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トランスサイレチン発現の調節

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C12N15/11

DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity

C12N15/113

Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing

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Description

配列表
本願は電子フォーマットの配列表と共に出願される。配列表は、ＢＩＯＬ０１２３ＷＯＳＥＱ．ｔｘｔのファイル名で２０１１年４月２８日に作成されたサイズ５５Ｋｂのファイルとして提出される。電子フォーマットでの配列表の情報は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。

本発明は、動物におけるトランスサイレチンｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を低減する方法、化合物及び組成物を提供する。これらの方法、化合物及び組成物は、例えば、トランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防又は改善に有用である。

トランスサイレチン（ＴＴＲ）（プレアルブミン、高サイロキシン血症、プレアルブミン異常、サイロキシン；老人性全身性アミロイドーシス、アミロイドポリニューロパチー、アミロイドーシスＩ型、ＰＡＬＢ；トランスサイレチン異常、ＨＳＴ２６５１；ＴＢＰＡ；プレアルブミン異常甲状腺機能正常高サイロキシン血症としても知られる）は、サイロキシン及びレチノールの輸送に関与する、血清／血漿及び脳脊髄液タンパク質である（Sakaki et al, Mol Biol Med. 1989, 6:161-8）。構造的には、ＴＴＲはホモテトラマーであり、このタンパク質の点突然変異及び異常な折り畳みは、アミロイド線維の沈着を引き起こし、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心疾患（ＦＡＣ）などの疾患に関係している。

ＴＴＲは、ヒトにおいて、主に肝臓や脳の脈絡叢で、また比較的少量が網膜で合成される（Palha, Clin Chem Lab Med, 2002, 40, 1292-1300）。肝臓で合成されたトランスサイレチンは血液中に分泌され、脈絡叢由来のトランスサイレチンは脳脊髄液（ＣＳＦ）に分泌される。脈絡叢では、トランスサイレチンの合成が局所タンパク質合成全体の約２０％を占め、またＣＳＦタンパク質全体の２５％にも及ぶ（Dickson et al., J Biol Chem, 1986, 261, 3475-3478）。

遺伝学的及び免疫組織化学的な診断テストの利用により、ＴＴＲアミロイドーシスの患者は世界中の多くの国々で見つかっている。最近の研究では、ＴＴＲアミロイドーシスはこれまで考えられていたような稀な風土病ではなく、高齢者人口の２５％に発症する可能性があることが指摘されている（Tanskanen et al, Ann Med. 2008;40(3):232-9）。

生化学的レベルでは、ＴＴＲはＦＡＰ患者のアミロイド沈着における主要なタンパク質成分であることが見出され（Costa et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1978, 75:4499-4503）、その後、該タンパク質の３０位のメチオニンがバリンに置換されていることが、該疾患を引き起こす最も一般的な分子欠陥であることが明らかとなった（Saraiva et al, J. Clin. Invest. 1984, 74: 104-119）。ＦＡＰでは、ＴＴＲ凝集物及びアミロイド繊維の広範囲に及ぶ全身的な細胞外沈着が、結合組織全体、特に末梢神経系において発生する（Sousa and Saraiva, Prog. Neurobiol. 2003, 71: 385-400）。ＴＴＲ沈着が起きると、次いで軸索変性が、小径の無髄及び有髄線維から生じ始め、最終的に神経節での神経細胞脱落に至る。

本明細書に記載する化合物及び治療方法は、ＴＴＲ関連疾患に現在用いることができる治療の選択肢に対して、有意な優越性をもたらす。ＴＴＲアミロイドーシスは、一般的に１０年以内に死に至り、最近まで治療不能と考えられていた。一般的に肝臓がアミロイド形成ＴＴＲの供給源であるため、肝臓移植は、家族性のケースにおいて、疾患関連対立遺伝子を野生型（ＷＴ）対立遺伝子で置き換える有効な方法の一つである。肝臓移植は、遺伝子治療の一形態としては有効であるが、問題がないわけではない。移植は、移植患者及びドナーへの侵襲的手術の必要性、移植後の長期間の免疫抑制療法、ドナーの不足、高額な費用、ＴＴＲアミロイドーシスの患者の多くが疾患の進行により適した対象とならないことなど、困難な面がある。また残念ながら、家族性患者の一部では、肝臓移植後であってもＷＴＴＴＲが沈着し続けることが多く、心アミロイドーシスが進行する場合もある。また、ＴＴＲの中枢神経系（ＣＮＳ）沈着は、脈絡叢での合成に起因するため、移植では治療することができない。最も多くみられるＴＴＲ疾患であり、ＷＴＴＴＲの沈着によって８０歳以上の約２５％が発症する老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）に対して、移植は実行可能な選択肢ではない。

特定の遺伝子産物の発現を低減する有効な手段の一つとして、アンチセンス技術が出現しつつあり、ＴＴＲ発現の調節に関する治療、診断及び研究の多数の用途に非常に有用な技術となる可能性がある（米国特許公開第２００８／００３９４１８号及び２００７／０２９９０２７号参照）。

本発明は、トランスサイレチンの発現を調節するための組成物及び方法を提供する。トランスサイレチンの発現を調節するためのアンチセンス化合物は、前述の公開特許出願に開示されている。しかし、そのような化合物の更なるものに対する必要性が残されている。

本発明は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節する方法、化合物及び組成物を提供する。ある実施形態では、ＴＴＲのｍＲＮＡ及びタンパク質の調節に有用な化合物は、アンチセンス化合物である。ある実施形態では、該アンチセンス化合物はアンチセンスオリゴヌクレオチドである。

ある実施形態では、調節は細胞又は組織内で起こり得る。ある実施形態では、該細胞又は組織は動物中にある。ある実施形態では、該動物はヒトである。ある実施形態では、ＴＴＲｍのＲＮＡレベルが低下する。ある実施形態では、ＴＴＲのタンパク質レベルが低下する。これらの低下は、時間依存的又は用量依存的に起こり得る。

本発明は、トランスサイレチンの発現の調節、及びトランスサイレチンアミロイドーシス及び／又はその症状の治療、予防、進行遅延又は改善のための方法、化合物及び組成物を提供する。ある実施形態では、トランスサイレチンの発現の調節、及びトランスサイレチンアミロイド病又はトランスサイレチンアミロイドーシスあるいはトランスサイレチン関連アミロイドーシス（例えば、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス、軟膜アミロイドーシス、トランスサイレチンアミロイドポリニューロパチー、家族性アミロイドポリニューロパチー、家族性アミロイド心筋症、又は老人性全身性アミロイドーシス）の治療、予防、進行遅延又は改善のための方法、化合物及び組成物である。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある動物を、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物、又は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物、又は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物、又は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２又は１２４に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号２５、８０、８６又は８７に記載する核酸塩基配列のいずれか一つから選択される核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスのリスクがある、又はトランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に相補的である修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１又は配列番号２に示すトランスサイレチン核酸に１００％相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物；又は、２０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物を、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１に示すトランスサイレチン核酸に１００％相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物であり；また２０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む該化合物を、該動物に投与することで治療を行う。

ある実施形態では、トランスサイレチンアミロイドーシスを有する動物は、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１に示すトランスサイレチン核酸に１００％相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む治療上有効量の化合物であり；２０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であり；また、１０個の連結したデオキシヌクレオシドのギャップセグメントを、それぞれ５つの連結した修飾ヌクレオシドを有する２つのウイングセグメントの間に持つ化合物を、該動物に投与することで治療￥を行う。ある実施形態では、ウイングセグメント中の1以上の修飾ヌクレオシドは、修飾糖を有する。ある実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’−置換ヌクレオシドである。ある実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。

ある実施形態では、調節は細胞、組織、器官又は生物内で起こり得る。ある実施形態では、該細胞、組織又は器官は動物中にある。ある実施形態では、該動物はヒトである。ある実施形態では、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルが低下する。ある実施形態では、トランスサイレチンのタンパク質レベルが低下する。これらの低下は、時間依存的又は用量依存的に起こり得る。

本発明は、また、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連する疾患、障害及び状態の予防、治療及び改善に有用な方法、化合物及び組成物を提供する。ある実施形態では、そのような疾患、障害及び状態は、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連する疾患、障害及び状態である。

ある実施形態では、治療方法は、ＴＴＲアンチセンス化合物を、それを必要とする個体に投与することを含む。ある実施形態では、治療方法は、ＴＴＲアンチセンスオリゴヌクレオチドを、それを必要とする個体に投与することを含む。

ある実施形態では、治療方法は、トランスサイレチンアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与、及び更なる治療を、それを必要とする個体に行うことを含む。

上記の概略的説明及び下記の詳細な説明は、どちらも例示及び解説にすぎず、請求されている、本発明を限定するものではない。本明細書において、単数形の使用には、別段の明記がない限り、複数形が含まれる。本明細書で使用される「又は（or）」とは、別段の記載がない限り、「及び／又は（and/or）」を意味する。さらに、「含む（including）」という用語、並びに「includes」、「included」などの他の語形の使用は、限定を意味しない。また、「要素（element）」又は「成分（component）」などの用語は、別段の明記がない限り、１つのユニットを含む要素及び成分と、２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分を、どちらも包含する。

本明細書で使用する節の見出しには構成上の目的しかなく、記載される主題を限定するものと解釈されるものではない。本願で言及されるすべての文書又は文書の一部、例えば、限定されないが、特許、特許出願、論文、本、専門書などは、その文書の本明細書で論じた部分ならびにそれら全体が、これにより明示的に、参照により本明細書に組み入れられるものとする。

定義
明示的に定義しない限り、本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び薬化学に関連して使用される用語体系、ならびにそれらの方法及び技法は、当該分野において公知であり一般的に使用されるものを意味する。化学合成及び化学分析には標準的な技法を使用することができる。可能である場合は、本明細書の全体を通して言及されるすべての特許、出願、出願公開及びその他の公表物、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号及び国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）などのデータベースから得ることができる関連する配列情報、ならびにその他のデータは、その文書の本明細書で論じた部分ならびにそれら全体が、参照により本明細書に組み入れられるものとする。

別段の記述がない限り、以下の用語は次に挙げる意味を有する。

「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２−ＯＣＨ_３ともいう）は、フロシル環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を意味する。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は修飾糖である。

「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖部分を含むヌクレオチドを意味する。

「５−メチルシトシン」は、５’位に結合されたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは修飾核酸塩基である。

「活性薬剤」とは、個体に投与された時に治療上の利益をもたらす、医薬組成物中の物質又は複数の物質を意味する。例えば、ある実施形態では、トランスサイレチンを標的としたアンチセンスオリゴヌクレオチドが活性薬剤である。

「活性標的領域」又は「標的領域」とは、１つ以上の活性アンチセンス化合物が標的とする領域を意味する。「活性アンチセンス化合物」は、標的核酸レベル又はタンパク質レベルを低下させるアンチセンス化合物を意味する。

「併用して投与される」とは、２つの薬剤を、両方の薬理効果が患者に同時に認められるような任意の方法によって、共投与することを意味する。併用投与は、両方の薬剤が単一の医薬組成物、同じ剤形、又は同じ投与経路で投与される必要はない。両方の薬剤の効果が同時に現われる必要はない。効果はある期間にわたって重複しているだけでよく、同一の広がりを持つ必要はない。

「投与する」とは、医薬剤を個体に与えることを意味し、例えば医療専門家による投与及び自己投与が含まれるが、これらに限定されない。

「改善」とは、関連する疾患、障害、又は状態の少なくとも１つの指標、徴候、又は症状の減少を意味する。指標の重症度は、当業者に公知の主観的又は客観的尺度によって決定することができる。

「アミロイドーシス」とは、様々な生体組織中の異常なタンパク質（アミロイド又はアミロイド線維）の沈着の結果生じる一連の疾患又は障害である。アミロイドタンパク質は、体内の特定の1領域に沈着する（局所性アミロイドーシス）か、又は全身に沈着する（全身性アミロイドーシス）場合がある。全身性アミロイドーシスには、３つのタイプ、すなわち原発性（ＡＬ）、続発性（ＡＡ）、家族性（ＡＴＴＲ）が存在する。原発性アミロイドーシスは、他の疾患との関連はなく、それ自体の疾患と考えられている。続発性アミロイドーシスは、他の疾患の結果として生じる。家族性地中海熱は、家族性（遺伝性）アミロイドーシスの1種である。

「動物」とは、ヒト又は非ヒト動物を意味し、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、及びサル、チンパンジーなどの非ヒト霊長類などが含まれるが、これらに限定されない。

「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物が標的核酸にハイブリダイゼーションすることで生じる、検出可能又は測定可能な活性を意味する。ある実施形態では、アンチセンス活性は、標的核酸又はその標的核酸がコードするタンパク質の量又は発現の減少である。

「アンチセンス化合物」とは、水素結合により標的核酸へのハイブリダイゼーションができるオリゴマー化合物を意味する。

「アンチセンス阻害」とは、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下における標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルが、アンチセンス化合物の非存在下における標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルと比べて減少することを意味する。

「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域又はセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。

「二環式糖」とは、２つの非ジェミナル環原子の架橋によって修飾されたフロシル環を意味する。二環式糖は修飾糖である。

「二環式核酸」又は「ＢＮＡ」とは、ヌクレオシド又はヌクレオチドのフラノース部分がフラノース環上の２つの炭素原子を連結する架橋を含み、その結果、二環式の環系を形成しているヌクレオシド又はヌクレオチドを意味する。

「キャップ構造」又は「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物のどちらかの末端に組み込まれている化学修飾を意味する。

「中枢神経系（ＣＮＳ）」とは、髄膜に包まれている脊椎動物の神経系を意味する。それは神経系の大部分を含み、脳（脳を持つ脊椎動物の場合）と脊髄で構成される。ＣＮＳは背側腔内に収められており、脳は頭蓋腔、脊髄は脊椎腔内に収められている。また、脳は頭蓋骨で守られており、脊髄は、脊椎動物では、脊椎骨で守られている。

「化学的に異なる領域」とは、アンチセンス化合物において、そのアンチセンス化合物の別の領域とは何らかの形で化学的に異なる領域を意味する。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を伴わないヌクレオチドを有する領域とは、化学的に異なる。

「キメラアンチセンス化合物」とは、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。

「脈絡叢」とは、脳室上の領域で、脳脊髄液（ＣＳＦ）が作られる領域である。

「共投与」とは、１つの個体に２つ以上の医薬剤を投与することを意味する。２つ以上の医薬剤は、単一の医薬組成物中にあってもよいし、別々の医薬組成物中にあってもよい。２つ以上の医薬剤は、それぞれ同じ経路又は異なる経路で投与してもよい。共投与は、並行投与又は順次投与を含む。

「相補性」とは、第１の核酸と第２の核酸の核酸塩基間で対を形成する能力を意味する。

「連続する核酸塩基」とは、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。

「希釈剤」とは、薬理活性は持たないが薬学的に必要又は望ましい、組成物中の成分を意味する。例えば、注射される組成物においては、液体、例えば食塩水が希釈剤となり得る。

「用量」とは、１回の投与又は特定の期間において与えられる、医薬剤の特定の量を意味する。ある実施形態では、用量を、１つ、２つ又はそれ以上のボーラス、錠剤、又は注射剤で投与してもよい。例えば、皮下投与が望まれるある実施形態では、所望する用量が１回の注射では難しい量を要するため、所望する用量を達成するために２つ以上の注射剤を用いることができる。ある実施形態では、医薬剤は長時間の注入又は持続的注入によって投与される。用量は、１時間、１日、１週間、又は１ヶ月あたりの医薬剤の量として記載される。

「有効量」とは、その薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果をもたらすのに十分な活性薬剤の量を意味する。有効量は、治療される個体の健康状態や身体状態、治療される個体の分類群、組成物の処方、個体の病状の評価、及びその他の関連する要因に依存して、個体間で変動し得る。

「家族性アミロイドーシス」又は「遺伝性アミロイドーシス」とは、遺伝によるアミロイドーシスである。

「家族性アミロイドポリニューロパチー」又は「ＦＡＰ」は、遺伝的に伝達される神経変性疾患で、トランスサイレチンタンパク質のアミロイド変異体が全身に沈着し、進行性の感覚性及び運動性ポリニューロパチーを引き起こすことを特徴とする。

「完全に相補的」又は「１００％相補的」とは、第１の核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基が、第２の核酸の第２の核酸塩基配列における相補的核酸塩基を有することを意味する。ある実施形態では、第１の核酸がアンチセンス化合物であり、標的核酸が第２の核酸である。

「ギャップマー（gapmer）」とは、ＲＮａｓｅＨ開裂を補助する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外部領域の間に位置し、内部領域のヌクレオシドは外部領域のヌクレオシドと化学的に異なる、キメラアンチセンス化合物を意味する。内部領域は、「ギャップセグメント」とも呼ばれることがあり、外部領域は、「ウイングセグメント」とも呼ばれることがある。

「ギャップ拡大型（gap-widened）」とは、１２個以上の連続する２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有し、それが１〜６個のヌクレオシドを有する５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に直接隣接して位置する、キメラアンチセンス化合物を意味する。

「遺伝性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシス」とは、サイロキシン及びビタミンＡの血漿輸送タンパク質であるトランスサイレチンの変異によって引き起こされる全身性疾患である。末梢性ニューロパチーや拘束型心筋症に関連している場合が最も多いが、全身的な血管壁や結合組織構造へのアミロイドの沈着は、他の臓器系の機能障害を引き起こすことが多い。該疾患では、消化管の運動性異常が一般的に見られ、胃内容排出遅延から生じる便秘、下痢、及び早期満腹感が見られる。手関節におけるアミロイドの結合組織沈着は、手根管症候群を引き起こす場合がある。脊髄血管及び周辺構造におけるアミロイド沈着は、跛行の症状を伴う脊髄狭窄を引き起こす。

「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある実施形態では、相補的核酸分子は、アンチセンス化合物及び標的核酸を含む。

「直接隣接」とは、直接隣接する要素間に介在要素が存在しないことを意味する。

「個体」とは、処置又は治療のために選択されるヒト又は非ヒト動物を意味する。

「内脳室（intracerebroventricular）投与」、「脳室内（cerebral intraventricular）投与」又は「脳室投与」とは、注射又は注入による脳室系への投与を意味する。

「腹腔内投与」とは、腹腔への投与を意味する。

「髄腔内投与」とは、注射又は注入による、脊髄及び脳を満たしている脳脊髄液への投与を意味する。

「静脈内投与」とは、静脈中への投与を意味する。

「室内投与」とは、脳室又は心室への投与を意味する。

「ヌクレオシド間結合」とは、ヌクレオシド間の化学結合を指す。

「軟膜性」とは、脳及び脊髄を覆っている、最も内側にある２層の組織層である軟膜に関することを意味する。「軟膜性アミロイドーシス」とは、軟膜内のトランスサイレチンアミロイド沈着によって生じる軟膜のアミロイドーシスを意味する。

「連結されたヌクレオシド」とは、互いに結合された隣接ヌクレオシドを意味する。

「ミスマッチ」又は「非相補的核酸塩基」とは、第１の核酸の核酸塩基が、第２の核酸又は標的核酸の対応する核酸塩基と対を形成する能力を持たない場合を意味する。

「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然のヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換又は何らかの変化を意味する。

「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、又はウラシル以外の核酸塩基を意味する。「非修飾核酸塩基」とは、プリン塩基であるアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）を意味する。

「修飾ヌクレオチド」とは、独立して、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合、又は修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。「修飾ヌクレオシド」とは、独立して、修飾糖部分又は修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。

「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも一つの修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを意味する。

「修飾糖」とは、天然の糖からの置換又は変化を意味する。

「モチーフ」とは、アンチセンス化合物における化学的に異なる領域のパターンを意味する。

「天然のヌクレオシド間結合」とは、３’‐５’ホスホジエステル結合を意味する。

「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’−Ｈ）又はＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。

「核酸」とは、単量体のヌクレオチドで構成される分子を意味する。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。また、核酸は、単一の分子内にこれらの要素の組み合わせを含む場合もある。

「核酸塩基」とは、別の核酸の塩基と対を形成する能力を有する複素環部分を意味する。

「核酸塩基配列」とは、糖、結合又は核酸塩基修飾とは無関係に、連続する核酸塩基の順序を意味する。

「ヌクレオシド」とは、糖に連結された核酸塩基を意味する。

「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結されたリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。

「オリゴマー化合物」又は「オリゴマー」とは、核酸分子の少なくとも１つの領域にハイブリダイズする能力を有する、連結された単量体サブユニットのポリマーを意味する。

「オリゴヌクレオチド」とは、それぞれが互いに独立して修飾又は非修飾である連結されたヌクレオシドのポリマーを意味する。

「非経口投与」とは、注射又は注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は頭蓋内投与、例えば脳内投与、髄腔内投与、室内投与、室投与、内脳室投与、脳室内投与、脳室投与などが含まれる。投与は、連続投与、長期投与、又は短期若しくは間欠投与でもよい。

「ペプチド」とは、少なくとも２つのアミノ酸をアミド結合で連結することによって形成される分子を意味する。ペプチドは、ポリペプチド及びタンパク質を意味する。

「医薬組成物」とは、個体に投与するのに適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、１つ以上の活性薬剤と滅菌された水溶液を含むものがある。

「薬学的に許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保ち、望ましくない毒性効果を付与しない塩を意味する。

「ホスホロチオエート結合」とは、ホスホジエステル結合が非架橋酸素原子の１つを硫黄原子で置き換えることで修飾されている、ヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。

「部分（portion）」とは、核酸における、ある所定数の連続する（すなわち連結した）核酸塩基を意味する。ある実施形態では、部分は、標的核酸における所定数の連続する核酸塩基である。ある実施形態では、部分は、アンチセンス化合物における所定数の連続する核酸塩基である。

「予防」とは、ある疾患、障害又は状態の発症又は発現を、数分から無期限の期間で、遅延させる又は未然に防ぐことを意味する。また、予防は、ある疾患、障害、又は状態が発現するリスクを低下させることも意味する。

「プロドラッグ」とは、不活性な形態で調製され、体内又はその細胞内で、内因性酵素若しくは他の化学物質の作用又は条件によって活性型に変換される治療剤を意味する。

「副作用」とは、治療に起因すると考えられる、所望の効果以外の生理学的応答を意味する。ある実施形態では、副作用には、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパチー、及び倦怠感が含まれる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は肝毒性又は肝機能異常を示す場合がある。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示す場合がある。

「一本鎖オリゴヌクレオチド」とは、相補鎖にハイブリダイズしていないオリゴヌクレオチドを意味する。

「特異的にハイブリダイズ可能」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間で、所望の効果を誘導するのに十分な相補性を有する一方、特異的結合が望まれる条件下、すなわちインビボアッセイや治療的処置の場合であれば生理的条件下で、非標的核酸にはごくわずかな効果しか示さないか、又は全く効果を示さないアンチセンス化合物を意味する。

「皮下投与」とは、皮膚直下への投与を意味する。

「標的化」又は「標的化される」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズして所望の効果を誘導するアンチセンス化合物の設計と選択のプロセスを意味する。

「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」及び「標的ＲＮＡ転写物」とは、いずれも、アンチセンス化合物によって標的とされ得る核酸を意味する。

「標的セグメント」とは、アンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを意味する。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを意味する。

「治療上有効量」とは、個体に治療上の利益をもたらす医薬剤の量を意味する。

「トランスサイレチン特異的阻害剤」又は「トランスサイレチン阻害剤」とは、トランスサイレチンｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を減少させることができる化合物を意味する。そのような化合物の例としては、核酸、ペプチド、抗体、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤などが挙げられる。

「トランスサイレチン特異的調節因子」又は「トランスサイレチン調節因子」とは、トランスサイレチンｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を増加又は減少させることができる化合物を意味する。

「トランスサイレチン関連アミロイドーシス」、「トランスサイレチンアミロイドーシス」又は「トランスサイレチンアミロイド病」とは、本明細書において、トランスサイレチンの機能異常又は異常調節の結果、トランスサイレチンを含有するアミロイド繊維が形成されることに関連する病状又は疾患である。トランスサイレチンアミロイドーシスには、遺伝性ＴＴＲアミロイドーシス、軟膜アミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心筋症、家族性眼軟膜アミロイドーシス、老人性心アミロイドーシス又は老人性全身性アミロイドーシスが含まれるが、これらに限定されない。

「治療」とは、疾患、障害又は状態が変化又は改善するように、医薬組成物を投与することを意味する。

「非修飾ヌクレオチド」とは、天然の核酸塩基、糖部分、及びヌクレオシド間結合で構成されたヌクレオチドを意味する。ある実施形態では、非修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−リボヌクレオシド）又はＤＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。

ある実施形態

ある実施形態では、トランスサイレチン発現を阻害するための方法、化合物及び組成物を提供する。

ある実施形態は、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物を提供する。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸は、以下に記載される配列のいずれかである：ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００３７１．２（本明細書に配列番号１として組み入れられる）、２００９２３６〜２０１７２８９番目のヌクレオチドで切り取られたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿０１０９６６．１０（本明細書に配列番号２として組み入れられる）；ヒトエクソンとの類似性に基づき、アカゲザルゲノム配列ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１から取り出したエクソン１〜４；及び、６２８０００〜６３８０００番目のヌクレオチドで切り取られたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１（本明細書に配列番号４として組み入れられる）。

