PL218876B1 - Wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA, sposób wytwarzania cząsteczki dwuniciowego RNA, zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem, genu związanego z nowotworem, oraz genu związanego z chorobą autoimmunologiczną, sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, zastosowanie sposobu in vitro do ustalania działania genu w komórce oraz do modulowania działania genu w komórce, środek farmaceutyczny, komórka eukariotyczna transfekowana cząsteczką RNA lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA, oraz zastosowanie komórki eukariotycznej w procedurach analitycznych oraz w procedurach preparatywnych - Google Patents
Wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA, sposób wytwarzania cząsteczki dwuniciowego RNA, zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem, genu związanego z nowotworem, oraz genu związanego z chorobą autoimmunologiczną, sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, zastosowanie sposobu in vitro do ustalania działania genu w komórce oraz do modulowania działania genu w komórce, środek farmaceutyczny, komórka eukariotyczna transfekowana cząsteczką RNA lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA, oraz zastosowanie komórki eukariotycznej w procedurach analitycznych oraz w procedurach preparatywnychInfo
- Publication number
- PL218876B1 PL218876B1 PL365784A PL36578401A PL218876B1 PL 218876 B1 PL218876 B1 PL 218876B1 PL 365784 A PL365784 A PL 365784A PL 36578401 A PL36578401 A PL 36578401A PL 218876 B1 PL218876 B1 PL 218876B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- rna
- target
- dsrna
- stranded
- gene
- Prior art date
Links
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 title claims abstract description 105
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 title claims abstract description 105
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 title 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 469
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims abstract description 285
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 61
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 124
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 98
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 87
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 80
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 46
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 38
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 34
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 32
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 31
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 31
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 25
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 18
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 18
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 18
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 16
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 claims description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 9
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 claims description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 7
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 claims description 6
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 claims description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 4
- 125000006727 (C1-C6) alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000006728 (C1-C6) alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 claims description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 abstract description 237
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract description 80
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 abstract description 79
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract description 70
- 230000007022 RNA scission Effects 0.000 abstract description 38
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 32
- 239000006166 lysate Substances 0.000 abstract description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 25
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 abstract description 16
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 abstract description 8
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 196
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 29
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 27
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 23
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 18
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 15
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 15
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 13
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 7
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 7
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 7
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- -1 cationic lipid Chemical class 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 7
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 6
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 241000242743 Renilla reniformis Species 0.000 description 5
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 230000001743 silencing effect Effects 0.000 description 5
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 4
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical class C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000254064 Photinus pyralis Species 0.000 description 3
- 101710086015 RNA ligase Proteins 0.000 description 3
- 108010046983 Ribonuclease T1 Proteins 0.000 description 3
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 3
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101100144701 Mus musculus Drosha gene Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 102000018686 U4-U6 Small Nuclear Ribonucleoprotein Human genes 0.000 description 2
- 108010091808 U4-U6 Small Nuclear Ribonucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000005257 nucleotidylation Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 108090000446 ribonuclease T(2) Proteins 0.000 description 2
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 102000033955 single-stranded RNA binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000371 single-stranded RNA binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 2'-deoxyguanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1CC(O)C(CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 8-Bromoguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=C(Br)N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O ASUCSHXLTWZYBA-UMMCILCDSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000587430 Homo sapiens Serine/arginine-rich splicing factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000587434 Homo sapiens Serine/arginine-rich splicing factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000622060 Photinus pyralis Luciferin 4-monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108090000944 RNA Helicases Proteins 0.000 description 1
- 102000004409 RNA Helicases Human genes 0.000 description 1
- 108010039259 RNA Splicing Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015097 RNA Splicing Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010065868 RNA polymerase SP6 Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102100029683 Ribonuclease T2 Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102100029666 Serine/arginine-rich splicing factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029665 Serine/arginine-rich splicing factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 108020004688 Small Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020003224 Small Nucleolar RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042773 Small Nucleolar RNA Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008049 TAE buffer Substances 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 102000006986 U2 Small Nuclear Ribonucleoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010072724 U2 Small Nuclear Ribonucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108091026831 U4 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091026837 U5 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091026822 U6 spliceosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O HGEVZDLYZYVYHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003838 adenosines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108010028263 bacteriophage T3 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000007068 beta-elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 108020001778 catalytic domains Proteins 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000019113 chromatin silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003936 denaturing gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N desoxyinosine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007422 luminescence assay Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L magnesium acetate Chemical compound [Mg+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O UEGPKNKPLBYCNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011654 magnesium acetate Substances 0.000 description 1
- 229940069446 magnesium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000011285 magnesium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000004879 molecular function Effects 0.000 description 1
- 150000004712 monophosphates Chemical group 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012033 transcriptional gene silencing Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA, sposób wytwarzania cząsteczki dwuniciowego RNA, zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem, genu związanego z nowotworem, oraz genu związanego z chorobą autoimmunologiczną, sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, zastosowanie sposobu in vitro do ustalania działania genu w komórce, oraz do modulowania działania genu w komórce, środek farmacetyczny, komórka eukariotyczna transfekowana cząsteczką RNA lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA, oraz zastosowanie komórki eukariotycznej w procedurach analitycznych oraz w procedurach preparatywnych.
Określenie „interferencja RNA (RNAi) stworzono po odkryciu, że po wstrzyknięciu dsRNA do nicienia C. elegans prowadzi do specyficznego wyciszania genów o sekwencji w wysokim stopniu homologicznej do wprowadzonego dsRNA (Fire i in., 1998). Następnie RNAi obserwowano u owadów, żab (Oelgeschlager i in., 2000) oraz innych zwierząt włącznie z myszami (Svoboda i in., 2000; Wianny i Zernicka-Goetz, 2000) i prawdopodobnie występuje ona także u ludzi. RNAi jest ściśle związana z mechanizmem posttranskrypcyjnego wyciszania genów (PTGS) w kosupresji w roślinach oraz tłumieniu u grzybów (Catalanotto i in., 2000; Cogoni i Macino, 1999; Dalmay i in., 2000; Ketting i Plasterk, 2000; Mourrain i in., 2000; Smardon i in., 2000), a niektóre składniki maszynerii RNAi są także potrzebne do posttranskrypcyjnego wyciszania przez kosupresję (Catalanotto i in., 2000; Dernburg i in., 2000; Ketting i Plasterk, 2000). Temat ten omawiano także ostatnio w pracach przeglądowych (Bass, 2000; Bosher i Labouesse, 2000; Fire, 1999; Plasterk i Ketting, 2000; Sharp, 1999; Sijen i Kooter, 2000), patrz także cały numer Plant Molecular Biology, tom 43, numer 2/3, (2000).
W roślinach, oprócz PTGS, wprowadzone transgeny mogą także prowadzić do transkrypcyjnego wyciszania genów w wyniku kierowanej przez RNA metylacji cytozyn w DNA (patrz pozycje literaturowe w Wassenegger, 2000). Docelowe miejsca w genomie zaledwie o 30 pz są metylowane w roślinach w sposób kierowany przez RNA (Pelissier, 2000). Metylacja DNA zachodzi także u ssaków.
Naturalną funkcją RNAi i kosupresji wydaje się być ochrona genomu przed inwazją mobilnych elementów genetycznych, takich jak retrotranspozony i wirusy, które, gdy stają się aktywne, wytwarzają obarczony aberacjami RNA lub dsRNA w komórce gospodarzu (Jensen i in., 1999; Ketting i in., 1999; Ratcliff i in., 1999; Tabara i in., 1999). Specyficzna degradacja mRNA przeciwdziała replikacji transpozonów i wirusów, jednakże niektóre wirusy są zdolne do przezwyciężenia tego procesu lub zapobiegania mu przez ekspresję białek hamujących PTGS (Lucy i in., 2000; Voinnet i in., 2000).
DsRNA uruchamia specyficzną degradację homologicznych RNA tylko w regionie identyczności z dsRNA (Zamore i in., 2000). DsRNA ulega obróbce do fragmentów RNA o 21- do 23-nt i docelowe miejsca cięcia RNA są regularnie oddzielone od siebie przez 21- do 23-nt. Zasugerowano zatem, że 21- do 23-nt fragmenty są kierującymi RNA w rozpoznawaniu miejsca docelowego (Zamore i in., 2000). Te krótkie RNA wykryto także w ekstraktach otrzymanych z komórek D. melanogaster Schneider 2, które były transfekowane dsRNA przed lizą komórek (Hammond i in., 2000), jednakże frakcje wykazujące specyficzną względem sekwencji aktywność nukleazową zawierały także dużą frakcję resztkowych dsRNA. Rola 21- - 23-nt fragmentów w kierowaniu cięciem mRNA została ponadto potwierdzona przez obserwację, że 21- - 23-nt fragmenty wyizolowane z poddanego obróbce dsRNA są zdolne, w pewnym stopniu, kierować degradacją mRNA (Zamore i in., 2000). Cząsteczki RNA podobnych wielkości także gromadzą się w tkance roślinnej wykazującej PTGS (Hamilton i Baulcombe, 1999).
Zastosowano ustalony in vitro układ Drosophila (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000), aby dokładniej zbadać mechanizm RNAi. Wykazano, że krótkie 21- i 22-nt RNA, gdy zostaną sparowane zasadami z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami, działają jako RNA kierujące specyficzną względem sekwencji degradacją mRNA. Krótkie dsRNA o długości 30 pz nie są zdolne do kierowania RNAi w tym układzie, gdyż nie ulegają one już obróbce do 21- i 22-nt RNA. Ponadto zdefiniowano docelowe miejsca rozszczepiania RNA względem 21- i 22-nt krótkich interferujących RNA (siRNA) oraz dostarczono dowodu, że skierowanie obróbki dsRNA decyduje o tym, czy sensowny czy też antysensowny RNA może zostać pocięty przez wytworzenie kompleksu endonukleazowego siRNP. Ponadto siRNA mogą być także istotnymi narzędziami do modulacji transkrypcji, np. wyciszania genów ssaczych przez kierowanie metylacją DNA.
Dalsze doświadczenia w układach in vivo hodowli komórek ludzkich (komórki HeLa) wykazują, że cząsteczki dwuniciowego RNA o długości korzystnie 19-23 nukleotydów wykazują aktywność RNAi.
PL 218 876 B1
Celem leżącym u podstaw wynalazku jest dostarczenie nowych środków zdolnych do kierowania miejscowo specyficzną interferencją RNA, które to środki mają ulepszoną skuteczność i bezpieczeństwo w porównaniu z istniejącymi dotychczas środkami.
Rozwiązanie tego problemu zapewnia poniżej określona wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA.
Tak więc wynalazek dotyczy wyizolowanej cząsteczki dwuniciowego RNA, w której każda nić RNA ma długość 19-23 nukleotydów, oraz w której co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, przy czym ta cząsteczka RNA jest zdolna do miejscowo specyficznej interferencji RNA.
Korzystnia jest cząsteczka RNA, w której każda nić ma długość 20-22 nukleotydów.
Korzystna jest cząsteczka RNA, w której jednoniciowy wiszący 3'-koniec jest stabilizowany względem degradacji.
Korzystna jest cząsteczka RNA, która zawiera co najmniej jeden zmodyfikowany analog nukleotydu.
Korzystnie zmodyfikowany analog nukleotydu jest wybrany spośród rybonukleotydów ze zmodyfikowaną resztą cukrową lub szkieletem.
Korzystniej analog nukleotydu jest rybonukleotydem ze zmodyfikowaną resztą cukrową, przy czym grupa 2'-OH jest zastąpiona grupą wybraną spośród H, OR, R, atomu chlorowca, SH, SR, NH2, NHR, NR2 i CN, gdzie R oznacza C1-C6 alkil, C1-C6 alkenyl lub C1-C6 alkinyl, a atom chlorowca oznacza F, Cl, Br lub I.
Ponadto korzystniej analog nukleotydu jest rybonukleotydem ze zmodyfikowanym szkieletem zawierającym grupę tiofosforanową.
Korzystna jest cząsteczka RNA mająca sekwencję o identyczności co najmniej 70% z wcześniej ustaloną docelową cząsteczką mRNA.
Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania określonej powyżej cząsteczki dwuniciowego RNA, który charakteryzuje się tym, że (a) syntetyzuje się dwie nici RNA, każda o długości 19-23 nukleotydów, a ponadto co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, przy czym te nici RNA są zdolne do utworzenia cząsteczki dwuniciowego RNA, oraz (b) łączy się zsyntetyzowane nici RNA w warunkach, w których tworzona jest cząsteczka dwuniciowego RNA, zdolna do miejscowo specyficznej interferencji RNA.
Korzystnie w sposobie według wynalazku nici RNA syntetyzuje się chemicznie.
Ponadto korzystnie w sposobie według wynalazku nici RNA syntetyzuje się enzymatycznie.
Wynalazek dotyczy także zastosowania określonej powyżej cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem.
Korzystnie w odniesieniu do powyższego zastosowania gen związany z patogenem jest genem wirusowym.
Wynalazek dotyczy także zastosowania określonej powyżej cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z nowotworem.
Wynalazek dotyczy także zastosowania określonej powyżej cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z chorobą autoimmunologiczną.
Ponadto wynalazek dotyczy sposobu in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, który charakteryzuje się tym, że (a) kontaktuje się tę komórkę z określoną powyżej cząsteczką dwuniciowego RNA w warunkach, w których mogą zachodzić miejscowo specyficzne interferencje RNA, oraz (b) kieruje się miejscowo specyficzną interferencją RNA wywieraną przez dwuniciowy RNA na docelowym kwasie nukleinowym zawierającym część sekwencji zasadniczo odpowiadającą dwuniciowemu RNA.
Korzystnie w sposobie według wynalazku kontaktowanie obejmuje wprowadzenie tej cząsteczki dwuniciowego RNA do docelowej komórki, w której może zajść miejscowo specyficzna interferencja RNA.
Korzystnie w sposobie według wynalazku wprowadzenie obejmuje dostarczenie z użyciem nośnika lub iniekcję.
Ponadto wynalazek dotyczy zastosowania określonego powyżej sposobu in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, do ustalania działania genu w komórce.
PL 218 876 B1
Ponadto wynalazek dotyczy zastosowania określonego powyżej sposobu in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce do modulowania działania genu w komórce.
Korzystnie w odniesieniu do powyższych zastosowań sposobu in vitro gen jest związany ze stanem patologicznym.
Ponadto wynalazek dotyczy środka farmaceutycznego zawierającego substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, którego cechą jest to, że jako substancję czynną zawiera co najmniej jedną określoną powyżej cząsteczkę dwuniciowego RNA.
Korzystnie środek farmaceutyczny według wynalazku jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych.
Korzystnie środek farmaceutyczny według wynalazku jest przeznaczony do zastosowań terapeutycznych.
Wynalazek ponadto dotyczy komórki eukariotycznej transfekowanej określoną powyżej cząsteczką RNA lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA.
Korzystnie komórka eukariotyczna według wynalazku jest komórką ssaczą.
Korzystnie komórka eukariotyczna według wynalazku jest komórką ludzką.
Korzystnie komórka eukariotyczna według wynalazku jest transfekowana ponadto co najmniej jednym egzogennym docelowym kwasem nukleinowym kodującym docelowe białko lub wariant lub zmutowaną postać docelowego białka, przy czym ten egzogenny docelowy kwas nukleinowy różni się od endogennego genu docelowego na poziomie kwasu nukleinowego, tak że ekspresja egzogennego docelowego kwasu nukleinowego jest zasadniczo mniej hamowana przez cząsteczkę dwuniciowego RNA niż ekspresja endogennego genu docelowego.
Korzystnie w odniesieniu do komórki eukariotycznej według wynalazku egzogenny docelowy kwas nukleinowy jest zfuzowany z kolejną sekwencją kwasu nukleinowego kodującą wykrywalny peptyd lub polipeptyd.
Wynalazek dotyczy także zastosowania określonej powyżej komórki eukariotycznej w procedurach analitycznych.
Korzystne jest zastosowanie określonej powyżej komórki eukariotycznej do analizy profili ekspresji genów.
Korzystnie jest zastosowanie określonej powyżej komórki eukariotycznej do analizy proteomu.
Korzystnie w odniesieniu do określonych powyżej zastosowań komórki eukariotycznej prowadzi się analizę wariantu lub zmutowanej postaci docelowego białka kodowanego przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy.
Korzystniejsze jest zastosowanie określonej powyżej komórki eukariotycznej do identyfikacji domen funkcjonalnych docelowego białka.
Korzystnie w odniesieniu do określonych powyżej zastosowań komórki eukariotycznej prowadzi się porównanie co najmniej dwóch komórek, wybranych spośród:
(i) kontrolnej komórki bez zahamowania docelowego genu;
(ii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz (iii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz komplementacją docelowego genu przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy.
Korzystnie w odniesieniu do określonych powyżej zastosowań komórki eukariotycznej analiza obejmuje analizę funkcjonalną i/lub fenotypową.
Korzystne jest zastosowanie komórki eukariotycznej do wyodrębniania białek lub kompleksów białkowych z komórek eukariotycznych.
Jeszcze korzystne jest zastosowanie komórki eukariotycznej do wyodrębniania wysokocząsteczkowych kompleksów białkowych, które mogą dodatkowo zawierać kwasy nukleinowe.
Wynalazek dotyczy także zastosowania określonej powyżej komórki eukariotycznej w procedurach preparatywnych.
W odniesieniu do określonych powyżej zastosowań korzystne jest zastosowanie komórki eukariotycznej w procedurze identyfikacji i/lub charakteryzacji środków farmakologicznych.
Jak podano powyżej, co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, a korzystnie o długości dwóch nukleotydów. Druga nić może mieć tępe końce lub mieć jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości do sześciu nukleotydów. Także, jeżeli obie nici dsRNA mają długość dokładnie 21- lub 22-nt, możliwe jest obserwowanie pewnej interferencji RNA gdy oba końce są tępe (0 nt w jednoniciowym wiszącym 3' końcu). Cząsteczka RNA jest korzystnie syntetyczną cząsteczką RNA zasadniczo wolną od zanieczyszczeń występujących w ekstraktach komórkowych,
PL 218 876 B1 np. z embrionów Drosophila. Ponadto cząsteczka RNA jest korzystnie zasadniczo wolna od jakichkolwiek nie miejscowo specyficznych zanieczyszczeń, w szczególności nie miejscowo specyficznych cząsteczek RNA np. od zanieczyszczeń występujących w ekstraktach komórkowych.
Wyizolowane cząsteczki dwuniciowego RNA, w których każda nić RNA ma długość 19 - 23 nukleotydów, oraz w których co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1 - 3 nukleotydów, stosuje się do kierowania RNAi, w komorkach ssaczych, w szczególności w komórkach ludzkich.
Nieoczekiwanie stwierdzono, że syntetyczne krótkie cząsteczki dwuniciowego RNA, z jednoniciowym wiszącym 3'-końcem, są specyficznymi względem sekwencji mediatorami RNAi i pośredniczą w wydajnym rozszczepianiu docelowego RNA, przy czym miejsce rozszczepienia jest umiejscowione w pobliżu środka regionu obejmującego krótki kierujący RNA.
Korzystnie każda nić cząsteczki RNA ma długość 20 - 22 nukleotydów (lub 20 - 23 nukleotydów w komórkach ssaczych), przy czym długość każdej nici może być taka sama lub różna. Długość jednoniciowego wiszącego 3'-końca wynosi 1-3 nukleotydy, przy czym długość jednoniciowego wiszącego końca może być taka sama lub różna dla każdej nici. Nici RNA korzystnie zawierają grupy 3'-hydroksylowe. Na 5'-końcu korzystnie znajduje się grupa fosforanowa, difosforanowa, trifosforanowa lub hydroksylowa. Najskuteczniejsze dsRNA składają się z dwu nici 21-nt, które są sparowane tak, że 1 - 3, w szczególności 2-nt jednoniciowe wiszące 3'-końce są obecne na obu końcach dsRNA.
Reakcja rozszczepiania docelowego RNA kierowana przez siRNA jest wysoce specyficzna względem sekwencji. Jednakże, nie wszystkie pozycje siRNA w równym stopniu uczestniczą w rozpoznawaniu docelowego RNA. Błędnie sparowane zasady w centrum dupleksu siRNA mają decydujące znaczenie i zasadniczo znoszą rozszczepianie docelowego RNA. W odróżnieniu od tego, 3' nukleotyd nici siRNA (np. pozycja 21), który jest komplementarny do jednoniciowego docelowego RNA, nie wpływa na specyficzność rozpoznania docelowego RNA. Ponadto sekwencja niesparowanego 2-nt jednoniciowego wiszącego 3'-końca nici siRNA o tej samej polarności, co docelowy RNA, nie jest wymagana do rozszczepiania docelowego RNA, gdyż tylko antysensowna nić siRNA pośredniczy w rozpoznaniu docelowego RNA. Zatem z nukleotydów jednoniciowego wiszącego końca tylko przedostatnia pozycja antysensownego siRNA (np. pozycja 20) wymaga dopasowania z docelowym sensownym mRNA.
Nieoczekiwanie, cząsteczki dwuniciowego RNA według wynalazku wykazują wysoką stabilność in vivo w surowicy lub w podłożu hodowlanym dla hodowli komórkowych. W celu dalszego wzmocnienia stabilności, jednoniciowe wiszące 3'-końce można stabilizować przed degradacją, np. można je wybrać tak, by składały się one z nukleotydów purynowych, w szczególności nukleotydów adenozynowych lub guanozynowych. Alternatywnie, podstawienie nukleotydów pirymidynowych zmodyfikowanymi analogami, np. podstawienie urydyny w 2-nt jednoniciowych wiszących 3'-końcach 2'-deoksytymidyną jest tolerowane i nie wpływa na wydajność interferencji RNA. Brak grupy 2'-hydroksylowej w istotny sposób zwiększa odporność na nukleazę jednoniciowego końca w podłożu do hodowli tkankowych.
Jak podano powyżej, cząsteczka RNA może zawierać co najmniej jeden zmodyfikowany analog nukleotydu. Analogi nukleotydu mogą być umiejscowione w pozycjach, w których nie wpływa to zasadniczo na miejscowo specyficzną aktywność, np. aktywność kierującą RNAi, np. w regionie 5'-końca i/lub 3'-końca cząsteczki dwuniciowego RNA. W szczególności jednoniciowe wiszące końce mogą być stabilizowane przez wprowadzenie analogów nukleotydów.
Korzystne analogi nukleotydów wybiera się spośród rybonukleotydów ze zmodyfikowaną resztą cukrową lub szkieletem. Należy zauważyć, że odpowiednie są także rybonukleotydy ze zmodyfikowaną zasadą nukleinową, tj. rybonukleotydy zawierające nie występującą naturalnie zasadę nukleinową zamiast naturalnie występującej zasady nukleinowej, takie jak urydyny lub cytydyny zmodyfikowane w pozycji 5, np. 5-(2-amino)propylourydyna, 5-bromourydyna; adenozyny i guanozyny zmodyfikowane w pozycji 8, np. 8-bromoguanozyna; deazanukleotydy, np. 7-deazaadenozyna; O- i N-alkilowane nukleotydy, np. N6-metyloadenozyna. W korzystnych rybonukleotydach ze zmodyfikowaną resztą cukrową grupa 2'-OH jest zastąpiona grupą wybraną spośród H, OR, R, atomu chlorowca, SH, SR, NH2, NHR, NR2 i CN, przy czym R oznacza C1-C6 alkil, C1-C6 alkenyl lub C1-C6 alkinyl, a atom chlorowca oznacza F, Cl, Br lub I. W korzystnych rybonukleotydach ze zmodyfikowanym szkieletem grupa fosfoestrowa łącząca przyległe rybonukleotydy jest zastąpiona zmodyfikowaną grupą, np. grupą tiofosforanową. Należy zauważyć, że powyższe modyfikacje mogą być połączone.
PL 218 876 B1
Sekwencja cząsteczki dwuniciowego RNA według wynalazku wykazuje wystarczającą identyczność z docelową cząsteczką kwasu nukleinowego aby kierowała ona miejscowo specyficzną RNAi. Korzystnie sekwencja wykazuje co najmniej 70% identyczność z wymaganą docelową cząsteczką w dwuniciowej części cząsteczki RNA. Korzystniej identyczność wynosi co najmniej 85%, a najkorzystniej 100% w dwuniciowej części cząsteczki RNA. Identyczność cząsteczki dwuniciowego RNA z wyznaczoną wcześniej docelową cząsteczką kwasu nukleinowego, np. docelową cząsteczką mRNA, można wyznaczyć w następujący sposób.
I = - x 100
L gdzie I oznacza procent identyczności, n oznacza liczbę identycznych nukleotydów w dwuniciowej części dsRNA i docelowej sekwencji, a L oznacza długość pokrywających się sekwencji dwuniciowej części dsRNA i docelowej sekwencji.
Alternatywnie identyczność cząsteczki dwuniciowego RNA z docelową sekwencją można także zdefiniować z uwzględnieniem jednoniciowych wiszących 3'-końców, w szczególności jednoniciowego wiszącego końca o długości 1-3 nukleotydów. W tym przypadku identyczność sekwencji z sekwencją docelową wynosi co najmniej 70%, a korzystniej co najmniej 85%. Przykładowo, nukleotydy od jednoniciowego wiszącego 3'-końca oraz do 2 nukleotydów z 5'- i/lub 3'-końca dwuniciowego fragmentu mogą być zmodyfikowane bez istotnej utraty aktywności.
Cząsteczkę dwuniciowego RNA według wynalazku można wytwarzać sposobem obejmującym etapy:
(a) syntezy dwu nici RNA, każdej o długości 19-23 nukleotydów, a ponadto co najmniej jedna nić ma wiszący jednoniciowy 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, przy czym te nici RNA są zdolne do utworzenia cząsteczki dwuniciowego RNA, (b) połączenia zsyntetyzowanych nici RNA w warunkach, w których tworzona jest cząsteczka dwuniciowego RNA, która jest zdolna do pośredniczenia w miejscowo specyficznej interferencji RNA.
Sposoby syntezy cząsteczek RNA są znane. W tym kontekście odnoszą się one szczególnie do metod syntezy chemicznej opisanych w Verma i Eckstein (1998).
Jednoniciowe RNA można także wytwarzać przez enzymatyczną transkrypcję z syntetycznych matryc DNA lub z plazmidów DNA wyizolowanych ze zrekombinowanych bakterii. Zazwyczaj stosuje się fagowe polimerazy RNA, takie jak polimeraza RNA T7, T3 lub SP6 (Milligan i Uhlenbeck (1989)).
Jak podano powyżej, sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, polega na tym, że:
(a) kontaktuje się komórkę z cząsteczką dwuniciowego RNA według wynalazku w warunkach, w których mogą wystąpić miejscowo specyficzne interferencje RNA oraz (b) kieruje się miejscowo specyficzną interferencją RNA wywołaną przez dwuniciowy RNA na docelowym kwasie nukleinowym mającym część sekwencji zasadniczo odpowiadającą dwuniciowemu RNA.
Korzystnie etap kontaktowania (a) obejmuje wprowadzenie cząsteczki dwuniciowego RNA do docelowej komórki, np. wyizolowanej komórki docelowej, np. w hodowli komórkowej, do organizmu jednokomórkowego lub komórki docelowej lub większej liczby komórek docelowych w organizmie wielokomórkowym. Korzystniej, etap wprowadzenia obejmuje dostarczanie z użyciem nośnika, np. przez nośniki liposomowe, albo przez iniekcję.
Sposób in vitro według wynalazku można stosować do ustalania funkcji genu w komórce lub organizmie lub nawet do modulowania funkcji genu w komórce lub organizmie, przez zdolność pośredniczenia w interferencji RNA. Komórka jest korzystnie komórką eukariotyczną lub linią komórkową, np. komórką roślinną lub komórką zwierzęcą, taką jak ssacza komórka, np. komórka embrionalna, macierzysta komórka pluripotentna, komórka nowotworowa, np. komórka potworniaka złośliwego lub komórka zakażona wirusem. Organizm jest korzystnie organizmem eukariotycznym, np. rośliną lub zwierzęciem, takim jak ssak, w szczególności człowiek.
Docelowy gen, do którego skierowana jest cząsteczka RNA według wynalazku, może być związany ze stanem patologicznym. Przykładowo, gen może być genem związanym z patogenem, np. genem wirusowym, genem związanym z nowotworem lub genem związanym z chorobą autoimmunologiczną. Docelowy gen może także być genem heterologicznym wyrażanym w zrekombinowanej komórce lub genetycznie zmienionym organizmie. Przez ustalenie lub modulację, w szczególności zahamowanie działania takiego genu, można uzyskać cenne informacje oraz korzyści terapeutyczne w dziedzinie rolnictwa lub medycyny albo weterynarii.
PL 218 876 B1 dsRNA zazwyczaj podaje się jako środek farmaceutyczny. Podawanie można prowadzić znanymi sposobami, w których kwas nukleinowy wprowadza się do żądanej komórki docelowej in vitro lub in vivo. Często stosowane techniki transferu obejmują zastosowanie fosforanu wapnia, DEAEdekstranu, elektroporację oraz mikroiniekcję i metody wirusowe (Graham, F. L. i van der Eb, A. J. (1973) Virol. 52, 456; McCutchan, J. H. i Pagano, J. S. (1968), J. Natl. Cancer Inst. 41, 351; Chu, G. i in. (1987), Nucl. Acids Res. 15, 1311; Fraley, R. i in. (1980), J. Biol. Chem. 255, 10431; Capecchi, M. R. (1980), Cell 22, 479). Niedawnym dodatkiem do tego arsenału technik wprowadzania DNA do komórek jest zastosowanie kationowych liposomów (Felgner, P. L. i in. (1987), Proc. Natl. Acad. Sci USA 84, 7413). Dostępnymi w handlu preparatami kationowych lipidów są np. Tfx 50 (Promega) lub Lipofectamin 2000 (Life Technologies).
Jak podano powyżej, środek farmaceutyczny zawiera jako substancję czynną co najmniej jedną cząsteczkę dwuniciowego RNA, jak opisano powyżej, oraz nośnik farmaceutyczny. Środek można stosować w celach diagnostycznych i terapeutycznych w medycynie ludzi oraz w weterynarii.
Do zastosowań diagnostycznych i terapeutycznych, środek może być w postaci roztworu, np. roztworu do iniekcji, kremu, maści, tabletki, zawiesiny, itp. Środek można podawać w jakikolwiek odpowiedni sposób, np. drogą iniekcji, doustnie, miejscowo, donosowo, doodbytniczo, itp. Nośnikiem może być jakikolwiek odpowiedni nośnik farmaceutyczny. Korzystnie, stosuje się nośnik, który jest zdolny do zwiększenia wydajności wchodzenia cząsteczek RNA do komórek docelowych. Odpowiednimi przykładami takich nośników są liposomy, w szczególności kationowe liposomy. Kolejny korzystny sposób podawania stanowi iniekcja.
Kolejnym korzystnym zastosowaniem sposobu RNAi jest funkcjonalna analiza komórek eukariotycznych lub organizmów eukariotycznych, z wyjątkiem ludzi, korzystnie ssaczych komórek lub organizmów, a najkorzystniej komórek ludzkich, np. linii komórkowych, takich jak HeLa lub 293, albo gryzoni, np. szczurów i myszy. Przez transfekcję odpowiednich cząsteczek dwuniciowego RNA, które są homologiczne do wcześniej wyznaczonego genu docelowego lub cząsteczek DNA kodujących odpowiednią cząsteczkę dwuniciowego RNA, można uzyskać specyficzny fenotyp nokaut w komórce docelowej, np. w hodowli komórkowej lub w organizmie docelowym. Nieoczekiwanie stwierdzono, że obecność krótkich cząsteczek dwuniciowego RNA nie wywołuje odpowiedzi interferonowej z komórki gospodarza lub organizmu gospodarza.
Komórka eukariotyczna według wynalazku wykazuje fenotyp nokaut specyficzny dla docelowego genu, obejmujący co najmniej częściowy niedobór ekspresji co najmniej jednego endogennego genu docelowego, przy czym ta komórka jest transfekowana co najmniej jedną cząsteczką dwuniciowego RNA, zdolną do hamowania ekspresji co najmniej jednego endogennego docelowego genu, lub DNA kodującym co najmniej jedną cząsteczkę dwuniciowego RNA zdolną do hamowania ekspresji co najmniej jednego endogennego docelowego genu. Należy podkreślić, że wynalazek pozwala na miejscowo specyficzny nokaut kilku różnych endogennych genów ze względu na specyficzność RNAi.
Genowo specyficzne znokautowane fenotypy komórek, w szczególności komórek ludzkich, można stosować w procedurach analitycznych, np. w funkcjonalnej i/lub fenotypowej analizie złożonych procesów fizjologicznych, takich jak analiza profili ekspresji genów i/lub proteomów. Przykładowo, można otrzymać znokautowane fenotypy ludzkich genów w hodowlach komórkowych, co do których uważa się, że są regulatorami procesu alternatywnego składania. Pośród tych genów są szczególnie członkowie rodziny czynnika splicingowego SR, np. ASF/SF2, SC35, SRp20, SRp40 lub SRp55. Ponadto, można analizować wpływ białek SR na profile mRNA wcześniej ustalonych alternatywnie złożonych genów, takich jak CD44. Korzystnie analizę prowadzi się metodami o dużej rozdzielczości stosując chipy oparte na oligonukleotydach.
Przy zastosowaniu technologii nokaut opartych na RNAi, można zahamować ekspresję endogennego genu docelowego w komórce docelowej lub organizmie docelowym. Endogenny gen może zostać skomplementowany przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy kodujący docelowe białko lub wariant albo zmutowaną postać docelowego białka, np. gen lub cDNA, który może być dodatkowo zfuzowany z kolejną sekwencją kwasu nukleinowego kodującą wykrywalny peptyd lub polipeptyd, np. znacznik powinowactwa, w szczególności wielokrotny znacznik powinowactwa. Warianty lub zmutowane postacie docelowego genu różnią się od endogennego docelowego genu tym, że kodują one produkt genu, który różni się od endogennego produktu genu na poziomie aminokwasowym przez podstawienia, insercje i/lub delecje jednego lub większej liczby aminokwasów. Warianty lub zmutowane postacie mogą mieć taką samą aktywność biologiczną jak endogenny gen docelowy. Z drugiej strony, wariant lub zmutowany gen docelowy może także wykazywać aktywność biologiczną, która
PL 218 876 B1 różni się od aktywności biologicznej endogennego genu docelowego, np. częściowo zniesioną aktywność, całkowicie zniesioną aktywność lub podwyższoną aktywność itd.
Komplementację można osiągnąć przez koekspresję polipeptydu kodowanego przez egzogenny kwas nukleinowy, np. białka fuzyjnego zawierającego białko docelowe i znacznik powinowactwa oraz cząsteczki dwuniciowego RNA w celu nokautu endogennego genu w komórce docelowej. Taką koekspresję można osiągnąć przez zastosowanie odpowiedniego wektora ekspresyjnego, wyrażającego zarówno polipeptyd kodowany przez egzogenny kwas nukleinowy, np. białko docelowe zmodyfikowane znacznikiem, jak i cząsteczkę dwuniciowego RNA, albo wariantowo przez zastosowanie połączenia wektorów ekspresyjnych. Białka i kompleksy białkowe, które są syntetyzowane de novo w komórce docelowej, będą zawierać produkt egzogennego genu, np. zmodyfikowane białko fuzyjne. Aby zapobiec tłumieniu ekspresji produktu egzogennego genu przez cząsteczkę dupleksową RNAi, sekwencja nukleotydowa kodująca egzogenny kwas nukleinowy może zostać zmieniona na poziomie DNA (z lub bez wywoływania mutacji na poziomie aminokwasowym) w części sekwencji, która jest homologiczna z cząsteczką dwuniciowego RNA. Alternatywnie, endogenny gen docelowy może zostać skomplementowany przez odpowiednie sekwencje nukleotydowe z innych gatunków, np. z myszy.
Korzystnym zastosowaniem dla komórki według wynalazku jest analiza profili ekspresji genów i/lub proteomów. W szczególnie korzystnej postaci prowadzi się analizę wariantu lub zmutowanej postaci jednego lub kilku docelowych białek, przy czym te warianty lub zmutowane postacie ponownie wprowadza się do komórki przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy, jak opisano powyżej. Połączenie nokautu endogennego genu i ratunku przez zastosowanie zmutowanego, np. częściowo wydeletowanego egzogennego docelowego kwasu nukleinowego ma zalety w porównaniu z zastosowaniem komórki nokaut. Sposób ten jest ponadto szczególnie odpowiedni do identyfikacji funkcjonalnych domen docelowego białka. W kolejnej korzystnej postaci przeprowadza się porównanie, np. profili ekspresji genów i/lub proteomów i/lub charakterystyki fenotypowej co najmniej dwóch komórek wybranych spośród:
(i) kontrolnej komórki bez zahamowania docelowego genu, (ii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz (iii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz komplementacją genu docelowego przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy.
Sposób i komórka według wynalazku są także odpowiednie w procedurze identyfikacji i/lub charakteryzacji środków farmakologicznych, np. identyfikacji nowych środków farmakologicznych ze zbioru badanych substancji i/lub charakteryzacji mechanizmów działania i/lub skutków ubocznych znanych środków farmakologicznych.
Ponadto metodę nokautu komplementacji RNA można stosować do celów preparatywnych, np. do oczyszczania przez powinowactwo białek lub kompleksów białkowych z komórek eukariotycznych, w szczególności komórek ssaczych, a zwłaszcza komórek ludzkich. W tej postaci wynalazku, egozgenny docelowy kwas nukleinowy korzystnie koduje białko docelowe, które jest zfuzowane ze znacznikiem powinowactwa.
Metodę preparatywną można stosować do oczyszczania kompleksów białkowych o dużej masie cząsteczkowej, które korzystnie mają masę > 150 kD, korzystniej > 500 kD, oraz które ewentualnie mogą zawierać kwasy nukleinowe, takie jak RNA. Konkretne przykłady stanowi heterotrimeryczny kompleks białkowy składający się z białek 20 kD, 60 kD i 90 kD cząstki U4/U6 snRNP, czynnik składania SF3b z 17S U2 snRNP składający się z pięciu białek o masach cząsteczkowych 14, 49, 120, 145 i 155 kD oraz cząstka tri-snRNP 25S U4/U6/U5, zawierająca cząsteczki U4, U5 i U6 snRNA, oraz około 30 białek, które mają masę cząsteczkową około 1,7 MD.
Metoda ta jest odpowiednia do funkcjonalnej analizy proteomu w komórkach ssaczych, w szczególności w komórkach ludzkich.
Wynalazek jest dokładniej wyjaśniony na poniższych figurach i w przykładach.
Opisy figur
Figura 1: Dwuniciowy RNA o zaledwie 38 pz może kierować RNAi (A) Graficzne przedstawienie dsRNA stosowanego do skierowania do Pp-luc mRNA. Otrzymano trzy serie dsRNA o tępych końcach pokrywających zakres 29-504 pz. Pozycję pierwszego nukleotydu w nici sensownej dsRNA wskazano względem kodonu start Pp-luc mRNA (p1).
(B) Test interferencji RNA (Tuschl i in., 1999). Stosunek aktywności docelowej Pp-luc do kontrolnej Rr-luc normalizowano względem kontrolnego buforu (czarny słupek). DsRNA (5 nM) wstępnie inkubowano w lizacie Drosophila przez 15 minut w 25°C przed dodaniem mRNA Pp-luc i Rr-luc z czaPL 218 876 B1 peczką z 7-metyloguanozyny (~50 pM). Inkubację kontynuowano przez kolejną godzinę, a następnie analizowano za pomocą podwójnego testu lucyferazy (Promega). Dane stanowią średnie z co najmniej czterech niezależnych doświadczeń ± odchylenie standardowe.
