JPH08225589A - 修飾オリゴヌクレオチド、それらの製造、およびそれらの使用 - Google Patents

修飾オリゴヌクレオチド、それらの製造、およびそれらの使用

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JPH08225589A
JPH08225589A JP7311636A JP31163695A JPH08225589A JP H08225589 A JPH08225589 A JP H08225589A JP 7311636 A JP7311636 A JP 7311636A JP 31163695 A JP31163695 A JP 31163695A JP H08225589 A JPH08225589 A JP H08225589A
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alkyl
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alkoxy
hydrogen
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JP7311636A
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Frank Seela
フランク、ゼーラ
Horst Dr Thomas
ホルスト、トーマス
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Hoechst AG
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Hoechst AG
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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Abstract

(57)【要約】 【目的】 標的核酸と一層安定なハイブリダイゼーショ
ンを形成するオリゴヌクレオチドの提供。 【構成】 下記式Ｉを有するオリゴヌクレオチド、およ
び生理学的に許容可能なその塩。 【化１】 ［式中、Ｂは、それぞれ独立して、ヌクレオチド化学で
普通に用いられる塩基であり、少なくとも１個のＢは下
記式IIの塩基であり、 【化２】 、かつ曲線状の括弧は、Ｒ２および隣接するホスホリル
または−Ｙ′−Ｒ1a基が２′および３′位、または逆に
３′および２′位のいずれにも位置することができるこ
とを示している。］

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の背景】発明の分野 本発明は、修飾された塩基を含み、重要な物理的、生物
学的および薬理学的特性を有する新規なオリゴヌクレオ
チド、それらの製造法、および遺伝子発現の阻害剤（ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、センスオ
リゴヌクレオチド、およびトリプレックス形成オリゴヌ
クレオチド）として、核酸検出用のプローブとして、分
子生物学における助剤として、および医薬または診断薬
としてのそれらの使用に関する。
【０００２】発明の背景 オリゴヌクレオチドの多数の化学修飾は、文献により知
られている。これらの修飾は、糖−リン酸骨格またはヌ
クレオチド塩基に影響を与えることがある。当該技術分
野の状況は、例えばUhlmann & Peyman, Chem. Rev., 19
90, 90, 543 およびMilligan et al., J. Med. Chem.,
1993, 36,1923 に概説されている。一般に、未修飾オリ
ゴヌクレオチドは、細胞中および細胞培養液中のいずれ
でも核溶解活性(nucleolytic activities)によって極め
て迅速に分解されるので、オリゴヌクレオチドを化学的
に修飾する必要がある。糖−リン酸主鎖を替えることに
より、またはリン酸ブリッジ、糖残基またはヌクレオチ
ド塩基を修飾することにより、核溶解性分解に対して安
定化することができる［Milligan et al.,同上、および
Uhlmann & Peyman, 同上］。
【０００３】ヌクレオチドの分解に対して安定性が増加
したオリゴヌクレオチドを生じる修飾の他に、修飾した
オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション挙動を変
更して、例えば細胞内核酸（いわゆる、標的核酸）と更
に安定なハイブリダイゼーション複合体（二本鎖）を形
成することができるようにする修飾も興味深い。例え
ば、塩基を修飾することによってオリゴヌクレオチドの
ハイブリダイゼーション特性を変更することもできる。
この方法で修飾されたオリゴヌクレオチドの変更された
ハイブリダイゼーション特性は、例えば未修飾オリゴヌ
クレオチドで得られるものとは異なる二本鎖の融解温度
（Ｔｍ値）から認識することができる。
【０００４】従って、例えば、５−ブロモウラシルを含
むオリゴヌクレオチドは、対応する未置換塩基（ウラシ
ル）を含むオリゴヌクレオチドの場合よりも、相補性核
酸と更に安定なハイブリダイゼーション複合体を形成す
る［G.D. Fasman, CRC Hand-book of Biochemistry and
Molecular Biology, 第３版、１９７５年、NucleicAci
ds,第Ｉ巻、58 - 585］。また、ＰＣＴ出願ＷＯ９３／
１０８２０号明細書には、修飾したウラシルまたはシト
シン塩基を含みかつ未修飾オリゴヌクレオチドによって
形成されるものより安定な標的核酸と二本鎖または三本
鎖構造を形成することができるオリゴヌクレオチドが開
示されている。塩基類似体２−アミノアデニンを含むオ
リゴヌクレオチドは、改良されたハイブリダイゼーショ
ン特性を示すことも記載されている[Chollet et al.,
(1988), Nucleic Acid Research, 16, 305-317]。ドイ
ツ国特許出願第Ｐ４４１５３７０．８号明細書には、オ
リゴヌクレオチドに８−アザプリン塩基を配合すると、
標的核酸との対応するハイブリダイゼーション複合体の
安定性が増加することが開示されている。また、ＷＯ９
３／０９１２７号明細書には、置換または未置換７−デ
アザプリン塩基を含み、かつその結果、標的分子（二本
鎖ＤＮＡ）と更に容易に三本鎖構造を形成することがで
きるオリゴヌクレオチドが開示されている。７位が置換
されている７−デアザプリン塩基を含むオリゴヌクレオ
チドは、ＷＯ９４／２２８９２号およびＷＯ９４／２４
１４４号明細書にも開示されている。
【０００５】しかしながら、二本鎖の安定性を増加させ
る塩基の修飾を予測することはできない。従って、二本
鎖の安定性を減少させる塩基修飾の多数の例が知られて
いる。例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９２／００２２５８号明
細書には、標的核酸に対する結合親和性が少ないピリミ
ジン修飾オリゴヌクレオチドが記載されている。プリン
環の８位に導入されるメチルまたは臭素置換基も、対応
する二本鎖の安定性を減少させる[E. N. Kanaya et a
l., Biochemistry, (1987), 26, 7159、およびBiochemi
stry, 1984, 23, 4219] 。７−デアザアデニンを含むオ
リゴヌクレオチドでは、アデニンを含むオリゴヌクレオ
チドの場合よりも、相補性オリゴヌクレオチドとの安定
な二本鎖の数が有意に少ない[Seela et al., Nucleic A
cidResearch, (1982), 10, 1389] 。
【０００６】
【発明の概要】それ故、本発明の目的は、有利な特性を
有する利用可能な新規なオリゴヌクレオチドを製造する
ことである。
【０００７】意外なことには、少なくとも１個の置換し
た７−デアザプリンを有するオリゴヌクレオチドは、未
置換７−デアザプリン塩基を有する匹敵するオリゴヌク
レオチドによって形成されるものより有意に一層安定な
標的核酸とのハイブリダイゼーション複合体を形成する
事を見いだした。
【０００８】従って、本発明は、下記式Ｉのオリゴヌク
レオチドおよび生理学的に許容可能なその塩に関する。
【０００９】
【化７】 ［式中、Ｂは、それぞれ独立して、ヌクレオチド化学で
普通に用いられる塩基であり、少なくとも１個のＢは下
記式IIの塩基であり、
【００１０】
【化８】 （式中、Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に記載の基であって、Ｓ
Ｈ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−
アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＣＯ−Ｒ
（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ
（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
（ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、また
は式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
１〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、またＯＨ、
ＳＨ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
（ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、
１５． ３．、４．または５．に定義されている基であ
って、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素
によって置換されているものであり、Ｒ（ａ）は、Ｏ
Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ６〜Ｃ20）−ア
リールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔであり、Ｔは、適
宜もう一つのリンカーを介して、細胞内取り込みに好都
合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブの標識に利
用できる、またはオリゴヌクレオチド類似体が標的核酸
にハイブリダイゼーションするときには、結合、架橋ま
たは開裂と同時に後者の核酸を攻撃する１個以上の基に
結合しているアルキルカルボキシル基またはアルキルア
ミノ基であり、Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ
６）−アルコキシ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）であ
り、Ｒ（ｃ）およびＲ（ｄ）は、それぞれ独立して、Ｈ
であるか、または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
（ｅ）Ｒ（ｇ）によって置換されていないまたは置換さ
れている（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ（ｅ）お
よびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）
−アルキル−ＣＯＯＨであり、但し、Ｒ15およびＲ
16は、それぞれ同時に水素、ＮＯ２、ＮＨ２、シアノま
たはＳｉＨ３となることはできず、ＥおよびＦは、それ
ぞれ独立して、Ｈ、ＯＨまたはＮＨ２であり、Ｒ１は、
水素、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ２〜Ｃ18−アルケニ
ル、Ｃ２〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ２〜Ｃ18−アルキルカ
ルボニル、Ｃ３〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、Ｃ３〜
Ｃ19−アルキニルカルボニル、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリー
ル−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、ヌクレオチド化学で普
通に用いられる保護基、または下記式IIIaの基であり、 Ｒ1aは、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ２〜Ｃ18−ア
ルケニル、Ｃ２〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ２〜Ｃ18−アル
キルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、
Ｃ３〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、（Ｃ６〜Ｃ14）−
アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、または下記式II
Ibの基であり、 Ｒ２は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキ
シ、Ｃ１〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特にアリルオキ
シ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ２であり、ａは、オキ
シ、スルファンジイルまたはメチレンであり、ｎは、≧
１の整数であり、Ｗは、オキソ、チオキソまたはセレン
オキソであり、Ｖは、オキシ、スルファンジイルまたは
イミノであり、Ｙは、オキシ、スルファンジイル、イミ
ノまたはメチレンであり、Ｙ′はオキシ、スルファンジ
イル、イミノ、（ＣＨ２）ｍまたはＶ（（ＣＨ２）ｍ′
であり、但し、ｍは１〜１８の整数であり、Ｘはヒドロ
キシルまたはメルカプトであり、Ｕは、ヒドロキシル、
メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ１〜
Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−アリール、（Ｃ６〜
Ｃ14）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、ＮＨＲ
３、ＮＲ３Ｒ４、または下記式IVの基であり、 （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｒ５ (IV) 但し、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−ア
リール、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−
アルキル、２−（ＣＨ２）ｃ−［ＮＨ（ＣＨ２）ｃ］ｄ
−ＮＲ６Ｒ６であり、式中、ｃは２〜６の整数であり、
ｄは０〜６の整数であり、Ｒ６は、それぞれ独立して、
水素、またはＣ１〜Ｃ６−アルキル、またはＣ１〜Ｃ４
アルコキシ−Ｃ１〜Ｃ６−アルキルであり、Ｒ４は、Ｃ
１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−アリール、（Ｃ６〜
Ｃ10）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキルである
か、またはＮＲ３Ｒ４の場合には、Ｒ３およびそれらが
結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＳおよびＮ
の群からのヘテロ原子を更に含むことができる５〜６員
の複素環となり、ｐは、１〜１００の整数であり、ｑ
は、０〜２２の整数であり、Ｒ５は、水素であるか、ま
たは例えばヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜Ｃ18−アルキ
ルアミノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＯ（Ｃ１〜
Ｃ４）−アルキルまたはハロゲンなどの官能基であり、
ＺおよびＺ′は、それぞれ独立して、ヒドロキシル、メ
ルカプト、ＳｅＨ、Ｃ１〜Ｃ22−アルコキシ、−Ｏ−
（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ６Ｒ７（但し、ｂは１〜６の整数で
あり、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６−アルキルであるか、またはＲ
６およびＲ７がそれらが結合している窒素原子と一緒に
なって、３〜６員環を形成する）、Ｃ１〜Ｃ18−アルキ
ル、Ｃ６〜Ｃ20−アリール、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリール
−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリー
ル−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシ（但し、アリールはヘ
テロアリールでもあり、かつアリールは場合によって
は、カルボキシル、アミノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４−アル
キルアミノ、Ｃ１〜Ｃ６−アルコキシ、ヒドロキシル、
ハロゲン、およびシアノの群からの１、２または３個の
同一であるかまたは異なる基によって置換されてい
る）、Ｃ１〜Ｃ18アルキルメルカプト、ＮＨＲ３、ＮＲ
３Ｒ４、式IVの基、または細胞内取り込みに好都合であ
りまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブの標識に利用でき
る、またはオリゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイ
ブリダイゼーションするときには、結合、架橋または開
裂と同時に後者の核酸を攻撃する基である）、かつ曲線
状の括弧は、Ｒ２および隣接するホスホリルまたは−
Ｙ′−Ｒ1a基が２′および３′位、または逆に３′およ
び２′位のいずれにも位置することができることを示
し、それぞれのヌクレオチドはそのＤまたはＬ配置で存
在し、また塩基Ｂはα−またはβ−位に位置することが
できることを示している。］
【００１１】
【発明の具体的説明】ヌクレオチド化学で普通に用いら
れる塩基は、例えば、アデニン、シトシン、チミン、グ
アニン、ウラシルまたはヒポキサンチンのような天然塩
基、またはプリン、８−アザプリン、２，６−ジアミン
プリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ
４，Ｎ４−エタノシトシン、Ｎ６，Ｎ６−エタノ−２，
６−ジアミノプリン、シュードイソシトシン、５−メチ
ルシトシン、５−フルオロウラシル、５−（Ｃ３〜
Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ３〜Ｃ６）−ア
ルキニルシトシン、またはそれらのプロドラッグ形態な
どの非天然塩基を意味するものと理解すべきである。
【００１２】少なくとも１個の７−デアザグアニン塩基
（ＥがＮＨ２でありＦがＯＨである）または７−デアザ
アデニン（ＥがＨであり、ＦがＮＨ２である）であり、
７位が置換されている、式Ｉのオリゴヌクレオチドが、
好ましい。７位が置換されている少なくとも１個の７−
デアザアデニン塩基および適宜、７位が置換されている
１個以上の７−デアザグアニン塩基を更に有する式Ｉの
オリゴヌクレオチドが特に好ましい。
【００１３】７および８位が置換されている少なくとも
１個以上の７−デアザプリン塩基（二置換７−デアザプ
リン塩基）を有する式Ｉのオリゴヌクレオチドは、本発
明のもう一つの好ましい態様を表わす。二置換７−デア
ザプリン塩基を有する式Ｉのオリゴヌクレオチドにおい
て、二置換７−デアザプリン塩基が２．、３．、４．、
５．、１４．および１５．においてＲ16で定義されてい
る８位の置換基を有するものが好ましい。ハロゲン、例
えばフッ素が、８位では特に好ましい。３．、４．、
５．、１４．および１５．においてＲ15で定義されてい
る置換基、特にヘキシニルが、７位の好ましい置換基で
ある。式Ｉのオリゴヌクレオチドにおいて、Ｒ15が、
１． ＮＯ２、 ２． ＮＨ２、 ３． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 ４． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 ５． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 ６． ＳｉＨ３、 ８． ＳＨ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−
ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、
−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−
ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、
または式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
（Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニ
ル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであり、但し、
ｒおよびｓは、それぞれ独立して、１〜１８、好ましく
は１〜６の整数であり、またＯＨ、ＳＨ、−ＣＯ−Ｒ
（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ
（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）、−ＮＲ（ｅ）
Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）のような官能基は
更に、適宜もう一つのリンカーを介して、細胞内取り込
みに好都合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブの
標識に利用できる、またはオリゴヌクレオチド類似体が
標的核酸にハイブリダイゼーションするときには、結
合、架橋または開裂と同時に後者の核酸を攻撃する１個
以上の基に結合することができ、または ９． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−ア
ルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであり、
１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素によっ
て置換されているものであり、Ｒ16が、水素であるもの
も、好ましい。
【００１４】７−デアザプリン塩基の７位だけが置換さ
れているときには（Ｒ16＝Ｈ）、Ｃ１〜Ｃ10−アルキ
ル、Ｃ２〜Ｃ10−アルケニル、またはＣ２〜Ｃ10−アル
キニル基において、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ま
しくはフッ素で置換されているものが、７位にとって特
に好ましい。一般的には、７−デアザプリン含有オリゴ
ヌクレオチドにおいて、７−デアザプリン塩基が７位お
よび／または８位の電子吸引性置換基を表わすものが好
ましい。
【００１５】式Ｉのオリゴヌクレオチドにおいて、塩基
が糖のβ位に配置され、ヌクレオチドがＤ配置であり、
Ｒ２が２′位にあり、ａが酸素であるものも好ましい。
アザプリン環系の７位は、置換基Ｒ15が位置する位置を
意味するものと理解すべきである。したがって、置換基
Ｒ16は、８位に位置している。相補性核酸（標的核酸）
に結合するときには、新規なオリゴヌクレオチドは、天
然オリゴヌクレオチドによって示されるものよりも優れ
ている結合親和性を示す。
【００１６】新規オリゴヌクレオチドのもう一つの利点
は、酸およびヌクレアーゼに対する安定性は、天然プリ
ン塩基を含むオリゴヌクレオチドと比較して増加してい
ることである。これらのオリゴヌクレオチドが治療に用
いられるときには、リン酸主鎖、リボース単位またはオ
リゴヌクレオチド末端などの修飾を更にこれらのオリゴ
ヌクレオチドに導入するのが有利である［J.S. Cohen,
Topics in Molecular and Structural Biology, 12 (19
89), Macmillan Press, E. Uhlmann et al.,上記］。例
えば、自体既知の糖リン酸主鎖の修飾により、新規なオ
リゴヌクレオチドが生じ、ヌクレアーゼの攻撃に対して
更に効率的に保護されることになり、有利である。
【００１７】従って、Ｖ、Ｙ、Ｙ′およびＷの意味が、
チオキソ、セレノキソ、オキシ、オキソ、スルファンジ
イル、イミノまたはメチレンであり、Ｕの意味がヒドロ
キシル、メルカプトまたはメチルである、式Ｉの化合物
も好ましい。これらの化合物は、Ｒ２が更にヒドロキシ
ルまたは水素であり、特に水素である場合に、極めて好
ましい。Ｒ１およびＲ1aが水素である、式Ｉの化合物
も、好ましい態様を表わす。Ｒ１および／またはＲ1aが
水素であり、Ｒ２がヒドロキシルまたは水素であり、Ｕ
がヒドロキシルまたはメルカプトであり、Ｖ、Ｙ、Ｙ′
およびＷの意味がチオキソ、オキシ、オキソまたはヒド
ロキシルである、式Ｉの化合物が特に好ましい。
【００１８】ヌクレオチド化学で普通に用いられる保護
基は、例えばアミノ保護基、ヒドロキシル保護基、また
はE. Sonveaux, 1986, Bioorganic Chemistry, 14, 274
-325またはS.L. Beaucage et al., 1992, Tetrahedro
n, 48, 2223 - 2311に記載されているような他の保護基
を意味するものと理解すべきである。アルキル、アルケ
ニルおよびアルキニルは、直鎖状でもまたは分岐状でも
よく、アルカノイルまたはアルコキシのような、前記基
から誘導される基にも同様に適用される。
【００１９】（Ｃ１〜Ｃ10）−アルキルは、特に、メチ
ル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブ
チル、ペンチル、ヘキシルおよびヘプチルである。ハロ
ゲン化した（Ｃ１〜Ｃ10）−アルキルの例は、ＣＨ
Ｆ２、ＣＦ３、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３−ＣＨ２−ＣＨ２−、
ＣＦ３−ＣＦ２−ＣＨ２−、ＣＦ３（ＣＦ２）６−ＣＨ
２、 ＣＦ３（ＣＦ２）７−ＣＨ２−ＣＨ２−である。
【００２０】（Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニルは、例えば、
ビニル、（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロペニル（−ＣＨ
＝ＣＨ−ＣＨ３）、２−メチル−１−プロペニル（−Ｃ
Ｈ＝Ｃ（ＣＨ３）−ＣＨ３）、１−ブテニル（−ＣＨ＝
ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ３）、１−ペンテニル、１−ヘキセ
ニル、１−ヘプテニルおよび１−オクテニルである。ハ
ロゲン化（Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニルは、−ＣＨ＝ＣＦ
２、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＦ３および−ＣＦ＝ＣＦ−ＣＦ３
である。
【００２１】（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルは、例えば、
エチニル（−Ｃ＝ＣＨ）、１−プロピニル（−Ｃ＝Ｃ−
ＣＨ３）、１−ブチニル（−Ｃ＝Ｃ−ＣＨ２−Ｃ
Ｈ３）、３−メチル−ブチニル（−Ｃ＝Ｃ−ＣＨ（ＣＨ
３）−ＣＨ３）、３，−３−ジメチル−ブチニル（−Ｃ
＝Ｃ−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチニル、１，３−ペ
ンタジイニル（−Ｃ＝Ｃ−Ｃ＝Ｃ−ＣＨ３）、１−ヘキ
シニルおよび１−ヘプチニルである。ハロゲン化した
（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルは、−Ｃ＝Ｃ−ＣＨ２Ｆ、
−Ｃ＝Ｃ−ＣＦ３、−Ｃ＝Ｃ−（ＣＨ２）３−ＣＦ３、
および−Ｃ＝Ｃ−（ＣＦ２）３−ＣＦ３である。なお、
＝は三重結合を表すものとする。
【００２２】シクロアルキルは、アルキル置換した環を
意味するものと理解される。（Ｃ６〜Ｃ20）−アリール
は、例えば、フェニル、ナフチル、またはビフェニリ
ル、好ましくはフェニルである。ハロゲンは、ヨウ素、
臭素、塩素またはフッ素を意味するものと理解すべきで
ある。
【００２３】ヘテロアリールは、特にフェニルまたはナ
フチルから誘導される基であって、１個以上のＣＨ基が
Ｎで置換されておりおよび／または少なくとも２つの隣
接するＣＨ基がＳ、ＮＨまたはＯで置換されて（５員芳
香族環を形成）いることを意味するものと理解される。
更に、二環式基の縮合部位の一方または両方の原子は窒
素原子（インドリジニル基において）であることができ
る。ヘテロアリールは、特にフラニル、チエニル、ピロ
リル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テト
ラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリ
ル、イソチアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジ
ニル、ピリダジニル、インドリル、インダゾリル、キノ
リル、イソキノリル、フタラジニル、キノキサリニル、
キナゾリニル、およびシンノリニルである。
【００２４】モルホリニル基およびイミダゾリジニル基
は、基ＮＲ３Ｒ４において、Ｒ３およびＲ４が、これら
と結合している窒素原子と一緒になって、更に別のヘテ
ロ原子を含む５または６員の複素環を形成するものの例
として挙げることができる。
【００２５】式(I) の化合物の生理学的に許容可能な塩
は、Remington's PharmaceuticalSciences （第１７
版、１４１８頁（１９８５年））に記載されているよう
に、無機および有機塩の両方を意味するものと理解され
る。物理的および化学的安定性および溶解度により、ナ
トリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびアンモニ
ウム塩は、取り分け酸性基に好ましい。
【００２６】本発明は、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−
リボフラノシド、α−およびβ−Ｄ−またはＬ−デオキ
シリボフラノシド、および対応する炭素環式の５員環類
似体に限定されず、キシロフラノースおよびアラビノフ
ラノース誘導体、環拡大および環縮小糖、および環架橋
した糖誘導体または様々な種類の適当な糖誘導体などの
他の糖構築ブロックから組み立てられるオリゴヌクレオ
チド類似体にも適用される。更に、本発明は、式Ｉの例
によって記載されるホスフェート基の誘導体に限定され
ず、既知のデホスホ誘導体にも関する。
【００２７】従って、新規なオリゴヌクレオチドは、様
々な方法で天然構造を修飾することから得ることができ
る。本質的に既知の方法によって導入されるこのような
修飾の例は、下記の通りである。 ａ） ホスフェートブリッジの修飾 下記のものを、例として挙げることができる。ホスホロ
チオエート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネー
ト、ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、メチル
ホスフェート、エチルホスフェート、およびフェニルホ
スホネート。ホスホロチオエート、ホスホロジチオエー
トおよびメチルホスホネートは、ホスフェートブリッジ
の好ましい修飾物である。
【００２８】ｂ） ホスフェートブリッジの置換 下記のものを、例として挙げることができる。アセタミ
ド、ホルムアセタール、３′−チオホルムアセタール、
メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチ
ルヒドラゾ、ジメチレンスルホン、およびシリル基。ア
セタミド、ホルムアセタールおよび３′−チオホルムア
セタールによる置換が好ましい。
【００２９】ｃ） 糖の修飾 下記のものを、例として挙げることができる。α−アノ
マー性糖、２′−Ｏ−メチルリボース、２′−Ｏ−ブチ
