HRP20000751A2 - Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety - Google Patents

Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety Download PDF

Info

Publication number
HRP20000751A2
HRP20000751A2 HR20000751A HRP20000751A HRP20000751A2 HR P20000751 A2 HRP20000751 A2 HR P20000751A2 HR 20000751 A HR20000751 A HR 20000751A HR P20000751 A HRP20000751 A HR P20000751A HR P20000751 A2 HRP20000751 A2 HR P20000751A2
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
mmol
octane
dioxabicyclo
solution
title compound
Prior art date
Application number
HR20000751A
Other languages
English (en)
Inventor
Guangyi Wang
Original Assignee
Icn Pharmaceuticals
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icn Pharmaceuticals filed Critical Icn Pharmaceuticals
Publication of HRP20000751A2 publication Critical patent/HRP20000751A2/hr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Područje izuma
Izum je iz područja nukleozidnih i oligonukleotidnih analoga, i metoda za njihovo pripravljanje.
Pozadina
Nukleozidni i nukleotidni analozi dugo se upotrebljavaju kao farmaceutski sastojci protiv raznih virusa i raka. Općenito, brojni nukleozidni i nukleotidni analozi su u kliničkim ispitivanjima za više bolesti.
U stanici, nukleozidi i nukleotidi su fosforilirani ili se dalje fosforiliraju u odgovarajuće nukleozidne trifosfate. Nukleozidni trifosfati služe kao inhibitori DNA ili RNA polimeraza. Nukleozidni trifosfati se također mogu ugraditi u DNA ili RNA, što smeta produljenju DNA ili RNA.
Aktivni nukleozidni analozi se općenito odmah fosforiliraju u ciljnoj stanici. Odgovarajući nukleozidni trifosfati imaju visok afinitet prema katalitičkim mjestima polimeraza i nadmeću se s prirodnim nukleozidnim trifosfatima kao podloga polimeraze.
Određeni nukleozidni analozi djeluju na razini nukleozida ili na razini monosfata. Jedna skupina obećavajućih nukleozidnih analoga su nukleozidi s konformacijski zatvorenim saharidnim skupinama. Objavljeno je da određeni konformacijski zatvoreni karbociklički nukleozidni analozi pokazuju jako djelovanje protiv HCMV, HSV, i EBV (Siddiqui et al. Nucleosides Nucleotides 1996, 15, 235-250; Marquez et al. J. Med. Chem. 1996, 39, 3739-3747). Objavljeno je, također, da je konformacijski zatvoren, karbociklički AZT 5'-trifosfat ekvipotentan inhibitor HIV reverzne transkriptaze (Marquez et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 720, 2780-2789). Također su proizvedeni i drugi nukleozidi s bicikličkim saharidnim skupinama, iako njihovo djelovanje nije pronađeno ili opisano (Chao et al. Tetrahedron 1997, 53, 1957-1970; Okabe et al. Tetrahedron lett. 1989, 30, 2203-2206, Hong, et al. Tetrahedron Lett. 1998, 39, 225-228).
Ponajprije, očekuje se da će konformacijski zatvoreni nukleozidi imati positivan učinak na protuosjetilne oligonukleotide. Oligonukleotidi, kao mogući protuosjetilni terapeutici, prepoznati su i istraženi prije dva desetljeća. Oligonukleotidi mogu oblikovati dvostruku ili trostruku uzvojnicu s komplementarnom DNA ili RNA i imaju sposobnost da pogode specifične sekvence u virusnom i genomu raka. Specifično vezanje oligonukleotida na DNA ili RNA odabrane mete inaktivirat će funkciju povezanu s DNA ili RNA, kao što je replikacija, transkripcija, i translacija. Zbog toga se virusni ciklusi, ili kancerozni procesi mogu prekinuti, dok se na cikluse normalnih stanica ne djeluje.
Budući da su prirodni oligonukleotidi nepostojani prema staničnim i vanstaničnim nukleazama, uložen je velik napor na proučavanje oligonukleotidnih modifikacija, posebno onih modifikacija na koje se cilja pri poboljšanju otpornosti prema nukleazi i afinitetu prema vezanju. Vidjelo se je, da oligonukleotidi koji sadrže određene bicikličke nukleozide pokazuju poboljšanu postojanost prema nukleazi (Leumann et al. Bioorg. Med. Chem. Letts. 1995, 5, 1231-4; Altmann et al. Tetrahedron Lett. 1994, 35, 2331-2334, 7625-7628). U novije vrijeme, sintetizirani su 2’-O, 4’-C-metilen ribonukleozidi, koji imaju zatvoren 3’-endo saharidni nabor i ugrađeni su u oligonukleotide. Proučavanja hibridizacije pokazala su da konformacijski zatvoreni nukleozidi mogu značajno poboljšati hibridizaciju modificiranih oligonukleotida prema komplementarnoj RNA i DNA (Obika et al. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 8735-8738; Koshkin et al. Tetrahedron 1998, 54, 3607-3630).
Postoji potreba za novim, konformacijski zatvorenim nukleozidima s bicikličkim saharidnim skupinama. Ti novi nukleozidi bi se mogli upotrijebiti u terapiji protiv virusa i protiv raka i u drugim terapijama. K tome, oligonukleotidi, sastavljeni od tih novih, modificiranih nukleozida, trebali bi imati željenu postojanost prema staničnim nuklezama i jaki afinitet vezanja na ciljne nukleinske kiseline. Zbog toga bi se ti oligonukleotidi trebali moći upotrijebiti u terapeutskim i dijagnostičkim sredstvima.
Kratki opis izuma
Opisani su konformacijski zatvoreni biciklički saharidni nukleozidi, koji imaju opći geometrijski oblik, i metode za proizvodnju konformacijski zatvorenih bicikličkih saharidnih nukleozida. Dati su nukleozidi koji imaju bicikličke saharidne skupine i oligonukleotidi koji uključuju slijedeću formulu
[image]
u kojoj su X, Y i Z neovisno odabrani iz skupine koju čine O, S, CH2, NR, C=O, C=CH2 ili ništa, gdje je R odabran iz skupine koju čine vodik, alkil, alkenil, alkinil, acil; R1 je odabran iz skupine koju čine adenin, citozin, gvanin, hipoksantin, uracil, timin, heterocikli, H, ОСН3, OAc, halogen, sulfonat; R2, R3 su neovisno odabrani iz skupine koju čine H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OP(NiPr2)O(CH2)2CN, ОРО3Н, РО3Н, difosfat, trifosfat; R2 i R3 zajedno mogu biti PhCHO2, TIPDSO2 ili DTBSO2.
Ovdje opisani novi nukleozidi mogu se upotrijebiti u protuvirusnoj i terapiji protiv raka i u drugim terapijama. Oligonukleotidi sastavljeni od ovih modificiranih nukleozida imaju željenu fiziološku postojanost i afinitet vezanja koji im omogućuje upotrebu u terapeutskim i diagnostičkim sredstvima.
Opis izuma u pojedinostima
Dati su konformacijski zatvoreni nukleozidi koji imaju 3’-endo saharidni nabor, i metode za njihovo pripravljanje. Postupak za pripravljanje pretodno opisanih bicikličkih nukleozidnih analoga ne se može primijeniti na ovdje opisane nove nukleozidne analoge. Opisani analozi dobiveni su uspješnim povezivanjem između C2’ i C4’ položaja riboze u nukleozidne analoge.
Kako se ovdje rabi, kratica “Ac” odnosi se na acetil; kratica “Bn” odnosi se na benzil; kratica “Bz” odnosi se na benzoil; kratica “DMT” odnosi se na dimetoksitritil; kratica “THP” odnosi se na tetrahidropiranil; kratica “TBDMS” odnosi se na t-butildimetilsilil; kratica “TIPDS” odnosi se na tetraizopropildisilil; i kratica “DTBS” odnosi se na di(t-butil)silil.
Sinteza 2,4-premoštenih derivata ribofuranoze
1-α-metilarabinoza 1, proizvedena u skladu s objavljenim postupkom (Tejima et al. J. Org. Chem. 1963, 28, 2999-3003), zaštićena je s 1,1,3,3-tetraizopropil-disiloksanilom (TIPS) na O3 i O5, čime se dobiven spoj 2, koji je preveden u keton 3 obradom s DMSO/DCC/TFA. Slijedećom Wittigovom reakcijom i odstranjivanjem skupine TIPS dobiven je alken 4 s vrlo dobrim iskorištenjem. Spoj 4 je zaštićen s t-butildimetilsililom (TBS) na O5 i s benzilom (Bn) na O3, čime je dobiven spoj 5. Hidroboriranje spoja 5 provedeno je s 9-BBN, čime je dobiven samo 2-deoksi-2-hidroksimetilni derivat 6 s odličnim iskorištenjem. 2-deoksi-2-hidroksimetilni derivat 6 podvrgnut je tritilaciji sa 4,4’-O-dimetoksitritil (DMT) kloridom i TBS je odstranjen s tetrabutilamonijevim fluoridom (TBAF), čime je dobiven spoj 7.
Shema 1
[image]
Spoj 7 je oksidiran, čime se dobiven aldehid 8, koji je obrađen s formaldehidom i natrijevim hidroksidom, čime je dobiven 4-hidroksimetilni derivat 9 s odličnim iskorištenjem. Mezilacijom spoja 9 i zatim odstranjivanjem DMT-a dobiven je spoj 10. Ciklizacija je provedena s NaH u THF-u i zatim je odstranjivanjem mezila dobiven biciklički šećer 11. Obradom spoja 11 s octenim anhidridom u prisutnosti DMAP dobije se spoj 12, dok se obradom s octeni anhidrid/octenom kiselinom u prisutnosti sumporne kiseline dobije spoj 13, u kojem acetoksi skupina na Cl ima invertnu orijentaciju (1-β), u usporedbi s metoksi u spoju 11.
Shema 2.
[image]
Sinteza 2’,4’-premoštenih biciklonukleozida
Biciklonukleozidi, koji imaju 2’,4’-premoštenu saharidnu skupinu, sintetizirani su kondenzacijom sililirane nukleozidne baze i bicikličkog šećera, kako je dolje prikazano. Kondenzacijom spoja 13 s bis(trimetil-silil)-timinom dobije se proizvod 14, α-anomer, s odličnim iskorištenjem. Obradom spoja 14 s ВСl3, s istovremenim odstranjivanjem acetilne i benzilne skupine, dobije se biciklički α-timidin 15.
[image]
Kondenzacijom spoja 13 sa 6-klor-9-trimetilsilil-purinom dobivena je mješavina α- i β-purinskog nukleozida, 16 i 17 (omjer α:β, 1:1 do 2:3), koji se mogu rastaviti kromatografijom.
[image]
Obradom spojeva 17 i 16 s amonijakom u metanolu, zatim hidrogenolizom, dobiveni su adenozinski analozi 18 i 19. Hidrogenoliza zahtjeva veliku količinu katalitičkog materijala, kao i produljeno vrijeme reakcije, zbog povećane prostorne zapreke na saharidnoj skupini. Obradom spojeva 17 i 16 s merkaptoetanolom u prisutnosti natrijevog metoksida, zatim hidrogenolizom, dobiveni su inozinski analozi 20 i 21.
[image]
18 X = NH2 19 X = NH2
20 X = ОН 21 X = ОН
Kondenzacijom spoja 13 sa sililiranim N2-acetil-gvaninom dobije se derivat α-gvanozina 22 kao glavni proizvod (30%), mala količinu β-izomera i N7-povezani proizvodi. Obradom α-gvanozinskog derivata s amonijakom u metanolu, zatim hidrogenolizom, dobije se biciklički α- gvanozin 23.
[image]
Kako je gore opisano, reakcijama kondenzacije dobije se α-nukleozid, isključivo, ili mješavina α- i β-nukleozida, pri čemu β-anomer nema prednosti. Da se poveća omjer β-nukleozida, istraženi su različiti uvjeti kondenzacije. Temperatura je imala mali utjecaj na omjer α- i β-anomera. Međutim, sredstvo za povezivanje i funkcionalna skupina na C1 šećera, imale su značajne utjecaje na omjer α- i β-nukleozida.