Figura 2: dsRNA o długości 29 pz nie ulega obróbce do 21- do 23-nt fragmentów
Przebieg w czasie powstawania 21- do 23-meru przez obróbkę wewnętrznie znakowanych 32P dsRNA (5 nM) w lizacie Drosophila. Wskazano długość i źródło dsRNA. Znacznik wielkości RNA (M) naniesiono w lewej ścieżce i wskazano wielkości fragmentów. Podwójne prążki w czasie zero wynikają z niecałkowicie zdenaturowanego dsRNA.
Figura 3: Krótkie dsRNA rozszczepiają docelowy mRNA tylko raz (A) Elektroforeza na żelu denaturującym stabilnych 5' produktów rozszczepiania wytworzonych w ciągu 1 godzinnej inkubacji 10 nM sensownego lub antysensownego RNA znakowanego w cza32 peczce 32P z użyciem 10 nM dsRNA serii p133 w lizacie Drosophila. Znaczniki długości wytworzono przez częściowe trawienie nukleazą T1 i częściową hydrolizę zasadową (OH) znakowanego w czapeczce RNA. Regiony do których skierowano dsRNA wskazano przez czarne paski na obu stronach. Wskazano 20- do 23-nt rozdzielające dominujące miejsca rozszczepiania dla dsRNA o długości 111 pz. Pozioma strzałka wskazuje niespecyficzne rozszczepianie nie wynikające z RNAi.
(B) Pozycja miejsc rozszczepiania na sensownym i antysensownym docelowym RNA. Sekwencje 177-nt sensownych i 180-nt antysensownych docelowych RNA z czapeczką przedstawiono w antyrównoległej orientacji, tak, że sekwencje komplementarne są naprzeciw siebie. Regiony, do których były skierowane różne dsRNA, wskazano jako słupki o różnej barwie, umiejscowione pomiędzy seksowną i antysensowną sekwencją docelową. Miejsca rozszczepiania wskazano kółkami: duże kółka dla silnego rozszczepiania, małe kółka dla słabego rozszczepiania. Grupę fosforanową znakowaną 32 radioaktywnie 32P wskazano gwiazdką.
Figura 4: Fragmenty RNA o długości 21- i 22-nt wytwarza się według mechanizmu podobnego do działania RNazy III (A) Sekwencje RNA o długości ~21-nt po obróbce dsRNA.
Fragmenty RNA o długości ~21-nt wytworzone przez obróbkę dsRNA bezpośrednio sklonowano i zsekwencjonowano. Oligorybonukleotydy pochodzące z nici sensownej dsRNA wskazano jako niebieskie linie, pochodzące z nici antysensownej wskazano jako czerwone linie. Grube słupki zastosowano, gdy te same sekwencje były obecne w wielu klonach, a numer po prawej stronie wskazuje częstość. Miejsca rozszczepiania docelowego RNA kierowanego przez dsRNA wskazano jako pomarańczowe kółka, duże kółka dla silnego rozszczepiania, małe kółka dla słabego rozszczepiania (patrz fig. 3B). Kółka na górze nici sensownej oznaczają miejsca rozszczepiania w sensownej nici docelowej, a kółka na dole dsRNA wskazują miejsca rozszczepiania w antysensownej nici docelowej. W ~21-nt fragmentach pochodzących z 3'-końców dsRNA zidentyfikowano do pięciu dodatkowych nukleotydów. Nukleotydy te były losowymi kombinacjami głównie reszt C, G lub A i najprawdopodobniej zostały dodane w sposób niezależny od matrycy podczas transkrypcji T7 nici stanowiących dsRNA.
(B) Dwuwymiarowa analiza TLC składu nukleotydowego ~21-nt RNA. ~21-nt RNA wytworzono przez inkubację wewnętrznie znakowanego radioaktywnie dsRNA Pp-luc o długości 504 pz w lizacie
Drosophila, oczyszczono na żelu, a następnie strawiono do mononukleotydów z użyciem nukleazy P1 (górny rząd) lub rybonukleazy T2 (dolny rząd). dsRNA był wewnętrznie znakowany radioaktywnie 32 przez transkrypcję w obecności jednego ze wskazanych a- p trifosforanów nukleozydów. Radioaktywność wykrywano metodą luminescencyjnego obrazowania. 5'-Monofosforany nukleozydów, 3'-monofosforany nukleozydów, 5',3'-difosforany nukleozydów oraz nieorganiczny fosforan wskazano odpowiednio jako pN, Np, pNp, i pi. Czarne kółka wskazują plamy absorbujące w UV z nie radioaktywnych nukleotydów nośnikowych. 3',5'-Bisfosforany (czerwone kółka) zidentyfikowano przez wspólną migrację ze znakowanymi radioaktywnie wzorcami otrzymanymi przez 5'-fosforylację 3'-mono-fosforanów nukleozydów kinazą polinukleotydową T4 i γ- p-ATP.
Figura 5: Syntetyczne RNA o długości 21- i 22-nt pośredniczą w rozszczepianiu docelowego
RNA (A) Graficzne przedstawienie kontrolnego dsRNA o długości 52 pz i syntetycznych dsRNA o długości 21- i 22-nt. Nić sensowną krótkich interferujących RNA (siRNA) o długości 21 i 22-nt zaznaczono na niebiesko, a nić antysensowną na czerwono. Sekwencje siRNA wyprowadzono ze sklonowanych fragmentów dsRNA o długości 52 i 111 pz (fig. 4A), z wyjątkiem antysensownej nici o długości 22 nt dupleksu 5. siRNA w dupleksie 6 i 7 były unikalne dla reakcji obróbki dsRNA o długości 111 pz. Dwa nukleotydy wiszące w postaci jednoniciowego 3'-końca zaznaczone na zielono są obecne
PL 218 876 B1 w sekwencjach syntetycznych nici antysensownych dupleksów 1 i 3. Obie nici kontrolnego dsRNA o długości 52 pz otrzymano przez transkrypcję in vitro i frakcja transkryptów może zawierać nie zależną od matrycy addycję nukleotydu na 3'-końcu. Miejsca rozszczepiania docelowego. RNA kierowanego przez dupleksy siRNA wskazano jako pomarańczowe kółka (patrz legenda do fig. 4A) i wyznaczono je w sposób przedstawiony na fig. 5B.
(B) Pozycja miejsc rozszczepiania na sensownym i antysensownym docelowym RNA. Docelowe sekwencje RNA opisano jak na fig. 3B. Kontrolny dsRNA o długości 52 pz (10 nM) lub dupleksy RNA 1-7 o długości 21 i 22 nt (100 nM) inkubowano z docelowym RNA przez 2,5 godziny w 25°C w lizacie Drosophila. Stabilne 5'-produkty rozszczepiania rozdzielono na żelu. Miejsca rozszczepiania wskazano na fig. 5A. Region, do którego skierowany był dsRNA o długości 52 pz albo sensowna (s) lub antysensowna (as) nić, zaznaczono jako czarne słupki z boku żelu. Wszystkie miejsca rozszczepiania są zlokalizowane w regionie identyczności dsRNA. Do precyzyjnego wyznaczenia miejsc rozszczepiania nici antysensownej zastosowano żel o niższym stężeniu procentowym.
Fig. 6: Długie jednoniciowe wiszące 3'-końce na krótkich dsRNA hamują RNAi (A) Graficzne przedstawienie konstruktów dsRNA o długości 52 pz. Wydłużenia 3'-końca nici sensownej i antysensownej zaznaczono odpowiednio kolorem niebieskim i czerwonym. Obserwowane miejsca rozszczepiania na docelowych RNA przedstawiono jako pomarańczowe kółka analogicznie do fig. 4A, przy czym wyznaczono je jak pokazano na fig. 6B.
(B) Pozycja miejsc rozszczepiania na sensownym i antysensownym docelowym RNA. Docelowe sekwencje RNA opisano jak na fig. 3B. DsRNA (10 nM) inkubowano z docelowym RNA przez
2,5 godziny w 25°C w lizacie Drosophila. Stabilne 5'-produkty rozszczepiania rozdzielono na żelu. Główne miejsca rozszczepiania wskazano poziomą strzałką oraz przedstawiono je także na fig. 6A. Region, do którego skierowany był dsRNA o długości 52 pz wskazano jako czarne słupki po obu stronach żelu.
Figura 7: Proponowany model RNAi
Przewiduje się, że RNAi zaczyna się od obróbki dsRNA (nić sensowna na czarno, nić antysensowna na czerwono) głównie do krótkich interferujących RNA (siRNA) o długości 21 i 22 nt. Krótkie jednoniciowe wiszące 3'-końcowe nukleotydy, gdy są obecne na dsRNA, mogą być korzystne dla obróbki krótkich dsRNA. Białka obróbki dsRNA, które nie zostały scharakteryzowane, przedstawiono jako zielone i niebieskie owalne kształty i są one złożone na dsRNA w sposób asymetryczny. W tym modelu, jest to zilustrowane przez wiązanie hipotetycznego niebieskiego białka lub domeny białkowej z nicią siRNA w kierunku 3' do 5', podczas gdy hipotetyczne zielone białko lub domena białkowa zawsze jest związana z przeciwległą nicią siRNA. Te białka lub podzestawy pozostają związane z dupleksem siRNA i zabezpieczają jego orientację wyznaczoną przez kierunek reakcji obróbki dsRNA. Tylko sekwencja siRNA związana z niebieskim białkiem jest zdolna do kierowania rozszczepianiem docelowego RNA. Kompleks endonukleazowy jest określany jako kompleks małej interferującej rybonukleoproteiny lub siRNP. Przypuszcza się tutaj, że endonukleaza rozszczepiająca dsRNA może także rozszczepić docelowy RNA, prawdopodobnie przez tymczasowe przemieszczenie biernej nici siRNA nie wykorzystywanej do rozpoznania docelowej sekwencji. Następnie docelowy RNA jest rozszczepiany w centrum rozpoznanego regionu przez komplementarny do sekwencji kierujący siRNA.
Figura 8: Konstrukty reporterowe i dupleksy siRNA (a) Przedstawiono regiony genów reporterowych lucyferazy ze świetlika (Photinus pyralis) (Ppluc) lub Renilla reniformis (Rr-luc) z plazmidów pGL2-Control, pGL-3-Control i pRL-TK (Promega). Wskazano elementy regulatorowe SV40, promotor kinazy tymidynowej HSV oraz dwa introny (linie). Sekwencja lucyferazy GL3 jest w 95% identyczna z GL2, ale RL jest całkowicie niepodobna do obydwu z nich. Ekspresja lucyferazy z pGL2 jest około dziesięciokrotnie niższa niż z pGL3 w transfekowanych komórkach ssaczych. Region do którego skierowane były dupleksy siRNA wskazano jako czarny słupek poniżej regionu kodującego genów lucyferazy.
(b) Przedstawiono sekwencje sensowną (górna) i antysensowną (dolna) dupleksów siRNA skierowanych do GL2, GL3 i RL lucyferazy. Dupleksy GL2 i GL3 siRNA różnią się tylko trzema jednonukleotydowymi podstawieniami (zaznaczonymi na szaro). W celu niespecyficznej kontroli zsyntetyzowano dupleks z odwróconą sekwencją GL2, invGL2. Dwunukleotydowy jednoniciowy wiszący 3'-koniec 2'-deoksytymidyny wskazano jako TT; uGL2 jest podobna do GL2 siRNA, ale zawiera rybourydynowe jednoniciowe wiszące 3'-końce.
PL 218 876 B1
Figura 9: Interferencja RNA przez dupleksy siRNA
Stosunek docelowej do kontrolnej lucyferazy normalizowano względem kontroli buforowej (bu, czarne słupki); szare słupki wskazują stosunek lucyferazy Photinus pyralis (Pp-luc) GL2 lub GL3 do lucyferazy Renilla reniformis (Rr-luc) RL (lewa oś), białe słupki wskazują stosunek RL do GL2 lub GL3 (prawa oś). Panele a, c, e, g oraz i opisują doświadczenia przeprowadzone z połączeniem plazmidów reporterowych pGL2-Control i pRL-TK, panele b, d, f, h oraz j z plazmidami reporterowymi pGL3Control i pRL-TK. Linię komórkową zastosowaną do doświadczenia interferencji wskazano na górze każdego wykresu. Stosunki Pp-luc/Rr-luc dla kontroli buforowej (bu) wahały się odpowiednio pomiędzy 0,5 a 10 dla pGL2/pRL oraz pomiędzy 0,03 a 1 dla pGL3/pRL, przed normalizacją oraz pomiędzy różnymi badanymi liniami komórkowymi. Wykreślone dane są średnią z trzech niezależnych doświadczeń ± S.D.
Figura 10: Wpływ 21-nt siRNA, 50-pz i 500-pz dsRNA na ekspresję lucyferazy w komórkach
HeLa
Dokładną długość długich dsRNA wskazano poniżej słupków. Panele a, c i e opisują doświadczenia wykonane z plazmidami reporterowymi pGL2-Control i pRL-TK, panele b, d i f z plazmidami reporterowymi pGL3-Control i pRL-TK. Dane są średnią z dwóch niezależnych doświadczeń ± S.D. (a), (b) Absolutna ekspresja Pp-luc, wykreślona w jednostkach umownych luminescencji (skrót j.u.).
(c), (d) ekspresja Rr-luc, wykreślona w arbitralnych jednostkach luminescencji. (e), (f) Stosunek normalizowanej docelowej do kontrolnej lucyferazy. Stosunki aktywności lucyferazy dla dupleksów siRNA normalizowano względem kontroli buforowej (bu, czarne słupki); stosunki luminescencji dla 50- lub 500-pz dsRNA normalizowano względem odpowiednich stosunków obserwowanych dla 50- i 500-pz dsRNA z humanizowanym GFP (hG, czarne słupki). Należy podkreślić, że ogólne różnice sekwencji dsRNA o długości pomiędzy 49 a 484 pz skierowanych do GL2 i GL3 są niewystarczające do nadania specyficzności pomiędzy celami GL2 i GL3 (43-nt nieprzerwana identyczność w segmencie 49 pz, 239-nt najdłuższa nieprzerwana identyczność w segmencie 484 pz).
Figura 11: Zmienność jednoniciowych wiszących 3'-końców w dupleksach 21-nt siRNA (A) Zarys strategii doświadczalnej. Przedstawiono sensowny docelowy mRNA z czapeczką i poliadenylowany oraz przedstawiono względne pozycje sensownych i antysensownych siRNA. Otrzymano osiem serii dupleksów, zgodnie z ośmioma różnymi nićmi antysensownymi. Sekwencje siRNA oraz liczbę nukleotydów jednoniciowego wiszącego końca zmieniano w etapach jednonukleotydowych. (B) Normalizowana względna luminescencja docelowej lucyferazy (Photinus pyralis, Pp-luc) do kontrolnej lucyferazy (Renilla reniformis, Rr-luc) w lizacie embrionów D. melanogaster w obecności 5 nM dsRNA o tępych końcach. Stosunki luminescencji wyznaczone w obecności dsRNA normalizowano względem stosunku uzyskanego dla kontroli buforowej (bu, czarny słupek). Normalizowane stosunki niższe niż 1 wskazują specyficzną interferencję. (C-J) Normalizowane stosunki interferencji dla ośmiu serii 21-nt dupleksów siRNA. Sekwencję dupleksów siRNA przedstawiono powyżej wykresów słupkowych. Każdy wykres przedstawia stosunek interferencji dla zestawu dupleksów utworzonych przed dany wiodący antysensowny siRNA i 5 różnych sensownych siRNA. Liczbę nukleotydów jednoniciowego wiszącego końca (jednoniciowy wiszący 3'-koniec, liczby dodatnie; jednoniciowy wiszący 5'-ko-niec, liczby ujemne) wskazano na osi x. Punkty danych są średnią z co najmniej trzech niezależnych doświadczeń, słupki błędów przedstawiają odchylenia standardowe.
Figura 12: Zmienność długości nici sensownej w dupleksach siRNA (A) Graficzne przedstawienie doświadczenia. Trzy antysensowne nici o długości 21 nt sparowano z ośmioma sensownymi siRNA. siRNA różniły się długością na 3'-końcu. Jednoniciowy wiszący 3'-koniec antysensownego siRNA miał długość 1 nt (B), 2 nt (C) lub 3 nt (D), podczas gdy jednoniciowy wiszący koniec sensownego siRNA różnił się dla każdej serii. Wskazano sekwencje dupleksów siRNA i odpowiadające im stosunki interferencji.
Figura 13: Zmienność długości dupleksów siRNA z zachowanymi dwunukleotydowymi jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami (A) Graficzne przedstawienie doświadczenia. Dupleks siRNA o długości 21-nt ma sekwencję identyczną do przedstawionej na fig. 11H lub 12C. Dupleksy siRNA były wydłużone na 3'-stronie sensownego siRNA (B) lub 5'-stronie sensownego siRNA (C). Wskazano sekwencje dupleksów siRNA i odpowiadające im stosunki interferencji.
Figura 14: Podstawienie grup 2'-hydroksylowych reszt rybozy w siRNA
PL 218 876 B1
Grupy 2'-hydroksylowe (OH) w niciach dupleksów siRNA zostały zastąpione przez 2'-deoksy (d) lub 2'-O-metyl (Me). Dwu i czteronukleotydowe podstawienia 2'-deoksy na 3'-końcach wskazano odpowiednio jako 2-nt d i 4-nt d. Reszty urydyny zastąpiono 2'-deoksytymidyną.
Figura 15: Mapowanie rozszczepiania sensownego i antysensownego RNA przez dupleksy siRNA o długości 21-nt z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami o długości 2-nt (A) Graficzne przedstawienie znakowanych w czapeczce 32p (gwiazdka) sensownych i antysensownych docelowych RNA oraz dupleksów siRNA. Pozycję rozszczepiania sensownego i antysensownego docelowego RNA wskazano przez trójkąty odpowiednio na górze i poniżej dupleksów siRNA. (B) Mapowanie miejsc rozszczepiania docelowego RNA. Po dwóch godzinach inkubacji 10 nM docelowego RNA z 100 nM dupleksu siRNA w lizacie embrionów D. melanogaster, znakowany w 5'-czapeczce substrat i 5'-produkty rozszczepiania rozdzielono na żelu do sekwencjonowania. Znaczniki długości wytworzono przez częściowe strawienie RNazą T1 (T1) i częściową hydrolizę zasadową (OH-) docelowych RNA. Grube linie po lewej stronie obrazów wskazują region pokrywany przez nici siRNA 1 i 5 o tej samej orientacji co docelowa.
Figura 16: 5'-koniec kierującego siRNA definiuje pozycję rozszczepiania docelowego RNA (A, B) Graficzne przedstawienie strategii doświadczalnej. Antysensowny siRNA był taki sam we wszystkich dupleksach siRNA, ale nić sensowna różniła się od 18- do 25-nt przez zmiany na 3'-końcu (A) lub od 18- do 23-nt przez zmiany na 5'-końcu (B). Pozycję rozszczepiania sensownego i antysensownego docelowego RNA wskazano trójkątami odpowiednio nad i poniżej dupleksów siRNA. (C, D) Analiza rozszczepiania docelowego RNA przy zastosowaniu znakowanych w czapeczce sensownych (górny panel) lub antysensownych (dolny panel) docelowych RNA. Pokazano tylko 5'-produkty rozszczepiania znakowane w czapeczce. Przedstawiono sekwencje dupleksów siRNA oraz długość sensownych nici siRNA oznaczono na górze panelu. Linia kontrolna oznaczona kreską w panelu (C) przedstawia docelowy RNA inkubowany przy braku siRNA. Znaczniki opisano dla fig. 15. Strzałki w (D), dolny panel, wskazują miejsca rozszczepiania docelowego RNA różniące się o 1 nt.
Figura 17: Zmienność sekwencji jednoniciowych wiszących 3'-końców dupleksów siRNA
Zmieniano sekwencję i skład dwunukleotydowego jednoniciowego wiszącego 3'-końca (NN, szary) jak wskazano (T, 2'- deoksytymidyna, dG, 2'-deoksyguanozyna; gwiazdka, dupleks siRNA typu dzikiego). Normalizowane stosunki interferencji wyznaczono jak opisano dla fig. 11. Sekwencja typu dzikiego jest taka sama jak przedstawiona na fig. 14.
Figura 18: Specyficzność rozpoznawania docelowej sekwencji
Przedstawiono sekwencje błędnie sparowanych dupleksów siRNA, zmodyfikowane segmenty sekwencji lub pojedyncze nukleotydy wyróżniono na szaro. Dupleks referencyjny (ref.) oraz dupleksy siRNA od 1 do 7 zawierały dwunukleotydowe jednoniciowe wiszące końce 2'-deoksytymidyny. Wydajność wyciszania przez zmodyfikowany tymidyną dupleks referencyny była porównywalna z sekwencją typu dzikiego (fig. 17). Normalizowane stosunki interferencji wyznaczono w sposób opisany dla fig. 11.
Figura 19: Zmienność długości dupleksów siRNA z ustalonymi 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami
Dupleksy siRNA wydłużano po 3'-stronie sensownego siRNA (A) lub 5'-stronie sensownego siRNA (B). Wskazano sekwencje dupleksów siRNA i odpowiednie stosunki interferencji. Dla komórek HeLa SS6, dupleksy siRNA (0,84 μg) skierowane do GL2 lucyferazy transfekowano razem z plazmidami pGL2-Control i pRL-TK. Dla porównania przedstawiono aktywności RNAi in vitro dupleksów siRNA badane w lizacie D. melanogaster.
P r z y k ł a d 1
Interferencja RNA pośredniczona przez małe syntetyczne cząsteczki RNA
1.1. Procedury doświadczalne
1.1.1 RNAi in vitro
RNAi in vitro i preparaty lizatów wykonano w sposób wcześniej opisany (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000). Dla optymalnej regeneracji ATP krytyczne jest zastosowanie świeżo rozpuszczonej kinazy kreatynowej (Roche). Testy translacji RNAi (fig. 1) prowadzono z dsRNA w stężeniu 5 nM oraz przy wydłużonym czasie wstępnej inkubacji 15 minut w 25°C przed dodaniem transkrybowanych in vitro, z czapeczką i poliadenylowanych reporterowych mRNA Pp-luc i Rr-luc. Inkubację kontynuowano przez 1 godzinę i względną ilość białka Pp-luc i IB Rr-luc analizowano za pomocą podwójnego testu lucyferazy (Promega) w luminometrze Monolight 3010C (PharMingen).
PL 218 876 B1
1.1.2 Synteza RNA
Do transkrypcji in vitro RNA z matryc PCR niosących sekwencje promotorowe T7 lub SP6 zastosowano znane procedury, patrz przykładowo (Tuschl i in., 1998). Syntetyczny RNA otrzymano stosując fosforoamidyny Expedite RNA (Proligo). 3'-adaptorowy oligonukleotyd zsyntetyzowano stosując dimetoksytritylo-1,4-benzenodimetanolo-sukcynylo-aminopropylo-CPG. Oligorybonukleotydy odbezpieczano w 3 ml mieszaniny 32% amoniak/etanol (3/1) przez 4 godziny w 55°C (Expedite RNA) lub 16 godzin w 55°C (3'- i 5'-adaptorowe DNA/RNA chimeryczne oligonukleotydy), a następnie desililowano i oczyszczono na żelu jak wcześniej opisano (Tuschl i in., 1993). Transkrypty RNA do otrzymywania dsRNA zawierające jednoniciowe wiszące 3'-końce wytworzono z matryc PCR, które zawierały promotor T7 w sensownym kierunku i promotor SP6 w antysensownym kierunku. Matrycę do transkrypcji dla sensownego i antysensownego docelowego RNA amplifikowano metodą PCR z użyciem GCGTAATACGACTCACTATAGAACAATTGCTTTTACAG (podkreślony promotor T7) jako startera 5' i ATTTAGGTGACACTATAGGCATAAAGAATTGAAGA (podkreślony promotor SP6) jako startera 3', oraz linearyzowanego plazmidu Pp-luc (sekwencja pGEM-luc) (Tuschl i in., 1999) jako matrycy; transkrybowany z T7 sensowny RNA miał długość 177 nt z sekwencją Pp-luc pomiędzy pozycjami 113-273 względem kodonu start oraz 17-nt dopełnieniem sekwencji promotora SP6 na 3'-końcu. Transkrypty do wytworzenia dsRNA z tępymi końcami otrzymano przez transkrypcję z dwóch różnych produktów PCR, które zawierały tylko pojedynczą sekwencję promotorową.
Hybrydyzację dsRNA przeprowadzono stosując ekstrakcję mieszaniną fenol/chloroform. Sensowny i antysensowny RNA w równomolowych stężeniach (50 nM do 10 μM, zależnie od długości dostępnej ilości) w 0,3 M NaOAc (pH 6) inkubowano przez 30 sekund w 90°C, a następnie wyekstrahowano w temperaturze pokojowej równą objętością mieszaniny fenol/chloroform, po czym wyekstrahowano chloroformem w celu usunięcia pozostałego fenolu. Powstały dsRNA wytrącono przez dodanie 2,5-3 objętości etanolu. Osad rozpuszczono w buforze lizującym (100 mM KCl, 30 mM HEPESKOH, pH 7,4, 2 mM Mg(OAc)2) i jakość dsRNA weryfikowano znaną metodą elektroforezy na żelu agarozowym w buforze 1 x TAE. DsRNA o długości 52 pz z 17-nt i 20-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem (fig. 6) hybrydyzowano drogą inkubacji przez 1 minutę w 95°C, a następnie szybkie ochłodzenie do 70°C i powolne chłodzenie do temperatury pokojowej przez okres trzech godzin (reakcja hybrydyzacji w objętości 50 μ!, stężenie nici 1 pM, 300 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, pH 7,5). Następnie dsRNA wyekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform, wytrącano etanolem i rozpuszczano w buforze lizującym.
Transkrypcję wewnętrznie znakowanych 32P RNA stosowanych do otrzymywania dsRNA (fig. 2 i 4) prowadzono stosując 1 mM ATP, CTP, GTP, 0,1 lub 0,2 mM UTP oraz 0,2-0, 3 μM-32p-UTP (3000 Ci/mmol) lub w odpowiednim stosunku znakowane radioaktywnie trójfosforany nukleozydów, inne niż UTP. Znakowanie czapeczki w docelowych RNA prowadzono jak opisano poprzednio. Docelowe RNA były oczyszczane na żelu po znakowaniu czapeczki.
1.1.3 Mapowanie miejsc rozszczepiania
Znane reakcje RNAi prowadzono przez wstępną inkubację 10 nM dsRNA przez 15 minut, a następnie dodawano 10 nM znakowanego w czapeczce docelowego RNA. Reakcję zatrzymywano po godz. (fig. 2A) lub 2,5 godz. inkubacji (fig. 5B i 6B) przez podziałanie proteinazą K (Tuschl i in., 1999). Następnie próbki analizowano w 8 lub 10% żelach do sekwencjonowania. 21- i 22-nt syntetyczne dupleksy RNA zastosowano w końcowym stężeniu 100 nM (fig. 5B).
1.1.4 Klonowanie ~21-nt RNA
21-nt RNA otrzymano przez inkubację znakowanego radioaktywnie dsRNA w lizacie Drosophila przy braku docelowego RNA (reakcja 200 μ!, 1 godz. inkubacji, 50 nM dsP111 lub 100 nM dsP52 lub dsP39). Następnie mieszaninę reakcyjną potraktowano proteinazą K (Tuschl i in., 1999) i produkty obróbki dsRNA rozdzielono w 15% denaturującym żelu poliakrylamidowym. Wycięto prążek zawierający zakres wielkości co najmniej 18 do 24 nukleotydów, wyeluowano w 0,3 M NaCl przez noc w 4°C w silikonowanych probówkach. RNA odzyskano przez wytrącanie etanolem i defosforylowano (reakcja 30 μΧ 30 minut, 50°C, 10 U fosfatazy alkalicznej, Roche). Reakcję zatrzymano przez ekstrakcję mieszaniną fenol/chloroform i RNA wytrącono etanolem. Następnie 3'-adaptorowy oligonukleotyd (pUUUaaccgcatccttctcx: duże litery, RNA; małe litery, DNA; p, fosforan; x, 4-hydroksymetylobenzyl) zligowano z defosforylowanym ~21-nt RNA (reakcja 20 μ^ 30 minut, 37°C, 5 μΜ 3'-adapter, 50 mM Tris-HCl, pH 7,6, 10 mM MgCl2, 0,2 mM ATP, 0,1 mg/ml acetylowana BSA, 15% DMSO, 25 U ligazy RNA T4, Amersham-Pharmacia) (Pan i Uhlenbeck, 1992). Reakcję ligacji zatrzymano przez dodanie równej objętości mieszaniny zatrzymującej 8 M mocznik/50 mM EDTA i bezpośrednio naniesiono na
PL 218 876 B1
15% żel. Wydajności ligacji były wyższe niż 50%. Produkt ligacji odzyskano z żelu i 5'-fosforylowano (reakcja 20 μ|, 30 minut, 37°C, 2 mM ATP, 5 U kinazy polinukleotydowej T4, NEB). Reakcje fosforylacji zatrzymano przez ekstrakcję mieszaniną fenol/chloroform i RNA odzyskano przez wytrącenie etanolem. Następnie 5'-adapter (tactaatacgactcactAAA: duże litery, RNA; małe litery, DNA) zligowano z fosforylowanym produktem ligacji jak opisano powyżej. Nowy produkt ligacji oczyszczono w żelu i wyeluowano z bloczku żelu w obecności startera do odwrotnej transkrypcji (GACTAGCTGGAATTCAAGGATGCGGTTAAA: wytłuszczono miejsce dla Eco RI) zastosowanego jako nośnik. Po odwrotnej transkrypcji (reakcja 15 μ|, 30 minut, 42°C, 150 U odwrotnej transkryptazy Super-script II, Life Technologies) przeprowadzono PCR stosując jako starter 5' CAGCCAACGGAATTCATACGACTCACTAAA (wytłuszczono miejsce dla Eco RI) oraz starter 3' RT. Produkt PCR oczyszczono przez ekstrakcję mieszaniną fenol/chloroform i wytrącono etanolem. Następnie produkt PCR strawiono Eco RI (NEB) i konkatameryzowano z użyciem ligazy DNA T4 (wysokie stężenie, NEB). Konkatamery o wielkości z zakresu 200-800 pz rozdzielono w żelu agarozowym o niskim punkcie topnienia, odzyskano z żelu przez zwykłą procedurę rozpuszczenia i ekstrakcji fenolem oraz wytrącono etanolem. Niesparowane końce wypełniono przez inkubację z polimerazą Taq w zwykłych warunkach przez 15 minut w 72°C i produkt DNA bezpośrednio wligowano do wektora pCR2. 1-TOPO stosując zestaw do klonowania TOPO TA (Invitrogen). Kolonie przeszukiwano metodą PCR z użyciem odwrotnych starterów do sekwencjonowania M13-20 i M13. Produkty PCR bezpośrednio zsekwencjonowano w zwykły sposób (Sequence Laboratories Gottingen GmbH, Niemcy). Średnio otrzymano cztery do pięciu 21-merowych sekwencji na klon.
1.1.5 Analiza 2D-TLC
Trawienie nukleazą P1 znakowanych radioaktywnie, oczyszczonych na żelu siRNA i 2D-TLC prowadzono w opisany sposób (Zamore i in., 2000). Trawienie nukleazą T2 przeprowadzono w 10 μl reakcjach przez 3 godziny w 50°C w 10 mM octanie amonu (pH 4,5) stosując 2 μ9^ nośnikowego tRNA i 30 U rybonukleazy T2 (Life Technologies). Migrację nie radioaktywnych wzorców wyznaczono przez cieniowanie UV. Tożsamość nukleozydo-3',5'-disfosforanów potwierdzono przez wspólną migrację produktów trawienia T2 z wzorcami otrzymanymi przez 5'-32p-fosforylację dostępnych w han_32 _ dlu 3'-monofosforanów nuklezydów z użyciem γ_ p_ATP i kinazy polinukelotydowej T4 (dane nie prezentowane).
1.2 Wyniki i dyskusja
1.2.1 Długość wymagana do obróbki dsRNA do 21- i 22-nt fragmentów RNA
Lizaty otrzymane z syncytialnych embrionów D. melanogaster przeprowadzają RNAi in vitro dostarczając nowe narzędzie do biochemicznej analizy mechanizmu RNAi (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000). In vitro i in vivo analiza długości dsRNA wymaganej do RNAi ujawniła, że krótkie dsRNA (< 150 pz) są mniej skuteczne niż dłuższe dsRNA w degradacji docelowego mRNA (Caplen i in., 2000; Hammond i in., 2000; Ngo i in., 1998); Tuschl i in., 1999). Powody zmniejszenia wydajności degradacji mRNA nie są zrozumiałe. Zatem zbadano dokładne wymagania długości dsRNA do degradacji RNA w optymalizowanych lizatach Drosophila (Zamore i in., 2000). Zsyntetyzowano kilka serii dsRNA i skierowano je przeciw reporterowemu RNA lucyferazy świetlika (Pp-luc). Specyficzną supresję ekspresji docelowego RNA monitorowano w podwójnym teście lucyferazy (Tuschl i in., 1999) (fig. 1A i 1B). Stwierdzono specyficzne zahamowanie ekspresji docelowego RNA dla dsRNA zaledwie o 38 pz, ale dsRNA o 29-36 pz nie były skuteczne w tym procesie. Efekt ten był niezależny od pozycji docelowej sekwencji i stopień hamowania ekspresji mRNA Pp-luc był skorelowany z długością dsRNA, tj. długie dsRNA były skuteczniejsze niż krótkie dsRNA.
Zasugerowano, że 21- do 23-nt fragmenty RNA wytworzone przez obróbkę dsRNA pośredniczą w interferencji RNA i kosupresji (Hamilton i Baulcombe, 1999; Hammond i in., 2000; Zamore i in., 2000). Zanalizowano zatem szybkość tworzenia 21- do 23-nt fragmentów dla grupy dsRNA o wielkości w zakresie 501-29 pz. Tworzenie 21- - 23-nt fragmentów w lizacie Drosophila (fig. 2) było łatwo wykrywalne dla dsRNA o długości 39 - 501 pz, ale było istotnie opóźnione dla dsRNA o długości 29 pz. Ta obserwacja zgadza się z rolą 21- - 23-nt fragmentów w kierowaniu rozszczepianiem mRNA i dostarcza wyjaśnienie dla braku RNAi przez dsRNA o długości 30 pz. Zależność tworzenia 21- - 23-merów od długości prawdopodobnie odzwierciedla istotny biologicznie mechanizm kontrolny zapobiegający niepożądanej aktywacji RNAi przez krótkie struktury wewnątrzcząsteczkowe ze sparowanymi zasadami normalnych komórkowych RNA.
1.2.2 DsRNA o długości 39 pz pośredniczy w rozszczepianiu docelowego RNA w pojedynczym miejscu
PL 218 876 B1
Dodanie dsRNA i docelowego RNA z 5'-czapeczką do lizatu Drosophila wywołuje specyficzną dla sekwencji degradację docelowego RNA (Tuschl i in., 1999). Docelowy mRNA jest rozszczepiany tylko w regionie identyczności dsRNA i wiele z docelowych miejsc rozszczepiania było rozdzielonych przez 21-23 nt (Zamore i in., 2000). Zatem oczekiwano, że liczba miejsc rozszczepiania dla danego dsRNA mniej więcej odpowiada długości dsRNA podzielonej przez 21. Zmapowano docelowe miejsca rozszczepiania na sensownym i antysensownym docelowym RNA, który był znakowany radioaktywnie w 5'-czapeczce (Zamore i in., 2000) (fig. 3A i 3B). Trwałe 5'-produkty rozszczepiania rozdzielono na żelu do sekwencjonowania i pozycję rozszczepiania wyznaczono przez porównanie z drabinką z częściowego trawienia RNazą T1 i alkalicznej hydrolizy docelowego RNA.
Zgodnie z wcześniejszą obserwacją (Zamore i in., 2000), wszystkie docelowe miejsca rozszczepiania RNA były umiejscowione w regionie identyczności dsRNA. Sensowny i antysensowny docelowy RNA był rozszczepiany tylko raz przez dsRNA o długości 39 pz. Każde miejsce rozszczepiania było umiejscowione 10 nt od 5'-końca regionu pokrytego przez dsRNA (fig. 3B). DsRNA o długości 52 pz, który dzieli taki sam 5'-koniec z dsRNA o długości 39 pz, wytwarza to samo miejsce rozszczepiania na nici sensownej, umiejscowione 10 nt od 5'-końca regionu identyczności z dsRNA, dodatkowo do dwóch słabszych miejsc rozszczepiania 23 i 24 nt w dół od pierwszego. Nić antysensowna była rozszczepiana tylko raz, również 10 nt od 5'-końca regionu pokrytego przez odpowiadający mu dsRNA. Mapowanie miejsc rozszczepiania dla dsRNA o długości 38-49 pz przedstawione na fig. 1 pokazuje, że pierwsze i dominujące miejsce rozszczepiania było zawsze umiejscowione 7- do 10-nt w dół regionu pokrytego przez dsRNA (dane nie prezentowane). Sugeruje to, że punkt rozszczepiania docelowego RNA jest zdeterminowany przez koniec dsRNA i może sugerować, że obróbka do 0 21- do 23merów zaczyna się od końców dupleksu.
Miejsca rozszczepiania na sensownym i antysensownym docelowym RNA dla dłuższego dsRNA o długości 111 pz były znacznie częstsze niż przewidywane i większość z nich występowała w zgrupowaniach rozdzielonych przez 20- do 23-nt (fig. 3A i 3B). Tak jak dla krótszych dsRNA, pierwsze miejsce rozszczepiania na docelowej nici sensownej było umiejscowione 10 nt od 5'-końca regionu pokrytego przez dsRNA, a pierwsze miejsce rozszczepiania na nici docelowej antysensownej było umiejscowione 9 nt od 5'-końca regionu pokrytego przez dsRNA. Nie jest jasne co powoduje to nieuporządkowane rozszczepianie, ale możliwe jest, że dłuższe dsRNA mogą być obrabiane nie tylko od końców, ale także wewnętrznie lub istnieją pewne determinanty specyficzności dla obróbki dsRNA, które jeszcze nie zostały zrozumiane. Pewne nieregularności odległości 21- do 23-nt zostały wcześniej zauważone (Zamore i in., 2000). Aby lepiej zrozumieć molekularne podstawy obróbki dsRNA i rozpoznawania RNA, zdecydowano się zanalizować sekwencje fragmentów 21- do 23-nt wytworzonych przez obróbkę dsRNA o długości 39, 52 i 111 pz w lizacie Drosophila.
1.2.3 dsRNA ulega obróbce do RNA o długości 21 i 22 nt według mechanizmu typu RNazy III
Aby scharakteryzować fragmenty 21-23-nukleotydowe RNA zbadano 5'- i 3'-końce fragmentów RNA. Utlenienie nadjodanem oczyszczonych w żelu 21- do 23-nt RNA, a następnie β-eliminacja ujawniły obecność końcowych grup 2' i 3'-hydroksylowych. 21- do 23-mery odpowiadały także na traktowanie fosfatazą alkaliczną, co wskazywało na obecność 5'-końcowej grupy fosforanowej. Obecność końców 5'-fosforanowego i 3'-hydroksylowego sugeruje, że dsRNA może ulegać obróbce z wykorzystaniem aktywności enzymatycznej podobnej do RNazy III E. coli (prace przeglądowe, patrz (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982)).
