SI20474A - Novi nukleozidi, ki imajo bicikličen sladkorni del - Google Patents
Novi nukleozidi, ki imajo bicikličen sladkorni del Download PDFInfo
- Publication number
- SI20474A SI20474A SI9920038A SI9920038A SI20474A SI 20474 A SI20474 A SI 20474A SI 9920038 A SI9920038 A SI 9920038A SI 9920038 A SI9920038 A SI 9920038A SI 20474 A SI20474 A SI 20474A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- mmol
- dioxabicyclo
- octane
- gave
- nucleosides
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Tu so opisani konformacijsko omejeni 2',4'-premoščeni analogi nukleozidov. Spojine se lahko pripravijo s ciklizacijo pri C2' in C4' nukleozidov s pomočjo linkerja ali povezujoče molekule. Ti novi nukleozidi imajo zaželeno blokirano sladkorno gubo in so potencialno uporabni kot farmacevtske sestavine. Oligonukleotidi, sestavljeni iz teh novih nukleozidov, so uporabni za oligonukleotidne terapevtske in diagnostične spojine.ŕ
Description
NOVI NUKLEOZIDI, KI IMAJO BICIKLIČEN SLADKORNI DEL
Področje izuma
Področje izuma so analogi nukleozidov in oligonukleotidov in postopki za njihovo pripravo.
Ozadje
Analogi nukleozidov in nukleotidov so se dolgo uporabljali kot farmacevtske sestavine proti različnim virusum in rakom. Sedaj so številni analogi nukleozidov in nukleotidov v kliničnih preiskušnjah za različne bolezni.
V celici se nukleozidi innukleotidifosforilirajoalidaljefosforilirajo v ustrezne nukleozid-trifosfate. Nukleozid-trifosfati služijo kot inhibitorji DNA- ali RNA-polimeraz. Nukleozid-trifosfati se tudi lahko vključujejo v DNA ali RNA, kar moti pri raztegovaju DNA ali RNA.
Aktivni analogi nukleozidov se običajno v tarčni celici z lahkoto fosforilirajo. Ustrezni nukleozidtrifosfati imajo visoko afiniteto do katalitskih mest polimeraz in tekmujejo z naravnimi nukleozidtrifosfati kot substrat polimeraz.
Določeni analogi nukleozidov delujejo na nukleozidnem ali monofosfatnem nivoja Ena skupina mnogo obetajočih analogov nukleozidov so nukleozidi s konformacijsko blokiranimi (v angl. orig.: locked) sladkornimi deli. Bilo je opisano, da so določeni konformacijsko blokirani karbociklični analogi nukleozidov kazali močno aktivnost proti HCMV, HSV in EBV (Siddiqui et al. Nucleosides Nucleotides 1996,15, 235-250; Marquez et al. J. Med. Chem. 1996, 39, 37393747). Za konformacijsko blokiran karbociklični AZT 5'-trifosfat so poročali, daje enako močan inhibitor reverzne transkriptaze HlV-a (Marquez et al. J. Am. Chem. Soc. 1998,120, 27802789). Pripravljeni so bili tudi drugi nukleozidi z bicikličnimi sladkornimi deli, čeprav ni bila
-2ugotovljena ali opisana nikakršna aktivnost (Chao et al. Tetrahedron 1997, 53, 1957-1970; Okabe et al. Tetrahedron Lett. 1989,30,2203-2206, Hong, et al. Tetrahedron Lett. 1998,39, 225-228).
Pričakuje se, da imajo koristni konformacijsko blokirani nukleozidi pozitiven vpliv na protismeme (v angl. orig.: antisense) oligonukloetide. Oligonukleotide kot možna protismema zdravila so identificirali in preiskovali v teku dveh desetletij. Oligonukleotidi so sposobni tvogenja dvojne ah trojne vij ačnice s komplementarno DNA ali RNA in imaj o sposobnost cilj anj a specifičnih zaporedij v virusnem ali rakovem genomu. Specifična vezava oligonukleotidov na zanimive DNA- ah RNAtarče bi inaktivizirala funkcijo, povezano z DNA ali RNA, kot na primer replikacija, transkripcija in translacija. Zato se virusni ciklusi ah kancerozni procesi lahko prekinejo, medtem ko normalni celični ciklusi niso prizadeti.
Ker so naravni oligonukleotidi labilni proti celičnim in zunajceličnim nukleazam, je bilo narejenih veliko poskusov za raziskovanje modifikacij nukleotidov, posebno tistih modifikacij, ki so usmegene k izboljšanju rezistence za nukleaze in afinitete za vezavo. Za oligonukleotide, ki vsebujejo določene bicikličnenukleozide,jebilodokazano, da kažejo izboljšano stabilnost zanukleaze(Leumannetal. Bioorg. Med. Chem. Letts. 1995,5,1231-4; Altmann et al. Tetrahedron Lett. 1994,35, 23312334,7625-7628). Nedavno so bili sintetizirani in v oligonukleotide vključeni 2'-O,4'-C-metilen ribonukleozidi, ki imajo blokirano 3'-endo sladkorno gubo (v angl. orig.: pucker). Raziskovanja hibridizacije dokazujejo, da lahko konformacijsko blokirani nukleozidi močno povečajo hibridizacijo modificiranih oligonukleotidov na komplementarno RNA in DNA (Obika et al. Tetrahedron Lett. 1997,38, 8735-8738; Koshkin et al. Tetrahedron 1998,54, 3607-3630).
Obstoji potreba za novimi, konformacijsko blokiranimi nukleozidi z bicikličnimi sladkornimi deli. Ti novi nukleozidi naj bi bili uporabni pri protivirusnih, protirakavih in drugih terapijah Poleg tega naj bi imeli oligonukleotidi, sestavljeni iz teh novih, modificiranih nukleozidov, zaželeno stabilnost proti celičnim nukleazam in močno afiniteto za vezavo na tarče nukleinskih kislin. Zato naj bi bili ti oligonukleotidi potencialno uporabni pri terapevtiki in diagnostiki.
Povzetek izuma
Opisani so konformacijsko blokirani biciklični sladkorni nukleozidi, ki imajo skupno geometrijsko
-3obliko in postopki za izdelavo konformacijsko blokiranih bicikličnih sladkornih nukleozidov. Zagotovljeni so nukleozidi, ki imajo bicildične sladkorne dele in oligonukleotidi, ki obsegajo naslednjo formulo:
v čemer so X, Y in Z neodvisno izbrani iz skupine naslednjih, kot so O, S, CH 2 NR, OO, OCH 2 ali nič, kjer je R izbran iz skupine naslednjih, kot so vodik, alkil, alkenil, alkinil, acil; R j je izbran iz skupine naslednjih, kot so adenin, citozin, gvanin, hipoksantin, uracil, timin, heterocikli, H, 00¾, OAc, halogen, sulfonat; R?, R3 sta neodvisno izbrana iz skupine naslednjih, kot so H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OPtNiPr^CH^N, OPO3H, PO3H, difosfat, trifosfat; R2 in R3 skupaj sta lahko PhCHO2, TIPDSO2 ali DTBSO2.
Pričakujemo, da so novi nukleozidi, opisani tu notri, uporabni pri antivirusnih, protirakavih in drugih terapijah. Oligonukleotidi, sestavljeni iz teh modificiranih nukleozidov imajo zaželjeno fiziološko stabilnost in afiniteto vezave, ki jim omogoča, da so uporabni pri terapevtiki in diagnostiki.
Podroben opis
Zagotovljeni so konformacijsko blokirani nukleozidi, ki imajo 3'-endo sladkorno gubo in postopki njihove priprave. Postopki za pripravo prej objavljenih bicikličnih analogov nukleozidov se ne morej o uporabiti pri novih analogih nukleozidov, opisanih tu notri. Opisani analogi so bili posledica uspešnega povezovanja med C2' in C4' pozicijama riboze v analogih nukleozidov.
Kot je uporabljeno tu, se okrajšava Ac nanaša na acetil; okrajšava Bn se nanaša na benzil;
okrajšava Bz se nanaša na benzoil; okrajšava DMT se nanaša na dimetoksitritil; okrajšava
THP se nanaša na tetrahidropiranil; okrajšava TBDMS se nanaša na t-butildimetilsilil;
okrajšava TIPDS se nanaša na tetraizopropildisilil; in okrajšava DTBS se nanaša na di(t-butil)silil.
-4Sinteza 2,4-premoščenih derivatov ribofuranoze
1-a-metilarabinozo 1, pripravljeno po objavljenem postopku (Tejima et al. J. Org. Chem. 1963, 28.2999-3003), smo zaščitili z 1,1,3,3-tetraizopropildisiloksanil-om (TIPS) pri 03 in 05, da smo dobili 2, ki smo jo pretvorili v keton 3 z obdelavo z DMSO/DCC/TFA. Naslednja Wittig-ova reakcija in odstranitev TIPS je dala alken 4 z zelo dobrim dobitkom. Spojino 4 smo zaščitili z tbutildimetilsilil-om (TBS) pri 05 in z benzil-om (Bn) pri 03, da smo pridobili 5. Hidroboriranje spojine 5 smo izpeljali z 9-BBN, da smo pridobili izključno 2-deoksi-2-hidroksimetil derivat 6 z odličnim dobitkom. 2-deoksi-2-hidroksimetil derivat 6 smo podvrgli tritiliranju z 4,4'-O-dimetoksitritil (DMT) kloridom in odstranitvi TBS s tetrabutilamonijevim fluoridom (TBAF), da smo naredili 7.
Shema 1.
Spojino 7 smo oksidirali, da smo pridobili aldehid 8, ki smo ga obdelovali s formaldehidom in natrijevim hidroksidom, da smo proizvedli 4-hidroksimetil derivat 9 z odličnim dobitkom, Meziliranje derivata 9 in sledeča odstranitev DMT je dala 10. Ciklizacija, povzročena z NaH v THF in sledeča odstranitevmezilajedalabiciklični sladkor 11. Obdelava spojine 11 z acetanhidridom v prisotnosti DMAP daj e 12, medtem ko obdelava z acetanhidridom/ocetno kislino v prisotnosti žveplove kisline proizvede 13, pri kateri ima acetoksi pri Cl obrnjeno orientacijo (l-β) v primeri z metoksi spojine 11
-5Shema 2.
Sinteza 2',4'-premošČenih biciklonukleozidov
Biciklonukleozide, ki imajo 2',4'-premoščen sladkorni del, smo sintetizirali s kondenzacijami si 1 iliranih baz nukleozidov in bicikličnih sladkorjev, kot je prikazano spodaj. Kondenzacija spojine 13 z bis(trimetilsilil)timinom je dala proizvod 14, α-anomer, z odličnim dobitkom. Z obdelavo proizvoda 14 z BCl3 smo odstranili acetil in benzil istočasno, da smo proizvedli biciklični a-timidin 15
Kondenzacija spojine 13 s 6-kloro-9-trimetilsililpurinomje dala zmes a- in β-purinskih nukleozidov, in 17 (razmeije α:β, 1:1 do 2:3), ki smo jih lahko ločili s kromatografijo.
Obdelava 17 in 16 z amoniakom v metanolu, ki ji je sledila hidrogenoliza, je dala adenozinova analoga 18 in 19, poedino. Hidrogenoliza je zahtevala veliko količino materiala katalizatoija, tako kot tudi podaljšan reakcijski čas zaradi povečanega steričnega oviranja na sladkornem delu. Z obdelavo 17 in 16 z merkaptoetanolom v prisotnosti natrijevega metoksida, čemur je sledila hidrogenoliza, smo proizvedli inozinova analoga 20 in 21, poedino.
I8X*=NH2 19X-NH2
20Χ-ΘΗ 21Χ-ΟΗ
Kondenzacija spojine 13 s sililiranim N2-acetilgvaninom proizvede α-gvanozinov derivat 22 kot glavni produkt (30 %), majhno količino β-izomera in N7-vezane (v angl. orig.: N7-coupled) produkte. Obdelava α-gvanozinovega derivata z amoniakom v metanolu, čemur je sledila hidrogenoliza, je dala biciklični a-gvanozin 23.
-Ί-
Kot je opisano zgoraj, so kondenzacijske reakcije dale bodisi α-nukleozid, izključno, ali zmes ain β-nukleozidov, brez prednosti za β-anomere. Da bi povečali razmeije β-nukleozidov, smo preiskovali različne pogoje kondenzacije. Temperatura je imela majhen učinek na razmeije a- in β-anomerov. Reagent za pripajanje (v angl. orig.: coupling reagent) in funkcionalna skupina pri Cl sladkorja pa sta imela znatne učinke na razmerje a- in β-nukleozidov.
