UA61997C2

UA61997C2 - Nucleosides with bicyclic sugar constituent, oligonucleotide and antiviral pharmaceutical composition

Info

Publication number: UA61997C2
Application number: UA2000116545A
Authority: UA
Original assignee: Icn Pharmaceuticals
Priority date: 1998-05-26
Filing date: 1999-05-24
Publication date: 2003-12-15
Also published as: BR9911596A; EP1082012A4; SI20474A; CN1311630A; AU757724B2; JP2002516256A; ZA200006315B; YU73600A; WO1999060855A1; EP1082012A1; HUP0102152A3; MXPA00011473A; RU2211223C2; IL139420A0; AU4010099A; HRP20000751A2; SK17432000A3; NO20005938L; NZ507913A; CA2333380A1

Description

Опис винаходу

Нуклеозидні та нуклеотидні аналоги давно застосовують як фармацевтичні інгредієнти проти численних 2 вірусів та видів раку. У теперішній час ряд нуклеозидних та нуклеотидних аналогів випробують у клінічних умовах для лікування декількох захворювань.

У клітині нуклеозиди та нуклеотиди фосфорилюються або далі фосфорилюються до відповідних нуклеозидних трифосфатів. Нуклеозидні трифосфати є інгібіторами ДНК- та РНК-полімераз. Нуклеозидні трифосфати також можна включати у ДНК або РНК, що стає перешкодою для подовження ДНК або РНК. 70 Активні нуклеозидні аналоги взагалі легко фосфорилюються у клітині - мішені. Відповідні нуклеозидні трифосфати мають високий афінітет до каталітичних ділянок полімераз та конкурують з природними нуклеозидними трифосфатами як субстрат полімераз.

Певні нуклеозидні аналоги діють на нуклеозидному або монофосфатному рівні Однією групою перспективних нуклеозидних аналогів є нуклеозиди із конформаційно замкненими цукровими складовими. 12 Повідомлялося, що певні конформаційно замкнені карбоциклічні нуклеозидні аналоги демонстрували сильну активність проти НСММ, НеМ(вірусу простого герпесу) та ЕВМ(вірусу Епштейна-Барда) (бідами еї а).

Мисіеовідез Мисіеоїйдез 1996, 15, 235 - 250; Магдцел ей а). У. Мед. Спет. 1996, 39, 3739 - 3747)

Повідомлялося, що конформаційно замкнений карбоциклічний АТ 5'-трифосфат є рівносильним інгібітором зворотної транскриптази НІМ(ВІЛ) (Магднез еї а). 9. Ат. Спет. ос. 1998, 120, 2780 - 2789). Також приготували інші нуклеозиди з біциклічними цукровими складовими, проте у них не визначили ніякої активності або про активність не повідомлялося |Спао еї а). Тейапедгооп 1997, 53, 1957 - 1970; ОКаре еї аї. Теїігапедгоп ей. 1989, 30, 2203 - 2206, Нопо, еї! а). Текгапедгоп І ей. 1998, 39, 225 - 228).

Очікується, що сприятливі конформаційно замкнені нуклеозиди позитивно впливатимуть на антисмислові олігонуклеотиди. Олігонуклеотиди, як можливі антисмислові терапевтичні засоби, визначили та досліджували с протягом двох десятиріч. Олігонуклеотиди є здатними формувати подвійну або потрійну спіраль з Ге) комплементарною ДНК або РНК та мають здатність уціляти специфічні послідовності у вірусному та раковому геномі. Специфічне зв'язування олігонуклеотидів з мішенями ДНК або РНК, які є предметом зацікавленості, може інактивувати функцію, пов'язану з ДНК або РНК, таку як реплікація, транскрипція та трансляція. Отже, можна припинити вірусні цикли або раковий процес, не впливаючи при цьому на нормальні цикли клітин. -

Через те, що природні олігонуклеотиди є лабільними до клітинних та зовнішньоклітинних нуклеаз, багато Фд) зусиль докладали стосовно дослідження олігонуклеотидних модифікацій, особливо модифікацій, спрямованих на підвищення стійкості до нуклеази та афінітету зв'язування. Продемонстрували, що олігонуклеотиди, що о мають певні біциклічні нуклеозиди, мають підвищену стійкість до нуклеази (еутапп еї аЇ. Віоогу. Мед. Спет. че

Їенв. 1995, 5, 1231 - 4; АШтапп еї аЇ. Темйапйедгооп Ген. 1994, 35, 2331 - 2334, 7625 - 7628). Нещодавно 3о синтезували та включили в олігонуклеотиди 2"-О0,4-С-метиленрибонуклеозиди, що мають замкнену 3'-ендо ее, цукрову складку. Дослідження гібридизації демонструють, що конформаційно замкнені нуклеозиди можуть суттєво підвищити гібридизацію модифікованих олігонуклеотидів з комплементарною РНК та ДНК (ОБбіка еї аї.

Теганпеагоп І ек 1997, 38, 8735 - 8738; Козпкіп еї а). Теігапедгоп 1998, 54, 3607 - 36301. «

Отже, існує необхідність у нових конформаційно замкнених нуклеозидах з біциклічними цукровими З складовими. Ці нові нуклеозиди повинні бути корисними у лікуванні вірусних, ракових та інших захворювань. с Крім того, олігонуклеотиди, що складаються з цих нових модифікованих нуклеозидів, повинні мати необхідну

Із» стійкість до клітинних нуклеаз та сильний афінітет зв'язування з нуклеїновими кислотами - мішенями. Отже, ці олігонуклеотиди повинні бути потенційно корисними у терапії та діагностиці.

Описано конформаційно замкнені біциклічні цукрові нуклеозиди, що мають звичайну геометричну форму, та способи одержання конформаційно замкнених біциклічних цукрових нуклеозидів. Пропонуються нуклеозиди, що б мають біциклічні цукрові складові, та олігонуклеотиди, що включають наступну формулу:

Ка -й І се) ї "Х

Фо В:

У

"і де Х, У та 7 є незалежно обраними з групи 0, 5, СН», МК, С-О, С-СН» або нічого, де К є обраним з групи водню, алкілу, алкенілу, алкінілу, ацилу; КК. є обраним з групи аденіну, цитозину, гуаніну, гіпоксантину, урацилу, тиміну, гетероциклів, Н, ОСН»з, ОАс, галогену, сульфонату; Ко, Кз є незалежно обраними з групи Н, ОН,

ОМТтО, ТВОМ5О, ВПО, ТНРО, АсО, В20, ОР(МіРг2)О(СН2І)»СМ, ОРОЗН, РОЗН, дифосфату, трифосфату; К» та Кз о разом можуть бути РИСНО»; ТІРОБО» або ОТВ5О0».

Передбачається, що описані тут нові нуклеозиди будуть корисними у лікуванні вірусних, ракових та інших іме) захворювань. Олігонуклеотиди, що складаються з цих модифікованих нуклеозидів, мають бажану фізіологічну стійкість та афінітет зв'язування, що дозволяє застосовувати їх у лікуванні та діагностиці. 60 Запропоновано інформаційно замкнені нуклеозиди, що мають 3-ендо цукрову складку, та способи їх приготування. Способи приготування біциклічних нуклеозидних аналогів, про які повідомлялося раніше, не можна застосовувати до нових нуклеозидних аналогів, які описано тут. Описані аналоги є наслідком успішного зв'язування між позиціями С2' та С- рибози у нуклеозидних аналогах.

Скорочення, що застосовуються тут, позначають: "Ас" - ацетил; "Вп" - бензил; "В2" - бензоїл; "ОМ" - 65 диметокситритил; "ТНР" - тетрагідропіраніл; ""ВОМ5" - і-бутилдиметилсиліл; "ТІРО5" - тетраізопропілдисиліл та "ртва" - ди((-бутил)силіл.

Синтез похідних рибофуранози з 2,4-місточковим зв'язком 1-А-Метиларабінозу 1, яку було приготовлено згідно зі способом, надрукованим у Теї)|їта еї аї. 9. Ога.

Спет. 1963, 28, 2999 - 3003, захистили 1,1,3,3-тетраізопропілдисилоксанілом(ТІР5) у ОЗ та О5 і отримали 2, яку перетворили у кетон З шляхом обробки ОМ5О/ЮОСС/ТРА (ДМСО/ДСС/ТФА). Внаслідок наступної реакції

Віттига та видалення ТІР5 отримали дуже гарний вихід оалкену 4. Сполуку 4 захистили

І-бутилдиметилсилілом(ТВ5) у О5 та бензилом(Вп) у ОЗ і отримали 5. Гідроборування 5 виконували за допомогою 9-ВВМ і отримали відмінний вихід виключно похідної б 2-деокси-2-гідроксиметилу. Похідна 6 2-деокси-2-гідроксиметилу зазнала тритилювання 4,4'-О-диметокситритил(ОМТ) хлоридом, потім видалили ТВ5 70 тетрабутиламонійфторидом(ТВАРЕ) і отримали 7.

Схема 1. но. о. о 2 о о. но. о. нак і пе ве вору буд ром но, зо зоб о но сн

І н. о тв5о. о що; атя Кох Во Бе 1 5 5

Сполуку 7 окиснювали і отримали альдегід 8, який обробляли формальдегідом та гідроксидом натрію, внаслідок чого отримали відмінний вихід похідної 9 4-гідроксиметилу. Внаслідок мезилювання 9 та наступного видалення ОМТ отримали 10. Внаслідок циклізації, яку виконували Ман у ТНЕ, та наступного видалення мезилу отримали біциклічний цукор 11. Обробка сполуки 11 ацетангідридом у присутності ОМАР дозволила отримати 12, в той час як обробка ацетангідридом/оцтовою кислотою у присутності сірчаної кислоти дозволила отримати 13, у якій ацетокси у С1 має зворотну орієнтацію(1-В) порівняно з метокси 11. сч

Схема 2.