Bezpośrednie klonowanie 21- do 23-nt fragmentów RNA przeprowadzono przez ligację 3'- i 5'-adapterowego oligonukleotydu do oczyszczonych 21- do 23-merów z użyciem ligazy RNA T4. Produkty ligacji poddano odwrotnej trankrypcji, amplifikowanej PCR, konkatameryzowano, sklonowano i zsekwencjonowano. Ponad 220 krótkich RNA zsekwencjonowano z reakcji obróbki dsRNA o długości 39, 52 i 111 pz (fig. 4A). Stwierdzono następujący rozkład długości: 1% 18 nt, 5% 19 nt, 12% 20 nt, 45% 21 nt, 28% 22 nt, 6% 23 nt i 2% 24 nt. Analiza sekwencji 5'-końcowego nukleotydu obrabianych fragmentów wykazała, że oligonukleotydy z 5'-guanozyną były mniej reprezentowane. To odchylenie zostało najprawdopodobniej wprowadzone przez ligazę RNA T4, która odróżnia 5'-fosforylowaną guanozynę jako oligonukleotyd donorowy; nie zaobserwowano istotnych odchyleń na 3'-końcu. Wiele z ~21-nt fragmentów pochodziło z 3'-końców sensownej lub antysensownej nici dupleksów, włącznie z 3'-nukleotydami pochodzącymi z niezależnej od matrycy addycji nukleotydów podczas syntezy RNA z użyciem polimerazy RNA T7. Należy podkreślić, że sklonowano także istotną liczbę endogennych RNA ~21 nt Drosophila, niektóre z LTR i nie-LTR retrotranspozonów (dane nie prezentowane). Jest to zgodne z możliwą rolą RNAi w wyciszaniu transpozonów.
PL 218 876 B1 ~21 nt RNA występują w zebranych grupach (fig. 4A), które pokrywają całe sekwencje dsRNA. Najwidoczniej reakcja obróbki przecina dsRNA zostawiając lepkie 3'-końce, co jest inną charakterystyczną cechą rozszczepiania RNazą III. W przypadku dsRNA o długości 39 pz znaleziono dwa skupiska ~21 nt RNA dla każdej nici stanowiącej dsRNA-włącznie z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami, ale tylko jedno miejsce rozszczepiania wykryto na sensownej i antysensownej nici docelowej (fig. 3A i 3B). Gdyby ~21 nt fragmenty były obecne jako jednoniciowy kierujący RNA w kompleksie pośredniczącym w degradacji mRNA, możnaby założyć, że istnieją co najmniej dwa docelowe miejsca rozszczepiania, ale to nie występowało. Sugeruje to, że ~21 nt RNA mogą być obecne w formie dwuniciowej w kompleksie endonukleazowym, ale że tylko jedna z nici może być użyta do rozpoznania i rozszczepiania docelowego RNA. Używanie tylko jednej z ~21 nt nici do rozszczepiania docelowego RNA można łatwo wyznaczyć przez orientację, w której ~21 nt dupleks jest związany z kompleksem nukleazowym. Orientacja ta jest definiowana przez kierunek, w którym jest obrabiany oryginalny dsRNA.
~21-merowe skupiska dla dsRNA o długości 52 pz i 111 pz są znacznie gorzej zdefiniowane w porównaniu z dsRNA o długości 39 pz. Skupiska są rozrzucone w obszarach 25- do 30-nt, najprawdopodobniej reprezentujących kilka różnych subpopulacji ~21 nt dupleksów, a zatem pośredniczącym w rozszczepianiu docelowego RNA w kilku sąsiadujących miejscach. Te regiony nadal są głównie rozdzielone przez przerwy 20 do 23 nt. Reguły decydujące o tym, jak normalne dsRNA mogą być obrabiane do ~21-nt fragmentów, nie są dotychczas dobrze rozumiane, ale wcześniej obserwowano, że około 21- do 23-nt przerwa pomiędzy miejscami rozszczepiania może zostać zmieniona przez serię urydyn (Zamore i in., 2000). Specyficzność rozszczepiania dsRNA przez RNazę III z E. coli wydaje się być głównie kontrolowana przez antydeterminanty, tj. wykluczanie pewnych specyficznych par zasad w danych pozycjach względem miejsca rozszczepiania (Zhang i Nicholson, 1997).
Aby zbadać czy w obrabianych ~21-nt fragmentach były obecne modyfikacje cukru, zasady lub czapeczki, inkubowano znakowany radioaktywnie dsRNA Ppluc o długości 505 pz w lizacie przez 1 godzinę, wyizolowano produkty ~21-nt i strawiono nukleazami P1 lub T2 do mononukleotydów. Następnie mieszaninę nukleotydową analizowano metodą cienkowarstwowej chromatografii 2D (fig. 4B). Żaden z czterech naturalnych rybonukleotydów nie był modyfikowany, co wskazało trawienie P1 lub T2. Wcześniej analizowano przeprowadzanie adenozyny w inozynę w -21-nt fragmentach (po 2 godzinach inkubacji) i wykryto niewielki stopień (< 0,7%) deaminacji (Zamore i in., 2000); krótsza inkubacja w lizacie (1 godzina) zmniejszyła tą frakcję inozyny do ledwie wykrywalnych poziomów. RNaza T2, która rozszczepia 3' stronę wiązania fosfodiestrowego, wytwarza 3'-fosforan i 3',5'-difosforan nukleozydu, co wskazuje na obecność 5'-końcowego monofosforanu. Wykryto wszystkie cztery 35'-difosforany nukleozydu, co wskazuje na to, że wiązanie międzynukleotydowe zostało rozszczepione z niewielką specyficznością dla sekwencji lub przy braku tej specyficzności. W skrócie, -21-nt fragmenty były niezmodyfikowane i wytwarzane z dsRNA, tak, że 5'-monofosforany i 3'-hydroksyle były obecne na 5'- końcu.
1.2.4 Syntetyczne 21- i 22-nt RNA pośredniczą w rozszczepianiu docelowego RNA
Analiza produktów obróbki dsRNA wskazała, że ~21-nt fragmenty są wytwarzane w reakcji o wszystkich cechach charakterystycznych dla reakcji rozszczepiania RNazą III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982). RNaza III wykonuje dwa nierównomierne cięcia w obu niciach dsRNA, zostawiając jednoniciowe wiszące 3'-końce o długości około 2 nt. Chemicznie zsyntetyzowano 21- i 22-nt RNA, o sekwencji identycznej z pełnymi sklonowanymi fragmentami -21-nt i zbadano ich zdolność do kierowania degradacją docelowego RNA (fig. 5A i 5B). 21- i 22-nt dupleksy RNA inkubowano w stężeniach 100 nM w lizacie, dziesięciokrotnie wyższych stężeniach niż dla kontrolnego dsRNA o długości 52 pz. W tych warunkach rozszczepianie docelowego RNA było łatwo wykrywalne. Obniżenie stężenia 21- i 22-nt dupleksów z 100 do 10 nM nadal wywoływało rozszczepianie docelowego RNA. Jednakże podwyższenie stężenia dupleksu z 100 nM do 1000 nM nie zwiększało dalej rozszczepiania docelowego RNA, prawdopodobnie ze względu na limitujący czynnik białkowy w lizacie.
W odróżnieniu od dsRNA o długości 29 lub 30 pz, które nie kierowały RNAi, 21- i 22-nt dsRNA z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami o długości 2 do 4 nt kierowały wydają degradacją docelowego RNA (dupleksy 1, 3, 4, 6, fig. 5A i 5B). 21- lub 22-nt dsRNA z tępymi końcami (dupleksy 2, 5 i 7, fig. 5A i 5B) miały obniżoną zdolność degradacji docelowego RNA, co wskazuje, że jednoniciowe wiszące 3'-końce są krytyczne do rekonstytucji kompleksu RNA-nukleaza białkowa. Jednoniciowe wiszące końce mogą być niezbędne do wiązania z wysokim powinowactwem ~21-nt dupleksu ze składPL 218 876 B1 nikami białka. Pomimo, że 5'-końcowy fosforan był obecny po obróbce dsRNA, nie był on wymagany do kierowania rozszczepianiem docelowego RNA i brak go było w krótkich syntetycznych RNA.
Syntetyczne 21- i 22-nt dupleksy pośredniczą w rozszczepianiu sensownych, a także antysensownych docelowych RNA w regionie pokrywanym przez krótki dupleks. Jest to ważny wynik, jeśli się weźmie pod uwagę, że dsRNA o długości 39 pz, który tworzy dwie pary podzbiorów fragmentów ~21-nt (fig. 2), rozszczepiał sensowny i antysensowny docelowy RNA tylko raz, a nie dwa razy. Zinterpretowano ten wynik sugerując, że tylko jedna z dwóch nici obecna w dupleksie ~21-nt jest zdolna do pośredniczenia w rozszczepianiu docelowego RNA, oraz że orientacja ~21-nt dupleksu w kompleksie nukleazowym jest wyznaczona przez początkowy kierunek obróbki dsRNA. Jednakże obecność perfekcyjnie obrobionego ~21-nt dupleksu w systemie in vitro pozwala na wytworzenie aktywnego, specyficznego dla sekwencji kompleksu nukleazowego z dwoma możliwymi orientacjami symetrycznego dupleksu RNA. Powoduje to rozszczepianie sensownego, a także antysensownego docelowego RNA w regionie identyczności z 21-nt dupleksem RNA.
Docelowe miejsce rozszczepiania jest umiejscowione 11 lub 12 nt w dół od pierwszego nukleotydu, który jest komplementarny do 21- lub 22-nt sekwencji kierującej, tj. miejsce rozszczepiania leży w pobliżu centrum regionu pokrytego przez 21- lub 22-nt RNA (fig. 4A i 4B). Przesunięcie nici sensownej dupleksu 22-nt o dwa nukleotydy (porównaj dupleksy 1 i 3 na fig. 5A) przesuwało miejsce rozszczepiania tylko antysensownego docelowego RNA o dwa nukleotydy. Przesunięcie obu nici sensownej i antysensownej o dwa nukleotydy przesuwało obydwa miejsca rozszczepiania o dwa nukleotydy (porównaj dupleksy 1 i 4). Przewiduje się, że możliwe będzie zaprojektowanie pary 21- lub 22-nt RNA tak, aby rozszczepić docelowy RNA w prawie dowolnej danej pozycji.
Specyficzność rozszczepiania docelowego RNA kierowanego przez 21- i 22-nt RNA wydaje się być bardzo dobra, gdyż nie wykryto nieprawidłowych miejsc rozszczepiania (fig. 5B). Należy jednak zauważyć, że nukleotydy obecne w jednoniciowym wiszącym 3'-końcu 21- i 22-nt dupleksu RNA mogą uczestniczyć w mniejszym stopniu w rozpoznaniu substratu niż nukleotydy w pobliżu miejsca rozszczepiania. Jest to oparte na obserwacji, że najbliższy 3'-końca nukleotyd w jednoniciowym wiszącym 3' końcu aktywnych dupleksów 1 lub 3 (fig. 5A) nie jest komplementarny do docelowego RNA. Można teraz łatwo wykonać szczegółową analizę specyficzności RNAi z użyciem syntetycznych 21- i 22-ny RNA.
W oparciu o potwierdzenie, że syntetyczne 21- i 22-nt RNA z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami pośredniczą w interferencji RNA, zaproponowano nazwanie ~21-nt RNA „krótkimi interferującymi RNA lub siRNA, a odpowiedni kompleks RNA-białko „cząstką małej interferującej rybonukleoproteiny lub siRNP.
1.2.5 Jednoniciowe wiszące 3'-końce o długości 20 nt na krótkich dsRNA hamują RNAi
Wykazano, że krótkie dsRNA o tępych końcach wydają się ulegać obróbce od końców dsRNA. Podczas badania zależności RNAi od długości dsRNA, zanalizowano także dsRNA z jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami o 17- do 20-nt i stwierdzono z zaskoczeniem, że były one słabsze niż dsRNA z tępymi końcami. Hamujące działanie długich 3'-końców było szczególnie widoczne w przypadku dsRNA o długości do 100 pz, ale był mniej dramatyczny dla dłuższych dsRNA. Efekt ten nie wynikał z wadliwego tworzenia dsRNA, co stwierdzono na podstawie analizy w żelu natywnym (dane nie prezentowane). Zbadano, czy działanie hamujące długich jednoniciowych wiszących 3'-końców może być wykorzystane jako narzędzie do skierowania obróbki dsRNA do tylko jednego z dwóch końców krótkiego dupleksu RNA.
Zsyntetyzowano cztery kombinacje modelowego dsRNA o długości 52 pz, z tępymi końcami, z wydłużeniem 3'-końca tylko na nici sensownej, z wydłużeniem 3'-końca tylko na nici antysensownej oraz z dwoma wydłużeniami 3'-końca na obu niciach, po czym zmapowano miejsca rozszczepiania docelowego RNA po inkubacji w lizacie (fig. 6A i 6B). Pierwsze i dominujące miejsce rozszczepiania docelowej nici sensownej było tracone, gdy 3'-koniec nici antysensownej dupleksu był wydłużany i na odwrót, silne miejsce rozszczepiania docelowej nici antysensownej było tracone, gdy 3'-koniec nici sensownej dupleksu był wydłużany. Wydłużenia 3'-końca na obu niciach sprawiały, że dsRNA o długości 52 pz był praktycznie nieaktywny. Jednym wytłumaczeniem inaktywacji dsRNA przez ~20-nt wydłużenia na 3'-końcach może być asocjacja białek wiążących jednoniciowy RNA, która może zakłócać asocjację jednego z czynników obróbki dsRNA na tym końcu. Wynik ten zgadza się także z modelem, w którym tylko jedna nić dupleksu siRNA w złożonym siRNP jest zdolna do kierowania rozszczepianiem docelowego RNA. Orientacja nici kierującej rozszczepianiem RNA jest zdefiniowana przez kierunek reakcji obróbki dsRNA. Jest prawdopodobne, że obecność lepkich 3'-końców może ułatwiać
PL 218 876 B1 składanie kompleksu obróbki. Blok na 3'-końcu nici sensownej pozwala tylko na obróbkę dsRNA z przeciwstawnego 3'-końca nici antysensowej. Powoduje to z koleji tworzenie kompleksów siRNP, w których tylko nić antysensowna dupleksu siRNA jest zdolna do kierowania rozszczepianiem sensownego docelowego RNA. To samo dotyczy odwrotnej sytuacji.
Słabiej wyrażony efekt hamujący długich wydłużeń 3'-końca w przypadku dłuższych dsRNA (> 500 pz, dane nie prezentowane) sugeruje, że długie dsRNA mogą także zawierać wewnętrzne sygnały obróbki dsRNA lub mogą wspólnie ulegać obróbce ze względu na połączenie wielu czynników rozszczepiających.
1.2.6 Model kierowanego dsRNA rozszczepiania mRNA
Nowe dane biochemiczne uaktualniają model, zgodnie z którym dsRNA skierowuje mRNA do rozłożenia (fig. 7). Dwuniciowy RNA ulega najpierw obróbce do krótkich dupleksów RNA głównie o długości 21 i 22 nt oraz z lepkimi 3'-końcami podobnie do reakcji typu RNazy III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1982). W oparciu o 21- do 23-nt długość fragmentów obrabianego RNA wcześniej przypuszczano, że aktywność typu RNazy III może uczestniczyć w RNAi (Bass, 2000). Ta hipoteza jest dalej potwierdzona przez obecność 5'-fosforanów i 3'-hydroksyli na końcu siRNA, co obserwowano dla produktów reakcji RNazy III (Dunn, 1982; Nicholson, 1999). Wykazano, że bakteryjna RNaza III i eukariotyczne homologi Rnt1p z S. cerevisiae i Pac1p z S. pombe działają w obróbce rybosomalnego RNA, a także snRNA i snoRNA (patrz np. Chanfreau i in., 2000).
Niewiele wiadomo na temat biochemii homologów RNazy III z roślin, zwierząt lub ludzi. Zidentyfikowano dwie rodziny enzymów RNazy III, głównie przez analizę sekwencji z użyciem baz danych lub klonowanie cDNA. Pierwsza rodzina RNazy III jest reprezentowana przez białko drosha z D. melanogaster o długości 1327 (Acc. AF116572). C-koniec składa się z dwóch domen RNazy III i jednej domeny wiążącej dsRNA, a N-koniec ma nieznaną funkcję. Bliskie homologi znaleziono także w C. elegans (Acc. AF160248) i u ludzi (Acc. AF189011) (Filippov i in., 2000; Wu i in., 2000). Ludzką RNazę III typu drosha ostatnio sklonowano i scharakteryzowano (Wu i in., 2000). Gen ten jest wszechobecnie eksprymowany w tkankach ludzkich i liniach komórkowych, a białko jest umiejscowione w jądrze i jąderku komórki. W oparciu o wyniki wywnioskowane z badań z hamowaniem antysensownym zaproponowano rolę tego białka w obróbce rRNA. Druga klasa jest reprezentowana przez gen K12H4.8 C. elegans (Acc. S44849) kodujący białko o długości 1822 aminokwasów. Białko to ma N-końcowy motyw helikazy RNA, po którym występują dwie domeny katalityczne RNazy III i motyw wiązania dsRNA, podobny do rodziny drosha RNazy III. Istnieją bliskie homologi S. pombe (Acc. Q09884), A. thaliana (Acc. AF187317), D. melanogaster (Acc. AE003740) i ludzki (Acc. AB028449) (Filippov i in., 2000; Jacobsen i in., 1999; Matsuda i in., 2000). Możliwe, że K12H4.8 RNaza III/helikaza jest prawdopodobnym kandydatem białka związanego z RNAi.
Genetyczne przeszukiwanie C. elegans zidentyfikowało rde-1 i rde-4 jako istotne dla aktywacji RNAi bez efektu uruchomienia transpozonów lub kosupresji (Dernburg i in., 2000; Grishok i in., 2000; Ketting i Plasterk, 2000; Tabara i in., 1999). Doprowadziło to do hipotezy, że te geny są istotne do obróbki dsRNA, ale nie są związane z degradacją docelowego mRNA. Funkcja obu genów jak dotychczas nie jest znana, produkt genu rdel jest członkiem rodziny białek podobnych do króliczego białka eIF2C (Tabara i in., 1999), a sekwencji rde-4 jak dotychczas nie opisano. Wykonana w przyszłości biochemiczna charakteryzacja tych białek powinna wyjaśnić ich molekularną funkcję.
Obróbka dupleksów siRNA wydaje się zaczynać od końców zarówno dsRNA z tępymi końcami, jak i dsRNA z krótkimi (1-5 nt) jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami i postępuje w około 21- do 23-nt. Długie (-20 nt) lepkie 3'-końce na krótkich dsRNA hamują RNAi, prawdopodobnie przez oddziaływanie z białkami wiążącymi jednoniciowy RNA. Zahamowanie RNAi przez jednoniciowe regiony flankujące krótkie dsRNA oraz brak tworzenia siRNA z krótkich dsRNA o długości 30 pz może wyjaśniać dlaczego regiony tworzące struktury często znajdywane w mRNA nie prowadzą do uaktywnienia RNAi.
Bez wiązania się z teorią sądzi się, że białka obróbki dsRNA, lub ich podzbiór, pozostają związane z dupleksem siRNA po reakcji obróbki. Orientacja dupleksu siRNA względem tych białek determinuje, która z dwóch komplementarnych nici działa w kierowaniu degradacją docelowego RNA. Chemicznie syntetyzowane dupleksy siRNA kierują rozszczepianiem zarówno sensownego, jak i antysensownego RNA, gdyż są one zdolne do związania się z czynnikami białkowymi w którejkolwiek z dwóch możliwych orientacji.
Niezwykłe odkrycie, że 21- i 22-nt syntetyczne dupleksy siRNA można stosować do wydajnej degradacji mRNA, dostarcza nowych narzędzi do specyficznej dla sekwencji regulacji ekspresji genów w genomice funkcjonalnej, a także w badaniach biomedycznych. siRNA mogą być skuteczne w ukłaPL 218 876 B1 dach ssaczych, gdzie długie dsRNA nie mogą być stosowane ze względu na aktywację odpowiedzi PKR (Clemens, 1997). Jako takie, dupleksy siRNA stanowią nową alternatywę dla terapii sekwencjami antysensownymi lub rybozymami.
P r z y k ł a d 2
Interferencja RNA w ludzkich hodowlach tkankowych
2.1 Metody
2.1.1 Otrzymywanie RNA
21-nt RNA zsyntetyzowano stosując amidofosforyny Expedite RNA i amidofosforyn tymidyny (Proligo, Niemcy). Syntetyczne oligonukleotydy odbezpieczono i oczyszczono na żelu (przykład 1), następnie oczyszczano na kolumnach Sep Pak C18 (Wate rs , Milord, MA, USA) (Tuschl, 1993). Sekwencje siRNA skierowane do lucyferazy GL2 (Acc. X65324) i GL3 (Acc. U47296) odpowiadały regionom kodującym 153-173 względem pierwszego nukleotydu kodonu start, siRNA skierowane do RL (Acc. AF025846) odpowiadały regionowi 119-129 po kodonie start. Dłuższe RNA były transkrybowane polimerazą RNA T7 z produktów PCR, następnie oczyszczane na żelu i na kolumnach Sep-Pak. dsRNA GL2 lub GL3 o długości 49 i 484 pz odpowiadały odpowiednio pozycjom 113-161 i 113-596, względem startu translacji; dsRNA RL o długości 50 i 501 pz odpowiadały odpowiednio pozycjom 118-167 i 118-618. Matryce do PCR do syntezy dsRNA skierowanych do humanizowanego GFP (hG) zamplifikowano z pAD3 (Kehlenbach, 1998), przy czym dsRNA hG o długości 50 i 501 pz odpowiadały odpowiednio pozycjom 118-167 i 118-618 względem kodonu start.
Do hybrydyzacji siRNA 20 μΜ pojedyncze nici inkubowano w buforze do hybrydyzacji (100 mM octan potasu, 30 mM HEPESKOH, pH 7,4, 2 mM octan magnezu) przez 1 minutę w 90°C, a następnie przez 1 godzinę w 37°C. Etap inkubacji w 37°C przedłużono na noc w przypadku dsRNA o długości 50 i 500 pz, a te reakcje hybrydyzacji przeprowadzano przy stężeniach nici odpowiednio 8,4 μM i 0,8 4 μM.
2.1.2 Hodowla komórkowa
Komórki S2 namnażano w podłożu Schneider'a Drosophila (Life Technolgies) uzupełnionym 10% FBS, 100 jednostek/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny w 25°C. Komórki 293, NIH/3T3, HeLa S3, COS-7 hodowano w 37°C w podłożu Eagla w modyfikacji Dulbecco, uzupełnionym 10% FBS, 100 jednostek/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny. Komórki regularnie pasażowano aby utrzymać wzrost wykładniczy. 24 godziny przed transfekcją przy około 80% konfluencji, komórki ssa5 cze trypsynizowano i rozcieńczono 1:5 w świeżym podłożu bez antybiotyków (1-3 x 105 komórek/ml) i przeniesiono do 24-studzienkowych płytek (500 μl/studzienkę). Komórki S2 nie były trypsynizowane przed podzieleniem. Transfekcję przeprowadzono z użyciem odczynnika Lipofectamine 2000 (Life Technologies), w sposób opisany przez producenta dla linii komórkowych przylegających. Na studzienkę dodano 1,0 μg pGL2-Control (Promega) lub pGL3-Control (Promega), 0,1 μg pRL-TK (Promega) i 0,28 μg dupleksu siRNA lub dsRNA, formułowanych w liposomach; końcowa objętość wynosiła 600 μl na studzienkę. Komórki inkubowano 20 godzin po transfekcji i miały one wtedy zdrowy w ygląd. Następnie monitorowano ekspresję lucyferazy za pomocą podwójnego testu lucyferazy (Promega). Wydajności transfekcji wyznaczono metodą mikroskopii fluorescencyjnej dla ssaczych linii komórkowych po kotransfekcji 1,1 μg pAD3 kodującego hGFP i 0,28 μg invGL2 w GL2 siRNA i wynosiły one 70-90%. Plazmidy reporterowe amplifikowano w XL-1 Blue (Stratagene) i oczyszczono z użyciem zestawu Qiagen EndoFree Maxi Plasmid.
2.2 Wyniki i dyskusja
Aby zbadać czy siRNA są także zdolne do kierowania RNAi w hodowli komórkowej, zsyntetyzowano 21-nt dupleksy siRNA z symetrycznymi 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami skierowane przeciw genom reporterowym lucyferaz Renilla reniformis i dwu wariantom sekwencji ze świetlika (Photinus pyralis, GL2 i GL3) (fig. 8a, b). Dupleksy siRNA kotransfekowano z połączeniami plazmidów reporterowych pGL2/pRL lub pGL3/pRL do komórek D. melanogaster Schneider S2 lub ssaczych komórek z użyciem kationowych liposomów. Aktywności lucyferazy oznaczono 20 godzin po transfekcji. We wszystkich zbadanych liniach komórkowych zaobserwowano specyficzne obniżenie ekspresji genów reporterowych w obecności ich pokrewnych dupleksów siRNA (fig. 9a-j). Co ciekawe, absolutne poziomy ekspresji lucyferazy nie były zmienione przez nie spokrewnione siRNA, co wskazywało na brak szkodliwych skutków ubocznych 21-nt dupleksów RNA (np. fig. 10a-d dla komórek HeLa). W komórkach D. melanogaster S2 (fig. 9a, b), specyficzne zahamowanie lucyferaz było całkowite. W komórkach ssaczych, gdzie geny reporterowe były 50- do 100-krotnie silniej wyrażane, specyficzna supresja była mniej pełna (fig. 9c-j). Ekspresja GL2 była obniżona 3- do 12-krotnie, ekspresja GL39- do
PL 218 876 B1
25-krotnie, a ekspresja RL 1- do 3-krotnie, w odpowiedzi na ich pokrewne siRNA. Dla komórek 293, hamowanie lucyferazy RL przez siRNA RL było nieskuteczne, jednakże docelowe geny GL2 i GL3 odpowiadały specyficznie (fig. 9i, j). Brak zmniejszenia ekspresji RL w komórkach 293 może wynikać z jego 5- do 20-krotnie wyższej ekspresji w porównaniu z jakąkolwiek inną badaną ssaczą linią komórkową i/lub z ograniczonej dostępności sekwencji docelowej ze względu na drugorzędową strukturę RNA lub związane białka. Niemniej jednak, specyficzne zahamowanie lucyferazy GL2 i GL3 przez ich pokrewne dupleksy siRNA wskazywało, że RNAi działa także w komórkach 293.
Dwunukleotydowy jednoniciowy wiszący 3'-koniec we wszystkich dupleksach siRNA, z wyjątkiem uGL2, składał się z (2'-deoksy)tymidyny. Podstawienie urydyny tymidyną w jednoniciowym wiszącym 3'-końcu było dobrze tolerowane w in vitro systemie D. melanogaster, a sekwencja jednoniciowego wiszącego końca nie była krytyczna dla rozpoznania docelowego RNA. Tymidynowy jednoniciowy wiszący koniec wybrano, gdyż uważa się, że zwiększa on odporność siRNA na nukleazę w podłożu do hodowli tkankowych oraz w transfekowanych komórkach. Faktycznie, GL2 siRNA zmodyfikowany tymidyną był nieznacznie silniejszy niż niezmodyfikowany uGL2 siRNA we wszystkich badanych liniach komórkowych (fig. 9a, c, e, g, i). Niewykluczone, że dalsze modyfikacje nukleotydów jednoniciowego wiszącego 3'-końca mogą dostarczyć dodatkowe korzystne efekty względem dostarczania i stabilności dupleksów siRNA.
W doświadczeniach kotransfekcji zastosowano 25 nM dupleksy siRNA, w odniesieniu do końcowej objętości podłoża do hodowli tkankowych (fig. 9, 10). Podwyższenie stężenia siRNA do 100 nM nie wzmocniło efektów specyficznego wyciszania, ale zaczęło wpływać na wydajność transfekcji ze względu na współzawodnictwo w zamykaniu w liposomie pomiędzy plazmidowym DNA i siRNA (dane nie prezentowane). Obniżenie stężenia siRNA do 1,5 nM nie obniżyło specyficznego efektu wyciszania (dane nie prezentowane), pomimo, że siRNA były wtedy tylko 2- do 20- krotnie bardziej stężone niż plazmidy DNA. Oznacza to, że siRNA są nadzwyczaj silnymi czynnikami pośredniczącymi w wyciszaniu genów oraz, że siRNA są skuteczne w stężeniach, które są kilka rzędów wielkości niższe niż stężenia stosowane w zwykłych doświadczeniach kierowania do genów sekwencji antysensownych lub rybozymów.
Aby monitorować wpływ dłuższych dsRNA na komórki ssacze, otrzymano dsRNA o długości 50 i 500 pz, pokrewne genom reporterowym. Jako niespecyficzną kontrolę zastosowano dsRNA z humanizowanego GFP (hG) (Kehlenbach, 1998). Gdy dsRNA kotransfekowano w identycznych ilościach (nie stężeniach) z dupleksami siRNA, ekspresja genu reporterowego była silnie i niespecyficznie obniżona. Efekt ten przedstawiono dla komórek HeLa jako reprezentatywnego przykładu (fig. 10a-d). Absolutne aktywności lucyferazy były obniżone niespecyficznie odpowiednio 10- do 20-krotnie przez kotransfekcję dsRNA o długości 50 pz i 20- do 200-krotnie przez kotransfekcję dsRNA o długości 500 pz. Podobne niespecyficzne efekty obserwowano dla komórek COS-7 i ŃIH/3T3. Dla komórek 293 obserwowano 10- do 20-krotne niespecyficzne obniżenie tylko dla dsRNA o długości 500 pz. Niespecyficzne obniżenie ekspresji genu reporterowego przez dsRNA > 30 pz przewidywano jako część odpowiedzi interferonowej.
Zaskakująco, pomimo silnego niespecyficznego obniżenia ekspresji genu reporterowego, powtarzalnie wykryto specyficzne dla sekwencji wyciszanie kierowane dsRNA. Jednakże efekty specyficznego wyciszania były widoczne tylko gdy względne aktywności genu reporterowego normalizowano względem kontroli hG dsRNA (fig. 10e, f). Zaobserwowano 2- do 10-krotne specyficzne obniżenie w odpowiedzi na pokrewny dsRNA, także w trzech innych badanych liniach komórek ssaczych (dane nie prezentowane). Efekty specyficznego wyciszania dsRNA (356-1662 pz) wcześniej opisano w komórkach CHO-K1, ale ilości dsRNA wymagane do wykrycia 2- do 4-krotnego specyficznego obniżenia, były około 20-krotnie wyższe niż w naszych doświadczeniach (Ui-Tei, 2000). Także komórki CHO-K1 wydają się wykazywać niedobór odpowiedzi interferonowej. W innej pracy komórki 293, NIH/3T3 i BHK-21 badano pod względem RNAi stosując połączenia reporterowe lucyferaza/lacZ i dsRNA specyficzny lacZ o długości 829 pz lub niespecyficzny GFP o długości 717 pz (Caplen, 2000). Niemożność wykrycia RNAi w tym przypadku może wynikać z mniejszej czułości testu reporterowego lucyferaza/lacZ oraz różnic długości pomiędzy docelowym i kontrolnym dsRNA. Reasumując, wyniki te wskazują, że RNAi jest aktywna w komórkach ssaczych, że efekt wyciszania jest trudny do wykrycia, gdy system interferonu jest aktywowany przez dsRNA > 30 pz.
W skrócie, po raz pierwszy wykazano wyciszanie genów kierowane siRNA w komórkach ssaczych. Zastosowanie krótkich siRNA niesie wielką nadzieję inaktywacji funkcji genu w hodowli komórek ludzkich oraz opracowania genowo specyficznych środków terapeutycznych.
PL 218 876 B1
P r z y k ł a d 3
Specyficzne hamowanie ekspresji genu przez interferencję RNA
3.1 Materiały i Metody
3.1.1 Otrzymywanie RNA i test RNAi
Chemiczną syntezę RNA, hybrydyzację i testy RNAi oparte na lucyferazie przeprowadzono w sposób opisany w przykładach 1 lub 2 lub wcześniejszych publikacjach (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000). Wszystkie dupleksy siRNA były skierowane przeciw lucyferazie świetlika, a sekwencja mRNA lucyferazy pochodziła z pGEM-luc (GenBank nr dostępu X65316) jak opisano (Tuschl i in.,
1999). Dupleksy siRNA inkubowano w reakcji D. melanogaster RNAi/translacja przez 15 minut przed dodaniem mRNA. Oparte na translacji testy RNAi przeprowadzono co najmniej w trzech powtórzeniach.
W celu zmapowania rozszczepiania sensownego docelowego RNA wytworzono 177-nt transkrypt odpowiadający sekwencji lucyferazy świetlika pomiędzy pozycjami 113-273 względem kodonu start, a dalej 17-nt dopełnienie sekwencji promotora SP6. W celu zmapowania rozszczepiania antysensownego docelowego RNA wytworzono 166-nt transkrypt z matrycy, którą amplifikowano z sekwencji plazmidu metodą PCR z zastosowaniem 5'-startera TAATACGACTCACTATAGAGCCCATATCGTTTCATA (podkreślony promotor T7) i 3'-startera AGAGGATGGAACCGCTGG. Sekwencja docelowa odpowiada dopełnieniu sekwencji lucyferazy świetlika pomiędzy pozycjami 50-215 względem kodonu start. Znakowanie transferazy guanylanowej przeprowadzono w sposób wcześniej opisany (Zamore i in., 2000). W celu zmapowania rozszczepiania docelowego RNA 100 nM dupleksu siRNA inkubowano z 5 do 10 nM docelowego RNA w lizacie embrionów D. melanogaster w zwykłych warunkach (Zamore i in., 2000) przez 2 godziny w 25°C. Reakcję zatrzymano przez dodanie 8 objętości buforu proteinazy K (200 mM Tris-HCl pH 7,5, 25 mM EDTA, 300 mM NaCl, 2% wag./obj. dodecylosiarczan sodu). Proteinazę K (E. M. Merck, rozpuszczoną w wodzie) dodano do końcowego stężenia 0,6 mg/ml. Następnie reakcje inkubowano przez 15 minut w 65°C, wyekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform/alkohol izoamylowy (25:24:1) i wytrącono trzema objętościami etanolu. Próbki umieszczonej na 6% żelach do sekwencjonowania. Wzorce wielkości wytworzono przez częściowe rozszczepianie RNazą T1 i częściową hydrolizę zasadową znakowanych w czapeczce sensownych lub antysensownych docelowych RNA.
3.2 Wyniki
3.2.1 Zmienność jednoniciowych wiszących 3'-końców w dupleksach 21-nt siRNA
Jak opisano powyżej, dupleksy siRNA mające 2 lub 3 niesparowane nukleotydy na 3'-końcu są bardziej skuteczne w kierowaniu degradacją docelowego RNA niż odpowiednie dupleksy z tępymi końcami. Aby przeprowadzić pełniejszą analizę funkcji końcowych nukleotydów zsyntetyzowano pięć 21-nt sensownych siRNA, z których każdy był dłuższy o jeden nukleotyd względem docelowego RNA oraz osiem 21-nt antysensownych siRNA, z których każdy był dłuższy o jeden nukleotyd względem docelowego RNA (fig. 11A). Przez połączenie sensownych i antysensownych siRNA, otrzymano osiem serii dupleksów siRNA z syntetycznymi jednoniciowymi wiszącymi końcami pokrywającymi zakres od 7-nt jednoniciowego wiszącego 3'-końca do 4-nt jednoniciowego wiszącego 5'-końca. Interferencję dupleksów siRNA zmierzono z użyciem podwójnego układu testowego lucyferazy (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000). Dupleksy siRNA były skierowane przeciw mRNA lucyferazy świetlika, a mRNA lucyferazy Renilla reniformis zastosowano jako wewnętrzną kontrolę. Stosunek luminescencji aktywności lucyferazy docelowej do kontrolnej wyznaczono w obecności dupleksu siRNA i normalizowano względem stosunku obserwowanego przy braku dsRNA. Dla porównania, stosunki interferencji dla długich dsRNA (39-504 pz) przedstawiono na fig. 11B. Stosunki interferencji wyznaczono w stężeniach 5 nM dla dłuższych dsRNA (fig. 11A) i 100 nM dla dupleksów siRNA (fig. 11C-J). Wybrano 100 nM stężenia siRNA, H gdyż całkowita obróbka 5 nM dsRNA o długości 504 pz wytworzy całkowite 120 nM stężenie dupleksów siRNA.
Zdolność 21-nt dupleksów siRNA do kierowania RNAi zależy od liczby nukleotydów jednoniciowego wiszącego końca lub tworzonych par zasad. Dupleksy z czterema do sześciu nukleotydami jednoniciowego wiszącego 3'-końca nie były zdolne do kierowania RNAi (fig. 11C-F), tak jak dupleksy z dwoma lub większą liczbą nukleotydów jednoniciowego wiszącego 5'-końca (fig. 11G-J). Dupleksy z 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami były najskuteczniejsze w kierowaniu interferencją RNA, jednak wydajność wyciszania była także zależna od sekwencji i obserwowano do 12-krotne różnice dla różnych dupleksów siRNA z 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami (porównaj fig. 11D-H). Dupleksy z tępymi końcami, z 1-nt jednoniciowym wiszącym 5'-końcem lub 1- do 3-nt jednoniciowym
PL 218 876 B1 wiszącym 3'-końcem były czasami funkcjonalne. Niewielki efekt wyciszania obserwowany dla dupleksu siRNA z 7-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem (fig. 11C) może wynikać raczej z efektu antysensownego długiego jednoniciowego wiszącego 3'-końca niż z RNAi. Porównanie wydajności RNAi pomiędzy długimi dsRNA (fig. 11B) i najskuteczniejszymi 21-nt dupleksami siRNA (fig. 11E, G, H) wskazuje, że pojedynczy dupleks siRNA w stężeniu 100 nM może być tak skuteczny jak 5 nM dsRNA o długości 504 pz.
3.2.2 Zmienność długości sensownego siRNA sparowanego z niezmiennym 21-nt antysensownym siRNA
Aby zbadać wpływ długości siRNA na RNAi otrzymano trzy serie dupleksów siRNA przez połączenie trzech 21-nt nici antysensownych z ośmioma 18- do 25-nt nićmi sensownymi. Jednoniciowy wiszący 3'-koniec antysensownego siRNA miał ustaloną długość 1, 2 lub 3 nt dla każdej serii dupleksów siRNA, podczas gdy sensowny siRNA różnił się na swoim 3'-końcu (fig. 12A). Niezależnie od długości sensownego siRNA stwierdzono, że dupleksy z 2-nt w jednoniciowym wiszącym 3'-końcu antysensownego siRNA (fig. 12C) były bardziej aktywne niż te z 1- lub 3-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem (fig. 12B, D). W pierwszej serii z 1-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem antysensownego siRNA, dupleksy z 21- i 22-nt sensownymi siRNA, niosące odpowiednio 1- i 2-nt wiszący 3'-koniec sensownego siRNA, były najbardziej aktywne. Dupleksy z 19-25-nt sensownymi siRNA były także zdolne do kierowania RNAi, ale w mniejszym stopniu. Podobnie, w drugiej serii z 2-nt jednoniciowym wiszącym końcem antysensownego siRNA, 21-nt dupleks siRNA z 2-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem był najbardziej aktywny i jakiekolwiek inne połączenie z 18- do 25-nt sensownym siRNA było aktywne w istotnym stopniu. W ostatniej serii z 3-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem antysensownego siRNA, tylko dupleks z 20-nt sensownym siRNA i 2-nt sensownym jednoniciowym wiszącym 3'-końcem był zdolny do zmniejszenia ekspresji docelowego RNA. Reasumując, wyniki te wskazują, że ważne są długość siRNA, a także długość jednoniciowego wiszącego 3'-końca oraz, że dupleksy 21-nt siRNA z 2-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem są optymalne dla RNAi.
3.2.3 -Zmienność długości dupleksów siRNA ze stałym dwunukleotydowym jednoniciowym wiszącym 3'-końcem.