Kondenzacija spojine 12 zbis- ali tri(trimetilsilil) pirimidini v prisotnosti kositerfTV) klorida je dala β-nukleozidekotglavneproduktezdobrimi dobitki. Potemtakemjereakcijaspojinel2ssililiranim timinom dala timidinov derivat 24, z razmajem β: a ~4:1. Kondenzacija spojine 12 s sililiranim uracilom in N4-benzoilcitozinom je dala ustrezna nukleozida 25 in 26, poedino, z β: a razmerjem ~9:1 pri obeh reakcijah. Obdelava spojin 24-26 z borovim trikloridom je dala pirimidinove biciklonukleozide27-29, poedino. V primeru citidinovega derivata smo benzoil skupino spojine 29 odstranili z obdelavo z amoniakom, da smo pridobili 30. Alternativna pot (ni prikazano) za pripravo 30, je izhajala iz 28, kije bil acetiliran pri O3'in 05', čemur je sledila reakcija s triazolom in naslednja obdelava z amoniakom. Na ta način smo dobili 30 z zmernim dobitkom.
24X = OHY = Me 27X = OHY = Me
25X = OH,Y = H 28X = OH,Y = H
26X = NHBz,Y = H 29X = NHBz,Y = H
30X = NH2,Y = H
Raziskovali smotudikondenzacijospojinel2ssililiranimipurini,skupajskositer(IV)kloridomkot reagentom za pripajaiye. Za razliko od reakcij s pirimidini, je kondenzacija sililiranega 6-kloropurina z 12 dala ne samo a- in β-nukleozide 16 in 17, ampak tudi N7-vezni produkt (ni prikazano). Podobno je kondenzacija sililiranega N2-acetilgvanina z 12 dala zmes treh produktov, N7-vezan β-nukleozid 31 (42 %), zaželeni β-nukleozid 32 (10 %) in a-nukleozid 22 (6 %). Vendar seje N7-vezan produkt 31, če smo ga segrevali s sililiranim N2-acetilgvaninom v prisotnosti trimetilsilil triflata, deloma pretvoril v N9-vezane, a- in β-biciklonukleozide 22 (~22 %) in 32 (~25 %). Ločeni 32 smo podvrgli enakim obdelavam kot 22, da smo pridobili bicikličen β-gvanozin 33.
-9Stereokemijske določitve 2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktanovega derivata 11 in biciklonukleozidov, nastalih iz kondenzacije bicikličnih sladkorjev s sililiranimi bazami nukleozidov, lahko določimo z NOE protonsko NMR. Kot je naznačeno z modelom palička-kroglica (v angl. orig.: stick-ball), sili togi dioksabiciklo[3,2,l]oktanov obročni sistem protone (ΗΓ in H2') pri Cl' in C2' α-biciklonukleozidov, da postanejo skoraj paralelni, medtem ko soHl' inH2' v β-biciklonukleozidih obrnjeni na nasprotne strani. Na primer, torzijski kot ΗΓ-Ο'-02'-Η2' bicikličnega a-timidina 15 je 37° po optimizaciji geometrije in v skladnosti s tem smo pri protonski NMR ugotovili sklopitveno konstanto (v angl. orig.: coupling constant) 3,9 Hz. Torzijski kot H1'-C1'-C2'-H2' v bicikličnem β-timidinu 27 je po optimizaciji geometrije 96 0 in kot je bilo pričakovano, sklopitve med ΗΓ in H2' nismo opazili. Dejansko je proton pri Cl' v vseh izmegenih β-biciklonukleozidih posamezen vrh. Nasprotno j e v vseh izmeij enih α -biciklonukleozidih proton pri C1' dublet s sklopitveno konstantno ~4,0 Hz.
Stereokemijske določitve biciklonukleozidov so bile nadalje potrjene z rentgenskimi (v angl. orig.: X-ray) kristalnimi strukturami bicikličnih timidinov 15 in 27. Ribozin obroč dioksabiciklo[3,2,l]oktanovega sladkornega dela v obeh spojinah privzema tipično C3'-endo sladkorno gubo, medtem ko šestčlenski obroč v sladkornem delu privzema obliko stola. Timinova baza ima v obeh spojinah anti-orientacijo.
Sinteza fosforamiditov 2,4-premoščenega biciklonukleozida
Bicikličen β-ti mi din 27, bicikličen β-Ν4-Τ>βηζοΠοήΐ(ϋη 29 in bicikličen P-N4-acetilcitidin29 smo zaščitili z DMT in potem pretvorili v ustrezne fosforamidite, poedino. Zaradi steričnega oviranja je bil potreben daljši reakcijski čas.
DMT<
HO
P-O
CEO
X = OH, Y = Me 35X = NHAc, Y = H 36X = NHBz, Y = H
X = OH, Y = Me 38X-NHAc, Y = H 39 X = NHBz, Y = H
-10Sintezne poti, uporabljene za pripravo opisanih spojin, se lahko tudi uporabljajo za sintezo drugih zahtevanih spojin. Pričujoči izum vključuje, vendar ni omejen na spojine, ki so pripravljene s pomočjo naslednjih primerov. Številke v oklepaju, ki sledijo imenom spojin v primerih, ustrezajo številkam struktur v sekciji podrobnega opisa.
Primeri
Primer 1
Priprava 1-a metil-3,5-0-(1,l,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-ribofuranoze (2) α-metilarabinozo smo pripravili po objavljenem postopku (Tejima, S.; Fletcher, Jr. H. G. J. Org. Chem. 1963,28,2999-3003) in ločili od njenega β-anomera (stranski produkt) s kromatografijo na siliki. V mešano raztopino a -metilarabinoze (19,27 g, 119,9 mmola) v brezvodnem piridinu (200 mL) pri 0 °C smo dodali l,3-dikloro-l,l,3,3-tetraizopropildisiloksan (38,4 mL, 119,9 mmola). Nastalo raztopino smo mešali pri 0 °C v teku 1 h in potem pri sobni temperaturi v teku 1,5 h. Raztopino smo ohladili na 0 °C in dodali vodo (20 mL). Zmes smo mešali v teku 10 min in razredčili z EtOAc. Vodni sloj smo ekstrahirali z EtOAc. Združeni organski sloj smo sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki s 15 % EtOAc v heksanih je dala 42,7 g (88 %) naslovne spojine kot brezbarven sirup.
Primer 2
Priprava 2-C,2-O-didehidro-a-metiI-3,5-0-(1,l,3,3-tetraizopropil-L3disiloksandiil)-D-ribofuranoze (3)
V mešano raztopino 1-a-metil-3,5-0-(1,1,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-nbofuranoze (42,6 g, 104,9 mmola) in DCC (43,4 g, 209,8 mmola) v brezvodnem DMSO (250 mL) in etru (100 mL) pri 0 °C pod argonom smo dodali raztopino trifluoroocetne kisline (4,04 mL, 52,5 mmola) in piridin (8,44 mL, 105 mmolov) v DMSO (30 mL). Nastalo reakcijsko zmes smo segreli do sobne temperature, mešali v teku 5 h in potem ohladili na 0 <€. Dodali smo oksalno kislino (21,3 g, 236 mmolov) v metanolu (60 mL), čemur je sledilo dodajanje vode (30 mL). Nastalo zmes smo mešali
-11pri sobni temperaturi v teku 1 h in oborino filtrirali in temeljito izprali s heksani. Filtrat smo dalje razredčili s heksani, petkrat izprali z vodo, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 2 % MeOH v metilen kloridu-heksanih (1:2) je dala 37,6 g (89 %) naslovne spojine kot brezbarven sirup; hi NMRlCDClj) δ 1,00-1,12 (m, 28H,TIPDS), 3,47 (s, 3H, OCH3), 4,05-4,19 (m, 3H, H4, H5a, H5b), 4,51 (dd, J = 9,3 Hz, 1,5 Hz, IH, H3), 4,89 (t, J = 1,5 Hz, IH, HI).
Primer 3
Priprava 2-deoksi-2-metilen-l-a-metil-3,5-0-(1,1,3,3-tetraizopropil-l, 3disiloksandiil)-D-ribofuranoze
V mešano suspenzijo metiltrifenilfosfonijevega bromida (21,5 g, 60,1 mmola) v brezvodnem etru (1380 mL) pri sobni temperaturi pod argonom smo dodali raztopino natrijevega r-pentoksida (5,97 g, 54,0 mmolov) v brezvodnem benzenu (50 mL). Nastalo svetlo rumeno zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 6 h in ohladili na -10 TL potem smo dodali raztopino 2-C,2-O-didehidroa-metil-3,5-0-(1,1,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-ribofuranoze (12,1 g, 30,1 mmola) v etru (35 mL). Reakcijsko zmes smo mešali pri -10 °C v teku 1 h, dvakrat izprali s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali. Kromatografija na siliki s 5 % EtOAc v heksanih je dala 11,0 g (91 %) naslovne spojine kot brezbarven sirup; hlNMR^DCl}) δ 1,00-1,12 (m, 28H, TIPDS), 3,45 (s, 3H, OCH3), 3,73 (dt, J = 9,0 Hz, 3,0 Hz, IH, H4), 4,02,4,03 (2s, 2H, H5), 4,62 (dt, J = 9,0 Hz, 2,7 Hz, IH, H3), 5,27 (m, IH, HI), 5,32-5,36 (m, 2H, H2’),
Primer 4
Priprava 2-deoksi-2-metilen-l-a-metil-D-ribofuranoze (4)
V mešano raztopino 2-deoksi-2-metilen-l-a-metil-3,5-(9-(1,1,3,3-tetraizo-propil-l,3-disiloksandiil)D-ribofuranoze (35,0 g, 87,1 mmola) v THF (200 mL) smo dodali 1,0 M TBAF v THF (180 mL).
Nastala raztopina je stala pri sobni temperaturi v teku 1 h. THF smo izparili in ostanek kromatografirali na siliki z 10 % EtOH v metilen kloridu, da smo pridobili 14,6 g (88 %) naslovne spojine kot sirup.
-12Primer 5
Priprava 3-O-benzil-5-O-(i-butildimetilsiIiI)-2-deoksi-2-metiIeii-l-ametil-D-ribofuranoze (5)
Raztopina 2-deoksi-2-metilen-l-a-metil-D-ribofuranoze (13,7 g, 85,5 mmola) in TBDMS-C1 (13,5 g, 89,6 mmola) v brezvodnem piridinu (130 mL) je stala pri sobni temperaturi v teku 15 h. Po ohladitvi na 0 XI in dodajanju vode (2 mL), smo nastalo zmes mešali pri sobni temperaturi v teku 1 h, koncentrirali na polovico volumna, razredčili z EtOAc, izprali s slanico, sušili (Na £0 $ in koncentrirali do suhega. Temeljito sušeno surovo snov smo raztopili v THF (70 mL) in dodali v mešano zmes NaH (60 % v mineralnem olju, 5,6 g, 140 mmolov) v THF (350 mL) pri 0 Tl· Po mešanjupri sobni temperaturi vteku40 min, smo dodali benzil bromid(10,75 mL,90,5 mmola). Reakcijsko zmes smo mešali v teku 4 h in ohladili na 0 93, čemur je sledilo počasno dodajanje vode (2 mL) in potem 10 % AcOH v vodi do pH 7. Zmes smo razredčili z EtOAc, izprali s slanico, potem z razredčenim natrijevim bikarbonatom, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 0-10 % EtOAc v heksanih je dala 23,8 g (76 %) naslovne spojine kot brezbarvno tekočino; Ή NMR (CDC13), δ 0,01 (s, 3H, SiCH3), 0,02 (s, 3H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, t-Bu), 3,41 (s, 3H, OCH3), 3,60-3,72 (m, 2H, H5a, H5b), 4,20 (dd, J = 8,7 Hz, 4,5 Hz, IH, H3), 4,57,4,66 (AB, J = 12,0 Hz, 2H, Bn), 5,22 (t, J = 1,2 Hz, IH, HI), 5,38 (t, J = 1,5 Hz, IH, H2a'), 5,43 (m, J = 1,2 Hz, IH, H2b’), 7,23-7,37 (m, 5H, Bn); Anal. Izračunano za C20H32O4Si: C, 65,89; H, 8,85. Ugotovljeno: C, 65,92; H, 9,22.
