MXPA00011473A - Nuevos nucleosidos que tienen una porcion de azucar biciclica. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a analogos de nucleosidos con puentes en posicion 2',4' conformacionalmente restringidos. Los compuestos se pueden preparar mediante la ciclizacion , en los carbonos C2' y C4', de nucleosidos a traves de una molecula ligadora o de ligamiento. estos nuevos nucleosidos tienen una estructura ciclica de azucar asegurada y son potencialmente utiles como ingredientes farmaceuticos. los oligonucleotidos compuestos a partir de estos novedosos nucleosidos son utiles para preparar compuestos oligonucleotidicos terapeuticos y de diagnostico.

Description

NUEVOS NÚCLEOSIDOS QUE TIENEN UNA PORCIÓN DE AZÚCAR BICICLICA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a nucleósidos y análogos de oligonucleótidos y a métodos para su preparación. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los nucleósidos y análogos de nucleótidos se han utilizado desde hace tiempo como ingredientes farmacéuticos contra una variedad de virus y cánceres. En la actualidad un número de nucleósidos y análogos de nucleótidos se encuentran en estudios clínicos para varias enfermedades. En la célula, los nucleósidos y nucleótidos son fosforilados o adicionalmente fosforilados hasta los correspondientes trifosfatos de nucleósido. Los trifosfatos de nucleósido sirven como inhibidores de la ADN polimerasa o la ARN polimerasa. Los trifosfatos de nucleósido también se pueden incorporar al ADN o ARN, lo cual interfiere con el alargamiento del AD? o ARN. Los análogos de nucleósidos activos generalmente se forsforilan con facilidad en la célula blanco. Los correspondientes trifosfatos de nucleósido tienen una alta afinidad por sitios catalíticos de las polimerasas y compiten con los trifosfatos de nucleósido naturales como Ref: 124855 sustrato para las polimerasas. Ciertos análogos de nucleósido trabajan a nivel de nucleósido o a nivel de monofosfato. Un grupo de análogos de nucleósido prometedor son los nucleósidos con porciones de azúcar conformacionalmente aseguradas. Se ha reportado que ciertos análogos de nucleósido carbociclicos conformacionalmente asegurados tienen una potente actividad contra HCMV, HSV y EBV (Siddiqui et al. N?cleosides Nucleotides 1996, 15, 235-250; Márquez et al. J. Med. Chem. 1996, 39, 3739-3747) . Un AZT 5' -trifosfato carbociclico, conformacionalmente asegurado, se ha reportado que es un inhibidor equipotente de la transcriptasa inversa de HIV (Márquez et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 2780-2789) . También se han preparado otros nucleósidos con porciones de azúcar biciclico aunque no se encontró ni se reportó actividad alguna (Chao et al. Tetrahedron 1997, 53, 1957-1970; Okabe et al. Tetrahedron lett . 1989, 30, 2203-2206, Hong, et al. Tetrahedron Lett. 1998, 39, 225-228) . Los nucleósidos conformacionalmente asegurados favorables se espera que tengan un impacto positivo sobre los oligonucleótidos antisentido. Los oligonucleótidos, como agentes terapéuticos antisentido potenciales, se han reconocido y se han explorado durante dos décadas. Los oligonucleótidos son capaces de formar una doble o triple hélice con ADN o ARN complementario y tienen la capacidad de hacer blanco en secuencias especificas en el genoma viral y de células cancerosas. La unión especifica de oligonucleótidos al ADN o AR? blanco de interés, inactivaria su función asociada con el AD? o ARN tal como la replicación, transcripción y traducción. Por lo tanto, los ciclos virales o el proceso canceroso se pueden interrumpir, mientras que el ciclo normal de la célula no se vea afectado. Puesto que los oligonucleótidos naturales son propensos a las nucleasas celulares y extracelulares, se han realizado muchos esfuerzos para estudiar modificaciones de oligonucleótidos, especialmente aquellas modificaciones con el propósito de mejorar la resistencia a las nucleasas y la afinidad de unión. Los oligonucleótidos contienen ciertos nucleósidos biciclicos que se ha demostrado que mejoran la estabilidad de la nucleasa (Leumann et al. Bioorg. Med. Chem. Letts. 1995, 5, 1231-4; Altmann et al. Tetrahedron Lett. 1994, 35, 2331-2334, 7625-7628) . Recientemente se sintetizaron 2» -O, 4'-C-metilenribonucleósidos que tienen un 3 '-endoazúcar asegurado, y se incorporaron en oligonucleótidos. Estudios de hibridación demostraron que los nucleósidos conformacionalmente asegurados pueden intensificar significativamente la hibridación de los oligonucleótidos modificados al AR? y al AD? complementarios (Obika et al.

Tetrahedron Lett. 1997, 38, 8735-8738; Koshkin et al. Tetrahedron 1998, 54, 3607-3630) . Existe la necesidad de nuevos nucleósidos conformacionalmente asegurados con porciones de azúcar biciclico. Estos nuevos nucleósidos deberán ser útiles en terapias antivirales, antícáncer y otras terapias. Además, los oligonucleótidos compuestos de estos novedosos nucleósidos modificados, tendrán la estabilidad deseada frente a las nucleasas celulares y una fuerte afinidad de unión a sus ácidos nucleicos blanco. Por lo tanto, estos oligonucleótidos serán potencialmente útiles para fines terapéuticos y de diagnóstico. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En la presente se describen nucleósidos con azúcar biciclico, conformacionalmente asegurados, que tienen una forma geométrica común y métodos para producir los nucleósidos con azúcar biciclico conformacionalmente asegurados. Se proporcionan nucleósidos que tienen porciones de azúcar biciclico y oligonucleótidos que comprenden la siguiente fórmula: en donde X, Y y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste de 0, S, CH2, NR, C=0, C=CH2 o nada, en donde R se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo; Ri se selecciona del grupo . que consiste de adenina, citosina, guanina, hipoxantina, uracilo, timina, heterociclos, H, 0CH3, OAc, halógeno, sulfonato; R2, R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OP (NiPr2) 0 (CH2) 2CN, 0P03H, P03H, difosfato, trifosfato; R2 y R3 juntos pueden ser un grupo PhCH02, TIPDS02 ó DTBS02. Los nuevos nucleósidos que se describen en la presente se anticipa que son útiles en terapias antivirales, anticáncer y otras terapias. Los oligonucleótidos compuestos a partir de estos nucleósidos modificados, tienen la estabilidad fisiológica y la afinidad de unión deseadas que hace posible que sean útiles para fines terapéuticos y de diagnóstico. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se proporcionan nucleósidos conformacionalmente asegurados que tienen una porción de 3 f -endoazúcar y métodos para la preparación de los mismos. Los procesos para la preparación de los análogos de nucleósido biciclicos previamente reportados no se pueden aplicar a los nuevos análogos de nucleósido descritos en la presente. Los análogos descritos son el resultado de una unión exitosa entre las posiciones C2' y C4' de ribosa en los análogos de nucleósido. Tal como se utiliza en la presente, la abreviatura "Ac" se refiere a un grupo acetilo; la abreviatura "Bn" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo bencilo; la abreviatura "Bz" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo benzoilo; la abreviatura "DMT" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo dimetoxitritilo; la abreviatura "THP" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo tetrahidropiranilo; la abreviatura "TBDMS" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo t-butildimetilsililo; la abreviatura "TIPDS" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo tetraisopropildisililo; y la abreviatura "DTBS" tal como se utiliza en la presente, se refiere a un grupo di (t-butil) -sililo. Síntesis de Derivados de R±bofuranosa con Puente en la Posición 2,4 La 1-a-metilarabinosa (compuesto de la fórmula 1) , preparada de conformidad con un procedimiento publicado (Tejima et al. J. Org. Chem. 1963, 28, 2999-3003), se sometió a una reacción de protección con 1,1,3,3-tetraisopropildisiloxanilo (TIPS) _ en las posiciones 03 y 05, para obtener el compuesto de la fórmula 2, el cual fue transformado en la cetona de la fórmula 3 mediante un tratamiento con DMSO/DCC/TFA. La subsecuente reacción de Wittig y la remoción del TIPS produjo el alqueno de la fórmula 4, con un muy bien rendimiento. El compuesto de la fórmula 4 se sometió a una reacción de protección con t-butildimetilsililo (TBS) en la posición 05 y con bencilo (Bn) en la posición 03, para obtener el compuesto de la fórmula 5. La hidroboración del compuesto de la fórmula 5 se realizó con 9-BBN para obtener exclusivamente el derivado 2-desoxi-2-hidroximetilo de la fórmula 6, con un excelente rendimiento. El derivado 2-desoxi-2-hidroximetilo de la fórmula 6 fue sometido a una tritilación con cloruro de 4, 4 ' -O-dimetoxitritilo (DMT) y, después de la remoción del TBS con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) , se obtuvo el compuesto de la fórmula 7.

Diagrama de Reacción I 3 El compuesto de la fórmula 7 fue oxidado para obtener el aldehido de la fórmula 8, el cual se trató con formaldehido e hidróxido de sodio para obtener el derivado 4-hidroximetilo de la fórmula 9, con un excelente rendimiento. La mesilación del compuesto de la fórmula 9 y la subsecuente remoción del DMT, produjo el compuesto de la fórmula 10. La ciclización se efectuó con NaH en THF y la subsecuente remoción del grupo mesilo produjo el azúcar biciclico de la fórmula 11. El tratamiento del compuesto de la fórmula 11 con anhídrido acético en presencia de DMAP, produjo el compuesto de la fórmula 12, mientras que el tratamiento con anhídrido acético/ácido acético en presencia de ácido sulfúrico, produjo el compuesto de la fórmula 13, en el cual el grupo acetoxi en el carbono Cl tiene una orientación invertida (1-ß) , en comparación con el grupo metoxi del compuesto de la fórmula 11.