Następnie zbadano wpływ równoczesnego zmieniania długości obu nici siRNA przez utrzymanie symetrycznych 2-nt jednoniciowych wiszących 3'-końców (fig. 13A). Otrzymano dwie serie dupleksów siRNA zawierające 21-nt dupleks siRNA z fig. 11H jako odniesienie. Długość dupleksów zmieniano w zakresie 20-25 pz przez wydłużanie sparowanego segmentu na 3'-końcu sensownego siRNA (fig. 13B) lub 3'-końcu antysensownego siRNA (fig. 13C). Dupleksy o długości 20-23 pz wywoływały specyficzną represję aktywności docelowej lucyferazy, ale 21-nt dupleks siRNA był co najmniej ośmiokrotnie bardziej wydajny niż którykolwiek z innych dupleksów. 24- i 25-nt dupleksy siRNA nie wywołały jakiejkolwiek wykrywalnej interferencji. Efekty specyficzne dla sekwencji były mniejsze, gdyż zmiany na obu końcach dupleksu wywołały podobne efekty.
3.2.4 2'-Deoksy- i 2'-O-metylo-modyfikowane dupleksy siRNA
Aby ocenić istotność reszt rybozy w siRNA dla RNAi, zbadano 21-nt dupleksy siRNA z 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami z 2'-deoksy- lub 2'-O-metylo-modyfikowanymi nićmi (fig. 14). Podstawienie 2-nt jednoniciowych wiszących 3'-końców przez 2'-deoksynukleotydy nie wywołało żadnego efektu, a nawet w wyniku zastąpienia dwóch dodatkowych rybonukleotydów przyległych do jednoniciowych wiszących końców w regionie sparowanym uzyskano znacząco aktywne siRNA. Zatem 8 z 42 nt dupleksu siRNA zastąpiono przez reszty DNA bez utraty aktywności. Jednakże całkowite podstawienie jednej lub obu nici siRNA przez reszty 2'-deoksy zniosło RNAi, tak jak podstawienie resztami 2'-O-metylowanymi.
3.2.5 Definicja miejsc rozszczepiania docelowego RNA
Pozycje rozszczepiania docelowego RNA wcześniej wyznaczono dla 22-nt dupleksów siRNA oraz dupleksu 21-nt/22-nt. Stwierdzono, że pozycja rozszczepiania docelowego RNA była umiejscowiona w centrum regionu pokrytego przez dupleks siRNA, 11 lub 12 nt w dół od pierwszego nukleotydu komplementarnego do 21- lub 22-nt kierującej sekwencji siRNA. Pięć różnych 21-nt dupleksów siRNA z 2-nt jednoniciowym wiszącym 3'-końcem (fig. 15A) inkubowano ze znakowanym w 5'-czapeczce sensownym lub antysensownym docelowym RNA w lizacie D. melanogaster (Tuschl i in., 1999; Zamore i in., 2000). 5'-produkty rozszczepiania rozdzielano na żelach do sekwencjonowania (fig. 15B). Ilość rozszczepionego sensownego docelowego RNA korelowała z wydajnością dupleksów siRNA wyznaczoną w teście opartym na translacji, a dupleksy siRNA 1, 2 i 4 (fig. 15B i 11H, G, E) rozszczepiały docelowy RNA szybciej niż dupleksy 3 i 5 (fig. 15B i 11F, D). Warto zauważyć, że suma radioakPL 218 876 B1 tywności 5'-produktu rozszczepiania i wejściowego docelowego RNA nie były stałe w czasie oraz 5'-produkty rozszczepiania nie nagromadzały się. Przypuszczalnie produkty rozszczepiania, gdy zostaną już uwolnione z kompleksu siRNA-endonukleaza, są szybko rozkładane ze względu na brak zarówno ogona poli(A), jak i 5'-czapeczki.
Miejsca rozszczepiania dla obydwu sensownego i antysensownego docelowego RNA były umiejscowione w środku regionu pokrytego przez dupleksy siRNA. Miejsca rozszczepiania dla każdego docelowego dupleksu wytworzone przez pięć różnych dupleksów różniły się o 1-nt zgodnie z 1-nt przesunięciem dupleksów wzdłuż docelowych sekwencji. Docelowe sekwencje były rozszczepiane precyzyjnie 11-nt w dół od pozycji docelowej komplementarnej do najbliższego 3'-końca nukleotydu komplementarnego do sekwencji kierującego siRNA (fig. 15A, B).
Aby stwierdzić, czy 5'- czy 3'-koniec kierującego siRNA kieruje rozszczepianiem docelowego RNA opracowano strategię doświadczalną wyjaśnioną na fig. 16A i B. 21-nt antysensowny siRNA, który w tym badaniu był niezmienny, sparowano z sensownymi siRNA, które były zmodyfikowane na swoich 5' - lub 3'-końcach. Pozycję rozszczepiania sensownego lub antysensownego docelowego RNA wyznaczono w sposób opisany powyżej. Zmiany 3'-końca sensownego siRNA, monitorowane dla
1- nt jednoniciowego wiszącego 5'-końca do 6-nt jednoniciowego wiszącego 3'-końca nie wpłynęły na pozycję rozszczepiania ani sensownego ani antysensownego RNA (fig. 16C). Zmiany na 5'-końcu sensownego siRNA nie wpłynęły na rozszczepianie docelowego sensownego RNA (fig. 16D, górna część), co przewidywano, gdyż antysensowny siRNA nie był zmieniony. Jednakże rozszczepianie antysensownego docelowego RNA było zmieniane i silnie zależało od 5'-końca sensownego siRNA (fig. 16D, dolna część). Antysensowny docelowy RNA był rozszczepiany tylko wtedy, gdy sensowny siRNA miał długość 20- lub 21-nt oraz pozycja rozszczepiania różniła się o 1-nt, co sugerowało, że 5'-koniec siRNA rozpoznającego docelowy RNA kieruje rozszczepianiem docelowego RNA. Pozycja była umiejscowiona pomiędzy 10 a 11 nukleotydem licząc w górę od docelowego nukleotydu sparowanego z najbliższym 5'-końca nukelotydem kierującego siRNA (patrz także fig. 15A).
3.2.6 Efekty sekwencji i podstawienia 2'-deoksy w jednoniciowym wiszącym 3'-końcu
Dwunukleotydowy jednoniciowy wiszący 3'-koniec jest korzystny dla działania siRNA. Próbowano stwierdzić, czy sekwencja nukleotydowa jednoniciowego wiszącego końca wpływa na rozpoznanie docelowego RNA lub czy jest to tylko cecha wymagana do odtworzenia kompleksu endonukleazy (RISC lub siRNP). Zsyntetyzowano sensowne i antysensowne siRNA z AA, CC, GG, UU i UG jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami i włączono modyfikacje 2'-deoksy TdG i TT. SiRNA typu dzikiego zawierały AA w sensownym jednoniciowym wiszącym 3'-końcu i UG w antysensownym jednoniciowym wiszącym 3'-końcu (AA/UG). Wszystkie dupleksy siRNA były funkcjonalne w teście interferencji i obniżały ekspresję docelowego RNA co najmniej pięciokrotnie (fig. 17). Najskuteczniejsze dupleksy siRNA, które obniżały ekspresję docelowego RNA ponad dziesięciokrotnie, miały sekwencje typu NN/UG, NN/UU, NN/TdG, i NN/TT (N, dowolny nukleotyd). Dupleksy siRNA z antysensownym siRNA zawierającym jednoniciowy wiszący 3'-koniec AA, CC lub GG były dwu- do czterokrotnie mniej aktywne w porównaniu z sekwencją typu dzikiego UG lub zmutowaną UU. To obniżenie wydajności RNAi prawdopodobnie wynika z wpływu przedostatniego nukleotydu 3' na zależne od sekwencji rozpoznanie docelowego RNA, gdyż zmiana 3'-końcowego nukleotydu z G do U nie wywołała żadnego efektu.
Zmiany sekwencji jednoniciowego wiszącego 3'-końca sensownego siRNA nie ujawniły jakichkolwiek efektów zależnych od sekwencji, co przewidywano, gdyż sensowny siRNA nie może U wpływać na rozpoznanie sensownego docelowego mRNA.
3.2.7 Specyficzność rozpoznawania docelowej sekwencji
Aby zbadać specyficzność rozpoznawania docelowej sekwencji wprowadzono zmiany w sekwencji sparowanych segmentów dupleksów siRNA i wyznaczono wydajność wyciszania. Zmiany w sekwencji wprowadzono przez odwrócenie krótkich segmentów o długości 3- lub 4-nt lub przez mutacje punktowe (fig. 18). Zmiany w sekwencji jednej nici siRNA kompensowano w komplementarnej nici siRNA aby zapobiec zaburzeniom sparowanej struktury dupleksu siRNA. Sekwencją wszystkich
2- nt jednoniciowych wiszących 3'-końców było TT (T, 2'-deoksytymidyna), w celu zmniejszenia kosztów syntezy. Dupleks siRNA referencyjny TT/TT był porównywalny w RNAi z dupleksem siRNA typu dzikiego AA/UG (fig. 17). Zdolność do kierowania rozkładem reporterowego mRNA oznaczono za pomocą opartego na translacji testu luminescencji. Dupleksy siRNA z odwróconymi segmentami sekwencji wykazały radykalnie obniżoną zdolność rozszczepiania docelowego reporterowego mRNA lucyferazy świetlika (fig. 18). Zmiany sekwencji umiejscowione pomiędzy 3'-końcem i środkiem antysensownego siRNA całkowicie znosiły rozpoznawanie docelowego RNA, ale mutanty w pobliżu
PL 218 876 B1
5'-końca antysensownego siRNA wykazywały niewielki stopień wyciszania. Transwersja A/U pary zasad umiejscowionej bezpośrednio naprzeciw przewidywanego miejsca rozszczepiania docelowego RNA lub jeden nukelotyd od przewidywanego miejsca przeciwdziałała rozszczepianiu docelowego RNA, co wskazywało, że pojedyncza mutacja w centrum dupleksu siRNA rozróżnia pomiędzy błędnie sparowanymi docelowymi sekwencjami.
3.3 Dyskusja siRNA są cennymi czynnikami do inaktywacji ekspresji genów, nie tylko w komórkach owadzich, ale także w komórkach ssaczych, z dużymi możliwościami zastosowań terapeutycznych. Systematycznie zanalizowano determinanty strukturalne dupleksów siRNA wymaganych do wywoływania wydajnego rozkładania docelowego RNA w lizacie embrionów D. melanogaster, co dostarcza zasad projektowania najsilniejszych dupleksów siRNA. Perfekcyjny dupleks siRNA jest zdolny wyciszyć ekspresję genu z wydajnością porównywalną do dsRNA o długości 500 pz, pod warunkiem, że stosuje się porównywalne ilości całkowitego RNA.
3.4 Wskazówki dla użytkownika siRNA
Skutecznie wyciszające dupleksy siRNA korzystnie składają się z 21-nt antysensownych siRNA i powinny być wybrane tak by tworzyły podwójną helisę o długości 19 pz z 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami. Podstawienia 2'-deoksy rybonukleotydów w 2-nt jednoniciowym wiszącym 3'-koń-cu nie wpływają na RNAi, ale pomagają zmniejszyć koszty syntezy RNA i mogą zwiększyć odporność na RNAzę dupleksów siRNA. Jednakże bardziej rozległe modyfikacje 2'-deoksy lub 2'-O-metylo zmniejszają zdolność siRNA do kierowania RNAi, prawdopodobnie przez interferencję z wiązaniem białka przy składaniu siRNAP.
Rozpoznanie docelowego RNA jest procesem wysoce specyficznym względem sekwencji, kierowanym przez siRNA komplementarny do docelowego RNA. Najbliższy 3'-końca nukelotyd kierującego siRNA nie wpływa na specyficzność rozpoznania docelowego RNA, podczas gdy przedostatni nukleotyd jednoniciowego wiszącego 3'-końca wpływa na rozszczepianie docelowego RNA i błędne sparowanie ogranicza RNAi dwu- do czterokrotnie. Koniec 5' kierującego siRNA także wydaje się być bardziej skłonny do rozpoznania docelowego RNA przy błędnym parowaniu, w porównaniu z 3'-końcem. Nukleotydy w centrum siRNA, umiejscowione naprzeciw miejsca rozszczepiania docelowego RNA, są ważnymi determinantami specyficzności oraz nawet pojedyncze zmiany nukleotydowe zmniejszają RNAi do niewykrywalnego poziomu. Sugeruje to, że dupleksy siRNA mogą być zdolne do rozróżniania pomiędzy zmutowanymi lub polimorficznymi allelami w doświadczeniach skierowania do genu, co może się stać istotną cechą do przyszłych zastosowań terapeutycznych.
Zasugerowano, że sensowne i antysensowne siRNA, gdy są związane ze składnikami białkowymi kompleksu endonukleazy lub kompleksu w który jest on zaangażowany, odgrywają różne role; względna orientacja dupleksu siRNA w tym kompleksie wyznacza, która nić może być użyta do rozpoznania docelowego RNA. Syntetyczne dupleksy siRNA wykazują podwójną symetrię w odniesieniu do podwójnie-helikalnej struktury, ale nie w odniesieniu do sekwencji. Związanie dupleksów siRNA z białkami RNAi w lizacie D. melanogaster prowadzi do wytworzenia dwóch asymetrycznych kompleksów. W takich hipotetycznych kompleksach, środowisko chiralne różni się dla sensownego i antysensownego siRNA, podobnie jak ich funkcja. Przewidywania tego oczywiście nie stosuje się do palindromicznych sekwencji siRNA lub do białek RNAi, które mogą wiązać się jako homodimery. Aby zminimalizować efekty sekwencyjne, które mogą wpływać na stosunek sensownych i antysensownych skierowanych siRNP, sugeruje się zastosowanie sekwencji siRNA z identycznymi sekwencjami jednoniciowych wiszących 3'-końców. Zaleca się dostosowanie sekwencji jednoniciowego wiszącego końca sensownego siRNA do antysensownego jednoniciowego wiszącego 3'-końca, gdyż sensowny siRNA nie ma docelowego RNA w typowych doświadczeniach wyciszania. Asymetria w odtwarzaniu sensownych i antysensownych rozszczepiających siRNP może być (częściowo) odpowiedzialna za zmienność wydajności RNAi obserwowaną dla różnych 21-nt dupleksów siRNA z 2-nt jednoniciowymi wiszącymi 3'-końcami, stosowanych w tym badaniu (fig. 14). Alternatywnie, sekwencja nukleotydowa w miejscu docelowym i/lub dostępność struktury docelowego RNA może odpowiadać za zmienność wydajności tych dupleksów siRNA.
PL 218 876 B1
Literatura
Bass, B. L. (2000). Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Cell 101, 235-238.
Bosher, J. M. i Labouesse, M. (2000). RNA interference: genetic wand and genetic watchdog. Nat. Cell Biol. 2, E31-36.
Caplen, N. J., Fleenor, J., Fire, A. i Morgan, R. A. (2000). dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105.
Catalanotto, C., Azzalin, G., Macino, G. i Cogoni, C. (2000). Gene silencing in worms and fungi.
Nature 404, 245.
Chanfreau, G., Buckie, M. i Jacquier, A. (2000). Recognition of a conserved class of RNA tetraloops by Saccharomyces cerevisiae RNase III. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97, 3142-3147.
Clemens, M. J. (1997). PKR-a protein kinase regulated by double-stranded RNA. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 945-949.
Cogoni, C. i Macino, G. (1999). Homology-dependent gene silencing in plants and fungi: a number of variations on the same theme. Curr. Opin. Microbiol. 2, 657-662.
Dalmay, T., Hamilton, A., Rudd, S., Angell, S. i Baulcombe, D. C. (2000). An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell 101, 543-553.
Dernburg, A. F., Zalevsky, J., Colaiacovo, M. P. i Villeneuve, A. M. (2000). Transgene-mediated cosuppression in the C. elegans germ line. Genes & Dev. 14, 1578-1583.
Dunn, J. J. (1982). Ribonuclease III. W The enzymes, tom 15, część B, P. D. Boyer, red. (New York: Academic Press), str. 485-499.
Filippov, V., Solovyev, V., Filippova, M. i Gill, S. S. (2000). A novel type of RNase III family proteins in eukaryotes. Gene 245, 213-221.
Fire, A. (1999). RNA-triggered gene silencing. Trends Genet. 15, 358-363.
Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E. i Mello, C. C. (1998). Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811.
Grishok, A., Tabara, H. i Mello, C. C. (2000). Genetic requirements for inheritance of RNAi in
C. elegans. Science 287, 2494-2497.
Hamilton, A. J. i Baulcombe, D. C. (1999). A species of smali anti-sense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science 286, 950-952.
Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D. i Hannon, G. J. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296.
Jacobsen, S. E., Running, M. P. i M., M. E. (1999). Disruption of an RNA helicase/RNase III gene in Arabidopsis causes unregulated cell division in floral meristems. Development 126, 5231-5243.
Jensen, S., Gassama, M. P. i Heidmann, T. (1999). Taming of trans-posable elements by homology-dependent gene silencing. Nat. Genet. 21, 209-212.
Kehlenbach, R. H., Dickmanns, A. & Gerace, L. (1998). Nucleocytoplasmic shuttling factors including Ran and CRM1 mediate nuclear export of NFAT In vitro. J. Cell Biol. 141, 0 863-874.
Kennerdell, J. R. i Carthew, R. W. (1998). Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell 95, 1017-1026.
Ketting, R. F., Haverkamp, T. H., van Luenen, H. G. I Plasterk, R. H. (1999). Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNaseD. Cell 99, 133-141.
Ketting, R. F. i Plasterk, R. H. (2000). A genetic link between co-suppression and RNA interference in C. elegans. Nature 404, 296-298.
Lucy, A. P., Guo, H. S., Li, W. X. i Ding, S. W. (2000). Suppression of post-transcriptional gene silencing by a plant viral protein localized in the nucleus. EMBO J. 19, 1672-1680.
Matsuda, S., Ichigotani, Y., Okuda, T., Irimura, T., Nakatsugawa, S. i Hamaguchi, M. (2000). Molecular cloning and characterization of a novel human gene (HERNA) which encodes a putative RNA-helicase. Biochim. Biophys. Acta 31, 1-2.
Milligan, J.F. i Uhlenbeck, O.C. (1989). Synthesis of small RNAs using T7 RNA polymerase. Methods Enzymol. 180, 51-62.
Mourrain, P., Beclin, C., Elmayan, T., Feuerbach, F., Godon, C., Morel, J. B., Jouette, D., Lacombe, A. M., Nikic, S., Picault, N., Remoue, K., Sanial, M., Vo, T. A. i Vaucheret, H. (2000). Arabidopsis
PL 218 876 B1
SGS2 and SGS3 genes are required for posttranscriptional gene silencing and natural virus resistance. Cell 101, 533-542.
Ngo, H., Tschudi, C., Gull, K. i Ullu, E. (1998). Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 14687-14692.
Nicholson, A. W. (1999). Function, mechanism and regulation of bacterial ribonucleases. FEMS Microbiol. Rev. 23, 371-390.
Oelgeschlager, M., Larrain, J., Geissert, D. i De Robertis, E. M. (2000). The evolutionary conserved BMP-binding protein Twisted gastrulation promotes BMP signalling. Nature 405, 757-763.
Pan, T. i Uhlenbeck, O. C. (1992). In vitro selection of RNAs that undergo autolytic cleavage with Pb2+. Biochemistry 31, 3887-3895.
Pelissier, T. i Wassenegger, M. (2000). A DNA target of 30 bp is sufficient for RNA-directed methylation. RNA 6, 55-65.
Plasterk, R. H. i Ketting, R. F. (2000). The silence of the genes. Curr. Opin. Genet. Dev. 10, 562-567.
Ratcliiff, F. G., MacFarlane, S. A. i Baulcombe, D. C. (1999). Gene Silencing without DNA. RNA-mediated crossprotection between viruses. Plant Cell 11, 1207-1216.
Robertson, H. D. (1990). Escherichia coli ribonuclease III. Methods Enzymol. 181, 189-202.
Robertson, H. D. (1982). Escherichia coli ribonuclease III cleavage sites. Cell 30, 669-672.
Romaniuk, E., McLaughlin, L. W., Neilson, T. i Romaniuk, P. J. (1982). The effect of acceptor oligoribonucleotide sequence on the T4 RNA ligase reaction. Eur J Biochem 125, 639-643.
Sharp, P. A. (1999). RNAi and double-strand RNA. Genes & Dev. 13, 139-141.
Sijen, T. i Kooter, J. M. (2000). Post-transcriptional gene-silencing: RNAs on the attack or on the defense? Bioessays 22, 520-531.
Smardon, A., Spoerke, J., Stacey, S., Klein, M., Mackin, N. i Maine, E. (2000). EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C.
elegans. Curr. Biol. 10, 169-178.
Svoboda, P., Stein, P., Hayashi, H. i Schultz, R. M. (2000). Selective reduction of dormant maternal mRNAs in mouse oocytes by RNA interference. Development 127, 4147-4156.
Tabara, H., Sarkissian, M., Kelly, W. G., Fleenor, J., Grishok, A., Timmons, L., Fire, A. i Mello, C. C. (1999). The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. Cell 99,
123-132.
Tuschl, T., Ng, M. M., Pieken, W., Benseler, F. i Eckstein, F. (1993). Importance of exocyclic base functional groups of central core guanosines for hammerhead ribozyme activity. Biochemistry 32,
11658-11668.
Tuschl, T., Sharp, P. A. i Bartel, D. P. (1998). Selection in vitro of novel ribozymes from a partially randomized U2 and U6 snRNA library. EMBO J. 17, 2637-2650.
Tuschl, T., Zamore, P. D., Lehmann, R. , Bartel, D. P. i Sharp, P. A. (1999). Targeted mRNA degradation by doublestranded RNA in vitro. Genes & Dev. 13, 3191-3197.
Ui-Tel, K., Zenno, S., Miyata, Y. & Saigo, K. (2000). Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Letters 479, 79-82.
Verma, S. i Eckstein, F. (1999). Modified oligonucleotides: Synthesis and strategy for users. Annu. Rev. Biochem. 67, 99-134.
Voinnet O., Lederer, C. i Baulcombe, D. C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell 103, 157-167.
Wassenegger, M. (2000). RNA-directed DMA methylation. Plant Mol. Biol. 43, 203-220.
Wianny, F. i Zernicka-Goetz, M. (2000). Specific interference with gene function by doublestranded RNA in early mouse development. Nat. Cell Biol. 2, 70-75.
Wu, H., Xu, H., Miraglia, L. J. i Crooke, S. T. (2000). Humań RNase III is a 160 kDa Protein Involved in Preribosomal RNA Processing. J. Biol. Chem. 17, 17.
Yang, D., Lu, H. and Erickson, J.W. (2000) Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in drosophilia embryos. Curr. Biol., 10, 1191-1200.
Zamore, P. D., Tuschl, T., Sharp, P. A. i Bartel, D. P. (2000). RNAi: Double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 101, 25-33.
Zhang, K. i Nicholson, A. W. (1997). Regulation of ribonuclease III processing by double-helical sequence antideter- minants. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 13437-13441.
Claims (40)
1. Wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA, w której każda nić RNA ma długość 19-23 nukleotydów, oraz w której co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, przy czym ta cząsteczka RNA jest zdolna do miejscowo specyficznej interferencji RNA.
2. Cząsteczka RNA według zastrz. 1, w której każda nić ma długość 20 - 22 nukleotydów.
3. Cząsteczka RNA według zastrz. 1 albo 2, w której jednoniciowy wiszący 3'-koniec jest stabilizowany względem degradacji.
4. Cząsteczka RNA według zastrz. 1-3, która zawiera co najmniej jeden zmodyfikowany analog nukleotydu.
5. Cząsteczka RNA według zastrz. 4, w której zmodyfikowany analog nukleotydu jest wybrany spośród rybonukleotydów ze zmodyfikowaną resztą cukrową lub szkieletem.
6. Cząsteczka RNA według zastrz. 4 albo 5, w której analog nukleotydu jest rybonukleotydem ze zmodyfikowaną resztą cukrową, przy czym grupa 2'-OH jest zastąpiona grupą wybraną spośród H, OR, R, atomu chlorowca, SH, SR, NH2, NHR, NR2 i CN, gdzie R oznacza C1-C6 alkil, C1-C6 alkenyl lub C1-C6 alkinyl, a atom chlorowca oznacza F, Cl, Br lub I.
7. Cząsteczka RNA według zastrz. 4 albo 5, w której analog nukleotydu jest rybonukleotydem ze zmodyfikowanym szkieletem zawierającym grupę tiofosforanową.
8. Cząsteczka RNA według zastrz. 1-7, mająca sekwencję o identyczności co najmniej 70% z wcześniej ustaloną docelową cząsteczką mRNA.
9. Sposób wytwarzania cząsteczki dwuniciowego RNA określonej w zastrz. 1-8, znamienny tym, że (a) syntetyzuje się dwie nici RNA, każda o długości 19-23 nukleotydów, a ponadto co najmniej jedna nić ma jednoniciowy wiszący 3'-koniec o długości 1-3 nukleotydów, przy czym te nici RNA są zdolne do utworzenia cząsteczki dwuniciowego RNA, oraz (b) łączy się zsyntetyzowane nici RNA w warunkach, w których tworzona jest cząsteczka dwuniciowego RNA, zdolna do miejscowo specyficznej interferencji RNA.
10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że nici RNA syntetyzuje się chemicznie.
11. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że nici RNA syntetyzuje się enzymatycznie.
12. Zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA określonej w zastrz. 1-8 do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem.
13. Zastosowanie według zastrz. 12, w którym gen związany z patogenem jest genem wirusowym.
14. Zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA określonej w zastrz. 1-8 do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z nowotworem.
15. Zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA określonej w zastrz. 1-8 do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z chorobą autoimmunologiczną.
16. Sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, znamienny tym, że (a) kontaktuje się tę komórkę z cząsteczką dwuniciowego RNA określoną w zastrz. 1-8 w warunkach, w których mogą zachodzić miejscowo specyficzne interferencje RNA, oraz (b) kieruje się miejscowo specyficzną interferencją RNA wywieraną przez dwuniciowy RNA na docelowym kwasie nukleinowym mającym część sekwencji zasadniczo odpowiadającą dwuniciowemu RNA.
17. Sposób według zastrz. 16, znamienny tym, że kontaktowanie obejmuje wprowadzenie tej cząsteczki dwuniciowego RNA do docelowej komórki, w której może zajść miejscowo specyficzna interferencja RNA.
18. Sposób według zastrz. 17, znamienny tym, że wprowadzenie obejmuje dostarczenie z użyciem nośnika lub iniekcję.
19. Zastosowanie sposobu in vitro określonego w zastrz. 16-18, do ustalania działania genu w komórce.
20. Zastosowanie sposobu in vitro określonego w zastrz. 16-18, do modulowania działania genu w komórce.
21. Zastosowanie według zastrz. 19 albo 20, w którym gen jest związany ze stanem patologicznym.
PL 218 876 B1
22. Środek farmaceutyczny zawierający substancję czynną oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera co najmniej jedną cząsteczkę dwuniciowego RNA określoną w zastrz. 1-8.
23. Środek według zastrz. 22, znamienny tym, że jest przeznaczony do zastosowań diagnostycznych.
24. Środek według zastrz. 22, znamienny tym, że jest przeznaczony do zastosowań terapeutycznych.
25. Komórka eukariotyczna transfekowana cząsteczką RNA określoną w zastrz. 1-8 lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA.
26. Komórka według zastrz. 25, będąca komórką ssaczą.
27. Komórka według zastrz. 26, będąca komórką ludzką.
28. Komórka według zastrz. 25-27, transfekowana ponadto co najmniej jednym egzogennym docelowym kwasem nukleinowym kodującym docelowe białko lub wariant lub zmutowaną postać docelowego białka, przy czym ten egzogenny docelowy kwas nukleinowy różni się od endogennego genu docelowego na poziomie kwasu nukleinowego, tak że ekspresja egzogennego docelowego kwasu nukleinowego jest zasadniczo mniej hamowana przez cząsteczkę dwuniciowego RNA niż ekspresja endogennego genu docelowego.
29. Komórka według zastrz. 28, gdzie egzogenny docelowy kwas nukleinowy jest zfuzowany z kolejną sekwencją kwasu nukleinowego kodującą wykrywalny peptyd lub polipeptyd.
30. Zastosowanie komórki eukariotycznej określonej w zastrz. 25-29 w procedurach analitycznych.
31. Zastosowanie według zastrz. 30, do analizy profili ekspresji genów.
32. Zastosowanie według zastrz. 30, do analizy proteomu.
33. Zastosowanie według zastrz. 30-32, w którym prowadzi się analizę wariantu lub zmutowanej postaci docelowego białka kodowanego przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy.
34. Zastosowanie według zastrz. 33 do identyfikacji domen funkcjonalnych docelowego białka.
35. Zastosowanie według zastrz. 30-34, w którym prowadzi się porównanie co najmniej dwóch komórek wybranych spośród:
(i) kontrolnej komórki bez zahamowania docelowego genu;
(ii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz (iii) komórki z zahamowaniem docelowego genu oraz komplementacją docelowego genu przez egzogenny docelowy kwas nukleinowy.
36. Zastosowanie według zastrz. 30-35, w którym analiza obejmuje analizę funkcjonalną i/lub fenotypową.
37. Zastosowanie według zastrz. 36 do wyodrębniania białek lub kompleksów białkowych z komórek eukariotycznych.
38. Zastosowanie według zastrz. 37 do wyodrębniania wysokocząsteczkowych kompleksów białkowych, które mogą dodatkowo zawierać kwasy nukleinowe.