Primer 6
Priprava 3-č?-benzil-5-O-(/-butildimetiIsilil)-2-dcoksi-2-hidroksimetil-l - a metil-D-ribofuranoze (6)
V mešano raztopino 3-(9-benzil-5-č?-(/-butildimetilsilil)-2-deoksi-2-metilen-1 -a-metilD-ribofuranoze (5,28 g, 14,50 mmola) pod argonom smo dodali 9-BBN (0,5 M v THF, 87 mL). Nastalo raztopino smo mešali pri okoliški temperaturi v teku 1 h, potem pri 40 U preko noči, ohladili na sobno temperaturo in prenesli v stekleničko, kije vsebovala natrijev perborat tetrahidrat (13,39 g, 87 mmolov) v vodi (85 mL) in etanol (85 mL). Nastalo zmes smo močno mešali pri 50 °C v teku 4 h, ohladili na 0 °C, nevtralizirali z AcOH na pH 8 in koncentrirali na majhen volumen. Preostali volumen smo razredčili z vodo (20 ml) in trikrat ekstrahirali z metilen kloridom. Združeni
-13organski sloj smo izprali dvakrat s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z EtOAC-heksani (1:2) je dala 5,17 g (93 %) naslovne spojine kot brezbarvni sirup; ’HNMR (CDC13) δ 0,03 (s, 6H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, t-butil), 2,34-2,43 (m, IH, H2), 3,39 (s, 3H, OCH3), 3,48 (dd, J = 10,5 Hz, 6,0 Hz, IH, H5a), 3,60 (dd, J = 10,5 Hz, 3,6 Hz, IH, H5b), 3,88 (d, J = 7,2 Hz, 2H, H2'), 3,98 (dd, J = 7,2 Hz, 2,7 Hz, IH, H3), 4,17 (m, IH, H4), 4,44,4,66 (AB, J = 12,3 Hz, 2H, Bn), 4,95 (d, J = 5,4 Hz, IH, HI), 7,23-7,36 (m, 5H, Bn); Anal. Izračunano za C2oH3405Si: C, 62,79; H, 8,96. Ugotovljeno: C, 62,92; H, 9,21.
Primer 7
Priprava 3-O-bcnzil-2-deoksi-2-(4,4'-dimetoksitritiIoksimetil)-l-a-metiID-ribofuranoze (7)
Raztopina 3-O-benzil-5-O-(/-butildimetilsilil)-2-deoksi-2-hidroksimetil-1 -a -metil-D-ribofuranoze (6,60 g, 17,28 mmola) in DMT-C1 (7,03 g, 20,74 mmola) v brezvodnem piridinu (50 mL) je stala pri sobni temperaturi preko noči in reakcijo smo pogasili z dodajanjem vode (8 mL). Nastala raztopina je stala v teku 10 min in razredčili smo jo z EtOAc, trikrat izprali s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali, da smo pridobili surovo snov 9, ki smo jo raztopili v THF (52 mL). Dodali smo TBAF (1,0 M v THF, 26 mL) in nastala raztopina je stala pri sobni temperaturi v teku 30 min. THF smo izparili in ostanek kromatografirali na siliki z EtOAc-heksanom (1:1), da smo pridobili 9,28 g (94 %) naslovne spojine kot belo peno; *H NMR (CDCl^ δ 2,33-2,42 (m, IH, H2), 3,26-3,63 (m, 7H, H5a, H5b, H2a', H2b', OCH3), 3,79 (d, J = 1,2 Hz, 6H, DMT), 3,91 (dd, J - 7,5 Hz, 2,4 Hz, IH, H3), 4,13 (m, IH, H4), 4,41,4,50 (AB, J = 12,9 Hz, 2H, Bn), 5,05 (d, J = 5,1 Hz, IH, HI), 6,78-6,85 (m, 4H, DMT), 7,14-7,47 (m, 14H, Bn, DMT); Anal. Izračunano za C35H38O7: C, 73,66; H, 6,71. Ugotovljeno: C, 73,57; H, 6,76.
Primer 8
Priprava 3-0-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-5-C,5-0didehidro-1- α -metil-D-ribofuranoze (8)
V mešano raztopino 3-D-benzil-2-deoksi-2-{4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-l-a-metil-D-ribofuranoze (9,18 g, 16,16 mmola) in DCC (10,0 g, 48,49 mmola) v brezvodnem DMSO (60 mL) pri 10 R3 smo dodali raztopino trifluoroocetne kisline (0,622 mL, 8,08 mmola) in piridina (1,95 mL, 24,24
-14mmola) v DMSO (15 mL), Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri 10 Τ' v teku 1 h, pri sobni temperaturi v teku 6 h in potem ohladili na 0 Tl· Po dodajanju vode (8 mL) smo zmes mešali preko noči in razredčili z EtOAC. Oborino smo filtrirali in temeljito izprali z EtOAc. Združeni filtrat smo petkrat izprali s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z EtOAc-heksani (L 1) je dala 8,26 g (90 %) naslovne spojine kot belo peno.
Primer 9
Priprava 3-0-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-dimetoksitritiIoksim etil)-4-Chidroksimetil-l-a-metil-D-ribofuranoze(9)
V mešano raztopino 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4’-dimetoksitntiloksimetil)-5-C,5-6L didehidro-l-a-metil-D-ribofuranoze (8,0 g, 14,08 mmola) in formaldehida (37 % v vodi, 85 mL) v dioksanu (420 mL) pri 0 T? smo dodali po kapljicah vodno raztopino NaOH (2,0 M, 210 mL) v teku 15 min. Nastalo motno raztopino smo mešali pri sobni temperaturi v teku 2 dni, daje postala bistra raztopina. Po ohladitvi na 0 T smo raztopino nevtralizirali z 10 % ocetno kislino na pH 8, koncentrirali na majhen volumen, razredčili z vodo (100 mL) in trikrat ekstrahirali z metilen kloridom. Združeni organski sloj smo izprali s slanico, sušili (Na ) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki s 4-5 % etanola v metilen kloridu je dala 8,11 g (94 %) naslovne spojine kot belo peno; ’Η NMR (CDC13) δ 2,46-2,57 (m, IH, H2), 3,23-3,73 (m, 9H, H5, H4', H2', OCH3), 3,79 (d, J = 1,8 Hz, 6H, DMT), 4,14 (d, J = 6,9 Hz, IH, H3), 4,43,4,47 (AB, J = 12 Hz, 2H, Bn), 4,97 (d, J - 4,8 Hz, IH, HI), 6,77-6,85 (m, 4H, DMT), 7,11-7,46 (m, 14H, Bn, DMT).
Primer 10
Priprava 3-O-benzil-2-deoksi-2-hidroksimetil-5-f?-mezil-4-meziIoksimetil-la-metil-D-ribofuranoze (10)
V mešano raztopino 3-0-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-4-Chidroksimetil-1 -a-metil-D-ribofuranoze (7,80 g, 13,0 mmolov) v brezvodnem piridinu (60 mL) pri 0 °C pod argonom smo dodali po kapljicah metansulfonil klorid (3,03 mL, 39 mmolov). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 45 min, ohladili na 0 T in razredčili z dodajanjem vode (5 mL). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 15 min, razredčili z EtOAc, trikrat izprali s slanico, sušili (Na in koncentrirali, da smo pridobili surovo snov kot
-15belo peno, ki smo jo raztopili v AcOH-vodi (80:20,400 mL). Nastala raztopina je stala pri sobni temperaturi v teku 2 h in razredčili smo jo z vodo (200 mL) ter koncentrirali na okoli četrtino volumna. Dodali smo vodo (100 mL) in zmes koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z EtOAc-heksani (3:1 to 1:0) je dala 5,32 g (90 %) naslovne spojine kot poltrdno snov; ‘H NMR (CDC13) δ 2,43-2,54 (m, IH, H2), 3,01 (s, 3H, OMs), 3,03 (s, 3H, OMs), 3,41 (s, 3H, OCH3), 3,81 (d, J = 4,8 Hz, 2H, H2’), 4,01,4,04 (AB, J = 10,5 Hz, 2H, H4’), 4,21 (d, J = 7,5 Hz, IH, H3), 4,30, 4,50 (AB, J = 1,8 Hz, 2H, H5), 4,56,4,63 (AB, J = 12,0 Hz, 2H, Bn), 4,99 (d, J = 5,1 Hz, IH, HI), 7,30-7,42 (m, 5H, Bn); Anal. Izračunano za C ^270^2: C, 44,82; H, 5,97. Ugotovljeno: C, 44,68; H, 6,00.
Primer 11
Priprava (/5,35,4R,8ky)-8-benziloksi-l-hidroksimetil-3-metoksi-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (11)
V mešano zmes NaH (60 % v mineralnem olju, 1,83 g, 22,90 mmola) v brezvodnem THF (200 mL) smo dodali raztopino 3-0-benzil-2-deoksi-2-hidroksimetil-5-0-mezil-4-meziloksimetil-la-metil-D-ribofuranoze (5,20 g, 11,45 mmola) v THF (30 mL). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri 55 9C v teku 42 h in reakcijo pogasili z dodajanjem vode pri 0 9C. THF smo izparili in dodali vodni NaOH (0,5 M, 250 ml). Nastalo zmes smo segrevali pri refluksu v teku 24 h, ohladili na 0 °C, nevtralizirali z razredčeno klorovodikovo kislino na pH 8, štirikrat ekstrahirali z metilen kloridom. Združeni organski sloj smo sušili (Na^SO^) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z EtOAc-beksani (2:1 do 1:0) je dala 3,16 g (98 %) naslovne spojine kot brezbarven sirup; 'HNMR (CDC13) δ 2,32 (m, IH, H2), 3,41 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4a’), 3,46-3,60 (m, 2H, 5H, H5, OCH3), 3,91 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b'), 3,92 (dd, J = 10,8 Hz, 2,4 Hz, IH, H2a’), 4,01 (d, J = 5,4 Hz, IH, H3), 4,04 (d, J = 10,5 Hz, H1, H2b’), 4,58,4,64 (AB, J = 12,0 Hz, Bn), 5,07 (d, J - 3,9 Hz, IH, HI), 7,28-7,40 (m, 5H, Bn).
Primer 12
Priprava (7R,35,4R,SA)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (12)
Raztopino (7S,3S,47?,SS)-8-benziloksi-l-hidroksimetil-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-16oktana (1,60 g, 5,71 mmola), acetanhidrida (1,08 ml, 11,42 mmola) in DMAP (2,09 g, 17,13 mmola) v brezvodnem metilen kloridu (10 mL) smo mešali pri sobni temperaturi v teku 2 h, ohladili na 0 °C in razredčili z metanolom (4 mL). Zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 15 min, razredčili z metilen kloridom, izprali s slanico in potem z 10 % NaHCO3, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z etil acetatom-heksani (1:1) je dala 1,82 g (99 %) naslovne spojine kot brezbarven sirup; NMR (CDC1 j) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,33 (m, IH, H2), 3,50 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4a’), 3,57 (s, 3H, OCH3), 3,86-4,04 (m, 5H, H2a', H2b', H3, H4b', H5a), 4,14 (d, J = 12,0 Hz, IH, H5b), 4,50,4,64 (AB, J = 12,0 Hz, IH, Bn), 5,09 (d, J = 3,9 Hz, IH, HI), 7,29-7,42 (m, 5H, Bn); Anal. Izračunano za C C, 63,34; H, 6,88. Ugotovljeno:
C, 63,41; H, 6,94.
Primer 13
Priprava (7/?,3S,4/f,&y)-3-acetoksi-l-acetoksimelil-8-benziloksi-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (13)
V mešano raztopino (J S, 3S,4R, <5S)-8-benziloksi-1 -hidroksimetil-3-metoksi2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (600 mg, 2,14 mmola) v zmesi ocetne kisline (6,0 mL) in acetanhidrida (0,6 mL) pri 0 AC smo dodali po kapljicah koncentrirano žveplovo kislino (57 pL, 1,07 mmola). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri 0 °C v teku 10 min in potem pri sobni temperaturi v teku 2 h. Po ohladitvi na 0 92, smo raztopino razredčili z EtOAc, trikrat izprali s slanico in potem z 10 % natrijevim bikarbonatom, sušili (Na ^O^ in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z EtOAc-heksani (2:3) je dala 696 mg (93 %) naslovne spojine (β-anomer) in 31 mg (3 %) α-anomera, oba kot brezbarven sirup, β-anomer seje strdil po stanju več dni pri sobni temperaturi; tal.: 55-58 AC; !H NMR (CDClj) δ 2,03 (s, 3H, OAc), 2,08 (s, 3H, OAc), 2,36-2,39 (m, IH, H2), 3,49 (d, J - 10,8 Hz, H4a’), 3,73 (d, J = 11,1 Hz, 2,7 Hz, IH, H2a'), 3,89 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b'), 4,01 (d, J = 11,1 Hz, IH, H2b'), 4,03 (d, J=9,3 Hz, IH, H5a), 4,14 (d, J = 5,1 Hz, IH, H3),4,55 (d, J = 9,6 Hz, IH,H5b), 4,55,4,64 (AB, J = 11,7Hz, 2H, Bn), 6,39 (s, IH, HI), 7,29-7,42 (m, 5H, Bn); Anal. Izračunano za C18H22O7: C, 61,70; H, 6,33. Ugotovljeno: C, 61,74; H, 6,46.
