剂，包括17β-羟基类固醇脱氢酶13型RNAi试剂的组合物及其使用方法。
背景技术
肝脂质小滴蛋白17β-羟基类固醇脱氢酶13型(通常称为HSD17B13、17β-HSD13、HSD17β13、17β-HSD13、17β-HSD 13型或17-HSD13)是17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)家族的成员。17β-HSD家族由14种酶组成，所述酶参与性激素、脂肪酸和胆汁酸的还原或氧化。组织分布、亚细胞定位和催化偏好在各种家族成员之间不同。17β-HSD家族显示出不同的底物特异性，包括类固醇、脂质和类视黄醇。
17β-HSD13蛋白分布在体内广泛范围的组织中，并且由HSD17B13基因(可替代地称为17β-HSD13基因)编码。已知在肝脏的肝细胞中发现了最高的表达水平，而在卵巢、骨髓、肾脏、脑、肺、骨骼肌、膀胱和睾丸中可以检测到较低的水平。17β-HSD13的功能尚未完全理解，然而，一些17β-HSD家族成员，包括17β-HSD-4、-7、-10和-12，已显示参与碳水化合物和脂肪酸代谢。这提示了17β-HSD13也可能在脂质代谢途径中起作用。已报道，在脂肪肝患者中已观察到17β-HSD13的肝上调，这支持了该酶在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发病机制中的作用。
Wen Su等人先前已将17β-HSD13鉴定为NAFLD患者中的脂质小滴(LD)相关蛋白，并且报道17β-HSD13在特异性地定位在LD的表面上的最丰富表达的LD蛋白之一中。(Wen Su等人，Comparative proteomic study reveals 17β-HSD13 as a pathogenic protein in nonalcoholic fatty live disease，111 PNAS 11437-11442 (2014))。进一步地，发现17β-HSD13的水平在患有NAFLD的患者和小鼠的肝脏中是上调的。过表达导致LD的数目和大小中的增加，而HSD17B13的基因沉默减弱了培养的肝细胞中油酸诱导的LD形成。还已显示C57BL/6小鼠中的17β-HSD13蛋白的肝过表达，显著增加肝脏中的脂肪生成和甘油三酸酯(TG)含量，导致脂肪肝表型。
暗示NAFLD和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发病机制中的HSD17B13基因表达的另外证据，由N.S. Abul-Husn等人，A Protein-Truncating HSD17B13 Variant and Protection from Chronic Liver Disease，378 N. Eng. J. Med. 1096-1106 (2018)提供。该团体进行了全基因组关联研究，其揭示了在HSD17B13中，与丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平降低相关的剪接变体(rs72613567:TA)，指示了脂肪肝患者中较少的肝损伤和炎症。剪接变体产生功能蛋白的截短缺失，提示了HSD17B13通常生成可以促进肝细胞损害的产物。
NAFLD是全世界的重大健康问题。NAFLD是伞式术语，其包含在损伤严重性和所得到的纤维化方面不同的肝脏状况的连续体。在其中，单独的肝脂肪变性(脂肪肝)一般被称为NAFL，并且NASH通常被定义为具有炎症和肝细胞损害(脂肪性肝炎)的更严重的过程。一般地，NASH伴有纤维化，其经常进展为肝硬化。仅患有NAFL的患者携带不良结果的较低风险，而NASH的存在增加了肝脏和非肝脏相关结果的风险。与NASH有关的不良肝结果包括肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。非肝脏相关的不良结果通常与增加的心血管疾病和恶性肿瘤有关。
在全球范围内，NAFLD的患病率估计为约25%。在美国，NAFLD病例数目预计从2015年的8310万(人口的约25%)增加到2030年的1.009亿。NASH预计将在这些病例中占增加的比例，从20%上升到27%的患有NAFLD的成人。这种上升的疾病患病率无疑将导致增加的经济负担，并且将伴随着越来越多的需要肝移植的终末期肝病患者数目和肝细胞癌的急剧增加。与其它肝病的发生率相比，NASH中出现的较大百分比(约35–50%)的肝细胞癌病例在患者为肝硬化和进行常规癌症筛查之前发生。这经常导致与具有其它病因的肿瘤相比，更大且更不顺应治愈性疗法的肿瘤。
酒精相关性肝病(ARLD)在全世界也很普遍，并且指由过度的长期饮酒导致的进行性肝病。存在ARLD的各种疾病状态，并且包括酒精性脂肪肝(酒精性脂肪变性)、酒精性肝炎和肝硬化。
目前，不存在批准的用于NASH或列为NAFLD或ARLD的其它疾病和状况的药理学试剂。
发明内容
需要新型的HSD17B13基因特异性RNA干扰(RNAi)试剂(在本文中也称为RNAi试剂、RNAi触发剂或触发剂)，例如双链RNAi试剂，其能够选择性地和有效地抑制HSD17B13基因的表达。进一步地，需要包括新型HSD17B13特异性RNAi试剂的组合物，其用于治疗疾病例如尤其是NAFLD、NASH、肝纤维化和酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化。
一般而言，本公开内容的特点在于新型HSD17B13基因特异性RNAi试剂，包括HSD17B13 RNAi试剂的组合物，以及使用本文所述的HSD17B13 RNAi试剂和包括HSD17B13RNAi试剂的组合物，用于在体外和/或体内抑制HSD17B13基因表达的方法。本文所述的HSD17B13 RNAi试剂可以在受试者例如人或动物受试者中，选择性地和有效地减少、抑制或沉默HSD17B13基因的表达。
所述的HSD17B13 RNAi试剂可以用于治疗性治疗(包括预防性和预防治疗)症状和疾病的方法中，所述症状和疾病与NAFLD、NASH、肝纤维化和酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化相关。本文公开的方法包括使用本领域已知的任何合适方法，例如皮下注射或静脉内施用，向受试者例如人或动物受试者施用一种或多种HSD17B13 RNAi试剂。
在一个方面，本公开内容的特点在于用于抑制HSD17B13基因表达的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂包括有义链(也称为过客链)和反义链(也称为引导链)。有义链和反义链可以是彼此部分互补、基本上互补或完全互补的。本文所述的RNAi试剂的有义链和反义链的长度各自可以是长度16至49个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为17至26个核苷酸。有义链和反义链可以是相同的长度或不同的长度。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21至24个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度均为21个核苷酸。在一些实施方案中，反义链的长度独立地为18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度独立地为16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸。在递送至表达HSD17B13的细胞后，本文所述的RNAi试剂在体内或体外抑制一种或多种HSD17B13基因的表达。
本文公开的HSD17B13 RNAi试剂靶向人HSD17B13基因(参见例如，SEQ ID NO:1)。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂靶向具有表1中公开的任何序列的序列的HSD17B13基因的一部分。
表3和表4提供了HSD17B13 RNAi试剂的有义链和反义链的实例，所述有义链和反义链可以包括在本文公开的HSD17B13 RNAi试剂中。HSD17B13 RNAi试剂双链体的实例在表5中提供，并且显示与包括N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体连接的某些HSD17B13 RNAi试剂的化学结构和示意图，在图1A到10D和图11A到11E中进行描绘。由本文公开的HSD17B13RNAi试剂的有义链和反义链组成、或者包括在其中的19核苷酸核心段序列的实例在表2中提供。
在另一个方面，本公开内容的特点在于用于在体内将HSD17B13 RNAi试剂递送至受试者(例如哺乳动物)的肝脏细胞的方法。本文还描述的是用于此类方法中的组合物。
可以使用本领域已知的任何寡核苷酸递送技术，将一种或多种HSD17B13 RNAi试剂递送至靶细胞或组织。在一些实施方案中，通过将RNAi试剂与靶向基团，例如脱唾液酸糖蛋白受体配体(即，包括对于脱唾液酸糖蛋白受体具有亲和力的化合物的配体，所述脱唾液酸糖蛋白受体在肝脏中的肝细胞上丰富表达)共价连接或缀合，将HSD17B13 RNAi试剂递送至靶细胞或组织。在一些实施方案中，脱唾液酸糖蛋白受体配体包括半乳糖或半乳糖衍生物簇、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂与包含半乳糖衍生物N-乙酰基-半乳糖胺的靶向基团或靶向配体连接。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包括N-乙酰基-半乳糖胺三聚体或N-乙酰基-半乳糖胺四聚体、或者由其组成。
在一些实施方案中，与包括N-乙酰基-半乳糖胺的靶向基团或靶向配体缀合的本文公开的HSD17B13 RNAi试剂，通过受体介导的内吞作用或通过其它手段，被肝脏细胞且特别是肝细胞选择性地内在化。
在一些实施方案中，靶向基团与本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的有义链的3’端或5’端连接。在一些实施方案中，靶向基团与有义链的5'端连接。
可用于将本文公开的HSD17B13 RNAi试剂递送至肝细胞的靶向配体和靶向基团的实例，公开于例如国际专利申请公开号WO 2018/044350和WO 2017/156012中，所述国际专利申请整体引入本文作为参考。在一些实施方案中，本文所述的HSD17B13 RNAi试剂可以与具有以下结构的一种或多种靶向配体连接：(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s，其各自如本文表6中定义的。
在一些实施方案中，本文所述的HSD17B13 RNAi试剂在有义链的5'端处与靶向配体连接，所述靶向配体包含三个N-乙酰基-半乳糖胺部分，其中所述靶向配体具有以下的结构：(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s，其各自如本文表6中定义的。
在一些实施方案中，本文描述的是包括一种或多种HSD17B13 RNAi试剂的组合物，所述HSD17B13 RNAi试剂具有表5中公开的双链体结构。
在另一个方面，本公开内容的特点在于用于抑制HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括向受试者或受试者的细胞施用一定量的能够抑制HSD17B13基因表达的HSD17B13 RNAi试剂，其中所述HSD17B13 RNAi试剂包含有义链和反义链，并且其中所述反义链包括表2或表3中的任何一种反义链核苷酸序列的序列。在一些实施方案中，本文公开的是抑制HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括向受试者或细胞施用一定量的能够抑制HSD17B13基因表达的HSD17B13 RNAi试剂，其中所述HSD17B13 RNAi试剂包含有义链和反义链，并且其中所述有义链包括表2或表4中的任何一种有义链核苷酸序列的序列。在一些实施方案中，本文公开的是用于抑制细胞或受试者中的HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括向细胞或受试者施用HSD17B13 RNAi试剂，其具有包含表4中的任何序列的序列的有义链、以及包含表3中的任何序列的序列的反义链。本文还公开了用于此类方法中的组合物。
在一个进一步方面，本发明的特点在于治疗(包括预防或预防性治疗)由NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化引起的疾病或症状的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者施用HSD17B13 RNAi试剂，其具有包括表2或3中的任何序列的序列的反义链。在一些实施方案中，本文描述的是治疗(包括预防治疗)由NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化引起的疾病或症状的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者施用HSD17B13 RNAi试剂，其具有包含表2或4中的任何序列的序列的有义链。本文还公开了用于此类方法中的组合物。
在一些实施方案中，描述了用于在体内将HSD17B13 RNAi试剂递送至肝脏细胞，特别是肝细胞的组合物，该组合物包含：与靶向基团连接或缀合的HSD17B13 RNAi试剂。在一些实施方案中，靶向基团是N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ IDNO:3)相差0或1个核碱基的核碱基序列。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′)UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′)UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO: 3)相差0或1个核碱基的核碱基序列，其中SEQ IDNO:3位于反义链的位置1-21 (5′→3′)处。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)相差不多于1个核苷酸的修饰的核苷酸序列，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。如本领域普通技术人员将清楚地理解的，如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的，硫代磷酸酯键合的包括替换了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键合(参见例如，显示了所有核苷间键合的图11A到11E)。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)相差不多于1个核苷酸的修饰的核苷酸序列，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。如本领域普通技术人员将清楚地理解的，如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的，硫代磷酸酯键合的包括替换了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键合(参见例如，显示了所有核苷间键合的图11A到11E)。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg(SEQ ID NO:4)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ IDNO:6)相差0或1个核碱基的核碱基序列。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′)UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′)UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO: 3)相差0或1个核碱基的核碱基序列，其中SEQ IDNO:6位于反义链的位置1-21 (5′→3′)处。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)相差不多于1个核苷酸的修饰的核苷酸序列，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。如本领域普通技术人员将清楚地理解的，如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的，硫代磷酸酯键合的包括替换了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键合(参见例如，显示了所有核苷间键合的图11A到11E)。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)相差不多于1个核苷酸的修饰的核苷酸序列，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。如本领域普通技术人员将清楚地理解的，如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的，硫代磷酸酯键合的包括替换了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键合(参见例如，显示了所有核苷间键合的图11A到11E)。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc(SEQ ID NO:7)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合，并且其中有义链与反义链至少基本上互补。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：与核苷酸序列(5′→3′) UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ IDNO:3)相差0或1个核碱基的核碱基序列；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：与核苷酸序列(5′→3′) CGUAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ ID NO:8)相差0或1个核碱基的核碱基序列。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：与核苷酸序列(5′→3′) UCAUCUAUCAGACUUCUUACG(SEQ ID NO:3)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：与核苷酸序列(5′→3′) CGUAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ ID NO:8)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：与核苷酸序列(5′→3′) UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ IDNO:6)相差0或1个核碱基的核碱基序列；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：与核苷酸序列(5′→3′) GCCUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ ID NO:11)相差0或1个核碱基的核碱基序列，其中I代表肌苷(次黄嘌呤)核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：与核苷酸序列(5′→3′) UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：与核苷酸序列(5′→3′) GCCUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ ID NO:11)相差不多于1个核苷酸的核苷酸序列，其中I代表肌苷(次黄嘌呤)核苷酸，并且其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) cguaagaaGfUfCfugauagauga (SEQ ID NO:9)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) cguaagaaGfUfCfugauagauga (SEQ IDNO:9)，并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) cguaagaaGfuCfuGfauagauga (SEQ ID NO:10)，其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) cguaagaaGfuCfuGfauagauga (SEQ ID NO:10)，并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) gccuaggaCfAfUfuuuugiauca (SEQ ID NO:12)，其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′)gccuaggaCfAfUfuuuugiauca (SEQ ID NO:12)，并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)，其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′)gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)，并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)，其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′)usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)；以及由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的有义链：修饰的核苷酸序列(5′→3′) gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQID NO:13)，并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)；