ルリボース、２′−Ｏ−アリルリボース、２′−フルオ
ロ−２′−デオキシリボース、２′−アミノ−２′−デ
オキシリボース、α−アラビノフラノース、および炭素
環式糖類似物。好ましい就職物は、２′−Ｏ−メチルリ
ボースおよび２′−Ｏ−ｎ−ブチルリボースによるもの
である。Ｏ−リボースの２′および３′炭素原子が二重
結合を介して結合しており、それぞれの場合に置換基と
して水素原子を有する修飾が、特に好ましい。
【００３０】ｄ） 糖およびホスフェートブリッジの修
飾 例として挙げることができるものは、ペプチド核酸（Ｐ
ＮＡ′ｓ）であって、糖／ホスフェート主鎖がアミノエ
チルグリシン主鎖（ドイツ国特許出願第Ｐ４４０８５３
１．１号明細書参照）およびカルバメート−架橋したモ
ルホリノオリゴマーによって置換されているものであ
る。ＰＮＡ′ｓは、ドイツ国特許出願第Ｐ４４０８５２
８．１号明細書に記載されているように、核酸に結合す
ることもできる。
【００３１】ｅ） 塩基、特にピリミジン塩基の他の修
飾 例として、下記のものを挙げることができる。５−プロ
ピニル−２′−デオキシウリジン、５−プロピニル−
２′−デオキシシチジン、５−ヘキシニル−２′−デオ
キシウリジン、５−ヘキシニル−２′−デオキシシチジ
ン、５−フルオロ−２′−デオキシシチジン、５−フル
オロ−２′−デオキシウリジン、５−ヒドロキシメチル
−２′−デオキシウリジン、５−メチル−２′−デオキ
シシチジン、および５−ブロモ−２′−デオキシシチジ
ン。５−プロピニル−２′−デオキシウリジン、５−ヘ
キシニル−２′−デオキシウリジン、５−ヘキシニル−
２′デオキシシチジン、および５−プロピニル−２′−
デオキシシチジンが好ましい修飾である。
【００３２】ｆ） ３′−３′および５′−５′反転
［例えば、M. Koga et al., J. Org. Chem., 56 (199
1), 3757］
【００３３】ｇ） ５′−複合体および３′−複合体 細胞内摂取に好都合な基の例は、様々な親油性基、例え
ば−Ｏ−（ＣＨ２）ｘ−ＣＨ３（但し、ｘは６〜１８の
整数）、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）
ｍ−ＣＨ３（但し、ｎおよびｍは、それぞれ独立して６
〜１２の整数）、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４−（ＣＨ
２）９−ＣＨ３、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８−（ＣＨ
２）13−ＣＨ３、および−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）７−
（ＣＨ２）15−ＣＨ３、およびステロイド基、例えばコ
レステリル、またはビタミン基、例えばビタミンＥ、ビ
タミンＡまたはビタミンＤ、および天然のキャリヤー系
を利用する他の複合体、例えば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ
−アルキル，Ｎ−アルコキシ）−アミノアントラキノ
ン、およびマンノースとオリゴヌクレオチドのレセプタ
ーによって媒介されるエンドサイトーシスを生じる対応
するレセプターのペプチド、例えばＥＧＦ（上皮成長因
子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来成長因
子）、との複合体である。標識基は、蛍光性基、例えば
ダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−アミノナフチル−５−
スルホニル）誘導体、フルオレセイン誘導体、またはク
マリン誘導体、または化学発光基、例えばアクリジン誘
導体、およびＥＬＩＳＡによって検出することができる
ジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系によって検出
することができるビオチン基、または官能基を有するリ
ンカーアームであって、続いて検出可能なレポーター基
を有する誘導体を形成できるもの、例えば、アクリジニ
ウム活性エステルを用いて化学発光プローブに転換され
るアミノアルキルリンカーである。他の好適なリンカー
は、公表された特許出願ＥＰ２５１７８６号明細書およ
びＷＯ９３／０９２１７号明細書から当業者には知られ
ている。
【００３４】ｈ） ７−デアザプリンについての７位お
よび／または８位の複合 ＤＮＡまたはＲＮＡプローブを標識するのに用いられ
る、または細胞内摂取に好都合である基を、７−デアザ
プリンの７位および／または８位で複合することもでき
る。特殊な結合基を介して、７−デアザイプリンの７位
でビオチンまたはイミノビオチン基が複合している７−
デアザプリンヌクレオシドは、ＥＰ６３ ８７９号明細
書に開示されている。
【００３５】ＤＮＡまたはＲＮＡプローブに対する標識
基は、蛍光基、例えばダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−
アミノナトリウム−５−スルホニル）誘導体、フルオレ
セイン誘導体、またはクマリン誘導体、またはアクリジ
ン誘導体などの化学発光基、およびＥＬＩＳＡによって
検出することができるジゴキシゲニン系、またはビオチ
ン／アビジン系によって検出可能なビオチン基、および
既にｇ）に記載されている挿入剤および化学活性基（Be
aucage et al., Tetrah., (1993), Vol. 49,No. 10, 19
25-1963も参照）を意味するものと理解すべきである。
【００３６】細胞内摂取に好都合な基の例は、ステロイ
ド基、例えばコレステリル、またはビタミン基、例えば
ビタミンＥ、ビタミンＡまたはビタミンＤ、および天然
のキャリヤー系を利用する他の複合体、例えば胆汁酸、
葉酸、２−（Ｎ−アルキル，Ｎ−アルコキシ）−アミノ
アントラキノン、およびマンノースとオリゴヌクレオチ
ドのレセプターによって媒介されるエンドサイトーシス
を生じる対応するレセプターのペプチド、例えばＥＧＦ
（上皮成長因子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小
板由来成長因子）、との複合体である。
【００３７】一般的に、記載された基は、オリゴヌクレ
オチドの水準（例えば、ＳＨ基によって）、またはモノ
マーの水準（ホスホネート、ホスホアミダイト、または
トリホスフェート）のいずれで導入することもできる。
モノマーの場合には、特にトリホスフェートの場合に
は、レポーター基または挿入剤基を導入する側鎖を保護
された状態にしておき、側鎖の保護基を除去し、且つホ
スホリル化の後に、対応するレポーター基または挿入剤
基の場合によっては活性化した誘導体と反応させるのが
有利である。
【００３８】典型的な標識基は、フルオレセイン誘導
体：
【化９】 およびジゴキシゲニン複合体：
【００３９】
【化１０】 である。
【００４０】核酸と結合し、またはそれらとインターカ
レーションし、および／またはそれらを開裂しまたは架
橋するオリゴヌクレオチド類似体は、アクリジン、プソ
ラレン、フェナントリジン、ナフトキノン、ダウノマイ
シン、またはクロロエチルアミノアリール複合体を含
む。典型的な挿入および架橋基は、
【００４１】アクリジニウムエステル：
【化１１】
【００４２】フルオレセイン誘導体：
【化１２】 ［式中、ｘは２〜１８，好ましくは４、であり、ＲはＨ
またはＣ１〜Ｃ４−アルキル（ｘ＝４およびＲ＝ＣＨ３
では、「フルオレセイン」）である。］
【００４３】ビオチン複合体（＝「ビオチン」、Ｒ＝Ｆ
ｍｏｃに対して）：
【化１３】 （式中、ＲはＨまたはアミノ保護基である）
【００４４】アクリジン誘導体：
【化１４】 （式中、ｘは、２〜１２、好ましくは４である）
【００４５】下記式の化合物：
【化１５】 （式中、ｘは２〜１２、好ましくは４である）
【００４６】トリメチルプソラレン複合体：
【化１６】 （式中、Ｘは−ＮＨまたは−Ｏ−であり、ＸがＯのとき
「プソラレン」である）
【００４７】フェナントロリン複合体：
【化１７】
【００４８】プソラレン複合体：
【化１８】
【００４９】ナフトキノン複合体：
【化１９】
【００５０】ダウノマイシン誘導体：
【化２０】
【００５１】下記の化合物：
【化２１】 （式中、ｘは１〜１８であり、Ｘはアルキル、ハロゲ
ン、ＮＯ２、ＣＮ、または
【００５２】および下記の化合物である。
【化２２】 （式中、ｘは１〜１８であり、Ｘはアルキル、ハロゲ
ン、ＮＯ２、ＣＮ、または
【００５３】本発明は、更に下記式Ｖの化合物にも関す
る。
【化２３】 ［式中、Ｖは、オキシ、スルファンジイル、またはイミ
ノであり、Ｙｂは、オキシ、スルファンジイル、または
メチレンであり、ａは、オキシ、スルファンジイル、ま
たはメチレンであり、Ｒ2bは、水素、ＯＲ12、Ｃ１〜Ｃ
18−アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特に
アリルオキシ、ハロゲン、アジド、またはＮＲ10Ｒ11で
あり、Ｒ１は、ヌクレオチド化学で普通に用いられる保
護基であり、Ｒ1bは、アミドまたはメチルイミド結合に
よってアミノ官能化したまたはメチルアミノ官能化した
支持体に結合しているスクシニル基であるか、または下
記式IIIcまたはIIIdの基であり、 （式中、Ｕは、（Ｃ１〜Ｃ18）−アルコキシ、（Ｃ１〜
Ｃ18）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ６
〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、Ｏ−
Ｒ７、Ｓ−Ｒ７、または下記式IVの基であり、 （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｒ５ (IV) 但し、Ｒ５は、水素であり、Ｑは、基−ＮＲ８Ｒ９であ
り、Ｒ７は、−（ＣＨ２）２−ＣＮであり、Ｒ８および
Ｒ９は、同一であるかまたは異なるものであり、Ｃ１〜
Ｃ６−アルキル、特にイソプロピルまたはエチルである
か、またはそれらが結合している窒素原子と一緒になっ
て、Ｏ、ＳおよびＮの群からの別のヘテロ原子を更に含
むことができる５〜９員の複素環、特に
【化２４】 である）、Ｅ′およびＦ′は、それぞれ独立して、Ｈ、
ＯＲ12、またはＮＲ10Ｒ11であり、Ｒ10およびＲ11は、
同一であるかまたは異なるものであり、水素またはヌク
レオチド化学で普通に用いられるアミノ保護基である
か、またはＲ10およびＲ11が一緒になって、ヌクレオチ
ド化学で普通に用いられるアミノ保護基を形成し、Ｒ12
は、水素であるか、またはヌクレオチド化学で普通に用
いられるヒドロキシル保護基、例えばｔ−ブチルジメチ
ル−シリル、ジメトキシトリフェニルメチル（ＤＭ
Ｔ）、トリイソプロピル−シリル、ｏ−ニトロ−ベンジ
ル、ｐ−ニトロ−ベンジル、ｉＢｕ、２−フルオロフェ
ニル−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＦＰＭ
Ｐ）、またはメチルであり、Ｒ15およびＲ16は、それぞ
れ独立して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に定義されている基であ
って、ＳＨ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−
ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、
−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−
ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、
または式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
１〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、またＯＨ、
ＳＨ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
（ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｇ）のような官能基は、適宜もう一つのリンカーを介
して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡまた
はＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリゴヌ
クレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーション
するときには、結合、架橋または開裂と同時に後者の核
酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、 １５． ３．、４．または５．に定義されている基であ
って、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素
によって置換されているものであり、Ｒ（ａ）は、Ｏ
Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ６〜Ｃ20）−ア
リールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔであり、Ｔは、場
合によってはもう一つのリンカーを介して、細胞内取り
込みに好都合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブ
の標識に利用できる、またはオリゴヌクレオチド類似体
が標的核酸にハイブリダイゼーションするときには、結
合、架橋または開裂と同時に後者の核酸を攻撃する１個
以上の基に結合しているアルキルカルボキシル基または
アルキルアミノ基であり、Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、
（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｄ）であり、Ｒ（ｃ）およびＲ（ｄ）は、それぞれ独
立して、Ｈであるか、または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）また
は−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）によって置換されていないまた
は置換されている（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ
（ｅ）およびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまたは
（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１
〜Ｃ６）−アルキル−ＣＯＯＨであり、但し、Ｒ15およ
びＲ16は、それぞれ同時に水素、ＮＯ２、ＮＨ２、シア
ノまたはＳｉＨ３となることはできず、ＯＨ、ＮＨ２ま
たはＣＯＯＨのような官能基は、適宜ヌクレオチド化学
で普通に用いられる保護基で保護され、かつ曲線状の括
弧はＲ2bおよび隣接の−Ｙｂ−Ｒ1b基が２′および３′
位に位置することができ、または逆に３′および２′位
に位置することができることを示している。］
【００５４】好ましい態様は、式(V) の化合物におい
て、Ｖ、Ｙｂおよびａが酸素であり、Ｒ2bが水素または
ＯＲ12、特に水素であり、Ｒ1bが式(IIIc)または(IIId)
の基であり、但しＵはＯ−（ＣＨ２）２−ＣＮであり、
Ｒ８およびＲ９は同一であるかまたは異なるものであ
り、イソプロピルまたはエチルであるか、またはそれら
が結合しているＮと一緒になって脂肪族複素環、好まし
くはピロリジノである物によって表わされる。これらの
化合物は、更に塩基が糖のβ位に位置し、Ｒ2bが２′位
に位置する場合には、特に好ましい。
【００５５】式(V) の化合物において、ＥがＮＲ10Ｒ11
であり、ＦがＨであるものも好ましく、極めて一般的に
は、式Ｉの好ましいオリゴヌクレオチドを製造するのに
用いることができる式(V) の化合物が好ましい。好まし
いアミノ保護基の例は、アシルまたはアミジン保護基で
ある。
【００５６】普通は塩として存在する式(IIId)の基は、
無機または有機塩、例えばアルカリ金属、アルカリ土類
金属またはアンモニウム塩のような、Remington'sPharm
aceutical Sciences （第１７版、１４１８頁（１９８
５年））に記載されているものを意味するものと理解す
べきである。トリエチルアンモニウムおよびピリジニウ
ム塩を、例として挙げることができる。しかしながら、
本発明は、式(IIId)の基が遊離酸として含まれる式(V)
の化合物も包含する。式Ｖの化合物は、式Ｉの新規なオ
リゴヌクレオチドを製造するための構造成分として用い
ることができる。
【００５７】ＥＰ２５１ ７８６号明細書には、７−デ
アザプリンヌクレオチド、およびそのモノホスフェー
ト、ジホスフェートまたはトリホスフェートであって、
７−プリン位にアルキニルアミノ基を有するものが開示
されている。アルキニルアミノ基は、蛍光標識分子をヌ
クレオチドにカップリングさせることができるリンカー
として用いられる。次いで、蛍光標識を備えているジデ
オキシヌクレオチドを、Sanger法により配列決定され且
つ蛍光分光光度法によって直接検出されるジデオキシの
連鎖停止剤分子として用いることができる。米国特許第
５，２４１，０６０号明細書には、７−デアザプリン上
に検出可能な基を有する７−デアザプリンヌクレオチド
が開示されている。
【００５８】本発明は、下記式VIの化合物にも関する。
【化２５】 （式中、それぞれ独立して、Ｕ′＝Ｕ″＝Ｕ″′は、ヒ
ドロキシルまたはメルカプトであり、且つＵ′は更にＢ
Ｈ３であることもでき、ｅおよびｆは、０または１であ
り、Ｒ13は、水素、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキシ、ま
たはＣ１〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特にアリルオキシ
であり、ＥおよびＦは、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、
またはＮＨ２であり、Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立
して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に定義されている基であ
って、ＳＨ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−
ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、
−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−
ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、
または式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
１〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、またＯＨ、
ＳＨ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
（ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
（ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、
または、 １５． ３．、４．または５．に定義されている基であ
って、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素
によって置換されているものであり、Ｒ（ａ）は、Ｏ
Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ６〜Ｃ20）−ア
リールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔであり、Ｔは、適
宜もう一つのリンカーを介して、細胞内取り込みに好都
合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブの標識に利
用できる、またはオリゴヌクレオチド類似体が標的核酸
にハイブリダイゼーションするときには、結合、架橋ま
たは開裂と同時に後者の核酸を攻撃する１個以上の基に
結合しているアルキルカルボキシル基またはアルキルア
ミノ基であり、Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ
６）−アルコキシ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）であ
り、Ｒ（ｃ）およびＲ（ｄ）は、それぞれ独立して、Ｈ
であるか、または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
（ｅ）Ｒ（ｇ）によって置換されていないまたは置換さ
れている（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ（ｅ）お
よびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまたは（Ｃ１〜
Ｃ６）−アルキルであり、Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）
−アルキル−ＣＯＯＨであり、但し、Ｒ15およびＲ
16は、それぞれ同時に水素、ＮＯ２、ＮＨ２、シアノま
たはＳｉＨ３となることはできず、式VIの化合物におい
て、Ｒ16がＨであり、かつＲ15が−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）
または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）によって置換されている
（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであるものは除き、かつＥ
がＯＨまたはＮＨ２であり、ＦがＯＨであり、Ｒ16が水
素であり、Ｒ15がＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、シアノ、（Ｃ１〜Ｃ
４）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ４）−アルケニル、または
（Ｃ２〜Ｃ４）−アルキニルであるときには、ｅおよび
ｆは０ではない。）
【００５９】本発明は、一般的に用いられる方法で放射
性標識（例えば、αＰ原子が32Ｐ、Ｕ′が35Ｓ）を有す
る式VIの化合物も包含する。式VIの化合物において、
Ｕ′がヒドロキシルまたはメルカプトであり、Ｕ″＝
Ｕ″′がヒドロキシルであり、ｅおよび／またはｆが１
であるものが、好ましい。式VIの化合物は、ｅおよびｆ
が１であるとき、特に好ましい。
【００６０】普通は塩として存在する式VIの化合物は、
無機または有機塩、例えばアルカリ金属、アルカリ土類
金属またはアンモニウム塩を含む［Remington'sPharmac
eutical Sciences （第１７版、１４１８頁（１９８５
年）］。トリエチルアンモニウムおよびピリジニウム塩
を、例として挙げることができる。新規なVIの化合物
は、ホスフェート基が遊離酸として含まれている化合物
も包含する。
【００６１】式VIの新規な化合物は、通常は分子生物
学、例えばＰＣＲ反応（ｅ＝ｆ＝１、Ｒ13＝ＯＨ）にお
ける助剤として、または金属イオン封鎖（ｅ＝ｆ＝１、
Ｒ13＝ＨまたはＯＨ）に用いることができる。式VIのＰ
ＣＲ反応において、Ｒ６がＨであり、Ｒ15がハロゲンで
ある化合物が好ましい。
【００６２】核酸の金属イオン封鎖に新規な７−デアザ
プリンヌクレオチドを使用することは、幾つかの理由か
ら有利である。例えば、Sanger配列決定法（ジデオキシ
技術）においてＧＣ濃度が高いヌクレオチド領域で見ら
れることが多く、しかもヌクレオチド配列の正確な決定
を妨げるバンド圧縮が、除去されまたは少なくとも少な
くなる。また、配列決定の際にＤＮＡポリメラーゼまた
はＲＮＡポリメラーゼによって合成される二本鎖核酸
は、７−、８−または７，８−置換した７−デアザプリ
ン塩基の取り込みによって安定化する。従って、核酸の
配列決定で普通に用いられる未置換の７−デアザグアノ
シンヌクレオチドを用いるよりも、置換した７−デアザ
プリンヌクレオチドを用いる方が、ＧＣ濃度が高いＤＮ
Ａストレッチにおいてバンド圧縮をなくする上で有利で
ある（ＥＰ２１２５３６号明細書）。配列決定において
置換した７−デアザプリンヌクレオチドを用いることの
もう一つの利点は、配列決定反応中に合成される核酸分
子を蛍光分光光度法によって検出することができるよう
にするレポーター基の形態での蛍光残基を、一連の続い
て起こる反応において置換基に導入することができるこ
とである。
【００６３】更に、オリゴヌクレオチドに自己蛍光性の
置換７−デアザプリン塩基を取り込むことによって、置
換７−デアザプリン塩基の自己蛍光によって直接オリゴ
ヌクレオチドを検出することができるようになる。従っ
て、未置換型の７−デアザプリン塩基は蛍光性がなく、
アルキニル基、例えばヘキシニルを７位に導入すると、
蛍光性になる。これらの化合物の自己蛍光は、２８０ｎ
ｍの波長の光線で励起した後、３５０ｎｍ（放射）で測
定することができる。
【００６４】式VIの化合物は、対応する置換７−デアザ
プリンヌクレオチドから出発して、周知の方法を用いて
製造することができる。式VIの化合物は、１，８−ビス
（ジメチルアミノ）ナフタレンおよびトリメチルホスフ
ェートの存在下にて、Ludwigによる簡略化した１ポット
法によって好ましく製造することができる[J. Ludwiget
al., (1981), Acta Biochem. Biophys. Sci. Hung., 1
6, 131 ］。
【００６５】本発明は、下記式VII の化合物にも関す
る。
【化２６】 （式中、ＥおよびＦは、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨま
たはＮＨ２であり、ＯＨおよびＮＨ２はヌクレオチド化
学で普通に用いられる保護基によって適宜保護され、Ｒ
15およびＲ16は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ
10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、（Ｃ２
〜Ｃ10）−アルキニル、Ｉ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、シアノで
あるか、または（Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ
10）−アルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル
であって、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフ
ッ素によって置換されているものであり、Ｒ15およびＲ
16は、同時に水素およびシアノとなることはできず、か
つＲ16が水素であり、ＥがＮＨ２であり、ＦがＯＨであ
るときには、Ｒ15はＩではなく、Ｒ14は、それぞれ独立
して、Ｈであるかまたはヌクレオチド化学で普通に用い
られる保護基である。）
【００６６】本発明は、式Ｉ、Ｖ、VIおよびVII の化合
物の総ての互変異性形態、および特に、式IIの７−デア
ザプリン塩基の総ての互変異性形態も包含する。極めて
一般的な方法では、式Ｖ、VIおよびVII の化合物におい
て、式Ｉの好ましいオリゴヌクレオチドの製造のための
出発化合物または中間体として用いることができるもの
も、好ましい。
【００６７】本発明は、更に、式Ｉの新規なオリゴヌク
レオチドの製造法に関する。オリゴヌクレオチドの化学
合成で普通に用いられる標準的な条件を、置換７−デア
ザプリンを含む新規なオリゴヌクレオチドの製造に適用
することができる。
【００６８】式Ｉの新規なオリゴヌクレオチドは、適宜
自動合成装置を用いて溶液中でまたは、好ましくは固相
上で製造する。式Ｉのオリゴマーは、それぞれの場合に
ヌクレオチド塩基を有するモノヌクレオチドを適当に誘
導体形成した支持体または成長するオリゴマー鎖に連続
的に縮合することによって段階的に組み立てることがで
きる。あるいは、式Ｉのオリゴヌクレオチドは、ジヌク
レオチドまたはトリヌクレオチドを互いに結合すること
によって構築されることもできる［S. Beaucage et a
l., Tetrah., Vol. 48, No. 12, 2223-2311, (1992);お
よびTetrah., Vol. 48, No. 28, 6123-6294, (1993)
］。この方法は、修飾したホスフェートブリッジを有
するオリゴヌクレオチドを合成するときに、特に有利で
ある。
【００６９】オリゴヌクレオチドは、当業者に知られて
いる方法、例えばトリエステル法、Ｈ−ホスホネート法
またはホスホルアミダイト法を用いて構築される［E. S
onveaux, (1986), Bioorganic Chemistry, 14, 274-32
5; S.L. Beaucage et al., (1992), Tetrahedron, 48,
2223-2311］。式Ｖのヌクレオチドモノマー構造成分、
特に好ましくは、式Ｖにおいて、Ｅ′がＮＲ10Ｒ11であ
り、Ｆ′がＯＲ12であり、あるいはＦ′がＮＲ10Ｒ11で
あり、Ｅ′がＨであるものが、７−デアザプリン誘導体
を導入するのに好ましく用いられる。
【００７０】式Ｖの化合物は、オリゴヌクレオチド固相
合成用の構造成分として、対応する７−デアザプリンヌ
クレオシドから出発して、製造することができる。置換
基は、周知の方法を用いて７−デアザプリン環系の７位
に導入することができる。例えば、７位がハロゲンまた
はメチルで置換されている７−デアザプリンヌクレオシ
ドの製造は、Seela らによって報告されている［Helvet
ica Chimica Acta, (1994) 77, 897-903］。式Ｖのアル
ケニル−またはアルキニル−置換した７−デアザプリン
誘導体は、既知の５−ヨードツベルシジン（＝７−Ｉ−
７−デアザアデノシン、Seela et al.の前記文献を参
照）から出発して、テトラキス（トリフェニルホスフィ
ン）パラジウム（Ｏ）の存在下で、クロス−カップリン
グ反応によって７−デアザプリン環系の７位にアルケニ
ルまたはアルキニル基をカップリングすることによって
製造することができる。７−デアザプリンの２位に電子
供給性置換基（例えば、アミノ基）を有するヌクレオシ
ドを出発化合物として用いるときには、親電子性置換基
（例えば、ハロゲン）を７−デアザプリン環系の８位に
導入することができる。２−アミノ基が、例えばアセチ
ル化されていると、親電子置換基は７位に向かう。従っ
て、本発明は、親電子置換基（例えば、ハロゲン）を７
−デアザヌクレオシドの７または８位に位置選択的に挿
入する方法にも関する。従って、ハロゲン化したヌクレ
オシドを、前記のパラジウム−触媒を用いたクロス−カ
ップリング反応によってアルキル、アルケニルまたはア
ルキニル基などの他の置換基を挿入するための出発化合
物として用いることができる。アルコキシ誘導体または
置換アミン誘導体を親核置換によって導入することがで
き、ニトロ基を親電子置換によって導入することができ
る。
【００７１】７，８−ビス−アルキニル化した７−デア
ザプリンの場合には、Bergman 反応を用いて、あるいは
光化学的手段によってビラジカルを生成させることがで
き、または別の環系を融合させることができる［N. Trr
ro et al., Tetrahedron Letters, 1994, Vol. 35, 808
9 ］。
【００７２】７−デアザプリン塩基のアミノ基および糖
の遊離の５′−ヒドロキシル基に好適な保護基を導入し
た後、モノマーを対応するホスホネートまたはホスホル
アミダイト誘導体に転換する。ホルムアミジン保護基
（（ジメチルアミノ）メチリデン）またはアシル保護基
（例えば、ベンゾイルまたはフェノキシアセチル）の形
態などの適当なアミノ保護基が、周知の方法を用いて挿
入される［L.J. McBridge et al., (1983), Tetrahedro
n Lett., 24, 2953; G.S. Ti et al., (1982) J.Am. Ch
em. Soc., 104, 1316; H. Schaller et al., (1963),
J. Am. Chem. Soc., 85, 3821 ］が、アミノ基がアシル
化されているときには、Schallerのペルアシル化法を用
いるのが有利である。糖の遊離の５′−ＯＨ基に好適な
保護基の一例は４，４′−ジメトキシトリチルであり、
この挿入も同様に既知の方法を用いて行なわれる［C.B.