-17Primer 14
Priprava 4/^85)-l-acetoksimetiI--8-benziloksi-3-(timin-l-iI)-2,6dioksabiciklo[3,2,ljoktana (14)
Zmes tunina (189 mg, 1,5 mmola) in brezvodnega amonijevega sulfata (15 mg) v HMDS (6 mL) smo segrevali pri refluksu preko noči. Po odstranitvi HMDS smo ostanek soizparili z brezvodnim /n-ksilenom, sušili pod vakuumom v teku 30 min in raztopili v raztopini (1R,3S,4R,8S)3-acetoksi-l-acetoksimetil-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2, ljoktana (306 mg, 0,87 mmola) v 1,2-dikloroetanu (5 mL). V to mešano raztopino pod argonom smo dodali po kapljicah trimetilsilil triflat (0,38 mL) v 1,2-dikloroetanu (2 mL). Nastalo raztopino smo segrevali pod refluksom v teku 2 h, ohladili na 0 °C, razredčili s kloroformom in nevtralizirali z 10 % NaHCO 3 (10 mL). Organski sloj smo ločili in vodni sloj dvakrat ekstrahirali s kloroformom. Združeni organski sloj smo sušili (Na2SO4) inkoncentrirali do suhega. Kristalizacija izEtOAc-CH2CI2 je dala naslovno spojino (303 mg, 83 %) kot brezbarvno trdno snov; tal.: 198-200 AC; NMR (CDCI3) δ 1,94 (d, J = 1,2 Hz, IH, A1CH3), 2,04 (s, 3H, OAc), 2,93 (m, IH, H2'), 3,50 (dd, J = 11,8 Hz, 2,1 Hz, IH, H2a), 3,59 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4a), 4,016 (d, J = 11,7 Hz, IH, H4b), 4,022 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5a’), 4,09 (d, J = 12,0 Hz, IH, H2b), 4,11 (d, J=4,5 Hz, IH, H3’), 4,27 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5b'), 4,53,4,70 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 5,88 (d, J = 3,6 Hz, IH, ΗΓ), 7,30-7,42 (m, 5H, Bn), 7,74 (d, J = 1,5 Hz, IH, H6), 8,79 (s, IH, NH); Anal. Izračunano za C21H24N2O7: C, 60,57; H, 5,81; N, 6,73. Ugotovljeno: C, 60,55; H, 5,84; N, 6,69.
Primer 15
Priprava (ISJ S, 4R,&y)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(timin-l-il)-2,6dioksabicikloJ3,2, ljoktana (15)
V raztopino (//?,XS',-//?,<51S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timm-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,ljoktana v brezvodnem metilen kloridu (3 mL) pri 10 AC smo dodali borov triklorid (1,0 M v CH2C12,6 mL). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri 15 AC do sobne temperature preko noči in ohladili na 0 °C. Po kapljicah smo dodali metanol (1,5 mL) in nastalo zmes mešali pri 0 AC v teku 15 min, čemur je sledilo dodajanje trietilamina (2 mL). Topilo smo izparili in oborino temeljito ekstrahirali s toplim acetonom. Acetonsko raztopino smo sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 10 % metanola v kloroformu je dala 99 mg 20 kot belo peno.
-18Kristalizacija iz acetona je dala 95 mg (93 %) naslovne spojine kot brezbarvno trdno snov; tal.: 225-226 °C; 'f lNMR (DMSO-d6) δ 1,76 (d, J - 0,9 Hz, IH, ArCH3), 2,45 (m, IH, H2'), 3,25 (dd, J = 11,4 Hz, 2,1 Hz, IH, H2a), 3,32-3,52 (m, 2H, H5'), 3,53 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4a), 3,72 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b), 3,93 (d, J = 11,1 Hz, IH, H2b), 4,16 (m, IH, H3’), 4,84 (t, J = 6,0 Hz,
IH, OH), 5,74 (d, J = 4,2 Hz, IH, HI’), 5,84 (d, J = 3,9 Hz, IH, OH), 7,76 (d, J - 1,2 Hz, 1 H, H6),
II, 32 (s, IH, NH); MS m/z 285 (MH4); Anal. Izračunano za C12Hl6N2O6: C, 50,70; H, 5,67; N, 9,85. Ugotovljeno: C, 50,85; H, 5,68; N, 9,75.
Primer 16
Priprava (77?,3/?,47?,85)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (17) in (7/?,35,47?,S0’)-l-acetoksimetiI-8-benziloksi-3(6-kloropurin-9-il)-2,6-dioksabicikloI3,2,l]-oktana (16)
Zmes 6-kloropurina (246 mg, 1,6 mmola) in HMDS (8,0 mL) smo refluksirali pod argonom v teku 2 h. HMDS smo izparili in ostanek sušili pod vakuumom v teku 30 min in potem raztopili v raztopini (IR, 3S, 4R, &S)-3-acetoksi-1 -acetoksimetil-8-benzi]oksi-2,6- dioksabiciklo[3,2,1 joktana (302 mg, 0,83 mmola) v brezvodnem 1,2-dikloroetanu (5,0 mL), čemur je sledilo dodajanje trimetilsilil triflata (0,38 mL, 2,25 mmola) v 1,2-dikloroetanu (2,0 mL). Nastalo raztopino smo segrevali pri refluksu pod argonom v teku 45 min. Dodelava je bila enaka, kot je tista, kije bila opisana prej. Kromatografija na siliki z EtOAc-beksani (1:1) je dala (/R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktan (122 mg, α-anomer) in (77?,3/?,77?,55)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)·
2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktan(157 mg, β-anomer), oba kot brezbarvno trdno snov. Celoten dobitek je bil 75 %. α-izomer: JHNMR (CDClj) δ 2,05 (s, 3H, OAc), 2,89 (m, IH, H2'), 3,23 (dd, J 12,0 Hz, 2,4 Hz, IH, H2a), 3,72 (d, J = 11,7 Hz, H4a), 4,09 (d, J = 12,3 Hz, 2H, H4, H5a’), 4,13 (d, J = 13,2 Hz, IH, H2b), 4,24 (d, J = 4,8 Hz, H3’), 4,29 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b’), 4,60,4,74 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,50 (d, J = 4,2 Hz, IH, HI'), 7,32-7,44 (m, 5H, Bn), 8,69 (s, IH, H8), 8,78 (s, IH, H2). β-izomer: tal.: 124-125 T (EtOAc-heksani);1H NMR (CDC1)3 δ 2,05 (s, 3H, OAc), 2,90 (m, IH, H2’), 3,55 (d, J = 11,1 Hz, H4a”), 3,95-4,03 (m, 2H, H2a”, H4b), 4,18-4,24 (m, 3H, H5’, H2b), 4,32 (d, J - 4,8 Hz, H3'), 4,47,4,63 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,52 (s, IH, ΗΓ), 7,24-7,35 (m, 5H, Bn), 8,40 (s, IH, H8), 8,72 (s, IH, H2); Anal. Izračunano za C21H21N4O5C1: C, 56,70; H, 4,76; N, 12,59. Ugotovljeno: C, 56,36; H, 4,56; N, 12,37.
-19Primer 17
Priprava (7/?,35,4R,S5)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-9-iI)-8-benziloksi2,6-dioksabiciklo(3,2,l]oktana (22)
Zmes N2-acetil gvanina (193 mg, 1,0 mmol) in amonijevega sulfata (20 mg) v piridinu (1,0 mL) in HMDS (5,0 mL) smo refluksirali pod argonom v teku 3 h. Nastalo bistro raztopino smo koncentrirali in soizparili s ksilenom (10 mL, sušen z natrijem). Ostanek smo sušili pod vakuumom pri 50 °C v teku 1 h in raztopili v raztopini (//?,35,4/?,SS)-3-acetoksi-l-acetoksimetil-8benziloksi-2,6-djoksabiciklo[3,2,l]oktana (175 mg, 0,5 mmola) v brezvodnem 1,2-dikloroetanu (5,0 mL), čemur je sledilo dodajanje trimetilsilil triflata (0,27 mL, 1,5 mmola) v 1,2-dikloroetanu (1,0 mL). Nastalo raztopino smo mešali pri sobni temperaturi pod argonom v teku 30 min, potem segrevali pri 70-75 9C v teku 2 h, ohladili na 0 9C in nevtralizirali z 10 % natrijevim bikarbonatom (10 mL). Nastalo zmes smo mešali v teku 15 min in organski sloj ločili. Vodni sloj smo dvakrat ekstrahirali s kloroformom. Združeni organski sloj smo sušili (Na £>O $ in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 10 % etanola in CHC1 j-EtOAc (1:1) je dala naslovno spojino (72 mg, 30 %) kot brezbarvno trdno snov; tal.: 249 9C (razkroj, EtOAc); ]HNMR (CDClj) δ 2,01 (s, 3H, OAc), 2,29 (s, 3H, NAc), 2,75 (m, IH, H2'), 3,29 (dd, J = 11,7 Hz, 1,8 Hz, IH, H2a), 3,66 (d, J -11,4 Hz, IH, H4a), 4,03 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4b), 4,05 (d, J = 11,7 Hz, IH, H2b), 4,70 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5a'), 4,13 (d, J = 4,8 Hz, H3'), 4,23 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b’), 4,53,4,67 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,17 (d, J = 4,2 Hz, IH, HI'), 7,28-7,40 (m, 5H, Bn), 8,32 (s, IH, H8), 9,80 (s, ΙΗ,ΝΗ), 12,12 (s, ΙΗ,ΝΗ).
Primer 18
Priprava (75,3/f,4/?,85T)-3-(adenin-9-iI)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6dioksabiciklo[3,2,l Joklana (18)
Raztopino (/7?,37?,47?,55)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)-2,6dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (100 mg, 0,225 mmola) v zmesi dioksana (20 mL) in 30 % vodnega amonijevega hidroksida (20 mL) smo segrevali v jeklenem avtoklavu (v angl. orig.: Steel bomb) pri 100 °C v teku 16 h. Topila smo izparili in ostanek raztopili v metanolu, čemur je sledilo dodajanje 20 % paladijevega hidroksida na oglju (~50 % vode, 3 x 250 mg, dodano vsak dan). Hidrogenolizo smo izvajali pri sobni temperaturi pod 55 psi (= 3,79 χ 10 5Pa, opomba prev.) vodika
-20v teku 4 dni. Katalizator smo filtrirali in izprali z metanolom. Združeno metanolno raztopino smo koncentrirali in ostanek kromatografirali na siliki z 20 % metanola v metilen kloridu, da smo pridobili naslovno spojino (39 mg, 59 %) kot brezbarvno trdno snov, ki smo jo kristalizirali iz metanola; tal.: 250 <€ (razkroj); h i NMR (DMSO-d6+ D/)): δ 2,53 (m, IH, H2'), 3,33 (d, J = 11,1 Hz, IH, H2a), 3,40 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5a'), 3,50 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5b'), 3,69-3,76 (m, 2H, H2b, H4a), 4,05 (d, J = 10,2 Hz, H4b), 4,45 (d, J = 5,1 Hz, IH, H3'), 6,26 (s, IH, HI'), 7,28 (m, 2H, NH2), 8,12 (s, IH, H8), 8,33 (s, IH, H2); MS: 294 (MH4); Anal. Izračunano za C12H15N5O4: C, 49,14; H, 5,16; N, 23,88. Ugotovljeno: C, 49,01; H, 4,97; N, 23,92.
Primer 19
Priprava (75)35,4//,&y)-3-(adenin-9-iI)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (19)
Podoben postopek, kot je opisan v Primeru 18, je dal naslovno spojino (43 mg, 65 %) kot brezbarvno trdno snov iz (7//,35,-///,(S5)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurm-9-il)2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (100 mg), h i NMR (CDpD): δ 2,71 (m, IH, H2'), 3,13 (dd, J = 11,7 Hz, 2,4 Hz, IH, H2a), 3,57 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5a'), 3,64 (d, J = 11,1 Hz, H4a), 3,68 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b'), 3,96 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b), 4,14 (d, J = 11,7 Hz, IH, H2b), 6,39 (d, J = 4,2 Hz, IH, HI'), 8,04 (s, IH, H8), 8,44 (s, IH, H2); MS m/z 294 (MH+).
Primer 20
Priprava (75,37/,4R,85)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(hipoksantin-9-il)-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (20)
Raztopini (/7/,3//,4/7,&S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1 ]-oktana (150 mg, 0,34 mmola) in merkaptoetanola (0,19 mL, 2,7 mmola) v metanolu (20 mL) smo dodali natrijev metoksid (0,37 mL 5,4 M v metanolu, 2,0 mmola). Nastalo raztopino smo segrevali pod refluksom v teku 6 h, ohladili na sobno temperaturo, nevtralizirali z 10 % AcOH na pH 7. Metanol smo izparili in ostanek razredčili z 1,0 M NaHCOj (15 mL), čemur je sledila ekstrakcija z 10 % metanola v kloroformu, dokler vodna faza ni več vsebovala produkta. Združeni organski sloj smo sušili (Na^O^ in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 10-15 % metanola v kloroformu je dala 109 mg (84 %) inozinovega derivata (ni pokazano) kot brezbarvno
-21trdno snov, od katerega smo 100 mg (0,26 mmola) raztopili v metanolu, čemur je sledilo dodajanje 20 % paladijevega hidroksida na oglju (50 % vode, 600 mg). Hidrogenolizo smo izvajali pri sobni temperaturi pod 50 psi (= 3,45 χ 105 Pa, opomba prev.) vodika v teku 3 dni. Katalizator smo filtrirali in izprali z metanolom. Združeno metanolno raztopino smo koncentrirali in ostanek kromatografirali na siliki z 20-25 % metanola v metilen kloridu, da smo pridobili 61 mg (61 %) naslovne spoj ine kot brezbarvno trdno snov, ki smo j o kristalizirali iz metanola-etil acetata; tal.: 22 8 °C (razkroj); ]H NMR (DMSO-d^: δ 2,52 (m, IH, ffi'), 3,30-3,55 (m, 3H, H5', ffia), 3,69 (dd, J = 11,1 Hz, 2,7 Hz, IH,H2a”), 3,73 (d, J = 10,8Hz, ffib), 4,05 (d, J = 10,8 Hz, IH, ffib), 4,40 (m, IH, ffib), 5,03 (t, J = 6,0 Hz, IH, OH), 5,74 (d, J = 4,2 Hz, IH, OH), 6,24 (s, IH, ΗΓ), 8,06 (s, IH, H8), 8,30 (s, IH, ffi), 12,40 (s, IH, NH); MS m/z 295 (MII4).