其中所述HSD17B13 RNAi试剂进一步包括与反义链至少部分互补的有义链；并且其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)；
其中所述HSD17B13 RNAi试剂进一步包括与反义链至少部分互补的有义链；其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)；
其中所述HSD17B13 RNAi试剂进一步包括与反义链至少部分互补的有义链；其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺；并且其中分别的反义链序列位于反义链的位置1-21处。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其中所述反义链和有义链由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)对之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)和CGUAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ IDNO:8)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)和GCCUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ IDNO:11)，其中I代表肌苷(次黄嘌呤)核苷酸；
其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其中所述反义链和有义链由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)对之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)和CGUAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ IDNO:8)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)和GCCUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ IDNO:11)，其中I代表肌苷(次黄嘌呤)核苷酸；
其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰的核苷酸序列：
usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)；
usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；
usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)；
其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s代表硫代磷酸酯键合；并且其中所述HSD17B13 RNAi试剂进一步包括与反义链至少部分互补的有义链；并且其中所述有义链上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰的核苷酸序列：
usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)；
usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；
usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)；
其中所述HSD17B13 RNAi试剂进一步包括与反义链至少部分互补的有义链；其中所述有义链上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；其中所述反义链和有义链两者上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸；并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列对(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰的核苷酸序列：
usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)和
cguaagaaGfUfCfugauagauga (SEQ ID NO:9)；
usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)和
cguaagaaGfuCfuGfauagauga (SEQ ID NO:10)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)和
gccuaggaCfAfUfuuuugiauca (SEQ ID NO:12)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)和
gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)；或
usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)和
gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)；
其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；并且s代表硫代磷酸酯键合。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：下述核苷酸序列对(5′→3′)之一：
usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)和
cguaagaaGfUfCfugauagauga (SEQ ID NO:9)；
usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)和
cguaagaaGfuCfuGfauagauga (SEQ ID NO:10)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)和
gccuaggaCfAfUfuuuugiauca (SEQ ID NO:12)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)和
gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)；或
usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)和
gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)；
其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s代表硫代磷酸酯键合；并且其中所述有义链进一步包括在核苷酸序列的3'末端和5'端处的反向脱碱基残基，并且所述有义链还包括与5'末端共价连接的靶向配体，其中所述靶向配体包括N-乙酰基-半乳糖胺。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其包括与选自以下(5′→3′)的核苷酸序列相差0或1个核碱基的核碱基序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUA (SEQ ID NO:26)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAG (SEQ ID NO:41)。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其包括与选自以下(5′→3′)的核苷酸序列相差0或1个核碱基的核碱基序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUA (SEQ ID NO:26)；和
UGAUCCAAAAAUGUCCUAG (SEQ ID NO:41)；
其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其包括与选自以下(5′→3′)的核苷酸序列相差0或1个核碱基的核碱基序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUA (SEQ ID NO:26)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAG (SEQ ID NO:41)；
其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸，并且其中SEQ ID NO:26或SEQID NO:41分别位于反义链的核苷酸位置1-19(5′→3′)处。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其各自包括与选自以下(5′→3′)的核苷酸序列对相差0或1个核碱基的核碱基序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUA (SEQ ID NO:26)和UAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ ID NO:67)；
UGAUCCAAAAAUGUCCUAG (SEQ ID NO:41)和CUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ ID NO:86)，其中(I)代表肌苷核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂包括反义链和有义链，其各自包括与选自以下(5′→3′)的核苷酸序列对相差0或1个核碱基的核碱基序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUA (SEQ ID NO:26)和UAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ ID NO:67)；
UGAUCCAAAAAUGUCCUAG (SEQ ID NO:41)和CUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ ID NO:86)，其中(I)代表肌苷核苷酸；和
其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文所述的包含一种或多种HSD17B13 RNAi试剂的组合物包装到试剂盒、容器、包装、分配器、预填充注射器或小瓶中。在一些实施方案中，本文所述的组合物例如通过皮下注射进行肠胃外施用。
如本文使用的，术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”意指连接的核苷的聚合物，所述核苷各自可以独立地为修饰的或未修饰的。
如本文使用的，“RNAi试剂”(也称为“RNAi触发剂”)意指含有RNA或RNA样(例如化学修饰的RNA)寡核苷酸分子的组合物，所述寡核苷酸分子能够以序列特异性方式降解或抑制(例如，在适当的条件下降解或抑制)靶mRNA的信使RNA(mRNA)转录物的翻译。如本文使用的，RNAi试剂可以通过RNA干扰机制(即，通过与哺乳动物细胞的RNA干扰途径机制(RNA诱导沉默复合物或RISC)的相互作用而诱导RNA干扰)、或通过任何替代机制或途径来起作用。尽管认为如该术语在本文中使用的，RNAi试剂主要通过RNA干扰机制来起作用，但所公开的RNAi试剂不受任何特定的途径或作用机制的束缚或限制。本文公开的RNAi试剂由有义链和反义链构成，并且包括但不限于：短(或小)干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)和切丁酶(dicer)底物。本文所述的RNAi试剂的反义链与待靶向的mRNA(即HSD17B13 mRNA)至少部分互补。RNAi试剂可以包括一个或多个修饰的核苷酸和/或一个或多个非磷酸二酯键合。
如本文使用的，当提及给定基因的表达时，术语“沉默”、“降低”、“抑制”、“下调”或“敲减”，意指如通过基因在其中转录的细胞、细胞群、组织、器官或受试者中，由基因转录的RNA水平或者由mRNA翻译的多肽、蛋白质或蛋白质亚基的水平测量的，与未如此治疗的第二细胞、细胞群、组织、器官或受试者相比，当细胞、细胞群、组织、器官或受试者用本文所述的RNAi试剂进行治疗时，所述基因的表达是降低的。
如本文使用的，术语“序列”和“核苷酸序列”意指使用标准命名法，用连续字母来描述的核碱基或核苷酸的连续或次序。
如本文使用的，“碱基”、“核苷酸碱基”或“核碱基”是其为核苷酸的组分的杂环嘧啶或嘌呤化合物，并且包括主要的嘌呤碱基腺嘌呤和鸟嘌呤，以及主要的嘧啶碱基胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶。核碱基可以进一步进行修饰，以包括但不限于通用碱基、疏水性碱基、混杂碱基、尺寸扩展的碱基和氟化碱基。(参见例如，Modified Nucleosides inBiochemistry，Biotechnology and Medicine，Herdewijn，P.编辑Wiley-VCH，2008)。此类修饰的核碱基(包括包含修饰的核碱基的亚磷酰胺化合物)的合成是本领域已知的。
如本文使用的，并且除非另有说明，否则当用于描述与第二核碱基或核苷酸序列(例如，RNAi试剂的反义链或单链反义寡核苷酸)有关的第一核碱基或核苷酸序列(例如，RNAi试剂的有义链或靶向mRNA)时，术语“互补的”意指包括第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸，在某些标准条件下，与包括第二核苷酸序列的寡核苷酸杂交(在哺乳动物生理条件下(或者在其它方面合适的体内或体外条件下)形成碱基配对氢键)，并且形成双链体或双螺旋结构的能力。本领域普通技术人员将能够选择对于杂交测试最适当的条件集合。互补序列包括沃森-克里克碱基对或非沃森-克里克碱基对，并且至少在满足上述杂交要求的程度上，包括天然或修饰的核苷酸或核苷酸模拟物。序列同一性或互补性不依赖于修饰。例如，为了确定同一性或互补性的目的，如本文定义的a和Af与U(或T)互补且与A等同。
如本文使用的，“完全地互补的”或“完全互补的”意指在核碱基或核苷酸序列分子的杂交对中，第一寡核苷酸的邻接序列中的所有(100%)碱基，与第二寡核苷酸的邻接序列中的相同数目的碱基杂交。邻接序列可以包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列的全部或部分。
如本文使用的，“部分互补的”意指在核碱基或核苷酸序列分子的杂交对中，第一寡核苷酸的邻接序列中的至少70%但并非全部碱基，与第二寡核苷酸的邻接序列中的相同数目的碱基杂交。邻接序列可以包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列的全部或部分。
如本文使用的，“基本上互补的”意指在核碱基或核苷酸序列分子的杂交对中，第一寡核苷酸的邻接序列中的至少85%但并非全部碱基，与第二寡核苷酸的邻接序列中的相同数目的碱基杂交。邻接序列可以包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列的全部或部分。
如本文使用的，术语“互补的”、“完全互补的”、“部分互补的”和“基本上互补的”，就RNAi试剂的有义链与反义链之间、或RNAi试剂的反义链与HSD17B13 mRNA的序列之间的核碱基或核苷酸匹配而言使用。
如本文使用的，当应用于核酸序列时，术语“基本上等同的”或“基本同一性”意指与参考序列相比，核苷酸序列(或核苷酸序列的一部分)具有至少约85%序列同一性或更多，例如至少90%、至少95%或至少99%同一性。通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列，来确定序列同一性的百分比。百分比通过以下进行计算：确定在其下相同类型的核酸碱基出现在两个序列中的位置数目，以得出匹配位置数目，将匹配位置数目除以比较窗口中的位置总数目，并且将结果乘以100，以得出序列同一性的百分比。本文公开的本发明涵盖了与本文公开的核苷酸序列基本上等同的核苷酸序列。
如本文使用的，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等等，意指为了提供受试者中的一种或多种疾病症状的数目、严重性和/或频率的缓解或减轻而采取的方法或步骤。如本文使用的，“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”可以包括受试者中的一种或多种疾病症状的数目、严重性和/或频率的预防、管理、预防性治疗、和/或抑制或降低。
如本文使用的，当提及RNAi试剂时，短语“引入细胞内”意指将RNAi试剂功能性地递送到细胞内。短语“功能性递送”意指以致使RNAi试剂具有预计的生物活性，例如基因表达的序列特异性抑制的方式，将RNAi试剂递送至细胞。
除非另有说明，否则如本文使用的，符号的使用意指根据本文所述的本发明的范围，可以将任何一个或多个基团与其连接。
如本文使用的，术语“异构体”指这样的化合物，其具有等同分子式，但在其原子的键合次序或性质或者其原子在空间中的排列方面不同。其原子在空间中的排列不同的异构体被称为“立体异构体”。并非彼此镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，并且其为不能重叠的镜像的立体异构体被称为“对映异构体”、或有时被称为光学异构体。与四个非等同取代基键合的碳原子被称为“手性中心”。
如本文使用的，对于其中存在不对称中心，并且因此产生对映异构体、非对映异构体或其它立体异构构型的每个结构，除非在结构中被特异性地鉴定为具有特定构象，否则本文公开的每个结构预期代表所有此类可能的异构体，包括其光学纯和外消旋形式。例如，本文公开的结构预期涵盖非对映异构体以及单一立体异构体的混合物。
如本文的权利要求中使用的，短语“由……组成”排除权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文的权利要求中使用时，短语“基本上由……组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤、以及不会实质上影响本发明的基本和新型特征的那些材料或步骤。
本领域普通技术人员将容易理解且了解，本文公开的化合物和组合物可以具有以质子化或去质子化状态的某些原子(例如，N、O或S原子)，取决于化合物或组合物置于其中的环境。相应地，如本文使用的，本文公开的结构设想了某些官能团，例如OH、SH或NH，可以是质子化或去质子化的。如本领域普通技术人员容易理解的，本文的公开内容预期涵盖所公开的化合物和组合物，而与其基于环境(例如pH)的质子化状态无关。相应地，本文所述的具有不稳定质子或碱性原子的化合物也应该理解为代表相应化合物的盐形式。本文所述的化合物可以是游离酸、游离碱或盐的形式。本文所述化合物的药学上可接受的盐应该理解为在本发明的范围内。
如本文使用的，当提及两种化合物或分子之间的连接时，术语“连接的”或“缀合的”意指两种化合物或分子通过共价键进行接合。除非另有说明，否则如本文使用的，术语“连接的”和“缀合的”可以指具有或不具有任何中间原子或原子群的第一化合物和第二化合物之间的连接。
如本文使用的，术语“包括”在本文中用于意指短语“包括但不限于”，并且可与短语“包括但不限于”互换使用。除非上下文另外明确指出，否则术语“或”在本文中用于意指术语“和/或”，并且可与术语“和/或”互换使用。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本领域普通技术人员通常理解相同的含义。尽管下文描述了合适的方法和材料，但与本文描述的方法和材料类似或等价的方法和材料可以用于本发明的实践或测试中。本文提到的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献整体引入作为参考。在冲突的情况下，以本说明书包括定义为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，并不预期是限制性的。
根据下述具体实施方式、附图和权利要求，本发明的其它目的、特点、方面和优点将是显而易见的。
附图说明
图1A至1D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06214的化学结构表示，以游离酸形式显示。
图2A至2D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06280的化学结构表示，以游离酸形式显示。
图3A至3D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06187的化学结构表示，以游离酸形式显示。
图4A至4D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06276的化学结构表示，以游离酸形式显示。
图5A至5D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06277的化学结构表示，以游离酸形式显示。
图6A至6D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06214的化学结构表示，以钠盐形式显示。
图7A至7D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06280的化学结构表示，以钠盐形式显示。
图8A至8D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06187的化学结构表示，以钠盐形式显示。
图9A至9D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06276的化学结构表示，以钠盐形式显示。