ある実施形態は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。

ある実施形態は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２５、８０、８６及び８７に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、８〜８０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜５０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列から選択される配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態は、２０〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個又は少なくとも１９個の連続する核酸塩基を含む。

ある実施形態では、化合物は、配列番号８０に記載する２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の１２０〜１３９、２１２〜２３６、２２６〜２４５、２９３〜４６８、２９３〜３２６、３４７〜３８１、４２５〜４６８、４２５〜４６７、４５２〜４７８、４５２〜４７４、４５９〜４７８、４６１〜５１９、４６２〜５００、５００〜５１９、５０１〜５３５、５０２〜５３１、５０５〜５２４、５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１４〜５４０、５１４〜５３９、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５２３〜５４２、５４４〜６０６、５４４〜５６４、５６４〜５８３、５７８〜６０１、５８０〜６０８、５８０〜５９９、５８４〜６０６、５８５〜６０４、５８７〜６０６又は５９７〜６１７番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該領域は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８から選択される。ある実施形態では、該領域は、配列番号１の５０１〜５３５又は５８０〜６０８から選択される。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０１〜５３５又は５８０〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。

ある実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。

ある実施形態は、１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。

ある実施形態は、１８〜２１個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。

ある実施形態は、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ここに記載する領域内で相補的な少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）をコードする核酸、例えば配列番号１と、９０％、９５％、９９％又は１００％相補的である。

ある実施形態は、２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、該連結したヌクレオシドは、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の核酸塩基部分と相補的である少なくとも８個の連続する核酸塩基の部分を含む化合物を提供する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の部分と相補的な、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個又は少なくとも２０個の連続する核酸塩基の部分を有する。ある実施形態では、該修飾オリゴヌクレオチドは、ヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）をコードする核酸、例えば配列番号１と、９０％、９５％、９９％又は１００％相補的である。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で６０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で７０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で８０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で９０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で９５％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で９９％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６及び５８９〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内で１００％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で６０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で７０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で８０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で９０％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で９５％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で９９％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチド内で１００％相補的な２０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的としたアンチセンス化合物又は修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の以下のヌクレオチド領域を標的とする：１２０〜１３９、２１２〜２３６、２２６〜２４５、２９３〜４６８、２９３〜３２６、３４７〜３８１、４２５〜４６８、４２５〜４６７、４５２〜４７８、４５２〜４７４、４５９〜４７８、４６１〜５１９、４６２〜５００、５００〜５１９、５０２〜５３１、５０７〜５２６、５０５〜５２４、５０８〜５２７、５１４〜５４０、５１４〜５３９、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５２３〜５４２、５４４〜６０６、５４４〜５６４、５６４〜５８３、５７８〜６０１、５８０〜５９９、５８４〜６０６、５８５〜６０４、５８７〜６０６、又は５９７〜６１７。

ある実施形態では、アンチセンス化合物又は修飾オリゴヌクレオチドは、トランスサイレチン核酸の一領域を標的とする。ある実施形態では、そのようなトランスサイレチン核酸の一領域を標的とした化合物又はオリゴヌクレオチドは、該領域の等長の核酸塩基部分に相補的な、連続する核酸塩基部分を有する。該部分は、例えば、ここに記載する領域の等長の部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個の連続する核酸塩基の部分となり得る。ある実施形態では、そのような化合物又はオリゴヌクレオチドは、配列番号１の以下のヌクレオチド領域を標的とする：１２０〜１３９、２１２〜２３６、２２６〜２４５、２９３〜３８１、２９３〜３６６、３５３〜３８１、２９３〜４６８、４２５〜４６８、４２５〜４６７、４５２〜４７６、４６１〜４８１、４６１〜５００、５００〜５１９、４６１〜５１９、５０２〜５３１、５０２〜５３９、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５４０、５２３〜５４２、５４４〜６０６、５４４〜５６４、５４４〜５８３、又は５９７〜６１７。

ある実施形態では、そのようなトランスサイレチン核酸の一領域を標的とした化合物又はオリゴヌクレオチドは、配列番号１の５０１〜５３５又は５８０〜６０８の領域の等長の核酸塩基部分に相補的な、連続する核酸塩基部分を有する。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも６０％の阻害を示す：２２６〜２４５、２９３〜３６６、３５７〜４６７、４５２〜４７４、４５７〜４７６、４５９〜４７８、４６２〜５００、５００〜５１９、５０２〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３９、５４４〜５６４、５６４〜５８３、５７８〜６０１、５８４〜６０６、又は５９７〜６１７。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも６５％の阻害を示す：２９３〜３６６、３５７〜３７６、４２５〜４４９、４３２〜４６７、４５２〜４７４、４５９〜４７８、４６２〜５００、５００〜５１９、５０２〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３９、５４４〜５６３、５６４〜５８３、５７８〜６０１，５８５〜６０６、又は５９７〜６１７。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも７０％の阻害を示す：２９３〜３６６、４２５〜４４９、４３２〜４６７、４５２〜４７４、４５９〜４７８、４６２〜５００、５００〜５１９、５０２〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３９、５６４〜５８３、５７８〜５９８、５８１〜６００、又は５９７〜６１７。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも７５％の阻害を示す：２９３〜３２２、３４７〜３６６、４２５〜４４９、４３２〜４６７、４５２〜４７４、４５９〜４７８、４６２〜５００、５００〜５１９、５０３〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３９、５７８〜５９８、５８１〜６００、又は５９７〜６１６。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも８０％の阻害を示す：３０３〜３２２、４２５〜４４９、４３２〜４６０、４４３〜４６７、４５２〜４７３、４８１〜５００、５００〜５１９、５０３〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３６、５１９〜５３９、５７９〜５９８、５８１〜６００、又は５９７〜６１６。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも８５％の阻害を示す：４２７〜４４９、４３２〜４５８、４４１〜４６０、４４３〜４６７、４５２〜４７３、５０４〜５３１、５０４〜５３６、５０５〜５２５、５０６〜５３０、５０７〜５２７、５０８〜５２７、５０８〜５３６、５１４〜５３６、５１９〜５３９、又は５８１〜６００。

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも９０％の阻害を示す：４２８〜４４９、４３２〜４５６、４３９〜４５８、４４１〜４６０、４４５〜４６６、４５２〜４７３、５０４〜５２５、５０８〜５２７、又は５１５〜５３６

ある実施形態では、配列番号１の以下のヌクレオチド領域は、アンチセンス化合物又はオリゴヌクレオチドの標的とされた場合、少なくとも９５％の阻害を示す：４３４〜４５３、４３６〜４５６、４４１〜４６０、４４５〜４６５、５０５〜５２４、又は５１６〜５３５。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも６０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４２０９５４、４２０９０４、３０４２８６、４２０８７４、４２０９４８、４２０８８３、４２０９５５、４２０９５２、４２０９５６、４２０９５７、４２０８８２、４２０９４７、４２０９５０、３０４３１２、３０４３０７、４２０８７９、４２０９１０、４２０９０２、４２０９０８、４２０９２４、４２０８７７、４２０８８０、３０４３０９、３０４２８９、４２０９０６、３０４３１１、４２０８７８、４２０９１１、３０４２８４、３０４２８８、４２０９０９、３０４２９６、４２０９４９、３０４２９０、３０４２９９、４２０８９８、４２０９２０、４２０９２５、４２０９５１、３０４２８７、４２０８９４、４２０９１６、４２０９１８、４２０９２６、３０４２８５、４２０９１９、４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも６５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４２０９５５、４２０９５２、４２０９５６、４２０９５７、４２０８８２、４２０９４７、４２０９５０、３０４３１２、３０４３０７、４２０８７９、４２０９１０、４２０９０２、４２０９０８、４２０９２４、４２０８７７、４２０８８０、３０４３０９、３０４２８９、４２０９０６、３０４３１１、４２０８７８、４２０９１１、３０４２８４、３０４２８８、４２０９０９、３０４２９６、４２０９４９、３０４２９０、３０４２９９、４２０８９８、４２０９２０、４２０９２５、４２０９５１、３０４２８７、４２０８９４、４２０９１６、４２０９１８、４２０９２６、３０４２８５、４２０９１９、４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも７０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３０４３１２、３０４３０７、４２０８７９、４２０９１０、４２０９０２、４２０９０８、４２０９２４、４２０８７７、４２０８８０、３０４３０９、３０４２８９、４２０９０６、３０４３１１、４２０８７８、４２０９１１、３０４２８４、３０４２８８、４２０９０９、３０４２９６、４２０９４９、３０４２９０、３０４２９９、４２０８９８、４２０９２０、４２０９２５、４２０９５１、３０４２８７、４２０８９４、４２０９１６、４２０９１８、４２０９２６、３０４２８５、４２０９１９、４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも７５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４２０８７７、４２０８７８、４２０８８０、３０４２８４、３０４２８５、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８６、４２０８８７、４２０８８８、４２０８８９、４２０８９０、４２０８９１、３０４２８７、４２０８９２、３０４２８８、４２０８９３、３０４２８９、３０４２９０、４２０８９４、４２０８９５、４２０８９６、４２０８９７、４２０８９８、４２０８９９、４２０９００、４２０９０１、４２０９０２、４２０９０６、４２０９０８、３０４２９６、４２０９０９、４２０９１１、４２０９１２、４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、４２０９１９、４２０９２０、４２０９２１、４２０９２２、４２０９２３、４２０９２４、４２０９２５、４２０９２６、３０４３０９、４２０９４９、４２０９５１、又は３０４３１１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも８０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３０４３１１、４２０８７８、４２０９１１、３０４２８４、３０４２８８、４２０９０９、３０４２９６、４２０９４９、３０４２９０、３０４２９９、４２０８９８、４２０９２０、４２０９２５、４２０９５１、３０４２８７、４２０８９４、４２０９１６、４２０９１８、４２０９２６、３０４２８５、４２０９１９、４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも８５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号３０４２９０、３０４２９９、４２０８９８、４２０９２０、４２０９２５、４２０９５１、３０４２８７、４２０８９４、４２０９１６、４２０９１８、４２０９２６、３０４２８５、４２０９１９、４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも９０％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４２０９２３、４２０８８６、４２０９００、４２０９１２、４２０９１５、４２０９１７、４２０９２１、４２０８８４、４２０８８５、４２０８８７、４２０８８９、４２０８９２、４２０９０１、４２０９１４、４２０８９７、４２０８９９、４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、以下のアンチセンス化合物は、ヒトトランスサイレチンをコードする核酸である配列番号１の一領域を標的とし、トランスサイレチンｍＲＮＡの少なくとも９５％の阻害を示す：ＩＳＩＳ番号４２０８８８、４２０８９５、４２０８９６、４２０９１３、４２０９２２、４２０８９３、４２０８９０、又は４２０８９１。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の１２０〜１３９番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の１２０〜１３９番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号３７から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の１２０〜１３９番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７２から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の２１２〜２３６番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の２１２〜２３６番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号８及び３８から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の２１２〜２３６番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７３又は３０４２６７から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の２２６〜２４５番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の２２６〜２４５番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号３９から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の２２６〜２４５番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７４から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の２９３〜３８１番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の２９３〜３８１番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１０、４２〜４８から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の２９３〜３８１番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７７、４２０８７８、４２０８７９、４２０８８０、３０４２８０、４２０８８１、４２０８８２、又は４２０８８３から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の２９３〜３６６番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の２９３〜３６６番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号４２〜４５から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の２９３〜３６６番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７７、４２０８７８、４２０８７９、又は４２０８８０から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の３５３〜３８１番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の３５３〜３８１番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１０、４６〜４８から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の３５３〜３８１番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号３０４２８０、４２０８８１、４２０８８２、又は４２０８８３から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の２９３〜４６８番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の２９３〜４６８番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１０〜１８、４２〜６３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の２９３〜４６８番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８７７、４２０８７８、４２０８７９、４２０８８０、３０４２８０、４２０８８１、４２０８８２、４２０８８３、３０４２８４、３０４２８５、４２０８８４、４２０８８５、３０４２８６、４２０８８６、４２０８８７、４２０８８８、４２０８８９、４２０８９０、４２０８９１、３０４２８７、４２０８９２、３０４２８８、４２０８９３、３０４２８９、３０４２９０、４２０８９４、４２０８９５、４２０８９６、４２０８９７、４２０８９８、又は３０４２９１から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４２５〜４６８番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４２５〜４６８番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１１〜１８、４９〜６３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４２５〜４６８番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号３０４２８４、３０４２８５、４２０８８４、４２０８８５、３０４２８６、４２０８８６、４２０８８７、４２０８８８、４２０８８９、４２０８９０、４２０８９１、３０４２８７、４２０８９２、３０４２８８、４２０８９３、３０４２８９、３０４２９０、４２０８９４、４２０８９５、４２０８９６、４２０８９７、４２０８９８、又は３０４２９１から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４２５〜４６７番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４２５〜４６８番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１１〜１７、４９〜６３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４２５〜４６８番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号３０４２８４、３０４２８５、４２０８８４、４２０８８５、３０４２８６、４２０８８６、４２０８８７、４２０８８８、４２０８８９、４２０８９０、４２０８９１、３０４２８７、４２０８９２、３０４２８８、４２０８９３、３０４２８９、３０４２９０、４２０８９４、４２０８９５、４２０８９６、４２０８９７、又は４２０８９８から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４５２〜４７６番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４５２〜４７６番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号６４〜６９から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４５２〜４７６番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０８８９、４２０８９０、４２０８９１、３０４２８７、４２０８９２、３０４２８８、４２０８９３、３０４２８９、３０４２９０、４２０８９４、４２０８９５、４２０８９６、４２０８９７、４２０８９８、３０４２９１、３０４２９２、３０４２９３、４２０８９９、４２０９００、４２０９０１、４２０９０２、４２０９０３、又は４２０９０４から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４６１〜４８１番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４６１〜４８１番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号７２〜７３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４６１〜４８１番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９０７又は４２０９０８から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４６１〜５００番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４６１〜５００番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２２、７２及び７３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４６１〜５００番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９０７、４２０９０８、又は３０４２９６から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５００〜５１９番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５００〜５１９番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号７４から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５００〜５１９番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９０９から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の４６１〜５１９番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の４６１〜５１９番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２２、２３、７２〜７４から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の４６１〜５１９番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９０７、４２０９０８、３０４２９６、又は４２０９０９から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０２〜５３１番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０２〜５３１番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５、７５〜８４から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０２〜５３１番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１０、４２０９１１、４２０９１２、４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、又は４２０９１９から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０２〜５３９番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０２〜５３９番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５、２６、７５〜９１から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０２〜５３９番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１０、４２０９１１、４２０９１２、４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、４２０９１９、３０４３００、４２０９２０、４２０９２１、４２０９２２、４２０９２３、４２０９２４、４２０９２５、又は４２０９２６から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０４〜５３６番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０４〜５３６番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５、２６、７７〜８８から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０４〜５３６番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１２、４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、４２０９１９、３０４３００、４２０９２０、４２０９２１、４２０９２２、又は４２０９２３から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０５〜５３５番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０５〜５３５番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５、２６、７８〜８７から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０５〜５３５番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、４２０９１９、３０４３００、４２０９２０、４２０９２１、又は４２０９２２から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０６〜５３０番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０６〜５３０番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５、７９〜８３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０６〜５３０番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１３、４２０９１４、３０４２９９、４２０９１５、４２０９１６、４２０９１７、４２０９１８、又は４２０９１９から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０７〜５２７番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０７〜５２７番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号２５又は８０から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０７〜５２７番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号３０４２９９又は４２０９１５から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号８０から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９１５から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５１４〜５４０番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５１４〜５４０番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号８５〜９２から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５１４〜５４０番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９２０、４２０９２１、４２０９２２、４２０９２３、４２０９２４、４２０９２５、４２０９２６、又は４２０９２７から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５２３〜５４２番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５２３〜５４２番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号９４から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５２３〜５４２番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９２９から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５４４〜６０６番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５４４〜６０６番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号３０〜３３、１１２〜１２２から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５４４〜６０６番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９４７、４２０９４８、３０４３０４、３０４３０７、３０４３０８、３０４３０９、４２０９４９、４２０９５０、４２０９５１、４２０９５２、４２０９５３、４２０９５４、４２０９５５、４２０９５６、又は４２０９５７から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５４４〜５６４番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５４４〜５６４番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号１１２〜１１３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５４４〜５６４番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９４７又は４２０９４８から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５４４〜５８３番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５４４〜５８３番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号３０、３１、１１２、及び１１３から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５４４〜５８３番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号４２０９４７、４２０９４８、３０４３０４、又は３０４３０７から選択される。

ある実施形態では、標的領域は、配列番号１の５９７〜６１７番目のヌクレオチドである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、配列番号１の５９７〜６１７番目のヌクレオチドを標的とする。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、配列番号３４〜３５から選択される核酸塩基配列を含む。特定のそのような実施形態では、配列番号１の５９７〜６１７番目のヌクレオチドを標的とするアンチセンス化合物は、ＩＳＩＳ番号３０４３１１又は３０４３１２から選択される。

ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。

ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個の連結したヌクレオシドからなる。

ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、その全長にわたり、配列番号１、２、又は４の核酸塩基配列と少なくとも９０％相補的である。ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、その全長にわたり、配列番号１、２、又は４の核酸塩基配列と少なくとも９５％相補的である。ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、その全長にわたり、配列番号１、２、又は４と少なくとも９９％相補的である。ある実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、その全長にわたり、配列番号１、２、又は４の核酸塩基配列と１００％相補的である。

ある実施形態では、化合物は、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。ある実施形態では、ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある実施形態では、化合物は、修飾糖を含むヌクレオシドを少なくとも一つ有する。ある実施形態では、該少なくとも一つの修飾糖は二環式糖である。ある実施形態では、該少なくとも一つの二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’架橋を含む。ある実施形態では、該少なくとも一つの修飾糖は、２'−Ｏ−メトキシエチルを含む。

ある実施形態では、化合物は、フラノース環がテトラヒドロピラン環に置換されたテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドの少なくとも一つを、少なくとも一つ含む。ある実施形態では、該少なくとも一つのテトラヒドロピラン修飾ヌクレオシドは、下記の構造を有する：

式中、Ｂｘは、保護されていてもよいヘテロ環塩基部分を表す。

ある実施形態では、化合物は、修飾核酸塩基を含むヌクレオシドを少なくとも一つ有する。ある実施形態では、該修飾核酸塩基は、５−メチルシトシンである。

ある実施形態では、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｉｉ）連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｉｉｉ）連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に位置し、また、それぞれのウイングセグメントの各ヌクレオシドは修飾糖を含む。

ある実施形態では、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）１０個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｉｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に直接隣接して位置し、それぞれのウイングセグメントの各ヌクレオシドは２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；また、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。

ある実施形態では、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）８個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｉｉ）６個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｉｉｉ）６個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に直接隣接して位置し、それぞれのウイングセグメントの各ヌクレオシドは２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；また、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。

ある実施形態では、化合物の修飾オリゴヌクレオチドは、
（ｉ）８個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
（ｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント；
（ｉｉｉ）５個の連結したヌクレオシドからなる３’ウイングセグメント
を含み、ギャップセグメントは５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントの間に直接隣接して位置し、それぞれのウイングセグメントの各ヌクレオシドは２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み；また、各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む組成物を提供する。ある実施形態では、組成物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物又はその塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む組成物を提供する。ある実施形態では、組成物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチド又はその塩、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物を含み、粘度レベルが４０ｃＰ未満である組成物を提供する。ある実施形態では、組成物の粘度レベルは１５ｃＰ未満である。ある実施形態では、組成物の粘度レベルは１２ｃＰ未満である。ある実施形態では、組成物の粘度レベルは１０ｃＰ未満である。

ある実施形態は、トランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防、改善の方法を提供する。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物を動物に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、該方法は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを、動物に投与することを含む。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物を動物に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、該方法は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、該連結したヌクレオシドは配列番号１の５０１〜５３５又は５８０〜６０８番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の部分と相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む化合物又は修飾オリゴヌクレオチドを、動物に投与することを含む。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物を動物に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、該方法は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを、動物に投与することを含む。

ある実施形態は、本明細書に記載する化合物を動物に投与することを含む方法を提供する。ある実施形態では、該方法は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、該連結したヌクレオシドは配列番号１の５０８〜５２７番目のヌクレオチドから選択される領域内の等長の部分と相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む化合物又は修飾オリゴヌクレオチドを、動物に投与することを含む。

ある実施形態では、動物はヒトである。

ある実施形態では、投与は、本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスの進行を予防、治療、改善、又は遅延する。

ある実施形態では、化合物は、第２の薬剤と共投与される。

ある実施形態では、化合物と第２の薬剤は、併用して投与される。

ある実施形態では、投与は非経口投与である。ある実施形態では、非経口投与は皮下投与である。ある実施形態では、投与のための製剤は、食塩水中の化合物である。ある実施形態では、化合物は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する核酸塩基配列から選択される核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、製剤は、安定剤、又は脂質剤を含む付加的な安定剤を含まない。

ある実施形態では、投与は非経口投与である。ある実施形態では、非経口投与は頭蓋内投与である。ある実施形態では、頭蓋内投与は、脳内投与、髄腔内投与、室内投与、室投与、内脳室投与、脳室内投与、脳室投与である。

ある実施形態は、さらに、動物におけるトランスサイレチンｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を減少させるために本明細書に記載する化合物又は組成物を動物に投与することを含む、動物におけるトランスサイレチンｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を減少させる方法を提供する。ある実施形態では、動物はヒトである。ある実施形態では、トランスサイレチンｍＲＮＡ又はタンパク質の発現の減少は、トランスサイレチンアミロイドーシスの進行を予防、治療、改善、又は遅延する。

ある実施形態は、トランスサイレチン関連疾患を有するヒトを特定し、該ヒトに本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物を投与することを含む、トランスサイレチン関連疾患を有するヒトの治療方法を提供する。ある実施形態では、治療は、以下からなる群から選択される症状を緩和する：不穏、協調運動障害、眼振、痙性対麻痺、筋協調障害、視覚障害、不眠症、異常感覚、ミオクローヌス、失明、失語症、手根管症候群、発作、くも膜下出血、脳卒中及び脳内出血、水頭症、運動失調、痙性麻痺、昏睡、感覚性ニューロパチー、知覚異常、感覚鈍麻、運動ニューロパチー、自律神経ニューロパチー、起立性低血圧、反復性便秘、反復性下痢、嘔気、嘔吐、発汗減少、性交不能、胃排出遅延、尿閉、尿失禁、進行性心疾患、疲労、息切れ、体重減少、食欲不振、知覚麻痺、刺痛、脱力、舌肥大、ネフローゼ症候群、鬱血性心不全、労作性呼吸困難、末梢性浮腫、不整脈、動悸、朦朧状態、失神、体位性低血圧、末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚異常、下肢脱力、悪液質、末梢性浮腫、肝腫大、紫斑、拡張機能障害、心室性期外収縮、脳ニューロパチー、深部腱反射減弱、硝子体のアミロイド沈着、硝子体混濁、ドライアイ、緑内障、瞳孔における波状の外見、水分貯留による足の浮腫。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される認知症状である：記憶障害、判断力障害、思考障害、計画力障害、柔軟性障害、抽象的思考障害、ルール獲得力障害、適切な行動を取る能力の障害、不適切な行動を抑制する能力の障害、短期記憶障害、長期記憶障害、偏執病、見当識障害、錯乱、幻覚、及び痴呆。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される精神症状である：痴呆；不安、抑鬱、情動鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、被刺激性、人格変化（記憶障害、判断力障害及び思考障害を含む）、及び自殺念慮。

さらなる実施形態は、心アミロイドーシスを引き起こすトランスサイレチンアミロイドーシスを有するヒトに治療を行い、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物を該ヒトに投与する方法を提供する。ある実施形態では、治療は、以下からなる群から選択される症状を緩和する：鬱血性心不全、心肥大、労作性呼吸困難、末梢性浮腫、不整脈、動悸、朦朧状態、失神、重度の体位性低血圧を引き起こし得る末梢血管系の内皮下層内の沈着、拡張機能障害、心ブロック、心室性期外収縮、及び種々の頻脈性不整脈。

さらなる実施形態は、末梢性神経障害を引き起こすトランスサイレチンアミロイドーシスを有するヒトに治療を行い、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物を該ヒトに投与する方法を提供する。ある実施形態では、治療は、以下からなる群から選択される症状を緩和する：末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚異常、下肢脱力、疼痛、しばしば性機能障害又は泌尿器機能障害として現れる自律神経機能障害、対称感覚障害及び減弱、起立性低血圧、下痢、及び／又は性交不能。