Primer 21
Priprava (75,35',4R,85’)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(hipoksantin-9-il)-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (21)
Raztopini (IR, 3S,4/<&S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-kloropurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana(120mg,0,27mmola),merkaptoetanola(0,15mL,2,lmmola)vmetanolu(16 mL) smo dodali natrijev metoksid (1,62 mmola, 0,30 mL 5,4 M v metanolu). Podoben postopek, kot je opisan za Primer 20, je dal 37 mg (47 %) naslovne spojine kot higroskopsko trdno snov; ti NMR (DMSO-d6) δ 2,52 (m, IH, H2’), 3,06 (dd, J = 11,7 Hz, 2,4 Hz, IH, ffia), 3,34-3,53 (m, 2H, H5'), 3,56 (d, J = t1,1 Hz, IH, ffia), 3,79 (d, J = 11,4 Hz, IH, ffib), 3,98 (d, J - 11,4 Hz, IH, ffib), 4,31 (d, J = 4,5 Hz, IH, H3’), 4,89 (br, IH, OH), 5,99 (br, IH, OH), 6,28 (d, J = 4,2 Hz, IH, HV), 8,03 (s, IH, H8), 8,27 (s, IH, ffi), 12,30 (br, IH, NH).
Primer 22
Priprava (/5,35,4R,8A)-3-(gvanin-9-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6dioksabiciklo[3,2,l Joktana (23)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 18, je dal naslovno spojino (41 mg, 66 %) kot sivo belo trdno snov iz /7/č35,7A,55)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-9-il)-8-benziloksi-2,6dioksabiciklo[3,2,l joktana (100 mg). 1HNMR(DMSO-d6+ Dp)<5 2,42 (m, IH,H2’),3,15 (dd,
-22J = 11,4 Hz, 2,1 Hz, IH, H2a), 3,34 (d, J = 11,4 Hz, IH, H5a’), 3,47 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5b’),
3.51 (d, J = 12,0 Hz, IH, H4a), 3,77 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4b”), 3,98 (d, J = 11,7 Hz, IH, H2b), 4,23 (d, J = 4,8 Hz, IH, H3'), 4,80 (br, IH, OH), 5,90 (br, IH, OH), 6,05 (d, J = 4,2 Hz, IH, ΗΓ),
6.52 (br, 2H, NH2), 7,93 (s, IH, H8), 12,30 (br, IH, NH); MS m/z 310 (MH+)·
Primer 23
Priprava (7U,3/?,4J?,85)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-l-il)-2,6dioksabiciklo[3,2,l]oktana (24)
Reakcijo smo izvajali po istem postopku, kot je opisan za Primer 14, razen da je bil reagent za pripajanje kositer(IV) klorid (0,45 mL) in sladkorni substrat je bil (1R,3S,4R,8S)-1acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (202 mg, 0,63 mmola). Kromatografija na siliki s 5 % EtOH v CH2C12 je dala zmes (233 mg, 89 %) naslovne spojine (β-anomer) in njenega a-anomera (razmeije β:α, ~4:1) kot brezbarvno trdno snov. !HNMR (CDC13) β-anomera (iz spektra zmesi a- in β-anomerov) δ 1,93 (d, J = 0,9 Hz, IH, AiCH3), 2,05 (s, 3H, OAc), 2,66 (m, IH, H2*), 3,48 (d, J = 11,1 Hz, H4a), 3,86-4,12 (m, 5H, H2a, H2b, H3', H4b, H5a’), 4,26 (d, J = 12,6Hz, H5b'), 4,44,4,64 (AB, J = 11,4 Hz, 2H,Bn), 6,06 (s, IH, HI'), 7,26-7,42 (m, 5H, Bn), 7,59 (d, J = 1,2 Hz, IH, H6), 8,94 (s, IH, NH).
Primer 24
Priprava (/Z?,3Z?,4/?,&y)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(uracil-l-il)-2,6dioksabiciklo|3,2,lloktana (25)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 23, je dal, po kromatografiji na siliki s 5 % EtOH v metilen kloridu, zmes (267 mg, 87 %) naslovne spojine in njenega a-anomera (razmeije β: a, ~9:1) kot brezbarvno trdno snov iz (//?,35',-//?,YS’)-l-acetoksimetil-8-benziloksi3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana(230mg,0,71mmola)insililiranegauracila(2,0mmola). Naslovno spojino (β-anomer) smo delno ločili s kromatografijo na siliki; tal.: 145-147 °C (EtOAc-heksani); JHNMR (CDC13) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,67 (m, IH, H2'), 3,49 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4a), 3,86-3,97 (m, 3H, H2a, H3’, H4b), 4,08 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5a'), 4,09 (d, J = 10,5 Hz, IH, H2b),4,25 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b’), 4,44,4,64 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,05 (s, IH, HV), 7,26-7,40 (m, 5H, Bn), 5,69 (d, J = 8,1 Hz, IH, H5), 7,79 (d, J - 8,4 Hz, IH, H6), 8,92 (s,
-23ΙΗ,ΝΗ); Anal. Izračunano za C20H22^P7: č, 59,69; H, 5,51; N, 6,96. Ugotovljeno: C, 59,45; H, 5,56; N, 6,91.
Primer 25
Priprava (7/?,3/i,4/i,S5)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(N4-benzoilcitozin-l-il)2,6-dioksabiciklol3,2,lJoktana (26)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 23, je dal, po kromatografiji na siliki s 5 % EtOH v metilen kloridu, 910 mg (90%) naslovne spojine (β -anomer) kot brezbarvno trdno snov iz reakcije (/R3S,7/?,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (645 mg, 2,0 mmola) s sililiranimN4-benzoilcitozinom (4,0 mmoli); tal.: 173-174 ‘U (EtOAc); ]HNMR (CDC13) δ 2,07 (s, 3H, OAc), 2,83 (m, IH, H2’), 3,51 (d, J = 11,1 Hz, H4a), 3,86 (d, J = 5,4 Hz, IH, H3'), 3,97 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b), 3,99-4,13 (m, 3H, H2a, H2b, H5a'), 4,27 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b'), 4,38,4,61 (AB, J = 11,4 Hz, 2H, Bn), 6,15 (s, IH, HI’), 7,24-7,38 (m, 5H, Bn), 7,50-7,66 (m, 4H, H5, Bz), 7,90 (m, 2H, Bz), 8,28 (d, J = 7,5 Hz, IH, H6), 8,84 (br, IH, NH); Anal. Izračunano za C27H27N3O7: C, 64,15; H, 5,38; N, 8,31. Ugotovljeno: C, 64,10; H, 5,20; N, 8,43.
Primer 26
Priprava (1S,3R,4R, &S)-8-hidroksi-l-hidroksimetiI-3-(timin-l-il)2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (27)
Raztopini zmesi (//<3//,7/?,&S’)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,ljoktana in njegovega a-anomera(~4:1,200 mg, 0,48 mmola) v brezvodnem metilen kloridu (4 mL) pri 0 °C smo dodali borov triklorid (1,0 M v CH jCl^ 8 mL). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 8 h, pri 15 9C preko noči in potem ohladili na 0 Tl Po kapljicah smo dodali metanol (5,0 mL), čemur je sledilo dodajanje 1,0 M NaOMe v MeOH do pH 8. Raztopino smo ločili in oborino temeljito ekstrahirali z 20 % metanola v metilen kloridu. Združeni filtrat smo sušili (Na^O^) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z 10-15 % metanola v etil acetatu je dala naslovno spojino (78 mg), zmes naslovne spojine in njenega a-anomera (24 mg) in a-anomer(23 mg), vse kot brezbarvno trdno snov. Celotni dobitekjebil 91 %. Kristalizacija naslovne spojine iz metanola-etil acetata je dala kristalinično trdno snov; tal.: 217-218 T3; *H
-24NMR (DMSO-d6): 6 l,75(d,J= 1,2 Hz, lH,ArCH3),2,24(m, IH,H2'),3,20(d, J= 10,8 Hz, IH, H4a), 3,33-3,58 (m, 3H, H2a, H5’), 3,66 (d, J = 10,8 Hz, H4b), 3,97 (d, J = 10,5 Hz, IH, H2b), 4,14 (m, IH, H3'), 5,24 (ζ J = 5,1 Hz, IH, OH), 5,67 (d, J = 2,4 Hz, IH, OH), 5,82 (s, IH, HI’), 7,95 (d, J = 0,9 Hz, IH, H6), 11,32 (s, IH, NH); MS m/z 285 (MH+), Anal. Izračunano za C12H16N2°6: c> 50,70; H, 5,67; N, 9,85. Ugotovljeno: C, 50,65; H, 5,57; N, 9,73.
Primer 27
Priprava (/5,3R,4R,85)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(uracil-l-il)-2,6dioksabiciklo|3,2,l]oktana (28)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 26, je dal, po kromatografiji na siliki z 10 % metanola v metilen kloridu, 110 mg (76 %) naslovne spojine kot belo trdno snov iz (JR, 3R, 4R, 8S)-\-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(uracil-1 -il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1 ]-oktana (215 mg, 0,53 mmola). Naslovna spojinajebilakontaminiranazmajhno količino njenega α-anomera. Čisto naslovno spojino smo dobili s prekristalizacijo iz acetona-etil acetata; tal. : 218-219 *C; tl NMR (aceton-dg) δ 2,42 (m, IH, H2’), 3,27 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4a), 3,58-3,72 (m, 3H, H2a, H5’), 3,83 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4b), 4,13 (d, J = 10,5 Hz, IH, HH2b), 4,37 (t, J = 5,1 Hz, IH, OH), 4,42 (m, IH, H3'), 4,88 (d, J = 3,9 Hz, IH, OH), 5,52 (d, J = 7,8 Hz, IH, H5), 5,95 (s, IH, HI’), 8,17 (d, J = 7,8 Hz, IH, H6), 10,02 (s, IH, NH); MS m/z 271 (MH4); Anal. Izračunano za C, ,Hi4N2O6: C, 48,89; H, 5,22; N, 10,37. Ugotovljeno: C, 48,60; H, 5,64; N, 10,21.
Primer 28
Priprava (/5,3R,4R,85)-3-(citoziii-l-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil2,6-dioksabiciklo[3,2,l|oktana (30)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 26, je dal, po kromatografiji na siliki z 10 % MeOH v metilen kloridu iz (//<3/<-//?I&S')-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(N4-benzoilcitozinl-il)-2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktana, 364 mg(65 %) (/.S',3//,7/?,(7.S)-3-(N4-benzoilcitozin-l-il)8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo-[3,2,l joktana (760 mg), od česar smo 120 mg (0,32 mmola) raztopili v nasičeni raztopini amoniaka v metanolu in raztopino mešali pri sobni temperaturi v teku 24 h. Amoniak in metanol smo izparili in ostanek raztopili v vodi, čemur je sledila temeljita ekstrakcija s kloroformom (5 krat) in potem s toluenom (2 krat). Vodo smo izparili in kristalizacija
-25iz metanola je dala 62 mg naslovne spojine (45 mg kristalinične trdne snovi in 17 mg nekristalinične trdne snovi); tal.: 250 <€ (razkroj); bi NMR (CDpD) δ 2,33 (m, IH, H2'), 3,31 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4a), 3,57 (d, J -12,3 Hz, IH, H5a'), 3,65 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5b’), 3,78 (dd, J = 10,5 Hz, 2,7 Hz, H2a), 3,84 (d, J = 11,1 Hz, IH, H4b), 4,14 (d, J = 10,5 Hz, IH, H2b), 4,20 (d, J = 5,1 Hz, IH, H3'), 5,86 (d, J = 7,5 Hz, IH, H5), 5,96 (s, IH, HI’), 8,22 (d, J = 7,8 Hz, IH, H6); MS: m/z 270 (MH4-); Anal. Izračunano za C11H15N3O5: C, 49,07; H, 5,62; N, 15,61. Ugotovljeno: C, 48,93; H, 5,55; N, 15,64.
