JP2009091358A - 蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 - Google Patents
蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009091358A JP2009091358A JP2008261724A JP2008261724A JP2009091358A JP 2009091358 A JP2009091358 A JP 2009091358A JP 2008261724 A JP2008261724 A JP 2008261724A JP 2008261724 A JP2008261724 A JP 2008261724A JP 2009091358 A JP2009091358 A JP 2009091358A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- double bond
- group
- ring
- bonded
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 **1C(*)(*)C(N)=C(N(*)C(*)(*)C(*)=S)N(*)*1* Chemical compound **1C(*)(*)C(N)=C(N(*)C(*)(*)C(*)=S)N(*)*1* 0.000 description 3
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/22—Pteridine radicals
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【課題】本発明は、生理学的条件下に高度に蛍光性であり、そして蛍光性オリゴヌクレオチドの化学的合成において使用できる新規なプテリジンヌクレオチドを提供する。
【解決手段】本発明は、１または２以上のプテリジンヌクレオチドを含んでなる蛍光性オリゴヌクレオチドをさらに提供する。さらに、本発明は、DNA 増幅法において構成モノマーとして使用できるプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを提供する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明は、１または２以上のプテリジンヌクレオチドを含んでなる蛍光性オリゴヌクレオチドをさらに提供する。さらに、本発明は、DNA 増幅法において構成モノマーとして使用できるプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを提供する。
【選択図】なし
Description
本発明は、蛍光性DNA としてのプテリジンヌクレオチド類似体に関する。
合成オリゴヌクレオチドは、ゲノムおよび相補的DNA ライブラリーのスクリーニングのためのプローブとして、DNA 合成、配列決定、および増幅のプライマーとして、そしてDNA −タンパク質の相互作用の研究において、分子生物学において多数の用途を見出す。さらに、オリゴヌクレオチドプローブは、インサイチュ・ハイブリダイゼーションの技術を使用するin vitro遺伝子発現をアッセイするために有用であることが明らかになった。
DNA 配列決定法、蛍光性標識、および検出系における最近の改良は、これらの用途のすべてにおいて蛍光標識化オリゴヌクレオチドの使用を劇的に増加した。典型的には、オリゴヌクレオチドは蛍光性マーカーで、共有結合により直接（例えば、炭素リンカー）標識化するか、または間接的に標識化することができ、間接的標識化において、オリゴヌクレオチドを分子、例えば、ビオチンまたはジオキシゲニンに結合し、次いでこれを蛍光標識化した結合部分（例えば、ストレプチアビジンまたは標識化モノクローナル抗体）にカップリングさせる。
しかしながら、これらの蛍光標識化系は、蛍光性複合体およびそれらの結合部分が比較的大きいという欠点に悩まされる。大きい蛍光標識および関連するリンカーの存在は、配列決定におけるようにゲルを通して、または細胞の種々の区画を通して、オリゴヌクレオチドの移動度を変更することがある。
さらに、これらのマーカーの存在は、化学的相互作用または立体障害を通して、オリゴヌクレオチドと他の分子との相互作用を変更する。したがって、これらのマーカーの存在は、DNA と他の分子、例えば、タンパク質との相互作用の研究を困難とする。タンパク質−DNA の相互作用の研究は、相互作用が生物学における最も基本的メカニズムのあるものを含むので、非常に重要である。相互作用は、例えば、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったDNA ポリメラーゼまたは逆転写酵素の進行、AP１またはステロイドホルモン経路におけるように遺伝子転写の活性、またはHIV IN酵素により仲介されるようなウイルスDNA の宿主ゲノムの中への挿入を包含する。これらの理由で、ピリミジンまたはプリンヌクレオチドに構造が類似しかつオリゴヌクレオチドの中に組込むすることができる蛍光性成分を得ることは望ましい。このような成分は、オリゴヌクレオチドの大きさまたは化学的性質を変更しないで、オリゴヌクレオチド分子を蛍光性とすることが好ましい。
ヌクレオチドの多数の類似体が知られている。それらの中にはプテリジン誘導体がある。プリンヌクレオチドに構造的に類似する、これらの産物の合成法はよく知られている。事実、新しい生物学的に活性な化合物を発見する希望をもって、多数のプテリジン由来の類似体が合成されてきている。こうして、Pfleiderer（米国特許第 3,798,210号および米国特許第 3,792,036号）は、抗菌および抗ウイルス特性を有する多数のプテリジン−グリコシドを開示した。しかしながら、Pfleidererはこれらの化合物の蛍光性を研究しなかった。
同様に、Schmidt et al., Chem. Ber. 106 : 1952-1975 (1973)は、１系列のプテリジン誘導体をリボシド化してヌクレオチドグアノシンの構造類似体を生成することを記載しているが、Harris et al., Liebigs Ann. Chem. 1457-1468 (1981)は、アデノシンに構造的に類似するプテリジン誘導体の合成を記載している。再び、いずれの参考文献もヌクレオシドの蛍光性の測定を記載していない。
ルマジン誘導体を組込んだオリゴヌクレオチドの合成は、Bannwarth et al., Helvetica Chimica Acta. 74 : 1991-1999 (1991), Bannwarth et al., Helvetica Chimica Acta. 74 : 2000-2007 (1991)およびBannwarth et al.,(欧州特許出願第 0439036A2号）に記載された。Bannwarth et al.はルマジン誘導体をバソフェナンスロリン−ルテニウム複合体と組み合わせてエネルギー転移系として利用し、ここでルマジン誘導体はエネルギードナーとして作用し、そしてルテニウム複合体はエネルギーレセプターとして作用した。２つの化合物を接近させて蛍光を発生させるとき、エネルギー転移は起こった。この系は２つの基を有する分子の相互作用を研究するのためのメカニズムを提供した。しかしながら、この参考文献はオリゴヌクレオチドにおいてルマジン誘導体を単独で使用することを記載しなかった。さらに、Bannwarth は、ルマジン誘導体の主要な欠点は「・・・ルマジン発色団の長波長の吸収についての比較的低い吸光係数（ε＝8900m-1cm-1，324nm, pH6.9) 」であることを認識した。Bannwarth et al., Helv. Chim. Acta. 74 : 1991-1999 (1991) 。
本発明は、プリンヌクレオチドに構造が類似し、通常の生理学的条件下に高度に蛍光性であり、そしてオリゴヌクレオチドの化学的合成において使用するために適当である、多数のプテリジンヌクレオチドを提供することによって、これらの先行技術の制限を克服する。
本発明は、下記の形態のプテリジンヌクレオチドを提供する：
式中、Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に結合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ13と結合して環の頂点３と４との間の二重結合を形成し；
Ｒ12はＲ3 と組合わされないとき、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員であり；
Ｒ13はＲ11と結合しないとき、低級アルキルまたはＨであり；
Ｒ14はＨ、低級アルキルまたはフェニルであり；
Ｒ12はＲ3 と組合わされないとき、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員であり；
Ｒ13はＲ11と結合しないとき、低級アルキルまたはＨであり；
Ｒ14はＨ、低級アルキルまたはフェニルであり；
Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に結合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ17と結合して環の頂点１と２との間の二重結合を形成し、こうして環の頂点２および４は集合的に最大１つのオキソ酸素を有し；そして
Ｒ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員である。Ｒ15がＲ16と組合わされないとき、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成する。Ｒ15がＲ16と組合わされるとき、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨまたは低級アルキルである。Ｒ17はＲ15と結合しないとき、かつＲ20はＲ18と結合しないとき、
Ｒ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員である。Ｒ15がＲ16と組合わされないとき、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成する。Ｒ15がＲ16と組合わされるとき、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨまたは低級アルキルである。Ｒ17はＲ15と結合しないとき、かつＲ20はＲ18と結合しないとき、
の化合物であり、式中、記号Ｒ21は水素、保護基、またはトリホスフェートを表し；記号Ｒ22は水素、ヒドロキシル、または保護基で置換されたヒドロキシルを表し；そしてＲ23はＨ、ホスホルアミダイト、Ｈ−ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ヘミスクシネート、固体の支持体に共有結合したヘミスクシネート、ジシクロヘキシルカーボジイミド、および固体の支持体に共有結合したジシクロヘキシルカーボジイミドを表す。Ｒ13がＨでありかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートであり、そしてＲ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成でありかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートである。
これらの化合物は通常の生理学的条件下に高度に蛍光性であり、かつオリゴヌクレオチドの化学的合成において使用するために適当である。本発明は、さらに、これらのプテリジンヌクレオチドを組み込んだオリゴヌクレオチドを提供する。
さらに、本発明は、種々のDNA 増幅法において利用することができるプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを提供する。DNA 増幅法において使用するとき、ヌクレオチドトリホスフェートは増幅されたDNA 配列の中に直接組込んでそれを蛍光性とする。これは増幅された生成物の存在または非存在についての急速なアッセイを提供する。
さらに、本発明は、種々のDNA 増幅法において利用することができるプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを提供する。DNA 増幅法において使用するとき、ヌクレオチドトリホスフェートは増幅されたDNA 配列の中に直接組込んでそれを蛍光性とする。これは増幅された生成物の存在または非存在についての急速なアッセイを提供する。
特定の態様の説明
本明細書において使用するとき、用語「低級アルキル」は直鎖状または分枝鎖状であることができる飽和炭化水素（例えば、エチル、イソプロピル、ｔ−アミル、または２，５−ジメチルヘキシル）を意味する。好ましいアルキル基は１〜６個の炭素原子を含有するものである。この明細書および請求の範囲におけるすべての数の範囲は、それらの上限および下限を含むことを意図する。
本明細書において使用するとき、用語「低級アルキル」は直鎖状または分枝鎖状であることができる飽和炭化水素（例えば、エチル、イソプロピル、ｔ−アミル、または２，５−ジメチルヘキシル）を意味する。好ましいアルキル基は１〜６個の炭素原子を含有するものである。この明細書および請求の範囲におけるすべての数の範囲は、それらの上限および下限を含むことを意図する。
用語「オリゴヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、修飾デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド類似体、デオキシリボヌクレオチド類似体、または本発明のプテリジン誘導体を意味する。オリゴヌクレオチドの正確な使用は、多数の因子およびオリゴヌクレオチドの究極の機能または使用に依存する。一般に、化学的に合成したオリゴヌクレオチドは長さが２〜200 塩基の範囲であるが、オリゴヌクレオチドを一緒に結合してより長い配列することができることはよく知られている。本明細書おいて使用するとき、用語「オリゴヌクレオチド」は、また、これらの長い配列を包含する。また、相補的配列とのハイブリダイゼーションによるか、または酵素的にプライマー伸長により、二本鎖ポリヌクレオチドをつくることができることは認識されている。オリゴヌクレオチドという用語は、この出願において使用するとき、一本鎖または二本鎖のオリゴヌクレオチドを包含する。
用語「固体の支持体」は、ポリヌクレオチド合成において使用するモノマーのカップリングを可能とするように官能化されている固体の物質を意味する。固体の支持体は、典型的には、フラノース上の３'−炭素への共有結合を通してヌクレオシドモノマーにカップリングされている。固体の支持体の物質は、典型的には、ポリヌクレオチドの合成の間において非反応性であり、そして成長するポリヌクレオチドを定着する下層を単に提供する。固体の支持体は、ポリアクリロイルモルホリド、シリカ、コントロールされた孔のガラス（CPG)、ポリスチレン、ポリスチレン／ラテックス、およびカルボキシル変性テフロン（登録商標）を包含するが、これらに限定されない。
固相オリゴヌクレオチド合成における用語「切断」は、固体の支持体にオリゴヌクレオチドが結合する結合の破壊を意味する。典型的には、切断は取り付けられたオリゴヌクレオチドの３'−ヒドロキシルと固体の支持体との間のスクシネートエステル結合の加水分解を包含する。
用語「脱保護」は、オリゴヌクレオチドの複素環式塩基の還外アミンからの保護基の除去を意味する。典型的には、脱保護は還外アミンと、アミノ保護基、例えば、ベンゾイル、ｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、およびジメチルアミノメチレンアミノとから成るアミド部分の加水分解から成る。脱保護という用語は、また、オリゴヌクレオチドのホスフェートジエステル（インタヌクレオチドホスフェート）からの保護基の除去を意味する。このような保護基がメトキシであるとき、「脱保護」は、本明細書おいて使用するとき、それらの除去を包含しないことがある。その代わり、「チオレート」オリゴヌクレオチドの生成のために、標準的チオフェノールを含有する試薬を使用する追加の処理が望ましいことがある。
用語「プテリジンヌクレオチド」または「プテリジンモノマー」は、本明細書において、３'−ホスフェート基をもつ本発明のフラノシルプテリジン誘導体を意味するために使用する。適切に述べると、プテリジンはプリンまたはピリミジンではないので、フラノシルプテリジン誘導体はヌクレオチドではないことが認識される。しかしながら、フラノシルプテリジン誘導体はプリンヌクレオチドに構造的に類似し、そして本発明のフラノシルプテリジンはヌクレオチドと同一の方法で使用されるので、双方をヌクレオチドと呼ぶ。本明細書おいて使用するとき、プテリジンヌクレオチドまたはプテリジンモノマーはポリヌクレオチド合成において使用するために完全に保護することができるか、またはトリホスフェートとしてを使用するとき、またはオリゴヌクレオチドの中に組込むとき、脱保護することができる。
用語「ヌクレオチドモノマー」は、本明細書おいて使用するとき、プテリジンヌクレオチド、「標準的」ヌクレオチド；アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジン、およびウラシル、またはこれらのヌクレオチドの誘導体を意味する。このような誘導体は、５−ブロモデオキシシチジン、５−ブロモ−デオキシウリジン、Ｎ6−メチル−デオキシアデノシンおよび５−メチル−デオキシシチジンを包含するが、これらに限定されない。
本明細書において使用するとき、用語「保護基」は、分子上の反応性基（例えば、ヒドロキシルまたはアミン）に結合するか、またはそれと置換される基を意味する。保護基は化学反応の１または２以上の段階の間の特定の基の反応を防止するように選択される。一般に、特定の保護基は、後の時間における除去を可能として、分子の中に存在する反応性基を変更しないで反応性基を回復するように選択される。保護基の選択は、保護すべき特定の基およびその基が暴露される化合物の関数である。保護基の選択は当業者によく知られている。参照、例えば、Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis 、第２版、John Wiley & Sons, Inc., Somerset, N. J. (1991) 、これは引用することによって本明細書の一部とされる。
本明細書おいて使用するとき、用語「保護されたアミン」は、アミノ保護基と反応したアミンを意味する。アミノ保護基は、誘導化プテリジンヌクレオチドの合成の間またはそのヌクレオチドを使用するDNA またはRNA の化学的合成の間のアミド官能基の反応を防止する。アミノ保護基は、分子の中に存在他の基を変更しなで、後の時間において除去してアミノ基を回復することかできる。例えば、還外アミンをジメチルホルムアミド−ジエチルアセタールと反応させて、ジメチルアミノメチレンアミノ官能基を形成することができる。アミノ保護基は、一般に、カルバメート、ベンジル基、イミデート、およびこの分野において知られている他の基を包含する。好ましいアミノ保護基は、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルまたはジメチルアミノメチレンアミノを包含するが、これらに限定されない。
用語「カップリング」は、一般に、DNA 合成において、１つのヌクレオチドモノマーを他のヌクレオチドモノマーに、またはオリゴヌクレオチドの５’末端に接合することを意味するために使用される。カップリングは、一般に、１つのヌクレオチドモノマーの３'−ホスフェートから第２モノマーまたはオリゴヌクレオチドの５'−ヒドロキシルへのホスホジエステル結合の形成により達成される。カップリングは、また、初期のヌクレオチドの固体の支持体への接合を意味する。
用語「キャッピング」は、縮合できず、次の誘導化されたヌクレオチドと首尾よくカップリングする未反応の５'−ヒドロキシル基をブロックする段階を意味する。これにより、引き続く反応が所望の配列の鎖を拡大することによってのみ進行することが保証される。典型的には、キャッピングは５'−ヒドロキシル官能基のアセチル化を包含する。通常、これは４−ジメチルアミノピリジン（DMAP）により触媒された酸無水物により達成される。当業者に知られている他の試薬は適当である。
用語「合成サイクル」は、合成されるオリゴヌクレオチドの５'末端にヌクレオチドモノマーをカップリングさせるために必要な反応の順序を意味する。典型的には、合成サイクルは、オリゴヌクレオチドの末端上の５'−ヒドロキシル基の除去、ホスホジエステル結合を形成するためのヌクレオチドモノマーのホスファイト誘導体との反応、および引き続くカップリングが不成功であった場合の分子のキャッピングを包含する。
用語「通常の生理学的条件」は、本明細書において、生きている生物または細胞の内部において典型的である条件を意味する。いくつかの器官は極端な条件を提供することが認識されているが、生物の内部および細胞の内部の環境は通常pH７付近（すなわち、 pH6.5〜pH7.5)で変化し、主要な溶媒として水を含有し、そして０℃以上かつ50℃以下の温度において存在する。
本発明は、通常の生理学的条件下に高度に蛍光性でありかつ蛍光性オリゴヌクレオチドを製造するオリゴヌクレオチドの化学的合成において利用することができる、多数のプテリジンヌクレオチドを提供する。これらの蛍光性オリゴヌクレオチドは、例えば、ゲノムおよび相補的DNA ライブラリーのスクリーニングのためのプローブ、インサイチュ・ハイブリダイゼーションのためのプローブ、DNA合成、配列決定、および増幅のためのプライマー、そして DNA−タンパク質の相互作用を研究するためのモデルの基質を包含する多数の用途を有する。
１つの態様において、本発明のプテリジンヌクレオチドはオリゴヌクレオチドの化学的合成において使用するために適当である。一般に、これは下記のステップを必要とする：プテリジン上の還外アミンのブロッキング；考える特定の合成化学に適当な反応性基をもつホスファイト部分の誘導化；および合成の間に除去できる保護基による５'−ヒドロキシル基のブロッキング、このブロッキングは成長するオリゴヌクレオチドの５'末端への誘導化ヌクレオチドの段階的カップリングを促進する。プテリジン誘導体の糖がリボースである場合、反応性２'−ヒドロキシル基をまた保護しなくてはならない。
好ましい態様において、本発明は下記の式Ｉのヌクレオチドモノマーを提供する：
好ましい態様において、本発明は下記の式Ｉのヌクレオチドモノマーを提供する：
これらのヌクレオチドモノマーは示すように環の頂点１〜８をもつプテリジン誘導体であり、式中、Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ13と結合して環の頂点３と４との間の二重結合を形成し、Ｒ12はＲ11と組合わされないとき、NH2 、および保護基NH2 で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ13はＲ11と結合しないとき、低級アルキルまたはＨであり；Ｒ14はＨ、低級アルキルまたはフェニルであり、Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ17と結合して環の頂点１と２との間の二重結合を形成し、こうして環の頂点２および４は集合的に最大１つのオキソ酸素を有し、そしてＲ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員である。
Ｒ15がＲ16と組合わされないとき、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成する。Ｒ15がＲ16と組合わされるとき、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨまたは低級アルキルである。Ｒ17はＲ15と結合しないとき、かつＲ20はＲ18と結合しないとき、式IIの化合物である。
式中、記号Ｒ21は水素、保護基またはトリホスフェートを表し、記号Ｒ22は水素、ヒドロキシル、または保護基で置換されたヒドロキシルを表し、そしてＲ23は水素、ホスホルアミダイト、Ｈ−ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ヘミスクシネート、固体の支持体に共有結合したヘミスクシネート、ジシクロヘキシルカーボジイミド、および固体の支持体に共有結合したジシクロヘキシルカーボジイミドを表す。Ｒ13がＨでありかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートであり、そしてＲ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成しかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートである。
他の好ましい態様において、Ｒ14は水素、メチルまたはフェニル、特に水素またはメチルである。
なお他の好ましい態様において、Ｒ16は、Ｒ15と結合しないとき、水素、フェニル、アミノ基、または保護基で２置換されたNH2 である。特に、Ｒ16は水素およびフェニルである。
なお他の好ましい態様において、Ｒ16は、Ｒ15と結合しないとき、水素、フェニル、アミノ基、または保護基で２置換されたNH2 である。特に、Ｒ16は水素およびフェニルである。
しかも他の好ましい態様において、Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
なおしかも他の好ましい態様において、Ｒ14は水素、メチルおよびフェニルであり、Ｒ16は、Ｒ15と組合わされないとき、水素、フェニルまたはアミノであり、そしてＲ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
なおしかも他の好ましい態様において、Ｒ14は水素、メチルおよびフェニルであり、Ｒ16は、Ｒ15と組合わされないとき、水素、フェニルまたはアミノであり、そしてＲ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
本発明の化合物の中で、９つの態様が特に好ましい。第１好ましい態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ14は水素であり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はフェニルであり、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式IIである。この態様は式III により例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ12がNH2 であるとき、式III により例示される。
第２態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ14はフェニルであり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16は水素であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式IIである。この態様は式IVにより例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ12がNH2 であるとき、式IVにより例示される。
第３の好ましい態様において、Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13はCH3 であり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式IIである。この態様は式Ｖにより例示される。この態様の１つの特に好ましい化合物は、式IIのＲ23がＨであり、そして特に式IIのＲ21，Ｒ22、およびＲ23のすべてがＨであるとき、式Ｖにより例示されるヌクレオシドである。
第４の好ましい態様において、Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13は水素であり、Ｒ14は水素であり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 または保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式IIである。この態様は式VIにより例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ16がNH2 であるとき、式VIにより例示される。
第５の好ましい態様において、Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13は水素であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 または保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式IIである。この態様は式VII により例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ16がNH2 であるとき、式VII により例示される。
第６の好ましい態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 または保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式IIであり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はCH3 である。この態様は式VIIIにより例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ12がNH2 であるとき、式VIIIにより例示される。
第７の好ましい態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 または保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ14は水素であり、Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式IIであり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はCH3 である。この態様は式IXにより例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ12がNH2 であるとき、式IXにより例示される。
第８の好ましい態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式IIであり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨである。この態様は式Ｘにより例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ12がNH2 であるとき、式Ｘにより例示される。
第９の好ましい態様において、Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 または保護基で１または２置換されたNH2 であり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式IIであり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨである。この態様は式III により例示される。この態様の特に好ましい化合物は、Ｒ１２がNH2 であるとき、式ＸＩにより例示される。
前述したように、プテリジンの還外アミンは一般にオリゴヌクレオチド合成の間に保護しなくてはならない。プテリジンの還外アミンのブロッキングために適当な保護基は、この分野において広く知られている。一般に、保護基はプテリジン誘導体を組込んだオリゴヌクレオチドの合成の間の還外アミンの望ましくない反応を防止するであろう。これらの基は望ましくない反応を防止するためにプテリジン誘導体の実際の合成の間に保護ことが必要であることはもちろん認識されている。保護基は、分子の他の反応性基を変更しないで、オリゴヌクレオチドの合成後除去してアミン基を回復することができるべきである。
典型的には、アミン基は、アシル化により、通常カルバメート、ベンジル基、イミデート、およびこの分野において知られている他の保護基により保護される。保護基の例は下記のものを包含するが、これらに限定されない：ベンゾイル、４−メトキシベンゾイル、フェノキシアセチル、ジフェニルアセチル、イソブチリル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ジメチルアミノメチレンアミノ、ジメルチアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルおよびジメチルホルムアミド−ジエチルアセタール。ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルまたはジメチルアミノメチレンアミノは特に好ましい。多数の適当な保護基の説明については、下記の参考文献を参照のこと：Reese, Tetrahedron, 34 : 3143-3179 (1978) ; Ohtsuka et al., Nucleic Acids Res., 10 : 6553-6570 (1982) 、およびNarang, Tetrahedron 39 : 3-22 (1983)これらは引用することによって本明細書の一部とされる。
こうして、好ましい態様において、本発明は、Ｒ12およびＲ16が独立してベンゾイル、イソブチリル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ジメチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルおよびジメチルアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１または２置換されたNH2 である、式Ｉのヌクレオチドモノマーを提供する。特に、Ｒ12はジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル、およびジメルチアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１置換されたNH2 である。
オリゴヌクレオチド合成の間に、プテリジンモノマーの５'−ヒドロキシル基をブロックして望ましくない反応を防止しなくてはならない。しかしながら、このブロッキング基は、また、合成の間に除去して、成長するオリゴヌクレオチドの５'末端への新しいモノマーの段階的カップリングを可能とすることができなくてはならない。適当な保護基はこの分野においてよく知られており、そしてトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリレン、およびジメチルアミノメチリデンを包含するが、これらに限定されない。ジメトキシトリチルは、５'−ヒドロキシル基のブロッキング基として一般に好ましい。
こうして、好ましい態様において、本発明は、Ｒ20が式IIであり、Ｒ21がＨ、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリレン、またはジメチルアミノメチリデンである、式Ｉのヌクレオチドモノマーを提供する。さらに詳しくは、Ｒ21はジメトキシトリチル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、またはジメチルアミノメチリデンである。
プテリジン誘導体の糖がリボフラノースである場合、２'−ヒドロキシル基をまた保護しなくてはならない。好ましい２'−ヒドロキシル基保護基は下記のものを包含するが、これらに限定されない；トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、テトラヒドロピラン−１−イル、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル、１−（２−クロロ−４−メチル）フェニル−４−メトキシピペリジン−４−イル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｐ−ニトロフェニルエチルスルホニル、テトラヒドロピラニル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、２−ニトロベンジル、９−フェニルキサンテン−９−イルおよびｐ−ニトロフェニルエチルである。好ましい態様において、２'−ヒドロキシル基はｔ−ブチルジメチルシリル基で置換することによって保護されるであろう。
こうして、好ましい態様において、本発明は、Ｒ20が式IIであり、Ｒ22がＨ，OHまたは置換OHであり、前記置換OHはトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、テトラヒドロピラン−１−イル、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル、１−（２−クロロ−４−メチル）フェニル−４−メトキシピペリジン−４−イル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｐ−ニトロフェニルエチルスルホニル、テトラヒドロピラニル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、２−ニトロベンジル、９−フェニルキサンテン−９−イルまたはｐ−ニトロフェニルエチルで置換されている、式Ｉのヌクレオチドモノマーを提供する。特に、Ｒ22はＨまたはジメトキシトリチル、テトラヒドロピラン−１−イル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−ニトロベンジルもしくはｐ−ニトロフェニルエチルで置換されたOHである。
本発明のβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト化合物は、オリゴヌクレオチド合成のモノマーとして好ましい。これらの化合物は、合成のプロトコールを変更しないで、大部分の商業的DNA 合成において一般に利用することができる。しかしながら、大規模の合成を望む場合、またはホスフェート結合の中に硫黄基または他の変更を加えたい場合、本発明のＨ−ホスホネート化合物は合成試薬として好ましいことがある。オリゴヌクレオチド合成に適当な他のホスファイト誘導体の合成および使用は、この分野においてよく知られている。これらはメチルホスホネート、ホスホロチオエート、およびホスホトリエステルを包含するが、これらに限定されない。
本発明の好ましい態様は、プテリジンヌクレオチドがオリゴヌクレオチド合成において試薬として使用するために誘導化および保護されている化合物である。特に反応性還外アミンを保護し、そして３'−ヒドロキシルをＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトとして誘導化する。この方法において誘導体化された式III 〜ＸＩにより例示される化合物は特に好ましい。
こうして、好ましい第１態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式III により例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はジメチルアミノメチレンアミノである。
好ましい第２態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式IVにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はジメチルアミノメチレンアミノである。
好ましい第３態様は、Ｒ20が式IIでありそしてＲ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式IVにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。
好ましい第４態様は、Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式VIにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ16はジメチルアミノメチレンアミノである。
好ましい第５態様は、Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式VII により例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ16はジメチルアミノメチレンアミノである。
好ましい第６態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式VIIIにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
好ましい第７態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式IXにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
好ましい第８態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式Ｘにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
好ましい第９態様は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がＨ−ホスホネートまたはホスホルアミダイトである、式Ｘにより例示される。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨでありそしてＲ23はβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
本発明のオリゴヌクレオチドは、固相においてまた溶液中で合成することがきる。一般に、固相合成は好ましい。ホスファイトトリエステル、ホスホトリエステル、およびＨ−ホスホネートの化学によるオリゴヌクレオチドの固相合成の手法の詳細な説明は広く入手可能である。参照、例えば、Itakura 、米国特許第 4,401,796号；Caruthers et al.、米国特許第 4,458,066号および米国特許第 4,500,707号；Beaucage et al., Tetrahedron Lett., 22 : 1859-1862 (1981) ; Matteucci et al., J. Am. Chem. Soc. 103 : 3185-3191 (1981) ; Caruthers et al., Genetic Engineering, 4 : 1-17 (1982) ; Jones, chapter 2, Atkinson et al., chapter 3、およびSproar et al., chapter 4, Gait編、Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press, Washington D. C. (1984) ; Froehler et al., Tetrahedron Lett., 27 : 469-472 (1986) ; Froehler et al., Nucleic Acids Res., 14 : 5399-5407 (1986) ;Sinha et al., Tetrahedron Lett., 24 : 5843-5846 (1983)；およびSinha et al., Nucl. Acids Res., 12 : 4539-4557 (1984) これらは引用することによって本明細書の一部とされる。
一般に、カップリングサイクルにおいて利用する試薬の供給のタイミングおよび濃度は、商業的DNA 合成において使用する未修飾の商用ホスホルアミダイトについて典型的なプロトコールと異なる。これらの場合において、本発明のプテリジン誘導体を含有する溶液を、商業的合成装置（例えば、380B型、Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティー）上に余分のホスホルアミダイトのために設けられた口上の容器に単に添加することができる。しかしながら、特定の誘導化プテリジン化合物のカップリング効率が他のホスホルアミダイトより実質的に低い場合、合成を最適化するために試薬の供給のタイミングおよび濃度を変更することが必要であることがある。
低いカップリング効率を補正するためにオリゴヌクレオチド合成のプロトコールを最適化する手段は、この分野においてよく知られている。一般に、試薬の濃度または試薬の供給量を単に増加して、より高いカップリング効率を達成する。また、カップリング効率を決定する方法はよく知られている。例えば、５'−ヒドロキシル基がジメトキシトリチル（DMT)である場合、酸ステップ(DMT基を除去する）におけるDMT カチオン濃度を測定することによって、カップリング効率を決定することができる。
DMT カチオン濃度は、通常、酸性洗浄液を分光光度計でモニターすることによって決定される。酸／DMT 溶液は鮮明なオレンジ色である。また、カップリングが起こらなかった場合、キャッピングはオリゴヌクレオチドのさらにエクステンションを防止するので、例えば、毛管電気泳動またはHPLCを使用して、切形／全長のオリゴヌクレオチドの比を比較することによって、カップリング効率を推定することができる。
固相オリゴヌクレオチド合成は、多数の固体の支持体を使用して実施することができる。適当な支持体は、合成されたオリゴヌクレオチドにおいて３'末端塩基となるであろう保護されたモノマーを取り付ける官能基を提供する支持体である。支持体は、特定の合成化学において利用される試薬に対して不活性でなくてはならない。固体の支持体物質は、ポリアクリロイルモルホリド、シリカ、コントロールされた孔のガラス（CPG)、ポリスチレン、ポリスチレン／ラテックス、およびカルボキシル変性テフロン（登録商標）を包含するが、これらに限定されない。好ましい支持体は、アミノ官能化コントロールされた孔のガラスおよびカルボキシル官能化テフロン（登録商標）である。
固相オリゴヌクレオチド合成は、出発点として、固体の支持体にカップリングされた完全に保護されたモノマー（例えば、プテリジンヌクレオシド）を必要とする。このカップリングは典型的にはリンカーに共有結合した３'−ヒドロキシル（カップリングしたときオキソ）であり、次いでこれを固体の支持体に共有結合させる。次いで、第１合成サイクルはモノマーを、その３'−ホスフェートを介して、３'−５'ホスホジエステル結合を形成する縮合反応により結合ヌクレオシドの５'−ヒドロキシルにカップリングさせる。引き続く合成サイクルは、最後の結合ヌクレオシドの５'−ヒドロキシルにヌクレオチドモノマーを付加する。この方法において、オリゴヌクレオチドは３'→５'の方向に合成されて、固体の支持体にその３'末端を結合した「成長する」オリゴヌクレオチドを生成する。
固体の支持体にヌクレオシドモノマーを結合する多数の手段は当業者に知られているが、スクシネートまたはヘミスクシネートを通してコントロールされた孔のガラスに共有結合したモノマーは一般に好ましい。ヘミスクシネートを通してコントロールされた孔のガラスにカップリングした慣用の保護されたヌクレオシドは、多数の源から商業的に入手可能である（例えば、Glen Research 、米国バーモント州スターリング、Applied Biosystems、米国カリフォルニア州フォスターシティー、Pharmacia LKB 、米国ニュージャージイ州ピスカタウェイ）。
オリゴヌクレオチドの３'末端におけるプテリジンヌクレオチドの配置は、固体の支持体に結合した完全にブロックされたフラノシルプテリジンを使用してオリゴヌクレオチド合成を開始することを必要とする。好ましい態様において、プテリジンヌクレオチドの結合はまずプテリジンヌクレオチドをヘミスクシネートとして誘導化することによって達成される。次いで、縮合剤としてメシチレン−２−スルホニルクロライド／１−メチル−1H−イミダゾールを使用する縮合反応において、ヘミスクシネートをアミノ官能化されたコントロールされた孔のガラスに取り付けることができる。
多数の異なる反応性基で官能化されたコントロールされた孔のガラスは商業的に入手可能である（例えば、Sigma Chemicals 、米国ミゾリー州セントルイス）。同様なカップリングスキームは下記の参考文献に記載されている：Atkinson et al., chapter 3, Gait編、Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach, IRL Press, Washington D. C. (1984)。また、トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロライド、イミダゾリド、トリアゾリドまたはさらにテトラゾリドを縮合剤として使用することができる。ジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC)および構造類似体はまた適当なリンカーである。他のリンカーおよび適当な縮合剤は当業者によく知られている。
好ましい態様において、したがって、本発明は、５'−ヒドロキシルがヘミスクシネートとして誘導体化され、次いで固体の支持体に、特にコントロールされた孔のガラスに共有結合させることができる、プテリジンヌクレオチドを提供する。この方法において誘導化された式III 〜ＸＩにより例示される化合物は特に好ましい。
こうして、第１の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式III の化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はジメチルアミノメチレンアミノである。
第２の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式IVの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はジメチルアミノメチレンアミノである。
第３の好ましい態様において、本発明は、Ｒ20が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式Ｖの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。
第４の好ましい態様において、本発明は、Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式VIの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ16はジメチルアミノメチレンアミノである。
第５の好ましい態様において、本発明は、Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ20が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式VII の化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ16はジメチルアミノメチレンアミノである。
第６の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式VIIIの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
第７の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式IXの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
第８の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式Ｘの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
第９の好ましい態様において、本発明は、Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そしてＲ17が式IIであり、Ｒ23がヘミスクシネート、または固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートである、式Ｘの化合物を提供する。特に、式IIのＲ21はジメトキシトリチルであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである。なお特に、Ｒ12はｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである。
還外アミンがｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルにより保護されている態様において、脱保護試薬は、また、３'末端ヌクレオシドを固体の支持体に結合するトリスクシニルスペーサーのエステル官能基を切断することができる。この場合において、Stengele et al., Tetrahedron Lett., 18 : 2549-2552 (1990)(これは引用することによって本明細書の一部とされる）に記載されているカップリングスキームは好ましい。
この方法において、固体の支持体（ジヒドロキシプロピル−CPG, 500Åおよび1400Å，Fluka AG、スイス国、カタログNo. 27754, 27764, 2770) をまずN,N'−カルボニルジイミダゾールと反応させ、次いで脂肪族第２アミンスペーサーとして1,6−ビスメチルアミノヘキサンと反応させる。次いでこの化合物を適当に保護された２'−ヌクレオシド−３'−Ｏ−スクシネートとカップリングさせ、引き続いて固体の支持体の遊離ヒドロキシル基を酢酸無水物および４−ジメチルアミノピリジン（DMAP）とカップリングさせる。このリンカーはｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルおよびｐ−ニトロフェニルエチレン基について使用した脱保護条件下に完全に安定であるが、マトリックスからの切断は通常濃アンモニア中の加水分解条件下に２時間より短い時間で達成することができる。
いったん全長のオリゴヌクレオチドが合成されると、保護基を除去し（オリゴヌクレオチドを脱保護し）、次いで使用する前にオリゴヌクレオチドを固体の支持体から切断する。（テフロン（登録商標）の固体の支持体を使用する場合、オリゴヌクレオチドを支持体に永久的に取り付けてアフィニティーカラムを調製することができる。）切断および脱保護は同時にまたは任意の順序で順次に実施することができる。２つの手法は介在させ、こうしていくつかの保護基をオリゴヌクレオチドから除去した後、それを固体の支持体から切断し、そして他の基を溶液中で切断したオリゴヌクレオチドから脱保護する。
事象の順序は存在する特定のブロッキング基、固体の支持体の特定の結合、および合成を実施する個人の好みに依存する。脱保護が切断に先行する場合、保護基を固体の支持体に結合したままであるオリゴヌクレオチドから洗浄除去することができる。逆に、切断に引き続いて脱保護を実施する場合、除去した特定の基はオリゴヌクレオチドとともに溶液の中に残るであろう。しばしばオリゴヌクレオチドは使用する前にこれらの保護基から単離することが必要であろう。
好ましい態様、および大部分の商業的DNA 合成において、５'−ヒドロキシル上の保護基を合成の最後の段階において除去する。次いでオリゴヌクレオチドを固体の支持体から切断し、残りの脱保護基を溶液中で実施する。５'−ヒドロキシル保護基の除去は、典型的には、次のヌクレオチドモノマーのカップリング前に末端の５’−ヒドロキシル基を除去するために、合成を通じて利用する同一試薬で処理することをちょうど必要とする。５’−ヒドロキシル保護基はジメトキシトリチル基である場合、脱保護は酢酸、ジクロロ酢酸またはトリクロロ酢酸を使用する処理により達成することができる。
典型的には、まず固相支持体に取り付けられたオリゴヌクレオチド（塩基不安定性結合）を切断剤に約１〜２時間暴露し、こうしてオリゴヌクレオチドが固体の支持体から解放されるようにし、次いで解放されたオリゴヌクレオチドを含有する切断試薬を少なくとも20〜60分間約80〜90℃に加熱し、こうして還外アミンに取り付けられた保護基を除去することによって、還外アミンの切断および脱保護の双方を実施する。また、脱保護ステップはより低い温度において実施することができるが、より大きい時間の間実施しなくてはならない。（例えば、加熱は５時間の間55℃であることができる）。
一般に、好ましい切断および脱保護は濃アンモニアである。
一般に、好ましい切断および脱保護は濃アンモニアである。
オリゴヌクレオチドがリボヌクレオチドでありそして２'−ヒドロキシル基がｔ−ブチルジメトキシトリチルシリル（TBDMS)によりブロックされている場合、後者の基はテトラブチルアンモニウムフルオライドを使用して合成の終わりにおいて除去することができる。Wu et al., J. Org. Chem. 55 : 4717-4724 (1990)参照。フェノキシアセチル基はアルコール中で無水アンモニアを使用して除去することができる（これらの条件下にTBDMS 基は安定であり、そしてオリゴヌクレオチドは切断されない）。シチジンのベンゾイル保護基は、また、アルコール中の無水アンモニアで除去される。
還外アミンをｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル基で保護しそして固体の支持体へのカップリングがスクシネートヌクレオシドと縮合した1,6−ビス−メチルアミノヘキサンを介する場合、アミノ基は好ましくは１ＭのDBU(1,8−ジアザ−ビシクロ〔5.4.0〕−ウンデク−７−エン）を使用する処理により脱保護される。次いで、固体の支持体からのオリゴヌクレオチドの切断は濃アンモニアを使用する処理により達成される。
脱保護に対するこの後者のアプローチを使用する場合、それぞれ、アミドおよびアミンの保護のためにｐ−ニトロフェニルエチルおよびｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル基を使用して保護されたプテリジン、アデニン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウラシル、および修飾されたヌクレオチドモノマーを使用してオリゴヌクレオチドを合成することが好ましい。Barone et al., Nucleic Acids Res. 12 : 4051-4061 (1984) を引用するStengeleおよびPfleiderer, Tetrahedron Lett., 31 : 2549-2552 (1990)を参照のこと。次いで、単一の脱保護のプロトコールはオリゴヌクレオチドのすべての構成ヌクレオチドを脱保護するであろう。
切断されそして完全に脱保護されたオリゴヌクレオチドは多数の用途において直接使用することができる（凍結乾燥または蒸発させて脱保護試薬を除去した後）か、または使用前に精製することができる。脱保護工程において除去された保護基から、そして最も重要なことには、次のヌクレオチドとカップリングできなかったオリゴヌクレオチドを合成の間にキャッピングするとき形成した切形オリゴヌクレオチドから、全長のオリゴヌクレオチドを単離するために、合成オリゴヌクレオチドの精製は一般に望ましい。
オリゴヌクレオチドの精製技術は当業者によく知られている。方法は下記のものを包含するが、これらに限定されない：シリカプレート上の薄層クロマトグラフィー（TLC)、ゲル電気泳動、大きさ分画（例えば、Sephadexカラムを使用して）、逆相高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）およびアニオン交換クロマトグラフィー（例えば、モノＱカラム、Pharmacia-LKB 、米国ニュージャージイ州ピスカタウェイ、を使用する）。オリゴヌクレオチドの精製の説明については、下記の参考文献を参照のこと：McLaughlin et al., chapter 5、およびWu et al., chapter 6, Gait編、OligonucleotideSynthesis : A Practical Approach, IRL Press, Washington D. C. (1984)。
本発明のオリゴヌクレオチドは、配列に対して内部または末端における、配列の１または２以上の位置にプテリジンヌクレオチドを含有する。本発明のオリゴヌクレオチドは１または２以上の位置に単一のプテリジン誘導体を含有することができるか、または２またはそれ以上の異なるプテリジン誘導体を含有することができる。オリゴヌクレオチドは完全にプテリジンヌクレオチドから成るか、または天然に存在するおよび／または修飾されたヌクレオチドを含有することができる。
修飾されたヌクレオチドは当業者によく知られており、そして下記のものを包含するが、これらに限定されない：イノシン、５−ブロモデオキシシチジン、５−ブロモ−デオキシウリジン、Ｎ6−メチル−デオキシアデノシンおよび５−メチル−デオキシシチジン。これらのヌクレオチドのホスホルアミダイトの形態は、例えば、下記の会社を包含する多数の源から商業的に入手可能である：Applied Biosystems, Inc.、米国カリフォルニア州フォスターシティー、Clonetech 、米国カリフォルニア州パロアルト、およびGlen Research 、米国バーモント州スターリング。
好ましい態様において、本発明は、下記式ＸIIを有する１種または２種以上のヌクレオチドモノマーを含んでなるオリゴヌクレオチドを提供する。
ヌクレオチドモノマーは示すように環の頂点１〜８をもつプテリジン誘導体であり、式中Ｒ16，Ｒ18、およびＲ19は式Ｉについて記載されている通りであるが、ただし保護基は排除されている。こうして、Ｒ12は、Ｒ11と組合わされないとき、NH2 であり、そしてＲ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、またはNH2 であり、Ｒ17は、Ｒ15と結合しないとき、そしてＲ20はＲ18と結合しないとき、式ＸIII の化合物である。
式中、記号Ｒ22は水素またはヒドロキシルを表す。
好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ14は水素、メチルまたはフェニル、特に水素またはメチルである。
他の好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ16はＲ15と結合しないとき、水素、フェニル、またはアミノ基であり、特に水素およびフェニルである。
好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ14は水素、メチルまたはフェニル、特に水素またはメチルである。
他の好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ16はＲ15と結合しないとき、水素、フェニル、またはアミノ基であり、特に水素およびフェニルである。
なお他の好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
さらに好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ14は水素、メチル、またはフェニルであり、Ｒ16は水素、フェニルまたはアミノであり、そして、Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
さらに好ましい態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは式ＸIIのモノマーを含んでなり、式中Ｒ14は水素、メチル、またはフェニルであり、Ｒ16は水素、フェニルまたはアミノであり、そして、Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19は水素またはメチルである。
本発明の組成物の中で、９つのヌクレオチドモノマーの１または２以上のを含んでなるオリゴヌクレオチドは特に好ましい。第１の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はアミノ基であり、Ｒ14は水素であり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はフェニルであり、Ｒ18はＲ19と組合わされて環の頂点７に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式ＸIVである。このヌクレオチドモノマーは式ＸIVにより例示され、式中Ｒ22はOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第２の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はフェニルであり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16は水素であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて環の頂点７に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式ＸIII である。このヌクレオチドモノマーは式ＸＶにより例示され、式中Ｒ22はＨであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第３の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ12と結合して環の頂点４に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13はCH3 であり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて環の頂点７に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式ＸIII である。このヌクレオチドモノマーは式ＸVIにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第４の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ12と結合して環の頂点４に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13はＨであり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて環の頂点７に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式ＸIII である。このヌクレオチドモノマーは式ＸVIIIにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第５の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ12と組合わされて環の頂点４に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13は水素であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16はNH2 であり、Ｒ18はＲ19と組合わされて環の頂点７に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20は式ＸIII である。このヌクレオチドモノマーは式ＸVIIIにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第６の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ16と組合わされて環の頂点２に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式ＸIII であり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はCH3 である。このヌクレオチドモノマーは式ＸIXにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであ、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第７の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ16と組合わされて環の頂点２に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式ＸIII であり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はCH3 である。このヌクレオチドモノマーは式ＸＸにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第８の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はCH3 であり、Ｒ15はＲ16と組合わされて環の頂点２に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式ＸIII であり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨである。このヌクレオチドモノマーは式ＸＸＩにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