Diagrama de Reacción II 8 9 12 Síntesis de Biciclonucleósidos con Puente en la Posición 2*,4' Los biciclonucleósidos con una porción de azúcar con puente en la posición 2 * , 4 ' se sintetizaron a partir de condensaciones de las bases de nucleósido sililadas y los azúcares biciclicos, tal como se muestra a continuación. La condensación del compuesto de la fórmula 13 con bis (trimetilsilil) timina produjo el compuesto de la fórmula 14, que es el a-anómero, con un excelente rendimiento. El tratamiento del compuesto de la fórmula 14 con BC13, removiendo el grupo acetilo y el bencilo simultáneamente, produjeron la a-timidina biciclica de la fórmula 15.

La condensación del compuesto de la fórmula 13 con 6-cloro-9-trimetilsililpurina produjo una mezcla de los nucleósidos a- y ß-purina, de las fórmulas 16 y 17 (relación a/ß, 1:1 a 2:3), los cuales pueden ser separados por cromatografía.

El tratamiento de los compuestos 16 y 17 con amoniaco en metanol, seguido por una hidrogenólisis, produjo los análogos de adenosina de las fórmulas 18 y 19, respectivamente. La hidrogenólisis requirió una gran cantidad de material catalizador, así como un prolongado tiempo de reacción, debido al gran impedimento estérico de la porción de azúcar. El tratamiento de los compuestos de las fórmulas 16 y 17 con mercaptoetanol en presencia de metóxido de sodio, seguido por una hidrogenólisis, produjo los análogos de inosina de las fórmulas 20 y 21, respectivamente. 1SX-NH, 19X-NH2 20X-OH 21X-OH La condensación del compuesto de la fórmula 13 con N2-acetilguanina sililada produjo el derivado a-guanosina de la fórmula 22 como producto principal (30%) , una pequeña cantidad del ß-isómero y del producto N7-acoplado. El tratamiento del derivado a-guanosina con amoniaco en metanol, seguido por una hidrogenólisis, produjo la a-guanosina bicíclica de la fórmula 23. 22 23 Tal como se describió anteriormente, las reacciones de condensación produjeron ya sea el ct-nucleósido exclusivamente, o bien, una mezcla de los a- y ß-nucleósidos, sin preferencia por los ß-anómeros. Con el fin de incrementar la relación de ß-nucleósídos, se investigaron diferentes condiciones de condensación. La temperatura tuvo poco efecto sobre la relación de los a- y ß-anómeros, sin embargo, el reactivo de acoplamiento y el grupo funcional en el carbono Cl del azúcar, tuvieron efectos significativos en la relación de los a- y ß-nucleósidos. La condensación del compuesto de la fórmula 12 con bis- ó tri (trimetilsilil) -pirimidinas en presencia de cloruro de estaño (IV) produjo los ß-nucleósidos como producto principal, con buenos rendimientos. Así pues, la reacción del compuesto de la fórmula Í2 con timina sililada produjo el derivado timidina de la fórmula 24, con una relación ß/a de ~4:1. La condensación del compuesto de la fórmula 12 con el uracilo sililado y N4-benzoilcitosina, produjo los correspondientes nucleósidos de las fórmulas 25 y 26, respectivamente, con una relación ß/a de ~9:1 en ambas reacciones. El tratamiento de los compuestos de las fórmulas 24-26 con tricloruro de boro, produjo los biciclonucleósidos de pirimidina de las fórmulas 27-29, respectivamente. En el caso del derivado citidina, el grupo benzoilo del compuesto de la fórmula 29 fue removido mediante un tratamiento con amoniaco, para obtener el compuesto de la fórmula 30. Una ruta alternativa (no mostrada) para preparar el compuesto de la fórmula 30, se iniciaba a partir del compuesto de la fórmula 28, el cual estaba acilado en las posiciones 03' y 05', seguido por una reacción con triazol y un subsecuente tratamiento con amoniaco. De esta manera, se obtuvo el compuesto de la fórmula 30 con un rendimiento moderado. 2 X«OHY«Me 27X-OHY = Me 25X-OH.Y-H 28X-OH.Y-H 26X-NHB2.Y-H 29X«NHBz,Y«H 30X-=NH2.Y«H También se investigó la condensación del compuesto de la fórmula 12 con purinas sililadas, junto con cloruro de estaño (IV) como agente de acoplamiento. A diferencia de las reacciones con pirimidinas, la condensación de la 6-cloropurina sililada con el compuesto de la fórmula 12 produjo no sólo los a- y ß-nucleósidos de las fórmulas 16 y 17, sino que también un producto de N7-acoplamiento (no mostrado) . De manera similar, la condensación de la N2-acetilguanina sililada con el compuesto de la fórmula 12, produjo una mezcla de los tres productos en la siguiente proporción: ß-nucleósido N7-acoplado de la fórmula 31 (42%), ß-nucleósido de la fórmula 32 deseado (10%) y a-nucleósido de la fórmula 22 (6%) . Sin embargo, cuando se calentó con la N2-acetilguanina sililada en presencia de trimetilsililtriflato, el producto N7-acoplado de la fórmula 31 se transformó parcialmente en el producto N9-acoplado y los a- y ß-biciclonucleósidos de las fórmulas 22 (~22%) y 32 (-25%) . El compuesto de la fórmula 32 separado fue sometido a los mismos tratamientos que el compuesto de la fórmula 22, para obtener la ß-guanosina bicíclica de la fórmula 33.

Las asignaciones estereoquímicas del derivado 2, 6-dioxabiciclo [3,2, 1] octano de la fórmula 11 y los biciclonucleósidos formados a partir de la condensación de azúcares bicíclicos con bases de nucleósido sililadas, se pueden realizar mediante RMN de protón NOE. Tal como es indicado por un modelo de palo-pelota, el sistema de anillos rígido dioxabiciclo [3, 2, 1] octano obliga a los protones (Hl' y H2 ' ) de los carbonos Cl ' y C2' de los a-biciclonucleósidos a volverse casi paralelos, mientras que los protones Hl ' y H21 de los ß-biciclonucleósidos se dirigen hacia los lados opuestos. Por ejemplo, el ángulo de torsión de H1'-C1'-C2 '-H2 ' de la a-timidina bicíclica de la fórmula 15, después de una optimización de geometría, es de 37° y, en concordancia con esto, se observó una constante de acoplamiento de 3.9 Hz en la RMN de protón. El ángulo de torsión de Hl f -Cl ' -C2 * -H2 '' de la ß-timidina bicíclica de la fórmula 27, es de 96° después de una optimización de geometría y, tal como se' esperaba, no se observó acoplamiento entre el Hl' y el H2 ' . De hecho, el protón en el carbono Cl ' de todos los ß-biciclonucleósidos medidos, se encuentra en un solo pico. En contraste, en todos los a-biciclonucleósidos medidos, el protón del carbono Cl' es un doblete, con una constante de acoplamiento de ~0.4 Hz. Las asignaciones estereoquímicas de los biciclonucleósidos fueron confirmadas adicionalmente por rayos X de estructuras cristalinas de las timidinas bicíclicas de las fórmulas 15 y 27. El anillo de ribosa de la porción de azúcar dioxabiciclo [3, 2, 1] octano en ambos compuestos, adopta una posición típica C3'-endoazúcar, mientras que el anillo de 6 miembros en la porción de azúcar adopta una forma de silla. La base de timina en ambos compuestos tiene una orientación de tipo anti.

Síntesis de las Fosforamiditas del Biciclonucleósido con Puente en la Posición 2,4 La ß-timidina bicíclica de la fórmula 27, la ß-N4-benzoilcitidina bicíclica de la fórmula 29 y la ß-N4-acetilcitidina bicíclica de la fórmula 29 fueron protegidas con DMT y después se transformaron en las correspondientes fosforamiditas, respectivamente. Debido al impedimento estérico, se requirió de un tiempo de reacción muy prolongado . 34X«OH,Y-Me 37X-OH,Y-Me 35X=NHAc,Y~H 38X-NHAc,Y=H 36X-=NHBz,Y=*H 3 X«NHBz,Y«H EJEMPLOS Los procesos de síntesis utilizados para preparar los compuestos descritos, también se pueden utilizar para sintetizar otros compuestos reivindicados. La presente invención incluye, pero no se limita a los compuestos preparados a través de los siguientes ejemplos. Los números entre paréntesis enseguida de los nombres de los compuestos en los ejemplos, corresponden a los números de las estructuras en la sección de descripción detallada de la invención. Ejemplo 1 Preparación de l-a-metil-3,5-0- (1,1,3,3-tetraisopropil- l,3-disiloxanodiil)-D-ribofuranosa (2) Se preparó a-metilarabinosa de conformidad con un procedimiento publicado (Tejima, S.; Fletcher, Jr. H. G. J. Org. Chem. 1963, 23.2999-3003) y se separó de su beta-anómero (un producto menor) mediante una cromatografía en gel de sílice. A una solución en agitación de a- etilarabinosa (19.27 g, 119.9 mmol) en piridina anhidra (200 ml) a 0°C, se le agregó 1, 3-dicloro-l, 1, 3, 3-tetraisopropildisiloxano (38.4 ml, 119.9 mmol). La solución resultante se agitó a 0°C durante 1 hora y después a temperatura ambiente durante 1.5 horas. La solución se enfrió a 0°C y se agregó agua (20 ml) . La mezcla se agitó durante 10 minutos y se diluyó con EtOAc. La fase acuosa se sometió a extracción con ÉtOAc. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. Una cromatografía en gel de sílice con 15% de EtOAc en hexanos, produjo 42.7 g (88%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro.

