JPH06502655A - オリゴ−２’−デオキシヌクレオチドおよび抗ウイルス活性を有する医薬物質としてのそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 オリゴ−２°−デオキシヌクレオチドおよび抗ウィルス活性を有する医薬物質と してのそれらの使用 配列がウィルス配列のＲＮＡもしくはＤＮＡまたは癌遺伝子に相補性であるオリ ゴヌクレオチドは、ウィルス感染症の治療に潜在的に重要である。何となれば、 それらはウィルス遺伝子の発現を抑制し得るからである。アンチセンス原理と称 される基本的な方法が、例えば、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳ Ａ　７５．２８０にＺａｍｅｃｎｉｋ、　Ｐ、　Ｃ。

および５ｔｅｐｈｅｎｓｏｎ、　Ｍ、　Ｌ、　（１９７８）により記載されてい る。

しかしながら、このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドが細胞に導入される 場合、優先的な内在性細胞酵素（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ　１ｎｔｒｉｎ ｓｉｃ　ｃｅｌｌ　ｅｎｚｙｍｅｓ）がホスホジエステルブリッジの開裂により これらのオリゴヌクレオチドを迅速に分解し、こうしてそれらは有効でなくなる ことが判明した。

それ故、酵素的分解に抵抗性であるアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成しよ うとする試みがなされていた（Ｕｈｌｍａｎｎ、　Ｂ、およびＰｅｙｍａｎ、　 Ａ（１９９０）、　“Ａｎｔｊｓｅｎｓｅ　ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ：Ａ　ｎｅｗ　ｔｈｅｒａｐ。

Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅ”、Ｃｈｅｍ、Ｒｅｖ、９０．５４３−５８４）。現在まで 、このような修飾が主としてインターヌクレオチドブリッジで、即ち、リン原子 に対して行われていた。こうして、例えば、オリゴヌクレオシド−ホスホロチオ エートおよびオリゴヌクレオシド−ホスホロジチオエート、並びにノニオン性の オリゴヌクレオシド−メチルホスホネート、オリゴヌクレオシド−メチルホスホ ロチオエート、オリゴヌクレオシド−アルキルホスホトリエステルおよびオリゴ ヌクレオシド−アルキルホスホルアミデート（これらは酵素的分解に抵抗性であ る）が記載されていた。これらの化合物の欠点は、例えば、リン原子に対するそ れらのキラリティーである。これは、−それぞれの場合に二対のジアステレオ異 性体があることを意味する。しかしながら、この非一様性はそれらの薬理学的有 効性を制限し、または治療薬としての使用前に異性体の複雑な分離を必要とする 。

アンチセンス治療に提案された更に知られている類の化合物は挿入リガンドまた は反応性リガンドを含むオリゴヌクレオチドである。こうして、例えば、架橋（ ブソラレン置換、アジドプロフラビン置換）し得るアクリジン修飾オリゴマーま たはオリゴヌクレオチドが記載されていた（Ｈ６１ａｎｅ、　Ｃ，およびＴｈｕ ｏｎｇ、Ｎ、Ｔ、、　”Ａｎｔ−ｉｓｅｎｓｅ　ＲＮＡ　ａｎｄ　ＤＮＡ″、　 Ｃｕｒｒ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｏｌ、　；Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎ ｇ　Ｈａｒ−ｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｆ（ａ ｒｂｏｒ　ＮＹ、　１９８７）。しかしながら、このようなオリゴヌクレオチド の生産は非常に複雑である。

その他に、配置的に変化されたグリコン（ｇｌｙｃｏｎｉｃ）部分（αＤＮＡ） を有するオリゴデオキシヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドとし て使用し得ることが知られている。α−Ｄ配置中に専らプリン−２′−デオキシ ヌクレオシドおよびピリミジン−２′−デオキシヌクレオシドを含むこのような αＤＮＡは、内在性細胞酵素により分解されないか、または非常に遅く分解され 、それ故、アンチセンス治療に適するであろう。しかしながら、これらの化合物 の欠点は、非常に複雑で面倒な合成である（Ｃｏｈｅｎ、　Ｊ、　Ｓ、　、　Ｔ ｏｐ−ｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂ ｉｏｌｏｇｙ、Ｏ１ｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ　ｒｎ ｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ″、ＭａｃＭｉｌｌ ａｎ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｌｔ、　１９８９）。

それ故、本発明の目的は、真核細胞中で酵素で分解されず、容易に生産でき、そ してアンチセンス原理に基く医薬の抗ウィルス剤として適しているオリゴヌクレ オチドを提供することであった。

それ故、本発明は、少なくとも二つの２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトローペン トフラノシル基が５゛末端および３°末端の両方で２−デオキシ−β−Ｄ−トレ オーベントフラノシル基により置換されており、そして６〜１００のヌクレオチ ドビルディングブロックを含むオリゴデオキシ−リボヌクレオチドに関する。

更に、本発明は、２′−デオキシ−β−り一エリトローペントフラノシル基の少 なくとも２０％が連続のヌクレオチドビルディングブロック中で２°−デオキシ −β−Ｄ−トレオーベントフラノシル基により置換されており、そして６〜１０ ０のヌクレオチドビルディングブロックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチド に関する。

驚くことに、このようなオリゴヌクレオチド（以下、オリゴヌクレオチドとも称 される）は、細胞酵素、例えば、ホスホジェステラーゼ、エキソヌクレアーゼお よびエンドヌクレアーゼによる核溶解的（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）分解に対し て抵抗性または実質的に抵抗性である。加えて、それらは真核細胞中で自然条件 下で天然の２゛−デオキシリボヌクレオチドと安定な二本鎖ハイブリッド構造を 形成するが、それらはそれらのＣＤスペクトルにより証明されるようにおそらく 少なくとも一部で左巻きらせんＤＮＡ構造を有する。

本発明のオリゴヌクレオチドは、真核細胞中のウィルス遺伝子および癌遺伝子の 発現を抑制するのに適しており、それ故、アンチセンスオリゴヌクレオチドとし て治療上使用し得る。

２−デオキシ−β−Ｄ−エリトローペントフラノシル基の３０％、特に好ましく は全部が２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル基により置換され ている。

全ての２°−デオキシ−β−り一エリトローペントフラノシル基がオリゴヌクレ オチド中で２°−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル基により置換さ れている場合、このオリゴヌクレオチドはオリゴデオキシキシロヌクレオチドと 称されることが適切である。

本発明のこのようなオリゴヌクレオチドの構造が図１に図示される（オリゴデオ キシキシロヌクレオチドからの部分）。

以下、２゛−デオキシ−β−Ｄ−エリトローペントフラノシル基を含むヌクレオ チドは２−デオキシリボヌクレオチドと称され、そして２′−デオキシ−β−Ｄ −トレオーベントフラノシル基を含むヌクレオチドは２゛−デオキシキシロヌク レオチドまたはビルディングブロックと称される。

その他、２°−デオキシリボヌクレオチドビルディングブロックはｄＢ（例えば 、ｄＡ、　ｄＴ、　ｄＣ，ｄＧ）と称され、そして２′−デオキシキシロヌクレ オチドビルディングブロックはｄｘＢ（例えば、ｄｘＡ、ｄｘＴ　５ｄｘＣ、ｄ ｘＧ　）と称される。

ｄｘＢおよびｄＢは本発明のオリゴヌクレオチド中のブロック中で連続的に生じ ることが好ましい。

それ故、本発明の好ましいオリゴヌクレオチドは、ｄ　ｆｘＢｃＢ（Ｂ）　、　 ｘＢｘＢｌｄ　ｆ（Ｂ）　、　（ＸＢ）　、（Ｂ）　。１ｄ　ｆ（ｘＢ）、　（ Ｂ）　、　（ｘＢ）。）（式中、ｎ、ｍおよび０は少なくとも４であり、但し、 本発明のオリゴヌクレオチドの全長が１００のヌクレオチドビルディングブロッ クを越えないことを条件とする） である。

同等に好ましい実施態様において、エンドヌクレアーゼによる開裂を防止するた めに、一つまたは幾つかのヌクレオチドビルディングブロックｄＢはオリゴヌク レオチドの特定の位置（例えば、エンドヌクレアーゼの認識配列）でｄｘＢによ り置換し得る。

全ての天然ヌクレオペースまたは修飾ヌクレオペースが塩基として好適である。

特に好ましい修飾塩基は、５−メチルシトシンまたはデアザプリン、例えば、１ −デアザアデニン、３−デアザアデニン、７−デアザアデニン、１−デアザグア ニン、３−デアザグアニン、７−デアザグアニン、■−デアザヒポキサンチン、 ３−デアザヒポキサンチン、７−デアザヒポキサンチンおよびピリミジンのＣ− ５，７−デアザプリンの場合にはＣ−７またはプリンの場合にはＣ−８で置換さ れているこれらの塩基である。

加えて、本発明のオリゴヌクレオチドはインターヌクレオチドブリッジでの修飾 を含むことができ、この場合、修飾が本発明のオリゴヌクレオチドの全てのイン ターヌクレオチドブリッジで存在することが好ましい。これに関して、ホスホロ チオエート、メチルホスホネートおよびホスホロアミデートが好ましい。

本発明のオリゴヌクレオチドの３“末端および／または５′末端は当業者に知ら れているあらゆる適当な末端基を含むことができる。

水素、モノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェート、リポータ −基またはインターカレーター基が、３′末端および５“末端に好ましい。その 他のヌクレオチドビルディングブロックがまたリポータ−基またはインターカレ ーター基により修飾し得る。

本発明の意味内のリポータ−基は、ハブテン、例えば、ビオチンもしくはジゴキ シゲニンまたは蛍光色素残基と理解される。適当なインターカレーター基はＨｅ １ａｎ、　Ｃ，の上記の文献により記載されており、フェナントロリン、アクリ ジン、アクチノマイシンもしくはその発色団または重金属錯生成剤、例えば、Ｅ ＤＴＡであることが好ましい。また、核酸の架橋を生じるこれらの基、例えば、 ブソラレンが有利である。

本発明のオリゴヌクレオチドは、１５〜３０のヌクレオチドビルディングブロッ クを含むことが好ましい。本発明のオリゴヌクレオチド中の塩基の配列は、ウィ ルスまたは癌遺伝子（これらに向かって、オリゴヌクレオチドが送られることが 意図されている）の配列に依存する。こうして、例えば、本発明のオリゴヌクレ オチドは、旧Ｖｌ感染症の治療に特に適しており、この場合、全ての塩基はＡま たはＴを表し、そして全ての２′−デオキシ−β−り一エリトローペントフラノ シル基が２゛−デオキシ−β−り一トレオーベントフラノシル基により置換され ている。何となれば、１（ＩＶ　［のウィルス配列はポリＡ配列またはポリＴ配 列を有する幾つかのクラスターを含むからである。更に特に好ましいオリゴヌク レオチドは、ウィルス遺伝子の複製に重要である成るゲノム領域に相補性である オリゴヌクレオチドである。旧Ｖ［ゲノムの場合、これらは例えばｒｅｖ遺伝子 の調節領域である（Ｍａｔｓｕｋｕｒａ、　Ｍら（１９８９）Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ ｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８６．４２４４）。

本発明のオリゴヌクレオチドは、公知の方法、例えば、均一相中、または担体上 のホスフェートトリエステル法、ホスファイトトリエステル法またはＨ−ホスホ ネート法により生産される。最後の二つの方法が使用されることが好ましく、こ の場合、その合成は自動化合成装置を使用して通常行われる。

それ故、更に、本発明は、少なくとも二つの２゛−デオキシ−β−り一エリトロ ーペントフラノシル基が５°末端および３°末端の両方で２゛−デオキシ−β− り一トレオーベントフラノシル基により置換されており、そして６〜１００のヌ クレオチドビルディングブロックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチドの生産 方法に関するものであり、そのオリゴヌクレオチド合成方法により、開始ヌクレ オシドが固体担体に結合され、続いて適当な活性化された七ツマ−のヌクレオチ ドビルディングブロックを使用する段階的カップリングにより所望のオリゴヌク レオチドが合成され、所望により、３価のリンがその合成中または合成後に５価 のリンに酸化され、第一塩基を使用してオリゴヌクレオチドが担体から開裂され 、複素環保護基が第二塩基で開裂され、５′保護基が酸で開裂され、そして所望 により、オリゴヌクレオチドが精製される。

加えて、本発明は、２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトローペントフラノシル基の 少なくとも２０％が連続のヌクレオチドビルディングブロック中で２′−デオキ シ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル基により置換されており、そして６〜１ ００のヌクレオチドビルディングブロックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチ ドの生産方法に関するものであり、オリゴヌクレオチド合成方法により、開始ヌ クレオシドが固体担体に結合され、続いて適当な活性化されたモノマーのヌクレ オチドビルディングブロックを使用する段階的カップリングにより所望のオリゴ ヌクレオチドが合成され、所望により、３価のリンがその合成中または合成後に ５価のリンに酸化され、塩基を使用してオリゴヌクレオチドが担体から開裂され 、複素環保護基が第二塩基で開裂され、５°保護基が酸で開裂され、そして所望 により、オリゴヌクレオチドが精製される。

１５〜３０のヌクレオチドビルディングブロックを含むオリゴヌクレオチドが生 産されることが好ましい。

ヌクレオチドビルディングブロックとしてホスホルアミシトを使用する場合には ヌクレオチドビルディングブロックのそれぞれのカップリング後に、またはヌク レオチドビルディングブロックとしてホスホネートを使用する場合には全オリゴ ヌクレオチドの合成後に、３価のリンを５価のリンに酸化することが適切である 。

ヨウ素（例えば、ヨウ素／Ｈ２０／ルチジン）または２′−デオキシキシロヌク レオシド−３′−ホスホロチオエートおよび一３′−ホスホロジチオエートの生 産の場合には硫化試薬（例えば、ピリジン／二硫化炭素中の硫黄）が、酸化に使 用されることが好ましい。

６０℃のアンモニアがアルカリ開裂に使用されることが好ましい。

５°保護基を除去するために、シリル保護基の場合には８０％の酢酸水溶液また はテトラブチルアンモニウムフルオリドが室温で使用されることが好ましい。

塩基または酸による開裂後に、中和し、そして精製することが適当である。逆相 １（ＰＬＣまたはアニオン交換１（ＰＬＣが精製に使用されることが好ましく、 この場合には、続いてそれが脱塩される。

このようなオリゴヌクレオチド合成の方法は一般に当業者に知られており、例え ば、Ｇａ１ｔ、ＭＪ、、“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉ ｓ。

ａ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｐｐｒｏａｃｈ″、ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、ＬＴＤ、 １９８４．　Ｎａｒａｎｇ、　Ｓ、Ａ、。

“５−ｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ａ ｎｄ　ＲＮＡ”、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ１９８７に記載されている。

担体物質は、当業者に知られている無機ポリマー物質（調節された細孔ガラスで あるフラクトシル（Ｆｒａｃｔｏｓｉｌ、登録商標乃または有機ポリマー物質（ 例えば、ポリスチレン）を含む。

本発明のオリゴヌクレオチドを生産するために、七ツマ−の２′−デオキシキシ ロヌクレオシドまたは２゛−デオキシリボヌクレオシド（これはオリゴヌクレオ チド合成の開始ヌクレオシドとして利用できる）がカップリング剤（例えば、Ｇ ａｉ　ｔ、　Ｍ、　Ｊ、の上記の文献を参考のこと）により担体物質にカップリ ングされることが好ましい。

本発明のオリゴヌクレオチドの更に別の生産方法は、ホスフェートトリエステル 法（Ｇａｉｔ、Ｍ、Ｊ、の上記の文献を参考のこと）である。

更に、本発明は、塩基および糖により保護された２゛−デオキシキシロヌクレオ シド−３′−ホスホロアミシト、−３’−Ｈ−ホスホネートおよび−Ｐ−メチル −ホスホロアミシトに関する。これらの化合物は、本発明のオリゴヌクレオチド の生産のためのヌクレオチドビルディングブロックとして適している。

本発明のヌクレオチドビルディングブロックは、塩基アデニン、グアニン、シト シン、チミジン、ウラシル、５−メチル−シチジンまたはデアザプリン、例えば 、１−デアザアデニン、３−デアザアデニン、７−デアザアデニン、１−デアザ グアニン、３−デアザグアニンおよび７−デアザグアニンを含むことが特に好ま しい。更に別の好ましい塩基は、ピリミジンのＣ−５，７−デアザプリンのＣ− ７またはプリンのＣ−８で置換されている塩基である。

本発明のヌクレオチドビルディングブロックは、複素環塩基の保護基、５’−Ｏ Ｈ保護基または３−ＯＨ保護基を含むことが好ましい。

アミノ保護基、例えば、ベンジル基、ホルムアミジン基、イソブチリル基または フェノキシアセチル基が、複素環塩基の保護基として使用されることが好ましい 。

トリフェニルメチル基、モノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基、ｔ− ブチル−ジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、ｔ−ブチル−メト キシフェニルシリル基またはピキシル基が糖部分の５°−ＯＨ保護基として使用 されることが好ましい。