Reese, (1978), Tetrahedron, 34, 3143; D. Flockerz
i etal., (1981), Liebigs Ann. Chem., 1568］。この
方法で保護されたモノマーは、Froehlerらの方法によっ
て対応するホスホネートに転換することができる[B.C.
Froehler et al., (1986), Nucl. Acid Res., 14, 539
9] 。例えば、シアノエチル−ホスホルアミダイト誘導
体は、無水のジクロロメタン中でモノマーをクロロ−β
−シアノエトキシ（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホ
スファンと反応させることによって製造することができ
る［N.D. Sinha et al., (1984) Nucl.Acid Res., 12,
4539 ］。
【００７３】式Ｉの化合物のオリゴヌクレオチド残基が
３′末端および／または５′末端で修飾されているもの
は、この修飾に関してＥＰ−Ａ ０ ５５２ ７６６号
明細書に記載の方法を用いて合成される。
【００７４】本発明は、医薬を製造する目的での式Ｉの
新規なオリゴヌクレオチドの使用、および新規なオリゴ
ヌクレオチドを生理学的に許容可能な賦形剤、および好
適な添加剤および／または補助物質を適宜混合すること
を含んでなる医薬の製造法にも関する。
【００７５】極めて一般的な方法では、本発明は、式Ｉ
のオリゴヌクレオチドを、医薬の治療上有効な成分とし
て使用することにも及ぶ。一般的には、治療上有効なオ
リゴヌクレオチド誘導体は、アンチセンスオリゴヌクレ
オチド、三本鎖形成オリゴヌクレオチド、アプタマー(a
ptamers)またはリボザイム(ribozymes) 、特にアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを意味するものと理解される。
【００７６】更に、本発明は、例えば、生物学的試料中
の独特な二本鎖または一本鎖核酸分子の存在または非存
在をまたはその量を検出するための診断試薬として少な
くとも１個の置換７−デアザプリン、好ましくは７−デ
アザアデニンまたは７−デアザグアニンを含むオリゴヌ
クレオチドの使用にも関する。本発明による使用には、
オリゴヌクレオチドの長さは、４〜１００、好ましくは
約５〜４０、特に約６〜３０のヌクレオチドである。別
の状況では、前記の好ましい範囲、修飾、および複合
は、この場合にも適用される。
【００７７】本発明の医薬は、例えばＨＩＶ、ＨＳＶ−
１、ＨＳＶ−２、インフルエンザ、ＶＳＶ、Ｂ型肝炎ま
たはパピローマウイルスなどのウイルスによって引き起
こされる疾病を治療するのに用いることができる。
【００７８】新規なアンチセンスオリゴヌクレオチド誘
導体、すなわち、アンチセンスオリゴヌクレオチドであ
って、少なくとも１種類のプリン塩基が置換７−デアザ
プリン塩基によって置換されており、かつこれらの標的
に対して有効なものは、例えば、下記のような塩基配列
を有する。 ａ） ＨＩＶに対するもの、例えば 5'-ACACCCAATTCTGAAAATGG-3' (I) 、または 5'-AGGTCCCTGTTCGGGCGCCA-3' (II)、または 5'-GTCGACACCCAATTCTGAAAATGGATAA-3' (III) 、または 5'-GCTATGTCGACACCCAATTCTGAAA-3' (IV)、または 5'-TCGTCGCTGTCTCCGCTTCTTCTTCCTGCCA (VI)、または ｂ）ＨＳＶ−１に対するもの、例えば 5'-GCGGGGCTCCATGGGGGTCG-3' (VII) 本発明の医薬は、例えば癌の治療にも好適である。例え
ば、癌の発生または癌の成長に関与する標的に向けられ
たオリゴヌクレオチド配列を、この本発明で用いること
ができる。
【００７９】このような標的の例は、下記の通りであ
る。 １） ｃ−ｍｙｃ、Ｎ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｂ、ｃ−ｆｏ
ｓ、ｃ−ｆｏｓ／ｊｕｎ、ＰＣＮＡおよびｐ１２０など
の核発癌タンパク質（nuclear oncoprotein ）、 ２） ＥＪ−ｒａｓ、ｃ−Ｈａ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、
ｒｒｇ、ｂｃｌ−２、ｃｄｃ−２、ｃ−ｒａｆ−１、ｃ
−ｍｏｓ、ｃ−ｓｒｃおよびｃａｂｌなどの、細胞質／
膜−に関与した発癌タンパク質、 ３） ＥＧＦレセプター、ｃ−ｅｒｂＡ、レチノイドレ
セプター、タンパク質キナーゼ制御サブユニットおよび
ｃ−ｆｍｓなどの細胞レセプター、 ４） サイトカイン、成長因子、および細胞外マトリッ
クス、例えばＣＳＦ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａ、ＩＬ
−１ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ｂＦＧＦ、ミエロブラス
チンおよびフィブロネクチン。
【００８０】式Ｉの新規なアンチセンスオリゴヌクレオ
チドであって、これらの標的に対して有効なものは、例
えば、下記の塩基配列を有する。 ａ） ｃ−Ｈａ−ｒａｓに対するもの、例えば 5'-CAGCTGCAACCCAGC-3' (VIII) ｃ） ｃ−ｍｙｃ、例えば 5'-GGCTGCTGGAGCGGGGCACAC-3' (IX) 5'-AACGTTGAGGGGCAT-3' (X) ｄ） ｃ−ｍｙｂ、例えば 5'-GTGCCGGGGTCTTCGGGC-3' (XI) ｅ） ｃ−ｆｏｓ、例えば 5'-GGAGAACATCATGGTCGAAAG-3' (XII) 5'-CCCGAGAACATCATGGTCGAAG-3' (XIII) 5'-GGGGAAAGCCCGGCAAGGGG-3' (XIV) ｆ） ｐ１２０、例えば 5'-CACCCGCCTTGGCCTCCCAC-3' (XV) ｇ） ＥＧＦレセプター、例えば 5'-GGGACTCCGGCGCAGCGC-3' (XVI) 5'-GGCAAACTTTCTTTTCCTCC-3' (XVII) ｈ） ｐ５３腫瘍抑制剤、例えば 5'-GGGAAGGAGGAGGATGAGG-3' (XVIII) 5'-GGCAGTCATCCAGCTTCGGAG-3'r (XIX)
【００８１】本発明の医薬は、インテグリン、または細
胞−細胞接着レセプター、例えばＶＬＡ−４、ＶＬＡ−
２、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭまたはＥＬＡＭによって影響を
及ぼす、疾患を治療などに一層好適である。
【００８２】これらの標的に対して有効な新規なアンチ
センスオリゴヌクレオチド誘導体は、例えば下記の塩基
配列を有する。ａ） ＶＬＡ−４、例えば 5'-GCAGTAAGCATCCATATC-3' (XX)、または ｂ） ＩＣＡＭ、例えば 5'-CCCCCACCACTTCCCCTCTC-3' (XXI) 5'-CTCCCCCACCACTTCCCCTC-3' (XXII) 5'-GCTGGGAGCCATAGCGAGG-3' (XXIII) ｃ） ＥＬＡＭ−１、例えば 5'-ACTGCTGCCTCTTGTCTCAGG-3' (XXIV) 5'-CAATCAATGACTTCAAGAGTTC-3' (XXV)
【００８３】本発明の医薬は、再狭窄などの予防に好適
である。例えば、増殖または移動に関与する標的に対し
て向けられた関連において用いることができる。これら
の標的の例は、下記の通りである。 １） Ｔ核トランスアクティベータータンパク質および
サイクリン、例えば、ｃ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｂ、ｃ−ｆ
ｏｓ、ｃ−ｆｏｓ／ｊｕｎ、サイクリンおよびｃｄｃ２
キナーゼ。 ２） マイトジェンまたは成長因子、例えばＦＤＧＦ、
ｂＦＧＦ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、およびＴＧＦ−β。 ３） 細胞レセプター、例えばｂＦＧＦレセプター、Ｅ
ＧＦレセプター、およびＰＤＧＦレセプター。
【００８４】これらの標的に有効な式Ｉを有する新規な
オリゴヌクレオチドは、例えば下記の塩基配列などを有
する。 ａ） ｃ−ｍｙｂ 5'-GTGTCGGGGTCTCCGGGC-3' (XXVI) ｂ） ｃ−ｍｙｃ 5'-CACGTTGAGGGGCAT-3' (XXVII) ｃ） ｃｄｃ２キナーゼ 5'-GTCTTCCATAGTTACTCA-3' (XXVIII) ｄ） ＰＣＮＡ（ラットの増殖性細胞核抗原） 5'-GATCAGGCGTGCCTCAAA-3' (XXIX)
【００８５】これらの医薬は、経口投与することができ
る医薬製剤の形態で、例えば錠剤、コーティング錠剤、
硬質または軟質ゼラチンカプセル、溶液、エマルジョン
または懸濁液の形態で、用いることができる。この医薬
を、タンパク質などの追加成分を適宜含むリポソームに
包含させたものも、同様に好適な投与形態を表わしてい
る。これらの医薬は、座薬の形態で直腸に投与すること
もでき、または注射溶液の形態で非経口的に投与するこ
ともできる。医薬製剤を製造するために、これらの化合
物を、治療上不活性な有機および無機賦形剤中で加工す
ることができる。錠剤、コーティング錠剤、および硬質
ゼラチンカプセル用の賦形剤の例は、ラクトース、コー
ンスターチまたはその誘導体、獣脂酸およびステアリン
酸、またはそれらの塩である。溶液の製造に適当な賦形
剤は、水、ポリオール、スクロース、転化糖およびグル
コースである。注射溶液に好適な賦形剤は、水、アルコ
ール、ポリオール、グリセロール、および植物油であ
る。座薬に好適な賦形剤は、植物油および硬化油、ワッ
クス、脂肪、および半液状ポリオールである。医薬製剤
は、防腐剤、溶剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、
着色料、矯味料、浸透圧を変化させるための塩、緩衝
剤、コーティング剤、酸化防止剤、および他の治療上活
性な化合物を、適宜含むこともできる。
【００８６】好ましい投与形態は、カテーテルなどを用
いる局部投与、局所投与、または注射である。注射に
は、アンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を、液体溶
液、好ましくは生理学的に許容可能な緩衝剤、例えばハ
ンクス溶液またはリンガー溶液などに処方される。しか
しながら、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、固体状
で処方し、使用前に溶解または懸濁させることもでき
る。全身投与に好ましい投与料は、体重１ｋｇ当たりお
よび１日当たり約０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇである。
【００８７】極めて一般的には、本発明は、式Ｉの化合
物のＤＮＡ診断におけるＮＤＡプローブまたはプライマ
ーとしての、一般的には分子生物学における助剤として
の使用にまで及ぶ。
【００８８】個々のＤＮＡ分子は、電子顕微鏡法によ
り、例えば走査−トンネル型顕微鏡で視覚化することが
できる。ピリミジン塩基は、５位にメチル基があるため
電子顕微鏡的に区別することができるが、プリン塩基の
アデニンおよびグアニンの場合にはこれはできない。そ
れ故、核酸分子の塩基配列を電子顕微鏡的に直接的に解
読することはできない。しかしながら、検討を行なう核
酸分子が未修飾グアニン塩基の代わりに置換７−デアザ
グアニン誘導体を含む場合には、置換７−デアザグアニ
ン塩基は電子顕微鏡では未置換アデニン塩基と識別する
ことができる（また、逆にグアニン塩基は置換７−デア
ザアデニン塩基と識別することができる）。従って、７
−置換７−デアザプリン塩基を含む核酸の塩基配列は、
電子顕微鏡によって解読することができる。
【００８９】
【実施例】実施例において命名した化合物(1) 〜(25)の
構造式を示すと以下の通りである。
【化２７】
【化２８】
【化２９】
【００９０】デオキシツベルシジン誘導体(1) 〜(3)
（ツベルシジン＝７−デアザアデノシン）は、Seela ら
の方法を用いて製造する［Helvetica Chimica Acta, 19
94, 77, 897-903 ］。対応するリボヌクレオシド誘導体
は、出発化合物としてツベルシジン誘導体を用いて、下
記の実施例と同様にして製造することができる。
【００９１】実施例１ ４−ベンゾイルアミノ−５−クロロ−７−（２−デオキ
シ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン(4) ５−クロロデオキシツベルシジン(1) １．１４ｇ（４．
０ミリモル）を乾燥ピリジンと共に２回蒸発させ、乾燥
ピリジン１０ｍｌに溶解させた後、この溶液をトリチル
メチルクロロシラン５．２ｍｌ（４０．６ミリモル）と
一緒に、室温で２時間攪拌する。次に、新たに蒸留した
塩化ベンゾイル５２０μｌ（４．１ミリモル）を加え、
混合物を室温で更に２時間攪拌する。水４ｍｌ、および
更に５分後に、２５％アンモニア水溶液８ｍｌを、氷冷
しながら滴加する。混合物を室温で３０分間攪拌した
後、蒸発乾固させる。残渣を水２０ｍｌに吸収させ、こ
の溶液を酢酸エチル３０ｍｌずつで３回抽出する。有機
相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、蒸発させ、残渣をシリカ
ゲル上でクロマトグラフィ処理を行なう（２０×５ｃｍ
カラム、ジクロロメタン／メタノール＝９：１）。溶媒
を蒸発させ、残渣をメタノール／水から再結晶した後、
一層遅く移動する主画分から、無色結晶状の化合物(4)
９３０ｍｇ（２．４ミリモル、６０％）が得られる。融
点１９０℃。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．４。ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ
＝２７４ｎｍ（５３００）、３０５ｎｍ（５６００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．３１
（ｍ，２′α−Ｈ），２．５７（ｍ，２′β−Ｈ），
３．５８（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．８９（ｍ，４′
−Ｈ），４．４１（ｍ，３′−Ｈ），５．００（ｔ，Ｊ
＝５．０Ｈｚ，５′−ＯＨ），５．３３（ｄ，Ｊ＝５．
３Ｈｚ，３′−ＯＨ），６．７２（ｐｔ，Ｊ＝６．７５
Ｈｚ，１′−Ｈ），７．４４〜７．６５（ｍ，３Ｈ，メ
タ−およびパラ−ＨBz），８．００（ｓ，６−Ｈ），
８．０５（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．７２（ｓ，
２−Ｈ），１１．２（ｂｒ，４−ＮＨ）。 Ｃ18Ｈ17ＣｌＮ４Ｏ４（３８８．８） 計算値 Ｃ５５．６１， Ｈ４．４１， Ｎ１４．４
１； 実測値 Ｃ５５．７１， Ｈ４．５４， Ｎ１４．３
０。
【００９２】実施例２ ４−ベンゾイルアミノ−５−ブロモ−７−（２−デオキ
シ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン(5) ５−ブロモデオキシツベルシジン(2) １．３１ｇ（４．
０ミリモル）を乾燥ピリジンと共に２回蒸発させ、乾燥
ピリジン１０ｍｌに溶解させた後、この溶液をトリチル
メチルクロロシラン５．２ｍｌ（４０．６ミリモル）と
一緒に、室温で２時間攪拌する。次に、新たに蒸留した
塩化ベンゾイル５２０μｌ（４．１ミリモル）を加え、
混合物を室温で更に２時間攪拌する。水４ｍｌ、および
更に５分後に、２５％アンモニア水溶液８ｍｌを、氷冷
しながら滴加する。混合物を室温で３０分間攪拌した
後、化合物１４ｂと同様に処理する。シリカゲル上でク
ロマトグラフィ処理を行ない（２０×５ｃｍカラム、ジ
クロロメタン／メタノール＝９：１）、溶媒を蒸発さ
せ、メタノール／水から再結晶した後、無色結晶１．２
ｇ（２．８ミリモル、７０％）が得られる。融点１９８
℃。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．４。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ＝２７４ｎｍ（４６０
０）、３０８ｎｍ（４５００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．２７
（ｍ，２′α−Ｈ），２．５０（ｍ，２′β−Ｈ，ＤＭ
ＳＯと重複），３．５６（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．
８６（ｍ，４′−Ｈ），４．３８（ｍ，３′−Ｈ），
５．０１（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，５′−ＯＨ），５．３
４（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，３′−ＯＨ），６．６９（ｐ
ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１′−Ｈ），７．５２〜７．６４
（ｍ，３Ｈ，メタ−およびパラ−ＨBz），８．０４
（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．０４（ｓ，６−
Ｈ），８．７２（ｓ，２−Ｈ），１１．０（ｂｒ，４−
ＮＨ）。 Ｃ18Ｈ17ＢｒＮ４Ｏ４（４３３．３） 計算値 Ｃ４９．９０， Ｈ３．９６， Ｎ１２．９
３； 実測値 Ｃ５０．０４， Ｈ４．１０， Ｎ１３．０
５。
【００９３】実施例３ ４−ベンゾイルアミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−
エリスロペントフラノシル）−５−メチル−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン(6) ５−メチルデオキシツベルシジン(3) １．０６ｇ（４．
０ミリモル）を無水ピリジン２０ｍｌずつと共に２回再
蒸発させ、乾燥ピリジン１０ｍｌに溶解させた後、この
溶液をトリチルメチルクロロシラン５．２ｍｌ（４０．
６ミリモル）と一緒に、室温で２時間攪拌する。次に、
新たに蒸留した塩化ベンゾイル５２０μｌ（４．１ミリ
モル）を加え、混合物を室温で更に２時間攪拌する。化
合物(4) についてと同様にして処理を行ない、次いでシ
リカゲル上でクロマトグラフィ処理を行ない（２０×５
ｃｍカラム、ジクロロメタン／メタノール＝９：１）、
溶媒を蒸発させ、メタノール／水から再結晶した後、更
にゆっくり移動する主要画分から、無色結晶（化合物
６）１．１ｇ（２．９ミリモル、７３％）が得られる。
融点１９６℃。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．３。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ＝２７４ｎｍ（７０５
０）、３０９ｎｍ（５５００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．０９
（ｍ，２′α−Ｈ），２．２１（ｓ，５−ＣＨ３）、
２．５０（ｍ，２′β−Ｈ，ＤＭＳＯと重複），３．５
３（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．８３（ｍ，４′−
Ｈ），４．３６（ｍ，３′−Ｈ），４．９７（ｔ，Ｊ＝
５．０Ｈｚ，５′−ＯＨ），５．３２（ｄ，Ｊ＝５．３
Ｈｚ，３′−ＯＨ），６．６５（ｐｔ，Ｊ＝６．７Ｈ
ｚ，１′−Ｈ），７．５３（ｓ，６−Ｈ），７．５３〜
７．６６（ｍ，３Ｈ，メタ−およびパラ−ＨBz），８．
０５（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．６０（ｓ，２−
Ｈ），１０．９５（ｂｒ，４−ＮＨ）。 Ｃ19Ｈ20Ｎ４Ｏ４（３６８．４） 計算値 Ｃ６１．９５， Ｈ５．４７， Ｎ１５．２
１； 実測値 Ｃ６２．０８， Ｈ５．６５， Ｎ１５．０
０。
【００９４】実施例４ ５−ブロモ−４−［（１−ジメチルアミノ）メチレン］
アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペント
フラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
(7) Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジエチルアセタール１．
５ｍｌ（８．７５ミリモル）を、化合物(2) ２００ｍｇ
（０．６１ミリモル）をジメチルホルムアミド１５ｍｌ
に溶解したものに加え、反応溶液を室温で２時間攪拌す
る。次いで、これを濃縮乾固し、油状残渣をトルエンと
共に２回、およびアセトンと共に２回再蒸発させる。粗
生成物をシリカゲルに吸着させ、カラムクロマトグラフ
ィにより精製する（２０×５ｃｍカラム、ジクロロメタ
ン／メタノール＝９：１）。主要画分を濃縮して、残渣
をアセトン／メタノール＝９：１から再結晶すると、化
合物(7) が無色板状結晶（１５０ｍｇ、０．４ミリモ
ル、６５％）として得られる。融点１７７℃。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．６５。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．２０
（ｍ，２′α−Ｈ），２．５０（ｍ，２′β−Ｈ，ＤＭ
ＳＯと重複），３．１８，３．１９（２ｓ，２Ｎ−ＣＨ
３），３．５４（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．８６
（ｍ，４′−Ｈ），４．３５（ｍ，３′−Ｈ），５．０
１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，５′−ＯＨ），５．２６
（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３′−ＯＨ），６．５７（ｐ
ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１′−Ｈ），７．７０（ｓ，６−
Ｈ），８．３４（ｓ，２−Ｈ），８．８２（ｓ，Ｎ＝Ｃ
Ｈ）。 Ｃ14Ｈ18ＢｒＮ５Ｏ３（３８４．２） 計算値 Ｃ４３．７７， Ｈ４．７２， Ｎ１８．２
３； 実測値 Ｃ４３．９２， Ｈ４．８０， Ｎ１８．１
１。
【００９５】実施例５ ４−ベンゾイルアミノ−５−クロロ−７−［（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ
−（４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン(8) 化合物(4) ５００ｍｇ（１．２８ミリモル）を乾燥ピリ
ジンと共に２回蒸発させた後、無水ピリジン２０ｍｌに
溶解する。塩化ジメトキシトリチル６５０ｍｇ（１．９
５ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。
次に、これを５％ＮａＨＣＯ３水溶液１０ｍｌで加水分
解し、ジクロロメタン２５ｍｌずつで２回抽出する。合
わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した後、シリカゲ
ル（２０×５ｃｍカラム、ジクロロメタン／メタノール
＝９：１）でクロマトグラフィ処理を行なう。主要画分
を濃縮し、アセトンと共に蒸発させた後に得られる残渣
として、黄色味を帯びた気泡生成物６８０ｍｇ（０．９
９ミリモル％、７７％）を得る。精製のため、物質を少
量のジクロロメタンに溶解し、この溶液を激しく攪拌し
ながら、２００倍過剰量のｎ−ヘキサンにゆっくりと滴
加する。化合物(8)は、白色非晶質固形生成物として単
離する。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．５。 １ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．３０
（ｍ，２′α−Ｈ），２．５０（ｍ，２′β−Ｈ、ＤＭ
ＳＯと重複），３．１５（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．
７３（ｓ，６Ｈ，２ＯＣＨ３），３．９８（ｍ，４′−
Ｈ），４．４２（ｍ，３′−Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝
５．０Ｈｚ、３′−ＯＨ），６．６９（ｐｔ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ，１′−Ｈ），６．８４（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），
７．２〜７．８（ｍ，１２Ｈ，芳香族プロトン），７．
８７（ｓ，６−Ｈ），８．０６（ｄ，２Ｈ，オルト−Ｈ
Bz），８．７０（ｓ，２−Ｈ），１１．０（ｂｒ，４−
ＮＨ）。 Ｃ39Ｈ35ＣｌＮ４Ｏ６（６９１．２） 計算値 Ｃ６７．７７， Ｈ５．１０， Ｎ８．１１； 実測値 Ｃ６７．７０， Ｈ５．０５， Ｎ８．１９。
【００９６】実施例６ ４−ベンゾイルアミノ−５−ブロモ−７−［（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ
−（４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン(9) 化合物(5) ５００ｍｇ（１．１５モル）を乾燥ピリジン
と共に２回蒸発させた後、無水のピリジン２０ｍｌに溶
解させる。塩化ジメトキシトリチル５８５ｍｇ（１．７
５ミリモル）を加え、混合物を室温で１時間攪拌する。
次いで、これを５％ＮａＨＣＯ３水溶液１０ｍｌで加水
分解し、ジクロロメタン２５ｍｌずつで２回抽出する。
合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥した後、シリカ
ゲル（２０×５ｃｍカラム、ジクロロメタン／メタノー
ル＝９：１）でクロマトグラフィ処理を行なう。主要画
分を濃縮し、アセトンと共に蒸発させた後に得られる残
渣として、黄色味を帯びた気泡生成物６２０ｍｇ（０．
９３ミリモル、８０％）を得る。精製のため、物質を少
量のジクロロメタンに溶解し、この溶液を激しく攪拌し
ながら、２００倍過剰量のｎ−ヘキサンにゆっくりと滴
加する。化合物(9)は、白色非晶質の固形生成物として
沈澱し、吸引により濾別する。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．５５。１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］Ｄ
ＭＳＯ）：δ＝２．３０（ｍ，２′α−Ｈ），２．５０
（ｍ，２′β−Ｈ、ＤＭＳＯと重複），３．１５（ｍ，
２Ｈ，５′−Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ，２ＯＣ
Ｈ３），３．９８（ｍ，４′−Ｈ），４．４２（ｍ，
３′−Ｈ），５．４０（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ、３′−Ｏ
Ｈ），６．６９（ｐｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１′−Ｈ），
６．８４（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），７．２〜７．８（ｍ，
１２Ｈ，芳香族プロトン），７．８７（ｓ，６−Ｈ），
８．０６（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．７０（ｓ，
２−Ｈ），１１．０（ｂｒ，４−ＮＨ）。 Ｃ39Ｈ35ＢｒＮ４Ｏ６（７３５．６） 計算値 Ｃ６３．６８， Ｈ４．７９， Ｎ７．６２； 実測値 Ｃ６３．８５， Ｈ４．６７， Ｎ７．５２。
【００９７】実施例７ ４−ベンゾイルアミノ−７−［（２−デオキシ−β−Ｄ
−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−（４，４′
−ジメトキシトリフェニルメチル）］−５−メチル−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン(10) 化合物(6) ５００ｍｇ（１．３６ミリモル）を乾燥ピリ
ジン２０ｍｌと共に２回蒸発させた後、無水のピリジン
２０ｍｌに溶解させ、この溶液を塩化ジメトキシトリチ
ル６９０ｍｇ（２．１ミリモル）と共に室温で１時間攪
拌する。混合物を化合物(8) について用いるのと同じ方
法で処理し、シリカゲル（２０×５ｃｍカラム、ジクロ
ロメタン／メタノール＝９：１）でクロマトグラフィ処
理を行なう。主要画分から、黄色味を帯びた気泡生成物
として、完全に保護された化合物(10)７２０ｍｇ（１．
０５ミリモル％、７７％）を得る。ｎ−ヘキサンから再
沈澱によって精製すると、無色非晶質の固形生成物が得
られる。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．５。 １ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．０８
（ｓ，５−ＣＨ３），２．３０（ｍ，２′α−Ｈ），
２．５０（ｍ，２′β−Ｈ、ＤＭＳＯと重複），３．１
０（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ，２Ｏ
ＣＨ３），３．９７（ｍ，４′−Ｈ），４．４４（ｍ，
３′−Ｈ），５．３９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ、３′−Ｏ
Ｈ），６．６７（ｐｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１′−Ｈ），
６．８５（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），７．２〜７．８（ｍ，
１２Ｈ，芳香族プロトン），７．５８（ｓ，６−Ｈ），
８．０６（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．６０（ｓ，
２−Ｈ），１１．０（ｂｒ，４−ＮＨ）。 Ｃ40Ｈ38Ｎ４Ｏ６（６７０．８） 計算値 Ｃ７１．６３， Ｈ５．７１， Ｎ８．３５； 実測値 Ｃ７１．４８， Ｈ５．７１， Ｎ８．３６。
【００９８】実施例８ ４−ベンゾイルアミノ−５−クロロ−７−［（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ
−（４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−３′−（トリエ
チルアンモニウムホスホネート）(11) １，２，４−１Ｈ−トリアゾール８４０ｍｇ（１２．０
ミリモル）を、室温およびアルゴン雰囲気下にて、三塩
化リン３１５μｌ（３．７ミリモル）およびＮ−メチル
モルホリン４．１ｍｌ（３７．０ミリモル）を無水ジク
ロロメタン４０ｍｌに溶解したものに加える。混合物を
３０分間攪拌した後、０℃に冷却し、完全に保護したヌ
クレオシド(8) ５００ｍｇ（０．７４ミリモル）を乾燥
ジクロロメタン１０ｍｌに溶解したものを１０分間で滴
加する。混合物を室温で更に１０分間攪拌し、１Ｍ重炭
酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＢＣ、ｐＨ＝７．
５）３０ｍｌを加える。相分離を行ない、水相をＣＨ２
Ｃｌ２で数回抽出した後、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ
４上で乾燥する。溶媒を留去し、残っている気泡生成物
をシリカゲル（２０×５ｃｍカラム、０．５リットル
ジクロロメタン／Ｅｔ３Ｎ＝９８：２、次いでジクロロ
メタン／メタノール／Ｅｔ３Ｎ＝８８：１０：２）上で
クロマトグラフィ処理する。主要画分を濃縮した後、残
渣をジクロロメタン５０ｍｌに吸収させ、この溶液を
０．１Ｍ ＴＢＣ緩衝液２５ｍｌずつで５回抽出する。
有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して、溶媒を留去する
と、ホスホネート(11)４４５ｍｇ（０．５２ミリモル、
７０％）が無色気泡生成物として得られる。更に精製す
るため、この気泡生成物を、完全に保護されたヌクレオ