第９の好ましいヌクレオチドモノマーは式ＸIIにより例示され、式中Ｒ11はＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、Ｒ12はNH2 であり、Ｒ14はＨであり、Ｒ15はＲ16と組合わされて環の頂点２に二重結合により接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ17は式ＸIII であり、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨである。このヌクレオチドモノマーは式ＸＸIIにより例示され、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
オリゴヌクレオチド配列中の特定のプテリジンヌクレオチドおよびそれらの位置の選択は、オリゴヌクレオチドを意図する特定の用途に依存するであろう。当業者は認識するように、プテリジン誘導体の蛍光シグナルはpHおよび付近の分子の特定の化学により影響を受けるであろう。一般に、付近のプリンは付近のピリミジンよりも多くシグナルをクエンチングする傾向があるであろう。プリンは主要な付近の物質としてシグナルを厳しくクエンチングし、そして２次付近の物質としてさえ有意な作用を有する。第３プリンはクエンチャーとして強力ではない。さらに、ヌクレオチドの末端付近においてシグナルのクエンチングは最小となる。
したがって、完全なオリゴヌクレオチドから強いシグナルを望む場合、プテリジンヌクレオチドは末端にまたはその付近に位置し、そして１または２以上のピリミジンに隣接してシグナルのクエンチングを減少することが好ましい。逆に、オリゴヌクレオチドを切断する（例えば、エンドヌクレアーゼにより）ときのみオリゴヌクレオチドがシグナルを提供することを望む場合、プテリジン誘導体をクエンチング基（プリン）に密接させるが、オリゴヌクレオチドを切断するとき、クエンチング塩基からプテリジンを含有する鎖を分離することが期待された位置に配置し、これにより蛍光シグナルを解放することが好ましい。後者のアプローチは実施例12に例示されている。
したがって、１つの態様において、プテリジンヌクレオチドは３'末端に位置するが、他の実施態様において、プテリジンヌクレオチドは本発明のオリゴヌクレオチドの５'末端に位置する。
なお他の態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは１〜10ピリミジンモノマーにより囲まれているプテリジンヌクレオチドのモノマーを含んでなる。
なお他の態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは１〜10ピリミジンモノマーにより囲まれているプテリジンヌクレオチドのモノマーを含んでなる。
本発明のオリゴヌクレオチドは短い一本鎖の配列に限定されない。当業者は認識するように、オリゴヌクレオチドの合成は典型的にはほぼ200 塩基の上限を有するが、多数のオリゴヌクレオチドを一緒に結合してより長い配列を形成することができる。さらに、相補的配列を有するオリゴヌクレオチドを一緒にハイブリダイゼーションして二本鎖の分子を形成することができる。オリゴヌクレオチドをハイブリダイゼーションおよび結合して長い二本鎖の分子を形成する方法はよく知られている。参照、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1985)。
本発明のプテリジン誘導体は、天然に存在するプリンに構造的に類似する。オリゴヌクレオチドの中に組込むとき、プテリジン誘導体は蛍光性標識として作用するが、現在入手可能な蛍光性標識と同程度に厳しくはオリゴヌクレオチドの生理的および化学的性質を変更しない。ある場合において、混乱は非常に小さいので、酵素機能にとって重要であることが知られている部位において置換を行ったときでえ、酵素を触媒とする反応を可能とする酵素基質としてオリゴヌクレオチドは作用することができる。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは DNA−タンパク質の相互作用の研究において特に有用である。
１つのこのような相互作用は、DNA とウイルス組込み（IN）タンパク質との間の相互作用により例示される。インテグラーゼは、ヒトゲノムの中へのHIV ウイルス遺伝子の組込みに関係づけられたウイルス組込みタンパク質である。Engleman et al., Cell, 67 : 1211-1221 (1991)。したがって、インテグラーゼは細胞のHIV 感染に対して重要であるように思われ、そしてエイズ抗ウイルスの研究にとって極めて重要な標的を提供することがある。
特定のDNA 配列（５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３'、配列識別No：１）は、HIV インテグラーゼ酵素のための有効なモデルとして使用されてきている。同上。この酵素は、段階的方法で、宿主細胞のゲノムの中へのHIV ゲノムの調製および実際の挿入を達成する機能をする。このメカニズムにおける第１ステップは、配列の配列の３'末端からジヌクレオチドを切断して５'オーバーハングを残すように思われる。
本発明の多数のプテリジンヌクレオチド（例えば、式Ｖまたは式VIにより例示される化合物）はグアノシンに構造的に類似するので、インテグラーゼにより切断されるジヌクレオチドにおいてグアノシンの代わりに使用することができる。完全なDNA 配列において、付近のプリンはプテリジンヌクレオチドのシグナルをクエンチするであろう。インテグラーゼによる鎖からのヌクレオチドの切断はクエンチされた蛍光シグナルを解放し、そして蛍光の増加の検出により反応の実時間のモニターを可能とする。これはインテグラーゼ酵素の活性についての簡単かつ急速なアッセイを提供する。
したがって、なお他の態様において、本発明のオリゴヌクレオチドは、 HIV−１DNA のＵ５末端をつくり、インテグラーゼの基質として作用し、そして下記の配列から成る群より選択される：
５'−GTN TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：２），
５'−GTG TNG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：３），
５'−GTG TGN AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：４），
５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：５），
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC ANT −３’（配列識別No：６），
５'−GTG TNG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：７），
５'−ACT GCT AGA NAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：８），
５'−ACT GCT ANA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：９），
５'−ACT NCT AGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：10）および
５'−ACT GCT NGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：11）。
５'−GTN TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：２），
５'−GTG TNG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：３），
５'−GTG TGN AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：４），
５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：５），
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC ANT −３’（配列識別No：６），
５'−GTG TNG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：７），
５'−ACT GCT AGA NAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：８），
５'−ACT GCT ANA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：９），
５'−ACT NCT AGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：10）および
５'−ACT GCT NGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：11）。
ここでＡはアデノシンヌクレオチドであり、Ｃはシトシンヌクレオチドであり、Ｇはグアノシンヌクレオチドであり、Ｔはチミジンヌクレオチドであり、そしてＮは式ＸVI、式ＸVII 、または式ＸVIIIのプテリジンヌクレオチドであり、式中Ｒ22はＨまたはOHであり、より好ましくは、Ｒ22はＨである。
もちろん、プテリジンヌクレオチドおよびプテリジンオリゴヌクレオチドは、多数の関係においてDNA と他の分子との相互作用を研究するために利用することができる。例えば、式ＸIX，ＸＸ，ＸＸＩ、およびＸＸIIのプテリジンヌクレオチドは、他の特許請求した化合物の大部分とのエネルギー転移を達成することができる。これらの化合物は宿主ゲノムの中への外来DNA の挿入をモニターするために使用することができ、ここでヌクレオチドを含有するDNA 鎖は他の特許請求した化合物の１つを含有するDNA 鎖に対して近接させる。これはエネルギー転移を発生させ、その結果新しい不連続のシグナルを放射させる。
当業者は認識するように、本発明のプテリジン誘導体は、また、ほとんど任意の生物学的分子を標識化するための蛍光標識として単に使用することかできる。未保護のプテリジン単独は、直接に、またはリンカーまたはスペーサーを通して、プテリジン１Ｎまたは８Ｎにより、標識化しようとする組成物に結合することができる。また、プテリジンヌクレオシドは蛍光標識として使用することができる。プテリジンヌクレオシドは、好ましくは５'−ヒドロキシル、３'−ホスフェート、または２'−ヒドロキシル（リボフラノースの場合において）を通して直接、またはリンカーを通して、標識化しようとする組成物に結合することができる。このような標識化組成物は、生物学的分子、例えば、抗体、リガンド、細胞表面レセプター、および酵素を包含するが、これらに限定されない。
in vitroまたはin vivo において係合標識化されたオリゴヌクレオチドを検出する方法は当業者によく知られている。これらの手段は、直接可視化、蛍光顕微鏡検査、フルオロメーター、写真的検出、画像増強を使用する検出、光電子倍増管、ビデオカメラなどを包含するが、これらに限定されない。もちろん、特定の方法は特定の実験に依存する。例えば、オリゴヌクレオチドを酵素活性について、または１対の分子の間のエネルギー転移についてのアッセイとして使用する場合、反応はフルオロメーターにより溶液中で実施することができる。オリゴヌクレオチドをインサイチュ・ハイブリダイゼーションのプローブとして使用する場合、画像獲得システム（例えば、蛍光顕微鏡と画像処理システムとの組み合わせを有するCCDビデオカメラ）を使用して検出を実施することができる。
本発明のヌクレオチドトリホスフェート化合物は、DNA 増幅技術、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（Innis, et al., PCR Protocols, A Guide to Methods and Application, Academic Press, Inc. San Diego, (1990)) 、リガーゼ連鎖反応（LCR)（参照、Wu et al., Genomics, 4 : 560 (1989), Landegren, et al., Science, 241 : 1077 (1988)およびBarringer, et al., Gene, 89 : 117 (1990))、転写増幅（参照、Kwoh, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. A.), 86 : 1173 (1989))および自己持続配列複製（参照、Guatelli, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (U. S. A.), 87 : 1874 (1990) においてDNA 合成のモノマーとして利用することができる。本発明のプテリジンヌクレオチドを利用する増幅は、特定のDNA 配列について急速なアッセイを提供する。特定のDNA 配列の存在または非存在が病理的症状（例えば、AIDS）の診断である場合、プテリジンヌクレオチドトリホスフェートを使用する増幅は極端に感受性の急速な診断道具を提供する。
例えば、PCR 増幅を使用する場合、問題のDNA 配列をフランキングするDNA 配列に対して相補的である１対のPCR プライマーを選択する。適切な標的配列が試料の中に存在する場合、プライマーの間のDNA 配列を増幅されるであろう。この増幅されたDNA 配列はプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを含有するであろう。増幅された配列は、混合物の中に残留するモノマーから、簡単な大きさ分画（例えば、NAP カラム、 Pharmacia−LKB 、米国ニュージャージイ州ピスカタェイ）またはよく知られている他の技術により分離することができる。次いで、増幅された配列の存在または非存在は、残留する混合物の蛍光を測定することによって直ちに検出することができる。
また、蛍光偏光（FP）の測定を使用して、プライマーおよびヌクレオチドモノマーからのPCR 生成物の分離を必要としないで、陽性または陰性のPCR 反応を検出することができる。この技術はプテリジンヌクレオチドのモノマー、またはプテリジンヌクレオチドのモノマーを組込んだ比較的短い、各々約25塩基対のプライマーを使用する。PCR 法が完結した後、得られる混合物をFPを使用して、励起波長の偏光ビームを混合物に通過させることによって分析する。
標的配列が出発混合物の中に存在しない場合、蛍光性プライマーは溶液の中に比較的小さい一本鎖の断片として残留するか、または蛍光性ヌクレオチドモノマーは溶液の中に比較的小さい分子として残留するであろう。モノマーまたは短いプライマー断片は、比較的散乱した、非偏光の蛍光を放射するであろう。対照的に、標的配列が存在する場合、プテリジンモノマーまたは蛍光性プライマーは励起シグナルに対して応答していっそうゆっくり動く、より大きい二本鎖のセグメントの中に組込まれ、そして混合物が放射する蛍光はいっそう偏光されているであろう。参照、欧州特許（EP）第382433号、これはこの技術を詳細に記載している。
したがって、本発明は式Ｉのプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを提供する。式III 〜ＸＩのトリホスフェート化合物は特に好ましい。したがって、第１の好ましいトリホスフェートは式III であり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第２の好ましいトリホスフェートは式IVであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第２の好ましいトリホスフェートは式IVであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第３の好ましいトリホスフェートは式Ｖであり、式中Ｒ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第４の好ましいトリホスフェートは式VIであり、式中Ｒ16はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第４の好ましいトリホスフェートは式VIであり、式中Ｒ16はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第５の好ましいトリホスフェートは式VII であり、式中Ｒ16はNH2 であり、そしてＲ20は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第６の好ましいトリホスフェートは式VIIIであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第６の好ましいトリホスフェートは式VIIIであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第７の好ましいトリホスフェートは式IXであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第８の好ましいトリホスフェートは式Ｘであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第８の好ましいトリホスフェートは式Ｘであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
第９の好ましいトリホスフェートは式ＸＩであり、式中Ｒ12はNH2 であり、そしてＲ17は式IIであり、式中Ｒ21はトリホスフェートであり、Ｒ22はＨであり、そしてＲ23はＨである。
本発明の追加の面は、前述のアッセイの実施において有用なキットに関する。これらのキットは種々の形態を取ることができ、そして配列の特定の増幅プライマーおよび１または２以上のプテリジンヌクレオチドトリホスフェートを含有する１または２以上の容器を含んでなる。キットの他の任意の成分は、例えば、ポリメラーゼ、モノマーを増幅された混合物から分離するために使用する手段、およびPCR または他の増幅反応のための適当な緩衝液を包含する。上記成分に加えて、キットはまた前述の方法を実施するための説明書を含有することができる。
特許請求するプテリジンヌクレオチドは、当業者によく知られている標準的方法により合成することができる。一般に、保護されたプテリジン誘導体を４−クロロベンゾイルまたはパラトルエンスルホニルエステルとして保護された３'−または５'−ヒドロキシルを有するクロロフラノースと反応させて、プテリジンヌクレオシドを生成する。参照、例えば、Kiriasis et al., p. 49-53, Chemistry and Biology of Pteridines, Kisliuk およびBrown 編、Elsevier North Holland, Inc., N. Y. (1979), Schmid et al., Chem. Ber. 106 : 1952-1975 (1973), Pfleidere 、米国特許第 3,798,210号、Pfleidere 、米国特許第 3,792,036号、Herris et al., Liebigs Ann. Chem., 1457-1468 (1981) 、これらは種々のプテリジンヌクレオシドの合成を例示し、そして引用することによって本明細書の一部とされる。参照、また、実施例１〜４、これらはプテリジンヌクレオシドの合成を記載している。カップリング後、保護基を除去し、５'−ヒドロキシルをそのジメトキシトリチルエーテルに交換する。引き続いて５'−ヒドロキシルをＨ−ホスホネート、ホスホアミダイト、またはヘミスクシネートに変換すると、所望の化合物が得られる。
還外アミンまたは保護されたアミンを生成物において望む場合、それはいくつかの段階の任意の段階において導入することができる。例えば、出発プテリジンは、それ以上の操作の前に保護アミン置換基を含有することができる（例えば、式III の化合物を参照のこと）。また、アミンは後の段階においてオキソ部分をチオンに変換し、次いでアンモニアでアミン化することによって導入することができる（例えば、式III のホスホアミダイトの合成を記載する実施例８を参照のこと）。アミンを導入するなお他の方法は、２位にメチルチオ置換基を有する出発プテリジンを使用する（例えば、式Ｖのホスホアミダイトの合成を記載する実施例７を参照のこと）。所望のクロロフラノースとのカップリング後、保護基を除去し、メチルチオ基をアンモニアと置換する。
ヌクレオシドの５'−ヒドロキシルを保護基（好ましくはジメトキシトリチル）でブロックする。保護基をカップリングする手段は当業者によく知られている。特に、ジメトキシトリチル基のカップリングは実施例６〜９において例示されている。簡単に述べると、これは乾燥ピリジン中のヌクレオシドとジメトキシトリチルクロライドとの反応により達成される。他のプロトコールは一般に当業者に知られている。参照、例えば、Atkinson et al., chapter 3, Gait編、Oligonucleotide Synthesis : A Practical Aproach (IRL Press, Washington, D. C., 1984)、これは引用することによって本明細書の一部とされる。
プテリジンヌクレオチドの３'−ヒドロキシルは、この分野においてよく知られている方法を使用して、そのそれぞれのヘミスクシネート（上に定義したCPG へのカップリングのために）、ホスホアミダイト、Ｈ−ホスホネート、またはトリホスフェートに変換することができる。例えば、ヌクレオシド３'−ヒドロキシルのヘミスクシネートへの変換は、無水コハク酸との反応により達成することができる。Atkinson et al., chapter 3, Gait編、Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach (IRL Press, Washington, D. C., 1984) （これは引用することによって本明細書の一部とされる）は、コントロールされた孔のガラスの官能化およびヌクレオシド−３'−Ｏスクシネートの合成およびカップリングを記載している。
ヌクレオシドをホスホアミダイトに変換する方法は、また、当業者によく知れている。参照、例えば、Atkinson et al., chapter 3, Gait編、Oligonucleotide Synthesis : A Practical Approach (IRL Press, Washington, D. C., 1984) （これは引用することによって本明細書の一部とされる）、これはMcBride およびCaruthers, Tetrahedron Lett., 24 : 245 (1983) 。他のアプローチは実施例７および８において例示されており、ここにおいてヌクレオシドをβ−シアノエチル−ビス−ジイソプロピルホスファンとテトラゾール中で反応させる。ホスホアミダイトの引き続く単離はそれらの実施例に記載されている。
同様に、ヌクレオシドをＨ−ホスホネートに変換する手段は、また、当業者によく知られている。１つアプローチにおいて、三臭化リン（III ）誘導体を使用して、ヌクレオシドの３’−ヒドロキシルホスフィチレートを直接ホスフィチル化する。さらに詳しくは、リン（III ）トリイミダゾリドを使用して、３'−ヒドロキシルをホスフィチル化することができる。この方法は、Garegg et al., Chemica Scripta, 25 : 280-282 (1985) およびTocik et al., NucleicAcids Res., 18 : 193 (1987)(それらの双方は引用することによって本明細書の一部とされる）に詳細に記載されている。
同様に、トリス−（1,1,1,3,3,3−ヘキサフルオロ−２−プロピル）ホスファイトを使用してリボヌクレオシド−Ｈ−ホスホネートを製造することは、Sakatsume et al., Nucleic Acids Res., 17 : 3689-3697 (1989)(これは引用することによって本明細書の一部とされる）に記載されている。ジオキシヌクレオシド−Ｈ−ホスホネートを製造する同一の試薬の使用は、Sakatsume et al., Nucleic Acids Res., 18 : 3327-3331 (1990)(これは引用することによって本明細書の一部とされる）に記載されている。Ｈ−ホスホネートを製造する３’−ヒドロキシルの誘導化の他のアプローチは、Sekine et al., J. Org. Chem., 47 : 571-573 (1982) ; Marugg et al., Tetrahedron Lett., 23 : 2661-2664 (1986) 、およびPon et al.,Tetrahedron Lett., 26 : 2525-2528 (1985)の中に見出すことができる。
３'−ヒドロキシルのトリホスフェートとしての誘導化は、当業者に知られている多数の手段により達成することができる。プテリジンヌクレオシドが酵素基質として活性するために十分な自然ヌクレオチドに対する類似体を有する場合、モノホスフェートを後述するように化学的に合成し、次いで、それぞれ適当なヌクレオチドモノホスフェートおよびジホスフェートキナーゼを使用して、酵素的にジホスフェートに、次いでトリホスフェートに変換することができる。
また、ヌクレオシドはトリホスフェートとして化学的に誘導化することができる。これはヌクレオシドをトリメチルホスフェートおよびPOCl3 と反応させ、次いでトリエチルアンモニウム重炭酸塩緩衝液を添加してヌクレオチドモノホスフェートを生成し、次いでこれをクロマトグラフィーにより精製することができる。次いでヌクレオチドモノホスフェートをカルボニルイミダゾールを使用して活性化し、トリブチルアンモニウムピロホスフェートとカップリングしてヌクレオチドトリホスフェートを生成する。次いでヌクレオチドトリホスフェートをトリエチルアンモニウム塩より安定なナトリウム塩として沈澱させ、分解なしに貯蔵することができる。ヌクレオシドのヌクレオチドトリホスフェートへの誘導化は、実施例10において詳細に説明されている。
本発明のプテリジン誘導体の合成は実施例に詳細に記載されている。特に、式III ，VI，IX，ＸおよびＸＩのプテリジンヌクレオチドの合成は、それぞれ、実施例１〜５において例示されている。式IV，Ｖ，VIIIおよびVII のプテリジンヌクレオチドホスホアミダイトの合成は、実施例６〜９において例示されている。プテリジンヌクレオシドのプテリジンヌクレオチドトリホスフェートへの変換は、実施例10において例示されている。特許請求するプテリジンヌクレオチドの１つを組込んだジオキシオリゴヌクレオチドの合成、切断および脱保護は実施例11において例示されている。最後に、インテグラーゼ活性についてのアッセイにおける特許請求するオリゴヌクレオチドの使用は実施例12において例示されている。下記の実施例により、本発明を例示するが、これらの実施例は本発明を限定しない。
実施例１. 式III のヌクレオシド：４−アミノ−２−フェニル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−７−オン（５）の合成
ａ）イソニトロソマロノニトリルの銀塩（１）
工程（ｂ）において使用するイソニトロソマロノニトリルの銀塩の合成は、Longo, Gazz. Chim. Ital., 61 : 575 (1931) に記載された。酢酸およびH２O(１／１）の 120mlの溶液に、20ｇ（0.3mole)（Fluka AG、スイス国）を添加した。この混合物を、マロノニトリルが溶解するまで加熱および撹拌した。次いでこの混合物を０℃に冷却し、 100mlのH２O 中の23ｇ（0.33mole）の亜硝酸ナトリウムの溶液を撹拌しながらゆっくり添加した。次いでこの溶液を室温において暗所で12時間撹拌した。このオレンジ色溶液に、 100mlのH２O中の52ｇ(0.3mole）の溶液を添加した。生ずる沈殿を集め、低い真空下に濾過し、エーテルで洗浄し、次いでデシケーター中でP4O10 の存在下に真空下に乾燥すると、１が59.7ｇ（99％の収率、融点＞ 350℃）。
ａ）イソニトロソマロノニトリルの銀塩（１）
工程（ｂ）において使用するイソニトロソマロノニトリルの銀塩の合成は、Longo, Gazz. Chim. Ital., 61 : 575 (1931) に記載された。酢酸およびH２O(１／１）の 120mlの溶液に、20ｇ（0.3mole)（Fluka AG、スイス国）を添加した。この混合物を、マロノニトリルが溶解するまで加熱および撹拌した。次いでこの混合物を０℃に冷却し、 100mlのH２O 中の23ｇ（0.33mole）の亜硝酸ナトリウムの溶液を撹拌しながらゆっくり添加した。次いでこの溶液を室温において暗所で12時間撹拌した。このオレンジ色溶液に、 100mlのH２O中の52ｇ(0.3mole）の溶液を添加した。生ずる沈殿を集め、低い真空下に濾過し、エーテルで洗浄し、次いでデシケーター中でP4O10 の存在下に真空下に乾燥すると、１が59.7ｇ（99％の収率、融点＞ 350℃）。
ｂ）２−フェニル−４，６−ジアミノ−５−ニトロソピリミジン（２）
２−フェニル−4,6−ジアミノ−５−ニトロソピリミジンの合成は、Taylor et al., J. Am. Chem. Soc., 81 : 2442-2448（1959）に記載された。小さい部分、0.11moleの微細なイソニトロソマロノニトリルの銀塩（１）を、 100mlのメタノール中の 0.1moleのベンゾアミジンハイドロハライドの撹拌溶液に添加した。添加の完結後、１時間撹拌した。この時まで、黄色銀塩は消失し、白色ハロゲン化銀の重い沈殿が分離した。反応混合物を濾過し、黄色濾液を室温において減圧下に蒸発乾固した。粗生成物の収率はほぼ定量的であった。酢酸エチルから再結晶化させると、イソニトロソマロノニトリルの純粋なベンゾアミジン塩が淡黄色結晶の形態で得られた（融点 151−150 ℃）。C10H5N5Oについての分析、計算値：Ｃ，55.8；Ｈ，4.2 ；Ｎ，32.5。実測値：Ｃ，55.7；Ｈ，4.0 ；Ｎ，32.6。
２−フェニル−4,6−ジアミノ−５−ニトロソピリミジンの合成は、Taylor et al., J. Am. Chem. Soc., 81 : 2442-2448（1959）に記載された。小さい部分、0.11moleの微細なイソニトロソマロノニトリルの銀塩（１）を、 100mlのメタノール中の 0.1moleのベンゾアミジンハイドロハライドの撹拌溶液に添加した。添加の完結後、１時間撹拌した。この時まで、黄色銀塩は消失し、白色ハロゲン化銀の重い沈殿が分離した。反応混合物を濾過し、黄色濾液を室温において減圧下に蒸発乾固した。粗生成物の収率はほぼ定量的であった。酢酸エチルから再結晶化させると、イソニトロソマロノニトリルの純粋なベンゾアミジン塩が淡黄色結晶の形態で得られた（融点 151−150 ℃）。C10H5N5Oについての分析、計算値：Ｃ，55.8；Ｈ，4.2 ；Ｎ，32.5。実測値：Ｃ，55.7；Ｈ，4.0 ；Ｎ，32.6。
10mlの２ｇのα−ピコリン中のイソニトロソマロノニトリルのベンゾアミジン塩の混合物を 125〜130 ℃に 0.5時間加熱した。塩は急速に溶解し、この混合物の色は除々に緑色になった。次いで反応混合物を冷却し、H2O で希釈した。放置後濾過すると、２が２−フェニル−5,6−ジアミノ−５−ニトロソピリミジンの青色がかった結晶として得られた（融点 243−244 ℃）。C10H9N5Oについての分析、計算値：Ｃ，55.8；Ｈ，4.2 ；Ｎ，32.5。実測値：Ｃ，55.9；Ｈ，3.9 ；Ｎ，32.6。
ｃ）４−アミノ−２−フェニル−プテリジン−７−オン（３）
４−アミノ−２−フェニル−プテリジン−７−オンは、Harris et al., Liebigs Ann. Chem. 1457-1468 (1981)に記載された。 200mlのメタノールに、2.15ｇ（10mole）の２−フェニル−４，６−ジアミノ−５−ニトロソピリミジン（２）を添加した。反応が止むまで（ほぼ２時間）、５％炭素担持パラジウム触媒の存在下に水素を使用して混合物を撹拌機中で室温において水和した。無色の溶液を濾過し、20mlのH2O 中の１ｇのNaの溶液と一緒にし、加熱沸騰させ、次いで活性炭で処理し、熱時濾過した。濾液を氷酢酸でpH５にし、放置し、冷却した。沈殿をジメチルホルムアミドから再結晶化させると、３が 1.0ｇの褐色がかった結晶として得られた（42％の収率、融点 330−332 ℃) 。
４−アミノ−２−フェニル−プテリジン−７−オンは、Harris et al., Liebigs Ann. Chem. 1457-1468 (1981)に記載された。 200mlのメタノールに、2.15ｇ（10mole）の２−フェニル−４，６−ジアミノ−５−ニトロソピリミジン（２）を添加した。反応が止むまで（ほぼ２時間）、５％炭素担持パラジウム触媒の存在下に水素を使用して混合物を撹拌機中で室温において水和した。無色の溶液を濾過し、20mlのH2O 中の１ｇのNaの溶液と一緒にし、加熱沸騰させ、次いで活性炭で処理し、熱時濾過した。濾液を氷酢酸でpH５にし、放置し、冷却した。沈殿をジメチルホルムアミドから再結晶化させると、３が 1.0ｇの褐色がかった結晶として得られた（42％の収率、融点 330−332 ℃) 。
ｄ）４−アミノ−２−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（４）
1.0ｇ(4.2mole）の４−アミノ−２−フェニル−プテリジン−７−オン（３）および数個の結晶の硫酸アンモニウムの混合物を、 100mlのヘキサメチルジシラザン（HMDS）中で還流下に４時間加熱した。冷却後、HMDSを真空下に蒸留し、残留物をう100mの乾燥トルエン中に溶解した。この混合物に、2.17ｇ(4.6mole）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（実施例３におけるようにして製造した、トルイル誘導体について工程（ａ））および 0.476ｇ(2.3mole）の銀過塩素酸塩を添加した。次いでこの溶液を無水条件下に室温において24時間撹拌し、次いで 200mlのCH2Cl2で希釈した。生ずるAgCl沈殿をシリカで濾過し、濾液を 100mlの飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液で処理し、次いで 100mlの飽和塩化ナトリウム溶液で処理した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、次いで濾液を蒸発させた。
1.0ｇ(4.2mole）の４−アミノ−２−フェニル−プテリジン−７−オン（３）および数個の結晶の硫酸アンモニウムの混合物を、 100mlのヘキサメチルジシラザン（HMDS）中で還流下に４時間加熱した。冷却後、HMDSを真空下に蒸留し、残留物をう100mの乾燥トルエン中に溶解した。この混合物に、2.17ｇ(4.6mole）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（実施例３におけるようにして製造した、トルイル誘導体について工程（ａ））および 0.476ｇ(2.3mole）の銀過塩素酸塩を添加した。次いでこの溶液を無水条件下に室温において24時間撹拌し、次いで 200mlのCH2Cl2で希釈した。生ずるAgCl沈殿をシリカで濾過し、濾液を 100mlの飽和水性炭酸水素ナトリウム溶液で処理し、次いで 100mlの飽和塩化ナトリウム溶液で処理した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、次いで濾液を蒸発させた。
残留物を少量の酢酸エチル中に溶解し、シリカゲルのカラム上に置き、次いでｎ−ヘキサン／酢酸エチル5:1を溶離した。主要な画分を集め、蒸発させ、残留物をCHCl３ ／メタノールから２回再結晶化させると、４が1.43ｇ（54％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 175−178 ℃）。C31H23Cl2N5O6 (632.5）についての分析：Ｃ，58.87 ；Ｈ，3.67；Ｎ，11.07 。実測値：Ｃ，58.62 ；Ｈ，3.74；Ｎ，11.10 。
ｅ）４−アミノ−２−フェニル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−７−オン（５）
50mlの無水メタン中の10mgのナトリウムの溶液に、 0.632ｇ（１mmol）の４−アミノ−２−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（４）を添加した。この溶液を室温において１時間撹拌した。次いでこの溶液を AcOHの添加により中和し、次いで蒸発させた。残留物をメタノール／H2O から再結晶化させると、５が 0.323ｇ（91％の収率）の無色の結晶（融点 169−172 ℃）。C17H17N5O4 (355.4）についての分析：Ｃ，57.46 ；Ｈ，4.81；Ｎ，19.71 。実測値：Ｃ，57.04 ；Ｈ，4.88；Ｎ，20.01 。
50mlの無水メタン中の10mgのナトリウムの溶液に、 0.632ｇ（１mmol）の４−アミノ−２−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（４）を添加した。この溶液を室温において１時間撹拌した。次いでこの溶液を AcOHの添加により中和し、次いで蒸発させた。残留物をメタノール／H2O から再結晶化させると、５が 0.323ｇ（91％の収率）の無色の結晶（融点 169−172 ℃）。C17H17N5O4 (355.4）についての分析：Ｃ，57.46 ；Ｈ，4.81；Ｎ，19.71 。実測値：Ｃ，57.04 ；Ｈ，4.88；Ｎ，20.01 。
実施例２. 式IVのヌクレオシド：２’−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル−イソキサントプテリン（15）の合成
2,4,5−トリアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（９）の合成、工程（ａ）〜（ｄ）は、Pfeiderer et al., Chem. Ber., 94 : 12-18（1961）に記載された。
ａ）６−クロロ−2,4−ジアミノ−ピリミジン（６）
500ml)新しく蒸留したPOCl3 に80〜90℃の温度において、 100ｇの2,4−ジアミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン（Aldrich、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）を添加した。この混合物を、ほぼ２時間後、混合物が完全に溶解するまで、還流下に蒸留した。残留POCl3 を真空を使用して吸引し、残留するシロップ状物を氷上にゆっくり排出した。高度に酸性の溶液を濃アルミン酸ナトリウム溶液で冷却し、最後の段階において固体状炭酸ナトリウムを使用して、注意して中和した。完結したとき、溶液の合計の体積はほぼ1800mlである。冷却すると、黄色がかった沈殿が分離し、これを吸引し、真空デシケーター中で乾燥した。大部分非有機塩を含有する最終生成物を３回沸騰させ、各回１リットルのアセトン（活性炭を添加した）を使用する。抽出液を冷却し、生ずる透明な沈殿を集める。濾液を蒸発させると、追加の画分が得られる。
2,4,5−トリアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（９）の合成、工程（ａ）〜（ｄ）は、Pfeiderer et al., Chem. Ber., 94 : 12-18（1961）に記載された。
ａ）６−クロロ−2,4−ジアミノ−ピリミジン（６）
500ml)新しく蒸留したPOCl3 に80〜90℃の温度において、 100ｇの2,4−ジアミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン（Aldrich、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）を添加した。この混合物を、ほぼ２時間後、混合物が完全に溶解するまで、還流下に蒸留した。残留POCl3 を真空を使用して吸引し、残留するシロップ状物を氷上にゆっくり排出した。高度に酸性の溶液を濃アルミン酸ナトリウム溶液で冷却し、最後の段階において固体状炭酸ナトリウムを使用して、注意して中和した。完結したとき、溶液の合計の体積はほぼ1800mlである。冷却すると、黄色がかった沈殿が分離し、これを吸引し、真空デシケーター中で乾燥した。大部分非有機塩を含有する最終生成物を３回沸騰させ、各回１リットルのアセトン（活性炭を添加した）を使用する。抽出液を冷却し、生ずる透明な沈殿を集める。濾液を蒸発させると、追加の画分が得られる。
ｂ）2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（７）
100mlのベンジルアルコール中の 3.8ｇの溶液を、油浴中で、21.6ｇの６−クロロ−２，４−ジアミノ−ピリミジン（６）とともに 160℃において３時間加熱する。余分のアルコールを真空下に蒸留する。
100mlのベンジルアルコール中の 3.8ｇの溶液を、油浴中で、21.6ｇの６−クロロ−２，４−ジアミノ−ピリミジン（６）とともに 160℃において３時間加熱する。余分のアルコールを真空下に蒸留する。
ａ）油状残留物を温水でよく洗浄し、これによりゴム状物質が得られる。この温かい溶液を温かい30％酢酸中に溶解し、活性炭で脱色し、希薄アンモニアでpH６にする。ゆっくり冷却すると、油状塊が最初に分離し、次いで結晶質物質が分離する。結晶を撹拌、デカンテーションおよび濾過により凝固した油状物から分離する。次いで油状残留物を数回加熱および冷却して結晶化させる。プールした画分を、それらがいったん真空デシケーター中で乾燥させると、少量のクロロホルム中に溶解し、次いで活性炭および酸化アルミニウムで処理し、再び−20℃以下の温度に強く凍結することによって分離する。この方法を数回反復した後、クロマトグラフィー的に純粋な７が得られる。
ｂ）別精製法において、アルコールを含有しない反応残留物をベンゾール中に溶解し、活性炭で処理し、濾液をよく蒸発させる。冷却したとき、分離する生成物をベンゾールから数回再結晶化させると、７が得られる。
ｃ）５−ニトロソ−2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（８）
250mlの温かい30％酢酸中の16ｇの2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（７）の溶液に、25mlのH2O 中の７ｇの亜硝酸ナトリウムの溶液を添加する。亜硝酸ナトリウムの溶液を70〜80℃に保持し、連続的に撹拌しながら滴下する。ヨウ化カリウム澱粉紙が陽性の反応を示すまで、亜硝酸ナトリウム溶液を添加する。紫−赤色の沈殿を冷却し、吸引し、次いでエタノールまたはアセトンから再結晶化させると、８が得られる。
250mlの温かい30％酢酸中の16ｇの2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（７）の溶液に、25mlのH2O 中の７ｇの亜硝酸ナトリウムの溶液を添加する。亜硝酸ナトリウムの溶液を70〜80℃に保持し、連続的に撹拌しながら滴下する。ヨウ化カリウム澱粉紙が陽性の反応を示すまで、亜硝酸ナトリウム溶液を添加する。紫−赤色の沈殿を冷却し、吸引し、次いでエタノールまたはアセトンから再結晶化させると、８が得られる。
ｄ）2,4,5−トリアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（９）
ナトリウムジチオナイトを 300mlのH2O 中の17ｇの５−ニトロソ−2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（８）の懸濁液に50℃において、赤色ニトロソ化合物が完全に還元されるまで、少しずつ添加する。水性アンモニアの添加により、遊離塩基を分離させる。粗生成物を冷却し、吸引し、活性炭および微量のナトリウムジチオナイトを添加した水から結晶化させると、９が得られる。
ナトリウムジチオナイトを 300mlのH2O 中の17ｇの５−ニトロソ−2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（８）の懸濁液に50℃において、赤色ニトロソ化合物が完全に還元されるまで、少しずつ添加する。水性アンモニアの添加により、遊離塩基を分離させる。粗生成物を冷却し、吸引し、活性炭および微量のナトリウムジチオナイトを添加した水から結晶化させると、９が得られる。
ｅ）2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−エトキシカルボニルメチレンイミノ−ピリミジン（10）
2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−エトキシカルボニルメチレンイミノ−ピリミジンの合成は、PfleidererおよびReisser, Chem. Ber., 95 : 1621−1628 (1961) に記載されている。 250mlのH2O 中の2.39ｇの2,4,5−トリアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（９）の懸濁液を、室温において３ｇのエチルグリオキシレート−ヘミエチルアセタール中で３時間撹拌する。生ずる鮮明な黄色沈殿を低い真空下に濾過し、洗浄し、 100℃の温度において乾燥する。沈殿をエタノールから再結晶化させると、10が得られる。
2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−エトキシカルボニルメチレンイミノ−ピリミジンの合成は、PfleidererおよびReisser, Chem. Ber., 95 : 1621−1628 (1961) に記載されている。 250mlのH2O 中の2.39ｇの2,4,5−トリアミノ−６−ベンジルオキシ−ピリミジン（９）の懸濁液を、室温において３ｇのエチルグリオキシレート−ヘミエチルアセタール中で３時間撹拌する。生ずる鮮明な黄色沈殿を低い真空下に濾過し、洗浄し、 100℃の温度において乾燥する。沈殿をエタノールから再結晶化させると、10が得られる。
ｆ）２−アミノ−４−ベンジルオキシプテリジン−７−オン（11）
２−アミノ−４−ベンジルオキシプテリジン−７−オンの合成は、PfleidererおよびReisser, Chem. Ber., 95 : 1621-1628 (1961)に記載されている。 190mlのエタノール中１ｇの2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−エトキシカルボニルメチレンイミノ−ピリミジン（10）の溶液に30mlの１N NaHCO3を添加する。この溶液を還流下に１時間蒸留し、この溶液を少量の残留する未溶解物質から加熱分離する。20mlの氷酢酸で濾液を酸性化することによって沈殿するプテリジンを冷却後吸引し、ベンジルアルコールから再結晶化させると、11が得られる。
２−アミノ−４−ベンジルオキシプテリジン−７−オンの合成は、PfleidererおよびReisser, Chem. Ber., 95 : 1621-1628 (1961)に記載されている。 190mlのエタノール中１ｇの2,4−ジアミノ−６−ベンジルオキシ−５−エトキシカルボニルメチレンイミノ−ピリミジン（10）の溶液に30mlの１N NaHCO3を添加する。この溶液を還流下に１時間蒸留し、この溶液を少量の残留する未溶解物質から加熱分離する。20mlの氷酢酸で濾液を酸性化することによって沈殿するプテリジンを冷却後吸引し、ベンジルアルコールから再結晶化させると、11が得られる。
ｇ）４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−プテリジン−７−オン（12）
100mlの無水DMF に、2.88ｇ（10.7mmol）の２−アミノ−４−ベンジルオキシプテリジン−７−オン（11）および1.92ml（11.2mmol）のN,N−ジメチルホルムアミドジエチルアセタールを添加する。この混合物を室温において４時間撹拌し、その時間までに混合物は透明な溶液となる。DMF を高真空下に50℃以下において蒸留する。次いでこの残留物に、１mlのメタノールおよび50mlのジエチルエーテルの溶液を添加する。10分後、沈殿を集める。濾液を再び蒸発乾固し、生ずる残留物を10mlのジエチルエーテル中で撹拌すると、第２沈殿が得られる。沈殿をプールし、高真空下に乾燥すると、12が得られる。
100mlの無水DMF に、2.88ｇ（10.7mmol）の２−アミノ−４−ベンジルオキシプテリジン−７−オン（11）および1.92ml（11.2mmol）のN,N−ジメチルホルムアミドジエチルアセタールを添加する。この混合物を室温において４時間撹拌し、その時間までに混合物は透明な溶液となる。DMF を高真空下に50℃以下において蒸留する。次いでこの残留物に、１mlのメタノールおよび50mlのジエチルエーテルの溶液を添加する。10分後、沈殿を集める。濾液を再び蒸発乾固し、生ずる残留物を10mlのジエチルエーテル中で撹拌すると、第２沈殿が得られる。沈殿をプールし、高真空下に乾燥すると、12が得られる。
ｈ）４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−８−（２−デオキシ−3,5−ジ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（13）
3.24ｇ（10mmol）の４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−プテリジン−７−オン（12）に、 100mlの無水アセトニトリルを添加する。次いで1.87ml（12.5mmol）のDBU を添加し、この溶液を約10分後透明になるまで撹拌する。この溶液に、 4.5ｇ（11mmol）の１−クロロ−２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノースを除々に添加する。次いで30分間撹拌する。生ずる沈殿を集めると、乾燥後、α，β−アノマー混合物が得られる。濾液を蒸発乾固し、残留物を 100mlのCH2Cl2 中に溶解し、H2O で２回洗浄してDBU を除去する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで蒸発させる。生ずる残留物をトルエン／酢酸エチル１／３中のシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製する。主要な画分を集め、蒸発させると、α，β−アノマー混合物が得られる。両方の収穫物をプールし、酢酸エチル／メタノール20／１から再結晶化させると、13が得られる。
3.24ｇ（10mmol）の４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−プテリジン−７−オン（12）に、 100mlの無水アセトニトリルを添加する。次いで1.87ml（12.5mmol）のDBU を添加し、この溶液を約10分後透明になるまで撹拌する。この溶液に、 4.5ｇ（11mmol）の１−クロロ−２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノースを除々に添加する。次いで30分間撹拌する。生ずる沈殿を集めると、乾燥後、α，β−アノマー混合物が得られる。濾液を蒸発乾固し、残留物を 100mlのCH2Cl2 中に溶解し、H2O で２回洗浄してDBU を除去する。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで蒸発させる。生ずる残留物をトルエン／酢酸エチル１／３中のシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製する。主要な画分を集め、蒸発させると、α，β−アノマー混合物が得られる。両方の収穫物をプールし、酢酸エチル／メタノール20／１から再結晶化させると、13が得られる。
ｉ）８−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（14）
100mlのメタノール中に、3.38ｇ（５mmol）の４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−８−（２−デオキシ−3,5−ジ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（13）を溶解させる。次いで 0.2ｇの５％炭素担持パラジウムを添加し、この混合物を水素雰囲気下に１日間震盪させる。触媒を濾過し、濾液を蒸発乾固させる。残留物をメタノールから再結晶化させると、14が得られる。
100mlのメタノール中に、3.38ｇ（５mmol）の４−ベンジルオキシ−２−（N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ）−８−（２−デオキシ−3,5−ジ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（13）を溶解させる。次いで 0.2ｇの５％炭素担持パラジウムを添加し、この混合物を水素雰囲気下に１日間震盪させる。触媒を濾過し、濾液を蒸発乾固させる。残留物をメタノールから再結晶化させると、14が得られる。
ｊ）８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（15）
30mlのメタノール中のアンモニアの飽和溶液に、 1.0ｇ（２mmol）の８−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（14）を添加する。この混合物を室温において一夜撹拌する。次いでこの溶液を蒸発乾固し、残留物を少量のH2O から数滴の酢酸の添加により再結晶化させる。冷却すると、15が得られる。
30mlのメタノール中のアンモニアの飽和溶液に、 1.0ｇ（２mmol）の８−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（14）を添加する。この混合物を室温において一夜撹拌する。次いでこの溶液を蒸発乾固し、残留物を少量のH2O から数滴の酢酸の添加により再結晶化させる。冷却すると、15が得られる。
実施例３. 式IXのヌクレオシド：４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（23）の合成
ａ）２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシル−クロライド（16）
工程（ｅ）において使用する２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシルクロライドは、Hoffer, Chem. Ber., 93 : 2777-2781 (1960) に記載されている。 243mlのメタノールに、13.6ｇ(0.1mole）の２−デオキシ−Ｄ−リボース（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）および27mlの１％メタノール性 HClを添加する。この混合物を12〜15分間密閉放置してメチルグルコシドを形成する。次いで、 3.5ｇの炭酸銀を混入してすべての炭化水素を直ちに結合させる。
ａ）２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシル−クロライド（16）
工程（ｅ）において使用する２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシルクロライドは、Hoffer, Chem. Ber., 93 : 2777-2781 (1960) に記載されている。 243mlのメタノールに、13.6ｇ(0.1mole）の２−デオキシ−Ｄ−リボース（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）および27mlの１％メタノール性 HClを添加する。この混合物を12〜15分間密閉放置してメチルグルコシドを形成する。次いで、 3.5ｇの炭酸銀を混入してすべての炭化水素を直ちに結合させる。
透明な濾過溶液を真空下に沸騰させると、シロップ様コンシステンシーが得られ、真空下に沸騰を反復する同時に少量の乾燥ピリジンを添加して、残留するメタノールを分離する。最後に、混合物を80mlのピリジン中に溶解し、34ｇ（0.22mole）のｐ−トルイルクロライドでアシル化する。次いでこの混合物を40〜50℃に２時間加熱するか、または室温において一夜放置する。水を添加し、次いで混合物 200mlのエーテルで分配する。次いでエーテル溶液をH２O 、次いで希薄硫酸、次いで炭酸水素カリウム溶液で洗浄してピリジンを除去する。次いで混合物を真空下に沸騰して、蜂蜜−黄色のシロップ状物を形成する。このシロップ状物から、結晶化した３，５−ジ−ｐ−トルイル−メチル−２−デオキシ−Ｄ−リボフラノシドをシード添加により得ることができる。
クロライドを単離するために、シロップ状物を20〜50mlの氷酢酸中に溶解し、この溶液を80mlの塩化水素で飽和させた酢酸と一緒にビーカーに入れる。この溶液を10℃に保持し、塩化水素導入して、混合物を約10分間後濃厚な結晶質ペーストに固化させる。30分以内に、結晶質物質をフィルター上で低い真空下に無水エーテルで洗浄する。洗浄工程は好ましくは２回反復する。次いで、この物質を真空デシケーター中でソーダライムおよび五酸化リンで乾燥し、そしてこの物質は数週間この状態で安定に止まる。所望ならば、２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシル−クロライド（16）をトルエンまたは四塩化炭素から再結晶化させる。
ｂ）２−ヒドロキシ−4,6−ジアミノピリミジンサルフェート（17）
4,6−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェートの合成は、Bendich et al., J. Amer. Chem. Soc., 70 : 3109-3113(1948)に記載されている。5.40ｇの4,6−ジアミノ−２−チオピリミジン（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）および 5.5ｇのクロロ酢酸に、75mlの沸騰するH2O を添加する。この溶液を1.25時間還流させる。冷却しないで、 9.5mlの18Ｎ硫酸を添加し、還流をさらに１時間続ける。ノーライトを添加し、冷却すると、17が得られる。
4,6−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェートの合成は、Bendich et al., J. Amer. Chem. Soc., 70 : 3109-3113(1948)に記載されている。5.40ｇの4,6−ジアミノ−２−チオピリミジン（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）および 5.5ｇのクロロ酢酸に、75mlの沸騰するH2O を添加する。この溶液を1.25時間還流させる。冷却しないで、 9.5mlの18Ｎ硫酸を添加し、還流をさらに１時間続ける。ノーライトを添加し、冷却すると、17が得られる。
ｃ）4,6−ジアミノ−５−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジン（18）
4,6−ジアミノ−５−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンの合成は、Pfleiderer, Chem. Ber. 90 : 2272-2276 (1957)に記載されている。54mlのホルムアミドに９ｇの４，６−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェート（17）および4.5 ｇの亜硝酸ナトリウムを添加する。この溶液を60℃に加熱し、10mlのギ酸を滴下する。これは赤色懸濁液を形成し、これを 110℃にさらに加熱する。黄色化が得られるまで、少量のナトリウムジチオナイトを添加する。この時間の間に、温度は 130℃を超えてはならない。この混合物を冷却し、沈殿を高真空下に濾過する。最後に、18を大量のH２O （動物活性炭を含む）から再結晶化させる。
4,6−ジアミノ−５−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンの合成は、Pfleiderer, Chem. Ber. 90 : 2272-2276 (1957)に記載されている。54mlのホルムアミドに９ｇの４，６−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェート（17）および4.5 ｇの亜硝酸ナトリウムを添加する。この溶液を60℃に加熱し、10mlのギ酸を滴下する。これは赤色懸濁液を形成し、これを 110℃にさらに加熱する。黄色化が得られるまで、少量のナトリウムジチオナイトを添加する。この時間の間に、温度は 130℃を超えてはならない。この混合物を冷却し、沈殿を高真空下に濾過する。最後に、18を大量のH２O （動物活性炭を含む）から再結晶化させる。
ｄ）4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩（19）
4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩の合成は、Pfleiderer, Chem. Ber. 90 : 2272-2276 (1957)に記載されている。３ｇの4,6−ジアミノ−５−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジン（18）に、50mlの10％〜15％のメタノール性 HClを添加する。この溶液を７時間還流させ、次いで放冷する。冷却すると、混合物を低い真空下に濾過し、次いでアルコール中で洗浄し、乾燥チャンバー中で乾燥する。次いでこの塩酸塩を室温においてH2O 中に溶解し、１Ｎアンモニアの添加により中和する。生ずる沈殿を集め、エタノールで洗浄し、乾燥チャンバー中で乾燥すると、19が得られる。
4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩の合成は、Pfleiderer, Chem. Ber. 90 : 2272-2276 (1957)に記載されている。３ｇの4,6−ジアミノ−５−ホルミルアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジン（18）に、50mlの10％〜15％のメタノール性 HClを添加する。この溶液を７時間還流させ、次いで放冷する。冷却すると、混合物を低い真空下に濾過し、次いでアルコール中で洗浄し、乾燥チャンバー中で乾燥する。次いでこの塩酸塩を室温においてH2O 中に溶解し、１Ｎアンモニアの添加により中和する。生ずる沈殿を集め、エタノールで洗浄し、乾燥チャンバー中で乾燥すると、19が得られる。
ｅ）４−アミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（20）
50mlの水中に、1.77ｇ（0.01mole）の4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩（19）を溶解する。溶液のpHを５に調節し、次いで４mlの40％水性メチルグリオキサル（FLUKA AG、スイス国）を添加し、この溶液を還流下に30分間加熱する。生ずる沈殿を集め、大量のH2O から再結晶化させると、20が得られる。
50mlの水中に、1.77ｇ（0.01mole）の4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩（19）を溶解する。溶液のpHを５に調節し、次いで４mlの40％水性メチルグリオキサル（FLUKA AG、スイス国）を添加し、この溶液を還流下に30分間加熱する。生ずる沈殿を集め、大量のH2O から再結晶化させると、20が得られる。
ｆ）４−ベンゾルアミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（21）
20mlのピリジン中に、1.63ｇ（0.01mole）の４−アミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（20）を溶解する。次いで3.12ｇ（0.02mole）の塩化ベンゾイルを、混合物を撹拌しながら滴下する。この混合物を80℃に30分間加熱し、次いで氷上に注ぐ。生ずる沈澱を集め、エタノールおよびエーテルで洗浄し、次いでDMF から再結晶化させると、21が得られる。
20mlのピリジン中に、1.63ｇ（0.01mole）の４−アミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（20）を溶解する。次いで3.12ｇ（0.02mole）の塩化ベンゾイルを、混合物を撹拌しながら滴下する。この混合物を80℃に30分間加熱し、次いで氷上に注ぐ。生ずる沈澱を集め、エタノールおよびエーテルで洗浄し、次いでDMF から再結晶化させると、21が得られる。
ｇ）４−ベンゾイルアミノ−１（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（22）
60mlの無水アセトニトリルに、2.83ｇ（0.01mmol）の４−ベンゾイルアミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（21）を添加する。次いで 1.5ml（11mmol）の 1.8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデク−７−エン（DBU)を添加し、この混合物を室温において15分間撹拌する。撹拌後4.26ｇ（11mmol）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシルクロライドを溶液に添加し、室温において１時間撹拌する。次いでこの溶液を蒸発乾固し、残留物をCHCl3 中に溶解し、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥する。小さい体積に濃縮した後、物質を酢酸エチル／アセトン４／１中のシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製する。主要な画分を蒸発させ、残留物をエタノールから再結晶化させると、22が得られる。