３’−０−（２−シアノエチル）−Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピル−アミノホスファ ンおよび３゛−０−メチル−Ｎ、　Ｎ’−ジイソプロピルアミノ−ホスファンが ホスホルアミシトとして好ましい。Ｈ−ホスホネートが塩として使用されること が好ましい。

特に好ましい実施態様において、本発明のヌクレオチドビルディングブロックは ３２ｐまたは３ｆｉＳで標識される。

カップリングし得る本発明のヌクレオチドビルディングブロックは、相当する２ ゛−デオキシキシロヌクレオシド（例えば、ＦＯＸおよびＭｉｌｌｅｒ　Ｊ、Ｏ ｒｇ、Ｃｈｅｍ、２８（１９６３）９３６　、ＨａｎｓｓｋｅおよびＲｏｂ　１ ｎｓＪ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１０５（１９８３）　６７３６−６ ７３７またはＦ、５ｅｅｌａおよびＨ，Ｐ。

Ｍｕｔｈ、Ｈｅ１ｖｅｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ　７４（１９９１） １０８１−１０９０と同様にして生産される）から生産される。

モノマーのヌクレオチドビルディングブロックの生産は、当業者によく知られて いる方法、例えば、Ｇａ１ｔ、Ｍ、Ｊ、の上記の文献に記載された方法に従って 行われる。

本発明のオリゴヌクレオチドは、本発明の別のオリゴヌクレオチドまたは既知の オリゴヌクレオチドによる連結により３′末端および／または５′末端で伸長し 得る。ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼを使用するこのような連結反応は、当業者に よく知られており、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏ ｎｉｎｇ、Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ　 Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ（１９８２）に記載さ れている。

また、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡポリメラーゼおよび／またはＲＮ Ａポリメラーゼを使用して酵素により生産し得る。

この場合、一般式 （式中、ＢはＡ、Ｔ、Ｃ，Ｇまたは１−デアザアデニン、３−デアザアデニン、 ７−デアザアデニン、ｌ−デアザグアニン、３−デアザグアニン、７−デアザグ アニン、１−デアザヒボキサンチン、３−デアザヒポキサンチン、７−デアザヒ ボキサンチン、Ｃ−７で置換された７−デアザプリン、Ｃ−８で置換されたプリ ン、Ｃ−５で置換されたピリミジンを含む群からの塩基を表し、Ｒ，は水素原子 またはリポータ−基もしくはインターカレーター基を表し、かつＲ２はモノホス フェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートを表す）を有するヌクレオチ ドが使用される。

それ故、更に、本発明は、一般式 （式中、ＢはＡ、Ｔ、Ｃ，Ｇまたは１−デアザアデニン、３−デアザアデニン、 ７−デアザアデニン、ｌ−デアザグアニン、３−デアザグアニン、７−デアザグ アニン、１−デアザヒポキサンチン、３−デアザヒポキサンチン、７−デアザヒ ポキサンチン、Ｃ−７で置換された７−デアザプリン、Ｃ−８で置換されたプリ ン、Ｃ−５で置換されたピリミジンを含む群からの塩基を表し、Ｒ１は水素原子 またはリポータ−基もしくはインターカレーター基を表し、かっＲ２はモノホス フェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートを表す）を有するヌクレオチ ドに関する。

更に、本発明は、抗ウィルス活性を有する医薬物質の製造のための、少なくとも 二つの２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトローペントフラノシル基が５′末端およ び３゛末端の両方で２′〜デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル基によ り置換されており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディングブロックを含 むオリゴデオキシリボヌクレオチドの使用に関する。

更に、本発明は、抗ウィルス活性を有する医薬物質の製造のための、２゛−デオ キシ−β−Ｄ−エリトローペントフラノシル基の少なくとも２０％が連続のヌク レオチドビルディングブロック中で２゛−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフ ラノシル基により置換されており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディン グブロックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチドに関する。

本発明のオリゴヌクレオチドおよびそれらの塩は、例えば、錠剤、被覆錠剤、硬 質または軟質のゼラチンカプセル、溶液、エマルションまたは懸濁液の形態で経 口投与し得る医薬製剤の形態で薬剤として使用し得る。また、それらは、例えば 、座薬の形態で直腸投与でき、または注射用の溶液の形態で非経口投与できる。

医薬製剤を製造するために、これらの化合物は治療上不活性な有機および無機の ビヒクル中で処理し得る。錠剤、被覆錠剤および硬質ゼラチンカプセル用のこの ようなビヒクルの例は、ラクトース、トウモロコシ澱粉もしくはこれらの誘導体 、獣脂、ステアリン酸またはこれらの塩である。溶液の製造に適したビヒクルは 、水、ポリオール、蔗糖、転化糖およびグルコースである。注射液に適したビヒ クルは、水、アルコール、ポリオール、グリセロールおよび植物油である。座薬 に適したビヒクルは、植物油および硬化油、ワックス、脂肪および半液体のポリ オールである。

また、医薬製剤は、防腐剤、溶媒、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、色素、フ レーバー物質、浸透圧を変化させる塩、緩衝液、被覆剤または酸化防止剤を含む ことができるだけでなく、所望により、その他の治療上活性な物質を含むことが できる。

本発明が、以下の実施例および図面により更に詳しく説明される。

図１はオリゴデオキシキシロヌクレオチドからの部分を示す。

図２は子ウシの膵臓ホスホジェステラーゼによるオリゴヌクレオチドｄ（ＧＴＡ ＧＡＡｘＴｘＴＣＴＡＣ）の加水分解を示す（Ｈ＝得られた最終生産物の淡色性 ）。挿入図は最終生産物のＨＰＬＣの溶離プロフィールを示す。ａ　＝　（Ｅｔ 、ＮＨ）ＯＡｃ　ｐＨ７／アセトニトリル（９５：５）、ｂ−移動溶媒ａ中の０ 〜２０％のアセトニトリル。

図３は、ハイブリッドｄ（ＡＩ　２）／ｄ（Ｔｌ　２）（ａ）と比較したｄ（Ａ １２）／ｄ（ｘＴ１□）ハイブリッド（ｂ）および一本鎖オリゴヌクレオチドｄ （Ａ１２）（Ｃ）およびｄ（Ｔ、□）（ｄ）の融解曲線を示す。

図４は、ｄ（Ｔ、２）（ａ）、Ｔ（ｂ）、ｘＴ（ｃ）およびｄ（ｘＴｌ。）（ｄ ）のＣＤスペクトルを示す。

図５は、ハイブリッドａ（ＡＩ　ｚ）／ａ（’ｒ１ｚ）（ａ）およびｄ（ＡＩｚ ）／ｄ（ｘＴ＋　２）（Ｃ）並びに一本鎖オリゴヌクレオチドｄ（ＡＩ□）（ｂ ）のＣＤスペクトルを示す。

実施例１ 生産物（（Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグナ ルにより特性決定する。（δに関する結果（単位ｐｐｍ））　：１１．２５（ｓ 、　ｂｒ、　ＮＨ）　；７．８０（ｓ、　Ｈ−Ｃ（６））　；６．０６（ｄｄ、 　Ｊ　（Ｈ−Ｃ（１’　）、　Ｈａ−Ｃ（２°戸２．７gｚ。

Ｊ（Ｈ−Ｃ（１°）、　Ｈａ−Ｃ（２’戸５．５Ｈｚ、　Ｈ−Ｃ（１’　））　 ；５．２５（３’　−０Ｈ）　；４．６９（５’　−０Ｈ）@； ４、２３（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　：３．７６（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　）） 　；３．７０（ｍ、　Ｈ−Ｃ（５°））；約２．５（Ｈａ−Ｃ（２’　））　； ｔ、　８４（ｄ、　Ｊ（Ｈａ−Ｃ（２’　）、　Ｈａ　−Ｃ（２’　）＝−１６ ，０Ｈｚ、　Ｈａ−Ｃ（２’））；１、６６（Ｓ、　ＣＨ３）。

実施例２ ｌ−（２°−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）チミン５００ｍｇ （２，０６ミリモル）を無水ピリジン（それぞれの場合に５　ｍｌ）で数回同時 蒸発させることにより乾燥した。油状残渣を無水ピリジン１５ｍ１に溶解し、４ ．４−ジメトキシトリフェニルメチルクロリド１、０ｇ（３ミリモル）およびジ イソプロピルエチルアミン０．５ｎｔｌ（３ミリモル）と連続的に混合した。そ れを窒素雰囲気下で４０℃で３時間攪拌し、その後その溶液を５％のＮａＣＨＯ ｓ水溶液５０ｍ１に注ぎ、毎回１００　ｍｌのジクロロメタンで２回抽出する。

合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を蒸発により除去する。トルエ ンで数回同時蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（カラム：　 ６　ｘ　１５ｃｍ、Ｃｌ２ＣＩ□−ＭｅＯＨ，９８：２）によりシリカゲル６０ Ｈで精製する。主生成物を含んだ画分を無色の泡状残渣まで濃縮する（７８０ｍ ｇ、理論収率の６９％）。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨｚＣｌｚ−ＭｅＯＨ，９５：５）　Ｒ＋　０．６゜生 成物（（Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグナル により特性決定する。（δに関する結果（単位１）Ｉ）ｍ））：１１．３０（Ｓ 、　ＮＨ）　；７．６２（ｓ、　Ｈ−Ｃ（６））　；７．４５−６．８６（ｍ、 　１３Ｈ，芳香族Ｈ）　；６．１２（ｄｄ、　Ｊ＝６、２．２．７Ｈｚ、　（） Ｉ−Ｃ（１’　））　；５．２２（ｄ、　Ｊ＝３．４Ｈｚ、　３’　−０Ｈ）　 ；４．２０（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３f　））　； ４．１０（ｍ、Ｈ−Ｃ（４’））；３．７３（ｓ、６Ｈ，２ｘ　０ＣＨｚ）；３ ．４０および３．１９（２ｍ、　Ｈｚ−Ｃ（５°））；約２．５１（ｍ、　Ｈａ 　−Ｃ（２’　））　；１゜８７（ｄ、　Ｊ＝−１５，４Ｈｚ、　Ｈａ−２°） 　；　１．６６（ｓ。

ＣＨ３）。

Ｃ３＋Ｈ８ｚＮ２０ア（５４４，６）としての元素分析：計算値：　Ｃ６８，３ ７，Ｈ５，９２゜Ｎ５．１４．実測値：　Ｃ６８，４４，Ｈ６，００，Ｎ　５． １５゜実施例３ １　［２’−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル−５°−０−（４， ４′〜ジメトキシトリフエニルメチル）］−］チミンー３′−Ｈ−ホスホネート ）、トリエチルアンモニウム塩 １．２．４−　トリアゾール１．０６ｇ（１５，３ミリモル）をジクロロメタン ３６ｍ１中のオキシ三塩化リン０．４　ｍｌ（４，６ミリモル）およびＮ−メチ ルモルホリン５．１　ｍｌ（４６ミリモル）の溶液に添加した。３０分間攪拌し た後、その溶液を０℃に冷却し、ジクロロメタン１２ｍ１中の１−　［２’−デ オキシ−５’　−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−β−り一トレ オーベントフラノシルコーチミン５００ｍｇの溶液をこれに徐々に添加する。室 温で更に１０分間攪拌した後、その反応混合物をＩＭの重炭酸トリエチルアンモ ニウム水溶液５０ｍ１．　ｐＨ８，０に注ぎ、振とうし、相を分離する。水相を ＣＨｚＣＩ　ＪＯｍｌで抽出し、合わせた有機抽出物をＮａｔＳＯ４で乾燥腰無 色のフオームまで蒸発させる。シリカゲル６０Ｈによるフラッシュクロマトグラ フィー（カラム：６　Ｘ１５ｃｍ、最初にＣＨ，Ｃｌ２−Ｅｔ３Ｎ、９２：１Ｂ 　、次にＣＨ２Ｃ１ｔ−ＭＣＨ２Ｃ１ｔ−，８８：１０：２）は、主画分を生じ 、これを溜め、そして蒸発により濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ　、　１５ｍ１に 溶解し、ＬＭの重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液、ｐＨ８，０で２回抽出し 、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発により濃縮した。所望の生成物４ｓｏ ｍｇ（理論収率の７４％）を無色のフオームの形態で得る。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃ１２−ＭｅＯ）１４ｔ、Ｎ、８８：１０：２）： Ｒ，０，３゜生成物（（Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル中 の下記のシグナルにより特性決定する。（δに関する結果（単位１）Ｉ）ｍ）） 　：　１１．３０（ｓ、　ＮＨ）　；７．６６（ｓ、　Ｈ−Ｃ（６））　；７． ６３−６．８６（ｍ、　１３Ｈ，芳香族Ｈ）　；６．１３（ｄｄ、　Ｊ＝６、８ ．２．８Ｈｚ、　（Ｈ−Ｃ（１’　））；５．７６および５．２８（ｄ、　Ｊ： １１９Ｈｚ、　ＰＲ）　；４．６２（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３°））　；４．１２（ｍ 、　Ｈ−Ｃ（４’　））　：３．７３（ｓ、　６Ｈ，２Ｘ　０ＣＨ３）　：３． ３４および３．１６（ｍ、　Ｉ２−Ｃ（５’　））　；２．７３（Ｑ、　ＣＨ３ Ｃｌ２ＮＨ）　；約２．５（ｍ、　Ｈａ−Ｃ（２’））；２．１４（ｄｊ＝−１ ５，２Ｈｚ、　Ｈａ−Ｃ（２’））；１．６６（Ｓ、ＣＨ，）；１．０３（ｔ、 ＣＨ３Ｃｌ、ＮＨ）。

”　Ｐ−ＮＭＲ（（Ｄ　６）ＤＭＳＯ）　：０．８８ｐｐｍ（’　Ｊ　（Ｐ−Ｈ ）　＝５８７Ｈｚ　：　３Ｊ　（Ｐ−Ｈ−４゛戸８．８Ｈｚj。

Ｃ，、Ｈ，、Ｎ、０９Ｐ（７０９，８）としての元素分析二計算値：　Ｃ６２， ６１，Ｈ６，８２゜Ｉ５．９２．実測値：　Ｃ６２，８１，Ｈ７，００，Ｎ　５ ．９９゜実施例４ クロロ−β−シアノエトキシ−（Ｎ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−ホスファ ン４５μＩ（０，２ミリモル）を乾燥テトラヒドロフラン中の１−［２′−デオ キシ−５’　−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−β−Ｄ−トレオ ーベントフラノシル］−チミン１００ｍｇ（０，１８ミリモル）お）　よびＮ− エチルジイソプロピルアミン（１１ＩＩｔ　（０，５７ミリモル）の溶液に２分 の期間にわたって窒素雰囲気下で室温で滴下して添加する。それを３０分間攪拌 し、その後５％のＮａＨＣＯｓ水溶液４ｍ水溶液４仁ｌり反応を停止する。その 反応混合物を毎回５ｍｌのＣＨ２Ｃ１ｇで２回抽出する。合わせた有機相を硫酸 ナトリウムで乾燥し、蒸発により濃縮する。フラッシュクロマトグラフィー（シ リカゲル６０Ｈ。

カラム：３　ｘ　６　ｃｍ　、酢酸エチル−ＣＨ２ＣＩ２−ＥｔＪ、　４５：４ ５：１０）はジアステレオマーの二つの部分的に重なった主画分を生じた（９５ ｍｇ　、理論収率の７２％）。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２−ＥｔＯＡＣ−Ｅｔ、Ｎ、４５：４５：１０ ）：Ｒ，０，７および０．６゜ ”　’　Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）　：１４８．５ｐｐｍ（ＴＬＣで大きく移動 した化合物）；１５１．８ｐｐｍ（ＴＬＣで小さく移動した化合物）。

実施例５ ９−（２’−デオキシ−β−〇−キシロフラノシル）アデニン（２′−デオキシ キシロアデノシン） その化合物をＨａｎｓｓｋｅおよびＲｏｂｉｎｓ　［Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、 　Ｓａｃ、　（１９８３）。

１０５、６７３６−６７３７］の指示に従って調製した。

生産物（（Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグナ ルにより特性決定する。（δに関する結果（単位ｐｐｍ））　：８．３５（ｓ、 　Ｈ−Ｃ（８））　；８．１５（Ｈ−Ｃ（２））　；７．３４（ｓ、　ｂｒ、　 、　ＮＨ，）　；６．２５（ｄｄ、　Ｊ（Ｈ−Ｃ（１f　）。