Kondenzacija spoja 12 s bis- ili tri(trimetilsilil) pirimidinima u pristnosti kositar(IV) klorida dala je β-nukleozide kao glavne proizvode s dobrim iskorištenjem. Tako je reakcija spoja 12 sa sililiranim timinom dala derivat timidina 24, s omjerom β:α od pribl. 4:1. Kondenzacija spoja 12 sa sililiranim uracilom i N4-benzoil-citozinom dala je odgovarajuće nukleozide 25 i 26, s omjerom β:α od pribl. 9:l u obje reakcije. Obrada spojeva 24-26 s borovim trikloridom dala je pirimidinske biciklonukleozide 27-29. U slučaju citidinskog derivata, benzoilna skupina spoja 29 je odstranjena obradom s amonijekom, čime se dobiven spoj 30. Alternativni put (nije prikazan) za pripravljanje spoja 30 započinje od spoja 28, koji se acilira na 03’ i O5’, nakon čega slijedi reakcija s triazolom i zatim obrada s amonijakom. Na taj način spoj 30 je dobiven s umjerenim iskorištenjem.
[image]
24 X = ОН, Y = Me 27 X = ОН, Y = Me
25 X = ОН, Y = H 28 X = ОН, Y = H
26 X = NHBz, Y = H 29 X = NHBz, Y = H
30 X = NH2, Y = H
Također je istražena kondenzacija spoja 12 sa sililiranim purinima samo s kositar(IV) kloridom kao reagentom za povezivanje. Za razliku od reakcije s pirimidinima, kondenzacija sililiranog 6-klorpurina sa spojem 12 daje ne samo α- i β-nukleozide 16 i 17, već također i proizvod N7-povezivanja (nije prikazano). Slično tome, kondenzacija sililiranog N2-acetilgvanina sa spojem 12 daje mješavinu triju proizvoda, N7-povezani β-nukleozid 31 (42%), željeni β-nukleozid 32 (10%) i α-nukleozid 22 (6%). Međutim, kad se grije sa sililiranim N2-acetil-gvaninom u prisutnosti trimetilsilil triflata, N7-povezani proizvod 31 se djelomično pretvori u N9-povezane α- i β-biciklonukleozide 22 (-22%) i 32 (-25%). Odvojen spoj 32 podvrgnut je istoj obradi kao i spoj 22, čime je dobiven biciklički β-gvanozin 33.
[image]
Stereokemijske oznake derivata 2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktana 11 i biciklonukleozida, nastalih kondenzacijom bicikličkih šećera sa sililiranim nukleozidnim bazama, mogu se odrediti pomoću NOE protonske NMR. Kako pokazuje model sa štapićima i kuglicama, kruti dioksabiciklo[3,2,l]oktanski prstenasti sistem prisiljava protone (Н1’ i H2’) na С1’ i C2’ α-biciklonukleozida da postanu skoro paralelni, dok H1’ i H2’ u β-biciklo-nukleozidima usmjeravaju na suprotne strane. Na primjer, zakretni kut za Hl’-C1’-C2’-H2’ bicikličkog α-timidina 15 nakon geometrijskog optimiranja je 37° i, dosljedno tome, u protonskom NMR opažena je konstanta povezivanja od 3,9 Hz. Zakretni kut za H1’-C1’-C2’-H2’ u bicikličkom β-timidinu 27 je 96° nakon geometrijskog optimiranja i, prema očekivanju nije opaženo povezivanje između H1’ i H2’. U stvari, proton na С1’ u svim izmjerenim β-biciklonukleozidima je jednostruki pik. Suprotno tome, u svim izmjerenim α-biciklonukleozidima, proton na С1’ je dublet s konstantnom povezivanja od ~4,0 Hz.
Stereokemijske oznake biciklonukleozida bile su, nadalje, potvrđene pomoću X-zraka na kristalnim strukturama bicikličkih timidina 15 i 27. Ribozni prsten saharidne skupine dioksabiciklo[3,2,l]oktana u oba spoja poprima tipičan C3’-endo saharidni nabor, dok šesteročlani prsten u saharidnoj skupini poprima oblik lanca. Timinska baza u oba spoja ima suprotnu orijentaciju.
Sinteza fosforamidita 2,4-premoštenog biciklonukleozida
Biciklički β-timidin 27, biciklički β-N4-benzoil-citidin 29, i biciklički β-N4-acetilcitidin 29 zaštićeni su s DMT i zatim prevedeni u odgovarajuće fosforamidite. Zbog steričke zapreke, bilo je potrebno dulje vrijeme reakcija.
[image]
34 X = ОН, Y = Me 37 X = ОН, Y = Me
35 X = NHAc, Y = H 38 X = NHAc, Y = H
36 X = NHBz, Y = H 39 X = NHBz, Y = H
PRIMJERI
Pristupi sintezi primijenjeni za pripravljanje opisanih spojeva mogu se također primijeniti i za sintezu drugih zahtjevanih spojeva. Predloženi izum iključuje, ali nije ograničen samo na spojeve ptoizvedene u slijedećim primjerima. Brojevi u zagradama iza naziva spoja u primjerima odgovaraju brojevima struktura u dijelu opisa u pojedinostima.
Primjer 1
Priprava l-α-metil-3,5-O-(l,l,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-ribofuranoze (2)
α-metilarabinoza je proizvedena u skladu s poznatim postupkom (Tejima, S.; Fletcher, Jr. H. G. J. Org. Chem. 1963, 28, 2999-3003) i odvojena od svog β-anomera (neznatni proizvod) kromatografijom na silika gelu. K miješanoj otopini α-metilarabinoze (19,27 g, 119,9 mmolova) u bezvodnom piridinu (200 ml) pri 0°C doda se 1,3-diklor-l,1,3,3-tetraizopropildisiloksan (38,4 ml, 119,9 mmolova). Dobivenu otopinu se miješa 1h pri 0°C i zatim 1,5 h pri sobnoj temperaturi. Otopinu se ohladi na 0°C i doda se vodu (20 ml). Smjesu se miješa 10 min i razrijedi s EtOAc. Vodeni sloj se ekstrahira s EtOAc. Sjedinjeni organski slojevi se osuše (Na2SO4), i koncentriraju so suhog. Kromatografijom na silika gelu s 15% EtOAc u heksanu dobiveno je 42,7 g (88%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
Primjer 2
Pripravljanje 2-C,2-O-didehidro-α-metil-3,5-O-(1,1,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksanediil)-D-ribofuranoze (3)
K miješanoj otopini l-α-metil-3,5-O-(l,l,3,3-tetra-izopropil-l,3-disiloksane-diil)-D-ribofuranoze (42,6 g, 104,9 mmola) i DCC (43,4 g, 209,8 mmol) u bezvodnom DMSO (250 ml) i eteru (100 ml) pri 0°C pod argonom doda se otopinu trifluoroctene kiseline (4,04 ml, 52,5 mmola) i piridin (8,44 ml, 105 mmolova) u DMSO (30 ml). Dobivenu reakcijsku smjesu se zagrije na sobnu temperaturu, miješa se 5 h, i zatim se ohladi na 0 °C. Doda se oksalnu kiselinu (21,3 g, 236 mmolova) u metanolu (60 ml), i zatim se doda vodu (30 ml). Dobivenu smjesu se miješa 1 h pri sobnoj temperature, talog se odfiltrira i temeljito ispere s heksanom. Filtrat se dalje razrijedi heksanom, ispere s vodom pet puta, osuši (Na2SO4) i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 2% MeOH u metilen klorid-heksanu (1:2) dobiveno je 37,6 g (89%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
1H NMR (CDCl3,) δ 1,00-1,12 (m, 28H, TIPDS), 3,47 (s, 3H, OCH3), 4,05-4,19 (m, 3H, H4, H5a, H5b), 4,51 (dd, J = 9,3 Hz, 1,5 Hz, 1H, H3), 4,89 (t, J = 1,5 Hz, 1H, H1).
Primjer 3
Pripravljanje 2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-3,5-O-(l,l,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-ribofuranoze
K miješanoj suspenziji metiltrifenilfosfonijevog bromida (21,5 g, 60,1 mmol) u bezvodnom eteru (1380 ml) pri sobnoj temperaturi pod argonom doda se otopinu natrijevog t-pentoksida (5,97 g, 54,0 mmol) u bezvodnom benzenu (50 ml). Dobivenu svjetlo žutu smjesu miješa se 6 pri sobnoj temperaturi i ohladi na -10°C, zatim se doda otopinu 2-C,2-O-didehidro-α-metil-3,5-O-(1,1,3,3-tetraizopropil-1,3-di-siloksandiil)-D-ribofuranose (12,1 g, 30,1 mmolova) u eteru (35 ml). Reakcijsku smjesu se miješa 1 h pri -10°C, ispere se dva puta sa zas. otopinom NaCl, osuši, (Na2SO4), i koncentrira. Kromatografijom na silika gelu s 5% EtOAc u heksanu dobiveno je 11,0 g (91%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
1H NMR (CDCl) δ 1,00-1,12 (m, 28H, TIPDS), 3,45 (s, 3H, OCH3), 3,73 (dt, J = 9,0 Hz, 3,0 Hz, 1H, H4), 4,02, 4,03 (2s, 2H, H5), 4,62 (dt, J = 9,0 Hz, 2,7 Hz, 1H, H3), 5,27 (m, 1H, H1), 5,32-5,36 (m, 2H, H2').
Primjer 4
Pripravljanje 2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-D-ribofuranoze(4)
K miješanoj otopini 2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-3,5-O-(l,l,3,3-tetraizopropil-l,3-disiloksandiil)-D-ribofuranoze (35,0 g, 87,1 mmolova) u THF-u (200 ml) doda se 1,0 M TBAF-a u THF-u (180 ml). Dobivenu otopinu se pusti stajati 1 sat pri sobnoj temperaturi. THF se ispari i ostatak se kromatografira na silika gelu s 10% EtOH u metilen kloridu, čime se dobije 14,6 g (88%) naslovnog spoja kao sirupa.
Primjer 5
Pripravljanje 3-O-benzil-5-O-(t-butildimetilsilil)-2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-D-ribofuranoze (5)
Otopinu 2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-D-ribofuranoze (13,7 g, 85,5 mmolova) i TBDMS-Cl (13,5 g, 89,6 mmol) u bezvodnom piridinu (130 ml) pusti se stajati 15 h pri sobnoj temperaturi. Kad se ohladi na 0°C i doda vodu (2 ml), dobivenu smjesu se miješa 1 sat pri sobnoj temperature, koncentrira se na pola volumena, razrijedi se s EtOAc, ispere sa zas. otopinom NaCl, osuši (Na2SO4), i koncentrira do suhog. Temeljito osušen sirov proizvod se otopi u THF (70 ml) i doda se uz miješanje k mješavini NaH (60% u mineralnom ulju, 5,6 g, 140 mmolova) u THF-u (350 ml) pri 0°C. Nakon miješanja 40 min pri sobnoj temperaturi, doda se benzil bromid (10,75 ml, 90,5 mmolova). Reakcijska smjesa se miješa 4 h i ohladi se na 0°C, zatim se polako doda vodu (2 ml) i zatim 10% AcOH u vodi do pH 7. Smjesu se razrijedi s EtOAc, ispere se sa zas. otopinom NaCl, zatim s razrijeđenim natrijevim bikarbonatom, osuši (Na2SO4), i koncentrira so suhog. Kromatografijom na silika gelu s 0-10% EtOAc u heksanu dobiveno je 23,8 g (76%) naslovnog spoja kao bezbojnu tekućinu.
1H NMR (CDCl3) δ 0,01 (s, 3H, SiCH3), 0,02 (s, 3H, SiCH3), 0,85 (s, 9H, t-Bu), 3,41 (s, 3H, OCH3), 3,60-3,72 (m, 2H, H5a, H5b), 4,20 (dd, J = 8,7 Hz, 4,5 Hz, 1H, H3), 4,57, 4,66 (AB, J = 12,0 Hz, 2H, Bn), 5,22 (t, J = 1,2 Hz, 1H, H1), 5,38 (t, J = 1,5 Hz, 1H, H2a'), 5,43 (m, J = 1,2 Hz, 1H, H2b'), 7,23-7,37 (m, 5H, Bn).
Analiza: izračunato za С20Н32O4Si: C, 65,89; H, 8,85; nađeno: C, 65,92; H, 9,22.
Primjer 6
Pripravljanje 3-O-benzil-5-O-(t-butildimetilsilil)-2-deoksi-2-hidroksimetil-l-α-metil-D-ribofuranoze (6)
K miješanoj otopini 3-O-benzil-5-O-(t-butildimetil-silil)-2-deoksi-2-metilen-l-α-metil-D-ribofuranoze (5,28 g, 14,50 mmolova) pod argonom doda se 9-BBN (0,5 M u THF-u, 87 ml). Dobivenu otopinu se miješa pri sobnoj temperaturi 1 h, zatim preko noći pri 40°C, ohladi se na sobnu temperaturu, i prenese se u bocu u kojoj se nalazi natrijev perborat tetrahidrat (13,39 g, 87 mmolova) u vodi (85 ml) i etanolu (85 ml). Dobivenu smjesu se snažno miješa 4 h pri 50°C, ohladi se na 0°C, neutralizira s AcOH na pH 8, i koncentrira na mali volumen. Preostali volumen se razrijedi s vodom (20 ml) i ekstrahira tri puta s metilen kloridom. Sjedinjeni organski slojevi se isperu dva puta sa zas. otopinom NaCl, osuše (Na2SO4), i koncentriraju do suhog. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (1:2) dobiveno je 5,17 g (93%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
