MX2007002043A - Usos terapeuticos de los inhibidores del rtp801. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona nuevas moleculas, composiciones, procedimientos y usos para el tratamiento de los trastornos microvasculares, enfermedades del ojo, y dolencias respiratorias basadas en la inhibicion del gen y/o la proteina RTP801.

Description

USOS TERAPÉUTICOS DE LOS INHIBIDORES DEL RTP801 Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud de patente EP con el número EP 04019405.2, presentada el 16 de agosto de 2004; de las solicitudes provisionales de los Estados Unidos con números 60/601 ,983, presentada el 17 de agosto de 2004, 60/604,668, presentada el 25 de agosto de 2004; 60/609,786, presentada el 14 de septiembre de 2004; 60/638,659, presentada el 22 de diciembre de 2004; 60/664,236, presentada el 22 de marzo de 2005 y 60/688,943, presentada el 8 de junio de 2005, todas las cuales se incorporan por la presente en su totalidad por referencia.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a nuevas moléculas de ARNsi que inhiben el gen RTP801 , y al uso de dichas moléculas para tratar trastornos respiratorios de todo tipo (entre los que se incluyen trastornos pulmonares), enfermedades y dolencias del ojo, trastornos microvasculares, dolencias relacionadas con la angiogénesis y la apoptosis.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) afecta a más de 16 millones de americanos, y es la cuarta mayor causa de muerte en los Estados Unidos. Fumar tabaco origina la mayor parte de los casos de la enfermedad debilitante, pero no se pueden excluir otros factores ambientales (Petty T L. 2003, Definition, epidemiology, course, and prognosis of COPD. Clin. Cornerstone, 5-10). El enfisema pulmonar es una manifestación principal de la COPD. La destrucción permanente de los espacios aéreos periféricos distales a los bronquiolos, es la marca característica del enfisema (Tuder R M, y col. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003). El enfisema se caracteriza también por la acumulación de células inflamatorias tales como macrófagos y neutrófilos en los bronquiolos y en las estructuras alveolares (Petty, 2003). La patogénesis del enfisema es compleja y multifactorial. En los seres humanos se ha demostrado que una deficiencia en los inhibidores de las proteasas producidas por células inflamatorias, tales como alfal-antitripsina, contribuye al desequilibrio proteasa / antiproteasa, favoreciendo de esta manera la destrucción de la matriz extracelular alveolar en el enfisema inducido por el humo del tabaco (CS) (Eriksson, S. 1964, Pulmonary Emphysema and Alphal -Antitrypsin Deficiency. Acta Med Scand 175: 197-205, Jóos, L., Pare, P. D., y Sandford, A. J. 2002, Genetic risk factors of chronic obstructive pulmonary disease. Swiss Med Wkly 132:27-37). Las metaloproteinasas de la matriz (MMP) tienen un papel principal en el enfisema experimental, tal como se documenta por la resistencia en ratones que presentan inactivación de la metaloelastasa del macrófago frente al enfisema causado por inhalación crónica de humo de tabaco (Hautamaki, y col. Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice. Science 277:2002-2004). Más aún, la sobreexpresión pulmonar de la interleuquina-13 en ratones transgénicos da como resultado enfisema dependiente de MMP y catepsina (Zheng, T., y col. 2000, Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase- and cathepsin-dependent emphysema. J Clin Invest 106:1081-1093). Trabajos recientes describen la implicación de la apoptosis de las células septales en la destrucción de tejido pulmonar que lleva al enfisema (Rangasami T, y col. Genetic ablation of Nrí2 enhances susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Submitted to Journal of Clinical Investigation; Tuder R M y col. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003; Yokohori N, Aoshiba K, Nagai A, Increased levéis of cell death and proliferation in alveolar wall cells in patients con pulmonary emphysema. Chest. 2004 Febrero; 125(2):626-32; Aoshiba K, Yokohori N, Nagai A., Alveolar wall apoptosis causes lung destruction and emphysematous changes. Am J Respir Cell Mol. Biol. 2003 Mayo; 28(5): 555-62). Entre los mecanismos que subyacen en ambas vías de destrucción pulmonar en el enfisema, debe mencionarse en primer lugar la formación excesiva de especies de oxígeno reactivas (ROS). Está bien establecido que el desequilibrio pro-oxidante / antioxidante se produce en la sangre y en tejido pulmonar de los fumadores (Hulea S A, y col. Cigarette smoking causes biochemical changes in blood that are suggestive of oxidative stress: a case-control study. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 1995; 14(3-4): 173-80; Rahman I, MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease. Am J. Physiol. 1999 diciembre; 277 (6 Pt 1 ):L1067-88; MacNee W. Oxidants/antioxidants and COPD. Chest. 2000 mayo; 117(5 Supl 1):303S-17S.; Mar ick J A, Kirkham P, Gilmour P S, Donaldson K, MacNee W, Rahman I. Cigarette smoke-induced oxidative stress and TGF-beta1 increase p21waf1/cip1 expression in alveolar epithelial cells. Ann N Y Acad Sci. 2002 noviembre; 973:278-83; Aoshiba K, Koinuma M, Yokohori N, Nagai A. Immunohistochemical evaluation of oxidative stress in murine lungs añer cigarette smoke exposure. Inhal Toxicol. 2003 septiembre; 15(10):1029-38; Dekhuijzen P N. Antioxidant properties of N-acetilcysteine: their relevance in relation to chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 2004 abril; 23(4):629-36; Tuder R M, Zhen L, Cho C Y, Taraseviciene-Stewart L, Kasahara Y, Salvemini D, Voelkel N F, y Flores S C. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29:88-97; 2003). Tras una hora de exposición de los ratones al CS, se produce un aumento importante de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina (8-OHdG) en las células epiteliales alveolares, de manera particular del tipo II (ver Inhal Toxicol. 2003 septiembre; 15(10):1029-38, más arriba).

Se sabe que las especies de oxígeno reactivas sobreproducidas muestran actividad citotóxica, que es el resultado de un efecto dañino directo sobre el ADN y de la activación de las rutas de transducción de la señal apoptótica (Takahashi A, Masuda A, Sun M, Centonze V E, Hermán B. Oxidative stress-induced apoptosis is associated with alterations in mitochondrial caspase activity and Bcl-2-dependent alterations in mitochondrial pH (pHm). Brain Res Bull. 2004 Feb. 15; 62(6):497-504; Taniyama Y, Griendling K K. Reactive oxygen species in the vasculature: molecular and cellular mechanisms. Hypertension. 2003 Diciembre; 42(6):1075-81 , Epub 2003 Oct. 27; Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress. Biochem Pharmacol. 2003 Oct. 15; 66(8): 1527-35; Punj V, Chakrabarti A M. Redox proteins in mammalian cell death: an evolutionarily conserved function in mitochondria and prokaryotes. Cell Microbiol. 2003 abril; 5(4):225-31 ; Ueda S, Masutani H, Nakamura H, Tanaka T, Ueno M, Yodoi J. Redox control of cell death. Antioxid Redox Signal. 2002 junio; 4(3):405-14). Las ROS no son sólo citotóxicas per se, sino que son también estímulos pro inflamatorios, siendo activadores prominentes de los factores de transcripción redox-sensibles NFkB y AP-1 (revisado en Rahman I. Oxidative stress and gene transcription in asthma and chronic obstructive pulmonary disease: antioxidant therapeutic targets. Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2002 septiembre; 1(3):291-315). Ambos factores de transcripción están, a su vez, fuertemente implicados en la estimulación de la transcripción de citoquinas pro inflamatorias (revisado en Renard P, Raes M. The proinflammatory transcription factor NFkappaB: a potential target for novel therapeutical strategies. Cell Biol Toxicol. 1999; 15(6):341-4; Lentsch A B, Ward Pa. The NFkappaBb/lkappaB system in acute inflammation. Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2000; 48(2):59-63), y de las proteinasas degradadoras de la matriz (Ándela V B, Gordon A H, Zotalis G, Rosier R N, Goater J J, Lewis G D, Schwarz E M, Puzas J E, O'Keefe R J. NFkappaB: a pivotal transcription factor in prostate cáncer metástasis to bone. Clin Orthop. 2003 Octubre; (415 Supl):S75-85; Fleenor D L, Pang I H, Clark A F. Involvement of AP-1 in interleukin-1apha-stimulated MMP-3 expression in human trabecular meshwork cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003 agosto; 44(8):3494-501 ; Ruhul Amin A R, Senga T, Oo M L, Thant A A, Hamaguchi M. Secretion of matrix metalloproteinase-9 by the proinflammatory cytokine, IL-1beta: a role for the dual signalling pathways, Akt y Erk. Genes Cells. 2003 junio; 8(6):515-23). Las citoquinas pro inflamatorias, a su vez, actúan como atractores de células inflamatorias que también secretan enzimas degradadoras de la matriz, citoquinas, y especies de oxígeno reactivas. De esta manera, parece que un factor patogénico, como por ejemplo CS, desencadena una red patológica en la que las especies de oxígeno reactivas se comportan como mediadores principales de la destrucción pulmonar. Tanto las especies de oxígeno reactivas (ROS) procedentes del humo del tabaco inhalado y las formadas de manera endógena por las células inflamatorias contribuyen a una mayor carga oxidante intrapulmonar.

Un factor patógeno adicional relacionado con la patogénesis por COPD es la disminución observada en la expresión de VEGF y VEGFRII en los pulmones de pacientes enfisematosos (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, y Norbert F. Voelkel. Cell Endothelial Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growing Factor and Vascular Endothelial Growing Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163, pp 737-744, 2001). Más aún, la inhibición de las señales VEGF usando el producto químico inhibidor de VEGFR lleva a la apoptosis de las células del endotelio septal alveolar y posteriormente a la apoptosis de las células epiteliales, probablemente debido a la alteración de la íntima conexión estructura / función de ambos tipos de células en el interior de los alvéolos (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, y Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106:1311-1319 (2000); Voelkel N F, Cool C D. Pulmonary vascular involvement in chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J Suppl. 2003 noviembre; 46:28s-32s).

Degeneración macular La causa más habitual de mejor visión corregida disminuida en individuos de más de 65 años de edad en los Estados Unidos es el trastorno de la retina denominado degeneración macular relacionada con la edad (AMD). A medida que la AMD progresa, la enfermedad se caracteriza por una pérdida de la visión aguda central. El área del ojo afectada por la AMD es la mácula -una pequeña zona en el centro de la retina, compuesta principalmente por células fotorreceptoras. La llamada AMD "seca", que abarca aproximadamente el 85% - 90% de los pacientes de AMD, implica alteraciones en la distribución de los pigmentos oculares, pérdida de fotorreceptores y función retiniana disminuida debidos a la atrofia global de las células. La llamada AMD "húmeda" implica la proliferación de vasos coroidales anormales que originan coágulos o cicatrices en el espacio sub-retiniano. De esta forma, la aparición de la AMD húmeda se produce debido a la formación de una red neovascular coroidal anormal (neovascularización coroidal, CNV) por debajo de la retina neural. Los vasos sanguíneos de reciente formación son demasiado permeables. Esto lleva a la acumulación de fluido subretiniano y sangre, que lleva a la pérdida de agudeza visual. Eventualmente, hay una pérdida total de retina funcional en la región implicada, ya que se forma una gran cicatriz en forma de disco que implica coroides y retina. Mientras que los pacientes de ADM seca pueden retener una visión de calidad disminuida, la AMD húmeda muchas veces da como resultado la ceguera (Hamdi & Kenney, Age-related Degeneración macular - a new viewpoint, Frontiers in Bioscience, e305-314, Mayo 2003). La CNV se produce no sólo con la AMD húmeda sino también en otras patologías oculares tales como es el síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angiodes, rupturas en la membrana de Bruch, degeneración miópica, tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas retinianas. Diferentes estudios realizados han determinado varios factores de riesgo de AMD, tales como el hábito de fumar, envejecimiento, historia familiar (Milton, Am J Ophthalmol 88, 269 (1979); Mitchell y col., Ophthalmology 102, 1450-1460 (1995); Smith y col., Ophthalmology 108, 697-704 (2001 )), sexo (7 veces más posibilidad en las mujeres: Klein y col., Ophthalmology 99, 933-943 (1992) y raza (los más susceptibles son los blancos). Entre los factores adicionales de riesgo se pueden incluir características del ojo tales como hipermetropía (hiperopía) y ojos de color claro, así como enfermedad cardiovascular e hipertensión. Se ha documentado también la evidencia de implicaciones genéticas en el comienzo y progresión de la enfermedad (ver Hamdi & Kenney más arriba). Dos empresas, Acuity Pharmaceuticals y Sima Therapeutics, han registrado ambas recientemente un IND para moléculas de ARNsi que inhiben VEGF y VEGF-R1 (Flt-1 ), respectivamente, para el tratamiento de la AMD. Estas moléculas se denominan inhibidor Candd e inhibidor 027, respectivamente.

Trastornos microvasculares Los trastornos microvasculares están compuestos por un amplio grupo de dolencias que afectan en primer lugar a los capilares y vasos linfáticos microscópicos, y por tanto quedan fuera del alcance de las intervenciones quirúrgicas directas. La enfermedad microvascular se puede agrupar a grandes rasgos en la enfermedad vasospástica, la vasculitis y la enfermedad linfática oclusiva. De manera adicional, muchas de las enfermedades vasculares conocidas tienen en ellas un elemento microvascular.

Enfermedad vasospástica - las enfermedades vasospásticas son un grupo de dolencias relativamente habituales en las que, por razones desconocidas, los reflejos periféricos vasoconstrictivos son hipersensibles. Esto da como resultado una vasoconstricción inapropiada e isquemia tisular, incluso hasta llegar a la pérdida de tejido. Los síntomas vasospásticos están relacionados normalmente con la temperatura o el uso de maquinaria vibratoria, pero pueden ser secundarios a otras dolencias.

Enfermedad vasculítica - las enfermedades vasculíticas son aquellas en la está implicado un proceso inflamatorio primario en la microcirculación. La vasculitis es habitualmente un componente del trastorno autoinmune o del tejido conectivo, y por lo general el tratamiento quirúrgico no resulta adecuado, sino que requiere tratamiento inmunosupresor si los síntomas son graves.

Enfermedad linfática oclusiva - el hinchado crónico de la extremidad inferior o superior (linfoedema) es el resultado de la oclusión linfática periférica. Es una enfermedad relativamente rara que tiene un gran número de causas, algunas heredadas, otras adquiridas. Las líneas principales del tratamiento son prendas de compresión adecuadamente ajustadas y el uso de dispositivos de compresión intermitente.

Patologías microvasculares asociadas con la diabetes La diabetes es la causa principal de ceguera, la causa número uno de amputaciones e impotencia, y unas de las enfermedades crónicas de mayor incidencia en la infancia. La diabetes es también la causa principal de enfermedad renal terminal en los Estados Unidos, con un índice de predominio del 31 % en comparación con otras enfermedades renales. La diabetes es también la causa más frecuente de transplante renal, correspondiendo al 22% de todas las operaciones de transplante. En general, las complicaciones diabéticas se pueden clasificar en grandes rasgos como enfermedad microvascular o macrovascular. Entre las complicaciones microvasculares se incluyen neuropatía (daño en los nervios), nefropatía (enfermedad renal) y trastornos de la visión (por ejemplo, retinopatía, glaucoma, cataratas y enfermedad de la córnea). En la retina, glomérulos, y vasa nervorum, similares propiedades patofisiológicas caracterizan la enfermedad microvascular específica de la diabetes. Las patologías microvasculares asociadas con la diabetes se definen como una enfermedad de los vasos sanguíneos más pequeños (capilares) que se puede producir, por ejemplo, en personas que han padecido diabetes durante largo tiempo. Las paredes de los vasos se vuelven anormalmente gruesos, pero débiles. Por tanto, sangran, pierden proteína y ralentízan el caudal sanguíneo a través del cuerpo. Los datos de los modelos clínicos y animales indican que la hiperglicemía crónica es el factor iniciador principal para todos los tipos de enfermedad microvascular diabética. Tanto la duración como la magnitud de la hiperglicemia están estrechamente correlacionadas con la extensión y velocidad de progreso de la enfermedad microvascular diabética. Aunque todas las células diabéticas están expuestas a niveles elevados de glucosa en plasma, el daño hiperglicémico está limitado a aquellos tipos de células (por ejemplo, células endoteliales) que desarrollan hiperglicemia intracelular. Las células endoteliales desarrollan hiperglicemia intracelular debido a que, a diferencia de muchas otras células, no pueden regular a la baja el transporte de glucosa cuando están expuestas a hiperglicemia extracelular. Esta hiperglicemia intracelular es necesaria y suficiente para el desarrollo de patología diabética, como se demuestra de manera adicional por el hecho que la sobreexpresión del transportador de glucosa GLUT1 en células mesangiales cultivadas en un medio de glucosa normal imita el fenotipo diabético, induciendo los mismos incrementos en la expresión de los genes de colágeno tipo IV, colágeno tipo I, y fibronectína que la hiperglicemia diabética.

Función anormal de las células endoteliales: Pronto en el curso de la diabetes mellitus, antes de que sean evidentes los cambios estructurales, la hiperglicemia causa anormalidades en el caudal sanguíneo y permeabilidad vascular en la retina, glomérulos, y vasa nervorum de los nervios periféricos. El aumento en el caudal sanguíneo y en la presión intracapilar se cree que refleja la menor producción de óxido nítrico (NO) inducida por la hiperglicemia del lado eferente del lecho capilar, y posiblemente una sensibilidad aumentada a la angiotensina II. Como consecuencia de la presión intracapilar aumentada y la disfunción de las células endoteliales, los capilares retiñíanos muestran una mayor pérdida de fluoresceína y los capilares glomerulares tienen un elevado índice de excreción de albúmina (AER). Se producen cambios equivalentes en el vasa vasorum de los nervios periféricos. Temprano en el curso de la diabetes, el aumento en la permeabilidad es reversible; según el tiempo pasa, sin embargo, se vuelve irreversible.

Incremento en la acumulación de proteínas en la pared del vaso. La característica patofisiológica común de la enfermedad microvascular diabética es el estrechamiento progresivo y oclusión final de los lumina vasculares, lo que da como resultado una perfusión y funcionamiento inadecuados de los tejidos afectados. La hipertensión microvascular temprana inducida por la hiperglicemia y la mayor permeabilidad vascular contribuyen a una oclusión irreversible de los microvasos por tres procesos: El primero es una pérdida anormal de proteínas del plasma que contienen hidratos de carbono y positivos para el , ácido periódico de Schiff (PAS) que se depositan en la pared capilar y que pueden estimular a las células perivasculares tales como los pericitos y células mesangiales para elaborar factores del crecimiento y matriz extracelular. El segundo es la extravasación de factores del crecimiento, tales como el factor del crecimiento transformante D1 (TGF-D1), que estimula directamente la sobreproducción de componentes de la matriz extracelular, y puede inducir la apoptosis en algunos tipos celulares con complicaciones relevantes El tercero es la estimulación inducida por hipertensión de la expresión de génica patológica por células endoteliales y células de apoyo, que incluyen los transportadores de glucosa glut-1 , factores del crecimiento, receptores de factores del crecimiento, componentes de la matriz extracelular, y moléculas de adhesión que pueden activar los leucocitos circulantes. La observación de que la reducción unilateral en la gravedad de la enfermedad microvascular diabética se produce en el lateral con estenosis de la arteria renal y oftálmica es consistente con este concepto.

Pérdida celular microvascular y oclusión de vasos El estrechamiento progresivo y oclusión final de los lumina microvasculares en diabéticos se acompaña también por pérdida celular microvascular. En la retina, la diabetes mellitus induce la muerte celular programada de las células de Müller y de células de ganglio, pericitos, y células endoteliales. En los glomérulos, la función renal en declive está asociada con la amplia oclusión capilar y pérdida de podocitos, pero los mecanismos que subyacen en la pérdida de células glomerulares no se conocen aún. En los vasa nervorum, se produce la degeneración de células endoteliales y pericitos, y estos cambios microvasculares parecen preceder el desarrollo de neuropatía periférica diabética. La distribución multifocal de la degeneración axonal en la diabetes apoya un papel causal en la oclusión microvascular, pero la disminución inducida por híperglicemia de las neurotrofinas puede contribuir previniendo la reparación y regeneración axonal normal. Otra característica común de la enfermedad microvascular diabética se ha denominado memoria hiperglucémica, o la persistencia o progresión de las alteraciones microvasculares inducidas por hiperglicemia durante periodos posteriores de homeostasis normal de la glucosa. El ejemplo más llamativo de este fenómeno es el desarrollo de retinopatía grave en ojos histológicamente normales de perros diabéticos que se produjo en su totalidad durante un periodo de 2.5 años de glucosa en sangre normalizada, que siguió a 2.5 años de hiperglicemia. Los aumentos inducidos por hiperglicemia en la transcripción de genes seleccionados de la matriz persisten también durante semanas tras la restauración de la normoglicemia in vivo, y se produce una prolongación menos pronunciada aunque cualitativamente similar, del aumento inducido por hiperglicemia en la transcripción de genes seleccionados de la matriz en células endoteliales cultivadas. Para más información, ver "Shared pathophysiologic features of microvascular complications of diabetes" (Larsen: Williams Textbook of Endocrinology, 10a ed., Copyright © 2003 Elsevier). Las complicaciones microvasculares se producen no sólo en la diabetes manifiesta, sino que se deben también a la tolerancia alterada a la glucosa (IGT). Complicaciones microvasculares de la IGT: neuropatía, retinopatía, y microproteinuria renal.

Neuropatía diabética Las neuropatías diabéticas son enfermedades neuropáticas (daño de los nervios periféricos) que se asocian con la diabetes mellitus. Estos trastornos normalmente son el resultado de daño microvascular diabético que implica los vasos sanguíneos pequeños que abastecen los nervios (vasa nervorum). Entre las afecciones relativamente habituales que se pueden asociar con la neuropatía diabética incluyen parálisis del tercer nervio; mononeuropatía; mononeuropatía múltiple; amiotrofia diabética; una polineuropatía dolorosa; neuropatía autónoma; y neuropatía toracoabdominal y la forma más habitual, neuropatía periférica, que principalmente afecta los píes y las piernas. Existen cuatro factores implicados en el desarrollo de neuropatía diabética: enfermedad microvascular, productos finales de glicación avanzada, proteína quinasa C y la ruta de los polioles.

Enfermedad microvascular en la neuropatía diabética Los trastornos vasculares y neurales están estrechamente relacionados y entrelazados. Los vasos sanguíneos dependen de la función nerviosa normal, y los nervios dependen de un caudal sanguíneo correcto. El primer cambio patológico en la microvasculatura es la vasoconstricción. A medida que progresa la enfermedad, la disfunción neuronal se correlaciona estrechamente con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como espesamiento de la membrana de los cimientos capilares y la hiperplasia endotelial, que contribuyen a una tensión de oxígeno disminuida e hipoxia. La isquemia neuronal es una característica bien establecida de la neuropatía diabética. Los agentes vasodilatadores (por ejemplo, inhibidores del enzima que transforma la angiotensina, alfal -antagonistas) pueden ocasionar mejoras sustanciales en el flujo sanguíneo neuronal, con las correspondientes mejoras en las velocidades de conducción nerviosa. De esta manera, la disfunción microvascular se produce temprano en la diabetes, en paralelo con la progresión de la disfunción neural, y puede ser suficiente para apoyar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales y clínicos observados en la neuropatía diabética. La neuropatía periférica (piernas), neuropatía sensorimotora es un componente significativo en la patogénesis de las piernas ulcerosas en la diabetes. La neuropatía es una complicación habitual en la diabetes que se produce con el tiempo en más de la mitad de los pacientes de diabetes tipo 2. Los estudios de la conducción nerviosa demuestran que la neuropatía está ya presente en el 10-18% de los pacientes en el momento del diagnóstico de la diabetes, sugiriendo que el daño en los nervios periféricos se produce en los estadios tempranos de la enfermedad y con una desregulación glucémica más suave. El concepto de que la neuropatía es un signo clínico temprano de la diabetes se propuso hace más de 40 años, y la mayor parte de los estudios informan de una asociación entre IGT y neuropatía. La mayor parte de pacientes con IGT y neuropatía asociada tienen una polineuropatía distal sensorial simétrica con evidente dolor neuropático. La neuropatía por IGT (Microvascular complications of impaired glucose tolerance - Perspectives in Diabetes, J. Robinson Singleton, in Diabetes Dic. 1, 2003) es similar desde el punto de vista del fenotipo a la neuropatía diabética temprana, que también causa síntomas sensoriales entre los que se incluyen dolor y disfunción autónoma. En un estudio de 669 pacientes con neuropatía diabética temprana, los síntomas sensoriales estaban presentes en más del 60%, impotencia en casi el 40%, y otras implicaciones autónomas en el 33%, pero evidencias de implicaciones motoras únicamente en el 12%. Estos hallazgos clínicos sugieren una implicación temprana notable de las fibras nerviosas pequeñas no mielinizadas que transportan las señales de dolor, temperatura y autonomía. La cuantificación directa de las fibras nerviosas intraepidérmicas no mielinizadas procedentes de biopsias de la piel muestras pérdidas de fibra y morfología alterada similares en pacientes con neuropatía asociada con IGT y diabetes temprana. La disfunción autónoma, de manera particular la disfunción eréctil y la respuesta vagal cardiaca alterada, son características comunes tempranas de daño neuropátíco en la diabetes. El trabajo con pacientes de IGT sugiere también disautonomia vagal prevalente: estudios diferentes han encontrado una recuperación del ritmo cardiaco anormal tras el ejercicio, variabilidad en el intervalo R-R suavizada respecto a la respiración profunda, y relación reducida entre expiración e inspiración (todas ellas medidas de disautonomia vagal) en una buena parte de los pacientes de IGT que se habían emparejado por edad con sujetos normoglicémicos de control. El daño nervioso en la diabetes afecta a las fibras motoras, sensoriales y autónomas. La neuropatía motora causa debilidad muscular, atrofia y paresis. La neuropatía sensorial lleva a la pérdida de las sensaciones protectoras de dolor, presión y calor. La ausencia de dolor lleva a muchos problemas en el pie insensible, entre las que se incluyen ulceración, trauma no percibido, y neuroartropatía de Charcot. El paciente puede no buscar tratamiento hasta que la herida está avanzada. Una combinación de dísfunción sensorial y motora puede hacer que el paciente coloque tensiones anormales sobre el pie, dando como resultado el trauma, que puede llevar a una infección. La neuropatía del sistema simpático autónomo produce vasodilatación y una sudoración disminuida, lo que da como resultado unos pies calientes y resecos que son muy propicios a la rotura de la piel, así como a alteraciones funcionales en el flujo microvascular. La disfunción autónoma (y pérdida de nerviación en las estructuras dérmicas) también da como resultado una pérdida de la integridad de la piel, lo que proporciona un emplazamiento ideal para la invasión microbiana. El pie neuropático no se ulcera de manera espontánea; en su lugar, resulta de la combinación de alguna forma de trauma asociado con neuropatía. La disfunción microvascular se produce temprano en la diabetes, en paralelo con la progresión de la disfunción neural, y puede ser suficiente para apoyar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales y clínicos observados en la neuropatía diabética.

Productos finales de glicación avanzada - Los niveles elevados de glucosa intracelular causan un enlace covalente no enzimático con proteínas, lo que altera su estructura y destruye su función. Algunas de estas proteínas glicosadas están implicadas en la patología de la neuropatía diabética y en otras complicaciones a largo plazo de la diabetes.

Proteína quinasa C (PKC)- La PKC está implicada en la patología de la neuropatía diabética. Los niveles aumentados de glucosa originan un incremento en el diacilglicerol intracelular, lo que activa la PKC. Los inhibidores de la PKC en modelos animales incrementarían la velocidad de conducción nerviosa incrementando el flujo sanguíneo neuronal.

Polineuropatía sensorimotora Las fibras nerviosas más largas se ven afectadas en un grado más elevado que las cortas, ya que la velocidad de conducción nerviosa se ralentiza en proporción a la longitud del nervio. En este síndrome, se produce una reducción en las sensaciones y pérdida de reflejos en primer lugar bilateralmente en los dedos de los pies, posteriormente se extiende hacia arriba. Se describe normalmente como una distribución en forma de media o guante de entumecimiento, pérdida sensorial, disestesia y dolor nocturno. El dolor puede ser parecido a una quemazón, sensación de pinchazo, doloroso o suave. Es habitual la sensación de agujas y clavos. La pérdida de la propriocepción, esto es, la sensación de cuando un miembro está en el espacio, se afecta pronto. Estos pacientes no pueden sentir cuando están pisando un cuerpo extraño, como una astilla, o cuando se está desarrollando un callo debido a un zapato que ajusta mal. En consecuencia, existe riesgo de desarrollar úlceras e infecciones en pies y piernas, que pueden ser causa de amputación. De manera similar, estos pacientes pueden sufrir múltiples fracturas de rodilla, tobillo, o pie, y desarrollar una articulación de Charcot. La perdida de función motora da como resultado contracturas por dorsiflexión de los dedos de los pies, también llamados dedos en forma de martillo. Estas contracturas no sólo se producen en el pie, sino también en la mano.

Neuropatía autónoma El sistema nervioso autónomo está compuesto por nervios que sirven al corazón, tracto Gl y sistema urinario. La neuropatía autónoma puede afectar a cualquiera de estos sistemas de órganos. La disfunción autónoma más habitualmente presente en pacientes diabéticos es la hipotensión ortoestática, o la desagradable sensación de mareo cuando el paciente se pone de pie. En el caso de la neuropatía diabética autónoma, se debe al fallo del corazón y arterias para ajustar de manera adecuada la frecuencia cardiaca y el tono vascular para mantener la sangre fluyendo de manera completa y continua hacia el cerebro. Este síntoma está normalmente acompañado de una pérdida de la variación respiratorio en el seno, esto es, el cambio usual en la frecuencia cardiaca que se ve habitualmente en la respiración normal. Cuando están presentes estos dos hallazgos, está presente la neuropatía autónoma cardiaca. Las manifestaciones en el tracto Gl incluyen vaciado gástrico retardado, gastroparesis, nausea, hinchazón abdominal y diarrea. Puesto que muchos pacientes diabéticos toman medicación oral para su diabetes, la absorción de estas medicinas resulta muy afectada por el vaciado gástrico retardado. Esto puede producir una hipoglicemia cuando el agente diabético oral se ingiere antes de una comida y no se absorbe hasta horas, o a veces, días después, cuando ya hay un nivel normal o bajo de azúcar en sangre. El movimiento lento del intestino delgado puede producir el sobrecrecimiento bacteriano, que empeora por la presencia de hipergli'cemia. Esto produce hinchazón, gas y diarrea. Entre los síntomas urinarios se incluyen frecuencia urinaria, urgencia, incontinencia y retención. De nuevo, debido a la retención de la orina dulce, las infecciones del tracto urinario son frecuentes. La retención urinaria puede originar divertículos en la vejiga, piedras y nefropatía por reflujo.

Neuropatía craneal Cuando se afectan los nervios craneales, las neuropatías oculomotoras (3a) son las más habituales. El nervio oculomotor controla todos los músculos que mueven el ojo, con la excepción de los músculos recto lateral y oblicuo superior. También sirven para contraer la pupila y abrir el párpado. El inicio de parálisis del tercer nervio en diabéticos es normalmente abrupto, comenzando con dolor frontal o pehorbital y a continuación diplopía. Todos los músculos oculomotores inervados por el tercer nervio pueden quedar afectados, excepto los que controlan el tamaño pupilar. El sexto nervio, el nervio abducens, que inerva el músculo lateral recto del ojo (mueve el ojo lateralmente) también resulta habitualmente afectado, pero no es habitual la implicación del cuarto nervio, el nervio troclear (inerva el músculo oblicuo superior, que mueve el ojo hacia abajo). Se pueden producir mononeuropatías de los nervios espinales torácicos o lumbares y originar síndromes dolorosos que imitan el infarto de miocardio, colecistitis o apendicitis. Los pacientes diabéticos tienen una mayor incidencia de neuropatías de atrapamiento, tal como el síndrome del túnel carpiano.

Isquemia de la extremidad diabética y úlceras del pie diabético La diabetes y la presión pueden desequilibrar la circulación microvascular y llevar a cambios en la piel de las extremidades inferiores, lo que a su vez, puede llevar a la formación de úlceras y a la posterior infección. Los cambios microvasculares llevan a la microangiopatía de los músculos de las extremidades, así como a una predisposición a desarrollar isquemia periférica ya a una respuesta compensatoria reducida por angiogénesis a los episodios isquémicos. La patología microvascular agrava la Enfermedad vascular periférica (PVD) (o Enfermedad de las arterias periféricas (PAD) o Enfermedad arterial de las extremidades inferiores (LEAD) - una complicación MACROvascular - estrechando las arterias de las piernas debido a la aterosclerosis. La PVD se produce más pronto en los pacientes diabéticos, es más grave y está más extendida, y a menudo implica problemas microcirculatorios intercalados que afectan a piernas, ojos y riñones. Las úlceras y la gangrena del pie son afecciones comórbidas frecuentes de la PAD. La neuropatía periférica concurrente junto con la sensación desequilibrada vuelven al pie susceptible a traumas, ulceración e infección. La progresión de la PAD en la diabetes está compuesta de comorbidades tales como la neuropatía periférica y la insensibilidad de los pies y de las extremidades inferiores frente al dolor y trauma. Junto con una circulación desequilibrada y sensaciones desequilibradas, se producen úlceras e infecciones. La progresión hacia la osteomielitis y gangrena pueden hacer necesaria la amputación. Las personas con diabetes tienen 25 veces más posibilidades que las personas no diabéticas de padecer la amputación de una extremidad inferior, subrayando la necesidad de evitar las úlceras del pie y la consiguiente pérdida de la extremidad. Las úlceras del pie diabético se pueden producir no solamente junto con la PAD, sino también pueden estar asociadas con neuropatía, insuficiencia venosa (venas varicosas), trauma, e infección. La PAD contribuye a estas otras enfermedades para producir o acelerar las úlceras del pie. Las úlceras del pie no representan necesariamente una progresión en la PAD, ya que se pueden producir en presencia de perfusión arterial periférica adecuada desde el punto de vista clínico. Los estudios basados en pacientes indican un mayor riesgo de ulceración del pie en pacientes diabéticos que tienen neuropatía periférica y una elevada presión plantar en el pie. La incidencia de una historia de ulceraciones o llagas en el pie o en los tobillos fue del 15% de todos los pacientes diabéticos en el estudio basado en la población desarrollado al sur de Wisconsin. La incidencia fue mayor en individuos diabéticos diagnosticados a edad <30 años, fue ligeramente mayor en hombres (16%) que en mujeres (13%), y fue mayor en pacientes diabéticos tratados con insulina (17%) que en pacientes que no tomaban insulina (10%). La incidencia aumentó con la edad, especialmente en los pacientes diabéticos diagnosticados a edad <30 años. En estudios con pacientes procedentes de Europa, la incidencia de úlceras del pie en pacientes diabéticos fue de un 3% en aquellos con edad <50 años, del 7% en aquellos con edad <60 años, y del 14% en aquellos con edad <80 años. La incidencia fue superior en varones que en hembras a la edad de 70 años. En pacientes diabéticos, la isquémica e infección del pie son eventos graves, e incluso pueden ser una amenaza para la vida; sin embargo, la neuropatía es la dolencia más difícil de tratar. La bibliografía médica y quirúrgica acerca de todos los aspectos de las manifestaciones clínicas y patológicas del pie diabético es abrumadora. Las neuropatías, angiopatías, retinopatías, y nefropatías, solas o combinadas, y con varios niveles de gravedad, pueden influenciar el tratamiento del pie diabético. Cada año se llevan a cabo 82.000 amputaciones de extremidades en pacientes con diabetes mellitus. La mayor parte de estas amputaciones se llevan a cabo en la población de más edad. Las amputaciones como resultado de la diabetes pueden proceder de diferentes etiologías, entre las que se incluyen úlceras del pie, isquemia, úlceras de la pierna venosa (es decir, secundarias al reflujo venoso), y úlceras del talón (es decir, las que resultan de las úlceras de presión no tratadas en el talón). La mayoría de estas amputaciones están originadas en úlceras. La incidencia de úlceras del pie entre los pacientes con diabetes es del 12%. Además, la incidencia acumulada de 20 años de úlceras en las extremidades inferiores en pacientes con diabetes tipo 1 es del 9.9%. Las amputaciones de extremidades inducidas por diabetes dan como resultado un índice de mortalidad a 5 años de entre 39% y 68% y están asociadas con un riesgo aumentado de otras amputaciones. La duración de la estancia hospitalaria es aproximadamente un 60% más larga entre pacientes con úlceras del pie diabético, que cuando se compara con la de aquellos sin úlceras. La neuropatía diabética desequilibra el reflejo del axón nervioso que depende de la función nociceptora de las fibras C sanas, y causa la vasodilatación local en respuesta a un estímulo doloroso. Esta afección compromete de manera adicional la respuesta vasodilatadora presente en afecciones por estrés, tales como lesión o inflamación, el pie diabético neuropático. Este desequilibrio puede explicar de manera parcial por qué algunas úlceras en el pie diabético neuropático son bien de curación lenta o no curan en absoluto, a pesar de una revascularización satisfactoria de la extremidad inferior. La ruta causal más frecuente hacia la ulceración del pie diabético se puede por tanto identificar como la combinación de neuropatía (pérdida sensorial), deformidad (por ejemplo, cabezas metatarsales prominentes) y trauma (por ejemplo, calzado mal ajustado). La mayor parte de los cirujanos prefieren realizar un bypass arterial popliteal o tibial debido a los índices menores de salvamento de la extremidad y permeabilidad en comparación con procedimientos más proximales. Si el bypass arterial popliteal o tibial es incapaz de restaurar un pulso palpable en el pie, se ha informado que el bypass podálico puede conseguir un procedimiento de salvamento de la extremidad más duradero y efectivo en pacientes con diabetes y heridas por pie isquémico]. Incluso una enfermedad oclusiva multisegmento extensa en pacientes con diabetes no representa un impedimento para el salvamento del pie. Aunque las complicaciones en heridas graves pueden tener resultados desastrosos, son poco habituales tras el injerto de bypass podálico. Se ha demostrado que un control adecuado de la infección del pie preexistente y un tunelado cuidadoso del injerto son efectivos para evitar posteriores complicaciones. La angioplastia de la extremidad inferior se está usando cada vez más. Sin embargo, debe enfatizarse que para que la angioplastia sea efectiva, debe estar patente un vaso distal o vaso de alimentación si va a tener éxito una angioplastia más proximal. Aunque las úlceras diabéticas / patologías de la extremidad se pueden controlar en algunos pacientes (mediante desbridamiento, tratamiento con antibióticos, uso de preparaciones para estimular el tejido de granulación (colágeno y angiogénesis nuevos) y la reducción de la acumulación bacteriana en la herida), sería beneficioso tener una composición farmacéutica que pudiera tratar mejor estas dolencias y/o aliviar los síntomas. Para más información ver American Journal of Surgery, Volumen 187-Número 5 Supl 1-Mayo 1 , 2004, Copyright (c) 2004 Elsevier.

