TWI491408B - 與淋巴細胞活化基因－３（ｌａｇ－３）結合之人抗體類及彼等之用途 - Google Patents

與淋巴細胞活化基因－３（ｌａｇ－３）結合之人抗體類及彼等之用途 Download PDF

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Description

與淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)結合之人抗體類及彼等之用途
本發明關於與淋巴細胞活化基因-3(LAG-3)結合之人抗體類及彼等之用途。
淋巴細胞活化基因-3或LAG-3(亦稱為CD223)係免疫球蛋白超基因家族之一員，且在結構上及遺傳上係與CD4有關。LAG-3不被靜止的周圍血淋巴細胞表達，但被經活化的T細胞及NK細胞表達。LAG-3係由位於染色體12的短臂之遠端部分接近CD4基因處的基因所編碼之膜蛋白，其表示該LAG-3基因可能已藉由基因重複而進化(Triebelet al .(1990)J. Exp. Med. 171:1393-1405)。
類似於CD4，LAG-3已被證明係與MHC第II類分子進行交互作用，但不像CD4，LAG-3不與人免疫缺陷病毒gp120蛋白進行交互作用(Baixeraset a1 .(1992)J. Exp. Med. 176:327-337)。使用可溶性LAG-3免疫球蛋白融合蛋白(sLAG-3Ig)的研究證明LAG-3與在細胞表面上的MHC第II類分子直接且特異性結合(Huardet al .(1996)Eur. J. Immunol. 26:1180-1186)。
在抗原特異性T細胞應答的活體外研究中，加入抗LAG-3抗體導致T細胞增殖增加、活化抗原(諸如CD25)的較高表達、及較高濃度的細胞因子(例如干擾素γ及介白素4)，從而支持LAG-/MHC第II類分子交互作用在下調CD4+ T淋巴細胞的抗原依賴性刺激中的角色(Huardet al .(1994)Eur. J. Immunol . 24:3216-3221)。已證明LAG-3的細胞質內區域與名為LAP的蛋白進行交互作用，此蛋白被認為是涉及CD3/TCR活化途徑的下調之信號轉導分子(Iouzalenet al .(2001)Eur. J. Immunol . 31:2885-2891)。再者，業已顯示CD4+ CD25+ 調節性T細胞(Treg )在活化時表達LAG-3，且針對LAG-3之抗體在活體內及活體外均抑制由所誘導的Treg 細胞所產生的阻抑，其表示LAG-3有助於Treg 細胞的阻抑活性(Huang,C.et al .(2004)Immunity 21:503-513)。另外，業已顯示LAG-3係藉由調節性T細胞依T細胞依賴性及非依賴性機轉對T細胞穩態進行負向調節(Workman,C.J. and Vignali,D.A.(2005)J. Immunol . 174:688-695)。
在某些情況下，LAG-3亦已顯示具有免疫刺激作用。例如，當與未經轉染的腫瘤細胞相比時，移植至同系基因小鼠(mice)體內的經LAG-3轉染之腫瘤細胞顯示顯著的生長下降或完全消退，其表示在腫瘤細胞上的LAG-3表達係藉由經由MHC第II類分子觸發抗原呈現細胞而刺激抗腫瘤應答(Prigentet al .(1999)Eur. J. Immunol . 29:3867-3876)。另外，當與抗原一起被給予小鼠時，可溶性LAG-3免疫球蛋白融合蛋白已顯示刺激體液免疫反應及細胞免疫反應，其表明可溶性LAG-3免疫球蛋白係作用為疫苗佐劑(El Mir and Triebel(2000)J. Immunol . 164:5583-5589)。再者，業已顯示可溶性人LAG-3免疫球蛋白擴大活體外產生第I型腫瘤特異性免疫(Casatiet al .(2006)Cancer Res . 66:4450-4460)。Triebel(2003)Trends Immunol . 24:619-622文獻對LAG-3的功能活性進行回顧。鑒於上述，用於調節LAG-3活性的另外藥劑係令人感興趣的。
 概述
本揭露提供經分離之單株抗體(特別是人單株抗體)，該等單株抗體特異性結合LAG-3且具有所欲的功能特性。該等特性包括與人LAG-3的高親和性結合、與人或猴之LAG-3(例如食蟹猴及/或恒河猴之LAG-3)結合，但不與小鼠(mouse)LAG-3結合、抑制LAG-3與主要組織相容性(MHC)第II類分子的結合之能力及/或刺激抗原特異性T細胞應答的能力。本發明之抗體可被用於例如於諸如帶有腫瘤的個體或帶有病毒的個體體內檢測LAG-3蛋白或刺激抗原特異性T細胞應答。
一方面，本發明涉及經分離之人單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體結合人LAG-3，且顯現下述特性中的至少一種：
(a)結合猴LAG-3；
(b)不結合小鼠LAG-3；
(c)抑制LAG-3與主要組織相容性(MHC)第II類分子的結合；及