1H NMR (CDCl3) δ 0,03 (s, 6H, SiCH3), 0,87 (s, 9H, t-butil), 2,34-2,43 (m, 1H, H2), 3,39 (s, 3H, OCH3), 3,48 (dd, J = 10,5 Hz, 6,0 Hz, 1H, H5a), 3,60 (dd, J = 10,5 Hz, 3,6 Hz, 1H, H5b), 3,88 (d, J = 7,2 Hz, 2H, H2'), 3,98 (dd, J = 7,2 Hz, 2,7 Hz, 1H, H3), 4,17 (m, 1H, H4), 4,44, 4,66 (AB, J = 12,3 Hz, 2H, Bn), 4,95 (d, J = 5,4 Hz, 1H, H1), 7,23-7,36 (m, 5H, Bn).
Analiza: izračunato za С20Н34O5Si: С, 62,79; H, 8,96; nađeno: С, 62,92; H, 9,21.
Primjer 7
Pripravljanje 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4’-dimetoksitritil-oksi-metil)-l-α-metil-D-ribofuranoze (7)
Otopinu 3-O-benzil-5-O-(t-butildimetilsilil)-2-deoksi-2-hidroksimetil-l-α-metil-D-ribofuranoze (6,60 g, 17,28 mmolova) i DMT-Cl (7,03 g, 20,74 mmolova) u bezvodnom piridinu (50 ml) pusti se stajati pri sobnoj temperaturi preko noći i reakcijsku smjesu se pogasi dodatkom vode (8 ml). Dobivenu otopinu se pusti stajati 10 min i razrijedi se s EtOAc, ispere sa zas. otopinom NaCl tri puta, osuši (Na2SO4) i koncentrira, čime se dobije sirov spoj 9, koji se otopi u THF-u (52 ml). Doda se TBAF (1,0 M u THF-u, 26 ml) i dobivenu otopinu se pusti stajati 30 min pri sobnoj temperaturi. THF se ispari i ostatak se kromatografira na silika gelu s EtOAc-heksanom (1:1), čime se dobije 9,28 g (94%) naslovnog spoja kao bijele pjene.
1H NMR (CDCl3) δ 2,33-2,42 (m, 1H, H2), 3,26-3,63 (m, 7H, H5a, H5b, H2a’, H2b’, ОСНз), 3,79 (d, J = 1,2 Hz, 6H, DMT), 3,91 (dd, J = 7,5 Hz, 2,4 Hz, 1H, H3), 4,13 (m, 1H, H4), 4,41, 4,50 (AB, J = 12,9 Hz, 2H, Bn), 5,05 (d, J = 5,1 Hz, 1H, H1), 6,78-6,85 (m, 4H, DMT), 7,14-7,47 (m, 14H, Bn, DMT).
Analiza: izračunato za С35Н38O7: С, 73,66; H, 6,71; nađeno: С, 73,57; Н, 6,76.
Primjer 8
Pripravljanje 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4’-dimetoksitritil-oksimetil)-5-C,5-0-didehidro-1-α-metil-D-ribofuranoze (8)
K miješanoj otopini 3-(9-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-di-metoksitritiloksimetil)-l-α-metil-D-ribofuranoze (9,18 g, 16,16 mmolova) i DCC (10,0 g, 48,49 mmolova) u bezvodnom DMSO (60 ml) pri 10oС doda se otopinu trifluoroctene kiseline (0,622 ml, 8,08 mmolova) i piridin (1,95 ml, 24,24 mmola) u DMSO (15 ml). Dobivenu reakcijsku smjesu se miješa 1 h pri 10°C, 6 sati pri sobnoj temperature, i zatim se ohladi na 0°C. Nakon dodatka vode (8 ml), smjesu se miješa preko noći i razrijedi s EtOAC. Talog se odfiltrira i temeljito ispere s EtOAc. Sjedinjeni filtrat se ispere pet puta sa zas. otopinom NaCl, osuši, (Na2SO4), i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (1:1) dobiveno je 8,26 g (90%) naslovnog spoja kao bijele pjene.
Primjer 9
Pripravljanje 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-dimetoksitritil-oksimetil)-4-C-hidroksimetil-1-α-metil-D-ribofuranoze (9)
K miješanoj otopini 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-di-metoksitritiloksimetil)-5-C,5-O-didehidro-1-α-metil-D-ribofuranoze (8,0 g, 14,08 mmolova) i formaldehida (37% u vodi, 85 ml) u dioksanu (420 ml) pri 0°C doda se kap po kap tijekom 15 min vodenu otopinu NaOH (2,0 M, 210 ml). Dobivenu mutnu otopinu se miješa 2 dana pri sobnoj temperature tako da postane bistra otopina. Kad se ohladi na 0°C, otopinu se neutralizira s 10%-tnom octenom kiselinom na pH 8, koncentrira se na mali volumen, razrijedi se s vodom (100 ml) i ekstrahira tri puta s metilen kloridom. Sjedinjeni organski slojevi se isperu sa zasićenom otopinom NaCl, osuše (Na2SO4) i koncentriraju do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 4-5% etanola u metilen kloridu dobije se 8,11 g (94%) naslovnog spoja kao bijele pjene.
1H NMR (CDCl3) δ 2,46-2,57 (m, 1H, H2), 3,23-3,73 (m, 9H, H5, H4', H2', ОСНз), 3,79 (d, J = 1,8 Hz, 6H, DMT), 4,14 (d, J = 6,9 Hz, 1H, H3), 4,43, 4,47 (AB, J = 12 Hz, 2H, Bn), 4,97 (d, J = 4,8 Hz, 1H, Hl), 6,77-6,85 (m, 4H, DMT), 7,11-7,46 (m, 14H, Bn, DMT).
Primjer 10
Pripravljanje 3-(7-benzil-2-deoksi-2-hidroksimetil-5-O-mezil-4-meziloksimetil-l-α-metil-D-ribofuranoze (10)
K miješanoj otopini 3-O-benzil-2-deoksi-2-(4,4'-di-metoksitritiloksimetil)-4-C-hidroksimetil-1-α-metil-D-ribofuranoze (7,80 g, 13,0 mmolova) u bezvodnom piridinu (60 ml) pri 0oС pod argonom doda se kap po kap metan-sulfonil klorid (3,03 ml, 39 mmolova). Dobivenu reakcijsku smjesu se miješa 45 minuta pri sobnoj temperaturi, ohladi se na 0°C i razrijedi dodatkom vode (5 ml). Dobivenu smjesu se miješa 15 min pri sobnoj temperaturi, razrijedi s EtOAc, ispere tri puta sa zas. otopinom NaCl, osuši (Na2SO4) i koncentrira, čime se dobije sirov proizvod kao bijela pjena, koju se otopi u AcOH-vodi (80:20, 400 ml). Dobivenu otopinu pusti se stajati 2 h pri sobnoj temperaturi, razrijedi se s vodom (200 ml) i koncentrira na otprilike četvrtinu voluma. Doda se vodu (100 ml) i mješavinu se koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (3:1 do 1:0) dobije se 5,32 g (90%) naslovnog spoja kao polukrute tvari.
1H NMR (CDCl3) δ 2,43-2,54 (m, 1H, H2), 3,01 (s, 3H, OMs), 3,03 (s, 3H, OMs), 3,41 (s, 3H, ОСНз), 3,81 (d, J = 4,8 Hz, 2H, H2'), 4,01,4,04 (AB, J = 10,5 Hz, 2H, H4'), 4,21 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H3), 4,30, 4,50 (AB, J = 1,8 Hz, 2H, H5), 4,56, 4,63 (AB, J = 12,0 Hz, 2H, Bn), 4,99 (d, J = 5,1 Hz, 1H, HI), 7,30-7,42 (m, 5H, Bn).
Analiza: izračunato za С17Н27O10S2: C, 44,82; H, 5,97; nađeno: C, 44.68; H, 6.00.
Primjer 11
Pripravljanje (1S,3S,4R,8S)-8-benziloksi-l-hidroksimetil-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktane (11)
K mješavini NaH (60% u mineralnom ulju, 1,83 g, 22,90 mmol) u bezvodnom THF-u (200 ml) doda se uz miješanje otopinu 3-O-benzil-2-deoksi-2-hidroksimetil-5-O-mezil-4-meziloksimetil-l-α-metil-D-ribofuranoze (5,20 g, 11,45 mmolova) u THF-u (30 ml). Dobivenu reakcijsku smjesu miješa 42 h se pri 55°C i reakcijsku smjesu se pogasi dodatkom vode pri 0°C. THF se ispari i doda se vodenu otopinu NaOH (0,5 M, 250 ml). Dobivenu mješavinu se grije 24 h pod refluksom, ohladi se na 0°C, neutralizira se sa solnom kiselinom na pH 8, ekstrahira s metilen kloridom četri puta. Sjedinjeni organski slojevi se osuše (Na2SO4) i koncentriraju do suhog. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (2:1 do 1:0) dobiveno je 3,16 g (98%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
1H NMR (CDCl3) δ 2,32 (m, 1H, H2),3,41 (d, J= 11,4 Hz, 1H, H4a'), 3,46-3,60 (m, 2H, 5H, H5, ОСН3), 3,91 (d, J =11,1 Hz, 1H, H4b'), 3,92 (dd, J = 10,8 Hz, 2,4 Hz, 1H, H2a'), 4,01 (d, J = 5,4 Hz, 1H, H3), 4,04 (d, J = 10,5 Hz, 1H, H2b'), 4,58, 4,64 (AB, J = 12,0 Hz, Bn), 5,07 (d, J = 3,9 Hz, 1H, H1), 7,28-7,40 (m, 5H, Bn).
Primjer 12
Pripravljanje (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (12)
Otopinu (1S,3S,4R,8S)-8-benziloksi-l-hidroksimetil-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (1,60 g, 5,71 mmolova), octenog anhidrida (1,08 ml, 11,42 mmolova) i DMAP (2,09 g, 17,13 mmolova) u bezvodnom metilen kloridu (10 ml) miješa se 2 h pri sobnoj temperature, ohladi se na 0°C i razrijedi s metanolom (4 ml). Smjesu se miješa pri sobnoj temperaturi 15 min, razrijedi s metilen kloridom, ispere s otopinom soli i zatim s 10% NаНСО3, osuši (Na2SO4), i koncentrira so suhog. Kromatografijom na silika gelu s etil acetat-heksanom (1:1) dobiveno je 1,82 g (99%) naslovnog spoja kao bezbojnog sirupa.
1H NMR (CDCl3) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,33 (m, 1H, H2), 3,50 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4a1), 3,57 (s, 3Н, ОСН3), 3,86-4,04 (m, 5Н, Н2а', H2b', Н3, H4b', H5a), 4,14 (d, J = 12,0 Hz, 1H, H5b), 4,50, 4,64 (AB, J = 12,0 Hz, 1H, Bn), 5,09 (d, J = 3,9 Hz, lH, H1), 7,29-7,42 (m, 5Н, Bn).
Analiza: izračunato za С17Н22O6: С, 63,34; H, 6,88; nađeno: С, 63,41; H, 6,94.
Primjer 13
Pripravljanje (1R,3S,4R,8S)-3-acetoksi-l-acetoksimetil-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (13)
K miješanoj otopini (1R,3S,4R,8S)-8-benziloksi-l-hidroksimetil-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (600 mg, 2,14 mmola) u mješavini octene kiseline (6,0 ml) i octenog anhidrida (0,6 ml) pri 0oС doda se kap po kap koncentriranu sumpornu kiselinu (57 μl, 1,07 mmola). Dobivenu reakcijsku smjesu se miješa 10 min pri 0°C i zatim 2 h pri sobnoj temperaturi. Kad se ohladi na 0oС, otopinu se razrijedi s EtOAc, ispere tri puta s otopinom soli i zatim s 10%-tnim natrijevim bikarbonatom, osuši (Na2SO4), i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (2:3) dobiveno je 696 mg (93%) naslovnog spoja (β-anomer) i 31 mg (3%) α-anomer, obadva kao bezbojni sirup. β-anomer se je skrutnuo nakon stajanja pri sobnoj temperature dana; tal. 55-58 °C.
1H NMR (CDCl3) δ 2,03 (s, 3Н, OAc), 2,08 (s, 3Н, OAc), 2,36-2,39 (m, 1H, H2), 3,49 (d, J = 10,8 Hz, H4a'), 3,73 (d, J = 11,1 Hz, 2,7 Hz, 1H, Н2а’), 3,89 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4b'), 4,01 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H2b'), 4,03 (d, J = 9,3 Hz, 1H, H5a), 4,14 (d, J = 5,1 Hz, 1H, Н3), 4,55 (d, J = 9,6 Hz, 1H, H5b), 4,55, 4,64 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,39 (s, 1H, H1), 7,29-7,42 (m, 5Н, Bn).
Analiza: izračunato za С18Н22O7: С, 61,70; H, 6,33; nađeno: С, 61,74; H, 6,46.
Primjer 14
Pripravljanje (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-1-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktan (14)
Mješavinu timina (189 mg, 1,5 mmola) i bezvodnog amonijevog sulfata (15 mg) u HMDS (6 ml) grije se preko noći pod refluksom. Ostatak nakon odstranjivanja HMDS se ispari zajedno s bezvodnim ksilenom, suši se u vakuumu 30 min i otopi u otopini (1R,3S,4R,8S)-3-acetoksi-1-acetoksi-metil-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (306 mg, 0,87 mmola) u 1,2-dikloretanu (5 ml). K toj miješanoj otopini pod argonom se doda kap po kap trimetilsilil triflat (0,38 ml) u 1,2-dikloretanu (2 ml). Dobivenu otopinu se grije 2 h pod refluksom, ohladi se na 0°C, razrijedi s klorformom i neutralizira s 10%-tnim NaHCO3 (10 ml). Organski sloj se odvoji i vodeni sloj se ekstrahira dva puta s klorformom. Sjedinjeni organski slojevi se osuše (Na2SO4) i koncentriraju do suhog. Kristalizacijom iz EtOAc-CH2Cl2 dobiven je naslovni spoj (303 mg, 83%) kao bezbojna kruta tvar; tal. 198-200°C.