图10A至10D. 在有义链的5'末端处与(NAG37)s的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体缀合的HSD17B13 RNAi试剂AD06277的化学结构表示，以钠盐形式显示。
图11A. 与具有(NAG37)s结构的N-乙酰基-半乳糖胺三齿配体(参见表6；图1和6)缀合的，HSD17B13 RNAi试剂AD06214的修饰的有义链和反义链(参见表3-5)的示意图。在图11A至11E中使用下述缩写：a、c、g、i和u是2'-O-甲基修饰的核苷酸；Af、Cf、Gf和Uf是2'-氟修饰的核苷酸；o是磷酸二酯键合；s是硫代磷酸酯键合；invAb是反向脱碱基残基；(NAG37)s是具有表6所示结构的三齿N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体。图11A公开了SEQ ID NO:2和14。
图11B. 与具有(NAG37)s结构的N-乙酰基-半乳糖胺三齿配体(参见表6)缀合的，HSD17B13 RNAi试剂AD06280的修饰的有义链和反义链(参见表3-5)的示意图。图11B公开了SEQ ID NO:4和15。
图11C. 与具有(NAG37)s结构的N-乙酰基-半乳糖胺三齿配体(参见表6)缀合的，HSD17B13 RNAi试剂AD06187的修饰的有义链和反义链(参见表3-5)的示意图。图11C公开了SEQ ID NO:5和16。
图11D. 与具有(NAG37)s结构的N-乙酰基-半乳糖胺三齿配体(参见表6)缀合的，HSD17B13 RNAi试剂AD06276的修饰的有义链和反义链(参见表3-5)的示意图。图11D公开了SEQ ID NO:5和17。
图11E. 与具有(NAG37)s结构的N-乙酰基-半乳糖胺三齿配体(参见表6)缀合的，HSD17B13 RNAi试剂AD06277的修饰的有义链和反义链(参见表3-5)的示意图。图11D公开了SEQ ID NO:7和17。
具体实施方式
RNAi试剂
本文描述的是用于抑制HSD17B13基因表达的RNAi试剂(本文称为HSD17B13或17β-HSD13 RNAi试剂、或者HSD17B13或17β-HSD13 RNAi触发剂)。每种HSD17B13 RNAi试剂包含有义链和反义链。有义链和反义链各自的长度可以为16至49个核苷酸。有义链和反义链可以是相同的长度，或者它们可以是不同的长度。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度各自独立地为17至27个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度各自独立地为19-21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度各自均为21-26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度各自为21-24个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为约19个核苷酸，而反义链的长度为约21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为约21个核苷酸，而反义链的长度为约23个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为23个核苷酸，且反义链的长度为21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度各自均为21个核苷酸。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链和反义链的长度各自独立地为16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26或27个核苷酸。在一些实施方案中，双链RNAi试剂具有约16、17、18、19、20、21、22、23或24个核苷酸的双链体长度。
表2、表3和表4提供了用于形成HSD17B13 RNAi试剂的核苷酸序列的实例。包括表2、3和4中的有义链和反义链序列的RNAi试剂双链体的实例在表5中显示，并且还在图1A到10D和图11A到11E中描绘。
在一些实施方案中，有义链和反义链之间的完全互补性、基本互补性或部分互补性的区域的长度为16-26(例如16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26)个核苷酸，并且出现在反义链的5'端处或附近(例如，该区域可能与反义链的5'端分隔开0、1、2、3或4个核苷酸，所述核苷酸是不完全互补、基本互补或部分互补的)。
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂的有义链包括至少16个连续核苷酸，其与HSD17B13 mRNA中相同数目的核苷酸的核心段序列(在本文中也称为“核心段”或“核心序列”)具有至少85%的同一性。在一些实施方案中，有义链核心段序列与反义链中的核心段序列100% (完全)互补或至少约85% (基本上)互补，并且因此，有义链核心段序列与HSD17B13mRNA靶中存在的相同长度的核苷酸序列(有时例如称为靶序列)，通常是完全等同的或至少约85%等同的。在一些实施方案中，该有义链核心段的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链核心段的长度为17个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链核心段的长度为19个核苷酸。
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂的反义链包括至少16个连续核苷酸，其与HSD17B13 mRNA中相同数目的核苷酸的核心段、以及相应的有义链中相同数目的核苷酸的核心段具有至少85%的互补性。在一些实施方案中，反义链核心段与HSD17B13 mRNA靶中存在的相同长度的核苷酸序列(例如靶序列)100% (完全)互补或至少约85% (基本上)互补。在一些实施方案中，该反义链核心段的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。在一些实施方案中，该反义链核心段的长度为19个核苷酸。在一些实施方案中，该反义链核心段的长度为17个核苷酸。有义链核心段序列可以与相应的反义核心序列是相同的长度，或者它可以是不同的长度。
HSD17B13 RNAi试剂的有义链和反义链退火以形成双链体。HSD17B13 RNAi试剂的有义链和反义链可以是彼此部分互补、基本上互补或完全互补的。在互补双链体区域内，有义链核心段序列与反义核心段序列至少85%互补或100%互补。在一些实施方案中，有义链核心段序列含有至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个或至少23个核苷酸的序列，其与反义链核心段序列的相应16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸序列是至少85%或100%互补的(即HSD17B13 RNAi试剂的有义和反义核心段序列具有至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个或至少23个核苷酸的区域，其为至少85%碱基配对或100%碱基配对的。)
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的反义链与表2或表3中的任何反义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的有义链与表2或表4中的任何有义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。
在一些实施方案中，有义链和/或反义链可以任选地并且独立地含有在核心段序列的3'端、5'端、或3'和5'端两者处的另外的1、2、3、4、5或6个核苷酸(延伸)。反义链的另外核苷酸(如果存在的话)与HSD17B13 mRNA中的相应序列可以互补或可以不互补。有义链的另外核苷酸(如果存在的话)与HSD17B13 mRNA中的相应序列可以等同或可以不等同。反义链的另外核苷酸(如果存在的话)与相应的有义链的另外核苷酸(如果存在的话)可以互补或可以不互补。
如本文使用的，延伸包含在有义链核心段序列和/或反义链核心段序列的5'和/或3'端处的1、2、3、4、5或6个核苷酸。有义链上的延伸核苷酸与相应的反义链中的核苷酸(或核心段序列核苷酸或延伸核苷酸)可以互补或可以不互补。相反，反义链上的延伸核苷酸与相应的有义链中的核苷酸(或核心段核苷酸或延伸核苷酸)可以互补或可以不互补。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链和反义链均含有3'和5'延伸。在一些实施方案中，一条链的一个或多个3'延伸核苷酸与另一条链的一个或多个5'延伸核苷酸碱基配对。在其它实施方案中，一条链的一个或多个3'延伸核苷酸与另一条链的一个或多个5'延伸核苷酸并不碱基配对。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂具有带有3'延伸的反义链和带有5'延伸的有义链。在一些实施方案中，延伸核苷酸是未配对的并形成突出端。如本文使用的，“突出端”指位于有义链或反义链的末端处的一个或多个未配对核苷酸段，其不形成本文公开的RNAi试剂的杂交或双链体部分的一部分。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含具有长度为1、2、3、4、5或6个核苷酸的3’延伸的反义链。在其它实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含具有长度为1、2或3个核苷酸的3'延伸的反义链。在一些实施方案中，一个或多个反义链延伸核苷酸包含与相应的HSD17B13 mRNA序列互补的核苷酸。在一些实施方案中，一个或多个反义链延伸核苷酸包含与相应的HSD17B13 mRNA序列不互补的核苷酸。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含具有长度为1、2、3、4或5个核苷酸的3’延伸的有义链。在一些实施方案中，一个或多个有义链延伸核苷酸包含腺苷、尿嘧啶或胸苷核苷酸、AT二核苷酸、或者与HSD17B13 mRNA序列中的核苷酸相对应或等同的核苷酸。在一些实施方案中，3'有义链延伸包括下述序列之一或由下述序列之一组成，但不限于此：T、UT、TT、UU、UUT、TTT或TTTT(各自以5'至3'列出)。
有义链可以具有3'延伸和/或5'延伸。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含具有长度为1、2、3、4、5或6个核苷酸的5’延伸的有义链。在一些实施方案中，一个或多个有义链延伸核苷酸包含与HSD17B13 mRNA序列中的核苷酸相对应或等同的核苷酸。在一些实施方案中，有义链5’延伸是下述序列之一，但不限于此：CA、AUAGGC、AUAGG、AUAG、AUA、A、AA、AC、GCA、GGCA、GGC、UAUCA、UAUC、UCA、UAU、U、UU(各自以5'至3'列出)。
表2、3和4中提供了用于形成HSD17B13 RNAi试剂的序列的实例。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包括表2或3中的任何序列的序列。在某些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表3中的任何一种修饰序列、或由其组成。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包括表2或3中的任何序列的核苷酸(5'端→3'端)1-17、2-15、2-17、1-18、2-18、119、2-19、1-20、2-20、1-21或2-21的序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链包括表2或4中的任何序列的序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链包括表2或表4中的任何序列的核苷酸(5'端→3'端)1-18、1-19、1-20、121、2-19、2-20、2-21、3-20、3-21或4-21的序列。在某些实施方案中，HSD17B13RNAi试剂的有义链包含表4中任何一种修饰序列的修饰序列、或由其组成。
在一些实施方案中，本文描述的RNAi试剂的有义链和反义链含有相同数目的核苷酸。在一些实施方案中，本文描述的RNAi试剂的有义链和反义链含有不同数目的核苷酸。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链5'端和反义链3'端形成平端。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链3'端和反义链5'端形成平端。在一些实施方案中，RNAi试剂的两端形成平端。在一些实施方案中，RNAi试剂的两端均不是平端。如本文使用的，“平端”指双链RNAi试剂的端部，其中两条退火链的末端核苷酸是互补的(形成互补碱基对)。
在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链5'端和反义链3'端形成翻口端(frayedend)。在一些实施方案中，RNAi试剂的有义链3'端和反义链5'端形成翻口端。在一些实施方案中，RNAi试剂的两端形成翻口端。在一些实施方案中，RNAi试剂的两端均不是翻口端。如本文使用的，翻口端指双链RNAi试剂的端部，其中两条退火链的末端核苷酸形成一对(即，不形成突出端)，但不互补(即，形成非互补对)。在一些实施方案中，在双链RNAi试剂的一条链的端部处的一个或多个未配对核苷酸形成突出端。未配对核苷酸可以在有义链或反义链上，产生3'或5'突出端。在一些实施方案中，RNAi试剂含有：平端和翻口端、平端和5'突出端、平端和3'突出端、翻口端和5'突出端、翻口端和3'突出端、两个5'突出端、两个3'突出端、5'突出端和3'突出端、两个翻口端或两个平端。通常，当存在时，突出端位于有义链、反义链、或有义链和反义链两者的3'末端处。
本文公开的HSD17B13 RNAi试剂也可以包含一个或多个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链的基本上所有核苷酸和反义链的基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。本文公开的HSD17B13 RNAi试剂可以进一步包含一个或多个修饰的核苷间键合，例如一个或多个硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂含有一个或多个修饰的核苷酸和一个或多个修饰的核苷间键合。在一些实施方案中，2'-修饰的核苷酸与修饰的核苷间键合组合。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂作为盐、混合盐或游离酸制备或提供。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂制备为钠盐。本领域众所周知的此类形式在本文公开的本发明的范围内。
修饰的核苷酸
当用于各种寡核苷酸构建体中时，修饰的核苷酸可以保存化合物在细胞中的活性，同时增加这些化合物的血清稳定性，并且还可以最小化在寡核苷酸构建体施用后，激活人中的干扰素活性的可能性。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂含有一个或多个修饰的核苷酸。如本文使用的，“修饰的核苷酸”是除核糖核苷酸(2'-羟基核苷酸)外的核苷酸。在一些实施方案中，至少50% (例如，至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少99%或100%)的核苷酸是修饰的核苷酸。如本文使用的，修饰的核苷酸可以包括但不限于脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸、2'-修饰的核苷酸、反向核苷酸、包含修饰的核碱基的核苷酸、桥连的核苷酸、肽核酸(PNA)、2',3'-开环(seco)核苷酸模拟物(未锁定的核碱基类似物)、锁定的核苷酸、3'-O-甲氧基(2'核苷间连接的)核苷酸、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、5'-Me,2'-氟核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸、含乙烯基膦酸酯的核苷酸和含环丙基膦酸酯的核苷酸。2'-修饰的核苷酸(即，在五元糖环的2'位置处具有除羟基外的基团的核苷酸)包括但不限于2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸(在本文中也称为2'-脱氧-2'-氟核苷酸)、2'-脱氧核苷酸、2'-甲氧基乙基(2'-O-2-甲氧基乙基)核苷酸(也称为2'-MOE)、2'-氨基核苷酸和2'-烷基核苷酸。给定化合物中的所有位置不必是均匀地修饰的。相反，可以在单一HSD17B13 RNAi试剂中，或甚至在其单个核苷酸中掺入多于一种修饰。HSD17B13 RNAi试剂的有义链和反义链可以通过本领域已知的方法进行合成和/或修饰。在一个核苷酸处的修饰独立于在另一个核苷酸处的修饰。
修饰的核碱基包括合成的和天然的核碱基，例如5-取代的嘧啶，6-氮杂嘧啶以及N-2、N-6和O-6取代的嘌呤(例如2-氨丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶或5-丙炔基胞嘧啶)，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羟甲基胞嘧啶，肌苷，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-烷基(例如6-甲基、6-乙基、6-异丙基或6-正丁基)衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-烷基(例如2-甲基、2-乙基、2-异丙基或2-正丁基)及其它烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫胸腺嘧啶，2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶，胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶，5-丙炔基胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶，6-偶氮胞嘧啶，6-偶氮胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤代、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基及其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代(例如5-溴)、5-三氟甲基及其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮腺嘌呤，3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。
在一些实施方案中，反义链的5'和/或3'端可以包括脱碱基残基(Ab)，其也可以被称为“脱碱基位点”或“脱碱基核苷酸”。脱碱基残基(Ab)是在糖部分的1'位置处缺少核碱基的核苷酸或核苷。(参见例如，美国专利号5,998,203)。在一些实施方案中，脱碱基残基可以置于核苷酸序列内部。在一些实施方案中，可以将Ab或AbAb加入反义链的3'端。在一些实施方案中，有义链的5'端可以包括一个或多个另外的脱碱基残基(例如，(Ab)或(AbAb))。在一些实施方案中，将UUAb、UAb或Ab加入有义链的3'端。在一些实施方案中，脱碱基(脱氧核糖)残基可以替换为核糖醇(脱碱基核糖)残基。
在一些实施方案中，RNAi试剂的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。如本文使用的，其中存在的基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸的RNAi试剂，是在有义链和反义链两者中具有的四个或更少(即，0、1、2、3或4个)核苷酸是核糖核苷酸(即，未修饰的)的RNAi试剂。如本文使用的，其中存在的基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸的有义链，是在有义链中具有的两个或更少(即，0、1或2个)核苷酸是未修饰的核糖核苷酸的有义链。如本文使用的，其中存在的基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸的反义链，是在有义链中具有的两个或更少(即，0、1或2个)核苷酸是未修饰的核糖核苷酸的反义链。在一些实施方案中，RNAi试剂的一个或多个核苷酸是未修饰的核糖核苷酸。
修饰的核苷间键合