(d)刺激免疫反應。
較佳地，該抗體顯現特性(a)、(b)、(c)及(d)中的至少兩種。更佳地，該抗體顯現特性(a)、(b)、(c)及(d)中的至少三種。更為較佳地，該抗體顯現四種特性(a)、(b)、(c)及(d)全部。
在一較佳體系中，該抗體刺激抗原特異性T細胞應答，諸如在抗原特異性T細胞應答中產生介白素2(IL-2)。在其他較佳體系中，該抗體刺激免疫反應，諸如抗腫瘤應答(例如在活體內腫瘤移植模型中抑制腫瘤生長)或自體免疫反應(例如在NOD小鼠中促進糖尿病的形成)。在另一較佳體系中，該抗體結合人LAG-3的表位，該表位包含胺基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID NO：76)。又於另一較佳體系中，該抗體結合人LAG-3的表位，該表位LAG-3包含胺基酸序列HPAPPSSW(SEQ ID NO：77)或PAAPSSWG(SEQ ID NO：78)。又於其他較佳體系中，該抗體係以1×10-7 M或低於1×10-7 M的KD 值與人LAG- 3結合，或以1×10-8 M或低於1×10-8 M的KD 值與人LAG-3結合，或以5×10-9 M或低於1×10-9 M的KD 值與人LAG-3結合，或以1×10-9 M或低於1×10-9 M的KD 值與人LAG-3結合。在較佳體系中，該抗體藉由免疫組織化學法使垂體組織染色，且在另一較佳體系中，該抗體藉由免疫組織化學法不使垂體組織染色。
在另一方面，本發明涉及經分離之人單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體與參考抗體交叉競爭結合人LAG-3，其中該參考抗體包含：
(a)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：37，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：43；
(b)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：38，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：44；
(c)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：39，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：45；
(d)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：40，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：46；
(e)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：41，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：47；或
(f)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：42，且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：48。
在一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：37且該輕鏈可變區以及包含胺基酸序列SEQ ID NO：43。在另一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：38且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：44。在另一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：39且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：45。在另一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：40且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：46。在另一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：41且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：47。在另一較佳體系中，該參考抗體包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：42且該輕鏈可變區包含胺基酸序列SEQ ID NO：48。