1H NMR (CDCl3) δ 1,94 (d, J = 1,2 Hz, 1H, АrСН3), 2,04 (s, 3H, OAc), 2,93 (m, 1H, H2'), 3,50 (dd, J = 11,8 Hz, 2,1 Hz, 1H, H2a"), 3,59 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4a"), 4,016 (d, J = 11,7 Hz, 1H, H4b"), 4,022 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5a'), 4,09 (d, J = 12,0 Hz, 1H, H2b"), 4,11 (d, J = 4,5 Hz, 1H, H3'), 4,27 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5b'), 4,53, 4,70 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 5,88 (d, J = 3,6 Hz,lH, H1'), 7,30-7,42 (m, 5H, Bn), 7,74 (d, J = 1,5 Hz, 1H, H6), 8,79 (s, 1H, NH). Analiza: izračunato za С21Н24N2O7: C, 60,57; H, 5,81; N, 6,73; nađeno: C, 60,55; H, 5,84; N, 6,69.
Primjer 15
Pripravljanje (1S,S,4R,8S)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (15)
K otopini (1S,S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana u bezvodnom metilen kloridu (3 ml) pri 10°C doda se borov triklorid (1,0 M u CH2Cl2, 6 ml). Dobivenu reakcija smjesu se miješa preko noći pri 15°C do sobne temperature i ohladi na 0°C. Kap po kap doda se metanol (1,5 ml) i dobivenu smjesu se miješa 15 min pri 0°C, zatim se doda trietilamin (2 ml). Otapalo se ispari i talog se temeljito ekstrahira s toplim acetonom. Otopinu u acetonu se osuši (Na2SO4) i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 10%-tnim metanolom u klorformu dobiveno je 99 mg spoja 20 kao bijele pjene. Kristalizacijom iz acetona dobiveno je 95 mg (93%) naslovnog spoja kao bezbojne krute tvari; tal. 225-226°C; 1H NMR (DMSO-d6) δ 1,76 (d, J = 0,9 Hz, 1H, АrСН3), 2,45 (m, 1H, H2"), 3,25 (dd, J = 11,4 Hz, 2,1 Hz, 1H, H2a"), 3,32-3,52 (m, 2H, Н5"), 3,53 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4a"), 3,72 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4b"), 3,93 (d,J=ll,l Hz, lH, H2b"), 4,16 (m, 1H, H3'), 4,84 (t, J = 6,0 Hz, 1H, OH), 5,74 (d, J=4,2 Hz, lH, H1'), 5,84 (d, J = 3,9 Hz, 1H, OH), 7,76 (d, J = 1,2 Hz, 1H, H6), 11,32 (s, 1H, NH);
MS m/z 285 (MH+).
Analiza: izračunato za С12Н16N2O6: C, 50,70; H, 5,67; N, 9,85; nađeno: C, 50,85; H, 5,68; N,9.75.
Primjer 16
Pripravljanje (1R,3R,4R,8S)-1-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (17)
i (1R,3S,4R,8S)-1-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (16)
Mješavinu 6-klorpurina (246 mg, 1,6 mmola) i HMDS (8,0 ml) was refluktira se 2 h pod argonom. HMDS se ispari i ostatak se suši 30 min pod vakuumom i zatim se otopi u otopini (1R,3S,4R,8S)-3-acetoksi-1-acetoksimetil-8-benzil-oksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (302 mg, 0,83 mmola) u bezvodnom 1,2-dikloretanu (5,0 ml), zatim se doda trimetilsilil triflat (0,38 ml, 2,25 mmol) u 1,2-diklor-etanu (2,0 ml). Dobivenu otopinu se grije 45 min pod refluksom i pod argonom. Obrada je kao što je ranije opisano. Kromatografijom na silika gelu s EtOAc-heksanom (1:1) dobiven je (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktan (122 mg, α-anomer) i (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktan (157 mg, β-anomer), oba kao bezbojne krute tvari. Ukupno iskorištenje bilo je 75%.
α-izomer: 1H NMR (CDCl3) δ 2,05 (s, 3H, OAc), 2,89 (m, 1H, H2'), 3,23 (dd, J = 12,0 Hz, 2,4 Hz, 1H, H2a"), 3,72 (d, J = 11,7 Hz, H4a"), 4,09 (d, J = 12,3 Hz, 2H, H4", H5a'), 4,13 (d, J = 13,2 Hz, 1H, H2b"), 4,24 (d, J = 4,8 Hz, H3'), 4,29 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b"), 4,60, 4,74 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,50 (d, J = 4,2 Hz, 1H, H1’), 7,32-7,44 (m, 5H, Bn), 8,69 (s, 1H, H8), 8,78 (s, 1H, H2),
β-izomer: tal. 124-125oС (EtOAc-heksan);
1H NMR (CDCl3) δ 2,05 (s, 3H, OAc), 2,90 (m, 1H, H2'), 3,55 (d, J = 11,1 Hz, H4a"), 3,95-4,03 (m, 2H, H2a", H4b"), 4,18-4,24 (m, 3H, Н5', H2b"), 4,32 (d, J = 4,8 Hz, H3'), 4,47, 4,63 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,52 (s, 1H, H1’), 7,24-7,35 (m, 5H, Bn), 8,40 (s, 1H, H8), 8,72 (s, 1H, H2); Analiza: izračunato za С21Н21N4O5Cl: C, 56,70; H, 4,76; N, 12,59; nađeno: C, 56,36; H, 4,56; N, 12,37.
Primjer 17
Pripravljanje (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetil-gvanin-9-il)-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo|3,2,l]oktana (22)
Mješavinu N2-acetil gvanina (193 mg, 1,0 mmol) i amonijevog sulfata (20 mg) u piridinu (1,0 ml) i HMDS (5,0 ml) refluktira se 3 h pod argonom. Dobivenu bistru otopinu se koncentrira i ispari zajedno sa ksilenom (10 ml, osušen s natrijem). Ostatak se suši 1 h pod vakuumom pri 50°C i otopi u otopini (1R,3S,4R,8S)-3-acetoksi-1-acetoksimetil-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (175 mg, 0,5 mmola) u bezvodnom 1,2-dikloretanu (5,0 ml), zatim se doda trimetilsilil triflat (0,27 ml, 1,5 mmola) u 1,2-diklor-etanu (1,0 ml). Dobivenu otopinu se miješa 30 min pri sobnoj temperaturi pod argonom, zatim se grije 2 h pri 70-75°C, ohladi na 0°C i neutralizira s 10%-tnim natrijevim bikarbonatom (10 ml). Dobivenu smjesu se miješa 15 min i organski sloj se odvoji. Vodeni sloj se ekstrahira dva puta s klorformom. Sjedinjeni organski slojevi se osuše (Na2SO4) i koncentriraju do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 10%-tnim etanolom u СНСl3-ЕTOАс (1:1) dobiven je naslovni spoj (72 mg, 30%) kao bezbojna kruta tvar; tal. 249°C (rasp., EtOAc);
1H NMR (CDCl3) δ 2,01 (s, 3H, OAc), 2,29 (s, 3H, NAc), 2,75 (m, 1H, H2'), 3,29 (dd, J = 11,7 Hz, 1,8 Hz, 1 H, H2a"), 3,66 (d, J = 11,4 Hz, 1 H, H4a"), 4,03 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4b"), 4,05 (d, J = 11,7 Hz, 1H, H2b"), 4,70 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5a'), 4,13 (d, J = 4,8 Hz, H3'), 4,23 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b'), 4,53, 4,67 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,17 (d, J = 4,2 Hz, 1H, H1'), 7,28-7,40 (m, 5H, Bn), 8,32 (s, 1H, H8), 9,80 (s, 1H, NH), 12,12 (s, 1H, NH).
Primjer 18
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-3-(adenin-9-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (18)
Otopinu (1R,3R,4R,8S)-1-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (100 mg, 0,225 mmol) u mješavini dioksana (20 ml) i 30% vodenog amonijevog hidroksida (20 ml) grije se 16 h u čeličnom autoklavu pri 100°C for 16 h. Otapala se ispare i ostatak se otopi u metanolu, zatim se svaki dan doda 20%-tni paladijev hidroksid na ugljenu (pribl. 50% vode, 3 x 250 mg). Hidrogenolizu se provodi 4 dana pri sobnoj temperaturi pod 55 psi vodika. Katalizator se odfilterira i ispere s metanolom. Sjedinjenu otopinu u metanolu se koncentrira i ostatak se kromatografira na silika gelu s 20% metanola u metilen kloridu, čime se dobije naslovni spoj (39 mg, 59%) kao bezbojna kruta tvar, koja kristalizira iz metanola; tal. 250°C (rasp.).
1H NMR (DMSO-d6 + D2O): δ 2,53 (m, 1H, H2'), 3,33 ( d, J = 11,1 Hz, 1H, H2a"), 3,40 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5a'), 3,50 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5b'), 3,69-3,76 (m, 2H, H2b", H4a"), 4,05 (d, J = 10,2 Hz, H4b"), 4,45 (d, J = 5,1 Hz, 1H, H3'), 6,26 (s, 1H, H1’), 7,28 (m, 2H, NН2), 8,12 (s, 1H, H8), 8,33 (s, 1H, H2);
MS: 294 (MH+);
Analiza: izračunato za С12Н15N5O4: C, 49,14; H, 5,16; N, 23,88; nađeno: C, 49,01; H, 4,97; N, 23,92.
Primjer 19
Pripravljanje (1S,3S,4R,8S)-3-(adenin-9-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklol3,2,l]oktan (19)
Naslovni spoj dobiven je istim postupkom kako je opisano u primjeru 18 (43 mg, 65%) kao bezbojna kruta tvar iz (1S,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klor-purin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (100 mg).
1H NMR (CDCl3) δ 2,71 (m, 1H, H2'), 3,13 (dd, J = 11,7 Hz, 2,4 Hz, 1H, H2a"), 3,57 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5a'), 3,64 (d, J - 11,1 Hz, H4a"), 3,68 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b'), 3,96 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4b"), 4,14 (d, J = 11,7 Hz, 1H, H2b"), 6,39 (d, J =4,2 Hz, 1H, H1'), 8,04 (s, 1H, H8), 8,44 (s, 1H, H2); MS m/z 294 (MH+).
Primjer 20
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(hipoksantin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (20)
K otopini (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (150 mg, 0,34 mmola) i merkaptoetanola (0,19 ml, 2,7 mmol) u metanolu (20 ml) doda se natrijev metoksid (0,37 ml, 5,4 M u metanolu, 2,0 mmola). Dobivenu otopinu se grije 6 h pod refluksom, ohladi se na sobnu temperaturu, neutralizira s 10% AcOH na pH 7. Metanol se ispari i ostatak se razrijedi s 1,0 M МаНСО3 (15 ml), zatim se ekstrahira s 10%-tnim metanolom u klorformu sve dok vodena faza više ne sadrži ništa proizvoda. Sjedinjeni organski slojevi se osuše (Na2SO4) i koncentriraju do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 10-15% metanola u klorformu dobije se 109 mg (84%) derivata inosina (nije prikazan) kao bezbojnu krutu tvar, od kojeg se 100 mg (0,26 mmola) otopi u metanolu, zatim se doda 20% paladijev hidroksid na ugljenu (50% voda, 600 mg). Hidrogenolizu se provodi 3 dana pri sobnoj temperaturi pod 50 psi vodika. Katalizator se odfiltrira i ispere s metanolom. Sjedinjenu metanolnu otopinu se koncentrira i ostatak se kromatografira na silika gelu s 20-25% metanolom u metilen kloridu, čime se dobije 61 mg (61%) naslovnog spoja kao bezbojnu krutu tvar koja kristalizira iz metanol-etil acetata; tal. 228°C (rasp.);
1H NMR (DMSO-d6) δ 2,52 (m, 1H, H2'), 3,30-3,55 (m, 3H, H5', H4a"), 3,69 (dd, J = 11,1 Hz, 2,7 Hz, 1H, H2a"), 3,73 (d, J = 10,8 Hz, H4b"), 4,05 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H2b"), 4,40 (m, 1H, H2b"), 5,03 (t, J = 6,0 Hz, 1H, OH), 5,74 (d, J =4,2 Hz, 1H, OH), 6,24 (s, 1H, H1’), 8,06 (s, 1H, H8), 8,30 (s, 1H, H2), 12,40 (s, 1H, NH); MS m/z 295 (MH+).
Primjer 21
Pripravljanje (1S,3S,4R,8S)-8-hidroksi-1-hidroksimetil-3-(hipoksantin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (21)
K otopini (1S,3S,4R,8S)-1-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klorpurin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana (120 mg, 0,27 mmol), merkaptoetanola (0,15 ml, 2,1 mmol) u metanolu (16 ml) doda se natrijev metoksid (1,62 mmola, 0,30 ml 5,4 M u metanolu). Slično postupku opisanom u primjeru 20, dobiveno je 37 mg (47%) naslovnog spoja kao higroskopne krute tvari.
1H NMR (DMSO-d6) δ 2,52 (m, 1H, H2'), 3,06 (dd, J = 11,7 Hz, 2,4 Hz, 1H, H2a"), 3,34-3,53 (m, 2H, H5'), 3,56 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4a"), 3,79 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4b"), 3,98 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H2b"), 4,31 (d, J = 4,5 Hz, 1H, НЗ"), 4,89 (br, 1H, ОН), 5,99 (br, 1H, ОН), 6,28 (d, J = 4,2 Hz, 1H, H1"), 8,03 (s, 1H, H8), 8,27 (s, 1H, H2), 12,30 (br, 1H, NH).