Podobno smo pripravili (/S,5/?,7//&S)-3-(N4-acetilcitozin-l-il)-8~hidroksi-l-hidroksirnetil2.6- dioksabiciklo-[3,2,ljoktan.
Alternativen postopek Zmes (/lS,,3/<7/?,NS)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(uracil-l-il)2.6- dioksabiciklo[3,2,l]oktana (170 mg, 0,63 mmola), acetanhidrida (2,16 mL, 20,1 mmola) in piridina (0,29 mL, 3,5 mmola) v brezvodnem DMF (2,5 mL) smo mešali pri sobni temperaturi preko noči, razredčili z metilen kloridom, izprali s slanico in 10 % NaHCOg sušili (Na^SO^, koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki z etil acetatom-heksani (2:1) je dala 117 mg (77 %) 3',5’-diacetil derivata (IS, 3R, 4R, &S)-8-acetoksi-l-caetoksimetil-3-(uracil-l -il)-2,6dioksabiciklo[3,2,1 ]-oktana.
(/S,3R4/<8S)-8-acetoksi-l-caetoksimetil-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktan (175 mg, 0,58 mmola) smo raztopili v brezvodnem piridinu (1,5 mL) in nastalo raztopino ohladili na 0 °C pod argonom, čemur je sledilo dodajanje 4-klorofenil diklorofosfata (0,29 mL, 1,75 mmola). Nastalo raztopino smo segreli do sobne temperature in prenesli v vialo, zaprto s septumom, ki je vsebovala 1,2,4-triazol (120 mg, 1,75 mmola). Reakcijsko zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 3 dni, razredčili s CH^l^ izprali s slanico in 5 % NaHCOg sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Ostanek smo raztopili v dioksanu (7 mL) in 30 % amonijevem hidroksidu (10 mL). Raztopina je stala pri sobni temperaturi v teku 16 h in topila smo izparili. Ostanek smo kromatografirali na siliki z. Ht3N-MeOH-CHCl3(5:30:65), da smo pridobili 74 mg (55 %) naslovne spojine kot rahlo rumeno trdno snov.
-26Primer 29
Priprava (77Ϊ,377,47?,85)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-7-il)-8-benziloksi2,6-dioksabiciklo|3,2,l]-oktana (31)
Sililirano bazo izN2-acetilgvanina (386 mg, 2,0 mmola) smo pripravili po postopku, opisanem za Primer 17 in raztopili v raztopini (IR,3S,4R,8S)~ 1 -acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (477 mg, 1,48 mmola) v brezvodnem 1,2-dikloroetanu (10 mL), čemur je sledilo dodajanje kositer(IV) klorida (0,75 mL) v 1,2-dikloroetanu (2,0 mL). Nastalo zmes smo segrevali pri refluksu v teku 3 h, potem pri 70 93 preko noči in ohladili na 0 93. Zmes smo nevtralizirali z 2,0 M natrijevim karbonatom, filtrirali skozi celit in temeljito ekstrahirali s kloroformom. Združeni filtrat smo sušili (Na^SO^ in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki s 5 % EtOH v kloroformu je dala 297 mg (42 %) naslovne spojine, 73 mg (10 %) N9-vezanega β-anomera naslovne spojine in 46 mg (6 %) N9-vezanega α-anomera, vse kot belo trdno snov. Naslovna spojina: tal.: 176-178 9C (CHjCl-EtOAc); 'HNMR (CDCl3) δ 2,09 (s, 3H, OAc), 2,40 (s, 3H, NAc), 2,78 (m, IH, H2'), 3,53 (d, J = 11,4 Hz, IH, H4a), 3,99 (d, J = 11,1 Hz, H4b), 4,03-4,18 (m, 4H, H2a, H2b, H3’, H5a'), 4,26 (d, J = 12,6 Hz, IH, H5b'), 4,39,4,58 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,62 (s, IH, HI'), 7,22-7,40 (m, 5H, Bn), 8,21 (s, IH, H8), 10,60 (s, IH, NH), 12,34 (s, IH, NH); Anal. Izračunano za C23H25iN5O8: C, 55,31; H, 5,05; N, 14,02. Ugotovljeno: C, 55,35; H, 4,83; N, 13,80,
Primer 30
Priprava (77?,37i,4/i,S5)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-9-il)-8-benziloksi2,6-dioksabiciklol3,2,l J-oktana (32)
Enako količino sililiranega N2-acetilgvanina, kot je opisano za Primer 29, smo raztopili v raztopini (77?,37?,47?,^S)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-7-il)-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo [3,2,l]-oktana (370 mg, 0,76 mmola) v brezvodnem 1,2-dikloroetanu (10 mL) in dodali trimetilsilil triflat (0,54 mL, 3,0 mmole) v 1,2-dikloroetanu (3 mL). Nastalo raztopino smo segrevali pod refluksom preko noči. Dodali smo dodaten TMSOTf (0,54 mL) in zmes refluksirali v teku dodatnih dveh dni. Enaka dodelava, kot je opisana za Primer 29, je dala, po kromatografiji na siliki s 5 % etanola v kloroformu, 104 mg (28 %) intaktnega začetnega materiala, 91 mg (25 %) naslovne spojine in 80 mg (22 %) α-anomera naslovne spojine, vse kot belo trdno snov. Naslovna
-27spojina: tal.: 128-131 T?(CH3Cl-EtOAc); 'HNMR (CDC13) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,30 (s, 3H, NAc), 2,67 (m, IH, H2'), 3,50 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4a), 3,78 (dd, J = 10,8 Hz, 2,7 Hz, IH, H2a), 3,99 (d, J = 10,8 Hz, H4b”), 4,12 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5a’), 4,14 (d, J = 10,8 Hz, IH, H2b), 4,27 (d, J = 12,3 Hz, IH, H5bj, 4,33 (d, J = 5,1 Hz, IH, H3'), 4,49,4,62 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,25 (s, IH, HI'), 7,26-7,38 (m, 5H, Bn), 7,83 (s, IH, H8), 9,0 (s, IH, NH), 11,95 (s, IH, NH); MS: m/z 310 (MH+); Anal. Izračunano za υ23Η25Ν5Ο8: C, 55,31; H, 5,05; N, 14,02. Ugotovljeno: C, 55,70; H, 5,00; N, 13,95.
Primer 31
Priprava (1SJR,4R, &V)-3-(gvaniii-9-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6dioksabiciklo [3,2,1 Joktana (33)
Podoben postopek, kot je opisan za Primer 22, je dal, po kromatografiji, 52 mg (45 %) naslovne spojine kot brezbarvno trdno snov iz (7/?,5/?,-//?,&Sj-l-acetoksimetil-3-(N2- acetilgvanin-9-il)8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,1 ]-oktana (180 mg). Kristalizacija iz vode-etanola (9:1) je dala kristalinično trdno snov; tal.: 258 9C (razkroj); 'HNMR(DMSO): δ 2,45 (m, IH, H2'), 3,31 (d, J = 10,8 Hz, IH, H4a”), 3,36-3,50 (m, 2H, H5a’,H5b'), 3,60 (dd, J = 10,2 Hz, 2,7 Hz, IH, H2a), 3,1 (d, J = 11,1 Hz, H4b), 4,03 (d, J = 10,5 Hz, IH, H2b’j, 4,36 (m, IH, H3'), 4,95 (t, J = 5,7 Hz, IH, OH), 5,70 (d, J = 3,9 Hz, IH, OH), 6,06 (s, IH, HV), 6,55 (br, 2H, NH^, 7,90 (s, IH, H8), 10,68 (s, IH, NH); MS m/z 310 (MH+).
Primer 32
Priprava (1SJR,4R, &S)-8-hidroksi-l-(4,4’-dimetoksitritiloksimetil)-3-(N4acetilcitozin-il)-2,6-dioksabiciklo|3,2,l]oktana (35)
Raztopina (/S,3R4RS5)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(N4-acetilcitozin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (200 mg, 0,64 mmola) in 4,4'-dimetoksitritil klorida (548 mg, 0,61 mmola) v brezvodnem piridinu (7 mL) je stala pri sobni temperaturi preko noči, razredčili smo jo z etil acetatom, izprali s slanico in 10 %NaHCO3, sušili nad natrijevim sulfatom in koncentrirali. Kromatografija na siliki z 10 % etanola v kloroformu je dala 342 mg (87 %) naslovne spojine kot brezbarvno peno.
Podobno smo pripravili (1S,3R, 4R, &S)-8-hidroksi-1 -(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(N 4 benzoil-28citozin-1 -il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1 ]oktan (36) in (7S,3^,4/?,&S)-8-hidroksi-l -(4,4'-dimetoksi tritiloksimetil)-3-(timin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2, l]oktan (34).
Primer 33
Priprava (Z53fi,4fi,8S)-8-hidroksi-l-(4,4’-dimetoksitritiloksimetil)-3(N4-acetilcitozin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]<)ktaii 8-č?-(2-cianoetil-N,Ndiizopropilfosforamidit)-a (38)
V mešano raztopino (75,37^^^-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksi-metil)-3-(N-acetilcitozin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (320 mg, 0,52 mmola) in diizopropiletil-amina (0,36 mL, 2,08 mmola) v brezvodnem dikiorometanu (6 mL) pri 0 AC pod argonom smo dodali po kapljicah 2-cianoetil-N,N-diizopropilklorofosforamidit (0,23 mL, 1,04 mmola). Nastalo raztopino smo mešali pri okoliški temperaturi v teku 4 h, hladili z ledom, razredčili z etil acetatom, izprali s hladnim 10 % NaHCO3, sušili nad natrijevim sulfatom in koncentrirali pri sobni temperaturi. Kromatografija na siliki s 5 % trietilamina in 5 % acetona v metilen kloridu je dala 376 mg (89 %) naslovne spojine kot brezbarvno peno.
Podobnosmopripravili(/S,3/č4/<&S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(N-benzoilcitozin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l joktan 8-O-(2-cianoetil-N,N-diizopropil-fosforamidit (39) in (IS,3R,4R, &S)-8-hidroksi-1 -(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(timin-1 -il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1 ]oktan 8-<9-(2-cianoetil-N,N-diizopropil-fosforamidit) (37).
Primer 34
Priprava oligonukleotidov, ki vsebujejo 2,4-biciklonukleotide
Ta primer illustrira uporabo biciklonukleozid fosforamiditov (v angl. orig.: bicyclonucleoside phosphoramidites) 37-39 za sintezo oligonukleotida, ki vsebuje 2'-C,4'-C-premoščene biciklonukleozide. Oligonukleotide v tem primeru smo sintetizirali z uporabo fosforamiditne poti. Modificirane oligonukleotide smo sintetizirali po standardnem postopku (protokol za ABI 394 Synthesizer iz Perkin-Elmer-ja, 1994) razen, da smo uporabili bolj koncentrirano raztopino in podaljšan čas pripajanja. Raztopina za modificirane fosforamidite je bila 0,13 M, kar je 30 % bolj
-29koncentrirana kot tiste za nemodificirane fosforamidite (0,1 M). Čas za pripajanje deset minut smo uporabili za modificirane fosforamidite in pet minut za nemodificirane fosforamidite poleg modificiranih fosforamiditov. Dobitki pripajanja za modificirane fosforamidite so primerljivi nemodificiranim (98-99 %). Modificirane ODNs smo čistili z reverzno-fazno HPLC in karakterizirali z masno spektrometrijo.
Naslednja sintetizirana zaporedja so navedena kot primeri.
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(ATCTCrCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
A, C, G in T = nemodificiran deoksiribonukleozid
T = 2',4'-C-premoščen timidin
C = 2',4'-C-premoščen deoksicitidin
Primer 35
Lastnosti hibridizacije oligonukleotidov, ki vsebujejo 2’-C,4’-C-premoščene hiciklonukleotide
Hibridizacijo modificiranih oligonukleotidov na komplementarno DNA in RNA smo raziskovali preko termodinamičnih meritev taljenja (Wang et al. Nucleosides Nucleotides 1997,16,445).
Kot lahko vidimo v Tabeli 1, modifikacije pomembno povečajo hibridizacijo na RNA Za zaporedja, ki vsebujejo bicikličen T timidin, so povečanja v vrednostih Tm v območju 2,2-3,3 stopinje na
-30modifikacijo. Zaporedja, ki vsebujejo bicikličen C citidin, imajo tudi višje vrednosti Tm kot nemodificirani oligonukleotidi, 2,4 0 višjo na modifikacijo za Zaporedje 4 in 1,9 ° višjo na modifikacijo za Zaporedje 5. Zaporedje 12 vsebuje neujemajoč se nukleozid (G v sredini zaporedja je zamenjan s T) in ima vrednost Tm enajst stopinj nižjo kot Zaporedje 10, kar razkriva specifičnost zaporedja. Za zaporedja, v katerih so vsi T in C zamenjani s T in C, so bile vrednosti Tm (>90 °) dodatno povečane, tako da v merilnem sistemu ni bilo mogoče dobiti točnih vrednosti.