60mlの無水アセトニトリルに、2.83ｇ（0.01mmol）の４−ベンゾイルアミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（21）を添加する。次いで 1.5ml（11mmol）の 1.8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデク−７−エン（DBU)を添加し、この混合物を室温において15分間撹拌する。撹拌後4.26ｇ（11mmol）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシルクロライドを溶液に添加し、室温において１時間撹拌する。次いでこの溶液を蒸発乾固し、残留物をCHCl3 中に溶解し、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥する。小さい体積に濃縮した後、物質を酢酸エチル／アセトン４／１中のシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製する。主要な画分を蒸発させ、残留物をエタノールから再結晶化させると、22が得られる。
ｈ）４−アミノ−１（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（23）
50mlの飽和メタノール性アンモニアに、1.65ｇ(0.005mole）の４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（22）を添加する。この混合物を室温において一夜撹拌する。次いで混合物を蒸発乾固し、残留物をエタノール／H2O 20：１から再結晶化させると、２３が得られる。
50mlの飽和メタノール性アンモニアに、1.65ｇ(0.005mole）の４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（22）を添加する。この混合物を室温において一夜撹拌する。次いで混合物を蒸発乾固し、残留物をエタノール／H2O 20：１から再結晶化させると、２３が得られる。
実施例４. 式Ｘのヌクレオシド：４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチル−プテリジン−２−オン（28）の合成
ａ）メチルグリオキサルモノアルドキシム（24）
メチルグリオキサルアルドキシムは、G. Charrier Gazz. Chim.Italy 37 : 145 (1907) のプロトコールに従い合成することができる。30mlの酢酸／H2O 溶液（1/1）に 5.8ｇ(0.1mole）のアセトンを添加する。次いでこの溶液を０℃に冷却する。20mlのH2O 中の 7.6ｇ（0.11mole）の亜硝酸ナトリウムの溶液を撹拌しながら滴下する。次いでこの溶液を室温においてさらに３時間撹拌し、次いで真空下に注意して蒸発させる。残留物をベンゼンで抽出し、部分的に蒸発させると、24が無色の結晶として得られる。結晶を高真空下に昇華によりさらに精製することができる。
ａ）メチルグリオキサルモノアルドキシム（24）
メチルグリオキサルアルドキシムは、G. Charrier Gazz. Chim.Italy 37 : 145 (1907) のプロトコールに従い合成することができる。30mlの酢酸／H2O 溶液（1/1）に 5.8ｇ(0.1mole）のアセトンを添加する。次いでこの溶液を０℃に冷却する。20mlのH2O 中の 7.6ｇ（0.11mole）の亜硝酸ナトリウムの溶液を撹拌しながら滴下する。次いでこの溶液を室温においてさらに３時間撹拌し、次いで真空下に注意して蒸発させる。残留物をベンゼンで抽出し、部分的に蒸発させると、24が無色の結晶として得られる。結晶を高真空下に昇華によりさらに精製することができる。
ｂ）４−アミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（25）
50mlのH2O に、1.77ｇ（0.01mole）の4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩（19）（実施例３参照）を添加する。pHを５に調節し、混合物を撹拌しながら、1.74ｇ（0.02mole）のメチルグリオキサルモノアルドキシム（24）を添加する。対応するシッフ塩基の生ずる沈澱を集め、次いで25mlの80％硫酸中に溶解し、30分間 100℃に加熱する。冷却した後、この混合物を氷上に注ぎ、次いでNaHCO３により注意して中和し、これにより沈澱が形成する。生成物を濾過し、次いで大量のH2O から再結晶化させると、25が得られる。
50mlのH2O に、1.77ｇ（0.01mole）の4,5,6−トリアミノ−ピリミジン−２−オン塩酸塩（19）（実施例３参照）を添加する。pHを５に調節し、混合物を撹拌しながら、1.74ｇ（0.02mole）のメチルグリオキサルモノアルドキシム（24）を添加する。対応するシッフ塩基の生ずる沈澱を集め、次いで25mlの80％硫酸中に溶解し、30分間 100℃に加熱する。冷却した後、この混合物を氷上に注ぎ、次いでNaHCO３により注意して中和し、これにより沈澱が形成する。生成物を濾過し、次いで大量のH2O から再結晶化させると、25が得られる。
ｃ）４−ベンゾイルアミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（26）
４−ベンゾイルアミノ−６−メチル−プテリジン−２−オンの合成は、実施例３、工程（ｄ）におけるようにして、４−アミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（25）を４−アミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（20）の代わりに使用して実施する。
４−ベンゾイルアミノ−６−メチル−プテリジン−２−オンの合成は、実施例３、工程（ｄ）におけるようにして、４−アミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（25）を４−アミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（20）の代わりに使用して実施する。
ｄ）４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルプテリジン−２−オン（27）
４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルプテリジン−２−オンの合成は、実施例3 、工程（ｅ）におけるようにして、４−ベンゾイルアミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（26）を４−ベンゾイルアミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（21）の代わりに使用して実施する。
４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルプテリジン−２−オンの合成は、実施例3 、工程（ｅ）におけるようにして、４−ベンゾイルアミノ−６−メチル−プテリジン−２−オン（26）を４−ベンゾイルアミノ−７−メチル−プテリジン−２−オン（21）の代わりに使用して実施する。
ｅ）４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチル−プテリジン−２−オン（28）
４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチル−プテリジン−２−オン（27）の合成は、実施例３、工程（ｆ）におけるようにして、４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルプテリジン−２−オン（27）を４−ベンゾイルアミノ−１（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（22）の代わりに使用して実施する。
４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチル−プテリジン−２−オン（27）の合成は、実施例３、工程（ｆ）におけるようにして、４−ベンゾイルアミノ−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−６−メチルプテリジン−２−オン（27）を４−ベンゾイルアミノ−１（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７−メチル−プテリジン−２−オン（22）の代わりに使用して実施する。
実施例５. 式ＸＩのヌクレオシド：４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（32）の合成
ａ）4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）
化合物17、4,6−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェートは、実施例３工程（ｅ）に記載するように合成する。17の4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）への変換は、Bendich et al., J. Amer. Chem. Soc., 70 :3109-3113 (1948)に記載されている。110mlの氷酢酸および 110mlのH2O の混合物に、15.3ｇの非常に微細な17を添加する。
ａ）4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）
化合物17、4,6−ジアミノ−２−ヒドロキシ−ピリミジンサルフェートは、実施例３工程（ｅ）に記載するように合成する。17の4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）への変換は、Bendich et al., J. Amer. Chem. Soc., 70 :3109-3113 (1948)に記載されている。110mlの氷酢酸および 110mlのH2O の混合物に、15.3ｇの非常に微細な17を添加する。
この混合物を約５℃に保持し、25mlのH2O 中の11.0ｇの亜硝酸ナトリウムを一定に撹拌しながら添加する。カーマイン赤色の沈澱を２時間後に集め、３つの小さい部分の冷却H２O で洗浄する。湿潤沈澱を 400mlのH2O の中に懸濁させ、この混合物を３分間沸騰させ、その期間内に物質は漂白される。この溶液に、53mlの18Ｎ硫酸を注意して添加する。この混合物を数分間沸騰させ、ノーライト処理後、濾過し、冷却すると、29が得られ、これは２Ｎ硫酸から再結晶化させることができる。
ｂ）４−アミノ−プテリジン−２−オン（30）
４−アミノ−プテリジン−２−オンの合成は、Taylor et al., J. Amer. Chem. Soc. 71 : 2538-2541 (1949)に記載されている。冷却NaOHでpH５に調節した50mlのH2O 中の 2.0ｇ（0.0084mole）の4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）の溶液に、 3.0ｇ（0.0113mole）のグリオキサルビサルファイトを添加する。反応混合物を加熱沸騰させ、pHを９に調節し、15分間沸騰させる。希塩酸で中和し、冷却し、濾過した後、薄黄褐色固体状物をH2O で、次いでアセトンで洗浄し、真空下に乾燥する。この固体状物を熱 0.5N NaOH中に溶解し、次いでノーライトで処理する。次いで熱濾液を酢酸で酸性化する。最後に、 0.5Ｎ酢酸から再結晶化させると、30が得られる。
ｃ）４−アミノ−１−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（31）
20mlのヘキサメチルジシラザン（HMDS）に2.98ｇ（0.02mole）の４−アミノ−プテリジン−２−オン（30）を添加する。この混合物を還流下に、湿気を排除して、24時間加熱すると、透明な溶液が得られる。過剰のHMDSを真空下に除去すると、１−トリメチルシリルアミノ−２−トリメチルシリルオキシ−プテリジンが粘性油状物として得られる。
４−アミノ−プテリジン−２−オンの合成は、Taylor et al., J. Amer. Chem. Soc. 71 : 2538-2541 (1949)に記載されている。冷却NaOHでpH５に調節した50mlのH2O 中の 2.0ｇ（0.0084mole）の4,5,6−トリアミノ−２−ヒドロキシピリミジンサルフェート（29）の溶液に、 3.0ｇ（0.0113mole）のグリオキサルビサルファイトを添加する。反応混合物を加熱沸騰させ、pHを９に調節し、15分間沸騰させる。希塩酸で中和し、冷却し、濾過した後、薄黄褐色固体状物をH2O で、次いでアセトンで洗浄し、真空下に乾燥する。この固体状物を熱 0.5N NaOH中に溶解し、次いでノーライトで処理する。次いで熱濾液を酢酸で酸性化する。最後に、 0.5Ｎ酢酸から再結晶化させると、30が得られる。
ｃ）４−アミノ−１−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（31）
20mlのヘキサメチルジシラザン（HMDS）に2.98ｇ（0.02mole）の４−アミノ−プテリジン−２−オン（30）を添加する。この混合物を還流下に、湿気を排除して、24時間加熱すると、透明な溶液が得られる。過剰のHMDSを真空下に除去すると、１−トリメチルシリルアミノ−２−トリメチルシリルオキシ−プテリジンが粘性油状物として得られる。
残留物を 200mlのベンゼン中に溶解し、次いで9.37ｇ(0.022mole）の２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド、４ｇのHgO 、および４ｇのHgBr2 を添加し、この混合物を５時間還流させる。冷却後、沈澱を濾過し、濾液を蒸発乾固し、残留物を 100mlのCHCl3 中に溶解する。この溶液を２回 100mlの20％Klで抽出する。次いで有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、再び蒸発させ、残留物を少量の酢酸エチル中に溶解し、酢酸エチル／アセトン７：３を使用するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにかける。第１画分は過剰の糖を含有し、第２画分はα−アノマーを含有し、そして最後の溶出画分はβ−デオキシリボシドを含有する。蒸発させ、残留物をエタノールから再結晶化させると、31が得られる。
ｄ）４−アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（32）
0.51ｇ（１mmol）の４−アミノ−１−（２−デオキシ3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（31）に、50mlの0.0005Ｎナトリウムメトキシドを添加する。この混合物を室温において24時間撹拌する。次いで、この混合物をAcOHで中和し、蒸発乾固し、２回H2O と共蒸発させる。次いで残留物を50mlのエタノールから再結晶化させると、32が得られる。
0.51ｇ（１mmol）の４−アミノ−１−（２−デオキシ3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（31）に、50mlの0.0005Ｎナトリウムメトキシドを添加する。この混合物を室温において24時間撹拌する。次いで、この混合物をAcOHで中和し、蒸発乾固し、２回H2O と共蒸発させる。次いで残留物を50mlのエタノールから再結晶化させると、32が得られる。
実施例６. 式IVのヌクレオシドのホスホアミダイト：４−アミノ−６−フェニル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン−３’−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（41）の合成
４，６−ジアミノ−５−ニトロソ−ピリミジンの合成、工程（ａ）〜（ｃ）は、Evans et al., J. Chem. Soc., 4106 (1956)に記載された。
４，６−ジアミノ−５−ニトロソ−ピリミジンの合成、工程（ａ）〜（ｃ）は、Evans et al., J. Chem. Soc., 4106 (1956)に記載された。
ａ）4,6ジアミノピリミジン−２−スルフィン酸（33）
２N NaOH(200ml）中の50ｇの4,6−ジアミノ−２−メルカプトピリミジン（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）の溶液に、 750mlの３％過酸化水素溶液を添加した。この溶液を20℃より低い温度に維持した。撹拌をさらに30分間続け、透明な薄黄色溶液を酢酸（約50ml）で酸性化した。沈澱をH２O で洗浄し、空気乾燥すると、33が58ｇ（95％の収率）の灰色アモルファス酸が得られた（融点 168−170 ℃分解）。分析のために、試料を希薄水性アンモニア中に溶解し、酢酸で再沈澱させた。C4H6N4O2Sについての分析：実測値：Ｃ，27.6；Ｈ，3.5 ；Ｎ，32.2。実測値：Ｃ，27.8；Ｈ，3.8 ；Ｎ，32.2。
２N NaOH(200ml）中の50ｇの4,6−ジアミノ−２−メルカプトピリミジン（Aldrich 、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）の溶液に、 750mlの３％過酸化水素溶液を添加した。この溶液を20℃より低い温度に維持した。撹拌をさらに30分間続け、透明な薄黄色溶液を酢酸（約50ml）で酸性化した。沈澱をH２O で洗浄し、空気乾燥すると、33が58ｇ（95％の収率）の灰色アモルファス酸が得られた（融点 168−170 ℃分解）。分析のために、試料を希薄水性アンモニア中に溶解し、酢酸で再沈澱させた。C4H6N4O2Sについての分析：実測値：Ｃ，27.6；Ｈ，3.5 ；Ｎ，32.2。実測値：Ｃ，27.8；Ｈ，3.8 ；Ｎ，32.2。
ｂ）4,6−ジアミノ−ピリミジン塩酸塩（34）
2.5Ｎエタノール性塩化水素(150ml）を含有する 500mlの乾燥エタノールに、50ｇの４，６−ジアミノピリミジン−２−スルフィン酸（33）を添加した。この混合物を30分間震盪した。次いでこの混合物を０℃に冷却し、１時間後、結晶を取り出し、エーテルで洗浄し、乾燥すると、23ｇの薄黄色針状結晶が得られた（融点 196−198 ℃）。もとの濾液を 250mlに濃縮し、次いで 750mlのエーテルを添加すると、それ以上の収穫物の15ｇのほとんど白色の針状結晶が得られた（融点 203−204 ℃）。C4H6N4HClについての分析：実測値：Ｃ，32.8；Ｈ，4.8 ；Ｎ，24.2。実測値：Ｃ，33.3；Ｈ，4.8 ；Ｎ，24.1。
2.5Ｎエタノール性塩化水素(150ml）を含有する 500mlの乾燥エタノールに、50ｇの４，６−ジアミノピリミジン−２−スルフィン酸（33）を添加した。この混合物を30分間震盪した。次いでこの混合物を０℃に冷却し、１時間後、結晶を取り出し、エーテルで洗浄し、乾燥すると、23ｇの薄黄色針状結晶が得られた（融点 196−198 ℃）。もとの濾液を 250mlに濃縮し、次いで 750mlのエーテルを添加すると、それ以上の収穫物の15ｇのほとんど白色の針状結晶が得られた（融点 203−204 ℃）。C4H6N4HClについての分析：実測値：Ｃ，32.8；Ｈ，4.8 ；Ｎ，24.2。実測値：Ｃ，33.3；Ｈ，4.8 ；Ｎ，24.1。
次いでスルフィン酸（５ｇ）を室温において塩酸（15ml，ｄ1.18）に少しずつ添加した。反応は激しく、二酸化硫黄が自由に発生した。塩酸を生ずるスラリーから減圧下に除去した。残留物をアセトンで、次いでエーテルで洗浄すると、4.05ｇの７が得られた（融点 195℃）。試料をスピリットから再結晶化させると、融点は 201−202 ℃上昇した。
ｃ）4,6−ジアミノ−５−ニトロソ−ピリミジン（35）
250mlの２N HClに、 8.0ｇ（55mmol）の4,6−ジアミノ−ピリミジン塩酸塩（34）を添加した。4,6−ジアミノ−ピリミジン塩酸塩を溶解させた。次いでこの溶液を０℃に冷却し、15mlのH2O中に溶解した 4.2ｇ（61mmol）のNaNO2 の溶液を20分以内に撹拌しながら滴下した。０℃においてさらに30分間撹拌し、次いで室温において２時間撹拌した。紫色の溶液をNaHCO3で中和し、沈澱を集め、H2O およびエタノールで洗浄し、乾燥すると、35が 6.3ｇ（82％の収率）の青−紫色の結晶質粉末状物として得られた（融点＞ 350℃）。
250mlの２N HClに、 8.0ｇ（55mmol）の4,6−ジアミノ−ピリミジン塩酸塩（34）を添加した。4,6−ジアミノ−ピリミジン塩酸塩を溶解させた。次いでこの溶液を０℃に冷却し、15mlのH2O中に溶解した 4.2ｇ（61mmol）のNaNO2 の溶液を20分以内に撹拌しながら滴下した。０℃においてさらに30分間撹拌し、次いで室温において２時間撹拌した。紫色の溶液をNaHCO3で中和し、沈澱を集め、H2O およびエタノールで洗浄し、乾燥すると、35が 6.3ｇ（82％の収率）の青−紫色の結晶質粉末状物として得られた（融点＞ 350℃）。
ｄ）４−アミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（36）
４−アミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オンの合成は、Harris et al., Liebigs Ann. Chem. 1457-1468 (1981)に記載された。50mlの無水エタノール中の 0.5Naの溶液に、1.38ｇ（10mmol）の4,6−ジアミノ−５−ニトロソ−ピリミジン（35）および 2.0ｇのフェニル酢酸エチルエステルを添加した。この物質を溶解させ、次いで溶液を還流下に１時間加熱した。沈降した沈澱を冷却し、集めた。次いで沈澱を100 H２O中で加熱し、不溶性ニトロソ化合物から濾過し、次いで希塩酸でpH２に酸性化した。いったんゼラチン状生成物が沈澱すると、それが微結晶質の状態に到達するまで、それを加熱した。次いでゼラチン状生成物をジメチルホルムアミドから再結晶化させると、36が結晶として得られた（融点＞ 320℃）。C12H9N5Oについての分析：実測値：Ｃ，60.24 ；Ｈ，3.79；Ｎ，29.28 。実測値：Ｃ，60.35 ；Ｈ，3.78；Ｎ，29.53 。
４−アミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オンの合成は、Harris et al., Liebigs Ann. Chem. 1457-1468 (1981)に記載された。50mlの無水エタノール中の 0.5Naの溶液に、1.38ｇ（10mmol）の4,6−ジアミノ−５−ニトロソ−ピリミジン（35）および 2.0ｇのフェニル酢酸エチルエステルを添加した。この物質を溶解させ、次いで溶液を還流下に１時間加熱した。沈降した沈澱を冷却し、集めた。次いで沈澱を100 H２O中で加熱し、不溶性ニトロソ化合物から濾過し、次いで希塩酸でpH２に酸性化した。いったんゼラチン状生成物が沈澱すると、それが微結晶質の状態に到達するまで、それを加熱した。次いでゼラチン状生成物をジメチルホルムアミドから再結晶化させると、36が結晶として得られた（融点＞ 320℃）。C12H9N5Oについての分析：実測値：Ｃ，60.24 ；Ｈ，3.79；Ｎ，29.28 。実測値：Ｃ，60.35 ；Ｈ，3.78；Ｎ，29.53 。
ｅ）４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（37）
400mlの乾燥DMF 、2.39ｇ(10mmole）の４−アミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（36）および 2.5mlのN,N−ジメチルホルムアミド−ジエチルアセタールの混合物を60℃において５時間撹拌した。この溶液を真空下に蒸発乾固し、残留物をイソプロパノールから再結晶化させると、37が2.83ｇ（96％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 284−286 ℃）。C15H14N6O(294.3）についての分析：Ｃ，61.21 ；Ｈ，4.79；Ｎ，28.55 。実測値：Ｃ，60.88 ；Ｈ，5.00；Ｎ，28.15 。
400mlの乾燥DMF 、2.39ｇ(10mmole）の４−アミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（36）および 2.5mlのN,N−ジメチルホルムアミド−ジエチルアセタールの混合物を60℃において５時間撹拌した。この溶液を真空下に蒸発乾固し、残留物をイソプロパノールから再結晶化させると、37が2.83ｇ（96％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 284−286 ℃）。C15H14N6O(294.3）についての分析：Ｃ，61.21 ；Ｈ，4.79；Ｎ，28.55 。実測値：Ｃ，60.88 ；Ｈ，5.00；Ｎ，28.15 。
ｆ）４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（38）
60mlの乾燥アセトニトリルに2.94ｇ（10mmol）の４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（37）および1.49ml（11mmol）の1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデク−７−エン(DBU）を添加した。この溶液を透明になるまで15分間撹拌した。この溶液に、4.72ｇ（11mmol）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（トリイル誘導体についての実施例３、工程（ａ）におけるようにして製造した）を添加した。次いでこの溶液を室温において２時間撹拌し、その期間内に黄色がかった沈澱が形成した。この固体状沈澱を集め、CHCl3／メタノールから再結晶化させると、38が 5.3ｇ（83％の収率）の黄色がかった結晶として得られた（融点 171−174 ℃）。C34H28Cl2N6O6 ・1/2H2O (696.6）についての分析：Ｃ，58.62 ；Ｈ，4.05；Ｎ，12.06。実測値：Ｃ，58.71 ；Ｈ，4.16；Ｎ，11.91 。
60mlの乾燥アセトニトリルに2.94ｇ（10mmol）の４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−プテリジン−７−オン（37）および1.49ml（11mmol）の1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕ウンデク−７−エン(DBU）を添加した。この溶液を透明になるまで15分間撹拌した。この溶液に、4.72ｇ（11mmol）の２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（トリイル誘導体についての実施例３、工程（ａ）におけるようにして製造した）を添加した。次いでこの溶液を室温において２時間撹拌し、その期間内に黄色がかった沈澱が形成した。この固体状沈澱を集め、CHCl3／メタノールから再結晶化させると、38が 5.3ｇ（83％の収率）の黄色がかった結晶として得られた（融点 171−174 ℃）。C34H28Cl2N6O6 ・1/2H2O (696.6）についての分析：Ｃ，58.62 ；Ｈ，4.05；Ｎ，12.06。実測値：Ｃ，58.71 ；Ｈ，4.16；Ｎ，11.91 。
ｇ）４−アミノ−６−フェニル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−７−オン（39）
25mlの無水メタノール中の70mgのK２CO３ から成るの溶液に、４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（38）を添加した。次いで 0.7mlの濃アンモニアをこの懸濁液に添加した。この溶液を室温において２日間撹拌した後AcOHの添加により中和し、生ずる黄色沈澱(0.2ｇ，56％の収率）を集めた。濾液を蒸発乾固し、残留物をメタノールから再結晶化させると、39が他の0.12ｇ（34％の収率）の黄色結晶として得られた（融点 163℃分解）。C17H17N5O4・1/2H2O（364.4)についての分析：Ｃ，56.32 ；Ｈ，4.97；Ｎ，19.22 。実測値：Ｃ，56.16 ；Ｈ，4.75；Ｎ，19.14 。
25mlの無水メタノール中の70mgのK２CO３ から成るの溶液に、４−N,N−ジメチルアミノメチレンイミノ−６−フェニル−８−〔２−デオキシ−3,5-ジ-O-(4-クロロベンゾイル)-β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−７−オン（38）を添加した。次いで 0.7mlの濃アンモニアをこの懸濁液に添加した。この溶液を室温において２日間撹拌した後AcOHの添加により中和し、生ずる黄色沈澱(0.2ｇ，56％の収率）を集めた。濾液を蒸発乾固し、残留物をメタノールから再結晶化させると、39が他の0.12ｇ（34％の収率）の黄色結晶として得られた（融点 163℃分解）。C17H17N5O4・1/2H2O（364.4)についての分析：Ｃ，56.32 ；Ｈ，4.97；Ｎ，19.22 。実測値：Ｃ，56.16 ；Ｈ，4.75；Ｎ，19.14 。
ｈ）４−アミノ−６−フェニル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（40）
10mlの無水ピリミジン中の 0.355ｇ（１mmol）の４−アミノ−６−フェニル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−７−オン（39）の溶液に、多少のモレキュラーシーブおよび 0.407ｇ(1.2mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。この溶液を室温において12時間撹拌した。残留物を30mlのCH2Cl2中に溶解し、次いでNaHCO3の飽和溶液、次いでNaClの飽和溶液で抽出した。
10mlの無水ピリミジン中の 0.355ｇ（１mmol）の４−アミノ−６−フェニル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−７−オン（39）の溶液に、多少のモレキュラーシーブおよび 0.407ｇ(1.2mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。この溶液を室温において12時間撹拌した。残留物を30mlのCH2Cl2中に溶解し、次いでNaHCO3の飽和溶液、次いでNaClの飽和溶液で抽出した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで再び抽出し、残留物をシリカゲルのカラムのクロマトグラフィーかけ、トルエン／EtOAc 1:1で溶離した。生成物の画分を蒸発させ、再び少量のCH2Cl2中に溶解し、次いでｎ−ヘキサンに撹拌しながら滴下し、真空デシケーター中で乾燥すると、40が0.46ｇ（70％）の黄色結晶粉末状物として得られた（融点 114℃分解）。C38H35N5O6（657.7)についての分析：Ｃ，69.39 ；Ｈ，5.36；Ｎ，10.64 。実測値：Ｃ，68.91 ；Ｈ，5.67；Ｎ，10.44 。
ｉ）４−アミノ−６−フェニル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン−３'−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（41）
15mlのCH2Cl2中の 0.657ｇ（ａmmol）の４−アミノ−６−フェニル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（40）の溶液に、 0.452ｇ(1.5mmol）の２−シアノエチル−ビス−N,N−ジイソプロピルアミノ−ホスファンおよび35mg(0.5mmol）のテトラゾールを添加した。次いでこの混合物をアルゴン雰囲気下に室温において12時間撹拌した。
15mlのCH2Cl2中の 0.657ｇ（ａmmol）の４−アミノ−６−フェニル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（40）の溶液に、 0.452ｇ(1.5mmol）の２−シアノエチル−ビス−N,N−ジイソプロピルアミノ−ホスファンおよび35mg(0.5mmol）のテトラゾールを添加した。次いでこの混合物をアルゴン雰囲気下に室温において12時間撹拌した。
反応溶液を15mlのCH2Cl2で希釈し、次いでNaHCO3およびNaClの飽和溶液で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。残留物をシリカゲルのカラムのクロマトグラフィーにかけ、少量のトリエチルアミンを含有するトルエンEtOAc 3:2で溶離した。生成物の画分を 100mlのｎ−ヘキサンに撹拌しながら滴下すると、0.78ｇ（91％）の微結晶質粉末状物として得られた（融点＞100 ℃分解）。C47H52N7O7P（858.0)についての分析：Ｃ，65.80 ；Ｈ，6.11；Ｎ，11.43 。実測値：Ｃ，66.13 ；Ｈ，6.20；Ｎ，11.03 。
実施例７. 式Ｖのホスホアミダイト：（３−メチル−８−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン−３’−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト）（51）の合成
ａ）２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ピリミジン（42）
２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソピリミジンの合成は、Johns et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-387 (1913) に記載された。NaOHの10％溶液の 100mlに、25ｇの４−アミノ−２−メルカプト−６−オキソピリミジン粉末(Aldrich、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）を添加した。この溶液に、25ｇの工業用ジメチルサルフェートを少しずつ添加し、各添加後よく震盪した。
ａ）２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ピリミジン（42）
２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソピリミジンの合成は、Johns et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-387 (1913) に記載された。NaOHの10％溶液の 100mlに、25ｇの４−アミノ−２−メルカプト−６−オキソピリミジン粉末(Aldrich、米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）を添加した。この溶液に、25ｇの工業用ジメチルサルフェートを少しずつ添加し、各添加後よく震盪した。
ある場合において、生ずる沈澱が濃厚になり過ぎて混合が不可能となったので、溶液をH２O で希釈ことが必要であった。混合物を室温において15分間放置した後、それは酸性反応を示し、沈澱を吸引濾過した。このようにして得られたメルカプトピリミジンをまだ湿潤している間にフラスコに取り出し、 200mlのアルコールを添加し、この混合物をアルコールのベンゾイルペルオキシドに加熱した。次いで、フラスコを冷却し、室温において１時間放置した。濾過すると、20〜25ｇの純粋な42が得られた。これは計算重量の75〜90％であった。
ｂ）４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−６−オキソジヒドロピリミジン（43）
４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−６−オキソジヒドロピリミジンの合成は、Johns et al., J. Biol. Chem., 20 : 153-160 (1915) に記載された。65mlの１Ｎ水酸化カリウムの溶液に、10ｇの２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ピリミジン（42）を添加した。この溶液に、９ｇのジメチルサルフェートを添加すると同時にこの溶液を頻繁に振盪することによって撹拌した。白色の結晶質沈澱がほとんど直ちに形成し始め、これはすぐに非常に大量となった。
４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−６−オキソジヒドロピリミジンの合成は、Johns et al., J. Biol. Chem., 20 : 153-160 (1915) に記載された。65mlの１Ｎ水酸化カリウムの溶液に、10ｇの２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ピリミジン（42）を添加した。この溶液に、９ｇのジメチルサルフェートを添加すると同時にこの溶液を頻繁に振盪することによって撹拌した。白色の結晶質沈澱がほとんど直ちに形成し始め、これはすぐに非常に大量となった。
溶液がリトマスに対して酸性となるとすぐに、結晶を吸引濾過した。濾液をNaOHで中和し、蒸発乾固した。残留物を冷水で洗浄し、固体状物を濾過し、既に得られた結晶に添加した。次いで一緒に固体状物を希薄アンモニアで粉砕して、未変化の２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ピリミジンを溶解し、その少量は存在することがわかった。アンモニア中に溶解しない残留物の部分は、融点とエーテル中の溶解度が異なる２つの化合物から成っていた。低い融点を有する化合物はエーテルに非常に可溶性であったが、高い融点を有する化合物はこの溶媒にほとんど不溶性であった。したがって、いずれもこれらの化合物を互いに分離する。手段として働いた。
エーテル中に可溶性の化合物は２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−メトキシピリミジンであった。次いで固体状残留物をアルコールから再結晶化させると、43が細長いプリズムとして得られた（収率＝60％、融点 255℃）。C6H9ON3Sについて分析：Ｎ，24.57。実測値：Ｎ，24.71 。
ｃ）６−アミノ−３−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−ピリミジン−４−オン（44）
６−アミノ−３−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−ピリミジン−４−オン（＝４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−６−オキソジヒドロピリミジン）の合成は、Schneider et al., Chem. Ber. 107 : 3377-3394 (1974) に記載された。１リットルの30％酢酸中の４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−６−オキソジヒドピリミジン（43）の懸濁液に、 100mlのH2O中の50ｇの亜硝酸ナトリウムの溶液を滴下した。この混合物を室温においてさらに１時間撹拌し、次いで冷蔵庫中で一夜冷却した。沈澱を集め、H2O で洗浄し、次いでアセトンで洗浄し、 100℃において乾燥した。これにより、 119.5ｇ（92％）のクロマトグラフィー的に均一な粗生成物が得られた（融点 230℃分解）。この物質の１ｇを 240mlのH2O から再結晶化させると、44が0.52ｇの青色結晶として得られた（融点 234℃分解）。
６−アミノ−３−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−ピリミジン−４−オン（＝４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−６−オキソジヒドロピリミジン）の合成は、Schneider et al., Chem. Ber. 107 : 3377-3394 (1974) に記載された。１リットルの30％酢酸中の４−アミノ−１−メチル−２−メチルチオ−６−オキソジヒドピリミジン（43）の懸濁液に、 100mlのH2O中の50ｇの亜硝酸ナトリウムの溶液を滴下した。この混合物を室温においてさらに１時間撹拌し、次いで冷蔵庫中で一夜冷却した。沈澱を集め、H2O で洗浄し、次いでアセトンで洗浄し、 100℃において乾燥した。これにより、 119.5ｇ（92％）のクロマトグラフィー的に均一な粗生成物が得られた（融点 230℃分解）。この物質の１ｇを 240mlのH2O から再結晶化させると、44が0.52ｇの青色結晶として得られた（融点 234℃分解）。
ｄ）5,6−ジアミノ−３−メチル−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（45）
4.0ｇ（0.02mole）の６−アミノ−３−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−ピリミジン−４−オン（44）に、40mlの20％水性硫化アンモニウム溶液を添加した。この混合物を還流下に30分間加熱した。冷却後、沈澱を集め、少量のエタノールで洗浄し、デシケーター中で乾燥すると、45が2.72ｇ（75％収率）の無色の結晶として得られた（融点 211−212 ℃）。
4.0ｇ（0.02mole）の６−アミノ−３−メチル−２−メチルチオ−５−ニトロソ−ピリミジン−４−オン（44）に、40mlの20％水性硫化アンモニウム溶液を添加した。この混合物を還流下に30分間加熱した。冷却後、沈澱を集め、少量のエタノールで洗浄し、デシケーター中で乾燥すると、45が2.72ｇ（75％収率）の無色の結晶として得られた（融点 211−212 ℃）。
ｅ）１−メチル−２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン−アゾチメン炭酸−５エチルエステル（46）
１−メチル−２−メチルメルカプト−4,5−ジアミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン（5,6−ジアミノ−３−メチル−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン）からの３−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオンの合成、工程ｃおよびｄは、Pfleiderer, Chem. Ber. 91 : 1670 (1958) に記載された。この溶液を室温に冷却し、次いで６ｇのエチルグリオキシレート−ヘミエチルアセタールと一緒にした。直ちに生ずる濃厚な沈澱を１時間後取り出し、エタノールから再結晶化させると、46ｇの８ｇの鮮明な黄色結晶が得られた（融点 178℃）。C10H14N4O3S・H2O：Ｃ，41.66 ；Ｈ，5.59；Ｎ，19.44 。実測値：Ｃ，42.18 ; Ｈ，5.75；Ｎ，19.32 。
１−メチル−２−メチルメルカプト−4,5−ジアミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン（5,6−ジアミノ−３−メチル−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン）からの３−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオンの合成、工程ｃおよびｄは、Pfleiderer, Chem. Ber. 91 : 1670 (1958) に記載された。この溶液を室温に冷却し、次いで６ｇのエチルグリオキシレート−ヘミエチルアセタールと一緒にした。直ちに生ずる濃厚な沈澱を１時間後取り出し、エタノールから再結晶化させると、46ｇの８ｇの鮮明な黄色結晶が得られた（融点 178℃）。C10H14N4O3S・H2O：Ｃ，41.66 ；Ｈ，5.59；Ｎ，19.44 。実測値：Ｃ，42.18 ; Ｈ，5.75；Ｎ，19.32 。
ｆ）３−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−４，７−ジオン（47）
200mlの 0.5N NaHCO3に、８ｇの１−メチル−２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン−アゾメチン炭酸−５エチルエステル（46）を添加した。この溶液を30分間還流させた。この透明な溶液を動物活性炭で処理し、次いでpH１に加熱酸性化した。いったん冷却すると、沈澱を集め、H２O から再結晶化させると、47が 4.5ｇの３−メチル−２−メチルチオ−ピリミジン−4,7−ジオンの薄黄色結晶として得られた（融点 292−294℃）。C8H8N4O2S：Ｃ，42.86 ；Ｈ，3.60；Ｎ，24.99 。
実測値：Ｃ，42.70 ；Ｈ，3.58；Ｎ，24.73 。
200mlの 0.5N NaHCO3に、８ｇの１−メチル−２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソ−ジヒドロピリミジン−アゾメチン炭酸−５エチルエステル（46）を添加した。この溶液を30分間還流させた。この透明な溶液を動物活性炭で処理し、次いでpH１に加熱酸性化した。いったん冷却すると、沈澱を集め、H２O から再結晶化させると、47が 4.5ｇの３−メチル−２−メチルチオ−ピリミジン−4,7−ジオンの薄黄色結晶として得られた（融点 292−294℃）。C8H8N4O2S：Ｃ，42.86 ；Ｈ，3.60；Ｎ，24.99 。
実測値：Ｃ，42.70 ；Ｈ，3.58；Ｎ，24.73 。
ｇ）３−メチル−２−メチルチオ−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４ｔ−クロロ−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−４，７−ジオン（48）
３−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−４，７−ジオン（47）の結晶を、高真空下に 100℃において乾燥炉中で乾燥した。次いで 5.6ｇ（25mmol）の乾燥した結晶を、 250mlの無水アセトニトリル中にアルゴン雰囲気下に、12.9ｇの２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−Ｄ−リボフラノシルクロライド（トリイル誘導体について実施例３、工程（ａ）におけるようにして製造した）とともに懸濁させた。
３−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−４，７−ジオン（47）の結晶を、高真空下に 100℃において乾燥炉中で乾燥した。次いで 5.6ｇ（25mmol）の乾燥した結晶を、 250mlの無水アセトニトリル中にアルゴン雰囲気下に、12.9ｇの２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４−クロロベンゾイル）−Ｄ−リボフラノシルクロライド（トリイル誘導体について実施例３、工程（ａ）におけるようにして製造した）とともに懸濁させた。
次いで３mlのヘキサメチルジシラザンおよび２mlのトリエチルシリルクロライドを添加した。この混合物を30分間撹拌し、次いで 7.4mlのSnCl4 を２分以内に滴下した。正確に20分の反応後、この混合物を1200mlの重炭酸ナトリウムの冷却した飽和水溶液の中にゆっくり注いだ。次いで溶液を３回各 200mlの酢酸エチルで抽出した。プールした有機層をNaClで飽和溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発乾固し、３回CH２Cl２とともに共蒸発させた。
主としてα，β−アノマーヌクレオシド混合物から成る生ずる残留物を分別結晶化により分離した。第１の結晶化を 200mlのメタノール／350ml の酢酸エチルで実施した。生ずる沈澱を再び 200mlのメタノール／280ml の酢酸エチルから再結晶化させ、次いで生ずる固体状物をもう一度 200mlのメタノール／500ml の酢酸エチルから再結晶化させると、4.45ｇの純粋なα−ヌクレオシドから成る無色の結晶が得られた（融点 188−191 ℃，29％収率）。濾液を一緒にし、蒸発させ、残留物を 100mlのメタノール／130ml の酢酸エチルから再結晶化させると、 1.8ｇのα，β−混合物が得られた（12％収率）。その濾液を再び蒸発乾固し、残留物を50mlの酢酸エチル／50mlのエーテルから再結晶化させると、48が6.79ｇ（44％の収率）のクロマトグラフィー的に純粋な結晶質β−ヌクレオシドとして得られた（融点 130−133 ℃）。C27H22Cl2O7S：Ｃ，52.52；Ｈ，3.59；Ｎ，9.07。実測値：Ｃ，52.45 ；Ｈ，3.61；Ｎ，8.90。
ｈ）３−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（２−アミノ−３−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−４，７−ジオン）（49）
100mlの乾燥アセトニトリル中の 3.3ｇ（４mmol）の３−メチル−２−メチルチオ−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４ｔ−クロロ−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−４，７−ジオン）（48）の溶液を、 100mlの飽和メタノール性アンモニアに室温において添加した。少量の不溶性物質を濾過し、濾液を蒸発乾固した。メタノールとの２回の共蒸発後、沈澱を20mlの温かいメタノール中に溶解した。次いで50mlのエチルエーテルを添加し、この混合物をアイスボックス中で３日間冷却した。沈澱を集め、60℃において真空下に乾燥すると、49が1.46ｇ（88％収率）の無色の結晶として得られた（融点＞250 ℃）。C12H15N5O5・1/2H2Oについての分析：Ｃ，45.28 ；Ｈ，5.07；Ｎ，22.00 。実測値：Ｃ，45.55 ；Ｈ，5.07；Ｎ，21.92 。
100mlの乾燥アセトニトリル中の 3.3ｇ（４mmol）の３−メチル−２−メチルチオ−８−〔２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−（４ｔ−クロロ−β−Ｄ−リボフラノシル〕プテリジン−４，７−ジオン）（48）の溶液を、 100mlの飽和メタノール性アンモニアに室温において添加した。少量の不溶性物質を濾過し、濾液を蒸発乾固した。メタノールとの２回の共蒸発後、沈澱を20mlの温かいメタノール中に溶解した。次いで50mlのエチルエーテルを添加し、この混合物をアイスボックス中で３日間冷却した。沈澱を集め、60℃において真空下に乾燥すると、49が1.46ｇ（88％収率）の無色の結晶として得られた（融点＞250 ℃）。C12H15N5O5・1/2H2Oについての分析：Ｃ，45.28 ；Ｈ，5.07；Ｎ，22.00 。実測値：Ｃ，45.55 ；Ｈ，5.07；Ｎ，21.92 。
ｉ）３−メチル−８−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（50）
3.1ｇ（10mmol）の３−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（49）に、50mlの乾燥ピリジンを添加した。次いでこの溶液を共蒸発させた。共蒸発を各50mlの乾燥ピリジンで３回反復した。次いで残留物を50mlの乾燥ピリジン中に懸濁させた。この溶液に、 5.1ｇ（15mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加し、トリメチルシリル室温において撹拌した。10分後、透明溶液が得られ、10mlのメタノールの添加により反応を停止させた。この溶液を蒸発させ、残留物をCH2Cl2中に溶解し、次いで重炭酸ナトリウムの５％水溶液で２回抽出した。
3.1ｇ（10mmol）の３−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（49）に、50mlの乾燥ピリジンを添加した。次いでこの溶液を共蒸発させた。共蒸発を各50mlの乾燥ピリジンで３回反復した。次いで残留物を50mlの乾燥ピリジン中に懸濁させた。この溶液に、 5.1ｇ（15mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加し、トリメチルシリル室温において撹拌した。10分後、透明溶液が得られ、10mlのメタノールの添加により反応を停止させた。この溶液を蒸発させ、残留物をCH2Cl2中に溶解し、次いで重炭酸ナトリウムの５％水溶液で２回抽出した。
有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾液を再び蒸発させた。残留物を少量のCH２Cl２／メタノール中に溶解し、フラッシュクロマトグラフィーのためにシリカゲルのカラム（３×20cm、トルエン／酢酸エチルとともにパックされた）上に置いた。溶媒混合物の勾配を適用して、精製を達成しなくてはならなかった： 500mlのトルエン／酢酸エチル1:1， 2.5リットルの酢酸エチル、１リットルの酢酸エチル／メタノール99：１および２リットルの酢酸エチル／メタノール98：２。酢酸エチル／メタノール中の物質の画分を蒸発させ、高真空下に乾燥すると、50が 3.9ｇ（63％）の無色のアモルファス固体状物として得られた。C33H33N5O7・1/2H2Oについての分析：Ｃ，63.86 ；Ｈ，5.52；Ｎ，11.28 。実測値：Ｃ，63.90 ；Ｈ，5.82；Ｎ，10.86 。
ｊ）３−メチル−８−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン−３’−Ｏ−（β−シアノエチル,Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（51）
3.06ｇ(4.9mmol）の３−メチル−８−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（50）および0.18ｇ（25mmol）のテトラゾールの懸濁液を、アルゴン雰囲気下に、 2.2ｇ(7.3mmol）のβ−シアノエトキシ−ビス−ジイソプロピルホスファンとともに撹拌した。この懸濁液は30分後透明となり、反応を４時間後に停止させた。反応溶液を重炭酸ナトリウムの５％水溶液で１回抽出し、次いで有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾液を蒸発乾固させた。シリカゲルのカラム（３×20cm）上のフラッシュクロマトグラフィーにより、 200mlのヘキサン／酢酸エチル２：１、次いで２リットルのヘキサン／酢酸エチル1:1中において、精製を実施した。生成物の画分を集め、蒸発乾固し、高真空下に乾燥すると、51が2.38ｇ（59％の収率）の無色のアモルファス固体状物として得られた。C42H50N7O8P・H2O（820.8)についての分析：Ｃ，61.45 ；Ｈ，6.26；Ｎ，11.94 。
実測値：Ｃ，61.56 ；Ｈ，6.47；Ｎ，11.51 。
3.06ｇ(4.9mmol）の３−メチル−８−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）イソキサントプテリン（50）および0.18ｇ（25mmol）のテトラゾールの懸濁液を、アルゴン雰囲気下に、 2.2ｇ(7.3mmol）のβ−シアノエトキシ−ビス−ジイソプロピルホスファンとともに撹拌した。この懸濁液は30分後透明となり、反応を４時間後に停止させた。反応溶液を重炭酸ナトリウムの５％水溶液で１回抽出し、次いで有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾液を蒸発乾固させた。シリカゲルのカラム（３×20cm）上のフラッシュクロマトグラフィーにより、 200mlのヘキサン／酢酸エチル２：１、次いで２リットルのヘキサン／酢酸エチル1:1中において、精製を実施した。生成物の画分を集め、蒸発乾固し、高真空下に乾燥すると、51が2.38ｇ（59％の収率）の無色のアモルファス固体状物として得られた。C42H50N7O8P・H2O（820.8)についての分析：Ｃ，61.45 ；Ｈ，6.26；Ｎ，11.94 。
実測値：Ｃ，61.56 ；Ｈ，6.47；Ｎ，11.51 。
実施例８. 式VIIIのホスホルアミダイト：（６，７−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル）アミノ−１−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン−３’−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（59）の合成
ａ）4,5−ジアミノウラシル−塩酸塩（52）
物を水蒸気浴上で還流下に激しく撹拌しながら４時間加熱した。約２時間後、反応混合物を実際に固体状物となり、撹拌を停止しなくてはならない。反応時間の終わりにおいて、１リットルの熱（80℃）H2O を反応混合物に添加し、撹拌を再開する。完全に溶解した後、撹拌混合物を80℃に15分間加熱し、次いで氷酢酸でリトマスに対して中和する。追加の氷酢酸（75ml）を添加し、次いで70mlのH2O 中に溶解した64.8ｇ（0.94mole）の亜硝酸ナトリウムを注意して添加した。バラ赤色のニトロソ化合物は膨張した沈澱としてほとんど直ちに分離し、これをは撹拌機をほとんど停止させた。数分後、ニトロソ化合物を濾過により除去し、少量の氷水で２回洗浄した。湿潤物質を３リットルのフラスコに戻し、 460mlの温かいH2O(50℃）を添加した。
ａ）4,5−ジアミノウラシル−塩酸塩（52）
物を水蒸気浴上で還流下に激しく撹拌しながら４時間加熱した。約２時間後、反応混合物を実際に固体状物となり、撹拌を停止しなくてはならない。反応時間の終わりにおいて、１リットルの熱（80℃）H2O を反応混合物に添加し、撹拌を再開する。完全に溶解した後、撹拌混合物を80℃に15分間加熱し、次いで氷酢酸でリトマスに対して中和する。追加の氷酢酸（75ml）を添加し、次いで70mlのH2O 中に溶解した64.8ｇ（0.94mole）の亜硝酸ナトリウムを注意して添加した。バラ赤色のニトロソ化合物は膨張した沈澱としてほとんど直ちに分離し、これをは撹拌機をほとんど停止させた。数分後、ニトロソ化合物を濾過により除去し、少量の氷水で２回洗浄した。湿潤物質を３リットルのフラスコに戻し、 460mlの温かいH2O(50℃）を添加した。
スラリーを水蒸気浴上で加熱しながら撹拌し、ニトロソ化合物の赤色が完全に消失するまで、固体状ナトリウムヒドロサルファイトを添加した。次いで、追加の30ｇのナトリウムヒドロサルファイトを添加し、薄黄褐色懸濁液を加熱しながらさらに15分間撹拌し、放冷した。密なジアミノウラシル重亜硫酸塩を冷却した溶液から濾過し、H2O でよく洗浄し、部分的に乾燥した。
粗生成物はその塩酸塩への変換により容易に精製された。重亜硫酸塩を広口の１リットルのフラスコに移し、生ずる混合物のコンシステンシーが機械的撹拌を可能とするまで、濃塩酸を添加した(100〜200ml の酸）。スラリーを水蒸気浴上で撹拌しながら１時間加熱した。黄褐色のジアミノウラシル塩酸塩を焼結ガラスの漏斗上に濾過し、アセトンでよく洗浄し、五酸化リンの存在下に真空乾燥すると、 104〜124 ｇの52（68〜81％）が得られた。
ｂ）6,7−ジメチルルマジン（53）
6,7−ジメチルルマジンの合成は、Pfleiderer et al., Chem. Ber., 106 : 3149-3174 (1973) に記載されている。50mlのH2O ，20mlのエタノール、および１mlの濃HCl から成るの溶液に、20mlのジアセチルを添加した。この溶液を加熱沸騰させ、 450mlのH2O 中の20ｇの4,5−ジアミノウラシル塩酸塩（52）の溶液の数滴をゆっくり添加した。この混合物を還流下に２時間加熱し、アイスボックス中で冷却し、生ずる沈澱（18.7ｇ）を集めた。沈澱が溶解するまで希薄アルミン酸ナトリウム溶液を添加した 500mlのH2O 中に沈澱を溶解することによって、沈澱を精製した。溶液を活性炭を通して濾過し、次いで濾液を沸騰する希薄酢酸の中に滴下した。冷却後、混合物を 100℃の温度において減圧下に乾燥すると、53が17.0ｇ（79％の収率）の事実上無色の結晶として得られた（融点＞360 ℃）。
6,7−ジメチルルマジンの合成は、Pfleiderer et al., Chem. Ber., 106 : 3149-3174 (1973) に記載されている。50mlのH2O ，20mlのエタノール、および１mlの濃HCl から成るの溶液に、20mlのジアセチルを添加した。この溶液を加熱沸騰させ、 450mlのH2O 中の20ｇの4,5−ジアミノウラシル塩酸塩（52）の溶液の数滴をゆっくり添加した。この混合物を還流下に２時間加熱し、アイスボックス中で冷却し、生ずる沈澱（18.7ｇ）を集めた。沈澱が溶解するまで希薄アルミン酸ナトリウム溶液を添加した 500mlのH2O 中に沈澱を溶解することによって、沈澱を精製した。溶液を活性炭を通して濾過し、次いで濾液を沸騰する希薄酢酸の中に滴下した。冷却後、混合物を 100℃の温度において減圧下に乾燥すると、53が17.0ｇ（79％の収率）の事実上無色の結晶として得られた（融点＞360 ℃）。
ｃ）6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）ルマジン（54）
6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）ルマジンの合成は、Ritzmannet al., Liebigs Ann. Chem., 1217-1234 (1977)に記載されている。50mlのヘキサメチルジシラザンに、7.68ｇの6,7−ジメチルルマジン（53）および数個の硫酸アンモニウム結晶を添加した。この溶液が透明となるまで、これを還流下に約24加熱した。次いで過剰のヘキサメチルジシラザンを真空下に蒸留除去した。残留物を 220mlの無水ベンゾール中に溶解し、16ｇの3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−ｄ−エリスロ−ペントフラノシルクロライドを添加し、この溶液を室温において乾燥条件下に１週間撹拌した。
6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）ルマジンの合成は、Ritzmannet al., Liebigs Ann. Chem., 1217-1234 (1977)に記載されている。50mlのヘキサメチルジシラザンに、7.68ｇの6,7−ジメチルルマジン（53）および数個の硫酸アンモニウム結晶を添加した。この溶液が透明となるまで、これを還流下に約24加熱した。次いで過剰のヘキサメチルジシラザンを真空下に蒸留除去した。残留物を 220mlの無水ベンゾール中に溶解し、16ｇの3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−ｄ−エリスロ−ペントフラノシルクロライドを添加し、この溶液を室温において乾燥条件下に１週間撹拌した。
この溶液に、５mlのメタノールを添加した。この溶液を蒸発乾固し、残留物を 200mlのメタノールから再結晶化させた。ほぼDC純粋な6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−チオルマジン（β−異性体）を沈澱させた。 300mlのメタノールからのこの第１画分の更新した再結晶化は、2.36ｇの純粋なβ異性体を与えた。濾液を精製し、蒸発乾固し、次いでシリカゲルのカラム（70×５cm）のクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム／メタノール（30:1）を使用した。第１の主要な画分は、それを無色のアモルファス固体状物に蒸発させた後、 6.5ｇのDC純粋な6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−チオルマジン（β−異性体）を与えるように思われる。
引き続く混合した画分をまた蒸発乾固させ、 100mlのメタノールから再結晶化させ、次いで追加の2.67ｇのβ異性体の無色の結晶が沈澱した（融点 154−155 ℃）。濾液を再び蒸発乾固させ、シリカゲルのカラム(900ｇ）上に注ぎ、クロロホルム／アセトン（９：１）で展開した。追加の 2.7ｇのα異性体がより大きいＲF 値を有する主要な画分から得られ、そして追加の0.43ｇのβ異性体が低いＲF 値を有する画分から得られた。合計の収量は5.46ｇ（25％）の無色の結晶（融点 154−155 ℃）の形態のβ異性体および 9.2ｇ（43％）のアモルファス固体状物（融点 126−132 ℃）としてα異性体として得られた（融点54から成っていた。α−およびβ−Ｄ−アノマーの帰属は、Ritzman et al.の論文後に、Cao et al., Helv. Chim. Acta., 75 : 1267-1273 (1992)により逆転されたことに注意すべきである。
ｄ）6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−チオルマジン（55）
20mlのトルエン中の 0.871ｇ(1.6mmol）の6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）ルマジン（54）および 0.403ｇ（１mmol）のラウェッソン（Lawesson) 試薬の混合物を20時間還流させた。次いでこの混合物を蒸発させ、残留物を20mlのCH2Cl2の中に取り、次いで重炭酸ナトリウムの飽和溶液で２回処理した。水性相を３回各10mlのCH2Cl2で抽出し、一緒にした抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、再び蒸発させた。残留物を 150mlのメタノールから再結晶化させると、55が0.65ｇ（75％収率）のオレンジ色結晶として得られた（融点 166−168 ℃）。C29H28N4O6S・H2O（578.6)についての分析：Ｃ，60.20 ；Ｈ，5.22；Ｎ，9.68。実測値：Ｃ，60.43 ；Ｈ，5.06；Ｎ，9.72。
20mlのトルエン中の 0.871ｇ(1.6mmol）の6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）ルマジン（54）および 0.403ｇ（１mmol）のラウェッソン（Lawesson) 試薬の混合物を20時間還流させた。次いでこの混合物を蒸発させ、残留物を20mlのCH2Cl2の中に取り、次いで重炭酸ナトリウムの飽和溶液で２回処理した。水性相を３回各10mlのCH2Cl2で抽出し、一緒にした抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、再び蒸発させた。残留物を 150mlのメタノールから再結晶化させると、55が0.65ｇ（75％収率）のオレンジ色結晶として得られた（融点 166−168 ℃）。C29H28N4O6S・H2O（578.6)についての分析：Ｃ，60.20 ；Ｈ，5.22；Ｎ，9.68。実測値：Ｃ，60.43 ；Ｈ，5.06；Ｎ，9.72。
ｅ）４−アミノ−6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（56）
オートクレープ中で、25mlのメタノール中のアンモニアの飽和溶液中の0.42ｇ（0.75mmol）の6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−チオルマジン（55）を 100℃に16時間加熱した。冷却後、溶液を蒸発させ、残留物をCH2Cl2で処理した。固体状物質を集め、エーテルで洗浄し、高真空下に乾燥すると、56が 0.207ｇ（91％の収率）の無色の結晶粉末状物として得られた（融点＞℃分解）。C13H17N5O4・H2Oについての分析：Ｃ，49.36 ；Ｈ，5.74；Ｎ，22.14 。実測値：Ｃ，49.17 ；Ｈ，5.47；Ｎ，21.80 。
オートクレープ中で、25mlのメタノール中のアンモニアの飽和溶液中の0.42ｇ（0.75mmol）の6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−チオルマジン（55）を 100℃に16時間加熱した。冷却後、溶液を蒸発させ、残留物をCH2Cl2で処理した。固体状物質を集め、エーテルで洗浄し、高真空下に乾燥すると、56が 0.207ｇ（91％の収率）の無色の結晶粉末状物として得られた（融点＞℃分解）。C13H17N5O4・H2Oについての分析：Ｃ，49.36 ；Ｈ，5.74；Ｎ，22.14 。実測値：Ｃ，49.17 ；Ｈ，5.47；Ｎ，21.80 。