Disfunción coronaria microvascular en la diabetes La correlación entre histopatología y disfunción microcirculatoria en la diabetes es bien conocida desde antiguos estudios experimentales, y a partir de las autopsias, en las que se ha encontrado frecuentemente el espesamiento de la membrana basal, fibrosis perivascular, Tarificación vascular, y hemorragia capilar. Sigue siendo difícil confirmar estos dados in vivo, aunque un artículo reciente demostró una correlación entre patología y disfunción microvascular ocular (Am J Physiol 2003; 285). Sin embargo, una gran cantidad de estudios clínicos indican que no sólo la diabetes manifiesta, sino también un control metabólico desequilibrado pueden afectar la microcirculación coronaria (Hipert Res 2002; 25:893). Werner aludió al importante artículo de Sambuceti y col. (Circulation 2001 ; 104:1 129) demostrando la persistencia de la disfunción microvascular en pacientes tras la reapertura con éxito de la arteria infartada relacionada, y que puede explicar el aumento de morbilidad y mortalidad cardiovascular en estos pacientes. Existe evidencia creciente procedente de estudios de reperfusión aguda grave de que la morbilidad y mortalidad no están relacionadas con la propia reapertura de la arteria infartada relacionada, sino que dependen mucho más del caudal TIMI +/- del rubor miocardial (Stone 2002; Feldmann Circulation 2003). Herrmann indicó, entre otros, que la integridad de la microcirculación coronaria es probablemente el factor clínico y de prognóstico más importante en este contexto (Circulation 2001 ). El efecto neutro de los dispositivos de protección (sin cambios relevantes en el caudal TIMI, en la resolución ST, o en el MACE) puede indicar que el desequilibrio funcional en la microcirculación es el factor determinante principal del diagnóstico. Existe también evidencia creciente de que la disfuncíón mícrovascular coronaria juega un papel principal en el CAD no obstructivo. La disfunción coronaria endotelial continua siendo un fuerte indicador del diagnóstico es estos pacientes.

Nefropatía diabética (disfunción renal en pacientes con diabetes) La nefropatía diabética abarca microalbuminuria (un efecto de la enfermedad microvascular) de la proteinuria y la ESRD. La diabetes es la causa más frecuente de fallo renal, con más de un 40 por ciento de casos nuevos. Incluso cuando los fármacos y la dieta son capaces de controlar la diabetes, la enfermedad puede llegar a la nefropatía y el fallo renal. La mayor parte de las personas con diabetes no desarrollan una nefropatía lo suficientemente grave para causar fallo renal. Aproximadamente 16 millones de personas en los Estados Unidos padecen diabetes, y aproximadamente 100.000 personas tienen fallo renal como resultado de la diabetes.

Retinopatía diabética En la enfermedad diabética, la hiperglicemia lleva a una disminución en el flujo sanguíneo retiniano, hiperpermeabilidad retiniana, retrasos en la conducción nerviosa de los fotorreceptores, y muerte celular de las neuronas retinianas. En la diabetes de corta duración, se ha identificado la muerte celular de las neuronas en la capa nuclear interna de la retina. De manera específica, se ha localizado apoptosis en células gliales tales como células de Mueller y astrocitos y se ha demostrado que se produce en un mes de diabetes en el modelo rata diabética inducida por STZ. La causa de estos episodios es multifactorial, incluyendo la activación de la ruta diacilglicerol/PKC, estrés oxidativo, y glicosilación no enzimática. La combinación de estos episodios hace que la retina se vuelva hipóxica, y finalmente lleve al desarrollo de la retinopatía diabética. Una posible conexión entre la isquemia retiniana y los cambios tempranos en la retina diabética es la producción inducida por la hipoxia de factores de crecimiento tales como VEGF. El regulador maestro de la repuesta hipóxica se ha identificado como el factor 1 inducible por hipoxia (HIF-1 ), que controla los genes que regulan la proliferación celular y la angiogénesis. Los estudios anteriores han demostrado que la inhibición de la ubiquitinación del HIF-1 lleva al enlace con elementos de respuesta a la hipoxia (HRE) y a la producción de ARNm de VEGF. La retinopatía diabética se define como la disfunción progresiva de la vasculatura retiniana producida por la hiperglicemia crónica. Las características clave de la retinopatía diabética incluyen microaneurismas, hemorragias retinianas, exudados de lípidos retiñíanos, manchas de algodón -lana, no perfusión capilar, edema macular y neovascularización. Entre las características asociadas se incluyen hemorragia vitrea, desprendimiento de retina, glaucoma neovascular, catarata prematura y parálisis de los nervios cerebrales. Hay 16 millones de personas en los Estados Unidos con diabetes Tipo 1 y Tipo 2. En 15 años, el 80% de los pacientes de Tipo 1 han desarrollado retinopatía diabética mientras que el 84% de los pacientes diabéticos de Tipo 2 desarrollan retinopatía en los 19 años. Estos números constituyen un mercado significativo para agentes terapéuticos adecuados para enfermedades oculares de neovasculatura. El desarrollo de la retinopatía diabética es dependiente del tiempo. A pesar de un control de azúcar en sangre óptimo, los pacientes con una larga duración de la enfermedad pueden esperar el desarrollo finalmente de alguna forma de retinopatía. La National Socíety to Prevent Blindness ha estimado que de 4 a 6 millones de diabéticos en los Estados Unidos tienen retinopatía diabética. La incidencia anual estimada de nuevos casos de retinopatía diabética proliferativa y edema macular diabético son 65.000 y 75.000, de forma respectiva, con una incidencia de 700.000 y 500.000 de forma respectiva. La retinopatía diabética origina entre 12.000 y 24.000 nuevos casos de ceguera cada año en los Estados Unidos. La retinopatía se trata mediante procedimientos quirúrgicos, efectivos para reducir una pérdida grave de visión, pero las porciones de retina tratadas con láser se destruyen de forma irreversible. No se dispone de un tratamiento con fármacos. Como enfermedad microvascular que afecta principalmente a los capilares, la diabetes mellitus afecta al ojo destruyendo la vasculatura de la conjuntiva, retina y sistema nervioso central. Los pacientes pueden presentar historiales de conjuntiva bulbar inyectada a largo plazo junto con quejas sístémicas de pérdida de peso a pesar de un apetito mayor al normal (polifasia), sed anormal (polidipsia) y micción anormalmente frecuente (poliuria). La agudeza visual fluctuante, secundaria a una cantidad de azúcar en sangre inestable, en un signo ocular habitual. El hinchado de la lente del cristalino da como resultado cambios bruscos grandes en la refracción, así como una formación prematura de cataratas. Los cambios en la agudeza visual dependerán de la gravedad y del estado de la enfermedad. En la retina, el debilitamiento de las arteriolas y capilares puede dar como resultado la aparición característica de puntos intraretinianos y manchas hemorrágicas, exudados, anormalidades microvasculares intraretinianas (IRMA), mícroaneurismas, edema e infartos algodonosos. La retinopatía diabética proliferativa es el resultado de afecciones vasculares graves y es visible como neovascularización del disco (NVD), la neovascularización en cualquier parte (NVE) y la neovascularización del iris (NVI, o iris con rubeosís) Entre las complicaciones neurológicas se incluyen las parálisis de los nervios craneales tercero, cuarto y sexto, así como papilitis diabética y parálisis del nervio facial. La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades influidas por la genética que comparten la intolerancia a la glucosa. Se caracteriza por un trastorno de la regulación metabólica como resultado de una insulina deficiente o con mal funcionamiento, o receptores celulares de la insulina deficientes o con mal funcionamiento. La bioquímica que implica la formación del sorbitol juega un papel en la destrucción de los pericitos, que son las células que soportan el endotelio vascular. A medida que mueren los pericitos de soporte, queda comprometido el endotelio capilar, dando como resultado una exudación vascular de sangre, proteínas y lípidos. Esto, combinado con una sangre más espesa cargada de glucosa produce insuficiencia vascular, no perfusión capilar, hipoxia retiniana, una estructura alterada y una función disminuida. La formación y liberación de factores vasoproliferativos que tienen un papel en la génesis de la neovascularización retiniana son poco comprendidas. La mayor parte de las secuelas de la diabetes que no amenazan la visión se resuelven de manera espontánea en el curso de las semanas o meses que siguen al control médico. En los casos en los que hay fuertes cambios refractivos, los pacientes pueden necesitar una prescripción temporal de gafas hasta que la refracción se estabiliza. Cuando la retinopatía amenaza la mácula, o cuando proliferan nuevos vasos sanguíneos, el paciente puede someterse a una fotocoagulación mediante láser. El Diabetic Retinopathy Study (DRS) ha probado de manera conclusiva que la fotocoagulación panretiniana tiene éxito en la reducción del riesgo de pérdida grave de visión en pacientes de alto riesgo. Se definen como alto riesgo las características de (1 ) neovascularización del disco óptico (NVD) de tamaño entre un cuarto y un tercio del diámetro del disco, y (2) neovascularización en otra cualquier parte (NVE) con cualquier tipo de hemorragia vitrea.

Edema macular diabético (DME) El DME es una complicación de la retinopatía diabética, una enfermedad que afecta a los vasos sanguíneos de la retina. La retinopatía diabética da como resultado múltiples anormalidades en la retina, entre las que se incluyen espesamiento retiniano y edema, hemorragias, flujo sanguíneo impedido, exudación excesiva de fluido desde los vasos sanguíneos y, en los estados finales, crecimiento anormal de los vasos sanguíneos. Este crecimiento de los vasos sanguíneos puede producir hemorragias grandes y daño retiniano grave. Cuando el exudado de los vasos sanguíneos en la retinopatía diabética produce el hinchado de la mácula, esto se denomina DME. El síntoma principal del DME es una pérdida de visión central. Entre los factores de riesgo asociados con el DME se incluyen niveles de glucosa en sangre mal controlados, elevada presión sanguínea, función renal anormal que produzca retención de líquidos, niveles elevados de colesterol y otros factores sistémicos generales. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud, la retinopatía diabética es la principal causa de ceguera en adultos en edad laboral, y una causa principal de ceguera en pacientes diabéticos. La American Diabetes Association informa que hay aproximadamente 18 millones de diabéticos en los Estados Unidos, y aproximadamente 1.3 millones de casos nuevos de diabetes diagnosticados en los Estados Unidos cada año. Prevent Blindness America y el National Eye Institute estiman que en los Estados Unidos hay 5.3 millones de personas con 18 años de edad o más con retinopatía diabética, que incluyen aproximadamente 500.000 con DME. El CDC estima que cada año hay aproximadamente 75.000 casos nuevos de DME en los Estados Unidos.

Otras neuropatías Además de la diabetes, las causas habituales de la neuropatía son la infección por herpes zoster trauma crónico o agudo (incluyendo cirugía) y diversas neurotoxinas. El dolor neuropático es habitual en el cáncer como resultado directo del cáncer en los nervios periféricos, (por ejemplo, compresión por un tumor), y es un efecto secundario de muchos fármacos quimioterapéuticos.

Enfermedad microvascular - Las enfermedades vasculares y neurológicas estás estrechamente relacionadas y entrecruzadas. Los vasos sanguíneos dependen del funcionamiento nervioso normal, y los nervios dependen de un flujo sanguíneo adecuado. El primer cambio patofisiológico en la microvasculatura es la vasoconstricción. A medida que la enfermedad progresa, la disfunción neuronal se correlaciona estrechamente con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como espesamiento de la membrana basal de los capilares e hiperplasia endotelial, lo que contribuye a una tensión de oxígeno disminuida e hipoxia. Los agentes vasodilatadores, por ejemplo los inhibidores del enzima convertidor de la angiotensina, antagonistas D1) pueden llevar a mejoras sustanciales en el flujo sanguíneo neuronal, con las correspondientes mejoras en las velocidades de conducción nerviosa.

Manifestaciones clínicas La neuropatía afecta a todos los nervios periféricos: fibras del dolor, neuronas motoras, nervios autónomos. Por tanto, de manera necesaria puede afectar a todos los órganos y sistemas ya que están todos inervados. Hay varios síndromes diferentes basados en los sistemas orgánicos y miembros afectados, pero estos no son exclusivos en forma alguna. Un paciente puede tener una neuropatía sensorimotora y autónoma, o cualquier otra combinación. A pesar de los avances en la comprensión de las causas metabólicas de la neuropatía, los tratamientos dirigidos a la interrupción de estos procesos patológicos han estado limitados por los efectos secundarios y falta de eficacia. Así, los tratamientos son sintomáticos, y no se dirigen a los problemas subyacentes. Entre los agentes usados para el dolor causado por la neuropatía sensorimotora se incluyen antídepresivos tricíclicos (TCA), inhibidores de la recaptación de la serotonina (SSRI) y fármacos antíepilépticos (AED). Ninguno de estos agentes invierten los procesos patológicos que dan lugar a la neuropatía diabética, y ninguno de ellos altera la permanente progresión de la enfermedad. De esta manera, sería útil tener una composición farmacéutica que pudiera tratar mejor estas enfermedades y/o aliviar los síntomas.

Retinopatías adicionales Microvasculopatía retiniana (retinopatía por SIDA) La microvasculopatía retiniana se ve en el 100% de los pacientes de SIDA. Se caracteriza por hemorragias intraretinianas, microaneurismas, puntos de Roth, manchas algodonosas (microinfartos de la capa de la fibra nerviosa) y el envainado perivascular. La etiología de la retinopatía es desconocida, aunque se ha pensado que se debe a los inmunocomplejos circulantes, liberación local de sustancias citotóxicas, hemoreología anormal, e infección por VIH de las células del endotelio. La retinopatía por SIDA es en la actualidad tan habitual que los puntos algodonosos en un paciente sin diabetes o hipertensión pero en riesgo de VIH debe acudir a su médico para considerar la realización de un test vírico. No existe tratamiento específico para la retinopatía por SIDA, pero su presencia continua puede llevar al medio a reexaminar la eficacia de la terapia del VIH y el cumplimiento de la misma por parte del paciente.

Retinopatía por transplante de médula ósea (BMT) Se informó por primera vez de la retinopatía por transplante de médula ósea en 1983. Se produce normalmente en un plazo de seis meses, pero puede ocurrir tan tarde como 62 meses tras la BMT. Factores de riesgo tales como diabetes e hipertensión pueden facilitar el desarrollo de retinopatía por BMT aumentando la microvasculopatía isquémica. No hay edad conocida, género o raza predilecta conocida para el desarrollo de la retinopatía por BMT. Los pacientes presentan una disminución en la agudeza visual y/o un déficit del campo visual. Los hallazgos del segmento posterior son normalmente bilaterales y simétricos. Entre las manifestaciones clínicas se incluyen múltiples puntos algodonosos, telangiectasia, microaneurismas, edema macular, exudados duros y hemorragias retinianas. La angiografía con fluoresceína demuestra la no perfusión y punteado capilar, anormalidades intraretinianas microvasculares, microaneurismas y edema macular. Aunque no se ha elucidado aún la etiología precisa de la retinopatía por BMT, parece que está afectada por varios factores: toxicidad por ciclosporina, irradiación total del cuerpo (TBI), y agentes quimioterapéuticos. La ciclosporina es un potente agente inmunomodulatorio que suprime la respuesta inmune injerto -versus - huésped. Puede llevar a daño en las células endoteliales y a efectos secundarios neurológicos, y como resultado, se ha sugerido como causa de la retinopatía por BMT. Sin embargo, se puede desarrollar la retinopatía por BMT en ausencia de uso de ciclosporina, y no se ha demostrado que la ciclosporina cause retinopatía por BMT en receptores de médula ósea autólogos o singénicos. La ciclosporina, por tanto, no es aparentemente la única causa de retinopatía por BMT. La irradiación total del cuerpo (TBI) se ha implicado también como causa de la retinopatía por BMT. La radiación daña la microvasculatura retiniana y lleva a vasculopatía isquémica. Parece que son importante variables tales como la dosis total de radiación y el intervalo de tiempo entre la radiación y la ablación de la médula ósea. Sin embargo, la retinopatía por BMT se puede producir en pacientes que no reciben TBI, y no se observa retinopatía por BMT en pacientes transplántados con órganos sólidos que recibieron dosis de radiación similares. Por tanto, el TBI no es la única causa, pero es otro factor que contribuye al desarrollo de la retinopatía por BMT. Se ha sugerido que los agentes quimioterapéuticos son un factor potencial de contribución en la retinopatía por BMT. Las medicaciones como cisplatino, carmustina, y ciclofosfamida pueden causar efectos oculares secundarios entre los que se incluyen papiledema, neuritis óptica, déficit del campo visual y ceguera cortical. Se ha sugerido que estos fármacos quimioterapéuticos pueden predisponer a los pacientes a daños en la retina inducidos por la radiación, y estimular el efecto perjudicial de la radiación. En general, los pacientes con retinopatía por BMT tienen un bueno diagnóstico. La retinopatía normalmente se resuelve en dos a cuatro meses tras la detención o disminución de la dosificación de la ciclosporina. En un informe, el 69 por ciento de los pacientes experimentaron una resolución completa de los hallazgos retiñíanos, y el 46 por ciento de los pacientes recuperaron completamente su agudeza visual de partida. Debido a su pronóstico favorable y la naturaleza relativamente no progresiva de la retinopatía por BMT, no suele ser necesaria una intervención agresiva.

Dolencias isquémicas La isquémica se puede dividir en dos clases: la primera implica la aterosclerosis acelerada que se produce habitualmente en pacientes con diabetes, es decir, en las arterias femoral, poplítea, y posterior tibial. Estos vasos, a menudo de sólo 1 ó 2 cm de diámetro, pueden desarrollar placas ateroscleróticas, lo que disminuye seriamente el flujo sanguíneo. Una vez que los vasos grandes se han obstruido completamente, se pueden producir apoplejía, infarto de miocardio, isquemia, y úlceras del pie diabético que no se curan. Esta forma de isquemia es esencialmente una enfermedad de los grandes vasos.

Demencia post apoplejía El 25% de las persones tiene demencia tras una apoplejía, y muchas otras desarrollan demencia en los siguientes 5 a 10 años. Además, muchos individuos experimentan desequilibrios más sutiles de sus funciones cerebrales superiores (como habilidades de planificación y velocidad de procesamiento de la información), y presentan un riesgo muy elevado de desarrollar posteriormente la demencia. Apoplejías muy pequeñas en las partes profundas del cerebro en este proceso (denominado enfermedad microvascular) parecen ser esenciales en el proceso que lleva a identificar el modelo de atrofia cerebral específico de la demencia post apoplejía.

Síndrome ocular isquémico Los pacientes que padecen síndrome ocular isquémico (OÍS) son por lo general de edad avanzada, oscilando entre los 50 y los 80 años de edad. Los hombres se afectan dos veces más comúnmente que las mujeres.

El paciente es sólo raramente asintomático. Se produce una disminución de la visión en el 90 por ciento de los casos, y el 40 por ciento de pacientes muestra dolor en el ojo con necesidad de atención. Puede haber también un historial de cuidados o antecedentes de ataques isquémicos transitorios, o amaurosis fugax. Los pacientes tienen también una significativa enfermedad sistémica, conocida o desconocida, en el momento de la presentación. Las enfermedades sistémicas que se encuentran de forma más habitual son hipertensión, diabetes, enfermedad cardiaca isquémica, apoplejía, y enfermedad periférica vascular. En menor extensión, los pacientes manifiestan OÍS como resultados de una arteritis de las células gigantes (GCA). Los hallazgos unilaterales están presentes en un 80 por ciento de casos. Entre los hallazgos habituales se encuentran catarata unilateral avanzada, inflamación del segmento anterior, reacción asintomática de la cámara anterior, edema macular, venas retinianas dilatadas pero no reviradas, puntos hemiperiféricos y hemorragias puntuales, manchas algodonosas, exudados y neovascularización del disco y retina. También puede producirse la pulsación arterial espontánea, presión intraocular elevada, y neovascularización del iris y ángulo con glaucoma neovascular (NVG). Aunque el paciente puede presentar la neovascularización del segmento anterior, se puede producir la hipotonía ocular debida a la baja perfusión arterial del cuerpo ciliar. De forma ocasional, hay émbolos retiñíanos visibles (placas de Hollenhorst).

Los hallazgos en la OÍS están causados por ulceración ateromatosa de la arteria carótida interna y estenosis en la bifurcación de la arteria carótida común. El cinco por ciento de los pacientes con estenosis de la arteria interna desarrollan OÍS. Sin embargo, el OÍS se produce únicamente si el grado de estenosis excede del 90 por ciento. La estenosis de la arteria carótida reduce la presión de perfusión en el ojo, dando como resultado el fenómeno isquémico antes mencionado. Una vez que la estenosis alcanza el 90 por ciento, la presión de perfusión en la arteria retiniana central (CRA) cae sólo a un 50%. A menudo, la presión arterial reducida manifiesta una pulsación espontánea en la CRA. Los hallazgos son variables y pueden incluir cualquiera o todos los hallazgos anteriores. Los pacientes con OÍS tienen una enfermedad sistémica significativa que debe evaluarse. La muerte cardiaca es la principal causa de mortalidad en pacientes con OÍS - el índice de mortalidad a cinco años es del 40 por ciento. Por esta razón, los pacientes con OÍS deben enviarse al cardiólogo para serología completa, EKG, ECG, y evaluación de las carótidas.

Enfermedades microvasculares en el riñon El riñon está implicado en varios trastornos clínico patológicos discretos que afectan a la microvasculatura sistémica y renal. Algunas de estas dolencias se caracterizan por daño primario a las células endoteliales, tales como: Síndrome hemolítico urémico (HUS) y púrpura trombocitopénico trombótico {TTP). HUS y TTP son enfermedades estrechamente relacionadas que se caracterizan por anemia hemolítica microangiopática con desequilibrio variable en órganos. Tradicíonalmente, la diagnosis de HUS se realiza cuando el fallo renal es una característica predominante del síndrome, tal como es habitual en niños. En adultos, predomina frecuentemente el desequilibrio neurológico, y entonces, el síndrome se denomina TTP. La microangiopatía trombótica es la lesión patológica subyacente en ambos síndromes, y los hallazgos clínicos y de laboratorio en pacientes con tanto HUS como TTP se solapan en gran extensión. Esto ha llevado a varios investigadores a considerar a los dos síndromes como un continuo de una única enfermedad. Patogénesis. Los datos experimentales sugieren fuertemente que el daño en células endoteliales es el episodio principal en la patogénesis de HUS/TTP. El daño endotelial desencadena una cascada de eventos entre los que se incluyen la coagulación intravascular local, deposición de fibrina, y activación y agregación de las plaquetas. El resultado final es el hallazgo histopatológico de microangiopatía trombótica común a las diferentes formas del síndrome HUS/TTP. Si el HUS/TTP se deja sin tratar, el índice de mortalidad se aproxima al 90%. La terapia de soporte, que incluye diálisis, medicaciones antihípertensivas, transfusiones de sangre y gestión de las complicaciones neurológicas - contribuyen a la mejorada supervivencia de pacientes con HUS/TTP. Un adecuado equilibrio de fluidos y descanso del intestino grueso son importantes en el tratamiento del HUS típico asociado con diarrea.

Nefritis por radiación - las consecuencias a largo plazo de la irradiación renal de más de 2500 rad se puede dividir en cinco síndromes clínicos. (i) la nefritis por radiación aguda se produce en aproximadamente el 40% de los pacientes tras un periodo de latencia de entre 6 y 13 meses. Se caracteriza clínicamente por un comienzo abrupto de hipertensión, proteinuria, edema, y fallo renal progresivo que en la mayor parte de los casos conduce a riñones terminales. (ii) la nefritis por radiación crónica, inversamente, tiene un periodo de latencia que varía entre 18 meses y 14 años tras el ataque inicial. Es de despertar traicionero, y se caracteriza por hipertensión, proteinuria, y perdida gradual de la función renal. (iii) el tercer síndrome se manifiesta entre 5 y 19 años tras la exposición a la radiación en forma de una proteinuria benigna con función renal normal. (iv) un cuarto grupo de pacientes muestra únicamente una hipertensión benigna entre 2 y 5 años después, y puede tener una proteinuria variable. La hipertensión maligna tardía se inicia entre 18 meses y 11 años después de irradiación en pacientes tanto con nefritis por radiación crónica como con hipertensión benigna. La eliminación del riñon afectado revierte la hipertensión. Se ha informado de daño inducido por radiación a las arterias renales, con la posterior hipertensión renovascular. (v) Se ha observado un síndrome de insuficiencia renal análoga a la nefritis por radiación aguda en pacientes con transplante de médula ósea (BMT) que se habían tratado con radiación de cuerpo completo (TBI). Se ha informado que la irradiación produce disfunción endotelial pero conserva las células del músculo liso vascular en la fase temprana posradiación. La radiación puede dañar directamente el ADN, lo que lleva a una regeneración disminuida de estas células y desnudado de la membrana basal de los capilares y túbulos glomerulares. No está claro cómo este ataque inicial lleva finalmente a la glomerulosclerosis, atrofia tubular y fibrosis intersticial. Se postula que la degeneración de la capa de células endoteliales puede dar como resultado la trombosis intravascular en capilares y arteriolas más pequeñas- La angiopatía intrarenal explicaría seguidamente la fibrosis renal progresiva y la hipertensión que caracterizan la nefritis por radiación. Un estudio reciente de riñones de ratón irradiados demostró un aumento dependiente de la dosis en leucocitos en el córtex renal, sugiriendo un papel para procesos inflamatorios en la nefritis inducida por radiación. En otras enfermedades del riñon, la microvasculatura del riñon está implicada en enfermedades autoinmunes, tales como esclerosis sistémica (esclerodermia). La implicación del riñon en la esclerosis sistémica se manifiesta como una enfermedad renal crónica de progresión lenta o en forma de crisis renal por esclerodermia (SRC), que se caracteriza por una hipertensión maligna y azotemia aguda. Se postula que la SRC está causada por un fenómeno de tipo Raynaud en el riñon. El vasospasmo grave lleva a la isquemia cortical y producción aumentada de renina y angiotensina II, que a su vez perpetúan la vasoconstricción renal. Los cambios hormonales (embarazo), estrés físico y emocional, o una baja temperatura, pueden desencadenar el vasospasmo de tipo Raynaud. El papel del sistema renina -angiotensina en la perpetuación de la isquemia renal se subraya con el beneficio significativo de los inhibidores ACE en el tratamiento de la SRC. En pacientes con SRC que progresan a insuficiencia renal grave a pesar del tratamiento antihipertensivo, la diálisis se convierte en una necesidad. Se han empleado tanto la diálisis peritoneal como la hemodiálisis. El informe End-Stage Renal Disease (ESRD) Network sobre 311 pacientes con ESRD inducida por esclerosis sistémica dializados entre 1983 y 1985 reveló un índice de supervivencia del 33% en tres años. La microcirculación renal puede resultar también afectada por la enfermedad de las células falciformes, a la que el riñon resulta particularmente susceptible debido a la baja tensión de oxígeno que se alcanza en los vasos profundos de la médula renal como resultado de la transferencia de oxígeno en contracorriente a lo largo de los vasa recta. Las arterias renales y arteriolas mas pequeñas pueden ser también el lugar de daño tromboembólico debido a material que contiene colesterol desprendido de las paredes de los grandes vasos. Tomadas en su conjunto, las enfermedades que causan la oclusión permanente o transitoria de la microvasculatura renal que dan como resultado de manera uniforme en la interrupción de la perfusión glomerular, y por tanto, de la velocidad de filtración glomerular, constituyendo por tanto una amenaza grave a la homeostasis sistémica.

Fallo renal agudo (ARF) El ARF puede estar causado por una enfermedad microvascular o macrovascular (oclusión de la arteria renal principal o enfermedad aórtica abdominal grave). Las enfermedades microvasculares clásicas a menudo presentan hemolisis microangiopática y fallo renal agudo que se produce debido a trombosis u oclusión de los capilares glomerulares, a menudo con trombocitopenia adjunta. Entre los ejemplos típicos de estas enfermedades se incluyen: a) púrpura trombótica trombocitopénica - la péntada clásica de la púrpura trombótica trombocitopénica incluye fiebre, cambios neurológicos, fallo renal, anemia hemolítica microangiopática y trombocitopenia. b) síndrome urémico hemolítico - el síndrome urémico hemolítico es similar a la púrpura trombótica trombocitopénica pero sin cambios neurológicos. c) síndrome HELLP (hemolisis, enzimas del hígado elevadas y baja cantidad de plaquetas). El síndrome HELLP es un tipo de síndrome urémico hemolítico que se produce en mujeres embarazadas con la adición del aumento en las transaminasas.

El fallo renal agudo puede estar presente en todos los entorno médicos, pero se contrae principalmente en hospitales. La dolencia se desarrolla en el 5 por ciento de los pacientes hospitalizados, y aproximadamente el 0.5 por ciento de los pacientes hospitalizados necesita diálisis. En los últimos 40 años, el índice de supervivencia por fallo renal agudo no ha mejorado, principalmente porque los pacientes afectados son en la actualidad más ancianos y tienen mayor cantidad de dolencias co-mórbidas. La infección supone el 75 por ciento de las muertes en pacientes con fallo renal agudo, y las complicaciones cardiorrespiratorias son la segunda causa más frecuente de fallecimiento. Dependiendo de la gravedad del fallo renal, el índice de mortalidad puede oscilar entre 7 por ciento a tanto como el 80 por ciento. El fallo renal agudo se puede dividir en tres tipos. ARF prerenal, intrínseco y postrenal. El ARF intrínseco se subdivide en cuatro categorías: enfermedad tubular, enfermedad glomerular, enfermedad vascular (incluye microvascular) y enfermedad intersticial.

Enfermedad renal progresiva Existe evidencia de que la enfermedad renal progresiva se caracteriza por una pérdida progresiva de la microvasculatura. La pérdida de la microvasculatura se correlaciona de manera directa con el desarrollo de cicatrices glomerulares y túbulo - intersticiales. El mecanismo se media en parte mediante una reducción en la respuesta endotelial proliferativa, y este desequilibrio en la reparación de los capilares está mediado por una alteración en la expresión local de los factores tanto angiogénico (factor de crecimiento vascular endotelial) como antiangiogénico (trombospondina 1 ) en el riñon. La alteración en el equilibrio entre los factores de crecimiento angiogénicos esta mediada tanto por citoquinas asociadas a macrófagos (interleuquina-1 D) como por mediadores vasoactivos. Finalmente, existe una evidencia intrigante que la estimulación de la angiogénesis y/o de la reparación capilar puede estabilizar la función renal y ralentizar la progresión, y de que este beneficio se produce de manera independiente a los efectos sobre la BP o la proteinuria. Para más información, ver Brenner & Rector's The Kidney, 7a ed., Copyright (c) 2004 Elsevier: Capítulo 33 - Microvascular diseases of the kidney, y también Tiwari y Vikrant Journal of Indian Academy of Clinical Medicine Vol. 5, N° 1 Review Article - Sepsis and the Kidney. En conclusión, los tipos actuales de terapia para la prevención y/o tratamiento de COPD, degeneración macular y enfermedad microvascular no son satisfactorios, y existe necesidad de desarrollar nuevos compuestos a este efecto. Todas las enfermedades e indicaciones que se han descrito más arriba en el presente documento, así como otras enfermedades y dolencias descritas en el presente documento tales como Ml se pueden tratar mediante los nuevos compuestos de esta invención.

RTP801 El cesionario de la presente solicitud informó por primera vez del gen RTP801. Las Patentes de los Estados Unidos con números 6,455,674. 6,555,667, y 6740738, todas ellas cedidas al cesionario de la presente solicitud describen y reivindican per se el polinucleótido y polipéptido RTP801 , y los anticuerpos dirigidos hacia el polipéptido. El RTP801 representa un gen diana único para el factor-1 inducible por hipoxia (HIF-1 ) que puede regular la patogénesis inducida por hipoxia independiente de factores de crecimiento tales como VEGF. El inventor de la presente invención ha realizado descubrimientos que llevan al concepto nuevo de inhibir el gen RTP801 con el objetivo de mejorar diversas enfermedades respiratorias.

Las siguientes solicitudes y publicaciones de patente proporcionan aspectos de la información acerca de los antecedentes. El Documento WO 2001070979 se refiere a marcadores de ácido nucleico que se sobre expresan en células de cáncer de ovarios La Patente de los Estados Unidos N° 6,673,549 describe una combinación que comprende ADNc que se expresan de forma diferencial en respuesta al tratamiento con esferoides. La Solicitud de los Estados Unidos 2003165864 se refiere a ADNc que se expresan de forma diferencial en células tratadas con un agente desmetilante de ADN.

La Solicitud de los Estados Unidos 2003108871 se refiere a una composición que comprende varios ADNc que se expresan de forma diferencial en cultivos de células de hígado C3A humanas tratadas, que se alega son útiles para tratar los trastornos del hígado. La Solicitud de los Estados Unidos 2002119463 describe una nueva composición, útil para tratar y diagnosticar cáncer de próstata, dicha composición comprende ADNc humano que se expresan de forma diferencial en el cáncer de próstata. El Documento WO 2004018999 describe un procedimiento para evaluar, caracterizar, controlar, prevenir y tratar el cáncer cervical. El Documento EP 1394274 se refiere a un procedimiento para ensayar el asma bronquial o enfermedad pulmonar obstructiva crónica comparando el nivel de expresión de un gen marcador en una muestra biológica procedente de un sujeto con un nivel de expresión del gen en una muestra procedente de un sujeto sano. El Documento WO 2002101075 se refiere a una molécula de ácido nucleico aislada útil para detectar, caracterizar, prevenir y tratar cánceres cervicales humanos. El Documento WO 2003010205 se refiere a la inhibición de la angiogénesis para tratar la curación de heridas, retinopatía, isquemia, inflamación, microvasculopatía, curación de huesos e inflamación de la piel. El Documento WO 2002046465 se refiere a identificar un gen implicado en una enfermedad para tratar las enfermedades reguladas por hipoxia. El Documento WO 2002031111 se refiere a la alegación de polipéptidos nuevos, y a sus proteínas codificadas, y por tanto se proporcionan numerosos usos. El Documento WO 2001012659 se refiere a ácidos nucleicos útiles en metodologías de ADN recombinante. El Documento WO 2001077289 describe seiscientos veintitrés polinucleótidos derivados de una variedad de fuentes de tejido humano. El Documento WO 2003101283 se refiere a una combinación que comprende muchos ADNc y proteínas de las que se alega que se expresan de forma diferencial en trastornos respiratorios. El Documento JP 2003259877 se refiere a muchos marcadores de enfermedades tipo fibrosis hepática. Tzipora Shoshani, y col. Identification of a Novel Hypoxia-Inducible Factor 1 -Responsive Gene, RTP801, Involved in Apoptosis.

MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, abril 2002, p. 2283-2293; este papel, del que el inventor de la presente invención es co-autor, detalla el descubrimiento del gen RTP801 (por tanto, un nuevo gen dependiente de HIF- 1 )- Anat Brafman, y col. Inhibition of Oxygen-lnduced Retinopathy in RTP801 -Deficient Mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004 Octubre; 45 (10): 3796-805; del que el inventor de la presente invención es también co-autor, demuestra que en ratones genéticamente deficitarios en RTP801 , hiperoxia no origina la degeneración de la red capilar retiniana. Leif W. Ellisen, y col. REDD1 , a Developmentally Regulated Transcriptional Target of p63 and p53, Links p63 to Regulation of Reactive Oxygen Species. Molecular Cell, Vol. 10, 995-1005, noviembre, 2002; este artículo demuestra que la sobre expresión de RTP801 (lo que se denomina en el presente documento como REDD1 ) lleva a la producción aumentada de especies reactivas de oxígeno. Richard D R, Berra E, y Pouyssegur J. Non-hypoxic pathway mediates the induction of hypoxia-inducible factor 1 alpha in vascular smooth muscle cells. J. Biol. Chem. 2000, Sep. 1 ; 275(35): 26765-71 ; este artículo demuestra que la transcripción dependiente de HIF-1 se puede inducir mediante una producción excesiva de especies reactivas de oxígeno. Rangasami T, y col., Genetic ablation of Nrí2 enhances susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Submitted to Journal of Clinical Investigation. Este artículo se refiere a ratones con una defensa antioxidante comprometida (debida a una inactivación en línea germinal de RTP801 , que en dicho documento se denomina Nrf2).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona nuevos procedimientos y composiciones para tratar enfermedades microvasculares, degeneración macular, enfermedades respiratorias, y lesiones o enfermedades de la médula espinal. En una forma de realización, se proporcionan nuevas moléculas que inhiben el RTP801 y se pueden usar para tratar diversas dolencias e indicaciones. En otra forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar un paciente que padece una enfermedad microvascular, degeneración macular o una enfermedad respiratoria, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor del RTP801. Otra forma de realización de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar un paciente que padece COPD, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor del RTP801. En una forma de realización, el inhibidor es una molécula de ARNsi, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima. Otra forma de realización de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar un paciente que padece degeneración macular, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor del RTP801. En una forma de realización el inhibidor es una molécula de ARNsi, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima.