Ejepplo 2 Preparación de 2-C,2-0-dideshidro-a-metil-3,5-0-(l,l,3,3- tetraisopropil-1 ,3-disiloxanodiil) -D-ribofuranosa (3) A una solución en agitación de l-a-metil-3, 5-0- (1A 1/ 3, 3-tetraisopropil-l, 3-disiloxanodiil) -D-ribofuranosa (42.6 g, 104.9 mmol) y DCC (43.4 g, 209.8 mmol) en dimetiisulfóxido (DMSO) anhidro (250 ml) y éter (100 ml) a 0°C bajo una atmósfera de argón, se le añadió una solución de ácido trifluoroacético (4.04 ml, 52.5 mmol) y piridina (8.44 ml, 105 mmol) en DMSO (30 ml) . La mezcla de reacción resultante se calentó a temperatura ambiente, se agitó durante 5 horas y después se enfrió a 0°C. Se añadió ácido oxálico (21.3 g, 236 mmol) en metanol (60 ml) , seguido por la adición de agua (30 ml) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y el precipitado se filtró y se lavó bien con hexanos. El filtrado se diluyó adicionalmente con hexanos, se lavó 5 veces con agua, se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 2% de MeOH en cloruro de metileno/hexanos (1:2), rindió 37.6 g (89%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro. XH RMN (CDC13) d 1.00-1.12 (m, 28H, TIPDS) , 3.47 (s, 3H, OCH3) , 4.05-4.19 (m, 3H, H4, H5a, H5b) , 4.51 (dd, J = 9.3 Hz, 1.5 Hz, 1H, H3), 4.89 (t, J = 1.5 Hz, 1H, Hl) .

EJEMPLO 3 Preparación de 2-desoxi-2-me ilen-l-a-metil-3,5-0- (1,1,3,3-tetraisopropil-l ,3-disiloxanodiil) -D-ribofuranosa A una suspensión en agitación de bromuro de metiltrifenilfosfonio (21.5 g, 60.1 mmol) en éter anhidro (1380 ml) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón, se le agregó una solución de t-pentóxido de sodio (5.97 g, 54.0 mmol) en benceno anhidro (50 ml) . La mezcla de color amarillo claro resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas y se enfrió a -10°C, después se agregó una solución de 2-C, 2-0-dideshidro-a-metil-3, 5-0- (1, 1, 3, 3-tetraisopropil-l, 3-disiloxanodiil) -D-ribofuranosa (12.1 g, 30.1 mmol) en éter (35 ml) . La mezcla de reacción se agitó a -10°C durante 1 hora, se lavó dos veces con salmuera, se secó (Na2S0) y se concentró. La cromatografía en gel de sílice con 5% de EtOAc en hexanos rindió 11.0 g (91%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro. 2H RMN (CDC13) d 1.00-1.12 (m, 28H, TIPDS), 3.45 (s, 3H, 0CH3) , 3.73 (dt, J = 9.0 Hz, 3.0 Hz, 1H, H4), 4.02, 4.03 (2s, 2H, H5) , 4.62 (dt, J = 9.0 Hz, 2.7 Hz, 1H, H3), 5.27 (m, 1H, Hl), 5.32-5.36 (m, 2H, H2' ) . EJEMPLO 4 Preparación de 2-desoxi-2-metilen-l-a-metil-D- ribofuranosa (4) A una solución en agitación de 2-desoxi-2-metilen-l-a-metil-3, 5-0- (1, 1,3, 3-tetraiso-propil-l, 3-disiloxanodiil) -D-ribofuranosa (35.0 g, 87.1 mmol) en tetrahidrofurano (THF) (200 ml) , se le agregó TBAF l.OM en THF (180 ml) . La solución resultante se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 1 hora. El THF se evaporó y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con 10% de EtOH en cloruro de metileno, para obtener 14.6 g (88%) del compuesto del título en forma de un jarabe. EJEMPLO 5 Preparación de 3-0-bencil-5-0- (t-butildimetilsilil) -2- desoxi-2-metilen-1-a-metil-D-ribofuranosa (5) Una solución de 2-desoxi-2-metilen-l-a-metil-D-ribofuranosa (13.7 g, 85.5 mmol) y TBDMS-C1 (13.5 g, 89.6 mmol) en piridina anhidra (130 ml) se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 15 horas. Después de enfriar a 0°C y añadir agua (2 ml), la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se concentró hasta la mitad del volumen, se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera, se secó (Na2S0 ) y se concentró a sequedad. El producto crudo se secó bien y se disolvió en THF (70 ml) y fue agregado a una mezcla en agitación de NaH (60% en aceite mineral, 5.6 g, 140 mmol) en THF (350 ml) a 0°C. Después de agitar a temperatura ambiente durante 40 minutos, se añadió bromuro de bencilo (10.75 ml, 90.5 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 4 horas y se enfrió a 0°C, seguido por una adición lenta de agua (2 ml) y después AcOH al 10% en agua hasta pH = 7. La mezcla se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera y después se diluyó con bicarbonato de sodio, se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 0-10% de EtOAc en hexanos, rindió 23.8 g (76%) del compuesto del título en forma de un líquido incoloro. XH RMN (CDC13) d 0.01 (s, 3H, SiCH3) , 0.02 (s, 3H, SiCH3) , 0.85 (s, 9H, t- Bu), 3.41 (s, 3H, OCH3) , 3.60-3.72 (m, 2H, H5a, H5b) , 4.20 (dd, J = 8.7 Hz, 4.5 Hz, 1H, H3) , 4.57, 4.66 (AB, J = 12.0 Hz, 2H, Bn) , 5.22 (t, J = 1.2 Hz, 1H, Hl) , 5.38 (t, J = 1.5 Hz, 1H, H2a' ) , 5.43 (m, J = 1.2 Hz, 1H, H2b' ) , 7.23-7.37 ( , 5H, Bn) ; Anal . Cale, para C20H32O Si : C, 65.89; H, 8.85. Encontrado : C, 65.92 ; H, 9.22. EJEMPLO 6 Preparación de 3-O-bencil-d-O- (t-butildimetilsilil) -2- desoxi-2-hidroximetil-l-a-metil-D-ribof ranosa (6) A una solución en agitación de 3-0-bencil-5-0- (t-butildimetilsilil) -2-desoxi-2-metilen-l-a-metil-D-ribofuranosa (5.28 g, 14.50 mmol) bajo una atmósfera de argón, se le agregó 9-BBN (0.5M en THF, 87 ml) . La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después a 40°C durante una noche, se enfrió a temperatura ambiente y se transfirió a un matraz que contenía perborato de sodio tetrahidratado (13.39 g, 87 mmol) en agua (85 ml) y etanol (85 ml) . La mezcla resultante se agitó vigorosamente a 50°C durante 4 horas, se enfrió a 0°C, se neutralizó con AcOH a pH 8 y se concentró hasta llegar a un pequeño volumen. El volumen remanente se diluyó con agua (20 ml) y se sometió a extracción tres veces con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se lavó dos veces con salmuera, se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (1:2), produjo 5.17 g (93%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro. XH RMN (CDC13) d 0.03 (s, 6H, SiCH3) , 0.87 (s, 9H, t-butil), 2.34-2.43 (m, 1H, H2) , 3.39 (s, 3H, 0CH3), 3.48 (dd, J = 10.5 Hz, 6.0 Hz, 1H, H5a) , 3.60 (dd, J = 10.5 Hz, 3.6 Hz, 1H, H5b) , 3.88 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H2' ) , 3.98 (dd, J = 7.2 Hz, 2.7 Hz, 1H, H3) , 4.17 (m, 1H, H4) , 4.44, 4.66 (AB, J = 12.3 Hz, 2H, Bn) , 4.95 (d, J = 5.4 Hz, 1H, Hl ) , 7 .23-7 .36 (m, 5H, Bn) ; Anal . Cale . para C20H34O5Si : C, 62.79; H, 8 . 96. Encontrado : C, 62. 92 ; H, 9.21 . EJEMPLO 7 Preparación de 3-O-bencil-2-desoxi-2- (4 ,4' - dimetoxitritiloximetil) -1-a-metil-D-ribofuranosa (7) Una solución de 3-0-bencil-5-0- (t-butildimetilsilil) -2-desoxi-2-hidroximetil-l-a-metil-D-ribofuranosa (6.60 g, 17.28 mmol) y DMT-C1 (7.03 g, 20.74 mmol) en piridina anhidra (50 ml) se dejó en reposo a temperatura ambiente durante una noche y la reacción fue detenida agregando agua (8 ml) . La solución resultante se dejó en reposo durante 10 minutos y se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera tres veces, se secó (Na2S04) y se concentró para obtener el compuesto de la fórmula 9 crudo, el cual se disolvió en THF (52 ml) . Se añadió TBAF (l.OM en THF, 26 ml) y la solución resultante se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 30 minutos. El THF se evaporó y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexano (1:1), para obtener 9.28 g (94%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca. 1H RMN CDcl3) d 2.33-2.42 (m, 1H, H2) , 3.26-3.63 (ra, 7H, H5a, H5b, H2a', H2b', OCH3) , 3.79 (d, J = 1.2 Hz, 6H, DMT); 3.91 (dd, J = 7.5 Hz, 2.4 Hz, 1H, H3) , 4.13 ( , 1H, H4) , 4.41, 4.50 (AB, J = 12.9 Hz, 2H, Bn) ; 5.05 (d, J = 5.1 Hz, 1H, Hl), 6.78-6.85 (m, 4H, DMT), 7.14-7.47 (m, 14H, Bn, DMT); Anal. Cale, para C23H3807: C, 73.66; H, 6.71. Encontrado: C, 73.57; H, 6.76.