39. Zastosowanie komórki eukariotycznej określonej w zastrz. 25-29 w procedurach preparatywnych.
40. Zastosowanie według zastrz. 30-39 w procedurze identyfikacji i/lub charakteryzacji środków farmakologicznych.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP00126325 | 2000-12-01 | ||
US27966101P | 2001-03-30 | 2001-03-30 | |
PCT/US2001/010188 WO2001075164A2 (en) | 2000-03-30 | 2001-03-30 | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
PCT/EP2001/013968 WO2002044321A2 (en) | 2000-12-01 | 2001-11-29 | Rna interference mediating small rna molecules |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL365784A1 PL365784A1 (pl) | 2005-01-10 |
PL218876B1 true PL218876B1 (pl) | 2015-02-27 |
Family
ID=40529293
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL365784A PL218876B1 (pl) | 2000-12-01 | 2001-11-29 | Wyizolowana cząsteczka dwuniciowego RNA, sposób wytwarzania cząsteczki dwuniciowego RNA, zastosowanie cząsteczki dwuniciowego RNA do wytwarzania leku do modulowania działania genu związanego z patogenem, genu związanego z nowotworem, oraz genu związanego z chorobą autoimmunologiczną, sposób in vitro kierowania miejscowo specyficznymi interferencjami RNA w komórce, zastosowanie sposobu in vitro do ustalania działania genu w komórce oraz do modulowania działania genu w komórce, środek farmaceutyczny, komórka eukariotyczna transfekowana cząsteczką RNA lub cząsteczką DNA kodującą tę cząsteczkę RNA, oraz zastosowanie komórki eukariotycznej w procedurach analitycznych oraz w procedurach preparatywnych |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (25) | US20040259247A1 (pl) |
EP (3) | EP1873259B1 (pl) |
JP (5) | JP4095895B2 (pl) |
KR (2) | KR100909681B1 (pl) |
CN (1) | CN100523215C (pl) |
AT (1) | ATE373724T2 (pl) |
AU (3) | AU2002235744B8 (pl) |
BR (1) | BRPI0115814B8 (pl) |
CA (1) | CA2429814C (pl) |
CY (1) | CY1119062T1 (pl) |
CZ (2) | CZ308053B6 (pl) |
DE (1) | DE60130583T3 (pl) |
DK (2) | DK2813582T3 (pl) |
ES (2) | ES2215494T5 (pl) |
HK (4) | HK1110631A1 (pl) |
HU (1) | HU230458B1 (pl) |
IL (3) | IL155991A0 (pl) |
LT (1) | LTPA2021005I1 (pl) |
MX (1) | MXPA03004836A (pl) |
NO (2) | NO333713B1 (pl) |
NZ (1) | NZ525888A (pl) |
PL (1) | PL218876B1 (pl) |
PT (1) | PT1407044E (pl) |
RU (2) | RU2322500C2 (pl) |
SI (1) | SI1407044T2 (pl) |
TR (1) | TR200401292T3 (pl) |
WO (1) | WO2002044321A2 (pl) |
ZA (1) | ZA200303929B (pl) |
Families Citing this family (1199)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993023569A1 (en) * | 1992-05-11 | 1993-11-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Method and reagent for inhibiting viral replication |
US20030206887A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
US5639647A (en) * | 1994-03-29 | 1997-06-17 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'-deoxy-2'alkylnucleotide containing nucleic acid |
US9096636B2 (en) | 1996-06-06 | 2015-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US7812149B2 (en) | 1996-06-06 | 2010-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US20040219569A1 (en) * | 1999-07-06 | 2004-11-04 | Fruma Yehiely | Gene identification method |
US20110003879A1 (en) * | 2005-03-11 | 2011-01-06 | Vincent Mark D | Antisense oligonucleotides targeted to the coding region of thymidylate synthase and uses thereof |
AUPP249298A0 (en) | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
KR101085210B1 (ko) | 1998-03-20 | 2011-11-21 | 커먼웰쓰 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치 오가니제이션 | 유전자 발현 조절방법 |
AU3751299A (en) * | 1998-04-20 | 1999-11-08 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression |
AU776150B2 (en) | 1999-01-28 | 2004-08-26 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA |
DE19956568A1 (de) * | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US7601494B2 (en) | 1999-03-17 | 2009-10-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion |
EP2270148A3 (en) | 1999-04-09 | 2011-06-08 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
US6656698B1 (en) * | 1999-06-30 | 2003-12-02 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | 12832, a novel human kinase-like molecule and uses thereof |
US6423885B1 (en) | 1999-08-13 | 2002-07-23 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) | Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells |
US8128922B2 (en) | 1999-10-20 | 2012-03-06 | Johns Hopkins University | Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen |
GB9925459D0 (en) * | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
DE10100586C1 (de) | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
DE10160151A1 (de) * | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
US7179796B2 (en) * | 2000-01-18 | 2007-02-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US8202979B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
US20080039414A1 (en) * | 2002-02-20 | 2008-02-14 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050032733A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-02-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA) |
US8273866B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-09-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA) |
US20070026394A1 (en) * | 2000-02-11 | 2007-02-01 | Lawrence Blatt | Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies |
US8202846B2 (en) | 2000-03-16 | 2012-06-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Methods and compositions for RNA interference |
JP2003526367A (ja) * | 2000-03-16 | 2003-09-09 | ジェネティカ インコーポレイテッド | Rna干渉の方法とrna干渉組成物 |
US20030084471A1 (en) * | 2000-03-16 | 2003-05-01 | David Beach | Methods and compositions for RNA interference |
DK2360253T3 (da) * | 2000-03-30 | 2014-06-16 | Whitehead Biomedical Inst | Fremgangsmåde til fremstilling af knockdown-celler eller knockdown-organismer ved hjælp af RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens og anvendelser deraf |
CA2404890C (en) * | 2000-03-30 | 2013-11-19 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
US7662791B2 (en) * | 2000-08-02 | 2010-02-16 | University Of Southern California | Gene silencing using mRNA-cDNA hybrids |
US20080242627A1 (en) * | 2000-08-02 | 2008-10-02 | University Of Southern California | Novel rna interference methods using dna-rna duplex constructs |
AU2001278117A1 (en) * | 2000-08-03 | 2002-02-18 | Johns Hopkins University | Molecular vaccine linking an endoplasmic reticulum chaperone polypeptide to an antigen |
US20080032942A1 (en) * | 2000-08-30 | 2008-02-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030190635A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-10-09 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA |
US20020165192A1 (en) * | 2000-09-19 | 2002-11-07 | Kerr William G. | Control of NK cell function and survival by modulation of ship activity |
WO2009042910A2 (en) * | 2007-09-26 | 2009-04-02 | University Of South Florida | Ship inhibition to direct hematopoietic stem cells and induce extramedullary hematopoiesis |
US7691821B2 (en) | 2001-09-19 | 2010-04-06 | University Of South Florida | Inhibition of SHIP to enhance stem cell harvest and transplantation |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
BRPI0115814B8 (pt) | 2000-12-01 | 2021-05-25 | Europaeisches Laboratorium Fuer Molekularbiologie Embl | moléculas de rna de filamento duplo, seu método de preparação e composição farmacêutica compreendendo as mesmas |
US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US8546143B2 (en) | 2001-01-09 | 2013-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
EP1229134A3 (en) * | 2001-01-31 | 2004-01-28 | Nucleonics, Inc | Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell |
EP1627061B1 (en) * | 2001-05-18 | 2009-08-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING CHEMICALLY MODIFIED SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050014172A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-01-20 | Ivan Richards | RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050239731A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-27 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030175950A1 (en) * | 2001-05-29 | 2003-09-18 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA |
US20050159380A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159382A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176664A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050137155A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050287128A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233344A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050267058A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA) |
WO2002097114A2 (en) * | 2001-05-29 | 2002-12-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | Nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of ras, her2 and hiv |
US20060142225A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-06-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cyclin dependent kinase-2 (CDK2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050256068A1 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070270579A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-11-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124569A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050079610A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-04-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050164967A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050222066A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050158735A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176025A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050159378A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050187174A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176666A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050048529A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-03-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060211642A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-09-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7109165B2 (en) * | 2001-05-18 | 2006-09-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US20050159381A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050261219A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-11-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196767A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA) |
US20050159379A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-21 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7517864B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-04-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050209180A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050191618A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090299045A1 (en) * | 2001-05-18 | 2009-12-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
US20050282188A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060148743A1 (en) * | 2001-05-18 | 2006-07-06 | Vasant Jadhav | RNA interference mediated inhibition of histone deacetylase (HDAC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233996A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050124566A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050203040A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20080161256A1 (en) * | 2001-05-18 | 2008-07-03 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050176663A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050233997A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-10-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050136436A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050143333A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20080188430A1 (en) * | 2001-05-18 | 2008-08-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070093437A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-04-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of xiap gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US20050164224A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US9994853B2 (en) | 2001-05-18 | 2018-06-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
WO2005014811A2 (en) * | 2003-08-08 | 2005-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF XIAP GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050176024A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-11 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050182007A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-08-18 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
US20050153914A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040219671A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-11-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050119212A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-06-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070042983A1 (en) * | 2001-05-18 | 2007-02-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050288242A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196781A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050196765A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-09-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050148530A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-07-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040198682A1 (en) * | 2001-11-30 | 2004-10-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050054596A1 (en) * | 2001-11-30 | 2005-03-10 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040019001A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20050164968A1 (en) * | 2001-05-18 | 2005-07-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US8008472B2 (en) | 2001-05-29 | 2011-08-30 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050019915A1 (en) * | 2001-06-21 | 2005-01-27 | Bennett C. Frank | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
CA2790034A1 (en) | 2001-06-21 | 2003-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
DE10133858A1 (de) * | 2001-07-12 | 2003-02-06 | Aventis Pharma Gmbh | Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression |
BR0211111A (pt) | 2001-07-12 | 2004-06-22 | Univ Massachusetts | Molécula de ácido nucleico isolada, vetor, célula hospedeira, transgene, precursor de rna engenheirado, animal transgênico não humano, e, método de induzir a interferência de ácido ribonucleico de um gene alvo em uma célula |
EP1409506B1 (en) | 2001-07-23 | 2012-05-09 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for rnai mediated inhibition of gene expression in mammals |
US10590418B2 (en) * | 2001-07-23 | 2020-03-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals |
US20090247606A1 (en) * | 2001-08-28 | 2009-10-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition of Adenosine A1 Receptor (ADORA1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
US20030198627A1 (en) * | 2001-09-01 | 2003-10-23 | Gert-Jan Arts | siRNA knockout assay method and constructs |
US7745418B2 (en) | 2001-10-12 | 2010-06-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting viral replication |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
WO2003035083A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Medikament zur behandlung einer fibrotischen erkrankung durch rna interferenz |
JP2005506087A (ja) * | 2001-10-26 | 2005-03-03 | リボファーマ アーゲー | プラス鎖rnaウイルスによる感染症を処置するための2本鎖リボ核酸の使用 |
WO2003035870A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms |
DE10230996A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms |
US20040063654A1 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
AU2002348163A1 (en) * | 2001-11-02 | 2003-05-19 | Intradigm Corporation | Therapeutic methods for nucleic acid delivery vehicles |
IL161733A0 (en) * | 2001-11-02 | 2005-11-20 | Insert Therapeutics Inc | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
ES2401326T3 (es) * | 2001-11-21 | 2013-04-18 | Astellas Pharma Inc. | Procedimiento para inhibir la expresión génica |
US20050075304A1 (en) * | 2001-11-30 | 2005-04-07 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070203333A1 (en) * | 2001-11-30 | 2007-08-30 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20040138163A1 (en) * | 2002-05-29 | 2004-07-15 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7294504B1 (en) | 2001-12-27 | 2007-11-13 | Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for DNA mediated gene silencing |
KR101166214B1 (ko) * | 2002-01-17 | 2012-07-16 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 아이지에프비피-2 및 아이지에프비피-5를 억제하는 양특이성 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 그 사용방법 |
DE10202419A1 (de) * | 2002-01-22 | 2003-08-07 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens |
GB0201477D0 (en) * | 2002-01-23 | 2002-03-13 | Novartis Forschungsstiftung | Methods of obtaining isoform specific expression in mammalian cells |
EP3415625A1 (en) | 2002-02-01 | 2018-12-19 | Life Technologies Corporation | Double-stranded oligonucleotides |
US20060009409A1 (en) | 2002-02-01 | 2006-01-12 | Woolf Tod M | Double-stranded oligonucleotides |
WO2003064621A2 (en) * | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Ambion, Inc. | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
US20050096289A1 (en) * | 2002-02-07 | 2005-05-05 | Hans Prydz | Methods and compositions for modulating tissue factor |
IL163547A0 (en) * | 2002-02-12 | 2005-12-18 | Quark Biotech Inc | Use of the axl receptor for diagnosis and treatment of renal disease |
WO2003068961A2 (en) * | 2002-02-13 | 2003-08-21 | Axordia Limited | Method to modify differentiation of pluripotential stem cells |
ES2312753T5 (es) | 2002-02-14 | 2012-12-13 | City Of Hope | Procedimientos para producir moléculas de ARN de interferencia en células de mamífero y usos terapéuticos para tales moléculas |
AU2003207708A1 (en) | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of map kinase genes |
US7700760B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-04-20 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20050096284A1 (en) * | 2002-02-20 | 2005-05-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7928218B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7897757B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7897752B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090137509A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-05-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLIFERATION CELL NUCLEAR ANTIGEN (PCNA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US9181551B2 (en) | 2002-02-20 | 2015-11-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090253774A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-10-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US9657294B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003106476A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-12-24 | Sirna Therapeutics, Inc | Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity |
JP2005517437A (ja) * | 2002-02-20 | 2005-06-16 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 短干渉核酸(siNa)を用いる表皮成長因子レセプター遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
US8067575B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-11-29 | Merck, Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7683166B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-03-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090192105A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-07-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA) |
US8258288B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-09-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090253773A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-10-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
WO2003070966A2 (en) * | 2002-02-20 | 2003-08-28 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA INTERFERENCE MEDIATED TARGET DISCOVERY AND TARGET VALIDATION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20090233983A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-09-17 | Sirna Therapeutics Inc. | RNA Interference Mediated Inhibition of Protein Tyrosine Phosphatase-1B (PTP-1B) Gene Expression Using Short Interfering RNA |
US7897753B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-03-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7691999B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-04-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7910724B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-03-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
EP1495041A4 (en) * | 2002-02-20 | 2006-02-01 | Sirna Therapeutics Inc | RNA interferon-mediated inhibition of gene expression of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) using short-term interfering nucleic acid (siNA) |
US20090093439A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-04-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7795422B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-09-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7893248B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-02-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090099117A1 (en) | 2002-02-20 | 2009-04-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US8013143B2 (en) * | 2002-02-20 | 2011-09-06 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US8232383B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-07-31 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20100240730A1 (en) * | 2002-02-20 | 2010-09-23 | Merck Sharp And Dohme Corp. | RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
AU2003220136A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TGF-BETA AND TGF-BETA RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7928219B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA) |
AU2003217550A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR SUPERFAMILY GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20090247613A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-10-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF B-CELL CLL/LYMPHOMA-2 (BCL2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
AU2003213005A1 (en) * | 2002-02-20 | 2003-09-09 | Sirna Therapeutics, Inc | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROTEIN KINASE C ALPHA (PKC-ALPHA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US7667029B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-02-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7928220B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-04-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7667030B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-02-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
ATE519774T1 (de) * | 2002-02-20 | 2011-08-15 | Sirna Therapeutics Inc | Durch eine störung der rna vermittelte inhibierung der genexpression des hepatitis c virus (hcv) mit kurzer, störender nukleinsäure (short interfering nucleic acid, sina) |
US7935812B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-05-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7683165B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-03-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7662952B2 (en) * | 2002-02-20 | 2010-02-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US7678897B2 (en) | 2002-02-20 | 2010-03-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20090306182A1 (en) * | 2002-02-20 | 2009-12-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MAP KINASE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20060111312A1 (en) * | 2002-02-22 | 2006-05-25 | The John Hopkins University | Antigene locks and therapeutic uses thereof |
US7332276B2 (en) * | 2002-03-01 | 2008-02-19 | Celltech R&D, Inc. | Methods to increase or decrease bone density |
EP1572923A4 (en) * | 2002-03-06 | 2007-10-31 | Rigel Pharmaceuticals Inc | NEW METHOD FOR THE INTRODUCTION AND INTRA-CELLULAR SYNTHESIS OF SIRNA MOLECULES |
US7274703B2 (en) * | 2002-03-11 | 2007-09-25 | 3Com Corporation | Stackable network units with resiliency facility |
CA2479530A1 (en) * | 2002-03-20 | 2003-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Hiv therapeutic |
US7357928B2 (en) | 2002-04-08 | 2008-04-15 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Method for the diagnosis and prognosis of malignant diseases |
MXPA04010283A (es) * | 2002-04-18 | 2005-08-18 | Acuity Pharmaceuticals Inc | Medios y metodos para la modulacion especifica de genes objetivo en el cns y el ojo y metodos para su identificacion. |
CA2524569C (en) | 2002-05-03 | 2013-10-22 | Duke University | A method of regulating gene expression |
US7199107B2 (en) * | 2002-05-23 | 2007-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
JP2006506961A (ja) | 2002-05-23 | 2006-03-02 | セプティア, インコーポレイテッド | Rna干渉によるptp1bシグナル導入の調節 |
AU2003237686A1 (en) * | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
AU2003276666A1 (en) * | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Ambion, Inc. | Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference |
US20100075423A1 (en) * | 2002-06-12 | 2010-03-25 | Life Technologies Corporation | Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference |
US20040248094A1 (en) * | 2002-06-12 | 2004-12-09 | Ford Lance P. | Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression |
EP1513538A4 (en) * | 2002-06-14 | 2007-08-22 | Mirus Bio Corp | Novel methods for introducing polynucleotides into cells |
WO2004001044A1 (en) * | 2002-06-21 | 2003-12-31 | Sinogenomax Company Ltd. | Randomised dna libraries and double-stranded rna libraries, use and method of production thereof |
CA2491034A1 (en) * | 2002-06-26 | 2004-01-08 | The Penn State Research Foundation | Methods and materials for treating human papillomavirus infections |
EP2338478B1 (en) | 2002-06-28 | 2014-07-23 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Method for producing liposomes |
EP2314690A1 (en) | 2002-07-10 | 2011-04-27 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | RNA-interference by single-stranded RNA molecules |
US7148342B2 (en) | 2002-07-24 | 2006-12-12 | The Trustees Of The University Of Pennyslvania | Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis |
SI3222724T1 (sl) | 2002-08-05 | 2019-03-29 | Silence Therapeutics Gmbh | Nadaljnje nove oblike molekul interferenčne RNA |
US20080274989A1 (en) | 2002-08-05 | 2008-11-06 | University Of Iowa Research Foundation | Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof |
AU2015264957B2 (en) * | 2002-08-05 | 2017-10-26 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering rna molecules |
DK1389637T3 (da) | 2002-08-05 | 2012-09-03 | Silence Therapeutics Ag | Interfererende RNA-molekyler med stumpe ender |
AU2012216354B2 (en) * | 2002-08-05 | 2016-01-14 | Silence Therapeutics Gmbh | Further novel forms of interfering RNA molecules |
US20050042646A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-02-24 | Davidson Beverly L. | RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof |
ES2665274T5 (es) * | 2002-08-05 | 2021-06-30 | Silence Therapeutics Gmbh | Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia |
US20040241854A1 (en) | 2002-08-05 | 2004-12-02 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing |
JP4483581B2 (ja) * | 2002-08-06 | 2010-06-16 | 東レ株式会社 | 腎疾患治療又は予防剤及び腎疾患の診断方法 |
US20060211637A1 (en) * | 2002-08-06 | 2006-09-21 | Intradigm Corporation | Methods of down regulating target gene expression in vivo by introduction of interfering rna |
US8729036B2 (en) | 2002-08-07 | 2014-05-20 | University Of Massachusetts | Compositions for RNA interference and methods of use thereof |
US20040029275A1 (en) * | 2002-08-10 | 2004-02-12 | David Brown | Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs |
WO2004019973A1 (en) | 2002-08-14 | 2004-03-11 | Atugen Ag | Use of protein kinase n beta |
WO2004018676A2 (en) * | 2002-08-21 | 2004-03-04 | The University Of British Columbia | Rnai probes targeting cancer-related proteins |
US7956176B2 (en) * | 2002-09-05 | 2011-06-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
US20060287269A1 (en) * | 2002-09-09 | 2006-12-21 | The Regents Of The University Of California | Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof |
US20080260744A1 (en) | 2002-09-09 | 2008-10-23 | Omeros Corporation | G protein coupled receptors and uses thereof |
US20040138119A1 (en) * | 2002-09-18 | 2004-07-15 | Ingo Tamm | Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis |
WO2004027063A1 (en) * | 2002-09-19 | 2004-04-01 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale-Inserm | Use of sirnas for gene silencing in antigen presenting cells |
WO2004029212A2 (en) | 2002-09-25 | 2004-04-08 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna |
US20040242518A1 (en) * | 2002-09-28 | 2004-12-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Influenza therapeutic |
US20060160759A1 (en) * | 2002-09-28 | 2006-07-20 | Jianzhu Chen | Influenza therapeutic |
KR20050084607A (ko) * | 2002-09-28 | 2005-08-26 | 매사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 인플루엔자 치료제 |
US20060240425A1 (en) * | 2002-09-30 | 2006-10-26 | Oncotherapy Science, Inc | Genes and polypeptides relating to myeloid leukemia |
US7422853B1 (en) * | 2002-10-04 | 2008-09-09 | Myriad Genetics, Inc. | RNA interference using a universal target |
JP5449639B2 (ja) | 2002-11-01 | 2014-03-19 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | HIF−1アルファのsiRNA阻害に関する組成物及び方法 |
US7892793B2 (en) * | 2002-11-04 | 2011-02-22 | University Of Massachusetts | Allele-specific RNA interference |
US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
US9150606B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
AU2003287464A1 (en) * | 2002-11-05 | 2004-06-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
US8604183B2 (en) | 2002-11-05 | 2013-12-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
WO2004041889A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
DE10322662A1 (de) * | 2002-11-06 | 2004-10-07 | Grünenthal GmbH | Wirksame und stabile DNA-Enzyme |
US9879266B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-01-30 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US9719094B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting SEC61G |
US9839649B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-12-12 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
JP2006507841A (ja) * | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
US7250496B2 (en) | 2002-11-14 | 2007-07-31 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
US7592442B2 (en) * | 2002-11-14 | 2009-09-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2) |
US9228186B2 (en) | 2002-11-14 | 2016-01-05 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7655785B1 (en) | 2002-11-14 | 2010-02-02 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
US20100113307A1 (en) * | 2002-11-14 | 2010-05-06 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF) |
US7951935B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-05-31 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC) |
US7977471B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-07-12 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting TNFα |
US9719092B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-08-01 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting CNTD2 |
US9771586B2 (en) | 2002-11-14 | 2017-09-26 | Thermo Fisher Scientific Inc. | RNAi targeting ZNF205 |
US10011836B2 (en) | 2002-11-14 | 2018-07-03 | Thermo Fisher Scientific Inc. | Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality |
US7781575B2 (en) | 2002-11-14 | 2010-08-24 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting tumor protein 53 (p53) |
US7691998B2 (en) * | 2002-11-14 | 2010-04-06 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62) |
US8198427B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-06-12 | Dharmacon, Inc. | SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1) |
US7635770B2 (en) * | 2002-11-14 | 2009-12-22 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3) |
US20080268457A1 (en) * | 2002-11-14 | 2008-10-30 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting forkhead box P3 (FOXP3) |
WO2006006948A2 (en) | 2002-11-14 | 2006-01-19 | Dharmacon, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY |
US20090227780A1 (en) * | 2002-11-14 | 2009-09-10 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting connexin 43 |
US7612196B2 (en) | 2002-11-14 | 2009-11-03 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B) |
US10920226B2 (en) * | 2002-11-14 | 2021-02-16 | Thermo Fisher Scientific Inc. | siRNA targeting LDHA |
US20090005548A1 (en) * | 2002-11-14 | 2009-01-01 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting nuclear receptor interacting protein 1 (NRIP1) |
US7619081B2 (en) * | 2002-11-14 | 2009-11-17 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2) |
US8163896B1 (en) | 2002-11-14 | 2012-04-24 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof |
CA2506619A1 (en) | 2002-11-18 | 2004-08-19 | Thomas W. Hodge | Cell lines and host nucleic acid sequences related to infectious disease |
US7064337B2 (en) | 2002-11-19 | 2006-06-20 | The Regents Of The University Of California | Radiation detection system for portable gamma-ray spectroscopy |
DE10254214A1 (de) * | 2002-11-20 | 2004-06-09 | Beiersdorf Ag | Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz |
WO2004047764A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | University Of Massachusetts | Modulation of hiv replication by rna interference |
CN1742086B (zh) * | 2002-11-22 | 2010-05-12 | 生物智囊团株式会社 | Rna干扰的目标碱基序列的搜索方法 |
JP4526228B2 (ja) * | 2002-11-22 | 2010-08-18 | 隆 森田 | RNAiによる新規治療法および治療剤 |
US7829694B2 (en) | 2002-11-26 | 2010-11-09 | Medtronic, Inc. | Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA |
US20130130231A1 (en) | 2002-11-26 | 2013-05-23 | Isaac Bentwich | Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof |
US7605249B2 (en) | 2002-11-26 | 2009-10-20 | Medtronic, Inc. | Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA |
US7217807B2 (en) | 2002-11-26 | 2007-05-15 | Rosetta Genomics Ltd | Bioinformatically detectable group of novel HIV regulatory genes and uses thereof |
US7696334B1 (en) | 2002-12-05 | 2010-04-13 | Rosetta Genomics, Ltd. | Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene |
EP1585756B1 (en) * | 2002-11-26 | 2010-04-21 | University of Massachusetts | Delivery of sirnas |
US7618948B2 (en) * | 2002-11-26 | 2009-11-17 | Medtronic, Inc. | Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA |
CN1301263C (zh) * | 2002-12-18 | 2007-02-21 | 北京昭衍新药研究中心 | 一组抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其应用 |
US9498530B2 (en) | 2002-12-24 | 2016-11-22 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same |
CA2511598C (en) | 2002-12-24 | 2016-09-13 | Rinat Neuroscience Corp. | Anti-ngf antibodies and methods using same |
JP4742023B2 (ja) * | 2003-01-03 | 2011-08-10 | ゲンシア コーポレーション | 脱毛に関与する遺伝子の、siRNA転写後遺伝子サイレンシング |
EP1604010B1 (en) | 2003-01-16 | 2010-08-11 | The Trustees of The University of Pennsylvania | COMPOSITIONS AND METHODS FOR siRNA INHIBITION OF ICAM-1 |
US7629323B2 (en) * | 2003-01-21 | 2009-12-08 | Northwestern University | Manipulation of neuronal ion channels |
US20060178297A1 (en) * | 2003-01-28 | 2006-08-10 | Troy Carol M | Systems and methods for silencing expression of a gene in a cell and uses thereof |
US20040147027A1 (en) * | 2003-01-28 | 2004-07-29 | Troy Carol M. | Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof |
US7994149B2 (en) | 2003-02-03 | 2011-08-09 | Medtronic, Inc. | Method for treatment of Huntington's disease through intracranial delivery of sirna |
US7732591B2 (en) | 2003-11-25 | 2010-06-08 | Medtronic, Inc. | Compositions, devices and methods for treatment of huntington's disease through intracranial delivery of sirna |
US20040248839A1 (en) * | 2003-02-05 | 2004-12-09 | University Of Massachusetts | RNAi targeting of viruses |
FR2850971B1 (fr) * | 2003-02-10 | 2006-08-11 | Aventis Pharma Sa | Oligonucleotide antisens inhibant l'expression de la proteine ob-rgrp et procede de detection de composes modifiant l'interaction entre la famille de la proteine ob-rgrp et le recepteur de la leptine |
US20070104688A1 (en) | 2003-02-13 | 2007-05-10 | City Of Hope | Small interfering RNA mediated transcriptional gene silencing in mammalian cells |
US20040162235A1 (en) * | 2003-02-18 | 2004-08-19 | Trubetskoy Vladimir S. | Delivery of siRNA to cells using polyampholytes |
CA2516454A1 (en) | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Rinat Neuroscience Corp. | Methods for treating pain by administering a nerve growth factor antagonist and an nsaid and compositions containing the same |
WO2004076664A2 (en) * | 2003-02-21 | 2004-09-10 | University Of South Florida | Vectors for regulating gene expression |
EP1611231A4 (en) * | 2003-02-21 | 2008-08-13 | Penn State Res Found | RNA-INTERFERING COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF |
AU2004214954A1 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and constructs for evaluation of RNAi targets and effector molecules |
CA2517259A1 (en) * | 2003-02-27 | 2004-09-10 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Induction of methylation of cpg sequences by dsrnas in mammalian cells |
JP2006520611A (ja) * | 2003-03-05 | 2006-09-14 | セネスコ テクノロジーズ,インコーポレイティド | eIF−5A1の発現を抑制するための、アンチセンス・オリゴヌクレオチド又はsiRNAの使用 |
WO2004078941A2 (en) * | 2003-03-06 | 2004-09-16 | Oligo Engine, Inc. | Modulation of gene expression using dna-rna hybrids |
ATE479752T1 (de) | 2003-03-07 | 2010-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Therapeutische zusammensetzungen |
AU2004220525B2 (en) * | 2003-03-12 | 2011-03-31 | Vasgene Therapeutics, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth |
EP1606406B2 (en) | 2003-03-21 | 2013-11-27 | Santaris Pharma A/S | SHORT INTERFERING RNA (siRNA) ANALOGUES |
JP4605799B2 (ja) * | 2003-04-02 | 2011-01-05 | ダーマコン, インコーポレイテッド | Rna干渉において使用するための修飾ポリヌクレオチド |
US20040198640A1 (en) * | 2003-04-02 | 2004-10-07 | Dharmacon, Inc. | Stabilized polynucleotides for use in RNA interference |
ATE536408T1 (de) * | 2003-04-02 | 2011-12-15 | Dharmacon Inc | Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz |
EP1631669A2 (en) | 2003-04-09 | 2006-03-08 | Biodelivery Sciences International, Inc. | Cochleate compositions directed against expression of proteins |
CA2521464C (en) | 2003-04-09 | 2013-02-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna conjugates |
US20070270360A1 (en) * | 2003-04-15 | 2007-11-22 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna Interference Mediated Inhibition of Severe Acute Respiratory Syndrome (Sars) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid |
US8796436B2 (en) | 2003-04-17 | 2014-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified iRNA agents |
US7851615B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipophilic conjugated iRNA agents |
EP1625138A4 (en) | 2003-04-17 | 2010-06-23 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | PROTECTED MONOMERS |
EP2664672A1 (en) | 2003-04-17 | 2013-11-20 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Modified iRNA agents |
US7723509B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-05-25 | Alnylam Pharmaceuticals | IRNA agents with biocleavable tethers |
US8017762B2 (en) | 2003-04-17 | 2011-09-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Modified iRNA agents |
AU2004233043A1 (en) * | 2003-04-18 | 2004-11-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for siRNA inhibition of angiopoietin 1 and 2 and their receptor Tie2 |
WO2005032595A2 (en) * | 2003-04-23 | 2005-04-14 | Georgetown University | Methods and compositions for the inhibition of stat5 in prostate cancer cells |
EP1644048B1 (en) * | 2003-05-05 | 2015-04-29 | Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein |
EP1623032A2 (en) | 2003-05-09 | 2006-02-08 | University of Pittsburgh of the Commonwealth System of Higher Education | Small interfering rna libraries and methods of synthesis and use |
WO2004101756A2 (en) | 2003-05-09 | 2004-11-25 | Diadexus, Inc. | Ovr110 antibody compositions and methods of use |
AU2003241409A1 (en) * | 2003-05-12 | 2005-01-21 | Potomac Pharmaceuticals, Inc. | Gene expression suppression agents |
WO2004104199A2 (en) * | 2003-05-15 | 2004-12-02 | Oligo Engine, Inc. | Modulation of gene expression using dna-dna hybrids |
JP2006525811A (ja) * | 2003-05-16 | 2006-11-16 | ロゼッタ インファーマティクス エルエルシー | Rna干渉の方法と組成物 |
WO2004100990A1 (ja) | 2003-05-19 | 2004-11-25 | Genecare Research Institute Co., Ltd. | 癌細胞に対するアポトーシス誘導剤 |
JP4505749B2 (ja) | 2003-05-30 | 2010-07-21 | 日本新薬株式会社 | Bcl−2の発現抑制をするオリゴ二本鎖RNAとそれを含有する医薬組成物 |
WO2004105774A1 (ja) * | 2003-05-30 | 2004-12-09 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | オリゴ核酸担持複合体、当該複合体を含有する医薬組成物 |
US7750144B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-07-06 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing |
WO2005001043A2 (en) * | 2003-06-02 | 2005-01-06 | University Of Massachusetts | METHODS AND COMPOSITIONS FOR ENHANCING THE EFFICACY AND SPECIFICITY OF FNAi |
DK1633767T3 (en) | 2003-06-02 | 2019-03-25 | Univ Massachusetts | METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING |
EP2241572A3 (en) | 2003-06-03 | 2011-04-06 | Eli Lilly And Company | Modulation of survivin expression |
US20050019918A1 (en) * | 2003-06-03 | 2005-01-27 | Hidetoshi Sumimoto | Treatment of cancer by inhibiting BRAF expression |
US7595306B2 (en) * | 2003-06-09 | 2009-09-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Method of treating neurodegenerative disease |
US8575327B2 (en) | 2003-06-12 | 2013-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing |
EP1486564A1 (de) * | 2003-06-13 | 2004-12-15 | Ribopharma AG | SiRNA mit erhöhter Stabilität in Serum |
ES2905724T3 (es) | 2003-06-13 | 2022-04-11 | Alnylam Europe Ag | Acido ribonucleico bicatenario con elevada eficacia en un organismo |
US20060241072A1 (en) * | 2003-06-20 | 2006-10-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds for use in gene modulation |
EP1644475A4 (en) * | 2003-06-20 | 2009-06-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | DOUBLE-STRAND COMPOSITIONS WITH A 3'-ENDO-MODIFIED STRING FOR USE IN GENE MODULATION |
AU2004257167B2 (en) * | 2003-07-03 | 2012-03-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Inhibition of Syk kinase expression |
US20050136430A1 (en) * | 2003-07-15 | 2005-06-23 | California Institute Of Technology | Inhibitor nucleic acids |
US20050256071A1 (en) * | 2003-07-15 | 2005-11-17 | California Institute Of Technology | Inhibitor nucleic acids |
WO2005007196A2 (en) * | 2003-07-16 | 2005-01-27 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
US20050079614A1 (en) * | 2003-07-21 | 2005-04-14 | Reinhart Brenda J. | RNAs able to modulate chromatin silencing |
US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
US7888497B2 (en) | 2003-08-13 | 2011-02-15 | Rosetta Genomics Ltd. | Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof |
EP1664274A4 (en) * | 2003-08-13 | 2010-06-30 | Univ Illinois | SILENCING OF THE EXPRESSION OF THE TGF-BETA-RECEPTOR TYPE II BY SIRNA |
US7825235B2 (en) * | 2003-08-18 | 2010-11-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression |
WO2005035759A2 (en) * | 2003-08-20 | 2005-04-21 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1 (HIF1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
US20050136437A1 (en) * | 2003-08-25 | 2005-06-23 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nanoparticles for delivery of nucleic acids and stable double-stranded RNA |
BRPI0413146A (pt) * | 2003-08-28 | 2006-10-03 | Novartis Ag | dúplex rna interferindo tendo extremidades-embotadas e modificações-3 |
US8501705B2 (en) * | 2003-09-11 | 2013-08-06 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and materials for treating autoimmune and/or complement mediated diseases and conditions |
US8680063B2 (en) | 2003-09-12 | 2014-03-25 | University Of Massachusetts | RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders |
EP3760234B1 (en) * | 2003-09-12 | 2023-11-01 | University of Massachusetts | Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders |
EP2256201A3 (en) | 2003-09-18 | 2012-07-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E expression |
AU2004276823A1 (en) * | 2003-09-22 | 2005-04-07 | Merck And Co., Inc | Synthetic lethal screen using RNA interference |
WO2005033310A1 (de) * | 2003-10-01 | 2005-04-14 | Grünenthal GmbH | Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen |
CA2541852A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-05-12 | Quark Biotech, Inc. | Bone morphogenetic protein (bmp) 2a and uses thereof |
WO2005035769A2 (en) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Gene silencing by using micro-rna molecules |