Otra forma de realización de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar un paciente que padece una enfermedad microvascular, que comprende administrar al paciente a composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor del RTP801. En una forma de realización, el inhibidor es una molécula de ARNsi, una molécula antisentido, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizante), un péptido negativo dominante o una ribozima. Una forma adicional de realización de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un Inhibidor del RTP801 para la preparación de un medicamento para estimular la recuperación de un paciente que padece una enfermedad respiratoria. En una forma de realización la enfermedad respiratoria es COPD y el inhibidor es de manera preferible un ARNsi. Una forma adicional de realización de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un Inhibidor del RTP801 para la preparación de un medicamento para estimular la recuperación de un paciente que padece degeneración macular. En una forma de realización la degeneración macular es AMD y el inhibidor es de manera preferible un ARNsi. Una forma adicional de realización de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un Inhibidor del RTP801 para la preparación de un medicamento para estimular la recuperación de un paciente que padece una enfermedad microvascular. En una forma de realización la enfermedad microvascular es la retinopatía diabética, y el inhibidor es de manera preferible un ARNsi.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención en alguna de sus formas de realización se refiere a la inhibición del gen o el polipéptido RTP801 para el tratamiento de las enfermedades de los ojos, trastornos respiratorios y trastornos microvasculares, inter alia. Tal como se describirá en el presente documento, los inhibidores preferidos que se van a usar con la presente invención son moléculas biológicas. Sin quedar ligado por la teoría, los inventores de la presente invención han encontrado que RTP801 está implicado en diversos estados de enfermedad que incluyen trastornos microvasculares, enfermedades de los ojos, trastornos respiratorios, y lesión y enfermedad de la médula espinal, y sería beneficioso inhibir RTP801 con el fin de tratar cualquiera de dichas enfermedades o trastornos. Se describen en el presente documento con detalle los procedimientos, moléculas y composiciones que inhiben RTP801 , y cualquiera de dichas moléculas y composiciones se pueden emplear de manera beneficiosa en el tratamiento de un paciente que padece cualquiera de dichas dolencias. La presente invención proporciona procedimientos y composiciones para inhibir la expresión del gen RTP801 in vivo. De manera general, el procedimiento incluye administrar oligorribonucleótidos tales como pequeños ARN interferentes (es decir, ARNsi) que se dirigen a un ARNm concreto y lo hibridan, o un material de ácido nucleico que puede producir ARNsi en una célula, en una cantidad suficiente para regular a la baja la expresión de un gen diana mediante un mecanismo de interferencia del ARN. De manera particular, se puede usar el procedimiento sujeto para inhibir la expresión del gen RTP801 para el tratamiento de trastornos respiratorios, trastornos microvasculares y enfermedades de los ojos. De esta manera, en una forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar un paciente que padece de un trastorno microvascular, enfermedad de los ojos o un trastorno respiratorio, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 en una cantidad terapéuticamente efectiva de forma que se trate al paciente con ésta. La invención proporciona de manera adicional un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, enfermedad de los ojos o trastorno respiratorio, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 , en una dosificación y durante un período de tiempo suficiente para promover la recuperación. La enfermedad del ojo puede ser una degeneración macular tal como una degeneración macular relacionada con la edad (AMD), inter alia. El trastorno microvascular puede ser una retinopatía diabética o un insuficiencia renal aguda, inter alia. El trastorno respiratorio puede ser una enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, inter alia. Se puede seleccionar el inhibidor de RTP801 entre una gran variedad de moléculas, que incluyen, pero no se limitan a, compuestos tales como polinucleótidos, fragmentos AS, moléculas de ARN que tienen como diana el ARNm del gen RTP801 tales como las ribozimas o los ARNsi (tales como los ARNsi de los cuadros A-C y en concreto, ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A), o los vectores de expresión que los comprenden; polipéptidos tales como anticuerpos negativos dominantes (tales como un anticuerpo que enlaza de manera específica con un epítope presente en el interior de un polipéptido que comprende aminoácidos consecutivos, la secuencia de los cuales se muestra en la Figura 2 (SEC DE ID N°: 2)), o, en algunos casos, enzimas. De manera adicional, el inhibidor de RTP801 puede ser un inhibidor químico tal como una molécula pequeña, por ejemplo moléculas químicas con bajo peso molecular, por ejemplo, un peso molecular por debajo de 2000 daltons. Se presentan a continuación los inhibidores específicos de RTP801. La presente invención proporciona de manera adicional un procedimiento para tratar a un paciente que padece de degeneración macular, COPD o retinopatía diabética, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 que comprende un polinucleótido que hibrida de manera específica con un ARNm transcrito a partir del gen RTP801 y / o regula a la baja la expresión del gen RTP801 de forma que se trate al paciente con éste. El polinucleótido puede ser un ARNsi que comprenda nucleótidos consecutivos que tengan una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias que se muestran en los cuadros A-C (SEC DE ID Nos: 3-344) y en particular ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A. De manera adicional, una forma adicional de realización de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, un trastorno respiratorio o una enfermedad del ojo, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 que comprende una molécula de ARNsi, de manera opcional una molécula de ARNsi detallada en una cualquiera de los cuadros A-C, en una dosificación y durante un período de tiempo de forma que se trate al paciente con ésta. Se proporciona un procedimiento adicional para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, un trastorno respiratorio o una enfermedad del ojo, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de una molécula de ARN que hace diana en el ARNm del gen RTP801 en una dosificación y durante un período de tiempo de forma que se trata al paciente con ésta. La molécula de ARN puede ser una molécula de ARNsi, tal como una molécula de ARNsi detallada en los cuadros A-C y en concreto, ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A, o una ribozima. La presente invención proporciona de manera adicional un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno respiratorio, un trastorno microvascular o una enfermedad del ojo o cualquiera de las dolencias descritas en el presente documento, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente efectiva de una molécula de ARNsi que hace diana en el ARNm del gen RTP801 , de manera opcional una molécula de ARNsi detallada en los cuadros A-C, en una dosificación y durante un período de tiempo de forma que se trate al paciente con ésta. De manera adicional, la enfermedad del ojo puede ser una degeneración macular tal como una degeneración macular relacionada con la edad (AMD); el trastorno microvascular puede ser una retinopatía diabética o un insuficiencia renal aguda; el trastorno respiratorio puede ser COPD, y los aspectos de la COPD que se está tratando pueden comprender, pero no limitarse a, enfisema, bronquitis crónica, o ambas. "Tratar una enfermedad" se refiere a administrar una sustancia terapéuticamente efectiva para mejorar los síntomas asociados con una enfermedad, para disminuir la gravedad o curar la enfermedad, o evitar que se produzca la enfermedad. Una "dosis terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un compuesto o composición farmacéutica que es efectiva para conseguir una mejora en un paciente o en sus sistemas fisiológicos que incluyen, pero no se limitan a, mejorar el índice de supervivencia, recuperación, o mejora o eliminación más rápida de los síntomas, y se seleccionan otros indicadores seleccionados según sea apropiado para determinar las medidas por personas expertas en la técnica. Los procedimientos para tratar las enfermedades descritas en el presente documento e incluidos en la presente invención pueden incluir administrar un inhibidor de RTP801 en conjunción con un inhibidor de RTP801 adicional, una sustancia que mejore las propiedades farmacológicas del ingrediente activo tal como se detalla a continuación, o un compuesto adicional conocido por ser efectivo en el tratamiento de la enfermedad que se va a tratar, tal como la degeneración macular, COPD, ARF, DR, inter alia. Por "en conjunción con" se entiende antes de, de manera simultánea, o subsiguiente a. Se proporcionan más adelante otros detalles acerca de las terapias conjuntas de ejemplo. En otra forma de realización, la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéutica efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de degeneración macular, COPD; ARF; DR, o cualquier otra enfermedad del ojo, dolencia microvascular o respiratoria tal como se ha detallado anteriormente, y el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para tratar dichas enfermedades y dolencias. En esta forma de realización, el inhibidor de RTP801 puede comprender un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia que comprende una secuencia de sentido opuesto respecto de la secuencia que se muestra en la Figura 1 (SEC DE ID N°:1 ). De manera adicional, el inhibidor de RTP801 puede ser un vector de expresión que comprende un polinucleótido que tiene una secuencia que es una secuencia de sentido opuesto respecto de la secuencia que se muestra en la Figura 1 (SEC DE ID N°: 1 ). El inhibidor de RTP801 de acuerdo con dichos usos puede ser también un anticuerpo, tal como un anticuerpo neutralizante que enlaza de manera específica con un epítope presente en el interior de un polipéptido que comprende aminoácidos consecutivos, las secuencias de los cuales se muestra en la Figura 2 (SEC DE ID N°: 2). De manera adicional, el inhibidor de RTP801 puede ser una molécula de ARN que hace diana en el ARNm del gen RTP801 , de manera opcional un ARNsi, de manera opcional un ARNsi que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias que se muestran en los cuadros A-C (SEC DE ID Nos: 3-344) y en concreto, ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A, o una ribozima. De esta manera, de acuerdo con la información descrita en el presente documento, se puede seleccionar el inhibidor de RTP801 que se va a usar con cualquiera de los procedimientos descritos en el presente documento, en cualquiera de los usos descritos en el presente documento y en cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento a partir del grupo constituido por una molécula de ARNsi, un vector que comprende una molécula de ARNsi, un vector que pueda expresar una molécula de ARNsi y cualquier molécula que se procese de manera endógena en una molécula de ARNsi. Tal como se ha detallado en el presente documento, dicha molécula de ARNsi es de manera preferible una molécula de ARNsi que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica una cualquiera de las secuencias que se muestran en los cuadros A-C (SEC DE ID Nos: 3-344) y en concreto; ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A: "Trastorno respiratorio" se refiere a las dolencias, enfermedades o síndromes del sistema respiratorio que incluyen, pero no se limitan a, trastornos pulmonares de todos los tipos que incluyen enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, inter alia. El enfisema y la bronquitis crónica se pueden producir como parte de la COPD o de manera independiente. "Trastorno microvascular" se refiere a cualquier dolencia que afecta a los capilares microscópicos y linfáticos, en concreto enfermedades vasospásticas, enfermedades vasculíticas, y enfermedades oclusivas linfáticas. Los ejemplos de trastornos microvasculares incluyen, inter alia: enfermedades de los ojos tales como Amaurosis Fugax (embólica o secundaria al SLE), síndrome de apla, deficiencias en Prot CS y ATIII, patologías microvasculares originadas por el uso de fármaco IV, disproteinemia, arteritis temporal, neuropatía óptica isquémica anterior, neuritis óptica (primaria o secundaria a enfermedades autoinmunes), glaucoma, síndrome de von hipel lindau, enfermedad de la córnea, cataratas de rechazo al transplante de córnea, enfermedad de Eales, angeítis escarchada, operaciones de cierre de curvatura, uveítis que incluye inflamación de la pars plana, melanoma coroidal, hemangioma coroidal, aplasia del nervio óptico; enfermedades de la retina tales como oclusión de la arteria de la retina, oclusión de la vena de la retina, retinopatía del prematuro, retinopatía por VIH, retinopatía de Purtscher, retinopatía de vasculitis sistémica y enfermedades autoinmunes, retinopatía diabética, retinopatía hipertensiva, retinopatía por radiación, oclusión del tramo de la vena o la arteria de la retina, vasculitis idiopática de la retina, aneurismas, neuroretinitis, embolización de la retina, necrosis aguda de la retina, retinocoroidopatía de Birdshot, desprendimiento de retina permanente; enfermedades sistémicas tales como Diabetes mellitus, retinopatía diabética (DR), patologías microvasculares relacionadas con la diabetes (tal como se detallan en el presente documento), síndromes de hiperviscosidad, síndromes del arco aórtico y síndromes isquémicos oculares, fístula carótido-cavemosa, esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémíco, arteriolitis con autoanticuerpos SS-A, vasculitis hemorrágica multifocal aguda, vasculitis que resulta de infección, vasculitis que resulta de la enfermedad de Beh?et, sarcoidosis, coagulopatías, nefropatías, neuropatías, enfermedades microvasculares del riñon, y enfermedades microvasculares isquémicas, inter alia. Los trastornos microvasculares pueden comprender un elemento neovascular. El término "trastorno neovascular" se refiere a aquellas dolencias en las que la formación de vasos sanguíneos (neovascularización) es perjudicial para el paciente. Los ejemplos de neovascularización ocular incluyen: enfermedades de la retina (retinopatía diabética, Edema macular diabético, glaucoma crónico, desprendimiento de retina, retinopatía de las células falciformes); rubeosis del iris; vitreo retinopatía proliferativa; enfermedades inflamatorias; uveítis crónica; neoplasmas (retinoblastoma, peudoglioma y melanoma); iridociclitis heterocrómica de Fuchs; glaucoma neovascular, neovascularización de la córnea (hipoplasia del iris en desarrollo, y inflamatoria por transplante); neovascularización que sigue a una vitrectomía y lensectomía combinada; enfermedades vasculares (isquemia de la retina, insuficiencia vascular coroidal, trombosis coroidal e isquemia de la arteria carótida); neovascularización del nervio óptico; y neovascularización debida a la penetración del ojo o lesión ocular contusiva. Se pueden tratar todas estas enfermedades neovasculares usando los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención. "Enfermedad del ojo" se refiere a las dolencias, enfermedades o síndromes del ojo que incluyen, pero no se limitan a cualquier dolencia que implica neovascularización coroidal (CNV), AMD húmeda y seca, síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, rupturas en la membrana de Brunch, degeneración miópica, tumores oculares, enfermedades degenerativas de la retina, y oclusión de la vena de la retina (RVO). Se han considerado algunas dolencias descritas en el presente documento, tales como la DR, que se pueden tratar de acuerdo con los procedimientos de la presente invención como un trastorno microvascular y una enfermedad del ojo, o ambas, bajo las definiciones presentadas en el presente documento. El "gen RTP801" se refiere al marco de lectura abierto de la secuencia que codifica RTP801 , tal como se muestra en la Figura 1 (SEC DE ID N°: 1 ), o cualquier secuencia homologa de la misma que tenga de manera preferible al menos un 70 % de identidad, de manera más preferible un 80 % de identidad, incluso de manera más preferible un 90 % o un 95 % de identidad. Esto abarca cualquier secuencia derivada de la SEC DE ID N°: 1 que haya experimentado mutaciones, alteraciones o modificaciones tal como se describen en el presente documento. De esta manera, en una forma de realización preferida, RTP801 se codifica mediante una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la SEC DE ID N: 1. Esta también comprendido en la presente invención que los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención son únicamente complementarios e idénticos, de manera respectiva, con una parte del ácido nucleico que codifica el RTP801 , tal como, de manera preferible, el primer tramo y la primera cadena es normalmente más cortas que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Se reconoce también que una persona experta en la técnica puede percibir basándose en la secuencia de aminoácidos de RTP801 cualquier secuencia de ácido nucleico que codifica dicha secuencia de aminoácidos basándose en el código genético. Sin embargo, debido al modo asumido de acción de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención, es más preferido que el ácido nucleico que codifica RTP801 , de manera preferible el ARNm del mismo, sea aquel presente en el organismo, tejido y/o célula, de manera respectiva, en el que la expresión de RTP801 se va a reducir. "Polipéptido RTP801" se refiere al polipéptído del gen RTP801 , y se entiende que incluye, para los objetivos de la presente invención, los términos "RTP779", "REDD1", "Ddit4", "FLJ20500", "Dig2" y "PRF1", derivados de cualquier organismo, de manera opcional el hombre, las variantes ayustadas y los fragmentos de las mismas que retienen la actividad biológica, y los homólogos de las mismas, que tienen de manera preferible al menos un 70%, de manera más preferible al menos un 80 %, incluso de manera más preferible al menos un 90 % o un 95 % de homología con ellos. De manera adicional, se entiende que este término abarca los polipéptidos que resultan de alteraciones menores en la secuencia que codifica el RTP801 , tales como, inter alia, mutaciones puntuales, sustituciones, delecciones e inserciones que pueden producir una diferencia en unos pocos aminoácidos entre el polipéptido resultante y el RTP801 que se produce de manera natural. Los polipéptidos codificados por las secuencias de ácido nucleico que enlazan con la secuencia que codifica RTP801 o la secuencia genómica bajo condiciones de hibridación con elevada restricción, que son bien conocidos en la técnica (por ejemplo, Ausubel y col., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988), actualizados en 1995 y 1998), se abarcan también por este término. Se incluyen también en el término RTP801 químicamente modificado o los fragmentos de RTP801 químicamente modificados, siempre que se retenga la actividad biológica. RTP801 tiene o comprende de manera preferible una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC. DE ID. N°. 2. Se reconoce que podría haber diferencias en la secuencia de aminoácidos entre diversos tejidos de un organismo y entre diferentes organismos de una especie o entre diferentes especies a las cuales se puede aplicar el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención en diversas formas de realización de la presente invención. Sin embargo, basándose en la enseñanza técnica proporcionada en el presente documento, se puede tomar en consideración la secuencia respectiva de acuerdo con esto cuando se diseñan cualquiera de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención. Los fragmentos concretos de RTP801 incluyen los aminoácidos 1-50, 51-100, 101-150, 151-200 y 201-232 de la secuencia que se muestra en la Figura 2. Los fragmentos concretos adicionales de RTP801 incluyen los aminoácidos 25-74, 75-124, 125-174, 175-224 y 225-232 de la secuencia que se muestra en la Figura 2. RTP801 tal como se usa en el presente documento, es una proteína descrita, entre otros, en el Documento WO 99/09046. RTP801 que se denomina también como RTP801 , se ha descrito como una diana transcripcional de HIF-1a por Shoshani T y col. (Shoshani y col., 2002, Mol Cell Biol, 22, 2283-93). Además el estudio por Ellisen y col. (Ellisen y col., Mol Cell, 10, 995-1005) ha identificado RTP801 como un gen de respuesta al daño de un ADN dependiente de p53 y como un gen dependiente de p63 implicado en la diferenciación epitelial. Igualmente el RTP801 mimetiza el modelo específico de tejido del miembro de la familia p53 p63, es efectivamente similar a o además de TP 63, es un inhibidor de la diferenciación in vitro y está implicado en la regulación de especies de oxígeno reactivas. Aparte de esto, RTP801 es sensible al factor de transcripción sensible a la hipoxia del factor 1 inducible por hipoxia (HIF-1 ), y típicamente se regula al alza durante la hipoxia, tanto in vitro como in vivo, en un modelo animal de ataque isquémico. RTP801 parece funcionar en la regulación de las especies de oxígeno reactivas (ROS) y los niveles de ROS y la sensibilidad reducida al estrés oxidativo se incrementan tras la expresión ectópica de RTP801 (Ellisen y col. 2002, más arriba; Soshani y col. 2002, más arriba): De manera preferible, RTP801 es una proteína RTP801 biológicamente activa que presenta de manera preferible al menos una de aquellas características, de manera preferible dos o más y de manera más preferible cada una y cualquiera de estas características. Un gen relacionado con el RTP801 es el RT801 L, denominado también como "REDD2", fue descubierto por los inventores de la presente invención. RTP801 L es homólogo a RTP801 , y reacciona de manera similar al estrés oxidativo; de esta manera, RTP801 L, posee de manera probable algunas funciones similares con RTP801. Sin quedar ligado por la teoría, siendo RTP801 una proteína inducible por estrés (que responde a la hipoxia, estrés oxídativo, estrés térmico, estrés ER) es un factor que actúa en el ajuste fino de la respuesta celular al desequilibrio de energía. Como tal, es una diana adecuada para el tratamiento de cualquier enfermedad en la que las células deberán rescatarse de la apoptosis debida a condiciones estresantes (por ejemplo, enfermedades que se acompañan por la muerte de las células normales) o en la que las células que se adaptan a las condiciones estresantes debidas a los cambios en la expresión de RTP801 (por ejemplo, células cancerosas) deberán morir. En el último caso, se puede ver RTP801 como un factor de supervivencia para las células cancerosas y sus inhibidores pueden tratar el cáncer como una monoterapia o como fármacos sensibilizantes en combinación con la quimioterapia o la radioterapia. El término "polinucleótido" se refiere a cualquier molécula compuesta de nucleótidos de ADN, nucleótidos de ARN o a una combinación de ambos tipos, es decir, que comprende dos o más de las bases guanidina, citosina, timidina, adenina, uracilo o inosina, inter alia. Un polinucleótido puede incluir nucleótidos naturales, nucleótídos químicamente modificados y nucleótidos sintéticos, o los análogos químicos de los mismos. El término incluye "oligonucleótidos" y abarca "ácidos nucleicos". El término "aminoácido" se refiere a una molécula que está constituida por uno cualquiera de los 20 aminoácidos que se producen de manera natural, aminoácidos que se han modificado químicamente (véase a continuación), o aminoácidos sintéticos. El término "polipéptido" se refiere a una molécula compuesta por dos o más residuos de aminoácidos. El término incluye péptidos, polipéptidos, proteínas y peptidomiméticos.

Un "peptidomimético" es un compuesto que contiene elementos estructurales no peptídicos que es capaz de imitar la(s) acción(es) biológica(s) de un péptido padre natural. Algunas de las características clásicas de los péptidos tales como los enlaces peptídicos que se rompen de forma enzimática no están presentes en un peptidomimético. Por el término "péptido dominante negativo" se entiende un polipéptido codificado por un fragmento de ADNc que codifica una parte de una proteína (véase Herskowitz I.: Functional inactivation of genes by dominant negative mutations. Nature. 1987 Septiembre 17-23; 329(6136); 219-22. Revisión; Roninson IB y col., Genetic suppress?r elements: new tools for molecular oncology — décimo tercera Cornelius P. Rhoads Memorial Award Lecture. Cáncer Res. 1995 Septiembre 15;55(18):4023). Este péptido puede tener una función diferente de la proteína de la cual se derivó. Puede interactuar con la proteína completa e inhibir su actividad o puede interactuar con otras proteínas e inhibir su actividad en respuesta a la proteína de longitud completa (padre). Dominante negativo significa que el péptído es capaz de superar la proteína padre natural e inhibir su actividad para proporcionar a la célula una característica diferente, tal como la resistencia o sensibilización a la muerte o cualquier fenotipo celular de interés. Para la intervención terapéutica, se puede suministrar el péptido por sí mismo como ingrediente activo de una composición farmacéutica, o se puede suministrar el ADNc a la célula utilizando procedimientos conocidos.

Preparación de péptidos y polipéptidos Se pueden producir polipéptidos mediante diversos procedimientos, por ejemplo: 1) Sintéticamente: Se pueden fabricar polipéptidos sintéticos usando un equipo comercialmente disponible, usando la secuencia conocida de RTP801 o una porción de la misma. 2) Procedimientos recombinantes: Un procedimiento preferido para fabricar los polipéptidos RTP801 o fragmentos de los mismos es clonar un polinucleótido que comprende el ADNc del gen RTP801 en un vector de expresión y cultivar la célula que contiene el vector de forma que exprese el polipéptido codificado, y a continuación purificar el polipéptido resultante, realizado todo usando procedimientos conocidos en la técnica tal como se describe en, por ejemplo, Marshak y col., "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manua\". CSHL Press (1996) (de manera adicional, véase Bibl. Haematol 1965;23:1165-74 Appl microbiol. 1967 Jul;15(4):851-6 Can J Biochem. 1968 Mayo;46(5):441-4; Biochemistry. 1968 Julio;/ (7):2574-80; Arch Biochem Biophys. 1968 Septiembre 10;126(3):746-72; Biochem Biophys Res Commun. 1970 Febrero 20;38(4):825-30)). El vector de expresión puede incluir un promotor para controlar la transcripción del material heterólogo y puede ser un promotor constitutivo o inducible para permitir la transcripción selectiva. Se pueden incluir de manera opcional potenciadores que se pueden requerir para obtener los niveles de transcripción necesarios. El vehículo de expresión puede incluir también un gen de selección. Se pueden introducir los vectores en las células o los tejidos mediante uno cualquiera de una variedad de procedimientos conocidos dentro de la técnica. Dichos procedimientos se pueden encontrar descritos de manera general en Sambrook y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992), en Ausubel y col., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989), Vega y col., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor, Ml (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses. Butterworths, Boston MA (1988) y Gilboa y col. (1986). 3) Purificación a partir de fuentes naturales Se pueden purificar el polipéptido RTP801 , o los fragmentos del mismo que se producen de manera natural, a partir de fuentes naturales (tales como tejidos) usando muchos procedimientos conocidos por una persona normalmente experta en la técnica, tales como, por ejemplo: inmunoprecipitación con un anticuerpo anti- RTP801 , o cromatografía de afinidad mediante unión a matriz con cualquier molécula conocida por unirse a RTP801.

La purificación de proteínas que se practica tal como se conoce en la técnica se describe en, por ejemplo, Marshak y col., "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manuaf. CSHL Press (1996). Por "efecto biológico de RTP801" o "actividad biológica de RTP801 " se entiende el efecto de RTP801 en los trastornos respiratorios, que puede ser directo o indirecto, e incluye, sin quedar ligado por la teoría, el efecto de RTP801 sobre la apoptosis de las células alveolares inducido por las condiciones hipóxicas o hiperóxicas. El efecto indirecto incluye, pero no se limita a, el enlace de RTP801 con o que tiene un efecto sobre una de las diversas moléculas, que están implicadas en una cascada de transducción de señal dando como resultado la apoptosis. "Apoptosis" se refiere a un tipo fisiológico de muerte celular que es el resultado de la activación de algunos mecanismos celulares, es decir, la muerte que se controla por la maquinaria celular. La apoptosis puede, por ejemplo, ser el resultado de la activación de la maquinaria celular mediante un estímulo externo, por ejemplo, una citoquina o un anticuerpo anti. FAS, que conduce a la muerte celular o mediante una señal interna. Se puede usar también de manera intercambiable el término "muerte celular programada" con "apoptosis". "Enfermedad relacionada con la apoptosis" se refiere a una enfermedad cuya etiología se relaciona bien de manera completa o parcial con el proceso de la apoptosis. La enfermedad puede producirse bien por una malfunción del proceso apoptótico (tal como en el cáncer o en una enfermedad autoinmune) o por sobreactividad del proceso apoptótico (tal como en algunas enfermedades neurodegenerativas): Muchas enfermedades en las que está implicado RTP801 son enfermedades relacionadas con la apoptosis. Por ejemplo, la apoptosis es un mecanismo significativo en la AMD seca, en la que tiene lugar la atrofia lenta de las células del epitelio del fotorreceptor y el pigmento, principalmente en la región central (macular) de la retina. La apoptosis neuroretinal es también un mecanismo significativo en la retinopatía diabética. Un "inhibidor" es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad de un gen o el producto de dicho gen con una extensión suficiente para conseguir un efecto biológico o fisiológico deseado. Un "inhibidor del RTP801" es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad del gen RTP801 o del producto del gen RTP801 , de manera particular el gen RTP801 humano o el producto del gen. Dichos inhibidores incluyen sustancias que afectan la transcripción o la traducción del gen, así como sustancias que afectan la actividad del producto del gen. Un inhibidor del RTP801 puede ser también un inhibidor del promotor RTP801. Los ejemplos de dichos inhibidores pueden incluir, inter alia, polinucleótidos tales como fragmentos AS, ARNsi, o los vectores que los comprenden; polipéptidos tales como péptidos dominantes negativos, anticuerpos y enzimas; ARN catalíticos tales como ribozímas; y moléculas químicas con un bajo peso molecular, por ejemplo, un peso molecular por debajo de 2000 daltons. Se proporcionan a continuación los inhibidores específicos de RTP801. "El vector de expresión" se refiere a un vector que tiene la capacidad de incorporar y expresar fragmentos de ADN heterólogos en una célula extraña. Se conocen y/o están disponibles en el mercado muchos vectores de expresión procariotas y eucariotas. La selección de los vectores de expresión apropiados está comprendida dentro del conocimiento de aquellas personas expertas en la técnica. El término "anticuerpo" se refiere al anticuerpo de IgG, IgM, IgD, IgA, e IgE, inter alia. La definición incluye los anticuerpos policlonales o los anticuerpos monoclonales. Este término se refiere a los anticuerpos completos o a los fragmentos de anticuerpos que comprenden un dominio de unión con el antígeno, por ejemplo los anticuerpos sin la porción Fc, los anticuerpos de cadena única, los minianticuerpos, los fragmentos constituidos esencialmente solo por el dominio de unión con el antígeno, variable del anticuerpo, etc. El término "anticuerpo" se puede referir también a los anticuerpos frente a las secuencias de polinucleótidos obtenidas mediante vacunación con ADNc, El término abarca también los fragmentos de anticuerpo que retienen la capacidad para enlazar de manera selectiva con su antígeno o receptor y se ejemplifican como sigue, inter alia: (1 ) Fab, el fragmento que contiene un fragmento de enlace con el antígeno monovalente de una molécula de anticuerpo que se puede producir mediante digestión del anticuerpo completo con el enzima papaína para dar como resultado una cadena ligera y una porción de cadena pesada; (2) F(ab')2, el fragmento del anticuerpo que se puede obtener tratando el anticuerpo completo con el enzima pepsina sin la reducción subsiguiente; F(ab')2 es un dímero de dos fragmentos Fab que se mantienen conjuntamente mediante dos enlaces disulfuro; (3) Fv, definido como un fragmento modificado mediante ingeniería genética que contiene la región variable de la cadena ligera y la región variable de la cadena pesada expresado como dos cadenas; y (4) El anticuerpo de cadena única (SCA), definido como una molécula modificada mediante ingeniería genética que contiene la región variable de la cadena ligera y la región variable de la cadena pesada enlazadas por un polipéptido engarce adecuado como una molécula de cadena única fusionada genéticamente. Por el término "epítope" tal como se usa en esta invención se entiende un determinante antigénico o un antígeno al cual se enlaza el anticuerpo, Los determinantes epitópicos están constituidos usualmente por agrupamientos químicamente tensioactivos de moléculas como aminoácidos o cadenas laterales de azúcares y usualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas.

Preparación de anticuerpos anti- RTP801 Se pueden preparar anticuerpos que enlazan con RTP801 o un fragmento derivado del mismo usando un polipéptido intacto o fragmentos que contienen polipéptidos más pequeños como antígeno inmunizante. Por ejemplo, puede ser deseable producir anticuerpos que enlazan de manera específica con el extremo N- o el C- terminal o cualquier otro dominio adecuado del RTP801. Se puede derivar el polipéptido usado para inmunizar un animal del ADNc traducido o de la síntesis química y se puede conjugar con una proteína vehículo, si se desea. Dichos vehículos comúnmente usados que se pueden acoplar químicamente con el polipéptido incluyen la hemocianina de la lapa americana (KLH), tiroglobulina, albúmina de suero bovino (BSA) y el toxoide del tétanos. A continuación se usa el polipéptido acoplado para inmunizar el animal. Si se desea, se pueden purificar de manera adicional anticuerpos policlonales o monoclonales, por ejemplo, mediante enlace a y elución desde una matriz a la cual se ha enlazado el polipéptido o péptido contra el cual se han originado los anticuerpos. Aquellas personas expertas en la técnica conocen diversas técnicas comunes en inmunología para la purificación y/o concentración de anticuerpos policlonales así como monoclonales (Coligan y col, Unidad 9, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1994). Se conocen en la técnica los procedimientos para fabricar anticuerpos de todos los tipos, que incluyen fragmentos (Véase por ejemplo, Harlow y Lañe: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York (1988)). Los procedimientos de inmunización, que incluyen todas las etapas necesarias para preparar el inmunógeno en un adyuvante adecuado, determinación del enlace del anticuerpo, el aislamiento de los anticuerpos, los procedimientos para obtener anticuerpos monoclonales, y la humanización de los anticuerpos monoclonales son todos conocidos por los técnicos expertos. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos humanizados o anticuerpos humanos. Se pueden humanizar los anticuerpos usando una variedad de técnicas conocidas en la técnica que incluyen injerto mediante CDR (Documento EP239.400: publicación PCT WO91/09967; patentes de los Estados Unidos Nos 5,225,539; 5,530,101 ; y 5,585,089, plaqueado o revestimiento (Documento EP 592,106; Documento EP 519,596; Padlan, Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991 ); Studnicka y col., Protein Engineering 7(6):805-814 (1994); Roguska y col., PNAS 91 :969-973 (1994)), e intercambio de cadenas (Patente de los Estados Unidos N° 5,565,332). Los anticuerpos monoclonales tal como se han definido, incluyen anticuerpos derivados de una especie (tal como murina, conejo, cabra, rata, ser humano, etc) así como los anticuerpos derivados de dos (o más) especies, tal como los anticuerpos quiméricos y humanizados. Son particularmente deseables los anticuerpos completamente humanos para el tratamiento terapéutico de los pacientes humanos. Se pueden fabricar anticuerpos humanos medíante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica que incluyen los procedimientos de presentación en fagos usando bibliotecas de anticuerpos derivadas de secuencias de inmunoglobulina humana. Véase también las Patentes de los Estados Unidos Nos 4,444,887 y 4,716,111 y las publicaciones PCT WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735, y WO 91/10741 , cada una de las cuales se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad. Se puede encontrar información adicional que concierne a todos los tipos de anticuerpos, que incluyen los anticuerpos humanizados, anticuerpos humanos y fragmentos de anticuerpo en el Documento WO 01/05998, que se incorpora en el presente documento como referencia en su totalidad. Se pueden preparar anticuerpos neutralizantes mediante los procedimientos descritos anteriormente, posiblemente con una etapa adicional de selección para la actividad neutralizante mediante, por ejemplo, un ensayo d supervivencia. Los términos "compuesto químico", "molécula pequeña", "molécula química" "molécula química pequeña" y "compuesto químico pequeño" se usan en el presente documento de manera intercambiable y se entiende que se refieren a las fracciones químicas de cualquier tipo concreto que se pueden producir de manera sintética u obtener a partir de fuentes naturales y usualmente tienen un peso molecular de menos de 2000 daltons, menos de 1000 daltons o incluso menos de 600 daltons. La presente invención se refiere también a los ácidos nucleicos funcionales que comprenden una estructura de doble cadena, su uso para la fabricación de un medicamento, una composición farmacéutica que comprende dichos ácidos nucleicos funcionales y un procedimiento para el tratamiento de un paciente.

Se ha reconocido la hipoxia como elemento clave en el patomecanismo de un número bastante grande de enfermedades tales como apoplejía, enfisema e infarto que se asocian con una disponibilidad subóptima de oxígeno y respuestas de daño en el tejido en condiciones de hipoxia. En tejidos de crecimiento rápido, que incluyen tumores, una disponibilidad subóptima de oxígeno se compensa mediante una neo-angiogénesis no deseada. Por tanto, al menos en el caso de las enfermedades cancerosas, no es deseado el crecimiento de la vasculatura. En vista de esto, la inhibición de la angiogénesis y el crecimiento vascular, de manera respectiva, son sujeto de una intensa investigación. Hoy en día, están disponibles algunos compuestos que inhiben la angiogénesis no deseada y el crecimiento vascular. Alguno de los compuestos más prominentes son aquellos que inhiben VEGF y el receptor del VEGF. En ambos casos, el efecto de VEGF se evita, mediante el bloqueo del VEGF como tal, por ejemplo, usando un anticuerpo dirigido contra VEGF tal como el conseguido por Genentech's AVASTIN (AB monoclonal específico para VEGF) (Ferrara N.; Endocr Rev. 2004 Agosto;25(4):581-611 ), o mediante bloqueo del receptor correspondiente, es decir, el receptor del VEGF (Traxler P; Cáncer Res. 2004 Julio 15;64(14):4931-41 ; o Stadler WM y col., Clin Cáncer Res. 2004 mayo 15;10(10):3365-70). Como, sin embargo, la angíogénesis y el crecimiento de la vasculatura son procesos muy básicos y vitales para cualquier animal y ser humano, el efecto de este tipo de compuesto debe centrarse en el emplazamiento concreto donde no se desea la angiogénesis y el crecimiento vascular, lo que convierte la fijación de la diana o liberación correcta en un aspecto crítico en conexión con este tipo de enfoque terapéutico. Es de esta manera un objetivo de la presente invención proporcionar medios adicionales para el tratamiento de las enfermedades que implican el crecimiento no deseado de la vasculatura y la angiogénesis, de manera respectiva. Por "ARN pequeño interferente" (ARNsi) se entiende una molécula de ARN que disminuye o silencia (evita) la expresión de un gen / ARNm de su homólogo celular endógeno. Se entiende que el término abarca "interferencia de ARN" (ARNi) Interferencia de ARN (ARNi) se refiere al proceso de silenciamiento del gen post transcripcional específico de la secuencia en mamíferos mediado por ARN pequeños interferentes (ARNsi) (FIRE y col, 1998, Nature 39_ , 806). El proceso correspondiente en plantas se denomina comúnmente como un silenciamiento específico del gen post transcripcional o silenciamiento del ARN y se denomina también como supresión en hongos. La respuesta de interferencia del ARN puede presentar un complejo de endonucleasas que contiene un ARNsi, denominado comúnmente como un complejo de silenciamiento inducido por el ARN (RISC), que media la rotura del ARN de cadena única que tiene la secuencia complementaria con la cadena de sentido opuesto del dúplex de ARNsi. La rotura del ARN diana puede tener lugar en el centro de la región complementaria de la cadena de sentido opuesto del dúplex de ARNsi (Elbashir y col 2001 , Genes Dev., 15, 188). Para información reciente sobre estos términos y mecanismos propuestos, véase Bernstein E., Denli AM., Hannon GJ: The rest is silence. RNA. 2001 Nov;7(11 ):1509-21 ; y Nishikura K-: A short primer on RNAi: RNA-directed RNA polymerase acts as a key catalyst. Cell. 2001 Noviembre 16;107(4):415-8. Se proporcionan en los cuadros A-C los ejemplos de moléculas de ARNsi que se pueden usar en la presente invención. Durante los últimos años, ARNi ha emergido como uno de los procedimientos más eficientes para la inactivación de los genes (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Nature, 2002, v.418, p244-51 ). Como procedimiento, se basa en la capacidad de las especies de ARNds para entrar en un complejo específico de proteínas, en el que éste, a continuación, se dirige al ARN celular complementario y la degrada de manera específica. Con más detalle, los ARNds se digieren en ARN inhibitorios cortos (17-29 pb) (ARNsi) mediante ARNasas de tipo lll (DICER, Drosha, etc) (Nature, 2001 , v.409, p.363-6; Nature, 2003, .425, p.415-9). Estos fragmentos y el ARNm complementario se reconocen por el complejo específico de proteína RISC. El proceso completo culmina mediante la rotura con endonucleasa del ARNm diana (Nature Reviews, 2002, v.3, p.737-47; Curr Opin Mol Ther. 2003 Junio;5(3):217-24). Para la descripción sobre cómo diseñar y preparar ARNsi para los genes conocidos véase por ejemplo Chalk AM, Wahlestedt C, Sonnhammer EL. Improved and automated prediction of effective siRNA Biochem. Biophys. Res Commun. 2004 Junio 18;319(1 ):264-74; Sioud M, Leirdal M., Potential design rules and enzymatic synthesis of siRNas. Methods Mol Biol. 2004;252:457-69; Levenkova N, Gu Q, Rux JJ.: Gene specific siRNA selector Bioinformatics. 2004 Febrero 12;20(3):430-2. y Ui-Tei K, Naito Y, Takahashi F, Haraguchi T, Ohki-Hamazaki H, Juni A, Ueda R, Saigo K., Guidelines for the selection of highly effective siRNA sequences for mammalian and chick RNA interference Nuclelc Acids Res, 2004 Febrero 9;32(3):936-48. Véase también Liu Y, Braasch DA, Nulf CJ, Corey DR. Efficient and isoform-selective inhibition of cellular gene expression by peptide nucleic acids Biochemistry, 2004 Feb 24;43(7):1921-7. Véanse también las publicaciones PCT WO 2004/015107 (Atugen) y WO 02/44321 (Tusch? y col), y también Chiu YL, Rana TM. siRNA function in RNAi: a chemical modification analysis. RNA 2003 Septiembre; 9(9):1034-48 y las Patentes de los Estados Unidos Nos 5898031 y 6107094 (Crooke) para la producción de ARNsi modificado / más estable. Se han desarrollado vectores basados en ADN capaces de la generación de ARNsi en el interior de células. El procedimiento implica de manera general la transcripción de ARN de horquilla corta que son eficientemente procesados para formar ARNsi en el interior de las células. Paddison y col. PNAS 2002, 99:1443-1448; Paddison y col. Genes & Dev 2002, 16:948-958; Sui y col. PNAS 2002, 8:5515-5520; y Brummelkamp y col. Science 2002, 296:550-553. Estos informes describen los procedimientos para generar ARNsi capaces de dirigir de manera específica numerosos genes que se expresan de manera endógena y exógena. Para la liberación de los ARNsi, véase, por ejemplo, Shen y col (FEBS letters 539:111-114 (2003)), Xia y col., Nature Biotechnology 20: 1006-1010 (2002), Reich y col., Molecular Vision 9: 210-216 (2003), Sorensen y col. (J. Mol. Biol. 327:761-766 (2003), Lewis y col., Nature Genetics 32: 107-108 (2002) y Simeoni y col., Nucleic Acids Research 31 , 11 : 2717-2724 (2003). Se ha usado recientemente ARNsi de manera satisfactoria para la inhibición en primates: para detalles adicionales véase Tolentino y col., retina 24(1 ) febrero 2004 pp 132-138.