Primjer 22
Pripravljanje (lS,3S,4R,8S)-3-(gvanin-9-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (23)
Naslovni spoj dobiven je istim postupkom kako je opisano u primjeru 18 (43 mg, 65%) kao bezbojna kruta tvar iz (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(6-klor-purin-9-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (100 mg).
1H NMR (DMSO-d6 + D2O): δ 2,42 (m, 1H, H2'), 3,15 (dd, J = 11,4 Hz, 2,1 Hz, 1H, H2a"), 3,34 (d, J - 11,4 Hz, 1H, H5a'), 3,47 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5b'), 3,51 (d, J = 12,0 Hz, 1H, H4a"), 3,77 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4b"), 3,98 (d, J = 11,7 Hz, 1H, H2b"), 4,23 (d, J = 4,8 Hz, 1H, H3'), 4,80 (br, 1H, OH), 5,90 (br, 1H, OH), 6,05 (d, J = 4,2 Hz, 1H, H1'), 6,52 (br, 2H, NH2), 7,93 (s, 1H, H8), 12,30 (br, 1H, NH); MS m/z 310 (MH+).
Primjer 23
Pripravljanje (lR,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (24)
Reakcija se odvija na isti način kako je opisano u primjeru 14 osim da je kao reagent za povezivanje upotrijebljen kositreni(IV) klorid (0,45 ml), a saharidna podloga je bio (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (202 mg, 0,63 mmola). Kromatografijom na silika gelu s 5% EtOH u СН2Сl2 dobivena je mješavina (233 mg, 89%) naslovnog spoja (β-anomer) i njegovog α-anomera (omjer β:α, pribl. 4:1) kao bezbojna kruta tvar.
1H NMR (CDCl3) za β-anomere (iz spekta smjese α- i β-anomera) δ 1,93 (d, J = 0,9 Hz, 1H, АrСНз), 2,05 (s, 3H, OAc), 2,66 (m, 1H, H2'), 3,48 (d, J = 11,1 Hz, H4a"), 3,86-4,12 (m, 5H, H2a", H2b", H3', H4b", H5a'), 4,26 (d, J = 12,6 Hz, H5b’), 4,44, 4,64 (AB, J = 11,4 Hz, 2H, Bn), 6,06 (s, 1H, H1'), 7,26-7,42 (m, 5H, Bn), 7,59 (d, J = 1,2 Hz, 1H, H6), 8,94 (s, 1H,NH).
Primjer 24
Pripravljanje (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo(3,2,l]oktana (25)
Istim postupkom kako je opisano u primjeru 23, nakon kromatografije na silika gelu s 5% EtOH u metilen kloridu, dobivena je smjesa (267 mg, 87%) naslovnog spoja i njegovog α-anomera (omjer β:α, pribl. 9:1) kao bezbojna kruta tvar iz (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (230 mg, 0,71 mmol) i sililiranog uracila (2,0 mmol). Naslovni spoj (β-anomer) je djelomično odvojen kromatografijom na silika gelu; tal. 145-147oС (EtOAc-heksan).
1H NMR (CDCl3) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,67 (m, 1H, H2'), 3,49 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4a"), 3,86-3,97 (m, 3H, Н2а", НЗ', H4b"), 4,08 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5a'), 4,09 (d, J = 10,5 Hz, 1H, H2b"), 4,25 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b'), 4,44, 4,64 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,05 (s, 1H, H1’), 7,26-7,40 (m, 5H, Bn), 5,69 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H5), 7,79 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H6), 8,92 (s, 1H, NH).
Analiza: izračunato za С20Н22N2O7: C, 59,69; H, 5,51; N, 6,96; nađeno: C, 59,45; H, 5,56; N, 6,91.
Primjer 25
Pripravljanje (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-beniloksi-3-(N4-benzoilcitozin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (26)
Istim postupkom kako je opisano u primjeru 23, nakon kromatografije na silika gelu s 5% EtOH u metilen kloridu, dobiven je (910 mg, 90%) naslovni spoj (β-anomer) kao bezbojna kruta tvar iz reakcije (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo-[3,2,1]oktana (645 mg, 2,0 mmola) sa sililiranim N4-benzoilcitozinom (4,0 mmola); tal. 173-174oС (EtOAc);
1H NMR (CDCl3) δ 2,07 (s, 3H, OAc), 2,83 (m, 1H, H2'), 3,51 (d, J = 11,1 Hz, H4a"), 3,86 (d, J = 5,4 Hz, 1H, НЗ'), 3,97 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4b"), 3,99-4,13 (т, 3H, Н2а", H2b", H5a'), 4,27 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b’), 4,38, 4,61 (AB, J = 11,4 Hz, 2H, Bn), 6,15 (s, 1H, H1’), 7,24-7,38 (m, 5H, Bn), 7,50-7,66 (m, 4Н, H5, Bz), 7,90 (m, 2H, Bz), 8,28 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H6), 8,84 (br, 1H, NH).
Analiza: izračunato za С27Н27N3O7: С, 64,15; H, 5,38; N, 8,31; nađeno: C, 64,10; H, 5,20; N, 8,43.
Primjer 26
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo(3,2,l]oktana (27)
K otopini mješavine (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(timin-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktana i njegovog α-anomera (pribl. 4:1, 200 mg, 0,48 mmol) u bezvodnom metilen kloridu (4 ml) pri 0°C doda se borov triklorid (1,0 M u CH2CH2, 8 ml). Dobivenu reakcijsku smjesu se miješa 8 h pri sobnoj temperaturi, preko noći pri 15°C i zatim se ohladi na 0°C. Kap po kap doda se metanol (5,0 ml), zatim se doda 1,0 M NaOMe u MeOH do pH 8. Otopinu se odvoji i talog se temeljito ekstrahira s 20% metanolom u metilen kloridu. Sjedinjeni filtrat se osuši (Na2SO4), i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 10-15%-tnim metanolom u etil acetatu dobiven je naslovni spoj (78 mg), smjesa naslovnog spoja i njegovog α-anomera (24 mg), i α-anomer (23 mg), sve kao bezbojna kruta tvar. Ukupno iskorištenje bilo je 91%. Kristalizacijom naslovnog spoja iz metanol-etil acetata dobivena je kristalinična kruta tvar; tal. 217-218°C.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,75 (d, J = 1,2 Hz, 1H, АrСНз), 2,24 (m, 1H, H2'), 3,20 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4a"), 3,33-3,58 (m, ЗН, Н2а", Н5'), 3,66 (d, J = 10,8 Hz, H4b"), 3,97 (d, J = 10,5 Hz, 1H, H2b"), 4,14 (m, 1H, H3'), 5,24 (t, J = 5,1 Hz, 1H, OH), 5,67 (d, J = 2,4 Hz, 1H, OH), 5,82 (s, 1H, H1'), 7,95 (d, J = 0,9 Hz, 1H, H6), 11,32 (s, 1H, NH).
MS m/z 285 (MH+).
Analiza: izračunato za С12Н16N2O6: С, 50,70; H, 5,67; N, 9,85; nađeno: С, 50,65; H, 5,57; N, 9,73.
Primjer 27
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo(3,2,l]oktana (28)
Sličnim postupkom kako je opisano u primjeru 26, nakon kromatografije na silika gelu s 10% metanol u metilen kloridu, dobiveno je 110 mg (76%) naslovnog spoja kao bijele krute tvari iz (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (215 mg, 0,53 mmola). Naslovni spoj sadržavao je malu količinu svoj α-anomera. Čisti naslovni spoj dobiven je prekristalizacikom iz aceton-etil acetata; tal. 218-219oС; 1H NMR (CDCl3) (acetone-d6) δ 2,42 (m, 1H, H2'), 3,27 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4a"), 3,58-3,72 (m, 3H, H2a", H5'), 3,83 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4b"), 4,13 (d, J = 10,5 Hz, 1H, HH2b"), 4,37 (t, J = 5,1 Hz, 1H, OH), 4,42 (m, 1H, H3'), 4,88 (d, J = 3,9 Hz, 1H, OH), 5,52 (d,J = 7,8 Hz, 1H, H5), 5,95 (s, 1H, H1'), 8,17 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H6), 10,02 (s, 1H, NH); MS m/z 271 (MH+).
Analiza: izračunato za С11Н14N2O6: C, 48,89; H, 5,22; N, 10,37; nađeno: C, 48,60; H, 5,64, N, 10,21.
Primjer 28
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-3-(citozin-l-il)-8-hidroksi-1-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (30)
Sličnim postupkom kako je opisano u primjeru 26, nakon kromatografije na silika gelu s 10% MeOH u metilen kloridu iz (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-(N4-benzoilcitozin-l-il)-dioksabiciklo-[3,2,l]oktana, dobiveno je 364 mg (65%) (1S,3R,4R,8S)-3-(N4-benzoilcitozin-l-il)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktana (760 mg), 120 mg (0,32 mmola) koji se otopi u zasićenoj otopini amonijaka u metanolu i otopinu se miješa 24 h pri sobnoj temperaturi. Amonijak i metanol se ispare i ostatak se otopi u vodi, zatim se temeljito ekstrahira s klorformom (5 puta) i zatim s toluenom (2 puta). Vodu se ispari i kristalizacijom iz metanola dobije se 62 mg naslovnog spoja (45 mg kristalinične krute tvari i 17 mg ne-kristalinične krute tvari); tal. 250oС (rasp.).
1H NMR (CD3OD) δ 2,33 (m, 1H, H2"), 3,31 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4a"), 3,57 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5a'), 3,65 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b'), 3,78 (dd, J = 10,5 Hz, 2,7 Hz, H2a"), 3,84 (d, J = 11,1 Hz, 1H, H4b"), 4,14 (d, J = 10,5 Hz, 1H, H2b"), 4,20 (d, J = 5,1 Hz, 1H, H3'), 5,86 (d, J = 7,5 Hz, 1H, H5), 5,96 (s, 1H, H1'), 8,22 (d, J = 7,8 Hz, 1H, H6); MS: m/z 270 (MH+).
Analiza: izračunato za С11Н15N3O5: C, 49,07; H, 5,62; N, 15,61; nađeno: C, 48,93; H, 5,55; N, 15,64.
Slično tome proizveden je (1S,3R,4R,8S)-3-(N4-acetilcitozin-1-il)-8-hidroksi-1-hidroksimetil-2,6-dioksa-biciklo[3,2,1]oktan.
Alternativa metoda
Mješavinu (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-hidroksimetil-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (170 mg, 0,63 mmola), octenog anhidrida (2,16 ml, 20,1 mmola) i piridina (0,29 ml, 3,5 mmola) u bezvodnom DMF-u (2,5 ml) miješa se preko noći pri sobnoj temperaturi, razrijedi se s metilen kloridom, ispere s otopnom soli i 10% МаНСО3, osuši (Na2SO4) i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s etil acetat-heksanom (2:1) dobiveno je 117 mg (77%) 3',5'-diacetilnog derivatae (1S,3R,4R,8S)-8-acetoksi-1-acetoksi-metil-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]-oktana.
(1S,3R,4R,8S)-8-acetoksi-l-acetoksimetil-3-(uracil-l-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (175 mg, 0.58 mmol) se otopi u bezvodnom piridinu (1,5 ml) i dobivenu otopinu se ohladi na 0°C pod argonom, zatim se doda 4-klorfenil diklorfosfat (0,29 ml, 1,75 mmola). Dobivenu otopinu se zagrije na sobnu temperaturu i prenese u začepljenu vijalu u kojoj se nalazi 1,2,4-triazol (120 mg, 1,75 mmola). Reakcijsku smjesu se miješa 3 dana pri sobnoj temperaturi, razrijedi sa CH2Cl2, ispere s otopinom soli i 5% НаНСО3, osuši (Na2SO4) i koncentrira do suhog. Ostatak se otopi u dioksanu (7 ml) i 30%-tnom amonijevom hidroksidu (10 ml). Otopinu se pusti stajati 16 h pri sobnoj temperaturi i otapala se ispare. Ostatak se kromatografira na silika gelu s Еt3N-МеОН-СНСl3 (5:30:65), čime se dobije 74 mg (55%) naslovnog spoja kao blago žute krute tvari.
Primjer 29
Pripravljanje (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetil-gvanin-7-il)-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (31)