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的一个或多个核苷酸通过非标准键合或主链(即，修饰的核苷间键合或修饰的主链)进行连接。修饰的核苷间键合或主链包括但不限于硫代磷酸酯基团(在本文中表示为小写字母“s”)、手性硫代磷酸酯、硫代磷酸盐(thiophosphate)、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基-磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如甲基膦酸酯或3'-亚烷基膦酸酯)、手性膦酸酯、次膦酸酯、氨基磷酸酯(例如3'-氨基氨基磷酸酯、氨基烷基氨基磷酸酯或硫羰氨基磷酸酯)、硫羰烷基膦酸酯、硫羰烷基磷酸三酯、吗啉代键合、具有正常3'-5'键合的硼烷磷酸酯、2'-5'连接的硼烷磷酸酯的类似物或具有反转极性的硼烷磷酸酯，其中相邻的核苷单元对将3'-5'连接至5'-3'或将2'-5'连接至5'-2'。在一些实施方案中，修饰的核苷间键合或主链缺少磷原子。缺少磷原子的修饰的核苷间键合包括但不限于短链烷基或环烷基糖间键合、混合的杂原子和烷基或环烷基糖间键合、或者一个或多个短链杂原子或杂环糖间键合。在一些实施方案中，修饰的核苷间主链包括但不限于硅氧烷主链，硫化物主链，亚砜主链，砜主链，甲乙酰基(formacetyl)和硫代甲乙酰基主链，亚甲基甲乙酰基和硫代甲乙酰基主链，含烯烃的主链，氨基磺酸酯主链，亚甲基亚氨基和亚甲基肼基主链，磺酸酯和磺酰胺主链，酰胺主链，以及具有混合的N、O、S和CH2组分的其它主链。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链可以含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键合，HSD17B13 RNAi试剂的反义链可以含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键合，或有义链和反义链均可以独立地含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链可以含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键合，HSD17B13 RNAi试剂的反义链可以含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键合，或有义链和反义链均可以独立地含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键合。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链含有至少两个硫代磷酸酯核苷间键合。在一些实施方案中，硫代磷酸酯核苷间键合在从有义链的3'端开始的位置1-3处的核苷酸之间。在一些实施方案中，一个硫代磷酸酯核苷间键合在有义链核苷酸序列的5'端处，并且另一个硫代磷酸酯键合在有义链核苷酸序列的3'端处。在一些实施方案中，两个硫代磷酸酯核苷间键合位于有义链的5'端处，并且另一个硫代磷酸酯键合在有义链的3'端处。在一些实施方案中，有义链不包括在核苷酸之间的任何硫代磷酸酯核苷间键合，但含有在5'和3'端两者上的末端核苷酸与任选存在的反向脱碱基残基末端帽之间的一个、两个或三个硫代磷酸酯键合。在一些实施方案中，靶向配体经由硫代磷酸酯键合与有义链连接。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链含有四个硫代磷酸酯核苷间键合。在一些实施方案中，四个硫代磷酸酯核苷间键合在从反义链的5'端开始的位置1-3处的核苷酸之间，以及在从5'端开始的位置19-21、20-22、21-23、22-24、23-25或24-26处的核苷酸之间。在一些实施方案中，三个硫代磷酸酯核苷间键合位于从反义链的5'端开始的位置1-4之间，并且第四个硫代磷酸酯核苷间键合位于从反义链的5'端开始的位置20-21之间。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂含有在反义链中的至少三个或四个硫代磷酸酯核苷间键合。
加帽残基或部分
在一些实施方案中，有义链可以包括一个或多个加帽残基或部分，在本领域中有时称为“帽”、“末端帽”或“加帽残基”。如本文使用的，“加帽残基”是可以在本文公开的RNAi试剂的核苷酸序列的一个或多个末端处掺入的非核苷酸化合物或其它部分。在一些情况下，加帽残基可以为RNAi试剂提供某些有益的特性，例如不受核酸外切酶降解的保护。在一些实施方案中，反向脱碱基残基(invAb)(在本领域中也称为“反向脱碱基位点”)作为加帽残基添加(参见表A)。(参见例如，F. Czauderna，Nucleic Acids Res.，2003，31(11)，2705-16)。加帽残基是本领域一般已知的，并且包括例如反向脱碱基残基以及碳链，例如末端C3H7 (丙基)、C6H13 (己基)或C12H25 (十二烷基)基团。在一些实施方案中，加帽残基存在于有义链的5'末端、3'末端、或5'和3'末端两者处。在一些实施方案中，有义链的5'端和/或3'端可以包括作为加帽残基的多于一个反向脱碱基脱氧核糖部分。
在一些实施方案中，将一个或多个反向脱碱基残基(invAb)加入有义链的3'端。在一些实施方案中，将一个或多个反向脱碱基残基(invAb)加入有义链的5'端。在一些实施方案中，在靶向配体和RNAi试剂的有义链的核苷酸序列之间插入一个或多个反向脱碱基残基或反向脱碱基位点。在一些实施方案中，在RNAi试剂的有义链的一个或多个末端处或附近包括一个或多个反向脱碱基残基或反向脱碱基位点，允许RNAi试剂增强的活性或其它期望的特性。
在一些实施方案中，将一个或多个反向脱碱基残基(invAb)加入有义链的5'端。在一些实施方案中，可以在靶向配体和RNAi试剂的有义链的核苷酸序列之间插入一个或多个反向脱碱基残基。反向脱碱基残基可以经由磷酸酯、硫代磷酸酯(例如，在本文中显示为(invAb)s)、或其它核苷间键合进行连接。在一些实施方案中，在RNAi试剂的有义链的一个或多个末端处或附近包括一个或多个反向脱碱基残基，可以允许RNAi试剂增强的活性或其它期望的特性。在一些实施方案中，可以将反向脱碱基(脱氧核糖)残基替换为反向核糖醇(脱碱基核糖)残基。在一些实施方案中，反义链核心段序列的3'端或反义链序列的3'端，可以包括反向脱碱基残基。在下表6中以及在图1A到10D中所示的化学结构中，显示了反向脱碱基脱氧核糖残基的化学结构。
HSD17B13 RNAi试剂
本文公开的HSD17B13 RNAi试剂被设计为靶向HSD17B13基因 (SEQ ID NO:1)上的特异性位置。如本文定义的，当与基因碱基配对时，反义链的5'末端核碱基与其为从基因上的位置开始的下游(朝向3'端)21个核苷酸的位置对齐时，反义链序列设计为在基因上的给定位置处靶向HSD17B13基因。例如，如本文表1和2中所示，设计为在位置499处靶向HSD17B13基因的反义链序列要求，当与该基因碱基配对时，反义链的5'末端核碱基与HSD17B13基因的位置519对齐。
如本文提供的，HSD17B13 RNAi试剂并不要求在反义链的位置1 (5′→3′)处的核碱基与该基因互补，条件是反义链和跨越至少16个连续核苷酸的核心段序列的基因存在至少85%的互补性(例如，至少85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%的互补性)。例如，对于本文公开的设计为靶向HSD17B13基因的位置499的HSD17B13 RNAi试剂，HSD17B13 RNAi试剂的反义链的5'末端核碱基必须与该基因的位置519对齐；然而，反义链的5'末端核碱基可以但不要求与HSD17B13基因的位置519互补，条件是反义链和跨越至少16个连续核苷酸的核心段序列的基因存在至少85%的互补性(例如，至少85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%的互补性)。如尤其通过本文公开的各种实例所示，该基因通过HSD17B13 RNAi试剂的反义链的特异性结合位点(例如，HSD17B13 RNAi试剂是否设计为在位置499、位置791、位置513或一些其它位置处靶向HSD17B13基因)，对于通过HSD17B13 RNAi试剂实现的抑制水平是重要的。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂在表1中所示的HSD17B13基因序列的位置处或附近靶向HSD17B13基因。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的反义链包括核心段序列，其与表1中公开的靶HSD17B13 19聚体序列完全互补、基本上互补或至少部分互补。
表1. HSD17B13 19聚体mRNA靶序列(取自智人(homo sapiens)羟基类固醇17-β脱氢酶13 (HSD17B13)，转录物变体A，GenBank NM_178135.4 (SEQ ID NO:1))
Figure DEST_PATH_IMAGE001
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其中反义链(5′→3′)的位置19能够与表1中公开的19聚体靶序列的位置1形成碱基对。在一些实施方案中，HSD17B13RNAi试剂包括反义链，其中反义链(5′→3′)的位置1能够与表1中公开的19聚体靶序列的位置19形成碱基对。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包括反义链，其中反义链(5′→3′)的位置2能够与表1中公开的19聚体靶序列的位置18形成碱基对。在一些实施方案中，HSD17B13RNAi试剂包括反义链，其中反义链(5′→3′)的位置2到18能够与位于表1中公开的19聚体靶序列的位置18到2处的相应互补碱基各自形成碱基对。
对于本文公开的RNAi试剂，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸可以与HSD17B13基因完全地互补，或者可以与HSD17B13基因不互补。在一些实施方案中，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸是U、A或dT。在一些实施方案中，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸与有义链形成A:U或U:A碱基对。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表2或表3中的任何反义链序列的核苷酸(从5’端→3’端)2-18、2-19、2-20或2-21的序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链包含表2或表4中的任何有义链序列的核苷酸(从5’端→3’端)3-21、2-21、1-21、3-20、2-20、1-20、3-19、2-19、2-19、2-18或1-18的序列。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂由以下构成：(i)包含表2或表3中的任何反义链序列的核苷酸(从5’端→3’端)2-18或2-19的序列的反义链，以及(ii)包含表2或表4中的任何有义链序列的核苷酸(从5’端→3’端)3-21、2-21、1-21、3-20、2-20、1-20、3-19、2-19、2-19、2-18或1-18的序列的有义链。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包括下表2中所示的核心19聚体核苷酸序列。
表2. HSD17B13 RNAi试剂的反义链和有义链核心段碱基序列(N=任何核碱基；I =次黄嘌呤(肌苷核苷酸))
Figure 228848DEST_PATH_IMAGE002
Figure 145988DEST_PATH_IMAGE003
包含表2中的序列或由表2中的序列组成的HSD17B13 RNAi试剂的有义链和反义链，可以是修饰的核苷酸或未修饰的核苷酸。在一些实施方案中，具有包含表2中的序列或由表2中的序列组成的有义链和反义链序列的HSD17B13 RNAi试剂，全部或基本上全部是修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的反义链与表2中的任何反义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的有义链与表2中的任何有义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。
如本文使用的，表2中公开的序列中列出的每个N可以独立地选自任何和所有核碱基(包括在修饰的和未修饰的核苷酸两者上发现的核碱基)。在一些实施方案中，表2中公开的序列中列出的N核苷酸具有与在另一条链的相应位置处的N核苷酸互补的核碱基。在一些实施方案中，表2中公开的序列中列出的N核苷酸具有与在另一条链的相应位置处的N核苷酸不互补的核碱基。在一些实施方案中，表2中公开的序列中列出的N核苷酸具有与在另一条链的相应位置处的N核苷酸相同的核碱基。在一些实施方案中，表2中公开的序列中列出的N核苷酸具有与在另一条链的相应位置处的N核苷酸不同的核碱基。
表3中提供了某些修饰的HSD17B13 RNAi试剂的反义链，以及其潜在的未修饰的核碱基序列。表4中提供了某些修饰的HSD17B13 RNAi试剂的有义链，以及其潜在的未修饰的核碱基序列。在形成HSD17B13 RNAi试剂时，上表3和表4以及表2中列出的每个潜在的碱基序列中的每个核苷酸，都可以是修饰的核苷酸。
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂通过使反义链与有义链退火而形成。含有表2或表4中列出的序列的有义链，可以与含有表2或表3中列出的序列的任何反义链杂交，条件是两个序列具有在邻接的16、17、18、19、20或21个核苷酸序列上的至少85%互补性的区域。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表2或表3中的任何序列的核苷酸序列。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含双链体或由双链体组成，所述双链体具有表2、表3或表4中的任何序列的有义链和反义链的核碱基序列。
表3中提供了含有修饰的核苷酸的反义链的实例。表4中提供了含有修饰的核苷酸的有义链的实例。
如表3和表4中使用的，下述符号用于指示修饰的核苷酸和连接基团：
A = 腺苷-3'-磷酸；
C = 胞苷-3'-磷酸；
G = 鸟苷-3'-磷酸；
U = 尿苷3'-磷酸
I = 肌苷3'-磷酸
a = 2'-O-甲基腺苷-3'-磷酸
as = 2'-O-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯
c = 2'-O-甲基胞苷-3'-磷酸
cs = 2'-O-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯
g = 2'-O-甲基鸟苷-3'-磷酸
gs = 2'-O-甲基鸟苷-3'-硫代磷酸酯
t = 2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-磷酸
ts = 2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
u = 2'-O-甲基尿苷-3'-磷酸
us = 2'-O-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
i = 2'-O-甲基肌苷-3'-磷酸
is = 2'-O-甲基肌苷-3'-硫代磷酸酯
Af = 2'-氟腺苷-3'-磷酸
Afs = 2'-氟腺苷-3'-硫代磷酸酯
Cf = 2'-氟胞苷-3'-磷酸
Cfs = 2'-氟胞苷-3'-硫代磷酸酯
Gf = 2'-氟鸟苷-3'-磷酸
Gfs = 2'-氟鸟苷-3'-硫代磷酸酯
Tf ＝ 2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-磷酸
Tfs = 2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
Uf = 2'-氟尿苷-3'-磷酸
Ufs = 2'-氟尿苷-3'-硫代磷酸酯
AUNA = 2',3'-开环-腺苷-3'-磷酸
AUNAs = 2',3'-开环-腺苷-3'-硫代磷酸酯
CUNA = 2',3'-开环-胞苷-3'-磷酸
CUNAs = 2',3'-开环-胞苷-3'-硫代磷酸酯
GUNA = 2',3'-开环-鸟苷3'-磷酸
GUNAs = 2',3'-开环-鸟苷3'-硫代磷酸酯
UUNA = 2',3'-开环-尿苷-3'-磷酸
UUNAs = 2',3'-开环-尿苷-3'-硫代磷酸酯
a_2N = 参见表6
a_2Ns = 参见表6
(invAb)= 反向脱碱基脱氧核糖核苷酸，参见表6
(invAb)s = 反向脱碱基脱氧核糖核苷酸-5'-硫代磷酸酯，参见表6
如本领域普通技术人员将容易理解的，除非由序列(例如，通过硫代磷酸酯键合“s”) 另外指出，否则当存在于寡核苷酸中时，核苷酸单体通过5'-3'-磷酸二酯键互相连接。如本领域普通技术人员将清楚地理解的，如本文公开的修饰的核苷酸序列中所示的，硫代磷酸酯键合的包括替换了寡核苷酸中通常存在的磷酸二酯键合(参见例如，显示了化学结构的图1A至10D，以及显示了某些HSD17B13 RNAi试剂中的所有核苷间键合的示意的图11A到11E)。进一步地，本领域普通技术人员将容易理解，在给定寡核苷酸序列的3'端处的末端核苷酸，通常在给定单体的相应3'位置处具有羟基(-OH)而不是离体的磷酸部分。另外，对于本文公开的实施方案，当观察相应的链5’→3’时，反向脱碱基残基这样插入，使得脱氧核糖的3'位置在相应链上的先前单体的3'端处连接(参见例如，图1A到10D和表6)。此外，如本领域普通技术人员将容易理解且了解的，尽管本文描绘的硫代磷酸酯化学结构通常显示在硫原子上的阴离子，但本文公开的本发明涵盖了所有硫代磷酸酯互变异构体(例如，其中硫原子具有双键且阴离子在氧原子上)。除非本文另外明确指出，否则当描述本文公开的HSD17B13 RNAi试剂和HSD17B13 RNAi试剂的组合物时，使用本领域普通技术人员的这种理解。
下表6中提供了与本文公开的HSD17B13 RNAi试剂一起使用的靶向配体，靶向基团和连接基团的某些实例。更具体而言，靶向基团和连接基团(其可以一起形成靶向配体)包括下述，关于其的化学结构在下表6中提供：(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。每条有义链和/或反义链可以具有与序列的5'和/或3'端缀合的本文列出的任何靶向配体、靶向基团或连接基团，以及其它基团。
Figure 128988DEST_PATH_IMAGE004
Figure 524197DEST_PATH_IMAGE005
Figure 932044DEST_PATH_IMAGE006
Figure 754507DEST_PATH_IMAGE007
Figure 349436DEST_PATH_IMAGE008
Figure 17178DEST_PATH_IMAGE009
Figure 686057DEST_PATH_IMAGE010
Figure 679421DEST_PATH_IMAGE011
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂通过使反义链与有义链退火而形成。含有表2或表4中列出的序列的有义链，可以与含有表2或表3中列出的序列的任何反义链杂交，条件是两个序列具有在邻接的16、17、18、19、20或21个核苷酸序列上的至少85%互补性的区域。
在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的反义链与表3中的任何反义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的有义链与表4中的任何有义链序列相差0、1、2或3个核苷酸。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表2或表3中的任何序列的核苷酸序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表2或表3中的任何序列的核苷酸(从5'端→3'端)1-17、2-17、1-18、2-18、1-19、2-19、1-20、2-20、1-21或2-21的序列。在某些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的反义链包含表3中的任何一种修饰序列的修饰序列、或由其组成。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链包含表2或表4中的任何序列的核苷酸序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂的有义链包含表2或表4中的任何序列的核苷酸(从5'端→3'端)1-17、2-17、3-17、4-17、1-18、2-18、3-18、4-18、1-19、2-19、3-19、4-19、1-20、2-20、3-20、4-20、1-21、2-21、3-21或4-21的序列。在某些实施方案中，HSD17B13RNAi试剂的有义链包含表4中的任何一种修饰序列的修饰序列、或由其组成。
对于本文公开的HSD17B13 RNAi试剂，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸可以与HSD17B13基因完全地互补，或者可以与HSD17B13基因不互补。在一些实施方案中，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸是U、A或dT(或其修饰形式)。在一些实施方案中，在反义链(从5’端→3’端)的位置1处的核苷酸与有义链形成A:U或U:A碱基对。
含有表2或表4中列出的序列的有义链，可以与含有表2或表3中列出的序列的任何反义链杂交，条件是两个序列具有在邻接的16、17、18、19、20或21个核苷酸序列上的至少85%互补性的区域。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂具有由表4中任何修饰序列的修饰序列组成的有义链、以及由表3中任何修饰序列的修饰序列组成的反义链。某些代表性的序列配对通过表5中显示的双链体ID No.例示。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含双链体、由双链体组成或基本上由双链体组成，所述双链体通过本文呈现的双链体ID No.中的任何一个表示。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含通过本文呈现的任何双链体ID No.表示的任何双链体的有义链和反义链核苷酸序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含通过本文呈现的任何双链体ID No.表示的任何双链体的有义链和反义链核苷酸序列、以及靶向基团和/或连接基团，其中所述靶向基团和/或连接基团与有义链或反义链共价连接(即，缀合)。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包括本文呈现的任何双链体ID No.的有义链和反义链的修饰核苷酸序列。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含本文呈现的任何双链体ID No.的有义链和反义链的修饰核苷酸序列、以及靶向基团和/或连接基团，其中所述靶向基团和/或连接基团与有义链或反义链共价连接。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含反义链和有义链，其具有表2或表5的任何反义链/有义链双链体的核苷酸序列，并且进一步包含靶向基团或靶向配体。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含反义链和有义链，其具有表2或表5的任何反义链/有义链双链体的核苷酸序列，并且进一步包含脱唾液酸糖蛋白受体配体靶向基团。