ARNsi de la presente invención Especificaciones generales de los ARNsi de la presente invención Por lo general, los ARNsi usados en la presente invención comprenden un ácido ribonucleico que comprende una estructura de doble cadena, en la que la estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, en la que la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y en el que dicho primer tramo es complementario al menos de manera parcial con un ácido nucleico diana, y en la que la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos y en el que dicho segundo tramo es idéntico al menos de manera parcial con un ácido nucleico diana, en el que dicho primer tramo y/o dicho segundo tramo comprende una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2', en el que dentro de cada cadena, cada grupo de nucleótidos modificados está flanqueado en uno o ambos lados por un grupo flanqueante de nucleótidos en el que los nucleótidos flanqueantes que forman el grupo flanqueante de nucleótidos es un nucleótido no modificado o un nucleótido que tenga una modificación distinta a la modificación de los nucleótidos modificados. Además, dicha primera cadena y/o dicha segunda cadena pude comprender dicha pluralidad de nucleótidos modificados, y puede comprender dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. El grupo de nucleótidos modificados y/o el grupo de nucleótidos flanqueantes puede comprender un número de nucleótidos en el que el número se selecciona entre el grupo que comprende entre uno y diez nucleótidos. En conexión con cualquier intervalo especificado en el presente documento, debe entenderse que cada intervalo describe cualquier número entero entre las cifras respectivas usadas para definir el intervalo, incluyendo dichas dos cifras que definen dicho intervalo. En el presente caso, el grupo por tanto comprende un nucleótido, dos nucleótidos, tres nucleótidos, cuatro nucleótidos, cinco nucleótidos, seis nucleótidos, siete nucleótidos, ocho nucleótidos, nueve nucleótidos y diez nucleótidos. El modelo de los nucleótidos modificados de dicha primera cadena puede ser el mismo que el modelo de los nucleótidos modificados de dicha segunda cadena, y se puede alinear con el modelo de dicha segunda cadena. De manera adicional, el modelo de dicha primera cadena puede estar desplazado o más nucleótidos en relación con el modelo dicha segunda cadena. Las modificaciones descritas más arriba se pueden seleccionar entre el grupo que comprende amino, fluoro, metoxi, alcoxi y alquilo. La estructura de doble cadena del ARNsi puede tener los extremos enromados, en uno o ambos extremos. De forma más específica, la estructura de doble cadena puede estar enromada en el lado de la estructura de doble cadena que se define por el extremo 5' de la primera cadena y el extremo 3' de la segunda cadena, o la estructura de doble cadena puede estar enromada en el lado de la estructura de doble cadena que se define por el extremo 3' de la primera cadena y el extremo 5' de la segunda cadena. De manera adicional, al menos una de las dos cadenas puede tener un saliente de al menos un nucleótido en el extremos 5'; la prolongación puede estar constituido por al menos un desoxirribonucleótido. Al menos una de las cadenas puede también tener de manera opcional un saliente de al menos uno nucleótido en el extremo 3'. La longitud de la estructura de doble cadena de ARNsi está comprendida normalmente entre aproximadamente 17 y 21 , y de manera más preferible de 18 ó 19 bases. Más aún, la longitud de dicha primera cadena y/o la longitud de dicha segunda cadena puede seleccionarse, independientemente entre sí, entre el grupo que comprende los intervalos de entre aproximadamente 15 y aproximadamente 23 bases, 17 a 21 bases y 18 ó 19 bases. De forma adicional, la complementariedad entre dicha primera cadena y el ácido nucleico diana puede ser perfecta, o el dúplex formado entre la primera cadena y el ácido nucleico diana puede comprender al menos 15 nucleótidos en el que hay un emparejamiento erróneo o dos emparejamientos erróneos entre dicha primera cadena y el ácido nucleico diana que forma dicha estructura de doble cadena. En algunos casos, tanto la primera cadena como la segunda cadena comprenden cada una al menos un grupo de nucleótidos modificados y al menos un grupo flanqueante de nucleótidos, en el que cada grupo de nucleótidos modificados comprende al menos un nucleótido y en el que cada grupo flanqueante de nucleótidos que comprende al menos un nucleótido estando cada grupo de nucleótidos modificados de la primera cadena alineado con un grupo flanqueante de nucleótidos de la segunda cadena, en el que el nucleótido en la posición más 5' terminal de la primera cadena es un nucleótido del grupo de nucleótidos modificados, y el nucleótido en la posición más 3' de la segunda cadena es un nucleótido del grupo flanqueante de nucleótidos. Cada grupo de nucleótidos modificados puede estar constituido por un único nucleótido y/o cada grupo flanqueante de nucleótidos puede estar constituido por un único nucleótido. De forma adicional, es posible que, en la primera cadena, el nucleótido que forma el grupo flanqueante de nucleótidos sea un nucleótido no modificado que se dispone en un sentido 3' relativo al nucleótido que forma el grupo de nucleótidos modificados, y en la segunda cadena el nucleótido que forma el grupo de nucleótidos modificados es un nucleótido modificado que se dispone en sentido 5' relativo al nucleótido que forma el grupo flanqueante de nucleótidos. Además, la primera cadena del ARNsi puede comprender entre ocho y doce, de manera preferible de nueve a once grupos de nucleótidos modificados, y la segunda cadena puede comprender entre siete y once de manera preferible ocho a diez, grupos de nucleótidos modificados. La primera cadena y la segunda cadena pueden estar enlazadas mediante una estructura en bucle, que puede estar comprendida por un polímero de que no sea ácido nucleico, tal como, inter alia, polietilén glicol. De manera alternativa, la estructura en bucle puede estar comprendida por ácido nucleico. Además, el extremo 5' de la primera cadena del ARNsi puede estar enlazado al extremo 3' de la segunda cadena, o el extremo 3' de la primera cadena puede estar enlazado al extremo 5' de la segunda cadena, siendo dicho enlace vía un engarce de ácido nucleico que tiene normalmente una longitud entre 10-2000 nucleobases.

Especificaciones particulares de los ARNsi de la presente invención La invención proporciona un compuesto que tiene la estructura (estructura A): 5' (N)x - Z 3" (cadena de sentido opuesto) 3' Z "-(N')y 5' (cadena positiva) en la que cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo de azúcar, y (N)x y (N')y es un oligómero en el que cada N o N' consecutivo se junta con el siguiente N o N' mediante un enlace covalente; en la que cada uno de x e y es un número entero comprendido entre 19 y 40; en la que cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está unido de forma covalente con el extremo 3' de la cadena en la que está presente; y en la que la secuencia de (N)x comprende una secuencia de sentido opuesto respecto del ADNc del gen RTP801 En particular, la invención proporciona el compuesto anterior en el que la secuencia de (N)x comprende una o más de las secuencias de sentido opuesto presentes en los cuadros A, B y C. En particular, la invención proporciona el compuesto anterior en el que el enlace covalente es un enlace fosfodiéster, en el que x = y, de manera preferible en el que x = y = 19, en el que Z y Z' están ambos ausentes, en el que al menos un ribonucleótido está modificado en su residuo de azúcar en la posición 2', en el que el resto en la posición 2' es metoxi(2'-0-metilo), en el que los ribonucleótidos alternantes están modificados tanto en la cadena positiva como en la cadena de sentido opuesto, y en el que los ribonucleótidos de los extremos 5' y 3' de la cadena de sentido opuesto están modificados en sus residuos de azúcar y los ribonucleótidos de los extremos 5' y 3' de la cadena positiva no están modificados en sus residuos de azúcar. En particular, el ARNsi usado en la presente invención es un oligorribonucleótido en el que una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, de 5' a 3', la secuencia definida en las SEC. de ID NROS.: 3-52 o en las SEC. de ID NROS.: 103-174 o en in las SEC. de ID NROS.: 247-295 (que son cadenas positivas), en el que se pueden modificar una pluralidad de las bases de manera preferible mediante una modificación 2-O-metilo, o un homólogo de la misma, en la que se altera una base en hasta 2 de los nucleótidos en cada región terminal. Además, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar un paciente que padece una enfermedad respiratoria, una enfermedad del ojo, una enfermedad microvascular, o una lesión o enfermedad de la médula espinal que comprende administrar al paciente a composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura anterior (A) (que tiene cualquiera de las especificaciones mencionadas más arriba) en una cantidad terapéuticamente efectiva de forma que se trate al paciente con la anterior. De forma adicional, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de la estructura anterior (A) (que tiene cualquiera de las especificaciones mencionadas más arriba) para la preparación de un medicamento para estimular la recuperación de un paciente que padece una enfermedad respiratoria, una enfermedad del ojo, una enfermedad microvascular, o una lesión o enfermedad de la médula espinal. Un aspecto adicional de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura anterior (A) para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y dolencias mencionadas en el presente documento. Además, este aspecto proporciona un composición farmacéutica que comprende dos o más compuestos de la estructura anterior (A) para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y dolencias mencionadas en el presente documento, en la que dichos dos compuestos pueden mezclarse físicamente conjuntamente en la composición farmacéutica en cantidades que generan la misma u otra actividad beneficiosa, o pueden estar unidos de forma covalente o no covalente, o juntarse mediante un engarce de ácido nucleico de una longitud comprendida entre 2-100, de manera preferible 2-50 o 2-30 nucleótidos. Dichas moléculas de ARNsi están por tanto comprendidas de una estructura de doble cadena de ácido nucleico tal como se describe en el presente documento, en la que dos secuencias ARNsi seleccionadas de los cuadros A-C y de manera preferible del cuadro A, con números de ID 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 están unidas de forma covalente o no covalente, o unidas mediante un engarce para formar una molécula de ARNsi en tándem. Dichas moléculas de ARNsi en tándem que comprende dos secuencias de ARNsi que serían típicamente de una longitud de 38-150 nucleótidos de manera más preferible 38 o 40-60 nucleótidos de longitud, y más largas de acuerdo con ello si se incluyen más de dos secuencias de ARNsi en la molécula en tándem. Se prevé también una molécula en tándem más larga comprendida por dos o más secuencias más largas que codifican ARNsi producido vía procesamiento interno celular, por Ejemplo, ARNds largo, como también una molécula en tándem que codifique dos o más ARNsh. Se consideran también dichas moléculas tándem como parte de la presente invención, y a continuación se proporciona información que las concierne. Dichas estructuras, combinadas o en tándem, tienen la ventaja de que se minimiza la toxicidad y/o los efectos fuera de objetivo de cada ARNsi, a la vez que se incrementa la eficacia. En particular el ARNsi usado en los Ejemplos ha sido modificado de tal manera que un grupo 2' O-Me estuvo presente en el primer, tercer, quinto, séptimo, noveno, decimoprimero, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo, y decimonoveno nucleótido de la cadena de sentido opuesto, en la que exactamente la misma modificación, es decir, un grupo 2' O-Me estuvo presente en el segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, decimosegundo, decimocuarto, decimosexto, y decimoctavo nucleótido de la cadena positiva. De forma adicional, debe tenerse en cuenta que en el caso de estos ácidos nucleicos concretos de acuerdo con la presente invención el primer tramo es idéntico a la primera cadena y el segundo tramo es idéntico a la segunda cadena., y estos ácidos nucleicos también tienen extremos romos. El ARNsi se fosforiló, pero se piensa que una versión no fosforilada puede ser más fácil de preparar a gran escala y se ha encontrado que dicho REDD14 no fosforilado, denominado REDD-14NP, era exactamente tan activo desde el punto de vista biológico como el REDD-14 en un modelo CNV (ver el Ejemplo 6). La secuencia de este ARNsi usado en los experimentos de los Ejemplos 6-8 es la del REDD14, es decir, la secuencia que tiene la referencia interna N° 14 (ver cuadro A). La región terminal del oligonucleótido se refiere a las bases 1-4 y/o 16-19 en las secuencias 19-mer (cuadros A y B siguientes) y a las bases 1-4 y/o 18-21 en las secuencias 21 -mer (cuadro C siguiente). De forma adicional, los ARNsi usados en la presente invención son oligorribonucleótidos en los que una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, desde 5' hasta 3', la secuencia definida en las SEC. de ID NROS.: 53-102 o las SEC. de ID NROS.: 175-246 o las SEC. de ID NROS.: 296-344 (cadenas de sentido opuestos) o un homólogo de las mismas en la que se ha alterado una base en hasta 2 de los nucleótidos en cada región terminal. Así, en los aspectos particulares el oligonucleótido comprende una estructura de doble cadena, en la que dicha estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, en el que la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en el que el primer tramo es complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el gen RTP801 y en el que el segundo tramo es idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Dicho primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, de manera preferible al menos 18 nucleótidos y e incluso de manera más preferible 19 nucleótidos o incluso al menos 21 nucleótidos. En una forma de realización el primer tramo comprende entre aproximadamente 14 y 40 nucleótidos, de manera preferible aproximadamente entre 18 y 30 nucleótidos, de manera más preferible entre aproximadamente 19 y 27 nucleótidos y lo más preferible entre aproximadamente 19 y 23 nucleótidos. En una forma de realización el segundo tramo comprende entre aproximadamente 14 y 40 nucleótidos, de manera preferible aproximadamente entre 18 y 30 nucleótidos, de manera más preferible entre aproximadamente 19 y 27 nucleótidos y lo más preferible entre aproximadamente 19 y 23 nucleótidos o incluso entre aproximadamente 19 y 21 nucleótidos. En una forma de realización el primer nucleótido del primer tramo se corresponde con un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , en el que el último nucleótido del primer tramo se corresponde con un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización el primer tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de un oligonucleótido, en el que dicho oligonucleótido se selecciona entre el grupo que comprende las SEC. de ID. NROS.: 3-344, de manera preferible entre el grupo que comprende los oligorribonucleótidos que tienen la secuencia de cualquiera de los números de serie 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A. Las especificaciones adicionales de las moléculas ARNsi usadas en la presente invención pueden proporcionar un oligorribonucleótido en el que el dinucleótido dTdT está unido de forma covalente al extremo 3', y/o en al menos un nucleótido está modificado un residuo de azúcar, posiblemente con una modificación que comprende una modificación 2'-0-metilo. Además, el grupo 2'OH puede sustituirse por un grupo o resto seleccionado entre el grupo que comprende -H-OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3, -NH2, y F. Además, los compuestos preferibles de la presente invención tal como se ha descrito más arriba pueden estar fosforilados o no fosforilados. De forma adicional, el ARNsi usado en la presente invención puede ser un oligorribonucleótido en el que en nucleótidos alternos, se localizan azúcares modificados en ambas cadenas. De manera particular, el oligorribonucleótido puede comprender una de las cadena positivas en la que el azúcar no está modificado en los nucleótidos terminales 5' y 3', o una de las cadenas de sentido opuestos en la que el azúcar está modificado en los nucleótidos terminales 5' y 3', De forma adicional, otros ácidos nucleicos a usar en la presente invención comprenden al menos 14 nucleótidos contiguos de una cualquiera de las SEC. de ID. N° 3 a 344, y de manera más preferible 14 pares de bases de nucleótidos contiguos en cualquier extremo de la estructura de doble cadena comprendida por el primer tramo y el segundo tramo tal como se ha descrito más arriba. Una persona experta en la técnica deberá entender que, dada la longitud potencial de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y de manera particular en los tramos individuales que forman dicho ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, son posibles algunos desplazamientos relativos a la secuencia de codificación del gen RTP801 tal como se detalla en la SEC. de ID. N°:1 a cada lado, en el que dichos desplazamiento pueden ser de hasta 1 , 2, 3, 4, 5 y 6 nucleótidos en ambos sentidos, y en el que las moléculas de ácido nucleico de doble cadena así formadas quedan también comprendidas en la presente invención. Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un ácido nucleico funcional que comprende una estructura de doble cadena, en la que dicha estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, en las que la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en los que el primer tramo es complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 y en el que el segundo tramo es idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización el ácido nucleico regula de forma reductora RTP801 , en la que la regulación reductora del RTP801 se selecciona entre el grupo que comprende la regulación reductora de función de RTP801 , la regulación reductora de la proteína RTP801 y la regulación reductora de la expresión del ARNm del RTP801. En una forma de realización el primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, de manera preferible al menos 18 nucleótidos e incluso de manera más preferible 19 nucleótidos. En una forma de realización el primer tramo comprende entre aproximadamente 14 y 40 nucleótidos, de manera preferible aproximadamente entre 18 y 30 nucleótidos, de manera más preferible entre aproximadamente 19 y 27 nucleótidos y lo más preferible entre aproximadamente 19 y 23 nucleótídos. En una forma de realización el segundo tramo comprende entre aproximadamente 14 y 40 nucleótidos, de manera preferible entre aproximadamente 18 y 30 nucleótidos, de manera más preferible entre aproximadamente 19 y 27 nucleótidos y lo más preferible entre aproximadamente 19 y 23 nucleótidos. En una forma de realización el primer nucleótido del primer tramo se corresponde con un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , en el que el último nucleótido del primer tramo se corresponde con un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización un tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, en el que dicha secuencia de ácido nucleico se selecciona entre las secuencias descritas en los cuadros A-C, de manera preferible entre el grupo que comprende las SEC. de ID. NROS: 53, 66, 67, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 91 , 92, 93, 94, 96, 101 y 102, de manera más preferible se selecciona entre el grupo que comprende las SEC. DE ID. Nos 66, 75, 79, 91 , 94, 101 y 102, y lo más preferible seleccionadas entre el grupo que comprende SEC. DE ID. NROS.: 66, 74, 75 y 79.

En una forma de realización el otro tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, en la que dicha secuencia de ácido nucleico se selecciona entre las secuencias descritas en los cuadros A-C, de manera preferible entre el grupo que comprende las SEC. de ID. NROS.: 3, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 51 y 52, de manera más preferible seleccionadas entre el grupo que comprende las SEC. DE ID. NROS.: 16, 24, 25, 29, 41 , 44, 51 , y 52, y lo más preferible seleccionadas entre el grupo que comprende las SEC. de ID. NROS.: 16, 24, 25 y 29. En una forma de realización el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 53 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 3; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 66 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 16; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 67 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 17; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 72 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 22; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 73 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 23; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 74 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 24; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 75 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 25; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 76 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 26; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 77 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 27; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 79 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 29; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 91 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 41 ; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 92 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 42; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 93 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 43; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 94 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 44; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 95 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 45; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 96 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 46; el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 101 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 51 ; y el primer tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 102 y el segundo tramo tiene una secuencia de acuerdo con la SEC. de ID. N° 52. En una forma de realización el primer tramo tiene una secuencia de ácido nucleico que se selecciona entre el grupo que comprende las SEC. de ID. N° 53, 66, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 101 y 102. Debe entenderse que aunque los términos "primero" y "segundo" tramo se usan en conexión con los ácidos nucleicos de la presente invención, se usan únicamente a efectos de conveniencia, y cualquier molécula de ácido nucleico de la invención que se describa como teniendo un primer tramo con la secuencia X y un segundo tramo con la secuencia Y podría igualmente describirse como que tiene un primer tramo con la secuencia Y y un segundo tramo con la secuencia X, siempre que comprenda que un tramo está comprendido en la cadena de sentido opuesto que debe ser de sentido opuesto a una porción de la secuencia de codificación del gen RTP801 , y el otro tramo está comprendido en la cadena positiva, que debe ser complementaria (aunque no complementaria al 100%) respecto de la cadena de sentido opuesto, todo ello de acuerdo con las definiciones y especificaciones que se presentan en el presente documento. En una forma de realización la primera y/o la segunda cadena comprende al menos un nucleótido saliente en el extremo 3' que es complementario o idéntico al correspondiente nucleótido de una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización la primera y/o la segunda cadena comprende entre 1 y 15 nucleótidos salientes en el extremo 3', de manera preferible la primera y/o la segunda cadena comprende entre 1 y 10 nucleótidos salientes en el extremo 3', de manera más preferible la primera y/o la segunda cadena comprende entre 1 y 5 nucleótidos salientes en el extremo 3', y lo más preferible la primera y/o la segunda cadena comprende entre 1 y 2 nucleótidos salientes en el extremo 3'. En una forma de realización la primera cadena y/o la segunda cadena comprende al menos un nucleótido saliente que son diferentes del correspondiente nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización la primera cadena comprende dos nucleótidos salientes que es diferente del correspondiente nucleótido de una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. En una forma de realización la primera cadena está constituida únicamente por el primer tramo. En una forma de realización la segunda cadena está constituida únicamente por el segundo tramo. En una forma de realización el primer tramo y/o la primera cadena comprende(n) ribonucleótidos. En una forma de realización el segundo tramo y/o la segunda cadena comprende(n) ribonucleótidos. En una forma de realización el primer tramo y/o la segunda cadena está(n) constituido(s) por ribonucleótidos. En una forma de realización algunos o todos los nucleótidos están modificados. En una forma de realización preferida dicha modificación está relacionada con el resto nucleobase del nucleótido, con el resto azúcar del nucleótido y/o con las fracción fosfato del nucleótido. En una forma de realización más preferida la modificación es una modificación de un resto de azúcar y la modificación es una modificación en la posición 2', en la que el grupo OH en 2' se sustituye por un grupo o resto seleccionado entre el grupo que comprende -H-OCH3, -OCH2CH3, OCH2CH2CH3, -NH2, y -F. En una forma de realización la modificación es un modificación del resto nucleobase y la modificación o nucleobase modificada se selecciona entre el grupo que comprende ¡nosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil, 2-propil y otras alquiladeninas, 5-halo uracilo, 5-halocitosina, 5-halo citosina, 6-azacitosina, 6-aza timina, pseudo-uracilo, 4-tiouracilo, 8-halo adenina, 8-aminoadenina, 8-tiol adenina, 8-tiolalquil adeninas, 8-hidroxil adenina y otras adeninas 8-sustituidas, 8-halo guaninas, 8-amino guanina, 8-tiol guanina, 8-tioalquil guanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otras aza- y desaza adeninas, otras aza- y desaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5-trifluoro citosina. En una forma de realización la modificación es una modificación del resto fosfato, en la que el resto fosfato modificado se selecciona entre el grupo que comprende fosfotioato. En una forma de realización el primer tramo y/o el segundo tramo comprende una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2', en la que en el interior del tramo cada grupo de nucleótidos modificados están flanqueados en uno o ambos lados por un grupo flanqueante de nucleótidos, en el que los nucleótidos flanqueantes que forman el grupo flanqueante de nucleótidos pueden ser un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. En una forma de realización preferida el primer tramo y/o el segundo tramo está constituido por ribonucleótidos. En una forma de realización más preferida el primer y el segundo tramo comprenden una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. En una forma de realización el primer tramo comprende dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. En una forma de realización el segundo tramo comprende dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. En una forma de realización cada grupo de nucleótidos modificados y/o cada grupo de nucleótidos flanqueantes comprende un número de nucleótidos, en el que el número se selecciona entre el grupo que comprende entre un nucleótido y diez nucleótidos. En una forma de realización el primer tramo comprende un primer patrón de nucleótidos modificados y el segundo tramo comprende un segundo patrón de nucleótidos modificados. En una forma de realización el primer patrón es el mismo patrón que el segundo patrón. En otra forma de realización el primer patrón se alinea con el segundo patrón. En una forma de realización preferida el primer patrón está desplazado en uno o más nucleótidos en relación con el segundo patrón. En una forma de realización cada uno de los grupos de nucleótidos modificados está constituido por un nucleótido modificado y cada uno de los grupos de nucleótidos flanqueantes está constituido por un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. En una forma de realización preferida el nucleótido modificado tiene un grupo -OMe en la posición 2'. En una forma de realización preferida el nucleótido flanqueante es un ribonucleótido que tienen un grupo OH en 2'. En una forma de realización el primer tramo comienza con un nucleótido modificado en el extremo 5' y todos y cada dos nucleótidos del tramo es también un nucleótido modificado, en el que un segundo nucleótido a partir del extremo 5' y cada dos nucleótidos es un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación del (de los) nucleótido(s) modificado(s). En una forma de realización el primer tramo tiene una orientación de sentido opuesto respecto de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico de acuerdo con el primer aspecto de la presente invención y/o un vector de acuerdo con el segundo aspecto de la presente invención y de manera preferible un vehículo farmacéuticamente aceptable; dicha composición es de manera opcional para administración sistémica o local.

En una forma de realización la composición es para el tratamiento de una enfermedad, en la que la enfermedad se selecciona entre el grupo que comprende enfermedades tumorales. En un aspecto adicional, el problema subyacente en la presente invención se resuelve mediante un procedimiento para la prevención y/o tratamiento de un paciente necesitado de dicho prevención y/o tratamiento que comprende la administración de un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o un vector de acuerdo con la presente invención y/o una composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención. En una forma adicional de realización, se usan un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o un vector de acuerdo con la presente invención en la fabricación de un medicamento. El medicamento puede ser para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad, en la que dicha enfermedad se selecciona entre el grupo que comprende enfermedades tumorales. Las enfermedades tumorales se pueden seleccionar entre el grupo que comprende tumores sólidos, tumores metastáticos que incluyen tumores PTEN negativos, tumores que son resistentes a fármacos y tumores en los que la inhibición del RTP801 se puede usar para sensibilización. Además, la enfermedad tumoral puede ser una enfermedad tumoral en fase tardía, o puede implicar células que son negativas para los supresores tumorales; dicho supresor tumoral puede ser PTEN. Un aspecto adicional de la presente invención se resuelve mediante un procedimiento para diseñar o seleccionar un ácido nucleico que es adecuado para regular de forma reductora el RTP801 , que comprende las siguientes etapas. a) diseñar o seleccionar un ácido nucleico adecuado para regular de forma reductora el RTP801 ; b) evaluar los defectos de un ácido nucleico de acuerdo con cualquiera de los aspectos anteriores de la presente invención; y c) comparar el efecto del ácido nucleico de la etapa a) con el efecto del ácido nucleico de la etapa b) En una forma de realización el efecto es la regulación reductora del RTP801. Un aspecto adicional de la presente invención es el uso de un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención como sensibilizante, de manera particular como sensibilizante en el tratamiento de una enfermedad, en el que dicha enfermedad se selecciona de manera preferible entre el grupo que comprende tumores y de forma más particular tumores que son resistentes al tratamiento que usa quimioterapéuticos y/o radioterapéuticos.

Se describen en el presente documento otras enfermedades para las cuales un ácido nucleico de la presente invención puede actuar como sensibilizante. Esta solicitud describe que un ácido nucleico que comprende una estructura de doble cadena que es específico para el RTP801 es un medio adecuado para inhibir la angiogénesis/ crecimiento de la vasculatura y exudaciones vasculares (procedentes tanto de la vasculatura existente como de la vasculatura en crecimiento). De forma adicional, esta solicitud describe (sin desear quedar ligado por teoría alguna) que puesto que el RTP801 es una proteína que se induce por estrés (inducida por hipoxia, estrés oxidativo, estrés térmico, estrés ER) es un factor que actúa en el afinado de la respuesta celular al desequilibrio energético. De esta forma, la inhibición del RTP801 mediante dicho ácido nucleico de doble cadena es adecuada para el tratamiento de cualquier enfermedad en la que las células deben rescatarse de la apoptosis debida a condiciones estresantes (por ejemplo, enfermedades acompañadas de la muerte de células sanas) o donde deben matarse las células adaptadas a condiciones estresantes debido a cambios en la expresión del RTP801 (por ejemplo, en células tumorales) En este último caso, tras la inhibición del RTP801 mediante dicho ácido nucleico de doble cadena, este factor de supervivencia con función antí-apoptótica en células hipóxicas, de manera más particular en células cancerosas hipóxicas, se vuelve inefectivo permitiendo de esta manera que las células desprovistas de la protección mediada por RTP801 se dirijan a la apoptosis. Esto se puede producir de forma adicional cuando están presentes otros factores de estimulación de la apoptosis. Dichos otros factores de estimulación de la apoptosis incluyen, entre otros, la quimioterapia y la terapia por radiación. En otras palabras, el ácido nucleico de doble cadena de acuerdo con la presente invención puede ser efectivo en solitario en el tratamiento del cáncer (monoterapia) y también como terapia complementaria. Dicha estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, en la que la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, en la que el primer tramo es complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 y en el que el segundo tramo es idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Mediante el uso particular del RTP801 como diana para este tipo de ácido nucleico de doble cadena, es por tanto también posible dirigir de forma inmediata una diana en la cascada implicada en el crecimiento y desarrollo de la vasculatura y angiogénesis, de forma respectiva, y por tanto de manera diferente en comparación con la ruta usada por inhibidores de VEGF tales como anticuerpos de VEGF. Sin desear quedar ligado por teoría alguna, los presentes inventores asumen que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención pueden ejercer su función en aquellas células que proporcionan antecedentes que están implicados u observados en conexión con cualquier enfermedad en la que se produzca una angiogénesis y/o crecimiento o desarrollo de la vasculatura particularmente inducidas por hipoxia no deseada. Esta comprensión está soportada por el hallazgo que los ratones que genéticamente carecen de RTP801 no presentan ningún fenotipo diferente del de los ratones de tipo salvaje en condiciones no hipóxicas. Sólo tras la inducción de hipoxia tal como se observa en un estado de enfermedad tal como, por ejemplo, crecimiento tumoral, la inactivación relativa al RTP801 da como resultado una patología similar a la que se observa en los seres humanos que padecen este tipo de enfermedad.

Debe entenderse que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención es de manera preferible un ácido nucleico funcional. Tal como se usa en el presente documento, el término ácido nucleico funcional de manera preferible significa un ácido nucleico cuya función es diferente de la activa en células como plantilla para la transcripción de cualquier ARNhn, ARNm, o cualquier otro producto de transcripción, en donde dichos ARNhn, ARNm, o cualquier otro producto de transcripción, de forma respectiva, o el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se somete a un proceso de traducción, de manera preferible un proceso de traducción celular, que da como resultado una proteína RTP801 biológicamente activa. Debe reconocerse también un ácido nucleico funcional tal como se usa de manera preferible en el presente documento capaz de reducir la expresión de un ácido nucleico diana. De manera más preferible, dicha reducción está basada en un procedimiento de silenciamiento de gen post-transcripcional del ácido nucleico diana. Incluso de forma más preferible, dicha reducción está basada en la interferencia de ARN. Una forma más preferida del ácido nucleico funcional es una molécula de ARNsi o cualquier otra molécula que tenga el mismo efecto que una molécula de ARNsi. Dicha molécula adicional se selecciona entre el grupo que comprende ARNsi, ARNsi sintético, ARNsh y ARNsh sintético. Tal como se usa en el presente documento, el ARNsi puede comprender de forma adicional vectores de expresión derivados de ARNsi en donde el vector de expresión es en una forma de realización preferida un virus tal como Adenovirus, virus Adenoasociados, Herpes virus y Lentivirus. Tal como se usa en el presente documento, el ARNsh significa de manera preferible ARN de horquilla corta. Dicho ARNsh se puede fabricar de forma sintética o se puede generar usando sistemas de expresión basado en vectores, de manera preferible usando promotores de ARN polimerasa lll. En conexión con lo anterior, debe reconocerse que el ácido nucleico funcional de acuerdo con la presente invención se dirige a RTP801 , que se denomina también de manera preferible en el presente documento como la diana, y el ácido nucleico que codifica dicha diana es el ácido nucleico diana. Tal como se usa de manera preferible en el presente documento, la estructura de doble cadena del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención comprende cualquier estructura de doble cadena, en la que dicha estructura de doble cadena se genera de manera preferible mediante el primer tramo y el segundo tramo que proporciona el ácido nucleico que tiene el diseño básico. La estructura de doble cadena puede comprender uno o varios desemparejamientos. Dicha estructura de doble cadena está formada por emparejamiento de bases de Watson-Crick y/o emparejamiento de bases de Hoogsteen y/o similares emparejamientos de bases. Basado en el diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se prefiere que un tramo tenga una orientación de sentido opuesto a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma, mientras que el otro tramo tiene la misma orientación que una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma. Debido a esto, un tramo es complementario a la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma y el otro tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma. En conexión con lo anterior, debe reconocerse que el término idéntico, por supuesto, significa también idéntico de manera parcial, en el que la identidad, expresada en forma de homología, es al menos del 80%, de manera preferible del 90%, de manera más preferible del 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%. De manera similar a la definición de la identidad, se puede definir la complementariedad en términos de homología, en la que dicha homología es del mismo intervalo que la identidad, si la cadena complementaria se tradujera en la cadena idéntica de acuerdo con las reglas de emparejamiento de bases de Watson-Crick. En una forma de realización, alternativa, un tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma y el otro tramo es complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 o una parte de la misma. En una forma de realización preferida, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención está regulando de forma reductora la función del RTP801. La regulación reductora de la función del RTP801 se produce de manera preferible mediante la reducción en el nivel de expresión a nivel de la proteína y/o a nivel del ARNm, en el que dicho nivel de expresión reducida, de manera preferible a nivel de la proteína, puede ser tan bajo como el 5% y tan alto como el 100%, con referencia a la expresión en las condiciones en las que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención no se ha administrado o no está funcionalmente activo. Dichas condiciones son de manera preferible las condiciones de o como se presente en un sistema de expresión, de manera preferible un sistema de expresión para RTP801. Dicho sistema de expresión es de manera preferible un sistema de traducción que puede ser un sistema de traducción ¡n vitro, de manera más preferible una célula, órgano y/u organismo. Se prefiere más que el organismo sea un organismo multicelular, de manera más preferible un mamífero, de manera preferible seleccionado entre el grupo que comprende hombre, mono, ratón, rata, cobaya, conejo, gato, perro, oveja, vaca, caballo, res y cerdo. En conexión con la regulación reductora debe reconocerse que dicha regulación reductora puede ser una función temporal, es decir, el efecto de regulación reductora no se observa de manera necesaria inmediatamente tras la administración o activación funcional de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención, sino que puede dilatarse tanto en el tiempo como en el espacio, es decir, en diferentes células, tejidos y/u órganos. Dicha dilatación puede estar comprendida entre 5%-100%, de manera preferible entre 10 y 50%. Aquellas personas expertas en la técnica reconocerán que una reducción del 5% en un periodo de tiempo más largo podría ser tan efectivo como una reducción del 100% en un periodo de tiempo más corto. Igualmente, aquellas personas expertas en la técnica reconocerán que dicha dilatación dependerá fuertemente del ácido nucleico funcional usado en la realidad, así como de la población de células diana y así, finalmente, de la enfermedad a tratar y/o prevenir de acuerdo con la técnica mostrada en la presente solicitud. De hecho, una reducción del 5% en un periodo de tiempo más largo debería ser tan efectiva como una reducción del 100% en un periodo de tiempo más corto. Igualmente, aquellas personas expertas en la técnica reconocerán que dicha dilatación se puede producir en cualquier nivel tal como se ha detallado más arriba, es decir, una dilatación en la función, en la que dicha función es cualquier función mostrada por el RTP801 , una dilatación en la expresión de proteína o una dilatación al nivel de expresión del ARNm. En una forma de realización preferida el primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, de manera preferible 14 nucleótidos contiguos. Aquellas personas expertas en la técnica reconocerán que el primer tramo debe tener una longitud que sea adecuada para permitir la dirección de forma específica una secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 y de forma más específica al ácido nucleico que codifica el RTP801 tal como está presente en el sistema de traducción en el que se va a reducir la expresión del RTP801. De nuevo, sin desear quedar ligado por teoría alguna o modo de acción alguno del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, parece que existe una interacción entre el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , de manera preferible al nivel del transcrito, es decir, tras la generación del ARNm procedente de la respectiva secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Debido a la posibilidad de que cualquier secuencia del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sea idéntica o complementaria a una secuencia contenida en el genoma o transcriptoma del sistema de traducción, la longitud del primer tramo debe ser por tanto lo suficientemente larga para estar seguros, con la asunción de que se produce en realidad algún tipo de emparejamiento de bases entre el ácido nucleico que codifica el RTP801 y una de las cadenas del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, de que únicamente la secuencia que codifica el RTP801 pero no otras secuencias de codificación, de manera preferible ninguna otra secuencia de codificación esencial, del genoma o del transcriptoma se dirige para o mediante dicho emparejamiento de bases. Por su longitud, la incidencia de efectos fuera de diana se pueden reducir y eliminar de manera preferible. Para aumentar el rigor de este direccionamiento específico de este RTP801 y de la secuencia de ácido nucleico que codifica el anterior, el primer tramo tiene, de manera preferible, una longitud de al menos 18 ó 19 nucleótidos. El límite superior de la longitud del primer tramo es de manera preferible inferior a 50 nucleótidos, sin embargo, la longitud puede ser significativamente más larga y puede comprender 100, 200 o incluso 500 nucleótidos, o cualquier longitud entre las anteriores. Además de esto, una persona experta en la técnica preferirá tener un primer tramo más bien corto, particularmente en el caso de que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se sintetiza químicamente ya que cuanto más corta sea la secuencia, menor tiempo y material consumirá la síntesis de la anterior, y menor será la tasa en la que se insertarán nucleótidos incorrectos en la secuencia respectiva. Otro factor que se debe tener en cuenta en conexión con la fijación de la longitud del primer tramo es el hecho de que, normalmente se puede observar una respuesta inespecífica del interferón con longitudes de 50 o más nucleótidos. Depende de la enfermedad concreta a tratar si esta respuesta de interferón no específica se puede tolerar o no. Por ejemplo, se podría tolerar una respuesta de ¡nterferón si la respuesta de interferón y/o la expresión de los genes del interferón se pueden limitar a las células patógenas. En vista de esto, las longitudes más preferidas del primer tramo están comprendidas entre aproximadamente 14 y 40 nucleótidos, 18 y 30 nucleótidos, 19 y 27 nucleótidos, 21 y 25 nucleótidos y 19 y 23 nucleótidos. Se pueden aplicar las mismas consideraciones, que se han detallado más arriba para el primer tramo al segundo tramo, que puede por tanto comprender cualquier longitud tal como se describe en el presente documento en conexión con el primer tramo. Queda también comprendida en el ámbito de la presente invención que la longitud del primer tramo sea diferente de la longitud del segundo tramo, sin embargo, se prefiere que ambos tramos tengan la misma longitud. De acuerdo con el diseño básico del ácido nucleico, el primer tramo y segundo tramo son partes de la primera cadena y de la segunda cadena, de forma respectiva, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Se reconocerá que en cualquiera de los extremos, es decir tanto en el extremo 5' como en el extremo 3', la primera cadena y/o la segunda cadena puede comprender uno o varios nucleótidos, de manera preferible nucleótidos adicionales, en cualquier combinación.