さらなる実施形態は、消化器疾患を引き起こすトランスサイレチンアミロイドーシスを有するヒトに治療を行い、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物を該ヒトに投与する方法を提供する。ある実施形態では、治療は、以下からなる群から選択される症状を緩和する：下痢、便秘、嘔気、嘔吐、及び関連する腎障害及び肝障害。

さらに、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物をヒトに投与し、それによりトランスサイレチンアミロイドーシスを緩和又は予防することを含む、トランスサイレチンアミロイドーシスの緩和又は予防の方法を提供する。

さらに、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物をヒトに投与し、それにより心疾患を緩和又は予防することを含む、心疾患の緩和又は予防の方法を提供する。さらに、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物をヒトに投与し、それにより神経疾患を緩和又は予防することを含む、神経疾患の緩和又は予防の方法を提供する。さらに、本明細書に記載する治療上有効量の化合物又は組成物をヒトに投与し、それにより消化器疾患を緩和又は予防することを含む、消化器疾患の緩和又は予防の方法を提供する。

さらに、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１、２、又は４に特異的にハイブリダイズする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とするヒトに投与し、それによりヒトにおけるトランスサイレチンアミロイドーシスの症状を改善することを含む、トランスサイレチンアミロイドーシスの症状を改善する方法を提供する。

さらに、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１、２、又は４に特異的にハイブリダイズする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とするヒトに投与し、それによりヒトにおけるトランスサイレチンアミロイドーシスの症状の進行速度を遅らせることを含む、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連する症状の進行速度を遅らせる方法を提供する。

さらに、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、配列番号１、２、又は４に特異的にハイブリダイズする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とするヒトに投与し、それによりヒトにおけるトランスサイレチンアミロイド病の症状が示す変性を後退させる、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連する症状が示す変性を後退させる方法を提供する。

さらに、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とするヒトに投与し、それによりヒトにおけるトランスサイレチンアミロイドーシスの症状を改善することを含む、トランスサイレチンアミロイドーシスの症状を改善する方法を提供する。

さらなる実施形態は、１２〜３０個の連結したヌクレオシドからなり、配列番号８０に記載する核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を、それを必要とするヒトに投与し、それによりヒトにおけるトランスサイレチンアミロイドーシスの治療を行う、トランスサイレチンアミロイドーシスを有するヒトの治療方法を提供する。

ある実施形態では、症状は、身体症状、認知症状、精神症状、又は周辺症状である。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される身体症状である：不穏、協調運動障害、眼振、痙性対麻痺、筋協調障害、視覚障害、不眠症、異常感覚、ミオクローヌス、失明、失語症、手根管症候群、発作、くも膜下出血、脳卒中及び脳内出血、水頭症、運動失調、痙性麻痺、昏睡、感覚性ニューロパチー、知覚異常、感覚鈍麻、運動ニューロパチー、自律神経ニューロパチー、起立性低血圧、反復性便秘、反復性下痢、嘔気、嘔吐、発汗減少、性交不能、胃排出遅延、尿閉、尿失禁、進行性心疾患、疲労、息切れ、体重減少、食欲不振、知覚麻痺、刺痛、脱力、舌肥大、ネフローゼ症候群、鬱血性心不全、労作性呼吸困難、末梢性浮腫、不整脈、動悸、朦朧状態、失神、体位性低血圧、末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚異常、下肢脱力、悪液質、末梢性浮腫、肝腫大、紫斑、拡張機能障害、心室性期外収縮、脳ニューロパチー、深部腱反射減弱、硝子体のアミロイド沈着、硝子体混濁、ドライアイ、緑内障、瞳孔における波状の外見、水分貯留による足の浮腫。

ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される認知症状である：記憶障害、判断力障害、思考障害、計画力障害、柔軟性障害、抽象的思考障害、ルール獲得力障害、適切な行動を取る能力の障害、不適切な行動を抑制する能力の障害、短期記憶障害、長期記憶障害、偏執病、見当識障害、錯乱、幻覚、及び痴呆。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される精神症状である：痴呆；不安、抑鬱、情動鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、被刺激性、人格変化（記憶障害、判断力障害及び思考障害を含む）、及び自殺念慮。

ある実施形態では、症状は、少なくとも一つの身体症状、少なくとも一つの認知症状、少なくとも一つの精神症状、及び少なくとも一つの周辺症状の少なくとも一つである。

ある実施形態では、身体症状は以下からなる群から選択される：不穏、協調運動障害、無意識的に起きる動作、無意識的に中断される動作、歩行不安定、舞踏病、固縮、苦悶動作、異常肢位、不安定性、異常顔貌、咀嚼困難、嚥下困難、発話困難、発作、及び睡眠障害。

ある実施形態では、認知症状は以下からなる群から選択される：記憶障害、判断力障害、思考障害、計画力障害、柔軟性障害、抽象的思考障害、ルール獲得力障害、適切な行動を取る能力の障害、不適切な行動を抑制する能力の障害、短期記憶障害、長期記憶障害、偏執病、見当識障害、錯乱、幻覚、及び痴呆。

ある実施形態では、精神症状は以下からなる群から選択される：痴呆；不安、抑鬱、情動鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、被刺激性、人格変化（記憶障害、判断力障害及び思考障害を含む）、及び自殺念慮。

ある実施形態では、周辺症状は以下からなる群から選択される：脳質量減少、筋萎縮、心不全、耐糖能障害、体重減少、骨粗鬆症、及び精巣萎縮。

また、中枢神経系関連疾患の治療、予防、又は改善のための薬剤を調製するための方法及び化合物も提供する。

ある実施形態は、トランスサイレチンアミロイドーシスの治療、改善、又は予防のための薬剤の製造における、本明細書に記載する化合物の使用を提供する。

ある実施形態は、本明細書に記載する付加的な薬剤又は療法との併用療法による、本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防、又は改善における使用のための、本明細書に記載する化合物を提供する。薬剤又は療法は、共投与又は併用して投与することができる。

ある実施形態は、本明細書に記載する付加的な薬剤又は療法との併用療法による、本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防、又は改善のための薬剤の製造における、本明細書に記載する化合物の使用を提供する。薬剤又は療法は、共投与又は併用して投与することができる。

ある実施形態は、本明細書に記載する付加的な薬剤又は療法の投与をそれに続いて受ける患者での本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防、又は改善のための薬剤の製造における、本明細書に記載する化合物の使用を提供する。

ある実施形態は、本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスの治療、予防、又は改善のためのキットであって、
（ｉ）本明細書に記載する化合物；及び、選択的に、
（ｉｉ）本明細書に記載する付加的な薬剤又は療法
を含むキットを提供する。

本明細書に記載するキットは、さらに、本明細書に記載する併用療法により本明細書に記載するトランスサイレチンアミロイドーシスを治療、予防、又は改善するための該キットの使用の説明を含む場合がある。

アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣剤、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」、すなわち、水素結合を介して標的核酸にハイブリダイゼーションすることができる場合がある。

ある実施形態では、アンチセンス化合物は、５’から３’への方向で示した場合、標的とする標的核酸の標的セグメントに対する逆相補体を含む核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’への方向で示した場合、標的とする標的核酸の標的セグメントに対する逆相補体を含む核酸塩基配列を有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１２〜３０個のヌクレオチドの長さである。言い換えれば、アンチセンス化合物は、１２〜３０個の連結した核酸塩基である。その他の実施形態では、アンチセンス化合物は、８〜８０、１２〜５０、１２〜３０、１５〜３０、１８〜２４、１８〜２１、１９〜２２、又は２０個の連結した核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定のそのような実施形態では、アンチセンス化合物は、長さが８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、又は８０個、又は前記個数のうちのいずれか２つによって定められる範囲である、連結した核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、アンチセンス化合物は、短縮又は切断された修飾オリゴヌクレオチドを含む。短縮又は切断された修飾オリゴヌクレオチドは、１つのヌクレオシドが、５’端から欠失（５’切断）、あるいは３’端から欠失（３’切断）している。短縮又は切断された修飾オリゴヌクレオチドは、５’端から２つのヌクレオシドが欠失していてもよく、あるいは、３’端から２つのサブユニットが欠失していてもよい。あるいは、欠失するヌクレオシドは修飾オリゴヌクレオチド中に分散していてもよく、例えば、５’端から１つのヌクレオシドが欠失し、３’端から１つのヌクレオシドが欠失したアンチセンス化合物がある。

延長されたオリゴヌクレオチドで１つの付加ヌクレオシドが存在する場合、付加ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの５’端又は３’端に位置することができる。２つ以上の付加ヌクレオシドが存在する場合、付加ヌクレオシドは互いに隣接してもよく、例えば、２つのヌクレオシドがオリゴヌクレオチドの５’端に付加（５’付加）、あるいは、３’端に付加（３’付加）したオリゴヌクレオチドがある。あるいは、付加ヌクレオシドは、アンチセンス化合物中に分散していてもよく、例えば、５’端に１つのヌクレオシドが付加し、３’端に１つのサブユニットが付加したオリゴヌクレオチドがある。

アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物は、活性を消失することなく、その長さを増加又は減少させ、及び／又は、ミスマッチ塩基を導入することが可能である。例えば、Woolfら（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992）では、１３〜２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドについて、卵母細胞注射モデルにおける標的ＲＮＡの開裂を誘導する能力が試験されている。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端近くに８又は１１個のミスマッチ塩基を有する２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも低い程度ではあるが、標的ｍＲＮＡの特異的開裂を誘導可能であった。同様に、標的特異的な開裂は、１又は３個のミスマッチを有するものを含む１３核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることでも達成されている。

Gautschiら（J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001）では、ｂｃｌ−２ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、かつｂｃｌ−ｘＬｍＲＮＡに対して３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドは、インビトロ及びインビボで、ｂｌｃ−２とｂｃｌ−ｘＬの両方の発現を減少させることが示されている。さらに、このオリゴヌクレオチドは、インビボで強い抗腫瘍活性を示している。

Maher and Dolnick（Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988）では、一連の縦列型１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びそれぞれ２又は３個の縦列型アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列で構成される２８及び４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドについて、ウサギ網状赤血球アッセイにおいて、ヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させる能力が試験されている。３つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２８又は４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも低いレベルではあるが、それぞれ単独で翻訳の阻害が可能であった。

アンチセンス化合物モチーフ
ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、阻害活性の増強、標的核酸への結合親和性の増加、又はインビボでのヌクレアーゼによる分解への耐性などの性質を、アンチセンス化合物に付与するようなパターン又はモチーフで配置された、化学修飾されたサブユニットを有する。

キメラアンチセンス化合物は、一般的には、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞取込みの増加、標的核酸への結合親和性の増加、及び／又は阻害活性の増加をもたらすように修飾された、少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を開裂する細胞エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅＨの基質として機能してもよい。

ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物として考えられる。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅＨ開裂を補助する、複数のヌクレオチド又は連結したヌクレオシドを有する内部領域が、内部領域のヌクレオチド又は連結したヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチド又は連結したヌクレオシドを有する外側領域の間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、一般的にエンドヌクレアーゼ切断のための基質として機能し、一方、ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを含む。ある実施形態では、ギャップマーの領域は、それぞれの異なる領域を構成する糖部分のタイプによって区別される。ギャップマーの領域を区別するために用いられる糖成分のタイプとしては、いくつかの実施形態では、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（そのような２’−修飾ヌクレオシドとしては、例えば２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ−ＣＨ_３などが挙げられる）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（そのような二環式糖修飾ヌクレオシドとしては、例えば４’−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−２’架橋（ｎ＝１又はｎ＝２）を有するものが挙げられる）などがある。好ましくは、それぞれの異なる領域は、一様な糖部分を含む。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは、しばしば「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載され、その場合、「Ｘ」は５’ウイング領域の長さを表し、「Ｙ」はギャップ領域の長さを表し、「Ｚ」は３’ウイング領域の長さを表す。本明細書において、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載されるギャップマーは、ギャップセグメントが５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントのそれぞれに直接隣接して位置するような構成を有する。したがって、５’ウイングセグメントとギャップセグメントの間、又はギャップセグメントと３’ウイングセグメントの間には、介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載するアンチセンス化合物は、いずれもギャップマーモチーフを有することができる。いくつかの実施形態ではＸとＺは同一であり、その他の実施形態ではそれらは異なる。好ましい一実施形態では、Ｙは８〜１５個のヌクレオチドである。Ｘ、Ｙ又はＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、又はそれ以上のヌクレオチドのいずれであってもよい。したがって、ギャップマーには、例えば、５−１０−５、４−８−４、４−１２−３、４−１２−４、３−１４−３、２−１３−５、２−１６−２、１−１８−１、３−１０−３、２−１０−２、１−１０−１、２−８−２、６−８−６、又は５−８−５が含まれるが、これらに限定されない。

ある実施形態では、アンチセンス化合物が、ウイング−ギャップ又はギャップ−ウイングの構成、すなわち、ギャップマーの構成に関して上述したＸ−Ｙ又はＹ−Ｚの構成を有する「ウイングマー」モチーフを有する。したがって、ウイングマーの構成には、例えば、５−１０、８−４、４−１２、１２−４、３−１４、１６−２、１８−１、１０−３、２−１０、１−１０、８−２、２−１３、又は５−１３が含まれるが、これらに限定されない。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−１０−５ギャップマーモチーフを有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、６−８−６ギャップマーモチーフを有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−８−５ギャップマーモチーフを有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、ギャップ拡大型モチーフを有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするギャップ拡大型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５個の化学修飾ヌクレオシドからなるウイングセグメントの間に直接隣接して位置する、１０個の２’−デオキシリボヌクレオチドからなるギャップセグメントを有する。ある実施形態では、化学修飾は２’−糖修飾を含む。別の実施形態では、化学修飾は２’−ＭＯＥ糖修飾を含む。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするギャップ拡大型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５個の化学修飾ヌクレオシドからなるウイングセグメントの間に直接隣接して位置する、８個の２’−デオキシリボヌクレオチドからなるギャップセグメントを有する。ある実施形態では、化学修飾は２’−糖修飾を含む。別の実施形態では、化学修飾は２’−ＭＯＥ糖修飾を含む。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするギャップ拡大型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、６個の化学修飾ヌクレオシドからなるウイングセグメントの間に直接隣接して位置する、８個の２’−デオキシリボヌクレオチドからなるギャップセグメントを有する。ある実施形態では、化学修飾は２’−糖修飾を含む。別の実施形態では、化学修飾は２’−ＭＯＥ糖修飾を含む。

標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
ある実施形態では、トランスサイレチン核酸は、以下に記載される配列のいずれかである：ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００３７１．２、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）に２００８年２月１３日に初めて登録（本明細書に配列番号１として組み入れられる）、２００９２３６〜２０１７２８９番目のヌクレオチドで切り取られたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿０１０９６６．１０、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）に２００２年８月１日に初めて登録（本明細書に配列番号２として組み入れられる）；ヒトエクソンとの類似性に基づき、アカゲザルゲノム配列ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１から取り出したエクソン１〜４；及び、６２８０００〜６３８０００番目のヌクレオチドで切り取られたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）に２００６年３月２８日に初めて登録（本明細書に配列番号４として組み入れられる）。

本明細書の実施例において、各配列番号に記載される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合、又は核酸塩基へのいかなる修飾にも影響を受けないと解釈される。そのため、ある配列番号によって定義されるアンチセンス化合物は、独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合、又は核酸塩基への１つ以上の修飾を含むことができる。ＩＳＩＳ番号（Isis Number（Isis No)又はISIS NO）で記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列とモチーフの組み合わせを示す。

ある実施形態では、標的領域は、標的核酸の構造的に定義された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン接合部、コーディング領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、又はその他の定義された核酸領域を包含し得る。トランスサイレチンの構造的に定義された領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースからアクセッション番号によって入手することができ、そのような情報は参照により本明細書に組み入れられる。ある実施形態では、標的領域は、標的領域内の１つの標的セグメントの５’標的部位から、標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含し得る。

標的化は、アンチセンス化合物がハイブリダイズして所望の効果が生じる、少なくとも１つの標的セグメントの決定を含む。ある実施形態では、所望の効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの低減である。ある実施形態では、所望の効果は、標的核酸がコードするタンパク質のレベルの低減、又は標的核酸に関連する表現型の変化である。

標的領域は１つ以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の複数の標的セグメントは部分的に重なり合っていてもよい。あるいは、重なり合っていなくてもよい。ある実施形態では、標的領域内の標的セグメントは、約３００より多いのヌクレオシドで隔てられることはない。ある実施形態では、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、又は１０個のヌクレオチド、およそその数のヌクレオチド、それ以下の数のヌクレオチド、およそそれ以下の数のヌクレオチド、又は、上記の数のいずれか２つによって定められる範囲の数のヌクレオチドで、隔てられる。ある実施形態では、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の５個以下又は約５個以下のヌクレオチドで隔てられる。ある実施形態では、標的セグメントは連続している。考えられるものとして、本明細書に記載する５’標的部位又は３’標的部位のいずれかである、開始核酸を有する範囲によって定められる標的領域がある。

適切な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コーディング領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソン、又はエクソン／イントロン接合部内に見いだすことができる。開始コドン又は終止コドンを含有する標的セグメントも、適切な標的セグメントである。適切な標的セグメントは、例えば開始コドン又は終止コドンなど、特定の構造的に定義された領域を、特異的に除外することもできる。

適切な標的セグメントの決定には、標的核酸の配列と、ゲノム全体の他の配列との比較が含まれ得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使って、異なる核酸間で類似性を有する領域を特定することができる。この比較により、選択した標的核酸以外の配列（すなわち非標的配列又は標的外配列）に非特異的にハイブリダイズする可能性のあるアンチセンス化合物配列の選択を防ぐことができる。

活性標的領域内でのアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの低下パーセントによって定義される）には、ばらつきがあり得る。ある実施形態では、トランスサイレチンｍＲＮＡレベルの低下は、トランスサイレチン発現の阻害を示す。また、トランスサイレチンタンパク質のレベルの低下は、標的ｍＲＮＡ発現の阻害を示す。さらに、表現型の変化は、トランスサイレチン発現の阻害を示す。測定可能な表現型の変化としては、例えば、脳の大きさの正常までの増加、運動協調性の改善、頻繁な筋痙縮（ジストニア）の減少、被刺激性及び／又は不安の減少、記憶力の改善、又は精力の増加などがある。例えばトランスサイレチンアミロイドーシスに関連する症状などのその他の表現型の兆候も、以下に記載するように測定することが可能である。

ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアンチセンス化合物とトランスサイレチン核酸との間でハイブリダイゼーションが起こる。最も一般的なハイブリダイゼーションの機序には、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合形成（例えばワトソン−クリック型、フーグスティーン型又は逆フーグスティーン型水素結合形成）が関与する。

ハイブリダイゼーションは様々な条件下で起こり得る。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、ハイブリダイズさせようとする核酸分子の性質及び組成によって決まる。

ある配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であるかどうかを決定する方法は、当該技術分野で周知である。ある実施形態では、本明細書に記載するアンチセンス化合物は、トランスサイレチン核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。

相補性
アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の効果（例えば、トランスサイレチン核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）を生じる形で、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができる場合、そのアンチセンス化合物と標的核酸は互いに相補的である。

アンチセンス化合物は、介在又は隣接するセグメントがハイブリダイゼーションに関与しない形（例えば、ループ構造、ミスマッチ又はヘアピン構造）で、トランスサイレチン核酸の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズすることができる。

ある実施形態では、本明細書に記載するアンチセンス化合物又はその特定の部分は、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％、若しくは少なくともその割合で、トランスサイレチン核酸、その標的領域、標的セグメント又は特定の部分に対して相補的である。アンチセンス化合物の標的核酸に対する相補性パーセントは、常法によって決定することができる。

例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基のうち１８個が標的領域に相補的であって、そのため特異的にハイブリダイズすると考えられるアンチセンス化合物は、相補性パーセントが９０％である。この例の場合、残りの非相補的核酸塩基は、相補的核酸塩基と集合しているか分散していてもよく、互いに又は相補的核酸塩基と連続していなくてもよい。したがって、１８核酸塩基の長さで、標的核酸塩基と完全に相補的な２つの領域に挟まれた４個の非相補的核酸塩基を有するアンチセンス化合物は、標的核酸に対して７７．８％の全相補性を有し、したがって本発明の範囲に含まれる。アンチセンス化合物と標的核酸のある領域との相補性パーセントは、常法により、当該技術分野で公知のＢＬＡＳＴプログラム（基本的な局所アライメントサーチツール）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラムを用いて決定することができる（Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656）。相同性パーセント、配列同一性パーセント又は相補性パーセントは、例えば、Smith and Waterman（Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489)のアルゴリズムを用いるギャッププログラム（Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.）により、デフォルト設定で決定することができる。

ある実施形態では、本明細書に記載するアンチセンス化合物又はその特定の部分は、標的核酸又はその特定の部分に、完全に相補的（すなわち１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、トランスサイレチン核酸、その標的領域、標的セグメント又は標的配列に、完全に相補的である場合がある。本明細書において、「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確な塩基対形成ができることを意味する。例えば、４００核酸塩基長の標的配列に関して、２０核酸塩基のアンチセンス化合物は、該アンチセンス化合物に完全に相補的な対応する２０核酸塩基部分が標的核酸に存在すれば、該４００核酸塩基長の標的配列に完全に相補的である。また、完全に相補的とは、第１及び／又は第２核酸の特定の部分についても用いることができる。例えば、３０核酸塩基のアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分が、４００核酸塩基長の標的配列に「完全に相補的」であることができる。３０核酸塩基のオリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が、対応する２０核酸塩基部分であって、各核酸塩基がアンチセンス化合物の２０核酸塩基部分に相補的である部分を有する場合、標的配列に完全に相補的である。同時に、その３０核酸塩基のアンチセンス化合物全体は、そのアンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も標的配列に相補的であるかどうかによって、標的配列に対して完全に相補的である場合も、完全には相補的でない場合もあり得る。

非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’端又は３’端であってもよい。あるいは、非相補的核酸塩基又は核酸塩基は、アンチセンス化合物の内部部分に位置してもよい。２個以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは連続して（すなわち、連結されて）いてもよく、連続していなくてもよい。一実施形態では、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメント中に位置する。

ある実施形態では、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０核酸塩基長、又は最大でその核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、トランスサイレチン核酸などの標的核酸又はその特定の部分に関して、４個より多く、３個より多く、２個より多く、又は１個より多い非相補的核酸塩基を含むことはない。

ある実施形態では、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、若しくは３０核酸塩基長、又は最大でその核酸塩基長であるアンチセンス化合物は、トランスサイレチン核酸などの標的核酸又はその特定の部分に関して、６個より多く、５個より多く、４個より多く、３個より多く、２個より多く、又は１個より多い非相補的核酸塩基を含むことはない。

本明細書に記載するアンチセンス化合物は、標的核酸の一部分に相補的であるものも含む。本明細書において、「部分」とは、標的核酸のある領域又はセグメント内の所定数の連続する（すなわち連結した）核酸塩基を意味する。「部分」は、アンチセンス化合物の所定数の連続する核酸塩基を意味することもある。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。また、標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個若しくはそれ以上、又はこれらの個数のいずれか２つによって定められる範囲の核酸塩基部分に相補的であるアンチセンス化合物が考えられる。

同一性
本明細書に記載するアンチセンス化合物は、特定のヌクレオチド配列、配列番号、若しくは特定のＩＳＩＳ番号で表される化合物、又はそれらの一部分に対して、所定の同一性パーセントを有することがある。本明細書において、アンチセンス化合物が本明細書に開示する配列と同じ核酸塩基対合形成能を有する場合、そのアンチセンス化合物は該配列と同一である。例えば、開示するＤＮＡ配列中のチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡでは、ウラシルとチミジンはどちらもアデニンと対を形成するため、そのＤＮＡ配列と同一であるとみなされる。本明細書に記載するアンチセンス化合物の短縮型及び延長型、ならびに本明細書に記載するアンチセンス化合物と比較して非同一塩基を有する化合物も企図される。非同一塩基は、互いに隣接していてもよいし、アンチセンス化合物中に分散していてもよい。アンチセンス化合物の同一性パーセントは、比較対象である配列と比較して同一の塩基対形成を有する塩基の数によって算出される。

ある実施形態では、アンチセンス化合物又はその一部分は、本明細書に開示するアンチセンス化合物若しくは配列番号、又はその一部分の１つ以上に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である。

修飾
ヌクレオシドは塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基とも呼ばれる）部分は通常はヘテロ環塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合されたリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合、リン酸基は糖の２’、３’又は５’ヒドロキシル部分に連結することができる。オリゴヌクレオチドは、隣接ヌクレオシドが互いに共有結合されて線状のポリマー状オリゴヌクレオチドを形成することによって形成される。オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は一般にオリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するとされる。

アンチセンス化合物に対する修飾には、ヌクレオシド間結合、糖部分、又は核酸塩基の置換又は改変が包含される。修飾アンチセンス化合物は、例えば、細胞取込みの向上、核酸標的に対する親和性の向上、ヌクレアーゼ存在下での安定性の増強、又は阻害活性の増強などの望ましい性質を有するため、ネイティブ型よりも好ましいことが多い。