Sililiranu bazu N2-acetilgvanina (386 mg, 2,0 mmola) proizvede se postupkom opisanim u primjeru 17 i otopi u otopini (1R,3S,4R,8S)-l-acetoksimetil-8-benziloksi-3-metoksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (477 mg, 1,48 mmola) u bezvodnom 1,2-dikloretanu (10 ml) i zatim se doda kositar(IV) klorid (0,75 ml) u 1,2-dikloretanu (2,0 ml). Dobivenu smjesu se grije 3 h pod refluksom, zatim preko noći pri 70°C i ohladi se na 0°C. Smjesu se neutralizira s 2,0 M natrijevim karbonatom, filterira se kroz celit i temeljito ekstrahira s klorformom. Sjedinjeni filtrat se osuši (Na2SO4) i koncentrira do suhog. Kromatografijom na silika gelu s 5% EtOH u klorformu dobiveno je 297 mg (42%) naslovnog spoja, 73 mg (10%) N9-povezanog β-anomera naslovnog spoja i 46 mg (6%) N9-povezanog α-anomer, sve kao bijelu krutu tvar. Naslovni spoj: tal. 176-178°C (СН3Сl-ЕtOАс).
1H NMR (CDCl3) δ 2,09 (s, 3H, OAc), 2,40 (s, 3H, NAc), 2,78 (m, 1H, H2'), 3,53 (d, J = 11,4 Hz, 1H, H4a"), 3,99 (d, J= 11,1 Hz, H4b"), 4,03-4,18 (m, 4H, H2a", H2b", H3', H5a'), 4,26 (d, J = 12,6 Hz, 1H, H5b'), 4,39, 4,58 (AB, J=11,7 Hz, 2H, Bn), 6,62 (s, 1H, H1’), 7,22-7,40 (m, 5H, Bn), 8,21 (s, 1H, H8), 10,60 (s, 1H, NH), 12,34 (s,1H, NH).
Analiza: izračunato za С23Н25N5O8: С, 55,31; H, 5,05; N, 14,02; nađeno: С, 55,35; H, 4,83; N, 13,80.
Primjer 30
Pripravljanje (1R,3R,4R,8S)-l-acetoksimetil-3-(N2-acetil-gvanin-9-il)-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo(3,2,1]-oktana (32)
Jednaku količinu sililiranog N2-acetilgvanina, kako je opisano u primjeru 29, otopi se u otopini (1R,3R,4R,8S)-1-acetoksimetil-3-(N2-acetilgvanin-7-il)-8-benziloksi-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]-oktana (370 mg, 0,76 mmol) u bezvodnom 1,2-dikloretanu (10 ml) i doda se trimetilsilil triflat (0,54 ml, 3,0 mmol) u 1,2-dikloretanu (3 ml). Dobivenu otopinu se grije preko noći pod refluksom. Doda se još TMSOTf (0,54 ml) i mješavinu se refluktira još dva dana. Obrada je ista kako je opisano gore u primjeru 29, i nakon kromatografije na silika gelu s 5% etanola u klorformu, dobiveno je 104 mg (28%) nedirnutog polaznog materijala, 91 mg (25%) naslovnog spoja, i 80 mg (22%) α-anomera naslovnog spoja, sve kao bijela kruta tvar. Naslovni spoj: tal. 128-131°C (СНзСl-ЕtOАс).
1H NMR (CDCl3) δ 2,02 (s, 3H, OAc), 2,30 (s, 3H, NAc), 2,67 (m, 1H, H2'), 3,50 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4a"), 3,78 (dd, J = 10,8 Hz, 2,7 Hz, 1H, H2a"), 3,99 (d, J = 10,8 Hz, H4b"), 4,12 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5a'), 4,14 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H2b"), 4,27 (d, J = 12,3 Hz, 1H, H5b'), 4,33 (d, J = 5,1 Hz, 1H, H3'), 4,49, 4,62 (AB, J = 11,7 Hz, 2H, Bn), 6,25 (s, 1H, H1'), 7,26-7,38 (m, 5H, Bn), 7,83 (s, 1H, H8), 9,0 (s, 1H, NH), 11,95 (s, 1H, NH); MS: m/z 310 (MH4).
Analiza: izračunato za С23Н25N5O8: C, 55,31; H, 5,05; N, 14,02; nađeno: C, 55,70; H, 5,00; N, 13,95.
Primjer 31
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-3-(gvanin-9-il)-8-hidroksi-1-hidroksimetil-2,6-dioksabiciklo(3,2,l]octana (33)
Istim postupkom kako je opisano gore za primjer 22 nakon kromatografije dobiveno je 52 mg (45%) naslovnog spoja kao bezbojne krute tvari iz (1R,3R,4R,8S)-1-acet-oksimetil-3-(N2-acetilgvanin-9-il)-8-benziloksi-2,6-dioksa-biciklo[3,2,l]-oktana (180 mg). Kristalizacijom iz voda-etanola (9:1) dobivena je kristalinična kruta tvar; tal. 258°C (rasp.).
1H NMR (DMSO): δ 2,45 (m, 1H, H2'), 3,31 (d, J = 10,8 Hz, 1H, H4a"), 3,36-3,50 (m, 2H, H5a', H5b'), 3,60 (dd, J = 10,2 Hz, 2,7 Hz, 1H, H2a"), 3,1 (d, J = 11,1 Hz, H4b"), 4,03 (d, J = 10,5 Hz, 1H, H2b"), 4,36 (m, 1H, H3'), 4,95 (t, J = 5,7 Hz, 1H, OH), 5,70 (d, J = 3,9 Hz, 1H, OH), 6,06 (s, 1H, H1’), 6,55 (br, 2H, NH2), 7,90 (s, 1H, H8), 10,68 (s, 1H, NH); MS m/z 310 (MH+).
Primjer 32
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksi-tritiloksimetil)-3-(N4-acetilcitozin-il)-2,6-dioksabiciklo-[3,2,l]oktana (35)
Otopinu (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-1-hidroksimetil-3-(N4-acetilcitozin-il)-2,6-dioksabicikio[3,2,1]oktana (200 mg, 0,64 mmol) i 4,4'-dimetoksitritil klorida (548 mg, 0,61 mmola) u bezvodnom piridinu (7 ml) pusti se stajati preko noći pri sobnoj temperaturi, razrijedi se s etil acetatom, ispere s otpinom soli i 10% NaHCO3, osuši preko natrijevog sulfata i koncentrira. Kromatografijom na silika gelu s 10% etanolom u klorformu dobiveno je 342 mg (87%) naslovnog spoja kao bezbojne pjene.
Jednako su proizvedeni (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(N4-benzoil-citozin-1-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktan (36) i (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(timin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktan (34).
Primjer 33
Pripravljanje (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-1-(4,4'-dimetoksi-tritiloksimetil)-3-(N4-асеtilсitozin-il)-2,6-dioksabiciklo-[3,2,1]оktan 8-O-(2-cijanoetil-N,N-diizopropilfosfor-amidita) (38)
K miješanoj otopini (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksi-metil)-3-(N4-acetil-citozin-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,l]oktana (320 mg, 0,52 mmol) i diizo-propil-etil-amina (0,36 ml, 2,08 mmola) u bezvodnom diklor-metanu (6 ml) pri 0°C pod argonom doda se kap po kap 2-cijanoetil-N,N-diizopropilklorfosforamidit (0,23 ml, 1,04 mmola). Dobivenu otopinu se miješa 4 h pri sobnoj temperaturi, ohladi s ledom, razrijedi s etil acetatom, ispere s hladnim 10%-tnim МаНСО3, osuši preko natrijevog sulfata i koncentrira pri sobnoj temperaturi. Kromatografijom na silika gelu s 5% trietilamina i 5% acetona u metilen kloridu dobiveno je 376 mg (89%) naslovnog spoja kao bezbojne pjene.
Slično su proizvedeni (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4’-dimetoksitritiloksimetil)-3-(N4-benzoil-citozin-1-il)-2,6-dioksabiciklo[3,2,1]oktan 8-O-(2-cijanoetil-N,N-diizopropil-fosforamidit) (39) i (1S,3R,4R,8S)-8-hidroksi-l-(4,4'-dimetoksitritiloksimetil)-3-(timin-1-il)-2,6-di-oksabiciklo[3,2,1]oktan 8-O-(2-cijanoetil-N,N-diizopropil-fosforamidit) (37).
Primjer 34
Pripravljanje oligonukleotida koji sadrže 2,4-biciklonukleotide
Ovaj primjer pokazuje upotrebu biciklonukleozidnih fosforamidita 37-39 za sintezu oligonukleotida koji sadrže 2'-C,4'-C-premoštene biciklonukleozide. Oligonukleotidi u ovom primjeru su sintetizirani primjenom fosforamiditnog pristupa. Modificirani oligonukelotidi su sintetizirani standardnim postupkom (protokol za sintetizer ABI 394 tvrtke Perkin-Elmer, 1994), osim što je upotrijebljena otopina jače koncentracije i vrijeme povezivanja je bilo dulje. Otopina za modificirane fosforamidite bila je 0,13 M, to jest 30% jače koncentrirana nego ona za nemodificirane fosforamidite (0,1 M). Vrijeme povezivanja bilo je 10 minuta za modificirane fosforamidite i pet minuta za nemodificirane fosforamidite neposredno do modificiranog. Iskorištenja povezivanja za modificirane fosforamidite slična su nemodiciranim (98-99%). Modificirani ODN su očišćeni pomoću HPLC reverzne faze i karakterizirani masenom spektrometrijom.
Slijedeće sintetizirane sekvence date su kao primjeri:
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
S'-dCATCTCTCCGCTTCCTTTC)^'
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-dCCTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3'
A, C, G, i Т = nemodificirani deoksiribonukleozid
Т = 2',4'-C-premošteni timidin
С = 2',4'-C-premošteni deoksicitidin
Primjer 35
Hibridizacijska svojstva oligonukleotida koji sadrže 2'-C,4'-C'-premoštene biciklonukleotide
Hibridizacija modificiranih oligonukleotida prema komplementarnoj DNA i RNA proučavana je pomoću termodinamičkih mjerenja tališta (Wang et al. Nucleosides Nucleotides 1997, 16, 445). Kako se može vidjeti u Tablici 1, modifikacije značajno pojačavaju hibridizaciju s RNA. Za sekvence koje sadrže biciklički timidin T, porasti Tm vrijednosti su u rasponu od 2,2 do 3,3 stupnja po modifikaciji. Sekvence koje sadrže biciklički citidin također imaju više Tm vrijednosti nego nemodificirani oligonukleotidi, 2,4° više po modifikaciji za sekvencu 4 i 1,9° više za modifikaciju za sekvencu 5. Sekvenca 12 koja sadrži nespareni nukleozid (G u sredini sekvence je zamijenjen s T) ima Tm vrijednost za jedanaest stupnjeva nižu od sekvence 10, koja pokazuje specifičnost sekvence. Za sekvence u kojima su svi T i С zamijenjeni s T i C, Tm vrijednosti (>90°) su dalje porasle tako da se u mjernom sistemu više nisu mogle dobiti točne vrijednosti.
Tablica 1. Hibridizaciski podaci oligonukleotida koji
sadrže 2'-C,4'-C-premoštene biciklonukleozide
Sekvenca Tm °C ΔTm
RNA oC/Mod.
1. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' 64,4
2. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' 78,1 +2,8
3. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' ~82 +2,2
4. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' 71,7 +2,4
5. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTrc)-3' 77,5 +1,9
6. 5'-d(ATCTCTCCGCTTCCTTTC)-3' >90
7. 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' 63,0
8. 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' 69,5 +3,3
9. 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' 76,2 +3,3
10. 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' 81,4 +2,3
11. 5'-d(CTTCCTGTCTGATGGCTTC)-3' >90
12. 5'-d(CTTCCTGTCTTATGGCTTC)-3' 70,3
------------------------------------------------------------------------------------------------
T = 2',4'-C-premošteni timidin, С = 2',4'-C-premošteni citidin. Uzorci za Tm mjerenja sadrže 2,0 μM modificiranih oligonukleotida i 2,0 μM komplementarne DNA ili RNA u puferu (10 mM natrijev fosfat, 0,1 mM EDTA, i 0,1 M natrijevog klorida, pH 7.0).
Opisane su specifične izvedbe i primjene prikaza i metoda za proizvodnju novih nukleozida i oligonukleotida s bicikličkim saharidnim skupinama. Stručnjaku je, međutim, jasno, da je osim već opisanih moguće i mnogo više modifikacija, bez udaljavanja od smisla izuma. Glavni predmet izuma ograničen je stoga samo smislom priloženih patentnih zahtjeva. Osim toga, u interpretaciji opisa i patentnih zahtjeva, sve pojmove treba podrazumijevati na najširi mogući način dosljedno s kontekstom. Posebno, pojmovi “uključuje” i “uključen” moraju se podrazumijevati tako da se odnose na elemente, komponente ili stupnjeve na ne-isključiv način, što znači da se oni odnose na elemente, komponente ili stupnjeve koji mogu biti prisutni ili upotrijebljeni, ili kombinirani s drugim elementima, komponentama ili stupnjevima koji nisu izričito navedeni.

