MX2011004891A

MX2011004891A - Modificacion de la carga de beta amiloide en el tejido no cerebral.

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Publication number: MX2011004891A
Application number: MX2011004891A
Authority: MX
Inventors: J Gregor Sutcliffe; Floyd E Bloom; Brian S Hilbush
Original assignee: Modgene Llc
Priority date: 2008-11-13
Filing date: 2009-11-13
Publication date: 2011-10-06
Also published as: JP2012508770A; WO2010057020A2; EP2365804A2; AU2009313851A1; ES2543987T3; WO2010057020A3; EP2365804B1; US20160287587A1; CN102271669A; HUE027027T2; PT2365804E; CA2742771A1; PL2365804T3; US20100120787A1; HK1162150A1; DK2365804T3; JP2015172061A

Abstract

La presente invención se refiere a métodos y a composiciones para modular los niveles del péptido ß amiloide (Aß) exhibidos en las células no neuronales (es decir, periféricas), los fluidos o los tejidos. La invención también se refiere a la modulación de los niveles de Aß a través de la modulación selectiva (por ejemplo, la inhibición) de la actividad y-secretasa. La invención también se refiere a métodos para prevenir, tratar o mejorar los síntomas de un trastorno inclusive, pero sin limitación, un trastorno relacionado con Aß mediante la administración de un compuesto que provoca la modulación de y-secretasa en un tejido no neuronal, tanto directa como indirectamente, para prevenir, tratar o mejorar los síntomas de un trastorno de Aß cerebral, como el mal de Alzheimer.

Description

MODIFICACIÓN DE LA CARGA DE BETA AMILOIDE EN EL TEJIDO NO CEREBRAL DESCRIPCIÓN La presente invención se refiere a métodos y a composiciones para modular los niveles del péptido ß amiloide (?ß) exhibidos en las células no neuronales (es decir, periféricas), los fluidos o los tejidos. La invención también se refiere a la modulación de los niveles de ?ß a través de la modulación selectiva (por ejemplo, la inhibición) de la actividad ?-secretasa. La invención también se refiere a procedimientos para prevenir, tratar o mejorar los síntomas de un trastorno inclusive, pero sin limitación, un trastorno relacionado con ?ß mediante la administración de un compuesto que provoca la modulación de ?-secretasa en un tejido no neuronal, tanto directa como indirectamente, para prevenir, tratar o mejorar los síntomas de un trastorno de ?ß cerebral, como el mal de Alzheimer .

MODIFICACIÓN DE LA CARGA DE BETA AMILOIDE EN EL TEJIDO NO CEREBRAL La presente solicitud reivindica la prioridad de las Solicitudes Provisionales de Estados Unidos N.° 61/114.459, presentada el 13 de noviembre de 2008, y 61/230.926, presentada el 3 de agosto de 2009, las cuales se incorporan a la presente como referencia en su totalidad.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a procedimientos y a composiciones para modular los niveles del péptido ß amiloide (?ß) exhibidos en las células no neuronales (es decir, periféricas), los fluidos o los tejidos. La invención también se refiere a la modulación de los niveles de ?ß cerebral a través de la modulación selectiva (por ejemplo, la inhibición) de la actividad ?-secretasa en tejidos periféricos. La invención también se refiere a procedimientos para prevenir, tratar o mejorar los síntomas de un trastorno inclusive, pero sin limitación, un trastorno neuronal relacionado con ?ß mediante la administración periférica de un compuesto que provoca la modulación de ?-secretasa, tanto directa como indirectamente. La invención también se refiere al uso de moduladores de la actividad ?-secretasa mediante administración periférica para prevenir, tratar o mejorar los síntomas del mal de Alzheimer.

ANTECEDENTES Los péptidos ß amiloide (?ß) son metabolitos de la proteina precursora asociada al mal de Alzheimer, la proteina precursora ß amiloide (APP) , y se cree que son los principales determinantes patológicos del mal de Alzheimer (AD, por sus siglas en inglés) . El AD es un trastorno neurodegenerativo caracterizado por el depósito dependiente de la edad de ?ß dentro de regiones vulnerables del cerebro, en particular la corteza frontal y el hipocampo (Terry RD. J Geriatr Psychiatry Neurol 19:125-128, 2006). Los ?ß tienen un efecto patogénico, que provoca una pérdida neuronal progresiva que causa el deterioro de la capacidad de esas regiones del cerebro para organizar los procesos neuronales básicos y de orden superior. A medida que el deterioro se agrava, la persona afectada sufre de demencia y de un empeoramiento de la calidad de vida, y en última instancia, la enfermedad es fatal (Brookmeyer R, Johnson E, Ziegler-Graham K, Arrighi HM. Alzheimer ' s Dement 3:186-191, 2007; Powers JM. Neurobiol Aging 18:S53-S54, 1997).

Se cree que el desarrollo del AD es consecuencia de los procesos bioquímicos naturales asociados al enve ecimiento, y que con el tiempo casi todas las personas manifestarán síntomas de la enfermedad si viven el tiempo suficiente. La edad es el principal factor de riesgo conocido del AD con una incidencia del 25 al 50% en personas mayores de 85 años (Giacobini E. Ann NY Acad Sci 920:321-327, 2000). En una persona específica, el momento en que la enfermedad se manifiesta es consecuencia de una serie de factores de riesgo adicionales, algunos de los cuales podrían deberse a causas ambientales, pero muchos se deben a la dotación genética de la persona: las variaciones naturales de las estructuras y las actividades de los genes de una persona producen conjuntos de proteínas cuyas redes de interacciones complejas hacen que una persona sea más o menos propensa a sufrir AD. Se han identificado algunos de los genes cuyos productos de proteínas afectan el riesgo de AD. Por ejemplo, existen tres variantes comunes del gen que codifica la proteína sérica Apolipoproteína E, llamadas e2, e3 y e4. Las personas que heredan un alelo codificante de e4 tienen un mayor riesgo que el resto de sufrir AD y tienen tendencia a padecer la enfermedad antes que las personas que carecen de alelos de e4. Las personas que heredan alelos de e4 de ambos padres tienen mayor riesgo aún de sufrir AD de aparición temprana, mientras que las personas con alelos de e2 tienen muy bajo riesgo, y si es que sufren la enfermedad, esta se presenta a una edad más avanzada que en el resto (Cedazo-Minguez A. J Cell Mol Med. 11:1227-38, 2007). También se ha descubierto que las lesiones cerebrales traumáticas y el trauma cerebral reiterativo aceleran el depósito de ?ß en el cerebro y el deterioro cognitivo. Uryu y colaboradores. J. Neurosci. 22 (2) : 446 (2002) .

Se considera que la mayoría de los casos de AD, sino todos, tienen algún componente genético relacionado con el umbral de riesgo de cada persona. Sin embargo, algunas formas de AD humano son particularmente muy hereditarias. Estas formas hereditarias son causadas por mutaciones poco frecuentes en genes individuales que codifican las proteínas asociadas con este trastorno neurodegenerativo y que cumplen funciones fundamentales en el inicio del proceso de la enfermedad. Las mutaciones en estos genes pueden ser heredadas o pueden producirse esporádicamente.

Uno de estos genes codifica la Proteína precursora amiloide (APP) (Tanzi RE. Ann Med. 21:91-94, 1989). La APP es una proteína de membrana cuya función bioquímica es desconocida actualmente. Se sabe que la APP es un sustrato para la proteólisis por varias proteasas endógenas, y que la proteólisis libera fragmentos con diversas estructuras. Dos de las actividades proteasa se denominan ß-secretasa y ?-secretasa. La proteólisis de APP por ß-secretasa genera un fragmento que posteriormente se puede escindir mediante ?-secretasa en diversas zonas para producir péptidos ?ß. La ?-secretasa es un complejo de varias proteínas (inclusive la presenilina 1 y presenilina 2), y la escisión de APP por ?-secretasa produce varias isoformas de ?ß, que contienen entre 37 y 43 residuos de aminoácidos (véase, por ejemplo, Steiner H, Fluhrer R, Haass C, J Biol Chem. 23 jul. 2008) . Se cree que una forma de ?ß con 42 residuos seria la más patogénica (Wolfe MS. Biochemistry 45:7931-7939, 2006) . El fragmento de ?ß con 42 residuos forma estructuras oligoméricas que, además de formar las placas que se depositan en el cerebro afectado con AD, se cree que provocan déficits cognitivos (Barten DM, Albright CF. Mol Neurobiol 37:171-186, 2008) .

Las variaciones de la APP que predisponen al AD se agrupan cerca de los sitios de escisión proteolitica, afectando la velocidad de generación de fragmentos de ?ß patogénicos, su estabilidad y su capacidad para formar oligómeros (Selkoe DJ. Physiol Rev 81:741-766, 2001) . Las personas que heredan estas variaciones de APP suelen presentar signos de AD entre los 50 y 60 años, mientras que el AD esporádico no es común antes de los 70 años ( aring SC, Rosenberg R . Arch Neurol. 65:329-34, 2008) .

Aún se desconoce la identidad molecular completa de la enzima ?-secretasa. La presenilina 1 o la presenilina 2, muy relacionada con la primera, son necesarias para la actividad ?-secretasa. La actividad ?-secretasa se reduce en 80% en células cultivadas derivadas de embriones en los que la presenilina 1 se ha eliminado genéticamente. En las células que carecen de presenilina 1 y presenilina 2, se pierde toda la actividad ?-secretasa. Los inhibidores peptidomiméticos de actividad ?-secretasa se pueden entrecruzar con las presenilinas 1 y 2, lo que sugiere que estas proteínas son subunidades catalíticas para la escisión. Sin embargo, la actividad ?-secretasa aislada de células se cromatografía en forma de un gran complejo de >1M daltones. Los estudios genéticos recientes han identificado tres proteínas más requeridas para la actividad ?-secretasa: la nicastrina, la aph-1 y la pen-1 (Francis y colaboradores, 2002, Developmental Cell 3(1): 85-97; Steiner y colaboradores, 2002, J. Biol. Chemistry: 277(42): 3906239065; y Li y colaboradores, 2002, J. Neurochem. 82(6): 1540-1548). La acumulación de presenilina en complejos de alto peso molecular se ve alterada en las células que carecen de estas proteínas. Las variaciones poco frecuentes de los genes que codifican los componentes de la presenilina 1 y la presenilina 2 de la ?-secretasa también propician el riesgo de AD de aparición temprana (Waring SC, Rosenberg RN. Arch Neurol. 65:329-34, 2008).

Una tercera enzima, la a-secretasa, escinde la proteína precursora entre los sitios de escisión ß y ?, impidiendo la producción de ?ß y liberando un péptido de 3 kDa aproximadamente, conocido como P3, que es no patológico. Las escisiones de ß- y a-secretasa también producen fragmentos terminales de APP solubles, secretados, denominados sAPPp y sAPPa, respectivamente. Se cree que el fragmento sAPPa sería neuroprotector.

Como consecuencia de estas observaciones genéticas y abundantes experimentos bioquímicos y neuroanatómicos, ha surgido el modelo de que los eventos bioquímicos que aumentan la producción y acumulación de ?ß, en particular ?ß-42, aceleran la aparición y el avance del AD. Por lo tanto, los programas terapéuticos y profilácticos, se han orientado a reducir la producción de ?ß o a disminuir su acumulación.

Actualmente, el tratamiento del AD se concentra en disminuir la producción y/o la acumulación en el cerebro de ?ß. En este momento se están investigando varios enfoques (Rojas-Fernandez CH, Chen M, Fernandez HL. Pharmacotherapy 22:1547-1563, 2002; Hardy J, Selkoe DJ. Science. 297:353-356, 2002) . Los ratones transgénicos con APP predisponente al AD y que además contienen una mutación de bloqueo de genes desactivante en el gen ß-secretasa presentan reducciones casi completas de ?ß en el cerebro (Luo Y, Bolón B, Kahn S, Bennett BD, Babu-Khan S, Denis P, Fan W, Kha H, Zhang J, Gong Y, Martin L, Louis JC, Yan Q, Richards WG, Citrón M, Vassar R. Nat Neurosci 4:231-232, 2001) . Sin embargo, se ha demostrado que estos ratones, no obstante, presentan déficits cognitivos, muerte prematura e hipomielinación (Ohno M, Chang L, Tseng , Oakley H, Citrón M, Klein WL, Vassar R, Disterhoft JF. Eur J Neurosci 23:251-260, 2006; Ohno M, Sametsky EA, Younkin LH, Oakley H, Younkin SG, Citrón M, Vassar R, Disterhoft JF. Neuron 41:27-33, 2004; Laird FM, Cai H, Savonenko AV, Farah MH, He K, Melnikova T, Wen H, Chiang H-C, Xu G, Koliatsos VE, Borchelt DR, Price DL, Lee H-K, Wong PC. J Neurosci 25:11693-11709, 2005; Domínguez D, Tournoy J, Hartmann D, Huth T, Cryns K, Deforce S, Serneels L, Camacho IE, Marjaux E, Craessaerts K, Roebroek AJ, Schwake M, D'Hooge R, Bach P, Kalinke U, Moechars D, Alzheimer C, Reiss K, Saftig P, De Strooper B. J Biol Chem 280:30797-30806, 2005; Hu X, Hicks CW, He W, Wong P, Macklin WB, Trapp BD, Yan R. Nat Neurosci 9:1520-1525, 2006). Esto permite concluir que la actividad ß-secretasa en el cerebro es necesaria para una función neuronal saludable, y que los agentes terapéuticos que disminuyen la actividad cerebral de ß-secretasa podrían tener efectos secundarios adversos. Además, ha resultado difícil diseñar inhibidores potentes de ß-secretasa de penetración cerebral (Barten DM, Albright CF. Mol Neurobiol 37:171-186, 2008), lo cual ha sido tradicionalmente el objetivo de las personas que trabajan en la farmacoterapia del AD.

También se han investigado los efectos de los inhibidores de ?-secretasa en la reducción del ?ß cerebral. Se ha demostrado que los inhibidores de ?-secretasa de penetración cerebral disminuyen la síntesis de ?ß y reducen los déficits cognitivos en modelos de ratones con AD (Barten D , Meredith JE Jr, Zaczek R, Houston JG, Albright CF. Drugs R D 7:87-97, 2006) . Sin embargo, la ?-secretasa tiene otras dianas aparte de la APP (Pollack SJ, Lewis H. Curr Opin Investig Drugs 6:35-47, 2005), una de las cuales es la familia Notch de receptores transmembrana. La inhibición de la señalización Notch mediante dosificación crónica de inhibidores de ?-secretasa provoca cambios en el tracto gastrointestinal, el bazo y el timo que limitan el grado de inhibición de ?ß alcanzable in vivo utilizando los compuestos estudiados (Searfoss GH, Jordán WH, Calligaro DO, Galbreath EJ, Schirtzinger LM, Berridge BR, Gao H, Higgins MA, May PC, Ryan TP. J Biol Chem 278:46107-46116, 2003; Wong GT, Manfra D, Poulet FM, Zhang Q, Josien H, Bara T, Engstrom L, Pinzon-Ortiz M, Fine JS, Lee HJ, Zhang L, Higgins GA, Parker EM. J Biol Chem 279:12876-12882, 2004; Milano J, McKay J, Dagenais C, Foster-Brown L, Pognan F, Gadient R, Jacobs RT, Zaceo A, Greenberg B, Ciaccio PJ. Toxicol Sci 82:341-358, 2004) .

La solicitud de patente de Estados Unidos 20020128319 Al afirma que determinados fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID, por sus siglas en inglés) bajan la producción y/o los niveles de ?ß42 en cultivos celulares que expresan ?ß40 y ?ß42 derivados de la escisión de APP.

Debido a que existen pruebas contundentes de que los altos niveles de ?ß42 son un factor de riesgo importante de AD, estos fármacos pueden resultar útiles para la prevención, el retraso o el retroceso del avance del AD. La desventaja del uso de estos fármacos, sin embargo, es que se requieren grandes dosis de NSAIDS para una disminución considerable de ?ß42, y el uso prolongado de NSAIDS en altas dosis tiene asociados efectos secundarios gastrointestinales importantes, inclusive úlceras con sangrado (Langman y colaboradores, 1994, Lancet 343:1075-1078). Además, aún existen riesgos desconocidos del mal de Alzheimer asociados con la formación de amiloide a partir de ?ß40 y otras formas no afectadas por agentes reductores del ?ß42. Existe, por lo tanto, la necesidad de desarrollar en la técnica tratamientos para enfermedades o trastornos relacionados con la regulación de la producción de ?ß.