化学修飾ヌクレオシドについても、短縮型又は切断型アンチセンスオリゴヌクレオチドの標的核酸に対する結合親和性を増強させるために用いることができる。その結果、そのような化学修飾ヌクレオシドを有する、より短いアンチセンス化合物で、同等の結果が得られる場合が多い。

修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然のヌクレオシド間結合は、３’‐５’ホスホジエステル結合である。１つ以上の修飾された、すなわち非天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、例えば、細胞取込みの向上、標的核酸に対する親和性の向上、ヌクレアーゼ存在下での安定性の増強などの望ましい性質を有するため、天然のヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物によりも優先して選択される場合が多い。

修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子を保持するヌクレオシド間結合、ならびにリン原子を持たないヌクレオシド間結合が含まれる。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、及びホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されない。リン含有結合及び非リン含有結合の形成方法は公知である。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。ある実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

修飾糖部分
本発明のアンチセンス化合物は、糖基が修飾されている１つ以上のヌクレオシドを含有してもよい。そのような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の向上、結合親和性の増強、又はその他の有益な生物学的性質を、アンチセンス化合物に付与し得る。ある実施形態では、ヌクレオシドは化学修飾されたリボフラノース環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例としては、置換基の付加（５’及び２’置換基を含む）、非ジェミナル環原子の架橋による二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）、又はＣ（Ｒ_１）（Ｒ_２）（Ｒ、Ｒ_１、Ｒ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル又は保護基を表す）による置換、及びこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。化学修飾糖の例としては、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（他の開示されている５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについては、ＰＣＴ国際出願第２００８／１０１１５７号（公開日２００８年８月２１日）を参照）、又は、リボシル環酸素原子のＳによる置き換えと２’位におけるさらなる置換（公開米国特許出願第２００５−０１３０９２３号（公開日２００５年６月１６日）参照）、あるいは、ＢＮＡの５’−置換（ＰＣＴ国際出願第２００７／１３４１８１号（公開日２００７年１１月２２日）参照；ここでは、ＬＮＡが例えば５’−メチル基又は５’−ビニル基で置換される）が含まれる。

修飾糖部分を有するヌクレオシドの例としては、５’−ビニル、５’−メチル（Ｒ又はＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ_３、２’−ＯＣＨ_２ＣＨ_３、２’−ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｆ、及び２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＣＨ_３置換基を含むヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。また、２’位の置換基は、以下から選択することができる：アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、ＯＣＦ_３、ＯＣＨ_２Ｆ、Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）、Ｏ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）、及びＯ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_１）−（ＣＨ_２）_２−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）（Ｒ_１、Ｒ_ｍ及びＲ_ｎは、それぞれ独立して、Ｈ又は置換若しくは非置換のＣ_１−Ｃ_１０アルキルである）。

本明細書において、「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドの例としては、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが含まれるが、これに限定されない。ある実施形態では、本明細書に記載するアンチセンス化合物は、４’−２’架橋を含む１つ以上の二環式ヌクレオシドを含む。そのような４’−２’架橋を有する二環式ヌクレオシドの例としては、以下の式の一つが挙げられるがこれに限定されない：４’−（ＣＨ_２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ_２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’及び４’−ＣＨ（ＣＨ_２ＯＣＨ_３）−Ｏ−２’（及びその類似体：米国特許第７，３９９，８４５号（発行日２００８年７月１５日）参照）；４’−Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_３）−Ｏ−２’（及びその類似体：公開国際出願第２００９／００６４７８号（公開日２００９年１月８日）参照）；４’−ＣＨ_２−Ｎ（ＯＣＨ_３）−２’（及びその類似体：公開国際出願第２００８／１５０７２９号（公開日２００８年１２月１１日）参照）；４’−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ_３）−２’（公開米国特許出願第２００４−０１７１５７０号（公開日２００４年９月２日）参照）；４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’、ここでＲはＨ、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル又は保護基を表す（米国特許第７，４２７，６７２号（発行日２００８年９月２３日）参照）；４’−ＣＨ_２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ_３）−２’（Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134参照）；及び４’−ＣＨ_２−Ｃ（＝ＣＨ_２）−２’（及びその類似体：公開国際出願第２００８／１５４４０１号（公開日２００８年１２月８日）参照）。

二環式ヌクレオシドに関するさらなる研究報告については、公開された文献に見ることができる（例えば：Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456；Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630；Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638；Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222；Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039；Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26)8362-8379；Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561；Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7；及びOrum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243；米国特許第６，２６８，４９０号；６，５２５，１９１号；６，６７０，４６１号、６，７７０，７４８号；６，７９４，４９９号；７，０３４，１３３号；７，０５３，２０７号；７，３９９，８４５；７，５４７，６８４号；及び７，６９６，３４５号；米国特許公開第２００８−００３９６１８号；２００９−００１２２８１号；米国特許シリアル番号第６０／９８９，５７４号；６１／０２６，９９５号；６１／０２６，９９８号；６１／０５６，５６４号；６１／０８６，２３１号；６１／０９７，７８７号；及び６１／０９９，８４４号；公開ＰＣＴ国際出願第１９９４／０１４２２６号；２００４／１０６３５６号；２００５／０２１５７０号；２００７／１３４１８１号；２００８／１５０７２９号；２００８／１５４４０１号；及び２００９／００６４７８号を参照）。上記の各二環式ヌクレオシドは、１つ以上の立体化学的な糖配置を有して作製することができ、例えばα−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースなどが含まれる（国際公開第９９／１４２２６号として１９９９年３月２５日に公開された、ＰＣＴ国際出願ＤＫ９８／００３９３号を参照）。

ある実施形態では、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分は、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも一つの架橋を有する化合物であって、該架橋がそれぞれ以下から独立して選択される１つ又は２〜４つの連結した基を含む化合物を含むが、これらに限定されない：−［Ｃ（Ｒ_ａ）（Ｒ_ｂ）］_ｎ−、−Ｃ（Ｒ_ａ）＝Ｃ（Ｒ_ｂ）−、−Ｃ（Ｒ_ａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ_ａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒ_ａ）_２−、−Ｓ（＝Ｏ）_ｘ−、及び−Ｎ（Ｒ_ａ）−；
式中、
ｘは、０、１、又は２であり；
ｎは、１、２、３、又は４であり；
Ｒ_ａ及びＲ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_５−Ｃ_２０アリール、置換Ｃ_５−Ｃ_２０アリール、ヘテロ環ラジカル、置換ヘテロ環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_５−Ｃ_７脂環式ラジカル、置換Ｃ_５−Ｃ_７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ_１、ＮＪ_１Ｊ_２、ＳＪ_１、Ｎ_３、ＣＯＯＪ_１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）_２−Ｊ_１）、又はスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ_１）であり；及び、
Ｊ_１及びＪ_２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_５−Ｃ_２０アリール、置換Ｃ_５−Ｃ_２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ヘテロ環ラジカル、置換ヘテロ環ラジカル、Ｃ_１−Ｃ_１２アミノアルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アミノアルキル、又は保護基である。

ある実施形態では、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒ_ａ）（Ｒ_ｂ）］_ｎ−、−［Ｃ（Ｒ_ａ）（Ｒ_ｂ）］_ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ_ａＲ_ｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−、又は−Ｃ（Ｒ_ａＲ_ｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある実施形態では、架橋は、４’−ＣＨ_２−２’、４’−（ＣＨ_２）_２−２’、４’−（ＣＨ_２）_３−２’、４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、及び４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（Ｒは、それぞれ独立して、Ｈ、保護基、又はＣ_１−Ｃ_１２アルキル）である。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、さらに異性体配置によって定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ配置であるか、又はβ−Ｄ配置である。すでに、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡは、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれている（Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372）。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、以下に示す（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ_２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチルカルボサイクリック（４’−ＣＨ_２−ＣＨ（ＣＨ_３）−２’）ＢＮＡ、及び（Ｊ）プロピレンカルボサイクリック（４’−（ＣＨ_２）_３−２’）ＢＮＡを含むが、これらに限定されない。

式中、Ｂｘは塩基部分であり、Ｒは独立してＨ、保護基、又はＣ_１−Ｃ_１２アルキルである。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式Ｉを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
−Ｑ_ａ−Ｑ_ｂ−Ｑ_ｃ−は、−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ_ｃ）−ＣＨ_２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_ｃ）−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ_ｃ）−、−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ_ｃ）−Ｏ−、又は−Ｎ（Ｒ_ｃ）−Ｏ−ＣＨ_２であり；
Ｒ_ｃは、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル又はアミノ保護基であり；そして、
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合である。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式ＩＩを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合であり；
Ｚ_ａは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオール、又は置換チオである。

一実施形態では、被置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪ_ｃ、ＮＪ_ｃＪ_ｄ、ＳＪ_ｃ、Ｎ_３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ_ｃ、及びＮＪ_ｅＣ（＝Ｘ）ＮＪ_ｃＪ_ｄから独立して選択される置換基で単置換又は多置換されている（Ｊ_ｃ、Ｊ_ｄ、及びＪ_ｅは、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、又は置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキルであり、Ｘは、Ｏ又はＮＪ_ｃである）。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式ＩＩＩを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合であり；
Ｚ_ｂは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、又は置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式ＩＶを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合であり；
Ｒ_ｄは、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、又は置換Ｃ_２−Ｃ_６アルキニルであり；
ｑ_ａ、ｑ_ｂ、ｑ_ｃ及びｑ_ｄは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ_１−Ｃ_６アミノアルキル、又は置換Ｃ_１−Ｃ_６アミノアルキルである。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式Ｖを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合であり；
ｑ_ａ、ｑ_ｂ、ｑ_ｅ及びｑ_ｆは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシ、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシ、ＯＪ_ｊ、ＳＪ_ｊ、ＳＯＪ_ｊ、ＳＯ_２Ｊ_ｊ、ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ_３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ_ｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊ_ｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ_ｊＪ_ｋであり；
又は、ｑ_ｅ及びｑ_ｆは、一緒になって、＝Ｃ（ｑ_ｇ）（ｑ_ｈ）であり；
ｑ_ｇ及びｑ_ｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、又は置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキルである。

メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡモノマーのアデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン、ウラシルの合成と作製、並びにそれらのオリゴマー化、及び核酸認識能については、すでに説明されている（Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630）。ＢＮＡ及びその作製についても、国際公開第９８／３９３５２号及び９９／１４２２６号に記載されている。

メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ及び２’−チオ−ＢＮＡの類似体もすでに作製されている（Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222）。核酸ポリメラーゼの基質としての、オリゴデオキシリボヌクレオチドを含む固定化ヌクレオシド類似体の作製も、すでに説明されている（Wengel et al., 国際公開第９９／１４２２６号）。さらに、新規の配座固定された高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成についても、当該技術分野で説明されている（Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039）。また、２’−アミノ−ＢＮＡ及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡはすでに作製されており、相補的ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖とそれらの二本鎖の熱安定性についてもすでに報告されている。

ある実施形態では、二環式ヌクレオシドは、式ＶＩを有する：

式中、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合基、反応性リン基、リン部分、又は支持体との共有結合であり；
ｑ_ｉ、ｑ_ｊ、ｑ_ｋ及びｑ_ｌは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、置換Ｃ_２−Ｃ_１２アルキニル、Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシル、置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルコキシル、ＯＪ_ｊ、ＳＪ_ｊ、ＳＯＪ_ｊ、ＳＯ_２Ｊ_ｊ、ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ_３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪ_ｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊ_ｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪ_ｊＪ_ｋ、又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪ_ｊＪ_ｋであり；そして、
ｑ_ｉ及びｑ_ｊ、又は、ｑ_ｌ及びｑ_ｋは、一緒になって、＝Ｃ（ｑ_ｇ）（ｑ_ｈ）であって、ｑ_ｇ及びｑ_ｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、又は置換Ｃ_１−Ｃ_１２アルキルである。

４’−（ＣＨ_２）_３−２’架橋及びアルケニル類似架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ_２−２’を有する炭素環式二環式ヌクレオシドは、すでに説明されている（Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443及びAlbaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成と作製、並びにそれらのオリゴマー化、及び生化学的研究についても、すでに説明されている（Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362-8379）。

本明細書において、「４’−２’二環式ヌクレオシド」又は「４’〜２’二環式ヌクレオシド」は、フラノース環の２つの炭素原子を結合する架橋が糖環の２’炭素原子と４’炭素原子を結合していることを含むフラノース環を含む、二環式ヌクレオシドを意味する。

本明細書において、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある実施形態では、ヌクレオシドの糖部分又は糖部分類似体は、任意の位置で修飾又は置換されていてもよい。

本明細書において、「２’−修飾糖」は、２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。ある実施形態では、そのような修飾は、以下から選択される置換基を含む：置換及び非置換アルコキシ、置換及び非置換チオアルキル、置換及び非置換アミノアルキル、置換及び非置換アルキル、置換及び非置換アリル、並びに置換及び非置換アルキニルを含むがこれらに限定されない、ハロゲン化物。ある実施形態では、２’修飾は、以下のものを含む置換基から選択されるが、これらに限定されない：Ｏ［（ＣＨ_２）_ｎＯ］_ｍＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＦ、Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＮＨ_２、ＯＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ_３、及びＯ（ＣＨ_２）_ｎＯＮ［（ＣＨ_２）_ｎＣＨ_３］_２（ｎ及びｍは、１から約１０である）。その他の２’−置換基は、以下から選択することができる：Ｃ_１−Ｃ_１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、又はＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ_３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ_３、ＯＣＦ_３、ＳＯＣＨ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＯＮＯ_２、ＮＯ_２、Ｎ_３、ＮＨ_２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ開裂基、レポーター基、インターカレーター、薬物動態学的性状の改善のための基、又はアンチセンス化合物の薬力学的性状の改善のための基、及び、同様の性質を持つその他の置換基。ある実施形態では、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシドや、例えば２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルなどの他の修飾ヌクレオシドと比較して、高い結合親和性を有することが報告されている。また、２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボでの使用に期待が持てる特徴を有する、遺伝子発現のアンチセンス阻害剤となることが報告されている（Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504；Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176；Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637；及びAltmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926）。

本明細書において、「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」又は「修飾ＴＨＰヌクレオシド」は、通常のヌクレオシドにおけるペントフラノシル残基を置換している６員のテトラヒドロピラン「糖」を有するヌクレオシドを意味する（糖代替物）。修飾ＴＨＰヌクレオシドには、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：当該技術分野において、ヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール（anitol）核酸（ＡＮＡ）、マニトール（manitol）核酸（ＭＮＡ）（Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854参照）、フルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と呼ばれるもの、又は式ＶＩＩを有する化合物：

式中、式ＶＩＩの少なくとも一つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
Ｂｘはヘテロ環塩基部分であり；
Ｔ_ａ及びＴ_ｂは、それぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体とアンチセンス化合物を結合するヌクレオシド間結合基であるか、又は、Ｔ_ａ及びＴ_ｂの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体とアンチセンス化合物を結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔ_ａ及びＴ_ｂのもう一方がＨ、ヒドロキシル保護基、結合した複合基、又は５’若しくは３’−末端基であり；
ｑ_１、ｑ_２、ｑ_３、ｑ_４、ｑ_５、ｑ_６、及びｑ_７は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、置換Ｃ_２−Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２−Ｃ_６アルキニル、又は置換Ｃ_２−Ｃ_６アルキニルであり；そして、
Ｒ_１及びＲ_２は、それぞれ以下から選択される：水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換又は非置換アルコキシ、ＮＪ_１Ｊ_２、ＳＪ_１、Ｎ_３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ_１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ_１Ｊ_２、ＮＪ_３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ_１Ｊ_２、及びＣＮ（ここで、ＸはＯ、Ｓ又はＮＪ_１であり、Ｊ_１、Ｊ_２及びＪ_３は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ_１−Ｃ_６アルキルである）。

ある実施形態では、式ＶＩＩの修飾ＴＨＰヌクレオシドは、ｑ_１、ｑ_２、ｑ_３、ｑ_４、ｑ_５、ｑ_６、及びｑ_７がいずれもＨである。ある実施形態では、ｑ_１、ｑ_２、ｑ_３、ｑ_４、ｑ_５、ｑ_６、及びｑ_７の少なくとも一つは、Ｈ以外である。ある実施形態では、ｑ_１、ｑ_２、ｑ_３、ｑ_４、ｑ_５、ｑ_６、及びｑ_７の少なくとも一つはメチルである。ある実施形態では、式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドは、Ｒ_１及びＲ_２の一つがフルオロである。ある実施形態では、Ｒ_１はフルオロでＲ_２はＨ；Ｒ_１はメトキシでＲ_２はＨ、及び、Ｒ_１はＨでＲ_２はメトキシエトキシである。

本明細書において、「２’−修飾」又は「２’−置換」は、２’位にＨ又はＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを意味する。２’−修飾ヌクレオシドには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：糖環の２つの炭素原子を結合する架橋が、糖環の２’炭素と他の炭素を結合している二環式ヌクレオシド；及び、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ_１−Ｃ_１０アルキル、−ＯＣＦ_３、Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−ＣＨ_３、２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）、又はＯ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ_ｍ）（Ｒ_ｎ）などの、非架橋２’置換基を有するヌクレオシド（Ｒ_ｍ及びＲ_ｎは、それぞれ独立して、Ｈ、又は、置換若しくは非置換Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルである）。２’−修飾ヌクレオシドは、さらに、例えば糖の他の位置、及び／又は核酸塩基にそのほかの修飾を含んでいてもよい。

本明細書において、「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを意味する。

本明細書において、「２’−ＯＭｅ」、「２’−ＯＣＨ_３」又は「２’−Ｏ−メチル」は、それぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ_３基を含む糖を含むヌクレオシドを意味する。

本明細書において、「ＭＯＥ」、「２’−ＭＯＥ」、「２’−ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３」又は「２’−Ｏ−メトキシエチル」は、それぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３基を含む糖を含むヌクレオシドを意味する。

本明細書において、「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味する。ある実施形態では、複数のヌクレオシドの１つ以上が修飾されている。ある実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ)及び／又はデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。

ヌクレオシドを修飾してアンチセンス化合物に組み込むために使用することができるビシクロ及びトリシクロ糖代替環系は、当該技術分野で他にも多く知られている（例えば、総説：Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854を参照）。それらの環系は、活性を向上させるために種々のさらなる置換を行うことができる。

修飾糖の作製方法は、当業者において公知である。

修飾糖部分を有するヌクレオチドでは、核酸塩基部分（天然、修飾又はそれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持されている。

ある実施形態では、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。ある実施形態では、修飾糖部分は２’−ＭＯＥである。ある実施形態では、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフ内に配置されている。ある実施形態では、修飾糖部分は、（４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。ある実施形態では、（４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウイングの全体にわたって配置されている。

修飾核酸塩基
核酸塩基（又は塩基）修飾又は置換は、天然又は合成された非修飾核酸塩基とは構造的に識別可能であるが、機能的には交換可能である。天然及び修飾核酸塩基は、どちらも水素結合に関与することができる。そのような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性、又はその他の何らかの有益な生物学的性質を、アンチセンス化合物に付与することができる。修飾核酸塩基には、例えば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などの、合成及び天然核酸塩基が含まれる。５−メチルシトシン置換を含むある種の核酸塩基置換は、標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合親和性を増強するために特に有用である。例えば、５−メチルシトシン置換は、核酸二本鎖安定性を０．６〜１．２℃増加させることが示されている（Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. and Lebleu, B., eds., Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278）。

その他の非修飾核酸塩基としては、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル及びその他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及びその他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ_３）ウラシル及びシトシン、及びピリミジン塩基のその他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシル（pseudouracil））、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及びその他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及びその他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニン、ならびに３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンなどがある。

ヘテロ環塩基部分は、プリン又はピリミジン塩基が他の複素環、例えば７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンで置き換えられているものも含む。アンチセンス化合物の結合親和性を増強するために特に有用な核酸塩基としては、５−置換ピリミジン類、６−アザピリミジン類、及びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン類、例えば２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンが含まれる。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするギャップ拡大型アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。ある実施形態では、修飾核酸塩基は５−メチルシトシンである。ある実施形態では、各シトシンは５−メチルシトシンである。

医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物又は製剤を作製するために、薬学的に許容される活性又は不活性物質と混合することができる。医薬組成物を製剤化するための組成物及び方法は、これらに限定されないが、投与経路、疾患の程度、又は投与用量などの複数の基準に従って決定される。

トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物は、それを適切な薬学的に許容される希釈剤又は担体と組み合わせることにより、医薬組成物に利用することができる。薬学的に許容される希釈剤には、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。ＰＢＳは、非経口的に送達される組成物における使用に適した希釈剤である。したがって、一実施形態において、本明細書に記載する方法では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物と薬学的に許容される希釈剤を含む医薬組成物が用いられる。ある実施形態では、薬学的に許容される希釈剤はＰＢＳである。ある実施形態では、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、薬学的に許容される塩、エステル若しくはその塩、又は、ヒトを含む動物に投与された時に生物学的に活性な代謝産物若しくはその残基を（直接又は間接的に）与えることができる他のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、プロドラッグの薬学的に許容される塩、及び他の生物学的同等物にも引用される。適切な薬学的に許容される塩には、ナトリウム塩及びカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。

プロドラッグには、体内で内因性ヌクレアーゼによって開裂されて活性アンチセンス化合物を形成させるアンチセンス化合物の一端又は両端に、付加的なヌクレオシドを組み込むことが含まれる。

複合化アンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、又は細胞取込みを増強する１つ以上の部分又は複合体と共有結合してもよい。代表的な複合基には、コレステロール部分及び脂質部分が含まれる。別の複合基としては、糖質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン類、ローダミン類、クマリン類、及び色素が含まれる。

アンチセンス化合物は、例えばヌクレアーゼ安定性などの性質を向上するために、通常アンチセンス化合物の一端又は両端に取付けられる１つ以上の安定化基を有するように修飾することができる。安定化基にはキャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物を、エキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内での送達及び／又は局在化を補助することができる。キャップは、５’−末端（５’−キャップ）若しくは３’−末端（３’−キャップ）に存在するか、又は両末端に存在することができる。キャップ構造は当該技術分野において公知であり、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップが含まれる。アンチセンス化合物の一端又は両端をキャップしてヌクレアーゼ安定性を付与するために使用することができる別の３’及び５’−安定化基としては、国際公開第０３／００４６０２号（公開日２００３年１月１６日）に開示されているものが含まれる。

細胞培養及びアンチセンス化合物の処理
トランスサイレチン核酸のレベル、活性又は発現に対するアンチセンス化合物の効果は、種々の細胞タイプにおいて、インビトロで試験することができる。分析に使用される細胞タイプは、商業販売業者（例えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、バージニア州マナッサス；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．、ノースカロライナ州リサーチ・トライアングル・パーク；ＣｌｏｎｅｔｉｃｓＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、メリーランド州ウォーカーズビル）から入手することができ、細胞は、その指示に従って市販の試薬（例えば、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カリフォルニア州カールズバッド）を用いて培養される。細胞タイプの例としては、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、初期肝細胞、Ａ５４９細胞、ＧＭ０４２８１線維芽細胞、及びＬＬＣ−ＭＫ２細胞が含まれるが、これらに限定されない。

アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
ここでは、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理するための方法を説明するが、該方法は、他のアンチセンス化合物による処理のために適宜変更することができる。

通常、細胞は、培養が約６０〜８０％コンフルエンスに達した時点で、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。

アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために一般的に用いられる試薬の１つに、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）中で、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度、及び、通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）濃度にする。

アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために用いられる別の試薬として、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）中で、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）と混合し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の濃度、及び、通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）濃度にする。

アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために用いられる別の試薬として、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）中で、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）と混合し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の濃度、及び、通常１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲であるＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）濃度にする。

アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために用いられる別の技術として、エレクトロポレーションがある。

細胞は、常法によりアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。細胞は、通常、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６〜２４時間後に収集し、その時点で、標的核酸のＲＮＡ又はタンパク質レベルを、当該技術分野において公知であって本明細書に説明する方法によって測定する。一般的に、処理が複数回反復して行なわれる場合は、データは反復した処理の平均で表す。

使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞株ごとに異なる。特定の細胞株についての最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定する方法は、当該技術分野において公知である。ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ、又はＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎを用いてトランスフェクトする場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、通常、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトする場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、それよりも高い６２５〜２０，０００ｎＭの範囲の濃度で使用される。

ＲＮＡの単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに対して行うことができる。ＲＮＡの単離方法は、当該技術分野において公知である。ＲＮＡは、当該技術分野において公知の方法で調製され、例えば、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）を使用して、製造者の推奨するプロトコールに従って調製する。

標的レベル又は標的発現の阻害の分析
トランスサイレチン核酸のレベル又は発現は、当該技術分野において公知の種々の方法で測定することができる。例えば、標的核酸レベルは、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、定量リアルタイムＰＣＲなどによって定量することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに対して行うことができる。ＲＮＡの単離方法は、当該技術分野において公知である。ノーザンブロット分析も当該技術分野では常法である。定量リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（カリフォルニア州フォスターシティ）から入手可能な市販のＡＢＩＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００又は７９００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍを、製造者の指示に従って使用することにより、簡便に行うことができる。