НС о щі о. о 7 ся --

Код в ОоМе

Вп орМт Во ОрМУ 8 9 М зо

Асо. о ОА Н о. Му о Ге)

Ге, - ж Ми ОМе ме) ви виб ВО он - 13 і 19 | ре)

Асо. о м. по « 12 ! : бом ' не

Синтез біциклонуклеозидів з 2',4"-місточковим зв'язком с Біциклонуклеозиди, що мають цукрову складову з 2',4"-місточковим зв'язком, синтезували з конденсацій :з» силілованих нуклеозидних основ. Біциклічні цукри зображено нижче. Внаслідок конденсації 13 з біс(триметилсилілутиміном отримали відмінний вихід продукту 14, А-аномеру. Обробка 14 ВСІз3 видалила 15 одночасно ацетил та бензил, внаслідок чого отримали біциклічний А-тимідин 15. део. о. но. о

Ме 13.- -6-- т т - во по

Ге) 14 15

Внаслідок конденсації 13 з б-хлоро-9-триметилсиліллпурином отримали суміш А- та В-пуринових нуклеозидів, се) 16 та 17(співвідношення А : В, від 1 : 1 до 2 : 3), які можна відокремити шляхом хроматографії. сі що

Ас о. м М щи

М що Її

Вп о; 9

ГФ) а ВпО

Кк. 16 17

Внаслідок обробки 17 та 16 аміаком у метанолі з наступним гідрогенолізом отримали аналоги аденозину 18 бо та 19, відповідно. Гідрогеноліз потребував велику кількість каталізатору, а також збільшену тривалість реакції через підвищену стеричну перешкоду на цукровій складовій. Внаслідок обробки 17 та 16 меркаптоетанолом у присутності метоксиду натрію з наступним гідрогенолізом отримали аналоги інозину 20 та 21, відповідно. б5

Хх

М

М н

По; 0 о пд н М. е побо-- у го;

М У но х 18х 2: МН, 19х- МН; 20х-он г1ххОон , щ , , , й

Внаслідок конденсації 13 з силілованим М2-ацетилгуаніном отримали похідну 22 А-гуанозину як головний продукт(3095), невелику кількість В-ізомеру та М'-з'єднаних продуктів. Внаслідок обробки похідної А-гуанозину аміаком у метанолі з наступним гідрогенолізом отримали біциклічний А-гуанозин 23.

Асо. о (и Мер

Вво ше 19) ря

Ще, мо МН, з но М й й с з (8)

Як описано вище, внаслідок реакцій конденсації отримали або виключно А-нуклеозид, або суміш А- та

В-нуклеозидів, без переваги щодо В-аномерів. Для того, щоб підвищити вихід В-нуклеозидів, досліджували різні умови конденсації. Температура має незначний вплив на співвідношення А- та В-аномерів. Проте, зв'язувальний - реагент та функціональна група на С1 цукру демонстрували значний вплив на співвідношення А- та б»

В-нуклеозидів.

Внаслідок конденсації 12 з біс- або три(триметилсиліл)піримідинами у присутності хлориду олова(М) Ф отримали гарні виходи В-нуклеозидів як головних продуктів. Отже, реакція 12 з силілованим тиміном дозволила - отримати похідну 24 тимідину у співвідношенні В : А, що становило - 4 : 1. Внаслідок конденсації 12 з силілованим урацилом та М" -бензоїлцитозином отримали відповідні нуклеозиди 25 та 26, відповідно, у (0 співвідношенні В : А, що становило З 9 : 1 в обох реакціях. Обробка 24 - 26 трихлоридом бору дозволила отримати піримідинові біциклонуклеозиди 27 - 29, відповідно. У випадку похідної цитидину, бензоїльну групу 29 видалили шляхом обробки аміаком і отримали 30. Альтернативний спосіб(не зображено) для приготування 30 « починався з 28, яку ацетилювали на О3' та 05 з наступною реакцією з триазолом та наступною обробкою аміаком. При цьому способі отримали помірний вихід 30. т с х , х . ! Асо- 9 и он о. (о)

Во но - с 24Х ОН, У є Ме 27 Х2оОН, У Ме 25ХеОН, ЕН 28хХ-онН, ун со 20 сбхеМмнвеуєнО 0 оХхеМНВеуєн зох- Мне "м Також досліджували конденсацію 12 з силілованими пуринами, разом з якими застосовували хлорид олову(ІМ) як зв'язувальний реагент. На відміну від реакції з піримідинами, внаслідок конденсації силілованого б-хлорпурину з 12 отримали не лише А- та В-нуклеозиди 16 та 17, а також і М'/-зв'язувальний продукт(не показано). Подібним чином, внаслідок конденсації силілованого М2-ацетилгуаніну з 12 отримали суміш трьох

ГФ) продуктів: М'-зв'язаний В-нуклеозид 31(4295), бажаний В-нуклеозид 32(1096) та А-нуклеозид 22(695). Проте,

ГІ внаслідок нагрівання з силілованим М 2-ацетилгуаніном у присутності триметилсилілтрифлату, М'-зв'язаний продукт 31 частково перетворився у М -зв'язані А- та В-біциклонуклеозиди 22(- 2296) та 32(7 2595). Виділений бо 32 зазнав таких самих обробок, що і 22, внаслідок чого отримали біциклічний В-гуанозин 33. б5

М им Мне с Ах

М Ми

Ш о | о

ВПО зі (в) о

М М то у М

АСМНТОТМИ ТМ Нім М

Щ о | З о

Вп но 32 З

Стереохімічні розподіли похідної 11 2,6-діоксабіцикло|3,2,1)октану та біциклонуклеозидів, створених шляхом конденсації біциклічних цукрів з силілованими нуклеозидними основами, можна розподілити шляхом протонного ядерного магнітного резонансу(ЯМР) з використанням ядерного ефекту Оверхаузера. Згідно з моделлю "стрижень - куля" система жорсткого кільця діоксабіцикло|3,2, Цоктану примушує протони(НТ' та Н2) на

Ст та С2" А-біциклонуклеозидів стати майже паралельними, у той час коли НТ та Н2" у В-біциклонуклеозидах спрямовуються у протилежні боки. Наприклад, кут закручування НІ'-С1-С2-Н2" біциклічного А-тимідину 15 після оптимізації геометрії становить 37", і згідно з цим спостерігали, що константа взаємодії становила З,9Гц у протонному ЯМР. Кут закручування НІ -С1-С2-Н2" у біциклічному В-тимідині 27 становив 96" після оптимізації геометрії, та, як і сподівалися, не спостерігали ніякої взаємодії між НІ" та Н2" Дійсно, протон на Ст в усіх с виміряних В-біциклонуклеозидах є єдиним піком. Навпаки, в усіх виміряних А-біциклонуклеозидах протонна Ст'є (3 дуплетом з константою взаємодії - 4,0ГцЦ.

Стереохімічні розподіли біциклонуклеозидів далі підтвердилися рентгенівськими кристалічними структурами біциклічних тимідинів 15 та 27. Рибозне кільце цукрової складової діоксабіцикло|3,2,1|октану в обох сполуках приймає звичайну С3'-ендо цукрову складку, проте кільце, що складається з шести членів у цукровій складовій, - 3о приймає форму стільця. Тимінова основа в обох сполуках має антиорієнтацію. (о)

Синтез фосфорамідитів біциклонуклеозидів з 2,4-місточковим зв'язком б»

Біциклічний В-тимідин 27, біциклічний В-М"-бензоїлцитидин 29 та біциклічний В-М?-ацетилцитидин 29 захистили за допомогою ОМТ, а потім перетворили у відповідні фосфорамідити, відповідно. Через стеричну 7 з5 перешкоду зросла тривалість реакції. «со с. му

І ше оМт п « но тк Й - с соб "з зах-он, ху: Ме 37 ХОН, Ух х Ме " 35 Х - МНАС, у - Н 38 Х - НАС, ен

ЗХ МНВа Мен 39 Х х МНВг, МУ Н

Приклади

Ф Способи синтезу, які застосовують для приготування описаних сполук, також можна застосовувати для того, - щоб синтезувати інші сполуки з формули винаходу. Цей винахід включає, проте не обмежується ними, сполуки, виготовлені згідно з описом наступних прикладів. Числа у круглих дужках після назв сполук у прикладах іш відповідають номерам структур у розділі докладного опису. (се) 20 Приклад 1 . Приготування 1-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраізопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-Ю-рибофуранози(2) в А-Метиларабінозу приготували за способом, надрукованим у Теї|йта, 5.; РіеісНег, Ог. Н. о. 9. Ога. Спет. 1963, 28, 2999 - 3003, та відокремили від її В-аномеру(менша кількість продукту) шляхом хроматографії на діоксиді кремнію. До перемішаного розчину А-метиларабінози(19,27г, 119, 9ммоль) у безводному піридині(20Омл) 29 при 0"С додали 1,3-дихлоро-1,1,3,3-тетраізопропілдисилоксан(38,їмл, 119,У9ммоль). Отриманий розчин

ГФ) перемішували при 0"С протягом 1 години, а потім при кімнатній температурі протягом 1,5 години. Розчин охолодили до 0"С і додали воду(20мл). Суміш перемішували протягом 10 хвилин і розвели ЕЮАс. Водний шар о екстрагували Е(Ас. Комбінований органічний шар висушили(Ма»5О)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 1595 ЕЮАс у гексанах отримали 42,7г((8890) вказаної у заголовку сполуки у 60 вигляді безбарвного сиропу.

Приклад 2

Приготування 2-С,2-О-дидегідро-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраіїзопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-О-рибофуранози(3)

До перемішаного розчину 1-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраізопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-О-рибофуранози(42,6г, бо 104 9Уммоль) та ДСС(43,4г, 209, вммоль) у безводному ДМСО(25Омл) та ефірі(10Омл) при 07С в атмосфері аргону додали розчин трифторооцтової кислоти(4,04мл, 52,5ммоль) та піридину(8,44мл, 105ммоль) в ДМОСО(ЗОмл).

Отриману в результаті реакції суміш нагрівали до кімнатної температури, перемішували протягом 5 годин, а потім охолоджували до 0"С. Додали щавлеву кислоту(21,3г, 23бммоль) в метанолі(бОомл), а потім додали воду(ЗОмл). Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години, а осад відфільтрували та ретельно промивали гексанами. Фільтрат потім розвели гексанами, промили п'ять разів водою, висушили(Ма».5О)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 2906 МОН у метиленхлориді-гексанах(1 : 2) отримали 37,6г(89905) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвного сиропу; 1Н ЯМР (СОСІ»з) 5 1,00-1,12(т, 28Н, ТІРОБ), 3,47(5, ЗН, ОСН»), 4,05-4,19(т, ЗН, Н4, Нба, Н5БЬ), 4,51(аа9, 9 - 7/0 9,3Гц, 1,5Гц, 1Н, НЗ), 4,89(5, У - 1,5Гц, 1Н, НІ).

Приклад З

Приготування 2-деокси-2-метилен-1-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраізопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-О-рибофуранози

До перемішаної суспензії метилтрифенілфосфонійброміду(21,5г, 60, Т1ммоль) у безводному ефірі(138Омл) при 7/5 Кімнатній температурі в атмосфері аргону додали розчин (-пентоксиду натрію(5,97г, 54,0ммоль) у безводному бензолі(бОмл). Отриману блідожовту суміш перемішували при кімнатній температурі протягом б годин та охолоджували до -1076, потім додали розчин 2-С,2-О-дидегідро-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраіїзопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-О-рибофуранози(12,1г, З0,Тммоль) в ефірі(З5мл). Реакційну суміш перемішували при -107С протягом 1 години, двічі промили соляним розчином, висушили(Ма»ЗО)) та концентрували. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 595 Е(ОАс у гексанах отримали 11,0г((9195) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвного сиропу; 'Н ЯМР (СОСІз) 5 1,00-1,12(т, 28Н, ТІРО5), 3,45(5, ЗН, ОСН»), 3,73(а6 9 - 9,0Гц, З,ОГЦ, 71Н, НЯ), 4,02, 4,03(285, 2Н, НУ), 4,62(а, 9 - 9,0Гц, 2,7ГЦц, 1Н, НЗ), 5,27(т, 1Н, НІ), 5,32-5,36(т, 2Н, Н2.