EJEMPLO 8 Preparación de 3-0-bencil-2-desoxi-2-(4,4'- dimetoxi ri iloximetil) -5-C,5-O-dideshidro-l-a-metil-D- ribofuranosa (8) A una solución en agitación de 3-0-bencil-2-desoxi-2- (4,4' -dimetoxitritiloximetil) -1-a-metil-D-ribofuranosa (9.18 g, 16.16 mmol) y DCC (10.0 g, 48.49 mmol) en DMSO anhidro (60 ml) a 10°C, se le agregó una solución de ácido trifluoroacético (0.622 ml, 8.08 mmol) y piridina (1.95 ml, 24.24 mmol) en DMSO (15 ml) . La mezcla de reacción resultante se agitó a 10°C durante 1 hora, a temperatura ambiente durante 6 horas y después se enfrió a 0°C. Después de agregar agua (8 ml) , la mezcla de reacción se agitó durante una noche y se diluyó con EtOAc. El precipitado se filtró y se lavó bien con EtOAc. El filtrado combinado se lavó con salmuera cinco veces, se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (1:1), produjo 8.26 g (90%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca. EJEMPLO 9 Preparación de 3-0-bencil-2-desoxi-2- (4,4' - dimetoxitritiloximetil) -4-C-hidroximetil-1-a-metil-D- ribofuranosa (9) A una solución en agitación de 3-0-bencil-2-desoxi-2- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -5-C, 5-0-dideshidro-1-a-metil-D-ribofuranosa (8.0 g, 14.08 mmol) y formaldehído (37% en agua, 85 ml) en dioxano (420 ml) a 0°C, se le agregó por goteo una solución acuosa de NaOH (2.0M, 210 ml) durante 15 minutos. La solución turbia resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 días hasta obtener una solución clara. Después de enfriar a 0°C, la solución se neutralizó con ácido acético al 10% hasta pH 8, se concentró hasta un pequeño volumen, se diluyó con agua (100 ml) y se sometió a extracción tres veces con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se lavó con salmuera, se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 4-5% de etanol en cloruro de metileno, produjo 8.11 g (94%) del compuesto del título en forma de una espuma blanca. 1H RMN (CDC13) d 2.46-2.57 (m, 1H, H2) , 3.23-3.73 (m, 9H, H5, H4' , H2' , OCH3) , 3.79 (d, J = 1.8 Hz, 6H, DMT), 4.14 (d, J = 6.9 Hz, 1H, H3) , 4.43, 4.47 (AB; J = 12 Hz, 2H, Bn) , 4.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H, Hl) , 6.77-6.85 (m, 4H, DMT), 7.11-7.46 (m, 14H, Bn, DMT). EJEMPLO 10 Preparación de 3-0-bencil-2-desoxi-2-hidroximetil-5-0- mesil-4-mesiloximetil-l-a-metil-D-ribofuranosa (10) A una solución en agitación de 3-0-bencil-2-desoxi-2- (4,4' -dimetoxitritiloximetil) -4-C-hidroximetil-l-a-metil-D-ribofuranosa (7.80 g, 13.0 mmol) en piridina anhidra (60 ml) a 0°C bajo una atmósfera de argón, se le agregó por goteo cloruro de metansulfonilo (3.03 ml, 39 mmol) . La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos, se enfrió a 0°C y se diluyó con agua (5 ml) . La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, se diluyó con EtOAc, se lavó tres veces con salmuera, se secó (Na2S04) y se concentró, para obtener el compuesto crudo en forma de una espuma blanca, la cual se disolvió en AcOH-agua (80:20, 400 ml) . La solución resultante se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 2 horas y se diluyó con agua (200 ml) y se concentró hasta aproximadamente una cuarta parte del volumen. Se agregó agua (100 ml) y la mezcla se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (3:1 a. 1:0) rindió 5.32 g (90%) del compuesto del título en forma de un semisólido, ? RMN (CDC13) d 2.43-2.54 (m, 1H, H2) , 3.01 (s, 3H, OMs) , 3.03 (s, 3H, OMs), 3.41 (s, 3H, OCH3) , 3.81 (d, J = 4.8 Hz, 2H, H2'), 4.01, 4.04 (AB, J = 10.5 Hz, 2H, H4' ) , 4.21 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H3), 4.30, 4.50 (AB, J = 1.8 Hz, 2H, H5) , 4.56, 4.63 (AB, J = 12.0 Hz, 2H, Bn) , 4.99 (d, J = 5.1 Hz, 1H, Hl), 7.30-7.42 (m, 5H, Bn) ; Anal. Cale, para C17H27O?0S2: C, 44.82; H, 5.97. Encontrado: C, 44.68; H, 6.00. EJEMPLO 11 Preparación de (1S,3S,4R,8S) -8-benciloxi-l-hidroximetil-3- metoxi-2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (11) A una mezcla en agitación de NaH (60% en aceite mineral, 1.83 g, 22.90 mmol) en THF anhidro (200 ml) se le agregó una solución de 3-0-bencil-2-desoxi-2-hidroximetil-5-0-mesil-4-mesiloximetil-l-a-metil-D-ribofuranosa (5.20 g, 11.45 mmol) en THF (30 ml) . La mezcla de reacción resultante se agitó a 55°C durante 42 horas y la reacción se detuvo agregando agua a 0°C. El THF se evaporó y se añadió una solución acuosa de NaOH (0.5M, 250 ml) . La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 24 horas, se enfrió a 0°C, se neutralizó con ácido clorhídrico diluido hasta pH 8, se sometió a extracción cuatro veces con cloruro de metileno. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (2:1 a 1:0), rindió 3.16 g (98%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro. XH RMN (CDC13) d 2.32 (M, 1H, H2) , 3.41 (D, J = 11.4 Hz, 1H, H4a' ) , 3.46-3.60 ( , 2H, 5H, H5, 0CH3) , 3.91 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b' ) , 3.92 (dd, J = 10.8 Hz, 2.4 Hz, 1H, H2a' ) , 4.01 (d, J = 5.4 Hz, 1H, H3) , 4.04 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H2b'), 4.58, 4.64 (AB; J = 12.0 Hz, Bn), 5.07 (d, J = 3.9 Hz, 1H, Hl) , 7.28-7.40 (m, 5H, Bn) . EJEMPLO 12 Preparación de (1R,3S,4R,8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- metoxi-2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (12) Una solución de (ÍS, 3S, 4R, 8S) -8-benciloxi-l-hidroximetil-3-metoxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (1.60 g, 5.71 mmol), anhídrido acético (1.08 ml, 11.42 mmol) y DMAP (2.09 g, 17.13 mmol) en cloruro de metileno anhidro (10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se enfrió a 0°C y se diluyó con metanol (4 ml) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos, se diluyó con cloruro de metileno, se lavó con salmuera y después con NaHC03 al 10%, se secó (?a2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo/hexanos (1:1), produjo 1.82 g (99%) del compuesto del título en forma de un jarabe incoloro. 1H RM? (CDC13) d 2.02 (s, 3H, OAc), 2.33 (m, 1H, H2) , 3.50 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4a' ) , 3.57 (s, 3H, OCH3) , 3.86-4.04 (m, 5H, H2a' , H2br, H3, H4b', H5a) , 4.14 (d, J = 12.0 Hz, 1H, H5b) , 4.50, 4.64 (AB, J = 12.0 Hz, 1H, Bn) , 5.09 (d, J = 3.9 Hz, 1H, Hl), 7.29-7.42 (m, 5H, Bn) ; Anal. Cale, para C?H2206: C, 63.34; H, 6.88. Encontrado: C, 63.41; H, 6.94. EJEMPLO 13 Preparación de (1R,3S,4R, 8S) -3-acetoxi-l-acetoximetil-8- benciloxi-2 , 6-dioxabicislo[3,2 , l]-ostano (13) A una solución en agitación de (ÍS, 3S, 4R, 8S) -8-benciloxi-l-hidroximetil-3-metoxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (600 mg, 2.14 mmol) en una mezcla de ácido acético (6.0 ml) y anhídrido acético (0.6 ml) a 0°C, se le agregó por goteo ácido sulfúrico concentrado (57 µL, 1.07 mmol). La mezcla de reacción resultante se agitó a 0°C durante 10 minutos y después a temperatura ambiente durante 2 horas. Después de enfriar a 0°C, la solución se diluyó con EtOAc, se lavó con salmuera tres veces y después con bicarbonato de sodio al 10%, se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (2:3) produjo 6.96 mg (93%) del compuesto del título (ß-anómero) y 31 mg (3%) del a-anómero, ambos en forma de un jarabe incoloro. El ß-anómero se solidificó después de reposar a temperatura ambiente durante algunos días; p.f. 55-58°C. lE RMN (CDC13) d 2.03 (s, 3H, OAc), 2.08 (s, 3H, OAc), 2.36-2.39 (m, 1H, H2) , 3.49 (d, J = 10.8 Hz, H4a' ) , 3.73 (d, J = 11.1 Hz, 2.7 Hz, 1H, H2a' ) , 3.89 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b' ) , 4.01 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H2b'), 4.03 (d, J = 9.3 Hz, 1H, H5a) , 4.14 (d, J = 5.1 Hz, 1H, H3), 4.55 (d, J = 9.6 Hz, 1H, H5b) , 4.55, 4.64 (AB; J = 11.7 Hz, 2H, Bn), 6.39 (s, 1H, Hl), 7.29-7.42 (m, 5H, Bn) ; Anal. Cale, para Ci8H2207: C, 61.70; H, 6.33. Encontrado: C, 61.74; H, 6.46. EJEMPLO 14 Preparación de (1R,3S,4R,8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (timin-l-il)-2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-ostano (14) Una mezcla de timina (189 mg, 1.5 mmol) y sulfato de amonio anhidro (15 mg) en HMDS (6 ml) , se calentó a reflujo durante una noche. Después de remover el HMDS, el residuo fue coevaporado con m-xileno anhidro, se secó al vacío durante 30 minutos y se disolvió en una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -3-acetoxi-l-acetoximetil-8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (306 mg, 0.87 mmol) en 1,2-dicloroetano (5 ml) . A esta solución en agitación, bajo una atmósfera de argón, se le añadió por goteo trimetilsililtriflato (0.38 ml) en 1,2-dicloroetano (2 ml) . La solución resultante se calentó a reflujo durante 2 horas, se enfrió a 0°C, se diluyó con cloroformo y se neutralizó con NaHC03 al 10% (10 ml) . La fase orgánica se separó y la fase acuosa se sometió a extracción dos veces con cloroformo. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cristalización en EtOAc/CH2Cl2 produjo el compuesto del título (303 mg, 83%) en forma de un sólido incoloro; p.f. 198-200°C. XH RMN (CDC13) d 1.94 (d, J = 1.2 Hz, 1H, ArCH3), 2.04 (s, 3H, OAc), 2.93 (m, 1H, H2' ) , 3.50 (dd, J = 11.8 Hz, 2.1 Hz, 1H, H2a") , 3.59 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4a") , 4.016 (d, J = 11.7 Hz, 1H, H4b") , 4.022 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5a'), 4.09 (d, J = 12.0 Hz, 1H, H2b") , 4.11 (d, J = 4.5 Hz, 1H, H3')/ 4.27 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5b' ) , 4.53, 4.70 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn) , 5.88 (d, J = 3.6 Hz, 1H, Hl'), 7.30-7.42 (m, 5H, Bn) , 7.74 (d, J = 1.5 Hz, 1H, H6) , 8.79 (s, 1H, NH) ; Anal. Cale, para C2?H24N207: C, 60.57; H, 5.81; N, 6.73. Encontrado: C, 60.55; H, 5.84; N, 6.69. EJEMPLO 15 Preparación de (1S,3S,4R,8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (timin-l-il)-2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (15) A una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (timin-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano en cloruro de metileno anhidro (3 ml) a 10°C, se le agregó tricloruro de boro (l.OM en CH2C12, 6 ml) . La mezcla de reacción resultante se agitó de una temperatura de 15°C hasta la temperatura ambiente, durante una noche, y se enfrió a 0°C. Se añadió por goteo metanol (1.5 ml) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante .15 minutos, seguido por la adición de trietilamina (2 ml) . El disolvente se evaporó y el precipitado se extrajo con acetona caliente. La solución de acetona se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 10% de metanol en cloroformo, rindió 99 mg del compuesto de la fórmula 20 en forma de una espuma blanca. La cristalización en acetona produjo 95 mg (93%) del compuesto del título en forma de un sólido incoloro; p.f. 225-226°C. XH RMN (DMSO-d6) d 1.76 (d, J = 0.9 Hz, 1H, ArCH3) , 2.45 (m, 1H, H2' ) , 3.25 (dd, J = 11.4 Hz, 2.1 Hz, 1H, H2a"), 3.32-3.52 ( , 2H, H5' ) , 3.53 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4a"), 3.72 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b") , 3.93 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H2b"), 4.16 (m, 1H, H3'), 4.84 (t, J = 6.0 Hz, 1H, OH), 5.74 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl' ) , 5.84 (d, J = 3.9 Hz, 1H, OH), 7.76 (d, J = 1.2 Hz, 1H, H6) , 11.32 (s, 1H, NH) ; MS m/z 285 (MH+) ; Anal. Cale, para C?2H?6N206: C, 50.70; H, 5.67; N, 9.85. Encontrado: C, 50.85; H, 5.68; N, 9.75. EJEMPLO 16 Preparación de (lR,3R,4R,8S)-l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (17) y (IR,3S,4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9- il) -2,6-dioxabicislo[3,2,l]-octano (16) Una mezcla de 6-clororpurina (246 mg, 1.6 mmol) y HMDS (8.0 ml) se sometió a reflujo bajo una atmósfera de argón durante 2 horas. El HDMS se evaporó y el residuo se secó al vacío durante 30 minutos y después se disolvió en una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -3-acetoxi-l-acetoximetil-8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (302 mg, 0.83 mmol) en 1, 2-dicloroetano anhidro (5.0 ml) , seguido por la adición de trimetilsililtriflato (0.38 ml, 2.25 mmol) en 1,2-dicloroetano (2.0 ml) . La solución resultante se calentó a reflujo bajo una atmósfera de argón durante 45 minutos. El trabajo posterior fue el mismo que el anteriormente descrito. La cromatografía en gel de sílice con EtOAc/hexanos (1:1) produjo (IR, 3S, 4R, 8S) -1-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3,2, l]-octano (122 mg, a-anómero) y (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (157 mg, ß-anómero), ambos en forma de un sólido incoloro. El rendimiento total fue del 75%. a-isómero: H RMN (CDC13) d 2.05 (s, 3H, OAc) , 2.89 (m, 1H, H2' ) , 3.23 (dd, J = 12.0 Hz, 2.4 Hz, 1H, H2a"), 3.72 (d, J = 11.7 Hz, H4a") , 4.09 (d, J = 12.3 Hz, 2H, H4", H5a'), 4.13 (d, J = 13.2 Hz, 1H, H2b") , 4.24 (d, J = 4.8 Hz, H3'), 4.29 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b' ) , 4.60, 4.74 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn) , 6.50 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl' ) , 7.32-7.44 (m, 5H, Bn) , 8.69 (s, 1H, H8) , 8.78 (s, 1H, H2) . ß-isómero: p.f. 124-125°C (EtOAc/hexanos); XH RMN (CDC13) d 2.05 (s, 3H, OAc), 2.90 ( , 1H, H2' ) , 3.55 (d, J = 11.1 Hz, H4a"), 3.95-4.03 (m, 2H, H2a", H4b") , 4.18-4.24 (m, 3H, H5', H2b"), 4.32 (d, J = 4.8 Hz, H3' ) , 4.47, 4.63 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn) , 6.52 ( s, 1H, Hl' ) , 7 .24-7 .35 (m, 5H, Bn) , 8 . 40 (s, 1H, H8) , 8 .72 (s, 1H, H2) ; Anal . Cale , para C2?H2?N405Cl : C, 56.70; H, 4 .76; N, 12 .59. Encontrado : C, 56.36; H, 4 .56; ?, 12 .37 . EJEMPLO 17 Preparación de (IR,3S,4R,8S) -l-acetoximetil-3- (?2- acetilguanin-9-il) -8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3,2, 1]- octano (22) Una mezcla de ?2-acetil guanina (193 mg, 1.0 mmol) y sulfato de amonio (20 mg) en piridina (1.0 ml) y HMDS (5.0 ml) , se sometió a reflujo bajo una atmósfera de argón durante 3 horas. La solución clara resultante se concentró y se coevaporó con xileno (10 ml, deshidratado con sodio) .