Tabela 1. Podatki za hibridizacijo oligonukleotidov, ki vsebujejo 2'-C,4'-C-premoščene biciklonukleozide
Zaporedje
Tm °C ATm
RNA °C/mod.
1. | 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' | 64.4 | |
2. | 5’-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' | 78.1 | +2.8 |
3. | 5AJ(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' | ~82 | +2.2 |
4. | 5'-d(ATCTCTCCGCnCCTTTC)-3' | 71.7 | +2.4 |
5. | 5Al(ATCTCTCCGCTTCC'rrrC)-3' | 77.5 | +1.9 |
6. | 5,-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3’ | >90 | |
7. | 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' | 63.0 | |
8. | 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' | 69.5 | +3.3 |
9. | 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' | 76.2 | +3.3 |
10. | 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3’ | 81.4 | +2.3 |
11. | 5’-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' | >90 | |
12. | 5'-d(CTTCCTGTCTTATGGCTTC)-3' | 70.3 |
T=2',4'-C-premoščen timidin, C=2',4'-C-premoščen citidin. Vzorci za meritve Tm vsebujejo 2,0 μΜ modificiranih oligonukleotidov in 2,0 μΜ bodisi komplementarne DNA ali RNA v pufru (10 mM natrijev fosfat, 0,1 mM EDTA in 0,1 M natrijev klorid, pH 7,0).
-31Opisane šobile torej specifične izvedbe in uporabe predstavitev in postopkov za pridobivanje novih nukleozidov in oligonukleotidov zbicikličnimi sladkornimi deli. Vendar naj bi bilo strokovnjakom jasno, daje možnih mnogo več modifikacij poleg tistih, ki so že bile opisane, ne da bi se oddaljili od izumiteljskih konceptov tu notri. Vsebina izumiteljskega predmeta naj zato ne bi bila omejena, razen v duhu dodanih patentnih zahtevkov. Razen tega naj bi se pri interpretiranju tako opisa kot zahtevkov vsi izrazi interpretirali na najširši možen način, kije skladen s kontekstom. Posebno izrazi obsega in obsegajoč naj bi se interpretirali kot nanašajoči se na elemente, sestavne dele ali korake na neizklj učevalen način, naznačuj oč, da so navedeni elementi, sestavni deli ali koraki lahko prisotni ali se uporabljajo ali kombinirajo z drugimi elementi, sestavnimi deli ali koraki, ki niso bili izrecno navedeni.
Claims (4)
1. Spojina, ki ima naslednjo formulo:
v čemer so X, Y in Z neodvisno izbrani iz skupine, ki obsega O, S, CH 2, NR, C=O, C=CH 2 ali nič, kjer je R izbran iz skupine, ki obsega vodik, alkil, alkenil, alkinil, acil;
Rj je izbran iz skupine, ki obsega adenin, citozin, gvanin, hipoksantin, uracil, timin, heterocikle; in
R2, R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki obsega H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OP(NiPr2)O(CH2)2CN, OPO3H, difosfat, trifosfat; R2 in R3 skupaj sta lahko PhCHO2, TIPDSO2 ali DTBSO2.
2. Spojina po zahtevku 1, kjer je X kisik; Y je O, S, NH ali metilen; Z je metilen.
3. Oligonukleotid, ki obsega vsaj en monomer po zahtevku 1.
4. Oligonukleotid, ki obsega vsaj en monomer po zahtevku 2.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US8671998P | 1998-05-26 | 1998-05-26 | |
PCT/US1999/011442 WO1999060855A1 (en) | 1998-05-26 | 1999-05-24 | Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SI20474A true SI20474A (sl) | 2001-08-31 |
Family
ID=22200439
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SI9920038A SI20474A (sl) | 1998-05-26 | 1999-05-24 | Novi nukleozidi, ki imajo bicikličen sladkorni del |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6403566B1 (sl) |
EP (1) | EP1082012A4 (sl) |
JP (1) | JP2002516256A (sl) |
CN (1) | CN1311630A (sl) |
AU (1) | AU757724B2 (sl) |
BR (1) | BR9911596A (sl) |
CA (1) | CA2333380A1 (sl) |
HR (1) | HRP20000751A2 (sl) |
HU (1) | HUP0102152A3 (sl) |
IL (1) | IL139420A0 (sl) |
MX (1) | MXPA00011473A (sl) |
NO (1) | NO20005938L (sl) |
NZ (1) | NZ507913A (sl) |
PL (1) | PL344303A1 (sl) |
RU (1) | RU2211223C2 (sl) |
SI (1) | SI20474A (sl) |
SK (1) | SK17432000A3 (sl) |
UA (1) | UA61997C2 (sl) |
WO (1) | WO1999060855A1 (sl) |
YU (1) | YU73600A (sl) |
ZA (1) | ZA200006315B (sl) |
Families Citing this family (96)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040033977A1 (en) * | 1990-08-14 | 2004-02-19 | Bennett C. Frank | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
US7119184B2 (en) * | 1991-08-12 | 2006-10-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry |
CA2190304A1 (en) * | 1995-12-15 | 1997-06-16 | Elazar Rabbani | Property effecting and/or property exhibiting compositions for therapeutic and diagnostic uses |
US6833361B2 (en) * | 1998-05-26 | 2004-12-21 | Ribapharm, Inc. | Nucleosides having bicyclic sugar moiety |
US7084125B2 (en) | 1999-03-18 | 2006-08-01 | Exiqon A/S | Xylo-LNA analogues |
US6900186B1 (en) * | 1999-06-21 | 2005-05-31 | Murdock Children's Research Institute | Method for the prophylaxis and/or treatment of medical disorders |
EP1560840B1 (en) * | 2002-11-05 | 2015-05-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
CN1852915A (zh) * | 2003-07-25 | 2006-10-25 | 艾登尼科斯(开曼)有限公司 | 治疗包括丙型肝炎的黄病毒科病毒所致疾病的嘌呤核苷类似物 |
WO2005021570A1 (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Gene Design, Inc. | N−0結合性架橋構造型新規人工核酸 |
US7480382B2 (en) * | 2003-09-30 | 2009-01-20 | Microsoft Corporation | Image file container |
US20050182252A1 (en) | 2004-02-13 | 2005-08-18 | Reddy K. R. | Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives |
US8288354B2 (en) * | 2005-12-28 | 2012-10-16 | The Scripps Research Institute | Natural antisense and non-coding RNA transcripts as drug targets |
EP3434259A1 (en) | 2007-05-04 | 2019-01-30 | Marina Biotech, Inc. | Amino acid lipids and uses thereof |
US20100015708A1 (en) * | 2008-06-18 | 2010-01-21 | Mdrna, Inc. | Ribonucleic acids with non-standard bases and uses thereof |
CA2739464C (en) * | 2008-10-03 | 2020-03-31 | Opko Curna, Llc | Treatment of apolipoprotein-a1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-a1 |
KR20110071017A (ko) | 2008-10-16 | 2011-06-27 | 마리나 바이오테크, 인크. | 유전자 침묵 치료제의 리포좀에 의한 효율적인 전달을 위한 프로세스 및 조성물 |
EP2358398A2 (en) | 2008-10-24 | 2011-08-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and methods |
CN102317458B (zh) | 2008-12-04 | 2018-01-02 | 库尔纳公司 | 通过红细胞生成素(epo)天然反义转录物的抑制对epo相关疾病的治疗 |
JP5971948B2 (ja) | 2008-12-04 | 2016-08-17 | クルナ・インコーポレーテッド | Vegfに対する天然アンチセンス転写物の抑制による血管内皮増殖因子(vegf)関連疾患の治療 |
MX2011005918A (es) | 2008-12-04 | 2011-06-17 | Opko Curna Llc | Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen supresor de tumor mediante inhibicion del transcrito antisentido natural para el gen. |
CA2752237C (en) | 2009-02-12 | 2020-03-24 | Opko Curna, Llc | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
CN102482677B (zh) | 2009-03-16 | 2017-10-17 | 库尔纳公司 | 通过抑制nrf2的天然反义转录物治疗核因子(红细胞衍生2)‑样2(nrf2)相关疾病 |
US9708604B2 (en) | 2009-03-17 | 2017-07-18 | Curna, Inc. | Treatment of delta-like 1 homolog (DLK1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to DLK1 |
CN102459596B (zh) | 2009-05-06 | 2016-09-07 | 库尔纳公司 | 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病 |
KR101722541B1 (ko) | 2009-05-06 | 2017-04-04 | 큐알엔에이, 인크. | Ttp에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 트리스테트라프롤린 관련된 질환의 치료 |
EP2427554B1 (en) | 2009-05-08 | 2016-11-16 | CuRNA, Inc. | Treatment of dystrophin family related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dmd family |
KR101749356B1 (ko) | 2009-05-18 | 2017-07-06 | 큐알엔에이, 인크. | 재편성 인자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 재편성 인자 관련된 질환의 치료 |
CA2762987A1 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Joseph Collard | Treatment of transcription factor e3 (tfe3) and insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to tfe3 |
KR101704988B1 (ko) | 2009-05-28 | 2017-02-08 | 큐알엔에이, 인크. | 항바이러스 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 항바이러스 유전자 관련된 질환의 치료 |
WO2010148065A2 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | Curna, Inc. | Treatment of paraoxonase 1 (pon1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pon1 |
ES2620960T3 (es) | 2009-06-16 | 2017-06-30 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen de colágeno mediante la inhibición de un transcrito antisentido natural a un gen de colágeno |
ES2618894T3 (es) | 2009-06-24 | 2017-06-22 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor del factor de necrosis tumoral 2 (tnfr2) por inhibición del transcrito natural antisentido para tnfr2 |
CN102482672B (zh) | 2009-06-26 | 2016-11-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病 |
CA2768947C (en) | 2009-07-24 | 2018-06-19 | Opko Curna, Llc | Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt) |
EP2462229B1 (en) | 2009-08-05 | 2016-05-11 | CuRNA, Inc. | Treatment of insulin gene (ins) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (ins) |
JP6189594B2 (ja) | 2009-08-11 | 2017-08-30 | クルナ・インコーポレーテッド | アディポネクチン(adipoq)に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるアディポネクチン(adipoq)関連疾患の治療 |
US8791087B2 (en) | 2009-08-21 | 2014-07-29 | Curna, Inc. | Treatment of ‘C terminus of HSP70-interacting protein’ (CHIP)related diseases by inhibition of natural antisense transcript to CHIP |
US9023822B2 (en) | 2009-08-25 | 2015-05-05 | Curna, Inc. | Treatment of 'IQ motif containing GTPase activating protein' (IQGAP) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IQGAP |
CA2775111C (en) | 2009-09-25 | 2019-12-31 | Opko Curna, Llc | Treatment of filaggrin (flg) related diseases by modulation of flg expression and activity |
CA2778171C (en) * | 2009-10-29 | 2017-07-25 | Osaka University | Bridged artificial nucleoside and nucleotide |
US9173895B2 (en) | 2009-12-16 | 2015-11-03 | Curna, Inc. | Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (MBTPS1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MBTPS1 |
CN102869776B (zh) | 2009-12-23 | 2017-06-23 | 库尔纳公司 | 通过抑制肝细胞生长因子(hgf)的天然反义转录物而治疗hgf相关疾病 |
CA2782375C (en) | 2009-12-23 | 2023-10-31 | Opko Curna, Llc | Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2 |
US8921334B2 (en) | 2009-12-29 | 2014-12-30 | Curna, Inc. | Treatment of nuclear respiratory factor 1 (NRF1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NRF1 |
WO2011090741A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-28 | Opko Curna, Llc | TREATMENT OF TUMOR PROTEIN 63 (p63) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO p63 |
CA2785727C (en) | 2009-12-31 | 2020-01-07 | Curna, Inc. | Treatment of insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irs2 and transcription factor e3 (tfe3) |
CA2785832A1 (en) | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Curna, Inc. | Treatment of interferon regulatory factor 8 (irf8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irf8 |
JP5963680B2 (ja) | 2010-01-06 | 2016-08-03 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | 膵臓発生遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の阻害による膵臓発生遺伝子疾患の治療 |
CA2786535C (en) | 2010-01-11 | 2019-03-26 | Curna, Inc. | Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg |
KR101853510B1 (ko) | 2010-01-25 | 2018-06-20 | 큐알엔에이, 인크. | Rnase h1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 rnase h1과 관련된 질환의 치료 |
EP2539452B1 (en) | 2010-02-22 | 2016-07-27 | CuRNA, Inc. | Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (pycr1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pycr1 |