Se ha descubierto que una clase de compuestos disminuye la producción de ?ß sin afectar la señalización Notch. Esta clase de compuestos comprende el inhibidor de tirosina quinasa mesilato de imatinib (STI-571, nombre comercial GLEEVEC) y el compuesto relacionado, 6- (2, 6-diclorofenil) -8-metil-2- (metilsulfanilfenil-amino) -8H-pirido [2, 3-d] pirimidin-7-ona, denominado inhibidor 2 (Netzer WJ, y colaboradores, Proc Nati Acad Sci U S A. 100:12444-12449, 2003). Véase también la publicación de patente de Estados Unidos 2004/0028673 y la publicación de patente de PCT O 2004/032925, las cuales se incorporan a la presente como referencia. Actualmente, el STI-571 está aprobado para el tratamiento de la leucemia mielógena y los tumores estromales gastrointestinales. STI-571 reduce potentemente la producción de ?ß en células de neuroblastoma transíectadas con APP y en extractos de células transfectadas in vitro, a través de un mecanismo que no requiere de tirosina quinasa Abl, uno de los objetivos importantes de este fármaco en células leucémicas (Netzer, mencionado anteriormente) . Se descubrió que el STI-571 y un compuesto relacionado llamado "Inhibidor 2" redujeron la producción de ?ß en cultivos de neuronas primarias preparadas de la corteza cerebral de ratas embrionarias de 18 días (Netzer, mencionado anteriormente) , lo que indica que estos fármacos afectan el procesamiento proteolitico de las proteínas de genes de APP endógenos y transfectados .

El STI-571, de acuerdo con la documentación del producto para GLEEVEC, se administra oralmente. Se ha investigado el fármaco en cuanto a su efecto sobre la acumulación de ?ß en el cerebro y se ha observado que el fármaco presenta escasa penetración de la barrera hematoencefálica . En un paciente con leucemia tratado con STI-571 que recibió el fármaco, el nivel del fármaco en el liquido cefalorraquídeo (CSF, por sus siglas en inglés) era 92 veces más bajo que el nivel en la sangre (Takayama N, Sato N, O'Brien SG, Ikeda Y, Okamoto S. Br J Haematol . 119:106-108, 2002). Por lo tanto, se ha descartado su utilidad en forma no modificada como posible agente terapéutico para el AD (Netzer, mencionado anteriormente) .

En vista de la escasa penetración de la barrera hematoencefálica, los investigadores que estudian el efecto de STI-571 sobre el ?ß cerebral han utilizado minibombas osmóticas implantadas para administrar STI-571 o inhibidor 2 por vía intratecal a cerebros de cobayos (Netzer, mencionado anteriormente) . Aunque Netzer y colaboradores observaron una disminución en la acumulación de ?ß en el cerebro, aún así concluyeron: "En el caso del Gleevec y de los fármacos relacionados, sería necesario alcanzar un alto grado de penetración de la barrera hematoencefálica para mejorar la probabilidad del beneficio terapéutico" (Netzer, mencionado anteriormente) .

Persiste entonces la necesidad de tratamientos que disminuyan eficazmente los niveles de ?ß en el cerebro.

SUMARIO La presente invención se refiere a procedimientos para tratar, prevenir o controlar un trastorno de ?ß cerebral, mediante pruebas y/o tratamiento de tejidos periféricos (ni cerebrales, ni del sistema nervioso central) . En algunas realizaciones preferidas, el tejido periférico comprende el higado, mientras que en otras realizaciones, el tejido periférico comprende la sangre y/o el suero. En algunas realizaciones, la presente invención comprende la evaluación de un sujeto para determinar la presencia de AD o la predisposición al AD, mediante la administración periférica de un compuesto que modula la acumulación o producción de ?ß, y la evaluación de dicho sujeto con relación al AD o a su avance.

La presente invención proporciona procedimientos, composiciones y procesos relacionados con el tratamiento o la prevención del AD mediante el tratamiento del higado de un sujeto. En particular, la presente invención se refiere a la modificación de la producción, el procesamiento, la acumulación o el transporte de ?ß en el higado de un sujeto mediante la inhibición directa de la producción (por ejemplo, a través de la inhibición de la expresión de APP), o mediante la modulación de un factor que, a su vez, modula la producción, el procesamiento, la acumulación o el transporte de ?ß en el higado. Estos factores comprenden, sin limitación, la ?-secretasa, la presenilina 1, la presenilina 2, el ApoE, la calmyrin, el neugrin, el receptor de inositol 1, , 5-trisfosfato (InsP3R) o la proteina-1 de interacción con Smad (SIP1, codificada por Zfhxlb) , la clusterina (codificada por CLU, también denominada ApoJ) , la proteina de ensamblaje clatrina unida a fosfoinositol (codificada por PICALM) , el receptor 1 componente de complemento (codificada por CR1) y sus moduladores. La invención comprende el tratamiento o la prevención del AD mediante la modulación de cualquier factor que, cuando es modulado, afecta directa (por ejemplo, actuando sobre la producción o el procesamiento de APP) o indirectamente (por ejemplo, actuando sobre un factor que, a su vez, actúa sobre un factor que actúa sobre la APP) la producción de ?ß en el hígado de un individuo. La invención no se verá limitada por la naturaleza de la modulación, o la identidad o la cantidad de factores sobre los que se actúe para modular el ?ß en el hígado del individuo.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos para tratar a un sujeto con un diagnóstico de trastorno de ?ß cerebral o una predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, que comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la producción de ?ß en un tejido periférico. En algunas realizaciones preferidas, el compuesto inhibe la producción de ?ß. En realizaciones específicamente preferidas, un compuesto administrado periféricamente tiene un coeficiente de partición menor que 2,0, y mejor aún, menor que 1,5; e incluso mejor, menor que 1,0 aproximadamente. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos para tratar a un sujeto con trastorno de ?ß cerebral o predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, que comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la expresión de un gen en un tejido periférico de dicho sujeto. En realizaciones preferidas, la modulación de la expresión del gen mencionado provoca la modulación de la producción o la acumulación de ?ß en el tejido periférico. En determinadas realizaciones preferidas, el tejido periférico es el hígado del individuo .

La presente invención comprende cualquier procedimiento para afectar la producción de AB en el hígado, inclusive, pero sin limitación, modificar la expresión y/o el procesamiento de la APP. En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos que comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la expresión de uno o más de los genes Psen 1, Apo E, InsP3R, Psen2, APP, Cibl, Ngrn, Zfhxlb, CLU (también denominado ApoJ) , PICALM y CR1. En algunas realizaciones, los procedimientos de la presente invención comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la actividad o la expresión de uno o más entre la presenilina 2, la calmyrin, el neugrin, el Zfhxlb, la clusterina, la proteina de ensamblaje clatrina unida a fosfoinositol, el receptor 1 de componente de complemento o APP. En algunas realizaciones, se modula uno o más de estos genes o actividades en el higado del individuo. En algunas realizaciones, la modulación comprende la inhibición de la expresión o la actividad, mientras que en otras realizaciones, la modulación comprende la estimulación de la expresión o la actividad.

En algunas realizaciones, la presente invención comprende un procedimiento, por ejemplo, para tratar un trastorno de ?ß cerebral, que comprende los siguientes pasos: la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o la predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, la administración periférica de un compuesto que modula la producción de ?ß, en la cual el compuesto no penetra considerablemente la barrera hematoencefálica, y la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral. Además, se considera que, en algunas realizaciones, se comparan los resultados de las evaluaciones previa y posterior al tratamiento, para determinar, por ejemplo, el efecto del tratamiento sobre el estado del trastorno de ?ß cerebral (por ejemplo, para determinar un efecto sobre la aparición o la velocidad de avance o alivio de las enfermedades) . La modulación de la producción de ?ß no se limita a ningún medio o via especifica de modulación. La modulación de la producción puede comprender, por ejemplo, la modificación (por ejemplo, la reducción) de la expresión de APP, o la modificación del procesamiento de APP en ?ß.

En algunas realizaciones, la invención comprende los siguientes pasos: la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o la predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, la administración periférica de un compuesto que modula la acumulación de ?ß, en la cual el compuesto no penetra considerablemente la barrera hematoencefálica, y la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral. La modulación de la acumulación de ?ß no se limita a ningún medio especifico. La modulación de la acumulación puede comprender, por ejemplo, la disminución de la producción de ?ß y/o el aumento de la degradación o la eliminación de ?ß, o la modificación de ?ß para producir una forma modificada con propiedades diferentes (por ejemplo, una forma no patogénica) .

Se considera que en algunas realizaciones' de la invención, la modulación de la producción y/o la acumulación de ?ß, el compuesto administrado comprende un modulador de una actividad ?-secretasa, mientras que en algunas realizaciones preferidas, el compuesto comprende un inhibidor de una actividad ?-secretasa.

Además, se considera que en algunas realizaciones de la invención, la modulación de la producción y/o la acumulación de ?ß, el compuesto administrado comprende un modulador de Presenilina 2. En algunas realizaciones preferidas, el compuesto comprende un inhibidor de Presenilina 2. En algunas realizaciones, el compuesto comprende un modulador de la escisión de la proteina precursora amiloide, mientras que en otras realizaciones el compuesto comprende un inhibidor de la escisión de la proteina precursora amiloide.

En algunas realizaciones, el compuesto comprende una composición seleccionada del grupo que comprende un compuesto de STI-571, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012 (Eisei), o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos. En realizaciones específicamente preferidas, la composición tiene un coeficiente de partición (por ejemplo, en un sistema octanol/agua) de menos de 2,0; mejor aún si es menor que 1,5; e incluso mejor si es menor que 1,0 aproximadamente. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .

En algunas realizaciones, el compuesto comprende un oligonucleótido de interferencia, mientras que en realizaciones preferidas, el compuesto comprende ARN de interferencia. En realizaciones incluso más preferidas, el ARN de interferencia se selecciona del grupo que comprende ARNsi, ARNsh y ARNmi . En algunas realizaciones, el ARN de interferencia comprende un ARN de interferencia dirigido hacia el ARN de la proteína precursora amiloide, mientras que en otras realizaciones, el ARN de interferencia comprende un ARN de interferencia dirigido hacia el ARN de Presenilina 2.

Se considera que en algunas realizaciones, el compuesto además comprende un agente terapéutico conocido para tratar, mejorar o disminuir el riesgo o la gravedad de un trastorno relacionado con el ?ß cerebral. En determinadas realizaciones preferidas, el agente terapéutico conocido se selecciona del grupo compuesto por cannabinoides, dimebona, prednisona, ibuprofeno, naproxeno, indometacina; estatinas, moléculas selectivas del receptor de estrógenos, antihipertensores, alfabloqueadores, betabloqueadores, alfa-beta bloqueadores, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, bloqueadores de receptores de la angiotensina, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos y antioxidantes.

La administración periférica de este compuesto en el procedimiento de la presente invención no se limita a ninguna vía especifica. Las vías de administración comprenden, pero no se limitan a la administración a través de los ojos (oftálmica), la boca (oral), la piel (transdérmica) , la nariz (nasal) , los pulmones (inhalación) , la mucosa bucal (bucal) , los oídos, la administración por inyección (por ejemplo, vía intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, etc.) y otras similares. En determinadas realizaciones preferidas, la administración periférica comprende la administración oral.

En algunas realizaciones de los procedimientos de la presente invención, la evaluación comprende una evaluación del estado mental. En algunas realizaciones preferidas, la evaluación comprende una o más pruebas neuropsicológicas e imágenes del cerebro.

Se considera que en algunas realizaciones, la presente invención proporciona un procedimiento para evaluar el riesgo o la presencia de un trastorno de ?ß cerebral en un individuo que comprende determinar el nivel de ?ß en un tejido periférico de dicho individuo. En algunas otras realizaciones, la invención proporciona un procedimiento de control de un trastorno de ?ß cerebral en un individuo, que comprende determinar el nivel de ?ß en un tejido periférico del individuo. En algunas realizaciones, el tejido periférico es la sangre, mientras que en otras realizaciones, el tejido periférico es el suero. En algunas realizaciones preferidas específicamente, el control comprende medir el ?ß en ese tejido periférico en varios momentos .

En realizaciones preferidas de los procedimientos divulgados anteriormente, el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos de control de un trastorno de ?ß cerebral en un individuo, que comprende el análisis de la expresión o la actividad de un producto genético en el tejido periférico del individuo. En determinadas realizaciones preferidas, el producto genético pertenece a un gen seleccionado del grupo que comprende Psen2, APP, Cibl, Ngrn y Zfhxlb.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un procedimiento, que comprende los siguientes pasos: la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o la predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, y la administración periférica de un compuesto que inhibe el transporte de ?ß periférico a través de la barrera hematoencefálica, en la cual dicho compuesto no es un anticuerpo anti-?ß. En realizaciones preferidas, además se incluye la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral. En realizaciones específicamente preferidas, el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer .

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un procedimiento de identificación de una diana genética para el tratamiento de un trastorno de ?ß cerebral, que comprende la comparación de un perfil de expresión genética del hígado de las crías de un primer padre con dicho trastorno de ?ß o con predisposición al mismo y de un segundo padre con susceptibilidad reducida a dicho trastorno de ?ß para identificar un marcador genético hereditario con un nivel de expresión en el hígado, donde una mayor o menor expresión de dicho marcador genético hereditario en el hígado de la cría con relación al nivel de expresión en el hígado del primer padre se correlacione con la herencia del marcador genético del segundo padre.

En algunas realizaciones, la presente invención comprende un compuesto seleccionado del grupo compuesto por un compuesto de STI-571, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación de la producción de ?ß en el tejido periférico de un individuo con un trastorno de ?ß o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß. En algunas realizaciones, el trastorno de ?ß es un trastorno de ?ß cerebral. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto tiene un coeficiente de partición menor que 2,0 y mejor aún menor que 1,5, e incluso mejor todavía si es menor que 1,0 aproximadamente. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado del grupo que incluye un compuesto de STI-571, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación (por ejemplo, la inhibición) de la producción de ?ß en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß. En algunas realizaciones, el trastorno de ?ß es un trastorno de ?ß cerebral. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto tiene un coeficiente de partición menor que 2,0 y mejor aún si es menor que 1,5, e incluso mejor aún si es menor que 1,0 aproximadamente. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .

En algunas realizaciones, la invención se refiere a un compuesto seleccionado del grupo que abarca un compuesto de imatinib (STI-571) , el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, y/o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para la fabricación de un medicamento para la modulación de la producción de ?ß en el tejido periférico de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral. En realizaciones preferidas, el medicamento se formula para la administración por vía oral. En realizaciones específicamente preferidas, el tejido periférico comprende el hígado. En realizaciones preferidas más específicamente, el compuesto tiene un coeficiente de partición menor que 2,0, mejor aún si es menor que 1,5, e incluso mejor aún si es menor que 1,0 aproximadamente. En realizaciones específicamente preferidas, el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica . En algunas realizaciones preferidas, la presente invención se refiere al uso de imatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en la fabricación de un medicamento para la inhibición de la producción de ?ß en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

La invención también proporciona el uso de los compuestos descritos anteriormente para la fabricación de un medicamento que contiene un segundo agente terapéutico para el tratamiento de un trastorno de ?ß cerebral. En algunas realizaciones, se selecciona un segundo agente terapéutico de un compuesto de imatinib (STI-571) WGB-BC-15, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan, y E2012, una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, y/o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En determinadas realizaciones preferidas, el segundo agente terapéutico comprende uno o más agentes seleccionados del grupo que abarca cannabinoides, dimebona, prednisona, ibuprofeno, naproxen, indometacina; estatinas, moléculas selectivas del receptor de estrógenos, antihipertensores, alfabloqueadores, betabloqueadores, alfa-beta bloqueadores, inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, bloqueadores de receptores de la angiotensina, bloqueadores de los canales de calcio, diuréticos y antioxidantes. En determinadas realizaciones específicamente preferidas de los procedimientos y las composiciones descritos anteriormente, el compuesto comprende imatinib en forma de sal mesilato.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1A muestra una gráfica de comparación de la cantidad de ARNm de Psen2 en las muestras de hígado de los ratones sometidos en comparación con el genotipo del ratón en el locus de Psen2.