シド(8) について用いたのと同様な方法でｎ−ヘキサン
から再沈澱する。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．６。 １ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１６
（ｔ，９Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）３Ｎ），２．５０（ｍ，
２′α−Ｈ、ＤＭＳＯと重複），２．７４（ｍ，２′β
−Ｈ），３．００（ｑ，６Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）
３Ｎ），３．３３（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．７２
（ｓ，６Ｈ，２ＯＣＨ３），４．１５（ｍ，４′−
Ｈ），４．７８（ｍ，３′−Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝
５８５．８Ｈｚ，Ｐ−Ｈ），６．６９（ｐｔ，Ｊ＝７．
８Ｈｚ，１′−Ｈ），６．８４（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），
７．２〜７．７（ｍ，１２Ｈ，芳香族プロトン），７．
７９（ｓ，６−Ｈ），８．０４（ｄ，２Ｈ，オルト−Ｈ
Bz），８．６９（ｓ，２−Ｈ），１０．６（ｂｒ，４−
ＮＨ）。31 Ｐ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１６ｐｐ
ｍ（ｄｄ， １Ｊ（ＰＨ）＝５８８Ｈｚ，３Ｊ（ＰＨ）
＝８．６Ｈｚ。 Ｃ45Ｈ51ＣｌＮ５Ｏ８Ｐ（９００．８）。
【００９９】実施例９ ４−ベンゾイルアミノ−５−ブロモ−７−［（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ
−（４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−３′−（トリエ
チルアンモニウムホスホネート）(12) １，２，４−１Ｈ−トリアゾール７７０ｍｇ（１１．０
ミリモル）を、室温およびアルゴン雰囲気下にて、三塩
化リン２９０μｌ（３．４ミリモル）およびＮ−メチル
モルホリン３．８ｍｌ（３４．０ミリモル）を無水ジク
ロロメタン３０ｍｌに溶解したものに加える。混合物を
３０分間攪拌した後、０℃に冷却し、完全に保護したヌ
クレオシド(9) ５００ｍｇ（０．６８ミリモル）を乾燥
ジクロロメタン１０ｍｌに溶解したものを１０分間で滴
加する。混合物を室温で更に１０分間攪拌し、１Ｍ重炭
酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＢＣ、ｐＨ＝７．
５）３０ｍｌを加える。相分離を行ない、水相をＣＨ２
Ｃｌ２で数回抽出した後、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ
４上で乾燥する。溶媒を留去し、残っている気泡生成物
をシリカゲル（２０×５ｃｍカラム、０．５リットル
ジクロロメタン／Ｅｔ３Ｎ＝９８：２、次いでジクロロ
メタン／メタノール／Ｅｔ３Ｎ＝８８：１０：２）上で
クロマトグラフィ処理する。主要画分を濃縮した後、残
渣をジクロロメタン５０ｍｌに吸収させ、この溶液を
０．１Ｍ ＴＢＣ緩衝液２５ｍｌずつで５回抽出する。
有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥して、溶媒を留去する
と、ホスホネート(12)４１０ｍｇ（０．４６ミリモル、
６７％）が無色気泡生成物として得られる。更に精製す
るため、この気泡生成物を、完全に保護されたヌクレオ
シド(9) について用いたのと同様な方法でｎ−ヘキサン
から再沈澱する。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．７。 １ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１６
（ｔ，９Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）３Ｎ），２．５０（ｍ，
２′α−Ｈ、ＤＭＳＯと重複），２．７８（ｍ，２′β
−Ｈ），３．００（ｑ，６Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）
３Ｎ），３．２２（ｍ，２Ｈ，５′−Ｈ），３．７３
（ｓ，６Ｈ，２ＯＣＨ３），４．１７（ｍ，４′−
Ｈ），４．８２（ｍ，３′−Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝
５８８．５Ｈｚ，Ｐ−Ｈ），６．６９（ｐｔ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ，１′−Ｈ），６．９０（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），
７．２〜７．８（ｍ，１２Ｈ，芳香族プロトン），７．
８６（ｓ，６−Ｈ），８．０７（ｄ，２Ｈ，オルト−Ｈ
Bz），８．７０（ｓ，２−Ｈ），１１．０５（ｂｒ，４
−ＮＨ）。31 Ｐ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１６ｐｐ
ｍ（ｄｄ， １Ｊ（ＰＨ）＝５８８Ｈｚ，３Ｊ（ＰＨ）
＝８．６Ｈｚ。 Ｃ45Ｈ51ＢｒＮ５Ｏ８Ｐ（９００．８）。
【０１００】実施例１０ ４−ベンゾイルアミノ−７−［（２−デオキシ−β−Ｄ
−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−（４，４′
−ジメトキシトリフェニルメチル）］−５−メチル−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−３′−（トリエ
チルアンモニウムホスホネート）(13) １，２，４−１Ｈ−トリアゾール０．７８ｇ（１１．３
ミリモル）を、室温およびアルゴン雰囲気下にて、無水
のジクロロメタン２５ｍｌ、三塩化リン２９０μｌ
（３．４ミリモル）およびＮ−メチルモルホリン３．４
４ｇ（３４．０ミリモル）の溶液に加える。これを３０
分間攪拌した後、反応溶液を０℃に冷却し、完全に保護
したヌクレオシド(10)５００ｍｇ（０．７５ミリモル）
をジクロロメタン１５ｍｌに溶解したものを１０分間で
滴加する。混合物を室温で更に２０分間攪拌した後、１
Ｍ重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＢＣ、ｐＨ
＝７．５）で加水分解を行なう。相分離を行なった後、
水相をジクロロメタン２０ｍｌずつで３回抽出し、有機
相を乾燥して、蒸発濃縮した後、残渣をシリカゲル（２
０×５ｃｍカラム、０．５リットル ジクロロメタン／
Ｅｔ３Ｎ＝９８：２、次いでジクロロメタン／メタノー
ル／Ｅｔ３Ｎ＝８８：１０：２）上でクロマトグラフィ
処理する。主要画分を濃縮した後、残渣をジクロロメタ
ン５０ｍｌに吸収させ、この溶液を０．１Ｍ ＴＢＣ緩
衝液で数回抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し
て、溶媒を留去すると、化合物(13)４４０ｍｇ（０．５
３ミリモル、７０％）が無色気泡生成物として得られ
る。 ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝
９：１）：Ｒｆ＝０．６５。１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］Ｄ
ＭＳＯ）：δ＝１．１６（ｔ，９Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）
３Ｎ），２．０９（ｓ，５−ＣＨ３），２．２４（ｍ，
２′α−Ｈ），２．６７（ｍ，２′β−Ｈ），３．００
（ｑ，６Ｈ，（ＣＨ３ＣＨ２）３Ｎ），３．２０（ｍ，
２Ｈ，５′−Ｈ），３．７３（ｓ，６Ｈ，２ＯＣ
Ｈ３），４．１３（ｍ，４′−Ｈ），４．８３（ｍ，
３′−Ｈ），６．６５（ｐｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１′−
Ｈ），６．６８（ｄ，Ｊ＝５８８．５Ｈｚ，Ｐ−Ｈ），
６．８５（ｍ，４Ｈ，ＤＭＴ），７．２〜７．６（ｍ，
１２Ｈ，芳香族プロトン），７．５８（ｓ，６−Ｈ），
８．０５（ｄ，２Ｈ，オルト−ＨBz），８．６０（ｓ，
２−Ｈ），１０．９８（ｂｒ，４−ＮＨ）。31 Ｐ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．０８ｐｐ
ｍ（ｄｄ，１Ｊ（ＰＨ）＝５７７Ｈｚ，３Ｊ（ＰＨ）＝
８．９Ｈｚ。 Ｃ46Ｈ54Ｎ５Ｏ８Ｐ（８３５．８）。
【０１０１】実施例１１ ４−アミノ−５−ブロモ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ
−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン＝５′−Ｏ−トリホスフェート、トリ
エチルアンモニウム塩 化合物(2) （３３ｍｇ、０．１ミリモル）を、１，８−
ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン（３３ｍｇ、０．１
５ミリモル）と共に、緩やかに加熱しながらトリメチル
ホスフェート（０．２５ｍｌ）に溶解する。溶液を０℃
に冷却した後、新たに蒸留したＰＯＣｌ３（１２μｌ、
０．１３ミリモル）を加える。反応混合物を４℃に４時
間保持し、トリ−ｎ−ブチルアンモニウムジホスフェー
ト（ＤＭＦ中０．５ミリモル、１ｍｌ）およびトリ−ｎ
−ブチルアミン（１００μｌ、０．４２ミリモル）を含
んでなる溶液を加える。混合物を０℃で３分間攪拌した
後、１Ｍ ＴＢＣ緩衝液（１０ｍｌ）を加え、全混合物
を蒸発乾固する。残渣をＤＥＡＤセファデックス（１．
５×２０ｃｍカラム、ＨＣＯ３ −型）上でクロマトグラ
フィ処理を行なう。カラムをＨ２Ｏ約５００ｍｌで洗浄
した後、Ｈ２Ｏ／０．９Ｍ ＴＢＣ緩衝液の線状グラデ
ィエント（それぞれの場合１リットル）を用いてクロマ
トグラフィを行なった。この操作法の際に、トリホスフ
ェート（０．０１９ｍＭ、２０％）が約０．５Ｍ ＴＢ
Ｃ緩衝液で得られる。 ＴＬＣ（シリカゲル、ｉ−プロパノール／Ｈ２Ｏ／ＮＨ
３，３：１：１）：Ｒｆ＝０．２。 ＵＶ（Ｈ２Ｏ）：λｍａｘ＝２６９ｎｍ。31 Ｐ−ＮＭＲ（０．１Ｍ トリス−ＨＣｌ，ｐＨ８．
０，１００ｍＭ ＥＤＴＡ／Ｄ２Ｏ）：−１１．８７
（ｄ，Ｊ＝２０．２，Ｐｙ）；−１０．９８（ｔｄ，Ｊ
＝２０．０および６．０，Ｐα）；−２３．０６（ｔ，
Ｊ＝２０．２，Ｐβ）。
【０１０２】実施例１２ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン(14) （５−ヨード−２′−デオキシ
−ツベルシジン） ２５％アンモニア水を、４−クロロ−７−［２−デオキ
シ−３，５−ジ−Ｏ−（４−トルオイル）−β−Ｄ−エ
リスロペントフラノシル）−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン１．０ｇをジオキサン（８０
ｍｌ）に溶解したものに加える。混合物を、１１０℃の
スチール製シリンダー中で４８時間攪拌する。溶媒を留
去した後、濃縮残渣をシリカゲル（２０×５ｃｍカラ
ム、溶媒Ｂ）上でクロマトグラフィ処理を行なう。Ｍｅ
ＯＨから無色結晶生成物が得られる（０．７５ｇ、２．
０ミリモル、４５％）。融点１９４℃。 ＴＬＣ：Ｒｆ０．４（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：
１）。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）２８３ｎｍ（５８００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．１６（ｍ，Ｈ−
２′α），２．４６（ｍ，Ｈ−２′β，ＤＭＳＯと重
複），３．５４（ｍ，２−Ｈ，Ｈ−５′），３．８１
（ｍ，Ｈ−４′），４．３３（ｍ，Ｈ−３′），５．０
０（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，５′−ＯＨ），５．２３
（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３′−ＯＨ），６．４９（ｐ
ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−１′），６．６５（ｂｒ，Ｎ
Ｈ２），７．６５（ｓ，Ｈ−６），８．１０（ｓ，Ｈ−
２）。13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）１５７．３（Ｃ
−４），１５２．０（Ｃ−２），１４９．８（Ｃ−７
ａ），１２６．９（Ｃ−６），１０３．２（Ｃ−４
ａ），８７．５（Ｃ−４′），８３．０（Ｃ−１′），
７１．０（Ｃ−３′），６２．０（Ｃ−５′），５１．
９（Ｃ−５）、３９．８（Ｃ−２′）。 元素分析 Ｃ11Ｈ13ＩＮ４Ｏ３に対する計算値： Ｃ３５．１３， Ｈ３．４８， Ｎ１４．９０； 実測値 Ｃ３５．３３， Ｈ３．６９，
Ｎ１５．０１。
【０１０３】実施例１３ ５−ヨード−２′−デオキシツベルシジン(14)の架橋反
応 ５−ヨード−２′−デオキシツベルシジン(14)（２００
ｍｇ、０．５３２ミリモル）およびヨウ化銅（Ｉ）（１
０ｍｇ、１０モル％）を、予めアルゴンを流しておいた
乾燥ＤＭＦ３ｍｌに懸濁させ、アルキン（６〜１５当
量）、乾燥トリエチルアミン（１０８ｍｇ、１．０６ミ
リモル、２当量）、およびテトラキス（トリスフェニル
ホスフィン）−パラジウム（０）（３０．７５ｍｇ、
０．０２７ミリモル、５モル％）をこの混合物に加え
る。数時間以内に、この混合物は透明な黄色溶液に変化
する。出発化合物を使い切るまで反応を継続する（薄層
クロマトグラフィによって観察）。次に、反応混合物を
メタノール／ジクロロメタン（１：１）５ｍｌで希釈
し、Ｄｏｗｅｘ １ｘ８（１００〜２００メッシュ、５
００ｍｇ、重炭酸塩型）を加える。１５分攪拌した後、
ガスの発生が止んだら、反応混合物を更に３０分間攪拌
する。次いで、これを濾過し、マトリックスをメタノー
ル／ジクロロメタン（１：１）で洗浄する。濾液を合わ
せて、乾燥する。乾燥した残渣を、直ちにシリカゲルカ
ラム（２５ｇ）上でメタノール含量を増加する（１０、
１５、２０％）ジクロロメタンを用いてクロマトグラフ
ィ処理を行なう。主要画分を蒸発させると、置換した
２′−デオキシ−ツベルシジン誘導体が得られる。
【０１０４】実施例１４ ４−ベンゾイルアミノ−５−（１−プロピニル−３−ト
リフルオロアセタミド）−７−［（２−デオキシ−β−
Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−（４，
４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］−ピリミジン−３′−（トリエチルア
ンモニウムホスホネート） (15) ａ） ７−デアザ−２′−デオキシ−７−（１−プロピ
ニル−３−トリフルオロアセタミド）−アデノシン 実施例１２からの５−ヨード−２′−ツベルシジン(14)
を、実施例１３に記載した条件下で、９時間、Ｎ−プロ
パルギルトリフルオロアセタミドにカップリングする。
下記の量を使用する：５−ヨード−２′−デオキシ−ツ
ベルシジン(14)（２００ｍｇ、０．５３２ミリモル）、
ヨウ化銅（Ｉ）（５．０ｍｇ、０．０２３６ミリモル、
５モル％）、ＤＭＦ（３ｍｌ）、Ｎ−プロパギル−トリ
フルオロアセタミド（４８２ｍｇ、３．２ミリモル、６
当量）、トリエチルアミン（１０８ｍｇ、１．０６ミリ
モル、２当量）、およびテトラキス（トリフェニルホス
フィン）パラジウム（０）（６１．５ｍｇ、０．０５３
２ミリモル、１０モル％）。クロマトグラフィの後、固
形生成物を酢酸エチルから再結晶させる：淡黄色結晶
（７０ｍｇ、０．１７６ミリモル、３３％）。融点１８
７〜１８８℃。ＴＬＣ：Ｒｆ０．３０（ＣＨ２Ｃｌ２／
ＭｅＯＨ，９：１）。ＵＶ（ＭｅＯＨ）２３７（１４，
４００），２７９（１４，２００）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ
６−ＤＭＳＯ）１０．０７（ｓ，１Ｈ，ＮＨＴＦＡ），
８．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２），７．７６（ｓ，１Ｈ，
Ｈ−６），６．７９（ブロードｓ、２Ｈ，ＮＨ２），
６．４９（ｐｔ，１Ｈ，Ｈ−１′，Ｊ＝６．６Ｈｚ），
５．２５（ｄ，１Ｈ，３′−ＯＨ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），
５．０５（ｔ，１Ｈ，５′−ＯＨ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），
４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），４．３２（ｄ，２
Ｈ，ＣＨ２，Ｊ＝４．２Ｈｚ），３．８４（ｍ，１Ｈ，
Ｈ−４′），３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′），２．４
７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′β），２．１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ
−２′α）。13 Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：１５７．４（Ｃ−
４），１５６．４および１５６．１（Ｃ＝Ｏ），１５
２．７（Ｃ−２），１４９．２（Ｃ−７ａ），１２６．
５（Ｃ−６），１１６．８および１１４．６（Ｃ
Ｆ３），１０２．２（Ｃ−４ａ），９４．０（Ｃ−
５），８７．５（Ｃ−４′），８６．７および７６．２
（Ｃ＝Ｃ），８３．２（Ｃ−１′），７０．９（Ｃ−
３′），６１．８（ｃ−５′），３９．６（Ｃ−２′，
ＤＭＳＯと重複），２９．９（ＣＨ２）。 元素分析 Ｃ16Ｈ16Ｆ３Ｎ５Ｏ４に対する計算値： Ｃ４８．１３， Ｈ４．０４， Ｎ１７．５４； 実測値： Ｃ４８．２６， Ｈ４．１３，
Ｎ１７．５８。 ｂ） ４−ベンゾイルアミノ−５−（１−プロピニル−
３−トリフルオロアセタミド）−７−［（２−デオキシ
−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］−ピリミジン ベンゾイルアミノ保護基を、実施例１と同様にして７−
デアザ−２′−デオキシ−７−（１−プロピニル−３−
トリフルオロアセタミド）−アデノシンに挿入する。 ｃ） ４−ベンゾイルアミノ−５−（１−プロピニル−
３−トリフルオロアセタミド）−７−［（２−デオキシ
−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−
（４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル）］−７Ｈ
−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン Ｄｍｔ−ヒドロキシル保護基を、実施例５と同様にして
４−ベンゾイルアミノ−５−（１−プロピニル−３−ト
リフルオロアセタミド）−７−［（２−デオキシ−β−
Ｏ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，
３−ｄ］ピリミジンに挿入する。 ｄ） 標記化合物(15)を、実施例８と同様にして４−ベ
ンゾイルアミノ−５−（１−プロピニル−３−トリフル
オロアセタミド）−７−［（２−デオキシ−β−Ｄ−エ
リスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−（４，４′−ジ
メトキシトリフェニルメチル）］−７Ｈ−ピロロ［２，
３−ｄ］−ピリミジンから製造する。
【０１０５】実施例１５ ４−ベンゾイルアミノ−５−（１−ペンチニルトリフル
オロアセタミド）−７−［（２−デオキシ−β−Ｄ−エ
リスロペントフラノシル）−５′−Ｏ−（４，４′−ジ
メトキシトリフェニルメチル）］−７Ｈ−ピロロ［２，
３−ｄ］−ピリミジン−３′−（トリエチルアンモニウ
ムホスホネート） (16) ａ） ７−デアザ−２′−デオキシ−７−（１−ペンチ
ニルトリフルオロアセタミド）−アデノシン 実施例１２からの５−ヨード−２′−ツベルシジン(14)
を、実施例１３に記載した条件下で、４８時間、５−ト
リフルオロアセタミド−１−ペンチンにカップリングす
る。下記の量を使用する：５−ヨード−２′−デオキシ
−ツベルシジン（２００ｍｇ、０．５３２ミリモル）、
ヨウ化銅（Ｉ）（５．０ｍｇ、０．０２３６ミリモル、
５モル％）、ＤＭＦ（３ｍｌ）、５−トリフルオロアセ
タミド−１−ペンチン（９５３ｍｇ、５．３２ミリモ
ル、１０当量）、トリエチルアミン（１０８ｍｇ、１．
０６ミリモル、２当量）、およびテトラキス（トリフェ
ニルホスフィン）パラジウム（０）（６１．５ｍｇ、
０．０５３２ミリモル、１０モル％）。クロマトグラフ
ィの後、液体から結晶化により薄く黄色味を帯びた油状
残渣を（８４．１ｍｇ、０．１９７ミリモル、３７％）
を得る。融点５１〜５２℃。ＴＬＣ：Ｒｆ０．３５（Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）。ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｍ
ａｘ＝２３９（１４，３００），２８０（１０，９０
０）。 １ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：８．０８（ｓ，１
Ｈ，Ｈ−２），７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６），６．４
６（ｐｔ，１Ｈ，Ｈ−１′，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．３
２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），３．８０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
４′），３．５９〜３．２８（数個のｍ，２Ｈ，Ｈ−
５′，ＣＨ２ −ＣＨ２−ＣＨ２ −Ｎ），２．４７（ｍ，
１Ｈ，Ｈ−２′β），２．１７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′
α），１．７６（ｑｕｉｎｔｅｔ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＨ
２ −ＣＨ２−Ｎ。13 Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：１５７．６（Ｃ−
４），１５６．５および１５６．２（Ｃ＝Ｏ），１５
２．７（Ｃ−２），１４９．２（Ｃ−７ａ），１２５．
７（Ｃ−６），１１８．５および１１４．０（Ｃ
Ｆ３），１０２．３（Ｃ−４ａ），９５．５（Ｃ−
５），９１．６（Ｃ＝Ｃ，１″），８７．６（Ｃ−
４′），８３．２（Ｃ−１′），７４．０（Ｃ＝Ｃ，
２″），７１．０（Ｃ−３′），６２．０（Ｃ−
５′），３９．６および３８．６（Ｃ−２′およびＣＨ
２，ＤＭＳＯと重複），２７．７（ＣＨ２），１６．６
（ＣＨ２）。 元素分析 Ｃ18Ｈ20Ｎ５Ｏ４Ｆ３に対する計算値： Ｃ５０．５９， Ｈ４．７２， Ｎ１６．３９； 実測値： Ｃ５０．６５， Ｈ４．８２，
Ｎ１６．３２。 標記化合物(16)は、実施例１４ｂ）、１４ｃ）および１
４ｄ）と同様にして７−デアザ−２′−デオキシ−７−
（１−ペンチニルトリフルオロアセタミド）アデノシン
から得られる。
【０１０６】実施例１６ ２′−デオキシ−７−デアザ−７−（２−カルボキシエ
テニル）アデノシン(17)実施例１２からの５−ヨード−
２′−ツベルシジン(14)を、実施例１３に記載した条件
下で、６５時間、アクリル酸メチルにカップリングす
る。下記の量を使用する：５−ヨード−２′−デオキシ
−ツベルシジン（２００ｍｇ、０．５３２ミリモル）、
ヨウ化銅（Ｉ）（５．０ｍｇ、０．０２３６ミリモル、
５モル％）、ＤＭＦ（３ｍｌ）、トリエチルアミン（１
０８ｍｇ、１．０６ミリモル、２当量）、アクリル酸メ
チル（６８６ｍｇ、８．０ミリモル、１５当量）、およ
びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム
（０）（６１．５ｍｇ、０．０５３２ミリモル、１０モ
ル％）。クロマトグラフィにより精製すると、淡黄色気
泡生成物が得られ、ジクロロメタンで洗浄すると、固形
物質７１．１ｍｇ（４０％）が得られる。融点１０１〜
１０２℃。ＴＬＣ：Ｒｆ０．４０（ＣＨ２Ｃｌ２／Ｍｅ
ＯＨ，９：１）。ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｍａｘ＝２６８．０
（１３，５００），３２４．８（１１，９００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：８．１１（２ｓ，２
Ｈ，Ｈ−２およびＨ−６），７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−
１″，Ｊ＝１５．６Ｈｚ），６．８６（ｓ，２Ｈ，ＮＨ
２），６．５１（ｐｔ，１Ｈ，Ｈ−１′，Ｊ＝６．６Ｈ
ｚ），６．４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−２″，Ｊ＝１５．６Ｈ
ｚ），５．２６（ｄ，１Ｈ，３′−ＯＨ，Ｊ＝３．６Ｈ
ｚ），５．０４（ｔ，１Ｈ，５′−ＯＨ，Ｊ＝５．１Ｈ
ｚ），４．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），３．８３
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′），３．７０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ
３），３．５５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５′），２．４５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′β），２．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
２′α）。13 Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：１６６．９（Ｃ＝
Ｏ），１５８．０（Ｃ−４），１５２．１（Ｃ−２），
１５１．２（Ｃ−７ａ），１３７．４（ＣＨ−Ｃ＝
Ｏ），１２３．７（Ｃ−６），１１５．５（ＣＨ＝ＣＨ
−Ｃ＝Ｏ），１１１．５（Ｃ−５），１０１．０（Ｃ−
４ａ），８７．６（Ｃ−４′），８３．２（Ｃ−
１′），７０．９（Ｃ−３′），６２．０（Ｃ−
５′），５１．２（ＯＣＨ３），３９．６（Ｃ−２′，
ＤＭＳＯと重複）。 元素分析 Ｃ15Ｈ18Ｎ４Ｏ５に対する計算値： Ｃ５３．８９， Ｈ５．４３， Ｎ１６．７６； 実測値： Ｃ５３．７９， Ｈ５．５６，
Ｎ１６．７４。
【０１０７】実施例１７ ７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−（２−メチルプ
ロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−
４−メトキシ−２−［（ホルミル）アミノ］−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン (18) ７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−４−メトキシ−２−［（ホルミル）アミノ］−７
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１．０ｇ、３．
３ミリモル）［F. Seela, H. Driller, Nucleosides, N
ucleotides, 1989, 8, 1-21]をアセトニトリル（２０ｍ
ｌ）に加えたものを、トリエチルアミン（２３ミリモ
ル）の存在下で、無水イソ酪酸と共に、室温で１５時間
攪拌した。溶媒を留去し、残渣をメタノールと共に再蒸
発させる。次いで、これを塩化メチレン／アセトン（９
５：５）の溶離剤でクロマトグラフィ処理を行ない、主
要画分を単離し、成分化合物をシクロヘキサンから再結
晶させる。無色固形生成物１．２６ｇ（８９％）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ），δ：１．０５〜
１．１４（ｍ，４ＣＨ３），２．６０，２，９０（ｍ，
ＣＨおよび２′−Ｈａ，ｂ），４．０２（ｓ，ＯＣ
Ｈ３），４．１６（ｍ，５′−Ｈ），４．２６（ｍ，
４′−Ｈ），５．３５（ｍ，３′−Ｈ），６．４７
（ｍ，１′−Ｈ），６．５２（ｄ，５−Ｈ），７．３９
（ｄ，６−Ｈ），９．４４（ｄ，ＮＨ），１０．７１
（ｄ，ＨＣＯ）。
【０１０８】実施例１８ ５−ブロモ−７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−
（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペント
フラノシル）−４−メトキシ−２−［（ホルミル）アミ
ノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン (19) 化合物１８（１０．１ミリモル）をジメチルホルムアミ
ドに溶解したものを、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１
０．１ミリモル）と共に、室温で１時間攪拌した。５％
ＮａＨＣＯ３水溶液数滴を溶液に加えて緩衝し、次に、
塩化メチレンを加える。有機相を水と振盪し、分離し、
硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発させる。残渣をシリカ
ゲルカラム上でジクロロメタン／アセトン（９５：５）
の溶離剤でクロマトグラフィを行なうと、２種類の画分
を生じる。移動の遅い主要画分からの蒸発残渣は、固形
生成物として無色生成物(19)（７５％）を生成する。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ），δ：１．０５〜
１．１４（ｍ，４ＣＨ３），２．６０，２，８８（ｍ，
ＣＨおよび２′−Ｈａ，ｂ），４．０４（ｓ，ＯＣ
Ｈ３），４．１６（ｍ，５′−Ｈ），４．２２（ｍ，
４′−Ｈ），５．３４（ｍ，３′−Ｈ），６．４６
（ｍ，１′−Ｈ），７．６０（ｄ，６−Ｈ），９．４３
（ｄ，ＮＨ），１０．８６（ｄ，ＨＣＯ）。 前記の反応からの速やかに移動する画分から、無色固形
生成物が得られ、これは５，６−ジブロモ−７−［２−
デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−（２−メチルプロピオニ
ル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−４−メト
キシ−２−［（ホルミル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジンと特性決定された。 １ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ），δ：０．９９〜
１．１３（ｍ，４ＣＨ３），２．５９，３．５８（ｍ，
ＣＨおよび２′−Ｈａ，ｂ），４．０３（ｓ，ＯＣ
Ｈ３），４．１６（ｍ，５′−Ｈ），４．３０（ｍ，
４′−Ｈ），５．５６（ｍ，３′−Ｈ），６．３９
（ｍ，１′−Ｈ），９．４２（ｄ，ＮＨ），１０．９１
（ｓ，ＨＣＯ）。
【０１０９】実施例１９ ５−クロロ−７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−
（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペント
フラノシル］−４−メトキシ−２−アミノ−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］−ピリミジン (20) Ｎ−クロロスクシンイミドを用いて、化合物(19)と同様