US9193752B2 (en) | 2010-03-17 | 2015-11-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
CA2795145C (en) | 2010-04-02 | 2019-01-22 | Curna, Inc. | Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3 |
WO2011127337A2 (en) | 2010-04-09 | 2011-10-13 | Opko Curna Llc | Treatment of fibroblast growth factor 21 (fgf21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fgf21 |
EP2563922A1 (en) | 2010-04-26 | 2013-03-06 | Marina Biotech, Inc. | Nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers and uses thereof |
EP3173419A1 (en) | 2010-04-28 | 2017-05-31 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified nucleosides, analogs thereof and oligomeric compounds prepared therefrom |
WO2011139699A2 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
KR101992076B1 (ko) | 2010-05-03 | 2019-06-21 | 큐알엔에이, 인크. | 시르투인 (sirt)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 시르투인 (sirt) 관련된 질환의 치료 |
TWI586356B (zh) | 2010-05-14 | 2017-06-11 | 可娜公司 | 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病 |
ES2664585T3 (es) | 2010-05-26 | 2018-04-20 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con metionina sulfóxido reductasa (MSRA) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a MSRA |
EP2576783B1 (en) | 2010-05-26 | 2017-11-29 | CuRNA, Inc. | Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1 |
KR101914309B1 (ko) | 2010-06-23 | 2018-11-02 | 큐알엔에이, 인크. | 전압 작동 나트륨 통로, 알파 소단위(scna)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 전압 작동 나트륨 통로, 알파 소단위(scna) 관련된 질환의 치료 |
DK2593547T3 (en) | 2010-07-14 | 2018-02-26 | Curna Inc | Treatment of Discs large homolog (DLG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to DLG |
CN103210086B (zh) | 2010-10-06 | 2017-06-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唾液酸酶4(neu4)的天然反义转录物而治疗neu4相关疾病 |
CN103180445B (zh) | 2010-10-22 | 2018-02-16 | 库尔纳公司 | 通过抑制α‑L‑艾杜糖醛酸酶(IDUA)的天然反义转录物而治疗IDUA相关疾病 |
US9416360B2 (en) | 2010-11-05 | 2016-08-16 | MiRagen Therapeutics, Inc. | Base modified oligonucleotides |
US10000752B2 (en) | 2010-11-18 | 2018-06-19 | Curna, Inc. | Antagonat compositions and methods of use |
CA2818824A1 (en) | 2010-11-23 | 2012-05-31 | Joseph Collard | Treatment of nanog related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nanog |
SG190355A1 (en) | 2010-12-15 | 2013-07-31 | Miragen Therapeutics | Microrna inhibitors comprising locked nucleotides |
US10131905B2 (en) | 2011-04-12 | 2018-11-20 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Micro-RNA inhibitors and their uses in disease |
AU2012252165A1 (en) | 2011-05-09 | 2013-03-21 | Cambridge Enterprise Limited | Methods of modulating micrornas in the treatment of pulmonary arterial hypertension |
JP6188686B2 (ja) | 2011-06-09 | 2017-08-30 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | フラタキシン(fxn)への天然アンチセンス転写物の阻害によるfxn関連疾患の治療 |
MX365525B (es) | 2011-09-06 | 2019-06-06 | Curna Inc | Compuestos que regulan la expresión de subunidades alfa de canales de sodio regulados por voltaje en enfermedades relacionadas con epilepsia mioclónica severa de la infancia. |
KR20140067092A (ko) * | 2011-09-07 | 2014-06-03 | 마리나 바이오테크, 인크. | 형태적으로 제한된 단량체를 갖는 핵산 화합물의 합성 및 용도 |
WO2013111132A1 (en) * | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Can-Fite Biopharma Ltd. | Treatment of liver conditions |
HUE040179T2 (hu) | 2012-03-15 | 2019-02-28 | Curna Inc | Agyi eredetû neutrotróf faktorral (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF) összefüggõ betegségek kezelése a BDNF-fel kapcsolatos természetes antiszensz transzkriptumok gátlása révén |
DK3354734T3 (da) | 2012-06-21 | 2020-06-29 | Miragen Therapeutics Inc | Oligonukleotid-baserede hæmmere omfattende låst nukleinsyremønster |
US9315535B2 (en) | 2013-02-18 | 2016-04-19 | Shionogi & Co., Ltd. | Nucleoside and nucleotide having nitrogen-containing heterocycle structure |
JP6410791B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-10-24 | ミラゲン セラピューティクス, インコーポレイテッド | Mir−145のロックト核酸阻害剤およびその使用 |
KR20150131365A (ko) | 2013-03-15 | 2015-11-24 | 미라젠 세러퓨틱스 인코포레이티드 | 브리지드 바이사이클릭 뉴클레오시드 |
US10449210B2 (en) | 2014-02-13 | 2019-10-22 | Ligand Pharmaceuticals Inc. | Prodrug compounds and their uses |
US10030042B2 (en) * | 2014-03-16 | 2018-07-24 | MiRagen Therapeutics, Inc. | Synthesis of bicyclic nucleosides |
WO2016003812A1 (en) | 2014-07-02 | 2016-01-07 | Ligand Pharmaceuticals, Inc. | Prodrug compounds and uses therof |
AR101449A1 (es) | 2014-08-04 | 2016-12-21 | Miragen Therapeutics Inc | Inhibidores de myh7b y usos de los mismos |
EA201791644A1 (ru) | 2015-01-20 | 2018-01-31 | Мираджен Терапьютикс, Инк. | Ингибиторы mir-92 и их применение |
EP3256591A4 (en) | 2015-02-13 | 2018-08-08 | Translate Bio Ma, Inc. | Hybrid oligonucleotides and uses thereof |
JP6721252B2 (ja) | 2015-06-05 | 2020-07-08 | ミラゲン セラピューティクス, インコーポレイテッド | 皮膚T細胞リンパ腫(CTCL)を処置するためのmiR−155阻害剤 |
WO2017119463A1 (ja) * | 2016-01-07 | 2017-07-13 | 国立大学法人大阪大学 | α-シヌクレイン発現抑制剤 |
EP3507367A4 (en) | 2016-07-05 | 2020-03-25 | Aduro BioTech, Inc. | CYCLIC DINUCLEOTID COMPOUNDS WITH INCLUDED NUCLEIC ACIDS AND USES THEREOF |
WO2019009298A1 (ja) * | 2017-07-05 | 2019-01-10 | 国立大学法人大阪大学 | α-シヌクレイン発現抑制剤 |
EP3737676B1 (en) | 2018-01-09 | 2024-03-06 | Ligand Pharmaceuticals, Inc. | Acetal compounds and therapeutic uses thereof |
SG11202006526YA (en) | 2018-01-12 | 2020-08-28 | Bristol Myers Squibb Co | Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof |
US11753639B2 (en) | 2018-03-14 | 2023-09-12 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Micro-RNA and obesity |
WO2020033791A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Verseau Therapeutics, Inc. | Oligonucleotide compositions for targeting ccr2 and csf1r and uses thereof |
EP4269586A1 (en) | 2022-04-29 | 2023-11-01 | Johann-Wolfgang-Goethe-Universität Frankfurt am Main | Targeting micro rna for treatment of heart failure with preserved ejection fraction (hfpef) |
EP4353823A1 (en) | 2022-10-12 | 2024-04-17 | Resalis Therapeutics S.r.l. | Inhibitors of micro-rna 22 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0538194B1 (de) * | 1991-10-17 | 1997-06-04 | Novartis AG | Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte |
ES2242291T5 (es) | 1997-09-12 | 2016-03-11 | Exiqon A/S | Análogos de nucleósidos bicíclicos y tricíclicos, nucleótidos y oligonucleótidos |
-
1999
- 1999-05-24 HU HU0102152A patent/HUP0102152A3/hu unknown
- 1999-05-24 SI SI9920038A patent/SI20474A/sl not_active IP Right Cessation
- 1999-05-24 CA CA002333380A patent/CA2333380A1/en not_active Abandoned
- 1999-05-24 UA UA2000116545A patent/UA61997C2/uk unknown
- 1999-05-24 NZ NZ507913A patent/NZ507913A/xx unknown
- 1999-05-24 YU YU73600A patent/YU73600A/sh unknown
- 1999-05-24 JP JP2000550331A patent/JP2002516256A/ja not_active Withdrawn
- 1999-05-24 AU AU40100/99A patent/AU757724B2/en not_active Ceased
- 1999-05-24 BR BR9911596-4A patent/BR9911596A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-05-24 WO PCT/US1999/011442 patent/WO1999060855A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-05-24 IL IL13942099A patent/IL139420A0/xx unknown
- 1999-05-24 CN CN99809057A patent/CN1311630A/zh active Pending
- 1999-05-24 MX MXPA00011473A patent/MXPA00011473A/es unknown
- 1999-05-24 RU RU2000129663/04A patent/RU2211223C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-05-24 PL PL99344303A patent/PL344303A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1999-05-24 EP EP99923288A patent/EP1082012A4/en not_active Withdrawn
- 1999-05-24 SK SK1743-2000A patent/SK17432000A3/sk unknown
- 1999-12-01 US US09/451,708 patent/US6403566B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-11-02 HR HR20000751A patent/HRP20000751A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2000-11-03 ZA ZA200006315A patent/ZA200006315B/en unknown
- 2000-11-24 NO NO20005938A patent/NO20005938L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2211223C2 (ru) | 2003-08-27 |
ZA200006315B (en) | 2002-02-04 |
UA61997C2 (en) | 2003-12-15 |
MXPA00011473A (es) | 2002-04-24 |
EP1082012A4 (en) | 2002-01-16 |
CN1311630A (zh) | 2001-09-05 |
NO20005938L (no) | 2001-01-16 |
JP2002516256A (ja) | 2002-06-04 |
US6403566B1 (en) | 2002-06-11 |
NZ507913A (en) | 2003-02-28 |
PL344303A1 (en) | 2001-10-22 |
HUP0102152A2 (hu) | 2001-12-28 |
EP1082012A1 (en) | 2001-03-14 |
YU73600A (sh) | 2003-08-29 |
SK17432000A3 (sk) | 2001-07-10 |
HRP20000751A2 (en) | 2001-12-31 |
IL139420A0 (en) | 2001-11-25 |
HUP0102152A3 (en) | 2002-04-29 |
CA2333380A1 (en) | 1999-12-02 |
NO20005938D0 (no) | 2000-11-24 |
AU4010099A (en) | 1999-12-13 |
BR9911596A (pt) | 2001-10-02 |
AU757724B2 (en) | 2003-03-06 |
WO1999060855A1 (en) | 1999-12-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SI20474A (sl) | Novi nukleozidi, ki imajo bicikličen sladkorni del | |
US6833361B2 (en) | Nucleosides having bicyclic sugar moiety | |
US6090932A (en) | Method of preparation of known and novel 2'-modified nucleosides by intramolecular nucleophilic displacement | |
EP3159351A2 (en) | Modified 3'-azido-4'-ethynyl-nucleosides as antiviral agents | |
WO2003062255A2 (en) | Sugar modified nucleosides as viral replication inhibitors | |
CA2404639A1 (en) | 3'-or 2'-hydroxymethyl substituted nucleoside derivatives for treatment of hepatitis virus infections | |
MX2011006892A (es) | Sintesis de nucleosidos de purina. | |
JPH07103150B2 (ja) | 2’―0―アルキルヌクレオチド並びにこのようなヌクレオチドを含むポリマー | |
US20170073368A1 (en) | Synthesis of bicyclic nucleosides | |
Wauchope et al. | Synthesis and biological evaluation of a series of thieno-expanded tricyclic purine 2′-deoxy nucleoside analogues | |
WO2008087558A2 (en) | Nucleoside and nucleotide analogues with quaternary carbon centers and methods of use | |
US20040033967A1 (en) | Alkylated hexitol nucleoside analogues and oligomers thereof | |
BR112020005067A2 (pt) | fosforamiditas nucleosídeo modificadas | |
WO2002074910A2 (en) | Selective anti-viral nucleoside chain terminators | |
CZ20004181A3 (cs) | Sloučenina zahrnující nukleosid s 2',4'-můstkem a oligonukleotid od ní odvozený | |
Chiacchio et al. | Isoxazolidinyl nucleosides | |
JPH0296590A (ja) | 新規核酸類 | |
Borrello et al. | Phosphoroamidate derivatives of N, O-nucleosides as inhibitors of reverse transcriptase | |
Janardhanam et al. | Efficient synthesis of α-purine nucleosides of 2-deoxyribofuranose and 2-deoxyribopyranose | |
BR122024007782A2 (pt) | Fosforamiditas nucleosídeo modificadas, composição compreendendo as mesmas e métodos para produzir um oligonucleotídeo | |
Reddy et al. | Stereoselective Synthesis of PSI-352938: A β-D-20-Deoxy-20-r-fluoro-20-β-C-methyl-30, 50-cyclic Phosphate Nucleotide Prodrug for the Treatment of HCV | |
EA045540B1 (ru) | Модифицированные нуклеозидные амидофосфиты | |
McGee | The synthesis of silylated arabinopyrimidine nucleosides: a thesis | |
JP2005023050A (ja) | 新規核酸誘導体、及びそのフォスフォロアミダイト体、トリリン酸体の製造及び使用 | |
MX2008004079A (en) | Modified 4'-nucleosides as antiviral agents |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20050217 |