另一方面，本發明涉及經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-20基因、人VH 4-34基因、人VH 3-33基因或VH 1-24基因之產物或衍生自該等基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。在另一方面，本發明涉及經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L18基因、人VK L6基因或人VK A27基因之產物或衍生自該等基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。在一較佳體系中，本發明提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含：
(a)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 4-34基因之產物或衍生自該基因之產物，且該輕鏈可變區係人VK L6基因之產物或衍生自該基因之產物；
(b)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-33基因之的產物或衍生自該基因之產物，且該輕鏈可變區係人VK A27基因之產物或衍生自該基因之產物；
(c)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-20基因之產物或衍生自該基因之產物，且該輕鏈可變區係人VK L18基因之產物或衍生自該基因之產物；
(d)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 1-24基因之產物或衍生自該基因之產物，且該輕鏈可變區係人VK L6基因之產物或衍生自該基因之產物；或
(e)一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-33基因之產物或衍生自該基因之產物，且該輕鏈可變區係人VK L6基因之產物或衍生自該基因之產物；
其中該抗體特異性結合人LAG-3。
在另一方面，本發明涉及經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含：
(a)一重鏈可變區，該重鏈可變區包含選自SEQ ID NO：37至42之胺基酸序列；
(b)一輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含選自SEQ ID NO：43至48之胺基酸序列；
其中該抗體特異性結合人LAG-3。
一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：43。
另一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：38；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：44。
另一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：39；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：45。
另一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：40；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：46。
另一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：41；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：47。
另一較佳組合包含：
(a)一重鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：42；及
(b)一輕鏈可變區，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：48。
本發明之抗體可為例如全長抗體，例如IgG1、IgG2或IgG4同型。在一較佳體系中，該抗體係IgG4同型。在另一較佳體系中，該抗體係IgG4同型，該同型在重鏈恒定區的鉸鏈區(在對應於文獻Angalet al .(1993)Mol. Immunol . 30:105-108所描述之位置241的位置)具有自絲胺酸至脯胺酸的突變，使得重鏈間之二硫橋鍵的異質性減小或消除。可替代地，該抗體可為諸如Fab、Fab'或Fab'2片段之抗體片段，或單鏈抗體。
本揭露亦提供免疫共軛物，該免疫共軛物包含與治療劑(例如細胞毒素或放射性同位素)連接的本發明之抗體或該抗體之抗原結合部分。本揭露亦提供一種雙特異性分子，該雙特異性分子包含本發明的抗體或其該抗體之原結合部分，其中該抗體或其抗原結合部分係與第二功能部分相連接，該第二功能部分具有與所述抗體或其抗原結合部分不同的結合特異性。