El residuo se secó al vacío a 50°C durante 1 hora y se disolvió en una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -3-acetoxi-l-acetoximetil-8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (175 mg, 0.5 mmol) en 1, 2-dicloroetano anhidro (5.0 ml) , seguido por la adición de trimetilsililtriflato (0.27 ml, 1.5 mmol) en 1, 2-dicloroetano (1.0 ml) . La solución resultante se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón durante 30 minutos, después se calentó a 70-75°C durante 2 horas, se enfrió a 0°C y se neutralizó con bicarbonato de sodio al 10% (10 ml) . La mezcla de reacción resultante se agitó durante 15 minutos y la fase orgánica se separó. La fase acuosa se sometió a extracción dos veces con cloroformo. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 10% de etanol en CHCl3/EtOAc (1:1), produjo el compuesto del título (72 mg, 30%) en forma de un sólido incoloro; p.f. 249°C (con descomposición, EtOAc) ? RMN (CDC13) d 2.01 (s, 3H, OAc), 2.29 (s, 3H, NAc) , 2.75 (m, 1H, H2'), 3.29 (dd, J = 11.7 Hz, 1.8 Hz, 1H, H2a") , 3.66 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4a") , 4.03 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4b"), 4.05 (d, J = 11.7 Hz, 1H, H2b") , 4.70 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5a'), 4.13 (d, J = 4.8 Hz, H3' ) , 4.23 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b'), 4.53, 4.67 (7?B, J = 11.7 Hz, 2H, Bn) , 6.17 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl'), 7.28-7.40 (m, 5H, Bn) , 8.32 (s, 1H, H8(, 9.80 (s, 1H, NH) , 12.12 (s, 1H, NH) . EJEMPLO 18 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -3- (adenin-9-il) -8-hidroxi-l- hidroxime il-2 , 6-dioxabisiclo[3,2, l]-octano (18) Una solución de (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (100 mg, 0.225 mmol) en una mezcla de dioxano (20 ml) e hidróxido de amonio acuoso al 30% (20 ml) , se calentó en una bomba de acero a 100°C durante 16 horas. Los disolventes se evaporaron y el residuo se disolvió en metanol, seguido por la adición de hidróxido de paladio al 20% en carbón (~ 50% de agua, 3 x 250 mg, agregado cada día) . La hidrogenólisis se llevó a cabo a temperatura ambiente bajo 55 psi de hidrógeno durante 4 días. El catalizador se filtró y se lavó con metanol. Las soluciones metanólicas se combinaron y el combinado se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con metanol al 20% en cloruro de metileno, para obtener el compuesto del título (39 mg, 59%) en forma de un sólido incoloro, el cual fue recristalizado en metanol; p.f. 250°C (con descomposición). XH RMN (DMSO-d6 + D20) : d 2.53 (m, 1H, H2' ) , 3.33 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H2a") , 3.40 (D, J = 12.3 Hz, 1H, H5a' ) , 3.50 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5b'), 3.69-3.76 ( , 2H, H2b", H4a") , 4.05 (d, J = 10.2 Hz, H4b") , 4.445 (d, J = 5. 1 Hz, 1H, H3' ) , 6.26 (s, 1H, Hl' ) , 7 .28 (m, 2H, NH2) , 8 . 12 (s, 1H, H2 ) ; MS : 294 (MH+ ) ; Anal . Cale . para C?2H?5N504 : C, 49. 14 ; H, 5. 16; N, 23 . 88 .