En conexión con lo anterior, se debe reconocer que aquellos nucleótidos de la cadena individual que van más allá del(los) extremo(s) del tramo correspondiente a la respectiva cadena se pueden usar para contribuir de manera adicional a la complementariedad e identidad, de forma respectiva, del tramo y, por tanto, a la dirección específica de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Se reconocerá que, básicamente, basándose en la enseñanza técnica que se proporciona en el presente documento, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede dirigir cualquier parte de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , de manera preferible que codifica el RTP801 en el sistema de traducción en el que se va reducir la expresión del RTP801. De esta forma, la presente invención comprende cualquier ácido nucleico que tenga las características que se definen en el presente documento, en el que las cadenas y los tramos complementarios e idénticos del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede iniciarse básicamente en cualquier nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. De acuerdo con ello, con la condición de que el primer tramo del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención es complementario respecto de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , es decir es la cadena de sentido opuesto a la misma o tiene una orientación de sentido opuesto a la anterior, el primer nucleótido de dicho tramo, es decir el nucleótido más 5' terminal se corresponde, es decir se alinea con el último nucleótido de la secuencia que codifica el RTP801 en el extremo 3'. En una forma de realización adicional dicho nucleótido más 5' terminal se corresponde con el penúltimo nucleótido del ácido nucleico que codifica el RTP801 y así sucesivamente hasta que se alcance la última posición lo que, dada la longitud del tramo de sentido opuesto, sigue permitiendo que la cadena de sentido opuesto del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sea complementaria de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. De esta forma, cualquier ácido nucleico de acuerdo con la presente invención queda comprendido por la presente invención que pudiera generarse explorando la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 empezando desde el nucleótido más 5' terminal del mismo y superponiendo el diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y llevando a cabo las características de dicho ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Se pueden aplicar las mismas consideraciones a las formas de realización descritas en el presente documento, en las que la complementariedad e identidad del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención no se proporciona únicamente mediante el primer tramo y el segundo tramo, de forma respectiva, sino que dichas complementariedad e identidad implican también uno o más nucleótidos mas allá del primer tramo y segundo tramo, de forma respectiva, por tanto formando parte de la primera cadena y segunda cadena, de forma respectiva. De los diferentes ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención tal como se describen en el presente documento, se prefieren de manera particular los que tienen como número de referencia interna 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 (ver cuadro A). En conexión con lo anterior, se debe tener en cuenta que son particularmente útiles aquellos ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención que se pueden usar en modelos tanto humanos como animales tales como en rata y/o ratón. La ventaja sorprendente de estos ácidos nucleicos concretos de acuerdo con la presente invención reside en el hecho de que son efectivos en modelos tanto humanos como animales, lo que significa que los resultados de los ensayos obtenidos en el modelo animal se pueden transferir de manera inmediata desde el modelo animal al ser humano y, de manera más particular, sin la necesidad de realizar ningún cambio a la secuencia humana, que por otra parte sería necesario en el caso en que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se diseñe de forma que comprenda una(s) secuencia(s) que se diferencie(n) entre las especies, de manera más particular las especies usadas para ensayos con modelos animales, y el hombre el organismo o paciente preferido definitivo. Se prefiere de forma adicional que estos ácidos nucleicos tengan un modelo de modificación que igualmente se describe en los ejemplos. Sin embargo, quedan también comprendidas en el ámbito de la presente invención que cualquiera de las secuencias de acuerdo con la SEC. de ID. NROS.: 3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91 -96 y 101-102 y las combinaciones respectivas que dan como resultado las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención que tienen los números de referencia interna 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50, y está sólo parcialmente contenida en otro ácido nucleico adicional de acuerdo con la presente invención. De manera preferible, los ácidos nucleicos adicionales de acuerdo con la presente invención comprenden al menos 14 nucleótidos contiguos de la SEC. de ID. NROS: 3, 16-17, 22-27, 29, 41-46, 51-53, 66-67, 72-77, 79, 91-96 y 101-102, y de manera más preferible 14 pares de bases de nucleótidos contiguos en cualquiera de los extremos de la estructura de doble cadena comprendida por el primer tramo y el segundo tramo tal como se detalla en el cuadro anterior. Las personas expertas en la técnica entenderán que, dada la longitud potencial del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y de manera particular los tramos individuales que forman dicho ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, son posibles algunos desplazamientos relativos a la secuencia de codificación del RTP801 a cada lado, en donde dichos desplazamientos pueden ser de hasta 1 , 2, 3, 4, 5 y 6 nucleótidos en ambas direcciones, y en donde las moléculas de ácido nucleico de doble cadena así generadas quedarán también comprendidas en el ámbito de la presente invención. En una forma de realización preferida de la presente invención, el primer tramo y la primera cadena tienen la misma longitud. Igualmente, se prefiere que la segunda cadena tenga la misma longitud que el segundo tramo, en donde se prefiere aún más que el primer tramo y el segundo tramo tengan la misma longitud. En una forma de realización más preferida, la primera cadena únicamente comprende el primer tramo y la segunda cadena únicamente comprende el segundo tramo. En una forma de realización incluso más preferida ni el primer tramo, y por tanto la primera cadena, ni tampoco el segundo tramo, y por tanto la segunda cadena, comprenden un saliente. En otras palabras, queda también comprendido en el ámbito de la presente invención que los ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención tengan los extremos enromados, de manera preferible en cada uno de los extremos de la estructura de doble cadena de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención. Dicha estructura de extremos enromados se puede llevar a cabo en conexión con cualquier otra de las formas de realización de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención, de manera particular aquellas formas de realización en las que los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención tienen un modelo de modificación, de manera más preferible un modelo de modificación tal como se describe en el presente documento. En un aspecto adicional, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención tiene por tanto un diseño básico que proporciona extremos enromados en ambos extremos de la estructura de doble cadena del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, queda también comprendido en el ámbito de la presente invención el que haya un saliente, es decir, un tramo de uno o más nucleótidos protuberantes con respecto de la estructura de doble cadena. La prolongación puede estar, en principio, en el extremo 5' de la cadena de sentido opuesto, en el extremo 3' de la cadena de sentido opuesto, en el extremo 5' de la cadena positiva y/o el extremo 3' de la cadena positiva. Se debe tener en cuenta que la realización de una sola opción de dichas opciones, así como cualquier combinación de las mismas, queda comprendida en el ámbito de la presente invención. Se prefiere más una combinación, en la que la prolongación se localiza en el extremo 3' de la cadena de sentido opuesto y en el extremo 3' de la cadena positiva. Queda también comprendido en el ámbito de la presente invención que la prolongación esté en el extremo 5' de la cadena de sentido opuesto y en el extremo 5' de la cadena positiva. Además, queda también comprendido en el ámbito de la presente invención que la prolongación se localice únicamente en la cadena de sentido opuesto de la estructura de doble cadena, de manera más preferible en el extremo 3' de la cadena de sentido opuesto de la estructura de doble cadena. En conexión con los salientes, debe tenerse en cuenta que la prolongación más el tramo forman de manera preferible la cadena, y las longitudes que se proporcionan para las cadenas del presente documento se aplican también a estas formas de realización. La prolongación individual puede, de manera independiente a su localización, estar constituido por al menos un nucleótido. Sin embargo, la prolongación individual puede comprender tanto como 10, y de manera preferible tiene dos nucleótidos de longitud. Queda comprendido en el ámbito de la presente invención que el(los) nucleótido(s) respectívo(s) que forma(n) el(los) saliente(s) es/son también complementarios de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 en el caso que la primera cadena sea complementaria de dicha secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , y la prolongación estando en el extremo 3' o 5' de la cadena de sentido opuesto, o que el(los) saliente(s) es(son) idénticos a la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 en el caso de que la primera cadena sea idéntica a la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801. Lo mismo se aplica a cualquier saliente localizado en el segundo tramo del diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, en el que se debe reconocer que el diseño de la prolongación en el segundo tramo puede ser independiente del diseño de la prolongación en el primer tramo. Queda también comprendido en el ámbito de la presente invención que los nucleótidos que forman la prolongación no sean ni complementarias ni tampoco idénticos a los correspondientes nucleótidos de la secuencia de ácido nucleico que codifica el RTP801 , Tal como se usa en el presente documento, y de manera preferible en esta forma de realización, "correspondientes" significa los nucleótidos respectivos que siguen en el extremo 5' y/o el extremo 3' del tramo que tiene un nucleótido homólogo en el ácido nucleico que codifica el RTP801. De manera preferible, la primera cadena comprende en su extremo 3' dos nucleótidos, de manera preferible desoxínucleótidos y de manera más preferible dos TT y/o este tipo de nucleótidos también en el extremo 3' de la segunda cadena, en donde de manera más preferible la longitud del primer tramo y el segundo tramo es de 19 nucleótidos. Las cadenas por tanto están comprendidas por el tramo y la prolongación. En esta forma de realización, la estructura de doble cadena consiste en 19 pares de bases y un saliente de dos nucleótidos en cada extreme del extremo 3' del tramo individual. En una forma de realización preferida, el primer tramo y/o la primera cadena comprende(n) ribonucleótidos, en el que se prefiere de forma particular que el primer tramo consista en su totalidad de ribonucleótidos. Lo mismo se aplica al segundo tramo y la segunda cadena, de forma respectiva. En conexión con lo anterior, sin embargo, todos y cada uno de los nucleótidos del primer tramo y segundo tramo, de forma respectiva, se modifica en una forma de realización preferida. Lo mismo se aplica a la primera cadena y segunda cadena, de forma respectiva. De manera particular, los nucleótidos terminales, sin tener en cuenta que sean ribonucleótídos o desoxirribonucleótidos, pueden tener un grupo OH que como tal se puede modificar. Dicho grupo OH puede provenir el resto azúcar del nucleótido, de manera más preferible de la posición 5' en el caso del grupo OH en 5' y/o de la posición 3' en el caso del grupo OH en 3', o proceder de un grupo fosfato enlazado con el resto azúcar del nucleótido terminar respectivo. El grupo fosfato puede en principio estar ligado a cualquiera de los grupos OH del resto azúcar del nucleótido. De manera preferible, el grupo fosfato está unido al grupo OH en 5' del resto azúcar en el caso del grupo OH en 5' libre y/o al grupo OH 3' del resto azúcar en el caso del grupo OH en 3' libre, que proporciona aún lo que en este documento se denominan como grupos OH libres 5' o 3'. Tal como se usa en el presente documento con cualquier estrategia para el diseño de ARNi o cualquier forma de realización del ARNi descrito en el presente documento, el término modificación del extremo significa una entidad química añadida al nucleótido más 5' o 3' terminal de los nucleótidos de la primera o segunda cadena. Entre los ejemplos de dichas modificaciones del extremo incluyen, pero no se limitan a, fosfato 3' o 5', (desoxi) abásicos invertidos, amino, fluoro, cloro, bromo, CN, CF, metoxi, imidazol, caboxilato, tioato, alquilo inferior Ci a C-?0, alquilo menor sustituido, alcarilo o aralquilo, OCF3, OCN, O-, S-, o N-alquilo; O-, S-, o N-alquenilo; SOCH3; S02CH3; ON02; N02, N3; heterocicloalquilo; heterocicloalcarilo; aminoalquilamino; polialquilamino o sililo sustituidos, tal como entre otros, los que se describen en las patentes europeas EP 0 586 520 B1 o EP 0 618 925 B1. Tal como se usa en el presente documento, alquilo o cualquier término que comprenda "alquil" significa de manera preferible cualquier cadena de átomos de carbono que comprenda entre 1 y 12, de manera preferible entre 1 y 6 y, de manera más preferible entre 1 y 2 átomos de C. Una modificación adicional del extremo es un grupo biotina. Dicho grupo biotina puede estar enlazado de manera preferible al nucleótido más 5' o al más 3' terminal de la primera y/o segunda cadena o a ambos extremos. En una forma de realización más preferida, el grupo biotina está acoplado a un polipéptido o a proteína. Queda también en el ámbito de la presente invención que el polipéptido o proteína esté enlazado a través de cualquiera de las otras las modificaciones del extremo anteriormente mencionadas. El polipéptido o proteína puede conferir, además, otras características a las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Entre otras, el polipéptido o proteína pueden actuar como ligandos frente a otra molécula. Si dicha otra molécula es un receptor, se puede activar la función y actividad del receptor mediante el ligando de unión. El receptor puede mostrar una actividad de internalización que permite una transfección efectiva de las moléculas de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención enlazadas al ligando. Un ejemplo de ligando a acoplarse con la molécula de ácido nucleico inventiva es VEGF y el correspondiente receptor es el receptor del VEGF. Diferentes posibles formas de realización del ARNi de la presente invención que tienen diferentes tipos de modificacíón(es) del extremo se presentan en el siguiente cuadro 1 CUADRO 1 Diferentes formas de realización del ácido ribonucleico interferente de acuerdo con la presente invención 1a cadena / 1er tramo 2a cadena/ 2o tramo 1.) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' OH libre OH libre 2.) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' Modificación del extremo Modificación del extremo 3.) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' OH libre Modificación del extremo 4.) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' Modificación del extremo OH libre 5.) extremo 5' OH libre Modificación del extremo extremo 3' OH libre OH libre 6.) extremo 5' OH libre Modificación del extremo extremo 3' Modificación del extremo OH libre 7.) extremo 5' OH libre Modificación del extremo extremo 3' OH libre Modificación del extremo 8.) extremo 5' OH libre Modificación del extremo extremo 3' Modificación del extremo Modificación del extremo Las diferentes modificaciones del extremo tal como se describen en el presente documento de manera preferible se localizan en el resto ribosa de un nucleótido del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. De manera más particular, la modificación del extremo se puede enlazar a, o sustituir cualquiera de los grupos OH del resto ribosa, incluyendo pero sin limitarse a las posiciones OH 2', OH 3' y OH 5'; siempre que el nucleótido así modificado sea un nucleótido terminal. Los abásicos invertidos son nucleótidos, tanto desoxirribonucleótidos como ríbonucleótidos que no tienen una fracción de nucleobase. Este tipo de compuestos se describe, entre otros, en Sternberger, M., Schmiedeknecht, A., Kretschmer, A., Gebhardt, F., Leenders, F., Czaudema, F., Von Carlowitz, I., Engle, M., Giese, K., Beigelman, L. y Klippel, A. (2002). Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 12, 131-43. Cualquiera de las modificaciones del extremo mencionadas más arriba se pueden usar junto con las diferentes formas de realización de ARNi representadas en el cuadro 1 ; debe tenerse en cuenta que las modificaciones en el extremo 5' mencionadas más arriba están normalmente únicamente presentes en la cadena positiva de la molécula ARNsi. Otras modificaciones pueden estar relacionadas con el resto la nucleobase, el resto azúcar o el resto fosfato del nucleótido individual. Dicha modificación del resto nucleobase puede ser tal que se modifiquen los derivados de adenina, guanina, citosina y timidina y uracilo, de forma respectiva. Las nucleobases modificadas preferidas de forma particular se seleccionan entre el grupo que comprende inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil, 2-propil y otras alquiladeninas, 5-halo uracilo, 5-halocitosina, 5-halo citosina, 6-azacitosina, 6-aza timina, pseudo-uracílo, 4-tiouracilo, 8-halo adenina, 8-amínoadenina, 8-tiol adenina, 8-tiolalquil adeninas, 8-hidroxil adenina y otras adeninas 8-sustituidas, 8-halo guaninas, 8-amino guanina, 8-tiol guanina, 8-tioalquil guanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otras aza- y desaza adeninas, otras aza- y desaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5-trifluoro citosina. En otra forma de realización preferida, está modificado el resto azúcar del nucleótido, en la que dicha modificación se realiza de manera preferible en la posición 2' del resto ribosa y desoxirribosa de forma respectiva, del nucleótido. De manera más preferible, el grupo OH 2' se sustituye por un grupo o resto seleccionado entre el grupo que comprende amino, fluoro, alcoxi y alquilo. De manera preferible, alcoxi es metoxi o etoxi. También de manera preferible alquilo significa metilo, etilo, propilo, isobutilo, butilo e ¡sobutilo. Se prefiere incluso más que, sin tener en cuenta el tipo de modificación, el nucleótido es de manera preferible a ribonucleótido. La modificación del resto fosfato se selecciona de manera preferible entre el grupo que comprende fosfotioatos. Aquellas personas expertas en la técnica reconocerán que el ácido nucleico de la presente invención que está constituido por una multitud de nucleótidos pueden por tanto estar formado mediante nucleótidos que están enlazados a través de un enlace fosfodiéster o través de un enlace fosfotioato, o una combinación de ambos a lo largo de la longitud de la secuencia del nucleótido de la cadena y tramo individual, de forma respectiva. Una forma adicional de nucleótidos usada puede realmente ser ARNsi, que, entre otras, se describe en la solicitud de patente internacional WO 03/070918. Los nucleótidos que forman el primer tramo y la primera cadena, de manera respectiva, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención pueden comprender uno o más nucleótidos modificados, por lo cual el nucleótido modificado individual tiene una modificación que es de manera preferible una modificación tal como se describe en el presente documento. De manera adicional a la modificación concreta, la modificación puede ser o comprender algún tipo de etiqueta, por lo cual se selecciona la etiqueta entre el grupo de etiquetas quimioluminiscentes, etiquetas fluorescentes y radio etiquetas. Una persona experta en la técnica conoce estas clases de etiquetas y, por ejemplo, se describen en Ausebel y col., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland, 1998. Se puede usar también el ácido nucleico etiquetado de esta manera de acuerdo con la presente invención para objetivos de diagnóstico o para el control del emplazamiento de la acción así como para la determinación del estadio de cualquier tratamiento, relacionado de manera preferible con cualquiera de las enfermedades descritas en el presente documento. En una forma de realización preferida, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se modifica de tal manera que los nucleótidos de pirimidina en el tramo o cadena de polaridad positiva son nucleótidos de 2' O-metil pirimidina y, bien de manera adicional o alternativa, los nucleótidos de purina en el tramo o cadena de polaridad positiva son nucleótidos de 2' -desoxipurina. En una forma de realización adicional, los nucleótidos de pirimidina presentes en el tramo de polaridad positiva o cadena de polaridad positiva son nucleótídos 2'-desoxí-2'-fluoro pirimidina. En una forma de realización alternativa, la modificación no se basa en la química del nucleótido, es decir, la modificación no depende de si el nucleótido que se va a modificar es un nucleótido de purina o un nucleótido de pirimidina, sino que se basa de manera predominante en la disposición espacial de los nucleótidos individuales en la estructura de doble cadena global del diseño básico del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. De manera más particular, la primera cadena y el primer tramo, de manera respectiva, o la segunda cadena y el segundo tramo, de manera respectiva, muestran un modelo espacial de modificación de los nucleótidos que forman dichos tramos y cadenas, de manera respectiva. Centrándonos en el primer tramo de la primera, existe un modelo de grupos de nucleótidos modificados y grupos de nucleótidos no modificados. Estos grupos de nucleótidos no modificados se denominan también en el presente documento como grupos flanqueantes de los nucleótidos. De manera preferible, el modelo está constituido por grupos de nucleótidos modificados y nucleótidos no modificados. Incluso de manera más preferible, el modelo es un modelo regular e incluso de manera más preferible un modelo alternante a lo largo de la longitud del primer tramo del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. El grupo de nucleótidos modificados puede estar constituido por uno o más de diversos nucleótidos que están modificados y que son de manera preferible nucleótidos que están modificados en la posición 2', es decir, que tienen una modificación en el resto azúcar. De manera más preferible, esta modificación es una modificación 2'-O-Me. El grupo de nucleótidos no modificados puede estar constituido por uno o más de diversos nucleótidos que están no modificados, por lo cual los nucleótidos no modificados son de manera preferible ribonucleótidos, o los nucleótidos no modificados son nucleótidos que tienen una modificación, por lo cual dicha modificación es diferente de la modificación que muestran los nucleótidos que forman el grupo de nucleótídos modificados. Incluso de manera más preferible, los nucleótidos no modificados son ribonucleótidos. Es de señalar que los términos no modificado y nucleótido no modificado se usan de manera intercambiable si no se indica lo contrario. El primer tramo del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede comenzar con un grupo de nucleótidos modificados o comenzar con un grupo de nucleótidos no modificados tal como se ha definido en el presente documento. Sin embargo, se prefiere que el primer tramo comience con un grupo de nucleótidos modificados. De manera más preferible, el grupo de nucleótidos modificados está constituido por un nucleótido único. En conexión con esta forma de realización el primer tramo es de manera preferible en orientación de sentido opuesto al ácido nucleico que codifica RTP801. Está también comprendido en la presente invención que la modificación que exhibida por los nucleótidos que forman el grupo de nucleótidos modificados es la misma para todos los grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo. Sin embargo, está también comprendido en la presente invención que algún grupo de nucleótidos modificados tenga una modificación diferente que uno o varios de los diversos grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo. En la segunda cadena del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, se puede realizar también un modelo como el descrito para el primer tramo. Se pueden realizar también las mismas características que se han descrito en conexión con el primer tramo en una forma de realización en el segundo tramo, por lo cual se prefiere que, bajo la condición de que el segundo tramo esté en la orientación con polaridad positiva en relación con la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , la segunda cadena de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención comience con un grupo de nucleótídos no modificados. El ácido nucleico de acuerdo con la presente invención que comprende una estructura de doble cadena, puede comprender un primer tramo que tenga el modelo de modificación tal como se ha descrito en el presente documento. De manera alternativa, el ácido nucleico de doble cadena de acuerdo con la presente invención puede comprender un segundo tramo que tenga el modelo de modificación tal como se ha reseñado anteriormente. Es, sin embargo, más preferido que el ácido nucleico de doble cadena de acuerdo con la presente invención esté constituido por un primer tramo y un segundo tramo, por lo cual el primer tramo y el segundo tramo tienen un modelo de modificación espacial tal como se describe en el presente documento. Está comprendido dentro de la presente invención que las características del modelo de modificación espacial sean las mismas en ambos tramos en términos de tamaño de los grupos de nucleótidos modificados y de los grupos de nucleótidos no modificados y la clase de modificaciones realmente usada. De manera preferible, el modelo espacial de modificación en el primer tramo cambia de sitio, de tal manera que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo es opuesto a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo y viceversa. Sin embargo, está también con la presente invención que los modelos estén exactamente alineados, es decir, que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo se oponga a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo y un grupo de nucleótidos no modificados en el primer tramo se oponga a un grupo de nucleótídos no modificados en el segundo tramo. Está todavía comprendido en la presente invención que el modelo espacial de modificación en el primer tramo y el segundo tramo cambia de sitio en relación uno con respecto al otrote tal manera que únicamente una primera porción de un grupo de nucleótidos modificados en un tramo es opuesto a una porción de un grupo de nucleótidos no modificados en el otro tramo, mientras que la segunda porción del grupo de nucleótidos modificados es opuesta a otro grupo de nucleótido modificados. Esta comprendido dentro de la presente invención que la descripción proporcionada en el presente documento sobre el modelo de modificación espacial del(os) tramo(s) del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, se aplica también a la(s) cadena(s) de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, se prefiere que los tramos del ácido nucleico comprendan el modelo de modificación espacial y las cadenas comprendan dichos tramos y uno o más salientes tal como se describe en el presente documento. Es particularmente preferido que la prolongación sea un grupo fosfato en el extremo 3' de la cadena de sentido opuesto, o la cadena de polaridad positiva o ambas cadenas, por lo cual, es más preferido que el grupo fosfato esté en el extremo 3' tanto de la cadena con sentido opuesto como en la cadena con polaridad positiva. En una forma de realización incluso más preferida, el grupo fosfato es un grupo fosfato tal como se ha definido en el presente documento. Está también comprendido dentro de la presente invención que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención puede presentar un engarce que conecta la primera y la segunda cadena. Dicho engarce es de manera preferible un polímero, El polímero puede ser cualquier polímero natural o sintético. Los enlazantes sintéticos posibles son, entre otros, PEG o un polinucleótido. Dicho engarce se diseña de manera preferible de tal manera que permita el pliegue hacia atrás parcial o completo del primer tramo sobre el segundo tramo y viceversa. Finalmente está comprendido dentro de la presente invención que el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sea uno sintético, uno químicamente sintetizado, uno aislado, o uno derivado de cualquier fuente natural tal como, por ejemplo, preparado por medio de tecnología recombinante. En conexión con la preparación de cualquier ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, se puede introducir cualquier modificación descrita en el presente documento antes, durante o subsiguiente a la preparación del ácido nucleico respectivo de acuerdo con la presente invención tal como conocen las personas expertas en la técnica.