ｆ）6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（57）
80mlの無水DMF 中の1.54ｇ（５mmol）の４−アミノ−6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（56）および1.87ｇ（６mmol）の１−メチル−３−〔２（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕イミダゾリウムクロライド（参照、Himmelsbach, et al. Tetrahedron 40 : 59 (1984)これは引用することによって本明細書の一部とされる）の混合物を室温において一夜撹拌した。この溶液に、 100mlのH２O を撹拌しながらゆっくり添加した。次いでこの溶液を冷却し、沈澱を吸引により集め、メタノールおよびエーテルで洗浄し、デシケーター中で乾燥すると、57が 2.0ｇ（80％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 154−155 ℃）。C22H24N6O8・H2Oについての分析：Ｃ，59.96 ；Ｈ，5.01；Ｎ，16.21 。実測値：Ｃ，50.51 ；Ｈ，5.15；Ｎ，15.84 。
80mlの無水DMF 中の1.54ｇ（５mmol）の４−アミノ−6,7−ジメチル−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（56）および1.87ｇ（６mmol）の１−メチル−３−〔２（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕イミダゾリウムクロライド（参照、Himmelsbach, et al. Tetrahedron 40 : 59 (1984)これは引用することによって本明細書の一部とされる）の混合物を室温において一夜撹拌した。この溶液に、 100mlのH２O を撹拌しながらゆっくり添加した。次いでこの溶液を冷却し、沈澱を吸引により集め、メタノールおよびエーテルで洗浄し、デシケーター中で乾燥すると、57が 2.0ｇ（80％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 154−155 ℃）。C22H24N6O8・H2Oについての分析：Ｃ，59.96 ；Ｈ，5.01；Ｎ，16.21 。実測値：Ｃ，50.51 ；Ｈ，5.15；Ｎ，15.84 。
ｇ）6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（58）
2.0ｇ（４mmol）の6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（57）から、結晶を20mlの無水ピリジンとともに２回共蒸発させることによって、水を除去した。残留物を 100mlの乾燥ピリジン中に溶解し、これに1.63ｇ(4.8mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。
2.0ｇ（４mmol）の6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−２−オン（57）から、結晶を20mlの無水ピリジンとともに２回共蒸発させることによって、水を除去した。残留物を 100mlの乾燥ピリジン中に溶解し、これに1.63ｇ(4.8mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。
次いでこの混合物を室温において18時間撹拌した。反応を10mlのメタノールの添加によりクエンチングし、次いで蒸発させ、最後に残留物をCH2Cl2中に溶解した。この溶液を重炭酸ナトリウムの飽和溶液で処理した。分離後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、再び蒸発させた。残留物を少量のCHCl3 中に溶解し、シリカゲルのカラム上に置き、次いでトルエン／酢酸エチル4:1〜1:1の勾配で溶離した。主要な画分がトルエン／酢酸エチル２：で得られ、蒸発させると、58が2.84ｇ（88％の収率）の無色のアモルファス固体状物として得られた。C43H42N6O10についての分析：Ｃ，64.33 ；Ｈ，5.27；Ｎ，10.47 。実測値：Ｃ，64.51 ；Ｈ，5.23；Ｎ，10.24 。
ｈ）6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン−３’−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（59）
40mlの乾燥CH2Cl2および20mlの乾燥アセトニトリルに、 1.0ｇ（1.25mmol）の6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（58）、44mg（0.63mmol）のテトラゾールおよび 0.754ｇ(2.5mmol）のβ−シアノエトキシ−ビス−ジイソプロピル−ホスファンを撹拌しながら添加した。
40mlの乾燥CH2Cl2および20mlの乾燥アセトニトリルに、 1.0ｇ（1.25mmol）の6,7−ジメチル−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕アミノ−１−（２−デオキシ−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プテリジン−２−オン（58）、44mg（0.63mmol）のテトラゾールおよび 0.754ｇ(2.5mmol）のβ−シアノエトキシ−ビス−ジイソプロピル−ホスファンを撹拌しながら添加した。
18時間後、この溶液を50mlのCH2Cl2で希釈し、次いで重炭酸ナトリウムの飽和溶液で抽出し、有機層硫酸ナトリウムで乾燥し、最後に蒸発させた。残留物を少量のCH2Cl2中に溶解し、次いでシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製し、トルエン／酢酸エチル4:1〜1:1の勾配を使用した。主要な画分を蒸発させ、高真空下に乾燥すると、59が0.98ｇ（78％の収率）のアモルファス固体状物として得られた。C52H59N8O11(1003.1)についての分析：Ｃ，52.27 ；Ｈ，5.93；Ｎ，11.17 。実測値：Ｃ，62.00 ；Ｈ，6.01；Ｎ，10.65 。
実施例９. 式VII のホスホルアミダイト：２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエチル−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン−３'−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（71）の合成
５，６−ジアミノ−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（２−メチルメルカプト−４，５−ジアミノ−６−オキソピリミジン）の合成、工程（ａ）〜（ｃ）は、Jons et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-388 (1913)に記載されているように実施した。
５，６−ジアミノ−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（２−メチルメルカプト−４，５−ジアミノ−６−オキソピリミジン）の合成、工程（ａ）〜（ｃ）は、Jons et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-388 (1913)に記載されているように実施した。
ａ）２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキシ−ピリミジン）（42）
２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキシピリミジンの合成は、Jons et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-388 (1913)に記載されており、そして実施例６、工程（ａ）に例示されている。
２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキシピリミジンの合成は、Jons et al., J. Biol. Chem., 14 : 381-388 (1913)に記載されており、そして実施例６、工程（ａ）に例示されている。
ｂ）２−メチルメルカプト−４−アミノ−５−ニトロソ−６−オキソピリミジン（60）
350mlのH2O に、20ｇの２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソピリミジン（42）および 5.1ｇのNaOHを添加した。40mlの水中の亜硝酸ナトリウムの溶液を添加した。次いで、この混合物を17ｇの氷酢酸の徐々の添加により酸性化した。形成する沈澱は白色であったが、短時間で青色に変化した。混合物を室温において一夜放置し、次いで沈澱を濾過し、冷水で洗浄し、乾燥しないで、２−メチルメルカプト−4,5−ジアミノ−６−オキソピリミジンの製造に使用した。ニトロソ誘導体の収率はほとんど定量的であった。それはわずかに熱水またはアルコール中に可溶性であり、ベンゼン中で可溶性ではなかった。それはアルカリ中で赤色溶液を形成し、そして酸中で青色溶液を形成した。一部分を分析のためにアンモニア中に溶解し、酢酸で沈澱させることによって精製した。この物質は溶融せず、約 255℃において分解し始めた。C5HO2N4Sについての分析：Ｎ，30.10 。実測値：Ｎ，30.16 。
350mlのH2O に、20ｇの２−メチルメルカプト−４−アミノ−６−オキソピリミジン（42）および 5.1ｇのNaOHを添加した。40mlの水中の亜硝酸ナトリウムの溶液を添加した。次いで、この混合物を17ｇの氷酢酸の徐々の添加により酸性化した。形成する沈澱は白色であったが、短時間で青色に変化した。混合物を室温において一夜放置し、次いで沈澱を濾過し、冷水で洗浄し、乾燥しないで、２−メチルメルカプト−4,5−ジアミノ−６−オキソピリミジンの製造に使用した。ニトロソ誘導体の収率はほとんど定量的であった。それはわずかに熱水またはアルコール中に可溶性であり、ベンゼン中で可溶性ではなかった。それはアルカリ中で赤色溶液を形成し、そして酸中で青色溶液を形成した。一部分を分析のためにアンモニア中に溶解し、酢酸で沈澱させることによって精製した。この物質は溶融せず、約 255℃において分解し始めた。C5HO2N4Sについての分析：Ｎ，30.10 。実測値：Ｎ，30.16 。
ｃ）5,6−ジアミノ−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（61）
１リットルのフラスコに、50mlの硫化アンモニウムの10％溶液を添加した。この溶液を水蒸気浴上で加熱した。前の実験において得られた湿潤２−メチルメルカプト−４−アミノ−５−ニトロソ−６−オキソ−ピリミジン（60）を徐々に添加した。ニトロソ化合物が過剰に存在することを示すように溶液が赤色になったとき、硫化アンモニウムをまた添加した。硫化アンモニウムは過剰に存在したとき、溶液は黄色であった。ニトロソ化合物のすべてが還元されたとき、過剰の硫化アンモニウムの添加は回避すべきであるか、または得られたジアミノ化合物は高度に着色するであろう。
１リットルのフラスコに、50mlの硫化アンモニウムの10％溶液を添加した。この溶液を水蒸気浴上で加熱した。前の実験において得られた湿潤２−メチルメルカプト−４−アミノ−５−ニトロソ−６−オキソ−ピリミジン（60）を徐々に添加した。ニトロソ化合物が過剰に存在することを示すように溶液が赤色になったとき、硫化アンモニウムをまた添加した。硫化アンモニウムは過剰に存在したとき、溶液は黄色であった。ニトロソ化合物のすべてが還元されたとき、過剰の硫化アンモニウムの添加は回避すべきであるか、または得られたジアミノ化合物は高度に着色するであろう。
ｄ）６−エトキシカルボニルメチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（62）
17.2ｇ(0.1mole）の5,6−ジアミノ−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（61）および22.6ｇのナトリウムエチルオキサリルアセテートの混合物を、 200mlの氷酢酸中で80℃に30分間加熱した。冷却後、沈澱を集め、H２O で洗浄し、乾燥した。次いで粗物質を再びEtOH／H2O 1:1中で加熱することによって溶解させ、 170mlの飽和NaHCO3を添加した。熱溶液を活性炭で処理し、濾液をゆっくり 200mlの熱氷酢酸中に撹拌しながら注いだ。黄色沈澱を濾過し、H2O およびエタノールで洗浄し、 100℃において乾燥すると、62が18.9ｇ（64％）の輝く結晶として得られた（融点 213℃）。C11H12N4O4S（296.3)についての分析：Ｃ，44.59 ；Ｈ，4.08；Ｎ，18.91 。実測値：Ｃ，44.49 ；Ｈ，4.03；Ｎ，18.88 。
17.2ｇ(0.1mole）の5,6−ジアミノ−２−メチルチオ−ピリミジン−４−オン（61）および22.6ｇのナトリウムエチルオキサリルアセテートの混合物を、 200mlの氷酢酸中で80℃に30分間加熱した。冷却後、沈澱を集め、H２O で洗浄し、乾燥した。次いで粗物質を再びEtOH／H2O 1:1中で加熱することによって溶解させ、 170mlの飽和NaHCO3を添加した。熱溶液を活性炭で処理し、濾液をゆっくり 200mlの熱氷酢酸中に撹拌しながら注いだ。黄色沈澱を濾過し、H2O およびエタノールで洗浄し、 100℃において乾燥すると、62が18.9ｇ（64％）の輝く結晶として得られた（融点 213℃）。C11H12N4O4S（296.3)についての分析：Ｃ，44.59 ；Ｈ，4.08；Ｎ，18.91 。実測値：Ｃ，44.49 ；Ｈ，4.03；Ｎ，18.88 。
ｅ）６−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（63）
120mlの 2.5N NaOH中の19.7ｇ（66.5mmol）の６−エトキシカルボニルメチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（62）の溶液を80℃において30分間撹拌した。熱溶液を活性炭で処理し、濾過し、濾液を50mlの熱氷酢酸の中にゆっくり添加した。沈澱を冷却後集め、H２O およびアセトンで洗浄し、 100℃において乾燥すると、63が14.3ｇ（96％）の黄色結晶粉末状物として得られた（融点 275℃分解）。C8H8N4O2S（224.3)についての分析：Ｃ，42.85 ；Ｈ，3.60；Ｎ，24.99 。実測値：Ｃ，42.79 ；Ｈ，3.59；Ｎ，25.06 。
120mlの 2.5N NaOH中の19.7ｇ（66.5mmol）の６−エトキシカルボニルメチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（62）の溶液を80℃において30分間撹拌した。熱溶液を活性炭で処理し、濾過し、濾液を50mlの熱氷酢酸の中にゆっくり添加した。沈澱を冷却後集め、H２O およびアセトンで洗浄し、 100℃において乾燥すると、63が14.3ｇ（96％）の黄色結晶粉末状物として得られた（融点 275℃分解）。C8H8N4O2S（224.3)についての分析：Ｃ，42.85 ；Ｈ，3.60；Ｎ，24.99 。実測値：Ｃ，42.79 ；Ｈ，3.59；Ｎ，25.06 。
ｆ）６−メチル−２−メチルチオ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−4,7−ジオン（64）
240mlの無水アセトニトリル中の 4.0ｇ(17.83mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（63）の懸濁液に、８ml（53.6mmol）のDBU を添加した。この混合物を室温において30分間撹拌した。生ずる透明な溶液に、4.62ｇ（11.9mmol）の3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（16）を添加し、次いで混合物を室温において湿気を排除して６時間撹拌した。
240mlの無水アセトニトリル中の 4.0ｇ(17.83mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−プテリジン−4,7−ジオン（63）の懸濁液に、８ml（53.6mmol）のDBU を添加した。この混合物を室温において30分間撹拌した。生ずる透明な溶液に、4.62ｇ（11.9mmol）の3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−α−Ｄ−リボフラノシルクロライド（16）を添加し、次いで混合物を室温において湿気を排除して６時間撹拌した。
この溶液に、 100mlのジクロロメタン中の 2.4mlの氷酢酸を添加した。この溶液を５分間撹拌し、次いで減圧下に蒸発乾固させると、シロップ状物が得られ、これをシリカゲルのカラム（16×8.5cm)のクロマトグラフィーにかけ、まず 3.5リットルのトルエン／酢酸エチル1:1、次いで 2.5リットルのトルエン／アセトン１：２、最後に３リットルのジクロロメタン／メタノール 100：３で溶離した。生成物の画分を集め、蒸発させ、残留物をトルエンから再結晶化させると、64が2.12ｇ（31％）の無色の結晶として得られた（融点 196−197 ℃）。Ｃ29Ｈ28Ｎ4O7S（576.6)についての分析：Ｃ，60.41 ；Ｈ，4.89；Ｎ，9.72。実測値：Ｃ，60.26 ；Ｈ，4.96；Ｎ，9.68。
ｇ）６−メチル−２−メチルチオ−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）
75mlのジオキサン中の2.19ｇ(3.8mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−８−（３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−４，７−ジオン（64），9.95ｇ（5.69mmol）のｐ−ニトロ−フェニルエタノールおよび1.52ｇ（5.69mmol）のトリフェニルホスファンの溶液に、1.16ｇ(5.7mmol）のエチルアゾジカルボキシレートを添加した。この混合物を室温において 2.5時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をシリカゲルのカラム(5.3×15cm）のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、 300mlのトルエン、 250mlのトルエン／酢酸エチル8:1および 650mlのトルエン酢酸エチル６：１を使用した。生成物の画分を集め、蒸発乾固し、残留物CH２Cl２／AcoEt から再結晶化させると、65が2.31ｇ（85％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 122−125 ℃）。C37H35N5O9S（727.8)についての分析：Ｃ，61.23 ；Ｈ，4.86；Ｎ，9.65。実測値：Ｃ，61.18 ；Ｈ，4.95；Ｎ，9.67。
75mlのジオキサン中の2.19ｇ(3.8mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−８−（３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−４，７−ジオン（64），9.95ｇ（5.69mmol）のｐ−ニトロ−フェニルエタノールおよび1.52ｇ（5.69mmol）のトリフェニルホスファンの溶液に、1.16ｇ(5.7mmol）のエチルアゾジカルボキシレートを添加した。この混合物を室温において 2.5時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をシリカゲルのカラム(5.3×15cm）のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、 300mlのトルエン、 250mlのトルエン／酢酸エチル8:1および 650mlのトルエン酢酸エチル６：１を使用した。生成物の画分を集め、蒸発乾固し、残留物CH２Cl２／AcoEt から再結晶化させると、65が2.31ｇ（85％の収率）の無色の結晶として得られた（融点 122−125 ℃）。C37H35N5O9S（727.8)についての分析：Ｃ，61.23 ；Ｈ，4.86；Ｎ，9.65。実測値：Ｃ，61.18 ；Ｈ，4.95；Ｎ，9.67。
ｈ）６−メチル−２−メチルスルホニル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）
100mlの無水CH2Cl2中の2.27ｇ（3.13mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）の溶液に、撹拌しながら1.35ｇ（＞6.25mmol）のｍ−クロロ過安息香酸（80〜90％の純度）を添加した。24時間撹拌した後、この溶液を減圧下に10mlに濃縮し、ｍ−クロロ過安息香酸の沈澱を濾過し、CH2Cl2（92×５ml）で洗浄し、次いで双方の濾液を蒸発させた。残留物をシリカゲルのカラム(5.3×14cm）上に置き、生成物をトルエン／AcOEt 5:2で溶離した。生成物の画分を小さい体積に濃縮し、これにより66は溶液の中から外に結晶化して 2.4ｇ（86％）の無色の結晶が得られた（融点 193℃）。C37H35N5O11S（757.8)についての分析：Ｃ，58.65 ；Ｈ，4.66；Ｎ，9.24。実測値：Ｃ，58.77 ；Ｈ，4.69；Ｎ，9.30。
100mlの無水CH2Cl2中の2.27ｇ（3.13mmol）の６−メチル−２−メチルチオ−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）の溶液に、撹拌しながら1.35ｇ（＞6.25mmol）のｍ−クロロ過安息香酸（80〜90％の純度）を添加した。24時間撹拌した後、この溶液を減圧下に10mlに濃縮し、ｍ−クロロ過安息香酸の沈澱を濾過し、CH2Cl2（92×５ml）で洗浄し、次いで双方の濾液を蒸発させた。残留物をシリカゲルのカラム(5.3×14cm）上に置き、生成物をトルエン／AcOEt 5:2で溶離した。生成物の画分を小さい体積に濃縮し、これにより66は溶液の中から外に結晶化して 2.4ｇ（86％）の無色の結晶が得られた（融点 193℃）。C37H35N5O11S（757.8)についての分析：Ｃ，58.65 ；Ｈ，4.66；Ｎ，9.24。実測値：Ｃ，58.77 ；Ｈ，4.69；Ｎ，9.30。
ｉ）２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（67）
撹拌しながら、1.89ｇ(2.5mmol）の６−メチル−２−メチルスルホニル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）に、気体NH3 を80分間泡立てて通入した。次いでこの溶液を蒸発させ、２回CH2Cl2とともに共蒸発させ、生ずる残留物をシリカゲルのカラム(5.5×８cm）上に置き、クロマトグラフィーにかけ、トルエン／AcOEt ５：２で溶離した。生成物の画分を小さい体積に濃縮し、これにより67は溶液の中から外に結晶化して1.68ｇ（97％）の無色の結晶が得られた（融点 208−209 ℃）。C36H34N6O9（694.7)についての分析：Ｃ，62.24 ；Ｈ，4.93；Ｎ，12.10 。実測値：Ｃ，61.98 ；Ｈ，4.94；Ｎ，12.14 。
撹拌しながら、1.89ｇ(2.5mmol）の６−メチル−２−メチルスルホニル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（65）に、気体NH3 を80分間泡立てて通入した。次いでこの溶液を蒸発させ、２回CH2Cl2とともに共蒸発させ、生ずる残留物をシリカゲルのカラム(5.5×８cm）上に置き、クロマトグラフィーにかけ、トルエン／AcOEt ５：２で溶離した。生成物の画分を小さい体積に濃縮し、これにより67は溶液の中から外に結晶化して1.68ｇ（97％）の無色の結晶が得られた（融点 208−209 ℃）。C36H34N6O9（694.7)についての分析：Ｃ，62.24 ；Ｈ，4.93；Ｎ，12.10 。実測値：Ｃ，61.98 ；Ｈ，4.94；Ｎ，12.14 。
ｊ）２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（68）
30mlのCH2Cl2および60mlのMeOH中の1.17ｇ（1.69mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（67）の溶液に、0.45ｇ（3.37mmol）のナトリウムチオフェノレートを添加した。この溶液を室温におて16時間撹拌した。次いで11ｇのフラッシュシリカゲルを反応混合物に添加し、減圧下に蒸発させた。生ずる混合物をCH2Cl2／MeOH混合物(500mlの 100:1， 300mlの50:1および9:1）で前もって平衡化したシリカゲルのカラム(5.3×8.5cm)上に置いた。生成物の画分をプールし、蒸発させると、68が0.63ｇ（81％）の微結晶質粉末状物として得られた（融点＞220 ℃分解）。C20H22N6O7 （458.4)についての分析：Ｃ，52.40 ；Ｈ，4.84；Ｎ，18.34 。実測値：Ｃ，52.31 ；Ｈ，4.76；Ｎ，18.22 。
30mlのCH2Cl2および60mlのMeOH中の1.17ｇ（1.69mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（3,5−ジ−Ｏ−ｐ−トルオイル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（67）の溶液に、0.45ｇ（3.37mmol）のナトリウムチオフェノレートを添加した。この溶液を室温におて16時間撹拌した。次いで11ｇのフラッシュシリカゲルを反応混合物に添加し、減圧下に蒸発させた。生ずる混合物をCH2Cl2／MeOH混合物(500mlの 100:1， 300mlの50:1および9:1）で前もって平衡化したシリカゲルのカラム(5.3×8.5cm)上に置いた。生成物の画分をプールし、蒸発させると、68が0.63ｇ（81％）の微結晶質粉末状物として得られた（融点＞220 ℃分解）。C20H22N6O7 （458.4)についての分析：Ｃ，52.40 ；Ｈ，4.84；Ｎ，18.34 。実測値：Ｃ，52.31 ；Ｈ，4.76；Ｎ，18.22 。
ｋ）２−アミノ−６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−４，７−ジオン〔６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（69）
15mlのピリジン中の 0.195ｇ(0.425mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（68）の溶液に、1.12ml（1.14mmol）のDBU を添加した。この溶液を室温において３時間撹拌した。次いでこの溶液を減圧下に蒸発させ、残留物を25mlのH2O 中に溶解し、CH2Cl2（３×25ml）で洗浄した。水性相をHClによりpH７に中和し、次いで小さい体積（５ml）に濃縮した。この混合物をアイスボックスの中に入れ、69は0.84ｇ（71％）の無色の結晶として得られた（融点 300℃分解）。C12H15N5O3・1/2H2O（318.3)についての分析：Ｃ，44.28 ；Ｈ，5.06；Ｎ，22.00 。実測値：Ｃ，45.42 ；Ｈ，4.91；Ｎ，21.86 。
15mlのピリジン中の 0.195ｇ(0.425mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（68）の溶液に、1.12ml（1.14mmol）のDBU を添加した。この溶液を室温において３時間撹拌した。次いでこの溶液を減圧下に蒸発させ、残留物を25mlのH2O 中に溶解し、CH2Cl2（３×25ml）で洗浄した。水性相をHClによりpH７に中和し、次いで小さい体積（５ml）に濃縮した。この混合物をアイスボックスの中に入れ、69は0.84ｇ（71％）の無色の結晶として得られた（融点 300℃分解）。C12H15N5O3・1/2H2O（318.3)についての分析：Ｃ，44.28 ；Ｈ，5.06；Ｎ，22.00 。実測値：Ｃ，45.42 ；Ｈ，4.91；Ｎ，21.86 。
ｌ）２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（70）
15mlの無水ピリジン中の0.57ｇ（1.22mmol）の２−アミノ−６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−4,7−ジオン〔６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（69）の溶液に、 0.454ｇ（1.34mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。
15mlの無水ピリジン中の0.57ｇ（1.22mmol）の２−アミノ−６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−4,7−ジオン〔６−メチル−８−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−イソキサントプテリン（69）の溶液に、 0.454ｇ（1.34mmol）のジメトキシトリチルクロライドを添加した。
この混合物を室温において 1.5時間撹拌した。次いで、５mlのMeOHを添加し、この溶液を５分間撹拌し、次いで 100mlのCH2Cl2で希釈した。生ずる溶液を 100mlの飽和NaHCO3溶液で洗浄し、H2O (100ml）で２回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、残留物をクロマトグラフィーのためにシリカゲルのカラム（３×15ml）上に置き、トルエン／AcOEt 1:1で溶離した。生成物の画分を蒸発させると、70が 0.5ｇ（54％）の固体状泡状物として得られた。C40H40N6O9（760.8)についての分析：Ｃ，63.14 ；Ｈ，5.30；Ｎ，11.05 。実測値：Ｃ，63.06 ；Ｈ，5.21；Ｎ，10.91 。
ｍ）２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン−３'−Ｏ−（β−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピル）ホスホルアミダイト（71）
15mlの無水CH2Cl2中の0.76ｇ（１mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（70）の溶液に、アルゴン雰囲気下に、0.425ｇ(1.5mmol）の２−シアノエチル−ビス−N,N−ジイソプロピルアミノ−−ホスファンおよび35mg(0.5mmol）のテトラゾールを添加した。この溶液を室温において12時間撹拌した。次いでこの混合物を15mlのCH2Cl2で希釈し、１回10mlの飽和NaHCO3溶液で、２回飽和NaCl溶液で抽出した。
15mlの無水CH2Cl2中の0.76ｇ（１mmol）の２−アミノ−６−メチル−４−ｐ−ニトロフェニルエトキシ−８−（５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−プテリジン−７−オン（70）の溶液に、アルゴン雰囲気下に、0.425ｇ(1.5mmol）の２−シアノエチル−ビス−N,N−ジイソプロピルアミノ−−ホスファンおよび35mg(0.5mmol）のテトラゾールを添加した。この溶液を室温において12時間撹拌した。次いでこの混合物を15mlのCH2Cl2で希釈し、１回10mlの飽和NaHCO3溶液で、２回飽和NaCl溶液で抽出した。
有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、残留物をクロマトグラフィーのためにシリカゲルのカラム上に置き、少量のトリエチルアミンを含有するトルエン／AcOEt で溶離した。生成物の画分を集め、蒸発させると、黄色がかった泡状物が得られ、これを少量のトルエン中に溶解し、 100mlのｎ−ヘキサンの中に撹拌しながら滴下すると、吸引濾過および乾燥後、71が 0.865ｇ（90％）の黄色がかった粉末状物として得られた（融点＞150 ℃分解）。C50H57N8O10P（960.9)についての分析：Ｃ，62.97 ；Ｈ，5.98；Ｎ，12.32 。実測値：Ｃ，62.81 ；Ｈ，5.88；Ｎ，12.20 。
実施例10. ２'−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル−プテリジン−５’−トリホスフェートの一般的合成
ａ）トリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−モノホスフェート（72）
15mlのトリメチルホスフェートに、 6.5mMの適当なプテリジン−β−Ｄ−２'−デオキシリボヌクレオシドを添加する。すべての湿気を排除して、この混合物を−６℃に冷却する。次いでこの混合物を撹拌し、 1.5ml（16.3mmol）のPOCl3 を５分かけて滴下し、次いで混合物を０℃において２時間撹拌して透明溶液を得る。この溶液に、 120mlの 0.5Ｍトリエチルアンモニウム重炭酸塩の緩衝液pH7.5 を添加する。この溶液を15分間撹拌し、次いで真空蒸発させる。メタノールとともに数回共蒸発させた後、残留物H2O 中に溶解し、DEAE−セファデックスカラム(2.5×80cm；HCO3型）上に置く。０〜0.3 Ｍトリエチルアンモニウム重炭酸塩の緩衝液pH7.5 の直線の勾配を使用してクロマトグラフィーを実施し、８〜10リットルの緩衝液を使用する。
ａ）トリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−モノホスフェート（72）
15mlのトリメチルホスフェートに、 6.5mMの適当なプテリジン−β−Ｄ−２'−デオキシリボヌクレオシドを添加する。すべての湿気を排除して、この混合物を−６℃に冷却する。次いでこの混合物を撹拌し、 1.5ml（16.3mmol）のPOCl3 を５分かけて滴下し、次いで混合物を０℃において２時間撹拌して透明溶液を得る。この溶液に、 120mlの 0.5Ｍトリエチルアンモニウム重炭酸塩の緩衝液pH7.5 を添加する。この溶液を15分間撹拌し、次いで真空蒸発させる。メタノールとともに数回共蒸発させた後、残留物H2O 中に溶解し、DEAE−セファデックスカラム(2.5×80cm；HCO3型）上に置く。０〜0.3 Ｍトリエチルアンモニウム重炭酸塩の緩衝液pH7.5 の直線の勾配を使用してクロマトグラフィーを実施し、８〜10リットルの緩衝液を使用する。
主要な画分は 0.2〜0.3 Ｍの緩衝液濃度において溶離される。この画分を30℃において真空蒸発させ、次いで生ずる残留物をメタノールとともに数回共蒸発させる。高真空下に乾燥すると、固体状物72が得られる。
ｂ）トリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−トリホスフェート（73）
トリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−モノホスフェート（58）（１mmol）を無水ピリジンとともに３回共蒸発させ、次いで10mlの無水ジメチルホルムアミド（DMF)中に溶解する。無水条件下に 0.8ｇ（５mmol）のカルボニルジイミダゾールを添加した後、この溶液を一夜撹拌する。0.33mlの無水メタノールを溶液に添加し、１時間撹拌することによって、過剰のカルボニルジイミダゾールをクエンチングする。
トリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−モノホスフェート（58）（１mmol）を無水ピリジンとともに３回共蒸発させ、次いで10mlの無水ジメチルホルムアミド（DMF)中に溶解する。無水条件下に 0.8ｇ（５mmol）のカルボニルジイミダゾールを添加した後、この溶液を一夜撹拌する。0.33mlの無水メタノールを溶液に添加し、１時間撹拌することによって、過剰のカルボニルジイミダゾールをクエンチングする。
この溶液に、50mlの無水DMF 中の５mMのｔ−ブチルアンモニウムピロホスフェートの懸濁液を添加する。次いでこの混合物を室温において連続的20時間撹拌する。生ずる沈澱を濾過し、DMF で洗浄し、濾液を高真空下に30℃において蒸発させる。残留物をメタノールおよびH2O とともに数回共蒸発させ、次いでH2O 中に溶解し、DEAE−セファデックスカラム(2.5×80cm；HCO3型）上に置き、トリエチルアンモニウム重炭酸塩の緩衝液pH7.5 の直線の勾配で溶離し、約10リットルを使用する。生成物は 0.7Ｍの緩衝液濃度の画分の中に溶離される。画分をポリし、次いでメタノールとともに数回共蒸発させる。次いで混合物を高真空下に乾燥すると、73がアモルファス固体状物として得られる。
ｃ）ナトリウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−トリホスフェート（74）
10mlの無水メタノールの中に、 0.5mMのトリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−トリホスフェート（73）を溶解する。この溶液を撹拌し、 1.5当量のアセトン中の１Ｎ NaI溶液をゆっくり滴下してナトリウム塩の沈澱を形成する。この懸濁液を 100mlのアセトンで希釈し、30分撹拌し、次いで固体状物を磁器の漏斗を通して吸引により集める。固体状物を小さい部分のアセトンで洗浄し、高真空下に乾燥すると、74が得られ、これはトリエチルアンモニウム塩よりも安定であり、分解しないで貯蔵することができる。
10mlの無水メタノールの中に、 0.5mMのトリエチルアンモニウムプテリジン−２'−デオキシリボヌクレオシド−５'−トリホスフェート（73）を溶解する。この溶液を撹拌し、 1.5当量のアセトン中の１Ｎ NaI溶液をゆっくり滴下してナトリウム塩の沈澱を形成する。この懸濁液を 100mlのアセトンで希釈し、30分撹拌し、次いで固体状物を磁器の漏斗を通して吸引により集める。固体状物を小さい部分のアセトンで洗浄し、高真空下に乾燥すると、74が得られ、これはトリエチルアンモニウム塩よりも安定であり、分解しないで貯蔵することができる。
実施例11. プテリジン誘導体を含有するオリゴヌクレオチドの合成
下記のオリゴヌクレオチドをABI DNA 合成装置（380B型、Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティー）により合成した：
オリゴ１： ５'−GTN TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：２），
オリゴ２： ５'−GTG TWG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：３），
オリゴ３： ５'−GTG TGN AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：４），
オリゴ４： ５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：５），
オリゴ５： ５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC ANT −３’（配列識別No：６），
オリゴ６： ５'−GTG TNG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：７），
オリゴ７： ５'−ACT GCT AGA NAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：８），
オリゴ８： ５'−ACT GCT ANA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：９），
オリゴ９： ５'−ACT NCT AGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：10）および
オリゴ10： ５'−ACT GCT NGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：11）。
各オリゴヌクレオチドにおいて、１または２以上のグアノシンを式ＸＶのプテリジンデオキシリボヌクレオチド（Ｎと表示する）で置換した。
下記のオリゴヌクレオチドをABI DNA 合成装置（380B型、Applied Biosystems、カリフォルニア州フォスターシティー）により合成した：
オリゴ１： ５'−GTN TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：２），
オリゴ２： ５'−GTG TWG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：３），
オリゴ３： ５'−GTG TGN AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：４），
オリゴ４： ５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：５），
オリゴ５： ５'−GTG TGG AAA ATC TCT ANC ANT −３’（配列識別No：６），
オリゴ６： ５'−GTG TNG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：７），
オリゴ７： ５'−ACT GCT AGA NAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：８），
オリゴ８： ５'−ACT GCT ANA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：９），
オリゴ９： ５'−ACT NCT AGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：10）および
オリゴ10： ５'−ACT GCT NGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：11）。
各オリゴヌクレオチドにおいて、１または２以上のグアノシンを式ＸＶのプテリジンデオキシリボヌクレオチド（Ｎと表示する）で置換した。
プテリジンヌクレオチドを含有するオリゴヌクレオチドを合成するために、ジメトキシトリチルでブロックしたプテリジンホスホルアミダイトをDNA 合成装置上のボトルの口＃５の中に入れた。
濃アンモニアの処理によりオリゴヌクレオチドの固体の支持体から切断し、アンモニア溶液を55℃に５時間加熱することによって脱保護した。次いで試料をスピード・バク・コンセントレーター（Speed Vac Concentrator) (Savant 、米国ニューヨーク州ファーミングデール）中で蒸発乾固させた。19:1の20％ポリアクリルアミドゲルの電気泳動により、オリゴヌクレオチドを精製した。バンドを紫外線吸収により検出し、切除し、粉砕およびソーキング方法により 0.3Ｍの酢酸ナトリウムpH5.2 の中に溶離した。最後に、MgCl2 を添加して 0.1 Mの濃度を達成し、試料をエタノール中で沈降させた。
TRIS緩衝液pH7.8 中のオリゴヌクレオチドの蛍光分析は、下表１に示す相対的量子を明らかにした。 360nmの励起波長を使用して、蛍光測定を行った。硫酸キニンを標準として使用し、測定をフルオロメーター（8000型、 SLM−Aminco、米国イリノイ州アーバナ）。
実施例12. プテリジン誘導体を含有するオリゴヌクレオチドを利用するインテグラーゼ活性の実時間検出
オリゴヌクレオチド５’−GTGTGGAAAATCTCTAGCANT −３’（配列No：６）およびその相補体５’−ACTGCTAGAGATTTTCCACAC −３’を実施例11の方法に従い合成した。次いでオリゴヌクレオチドを一緒に 100mMのNaCl溶液中で85℃に加熱し、この溶液を室温にゆっくり冷却することによってアニーリングした。これにより、モデルの基質の二本鎖DNA 分子が形成した：
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC ANT −３’（配列識別No：６）
３'−CAC ACC TTT TAG AGA TCG TCA −５’（配列識別No：12）
ここでＮはプテリジンヌクレオチドを表す。
オリゴヌクレオチド５’−GTGTGGAAAATCTCTAGCANT −３’（配列No：６）およびその相補体５’−ACTGCTAGAGATTTTCCACAC −３’を実施例11の方法に従い合成した。次いでオリゴヌクレオチドを一緒に 100mMのNaCl溶液中で85℃に加熱し、この溶液を室温にゆっくり冷却することによってアニーリングした。これにより、モデルの基質の二本鎖DNA 分子が形成した：
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC ANT −３’（配列識別No：６）
３'−CAC ACC TTT TAG AGA TCG TCA −５’（配列識別No：12）
ここでＮはプテリジンヌクレオチドを表す。
HIV−１インテグラーゼｐ−トルオイル−(3.5pmol／反応）を大腸菌（Escherichia coli) の発現ベクターを介して、Bushmann etal., Science, 249 : 1555-1558 (1990)に記載されているように、生産した。タンパク質は−70℃において１ＭのNaCl／20mMのHepes, pH7.6／１mMのEDTA／１mMのジチオスレイトール／20％のグリセロール（wt／vol)中で貯蔵した。
ストックｐ−トルオイル−（0.44mg／ml）をまずタンパク質貯蔵緩衝液（１ＭのNaCl／20mMのHepes, pH7.6／１mMのEDTA／１mMのジチオスレイトール／20％（wr／vol)グリセロール）中で1:3に希釈した。引き続く酵素の希釈は反応緩衝液（25mMの Mops, pH7.2／7.5mM のMnCl2／ウシ血清アルブミン、 100μｇ／ml／10mMの２−メルカプトエタノール）中で１：20であった。反応体積は60μｌであった。最終の反応混合物は50mMのNaCl，１mMのHepes,50μＭのEDTAおよび50μＭのジチオスレイトール、10％（et／vol)のグリセロール、7.5mM のMnCl2, 0.1mg／mlウシ血清アルブミン、10mMの２−メルカプトエタノール、および20mMのMOPS, pH7.2 を含有した。
反応を酵素の添加により開始し、フルオロメーター（8000型、 SLM−Aminco、米国イリノイ州アーバナ）を使用して蛍光強度の変化を観測することによって、実時間において10〜20分間モニターした。励起波長は 360nmであり、そして放射波長は 460nmであった。
インテグラーゼは上記に示すモデル基質と反応して、下記の配列を生成した：
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC A −３’ ＋NT
３'−CAC ACC TTT TAG AGA TCG TCA −５’
プテリジンヌクレオチドをオリゴヌクレオチドの中に組込んだとき、プテリジンヌクレオチドの蛍光はかなりクェンチングした（0.14の量子収量）。切断反応はこの反応はこのクエンチを解放し、シグナルの４倍増加を生じた（モノマーについて0.88の量子収量）。したがって、蛍光の増加を測定することによって、インテグラーゼの活性はアッセイされた。
インテグラーゼは上記に示すモデル基質と反応して、下記の配列を生成した：
５'−GTG TGG AAA ATC TCT AGC A −３’ ＋NT
３'−CAC ACC TTT TAG AGA TCG TCA −５’
プテリジンヌクレオチドをオリゴヌクレオチドの中に組込んだとき、プテリジンヌクレオチドの蛍光はかなりクェンチングした（0.14の量子収量）。切断反応はこの反応はこのクエンチを解放し、シグナルの４倍増加を生じた（モノマーについて0.88の量子収量）。したがって、蛍光の増加を測定することによって、インテグラーゼの活性はアッセイされた。
Claims (105)
- 下記に示すように環の頂点１〜８をもつ式；
Ｒ12はＲ11と組合わされないとき、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員であり、
Ｒ13はＲ11と結合しないとき、低級アルキルまたはＨであり、
Ｒ14はＨ、低級アルキルまたはフェニルから成る群より選択される構成員であり、
Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ17と結合して環の頂点１と２との間の二重結合を形成し、こうして環の頂点２および４は集合的に最大１つのオキソ酸素を有し、
Ｒ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、NH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択される構成員であり、
Ｒ15がＲ16と組合わされないとき、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ15がＲ16と組合わされるとき、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨおよび低級アルキルから成る群より選択される構成員であり、そして
Ｒ17はＲ15と結合しないとき、かつＲ20はＲ18と結合しないとき、
Ｒ21はＨ、トリホスフェート、および保護基から成る群より選択される構成員であり、
Ｒ22はＨ、OHおよび保護基で置換されたOHから成る群より選択される構成員であり、
Ｒ23はＨ、ホスホルアミダイト、Ｈ−ホスホネート、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、ヘミスクシネート、固体の支持体に共有結合したヘミスクシネート、ジシクロヘキシルカーボジイミド、および固体の支持体に共有結合したジシクロヘキシルカーボジイミドから成る群より選択される構成員であり、
Ｒ13がＨでありかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートであり、そして
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成しかつＲ23がＨであるとき、Ｒ21はトリホスフェートである）
を有する化合物。 - Ｒ14がＨ，CH3 およびフェニルから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ14がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈ、フェニル、NH2 、および保護基で２置換されたNH2 から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈおよびフェニルから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ14がＨ，CH3 およびフェニルから成る群より選択される構成員であり、Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈ、フェニルおよびNH2 から成る群より選択される構成員であり、そして、Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ12がベンゾイル、イソブチリル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ジメチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルおよびジメチルアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１または２置換されたNH2 である、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ12がジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル、およびジメルチアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１置換されたNH2 である、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ16がベンゾイル、イソブチリル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ジメチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルおよびジメチルアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１または２置換されたNH2 である、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ16がジ−ｎ−ブチルアミノメチリデン、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル、およびジメルチアミノメチレンアミノから成る群より選択される保護基で１置換されたNH2 である、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ21がＨ、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、フタロイル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリレン、およびジメチルアミノメチリデンから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ21がジメトキシトリチル、ジ−ｎ−ブチルアミノメチリレン、およびジメチルアミノメチリデンから成る群より選択される、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ22がＨ，OHおよび置換OHから成る群より選択される構成員であり、前記置換OHはトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル、テトラヒドロピラン−１−イル、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル、１−（２−クロロ−４−メチル）フェニル−４−メトキシピペリジン−４−イル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｐ−ニトロフェニルエチルスルホニル、テトラヒドロピラニル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、２−ニトロベンジル、９−フェニルキサンテン−９−イルおよびｐ−ニトロフェニルエチルから成る群より選択される構成員で置換されている、請求項１に記載の化合物。
- Ｒ22がＨおよび置換OHから成る群より選択される構成員であり、前記置換OHがジメトキシトリチル、テトラヒドロピラン−１−イル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−ニトロベンジル、およびｐ−ニトロフェニルエチルから成る群より選択される構成員で置換されている、請求項１に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がフェニルであり、
Ｒ18がＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がフェニルであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がＨであり、
Ｒ18がＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
- 式中、
Ｒ11がＲ13と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソを形成し、
Ｒ13がCH3 であり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 であり、
Ｒ18がＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ13がＨであり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ18がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ12と結合して二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ13がＨであり、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ18がＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がCH3 である、
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ16と結合して二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がCH3 である、
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がＨである、
請求項１に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 、および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がＨである、
請求項１に記載の化合物。 - Ｒ12がNH2 である、請求項16に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項16に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項16に記載の化合物。 - Ｒ12がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項27に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項26に記載の化合物。 - Ｒ12がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項29に記載の化合物。
- Ｒ12がNH2 である、請求項17に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項17に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項32に記載の化合物。 - Ｒ12がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項33に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項32に記載の化合物。 - Ｒ12がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項35に記載の化合物。
- Ｒ23がH,H−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、請求項18に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がＨであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項37に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項37に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項37に記載の化合物。 - Ｒ16がNH2 である、請求項19に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項19に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項42に記載の化合物。 - Ｒ16がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項43に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項42に記載の化合物。 - Ｒ16がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項45に記載の化合物。
- Ｒ16がNH2 である、請求項20に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ16が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項21に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項48に記載の化合物。 - Ｒ16がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項49に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項48に記載の化合物。 - Ｒ16がジメチルアミノメチレンアミノである、請求項51に記載の化合物。
- Ｒ12がNH2 である、請求項21に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項21に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項54に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項55に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項54に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項57に記載の化合物。
- Ｒ12がNH2 である、請求項22に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項22に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項60に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項61に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項60に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項63に記載の化合物。
- Ｒ12がNH2 である、請求項23に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項23に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項66に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項67に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項66に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項69に記載の化合物。
- Ｒ12がNH2 である、請求項24に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ12が保護基で１または２置換されたNH2 であり、そして
Ｒ23がＨ−ホスホネート、ホスホルアミダイト、ヘミスクシネート、および固体の支持体に共有結合したヘミスクシネートから成る群より選択される構成員である、
請求項24に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がβ−シアノエチル、Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトである、
請求項72に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項73に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がジメトキシトリチルであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がコントロールされた孔のガラスに共有結合したヘミスクシネートである、
請求項72に記載の化合物。 - Ｒ12がｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルである、請求項75に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項16に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項17に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項18に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項19に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項20に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項21に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項22に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項23に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ21がトリホスフェートであり、
Ｒ22がＨであり、そして
Ｒ23がＨである、
請求項24に記載の化合物。 - 下記に示すように環の頂点１〜８をもつ式
Ｒ11はＲ12と組合わされて二重結合により環の頂点４に結合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ13と結合して環の頂点３と４との間の二重結合を形成し、
Ｒ12はＲ3 と組合わされないとき、NH2 であり、
Ｒ13はＲ11と結合しないとき、低級アルキルまたはＨであり、
Ｒ14はＨ、低級アルキルまたはフェニルから成る群より選択される構成員であり、
Ｒ15はＲ16と組合わされて二重結合により環の頂点２に結合する単一のオキソ酸素を形成するか、またはＲ17と結合して環の頂点１と２との間の二重結合を形成し、こうして環の頂点２および４は集合的に最大１つのオキソ酸素を有し、
Ｒ16はＲ15と組合わされないとき、Ｈ、フェニル、およびNH2 から成る群より選択される構成員であり、
Ｒ15がＲ16と組合わされないとき、Ｒ18はＲ19と組合わされて二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ15がＲ16と組合わされるとき、Ｒ18はＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そしてＲ19はＨおよび低級アルキルから成る群より選択される構成員であり、そして
Ｒ17はＲ15と結合しないとき、かつＲ２０はＲ１８と結合しないとき、
Ｒ22はＨおよびOHから成る群より選択される構成員である）