具有或不具有接头的靶向基团可以与表2、3和4中公开的任何有义链和/或反义链的5’端或3’端连接。具有或不具有靶向基团的接头可以与表2、3和4中公开的任何有义链和/或反义链的5’端或3’端附着。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含反义链和有义链，其具有表2或表5的任何反义链/有义链双链体的核苷酸序列，并且进一步包含选自以下的靶向配体：(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s，其各自如表6中定义的。在一些实施方案中，靶向配体是表6中定义的(NAG25)或(NAG25)s。在其它实施方案中，靶向配体是如表6中定义的(NAG37)或(NAG37)s。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含反义链和有义链，其具有表3或表4中的任何反义链和/或有义链核苷酸序列的修饰核苷酸序列。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含反义链和有义链，其具有表5的任何双链体的任何反义链和/或有义链核苷酸序列的修饰核苷酸序列，并且进一步包含脱唾液酸糖蛋白受体配体靶向基团。
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂包含表5的任何双链体、由表5的任何双链体组成、或基本上由表5的任何双链体组成。
表5. 具有相应的有义链和反义链ID编号的HSD17B13 RNAi试剂双链体
Figure 761646DEST_PATH_IMAGE012
Figure 498658DEST_PATH_IMAGE013
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂作为盐、混合盐或游离酸制备或提供。在递送至表达HSD17B13基因的细胞后，本文所述的RNAi试剂在体内和/或体外抑制或敲减一种或多种HSD17B13基因的表达。
靶向配体或基团、连接基团和递送媒介物
在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂与一个或多个非核苷酸基团缀合，所述非核苷酸基团包括但不限于靶向基团、连接基团、靶向配体、递送聚合物或递送媒介物。非核苷酸基团可以增强RNAi试剂的靶向、递送或附着。表6中提供了靶向基团和连接基团的实例。非核苷酸基团可以与有义链和/或反义链的3’端和/或5’端共价连接。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂含有与有义链的3’端和/或5’端连接的非核苷酸基团。在一些实施方案中，非核苷酸基团与HSD17B13 RNAi试剂的有义链的5'端连接。非核苷酸基团可以经由接头/连接基团与RNAi试剂直接或间接连接。在一些实施方案中，非核苷酸基团经由不稳定的、可切割的或可逆的键或接头与RNAi试剂连接。
在一些实施方案中，非核苷酸基团增强了它与之附着的RNAi试剂或缀合物的药代动力学或生物分布特性，以改善RNAi试剂或缀合物的细胞或组织特异性分布和细胞特异性摄取。在一些实施方案中，非核苷酸基团增强了RNAi试剂的内吞作用。
靶向基团或靶向部分增强了它们与之附着的缀合物或RNAi试剂的药代动力学或生物分布特性，以改善缀合物或RNAi试剂的细胞特异性(在一些情况下，包括器官特异性)分布和细胞特异性(或器官特异性)摄取。靶向基团可以是单价、二价、三价、四价的，或者对于它所针对的靶具有更高的效价。代表性的靶向基团包括但不限于对细胞表面分子具有亲和力的化合物，细胞受体配体，半抗原，抗体、单克隆抗体、抗体片段和抗体模拟物(对细胞表面分子具有亲和力)。
在一些实施方案中，使用接头例如PEG接头，或者一个、两个或三个脱碱基和/或核糖醇(脱碱基核糖)残基(其在一些情况下可以充当接头)，将靶向基团与RNAi试剂连接。在一些实施方案中，靶向配体包含半乳糖衍生物簇。
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂可以合成为具有在5'末端和/或3'末端处的反应基团，例如氨基(在本文中也称为胺)。反应基团随后可以使用本领域通常的方法用于附着靶向部分。
在一些实施方案中，靶向基团包含脱唾液酸糖蛋白受体配体。如本文使用的，脱唾液酸糖蛋白受体配体是含有对脱唾液酸糖蛋白受体具有亲和力的化合物的配体。如本文指出的，脱唾液酸糖蛋白受体在肝细胞上高度表达。在一些实施方案中，脱唾液酸糖蛋白受体配体包括一种或多种半乳糖衍生物、或者由一种或多种半乳糖衍生物组成。如本文使用的，术语半乳糖衍生物包括半乳糖和半乳糖的衍生物两者，所述半乳糖的衍生物对于脱唾液酸糖蛋白受体具有的亲和力等于或大于半乳糖的亲和力。半乳糖衍生物包括但不限于：半乳糖、半乳糖胺、N-甲酰基半乳糖胺、N-乙酰基-半乳糖胺、N-丙酰基-半乳糖胺、N-正丁酰基-半乳糖胺和N-异丁酰基-半乳糖胺(参见例如：S.T. Iobst和K. Drickamer，J.B.C.，1996，271，6686)。可用于在体内将寡核苷酸及其它分子靶向肝脏的半乳糖衍生物和半乳糖衍生物簇是本领域已知的(参见例如，Baenziger和Fiete，1980，Cell，22，611-620；Connolly等人，1982，J. Biol. Chem.，257，939-945)。
半乳糖衍生物已通过其与肝细胞的表面上表达的脱唾液酸糖蛋白受体的结合，用于在体内将分子靶向肝细胞。脱唾液酸糖蛋白受体配体与脱唾液酸糖蛋白受体的结合，促进了对肝细胞的细胞特异性靶向以及分子进入肝细胞内的内吞作用。脱唾液酸糖蛋白受体配体可以是单体的(例如，具有单个半乳糖衍生物，也称为单价或单齿)，或多聚的(例如，具有多重半乳糖衍生物)。可以使用本领域已知的方法，将半乳糖衍生物或半乳糖衍生物簇附着至RNAi试剂的有义链或反义链的3’端或5’端。靶向配体例如半乳糖衍生物簇的制备在例如以下中描述：Arrowhead Pharmaceuticals，Inc.的国际专利申请公开号WO 2018/044350，以及Arrowhead Pharmaceuticals，Inc.的国际专利申请公开号WO 2017/156012，所述两个国际专利申请的内容整体引入本文作为参考。
如本文使用的，半乳糖衍生物簇包含具有两个至四个末端半乳糖衍生物的分子。末端半乳糖衍生物通过其C-1碳与分子附着。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇是半乳糖衍生物三聚体(也称为三触角半乳糖衍生物或三价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含三个N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇是半乳糖衍生物四聚体(也称为四触角半乳糖衍生物或四价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含四个N-乙酰基-半乳糖胺。
如本文使用的，半乳糖衍生物三聚体含有各自与中心分支点连接的三个半乳糖衍生物。如本文使用的，半乳糖衍生物四聚体含有各自与中心分支点连接的四个半乳糖衍生物。半乳糖衍生物可以通过糖的C-1碳与中心分支点附着。在一些实施方案中，半乳糖衍生物经由接头或间隔物与分支点连接。在一些实施方案中，接头或间隔物是柔性亲水性间隔物，例如PEG基团(参见例如，美国专利号5,885,968；Biessen 等人J. Med. Chem. 1995，第39卷，第1538-1546页)。在一些实施方案中，PEG间隔物是PEG3间隔物。分支点可以是任何小分子，其允许三个半乳糖衍生物的附着，并且进一步允许该分支点与RNAi试剂的附着。分支点基团的实例是二赖氨酸或二谷氨酸盐。分支点与RNAi试剂的附着可以通过连接子或间隔物而发生。在一些实施方案中，接头或间隔物包含柔性亲水性间隔物，例如但不限于PEG间隔物。在一些实施方案中，接头包含刚性接头，例如环状基团。在一些实施方案中，半乳糖衍生物包含N-乙酰基-半乳糖胺或由N-乙酰基-半乳糖胺组成。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇由半乳糖衍生物四聚体构成，所述半乳糖衍生物四聚体可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。
本公开内容的实施方案包括用于在体内将HSD17B13 RNAi试剂递送至肝脏细胞的药物组合物。此类药物组合物可以包括例如缀合至半乳糖衍生物簇的HSD17B13 RNAi试剂。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇由其可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺三聚体的半乳糖衍生物三聚体、或者其可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺四聚体的半乳糖衍生物四聚体构成。
靶向配体或靶向基团可以连接至本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的有义链或反义链的3’端或5’端。
靶向配体包括但不限于(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)¸ (NAG27)s、(NAG28)¸ (NAG28)s、(NAG29)¸ (NAG29)s、(NAG30)¸ (NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)和(NAG39)s，其如表6中定义的。其它靶向基团和靶向配体，包括半乳糖簇靶向配体，是本领域已知的。
在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi试剂。连接基团促进了试剂与靶向基团、递送聚合物或递送媒介物的共价连接。连接基团可以连接至RNAi试剂的有义链或反义链的3’端和/或5’端。在一些实施方案中，连接基团连接至RNAi试剂的有义链。在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi试剂的有义链的5’端或3’端。在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi试剂的有义链的5'端。连接基团的实例可以包括但不限于：反应基团，例如伯胺和炔烃、烷基、脱碱基核苷酸、核糖醇(脱碱基核糖)和/或PEG基团。
在一些实施方案中，靶向基团内部连接至RNAi试剂的有义链和/或反义链上的核苷酸。在一些实施方案中，靶向基团经由接头与RNAi试剂连接。
接头或连接基团是两个原子之间的连接，其经由一个或多个共价键，将一个化学基团(例如RNAi试剂)或目的区段与另一个化学基团(例如靶向基团或递送聚合物)或目的区段连接。不稳定键合含有不稳定键。键合可以任选地包括增加两个连接的原子之间的距离的间隔物。间隔物可以进一步增加键合的柔性和/或长度。间隔物包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基和芳炔基；其各自可以含有一个或多个杂原子、杂环、氨基酸、核苷酸和糖。间隔物基团是本领域众所周知的，并且先前的列表并不意味着限制本说明书的范围。
在一些实施方案中，当两种或更多种RNAi试剂包括在单一组合物中时，每种RNAi试剂可以连接至相同的靶向基团或两个不同的靶向基团(即，具有不同化学结构的靶向基团)。在一些实施方案中，靶向基团与本文公开的HSD17B13 RNAi试剂连接，而无需使用另外的接头。在一些实施方案中，靶向基团本身设计为具有接头或其它位点，以促进容易存在的缀合。在一些实施方案中，当两种或更多种RNAi试剂包括在单个中时，每种RNAi试剂可以利用相同的接头或不同的接头(即，具有不同化学结构的接头)。
表2、3或4中列出的任何HSD17B13 RNAi试剂核苷酸序列，无论是修饰的还是未修饰的，都可以含有3'和/或5'靶向基团或连接基团。含有3'或5'靶向基团或连接基团、在表3或4中列出或者在本文其它地方描述的任何HSD17B13 RNAi试剂序列，可以可替代地不含有3'或5'靶向基团或连接基团，或者可以含有不同的3'或5'靶向基团或连接基团，包括但不限于表6中描绘的那些。表5中列出的任何HSD17B13 RNAi试剂双链体，无论是修饰的还是未修饰的，都可以进一步包含靶向基团或连接基团，包括但不限于表6中所述的那些，并且靶向基团或连接基团可以附着至HSD17B13 RNAi试剂双链体的有义链或反义链的3’末端或5’末端。
表6中提供了靶向基团和连接基团(当组合时，其可以形成靶向配体)的实例。表4提供了HSD17B13 RNAi试剂的有义链的几个实施方案，所述有义链具有与5’端或3’端连接的靶向基团或连接基团。
表6. 代表各种修饰的核苷酸、靶向配体或靶向基团、加帽残基和连接基团的结构
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Figure 920729DEST_PATH_IMAGE015
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Figure 765374DEST_PATH_IMAGE017
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Figure 896644DEST_PATH_IMAGE024
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Figure 725109DEST_PATH_IMAGE026
Figure 667657DEST_PATH_IMAGE027
Figure 308854DEST_PATH_IMAGE028
在表6中的每个上述结构中，NAG包含N-乙酰基-半乳糖胺或另一种半乳糖衍生物，如考虑到上文结构和本文提供的描述，由本领域普通技术人员理解为附着的。例如，在一些实施方案中，所提供的结构中的NAG是N-乙酰基-半乳糖胺。
每个(NAGx)可以经由磷酸基(如(NAG25)、(NAG30)和(NAG31)中)，或硫代磷酸酯基团(如(NAG25)s、(NAG29)s、(NAG30)s、(NAG31)s或(NAG37)s)，或另一种连接基团与HSD17B13 RNAi试剂附着。
Figure 729471DEST_PATH_IMAGE029
可以使用本领域已知的其它连接基团。
在一些实施方案中，递送媒介物可以用于将RNAi试剂递送至细胞或组织。递送媒介物是改善RNAi试剂对细胞或组织的递送的化合物。递送媒介物可以包括以下或由以下组成，但不限于此：聚合物，例如两亲性聚合物、膜活性聚合物、肽、蜂毒肽、蜂毒肽样肽(MLP)、脂质、可逆修饰的聚合物或肽、或者可逆修饰的膜活性多胺。在一些实施方案中，RNAi试剂可以与脂质、纳米颗粒、聚合物、脂质体、胶束、DPC或本领域可获得的其它递送系统组合。RNAi试剂也可以化学缀合至靶向基团、脂质(包括但不限于胆固醇和胆固醇基衍生物)、纳米颗粒、聚合物、脂质体、胶束、DPC(参见例如，WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO2011/104169和WO 2012/083185、WO 2013/032829、WO 2013/158141，其各自引入本文作为参考)、水凝胶、环糊精、可生物降解的纳米胶囊和生物粘附性微球体、蛋白质载体、或者如本领域已知和可获得的适合于核酸或寡核苷酸递送的其它递送系统。
药物组合物和制剂
本文公开的HSD17B13 RNAi试剂可以制备为药物组合物或制剂(本文也称为“药剂”)。在一些实施方案中，药物组合物包括至少一种HSD17B13 RNAi试剂。这些药物组合物可特别用于抑制靶细胞、细胞群、组织或生物体中的靶mRNA表达。
药物组合物可以用于治疗患有疾病、病症或状况的受试者，所述疾病、病症或状况将受益于靶HSD17B13 mRNA水平的降低或靶基因表达的抑制。药物组合物可以用于治疗处于发展疾病、病症或状况的风险中的受试者，所述疾病、病症或状况将受益于靶mRNA水平的降低或靶基因表达的抑制。在一个实施方案中，该方法包括将如本文所述的与靶向配体连接的HSD17B13 RNAi试剂施用于待治疗的受试者。在一些实施方案中，将一种或多种药学上可接受的赋形剂(包括媒介物、载体、稀释剂和/或递送聚合物)加入包括HSD17B13 RNAi试剂的药物组合物中，从而形成适合于体内递送至受试者包括人的药物制剂或药剂。
本文公开的包括HSD17B13 RNAi试剂的药物组合物和方法减少了细胞、细胞群、细胞群、组织、器官或受试者中的靶mRNA水平，其包括通过向受试者施用治疗有效量的本文所述的HSD17B13 RNAi试剂，从而抑制受试者中的HSD17B13 mRNA表达。在一些实施方案中，受试者先前已被鉴定或诊断为具有靶细胞或组织中的靶基因的致病性上调。在一些实施方案中，受试者先前已被鉴定或诊断为患有NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病例如肝硬化。在一些实施方案中，受试者已患有与NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病例如肝硬化相关的症状。
在一些实施方案中，包括HSD17B13 RNAi试剂的所述药物组合物用于治疗或管理受试者中的临床表现，所述临床表现与NAFLD、NASH、肝纤维化、酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化、和/或HSD17B13的过表达相关。在一些实施方案中，将治疗上(包括预防上)有效量的一种或多种药物组合物施用于需要这种治疗的受试者。在一些实施方案中，任何公开的HSD17B13 RNAi试剂的施用可以用于减少受试者中的疾病症状的数目、严重性和/或频率。
包括HSD17B13 RNAi试剂的所述药物组合物可以用于治疗患有疾病或病症的受试者中的至少一种症状，所述疾病或病症将受益于HSD17B13 mRNA表达的降低或抑制。在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量的一种或多种药物组合物，所述药物组合物包括HSD17B13 RNAi试剂，从而治疗症状。在其它实施方案中，向受试者施用预防有效量的一种或多种HSD17B13 RNAi试剂，从而预防或抑制至少一种症状。
施用途径是HSD17B13 RNAi试剂通过其与身体接触的路径。一般而言，施用药物以及寡核苷酸和核酸用于治疗哺乳动物的方法是本领域众所周知的，并且可以应用于本文所述的组合物的施用。本文公开的HSD17B13 RNAi试剂可以在对特定途径适当定制的制剂中，经由任何合适的途径进行施用。因此，本文所述的药物组合物可以通过例如静脉内、肌内、皮内、皮下、关节内或腹膜内注射进行施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物经由皮下注射进行施用。
可以使用本领域已知的寡核苷酸递送技术，将包括本文所述的HSD17B13 RNAi试剂的药物组合物递送至细胞、细胞群、组织或受试者。一般而言，本领域公认的用于递送核酸分子(在体外或体内)的任何合适的方法，可以适于与本文所述的组合物一起使用。例如，可以通过局部施用(例如直接注射、植入或局部施用)、全身施用、或者皮下、静脉内、腹膜内或肠胃外途径，包括颅内(例如脑室内、实质内和鞘内)、肌内、经皮、气道(气溶胶)、鼻、经口、直肠或局部(包括颊和舌下)施用来递送。在某些实施方案中，组合物通过皮下或静脉内输注或注射进行施用。
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。本文所述的药物组合物配制用于施用于受试者。
如本文使用的，药物组合物或药剂包括药理学有效量的至少一种所述治疗化合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的一种或多种赋形剂是除活性药物成分(API，治疗产品，例如HSD17B13 RNAi试剂)外的物质，其有意包括在药物递送系统中。赋形剂在预期的剂量下并不发挥或并不预期发挥疗效。赋形剂可以作用于：a)在制造过程中有助于药物递送系统的加工，b)保护、支持或增强API的稳定性、生物利用度或患者接受度，c)帮助产品鉴定，和/或d)在贮存或使用过程中，增强API递送的总体安全性、有效性的任何其它属性。药学上可接受的赋形剂可以是或可以不是惰性物质。
赋形剂包括但不限于：吸收增强剂、抗粘着剂、消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂、载体、包被剂、色素、递送增强剂、递送聚合物、去污剂、葡聚糖、葡萄糖、稀释剂、崩解剂、乳化剂、增量剂、填料、调味剂、助流剂、润湿剂、润滑剂、油、聚合物、防腐剂、盐水、盐、溶剂、糖、表面活性剂、悬浮剂、缓释基质、甜味剂、增稠剂、张度剂、媒介物、防水剂和湿润剂。
适合于注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(当水溶性的时)或分散体，以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor® ELTM (BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。合适的载体在制造和贮存的条件下应该是稳定的，并且应该针对微生物如细菌和真菌的污染作用进行防腐。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。适当的流动性可以例如通过以下得到维持：使用包衣例如卵磷脂，在分散体的情况下维持所需粒度，以及使用表面活性剂。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露糖醇、山梨糖醇和氯化钠。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
可以通过将以所需量的活性化合物与根据需要的上文列举成分之一或组合一起掺入适当的溶剂中，随后过滤灭菌，来制备无菌注射溶液。一般地，通过将活性化合物掺入无菌媒介物内，来制备分散体，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自上文列举的那些的所需其它成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，这从其先前无菌过滤的溶液得到活性成分加上任何另外所需成分的粉末。