El vector de acuerdo con la presente invención comprende un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. De manera adicional, el vector puede incluir elementos para controlar el direccionamiento, la expresión y la transcripción de dicho ácido nucleico de una manera selectiva con la célula tal como se conoce en la técnica. El plásmido puede incluir un promotor para controlar la transcripción del material heterólogo, es decir, el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, y puede ser un promotor constitutivo o inducible para permitir la transcripción selectiva, Se pueden incluir de manera opcional potenciadores que se pueden necesitar para obtener los niveles de transcripción necesarios. Los potenciadores son de manera general secuencias de ADN no traducidas que trabajan de manera contigua con la secuencia de codificación, de esta manera en cis, para cambiar el nivel de transcripción basal dictado por el promotor. Una persona experta en la técnica conoce la expresión de dichos constructos y puede llevarla a cabo, por ejemplo, proporcionando un constructo en tándem respectivo o teniendo diferentes promotores que transcriben la primera y segunda cadena y el primer y el segundo tramo, de manera respectiva, del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención. Cuando el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención se fabrica o expresa, de manera preferible se expresa in vivo, de manera más preferible en un paciente que necesita el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, dicha fabricación o expresión usa de manera preferible un vector de expresión, de manera preferible un vector de expresión en mamíferos. Se conocen en la técnica los vectores de expresión y comprenden de manera preferible plásmidos, cósmidos, sistemas de expresión vírica. Los sistemas de expresión vírica preferidos incluyen, pero no se limitan a, adenovirus, retrovirus y lentivirus. Se conocen procedimientos en la técnica para introducir los vectores en las células o los tejidos. Se pueden encontrar descritos de manera general dichos procedimientos en Sambrook y col., Molecular cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbour Laboratory, Nueva York (1983, 1992), o en Ausubel y col., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland, 1998. Los procedimientos adecuados comprenden, entre otros, la transfección, lipofección, electroporación e infección con vectores víricos recombinantes. En conexión con la presente invención, una característica adicional del vector es una característica que limita la expresión en una forma de realización tal como un promotor y un elemento regulador, de manera respectiva, que son específicos para el tipo de célula deseado permitiendo de esta manera la expresión de la secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención sólo una vez que se proporciona el fondo que permite la expresión deseada. En un aspecto adicional la presente invención está relacionada con una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y/o un vector de acuerdo con la presente invención y, de manera opcional, un vehículo, diluyente o adyuvantes farmacéuticamente aceptables u otro(s) vehículo(s). De manera preferible, dicho vehículo, diluyentes, adyuvantes y vehículos son inertes, y no tóxicos. La composición farmacéutica está en sus diversas formas de realización adaptada para la administración por diversos medios. Dicha administración comprende la administración sistémica y local así como la oral, subcutánea, parenteral, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, e intrategral. Las personas expertas en la técnica reconocerán que la cantidad de composición farmacéutica y el ácido nucleico y el vector, respectivamente, dependen de la dolencia clínica del paciente individual, el emplazamiento y el procedimiento de administración, el calendario de administración, la edad del paciente, el sexo, el peso corporal y otros factores conocidos por los médicos. La cantidad farmacéuticamente efectiva para los objetivos de prevención y/o tratamiento se determina de esta manera mediante consideraciones como son conocidas en las artes médicas. De manera preferible, la cantidad es efectiva para conseguir la mejora que incluye pero se limita a mejorar la dolencia de la enfermedad o proporcionar una recuperación, la mejora o eliminación más rápida de los síntomas y otros indicadores que se seleccionan como medidas apropiadas por aquellos técnicos expertos en las artes médicas. En una forma de realización preferida, la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención puede comprender otros compuestos farmacéuticamente activos. De manera preferible dichos otros compuestos farmacéuticamente activos se seleccionan entre el grupo que comprende los compuestos que permiten la captación intracelular del suministro celular, los compuestos que permiten la liberación endosómica, los compuestos que permiten, un tiempo de circulación más largo y los compuestos que permiten el direccionamiento de las células endoteliales o las células patogénicas. Los compuestos preferidos para la liberación endosómica son la cloroquina, y los inhibidores de las bombas de H+ dependientes de ATP. La composición farmacéutica se formula de manera preferible de tal manera que proporcione una administración de dosificación única o una administración multidosificación. Se reconocerá que se puede usar la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención para cualquier enfermedad que implique el desarrollo o crecimiento no deseado de la vasculatura que incluye la angiogénesis, así como cualquiera de las enfermedades y dolencias descritas en el presente documento. De manera preferible, estas clases de enfermedades y enfermedades tumorales. Entre otras enfermedades tumorales, son más preferidos los siguientes tumores: cáncer endometrial, carcinomas colorectales, gliomas, cánceres endometriales, adenocarcinomas, hiperplasias endometriales, síndrome de Cowden, carcinoma colorectal sin poliposis hereditario, síndrome de Li-Fraumene, cáncer de mama-ovarios, cáncer de próstata (Ali, I. U., Journal of the National Cáncer Institute, Vol 92, n° 11 , Junio 07, 2000, página 861 - 863), síndrome de Bannayan-Zonana, LDD (síndrome de Lhermitte-Duklos) (Macleod, K., más arriba) enfermedades de hamartoma-macrocefalia que incluyen la enfermedad de Cow (CD) y el síndrome de Bannayan-Ruvalcaba-Rily (BRR), lesiones mucocutáneas (por ejemplo, trichilemnonmas), macrocefalia, retraso mental, harmatomas gastrointestinal, lipomas, adenomas del tiroide, enfermedad fibrocistica de la mama, gangliocitoma dísplásico cerebelar y malignidades del tiroides y el seno (Vázquez, F., Sellers, W. R., más arriba). Se reconoce que cualquiera de las enfermedades tumorales que se va a tratar con la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención es de manera preferible una enfermedad tumoral en su etapa tardío. En otra forma de realización la enfermedad tumoral implica células que son negativas para el supresor del tumor, por lo cual, de manera más preferible, el supresor del tumor es PTEN. Se puede usar también la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención en un procedimiento para prevenir y/o tratar una enfermedad tal como se describe en el presente documento, por lo cual el procedimiento comprende la administración de un ácido nucleico de acuerdo con la presente invención, un vector de acuerdo con la presente invención o una composición farmacéutica o medicamento de acuerdo con la presente invención para cualquiera de las enfermedades descritas en el presente documento. En un aspecto adicional, la presente invención está relacionada con un procedimiento para diseñar o seleccionar un ácido nucleico que es adecuado para regular a la baja el RTP801 , de manera más particular para regular a la baja la función del RTP801. Este procedimiento comprende el uso de una secuencia de ácido nucleico tal como se describe en el presente documento y la evaluación de dicho ácido nucleico en un ensayo adecuado, Se conoce dicho ensayo en la técnica y, por ejemplo, se describe en la parte de ejemplos de esta solicitud. En una etapa adicional, se diseña un ácido nucleico de doble cadena, de manera preferible de acuerdo con los principios de diseño como se expone en el presente documento, que sea adecuado para regular a la baja el RTP801 , de manera preferible en conexión con un mecanismo que silencia el gen post transcripcional tal como la interferencia del ARN. También, el ácido nucleico obtenido de esta manera diseñado o seleccionado, se evalúa en el ensayo respectivo y el resultado, es decir, el efecto del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención así como del ácido nucleico recién diseñado o seleccionado en dicho ensayo se compararán. De manera preferible, el ácido nucleico diseñado o seleccionado es más adecuado en el caso en que sea más estable o más efectivo, de manera preferible ambos. Se reconocerá que el procedimiento será particularmente efectivo si se usa cualquiera de los ácidos nucleicos de acuerdo con la presente invención como punto de partida. Está de esta manera comprendido dentro de la presente invención, que nuevas moléculas de ácido nucleico se diseñarán en función de los principios descritos en el presente documento, por lo cual la secuencia diana en el ARNm del RTP801 se desplazará ligeramente en relación con la secuencia diana en el ARNm del RTP801 para el ácido nucleico correspondiente de acuerdo con la presente invención. De manera preferible, el nuevo ácido nucleico se desplazará al menos uno o más nucleótidos en relación con el tramo en el ARNm diana en la dirección 5' o la 3' del ARNm que codifica el RTP801. Está sin embargo dentro de la presente invención el desplazamiento se produzca en ambas direcciones de manera simultánea lo que significa que el nuevo ácido nucleico incorpora el ácido nucleico de acuerdo con la presente invención usado como punto de partida. Está también comprendido dentro de la presente invención que la elongación del ácido nucleico de acuerdo con la presente invención y usado como punto de partida está sesgada en el extremo 3' o el extremo 5'. En el caso de que dicho sesgo bien en el extremo 3' o en el extremo 5' del nuevo ácido nucleico sea más largo, es decir, más extendido que en el otro extremo. Cuando se genera la nueva molécula de ácido nucleico extendiendo el extremo 3' o el extremo 5' de la cadena de sentido opuesto y/o la cadena con polaridad positiva, se aplica normalmente la siguiente secuencia de etapas. Si el desplazamiento es hacia el extremo 5' del ARNm del RTP801 , el extremo 3' de la cadena con sentido opuesto se tiene que extender en el número de nucleótidos por el cual se desplaza el extremo 5' del ARNm del RTP801. De esta manera, el(los) nucleótido(s) que se va(n) a añadir al extremo 3' de la cadena con sentido opuesto del nuevo ácido nucleico es/son complementario(s) a aquellos nucleótidos que siguen en el extremo 5' de la secuencia diana en el ARNm del RTP801 usado para la molécula de ácido nucleico de acuerdo con la presente invención usada como punto de partida. Lo mismo tiene que llevarse a cabo en la cadena con polaridad positiva. Sin embargo, los nucleótidos que se van a añadir a la cadena con polaridad positiva tienen que corresponder, es decir, ser complementarios con los nucleótidos recién añadidos en el extremo 3' de la cadena con sentido opuesto, lo que significa que tienen que añadirse en el extremo 5' de la cadena con polaridad positiva. La etapa última en la cadena con polaridad positiva sin embargo, tiene que llevarse a cabo únicamente en la extensión en que aparte de la cadena con sentido opuesto, deba cambiarse la cadena con polaridad positiva, que es el caso en las formas de realización preferidas de la presente invención. Aunque este desplazamiento se puede llevar a cabo en una extensión definida por la personas expertas en la técnica, de manera más preferible, deberá llevarse a cabo el desplazamiento de tal manera que también el nuevo ácido nucleico contenga todavía un tramo de al menos 14 nucleótidos, de manera preferible 14 nucleótidos contiguos como presentan cualquiera de la moléculas de ácido nucleico descritas en el presente documento. La síntesis de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en el presente documento está comprendida en las habilidades de una persona experta en la técnica, Dicha síntesis es, entre otros, descrita en Becauge S. L. e lyer R, P., Tetrahedron 1992; 48: 2223-2311 , Becauge S. L. e lyer R. P., Tetrahedron 1993; 49: 6123-6194 y Caruthers M. H. y col., Methods Enzymol. 1987; 154: 287-313, La síntesis de tioatos es, entre otros, descrita en Eckstein F., Annu. Rev. Biochem. 1985; 54: 367-402, la síntesis de las moléculas de ARN se describe en Sproat B., en Humana Press 2005 Editado por Herdewijn P.; Kap. 2: 17-31 y los respectivos procesos corriente abajo están, entre otros, descritos en Pingoud A. Y COL., en IRL Press 1989 Editado por Oliver R. W. A.; Kap. 7: 183-208 y Sproat B., en Humana Press 2005 Editado por Herdewijn P.: Kap 2: 17-31 (más arriba). Se puede fabricar ARNsi para RTP801 usando procedimientos conocidos en la técnica tal como se ha descrito anteriormente, basándose en la secuencia conocida de RTP801 (SEC DE ID N°: 1 ) y se puede fabricar estable mediante diversas modificaciones tal como se ha descrito anteriormente. Para información adicional, véase el Ejemplo 9. De manera adicional, en relación con los procedimientos de la presente invención tal como se describen en el presente documento, se pueden usar moléculas adicionales de ARN con dichos procedimientos, por ejemplo, moléculas de ARN de inhibición de la presente invención que incluyen oligorribonucleótidos de cadena única que comprenden de manera preferible tramos de al menos 7-10 nucleótidos consecutivos presentes en las secuencias que se detallan en los cuadros A-C, siendo dichos oligorribonucleótidos capaces de formar [y/o comprender] regiones de dobles cadenas en conformaciones concretas que se reconocen mediante los complejos intracelulares, que conducen a la degradación de dichos oligorribonucleótidos en moléculas más pequeñas de ARN que son capaces de ejercer la inhibición de su gen endógeno correspondiente, y moléculas de ADN que codifican dichas moléculas de ARN. El gen endógeno correspondiente es de manera preferible el gen 801 y puede ser de manera adicional el gen VEGF y / o el gen VEGF-R1. La invención proporciona también una composición que comprende el oligorribonucleótido de cadena única anterior en un vehículo, de manera preferible un vehículo farmacéuticamente aceptable. De manera adicional, la presente invención proporciona una terapia de combinación para todas las dolencias descritas en el presente documento y, en dolencias concretas que implican la neovascularización coroidal. En dicha terapia de combinación, los genes RTP801 y VEGFR se inhiben con el fin de mejorar los síntomas de la enfermedad que está siendo tratada. Se pueden inhibir estos genes con una combinación de ARNsi o anticuerpos (que incluyen anticuerpos aptámeros) o ambos. La presente invención proporciona también por tanto una composición farmacéutica nueva que comprende un inhibidor de RTP801 y un inhibidor de VEGF o VEGFR-1 , siendo de manera preferible el inhibidor de RTP801 un ARNsi, de manera más preferible una molécula de ARNsi detallada en los cuadros A-C y en concreto, los ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A, siendo de manera opcional el inhibidor de VEGF / VEGFR-1 un anticuerpo o aptámero. El uso combinado de dichos compuestos (es decir, el ARNsi de RTP801 y el anticuerpo de VEGF o cualquier otro ejemplo combinado descrito en el presente documento) en la preparación de un medicamento es también parte de la presente invención. De esta manera, se puede administrar el ARNsi de RTP801 tal como una molécula de ARNsi que se detalla en los cuadros A-C y en concreto, lo ARNsi Nos: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A en conjunción con agentes que hacen diana en VEGF o en el receptor 1 de VEGF (VEGFR1), Dichos agentes existen actualmente en el mercado o en diversas etapas de aprobación y trabajo a través de diferentes mecanismos. Los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpo tales como ranibizumab (Lucentis, Genentech) se unen al VEGF liberado para inhibir el enlace de VEGF con los receptores activos. También es una posibilidad un aptámero que puede actuar de manera similar a un ligando / anticuerpo (Maculen, Eyetech / Pfizer, aprobado recientemente por la FDA para la AMD húmeda). Macugen se enlaza con el VEGF extracelular para bloquear su actividad. Estos fármacos se administran localmente mediante inyección intravítrea. Están también disponibles los compuestos basados en ARNsi anti-VEGF (tal como un inhibidor Candd de Acuity de VEGF o el inhibidor 027 de SIRNA de VEGFR-1 : De manera adicional, se informa que la pequeña molécula de aminosterol Squalamine (Genaera) que se administra sistémicamente interfiere en múltiples facetas del proceso angiogénico, que incluyen la inhibición de la señalización de VEGF y otros factores de crecimiento en células endoteliales. La administración conjunta de un inhibidor de RTP801 , de manera preferible un ARNsi, y cualquiera de los agentes inhibidores de VEGF / VEGFR-1 anteriores puede tener un efecto sinérgico por el cual dicho tratamiento combinado es más efectivo que el tratamiento individual por cualquiera de estas composiciones, con independencia de la dosificación en la opción de la terapia única. Este efecto sinérgico se apoya también por los resultados preliminares obtenidos por el cesionario, tal como se detalla en el ejemplo 6. RTP801 Í tiene un mecanismo diferente de acción y es potencialmente sinérgico con los inhibidores de VEGF-VEGFR. Un estudio en ratones KO para RTP801 indica que el fenotipo protector en los ratones KO persiste a pesar del hecho de que la expresión del ARNm de VEGF en el ojo es tan alta como en los ratones WT. Nuestros datos preliminares adicionales indican que la inhibición de RTP801 puede ser sinérgica con la inhibición del eje regulador de VEGF-VEGFR en el tratamiento de la patología de la retina. Los inventores de la presente invención han encontrado en experimentos apropiados que la administración de ARNsi frente al RTP801 en el modelo de AMD (véase Ejemplo 6 a continuación) conduce no solo a la regulación a la baja de RTP801 por sí mismo sino también, como consecuencia, a la regulación al alza del factor PEDF antiangiogénico y neuroprotector así como a la regulación a la baja de la expresión de MCP1 , una proteína quimioatractiva de macrófago. De esta manera, la inhibición de RTP801 confiere de manera simultánea efectos antiangiogénicos, neuroprotectores y antiinflamatorios. Se debe entender que, en el contexto de la presente invención, se pueden emplear cualquiera de las moléculas de ARNsi descritas en el presente documento, o cualquier molécula de ARN de doble cadena larga (normalmente 25-500 nucleótidos de longitud) que se procesa por los complejos celulares endógenos (tales como DICER - véase anteriormente) para formar las moléculas de ARNsi descritas en el presente documento, o las moléculas que comprenden las moléculas de ARNsi descritas en el presente documento, en el tratamiento de las enfermedades o trastornos descritos en el presente documento. Los trastornos adicionales que se pueden tratar mediante las moléculas y composiciones de la presente invención incluyen todos los tipos de neovascularización coroidal (CNV), que se producen no sólo en la AMD húmeda sino también en otras patologías oculares tales como el síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, rupturas en la membrana de Bruch, degeneración miópica, tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas de la retina. Un aspecto adicional de la presente invención proporciona los procedimientos para tratar una enfermedad relacionada con la apoptosis. Se proporcionan los procedimientos para la terapia de las enfermedades o trastornos asociados con el crecimiento celular patológico, no controlado, por ejemplo, el cáncer, la psoriasis, las enfermedades autoinmunes, inter alia, y los procedimientos para la terapia de las enfermedades asociadas con la isquemia y la ausencia de un flujo de sangre apropiado, por ejemplo, infarto de miocardio (Ml) y apoplejía. "Cáncer" o "Tumor" se refieren a una masa en crecimiento incontrolado de células anormales. Estos términos incluyen los tumores primarios, que pueden ser benignos o malignos, así como los tumores secundarios o metástasis que se han esparcido a otros lugares en el cuerpo. Los ejemplos de enfermedades de tipo cáncer incluyen, inter alia: carcinoma (por ejemplo: mama, colon y pulmón), leucemia tal como leucemia de las células B, linfoma tal como linfoma de las células B, blastoma tal como neuroblastoma y melanoma. La invención proporciona también una composición que comprende uno o más de los compuestos de la invención en un vehículo, de manera preferible un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta composición puede comprender una mezcla de dos o más ARNsi para diferentes genes o diferentes ARNsi para el mismo gen. Se pretende una composición que comprenda ARNsi para el gen RTP801 y ARNsi para el gen VEGF y / o el gen VEGFR-1. Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido de manera covalente o no covalente con uno o más compuestos de la invención (estructura A). Se puede dosificar este compuesto en un vehículo, de manera preferible un vehículo farmacéuticamente aceptable, y se puede procesar intracelularmente por los complejos celulares endógenos para producir uno o más ARNsi de la invención. Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido de manera covalente o no covalente con un ARNsi para otro gen, de manera especial el gen VEGF y/o el gen VEGF-R1. La invención comprende también una entidad química nueva que es un inhibidor de RTP801 , de manera preferible un ARNsi, unido químicamente, de manera covalente o no covalente, a cualquiera de los anteriores agentes inhibidores de VEGF / VEGFR-1. Una entidad química concreta buscada es un ARNsi inhibidor del RTP801 unido de manera covalente a un anticuerpo contra el VEGF o del receptor-1 del VEGF. Son conocidos los procedimientos de producción de dichas nuevas entidades químicas por aquellas personas expertas en la técnica. Esta invención comprende también una estructura de doble cadena en tándem que comprende dos o más secuencias de ARNsi, que se procesa intracelularmente para formar dos o más diferentes ARNsi, uno que inhibe el 801 y un segundo que inhibe el VEGF / VEGFR-1. En un aspecto relacionado, esta invención comprende también una estructura de doble cadena en tándem que comprende dos o más secuencias de ARNsí, que se degrada intracelularmente para formar dos o más ARNsi diferentes, inhibiendo ambos el 801. De manera particular, se busca que se pueda dosificar en un vehículo, de manera preferible un vehículo farmacéuticamente aceptable, un oligonucleótido largo (normalmente de una longitud aproximada de 80-500 nucleótidos) comprendiendo una o más estructuras de horquilla y bucle, en donde las regiones de horquilla comprenden las secuencias de oligonucleótidos de la invención; y se pueda procesar intracelularmente mediante complejos celulares endógenos (por ejemplo, mediante DROSHA y DICER tal como se ha descrito anteriormente) para producir uno o más oligonucleótidos de doble cadena más pequeños (ARNsi) que son los oligonucleótidos de la invención: Se puede denominar este oligonucleótido un constructo de shARN en tándem. Se pretende que este oligonucleótído largo sea un oligonucleótido de cadena única que comprenda una o más estructuras de horquilla y bucle, en la que cada región horquilla comprende una secuencia de ARNsi de polaridad positiva y la correspondiente de sentido opuesto de un gen 801. De manera particular, se pretende que este oligonucleótido comprenda secuencias de ARNsi de polaridad positiva y de sentido opuesto tal como se representa en una cualquiera de los cuadros A C. De manera alternativa, el constructo de ARNsh en tándem puede comprender la secuencia de ARNsi de polaridad positiva y la correspondiente de sentido opuesto de un gen 801 y de manera adicional la secuencia de ARNsi de polaridad positiva y la correspondiente de sentido opuesto de un gen diferente tal como VEGF o VEGF-R1. Tal como se ha mencionado en el presente documento, el ARNsi frente al RTP801 puede ser el componente activo principal en una composición farmacéutica, o puede ser un componente activo de una composición farmacéutica que contiene dos o más ARNsi (o las moléculas que codifican o producen endógenamente dos o mas ARNsi, ser una mezcla de moléculas o una o más moléculas en tándem que codifican dos o más ARNsi), estando comprendida de manera adicional dicha composición farmacéutica por una o más moléculas de ARNsi adicionales que hacen diana en uno o más genes adicionales. La inhibición simultánea de RTP801 y dicho gen(es) adicional(es) tendrá probablemente un efecto aditivo o sinérgico en el tratamiento de las enfermedades descritas en el presente docu acuerdo con lo siguiente: Insuficiencia renal aguda (ARF) y otros microvasculares: la composición farmacéutica para el tratamient 5 puede estar comprendida por las siguientes combinaciones de com dímeros ARNsi de RTP801 y ARNsi de p53; dímeros de ARNsi de ARNsi de Fas; 3) dímeros de ARNsi de RTP801 y ARNsi de Bax; de p53 y ARNsi de Fas; 5) dímeros de ARNsi de RTP801 y ARNsi dímeros de ARNsi de RTP801 y ARNsi de Noxa; 7) dímeros de 10 RTP801 y ARNsi de Puma; 8) dímeros de ARNsi de RTP801 ( ARNsi de RTP801 L (REDD2); 9) ARNsi de RTP801 , ARNsi cualquiera de ARNsi de RTP801L, ARNsí de p53, ARNsi de Bax, Noxa o ARNsi de Puma para formar trímeros o polímeros (es decir, en tándem que codifican tres ARNsi). 15 Degeneración macular (MD), retinopatía diabética ( de la médula espinal: las composiciones farmacéuticas para el trata la MD, la DR y la lesión de la médula espinal pueden estar compr las siguientes combinaciones de compuestos: 1 ) ARNsi d combinado bien con ARNsí de VEGF, ARNsi de VEGF-R1 , ARNs 20 R2, ARNsi de PKCbeta, ARNsi de MCP1 , ARNsi de eNOS, ARNs ARNsi de RTP801 L (mezclados físicamente o en una molécula en t ARNsi de RTP801 en combinación con dos o más ARNsi de la li (mezclados físicamente o en una molécula en tándem que codifica o una combinación de los mismos). COPD y trastornos respiratorios: la composición fa para el tratamiento de los trastornos respiratorios puede estar co por las siguientes combinaciones de compuestos: ARNsi d 5 combinado con ARNsi frente a uno o más de los siguientes gene metaloproteasas de matriz, fosfolipasas, caspasas, esfingomi ceramida sintasa. De manera adicional, se pueden enlazar ARNsi de cualquier molécula de ácido nucleico que comprenda o codifique e 10 RTP801 (covalente o no covalentemente) con anticuerpos, con conseguir un direccionamiento mejorado para el tratamient enfermedades descritas en el presente documento, de acuer siguiente: ARF: anticuerpo anti-Fas (de manera preferible 15 neutralizantes). Degeneración macular, retinopatía diabética, lesión d espinal: anticuerpo anti-Fas, anticuerpo anti-MCP1 , anticuerpo anti anticuerpo anti-VEGFR2. Los anticuerpos deberán ser de maner anticuerpos neutralizantes. 20 Cualquier molécula, tal como, por ejemplo, molécul con sentido opuesto que comprendan las secuencias de ARNsi de presente documento (con las modificaciones apropiadas en el ácid es particularmente deseable y se puede usar con la misma capacid ARNsi correspondientes para todos los usos y procedimientos presente documento. La invención comprende también un procedimient paciente que padece de un trastorno tal como los trastornos 5 presente documento que comprende la administración al composición o compuesto anterior en una dosis terapéuticame tal manera que por ese modo se trate al paciente. Por el término "con sentido opuesto" (AS) o " sentido opuesto" se entiende un fragmento de polinucleótido ( 10 desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos o una mezcla de amb actividad con sentido opuesto inhibidora, produciendo dicha disminución en la expresión de la copia genómica end correspondiente (en este caso RTP801). Un polinucleótido AS un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos 15 secuencia de longitud y homología suficientes con una secuen el interior de la secuencia del gen RTP801 que se muestra e N°: 1 para permitir la hibridación del AS al gen. Se diseña la s para complementar un ARNm diana de interés y formar un dúp Esta formación del dúplex puede evitar el procesamiento, 20 transporte o la traducción del ARNm relevante. Por otra secuencias de nucleótidos AS pueden estimular la actividad celular cuando se hibridan con sus ARNm diana, dando co degradación del ARNm (Calabretta y col, 1996: Antisense s treatment of leukemias. Semin Oncol. 23(1): 78-87): En este caso, la RNasa H romperá el componente de ARN del dúplex y puede liberar de manera potencial el AS para hibridar de manera adicional con moléculas adicionales del ARN diana. Un modo adicional de acción resulta de la interacción del AS con el ADN genómico para formar una triple hélice que puede ser inactiva transcripcionalmente. Los fragmentos de AS concretos son el AS del ADN que codifica los fragmentos concretos de RTP801 descritos en el presente documento Muchas revisiones han cubierto los aspectos principales de la tecnología con sentido opuesto (AS) y su potencial terapéutico (Wright & Anazodo, 1995. Antisense Molecules and Their Potencial For The Treatment Of Cáncer and AIDS. Cáncer J. 8:185-189). Existen revisiones de los aspectos químicos (Crooke, 1995. Progress in antisense therapeutics. Hematol. Pathol. 2:59: Uhlmann y Peyman, 1990. Antisense Oligonucleotides: A New Therapeutic Principie. Chem Rev 90(4):543-584.), celulares (Wagner, 1994. Gene inhibition using antisense oligodeoxynucleotides. Nature 372:333.) y terapéuticos (Hanania, y col 1995. Recent advances in the application of gene therapy to human disease. Am. J. Med. 99:537; Scanlon y col., 1995. Oligonucleotid s-mediated modulation of mammalian gene expression. FASEB J. 9:1288; Gewirtz, 1993. Oligodeoxynucleotide-based therapeutics for human leukemias, Stem Cells Dayt. 11:96) de esta tecnología. Se puede conseguir la intervención con sentido opuesto en la expresión de los genes específicos mediante el uso de secuencias de oligonucleótidos AS sintéticos (véase Lefebvre-d'Hellencourt y col, 1995. Immunomodulation by cytokine antisense oligonucleotides. Eur. Cytokine Netw. 6:7; Agrawal, 1996. Antisense oligonucleotides: towards clinical triáis, TIBTECH. 14:376; Lev-Lehman y col., 1997. Antisense Oligomers in vitro and in vivo. In Antisense Therapeutics, A. Cohén y S. Smicek, eds (Plenum press, Nueva York)). Se diseñan las secuencias de oligonucleótidos AS para complementar un ARNm diana de interés y formar un dúplex de ARN:AS. Esta formación del dúplex puede evitar el procesamiento, el ayuste, el transporte o la traducción del ARNm relevante. . Por otra parte, algunas secuencias de nucleótidos AS pueden estimular la actividad de la RNasa H celular cuando se hibridan con sus ARNm diana, dando como resultado la degradación del ARNm (Calabretta y col, 1996: Antisense strategies in the treatment of leukemias. Semin Oncol. 23: 78): En este caso, la RNasa H romperá el componente de ARN del dúplex y puede liberar de manera potencial el AS para hibridar de manera adicional con moléculas adicionales del ARN diana. Un modo adicional de acción resulta de la interacción del AS con el ADN genómico para formar una triple hélice que puede ser inactiva transcripcionalmente. El segmento diana de la secuencia para el oligonucleótido con sentido opuesto se selecciona de tal manera que la secuencia presente características relacionadas con la energía adecuadas importantes para la formación del dúplex de oligonucleótidos con sus plantillas complementarias, y muestre un bajo potencial de autodimerización o autocomplementación (Anazodo y col., 1996). Por ejemplo, se puede usar el programa de ordenador OLIGO (Primer Analysis Software, Versión 3.4) para determinar la temperatura de fusión de la secuencia con sentido opuesto, las propiedades de energía libre, y para estimar la formación potencial del autodímero y las propiedades de autocomplimentareidad. El programa permite la determinación de una estimación cualitativa de estos dos parámetros (formación potencial del autodímero y autocomplimentareidad) y proporciona una indicación del "sin potencial" o "algún potencial" o del "potencial esencialmente completo". Usando este programa se seleccionan generalmente los segmentos diana que se han estimado que no tienen potencial en estos parámetros. Sin embargo, se pueden usar los segmentos que tienen "algún potencial" en una de las categorías. Se usa un balance de los parámetros en la selección tal como se conoce en la técnica. De manera adicional, se seleccionan también los oligonucleótidos según sea necesario de tal manera que la sustitución análoga no afecte la función sustancialmente. Los oligonucleótidos con sentido opuesto de fosforotioato no muestran normalmente toxicidad significativa a concentraciones que son efectivas y presentan semividas farmacodinámicas suficientes en animales (Agrawal, 1996. Antisense oligonucleotides: towards clinical triáis, TIBTECH, 14:376) y son nucleasa resistentes. Se ha demostrado por parte de los oligonucleótídos de pérdida de función en fenotipos relacionados con el desarrollo celular para la proteína acídica fibrilar de la glia (GFAP), para el establecimiento de la formación de la placa tectal en pollos (Galileo y col., 1991. J. Cell. Biol., 112:1285.) y para la proteína N-myc, responsable del mantenimiento de la heterogeneidad celular en cultivos neuroectodérmicos (células epiteliales frente a neuroblásticas, que difieren en sus capacidades para formar colonias, la tumorogenicidad y la adherencia) (Rosolen y col., 1990. Cáncer Res. 50:6316; Whitesell y col., 1991. Episome-generated N-myc antisense RNA restricts the differentiation potential of primitive neuroectodermal cell lines. Mol. Cell. Biol. 11 :1360.). La inhibición por parte de los oligonucleótidos con sentido opuesto del factor básico de crecimiento del fibroblasto (bFgF), que tiene propiedades mitogénicas y angiogénicas, suprime el 80 % del crecimiento en las células del glioma (Morrison, 1991. Supression of Basic fibroblast growth factor expression by antisense oligonucleotides inhibits the growth of transformed human astrocytes. J. Biol. Chem. 266:728.) de una manera saturable y específica. Siendo hidrófobos, los oligonucleótidos con sentido opuesto interactúan bien con las membranas de fosfolípidos (Akhter y col, 1991. Interactions of antisense DNA oligonucleotide anaiogs with phospholipid membranes (liposomes) Nuc. Res. 19:5551-5559.).Tras su interacción con la membrana del plasma celular, son activa (o pasivamente) transportados en las células vivas (Loke y col, 1989. Characterization of oligonucleotide transport into living cells. PNAS USA 86:3474.) en un mecanismo saturable predicho para implicar receptores específicos (Yakubov y col, 1989. PNAS USA 86:6454).). Una "ribozima" es una molécula de ARN que posee actividad catalítica de ARN(véase Cech para la revisión) y rompe un emplazamiento específico en un ARN diana. De acuerdo con la presente invención, se pueden utilizar ribozimas que rompen el ARNm de RTP801 como inhibidores de RTP801. Esto puede ser necesario en los casos en que está limitada la terapia con sentido opuesto por consideraciones estequiométricas (Sarver y col., 1990 Gene Regulation and Aids, pp 305-325). A continuación se pueden usar ribozimas que harán diana en la secuencia de RTP801. El número de moléculas de ARN que se rompen por una ribozima es mayor que el número predicho por la estequiometría. (Hampel y Tritz, 1989; Uhlenbeck, 1987). Las ribozimas catalizan la rotura del enlace fosfodiéster del ARN.

Se han identificado diversas familias estructurales de las ribozimas que incluyen los intrones del Grupo I, la RNasa P, la ribozima del virus delta de la hepatitis, las ribozimas del tipo cabeza de martillo y las ribozimas de tipo horquilla derivadas originalmente de la cadena negativa del ARN del satélite del virus del mosaico de tabaco (sTRSV) (Sullivan, 1994; Patente de los Estados Unidos n° 5.225.347, columnas 4-5). Las dos últimas familias se derivan de los viroides y virusoides, en los que se cree que la ribozima separa los monómeros de los oligómeros creados durante la replicación en círculo giratorio (Symons, 1989 y 1992). Los motivos de ribozima del tipo cabeza de martillo y horquilla son las más comúnmente adaptados para la trans rotura de los ARNm para la terapia génica (Sullivan, 1994). El tipo de ribozima utilizado en la presente invención se selecciona tal como se conoce en la técnica. Las ribozimas de tipo horquilla están ahora en ensayo clínico y son el tipo preferido. De manera general, la ribozima tiene una longitud de 30-100 nucleótidos. La liberación de las ribozimas es similar a la de los fragmentos AS y/o las moléculas de ARNsi. Se deberá señalar que todos los polinucleótidos que se van a usar en la presente invención pueden experimentar modificaciones con el fin de poseer propiedades terapéuticas mejoradas. Se pueden introducir modificaciones o análogos de nucleótidos para mejorar las propiedades terapéuticas de los polinucleótidos. Las propiedades mejoradas incluyen un aumento de la resistencia a la nucleasa y/o la capacidad aumentada para pernetrar las membranas celulares. La resistencia a la nucleasa, cuando se necesita, se proporciona mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica que no interfiera con la actividad biológica del polinucleótido AS, el ARNsi, el ADNc y/o las ribozimas que se necesiten para el procedimiento de uso y liberación (lyer y col., 1990; Eckstein, 1985; Spitzer y Eckstein, 1988; Wooll y col., 1990; Shaw y col., 1991 ). Las modificaciones que se pueden hacer a los oligonucleótidos con el fin de mejorar la resistencia a la nucleasa incluyen modificar el heteroátomo de fósforo u oxígeno en el esqueleto de fosfato. Esto incluye preparar oligómeros de metil fosfonatos, fosforotioatos, fosforoditioatos y morfolino. En una forma de realización se proporciona teniendo enlaces de fósforotioato enlazados entre cuatro y seis bases de nucleótidos del extremo 3'. De manera alternativa, los enlaces fosforotioato uniendo entre cuatro y seis bases de nucleótidos. Se pueden usar otras modificaciones conocidas en la técnica en las que la actividad biológica está retenida, pero la estabilidad a las nucleasas aumenta de manera sustancial. Se pueden emplear todos los análogos de, o modificaciones a, un polinucleótido con la presente invención, siempre que dicho análogo o modificación no afecte de manera sustancial la función del polinucleótido. Se pueden seleccionar los nucleótidos a partir de bases de origen natural o sintéticas modificadas. Las bases que se producen de manera natural incluyen adenina, guanina, citosina, timina y uracilo. Las bases modificadas de nucleótidos incluyen inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil, 2-propil y otras alquil adeninas, 5-halo uracilo, 5-halo citosina, 6-aza citosina y 6-aza timina, pseudo uracilo, 4 -tiouracilo, 8-halo adenina, 8-aminoadenina, 8-tiol adenina, 8-tiolalquil adeninas, 8-hidroxil adenina y otras adeninas 8-sustituidas, 8-halo guaninas, 8-amino guanina, 8-tiol guanina, 8-tioalquil guaninas, 8-hidroxil guanina y otras guaninas sustituidas, otras aza y desaza adeninas, otras aza y desaza guaninas, 5-trifluorometil uracilo y 5-trifluoro citosina. De manera adicional, se pueden preparar análogos de polinucleótidos en los que la estructura del nucleótido está fundamentalmente alterada y que son más adecuados como reactivos terapéuticos o experimentales. Un ejemplo de un análogo de nucleótido es un péptido de ácido nucleico (PNA) en el que el esqueleto de la desoxirribosa (o ribosa) fosfato en el ADN (O ARN) se reemplaza con un esqueleto de poliamida que es similar al encontrado en los péptidos. Se ha demostrado que los análogos de PNA son resistentes a la degradación por los enzimas y tienen vidas extendidas in vivo e in vitro. De manera adicional, se ha demostrado que los PNA enlazan más fuertemente con una secuencia complementaria de ADN que con una molécula de ADN. Esta observación se atribuye a la carencia de repulsión de carga entre la cadena de PNA y la cadena de ADN. Otras modificaciones que se pueden hacer a los oligonucleótidos incluyen esqueletos de polímero, esqueletos cíclicos, o esqueletos acíclicos. Los polipéptidos empleados en la presente invención pueden estar también modificados, opcionalmente modificados químicamente, con el fin de mejorar su actividad terapéutica. "Modificado químicamente" - cuando se refiere a los polipéptidos, significa un polipéptido en el que al menos uno de sus residuos de aminoácidos se modifica bien por procesos naturales, tales como el procesamiento u otras modificaciones post traduccionales, o mediante técnicas de modificación química que son bien conocidas en la técnica. Entre las numerosas modificaciones típicas conocidas, pero no exclusivas, los ejemplos incluyen: acetílación, acilación, amidación, ADP-ribosilación, glicosilación, formación del ancla de GPI, enlace covalente de un lípido o derivado de lípido, metilación, miristílación, pegilación, prenilación, fosforilación, ubiquitinación, o cualquier proceso similar. Las modificaciones posibles adicionales de polipéptidos (tales como aquellas que resultan de la alteración de la secuencia del ácido nucleico) incluyen las siguientes: "Sustitución conservativa" - se refiere a la sustitución de un aminoácido de una clase por un aminoácido de la misma clase, en el que se define una clase por las propiedades fisicoquímicas comunes de la cadena secundaria del aminoácido y las frecuencias elevadas de sustitución en los polipéptidos homólogos que se encuentran en la naturaleza, tal como se determina, por ejemplo, mediante una matriz estándar de intercambio de frecuencia Dayhoff o matriz BLOSUM. Se han categorizado seis clases generales de cadenas secundarias de aminoácidos e incluyen: Clase I (Cys); Clase II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); Clase lll (Asn, Asp, Gln, Glu); Clase IV (His, Arg, Lys); Clase V (He, Leu, Val, Met); y Clase VI (Phe, Tyr, Trp). Por ejemplo, la sustitución de un Asp por otro residuo de la Clase lll tal como Asn, Gln, o Glu, es una sustitución conservativa. "Sustitución no conservativa" - se refiere a la sustitución de un aminoácido de una clase por un aminoácido de otra clase; por ejemplo, la sustitución de un Ala, un residuo de la Clase II, con un residuo de Clase lll tal como Asp, Asn, Glu, o Gln. "Delección" - es un cambio en cualquier secuencia de aminoácidos o nucleótido en las que están ausentes uno o más residuos de aminoácidos o nucleótidos, de manera respectiva. "Inserción" o "adición"- es el cambio en una secuencia de aminoácidos o nucleótidos que ha resultado en la adición de uno o más residuos de aminoácidos o nucleótidos, de manera respectiva, en comparación con la secuencia que se produce de manera natural. "Sustitución" - sustitución de uno o más nucleótidos o aminoácidos por nucleótidos o aminoácidos diferentes, de manera respectiva. Como ocurre en las secuencias de aminoácidos, la sustitución puede ser conservativa o no conservativa. En una forma de realización adicional de la presente invención, se puede usar el polipéptído o polinucleótido RTP801 para diagnosticar o detectar la degeneración macular en un sujeto, Un procedimiento de detección podría comprender de manera típica la evaluación del ARNm de RTP801 o el polipéptido RTP801 en una muestra derivada de un sujeto, "Detección" - se refiere a un procedimiento de detección de una enfermedad. Este término se puede referir a la detección de una predisposición a una enfermedad, o a la detección de la gravedad de la enfermedad, Por "homólogo / homología", tal como se utilizan en la presente invención, se entiende al menos aproximadamente un 70 %, de manera preferible al menos aproximadamente un 75 % de homología, de manera ventajosa al menos aproximadamente un 80 % de homología, de manera más ventajosa al menos aproximadamente un 90 % de homología, incluso de manera más ventajosa al menos aproximadamente un 95 %, por ejemplo al menos aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 %, aproximadamente un 99 % o incluso aproximadamente un 100 % de homología. La invención comprende también que se pueden usar estos polinucleótidos y polipéptidos de la misma manera que los anteriormente mencionados polinucleótidos y polipéptidos o aquellos del presente documento. De manera alternativa o adicionalmente, "homología", con respecto a las secuencias, se puede referir al número de posiciones con residuos nucleótidos o de aminoácidos idénticos, dividido por el número de residuos de aminoácidos o nucleótidos en la más corta de las dos secuencias, en el que se puede determinar el alineamiento de las dos secuencias de acuerdo con el algoritmo de Wilbur y Lipman ((1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726); por ejemplo, usando un tamaño de ventana de 20 nucleótidos, una longitud de palabra de 4 nucleótidos, una señalización por hueco de 4, el análisis asistido por ordenador e interpretación de los datos de la secuencia, que incluyen el alineamiento, puede ser llevado a cabo de manera conveniente usando programas comercialmente disponibles (por ejemplo, Intelligenetics ™ Suite, Intelligenetics Inc., CA). Cuando se dice que las secuencias de ARN son similares, o tienen un grado de identidad u homología de secuencia con las secuencias de ADN, se considera la timidina (T) en la secuencia de ADN igual al uracilo (U) en la secuencia del ARN: Las secuencias de ARN dentro del alcance d la invención se pueden derivar de las secuencias de ADN o sus complementos, sustituyendo la timidina (T) en la secuencia de ADN con uracilo (U). De manera adicional o alternativa, se puede determinar la similaridad u homología de la secuencia de aminoácidos, por ejemplo, usando el programa BlastP (Altschul y col., Nucí. Acid Res. 25:3389-3402) y disponible en NCBI. Las siguientes referencias proporcionan algoritmos para comparar la identidad u homología relativa de los residuos de aminoácidos de dos polípéptidos, y de manera adicional, o de manera alternativa, con respecto a lo anterior, se pueden usar las enseñanzas en estas referencias para determinar el porcentaje de homología: Smith y col., (1981 ) Adv. Appl. Math. 2:482-489; Smith y col., (1983) Nucí. Acids Res. 11 :2205-2220; Devereux y col., (1984) Nucí. Acids Res. 12:387-395; Feng y col., (1987) J. Molec. Evol. 25:351-360; Higgins y col., (1989) CABIOS 5:151-153; y Thompson y col., (1994) Nucle. Acids Res. 22:4673-4680. "Que tiene al menos un X % de homología" - con respecto a secuencias dos aminoácidos o de nucleótidos, se refiere al porcentaje de residuos que son idénticos en las dos secuencias cuando las secuencias están alineadas de manera óptima. De esta manera, una identidad del 90 % en la secuencia de aminoácidos significa que el 90 % de los aminoácidos en dos o más secuencias de polipéptidos alineados de manera óptima son idénticos. Una forma de realización adicional de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 en una cantidad terapéuticamente efectiva como ingrediente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El inhibidor puede ser un inhibidor biológico, una molécula orgánica, una molécula química, etc., dicha composición farmacéutica puede comprender un inhibidor de RTP801 que es un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia que es una secuencia con sentido opuesto a la secuencia que se muestra en la figura 1 (SEC DE ID N°: 1 ). De manera adicional, el inhibidor de RTP801 puede ser un vector que comprende estos polinucleótidos. De manera adicional, el inhibidor de RTP801 puede ser un anticuerpo monoclonal que enlaza de manera específica con un epítope que comprende 4-25 aminoácidos que se muestran en la figura 2 (SEC DE ID N° 2), o una molécula de ARN que hace diana en el ARNm del gen RTP801 tal como una molécula de ARNsi (representada de manera opcional en los cuadros A-C y en concreto, los ARNsi Nos: 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A) o una ribozima. Los ingredientes activos de la composición farmacéutica pueden incluir oligonucleótidos que son nucleasa resistentes necesarios para la práctica de la invención o un fragmento de los mismos que se muestra por tener el mismo efecto dirigido contra a la(s) secuencia(s) y/o los ribozimas apropiado(s). Se pueden usar combinaciones de ingredientes activos tal como se describen en la presente invención, que incluyen combinaciones de secuencias con sentido opuesto. Una forma de realización adicional de la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de enfermedad o lesión de la médula espinal. En una forma de realización el inhibidor es de manera preferible un ARNsi. En otra forma de realización el inhibidor es de manera preferible la Estructura A representada en el presente documento.