La Figura IB muestra gráficas del genotipo del locus de Psen2 (B6/B6 o D2/D2) frente a la concentración de ARNm de Psen2 en 6 tejidos (unidades arbitrarias) de las hasta 89 líneas endogámicas recombinantes (RI, por sus siglas en inglés) . Los valores de C57 y DBA parentales se grafican junto a los de las líneas RI . Algunos tejidos tienen información de líneas RI individuales que son heterocigóticas en el locus de Psen2: éstas están representadas en las gráficas como B6/D2. Información obtenida de GeneNetwork.org (J. Wang, R.W. Williams, K.F. Manly KF, Neuroinformatics 1, 299 (2003)). Para el hígado, los datos de expresión se expresaron inicialmente como la relación de la señal de fluorescencia del hígado y la señal generada por la muestra de ARNm de referencia para cada sonda. Se normalizaron los datos utilizando un procedimiento de suavización sólido LOWESS que se ajusta a la no linealidad de la señal en los dos canales. Luego, se computarizó el logaritmo en base 2 de estas relaciones (media) . Un valor de -1 indica que la expresión en el hígado es aproximadamente la mitad que en el control; un valor de -2 indica que la expresión en el hígado es aproximadamente 1/4 que en el control, etc. Por otra parte, un valor de +2 indica que la expresión en el hígado es 4 veces mayor que en el hígado. Los datos del hígado de 40 líneas endogámicas recombinantes fueron descritos por D. Gatti, y colaboradores, Hepatology 46, 548 (2007) . Para otros tejidos, los valores de expresión y los procedimientos de normalización alternativos fueron los indicados (Wang, mencionados anteriormente) .

La Figura 2 es un diagrama de las ¿structuras químicas de STI-571 (la sal mesilato GLEEVEC™) , la variante de STI-571 ("WGB-BC-15" ) , el Compuesto 1 (PD173955, oasser y colaboradores, 1999, Cáncer Research 59: 6145-6152; Wisniewski y colaboradores, Cáncer Research 2002, 62 (15) : 4244-55) y el Compuesto 2 (PD166326; Wisniewski y colaboradores, Cáncer Research 2002, 62 (15) : 4244-55) .

Las Figuras 3A-3F muestran los efectos del STI-571 administrado periféricamente sobre los niveles de ?ß en el plasma y en todo el cerebro. Los ratones B6 y D2 naturales (de 8 a 12 semanas [A-F] o de 15 a 18 meses [G, H ] ) recibieron el fármaco o el vehículo dos veces por día durante 7 días por inyección intraperitoneal . En la Fig. 3A, se observan Western blots que muestran niveles de hexámeros de ?ß en el plasma de ratones D2 jóvenes tratados con vehículo salino (carriles 1, 2, 9 y 10) o STI-571 en tres dosis: los carriles 3, 4, 11 y 12 muestran los resultados con 1 mg/kg; los carriles 5, 6, 13 y 14 muestran los resultados con 10 mg/kg; y los carriles 7, 8, 15 y 16 muestran los resultados con 100 mg/kg; n=4 por grupo. La Fig. 3B muestra una cuantificación en gráfica de barras de las imágenes del Western blot de la Fig. 3A. En la Fig. 3C, se observa un Western blot que muestra niveles de hexámeros de ?ß en extractos del cerebro de ratones B6 jóvenes tratados con vehículo salino o STI-571, 20 mg/kg (n=10 por grupo en total; en el Western blot sólo se observa n=5) . La Fig. 3D muestra una cuantificación en gráfica de barras de las imágenes del Western blot de la Fig. 3C. Las Fig. 3E y 3F muestran gráficas de barras que indican niveles de hexámeros de ?ß en extractos de cerebro (E) o plasma (F) de ratones B6 adultos tratados con vehículo salino o STI-571, 20mg/kg (n=4 por grupo) .

La Figura 4 muestra una gráfica de comparación de la cantidad de ARNm de Ngrn en las muestras de hígado de los ratones sometidos en comparación con el genotipo de los ratones en el locus de Ngrn.

La Figura 5 muestra las gráficas del genotipo de Cibl (Fig. 5A) o Zfhxlb (Fig. 5B) (B6/B6, B6/D2 o D2/D2) frente a la concentración de ARNm de la calmyrin (Fig. 5A) o Zfhxlb (Fig. 5B) en el hígado (unidades arbitrarias) para 40 líneas endogámicas recombinantes, como en la Figura IB.

Información obtenida de GeneNetwork.org ( ang, según se menciona anteriormente) ; los datos del hígado fueron descritos por Gatti, según se menciona anteriormente.

DEFINICIONES Según se los emplea aquí, los términos "individuo" y "paciente" se utilizan indistintamente. Según se los emplea aquí, los términos "individuo" y "individuos" se refieren a un animal, preferentemente, un mamífero incluido un mamífero no primate (por ejemplo, una vaca, un cerdo, un caballo, un burro, una cabra, un camello, un gato, un perro, un cobayo, una rata, un ratón, una oveja) y un mamífero primate (por ejemplo, un mono, como por ejemplo un mono cynomolgus, un gorila, un chimpancé y un ser humano) , preferentemente un ser humano. En una realización, el individuo es un individuo con mal de Alzheimer (AD) .

Según se lo emplea aquí, el término "trastorno relacionado con ?ß" o un "trastorno de ?ß" es una enfermedad (por ejemplo, el mal de Alzheimer) o una afección (por ejemplo, la demencia senil) que comprende una aberración o una desregulación de los niveles de ?ß. Un trastorno relacionado con ?ß comprende, pero sin limitación, el AD, los trastornos amiloides relacionados con trauma cerebral, el síndrome de Down y la miositis por cuerpos de inclusión.

Según se lo emplea aquí, el término "riesgo de enfermedad" se refiere a un individuo (por ejemplo, un humano) con predisposición a sufrir determinada enfermedad. Esta predisposición puede ser genética (por ejemplo, una tendencia genética específica a padecer la enfermedad, como por ejemplo trastornos hereditarios) u obedecer a otros factores (por ejemplo, la edad, el peso, las condiciones ambientales, la exposición a los compuestos perjudiciales presentes en el ambiente, etc.)- Por lo tanto, no se pretende limitar la presente invención a ningún riesgo específico, ni se pretende limitar la presente invención a ninguna enfermedad específica.

Según se lo emplea aquí, el término "sufrir una enfermedad" se refiere a un individuo (por ejemplo, un ser humano) que padece una enfermedad específica o que se le ha diagnosticado determinada enfermedad. No se pretende limitar la presente invención a ningún signo, síntoma o enfermedad específica. Por lo tanto, se pretende que la presente invención comprenda a los individuos que padecen cualquier grado de enfermedad (por ejemplo, desde una manifestación sub-clínica hasta una enfermedad avanzada) en la cual el individuo presenta al menos algunos indicios (por ejemplo, signos y síntomas) asociados con la enfermedad específica.

Según se los emplea aquí, los términos "enfermedad" y "afección patológica" se utilizan indistintamente para describir un estado, los signos y/o los síntomas asociados a cualquier deterioro del estado normal de un animal vivo o de cualquiera de sus órganos o tejidos que interrumpa o modifique el desempeño normal de sus funciones, y puede ser una respuesta a factores ambientales (por ejemplo, un trauma emocional, un trauma físico, desnutrición, peligros industriales o el clima) , a agentes infecciosos específicos (por ejemplo, gusanos, bacterias o virus) , a un defecto inherente al organismo (por ejemplo, anomalías genéticas diversas) o a combinaciones de éstos y otros factores.

Según se los emplea aquí, los términos "individuo con AD" o "individuo que presenta signos o síntomas, o patología indicativa de AD" o "individuos que se sospecha que presentan signos o síntomas, o patología indicativa de AD" se refieren a un individuo que se ha se ha determinado que presenta o que es probable que presente AD, o que ha sido diagnosticado en tal sentido, sobre la base de los signos, los síntomas y la patología de AD conocidos.

Según se los emplea aquí, los términos "individuo con riesgo de presentar patología indicativa de AD" y "individuo con riesgo de AD" se refieren a un individuo que se ha identificado que corre riesgo de desarrollar AD.

Según se lo emplea aquí, el término "agente terapéutico contra el AD" se refiere a un agente utilizado para tratar o prevenir el AD. Estos agentes comprenden, entre otros, moléculas pequeñas, fármacos, anticuerpos, productos farmacéuticos y otros similares.

Según se lo emplea aqui, el término "función cognitiva" suele referirse a la capacidad para pensar, razonar, concentrarse o recordar. Por consiguiente, el término "disminución de la función cognitiva" se refiere al deterioro o la falta de capacidad para pensar, razonar, concentrarse o recordar.

Según se los emplea aqui, los términos "modular", "modula", "modulada" o "modulación" tienen sus significados habituales y abarcan los significados de las palabras "mejorar", "promover", "aumentar", "agonizar", "inhibir", "disminuir" o "antagonizar" . Un modulador, por ejemplo, de una actividad enzimática, como por ejemplo una actividad ?-secretasa, puede actuar directamente, o sea, mediante interacción directa con la enzima que tiene la actividad que se modulará, o puede actuar de forma indirecta, o sea, sin interacción directa con la enzima, sino a través de una via que provoque la modulación de la actividad.

Según se lo emplea aqui, el término "evaluar a un individuo para determinar la presencia de AD" se refiere a realizar una o más pruebas para determinar, por ejemplo, la presencia o el avance de AD en un individuo, o el riesgo de aparición de AD en un individuo. La evaluación de un individuo para determinar la presencia de AD y/o la distinción del mal de Alzheimer de otras causas de pérdida de la memoria, puede comprender la evaluación de uno o más de los siguientes aspectos: 1. la historia clínica que incluye la evaluación de la salud general de. un individuo y sus problemas médicos anteriores, y los problemas que un individuo puede tener para realizar las .actividades cotidianas; 2. las pruebas médicas básicas que comprenden, por ejemplo, un análisis de sangre para descartar otras posibles causas · de demencia, como por ejemplo los trastornos de tiroides o las deficiencias vitamínicas; 3. la evaluación del estado mental, por ejemplo, la memoria selectiva, la capacidad para resolver problemas, el lapso de concentración, la habilidad para contar y para el lenguaje; 4. las pruebas neuropsicológicas que comprenden una evaluación más completa de la memoria, la capacidad para resolver problemas, el lapso de concentración, la habilidad para contar y para el lenguaje; 5. las imágenes cerebrales a través de, por ejemplo, tomografía computarizada (TC) , resonancia magnética (RM) y tomografia por emisión de positrones (PET, por sus siglas en inglés) para buscar anomalías visibles.

Según se lo emplea aquí, un "agonista" es cualquier compuesto que actúa directa o indirectamente sobre una molécula para producir un efecto farmacológico, mientras que un "antagonista" es cualquier compuesto que actúa directa o indirectamente sobre una molécula para disminuir un efecto farmacológico.

El término "muestra" se utiliza en su sentido más ' amplio y abarca las muestras obtenidas de cualquier fuente. Según se lo emplea aquí, el término "muestra" se utiliza para referirse a las muestras biológicas obtenidas de animales (inclusive seres humanos) y abarca . líquidos, sólidos, tejidos y gases. En algunas realizaciones de la invención, las muestras biológicas comprenden tejido neuronal (por ejemplo, tejido cerebral) , líquido cefalorraquídeo (CSF) , líquido seroso, orina, saliva, sangre y hemoderivados como plasma, suero · y otros similares. Sin embargo, estos ejemplos no deben interpretarse como limitantes de los tipos de muestras que pueden utilizarse en la presente invención.

Según se lo emplea aquí, el término "barrera hematoencefálica " se refiere a una estructura en el sistema nervioso central (CNS, por sus siglas en inglés) que restringe el pasaje de sustancias químicas y objetos microscópicos (por ejemplo, bacterias) entre el torrente sanguíneo y el tejido neuronal. Las referencias direccionales "dentro" y "fuera" de la barrera hematoencefálica se refieren a objetos que se encuentran del lado del tejido cerebral/neuronal de la barrera hematoencefálica o del otro lado del tejido cerebral/neuronal de la barrera hematoencefálica, respectivamente .

Según se lo emplea aquí, el término "variante impermeable a la . barrera hematoencefálica" utilizado con referencia a un material o un compuesto (por ejemplo, un fármaco) se refiere a una variante de un compuesto con capacidad reducida para penetrar la . barrera hematoencefálica cuando se administra periféricamente a un individuo en comparación con la penetrabilidad de un compuesto original o de referencia, de manera que, por ejemplo, la variante no penetre considerablemente la barrera hematoencefálica del individuo al que se le administra. Según . se plantea más adelante, la capacidad de un compuesto de atravesar la barrera hematoencefálica puede caracterizarse por cualquiera de varios procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo, por pruebas in vivo o in vitro, por modelo computacional, o por caracterización de un compuesto (por ejemplo, por pruebas físicas o modelo computacional) con respecto a las características vinculadas a la transmisibilidad de la barrera hematoencefálica, por ejemplo, el tamaño, la carga, etc.

Los procedimientos para determinar o calcular la absorción de fármacos del cerebro/CNS .comprenden procedimientos in vivo (por ejemplo, inyección intravenosa o en la carótida seguida de muestreo o imágenes del cerebro) , procedimientos in vitro en los que se utilizan, por ejemplo, microvasos cerebrales aislados o modelos de cultivo celular, y procedimientos de predicción computacional (in silico) , por lo general, sobre la base de factores, como el peso molecular y la lipofilicidad. Véase, por ejemplo, U. Bickel, NeuroRx., enero de 2005; 2(1): 15-26, que se incorpora a la presente como referencia, para una revisión y comparación de procedimientos de medición de transporte del fármaco a través de la barrera hematoencefálica . ¦ La lipofilicidad/hidrofilicidad de un compuesto se asocia, generalmente, con la velocidad y la cantidad de ingreso de un compuesto al cerebro. La lipofilicidad/hidrofilicidad de un fármaco suele representarse como un coeficiente de partición que representa el comportamiento de un fármaco cuando se fracciona en un sistema inmiscible solvente acuoso/orgánico. Se ha utilizado ampliamente un sistema de partición 1-octanol/agua para evaluar la capacidad de los compuestos de atravesar la barrera hematoencefálica . El coeficiente de partición de l-octanol/agua, "log P", se ha utilizado durante mucho tiempo como descriptor de lipofilicidad, y algoritmos informáticos que proporcionan valores de log P calculados, como Clog P y Mlog P, suelen ser muy similares a los valores medidos experimentalmente (dentro de 0,3 unidades logarítmicas aproximadamente; Bickel, mencionado anteriormente) . Para las moléculas ionizables, se utilizan los coeficientes de distribución, o sea, los valores de log P a un pH definido (por lo general, el pH del plasma fisiológico de 7.4) . Si log P y pKa son conocidos, se puede derivar log D (logaritmo de coeficiente de distribución) : utilizando la ecuación de Henderson-Hasselbalch. Se suele mencionar el log D a pH 7.4 para dar una indicación de la lipofilicidad de un fármaco con relación al pH del plasma sanguíneo.

Hansch y sus colaboradores determinaron que los fármacos con un log P de 2 aproximadamente ingresan fácilmente al sistema nervioso central (Hansch y colaboradores, 1987, J. Pharm. Sci . 76 ( 9 ) : 663-687 , que se incorpora a la presente como referencia) , y que los fármacos más hidrófilos, que tienen valores de log P bajos (por ejemplo, 1 aproximadamente) suelen tener menor capacidad para ingresar al CNS. Esta observación se ha aplicado a la modificación de los fármacos para disminuir la penetración en el CNS como forma de controlar, por ejemplo, la toxicidad en el CNS o los efectos secundarios. Por ejemplo, la penetración en el CNS del fármaco para el corazón, ARL-57. .Este fármaco se consideraba un fármaco cardiotónico excelente pero que no podía ser utilizado en pacientes porque causaba una "visión de color brillante muy impresionante" en los seres humanos. ARL-57 tiene log P = 2,59 a pH 8. Se produjo una variante más hidrofílica de la sustancia, ARL115, (sulmazola; log P = 1,17 a pH 8; calculado 1,82) y se halló que no provocaba efectos secundarios en el CNS, lo que demuestra que la modificación de la lipofilicidad/hidrofilicidad se puede utilizar como medio para modificar (por ejemplo, reducir) la penetración del fármaco de la barrera hematoencefálica (Hansch, y colaboradores, mencionado anteriormente) .