にして物質を製造して処理した。ハロゲン化反応時間は
８時間であった。アセトニトリル／ＤＭＦ（４：１）を
溶媒として用いた。無色生成物（７０％）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ），δ：１．０７〜
１．１３（ｍ，４ＣＨ３），２．５９，２，７４（ｍ，
ＣＨおよび２′−Ｈａ，ｂ），３．９３（ｓ，ＯＣ
Ｈ３），４．１５（ｍ，５′−Ｈ），４．２１（ｍ，
４′−Ｈ），５．２５（ｍ，３′−Ｈ），６．３９
（ｍ，１′−Ｈ），６．４７（５，ＮＨ２），７．２０
（ｄ，６−Ｈ）。 無色固形生成物の形態での化合物５，６−ジクロロ−７
−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−（２−メチル−プ
ロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−
４−メトキシ−２−アミノ−７Ｈ−ピロロ［２，３−
ｄ］ピリミジンを、副生成物として得た。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ），δ：１．０３〜
１．１３（ｍ，４ＣＨ３），２．５８，３．４０（ｍ，
ＣＨおよび２′−Ｈａ，ｂ），３．９３（ｓ，ＯＣ
Ｈ３），４．１６（ｍ，５′−Ｈ），４．３７（ｍ，
４′−Ｈ），５．４４（ｍ，３′−Ｈ），６．３７
（ｍ，１′−Ｈ），６．５８（５，ＮＨ２）。
【０１１０】実施例２０ ２−アミノ−７−（２′−デオキシ−β−エリスロペン
トフラニノシル）−３，７−ジヒドロ−５−ブロモ−４
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(21) 化合物(19)を、既知の方法を用いて反応させる［F. See
la, B. Westermann,U. Bindig, J. Chem. Soc. Perkin
Trans I, 1988, 699]。化合物(19) ５００ｍｇを、２Ｎ ＮａＯＨ２００ｍｌ中で３時間還
流温度で加熱する。冷却した溶液を氷酢酸で中和し、無
機残渣を濾別し、水性相を蒸発させる。水から再結晶さ
せると、(21)の無色結晶を生じる。
【０１１１】実施例２１ ２−アミノ−７−（２′−デオキシ−β−エリスロペン
トフラニノシル）−３，７−ジヒドロ−５−ブロモ−４
−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(22) 実施例２０に記載の方法と同様にして、化合物(20)から
出発して、化合物(22)を製造する。水から再結晶する
と、(22)の無色結晶を生じる。
【０１１２】実施例２２ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラニノシル）−５−トリメチルシリルエチニル−
７Ｈ−４−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン(23) 実施例１３におけるカップリング反応の一般的方法に従
って、トリメチルシリルアセチレンから化合物(20)から
出発して、化合物(23)を製造する。無色固形生成物、収
率５４％。 計算値： Ｃ５５．４７， Ｈ６．４０，
Ｎ１６．１７； 実測値： Ｃ５５．５７， Ｈ６．５３，
Ｎ１６．２０。１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：８．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
２），７．８０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６），６．７６（ブロ
ード、２Ｈ，ＮＨ２），６．４７（「ｔ」，１Ｈ，Ｈ−
１′，Ｊ＝６．７Ｈｚ），５．２３（ｄ，１Ｈ，３′−
ＯＨ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），５．０７（ｔ，１Ｈ，５′−
ＯＨ），４．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），３，８７
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′），３．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
５′），２．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′），２．１７
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′），０．７３（ｓ，９Ｈ，Ｍ
ｅ）。
【０１１３】実施例２３ ４−アミノ−７−［２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル］−５−エチニル−７Ｈ−ピロロ［２，
３−ｄ］ピリミジン (24) 化合物(23)２００ｍｇをＭｅＯＨ２０ｍｌに溶解させ
る。Ｋ２ＣＯ３８ｍｇを加えて１時間攪拌すると、加水
分解を生じる。溶液をロータリーエバポレーターで蒸発
させた後、残渣をシリカゲル上で塩化メチレン／ＭｅＯ
Ｈ（８：１）の溶離剤でクロマトグラフィ処理を行な
う。ＭｅＯＨから再結晶させると、無色結晶生成物を生
じる（７３％）。 計算値： Ｃ５６．９３， Ｈ５．１５，
Ｎ２０．４３； 実測値： Ｃ５６．７７， Ｎ５．７１，
Ｎ２０．４２。１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：８．１３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
２），７．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６），６．６５（ブロ
ード、２Ｈ，ＮＨ２），６．４９（ｔ，１Ｈ，Ｈ−
１′），５．２５（ｍ，１Ｈ，３′−ＯＨ），５．０５
（ｍ，１Ｈ，５′−ＯＨ），４．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
３′），４．２６（ｓ，１Ｈ，エチン），３，８４
（ｓ，１Ｈ，Ｈ−４′），３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
５′），２．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′），２．２１
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′）。
【０１１４】実施例２４ ４−アミノ−７−［２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル］−５−ヘキシニル−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン (25) 架橋反応( 実施例１３）の一般的方法に従って、１−ヘ
キシンを用いて、化合物(25)を製造する。ＭｅＯＨから
再結晶すると、無色結晶生成物を生じる（収率４８
％）。 計算値： Ｃ６１．８０， Ｈ６．７１，
Ｎ１９．９６； 実測値： Ｃ６１．６８， Ｎ６．６０，
Ｎ１６．９０。１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：８．３１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
２），７．６５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６），６．６５（ブロ
ード、２Ｈ，ＮＨ２），６．４９（「ｔ」，１Ｈ，Ｈ−
１′），５．２４（ｍ，１Ｈ，３′−ＯＨ），５．０５
（ｍ，１Ｈ，５′−ＯＨ），４．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
３′），３，８４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−４′），３．５６
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′），２．４８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２
Ｃ＝），２．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′），２．１８
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′），１．５４（ｍ，２Ｈ，Ｃ
Ｈ２），１．４３（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２），＝０．９３
（ｍ，２Ｈ，ＣＨ３）。
【０１１５】実施例２５ ２−アミノ−６−クロロ−７−［２−デオキシ−３，５
−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル］−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン Ｎ−クロロスクシンイミド３６．６ｍｇ（０．２７ミリ
モル）を、２−アミノ−７−（２−デオキシ−３，５−
ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン５０ｍｇをジクロロメタン３ｍｌに溶解したもの
に加え、混合物を室温で１２時間攪拌する。溶媒をスト
リッピングして、残渣をシリカゲル上でＣＨ２Ｃｌ２／
アセトン（９：１）でクロマトグラフィ処理を行なう。
移動速度の遅い主要画分から、無色気泡生成物３０ｍｇ
（５４％）が得られる。１Ｈ−ＮＭＲ Ｄ６（ＤＭＳ
Ｏ）：１．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），２．０９（ｓ，
３Ｈ，ＣＨ３），２．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′ｂ），
３．９３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．１８（ｍ，２
Ｈ，Ｈ−５′），４．４３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），５．
４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），６．３８（ｍ，１Ｈ，Ｈ
−１′），６．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−５）。13Ｃ−ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ）：２０．４８（ＣＨ３），２０．７６
（ＣＨ３），３３．７８（Ｃ−２′），５２．９９（Ｏ
ＣＨ３），６３．４７（Ｃ−５′），７４．３１（Ｃ−
３′），８０．９１（Ｃ−４′），８２．９５（Ｃ−
１′），９６．４５（Ｃ−４ａ），９８．６５（Ｃ−
５），１１８．１２（Ｃ−６），１５３．６９（Ｃ−７
ａ），１５９．２５（Ｃ−２），１６２．１６（Ｃ−
４），１６９．９８（Ｃ＝Ｏ），１７０．０９（Ｃ＝
Ｏ）。
【０１１６】実施例２６ ２−アミノ−５，６−ジクロロ−７−［２−デオキシ−
３，５−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−エリスロペントフ
ラノシル］−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−
ｄ］ピリミジン 移動速度の速い画分は、無色気泡生成物を生じる。６ｍ
ｇ（９．９％）。１ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：１．９８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ
３），２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），２．２４（ｍ，
１Ｈ，Ｈ−２′ｂ），２．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２′
ａ），３．９４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），４．１４
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′），４．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
４），５．４０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′），６．３９
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１′），６．５９（ｓ，２Ｈ，Ｎ
Ｈ２）。13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：２０．４７（ＣＨ３），２
０．７５（ＣＨ３），３４．０６（Ｃ−２′），５３．
３４（ＯＣＨ３），６３．４１（Ｃ−５′），７４．０
９（Ｃ−３′），８１．０１（Ｃ−４′），８３．２６
（Ｃ−１′），９４．５９（Ｃ−４ａ），１０２．０８
（Ｃ−５），１１５．１６（Ｃ−６），１５１．９４
（Ｃ−７ａ），１５９．５９（Ｃ−２），１６２．０８
（Ｃ−４），１６９．９７（Ｃ＝Ｏ），１７０．０７
（Ｃ＝Ｏ）。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ（ε）：２９０ｎｍ（８５
００），２６４ｎｍ（１３１００），２２６ｎｍ（２２
７００）。
【０１１７】実施例２７ ７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミノ
−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
(26) ５−ヨード−２′−デオキシツベルシジン(14)（４００
ｍｇ，１．０６ミリモル）をメタノール（２０ｍｌ）に
溶解したものを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチ
ルアセチル（２．０ｇ、１６．８ミリモル）と共に４０
℃で２時間攪拌する。溶媒を留去した後、残渣をフラッ
シュクロマトグラフィ（ＦＣ）（カラム：２０×５ｃ
ｍ，ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）によって精製す
る。主要画分は無色気泡生成物（３８９ｍｇ，８５％）
を生じる。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ、シリカゲ
ル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）：Ｒｆ０．４
６。ＵＶ（ＭｅＯＨ：ｍａｘ＝２２９ｎｍ（１７４０
０），２７７ｎｍ（１０４００），３２３ｎｍ（１９０
００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．１８（ｍ，１
Ｈ，Ｈα−２′）；２．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈβ−２′，
ＤＭＳＯと重複）；３．１８，３．２２（２ｓ，６Ｈ，
Ｎ（ＣＨ３）２）；３．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′）；
３．８１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′）；４．３２（ｍ，１
Ｈ，Ｈ−３′）；５．００（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１
Ｈ，５′−ＯＨ）；５．２３（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１
Ｈ，３′−ＯＨ）；６．５２（「ｔ」，Ｊ＝７．０Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ−１′）；７．７０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
６）；８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）；８．８２（ｓ，
１Ｈ，Ｎ＝ＣＨ）。 元素分析 Ｃ14Ｈ18Ｎ５Ｏ３Ｉに対する計算値： Ｃ３８．９９， Ｈ４．２１， Ｎ１６．２４； 実測値： Ｃ３９．０９， Ｈ４．２７，
Ｎ１６．１０。
【０１１８】実施例２８ ７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミノ
−５−ヘキシニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミ
ジン (27) ５−ヘキシニル−２′−デオキシツベルシジン(25)（４
００ｍｇ、１．２１ミリモル）をメタノール（２０ｍ
ｌ）に溶解したものを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ジメチルアセタール（２．０ｇ、１６．８ミリモル）と
共に、４０℃で２時間攪拌する。溶媒を留去した後、残
渣をフラッシュクロマトグラフィ（ＦＣ）（カラム：２
０×５ｃｍ，ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）によっ
て精製する。主要画分は無色気泡生成物（３７３ｍｇ，
８０％）を生じる。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ、シ
リカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）：Ｒ
ｆ０．５１。ＵＶ（ＭｅＯＨ：ｍａｘ＝２７８（１２１
００），３２１（１０４００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝０．９１（ｔ，
Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ３），１．４５（ｓｅｘｔ
ｅｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＨ３）；１．
５３（ｑｕｉｎｔｅｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２
ＣＨ２−ＣＨ３）；２．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈα−
２′）；２．４７（ｍ，３Ｈ，Ｈβ−２′，Ｃ＝Ｃ−Ｃ
Ｈ２，ＤＭＳＯと重複）；３．１６，３．１８（２ｓ，
６Ｈ，Ｎ（ＣＨ３）２）；３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
５′）；３．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′）；４．３５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′）；５．０２（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ，１Ｈ，５′−ＯＨ）；５．２６（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈ
ｚ，１Ｈ，３′−ＯＨ）；６．５０（「ｔ」，Ｊ＝７．
０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１′）；７．６４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
６）；８．３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−２）；８．７６（ｓ，
１Ｈ，Ｎ＝ＣＨ）。
【０１１９】実施例２９ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリフェニルメチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノ
シル］−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミ
ノ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン (28) ４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル クロリド
（２５６ｍｇ、０．７６ミリモル）を、化合物(26)（３
００ｍｇ、０．７０ミリモル）を乾燥ピリジン（３ｍ
ｌ）に溶解したものに、アルゴン雰囲気下にて加える。
混合物を５０℃で２時間攪拌した後、５％ＮａＨＣＯ３
水溶液（１５ｍｌ）を加える。水相をＣＨ２Ｃｌ２（５
０ｍｌずつ３回）で抽出する。合わせた有機相をＮａ２
ＳＯ４上で乾燥した後、蒸発させる。残渣をフラッシュ
クロマトグラフィ（ＦＣ）（カラム：２０×５ｃｍ、
Ｂ）処理に付すと、無色気泡生成物（３６０ｍｇ、７０
％）を得る。ＴＬＣ（シリカゲル、Ｂ）：Ｒｆ０．６
０。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｍａｘ＝２３６（３８４００），２７
５（１４２００），３２２（１８９００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：２．２４（ｍ，１
Ｈ，Ｈα−２′）；２．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈβ−２′，
ＤＭＳＯと重複）；３．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′，Ｎ
ａＣＨ３と重複）；３．１８，３．２２（２ｓ，６Ｈ，
Ｎ（ＣＨ３）２）；３．７２（ｓ，６Ｈ，２ＯＣ
Ｈ３）；３．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′）；４．３７
（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′）；５．３０（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈ
ｚ，１Ｈ，３′−ＯＨ）；６．５４（「ｔ」，Ｊ＝６．
６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１′）；６．８４（ｍ，４Ｈ，芳香
族Ｈ）；７．２２〜７．３８（ｍ，９Ｈ，芳香族Ｈ）；
７．５６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）；８．３１（ｓ，１Ｈ，
Ｈ−２）；８．８２（ｓ，１Ｈ，Ｎ＝ＣＨ）。 元素分析 Ｃ35Ｈ36Ｎ５Ｏ５Ｉに対する計算値： Ｃ５７．３０， Ｈ４．９５， Ｎ９．５５； 実測値： Ｃ５７．４８， Ｈ５．１２，
Ｎ９．４４。
【０１２０】実施例３０ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリフェニルメチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノ
シル］−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミ
ノ−５−ヘキシニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン (29) ４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル クロリド
（２９０ｍｇ、０．８６ミリモル）を、化合物(27)（３
００ｍｇ、０．７８ミリモル）を乾燥ピリジン（３ｍ
ｌ）に溶解したものに、アルゴン雰囲気下にて加える。
混合物を５０℃で２時間攪拌した後、５％ＮａＨＣＯ３
水溶液（１５ｍｌ）を加える。水相をＣＨ２Ｃｌ２（５
０ｍｌずつ３回）で抽出する。合わせた有機相をＮａ２
ＳＯ４上で乾燥した後、蒸発させる。フラッシュクロマ
トグラフィ（ＦＣ）（カラム：２０×５ｃｍ、Ｂ）処理
を行なうと、無色気泡生成物（３６０ｍｇ、６２％）を
得る。ＴＬＣ（シリカゲル、Ｂ）：Ｒｆ０．６０。 ＵＶ（ＭｅＯＨ）ｍａｘ＝２７６（１７５００），３２
０（１２９００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝０．９１（ｔ，
Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ３）；１．４５（ｓｅｘｔ
ｅｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２−ＣＨ３）；１．
５３（ｑｕｉｎｔｅｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２
−ＣＨ２−ＣＨ３）；２．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈα−
２′）；２．４７（ｍ，１Ｈ，Ｈβ−２′，Ｃ＝Ｃ−Ｃ
Ｈ２、ＤＭＳＯと重複）；３．１６，３．１８（２ｓ，
６Ｈ，Ｎ（ＣＨ３）２）；３．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ−
５′，Ｎ（ＣＨ３）２と重複）；３．７１（ｓ，６Ｈ，
２ＯＣＨ３）；３．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４′）；４．
３４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′）；５．２８（ｄ，Ｊ＝３．
９Ｈｚ，１Ｈ，３′−ＯＨ）；６．５３（「ｔ」，Ｊ＝
７．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１′）；６．８２（ｍ，４Ｈ，
芳香族Ｈ）；７．２０〜７．３６（ｍ，９Ｈ，芳香族
Ｈ）；７．５６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−６）；８．３０（ｓ，
１Ｈ，Ｈ−２）；８．９７（ｓ，１Ｈ，Ｎ＝ＣＨ）。
【０１２１】実施例３１ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリフェニルメチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノ
シル］−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミ
ノ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン−３′−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロ
ピルホスホルアミダイト (30) クロロ（２−シアノエトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルアミノホスフィン（１９４ｍｇ、０．８２ミリモル）
を、乾燥したヌクレオシド(28)（３００ｍｇ、０．４１
ミリモル）および無水のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチル
アミン（２１２ｍｇ、１．６４ミリモル）を乾燥ＴＨＦ
（２ｍｌ）に攪拌溶解したものに、アルゴン雰囲気下に
て加える。混合物を３０分間攪拌した後、濾別する。濾
液に酢酸エチル（３０ｍｌ）を加え、全混合物を氷冷し
た１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍｌ）および水
１０ｍｌで２回抽出する。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上
で乾燥した後、蒸発させる。フラッシュクロマトグラフ
ィ（ＦＣ）（カラム：１０×３ｃｍ、石油エーテル／ア
セトン）処理を行なうと、無色気泡生成物（２２２ｍ
ｇ、６０％）を得る。ＴＬＣ（シリカゲル、石油エーテ
ル／アセトン、１：１）：Ｒｆ０．３８，０．４５。31 Ｐ−ＮＭＲ ＣＤＣｌ３：１４９．０，１４９．２。
【０１２２】実施例３２ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリフェニルメチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノ
シル］−４−［（ジメチルアミノ）−メチリデン］アミ
ノ−５−ヘキシニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジン−３′−（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソ
プロピルホスホルアミダイト (31) クロロ（２−シアノエトキシ）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ
ルアミノホスフィン（１９４ｍｇ、０．８２ミリモル）
を、乾燥したヌクレオシド(29)（３００ｍｇ、０．４４
ミリモル）および無水のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチル
アミン（２１２ｍｇ、１．６４ミリモル）を乾燥ＴＨＦ
（２ｍｌ）に攪拌溶解したものに、アルゴン雰囲気下に
て加える。混合物を３０分間攪拌した後、濾別する。濾
液に酢酸メチル（３０ｍｌ）を加え、全混合物を氷冷し
た１０％ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍｌ）および水
１０ｍｌで２回抽出する。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上
で乾燥した後、蒸発させる。フラッシュクロマトグラフ
ィ（ＦＣ）（カラム：１０×３ｃｍ、石油エーテル／ア
セトン）処理を行なうと、黄色気泡生成物（２２９ｍ
ｇ、６０％）を得る。Ｒｆ０．４５，０．５３。31 Ｐ−ＮＭＲ ＣＤＣｌ３：１４９．０，１４９．３。
【０１２３】実施例３３ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−メチル−チオ−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン (32) ２′，３′，５′−トリ−Ｏ−アセチル−７−デアザア
デノシンから出発して、この化合物を酢酸中で塩化チオ
シアンと反応させることによって、対応する５−チオシ
アン酸誘導体を形成する。２−メルカプトエタノールで
還元した後、メチル化を行なうと、保護されていない糖
残基を有する５−メチルチオ誘導体を生成する（Watana
be et al., Nucleosides & Nucleotides, 1(2), 191-20
3, 1982)。３′，５′−ＯＨ基を選択的にシリル化した
後、対応するチオノエステルを介してBarton脱酸素化す
ることによって、メチルチオ化合物(32)が得られる。
【０１２４】実施例３４ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−モルホリノメチル−７Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｄ］ピリミジン (33) (33)は、マンニッヒ反応を用いて製造することができ
る。５−モルホリノメチル誘導体(Watanabe et al., Nu
cleosides & Nucleotides, 1(2), 191-203, 1982）は、
ツベルシジンをパラホルムアルデヒドおよびモルホリン
と共にＤＭＦ中で加熱することによって得られる。５−
モルホリノ誘導体(33)は、実施例３３に記載のシリル化
および脱酸素化によって得られる。
【０１２５】実施例３５ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−トリフルオロメチル−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (34) 化合物34は、Nairらの方法に従って化合物(14)をＣＦ３
Ｃｕと反応させることによって得られる（J. Am. Chem.