Приклад 4 см

Приготування 2-деокси-2-метилен-1-А-метил-О-рибофуранози(4) (5)

До перемішаного розчину 2-деокси-2-метилен-1-А-метил-3,5-0-(1,1,3,3-тетраізопропіл-1,3-дисилоксандіїл)-ЮО-рибофуранози(35,Ог, 87,1ммоль) у ТНЕ(200мл) додали 1,0М ТВАЕ у ТНЕ(180мл). Отриманий розчин залишили на 1 годину при кімнатній температурі. ТНЕ випарили, а залишок зазнав хроматографії на діоксиді кремнію 1095 ЕН в їч- метиленхлориді, внаслідок чого отримали 14,6г(8890о) сполуки, вказаної у заголовку, у вигляді сиропу. Ф

Приклад 5

Приготування 3-О-бензил-5-0-(І-бутилдиметилсиліл)-2-деокси-2-метилен-1-А-метил-О-рибофуранози(5) Ге)

Розчин 2-деокси-2-метилен-1-А-метил-О-рибофуранози(13,7г, 85,5ммоль) та ТВОМ5-С1(13,5г, 89,бммоль) у - безводному піридині(1З3Омл) настоювали при кімнатній температурі протягом 15 годин. Після охолодження до 0"С та додавання води(2мл) отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 1 години, (Се) концентрували до половини об'єму, розвели ЕТОАс, промили соляним розчином, висушили(Ма 2504) та концентрували до сухості. Ретельно висушений сирий продукт розчинили у ТНЕ(7Омл) та додали до перемішаної суміші Ман(бобь у мінеральному маслі, 5,6г, 140ммоль) в ТНЕ(З5Омл) при 0"С. Після перемішування протягом 40 « хвилин при кімнатній температурі додали бензилбромід(10,75мл, 90,5ммоль). Реакційну суміш перемішували протягом 4 годин та охолоджували до 0"С, а потім повільно додавали воду(2мл) і потім 1095 АСОН у воді, доки - с рН не становив 7. Суміш розвели Е(Ас, промили соляним розчином, потім розвели бікарбонатом натрію, и висушили(Ма».5О)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 0 - 1090Е(ОАс у ня гексанах отримали 23,8г(7696) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвної рідини; "Н ЯМР (СОСІз) 5 0,01(5, ЗН, ЗіСН»5), 0,02(5, ЗН, БІіСН»з), 0,85(5, УНН, Е-Вш), 3,41(5, ЗН, ОСНз), 3,60-3,72(т, 2Н, Н5ба, Н5ББ),

Аго(аа, о - 8,7Гц, 4,5Гц, 1Н, НЗ), 4,57, 4,66(АВ, 0 - 12,0Гц, 2Н, Вп), 5,22(5 9 - 1,2Гц, 1Н, НІ), 5,38(ї, У

Ме, - 1,5Гц, 1Н, Нга), 5,43(т, у) - 1,2Гц, 1Н, НО), 7,23-7,37(т, 5Н, Вп); Обчислено для Со20Нз»О,зі: С, 65,89; Н, - 8,85. Знайдено: С, 65,92; Н, 9,22.

Приклад 6 ісе) Приготування 3-О-бензил-5-О-(І-бутилдиметилсиліл)-2-деокси-2-гідроксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(6) со 020 До перемішаного розчину 3-О-бензил-5-0-(І-бутилдиметилсиліл)-2-деокси-2-метилен-1-А-метил-О-рибофуранози(5,28Гг, 14,5О0ммоль) в "М атмосфері аргону додали 9-ВВМ(0О,5М в ТНЕ, 87мл). Отриманий розчин перемішували при температурі навколишнього середовища протягом 1 години, потім при 40"С протягом ночі, охолодили до кімнатної температури та перенесли до колби, що містила перборат тетрагідрат натрію(13,39г, 87ммоль) у воді(85мл) та 22 етанолі(дбмл). Отриману суміш інтенсивно перемішували при 502С протягом 4 годин, охолодили до 02С,

Ф! нейтралізували АсОН до рН 8 та концентрували до невеликого об'єму. Об'єм, що залишився, розвели водою(2О0мл) та екстрагували тричі метиленхлоридом. Комбінований органічний шар двічі промили соляним о розчином, висушили(Ма».ЗО)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію

ЕЮАс-гексанами(1 : 2) отримали 5,17(9395) зазначеної в заголовку сполуки у вигляді безбарвного сиропу; /Н 60 яЯМР (СОСІз) 5 0,03(5, 6Н, 5ІіСН»), 0,87(5, 9Н, Е-бутил), 2,34-2,43(т, 1Н, Н2), 3,39(85, ЗН, ОСН»), з,48(аа, 9 - 10,5Гц, 6,0Гц, 1Н, НбБа), з,бо(аа, 0 - 10,5Гц, з6бГуц, їн, Н5ББ), з,ва(а, 0 - 72Ггц, 2Нн, нг), зада, 7,2Гц, 2,7ГцЦ, Л1Н, НЗ), 4,17(т, ТН, НЯ), 4,44, 466(АВ, 7 - 12,3Гц, 2Н, Вп), 4,95(а, 9 - 54ГцЦ, МН, НІ), 7,23-7,36(т, 5Н, Вп); Обчислено для СооНзаОБзі: С, 62,79; Н, 8,96, Знайдено: С, 62,92; Н, 9,21.

Приклад 7 бо Приготування 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4-диметокситритилоксиметил)-1-А-метил-О-рибофуранози(7)

Розчин 3-О-бензил-5-О-(і-бутилдиметилсиліл)-2-деокси-2-гідроксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(6,боОг, 17,28ммоль) та ОМТ-СІ(7,03г, 20,74ммоль) у безводному піридині(5ХОмл) настоювали при кімнатній температурі протягом ночі, і реакцію загасили шляхом додавання води(8мл). Отриманий розчин настоювався протягом 10

ХВИЛИН, потім його розвели ЕЮАс, тричі промили соляним розчином, висушили(Ма 2504) та концентрували, внаслідок чого отримали сирий продукт 9, який розчинили у ТНЕ(52мл). Додали ТВАК(1,ОМ у ТНЕ, 26бмл), та отриманий розчин настоювався при кімнатній температурі протягом ЗО хвилин. Випарили ТНЕ, а залишок піддали хроматографії на діоксиді кремнію Е(ЮАс-гексаном(1 : 1), внаслідок чого отримали 9,28г(949б5) вказаної в заголовку сполуки у вигляді білої піни; ІН ЯМР (СОСІз) 5 2,33-2,42(т, 1Н, Н2), 3,26-3,63(т, 7Н, Ноба, Н5БЬ, 70 Нга, Н2гв, ОСН»), 3,79(а, 9 - 1,2гц6, 6Н, ОМ), з ецаа, о - 7,5Гу, 2,4Гц, 1Н, НЗ), 4,13(т, ТТН, На), 4,41, 4,5О(АВ, 2 - 12,9Гц, 2Н, Вп), 5,05(4, 9 - 51ГцЦ, 1Н, НІ), 6,78-6,85(т, 4Н, ОМТ), 7,14-7,47(т, 14Н, Вп, ОМТ);

Обчислено для Сз5НзвО»;: С, 73,66; Н, 6,71. Знайдено: С, 73,57; Н, 6,76.

Приклад 8

Приготування 75 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4-диметокситритилоксиметил)-5-С,5-О-дидегідро-1-А-метил-О-рибофуранози(8)

До перемішаного розчину 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4"-диметокситритилоксиметил)-1-А-метил-О-рибофуранози(9,18Гг, 16,1бммоль) та

ДдСС(10,0г, 48,49ммоль) у безводному ДМОСО(бОмл) при 107С додали розчин трифторооцтової кислоти(0,622мл, 8,0в8ммоль) та піридину(1,95мл, 24,24ммоль) в ДМСО(15мл). Отриману реакційну суміш перемішували при 107С протягом 1 години, при кімнатній температурі протягом 6 годин, а потім охолодили до 0"С. Після додавання води(8мл) суміш перемішували протягом ночі та розвели Е(Ас. Осад відфільтрували та ретельно промили соляним розчином, висушили(Ма 2503) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію ЕІЮАс-гексанами(1 : 1) отримали 8,26г(90905) вказаної в заголовку сполуки у вигляді білої піни.

Приклад 9 Ге

Приготування о 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4-диметокситритилоксиметил)-4-С-гідроксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(9)

До перемішаного розчину 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4-диметокситритилоксиметил)-5-С,5-О-дидегідро-1-А-метил-О-рибофуранози(8,ОГг, 14, 0вммоль) та формальдегіду(3795 у воді, 85мл) у діоксані(42о0мл) при 0"С додавали краплями водний розчин їч- Маон(2,оМ, 210мл) протягом 15 хвилин. Отриманий каламутний розчин перемішували при кімнатній температурі протягом 2 днів, доки він не став прозорим розчином. Після охолодження до 0"С розчин нейтралізували 1090 Ф оцтовою кислотою до рН 8, концентрували до невеликого об'єму, розвели водою(1ООмл) та тричі екстрагували Ф) метиленхлоридом. Комбінований органічний шар промили соляним розчином, висушили(Ма 5504) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 4 - 5956 етанолом у метиленхлориді - отримали 8,11г(9495) вказаної в заголовку сполуки у вигляді білої піни; "Н ЯМР (СОСІз) 6 2,46-2,57(т, ІН, нг), 3,23-3,73(т, 9Н, Н5, Н-, Н2 Осн»), 3,79(а, 9 - 1,8Гц, 6Н, ОМТ), 4,14(а, 9 - 6,9ГцЦ, 1Н, НЗ), 4,43, 4,47(АВ,

У - 12Гц,2Н, Вп), 4,97(д9, 9 - 4,8Гц, 1Н, НІ), 6,77-6,85(т, 4Н, ОМТ), 7,11-7,46(т, 14Н, Вп, ОМТ).