本發明亦提供包含本發明的抗體或其抗原結合部分、或免疫共軛物、或雙特異性分子及藥學上可接受之載體的組成物。
本揭露亦涵蓋編碼本發明之抗體或該抗體的抗原結合部分之核酸分子，以及包含該核酸的表達載體及包含該表達載體的宿主細胞。本發明亦提供使用包含該表達載體的宿主細胞以製備抗LAG-3抗體之方法，且該方法可包括下述步驟：(i)在宿主細胞中表達該抗體及(ii)自該宿主細胞分離該抗體。
另一方面，本發明涉及使用本發明的抗LAG-3抗體以刺激免疫反應的方法。例如，在一較佳體系中，本發明提供刺激抗原特異性T細胞應答的方法，該方法包含令所述T細胞與本發明的抗體相接觸以刺激抗原特異性T細胞應答。在一較佳體系中，刺激抗原特異性T細胞產生介白素2。在另一較佳體系中，本發明提供一種刺激個體之免疫反應(例如抗原特異性T細胞應答)的方法，該方法包含給予該個體本發明之抗體以刺激該個體的免疫反應(例如抗原特異性T細胞應答)。在一較佳體系中，該個體係帶有腫瘤的個體，且刺激針對該腫瘤的免疫反應。在一較佳體系中，該個體係帶有病毒的個體，且刺激針對該病毒的免疫反應。
另一方面，本發明提供一種抑制個體體內腫瘤細胞生長的方法，該方法包含給予該個體本發明之抗體以抑制該個體體內的腫瘤生長。又於另一方面，本發明提供一種治療個體之病毒感染的方法，該方法包含給予該個體本發明之抗體以治療該個體的病毒感染。
又在另一方面，本發明提供一種在個體體內刺激免疫反應的方法，該方法包含給予該個體抗LAG-3抗體及至少一種另外的免疫刺激性抗體，諸如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體及/或抗CTLA-4抗體，使得在該個體體內刺激免疫反應以例如抑制腫瘤生長或刺激抗病毒應答。在一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗PD-1抗體。在另一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗PD-L1抗體。在另一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗CTLA-4抗體。在一較佳體系中，該抗LAG-3抗體係人抗體，諸如本揭露的抗體。可替代地，該抗LAG-3抗體可為例如嵌合或人化抗體。在另一較佳體系中，該至少一種另外的免疫刺激性抗體(例如抗PD-1、抗PD-L1及/或抗CTLA-4抗體)係人抗體。可替代地，該至少一種另外的免疫刺激性抗體為例如嵌合或人化抗體。
又於另一方面，本發明涉及一種製備抗LAG-3抗體的方法。該方法包含：
(a)提供：(i)一重鏈可變區抗體序列，其包含選自SEQ ID NO：1至6之CDR1序列、選自SEQ ID NO：7至12之CDR2序列及/或選自SEQ ID NO：13至14、GGY或SEQ ID NO：16至18之CDR3序列及/或(ii)一輕鏈可變區抗體序列，其包含選自SEQ ID NO：19至24之CDR1序列、SEQ ID NO：25至30之CDR2序列及/或選自SEQ ID NO：31至36之CDR3序列；
(b)改變該重鏈可變區抗體序列及/或輕鏈可變區抗體序列中的至少一個胺基酸殘基以產生至少一種經改變之抗體序列；及
(c)表達該經改變之抗體序列為蛋白。
自下述詳細說明及實施例將可明瞭本揭露的其他特徵及優點，且該等說明與實施例不得被解釋為是對本揭露的限制。本申請案全文所引用的所有參考文獻、Genbank登錄、專利及已公開的專利申請案皆明確地併入本文作為參考。
發明詳細說明
本揭露涉及經分離之單株抗體(特別是人單株抗體)，該抗體結合人LAG-3且具有所欲的功能特性。在某些較佳體系中，本發明之抗體係源於特定的重鏈和輕鏈種系序列及/或包含特定的結構特徵，諸如包含特定胺基酸序列的CDR區。本揭露提供經分離之抗體、製備該等抗體的方法、包含該等抗體的免疫共軛物及雙特異性分子以及包含本發明之抗體、免疫共軛物或雙特異性分子的醫藥物組成物。本揭露還亦及使用該等抗體(例如檢測LAG-3蛋白)的方法以及使用本發明的抗LAG-3抗體(單獨或與其他免疫刺激性抗體組合)以刺激免疫反應的方法。因此，本揭露亦提供使用本發明的抗LAG-3抗體以例如抑制腫瘤生長或治療病毒感染的方法。
為了更容易地理解本揭露，首先定義某些術語。其他定義在整個詳細說明給出。
術語“LAG-3”指淋巴細胞活化基因-3。術語“LAG-3”包括變體、同-種型、同源蛋白、直系同源蛋白及旁系同源蛋白。例如，在某些情況下，對人LAG-3蛋白特異之抗體可與源自於非人的物種的LAG-3蛋白交叉反應。在其他較佳體系中，對人LAG-3蛋白特異之抗體可對人LAG-3蛋白完全特異，且可能不表現出物種或其他類型的交叉反應性，或可能與源自某些其他物種但不是所有其他物種的LAG-3進行交叉反應(例如與猴LAG-3而非小鼠LAG-3進行交叉反應)。術語“人LAG-3”指人序列LAG-3，如具有Genbank登錄號NP_002277的人LAG-3的完整胺基酸序列。術語“小鼠LAG-3”指小鼠序列LAG-3，如具有Genbank登錄號NP_032505的小鼠LAG-3的完整胺基酸序列。LAG-3在本領域亦稱作例如CD223。人LAG-3序列可經由具有例如保守突變或在非保守區的突變而不同於Genbank登錄號NP_002277的人LAG-3，而LAG-3具有基本上與Genbank登錄號NP_002277的人LAG-3的生物功能相同的生物功能。例如，人LAG-3的生物功能係在LAG-3的細胞外結構域中具有一個表位，該表位被本揭露的抗體特異性地結合或者人LAG-3的生物功能係與MHC第II類分子結合。