Soc., 111, 8502-8504, 1989)。
【０１２６】実施例３６ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−ニトロ−７Ｈ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン (35)および４−アミノ−７−（２−
デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−６−
ニトロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (36) ２′，３′，５′−トリ−Ｏ−アセチル−７−デアザア
デニンを、塩化メチレン中でＨＮＯ３／Ｈ２ＳＯ４で処
理することによって、５−および６−置換ニトロ誘導体
からなる混合物が得られる。５−ニトロ誘導体(Watanab
e et al., Nucleosides & Nucleotides, 1(2), 191-20
3, 1982) は、主生成物として生じる。脱アシル化、
３′，５′−ＯＨシリル化および２′−脱酸素化によ
り、化合物(35)および(36)が得られる。
【０１２７】実施例３７ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−６−シアノ−７Ｈ−ピロロ［２，３
−ｄ］ピリミジン (37) 化合物(32)の酸化により、５−メチルスルホン誘導体が
得られる。ＤＭＦ中でＮａＣＮで処理すると、６−シア
ノ誘導体(37)、トヨカマイシンの位置異性体(Watanabe
et al., Nucleosides & Nucleotides, 1(2), 191-203,
1982) を生じる。シリル化および脱酸素化は、実施例３
３に従って行なう。
【０１２８】実施例３８ ４−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−カルボキシ−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン (38) 化合物(38)は、化合物(37)を加水分解することによって
得られる。
【０１２９】実施例３９ ４−アミノ−５，６−ジブロモ−７−（２−デオキシ−
β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン (66) ２′−デオキシツベルシジン（１．０ｇ、４．０ミリモ
ル）およびＮａＯＡｃ（０．７８ｇ、８．０ミリモル）
を乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解したものに、ＮＢＳ
（１．４２ｇ、８．０ミリモル、乾燥ＤＭＦ４ｍｌに溶
解したもの）を室温で加える。赤色溶液を１０分間攪拌
した後、蒸発させる。フラッシュクロマトグラフィ（カ
ラム：２０×５ｃｍ，ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：
１）、速やかに移動する方の画分を蒸発させた後、イソ
プロパノールから再結晶することにより、標記化合物(3
8)が無色結晶生成物（４００ｍｇ、２５％）として得ら
れる。移動速度の遅い画分を単離すると、５−ブロモ−
２′−デオキシツベルシジン（１３０ｍｇ、１０％）が
得られる。方法Ｂ：ＮＢＳ（１．４２ｇ、８．０ミリモ
ル、乾燥ＤＭＦ４ｍｌに溶解したもの）を５−ブロモ−
２′−デオキシ−ツベルシジン（１．３ｇ、４．０ミリ
モル）およびＮａＯＡｃ（０．７８５ｇ、８．０ミリモ
ル）を乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解したものに加え
る。精製は、方法Ａを参照して行う。収率：４９０ｍ
ｇ、２１の３０％。融点：１８１℃。 ＴＬＣ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：
１）：Ｒｆ０．４０。１ Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ＝２．１２（ｍ，
Ｈα−２′）；２．５０（ｍ，Ｈβ−２′）；３．５１
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５′）；３．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−
４′）；４．４４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３′）；５．２０
（ｂｒ，２Ｈ，５′−ＯＨ，３′−ＯＨ）；６．４２
（「ｔ」，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１′）；６．９
３（ｂｒ，２Ｈ，ＮＨ２）；８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−
２）。
【０１３０】実施例４０ ４−アミノ−５，６−ジクロロ−７−（２−デオキシ−
β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジン (39) 標記化合物(39)は、５−クロロ−ヌクレオシド(1) をＮ
−クロロスクシンイミドで塩素化することによって得ら
れる。
【０１３１】実施例４１ ４−アミノ−５−ヨード−６−クロロ−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (40) 標記化合物(40)は、５−ヨード−ヌクレオシド(14)をＮ
−クロロスクシンイミドで塩素化することによって得ら
れる。
【０１３２】実施例４２ ４−アミノ−５−ヨード−６−ブロモ−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (41) 標記化合物(41)は、５−ヨード−ヌクレオシド(14)をＮ
−ブロモスクシンイミドで臭素化することによって得ら
れる。
【０１３３】実施例４３ ４−アミノ−５−ブロモ−６−ヨード−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (42) 標記化合物(42)は、５−ブロモ−ヌクレオシド(2) をＮ
−ヨードスクシンイミドでヨウ素化することによって得
られる。
【０１３４】実施例４４ ４−アミノ−５−クロロ−６−ブロモ−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (43) 標記化合物(43)は、５−クロロ−ヌクレオシド(1) をＮ
−ブロモスクシンイミドで臭素化することによって得ら
れる。
【０１３５】実施例４５ ４−アミノ−５−クロロ−６−ヨード−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−７Ｈ−ピ
ロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (44) 標記化合物(44)は、５−クロロ−ヌクレオシド(2) をＮ
−ヨードスクシンイミドでヨウ素化することによって得
られる。
【０１３６】実施例４６ ５−クロロ−７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−
（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペント
フラノシル］−２−［（ホルミル）アミノ］−４−メト
キシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (45) Ｎ−クロロスクシンイミド（８７ｍｇ、０．６７ミリモ
ル）を、化合物(18)（３００ｍｇ、０．６７ミリモル、
ＤＭＦ５ｍｌ中）の溶液に加える。これを（室温で２０
時間）攪拌した後、溶液をＣＨ２Ｃｌ２／５％ＮａＨＣ
Ｏ３水溶液（５０ｍｌ、９：１）に加える。有機層を分
離し、水で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し
て、蒸発させる。蒸発残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、こ
の溶液をシリカゲル（カラム：５×２０ｃｍ、ＣＨ２Ｃ
ｌ２／アセトン，９５：５）上でクロマトグラフィ処理
を行なう。主要画分を濃縮し、ｎ−ヘキサンを残渣に加
える。沈澱した無色結晶生成物（２３０ｍｇ、７１％）
を単離する。 融点：１１９〜１２０℃。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．０９
（ｄ，Ｊ＝７．０，ＣＨ３），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．
９，ＣＨ３），２．４５，２．６０，２．６３，２．８
９（４ｍ，ＣＨおよびＨα，β−Ｃ（２′）），４．０
６（ｓ，ＯＣＨ３），４．１８（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′），
４．２８（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），５．３５（ｍ，Ｈ−
Ｃ（３′）），６．４７（ｍ，Ｈ−Ｃ（１′）），７．
５８（ｓ，Ｈ−Ｃ（６）），９．４５（ｄ，Ｊ＝８．
９，ＮＨ），１０．８４（ｄ，Ｊ＝９．６，ＨＣＯ）。 元素分析 Ｃ21Ｈ27ＣｌＮ４Ｏ７（４８２．９）に対する計算値： Ｃ５２．２３， Ｈ５．６４， Ｎ１１．６０； 実測値： Ｃ５２．５１， Ｈ５．６９，
Ｎ１１．６５。
【０１３７】実施例４７ ７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−（２−メチルプ
ロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−
２−［（ホルミル）アミノ］−５−ヨード−４−メトキ
シ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (46) 化合物(46)を、化合物(18)（５００ｍｇ、１．１１ミリ
モル）およびＮ−ヨードスクシンイミド（２６４ｍｇ、
１．１６ミリモル）から出発して、化合物(45)に記載の
方法で製造する。反応時間は２３時間である。シクロヘ
キサンから無色結晶生成物（５９０ｍｇ、９２％）が得
られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．９（ｄ，
Ｊ＝７．０，ＣＨ３），１．１５（ｄ，Ｊ＝７．０，Ｃ
Ｈ３），２．４６，２．６０，２．８９，（３ｍ，ＣＨ
およびＨα，β−Ｃ（２′）），４．０６（ｓ，ＯＣＨ
３），４．１７（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′），４．２７（ｍ，
Ｈ−Ｃ（４′）），５．３５（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′）），
６．４６（ｍ，Ｈ−Ｃ（１′）），７．６２（ｓ，Ｈ−
Ｃ（６）），９．５５（ｄ，Ｊ＝９．７，ＮＨ），１
０．８１（ｄ，Ｊ＝９．９，ＨＣＯ）。元素分析 Ｃ21Ｈ27ＩＮ４Ｏ７（５７４．４）に対する計算値： Ｃ４３．９１， Ｈ４．７４， Ｎ９．７５； 実測値： Ｃ４３．９８， Ｈ４．７５，
Ｎ９．８２。
【０１３８】実施例４８ ６−クロロ−７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−
（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペント
フラノシル］−２−［（ホルミル）アミノ］−５−ヨー
ド−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミ
ジン (47) 標記化合物(47)は、５−ヨード−ヌクレオシド(46)をＮ
−クロロスクシンイミドで塩素化することによって得ら
れる。
【０１３９】実施例４９ ５−ブロモ−６−クロロ−７−［２−デオキシ−３，５
−ジ−Ｏ−（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリ
スロペントフラノシル］−２−［（ホルミル）アミノ］
−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン (48) 標記化合物(48)は、５−ブロモ−ヌクレオシド(2) をＮ
−クロロスクシンイミドで塩素化することによって得ら
れる。
【０１４０】実施例５０ ７−［２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−（２−メチルプ
ロピオニル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−
５，６−ジクロロ−２−［（ホルミル）アミノ］−４−
メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン (4
9) Ｎ−クロロスクシンイミド（１１７ｍｇ、０．９ミリモ
ル）を、化合物(45)の溶液（２００ｍｇ、０．４ミリモ
ル、ＤＭＦ５ｍｌ中）に加える。（室温で１６時間）攪
拌を行なった後、溶液をＣＨ２Ｃｌ２／５％ＮａＨＣＯ
３水溶液（５０ｍｌ、９：１）に加える。有機層を分離
し、水で洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し
て、蒸発させる。蒸発残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、こ
の溶液をシリカゲル（カラム：５×２０ｃｍ、ＣＨ２Ｃ
ｌ２／アセトン，９５：５）上でクロマトグラフィ処理
を行なう。主要画分を分離する。溶媒を留去し、シクロ
ヘキサンから結晶化させると、無色結晶生成物（１４９
ｍｇ、７２％）が得られる。 融点：１２７〜１２８℃。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．０１（ｄ
ｄ，ＣＨ３），１．１４（ｄ，Ｊ＝７．０，ＣＨ３），
２．４４，２．４７，２．６０，３．５３（４ｍ，ＣＨ
およびＨα，β−Ｃ（２′）），４．０５（ｓ，ＯＣＨ
３），４．１７（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′），４．３０（ｍ，
Ｈ−Ｃ（４′）），５．５６（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′）），
６．４１（ｍ，Ｈ−Ｃ（１′）），９．４４（ｄ，Ｊ＝
９．１，ＮＨ），１０．９４（ｄ，Ｊ＝９．８，ＨＣ
Ｏ）。 元素分析 Ｃ21Ｈ26Ｃｌ２Ｎ４Ｏ７（５１７．４）に対する計算
値：Ｃ４８．７５， Ｈ５．０７， Ｎ１０．８３； 実測値： Ｃ４９．０４， Ｈ５．０９，
Ｎ１０．６６。
【０１４１】実施例５１ ５−クロロ−６−ヨード−７−［２−デオキシ−３，５
−ジ−Ｏ−（２−メチルプロピオニル）−β−Ｄ−エリ
スロペントフラノシル］−２−［（ホルミル）アミノ］
−４−メトキシ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジ
ン (50) 標記化合物(50)は、５−クロロ−ヌクレオシド(45)をＮ
−ヨードスクシンイミドでヨウ素化することによって得
られる。
【０１４２】実施例５２ ２−アミノ−５，６−ジクロロ−７−（２−デオキシ−
β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−３，７−ジヒド
ロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン
(51) 化合物(49)（２００ｍｇ、０．４ミリモル）を２Ｎ Ｎ
ａＯＨ水溶液（８ｍｌ）に懸濁したものを、還流下にて
３時間沸騰させる。溶液を濃ＡｃＯＨで中和した後、反
応生成物を濾過して、水で洗浄して、乾燥する。ＣＨ３
ＣＮから結晶させると、無色結晶生成物（１２８ｍｇ、
９６％）が得られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．２２
（ｍ，Ｈα−Ｃ（２′）），２．９２（ｍ，Ｈβ−Ｃ
（２′）），３．５２（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′）），３．７
２（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．３３（ｍ，Ｈ−Ｃ
（３′）），４．８１（ｔ，５′−ＯＨ），５．２２
（ｄ，３′−ＯＨ），６．３５（ｄｄ，Ｈ−Ｃ
（１′）），６．４６（ｂｒ．，ＮＨ２），１０．７５
（ｓ，ＮＨ）。
【０１４３】実施例５３ ２−アミノ−５−ヨード−６−クロロ−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン (52) 標記化合物(52)は、化合物(47)から出発して、実施例５
２に記載されたのと同様にして製造する。
【０１４４】実施例５４ ２−アミノ−５−ブロモ−６−クロロ−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン (53) 標記化合物(53)は、化合物(48)から出発して、実施例５
２に記載されたのと同様にして製造する。
【０１４５】実施例５５ ２−アミノ−５−クロロ−６−ヨード−７−（２−デオ
キシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル）−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン (54) 標記化合物(54)は、化合物(50)から出発して、実施例５
２に記載されたのと同様にして製造する。
【０１４６】実施例５６ ２−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−メチル−３，７−ジヒドロ−４
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(55) 標記化合物(55)は、Winkelerらの報告した方法によって
製造される（LiebigsAnn. Chem., 1984, 708)。
【０１４７】実施例５７ ２−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−６−メチル−３，７−ジヒドロ−４
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(56) 標記化合物(56)は、実施例５５と同様にして製造され
る。
【０１４８】実施例５８ ２−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５，６−ジメチル−３，７−ジヒド
ロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン
(57) 標記化合物(57)は、実施例５５と同様にして製造され
る。
【０１４９】実施例５９ ２−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−ヨード−３，７−ジヒドロ−４
Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(58) 標記化合物(58)は、化合物(46)（２００ｍｇ、０．３５
ミリモル）から出発して、実施例５１と同様にして製造
される。ＭｅＣＮから、無色結晶生成物（１２６ｍｇ、
９２％）が得られる。融点：２１８〜２２０℃。ＵＶ
（ＭｅＯＨ）：λｍａｘ２６６（１２，０００），２８
５（ｓｈ，８４００）。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝２．０８
（ｍ，Ｈα−Ｃ（２′）），２．３０（ｍ，Ｈβ−Ｃ
（２′）），３．４８（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′）），３．７
４（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．２６（ｍ，Ｈ−Ｃ
（３′）），４．８９（ｔ，５′−ＯＨ），５．１８
（ｄ，３′−ＯＨ），６．２５（ｄｄ，Ｈ−Ｃ
（１′）），６．３４（ｂｒ．，ＮＨ２），７．０９
（ｓ，Ｈ−Ｃ（６）），１０．５１（ｂｒ．，ＮＨ）。 Ｃ11Ｈ13ＩＮ４Ｏ４（３９２．２）に対する計算値： Ｃ３３．６９， Ｈ３．３４， Ｎ１４．２９； 実測値： Ｃ３３．７８， Ｈ３．４２，
Ｎ１４．２９。
【０１５０】実施例６０ ７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−５−ヨード−２−イソブチリルアミノ−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン(59) ピリジンを留去することによって３回乾燥した後、化合
物(58)（３００ｍｇ、０．７６ミリモル、乾燥ピリジン
４ｍｌに溶解）をトリメチルクロロシラン０．４８ｍｌ
（３．７８ミリモル）で処理する。溶液を１５分間攪拌
する。無水イソ酪酸０．６２ｍｌ（３．７８ミリモル）
を加えた後、溶液を室温で３時間放置する。反応混合物
を氷浴で冷却した後、水１ｍｌを加える。５分後に、２
５％強度のアンモニア水溶液１ｍｌを加え、混合物を１
５分間攪拌する。次に、溶液をほぼ乾固する。水から結
晶させると、無色の結晶生成物（３１２ｍｇ、８９％）
が得られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１０（２
ＣＨ３），２．１２（ｍ，Ｈβ−Ｃ（２′）），２．
３７（ｍ，Ｈα−Ｃ（２′）），３．５０（ｍ，Ｈ−Ｃ
（５′）），３．７８（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．３
０（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′）），４．８９（ｔ，５′−Ｏ
Ｈ），５．２０（ｄ，３′−ＯＨ），６．３５（ｄｄ，
Ｈ−Ｃ（Ｉ′）），７．４３（ｓ，Ｈ−Ｃ（６）），１
１．４９，１１．７６（２ｓ，２ＮＨ）。 Ｃ15Ｈ19ＩＮ４Ｏ５（４６２．２）に対する計算値： Ｃ３８．９８， Ｈ４．１４， Ｎ１２．１２； 実測値： Ｃ３９．１１， Ｈ４．３７，
Ｎ１１．９６。
【０１５１】実施例６１ ７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペントフラノシ
ル）−５−メチル−２−イソブチリルアミノ−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン(60) ピリジンを留去することによって３回乾燥した後、化合
物(55)（５００ｍｇ、１．７８ミリモル、乾燥ピリジン
９ｍｌに溶解）をトリメチルクロロシラン１．２ｍｌ
（９ミリモル）で処理する。溶液を１５分間攪拌する。
無水イソ酪酸１．２ｍｌ（９ミリモル）を加えた後、溶
液を室温で３時間放置する。反応混合物を氷浴で冷却し
た後、水１．８ｍｌを加える。５分後に、２５％強度の
アンモニア水溶液１．８ｍｌを加え、反応を１５分間継
続する。次に、溶液をほぼ乾固させ、水１０ｍｌに吸収
させると、無色の結晶生成物（５５５ｍｇ、８９％）が
極めて速やかに生成する。薄層クロマトグラフィ（シリ
カゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９：１）Ｒｆ＝０．
７。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１０
（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２ＣＨ３−Ｃ），２．１１，
２．２８（２ｍ，２Ｈ−Ｃ（２′）），２．２３（ｓ，
ＣＨ３），２．７３（ｑ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ），
３．４８（ｍ，２Ｈ−Ｃ（５′）），３．７５（ｍ，Ｈ
−Ｃ（４′）），４．２９（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′）），
４．８５（ｍ，ＯＨ−Ｃ（５′）），５．２０（ｍ，Ｏ
Ｈ−Ｃ（３′）），６．３６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ
−Ｃ（１′）），６．９４（ｓ，Ｈ−Ｃ（６）），１
１．４２，１１．６７（２ｓ，２ＮＨ）。 元素分析 Ｃ16Ｈ22Ｎ４Ｏ５（３５０．３７）に対する計算値： Ｃ５４．８４， Ｈ６．３３， Ｎ１５．９９； 実測値： Ｃ５４．７６， Ｈ６．４６，
Ｎ１６．０１。
【０１５２】実施例６２ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−５
−ヨード−２−イソブチリルアミノ−３，７−ジヒドロ
−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(6
1) 無水ピリジンを留去することによって化合物(59)を繰り
返し乾燥する。化合物(59)４００ｍｇ（０．８７ミリモ
ル）をこの方法で乾燥して、乾燥ピリジン５ｍｌに溶解
する。４，４′−ジメトキシトリチル クロリド（３２
８ｍｇ、０．９５ミリモル）を室温で加えた後、反応混
合物を一晩攪拌する。次に、ＭｅＯＨ（３ｍｌ）および
５％ＮａＨＣＯ３水溶液を加える。水相をＣＨ２Ｃｌ２
で３回抽出する。有機相を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸
発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィ（カラム：
１０×５ｃｍ、溶媒、ＣＨ２Ｃｌ２／アセトン，９：
１）処理を行なう。主要画分から材料を単離すると、無
色非晶質の標記化合物(61)（６００ｍｇ、９１％）が得
られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１３
（ｍ，４ ＣＨ３），２．２４（ｍ，Ｈ−Ｃ
（２′）），２．７７（ｍ，ＣＨ），３．１２（ｍ，Ｈ
−Ｃ（５′）），３．７５（ｓ，２ ＣＨ３Ｏ），３．
９３（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．３５（ｍ，Ｈ−Ｃ
（３′）），５．３０（ｄ，３′−ＯＨ），６．３９
（ｄｄ，Ｈ−Ｃ（１′）），６．８６〜７．３９（ｍ，
芳香族Ｈ＋Ｈ−Ｃ（６）），１１．５４，１１．８２
（２ｓ，２ＮＨ）。 元素分析 Ｃ36Ｈ37Ｎ４Ｏ７（７６４．６）に対する計算値： Ｃ５６．５５， Ｈ４．８８， Ｎ７．３３； 実測値： Ｃ５６．４２， Ｈ４．８２，
Ｎ７．３０。
【０１５３】実施例６３ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−５
−メチル−２−イソブチリルアミノ−３，７−ジヒドロ
−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン(6
2) （ＭｅＯ）２ＴｒＣｌ（４４８ｍｇ、１．３ミリモル）
を化合物(60)（３９０ｍｇ、１．１ミリモル、乾燥ピリ
ジンから蒸発させることによって乾燥し、乾燥したピリ
ジン８ｍｌに懸濁させたもの）に加え、反応混合物を室
温で４時間攪拌する。ＭｅＯＨ（５ｍｌ）を加えた後、
反応混合物を５％ＮａＨＣＯ３水溶液（８０ｍｌ）で処
理する。ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出した後、
有機相を合わせて、乾燥し（無水Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発
させる。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、この溶液をフ
ラッシュクロマトグラフィ（シリカゲルカラム：４×８
ｃｍ、溶媒、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９５：５、微量
のＥｔ３Ｎを含有）処理を行なう。主要画分を単離し、
標記化合物(62)が無色粉末生成物（６５４ｍｇ、９０
％）として得られる。薄層クロマトグラフィ（シリカゲ
ル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ，９５：５）：Ｒｆ＝０．
３。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１０
（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２ＣＨ３−Ｃ），２．１６
（ｓ，ＣＨ３）；２．２０，２．４０（２ｍ，２Ｈ−Ｃ
（２′）），２．７４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，ＣＨ）；
３．１２（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′）），３．７２（ｓ，２Ｃ
Ｈ３Ｏ）；３．８９（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．３４
（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′））；５．３０（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈ
ｚ，ＯＨ−Ｃ（３′））；６．３８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈ
ｚ，Ｈ−Ｃ（１′）），６．７〜７．４（ｍ，芳香族Ｈ
およびＨＣ（６）），１１．４６，１１．７１（２ｓ，
２ＮＨ）。 元素分析 Ｃ37Ｈ40Ｎ４Ｏ５（６５２．７２）に対する計算値： Ｃ６８．０８， Ｈ６．１８， Ｎ８．５８； 実測値： Ｃ６８．２５， Ｈ６．２９，
Ｎ８．５０。
【０１５４】実施例６４ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−５
−ヨード−２−イソブチリルアミノ−３，７−ジヒドロ
−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン−
３′−トリエチルアンモニウムホスホネート(63) １，２，４−トリアゾール（４８０ｍｇ、６．８ミリモ
ル）を、ＰＣｌ３（１８０μｌ、２ミリモル）およびＮ
−メチルモルホリン（２．２ｍｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１
２ｍｌ）に溶解したものに加える。溶液を３０分間攪拌
した後、０℃まで徐々に冷却する。化合物(61)３０６ｍ
ｇ（０．４ミリモル）（ＣＨ２Ｃｌ２１２ｍｌに溶解し
たもの）を徐々に加え、混合物を０℃で３０分間攪拌す
る。その後、これを１Ｍ （Ｅｔ３ＮＨ）ＨＣＯ３（Ｔ
ＢＣ、ｐＨ８．０、２５ｍｌ）に加え、全混合物を振盪
して、相分離を行なう。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３×３０