を有するプテリジン誘導体である１種または２種以上のヌクレオチドモノマーを含んでなるオリゴヌクレオチド。 - Ｒ14がＨ，CH3 およびフェニルから成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- Ｒ14がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈ、フェニル、およびNH2 から成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈおよびフェニルから成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- Ｒ16がＨ，CH3 およびフェニルから成る群より選択される構成員であり、Ｒ16が、Ｒ15と結合しないとき、Ｈ、フェニルおよびNH2 から成る群より選択される構成員であり、そして、Ｒ18がＲ20と結合するとき、Ｒ19がＨおよびCH3 から成る群より選択される、請求項86に記載の化合物。
- 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がフェニルであり、
Ｒ16がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がフェニルであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がＨであり、
Ｒ16がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ12と結合して二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ13がCH3 であり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 であり、
Ｒ16がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ12と結合して二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ13がＨであり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 であり、
Ｒ18がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ12と結合して二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ13がＨであり、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、
Ｒ16がNH2 および保護基で１または２置換されたNH2 から成る群より選択され、
Ｒ18がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そして
Ｒ20が
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ16と結合して二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がCH3 である、
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ16と結合して二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がCH3 である、
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がCH3 であり、
Ｒ15がＲ16と結合して二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がＨである、
請求項86に記載の化合物。 - 式中、
Ｒ11がＲ13と結合して環の頂点３と４との間で二重結合を形成し、
Ｒ12がNH2 であり、
Ｒ14がＨであり、
Ｒ15がＲ16と結合して二重結合により環の頂点２に接合した単一のオキソ酸素を形成し、
Ｒ17が
Ｒ18がＲ20と結合して環の頂点７と８との間で二重結合を形成し、そして
Ｒ19がＨである、
請求項86に記載の化合物。 - 前記ヌクレオチドモノマーが前記オリゴヌクレオチドの３'末端に存在する、請求項86に記載の化合物。
- 前記ヌクレオチドモノマーが前記オリゴヌクレオチドの５'末端に存在する、請求項86に記載の化合物。
- 前記ヌクレオチドモノマーが１〜10ピリミジンモノマーにより囲まれている、請求項86に記載の化合物。
- ５’−GTN TGG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：２），
５’−GTG TNG AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：３），
５’−GTG TGN AAA ATC TCT AGC AGT −３’（配列識別No：４），
５’−GTG TGG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：５），
５’−GTG TGG AAA ATC TCT AGC ANT −３’（配列識別No：６），
５’−GTG TNG AAA ATC TCT ANC AGT −３’（配列識別No：７），
５’−ACT GCT AGA NAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：８），
５’−ACT GCT ANA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：９），
５’−ACT NCT AGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：10）および
５’−ACT GCT NGA GAT TTT CCA CAC −３’（配列識別No：11）、
から成る群より選択され、ここでＡはアデノシンヌクレオチドであり、Ｃはシトシンヌクレオチドであり、Ｇはグアノシンヌクレオチドであり、Ｔはチミジンヌクレオチドであり、そしてＮはプテリジンヌクレオチドであり、式中Ｒ11がＲ12と結合して二重結合により環の頂点４に接合した単一のオキソ酸素を形成し、Ｒ13がCH3 またはＨであり、Ｒ14がＲ17と結合して環の頂点１と２との間で二重結合を形成し、Ｒ16がNH2 であり、Ｒ18がＲ19と結合して二重結合により環の頂点７に接合した単一のオキソ酸素を形成し、そしてＲ20が
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/245,923 US5525711A (en) | 1994-05-18 | 1994-05-18 | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7529675A Division JPH10500949A (ja) | 1994-05-18 | 1995-04-25 | 蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2009091358A true JP2009091358A (ja) | 2009-04-30 |
Family
ID=22928654
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7529675A Withdrawn JPH10500949A (ja) | 1994-05-18 | 1995-04-25 | 蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 |
| JP2008261724A Pending JP2009091358A (ja) | 1994-05-18 | 2008-10-08 | 蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7529675A Withdrawn JPH10500949A (ja) | 1994-05-18 | 1995-04-25 | 蛍光性ｄｎａとしてのプテリジンヌクレオチド類似体 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5525711A (ja) |
| EP (1) | EP0759927B1 (ja) |
| JP (2) | JPH10500949A (ja) |
| AT (1) | ATE167680T1 (ja) |
| AU (1) | AU688036B2 (ja) |
| CA (1) | CA2190588C (ja) |
| DE (1) | DE69503129T2 (ja) |
| DK (1) | DK0759927T3 (ja) |
| ES (1) | ES2118593T3 (ja) |
| WO (1) | WO1995031469A1 (ja) |
Families Citing this family (863)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6335434B1 (en) | 1998-06-16 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc., | Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates |
| US8153602B1 (en) | 1991-11-19 | 2012-04-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Composition and methods for the pulmonary delivery of nucleic acids |
| CA2170869C (en) | 1993-09-03 | 1999-09-14 | Phillip Dan Cook | Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides |
| US6787304B1 (en) | 1994-12-28 | 2004-09-07 | Georgetown University | Fluorometric assay for detecting nucleic acid cleavage |
| US20030165908A1 (en) * | 1994-12-30 | 2003-09-04 | Georgetown University | Fluorometric assay for detecting nucleic acid cleavage |
| US6420549B1 (en) | 1995-06-06 | 2002-07-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide analogs having modified dimers |
| US5854033A (en) | 1995-11-21 | 1998-12-29 | Yale University | Rolling circle replication reporter systems |
| US6379911B2 (en) * | 1996-02-23 | 2002-04-30 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Enzyme detection/assay method and substrates |
| US9096636B2 (en) | 1996-06-06 | 2015-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
| US7875733B2 (en) * | 2003-09-18 | 2011-01-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising 4′-thionucleosides for use in gene modulation |
| US20070275921A1 (en) * | 1996-06-06 | 2007-11-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric Compounds That Facilitate Risc Loading |
| US7812149B2 (en) | 1996-06-06 | 2010-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
| US20030044941A1 (en) | 1996-06-06 | 2003-03-06 | Crooke Stanley T. | Human RNase III and compositions and uses thereof |
| US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
| US6451530B1 (en) | 1996-12-13 | 2002-09-17 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Fluorescent nucleotide analog hairpin formation for detection of nucleic acid hybridization |
| US5872011A (en) * | 1997-06-13 | 1999-02-16 | The Rockefeller University | Crystal of a protein-ligand complex containing an N-terminal truncated eIF4E, and methods of use thereof |
| US6020162A (en) * | 1997-06-13 | 2000-02-01 | The Rockefeller University | Crystal of a protein-ligand complex containing an N-terminal truncated eIF4E, and methods of use thereof |
| CA2242035C (en) | 1997-07-01 | 2004-11-23 | Transgene S.A. | Compositions useful for transferring therapeutically active substances into a target cell, and their use in gene therapy |
| CA2294988C (en) | 1997-07-01 | 2015-11-24 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for the delivery of oligonucleotides via the alimentary canal |
| US7321828B2 (en) * | 1998-04-13 | 2008-01-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | System of components for preparing oligonucleotides |
| US20040186071A1 (en) | 1998-04-13 | 2004-09-23 | Bennett C. Frank | Antisense modulation of CD40 expression |
| AU745880B2 (en) | 1998-05-21 | 2002-04-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for non-parenteral delivery of oligonucleotides |
| JP2002515514A (ja) | 1998-05-21 | 2002-05-28 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | オリゴヌクレオチドの局所送逹のための組成物及び方法 |
| US6867294B1 (en) | 1998-07-14 | 2005-03-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages |
| DE19858588B4 (de) * | 1998-08-22 | 2016-04-07 | Qiagen Gmbh | Farbstoffmarkiertes Oligonukleotid zum Markieren eines Nukleinsäuremoleküls |
| US6225293B1 (en) | 1998-09-02 | 2001-05-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compounds for tracking the biodistribution of macromolecule-carrier combinations |
| US6716971B1 (en) | 1998-09-08 | 2004-04-06 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pteridine nucleotide analogs |
| EP1112281B1 (en) * | 1998-09-08 | 2005-11-23 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Pteridine nucleotide analogs |
| US6077709A (en) | 1998-09-29 | 2000-06-20 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of Survivin expression |
| US6300320B1 (en) | 1999-01-05 | 2001-10-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of c-jun using inhibitors of protein kinase C |
| US6127124A (en) * | 1999-01-20 | 2000-10-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Fluorescence based nuclease assay |
| US6946465B2 (en) | 1999-02-02 | 2005-09-20 | 4 Aza Bioscience Nv | Immunosuppressive effects of pteridine derivatives |
| EP1187615A2 (en) * | 1999-02-02 | 2002-03-20 | K.U. Leuven Research & Development | Immunosurpressive effects of pteridine derivatives |
| US6613513B1 (en) * | 1999-02-23 | 2003-09-02 | Caliper Technologies Corp. | Sequencing by incorporation |
| US7098192B2 (en) | 1999-04-08 | 2006-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression |
| DE69926053T2 (de) | 1999-04-27 | 2006-04-27 | Transgene S.A. | Verfahren zur Herstellung von Säugetier-Zellinien |
| US6656730B1 (en) | 1999-06-15 | 2003-12-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs |
| US6147200A (en) * | 1999-08-19 | 2000-11-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers |
| WO2001036668A1 (de) * | 1999-11-16 | 2001-05-25 | Atto-Tec Gmbh | Farbstoffmarkiertes oligonukleotid zum markieren eines nukleinsäuremoleküls |
| WO2001038585A2 (en) * | 1999-11-24 | 2001-05-31 | The Regents Of The University Of California | Polymer arrays and methods of using labeled probe molecules to identify and quantify target molecule expression |
| AU782912B2 (en) | 1999-12-28 | 2005-09-08 | Association Francaise Contre Les Myopathies | Use of lithium (Li+) for the preparation of a composition for transfection of a polynucleotide into a cell and compositions useful in gene therapy |
| US20020055479A1 (en) | 2000-01-18 | 2002-05-09 | Cowsert Lex M. | Antisense modulation of PTP1B expression |
| US6261840B1 (en) | 2000-01-18 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
| US20030176385A1 (en) * | 2000-02-15 | 2003-09-18 | Jingfang Ju | Antisense modulation of protein expression |
| US20040146918A1 (en) * | 2000-02-18 | 2004-07-29 | Weiner Michael L. | Hybrid nucleic acid assembly |
| US6680172B1 (en) | 2000-05-16 | 2004-01-20 | Regents Of The University Of Michigan | Treatments and markers for cancers of the central nervous system |
| US20060166227A1 (en) * | 2000-06-20 | 2006-07-27 | Stephen Kingsmore | Protein expression profiling |
| US6323009B1 (en) * | 2000-06-28 | 2001-11-27 | Molecular Staging, Inc. | Multiply-primed amplification of nucleic acid sequences |
| US8568766B2 (en) | 2000-08-24 | 2013-10-29 | Gattadahalli M. Anantharamaiah | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease |
| GB0023057D0 (en) | 2000-09-20 | 2000-11-01 | Randox Lab Ltd | Liquid reagent |
| EP1326892A2 (en) | 2000-10-12 | 2003-07-16 | University of Rochester | Compositions that inhibit proliferation of cancer cells |
| US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
| ATE434936T1 (de) | 2001-03-14 | 2009-07-15 | Myriad Genetics Inc | Tsg101-gag-wechselwirkung und ihre verwendung |
| US7803915B2 (en) | 2001-06-20 | 2010-09-28 | Genentech, Inc. | Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor |
| ES2372321T3 (es) | 2001-06-20 | 2012-01-18 | Genentech, Inc. | Composiciones y métodos para el diagnóstico y tratamiento de un tumor de pulmón. |
| EP2270024B1 (en) | 2001-06-21 | 2018-10-24 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
| US6964950B2 (en) | 2001-07-25 | 2005-11-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of C-reactive protein expression |
| US7425545B2 (en) | 2001-07-25 | 2008-09-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of C-reactive protein expression |
| US20030096772A1 (en) | 2001-07-30 | 2003-05-22 | Crooke Rosanne M. | Antisense modulation of acyl CoA cholesterol acyltransferase-2 expression |
| US7407943B2 (en) | 2001-08-01 | 2008-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
| US7227014B2 (en) | 2001-08-07 | 2007-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression |
| JP4370164B2 (ja) * | 2001-08-14 | 2009-11-25 | 富山化学工業株式会社 | 新規なウイルス増殖阻害・殺ウイルス方法および新規なピラジンヌクレオチド・ピラジンヌクレオシド類似体 |
| EP2284195A1 (en) | 2001-09-18 | 2011-02-16 | Carnegie Institution Of Washington | Fusion proteins useful for detecting analytes |
| KR101008758B1 (ko) | 2001-09-18 | 2011-01-14 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물 |
| EP2270231A3 (en) | 2001-10-09 | 2011-04-27 | ISIS Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of insulin-like growth factor binding protein 5 expression |
| US6750019B2 (en) | 2001-10-09 | 2004-06-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of insulin-like growth factor binding protein 5 expression |
| US6965025B2 (en) | 2001-12-10 | 2005-11-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of connective tissue growth factor expression |
| KR100623128B1 (ko) | 2002-01-02 | 2006-09-14 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물 |
| US7553619B2 (en) * | 2002-02-08 | 2009-06-30 | Qiagen Gmbh | Detection method using dissociated rolling circle amplification |
| US20030180712A1 (en) | 2002-03-20 | 2003-09-25 | Biostratum Ab | Inhibition of the beta3 subunit of L-type Ca2+ channels |
| US7169916B2 (en) * | 2002-04-01 | 2007-01-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chloral-free DCA in oligonucleotide synthesis |
| EP2011886A3 (en) | 2002-04-16 | 2009-02-11 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
| US7199107B2 (en) | 2002-05-23 | 2007-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
| AU2003276131A1 (en) * | 2002-06-18 | 2003-12-31 | Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. | A dry powder oligonucleotide formulation, preparation and its uses |
| EP2116604A1 (en) | 2002-08-05 | 2009-11-11 | University of Rochester | Protein transducing domain/deaminase chimeric proteins, related compounds, and uses thereof |
| WO2004027035A2 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-01 | Yale University | Riboswitches, methods for their use, and compositions for use with riboswitches. |
| EP1549767A4 (en) | 2002-09-26 | 2006-06-07 | Amgen Inc | MODULATION OF FORKHEAD BOX O1A GENE EXPRESSION |
| US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
| US9150606B2 (en) * | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
| EP1560839A4 (en) | 2002-11-05 | 2008-04-23 | Isis Pharmaceuticals Inc | CHIMERIC OLIGOMER COMPOUNDS AND THEIR USE IN GENE MODULATION |
| WO2004044132A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modified oligonucleotides for use in rna interference |
| EP2336319A1 (en) | 2002-11-13 | 2011-06-22 | Genzyme Corporation | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
| WO2004044181A2 (en) | 2002-11-13 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein b expression |
| AU2003295576B2 (en) * | 2002-11-15 | 2011-03-17 | Eisai, Inc. | Methods of generating high-production of antibodies from hybridomas created by in vitro immunization |
| CA2505601C (en) | 2002-11-15 | 2014-10-28 | Musc Foundation For Research Development | Complement receptor 2 targeted complement modulators |
| EP1624753B1 (en) | 2002-11-21 | 2012-01-25 | The University of Utah Research Foundation | Purinergic modulation of smell |
| US7144999B2 (en) | 2002-11-23 | 2006-12-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression |
| JP4886298B2 (ja) | 2002-12-20 | 2012-02-29 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 核酸増幅 |
| US9487823B2 (en) | 2002-12-20 | 2016-11-08 | Qiagen Gmbh | Nucleic acid amplification |
| US6977153B2 (en) * | 2002-12-31 | 2005-12-20 | Qiagen Gmbh | Rolling circle amplification of RNA |
| US7781163B2 (en) | 2003-01-08 | 2010-08-24 | Lesley Davenport | G-quadruplex binding assays and compounds therefor |
| US7468356B2 (en) | 2003-02-11 | 2008-12-23 | Antisense Therapeutics Ltd. | Modulation of insulin like growth factor I receptor expression |
| US7002006B2 (en) * | 2003-02-12 | 2006-02-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Protection of nucleosides |
| US7803781B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-09-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression |
| US20040175704A1 (en) | 2003-03-06 | 2004-09-09 | Stratagene | Compositions and methods for polynucleotide sequence detection |
| US20040185559A1 (en) | 2003-03-21 | 2004-09-23 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 1 expression |
| US8043834B2 (en) | 2003-03-31 | 2011-10-25 | Qiagen Gmbh | Universal reagents for rolling circle amplification and methods of use |
| US7598227B2 (en) | 2003-04-16 | 2009-10-06 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of apolipoprotein C-III expression |
| US7399853B2 (en) | 2003-04-28 | 2008-07-15 | Isis Pharmaceuticals | Modulation of glucagon receptor expression |
| US7276599B2 (en) | 2003-06-02 | 2007-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide synthesis with alternative solvents |
| BRPI0410886A (pt) | 2003-06-03 | 2006-07-04 | Isis Pharmaceuticals Inc | composto de filamento duplo, composição farmacêutica, sal farmaceuticamente aceitável, métodos de modificação do ácido nucleico que codifica a survivina humana, de inibição da expressão da suvivina em células ou tecidos, e de tratamento de uma condição associada com a expressão ou superexpressão da suvivina, e, oligonucleotìdeo de rnai de filamento único |
| EP1633770B1 (en) | 2003-06-13 | 2015-04-29 | Alnylam Europe AG | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
| DK1648931T3 (da) | 2003-07-21 | 2011-03-07 | Transgene Sa | Multifunktionelle cytokiner |
| US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
| US7825235B2 (en) | 2003-08-18 | 2010-11-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression |
| EP1508624A1 (en) * | 2003-08-22 | 2005-02-23 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | A quantification method for integrated viruses |
| NZ617083A (en) | 2003-08-27 | 2015-04-24 | Ophthotech Corp | Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders |
| US20050053981A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-03-10 | Swayze Eric E. | Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini |
| CA2539181A1 (en) | 2003-09-18 | 2005-03-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eif4e expression |
| CA2541438C (en) | 2003-10-10 | 2013-11-26 | Meditech Research Limited | The modulation of hyaluronan synthesis and degradation in the treatment of disease |
| US20050191653A1 (en) | 2003-11-03 | 2005-09-01 | Freier Susan M. | Modulation of SGLT2 expression |
| ES2472690T3 (es) | 2003-11-17 | 2014-07-02 | Genentech, Inc. | Anticuerpo contra CD22 para el tratamiento de tumores de origen hematopoy�tico |
| EP1711606A2 (en) | 2004-01-20 | 2006-10-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of glucocorticoid receptor expression |
| US8778900B2 (en) * | 2004-01-22 | 2014-07-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E-BP1 expression |
| US7468431B2 (en) * | 2004-01-22 | 2008-12-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E-BP2 expression |
| US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
| US8790919B2 (en) | 2004-03-15 | 2014-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for optimizing cleavage of RNA by RNase H |
| JP2007531794A (ja) | 2004-04-05 | 2007-11-08 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチドの合成および精製に使用する方法および反応試薬 |
| US20050244869A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Brown-Driver Vickie L | Modulation of transthyretin expression |
| US20050260755A1 (en) * | 2004-04-06 | 2005-11-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sequential delivery of oligomeric compounds |
| JP4584987B2 (ja) | 2004-04-30 | 2010-11-24 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | Ｃ５修飾ピリミジンを含むオリゴヌクレオチド |
| WO2005107404A2 (en) * | 2004-05-03 | 2005-11-17 | The Penn State Research Foundation | Methods and systems for nanoparticle enhancement of signals |
| DK1773872T3 (en) | 2004-05-21 | 2017-05-08 | Uab Res Found | VARIABLE Lymphocyte Receptors, Associated Polypeptides and Nucleic Acids, and Uses thereof |
| US8394947B2 (en) | 2004-06-03 | 2013-03-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Positionally modified siRNA constructs |
| JP2008501693A (ja) * | 2004-06-03 | 2008-01-24 | アイシス ファーマシューティカルズ、インク． | 遺伝子調節で使用するための個別に調節された鎖を有する二本鎖組成物 |
| WO2006014437A2 (en) * | 2004-07-07 | 2006-02-09 | The Penn State Research Foundation | Methods and systems for nanoparticle enhancement of signals |
| WO2006023880A2 (en) | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the characterization of oligonucleotides |
| US7884086B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays |
| WO2006032436A2 (en) | 2004-09-21 | 2006-03-30 | Nascacell Technologies Ag. | Use of microproteins as tryptase inhibitors |
| WO2006032143A1 (en) | 2004-09-23 | 2006-03-30 | Arc Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions and methods relating to inhibiting fibrous adhesions or inflammatory disease using low sulphate fucans |
| US7851152B2 (en) * | 2004-09-25 | 2010-12-14 | Yaodong Chen | Fluorescent base analogues' usage in the characterization of nucleic acid molecules and their interactions |
| CA2590294A1 (en) * | 2004-12-13 | 2006-06-22 | Sunesis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrido pyrimidinones, dihydro pyrimido pyrimidinones and pteridinones useful as raf kinase inhibitors |
| EP1848815B1 (en) | 2005-02-02 | 2010-05-19 | Universität Bayreuth | Esterases for monitoring protein biosynthesis in vitro |
| RU2007137489A (ru) | 2005-03-10 | 2009-04-20 | Дженентек, Инк. (Us) | Способы и композиции для модуляции целостности сосудов |
| EP1863908B1 (de) | 2005-04-01 | 2010-11-17 | Qiagen GmbH | Reverse transkription und amplifikation von rna bei simultaner degradierung von dna |
| US9505867B2 (en) | 2005-05-31 | 2016-11-29 | Ecole Polytechmique Fédérale De Lausanne | Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs |
| WO2006138145A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
| EP2239327B1 (en) | 2005-08-11 | 2015-02-25 | Synthetic Genomics, Inc. | Method for in vitro recombination |
| US20100015604A1 (en) | 2005-08-17 | 2010-01-21 | Evriklia Lianidou | Composition and method for determination of ck19 expression |
| ATE494372T1 (de) | 2005-08-29 | 2011-01-15 | Regulus Therapeutics Inc | Verfahren für mir-122a-modulation |
| EP1762627A1 (de) | 2005-09-09 | 2007-03-14 | Qiagen GmbH | Verfahren zur Aktivierung einer Nukleinsäure für eine Polymerase-Reaktion |
| US20070087987A1 (en) | 2005-09-19 | 2007-04-19 | Monia Brett P | Modulation of glucagon receptor expression |
| EA200800868A1 (ru) | 2005-09-19 | 2008-10-30 | ДЖОНСОН ЭНД ДЖОНСОН ФАРМАСЬЮТИКАЛ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ, Эл. Эл. Си. | Модуляция экспрессии глюкокортикоидного рецептора |
| EP2402435A3 (en) | 2005-10-14 | 2012-03-28 | MUSC Foundation For Research Development | Targeting PAX2 for the induction of DEFB1-mediated tumor immunity and cancer therapy |
| US8080534B2 (en) | 2005-10-14 | 2011-12-20 | Phigenix, Inc | Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer |
| US7320965B2 (en) | 2005-10-28 | 2008-01-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of Huntingtin gene |
| EP2363134B1 (en) | 2005-11-09 | 2014-01-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor V Leiden mutant gene |
| JP2009516710A (ja) | 2005-11-21 | 2009-04-23 | アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド | ｅＩＦ４Ｅ−ＢＰ２の発現のモジュレート |
| EP1974052A2 (en) * | 2005-12-21 | 2008-10-01 | Yale University | Methods and compositions related to the modulation of riboswitches |
| EP1976567B1 (en) | 2005-12-28 | 2020-05-13 | The Scripps Research Institute | Natural antisense and non-coding rna transcripts as drug targets |
| EP2388328A1 (en) | 2006-01-27 | 2011-11-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and compositions for the use in modulation of micrornas |
| US7569686B1 (en) | 2006-01-27 | 2009-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs |
| CN102908630B (zh) | 2006-01-27 | 2014-11-19 | Isis制药公司 | 6-修饰的双环核酸类似物 |
| NZ571568A (en) | 2006-03-31 | 2010-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Double-stranded RNA molecule compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene |
| EP2013344B1 (en) * | 2006-05-03 | 2012-08-29 | Baltic Technology Development, Ltd. | Antisense agents combining strongly bound base - modified oligonucleotide and artificial nuclease |
| AU2007257093A1 (en) * | 2006-05-05 | 2007-12-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating expression of PCSK9 |
| EP2066684B1 (en) * | 2006-05-11 | 2012-07-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs |
| US7666854B2 (en) * | 2006-05-11 | 2010-02-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs |
| EP2392583A1 (en) | 2006-05-19 | 2011-12-07 | Alnylam Europe AG. | RNAi modulation of Aha and therapeutic uses thereof |
| CA2653451C (en) | 2006-05-22 | 2015-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of ikk-b gene |
| EP2023938A4 (en) * | 2006-05-23 | 2010-11-10 | Isis Pharmaceuticals Inc | MODULATION OF THE EXPRESSION OF ChREBP |
| US20090280188A1 (en) * | 2006-06-23 | 2009-11-12 | Northwestern University | Asymmetric functionalizated nanoparticles and methods of use |
| US8198253B2 (en) | 2006-07-19 | 2012-06-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to HBXIP |
| US10144736B2 (en) | 2006-07-20 | 2018-12-04 | Gilead Sciences, Inc. | Substituted pteridines useful for the treatment and prevention of viral infections |
| EP2061799A4 (en) * | 2006-09-11 | 2010-12-22 | Univ Yale | METHOD AND COMPOSITIONS FOR USE OF LYSIN RIBOSWITCHES |
| US7906484B2 (en) * | 2006-09-21 | 2011-03-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complex for transferring an anionic substance into a cell |
| US20100099858A1 (en) * | 2006-09-28 | 2010-04-22 | Mirkin Chad A | Maximizing Oligonucleotide Loading on Gold Nanoparticle |
| CA2665536C (en) | 2006-10-05 | 2016-02-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Multifunctional encoded particles for high-throughput analysis |
| US8999317B2 (en) | 2006-11-01 | 2015-04-07 | University Of Rochester | Methods and compositions related to the structure and function of APOBEC3G |
| WO2008073441A2 (en) | 2006-12-11 | 2008-06-19 | University Of Utah Research Foundation | Compositions and methods for treating pathologic angiogenesis and vascular permeability |
| EP2913341A1 (en) | 2006-12-22 | 2015-09-02 | University of Utah Research Foundation | Method of detecting ocular diseases and pathologic conditions and treatment of same |
| KR101636575B1 (ko) | 2007-01-30 | 2016-07-05 | 트랜스진 에스.에이. | 유두종바이러스 백신 |
| WO2008098248A2 (en) | 2007-02-09 | 2008-08-14 | Northwestern University | Particles for detecting intracellular targets |
| EP2471925A1 (en) | 2007-03-22 | 2012-07-04 | Yale University | Methods and compositions related to riboswitches that control alternative splicing |
| US7759320B2 (en) | 2007-03-29 | 2010-07-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the Ebola |
| AU2008266684A1 (en) | 2007-05-29 | 2008-12-24 | Yale University | Riboswitches and methods and compositions for use of and with riboswitches |
| MX2009012647A (es) * | 2007-05-29 | 2009-12-14 | Univ Yale | Metodos y composiciones relacionadas con ribointerruptores que controlan la separacion alternativa y proceso de arn. |
| CA3055145A1 (en) | 2007-05-30 | 2008-12-11 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
| US8278425B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
| US7807372B2 (en) * | 2007-06-04 | 2010-10-05 | Northwestern University | Screening sequence selectivity of oligonucleotide-binding molecules using nanoparticle based colorimetric assay |
| WO2008154401A2 (en) | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs |
| DK2176280T4 (en) * | 2007-07-05 | 2015-07-20 | Isis Pharmaceuticals Inc | 6-Disubstituerede bicykliske nukleinsyreanaloge |
| ES2439591T3 (es) | 2007-08-15 | 2014-01-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de ácido nucleico de tetrahidropirano |
| PL2197900T3 (pl) | 2007-08-24 | 2012-12-31 | Univ Wuerzburg J Maximilians | Zmutowane podwójnie cyklizowane peptydy receptorowe hamujące przeciwciała przeciwko beta 1-adrenoreceptorowi |
| AU2008296478B9 (en) | 2007-08-28 | 2015-03-19 | The Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use |
| US8557767B2 (en) | 2007-08-28 | 2013-10-15 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use |
| WO2009039466A1 (en) | 2007-09-20 | 2009-03-26 | Vanderbilt University | Free solution measurement of molecular interactions by backscattering interferometry |
| US7951785B2 (en) * | 2007-09-21 | 2011-05-31 | California Institute Of Technology | NFIA in glial fate determination, glioma therapy and astrocytoma treatment |
| EP2217705A2 (en) * | 2007-11-05 | 2010-08-18 | Baltic Technology Development, Ltd. | Use of oligonucleotides with modified bases in hybridization of nucleic acids |
| WO2009067243A2 (en) | 2007-11-20 | 2009-05-28 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of cd40 expression |
| JP5530933B2 (ja) | 2007-12-10 | 2014-06-25 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 第ｖｉｉ因子遺伝子発現阻害のための組成物及び方法 |
| WO2009086558A1 (en) | 2008-01-02 | 2009-07-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
| EP2265627A2 (en) * | 2008-02-07 | 2010-12-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs |
| AU2009221775B2 (en) | 2008-03-05 | 2015-05-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes |
| US8426378B2 (en) | 2008-03-21 | 2013-04-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising tricyclic nucelosides and methods for their use |
| WO2009124238A1 (en) * | 2008-04-04 | 2009-10-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising neutrally linked terminal bicyclic nucleosides |
| US8846639B2 (en) * | 2008-04-04 | 2014-09-30 | Isis Pharmaceutical, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and having reduced toxicity |
| AU2009237577B2 (en) | 2008-04-18 | 2014-06-05 | Baxter Healthcare Sa | Microsphere-based composition for preventing and/or reversing new-onset autoimmune diabetes |
| JP2011523401A (ja) * | 2008-04-29 | 2011-08-11 | ワイス・エルエルシー | 炎症を治療するための方法 |
| KR101877698B1 (ko) | 2008-08-25 | 2018-07-12 | 엑스칼리아드 파마슈티컬즈, 인코포레이티드 | 결합 조직 성장 인자에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 그의 용도 |
| WO2010028054A1 (en) | 2008-09-02 | 2010-03-11 | Alnylam Europe Ag. | Compositions and methods for inhibiting expression of mutant egfr gene |
| WO2010036698A1 (en) * | 2008-09-24 | 2010-04-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides |
| DK2361256T3 (da) * | 2008-09-24 | 2013-07-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | Cyclohexenyl-nukleinsyreanaloger |
| CA2739170A1 (en) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene |
| EP2350043B9 (en) | 2008-10-09 | 2014-08-20 | TEKMIRA Pharmaceuticals Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
| CA2966011C (en) | 2008-10-15 | 2021-10-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of factor 11 expression |
| ES2656516T3 (es) | 2008-10-20 | 2018-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Composiciones y métodos para inhibir la expresión de transtiretina |
| EP2358398A2 (en) | 2008-10-24 | 2011-08-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and methods |
| US20120059045A1 (en) | 2008-10-24 | 2012-03-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of using oligomeric compounds comprising 2'-substituted nucleosides |
| CN106955360A (zh) | 2008-11-24 | 2017-07-18 | 西北大学 | 多价rna纳米颗粒组合物 |
| WO2010064146A2 (en) | 2008-12-02 | 2010-06-10 | Chiralgen, Ltd. | Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids |
| RU2620970C2 (ru) | 2008-12-04 | 2017-05-30 | КьюРНА,Инк., | Лечение связанных с эритропоэтином (еро) заболеваний путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к еро |
| KR101866152B1 (ko) | 2008-12-04 | 2018-06-08 | 큐알엔에이, 인크. | 종양 억제 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 종양 억제 유전자 관련된 질환의 치료 |
| MX366774B (es) | 2008-12-04 | 2019-07-24 | Curna Inc | Uso de oligonucleótidos antisentido en la inhibición de transcrito antisentido natural para sirtuina 1. |
| AU2009324534B2 (en) | 2008-12-10 | 2015-07-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | GNAQ targeted dsRNA compositions and methods for inhibiting expression |
| WO2010070136A2 (en) | 2008-12-19 | 2010-06-24 | Centre de Recherche Public de la Santé | Novel caviidae allergens and uses thereof |
| EP2367564A1 (en) | 2008-12-22 | 2011-09-28 | Universität Regensburg | Norrin in the treatment of diseases associated with an increased tgf-beta activity |
| US20100184844A1 (en) * | 2009-01-08 | 2010-07-22 | Northwestern University | Inhibition of Bacterial Protein Production by Polyvalent Oligonucleotide Modified Nanoparticle Conjugates |
| US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
| KR101546673B1 (ko) * | 2009-01-15 | 2015-08-25 | 삼성전자주식회사 | 전자 사진용 토너 및 그의 제조방법 |
| CA2750820A1 (en) | 2009-01-27 | 2010-08-05 | Qiagen Gaithersburg | Thermophilic helicase dependent amplification technology with endpoint homogenous fluorescent detection |
| US20120101148A1 (en) | 2009-01-29 | 2012-04-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | lipid formulation |
| WO2010090969A1 (en) | 2009-02-06 | 2010-08-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tetrahydropyran nucleic acid analogs |
| US20120021515A1 (en) | 2009-02-06 | 2012-01-26 | Swayze Eric E | Oligomeric compounds and methods |
| ES2658626T3 (es) | 2009-02-12 | 2018-03-12 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor neurotrófico derivado de células gliales (GDNF) por inhibición de transcrito antisentido natural a GDNF |
| EP2396038B1 (en) | 2009-02-12 | 2015-10-21 | CuRNA, Inc. | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
| WO2010092109A2 (en) | 2009-02-13 | 2010-08-19 | Novartis Ag | Nucleic acid molecule of a biosynthetic cluster encoding non ribosomal peptide synthases and uses thereof |
| WO2010099341A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-09-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of mig-12 gene |
| EP2963116B1 (en) | 2009-03-04 | 2020-11-11 | CuRNA, Inc. | Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirt 1 |
| CN102421900B (zh) | 2009-03-12 | 2015-07-22 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制Eg5和VEGF基因表达的脂质配制的组合物以及方法 |
| ES2656290T3 (es) | 2009-03-16 | 2018-02-26 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor nuclear (derivado de eritroide 2) similar al 2 (NRF2) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a NRF2 |
| WO2010107740A2 (en) | 2009-03-17 | 2010-09-23 | Curna, Inc. | Treatment of delta-like 1 homolog (dlk1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlk1 |
| WO2010120420A1 (en) | 2009-04-15 | 2010-10-21 | Northwestern University | Delivery of oligonucleotide-functionalized nanoparticles |
| EP3524275A1 (en) | 2009-04-22 | 2019-08-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Innate immune supression enables repeated delivery of long rna molecules |
| DE102010018878B4 (de) | 2009-04-30 | 2013-09-26 | Julius-Maximilians-Universität Würzburg | Neue Zell-Linie zur Fluoreszenz-basierten Detektion von funktionell aktiven Antikörpern und Autoantikörpern gegen den Beta1-adrenergen Rezeptor |
| EP2424987B1 (en) | 2009-05-01 | 2017-11-15 | CuRNA, Inc. | Treatment of hemoglobin (hbf/hbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to hbf/hbg |
| JP5889783B2 (ja) | 2009-05-05 | 2016-03-22 | テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイションＴｅｋｍｉｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ | 免疫細胞へオリゴヌクレオチドを送達する方法 |
| CA3042927C (en) | 2009-05-05 | 2022-05-17 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid compositions for the delivery of therapeutic agents |
| US9155754B2 (en) | 2009-05-06 | 2015-10-13 | Curna, Inc. | Treatment of ABCA1 gene related diseases by inhibition of a natural antisense transcript to ABCA1 |
| US20120046236A1 (en) | 2009-05-06 | 2012-02-23 | Opko Curna Llc | Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp |
| WO2010132665A1 (en) | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Yale University | Gemm riboswitches, structure-based compound design with gemm riboswitches, and methods and compositions for use of and with gemm riboswitches |
| KR101749356B1 (ko) | 2009-05-18 | 2017-07-06 | 큐알엔에이, 인크. | 재편성 인자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 재편성 인자 관련된 질환의 치료 |
| EP2432882B1 (en) | 2009-05-22 | 2019-12-25 | CuRNA, Inc. | TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3 |
| WO2010138806A2 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-02 | Curna, Inc. | Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene |
| EA028860B1 (ru) | 2009-06-10 | 2018-01-31 | Арбутус Биофарма Корпорэйшн | Улучшенная липидная композиция |
| CA2765700C (en) | 2009-06-16 | 2021-01-05 | Opko Curna, Llc | Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene |
| EP2443238B1 (en) | 2009-06-16 | 2017-03-22 | CuRNA, Inc. | Treatment of paraoxonase 1 (pon1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pon1 |
| JP6073133B2 (ja) | 2009-06-24 | 2017-02-01 | クルナ・インコーポレーテッド | 腫瘍壊死因子受容体２（ｔｎｆｒ２）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｎｆｒ２関連疾患の治療 |
| KR101807324B1 (ko) | 2009-06-26 | 2017-12-08 | 큐알엔에이, 인크. | 다운 증후군 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 다운 증후군 유전자 관련된 질환의 치료 |
| KR101885383B1 (ko) | 2009-07-06 | 2018-08-03 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 신규한 핵산 프로드러그 및 그의 사용 방법 |
| JP6128848B2 (ja) | 2009-08-05 | 2017-05-17 | クルナ・インコーポレーテッド | インスリン遺伝子（ｉｎｓ）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるインスリン遺伝子（ｉｎｓ）関連疾患の治療 |
| EP2462153B1 (en) | 2009-08-06 | 2015-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs |
| EP2461826A2 (en) | 2009-08-07 | 2012-06-13 | Transgene SA | Composition for treating hbv infection |
| AP3574A (en) | 2009-08-14 | 2016-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus |
| WO2011022420A1 (en) | 2009-08-17 | 2011-02-24 | Yale University | Methylation biomarkers and methods of use |
| WO2011031482A2 (en) | 2009-08-25 | 2011-03-17 | Curna, Inc. | Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap |
| RU2012111424A (ru) | 2009-08-26 | 2013-10-10 | Медицинише Хохшуле Ханновер | Средства и способы производства искусственных капсульных полисахаридов neisseria meningitidis |
| JP5887270B2 (ja) | 2009-09-02 | 2016-03-16 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 突然変異体ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄおよびその使用方法 |
| ES2564207T3 (es) | 2009-10-22 | 2016-03-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Métodos y composiciones para modular la activación con hepsina de la proteína estimuladora de macrófagos |
| AU2010315399B2 (en) | 2009-10-27 | 2016-01-28 | Swift Biosciences, Inc. | Bimolecular primers |
| JP5866119B2 (ja) | 2009-10-30 | 2016-02-17 | ノースウェスタン ユニバーシティ | 鋳型ナノ複合体 |
| WO2011056215A1 (en) | 2009-11-03 | 2011-05-12 | Landers James P | Versatile, visible method for detecting polymeric analytes |
| EP2504450B1 (en) | 2009-11-23 | 2016-07-06 | Swift Biosciences, Inc. | Devices to extend single stranded target molecules |
| EP3002297B1 (en) | 2009-11-30 | 2020-04-08 | F. Hoffmann-La Roche AG | Antibodies for treating and diagnosing tumors expressing slc34a2 (tat211) |
| US9173895B2 (en) | 2009-12-16 | 2015-11-03 | Curna, Inc. | Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (MBTPS1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MBTPS1 |
| WO2011079261A2 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Curna, Inc. | Treatment of hepatocyte growth factor (hgf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to hgf |
| CA2782375C (en) | 2009-12-23 | 2023-10-31 | Opko Curna, Llc | Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2 |
| JP5993744B2 (ja) | 2009-12-29 | 2016-09-14 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | 核呼吸因子１（ｎｒｆ１）に対する天然アンチセンス転写物の阻害による核呼吸因子１関連疾患の治療 |
| WO2011090741A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-28 | Opko Curna, Llc | TREATMENT OF TUMOR PROTEIN 63 (p63) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO p63 |
| US8946181B2 (en) | 2010-01-04 | 2015-02-03 | Curna, Inc. | Treatment of interferon regulatory factor 8 (IRF8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IRF8 |
| US8912157B2 (en) | 2010-01-06 | 2014-12-16 | Curna, Inc. | Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene |
| RU2611191C2 (ru) | 2010-01-11 | 2017-02-21 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных со связывающим половые гормоны глобулином (гспг), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к гспг |
| WO2011085102A1 (en) | 2010-01-11 | 2011-07-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Base modified bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2011088076A2 (en) | 2010-01-12 | 2011-07-21 | Yale University | Structured rna motifs and compounds and methods for their use |
| JP5981850B2 (ja) | 2010-01-25 | 2016-08-31 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | ＲＮａｓｅＨ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるＲＮａｓｅＨ１関連疾患の治療 |
| US20130028889A1 (en) | 2010-02-04 | 2013-01-31 | Ico Therapeutics Inc. | Dosing regimens for treating and preventing ocular disorders using c-raf antisense |
| CN102844435B (zh) | 2010-02-22 | 2017-05-10 | 库尔纳公司 | 通过抑制吡咯啉‑5‑羧酸还原酶1(pycr1)的天然反义转录物而治疗pycr1相关疾病 |
| WO2011105901A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 9 (c9) and uses thereof |
| KR20130004579A (ko) | 2010-02-23 | 2013-01-11 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법 |
| WO2011105900A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 8-alpha (c8-alpha) and uses thereof |
| WO2011105902A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 8-beta (c8-beta) and uses thereof |
| WO2011112516A1 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | Ico Therapeutics Inc. | Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides |
| WO2011113054A2 (en) | 2010-03-12 | 2011-09-15 | Aurasense Llc | Crosslinked polynucleotide structure |
| EP3210611B1 (en) | 2010-03-12 | 2019-08-21 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | Methods of treating vascular inflammatory disorders |
| WO2011115817A1 (en) | 2010-03-16 | 2011-09-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of preparing 2'-o-substituted purine nucleosides |
| US9193752B2 (en) | 2010-03-17 | 2015-11-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2011120046A2 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Swift Biosciences, Inc. | Methods and compositions for isolating polynucleotides |
| CA2792291A1 (en) | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Kumamoto University | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
| JP2013523162A (ja) | 2010-04-06 | 2013-06-17 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｃｄ２７４／ｐｄ−ｌ１遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
| TWI644675B (zh) | 2010-04-09 | 2018-12-21 | 可娜公司 | 藉由抑制纖維母細胞生長因子２１（ｆｇｆ２１）之天然反義轉錄物以治療ｆｇｆ２１相關疾病 |
| US20110269194A1 (en) | 2010-04-20 | 2011-11-03 | Swift Biosciences, Inc. | Materials and methods for nucleic acid fractionation by solid phase entrapment and enzyme-mediated detachment |
| US20130260460A1 (en) | 2010-04-22 | 2013-10-03 | Isis Pharmaceuticals Inc | Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides |
| US10913767B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
| KR101869570B1 (ko) | 2010-04-28 | 2018-06-20 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 변형된 뉴클레오사이드 및 그로부터 제조된 올리고머 화합물 |
| US9156873B2 (en) | 2010-04-28 | 2015-10-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modified 5′ diphosphate nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| EP3091027B1 (en) | 2010-04-28 | 2018-01-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| NZ603339A (en) | 2010-04-29 | 2015-01-30 | Isis Pharmaceuticals Inc | Modulation of transthyretin expression |
| US20130156845A1 (en) | 2010-04-29 | 2013-06-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated single stranded rna |
| RU2636461C2 (ru) | 2010-05-03 | 2017-11-23 | Дженентек, Инк. | Композиции и способы для диагностики и лечения опухоли |
| KR101992076B1 (ko) | 2010-05-03 | 2019-06-21 | 큐알엔에이, 인크. | 시르투인 (sirt)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 시르투인 (sirt) 관련된 질환의 치료 |
| WO2011138457A1 (en) | 2010-05-07 | 2011-11-10 | Technische Universität Graz | Ucp1 (thermogenin) - inducing agents for use in the treatment of a disorder of the energy homeostasis |
| TWI531370B (zh) | 2010-05-14 | 2016-05-01 | 可娜公司 | 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病 |
| BR112012029656A2 (pt) | 2010-05-21 | 2016-12-13 | Uni Fur Bodenkultur Wien | composições para uso no tratamento ou diagnóstico de disturbios ósseos e/ou distúrbios cardiovasculares |
| WO2011150226A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Landers James P | Method for detecting nucleic acids based on aggregate formation |
| WO2011150227A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Quantitative helicase assay |
| EP3299464B1 (en) | 2010-05-26 | 2019-10-02 | CuRNA, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1 |
| WO2011153323A2 (en) | 2010-06-02 | 2011-12-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods directed to treating liver fibrosis |
| US8795664B2 (en) | 2010-06-04 | 2014-08-05 | Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts, Universitätsmedizin | Monoclonal antibodies targeting amyloid beta oligomers |
| WO2011156278A1 (en) | 2010-06-07 | 2011-12-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| CA2802049C (en) | 2010-06-07 | 2018-07-10 | Firefly Bioworks, Inc. | Scanning multifunctional particles |
| US8846637B2 (en) | 2010-06-08 | 2014-09-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 2′-amino and 2′-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2011156713A1 (en) | 2010-06-11 | 2011-12-15 | Vanderbilt University | Multiplexed interferometric detection system and method |
| EP2582397A4 (en) | 2010-06-15 | 2014-10-29 | Isis Pharmaceuticals Inc | COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING THE INTERACTION BETWEEN PROTEINS AND TARGET NUCLEIC ACIDS |
| RU2012157399A (ru) | 2010-06-18 | 2014-07-27 | КсайберСайенс ГмбХ | Пептиды в качестве активных агентов для стабилизации биологических барьеров |
| US9168297B2 (en) | 2010-06-23 | 2015-10-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Regulation of skin pigmentation by neuregulin-1 (NRG-1) |
| NO2593547T3 (ja) | 2010-07-14 | 2018-04-14 | ||
| EP3031920B1 (en) | 2010-07-19 | 2019-08-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of dystrophia myotonica-protein kinase (dmpk) expression |
| WO2012021554A1 (en) | 2010-08-09 | 2012-02-16 | Yale University | Cyclic di-gmp-ii riboswitches, motifs, and compounds, and methods for their use |
| JP2013538051A (ja) | 2010-08-26 | 2013-10-10 | エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト | Ｄｃｃの第５フィブロネクチンタイプｉｉｉドメインの組換えｆｃ融合タンパク質 |
| EP2620428B1 (en) | 2010-09-24 | 2019-05-22 | Wave Life Sciences Ltd. | Asymmetric auxiliary group |
| DK2625197T3 (en) | 2010-10-05 | 2016-10-03 | Genentech Inc | Smoothened MUTANT AND METHODS OF USING THE SAME |
| CA2813901C (en) | 2010-10-06 | 2019-11-12 | Curna, Inc. | Treatment of sialidase 4 (neu4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to neu4 |
| CN103517990A (zh) | 2010-10-07 | 2014-01-15 | 通用医疗公司 | 癌症生物标志物 |
| US8648053B2 (en) | 2010-10-20 | 2014-02-11 | Rosalind Franklin University Of Medicine And Science | Antisense oligonucleotides that target a cryptic splice site in Ush1c as a therapeutic for Usher syndrome |
| US9222088B2 (en) | 2010-10-22 | 2015-12-29 | Curna, Inc. | Treatment of alpha-L-iduronidase (IDUA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IDUA |
| US20130210893A1 (en) | 2010-10-27 | 2013-08-15 | Curna, Inc. | Treatment of interferon-related developmental regulator 1 (ifrd1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ifrd1 |
| CN103370054A (zh) | 2010-11-09 | 2013-10-23 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制Eg5和VEGF基因的表达的脂质配制的组合物和方法 |
| EP3702460A1 (en) | 2010-11-12 | 2020-09-02 | The General Hospital Corporation | Polycomb-associated non-coding rnas |
| CA3077910A1 (en) | 2010-11-17 | 2012-05-24 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of alpha synuclein expression |
| JP6071893B2 (ja) | 2010-11-23 | 2017-02-01 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | Ｎａｎｏｇへの天然アンチセンス転写物の阻害によるｎａｎｏｇ関連疾患の治療 |
| US9150926B2 (en) | 2010-12-06 | 2015-10-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Diagnosis and treatment of adrenocortical tumors using human microRNA-483 |
| EP2649182A4 (en) | 2010-12-10 | 2015-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR INCREASING AN ERYTHROPOIETIN (EPO) PREPARATION |
| EP2648763A4 (en) | 2010-12-10 | 2014-05-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR EXPRESSION INHIBITION OF GENES KLF-1 AND BCL11A |
| WO2012095841A1 (en) | 2011-01-10 | 2012-07-19 | State Of Israel, Ministry Of Agriculture And Rural Development, A.R.O. - Volcani Center | Improved tomato plants |
| EP2663323B1 (en) | 2011-01-14 | 2017-08-16 | The General Hospital Corporation | Methods targeting mir-128 for regulating cholesterol/lipid metabolism |
| EP2670404B1 (en) | 2011-02-02 | 2018-08-29 | The Trustees of Princeton University | Sirtuin modulators as virus production modulators |
| MX365647B (es) | 2011-02-02 | 2019-06-10 | Excaliard Pharmaceuticals Inc | El uso de compuestos antisentido dirigidos al factor de crecimiento del tejido conectivo (ctgf) para tratar queloides o cicatrices hipertroficas. |
| EP2673381A4 (en) | 2011-02-07 | 2014-10-15 | Univ Toronto | BIOSONDES AND METHOD FOR THEIR USE |
| EP3067421B1 (en) | 2011-02-08 | 2018-10-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
| WO2012113779A1 (en) | 2011-02-21 | 2012-08-30 | Medizinische Universität Wien | Means and methods for treating a disease or disorder related to lymphangiogenesis or preventing metastasis |
| US9562853B2 (en) | 2011-02-22 | 2017-02-07 | Vanderbilt University | Nonaqueous backscattering interferometric methods |
| MX343008B (es) | 2011-03-29 | 2016-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen de proteasa transmembrana, serina 6 (tmprss6). |
| US10086043B2 (en) | 2011-04-03 | 2018-10-02 | The General Hospital Corporation | Efficient protein expression in vivo using modified RNA (MOD-RNA) |
| WO2012149154A1 (en) | 2011-04-26 | 2012-11-01 | Swift Biosciences, Inc. | Polynucleotide primers and probes |
| WO2012151268A1 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | University Of Virginia Patent Foundation | Method and system for high throughput optical and label free detection of analytes |
| WO2012151324A1 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with usher syndrome |
| WO2012151289A2 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | University Of Virginia Patent Foundation | Method and system to detect aggregate formation on a substrate |
| EP2522689A1 (en) | 2011-05-13 | 2012-11-14 | Universität Bayreuth | Non-viral transfection systems |
| EP2523002A1 (en) | 2011-05-13 | 2012-11-14 | Universität Bayreuth | Utilization of magnetic nanoparticles as intracellular pull-down system |
| WO2012170347A1 (en) | 2011-06-09 | 2012-12-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| US9593330B2 (en) | 2011-06-09 | 2017-03-14 | Curna, Inc. | Treatment of frataxin (FXN) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to FXN |
| EP4092120A1 (en) | 2011-06-21 | 2022-11-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (anglptl3) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2012177949A2 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes |
| CA3191066A1 (en) | 2011-06-21 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of apolipoprotein c-iii (apoc3) genes |
| EP3597750B1 (en) | 2011-06-23 | 2022-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment |
| US9222093B2 (en) | 2011-06-30 | 2015-12-29 | The University Of Hong Kong | Two-way, portable riboswitch mediated gene expression control device |
| JP6128529B2 (ja) | 2011-07-19 | 2017-05-17 | ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． | 官能化核酸の合成のための方法 |
| WO2013019857A2 (en) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Method for improving the success rate of hematopoietic stem cell transplants |
| WO2013017656A1 (en) | 2011-08-02 | 2013-02-07 | Medizinische Universität Wien | Antagonists of ribonucleases for treating obesity |
| EP3922722B1 (en) | 2011-08-11 | 2023-06-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Selective antisense compounds and uses thereof |
| WO2013024173A1 (en) | 2011-08-17 | 2013-02-21 | Technische Universität München | Computer implemented method for identifying regulatory regions or regulatory variations |
| US9976138B2 (en) | 2011-08-29 | 2018-05-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compounds useful in conditions related to repeat expansion |
| EP3640332A1 (en) | 2011-08-29 | 2020-04-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomer-conjugate complexes and their use |
| ES2856091T3 (es) | 2011-09-14 | 2021-09-27 | Univ Northwestern | Nanoconjugados capaces de atravesar la barrera hematoencefálica |
| DK2756080T3 (da) | 2011-09-14 | 2019-05-20 | Translate Bio Ma Inc | Multimeriske oligonukleotidforbindelser |
| WO2013040548A2 (en) | 2011-09-17 | 2013-03-21 | Yale University | Fluoride-responsive riboswitchs, fluoride transporters, and methods of use |
| BR112014008925A2 (pt) | 2011-10-11 | 2020-10-27 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | micro rnas em distúrbios de neurodegenerativos |
| ES2687951T3 (es) | 2011-10-14 | 2018-10-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos anti-HtrA1 y procedimientos de uso |
| US9243291B1 (en) | 2011-12-01 | 2016-01-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of predicting toxicity |
| JP2015502365A (ja) | 2011-12-12 | 2015-01-22 | オンコイミューニン，インコーポレイティド | オリゴヌクレオチドのイン−ビボ送達 |
| EP3431095B1 (en) | 2011-12-22 | 2023-11-01 | Medizinische Universität Wien | Cyclotides as immunosuppressive agents |
| EP2802674B1 (en) | 2012-01-11 | 2020-12-16 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of ikbkap splicing |
| EP2626066A1 (en) | 2012-02-10 | 2013-08-14 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Combination therapy comprising selective VEGFR-2 inhibitors and MEK inhibitors |
| EP2820037B1 (en) | 2012-02-29 | 2020-02-19 | Syngenta Participations AG | Modulation of seed vigor |
| AU2013232131B2 (en) | 2012-03-13 | 2018-09-20 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Methods and compositions for size-controlled homopolymer tailing of substrate polynucleotides by a nucleic acid polymerase |
| WO2013138374A2 (en) | 2012-03-15 | 2013-09-19 | Curna, Inc. | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
| CA2907072A1 (en) | 2012-03-16 | 2013-09-19 | Valerion Therapeutics, Llc | Antisense conjugates for decreasing expression of dmpk |
| JP6492003B2 (ja) | 2012-03-30 | 2019-03-27 | ワシントン・ユニバーシティＷａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | 発作を減少させるためおよび神経変性症候群を改質するためにタウ発現を調節する方法 |
| WO2013154799A1 (en) | 2012-04-09 | 2013-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tricyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2013154798A1 (en) | 2012-04-09 | 2013-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tricyclic nucleic acid analogs |
| US9133461B2 (en) | 2012-04-10 | 2015-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene |
| JP2015518485A (ja) | 2012-04-20 | 2015-07-02 | アプタミアール セラピューティクス インコーポレイテッド | 熱発生のｍｉＲＮＡ調節剤 |
| EP3336189A1 (en) | 2012-04-20 | 2018-06-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
| US9127274B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpinc1 iRNA compositions and methods of use thereof |
| WO2013163628A2 (en) | 2012-04-27 | 2013-10-31 | Duke University | Genetic correction of mutated genes |
| US9273949B2 (en) | 2012-05-11 | 2016-03-01 | Vanderbilt University | Backscattering interferometric methods |
| EP2850186B1 (en) | 2012-05-16 | 2018-12-19 | Translate Bio MA, Inc. | Compositions and methods for modulating smn gene family expression |
| EP3511416A1 (en) | 2012-05-16 | 2019-07-17 | Translate Bio MA, Inc. | Compositions and methods for modulating gene expression |
| US9574193B2 (en) | 2012-05-17 | 2017-02-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression |
| US20160002624A1 (en) | 2012-05-17 | 2016-01-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide compositions |
| US9487780B2 (en) | 2012-06-01 | 2016-11-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with fibronectin |
| US9828602B2 (en) | 2012-06-01 | 2017-11-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with fibronectin |
| WO2013184209A1 (en) | 2012-06-04 | 2013-12-12 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Mif for use in methods of treating subjects with a neurodegenerative disorder |
| WO2013185097A1 (en) | 2012-06-08 | 2013-12-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Ultrasound-triggerable agents for tissue engineering |
| WO2014006063A2 (en) | 2012-07-02 | 2014-01-09 | Medizinische Universität Wien | Complement split product c4d for the treatment of inflammatory conditions |
| WO2014006088A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | Wintershall Holding GmbH | Genetically modified microorganisms capable of producing beta-glucans and methods for producing beta-glucans |
| CA2879066C (en) | 2012-07-13 | 2019-08-13 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant |
| DK2872485T3 (da) | 2012-07-13 | 2021-03-08 | Wave Life Sciences Ltd | Asymmetrisk hjælpegruppe |
| JP6453212B2 (ja) | 2012-07-13 | 2019-01-16 | ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッドＷａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｔｄ． | キラル制御 |
| US20140038182A1 (en) | 2012-07-17 | 2014-02-06 | Dna Logix, Inc. | Cooperative primers, probes, and applications thereof |
| CA2880833A1 (en) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | Aptamir Therapeutics, Inc. | Cell-specific delivery of mirna modulators for the treatment of obesity and related disorders |
| EP2695950A1 (en) | 2012-08-10 | 2014-02-12 | Blackfield AG | Markers for responsiveness to an inhibitor of the fibroblast growth factor receptor |
| KR102237882B1 (ko) | 2012-08-15 | 2021-04-07 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 변형된 캡핑 프로토콜을 이용하는 올리고머 화합물 제조 방법 |
| CA2884245C (en) | 2012-09-06 | 2023-03-14 | The University Of Chicago | Antisense polynucleotides to induce exon skipping and methods of treating dystrophies |
| EP2708231A1 (en) | 2012-09-12 | 2014-03-19 | Netris Pharma | Combined treatment with netrin-1 interfering drug and chemotherapeutic drug |
| EP2708241A1 (en) | 2012-09-12 | 2014-03-19 | Netris Pharma | Recombinant Fc-fusion protein of the two Immunoglobulin domains of UNC5 |
| EP2906699A4 (en) | 2012-10-11 | 2016-06-08 | Ionis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMER COMPOUNDS WITH BICYCLIC NUCLEOSIDES AND USES THEREOF |
| DK2906256T3 (en) | 2012-10-12 | 2018-11-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | SELECTIVE ANTISENSE COMPOUNDS AND APPLICATIONS THEREOF |
| US20160138014A1 (en) | 2012-10-12 | 2016-05-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds and uses thereof |
| US9029335B2 (en) | 2012-10-16 | 2015-05-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 2′-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| EP2912069B1 (en) | 2012-10-23 | 2019-07-31 | Emory University | Gm-csf and il-4 conjugates, compositions, and methods related thereto |
| EP2912179A4 (en) | 2012-10-26 | 2016-10-12 | Geron Corp | C-MYC ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES AND METHODS OF USE FOR THE TREATMENT OF CELL PROLIFERATION DISORDERS |
| EP2914621B1 (en) | 2012-11-05 | 2023-06-07 | Foundation Medicine, Inc. | Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof |
| US8883857B2 (en) | 2012-12-07 | 2014-11-11 | Baylor College Of Medicine | Small molecule xanthine oxidase inhibitors and methods of use |
| WO2014093537A1 (en) | 2012-12-11 | 2014-06-19 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Competitive modulation of micrornas |
| WO2014113729A2 (en) | 2013-01-18 | 2014-07-24 | Foundation Mecicine, Inc. | Methods of treating cholangiocarcinoma |
| ES2817050T3 (es) | 2013-02-04 | 2021-04-06 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos antisentido selectivos y usos de los mismos |
| WO2014130922A1 (en) | 2013-02-25 | 2014-08-28 | Trustees Of Boston University | Compositions and methods for treating fungal infections |
| MX366660B (es) | 2013-03-14 | 2019-07-18 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de arni contra el componente c5 del complemento y métodos para su uso. |
| CN105229150A (zh) | 2013-03-14 | 2016-01-06 | 安第斯生物技术股份有限公司 | 用于治疗癌症干细胞的反义寡核苷酸 |
| BR112015022621A2 (pt) | 2013-03-14 | 2017-10-31 | Andes Biotechnologies S A | métodos para detecção e tratamento de mieloma múltiplo |
| CN111254145A (zh) | 2013-03-14 | 2020-06-09 | Ionis制药公司 | 用于调节tau表达的组合物和方法 |