標的ＲＮＡレベルの定量リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量は、ＡＢＩＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００又は７９００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＰＥ−ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティ）を使用し、製造者の指示に従い、定量リアルタイムＰＣＲによって行うことができる。定量リアルタイムＰＣＲの方法は、当該技術分野において公知である。

リアルタイムＰＣＲの前に、単離されたＲＮＡに逆転写酵素（ＲＴ）反応を行い、それにより相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が生成され、それをリアルタイムＰＣＲの増幅のための基質として使用する。ＲＴ反応及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じサンプルウェル内で逐次的に行なわれる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州カールズバッド）から入手する。ＲＴ反応及びリアルタイムＰＣＲ反応は、当業者において公知の方法によって行う。

リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（又はＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡなどの発現量が一定な遺伝子の発現レベルを使って正規化するか、又はＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州カールズバッド）を用いて全ＲＮＡを定量することによって正規化する。シクロフィリンＡの発現は、標的と同時に、多重に、又は別々に、リアルタイムＰＣＲで定量する。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｅｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．、オレゴン州ユージーン）を用いて定量する。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡの定量方法は、Jones, L.J., et al,（Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374)に記載されている。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）の蛍光測定には、ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００装置（ＰＥＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）が用いられる。

プローブ及びプライマーは、トランスサイレチン核酸とハイブリダイズするよう設計される。リアルタイムＰＣＲのプローブ及びプライマーの設計方法は、当該技術分野において公知であり、ＰＲＩＭＥＲＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスターシティ）などのソフトウェアの使用が含まれる。

タンパク質レベルの分析
トランスサイレチン核酸のアンチセンス阻害は、トランスサイレチンタンパク質レベルを測定することで評価することができる。トランスサイレチンのタンパク質レベルは、当該技術分野において公知の各種の方法によって評価又は定量することができ、例えば、免疫沈降、ウェスタンブロット分析（イムノブロット法）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、定量タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えばカスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学又は蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などがある。標的に対する抗体は、ＭＳＲＳ抗体カタログ（ＡｅｒｉｅＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ミシガン州バーミンガム）などの各種の供給元から特定して入手するか、又は当該技術分野で公知である従来のモノクローナル又はポリクローナル抗体産生方法によって作製することができる。ヒト及びマウストランスサイレチンの検出に有用な抗体は市販されている。

アンチセンス化合物のインビボ試験
アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物は、動物において、トランスサイレチン発現の阻害や表現型変化をもたらす能力を評価するために試験される。試験は、正常な動物、又は実験的病態モデルで行われる。動物への投与のためには、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝食塩水などの薬学的に許容される希釈剤中で製剤される。投与には、非経口投与経路が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置期間の後、ＲＮＡを組織から単離し、トランスサイレチン核酸発現の変化を測定する。トランスサイレチンタンパク質レベルの変化についても測定する。

特定の化合物
様々な長さ、モチーフ、及び骨格構成を有する、およそ２４６種類の新たに設計したアンチセンス化合物について、ヒトトランスサイレチンｍＲＮＡに対する効果を、いくつかの細胞タイプにおいてインビトロで試験を行った。新たな化合物は、インビトロで最も効果のあるアンチセンス化合物の一部として認められているＩＳＩＳ番号３０４２６７、３０４２６８、３０４２８０、３０４２８４、３０４２８５、３０４２８６、３０４２８７、３０４２８８、３０４２８９、３０４２９０、３０４２９１、３０４２９２、３０４２９３、３０４２９４、３０４２９６、３０４２９７、３０４２９８、３０４２９９、３０４３００、３０４３０１、３０４３０２、３０４３０３、３０４３０４、３０４３０７、３０４３０８、３０４３０９、３０４３１１、及び３０４３１２を含む、およそ７９種類のこれまでに設計された化合物と比較を行った（例えば、米国特許公開第２００５／０２４４８６９号及び２００９／００８２３００号を参照）。新たに設計したもの及びこれまでに設計されたもののおよそ３２５種類のアンチセンス化合物のうち、インビトロでの有効性に基づき、およそ１５種類の化合物を選択して更なる試験を行った。選択した化合物は、インビボでの有効性及び耐容性について、トランスジェニックマウスモデルで試験した（実施例１０参照）。試験した１５種類の化合物から１１種類を選択し、ＣＤ１マウスにおいて、全身耐容性（実施例１１参照）及び肝臓での半減期測定（実施例１２参照）の試験を行い、ＳＤラットにおいて、全身耐容性（実施例１３参照）及び肝臓におけるオリゴヌクレオチド濃度の薬物動態学的検討（実施例１４参照）の試験を行った。これらの試験から、７種類の化合物について、用量依存的な阻害及び耐容性をトランスジェニックマウスで試験した（実施例１５参照）。さらに、表１から１５種類の別の化合物を選択し、また、様々なモチーフを有する６種類の別の化合物を、上述の試験で高い有効性及び耐容性を示したＩＳＩＳ４２０９５１と重複する配列を有して設計した。これらの別の化合物は、トランスジェニックマウスにおいて、有効性及び耐容性をＩＳＩＳ４２０９５１と比較した（実施例１６参照）。これらすべての試験（実施例１０〜１６）に基づき、２２種類の化合物を選択し、ＣＤ１マウスにおいて、全身耐容性を試験した（実施例１７参照）。７種類の化合物が該マウスにおいて耐容可能であると考えられ、さらにＳＤラットにおける全身耐容性（実施例１８参照）、並びに肝臓及び腎臓におけるオリゴヌクレオチド濃度の薬物動態学的検討（実施例１９参照）の試験を行った。また、該７種類の化合物について、用量依存的な有効性をトランスジェニックマウスで試験した（実施例２０参照）。

これらの試験（実施例１６〜２０）の最終評価から、配列番号２５、７８、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する配列の核酸配列を有する９種類の化合物が選択された。これらの化合物は、それらの相補的配列から、配列番号１の５０５〜５２４、５０７〜５２６、５０８〜５２７、５１３〜５３２、５１５〜５３４、５１６〜５３５、５８０〜５９９、５８５〜６０４、５８７〜６０６、又は５８９〜６０８の領域に相補的である。ある実施形態では、本明細書にさらに記載するような上記領域を標的とする化合物は、本明細書にさらに記載するように、該配列番号に記載する配列のいくつかの核酸部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、上記領域を標的とする化合物、又は上記配列番号に記載する配列のある核酸部分を有する化合物は、本明細書にさらに記載するように様々な長さを有することができ、また、本明細書にさらに記載するように様々なモチーフの１つを有することができる。ある実施形態では、ある領域を標的とする化合物、又は上記配列番号に記載する配列のある核酸部分を有する化合物は、ＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、又はＩＳＩＳ４２０９５９に示すような、特定の長さ及びモチーフを有する。

配列番号２５、７８、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する配列の核酸配列を有する９種類の化合物について、さらに、カニクイザルの初期肝細胞における用量依存的な阻害を試験した（実施例２１参照）。また、これらの化合物の最適粘度についても試験した（実施例２２）。さらに、配列番号７８、８６、８７、１１５、１２０、及び１２４に記載する配列の核酸配列を有する７種類の化合物について、ＣＤ１マウスの肝臓における半減期を評価した（実施例２３）。

これらの試験（実施例１〜２３）の最終評価から、配列番号２５、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２、及び１２４に記載する配列の核酸配列を有する８種類の化合物が選択された。これらの化合物は、それらの相補的配列から、配列番号１の５０４〜５２３、５０５〜５２４、５１２〜５３１、５１３〜５３２、５７７〜５９６、５８２〜６０１、５８４〜６０３、及び５８６〜６０５の領域に相補的である。ある実施形態では、本明細書にさらに記載するような上記領域を標的とする化合物は、本明細書にさらに記載するような、該配列番号に記載する配列のいくつかの核酸部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、上記領域を標的とする化合物、又は上記配列番号に記載する配列のある核酸部分を有する化合物は、本明細書にさらに記載するような様々な長さを有することができ、また、本明細書にさらに記載するような様々なモチーフの１つを有することができる。ある実施形態では、ある領域を標的とする化合物、又は上記配列番号に記載する配列のある核酸部分を有する化合物は、ＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、又はＩＳＩＳ４２０９５９に示すような、特定の長さ及びモチーフを有する。

これらの８種類の化合物に対し、カニクイザルにおける効果、薬物動態プロファイル及び耐容性について試験を行った（実施例２４）。カニクイザルにおける阻害試験では、これらの化合物のうちのいくつかを用いた処置により、肝臓のＴＴＲｍＲＮＡの強い阻害が引き起こされることが示された。具体的には、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、及びＩＳＩＳ４２０９１５を用いた処置により、ＰＢＳ対照に比べて、それぞれ９１％、７９％、及び７８％の阻害を引き起こした。ＩＳＩＳ４２０９１５のＴＴＲｍＲＮＡ阻害（７８％）は、ＩＳＩＳ３０４２９９（５９％）よりも高いが、これら２つのオリゴヌクレオチドは、配列番号１上の標的領域に互いに１つの塩基対シフトの違いがあるだけである。タンパク質分析もＲＮＡ分析のデータを補足しており、対照と比べて、ＩＳＩＳ４２０９１５による処置が７６％、ＩＳＩＳ３０４２９９による処置が４７％のＴＴＲタンパク質の阻害を引き起こしている。また、トランスサイレチンに関連するタンパク質として、ＲＢＰ４タンパク質レベルも、アンチセンス化合物による処置後に減少することが考えられた。ＩＳＩＳ４２０９１５による処置後には、ＲＢＰ４タンパク質レベルは６３％減少した。ＩＳＩＳ３０４２９９による処置では、ＲＢＰ４タンパク質レベルは１９％減少している。さらに、サルでの試験に示されるように、ＩＳＩＳ４２０９１５は、ＩＳＩＳ３０４２９９よりも耐容性が高かった（実施例２４）。ＩＳＩＳ３０４２９９で処置したサルのトランスアミナーゼレベル（ＡＬＴ８１ＩＵ／Ｌ及びＡＳＴ１０１ＩＵ／Ｌ）は、ＩＳＩＳ４２０９１５で処置したもの（ＡＬＴ６８ＩＵ／Ｌ及びＡＳＴ６２ＩＵ／Ｌ）よりも高かった。ＩＳＩＳ３０４２９９で処置したサルの補体Ｃ３レベル（９６ｍｇ／ｄＬ）は、ＩＳＩＳ４２０９１５で処置したもの（１０４ｍｇ／ｄＬ）よりも低かった。

したがって、本発明は、改善された特徴のいずれか１つ以上を有するアンチセンス化合物を提供する。ある実施形態では、本発明は、本発明にさらに記載する、配列番号１のヌクレオチドの当該領域を標的とする、又は当該領域と特異的にハイブリダイズ可能な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

したがって、本発明は、改善された特徴のいずれか１つ以上を有するアンチセンス化合物を提供する。ある実施形態では、本発明は、本発明にさらに記載する、配列番号２のヌクレオチドの当該領域を標的とする、又は当該領域と特異的にハイブリダイズ可能な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

したがって、本発明は、改善された特徴のいずれか１つ以上を有するアンチセンス化合物を提供する。ある実施形態では、本発明は、本発明にさらに記載する、配列番号４のヌクレオチドの当該領域を標的とする、又は当該領域と特異的にハイブリダイズ可能な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。

ある実施形態では、本明細書に記載する化合物は、実施例６７に記載するように、エレクトロポレーションを用いてカニクイザル肝細胞株に送達された際に、２．９μＭ未満、２．２μＭ未満、２．０μＭ未満、１．５μＭ未満、１．４μＭ未満、１．３μＭ未満、１．０μＭ未満、０．７μＭ未満、０．６μＭ未満のインビトロＩＣ_５０の少なくとも一つを有するので効果的である。ある実施形態では、本明細書に記載する化合物は、食塩水で処置した動物に比べて、ＡＬＴ値又はＡＳＴ値が４倍、３倍、又は２倍より多くない増加；又は肝臓、脾臓、又は腎臓の重量が３０％、２０％、１５％、１２％、１０％、５％、又は２％より多くない増加の少なくとも一つを示すため、耐容性が高い。

特定の適応症
ある実施形態では、本明細書に記載する１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体の治療方法を提供する。ある実施形態では、個体は、中枢神経系関連疾患を有する。

下記の実施例に示すように、本明細書に記載するトランスサイレチンを標的とする化合物は、中枢神経系関連疾患の生理的症状の重症度を軽減することが示されている。いくつかの実験では、化合物はアミロイド斑の形成速度を低減しており、例えば、動物の症状は継続するが、非処置の動物に比べて症状の重症度は軽度である。一方、他の実験では、化合物は、時間とともに機能の再生が見られている；例えば、処置をより長い期間行った動物では、化合物を短い期間投与したものに比べて症状が軽度であった。そのため、以下に例示する化合物の機能回復能は、本明細書に記載する化合物を用いた治療により、疾患の症状を後退させ得ることを示している。

したがって、本明細書では、必要とする対象における、中枢神経系関連疾患、心疾患、神経病理学的疾患、又は消化器疾患に関連する症状の改善方法を提供する。ある実施形態では、中枢神経系関連疾患、心疾患、神経病理学的疾患、又は消化器疾患に関連する症状の発症率を低減する方法を提供する。ある実施形態では、中枢神経系関連疾患、心疾患、神経病理学的疾患、又は消化器疾患に関連する症状の重症度を低減する方法を提供する。これらの実施形態では、該方法は、治療上有効量のトランスサイレチン核酸を標的とする化合物を、それを必要とする個体に投与することを含む。

トランスサイレチンアミロイドーシスは、多数の身体症状、神経症状、精神症状、及び／又は周辺症状によって特徴づけられる。上述の方法では、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連することが当業者に知られているいかなる症状も、上記に示すように改善するか又は調節することができる。ある実施形態では、症状は、身体症状、認知症状、精神症状、又は周辺症状である。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される身体症状である：不穏、協調運動障害、眼振、痙性対麻痺、筋協調障害、視覚障害、不眠症、異常感覚、ミオクローヌス、失明、失語症、手根管症候群、発作、くも膜下出血、脳卒中及び脳内出血、水頭症、運動失調、痙性麻痺、昏睡、感覚性ニューロパチー、知覚異常、感覚鈍麻、運動ニューロパチー、自律神経ニューロパチー、起立性低血圧、反復性便秘、反復性下痢、嘔気、嘔吐、発汗減少、性交不能、胃排出遅延、尿閉、尿失禁、進行性心疾患、疲労、息切れ、体重減少、食欲不振、知覚麻痺、刺痛、脱力、舌肥大、ネフローゼ症候群、鬱血性心不全、労作性呼吸困難、末梢性浮腫、不整脈、動悸、朦朧状態、失神、体位性低血圧、末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚異常、下肢脱力、悪液質、末梢性浮腫、肝腫大、紫斑、拡張機能障害、心室性期外収縮、脳ニューロパチー、深部腱反射減弱、硝子体のアミロイド沈着、硝子体混濁、ドライアイ、緑内障、瞳孔における波状の外見、水分貯留による足の浮腫。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される認知症状である：記憶障害、判断力障害、思考障害、計画力障害、柔軟性障害、抽象的思考障害、ルール獲得力障害、適切な行動を取る能力の障害、不適切な行動を抑制する能力の障害、短期記憶障害、長期記憶障害、偏執病、見当識障害、錯乱、幻覚、及び痴呆。ある実施形態では、症状は、以下からなる群から選択される精神症状である：痴呆；不安、抑鬱、情動鈍麻、自己中心性、攻撃性、強迫行動、被刺激性、人格変化（記憶障害、判断力障害及び思考障害を含む）、及び自殺念慮。

ある実施形態では、症状は不穏である。ある実施形態では、症状は協調運動障害である。ある実施形態では、症状は眼振である。ある実施形態では、症状は痙性対麻痺である。ある実施形態では、症状は筋協調障害である。ある実施形態では、症状は視覚障害である。ある実施形態では、症状は不眠症である。ある実施形態では、症状は異常感覚である。ある実施形態では、症状はミオクローヌスである。ある実施形態では、症状は失明である。ある実施形態では、症状は失語症である。ある実施形態では、症状は手根管症候群である。ある実施形態では、症状は発作である。ある実施形態では、症状はくも膜下出血である。ある実施形態では、症状は脳卒中である。ある実施形態では、症状は脳内出血である。ある実施形態では、症状は水頭症である。ある実施形態では、症状は運動失調である。ある実施形態では、症状は痙性麻痺である。ある実施形態では、症状は昏睡である。ある実施形態では、症状は感覚性ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は知覚異常である。ある実施形態では、症状は感覚鈍麻である。ある実施形態では、症状は運動ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は自律神経ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は起立性低血圧である。ある実施形態では、症状は反復性便秘である。ある実施形態では、症状は反復性下痢である。ある実施形態では、症状は嘔気である。ある実施形態では、症状は嘔吐である。ある実施形態では、症状は発汗減少である。ある実施形態では、症状は性交不能症である。ある実施形態では、症状は胃排出遅延である。ある実施形態では、症状は尿閉である。ある実施形態では、症状は尿失禁である。ある実施形態では、症状は進行性心疾患である。ある実施形態では、症状は疲労である。ある実施形態では、症状は息切れである。ある実施形態では、症状は体重減少である。ある実施形態では、症状は知覚麻痺である。ある実施形態では、症状は刺痛である。ある実施形態では、症状は脱力である。ある実施形態では、症状は舌肥大である。ある実施形態では、症状はネフローゼ症候群である。ある実施形態では、症状は鬱血性心不全である。ある実施形態では、症状は労作性呼吸困難である。ある実施形態では、症状は末梢性浮腫である。ある実施形態では、症状は不整脈である。ある実施形態では、症状は動悸である。ある実施形態では、症状は朦朧状態である。ある実施形態では、症状は失神である。ある実施形態では、症状は体位性低血圧である。ある実施形態では、症状は末梢神経疾患である。ある実施形態では、症状は感覚運動障害である。ある実施形態では、症状は下肢ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は上肢ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は痛覚過敏である。ある実施形態では、症状は温度感覚異常である。ある実施形態では、症状は下肢脱力である。ある実施形態では、症状は悪液質である。ある実施形態では、症状は浮腫である。ある実施形態では、症状は肝腫大である。ある実施形態では、症状は紫斑である。ある実施形態では、症状は拡張機能障害である。ある実施形態では、症状は心室性期外収縮である。ある実施形態では、症状は脳ニューロパチーである。ある実施形態では、症状は深部腱反射減弱である。ある実施形態では、症状は硝子体のアミロイド沈着である。ある実施形態では、症状は硝子体混濁である。ある実施形態では、症状はドライアイである。ある実施形態では、症状は緑内障である。ある実施形態では、症状は瞳孔における波状の外見である。ある実施形態では、症状は水分貯留による足の浮腫である。

ある実施形態では、症状は記憶障害である。ある実施形態では、症状は判断力障害及び思考障害である。ある実施形態では、症状は計画力障害である。ある実施形態では、症状は柔軟性障害である。ある実施形態では、症状は抽象的思考障害である。ある実施形態では、症状はルール獲得力障害である。ある実施形態では、症状は適切な行動を取る能力の障害である。ある実施形態では、症状は不適切な行動を抑制する能力の障害である。ある実施形態では、症状は短期記憶障害である。ある実施形態では、症状は長期記憶障害である。ある実施形態では、症状は偏執病である。ある実施形態では、症状は見当識障害である。ある実施形態では、症状は錯乱である。ある実施形態では、症状は幻覚である。ある実施形態では、症状は痴呆である。

ある実施形態では、症状は痴呆である。ある実施形態では、症状は不安である。ある実施形態では、症状は抑鬱である。ある実施形態では、症状は情動鈍麻である。ある実施形態では、症状は自己中心性である。ある実施形態では、症状は攻撃性である。ある実施形態では、症状は強迫行動である。ある実施形態では、症状は被刺激性である。ある実施形態では、症状は人格変化である。ある実施形態では、症状は自殺念慮である。

ある実施形態では、本明細書に記載する１つ以上の医薬組成物を投与することを含む、個体を治療する方法を提供する。ある実施形態では、個体は中枢神経系関連疾患を有する。

ある実施形態では、トランスサイレチン核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与が、少なくとも約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、若しくは９９％、又はこれらの数値のいずれか２つにより定められる範囲で、トランスサイレチン発現を低減する。

ある実施形態では、トランスサイレチンを標的とするアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、中枢神経系関連疾患を患っている、又はそれを引き起こしやすい患者を治療する薬剤の調製に用いられる。

ある実施形態では、本明細書に記載する方法は、本明細書に記載する、配列番号２５、７８、８０、８６、８７、１１５、１２０、１２２及び１２４に記載する配列の連続する核酸塩基部分を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与することを含む。

投与
ある実施形態では、本明細書に記載の化合物および組成物は、局所療法または全身療法のどちらが望ましいかに依存して、且つ、治療される領域に依存して、いくつかの方法で投与され得る。投与は、例えば、噴霧器によるものを含む、散剤またはエアロゾルの吸入またはガス注入による局所的経肺投与であり得；気管内投与、鼻腔内投与、表皮投与および経皮投与、経口投与、または非経口投与であり得る。本明細書に記載の化合物および組成物は、肝臓または脳等の特定の組織を標的とする方法で送達され得る。

ある実施形態では、本明細書に記載の化合物および組成物は、非経口的に投与される。「非経口投与」とは、注射または点滴による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば脳内投与、脊髄内投与、脳室内投与（intraventricular administration）、脳室投与（ventricular administration）、側脳室内投与（intracerebroventricular administration）、大脳脳室内投与（cerebral intraventricular administration）または大脳脳室投与（cerebral ventricular administration）が含まれる。投与は継続投与、または慢性投与、または短期投与あるいは間欠投与であり得る。

ある実施形態では、非経口投与は点滴により行われる。点滴は慢性投与または継続投与または短期投与あるいは間欠的投与であり得る。ある実施形態では、注入された医薬品はポンプにより送達される。ある実施形態では、非経口投与は注射により行われる。

ある実施形態では、非経口投与は皮下的に行われる。

さらなる実施形態では、投与のための製剤は、本明細書に記載の化合物および食塩水である。

ある実施形態では、化合物および組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）に送達される。ある実施形態では、化合物および組成物は、脳脊髄液に送達される。ある実施形態では、化合物および組成物は、脳実質に投与される。ある実施形態では、化合物および組成物は、動物に対し、中枢神経系の複数の領域に（例えば、脳の複数の領域に、および／または脊髄に）、脊髄内投与、または脳室内投与によって送達される。本明細書に記載の化合物および組成物の、中枢神経系における広域分布は、実質内投与、脊髄内投与、または脳室内投与により達成され得る。

ある実施形態では、本発明には脳内への直接注射により送達され得る医薬組成物が含まれる。該注射は、脳の特定領域（例えば、黒質、脈絡叢、皮質、海馬、線条、脈絡叢または淡蒼球）への定位的注射によるものであり得る。本化合物はまた、脳の広域（例えば、脳皮質への広範な送達）に送達され得る。

ある実施形態では、非経口投与は注射により行われる。注射剤は、注射器またはポンプにより送達され得る。ある実施形態では、注射はボーラス投与である。ある実施形態では、注射は組織、例えば線条、尾状核、皮質、海馬および小脳に直接投与される。

ある実施形態では、本明細書に記載の化合物または組成物の送達は、該化合物または該組成物の薬物動態プロファイルに影響し得る。ある実施形態では、本明細書に記載の化合物または組成物を標的組織へ注射することにより、該化合物または該組成物の点滴と比較して、その薬物動態プロファイルが向上する。ある実施形態では、該化合物または該組成物を注射することにより、広範な拡散と比較して効力が向上し、同様の薬効薬理を達成するのに必要な該化合物または該組成物が少なくなる。ある実施形態では、同様の薬効薬理とは、標的ｍＲＮＡおよび／または標的タンパク質の発現量が減少する時間（例えば作用持続時間）を意味する。ある実施形態では、ボーラス投与による方法等の、医薬品を特異的に局在させる方法は、半有効濃度（ＥＣ５０）を約５０倍に減少させる（例えば、組織中５０倍少ない濃度で、同一または同様の薬理学的効果を達成できる）。ある実施形態では、ボーラス投与による方法等の、医薬品を特異的に局在させる方法は、半有効濃度（ＥＣ５０）を２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０分の１に減少させる。ある実施形態では、本明細書にさらに記載されるようなアンチセンス化合物における本医薬品。ある実施形態では、標的組織は脳組織である。ある実施形態では、標的組織は線条体組織である。ある実施形態では、薬理学的効果を、それを必要とする患者で達成するのに必要な用量を減らすので、ＥＣ５０を減少させることが望ましい。

ＣＤ１マウス肝臓組織中のＭＯＥギャップマーオリゴヌクレオチドの半減期は、約２１日間である（実施例１２参照）。

ある実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、注射または点滴により、月１回、２ヶ月に１回、９０日に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回、１年に２回または１年に１回、送達される。