ｍｌ）で抽出する。合わせた有機抽出物を乾燥し（Ｎａ
２ＳＯ４）、蒸発させる。０．１Ｍ ＴＢＣで抽出した
後（８×２０ｍｌ）、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、蒸発させ
た後、クロマトグラフィ（カラム：１０×５ｃｍ、溶媒
ＣＨ２Ｃｌ２／Ｅｔ３Ｎ，９８：２，次いでＣＨ２Ｃｌ
２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ（８８：１０：２））処理を行
なうと、標記化合物(63)（３２０ｍｇ、８６％）が無色
気泡生成物として得られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１５
（ｍ，５ ＣＨ３），２．３６〜２．３７（ｍ，Ｈ−Ｃ
（２′）），２．７６（ｍ，ＣＨ），２．９８（ｍ，３
ＣＨ２），３．２０（ｍ，Ｈ−Ｃ（５′）），３．７
５（ｓ，２ ＭｅＯ），４．１１（ｍ，Ｈ−Ｃ
（４′）），４．８０（ｍ，Ｈ−Ｃ（３′）），６．４
４（ｄｄ，Ｈ−Ｃ（１′）），６．０９（ｓ，ｐＨ），
６．８７〜７．３９（ｍ，芳香族Ｈ＋Ｈ−Ｃ（６）），
１１．７９（ｂｒ．，２ＮＨ）。31 Ｐ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：１．０５（１Ｊ
（Ｐ，Ｈ）＝５８７，３Ｊ（Ｐ，Ｈ−Ｃ（３′））＝
８．３Ｈｚ。
【０１５５】実施例６５ ７−［２−デオキシ−５−Ｏ−（４，４′−ジメトキシ
トリチル）−β−Ｄ−エリスロペントフラノシル］−５
−メチル−２−イソブチリルアミノ−３，７−ジヒドロ
−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−オン、
３′−トリエチルアンモニウムホスホネート(64) １，２，４−トリアゾール（５２３ｍｇ、７．３ミリモ
ル）を、ＰＣｌ３（２００μｌ、２．２６ミリモル）お
よびＮ−メチルモルホリン（２．５ｍｌ）をＣＨ２Ｃｌ
２（１４ｍｌ）に溶解したものに加える。溶液を３０分
間攪拌した後、０℃まで徐々に冷却する。化合物(62)３
００ｍｇ（０．４６ミリモル）（ＣＨ２Ｃｌ２１４ｍｌ
に溶解したもの）を徐々に加え、混合物を０℃で３０分
間攪拌する。その後、これを１Ｍ （Ｅｔ３ＮＨ）ＨＣ
Ｏ３（３０ｍｌ）に加え、全混合物を振盪して、相分離
を行なう。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３×４０ｍｌ）で抽出
する。合わせた有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、
濃縮する。濃縮残渣を、フラッシュクロマトグラフィ
（シリカゲル：３×７ｃｍカラム、ＣＨ２Ｃｌ２／Ｍｅ
ＯＨ／Ｅｔ３Ｎ，８８：１０：２）処理を行なう。主要
画分を集めて蒸発させ、残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、
この溶液を０．１Ｍ（Ｅｔ３ＮＨ）ＨＣＯ３（５×１５
ｍｌ）で洗浄する。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥さ
せ、蒸発させる。標記化合物(64)が、無色気泡生成物
（２７０ｍｇ、７２％）として得られる。薄層クロマト
グラフィ（シリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｅｔ
３Ｎ，８８：１０：２）：Ｒｆ＝０．５。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝１．１６
（ｍ，５ ＣＨ３），２．１９（ｓ，ＣＨ３），２．３
０（ｍ，Ｈ−Ｃ（２′）），２．７４（ｍ，Ｊ＝６．３
Ｈｚ，ＣＨ），３．００（ｍ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３ＣＨ
２），３．１３，３．１８（２ｍ，２Ｈ−Ｃ
（５′）），３．７５（ｓ，２ＣＨ３Ｏ），４．０１
（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．７７（ｍ，Ｈ−Ｃ
（３′）），６．４３（ｄ，Ｊ（Ｐ，Ｈ）＝３４６Ｈ
ｚ，ＰＨ），６．４５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−Ｃ
（１′）），６．８〜７．４（ｍ，芳香族ＨおよびＨ−
Ｃ（６）），１１．６７，１１．６９（２ｓ，２Ｎ
Ｈ）。31 Ｐ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：０．９４（１Ｊ
（Ｐ，Ｈ）＝３５４Ｈｚ，３Ｊ（Ｐ，Ｈ−Ｃ（３′））
＝８．１Ｈｚ。 元素分析元素分析 Ｃ43Ｈ56Ｎ５Ｏ９Ｐ（８１７．８９）に対する計算値： Ｃ６３．１４， Ｈ６．９０， Ｎ８．５６； 実測値： Ｃ６３．０６， Ｈ６．８８，
Ｎ８．５１。
【０１５６】実施例６６ ２−アミノ−７−（２−デオキシ−β−Ｄ−エリスロペ
ントフラノシル）−５−（１−ヘキシニル）−３，７−
ジヒドロ−４Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４
−オン (65) ヨウ化銅（３８．１ｍｇ、０．２ミリモル）、トリエチ
ルアミン（２．８ｍｌ、２ミリモル）テトラキス（トリ
フェニルホスフィン）パラジウム（０）（４０．５ｍ
ｇ、０．１ミリモル）および１−ヘキシン（４９２ｍ
ｇ、６ミリモル）を、化合物(58)のアルゴンを流した溶
液（３９０ｍｇ、１ミリモル、乾燥ＤＭＦ５ｍｌ中）に
加え、溶液を室温で２４時間攪拌する。次に、これを蒸
発させ、残渣をシリカゲルカラム（５×２５ｃｍ）上に
置く。５％、１０％、および２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃ
ｌ２で段階的溶出により、標記化合物(65)が得られる。
ＭｅＣＮから再結晶を行なうと、無色固形生成物（１２
０ｍｇ、３５％）が得られる。１ Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ６］ＤＭＳＯ）：δ＝０．９４
（ｍ，ＣＨ３），１．４９，２．３８（ｍ，ＣＨ２），
２．０（ｍ，Ｈα−Ｃ（２′））、２．３５（ｍ，Ｈβ
−Ｃ（２′）），３．５０（ｍ，Ｈ２−Ｃ（５′）），
３．７６（ｍ，Ｈ−Ｃ（４′）），４．（ｍ，Ｈ−Ｃ
（３′）），４．８８（ｔ，５′−ＯＨ），５．１８
（ｄ，Ｊ＝３．５，３′−ＯＨ），６．２７（ｍ，Ｈ−
Ｃ（１′）＋ＮＨ２），７．１３（ｓ，Ｈ−Ｃ
（６）），１０．３４（ｂｒ．，ＮＨ）。 ＭＳ：ｍ／ｅ ３４６（Ｍ＋）。
【０１５７】実施例６７ ホスホネート法によるオリゴデオキシリボヌクレオチド
の固相合成 オリゴデオキシリボヌクレオチド合成は、自動３８０Ｂ
型ＤＮＡ合成装置(Applied Biosystems,バイターシュタ
ット) で、ホスホネート法によってＤＮＡフラグメント
を３′−５′方向に合成することによって固相（ＣＰ
Ｇ：（商品名）Controlled Pore Glass)上で、１マイク
ロモルの規模で行なった。反応サイクル（脱トリチル
化、カップリング、キャッピングおよび酸化）は、ホス
ホネート化学のために開発されたプログラムに従って行
った［H. Koester, K. Kulikowsky, T. Liese, W. Heik
ens, V. Kohli, Tetrahadron, 1981, 37, 363 ］。塩基
で保護されたオリゴヌクレオチドであって、その５′−
ヒドロキシル基もＤｍｔで保護されているものを、２５
％アンモニア水溶液を用いて３０分以内に支持体から開
裂した。複素環の保護基は、同じ媒質中で６０℃で４８
時間以内に除去した。（５′−ＯＨ保護基の早すぎる除
去を回避するため）トリエチルアミン１滴を加えて、試
料をSpeed-Vac （商品名）濃縮装置で約２００μｌまで
濃縮した。この状態で、これらの試料は−２５℃で数か
月間保存することができる。
【０１５８】実施例６８ ホスホルアミダイト法によるオリゴデオキシリボヌクレ
オチドの固相合成 オリゴデオキシリボヌクレオチド合成は、自動３８０Ｂ
型ＤＮＡ合成装置(Applied Biosystems,バイターシュタ
ット) で、最初のヌクレオシド単位がその３′末端を介
して結合するＣＰＧ（商品名）(Controlled Pore Glas
s) またはＦｒａｃｔｏｓｉｌ（商品名）を用いて、固
相ホスホルアミダイト法によって１マイクロモルの規模
で行なった。下記の段階を行なった。 １． 無水アセトニトリルでの洗浄、 ２． ジクロロメタン中３％トリクロロ酢酸による処
理、 ３． 無水アセトニトリルでの洗浄、 ４． 無水アセトニトリル０．３ｍｌ中での５′−Ｏ−
ジメトキシトリチルヌクレオシド−３′−β−シアノエ
チル＝ホスファイト−ジイソプロピルアミダイト１０マ
イクロモルおよびテトラゾール５０マイクロモルとの縮
合、 ５． アセトニトリルでの洗浄、 ６． ４０％ルチジンおよび１０％ジメチルアミノピリ
ジンを含むＴＨＦ中での２０％無水酢酸によるキャッピ
ング、 ７． アセトニトリルでの洗浄、 ８． ヨウ素（１．３ｇ、ＴＨＦ／水／ピリジン，７
０：２０：５＝ｖ：ｖ：ｖ）による酸化。 下記のＤＮＡ反応サイクルと呼ばれる段階１〜８を繰り
返し、それぞれの場合に段階４で用いられる配列に相当
する５′−Ｏ−ジメトキシトリチル（ヌクレオチド塩
基）−３′−β−シアノエチルホスファイト−ジイソプ
ロピルアミダイトを用いて、合成される配列によってオ
リゴヌクレオチドを構築した。合成が完了したならば、
実施例６７に記載したのと同様にして処理を行なう。
【０１５９】実施例６９ トリチル−保護されたおよび脱保護されたオリゴヌクレ
オチドのＨＰＬＣ精製 第一の精製段階では、ＤＭＴで保護したオリゴマーをＲ
Ｐ−１８シリカゲル上でＨＰＬＣ（溶離剤系Ｉ、下記を
参照）によって精製し、蒸発乾固し、乾燥メタノールで
数回蒸発を繰り返した後、氷冷しながら、８０％強度の
酢酸に１０分間暴露することによって脱トリチル化し
た。その後、０℃でトリチルエチルアミン（１〜２ｍ
ｌ）を滴加して、酸を中和し、ほぼ濃縮乾固した後、無
水メタノールで更に２回蒸発を繰り返した。残渣を、２
回蒸留した水５００μｌに吸収させた後、完全に脱保護
したオリゴヌクレオチドを、ＲＰ−１８シリカゲル（溶
離剤系ＩＩ、下記を参照）上でＨＰＬＣによって再度精
製した。合わせた主要画分を蒸発させ、残渣を２回蒸留
した水５００μｌに溶解し、この溶液をショートＲＰ−
１８カラム（溶離剤系ＩＩＩ、下記を参照）を通して脱
塩した。Speed-Vac 濃縮装置で凍結乾燥した後、オリゴ
ヌクレオチドを二回蒸留した水１００μｌに吸収させ、
この溶液を−２５℃で保存した。
【０１６０】下記のＨＰＬＣ溶離剤を用いた。 Ａ： ０．１Ｍ酢酸トリチルエチルアンモニウム、ｐＨ
７．０／５％強度アセトニトリル、 Ｂ： ２回蒸留水、 Ｃ： アセトニトリル、 Ｄ： メタノール／水、３：２。 上記溶離剤からなる下記のグラディエント系を用いた。 Ｉ： ３分、１５％Ｃ／Ａ；７分、１５〜４０％Ｃ／
Ａ；５分、４０％Ｃ／Ａ、５分、４０〜１５％Ｃ／Ａ。 ＩＩ： ２０分、０〜２０％Ｃ／Ａ、５分、２０％Ｃ／
Ａ。 ＩＩＩ：１００％Ａ。 ＩＶ： ３０分、Ｂ；１０分、Ｄ。 Ｖ： １２分、１００％Ａ；８分、０〜４０％Ｃ／
Ａ；５分、４０〜０％Ｃ／Ａ。
【０１６１】オリゴマーは、下記の保持時間で観察され
た。 合成したオリゴヌクレオチドのＨＰＬＣ保持時間 オリゴマー（５′→３′方向） 保持時間（分） トリチルあり トリチルなし ｄ（Ａ12） １１．６ １５．５ ｄ（Ｔ12） １１．５ １３．７ ｄ（ｃ７Ａ11Ａ） １２．３ １５．３ ｄ（Ｂｒ７ｃ７Ａ11Ａ） １２．７ １９．１ ｄ（Ｍｅ７ｃ７Ａ11Ａ） １２．２ １８．１ ｄ（Ａ−Ｔ）６ １３．５ ２０．１ ｄ（ｃ７Ａ−Ｔ）６ １３．６ ２０．５ ｄ（Ｃｌ７ｃ７Ａ−Ｔ）６ １２．８ １９．９ ｄ（Ｂｒ７ｃ７Ａ−Ｔ）６ １２．３ １７．８ｄ（Ｍｅ７ｃ７Ａ−Ｔ）６ １２．６ １７．９
【０１６２】実施例７０ 酵素加水分解によるオリゴデオキシリボヌクレオチドの
特性決定 オリゴヌクレオチド（それぞれの場合に０．５Ａ260 単
位）を０．１Ｍトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝８．３、
２００μｌ）に溶解し、ヘビ毒ホスホジエステラーゼ
（３μｇ）と共に３７℃で４５分間インキュベーション
する。次に、アルカリホスファターゼ（３μｇ）を加
え、温度を３７℃に更に３０分間保持する。精製するヌ
クレオシド混合物を、逆相ＨＰＬＣ（溶離剤系Ｖ）を用
いてＵＶ分光光度法によって分析する。相当するオリゴ
ヌクレオチドのヌクレオシド組成をピーク面積および２
６０ｎｍにおけるヌクレオシドの消光係数（ｄＡ：１５
４００，ｄＣ：７３００，ｄＧ：１１７００，ｄＴ：８
８００，Ｂｒｄｃ７Ａ：５３００，Ｍｅｄｃ７Ａ：４９
００，Ｃｌｄｃ７Ａ：６３００）に基づいて定量するこ
とができる。
【０１６３】実施例７１ オリゴヌクレオチドの酵素加水分解による開裂の淡色性
遷移の測定 オリゴヌクレオチドの０．２Ａ260 単位を、０．１Ｍト
リス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ＝８．３、２００μｌ）中で
ヘビ毒ホスホジエステラーゼで加水分解する。開裂の前
および後の２６０ｎｍにおけるＵＶ吸収から、下記の式
に従って、酵素吸収を考慮して、％での淡色性遷移を計
算することができる。 Ｈ酵素＝［（εモノマー−εポリマー）×
（εモノマー）-1］×１００％
【０１６４】実施例７２ Ｔｍ値のＵＶ分光光度法およびＣＤ分光光度法による測
定および熱力学的データーの計算 オリゴヌクレオチドのＴｍ値は、Ｃａｒｙ１型ＵＶ−可
視分光光度計（Varian、メルボルン、オーストラリア）
を用いて測定した。温度は、毎分０．５℃または１．０
℃ずつ直線的に変化させた。溶融温度を検討するため、
６０ｍＭカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５、１
Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍＭ ＭｇＣｌ２）１ｍｌ中で
０．２および０．８Ａ260 単位のオリゴマー濃度を用い
た。非自己相補性オリゴヌクレオチドについての実験で
は、一本鎖濃度は０．２〜０．６ＯＤであった。％で現
した溶融染色性遷移は、下記の式に従って、溶融前およ
び後の吸収の差から得られる。 Ｈmelt＝［（Ａｅ−Ａｔ）Ａｅ -1］×１００
【０１６５】溶融曲線は、下記の式に従って二状態モデ
ル（「重なり／非重なり(stacked/untacked)」）に基づ
いたプログラムを用いて分析した。 ｌｎＫ＝ｌｎ［（ＥＳ−Ｅ）／（ＥＵ−Ｅ）］＝Ｓ／Ｒ
−Ｈ／ＲＴ （式中、Ｅ＝相当する波長における吸収、Ｓ＝重なり、
およびＵ＝非重なりである。）温度依存性のＣＤスペク
トルを、温度制御のされた石英製セルを有するJasco 60
0 分光旋光計を用いて、２００〜３５０ｎｍの波長範囲
でプロットした。温度は、６０ｍＭ カコジル酸ナトリ
ウム緩衝液および０．１Ｍ、１および４ＭＮａＣｌ中３
〜１５μＭの濃度で５〜８０℃の範囲で５〜１０℃の間
隔で増加させた。
【０１６６】実施例７３ オリゴヌクレオチドａのＴｍ値オリゴマー Ｔｍ［℃］ ｄ（Ａ12）×ｄ（Ｔ12） ４４ｂ ｄ（Ｃ７Ａ11Ａ）×ｄ（Ｔ12） ３０ｂ ｄ（Ｂｒ７Ｃ７Ａ11Ａ）×ｄ（Ｔ12） ５３ｂ ｄ（Ｍｅ７Ｃ７Ａ11Ａ）×ｄ（Ｔ12） ４８ｂ ［ｄ（Ａ−Ｔ）６］２ ３３ｃ ［ｄ（ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ３６ｃ ［ｄ（Ｂｒ７ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ５５ｃ ［ｄ（Ｃｌ７ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ５９ｃ ［ｄ（Ｍｅ７ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ４１ｃ ［ｄ（ヘキシニル７ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ５０ｄ ［ｄ（Ｉ７ｃ７Ａ−Ｔ）６］２ ６０ｄ ［ｄ（Ｇ−Ｃ）４］２ ６０ｄ ［ｄ（ｃ７Ｇ−Ｃ）４］２ ５３ｄ ［ｄ（Ｍｅ７ｃ７Ｇ−Ｃ）４］２ ５８ｄ ［ｄ（Ｉ７ ｃ７ Ｇ−Ｃ）４ ］２ ７０ｄ ａ ： ６０ｍＭカコジル酸ナトリウム、１００ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ２、ｐＨ７．１を含む１Ｍ ＮａＣ中で測定。ｂ ： オリゴマー濃度：７．５μＭ一本鎖。ｃ ： オリゴマー濃度：１５μＭ一本鎖。ｄ ： オリゴマー濃度：１０μＭ一本鎖。
【０１６７】実施例７４ ＥｃｏＲＩエンドデオキシリボヌクレアーゼによる自己
相補性オリゴヌクレオチドのホスホジエステル加水分解 適当なオリゴヌクレオチドの０．５Ａ260 単位を、（５
０μＭトリス−ＨＣｌ緩衝液、ｐＨ７．５、１００ｍＭ
ＮａＣｌ、１０ｍＭ 塩化マグネシウム、および１ｍ
Ｍジチオエリスロースからなる）緩衝液１００μｌに溶
解させ、ＥｃｏＲＩエンドデオキシリボヌクレアーゼ
（高濃度、５μｌ＝２５０単位）をこの溶液に加える。
次に、混合物を３７℃でインキュベーションし、それぞ
れの場合に１０μｌの容積の試料を３０分間隔で採取
し、逆相ＨＰＬＣ（溶離剤系ＩＩ）によって分析した。
【０１６８】実施例７５ ヌクレアーゼの安定性の試験 検討を行なうオリゴヌクレオチド１０ナノモルを、ＲＰ
ＭＩ媒質中２０％強度のウシ胎児血清４５０μｌおよび
２回蒸留水に溶解し、この溶液を３℃でインキュベーシ
ョンする。次に、ゲル電気泳動の１０μｌ試料またはＨ
ＰＬＣ用の２０μｌ試料を、直後、および１、２、４、
７および２４時間後に採取し、ホルムアミド５μｌまた
は１０μｌを加え、９５℃で５分間加熱することによっ
て、反応を停止する。ゲル電気泳動のために、試料を１
５％ポリアクリルアミドゲル（２％ＢＩＳ）上に置き、
これを約３０００ボルト時で展開する。バンドを銀染色
によって可視化する。ＨＰＬＣ分析のため、試料をGen-
Pak fax ＨＰＬＣカラム（Waters/Millipore) に注入
し、５〜５０％緩衝液Ａ／Ｂ（緩衝液Ａ：アセトニトリ
ル／水、１：４（ｖ：ｖ）ｐＨ６．８中１０ｍＭリン酸
二水素ナトリウム、０．１Ｍ ＮａＣｌ；緩衝液Ｂ：
１．５Ｍ ＮａＣｌを含むこと以外はＡと同じ）を用い
て１ｍｌ／分でクロマトグラフィを行なう。
【０１６９】実施例７６ 抗ウイルス活性の試験 ヒトに対する病原性を有する各種ヘルペスウイルスに対
する試験物質の抗ウイルス活性を、細胞培養試験系で検
討する。実験のため、血清を含むダルベッコのＭＥＭ
（５％ウシ胎児血清、ＦＣＳ）中サル腎細胞（Vero、２
×１０５／ｍｌ）を９６穴マイクロタイタープレートに
播種し、５％ＣＯ２中で３７℃で２４時間インキュベー
ションする。次いで、血清を含む培地を吸引除去し、細
胞を無細胞ダルベッコＭＥＭ（−ＦＣＳ）で２回洗浄す
る。試験物質は、予めＨ２Ｏで希釈して６００μＭの濃
度として、−１８℃で保存する。ダルベッコの最小必須
培地（ＭＥＭ）でのそれ以上の希釈段階を行なって試験
する。個々の試験物質の希釈物をそれぞれ１００μｌ
を、無血清ダルベッコＭＥＭ（−ＦＣＳ）１００μｌと
共に洗浄した細胞に加える。５％ＣＯ２において、３７
℃で３時間インキュベーションした後、細胞を、セルロ
ーン(cell lawn) が３日以内に完全に破壊される濃度の
単純ヘルペス１型（ＡＴＣＣ ＶＲ７３３、ＨＳＶ−１
Ｆ株）または単純ヘルペス２型（ＡＴＣＣ ＶＲ７３
４、ＨＳＶ−２ Ｇ株）に感染させる。ＨＳＶ−１の場
合には、感染強度はウェル当たり５００プラーク形成単
位（ＰＦＵ）であり、ＨＳＶ−２の場合には、３５０Ｐ
ＦＵ／ウェルである。このとき、実験混合物は、１００
Ｕ／ｍｌのペニシリンＧおよび１００ｍｇ／ｍｌのスト
レプトマイシンを補充したＭＥＭ中に８０μＭ〜０．０
４μＭの濃度で試験物質を含んでいる。総ての実験はコ
ントロール以外は２回ずつ測定を行ない、コントロール
はプレート当たり８回行なった。実験混合物を、５％Ｃ
Ｏ２中で３７℃で１７時間インキュベーションする。試
験物質の細胞毒性を、２０時間の総インキュベーション
時間の後に細胞培養物の顕微鏡評価によって測定する。
特定の実験条件下で顕微鏡的に認められる細胞の損傷を
全く引き起こさない最高の製剤濃度を、最大許容投与量
（ＭＴＤ）と呼ぶ。次に、ＦＣＳを４％の最終濃度に加
え、プレートを５％ＣＯ２において３７℃で更に５５時
間インキュベーションする。未処理感染コントロール
は、完全に展開した細胞障害作用（ＣＰＥ）を示す。細
胞培養物を顕微鏡的に評価した後、フィンターのウイル
ス染色法（１９６６年）を用いて中性レッドで染色す
る。試験物質の抗ウイルス活性は、ウイルスの細胞障害
作用から細胞の３０〜６０％を保護するのに要する最小
阻止濃度（ＭＩＣ）として定義される。
【０１７０】本明細書においては以下の略号が用いられ
る。 略号 Ｂｚ ベンゾイル ｂｒ． ブロードな ＣＤ 円偏光二色性 ｄ 二重線 ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィ ｄＧ ２′−デオキシグアノシン ｄＡ ２′−デオキシアデノシン ｄＣ ２′−デオキシシチジン ｄＴ ２′−デオキシチミジン （Ｄ６）ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド、重水素化、６倍 ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＤＮＡ デオキシリボ核酸 Ｄｍｔ ４，４′−ジメトキシトリチル （４，４′−ジメトキ シトリフェニルメチル） ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸 ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル Ｅｔ３Ｎ トリエチルアミン ＦＣ フラッシュクロマトグラフィ Ｇ 自由エンタルピー ｈ 時 Ｈ 二本鎖形成のエンタルピー ＨＰＬＣ 高圧液体クロマトグラフィ Ｈｙｐ． 淡色性遷移 ｉｂｕ イソブチリル Ｊ カップリング定数 Ｋｍ ミカエリス−メンテン定数 ＮＭＲ 核磁気共鳴 ＰＡＧＥ ポリアクリルアミドゲル電気泳動 ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応 ｐｐｍ 百万分率 ２−ＰｒＯＨ イソプロパノール Ｒｆ 溶離剤の先端に対するＴＬＣにおける保持 ＲＮＡ リボ核酸 ＲＰ 逆相 ｓ 一重線 Ｓ 二本鎖形成のエントロピー Ｍ．ｐ． 融点 ＳＶＰＤ 蛇毒ホスホジエステラーゼ ｔ 三重線 ＴＢＣ 重炭酸トリエチルアンモニウム Ｔｍ オリゴマー融解温度 ＵＶ 紫外 Ｖｍａｘ 最大反応速度 ｃ７Ａ ７−デアザアデノシン Ｂｒ７ｃ７Ａ ７−ブロモ−７−デアザアデノシン Ｃｌ７ｃ７Ａ ７−クロロ−７−デアザアデノシン Ｉ７ｃ７Ａ ７−ヨード−７−デアザアデノシン Ｍｅ７ｃ７Ａ ７−メチル−７−デアザアデノシン ｃ７Ｇ ７−デアザグアノシン Ｉ７ｃ７Ｇ ７−ヨード−７−デアザグアノシン Ｍｅ７ｃ７ ７−メチル−７−デアザグアノシン λ 波長 ε 分子吸光係数

Claims (19)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記式Ｉを有するオリゴヌクレオチド、お
    よび生理学的に許容可能なその塩。 【化１】 ［式中、 Ｂは、それぞれ独立して、ヌクレオチド化学で普通に用
    いられる塩基であり、少なくとも１個のＢは下記式IIの
    塩基であり、 【化２】 （式中、 Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に記載の基であって、Ｓ
    Ｈ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−
    アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＣＯ−Ｒ
    （ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ
    （ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
    （ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、また
    は式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
    ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
    １〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、ＯＨ、Ｓ
    Ｈ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
    （ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
    を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
    またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
    ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
    ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
    の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、
    または１５． ３．、４．または５．に定義されている
    基であって、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくは
    フッ素によって置換されているものであり、 Ｒ（ａ）は、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ
    ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔで
    あり、Ｔは、適宜もう一つのリンカーを介して、細胞内
    取り込みに好都合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプロ
    ーブの標識に利用できる、またはオリゴヌクレオチド類
    似体が標的核酸にハイブリダイゼーションするときに
    は、結合、架橋または開裂と同時に後者の核酸を攻撃す
    る１個以上の基に結合しているアルキルカルボキシル基
    またはアルキルアミノ基であり、 Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキ
    シ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）であり、Ｒ（ｃ）およ
    びＲ（ｄ）は、それぞれ独立して、Ｈであるか、または
    −ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）によ
    って置換されていないまたは置換されている（Ｃ１〜Ｃ
    ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｅ）およびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまた
    は（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−ＣＯＯＨであ
    り、但し、Ｒ15およびＲ16は、それぞれ同時に水素、Ｎ
    Ｏ２、ＮＨ２、シアノまたはＳｉＨ３となることはでき
    ず、 ＥおよびＦは、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨまたはＮＨ
    ２であり、 Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ２〜Ｃ18−ア
    ルケニル、Ｃ２〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ２〜Ｃ18−アル
    キルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、
    Ｃ３〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、（Ｃ６〜Ｃ14）−
    アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、ヌクレオチド化
    学で普通に用いられる保護基、または下記式IIIaの基で
    あり、 Ｒ1aは、水素、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、Ｃ２〜Ｃ18−ア
    ルケニル、Ｃ２〜Ｃ18−アルキニル、Ｃ２〜Ｃ18−アル
    キルカルボニル、Ｃ３〜Ｃ19−アルケニルカルボニル、
    Ｃ３〜Ｃ19−アルキニルカルボニル、（Ｃ６〜Ｃ14）−
    アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、または下記式II
    Ibの基であり、 Ｒ２は、水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキ
    シ、Ｃ１〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特にアリルオキ
    シ、ハロゲン、アジドまたはＮＨ２であり、 ａは、オキシ、スルファンジイルまたはメチレンであ
    り、 ｎは、≧１の整数であり、 Ｗは、オキソ、チオキソまたはセレンオキソであり、 Ｖは、オキシ、スルファンジイルまたはイミノであり、 Ｙは、オキシ、スルファンジイル、イミノまたはメチレ
    ンであり、 Ｙ′はオキシ、スルファンジイル、イミノ、（ＣＨ２）
    ｍまたはＶ（ＣＨ２）ｍ′であり、但し、ｍは１〜１８
    の整数であり、 Ｘはヒドロキシルまたはメルカプトであり、 Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、ＳｅＨ、Ｃ１〜Ｃ18
    −アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−ア
    リール、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−
    アルキル、ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４、または下記式IVの基