Se ha calculado que el coeficiente de partición (log P) del mesilato de imatinib es 1,198 y 1,267 a 25 y 37 °C, respectivamente (Velpandian, y colaboradores, Journal of Chromatography B, 804 ( 2 ): 431-434 (2004)). Este valor de log P coincide con la información que muestra que el imatinib no penetra considerablemente la barrera hematoencefálica .

El término "periférico" utilizado con referencia a la ubicación en o sobre, o a un tejido de un individuo, se refiere a todas las ubicaciones y tejidos del individuo fuera de la barrera hematoencefálica .

Según se lo emplea aquí, el término "no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica" o "no penetra considerablemente en la barrera hematoencefálica" se refiere a un material o compuestos, por ejemplo, GLEEVEC mesilato de imatinib (STI-571) que, si se administra en un tejido periférico o se toma por vía oral, o bien no aparece en lo absoluto en un muestreo del CNS (por ejemplo, en el tejido cerebral, el líquido cefalorraquídeo), o bien se encuentra presente en el muestreo de CNS en un porcentaje pequeño de la concentración observada en el tejido periférico, por ejemplo, menos del 10% aproximadamente, preferentemente menos del 5% aproximadamente, y, mejor aún si representa menos del 2% aproximadamente de la concentración observada en los tejidos periféricos. Por ejemplo, GLEEVEC/STI-571 tiene una escasa penetración de la barrera hematoencefálica, como se observó en un paciente con leucemia tratado con STI-571, cuyo nivel del fármaco en el líquido cefalorraquídeo fue 92 veces más bajo que en la sangre (Takayama N, Sato N, O'Brien SG, Ikeda Y, Okamoto S. Br J Haeraatol. 119:106-108, 2002). Por lo tanto, GLEEVEC/S I-571 mesilato de imatinib no penetra considerablemente en la barrera hematoencefálica .

Según se lo emplea aquí, el término "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad (por ejemplo, de una composición que contiene un modulador de la actividad ?-secretasa de la presente invención) suficiente para producir un efecto seleccionado. Se puede administrar una cantidad eficaz en una o varias instancias de administración, aplicaciones o dosificaciones, y no se pretende limitar a una formulación o via de administración especifica.

Según se lo emplea aquí, una "cantidad suficiente" de un compuesto, o "una cantidad de un compuesto suficiente para..." se refiere a una cantidad que contiene al menos la cantidad mínima necesaria para lograr el resultado esperado. Esta cantidad la puede determinar en forma rutinaria el entendido en la técnica sobre la base de estudios, a través de métodos de análisis como los descritos en el presente documento.

Según se lo emplea aquí, el término "aproximadamente" significa en el intervalo del 10 al 15%, preferentemente en el intervalo del 5 al 10%.

Según se los emplea aquí, los términos "manejar" y "manejo" se refieren a los efectos beneficiosos que un individuo obtiene de un compuesto, como por ejemplo un compuesto que disminuye los niveles de ?ß observados en una célula o un tejido, lo que no provoca una cura de la enfermedad. En determinadas realizaciones, a un individuo se le administra uno o más de estos agentes para "manejar" un trastorno de manera de prevenir o enlentecer el avance o agravamiento del trastorno.

Según se los emplea aquí, los términos "prevenir" y "prevención" se refieren a impedir la recaída o la aparición de un trastorno relacionado con ?ß o uno o más síntomas de un trastorno relacionado con ?ß en un individuo .

Según se lo emplea aquí, un "protocolo" comprende planes de administración y regímenes de administración. Los protocolos mencionados aquí son procedimientos de uso y comprenden protocolos profilácticos y terapéuticos.

Según se los emplea aquí, los términos "administración" y "administrar" se refieren al acto de suministrar un fármaco, un profármaco u otro agente, o tratamiento terapéutico (por ejemplo, las composiciones de la presente invención) a un individuo (por ejemplo, a un individuo o a células, tejidos y órganos in vivo, in vitro o ex vivo) . Los ejemplos de vías de administración al cuerpo humano comprenden la administración a través de los ojos (oftálmica) , la boca (oral) , la piel (tópica o transdérmica) , la nariz (nasal) , los pulmones (inhalación) , la mucosa bucal (bucal), los oídos, la vía rectal, la vaginal, la administración por inyección (por ejemplo, vía intravenosa, subcutánea, intratumoral, intraperitoneal, etc.) y otras similares. "Administración periférica" se refiere a cualquier vía de administración que se aplica fuera de la barrera hematoencefálica .

Según se los emplea aquí, los términos "coadministración" y "coadministrar" se refieren a la administración de al menos dos agentes (por ejemplo, composiciones que - contienen STI-571 y uno o más de otros agentes, por ejemplo, un agente terapéutico contra una enfermedad relacionada con ?ß) o tratamientos a un individuo. En algunas realizaciones, la coadministración de dos o más agentes o terapias es conjunta. En otras realizaciones, se administra un primer agente/tratamiento y luego un segundo agente/tratamiento. Los entendidos en la técnica comprenden que las formulaciones y/o vías de administración de los diversos agentes o tratamientos utilizados pueden variar. Un entendido en la técnica puede determinar fácilmente la dosificación adecuada para la coadministración. En algunas realizaciones, cuando se coadministran agentes o tratamientos, estos agentes o tratamientos se administran en dosis más bajas que las dosis adecuadas para la administración en forma individual. Por lo tanto, la coadministración resulta conveniente especificamente en las realizaciones en las que la coadministración de los agentes o los tratamientos disminuye la dosis necesaria de un agente posiblemente nocivo (por ejemplo, tóxico) , y/o cuando la coadministración de dos o más agentes provoca la sensibilización de un individuo a los efectos beneficiosos de uno o más de los agentes a través de la coadministración del otro agente.

Según se lo emplea aquí, el término "tratar" comprende la administración de un tratamiento para prevenir, curar o mejorar/prevenir los síntomas asociados a un trastorno, enfermedad, lesión o afección específica.

Según se lo emplea aquí, el término "tratamiento" o sus equivalentes gramaticales comprenden la mejoría y/o la regresión de los síntomas de la enfermedad (por ejemplo, una enfermedad relacionada con ?ß, como el mal de Alzheimer) . Cuando se utiliza en los procedimientos de evaluación de la presente invención, un compuesto que provoca una mejoría en cualquier parámetro asociado con la enfermedad puede de ese modo identificarse como un compuesto terapéutico. El término "tratamiento" se refiere a un tratamiento terapéutico y profiláctico o a medidas preventivas. Por ejemplo, las personas que pueden beneficiarse de un tratamiento con composiciones y procedimientos de la presente invención comprenden personas que ya tienen una enfermedad y/o trastorno (por ejemplo, un trastorno relacionado con ?ß, o síntomas o patologías que coinciden con una enfermedad relacionada con ?ß) y personas en las que se puede prevenir una enfermedad y/o trastorno (por ejemplo, con un tratamiento profiláctico de la presente invención) .

El término "compuesto" se refiere a cualquier entidad química, producto' farmacéutico, fármaco y otros similares que pueden utilizarse para tratar o prevenir una ;enfermedad o afección de la función corporal. Según se lo emplea aquí, un compuesto puede ser una composición individual (por ejemplo, una preparación pura de una sustancia química) o puede ser una composición que contenga varias sustancias químicas (por ejemplo, uno o más agentes eficaces y uno o más agentes inertes) . Un compuesto puede comprender composiciones terapéuticas conocidas y composiciones posiblemente terapéuticas. Se puede determinar que un compuesto es terapéutico mediante evaluación con los procedimientos de evaluación de la presente invención.

Un compuesto o agente "terapéutico conocido" comprende un compuesto terapéutico observado (por ejemplo, a través de pruebas en animales o experiencias anteriores de administración a seres humanos) que tiene un efecto terapéutico en un tratamiento. Sin embargo, un compuesto terapéutico conocido no se limita a un compuesto que presenta un nivel : específico de eficacia en el tratamiento o la prevención de una enfermedad (por ejemplo, una enfermedad relacionada con ?ß) , y comprende, por ejemplo, los compuestos sobre los que la información sugiere que provocan cierto efecto beneficioso y escaso o ningún efecto negativo (por ejemplo, los compuestos que, generalmente, se reconocen como seguros, como los productos de extractos de alimentos y nutracéuticos) . Como ejemplos de agentes terapéuticos para tratar, mejorar d reducir el riesgo o la gravedad de enfermedades relacionadas con ?ß (por ejemplo, mal de Alzheimer) utilizadas en forma individual o en combinación con otros compuestos o tratamientos se pueden citar, entre otros, los cannabinoides (véase, por ejemplo, Ramírez, y colaboradores, The Journal of Neuroscience, 23 de febrero de 2005, 25 (8) : 1904-1913) ; el dimebon (véase, por ejemplo, RS Doody, y colaboradores, The Lancet 372:207-215 (2008)); los agentes antiinflamatorios como la prednisona (un esteroide) y los fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) , incluidos, pero sin limitación, el ibuprofeno, el naproxen, la indometacina; los fármacos para reducir el colesterol y/o de protección cardiaca, como las estatinas, por ejemplo, la atorvastatina (LIPITOR®) , la cerivastatina (BAYCOL®) , la fluvastatina (por ejemplo, LESCOL®) , la mevastatina, la pitavastatina (por ejemplo, LIVALO ®) , la pravastatina (por ejemplo, PRAVACHOL®) , la rosuvastatina (por ejemplo, CRESTOR®) y la simvastatina (por ejemplo, ZOCOR®) ; las moléculas selectivas de los receptores de estrógenos (SERM, por sus siglas en inglés) , por ejemplo, el raloxifeno (EVISTA®) ; los antihipertensores, incluidos los alfabloqueadores, los betabloqueadores, los alfa-beta bloqueadores , los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, los bloqueadores de los receptores de la angiotensina (ARB, por sus siglas en inglés, como por ejemplo el valsartan (por ejemplo, DIOVAN®)), los bloqueadores de los canales de calcio y los diuréticos (véase, por ejemplo, I Hajjar, y colaboradores, The Journals of Gerontology Series A: Biological Sciences anP Medical Sciences 60:67-73 (2005)); y los antioxidantes como el extracto de ajo, la curcumina, la melatonina, el resveratrol, el extracto de Ginkgo biloba, el té verde, la vitamina C y la vitamina. E (véase, por ejemplo, B Frank, y colaboradores, Ann Clin Psychiatry 17 (4) :269-86 (2005) . : Según se lo emplea aqui, el término "molécula pequeña" suele referirse a una molécula menor que 10 kDa de peso molecular aproximadamente, incluidos, entre otros, los compuestos naturales o sintéticos, orgánicos o inorgánicos, los péptidos, los (poli ) nucleótidos, los (oligo) sacáridos y otros similares. Las moléculas pequeñas abarcan específicamente las moléculas orgánicas e inorgánicas no poliméricas (o sea, ni los péptidos ni los polipéptidos ) pequeñas .

Según se lo emplea aqui, el término "extracto" y otros términos similares se refieren a un proceso para separar y/o purificar uno o más componentes de su fuente natural, o cuando se utiliza como sustantivo, se refiere a la composición producida mediante dicho proceso.

Según se lo emplea aquí, el término "kit" o "equipo" se refiere a cualquier sistema de administración para administrar materiales. En el contexto de la actividad quinasa o los ensayos de inhibición, estos sistemas de administración comprenden sistemas que permiten el almacenamiento, el transporte o la administración de reactivos de reacción y/o materiales de apoyo (por ejemplo, tampones, instrucciones escritas para llevar a cabo el ensayo, etc.) de un lugar a otro. Por ejemplo, los kit incluyen uno o más adjuntos (por ejemplo, casilleros) que contienen los reactivos de reacción y/o los materiales de apoyo importantes.- Según se lo emplea aquí, el término "kit fragmentado" se refiere a sistemas de administración que comprenden dos o más contenedores separados, cada uno con una subporción de la totalidad de los componentes del kit. Los contenedores se pueden administrar al receptor deseado en forma conjunta o independiente. Por ejemplo, un primer contenedor puede contener una enzima para utilizar en un ensayo, mientras que un segundo contenedor contiene estándares para comparación con compuestos de prueba. El término "kit fragmentado" pretende abarcar los kit que contienen Reactivos Específicos para Analitos (ASR, por sus siglas en inglés) regulados en la sección 520(e) de la Ley Federal de Alimentos, Fármacos y Cosméticos, pero no se limita a éstos. En realidad, todo sistema de administración que contiene dos o más contenedores separados, cada uno de los cuales contiene una subporción de la totalidad de los componentes del kit, queda comprendido dentro del término "kit fragmentado". Contrariamente, un "kit combinado" se refiere a un sistema de administración que contiene todos los componentes de un ensayo de reacción en , un único contenedor (por ejemplo, en un único casillero que aloja a cada uno de los componentes deseados) . El término "kit" comprende a los kit fragmentados y a los combinados.

Según se lo emplea aquí, el término "tóxico" se refiere a cualquier efecto perjudicial o nocivo sobre un individuo, célula, tejido en comparación con la misma célula o tejido antes de la administración del tóxico.

Según se lo: emplea aqui, el término "purificado farmacéuticamente" se refiere a una composición con una pureza o una calidad de preparación suficiente para uso farmacéutico.

Según se lo emplea aqui, el término "purificado" se refiere a un tratamiento que se le realiza a una composición inicial para quitarle al menos un componente (por ejemplo, otro componente de una composición inicial (por ejemplo, un tejido vegetal o animal, una muestra ambiental, etc.), un contaminante, un precursor de síntesis o un subproducto,: etc. ) , de modo que la proporción del componente purificado frente al componente eliminado sea mayor que en la composición inicial.

Según se lo emplea aquí, el término "composición farmacéutica" se refiere a la combinación de un principio activo (por ejemplo, una composición que contiene un modulador de la actividad ?-secretasa) con un vehículo, inerte o activo, de manera que la composición resulte adecuada específicamente para uso en diagnósticos o uso terapéutico in vitro, in vivo o ex vivo.

Según se los emplea aquí, los términos "farmacéuticamente aceptable" o "farmacológicamente aceptable", se refieren a las composiciones que no producen reacciones adversas considerables, por ejemplo, reacciones tóxicas, alérgicas o inmunológicas cuando se administran a un individuo.

Según se lo emplea aquí, el término · "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar incluidos, entre otros, una solución salina con tampón fosfato, el agua, las emulsiones (por ejemplo, las emulsiones aceite/agua o agua/aceite) , y diversos tipos de agentes humectantes, cualquier solvente, medio de dispersión o cobertura el lauril sulfato de sodio, los agentes isotónicos y de retraso de la absorción, los desintegrantes (por ejemplo, el almidón de papa o el glicolato sódico de almidón) y otros similares. Las composiciones también pueden comprender estabilizantes y conservantes. Para obtener ejemplos de vehículos, estabilizantes y adyuvantes (véase, por ejemplo, Pharmaceutical Sciences de Martin Remington, 15° ed. , Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975);, que se incorpora a la presente como referencia) .

Según se lo emplea aquí, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier sal (por ejemplo, obtenida por reacción con un ácido o una base) de un compuesto de la presente invención que sea tolerada fisiológicamente por el individuo objetivo (por ejemplo, un mamífero y/o las células, los tejidos o los órganos in vivo o ex vivo) . Las "sales" de los compuestos de la presente invención pueden derivar de ácidos o bases inorgánicas u orgánicas. Entre los ejemplos de ácidos se pueden citar, entre otros, el ácido clorhídrico, el bromhídrico, el sulfúrico, el nítrico, el perclórico, el fumárico, el maleico, el fosfórico, el glicólico, el láctico, el salicílico, el succínico, el tolueno-p- sulfónico, el tartárico, el acético, el cítrico, el metansulfónico, el etansulfónico, el fórmico, el benzoico, el malónico, el sulfónico, el naftaleno-2-sulfónico, el bencensulfónico y otros similares. Otros ácidos, como el oxálico, aunque no son aceptables farmacéuticamente en sí mismos, se pueden :emplear en la preparación de sales útiles como intermedios para obtener los compuestos de la invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables .

Entre las bases ejemplares se pueden citar, entre 1 otras, los hidróxidos de metales alcalinos (por ejemplo, el sodio) , los hidróxidos de metales alcalinotérreos (por ejemplo, el magnesio), el amoniaco y los componentes de fórmula NW4+, en donde W es un alquilo Ci_4, y otras similares.

Entre las sales ejemplares se pueden mencionar, entre otras: el acetato, el adipato, el alginato, el aspartato, el benzoato, el bencenosulfonato, el bisulfato, el butirato, el citrato, el camforato, el camforsulfonato, el ciclopentanopropionato, el digluconato, el dodecilsulfato, el etanosulfonato, el fumarato, el flucoheptanoato, el glicerofosfato, el hemisulfato, el heptanoato, el hexanoato, el cloruro, el bromuro, el yoduro, el 2- hidroxietanosulfonato, el lactato, el maleato, el metanosulfonato, el 2-naftalenosulfonato, el nicotinato, el oxalato, el palmoato, el pectinato, el persulfato, el fenilpropionato, el picrato, el pivalato, el propionato, el succinato, el tartrato, el tiocianato, el tosilato, el undecanoato y otras similares. Otros ejemplos de sales son los aniones de los compuestos de la presente invención conformados por un catión adecuado, como por ejemplo Na+, NH4+ y NW4+ (donde W es un grupo alquilo C1-4) y otras similares. Para uso terapéutico, se considera que las sales de los compuestos de la presente invención son farmacéuticamente : aceptables. Sin embargo, las sales de ácidos y las bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden resultar útiles, por ejemplo, en la preparación o la purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable.

Para uso terapéutico, se considera que las sales de los compuestos . de la presente invención son farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las. sales de ácidos y las bases que no son farmacéuticamente aceptables también pueden resultar útiles, por ejemplo, en la preparación o la purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones de la presente invención, una composición de medicamento comprende una forma seleccionada del grupo que abarca un polvo, una solución, una emulsión, micelas, un liposoma, un gel y una pasta. En algunas realizaciones, una composición de medicamento comprende un comprimido o una cápsula rellena, donde dicho comprimido o cápsula rellena contiene, opcionalmente, un material gastrorresistente.

Según se lo emplea aqui, el término "excipiente" se refiere a un ingrediente inactivo (o sea, no activo farmacéuticamente) agregado a una preparación de un ingrediente activo.

El término "gen" se refiere a una secuencia de ácidos nucleicos (por ejemplo, ADN) que comprende las secuencias codificantes necesarias para la producción de un polipéptido, un precursor o ARN (por ejemplo, ARNr, ARNt) . El polipéptido puede ser codificado por una secuencia codificante de longitud completa o por cualquier porción de la secuencia codificante siempre que se conserve la actividad o las propiedades funcionales deseadas (por ejemplo, la actividad enzimática, la unión de los ligandos, la transducción de señales, la inmunogenicidad, etc.) de la longitud completa o del fragmento. El término también abarca la región codificante de un gen estructural y las secuencias ubicadas al lado de la región codificante en los extremos 5' y 3' para una distancia de 1 kb aproximadamente o más en cada extremo de manera que el gen corresponda a la longitud del ARNm de longitud completa. Las secuencias ubicadas en 5' de la región codificante y presentes en el ARNm se conocen como secuencias no traducidas 5'. Las secuencias ubicadas en 3 ' o corriente abajo de la región codificante y presentes en el ARNm se conocen como secuencias no traducidas 3'. El término "gen" comprende al ADNc y las formas genómicas de un gen. Una forma genómica o un clon de un gen contiene la región codificante interrumpida con secuencias no codificantes denominadas "intrones" o "regiones intercaladas" o "secuencias intercaladas". Los intrones son segmentos de un gen que se transcriben en ARN nuclear (hnRNA, por sus siglas en inglés) ; los intrones pueden contener elementos reguladores como por ejemplo intensificadores . Los intrones se quitan o se remueven de la transcripción nuclear o primaria; por lo tanto, los intrones se encuentran ausentes en la transcripción del ARN mensajero (ARNm) . El ARNm funciona durante la traducción para especificar la secuencia u orden de los aminoácidos en un polipéptido naciente.

Tal como se emplean aquí, los términos "expresión genética" y "expresión" se refieren al proceso para convertir la información genética codificada en un gen en ARN (por ejemplo, ARNm, ARNr, ARNt o snRNA) mediante la "transcripción" del gen (o sea, a través de la acción enzimática de un ARN polimerasa) , y, para genes que codifican proteínas, en una proteína mediante "traducción" de ARNm. La expresión genética se puede regular en muchas etapas del proceso. La "sobrerregulación" o la "activación" se refiere a la regulación que aumenta y/o intensifica la producción de productos de expresión genética (por ejemplo, el ARN o las proteínas) , mientras que la "subregulación" o la "represión" se refiere a la regulación que disminuye la producción. Las moléculas (por ejemplo, los factores de transcripción) que participan en la sobrerregulación o la subregulación suelen denominarse "activadores" y "represores" , respectivamente .

Además de contener introñes, las formas genómicas de un gen también pueden contener secuencias ubicadas en los extremos 5' y 3' de las secuencias presentes en la transcripción del ARN. Estas secuencias se denominan secuencias o regiones "flanqueadoras" (estas .secuencias flanqueadoras se encuentran en 5 ' o 3' de las secuencias no traducidas presentes en la transcripción del ARNm) . La región flanqueadora 5' puede contener secuencias reguladoras tales como promotores e intensificadores que controlan o afectan la transcripción del gen. La región flanqueadora 3' puede contener secuencias que indican la terminación de la transcripción, la escisión posterior a la transcripción y la: poliadenilación.

El término "natural" se refiere a un gen o producto genético aislado de una fuente natural. Un gen natural es aquel que se observa con mayor frecuencia en una población y, por lo tanto, se designa arbitrariamente como la forma "normal" o "natural" del gen. En contraste, el término "modificado" o "mutante" se refiere a un gen o un producto genético que presenta modificaciones en la secuencia y/o las propiedades funcionales (es decir, las características modificadas) cuando se lo compara con el gen o el producto genético natural. Se observa que los mutantes naturales se pueden aislar; se identifican por el hecho de que presentan características modificadas (incluso secuencias de ácidos nucleicos modificadas) en comparación con el gen o el producto genético natural.

Según se los emplea aquí, los términos "molécula de ácido nucleico codificante", "secuencia de ADN codificante" y "ADN codificante" se refieren al orden o la secuencia de desoxirribonucleotidos a lo largo de una cadena de ácido desoxirribonucleico . El orden de estos desoxirribonucleotidos determina el orden de los aminoácidos a lo largo de la cadena de polipéptidos (proteínas) . La secuencia de ADN codifica así la secuencia de aminoácidos .

Según se lo .emplea aquí, el término "eucariota" se refiere a los organismos que se distinguen de los "procariotas". Se .pretende que el término incluya a todos los organismos con células que presentan las características habituales de los eucariotas, como la presencia de un verdadero núcleo cubierto por una membrana nuclear, dentro de la que se encuentran los cromosomas, la presencia de orgánulos unidos a la membrana y otras características observadas comúnmente en los organismos eucariotas. Por lo tanto, el término comprende, entre otros, los organismos como los hongos, los protozoarios y los animales (por ejemplo, los seres humanos) .

Según se lo emplea aquí, el término " in vi tro" se refiere a un ambiente artificial y a los procesos o las reacciones que ocurren dentro de un ambiente artificial. Los ambientes in vitro pueden comprender, entre otros, los tubos de ensayo y el cultivo celular. El término " in vivo" se refiere al ambiente natural (por ejemplo, un animal o una célula) y a los procesos o las reacciones que ocurren dentro de un ambiente natural.

Los términos "compuesto de prueba" y "compuesto candidato" se refieren a cualquier entidad química, producto farmacéutico, fármaco y otros similares que son candidatos para uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad o un trastorno de la función corporal (por ejemplo, la función cognitiva, el trastorno asociado con amiloides, la circulación, la hipertensión, la enfermedad cardíaca, etc.). Los compuestos de prueba comprenden compuestos terapéuticos conocidos y compuestos posiblemente terapéuticos. Se puede determinar que un compuesto de prueba es terapéutico mediante evaluación utilizando los procedimientos de evaluación de la presente invención.

Según se lo emplea aquí, una molécula "funcional" es una molécula en una forma en la que exhibe una propiedad que la caracteriza. A modo de ejemplo, una enzima funcional es una enzima que exhibe la actividad catalítica característica que. caracteriza a la enzima.

Según se lo emplea aquí, el término "oligonucleótido antisentido" se refiere a un ácido nucleico, por ejemplo, un segmento de ARN o ADN, complementario de la secuencia de un ARN diana (o un fragmento del mismo) . Por lo general, el ARN diana es un ARNm expresado por una célula.

Según se lo emplea aquí, el término "onligonucleótido de interferencia" se refiere a un oligonucleótido capaz de inhibir la función de un producto genético objetivo, independientemente- del mecanismo de inhibición. Según se lo emplea aquí, el oligonucleótido de interferencia comprende, entre otros, los oligonucleótidos antisentido, los aptámeros, el microARN (ARNmi, por sus siglas en inglés) , el ARN corto de interferencia (ARNsi, por sus siglas en inglés) y el ARN horquillado corto (ARNsh, por sus siglas en inglés) . Los ARN cortos de interferencia contienen moléculas de ARN de cadena doble, generalmente entre 19 y 22 nt, mientras que el ARN horquillado corto,, contiene secuencias palindrómicas conectadas por secuencias de anillos, generalmente, entre 19 y 29 nt . Los procedimientos para producir oligonucleótidos de interferencia son conocidos por los entendidos en la técnica y comprenden, entre otros, la síntesis química, las técnicas de ADN recombinante o la generación a partir de una molécula precursora mayor a través de la escisión enzimática, por ejemplo, por enzimas Dicer.

Según se lo emplea aquí, el término "anticuerpo" se refiere a una inmunoglobulina o una proteina derivada de la inmunoglobulina que contiene un sitio de reconocimiento de antigeno. Los anticuerpos comprenden, entre otros, las inmunoglobulinas naturales o recombinantes que contienen dos cadenas pesadas y dos cadenas livianas, asi como formas modificadas, incluidos, por ejemplo, los anticuerpos fragmentados y los anticuerpos de cadena única que comprenden diferentes combinaciones de las porciones de las cadenas liviana y pesada. El término abarca los anticuerpos policlonales y los- monoclonales .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En esta sección, Descripción detallada de la invención, y en el Resumen de la invención, que se incorpora aqui como referencia, se describen las realizaciones especificas de la invención. Aunque la invención se ha descrito con relación a las realizaciones especificas, se entenderá que la invención, según se reivindica, no se limita indebidamente a estas realizaciones especificas. Por ejemplo, los procedimientos y las composiciones de la presente invención se describen con relación a los moduladores específicos de la actividad ?-secretasa, por ejemplo, el GLEEVEC (STI-571) mesilato de imatinib y los trastornos amiloides cerebrales específicos (por ejemplo, el mal de Alzheimer) . Se entenderá que la presente invención no se limita ni a los procedimientos ni a las composiciones que utilizan o contienen mesilato de imatinib ni al AD.

La presente invención se basa, en parte, en el sorprendente hallazgo de los autores de que la modulación de la expresión o la acumulación de ?ß en tejidos periféricos, por ejemplo, en el hígado, proporciona un efecto terapéutico en las enfermedades cerebrales relacionadas con ?ß, por ejemplo, el mal de Alzheimer. Por lo tanto, la presente invención, se relaciona, generalmente, con los procedimientos y las composiciones para prevenir o tratar un trastorno relacionado con ?ß cerebral, como por ejemplo el AD, a través de la administración de compuestos que modulan la producción y/o la acumulación de :?ß en las células, los líquidos y/o los tejidos no neuronales (o sea, periféricos) .

Según se planteó anteriormente, los péptidos ß amiloide (?ß) son metabolitos de la proteína precursora amiloide (APP) y se cree que son los determinantes patológicos más importantes del mal de Alzheimer (AD) . La APP es proteolizada por ß y ?-secretasa para producir péptidos de ?ß con una forma de 42 residuos de ?ß que se cree que es la más patogénica. La ß-secretasa es necesaria para una función cerebral saludable y, por lo tanto, no es una buena candidata para inhibir y reducir el ?ß. Varios inhibidores de ?-secretasa de penetración cerebral han presentado efectos secundarios no deseados como resultado de la interrupción de la acción ?-secretasa sobre otras dianas, en particular, la familia Notch de receptores transmembrana. Se ha descubierto que una clase de compuestos disminuye la producción de ?ß sin afectar la señalización Notch. Esta clase de compuestos comprende el inhibidor de tirosina quinasa mesilato de imatinib (STI-571, nombre comercial GLEEVEC) y el compuesto relacionado, 6- (2, 6-diclorofenil) -8-metil-2- (metilsulfanilfenil-amino) - 8fí-pirido [2 , 3-d] pirimidin-7-ona, denominado inhibidor 2 (Netzer J, y colaboradores, Proc Nati Acad Sci U S A. 100:12444-12449, 2003). Sin embargo, se ha descartado esta clase de compuestos como tratamiento de los trastornos de ?ß cerebral porque no atraviesan la barrera hematoencefálica y, por lo tanto, es casi imposible administrarlos en el tejido cerebral.

Como se indicó anteriormente, descubrimos que la modulación de la producción o la acumulación de ?ß en los tejidos periféricos, por ejemplo, en el hígado, proporciona un efecto terapéutico en enfermedades cerebrales relacionadas con ?ß, por ejemplo, el mal de Alzheimer. La presente invención proporciona procedimientos, composiciones y procesos relacionados con el tratamiento o la prevención del AD mediante el tratamiento del hígado de un individuo. En particular, la presente invención se refiere a modificar la producción, el procesamiento, la acumulación o el transporte de ?ß en el hígado de un individuo mediante la inhibición directa de la producción (por ejemplo, por inhibición de la expresión de APP) o mediante la modulación de un factor que, a su vez, modula la producción, el procesamiento, la acumulación o el transporte de ?ß en el hígado. En realizaciones preferidas, la inhibición se realiza mediante el uso de compuestos que no atraviesan considerablemente la barrera hematoencefálica . En realizaciones específicamente preferidas, las composiciones y los procedimientos de tratamiento comprenden el uso de un STI-571 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, administrado periféricamente, por ejemplo por vía oral. : El uso de una composición en la fabricación de itiedicamen'bos Imatinib es el nombre genérico [la denominación común internacional] del compuesto 4- (4-metilpiperazin- 1- ilmetil) -N- [4-metil-3- (4-piridin-3-il) pirimidin-2- ilamino) fenil] -benzamida con la siguiente fórmula I: STI-571 generalmente se refiere a la sal mesilato del imatinib, y ha sido aprobado para el tratamiento de la leucemia mieloide crónica y los tumores estromales gastrointestinales.. El uso del imatinib en el tratamiento del cáncer de mama se describe en WO 2004/032925. El imatinib, su fabricación, sus sales farmacéuticamente aceptables, por ejemplo las sales de adición de ácidos, y sus propiedades de inhibición de proteina quinasa están descritas en la Patente de Estados Unidos N.° 5.521.184, que se incorpora a la presente como referencia. :" Imatinib" corresponde a 4- ( 4-metilpiperazin-l-ilmetil) - [ 4-metil-3- ( 4-piridin-3-il) pirimidin-2-ilamino) fenil] -benzamida en forma de una base libre o la sal mesilato. La preparación del imatinib y sus usos se describen en el Ejemplo 21 de la solicitud de patente europea EP-A-0 564 409, que se incorpora a la presente como referencia.

Aunque la administración periférica no se limita a ninguna vía de administración especifica, en algunas realizaciones preferidas, la administración se realiza por vía oral. Por lo tanto, en algunas realizaciones preferidas, la presente invención comprende el uso de STI-571 en la preparación de un medicamento para administración oral para el tratamiento o la prevención de un trastorno de ?ß cerebral. En algunas realizaciones, la forma administrada por vía oral comprende un comprimido, mientras que en otras realizaciones, la forma administrada por vía oral comprende, una cápsula.