ある併用療法
ある実施形態では、一つまたは複数の本発明の医薬組成物は、一つまたは複数の他の医薬品と同時投与される。ある実施形態では、そのような一つまたは複数の他の医薬品は、本明細書に記載の一つまたは複数の医薬組成物と同一の疾患、障害、状態を治療できるように設計される。ある実施形態では、そのような一つまたは複数の他の医薬品は、本明細書に記載の一つまたは複数の医薬組成物とは異なる疾患、障害、状態を治療するために設計される。ある実施形態では、そのような一つまたは複数の他の医薬品は、本明細書に記載の一つまたは複数の医薬組成物の望ましくない副作用を治療するために設計される。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物は、別の医薬品と同時投与され、その他の医薬品の望ましくない効果を治療する。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物は、別の医薬品と同時投与され、併用効果を生み出す。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物は他の医薬品と同時投与され、相乗効果を生み出す。

ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物および一つまたは複数の他の医薬品は、同時に投与される。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物および一つまたは複数の他の医薬品は、それぞれ別の時間に投与される。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物および一つまたは複数の他の医薬品は、単一製剤中に一緒に調製される。ある実施形態では、一つまたは複数の医薬組成物および一つまたは複数の他の医薬品は、別々に調製される。

ある実施形態では、第二の化合物は、本発明の医薬組成物の投与前に投与される。ある実施形態では、第二の化合物は、本発明の医薬組成物の投与後に投与される。ある実施形態では、第二の化合物は、本発明の医薬組成物と同時に投与される。ある実施形態では、同時に投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与される場合に投与されるであろう用量と同じである。ある実施形態では、同時に投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与される場合に投与されるであろう用量より少ない。ある実施形態では、同時に投与される第二の化合物の用量は、第二の化合物が単独で投与される場合に投与されるであろう用量より多い。

ある実施形態では、第二の化合物を同時に投与することにより、第一の化合物の効果が増強され、該化合物の同時投与により、第一の化合物の単独投与の効果よりも高い効果が得られる。ある実施形態では、同時投与により、単独で投与された場合の化合物の相加効果が得られる。ある実施形態では、同時投与により、単独で投与された場合の化合物の相乗効果が得られる。ある実施形態では、第一の化合物はアンチセンス化合物である。ある実施形態では、第二の化合物がアンチセンス化合物である。

ある実施形態では、本発明の医薬組成物と同時投与され得る医薬品には、例えば、ハロペリドール、クロルプロマジン、クロザピン、クエチアピン（quetapine）、およびオランザピン等の抗精神病薬；例えば、フルオキセチン、塩酸セルトラリン、ベンラファキシンおよびノルトリプチリン等の抗鬱剤；例えば、ベンゾジアゼピン、クロナゼパム、パロキセチン、ベンラファキシン（venlafaxin）、およびβ遮断薬等の精神安定剤；例えば、リチウム、バルプロ酸、ラモトリジン、およびカルバマゼピン等の抗躁鬱病薬；例えば、ボツリヌス毒素等のまひ薬；ならびに／またはその他の実験的薬剤、例えば、これらに限定されないが、テトラベナジン（Xenazine）、クレアチン、補酵素Ｑ１０（conezyme Q10）、トレハロース、ドコサヘキサエン酸（docosahexanoic acid）、ＡＣＲ１６、エチル−ＥＰＡ、アトモキセチン、シタロプラム、ディメボン、メマンチン、フェニル酪酸ナトリウム、ラメルテオン、ウルソジオール、ジプレキサ、キセナジン（xenasine）、チアプリド、リルゾール、アマンタジン、［１２３Ｉ］ＭＮＩ−４２０、アトモキセチン、テトラベナジン、ジゴキシン、デキストロメトルファン（detromethorphan）、ワルファリン、アルプラゾラム（alprozam）、ケトコナゾール、オメプラゾール、およびミノサイクリンが含まれる。

ある実施形態では、本発明の医薬組成物と同時投与される医薬品には、パラセタモール（アセトアミノフェン）等の鎮痛剤；サリチレート等の非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）；モルヒネ等の麻薬、並びにトラマドール等の麻薬性特性を有する合成薬剤が含まれる。ある実施形態では、本発明の医薬組成物と同時投与される医薬品には、ベンゾジアゼピン（benzodiapine）およびメトカルバモール等の筋弛緩薬が含まれる。

製剤
また、本発明の化合物は、例えば、リポソーム、受容体標的分子、または他の製剤等の、取り込み、分布および／または吸収を促進する他の分子、分子構造または化合物の混合物と、混合、複合あるいは会合し得る。そのような取り込み、分布および／または吸収促進製剤の調製を教示している米国特許の代表例としては、限定されないが、米国特許第５，１０８，９２１号；同第５，３５４，８４４号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４５９，１２７号；同第５，５２１，２９１号；同第５，５４３，１５８号；同第５，５４７，９３２号；同第５，５８３，０２０号；同第５，５９１，７２１号；同第４，４２６，３３０号；同第４，５３４，８９９号；同第５，０１３，５５６号；同第５，１０８，９２１号；同第５，２１３，８０４号；同第５，２２７，１７０号；同第５，２６４，２２１号；同第５，３５６，６３３号；同第５，３９５，６１９号；同第５，４１６，０１６号；同第５，４１７，９７８号；同第５，４６２，８５４号；同第５，４６９，８５４号；同第５，５１２，２９５号；同第５，５２７，５２８号；同第５，５３４，２５９号；同第５，５４３，１５２号；同第５，５５６，９４８号；同第５，５８０，５７５号；および同第５，５９５，７５６号が挙げられ、そのそれぞれは参照により本明細書に取り込まれる。

本発明のアンチセンス化合物は、任意の薬剤的に許容できる塩、エステル、またはそのようなエステルの塩、あるいは、動物（ヒトを含む）への投与時に、生物活性のあるその代謝物または残留物を（直接的または間接的に）与えることができるその他の任意の化合物を包含する。

「薬剤的に許容できる塩」という用語は、本発明の化合物の生理学的且つ薬剤的に許容できる塩、すなわち、親化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない毒性効果を与えない塩を意味する。オリゴヌクレオチドについて、薬剤的に許容できる塩およびそれらの使用の好ましい例は、米国特許第６,２８７,８６０号にさらに記載があり、その全体が本明細書に取り込まれるナトリウム塩が、オリゴヌクレオチド薬剤の好適な形態であることが示されている。

また、本発明には、本発明のアンチセンス化合物を含む医薬組成物および製剤が含まれる。本発明の医薬組成物は、局所療法または全身療法のどちらが望ましいかに依存して、且つ、治療される領域に依存して、いくつかの方法で投与され得る。投与は非経口投与であり得る。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内もしくは筋肉内注射または点滴；あるいは頭蓋内投与、例えば、脳内投与、脊髄内投与、脳室内投与（intraventricular administration）、脳室投与（ventricular administration）、側脳室内投与（intracerebroventricular administration）、大脳脳室内投与（cerebral intraventricular administration）または大脳脳室投与（cerebral ventricular administration）が含まれる。

脈絡叢におけるトランスサイレチン発現を標的とするには、脳室内へ投与することが好ましい。少なくとも１つの２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を有するオリゴヌクレオチドは、経口投与に特に有用であると考えられている。局所投与のための医薬組成物および製剤には、経皮貼付剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴剤、坐剤、噴霧剤、液剤および散剤が含まれ得る。従来の医薬担体、水溶性、粉末または油性基剤、増粘剤等が、必要であるかまたは望ましい場合がある。コートされたコンドーム、手袋等も有用であり得る。

本発明の医薬製剤は、単位剤形で好都合に提供され得、医薬産業において周知の従来技術により調製され得る。そのような技術には、活性成分と医薬担体または賦形剤とを会合させるステップが含まれる。一般的に、製剤は、活性成分と液体担体または微細固体担体あるいはその両方とを均一且つ密に会合させ、その後、必要ならば産物を成形することにより調製される。

本発明の組成物は、多くの可能な剤形、例えば、これらに限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル、液体シロップ剤、ソフトゲル、坐剤、および浣腸剤のいずれにも製剤され得る。本発明の組成物はまた、水溶性、非水溶性または混合媒体中の懸濁剤として製剤され得る。水溶性懸濁剤は、懸濁剤の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランをさらに含有し得る。懸濁剤は安定剤も含有し得る。

本発明の医薬組成物には、これらに限定されないが、水剤、乳剤、消泡剤およびリポソーム含有製剤が含まれる。本発明の医薬組成物および製剤は、一つまたは複数の浸透促進剤、担体、賦形剤または他の活性もしくは非活性成分が含まれる。

乳剤は、典型的には、ある液体が別の液体に、通常は直径０．１μｍ超の小滴の形態で、分散している不均一系である。乳剤は、分散相、および活性薬剤に加えて、さらなる成分を含むことができ、該活性薬剤は水相、油相中に溶液としてまたはそれ自体が分離相として存在し得る。マイクロエマルジョンは、本発明の実施形態として含まれる。乳剤およびそれらの使用は、当該技術分野において周知であり、米国特許第６,２８７,８６０号でさらに説明がなされており、その全体が本明細書に組み込まれる

本発明の製剤には、リポソーム製剤が含まれる。本発明で使用される場合、「リポソーム」という用語は、球状の二分子層に配列した両親媒性脂質を含むベシクルを意味する。リポソームは一枚膜または多重膜のベシクルであり、親油性物質から形成される膜、および送達される組成物を含む親水性の内側を有する。カチオン性リポソームは正に帯電しているリポソームであり、負に帯電しているＤＮＡ分子と相互作用して安定な複合体を形成すると考えられている。ｐＨ感受性のまたは負に帯電したリポソームは、ＤＮＡと複合体を形成するよりむしろ、ＤＮＡを封入すると考えられている。陽イオン性リポソームおよび非陽イオン性リポソームは共に、細胞にＤＮＡを送達するのに用いられている。

また、リポソームには、「立体的に安定な」リポソームが含まれ、その用語は、本明細書で使用される場合、一つまたは複数の特殊な脂質を含むリポソームを意味し、その特殊な脂質とは、リポソームに組み込まれた場合に、そのような特殊な脂質を欠くリポソームと比較して循環寿命が延長される脂質である。リポソームおよびそれらの使用については、米国特許第６，２８７，８６０でさらに説明がなされており、その全体が本明細書に組み込まれる。

本発明の別の実施形態では、本発明の製剤には食塩水製剤が含まれる。本発明のある実施形態では、製剤は本明細書に記載の化合物および食塩水から成る。ある実施形態では、製剤は本明細書に記載の化合物および食塩水から実質的に成る。ある実施形態では、食塩水は薬剤的に許容されるグレードの食塩水である。ある実施形態では、食塩水は緩衝食塩水である。ある実施形態では、食塩水はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。

ある実施形態では、製剤にリポソームが含まれない。ある実施形態では、製剤に立体的に安定なリポソームが含まれない。ある実施形態では、製剤にリン脂質が含まれない。ある実施形態では、製剤は本明細書に記載の化合物および食塩水から実質的に成り、リポソームを含まない。

本発明の医薬製剤および組成物には、界面活性剤も含まれ得る。界面活性剤およびそれらの使用については米国特許第６,２８７,８６０号でさらに説明がなされており、その全体が本明細書に組み込まれる。

一実施形態において、本発明には種々の浸透促進剤が使用され、核酸、特にオリゴヌクレオチドの効率的な送達に影響する。浸透促進剤およびそれらの使用については、米国特許第６,２８７,８６０号でさらに説明がなされており、その全体が本明細書に組み込まれる。

製剤がそれらの用途に応じて、すなわち投与経路に応じて、規定通りに設計されることは、当業者が認識するところであろう。

局所投与に好ましい製剤には、本発明のオリゴヌクレオチドが脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド類、キレート化剤および界面活性剤等の局所的送達媒介物と混合状態である製剤が含まれる。好ましい脂質およびリポソームには、中性の脂質およびリポソーム（例えば、ジオレオイルホスファチジル（ＤＯＰＥ）エタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（distearolyphosphatidyl choline））、陰性の脂質およびリポソーム（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ））並びに陽イオン性の脂質およびリポソーム（例えばジオレオイルテトラメチルアミノプロピル（ＤＯＴＡＰ）およびジオレオイルファチジルエタノールアミン（ＤＯＴＭＡ））が含まれる。

非経口投与、例えば、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内注射または点滴、あるいは頭蓋内投与のための組成物および製剤には、緩衝液、希釈液および他の好適な添加剤、例えば、限定されないが、浸透促進剤、担体化合物および他の薬剤的に許容される担体または賦形剤等も含有し得る無菌水溶液が含まれ得る。

本発明のある実施形態では、一つまたは複数のオリゴマー化合物、および非アンチセンス機構により機能する一つまたは複数の他の化学療法剤を含有する医薬組成物が提供される。そのような化学療法剤の例としては、これらに限定されないが、ダウノルビシン、ダウノマイシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、エソルビシン、ブレオマイシン、マホスファミド、イホスファミド、シトシンアラビノシド、ビス−クロロエチルニトロソ尿素、ブスルファン、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、ミトラマイシン、プレドニゾン、ヒドロキシプロゲステロン、テストステロン、タモキシフェン、ダカルバジン、プロカルバジン、ヘキサメチル-メラミン、ペンタメチルメラミン、ミトキサントロン、アムサクリン、クロラムブシル、メチルシクロヘキシルニトロソウレア（methylcyclohexylnitrosurea）、ナイトロジェンマスタードｓ、メルファラン、シクロホスファミド、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−アザシチジン、ヒドロキシ尿素、デオキシコホルマイシン、４−ヒドロキシペルオキシシクロホスホロアミド、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、５−フルオロデオキシウリジン（５−ＦＵｄＲ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、コルヒチン、タキソール、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド（ＶＰ−１６）、トリメトレキサート、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、テニポシド、シスプラチンおよびジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）等のがん化学療法剤が挙げられる。本発明の化合物と一緒に使用された場合、そのような化学療法剤は、別々に（例えば、５−ＦＵおよびオリゴヌクレオチド）、順次に（例えば、５−ＦＵおよびオリゴヌクレオチドから一定時間後にＭＴＸおよびオリゴヌクレオチド）、あるいは一つまたは複数の他のそのような化学療法剤と組み合わせて（例えば、５−ＦＵ、ＭＴＸおよびオリゴヌクレオチド、または５−ＦＵ、放射線療法およびオリゴヌクレオチド）、使用され得る。抗炎症剤、例えば、限定されないが、非ステロイド系の抗炎症剤および副腎皮質ステロイド、並びに抗ウイルス剤、例えば、これらに限定されないが、リバビリン（ribivirin）、ビダラビン、アシクロビルおよびガンシクロビルも、本発明の化合物と組み合され得る。アンチセンス化合物と他の非アンチセンス薬剤の組み合わせも本発明の範囲内である。２つ以上の組み合わされた化合物は、一緒にまたは順次に使用され得る。

別の関連実施形態では、本発明の組成物は、第一の核酸を標的とする一つまたは複数のアンチセンス化合物、特にオリゴヌクレオチド、および第二の核酸標的を標的とする一つまたは複数のさらなるアンチセンス化合物を含有し得る。あるいは、本発明の組成物は、同一の核酸標的の異なる領域を標的とする２つ以上のアンチセンス化合物を含有し得る。アンチセンス化合物の多くの例が該技術分野において周知である。２つ以上の組み合わされた化合物は、一緒にまたは順次に使用され得る。

投薬
治療用組成物の製剤およびそれに続くそれらの投与（投薬）は、当業者の技術範囲内であると考えられる。投薬は、治療対象の疾患状態の重症度および応答性に依存し、一連の治療が、数日から数ヶ月継続されるか、あるいは治癒に効果があるまでまたは疾患状態の減退が達成されるまで継続される。最適な用量スケジュールは、患者の身体における薬物蓄積を測定することにより計算できる。最適用量は、個々のオリゴヌクレオチドの相対的な効力に非常に依存する場合があり、一般的には、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏの動物モデルにおいて効果があると判明したＥＣ_５０に基づいて推定できる。一般的に、投薬量は体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｇであり、１回または複数回、毎日、毎週、毎月または毎年、あるいは所望の間隔をおいて、投与され得る。成功的治療に続き、疾患状態の再発を防ぐために、患者が維持療法を施されることが望ましい場合があり、該維持療法では、前記オリゴヌクレオチドが、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ〜１００ｇの範囲の維持量を、毎日１回または複数回投与される。

本発明は、ある好ましい実施形態に関して具体性をもって記載されたが、以下の実施例は本発明の例示のみを目的としており、本発明を限定することを意図するものではない。本出願に記載される各参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号等は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

非制限的開示および参照による組み込み
本明細書に記載のある化合物、組成物および方法は、ある実施形態に関して具体性をもって記載されたが、下記の実施例は本明細書に記載の化合物の例示のみを目的としており、該化合物を限定すること意図するものではない。本明細書に記載の各参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

実施例１：ＨｅｐＧ２細胞における、ヒトトランスサイレチンのアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドはトランスサイレチン核酸を標的とするよう設計され、ｉｎｖｉｔｒｏにおけるトランスサイレチンｍＲＮＡに対するそれらの効果が試験された。１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で培養されたＨｅｐＧ２細胞を、リポフェクチン試薬を用いて５０ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。およそ２４時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ１３９６（順方向配列ＣＣＣＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＣＴＡＣＴＣ、本明細書では配列番号５と指定；逆方向配列ＴＣＣＣＴＣＡＴＴＣＣＴＴＧＧＧＡＴＴＧ、本明細書では配列番号６と指定；プローブ配列ＡＴＴＣＣＡＣＣＡＣＧＧＣＴＧＴＣＧＴＣＡＸ、本明細書では配列番号７と指定）。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定した全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果は、無処理対照群細胞に対する、トランスサイレチンの阻害率（％）として表わされる。

表１および２のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計した。ギャップマーは２０ヌクレオチドの長さをもち、その中で中央ギャップセグメント（central gap segment）は１０個の２’−デオキシヌクレオチドから成っており、それぞれが５個のヌクレオチドから成るウイング（wing）によって、（５’および３’方向の）両端に隣接する。５’ウイングセグメントにおける各ヌクレオチドおよび３’ウイングセグメントにおける各ヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー全体のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「ヒト標的開始部位（Human Target start site）」とは、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする５’末端のヌクレオチドを意味する。「ヒト標的終結部位（Human Target stop site)」とは、ギャップマーがヒト遺伝子配列において標的とする３’末端のヌクレオチドを意味する。表１に列挙する各ギャップマーはヒトトランスサイレチンのｍＲＮＡを標的としており、本明細書では配列番号１と指定される（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００３７１．２）。また、ヒトトランスサイレチンのゲノム配列のイントロン配列またはイントロンエキソン移行部を標的とする特定のギャップマーが設計され、本明細書では配列番号２と指定され（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＴ＿０１０９６６．１０、ヌクレオチド２００９２３６〜２０１７２８９から切断）、表２に列挙する。

また、表１および２のヒトオリゴヌクレオチドは、アカゲザル遺伝子配列と交差反応性がある。ヒトオリゴヌクレオチ「ミスマッチ」とは、ヒトオリゴヌクレオチドがアカゲザル遺伝子配列とミスマッチしている核酸塩基の数を示す。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列間の相補性が大きい程、ヒトオリゴヌクレオチドはアカゲザル配列と交差し易い。表１のヒトオリゴヌクレオチドを、アカゲザルのゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１）から抽出されたエキソン１〜４と、ヒトエキソンとの類似性に基づいて、比較した。表２のヒトオリゴヌクレオチドを、本明細書では配列番号４（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１、ヌクレオチド６２８０００〜６３８０００から切断）と指定されるアカゲザルのゲノム配列と比較した。「アカゲザル標的開始部位（Rhesus monkey Target start site）」とは、ギャップマーがアカゲザル遺伝子配列において標的とする５’末端のヌクレオチドを意味する。「アカゲザル標的終結部位（Rhesus monkey Target stop site）」とは、ギャップマーがアカゲザル遺伝子配列において標的とする３’末端のヌクレオチドを意味する。

ヒトトランスサイレチンのｍＲＮＡは長さが短いため、第二のプライマープローブセットを第一のプライマープローブセットＲＴＳ１３９６から離れて設計し、単位複製配列オリゴヌクレオチドを避けた。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、新しいヒトプライマープローブセットＲＴＳ３０２９（本明細書では配列番号１６１と指定される順方向配列ＣＴＴＧＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＴＧＴＧＴＣＴ、本明細書では配列番号１６２と指定される逆方向配列ＡＧＡＡＣＴＴＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴ；本明細書では配列番号１６３と指定されるプローブ配列ＣＣＣＴＡＣＧＧＧＣＡＣＣＧＧＴＧＡＡＴＣＣＸ）を用いて、ｉｎｖｉｔｒｏにおけるトランスサイレチンｍＲＮＡに対するそれらの効果について試験された。１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で培養したＨｅｐＧ２細胞を、リポフェクチン試薬を用いて、５０ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。およそ２４時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率として示す。結果を、ＰＢＳ対照細胞セットの阻害率（％）として表３に示す。

新しいプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いた阻害の結果に基づき、トランスサイレチンｍＲＮＡを５０％以上阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドをさらなる試験のために選択した。

実施例２：ＨｅｐＧ２細胞における、マイクロウォーク（microwalk）により設計されるオリゴヌクレオチドによるヒトトランスサイレチンのアンチセンス阻害
さらなるギャップマーが、少なくとも５０％の阻害を示す表３に表わされるギャップマーに基づいて設計された。これらのギャップマーは、表３から得られる元のギャップマーを上流および下流にわずかに移動させて（すなわち、「マイクロウォーク（microwalk）」）ギャップマーを生成することにより設計された。ギャップマーはまた、種々のモチーフ、例えば、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、２−１３−５ＭＯＥ、および４−１１−５ＭＯＥモチーフと共に生成された。これらのギャップマーはｉｎｖｉｔｒｏで試験された。１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で培養したＨｅｐＧ２細胞は、リポフェクチン試薬を用いて、５０ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。およそ２４時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。結果を表４に示す。

表４のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥ、３−１４−３ＭＯＥ、２−１３−５ＭＯＥまたは４−１１−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表４でアステリスク（＊）と一緒に名付けられているギャップマーは、それからＩＳＩＳ４２５６５０〜４２５７６３のギャップマーが、マイクロウォーク（microwalk）により設計される、元となるギャップマーである。５−１０−５ギャップマーは２０ヌクレオチドの長さをもち、その中で中央ギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオチドから成っており、それぞれが５個のヌクレオチドから成るウイングによって、（５’および３’方向の）両端に隣接する。３−１４−３ギャップマーは２０ヌクレオチドの長さをもち、その中で中央ギャップセグメントは１４個の２’−デオキシヌクレオチドから成っており、それぞれが３個のヌクレオチドから成るウイングによって、（５’および３’方向の）両端に隣接する。２−１３−５ギャップマーは２０ヌクレオチドの長さをもち、その中で中央ギャップセグメントは１３個の２’−デオキシヌクレオチドから成っており、それぞれが２個および５個のヌクレオチドから成るウイングで、５’および３’方向に隣接する。４−１１−５ギャップマーは２０ヌクレオチドの長さをもち、その中で中央ギャップセグメントは１１個の２’−デオキシヌクレオチドから成っており、それぞれが４個および５個のヌクレオチドから成るウイングで、５’および３’方向に隣接する。４つの各モチーフ（５−１０−５、３−１４−３、２−１３−５、および４−１１−５）、５’ウイングセグメントにおける各ヌクレオチドおよび３’ウイングセグメントにおける各ヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ修飾を有する。各ギャップマー全体のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー全体のシチジン残基は全て、５−メチルシチジンである。「標的開始部位（Target start site）」とは、ギャップマーが標的とする５’末端のヌクレオチドを意味する。「標的終結部位（Target stop site）」とは、ギャップマーが標的とする３’末端のヌクレオチドを意味する。表４に列挙した各ギャップマーは、配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＭ＿０００３７１．２）の核酸塩基４８１〜６１９にまたがる標的領域を標的とする。