Ｈａ−Ｃ（２’））：２．２Ｈｚ；　Ｊ（Ｈ−Ｃ（１’）、Ｈａ−Ｃ（２′）） ＝８．７Ｈｚ；Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．９７（ｓ、　ｂｒ、　３’　−０Ｈ ）　：４．６９（ｓ、　ｂｒ、　、　５’　−０Ｈ）　；４．３３（＋ｎ、　Ｈ −Ｃ（３’　））　；３．８X＜ｔｎ、　Ｈ−Ｃ （４°））；３．６７（ｍ、Ｉ２−Ｃ（５’））；２．７８（ｍ、　Ｈａ−Ｃ（ ２’））；２．２５（ｄｄ、Ｊ（Ｈａ−Ｃ（２’　）、　Ｈａ−Ｃ（２’））＝ −１４，５Ｈｚ；　Ｈａ−Ｃ（２’　））。

実施例５ａ ２°−デオキシ−キシロ−イノシン ２′−デオキシ−キシロ−アデノシン（７８ｍｇ　、　０１３１ミリモル）を水 ３ｍｌ中に懸濁させ、アデノシンデアミナーゼ（子ウシの膵臓、５０ｇｇ）と混 合する。それを室温で２時間攪拌し、蒸発、乾燥させる。融点２０８〜２１０℃ を有する無色の結晶。収量７５ｍｇ（９７％）。

生産物＜（ｏ、）ｏｙｓｏに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグナ ルにより特性決定する。（δに関する結果（単位１）ｐｍ））：Ｌ２．４（ｂｒ 、　ＮＨ”）　：８．３１　（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　：８．０７（ｓ、　Ｈ− Ｃ（２））　；６．２４（ｄｄ、　Ｊ：８．８．１．UＨｚ。

（Ｈ−Ｃ（１’　）　；５．４５（ｄ、　Ｊ＝４．０Ｈｚ、　３’　−０Ｈ）　 ：４．７０（ｍ、　５’　−０Ｈ）　；４．３６（ｍ、　Ｊ≠R．５ Ｈｚ、　Ｈ−Ｃ（３’　）　；３．９２（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　）　；３．７１ および３．６０（２ｍ、　Ｉ２−Ｃ（５’　）　；２．７６（ｍ、Ｈａ−Ｃ（２ ’）；２，２５（ｄ、Ｊニー１５Ｈｚ、　Ｈａ−Ｃ（２’）。

”　Ｃ−ＮＭＲ（（Ｄ、　）ＤＭＳＯ）　：１５６．７（Ｃ−６）　；　１４７ ．８（Ｃ−４）　；　１４５．９（Ｃ−２）　：１３９．１@（Ｃ −８）：１２４．０（Ｃ−５）：８５．６ＣＣ−４°）；８２．８（Ｃ−１’） ；６９．１（Ｃ−３°）　；５９．９（Ｃ−５°）；４１、１（Ｃ−２’　”） 。

ｕｖスペクトル（ＭｅＯＨ中）は２４９ｎｍで最大の吸光度（ａ：、、、＝計算 値：　Ｃ４７，６２，Ｈ４，８０，Ｎ　２２．２１実測値：　Ｃ４７，７６；　 Ｈ４，９８；　Ｎ　２２．１５実施例６ ９−　［２’−デオキシ−５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメ チル）二互」二ま２二３２」１ｊノ長ゴリニ對−［［ふとムｉ止乙旦ｌとメチリ デン］アミノコアデニン ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の２゛−デオキシ−キシロアデノシン（５ ０２ｍｇ、２ミリモル）の溶液を１８時間にわたって室温でジメチルホルムアミ ド−ジエチルアセタール（１，７ｍｌ　１０ミリモル）と共に攪拌し、続いて蒸 発により濃縮した［ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃ２２−７（’トンーＥｈＮ（ ２０：１０：Ｉ））　Ｒ，０，１コ。油状残渣（０，８ｇ）を更に精製しないで ピリジン（５０ｍｌ）に溶解し、そしてその半分の容積まで濃縮した。４，４゛ −ジメトキシトリフェニルメチルクロリド（７６０ｍｇ、２．２４ミリモル）お よびエチルジイソプロピルアミン（０，３７ｍｌ、　２．１　ミリモル）の添加 後に、それを室温で３．５時間攪拌した。ピリジンを蒸発により除去し、トルエ ン（２ｘ　３０　ｍｌ）で再度流した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ２−７セトンーＥｔ ｓＮ（２０：１０：１．　ｖ／ｖ／ｖ、　５ｍ１）に溶解し、シリカゲル６ｏで クロマトグラフィーにかけた　（６ｘ　１０ｃｍ、０．５バール；移動溶媒：　 ＣＨ２Ｃｌ２−７　セトニｚ−Ｅｔ、Ｎ、２０：　１０：工）。収量：　５２０ ｍｇ（４３％）無色のフオーム。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２−アセトン−Ｂｔ、Ｎ、２０：１０：ｌ）Ｒ ，０，４８゜生産物（（Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の 下記のシグナルにより特性決定する。（δに関する結果（単位１）ｐｍ））：８ ．９３（ｓ。

：ＣＨ−）　；８．４３（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；８．３４（ｓ、　Ｈ−Ｃ（ ２））　；７．１７−７．４０（ｍ、　ＤＭＴ）　；６．７T− ６．８４（ｍ、　ＤＭＴ）　；６．４１　（ｍ、　（Ｈ−Ｃ（１’　））　；５ ．７５（ｄ、　Ｊ：５．０Ｈｚ、　３’　−０Ｈ）　；４．R３（ｍ。

Ｈ−Ｃ（３’乃、４．２０（ｍ、　（Ｈ−Ｃ（４’乃；３．７（ｍ、　２　ＣＨ ３およびＨ！−Ｃ（５））　；ａ、　２０および３．１３（２ｓ、　２０ＣＨ８ ）；２．７８（ｍ、Ｈα−Ｃ（２’））；２．３（ｄ、　Ｈβ−Ｃ（２’　）） 。

元素分析： 計算値：　Ｃ６７，０９：　Ｈ５，９６，Ｎ　１３．８１実測値：　Ｃ６６，８ ９，Ｈ６，０３，Ｎ　１３．６４実施例６ａ ２゛−デオキシ−キシロアデノシン（１００ｍｇ、０．４０ミリモル）を乾燥ピ リジン（１０ｍｌ）中に懸濁させ、そしてその容積の１７３まで蒸発させる。ト リメチルクロロシラン（０，２５ｍｌ、２ミリモル）を添加し、それを室温で１ ５分間攪拌する。続いて塩化ベンゾイル（０，２３ｍ１．２ミリモル）を添加し 、それを室温で更に２時間攪拌する。

０℃に冷却し、ＨｘＯＯ，５ｍｌを添加した後、２５％のアンモニア水溶液を更 に５分間後に添加し、それを室温で更に３０分間攪拌する。

ピリジンを蒸発させた後、残渣を水に溶解し、そして酢酸エチル（１０ｍｌ）で 抽出する。有機相を蒸発により濃縮し、ピリジン（３ｍｌ）および２５％のアン モニア水溶液（１ｍｌ）と混合する。１時間後、それを蒸発により濃縮し、そし て移動溶媒、酢酸エチル／アセトン／エタノール／Ｈ２０（１８：３：２：２） を使用してシリカゲル６０（７０ｍｌ）でクロマトグラフィーにかけ、その間に 主生成物を溶離する。収量は２５ｍｇ（６０％）であり、融点は１７５〜１７７ ℃である。

ＴＬＣ（シリカゲル、酢酸エチル／アセトン／エタノール／１（２０，１８：３ ：２：２）　Ｒ，０，４゜ 生産物（（Ｄｆｉ）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグ ナルにより特性決定する。（δに関する結果（単位１）ｐｍ））：１１．２（ｂ ｒ、　ＮＨ）　：８．７７（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；８．７０（ｓ、　Ｈ−Ｃ （２））　；８．０５および７．６０（２ｍ。

ベンゾイル−Ｈ）　；ｅ、　４７（ｄ、　（Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．５５（ ｄ、　３’　−０Ｈ）　；４．７３（ｔ、　５°−０Ｈ）　G ４．４２（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．００（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　）） 　；３．７４（ｍ、　Ｈｚ−Ｃ（５’　））　；２．８３（香B Ｈα−Ｃ（２’））；２．３８（ｍ、Ｈβ−Ｃ（２′乃。

元素分析： 計算値：　Ｃ５７，４６；　Ｈ４，８２；　Ｎ　１９．７１実測値：　Ｃ５７， ３６；　Ｈ４，９５：　Ｎ　１９．６４実施例６ｂ Ｎ　”ｄｘＡ（２８０ｍｇ　、　０．７９ミリモル）をピリジン（３０ｍｌ）と 共に蒸発させることにより乾燥し、その残渣をピリジン（１５ｍｌ）に溶解する 。４，４−ジメトキシトリフェニルメチルクロリド（３１５ｍｇ。

０．９３ミリモル）およびエチルジイソプロピルアミン（０，１４ｍＬＯ，８５ ミＩＪモル）をこれに添加し、室温で３時間攪拌する。続いてそれを蒸発により 濃縮し、トルエン（５０ｍｌ）と共に再度数回蒸発させる。

残渣をシリカゲル６０（６０ｍｌ）でＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（１２：５）で溶 離して主領域を得、これから、溶媒を蒸発により除去した後に表題化合物４２８ ｍｇ（８２％）を無色のフオームとして得る。

ＴＬＣ（ＣＨ２ＣＩ２／アセトン、１２：５）　：　Ｒ，０，４７゜生産物（（ Ｄ、）ＤＭＳＯに溶解）を’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル中の下記のシグナルにより 特性決定する。（δに関する結果（単位ｐｐｍ））　：１１．２（ｂｒ、　ＮＨ ）　；８．７７（ｓ、　Ｈ−Ｃ（２））　；８．０７−６、７７（ｍ、ベンゾイ ル−ＨおよびＤＭＴ−Ｈ）　；６．５３（ｄ、　Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．５ １（ｄ、　３’　−ＤＨ）　；４．３７（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．２ Ｂiｍ。

Ｈ−Ｃ（４’））；３．７２（ｍ、　２０ＣＨおよびＨｚ−Ｃ（５’））；２． ７９（ｍ、Ｈα−Ｃ（２°））；約２．５（ｍ、Ｈβ−Ｃ（２’　））。

元素分析： 計算値：　Ｃ６９，３９，Ｈ５，３６，Ｎ　１０．６５実測値：　Ｃ６９，４８ ，Ｈ５，８４；　Ｎ　１０．５１実施例７ １、２．４−１−リアゾール（０，９４ｇ、　１３．６ミリモル）をＣＨｔＣｌ ｇ（３５ｍｌ）中のＰＣｌ３（３６０μｍ、４．１　ミリモル）およびＮ−メチ ル−モルホリン（４，５ｍｌ、４１ミリモル）の溶液に添加し、その反応混合物 を室温で３０分間攪拌する。０℃に冷却した後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中の 実施例６からの保護ヌクレオシド（４８０ｍｇ、０．７９ミリモル）の溶液を滴 下して添加し、その溶液を室温で１０分間攪拌する。続いてその反応混合物を重 炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＬＭ　、　ｐＨ８，５０ｍ１）に注ぎ、相 を分離し、そして水相をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）で２回抽出する。合わせた有 機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして蒸発により濃縮する。残渣をシリカゲル６ ０でクロマトグラフィーにかける（６　ｘ　１０ｃｍ。

０．５バール；移動溶媒：　６００　ｍｌのＣＨ２Ｃ１ｚ−Ｅｔ、Ｎ、　９２： ８；ＣＨ２Ｃ１２−ＭｅＯＨ−Ｅｔ、Ｎ、　８８：１０：２）。主領域を蒸発に より濃縮した後、残渣をＣＨｚＣｌｇ（１５ｍｌ）に溶解し、ＥｔｓＮＦ（”　 ＨＣＯ３−（ＩＭ　、　ｐＨ８，２０ｍ１）で２回抽出する。有機相をＮａ２Ｓ Ｏ４で乾燥し、そして蒸発により濃縮する。収量３９０　ｍｇ（６４％）。無色 のフオーム。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＩ２Ｃ１２−ＭｅＯＨ−Ｅｔ、Ｎ、８８：１０：２）　 、　ＲＬＯ，６５゜生産物（（Ｃ６）ＤＭＳＯに溶解）を’Ｈ−ＮＭＲスペクト ル中の下記のシグナルにより特性決定する。（δに関する結果（単位ｐｐｍ）） ：１０．５（ｓ、　ｂｒ、　ＮＨ）　；８．９５（ｓ、　＝ＣＨ−）　；８．４ ５（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；８．４１　（ｓ、　Ｈ−Ｃ（２））　ニA、　３ ９− ６、７５（ｍ、　ＤＭＴ）　：６．７９および５．２９（Ｐ−Ｈ）；６，４５（ ｍ、　Ｈ−Ｃ（１’））；４．７９（Ｈ−Ｃ（３’　））　：４．２８（ｍ、　 Ｈ−Ｃ（４’乃；３，７１（ｍ、　２　ＣＨ３およびＩ２−Ｃ（５））　；ａ、 　２０および３．１３（２ｓ、　２０ＣＨ３）；２．９６（ｍ、ｃＨｚ）；２． ５（ｍ、Ｈ，−Ｃ（２’））；１．１０（ｔ。

Ｃ１３）。

元素分析： 計算値：　Ｃ６２，０８；　Ｈ６，７７、Ｎ　１２．６７実測値：　Ｃ６２，１ ２；　Ｈ６，９０，Ｎ　１２．４６実施例７ａ ９−　［２’−デオキシ−５’　−０−（４，４−ジメトキシトリフェニルメチ ル）−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル］　−Ｎ’−ベンゾイルアデニン−３ ’−（Ｈ−ホスホネー°ト）トリエチルアンモニウム塩１、２．４−　トリアゾ ール（３５９ｍｇ、　５．２ミリモル）をＣＨｔＣＩ２（１３ｍｌ）中のＰＣｌ ３（１３６μＩ　、１．５６ミリモル）およびＮ−メチル−モルホリン（１，７ ２ｍ１　、１５．６Ｅリモル）の溶液に添加する。その溶液を室温で３０分間攪 拌し、続いて０℃に冷却し、そして完全に保護されたヌクレオシド（ＤＭＴ−Ｎ ”ｄｘＡ　、　２００ｍｇ　、０．３ミリモル、ＣＬＣＬ　（８ｍｌ）に溶解） を添加する。室温で３０分間攪拌した後、その溶液を１モル／ｌのＴＤＫ緩衝液 （ｐＨ８，２０ｍ１）に注ぎ、有機相を分離する。水相を再度ジクロロメタン（ ３０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機相をＮａ、ＳＯｌで乾燥し、そして蒸発によ り濃縮する。残渣をシリカゲル６０（５０ｍｌ）でクロマトグラフィーにかける 。出発物質３１ｍｇ（１６％）をＣＨ，Ｃ１，−トリエチルアミン（９２：８） で溶離する。所望のＨ−ホスホネートをＣＨ２Ｃｌ２−メタノール−トリエチル アミン（８８：５：２）で溶離する。溶媒を除去した後、残渣をＣＨ２Ｃｌ　２ 　（３０ｍｌ）に溶解し、１モル／ｌのＴＢＫ緩衝液（ｐｌ（８，３０ｍ１）で 抽出する。有機相をＮａ２ｓＯｔで乾燥した後、それを蒸発により濃縮する。無 色のフオーム１５８ｍｇ（６４％）を得る。

ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃ１ｇ−ＭｅＯＨ−Ｅｊ３Ｎ、　８８：５：２）。

Ｒ，０，３゜”　’　Ｐ−ＮＭＲ（（Ｄａ　）　ＤＭＳＯ）　：　１．３７ｐｐ ｍ（’　Ｊ　（Ｐ−Ｈ）　＝５９４Ｈｚ　；　３Ｊ　（Ｐ−Ｈ−３°戸８D７Ｈ ｚ） 元素分析： 計算値：　Ｃ６４，２２，Ｈ６，２５；　Ｎ　１０．２１実測値：　Ｃ６４，４ ７，Ｈ６，４８；　Ｎ　１０．５１実施例８ ９−　［２’−デオキシ−５’　−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメ チル）−β−Ｄ−キシロペントフラノシル］−６−［［（ジメチルアミノ）−メ チリデン］アミノ］アデニン−３’−［２−（シアノエチル）−Ｎ、Ｎ−ジイソ プロピル−ホスホルアミシト］ エチルジイソプロピルアミン（１１０μｌ　、０．６３ミリモル）を乾燥ＴＨＦ （１，５ｍｌ）中の実施例６からの保護ヌクレオシド（１２２ｍｇ、　０．２ミ リモル）の溶液に添加する。続いてクロロ−β−シアノエチルオキシ−（Ｎ、　 Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスファン（５０μｍ、０．２２ミリモル）をＮ２ 雰囲気下で２分以内に滴下して添加する。その反応混合物を室温で３０分間攪拌 した後、ＮａＨＣｏ　３水溶液（５％、４　ｍｌ）を添加し、ＣＨ２Ｃ１ｇ（５ ｍｌ）で２回抽出する。合わせた有機相をＮａｚＳＯ＋で乾燥し、蒸発により濃 縮し、モして残渣をシリカゲル６０Ｈでクロマトグラフィーにかける（３　ｘ　 ６ｃｍ、０．５バール；移動溶媒：ＣＨ２Ｃ１ｔ−ＥｔＯＡＣ−Ｅｔ３Ｎ、４５ ：４５：１０）　。収量：　１５６ｍｇ（９６％）無色の油。