En realizaciones preferidas, la presente : invención comprende la preparación de un comprimido o una cápsula que contiene una cantidad eficaz de imatinib para disminuir los niveles de ?ß en él cerebro. Por ejemplo, una cápsula o un comprimido puede ¦ contener entre 100 y 1000 mg de un principio activo (por ejemplo, imatinib o un derivado del mismo) . Por ejemplo, un comprimido o una cápsula puede contener 100, 200,· 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 mg, o cualquier cantidad de dosis adecuada intermedia (por ejemplo, 125 mg, 1-50 mg, 175 mg, 225 mg, 250 mg... 975 mg, etc.). En algunas realizaciones, se configura un comprimido o una cápsula para contener una dosis eficaz más pequeña de imatinib, por ejemplo, entre 1 y 5 mg (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 ó 5 mg, o una fracción adecuada de los mismos), entre 6 y 10 mg, entre 11 y 15 mg, etc.

Las composiciones y las formulaciones para administración oral comprenden, por ejemplo, polvos o gránulos, suspensiones o soluciones en agua o en medio no acuoso, cápsulas, sobrecitos, obleas, tiras solubles y comprimidos. Puede resultar conveniente agregar agentes espesantes, saborizantes , diluyentes, emulsionantes, dispersantes o aglutinantes. En realizaciones preferidas, se configura un comprimido o una cápsula (u otra forma de administración periférica) para administrar una dosis de, o una cantidad equivalente a cualquier cantidad entera en mg entre 1 y 1000 mg (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, etc.), o cualquier fracción, en mg entre 1 y 1000 mg. En determinadas realizaciones, una formulación puede comprender, por ejemplo, una cápsula rellena con una mezcla de la composición : Mesilato de imatinim (STI-571) 119,5 mg (corresponde a 100 mg de base libre de imatinib) Celulosa K GR 92 mg Crospovidona XL 15 mg Aerosil 200 2 mg Estearato de magnesio 1,5 mg 230 mg En algunas realizaciones, una cápsula o un comprimido contiene una cobertura gastrorresistente .

"Gastrorresistente" se refiere al intestino delgado, por lo tanto "cobertura gastrorresistente", generalmente, se refiere a una cobertura que evita en gran medida la liberación de un medicamento antes de que llegue al intestino delgado. Aunque no se pretende limitar la invención a ningún mecanismo de acción especifico, se entiende que la mayoría de las coberturas gastrorresistentes funcionan presentando una superficie estable al pH ácido, pero que se desintegra rápidamente a un pH más alto.

Las composiciones y las formulaciones para administración parenteral pueden contener soluciones acuosas esterilizadas que también pueden contener tampones, diluyentes y otros aditivos adecuados, como compuestos de vehículo y otros vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables, entre otros.

Las formulaciones farmacéuticas de la presente invención, que pueden presentarse a los efectos prácticos en una fórmula de dosificación unitaria, se pueden preparar según técnicas convencionales muy conocidas en la industria farmacéutica. Estas técnicas comprenden la etapa de mezclar los principios activos con los excipientes o los: vehículos farmacéuticos. En general, las formulaciones se preparan mezclando en forma uniforme y a fondo los principios activos con los vehículos líquidos o los vehículos sólidos en partículas finas o ambos, y luego, si resulta necesario, dando forma al producto.

Se ha evaluado la farmacocinética del mesilato de imatinib (GLEEVEC) en estudios en individuos sanos y en estudios de farmacocinética en la población. El imatinib se absorbe bien luego de la administración por vía oral, la CmáX se logra entre las 2 y las 4 horas después de la administración. La biodisponibilidad absoluta media es del 98%. Después de la administración por vía oral a voluntarios sanos, los valores de semivida de la eliminación del imatinib y de su principal metabolito activo, el derivado de N-desmetil, son 18 y . 40 horas aproximadamente, respectivamente. El AUC (siglas en inglés del área bajo la: curva de concentración plasmática del fármaco en función del tiempo) de imatinib medio aumenta proporcionalmente con mayores dosis entre 25 mg y 1000 mg. No se observan cambios importantes en la farmacocinética del imatinib con la administración repetida, y la acumulación es de 1,5 a 2,5 veces en estado estacionario cuando se administra una vez al día. A concentraciones pertinentes desde el punto de vista clínico de imatinib, la unión a proteínas plasmáticas en experimentos in vitro es del 95% aproximadamente, principalmente a la albúmina y a la glicoproteína ácida al. Véase, por ejemplo, "Gleevec Prescribing Information", modificación de 2003 T2003-09; impreso en EE. UU . 89019001 (Novartis) .

CYP3A4 es la principal enzima responsable del metabolismo de imatinib. Otras enzimas citocromo P450, como por , ejemplo CYP1A2, CYP2D6, CYP2C9 y CYP2C19, juegan un papel de poca importancia en su metabolismo. El metabolito activo circulante más importante en los seres humanos es el derivado de piperazina N-desmetilada, formado principalmente por CYP3A . Presenta una potencia in vitro similar a la de su compuesto original imatinib. El AUC plasmático para este metabolito es de aproximadamente el 15% del AUC para el imatinib.

La eliminación se produce mayoritariamente por las heces, principalmente en forma de metabolitos. Sobre la base de la recuperación del compuesto después de la administración de :una dosis de imatinib etiquetada 14C por vía oral, aproximadamente el 81% de la dosis se eliminó en 7 dias, a través de las heces (el 68% de la dosis) y de la orina (el 13% de la dosis) . El 25% de la dosis de imatinib se mantuvo intacta (el 5% en orina, el 20% en heces) y el resto se convirtió en metabolitos.

Por lo general, se espera que la eliminación del imatinib en un paciente de 50 años que pesa 50 kg sea de 8 L/h, mientras que en un paciente de 50 años que pesa 100 kg la eliminación aumentará a 14 L/h. Sin embargo, la variabilidad del 40% entre pacientes en la eliminación no garantiza el ajuste inicial de la dosis en función del peso corporal y/o la edad, pero indica la necesidad de un control estricto de la toxicidad relacionada con el tratamiento. : Al igual que .en los pacientes adultos, se informó que el imatinib fue absorbido rápidamente luego de administración por vía oral a pacientes pediátricos, con una Cmáx de 2 y 4 horas. Los valores de eliminación oral aparente fueron similares a los valores en adultos (11,0 L/h/m2 en niños frente a 10,0 L/h/m2 en adultos), y lo mismo sucedió con la semivida de eliminación (14,8 horas en niños frente a 17,1 horas en adultos). La administración en niños de 260 mg/m2 y 340 mg/m2 produjo un AUC similar al de la administración de 400-mg en adultos. La comparación del AUC (0-24) el día 8 frente al día 1, con niveles de dosis de 260 mg/m2 y 340 mg/m2, reveló una acumulación del fármaco de 1,5 y 2,2 veces, respectivamente, después de administración repetida una vez al día. El AUC de imatinib medio no aumentó proporcionalmente con el aumento de la dosis. "Gleevec Prescribing Information", modificación de 2003 T2003-09; impreso en EE. UU. 89019001 (Novartis) .

Aunque anteriormente se empleó la modulación de la producción de ?ß en el hígado mediante el tratamiento con imatinib a modo ejemplar, la presente invención no se limita al tratamiento del hígado con este compuesto y proporciona procedimientos generales para tratar a un individuo contra un trastorno de ?ß cerebral o una predisposición a un trastorno de ?ß cerebral, que comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la expresión de un gen en un tejido periférico de dicho individuo. En realizaciones preferidas, la modulación de la expresión del gen mencionado provoca la modulación de la producción o . la acumulación de ?ß en el tejido periférico. En determinadas realizaciones preferidas, el tejido periférico es el higado del individuo.

La presente invención comprende cualquier procedimiento para afectar la producción de ?ß en el higado, inclusive, pero sin limitación, la modificación de la expresión y/o el procesamiento de la APP. En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos que- comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la expresión de uno o más de los genes Psen 1, Apo E, InsP3R, Psen2, APP, Cibl, Ngrn, Zfhxlb, CLU (también denominado ApoJ) , PICALM y CR1. En algunas realizaciones, los procedimientos de la presente invención comprenden la administración periférica de un compuesto que modula la actividad o la expresión de uno o más de presenilina 2, calmyrin, neugrin, Zfhxlb, clusterina, proteina de ensamblaje clatrina unida a fosfoinositol, receptor 1 de componente de complemento o APP. En algunas realizaciones, se modula uno o más de estos genes o actividades en el hígado del individuo. En algunas realizaciones, la modulación comprende la inhibición de la expresión o la · actividad, mientras que en otras realizaciones, la modulación comprende la estimulación de la expresión o la actividad.

Evaluación y control de trastornos de ?ß cerebral durante el tratamiento periférico La presente invención se refiere a la evaluación y el tratamiento del AD y el riesgo de AD mediante la evaluación y administración' en tejidos periféricos (o sea, no cerebrales) de un individuo. Como se plantea más adelante, el presente estudio demuestra que la expresión de presenilina 2 en . el hígado y/o en uno o más tejidos periféricos modifica la acumulación de ?ß, y que la disminución de ?ß en la periferia es suficiente para modificar su depósito en el cerebro. Por lo tanto, a pesar de que en la bibliografía se ha afirmado ampliamente lo contrario, no es necesario que un tratamiento terapéutico o profiláctico eficaz contra el AD que reduzca la acumulación de ?ß atraviese la barrera hematoencefálica e ingrese al cerebro. La inhibición de la actividad ?-secretasa o Psen2, o la reducción de la producción o la acumulación de ?ß por otros medios, por fuera del sistema nervioso central (es decir, por fuera de la barrera hematoencefálica) , resulta útil en la protección del cerebro contra patologías relacionadas con ?ß. El tratamiento de tejidos periféricos tiene el beneficio adicional de proteger al cerebro de cualquier efecto secundario que pueda surgir si el agente terapéutico ingresa al cerebro.

En algunas realizaciones, la presente invención proporciona procedimientos para personalizar los tratamientos según el estado bioquímico de un individuo o un paciente. Se considera que las características de las dosis eficaces de uno o más de los compuestos seleccionados para la modulación de ?ß en un tejido periférico pueden resultar afectadas por las circunstancias bioquímicas específicas de un individuo o un paciente, incluidas, entre otras, la presencia de otros fármacos o medicamentos (por ejemplo, para el tratamiento de un trastorno de ?ß o una afección no relacionada) , o los cambios bioquímicos provocados por otras circunstancias. La presente- invención proporciona procedimientos que comprenden controlar a un individuo mediante la evaluación de dicho individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral antes y después de la administración de un compuesto que modula la producción de ?ß, por ejemplo, en el hígado. En algunas realizaciones, el tratamiento contra un trastorno de ?ß cerebral se selecciona, ajusta o modifica según corresponda.

EJEMPLOS EXPERIMENTALES Se proporciona el siguiente ejemplo para demostrar e ilustrar mejor determinadas realizaciones preferidas y aspectos de la presente invención, y no se debe interpretar que limita el alcance de la misma.

EJEMPLO 1 Identificación de los modificadores del desarrollo de una patología del tipo del AD Se han desarrollado modelos de ratones transgénicos que recapitulan características fundamentales del mal de Alzheimer humano. Se ha unido el gen APP con algunas de las variaciones predisponentes al AD en humanos a varios promotores de transcripción e introducido en la línea germinal de los ratones (Games D, Adams D, Alessandrini R, Barbour R, Berthelette P, Blackwell C, Carr T, Glemens J, Donaldson T, Gillespie F, y colaboradores, Nature 373:523- 527; Hsia AY, Masliah E, McConlogue L, Yu GQ, Tatsuno G, Hu K, Kholodenko D, Malenka RC, Nicoll RA, Mucke L. Proc Nati Acad Sci U S A. 96:3228-3233, 1999; Hsiao K, Chapman P, Nilsen S, Eckman C, Harigaya Y, Younkin S, Yang F, Colé G. Science 274:99-102, 1996; Sturchler-Pierrat C, Abramowski D, Duke , iederhold KH, Mistl C, Rothacher S, Ledermann B, Bürki K, Frey P, Paganetti PA, Waridel C, Calhoun ME, Jucker M, Probst A, Staufenbiel M, Sommer B. Proc Natl Acad Sci U S 94:13287-13292, 1997; Moechars D, Dewachter I, Lorent K, Reversé D, Baekelandt V, Naidu A, Tesseur I, Spittaels K, Haute CV, Checler F, Godaux E, Cordell B, Van Leuven F. J Biol Chem. 274:6483-6492, 1999; Richardson JC, Kendal CE, Anderson R, Priest F, Go er E, Soden P, Gray R, Topps S, Howlett DR, Lavender D, Clarke NJ, Barnes JC, Haworth R, Stewart MG, Rupniak HT . Neuroscience 122:213-228, 2003; Buttini M, Yu GQ, Shockley K, Huang Y, Jones B, Masliah E, allory M, Yeo T, Longo FM, Mucke L. J Neurosci. 22:10539-10548, 2002). Los ratones transgénicos resultantes desarrollan depósitos de ?ß, pero el momento varia entre los 3 y los 15 meses de edad. Las variables que explican estas · diferencias de edad comprenden el promotor de transcripción especifico elegido, las mutaciones en el gen APP predisponentes al AD especificas, el lugar cromosómico de la integración transgénica y la cepa de trasfondo del ratón sobre la que se perpetúa el transgen (reseñado en Bloom FE, Reilly JF, Redwine JM, Wu CC, Young WG, orrison JH. Arch Neurol. 62:185-187, 2005).

Un informe (Kulnane LS, Lamb BT . _Neurobiol Dis. 8:982- 992, 2001) presentó el R1.40, un transgen de APP humana con las llamadas mutaciones suecas (K670N, M671L, variaciones que predisponen a esos seres humanos a heredar este gen mutado para desarrollar AD de aparición temprana) a un trasfondo genético de ratón de una mezcla de C57Bl/6xl29/Sv. La expresión del transgen R1.40 fue extraída del promotor de APP humana natural. Los depósitos de ?ß comenzaron a resultar perceptibles en los cerebros de los ratones entre los 14 y los 16 meses. Posteriormente, el transgen Rl.40 se cruzó a partir de su trasfondo inicial por separado en los trasfondos C57B1/6 (B6) , DBA/2 (D2) y 129/Sv. Luego, se reprodujo cada una de estas 3 cepas hasta consanguinidad: 10· o más retrocruzamientos hasta obtener el mismo trasfondo de manera de crear 3 cepas transgénicas con trasfondos uniformes pero diferenciados (Lehman EJ, Kulnane LS, Gao Y, Petriello MC, Pimpis KM, Younkin L, ; Dolios G, Wang R, Younkin SG, Lamb BT . Hum Mol Genet . 12: 2949-2956, 2003) . Aunque las' tres cepas transgénicas produjeron la misma cantidad de precursor de APP (lo que indicó que el transgen se expresó en forma similar en los 3 trasfondos de cepas) , B6 acumuló más ?ß (el fragmento patogénico de la APP) al medirse por ELISA en los homogenatos cerebrales y el plasma a los 21 y los 60 días que las otras dos cepas, y desarrolló depósitos de amiloides característicos del AD humano AD a los 13,5 meses, mientras que los D2 permanecieron protegidos (sin presencia de depósitos a los dos años) . Por lo tanto, esto indica que hay genes que distinguen a los ratones B6 y D2 y que modifican el desarrollo de una patología del tipo del AD, y que es muy probable que participen en la acumulación de la sustancia patogénica ?ß (Lehman EJ, Kulnane LS, Gao Y, Petriello MC, Pimpis KM, Younkin L, Dolios G, Wang R, Younkin SG, Lamb BT. Hum Mol Genet. 12:2949-2956, 2003). Las identidades de los genes modificadores podrían sugerir modalidades terapéuticas o profilácticas que imitarían el efecto modificante y retrasarían o impedirían la aparición de la patología del AD.