Se ha descrito la invención de una manera ilustrativa y se debe entender que se pretende que la terminología que se ha usado esté dentro de la naturaleza de las palabras de la descripción más bien que de la limitación. De manera obvia, son posibles muchas modificaciones y variaciones de la presente invención a la luz de las enseñanzas anteriores. Es que se debe entender, por tanto, que dentro del alcance de la invención de las reivindicaciones adjuntas, se puede practicar la invención de otra manera que la específicamente descrita. A lo largo de esta solicitud, se referencian por autor y año y patentes por número, diversas publicaciones, que incluyen Patentes de los Estados Unidos. Las descripciones de estas publicaciones y patentes y las solicitudes de patente en su totalidad se incorporan por tanto como referencia en esta solicitud con el fin de describir de manera más completa el estado de la técnica a la cual pertenece esta invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS la figura 1 muestra detalles de la secuencia de codificación del gen RTP801 (SEC DE ID N°: 1 ); la figura 2 muestra detalles de la secuencia de aminoácidos del polipéptido RTP801 (SEC DE ID N°: 2); la figura 3 es un diagrama que representa los exones, CDS las SNP humana y la posición de las diversas moléculas de ácidos nucleicos que son bien específicas de ser humano o específicas para el ser humano, ratón y rata en paralelo; las figuras 4A-4H representan un grupo de resultados de un análisis Western Blot tras aplicar diversos ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención a una primera línea celular humana, donde el experimento se llevó a cabo dos veces, refiriéndose a un experimento 1 y a un experimento 2, y donde los niveles de expresión de p110a y p85 se representan como controles de carga y la intensidad (densidad) de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de doble cadena concreto aplicado; las figuras 5A-5F representan un grupo de resultados obtenidos de un análisis Western Blot tras aplicar diversos ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención a una segunda línea celular humana, por tanto el experimento se llevó a cabo dos veces, refiriéndose a un experimento 1 y a un experimento 2, y por tanto los niveles de expresión de p 110a y p85 se representan como controles de carga y la densidad de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de doble cadena concreto aplicado; las figuras 6A-6C representan los resultados obtenidos de un panel de un análisis Western Blot aplicando diversos ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención a la primera línea celular humana a diferentes concentraciones, en concreto 10 nM (5A), 5 nM (5B) y 1 nM (5C), donde el experimento se llevó a cabo dos veces, refiriéndose a un experimento 1 y a un experimento 2, y donde los niveles de expresión de p110a y p85 se representan como controles de carga y la densidad de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de doble cadena concreto aplicado; la figura 7 representa un grupo de resultados obtenidos de un análisis Western Blot aplicando diversos ácido nucleicos de acuerdo con la presente invención a una línea celular de ratón, donde el experimento se llevó a cabo dos veces, refiriéndose como experimento 1 y experimento 2, y donde los niveles de expresión de p110a y p85 se representan como controles de carga y la densidad de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico de doble cadena concreto aplicado; la figura 8 muestra los resultados de los experimentos en un sistema de un modelo de AMD en ratón la figura 9 muestra los resultados de los experimentos adicionales en un sistema de un modelo de AMD en ratón; la figura 10 muestra los resultados de los experimentos en un sistema de un modelo de AMD en un primate no humano; las figuras 11A-11B muestran los resultados de los experimentos adicionales en un sistema de un modelo de AMD en un primate no humano; las figuras 12A-12B muestran los resultados de otros experimentos adicionales en un sistema de un modelo de AMD en un primate no humano; las figuras 13A-13B representan un análisis de los resultados experimentales alcanzados en un modelo de AMD en un primate no humano; las figuras 14A-14B representa un análisis adicional de los resultados experimentales alcanzados en un modelo de AMD en un primate no humano las figuras 15A-15C muestran los resultados de un experimento que implica la instilación ¡ntratraqueal de un plásmido que expresa RTP801 en ratones; las figuras 16A-16C muestran los resultados de un modelo de fumar cigarrillos de corto plazo (7 días) en ratones KO para RTP801 de y salvajes (WT); las figuras 17A-17D muestran los resultados de un modelo de fumar cigarrillos de corto plazo en ratones WT instilados con ARNsi control (REDD8) y anti-RTP801 activo (REDD14) y; la figura 18 muestra los resultados de los experimentos con ratones KO para RTP801 en un modelo CS a largo plazo, la figura 19 muestra los resultados de los experimentos en un sistema de modelo de ARF en ratón; la figura 20 muestra los resultados de los experimentos en un sistema de un modelo de Retinopatía Diabética en ratón; la figura 21 muestra los resultados de los experimentos adicionales en un sistema de un modelo de Retinopatía Diabética en ratón; la figura 22 muestra los resultados de otros experimentos adicionales en un sistema de un modelo de Retinopatía Diabética en ratón; la figura 23 muestra los resultados de los experimentos de inhibición combinada de RTP801 / VEGF en un sistema de un modelo de CNV en ratón; la figura 24 muestra los resultados de los experimentos de inhibición combinada adicionales de RTP801 / VEGF en un sistema de un modelo de CNV en ratón; la figura 25 muestra los resultados de los experimentos que estudian el efecto del ARNsi de RTP801 sobre la expresión del gen en RPE y retina neural; las figuras 26A-26B muestran los resultados adicionales de los experimentos que estudian el efecto del ARNsi de RTP801 sobre la expresión del gen en RPE y la retina neural; y la figura 27 muestra los resultados de los experimentos que demuestran que RTP801 NP es tan activo como RTP801.

EJEMPLOS Sin más elaboración, se cree que una persona experta en la técnica puede, usando la descripción anterior, utilizar la presente invención en su máxima extensión- Las siguientes formas de realización específicas preferidas deben, por tanto, tomarse como meramente ilustrativas, y no limitantes de la invención reivindicada en forma alguna. Los protocolos convencionales en biología molecular conocidos en la técnica no descritos de manera específica en el presente documento, se siguen esencialmente por lo general como en Sambrook y col., Molecular cloning: A laboratory manual, Cold Springs Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992), y en Ausubel y col., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland. (1988). Los protocolos convencionales de síntesis orgánica conocidos en la técnica no se describen de manera específica en el presente documento, y se siguen esencialmente por lo general como en Organic syntheses: Vol. 1-79, diversos editores, J. Wiley, Nueva York, (1941-2003); Gewert y col., Organic synthesis workbook, Wiley-VCH, Weinheim (2000); Smith y March, Advanced Organic Chemistry, Wiley-lnterscience; 5a edición (2001 ). Los procedimientos convencionales de química médica conocidos en la técnica no se describen de manera específica en el presente documento, y se siguen esencialmente por lo general como en la serie "Comprehensive Medicinal Chemistry", de diversos autores y editores, publicado por Pergamon Press. Las características de la presente invención descritas en la memoria descriptiva, las reivindicaciones y/o las figuras pueden ser, tanto de manera separada como en cualquier combinación de los mismos, material para llevar a cabo la invención en las diferentes formas de la misma.

EJEMPLO 1 Materiales y procedimientos generales Si no se indica lo contrario, se usaron en los ejemplos 1-5 los siguientes materiales y procedimientos: Cultivo celular La primera línea celular humana, denominada células HeLa (American Type Culture Collection) se cultivó como sigue: las células HeLa (American Type Culture Collection) se cultivaron tal como se describe en Czaudema F y col. (Czaudema, F., Fechtner, M., Aygun, H., Arnold, W., Klippel, A., Giese, K. & Kaufmann, J. (2003). Nucleic Acids Res., 31 , 670-82). La segunda línea celular humana fue una línea celular de keratinocito humano que se cultivó como sigue: los keratinocitos humanos se cultivaron a 37° C en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contiene FCS al 10%. La línea celular de ratón fue B16V (American Type Culture Collection) cultivada a 37° C en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contiene FCS al 10%. Las condiciones de cultivo son las que se describen en Methods Find Exp Clin Pharmacol. 1997 Mayo; 19(4):231-9: En cada caso, las células se sometieron a los experimentos que se describen en el presente documento a una densidad de aproximadamente 50,000 células por pocilio y el ácido nucleico de doble cadena de acuerdo con la presente invención se añadió a 20 nM, en el que el ácido nucleico de doble cadena se complejo usando 1 µg/ml de un lípido patentado.

Inducción de estado similar a la hipoxia Las células se trataron con CoCI2 para inducir un estado similar a la hipoxia como sigue: las transfecciones de ARNsi se llevaron a cabo en placas de 10 cm (confluencia del 30-50%) tal como se describe en (Czauderma y col., 2003; Kretschmer y col., 2003). En resumen, el ARNsi se transfectó añadiendo un complejo preformado concentrado 10x de GB y lípido en medio libre de suero a células en medio completo. El volumen total de transfeccíón fue de 10 ml. La concentración final de lípido fue 1.0 µg/ml; la concentración final de ARNsi fue 20 nM a no ser que se defina de otra forma. La inducción de las respuestas hipóxicas se llevó a cabo añadiendo CoCI2 (100 µM) directamente al medio de cultivo tisular 24 h antes de la lisis.

Preparación de los extractos celulares y de la inmunotransferencia La preparación de los extractos celulares y del análisis de inmunotransferencía se llevaron a cabo esencialmente tal como se describe en Klippel y col. (Klippel, A., Escobedo, M. A., Wachowicz, M. S., Apell, G., Brown, T. W., Giedlín, M. A., Kavanaugh, W. M. & Williams, L. T. (1998). Mol Cell Biol, 18, 5699-711 ; Klippel, A., Reinhard, C, Kavanaugh, W. M., Apell, G., Escobedo, M. A. & Williams, L. T. (1996). Mol Cell Biol, 16, 4117-27). Se generaron anticuerpos policlonales frente a RTP801 de longitud completa mediante la inmunización de conejos con bacterias productoras de la proteína RTP801 recombinante procedente del vector de expresión pET19-b (Merck Biosciences GmbH, Schwalbach, Alemania). Los anticuerpos monoclonales anti-p110a y anti-p85 de ratón se han descrito en Klippel y col. (supra).

EJEMPLO 2 Reducción de la expresión de RTP801 en una primera línea celular humana Se prepararon diversos ácidos nucleicos de doble cadena. Su localización relativa respecto del ARNm y CDS así como del SNP humano en el ácido nucleico que codifica el RTP801 humano (número de acceso al banco de datos NM-019058) se representa en la figura 3. La primera línea celular humana se puso en contacto con dichos ácidos nucleicos de doble cadena tal como se describe en el ejemplo 1. Tras la inducción de un estado similar a la hipoxia y el tratamiento con dichos ácidos nucleicos de doble cadena, las células se lisaron, y los lisados celulares se sometieron a inmunotransferencia. El p110a, que es una unidad catalítica de la PI3-quinasa, y el p85 se usaron como controles de carga. La intensidad de la banda RTP801 tal como se visualiza usando los anticuerpos policlonales del RTP801 es una medida de la actividad de los ácidos nucleicos de doble cadena individuales en los términos de reducción del nivel de expresión de RTP801.

Todos y cada uno de los ácidos nucleicos de doble cadena han sido modificados de forma tal que estaba presente un grupo 2' O-Me en el primer, tercer, quinto, séptimo, noveno, decimoprimero, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno nucleótido de la cadena de sentido opuesto, en el que la misma modificación, es decir un grupo 2'-0-Me estaba presente en el segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, decimosegundo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo nucleótido de la cadena positiva. De forma adicional, debe tenerse en cuenta que en el caso de estos ácidos nucleicos particulares de acuerdo con la presente invención el primer tramo es idéntico a la primera cadena y el segundo tramo es idéntico a la segunda cadena y estos ácidos nucleicos también tienen los extremos romos. Los experimentos se realizaron dos veces, y los resultados individuales se muestran en las figuras 4A-4H, en las que se designan como experimento 1 y experimento 2, de forma respectiva. Las representaciones h, hr y hmr de las figuras 4A-4H indican que el ácido nucleico de doble cadena respectivo se diseñó de forma que se dirigiera a una sección del ARNm de RTP801 que es específica del ARNm humano (h) del RTP801 , de forma que se dirigiera a una sección del ARNm de RTP801 que es específica para el ARNm de RTP801 de ser humano y rata (hr), y de forma que se dirigiera a una sección del ARNm de RTP801 que es específico del ARNm RTP801 de ser humano, ratón y rata (hmr). El ácido nucleico de doble cadena denominado con el número 40.1 se usó como control positivo, y se usaron células no tratadas (UT+) como control negativo. De acuerdo con los resultados, los siguientes ácidos nucleicos de doble cadena resultaron particularmente útiles para regular de forma reductora la expresión del RTP801 : N° 14, N° 15, N° 20, N° 21 , N° 22, N° 23, N° 24, N° 25, N° 27, N° 39, N° 40, N° 41 , N° 42, N° 43, N° 44, N° 49 y N° 50 (ver cuadro A).

EJEMPLO 3 Reducción de la expresión de RTP801 en una segunda línea celular humana Los experimentos, tal como se describen en relación con el ejemplo 2, se repitieron usando la segunda línea celular humana tal como se especifica en el ejemplo 1 y los resultados se representan en las figuras 5A-5F. Tal como se puede deducir de estas figuras, los resultados que se obtuvieron en relación con los experimentos descritos en el ejemplo 2, se confirmaron usando la segunda línea celular humana.

EJEMPLO 4 Efecto de la dosis de los ácidos nucleicos de doble cadena específico de RTP801 En este experimento, se investigó el efecto de dosificación de los ácidos nucleicos de doble cadena específico de RTP801. A este efecto, las células HeLa se tratan como en relación con los ejemplos 2 y 3, con el que la concentración del ácido nucleico de doble cadena en el caldo de cultivo fue de 10 nM, 5 nM y 1 nM. Como control positivo se usó el ácido nucleico de doble cadena N° 40.1 y como control negativo las células no tratadas (UT+). La lectura fue la misma que la que se describe en relación con los ejemplos 2 y 3. Los ácidos nucleicos concretos de doble cadena usados fueron aquellos con números de referencia interna 14, 22, 23 y 27 que se dirigen a los tramos de ARNm del RTP801 que se comparten entre seres humanos, ratones y ratas, y el ácido nucleico de doble cadena con números de referencia interna 39 y 42 que se dirigen a los tramos del ARNm de RTP801 específico del RTP801 de ser humano. Los resultados se muestran en las figura 6A a C. A partir de dichas figuras se puede deducir que existe una evidente dependencia de la concentración del efecto de los ácidos nucleicos de doble cadena específicos de RTP801 , en el que las moléculas de ácido nucleico que tienen los números de referencia interna 1 , 15, 20, 21 , 24, 40, 41 , 43, 44, 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 , 44.1 , y 14, de manera preferible 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 y 44.1 y de manera más preferible 14, 23 y 27 y de manera preferible cada una de dichas moléculas de ácido nucleico que tienen el modelo concreto de modificación que se describe para ellos en el apartado de ejemplos del presente documento son particularmente efectivas.

EJEMPLO 5 Especificidad de las especies de los ácidos nucleicos de doble cadena específicos de RTP801 Los ácidos nucleicos de doble cadena de acuerdo con la presente invención se han diseñado frente a los tramos del ARNm del RTP801 que son iguales o diferentes en diversas especies. Para ensayar si existe una especificidad por especie de un ácido nucleico de doble cadena específico de RTP801 , los ácidos nucleicos de doble cadena con números de referencia interna 14, 22, 23 y 27 que se dirigen a un tramo del ARNm del RTP801 que se conserva entre el ARNm del RTP801 , de ser humano, ratón y rata, y los ácidos nucleicos de doble cadena con números de referencia interna 39 y 42 que se dirigen a un tramo del ARNm del RTP801 que es específico del ARNm del RTP801 humano, es decir, que se dirigen a un tramo que como tal no está presente en ratón o rata, cuando se comparan en términos de regulación reductora del RTP801 usando el mismo enfoque y lectura que se especifica en los ejemplos 1 y 2. Aunque todos los ácidos nucleicos de doble cadena usados son en principio activos frente al ARNm humano y, tal como se demuestra en los ejemplos anteriores, son también adecuados para regular de forma reductora la expresión del RTP801 , tras usar una línea celular de ratón únicamente aquellos ácidos nucleicos de doble cadena que son también específicos del ARNm del RTP801 de ratón reducen de forma efectiva la expresión de RTP801 , concretamente los ácidos nucleicos de doble cadena NROS. 14, 22, 23 y 27. A partir de este resultado se puede concluir que es posible diseñar un ácidos nucleicos de doble cadena que se dirija a RTP801 que sean específicos de una o diversas especies. Esto permite el uso de exactamente la misma molécula en modelos animales, así como en el hombre.

EJEMPLO 6 Modelos experimentales, procedimientos y resultados relacionados con la degeneración macular Los compuestos de la presente invención se ensayaron en el siguiente modelo animal de neovascularización coroidal (CNV). Este contraste de la AMD húmeda se induce en modelos animales mediante tratamiento por láser.

A) Modelo de ratón Inducción de la neovascularización coroidal (CNV) La neovascularización coroidal (CNV), un contraste de la AMD húmeda se desencadenó mediante fotocoagulación por láser (532 nm, 200 mW, 100 ms, 75 µm) (OcuLight GL, Iridex, Mountain View, CA) realizado en ambos ojos de cada ratón en el día 0 por un único individuo enmascarado respecto de la asignación del grupo de fármaco. Se aplicaron manchas de láser de manera normalizada alrededor del nervio óptico, usando un sistema de liberación de lámpara con rendija, y un cubreobjetos como una lente de contacto.

Grupos de tratamiento Se indujo CNV en los siguientes grupos de ratones (machos 6-8 semanas de edad): (1 ) 12 Ratones WT; (2) 12 Ratones que carecían genéticamente de RTP801 ; (3) 12 Ratones WT inyectados con 0.25 µg de ARNsi de anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNsi de anti-RTP801 inactivo (REDD8 control negativo) en el otro ojo, en los días 0 y 7; (4) 12 Ratones WT inyectados con 0.25 µg de ARNsi de anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNsi de anti-GFP inactivo (control negativo) en el otro ojo en los días 0 y 7; (5) 12 Ratones WT inyectados con 0.1 µg de ARNsi de anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y PBS (control negativo) en el otro ojo en los días 0 y 7; (6) 12 Ratones WT inyectados con 0.05 µg de ARNsi de anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y PBS (control negativo) en el otro ojo en los días 0 y 7, Se trataron ambos ojos de cada ratón con láser. El volumen inyectado fue de 2 µl.

Evaluación 1. El experimento finalizó el día 14. Para la evaluación, los ojos se enuclearon y fijaron con paraformaldehído al 4% durante 30 min a 4° C. Se desprendió la retina neurosensorial y se separó del nervio óptico. El resto del complejo RPE-coroide-esclerótica se montó plano en un Immu-Mount medio de montaje (Vectashield Mounting Médium, Vector) y se tapó con un cubre. Los montes planos se examinaron con un microscopio láser confocal de barrido (TCS SP, Leica, Alemania). Los vasos se visualizaron excitando con láser de argón azul. Se obtuvieron secciones ópticas horizontales (incremento de 1 µm) a partir de la superficie del complejo RPE-coroide-esclerótíca. El plano focal más profundo en el que se pudo identificar la red vascular coroídal circundante que se conectaba con la lesión se tomó como el suelo de la lesión. Cualquier vaso de la zona tratada con láser y superficial a este plano de referencia se tomó como CNV. Se almacenaron de forma digital imágenes de cada sección. Se midió el área de la fluorescencia relacionada con CNV mediante análisis de la imagen computerizada usando el software Leica TCS SP. La suma de todo el área de fluorescencia en cada sección horizontal se usó como índice del volumen de CNV. 2. Se usaron ratones WT diferentes (5 ojos por grupo) para evaluar la expresión del ARNm del RTP801 en CNV (así como la expresión de otros genes relevantes para el AMD) (no tratado y tratado con ARNsi) usando PCR en tiempo real sobre el ARN extraído del RPE/coroide, o procedente de la retina neural.

Resultados 1. Los ratones KO para RTP801 mostraron un exudado de sangre desde el vaso un 30% menor en comparación con ratones WT tras la inducción de CNV; ver figura 8. 2. El ARNsi sintético estabilizado frente a RTP801 , REDD14, despertó una reducción del volumen de CNV dependiente de la dosis. Se consiguió un máximo de inhibición aproximadamente del 70% en comparación con los ojos inyectados con PBS con una dosis de REDD14 (secuencia N° 14 del cuadro 1 , SEC de ID NROS.: 16 (sentido positivo) y 66 (de sentido contrario)) con dosis de 0.25 µg por ojo. A la misma dosis, ambos ARNsi control negativo, REDD8 y anti ARNsi -GFP, mostraron únicamente 27% y 33% de reducción del volumen de CNV respectivamente, apoyando tanto la eficacia superior del REDD14 como también la especificidad de su efecto.

B) Modelo en primates no humanos Inducción de CNV Se usaron ocho machos de mono cinomólogo {Macaca fascicularis) de 2-6 años de edad. Se indujo la neovascularización coroidal (CNV) mediante tratamiento perimacular con láser en ambos ojos antes de la administración de la dosis. Se realizaron nueve lesiones en la mácula con un foto-coagulador láser [OcuLight GL (532 nm) con un adaptador de ranura portátil IRIS Medical® Portable Slit Lamp Adaptor], y las manchas por láser en el ojo derecho se colocaron de manera simétrica en el ojo izquierdo. Los parámetros aproximados de láser fueron los siguientes: tamaño de la mancha: 50-100 µm de diámetro; potencia del láser 300-700 miliwatios; tiempo de exposición: 0.1 segundos.

Tratamiento Inmediatamente después del tratamiento con láser, ambos ojos de todos los animales se sometieron a una única inyección intravítrea. Se dosificó el ojo izquierdo con 350 µg de ARNsi sintético estabilizado frente a RTP801 (el mismo que el usado en el estudio con ratones) en un volumen final de 50 µl, mientras que el ojo contrario recibió 50 µl de PBS (vehículo).

Evaluación 1. Todos los animales se sometieron a examen diario de medidas de consumo de alimento y peso corporal. 2. 2 monos se sometieron a eutanasia en el día 6 tras la Inducción de CNV. Sus ojos se enuclearon y el polo posterior se abatió. A continuación, se retiró la región de la fóvea, y se separó en la coroides y neuroretina, que se congelaron de manera separada (para cada animal) en nitrógeno líquido, que se usaron para la posterior extracción de ARN y evaluación mediante PCR en tiempo real de la expresión del RTP801. 3. Se llevaron a cabo angiogramas con fluoresceína antes del estudio, y al final de las semanas 1 , 2, y 3 tras la Inducción de CNV. Se tomaron fotografías, usando una cámara fundus (TRC-50EX Retina Camera). Las imágenes se capturaron usando un sistema TOPCON IMAGEnet™. El tinte de fluoresceína (fluoresceína sódica al 10 %, aproximadamente 0.1 ml/kg) se inyectó mediante puertos de acceso visual. Se tomaron fotografías en diversos momentos tras la inyección del tinte, para incluir la fase arterial, la fase arteriovenosa temprana y diversas fases arteriovenosas tardías con el fin de evaluar la neovascularización y después del control del exudado de fluoresceína asociado con lesiones de CNV. Dos oftalmólogos realizaron de forma independiente la interpretación y análisis de los angiogramas. Se evaluó la neovascularización (NV) en los angiogramas tempranos, y cada mancha se puntuó con arreglo al siguiente esquema: 0 - sin signos de NV 0.5 - mancha sospechosa 1 - mancha 'caliente' 2 NV en la quemadura del láser 3 NV evidente Se evaluó el exudado de acuerdo con el siguiente esquema 0 - sin exudado 0.5 - mancha sospechosa 1 - exudado de mancha pequeña evidente 2 - exudado creciente con el tiempo 3 - exudado mayor que los límites anteriores (evidente) Además, se comparó el tamaño de cada mancha entre los angiogramas primero y último usando medidas morfométricas, y se calculó el aumento en el tamaño de la mancha que resulta del exudado. 4. Se registraron electroretinogramas (ERG) usando un electroretinógrafo Epic 2000 de acuerdo con el SOP específico del estudio y el SOP de Sierra, incluyendo el uso de un equipo de Ganzfield, en el pre-estudio y al final de la semana 3. Un oftalmólogo veterinario evaluó los datos tabulados de ERG El estudio finalizó en el día 21 tras la Inducción de CNV. Se realizaron necropsia a grosso modo y examen histológico, en órganos y tejidos, incluyendo los ojos Resultados 1. El ARNsi frente al RTP801 redujo la expresión del RTP801 en el RPE/coroides de los animales tratados con láser, tal como se mide en el día 6 tras la Inducción de CNV mediante PCR en tiempo real (ver figura 10). 2. La comparación de la puntuación de las manchas para exudado y neovascularización entre ambos ojos de cada mono individual reveló que disminuyeron ambas características patológicas en los ojos inyectados con el ARNsi del RTP801 cuando se compara con el control (para los resultados de exudado, ver figura 11 ; para los resultados de neovascularización, ver figura 12). 3. El cálculo del numero global de manchas con las puntuaciones clínicamente más elevadas (2 y 3) de exudado o neovascularización en todos los ojos inyectados con ARNsi comparados con todos los ojos inyectados con PBS reveló de nuevo que los ojos inyectados con ARNsi resultaron menos afectados (ver figura 13, a+b). 4. Los datos de puntuación globales para el exudado de las manchas y neovascularización se sometió a evaluación estadística. La existencia de diferencias entre los tratamientos con ARNsi y de control se analizaron calculando los delta entre las puntuaciones medias de las manchas en el ojo de control derecho (R) y el ojo inyectado con ARNsi izquierdo (L) (delta = R-L). La significación de la diferencia se calculó usando un procedimiento estadístico no paramétrico, ensayo de Wílcoxon de valores señalados -un ensayo de una cola. Se analizaron de forma separada diferentes fases de los angiogramas (arterial temprano, arterio-venoso y venoso tardío) para cada semana (1 , 2, y 3). El cuadro 1 muestra la significación (ensayo de una cola) de la diferencia en la puntuación del exudado desde 0 para cada grupo (los valores de p <0.05 se destacan). Se encontró una reducción significativa en la puntuación del exudado en los ojos izquierdos (tratados con ARNsi) con respecto al ojo derecho (tratado con placebo), en las semanas 2 y 3 en los angiogramas tardíos.

CUADRO 1 Notar que los angiogramas tardíos se usaron habitualmente para evaluación de los parámetros de exudado. El cuadro 2 muestra la significación (ensayo de una cola) de la diferencia en la puntuación de la neovascularización (NV) desde 0 para cada grupo (los valores de p <0.05 están subrayados).

CUADRO 2 Se encontró una reducción significativa en la puntuación de NV en los ojos izquierdos respecto de los derechos en las semanas 2 y 3 en el periodo temprano y en periodo arteriovenoso en la semana 2. Notar que los angiogramas tempranos se usaron habitualmente para la evaluación de los parámetros de neovascularización. 5. La evaluación morfométrica cuantitativa del aumento en el área de las manchas que se producen entre los angiogramas temprano (fase arterial) y tardío (fase venosa) debido al exudado reveló que este parámetro se redujo de manera significativa en las manchas de láser en los ojos inyectados con ARNsi (ojos izquierdos, OS) comparados con el control (ojos derechos, OD). Se muestran dos ejemplos en la figura 14. Los gráficos demuestran el aumento relativo (en %) en el área de cada mancha en los ojos izquierdo y derecho de los animales n° 3315 y 3300.

De forma adicional, se encontró en todos los estudios anteriores que el ARNsi de anti RTP-801 no tiene efectos adversos sobre los electroretinogramas (ERG), sobre la histología ocular, o sobre la estructura y función de otros órganos y sistemas. Para resumir los experimentos y resultados anteriores: 1. Tanto la inhibición de la expresión de RTP801 genética (RTP801-/-) y terapéutica mediante ARNsi en el modelo CNV inducido por láser de la degeneración macular relacionada con la edad húmeda (AMD húmeda) da como resultado una reducción significativa en el volumen de CNV. 2. Se obtuvieron resultados positivos en el modelo de ratón y primate no humano. 3. El examen patológico y ERG en monos no reveló ninguna toxicidad mediada por ARNsi ni en los ojos ni en otros órganos y sistemas.

C) Eficacia de la terapia de combinación del ARNsi del RTP801 (REDD14) v el anticuerpo anti-VEGF Se ensayó la eficacia de la terapia de combinación del ARNsi del RTP801 (REDD14) y anticuerpo anti-VEGF en el tratamiento de enfermedades en las que se produce CNV en el modelo anterior de CNV en ratón A) Estudios de volumen de CNV Se calculó el volumen de neovascularización coroidal (CNV) 3 semanas después tras la lesión con láser mediante microscopía de fluorescencia confocal tal como se ha descrito más arriba (Sakurai y col. IOVS 2003; 44: 3578-85 y en Sakurai y col. IOVS 2003; 44: 2743-2749). En los estudios anteriores, encontramos que el anticuerpo (Ab) anti-VEGF-A redujo el volumen de CNV en una forma dependiente de la dosis.

Se eligió una dosis de 1 ng de Ab VEGF-A para los estudios de combinación REDD14+ Ab VEGF-A debido a que esta dosis tiene un efecto inhibitorio intermedio: Ab VEGF-A (1 ng) redujo el tamaño de la CNV en un 26 +_6%. Los hallazgos principales del estudio REDD14+ anticuerpo (Ab) VEGF-A son: • La adición de REDD14 en la menor dosis de 0.05 µg redujo el tamaño de CNV en un 27 + 4% comparado con Ab VEGF-A únicamente. • La adición de REDD14 en la dosis más elevada de 0.25 µg redujo el tamaño de CNV en un 55 + 3% comparado con Ab VEGF-A únicamente.

B) Estudios de exudado de CNV Experimento 1 Este experimento se diseñó con el fin de identificar el efecto terapéutico sinérgico o aditivo potencial para de inhibición de VEGF y RTP801 en el modelo de neovascularizacíón coroidal inducido por láser en ratones Materiales: REDD14 (ARNsi del RTP801 ) • REDD8 (control negativo) • Anticuerpos anti-VEGF • IgG no específicas (control negativo) Se indujo CNV en el día cero tal como se ha descrito más arriba; el material de ensayo se inyectó en los sujetos en el día cero y día 7. Los resultados se evaluaron mediante angiografía con fluoresceína en las semanas 1 , 2, 3, y mediante medidas del volumen de CNV en la semana 3, cada grupo de ensayo se compuso de 10 ojos.

Grupos Experimentales: • Ab VEGF 0.5 ng/ojo • Ab VEGF 1 ng/ojo Ab VEGF 2 ng/ojo • Ab VEGF 4 ng/ojo REDD14 0.05 µg /ojo REDD14 0.1 µg /ojo REDD14 0.25 µg/ojo REDD14 0.05 µg/ojo+ Ab VEGF 1 ng/ojo REDD14 0.1 µg/ojo+ Ab VEGF 1 ng/ojo REDD14 0.25 µg/ojo+ Ab VEGF 1 ng/ojo Grupos de control PBS • IgG No específicos 2 ng/ojo • REDD8 0.1 µg/ojo • REDD8 0.1 µg/ojo + Ab VEGF 1 ng/ojo Resultados Los resultados del experimento anterior se presentan en las figuras 23-24. Estos resultados muestran que la administración intravítrea simultánea de Ab VEGF y REDD14 lleva a una inhibición de la neovascularización coroidal y del exudado de los vasos sanguíneos coroidales aumentada y dependiente de la dosis, tal como se expresa mediante la menor incidencia de las manchas de Grado 4 y la mayor incidencia de las manchas de Grado 1. Los angiogramas se puntuaron usando una modificación de una escala semicuantitativa anteriormente publicada (Sakurai y col. IOVS 2003; 44: 2743-2749). Las lesiones de Grado 1 se consideran como si nunca se hubieran formado, es decir, equivalentes a una prevención completa. Las lesiones de Grado 4 se consideran como patológicamente significativas, es decir, equivalentes a lesiones que se tratarían en pacientes. El Ab VEGF-A (1 ng) redujo la incidencia de lesiones de Grado 1 por ojo en un 66 + 43%. Los hallazgos principales del estudio de exudado por combinación de REDD14 + Ab VEGF-A fueron: • La adición de REDD14 en la menor dosis de 0.05 µg redujo la incidencia de lesiones de Grado 1 en un ojo en un 38 + 8 % y aumentó la incidencia de Grado 4 en un 66 + 12% comparados con Ab VEGF-A en solitario. • La adición de REDD14 en la dosis más elevada de 0.25 µg redujo la incidencia de lesiones de Grado 4 en un 60+12% comparados con Ab VEGF-A en solitario. « La adición de REDD14 en la dosis más elevada de 0.25 µg dobló (100 + 34 %) la incidencia de lesiones de Grado 1 comparados con Ab VEGF-A en solitario.

Experimento 2 Este experimento se diseñó con el fin de estudiar el efecto de REDD14 sobre la expresión del gen en RPE y retina neural.

Diseño experimental Grupos PBS • REDD14 0.25 mg El tamaño del Grupo fue de 5 ojos. Se indujo CNV mediante tratamiento con láser tal como se ha descrito más arriba en el día cero; el material de ensayo se inyectó también en el día cero, y se evaluó el efecto mediante análisis qPCR de la expresión del gen en RPE y retina neural en los días cero y 5.

Resultados Los resultados del experimento anterior se presentan en las figura 25. Estos resultados muestran que la administración de REDD14 causa: • ~ 40% de regulación reductora en la expresión del RTP801 por debajo de la línea base tanto en la RPE como en la retina neural (ver también la figura 26); • ~ 70% de regulación al alza de la expresión de PEDF sobre la línea base en la retina neural (nota: en los ojos inyectados con PBS, la expresión del PEDF está regulada a la baja en un 40% por debajo de la línea base) • ~ 40% de regulación reductora en la expresión del VEGF 164 por debajo de la línea en RPE (nota: en los ojos inyectados con PBS, la expresión del VEGF164 está regulada a la baja en un 20%) • = 50% de reducción en la expresión de MCP1 en RPE/coroides (figura 26) Conclusiones generales de ambos experimentos • La inhibición simultánea de RTP801 y VEGF ha mejorado el efecto inhibitorio en la neovascularización coroidal y exudado neovascular. • La inhibición de la expresión del RTP801 mediante REDD14 no previene únicamente la regulación reductora de PEDF en el modelo CNV, sino que estimula su expresión comparada con la línea base. • La inhibición de la expresión del RTP801 lleva a la regulación reductora del MCP1 concomitante, lo que debería tener un efecto anti-inflamatorio. • Sin desear quedar ligado por la teoría, el aumento en la expresión del PEDF mediante REDD14 puede estar debajo del efecto cooperativo observado en la inhibición simultánea de VEGF y RTP801 (Nota: PEDF es un factor antiangiogénico y neuroprotector bien conocido) • Sin desear quedar ligado por la teoría, la reducción en la expresión del MCP1 mediante REDD14 puede también estar debajo del efecto cooperativo observado en la inhibición simultánea de VEGF y RTP801 (Nota: MCP1 es una quimioquina pro-inflamatoria conocida implicada en la patogénesis de AMD) Modelos adicionales de AMD que se pueden usar para ensayar los procedimientos de la presente invención: • animales Ccl-2 o Ccr-2 deficientes - la deficiencia en cualquiera de estas proteínas origina el desarrollo de algunas de las características principales de la AMD. Se pueden usar para ensayar los procedimientos de la presente invención animales deficientes en estas proteínas. Para más información acerca de modelos animales de la AMD, ver: Chader, Vision research 42 (2002) 393-399; Ambati y col., Nature Medicine 9(11 ) (2003) 1390-1397; Tolentino y col., Retina 24 (2004) 132-138 D) Comparación de la actividad de ARNsi del Anti RTP8Q1 REDD14 que tiene un grupo 3' fosfato en cada cadena con la misma molécula sin grupos 3' fosfato (REDD14NP) en el modelo CNV inducido por láser El experimento se llevó a cabo y se evaluó por lo general tal como se ha descrito más arriba. Un ojo de cada ratón (12 por grupo) se inyectó con 0.25 µg de ARNsi de REDD14 mientras que el otro ojo se inyectó con ARNsi de REDD14NP.

Resultados Ambos ARNsi redujeron de manera igualmente eficiente el volumen de CNV (figura 27).

EJEMPLO 7 Modelos y Resultados Relacionados con COPD y Enfisema Los compuestos de la presente invención se ensayaron en los siguientes modelos animales: * modelo de enfisema Inducido por humo de tabaco: la exposición crónica al humo de tabaco causa enfisema en diversos animales, animales tales como, inter alia, ratón, cobaya. * La actividad de la proteasa del pulmón como estímulo del enfisema. * modelo de inhibición de VEGFR del enfisema * instilación bronquial con elastasa pancreática / neutrófilo humano en roedores * enfisema inducido por MMP (metaloproteasa de la matriz) * enfisema inducido por inflamación De forma adicional, los modelos de enfisema se pueden generar por medios genéticos (por ejemplo, ratones con la mutación TSK) y se pueden generar animales enfisematosos mediante modificantes conocidos de susceptibilidad al enfisema tales como, inter alia, lesión pulmonar, hipoplasia alveolar, hiperoxia, tratamiento con glucocorticoídes y nutrición.

A. Evaluación de la influencia de la carencia de RTP801 sobre el desarrollo de la enfermedad en modelos de ratón de enfisema (usando ratones que carecen genéticamente de RTP801 ) (1 ) la inflamación y apoptosis inducidas por humo de tabaco (CS) se iniciaron en 5 ratones KO para RTP801 y 5 ratones de control de tipo salvaje de 4 meses de edad y machos. Los ratones se sometieron a CS intenso (tal como se describe en el Rangasamy y col., ver más arriba) durante 7 días. Los ratones KO y WT no tratados procedentes del experimento anterior de inhibición del VEGFR se usaron también como grupo de control no tratado para este experimento. Los pulmones se hincharon posteriormente en agarosa, se fijaron y embebieron en parafina, y el desarrollo de estrés oxidativo en ratones KO se evaluó mediante: a) localización inmunohístoquímica y cuantificación de la 8-oxo-dG en secciones del pulmón; b) localización inmunohistoquímica y cuantificación de la caspasa 3 activa en secciones del pulmón usando anticuerpos específicos o evaluación cuantitativa del número de las células TUNEL-positivas c) medidas de la concentración de ceramida en los extractos pulmonares; d) medidas de la actividad de la caspasa en los extractos pulmonares. (2) Humo de tabaco a largo plazo en ratones KO. 6 ratones KO y 6 ratones WT de la misma edad hembra se sometieron a humo de tabaco intenso (5 h al día) durante un periodo de 6 meses. A continuación se sacrificaron los ratones, y se evaluó el diámetro interseptal medio (un parámetro de desarrollo del enfisema) usando un enfoque morfométrico.

B. Evaluación de la influencia de la carencia de RTP801 sobre el desarrollo de la enfermedad en modelos de ratón de enfisema por inhibición del RTP801 endógeno empleando la dosificación intrapulmonar de ARNsi que inactiva RTP801 La inflamación inducida por CS - se indujo por humo durante 7 días en 2 grupos de ratones C57BL6, 10 ratones por grupo. Grupo 1 : CS+ dosificación de ARNsi (REDD8) ARNsi de control; Grupo 2: CS + ARNsi del RTP801 (REDD14). Los grupos de control de ratones se instilaron con cualquier tipo de ARNsi pero se mantuvieron en condiciones ambientales. Los animales se evaluaron como en el experimento anterior de ratones con carencia genética (ratones KO).

Procedimientos Exposición a humo de ciqarrilos (CS) La exposición se llevó a cabo (7 h/día, 7 días/semana) quemando cigarrillos de referencia 2R4F (2.45 mg de nicotina por cigarrillo; obtenidos del Tobacco Research Institute, University of Kentucky, Lexington, KY, USA) usando una máquina de fumar (Modelo de TE-10, Teague Enterprises, Davis, CA, USA). Cada cigarrillos en combustión sin llama se soplaba durante 2 s, una vez cada minuto para un total de ocho soplidos, con un caudal de 1.05 L/min, para obtener un soplido normalizado de 35 cm3. La máquina de fumar se ajustó para producir una mezcla de humo secundario (89%) y humo principal (11 %) quemando cinco cigarrillos a la vez. La atmósfera de la cámara se controló respecto al número total de partículas en suspensión y de monóxido de carbono, con concentraciones de 90 mg/m3 y 350 ppm, de forma respectiva.