WO2005045032A2 (en) * | 2003-10-20 | 2005-05-19 | Sima Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
EP1694838A2 (en) * | 2003-10-23 | 2006-08-30 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GPRA AND AAA1 GENE EXPRESSION USING SHORT NUCLEIC ACID (siNA) |
EP1682661A2 (en) * | 2003-10-23 | 2006-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
WO2005042708A2 (en) | 2003-10-27 | 2005-05-12 | Rosetta Inpharmatics Llc | METHOD OF DESIGNING siRNAS FOR GENE SILENCING |
US8227434B1 (en) | 2003-11-04 | 2012-07-24 | H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. | Materials and methods for treating oncological disorders |
WO2005047504A1 (en) * | 2003-11-07 | 2005-05-26 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Induction of cellular senescence by cdk4 disruption for tumor suppression and regression |
EP1697515A4 (en) * | 2003-11-12 | 2008-02-06 | Austin Research Inst | CONJUGATE DNA-EXCIPIENT |
JP2005168485A (ja) * | 2003-11-20 | 2005-06-30 | Tsutomu Suzuki | siRNAの設計方法 |
US7807646B1 (en) * | 2003-11-20 | 2010-10-05 | University Of South Florida | SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production |
US7763592B1 (en) | 2003-11-20 | 2010-07-27 | University Of South Florida | SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production |
US20050208658A1 (en) * | 2003-11-21 | 2005-09-22 | The University Of Maryland | RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression |
US20100145038A1 (en) * | 2003-11-24 | 2010-06-10 | Merck & Co., Inc. | RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) |
EP3427585A1 (en) * | 2003-11-26 | 2019-01-16 | University of Massachusetts | Sequence-specific inhibition of small rna function |
WO2005053725A2 (en) * | 2003-11-26 | 2005-06-16 | The Queen's University Of Belfast | Cancer treatment |
EP1689414A4 (en) | 2003-12-04 | 2009-04-08 | Univ South Florida Res Foundat | POLYNUCLEOTIDES FOR REDUCING GENE EXPRESSION OF THE RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS |
US20050234000A1 (en) * | 2003-12-12 | 2005-10-20 | Mitchell Gordon S | SiRNA delivery into mammalian nerve cells |
WO2005068630A1 (ja) * | 2003-12-16 | 2005-07-28 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | 干渉用二重鎖rna |
US20060134787A1 (en) | 2004-12-22 | 2006-06-22 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA |
AU2004308484A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for combined therapy of disease |
US20070161586A1 (en) * | 2004-01-16 | 2007-07-12 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Drug for preventing and treating atherosclerosis |
EP1758998B1 (en) | 2004-01-30 | 2010-12-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases |
WO2005073378A1 (en) * | 2004-01-30 | 2005-08-11 | Santaris Pharma A/S | MODIFIED SHORT INTERFERING RNA (MODIFIED siRNA) |
US20070269889A1 (en) * | 2004-02-06 | 2007-11-22 | Dharmacon, Inc. | Stabilized siRNAs as transfection controls and silencing reagents |
CA2554212A1 (en) * | 2004-02-10 | 2005-08-25 | Sirna Therapeutics, Inc. | Rna interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional sina) |
US20060019914A1 (en) | 2004-02-11 | 2006-01-26 | University Of Tennessee Research Foundation | Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase DNAzymes |
US20050273868A1 (en) * | 2004-02-17 | 2005-12-08 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing RISC activity in vitro and in vivo |
WO2005079533A2 (en) * | 2004-02-17 | 2005-09-01 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for mediating gene silencing |
EP1566202A1 (en) * | 2004-02-23 | 2005-08-24 | Sahltech I Göteborg AB | Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis |
WO2005082458A1 (en) * | 2004-02-23 | 2005-09-09 | Genzyme Corporation | Muc1 antagonist enhancement of death receptor ligand-induced apoptosis |
EP1958964A3 (en) | 2004-02-24 | 2009-01-07 | The Government of the United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | RAB9A, RAB11A, and modulators thereof related to infectious disease |
US7691823B2 (en) * | 2004-03-05 | 2010-04-06 | University Of Massachusetts | RIP140 regulation of glucose transport |
US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
US20050202075A1 (en) * | 2004-03-12 | 2005-09-15 | Pardridge William M. | Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers |
EP1735009A4 (en) | 2004-03-12 | 2011-03-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | RNAI AGENTS TARGETING THE VASCULAR ENDOTHELIUM GROWTH FACTOR (VEGF) |
US20070265220A1 (en) | 2004-03-15 | 2007-11-15 | City Of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA |
WO2005089287A2 (en) * | 2004-03-15 | 2005-09-29 | City Of Hope | Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna |
US20050208090A1 (en) * | 2004-03-18 | 2005-09-22 | Medtronic, Inc. | Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system |
US20050272682A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-12-08 | Evers Bernard M | SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy |
US7851452B2 (en) * | 2004-03-22 | 2010-12-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of use of bcl-6-derived nucleotides to induce apoptosis |
AU2005231692B2 (en) * | 2004-03-26 | 2011-01-27 | Curis, Inc. | RNA interference modulators of Hedgehog signaling and uses thereof |
US7872117B2 (en) * | 2004-03-26 | 2011-01-18 | Van Andel Research Institute | c-met siRNA adenovirus vectors inhibit cancer cell growth, invasion and tumorigenicity |
JPWO2005095647A1 (ja) * | 2004-03-31 | 2008-02-21 | タカラバイオ株式会社 | siRNAのスクリーニング方法 |
JP2005312428A (ja) * | 2004-03-31 | 2005-11-10 | Keio Gijuku | Skp−2発現抑制を利用した癌の治療 |
KR101147147B1 (ko) * | 2004-04-01 | 2012-05-25 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Rna 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드 |
AU2005230684B2 (en) * | 2004-04-05 | 2011-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification |
US8193332B2 (en) | 2004-04-09 | 2012-06-05 | Genecare Research Institute Co., Ltd. | Cancer cell-specific apoptosis-inducing agents that target chromosome stabilization-associated genes |
US20060078902A1 (en) * | 2004-04-15 | 2006-04-13 | Michaeline Bunting | Method and compositions for RNA interference |
US20060014289A1 (en) * | 2004-04-20 | 2006-01-19 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded RNA or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells |
CA2557532A1 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-10 | Angela M. Christiano | Inhibition of hairless protein mrna |
AU2005325262B2 (en) | 2004-04-27 | 2011-08-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety |
AU2005247319B2 (en) | 2004-04-28 | 2011-12-01 | Molecules For Health, Inc. | Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders |
JP4584987B2 (ja) | 2004-04-30 | 2010-11-24 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | C5修飾ピリミジンを含むオリゴヌクレオチド |
US20060040882A1 (en) * | 2004-05-04 | 2006-02-23 | Lishan Chen | Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells |
US20050260214A1 (en) * | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
US7605250B2 (en) * | 2004-05-12 | 2009-10-20 | Dharmacon, Inc. | siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D |
US20110117088A1 (en) * | 2004-05-12 | 2011-05-19 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of rna interference sequences into targeted cells and tissues |
US20060030003A1 (en) * | 2004-05-12 | 2006-02-09 | Simon Michael R | Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues |
WO2005110464A2 (en) * | 2004-05-14 | 2005-11-24 | Oregon Health & Science University | Irx5 inhibition as treatment for hyperproliferative disorders |
US7687616B1 (en) | 2004-05-14 | 2010-03-30 | Rosetta Genomics Ltd | Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof |
EP1784501B1 (en) | 2004-05-14 | 2015-11-18 | Rosetta Genomics Ltd | VIRAL AND VIRUS ASSOCIATED MicroRNAS AND USES THEREOF |
US10508277B2 (en) | 2004-05-24 | 2019-12-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
AU2005287383B2 (en) * | 2004-05-25 | 2011-09-22 | Chimeros, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
US7795419B2 (en) * | 2004-05-26 | 2010-09-14 | Rosetta Genomics Ltd. | Viral and viral associated miRNAs and uses thereof |
AU2005250432B2 (en) | 2004-05-28 | 2011-09-15 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving microRNA |
US8394947B2 (en) | 2004-06-03 | 2013-03-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Positionally modified siRNA constructs |
EP1602926A1 (en) * | 2004-06-04 | 2005-12-07 | University of Geneva | Novel means and methods for the treatment of hearing loss and phantom hearing |
WO2005121348A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Lipid encapsulated interfering rna |
CA2569645C (en) * | 2004-06-07 | 2014-10-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods of use |
US20060008907A1 (en) * | 2004-06-09 | 2006-01-12 | The Curators Of The University Of Missouri | Control of gene expression via light activated RNA interference |
US20090215860A1 (en) * | 2004-06-17 | 2009-08-27 | The Regents Of The University Of California | Compositions and methods for regulating gene transcription |
US20060051815A1 (en) * | 2004-06-25 | 2006-03-09 | The J. David Gladstone Institutes | Methods of treating smooth muscle cell disorders |
JP2008504840A (ja) | 2004-06-30 | 2008-02-21 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 非リン酸骨格結合を含むオリゴヌクレオチド |
WO2006002538A1 (en) * | 2004-07-02 | 2006-01-12 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Immunostimulatory sirna molecules and uses therefor |
CA2576293C (en) | 2004-07-12 | 2016-10-04 | Nicola J. Mabjeesh | Agents capable of downregulating an msf-a-dependent hif-1alpha and use thereof in cancer treatment |
WO2006112869A2 (en) * | 2004-07-19 | 2006-10-26 | Baylor College Of Medicine | Modulation of cytokine signaling regulators and applications for immunotherapy |
EP1828215A2 (en) | 2004-07-21 | 2007-09-05 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase |
CA2573671A1 (en) * | 2004-07-21 | 2006-02-23 | Medtronic, Inc. | Methods for reducing or preventing localized fibrosis using sirna |
EP1778310A2 (en) * | 2004-07-21 | 2007-05-02 | Medtronic, Inc. | Medical devices and methods for reducing localized fibrosis |
WO2007001324A2 (en) | 2004-07-23 | 2007-01-04 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and materials for determining pain sensitivity and predicting and treating related disorders |
US7632932B2 (en) | 2004-08-04 | 2009-12-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase |
CA2576233C (en) | 2004-08-10 | 2016-03-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conjugate comprising an antagomir and a ligand |
WO2006020557A2 (en) * | 2004-08-10 | 2006-02-23 | Immusol, Inc. | Methods of using or identifying agents that inhibit cancer growth |
US20060063181A1 (en) * | 2004-08-13 | 2006-03-23 | Green Pamela J | Method for identification and quantification of short or small RNA molecules |
CN101123994B (zh) | 2004-08-16 | 2012-11-14 | 夸克医药公司 | Rtp801的抑制剂的治疗性用途 |
US20070021366A1 (en) * | 2004-11-19 | 2007-01-25 | Srivastava Satish K | Structural-based inhibitors of the glutathione binding site in aldose reductase, methods of screening therefor and methods of use |
CN105251024A (zh) * | 2004-08-23 | 2016-01-20 | 西伦蒂斯私人股份公司 | 眼病的治疗 |
RU2410430C2 (ru) * | 2004-08-31 | 2011-01-27 | Силентис С.А.У. | Способы и композиции для ингибирования экспрессии рецептора p2х7 |
WO2006026738A2 (en) | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Qiagen North American Holdings, Inc. | Methods and compositions for rna amplification and detection using an rna-dependent rna-polymerase |
US7884086B2 (en) * | 2004-09-08 | 2011-02-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays |
JP2008512500A (ja) | 2004-09-10 | 2008-04-24 | ソマジェニックス インコーポレーティッド | ウィルス遺伝子発現を効率的に阻害する低分子干渉rnaおよびその使用方法 |
WO2006033965A2 (en) * | 2004-09-16 | 2006-03-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Nadph oxidase inhibition pharmacotherapies for obstructive sleep apnea syndrome and its associated morbidities |
FI20041204A0 (fi) | 2004-09-16 | 2004-09-16 | Riikka Lund | Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi |
CA2580707C (en) | 2004-09-24 | 2014-07-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of apob and uses thereof |
MX2007003795A (es) | 2004-09-28 | 2007-07-11 | Quark Biotech Inc | Oligoribonucleotidos y metodos de uso de los mismos para tratamiento de la alopecia, insuficiencia renal aguda y otras enfermedades. |
US20090028862A1 (en) * | 2004-09-30 | 2009-01-29 | Arndt Gregory M | Emmprin antagonists and uses thereof |
WO2006047495A2 (en) | 2004-10-21 | 2006-05-04 | Venganza Inc | Methods and materials for conferring resistance to pests and pathogens of plants |
US20060110440A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-25 | Kiminobu Sugaya | Method and system for biasing cellular development |
US7790878B2 (en) * | 2004-10-22 | 2010-09-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof |
JP4704435B2 (ja) * | 2004-10-22 | 2011-06-15 | ニューレジェニクス リミテッド | ニューロン再生 |
US20060089324A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-04-27 | Sailen Barik | RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof |
SG158921A1 (en) * | 2004-10-27 | 2010-02-26 | Schering Corp | Compositions and methods for short interfering nucleic acid inhibition of nav1.8 |
SG156690A1 (en) | 2004-10-27 | 2009-11-26 | Univ Vanderbilt | Mammalian genes involved in infection |
US8293253B2 (en) * | 2004-10-28 | 2012-10-23 | Idexx Laboratories, Inc. | Compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
US20060094676A1 (en) * | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Ronit Lahav | Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity |
WO2007001448A2 (en) | 2004-11-04 | 2007-01-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals |
ES2534304T3 (es) | 2004-11-12 | 2015-04-21 | Asuragen, Inc. | Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN |
US20060105052A1 (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Acar Havva Y | Cationic nanoparticle having an inorganic core |
WO2006055635A2 (en) * | 2004-11-15 | 2006-05-26 | Mount Sinai School Of Medicine Of New York University | Compositions and methods for altering wnt autocrine signaling |
WO2006053430A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of apolipoprotein b |
WO2006055727A2 (en) * | 2004-11-18 | 2006-05-26 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | MULTICISTRONIC siRNA CONSTRUCTS TO INHIBIT TUMORS |
KR101330229B1 (ko) * | 2004-11-19 | 2013-11-15 | 가부시키가이샤 진케어켄큐쇼 | 암세포 특이적 세포증식 억제제 |
US7923206B2 (en) * | 2004-11-22 | 2011-04-12 | Dharmacon, Inc. | Method of determining a cellular response to a biological agent |
US7923207B2 (en) | 2004-11-22 | 2011-04-12 | Dharmacon, Inc. | Apparatus and system having dry gene silencing pools |
US7935811B2 (en) | 2004-11-22 | 2011-05-03 | Dharmacon, Inc. | Apparatus and system having dry gene silencing compositions |
ATE539758T1 (de) * | 2004-11-24 | 2012-01-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai-modulation des bcr-abl-fusionsgens und dessen verwendungen |
WO2006060454A2 (en) * | 2004-12-02 | 2006-06-08 | B-Bridge International, Inc. | Methods of designing small interfering rnas, antisense polynucleotides, and other hybridizing polynucleotides |
US20060165667A1 (en) * | 2004-12-03 | 2006-07-27 | Case Western Reserve University | Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization |
US7361752B2 (en) * | 2004-12-14 | 2008-04-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of MLL-AF4 and uses thereof |
KR100967868B1 (ko) | 2004-12-17 | 2010-07-05 | 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 | 박테리아 매개 유전자 침묵을 위한 조성물 및 이것을이용하는 방법 |
GB0427916D0 (en) * | 2004-12-21 | 2005-01-19 | Astrazeneca Ab | Method |
TWI386225B (zh) | 2004-12-23 | 2013-02-21 | Alcon Inc | 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子(CTGF)RNA干擾(RNAi)抑制技術 |
US20060142228A1 (en) | 2004-12-23 | 2006-06-29 | Ambion, Inc. | Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference |
ES2548515T3 (es) | 2004-12-27 | 2015-10-19 | Silence Therapeutics Gmbh | Complejos lipídicos recubiertos con PEG y su uso |
CN101124339A (zh) * | 2004-12-30 | 2008-02-13 | 托德·M·豪泽 | 使用自我保护寡核苷酸调节基因表达的组合物和方法 |
CA2594040A1 (en) * | 2005-01-06 | 2006-07-13 | The Johns Hopkins University | Rna interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by dna and transfected dendritic cell vaccines |
JP2008526883A (ja) | 2005-01-07 | 2008-07-24 | ディアデクサス インコーポレーテッド | Ovr110抗体組成物および使用方法 |
JP5081630B2 (ja) * | 2005-01-07 | 2012-11-28 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | RSVのRNAi調節及びその治療上の使用方法 |
EP1841464B1 (en) * | 2005-01-24 | 2012-06-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Rnai modulation of the nogo-l or nogo-r gene and uses thereof |
JP2008528004A (ja) * | 2005-01-26 | 2008-07-31 | ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー | 突然変異癌タンパク質抗原およびカルレティキュリンをコードするプラスミドを用いる抗癌dnaワクチン |
TW200639253A (en) * | 2005-02-01 | 2006-11-16 | Alcon Inc | RNAi-mediated inhibition of ocular targets |
JP2008530084A (ja) * | 2005-02-14 | 2008-08-07 | 株式会社Hvc戦略研究所 | 癌の転移を予防するための薬剤 |
ATE526421T1 (de) | 2005-02-14 | 2011-10-15 | Univ Iowa Res Found | Verfahren und reagenzien zur behandlung und diagnose von altersbedingter makuladegeneration |
US8859749B2 (en) | 2005-03-08 | 2014-10-14 | Qiagen Gmbh | Modified short interfering RNA |
JP2008533050A (ja) | 2005-03-11 | 2008-08-21 | アルコン,インコーポレイテッド | 緑内障を処置するためのフリッツルド関連蛋白質―1のrnai媒介性阻害 |
GB0505081D0 (en) * | 2005-03-14 | 2005-04-20 | Genomica Sau | Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology |
US8999943B2 (en) * | 2005-03-14 | 2015-04-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antigene oligomers inhibit transcription |
JP4585342B2 (ja) * | 2005-03-18 | 2010-11-24 | 株式会社資生堂 | 不全角化を抑制する物質のスクリーニング方法、同方法によりスクリーニングされた物質及び不全角化を抑制する方法 |
EP1877556B1 (en) * | 2005-03-25 | 2011-09-14 | Medtronic, Inc. | Use of anti-tnf or anti-il1 rnai to suppress pro- inflammatory cytokine actions locally to treat pain |
EP1866414B9 (en) * | 2005-03-31 | 2012-10-03 | Calando Pharmaceuticals, Inc. | Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof |
WO2006113743A2 (en) * | 2005-04-18 | 2006-10-26 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for rna interference with sialidase expression and uses thereof |
US7902352B2 (en) | 2005-05-06 | 2011-03-08 | Medtronic, Inc. | Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression |
EP1885854B1 (en) | 2005-05-06 | 2012-10-17 | Medtronic, Inc. | Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression |
WO2007008300A2 (en) * | 2005-05-31 | 2007-01-18 | ECOLE POLYTECHNIQUE FéDéRALE DE LAUSANNE | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
US20070048293A1 (en) * | 2005-05-31 | 2007-03-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Manipulation of PTEN in T cells as a strategy to modulate immune responses |
CN101213300B (zh) * | 2005-06-01 | 2013-01-23 | 聚加转染股份有限公司 | 用于rna干扰的寡核苷酸及其生物学应用 |
AU2006252456A1 (en) * | 2005-06-01 | 2006-12-07 | Duke University | Method of inhibiting intimal hyperplasia |
CN100445381C (zh) * | 2005-06-10 | 2008-12-24 | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 | 带有单链polyA尾巴的siRNA分子制备方法和应用 |
US20100266574A1 (en) * | 2005-06-10 | 2010-10-21 | Orna Mor | Oligoribonucleotides and Methods of Use Thereof for Treatment of Fibrotic Conditions and Other Diseases |
WO2006138145A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
US7838503B2 (en) * | 2005-06-15 | 2010-11-23 | Children's Medical Center Corporation | Methods for extending the replicative lifespan of cells |
FI20050640A0 (fi) * | 2005-06-16 | 2005-06-16 | Faron Pharmaceuticals Oy | Yhdisteitä amiinioksidaasista riippuvien sairauksien tai häiriöiden hoitoon tai estoon |
US7868159B2 (en) * | 2005-06-23 | 2011-01-11 | Baylor College Of Medicine | Modulation of negative immune regulators and applications for immunotherapy |
WO2007002718A2 (en) * | 2005-06-27 | 2007-01-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai modulation of hif-1 and theraputic uses thereof |
US9133517B2 (en) | 2005-06-28 | 2015-09-15 | Medtronics, Inc. | Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin |
CN101273130B (zh) | 2005-07-07 | 2012-05-30 | 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司 | 用于下调h19的核酸物质及其使用方法 |
US8703769B2 (en) | 2005-07-15 | 2014-04-22 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Use of EGFR inhibitors to prevent or treat obesity |
EP1910528A2 (de) * | 2005-07-25 | 2008-04-16 | Technische Universität Dresden | Rna-abhängige rna-polymerase, verfahren und kits zur amplifikation und / oder markierung von rna |
US20070111227A1 (en) * | 2005-07-28 | 2007-05-17 | Green Pamela J | Small regulatory RNAs and methods of use |
US7919583B2 (en) | 2005-08-08 | 2011-04-05 | Discovery Genomics, Inc. | Integration-site directed vector systems |
US20070213257A1 (en) * | 2005-08-12 | 2007-09-13 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Compositions and methods for complexes of nucleic acids and peptides |
AU2006279280A1 (en) | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating neurological disease |
US20070054873A1 (en) * | 2005-08-26 | 2007-03-08 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation |
EP1937312B1 (en) * | 2005-08-30 | 2016-06-29 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing |
WO2007030167A1 (en) * | 2005-09-02 | 2007-03-15 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules |
US20090221673A1 (en) * | 2005-09-13 | 2009-09-03 | Rigby William F C | Compositions and Methods for Regulating RNA Translation via CD154 CA-Dinucleotide Repeat |
CA2620387C (en) | 2005-09-20 | 2018-09-18 | Basf Plant Science Gmbh | Methods for controlling gene expression using ta-sirna |
FR2890859B1 (fr) * | 2005-09-21 | 2012-12-21 | Oreal | Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase |
US8933043B2 (en) * | 2005-09-30 | 2015-01-13 | St. Jude Children's Research Hospital | Methods for regulation of p53 translation and function |
US8168584B2 (en) | 2005-10-08 | 2012-05-01 | Potentia Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof |
US8080534B2 (en) | 2005-10-14 | 2011-12-20 | Phigenix, Inc | Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer |
WO2007048046A2 (en) * | 2005-10-20 | 2007-04-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of filovirus gene expression |
GB0521351D0 (en) * | 2005-10-20 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of TRPV expression levels |
GB0521716D0 (en) * | 2005-10-25 | 2005-11-30 | Genomica Sau | Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases |
WO2007049690A1 (ja) * | 2005-10-27 | 2007-05-03 | National University Corporation NARA Institute of Science and Technology | Singarの発現または機能の抑制による神経軸索の形成・伸長と神経再生への応用 |
EP1941059A4 (en) | 2005-10-28 | 2010-11-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE EXPRESSION OF THE HUNTINGTIN GENE |
EP2395012B8 (en) * | 2005-11-02 | 2018-06-06 | Arbutus Biopharma Corporation | Modified siRNA molecules and uses thereof |
WO2007056326A2 (en) * | 2005-11-04 | 2007-05-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of nav1.8 gene |
WO2007051316A1 (en) * | 2005-11-07 | 2007-05-10 | British Columbia Cancer Agency | Inhibition of autophagy genes in cancer chemotherapy |
US20100069461A1 (en) | 2005-11-09 | 2010-03-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor v leiden mutant gene |
AU2006336624B2 (en) * | 2005-11-17 | 2010-11-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal DNA |
US8603991B2 (en) | 2005-11-18 | 2013-12-10 | Gradalis, Inc. | Individualized cancer therapy |
US8916530B2 (en) | 2005-11-18 | 2014-12-23 | Gradalis, Inc. | Individualized cancer therapy |
US20080125384A1 (en) * | 2005-11-21 | 2008-05-29 | Shuewi Yang | Simultaneous silencing and restoration of gene function |
JP4901753B2 (ja) * | 2005-11-24 | 2012-03-21 | 学校法人自治医科大学 | プロヒビチン2(phb2)のミトコンドリア機能 |
WO2007070682A2 (en) | 2005-12-15 | 2007-06-21 | Massachusetts Institute Of Technology | System for screening particles |
DE602006014026D1 (de) * | 2005-12-22 | 2010-06-10 | Opko Ophthalmics Llc | Zusammensetzungen und verfahren zur regulierung eines komplementsystems |
AR057252A1 (es) * | 2005-12-27 | 2007-11-21 | Alcon Mfg Ltd | Inhibicion de rho quinasa mediada por arni para el tratamiento de trastornos oculares |
EP1976567B1 (en) | 2005-12-28 | 2020-05-13 | The Scripps Research Institute | Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets |
US8673873B1 (en) * | 2005-12-28 | 2014-03-18 | Alcon Research, Ltd. | RNAi-mediated inhibition of phosphodiesterase type 4 for treatment of cAMP-related ocular disorders |
EP1973574B1 (en) * | 2005-12-30 | 2014-04-02 | Institut Gustave Roussy | Use of inhibitors of scinderin and/or of ephrin-a1 for treating tumors |
CA2637254A1 (en) * | 2006-01-17 | 2007-07-26 | Biolex Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for humanization and optimization of n-glycans in plants |
US20090060921A1 (en) * | 2006-01-17 | 2009-03-05 | Biolex Therapeutics, Inc. | Glycan-optimized anti-cd20 antibodies |
US20120208824A1 (en) | 2006-01-20 | 2012-08-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | ROS Kinase in Lung Cancer |
EP3360965A1 (en) | 2006-01-20 | 2018-08-15 | Cell Signaling Technology, Inc. | Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma |
US7825099B2 (en) | 2006-01-20 | 2010-11-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes |
NL2000439C2 (nl) | 2006-01-20 | 2009-03-16 | Quark Biotech | Therapeutische toepassingen van inhibitoren van RTP801. |
US20070259827A1 (en) * | 2006-01-25 | 2007-11-08 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for enhancing discriminatory RNA interference |
WO2007085485A2 (en) * | 2006-01-27 | 2007-08-02 | Santaris Pharma A/S | Lna modified phosphorothiolated oligonucleotides |
US8229398B2 (en) * | 2006-01-30 | 2012-07-24 | Qualcomm Incorporated | GSM authentication in a CDMA network |
EP1989307B1 (en) * | 2006-02-08 | 2012-08-08 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | NOVEL TANDEM siRNAS |
US7910566B2 (en) | 2006-03-09 | 2011-03-22 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA |
FI20060246A0 (fi) | 2006-03-16 | 2006-03-16 | Jukka Westermarck | Uusi kasvua stimuloiva proteiini ja sen käyttö |
US20100056441A1 (en) * | 2006-03-17 | 2010-03-04 | Costa Robert H | Method for Inhibiting Angiogenesis |
DK2002004T3 (en) | 2006-03-23 | 2015-11-30 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | LITTLE INTERNAL SEGMENTED INTERFERENCE RNA |
BRPI0709147A2 (pt) * | 2006-03-24 | 2011-06-28 | Novartis Ag | composições de dsrna e métodos para tratamento de infecção por hpv |
FR2898908A1 (fr) | 2006-03-24 | 2007-09-28 | Agronomique Inst Nat Rech | Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence |
US20070238691A1 (en) * | 2006-03-29 | 2007-10-11 | Senesco Technologies, Inc. | Inhibition of HIV replication and expression of p24 with eIF-5A |
WO2007115168A2 (en) | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 gene |
CA2648099C (en) | 2006-03-31 | 2012-05-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc | System for targeted delivery of therapeutic agents |
US20090226446A1 (en) * | 2006-04-06 | 2009-09-10 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentilchen Rechts | Method to Inhibit the Propagation of an Undesired Cell Population |
ATE460922T1 (de) * | 2006-04-07 | 2010-04-15 | Chimeros Inc | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von b-zellen-malignomen |
EP2010226B1 (en) | 2006-04-07 | 2014-01-15 | The Research Foundation of State University of New York | Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency |
US9044461B2 (en) | 2006-04-07 | 2015-06-02 | The Research Foundation Of State University Of New York | Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency |
EP2371957A1 (en) * | 2006-04-12 | 2011-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to hepcidin |
WO2007120842A2 (en) * | 2006-04-13 | 2007-10-25 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods and compositions for targeting c-rel |
US8969295B2 (en) * | 2006-04-14 | 2015-03-03 | Massachusetts Institute Of Technology | Identifying and modulating molecular pathways that mediate nervous system plasticity |
EP2447360A1 (en) | 2006-04-14 | 2012-05-02 | Cell Signaling Technology, Inc. | Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors |
US7691824B2 (en) * | 2006-04-28 | 2010-04-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the JC virus |
GB0608838D0 (en) | 2006-05-04 | 2006-06-14 | Novartis Ag | Organic compounds |
NZ572666A (en) | 2006-05-11 | 2010-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions comprising double stranded rna and methods for inhibiting expression of the pcsk9 gene |
CA2652280C (en) | 2006-05-15 | 2014-01-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymers for functional particles |
US20090130212A1 (en) * | 2006-05-15 | 2009-05-21 | Physical Pharmaceutica, Llc | Composition and improved method for preparation of small particles |
US20070269892A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-22 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | FORMULATIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY dsRNA |
EP2023937B1 (en) * | 2006-05-19 | 2011-10-12 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Rnai modulation of aha and therapeutic uses thereof |
EP2021352A4 (en) * | 2006-05-19 | 2009-10-28 | Scripps Research Inst | TREATMENT OF PROTEIN MISCONDUCT |
WO2007137220A2 (en) * | 2006-05-22 | 2007-11-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of ikk-b gene |
US9273356B2 (en) | 2006-05-24 | 2016-03-01 | Medtronic, Inc. | Methods and kits for linking polymorphic sequences to expanded repeat mutations |
US20070275923A1 (en) * | 2006-05-25 | 2007-11-29 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY |
GB0610542D0 (en) * | 2006-05-26 | 2006-07-05 | Medical Res Council | Screening method |
US8598333B2 (en) * | 2006-05-26 | 2013-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SiRNA silencing of genes expressed in cancer |
WO2007141796A2 (en) | 2006-06-09 | 2007-12-13 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Therapeutic uses of inhibitors of rtp801l |
US7915399B2 (en) * | 2006-06-09 | 2011-03-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Modified siRNA molecules and uses thereof |
JP2009540011A (ja) * | 2006-06-12 | 2009-11-19 | エクセジェニックス、インク.ディー/ビー/エー オプコ ヘルス、インク. | 血管新生のsiRNA阻害のための組成物及び方法 |
WO2007147067A2 (en) * | 2006-06-14 | 2007-12-21 | Rosetta Inpharmatics Llc | Methods and compositions for regulating cell cycle progression |
WO2007150030A2 (en) | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Microfluidic synthesis of organic nanoparticles |
US8124752B2 (en) * | 2006-07-10 | 2012-02-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the MYC gene |
GB0613753D0 (en) | 2006-07-11 | 2006-08-23 | Norwegian Radium Hospital Res | Method |
NZ574046A (en) | 2006-07-13 | 2012-09-28 | Univ Iowa Res Found | Methods and reagents for treatment and diagnosis of vascular disorders and age-related macular degeneration |
JP4756271B2 (ja) * | 2006-07-18 | 2011-08-24 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | ガン細胞の老化、アポトーシス誘導剤 |
KR101670085B1 (ko) | 2006-07-21 | 2016-10-28 | 사일런스 테라퓨틱스 게엠베하 | 단백질 키나아제 3의 발현을 억제하기 위한 수단 |
US20080039415A1 (en) * | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Gregory Robert Stewart | Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders |
US20100330105A1 (en) * | 2006-08-22 | 2010-12-30 | John Hopkins University | Anticancer Combination Therapies |
DE102006039479A1 (de) | 2006-08-23 | 2008-03-06 | Febit Biotech Gmbh | Programmierbare Oligonukleotidsynthese |
US7872118B2 (en) * | 2006-09-08 | 2011-01-18 | Opko Ophthalmics, Llc | siRNA and methods of manufacture |
WO2008036776A2 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | Mir-15, mir-26, mir -31,mir -145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216 mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
WO2008036741A2 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
US20090209478A1 (en) | 2006-09-21 | 2009-08-20 | Tomoko Nakayama | Compositions and methods for inhibiting expression of the hamp gene |
WO2008036825A2 (en) | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference |
AU2007306542B2 (en) * | 2006-10-11 | 2013-08-01 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Influenza targets |
WO2008063760A2 (en) * | 2006-10-18 | 2008-05-29 | The University Of Texas M.D. Anderson Cancer Center | Methods for treating cancer targeting transglutaminase |
JP2010507387A (ja) * | 2006-10-25 | 2010-03-11 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | 新規のsiRNAおよびその使用方法 |
EP2061901A2 (en) | 2006-10-31 | 2009-05-27 | Noxxon Pharma AG | Methods for detection of a single- or double-stranded nucleic acid molecule |
WO2008053487A2 (en) | 2006-11-01 | 2008-05-08 | The Medical Research Fund At The Tel-Aviv Sourasky Medical Center | Adipocyte-specific constructs and methods for inhibiting platelet-type 12 lipoxygenase expression |
US9375440B2 (en) | 2006-11-03 | 2016-06-28 | Medtronic, Inc. | Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity |
US8324367B2 (en) | 2006-11-03 | 2012-12-04 | Medtronic, Inc. | Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity |
US8758998B2 (en) | 2006-11-09 | 2014-06-24 | Gradalis, Inc. | Construction of bifunctional short hairpin RNA |
US8906874B2 (en) | 2006-11-09 | 2014-12-09 | Gradalis, Inc. | Bi-functional shRNA targeting Stathmin 1 and uses thereof |
US8252526B2 (en) | 2006-11-09 | 2012-08-28 | Gradalis, Inc. | ShRNA molecules and methods of use thereof |
US8034921B2 (en) * | 2006-11-21 | 2011-10-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof |
US7988668B2 (en) | 2006-11-21 | 2011-08-02 | Medtronic, Inc. | Microsyringe for pre-packaged delivery of pharmaceuticals |
US7819842B2 (en) | 2006-11-21 | 2010-10-26 | Medtronic, Inc. | Chronically implantable guide tube for repeated intermittent delivery of materials or fluids to targeted tissue sites |
EP2087912B1 (en) * | 2006-11-22 | 2017-05-10 | The University of Tokyo | Sirna carrier using disulfide-bridged polymeric micelle |
US20080199475A1 (en) | 2006-11-27 | 2008-08-21 | Patrys Limited | Novel glycosylated peptide target in neoplastic cells |
WO2008067283A2 (en) | 2006-11-27 | 2008-06-05 | Diadexus, Inc. | Ovr110 antibody compositions and methods of use |
WO2008067373A2 (en) * | 2006-11-28 | 2008-06-05 | Alcon Research, Ltd. | RNAi-MEDIATED INHIBITION OF AQUAPORIN 1 FOR TREATMENT OF IOP-RELATED CONDITIONS |
WO2008067526A2 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | University Of Southern California Usc Stevens | Compositions and methods of sphingosine kinase inhibitors in radiation therapy of various cancers |
WO2008073920A2 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
DK2104737T3 (da) * | 2006-12-08 | 2013-05-27 | Asuragen Inc | Funktioner og formål for let-7 mikro-RNAer |
EA200900782A1 (ru) * | 2006-12-14 | 2009-12-30 | Новартис Аг | Композиции и способы, предназначенные для лечения мышечных и сердечно-сосудистых нарушений |
US20090175827A1 (en) * | 2006-12-29 | 2009-07-09 | Byrom Mike W | miR-16 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
US7754698B2 (en) * | 2007-01-09 | 2010-07-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of FR-alpha expression |
US9896511B2 (en) | 2007-01-10 | 2018-02-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies |
US9068003B2 (en) | 2007-01-10 | 2015-06-30 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies |
CA2675967A1 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusale M | Nucleic acid constructs and methods for specific silencing of h19 |
AU2007344641B2 (en) | 2007-01-16 | 2014-05-22 | The University Of Queensland | Method of inducing an immune response |
US20080171906A1 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-17 | Everaerts Frank J L | Tissue performance via hydrolysis and cross-linking |
WO2008088836A2 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-24 | The Burnham Institute For Medical Research | Compositions and methods for treatment of colorectal cancer |
CA2712073A1 (en) * | 2007-01-17 | 2008-07-24 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal | Nucleoside and nucleotide analogues with quaternary carbon centers and methods of use |
CN101641010A (zh) | 2007-01-26 | 2010-02-03 | 路易斯维尔大学研究基金会公司 | 用作疫苗的外来体组分的修饰 |
US20100196403A1 (en) * | 2007-01-29 | 2010-08-05 | Jacob Hochman | Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance |
US20100183696A1 (en) * | 2007-01-30 | 2010-07-22 | Allergan, Inc | Treating Ocular Diseases Using Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Delta Antagonists |
US8507200B2 (en) | 2007-02-09 | 2013-08-13 | Northwestern University | Particles for detecting intracellular targets |
EP2134830A2 (en) | 2007-02-09 | 2009-12-23 | Massachusetts Institute of Technology | Oscillating cell culture bioreactor |
DE102007008596B4 (de) * | 2007-02-15 | 2010-09-02 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von PNA und siRNA, Verfahren zu deren zellspezifischen Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung |
WO2008103643A1 (en) * | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Monsanto Technology, Llc | Invertebrate micrornas |
JP2010518880A (ja) | 2007-02-26 | 2010-06-03 | クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド | Rtp801のインヒビター及びその疾患の治療における使用 |
WO2008104978A2 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Novel sirna structures |
US20080299659A1 (en) * | 2007-03-02 | 2008-12-04 | Nastech Pharmaceutical Company Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof |
WO2008109034A2 (en) * | 2007-03-02 | 2008-09-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modulating pdx-1 with pcif1, methods and uses thereof |
US20100055784A1 (en) * | 2007-03-02 | 2010-03-04 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting wnt gene expression and uses thereof |
US9085638B2 (en) | 2007-03-07 | 2015-07-21 | The Johns Hopkins University | DNA vaccine enhancement with MHC class II activators |
US20080260765A1 (en) * | 2007-03-15 | 2008-10-23 | Johns Hopkins University | HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof |
DK2129680T3 (en) | 2007-03-21 | 2015-08-10 | Brookhaven Science Ass Llc | COMBINED hairpin ANTISENSE COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING EXPRESSION OF |
US7812002B2 (en) | 2007-03-21 | 2010-10-12 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer |
PE20090064A1 (es) * | 2007-03-26 | 2009-03-02 | Novartis Ag | Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende |
WO2008121604A2 (en) * | 2007-03-29 | 2008-10-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola |
WO2008124634A1 (en) | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymer-encapsulated reverse micelles |
WO2008124639A2 (en) | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Poly (amino acid) targeting moieties |
AU2008236566A1 (en) * | 2007-04-09 | 2008-10-16 | Chimeros, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
CA2678055C (en) | 2007-04-10 | 2016-02-16 | Qiagen Gmbh | Rna interference tags |
EP2146691A2 (en) * | 2007-04-17 | 2010-01-27 | Baxter International Inc. | Nucleic acid microparticles for pulmonary delivery |
WO2008131419A2 (en) | 2007-04-23 | 2008-10-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycoconjugates of rna interference agents |
WO2008143774A2 (en) * | 2007-05-01 | 2008-11-27 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy |
US20100291042A1 (en) | 2007-05-03 | 2010-11-18 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Multipotent stem cells and uses thereof |
JP5296328B2 (ja) * | 2007-05-09 | 2013-09-25 | 独立行政法人理化学研究所 | 1本鎖環状rnaおよびその製造方法 |
EP2162137B1 (en) * | 2007-05-15 | 2016-11-23 | Dart NeuroScience LLC | Methods of treating cognitive disorders by inhibition of gpr12 |
JP2010527243A (ja) * | 2007-05-15 | 2010-08-12 | ヘリコン セラピューティクス,インコーポレイテッド | 低分子干渉RNA(siRNA)を用いた記憶形成に関わる遺伝子の同定方法 |
US20090131354A1 (en) * | 2007-05-22 | 2009-05-21 | Bader Andreas G | miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
CA2687850C (en) | 2007-05-22 | 2017-11-21 | Mdrna, Inc. | Oligomers for therapeutics |
WO2008151049A2 (en) | 2007-05-30 | 2008-12-11 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
EP2572712A3 (en) | 2007-06-01 | 2013-11-20 | The Trustees Of Princeton University | Treatment of viral infections by modulation of host cell metabolic pathways |
EP2172547B1 (en) | 2007-06-11 | 2016-01-06 | Takara Bio Inc. | Method for expression of specific gene |
AR066984A1 (es) * | 2007-06-15 | 2009-09-23 | Novartis Ag | Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia) |
US20100273854A1 (en) * | 2007-06-15 | 2010-10-28 | Hagar Kalinski | Compositions and methods for inhibiting nadph oxidase expression |
ES2474176T3 (es) | 2007-06-27 | 2014-07-08 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Composiciones y métodos para inhibir la expresión de genes pro-apopt�ticos |
EP2172226A4 (en) | 2007-06-29 | 2010-06-30 | Stelic Institute Regenerative Medicine | METHOD FOR FIXING AND EXPRESSING A PHYSIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCE |
EP2164966A2 (en) * | 2007-07-05 | 2010-03-24 | Novartis Ag | Dsrna for treating viral infection |
AU2008273713B2 (en) * | 2007-07-10 | 2014-07-03 | Neurim Pharmaceuticals (1991) Ltd. | CD44 splice variants in neurodegenerative diseases |
US8828960B2 (en) * | 2007-07-17 | 2014-09-09 | Idexx Laboratories, Inc. | Amino acid vitamin ester compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds |
JP2009033986A (ja) * | 2007-07-31 | 2009-02-19 | Sumitomo Chemical Co Ltd | RNA干渉による遺伝子発現抑制のためのターゲット遺伝子としてのcar遺伝子の使用 |
US9526707B2 (en) | 2007-08-13 | 2016-12-27 | Howard L. Elford | Methods for treating or preventing neuroinflammation or autoimmune diseases |
US8501929B2 (en) * | 2007-08-17 | 2013-08-06 | Biochrom Pharma Inc. | PTHrP, its isoforms and antagonist thereto in the diagnosis and treatment of disease |
US20100286378A1 (en) * | 2007-08-27 | 2010-11-11 | Boston Biomedical, Inc. | Composition of Asymmetric RNA Duplex As MicroRNA Mimetic or Inhibitor |
JP2010536392A (ja) * | 2007-08-30 | 2010-12-02 | ヴィレックス メディカル コーポレイション | 抗原性組成物および核酸の標的化送達におけるその使用 |
WO2009032364A1 (en) * | 2007-08-31 | 2009-03-12 | Ghc Research Development Corporation | Activation of nuclear factor-kappa b |
WO2009033027A2 (en) | 2007-09-05 | 2009-03-12 | Medtronic, Inc. | Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain |
EP2207570A2 (en) * | 2007-09-14 | 2010-07-21 | Nitto Denko Corporation | Drug carriers |
JP5049713B2 (ja) * | 2007-09-14 | 2012-10-17 | 株式会社コナミデジタルエンタテインメント | ゲームシステム並びにこれを構成するゲーム装置及び課題報知装置 |
US8361714B2 (en) | 2007-09-14 | 2013-01-29 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof |
JP5723154B2 (ja) | 2007-09-19 | 2015-05-27 | アプライド バイオシステムズ リミテッド ライアビリティー カンパニー | RNAiにおけるオフターゲット表現型の影響を減少させるためのSiRNA配列非依存性修飾フォーマットおよびその安定化型 |
EP2197454A4 (en) * | 2007-09-25 | 2012-07-04 | Idexx Lab Inc | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE ADMINISTRATION OF OLIGONUCLEOTIDES |
EP2436376B1 (en) | 2007-09-28 | 2014-07-09 | BIND Therapeutics, Inc. | Cancer cell targeting using nanoparticles |
US20120082659A1 (en) * | 2007-10-02 | 2012-04-05 | Hartmut Land | Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations |
CN101815521B (zh) | 2007-10-03 | 2014-12-10 | 夸克制药公司 | 新siRNA结构 |
EP2205746A4 (en) * | 2007-10-04 | 2010-12-22 | Univ Texas | MODULATION OF GENE EXPRESSION WITH AGRNA AND GAPS WITH ANTISENSE TRANSCRIPTS AS A TARGET |
ES2627292T3 (es) | 2007-10-12 | 2017-07-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Nanotecnología de vacunas |
EP3072963B1 (en) | 2007-10-18 | 2020-04-01 | Cell Signaling Technology, Inc. | Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma |
US8097712B2 (en) * | 2007-11-07 | 2012-01-17 | Beelogics Inc. | Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof |
US20100098664A1 (en) * | 2007-11-28 | 2010-04-22 | Mathieu Jean-Francois Desclaux | Lentiviral vectors allowing RNAi mediated inhibition of GFAP and vimentin expression |
JP2011505144A (ja) * | 2007-11-30 | 2011-02-24 | ベイラー カレッジ オブ メディシン | 樹状細胞ワクチン組成物およびその使用 |
WO2009070805A2 (en) | 2007-12-01 | 2009-06-04 | Asuragen, Inc. | Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
EP2268664B1 (en) | 2007-12-03 | 2017-05-24 | The Government of the United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Doc1 compositions and methods for treating cancer |
CA2708153C (en) | 2007-12-04 | 2017-09-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
CA2708171C (en) * | 2007-12-04 | 2018-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Folate conjugates |