術語“猴LAG-3”旨在涵蓋由舊世界猴及新世界猴所表達的LAG-3蛋白，其包括但不限於食蟹猴LAG-3及恒河猴LAG-3。猴LAG-3的代表性序列係圖19示出的恒河猴LAG-3胺基酸序列及SEQ ID NO：85，其亦被儲存為Genbank登錄號XM_001108923。猴LAG-3的另一代表性序列係圖19示出的選殖系pa23-5的可替代的恒河猴序列及SEQ ID NO：84，其係如於實施例3A第3小節所說明而被分離。當與Genbank所存儲的序列比較時，此可替代的恒河猴序列在位置419上顯示出一個單一胺基酸差異。
特定人LAG-3序列與Genbank登錄號NP_002277的人LAG-3在胺基酸序列上通常會有至少90%的同一性，且包含多個胺基酸殘基，當與其他物種(如鼠類)的LAG-3胺基酸序列相比時，該等胺基酸殘基將該胺基酸序列鑒定為是人源的。在某些情況下，人LAG-3與Genbank登錄號NP_002277的LAG-3在胺基酸序列上可具有至少95%，或者甚至至少96%、97%、98%或99%的同一性。在某些較佳體系中，與Genbank登錄號NP_002277的LAG-3序列相比，人類LAG-3序列可顯示不超過10個胺基酸之差異。在某些較佳體系中，與Genbank登錄號NP_002277的LAG-3序列相比，該人LAG-3可顯示不超過5個，或者甚至不超過4、3、2或1個胺基酸之差異。百分比同一性可如本文所描述者進行測定。
術語“免疫反應”指例如淋巴細胞、抗原呈現細胞、吞噬細胞、顆粒細胞以及由上述細胞或肝臟所產生的可溶性大分子(包括抗體、細胞因子及補體)的作用，該作用導致對侵入性病原體、被病原體感染的細胞或組織、癌細胞、或者在自體免疫炎症及病理炎症情況下的正常人類細胞或組織的選擇性損害、破壞或將彼等自人體中清除。
“抗原T細胞應答”指由T細胞產生的應答，該應答產生於對T細胞特異的抗原對該T細胞的刺激。由T細胞在特異性抗原刺激時產生的反應的非限制性實例包括增殖及細胞因子的產生(例如IL-2的產生)。
此處所指之術語“抗體”包括完整抗體及彼等的任何抗原結合片段(即“抗原結合部分”)或彼等的單鏈。完整抗體係包含由二硫鍵相互連接的至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈的糖蛋白。每一個重鏈均包含一重鏈可變區(在此縮寫為VH )及一重鏈恒定區。重鏈恒定區由三個結構域CH 1、CH 2及CH 3構成。每一個輕鏈均包含一輕鏈可變區(在此縮寫為VL )及一輕鏈恒定區。輕鏈恒定區包括結構域CL 。VH 及VL 區可進一步被分為多個高可變性區，被稱為互補決定區(CDR)，其間散佈更為保守且被稱為框架區(FR)的多個區。每個VH 及VL 均由三個CDR及四個FR構成，按照以下順序自胺基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。重鏈及輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合結構域。該等抗體的恒定區能夠介導免疫球蛋白與宿主組織或因子的結合，該等宿主組織或因子包括免疫系統的不同細胞(例如效應細胞)及正統補體系統的第一成分(Clq)。
此處使用之術語，抗體的“抗原結合部分”(或簡稱為“抗體部分”)，是指保留特異性結合抗原(例如LAG-3蛋白)的能力之抗體的一或多個片段。已發現抗體的抗原結合功能可以由全長抗體的片段進行。術語抗體的“抗原結合部分”所涵蓋的結合片段的實例包括：(i)Fab片段，由VL 、VH 、CL 及CH 1結構域構成的一單價片段；(ii)F(ab')2 片段，包含經由鉸鏈區的二硫橋鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)Fab'片段，其實質上是帶有鉸鏈區部分的Fab(見，FUNDAMENTAL IMMUNOLOGY(Paul ed.,3.sup.rd ed. 1993))；(iv)由VH 及CH 1結構域構成的Fd片段；(v)由抗體的單臂的VL 及VH 結構域構成的Fv片段；(vi)dAb片段(Wardet al .,(1989)Nature 341:544-546)，其係由VH 結構域構成；(vii)分離的互補決定區(CDR)；以及(viii)納米抗體(nanobody)，其係含有一個單一可變結構域及兩個恒定結構域的一重鏈可變區。此外，雖然Fv片段的兩個功能域VL 和VH 係由個別基因所編碼，但是使用重組方法藉由合成連接子可以將彼等連接以形成一個單一蛋白鏈，其中VL 和VH 區域進行配對形成單價分子(被稱為單鏈Fv(scFv)；參見例如Bird et al.(1988)Science 242:423-426；及Huston et al.(1988)Proc .Natl .Acad .Sci .USA 85:5879-5883)。術語抗體的“抗原結合部分”亦旨在涵蓋此類單鏈抗體。該等抗體片段係使用本發明所屬技術領中具有通常知識者已知的常規方法獲得，並且對該等片段採用與完整抗體相同的方式進行利用性篩選。