在一些实施方案中，可以在磷酸钠水性缓冲液中制备适合于皮下施用的药物制剂，其包括本文公开的HSD17B13 RNAi试剂(例如，在0.5 mM磷酸二氢钠、0.5 mM磷酸氢二钠的水溶液中配制的HSD17B13 RNAi试剂)。
适合于关节内施用的制剂可以是药物的无菌水性制剂的形式，其可以是微晶形式，例如水性微晶悬浮液的形式。脂质体制剂或可生物降解的聚合物系统也可以用于呈递药物，用于关节内和眼内施用。
也可以制备适合于经口施用本文公开的HSD17B13 RNAi试剂的制剂。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂是经口施用的。在一些实施方案中，本文公开的HSD17B13 RNAi试剂在胶囊中进行配制，用于经口施用。
活性化合物可以与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域技术人员将是显而易见的。脂质体悬浮液也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法，例如如美国专利号4,522,811中所述进行制备。
HSD17B13 RNAi试剂可以以剂量单位形式在组合物中进行配制，用于施用的容易性和剂量的均匀性。剂量单位形式指物理上离散的单位，其适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量；每个单元含有预定数量的活性化合物，其计算为与所需的药物载体结合产生所需疗效。关于本公开内容的剂量单位形式的规格由以下指定且直接取决于其：活性化合物的独特特征和待实现的疗效，以及配制此类活性化合物用于个体治疗的领域中固有的局限性。
药物组合物可以含有通常在药物组合物中发现的其它的另外组分。此类另外组分包括但不限于：止痒药、收敛药、局部麻醉药、镇痛药、抗组胺药或消炎药(例如对乙酰氨基酚、NSAID、苯海拉明等)。还设想了表达或包含本文定义的RNAi试剂的细胞、组织或分离的器官可以用作“药物组合物”。如本文使用的，“药理学有效量”、“治疗有效量”或简单地“有效量”指产生药理学、治疗或预防结果的RNAi试剂的量。
在一些实施方案中，除施用本文公开的RNAi试剂之外，本文公开的方法进一步包括施用第二治疗剂或治疗的步骤。在一些实施方案中，第二治疗剂是另一种HSD17B13 RNAi试剂(例如，靶向HSD17B13靶内的不同序列的HSD17B13 RNAi试剂)。在其它实施方案中，第二治疗剂可以是小分子药物、抗体、抗体片段或适体。
在一些实施方案中，所述的HSD17B13 RNAi试剂任选地与一种或多种另外的治疗剂组合。HSD17B13 RNAi试剂和另外的治疗剂可以在单一组合物中施用，或者它们可以分开施用。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂以与RNAi试剂分开的剂型分开施用(例如，HSD17B13 RNAi试剂通过皮下注射进行施用，而治疗给药方案的方法中涉及的另外治疗剂是经口施用的)。在一些实施方案中，所述HSD17B13 RNAi试剂经由皮下注射施用于有此需要的受试者，并且一种或多种任选的另外治疗剂是经口施用的，其一起提供了用于疾病和状况的治疗方案，所述疾病和状况与NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化相关。在一些实施方案中，所述HSD17B13 RNAi试剂经由皮下注射施用于有此需要的受试者，并且一种或多种任选的另外治疗剂经由分开的皮下注射进行施用。在一些实施方案中，将HSD17B13 RNAi试剂和一种或多种另外的治疗剂组合成单一剂型(例如，配制成用于皮下注射的单一组合物的“混合物(cocktail)”)。连同或不连同一种或多种另外治疗剂的HSD17B13 RNAi试剂，可以与一种或多种赋形剂组合，以形成药物组合物。
一般地，HSD17B13 RNAi试剂的有效量在约0.1至约100 mg/kg体重/剂量的范围内，例如约1.0至约50 mg/kg体重/剂量。在一些实施方案中，活性化合物的有效量在约0.25至约5 mg/kg体重/剂量的范围内。在一些实施方案中，活性成分的有效量在约0.5至约4mg/kg体重/剂量的范围内。给药可以是每周一次、每两周一次、每月一次或以任何其它间隔，其取决于所施用的HSD17B13 RNAi试剂的剂量、特定HSD17B13 RNAi试剂的活性水平、以及对于特定受试者的所需抑制水平。本文的实施例显示了在某些动物物种中合适的抑制水平。施用的量将取决于此类变量，如患者的总体健康状况、所递送的化合物的相对生物学功效、药物的制剂、制剂中赋形剂的存在和类型、以及施用途径。另外，应理解，可以将所施用的初始剂量增加到超过上述上限水平，以迅速达到所需的血液水平或组织水平，或者初始剂量可以小于最佳剂量。
为了治疗疾病或为了形成用于治疗疾病的药剂或组合物，本文所述的包括HSD17B13 RNAi试剂的药物组合物，可以与赋形剂或者第二治疗剂或治疗组合，所述第二治疗剂或治疗包括但不限于：第二或其它RNAi试剂、小分子药物、抗体、抗体片段、肽和/或适体。
当加入药学上可接受的赋形剂或佐剂中时，所述的HSD17B13 RNAi试剂可以包装到试剂盒、容器、包装或分配器内。本文所述的药物组合物可以包装到预填充的注射器或小瓶中。
治疗和抑制表达的方法
本文公开的HSD17B13 RNAi试剂可以用于治疗患有疾病或病症的受试者(例如人或其它哺乳动物)，所述疾病或病症将受益于RNAi试剂的施用。在一些实施方案中，本文公开的RNAi试剂可以用于治疗受试者(例如，人)，所述受试者将受益于HSD17B13 mRNA的表达和/或HSD17B13(本文可替代地称为17β-HSD13)蛋白质水平的降低和/或抑制，例如已诊断有或患有与NAFLD、NASH、肝纤维化、或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化有关的症状的受试者。
在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量的任何一种或多种HSD17B13 RNAi试剂。受试者的治疗可以包括治疗性和/或预防性治疗。向受试者施用治疗有效量的本文所述的任何一种或多种HSD17B13 RNAi试剂。受试者可以是人、患者或人患者。受试者可以是成人、青少年、儿童或婴儿。本文所述的药物组合物的施用可以是对于人类或动物的。
本文所述的HSD17B13 RNAi试剂可以用于治疗受试者中的至少一种症状，所述受试者患有与HSD17B13有关的疾病或病症、或者患有至少部分由HSD17B13基因表达介导的疾病或病症。在一些实施方案中，HSD17B13 RNAi试剂用于治疗或管理患有疾病或病症的受试者的临床表现，所述疾病或病症将受益于HSD17B13 mRNA的降低或者至少部分由其介导。向受试者施用治疗有效量的本文所述的一种或多种HSD17B13 RNAi试剂，或者含HSD17B13RNAi试剂的组合物。在一些实施方案中，本文公开的方法包括向待治疗的受试者施用包含本文所述的HSD17B13 RNAi试剂的组合物。在一些实施方案中，向受试者施用预防有效量的任何一种或多种所述HSD17B13 RNAi试剂，从而通过预防或抑制至少一种症状来治疗受试者。
在某些实施方案中，本公开内容提供了用于治疗有此需要的患者中，至少部分由HSD17B13基因表达介导的疾病、病症、状况或病理状态的方法，其中所述方法包括向患者施用本文所述的任何HSD17B13 RNAi试剂。
在一些实施方案中，相对于在施用HSD17B13 RNAi试剂之前的受试者、或未接受HSD17B13 RNAi试剂的受试者，在所述HSD17B13 RNAi试剂施用于其的受试者中，HSD17B13基因的基因表达水平和/或mRNA水平降低了至少约30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、95%、96%、97%、98%、99%或大于99%。受试者中的基因表达水平和/或mRNA水平在受试者的细胞、细胞群和/或组织中可以是降低的。
在一些实施方案中，相对于在施用HSD17B13 RNAi试剂之前的受试者、或未接受HSD17B13 RNAi试剂的受试者，在所述HSD17B13 RNAi试剂已施用于其的受试者中，HSD17B13蛋白水平降低了至少约30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或大于99%。受试者中的蛋白质水平在受试者的细胞、细胞群、组织、血液和/或其它流体中可以是降低的。
可以通过本领域已知的任何方法，来评价HSD17B13 mRNA水平和HSD17B13蛋白水平的降低。如本文使用的，HSD17B13 mRNA水平和/或蛋白质水平的降低或减少，在本文中统称为HSD17B13的降低或减少或者抑制或降低HSD17B13的表达。本文阐述的实施例示出了用于评价HSD17B13基因表达抑制的已知方法。本领域普通技术人员将进一步知道，用于在体内和/或体外评价HSD17B13基因表达抑制的合适方法。
在一些实施方案中，本文公开的是由NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化引起的疾病、病症或症状的治疗(包括预防性或预防治疗)方法，其中所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的HSD17B13 RNAi试剂，其包括与具有表1中的序列的HSD17B13 mRNA的一部分至少部分互补的反义链。在一些实施方案中，本文公开的是治疗(包括预防性或预防治疗)由NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化引起的疾病或症状的方法，其中所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的HSD17B13 RNAi试剂，其包括包含表2或3中的任何序列的序列的反义链、以及包含与反义链至少部分互补的表2或4中的任何序列的有义链。在一些实施方案中，本文公开的是治疗(包括预防性或预防治疗)由NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化引起的疾病或症状的方法，其中所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的HSD17B13 RNAi试剂，其包括包含表2或4中的任何序列的有义链、以及包含与有义链至少部分互补的表2或3中的任何序列的序列的反义链。
在一些实施方案中，本文公开的是用于抑制细胞中的HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括向细胞施用HSD17B13 RNAi试剂，其包括与具有表1中的序列的HSD17B13mRNA的一部分至少部分互补的反义链。在一些实施方案中，本文公开的是抑制细胞中的HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括向细胞施用HSD17B13 RNAi试剂，其包括包含表2或3中的任何序列的序列的反义链、以及包含与反义链至少部分互补的表2或4中的任何序列的有义链。在一些实施方案中，本文公开的是抑制细胞中的HSD17B13基因表达的方法，其中所述方法包括施用HSD17B13 RNAi试剂，其包括包含表2或4中的任何序列的有义链、以及包括与有义链至少部分互补的表2或3中的任何序列的序列的反义链。
HSD17B13 RNAi试剂的使用提供了用于治疗性(包括预防性)治疗与NAFLD、NASH、肝纤维化、酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化相关的疾病/病症，和/或增强或升高HSD17B13表达的方法。所述的HSD17B13 RNAi试剂介导RNA干扰，以抑制对于HSD17B13蛋白产生必需的一种或多种基因的表达。HSD17B13 RNAi试剂也可以用于治疗或预防各种疾病、病症或状况，包括NAFLD、NASH、肝纤维化、和/或酒精性肝病或非酒精性肝病包括肝硬化。此外，描述了用于在体内将HSD17B13 RNAi试剂递送至肝脏细胞的组合物。
细胞、组织、器官和非人生物体
考虑了包括本文所述的至少一种HSD17B13 RNAi试剂的细胞、组织、器官和非人生物体。细胞、组织、器官或非人生物体通过将RNAi试剂递送至细胞、组织、器官或非人生物体而制备。
现在通过下述非限制性实施例来说明上文提供的实施方案和项目。
实施例
实施例1. HSD17B13 RNAi试剂的合成。
根据下述一般程序合成了上表5中所示的HSD17B13 RNAi试剂双链体：
A.合成。
根据在寡核苷酸合成中使用的固相上的亚磷酰胺技术，合成RNAi试剂的有义链和反义链。此类标准合成是本领域一般已知的。取决于规模，使用MerMade96E®(Bioautomation)、MerMade12® (Bioautomation)、或OP Pilot 100 (GE Healthcare)。合成在由可控孔度玻璃(CPG，500 Å或600Å，得自Prime Synthesis，Aston，PA，USA)制成的固体支撑物上执行。将置于相应链的3'端处的单体附着至固体支撑物，作为用于合成的起点。所有RNA和2'-修饰的RNA亚磷酰胺都购自Thermo Fisher Scientific (Milwaukee，WI，USA)或Hongene Biotech (Shanghai，PRC)。2'-O-甲基亚磷酰胺包括下述：(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N6-(苯甲酰基)-2'-O-甲基-腺苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺、5'-O-二甲氧基-三苯甲基-N4-(乙酰基)-2'-O-甲基胞苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基-氨基)亚磷酰胺、(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N2-(异丁酰基)-2'-O-甲基鸟苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺、以及5'-O-二甲氧基三苯甲基-2'-O-甲基尿苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺。2'-脱氧-2'-氟代亚磷酰胺携带与2'-O-甲基亚磷酰胺(2'-O-methyl amidite)相同的保护基团。5'-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2',3'-开环-尿苷、2'-苯甲酰基-3'-[(2-氰乙基)-(N,N-二异丙基)]-亚磷酰胺也购自ThermoFisher Scientific或Hongene Biotech。5'-二甲氧基三苯甲基-2'-O-甲基-肌苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺购自Glen Research (Virginia)或HongeneBiotech。反向脱碱基(3'-O-二甲氧基三苯甲基-2'-脱氧核糖-5'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺购自ChemGenes (Wilmington，MA，USA)或SAFC (St Louis，MO，USA)。5'-O-二甲氧基三苯甲基-N2,N6-(苯氧乙酸酯)-2'-O-甲基-二氨基嘌呤-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺得自ChemGenes或Hongene Biotech。
将含有靶向配体的亚磷酰胺溶解于无水二氯甲烷或无水乙腈(50 mM)中，而将所有其它亚酰胺溶解于无水乙腈(50 mM)中，或添加无水二甲基甲酰胺和分子筛(3Å)。使用5-苄硫基-1H-四唑(BTT，250 mM乙腈溶液)或5-乙硫基-1H-四唑(ETT，250 mM乙腈溶液)作为活化剂溶液。偶联时间为12分钟(RNA)、15分钟(靶向配体)、90秒(2'OMe)和60秒(2'F)。为了引入硫代磷酸酯键合，采用3-苯基1,2,4-二硫唑啉-5-酮(POS，得自PolyOrg，Inc.，Leominster，MA，USA)在无水乙腈中的100 mM溶液。除非特异性地鉴定为不存在靶向配体的“裸”RNAi试剂，否则在下述实施例中合成且测试的每种HSD17B13 RNAi试剂双链体，利用在表6中表示的靶向配体化学结构中作为“NAG”的N-乙酰基-半乳糖胺。在本文报道的实施例中使用的某些双链体的化学结构可以在图1A到10D中找到。
B. 支撑物结合的寡聚物的切割和脱保护。
在固相合成完成之后，干燥的固体支撑物用40重量%的甲胺的水溶液和28%的氢氧化铵溶液(Aldrich)的1:1 体积溶液在30℃下处理1.5小时。将溶液蒸发，并且将固体残余物在水中重构(参见下文)。
C. 纯化。
使用TSKgel SuperQ-5PW 13µm柱和Shimadzu LC-8系统，通过阴离子交换HPLC来纯化粗制的寡聚物。缓冲液A为20 mM Tris，5 mM EDTA，pH 9.0，且含有20%的乙腈，并且缓冲液B与缓冲液A相同，伴随1.5 M氯化钠的添加。记录在260 nm处的UV迹线。将适当的级分合并，然后使用装有Sephadex G25细粉的GE Healthcare XK 26/40柱，伴随过滤的DI水或100mM碳酸氢铵，pH 6.7和20%乙腈的运行缓冲液，在尺寸排阻HPLC上运行。
D. 退火。
通过在1×磷酸盐缓冲盐水(Corning，Cellgro)中组合等摩尔的RNA溶液(有义和反义)，来混合互补链，以形成RNAi试剂。将一些RNAi试剂冻干并贮存于-15至-25℃下。通过在1×磷酸盐缓冲盐水中，在UV-Vis光谱仪上测量溶液的吸光度，来确定双链体浓度。然后将在260 nm处的溶液吸光度乘以换算因子和稀释因子，以确定双链体浓度。所使用的换算因子为0.050 mg/(mL∙cm)或根据实验确定的消光系数进行计算。
实施例2. HSD17B13 RNAi试剂在大鼠中的体内测试。
为了评价设计为靶向HSD17B13基因上的不同位置的HSD17B13 RNAi试剂的体内活性，使用了Sprague Dawley大鼠。在第1天时，根据表7中所述的给药组，每只大鼠施用500 μl/200 g动物重量的单次皮下注射，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)。
表7. 实施例2的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06079 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06080 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06081 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06082 在第1天时的单次注射
6 3.0 mg/kg AD06083 在第1天时的单次注射
7 3.0 mg/kg AD06084 在第1天时的单次注射
8 3.0 mg/kg AD06085 在第1天时的单次注射
每种RNAi试剂包括修饰的序列，以及与有义链的5'末端缀合的含三齿N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。(关于修饰的序列和靶向配体结构，参见表3-6)。HSD17B13 RNAi试剂AD06079、AD06080和AD06081 (组2、3和4)，各自包括设计为在基因的位置488处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06082和AD06083 (组5和6)，各自包括设计为在基因的位置492处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；并且HSD17B13 RNAi试剂AD06084和AD06085 (组7和8)，各自包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见例如，SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的三(3)只大鼠(n=3)。在第15天处死所有大鼠。收获肝脏，并且收集大约100 mg肝脏样品，并且在液氮中速冻用于RNA分离。通过将来自每个相应治疗组的动物的HSD17B13mRNA表达水平针对组1中的动物(媒介物对照，无RNAi试剂)进行标准化(ΔΔCT分析)，通过qRT-PCR确定每种HSD17B13 RNAi试剂的相对表达，其结果在下表8中阐述：
表8. 来自实施例2，针对对照标准化的，在第15天时的相对HSD17B13 mRNA水平
Figure 795516DEST_PATH_IMAGE030
如上表8中所示，在第15天时，与媒介物对照相比，组2到组8中的每种RNAi试剂显示了HSD17B13 mRNA水平的降低。例如，3.0 mg/kg的HSD17B13 RNAi试剂AD06085的单次皮下施用，在第15天显示了HSD17B13 mRNA的大约87% (0.131)降低。
实施例3. HSD17B13 RNAi试剂在大鼠中的体内测试。
为了评价另外的HSD17B13 RNAi试剂的体内活性，使用了Sprague Dawley大鼠。在第1天时，根据表9中所述的给药组，每只大鼠施用500 μl/200 g动物重量的单次皮下注射，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)。
表9. 实施例3的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06081 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06079 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06177 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06178 在第1天时的单次注射
6 3.0 mg/kg AD06179 在第1天时的单次注射
7 3.0 mg/kg AD06180 在第1天时的单次注射
8 3.0 mg/kg AD06181 在第1天时的单次注射
9 3.0 mg/kg AD06182 在第1天时的单次注射
10 3.0 mg/kg AD06183 在第1天时的单次注射