Claims (4)

1. Spoj formule [image] naznačen time, da su X, Y i Z neovisno odabrani iz skupine koju čine O, S, CH2, NR, C=O, C=CH2 ili ništa, gdje je R odabran iz skupine koju čine vodik, alkil, alkenil, alkinil, acil; R1 je odabran iz skupine koju čine adenin, citozin, gvanin, hipoksantin, uracil, timin, heterocikli; i R2, R3 su neovisno odabrani iz skupine koju čine H, OH, DMTO, TBDMSO, BnO, THPO, AcO, BzO, OP(NiPr2)O(CH2)2CN, ОРО3Н, РО3Н, difosfat, trifosfat; R2 i R3 zajedno mogu biti PhCHO2, TIPDSO2 ili DTBSO2.
2. Spoj prema zahtjevu 1, naznačen time, da X predstavlja kisik; Y is O, S, NH, ili metilen; Z je metilen.
3. Oligonukleotid, naznačen time, da uljučuje najmanje jedan monomer prema zahtjevu 1.
4. Oligonukleotid, naznačen time, da uključuje najmanje jedan monomer prema zahtjevu 2.
HR20000751A 1998-05-26 2000-11-02 Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety HRP20000751A2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8671998P 1998-05-26 1998-05-26
PCT/US1999/011442 WO1999060855A1 (en) 1998-05-26 1999-05-24 Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20000751A2 true HRP20000751A2 (en) 2001-12-31