Приклад 10 «

Приготування 3-О-бензил-2-деокси-2-гідроксиметил-5-О-мезил-4-мезилоксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(10) т с До перемішаного розчину "» 3-О-бензил-2-деокси-2-(4,4-диметокситритилоксиметил)-4-С-гідроксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(7,80Гг, " 13,0ммоль) у безводному піридині(боОмл) при 0"С в атмосфері аргону додавали краплями метансульфонілхлорид(3,0Змл, ЗОммоль). Отриману реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 45 хвилин, охолоджували до 0"С і розвели шляхом додавання води(бмл). Отриману суміш (22) перемішували при кімнатній температурі протягом 15 хвилин, розвели Е(ОАс, тричі промили соляним розчином, - висушили(Ма».5О)) та концентрували, внаслідок чого отримали сирий продукт у вигляді білої піни, який розчинили у АсОН-воді(80 : 20, 400мл). Отриманий розчин настоювали при кімнатній температурі протягом 2 ре) годин, його розвели водою(20Омл) і концентрували до приблизно чверті об'єму. Додали воду(1ООмл) і суміш со 20 концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію Е(оАс-гексанами(3 : 1 - 1 : 0) отримали 5,32г(90965) вказаної в заголовку сполуки у вигляді напівтвердої речовини; "Н ЯМР (СОСІ»з) 5 2,43-2,54(т. 1Н, т Н2г), 3,01(5. ЗН, ОМ»). 3,03(5, ЗН, ОМв), 3,41(5, ЗН, ОСНз), 3,81(9, 9 - 4,8Гц, 2Н, Н2, 4,01, 4,04(АВ, у - 10,5Гц, 2Н, НЕ), 421(а, 9 - 7,5ГЦ, 1Н, НЗ), 4,30, 4,50(АВ, 9 - 1,8ГЦ, 2Н, Н5), 4,56, 4,63(АВ, 2 - 12,0Гц, 2Н, Вп), 4,99(а, 0) - 51ГЦц, 1Н, НІ), 7,30-7,42(т, 5Н, Вп); Обчислено для С 47Н27О1052: С, 44,82; Н, 5,97, 22 Знайдено: С, 44,68; Н, 6,00.

ГФ) Приклад 11

Приготування (15,35,4К,85)-8-бензилокси-1-гідроксиметил-3-метокси-2,6-діоксабіцикло!|3,2,1|октану(11) о До перемішаної суміші Ман(бобо у мінеральному маслі, 1,83г, 22,90ммоль) у безводному ТНЕ(200мл) додали розчин 3-О-бензил-2-деокси-2-гідроксиметил-5-О-мезил-4-мезилоксиметил-1-А-метил-О-рибофуранози(5,20г, 60 11,45ммоль) в ТНЕ(ЗОмл). Отриману реакційну суміш перемішували при 557С протягом 42 годин і загасили реакцію шляхом додавання води при 0"С. ТНЕ випаровували і додавали водний Маон(о,5М, 25Омл). Отриману суміш нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом 24 годин, охолоджували до 0"С, нейтралізували розведеною соляною кислотою до рН 8, екстрагували 4 рази метиленхлоридом. Комбінований органічний шар висушили(Ма»ЗО)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію бо ЕЮАс-гексанами(2 : 1 - 1 : 0) отримали 3,161(9895) вказаної в заголовку сполуки у вигляді безбарвного сиропу; "Н ЯМР (СОСІ»з) 5 2,32(т, 1Н, Н2), 3,41(4, У - 11,4Гу, 1Н, Наа), 3,46-3,60(т, 2Н, 5Н, Н5, ОСН»У), 3,91(а,

У -11,1гц, їн, Нав), 3,92(аа, о - 10,8Гц, 2,4ГЦц, 1Н, Нга), 4,01(а, 9 - 54ГЦ, тн, НЗ), 4,04(а, юю - 105Гц, 1Н, Н2), 4,58, 4,64(АВ, У - 12,0Гц, Вп), 5,074, 9 - 3,9Гц, 1Н, НІ), 7,28-7,40(т, 5Н, Вп).

Приклад 12

Приготування (1К,35,4К,85)-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-метокси-2,6-діоксабіцикло!|3,2,1|октану(12)

Розчин(1кК,35,4К,85)-8-бензилокси-1-гідроксиметил-3-метокси-2,6-діоксабіциклоїЇЗ,2, Цоктану(1,6Ог, 5,71ммоль), ацетангідриду(1,О8мл, 11,42ммоль) та ОМАР'/(2,09Гг, 17, 1Зммоль) у безводному метиленхлориді(1Омл) перемішували при кімнатній температурі протягом 2 годин, охолоджували до 0"С та 70 розвели метанолом(4мл). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 15 хвилин, розвели метиленхлоридом, промили соляним розчином, а потім 1095 МансСоОз, висушили(Ма»зО)) та концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію етилацетатом-гексанами(1 : 1) отримали 1,82щ(99965) вказаної в заголовку сполуки у вигляді безбарвного сиропу; "Н ЯМР (СОСІз) 5 2,02(85, ЗН, ОАс), 2,33(т, 1Н,

Нг), 3,50(а, у - 10,8Гц. 1Н, Наа"), 3,57(5, ЗН, ОСН»), 3,86-4,04(т, 5Н, Нога, НО, НЗ, НАБ", Нба), 4,14(д, 9 - 75 12,0гц, ІН, Н5ББ), 4,50, 4,64(АВ, у - 12,0Гц, 1Н, Вп), 5,09(4, 9 - 3,9Гц, ЯН, НІ), 7,29-7,42(т, 5Н, Вп);

Обчислено для С.47Но2Ов: С, 63,34; Н, 6,88, Знайдено: С, 63,41; Н, 6,94.

Приклад 13

Приготування (1К,35,4К,85)-3-ацетокси-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло!|3,2,1|октану(13)

До перемішаного розчину (15,35,4К,85)-8-бензилокси-1-гідроксиметил-3-метокси-2,6-діоксабіцикло!|З,2,Цоктану(бООмг, 2,14ммоль) у суміші оцтової кислоти(б,)мл) та ацетангідриду(0,бмл) при 0"С додавали краплями концентровану сірчану кислоту(57мкл, 1,07ммоль). Отриману реакційну суміш перемішували при 0"С протягом 10 хвилин, а потім при кімнатній температурі протягом 2 годин. Після охолодження до 0"С розчин розвели Е(ОАс, тричі промили соляним розчином, а потім 1095 бікарбонатом натрію, висушили(Ма 52505) та концентрували до сухості. с 29 Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію Е(Ас-гексанами(2 : 3) отримали 696мг(9395) вказаної в заголовку ге) сполуки(В-аномер) та Зімг(390) А-аномеру, обидві сполуки мали вигляд безбарвного сиропу, В-Аномер затверднув після знаходження при кімнатній температурі протягом днів; точка плавлення(т. пл.) 55 - 582; /Н

ЯМР (СОСІз) 6 2,03(5, ЗН, ОАс), 2,08(5, ЗН, ОАс), 2,36-2,39(т, 1Н, Н2), 3,49(а, 9 - 108Гц, Наа), 3,73(а,

У ж О111гцу, 2,7ГЦ, 7ТН, Нога), 38900, 9 - 11,1Гу, 1Н, Н4Б), 4о1а, 0 - 111гц, тн, Н2), 4,03(й, 9 - 3о 9,3Гц, 1Н, Нба), 4,14(а, 9 - 51ГЦц, їн, НЗ), 4,55(а, 9 - 9,6ГЦ, 1Н, Н5ББ), 4,55, 4,64(АВ, у - 11,7Гц, 2Н, Вп), Ф 6,39(в8, 1Н, НІ), 7,29-7,42(т, 5Н, Вп); Обчислено для Сі8Но»20»;7: С, 61,70; Н, 6,33, Знайдено: С, 61,74; Н, 6,46.

Приклад 14 б

Приготування (1К,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіцикло!|3,2,1|октану(14) ч--

Суміш тиміну(189мг, 1,5ммоль) та безводного сульфату амонію(15мг) в НМО5(бмл) нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом ночі. Після видалення НМО5З залишок випаровували безводним ї-о т-ксилолом, висушували в умовах вакууму протягом 0) хвилин і розчинили у розчині(1кК,35,4К,85)-3-ацетокси-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло|З3,2,октану (ЗОбмг,

О,87ммоль) в 1,2-дихлороетані(бмл). До цього перемішаного розчину в атмосфері аргону додали краплями « триметилсилілтрифлат(0,Звмл) в 1,2-дихлороетані(2мл). Отриманий розчин нагрівали у колбі зі зворотним -о 70 холодильником протягом 2 годин, охолодили до 0"С, розвели хлороформом та нейтралізували 1095 с МмансСоОз(1Омл). Відділили органічний шар та водний шар двічі екстрагували хлороформом. Комбінований :з» органічний шар висушили(Ма»5О)) та концентрували до сухості. Внаслідок кристалізації з ЕЮАс-СНоСІі» отримали вказану в заголовку сполуку(ЗОЗмг, 8395) у вигляді безбарвної твердої речовини; т. пл. 198 - 2002С; "Н

ЯМР (СОСІз) 5 1,94(а, 9 - 1,2ГЦ, 1Н, АгеН»У), 2,04(5, ЗН, ОАс), 2,93(т, 1Н, Н2), 3,5Ф(ай, юю - 11,8гц, 2и1гц,

ФО 1Н, Нга"), 3,59(а, 9 - 11,4ГЦ, 1Н, Наа"), 4,016(9, 9 - 11,7ГЦ, 1Н, Нав", 4,022(4, 9 - 12,6ГЦ, 1Н, Н5а), 4,09(а, 9 - 12,0ГЦц, 1Н, Н2Ь"У, 411049, 9 - 4,5ГЦ, тн, НЗ), 427(д, 9 - 12,6ГЦ, 1Н, Н5Б), 4,53, 4,790(АВ, У - - 11,7Гц, 2Н, Вп), 5,88(4, 9 - 3,6ГЦц, 1Н, НТ), 7,30-7,42(т, 5Н, Вп), 7,74 (а, 9 - 1,5Гц, 7ТН, Нв), 8,79(в, 1Н, со МН); Обчислено для С21Н24М2О7: С, 60,57; Н, 5,81; М, 6,73, Знайдено: С, 60,55; Н, 5,84; М, 6,69. 20 Приклад 15 со Приготування (15,35.4К,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(15)

І До о розчину /(1К,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіцикло|З3,2,октану у безводному метиленхлориді(Змл) при 10"С додали трихлорид бору(1,0М в СНьоСі», бмл). Отриману реакційну суміш перемішували протягом ночі при 1573 з підвищенням до кімнатної температури та охолодили до 0"С.