| EP2971160B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-05-30 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital assays for mutation detection |
| WO2014160871A2 (en) | 2013-03-27 | 2014-10-02 | The General Hospital Corporation | Methods and agents for treating alzheimer's disease |
| JP2016522679A (ja) | 2013-04-04 | 2016-08-04 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系を用いたゲノム編集の治療的使用 |
| WO2015012916A2 (en) | 2013-04-23 | 2015-01-29 | Northwestern University | Metal-ligand coordination polymer nanoparticles and methods for making |
| NZ631552A (en) | 2013-05-01 | 2017-02-24 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for modulating hbv expression |
| EP2999785B1 (en) | 2013-05-22 | 2018-04-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 irna compositions and methods of use thereof |
| IL293657A (en) | 2013-05-22 | 2022-08-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Preparations of tmprss6 irna and methods of using them |
| WO2014197835A2 (en) | 2013-06-06 | 2014-12-11 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| DK3007704T3 (da) | 2013-06-13 | 2021-03-29 | Antisense Therapeutics Ltd | Kombinationsterapi til akromegali |
| AU2014284152B2 (en) | 2013-06-21 | 2020-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of target nucleic acids |
| KR102285326B1 (ko) | 2013-06-28 | 2021-08-04 | 에트리스 게엠베하 | Rna를 세포에 도입하기 위한 조성물 |
| EP3022176B8 (en) | 2013-07-15 | 2019-12-25 | The Regents of the University of California | Azacyclic constrained analogs of fty720 |
| TW202246503A (zh) | 2013-07-19 | 2022-12-01 | 美商百健Ｍａ公司 | 用於調節τ蛋白表現之組合物 |
| US10435430B2 (en) | 2013-07-31 | 2019-10-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compounds useful in conditions related to repeat expansion |
| RS59991B1 (sr) | 2013-08-08 | 2020-04-30 | Scripps Research Inst | Metoda enzimskog in vitro obeležavanja specifičnog za položaj nukleinskih kiselina uvođenjem neprirodnih nukleotida |
| TW201536329A (zh) | 2013-08-09 | 2015-10-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | 用於調節失養性肌強直蛋白質激酶(dmpk)表現之化合物及方法 |
| WO2015022326A1 (en) | 2013-08-12 | 2015-02-19 | Xiber Science Gmbh | Peptides as active agents for treating primary graft dysfunction |
| US9371570B2 (en) | 2013-09-16 | 2016-06-21 | CeMM—FORSCHUNGSZENTRUM FÜR MOLEKULARE MEDIZIN GmbH | Mutant calreticulin for the diagnosis of myeloid malignancies |
| US9943604B2 (en) | 2013-09-20 | 2018-04-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted therapeutic nucleosides and their use |
| MX2016004230A (es) | 2013-10-02 | 2016-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen lect2. |
| SG10201910929QA (en) | 2013-10-04 | 2020-01-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for inhibiting expression of the alas1 gene |
| WO2015054451A1 (en) | 2013-10-09 | 2015-04-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Detection of hepatitis delta virus (hdv) for the diagnosis and treatment of sjögren's syndrome and lymphoma |
| US11162096B2 (en) | 2013-10-14 | 2021-11-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript |
| WO2015061091A1 (en) | 2013-10-21 | 2015-04-30 | The General Hospital Corporation | Methods relating to circulating tumor cell clusters and the treatment of cancer |
| WO2015066708A1 (en) | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Northwestern University | Quantification and spatio-temporal tracking of a target using a spherical nucleic acid (sna) |
| US10752940B2 (en) | 2013-11-08 | 2020-08-25 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for detecting oligonucleotides |
| ES2797679T3 (es) | 2013-12-02 | 2020-12-03 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos antisentido y usos de los mismos |
| JP6527516B2 (ja) | 2013-12-03 | 2019-06-05 | ノースウェスタン ユニバーシティ | リポソーム粒子、前述のものを作製する方法及びその使用 |
| CA2844640A1 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-06 | The University Of British Columbia | Method for treatment of castration-resistant prostate cancer |
| WO2015085183A2 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-11 | Swift Biosciences, Inc. | Cleavable competitor polynucleotides |
| KR102344559B1 (ko) | 2013-12-12 | 2021-12-31 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 보체 성분 ｉＲＮＡ 조성물 및 이의 이용 방법 |
| EP3082840B1 (en) | 2013-12-20 | 2021-03-24 | The General Hospital Corporation | Methods and assays relating to circulating tumor cells |
| WO2015108046A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤 |
| WO2015108047A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤 |
| EP3095459A4 (en) | 2014-01-15 | 2017-08-23 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having antitumor effect and antitumor agent |
| SG10201912897UA (en) | 2014-01-16 | 2020-02-27 | Wave Life Sciences Ltd | Chiral design |
| JP6736467B2 (ja) | 2014-02-04 | 2020-08-05 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 平滑化変異体及びその使用方法 |
| EP3960860A3 (en) | 2014-02-11 | 2022-06-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| EP3104873B1 (en) | 2014-02-13 | 2019-09-04 | Technische Universität München | Fgf-8 for use in treating diseases or disorders of energy homeostasis |
| JP2017507946A (ja) | 2014-02-26 | 2017-03-23 | エスリス ゲーエムベーハーｅｔｈｒｉｓ ＧｍｂＨ | Ｒｎａを胃腸内投与するための組成物 |
| US10036019B2 (en) | 2014-03-17 | 2018-07-31 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic carbocyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2015143245A1 (en) | 2014-03-19 | 2015-09-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating ataxin 2 expression |
| HUE055877T2 (hu) | 2014-03-19 | 2021-12-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Ataxin-2 expresszióját módosító készítmények |
| HRP20220798T1 (hr) | 2014-04-01 | 2022-10-14 | Biogen Ma Inc. | Pripravci za modulaciju ekspresije sod-1 |
| DK3129493T3 (da) | 2014-04-09 | 2021-09-27 | Scripps Research Inst | Import af unaturlige eller modificerede nukleosidtriphosphater ind i celler via nukleinsyre-triphosphat-transportører |
| WO2015158898A2 (en) | 2014-04-17 | 2015-10-22 | Medizinische Hochschule Hannover | Means and methods for producing neisseria meningitidis capsular polysaccharides of low dispersity |
| WO2015164693A1 (en) | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising alpha-beta-constrained nucleic acid |
| WO2015168172A1 (en) | 2014-04-28 | 2015-11-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Linkage modified oligomeric compounds |
| EP3757215A3 (en) | 2014-05-01 | 2021-03-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression |
| CA2946003A1 (en) | 2014-05-01 | 2015-11-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating angiopoietin-like 3 expression |
| CN106232804B (zh) | 2014-05-01 | 2019-10-25 | Ionis制药公司 | 用于调节补体因子b表达的组合物和方法 |
| TW201607559A (zh) | 2014-05-12 | 2016-03-01 | 阿尼拉製藥公司 | 治療ｓｅｒｐｉｎｃ１相關疾患之方法和組成物 |
| WO2015179693A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
| JP6811094B2 (ja) | 2014-05-22 | 2021-01-13 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | アンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用 |
| JP2017518307A (ja) | 2014-06-02 | 2017-07-06 | チルドレンズ メディカル センター コーポレーション | 免疫調節のための方法および組成物 |
| TR201908550T4 (tr) | 2014-06-04 | 2019-07-22 | Exicure Inc | Profilaktik veya terapötik uygulamalar için lipozomal sferik nükleik asitler tarafından immün modülatörlerin çok değerlikli teslimi. |
| US10308940B2 (en) | 2014-06-10 | 2019-06-04 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Antisense oligonucleotides useful in treatment of Pompe disease |
| WO2015200697A1 (en) | 2014-06-25 | 2015-12-30 | The General Hospital Corporation | Targeting human satellite ii (hsatii) |
| US9951327B1 (en) | 2014-07-17 | 2018-04-24 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Efficient and rapid method for assembling and cloning double-stranded DNA fragments |
| US10653747B2 (en) | 2014-07-31 | 2020-05-19 | Uab Research Foundation | ApoE mimetic peptides and higher potency to clear plasma cholesterol |
| MX2017002085A (es) | 2014-08-19 | 2017-08-21 | Univ Northwestern | Tratamientos con nanopartículas núcleo-corteza de proteína/oligonucleótido. |
| CN107074767A (zh) | 2014-08-20 | 2017-08-18 | 西北大学 | 用于反义基因调节的生物相容的无限配位聚合物纳米颗粒–核酸缀合物 |
| JP6672270B2 (ja) | 2014-08-29 | 2020-03-25 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | トランスサイレチン（ｔｔｒ）媒介アミロイドーシスの治療方法 |
| WO2016033472A1 (en) | 2014-08-29 | 2016-03-03 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| WO2016033424A1 (en) | 2014-08-29 | 2016-03-03 | Genzyme Corporation | Methods for the prevention and treatment of major adverse cardiovascular events using compounds that modulate apolipoprotein b |
| US10436802B2 (en) | 2014-09-12 | 2019-10-08 | Biogen Ma Inc. | Methods for treating spinal muscular atrophy |
| WO2016040589A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting complement component c5 and methods of use thereof |
| EP3663403A1 (en) | 2014-09-26 | 2020-06-10 | University of Massachusetts | Rna-modulating agents |
| EP3201348B2 (en) | 2014-09-30 | 2022-06-29 | Basf Se | Method for preparing an aqueous acrylamide solution having a low acrylic acid concentration |
| WO2016050819A1 (en) | 2014-09-30 | 2016-04-07 | Basf Se | Method for preparing an acrylamide solution having a low acrylic acid concentration |
| BR112017005847A2 (pt) | 2014-09-30 | 2018-02-06 | Basf Se | métodos para produzir um composto de amida, para produzir um micro-organismo e para reduzir a formação de ácido acrílico, solução de composto de amida aquosa, composição, e, usos de uma nitrila hidratase e amidase e de um método de secagem. |
| JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
| WO2016061487A1 (en) | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof |
| EP3904519A1 (en) | 2014-10-30 | 2021-11-03 | Genzyme Corporation | Polynucleotide agents targeting serpinc1 (at3) and methods of use thereof |
| JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
| WO2016077540A1 (en) | 2014-11-12 | 2016-05-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the modulation of comp |
| WO2016081444A1 (en) | 2014-11-17 | 2016-05-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof |
| AU2015349680A1 (en) | 2014-11-21 | 2017-06-08 | Northwestern University | The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates |
| AU2015360794B2 (en) | 2014-12-08 | 2021-07-08 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Lipocationic polymers and uses thereof |
| EP3230445B1 (en) | 2014-12-12 | 2024-01-24 | Tod M. Woolf | Compositions and methods for editing nucleic acids in cells utilizing oligonucleotides |
| EP3034539A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-22 | Ethris GmbH | Compositions for introducing nucleic acid into cells |
| US9688707B2 (en) | 2014-12-30 | 2017-06-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic morpholino compounds and oligomeric compounds prepared therefrom |
| WO2016112132A1 (en) | 2015-01-06 | 2016-07-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript |
| US10538763B2 (en) | 2015-01-16 | 2020-01-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulation of DUX4 |
| EP3247988A4 (en) | 2015-01-23 | 2018-12-19 | Vanderbilt University | A robust interferometer and methods of using same |
| WO2016130600A2 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Duke University | Compositions and methods for epigenome editing |
| WO2016130806A2 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
| EP3262173A2 (en) | 2015-02-23 | 2018-01-03 | Crispr Therapeutics AG | Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies |
| US11129844B2 (en) | 2015-03-03 | 2021-09-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating MECP2 expression |
| EP3722297A1 (en) | 2015-03-04 | 2020-10-14 | Gilead Sciences, Inc. | Toll-like receptor modulating 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine compounds |
| IL254734B2 (en) | 2015-03-27 | 2023-09-01 | Harvard College | Modified t cells and methods for their preparation and use |
| WO2016164463A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | The General Hospital Corporation | Methods for reactivating genes on the inactive x chromosome |
| DK3283500T3 (en) | 2015-04-08 | 2020-11-16 | Univ Chicago | Compositions and methods for correcting limb girdle muscular dystrophy type 2C using exon skipping |
| US10745702B2 (en) | 2015-04-08 | 2020-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the LECT2 gene |
| WO2016167780A1 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript |
| EP3307316A1 (en) | 2015-06-12 | 2018-04-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
| WO2016205323A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotde agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof |
| WO2016209862A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof |
| AU2016282986A1 (en) | 2015-06-26 | 2018-02-01 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Cancer therapy targeting tetraspanin 33 (tspan33) in myeloid derived suppressor cells |
| WO2017004261A1 (en) | 2015-06-29 | 2017-01-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified crispr rna and modified single crispr rna and uses thereof |
| AU2016287499B2 (en) | 2015-06-29 | 2022-08-04 | Caris Science, Inc. | Therapeutic oligonucleotides |
| US10494632B2 (en) | 2015-07-10 | 2019-12-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof |
| KR102640776B1 (ko) | 2015-07-10 | 2024-02-23 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 디아실글리세롤 아실전이효소 2(dgat2) 조절제 |
| MA43072A (fr) | 2015-07-22 | 2018-05-30 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
| US10941176B2 (en) | 2015-07-28 | 2021-03-09 | Caris Science, Inc. | Therapeutic oligonucleotides |
| US20180237774A1 (en) | 2015-08-04 | 2018-08-23 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of screening for riboswitches and attenuators |
| PE20181131A1 (es) | 2015-09-02 | 2018-07-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE ARNi PARA LIGANDO 1 DE MUERTE CELULAR PROGRAMADA 1 (PD-L1) Y METODOS DE USO DE LAS MISMAS |
| KR102641298B1 (ko) | 2015-09-14 | 2024-03-04 | 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | 지질양이온성 덴드리머 및 이의 용도 |
| CN108366990B (zh) | 2015-09-24 | 2021-09-03 | 加利福尼亚大学董事会 | 合成的鞘脂类分子、药物、它们的合成方法及治疗方法 |
| AU2016339053A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-04-12 | Crispr Therapeutics Ag | Novel family of RNA-programmable endonucleases and their uses in genome editing and other applications |
| US20180273577A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-09-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of kras expression |
| WO2017053781A1 (en) | 2015-09-25 | 2017-03-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression |
| US10709812B2 (en) | 2015-09-29 | 2020-07-14 | The Regents Of The University Of Michigan | Biodegradable hydrogel for tissue expansion |
| EP4089175A1 (en) | 2015-10-13 | 2022-11-16 | Duke University | Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells |
| JP2019507579A (ja) | 2015-10-28 | 2019-03-22 | クリスパー セラピューティクス アーゲー | デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置のための材料および方法 |
| KR102162324B1 (ko) | 2015-10-30 | 2020-10-07 | 제넨테크, 인크. | 항-HtrA1 항체 및 이의 사용 방법 |
| WO2017075670A1 (en) | 2015-11-05 | 2017-05-11 | Children's Hospital Los Angeles | "mobilizing leukemia cells" |
| EP3371201A4 (en) | 2015-11-06 | 2019-09-18 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds for use in therapy |
| MX2018005332A (es) | 2015-11-06 | 2018-11-09 | Crispr Therapeutics Ag | Materiales y metodos para tratamiento de la enfermedad de almacenamiento de glucogeno tipo 1a. |
| BR122023026882A2 (pt) | 2015-11-06 | 2024-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Uso de um composto oligomérico |
| AU2016355178B9 (en) | 2015-11-19 | 2019-05-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Lymphocyte antigen CD5-like (CD5L)-interleukin 12B (p40) heterodimers in immunity |
| US11851653B2 (en) | 2015-12-01 | 2023-12-26 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency |
| WO2017096395A1 (en) | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating breast cancer |
| AU2015416656B2 (en) | 2015-12-07 | 2023-02-23 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Enzymatic replacement therapy and antisense therapy for Pompe disease |
| US11761007B2 (en) | 2015-12-18 | 2023-09-19 | The Scripps Research Institute | Production of unnatural nucleotides using a CRISPR/Cas9 system |
| WO2017109757A1 (en) | 2015-12-23 | 2017-06-29 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis and/or frontal temporal lobular degeneration |
| US10907160B2 (en) | 2016-01-05 | 2021-02-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing LRRK2 expression |
| EP3408649B1 (en) | 2016-01-29 | 2023-06-14 | Vanderbilt University | Free-solution response function interferometry |
| US20190038771A1 (en) | 2016-02-02 | 2019-02-07 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of severe combined immunodeficiency (scid) or omenn syndrome |
| CN109071625A (zh) | 2016-02-04 | 2018-12-21 | 柯瑞斯公司 | 平滑化突变体和其使用方法 |
| WO2017141109A1 (en) | 2016-02-18 | 2017-08-24 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of severe combined immunodeficiency (scid) or omenn syndrome |
| WO2017147087A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Treatment methods for fibrosis targeting smoc2 |
| EP3423581A4 (en) | 2016-03-04 | 2020-03-04 | Rhode Island Hospital | TARGETING MIKRORNA FOR CANCER TREATMENT |
| US11136577B2 (en) | 2016-03-09 | 2021-10-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting PMP22 expression |
| WO2017161168A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of dyrk1b expression |
| EP3429632B1 (en) | 2016-03-16 | 2023-01-04 | CRISPR Therapeutics AG | Materials and methods for treatment of hereditary haemochromatosis |
| AU2017234678A1 (en) | 2016-03-16 | 2018-08-16 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modulating KEAP1 |
| EP4339288A3 (en) | 2016-03-18 | 2024-06-05 | Caris Science, Inc. | Oligonucleotide probes and uses thereof |
| WO2017167803A1 (en) | 2016-03-29 | 2017-10-05 | Basf Se | Process for producing a polyacrylamide solution with increased viscosity |
| EP3225693A1 (en) | 2016-03-29 | 2017-10-04 | Basf Se | Method for preparing aqueous acrylamide solutions |
| EP3225694A1 (en) | 2016-03-29 | 2017-10-04 | Basf Se | Method for the production of acrylamide by defined addition of the biocatalyst |
| WO2017180835A1 (en) | 2016-04-13 | 2017-10-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing c9orf72 expression |
| WO2017178193A1 (en) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Method for the identification of random polynucleotide or polypeptide sequences with biological activity |
| SG10202010261YA (en) | 2016-04-18 | 2020-11-27 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
| MA45295A (fr) | 2016-04-19 | 2019-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser |
| EP3448898A1 (en) | 2016-04-26 | 2019-03-06 | Basf Se | Method for preparing an aqueous polyacrylamide solution |
| WO2017186685A1 (en) | 2016-04-26 | 2017-11-02 | Basf Se | Method for preparing an aqueous polyacrylamide solution |
| WO2017186697A1 (en) | 2016-04-26 | 2017-11-02 | Basf Se | Method for preparing an aqueous polyacrylamide solution |
| WO2017191503A1 (en) | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
| KR20190003740A (ko) | 2016-05-06 | 2019-01-09 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | Glp-1 수용체 리간드 모이어티 컨쥬게이트된 올리고뉴클레오티드 및 이의 용도 |
| JP7080826B2 (ja) | 2016-05-16 | 2022-06-06 | ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | カチオン性スルホンアミドアミノ脂質および両親媒性両性イオンアミノ脂質 |
| AU2017271579B2 (en) | 2016-05-25 | 2023-10-19 | Caris Science, Inc. | Oligonucleotide probes and uses thereof |
| WO2017214518A1 (en) | 2016-06-10 | 2017-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLETMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSTIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH) |
| ES2929381T3 (es) | 2016-06-15 | 2022-11-28 | Streck Inc | Ensayos y métodos para determinar la resistencia microbiana |
| WO2017219017A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of gys1 expression |
| MA45496A (fr) | 2016-06-17 | 2019-04-24 | Hoffmann La Roche | Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b |
| ES2929047T3 (es) | 2016-06-24 | 2022-11-24 | Scripps Research Inst | Transportador de nucleósido trifosfato novedoso y usos del mismo |
| WO2018002812A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 (dm1) and other related disorders |
| WO2018002783A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of friedreich ataxia and other related disorders |
| US11174469B2 (en) | 2016-06-29 | 2021-11-16 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) and other related disorders |
| WO2018007980A1 (en) | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of pain related disorders |
| WO2018007976A1 (en) | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of pain related disorders |
| WO2018007871A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of transthyretin amyloidosis |
| CA3030701A1 (en) | 2016-07-11 | 2018-01-18 | Translate Bio Ma, Inc. | Nucleic acid conjugates and uses thereof |
| EP3484524B1 (en) | 2016-07-15 | 2022-11-09 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulation of smn2 |
| WO2018020323A2 (en) | 2016-07-25 | 2018-02-01 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of fatty acid disorders |
| NL2017295B1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-14 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Antisense oligomeric compound for Pompe disease |
| NL2017294B1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-14 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Natural cryptic exon removal by pairs of antisense oligonucleotides. |
| US11981703B2 (en) | 2016-08-17 | 2024-05-14 | Sirius Therapeutics, Inc. | Polynucleotide constructs |
| US11364304B2 (en) | 2016-08-25 | 2022-06-21 | Northwestern University | Crosslinked micellar spherical nucleic acids |
| SG10201607303YA (en) | 2016-09-01 | 2018-04-27 | Agency Science Tech & Res | Antisense oligonucleotides to induce exon skipping |
| WO2018045150A1 (en) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Gilead Sciences, Inc. | 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine derivaties as toll like receptor modulators |
| AU2017318601B2 (en) | 2016-09-02 | 2020-09-03 | Gilead Sciences, Inc. | Toll like receptor modulator compounds |
| WO2018055577A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Synthena Ag | Mixed tricyclo-dna, 2'-modified rna oligonucleotide compositions and uses thereof |
| JOP20190065A1 (ar) | 2016-09-29 | 2019-03-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau |
| CN109661233A (zh) | 2016-10-06 | 2019-04-19 | Ionis 制药公司 | 缀合低聚化合物的方法 |
| SG10201609048RA (en) | 2016-10-28 | 2018-05-30 | Agency Science Tech & Res | Antisense oligonucleotides |
| EP3532638A4 (en) | 2016-10-31 | 2020-07-29 | University of Massachusetts | TARGETING MICROARN-101-3 P IN CARCINOTHERAPY |
| JOP20190104A1 (ar) | 2016-11-10 | 2019-05-07 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3 |
| TW202313978A (zh) | 2016-11-23 | 2023-04-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 絲胺酸蛋白酶抑制因子Ａ１ ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| US11033570B2 (en) | 2016-12-02 | 2021-06-15 | Cold Spring Harbor Laboratory | Modulation of Lnc05 expression |
| AU2017378153B2 (en) | 2016-12-13 | 2024-03-28 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Methods of exogenous drug activation of chemical-induced signaling complexes expressed in engineered cells in vitro and in vivo |
| TWI790217B (zh) | 2016-12-16 | 2023-01-21 | 美商阿尼拉製藥公司 | 使用甲狀腺素運載蛋白（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物於治療或預防ＴＴＲ相關疾病之方法 |
| JP7458785B2 (ja) | 2017-01-23 | 2024-04-01 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | ヒドロキシステロイド１７－βデヒドロゲナーゼ１３（ＨＳＤ１７Ｂ１３）バリアント及びその使用 |
| EP3585898A1 (en) | 2017-02-22 | 2020-01-01 | CRISPR Therapeutics AG | Materials and methods for treatment of spinocerebellar ataxia type 1 (sca1) and other spinocerebellar ataxia type 1 protein (atxn1) gene related conditions or disorders |
| WO2018154459A1 (en) | 2017-02-22 | 2018-08-30 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of primary hyperoxaluria type 1 (ph1) and other alanine-glyoxylate aminotransferase (agxt) gene related conditions or disorders |
| WO2018154462A2 (en) | 2017-02-22 | 2018-08-30 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of spinocerebellar ataxia type 2 (sca2) and other spinocerebellar ataxia type 2 protein (atxn2) gene related conditions or disorders |
| US11920148B2 (en) | 2017-02-22 | 2024-03-05 | Crispr Therapeutics Ag | Compositions and methods for gene editing |
| EP3585807A1 (en) | 2017-02-22 | 2020-01-01 | CRISPR Therapeutics AG | Materials and methods for treatment of early onset parkinson's disease (park1) and other synuclein, alpha (snca) gene related conditions or disorders |
| US11180756B2 (en) | 2017-03-09 | 2021-11-23 | Ionis Pharmaceuticals | Morpholino modified oligomeric compounds |
| JOP20190215A1 (ar) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
| US20180284123A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | California Institute Of Technology | Barcoded rapid assay platform useful for efficient analysis of candidate molecules and methods of making and using the platform |
| WO2018185222A1 (en) | 2017-04-05 | 2018-10-11 | Acib Gmbh - Austrian Centre Of Industrial Biotechnology | Aminoacyl trna synthetases and orthogonal trnas |
| IL269970B (en) | 2017-04-14 | 2022-09-01 | Tallac Therapeutics Inc | Polynucleotides that modulate the immune system, their antibody binding, and methods of using them |
| CN110913898B (zh) | 2017-04-18 | 2024-04-05 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 具有乙肝病毒(hbv)感染的受试者的治疗方法 |
| CA3059321A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Synthena Ag | Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof |
| WO2018193428A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Synthena Ag | Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof |
| US20200384115A1 (en) | 2017-04-21 | 2020-12-10 | The Broad Institute , Inc. | Targeted delivery to beta cells |
| WO2018209270A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas) |
| IL270415B1 (en) | 2017-05-12 | 2024-04-01 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for cell engineering and their uses in immuno-oncology |
| US11597744B2 (en) | 2017-06-30 | 2023-03-07 | Sirius Therapeutics, Inc. | Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use |
| JP7325341B2 (ja) | 2017-07-11 | 2023-08-14 | シンソークス，インク． | 非天然ヌクレオチドの組み込み及びその方法 |
| MX2020000387A (es) | 2017-07-13 | 2020-08-17 | Univ Northwestern | Método general y directo para preparar nanopartículas de estructura organometálica funcionalizadas con oligonucleotidos. |
| CA3069868A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof |
| EP3658176A1 (en) | 2017-07-26 | 2020-06-03 | Medizinische Universität Wien | Superactive mutant thymidine kinase for use in cancer therapy |
| JP2020529976A (ja) | 2017-08-03 | 2020-10-15 | シンソークス，インク． | 自己免疫疾患の処置のためのサイトカイン抱合体 |
| AU2018318231A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-02-13 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of the notch signaling pathway for treatment of respiratory disorders |
| WO2019051173A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | MODULATORS OF SMAD7 EXPRESSION |
| WO2019055460A1 (en) | 2017-09-13 | 2019-03-21 | The Children's Medical Center Corporation | COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF TRANSPOSON-ASSOCIATED DISEASES |
| US11806360B2 (en) | 2017-09-19 | 2023-11-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating transthyretin (TTR) mediated amyloidosis |
| AU2018350693B2 (en) | 2017-10-16 | 2021-03-04 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Nucleic acid molecule for reduction of PAPD5 and PAPD7 mRNA for treating hepatitis B infection |
| MX2020004043A (es) | 2017-10-17 | 2021-05-27 | Crispr Therapeutics Ag | Composiciones y métodos para la edición génica de hemofilia a. |
| WO2019081982A1 (en) | 2017-10-26 | 2019-05-02 | Crispr Therapeutics Ag | SUBSTANCES AND METHODS FOR THE TREATMENT OF HEMOGLOBINOPATHIES |
| WO2019089922A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
| US20210363521A1 (en) | 2017-11-09 | 2021-11-25 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | CRISPR/CAS Systems For Treatment of DMD |
| TWI809004B (zh) | 2017-11-09 | 2023-07-21 | 美商Ionis製藥公司 | 用於降低snca表現之化合物及方法 |
| WO2019099610A1 (en) | 2017-11-16 | 2019-05-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof |
| EP3714054A1 (en) | 2017-11-20 | 2020-09-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof |
| MA50877A (fr) | 2017-11-21 | 2020-09-30 | Bayer Healthcare Llc | Matériaux et méthodes pour le traitement de la rétinite pigmentaire autosomique dominante |
| EP3720473A1 (en) | 2017-12-05 | 2020-10-14 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Crispr-cas9 modified cd34+ human hematopoietic stem and progenitor cells and uses thereof |
| JP2021506239A (ja) | 2017-12-14 | 2021-02-22 | アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． | 複合アンチセンス化合物及びその使用 |
| MA51138A (fr) | 2017-12-14 | 2020-10-21 | Bayer Healthcare Llc | Nouveaux systèmes d'endonucléases arn-programmables et leurs utilisations dans l'édition de génome et d'autres applications |
| CA3086343A1 (en) | 2017-12-18 | 2019-06-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | High mobility group box-1 (hmgb1) irna compositions and methods of use thereof |
| CN111836892A (zh) | 2017-12-21 | 2020-10-27 | 克里斯珀医疗股份公司 | 用于治疗2a型乌谢尔综合征的材料和方法 |
| CA3084633A1 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of usher syndrome type 2a and/or non-syndromic autosomal recessive retinitis pigmentosa (arrp) |
| WO2019126641A2 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of frataxin expression |
| PE20201501A1 (es) | 2018-01-12 | 2020-12-29 | Bristol Myers Squibb Co | Oligonucleotidos antisentido que actuan sobre alfa-sinucleina, y usos de estos |
| MA51637A (fr) | 2018-01-12 | 2020-11-18 | Bayer Healthcare Llc | Compositions et méthodes pour l'édition génique par ciblage de la transferrine |
| RU2020127049A (ru) | 2018-01-15 | 2022-02-17 | Айонис Фармасьютикалс, Инк. | Модуляторы экспрессии dnm2 |
| EP3740472A1 (en) | 2018-01-19 | 2020-11-25 | Synthena AG | Tricyclo-dna nucleoside precursors and processes for preparing the same |
| WO2019147743A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Structure-guided chemical modification of guide rna and its applications |