Por lo tanto, para asignar los genes modificadores a los intervalos cromosómicos, Ryman y sus colegas. (Ryman D, Gao Y, Lamb BT. Neurobiol Aging 29:1190-1198, 2008) cruzaron ratones B6 R1.40 hembra (homozigotos para el transgen) con ratones D2 R1.40 macho (también homozigotos para el transgen) , después cruzaron sus crías Fl (que tenían 2 copias del transgen R1.40) con crías B6 x D2 Fl no transgénicas, generando ratones 516 F2, cada uno con un único transgen. Estos se genotipificaron con 909 SNP. Se midió el ?ß mediante ELISA en homogenatos cerebrales de los 516 ratones. Un análisis de regresión correlacionando la cantidad de acumulación de ?ß con los genotipos de los 516 ratones permitió asignar 3 locus modificadores a las regiones amplias centradas en las siguientes posiciones: cromosoma 1, 182,049374 megabases (Mb) ; cromosoma 2, 41,216315 Mb; cromosoma 7, 63,680922 Mb.

Identificación de un gen modificador El gen de ratón codificante de presenilina 2, Psen2, se ubica en el cromosoma 1 en 182,06371 megabases, el centro del intervalo del locus de rasgo genético, lo que sugiere que es un candidato para modificar la acumulación y el depósito de ?ß. Esto coincide con su función como componente de la ?-secretasa. Para que el Psen2 represente el verdadero modificador mapeado al cromosoma 1 por Ryman y sus colegas, su actividad debe variar hereditariamente (de forma mendeliana) entre las cepas de ratones B6 y D2, y la actividad de Psen2 debe ser mayor en ratones B6 que en ratones D2, porque seria de esperar que una actividad ?-secretasa más baja resulte protectora en el AD. Se investigó este tema mediante la determinación de la cantidad de ARNm del gen Psen2 que se acumula en diversos tejidos en cepas de ratones B6 y D2 y hasta 89 cepas de ratones de lineas endogámicas recombinantes mediante el cruzamiento de ratones B6 y D2 y la reproducción de las crias hasta consanguinidad. Las concentraciones de cada uno de más de 20.000 ARNm en 10 tejidos (cerebro, cerebelo, hígado, cuerpo estriado, riñon, hipocampo, ojo, corteza prefrontal, núcleo accumbens y neocortex) de cepas de ratones B6 y D2 y las 89 cepas de ratones de líneas endogámicas recombinantes se encuentran disponibles en las bases de datos públicas reunidas en http://www.GeneNetwork.org. Para cada una de las 89 cepas de ratones de líneas endogámicas recombinantes, se ha determinado por genotipificación si la cepa heredó cada intervalo de su genoma del padre B6 o D2.

La sonda rsl3476267 se ubica en el cromosoma 1 en 182,120454 b. Empleando el software del sitio público de Internet genenetwork.org/webqtl/WebQTL.py, se realizaron correlaciones de rasgos genéticos entre el genotipo del intervalo rsl3476267 y la cantidad de ARNm de Psen2 que se acumula en cada uno de los 10 tejidos en las hasta 89 cepas de ratones de líneas endogámicas recombinantes, calculando así el coeficiente de correlación producto-momento de Pearson. Los valores fueron: cerebro |r|>0,05 cerebelo r = 0,6344 hígado r = -0, 402 cuerpo estriado r = 0,5329 riñon r = -0,4733 hipocampo |r|>0,36 ojo |r|>0,35 corteza prefrontal |r |>0, 51 núcleo accumbens r = 0,7260 neocortex r = 0,5500 Ninguna de las muestras de tejido derivadas del cerebro muestra heredabilidad alta (|r|>0,9) de expresión de Psen2, y para las dos regiones del cerebro que presentan heredabilidad baja de expresión de ARNm de Psen2, el cerebelo y el núcleo accumbens, se correlacionó el ARNm de Psen2 más con el genotipo D2 que con el genotipo B6. Por lo tanto, la expresión de Psen2 en el cerebro -no es un modificador de la acumulación de ?ß . Sin embargo, en el hígado, la cantidad de ARNm de Psen2 se correlacionó en gran medida con el genotipo en el locus de Psen2 (Figura 1A) . Además, los ratones B6 expresan más ARNm de Psen2 que los ratones D2.

Los datos demuestran que la expresión de Psen2 en el hígado o en uno o más tejidos periféricos modifica la acumulación de ?ß, y que la disminución de ,?ß en la periferia es suficiente para modificar su depósito en el cerebro. Por lo tanto, a pesar de que en la bibliografía se ha afirmado ampliamente lo contrario, sobre la base al menos en parte de la suposición natural de que una enfermedad cerebral sería causada por eventos que ocurren dentro del cerebro, no es necesario que un tratamiento terapéutico o profiláctico eficaz contra el AD que reduzca la acumulación de ?ß atraviese la barrera hematoencefálica e ingrese al cerebro. La inhibición de la actividad ?- secretasa o Psen2, o la reducción de la producción o la acumulación de ?ß por otros medios, por fuera del sistema nervioso central, resultan suficientes para proteger el cerebro del depósito de ?ß y, a su vez, protege el cerebro de cualquier efecto secundario que pudiera surgir si el agente terapéutico ingresara al cerebro. Se puede lograr tratar la acumulación de ?ß en la periferia utilizando vías de administración de fármacos que no comprenden la administración directa al CNS (por ejemplo, por administración al LCR) , por ejemplo, mediante la administración oral.

EJEMPLO 2 Administración periférica de STI-571 mesilato de imatinib para disminuir el ?ß en el cerebro Los datos del estudio de mapeo y nuestras ideas sugieren una nueva vía terapéutica para tratar el AD (su aparición, su avance o su gravedad) sobre la base de la modulación de la producción de ?ß en el hígado. La nueva estrategia terapéutica se basa en que un fármaco que disminuye los niveles en estado estacionario de ?ß en la sangre (mediante la inhibición de la producción de ?ß en el hígado) reduciría la concentración de ?ß en el cerebro.

Se diseñó un experimento para evaluar el efecto de la administración de STI-571 mesilato de imatinib sobre los niveles de proteína ?ß en el tejido cerebral y sanguíneo en 2 cepas de ratones. Se administró STI-571 mesilato de imatinib por inyección IP a los ratones a lo largo de una semana, se extrajeron muestras de cerebro y de tejido y se midieron los niveles de proteína ?ß por ELISA en Western blot.

Se administró el fármaco o vehículo a ratones C57B1/6 y DBA/2J naturales machos (de 8-12 semanas) dos veces al día durante 7 días por inyección intraperitoneal . Se inyectaron 100 ul de solución salina a los grupos de vehículo (n=4 animales por cepa) y se administraron 1, 10 o 100 mg/kg de STI-571 (GLEEVEC imatinib, sal metanosulfonato, N.° en catálogo 1-5508, LC laboratories, Woburn, MA) a los grupos de tratamiento con fármaco (n=4). La dosis de STI-571 recetada para pacientes humanos con cáncer es de 100 mg a 1000 mg. Véase, por ejemplo, Gleevec Prescribing Information, modificación de 2003 T2003-09; impreso en EE. UU . 89019001 (Novartis) , que se incorpora a la presente como referencia.

Se sacrificaron los animales 12 h después de la última inyección. Se anestesiaron ratones específicos con isoflurano y se extrajeron muestras de sangre (100-300 ul) por punción cardíaca con jeringas heparinizadas . Se colocaron las muestras en hielo durante 30 minutos en presencia de EDTA y luego se centrifugaron durante 20 minutos a 16.000xg a 4°C. Se extrajo la fracción de plasma y se almacenó a -80 °C. Se extrajeron los cerebros y se congelaron rápidamente sobre hielo seco y se almacenaron a -80 °C.

La detección de ?ß?_4? de ratones en las muestras de sangre y de cerebro se realizó utilizando un kit de inmunoensayo disponible en el mercado (Biosource mouse ?ß?_ 40, N.° en catálogo KMB3481, Invitrogen, Carlsbad, CA) o por Western blot. Se prepararon las muestras de cerebro de ratón mediante homogenización del tejido cerebral en un politrón en presencia de clorhidrato de guanidina 5M y Tris HC1 50 mM, pH 8.0, según se describe en el protocolo del ensayo (véase, por ejemplo, Masliah, E., y colaboradores, (2001) ß amyloid peptides enhance -synuclein accumulation and neuronal déficits in a transgenic mouse model linking Alzheimer's disease and Parkinson' s disease. PNAS 98:12245- 12250; Johnson-Wood, K, y colaboradores (1997) Amyloid precursor protein processing and A beta42 deposition in a transgenic mouse model of Alzheimer disease PNAS 94:1550- 1555; y Chishti, M.A., y colaboradores (2001); Early-onset amyloid deposition and cognitive defects in transgenic mice expressing a double mutant form of amyloid precursor protein 695. J. Biol. Chem. 276:21562-21570).

Para el ensayo, se diluyeron homogenatos cerebrales 1:10 en un tampón de reacción que contenia solución salina con tampón fosfato Dulbecco con BSA al 5% y Tween-20 al 0,03%; complementado con un combinado inhibidor de proteasa (N.° en catálogo 539131, EMD Biosciences, La Jolla, CA) . Se diluyeron 1:5 las muestras de sangre en tampón de dilución estándar. Las muestras se sometieron a un ensayo por duplicado y se midió el OD450 en un lector de placas Tecan infinite 2000.

Se extrajo ?ß oligomérico en la fracción SDS esencialmente según se describió (T. Kawarabayashi, y colaboradores, Neurosci 21, 372 (2001) ) . Para los Western blots, se sometieron las muestras a análisis PAGE, se traspasaron a membranas PVDF y se visualizaron los hexámeros de ?ß utilizando un anticuerpo monoclonal 4G8 dirigido contra ?ß de ratón (1:1,000; Covance) utilizando el protocolo recomendado por el fabricante. Se analizaron las membranas de transferencia por densitometria y luego se volvieron a analizar con un anticuerpo a histona H3 (1:50,000; Abcam) como control de carga y de transferencia. Los datos se presentan como densidad óptica normalizada.

Los niveles de ?ß en el cerebro y en la sangre fueron diferentes entre ¦ las dos cepas de ratones evaluados (C57B1/6 y DBA/2J) . Los niveles de ?ß fueron mayores en las muestras de cerebro y de sangre de ratones C57B1/6 en comparación con los ratones DBA/2J en los grupos de control tratados con vehículo, según se mostró previamente.

La Figura 3 muestra los efectos del STI-571 administrado periféricamente sobre los niveles de ?ß en el plasma y en el cerebro. En la Fig. 3A, se observan Western blots que muestran niveles de hexámeros de ?ß en' el plasma de ratones D2 jóvenes tratados con vehículo salino (carriles 1,2, 9: y 10) o STI-571 en tres dosis: los carriles 3, 4, 11 y 12 muestran resultados con 1 mg/kg; los carriles 5, 6, 13 y 14 muestran los resultados con 10 mg/kg; y los carriles 7, 8, 15 y 16 muestran los resultados con 100 mg/kg; n=4 por grupo. La Fig. 3B muestra una cuantificación en gráfica de barras de las imágenes del Western blot en la Fig. 3A. En la Fig. 3C, se observa un Western blot que muestra niveles de hexámeros de ?ß en extractos de cerebro de ratones B6 jóvenes tratados con vehículo salino o STI-571, 20 mg/kg (n=10 por grupo en total; en el Western blot sólo se observa n=5) . La Fig. 3D muestra una cuantificación en gráfica de barras de las imágenes del Western blot de la Fig. 3C. Las Fig. 3E y 3F muestran gráficas de barras que indican niveles de hexámeros de ?ß en extractos de cerebro (E) o plasma (F) de ratones B6 adultos tratados con vehículo salino o STI-571, 20mg/kg (n=4 por grupo) .

Se observó una reducción de ?ß en el plasma dependiente de dosis (Fig. 3A-B) , y la dosis más alta redujo el ?ß circulante en 75% aproximadamente. Se seleccionó una dosis intermedia, 20 mg/kg, para el estudio de los efectos en el cerebro. Esta dosis redujo los niveles de ?ß en el cerebro y en el plasma en 50% aproximadamente en ratones B jóvenes y adultos (Fig. 3B y 3C) . Se ha observado que estos niveles de ?ß resultan protectores en el modelo de ratones R1.40 (E.J. Lehman, y colaboradores, Hum Mol Genet 12, 2949 (2003)).

Estos resultados demuestran que el tratamiento a corto plazo (una semana) con STI-571 mesilato de imatinib disminuye considerablemente los niveles de ?ß en. la sangre y en el cerebro. Además, como el fármaco no atraviesa perceptiblemente la barrera hematoencefálica a las concentraciones utilizadas en este estudio, los resultados indican que el STI-571 mesilato de imatinib puede modificar indirectamente los niveles del ?ß cerebral mediante la modulación periférica de la producción de ?ß .

EJEMPLO 3 Identificación de los genes candidatos modificadores de los cromosomas 2 y 7 Los estudios descritos anteriormente demuestran que probablemente el ?ß patogénico provenga del hígado. Utilizando la misma base de datos y metodología mencionadas anteriormente, también buscamos genes que se mapearan a los intervalos de los cromosomas 2 y 7, y cuyas actividades en el hígado variaran hereditariamente entre las cepas de ratones B6 y D2.

El marcador rs4226715 se ubica en el cromosoma 7 en 80,138616 Mb dentro del locus modificador para ese cromosoma. Dos genes de este intervalo presentaron una heredabilidad de expresión dentro del hígado extremadamente alta: el gen Ngrn y el gen Cibl. El gen Ngrn codifica al neugrin, una proteína ampliamente expresada de función desconocida cuya expresión aumenta en algunos tipos de cáncer y que se ha asociado con la diferenciación de neuroblastomas (S. Ishigaki, y colaboradores, Biochem Biophys Res Commun 279, 526 (2002), S.R. Hustinx, y colaboradores, Cáncer Biol Ther 3, 1254 (2004)), y el gen Cibl, que codifica al calmyrin, una proteína asociada a una membrana de unión al calcio y al integrin miristoilada descubierta originariamente debido a su interacción preferencial con la presenilina 2 en células HeLa (S.M. Stabler, y colaboradores, J Cell Biol 14, 145, 1277 (1999) ) . Estos genes presentaron las correlaciones más altas: Valores de Pearson r = 0,945; y r = -0,913; respectivamente, ambos p < 4,99 e-39, (Fig. 5 y 4, respectivamente) . Ngrn se ubica en el cromosoma 7 en 80, 138736 Mb y Cibl en 80, 101507, lo que coincide en ambos casos con el locus modificador mapeado.

Como se indicó anteriormente, se ha demostrado que el calmyrin presenta interacción con la presenilina 2. Sin embargo, como la distribución del calmyrin en el cerebro no se correlaciona bien ni con la distribución de la presenilina en el cerebro ni con las regiones más susceptibles a una patología de AD, los estudios anteriores han considerado su posible rol como colaborador para la producción de ?ß en el prosencéfalo, pero consideraron que dicho rol sería poco probable (M. Blazejczyk, y colaboradores, Biochim Biophys Acta 1762, 66 (2006)). Sin embargo, el calmyrin es altamente expresado por el hígado (S.M. Stabler, mencionado anteriormente). Una actividad sugerida del calmyrin es como ligando de proteína para el canal de liberación del receptor de inositol 1,4,5-trisfosfato Ca(2+) (C. White, y colaboradores, J Biol Chem 281, 20825 (2006).), cuya actividad de regulación es aberrante en células de pollo transfectadas con genes de presenilina mutantes (K.H. Cheung, y colaboradores, Neuron 58, 871 (2008)).

La heredabilidad de la expresión del ARNm de calmyrin en el hígado fue extremadamente alta. En todas las cepas que heredaron sus genes Cibl de padres B6, la cantidad de ARNm de calmyrin fue mayor que la cantidad observada en las cepas que heredaron sus genes Cibl de padres D2 (Figura 5A) . Una cepa (línea 73) parece ser heterocigótica en la sonda, pero expresa cantidades de ARNm de calmyrin similares a D2. Esto sugiere que una expresión baja de calmyrin en el hígado disminuye la acumulación de ?ß en el cerebro y protege a los ratones de sus efectos adversos.

El tratamiento con un compuesto que disminuye la actividad potenciadora de ?ß de calmyrin debe imitar la baja expresión del genotipo D2 y, por lo tanto, resultará protector.