Метанол(1,5мл) додавали краплями і отриману суміш перемішували при 0"С протягом 15 хвилин, а потім додали триетиламін(2мл). Розчинник випаровували, а осад ретельно екстрагували теплим ацетоном. Ацетоновий (Ф) розчин висушили(Ма»зО);) і концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 1090 ко метанолом у хлороформі отримали 9О9мг сполуки 20 у вигляді білої піни. Після кристалізації з ацетону отримали оБМг(9395) вказаної в заголовку сполуки у вигляді безбарвної твердої речовини; т. пл. 225 - 2267С; "Н ЯМР во ДМСО-ав) 6 1,76(4, у - 09гц, ТН, АгСН3), 245(т, 7ТН, Н2), 3250494, 9 - 114Гу, 21ГгЦу, ТН, На"), 3,32-3,52(т, 2Н, Н5), 3,53(4, 9 - 11,4ГЦ, 1Н, Наа"), 3,72(а, 9 - 11,1Гц, їн, Нав", 3,93(а, 9 - 111Гц, тн,

НгЬ"), 4,16(т, 1Н, НУ), 4,84(, 9 - б6,ОГц, тн, ОН), 5,74(а4, 9 - 42ГЦц, тн, НІ, 5,84(а, 9 - 3,9Гц, 1Н, ОН), 7,76(а, У е 1,2Гц, 1Н, НО), 11,32(8, ІН, МН); М5 т/2 285(МН"); Обчислено для С12НівМоОв,: С, 50,70; Н, 5,67;

М, 9,85, Знайдено: С, 50,85; Н, 5,68; М, 9,75. 65 Приклад 16

Приготування

(1кК,ЗКАкК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(6-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2,октану(17) та (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(16)

Суміш б-хлорпурину(246бмг, 1,6бммоль) та НМО5(8,О0мл) нагрівали у колбі зі зворотним холодильником в атмосфері аргону протягом 2 годин. НМО5 випаровували, а залишок висушували в умовах вакууму протягом 30 хвилин, а потім розчинили у розчині(1кК,35,4К,85)-3-ацетокси-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло!|З3,2, Цоктану(302мг, 0О,8Зммоль) у безводному 1,2-дихлороетані(5,Омл), потім додали триметилсилілтрифлат(0О,Звмл, 2,25ммоль) в 1,2-дихлороетані(2,0мл). Отриманий розчин нагрівали у колбі зі зворотним холодильником в атмосфері аргону 7/0 протягом 45 хвилин. Кінцева стадія обробки була такою самою, як описано раніше. Після хроматографії на діоксиді кремнію ЕЮАс-гексанами(1 : 1) отримали (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіциклої|3,2, Цоктан(122мг,

А-аномер) та (1К,3Кк,4кК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2, Цоктан (157мг, В-аномер), обидва мали вигляд безбарвної твердої речовини. Загальний вихід становив 7595. 75 А-ізомер: "Н ЯМР (СОСІз) 5 2,05(8, ЗН, ОАс), 2,89(т, 1Н, Н2), 3,23(9а, 9 - 12,0Гц, 2,4Гц, МН, Нга"), 3,72(4, 9 - 11,7ГЦ, Наа", 409(а, 9 - 12,3ГЦц, 2Н, На", Н5ба), 413(а, 9 - 132ГЦц, ЯН, Н2Ь"), 4,24(а, 4,8Гц, НЗ), 4,29(4, 9 - 12,3ГЦ, ТН, Н5Б), 4,60, 4,74(АВ, 9 - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,50(4, 9 - 4,2Гц, МН, НТ), 7,32-7,44(т, 5Н, Вп), 8,69(85, 1Н, НВ), 8,78(5, 1Н, Н2) В-ізомер: т. пл. 124 - 125"С(ЕЮАс-гексани); ІН ЯМР (СОСІ5) 6 2,05(5, ЗН, ОАс), 2,90(т, 1Н, Н2), 85500, 9 - 11,1Гу, Наа"), 3,95-4,03(т, 2Н, Нга", НаБ), 4,18-424(т, ЗН, Н5 НО"), 4,32(а, 9 - 4,8Гц, НУ), 4,47, 4,63(АВ, 9 - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,52(5, 1Н, НІ), 7,24-7,35(т, 5Н, Вп), 8,40(5, 1Н, НВ), 8,72(8, 1Н, Н2); Обчислено для С 241Н24МАОБСІ: С, 56,70; Н, 4,76; М, 12,59, Знайдено: С, 56,36; Н, 4,56; М, 12,37.

Приклад 17

Приготування с (18,35,48,85)-1-ацетоксиметил-3-(М2-ацетилгуанін-9-іл)-8-бензилокси-2,6б-діоксабіцикло|3,2,1|октану(22) Го)

Суміш М2-ацетилгуаніну(19Змг, 1,0ммоль) та сульфату амонію(2Омг) в піридині((1,мл) та НМО5(5,Омл) нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом З годин в атмосфері аргону. Отриманий прозорий розчин концентрували та випарювали разом з ксилолом(1Омл, висушений натрієм). Залишок висушували в умовах вакууму при 5 протягом 1 години та розчинили у - розчині(1кК,35,4К,85)-3-ацетокси-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло|3,2,Цоктану(175мг, О,бммоль) Ге) у безводному 1,2-дихлороетані(5,Омл), потім додавали триметилсилілтрифлат(0,27мл, 1,5ммоль) у 1,2-дихлороетані(1,0мл). Отриманий розчин перемішували при кімнатній температурі в атмосфері аргону Ф протягом 30 хвилин, потім нагрівали при 70 - 757С протягом 2 годин, охолоджували до 0"С та нейтралізували - 1096 бікарбонатом натрію(1Омл). Отриману суміш перемішували протягом 15 хвилин і відокремили органічний

Зо шар. Водний шар двічі екстрагували хлороформом. Комбінований органічний шар висушили(Ма»5оО)) і ї-оі концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 1096 етанолом у СНСІЗ-ЕЮАСсС(1 : 1) отримали вказану в заголовку сполуку(72мг, 3090) у вигляді безбарвної твердої речовини; т. пл. 249"С(розклад,

ЕЮАс); "Н ЯМР (СОСІз) 5 2,01(8, ЗН, ОАс), 2,29(8, ЗН, МАс), 2,75(т, 1Н, Н2), 329(аа, 9 - 11,7Гц, 1,8Гц, « 20 ІН, Нга"), 366(д, 9 - 11,4Гу, ТН, Наа") 4054, 9 - 114Гу, 1Н, НаБ), 40504, 9 - 11,7гцу, їн, Н2Б), З с 4,79(а, 9 - 12,3ГЦ, 71Н, Н5ба), 413(а, 9 - 48Гц, НУ), 4,23(0, 9 - 12,3ГЦ, ЯН, Н5), 4,53, 467(АВ, У - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,17 (а, 9 - 4,2Гц, 1Н, НТ, 7,28-7 40(т, 5Н, Вп), 8,32 (в, 1Н, НВ), 9,80(8, 1Н, МН), 12,12(8, 1Н, МН). :з» Приклад 18

Приготування (15,3К,4Кк,85)-3-(аденін-9-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6б-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(18)

Розчин

ФО (1кК,ЗзК4кК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло!/3,2,1|октану(1ООмг, 0,225ммоль) у суміші діоксану(2Омл) та 3095 водного гідроксиду амонію(2Омл) нагрівали у сталевій бомбі при - 1007С протягом 16 годин. Розчинники випаровували, а залишок розчинили у метанолі, потім додали 2090 со гідроксид паладію на вугіллі" 5095 води, З х 250мг додавали кожного дня). Гідрогеноліз здійснювали при кімнатній температурі в атмосфері водню 55 фунтів на кв. дюймі(рзі) (379,2кПа) протягом 4 днів. Каталізатор іс) відфільтрували та промили метанолом. Комбінований розчин метанолу концентрували, а після хроматографії «М залишку на діоксиді кремнію 2095 метанолом у метиленхлориді отримали вказану в заголовку сполуку(ЗОмг, 5995) у вигляді безбарвної твердої речовини, яку викристалізували з метанолу; т. пл. 250"С(розклад); "Н ЯМР (ДМСО-4ав - 050): 5 2,53(т, 1Н, Н2), 3,33(а, 9 - 11,1ГЦц, 1Н, Нга"), 3,40(а, юю - 12,3ГЦ, 1Н, Н5ба), 3,5Ф(а, У вв ж 12,6Гц, 1Н, Н5Б), 3,69-3,76(т, 2Н, Н2Б", Наа"), 4,05(4, 9 - 102Гц, Н4Б"), 44504, 9 - 51ГЦц, МН, НУ), о 6,26(85, 1Н, НІ, 7,28(т, 2Н, МН»), 8,12(в. 1Н, НВ), 8,33(5, 1Н, Но»); М8: 294(МН"); Обчислено для С 412Ні15МеОу:

С.49,14; Н, 5,16; М, 23,88, Знайдено: С, 49,01; Н, 4,97; М, 23,92. ко Приклад 19

Приготування (15,35,4К,85)-3-(аденін-9-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6-діоксабіцикло!|З,2, Цоктану(19) 60 Внаслідок подібної процедури, яку описано у прикладі 18, з (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(10Омг) отримали вказану у заголовку сполуку(4Змг, 6595) у вигляді безбарвної твердої речовини. "Н ЯМР (СОзО0): 5 2,71(т, 1Н, Н2г), з13(аа, о - 11,7гц, 24ГЦ, 1Н, Нга", 3,57(а, 9 - 12,6Гц, 1Н, Нба), 3,64(0, 9 - 11и1Гц,

Наа"), з,68(а, 9 - 12,3Гц, 1Н, Н5Б), з,96(а, 0 - 11,1гу, ЯН, Нав", 41409, 9 - 11,7гц, 1Н, Н2Ь"), 6,39(й, 9 62 -4,2ГЦ,1Н, НІ), 8,04(5, 1Н, НВ), 8,44(в5, 1Н, Н2); М5 т/2 294(МН).

Приклад 20

Приготування (15,3К,4К,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(гіпоксантин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло!/3,2,1|октану(20)

До розчину (1кК,ЗзК4кК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло!/3,2,1|октану(15Омг,

О,З4ммоль) та меркаптоетанолу(0,1Умл, 2,/7ммоль) в метанолі(2омл) додали метоксид натрію(0,37мл 5,4М у метанолі, 2,0ммоль). Отриманий розчин нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом б годин, охолоджували до кімнатної температури, нейтралізували 1095 АсОН до рН 7. Метанол випаровували, а залишок розвели 1,00М МансСоз(15мл), потім екстрагували 1095 метанолом у хлороформі, доки водна фаза не містила 7/0 продукт. Комбінований органічний шар висушили(Ма»зО4) і концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 10 - 1595 метанолом у хлороформі отримали 109мг(8495) похідної інозину(не показано) у вигляді безбарвної твердої речовини. 100мг(0,2бммоль) цієї речовини розчинили у метанолі, потім додали 2095 гідроксид паладію на вугіллі(5095 води, бООмг). Гідрогеноліз здійснювали при кімнатній температурі в атмосфері водню 5Орзі(344,7кПа) протягом З днів. Каталізатор фільтрували та промили метанолом. Комбінований розчин /5 метанолу концентрували, а після хроматографії залишку на діоксиді кремнію 20 - 2595 метанолом у метиленхлориді отримали б1мг(6195) вказаної в заголовку сполуки у вигляді безбарвної твердої речовини, яку викристалізували з метанол-етилацетату; т. пл. 228"С(розклад); "НН ЯМР (ДМСО-йв) 5 2,52(т, 1Н, Н2), 3,30-3,55(т, ЗН, Н5 Наа"), зба, - 11,1гц, 2,7ГЦ, 1Н, Нга"), 3,73(а, 9 - л108Гц, На4б"У, 4,о5(а, у 10,8Гц, 1Н, Н2ЬБ"), 4,40(т, 1Н, Н2ЬБ"), 5,03( 9 - 6,ОГц, їн, ОН), 5,74(д0, 9 - 4,2ГЦ, 1Н, ОН), 6,24(5, 1Н,

НТ, 8,06(5, 1Н, НВ), 8,30(5. 1Н, Н2), 12,40(5, ІН, МН); М5 т/2 295(МН).