表４に示されるように、いくつかのギャップマーは少なくとも５０％の阻害を示し、例えば以下のＩＳＩＳ番号のものが挙げられる：３０４２９６、４２５６５５、４２５６９５、４２５７３５、４２５６４９、４２５６５６、４２５６９６、４２５７３６、４２０９１２、４２５６５７、４２５６９７、４２５７３７、４２０９１３、４２５６５８、４２５６９８、４２５７３８、４２０９１４、４２５６５９、４２５６９９、４２５７３９、３０４２９９、４２５６６０、４２５７００、４２５７４０、４２０９１５、４２０９１６、４２５６６２、４２５７０２、４２０９１９、４２５７０３、４２０９２０、４２５６６４、４２５７０４、４２５７４２、４２０９２１、４２５６６５、４２５７０５、４２５７４３、４２０９２２、４２５６６６、４２５７０６、４２０９２３、４２０９３７、４２０９４４、４２５６６９、４２５７０９、４２５７４６、４２５７１０、４２５７１１、４２５７４７、４２０９４８、４２５７１２、４２５７４８、４２５６７３、４２５７１３、４２５７４９、４２５６５１、４２５６７５、４２５７１５、４２５７５１、３０４３０９、４２５６７６、４２５７１６、４２５７５２、４２０９４９、４２５６７７、４２５７１７、４２５７５３、４２０９５０、４２５６７８、４２５７１８、４２５７５４、４２０９５１、４２５６７９、４２５７１９、４２５７５５、４２０９５２、４２５６８０、４２５７２０、４２５７５６、４２０９５３、４２５６８１、４２５７２１、４２５７５７、４２０９５４、４２５７２２、４２５７５８、４２０９５５、４２５７５９、４２５７２４、４２５７６０、４２５７６２、３０４３１０、４２５７２９、４２５７６４、４２５６５３、４２５６９０、４２５７３０、４２５７６５、３０４３１１、４２５６９１、４２５７３１、４２５７６６、３０４３１２、４２５６９２、４２５７３２、４２５７６７、４２５６５４、４２５６９３、４２５７３３、４２５７６８、３０４３１３、４２５７３４、および４２５７６９。

いくつかのギャップマーは少なくとも６０％の阻害を示し、例えば、以下のＩＳＩＳ番号のものが挙げられる：３０４２９６、４２５６５５、４２５６９５、４２５７３５、４２５６４９、４２５６５６、４２５６９６、４２５７３６、４２０９１２、４２５６５７、４２５６９７、４２５７３７、４２０９１３、４２５６５８、４２５６９８、４２５７３８、４２０９１４、４２５６５９、４２５７３９、３０４２９９、４２５７４０、４２０９１５、４２５７０２、４２０９１９、４２０９２０、４２５７４２、４２０９２１、４２５６６５、４２５７０５、４２５７０６、４２０９２３、４２５７４６、４２５７１１、４２５７４７、４２０９４８、４２５７１２、４２５７４８、４２５６５１、４２５７１５、４２５７５１、３０４３０９、４２５７１６、４２５７５２、４２５６７７、４２５７１７、４２５７５３、４２０９５０、４２５７１８、４２５７５４、４２０９５１、４２５６７９、４２５７１９、４２５７５５、４２０９５２、４２５６８０、４２５７２０、４２０９５３、４２５６８１、４２５７２１、４２５７５７、４２０９５４、４２５７２２、４２５７５８、４２０９５５、４２５７２４、４２５７６０、４２５７６４、４２５６５３、４２５６９０、４２５７３０、４２５７６５、３０４３１１、４２５６９１、４２５７３１、４２５７６６、３０４３１２、４２５６９２、４２５７３２、４２５７６７、４２５６５４、４２５６９３、４２５７３３、３０４３１３、および４２５７６９。

いくつかのギャップマーは少なくとも７０％の阻害を示し、例えば、以下のＩＳＩＳ番号のものが挙げられる：３０４２９６、４２５６５５、４２５６９５、４２５７３５、４２５６４９、４２５６５６、４２５６９６、４２５７３６、４２０９１２、４２５６５７、４２５７３７、４２０９１３、４２５７３８、４２０９１４、４２５６５９、３０４２９９、４２０９１５、４２０９２０、４２５７４２、４２５７１２、４２５７４８、４２５７１６、４２５７５４、４２０９５１、４２５６７９、４２５７１９、４２５７５５、４２５６８０、４２５７２１、４２５７５７、４２５７６０、４２５６５３、４２５６９０、４２５７３０、４２５７６５、３０４３１１、４２５６９１、４２５７３１、４２５７６６、３０４３１２、４２５７６７、４２５６９３、および３０４３１３。

いくつかのギャップマーは少なくとも８０％の阻害を示し、例えば、以下のＩＳＩＳ番号のものが挙げられる：３０４２９６、４２５６５５、４２５６９５、４２５７３６、４２０９１３、４２５６５９、３０４２９９、４２０９１５、４２５７１６、４２５７５４、４２５７１９、４２５７５７、４２５７６５、および４２５７６７。

いくつかのギャップマーは少なくとも８５％の阻害を示し、例えば、以下のＩＳＩＳ番号のものが挙げられる：４２０９１３、４２５７１６、４２５７５４、および４２５７１９。

１つのギャップマー、ＩＳＩＳ４２５７１９は、９０％の阻害を示した。

実施例３：ＨｅｐＧ２細胞における、ヒトトランスサイレチンの用量依存的なアンチセンス阻害
実施例２から得られた、ヒトトランスサイレチンをｉｎｖｉｔｒｏで有意に阻害するギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞において種々の用量で試験した。細胞を１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で播種し、表５で規定されるように、エレクトロポレーションを用いて６２５ｎＭ、１２５０ｎＭ、２５００ｎＭ、５０００ｎＭおよび１００００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。

また、表５に各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ_５０）が示されるが、これは、各濃度で達成されるトランスサイレチンｍＲＮＡ発現の阻害率に対して、使用されたオリゴヌクレオチドの濃度をプロットすることにより計算され、対照と比較してトランスサイレチンｍＲＮＡ発現の５０％阻害が達成されるオリゴヌクレオチド濃度を示している。表５に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において用量依存的に有意に減少した。

また、実施例２から得られたギャップマーを、トランスフェクション試薬であるリポフェクチンを用いて、ＨｅｐＧ２細胞において種々の用量で試験した。細胞を１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で播種し、表６で規定されるように、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭおよび１００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表６に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞において用量依存的に有意に減少した。

実施例４：ＨｅｐＧ２細胞における、ヒトトランスサイレチンの用量依存的なアンチセンス阻害
実施例３から選択されたギャップマーが、ＨｅｐＧ２細胞において種々の濃度で試験された。細胞を１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で播種し、表７で規定されるように、０．０６１７μＭ、０．１８５２μＭ、０．５５５６μＭ、１．６６６７μＭおよび５μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表７に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に減少した。

実施例５：Ｈｅｐ３Ｂ細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
ヒトトランスサイレチンの有意なｉｎｖｉｔｒｏ阻害を示す実施例４から得られたギャップマーを、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において種々の濃度で試験した。細胞を１ウェル当たり２０，０００細胞の密度で播種し、表８で規定されるように、０．０２０６μＭ、０．０６２μＭ、０．１８５μＭ、０．５５６μＭ、１．６６７μＭおよび５μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ１３９６を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表８に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に減少した。また、各オリゴヌクレオチドのＩＣ_５０も表８に示される。

実施例６：ヒトトランスサイレチン−トランスジェニックマウスの初期肝細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
また、ヒトトランスサイレチン−トランスジェニックマウスの初期肝細胞においても、実施例５から得られたギャップマーを種々の用量で試験した。ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ３０４３１１、ＩＳＩＳ３０４３１２およびＩＳＩＳ４２０９５１（実施例２参照）はまた、同一の培養条件下で、これらのギャップマーと一緒に再試験された。細胞を１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で播種し、表９で規定されるように、１８．７５ｎＭ、３７．５ｎＭ、７５ｎＭ、１５０ｎＭおよび３００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、サイトフェクチンを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ１３９６を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表９に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に減少した。

実施例７：ＨｅｐＧ２細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
実施例６から得られたギャップマーを、ＨｅｐＧ２細胞において種々の濃度で試験した。細胞を１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で播種し、表１０で規定されるように、０．０６２μＭ、０．１８５μＭ、０．５５６μＭ、１．６６μＭおよび５.０００μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ１３９６を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表１０に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に減少した。

実施例８：ヒトトランスサイレチン-トランスジェニックマウスの初期肝細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
また、実施例６から得られたギャップマーを、ヒトトランスサイレチン−トランスジェニックマウスの初期肝細胞においても種々の用量で試験した。細胞を１ウェル当たり１０，０００細胞の密度で播種し、表１１で規定されるように、５ｎＭ、１０ｎＭ、２０ｎＭ、４０ｎＭおよび８０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、サイトフェクチンを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表１１に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理した細胞において、用量依存的に減少した。

ギャップマーはまた、エレクトロポレーションを用いて、トランスフェクション試薬として試験された。細胞を１ウェル当たり３５，０００細胞の密度で播種し、表１２で規定されるように、１４８．１４８ｎＭ、４４４．４４４ｎＭ、１，３３３．３３３ｎＭ、４，０００ｎＭおよび１２，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ３０２９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。

実施例９：カニクイザル初期肝細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
また、実施例６から得られたギャップマーを、カニクイザルの初期肝細胞においても種々の用量で試験した。細胞を１ウェル当たり３５，０００細胞の密度で播種し、表１３で規定されるように、１，２５０ｎＭ、２，５００ｎＭ、５，０００ｎＭ、１０，０００ｎＭおよび２０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ１３９６を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表１３に例示されるように、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで処理された肝細胞において用量依存的に有意に減少した。

ＮＣＢＩデータベース中にカニクイザルの完全遺伝子配列が存在せず、２つの種は同じ属、「マカク属」に由来するため、オリゴヌクレオチドはアカゲザル遺伝子配列に対する交差反応について試験された。ヒトオリゴヌクレオチドは、本明細書で配列番号４（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１から抽出されたエキソン１〜４）と指定されるアカゲザルトランスサイレチン遺伝子と交差反応性である。「ミスマッチ」とは、ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザルトランスサイレチン遺伝子間のミスマッチの数を意味する。「ｎ／ａ」とは、ヒトオリゴヌクレオチドが、アカゲザルトランスサイレチン遺伝子とのミスマッチを４個以上有しており、それ故アカゲザルトランスサイレチン遺伝子と交差反応しないことを意味する。

実施例１０：ヒトトランスサイレチン−トランスジェニックマウスにおける、ヒトトランスサイレチンのｉｎｖｉｖｏでの阻害
トランスサイレチンｍＲＮＡの有意な阻害を示す実施例６から得られたギャップマーを、ヒトトランスサイレチン遺伝子を含むトランスジェニックマウスにおいて試験し、該ギャップマーの有効性を評価した。

処置
４匹のｈＴＴＲトランスジェニック雌マウスを１５群用意し、それぞれに、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ３０４３１１、ＩＳＩＳ３０４３１２、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６５３、ＩＳＩＳ４２５６５５、ＩＳＩＳ４２５６５６、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５６９５、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、ＩＳＩＳ４２５７５５、またはＩＳＩＳ４２５７５７を、週２回、４週間、皮下に投与した。別の群の４匹のｈＴＴＲトランスジェニック雌マウスには、２５ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３（ＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＧＴＴＣＣＴＣＣ、本明細書では配列番号１６５と指定される）を、週に２回、４週間、注射した。別の群の４匹のｈＴＴＲトランスジェニック雌マウスには、ＰＢＳを週２回４週間、皮下に注射した。ＰＢＳを注射されたマウスは対照群として利用された。血漿トランスサイレチンレベル分析のために、０、１、２、３、および４週目に、血液試料を全ての群から採取した。最終投与から２日後にマウスを屠殺し、標的ｍＲＮＡ分析のために肝臓を採取した。

ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いてトランスサイレチンのリアルタイムＰＣＲ分析を行うために、ＲＮＡを肝臓組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照と比較したヒトトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表１４で示されるように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理することにより、ＰＢＳ対照と比較してヒトトランスサイレチンのｍＲＮＡが有意に減少した。対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３での処理では、予想通り、トランスサイレチンは有意に減少しなかった。

タンパク質分析
トランスジェニックマウスの血漿中におけるヒトトランスサイレチンのタンパク質レベルを、抗トランスサイレチンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ社製Ａｂ３７７７４）およびヒツジ抗ＴＴＲホースラディッシュペルオキシダーゼ検出抗体（Ａｂｃａｍ社カタログ番号３５２１７）を用いてＥＬＩＳＡにより測定した。ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（登録商標）ＴＭＢ基質キットにより呈色反応を起こし、吸光度をマイクロプレート分光光度計を用いて４５０ｎｍで測定した。血漿試料を、投与前並びに７日目、１４日目および２８日目に採取した。表１５に示される結果は投与前レベルと比較した阻害率（％）を表わしており、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処理でのタンパク質レベルにおける時間依存的な減少を示している。

体重および臓器重量
マウスの体重を投与前と処置期間の最後に測定した。体重は表１６に示され、処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率（％）を表わしている。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、またそれらもＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の増加率として表１６に示す。表１６で示されるように、体重または臓器重量に、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置の結果としての有意な変化はなかった。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表１７に示す。また、ビリルビンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果もｍｇ／ｄＬ表示で表１７に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表１８に示す。そのデータにより、トランスサイレチンのアンチセンス阻害は、これらのトランスジェニックマウスにおけるＢＵＮレベルに対して効果がないことが示される。

実施例１１：ＣＤ１マウスにおける、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（チャールス・リバー社、マサチューセッツ州）は多目的なマウスモデルであり、しばしば安全性および効力試験に利用される。マウスを実施例１０に記載された検査から選択されるＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、種々の代謝マーカーのレベル変化について評価した。

処置
ＣＤ１マウス８匹からなる群のそれぞれに、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６５５、ＩＳＩＳ４２５６５６、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５６９５、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、およびＩＳＩＳ４２５７５５を、週２回皮下に注射した。各グループのマウス４匹を、処理期間の２週目および６週目に評価した。各時点での最終投与から3日後に、体重を測定し、マウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器および血漿を採取した。

体重および臓器重量
投与前および各処理期間（２週目および６週目）の最後に、マウスの体重を測定した。体重は表１９および２０に示され、処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率（％）として表記される。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、また、ＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率（％）として表１９および２０に示す。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、結果を表２１および表２２にＩＵ／Ｌ表示で示す。また、ビリルビンおよびアルブミンの血漿中レベルも同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果も表２１および２２に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表２３および２４に示す。

血液学的分析
全マウス群より得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定および分析、加えてＷＢＣ（好中球、リンパ球、および単球）、ＲＢＣ、および血小板等の血液細胞百分率数並びに総ヘモグロビン量の測定のために、アンテック・ダイアグノスティクス社（Antech Diagnostics）へ送った。結果を表２５〜２８に示す。表中のパーセンテージは、ＰＢＳ対照と比較した総血液細胞数における増減率を表わす。ＰＢＳ対照の７０％未満に血小板数を減少させなかった、または単球数を２倍より多くに増加させなかったアンチセンスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した。

実施例１２：ＣＤ１マウス肝臓における、アンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期測定
マウスを、実施例１１に記載される試験から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、オリゴヌクレオチド半減期並びに肝臓からオリゴヌクレオチドが分解および除去されるのに要する経過時間を評価した。

処置
ＣＤ１マウス１２匹からなる群にそれぞれ、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６５５、ＩＳＩＳ４２５６５６、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５６９５、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、およびＩＳＩＳ４２５７５５を、週２回を２週間、皮下に注射した。各群から４匹のマウスを、最終投与後の３日目、２８日目および５６日目に屠殺した。肝臓を分析のために採取した。

オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度および総オリゴヌクレオチド濃度（分解された形態も含む）を測定した。使用された方法は既刊の方法を改変したものであり（Leeds et al.、1996; Geary et al.、1999）、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出とそれに続く固相抽出から成る。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書では配列番号１６６と指定される）を抽出前に加えた。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである検量線を用いて計算した。続いて、半減期をＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウエア（ファーサイト社（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ））を用いて計算した。

結果をμｇ／肝臓組織のｇ表示で表２９および３０に示す。各オリゴヌクレオチドの半減期を表３１に示す。１１〜３４日以内の半減期を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを、さらなる試験のために選択した。

実施例１３：スプラーグドーリーラットにおける、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
スプラーグドーリーラットを、実施例１１および１２に記載された検査から選択されたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、種々の代謝マーカーのレベル変化について評価した。

処置
ラットの体重、全血球計算値および差分血球数（different blood count）、並びに尿蛋白／クレアチニン比を投与前に評価した。スプラーグドーリーラット４匹からなる群にそれぞれ、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６５５、ＩＳＩＳ４２５６５６、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５６９５、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、およびＩＳＩＳ４２５７５５を、週２回皮下に注射した。各時点での最終投与から３日後に、体重を測定し、マウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器および血漿を採取した。

体重および臓器重量
ラットの体重を投与前および処理期間の最後に測定した。体重は表３２に示され、処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率として表記した。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、またこれもＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率として表３２に示す。

表３２で示されるように、ある化合物は脾臓重量において４倍未満の増加を示した。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表３３に示す。また、ビリルビンおよびアルブミンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果も表３３に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表３４に示す。また、クレアチニンに対する全尿蛋白の割合を評価し、表３５に示す。

表３４および３５に示されるように、ある化合物は、これらラットの腎臓における全尿蛋白／クレアチニンにおいて７倍未満の増加を示した。さらに、ある化合物は、これらラットの腎臓における全尿蛋白／クレアチニンにおいて６倍未満の増加を示した。

血液学的分析
全マウス群より得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定および分析、加えてＷＢＣ（好中球、リンパ球、および単球）、ＲＢＣ、および血小板等の血液細胞百分率数並びに総ヘモグロビン量の測定のために、アンテック・ダイアグノスティクス社（Antech Diagnostics）へ送った。結果を表３６〜３７に示す。表中のパーセンテージは、ＰＢＳ対照と比較した総血液細胞数における増減率を表わす。

実施例１４：スプラーグドーリーラットの肝臓および腎臓における、アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度についての薬物動態試験
スプラーグドーリーラットを実施例１３に記載される試験から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、オリゴヌクレオチドの半減期並びに肝臓および腎臓からオリゴヌクレオチドが分解および除去されるのに要する経過時間を評価した。

処置
スプラーグドーリーラット４匹からなる群にそれぞれ、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ３０４３０９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６５５、ＩＳＩＳ４２５６５６、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５６９５、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、およびＩＳＩＳ４２５７５５を、週２回を２週間、皮下に注射した。最終投与から３日後、ラットを屠殺し、肝臓および腎臓を分析のために採取した。

オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度および総オリゴヌクレオチド濃度（分解された形態も含む）を測定した。使用された方法は既刊の方法を改変したものであり（Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999）、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出とそれに続く固相抽出から成る。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書では配列番号１６６と指定される）を抽出前に加えた。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである検量線を用いて計算した。結果を、μｇ／肝臓または腎臓組織のｇ表示で表３８および３９に示す。また、完全長オリゴヌクレオチドに関して腎臓の肝臓に対する割合を計算し、表３８に示す。

実施例１５：トランスジェニックマウスにおける、ヒトトランスサイレチンのＩｎｖｉｖｏでの用量依存的阻害
ヒトトランスサイレチン遺伝子を含むトランスジェニックマウスに、実施例１４に記載される検査から選択されるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを漸増投与法で投与し、これらマウスにおけるヒトトランスサイレチンの用量依存的阻害の効果を評価した。

処置
４匹のマウスからなる群（２匹の雄および２匹の雌）にそれぞれ、４ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２５６７９、ＩＳＩＳ４２５７３６、ＩＳＩＳ４２５７３７、またはＩＳＩＳ４２５７５５を、週に２回、４週間、皮下に注射した。４匹のマウスからなる群（２匹の雄および２匹の雌）の一つに、２５ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ１４１９２３を、週に２回、４週間、皮下に注射した４匹のマウスからなる対照群（２匹の雄および２匹の雌）の一つに、ＰＢＳを、週に２回、４週間、皮下に注射した。０、７、１４、２１および２８日目に各群から血漿試料を採取した。最終投与から２日後、マウスを安楽死させ、臓器をさらなる分析のために採取した。

ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いてトランスサイレチンのリアルタイムＰＣＲ分析を行うために、ＲＮＡを肝臓組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照と比較したヒトトランスサイレチンの阻害率として示す。表４０で示されるように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置により、ヒトトランスサイレチンｍＲＮＡがＰＢＳ対照と比較して用量依存的に有意に減少した。対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３での処理では、予想通り、トランスサイレチンは有意に減少しなかった。

タンパク質分析
トランスジェニックマウスの血漿におけるヒトトランスサイレチンのタンパク質レベルを、抗トランスサイレチンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ社Ａｂ３７７７４）およびヒツジ抗ＴＴＲホースラディッシュペルオキシダーゼ検出抗体（Ａｂｃａｍ社カタログ番号３５２１７）を用いて、ＥＬＩＳＡにより測定した。ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（登録商標）ＴＭＢ基質キットにより呈色反応を起こし、吸光度をマイクロプレート分光光度計を用いて４５０ｎｍで測定した。血漿試料を、投与前並びに７、１４、２１および２８日目に採取した。表４１に示される結果は投与前レベルと比較した阻害率（％）を表わしており、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置により、タンパク質レベルにおいて時間依存的且つ用量依存的な減少が起こることを示している。

体重および臓器重量
マウスの体重を、投与前および処理期間の最後に測定した。表４２に体重を示し、体重は処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率として表わしている。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、ＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率として表４２に示す。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表４３に示す。また、ビリルビンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果もｍｇ／ｄＬ表示で表４３に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表４４に示す。

実施例１６：ヒトトランスサイレチン−トランスジェニックマウスにおける、ヒトトランスサイレチンのＩｎｖｉｖｏでの阻害
表４からの、５−１０−５ＭＯＥモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチド：ＩＳＩＳ３０４３１３、ＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９１９、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９３７、ＩＳＩＳ４２０９４４、ＩＳＩＳ４２０９４７、ＩＳＩＳ４２０９４９、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２０９５２、ＩＳＩＳ４２０９５３、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、およびＩＳＩＳ４２０９５９。トランスサイレチンｍＲＮＡを６５％以上阻害するこれらのアンチセンスオリゴヌクレオチドを選択し、ヒトトランスサイレチン遺伝子を含むトランスジェニックマウスにおいて試験した。また、ＩＳＩＳ４２０９５１（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ（配列番号１１６））に対する重複配列を有し、種々のモチーフを有するさらなるオリゴヌクレオチドを設計し、トランスジェニックマウスにおいて試験した。これらのさらなるオリゴヌクレオチドは、ＩＳＩＳ４５０５１８（ＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧ（配列番号５−８−５ＭＯＥ（配列番号１６７））、ＩＳＩＳ４５０５１９（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ、６−８−６ＭＯＥ（配列番号１１６））、ＩＳＩＳ４５０５２０（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ、３−１０−７ＭＯＥ（配列番号１１６））、ＩＳＩＳ４５０５２１（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ、７−１０−３ＭＯＥ（配列番号１１６））、ＩＳＩＳ４５０５２２（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ、２−１０−８ＭＯＥ（配列番号１１６））、およびＩＳＩＳ４５０５２３（ＧＴＴＴＴＡＴＴＧＴＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧ、８−１０−２ＭＯＥ（配列番号１１６））である。

処置
４匹のｈＴＴＲトランスジェニックマウス（２匹の雄および２匹の雌）からなる群にそれぞれ、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４３１３、ＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９１９、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９３７、ＩＳＩＳ４２０９４４、ＩＳＩＳ４２０９４７、ＩＳＩＳ４２０９４９、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２０９５２、ＩＳＩＳ４２０９５３、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、ＩＳＩＳ４２０９５９、ＩＳＩＳ４２５５１８、ＩＳＩＳ４２５５１９、ＩＳＩＳ４２５５２０、ＩＳＩＳ４２５５２１、ＩＳＩＳ４２５５２２、またはＩＳＩＳ４２５５２３を、週に２回、４週間、皮下に投与した。４匹のｈＴＴＲトランスジェニックマウスからなる対照群（２匹の雄および２匹の雌）に、ＰＢＳを、週に２回、４週間、皮下に注射した。０，１４および２８日目に血液試料を全ての群から採取し、血漿中トランスサイレチンレベルを分析した。最終投与から２日後にマウスを屠殺し、標的ｍＲＮＡ分析のために肝臓を採取した。

ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いてトランスサイレチンのリアルタイムＰＣＲ分析を行うために、ＲＮＡを肝臓組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照と比較したヒトトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表４５で示されるように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置することにより、ＰＢＳ対照と比較してヒトトランスサイレチンのｍＲＮＡが有意に減少した。

タンパク質分析
トランスジェニックマウスの血漿におけるヒトトランスサイレチンのタンパク質レベルを、抗トランスサイレチンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ社Ａｂ３７７７４）およびヒツジ抗ＴＴＲホースラディッシュペルオキシダーゼ検出抗体（Ａｂｃａｍ社カタログ番号３５２１７）を用いて、ＥＬＩＳＡにより測定した。ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（登録商標）ＴＭＢ基質キットにより呈色反応を起こし、吸光度をマイクロプレート分光光度計を用いて４５０ｎｍで測定した。血漿試料を、投与前並びに７日目、１４日目および２８日目に採取した。表４６に示される結果は、投与前レベルと比較した阻害率（％）を表わし、オリゴヌクレオチドで処置した場合のタンパク質レベルにおける時間依存的な減少を示している。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表４７に示す。また、ビリルビンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果もｍｇ／ｄＬ表示で表４７に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表４８に示す。

実施例１７：ＣＤ１マウスにおける、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
ＣＤ１マウスを実施例１６から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、種々の代謝マーカーのレベル変化について評価した。