El neugrin presenta una correlación inversa (Fig. 4). La abundancia de neugrin en el hígado se correlaciona con una disminución de la acumulación de ?ß, lo que sugiere que el tratamiento con un compuesto que aumente el neugrin debería resultar protector.

El marcador rs3669981 se ubica en el cromosoma 2 en 44,943029 Mb, dentro del locus modificador bastante amplio para ese cromosoma. El gen Zfhxlb (44,810557. Mb) , que codifica la proteína Ib homeobox de dedo de zinc, mostró la mayor correlación:, r = -0,919; p = 4,99 e-39 (Fig. 5B) . La proteína Zfhxbl es un correpresor transcripcional de interacción con Smad que participa en la señalización nt y hedgehog (G. Bassez, y colaboradores, Neurobiol Dis 15, 240 (2004); G. Verstappen, y colaboradores, Hum Mol Genet 17, 1175 (2008); N. Isohata, y colaboradores, Int J Cáncer 125, 1212 (2009).). Las variantes perjudiciales del gen provocan el trastorno del desarrollo conocido como síndrome de owat-Wilson, que se presenta con varios déficits congénitos, incluido el retardo mental (C. Zweier, y colaboradores, Am J Med Genet 108, 177 (2002)). Aunque el ARNm de Zfhxlb se expresa mucho durante el desarrollo, especialmente dentro del sistema nervioso, en el ratón adulto se expresa mayoritariamente en el hígado (G. Bassez, mencionado anteriormente) . El gen Zfhxlb se ubica en el cromosoma 2 en 44.810557 Mb, lo que coincide con el locus modificador mapeado. La heredabilidad de la expresión de ARNm en el hígado fue extremadamente alta para este gen. En casi todas las cepas que heredaron sus genes Zfhxlb de padres B6, la cantidad de ARNm de Zfhxlb fue mayor que en las cepas que heredaron sus genes Zfhxlb de padres D2 (Figura 5B) . Las cepas 12 y 36 presentaron diferencias en su genotipo en la sonda, pero presentaron niveles similares de ARNm. Estos datos sugieren que una expresión baja de Zfhxlb en el hígado disminuye la acumulación de ?ß en el cerebro y protege a los ratones de sus efectos adversos. El tratamiento con un compuesto que inhibe la actividad de Zfhxlb debe imitar la baja expresión del genotipo D2 y, por lo tanto, resultará protector.

Todas las publicaciones y las patentes mencionadas en la memoria anterior se incorporan a la presente como referencia. Además, la solicitud provisional de Estados Unidos N.° 61114459 se incorpora a la presente como referencia en su totalidad. Para los entendidos en la técnica resultarán evidentes las diversas modificaciones y variaciones de las composiciones y procedimientos de la invención descritos, sin que esto implique apartarse del espíritu y el alcance de la invención. Aunque la invención se ha descrito con relación a las realizaciones preferidas específicas, se entenderá que la invención, según se reivindica, no debe limitarse indebidamente a estas realizaciones específicas. En realidad, se pretende que las diversas modificaciones a las maneras descritas de llevar a cabo la invención que resultan obvias para los entendidos en los campos pertinentes queden comprendidas dentro del alcance de la presente invención.

Claims

REIVINDICACIONES

1. El uso de imatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para la modulación de la producción de ?ß en · un tejido periférico de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

2. El uso de imatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para la modulación de la producción de ?ß en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

3. El uso según la Reivindicación 1 o la Reivindicación 2 en el cual el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer.

4. El uso según las Reivindicaciones 1 a 3 en el cual el medicamento se formula para la administración oral.

5. El uso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4 en el cual el compuesto además contiene una cantidad eficaz de un segundo agente terapéutico para el tratamiento de un trastorno de ?ß cerebral.

6. El uso según la Reivindicación 5 en el cual el segundo agente terapéutico comprende un agente seleccionado del grupo que incluye los cannabinoides, el dimebon, la prednisona, el ibuprofeno, el naproxen, la indometacina; las estatinas, las moléculas selectivas del receptor de estrógenos, los antihipertensores, los alfabloqueadores, los betabloqueadóres, los alfa-beta bloqueadores, los inhibidores de la . enzima convertidora de angiotensina, los bloqueadores de los receptores de la angiotensina, los bloqueadores de los canales de calcio, los diuréticos, los NSAID y los antioxidantes.

7. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el cual el imatinib se encuentra en forma de la sal mesilato.

8. El uso de un compuesto seleccionado del grupo que abarca un compuesto de WGB-BC-15, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E20:12, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, y/o una .sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la producción de ?ß en el tejido .periférico de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

9. El uso de un compuesto seleccionado del grupo que abarca un compuesto de WGB-BC-15, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, y/o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la producción de ?ß en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

10. El uso según la Reivindicación 8 o la Reivindicación 9 en el cual el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer.

11. El uso según cualquiera de las Reivindicaciones 8 a 10 en el cual el medicamento se formula para administración oral.

12. El uso según cualquiera de las Reivindicaciones 8 a 11 en el cual el compuesto además contiene una cantidad eficaz de un segundo agente terapéutico para el tratamiento de un trastorno de ?ß cerebral.

13. El uso según la Reivindicación 12 en el cual el segundo agente terapéutico comprende un agente seleccionado del grupo que incluye los cannabinoides , el dimebon, la prednisona, el ibuprofeno, el naproxeno, la indometacina ; las estatinas, las moléculas selectivas del receptor de estrógenos, los antihipertensores , los alfabloqueadores , los betabloqueadores, los alfa-beta bloqueadores, los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, los bloqueadores de los receptores de la angiotensina, los bloqueadores de los canales de calcio, los diuréticos, los NSAIDS y los antioxidantes.

14. Un procedimiento para tratar a un individuo contra un trastorno de ?ß cerebral o una predisposición a un trastorno de ?ß cerebral que comprende la administración periférica de un compuesto que modula la producción de ?ß en un tejido periférico.

15. El procedimiento de la Reivindicación 14 en el cual dicha modulación comprende la inhibición.

16. El procedimiento de la Reivindicación 14 en el cual el compuesto, tiene un coeficiente de partición menor que 2,0.

17. El procedimiento de la Reivindicación 16 en el cual el coeficiente de partición es menor que 1,5.

18. El procedimiento de la Reivindicación 17 en el cual el coeficiente de partición es menor que 1,0 aproximadamente.

19. El procedimiento de la Reivindicación 14 en el cual el compuesto :no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .

20. Un procedimiento para tratar a un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o una predisposición a un trastorno de ?ß cerebral que comprende la administración periférica de un compuesto que modula la expresión de un gen en un tejido periférico del individuo.

21. El procedimiento de la Reivindicación 14 ó 20 en el cual el tejido periférico es el hiqado.

22. El procedimiento de la Reivindicación 20 en el cual el gen se selecciona del grupo que comprende Psen2, APP, Cibl, Ngrn y .Zfhxlb.

23. El procedimiento de la Reivindicación 14 ó 20 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de uno o más de presenilina 2, calmyrin, neugrin, Zfhxlb o APP.

24. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la expresión o la actividad de uno o más de presenilina 2 , calmyrin, neugrin, Zfhxlb o APP comprende la inhibición de dicha expresión o actividad.

25. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de presenilina 2 en el hígado del individuo.

26. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de calmyrin en el hígado del individuo.

27. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de neugrin en el hígado del individuo.

28. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de Zfhxlb en el hígado del individuo.

29. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de la proteina precursora amiloide (APP) en el hígado del individuo.

30. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la inhibición de la expresión o la actividad de presenilina 2 en el hígado del individuo.

31. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la expresión o la actividad de calmyrin en el hígado del individuo.

32. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la estimulación de la expresión o la actividad de neugrin en el hígado del individuo.

33. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la inhibición de un factor que disminuye la expresión o la actividad de neugrin en el hígado del individuo.

34. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la inhibición de la expresión o la actividad de Zfhxlb en el hígado del individuo.

35. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la inhibición de la expresión o la actividad de la proteina precursora amiloide (APP) en el hígado del individuo.

36. El procedimiento de la Reivindicación 23 en el cual la modulación de ?ß comprende la modulación de la expresión o actividad en el hígado de al menos dos proteínas seleccionadas del grupo que comprende la presenilina 2, la .calmyrin, el neugrin, Zfhxlb y la APP.

37. Un procedimiento que comprende: a) la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o una predisposición a un trastorno de ?ß cerebral; b) la administración periférica de un compuesto que modula la producción de ?ß en la cual el compuesto no penetra considerablemente la barrera hematoencefálica; c) la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral.

38. El procedimiento de la Reivindicación 37 en el cual la modulación de la producción de ?ß comprende la modulación de la producción de ?ß en el hígado del individuo.

39. El procedimiento de la Reivindicación 38 en el cual dicha modulación comprende la inhibición.

40. Un procedimiento que comprende: a) la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o predisposición a un trastorno de ?ß cerebral b) la administración periférica de un compuesto que modula la acumulación de ?ß en el cual el compuesto no penetra considerablemente la barrera hematoencefálica; c) la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral.

41. El procedimiento de la Reivindicación 40 en el cual la modulación de la acumulación de ?ß comprende la modulación de la acumulación de ?ß en el hígado del individuo .

42. El procedimiento de la Reivindicación 41 en el cual la modulación comprende disminuir la acumulación de ?ß en el hígado del individuo.

43. El procedimiento de cualquiera de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer.

44. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el compuesto comprende un modulador de una actividad ?-secretasa.

45. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el compuesto es un modulador de una proteina que no es ?-secretasa.

46. El procedimiento de la Reivindicación 44 en el cual el compuesto- comprende un inhibidor de una actividad ?-secretasa .

47. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el . compuesto comprende un modulador de presenilina 2. :

48. El procedimiento de la Reivindicación 47 en el cual el compuesto comprende un inhibidor de presenilina 2.

49. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el compuesto comprende un modulador de escisión de la proteina precursora amiloide.

50. El procedimiento de la Reivindicación 49 en el cual el compuesto comprende un inhibidor de escisión de la proteina precursora amiloide.

51. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual la evaluación comprende una evaluación de estado mental.

52. El procedimiento de la Reivindicación 37 ó 40 en el cual la evaluación comprende pruebas neuropsicológicas .

53. El procedimiento de la Reivindicación 37 ó 40 en el cual la evaluación comprende imágenes del cerebro.

54. El procedimiento de las Reivindicaciones 37 ó 40 en el cual el compuesto comprende una composición seleccionada del grupo que comprende un compuesto de STI-571, el Compuesto 1, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012. .

55. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 42 en el cual el compuesto comprende un oligonucleótido de interferencia.

56. El procedimiento de las Reivindicaciones 1-14-42 en el cual el compuesto comprende el ARN de interferencia.

57. El procedimiento de la Reivindicación 56 en el cual el ARN de interferencia se selecciona del grupo que comprende el ARNsi, el ARNsh y el ARNmi .

58. El procedimiento de la Reivindicación 20 en el cual el ARN de interferencia comprende un ARN de interferencia dirigido hacia el ARN de la. proteina precursora amiloide.

59. El procedimiento de la Reivindicación - 56 en el cual el ARN de interferencia comprende un ARN de interferencia dirigido hacia el ARN de la Presenilina 2.

60. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 59 en el cual el compuesto además comprende un agente terapéutico conocido para tratar, mejorar o disminuir el riesgo o la gravedad de un trastorno relacionado con el ?ß cerebral.

61. El procedimiento de la Reivindicación 60 en el cual el agente terapéutico conocido se selecciona del grupo que incluye los cannabinoides, el dimebon, la prednisona, el ibuprofeno, el naproxeno, la indometacina; las estatinas, las moléculas selectivas del receptor de estrógenos, los antihipertensores, los alfabloqueadores, los betabloqueadores, los alfa-beta bloqueadores, los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, los bloqueadores de los receptores de la angiotensina, los bloqueadores de los canales de calcio, los diuréticos y los antioxidantes.

62. El procedimiento de las Reivindicaciones 14 a 61 en el cual la administración periférica comprende la administración oral.

63. Un procedimiento para evaluar el riesgo o la presencia de un trastorno de ?ß cerebral en un individuo que comprende determinar un nivel de ?ß en un tejido periférico del individuo.

64. Un procedimiento para evaluar el riesgo o la presencia de un trastorno de ?ß cerebral en un: individuo que comprende el análisis de la expresión o la actividad de un producto genético en tejido periférico del individuo.

65. El procedimiento de la Reivindicación- 64 en el cual el producto genético se selecciona del grupo que abarca Psen2, APP, Cibl, Ngrn y Zfhxlb.

66. El procedimiento de las Reivindicaciones 63 a 65 en el cual el tejido periférico es el hígado.

67. El procedimiento de las Reivindicaciones 63 a 65 en el cual el tejido periférico es la sangre.

68. El procedimiento de las Reivindicaciones 63 a 65 en el cual el tejido periférico es el suero.

69. Un procedimiento para controlar un trastorno de ?ß cerebral en un individuo que comprende determinar un nivel de ?ß en un tejido periférico del individuo-.

70. Un procedimiento de control de un trastorno de ?ß cerebral en un individuo, que comprende el análisis de la expresión o la actividad de un producto genético en el tejido periférico del individuo.

71. El procedimiento de la Reivindicación 70 en el cual el producto genético se selecciona del .grupo que comprende Psen2, APP, Cibl, Ngrn y Zfhxlb.

72. El procedimiento de las Reivindicaciones 69 a 71 en el cual el tejido periférico es el hígado.

73. El procedimiento de las Reivindicaciones 69 a 71 en el cual el tejido periférico es la sangre.

74. El procedimiento de las Reivindicaciones 69 a 71 en el cual el tejido periférico es el suero.

75. El procedimiento de las Reivindicaciones 69 a 71 en el cual el control comprende medir el ?ß en el tejido periférico en varios momentos.

76. El procedimiento de las Reivindicaciones 63 a 75 en el cual el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer .

77. Un procedimiento que comprende: a) la evaluación de un individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o la predisposición a un trastorno de ?ß cerebral; b) la administración periférica de un compuesto que inhibe el transporte de ?ß periférico a través de la barrera hematoencefálica en el cual dicho compuesto no es un anticuerpo anti-?ß.

78. El procedimiento de la Reivindicación 77 que además comprende: c) después de la administración, la evaluación del individuo para determinar la presencia de un trastorno de ?ß cerebral o el avance de un trastorno de ?ß cerebral .

79. El procedimiento de la Reivindicación 77 en el cual el trastorno de ?ß cerebral es el mal de Alzheimer.

80. Un procedimiento de identificación de una diana genética para el tratamiento de un trastorno de ?ß cerebral que comprende la comparación de un perfil de expresión genética del hígado de crías de un primer padre con dicho trastorno de ?ß o predisposición al mismo y de un segundo padre con susceptibilidad reducida a dicho trastorno de ?ß, para identificar un marcador genético hereditario con un nivel de expresión en el hígado en el cual una mayor o menor expresión de dicho marcador genético hereditario en el hígado de la cría con relación al nivel de expresión en el hígado del primer padre y del segundo padre se correlacionen con la herencia del marcador genético del segundo padre.

81. Un compuesto seleccionado del grupo que abarca un compuesto de STI-571, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación de la producción de ?ß en el tejido periférico de un individuo con un trastorno de ?ß o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß .

82. Un compuesto seleccionado del grupo que incluye un compuesto de STI-571, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación de la producción - de ?ß en el tejido periférico de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß cerebral.

83. Un compuesto seleccionado del grupo que abarca un compuesto de STI-571, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación de la producción de Ap en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß.

84. Un compuesto seleccionado del grupo que comprende un compuesto de STI-571, el Compuesto 2, LY450139, GSI-953, Flurizan y E2012, . o una variante impermeable a la barrera hematoencefálica de los mismos, para usar en la modulación de la producción de ?ß en el hígado de un individuo con un trastorno de ?ß cerebral o con predisposición a desarrollar un trastorno de ?ß' cerebral.

85. El compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 81a 84 en el cual el compuesto tiene un coeficiente de partición menor que 2,0.

86. El compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 81 a 84 en el cual el coeficiente de partición es menor que 1,5.

87. El compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 81 a 84 en el cual el coeficiente de partición es menor' que 1,0 aproximadamente.

88. El compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 81 a 84 en el cual el compuesto no atraviesa considerablemente la barrera hematoencefálica .