Encontrado : C, 49.01; H, 4.97; N, 23.92. EJEMPLO 19 Preparación de (1S,3S,4R,8S) -3- (adenin-9-il) -8-hidroxi-l- hidroxime il-2,6-dioxabicislo[3,2, l]-ostano (19) Se siguió un procedimiento similar al descrito en el Ejemplo 18, obteniéndose el compuesto del título (43 mg, 65%) en forma de un sólido incoloro (IR, 3S, 4R, 8S) -1-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (100 mg) . XH RMN (CD30D) : 5 2.71 (m, 1H, H2'), 3.13 (dd, J = 11.7 Hz, 2.4 Hz, 1H, H2a") , 3.57 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5a' ) , 3.64 (d, J = 11.1 Hz, H4a"), 3.68 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b' ) , 3.96 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b"), 4.14 (d, J = 11.7 Hz, 1H, H2b") , 6.39 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl'), 8.04 (s, 1H, H8) , 8.44 (s, 1H, H2) ; MS m/z 294 (MH+) . EJEMPLO 20 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (hipoxantin-9-il) -2 , 6-dioxabiciclo[3,2 , l]-ostano (20) A una solución de (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3,2, 1]-octano (150 mg, 0.34 mmol) y mercaptoetanol (0.19 ml, 2.7 mmol) en metanol (20 ml) se le agregó metóxido de sodio (0.37 ml de una solución 5.4M en metanol, 2.0 mmol). La solución resultante se calentó a reflujo durante 6 horas, se enfrió a temperatura ambiente, se neutralizó con AcOH al 10% hasta pH 7. El metanol se evaporó y el residuo se diluyó con NaHC03 l.OM (15 ml) , seguido por una extracción con metanol al 10% en cloroformo hasta que la fase acuosa no contuviera producto. Las fases orgánicas se combinaron y el combinado se secó (Na2S0) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 10-15% de metanol en cloroformo, rindió 109 mg (84%) del derivado inosina (no mostrado) en forma de un sólido incoloro, del cual 100 mg (0.26 mmol) se disolvieron en metanol, seguido por la adición de hidróxido de paladio al 20% en carbón (50% de agua, 600 mg) . La hidrogenólisis se llevó a cabo a temperatura ambiente bajo 50 psi de hidrógeno durante 3 días. El catalizador se filtró y se lavó con metanol. La solución metanólica combinada se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con 20-25% de metanol en cloruro de metileno, para obtener 61 mg (61%) del compuesto del título en forma de un sólido incoloro, el cual se cristalizó en metanol/acetato de etilo; p.f. 228°C (con descomposición). 1H RMN DMSO-d6) : d 2.52 (m, 1H, H2'), 3.30-3.55 (m, 3H, H5' , H4a") , 3.69 (dd, J = 11.1 Hz, 2.7 Hz, 1H, H2a"), 3.73 (d, J = 10.8 Hz, H4b") , 4.05 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H2b"), 4.40 (m, 1H, H2b") , 5.03 (t, J = 6.0 Hz, 1H, OH), 5.74 (d, J = 4.2 Hz, 1H, OH), 6.24 (s, 1H, Hl'), 8.06 (s, 1H, H8), 8.30 (s, 1H, H2) , 12.40 (s, 1H, NH) ; MS m/z 295 (MH+) . EJEMPLO 21 Preparación de (1S,3S,4R,8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (hipoxantin-9-il) -2 , 6-dioxabiciclo[3,2 , l]-ostano (21) A una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (6-cloropurin-9-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (120 mg, 0.27 mmol), mercaptoetanol (0.15 ml, 2.1 mmol) en metanol (16 ml) se le agregó metóxido de sodio (1.62 mmol, 0.30 ml de una solución 5.4M en metanol). Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 20, obteniéndose 37 mg (47%) del compuesto del título en forma de un sólido higroscópico. ""? RMN DMSO-dß) d 2.52 (m, 1H, H2'), 3.06 (dd, J = 11.7 Hz, 2.4 Hz, 1H, H2a") , 3.34-3.53 ( , 2H, H5' ) , 3.56 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4a") , 3.79 (d, J = 11.4 Hz, 1H; H4b") , 3.98 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H2b"), 4.31 (d, J = 4.5 Hz, 1H, H3' ) , 4.89 (br, 1H, OH), 5.99 (br, 1H, OH), 6.28 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl' ) , 8.03 (s, 1H, H8), 8.27 (s, 1H, H2) , 12.30 (br, 1H, ?H) . EJEMPLO 22 Preparación de (1S,3S,4R,8S) -3- (guanin-9-il) -8- hidroxi-1-hidroximetil-2 , 6-dioxabiciclo[3,2 , l]-octano (23) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 18, obteniéndose el compuesto del título (41 mg, 66% ) en forma de un sólido blancuzco (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-3- (?2-acetilguanin-9-il) -8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (100 mg) . XH RM? DMSO-d6 + D20) d 2.42 (m, 1H, H2' ) , 3.15 (dd, J = 11.4 Hz, 2.1 Hz, 1H, H2a"), 3.34 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H5a' ) , 3.47 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5b'), 3.51 (d, J = 12.0 Hz, 1H, H4a") , 3.77 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4b") , 3.98 (d, J = 11.7 Hz, 1H, H2b") , 4.23 (d, J = 4.8 Hz, 1H, H3'), 4.80 (br, 1H, OH), 5.90 (br, 1H, OH), 6.05 (d, J = 4.2 Hz, 1H, Hl' ) , 6.52 (br, 2H, NH2) , 7.93 (s, 1H, H8), 12.30 (br, 1H, NH) ; MS m/z 310 (MH+) . EJEMPLO 23 Preparación de (1R,3R,4R,8S) -l-asetoximetil-8-benciloxi-3- (timin-1-il) -2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (24) Para esta reacción se siguió el mismo procedimiento que el descrito para el Ejemplo 14, excepto que el reactivo de acoplamiento fue cloruro de estaño (IV) (0.45 ml) y el sustrato de azúcar fue (IR, 3S, 4R, 8S) -1-acetoximetil-8-benciloxi-3-metoxi-2; 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (202 mg, 0.63 mmol). La cromatografía en gel de sílice con 5% de EtOH en CH2C12, produjo una mezcla (233 mg, 89%) del compuesto del título (ß-anómero) y su a-anómero (relación de ß:a, ~4:1) en forma de un sólido incoloro. 1H RMN (CDC13) de ß-anómero (del espectro de una mezcla de los a- y ß-anómeros) d 1.93 (d, J = 0.9 Hz, 1H ArCH3) , 2.05 (s, 3H, OAc), 2.66 (m, 1H, H2' ) , 3.48 (d, J = 11.1 Hz, H4a"), 3.86-4.12 (m, 5H, H2a", H2b", H3' , H4b", H5a'), 4.26 (d, J = 12.6 Hz, H5b' ) , 4.44, 4.64 (AB, J = 11.4 Hz, 2H, Bn) , 6.06 (s, 1H, Hl' ) , 7.26-7.42 ( , 5H, Bn) , 7.59 (d, J = 1.2 Hz, 1H, H6) , 8.94 (s, 1H, NH) . EJEMPLO 24 Preparación de (IR,3R,4R,8S) -l-asetoximetil-8-benciloxi-3- (uracil-1-il) -2,6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (25) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 23, obteniéndose, después de la cromatografía en gel de sílice con 5% de EtOH en cloruro de metileno, una mezcla (267 mg, 87%) del compuesto del título y su a-anómero (relación de ß-a, ~9:1) en forma de un sólido incoloro (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3-metoxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (230 mg, 0.71 mmol) y uracilo sililado (2.0 mmol). El compuesto del título (ß-anómero) fue parcialmente separado por cromatografía en gel de sílice; p.f. 145-147°C (EtQAc/hexanos) . XH RMN (CDC13) d 2.02 (s, 3H, OAc), 2.67 (m, 1H, H2' ) , 3.49 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4a"), 3.86-3.97 (m, 3H, H2a", H3' , H4b") , 4.08 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5a'), 4.09 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H2b"), 4.25 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b' ) , 4.44, 4.64 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn), 6.05 (s, 1H, Hl' ) , 7.26-7.40 (m, 5H, Bn) , 5.69 (d, J = 8.1 Hz, 1H, H5), 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H, H6) , 8.92 (s, 1H, NH) ; Anal. Cale, para C20H22N2O7: C, 59.69; H, 5.51; N, 6.96. Encontrado: C, 59.45; H, 5.56; N, 6.91. EJEMPLO 25 Preparación de (1R,3R,4R,8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (N^-benzoilcitosin-l-il) -2,6-dioxabicislo[3,2, l]-octano (26) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 23, obteniéndose, después de una cromatografía en gel de sílice con 5% de EtOH en cloruro de metileno, 910 mg (90%) del compuesto del título (ß-anómero) en forma de un sólido incoloro, a partir de la reacción de (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3-metoxi-2, 6-dioxabiciclo[3,2, l]-octano (645 mg, 2.0 mmol) con N4-benzoilcitosina sililada (4.0 mmol), p.f. 173-174°C (EtQAc). 1H RM? (CDC13) d 2.07 (s, 3H, OAc), 2.83 ( , 1H, H2'), 3.51 (d, J = 11.1 Hz, H4a") , 3.86 (d, J = 5.4 Hz, 1H, H3'), 3.97 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b") , 3.99-4.13 (m, 3H, H2a", H2b", H5a' ) , 4.27 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b' ) , 4.38, 4.61 (AB, J = 11.4 Hz, 2H, Bn) , 6.15 (s, 1H, Hl' ) , 7.24-7.38 ( , 5H, Bn) , 7.50-7.66 (m, 4H, H5, Bz) , 7.90 (m, 2H, Bz), 8.28 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H6) , 8.84 (br, 1H, ?H) ; Anal. cale, para C27H2?307: C, 64.15; H, 5.38; ?, 8.31. Encontrado: C, 64.10; H, 5.20; ?, 8.43. EJEMPLO 26 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (timin-1-il) -2,6-dioxabiciclo[3,2, l]-octano (27) A una solución de la mezcla de (IR, 3R, 4R, 8S) -1-acetoximetil-8-benciloxi-3- (timin-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano y su a-anómero (~4:1, 200 mg, 0.48 mmol) en cloruro de metileno anhidro (4 ml) a 0°C, se le agregó tricloruro de boro (l.OM en CH2C12, 8 ml) . La mezcla de reacción resultante se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas, a 15°C durante una noche y después se enfrió a 0°C. Se añadió metanol (5.0 ml) por goteo, seguido por la adición de NaOMe l.OM en MeOH, hasta pH 8. La solución se separó y el precipitado se sometió a extracción con metanol al 20% en cloruro de metileno. El filtrado se combinó y se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 10-15% de metanol en acetato de etilo, produjo el compuesto del título (78 mg) , una mezcla del compuesto del título y su a-anómero (24 mg) y el a-anómero (23 mg) , todos en forma de sólidos incoloros. El rendimiento total fue del 91%. La cristalización del compuesto del título en metanol/acetato de etilo, produjo el sólido cristalino; p.f. 217-218°C. XH RMN DMS0-d6) : d 1.75 (d, J = 1.2 Hz, 1H, ArCH3), 2.24 ( , 1H, H2' ) , 3.20 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4a"), 3.33-3.58 ( , 3H, H2a", H5' ) , 3.66 (d, J = 10.8 Hz, H4b"), 3.97 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H2b") , 4.14 (m, 1H, H3' ) , 5.24 (t, J = 5.1 Hz, 1H, OH), 5.67 (d, J = 2.4 Hz, 1H, OH), 5.82 (s, 1H, Hl'), 7.95 (d, J = 0.9 Hz, 1H, H6) , 11.32 (s, 1H, NH) ; MS m/z 285 (MH+) ; Anal. cale, para Ci2H16N2?6: C, 50.70; H, 5.67; N, 9.85. Encontrado: C, 50.65; H, 5.57; N, 9.73. EJEMPLO 27 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (uracil-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano (28) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 26, obteniéndose, después de una cromatografía en gel de sílice con metanol al 10% en cloruro de metileno, 110 mg (76%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco a partir de (IR, 3R, 4R, 8S) -1-acetoximetil-8-benciloxi-3- (uracil-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (215 mg, 0.53 mmol). El compuesto del título estaba contaminado con una pequeña cantidad de su a-anómero. El compuesto del título puro se obtuvo mediante recristalización en acetona/acetato de etilo; p.f. 218-219°C. XH RMN (acetona-d6 d 2.42 (m, 1H, H2'), 3.27 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4a") , 3.58-3.72 (m, 3H, H2a", H5'), 3.83 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4b") , 4.13 (d, J = 10.5 Hz, 1H, HH2b"), 4.27 (t, J = 5.1 Hz, lH, OH), 4.42 ( , 1H, H30), 4.88 (d, J = 3.9 Hz, 1H, OH), 5.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H5) , 5.95 (s, 1H, Hl' ) , 8.17 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H6) , 10.02 (s, 1H, NH) ; MS m/z 271 (MH+) ; Anal . cale, para CnH14N206 : C, 48 . 89; H, 5.22 ; N, 10.37 . Encontrado : C, 48 . 60; H, 5. 64 ; N, 10.21 . EJEMPLO 28 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -3-(citosin-l-il)-8-hidroxi-l- hidroximetil-2,6-dioxabiciclo[3,2 , l]-octano (30) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 26, obteniéndose, después de una cromatografía en gel de sílice con MeOH al 10% en cloruro de metileno, a partir de (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3- (N4-benzoilcitosin-l-il) -2, 6-dioxabiciclo[3,2,l]-octano, 364 mg (65%) de (1S, 3R, 4R, 8S) -3- (N^-benzoilcitosin-l-il) -8-hidroxi-l-hidroximetil-2, 6-dioxabiciclo[3,2, l]-octano (760 mg) , de los cuales 120 mg (0.32 mmol) se disolvieron en una solución saturada de amoniaco en metanol y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. El amoniaco y el metanol fueron evaporados y el residuo se disolvió en agua, seguido por una extracción completa con cloroformo (5 veces) y después con tolueno (2 veces) . El agua fue evaporada y la cristalización en metanol produjo 62 mg del compuesto del título (45 mg del sólido cristalino y 17 mg de un sólido no cristalino); p.f. 250°C (con descomposición). ? RMN (CD30D) d 2.33 ( , 1H, H2' ) , 3.31 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4a"), 3.57 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5a' ) , 3.65 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b'), 3.78 (dd, J = 10.5 Hz, 2.7 Hz, H2a") , 3.84 (d, J = 11.1 Hz, 1H, H4b"), 4.14 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H2b"), 4.20 (d, J = 55.1 Hz, 1H, H3' ) , 5.86 (d, J = 7.5 Hz, 1H, H5), 5.96 (s, 1H, Hl' ) , 8.22 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H&) ; MS: m/z 270 (MH+) ; Anal. cale, para C??H?5N305: C, 49.07; H, 5.62; N, 15.61. Encontrado: C, 48.93; H, 5.55; N, 15.64. De manera similar, se preparó el compuesto (ÍS, 3R, 4R, 8S) -3- (N4-acetilcitosin-l-il) -8-hidroxi-l-hidroximetil-2, 6-dioxabiciclo[3,2, l]-octano. Método alternativo. Una mezcla de (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (uracil-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (170 mg, 0.63 mmol), anhídrido acético (2.16 ml, 20.1 mol) y piridina (0.29 ml, 3.5 mmol) en DMF anhidra (2.5 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche, se diluyó con cloruro de metileno, se lavó con salmuera y con NaHC03 al 10%, se secó (Na2S04) , y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con acetato de etilo/hexanos (2:1) produjo 117 mg (77%) del derivado 3' , 5'-diacetilo del compuesto (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-acetoxi-l-cetoximetil-3- (uracil-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano . El (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-acetoxi-l-cetoximetil-3- (uracil-1-il) -2, 6-dioxabiciclo-[3, 2, l]-octano (175 mg, 0.58 mmol) se disolvió en piridina anhidra (1.5 ml) y la solución resultante se enfrió a 0°C bajo una atmósfera de argón, seguido por la adición de diclorofosfato de 4-clorofenilo (0.29 ml, 1.75 mmol). La solución resultante se calentó hasta la temperatura ambiente y se transfirió a un frasco con tapa conteniendo 1,2, 4-triazol (120 mg, 1.75 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 días, se diluyó con CH2C12, se lavó con salmuera y con NaHC03 al 5%, se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en dioxano (7 ml) e hidróxido de amonio al 30% (10 ml) . La solución se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 16 horas y los disolventes se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice con Et3N/MeOH/CHCl3 (5:30:65), para obtener 74 mg (55%) del compuesto del título en forma de un sólido ligeramente amarillo. EJEMPLO 29 Preparación de (IR,3R,4R, 8S) -l-acetoximetil-3- (N2- acetilguanin-7-il) -8-benciloxi-2,6-dioxabiciclo[3,2,1]- octano (31) La base sililada de la N2-acetilguanina (386 mg, 2.0 mmol) se preparó de conformidad con el procedimiento descrito en el Ejemplo 17 y se disolvió en una solución de (IR, 3S, 4R, 8S) -l-acetoximetil-8-benciloxi-3-metoxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (477 mg, 1.48 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro (10 ml) , seguido por la adición de cloruro de estaño (IV) (0.75 ml) en 1, 2-dicloroetano (2.0 ml) . La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas, después a 70°C durante una noche y se enfrió a 0°C.