ＴＬＣ（シリカゲル、Ｃ）１．ｃ１２−ＥｔＯＡｃ−Ｅｔ、Ｎ、　４５：４５： １０）。Ｒ，０，５０および０．５３（２種のジアステレオ異性体）。

”Ｐ−ＮＭＲ（（Ｄａ）ＤＭＳＯ）：１５１．５．１ｌ４６−７ｐｐ　０実施例 ９ ４−ジメチルアミノピリジン７０ｍｇ（０，５４ミリモル）および無水コハク酸 ２３０ｍｇ（２，３ミリモル）を乾燥ピリジン１０ｍ１中の実施例２からのヌク レオシド２５０ｍｇ　（０，４６ミリモル）の溶液に添加し、その混合物を４０ ℃で７０時間攪拌する。その後、水３ｍｌを反応混合物に添加し、それを乾燥残 渣まで蒸発させる。痕跡量のピリジンをトルエンによる同時蒸発により除去する 。残っている油をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、１０％のクエン酸水溶液および水で連 続して振とうすることにより抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、そし て蒸発により濃縮する。残渣をＣＨ，Ｃ１ｍとピリジンの混合物（９５：５）　 ２　ｍｌに吸収させ、その溶液をｎ−ペンタン／エーテルの混合物（１：ｌ）　 ５０ｍ１に徐々に注ぎ、その間攪拌する。沈降する沈殿を濾過し゛、シリカゲル ６０によるフラッシュクロマトグラフィー（カラム＋　１０　ｘ　６ｇｍ、アセ トニトリル−水（９：１））により精製する。所望の化合物（１８０ｍｇ、理論 収率の６１％）を無色の粉末の形態で主画分として得る。

ＴＬＣ（シリカゲル、アセトニトリル−水、９：ｌ）　Ｒ，０，８゜生産物を” Ｃ−ＮＭＲ（（Ｄａ）ＤＭＳＯ中の溶液）中の下記のシグナルにより特性決定す る。（結果（単位ｐｐｍ））：１７３．ｅ、　１７１．２（２Ｃ＝０）　；１６ ３、８（Ｃ−６）　；　１５８．３（ＤＭＴ）　；　１５０．５（Ｃ−２）　； 　１４４．７（ＤＭＴ）　；　１３５．５（Ｃ−４）　F １３５、４−１２６．９（１０のシグナル、ＤＭＴ）；１１３，３（４重線のＣ ，ＤＭＴ）、　１０９．０（Ｃ−５）　；８５．８（ＤＭＴ）　；８３．６（Ｃ −４“）；ｓｏ、　１（Ｃ−１“’）　；７２．３（Ｃ−３”）　；６１．２（ Ｃ−５求j； ５５、１（ＯＣＨ３，ＤＭＴ）　：４０．６（Ｃ−２°）；２９．１．　２９． ０（２ＣＨ２）：１２．３（ＣＨ３−チミン）。

実施例１０ フラクトシル結合された１−［２°−デオキシ−５’　−０−（４，４’−ジメ トキシトリフェニルメチル）−３’−０−スクシニル−β−Ｄ−トレオーベント フラノシル］−チミン ４−ニトロフェノール４０ｍｇ（０，２９ミリモル）およびＮ、Ｎ−ジシクロへ キシルカルボジイミド６０ｍｇ（０，３ミリモル）を、室温で攪拌しながら、ジ オキサン−５％ピリジンの混合物１ｍｌ中の実施例９からのヌクレオシド１００ ｍｇ（０，１６ミリモル）の溶液に添加する。２時間後、沈殿したジシクロヘキ シル尿素を濾過により除去し、そしてフラクトシル（登録商標）２００　（メル ク社、４５０μ当量のＮＨｚ／ｇ）２００ｍｇおよびジメチルホルムアミド１ｍ ｌを濾液に添加する。トリエチルアミン０．２ｍｌの添加後に、その懸濁液を室 温で４時間振とうする。次に無水酢酸６０μｌを添加し、振とうを更に３０分間 続ける。

その後、シリカゲルに結合されたヌクレオシドを濾別し、ジメチルホルムアミド 、エタノールそしてエーテルで洗浄し、減圧で乾燥させる。

シリカゲルに結合されたヌクレオシドの量を以下のよう（こして測定した。フラ クトシル担体５ｍｇをアセトニトリル中の０．１Ｍの４＝トル工ンスルホン酸１ ０ｍ１で処理した。上澄みを４９８ｎｍで分光光度測定し、その間にフラクトシ ルＩｇ当たり５０．４μモルのヌクレオシドが見られた（εＤＭＴ＝７００００ ）。

実施例１０ａ Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６０ｍｇ　、　０．４９ミリモル）および無 水コハク酸（２００ｍｇ、２ミリモル）を、ピリジン（１０ｍｌ）中の実施例６ からの完全に保護されたヌクレオシド（２５０ｍｇ、　０．４１ミリモル）の溶 液に添加し、そしてその溶液を４０℃で７２時間攪拌する。水（３ｍｌ）の添加 後に、それを蒸発、乾燥し、そして残渣をトルエン（５０ｍｌ）で再度蒸発させ る。それをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、１０％のクエン酸水溶液（３０ｍｌ）そして 水（３０ｍｌ）で抽出する。有機相をＮａｚＳＯ＋で乾燥し、蒸発により濃縮す る。無色の物質２７８ｍｇ（９６％）を得、これを更に精製しないで反応させる 。コノ１り酸塩（１４２ｍｇ、０．２０ミリモル）をジオキサン（１，２５ｍｌ ）中のピリジンの５％溶液１こ溶解し、ｐ−ニトロフェノール（５０ｍｇ　、０ ．３６ミリモル）およびジシクロへキシルカルボジイミド（８０ｍｇ　、０．４ ０ミリモル）と室温で混合する。それをこの温度で３時間攪拌し、続いて沈殿し たジシクロヘキシル尿素を濾別する。続いて、ジメチルホルムアミド（１，２５ ｍｌ）およびフラクトシル２００（４５０μ当量のＮＨ２／ｇ）を添加する。ト リエチルアミン（２５０μｌ）の添加後に、その懸濁液を室温で４時間振とうし 、続いて無水酢酸（７５μｍ）を添加する。振とうを３０分間続け、シリカゲル に結合されたヌクレオシドを濾別し、ジメチルホルムアミド、エタノールそして エーテルで洗浄し、減圧で乾燥させる。

実施例１０に記載された方法を使用してシリカゲルに結合されたヌクレオシドを 測定した。シリカゲルに結合されたヌクレオシドの濃度はフラクトシル１ｇ当た り２７μモルである。

実施例ＩＩ オリゴヌクレオチドｄ（ｘＴ＋□）の固相合成実施例３からの３′−ホスホン酸 水素塩を使用してオリゴマーの合成を１μモルのスケールで行った。その合成は 、３゛−Ｈ−ホスホネート方法のためのＤＮＡ合成装置の標準プロトコル（Ａｐ ｐｌｉｅｄ　Ｂｉ−ｏｓｙｓｊｅｍｓ　Ｕｓｅｒｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｆｏｒ　ｔ ｈｅ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ　３８０Ｂ）に従った。

オリゴマーの４，４°−ジメトキシトリチル保護基を、室温で５分間の８０％酢 酸による処理により除去した。それをＲＰ−１８カラムおよび０．１ＭのＥｔ３ ＮＨＯＨＡｃ　ｐＨ７／アセトニトリル（９５：５）　［Ａ］およびアセトニト リル［Ｂ］の勾配系でＨＰＬＣにより精製した。純粋なオリゴマーを４　ｘ　２ ５　ｍｍのＨＰＬＣカートリッジ（ＲＰ−１８シリカゲル）で脱塩し、続いて凍 結乾燥した。

実施例１１ａ オリゴヌクレオチドｄ（ＧＴＡＧｘＡｘＡｘＣＴＡＣ）の固相合成塩基Ａ、Ｇ、 ＣおよびＴのヌクレオシド−３’−０−（２−シアノエチル）−Ｎ、　Ｎ−ジイ ソブロピルアミノーボスホルアミジト並びに実施例４および８からの３′−キシ ロ−ヌクレオシドｘＴおよびｘＡの相当するホスホルアミシトを使用してオリゴ ヌクレオチドの合成を１μモルのスケールで行った。その合成はホスホルアミシ ト方法のためのＤＮＡ合成装置の標準プロトコル（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙ ｓｔｅｍｓ　ＵｓｅｒｓＭａｎｕａｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　５ｙｎｔｈｅ ｓｉｚｅｒ　３８０Ｂ）に従った。ＮＨ，保護基を６０℃で４８時間にわたって ２５％のアンモニア水溶液で開裂した。５′−〇−ジメトキシトリチル保護基の 除去、ＨＰＬＣによる精製および脱塩を実施例１１に記載されたようにして行っ た。

実施例１２ 更に別のオリゴヌクレオチドの固相合成オリゴ７−ｄ（ｘＴｃＧ　ｘＴＣＧ　Ｃ ｘＴＧ　ｘＴＣｘＴ　ＣＣＧ　ＣｘＴｘＴ　ＣｘＴｘＴ　ＣＣｘＴ　ＧＣＣｘＡ ）およびｄ　（ＧＸＴＸＡＧＡＡＴＴＣＸＴＸＡＣ）の固相合成を実施例１１に 記載された方法と同様にして行った。

実施例１２ａ オリゴヌクレオチドの０．２Ａｔａｏ単位をＯ，ＬＭのトリス（Ｔｒｉｓ）−Ｈ ＣＩ緩衝液（ｐＨ８，３）２００μｌに溶解し、そして３７℃で４５分間にわた って子ウシの膵臓ホスホジェステラーゼ（ベーリンガー・マンハイム社、カタロ グＮｏ、　１０８２５１）１２μｇで処理し、続いて３７℃で３０分間にわたっ てアルカリ性ホスファターゼ（ベーリンガー・マンハイム社、カタログＮｏ、　 １０８１５４）で処理した。

その後、その反応混合物をＨＰＬＣ（ＲＰ−１８、溶離剤０．　ＬＭの（Ｂｔ、 ＮＨ）ＯＡｃ　（ｐＨ７）／アセトニトリル（９５：５）　［Ａ］　、続いて［ Ａ］中０〜２０％のアセトニトリル［Ｂ］、流速的１　ｍｌ／分）により分析し た。

オリゴマーがわずかに部分的に加水分解されることがわかる。

その後、ホスホジェステラーゼは５．５分のｔ／２値で修飾されていない５′− 末端ヌクレオチドのみを開裂する（最終生産物の淡色性９％、Ｔ　Ｍ＝３６℃） 。ＨＰＬＣプロフィール（挿入図）が示すように、オリゴヌクレオチドの主要部 分は、変化されていない形態で存在する。

実施例１２ｂ オリゴマーｄ（ＧｘＴｘＡＧＡＡＴＴＣｘＴｘＡＣ）のホスホジェステラーゼ開 裂子ウシの膵臓ホスホジェステラーゼによるこのオリゴヌクレオチドの開裂を、 実施例１２ａに記載した方法と同様の方法で調べた。

この場合、非常に遅く、しかもごくわずかの加水分解のみが観察される（最終生 産物の淡色性３％、Ｔ　Ｍ＝２７℃）。

実施例１３ ｄ（Ａ、□）とｄ（ＸＴＩ　２）のハイブリダイゼーション複合体ａ）融解曲線 それぞれのオリゴヌクレオチド２μモルを、このために使用した。測定を、“Ｋ ｉｐｐ　ｕｎｄ　Ｚｏｎｅｎ　ＢＤ　９０”記録計と連結したシマズ（Ｓｈｉｍ ａｚｕ）２１０−Ａ　ＵＶ分光光度計を使用してサーモスタット制御されたセル 中で行った。２６０ｎｍまたは２８４ｎｍのいずれかにおけるＵＶ吸光度の増加 を、その溶液の温度を２０℃／時間で直線的に上昇させる間（１０〜８０℃）の 時間の関数として記録した（Ｒ２２ユニツトを備えたラウダ（Ｌａｕｄａ）ＲＣ ３６浴と組み合わせたラウダＰＭ−３５０プログラマ−）。それぞれの温度を、 ｐｔ抵抗器を使用して基準セル中で測定した。淡色性の値を、初期の吸光度と最 終の吸光度から計算（７た。このようにして得られた融解曲線を図３に示す。ハ イブリッドｄ（Ａ１２）／ｄ（ＸＴｌ□）（ｂ）に関する融解曲線は、二本鎖の 協同的融解に特徴的である形状（ｄ（Ａ１２）／ｄ（ＴＩ２）に関する曲線（ａ ）と比較のこと）を有し、これは−末鎖ホモポリマー（ｄｃＡ＋ｇＸｃ）および ｄ（Ｔ１り（ｄ）により示されない。

ｂ）ＣＤ分光分析（図３） それぞれの−末鎖ｄ（Ａ、□）および（１（Ｔｌ□）またはｄ（ｘＴ、□）のそ れぞれ２μモルを、ハイブリダイズを形成させた（６０ミリモルのカコジレート 緩衝液ｐＨ７，０、ＩＭのＮａＣ１，１００ミリモルのＭｇＣｌ　２．８℃）。

得られたハイブリッド並びに−末鎖ｄ（Ｔ＋□）、ｄ（ｘＴ、□）およびｄ（Ａ ｒ１）およびモノマーＴおよびＸＴのＣＤスペクトルを、温度制御された（ラウ ダＲＣ３６）　ｌ　ｃｍのキュベツトを用いてジャス：２　（Ｊａｓｃｏ）６０ ０分光偏光計で記録した。得られたスペクトルを図４および図５に示す。

ハイブリッドのＣＤスペクトルは一本鎖の合計および相違とは明らかに異なるこ とが明白である。これは、新しい型の二本鎖ハイブリッド構造が形成されること を示す。

実施例１４ Ｈｆｆ−１感染Ｈ９細胞のウィルス遺伝子発現の測定慢性感染されたＲ９（ＡＴ ＣＣＣＲＬ　８５４３）細胞を、培養培地２００μ！（１５％のウシ胎児血清、 ４ミリモルのし一グルタミン、５００モルの２−メルカプトエタノール、５０単 位のペニシリンおよび５０μｇのストレプトマイシン／ｍｌを含むＲＰＭＩ　１ ６４０）中で実施例１２からのオリゴ７−ｄ（ｘＴＣＧ　ｘＴＣＧ　ＣｘＴＧ　 ＸＴＣＸＴ　ＣＣＧ　ＣｘＴｘＴ　ＣｘＴｘＴ　ＣＣｘＴ　ＧＣＣｘＡ）の種々 の濃度の存在下で培養した。６日の培養後に、培地上澄み１００μｌを取り出し 、９２４　ｇａｇタンパク質の量をラジオイムノアッセイにより測定した。

一方、対照実験（オリゴマーを使用しない）では、ｐ２４　ｇａｇタンパク質の 量が５日以内に２００ｎｇ／＋ｎｌ付近の値まで増加したが、オリゴマーを使用 する場合のタンパク質合成は投与量に応じて５０ｎｇ／ｍｌ　〜約５ｎｇ／ｍｌ であった。

実施例１５ ２．６ジアミノー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（２）［１］グアノシ ン（ｌＸ８０℃／Ｐ２Ｏ５で乾燥）５．６６ｇ（２０ミリモル）を、ヘキサメチ ルジシラザン（ｌ（ＭＤＳ）２００　ｍｌおよびトリメチルクロロシラン（Ｔｅ ３）０．５ｍｌと共に１４０℃に１０時間加熱することによりシリル化する。続 いて過剰のＨＭＤＳを常圧で蒸留により除去し、そして残っている粘稠なシロッ プを無水トルエン３５ｍ１およびＨＭＤＳ　２　ｍｌの混合物と共に１００　ｍ ｌのオートクレーブに移す。ベンゼン中のトリメチルシリルトリフレート（（Ｃ Ｈ３）Ｓｉｌｏ、ＣＦ、）の０．５Ｍの溶液（２ミリモル）４ｍｌの添加後に、 ５　ａｔｍの圧力のＮＨ，を＋５℃で３０分間適用する。次にオートクレーブを １５０℃に４８時間加熱する。アンモニアを注意して排出した後、オートクレー ブの内容物をメタノール１５０ｍ１で洗浄し、そして水１５０　ｍｌの添加後に 、スチーム浴上で４時間加熱する。メタノールを除去した後、それを水で２５０ 　ｍｌまで希釈し、沸騰溶液を少量の活性炭で脱色し、濾過し、その間、それを 熱水１００　ｍｌで再度洗浄する。２５０　ｍｌに濃縮後、黄色の濾液が２４° Ｃで冷却、放置した際に徐々に結晶化する。濾過し、母液を１００　ｍｌまで更 に蒸発させた後、２［ｌ］の無色の結晶４．２３ｇ（７５，５％）を得る。