Приклад 21

Приготування (15,35,4К,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(гіпоксантин-9-іл)-2,6-діоксабіцикло!|З,2,Цоктану(21)

До розчину (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(б-хлорпурин-9-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(12Омг, Ге 0,27ммоль), меркаптоетанолу(0,15мл, 2,1ммоль) у метанолі(1бмл) додали метоксид натрію(1,62ммоль, О,ЗОмл, о 5,4М в метанолі). Після подібної процедури, яку описано у прикладі 20, отримали 37мг(47905) вказаної у заголовку сполуки у вигляді гігроскопічної твердої речовини; "Н ЯМР (ДМСО-ав) 5 2,52(т, 1Н, Н2), З,о6(аа, - 11,7Гц, 2,4ГЦ, 1Н, Нга"), 3,34-3,53(т, 2Н, Н5), 3,56(а, 9 - 11,1Гц, ЯН, Наа", 3,79(а, 9 - 114Гц, 1Н,

Н46Б", з,еа(а, юю - 114Гуц, їн, Н2Ь"У, 4,31(а, 9 - 4,5ГЦ, їн, НУ), 4,89(рг, ЯН, ОН), 5,99(рг, 1Н, ОН), - в28(а, 9 - 4,2Гц, 1Н, НІ), 8,03(5, 1Н, НВ), 8,27(5, 1Н, Н2), 12,30(Ьг, 1Н, МН). Ге!

Приклад 22

Приготування (15,35,4К,85)-3-(гуанін-9-іл)-8-гідрокси 1-гідроксиметил-2,6-діоксабіцикло!|З,2, Цоктану(23) б»

Після подібної процедури, яку описано в прикладі 18, Кк! ч (18,35,48,85)-1-ацетоксиметил-3-(М2-ацетилгуанін-9-іл)-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло-|3,2,1октану(10Омг) отримали вказану у заголовку сполуку(41мг, 6695) у вигляді не зовсім білої твердої речовини. "Н ЯМР (ДМСО-ав і - 050) 5 242(т, 1М, Н2), з15(аа, 0 - 114Гц, 2и1Гц, 1Н, Нга"), 3,34а(а, 9 - 11,4ГЦ, ІН, Н5ба), 3,47(9, 9 - 12,6Гц, 71Н, Н5ББ), 35109, 9 - 12,0ГЦ, ЯН, Наа", 3,77(а, 9 - 10,8Гц, їн, Н4Б", з,98(а, 9 - 11,7Гц, 1Н,

Н2гЬ"), 4,23(а, У - 4,8Гц, 1Н, НЗ), 4,80(рг, 1Н, ОН), 5,90(БЬг, 1Н, ОН), 6,05(а9, 9 - 4,2Гц, 1Н, НТ, 6,52(Ьг, 2Н, МН»), « 7,93(в, 1Н, НВ), 12,3О(Ьг, 1Н, МН); М5 т/2 ЗФ(МН). 2 с Приклад 23

Приготування (1К,З3К,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктану(24) з Реакцію здійснювали за подібною процедурою, яку описано для прикладу 14, за тим винятком, що реагентом взаємодії був хлорид олова(ІМ) (0,45мл), а цукровим субстратом був (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-метокси-2,6-діоксабіциклої|З,2, Цоктан(202мг, 0,6Зммоль). Після

Ге» хроматографії на діоксиді кремнію 5956 ЕН в СНьЬСІ» отримали суміщ(2З3Змг, 89905) вказаної в заголовку сполуки(В-аномер) та її А-аномеру(співвідношення В : А становило - 4 : 1) у вигляді безбарвної твердої - речовини. "Н ЯМР (СОСІз) В-аномеру(зі спектру суміші А- та В-аномерів) 5 1,93(4, . - 0,9Гц, 1Н, АгСН»З), (Се) 2,05(5, ЗН, ОАс), 2,66б(т, 1Н, Н2г), 3,48(а0, 9 - 11,1ГЦц, Наа"), 3,86-4,12(т, 5Н, Нга", Н2Ь", НУ, Наб", Нба), 5о 4,26(а, 9 - 12,6ГцЦ, Н5ББ), 4,44, 4,64(АВ, у - 114ГЦ, 2Н, Вп), 6,0б(в, 1Н, НІ), 7,26-7,42(т, 5Н, Вп), ї-о 7,59(9, 9 - 1,2Гц, 1Н, НО), 8,94(в5, 1Н, МН). "І Приклад 24

Приготування (1К,ЗК,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(урацил-1-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇЗ3,2, Цоктану(25)

За подібною процедурою, яку описано в прикладі 23, після хроматографії на діоксиді кремнію 596 ЕЮН у метиленхлориді з (1К,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-метокси-2,6-діоксабіцикло|3,2,1|октану(2ЗОмг, 0,71ммоль) та силілованого урацилу(2,0ммоль) отримали суміщ(26б7мг, 87905) вказаної у заголовку сполуки та Її і) А-аномеру(співвідношення В : А становило - 9 : 1) у вигляді безбарвної твердої речовини. Вказану у заголовку ко сполуку(В-аномер) частково відокремили шляхом хроматографії на діоксиді кремнію; т. пл. 145 - 147"С(ЕЮАс-гексани); "Н ЯМР (СОСІз) 5 2,02(3, ЗМ, ОАс), 2,67(т, 1Н, Н2), 3,49(0, 9 - 11,4Гц, 1Н, Наа"), бо 3,86-3,97(т, ЗН, Нга", НУ, Н4Б"), 4,08(4, 9 - 12,3ГЦ, 1Н, НБбБа), 4,09(а, 9 - 10,5Гц, 1Н, Н2ЬБ"), 4,25(9, 9 - 12,3ГЦ, 1Н, Н5Б), 4,44, 4,64(АВ, у) - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,05(5, 71Н, НТ), 7,26-7,40(т, 5Н, Вп), 5,69(а, 9 - 8,1ГгЦц, тн, Н5Б), 7,79(а, 9 - 8,4ГЦц, 1Н, Нв), 8,92(5, 1Н, МН); Обчислено для Со20Но»М»О;: С, 59,69; Н, 5,51; М, 6,96, Знайдено: С, 59,45; Н, 5,56; М, 6,91.

Приклад 25 бо Приготування (18,38,48,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(М 7-бензоїлцитозин-1-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2,1|октану(26)

За подібною процедурою, яку описано в прикладі 23, після хроматографії на діоксиді кремнію з 595 ЕЮН у метиленхлориді з реакції (1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-метокси-2,6-діоксабіциклоїЇЗ3,2, Цоктану(645мг, 2,О0ммоль) Кк! силілованим М? -бензоїлцитозином(4,0ммоль) отримали 910мг(9095) вказаної в заголовку сполуки(В-аномер) у вигляді безбарвної твердої речовини; т. пл. 173 - 174"С(ЕЮАс); "Н ЯМР (СОСІз) 5 2,07(8, ЗН, ОАс), 2,83(т, 1Н, нг, 3,51(4, 9 - 11,1Гуц, Наа"), звб(а, у - 54Гц, 1Н, НЗ), 3,97(а, 9 - 11,1Гц, 1Н, Н4АБ"), 3,99-413(т,

ЗН, Нга", Н2Б", Ноба), 4,27(а, 9 - 12,3ГЦ, ТН, Н5ББ), 4,38, 4,61(АВ, 9 - 11,4ГцЦ, 2Н, Вп), 6,15(85, 1Н, НІ), 7,24-7,38(т, 5Н, Вп), 7,50-7,66б(т, 4Н, Н5, В2), 7,90(т, 2Н, В2), 8,28(а, 9 - 7,5Гц, 7ТН, Нв), 8,84(Ьг, 1Н, 70 МН); Обчислено для Со7Но7М3О;7: С, 64,15; Н, 5,38; М, 8,31, Знайдено: С, 64,10; Н, 5,20; М, 8,43.

Приклад 26

Приготування (15,3К,4К,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіцикло!/3,2,1|октану(27)

До розчину суміші (1кК,ЗКА4кК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіцикло|З,2,1октану та її А-аномеру(- 4 75: 1, 200мг, 048ммоль) у безводному метиленхлориді(4мл) при 0"С додали трихлорид бору(1,р0М в СНьЬСН», мл). Отриману реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 8 годин, при 157С протягом ночі, а потім охолодили до 07"С. Метанол(5,Омл) додавали краплями, потім додавали 1,0М МаОМе у Меон до рН 8. Розчин відокремили, а осад ретельно екстрагували 2095 метанолом у метиленхлориді. Комбінований фільтрат висушили(Ма».5О)) і концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 10 - 1595 метанолом у етилацетаті отримали вказану у заголовку сполуку(78мг), суміш вказаної в заголовку сполуки та її

А-аномеру(24мг), та А-аномер(2З3мг). Усі вони мали вигляд безбарвної твердої речовини. Загальний вихід становив 9195. Після кристалізації вказаної в заголовку сполуки з метанол-етилацетату отримали кристалічну тверду речовину; т. пл. 217 - 2182С; "Н ЯМР (ДМСО-йав) 5 1,75(а9, 9 - 1,2Гц, 1Н, АгСНУ), 2,24(т, 1Н, Н2), 3,20(а, 9 - 10,8ГЦ. МН, Наа"), 3,33-3,58(т, ЗН, Нога", Н5Б), 3,66(а, 9 - 10,8Гц, НАБ"), 3,97(й, 0 - л05Гц, СМ 29 41Н, НО), 414(т, 1Н, НУ), 524(6 9 - 51Ггц, ІН, ОН), 5,67(а, 9 - 2,4ГЦ, ІН, ОН), 5,82(5, 1ТН, НІ), г) 7,95(а, 9 - 0,9Гц, 1Н, НВ), 11,32(8, 1ІН, МН); М5 т/2 285(МН"); Обчислено для С42Ні6МоОв: С, 50,70; Н, 5,67;

М, 9,85, Знайдено: С, 50,65; Н, 5,57; М, 9,73.