EP2245159A2 (en) | 2007-12-10 | 2010-11-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor vii gene |
US8614311B2 (en) | 2007-12-12 | 2013-12-24 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof |
WO2009074990A2 (en) * | 2007-12-12 | 2009-06-18 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Rtp801l sirna compounds and methods of use thereof |
NZ585784A (en) * | 2007-12-13 | 2012-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | siRNAs for the treatment and prevention of respiratory syncytial virus (RSV) infection |
WO2009079399A2 (en) * | 2007-12-14 | 2009-06-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating neurodegenerative disease |
US7845686B2 (en) * | 2007-12-17 | 2010-12-07 | S & B Technical Products, Inc. | Restrained pipe joining system for plastic pipe |
KR100949791B1 (ko) * | 2007-12-18 | 2010-03-30 | 이동기 | 오프-타겟 효과를 최소화하고 RNAi 기구를 포화시키지않는 신규한 siRNA 구조 및 그 용도 |
WO2009086156A2 (en) * | 2007-12-21 | 2009-07-09 | Asuragen, Inc. | Mir-10 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
EP2242854A4 (en) * | 2008-01-15 | 2012-08-15 | Quark Pharmaceuticals Inc | COMPOUNDS AND USES THEREOF |
BRPI0907008A2 (pt) * | 2008-01-31 | 2015-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos otimizados para liberação de dsrna alvejando o gene pcsk9 |
EP2260110B1 (en) * | 2008-02-08 | 2014-11-12 | Asuragen, INC. | miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS |
US8188060B2 (en) | 2008-02-11 | 2012-05-29 | Dharmacon, Inc. | Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation |
CA2715289C (en) | 2008-02-11 | 2019-12-24 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Modified rnai polynucleotides and uses thereof |
US7977321B2 (en) * | 2008-02-12 | 2011-07-12 | University Of Tennessee Research Foundation | Small interfering RNAs targeting feline herpes virus |
US8288525B2 (en) * | 2008-02-12 | 2012-10-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of CD45 gene |
JP2011515072A (ja) * | 2008-02-13 | 2011-05-19 | エラン ファーマ インターナショナル リミテッド | α−シヌクレインキナーゼ |
DE102009043743B4 (de) | 2009-03-13 | 2016-10-13 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Zellspezifisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA sowie Applikationskits zu deren Herstellung und Verwendung |
WO2009103067A2 (en) * | 2008-02-14 | 2009-08-20 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods to treat asthma |
WO2009111658A2 (en) * | 2008-03-05 | 2009-09-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes |
EP2268832A2 (en) * | 2008-03-06 | 2011-01-05 | Asuragen, INC. | Microrna markers for recurrence of colorectal cancer |
CN102036689B (zh) * | 2008-03-17 | 2014-08-06 | 得克萨斯系统大学董事会 | 神经肌肉突触维持和再生中涉及的微小rna的鉴定 |
JP2011517404A (ja) * | 2008-03-20 | 2011-06-09 | クォーク・ファーマシューティカルズ・インク | RTP801を阻害するための新規なsiRNA化合物 |
US20090253780A1 (en) * | 2008-03-26 | 2009-10-08 | Fumitaka Takeshita | COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO miR-16 AND THERAPY OF PROSTATE CANCER |
EP2105145A1 (en) * | 2008-03-27 | 2009-09-30 | ETH Zürich | Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides |
US9040492B2 (en) * | 2008-03-31 | 2015-05-26 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Double-stranded lipid-modified RNA having high RNA interference effect |
TWI348916B (en) * | 2008-04-03 | 2011-09-21 | Univ Nat Taiwan | A novel treatment tool for cancer: rna interference of bcas2 |
US20090258928A1 (en) * | 2008-04-08 | 2009-10-15 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv) |
US8309614B2 (en) * | 2008-04-11 | 2012-11-13 | Cedars-Sinai Medical Center | Poly(beta malic acid) with pendant leu-leu-leu tripeptide for effective cytoplasmic drug delivery |
WO2009126933A2 (en) | 2008-04-11 | 2009-10-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
US8278287B2 (en) * | 2008-04-15 | 2012-10-02 | Quark Pharmaceuticals Inc. | siRNA compounds for inhibiting NRF2 |
PL2279254T3 (pl) | 2008-04-15 | 2017-11-30 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Nowe preparaty lipidowe do dostarczania kwasów nukleinowych |
US7875711B2 (en) * | 2008-04-17 | 2011-01-25 | Alnylam Pharamaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of XBP-1 gene |
US20090285861A1 (en) * | 2008-04-17 | 2009-11-19 | Tzyy-Choou Wu | Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods |
USRE48948E1 (en) | 2008-04-18 | 2022-03-01 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Clonidine compounds in a biodegradable polymer |
KR20100137006A (ko) | 2008-04-21 | 2010-12-29 | 티슈 리제너레이션 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 | 생물학적 또는 화학적 물질에 대한 예방 또는 치료를 위한 유전적으로 변형된 인간 탯줄 혈관주위 세포 |
US8324366B2 (en) | 2008-04-29 | 2012-12-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins |
US8173616B2 (en) * | 2008-05-02 | 2012-05-08 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | RNA-induced translational silencing and cellular apoptosis |
EP2285960B1 (en) | 2008-05-08 | 2015-07-08 | Asuragen, INC. | Compositions and methods related to mir-184 modulation of neovascularization or angiogenesis |
US20090291073A1 (en) * | 2008-05-20 | 2009-11-26 | Ward Keith W | Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same |
WO2009146417A1 (en) * | 2008-05-30 | 2009-12-03 | Sigma-Aldrich Co. | Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid |
EP2297322A1 (en) | 2008-06-04 | 2011-03-23 | The Board of Regents of The University of Texas System | Modulation of gene expression through endogenous small rna targeting of gene promoters |
WO2009147684A2 (en) | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of ear disorders |
US20090305611A1 (en) * | 2008-06-06 | 2009-12-10 | Flow International Corporation | Device and method for improving accuracy of a high-pressure fluid jet apparatus |
US20110053226A1 (en) * | 2008-06-13 | 2011-03-03 | Riboxx Gmbh | Method for enzymatic synthesis of chemically modified rna |
US8361510B2 (en) * | 2008-06-16 | 2013-01-29 | Georgia Tech Research Corporation | Nanogels for cellular delivery of therapeutics |
TWI455944B (zh) | 2008-07-01 | 2014-10-11 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 雙股多核苷酸 |
US20110184046A1 (en) * | 2008-07-11 | 2011-07-28 | Dinah Wen-Yee Sah | Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of GSK-3 Genes |
US8309791B2 (en) | 2008-07-16 | 2012-11-13 | Recombinectics, Inc. | Method for producing a transgenic pig using a hyper-methylated transposon |
US8815818B2 (en) | 2008-07-18 | 2014-08-26 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Phagocytic cell delivery of RNAI |
US8039658B2 (en) * | 2008-07-25 | 2011-10-18 | Air Products And Chemicals, Inc. | Removal of trace arsenic impurities from triethylphosphate (TEPO) |
US8212019B2 (en) * | 2008-07-30 | 2012-07-03 | University Of Massachusetts | Nucleic acid silencing sequences |
WO2010021718A1 (en) | 2008-08-19 | 2010-02-25 | Nektar Therapeutics | Complexes of small-interfering nucleic acids |
EP3081648A1 (en) | 2008-08-25 | 2016-10-19 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof |
WO2011028218A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Process for triphosphate oligonucleotide synthesis |
WO2010030963A2 (en) * | 2008-09-15 | 2010-03-18 | Children's Medical Center Corporation | Modulation of bcl11a for treatment of hemoglobinopathies |
US8796443B2 (en) | 2008-09-22 | 2014-08-05 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering RNAi compounds |
EP2342616A2 (en) | 2008-09-23 | 2011-07-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition |
EP3109321B1 (en) | 2008-09-25 | 2019-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene |
US8592570B2 (en) * | 2008-10-06 | 2013-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of an RNA from West Nile virus |
US8802646B2 (en) * | 2008-10-08 | 2014-08-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting the activity of ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease |
US9388414B2 (en) | 2008-10-08 | 2016-07-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
US9149492B2 (en) | 2008-10-08 | 2015-10-06 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease |
WO2010042292A1 (en) * | 2008-10-08 | 2010-04-15 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease |
US9388413B2 (en) | 2008-10-08 | 2016-07-12 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
US9139554B2 (en) | 2008-10-09 | 2015-09-22 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
US8343497B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics |
US8343498B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-01-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics |
US8591905B2 (en) | 2008-10-12 | 2013-11-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Nicotine immunonanotherapeutics |
US8277812B2 (en) | 2008-10-12 | 2012-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen |
JP2012505657A (ja) * | 2008-10-15 | 2012-03-08 | ソマジェニックス インク. | 遺伝子発現の阻害のためのショートヘアピンrna |
US9458472B2 (en) * | 2008-10-15 | 2016-10-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Detection and destruction of cancer cells using programmed genetic vectors |
NO2937418T3 (pl) | 2008-10-20 | 2018-03-17 | ||
WO2010048590A1 (en) * | 2008-10-23 | 2010-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for prevention or treatment of rsv infection using modified duplex rna molecules |
US20110190380A1 (en) * | 2008-10-23 | 2011-08-04 | Elena Feinstein | Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof |
EP4241767A3 (en) | 2008-11-10 | 2023-11-01 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics |
WO2010056737A2 (en) * | 2008-11-11 | 2010-05-20 | Mirna Therapeutics, Inc. | Methods and compositions involving mirnas in cancer stem cells |
MX2011004891A (es) * | 2008-11-13 | 2011-10-06 | Modgene Llc | Modificacion de la carga de beta amiloide en el tejido no cerebral. |
WO2010059226A2 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of map4k4 through rnai |
JP2012509331A (ja) | 2008-11-21 | 2012-04-19 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | がんの治療のための併用療法 |
MX2011005429A (es) | 2008-11-24 | 2011-06-21 | Univ Northwestern | Composiciones de nanoparticulas de arn polivalentes. |
EP2191834A1 (en) * | 2008-11-26 | 2010-06-02 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Compositions and methods for treating retrovirus infections |
JP5816556B2 (ja) | 2008-12-03 | 2015-11-18 | アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. | 治療剤のためのunaオリゴマー構造 |
NZ593743A (en) | 2008-12-04 | 2012-07-27 | Opko Ophthalmics Llc | Compositions and methods for selective inhibition of pro-angiogenic vegf isoforms |
US20100291188A1 (en) * | 2008-12-04 | 2010-11-18 | Musc Foundation For Research Development | Periostin Inhibitory Compositions for Myocardial Regeneration, Methods of Delivery, and Methods of Using Same |
CN114835812A (zh) | 2008-12-09 | 2022-08-02 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途 |
CA2746514C (en) | 2008-12-10 | 2018-11-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression |
EP2356236B1 (en) * | 2008-12-11 | 2015-07-29 | Xiangxue Group (Hong Kong) Company Limited | siRNA COMPOSITIONS AND METHODS FOR POTENTLY INHIBITING VIRAL INFECTION |
WO2010067882A1 (ja) * | 2008-12-12 | 2010-06-17 | 株式会社クレハ | 癌及び喘息治療のための医薬組成物 |
EP2370175A2 (en) | 2008-12-16 | 2011-10-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation |
WO2010080452A2 (en) | 2008-12-18 | 2010-07-15 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | siRNA COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOF |
US20110268772A1 (en) | 2008-12-26 | 2011-11-03 | Samyang Corporation | Pharmaceutical composition containing an anionic drug and a production method thereof |
US9493774B2 (en) | 2009-01-05 | 2016-11-15 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of PCSK9 through RNAi |
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
WO2010083532A1 (en) * | 2009-01-19 | 2010-07-22 | The Research Foundaton Of State University Of New York | Fatty acid binding proteins as drug targets for modulation of endocannabinoids |
WO2010084134A1 (en) * | 2009-01-20 | 2010-07-29 | Vib Vzw | Phd2 inhibition for blood vessel normalization, and uses thereof |
WO2010083615A1 (en) | 2009-01-26 | 2010-07-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression |
SG173182A1 (en) * | 2009-02-03 | 2011-09-29 | Hoffmann La Roche | Compositions and methods for inhibiting expression of ptp1b genes |
WO2010090762A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-08-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality |
CA2744236C (en) | 2009-02-12 | 2021-03-16 | Cell Signaling Technology, Inc. | Mutant ros expression in human cancer |
JP2012518401A (ja) * | 2009-02-24 | 2012-08-16 | リボックス・ゲーエムベーハー | 低分子干渉rnaの改善された設計 |
EP2403863B1 (en) | 2009-03-02 | 2013-08-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Nucleic acid chemical modifications |
BRPI1009271A8 (pt) * | 2009-03-19 | 2016-02-10 | Merck Sharp & Dohme | Molécula de ácido nucleico interferente curto de filamento duplo, composição farmacêutica, e, método para tratar um indivíduo humano que sofre de uma condição que é mediada pela ação, ou pela perda de ação, de bach1 |
CA2753388C (en) | 2009-03-23 | 2016-11-29 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Endo180 antibody to treat cancer and fibrotic disease |
US20100239632A1 (en) | 2009-03-23 | 2010-09-23 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue |
WO2010120874A2 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Chimeros, Inc. | Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same |
EP2421972A2 (en) * | 2009-04-24 | 2012-02-29 | The Board of Regents of The University of Texas System | Modulation of gene expression using oligomers that target gene regions downstream of 3' untranslated regions |
US8367350B2 (en) | 2009-04-29 | 2013-02-05 | Morehouse School Of Medicine | Compositions and methods for diagnosis, prognosis and management of malaria |
US8933049B2 (en) * | 2009-05-05 | 2015-01-13 | Medical Diagnostic Laboratories, Llc | Repressor on IFN-λ promoter and siRNA against ZEB1 and BLIMP-1 to increase IFN-λ gene activity |
WO2010128465A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Beeologics, Llc | Prevention and treatment of nosema disease in bees |
WO2010129791A1 (en) | 2009-05-06 | 2010-11-11 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Rna targeting in alpha-synucleinopathies |
EP2429657A2 (en) * | 2009-05-15 | 2012-03-21 | F. Hoffmann-La Roche AG | Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (gcr) genes |
WO2011005363A2 (en) * | 2009-05-18 | 2011-01-13 | Ensysce Biosciences, Inc. | Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto |
WO2011019423A2 (en) | 2009-05-20 | 2011-02-17 | Schering Corporation | Modulation of pilr receptors to treat microbial infections |
WO2010135669A1 (en) * | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Sabiosciences Corporation | Arrays and methods for reverse genetic functional analysis |
CA2764158A1 (en) | 2009-06-01 | 2010-12-09 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof |
US20120083519A1 (en) * | 2009-06-03 | 2012-04-05 | Djillali Sahali | Methods For Diagnosing And Treating A Renal Disease In An Individual |
WO2010141928A2 (en) | 2009-06-05 | 2010-12-09 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Isolation and targeted suppression of lignin biosynthetic genes from sugarcane |
DK3276004T3 (da) | 2009-06-08 | 2020-04-06 | Quark Pharmaceuticals Inc | Fremgangsmåder til behandling af kronisk nyresygdom |
WO2010144058A1 (en) | 2009-06-10 | 2010-12-16 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Virus induced gene silencing (vigs) for functional analysis of genes in cotton. |
HUE056773T2 (hu) | 2009-06-10 | 2022-03-28 | Arbutus Biopharma Corp | Továbbfejlesztett lipid készítmény |
US9051567B2 (en) | 2009-06-15 | 2015-06-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA |
MX2011013421A (es) | 2009-06-15 | 2012-03-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Arnds formulado con lipido de direccionamiento del gen pcsk9. |
US20100323018A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Branched DNA/RNA monomers and uses thereof |
US20100324124A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods relating to DNA-based particles |
GB0910723D0 (en) * | 2009-06-22 | 2009-08-05 | Sylentis Sau | Novel drugs for inhibition of gene expression |
US9018187B2 (en) | 2009-07-01 | 2015-04-28 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
US8569256B2 (en) | 2009-07-01 | 2013-10-29 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents |
EP2449114B9 (en) | 2009-07-01 | 2017-04-19 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors |
EP2454371B1 (en) | 2009-07-13 | 2021-01-20 | Somagenics, Inc. | Chemical modification of small hairpin rnas for inhibition of gene expression |
US8716464B2 (en) * | 2009-07-20 | 2014-05-06 | Thomas W. Geisbert | Compositions and methods for silencing Ebola virus gene expression |
JP5589077B2 (ja) | 2009-07-20 | 2014-09-10 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー | 増殖性疾患の相乗的処置のための抗ctla4抗体と多様な治療レジメンとの組み合わせ |
JP5883384B2 (ja) | 2009-08-13 | 2016-03-15 | ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー | 免疫機能を調節する方法 |
AP3574A (en) | 2009-08-14 | 2016-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus |
NZ599005A (en) | 2009-08-24 | 2014-11-28 | Phigenix Inc | Targeting pax2 for the treatment of breast cancer |
US20120263709A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-10-18 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic diseases |
EP2295543A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-16 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Method for the preparation of an influenza virus |
WO2011032100A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Inhibitors of kshv vil6 and human il6 |
WO2011034798A1 (en) | 2009-09-15 | 2011-03-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes |
WO2011035065A1 (en) | 2009-09-17 | 2011-03-24 | Nektar Therapeutics | Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids |
WO2011038031A1 (en) | 2009-09-22 | 2011-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dual targeting sirna agents |
CA2775092A1 (en) * | 2009-09-23 | 2011-03-31 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer |
US20150025122A1 (en) | 2009-10-12 | 2015-01-22 | Larry J. Smith | Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro |
US8962584B2 (en) | 2009-10-14 | 2015-02-24 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. | Compositions for controlling Varroa mites in bees |
EP2494075B1 (en) | 2009-10-30 | 2018-04-04 | Northwestern University | Templated nanoconjugates |
JP5723378B2 (ja) | 2009-11-03 | 2015-05-27 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | トランスサイレチン(ttr)を阻害する脂質製剤化組成物及び方法 |
US9799416B2 (en) * | 2009-11-06 | 2017-10-24 | Terrapower, Llc | Methods and systems for migrating fuel assemblies in a nuclear fission reactor |
US8901097B2 (en) | 2009-11-08 | 2014-12-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods for delivery of siRNA to the spinal cord and therapies arising therefrom |
WO2011062997A2 (en) | 2009-11-17 | 2011-05-26 | Musc Foundation For Research Development | Human monoclonal antibodies to human nucleolin |
TW201124160A (en) | 2009-11-26 | 2011-07-16 | Quark Pharmaceuticals Inc | SiRNA compounds comprising terminal substitutions |
CA2783372C (en) | 2009-12-07 | 2019-07-16 | Muthiah Manoharan | Compositions for nucleic acid delivery |
EP2862929B1 (en) | 2009-12-09 | 2017-09-06 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating diseases, disorders or injury of the CNS |
KR101692063B1 (ko) * | 2009-12-09 | 2017-01-03 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | hsp47 발현의 조절 |
EP2509421B1 (en) | 2009-12-10 | 2020-02-05 | Cedars-Sinai Medical Center | Drug delivery of temozolomide for systemic based treatment of cancer |
EP2336171A1 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-22 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Novel targets for the treatment of proliferative diseases |
US8691227B2 (en) | 2009-12-17 | 2014-04-08 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods of treating multiple sclerosis, rheumatoid arthritis and inflammatory bowel disease using agonists antibodies to PILR-α |
US8293718B2 (en) | 2009-12-18 | 2012-10-23 | Novartis Ag | Organic compositions to treat HSF1-related diseases |
ES2749426T3 (es) | 2009-12-18 | 2020-03-20 | Univ British Columbia | Métodos y composiciones para administración de ácidos nucleicos |
CA2785258A1 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Gradalis, Inc. | Furin-knockdown and gm-csf-augmented (fang) cancer vaccine |
EP2516645A1 (en) | 2009-12-23 | 2012-10-31 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Influenza targets |
US20130023578A1 (en) | 2009-12-31 | 2013-01-24 | Samyang Biopharmaceuticals Corporation | siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same |
TW201124159A (en) * | 2010-01-07 | 2011-07-16 | Univ Nat Cheng Kung | Small interference RNA molecule and applications thereof |
WO2011084193A1 (en) | 2010-01-07 | 2011-07-14 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs |
EP2524039B1 (en) * | 2010-01-11 | 2017-11-29 | CuRNA, Inc. | Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg |
WO2011088058A1 (en) * | 2010-01-12 | 2011-07-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expressions of factor vii and pten genes |
DE102010004957A1 (de) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Universitätsklinikum Jena, 07743 | Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung |
US9198972B2 (en) | 2010-01-28 | 2015-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s) |
WO2011094580A2 (en) | 2010-01-28 | 2011-08-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Chelated copper for use in the preparation of conjugated oligonucleotides |
WO2011094546A2 (en) | 2010-01-29 | 2011-08-04 | St. Jude Children's Research Hospital | Oligonucleotides which inhibit p53 induction in response to cellular stress |
CN102770767A (zh) | 2010-02-10 | 2012-11-07 | 诺瓦提斯公司 | 用于肌肉生长的方法和组合物 |
US9186370B2 (en) | 2010-03-19 | 2015-11-17 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
WO2011119871A1 (en) | 2010-03-24 | 2011-09-29 | Rxi Phrmaceuticals Corporation | Rna interference in ocular indications |
EP2550002B1 (en) | 2010-03-24 | 2019-05-08 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Rna interference in dermal and fibrotic indications |
US9080171B2 (en) | 2010-03-24 | 2015-07-14 | RXi Parmaceuticals Corporation | Reduced size self-delivering RNAi compounds |
US8455455B1 (en) | 2010-03-31 | 2013-06-04 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever |
WO2011123621A2 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides |
US10913767B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
WO2011133868A2 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides |
US9725479B2 (en) | 2010-04-22 | 2017-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-end derivatives |
WO2011133658A1 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Boston Medical Center Corporation | Compositions and methods for targeting and delivering therapeutics into cells |
BR112012027547B1 (pt) | 2010-04-29 | 2022-06-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Oligonucleotídeo modificado de fita simples, composição, e seus usos para tratar amiloidose transtirretina, reduzir os seus sintomas e para reduzir a expressão de mrna ou de proteína de transtirretina |
US20110269807A1 (en) | 2010-04-30 | 2011-11-03 | Allergan, Inc. | Novel treatment for age related macular degeneration and ocular ischemic disease associated with complement activation by targeting 5-lipoxygenase |
CA2805267C (en) | 2010-05-04 | 2019-07-30 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Detection and treatment of fibrosis |
US8563243B2 (en) * | 2010-05-12 | 2013-10-22 | University Of South Carolina | Methods for affecting homology-directed DNA double stranded break repair |
CA2798323A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Selecta Biosciences, Inc. | Dose selection of adjuvanted synthetic nanocarriers |
EP2390327A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-11-30 | Sylentis S.A. | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
DE102010022937A1 (de) | 2010-06-04 | 2011-12-08 | Universitätsklinikum Jena | Zellspezifisch aktivierbare biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA, Verfahren zu deren Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung |
US20130236968A1 (en) | 2010-06-21 | 2013-09-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery |
US9045755B2 (en) | 2010-06-24 | 2015-06-02 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded RNA compounds to RhoA and use thereof |
WO2012000104A1 (en) | 2010-06-30 | 2012-01-05 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Non-liposomal systems for nucleic acid delivery |
US20130202652A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-08-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for delivery of active agents |
US20130323269A1 (en) | 2010-07-30 | 2013-12-05 | Muthiah Manoharan | Methods and compositions for delivery of active agents |
WO2012019132A2 (en) | 2010-08-06 | 2012-02-09 | Cell Signaling Technology, Inc. | Anaplastic lymphoma kinase in kidney cancer |
WO2012027206A1 (en) | 2010-08-24 | 2012-03-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | SINGLE-STRANDED RNAi AGENTS CONTAINING AN INTERNAL, NON-NUCLEIC ACID SPACER |
WO2012041959A1 (en) | 2010-09-30 | 2012-04-05 | University Of Zurich | Treatment of b-cell lymphoma with microrna |
WO2013052006A1 (en) * | 2010-10-07 | 2013-04-11 | Agency For Science, Technology And Research (A*Star) | Parp-1 inhibitors |
WO2012051491A1 (en) | 2010-10-14 | 2012-04-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary National Institutes Of Health | Compositions and methods for controlling neurotropic viral pathogenesis by micro-rna targeting |
ES2732929T3 (es) | 2010-10-22 | 2019-11-26 | Olix Pharmaceuticals Inc | Moléculas de ácido nucleico que inducen interferencia de ARN y usos de las mismas |
US9260471B2 (en) | 2010-10-29 | 2016-02-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (siNA) |
WO2012071436A1 (en) | 2010-11-24 | 2012-05-31 | Genentech, Inc. | Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants |
US20130324591A1 (en) | 2010-12-06 | 2013-12-05 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications |
US10202615B2 (en) | 2010-12-10 | 2019-02-12 | Vanderbilt University | Mammalian genes involved in toxicity and infection |
US8575328B2 (en) * | 2010-12-14 | 2013-11-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Formicidae (ant) control using double-stranded RNA constructs |
US9623041B2 (en) | 2010-12-30 | 2017-04-18 | Cedars-Sinai Medical Center | Polymalic acid-based nanobiopolymer compositions |
CN103547288B (zh) | 2011-01-10 | 2016-03-16 | 密执安大学评议会 | 干细胞因子抑制剂 |
WO2012099755A1 (en) | 2011-01-11 | 2012-07-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Pegylated lipids and their use for drug delivery |
DE102011009470A1 (de) | 2011-01-21 | 2012-08-09 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Biologisch wirksame Nukleotid-Moleküle zur gezielten Abtötung von Zellen, Verwendung derselben sowie Applikationskit |
KR101697396B1 (ko) | 2011-02-02 | 2017-01-17 | 엑스칼리아드 파마슈티컬즈, 인코포레이티드 | 결합 조직 성장 인자(ctgf)를 표적으로 하는 안티센스 화합물을 사용하여 켈로이드 또는 비후성 흉터를 치료하는 방법 |
CN103459598B (zh) | 2011-02-03 | 2016-08-10 | 米尔纳医疗股份有限公司 | Mir-124的合成模拟物 |
JP6132775B2 (ja) * | 2011-03-03 | 2017-05-24 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドQuark Pharmaceuticals,Inc. | Toll様受容体経路のオリゴヌクレオチド修飾因子 |
US9796979B2 (en) | 2011-03-03 | 2017-10-24 | Quark Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway |
WO2012125554A2 (en) * | 2011-03-11 | 2012-09-20 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Compositions and methods for the treatment of cancer |
CA2830407C (en) | 2011-03-15 | 2021-08-31 | University Of Utah Research Foundation | Methods of diagnosing and treating vascular associated maculopathy and symptoms thereof |
WO2012135696A2 (en) * | 2011-04-01 | 2012-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
JP2014511877A (ja) | 2011-04-12 | 2014-05-19 | ザ・ガバメント・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ・アズ・リプリゼンテッド・バイ・ザ・セクレタリー・デパートメント・オブ・ヘルス・アンド・ヒューマン・サービシーズ | ポロ様キナーゼ1ポロ−ボックスドメインのペプチド模倣リガンド及び使用方法 |
CA2832972C (en) | 2011-04-13 | 2019-04-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of ptp1b expression |
WO2012142622A1 (en) | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Molecular Transfer, Inc. | Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells |
US8716257B2 (en) * | 2011-04-15 | 2014-05-06 | Sutter West Bay Hospitals | CMV gene products promote cancer stem cell growth |
EP2714094B1 (en) | 2011-06-02 | 2016-02-24 | The University of Louisville Research Foundation, Inc. | Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles |
SG10201800715PA (en) | 2011-06-21 | 2018-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof |
EP2723756B1 (en) | 2011-06-21 | 2020-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes |
EP2723351B1 (en) | 2011-06-21 | 2018-02-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes |
EP2723861A4 (en) | 2011-06-21 | 2014-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING HEPCIDINE ANTIMICROBIAL PEPTIDE (HAMP) OR THE ASSOCIATED GENE EXPRESSION |
WO2013001372A2 (en) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | University Of Oslo | Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells |
US20140227293A1 (en) | 2011-06-30 | 2014-08-14 | Trustees Of Boston University | Method for controlling tumor growth, angiogenesis and metastasis using immunoglobulin containing and proline rich receptor-1 (igpr-1) |
CN103813805B (zh) | 2011-07-06 | 2017-02-22 | 索兰徳特医院 | Egfr靶向疗法 |
WO2013006861A1 (en) | 2011-07-07 | 2013-01-10 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Sorghum grain shattering gene and uses thereof in altering seed dispersal |
US8853181B2 (en) | 2011-07-21 | 2014-10-07 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Fidgetin-like 2 as a target to enhance wound healing |
US9120858B2 (en) | 2011-07-22 | 2015-09-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | Antibodies to the B12-transcobalamin receptor |
DE102011118024A1 (de) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Technische Universität Dresden | Inhibitor der Expression der Pro-Caspase 1 |
CA2847726C (en) | 2011-09-06 | 2023-04-04 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | The mirna-212/132 family as a therapeutic target |
CA2847888A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Biomed Realty, L.P. | Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins |
US9644241B2 (en) | 2011-09-13 | 2017-05-09 | Interpace Diagnostics, Llc | Methods and compositions involving miR-135B for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease |
WO2013049328A1 (en) | 2011-09-27 | 2013-04-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Di-aliphatic substituted pegylated lipids |
US9951349B2 (en) | 2011-09-27 | 2018-04-24 | Yale University | Compositions and methods for transient expression of recombinant RNA |
CN107266391B (zh) | 2011-10-18 | 2020-04-17 | 迪克纳制药公司 | 胺阳离子脂质及其用途 |
US20140323549A1 (en) | 2011-11-08 | 2014-10-30 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system |
EP2725103A3 (en) * | 2011-11-14 | 2016-01-06 | Silenseed Ltd | Methods and compositions for treating prostate cancer |
SG11201402392QA (en) | 2011-11-18 | 2014-06-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases |
WO2013082529A1 (en) | 2011-12-02 | 2013-06-06 | Yale University | Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery |
SG11201403756PA (en) | 2012-01-01 | 2014-11-27 | Qbi Entpr Ltd | Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents |
WO2013103401A1 (en) * | 2012-01-06 | 2013-07-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
CN104302768A (zh) | 2012-01-09 | 2015-01-21 | 诺华股份有限公司 | 治疗β-联蛋白相关疾病的有机组合物 |
CN104080912A (zh) | 2012-01-12 | 2014-10-01 | 夸克制药公司 | 用于治疗听力和平衡障碍的组合疗法 |
WO2013112458A1 (en) | 2012-01-24 | 2013-08-01 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Novel chrebp isoforms and methods using the same |
EP2825209B1 (en) | 2012-03-14 | 2018-08-29 | University of Central Florida Research Foundation, Inc. | Neurofibromatoses therapeutic agents and screening for same |
KR20140136488A (ko) | 2012-03-15 | 2014-11-28 | 큐알엔에이, 인크. | 뇌 유래 신경영양 인자(bdnf)에 대한 천연 안티센스 전사체의 저해에 의한 뇌 유래 신경영양 인자(bdnf)관련 질환의 치료 |
DK2838998T3 (en) | 2012-04-18 | 2018-01-15 | Cell Signaling Technology Inc | EGFR AND ROS1 IN CANCER |
EP3919620A1 (en) | 2012-05-02 | 2021-12-08 | Sirna Therapeutics, Inc. | Short interfering nucleic acid (sina) compositions |
WO2013166043A1 (en) | 2012-05-02 | 2013-11-07 | Children's Hospital Medical Center | Rejuvenation of precursor cells |
JP6139671B2 (ja) | 2012-05-22 | 2017-05-31 | オリックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドOlix Pharmaceuticals Inc. | 細胞内貫通能を持ってrna干渉を誘導する核酸分子およびその用途 |
DK2867368T3 (da) | 2012-07-06 | 2022-01-31 | Roussy Inst Gustave | Samtidig detektering af kannibalisme og senescens som prognostisk markør for cancer |
WO2014018375A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-30 | Xenon Pharmaceuticals Inc. | Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods |
EP3441467A3 (en) * | 2012-08-31 | 2019-04-24 | The General Hospital Corporation | Biotin complexes for treatment and diagnosis of alzheimer's disease |
AU2012389270B2 (en) | 2012-09-05 | 2018-11-08 | Sylentis S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
GB201215857D0 (en) | 2012-09-05 | 2012-10-24 | Sylentis Sau | siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
EP2895608B1 (en) | 2012-09-12 | 2018-12-05 | Quark Pharmaceuticals, Inc. | Double-stranded oligonucleotide molecules to p53 and methods of use thereof |
JP6364009B2 (ja) | 2012-09-12 | 2018-07-25 | クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドQuark Pharmaceuticals,Inc. | P53に対する二本鎖オリゴヌクレオチド分子、およびその使用方法 |
DK2897620T3 (da) | 2012-09-21 | 2020-08-17 | Intensity Therapeutics Inc | Fremgangsmåde til behandling af cancer |
EP3795694A3 (en) * | 2012-10-02 | 2021-06-23 | The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital | Methods relating to dna-sensing pathway related conditions |
WO2014055825A1 (en) | 2012-10-04 | 2014-04-10 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | A formulation of mycobacterial components as an adjuvant for inducing th17 responses |
WO2014068072A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-08 | Institut Gustave-Roussy | Identification, assessment and therapy of essential thrombocythemia with resistance to jak2 inhibitors |
CN105051192B (zh) * | 2012-11-13 | 2020-04-17 | 科迪艾克生物科学公司 | 治疗剂的递送 |
DE102012022596B4 (de) | 2012-11-15 | 2017-05-04 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Neue zellspezifisch wirksame Nukleotid-Moleküle und Applikationskit zu deren Anwendung |
EP3660033B9 (en) | 2012-11-15 | 2022-06-22 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Long-acting compstatin analogs and related compositions and methods |
SG10202110062SA (en) | 2012-11-27 | 2021-11-29 | Childrens Medical Center | Targeting Bcl11a Distal Regulatory Elements for Fetal Hemoglobin Reinduction |
US9970002B2 (en) | 2012-12-12 | 2018-05-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Compositions and methods for functional nucleic acid delivery |
WO2014095088A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Sykehuset Sørlandet Hf | Egfr targeted therapy of neurological disorders and pain |
US9206423B2 (en) * | 2012-12-30 | 2015-12-08 | The Regents Of The University Of California | Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork |
US10258682B2 (en) | 2013-01-16 | 2019-04-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Attenuated chlamydia vaccine |
DE102013003869B4 (de) | 2013-02-27 | 2016-11-24 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung |
KR102205278B1 (ko) | 2013-03-14 | 2021-01-22 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | 음이온성 약제를 제형화하는 방법 |
WO2014152391A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof |
WO2014150751A2 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Novartis Ag | Biomarkers associated with brm inhibition |
EP2968263A2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-01-20 | Genentech, Inc. | Treating th2-mediated diseases by inhibition of bromodomain-comprising proteins brd7 and brd9 |
CA2918194C (en) | 2013-03-27 | 2022-12-06 | The General Hospital Corporation | Methods and agents for treating alzheimer's disease |
WO2014186798A1 (en) | 2013-05-17 | 2014-11-20 | Amplimmune, Inc. | Receptors for b7-h4 |
AU2014302038B2 (en) | 2013-06-25 | 2019-11-14 | Epiaxis Therapeutics Pty Ltd | Methods and compositions for modulating cancer stem cells |
TW201534578A (zh) | 2013-07-08 | 2015-09-16 | Daiichi Sankyo Co Ltd | 新穎脂質 |
WO2015006554A1 (en) | 2013-07-10 | 2015-01-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Therapeutic antibodies and uses thereof |
EP3030663B1 (en) | 2013-07-19 | 2019-09-04 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for controlling leptinotarsa |
US10711106B2 (en) | 2013-07-25 | 2020-07-14 | The University Of Chicago | High aspect ratio nanofibril materials |
WO2015015498A1 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Qbi Enterprises Ltd. | Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds |
CN105452465B (zh) | 2013-07-31 | 2019-06-21 | 奇比艾企业有限公司 | 鞘脂-聚烷基胺-寡核苷酸化合物 |
US9670492B2 (en) | 2013-08-28 | 2017-06-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of prekallikrein (PKK) expression |
MX2016003182A (es) | 2013-09-11 | 2017-03-31 | Arsia Therapeutics Inc | Formulaciones de proteínas líquidas que contienen líquidos iónicos. |
CA2923765C (en) | 2013-09-18 | 2021-06-29 | University Of Canberra | Stem cell modulation ii |
EP3052464B1 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-15 | Novartis AG | 3'end caps for rna-interferring agents for use in rna interference |
WO2015050871A2 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Novartis Ag | Organic compounds to treat hepatitis b virus |
EP2865758A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene |
EP2865756A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene. |
EP2865757A1 (en) | 2013-10-22 | 2015-04-29 | Sylentis, S.A.U. | siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene. |
WO2015070158A1 (en) | 2013-11-11 | 2015-05-14 | Sirna Therapeutics, Inc. | Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (sina) conjugated to a lipophilic moiety |
EP3071590A4 (en) | 2013-11-21 | 2017-07-19 | SeNA Research, Inc. | Methods for structural determination of selenium derivatized nucleic acid complexes |
US10934550B2 (en) | 2013-12-02 | 2021-03-02 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Immunotherapy of cancer |
AU2014360314B2 (en) | 2013-12-06 | 2018-04-26 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA |
CN104830906B (zh) | 2014-02-12 | 2018-09-04 | 北京维通达生物技术有限公司 | 一种重编程获得功能性人肝脏实质细胞的方法 |
WO2015132303A1 (en) | 2014-03-04 | 2015-09-11 | Sylentis Sau | Sirnas and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions |
JP6681837B2 (ja) | 2014-03-11 | 2020-04-15 | セレクティスCellectis | 同種移植に適合するt細胞を作製するための方法 |
DK3119887T3 (da) * | 2014-03-20 | 2019-05-20 | Oommen Varghese | Forbedrede korte interfererende ribonukleinsyremolekyler |
CN106460025A (zh) | 2014-03-25 | 2017-02-22 | 阿克丘勒斯治疗公司 | 在基因沉默中具有降低的脱靶效应的una寡聚物 |
US9856475B2 (en) | 2014-03-25 | 2018-01-02 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Formulations for treating amyloidosis |
WO2015148582A1 (en) | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Transthyretin allele selective una oligomers for gene silencing |
EP3420809A1 (en) | 2014-04-01 | 2019-01-02 | Monsanto Technology LLC | Compositions and methods for controlling insect pests |
SG10201906520RA (en) | 2014-04-01 | 2019-09-27 | Biogen Ma Inc | Compositions for modulating sod-1 expression |
BR112016024565A2 (pt) | 2014-04-25 | 2018-01-23 | Children's Medical Center Corporation | composições e métodos de tratar hemoglobinopatias |
US11279934B2 (en) | 2014-04-28 | 2022-03-22 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN |
HUE052709T2 (hu) | 2014-05-01 | 2021-05-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Módosított antiszensz oligonukleotidok konjugátumai és azok alkalmazása PKK expressziójának módosítására |
WO2015168674A1 (en) | 2014-05-02 | 2015-11-05 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation |
CA2948844C (en) | 2014-05-12 | 2020-06-30 | The Johns Hopkins University | Engineering synthetic brain penetrating gene vectors |
WO2015175545A1 (en) | 2014-05-12 | 2015-11-19 | The Johns Hopkins University | Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers |
US10100308B2 (en) | 2014-05-29 | 2018-10-16 | Trustees Of Dartmouth College | Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases |
TR201908550T4 (tr) | 2014-06-04 | 2019-07-22 | Exicure Inc | Profilaktik veya terapötik uygulamalar için lipozomal sferik nükleik asitler tarafından immün modülatörlerin çok değerlikli teslimi. |
CN104120127B (zh) * | 2014-07-01 | 2016-09-21 | 清华大学 | 分离的寡核苷酸及其应用 |
WO2016018887A1 (en) | 2014-07-29 | 2016-02-04 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling insect pests |
WO2016019126A1 (en) | 2014-07-30 | 2016-02-04 | The Research Foundation For The State University Of New York | System and method for delivering genetic material or protein to cells |
WO2016023974A1 (de) | 2014-08-14 | 2016-02-18 | Friedrich-Schiller-Universität Jena | Peptid zur verwendung in der reduktion von nebenwirkungen in form von immunstimulatorischen reaktionen/effekten |
CN107106517A (zh) | 2014-08-25 | 2017-08-29 | 堪培拉大学 | 用于调节癌干细胞的组合物及其用途 |
EP3185957B1 (en) | 2014-08-29 | 2022-06-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patisiran for use in treating transthyretin mediated amyloidosis |
CN107073294A (zh) | 2014-09-05 | 2017-08-18 | 阿克赛医药公司 | 使用靶向tyr或mmp1的核酸治疗老化和皮肤病症的方法 |
EP3194581A4 (en) | 2014-09-15 | 2018-04-25 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions to increase somatic cell nuclear transfer (scnt) efficiency by removing histone h3-lysine trimethylation |
ES2927649T3 (es) | 2014-09-25 | 2022-11-08 | Cold Spring Harbor Laboratory | Tratamiento del síndrome de Rett |
MX2017004306A (es) | 2014-10-01 | 2017-12-20 | Eagle Biologics Inc | Formulaciones de polisacáridos y ácido nucleico que contienen agentes de reducción de viscosidad. |
WO2016057693A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide |
WO2016057898A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of cancer using tlr9 agonist with checkpoint inhibitors |
JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
US10538762B2 (en) * | 2014-10-14 | 2020-01-21 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Allele selective inhibition of mutant C9orf72 foci expression by duplex RNAS targeting the expanded hexanucleotide repeat |
WO2016061642A1 (en) | 2014-10-22 | 2016-04-28 | Katholieke Universiteit Leuven Ku Leuven Research & Development | Modulating adipose tissue and adipogenesis |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
AU2015346281B2 (en) | 2014-11-12 | 2021-12-02 | Nmc, Inc. | Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same |
CN113846101A (zh) | 2014-11-17 | 2021-12-28 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 载脂蛋白C3(APOC3)iRNA组合物及其使用方法 |
WO2016081621A1 (en) | 2014-11-18 | 2016-05-26 | Yale University | Formulations for targeted release of agents under low ph conditions and methods of use thereof |
CN107106493A (zh) | 2014-11-21 | 2017-08-29 | 西北大学 | 球形核酸纳米颗粒缀合物的序列特异性细胞摄取 |
US20190002876A1 (en) * | 2014-12-09 | 2019-01-03 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Compositions and methods for treatment of friedreich's ataxia |
US10264976B2 (en) | 2014-12-26 | 2019-04-23 | The University Of Akron | Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging |
US20180002702A1 (en) * | 2014-12-26 | 2018-01-04 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
US10792299B2 (en) | 2014-12-26 | 2020-10-06 | Nitto Denko Corporation | Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation |
US10968449B2 (en) | 2015-01-22 | 2021-04-06 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling Leptinotarsa |
JP6830441B2 (ja) | 2015-04-01 | 2021-02-17 | アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. | 治療上のunaオリゴマーおよびその使用 |
MX2017013102A (es) | 2015-04-13 | 2018-02-23 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de ácido ribonucleico de interferencia (arni) de angiopoyetina-tipo 3 (angptl3) y método de uso de las mismas. |