| EP3749767A1 (en) | 2018-02-05 | 2020-12-16 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
| US11268077B2 (en) | 2018-02-05 | 2022-03-08 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
| AU2019218987A1 (en) | 2018-02-12 | 2020-07-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified compounds and uses thereof |
| MA51869A (fr) | 2018-02-16 | 2020-12-23 | Bayer Healthcare Llc | Compositions et méthodes pour l'édition génique par ciblage du fibrinogène-alpha |
| SG11202007728QA (en) | 2018-02-26 | 2020-09-29 | Synthorx Inc | Il-15 conjugates and uses thereof |
| US11241451B2 (en) | 2018-03-02 | 2022-02-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of IRF4 expression |
| US11732260B2 (en) | 2018-03-02 | 2023-08-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the modulation of amyloid-β precursor protein |
| JP2021518139A (ja) | 2018-03-19 | 2021-08-02 | クリスパー セラピューティクス アーゲー | 新規ｒｎａプログラム可能エンドヌクレアーゼ系およびその使用 |
| US11661601B2 (en) | 2018-03-22 | 2023-05-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating FMR1 expression |
| CA3095545A1 (en) | 2018-03-30 | 2019-10-03 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universitat Bonn | Aptamers for targeted activaton of t cell-mediated immunity |
| CN116536272A (zh) | 2018-04-06 | 2023-08-04 | 儿童医疗中心有限公司 | 用于体细胞重新编程和调整印记的组合物和方法 |
| AU2019252667A1 (en) | 2018-04-11 | 2020-10-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of EZH2 expression |
| WO2019204668A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Casebia Therapeutics Limited Liability Partnership | Compositions and methods for knockdown of apo(a) by gene editing for treatment of cardiovascular disease |
| ES2960936T3 (es) | 2018-04-25 | 2024-03-07 | Ethris Gmbh | Formulaciones a base de lípidos para el suministro de ARN |
| AU2019260687B2 (en) | 2018-04-27 | 2022-09-22 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Rapamycin resistant cells |
| US20210172928A1 (en) | 2018-05-03 | 2021-06-10 | The Trustees Of Wheaton College | Improved membranes for nanopore sensing applications |
| CU20200082A7 (es) | 2018-05-09 | 2021-06-08 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos y métodos para la reducción de la expresión de fxi |
| EP3799602A4 (en) | 2018-05-09 | 2022-02-16 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING ATXN3 EXPRESSION |
| TW202016304A (zh) | 2018-05-14 | 2020-05-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 血管收縮素原（ＡＧＴ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| WO2019238725A1 (en) | 2018-06-13 | 2019-12-19 | Acib Gmbh - Austrian Centre Of Industrial Biotechnology | Methionine analogue synthesis |
| EP3807411A4 (en) | 2018-06-14 | 2022-08-03 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | COMPOUNDS AND METHODS FOR ENHANCING STMN2 EXPRESSION |
| TWI833770B (zh) | 2018-06-27 | 2024-03-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法 |
| JP7102557B2 (ja) | 2018-07-03 | 2022-07-19 | エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー | Ｔａｕ発現調節用オリゴヌクレオチド |
| WO2020023737A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing atxn2 expression |
| SG11202100715WA (en) | 2018-08-13 | 2021-02-25 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | HEPATITIS B VIRUS (HBV) dsRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2020037125A1 (en) | 2018-08-16 | 2020-02-20 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
| WO2020041348A1 (en) | 2018-08-20 | 2020-02-27 | Rogcon, Inc. | Antisense oligonucleotides targeting scn2a for the treatment of scn1a encephalopathies |
| WO2020047229A1 (en) | 2018-08-29 | 2020-03-05 | University Of Massachusetts | Inhibition of protein kinases to treat friedreich ataxia |
| AU2019328501A1 (en) | 2018-08-31 | 2021-03-04 | Leibniz-Institut Für Pflanzenbiochemie | Calcium dependent protein kinase constructs and uses thereof |
| EP3620520A1 (en) | 2018-09-10 | 2020-03-11 | Universidad del Pais Vasco | Novel target to treat a metabolic disease in an individual |
| CA3103175A1 (en) | 2018-09-11 | 2020-03-19 | Helmholtz Zentrum Muenchen - Deutsches Forschungszentrum Fur Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) | Microrna inhibitors for use in treating metabolic diseases |
| AU2019339509A1 (en) | 2018-09-14 | 2021-05-13 | Northwestern University | Programming protein polymerization with DNA |
| WO2020060986A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| TW202023573A (zh) | 2018-09-19 | 2020-07-01 | 美商Ionis製藥公司 | Pnpla3表現之調節劑 |
| KR20210071003A (ko) | 2018-10-05 | 2021-06-15 | 멀티플렉스디엑스, 에스.알.오. | 멀티플렉스 형광 및 서열분석을 사용한 질환 진단 방법 |
| KR20210096088A (ko) | 2018-10-17 | 2021-08-04 | 크리스퍼 테라퓨틱스 아게 | 전이유전자 전달용 조성물 및 방법 |
| US10913951B2 (en) | 2018-10-31 | 2021-02-09 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure |
| TW202028222A (zh) | 2018-11-14 | 2020-08-01 | 美商Ionis製藥公司 | Foxp3表現之調節劑 |
| CR20210311A (es) | 2018-11-15 | 2021-07-22 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Moduladores de la expresión de irf5 |
| CN113286886A (zh) | 2018-11-21 | 2021-08-20 | Ionis制药公司 | 用于减少朊病毒表达的化合物和方法 |
| WO2020118259A1 (en) | 2018-12-06 | 2020-06-11 | Northwestern University | Protein crystal engineering through dna hybridization interactions |
| WO2020123395A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | Ideaya Biosciences, Inc. | 2-oxoquinazoline derivatives as methionine adenosyltransferase 2a inhibitors |
| EA202191736A1 (ru) | 2018-12-20 | 2021-10-01 | Вир Байотекнолоджи, Инк. | Комбинированная терапия hbv |
| WO2020132521A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Praxis Precision Medicines, Inc. | Compositions and methods for the treatment of kcnt1 related disorders |
| WO2020132647A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Northwestern University | Use of annexins in preventing and treating muscle membrane injury |
| US20220062299A1 (en) | 2018-12-26 | 2022-03-03 | Northwestern University | Use of glucocorticoid steroids in preventing and treating conditions of muscle wasting, aging and metabolic disorder |
| SG11202107669WA (en) | 2019-01-16 | 2021-08-30 | Genzyme Corp | Serpinc1 irna compositions and methods of use thereof |
| CN113395971A (zh) | 2019-01-31 | 2021-09-14 | Ionis制药公司 | Yap1表达的调节剂 |
| JP2022519271A (ja) | 2019-02-06 | 2022-03-22 | シンソークス， インコーポレイテッド | Ｉｌ－２コンジュゲートおよびその使用方法 |
| CA3129532A1 (en) | 2019-02-15 | 2020-08-20 | Crispr Therapeutics Ag | Gene editing for hemophilia a with improved factor viii expression |
| TW202045724A (zh) | 2019-02-27 | 2020-12-16 | 美商Ionis製藥公司 | Malat1表現之調節劑 |
| US20220175956A1 (en) | 2019-03-06 | 2022-06-09 | Northwestern University | Hairpin-like oligonucleotide-conjugated spherical nucleic acid |
| CN113924127A (zh) | 2019-03-11 | 2022-01-11 | 奥克斯纳健康系统公司 | 在患有自发性脑内出血的患者中作为癫痫发作的生物标志物的微rna调节网络 |
| WO2020186059A2 (en) | 2019-03-12 | 2020-09-17 | Crispr Therapeutics Ag | Novel high fidelity rna-programmable endonuclease systems and uses thereof |
| CA3135180A1 (en) | 2019-03-29 | 2020-10-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating ube3a-ats |
| TW202210480A (zh) | 2019-04-17 | 2022-03-16 | 美商基利科學股份有限公司 | 類鐸受體調節劑之固體形式 |
| TWI751517B (zh) | 2019-04-17 | 2022-01-01 | 美商基利科學股份有限公司 | 類鐸受體調節劑之固體形式 |
| EP3969588A1 (en) | 2019-05-13 | 2022-03-23 | VIR Biotechnology, Inc. | Compositions and methods for treating hepatitis b virus (hbv) infection |
| EP3976791A4 (en) | 2019-05-28 | 2023-10-11 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING FOOT EXPRESSION |
| CA3140112A1 (en) | 2019-05-31 | 2020-12-03 | Streck, Inc. | Detection of antibiotic resistance genes |
| EP3983543A4 (en) | 2019-06-14 | 2023-05-03 | The Scripps Research Institute | REAGENTS AND METHODS FOR REPLICATION, TRANSCRIPTION AND TRANSLATION IN SEMI-SYNTHETIC ORGANISMS |
| TW202115056A (zh) | 2019-06-28 | 2021-04-16 | 美商基利科學股份有限公司 | 類鐸受體調節劑化合物的製備方法 |
| WO2021021673A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating gfap |
| WO2021022109A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2021022108A2 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| WO2021023860A1 (en) | 2019-08-07 | 2021-02-11 | Db Biotech, As | Improved horseradish peroxidase polypeptides |
| WO2021030522A1 (en) | 2019-08-13 | 2021-02-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SMALL RIBOSOMAL PROTEIN SUBUNIT 25 (RPS25) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| KR20220047598A (ko) | 2019-08-15 | 2022-04-18 | 신톡스, 인크. | Il-2 콘쥬게이트를 사용한 면역 종양학 병용 요법 |
| JP2022544587A (ja) | 2019-08-15 | 2022-10-19 | アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド | 結合修飾オリゴマー化合物及びその使用 |
| JP2022544817A (ja) | 2019-08-23 | 2022-10-21 | シンソークス， インコーポレイテッド | Ｉｌ－１５コンジュゲートおよびその使用 |
| JP2022546570A (ja) | 2019-09-03 | 2022-11-04 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｌｅｃｔ２遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法 |
| EP4025303A1 (en) | 2019-09-04 | 2022-07-13 | Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen e.V. (DZNE) | Herv inhibitors for use in treating tauopathies |
| WO2021050554A1 (en) | 2019-09-10 | 2021-03-18 | Synthorx, Inc. | Il-2 conjugates and methods of use to treat autoimmune diseases |
| US20220333120A1 (en) | 2019-09-11 | 2022-10-20 | Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum Für Gesundheit Und Umwelt (Gmbh) | Bactericidal phage vectors |
| WO2021067747A1 (en) | 2019-10-04 | 2021-04-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing ugt1a1 gene expression |
| WO2021074772A1 (en) | 2019-10-14 | 2021-04-22 | Astrazeneca Ab | Modulators of pnpla3 expression |
| WO2021076828A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof |
| MX2022004726A (es) | 2019-10-22 | 2022-05-13 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de acido ribonucleico de interferencia (arni) de componente c3 de complemento y metodos de uso de las mismas. |
| EP4052035A1 (en) | 2019-10-31 | 2022-09-07 | The Trustees of Wheaton College | Design and characterization of multilayered structures for support of lipid bilayers |
| AU2020376840A1 (en) | 2019-11-01 | 2022-04-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (HTT) iRNA agent compositions and methods of use thereof |
| WO2021087325A1 (en) | 2019-11-01 | 2021-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajb1-prkaca fusion gene expression |
| CN115175704A (zh) | 2019-11-04 | 2022-10-11 | 新索思股份有限公司 | 白介素10缀合物及其用途 |
| AR120393A1 (es) | 2019-11-05 | 2022-02-09 | Basf Se | Método de almacenamiento de un biocatalizador |
| EP4058577A1 (en) | 2019-11-13 | 2022-09-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating an angiotensinogen- (agt-) associated disorder |
| EP4061945A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
| CA3159501A1 (en) | 2019-11-27 | 2021-06-03 | Brian Joseph CAFFERTY | Methods of synthesizing rna molecules |
| CN115151641A (zh) | 2019-12-13 | 2022-10-04 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 人类染色体9开放阅读框72(C9ORF72)iRNA剂组合物及其使用方法 |
| TW202138559A (zh) | 2019-12-16 | 2021-10-16 | 美商阿尼拉製藥公司 | 含類ＰＡＴＡＴＩＮ磷脂酶結構域３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法 |
| WO2021122944A1 (en) | 2019-12-18 | 2021-06-24 | Alia Therapeutics Srl | Compositions and methods for treating retinitis pigmentosa |
| WO2021142245A1 (en) | 2020-01-10 | 2021-07-15 | Translate Bio, Inc. | Compounds, pharmaceutical compositions and methods for modulating expression of muc5b in lung cells and tissues |
| WO2021154705A1 (en) | 2020-01-27 | 2021-08-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Rab13 and net1 antisense oligonucleotides to treat metastatic cancer |
| WO2021154941A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions for use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| WO2021156244A1 (en) | 2020-02-03 | 2021-08-12 | Medizinische Universität Wien | Modified filamins and their uses |
| TW202140786A (zh) | 2020-02-10 | 2021-11-01 | 美商艾爾妮蘭製藥公司 | 用於靜默ｖｅｇｆ－ａ表現之組合物及方法 |
| KR20220143106A (ko) | 2020-02-18 | 2022-10-24 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아포지질단백질 C3 (APOC3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 |
| CN115279379A (zh) | 2020-02-28 | 2022-11-01 | Ionis 制药公司 | 用于调节smn2的化合物和方法 |
| IL295759A (en) | 2020-02-28 | 2022-10-01 | Tallac Therapeutics Inc | Transglutaminase mediated coupling |
| EP4114947A1 (en) | 2020-03-05 | 2023-01-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases |
| WO2021178736A1 (en) | 2020-03-06 | 2021-09-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | KETOHEXOKINASE (KHK) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| EP4121534A1 (en) | 2020-03-18 | 2023-01-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant |
| KR20220155367A (ko) | 2020-03-20 | 2022-11-22 | 메디치니쉐 유니베르지테트 빈 | MS 치료를 위한 카파 오피오이드 수용체(kappa opioid receptor) 리간드와 조합된 사이클로타이드(cyclotide) |
| JP2023519274A (ja) | 2020-03-26 | 2023-05-10 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | コロナウイルスｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| US20230190785A1 (en) | 2020-03-30 | 2023-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajc15 gene expression |
| US20230295622A1 (en) | 2020-04-06 | 2023-09-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing myoc expression |
| WO2021206917A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| EP4133079A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing scn9a expression |
| EP4133077A1 (en) | 2020-04-07 | 2023-02-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
| CN111995649A (zh) * | 2020-04-09 | 2020-11-27 | 瀚海新拓(杭州)生物医药有限公司 | 一种蝶啶酮核苷酸类似物及其药物组合物、制备方法和医药用途 |
| CN115955972A (zh) | 2020-04-27 | 2023-04-11 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 载脂蛋白E(APOE)iRNA剂组合物及其使用方法 |
| BR112022021136A2 (pt) | 2020-04-30 | 2022-11-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de fator b de complemento (cfb) e métodos de uso das mesmas |
| JP2023524065A (ja) | 2020-05-01 | 2023-06-08 | アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド | Ａｔｘｎ１を調節するための化合物及び方法 |
| US20230175081A1 (en) | 2020-05-04 | 2023-06-08 | MultiplexDX, s.r.o. | Means and methods for detecting novel coronavirus (sars-cov-2) |
| EP4150089A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rs1) |
| WO2021231685A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1) |
| WO2021231680A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) |
| WO2021231692A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof) |
| WO2021231673A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2) |
| EP4150078A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl) |
| EP4150088A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1) |
| WO2021231679A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2) |
| US20230183707A1 (en) | 2020-05-21 | 2023-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting marc1 gene expression |
| US11408000B2 (en) | 2020-06-03 | 2022-08-09 | Triplet Therapeutics, Inc. | Oligonucleotides for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders associated with MSH3 activity |
| EP4162050A1 (en) | 2020-06-09 | 2023-04-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation |
| EP4168546A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Xanthine dehydrogenase (xdh) irna compositions and methods of use thereof |
| AU2021296848A1 (en) | 2020-06-24 | 2023-02-09 | Humabs Biomed Sa | Engineered hepatitis B virus neutralizing antibodies and uses thereof |
| IL299074A (en) | 2020-06-25 | 2023-02-01 | Synthorx Inc | Immuno-oncology therapeutic combination with IL-2 and anti-AGFR antibody conjugates |
| AU2021299290A1 (en) | 2020-06-29 | 2023-01-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating PLP1 |
| WO2022003142A1 (en) | 2020-07-03 | 2022-01-06 | Engenes Biotech Gmbh | PYRROLYSYL-tRNA SYNTHETASE VARIANTS AND USES THEREOF |
| TW202227102A (zh) | 2020-09-22 | 2022-07-16 | 瑞典商阿斯特捷利康公司 | 治療脂肪肝病之方法 |
| MX2023003372A (es) | 2020-09-24 | 2023-05-04 | Medigene Immunotherapies Gmbh | Nuevos receptores prame y usos de los mismos. |
| WO2022066847A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof |
| US20230392134A1 (en) | 2020-09-30 | 2023-12-07 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
| JP2023544413A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | Ｇタンパク質共役受容体７５（ＧＰＲ７５）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法 |
| EP3978608A1 (en) | 2020-10-05 | 2022-04-06 | SQY Therapeutics | Oligomeric compound for dystrophin rescue in dmd patients throughout skipping of exon-51 |
| MX2023004029A (es) | 2020-10-09 | 2023-04-27 | Synthorx Inc | Terapia de combinacion de inmunoncologia con conjugados de il-2 y pembrolizumab. |
| CA3194880A1 (en) | 2020-10-09 | 2022-04-14 | Carolina E. CAFFARO | Immuno oncology therapies with il-2 conjugates |
| CA3198823A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating primary hyperoxaluria |
| WO2022087329A1 (en) | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022103999A1 (en) | 2020-11-13 | 2022-05-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| IL302817A (en) | 2020-11-18 | 2023-07-01 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for modulating angiotensinogen expression |
| WO2022106695A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | Alpha Anomeric Sas | Nucleic acid duplexes |
| US11987795B2 (en) | 2020-11-24 | 2024-05-21 | The Broad Institute, Inc. | Methods of modulating SLC7A11 pre-mRNA transcripts for diseases and conditions associated with expression of SLC7A11 |
| WO2022119873A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression |
| EP4259795A1 (en) | 2020-12-08 | 2023-10-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof |
| GB2603454A (en) | 2020-12-09 | 2022-08-10 | Ucl Business Ltd | Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
| EP4267732A1 (en) | 2020-12-23 | 2023-11-01 | Flagship Pioneering Innovations VI, LLC | Compositions of modified trems and uses thereof |
| WO2022150260A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| IL304880A (en) | 2021-02-12 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Superoxide dismutase 1 (SOD1) IRNA compositions and methods of using them to treat or prevent superoxide dismutase 1- (SOD1-) associated neurodegenerative diseases |
| EP4291243A1 (en) | 2021-02-12 | 2023-12-20 | Synthorx, Inc. | Lung cancer combination therapy with il-2 conjugates and an anti-pd-1 antibody or antigen-binding fragment thereof |
| WO2022174101A1 (en) | 2021-02-12 | 2022-08-18 | Synthorx, Inc. | Skin cancer combination therapy with il-2 conjugates and cemiplimab |
| CN117222739A (zh) | 2021-02-25 | 2023-12-12 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 朊病毒蛋白(prnp)irna组合物和其使用方法 |
| EP4298218A1 (en) | 2021-02-26 | 2024-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
| IL305414A (en) | 2021-03-04 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them |
| EP4305169A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4304640A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Northwestern University | Antiviral vaccines using spherical nucleic acids |
| JP2024512635A (ja) | 2021-03-29 | 2024-03-19 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | ハンチンチン（ＨＴＴ）ｉＲＮＡ剤組成物およびその使用方法 |
| WO2022212153A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022214632A1 (en) | 2021-04-07 | 2022-10-13 | Neoplants Sas | Compositions and methods for indoor air remediation |
| EP4330392A1 (en) | 2021-04-26 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane protease, serine 6 (tmprss6) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4330396A1 (en) | 2021-04-29 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4334448A1 (en) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating transthyretin (ttr) mediated amyloidosis |
| WO2022245583A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
| EP4341405A1 (en) | 2021-05-20 | 2024-03-27 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
| WO2022256283A2 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Korro Bio, Inc. | Methods for restoring protein function using adar |
| EP4347823A1 (en) | 2021-06-02 | 2024-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2022256538A1 (en) | 2021-06-03 | 2022-12-08 | Synthorx, Inc. | Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and cetuximab |
| JP2024521907A (ja) | 2021-06-04 | 2024-06-04 | アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | ヒト９番染色体オープンリーディングフレーム７２（Ｃ９ＯＲＦ７２）ｉＲＮＡ剤組成物及びその使用方法 |
| AR126070A1 (es) | 2021-06-08 | 2023-09-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para tratar o prevenir la enfermedad de stargardt y/o trastornos asociados con la proteína transportadora de retinol 4 (rbp4) |
| EP4101928A1 (en) | 2021-06-11 | 2022-12-14 | Bayer AG | Type v rna programmable endonuclease systems |
| BR112023023768A2 (pt) | 2021-06-11 | 2024-02-27 | Bayer Ag | Sistemas de endonucleases programáveis por rna tipo v |
| CA3223192A1 (en) | 2021-06-18 | 2022-12-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing ifnar1 expression |
| US20230194709A9 (en) | 2021-06-29 | 2023-06-22 | Seagate Technology Llc | Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics |
| WO2023278410A1 (en) | 2021-06-29 | 2023-01-05 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
| EP4363580A1 (en) | 2021-06-30 | 2024-05-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating an angiotensinogen- (agt-) associated disorder |
| WO2023285431A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-19 | Alia Therapeutics Srl | Compositions and methods for allele specific treatment of retinitis pigmentosa |
| EP4119581A1 (en) | 2021-07-14 | 2023-01-18 | Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt GmbH | Novel fab dimers |
| IL309905A (en) | 2021-07-23 | 2024-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | IRNA compositions in β-catenin (CTNNB1) and methods of using them |
| WO2023009687A1 (en) | 2021-07-29 | 2023-02-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof |
| CN117795074A (zh) | 2021-08-03 | 2024-03-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 转甲状腺素蛋白（TTR）iRNA组合物和其使用方法 |
| CA3228255A1 (en) | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing angiotensinogen (agt) |
| EP4384617A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-06-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Factor xii (f12) irna compositions and methods of use thereof |
| US11833221B2 (en) | 2021-09-01 | 2023-12-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds for reducing DMPK expression |
| EP4144841A1 (en) | 2021-09-07 | 2023-03-08 | Bayer AG | Novel small rna programmable endonuclease systems with impoved pam specificity and uses thereof |
| WO2023044370A2 (en) | 2021-09-17 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3) |
| AU2022345881A1 (en) | 2021-09-20 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof |
| AU2022356427A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-05-09 | Akouos, Inc. | Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss |
| WO2023069603A1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing |
| WO2023076450A2 (en) | 2021-10-29 | 2023-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
| AR127477A1 (es) | 2021-10-29 | 2024-01-31 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES DE ARNi CONTRA EL FACTOR B DEL COMPLEMENTO (CFB) Y MÉTODOS DE USO DE LAS MISMAS |
| WO2023086292A2 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | University Of Rochester | Gata4-targeted therapeutics for treatment of cardiac hypertrophy |
| CA3237770A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | University Of Rochester | Antisense oligonucleotides for modifying protein expression |
| GB202117758D0 (en) | 2021-12-09 | 2022-01-26 | Ucl Business Ltd | Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
| WO2023122573A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Synthorx, Inc. | Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab |
| WO2023118349A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Alia Therapeutics Srl | Type ii cas proteins and applications thereof |
| WO2023122750A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Synthorx, Inc. | Cancer combination therapy with il-2 conjugates and cetuximab |
| WO2023118068A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel small type v rna programmable endonuclease systems |
| EP4215042A1 (en) | 2022-01-21 | 2023-07-26 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | A non-human mammal comprising in its genome at least two human leukocyte antigen (hla) class i alleles, methods of making such mammal and uses thereof |
| WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
| WO2023194359A1 (en) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | Alia Therapeutics Srl | Compositions and methods for treatment of usher syndrome type 2a |
| WO2023237587A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel small type v rna programmable endonuclease systems |
| WO2024003799A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Method for producing extrachromosomal nucleic acids |
| EP4299753A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-03 | enGenes Biotech GmbH | Method for producing extrachromosomal nucleic acids |
| WO2024039776A2 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof |
| WO2024050261A1 (en) | 2022-08-29 | 2024-03-07 | University Of Rochester | Antisense oligonucleotide-based anti-fibrotic therapeutics |
| WO2024047155A1 (en) | 2022-08-31 | 2024-03-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Bifidobacterium adolescentis strains, methods and uses thereof for starch degradation and modifying gut flora in non-human mammals |
| WO2024059165A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
| WO2024056880A2 (en) | 2022-09-16 | 2024-03-21 | Alia Therapeutics Srl | Enqp type ii cas proteins and applications thereof |
| WO2024089180A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Eximmium Biotechnologies Gmbh | Method to determine extracellular vesicle recovery |
| WO2024105162A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Alia Therapeutics Srl | Type ii cas proteins and applications thereof |
| WO2024115430A1 (en) | 2022-11-28 | 2024-06-06 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Acinetobacter baumannii phages |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2081410B1 (ja) * | 1970-01-06 | 1974-08-23 | Ciba Geigy Ag | |
| FR2081415A1 (en) * | 1970-01-07 | 1971-12-03 | Ciba Geigy Ag | Tetrahydropteridine-glycosides as anti- - virals and antimacarials |
| US3792036A (en) * | 1970-01-07 | 1974-02-12 | Ciba Geigy Corp | Pteridine-glycosides |
| GB2056459B (en) * | 1979-07-04 | 1983-03-09 | Daiichi Radioisotope Lab | Pterin derivatives and an assay method for determining pterins |
| WO1987001373A1 (en) * | 1985-09-09 | 1987-03-12 | Teijin Limited | Pyridopyrimidine nucleotide derivatives |
| US5270465A (en) * | 1989-03-30 | 1993-12-14 | Lipha, Lyonnaise Industrille Pharmaceutique | 4(3H)-pteridinone compounds |
| US5034393A (en) * | 1989-07-27 | 1991-07-23 | Dowelanco | Fungicidal use of pyridopyrimidine, pteridine, pyrimidopyrimidine, pyrimidopyridazine, and pyrimido-1,2,4-triazine derivatives |
| CA2033692A1 (en) * | 1990-01-25 | 1991-07-26 | Wilhelm Bannwarth | Energy transfer systems |
| CA2129105A1 (en) * | 1992-02-12 | 1993-08-19 | Michael J. Conrad | Applications of fluorescent n-nucleosides and fluorescent structural analogs of n-nucleosides |
-
1994
- 1994-05-18 US US08/245,923 patent/US5525711A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-04-25 AU AU23991/95A patent/AU688036B2/en not_active Ceased
- 1995-04-25 AT AT95917197T patent/ATE167680T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 DE DE69503129T patent/DE69503129T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 CA CA002190588A patent/CA2190588C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 ES ES95917197T patent/ES2118593T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 DK DK95917197T patent/DK0759927T3/da active
- 1995-04-25 JP JP7529675A patent/JPH10500949A/ja not_active Withdrawn
- 1995-04-25 EP EP95917197A patent/EP0759927B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 WO PCT/US1995/005264 patent/WO1995031469A1/en active IP Right Grant
- 1995-05-26 US US08/451,641 patent/US5612468A/en not_active Expired - Lifetime
-
2008
- 2008-10-08 JP JP2008261724A patent/JP2009091358A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69503129D1 (de) | 1998-07-30 |
| AU688036B2 (en) | 1998-03-05 |
| DE69503129T2 (de) | 1999-02-18 |
| AU2399195A (en) | 1995-12-05 |
| US5525711A (en) | 1996-06-11 |
| US5612468A (en) | 1997-03-18 |
| JPH10500949A (ja) | 1998-01-27 |
| EP0759927B1 (en) | 1998-06-24 |
| DK0759927T3 (da) | 1999-04-06 |
| ES2118593T3 (es) | 1998-09-16 |
| EP0759927A1 (en) | 1997-03-05 |
| ATE167680T1 (de) | 1998-07-15 |
| CA2190588A1 (en) | 1995-11-23 |
| CA2190588C (en) | 2003-03-18 |
| WO1995031469A1 (en) | 1995-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5525711A (en) | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes | |
| US6174998B1 (en) | C-nucleoside derivatives and their use in the detection of nucleic acids | |
| AU710074B2 (en) | Novel method of preparation of known and novel 2'-modified nucleosides by intramolecular nucleophilic displacement | |
| EP0543913B1 (en) | Oligo(alpha-arabinofuranosyl nucleotides) and alpha-arabinofuranosyl precursors thereof | |
| CA2215176C (en) | C-nucleoside derivatives and their use in the detection of nucleic acids | |
| JPH11513388A (ja) | 選択的結合性相補的オリゴヌクレオチド | |
| KR20020013515A (ko) | Ｌ-리보-ｌｎａ 유사체 | |
| JP2009149605A (ja) | ６員環を有するヌクレオチドアナログ | |
| US5795756A (en) | Method and compounds for the inhibition of adenylyl cyclase | |
| JP2003528883A (ja) | オリゴヌクレオチド・ハイブリダイゼーションにユニバーサル・ヌクレオシドとして使用されるｎ８−及びｃ８−連結プリン塩基、並びに構造的に関連したヘテロ環 | |
| JPH09505556A (ja) | 蛍光性ｎ−ヌクレオシド及び蛍光性ｎ−ヌクレオシド構造類似体の応用 | |
| JP2001526639A (ja) | 三環式塩基類似体 | |
| JPH10503773A (ja) | ５’−ジチオ修飾オリゴヌクレオチド | |
| JP2005536211A (ja) | 遺伝子解析用オリゴヌクレオチドタグ化ヌクレオシド三リン酸（ｏｔｎｔｐ） | |
| US6664058B2 (en) | Base analogues | |
| NZ292140A (en) | Oligomers consisting of 1,5-anhydrohexitol nucleosides, antisence techniques. | |
| US11912734B2 (en) | Solid-phase synthesis of oligonucleotides containing N6-(2-deoxy-alpha,beta-derythropentofuranosyl)-2,6-diamino-4-hydroxy-5-formamidopyrimidine (Fapy⋅dG) | |
| EP1112281B1 (en) | Pteridine nucleotide analogs | |
| JP2005023050A (ja) | 新規核酸誘導体、及びそのフォスフォロアミダイト体、トリリン酸体の製造及び使用 | |
| JPH06502655A (ja) | オリゴ−２’−デオキシヌクレオチドおよび抗ウイルス活性を有する医薬物質としてのそれらの使用 | |
| JPH0967391A (ja) | 新規修飾ヌクレオシドおよびその製造法 さらにはそれを用いたオリゴヌクレオチ ド類の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120214 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120731 |