Análisis morfométricos y morfológicos Tras exponer los ratones a CS o instilación del plásmido que expresa RTP801 , los ratones se anestesiaron con halotano, y los pulmones se inflaron con agarosa de bajo punto de fusión al 0.5% a una presión constante de 25 cm tal como se ha descrito más arriba6. Los pulmones inflados se fijaron en formalina tamponada al 10% y se embebieron en parafina. Se tiñeron secciones (5 µm) con hematoxilina y eosina. Se determinaron el diámetro alveolar medio, la longitud alveolar, y las intersecciones lineales medias mediante morfometría asistida por ordenador con el software Image Pro Plus (Media Cybemetics, Silver Spring, MD, USA). Las secciones pulmonares de cada grupo se codificaron y se tomaron imágenes representativas (15 por sección pulmonar) por un investigador enmascarado respecto de la identidad de los portas, con un microscopio Nikon E800 y aumento 20X.

Lavado broncoalveolar (BAL) y establecimiento del fenotipo Tras exponer los ratones a CS o instilación del plásmido que expresa RTP801 , los ratones se anestesiaron con pentobarbítal sódico. El fluido BAL recogido de los pulmones se centrifugó a (500 'g a 4° C), y el residuo celular se resuspendió en solución salina tamponada con fosfato. Se determinó el número total de células del fluido de lavado, y 2 x 104 células se citocentrifugaron (Shandon Southern Products, Pittsburgh, Pa., USA) en portas de vidrio y se tiñeron con tinte Wright-Giemsa. Se realizaron conteos celulares diferenciales en 300 células, de acuerdo con técnicas citológicas normalizadas.

Identificación de poblaciones de células apoptóticas alveolares en los pulmones Para identificar los diferentes tipos de células alveolares que experimentan apoptosis en los pulmones, se realizó una tinción inmunohistoquímica de la caspasa 3 activa en secciones pulmonares procedentes de los ratones expuestos a aire ambiental (RA) así como en ratones expuestos a CS. Para identificar las células epiteliales de tipo II apoptóticas en los pulmones, tras el marcado de la caspasa 3 activa las secciones pulmonares se incubaron en primer lugar con anticuerpo de anti-proteína C tensioactiva de ratón (SpC) y a continuación con un anticuerpo anti-conejo rojo Texas. Las células endoteliales apoptóticas se identificaron incubando las secciones en primer lugar con anticuerpo anti-ratón CD 31 y a continuación con el anticuerpo secundario conejo anti-ratón biotinilado Las secciones pulmonares se lavan en PBS y a continuación se incuban con complejo conjugado estreptavidina-rojo Texas. Los macrófagos apoptóticos en los pulmones se identifican incubando las secciones en primer lugar con el anticuerpo rata anti-ratón Mac-3 y a continuación con anticuerpo anti-rata rojo Texas. Finalmente, se aplicó DAPI a todas las secciones pulmonares, se incubó durante 5 minutos, se lavó y montó con medio de montaje Vectashield HardSet. El DAPI y la fluoresceína se visualizaron a 330-380 nm y 465-495 nm, de forma respectiva. Se tomaron imágenes de las secciones pulmonares mediante un microscopio Nikon E800 con aumento de 40X.

Localización inmunohistoquímica de la caspasa 3 activa Se realizó un ensayo de tinción ¡nmunohistoquímica de la caspasa 3 activa usando un anticuerpo anti-caspasa-3 activa y se contaron las células positivas para la caspasa-3 activa con una macro, usando el programa Image Pro Plus. Los conteos se normalizaron mediante la suma de perfiles alveolares, denominados en el presente documento como longitud alveolar, y expresados en µm. La longitud alveolar se correlaciona de forma inversa con la intersección media lineal, es decir, a medida que los tabiques alveolares se destruyen aumenta la intersección media lineal como longitud alveolar total, es decir, disminuye la longitud alveolar total septal.

Ensayo de la actividad de la Caspasa 3 Se midió la actividad de la caspasa-3/7 en extractos de tejido pulmonar usando un ensayo fluorométrico de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El tejido pulmonar se congeló súbitamente (n = 3 por grupo) y se homogeneizó con el tampón de ensayo, seguido por sonicación y centrifugación a 800 x g. Tras la eliminación del núcleo y los residuos celulares, el sobrenadante (300 µg de proteína) se incubó a continuación con el sustrato pro-fluorescente a temperatura ambiente durante 1 h, y se midió la intensidad de la fluorescencia usando un Typhoon fosfoimager (Amersham Biosciences, Inc., Piscataway, N.J., USA). Los resultados se expresan en forma de la velocidad de escisión del sustrato de la caspasa-3 específico, expresado en unidades de actividad enzimática de la caspasa 3, normalizada respecto de la concentración total de proteína. La caspasa 3 activa recombinante se utilizó como el patrón de ensayo (0-4 U). Los lisados tisulares sin sustrato, tampón de ensayo en solitario y los lisados con inhibidor de la caspasa-3 se usaron como controles negativos.

Localización ¡nmunohistoquímica de la 8-oxo-dG Para la localización y cuantificación inmunohistoquímica de 8-oxo-dG se incuban secciones pulmonares procedentes de ratones expuestos a CS o que han instilado con el plásmído que expresa RTP801 , con el anticuerpo anti-8-oxo-dG y se tiñeron usando el kit InnoGenex™ Iso-IHC DAB usando anticuerpos de ratón. Las células positivas para 8-oxo-dG se contaron con una macro (usando Image Pro Plus), y los conteos se normalizaron por la longitud alveolar tal como se ha descrito.

Instilación de ADN de plásmido en los pulmones de ratón Se prepararon el ADN de plásmido de los vectores de control y que expresan RTP801 mediante un kit de aislamiento de ADN libre de endotoxinas. Para instilación intratraqueal, se dosificaron 50 µg de ADN de plásmido en 80 µl de perfluorocarbono estéril. Las propiedades de transporte de oxígeno del perfluorocarbono hacen que sea bien tolerado a estos volúmenes, mientras que sus propiedades físico-químicas le permiten una dosificación pulmonar distal extremadamente eficiente cuando se instila intratraquealmente. Los ratones se anestesiaron mediante una breve exposición inhalatoria al halotano, la lengua se extrajo hacia fuera suavemente con un fórceps, y se instiló la tráquea con solución de perfluorocarbono aplicada en la base de la lengua mediante un angiocateter enromado.

Instilación de ARNsi en los pulmones de ratón Los ratones se anestesiaron con una inyección intra-peritoneal de Ketamine/Xilazine (115/22 mg/kg). Se instilaron intranasalmente 50 µg de ARNsi en un volumen de 50 µl de NaCI al 0.9% dosificando cinco porciones consecutivas de 10 µl. Al término de la instilación intranasal, se mantuvo recta la cabeza del ratón durante 1 minuto para asegurar que toda la solución instilada drenaba hacia dentro. Para más información ver: Rangasamy T, Cho C Y, Thimmulappa, R K, Zhen L, Srisuma S S, Kensler T W, Yamamoto M, Petrache I, Tuder R M, Biswal S. Genetic ablation of Nrí2 enhances susceptibility to cigarette smoke-iduced emphysema in mice. Enviado al Journal of Clinical Investigation; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, y Norbert F. Voelkel. Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163, pp 737-744, 2001 ; Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger, y Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106:1311-1319 (2000); y una revisión del tema: Robin M. Tuder, Sharon McGrath y Enid Neptune, The pathological mechanisms of emphysema models: what do they have in common?, Pulmonary Pharmacology & Therapeutics 2002, Resultados 1. La instilación de un plásmido que expresa RTP801 da como resultado un fenotipo similar al enfisema en pulmones de ratón, lo que es evidente por (1 ) aumento en los conteos de células en el lavado broncoalveolar (figura 15a); (2) la apoptosis de células septales del pulmón (figura 15b) y el aumento en el diámetro alveolar (figura 15c). 2. La instilación de ARNsi del RTP801 (REDD14) da como resultado la reducción en la expresión de RTP801 en los pulmones (figura 17b). 3. Los ratones KO para RTP801 se protegen del desarrollo del enfisema tras 6 meses de humo de cigarrillo, lo que es evidente por la falta de alargamiento del diámetro alveolar (figura 18). 4. Los ratones KO para RTP801 se protegen de la inflamación inducida por humo de cigarrillo, lo que es evidente por el número reducido de células inflamatorias broncoalveolares tras 1 semana de humo de cigarrillo (figura 16, a-b). 5. Los ratones KO para RTP801 se protegen de la apoptosis inducida por humo de cigarrillo de las células septales del pulmón, lo que es evidente por la tinción de la sección pulmonar respecto de la caspasa activada (figura 16c). 6. Los ratones instilados con REDD14 están parcialmente protegidos de la inflamación inducida por humo de cigarrillo, lo que es evidente por el número reducido de células inflamatorias broncoalveolares tras 1 semana de humo de cigarrillo (figura 17a). 7. Los ratones instilados con REDD14 están parcialmente protegidos de la apoptosis inducida por humo de cigarrillo de las células septales del pulmón, lo que es evidente por la tinción de la sección pulmonar respecto de la caspasa activada y por inmunotransferencia de los extractos pulmonares con anticuerpos anti caspasa 3 activada ((figura 17C y 17D).

EJEMPLO 8 Modelos y resultados relacionados con enfermedades microvasculares Los compuestos de la presente invención se ensayaron en modelos animales en un intervalo de enfermedades microvasculares tal como se han descrito a continuación. 1. Retinopatía Diabética RTP801 promueve la apoptosis de las células neuronales y la generación de especies de oxígeno reactivas in vitro. El inventor de la presente invención ha encontrado también que en los ratones que carecen genéticamente de RTP801 (KO) sometidos al modelo de retinopatía del prematuro (ROP), la neovascularización patológica NV, se redujo en condiciones de hipoxia, a pesar del aumento de VEFG, a la vez que la carencia de este gen no influenció la NV fisiológica neonatal retiniana. Más aún, en este modelo, la carencia de RTP801 resultó también protectora frente a la apoptosis neuronal hipóxica y la vaso-obliteración hiperóxica.

Experimento 1 Se indujo diabetes en ratones KO para RTP801 y en ratones de tipo salvaje C57/129sv (WT) de 8 semanas mediante inyección intraperitoneal de STZ. Tras 4 semanas, se obtuvo un ERG (flash único blanco, 1.4 x 104 ftc, 5 ms) del ojo izquierdo tras una hora de adaptación a la oscuridad. El evaluó el RVP de ambos ojos usando la técnica de permeación albúmina de Evans azul.

Resultados La glucosa en sangre no fue diferente entre ratones diabéticos (DM) WT y DM KO (495 + 109 vs 513 +_76 mg/dl), y no diabéticos (NDM) WT y KO (130 + 10 vs 135 + 31 mg/dl, de forma respectiva). El RVP en el grupo DM WT aumentó en un 138% (51.2 + 37.9 µl/g/h, n = 8) comparados con NDM WT (21.5 + 18.8 µl/g/h, n = 9, p = 0.055). Por contra, RVP se redujo en un 80% en DM KO (9.5 + 8.5 µl/g/h, n = 6, p = 0.023) comparados con los Ratones DM WT, dando como resultado una disminución del 140% de RVP inducida por diabetes. En ratones DM WT, hay una prolongación (p<0.05) de los tiempos implícitos del potencial oscilatorio para OP2 (11 %), OP3 (12%), y OP4 (14%) y para la onda B (23%) en comparación con NDM WT La onda A no cambió significativamente. Estos cambios se normalizaron aproximadamente al 100 en ratones DM KO y OP4 y al 65% para la onda B en comparación con NDM KO. Conclusión: la carencia genética de RTP801 mejora las anormalidades de RVP y ERG inducidas por diabetes, sugiriendo que este gen inducible por hipoxia puede tener un papel importante en la patogénesis de la enfermedad retiniana diabética temprana.

Experimento 2 Se indujo diabetes en ratones que carecían genéticamente de RTP801 y en ratones control de tipo salvaje con un fondo genético similar. Además, se indujo en ratones C57B16, que se usaron posteriormente para inyección intravítrea de ARNsi anti-RTP801 y control. Para la inducción de la diabetes, los ratones se inyectaron con estreptozotocina (STZ 90 mg/kg/d durante 2 días tras ayuno nocturno). Se controló la fisiología animal mediante el estudio de los cambios de glucosa en sangre, pero corporal, y hematocrito. Los ratones inyectados con vehículo se usaron como controles. Los animales apropiados se trataron con inyecciones intravítreas de 1 µg de REDD14 anti-ARNsi del RTP801 o 1 µg de ARNsi anti-GFP de control. El ARNsi se inyectó dos veces en el curso del estudio -en el día 0, cuando se realizó la primera inyección de STZ, y en el día 14, tras la inyección de STZ. Se midió el exudado vascular retiniano usando la técnica de tinción de Evans-azul (EB) en los animales tras diabetes de 4 semanas de duración. Los ratones tuvieron un catéter implantado en la vena yugular derecha durante 24 horas antes de las medidas de Evans Azul (EB). Las medidas de permeabilidad retiniana en ambos ojos de cada animal siguieron un protocolo convencional Evans-azul Resultados 1. El exudado del vaso sanguíneo retiniano se redujo en un 70% en ratones diabéticos KO para RTP801 en comparación con los ratones diabéticos de tipo salvaje (ver figura 20). 2. La carencia de RTP801 normaliza las anormalidades ERG en ratones: En ratones DM WT, hay una prolongación (p<0.05) de los tiempos implícitos del potencial oscilatorio para OP2 (11%), OP3 (12%), & OP4 (14%) y para la onda B (23%) en comparación con NDM WT. La onda A no varió de forma significativa. Estos cambios se normalizaron en = 100% en ratones DM KO para RTP801 para OP3 y OP4 y 65% para la onda B comparados con NDM KO para RTP801 (ver figura 21 ). 3. De manera similar a los resultados en ratones KO, el exudado del vaso sanguíneo retiniano se redujo en un 50% en ratones diabéticos inyectados intravitrealmente con REDD14 ARNsi frente al RTP801 comparados con ratones diabéticos inyectados intravítreamente con control ARNsi frente al GFP (ver figura 22). 2. Retinopatía del prematuro La retinopatía del prematuro se indujo exponiendo los animales de ensayo a condiciones hipóxicas e hiperóxicas, y posteriormente ensayando los efectos sobre la retina. Los resultados muestran que los ratones KO para RTP801 se protegieron de la retinopatía del prematuro, validando por tanto el efecto protector de la inhibición de RTP801. 3. Infarto de miocardio El infarto de miocardio se indujo por ligadura de la arteria descendente izquierda anterior en ratones, tanto a corto como a largo plazo.

Resultados. La reducción de los niveles de fracción TnT y CPK-MB 24 h tras el infarto en la sangre del ratón y un mejor ecocardiograma (fracción de volumen eyectada) a 28 días tras el infarto en ratones KO para RTP801. 4. Dolencias microvasculares isquémicas Los modelos animales para evaluar las enfermedades isquémicas incluyen: 1. Lesión craneal cerrada (CHI) El TBI experimental produce una serie de eventos que contribuyen a las casacas neurológícas y neurometabólicas, que están relacionadas con el grado y extensión de los déficits de comportamiento. El CHI se induce bajo anestesia, mientras que se deja caer un peso desde una altura prefijada (Chen y col., J. Neurotrauma 13, 557, 1996) sobre el cráneo expuesto que cubre el hemisferio izquierdo en el plano hemicoronal. 2. Oclusión transitoria de la arteria cerebral media (MCAO) -se realizó una isquemia focal transitoria de entre 90 y 120 minutos en ratas adultas macho Sprague Dawley de 300-370 g. El procedimiento empleado es la sutura intralumenl de MCAO (Longa y col., Stroke, 30, 84, 1989, y Dogan y col., J. Neurochem. 72, 765, 1999). En resumen, bajo anestesia de halotano, se inserta una material de sutura de nylon 3-0 recubierto con Poli-L-Lisina en la arteria carótida interna derecha (ICA) a través de un agujero en la arteria carótida externa. Se empujó la hebra de nylon en el interior del ICA hacia el origen del MCA derecho (20-23 mm). 90-120 minutos más tarde, se retiró la hebra, se cerró el animal, y se dejó recuperar. 3. Oclusión permanente de la arteria cerebral media (MCAO) - la oclusión es permanente, inducida de forma unilateral por electrocoagulación de MCA. Ambos procedimientos llevan a la isquemia cerebral focal en el lado ipsilateral del córtex cerebral dejando intacto el lado contralateral (control). El MCA izquierdo se expuso a craniectomía temporal, tal como se ha descrito para ratas en Tamura A. y col., J Cereb Blood Flow Metab. 1981 ; 1 :53-60. El MCA y su rama lenticulostriatal se ocluyeron cerca del borde medio del tracto olfativo con coagulación microbipolar. Se suturó la herida, y los animales volvieron a su jaula en una habitación termostatizada a entre 26° C y 28° C. La temperatura de los animales se mantuvo todo el tiempo con un termostato automático. 5. Fallo renal agudo (ARF) Se puede realizar el ensayo de ARNsi activo para tratar el ARF usando ARF inducido por sepsis o ARF inducido por isquemia-reperfusión. 1. ARF inducido por sepsis Se describen dos modelos animales predictivos de ARF inducido por sepsis en Miyaji T, Hu X, Yuen P S, Muramatsu Y, lyer S, Hewitt S M, Star R A, 2003, Ehtyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and múltiple organ damage in aged mice, Kidney Int. Nov; 64(5): 1620-31. Estos dos modelos son la administración de lipopolisacáridos y punción con ligadura cecal en ratones, de manera preferible en ratones viejos. 2. ARF inducido por isquemia-reperfusión Este modelo animal predictivo se describe en Kelly K J, Plotkin Z, Vulgamott S L, Dagher P C, 2003 enero. P53 mediates the apoptotic response to GTP depletion after renal ischemia-reperfi/s/on: protective role of a p53 inhibitor, J Am Soc Nephrol.; 14(1 ):128-38. El daño por isquemia-reperfusión se indujo en ratas tras pinzamiento bilateral en la arteria del riñon durante 45 minutos y posterior liberación del pinzamiento para permitir 24 horas de reperfusión. Se inyectaron 250 µg de REDD14 o ARNsi GFP (control negativo) en la vena yugular 2 h antes y 3 minutos después del pinzamiento. Se proporcionaron 250 µg más de ARNsi mediante la vena de la cola a 4 y 8 h después del pinzamiento. El ARNsi frente al GFP se usó como control negativo. Se controló el progreso del ARF midiendo los niveles de creatinina en suero antes y 24 h después de la cirugía. Al final del experimento, las ratas se perdifundieron mediante una línea femoral interna con PBS caliente seguido por paraformaldehído al 4%. Se retiró y guardó el riñon izquierdo en paraformaldehído al 4% para posterior análisis histológico. El fallo renal agudo se define frecuentemente como un incremente agudo del nivel de creatinina en suero desde la línea base. Un incremento de al menos 0.5 mg por di o 44.2 µmol por I de creatinina en suero se considera una indicación de fallo renal agudo. Se midió la creatinina en suero a tiempo cero antes de la cirugía y 24 horas después de la cirugía ARF. Para estudiar la distribución del ARNsi en el riñon de rata, se administraron moléculas de ARNsi Cy3-marcadas de 19-mer enromadas (2 mg/kg) con modificaciones de O-metilo alternantes en los residuos de azúcar, por vía iv durante 3-5 min, tras lo cual se llevó a cabo diagnóstico por formación de imágenes in vivo usando microscopía confocal de dos fotones. La microscopía confocal reveló que la mayor parte del ARNsi en los riñones se concentra en el compartimento endosómico de las células tubulares proximales. La fluorescencia de ARNsi tanto endosómica como citoplásmica fueron relativamente estables durante las primeras 2 h tras la dosificación, y desapareció a las 24 h. Como es evidente a partir de la figura 19, se produjo un aumento de 10 veces en el nivel de creatinina en suero tras un tratamiento por pinzamiento bilateral en la arteria del riñon durante 45 minutos (tratamiento con PBS). Cuatro inyecciones de ARNsi 801 (REDD14, SEC. ID NROS 16 y 66) (2 h antes del pinzamiento y 30 min, 4 h y 8 h tras el pinzamiento) redujeron de forma significativa el nivel de creatinina en suero en un 40% (P<0.02). Estos resultados sugieren que el ARNsi 801 puede proteger el tejido renal de los efectos de la lesión por isquemia-reperfusión y por tanto, reducir la gravedad del ARF.

EJEMPLO 9 Preparación del ARNsi Usando algoritmos patentados, y la secuencia conocida del gen RTP801 (SEC. de ID. N°:1 ), se generaron secuencias de muchos ARNsi potenciales. Las moléculas de ARNsi de acuerdo con las especificaciones anteriores se prepararon esencialmente tal como se ha descrito en el presente documento. Los ARNsi de la presente invención se pueden sintetizar por cualquiera de los procedimiento bien conocidos en la técnica para la síntesis de oligonucleótidos ribonucleicos (o desoxirribonucleicos). Por ejemplo, se puede usar una máquina comercialmente disponible (comercializada inter alia, por Applied Biosystems); los oligonucleótidos se preparan de acuerdo con las secuencias descritas en el presente documento. Los pares solapantes de los fragmentos químicamente sintetizados se pueden ligar usando procedimientos bien conocidos en la técnica (por ejemplo, ver la Patente de los Estados Unidos N° 6,121 ,426). Las cadenas se sintetizan de forma separada, y a continuación se fusionan entre sí en el tubo. A continuación, los ARNsi de doble cadena se separan de los oligonucleótidos de cadena sencilla que no se fusionan (por ejemplo, debido al exceso de uno de ellos) mediante HPLC. En relación con los fragmentos de ARNsi o ARNsi de la presente invención, dos o más de estas secuencias se pueden sintetizar y enlazar entre sí para uso en la presente invención.

La moléculas de ARNsi de la invención pueden sintetizarse mediante procedimientos conocidos en la técnica, pro ejemplo mediante procedimientos como los que se describen en Usman y col., 1987, J. Am. Chem. Soc, 109, 7845; Scarínge y col., 1990, Nucleic Acids Res., 18, 5433; Wincott y col., 1995, Nucleic Acids Res. 23, 2677-2684; y Wincott y col., 1997, Methods Mol. Bio., 74, 59., y pueden hacer uso de los grupos de acoplamiento y protección de ácido nucleico, tales como dimetoxitritilo en el extremos 5', y fosforamidítas en el extremo 3'. Los nucleótidos modificados (por ejemplo, 2'-O-metilados) y nucleótidos no modificados se incorporan según se desee. De manera alternativa, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención se pueden sintetizar de forma separada, y juntarse tras la síntesis, por ejemplo, mediante ligadura (Moore y col., 1992, Science 256, 9923; Draper y col., International PCT publication N° W093/23569; Shabarova y col., 1991 , Nucleic Acids Research 19, 4247; Bellon y col., 1997, Nucleosides & Nucleotides, 16, 951 ; Bellon y col., 1997, Bioconjugate Chem. 8, 204), o mediante hibridación tras la síntesis y/o desprotección. Las moléculas de ARNsi de la invención se pueden sintetizar también mediante una metodología de síntesis en tándem, tal como se describe en la publicación de la solicitud de Patente de los Estados Unidos N° US2004/0019001 (McSwiggen) en la que ambas cadenas de ARNsi se sintetizan como un único fragmento o cadena de oligonucleótido contiguo o separada por un engarce que se puede romper que se rompe con posterioridad para proporcionar fragmentos o cadenas de ARNsi diferentes que se hibridan y permiten la purificación del dúplex de ARNsi. El engarce puede ser un engarce de polinucleótido o un engarce de no polinucleótido. Para más información, ver la publicación PCT N° WO 2004/015107 (ATUGEN). Tal como se ha descrito más arriba, los ARNsi del cuadro A (siguiente) se construyeron de forma que los azúcares alternos tienen la modificación 2'-0-metilo, es decir, los nucleótidos alternos se modificaron de esta forma. En estas formas de realización preferidas, en una cadena del ARNsi los nucleótidos modificados fueron los de número 1 , 3, 5, 7, 9, 11 , 13, 15, 17 y 19 y en la cadena opuesta los nucleótidos modificados fueron los de número 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16 y 18. De esta forma, estos ARNsi son moléculas de ARN de 19-mer enromadas con modificaciones alternas de 2'-0-metilo tal como se ha descrito más arriba. Los ARNsi de los cuadros 2 y 3 (siguiente) están construidos también de la misma manera, los ARNsi del cuadro B son moléculas de ARN de 19-mer enromadas con modificaciones alternas de 2'-0-metilo; los ARNsí del cuadro C son moléculas de ARN de 21-mer enromadas con modificaciones alternas de 2'-0-metilo. El cuadro A detalla diversas moléculas de ARNsi nuevas que se generaron y posteriormente se sintetizaron para el gen RTP801. Las dos columnas finales indican los resultados de dos experimentos llevados a cabo para examinar la actividad de las moléculas nuevas. En resumen, las células HeLa o Hacat se transfectaron con un ARNsi nuevo específico para su ensayo. A continuación, se determinó la expresión del polipéptido RTP801 mediante trasferencia western usando un anticuerpo frente al polipéptido RTP801. Haciendo referencia a las dos columnas de la derecha del cuadro A, "-" significa una molécula inactiva o de baja actividad (que no inhibe sustancialmente la expresión del gen RTP801 ); "+" significa una molécula de ARNsi con cierta actividad inhibitoria (de la expresión del gen RTP801 ); "++" significa una molécula con mayor actividad inhibitoria y así sucesivamente. Una cualquiera de las moléculas de ARNsi descritas en el presente documento, y en particular las moléculas activas que se detallan en el cuadro A son nuevas y también se consideran una parte de la presente invención.

CUADRO A ro ? ro ro Notar que en el cuadro A anterior, las cadenas positivas de ARNsi 1-50 tienen las SEC. de ID NROS.: 3-52 de forma respectiva, y las cadenas de sentido opuestos de ARNsi 1-50 tienen las SEC. de ID NROS.: 53-102 de forma respectiva. La molécula denominada como REDD 14 tiene las SEC. de ID NROS 16 (Cadena positiva) y 66 (cadena de sentido opuesto).

CUADRO B Notar que, en el Cuadro B anterior, las cadenas positivas de ARNsi 51-122 tienen las SEC. de ID NROS.: 103-174 de forma respectiva, y las cadenas de sentido opuesto de ARNsi 51-122 tienen las SEC. de ID NROS.: 175-246 de forma respectiva.

CUADRO C Notar que en el Cuadro C, anterior, las cadenas positivas de ARNsi 123-171 tienen las SEC. de ID NROS.: 247-295 de forma respectiva, y las cadenas de sentido opuestos de ARNsi 123-171 tienen las SEC. de ID NROS.: 296-344 de forma respectiva.

EJEMPLO 10 Farmacología y dosificación del fármaco Se pueden dosificar las secuencias nucleotídicas de la presente invención de manera directa o con vectores víricos o no víricos. Cuando se dosifican de manera directa las secuencias se vuelven generalmente nucleasa resistentes. De manera alternativa, se pueden incorporar las secuencias en casetes de expresión o constructos de tal manera que la secuencia se expresa en la célula tal como se describe en el presente documento a continuación. Generalmente el constructo contiene la secuencia reguladora apropiada o promotor para permitir que la secuencia se exprese en la célula diana. Los compuestos o composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran y dosifican de acuerdo con la buena práctica médica, teniendo en cuenta la dolencia clínica del paciente individual, la enfermedad que se va a tratar, el emplazamiento y el procedimiento de administración, el calendario de administración, la edad del paciente, el sexo, el peso corporal y otros factores conocidos por los médicos. La "cantidad farmacéuticamente efectiva" para los objetivos del presente documento se determina de esta manera mediante dichas consideraciones que son conocidas en la técnica. La cantidad debe ser efectiva para conseguir la mejora, que incluye, pero no se limita a la mejora en el índice de supervivencia o a la recuperación, o a la mejora o eliminación de los síntomas más rápida y otros indicadores que se seleccionan como medidas apropiadas por aquellas personas expertas en la técnica. El tratamiento generalmente tiene una longitud proporcional a la longitud del proceso de la enfermedad y la efectividad del fármaco y la especie de paciente que está siendo tratado. Es de señalar que los seres humanos se tratan generalmente más tiempo que los ratones u otros animales experimentales ejemplificados en el presente documento. Se pueden administrar los compuestos de la presente invención mediante cualquiera de las rutas convencionales de administración. Deberá señalarse que se puede administrar el compuesto como el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable y que se puede administrar sólo o como ingrediente activo en combinación con vehículos, solventes, diluyentes, excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Se pueden administrar los compuestos por vía oral, subcutánea o parenteral, que incluye la administración intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, e intranasal así como intratecal y mediante técnicas de infusión. Son también útiles los implantes de los compuestos. Se pueden preparar formas líquidas para la inyección, incluyendo el término la administración subcutánea, transdérmíca, intravenosa, intramuscular, intratecal, y otras rutas parentales de administración. Las composiciones líquidas incluyen soluciones acuosas, con o sin cosolventes orgánicos, suspensiones acuosas u oleosas, emulsiones con aceites comestibles, así como vehículos farmacéuticos similares. De manera adicional, bajo algunas circunstancias, se pueden formar las composiciones para uso en los nuevos tratamientos de la presente invención como aerosoles, para la administración intranasal y similar. El paciente a tratar es un animal de sangre caliente, y en particular mamíferos, incluyendo al hombre. Los vehículos, solventes, diluyentes, excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables así como los vehículos de implantes se refieren al material inerte, rellenos sólidos o líquidos no tóxicos, diluyentes o material encapsulante no reactivo con los ingredientes activos de la invención. Cuando se administra el compuesto de la invención por vía parenteral, se formula de manera general en una forma inyectable de dosificación unitaria (solución, suspensión, emulsión). Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la inyección incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la reconstitución en soluciones o dispersiones inyectables estériles. El vehículo puede ser un solvente o medio dispersante que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, politielenglicol líquido, y similares) o las mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales. Se puede mantener una fluidez apropiada, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de tensíoactivos. Se pueden usar también vehículos no acuosos tales como aceite de semillas de algodón, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de maíz, aceite de girasol, o aceite de cacahuete y los esteres, tal como miristato de isopropilo, como sistemas solventes para las composiciones de los compuestos. De manera adicional, se pueden añadir diversos aditivos que mejoran la estabilidad, la esterilidad, y la isotonícidad de las composiciones, que incluyen conservantes antímicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes, y tampones. Se puede asegurar la prevención de la acción de los microorganismos mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, y similares. En muchos casos, es deseable incluir agentes isotónícos, por ejemplo, azúcares, cloruro de sodio, y similares. Se puede llevar a cabo la absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable medíante el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. De acuerdo con la presente invención, sin embargo, cualquier vehículo, diluyente, o aditivo usado tiene que ser compatible con los compuestos. Se pueden preparar soluciones inyectables estériles incorporando los compuestos utilizados en la práctica de la presente invención en la cantidad requerida del solvente apropiado con otros diversos ingredientes, tanto como se desee. Se puede administrar una formulación farmacológica de la presente invención al paciente en una formulación inyectable que contiene cualquier vehículo compatible, tal como diversos vehículos, adyuvantes, aditivos, y diluyentes; o se pueden administrar los compuestos utilizados en la presente invención por vía parenteral al paciente en la forma de implantes subcutáneos de liberación lenta o sistemas de dosificación dirigidos tales como anticuerpos monoclonales, liberación con vectores, iontoforesis, matrices de polímeros, liposomas y microesferas. Los ejemplos de sistemas de liberación útiles en la presente invención incluyen las Patentes de los Estados Unidos Nos 5,225,182; 5,169,383; 5,167,616; 4,959,217; 4,925,678; 4,487,603; 4,486,194; 4,447,233; 4,447,224; 4,439,196; y 4,475,196. Son bien conocidos por aquellas personas expertas en la técnica, muchos otros de esos implantes, sistemas de liberación y módulos. Se puede administrar por vía oral al paciente una formulación farmacológica del compuesto utilizado en la presente invención. Son utilizables los procedimientos convencionales tales como la administración del compuesto en comprimidos, suspensiones, soluciones, emulsiones, cápsulas, polvos, jarabes y similares. Se prefieren las técnicas conocidas que lo liberan oral o intravenosamente y retienen la actividad biológica. En una forma de realización, se puede administrar inícialmente el compuesto de la presente invención mediante inyección intravenosa para llevar los niveles en sangre a un nivel adecuado. Los niveles del paciente se mantienen a continuación mediante una forma de dosificación oral, aunque se pueden usar otras formas de administración dependientes de la dolencia del paciente y tal como se ha indicado anteriormente. De manera general, la dosis activa del compuesto para seres humanos está en el intervalo de entre 1 ng/kg a aproximadamente 20-100 mg/kg de peso corporal por día, de manera preferible aproximadamente 0.01 mg a aproximadamente 2-10 mg/kg de peso corporal por día, en un régimen de una dosis por día o dos veces o tres veces o más veces por día durante un período de 1-2 semanas o mayor, de manera preferible durante 24- a 48 h o mediante infusión continua durante un período de 1-2 semanas o mayor.

Administración de los compuestos de la presente invención en el ojo Se pueden administrar los compuestos de la presente invención de manera tópica en el ojo o en forma de una inyección, tal como una inyección intravitreal, una inyección sub-retinal o una inyección bilateral. Se puede encontrar información adicional sobre la administración de los compuestos de la presente invención en Tolentino y col., Retina 24 (2004) 132-138; Reich y col., Molecular visión 9 (2003) 210-216.

Administración pulmonar de los compuestos de la presente invención Las composiciones terapéuticas de la presente invención se administran de manera preferible a los pulmones por inhalación de un aerosol que contiene estas composiciones/compuestos, o mediante instilación intranasal o intratraqueal de dichas composiciones. La formulación de las composiciones en forma de liposomas puede beneficiar la absorción. De manera adicional, las composiciones pueden incluir un PFC líquido tales como perflubron, y las composiciones se pueden formular como un complejo de compuestos de la invención con polietilenemina (PEÍ). Para más información acerca de la administración pulmonar de las composiciones farmacéuticas ver Weiss y col., Human gene therapy 10:2287-2293 (1999); Densmore y col., Molecular therapy 1 :180-188 (1999); Gautam y col., Molecular therapy 3:551-556 (2001 ); y Shahiwaia & Misra, AAPS PharmSciTech 5 (2004). Además, se describen formulaciones respiratorias para ARNsi en la solicitud de Patente de los Estados Unidos con N° 2004/0063654 de Davis y col. Las formulaciones adicionales para la liberación mejorada de los compuestos de la presente invención pueden incluir compuestos no formulados, compuestos unidos de manera covalente a colesterol, y compuestos enlazados con anticuerpos direccíonales (Song y col., Antibody mediated in vivo delivery of small interfering ARNs vía cell-surface receptors, Nat Biotechnol. 2005 junio; 23(6):709-17).

Claims (28)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 , en la elaboración de un medicamento útil para tratar a un paciente que padece de un transtorno respiratorio, una enfermedad del ojo, un transtorno microvascular, o una lesión o enfermedad de la médula espinal.

2.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde la enfermedad del ojo es la degeneración macular.

3.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno respiratorio es COPD.

4.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno respiratorio es asma.

5.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno respiratorio es bronquitis crónica

6.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno respiratorio es enfisema.

7.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno microvascular es la retinopatía diabética.

8.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el transtorno microvascular es la insuficiencia renal aguda.

9.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el inhibidor comprende un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia de longitud y homología suficientes respecto de una secuencia presente en el interior de la secuencia del gen RTP801 que se muestra en la SEC DE ID N°; 1 para permitir la hibridación del inhibidor al gen.

10.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el inhibidor comprende un anticuerpo que enlaza de manera específica con un epítope presente en el interior de un polipéptido que comprende aminoácidos consecutivos, la secuencia del cual se muestra en la Figura 2 (SEC DE ID N°: 2).

11.- El uso de una composición farmacéutica que comprende un inhibidor del polinucleótido de RTP801 , en la elaboración de un medicamento útil para tratar a un paciente que padece de un transtorno respiratorio, una enfermedad del ojo, un transtorno microvascular o una lesión o enfermedad de la médula espinal.

12.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde el polinucleótido es ARNsi.

13.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 12, en donde el ARNsi comprende nucleótídos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias que se muestran en una cualquiera de las Tablas A-C (SEC DE ID Nos. 3-344).

14.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde se selecciona el inhibidor entre el grupo constituido por una molécula de ARNsí, un vector que comprende una molécula de ARNsi, un vector que puede expresar una molécula de ARNsi, y una molécula que se procesa de manera endógena en una molécula de ARNsi.

15.- El uso de una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento útil para promover la recuperación en un paciente que padece de un transtorno respiratorio, una enfermedad del ojo, un transtorno microvascular o una lesión o enfermedad de la médula espinal.

16.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde la enfermedad del ojo es la degeneración macular.

17.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno respiratorio es COPD.

18.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno respiratorio es asma.

19.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno respiratorio es bronquitis crónica.

20.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno respiratorio es enfisema.

21.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno microvascular es la retínopatía diabética.

22.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde el transtorno microvascular es la insuficiencia renal aguda

23.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 15-22, en donde el inhibidor comprende un polinucleótido que comprende nucleótido consecutivos que tienen una secuencia de longitud y homología suficientes respecto de una secuencia presente en el interior de la secuencia del gen RTP801 que se muestra en la SEC DE ID N°: 1 para permitir la hibridación del inhibidor al gen.

24.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 15-22, en donde el inhibidor de RTP801 es un anticuerpo que enlaza de manera específica con un epítope presente en el interior de un polipéptido que comprende aminoácidos consecutivos, la secuencia del cual se muestra en la Figura 2 (SEC DE ID N°: 2).

25.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 15-22, en donde el polinucleótido regula a la baja la expresión del gen RTP801.

26.- El uso como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 15-22, en donde el polinucleótido es un ARNsi.

27.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 26, en donde el ARNsi comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a una cualquiera de las secuencias que se muestran en una cualquiera de las Tabla A-C (SEC DE ID Nos: 3-344).

28.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 25, en donde el inhibidor se selecciona entre el grupo constituido por una molécula de ARNsi, un vector que comprende una molécula de ARNsi, un vector que puede expresar una molécula de ARNsi y una molécula que se procesa de manera endógena en una molécula de ARNsi.