每种RNAi试剂包括修饰的序列，以及与有义链的5'末端缀合的含三齿N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。(关于修饰的序列和靶向配体结构，参见表3-6)。所有测试的HSD17B13 RNAi试剂(组2到10)都包括设计为在基因的位置488处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见例如，SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只大鼠(n=4)。在第15天处死所有大鼠。收获肝脏，并且收集大约100 mg肝脏样品，并且在液氮中速冻用于RNA分离。通过将来自每个相应治疗组的动物的HSD17B13mRNA表达水平针对组1中的动物(媒介物对照，无RNAi试剂)进行标准化(ΔΔCT分析)，通过qRT-PCR确定每种HSD17B13 RNAi试剂的相对表达，其结果在下表10中阐述：
表10. 来自实施例3，针对对照标准化的，在第15天时的相对HSD17B13 mRNA水平
Figure 908965DEST_PATH_IMAGE031
如上表10中所示，在第15天时，与媒介物对照相比，组2到组10中的每种RNAi试剂显示了HSD17B13 mRNA水平的降低。在第15天，组9(AD06182)仅显示了HSD17B13 mRNA的大约20% (0.800)减少。然而，在单次皮下施用后，在第15天，测试的剩余HSD17B13 RNAi试剂(即，组2-8和10)，各自显示了HSD17B13 mRNA的大约65% (组10，0.348)至大约81% (组3，0.196)降低。
实施例4. HSD17B13 RNAi试剂在大鼠中的体内测试。
为了评价某些另外的HSD17B13 RNAi试剂的体内活性，使用了Sprague Dawley大鼠。在第1天时，根据表11中所述的给药组，每只大鼠施用500 μl/200 g动物重量的单次皮下注射，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)。
表11. 实施例4的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06085 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06184 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06185 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06186 在第1天时的单次注射
6 3.0 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
7 3.0 mg/kg AD06188 在第1天时的单次注射
8 3.0 mg/kg AD06189 在第1天时的单次注射
9 3.0 mg/kg AD06190 在第1天时的单次注射
10 3.0 mg/kg AD06082 在第1天时的单次注射
11 3.0 mg/kg AD06191 在第1天时的单次注射
每种RNAi试剂包括修饰的序列，以及与有义链的5'末端缀合的含三齿N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。(关于修饰的序列和靶向配体结构，参见表3-6)。HSD17B13 RNAi试剂AD06085、AD06184、AD06185、AD06186、AD06187、AD06188、AD06189和AD06190 (组2到9)，各自包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；并且HSD17B13RNAi试剂AD06082和AD06191包括设计为在基因的位置492处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见例如，SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只大鼠(n=4)。在第15天处死所有大鼠。收获肝脏，并且收集大约100 mg肝脏样品，并且在液氮中速冻用于RNA分离。通过将来自每个相应治疗组的动物的HSD17B13mRNA表达水平针对组1中的动物(媒介物对照，无RNAi试剂)进行标准化(ΔΔCT分析)，通过qRT-PCR确定每种HSD17B13 RNAi试剂的相对表达，其结果在下表12中阐述：
表12. 来自实施例4，针对对照标准化的，在第15天时的相对HSD17B13 mRNA水平
Figure 162092DEST_PATH_IMAGE032
如上表12中所示，在第15天时，与对照相比，组2到组11中的每种RNAi试剂显示了HSD17B13 mRNA水平的降低。更具体而言，在单次皮下施用后，在第15天时，HSD17B13 RNAi试剂AD06187显示了HSD17B13 mRNA的大约90% (0.099)降低，并且HSD17B13 RNAi试剂AD06085显示了HSD17B13 mRNA的大约79% (0.211)降低。
实施例5. HSD17B13 RNAi试剂在食蟹猕猴中的体内测试。
HSD17B13 RNAi试剂AD06078在食蟹猕猴中进行评估。在第1天和第22天，向两只食蟹猕猴(食蟹猴(Macaca fascicularis))灵长类动物(本文也称为“猕猴(cynos)”)施用0.4mL/kg(大约3 mL体积，取决于动物质量)的皮下注射，其含有在盐水中配制的4.0 mg/kg的HSD17B13 RNAi试剂AD06078。HSD17B13 RNAi试剂AD06078包括修饰的核苷酸，以及与有义链的5'末端缀合的含三齿N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体((NAG37)s)，如表3-6中所示。HSD17B13 RNAi试剂AD06078包括设计为在基因的位置1501处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见例如，SEQ ID NO:1和表2)。
在第-8(给药前)、15、29和43天，获取肝脏活组织检查。在每次活组织检查收集当天，对猕猴进行麻醉，并且执行超声引导的肝脏活组织检查，以提取尺寸大约1 mm x 2 mm的两个或三个肝脏组织样品。然后将活组织检查样品匀浆化，并且通过RT-qPCR测量猕猴肝脏中的HSD17B13 mRNA水平。然后将所得到的值针对给药前(在这种情况下，在第-8天时)的HSD17B13 mRNA测量进行标准化。所得到的mRNA数据在下表13和14中反映：
表13. 来自实施例5，针对猕猴＃1(cy0595)的给药前标准化的HSD17B13 mRNA水平
Figure 386400DEST_PATH_IMAGE033
**关于猕猴#1的第29天活组织检查样品比正常小，并且基于过于苍白的外观，怀疑是脂肪组织而不是肝脏组织。在第29天时的分析因此被丢弃。
表14. 来自实施例5，针对猕猴＃2(cy0471)的给药前标准化的HSD17B13 mRNA水平
Figure 447897DEST_PATH_IMAGE034
与治疗前测量相比，用AD06078给药的两只猕猴均显示了直到第43天的肝脏特异性HSD17B13 mRNA的降低。例如，在第43天，与给药前水平相比，第二只猕猴具有大约67%(0.335)的HSD17B13 mRNA降低。
实施例6. HSD17B13-SEAP小鼠模型。
为了评估某些另外的HSD17B13 RNAi试剂，使用了HSD17B13-SEAP小鼠模型。六至八周龄的雌性C57BL/6白化小鼠通过流体力学尾静脉注射，用质粒在体内进行瞬时转染，其在施用HSD17B13 RNAi试剂或对照之前至少29天施用。该质粒含有插入SEAP(分泌型人胎盘碱性磷酸酶)报告基因的3' UTR内的HSD17B13 cDNA序列(GenBank NM_178135.4 (SEQ IDNO:1))。总体积为动物体重的10%、含有在林格氏溶液中的HSD17B13 cDNA序列的50 µg质粒经由尾静脉注射到小鼠内，以产生HSD17B13-SEAP模型小鼠。如先前所述(Zhang G等人，“High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail veininjection of naked plasmid DNA.” Human Gene Therapy 1999，第10卷，第p1735-1737页。)，在5-7秒内通过27号针头来注射溶液。通过HSD17B13 RNAi试剂的HSD17B13表达抑制导致测量的SEAP表达的伴随抑制。在施用治疗之前(在给药前第-7天至第1天之间)，通过Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System (Invitrogen)，测量血清中的SEAP表达水平，并且根据平均SEAP水平对小鼠进行分组。
小鼠用2-3%异氟烷进行麻醉，并且血液样品从下颌下区收集到血清分离管(Sarstedt AG & Co.，Nümbrecht，德国)内。允许血液在环境温度下凝固20分钟。管以8,000×g离心3分钟以分离血清并贮存于4℃下。收集血清，并且根据制造商的说明书，通过Phospha-Light™ SEAP Reporter Gene Assay System (Invitrogen)进行测量。每只动物的血清SEAP水平可以针对用媒介物对照注射的小鼠的对照组进行标准化，以便解释使用该模型与治疗无关的HSD17B13表达下降。为了实现这点，首先，将每只动物在某个时间点的SEAP水平除以该动物的治疗前表达水平(第-1天)，以便确定“针对治疗前标准化”的表达比率。然后通过将个别动物的“针对治疗前标准化”的比率，除以正常媒介物对照组中所有小鼠的平均“针对治疗前标准化”的比率，将在特定时间点的表达针对对照组进行标准化。可替代地，仅通过针对治疗前水平标准化，来评价每只动物的血清SEAP水平。
实施例7. HSD17B13 RNAi试剂在HSD17B13-SEAP小鼠中的体内测试。
使用了上文实施例6中描述的HSD17B13-SEAP小鼠模型。在第1天时，根据下表15，每只小鼠给予200 μl/20 g动物重量的单次皮下施用，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液中配制的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)：
表15. 实施例7的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06078 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06081 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06084 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06085 在第1天时的单次注射
每种HSD17B13 RNAi试剂包括修饰的核苷酸，其在有义链的5'末端处与包括三个N-乙酰基-半乳糖胺基团的靶向配体(三齿配体)缀合，具有如本文的双链体结构中所示的修饰序列。(关于与HSD17B13 RNAi试剂有关的具体修饰和结构信息，参见表3-6)。HSD17B13RNAi试剂AD06078 (组 2)包括设计为在基因的位置1501处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06081 (组 3)包括设计为在基因的位置488处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；并且HSD17B13 RNAi试剂AD06084和AD06085包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见SEQID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只小鼠(n=4)。在第-2天(治疗前)、第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并且依据上文实施例6中所述的程序测定SEAP表达水平。来自实验的数据显示于下表16和表17中：
表16. 来自实施例7的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-2天)标准化的平均SEAP
Figure 201090DEST_PATH_IMAGE035
*如上文实施例6中指出的，媒介物对照组(组1)中的SEAP随着时间过去的逐渐减少，是由于小鼠细胞中的SEAP报告基因丢失，这是由于动物中的天然细胞复制，而不是任何抑制性化合物的结果。
表17. 来自实施例7的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-2天)和媒介物对照标准化的平均SEAP
Figure 613616DEST_PATH_IMAGE036
在第8天和第15天时，与媒介物对照(组1)相比，每个给药组(即，组2到5)中的每种HSD17B13 RNAi试剂显示了SEAP的降低。进一步地，两者均包括设计为在HSD17B13基因的位置499处抑制表达的核苷酸序列的HSD17B13 RNAi试剂AD06084和AD06085，显示了直到第22天测量的特别高的敲减水平。(比较组4和5与组1)。
实施例8. HSD17B13 RNAi试剂在食蟹猕猴中的体内测试。
HSD17B13 RNAi试剂AD06078、AD06187、AD06278和AD06280在食蟹猕猴中进行评估。在第1天和第30天，向每组三只猕猴(n=3)施用0.3 mL/kg(大约3 mL体积，取决于动物质量)的皮下注射，其含有在盐水中配制的3.0 mg/kg的相应HSD17B13 RNAi试剂。HSD17B13RNAi试剂包括修饰的核苷酸，以及与有义链的5'末端缀合的含三齿N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体((NAG37)s)，如表3-6中所示。HSD17B13 RNAi试剂AD06078 (组 1)包括设计为在基因的位置1501处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06187 (组2)包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06278 (组 3)包括设计为在基因的位置513处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；并且HSD17B13 RNAi试剂AD06280 (组 4)包括设计为在基因的位置791处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见例如，SEQ ID NO:1和表2)
在第-7(给药前)、15、29和43天，获取肝脏活组织检查。在每次活组织检查收集当天，对猕猴进行麻醉，并且使用腹腔镜手术来提取各自大约80 mg至120 mg的两个肝脏组织样品。然后将活组织检查样品匀浆化，并且通过RT-qPCR测量猕猴肝脏中的HSD17B13 mRNA水平。然后将所得到的值针对给药前(在这种情况下，在第-7天时)的HSD17B13 mRNA测量进行标准化。所得到的mRNA数据在下表18中反映：
表18. 对于各组(n=3)，来自实施例8，针对给药前(第-7天)标准化的HSD17B13mRNA水平
Figure 641615DEST_PATH_IMAGE037
实施例9. HSD17B13 RNAi试剂在HSD17B13-SEAP小鼠中的体内测试。
使用了上文实施例6中描述的HSD17B13-SEAP小鼠模型。在第1天时，根据下表19，每只小鼠给予200 μl/20 g动物重量的单次皮下施用，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)：
表19. 实施例9的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06210 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06211 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06212 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06213 在第1天时的单次注射
6 3.0 mg/kg AD06214 在第1天时的单次注射
7 3.0 mg/kg AD06217 在第1天时的单次注射
8 3.0 mg/kg AD06218 在第1天时的单次注射
每种HSD17B13 RNAi试剂包括修饰的核苷酸，其在有义链的5'末端处与包括三个N-乙酰基-半乳糖胺基团的靶向配体(三齿配体)缀合，具有如本文的双链体结构中所示的修饰序列。(关于与HSD17B13 RNAi试剂有关的具体修饰和结构信息，参见表3-6)。HSD17B13RNAi试剂AD06210 (组 2)包括设计为在基因的位置513处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06211 (组 3)包括设计为在基因的位置645处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06212 (组 4)包括设计为在基因的位置649处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06213 (组 5)包括设计为在基因的位置759处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06214 (组6)包括设计为在基因的位置791处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06217 (组 7)包括设计为在基因的位置1505处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；并且HSD17B13 RNAi试剂AD06218 (组 8)包括设计为在基因的位置2185处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只小鼠(n=4)。在第-1天(治疗前)、第8天、第15天和第22天收集血清，并且依据上文实施例6中所述的程序测定SEAP表达水平。来自实验的数据显示于下表20中：
表20. 来自实施例9的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-1天)标准化的平均SEAP
Figure 151094DEST_PATH_IMAGE038
*如上文实施例6中指出的，媒介物对照组(组1)中的SEAP随着时间过去的逐渐减少，是由于小鼠细胞中的SEAP报告基因丢失，这是由于动物中的天然细胞复制，而不是任何抑制性化合物的结果。
在第15天和第22天时，与媒介物对照(组1)相比，每个给药组(即，组2到8)中的每种HSD17B13 RNAi试剂显示了SEAP的降低。进一步地，相对于测试的其它RNAi试剂，包括设计为在HSD17B13基因的位置513处抑制表达的核苷酸序列的HSD17B13 RNAi试剂AD06210(组2)，以及包括设计为在HSD17B13基因的位置791处抑制表达的核苷酸序列的AD06214(组6)，显示了特别高的敲减水平。例如，在第15天时，AD06210 (组2)显示了大约84%(0.157)的降低，而AD06214 (组6)显示了大约85% (0.151)的降低。(例如，与仅显示了略微大于对照组(组1)的敲减水平的AD06218 (组8)相比)。在第22天时，HSD17B13 RNAi试剂AD06214 (组6)也显示了大约83%的敲减(0.171)。
实施例10. HSD17B13 RNAi试剂在HSD17B13-SEAP小鼠中的体内测试。
使用了上文实施例6中描述的HSD17B13-SEAP小鼠模型。在第1天时，根据下表21，每只小鼠给予200 μl/20 g动物重量的单次皮下施用，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3.0 mg/kg(mpk)的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)：
表21. 实施例10的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3.0 mg/kg AD06185 在第1天时的单次注射
3 3.0 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
4 3.0 mg/kg AD06210 在第1天时的单次注射
5 3.0 mg/kg AD06213 在第1天时的单次注射
6 3.0 mg/kg AD06214 在第1天时的单次注射
每种HSD17B13 RNAi试剂包括修饰的核苷酸，其在有义链的5'末端处与包括三个N-乙酰基-半乳糖胺基团的靶向配体(三齿配体)缀合，具有如本文的双链体结构中所示的修饰序列。(关于与HSD17B13 RNAi试剂有关的具体修饰和结构信息，参见表3-6)。HSD17B13RNAi试剂AD06185 (组2)和AD06187 (组3)包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06210 (组4)包括设计为在基因的位置513处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06213 (组5)包括设计为在基因的位置759处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06214 (组6)包括设计为在基因的位置791处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只小鼠(n=4)。在第-1天(治疗前)、第8天、第15天和第22天收集血清，并且依据上文实施例6中所述的程序测定SEAP表达水平。来自实验的数据显示于下表22中：
表22. 来自实施例10的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-1天)标准化的平均SEAP
Figure 340767DEST_PATH_IMAGE039
*如上文实施例6中指出的，媒介物对照组(组1)中的SEAP随着时间过去的逐渐减少，是由于小鼠细胞中的SEAP报告基因丢失，这是由于动物中的天然细胞复制，而不是任何抑制性化合物的结果。