    であり、 （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｒ５ (IV) 但し、 Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−アリー
    ル、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アル
    キル、２−（ＣＨ２）ｃ−［ＮＨ（ＣＨ２）ｃ］ｄ−Ｎ
    Ｒ６Ｒ６であり、式中、ｃは２〜６の整数であり、ｄは
    ０〜６の整数であり、Ｒ６は、それぞれ独立して、水
    素、またはＣ１〜Ｃ６−アルキル、またはＣ１〜Ｃ４ア
    ルコキシ−Ｃ１〜Ｃ６−アルキルであり、 Ｒ４は、Ｃ１〜Ｃ18−アルキル、Ｃ６〜Ｃ20−アリー
    ル、（Ｃ６〜Ｃ10）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アル
    キルであるか、またはＮＲ３Ｒ４の場合には、Ｒ３およ
    びそれらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、
    ＳおよびＮの群からのヘテロ原子を更に含むことができ
    る５〜６員の複素環となり、 ｐは、１〜１００の整数であり、 ｑは、０〜２２の整数であり、 Ｒ５は、水素であるか、または例えばヒドロキシル、ア
    ミノ、Ｃ１〜Ｃ18−アルキルアミノ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ
    Ｈ２、ＣＯＯ（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルまたはハロゲン
    などの官能基であり、 ＺおよびＺ′は、それぞれ独立して、ヒドロキシル、メ
    ルカプト、ＳｅＨ、Ｃ１〜Ｃ22−アルコキシ、−Ｏ−
    （ＣＨ２）ｂ−ＮＲ６Ｒ７（但し、ｂは１〜６の整数で
    あり、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６−アルキルであるか、またはＲ
    ６およびＲ７がそれらが結合している窒素原子と一緒に
    なって、３〜６員環を形成する）、Ｃ１〜Ｃ18−アルキ
    ル、Ｃ６〜Ｃ20−アリール、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリール
    −（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ14）−アリー
    ル−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルコキシ（但し、アリールはヘ
    テロアリールでもあり、かつアリールは場合によって
    は、カルボキシル、アミノ、ニトロ、Ｃ１〜Ｃ４−アル
    キルアミノ、Ｃ１〜Ｃ６−アルコキシ、ヒドロキシル、
    ハロゲン、およびシアノの群からの１、２または３個の
    同一であるかまたは異なる基によって置換されてい
    る）、Ｃ１〜Ｃ18アルキルメルカプト、ＮＨＲ３、ＮＲ
    ３Ｒ４、式IVの基、または細胞内取り込みに好都合であ
    りまたはＤＮＡまたはＲＮＡプローブの標識に利用でき
    る、またはオリゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイ
    ブリダイゼーションするときには、結合、架橋または開
    裂と同時に後者の核酸を攻撃する基である）、、かつ曲
    線状の括弧は、Ｒ２および隣接するホスホリルまたは−
    Ｙ′−Ｒ1a基が２′および３′位、または逆に３′およ
    び２′位のいずれにも位置することができることを示
    す。］
  2. 【請求項２】Ｒ15が、１． ＮＯ２、 ２． ＮＨ２、 ３． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 ４． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 ５． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 ６． ＳｉＨ３、 ８． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−ア
    ルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであっ
    て、ＳＨ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ
    ６）−アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−Ｃ
    Ｏ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−
    ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）、または−
    ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１以上の基によって、ま
    たは式−［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）
    のポリアルキレングリコール基によって置換されている
    ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
    １〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、ＯＨ、Ｓ
    Ｈ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
    （ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
    を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
    またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
    ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
    ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
    の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、
    または ９． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−ア
    ルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであっ
    て、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素に
    よって置換されているものであり、 Ｒ16が、水素である、請求項１に記載のオリゴヌクレオ
    チド。
  3. 【請求項３】塩基Ｂがβ位に位置し、ヌクレオチドがＤ
    配置で存在し、Ｒ２が２′位に位置し、ａが酸素であ
    り、ｎが２〜９９の整数である、請求項１または２に記
    載のオリゴヌクレオチド。
  4. 【請求項４】Ｒ１が、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、特
    にメチル、または式IIIaの基であり、 Ｒ1aが、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、特にメチル、ま
    たは式IIIbの基であり、 Ｒ２が、水素、Ｃ１〜Ｃ６−アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６−
    アルケニルオキシ、特にアリルオキシ、またはヒドロキ
    シルであり、特に水素であり、 ｎが、４〜３９、特に５〜２９の整数であり、 ｍが、１〜６の整数、特に１であり、 Ｕが、ヒドロキシル、メルカプト、Ｃ１〜Ｃ６−アルコ
    キシ、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、ＮＲ３Ｒ４またはＮＨＲ
    ３、特にヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ６−アルキルであ
    り、但し、Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、好ましくは
    Ｃ１〜Ｃ４−アルキルであるか、またはメトキシエチル
    であり、 Ｂ、Ｗ、Ｖ、Ｙ、Ｙ′、ＸおよびＺは、請求項１に記載
    した意味を表わす、請求項１〜３のいずれか一項に記載
    のオリゴヌクレオチド。
  5. 【請求項５】Ｖ、ＹおよびＹ′の意味が、オキシ、スル
    ファンジイルまたはイミノであり、Ｗの意味がオキソま
    たはチオキソである、請求項１〜４のいずれか一項に記
    載のオリゴヌクレオチド。
  6. 【請求項６】Ｕの意味が、ヒドロキシル、メチルまたは
    メルカプトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載
    のオリゴヌクレオチド。
  7. 【請求項７】Ｒ１および／またはＲ1aが、水素である、
    請求項１〜６のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチ
    ド。
  8. 【請求項８】それぞれの場合に１個のヌクレオチド塩基
    を有するヌクレオチドを適当に誘導体形成した支持体ま
    たは伸長しているオリゴマー鎖に連続的に縮合させるこ
    とを含んでなる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の
    式Ｉを有するオリゴヌクレオチドおよび生理学的に許容
    可能なその塩の製造法。
  9. 【請求項９】医薬または診断試薬を製造するための、請
    求項１〜７のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド
    の使用。
  10. 【請求項１０】少なくとも１個の請求項１〜７のいずれ
    か一項に記載のオリゴヌクレオチドを生理学的に許容可
    能な賦形剤、および適宜好適な添加剤および／または補
    助物質と混合する、医薬または診断試薬の製造法。
  11. 【請求項１１】請求項１〜７のいずれか１項に記載の化
    合物を１種類以上を、適宜生理学的に許容可能な賦形剤
    および／または補助物質と一緒に含む、医薬または診断
    試薬。
  12. 【請求項１２】下記式Ｖを有するヌクレオチドモノマ
    ー。 【化３】 ［式中、 Ｖは、オキシ、スルファンジイル、またはイミノであ
    り、 Ｙｂは、オキシ、スルファンジイル、またはメチレンで
    あり、 ａは、オキシ、スルファンジイル、またはメチレンであ
    り、 Ｒ2bは、水素、ＯＲ12、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキシ、Ｃ１
    〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特にアリルオキシ、ハロゲ
    ン、アジド、またはＮＲ10Ｒ11であり、 Ｒ１は、ヌクレオチド化学で普通に用いられる保護基で
    あり、 Ｒ1bは、アミドまたはメチルイミド結合によってアミノ
    官能化したまたはメチルアミノ官能化した支持体に結合
    しているスクシニル基であるか、または下記式IIIcまた
    はIIIdの基であり、 （式中、 Ｕは、（Ｃ１〜Ｃ18）−アルコキシ、（Ｃ１〜Ｃ18）−
    アルキル、（Ｃ６〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ６〜Ｃ14）
    −アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、Ｏ−Ｒ７、Ｓ
    −Ｒ７、または下記式IVの基であり、 （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｒ５ (IV) 但し、Ｒ５は、水素であり、 Ｑは、基−ＮＲ８Ｒ９であり、 Ｒ７は、−（ＣＨ２）２−ＣＮであり、 Ｒ８およびＲ９は、同一であるかまたは異なるものであ
    り、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル、特にイソプロピルまたはエ
    チルであるか、またはそれらが結合している窒素原子と
    一緒になって、Ｏ、ＳおよびＮの群からの別のヘテロ原
    子を更に含むことができる５〜９員の複素環、特に下記
    式： 【化４】 である）、 Ｅ′およびＦ′は、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＲ12、ま
    たはＮＲ10Ｒ11であり、 Ｒ10およびＲ11は、同一であ
    るかまたは異なるものであり、水素またはヌクレオチド
    化学で普通に用いられるアミノ保護基であるか、または
    Ｒ10およびＲ11が一緒になって、ヌクレオチド化学で普
    通に用いられるアミノ保護基を形成し、 Ｒ12は、水素であるか、またはヌクレオチド化学で普通
    に用いられるヒドロキシル保護基、例えばｔ−ブチルジ
    メチル−シリル、トリイソプロピル−シリル、ｏ−ニト
    ロ−ベンジル、ｐ−ニトロ−ベンジル、または２−フル
    オロフェニル−４−メトキシピペリジン−４−イル（Ｆ
    ＰＭＰ）であり、 Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に記載の基であって、Ｓ
    Ｈ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−
    アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＣＯ−Ｒ
    （ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ
    （ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
    （ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、また
    は式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
    ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
    １〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、ＯＨ、Ｓ
    Ｈ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
    （ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｇ）のような官能基は、適宜もう一つのリンカーを介
    して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡまた
    はＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリゴヌ
    クレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーション
    するときには、結合、架橋または開裂と同時に後者の核
    酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、また
    は １５． ３．、４．または５．に定義されている基であ
    って、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素
    によって置換されているものであり、 Ｒ（ａ）は、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ
    ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔで
    あり、Ｔは、場合によってはもう一つのリンカーを介し
    て、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡまたは
    ＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリゴヌク
    レオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーションす
    るときには、結合、架橋または開裂と同時に後者の核酸
    を攻撃する１個以上の基に結合しているアルキルカルボ
    キシル基またはアルキルアミノ基であり、 Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキ
    シ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）であり、 Ｒ（ｃ）およびＲ（ｄ）は、それぞれ独立して、Ｈであ
    るか、または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ（ｅ）
    Ｒ（ｇ）によって置換されていないまたは置換されてい
    る（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｅ）およびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまた
    は（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−ＣＯＯＨであ
    り、但し、Ｒ15およびＲ16は、それぞれ同時に水素、Ｎ
    Ｏ２、ＮＨ２、シアノまたはＳｉＨ３となることはでき
    ず、 ＯＨ、ＮＨ２またはＣＯＯＨのような官能基は、適宜ヌ
    クレオチド化学で普通に用いられる保護基で保護されて
    おり、かつ曲線状の括弧はＲ2bおよび隣接の−Ｙｂ−Ｒ
    1b基が２′および３′位に位置することができ、または
    逆に３′および２′位に位置することができることを示
    す。］
  13. 【請求項１３】Ｒ15が １． ＮＯ２、 ２． ＮＨ２、 ３． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 ４． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 ５． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 ６． ＳｉＨ３、 ８． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−ア
    ルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであっ
    て、群ＳＨ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜
    Ｃ６）−アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−
    ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、
    −ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）、または
    −ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）からの１個以上の基によって、ま
    たは式−［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）
    （式中、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、１〜１８、
    好ましくは１〜６の整数である）のポリアルキレングリ
    コール基によって置換されているものであり、ＯＨ、Ｓ
    Ｈ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
    （ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
    を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
    またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
    ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
    ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
    の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、
    または ９． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−ア
    ルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであっ
    て、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素に
    よって置換されているものであり、 Ｒ16が水素である、請求項１２に記載の式Ｖを有するヌ
    クレオチドモノマー。
  14. 【請求項１４】式Ｖの対応するヌクレオシドモノマー
    を、好適なアミノ保護基またはヒドロキシル保護基を挿
    入した後、対応するホスホネート誘導体またはホスホル
    アミダイト誘導体に転換する、請求項１２または１３に
    記載の式Ｖのヌクレオチドモノマーの製造法。
  15. 【請求項１５】標的核酸と一緒に安定なハイブリダイゼ
    ーション複合体を形成するオリゴヌクレオチドを製造す
    るための請求項１２または１３に記載のヌクレオチドモ
    ノマーの使用。
  16. 【請求項１６】下記式VIを有する化合物。 【化５】 （式中、それぞれ独立して、 Ｕ′＝Ｕ″＝Ｕ″′は、ヒドロキシルまたはメルカプト
    であり、 ｅおよびｆは、０または１であり、 Ｒ13は、水素、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ18−アルコキシ、または
    Ｃ１〜Ｃ６−アルケニルオキシ、特にアリルオキシであ
    り、 ＥおよびＦは、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、またはＮ
    Ｈ２であり、 Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立して、 １． 水素、 ２． ハロゲン、 ３． （Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、 ４． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、 ５． （Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニル、 ６． ＮＯ２、 ７． ＮＨ２、 ８． シアノ、 ９． −Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、 １０． （Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、 １１． （Ｃ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、 １２． ＳｉＨ３、 １４． ３．、４．または５．に記載の基であって、Ｓ
    Ｈ、Ｓ−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、（Ｃ１〜Ｃ６）−
    アルコキシ、ＯＨ、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＣＯ−Ｒ
    （ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ
    （ｃ）Ｒ（ｇ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ
    （ｅ）Ｒ（ｇ）の群からの１個以上の基によって、また
    は式 −［Ｏ−（ＣＨ２）ｒ］ｓ−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ） のポリアルキレングリコール基によって置換されている
    ものであり、但し、ｒおよびｓは、それぞれ独立して、
    １〜１８、好ましくは１〜６の整数であり、ＯＨ、Ｓ
    Ｈ、−ＣＯ−Ｒ（ｂ）、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｄ）、−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ
    （ｆ）、−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｇ）または−ＮＲ（ｃ）Ｒ
    （ｇ）のような官能基は更に、適宜もう一つのリンカー
    を介して、細胞内取り込みに好都合でありまたはＤＮＡ
    またはＲＮＡプローブの標識に利用できる、またはオリ
    ゴヌクレオチド類似体が標的核酸にハイブリダイゼーシ
    ョンするときには、結合、架橋または開裂と同時に後者
    の核酸を攻撃する１個以上の基に結合することができ、 １５． ３．、４．または５．に定義されている基であ
    って、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくはフッ素
    によって置換されているものであり、 Ｒ（ａ）は、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキシ、（Ｃ
    ６〜Ｃ20）−アリールオキシ、ＮＨ２またはＮＨ−Ｔで
    あり、Ｔは、適宜もう一つのリンカーを介して、細胞内
    取り込みに好都合でありまたはＤＮＡまたはＲＮＡプロ
    ーブの標識に利用できる、またはオリゴヌクレオチド類
    似体が標的核酸にハイブリダイゼーションするときに
    は、結合、架橋または開裂と同時に後者の核酸を攻撃す
    る１個以上の基に結合しているアルキルカルボキシル基
    またはアルキルアミノ基であり、 Ｒ（ｂ）は、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルコキ
    シ、または−ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）であり、 Ｒ（ｃ）およびＲ（ｄ）は、それぞれ独立して、Ｈであ
    るか、または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）または−ＮＲ（ｅ）
    Ｒ（ｇ）によって置換されていないまたは置換されてい
    る（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｅ）およびＲ（ｆ）は、それぞれ独立して、Ｈまた
    は（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルであり、 Ｒ（ｇ）は、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル−ＣＯＯＨであ
    り、但し、Ｒ15およびＲ16は、それぞれ同時に水素、Ｎ
    Ｏ２、ＮＨ２、シアノまたはＳｉＨ３となることはでき
    ず、 式VIの化合物において、Ｒ16がＨであり、かつＲ15が−
    ＮＲ（ｃ）Ｒ（ｄ）または−ＮＲ（ｅ）Ｒ（ｆ）によっ
    て置換されている（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニルであるも
    のは除き、かつＥがＯＨまたはＮＨ２であり、ＦがＯＨ
    であり、Ｒ16が水素であり、Ｒ15がＢｒ、Ｃｌ、シア
    ノ、（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ４）−アル
    ケニル、または（Ｃ２〜Ｃ４）−アルキニルであるとき
    には、ｅおよびｆは０ではない。）
  17. 【請求項１７】請求項１６に記載の式VIのヌクレオチド
    モノマーの、分子生物学における助剤としての使用。
  18. 【請求項１８】下記式VII を有する化合物。 【化６】 （式中、 ＥおよびＦは、それぞれ独立して、Ｈ、ＯＨまたはＮＨ
    ２であり、ＯＨおよびＮＨ２は、ヌクレオチド化学で普
    通に用いられる保護基によって適宜保護され、 Ｒ15およびＲ16は、それぞれ独立して、水素、（Ｃ１〜
    Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜Ｃ10）−アルケニル、（Ｃ
    ２〜Ｃ10）−アルキニル、Ｉ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、シアノ
    であるか、または（Ｃ１〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ２〜
    Ｃ10）−アルケニル、または（Ｃ２〜Ｃ10）−アルキニ
    ルであって、１個以上のＨ原子がハロゲン、好ましくは
    フッ素によって置換されているものであり、 Ｒ15およびＲ16は、同時に水素およびシアノとなること
    はできず、かつＲ16が水素であり、ＥがＮＨ２であり、
    ＦがＯＨであるときには、Ｒ15はＩではなく、 Ｒ14は、それぞれ独立して、Ｈであるかまたはヌクレオ
    チド化学で普通に用いられる保護基である。）
  19. 【請求項１９】７位および／または８位が置換されてい
    る、７−デアザプリンヌクレオチドの、核酸の配列決定
    への使用。
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