La mezcla se neutralizó con carbonato de sodio 2.0M, se filtró a través de celita y se sometió a extracción con cloroformo. El filtrado combinado se secó (Na2S04) y se concentró a sequedad. La cromatografía en gel de sílice con 5% de EtOH en cloroformo rindió 297 mg (42%) del compuesto del título, 72 mg (10%) del ß-anómero N9-acoplado del compuesto del título y 46 mg (6%) del a-anómero N9-acoplado, todos ellos en forma de sólidos blancos. Compuesto del título: p.f. 176-178°C (CH3C1/EtOAC) . XH RMN (CDC13) d 2.09 (s, 3H, OAc), 2.40 (s, 3H, NAc) , 2.78 (m, 1H, H2'), 3.53 (d, J = 11.4 Hz, 1H, H4a") , 3.99 (d, J = 11.1 Hz, H4b"), 4.03-4.18 (m, 4H, H2a", H2b", H3',H5a'), 4.26 (d, J = 12.6 Hz, 1H, H5b' ) , 4.39, 4.58 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn), 6.62 (s, 1H, Hl' ) , 7.22-7.40 ( , 5H, Bn) , 8.21 (s, 1H, H8), 10.60 (s, 1H, NH) , 12.34 (s, 1H, NH) ; Anal, cale, para C23H251N5?8: C, 55.31; H, 5.05; N, 14.02. Encontrado: C, 55.35; H, 4.83; N, 13.80. EJEMPLO 30 Preparación de (IR,3R,4R, 8S) -l-acetoximetil-3- (N2- asetilguanin-9-il) -8-benciloxi-2 , 6-dioxabiciclo[3,2, 1]- octano (32) La misma cantidad de la N2-acetilguanina sililada que la descrita para el Ejemplo 29, se disolvió en una solución de (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-3- (N2-acetilguanin-7-il) -8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (370 mg, 0.76 mmol) en 1, 2-dicloroetano anhidro (10 ml) y se agregó trimetilsililtriflato (0.54 ml, 3.0 mmol) en 1,2-dicloroetano (3 ml) . La solución resultante se calentó a reflujo durante una noche. Se agregó TMSOTf adicional (0.54 ml) y la mezcla se sometió a reflujo durante 3 días más. Se realizó el mismo trabajo posterior que el descrito para el Ejemplo 29, obteniéndose, después de una cromatografía en gel de sílice con 5% de etanol en cloroformo, 104 mg (28%) de la materia prima intacta, 91 mg (25%) del compuesto del título y 80 mg (22%) del a-anómero del compuesto del título, todos ellos en forma de sólidos blancos. Compuesto .del título: p.f. 128-131°C (CH3Cl/EtOAc) . XH RMN (CDC13) d 2.02 (s, 3H, OAc), 2.30 (s, 3H, NAc) , 2.67 (m, 1H, H2' ) , 3.50 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4a") , 3.78 (dd, J = 10.8 Hz, 2.7 Hz, 1H, H2a") , 3.99 (d, J = 10.8 Hz, H4b"), 4.12 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5a' ) , 4.14 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H2b"), 4.27 (d, J = 12.3 Hz, 1H, H5b' ) , 4.33 (d, J = 5.1 Hz, 1H, H3' ) , 4.49, 4.62 (AB, J = 11.7 Hz, 2H, Bn), 6.25 (s, 1H, Hl' ) , 7.26-7.38 (m, 5H, Bn) , 7.83 (s, 1H, H8), 9.0 (s, 1H, NH) , 11.95 (s, 1H, NH) ; MS: m/z 310 (MH+) ; Anal. cale, para C23H25N508: C, 55.31; H, 5.05; N, 14.02. Encontrado: C, 55.70; H, 5.00; N, 13.95. EJEMPLO 31 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -3-(guanin-9-il) -8-hidroxi-l- hidroximetil-2 , 6-dioxabiciclo[3 , 2 , l]-octano (33) Se siguió un procedimiento similar al descrito para el Ejemplo 22, obteniéndose, después de una cromatografía, 52 mg (45%) del compuesto del título en forma de un sólido incoloro (IR, 3R, 4R, 8S) -l-acetoximetil-3- (N2-acetilguanin-9-il) -8-benciloxi-2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (180 mg) . La cristalización en agua/etanol (9:1) rindió un sólido cristalino; p.f. 258°C (con descomposición). XH RMN DMSO): d 2.45 (m, 1H, H2' ) , 3.31 (d, J = 10.8 Hz, 1H, H4a"), 3.36-3.50 (m, 2H, H5a' , H5b' ) , 3.60 (dd, J = 10.2 Hz, 2.7 Hz, 1H, H2a") , 3.1 (d, J = 11.1 Hz, H4b"), 4.03 (d, J = 10.5 Hz, 1H, H2b") , 4.36 (m, 1H, H3'), 4.95 (t, J = 5.7 Hz, 1H, OH), 5.70 (d, J = 3.9 Hz, 1H, OH), 6.06 (s, 1H, Hl' ) , 6.55 (br, 2H, NH2) , 7.90 (s, 1H, H8), 10.68 (s, 1H, NH) ; MS m/z 310 (MH+) . EJEMPLO 32 Preparación de (1S,3R,4R,8S) -8-hidroxi-l- (4,4' - dimetoxitritiloximetil) -3- (N*-acetilcitosinil) -2 , 6- dioxabiciclo[3,2,l]-octano (35) Una solución de (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-l-hidroximetil-3- (N-acetilcitosinil) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, 1]-octano (200 mg, 0.64 mmol) y cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (548 mg, 0.61 mmol) en piridina anhidra (7 ml) se dejó. en reposo a temperatura ambiente durante una noche, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con salmuera y con NaHC03 al 10%, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró. La cromatografía en gel de sílice con 10% de etanol en cloroformo, rindió 342 mg (87%) del compuesto del título en forma de una espuma incolora. De manera similar, se prepararon (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-1- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -3- (N4-benzoilcitosin-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (36) y (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-l- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -3-(timinil) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (34) . EJEMPLO 33 Preparación de 8-0- (2-sianoetil-N,N- diisopropilfosforamidita) de (1S,3R,4R,8S) -8-hidroxi-l- (4,4' -dimetoxitritiloximetil) -3- (l^-acetilcitosinil) -2,6- dioxabiciclo[3,2 , l]-octano (38) A una solución en agitación de (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-1- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -3- (N4-acetilcitosinil) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (320 mg, 0.52 mmol) y diisopropiletilamina (0.36 ml, 2.08 mmol) en diclorometano anhidro (6 ml) a 0°C bajo una atmósfera de argón, se le agregó por goteo 2-cianoetil-N, N-diisopropilclorofosforamidita (0.23 ml, 1.04 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, se enfrió con hielo, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHCÜ3 al 10% frío, se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a temperatura ambiente. La cromatografía en gel de sílice con 5% de trietilamina y 5% de acetona en cloruro de metileno, rindió 376 mg (89%) del compuesto del título en forma de una espuma incolora. De manera similar se prepararon 8-0- (2-cianoetil- N,N-diisopropilfosforamidita) de (ÍS, 3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-l- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -3- (N4-benzoilcitosin-l-il) -2, 6-dioxabicicilo[3,2, l]-octano (39) y 8-0- (2-cianoetil-N,N-diisopropilfoforamidita) de (1S,3R, 4R, 8S) -8-hidroxi-l- (4, 4' -dimetoxitritiloximetil) -3- (timin-1-il) -2, 6-dioxabiciclo[3, 2, l]-octano (37). EJEMPLO 34 Preparación de oligonucleótidos conteniendo 2,4- biciclonucleótidos Este ejemplo ilustra el uso de las fosforamiditas de biciclonucleósido de las fórmulas 37-39 para la síntesis de oligonucleótidos conteniendo los biciclonucleósidos con puente en posición 2'-C,4'-C. Los oligonucleótidos de este ejemplo fueron sintetizados utilizando el método de la fosforamidita. Los oligonucleótidos modificados se sintetizaron mediante un procedimiento estándar (un protocolo para un equipo ABl 394 Synthesizer de Perkin-Elmer, 1994) excepto que se utilizaron una solución más concentrada y un tiempo de acoplamiento más prolongado.