Family

ID=22200439

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HR20000751A HRP20000751A2 (en) 1998-05-26 2000-11-02 Novel nucleosides having bicyclic sugar moiety

Country Status (21)

Country Link
US (1) US6403566B1 (hr)
EP (1) EP1082012A4 (hr)
JP (1) JP2002516256A (hr)
CN (1) CN1311630A (hr)
AU (1) AU757724B2 (hr)
BR (1) BR9911596A (hr)
CA (1) CA2333380A1 (hr)
HR (1) HRP20000751A2 (hr)
HU (1) HUP0102152A3 (hr)
IL (1) IL139420A0 (hr)
MX (1) MXPA00011473A (hr)
NO (1) NO20005938L (hr)
NZ (1) NZ507913A (hr)
PL (1) PL344303A1 (hr)
RU (1) RU2211223C2 (hr)
SI (1) SI20474A (hr)
SK (1) SK17432000A3 (hr)
UA (1) UA61997C2 (hr)
WO (1) WO1999060855A1 (hr)
YU (1) YU73600A (hr)
ZA (1) ZA200006315B (hr)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040033977A1 (en) * 1990-08-14 2004-02-19 Bennett C. Frank Oligonucleotide modulation of cell adhesion
US7119184B2 (en) * 1991-08-12 2006-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
CA2279675A1 (en) * 1995-12-15 1997-06-16 Enzo Therapeutics, Inc. Property effecting and/or property exhibiting constructs for localizing a nucleic acid construct within a cell for therapeutic and diagnostic uses
US6833361B2 (en) * 1998-05-26 2004-12-21 Ribapharm, Inc. Nucleosides having bicyclic sugar moiety
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US6900186B1 (en) * 1999-06-21 2005-05-31 Murdock Children's Research Institute Method for the prophylaxis and/or treatment of medical disorders
WO2004044136A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2’-modified nucleosides for use in gene modulation
PL1658302T3 (pl) 2003-07-25 2011-03-31 Idenix Pharmaceuticals Inc Analogi nukleozydów purynowych do leczenia chorób spowodowanych przez Flaviviridae obejmujących zapalenie wątroby typu C
ATE555118T1 (de) * 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
US7480382B2 (en) * 2003-09-30 2009-01-20 Microsoft Corporation Image file container
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
CN101437933B (zh) 2005-12-28 2013-11-06 斯克里普斯研究所 作为药物靶标的天然反义和非编码的rna转录物
EP2157982B1 (en) 2007-05-04 2014-12-17 Marina Biotech, Inc. Amino acid lipids and uses thereof
US20100015708A1 (en) * 2008-06-18 2010-01-21 Mdrna, Inc. Ribonucleic acids with non-standard bases and uses thereof
RU2604489C2 (ru) * 2008-10-03 2016-12-10 КьюРНА,Инк.,US Лечение заболеваний, связанных с аполипопротеином-а1, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта аполипопротеина-а1
EP2902013A1 (en) 2008-10-16 2015-08-05 Marina Biotech, Inc. Processes and Compositions for Liposomal and Efficient Delivery of Gene Silencing Therapeutics
WO2010048585A2 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
US8927511B2 (en) * 2008-12-04 2015-01-06 Curna, Inc. Treatment of vascular endothelial growth factor (VEGF) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to VEGF
MX2011005918A (es) 2008-12-04 2011-06-17 Opko Curna Llc Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen supresor de tumor mediante inhibicion del transcrito antisentido natural para el gen.
ES2629630T3 (es) 2008-12-04 2017-08-11 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con eritropoyetina (EPO) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a EPO
CA2752237C (en) 2009-02-12 2020-03-24 Opko Curna, Llc Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
CA2755409C (en) 2009-03-16 2019-04-30 Joseph Collard Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2
CA2755404C (en) 2009-03-17 2020-03-24 Joseph Collard Treatment of delta-like 1 homolog (dlk1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlk1
CA2761142C (en) 2009-05-06 2021-06-08 Opko Curna, Llc Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
CN103223177B (zh) 2009-05-06 2016-08-10 库尔纳公司 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病
US9012139B2 (en) 2009-05-08 2015-04-21 Curna, Inc. Treatment of dystrophin family related diseases by inhibition of natural antisense transcript to DMD family
CN102575251B (zh) 2009-05-18 2018-12-04 库尔纳公司 通过抑制针对重编程因子的天然反义转录物来治疗重编程因子相关的疾病
US8895527B2 (en) 2009-05-22 2014-11-25 Curna, Inc. Treatment of transcription factor E3 (TFE3) and insulin receptor substrate 2(IRS2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to TFE3
CA2764683A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 Joseph Collard Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene
JP6128846B2 (ja) 2009-06-16 2017-05-17 クルナ・インコーポレーテッド パラオキソナーゼ（ｐｏｎ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｐｏｎ１遺伝子関連疾患の治療
ES2620960T3 (es) 2009-06-16 2017-06-30 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen de colágeno mediante la inhibición de un transcrito antisentido natural a un gen de colágeno
JP6073133B2 (ja) 2009-06-24 2017-02-01 クルナ・インコーポレーテッド 腫瘍壊死因子受容体２（ｔｎｆｒ２）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｎｆｒ２関連疾患の治療
WO2010151674A2 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Curna, Inc. Treatment of down syndrome gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a down syndrome gene
KR101801407B1 (ko) 2009-07-24 2017-11-24 큐알엔에이, 인크. 시르투인 (ｓｉｒｔ)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 시르투인 관련된 질환의 치료
KR101802536B1 (ko) 2009-08-05 2017-11-28 큐알엔에이, 인크. 인슐린 유전자 (ｉｎｓ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 인슐린 유전자 (ｉｎｓ) 관련된 질환의 치료
WO2011019815A2 (en) 2009-08-11 2011-02-17 Curna, Inc. Treatment of adiponectin (adipoq) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an adiponectin (adipoq)
JP5943836B2 (ja) 2009-08-21 2016-07-05 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド ‘ｈｓｐ７０相互作用タンパク質ｃ末端’（ｃｈｉｐ）に対する天然アンチセンス転写産物の阻害によるｃｈｉｐ関連疾患の治療
JP5964232B2 (ja) 2009-08-25 2016-08-03 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド ‘ｉｑモチーフ含有ｇｔｐアーゼ活性化タンパク質’（ｉｑｇａｐ）に対する天然アンチセンス転写産物の阻害によるｉｑｇａｐ関連疾患の治療
JP6175236B2 (ja) 2009-09-25 2017-08-09 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド フィラグリン（ｆｌｇ）の発現および活性の調整によるｆｌｇ関連疾患の処置
WO2011052436A1 (ja) * 2009-10-29 2011-05-05 国立大学法人大阪大学 架橋型人工ヌクレオシドおよびヌクレオチド
DK2513310T3 (en) 2009-12-16 2018-02-05 Curna Inc TREATMENT OF DISEASES CONNECTED WITH MEMBRANE-BONDED TRANSCRIPTION FACTOR Peptidase, site 1 (MBTPS1), BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTION TO MBTPS1
DK2516648T3 (en) 2009-12-23 2018-02-12 Curna Inc TREATMENT OF HEPATOCYTE GROWTH FACTOR (HGF) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT AGAINST HGF
EP2515947B1 (en) 2009-12-23 2021-10-06 CuRNA, Inc. Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
EP2519634B1 (en) 2009-12-29 2016-06-01 CuRNA, Inc. TREATMENT OF TUMOR PROTEIN 63 (p63) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO p63
JP5993744B2 (ja) 2009-12-29 2016-09-14 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド 核呼吸因子１（ｎｒｆ１）に対する天然アンチセンス転写物の阻害による核呼吸因子１関連疾患の治療
US20120289583A1 (en) 2009-12-31 2012-11-15 Curna, Inc. Treatment of insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irs2 and transcription factor e3 (tfe3)
EP2521784B1 (en) 2010-01-04 2017-12-06 CuRNA, Inc. Treatment of interferon regulatory factor 8 (irf8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irf8
EP2521785B1 (en) 2010-01-06 2022-03-09 CuRNA, Inc. Inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene for use in a treatment of pancreatic developmental gene related diseases
ES2664866T3 (es) 2010-01-11 2018-04-23 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la globulina fijadora de hormonas sexuales (shbg) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a shbg
DK2529015T3 (en) 2010-01-25 2018-02-26 Curna Inc TREATMENT OF RNASE H1-RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO RNASE H1
CA2790506A1 (en) 2010-02-22 2011-08-25 Curna, Inc. Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (pycr1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pycr1
US9193752B2 (en) 2010-03-17 2015-11-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CA2795145C (en) 2010-04-02 2019-01-22 Curna, Inc. Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3
TWI644675B (zh) 2010-04-09 2018-12-21 可娜公司 藉由抑制纖維母細胞生長因子２１（ｆｇｆ２１）之天然反義轉錄物以治療ｆｇｆ２１相關疾病
WO2011139710A1 (en) 2010-04-26 2011-11-10 Marina Biotech, Inc. Nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers and uses thereof
EP2601204B1 (en) 2010-04-28 2016-09-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2011139699A2 (en) 2010-04-28 2011-11-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
KR20130101442A (ko) 2010-05-03 2013-09-13 큐알엔에이, 인크. 시르투인 (sirt)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 시르투인 (sirt) 관련된 질환의 치료
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
RU2620978C2 (ru) 2010-05-26 2017-05-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с метионинсульфоксидредуктазой а (msra), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена msra
JP5973996B2 (ja) 2010-05-26 2016-08-23 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ａｔｏｈ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害による無調ホモログ１（ａｔｏｈ１）関連疾患の治療
RU2016118528A (ru) 2010-06-23 2018-10-31 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с альфа-субъединицей потенциалзависимого натриевого канала (scna), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена scna
RU2611190C2 (ru) 2010-07-14 2017-02-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с геном dlg, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена dlg
US8993533B2 (en) 2010-10-06 2015-03-31 Curna, Inc. Treatment of sialidase 4 (NEU4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NEU4
US9222088B2 (en) 2010-10-22 2015-12-29 Curna, Inc. Treatment of alpha-L-iduronidase (IDUA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IDUA
CA2817002C (en) 2010-11-05 2019-01-15 Miragen Therapeutics Base modified oligonucleotides
US10000752B2 (en) 2010-11-18 2018-06-19 Curna, Inc. Antagonat compositions and methods of use
KR102010598B1 (ko) 2010-11-23 2019-08-13 큐알엔에이, 인크. Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료
AR084319A1 (es) 2010-12-15 2013-05-08 Miragen Therapeutics INHIBIDORES DE microARN (miARN O miR) QUE COMPRENDEN NUCLEOTIDOS BLOQUEADOS
EP2697374A2 (en) 2011-04-12 2014-02-19 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Micro-rna inhibitors and their uses in disease
EP2707485B1 (en) 2011-05-09 2016-12-14 The University Court of The University Of Glasgow Methods of modulating micrornas in the treatment of pulmonary arterial hypertension
CN103620036B (zh) 2011-06-09 2016-12-21 库尔纳公司 通过抑制共济蛋白(fxn)的天然反义转录物而治疗fxn 相关疾病
EA029151B1 (ru) 2011-09-06 2018-02-28 Курна, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С АЛЬФА-СУБЪЕДИНИЦАМИ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ (SCNxA), С ПОМОЩЬЮ МАЛЫХ МОЛЕКУЛ
AU2012304358B2 (en) * 2011-09-07 2017-07-20 Marina Biotech Inc. Synthesis and uses of nucleic acid compounds with conformationally restricted monomers
EP2806878A1 (en) * 2012-01-23 2014-12-03 Can-Fite Biopharma Ltd. Treatment of liver conditions
HUE040179T2 (hu) 2012-03-15 2019-02-28 Curna Inc Agyi eredetû neutrotróf faktorral (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF) összefüggõ betegségek kezelése a BDNF-fel kapcsolatos természetes antiszensz transzkriptumok gátlása révén
CA2876180C (en) 2012-06-21 2019-11-19 MiRagen Therapeutics, Inc. Oligonucleotide-based inhibitors comprising locked nucleic acid motif
WO2014126229A1 (ja) * 2013-02-18 2014-08-21 塩野義製薬株式会社 含窒素複素環構造を有するヌクレオシド及びヌクレオチド
KR20150131365A (ko) * 2013-03-15 2015-11-24 미라젠 세러퓨틱스 인코포레이티드 브리지드 바이사이클릭 뉴클레오시드
US9752143B2 (en) 2013-03-15 2017-09-05 MiRagen Therapeutics, Inc. Locked nucleic acid inhibitor of miR-145 and uses thereof
US10449210B2 (en) 2014-02-13 2019-10-22 Ligand Pharmaceuticals Inc. Prodrug compounds and their uses
CA2940440A1 (en) * 2014-03-16 2015-09-24 MiRagen Therapeutics, Inc. Synthesis of bicyclic nucleosides
CN106687118A (zh) 2014-07-02 2017-05-17 配体药物公司 前药化合物及其用途
AU2015301221B2 (en) 2014-08-04 2020-07-02 MiRagen Therapeutics, Inc. Inhibitors of MYH7B and uses thereof
SG10201906716QA (en) 2015-01-20 2019-08-27 Miragen Therapeutics Inc Mir-92 inhibitors and uses thereof
US10758558B2 (en) 2015-02-13 2020-09-01 Translate Bio Ma, Inc. Hybrid oligonucleotides and uses thereof
RU2718534C2 (ru) 2015-06-05 2020-04-08 Мираджен Терапьютикс, Инк. Ингибиторы mir-155 для лечения кожной t-клеточной лимфомы (ctcl)
JP6569920B2 (ja) * 2016-01-07 2019-09-04 国立大学法人大阪大学 α−シヌクレイン発現抑制剤
EP3507367A4 (en) 2016-07-05 2020-03-25 Aduro BioTech, Inc. CYCLIC DINUCLEOTID COMPOUNDS WITH INCLUDED NUCLEIC ACIDS AND USES THEREOF
WO2019009298A1 (ja) * 2017-07-05 2019-01-10 国立大学法人大阪大学 α－シヌクレイン発現抑制剤
US11970482B2 (en) 2018-01-09 2024-04-30 Ligand Pharmaceuticals Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof
CA3088112A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Bristol-Myers Squibb Company Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof
EP3765610A4 (en) 2018-03-14 2022-01-19 Beth Israel Deaconess Medical Center MICRO-RNA AND OBESITY
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
EP4269586A1 (en) 2022-04-29 2023-11-01 Johann-Wolfgang-Goethe-Universität Frankfurt am Main Targeting micro rna for treatment of heart failure with preserved ejection fraction (hfpef)
EP4353823A1 (en) 2022-10-12 2024-04-17 Resalis Therapeutics S.r.l. Inhibitors of micro-rna 22

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2103918T3 (es) * 1991-10-17 1997-10-01 Ciba Geigy Ag Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios.
EP2341058A3 (en) 1997-09-12 2011-11-23 Exiqon A/S Oligonucleotide Analogues

Also Published As

Publication number Publication date
BR9911596A (pt) 2001-10-02
EP1082012A4 (en) 2002-01-16
SI20474A (sl) 2001-08-31
CN1311630A (zh) 2001-09-05
AU757724B2 (en) 2003-03-06
JP2002516256A (ja) 2002-06-04
ZA200006315B (en) 2002-02-04
YU73600A (sh) 2003-08-29
WO1999060855A1 (en) 1999-12-02
EP1082012A1 (en) 2001-03-14
HUP0102152A3 (en) 2002-04-29
MXPA00011473A (es) 2002-04-24
RU2211223C2 (ru) 2003-08-27
IL139420A0 (en) 2001-11-25
AU4010099A (en) 1999-12-13
UA61997C2 (en) 2003-12-15
SK17432000A3 (sk) 2001-07-10
NO20005938L (no) 2001-01-16
NZ507913A (en) 2003-02-28
CA2333380A1 (en) 1999-12-02
PL344303A1 (en) 2001-10-22
NO20005938D0 (no) 2000-11-24
HUP0102152A2 (hu) 2001-12-28
US6403566B1 (en) 2002-06-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6403566B1 (en) Nucleosides having bicyclic sugar moiety
US6833361B2 (en) Nucleosides having bicyclic sugar moiety
US6525191B1 (en) Conformationally constrained L-nucleosides
AU784374C (en) Synthesis of 2'-deoxy-L-nucleosides
US6090932A (en) Method of preparation of known and novel 2'-modified nucleosides by intramolecular nucleophilic displacement
CA2421040C (en) Methods for synthesizing nucleosides, nucleoside derivatives and non-nucleoside derivatives
JPH07103150B2 (ja) ２’―０―アルキルヌクレオチド並びにこのようなヌクレオチドを含むポリマー
EP2479182A1 (en) Novel protecting group for synthesizing rna and derivative thereof
US5807837A (en) Composition and method for the treatment or prophylaxis of viral infections using modified oligodeoxyribonucleotides
JP3119871B2 (ja) オリゴデオキシリボヌクレオチド類
HU199154B (en) Process for producing xylophenanosylthymine derivatives
Carnero et al. Novel 1′-homo-N-2′-deoxy-α-nucleosides: synthesis, characterization and biological activity
Seela et al. 6-Azauracil or 8-aza-7-deazaadenine nucleosides and oligonucleotides: the effect of 2′-fluoro substituents and nucleobase nitrogens on conformation and base pairing
BR112020005067A2 (pt) fosforamiditas nucleosídeo modificadas
WO2004018494A1 (ja) ４’−チオヌクレオチド
CZ20004181A3 (cs) Sloučenina zahrnující nukleosid s 2',4'-můstkem a oligonukleotid od ní odvozený
JP2683296B2 (ja) オリゴ−２’−デオキシヌクレオチドおよび抗ウイルス活性を有する医薬物質としてのそれらの使用
Okello et al. Methodologies for the Synthesis of Isomeric Nucleosides and Nucleotides of Antiviral Significance
Hari et al. 2′-O, 4′-C-Methyleneoxymethylene Bridged Nucleic Acids (2′, 4′-BNA COC)
JPH07157496A (ja) デオキシヌクレオシドの製造法
WO1994001445A1 (en) Base-protected nucleotide analogs with protected thiol groups
Reddy et al. Stereoselective Synthesis of PSI-352938: A β-D-20-Deoxy-20-r-fluoro-20-β-C-methyl-30, 50-cyclic Phosphate Nucleotide Prodrug for the Treatment of HCV
McGee The synthesis of silylated arabinopyrimidine nucleosides: a thesis
Carnero et al. Novel 10-homo-N-20-deoxy-a-nucleosides: synthesis, characterization and biological activity
EP1634888A2 (en) Synthesis of 2'-deoxy-L-nucleosides

Legal Events

Date Code Title Description
A1OB Publication of a patent application
OBST Application withdrawn