ＴＬＣ（シリカゲル、移動溶媒ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨ；６０：４０、Ｒ，＝０． ５５）実施例１５ ２．６−ジアミツー９−（２−０−ｐ−）ルエンスルホニルーβ−Ｄ−リボフラ ノシル）プリン（３）　［２］ （２）２．４０ｇおよびジブチル−スズオキサイド２．２ｇをＭｅＯＨ２００ｍ １中で懸濁させ、還流下で２時間沸騰させ、その間に透明な溶液が徐々に生成さ れる。室温に冷却し、トリエチルアミン１８ｍ１を添加した後、ｐｌ−ルエンス ルホン酸クロリド２４ｇを徐々に添加し、続いてそれを更に１５分間攪拌する。

過剰の溶媒を４０℃で除去し、そして残渣を水２００　ｍｌに吸収させる。エー テル（２ｘ　１００ｍ１）で抽出した後、水相を１００　ｍｌまで蒸発させ、そ してＯｏＣで一夜貯蔵する。

このプロセスで沈殿する粗生成物を回収し、カラムクロマトグラフィー（シリカ ゲル、移動溶媒Ｂ）により精製する。母液を蒸発、乾燥し、シリカゲルに吸着さ せ、そしてまたクロマトグラフィーにかける。化合物（３）　［２］　２．８５ ｇ（７７％）を得る。Ｆ、　ｐ、・１３４℃；ＴＬＣ（シリカゲル、移動溶媒ｆ ！ｔＯＡｃ−ＭｅＯＨ，８５：１５）　Ｒ，＝０．４５　；ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ ６］　ＤＭＳＯ）ニア、８２（ｓ、Ｈ−Ｃ（８））：６．８３（ｓ、ＮＨ２）； ５．９Ｌ（ｄ、Ｊ（Ｈ−Ｃ（１’　）、　Ｈ−Ｃ（２’　）＝７．５Ｈｚ　；Ｈ −Ｃ（１’　））　；５．６７（ｓ、　ＮＨ２）　；５．４１　（ｍ、　Ｈａ− Ｃ（Q°））； ４、２９（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３°））　；４．０１　（Ｈ−Ｃ（４’　））　；３ ．５５（ｍ、　ＣＨ２）　；３．１７　（ｄ、　Ｈβ−Ｃ（Q’　））　； ２、２９Ｃ８，−Ｃ）１３）。

実施例１６ ２°−アミノ−（２°−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）アデニ ン（４）　［２］ ＴＨＦ（３４ｍｌ）中のＬ＋ＥｔａＢＨのＩＭの溶液をアルゴン雰囲気下で乾燥 ＤＭ３０３０ｍｌ中の（３）（１，４ｇ、２．７５ミリモル）の溶液に添加する 。得られる無色の溶液を室温で一夜攪拌し、水７ｍｌを３０分の期間にわたって 滴下して添加する。続いて溶媒を除去し、残渣を水５００　ｍｌでダウエックス （Ｄｏｗｅｘ）１ｘ２　（ＯＨ−）カラム（４ｘ　３０ｃｍ）で脱塩する。

その反応生成物をＭｅＯＨ／水混合物（１：ｌ）でカラムから溶離することがで き、蒸発後に適当な画分を得ることができる。水（１００ｍｌ）で再結晶して純 粋な（４）　［３］　７６０ｍｇ（９８％）を得る。Ｆ、　ｐ、　＝１７５℃； ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６］　ＤＭＳＯ）ニア、９５（ｓ、Ｈ−Ｃ（８））；６．７ ８（ｓ、ＮＨ２）；６．０７（ｄ、Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．８１（ｓ、　Ｎ ｔ（２）　：４．６５（ｍ、　０Ｈ−Ｃ（５°））　；４．３０（ｂｒ、　Ｈ− Ｃ（３’乃、３．８４軸、　Ｈ−Ｃ（４°））　；３．７２（ｍ、　Ｃ）１２− Ｃ（５’　））　；２．７３（ｍ、　Ｈａ　−Ｃ（２’　））　；２．２３（ｄ 、@Ｊ（Ｈ ａ−Ｃ（２“）、Ｈβ−Ｃ（２’））＝−１４，５Ｈｚ；　Ｈβ−Ｃ（２’）） 。

実施例１７ （２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）グアニン（５）化合物 （４）を水１００　ｍｌに加熱しながら溶解し、約３０℃に冷却した後、アデノ シンデアミナーゼ（２００μりを添加する。反応混合物を３０℃で一夜攪拌した 後、その反応の進行をＴＬＣおよびＵＶ分光分析により監視する。溶媒を除去し た後、反応生成物をアセトンで数回蒸発させ、最後に（５）６５０ｍｇ（９２％ ）を得る。Ｆ、　ｐ、　＞２５０℃；ＴＬＣ（シリカゲル、移動溶媒１ＰｒＯＨ −２５％ＮＨ３ａｑ−Ｈ２０；３：１：ｌ）　：　Ｒ＋　＝０．６１゜ ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６］　ＤＭＳＯ）ニア、９５（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；６ ．４９（ｓ、　ＮＨ２）　：６．０５（ｄ、　Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．４３ （ｓ、　０Ｈ−Ｃ（３’　）　；４．６７（ｓ、　０）１−Ｃ（５′））；４． ３３（ｄ、　Ｈ−Ｃ（３”）’）@；３．８７ （ｓ、　Ｈ−Ｃ（４’　））　＋３．６５（ｍ、　ＣＨ２−Ｃ（５°））；　２ ．７０（ｍ、Ｈａ−Ｃ（２’））；２．２０（ｍ、Ｈβ−Ｃ（２’　））。

実施例１８ Ｎ２．３’、５’−）−リイソブチリル−（２゛−デオキシ−β−り一　トレオ ーベントフラノシル）グアニン（６） （５）５００ｍｇを無水ピリジンで数回蒸発させることにより乾燥し、穏やかに 加熱しながらピリジン２０ｍ１に溶解する。水浴中で０℃に冷却した後、イソブ チリルクロリド１．９５ｍ１（１８，５ミリモル）を激しく攪拌しながら窒素雰 囲気下で徐々に添加する。濁ったゼラチン状の反応混合物を室温で更に１時間攪 拌し、続いてＮ２０４０ｍ１中の２．５ｇのＮａＨＣＯ３の溶液で加水分解する 。その溶液を約２０ｍ１に濃縮し、それをＯｏＣで一夜放置した後、反応生成物 をアスピレータ−で吸引し、エーテル２０ｍ１で再度洗浄する。シリカゲル（５ ｃｍ　ｘ　３０ｃｍ）、移動溶媒ＣＨＣＩｓ−ＭｅＯＨ；８：２を使用するカラ ムクロマトグラフィー後に、無定形の（６）　［４］　８２０ｍｇを得る。Ｆ、 ｐ、＝９１℃、ＴＬＣ（移動溶媒ＣＨＣＩｓ−ＭｅＯＨ；８：２）　Ｒ７＝０． ４０：ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６］　ＤＭＳＯ）：１２、０５（ｂｒ、　ＮＨ）　； １１．７０（ｂｒ、　ＮＨ）　；ｓ、　１４（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；ｅ、　 １４（ｄ、　Ｈ−Ｃ（１’@））　； ５、３０（ｓ、　０Ｈ−Ｃ（３’　）　；４．６８（ｓ、　０Ｈ−Ｃ（５’　） ）　；４．３６（ｓ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；３．９４（香A　Ｈ− Ｃ（４’　））　；３．７２（ｍ、　ＣＨ２−Ｃ（５’　））　；２．７７（ｍ 、　Ｈａ　−Ｃ（２’　））　；２゜２８（ｄ、　Ｈβ−Ｃ（２’　））　；　 １．１３（ｍ、　７Ｈ−＋　ｂｕ　ｔ、　）　；Ｃ２ｔＨ３ＩＮｓＯｔ　（４７ ７、５１ル計算値：Ｃ５５，３４゜Ｈ６，５４，Ｎ　１４．６７、実測値：Ｃ５ ５，１８，Ｈ６，５７，Ｎ　１４．７３゜実施例ｌ９ Ｎ２−イソブチリル＝（２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル） グアニン（７） （６）１．２ｇ（２，５ミリモル）をＭｅＯＨ４０ｍｌに溶解し、水浴中で０℃ に冷却する。続いてｐＨ値が１２に上昇するまでＩＮのＮａＯＨ水溶液を少しず つ添加する。５０分後に、イオン交換樹脂（ダウエックスＷ　ｘ　８；ピリジニ ウム形態）の添加により反応を停止し、そしてその中性溶液を濾過する。その樹 脂をＭｅＯＨで洗浄した後、溶媒を除去し、残渣を少量の水で再結晶する。それ を冷蔵庫中で一夜放置することにより結晶化を完結した後、化合物（７）の白色 の針状結晶５６０ＩＩｇ（７２％）を得る。Ｆ、　ｐ、　＞２６０°Ｃ，ＴＬＣ （シリカゲル、移動溶媒ＣＨＣＩ。

−ＭｅＯＨ，９：１）Ｒ，＝０．４２：ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６］　ＤＭＳＯ）： １２．０５（ｂｒ、ＮＨ）；１１．７０（ｂｒ、　ＮＨ）　；８．２０（ｓ、　 Ｈ−Ｃ（８））　；６．１４（ｄ、　Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．３０（ｓ、　 ０Ｈ−Ｃ（３°））G ４、６８（ｓ、　０Ｈ−Ｃ（５’　））　；４．３６（ｓ、　Ｈ−Ｃ（３’　） ）　；３．９４（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　））　；３．７２（香B ＣＨ２−Ｃ（５’　））　；２．７７（ｍ、　Ｈａ　−Ｃ（２’　））　；２． ２８（ｄ、　Ｈａ−Ｃ（２’　））　；１．１３（ｍ、　７g− ｉｂｕｔ、）； Ｃ１Ｈ１ｏＮｓＯｓ（３３７，３）：計算値：Ｃ４９，８５，Ｈ５，６８，Ｎ　 ２０．６７、実測値：Ｃ４９，９８，Ｈ５，８１，Ｎ　２０．７５゜実施例２０ （７）３００ｍｇ（０，８９ミリモル）を無水ピリジンで数回蒸発させることに より乾燥し、続いて無水ピリジン５ｍｌに溶解する。ジメチルアミノピリジン（ １６ｍｇ　、０．１３ミリモル）の添加後に、４’　、　４’−ジメトキシトリ チルクロリド１５０ｍｇ（０，４ミリモル）をアルゴン雰囲気下で添加する。室 温で４時間攪拌し、続いて５％のＮａＨＣＯ、溶液４５ｍ１を添加した後、それ をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ　５０　ｍｌ）で抽出する。合わせた有機相をＮａ２５Ｏ ｔで乾燥し、濾過し、溶媒を除去する。シリカゲルによるクロマトグラフィー（ ２０Ｘ　５ｃｍ　、移動溶媒ＣＨＣｌ　３−ＭｅＯＨ；　８：２）そして主領域 の蒸発後に、無定形の（８）４２３ｍｇ（７４％）を得る。

ＴＬＣ（シリカゲル、移動溶媒ＣＨＣＩ　３−ＭｅＯＨ，８：　２）　Ｒｌ：０ ．３８ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６］　ＤＭＳＯ）：１２．０９（ｂｒ、ＮＨ）；１１ ．７７（ｂｒ、ＮＨ）；８．０７（ｓ、Ｈ−Ｃ（８））　＋６．２２（ｄ、　Ｈ −Ｃ（１°））　；５．３０（ｓ、　０ｆ（−Ｃ（３’　））　；４．３４（ｓ 、　０Ｈ−Ｃ（３’　）　G４．２１ （ｓ、　Ｈ−Ｃ（４’　）　＋３．７１（ｓ、　３Ｈ−ＯＣＨ３）　；３．２０ （ｍ、　Ｆｌ−Ｃ（５’　））　；２．７４（ｍ、　Ｈａ　|Ｃ （２’　））　；２．３０（ｄ、　Ｈａ−Ｃ（２°））　；１．１２（ｍ、　７ Ｈ−ｉ−ｂｕｔ、　）。

実施例２１ Ｎ２−インブチリル−５′−ジメトキシトリチル−（２゛−デオキシ−β−Ｄ− トレオーベントフラノシル）グアニン３′−ホスホネート（９ａ）その化合物を 、化合物１６に関して記載されたようにして調製し、処理した。

実施例２２ Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−（２゛−デオキシ−β−Ｄ− トレオーベントフラノシル）グアニン３’　［（２−シアノエチル）−Ｎ、　Ｎ −ジイソプロピルホスホルアミシト［９ｂ］化合物９ｂを、［６］に記載された ようにして調製し、処理した。

実施例２３ ９−（２°−デオキシ−β−Ｄ−）レオ−ペントフラノシル）グアニン３’−［ ３−（Ｎ−’フラノシル゛カルバモイル）プロパノエート］　［９ｃ］化合物９ ｃを、［６］に記載されたようにして調製し、処理した。

実施例２４ ４−ベンゾイルアミノ−１−（２’−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノ シル）−２（ＬＨ）−ピリミジノン（１ｏ）化合物ＩＯを、Ｔｉらにより記載さ れたようにして調製した。

実施例２５ ０２、３’−アンヒドロ−１−［２’−デオキシ−５’−０−（４−メトキシベ ンゾイル）−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）−４−ベンゾイルシトシン（ １１）［３］ 乾燥ＤＭＦ（１１ｍｌ）中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ 、３ｍｌ、１５ミリモル）およびｐ−メトキシ安息香酸（２，３ｇ。

１５ミリモル）の溶液を乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の（１０）（３，３ｇ　、　 １０ミリモル）およびＰＰｈ、（４ｇ　、１５ミリモル）の溶液に５分以内に滴 下して添加する。その反応混合物を室温で１５分間攪拌し、続いて同量のトリフ ェニルホスフィンおよびＤＩＡＤと混合する。それを室温で更に３０分間攪拌す る。続いてその溶液を氷で冷却したＥｔ２０（２５０ｍｌ）に注ぎ、得られる懸 濁液を２時間冷却する。白色の残渣を濾別し、Ｅｔ＋０て洗浄する。化合物（１ １）をエタノールによる再結晶により無色の板状結晶（３，４２ｇ、７６％）と して得る。融点１８８℃、Ｒ，（ＣＨ２Ｃｆ２／ＣＨ３０Ｈ）　：０．３８．　 ＵＶ（（ＭｅＯＨ）　：　λｍａｘ（８戸３１８．２５４　（３０４４０゜１７ １５０）、ＩＨ−ＮＭＲ［（Ｄ６）−ＤＭＳＯ］　：］２．５９−２．７１ｍ、 Ｊｇｅｍ＝１２．５Ｈｚ、２Ｈ，Ｈ−２“β、　Ｈ−２’　ａ　）＋４．４１（ ｍ、　２Ｈ，Ｈ−５’　）　；４．５８（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−４’　）；５．４７ （ｍ、　ＩＨ，Ｈ| ３’　）　；６．００（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−１°）　：６．５２（ｄ、　Ｊ５．６ ＝７．２５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−５）　；７．０１．７．８４K （ＡＢ、　ｑ、　４Ｈ，Ｃ６Ｈ４）　ニア、　６８（ｄ、　ＩＨ，Ｈ−６）　； ７．４５．７．９５（ｍ、　５Ｈ，芳香族Ｈ）。

Ｃ２＜ＨｚＩＮ３０＋（４４７，４）：計算値：Ｃ６４，４４，Ｈ４，７３，Ｎ 　９．３９．実測値：Ｃ６４，４９，Ｈ４，７１，Ｎ　９．３１゜実施例２６ エタノール／水（１：１．２５０　ｍｌ）に溶解した（１１）（２，０ｇ　、　 ４．５　ミリモル）の溶液をダウエックスイオン交換樹脂（ＯＨ−形態；２５０ ｍ１、水に懸濁）と混合する。それを５０℃で１６時間攪拌する。そのイオン交 換樹脂を濾別し、水で徹底的に洗浄する。濾液およびスラリーを蒸発により濃縮 し、油状残渣を少量のメタノール／酢酸エチル（１：１．５０ｍ１）に吸収させ 、そしてオイルポンプ減圧で濃縮する。