Las soluciones para las fosforamiditas modificadas fueron 0.13M; es decir, 30% más concentradas que aquellas para las fosforamiditas no modificadas (0.1M) . Se utilizó un tiempo de acoplamiento de 10 minutos para las fosforamiditas modificadas y de 5 minutos para las fosforamiditas no modificadas. Los rendimientos de los acoplamientos para las fosforamiditas modificadas son comparables a los de las no modificadas (98-99%) . Los ODN modificados fueron purificados por HPLC de fase reversa y caracterizados por espectrometría de masas . Las siguientes secuencias sintetizadas se listan como ejemplos . 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTtC 3, S'-díATCTCTCCGCTTCCTTT -S' S'-dCATCTCTCCGCpCCTTTC)-^ S'- íATCTCTCCGCnTCCpTC)- S^CATCTCTCCGCITCCTrTQ-T 5,-d(CTrCCTGTC GATGGCTTC •3, S^CITCCTGTCTGATGGCITQ-T 5,-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC 3, 5,-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC>3' A, C, G y T = desoxirribonucleósido no modificado T = timidina con puente en posición 2' , 4' -C C = desoxicitidina con puente en posición 2' , 4' -C EJEMPLO 35 Propiedades de hibridación de oligonucleótidos que contienen los bisiclonucleótidos con puente en posición 2 ' - C,4'-C La hibridación de los oligonucleótidos modificados al ADN y ARN complementarios se estudió a través de mediciones de fusión termodinámica (Wang et al. Nucleosides Nucleotides 1997, 16, 445) . Como puede observarse en la Tabla 1, las modificaciones intensifican la hibridación al ARN de manera significativa. Para las secuencias que contienen la timidina bicíclica T, los incrementos de los valores Tm están en el rango de 2.2-3.3 grados por modificación. Las secuencias que contienen la citidina bicíclica C también tienen valores Tm más altos en comparación con los oligonucleótidos no modificados, 2.4 grados más altos por modificación para la secuencia 4 y 1.9° más alto por modificación para la secuencia 5. La secuencia 12 que contiene un nucleósido que no encaja (G en medio de la secuencia fue reemplazado por T) tiene un valor Tm once grados más bajo que la secuencia 10, lo cual revela la especificidad de secuencia. Para las secuencias en las cuales toda las T y C fueron reemplazadas por T y C, los valores Tm (>90°) se incrementaron todavía más, de modo que no fue posible obtener los valores exactos con el sistema de medición.

Tabla 1. Datos de hibridación de oligonusleótidos que contienen biciclonucleósidos con puente en posición 2 "- C,4'-C Tm ?TÍG? Secuencia °C/Mod. 1. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' 64.4 2. 5,-r ATCrcp,CCGCTTCCTTTC)-3, 78.1 +2.8 3. 5,- (ATCTC^CCGCTTCCTr^C>-3, -82 +2.2 4. S'- CATCTCTCCGCTTCCHTrC)^ 71.7 +2.4 5. 5,- (ATC CTCCGCTTCCTTTC)-3• 77.5 +1.9 6. 5'-d(ATCTCrCCGCTTCCTTTC 3' >90 7. 5'-d(CTrCCTGTCTGATGGCnTC)-3' 63.0 8. 5,-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3, 69.5 +3.3 10. 5,-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3, 81.4 +2.3 11. 5'-d(CTtCCTGTCTGATGGCtTC)-3* >90 12. 5 d(CTTCC^GTCr^TATGGCTTC 3• 70.3 T = timidina con puente en posición 2',4'-C, C = citidina con puente en posición 2',4'-C. Las muestras para las mediciones de Tm contenían 2.0 µM de los oligonucleótidos modificados y 2.0 µM ya sea de ADN o de ARN complementario en una solución reguladora (fosfato de sodio 10 mM, AEDT O.lmM y cloruro de sodio 0.1M, pH 7.0).

Así pues, se han descrito las modificaciones específicas y aplicaciones mostradas y los métodos para producir los nuevos nucleósidos y oligonucleótidos con porciones de azúcar bicíclico. Sin embargo, debe ser evidente para los técnicos en la materia que son posibles numerosas modificaciones además de las ya descritas, sin apartarse de los conceptos inventivos de la presente. Por lo tanto, la materia objeto inventiva no esta restringida excepto por el espíritu de las reivindicaciones anexas . Además, al interpretar la descripción y las reivindicaciones, todos los términos deben ser interpretados de la manera más amplia posible concordante con el contexto. En particular, los términos "comprende" y "comprendiendo" deben interpretarse como que se refieren a elementos, componentes o etapas, de manera no exclusiva, lo cual indica que los elementos, componentes o etapas referidos pueden estar presentes o pueden ser utilizados o combinados con otros elementos, componentes o etapas que no están referidos expresamente. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. )

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un compuesto que tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque X, Y y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste de O, S, CH2, NR, C=0, C=CH2 o nada, en donde R se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, acilo; Ri se selecciona del grupo que consiste de adenina, citosina, guanina, hipoxantina, uracilo, timina, heterociclos, H, OCH3, OAc, halógeno, sulfonato; R2, R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OP(NiPr2)0(CH2)2CN, OP03H, difosfato, trifosfato; R2 y R3 juntos pueden ser un grupo PhCH02, TIPDS02 ó DTBS02.
2. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X es oxígeno, Y es 0, S, NH o metileno; Z es metileno.
3. 3. Un oligonucleótido caracterizado porque comprende cuando menos un monómero de conformidad con la reivindicación 1.
4. 4. Un oligonucleótido caracterizado porque comprende cuando menos un monómero de conformidad con la reivindicación 2.
5. 5. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende: un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición farmacéutica es una composición antiviral.
6. 6. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la composición antiviral tiene actividad contra un virus que se selecciona del grupo que consiste del virus VIH y del virus VBH.
7. 7. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la composición antiviral tiene actividad contra el virus VIH.
8. 8. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la composición antiviral tiene actividad contra el virus VIH.