US20180126014A1 (en) | 2015-04-15 | 2018-05-10 | Yale University | Compositions for enhancing delivery of agents across the blood brain barrier and methods of use thereof |
EP3291839A1 (en) | 2015-05-05 | 2018-03-14 | The University of Louisville Research Foundation, Inc. | Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles as radio-sensitizers and mri and/or x-ray contrast agents |
WO2016182917A1 (en) | 2015-05-08 | 2016-11-17 | Children's Medical Center Corporation | Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction |
CA3026154A1 (en) | 2015-06-03 | 2016-12-08 | The University Of Queensland | Mobilizing agents and uses therefor |
AU2016275046B2 (en) | 2015-06-10 | 2022-07-28 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Use of exosomes for the treatment of disease |
WO2017002928A1 (ja) | 2015-06-30 | 2017-01-05 | 岸本 忠三 | 新規な肺疾患治療剤および/またはそのスクリーニング方法 |
US10808247B2 (en) | 2015-07-06 | 2020-10-20 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach |
CA2991598A1 (en) | 2015-07-06 | 2017-01-12 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Nucleic acid molecules targeting superoxide dismutase 1 (sod1) |
EP4092119A3 (en) | 2015-07-10 | 2023-03-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2) |
WO2017015671A1 (en) | 2015-07-23 | 2017-01-26 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions for treating amyloidosis |
ES2842300T3 (es) | 2015-07-31 | 2021-07-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de ARNi de transtiretina (TTR) y métodos para su uso para el tratamiento o la prevención de enfermedades asociadas con TTR |
CA2995995A1 (en) | 2015-08-24 | 2017-03-02 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof |
MA44908A (fr) | 2015-09-08 | 2018-07-18 | Sylentis Sau | Molécules d'arnsi et leur utilisation dans des procédés et des compositions pour inhiber l'expression du gène nrarp |
GB201516685D0 (en) * | 2015-09-21 | 2015-11-04 | Varghese Oommen P And Oommen Oommen P | Nucleic acid molecules with enhanced activity |
CN108601823A (zh) | 2015-09-23 | 2018-09-28 | 麻省理工学院 | 用于改性树枝状聚合物纳米颗粒疫苗递送的组合物和方法 |
US10383935B2 (en) | 2015-09-23 | 2019-08-20 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods of making and using live attenuated viruses |
US10086063B2 (en) | 2015-09-23 | 2018-10-02 | Regents Of The University Of Minnesota | Methods of making and using live attenuated viruses |
JP2018535655A (ja) | 2015-09-29 | 2018-12-06 | アムジエン・インコーポレーテツド | Asgr阻害剤 |
JOP20210043A1 (ar) * | 2015-10-01 | 2017-06-16 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa |
JP6968787B2 (ja) | 2015-10-07 | 2021-11-17 | アペリス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドApellis Pharmaceuticals, Inc. | 投与レジメン |
US11021707B2 (en) | 2015-10-19 | 2021-06-01 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding RNA |
CA3005411C (en) | 2015-11-16 | 2024-01-09 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of age-related macular degeneration using rna complexes that target myd88 or tlr3 |
WO2017095751A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Partikula Llc | Compositions and methods for modulating cancer cell metabolism |
EP3386544B1 (en) | 2015-12-10 | 2020-11-25 | Fibrogen, Inc. | Methods for treatment of motor neuron diseases |
CN108366964B (zh) | 2015-12-18 | 2022-04-08 | 三养控股公司 | 制备含阴离子药物的聚合物胶束的方法 |
BR102017001164A2 (pt) | 2016-01-26 | 2019-03-06 | Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária | Composições de rna de fita dupla para controle de diaphorina citri e métodos de uso. |
CA3011894A1 (en) | 2016-01-31 | 2017-08-03 | University Of Massachusetts | Branched oligonucleotides |
WO2017134526A1 (en) | 2016-02-02 | 2017-08-10 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of angiogenesis-associated diseases using rna complexes that target angpt2 and pdgfb |
JP6944942B2 (ja) | 2016-02-02 | 2021-10-06 | オリックス ファーマシューティカルズ,インコーポレーテッド | IL4Rα、TRPA1、またはF2RL1を標的とするRNA複合体を用いたアトピー性皮膚炎および喘息の治療 |
US20170360815A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-12-21 | Applied Biological Laboratories, Inc. | Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants |
SG11201806868TA (en) | 2016-02-25 | 2018-09-27 | Applied Biological Laboratories Inc | Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants |
WO2017147594A1 (en) | 2016-02-26 | 2017-08-31 | Yale University | COMPOSITIONS AND METHODS OF USING piRNAS IN CANCER DIAGNOSTICS AND THERAPEUTICS |
WO2017151623A1 (en) | 2016-03-01 | 2017-09-08 | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery |
EP3423568A4 (en) | 2016-03-04 | 2019-11-13 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | METHOD AND COMPOSITIONS FOR EX-VIVO REPRODUCTION OF VERY SMALL EMBRYONAL STEM CELLS (VSELS) |
TWI783434B (zh) | 2016-03-07 | 2022-11-11 | 美商愛羅海德製藥公司 | 治療性化合物之標靶性配體 |
AU2017234163B2 (en) | 2016-03-15 | 2023-01-19 | Mersana Therapeutics, Inc. | NaPi2b-targeted antibody-drug conjugates and methods of use thereof |
MA45328A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci |
MA45469A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations |
MA45349A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques egfr et leurs utilisations |
MA45470A (fr) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Avidity Biosciences Llc | Acides nucléiques kras et leurs utilisations |
US20190117799A1 (en) | 2016-04-01 | 2019-04-25 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications |
EP3440090B1 (en) | 2016-04-06 | 2022-09-28 | Ohio State Innovation Foundation | Rna ligand-displaying exosomes for specific delivery of therapeutics to cell by rna nanotechnology |
CA3020487C (en) | 2016-04-11 | 2022-05-31 | Olix Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of idiopathic pulmonary fibrosis using rna complexes that target connective tissue growth factor |
AU2017250017B2 (en) * | 2016-04-14 | 2022-12-22 | Benitec IP Holdings Inc. | Reagents for treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (OPMD) and use thereof |
WO2017189870A1 (en) | 2016-04-27 | 2017-11-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof |
WO2017197128A1 (en) | 2016-05-11 | 2017-11-16 | Yale University | Poly(amine-co-ester) nanoparticles and methods of use thereof |
KR101916652B1 (ko) | 2016-06-29 | 2018-11-08 | 올릭스 주식회사 | 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도 |
SG11201811600PA (en) | 2016-06-30 | 2019-01-30 | Oncorus Inc | Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides |
RU2627179C1 (ru) * | 2016-07-28 | 2017-08-03 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ИНТЕРФЕРОНА λ, ИНТЕРЛЕЙКИНА IL23 И ПРОТИВОВИРУСНОГО БЕЛКА MxA |
WO2018020012A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Danmarks Tekniske Universitet | Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides |
CA3032320A1 (en) | 2016-08-03 | 2018-02-08 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Tlr9 targeted therapeutics |
US11364304B2 (en) | 2016-08-25 | 2022-06-21 | Northwestern University | Crosslinked micellar spherical nucleic acids |
HUE059718T2 (hu) | 2016-09-02 | 2022-12-28 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | 4'-foszfát analógok és azokat tartalmazó oligonukleotidok |
TW202320855A (zh) | 2016-09-02 | 2023-06-01 | 美商愛羅海德製藥公司 | 標靶性配體 |
EP3516062A1 (en) | 2016-09-21 | 2019-07-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Myostatin irna compositions and methods of use thereof |
JP7129702B2 (ja) * | 2016-09-29 | 2022-09-02 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体 |
WO2018098352A2 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | Jun Oishi | Targeting kras induced immune checkpoint expression |
US11135307B2 (en) | 2016-11-23 | 2021-10-05 | Mersana Therapeutics, Inc. | Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates |
WO2018107096A1 (en) | 2016-12-08 | 2018-06-14 | University Of Utah Research Foundation | Staufen1 agents and associated methods |
US20200085758A1 (en) | 2016-12-16 | 2020-03-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Co-delivery of nucleic acids for simultaneous suppression and expression of target genes |
CA3045045A1 (en) | 2017-01-10 | 2018-07-19 | Zhen Li | Alpha-1 antitrypsin (aat) rnai agents, compositions including aat rnai agents, and methods of use |
JP7424728B2 (ja) * | 2017-02-10 | 2024-01-30 | オリック パルマセゥティカルズ インコーポレイテッド | Rna干渉のための長鎖の二本鎖rna |
WO2018152523A1 (en) * | 2017-02-20 | 2018-08-23 | Northwestern University | Use of trinucleotide repeat rnas to treat cancer |
DE102017103383A1 (de) | 2017-02-20 | 2018-08-23 | aReNA-Bio GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr. Heribert Bohlen, 50733 Köln) | System und Verfahren zur Zelltyp-spezifischen Translation von RNA-Molekülen in Eukaryoten |
US20180271996A1 (en) | 2017-02-28 | 2018-09-27 | Mersana Therapeutics, Inc. | Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates |
US11261441B2 (en) | 2017-03-29 | 2022-03-01 | Bluebird Bio, Inc. | Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies |
US11040107B2 (en) | 2017-04-07 | 2021-06-22 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Dosing regimens and related compositions and methods |
CN110945128B (zh) | 2017-04-14 | 2023-11-03 | 代表亚利桑那大学的亚利桑那董事会 | 用于治疗肺纤维化的组合物和方法 |
US11324820B2 (en) | 2017-04-18 | 2022-05-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection |
WO2018209270A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas) |
WO2018218135A1 (en) | 2017-05-25 | 2018-11-29 | The Children's Medical Center Corporation | Bcl11a guide delivery |
EP3642341A4 (en) * | 2017-06-23 | 2021-06-16 | University Of Massachusetts | TWO-DAY SELF-RELEASING SIRNA AND RELATED PROCEDURES |
BR112019023650A2 (pt) | 2017-07-06 | 2020-06-02 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Agentes rnai para inibir a expressão de alfa-enac e métodos de uso |
CA3069451A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression |
US11104700B2 (en) | 2017-07-17 | 2021-08-31 | Oxford University Innovation Limited | Oligonucleotides |
US11110114B2 (en) | 2017-07-17 | 2021-09-07 | Oxford University Innovation Limited | Dinucleotides |
SG11201912178VA (en) | 2017-09-11 | 2020-01-30 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | Rnai agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) |
KR20200089656A (ko) | 2017-09-19 | 2020-07-27 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증을 치료하기 위한 조성물 및 방법 |
WO2019068326A1 (en) | 2017-10-05 | 2019-04-11 | Université D'aix-Marseille | INHIBITORS OF LSD1 FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CARDIOMYOPATHIES |
EP4197544A1 (en) | 2017-10-20 | 2023-06-21 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hepatitis b infection |
EP3713644A1 (en) | 2017-11-20 | 2020-09-30 | University of Georgia Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for modulating hif-2& x391; to improve muscle generation and repair |
WO2019104289A1 (en) | 2017-11-27 | 2019-05-31 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
RU2020121752A (ru) | 2017-12-01 | 2021-12-30 | ТЕХАССКАЯ УНИВЕРСИТЕТСКАЯ СИСТЕМА А энд М | Средство для лечения синдрома ангельмана на основе антисмысловой нуклеиновой кислоты |
CN111902148A (zh) | 2017-12-06 | 2020-11-06 | 艾维迪提生物科学公司 | 治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法 |
EP3728281A1 (en) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chirally-enriched double-stranded rna agents |
WO2019126691A1 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Mersana Therapeutics, Inc. | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates |
US10960086B2 (en) | 2017-12-28 | 2021-03-30 | Augusta University Research Institute, Inc. | Aptamer compositions and methods of use thereof |
US11865081B2 (en) | 2017-12-29 | 2024-01-09 | Virogin Biotech Canada Ltd. | Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides |
MX2020007066A (es) | 2018-01-05 | 2020-09-09 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Reduccion de la expresion de beta-catenina e ido para potenciar la inmunoterapia. |
WO2019143621A1 (en) | 2018-01-16 | 2019-07-25 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting aldh2 expression |
PE20211197A1 (es) | 2018-02-09 | 2021-07-01 | Genentech Inc | Oligonucleotidos para modular la expresion de tmem106b |
EP3790991A1 (en) | 2018-05-07 | 2021-03-17 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Massively parallel discovery methods for oligonucleotide therapeutics |
AU2019266548A1 (en) | 2018-05-10 | 2021-01-07 | Complement Therapeutics Limited | Methods for assessing macular degeneration |
WO2019241734A1 (en) * | 2018-06-14 | 2019-12-19 | University Of Utah Research Foundation | Staufen1 regulating agents and associated methods |
AR114551A1 (es) | 2018-08-13 | 2020-09-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE AGENTES DE ARNhd CONTRA EL VIRUS DE HEPATITIS B (HBV) Y MÉTODOS PARA SU USO |
EP4043015A1 (en) | 2018-09-04 | 2022-08-17 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Delta-tocotrienol for treating cancer |
WO2020051507A1 (en) | 2018-09-06 | 2020-03-12 | The Broad Institute, Inc. | Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery |
KR20210084546A (ko) | 2018-10-29 | 2021-07-07 | 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | 펩티드 함유 링커를 갖는 시스테인 조작된 항체-약물 접합체 |
CN113692444A (zh) | 2019-02-12 | 2021-11-23 | 迪克纳制药公司 | 用于抑制cyp27a1的表达的方法和组合物 |
BR112021018739A2 (pt) | 2019-03-29 | 2022-05-03 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Composições e métodos para o tratamento de doenças ou distúrbios associados a kras |
JP2022526419A (ja) | 2019-04-04 | 2022-05-24 | ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 中枢神経系における遺伝子発現を阻害するための組成物及び方法 |
US11814464B2 (en) | 2019-04-29 | 2023-11-14 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymers and polyplexes with modified end groups and methods of use thereof |
BR112021021686A2 (pt) | 2019-05-03 | 2022-03-22 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Moléculas inibidoras de ácido nucleico de fita dupla com fitas senso curtas |
US20200369759A1 (en) | 2019-05-23 | 2020-11-26 | Fibrogen, Inc. | Methods of treatment of muscular dystrophies |
MX2022000045A (es) | 2019-06-26 | 2022-04-20 | Biorchestra Co Ltd | Nanoparticulas micelares y sus usos. |
EP4021496A1 (en) | 2019-08-30 | 2022-07-06 | Yale University | Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells |
US20220378920A1 (en) | 2019-09-10 | 2022-12-01 | Daiichi Sankyo Company, Limited | CONJUGATE OF GalNAc-OLIGONUCLEOTIDE FOR DELIVERY TO LIVER AND MANUFACTURING METHOD THEREOF |
CA3153026A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Weimin Wang | Chemical modifications of small interfering rna with minimal fluorine content |
US11017851B1 (en) | 2019-11-26 | 2021-05-25 | Cypress Semiconductor Corporation | Silicon-oxide-nitride-oxide-silicon based multi level non-volatile memory device and methods of operation thereof |
WO2021130266A1 (en) | 2019-12-24 | 2021-07-01 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv |
MX2022007909A (es) | 2019-12-24 | 2022-07-21 | Hoffmann La Roche | Combinacion farmaceutica de agentes antivirales que actuan sobre hbv y/o un inmunomodulador para el tratamiento de hbv. |
JP2023511274A (ja) | 2020-01-14 | 2023-03-17 | シンセカイン インコーポレイテッド | Il2オルソログおよび使用法 |
US20210222128A1 (en) | 2020-01-22 | 2021-07-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Inducible tissue constructs and uses thereof |
US11642407B2 (en) | 2020-02-28 | 2023-05-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Identification of variable influenza residues and uses thereof |
MX2022011550A (es) | 2020-03-18 | 2023-01-04 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para inhibir la expresión de angptl3. |
EP4121063A1 (en) | 2020-03-19 | 2023-01-25 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy |
CA3177180A1 (en) | 2020-03-27 | 2021-09-30 | Avidity Biosciences, Inc. | Compositions and methods of treating muscle dystrophy |
WO2021216920A1 (en) | 2020-04-22 | 2021-10-28 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy |
AU2021293780A1 (en) | 2020-06-19 | 2023-02-02 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymers with modified end groups and enhanced pulmonary delivery |
WO2021255262A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Sylentis Sau | siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES |
US20220031633A1 (en) | 2020-07-28 | 2022-02-03 | Yale University | Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery |
IL300286A (en) | 2020-08-04 | 2023-04-01 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for inhibiting PLP1 expression |
EP4192505A1 (en) | 2020-08-04 | 2023-06-14 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Systemic delivery of oligonucleotides |
TW202221120A (zh) | 2020-08-04 | 2022-06-01 | 美商黛瑟納製藥公司 | 用於治療代謝症候群之組成物及方法 |
KR20230043912A (ko) | 2020-08-05 | 2023-03-31 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | Lpa 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법 |
EP4192955A1 (en) | 2020-08-05 | 2023-06-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Oligonucleotide treatment of hepatitis b patients |
US20230265214A1 (en) | 2020-08-31 | 2023-08-24 | Yale University | Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells |
EP3964204A1 (en) | 2020-09-08 | 2022-03-09 | Université d'Aix-Marseille | Lsd1 inhibitors for use in the treatment and prevention of fibrosis of tissues |
WO2022058447A1 (en) | 2020-09-16 | 2022-03-24 | The University Of Manchester | Complementome assay |
CA3200234A1 (en) | 2020-11-25 | 2022-06-02 | Daryl C. Drummond | Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use |
CN117295753A (zh) | 2020-12-04 | 2023-12-26 | 基那奥生物公司 | 用于将核酸递送到细胞的组合物和方法 |
EP4015634A1 (en) | 2020-12-15 | 2022-06-22 | Sylentis, S.A.U. | Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases |
BR112023017737A2 (pt) | 2021-03-04 | 2023-10-03 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de angiopoietina-semelhantes 3 (angptl3) e métodos de uso das mesmas |
WO2022211740A1 (en) | 2021-03-31 | 2022-10-06 | Carmine Therapeutics Pte. Ltd. | Extracellular vesicles loaded with at least two different nucleic acids |
EP4323518A2 (en) | 2021-04-12 | 2024-02-21 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk) |
KR20230171431A (ko) | 2021-04-14 | 2023-12-20 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | Pnpla3 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법 |
CA3213775A1 (en) | 2021-04-19 | 2022-10-27 | Utsav SAXENA | Compositions and methods for inhibiting nuclear receptor subfamily 1 group h member 3 (nr1h3) expression |
AR125992A1 (es) | 2021-05-28 | 2023-08-30 | Novo Nordisk As | Composiciones y métodos para inhibir la expresión del componente 1 de reducción de amidoxima mitocondrial (marc1) |
CA3221923A1 (en) | 2021-05-29 | 2022-12-08 | 1Globe Health Institute Llc | Short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof |
EP4347829A1 (en) | 2021-05-29 | 2024-04-10 | 1Globe Health Institute LLC | Asymmetric short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof |
TW202315943A (zh) | 2021-06-23 | 2023-04-16 | 麻薩諸塞大學 | 用於治療子癇前症及其它血管新生病症的最佳化抗flt1寡核苷酸化合物 |
AU2022323090A1 (en) | 2021-08-03 | 2024-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof |
WO2023021046A1 (en) | 2021-08-16 | 2023-02-23 | Vib Vzw | Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression |
KR20240046843A (ko) | 2021-08-25 | 2024-04-11 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 알파-1 항트립신 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
AU2022349065A1 (en) | 2021-09-21 | 2024-04-04 | The Johns Hopkins University | Dendrimer conjugates of small molecule biologics for intracellular delivery |
AU2022384619A1 (en) | 2021-11-11 | 2024-04-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Pharmaceutical combinations for treatment of hbv |
US20240043846A1 (en) | 2021-11-19 | 2024-02-08 | Kist (Korea Institute Of Science And Technology) | Therapeutic Compounds for Red Blood Cell-Mediated Delivery of an Active Pharmaceutical Ingredient to a Target Cell |
AR127843A1 (es) | 2021-12-01 | 2024-03-06 | Dicerna Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para modular la expresión de apoc3 |
WO2023118546A2 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | METHODS AND MOLECULES FOR RNA INTERFERENCE (RNAi) |
WO2023159189A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | Yale University | Branched poly(amine-co-ester) polymers for more efficient nucleic expression |
GB202203627D0 (en) | 2022-03-16 | 2022-04-27 | Univ Manchester | Agents for treating complement-related disorders |
WO2023192872A1 (en) | 2022-03-28 | 2023-10-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Rna scaffolded wireframe origami and methods thereof |
GB202204884D0 (en) | 2022-04-04 | 2022-05-18 | Fondo Ricerca Medica S R I | Sirna targeting kcna1 |
WO2023201043A1 (en) | 2022-04-15 | 2023-10-19 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating scap activity |
WO2023220349A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting mapt expression |
US20230416743A1 (en) | 2022-05-13 | 2023-12-28 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting snca expression |
TW202400193A (zh) | 2022-06-24 | 2024-01-01 | 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 | 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶6(tmprss6)表現的組成物及方法 |
WO2024040041A1 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Regulation of activity of rnai molecules |
WO2024081736A2 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Yale University | Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies |
Family Cites Families (136)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2003006A (en) * | 1933-04-11 | 1935-05-28 | Michelson Barnett Samuel | Water tank cover |
US4469863A (en) * | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US5208149A (en) * | 1983-10-20 | 1993-05-04 | The Research Foundation Of State University Of New York | Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures |
GB8704365D0 (en) * | 1987-02-25 | 1987-04-01 | Exxon Chemical Patents Inc | Zeolite l preparation |
US5712257A (en) * | 1987-08-12 | 1998-01-27 | Hem Research, Inc. | Topically active compositions of mismatched dsRNAs |
IE66830B1 (en) | 1987-08-12 | 1996-02-07 | Hem Res Inc | Topically active compositions of double-stranded RNAs |
US5703055A (en) * | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
ATE269870T1 (de) * | 1989-10-24 | 2004-07-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | 2'-modifizierte oligonukleotide |
US5457189A (en) * | 1989-12-04 | 1995-10-10 | Isis Pharmaceuticals | Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus |
WO1991010671A1 (en) | 1990-01-11 | 1991-07-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for detecting and modulating rna activity and gene expression |
US5670633A (en) * | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5514577A (en) * | 1990-02-26 | 1996-05-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses |
PL169576B1 (pl) * | 1990-10-12 | 1996-08-30 | Max Planck Gesellschaft | Sposób wytwarzania czasteczki RNA o aktywnosci katalitycznej PL PL |
FR2675803B1 (fr) | 1991-04-25 | 1996-09-06 | Genset Sa | Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications. |
WO1994008003A1 (en) * | 1991-06-14 | 1994-04-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE |
FR2685346B1 (fr) * | 1991-12-18 | 1994-02-11 | Cis Bio International | Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications. |
EP0635023B1 (en) | 1992-03-05 | 2002-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Covalently cross-linked oligonucleotides |
US5792751A (en) * | 1992-04-13 | 1998-08-11 | Baylor College Of Medicine | Tranformation of cells associated with fluid spaces |
US20030068301A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-04-10 | Kenneth Draper | Method and reagent for inhibiting hepatitis B virus replication |
US20040054156A1 (en) * | 1992-05-14 | 2004-03-18 | Kenneth Draper | Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication |
US5693535A (en) * | 1992-05-14 | 1997-12-02 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | HIV targeted ribozymes |
US20030206887A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20030171311A1 (en) * | 1998-04-27 | 2003-09-11 | Lawrence Blatt | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection |
NZ255028A (en) | 1992-07-02 | 1997-03-24 | Hybridon Inc | Antisense oligonucleotides resistant to nucleolytic degradation |
US5652355A (en) | 1992-07-23 | 1997-07-29 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
AU6080294A (en) | 1992-12-31 | 1994-08-15 | Texas Biotechnology Corporation | Antisense molecules directed against genes of the (raf) oncogene family |
US6056704A (en) | 1993-03-03 | 2000-05-02 | Ide; Masatake | Foot-pressure massage stand |
EP0616026A1 (en) | 1993-03-19 | 1994-09-21 | The Procter & Gamble Company | Concentrated cleaning compositions |
HUT74597A (en) * | 1993-06-23 | 1997-01-28 | Genesys Pharma Inc | Antisense oligonucleotides and therapeutic use thereof in human immunodeficiency virus infection |
FR2710074B1 (fr) | 1993-09-15 | 1995-12-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Gène GRB3-3, ses variants et leurs utilisations. |
US5624803A (en) * | 1993-10-14 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom |
US5801154A (en) * | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
EP0743859A4 (en) | 1993-11-16 | 1998-10-21 | Genta Inc | CHEMICAL OLIGONUCLEOSIDE COMPOUNDS |
US5908779A (en) * | 1993-12-01 | 1999-06-01 | University Of Connecticut | Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA |
US5578716A (en) * | 1993-12-01 | 1996-11-26 | Mcgill University | DNA methyltransferase antisense oligonucleotides |
WO1995030746A1 (en) * | 1994-05-10 | 1995-11-16 | The General Hospital Corporation | Antisense inhibition of hepatitis c virus |
US6057153A (en) * | 1995-01-13 | 2000-05-02 | Yale University | Stabilized external guide sequences |
US5674683A (en) | 1995-03-21 | 1997-10-07 | Research Corporation Technologies, Inc. | Stem-loop and circular oligonucleotides and method of using |
US5624808A (en) * | 1995-03-28 | 1997-04-29 | Becton Dickinson And Company | Method for identifying cells committed to apoptosis by determining cellular phosphotyrosine content |
EP1489184A1 (en) | 1995-06-07 | 2004-12-22 | Inex Pharmaceutical Corp. | Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer |
CA2239976A1 (en) * | 1995-09-20 | 1997-03-27 | Paul A. Zamecnik | Antisense oligonucleotide chemotherapy for benign hyperplasia or cancer of the prostate |
US5998203A (en) * | 1996-04-16 | 1999-12-07 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures |
AU725262B2 (en) | 1996-02-14 | 2000-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar-modified gapped oligonucleotides |
BR9708701A (pt) | 1996-04-17 | 2000-01-04 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Inibidores anti-sense de expressão do fator de crescimento endotelial vascular. |
DE19618797C2 (de) | 1996-05-10 | 2000-03-23 | Bertling Wolf | Vehikel zum Transport molekularer Substanz |
US20040266706A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-12-30 | Muthiah Manoharan | Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
DE19631919C2 (de) | 1996-08-07 | 1998-07-16 | Deutsches Krebsforsch | Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur |
US6225290B1 (en) * | 1996-09-19 | 2001-05-01 | The Regents Of The University Of California | Systemic gene therapy by intestinal cell transformation |
ATE329015T1 (de) * | 1996-10-04 | 2006-06-15 | Derek Nigel John Hart | Enzyme mit s-adenosyl-l-homocystein-hydrolase- ähnlicher aktivität. |
US5814500A (en) * | 1996-10-31 | 1998-09-29 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Delivery construct for antisense nucleic acids and methods of use |
ATE352614T1 (de) | 1996-12-12 | 2007-02-15 | Yissum Res Dev Co | Synthetische antisense oligodeoxynukleotide und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen |
US20030064945A1 (en) * | 1997-01-31 | 2003-04-03 | Saghir Akhtar | Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors |
GB9703146D0 (en) * | 1997-02-14 | 1997-04-02 | Innes John Centre Innov Ltd | Methods and means for gene silencing in transgenic plants |
US6218142B1 (en) * | 1997-03-05 | 2001-04-17 | Michael Wassenegger | Nucleic acid molecules encoding polypeptides having the enzymatic activity of an RNA-directed RNA polymerase (RDRP) |
GB9710475D0 (en) | 1997-05-21 | 1997-07-16 | Zeneca Ltd | Gene silencing |
JP4236812B2 (ja) | 1997-09-12 | 2009-03-11 | エクシコン エ/エス | オリゴヌクレオチド類似体 |
WO1999014346A2 (en) | 1997-09-19 | 1999-03-25 | Sequitur, Inc. | SENSE mRNA THERAPY |
GB9720148D0 (en) | 1997-09-22 | 1997-11-26 | Innes John Centre Innov Ltd | Gene silencing materials and methods |
US6506559B1 (en) * | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6475726B1 (en) * | 1998-01-09 | 2002-11-05 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Method for identifying validated target and assay combinations for drug development |
AUPP249298A0 (en) * | 1998-03-20 | 1998-04-23 | Ag-Gene Australia Limited | Synthetic genes and genetic constructs comprising same I |
KR101085210B1 (ko) | 1998-03-20 | 2011-11-21 | 커먼웰쓰 사이언티픽 앤드 인더스트리얼 리서치 오가니제이션 | 유전자 발현 조절방법 |
JP5015373B2 (ja) | 1998-04-08 | 2012-08-29 | コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション | 改良表現型を得るための方法及び手段 |
US20040214330A1 (en) * | 1999-04-07 | 2004-10-28 | Waterhouse Peter Michael | Methods and means for obtaining modified phenotypes |
AU3751299A (en) | 1998-04-20 | 1999-11-08 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression |
AR020078A1 (es) | 1998-05-26 | 2002-04-10 | Syngenta Participations Ag | Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta |
GB9827152D0 (en) | 1998-07-03 | 1999-02-03 | Devgen Nv | Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition |
US6429308B1 (en) | 1998-11-24 | 2002-08-06 | Hisamitsu Pharmaceutical Co., Inc. | HIV infection inhibitors |
AU1830000A (en) | 1998-11-30 | 2000-06-19 | Ribogene, Inc. | Methods and compositions for identification of inhibitors of ribosome assembly |
US6939712B1 (en) | 1998-12-29 | 2005-09-06 | Impedagen, Llc | Muting gene activity using a transgenic nucleic acid |
AU776150B2 (en) * | 1999-01-28 | 2004-08-26 | Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. | Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA |
DE19956568A1 (de) * | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
WO2000063364A2 (en) | 1999-04-21 | 2000-10-26 | American Home Products Corporation | Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences |
US20040002153A1 (en) * | 1999-07-21 | 2004-01-01 | Monia Brett P. | Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds |
GB9925459D0 (en) * | 1999-10-27 | 1999-12-29 | Plant Bioscience Ltd | Gene silencing |
GB9927444D0 (en) | 1999-11-19 | 2000-01-19 | Cancer Res Campaign Tech | Inhibiting gene expression |
DE10160151A1 (de) | 2001-01-09 | 2003-06-26 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens |
DE10100586C1 (de) * | 2001-01-09 | 2002-04-11 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens |
US7829693B2 (en) * | 1999-11-24 | 2010-11-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene |
RU2164944C1 (ru) * | 1999-12-09 | 2001-04-10 | Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН | Способ изменения генетических свойств организма |
US8202979B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
AU2001260114A1 (en) | 2000-03-14 | 2001-09-24 | Syngenta Participations Ag | Protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes |
US20030084471A1 (en) | 2000-03-16 | 2003-05-01 | David Beach | Methods and compositions for RNA interference |
JP2003526367A (ja) | 2000-03-16 | 2003-09-09 | ジェネティカ インコーポレイテッド | Rna干渉の方法とrna干渉組成物 |
CA2404890C (en) | 2000-03-30 | 2013-11-19 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Rna sequence-specific mediators of rna interference |
DK2360253T3 (da) | 2000-03-30 | 2014-06-16 | Whitehead Biomedical Inst | Fremgangsmåde til fremstilling af knockdown-celler eller knockdown-organismer ved hjælp af RNA-sekvensspecifikke formidlere af RNA-interferens og anvendelser deraf |
US20100305186A1 (en) | 2000-05-30 | 2010-12-02 | Johnson & Johnson Research Pty Limited | Methods for mediating gene suppression |
US7033801B2 (en) | 2000-12-08 | 2006-04-25 | Invitrogen Corporation | Compositions and methods for rapidly generating recombinant nucleic acid molecules |
BRPI0115814B8 (pt) | 2000-12-01 | 2021-05-25 | Europaeisches Laboratorium Fuer Molekularbiologie Embl | moléculas de rna de filamento duplo, seu método de preparação e composição farmacêutica compreendendo as mesmas |
JP2004532616A (ja) | 2000-12-28 | 2004-10-28 | ジョンソン・アンド・ジョンソン・リサーチ・ピー・ティー・ワイ・リミテッド | 二本鎖rna仲介遺伝子抑制 |
WO2003035869A1 (de) | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Ribopharma Ag | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens |
US7423142B2 (en) * | 2001-01-09 | 2008-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
EP1229134A3 (en) * | 2001-01-31 | 2004-01-28 | Nucleonics, Inc | Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell |
JP2004532022A (ja) * | 2001-03-26 | 2004-10-21 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | B型肝炎ウイルスおよびc型肝炎ウイルスの複製のオリゴヌクレオチド媒介性阻害 |
WO2002097114A2 (en) * | 2001-05-29 | 2002-12-05 | Sirna Therapeutics, Inc. | Nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of ras, her2 and hiv |
US20040019001A1 (en) * | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20040006035A1 (en) * | 2001-05-29 | 2004-01-08 | Dennis Macejak | Nucleic acid mediated disruption of HIV fusogenic peptide interactions |
DE50101770D1 (de) | 2001-06-01 | 2004-04-29 | Mobilkom Austria Ag & Co Kg Wi | Verfahren zur Bestimmung des Standortes einer Mobilstation in einem Mobilfunksystem |
US20030140362A1 (en) * | 2001-06-08 | 2003-07-24 | Dennis Macejak | In vivo models for screening inhibitors of hepatitis B virus |
EP2386637B1 (en) | 2001-09-28 | 2018-05-16 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Microrna molecules |
DE10163098B4 (de) | 2001-10-12 | 2005-06-02 | Alnylam Europe Ag | Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren |
US20040121348A1 (en) * | 2001-10-26 | 2004-06-24 | Ribopharma Ag | Compositions and methods for treating pancreatic cancer |
DE10230997A1 (de) * | 2001-10-26 | 2003-07-17 | Ribopharma Ag | Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels |
JP2005506087A (ja) * | 2001-10-26 | 2005-03-03 | リボファーマ アーゲー | プラス鎖rnaウイルスによる感染症を処置するための2本鎖リボ核酸の使用 |
DE10154113A1 (de) | 2001-11-03 | 2003-05-15 | Opel Adam Ag | Frontstruktur eines Kraftfahrzeuges |
DE10202419A1 (de) * | 2002-01-22 | 2003-08-07 | Ribopharma Ag | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens |
WO2003064621A2 (en) | 2002-02-01 | 2003-08-07 | Ambion, Inc. | HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES |
ES2312753T5 (es) * | 2002-02-14 | 2012-12-13 | City Of Hope | Procedimientos para producir moléculas de ARN de interferencia en células de mamífero y usos terapéuticos para tales moléculas |
EP1572923A4 (en) * | 2002-03-06 | 2007-10-31 | Rigel Pharmaceuticals Inc | NEW METHOD FOR THE INTRODUCTION AND INTRA-CELLULAR SYNTHESIS OF SIRNA MOLECULES |
CA2479530A1 (en) * | 2002-03-20 | 2003-10-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Hiv therapeutic |
US20030180756A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Yang Shi | Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression |
US20040053876A1 (en) * | 2002-03-26 | 2004-03-18 | The Regents Of The University Of Michigan | siRNAs and uses therof |
AU2003237686A1 (en) | 2002-05-24 | 2003-12-12 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Rna interference mediating small rna molecules |
AU2003273995A1 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-22 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites |
AU2003276666A1 (en) | 2002-06-12 | 2003-12-31 | Ambion, Inc. | Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference |
EP2314690A1 (en) | 2002-07-10 | 2011-04-27 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | RNA-interference by single-stranded RNA molecules |
SI3222724T1 (sl) | 2002-08-05 | 2019-03-29 | Silence Therapeutics Gmbh | Nadaljnje nove oblike molekul interferenčne RNA |
US20040241854A1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-12-02 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing |
US8729036B2 (en) * | 2002-08-07 | 2014-05-20 | University Of Massachusetts | Compositions for RNA interference and methods of use thereof |
US20040137471A1 (en) * | 2002-09-18 | 2004-07-15 | Timothy Vickers | Efficient reduction of target RNA's by single-and double-stranded oligomeric compounds |
WO2004029212A2 (en) | 2002-09-25 | 2004-04-08 | University Of Massachusetts | In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna |
US8604183B2 (en) | 2002-11-05 | 2013-12-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
JP2006507841A (ja) | 2002-11-14 | 2006-03-09 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 機能的siRNAおよび超機能的siRNA |
AU2003295539A1 (en) | 2002-11-15 | 2004-06-15 | University Of Massachusetts | Allele-targeted rna interference |
WO2004047764A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | University Of Massachusetts | Modulation of hiv replication by rna interference |
WO2004063375A1 (en) | 2003-01-15 | 2004-07-29 | Hans Prydz | OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE |
US20040224328A1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-11-11 | Hans Prydz | siRNA screening method |
EP2314687B1 (en) | 2003-01-17 | 2017-12-27 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Inducible small interfering rna (sirna) expression constructs for targeted gene silencing |
WO2004065600A2 (en) | 2003-01-17 | 2004-08-05 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Rna interference by palindromic or modified rna molecules |
KR20050115231A (ko) | 2003-02-10 | 2005-12-07 | 내셔날 인스티튜트 오브 어드밴스드 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지 | 포유동물 세포의 조절 |
CN1750752A (zh) * | 2003-02-19 | 2006-03-22 | 联邦科学和工业研究组织 | 使用短dsRNA序列在植物中进行有效的基因沉默 |
DK1633767T3 (en) | 2003-06-02 | 2019-03-25 | Univ Massachusetts | METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING |
US6998203B2 (en) * | 2003-08-01 | 2006-02-14 | Intel Corporation | Proximity correcting lithography mask blanks |
JP5081630B2 (ja) | 2005-01-07 | 2012-11-28 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | RSVのRNAi調節及びその治療上の使用方法 |
CN103649396B (zh) | 2011-07-08 | 2016-09-14 | 因特瓦产品有限责任公司 | 用于缝制车辆内装部件的方法以及由该方法形成的部件 |
-
2001
- 2001-11-29 BR BRPI0115814A patent/BRPI0115814B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-11-29 ES ES01985833.1T patent/ES2215494T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 AU AU2002235744A patent/AU2002235744B8/en not_active Expired
- 2001-11-29 AT AT01985833T patent/ATE373724T2/de active
- 2001-11-29 RU RU2003119457/13A patent/RU2322500C2/ru active
- 2001-11-29 TR TR2004/01292T patent/TR200401292T3/xx unknown
- 2001-11-29 NZ NZ525888A patent/NZ525888A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-11-29 US US10/433,050 patent/US20040259247A1/en not_active Abandoned
- 2001-11-29 IL IL15599101A patent/IL155991A0/xx unknown
- 2001-11-29 DE DE60130583.3T patent/DE60130583T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 SI SI200130787T patent/SI1407044T2/en unknown
- 2001-11-29 CN CNB018209009A patent/CN100523215C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 ES ES17160119T patent/ES2728168T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 EP EP07014533A patent/EP1873259B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 WO PCT/EP2001/013968 patent/WO2002044321A2/en active Application Filing
- 2001-11-29 HU HU0302557A patent/HU230458B1/hu unknown
- 2001-11-29 JP JP2002546670A patent/JP4095895B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 CA CA2429814A patent/CA2429814C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 MX MXPA03004836A patent/MXPA03004836A/es active IP Right Grant
- 2001-11-29 CZ CZ2011452A patent/CZ308053B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-29 EP EP10179952.6A patent/EP2348133B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 PT PT01985833T patent/PT1407044E/pt unknown
- 2001-11-29 EP EP01985833.1A patent/EP1407044B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-29 DK DK14176605.5T patent/DK2813582T3/en active
- 2001-11-29 PL PL365784A patent/PL218876B1/pl unknown
- 2001-11-29 KR KR1020087011582A patent/KR100909681B1/ko active IP Right Grant
- 2001-11-29 KR KR1020037006978A patent/KR100872437B1/ko active IP Right Grant
- 2001-11-29 CZ CZ20031839A patent/CZ302719B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-29 DK DK01985833.1T patent/DK1407044T4/en active
-
2003
- 2003-05-19 IL IL155991A patent/IL155991A/en active IP Right Grant
- 2003-05-21 ZA ZA200303929A patent/ZA200303929B/xx unknown
- 2003-05-30 NO NO20032464A patent/NO333713B1/no not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-04-27 US US10/832,257 patent/US20050026278A1/en not_active Abandoned
- 2004-04-27 US US10/832,248 patent/US7078196B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-27 US US10/832,432 patent/US7056704B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-06-02 US US11/142,865 patent/US20050234006A1/en not_active Abandoned
- 2005-06-02 US US11/142,866 patent/US20050234007A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-11-24 JP JP2006317758A patent/JP4494392B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2006-12-06 US US11/634,138 patent/US20080269147A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-06 US US11/634,129 patent/US20070093445A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-07-19 AU AU2007203385A patent/AU2007203385B2/en not_active Expired
- 2007-08-16 RU RU2007131270/10A patent/RU2470073C2/ru active
-
2008
- 2008-05-07 HK HK08105073.1A patent/HK1110631A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-10-29 US US12/260,443 patent/US20090155174A1/en not_active Abandoned
-
2009
- 2009-08-07 US US12/537,632 patent/US20100010207A1/en not_active Abandoned
- 2009-08-07 US US12/537,602 patent/US8372968B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-09-11 JP JP2009210276A patent/JP6189576B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2009-12-02 US US12/591,829 patent/US8853384B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-01-06 US US12/683,070 patent/US8933044B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-06 US US12/683,081 patent/US8362231B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2010-03-03 JP JP2010046471A patent/JP5749892B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2010-05-14 HK HK10104709.2A patent/HK1139181A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-06-02 HK HK10105414.5A patent/HK1139433A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2010-06-04 US US12/794,071 patent/US8765930B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-06-21 US US12/819,444 patent/US8796016B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-07-12 US US12/834,311 patent/US8445237B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2010-07-13 US US12/835,086 patent/US8778902B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-07-19 US US12/838,786 patent/US8329463B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2010-08-19 IL IL207727A patent/IL207727A/en active IP Right Grant
- 2010-08-19 AU AU2010212438A patent/AU2010212438B2/en not_active Expired
- 2010-09-10 US US12/879,300 patent/US8993745B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-10-04 US US12/897,374 patent/US8895718B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-12-21 US US13/725,262 patent/US8895721B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-02-14 NO NO20130246A patent/NO335426B1/no not_active IP Right Cessation
-
2014
- 2014-09-03 US US14/476,465 patent/US9567582B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2014-12-12 JP JP2014251819A patent/JP6325974B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2015
- 2015-06-05 HK HK15105362.2A patent/HK1204798A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-12-22 US US15/388,681 patent/US10633656B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2017
- 2017-07-05 CY CY20171100721T patent/CY1119062T1/el unknown
-
2020
- 2020-02-28 US US16/805,072 patent/US20200299693A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-05-18 LT LTPA2021005C patent/LTPA2021005I1/lt unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200299693A1 (en) | Rna interference mediating small rna molecules | |
EP2813582B1 (en) | RNA interference mediating small RNA molecules | |
AU2002235744A1 (en) | RNA interference mediating small RNA molecules |