化合物（１２）を無色のフオーム（９６５ｍｇ、９５％）として得る。化合物（ １２）のＵＶデータは（１１）のデータと同一であった。ＬＨ−ＮＭＲ［（Ｄ６ １ＤＭＳＯ］　：１．８２（ｍ、Ｊ　２’β、２°ａ　＝１４．５Ｈｚ、　Ｈ− ２’β）　；２．５７（ｍ、　ＬＨ，Ｈ−２’　α）；３、６８（ｍ、　２Ｈ， Ｈ−５’　）；３．　ｓｔ　（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−４’　）　；４．２３（ｍ、　 ＩＨ，Ｈ−３°）　：４．７３（ｂ秩@ｓ。

ＬＨ，５°−０Ｈ）　：５．１９（ｂｒ　ｓ、　ＩＨ，３’　−０Ｈ）　：５． ７３（ｄ、　Ｊ５．６＝７．２５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−５）　G ６、０２（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−１’　）　ニア、　１１　（ｂｒ　ｓ、　２Ｈ，Ｎ Ｈ２）　；７．８４（ｄ、　ＩＨ，Ｈ−６）。

実施例２７ 前もって乾燥ピリミジンによる蒸発により３回乾燥したヌクレオシド１２（４５ ４ｍｇ、２ミリモル）を無水ピリジン（１０ｍｌ）中で懸濁させ、そしてアルゴ ン雰囲気下で（ＣＨ＝）ａｓｉｃｌ（１，２８ｍｌ　１０ミリモル）と混合する 。その溶液を１５分間攪拌し、その後、塩化ベンゾイル（０，８７ｍｌ、１０ミ リモル）を添加し、その溶液を室温で２時間攪拌する。続いてその混合物を水浴 中で冷却し、水（２ｍｌ）を添加する。２５％のアンモニア溶液（２ｍｌ）の添 加後、それを室温で更に１５分間攪拌する。その溶液を殆ど蒸発させて乾燥し、 残渣を水（２８ｍｌ）に溶解し、酢酸エチル（１０ｍｌ）で洗浄する。水相を蒸 発により濃縮した後、生成物（１３）は冷却すると結晶化し始める。白色の針状 結晶をメタノールによる再結晶により得る。（４５０ｍｇ、６８％）。

融点：１７７℃（ＭｅＯＨ）。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃ１，／ＣＨ１ＯＨ９：１）：Ｒ ，０，３６，ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ（ε）＝３０２．２５８　（１０５０ ０，２２２３０）。

Ｃ１６８１７Ｎ３０Ｓ（３３１，７０）　：計算値：Ｃ５８，０１，Ｈ５，１７ ，Ｎ　１２．６８；　実測値：　Ｃ５８，１４，Ｈ５，２９，Ｎ　１２．７１０ ＬＨ−ＮＭＲ［（ｄ６）−ＤＭＳＯ］　：２．０１（ｄ、ＪＨ−２’β、　Ｈ− ２’　ａ　＝１４．５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−２°β）　；２．５７（ｍ、　ＬＨ， Ｈ−２’　ａ　）　；３．７８（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−５’　、　Ｈ−５″）　；３ ．９８（ｍ、　ＩＨ，g− ４°）　；４．３５（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−３’　）　；４．７６（ｔ、　Ｊ５’　 −ＤＨ，Ｈ−５’　、　Ｈ−５”＝５．５Ｈｚ、　１８．５求|０Ｈ）　； ５．０９（ｄ、　Ｊ３’　−ＯＨ，Ｈ−３’　＝２．７５．１Ｈ，３’　−０Ｈ ）　；６．００（ｄｄ、　Ｊ＝７．２５Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−P”）　； ７、３１−８．０２（ｍ、　５Ｈ，芳香族Ｈ）　；７．６３（ｄ、　ＪＨ−５， Ｈ−６＝７．５Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−６）　；８．２８（ｄ、　ＪＨ−６，８−５ ＝７．５Ｈｚ、　１８．　Ｈ−６）　；１１．１９（ｂｒｓ、　ｌ［（、ＮＨ） 。

実施例２８ １−　［５’　−０，４−Ｎ−ビス（４，４′−ジメトキシトリチル）−２−デ オキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル］　シトシン（１４ａ）乾燥ピリジ ンによる蒸発により得ることができる乾燥した（１２）（５２０ｍｇ、２．２ミ リモル）を無水ピリジン（１０ｍｌ）に溶解する。

４．４°−ジメトキシトリチルクロリド（１，５ｇ、４ミリモル）および４−ジ メチルアミノピリジン（１５０ｍｇ、１．２６ミリモル）をこの溶液に添加する 。５時間後、ＴＬＣは出発物質が殆どないことを示す。その反応混合物を、冷却 した飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍｌ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍｌ） で３回抽出する。回収した有機相を蒸発により濃縮し、そして残渣をカラムクロ マトグラフィー（カラム６　ｘ　３０ｃｍ、０．１バール、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｍｅ ＯＨ／ＥｔＪ最初に９３：５：２、次に８８：１０：２）により精製する。

非極性物質（１４ａ）の適当な画分を回収し、溶媒を蒸発により除去し、残渣を 少量のジクロロメタンに溶解し、そして攪拌しながら石油エーテルに滴下して添 加し、その結果、（１４ａ）が白色の固体（６８０ｍｇ、４０％）として沈殿す る。

ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃ１２／ＣＨ３０１（９：１）：Ｒ１０，４６，ＵＶ（ＭｅＯＨ ）：　λｍａｘ（８戸２８０゜２３０　（１８１００，４３０００）。

ＩＨ−ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３］　：２．１７（ｄ、ＪＨ−２’β、　Ｈ−２’　ａ 　＝１４．３Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−２’β）；２、５２（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−２’　 ａ　）　：３．４６（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−５’　、　Ｈ−５”）　；３．７４（ｓ 、　１２Ｈ，０ＣＨ３）@； ３、９６（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−４°）　；４．３５（ｍ、　ＬＨ，Ｉ（−３’　” ）　；４．９９（ｄ、　ＪＨ−５，Ｈ−６＝７．７５Ｈｚ、@ＩＨ。

Ｈ−５°”）　；６．　ｏｔ　（ｄｄ、　Ｊ＝６．２５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−１’ 　）　；ｅ、　７５−７．３８（ｍ、　２６８．芳香族Ｈ）G ７、５１（ｄ、　ＪＨ−５，Ｈ−６＝７．７５Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−６）Ｃｓ＋Ｈ ４゜ＮｓＯｇ（８３１，９６）：計算値：Ｃ７３，６３，Ｈ５，９４，Ｎ　５． ０５；実測値：Ｃ７３，６２，Ｈ６゜０８．　Ｎ　５．０６　。

実施例２９ 極性物質（１４ｂ）の両分を、また回収し、溶媒を蒸発により除去し、残渣を少 量のジクロロメタンに吸収させ、そして攪拌しながら石油エーテルに滴下して添 加し、その結果、（１４ｂ）が白色の固体（５８０ｍｇ、５５％）として沈殿す る。

ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃ１２／ＣＨ，ＯＨ９：１）：Ｒ，０，３６，ＵＶ（ＭｅＯＨ） ：　λｍａｘ（ｅ　）＝２３４゜２７４　（２２２００，８９７０）。

ＩＨ−ＮＭＲ［（ｄ６）−ＤＭＳＯコ　：１．８０（ｄ、ＪＨ−２’　β、　Ｈ −２’　ａ　＝１４．５Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−２′β）　；２．５０”　）（ｍ、 　ＬＨ，Ｈ−２’　ａ　）　；３．１８（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−５’　、　Ｈ−５” ）　；３．７４（ｓ、　UＨ。

０ＣＨ３）　；４．０６（ｍ、　ＩＨ，Ｈ−４’　”）　；４．１５（ｍ、　Ｉ Ｈ，Ｈ−３°）　；５．１２（ｄ、　Ｊ３’　−ＯＨ，Ｈ−R°＝ ３、７０Ｈｚ、　ＬＨ，３’　−０Ｈ）　：５．６４（ｄ、　ＪＨ−５，Ｈ−６ ＝７．４３Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−１’　）　；６．０４（ｄｄB Ｊ＝６．５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−１’　）　；６．８７−７、４４（ｍ、　１５Ｈ ，芳香族Ｈ）；　７．６６（ｄ、ＪＨ−５，Ｈ−６＝７．４３Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ −６） ＣｚｏＨｚ１Ｎ＋０８（５２９，５９）：計算値：Ｃ６８，０４，Ｈ５，９０， Ｎ　７．９３．実測値：Ｃ６８，０３，Ｈ５，９３，Ｎ　７．８９゜実施例３０ 方法Ａ　［８］　：化合物１３（２７０ｍｇ、０．８ミリモル）を乾燥ピリジン による蒸発により乾燥する。残渣を無水ピリジン（１０ｍｌ）に溶解する。ＤＭ Ｔ−ＣＩ（０，６ｇ　、　１．８　ミリモル）および４−ジメチルアミノピリジ ン（２００ｍｇ、　１．８　ミリモル）をアルゴン雰囲気下で添加し、その溶液 を室温で４時間攪拌する。その溶液を５％のＮａＨＣＯ３溶液（２７ｍｌ）中で 振とうし、ジクロロメタン（５０ｍｌ）で２回抽出し、回収した有機相をＮａ５ Ｏｔで乾燥し、溶媒を蒸発により除去する。

トルエンで繰り返し蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（カラ ム６　ｘ　２０ｃｍ、　０．１バール、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ９３ ：５：２）により精製する。生成物（１５）を石油エーテルで白色の粉末（３３ ０ｍｇ、６４％）として沈殿させる。

方法Ｂ：処理（カラムクロマトグラフィーを使用しない）後、（１４ａ）および （１４ｂ）の反応混合物を無水ピリジン（１０ｍｌ）に溶解する。（ＣＨｘ）ｓ ｓｆｃｌ（１，２８ｍｌ、　ｔｏミリモル）をアルゴン雰囲気下でその溶液に添 加する。１５分後に塩化ベンゾイル（１，１６ｍｌ、　１０ミリモル）を添加し 、その反応混合物を室温で３時間攪拌する。０℃に冷却した後、水（２ｍｌ）を 添加し、更に５分後に２５％のアンモニア溶液（４ｍｌ）を添加する。室温で３ ０分間攪拌した後、その溶液を蒸発により濃縮し、ゴム状の残渣をジクロロメタ ン（２０ａｌｌ）および５％のＮａＨＣＯｚ溶液（４０ｍｌ）で抽出する。水相 をジクロロメタンで２回抽出し、有機相を合わせ、溶媒を蒸発により除去する。

単離を上記と同じ方法で行う（５３０ｍｇ、３６．５％）。

ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃ１２／ＣＨＯＨ９：１）：　ＲＬＯ，５４，ＵＶ（ＭｅＯＨ） ：　λｍａｘ（８戸３０１゜２５６、２３６　（１４５４０，２８８８０，３７ ０４０）。

ＬＨ−ＮＭＲ［（ｄ６）−ＤＭＳＯ］　：２．０Ｏ（ｄ、　ＪＨ−２°β、　Ｈ −２’　ａ　４４．５Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−２°β’）　、２．５０”　）　（ｍ 、　ＩＨ，Ｈ−２’　ｔｘ　）　；３．３９（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−５’　、　Ｈ− ５”）；３．７５（ｓA　６Ｈ。

０ＣＨ３）　；４．２３（ｍ、　２Ｈ，Ｈ−４°、　Ｈ−３’　）　；５．０７ （ｄ、　Ｊ３°−ＯＨ，Ｈ−３’　＝２．５０Ｈｚ、　ＩＨC３’ −０Ｈ）　：６．０５（ｄｄ、　Ｊ＝７Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−１’　）　；６．８ ９−７．６２（ｍ、　１８Ｈ，芳香族Ｈ）；　７．５３（ｄ、　ＪＨ−５，Ｈ− ６＝７．４３Ｈｚ、　ＬＨ，Ｈ−１’　）　；８．００（ｄ、　ＪＨ−５，Ｈ− ６＝７．４３Ｈｚ、　Ｉｆｆ、　Ｈ|６）　； １１．２０（ｂｒｓ、ＩＨ，ＮＨ） Ｃ３７Ｈ３５Ｎ３０７（６３３，７０）　：計算値：Ｃ７０，１３，Ｈ５，５７ ，Ｎ　６．６３；実測値：Ｃ７０，１５，Ｈ５，６４，Ｎ　６．４６　。

実施例３１ ■−［４−ベンゾイル−２′−デオキシ−５’−０−（４，４°−ジメトキシト リチル）−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル］シトシン−（３′−ホスホン酸 水素塩）（１６） ＰＣｌ、（５００μｌ　、５．７５ミリモル）および１．２．４−トリアゾール （１，３５ｇ　、　１９．４ミリモル）をアルゴン雰囲気下で無水ジクロロメタ ン２３ｍ１中のＮ−メチルモルホリン（６，５ｍｌ　５７．５ミリモル）の溶液 に添加する。その溶液を３０分間攪拌し、その後それを０℃に冷却し、（１５） （４００ｍｇ、０．６３ミリモル）と混合する（（１５）は前もって無水アセト ニトリルによる蒸発により乾燥され、無水ジクロロメタン７ｎｌに溶解され、そ して室温で徐々に滴下して添加された）。室温で２０分間攪拌した後、その溶液 をＴＢＫ緩衝液（ｐＨ７，５〜８．０）３２ｏ１に注ぎ、相を分離する。水相を ジクロロメタン（１５ｍ＋１）で４回抽出し、溜めた有機相をＮａ２ｓ’４で乾 燥し、濾過し、溶媒を蒸発により除去する。淡黄色のフオームをクロマトグラフ ィー（シリカゲルカラム６　ｘ　２０ｃｍ％０．５バール、１リツトルのＣＨ２ Ｃ１２／ＣＨＮ　９８：２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ、Ｎ８８：１０：２ ）にかける。主領域の残渣をＣｌＩＣＩ２に溶解し、０．１ＭのＴＢＫ緩衝液（ １０ｍｌ）でＩＯ回振とうすることにより抽出し、水相を再度ＣＨ２Ｃｌ２で数 回振とうし、回収した有機相をＮａｚＳＯで乾燥し、溶媒を蒸発により除去する 。ホスホン酸水素塩は無色のフオームとして存在する（２６０ｍｇ、５１％）。

ＴＬＣ（ＣＨｔＣ１ｔ／ＭｅＯＨ／ＥｔｓＮ８８：１０：２）：　Ｒ４０，３５ ゜ＩＨ−ＮＭＲ［ＣＤＣ１５］：１．１８（ｔ、Ｊ４．２５Ｈｚ、９８．３ｘＣ Ｈ３ＣＨ２ＮＨ）；２．４７（ｄ、　ＪＨ−２’　ａ　、　Ｈ−２’β＝−１５ Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−２’β）；２．６２（ｍ、ＩＨ，Ｈ−２°　ａ　）　；２． ９０（ｑ。

Ｊ＝７．２５Ｈｚ、６Ｈ，３ｘＣＨ３ＣＨ２ＮＨ）；３．５５（ｍ、２Ｈ，５’ −Ｃ）１２）；３．７７（ｓ、６Ｈ，０ＣＨ３）４、２７（ｍ、　ＬＨ，Ｈ−４ ’　）　；４．７８（ｍ、　１Ｂ、　Ｈ−３°）；５．３１．７．８１（ｄ、、 Ｊ）Ｉ−Ｐ＝６２５Ｈｚ、Ｉg。

Ｈ−Ｐ）　：６．１６（“ｄｄ”、　Ｊ＝６．７５Ｈｚ、　ＩＨ，Ｈ−１’　） 　；６．８０−７．９０（ｍ、　１８Ｈ，芳香族Ｈ）；７、２１　（ｄ、　ＪＨ −５，Ｈ−６＝７．２５Ｈｚ、　ＩＩ（、Ｈ−５）　；ａ、　０８（Ｊｌ（−６ ，８−５＝７．２５Ｈｚ、　１８．@Ｈ−６）。

３ＩＰ−ＮＭＲ［ｄ６−ＤＭＳＯ］　：　０．８０１Ｊ（Ｐ、Ｈ＝５９０）１ｚ ；　３Ｊ（Ｐ、Ｈ−Ｃ４’＝８．４　Ｈｚ）。

３１Ｐ−ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３　］　：３．３０１Ｊ（Ｐ、Ｈ：６２５Ｈｚ；　３ Ｊ（Ｐ、Ｈ−Ｃ４’＝８；９Ｈｚ）。