此處所使用之“經分離之抗體”旨在表示一抗體，其基本上不含有具備不同抗原特異性的其他抗體(例如特異性結合LAG-3蛋白的經分離之抗體基本上不含有特異性結合除LAG-3蛋白以外的抗原之抗體)。然而，特異性結合人LAG-3蛋白的經分離之抗體對於其他抗原(諸如源自其他物種的LAG-3蛋白)可具有交叉反應性。此外，分離之抗體可基本上不含有其他細胞材料及/或化學物。
此處使用之術語“單株抗體”或“單株抗體組合物”是指具有單一分子組成之抗體分子的製備物。單株抗體組合物展示針對某一特定表位的單一結合特異性及親和力。
此處使用之術語“人抗體”旨在包括具有可變區之抗體，在該等可變區中，框架區及CDR區均衍生自人種系免疫蛋白序列。此外，如果該抗體包括一恒定區，則該恒定區亦衍生自人種系免疫球蛋白序列。本發明的人抗體可包含不是由人種系免疫球蛋白序列所編碼的胺基酸殘基(例如，由體外隨機誘變或定點誘變引入的突變或藉由體內體細胞突變引入的突變)。然而，在此所使用之術語“人抗體”並非旨在包括這樣之抗體，其中衍生自另外哺乳動物物種(如小鼠)的種系的CDR序列已經被移植到人框架序列上。
術語“人單株抗體”指顯示單一結合特異性之抗體，該等抗體具有多個可變區，其中框架區及CDR區均衍生自人種系免疫球蛋白序列。在一較佳體系中，人單株抗體係由一雜交瘤產生，該雜交瘤包括自轉基因的非人類動物(例如轉基因小鼠)處獲得的B細胞，該轉基因的非人動物具有包含融合至無限增殖化細胞的人重鏈轉基因及輕鏈轉基因的基因組。
此處使用之術語“重組人抗體”包括藉由重組手段製備、表達、產生、或分離的所有人抗體，例如(a)從動物(例如小鼠)或由其製備出的雜交瘤(以下將進一步說明)中分離之抗體，該動物對於人免疫球蛋白基因係經轉基因性或經轉染色體性、(b)從被轉化以表達人抗體的宿主細胞(例如從轉染瘤)分離之抗體、(c)從重組的組合人抗體庫中分離之抗體、及(d)藉由其他方法製備、表達、產生或分離之抗體，該等方法涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列上。此類重組的人類抗體具有可變區，其中框架區及CDR區均衍生自人種系免疫球蛋白序列。然而，在某些較佳體系中，此類重組人抗體能經活體外誘變(或者當使用針對人Ig序列進行轉染的動物時，經活體內體誘變)，並且因此重組抗體的VH 和VL 區的胺基酸序列也許並非自然地存在於活體內的人抗體種系表達譜中，儘管該等序列衍生自人種系的VH 和VL 序列並與其相關。
術語“同型”指由重鏈恒定區基因編碼之抗體種類(例如IgM或IgGl)。
短語“識別抗原的抗體”及“對抗原特異的抗體”此處可以與術語“特異地結合抗原的一抗體”互換使用。
術語“人抗體衍生物”指人抗體的任何已修飾的形式，例如該抗體與另一試劑或抗體的共軛物。
術語“人化抗體”旨在表示以下抗體，其中衍生自另一哺乳動物物種(如小鼠)的種系的CDR序列已被移植到人框架序列上。可以在人框架序列中進行另外的框架區修飾。
術語“嵌合抗體”旨在表示以下抗體，其中可變區序列係衍生於一物種而恒定區序列係衍生於另一物種，例如一抗體，其中可變區序列衍生於小鼠抗體而恒定區序列衍生於人抗體。
在此所使用“特異性結合人LAG-3”之抗體意指一抗體，其結合人LAG-3蛋白(並且可能是源自一或多種非人物種的LAG-3蛋白)，但基本上不結合非LAG-3蛋白。較佳的是，該抗體以“高親和力”(也就是以1×10-7 M或低於1×10-7 M的KD 值)結合人LAG-3蛋白，更佳地為5×10-8 M或低於5×10-8 M，更佳地為3×10-8 M或低於3×10-8 M，更佳地為1×10-8 M或低於1×10-8 M，更佳地為5×10-9 M或低於1×10-9 M，或甚至更佳地為1×10-9 M或低於1×10-9 M。
此處使用之術語“基本上不結合”蛋白質或細胞是指不結合或不以高親和力結合蛋白質或細胞，即以1×10-6 M或高於1×10-6 M，更佳地為1×10-5 M或高於1×10-5 M，更佳地為1×10-4 M或高於1×10-4 M，更佳地為1×10-3 M或高於1×10-3 M，甚至更佳地為1×10-2 M或高於1×10-2 M的KD 值結合蛋白質或細胞。