Приклад 27

Приготування (15,3К,4К,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(урацил-1-іл)-2,6-діоксабіцикло!|З,2, Цоктану(28) т

За подібною процедурою, яку описано в прикладі 26, після хроматографії на діоксиді кремнію 1095 метанолом Фд) у метиленхлориді Кк! (1кК,ЗКАкК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-("урацил-1-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2, Цоктану(215мг, 0,53ммоль) б отримали 11О0мг(7695) вказаної в заголовку сполуки у вигляді білої твердої речовини. Вказана у заголовку -- сполука була забрудненою невеликою кількістю її А-аномеру. Вказану у заголовку чисту сполуку отримали після перекристалізації з ацетон-етилацетату; т. пл. 218 - 2192; "Н ЯМР (ацетон-ав) 5 2,42(т, 1Н, Н2), 3,27(д, 9 - і 10,8ГЦ, 71Н, Наа"), 3,58-3,72(т, ЗН, Нга", Н5Б), 3,83(а, 9 - 108Гц, їн, Нав", 413(а, 9 - 10,5ГЦц, НН,

НН2Ь"), 4,370, 9 - 51ГЦ, 1Н, ОН), 4,42(т, 1Н, НУ), 4,88(9, 9 - 3,9ГЦц, ІН, ОН), 5,52(а, 9 - 7,8Гц, 1Н, Н5), 5,95(в5, 1Н, НІ, 8,17(а, У - 7,8Гц, 1Н, Нб), 10,02(в, ІН, МН); М5 т/2 271(МН7); Обчислено для С44Н44МоОв: С, « 400 28,89; Н, 5,22; М, 10,37, Знайдено: С, 48,60; Н, 5,64; М, 10,21. 2 с Приклад 28

Приготування (15,3К,4К,85)-3-(цитозин-1-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6-діоксабіцикло!|З,2, Цоктану(30) з За подібною процедурою, яку описано в прикладі 26, після хроматографії на діоксиді кремнію 1095 МеОН у метиленхлориді з (1К,ЗКАК,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-(М 4 бензоїлцитозин-1-іл)-2,6-діоксабіцикло-І3,2,ПЦоктану (о) отримали Зб4мг(65905) - (15,38,48,85)-3-(М7-бензоїлцитозин-1-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6-діоксабіцикло-|3,2,1октану(7бОмг). 120мг((0,32ммоль) цієї сполуки розчинили у насиченому розчині аміаку у метанолі і розчин перемішували при (Се) кімнатній температурі протягом 24 годин. Аміак та етанол випаровували, а залишок розчинили у воді, потім с 50 ретельно екстрагували хлороформом(5 разів), а потім толуолом(2 рази). Воду випаровували, а після кристалізації з метанолу отримали 6б2мг вказаної у заголовку сполуки(45мг кристалічної твердої речовини та що 17мг некристалічної твердої речовини); т. пл. 250"С(розклад); "Н ЯМР (СОЗО0) 5 2,33(т, 1Н, Н2), 3,31(а, у - 11,1ГЦц, 1Н, Наа"), 3,570, 9 - 12,3ГЦ, 1Н, Н5ба), 3,65(а, 9 - 12,3Гц, 1Н, Н5Б), 3,78 (аа, 9 - 10,5Гц, 2,7Гц,

Нга"), з,ва(а, юю -111Ггц, 1Н, Нав", 4м14(а, 9 -10,5Гц, їн, Н2гЬв"У, 42Фа,ю - 51Гц, їн, НЗ), 586б(а, У 22 7,БГЦ, 1Н, НБ), 5,96(8, 1Н, НІ), 8,22(а, 9 - 7,8Гц, 1Н, НЄ); М8: т/2 279(МН); Обчислено для С141Ну5МзОв: С,

ГФ) 49,07; Н, 5,62; М, 15,61, Знайдено: С, 48,93; Н, 5,55; М, 15,64. юю Подібним способом приготували (1553К, 4в,85)-3-(М-ацетилцитозин-1-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6б-діоксабіцикло|3,2,1октан.

Альтернативний спосіб. 60 Суміш (15,3кК,4кК,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-"урацил-1-іл)-2,6-діоксабіцикло|З3,2, Цоктану(17Омг, 0О,бЗммоль), ацетангідриду(2,1бмл, 20, ммоль) та піридину(0,29мл, З,бБммоль) у безводному ОМР(2,5мл) перемішували при кімнатній температурі протягом ночі, розвели метиленхлоридом, промили соляним розчином та 1095 МансСо», висушили(Ма»зО)), концентрували до сухості. Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію етилацетатом-гексанами(2 : 1) отримали 117мг(7796) 3,5-діацетилової похідної бо (1553К,4К,85)-8-ацетокси-1-ацетоксиметил-3-(урацил-1-іл)-2,6-діоксабіцикл 013,2, Цоктану.

(1553К,4К,85)-8-ацетокси-1-ацетоксиметил-3-("урацил-1-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктан(175мг, 0,58ммоль) розчинили у безводному піридині(1,5мл) і отриманий розчин охолоджували до 0"С в атмосфері аргону, потім додали 4-хлорфеніл-дихлорфосфат(0,29мл, 1,75ммоль). Отриманий розчин нагрівали до кімнатної температури і перенесли до пробірки, закритої мембраною, яка містила 1,2,4-триазол(120Омг, 1,75ммоль). Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом З днів, розвели СН»оСі», промили соляним розчином та 590

Мансо», висушили(Ма»зО)) і концентрували до сухості. Залишок розчинили у діоксані(/мл) та 3090 гідроксиді амонію(1Омл). Розчин витримували при кімнатній температурі протягом 16 годин і розчинники випаровувалися.

Після хроматографії залишку на діоксиді кремнію ЕЄ3М-Меон-СНСЇІз(5 : 30 : 65) отримали 74мг(55905) сполуки, 7/о вказаної у заголовку, у вигляді блідо-жовтої твердої речовини.

Приклад 29

Приготування (18,32, 4Р,88)-1-ацетоксиметил-3-(М ?-ацетилгуанін-7-іл)-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло!3,2, ПЦоктану(31)

Силіловану основу з М2-ацетилгуаніну(3З8бмг, 2,0ммоль) приготували за способом, який описано для 75 прикладу 17, та розчинили у розчині(1кК,35,4К,85)-1-ацетоксиметил-8-бензилокси-3-метокси-2,6-діоксабіцикло|3,2,Цоктану(477мг, 1,48ммоль) у безводному 1,2-дихлороетані(1Омл). Потім додали хлорид олова(ІМ) (0,7бмл) у 1,2-дихлороетані(2,Омл).

Отриману суміш нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом З годин, потім при 707С протягом ночі та охолоджували до 0"С. Суміш нейтралізували 2,0М карбонатом натрію, фільтрували крізь броунмілерит, ретельно екстрагували хлороформом. Комбінований фільтрат висушили(Ма»зО)) та концентрували до сухості.

Внаслідок хроматографії на діоксиді кремнію 590 ЕН у хлороформі отримали 297мг(4290) вказаної у заголовку сполуки, 7Змг(1095) МУ-зв'язаного В-аномеру вказаної у заголовку сполуки та 4бмг(б95) М 9-зв'язаного

А-аномеру. Усі вони мали вигляд білої твердої речовини. Сполука, вказана у заголовку: т. пл. 176 - 17870 (СНЗСІ-ЕЮАс); "ІН ЯМР (СОСІв) 5 2,09(85, ЗН, ОАс), 2,40(85, ЗН, МАс), 2,78(т, ІН, Н2), 3,53(а, 9 - 114гц, СМ 4Н, Наа, 3,99(4, 9 - 11,гц, Н4Б"), 4,03 - 418(т, 4Н, Нога", Н2Б", НУ, НБа), 4,26(4, 9 - 12,6Гц, МН, ге)

Н5БЬ), 4,39, 4,58(АВ, 9 - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,62(8, 1Н, НІ), 7,22 - 740(т, 5Н, Вп), 8,21(85, МН, НВ), 10,60(85, 1ТН, МН), 12,34(85, ІН, МН); Обчислено для С 23НовБіМеОв: С, 55,31; Н, 5,05; М, 14,02, Знайдено: С, 55,35; Н, 4,83; М, 13,80.

Приклад 30 в

Приготування Ге) (18,38,48,85)-1-ацетоксиметил-3-(М 2-ацетилгуанін-9-іл)-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло|3,2,1|октану(32) Ф

Таку саме кількість силілованого М?-ацетилгуаніну, як описано для прикладу 29, розчинили у розчині (18,38,48,85)-1-ацетоксиметил-3-(М 2-ацетилгуанін-7-іл)-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло|3,2, октану(37Омг, -- 0О,7бммоль) у безводному 1,2-дихлороетані(1Омл) та додали триметилсилілтрифлат(О,54мл, ЗОммоль) в «со 1,2-дихлороетані(Змл). Отриманий розчин нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом ночі. Додали додатковий ТМ5ОТ(тетраметилен-сульфоксид) (0,54мл) та суміш нагрівали у колбі зі зворотним холодильником протягом іще двох днів. Після кінцевої обробки, такої як описано для прикладу 29, отримали після хроматографії на діоксиді кремнію 595 етанолом у хлороформі 104мг(2895) початкового матеріалу без змін, « 91мг(2570) вказаної в заголовку сполуки та 80мі((2290о) А-аномеру вказаної у заголовку сполуки. Усі мали вигляд пт) с білої твердої речовини. Сполука вказана у заголовку: т. пл. 128 - 1317С (СНзСІ-ЕЮАс); "Н ЯМР (СОСІЗ) 5 ц 2,02(5, ЗМ, ОАс), 2,30(5, ЗН, МАс), 2,67(т, 1Н, Н2), 3,50(90, 9 - 10,8ГЦ, 1Н, Наа"), з,78(аа, 9 - 108Гц, "» 2,7Гц, 1Н, Нга"), з,99(а, 9 - 108Гц, Нав", 41204, 9 - 12,3ГЦ, 1Н, Н5ба), 414(а, 9 - 10,8Гц, ЯН, Н2Ь", 427(а, 9 - 12,3ГЦ, 1Н, Н5Б), 4,33(4, 9 - 51ГЦ, тн, НЗ), 4,49, 462(АВ, 9 - 11,7Гц, 2Н, Вп), 6,25(5,1Н,

НІ), 7,26-7,38(т, БН, Вп), 7,83(5, 1Н, НВ), 9,0(в, 1Н, МН), 11,95(в, 1Н, МН); М5: т/2 З10(МНУ); Обчислено для (22) Со8Но5МеОв: С, 55,31; Н, 5,05; М, 14,02, Знайдено: С, 55,70; Н, 5,00; М, 13,95. - Приклад 31

Приготування (15,3К,4Кк,85)-3-(гуанін-9-іл)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-2,6-діоксабіцикло!|З,2,Цоктану(33) ре) За подібною процедурою, яку описано для прикладу 22, після хроматографії з

Ге) 20 (18,38,48,85)-1-ацетоксиметил-3-(М 2-ацетилгуанін-О-іл)-8-бензилокси-2,6-діоксабіцикло!|3,2,1октану(18Омг) отримали 52мг(45905) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвної твердої речовини. Після кристалізації з 7 води - етанолу(9 : 1) отримали кристалічну тверду речовину; т. пл. 258"С(розклад); "Н ЯМР (ДМСО): 5 2,45(т, 1Н, нг, 3,31(а, 9 - 108ГЦ, 1Н, Наа"), 3,36-3,50(т, 2Н, Нба, Н5ББ), 3,6О(аа, 0 - 102Гц, 2,7Гц, 1Н, Нага"), за, 9 - 11иГгц, Н4Б", 403(а, 9 - 10,5ГЦ, 1Н, Н2ЬБ"), 4,36(т, 1Н, НУ), 495(6 9 - 5,7Гц, 7Н, ОН), 25 5,79(а, 9 - 3,9Гц, 1Н, ОН), 6,06(з5, 1Н, НІ, 6,55(Ьг, 2Н, МН), 7,90(в, 1Н, НВ), 10,68(5, 1Н, МН); М5 т/2 З'(МН).