実施例３２ 実施例３３ 化合物１６ｃを、［６］に記載したようにして調製し、処理した。

実施例１５〜３３に関する参考文献 ［１コ　Ｈ，Ｖｏｒｂｒｉｇｇｅｎ、　Ｋ、　Ｋｒｏｌｉｋｉｅｗｉｃｚ、　Ｌ ｉｅｂｉｇｓ　Ａｎｎ、　Ｃｈｅｍ、　１９７６゜７４５゜ 〕＋　［２コ　Ｍ、　Ｊ、　Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｓ、　Ｇ、　Ｗｏｏｄ、　Ｎ、　 Ｋ、　Ｄａｌｌｅｙ、　Ｐ、　Ｈｅｒｄｅｗｉ　ｊｎ、　ＪA　Ｂａ１ｚａｒ− ｉｎｉ、Ｅ、ｄｅＣｌｅｒｃｑ、Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、ｌ９８９．３２．１７ ６３゜［３］　Ｓ、　Ｃｚｅｒｎｅｃｋｉ、　Ｊ、　Ｍ、　Ｖａｌｅｒｙ、　５ ｙｎｔｈｅｓｉｓ　１９９１．２３９［４］　Ｇ、　Ｓ、　Ｔｉ、　Ｂ、　Ｌ、 　Ｇａｆ　ｆｎｅｙ、　Ｒ，Ａ、　Ｊｏｎｅｓ、　Ｊ、　Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｗ 、　Ｓｏｃ、　１X８２゜ １０４、　１３１５゜ ［５］　Ｂ、Ｃ，Ｆｒｏｅｈｌｅｒ、Ｐ、Ｇ、Ｎｇ、Ｍ、Ｄ、Ｍａｔｅｕｃｃｉ 　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ。

１；　１９８６．１４．５３９９゜ ［６］　Ｈ，Ｒｏｓｅｍｅｙｅｒ、　Ｆ、　５ｅｅｌａ、　Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｊ ｍ、　Ａｃｔａ　１９９１．７４．７４８゜（来貢以下余白） ）。

）。

実施例３４ 本発明のオリゴヌクレオチドにょる旧■ウィルス発現の抑制５’−ｘＴｘＴＴ　 ＣＣＣＡＧＧ　ＣＴＣＡＧＡ　ＴＣＴ　ＧＧＴ　ＣｘＴｘＴ　Ｔ　”　−３’　 （ｔａｒ領域）５’−ｘＴｘＴＴ　ＣＧＴ　ＣＧＣＴＧＴ　ＣＴＣＣＧＣＴＴＣ ＴＴＣＣＴＧ　ＣＣＡ　ＸＴＸＴＴ　”　−３’（ｒｅｖ領域） ５’　−ｘＴｘＴＣＴＧＣＴＡＧ　ＡＧＡ　ＴＴＴ　ＴＣＣＡＣＡ　ＣＸＴＸＴ 　Ｔ　’　−３’（プライマー結合部位） ＄ＣＰＧキャリヤー物質の商業上の利用可能性のために、それを修飾されていな い２′−デオキシ−リボチミジンで開始した。

ウィル７、ＨＩＶ　ＩＩＩ　Ｂ　Ｈ９ オリゴマーの原液：　ＰＢＳ緩衝液中１ｍｇｘ　ｍｌ−’オリゴマーノ希釈系列 ：　０．０５−５０　ｕｇ　ｘ　ｍｌ　−’試験系Ｉ　：　ＭＴ−２（Ｔ−リン パ芽球様細胞）試験系Ｉｆ　：　ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）試験方法： それぞれ２　ｘ　１０″または２　Ｘ　１０’の感染したＭＴ−２細胞またはＰ ＢＭＣ細胞を、それぞれの場合にそれぞれのオリゴヌクレオチド溶液１００μｌ に添加した。

３７℃で７日間インキュベートした後、それを融合細胞形成につき監視し、そし て細胞質体の作用の低下をＭＴＴによる着色試験またはｐ２４　ＥＬＩＳＡによ り測定した。結果を表Ｉに示す。

表■ オリゴヌクレオチド　濃度　ＣＰＥ減少ｒｅｖ　Ｏ，０５４０，７ ｐｂｓ　Ｏ，０５４２，２ 本発明のあらゆるオリゴヌクレオチド（例えば、実施例１１および２２に類似の オリゴヌクレオチド）は、実施例に記載されたモノマーを使用して合成し得る。

実施例３５ １−（２−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）チミン環状３’　、 　５’−モノホスフェート、トリエチルアンモニウム（２）デオキシキシロヌク レオシド−５°−モノ、ジおよびトリホスフェートの生産に関する一般的な情報 ５°−モノ、ジまたはトリホスフェートを生産するために、３′−ＯＨ基を最初 にベンゾイル化し、次にそれをトリアルキルホスフェート、好ましくはトリメチ ルホスフェートまたはトリエチルホスフェート中でＰＯＣ１３でホスホリル化し て５−ボスフェートを生成する。続いて３°保護基をアンモ巳アの如き塩基で除 去し、その間に成る種のヌクレオチド中の複素環塩基中に導入された相当する保 護基がまた必要により開裂される。また、相当する保護基ストラテジーがチオホ スフェートの生産に適用し得る。

トリメチルホスフェート（１ｍｌ）中の（１−（２−デオキシ−β−０−トリオ ーベントフラノシル）チミン（１０５９ｍｇ、　０．２４ミリモル）の溶液をＰ ＯＣｌ、（４０μｍ、０．４２ミリモル）と共に４℃で５時間インキュベートす る。

重炭酸トリエチルアンモニウム（１モル、ｐＨ７，６、ｌｏｍｌ）を添加し、室 温で１時間攪拌した後にその反応混合を蒸発により濃縮する。

残渣をＤＥＡＥセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　（ＨＣＯｘ−形態、カラ ム３０Ｘ　２　ｃｍ）でクロマトグラフィーにかける。クロマトグラフィーを水 ４００　ｍｌ、続いて重炭酸トリエチルアンモニウム（０−０，３モル／ｌ。

１２００ｍ１）の線形勾配で行う。シクロホスフェートが０．２モル／ｌで溶離 する。その生成物を含む画分を蒸発により濃縮し、水５０ｍ１に３回吸収させ、 再度蒸発により濃縮する。

生成物を再度同条件下でＤＥＡＥでクロマトグラフィーにかける。

気化性の塩を水、エタノールおよびアセトンによる繰り返しの同時蒸発により除 去する。

１３９４　Ａｓ５７単位（６５％）の無色の固体。ＴＬＣ（２−プロパツール７ ２５％のアンモニア水／水、７：ｌ：ｌ）：Ｒ＋　０．４５；（ＢｔＯＡｃ／ア セトン／ＥｔＯＨ／水、１５：３：４：３）：　Ｒ，０，０９，ＨＰＬＣ（０， １Ｍの酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ７，０中５％のＭｅＣＮ；０．６ｍｌ ／分）：ｔＲ１４，９分。

電気泳動：　Ｅ、、０．６４．　ＵＶ（ＭｅＯＨ）：　λｍａｘ２６７ｎｍ、　 ”Ｐ−ＮＭＲ（０２０１０，１Ｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液、１：１）　−５，０ ３（ｄ、Ｊ＝１７．３）、　’Ｈ−ＮＭＲ（（Ｄ、）ＤＭＳＯ）：１１、２８（ Ｓ、　ＮＨ）　；　１０．７９（ｂｒ、　ＮＨ）　；７．８７（ｓ、　Ｈ−Ｃ（ ６））　；６．１２（ｄ、　Ｊ４．９．　Ｈ−b （１’　））　；４．６９（ｂｒ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．４０−４．１ ４（ｍ、　ＣＨ２（５°））　；３．６４（ｂｒ、　Ｈ−Ｃ（４’　））　；３ ．０４（Ｑ、　ＣＨ２（Ｅｔ））　；２．６６（ｍ、　Ｈａ　−Ｃ（２’　）） 　；　１．９６（ｄ、　、ｌニー１６．Q．　Ｈβ −〇（２°））　；１．７６（ｓ、　Ｍｅ−Ｃ（５））　；１．２０（ｔ、　Ｍ ｅ−（Ｅｔ））。

実施例３６ ９−（２−デオキシ−β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）アデニン化合物３　 （９−（２−デオキシ−β−り一トレオーベントフラノシル）アデニン（２５ｍ ｇ　、　０．１　ミリモル）とＰＯＣ１３の反応を、実施例３５で化合物２に関 して記載されたようにして、但し、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチル−アミ ノ−１，３−、ジメチル−ベルヒドロジアザホスホリン（ＢＥＭＰ）（４１ｍｇ 　、０．１５ミリモル）の存在下でトリメチルホスフェート中で行う。その反応 を１２時間後に完結する。処理を実施例３５に記載されたようにして行う。セフ ァデックスによるクロマトグラフィー後の最終の精製を、溶媒系としてＥｔＯＡ ｃ／アセトン／ｐｔＯＨ／水、　１５：３：４：３を使用する薄層クロマトグラ フィーにより行う（Ｒｆｏ、１３）。

方法Ｂ： 反応を、ＢＥＭＰを添加しないで、方法Ａに記載されたようにして化合物３　（ ２０ｍｇ　、０．０８ミリモル）で行う。ＤＥＡＥセファデックスによるクロマ トグラフィー後に、アデニン（５ｍｇ、４６％）を最初に水で溶離し、次に化合 物４ａ）を緩衝液で溶離する。無色の物質を得る（５６７Ａ２＊。単位、３９％ ）。

方法Ｃ： ＰＯＣｌ３（２０μｍ　、　０．２１ミリモル）をＭｅＣＮ（０，５ｍ１）中の イミダゾール（８６ｍｇ　ＳＬ、２６ミリモル）の溶液に添加する。それを室温 で３０分間攪拌し、０℃に冷却し、そしてＭｅＣＮ／ジメチルホルムアミド（１ ：１．１　ｍｌ）中の９ｂＸ３５ｍｇ、　０．１　ミリモル）の溶液を添加する 。

その反応混合物を４℃で２時間インキュベートし、続いて室温で１４時間インキ ュベートする。１モル／Ｉの重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（１２ｍｌ） で中和した後、その溶液を１時間攪拌し、蒸発により濃縮する。残渣を２５％の アンモニア水溶液（２０ｍｌ）で１６時間処理し、蒸発により濃縮する。化合物 ４ａ）の精製を、上記のようにＤＥＡＥセファデックスで行う。保護されていな いヌクレオシド３を、水による溶離後に得（２４％）、そして０．２モル／ｌの 重炭酸トリエチルアンモニウムの溶液を使用して化合物４ａ）を無色の化合物と して得る（８４３Ａ２　ａ　ｏ単位、５７％）。

実施例３７ １−　［３−０−ベンゾイル−２−デオキシ−５−０−（４，４°−ジメトキシ トリフェニルメチル）−β−Ｄ−）レオーペントフラノシル］チミン（６ａ）ベ ンゾイルシアニド（７５ｍｇ　、　０．５７ミリモル）およびトリエチルアミン （８０μｌ　、０．５７ミリモル）をＭｅＣＮ（４ｍｌ）中の化合物５ａ）　（ ２６５ｍｇ、０．４９　ミリモル）の溶液に添加する。それを室温で１時間攪拌 し、蒸発により濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２／アセトン、６：１中でシリカゲル カラム（２ｘ　１７　ａｍ）でクロマトグラフィーにかける。化合物６ａ）を白 色のフオームとして得る（２５５ｍｇ、　８１％）。

ＴＬＣ（ＣＨｚＣ１２／アセトン、６：１）：Ｒ，０，５６，’Ｈ−ＮＭＲ（（ Ｄａ）ＤＭＳＯ）：　１１．３２（ｓ、　ＮＨ）　；７．７２−７．１７（ｍ、 　１４芳香族ＨおよびＨ−Ｃ（６））　、６．８０−６．６１（ｍ、　４芳香族 Ｈ）　；６．１８（ｄ、　Ｊ＝５．７．　Ｈ−Ｃ（１°））　；５．６８（ｍ、 　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．４８（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　））　；３．６９（ ｍ、　ＣＨ２（５’　）および２ｓ、　２　ＭｅＯ）；２．８８（ｍ、　Ｈα− Ｃ（２’））；２、２６（ｄ、　Ｊ＝−１６，２，Ｈβ−Ｃ（２’　））　；１ ．５５（ｓ、　Ｍｅ）。

分析Ｃ，、Ｈ，、ＮＩＯ，（６４８，７１）としての計算値：　Ｃ７０，３６， Ｈ５，５９Ｎ４．３２．実測値：　Ｃ７０，３１，Ｈ５，７０，Ｎ　４．３６゜ 実施例３８ １−（３−０−ベンゾイル−２−デオキシ−β−Ｄ−トリオーペントフラ８０％ の酢酸（３ｍｌ）中の６ａＸ２００ｍｇ　、　０．３１ミリモル）の溶液を室温 で１５分間攪拌し、１００　ｍｌで希釈し、蒸発により濃縮する。残渣を毎回水 ５０ｍ１．２−プロパツール（５０ｍｌ）そしてメタノール５０ｍ１で１回ずつ 吸収させ、蒸発により濃縮し、そしてＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９５：５中でシリ カゲルカラム（２ｘ　１２　ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけ、化合物７ａ） を白色のフオームとして得る（９８ｍｇ　、９２％）。

ＴＬＣ（ＣＨｚＣ１２／ＭｅＯＨ，９５：５）　：　Ｒ、０，３０，’Ｈ−ＮＭ Ｒ（（ＤＪＤＭＳＯ）　：　１１．２９（ｓ。

ＮＨ）　；７．９８−７．５１（ｍ、　５芳香族ＨおよびＨ−Ｃ（６））；６． １４（ｄｄ、Ｊ＝７．８．２．３Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．５４（ｍ、　Ｈ− Ｃ（３°））　；４．９８（ｔ、　０Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．１９（ｍ、　 Ｈ−Ｃ（４’@））　： ３、８２（ｍ、　ＣＨ２（５°））；２．８７（ｍ、Ｈα−Ｃ（２’））；２． ２０（ｄｄ、Ｊ＝−１５，４，２，ＯＨβ−Ｃ（２’　））　；１．６９（ｓ、 　Ｍｅ）。

分析Ｃ１□Ｈ＋　ｅＮｇｏｅ（３４６，３４）としての計算値：　Ｃ５８，９６ ，Ｈ５，２４Ｎ８．０９．実測値：　Ｃ５９，１１，Ｈ５，３５，Ｎ　７．９９ ゜実施例３９ ＰＯ（ＯＭｅ）　３　（０，５ｍ１）中の化合物７ａ０８０ｍｇ、　０．２３ミ リモル）の溶液をＰＯＣｌｚ（４６μｍ、０．４８ミリモル）と共に４℃で８時 間インキュベートする。その反応混合物を冷却した１モルの重炭酸トリエチルア ンモニウム水溶液（１５ｍｌ）に添加し、室温で２時間インキュベートし、蒸発 により濃縮し、再度、水（５０ｍｌ）に２回吸収させ、蒸発により濃縮する。残 渣を２５％のアンモニア水溶液（５０ｍｌ）と共に３時間インキュベートし、蒸 発により濃縮し、ＤＥＡＥセファデックス　（ＨＣＯ３一形態、２　ｘ　３０　 ａｍ）でクロマトグラフィーにかける。それを水（６００ｍｇ）　、次に重炭酸 トリエチルアンモニウムの線形勾配　（０−０，３モル／１．１２００ｍ１）で 溶離する。ホスフェートを含む両分は０．２−０．２５モル／ｌで溶離する。そ れらを蒸発により濃縮し、再度水に吸収させ、濃縮し、再度同条件下でＤＥＡＲ セファデックスでクロマトグラフィーにかける。重炭酸トリエチルアンモニウム を水およびエタノールと共に繰り返し蒸発することにより除去する。無色の無定 形の生成物を得る。

（１４４３Ａ２６７単位、７１％）、　ＴＬＣ（ＥｔＯＡＣ／アセトン／ＥｔＯ Ｈ／水、　１５：３：４：３）：　Ｒ，０，０６，（２−）ｏハ／　−／ｌ／／ ２５　％（７）７ンモニ７水２水、７：ｌ：ｌ）Ｒ，０，１０，ＨＰＬＣ（０， １Ｍの酢酸トリエチルアンモニウム７５％のＭｅＣＮ；０．６ｍｌ／分）：ｔ＊ ８分。

電気泳動：　Ｅ　ｕｐｏ、　８７．　ＵＶ（Ｉ２０）　：λｍａｘ２６７ｎｍ、 　”Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ２０１０．１Ｍのトリス−）ＩＣＩ緩衝液）：　１．３６方 法Ｂ： ９−［２−デオキシ−５−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）− β−Ｄ−）レオーペントフラノシル］アデニン（５ｂ）その化合物を方法Ａのよ うに化合物７ａ）　（８０ｍｇ、　０．２３　ミリモル）から得る。ベンゾイル 基の除去だけは、５０°Ｃで２時間にわたって５０％の水性メタノール（１５ｍ ｌ）中で０．１モル／ｌのＮａ１ｌを用いて行う。その溶液をダウエックス５０ （Ｈ＋形態）で中和し、そのイオン交換樹脂を濾過により除去し、中性の溶液を 蒸発により濃縮する。