処置
８匹のＣＤ１マウスからなる群にそれぞれ、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４３１３、ＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９１９、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９３７、ＩＳＩＳ４２０９４４、ＩＳＩＳ４２０９４７、ＩＳＩＳ４２０９４９、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５１、ＩＳＩＳ４２０９５２、ＩＳＩＳ４２０９５３、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、ＩＳＩＳ４２０９５９、ＩＳＩＳ４２５５１８、ＩＳＩＳ４２５５１９、ＩＳＩＳ４２５５２０、ＩＳＩＳ４２５５２１、ＩＳＩＳ４２５５２２、またはＩＳＩＳ４２５５２３を、週２回皮下に注射した。各時点での最終投与から３日後に、体重を測定し、マウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器および血漿を採取した。

体重および臓器重量
投与前および各処置期間の最後に（２週目および６週目）マウスの体重を測定した。表４９に示される体重は処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率（％）を表わしている。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、これもまた、ＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率（％）として表４９に示す。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表５０に示す。また、ビリルビンおよびアルブミンの血漿中レベルも同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果も表５０に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表５１に示す。

血液学的分析
全マウス群より得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定並びに分析、加えてＷＢＣ（好中球、リンパ球、および単球）、ＲＢＣ、および血小板等の血液細胞百分率数並びに総ヘモグロビン量の測定のために、アンテック・ダイアグノスティクス社（Antech Diagnostics）へ送った。結果を表５２〜５３に示す。表中のパーセンテージは、ＰＢＳ対照と比較した総血液細胞数における増減率を表わす。

実施例１８：スプラーグドーリーラットにおける、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの忍容性
実施例１７に記載される検査から選択されるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、スプラーグドーリーラットにおいて試験し、種々の代謝マーカーのレベル変化について評価した。

処置
ラットの体重、全血球計算値および差分血球数（different blood count）、並びに尿蛋白／クレアチニン比を投与前に評価した。スプラーグドーリーラット４匹からなる群それぞれに、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、およびＩＳＩＳ４２０９５９を、週２回皮下に注射した。各時点での最終投与から３日後に、体重を測定し、マウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器および血漿を採取した。

体重および臓器重量
ラットの体重を投与前および処置期間の最後に測定した。体重は表５４に示され、処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率（％）として表記した。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、また、ＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率（％）として表５４に示す。

表５４で示されるように、前記化合物はこれらのラットの臓器重量において、１０倍未満の増加を示した。さらに、ある化合物は、これらのラットの臓器重量において、７倍未満の増加を示した。一方で、ある化合物は、これらのラットの臓器重量において、６倍未満の増加を示した。ある化合物は、これらのラットの臓器重量において、５倍未満の増加を示した。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表５５に示す。また、ビリルビンおよびアルブミンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果も表５５に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表５６に示す。クレアチニンに対する全尿蛋白の割合についても評価し、表５６に示す。

血液学的分析
全マウス群より得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）、および平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）の測定並びに分析、加えてＷＢＣ（好中球、リンパ球、および単球）、ＲＢＣ、および血小板等の血液細胞百分率数並びに総ヘモグロビン量の測定のために、アンテック・ダイアグノスティクス社（Antech Diagnostics）へ送った。結果を表５８〜５９に示す。表中のパーセントは、ＰＢＳ対照と比較した総血液細胞数における増減率を表わす。

実施例１９：スプラーグドーリーラットの肝臓および腎臓における、アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度の半減期に関する薬物動態試験
スプラーグドーリーラットを、実施例１８に記載される試験から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、オリゴヌクレオチドの半減期、並びに肝臓からオリゴヌクレオチドが分解および除去されるのに要する経過時間を評価した。

処置
スプラーグドーリーラット４匹からなる群にそれぞれ、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、およびＩＳＩＳ４２０９５９を、週２回を２週間、皮下に注射した。最終投与から３日後、ラットを屠殺し、肝臓および腎臓を分析のために採取した。

オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度および総オリゴヌクレオチド濃度（分解された形態も含む）を測定した。使用された方法は既刊の方法を改変したものであり（Leeds et al.、1996; Geary et al.、1999）、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出とそれに続く固相抽出から成る。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書では配列番号１６６と指定される）を抽出前に加えた。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである検量線を用いて計算した。結果を、μｇ／肝臓または腎臓組織のｇ表示で、表６０および６１に示す。オリゴヌクレオチド濃度について腎臓の肝臓に対する割合についても計算し、表６０および６１に示す。

実施例２０：トランスジェニックマウスにおける、ヒトトランスサイレチンのｉｎｖｉｖｏでの用量依存的阻害
ＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５７およびＩＳＩＳ４２０９５９は、実施例１６〜１９で明示されるように、良好な効能および忍容性を示し、ヒトトランスサイレチン遺伝子を含むトランスジェニックマウスにおける用量依存的な標的ノックダウンについての試験を行うために選択された。ＣＤ１マウスにおいて９０％以上の標的ノックダウンを示したが、毒性も示したＩＳＩＳ４２０９５０およびＩＳＩＳ４２０９５５も、比較を目的とする本試験のために選択された。

処置
マウス４匹からなる群（２匹の雄および２匹の雌）にそれぞれ、４ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、またはＩＳＩＳ４２０９５９を、週に２回、４週間、皮下に注射した。４匹のマウスからなる群（２匹の雄および２匹の雌）の１つに、２５ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ１４１９２３を、週に２回、４週間、皮下に注射した。４匹のマウスからなる対照群（２匹の雄および２匹の雌）の１つに、ＰＢＳを、週に２回、４週間、皮下に注射した。０、１４および２８日目に、各群から血漿試料を採取した。最終投与から２日後、マウスを安楽死させ、臓器をさらなる分析のために採取した。

ＲＮＡ分析
プライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いてトランスサイレチンのリアルタイムＰＣＲ分析を行うために、ＲＮＡを肝臓組織から抽出した。結果を、ＰＢＳ対照と比較したヒトトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表６２で示されるように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処置により、ヒトトランスサイレチンｍＲＮＡがＰＢＳ対照と比較して用量依存的に有意に減少した。対照オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ１４１９２３での処理では、予想通り、トランスサイレチンは有意に減少しなかった。

タンパク質分析
トランスジェニックマウスの血漿中におけるヒトトランスサイレチンのタンパク質レベルを、抗トランスサイレチンポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ社Ａｂ３７７７４）およびヒツジ抗ＴＴＲホースラディッシュペルオキシダーゼ検出抗体（Ａｂｃａｍ社カタログ番号３５２１７）を用いたＥＬＩＳＡにより測定した。ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（登録商標）ＴＭＢ基質キットにより呈色反応を起こし、吸光度をマイクロプレート分光光度計を用いて４５０ｎｍで測定した。投与前および７、１４、２１および２８日目に血漿試料を採取した。表６３に示される結果は投与前レベルと比較した阻害率を表わしており、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドでの処置時におけるタンパク質レベルの時間依存的且つ用量依存的な減少を示している。

体重および臓器重量
マウスの体重を、投与前および処置期間の最後に測定した。表６４に示される体重は処置開始前に測定したＰＢＳ対照の体重を超えた分の増加率（％）を表わしている。肝臓、脾臓および腎臓の重量を検査の最後に測定し、ＰＢＳ対照の各臓器体重を超えた分の変化率（％）として表６４に示す。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、トランスアミナーゼの血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表６５に示す。また、ビリルビンの血漿中レベルを同じ臨床化学分析機を用いて測定し、その結果もｍｇ／ｄＬ表示で表６５に示す。

腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中濃度を、自動臨床化学分析機（日立オリンパスＡＵ４００ｅ、ニューヨーク州メルビル）を用いて測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表６６に示す。

実施例２１：カニクイザル初期肝細胞における、ヒトトランスサイレチンを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの用量反応確認
ＣＤ１マウスおよびスプラーグドーリーラットにおいて忍容性を示し（実施例１７〜１９に記載された試験）、且つトランスジェニックマウスにおいて効力を示す（実施例１６および２０に記載された試験）ギャップマーを選択し、カニクイザル初期肝細胞において種々の用量で試験した。細胞を１ウェル当たり３５，０００細胞の密度で播種し、表６７で規定されるように、１５６．２５ｎＭ、３１２．５ｎＭ、６２５ｎＭ、１，２５０ｎＭ、２，５００ｎＭ、５，０００ｎＭ、１０，０００ｎＭおよび２０，０００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと一緒に、エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした。およそ１６時間の処理期間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトトランスサイレチンのプライマープローブセットＲＴＳ１３９６を使用して、ｍＲＮＡレベルを測定した。トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により測定される全ＲＮＡ含量に従って補正した。結果を、未処理対照群細胞と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示す。表６７に例示されるように、アカゲザルトランスサイレチン遺伝子（本明細書では配列番号４と指定される（ＧＥＮＢＡＮＫ受託番号ＮＷ＿００１１０５６７１．１から抽出されるエキソン１〜４））と交差反応性である全てのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで処理した肝細胞において、トランスサイレチンのｍＲＮＡレベルは用量依存的に減少した。

実施例２２：ヒトトランスサイレチンを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度測定
実施例２１に記載される試験から得られたアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を、４０ｃＰ超の粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの選別排除を目的として、測定した。４０ｃＰ超の粘度を有するオリゴヌクレオチドは、あまりに粘性が高いので、いかなる対象にも投与できないだろう。

ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２〜３５ｍｇ）をガラス製のバイアルに量って入れ、１２０μＬの水を加え、バイアルを５０℃に加熱することによりアンチセンスオリゴヌクレオチドを溶液に溶解させた。予め加熱した試料の一部分（７５μＬ）を、ｍｉｃｒｏ−ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ（ケンブリッジ社（Cambridge））にピペットで入れた。ｍｉｃｒｏ−ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒの温度を２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。２６０ｎＭ、８５℃でＵＶを読み取るために（ＣａｒｙＵＶ機器）、予め加熱した試料の別の部分（２０μＬ）を、１０ｍＬの水にピペットで入れた。表６８に示されるその結果は、全てのアンチセンスオリゴヌクレオチド溶液が、上記の基準の下で、それらの粘度において最適であることを示している。

実施例２３：ＣＤ１マウス肝臓における、アンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期測定
マウスを、実施例２２に記載される試験から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、オリゴヌクレオチド半減期並びに肝臓からオリゴヌクレオチドが分解および除去されるのに要する経過時間を評価した。

処置
１２匹のＣＤ１マウスからなる群にそれぞれ、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４２０９１３、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、およびＩＳＩＳ４２０９５９を、週に２回、２週間、皮下に注射した。各群から４匹のマウスを、最終投与後の３日目、２８日目および５６日目に屠殺した。肝臓を分析のために採取した。

オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度および総オリゴヌクレオチド濃度（分解された形態も含む）を測定した。使用された方法は既刊の方法を改変したものであり（Leeds et al.、1996; Geary et al.、1999）、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出とそれに続く固相抽出から成る。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書では配列番号１６６と指定される）を抽出前に加えた。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである検量線を用いて計算した。続いて、半減期をＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（ファーサイト社（PHARSIGHT））を用いて計算した。

結果は、μｇ／肝臓組織のｇ表示で表６９に示す。各オリゴヌクレオチドの半減期を表７０に示した。

実施例２４：カニクイザルにおける、ヒトトランスサイレチンを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
カニクイザルを、実施例２１、２２および２３に記載された試験から得られたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。肝臓および腎臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの効能および忍容性、並びにそれらの薬物動態プロファイルを評価した。

処置
試験に先立ち、カニクイザルを３０日間隔離し、その間に、標準的な一連の血清の生化学検査および血液学検査、卵および寄生虫に関する糞便試料検査、並びに結核検査が行われ、異常なまたは病的な状態にあるサルを選別して除いた。４匹の無作為に割り付けられた雄カニクイザルからなる９群にそれぞれ、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３０４２９９、ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９２１、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５、ＩＳＩＳ４２０９５７、またはＩＳＩＳ４２０９５９を、最初の週は週３回、続く１１週間は週２回、皮下に注射した。４匹のカニクイザルからなる一対照群に、ＰＢＳを、最初の週は週３回、続く１１週間は週２回、皮下に注射した。処置の５日前および試験期間の様々な日において血液試料を採取し、分析した。動物は血液採取前に少なくとも１３時間（一晩）絶食させた。全ての群の最終屠殺を、８６日目、すなわち最終投与から４８時間後に行った。

試験期間中、カニクイザルを、病気または疾患の兆候について毎日観察した。処置に対し有害作用を示した動物についてはいずれも、試験から排除し獣医師および試験責任者に問い合わせた。群中の２匹のサルに病気の症状が現れたため、ＩＳＩＳ４２０９５５で処置された動物は全て、３１日目に試験から排除した。同様に、ＩＳＩＳ４２０９５７およびＩＳＩＳ４２０９５０で処置された群から各１匹ずつを、それぞれ４４日目および７６日目に、疾病兆候があったために試験から排除した。

阻害試験
ＲＮＡ分析
８６日目に、プライマープローブセットＲＴＳ３０２９を用いてトランスサイレチンのリアルタイムＰＣＲ分析を行うために、ＲＮＡを肝臓組織から抽出した。結果は、ＰＢＳ対照と比較したトランスサイレチンの阻害率（％）として示し、シクロフィリンに対し正規化した。同様の結果が、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）での正規化で得られた。表７１で示されるように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置することにより、ＰＢＳ対照と比較してトランスサイレチンｍＲＮＡが有意に減少した。特に、ＩＳＩＳ４２０９１５処置は、ＩＳＩＳ３０４２９９処置よりも、ＴＴＲのｍＲＮＡをより大きく阻害したが、この２つのオリゴヌクレオチドは一塩基シフトにより互いに異なるだけである。ＩＳＩＳ４２０９５５で処置された動物のデータを３１日に取った。

タンパク質分析
カニクイザルを血液採取前に一晩絶食させた。全ての利用可能な動物からおよそ１ｍＬの血液を採取し、ＥＤＴＡのカリウム塩を含む管に入れた。該管を遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）血漿を得た。血漿中のトランスサイレチンのタンパク質レベルを、臨床分析機器を用いて測定した。血漿試料を、投与前（−５日目）並びに１、９、１６、２３、３０、４４、５８、７２、および８６日目に、採取した。表７２に示される結果は投与前レベルと比較した阻害率（％）を表わしており、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処理でのタンパク質レベルにおける時間依存的な減少を示している。最終的な血漿中ＴＴＲレベルは表７３に示され、ＴＴＲのタンパク質レベルの減少およびＴＴＲのｍＲＮＡ阻害の間に強い相関関係が明示される（表７１）。特に、ＩＳＩＳ４２０９１５処置は、ＩＳＩＳ３０４２９９処置よりも、血漿中ＴＴＲタンパク質をより強く阻害したが（７６％阻害対４７％阻害）、この２つのオリゴヌクレオチドは一塩基シフトにより互いに異なるだけである。

血漿中のＲＢＰ４のタンパク質レベルについても、ＥＬＩＳＡキットを用いて測定した。血漿試料を、投与前（−５日目）並びに９、１６、２３、３０、４４、５８、７２、および８６日目に、採取した。表７４に示される結果は、投与前レベルと比較した阻害率（％）を表わしている。いくつかのＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ４２０９１５、ＩＳＩＳ４２０９２２、ＩＳＩＳ４２０９５０、ＩＳＩＳ４２０９５５およびＩＳＩＳ４２０９５９）は、ＴＴＲ減少に付随して、タンパク質レベルにおける時間依存的な減少を示している。最終的な血漿中ＲＢＰ４レベルを表７５に示し、またその結果により、上記オリゴヌクレオチド処置時に、ＲＢＰ４およびＴＴＲのタンパク質レベルの減少（表７３）の間に強い相関関係が明示される。特に、ＩＳＩＳ４２０９１５処置は、ＩＳＩＳ３０４２９９処置よりも、血漿中ＲＢＰ４タンパク質をより大きく阻害するが（６３％阻害対１９％阻害）、その２つのオリゴヌクレオチドは一塩基対シフトにより互いに異なるのみである。

忍容性試験
体重および臓器重量の測定
動物の健康全般に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、体重および臓器重量を８６日目に測定した。ＩＳＩＳ４２０９５５で処置された動物のデータは３１日目に取った。体重を測定し投与前レベルでの体重と比較した。臓器重量を測定し、処置群の重量を対応するＰＢＳ対照群の体重と比較した。データを表７６に示す。

肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血液試料を全ての試験群から採取した。血液試料は血清分離のために抗凝結剤なしで管に採取された。管を室温に９０分間置き、その後遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）、血清を得た。トランスアミナーゼの濃度を、Ｔｏｓｈｉｂａ２００ＦＲＮＥＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｚｅｒ（東芝、日本）を用いて測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）およびＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中濃度を８６日目に測定し、その結果をＩＵ／Ｌ表示で表７７に示す。アルカリホスファターゼは、損傷した肝臓細胞では合成量が増加し、これも肝臓疾患のマーカーであるが、同様に測定された。Ｃ−ｒｅ活性タンパク質（ＣＲＰ）は、肝臓で合成され炎症のマーカーとして利用されるが、これについても同様に８６日目に測定された。アルカリホスファターゼおよびＣＲＰの両方のデータも、表７７に示す。また、ビリルビンも肝臓代謝マーカーであり、同様に測定され、ｍｇ／ｄＬ表示で表７７に示される。

腎機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血液試料を全ての試験群から採取した。血液試料は血清分離のために抗凝結剤なしで管に採取された。管を室温に９０分間置き、その後遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）、血清を得た。ＢＵＮおよびクレアチニンの濃度を、Ｔｏｓｈｉｂａ２００ＦＲＮＥＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｚｅｒ（東芝、日本）を用いて、８６日目に測定した。結果をｍｇ／ｄＬ表示で表７８に示す。

尿試料を、試験５日前、並びに２５日目および８４日目に、特殊なステンレス鋼ケージ便器からドレナージにより採取した。クレアチニンに対する全尿蛋白の比を、Ｔｏｓｈｉｂａ２００ＦＲＮＥＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｚｅｒ（東芝、日本）を用いて測定し、その結果を表７９に示す。

血液学的分析
カニクイザルにおけるＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの任意の炎症効果を評価するために、利用可能な試験動物からおよそ０．５ｍＬの血液を試料としてＥＤＴＡのカリウム塩を含む管に採取した。ＡＤＶＩＡ１２０ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙａｎａｌｙｚｅｒ（バイエル、米国）を用いて、試料を分析し、赤血球（ＲＢＣ）数、白血球（ＷＢＣ）数、単球、好中球、リンパ球等の個々の白血球細胞の割合（％）、並びに血小板数およびヘマトクリット（％）を求めた。データを表８０に示す。

炎症に関する因子の分析
炎症に関与する因子に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、血液を８６日目に全ての利用可能な動物から採取し、補体Ｃ３分析およびサイトカインレベルの測定を行った。補体Ｃ３分析を目的として、血清分離のために血液試料を抗凝血剤なしで管に採取した。該管を室温に９０分置き、その後遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）、血清を得た。補体Ｃ３を、自動分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ２００ＦＲＮＥＯｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎａｌｙｚｅｒ、東芝、日本）を用いて測定した。データをｍｇ／ｄＬ表示で表８１に示す。

サイトカインレベル分析を目的として、血漿分離のために血液をＥＤＴＡを含む管に採取した。その後、該管を遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）、血漿を得た。血漿試料を、ケモカインおよびサイトカインのレベルを測定するために、オーション・バイオシステムズ社（Aushon Biosystems Inc.）（マサチューセッツ州ビルリカ）に送った。ＴＮＦ−αのレベルを、それぞれの霊長類抗体を用いて測定し、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、およびＭＩＰ−１βのレベルを、それぞれの交差反応ヒト抗体を用いて測定した。測定は、処置開始の５日前、並びに３日目および８６日目に行った。結果を表８２〜８５に示す。

凝固試験
凝固経路に関与する因子に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、凝固に関する標準的な試験を行った。ＰＴおよびａＰＴＴを、カニクイザルから得た乏血小板血漿（ＰＰＰ）を用いて、４８時間にわたって測定した。ＰＴおよびａＰＴＴの値を、秒表示で表８６および８７に示す。また、血漿中のフィブリノーゲンレベルを４８時間にわたって定量化し、そのデータを表８８に示す。表８６〜８８に示されるように、ＰＴ、ａＰＴＴおよびフィブリノーゲンは、ＰＢＳ対照と比較して、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド処置されたカニクイザルにおいて有意に変化しなかった。

甲状腺パネル分析
甲状腺ホルモンに対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、処置開始の５日前並びに５１日目および８６日目に、サルを一晩絶食させ、３．５ｍＬの血液をそれぞれの利用可能な試験動物から採血した。採取した血液試料を、血清分離のために抗凝結剤なしで管に保存した。管を室温に９０分間置き、その後遠心し（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）、血清を得た。血清試料を、パネル分析のためにエモリー大学の生物マーカー中央研究所（Biomarkers Core Laboratory）（ジョージア州アトランタ）に送った。甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）に関する結果を、μＬ／ｍＬ表示で表８９に示す。全Ｔ３ホルモンおよび遊離型Ｔ３ホルモンに関する結果を、表９０および９１に示す。全Ｔ４ホルモンおよび遊離型Ｔ４ホルモンに関する結果を、表９２および９３に示す。全体的に、甲状腺パネル分析により、トランスサイレチン発現レベルが減少しても全ての動物は許容できるホルモンレベル内に維持されることが示され、このことはトランスサイレチンのアンチセンスオリゴヌクレオチドがホルモンレベルに影響しなかったことを明示している。

薬物動態試験
オリゴヌクレオチド濃度の測定
完全長オリゴヌクレオチドの濃度および総オリゴヌクレオチド濃度（分解された形態も含む）を測定した。使用された方法は既刊の方法を改変したものであり（Leeds et al.、1996; Geary et al.、1999）、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出とそれに続く固相抽出から成る。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチル修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ、本明細書では配列番号１６６と指定される）を抽出前に加えた。組織試料濃度を、定量下限（ＬＬＯＱ）がおよそ１．１４μｇ／ｇである検量線を用いて計算した。肝臓中の濃度に対する腎臓中の濃度の比率を計算した。結果をμｇ／組織のｇ表示で表９４および９５に示す。

Claims (9)

Hide Dependent

配列番号80に記載される配列からなる核酸塩基配列を有する、20個の連結したオリゴヌクレオシドからなる一本鎖修飾ヌクレオチドを含む化合物であって:
前記オリゴヌクレオチドが、
10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント；
5個の連結したヌクレオシドからなる5'ウイングセグメント；及び
5個の連結したヌクレオシドからなる3'ウイングセグメント；
を含み、ギャップセグメントが5'ウイングセグメントと3'ウイングセグメントの間に位置し、それぞれのウイングセグメントの各ヌクレオシドが2'-O-メトキシエチル糖を含み、それぞれのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であり、そしてそれぞれのシトシンが5-メチルシトシンである、前記化合物。
前記オリゴヌクレオチドが複合化している、請求項１に記載の化合物。
前記化合物が前記一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる、請求項１に記載の化合物。
請求項1〜3のいずれかに記載の化合物又はその塩、及び少なくとも一つの薬学的に許容される担体又は希釈剤を含む、組成物。
請求項1〜3のいずれかに記載の化合物又は請求項4に記載の組成物を含む医薬組成物。
前記化合物または組成物がトランスサイレチンアミロイドーシスを予防し、治療し、改善し又は進行を遅延させる、請求項5に記載の医薬組成物。
請求項1〜3のいずれかに記載の化合物又は請求項4に記載の組成物を含む、動物におけるトランスサイレチンmRNA又はタンパク質の発現を低減するための医薬組成物。
動物がヒトである、請求項7に記載の医薬組成物。
請求項1〜3のいずれかに記載の化合物または請求項4に記載の組成物を含む、トランスサイレチンアミロイドーシスに関連する症状を低減するための医薬組成物であって、症状が、不穏、協調運動障害、眼振、痙性対麻痺、筋協調障害、視覚障害、不眠症、異常感覚、ミオクローヌス、失明、失語症、手根管症候群、発作、くも膜下出血、脳卒中及び脳内出血、水頭症、運動失調、痙性麻痺、昏睡、感覚性ニューロパチー、知覚異常、感覚鈍麻、運動ニューロパチー、自律神経ニューロパチー、起立性低血圧、反復性便秘、反復性下痢、嘔気、嘔吐、発汗減少、性交不能、胃排出遅延、尿閉、尿失禁、進行性心疾患、疲労、息切れ、体重減少、食欲不振、知覚麻痺、刺痛、脱力、舌肥大、ネフローゼ症候群、鬱血性心不全、労作性呼吸困難、末梢性浮腫、不整脈、動悸、朦朧状態、失神、体位性低血圧、末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚異常、下肢脱力、悪液質、末梢性浮腫、肝腫大、紫斑、拡張機能障害、心室性期外収縮、脳ニューロパチー、深部腱反射減弱、硝子体のアミロイド沈着、硝子体混濁、ドライアイ、緑内障、瞳孔における波状の外見、および水分貯留による足の浮腫、からなる群から選択される、前記医薬組成物。

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