ГФ) Приклад 32 ка Приготування (15,3Е,48,85)-8-гідрокси-1-(4,2-диметокситритилоксиметил)-3-(М 7-ацетилцитозин-іл)-2,6-діоксабіцикло!|3,2, Цок 60 тану(з5)

Розчин (15,38,48,85)-8-гідрокси-1-гідроксиметил-3-(М "-ацетилцитозин-іл)-2,6-діоксабіцикло!3,2, Поктану(20Омг,

О,баммоль) та 4,4-диметокситритилхлориду(548мг, О,біммоль) в безводному піридині(/мл) залишили при кімнатній температурі на ніч, розвели етилацетатом, промили соляним розчином та 1095 МансСоОз, висушили над 65 сульфатом натрію та концентрували. Після хроматографії на діоксиді кремнію 1096 етанолом у хлороформі отримали 342мг(87905) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвної піни.

Подібним способом приготували (15,38,48,85)-8-гідрокси-1-(4,4"-диметокситритилоксиметил)-3-(М 7-бензоїл-цитозин-1-іл)-2,6-діоксабіцикло! 3,2,

Цоктан(Зб) та (1553К4К,85)-8-гідрокси-1-(4,4-диметокситритилоксиметил)-3-(тимін-іл)-2,6-діоксабіцикло!|3,2,октан(З34).

Приклад 33

Приготування (185,32,48,85)-8-гідрокси-1-(4,4-диметокситритилоксиметил)-3-(М 7-ацетилцитозин-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2, Док тан 8-0-(2-ціаноетил-М,М-діізопропілфосфорамідит) (38)

До перемішаного розчину (15,38,48,85)-8-гідрокси-1-(4,2-диметокситритилоксиметил)-3-(М 7-ацетил-цитозин-іл)-2,6-діоксабіцикло|3,2, о ктану(32Омг, О,52ммоль) та діізопропілетиламіну(0,Збмл, 2,0в8ммоль) у безводному дихлорометані(бмл) при 0"С в атмосфері аргону додавали краплями 2-ціаноетил-М,М-дізопропілхлорофосфорамідит(0,2З3мл, 1,04ммоль).

Отриманий розчин перемішували при температурі навколишнього середовища протягом 4 годин, охолодили льодом, розвели етилацетатом, промили холодним 1095 МанНсСоОз, висушили над сульфатом натрію та концентрували при кімнатній температурі. Після хроматографії на діоксиді кремнію 595 триетиламіном та 595 ацетоном у метиленхлориді отримали 37бмг(89905) вказаної у заголовку сполуки у вигляді безбарвної піни.

Подібним способом приготували (15,38,48,85)-8-гідрокси-1-(4,4"-диметокситритилоксиметил)-3-(М 7-бензоїл-цитозин-1-іл)-2,6-діоксабіцикло! 3,2, 20. Моктан 8-0-(2-ціаноетил-М,М-діізопропілфосфорамідит) (39) та (1553кК,4К,85)-8-гідрокси-1-(4,4-диметокситритилоксиметил)-3-(тимін-1-іл)-2,6-діоксабіциклоїЇ3,2, Цоктан-8-0-(2 -ціаноетил-М,М-діїізопропілфосфорамідит) (37).

Приклад 34

Приготування олігонуклеотидів, що містять 2,4-біциклонуклеотиди с

Цей приклад ілюструє застосування біциклонуклеозидних фосфорамідитів 37 - 39 для синтезу г) олігонуклеотидів, що містять біциклонуклеозиди з 2'-С,4-С-місточковим зв'язком. У цьому прикладі олігонуклеотиди синтезували шляхом застосування фосфорамідитного способу. Модифіковані олігонуклеотиди синтезували згідно за стандартними процедурами(протокол для синтезатору АВІ 394 від РегКкіп-ЕІтег, 1994) за тим винятком, що застосовували більш концентрований розчин та подовжений час взаємодії. Розчин для - модифікованих фосфорамідитів був 0,13М, тобто був на 3095 більш концентрованим, ніж розчини для б немодифікованих фосфорамідитів(0,1М). Час взаємодії для модифікованих фосфорамідитів дорівнював 10 хвилинам, а для немодифікованих фосфорамідитів-5 хвилин поряд з модифікованими. Виходи взаємодії для (22) модифікованих фосфорамідитів можна порівнювати з немодифікованими(98 - 9995). Модифіковані ООМ очистили -с де шляхом рідинної хроматографії високого розрізнення(НРІ С) з оберненою фазою та характеризували за

Зо допомогою мас-спектрометрії. ісе)

Для прикладу наводиться наступний перелік синтезованих послідовностей: 5-фАТСТСТОСОСТТССТТТС)-3 5-ФАТСТСТОСОСТТОСТТТО)-3 « 5-ФАТСТСТОСОСТТОСТТТО)-3 о, с 5-Д(АТсТтстТоСОоСстТосттТовУ . "» 5-(АТСТСТоСОоСТТеСТТТО)-3 5-4(СТТОСТСТСТОАТООСТТО)-У б що 5-Д(СТТоСТоТотТоАТОоОСтте)-3 - 5-д(СТТССТСТСТоСАТОССТТО)-3 с 5-ЩСТТОСТОТСТОАТООСТТС)-3 со 50 5-ФСТТОСТОТСТоАТООСТТС)-3 . 5-д((СТТоСТОоТСтТоАтТОоОстто)-3 з А, С, б та Т - немодифікований деоксирибонуклеозид

Т Е тимідин з 2'4-С-місточковим зв'язком

С - деоксицитидин з 24-С-місточковим зв'язком. 59 Приклад 35

ГФ) Властивості гібридизації олігонуклеотидів, що містять біциклонуклеотиди з 2'-С,4"-С-місточковим зв'язком. 7 Гібридизацію модифікованих олігонуклеотидів з комплементарної ДНК та РНК досліджували шляхом вимірювання термодинамічного плавлення (М/апуд еї аї. Мисіеовідез Мисіеойдез 1997, 16, 445). Як видно з таблиці 1, модифікації значно підсилюють гібридизацію з РНК. Для послідовностей, що містять біциклічний бо тимідин Т, підвищення значень Тт становить 2,2 - 3,3 градусів для однієї модифікації. Послідовності, що містять біциклічний цитидин С, також мають більш високі значення Тт порівняно з немодифікованими олігонуклеотидами, на 2,47 вище для модифікації з послідовністю 4 та на 1,97 вище для модифікації з послідовністю 5. Послідовність 12 містить помилково спарений нуклеозид(с у середині послідовності заміщується Т), має значення Тт на одинадцять градусів нижче, ніж послідовність 10, що вказує на бо специфічність послідовності. Для послідовностей, у яких усі Т та С заміщуються Т та С, значення Тт( » 907)

підвищилися далі, так що не можна було отримати точні значення у вимірювальній системі. нн нн полян 000001 повно | атеомод 0 Бадтстстосостосттює 30310854 о в Бедтстстосостосттоз 00310050 ів 7 вестостототодтессттоум 01000530 в Бастостотстодтосствз 10069538 8 Бсттостотстодтоссттою 078213 я Бастостетстодтосствю 01000550

Гола |взасттостотсттАтоссттою | то3 11

Т о - тимідин з 2'4-С-місточковим зв'язком, С о - цитидин 24-С-місточковим зв'язком. Зразки для вимірювання Тт містять 2,0мкМ модифікованих олігонуклеотидів та 2,0МкМ комплементарної ДНК або РНК у буфері(10тМ фосфат натрію, 0,1птМ ЕОТА (етилендіамінтетраоцтова кислота), та О0,1М хлорид натрію, рН 7,0). Га

Отже, було описано специфічні варіанти здійснення та застосування прикладів та способів отримання нових нуклеозидів та олігонуклеотидів з біциклічними цукровими складовими. Проте, фахівці у галузі повинні і) розуміти, що можливими є набагато більше модифікацій окрім тих, що вже описано, які не суперечать концепціям цього винаходу. Отже, об'єм винаходу не можна обмежувати, окрім як в дусі формули винаходу, що додається. Крім того, під час інтерпретації як опису, так і формули винаходу, усі терміни слід інтерпретувати ч- як можна ширше згідно зі змістом. Зокрема терміни "включає" та "що включає" слід відносити до елементів компонентів або кроків без винятку, вказуючи на те, що елементи, компоненти або кроки, про які йдеться мова, б можуть бути присутніми, можуть застосовуватися або об'єднуватися з іншими елементами, компонентами або Ге»! кроками, про які особливо не йде мова.

Claims

«- Формула винаходу і

1. Нуклеозиди з біциклічною цукровою складовою, які мають загальну формулу І « рас - с 7, те г» З ві 0) Ге») де 7 являє собою метилен, з Ку є незалежно вибраним з групи, що містить аденін, цитозин, гуанін, гіпоксантин, урацил, тимін; Ко, Кз є незалежно вибраними з групи, що містить Н, ОН, ЮМТО, ТВОМ5О, ВпоО, ТНРО, АсО, 820, (Се) ОР(МІРг2)О(СНІ»Ш»СМ, ОРОЗН, дифосфат, трифосфат; Ко та Кз разом можуть бути РИСНО», ТІРОБО» або 5о ОТВ5О». іш

2. Олігонуклеотид, що містить, принаймні, один мономер за п. 1. "|

3. Антивірусна фармацевтична композиція, яка містить активний початок та принаймні один фармацевтично прийнятний носій або розріджувач, яка відрізняється тим, що як активне начало вона містить сполуку зап. 1 у терапевтично ефективній кількості.

4. Фармацевтична композиція за п. З, яка відрізняється тим, що вона має активність проти вірусу, що є вибраним з групи, яка складається з вірусу імунодефіциту людини (НІМ) та вірусу гепатиту В (НВМ). і)

5. Фармацевтична композиція за п. З, яка відрізняється тим, що вона має активність проти вірусу ко імунодефіциту людини (НІМ).

6. Фармацевтична композиція за п. З, яка відрізняється тим, що вона має активність проти вірусу гепатиту В 6о «(НВУ). Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2003, М 12, 15.12.2003. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. б5