更に精製を方法Ａに記載されたように行う。１２１４Ａ２　ｓ　、単位（６０％ ）を得る。

実施例４０ ピリジン（１５ｍｌ）中の化合物３　（３００ｍｇ、　１．１９ミリモル）を４ ，４′−ジメトキシトリチルクロリド（５０８ｍｇ、　１．５　ミリモル）およ びエチルジイソプロピルアミン（２５５μｍ、１．５　ミリモル）と共に室温で １２時間インキュベートする。その溶液を３０℃で蒸発により濃縮する。残渣を 再度トルエンに吸収させ、蒸発により濃縮し、シリカゲル（４ｘ　１１　ａｍ） でクロマトグラフィーにかける。

Ｃ）（ｔｃＬ２／アセトン／Ｅｔ、Ｎ（４０：４０：３）、白色のフオーム（４ ７６ｍｇ、７２％）。

ＴＬＣ（ＣＨｚＣＩｇ／アセトン／εｔ＄Ｎ、４０：４０：３）：　Ｒ，０，６ ４゜’Ｈ−ＮＭＲ（（Ｄｓ）ＤＭＳＯ）：　８．２６（ｓ、　Ｈ−Ｃ６））；８ ．１６（ｓ、　Ｈ−Ｃ（２））；７．４１−７．１８１：　（ｍ、９芳香族Ｈ， ＮＨｔ）　；６．８４−６．７７（ｍ、　４芳香族Ｈ）、６．３５（ｄ、Ｊ＝８ ．２．　Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．９４（ｄ、　Ｊ＝５．２．０Ｈ−Ｃ（３’ 　））　；４．３２（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．１９（ｍ、　Ｈ−b （４′乃：３．７１（ｓ、　２　ＯＭｅ）　；３．２３−３．０２（ｍ、　ＣＨ ｔ−（５°））；２．７８（ｍ、　Ｈａ−Ｃ（２’））；２．２９（ｄｄ、Ｊ＝ −１４，８，Ｈａ−Ｃ（２’））。

実施例４１ ＭｅＣＮ（４ｍｌ）中の化合物５ｂ）（４００ｍｇ　、０．７２ミリモル）の溶 液を室温で３時間にわたってベンゾイルシアニド（１０５ｍｇＳ０．８　ミリモ ル）およびトリエチルアミン（１３０μｌ　、　０．３９ミリモル）と共にイン キュベートする。ベンゾイルシアニド２５ｍｇ（０，１９ミリモル）およびトリ エチルアミン２５μｌを更に添加し、そしてそれを更に１５時間［攪拌する。そ の溶液を蒸発により濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ！／アセトン（１：２）を使用して残渣 をシリカゲル（２ｘ　１５　ｃｍ）でクロマトグラフィーにかけて白色のフオー ム（３０５ｍｇ、６４％）を得る。ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃ１２／アセトン、１：２） ：Ｒ，０，６０゜ ’Ｈ−ＮＭＲ（（Ｄａ）ＤＭＳＯ）：　８．０９（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））；８． ０７（ｓ、　Ｈ−Ｃ（２））ニア、６８−７．１３（ｍ、１４芳香族Ｈ，ＮＭＲ ）　；６．７５−６．６９（ｍ、　４芳香族Ｈ）；６．４１（ｄ、Ｊ＝５．２． 　Ｈ−Ｃ（１’　））　；５．８２（ｍ、　Ｈ−Ｃ（３’　））　；４．５７（ ｍ、　Ｈ−ＣＣ４°乃；３．６９（ｓ、　ＯＭｅ）；３．６７（ｓ、　ＯＭｅ） ；約３．３−３．２（ｍ、　ＣＨ２（５°））；３．０５（ｍ、　Ｈａ−Ｃ（２ °））　；２．９１（ｄ。

Ｊ＝−１４，３，Ｈａ−Ｃ（２“））。

実施例４２ ９−（３−０−ベンゾイル−２−デオキシ−β−Ｄ−）レオ−ペントフラノシル ）アデニン（７ｂ） 化合物６ｂＸ２６０ｍｇ　、　０．４０ミリモル）を８０％の酢酸（１０ｍｌ） に吸収させ、室温で８０分間攪拌する。その溶液を水５０ｍ１で希釈し、蒸発に より濃縮する。残渣を毎回水２０ｍ１で２回吸収させ、２−プロパツール２０ｍ １で１回吸収させ、蒸発により濃縮する。生成物をシリカゲル（２Ｘ　１２　ｃ ｍ）で精製し、ＣＨｚＣ１２／ＭｅＯＨ９３ニア中でクロマトグラフィーにかけ る。無色の固体（１２０ｍｇ、　８５％）。融点１６６−１８８℃（２−プロパ ツール）。

ＴＬＣ（ＣＨ２ＣＩ２／ＭｅＯＨ，９３ニア）：Ｒ，０，３０，’Ｈ−ＮＭＲ（ （Ｄ、）ＤＭＳＯ）：　８，２８（ｓ。

Ｈ−Ｃ（８））；８．０７（ｓ、　Ｈ−Ｃ（２））；７．８５−７．４７　（ｍ 、５芳香族Ｈ）　；７．２７（Ｓ、　ＮＭＲ）　；６．３８（ｄ、Ｊ＝５．２． 　Ｈ−Ｃ（１’））＋５．６８（ｍ、Ｈ−Ｃ（３°））；５．０１（ｂｒ、　０ ）Ｉ−Ｃ（５′））；４、３３（ｍ、　Ｈ−Ｃ（４’　））　；３．７６（ａ＋ 、　Ｈ−Ｃ（５’　））　：３．０２（ｍ、　Ｈａ　−Ｃ（２’　））　；２． ８R（ｄ。

Ｊ＝−１４，７，Ｈａ−Ｃ（２’））。

分析Ｃ１，Ｈｌ、ＮＳＯ，（３５５，３５）としての計算値：　Ｃ５７，４６， Ｈ４，８２Ｎ１９、７１　；実測値：　Ｃ５７，１５，Ｈ５，０２，Ｎ　１９． ４９゜実施例４３ ９−（２−デオキシ〜β−Ｄ−トレオーベントフラノシル）アデニン５′−ホス フェート、トリエチルアンモニウム（８ｂ）化合物８ｂ）を化合物８ａ）の製造 方法Ａと同様にして化合物７ｂ）（５３ｍｇ　、　０．１５ミリモル）から調製 する。ＰＯＣｌ、処理の期間は４時間である。無定形の生成物（１２２２Ａｔｓ ｓ単位、５３％）を得る。生成物をメタノール約２００μｍに溶解し、エーテル ２０ｍ１で沈殿させる。

その沈殿を遠心分離により分離し、五酸化リンで乾燥させる。薄層クロマトグラ フィーを２−プロパツール７２５％のアンモニア／水。

７：１：２）で行う：　Ｒｔ　０．２４．　（ＥｔＯＡ／アセトン／ＥｔＯＨ／ 水、１５：３：４：３）：Ｒ，０，０６，）ＩＰＬＣ（０，ＩＭの酢酸トリエチ ルアンモニウム７５％のＭｅＣＮ　；０、Ｏｍｌ／分）ｔｉｌａ分、電気泳動： Ｅｕｐ　Ｏ，６８，ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λ、、、　２５９ｎｍ、　”Ｐ−ＮＭＲ （ＤｇＯ／ＭｅＯＤ、１：１）２．９４．　’Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２０／ＭｅＯＤ、 １：ｌ）：９．８９（ｓ、Ｈ−Ｃ（８））；９．７１（ｓ、Ｈ−Ｃ（２））；７ ．８４（ｄ、　に８．０．　Ｈ−Ｃ（１’））；６．０８（ｍ、Ｈ−Ｃ（３’） ）；５．７７−５．６１（ｍ、　ＣＨ２（５’））；５．０１（Ｉｌｌ、Ｈ−Ｃ （４°））；４．６８（ｑ、　ＣＨ２）；４、４８（ｍ、　Ｈａ　−Ｃ（２’　 ））　：３．９２（ｄ、　Ｈａ−〇（２°））；２．７４（ｍ、　ＣＨ３）。

実施例４４ 化合物５ａ）を、 Ｒｏｓｅｍｅｙｅｒ、Ｈ，；５ｅｅｌａ、Ｆ、Ｈｅ１ｖ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ　 １９９１．７４．７４８゜Ｒｏｓｅｍｅｙｅｒ、　Ｈ，；Ｋｒｅｃｍｅｒｏｖａ 　Ｍ、　；５ｅｅｌａ、　Ｆ、　Ｈｅ１ｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔａ、　１９９ １．７S゜ ２０５４゜ Ｆａｘ、　Ｊ、Ｊ、；Ｍｉｌｌｅｒ、Ｎ、Ｃｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、１９６３． ２８，９３６゜と同様にして調製する。

化合物４ａに関するデータ： ８２４Ａｚ　ｓ　ｏ単位（５３，８％）の無色の固体。ＴＬＣ（２−プロパツー ル７２５％のアンモニア水／水、７コｌ：ｌ）：　Ｒ，０，５４，ＨＰＬＣ（０ ，１Ｍの酢酸トリエチルアンモニウム、ｐＨ７中５％のＭｅＣＮ　Ｏ，６ｍ１７ 分）ｔ、１５分。

電気泳動：ＥＬＩ、　０．３５．　ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λ□、２６０　ｎｍ、　 ３１Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ２０１０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ緩衝液、１：１）：　−５ ，１１（ｄ、Ｊ＝１９．４）、’Ｈ−ＮＭＲ（（Ｄ６）ＤＭＳＯ）　：９．９７ （ｂｒ、　ＮＨ）　；８．３３（ｓ、　Ｈ−Ｃ（８））　；８．１５（ｓ、　Ｈ −Ｃ（２））　；７．３４（ｓ。

ＮＨ２）　；６．４０（ｄ、　Ｊ＝７．８．　Ｈ−Ｃ（１’　））　；４．６３ （ｂｒ、　Ｈ−Ｃ（３′））　；４．４２−４．１０（ｍ。

ＣＨ，（５′））；３．９４（ｂｒ、Ｈ−Ｃ（４’））；３．０５（ｑ、　ＣＨ ｘ）；２．８５（ｍ、Ｈα−Ｃ（２°））；２．２８（ｄ、　Ｊ＝−１４，６， Ｈβ−Ｃ（２’））；１．１８（ｔ、　Ｍｅ）。

ＦＩＳ、　１ Ｆｉｇ、２ ｔ（分） Ｆｉ９．３ 温　度　（０Ｃ） Ｆノ５　リ Ｆｕ５．！；： λ（ｎｍｌ ネ甫正書の写しく翻訳文）提出書 （特許法　第１８４条の８） 平成５年１１月２５日 圀

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. １．少なくとも２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル基が５′ 末端および３′末端の両方で２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシ ル基により置換されており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディングブロ ックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチド。
2. ２．連続のヌクレオチドビルディングブロック中の２′−デオキシ−β−Ｄ−エ リトロ−ペントフラノシル基の少なくとも２０％が２′−デオキシ−β−Ｄ−ト レオ−ペントフラノシル基により置換されており、そして６〜１００のヌクレオ チドビルディングブロックを含むオリゴデオキシリボヌクレオチド。
3. ３．それらが１５〜３０のヌクレオチドビルディングブロックを含む請求項１ま たは２に記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド。
4. ４．２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル基の少なくとも３０ ％が２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基により置換されてい る請求項１〜３に記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド。
5. ５．全ての２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル基が２′−デ オキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基により置換されている請求項１〜 ４に記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド。
6. ６．一つまたは幾つかのヌクレオチドビルディングブロックがオリゴヌクレオチ ド中のエンドヌクレアーゼの認識配列で２′−デオキシキシロヌクレオチドによ り置換されている請求項１〜５に記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド。
7. ７．それらが１−デアザアデニン、３−デアザアデニン、７−デアザアデニン、 １−デアザグアニン、３−デアザグアニン、７−デアザグアニン、１−デアザヒ ポキサンチン、３−デアザヒポキサンチン、７−デアザヒポキサンチン、Ｃ−７ で置換された７−デアザプリン、Ｃ−８で置換されたプリン、Ｃ−５で置換され たピリミジンを含む群からの少なくとも一つの塩基を含む請求項１〜６に記載の オリゴデオキシリボヌクレオチド。
8. ８．それらが５′末端および／または３′末端で水素、リポーター基またはイン ターカレーター基を含む請求項１〜７に記載のオリゴデオキシリボヌクレオチド 。
9. ９．それが５′末端でモノホスフェート基、ジホスフェート基またはトリホスフ ェート基を有する請求項８に記載のオリゴヌクレオチド。
10. １０．オリゴヌクレオチド合成方法による、少なくとも二つの２′−デオキシ− β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル基が５′末端および３′末端の両方で２′ −デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基により置換されており、そし て６〜１００のヌクレオチドビルディングブロックを含むオリゴデオキシリボヌ クレオチドの生産方法であって、 開始ヌクレオシドを固体担体に結合し、続いて適当に活性化されたモノマーのヌ クレオチドビルディングブロックで段階的カップリングにより所望のオリゴヌク レオチドを合成し、所望により３価のリンをその合成中そして合成後に５価のリ ンに酸化し、第−塩基を使用してオリゴヌクレオチドを担体から開製し、複素環 保護基を第二塩基で開製し、５′保証基を酸で開製し、そして所望により、オリ ゴヌクレオチドを精製するオリゴデオキシリボヌクレオチドの生産方法。
11. １１．オリゴヌクレオチド合成方法による、連続のヌクレオチドビルディングブ ロック中のβ−Ｄ−２′−デオキシ−エリトロ−ペントフラノシル基の少なくと も２０％がβ−Ｄ−２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基によ り置換されており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディングブロックを含 むオリゴデオキシリボヌクレオチドの生産方法であって、 開始ヌクレオシドを固体担体に結合し、続いて適当に活性化されたモノマーのヌ クレオチドビルディングブロックで段階的カップリングにより所望のオリゴヌク レオチドを合成し、所望により、３価のリンをその合成中そして合成後に５価の リンに酸化し、第−塩基を使用してオリゴヌクレオチドを担体から開裂し、複素 環保護基を第二塩基で開裂し、５′保護基を酸で開裂し、そして所望により、オ リゴヌクレオチドを精製するオリゴデオキシリボヌクレオチドの生産方法。
12. １２．２′−デオキシ−キシロヌクレオシド−３′−Ｏ−ホスホルアミジト。
13. １３．２′−デオキシ−β−Ｄ−キシロヌクレオシド−３′−Ｏ−Ｈ−ホスホネ ートおよびそれらの塩。
14. １４．２′−デオキシ−β−Ｄ−キシロヌクレオシド−Ｐ−メチル−ホスホルア ミジト。
15. １５．−般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＢはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇまたは１−デアザアデニン、３−デアザアデニン、 ７−デアザアデニン、１−デアザグアニン、３−デアザグアニン、７−デアザグ アニン、１−デアザヒポキサンチン、３−デアザヒポキサンチン、７−デアザヒ ポキサンチン、Ｃ−７で置換された７−デアザプリン、Ｃ−８で置換されたプリ ン、Ｃ−５で置換されたピリミジンを含む群からの塩基を表し、Ｒ１は水素原子 またはリポーター基もしくはインターカレーター基を表し、かつＲ２はモノホス フェート、ジホスフェートまたはトリホスフェートを表す）を有するヌクレオチ ド。
16. １６．それらが５′−０および／または複素環塩基で保護基を有する請求項１２ 〜１５に記載の化合物。
17. １７．抗ウイルス活性を有する医薬物質の製造のための、少なくとも二つの２′ −デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル基が５′末端および３′末端 の両方で２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基により置換され ており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディングブロックを含むオリゴデ オキシリボヌクレオチドの使用。
18. １８．抗ウイルス活性を有する医薬物質の製造のための、連続のヌクレオチドビ ルディングブロック中の２′−デオキシ−β−Ｄ−エリトロ−ペントフラノシル 基の少なくとも２０％が２′−デオキシ−β−Ｄ−トレオ−ペントフラノシル基 により置換されており、そして６〜１００のヌクレオチドビルディングブロック を含むオリゴデオキシリボヌクレオチドの使用。
19. １９．デオキシキシロヌクレオシド−５′−モノホスフェート、ジホスフェート およびトリホスフェート。
20. ２０．相当するデオキシキシロヌクレオシドの３′ＯＨ基をベンゾイル化し、続 いてトリアルキルホスフェート中でＰＯＣｌ３でホスホリル化して５′−ホスフ ェートを生成し、そして３′保護基を塩基で除去する請求項１９に記載の化合物 の製造方法。