在所有测量的时间点，与媒介物对照(组1)相比，每个给药组(即，组2到6)中的每种HSD17B13 RNAi试剂显示了SEAP的降低。
实施例11. HSD17B13 RNAi试剂在HSD17B13-SEAP小鼠中的体内测试。
使用了上文实施例6中描述的HSD17B13-SEAP小鼠模型。在第1天时，根据下表23，每只小鼠给予200 μl/20 g动物重量的单次皮下施用，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的mg/kg(mpk)剂量的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)：
表23. 实施例11的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 0.625 mg/kg AD06280 在第1天时的单次注射
3 1.25 mg/kg AD06280 在第1天时的单次注射
4 2.5 mg/kg AD06280 在第1天时的单次注射
5 5.0 mg/kg AD06280 在第1天时的单次注射
6 0.625 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
7 1.25 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
8 2.5 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
9 5.0 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
两种HSD17B13 RNAi试剂均包括修饰的核苷酸，其在有义链的5'末端处与包括三个N-乙酰基-半乳糖胺基团的靶向配体(三齿配体)缀合，具有如本文的双链体结构中所示的修饰序列。(关于与HSD17B13 RNAi试剂有关的具体修饰和结构信息，参见表3-6)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只小鼠(n=4)，除了仅具有两(2)只小鼠的媒介物对照组之外。在第-1天(治疗前)、第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并且依据上文实施例6中所述的程序测定SEAP表达水平。来自实验的数据显示于下表24中：
表24. 来自实施例11的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-1天)和对照标准化的平均SEAP
Figure 568486DEST_PATH_IMAGE041
与媒介物对照(组1)相比，两种测试的HSD17B13 RNAi试剂(即，AD06280和AD06187)均显示了SEAP的降低。
实施例12. HSD17B13 RNAi试剂在HSD17B13-SEAP小鼠中的体内测试。
使用了上文实施例6中描述的HSD17B13-SEAP小鼠模型。在第1天时，根据下表25，每只小鼠给予200 μl/20 g动物重量的单次皮下施用，其含有在药学上可接受的盐水缓冲液配制中的3 mg/kg(mpk)剂量的HSD17B13 RNAi试剂、或媒介物对照(不含RNAi试剂的盐水缓冲液)：
表25. 实施例12的给药组
组 RNAi试剂和剂量 给药方案
1 盐水(无RNAi试剂) 在第1天时的单次注射
2 3 mg/kg AD06187 在第1天时的单次注射
3 3 mg/kg AD06208 在第1天时的单次注射
4 3 mg/kg AD06209 在第1天时的单次注射
5 3 mg/kg AD06215 在第1天时的单次注射
6 3 mg/kg AD06216 在第1天时的单次注射
7 3 mg/kg AD06219 在第1天时的单次注射
所有HSD17B13 RNAi试剂包括修饰的核苷酸，其在有义链的5'末端处与包括三个N-乙酰基-半乳糖胺基团的靶向配体(三齿配体)缀合，具有如本文的双链体结构中所示的修饰序列。(关于与HSD17B13 RNAi试剂有关的具体修饰和结构信息，参见表3-6)。HSD17B13RNAi试剂AD06187 (组 2)包括设计为在基因的位置499处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06208 (组 3)包括设计为在基因的位置92处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06209 (组 4)包括设计为在基因的位置417处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06215 (组 5)包括设计为在基因的位置1418处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06216 (组6)包括设计为在基因的位置1502处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列；HSD17B13 RNAi试剂AD06219 (组 7)包括设计为在基因的位置2195处抑制HSD17B13基因表达的核苷酸序列。(关于所提及的HSD17B13基因，参见SEQ ID NO:1和表2)。
在皮肤和肌肉之间在颈部和肩部区域上的松弛皮肤内执行注射(即皮下注射)。测试每组中的四(4)只小鼠(n=4)。在第-1天(治疗前)、第8天、第15天和第22天收集血清，并且依据上文实施例6中所述的程序测定SEAP表达水平。来自实验的数据显示于下表26中：
表26. 来自实施例12的HSD17B13-SEAP小鼠中，针对治疗前(第-1天)和对照标准化的平均SEAP
Figure 134596DEST_PATH_IMAGE042
其它实施方案
应理解，尽管本发明已与其具体实施方式结合进行描述，但前述说明书预期说明而不是限制本发明的范围，所述本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面、优点和修改在所附权利要求的范围内。
Figure IDA0002984182940000011
Figure IDA0002984182940000021
Figure IDA0002984182940000031
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Claims (58)

1. 一种用于抑制HSD17B13基因表达的RNAi试剂，其包含：
反义链，其包含与表2或表3中提供的任何一种序列相差0或1个核苷酸的至少17个邻接核苷酸；和
有义链，其包含与所述反义链至少部分互补的核苷酸序列。
2.权利要求1的RNAi试剂，其中所述反义链包含表2或表3中提供的任何一种序列的核苷酸2-18。
3.权利要求1或权利要求2的RNAi试剂，其中所述有义链包含与表2或表4中提供的任何一种有义链序列相差0或1个核苷酸的至少17个邻接核苷酸的核苷酸序列，并且其中所述有义链具有在17个邻接核苷酸上的与所述反义链至少85%互补的区域。
4.权利要求1-3中任一项的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂的至少一个核苷酸是修饰的核苷酸或包括修饰的核苷间键合。
5.权利要求1-3中任一项的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂的有义链和/或反义链的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
6.权利要求4-5中任一项的RNAi试剂，其中所述修饰的核苷酸选自：2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸、2'-脱氧核苷酸、2',3'-开环核苷酸模拟物、锁定的核苷酸、2'-F-阿拉伯糖核苷酸、2'-甲氧基乙基核苷酸、脱碱基核苷酸、核糖醇、反向核苷酸、反向2'-O-甲基核苷酸、反向2'-脱氧核苷酸、2'-氨基修饰的核苷酸、2'-烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸、环丙基膦酸酯脱氧核糖核苷酸和3'-O-甲基核苷酸。
7.权利要求5的RNAi试剂，其中所有或基本上所有的修饰的核苷酸都是2'-O-甲基核苷酸、2'-氟核苷酸或其组合。
8.权利要求1-7中任一项的RNAi试剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一种修饰的反义链序列的核苷酸序列。
9.权利要求1-8中任一项的RNAi试剂，其中所述有义链包含表4中提供的任何修饰的有义链序列的核苷酸序列。
10.权利要求1的RNAi试剂，其中所述反义链包含表3中提供的任何一种修饰的序列的核苷酸序列，并且所述有义链包含表4中提供的任何一种修饰的序列的核苷酸序列。
11.权利要求1-10中任一项的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂与靶向配体连接。
12.权利要求11的RNAi试剂，其中所述靶向配体包含n-乙酰基-半乳糖胺。
13.权利要求11或权利要求12的RNAi试剂，其中所述靶向配体包含选自以下的结构：(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。
14.权利要求13的RNAi试剂，其中所述靶向配体包含(NAG37)或(NAG37)s的结构。
15.权利要求11-14中任一项的RNAi试剂，其中所述靶向配体与有义链连接。
16.权利要求15的RNAi试剂，其中所述靶向配体与有义链的5'末端连接。
17.权利要求1-16中任一项的RNAi试剂，其中所述有义链的长度为18至30个核苷酸，并且所述反义链的长度为18至30个核苷酸。
18.权利要求17的RNAi试剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自为18至27个核苷酸。
19.权利要求18的RNAi试剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自为18至24个核苷酸。
20.权利要求19的RNAi试剂，其中所述有义链和所述反义链的长度各自为21个核苷酸。
21.权利要求17-20中任一项的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂具有两个平端。
22.权利要求1-21中任一项的RNAi试剂，其中所述有义链包含一个或两个末端帽。
23.权利要求1-22中任一项的RNAi试剂，其中所述有义链包含一个或两个反向脱碱基残基。
24.权利要求1的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂由有义链和反义链构成，所述有义链和反义链形成具有表5中的任何一种双链体的结构的双链体。
25. 权利要求1的RNAi试剂，其包括由以下组成、基本上由以下组成或包含以下的反义链：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
UCAUCUAUCAGACUUCUUACG (SEQ ID NO:3)；或
UGAUCCAAAAAUGUCCUAGGC (SEQ ID NO:6)。
26. 权利要求25的RNAi试剂，其中所述有义链由以下组成、基本上由以下组成或包含以下：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的核苷酸序列：
CGUAAGAAGUCUGAUAGAUGA (SEQ ID NO:8)；或
GCCUAGGACAUUUUUGIAUCA (SEQ ID NO:11)，其中I代表肌苷(次黄嘌呤)核苷酸。
27.权利要求25或26的RNAi试剂，其中所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
28.权利要求25或26的RNAi试剂，其中所述有义链进一步包括在所述核苷酸序列的3'末端处、在所述核苷酸序列的5'端处、或在两者处的反向脱碱基残基。
29.权利要求1的RNAi试剂，其包括包含以下、由以下组成或基本上由以下组成的反义链：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰的核苷酸序列：
usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)；
usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)；
usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)；
usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)；
其中a、c、g和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s代表硫代磷酸酯键合；并且其中所述有义链上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
30.权利要求1的RNAi试剂，其中所述有义链包含以下、由以下组成或基本上由以下组成：与下述核苷酸序列(5′→3′)之一相差0或1个核苷酸的修饰的核苷酸序列：
cguaagaaGfUfCfugauagauga (SEQ ID NO:9)；
cguaagaaGfuCfuGfauagauga (SEQ ID NO:10)；
gccuaggaCfAfUfuuuugiauca (SEQ ID NO:12)；或
gccuaggaCfaUfuUfuugiauca (SEQ ID NO:13)；
其中a、c、g、i和u分别代表2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别代表2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s代表硫代磷酸酯键合；并且其中所述反义链上的所有或基本上所有核苷酸都是修饰的核苷酸。
31.权利要求25-30中任一项的RNAi试剂，其中所述有义链进一步包括在所述核苷酸序列的3'末端处、在所述核苷酸序列的5'端处、或在两者处的反向脱碱基残基。
32.权利要求25-31中任一项的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂的有义链与靶向配体连接。
33.权利要求32的RNAi试剂，其中所述靶向配体对于脱唾液酸糖蛋白受体具有亲和力。
34.权利要求33的RNAi试剂，其中所述靶向配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
35. 权利要求1的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂具有选自以下的双链体结构：AD06214(SEQ ID NO: 2和16)；AD06280 (SEQ ID NO: 4和15)；AD06187 (SEQ ID NO: 5和16)；AD06276 (SEQ ID NO: 5和17)；AD06277 (SEQ ID NO: 7和17)。
36. 权利要求35的RNAi试剂，其中所述RNAi试剂具有选自以下的双链体结构：AD06214(SEQ ID NO: 2和16)和AD06280 (SEQ ID NO: 4和15)。
37. 权利要求1的RNAi试剂，其中所述靶向配体包含：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
，或
Figure DEST_PATH_IMAGE004
。
38. 权利要求1的RNAi试剂，其中所述反义链由(5′→3′) usCfsasUfcUfaUfcAfgAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:2)的修饰的核苷酸序列组成，并且所述有义链由(5′→3′)(NAG37)s(invAb)scguaagaaGfUfCfugauagaugas(invAb) (SEQ ID NO:14)的修饰的核苷酸序列组成；
其中a、c、g和u分别是2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别是2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s是硫代磷酸酯键合；(invAb)是反向脱碱基脱氧核糖残基；且(NAG37)s具有下述化学结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004A
。
39. 权利要求1的RNAi试剂，其中所述反义链由(5′→3′) usCfsasUfcUfaucagAfcUfuCfuUfaCfsg (SEQ ID NO:4)的修饰的核苷酸序列组成，并且其中所述有义链由(5′→3′)(NAG37)s(invAb)scguaagaaGfuCfuGfauagaugas(invAb) (SEQ ID NO:15)的修饰的核苷酸序列组成；
其中a、c、g和u分别是2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别是2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s是硫代磷酸酯键合；(invAb)是反向脱碱基脱氧核糖残基；且(NAG37)s具有下述化学结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004AA
。
40. 权利要求30的RNAi试剂，其中所述反义链由(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)的修饰的核苷酸序列组成，并且其中所述有义链由(5′→3′) (NAG37)s(invAb)sgccuaggaCfAfUfuuuugiaucas(invAb) (SEQ ID NO:16)的修饰的核苷酸序列组成；
其中a、c、g、i和u分别是2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别是2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s是硫代磷酸酯键合；(invAb)是反向脱碱基脱氧核糖残基；且(NAG37)s具有下述化学结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004AAA
。
41. 权利要求30的RNAi试剂，其中所述反义链由(5′→3′) usGfsasUfcCfaAfaAfaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:5)的修饰的核苷酸序列组成，并且其中所述有义链由(5′→3′) (NAG37)s(invAb)sgccuaggaCfaUfuUfuugiaucas(invAb) (SEQ ID NO:17)的修饰的核苷酸序列组成；
其中a、c、g、i和u分别是2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别是2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s是硫代磷酸酯键合；(invAb)是反向脱碱基脱氧核糖残基；且(NAG37)s具有下述化学结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004AAAA
。
42. 权利要求30的RNAi试剂，其中所述反义链由(5′→3′) usGfsasUfcCfaaaaaUfgUfcCfuAfgGfsc (SEQ ID NO:7)的修饰的核苷酸序列组成，并且其中所述有义链由(5′→3′)(NAG37)s(invAb)sgccuaggaCfaUfuUfuugiaucas(invAb) (SEQ ID NO:17)的修饰的核苷酸序列组成；
其中a、c、g、i和u分别是2'-O-甲基腺苷、胞苷、鸟苷、肌苷或尿苷；Af、Cf、Gf和Uf分别是2'-氟腺苷、胞苷、鸟苷或尿苷；s是硫代磷酸酯键合；(invAb)是反向脱碱基脱氧核糖残基；且(NAG37)s具有下述化学结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004AAAAA
。
43.一种包含权利要求1-42中任一项的RNAi试剂的组合物，其中所述组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂。
44.权利要求43的组合物，其进一步包含用于抑制HSD17B13表达的第二RNAi试剂。
45.权利要求43或44的组合物，其进一步包含一种或多种另外的治疗剂。
46.一种用于抑制细胞中的HSD17B13基因表达的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1-42中任一项的RNAi试剂或权利要求43-45中任一项的组合物引入细胞内。
47.权利要求46的方法，其中所述细胞在受试者内。
48.权利要求47的方法，其中所述受试者是人受试者。
49.权利要求46-48中任一项的方法，其中所述HSD17B13基因表达被抑制至少约30%。
50.一种治疗与HSD17B13有关的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的人受试者施用治疗有效量的权利要求43-45中任一项的组合物。
51.权利要求50的方法，其中所述疾病是NAFLD、NASH、肝纤维化、酒精性脂肪肝病或肝硬化。
52. 权利要求46-51中任一项的方法，其中所述RNAi试剂以约0.05 mg/kg至约5.0 mg/kg人受试者体重的剂量施用。
53.权利要求46-52中任一项的方法，其中所述RNAi试剂以两个或更多个剂量施用。
54.权利要求1-42中任一项的RNAi试剂或根据权利要求43-45中任一项的组合物，用于治疗至少部分由HSD17B13基因表达介导的疾病、病症或症状的用途。
55.根据权利要求54的用途，其中所述症状是肝脏的硬化。
56.权利要求1-42中任一项的RNAi试剂或根据权利要求43-45中任一项的组合物，用于制备用于治疗至少部分由HSD17B13基因表达介导的疾病、病症或症状的药物组合物的用途。
57.权利要求43-45中任一项的组合物的用途，其中所述疾病是NAFLD、NASH、肝纤维化、或者酒精性肝病或非酒精性肝病例如肝硬化。
58. 权利要求43-45中任一项的组合物的用途，其中所述RNAi试剂以约0.05 mg/kg至约5.0 mg/kg人受试者体重的剂量施用。
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