此處使用之術語“Kassoc ”或“Ka ”旨在表示特定之抗體-抗原相互作用的結合速率，而此處使用之術語“Kdjs ”或“Kd ”旨在表示特定之抗體-抗原相互作用的解離速率。此處使用之術語“KD ”旨在表示解離常數，其係由Kd 與Ka 之比(即Kd /Ka )得到，並被表示為莫爾濃度(M)。抗體的KD 值可以使用本領域已經充分確認的方法進行確定。確定抗體的KD 值的較佳方法係藉由使用表面等離子共振，較佳地是使用例如系統的生物感測器系統。
術語IgG抗體的“高親和力”是指對於靶抗原而言，抗體具有的KD 值為1×10-7 M或低於1×10-7 M，更佳地為5×10-8 M或低於5×10-8 M，甚至更佳地為1×10-8 M或低於1×10-8 M，甚至更佳的是為5×10-9 M或低於5×10-9 M，並且甚至其選為1×10-9 M或低於1×10-9 M。然而，對於其他抗體同型而言，“高親和力”結合可以發生變化。例如，對於IgM同型而言，“高親和力”結合是指抗體具有的KD 值為10-6 M或低於10-6 M，更佳地為10-7 M或低於10-7 M，甚至更佳地為10-8 M或低於10-8 M。
術語“個體”包括任何人或非人動物。術語“非人動物”包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，如非人靈長類、綿羊、犬、貓、牛、馬、雞、兩棲動物及爬行動物，儘管哺乳動物係較佳的，如非人靈長類、綿羊、犬、貓、牛、以及馬。
下述各分部進一步詳細地說明本發明的不同方面。
具有特定功能特性的抗LAG-3抗體
本發明抗體之特徵為抗體特定的功能性特徵或特性。例如，該等抗體與人LAG-3特異地結合，並且可與源自某些其他物種的LAG-3相結合，例如猴LAG-3(例如食蟹猴、恒河猴)，但是基本上不與源自其他物種的KAG-3(例如小鼠LAG-3)相結合。較佳的是，本發明之抗體以高親和力與人LAG-3相結合。
該抗體刺激免疫反應(如抗原特異性T細胞應答)的能力可藉由例如該抗體在抗原特異性T細胞應答中刺激介白素2(IL-2)的產生來說明。在某些較佳體系中，本發明的抗體與人LAG-3結合並表現出刺激抗原特異性T細胞應答的能力。在某些較佳體系中，本發明的抗體與人LAG-3結合但並不表現刺激抗原特異性T細胞應答的能力。評估抗體刺激免疫反應的能力的其他手段包括該抗體(如在體內腫瘤移植模型中)抑制腫瘤生長的能力(參見例如實施例6)或該抗體刺激自體免疫反應的能力，例如在自體免疫模型中促進自體免疫疾病的發展的能力，例如在NOD小鼠模型中促進糖尿病發展的能力(參見例如實施例7)。
本發明之抗體與LAG-3的結合可用本領域已充分確認的一或多個技術進行評估。例如，在一較佳體系中，抗體可用流式細胞術測定法進行測試，其中該抗體與表達人LAG-3的細胞系進行反應，例如已經被轉染而能在細胞表面表達LAG-3(例如人LAG-3、猴LAG-3(例如恒河猴或食蟹猴)或小鼠LAG-3)的CHO細胞(參見例如實施例3A中適宜的測定)。在流式細胞術測定中使用的其他適宜的細胞包括表達天然LAG-3的由抗CD3刺激的CD4+ 活化的T細胞。另外地或可替代地，抗體的結合，包括結合動力學(例如KD 值)可在BIAcore結合測定中進行測試(參見例如實施例3B中適宜的測定)。其他適宜的結合測定包括ELISA測定，例如使用重組的LAG-3蛋白(參見例如實施例1中適宜的測定)。
較佳的是，本發明之抗體以5×10-8 M或低於5×10-8 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以2×10-8 M或低於2×10-8 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以5×10-9 M或低於5×10-9 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以4×10-9 M或低於4×10-9 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以3×10-9 M或低於3×10-9 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以2×10-9 M或低於2×10-9 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以1×10-9 M或低於1×10-9 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，以5×10-10 M或低於5×10-10 M的KD 值與LAG-3蛋白結合，或1×10-10 M或低於1×10-10 M的KD 值與LAG-3蛋白結合。
典型地，本發明的抗體與淋巴樣組織(如扁桃體、脾臟或胸腺)中的LAG-3相結合，這可藉由免疫組織化學法進行檢測。另外地，如在實施例8中進一步說明，本發明的某些抗LAG-3抗體如藉由免疫組織化學法所測量使垂體組織染色(例如被保留在垂體中)，而本發明的其他抗LAG-3抗體如藉由免疫組織化學法所測量不使垂體組織染色(例如不被保留在垂體中)。因此，在一較佳體系中，本發明提供藉由免疫組織化學法使垂體組織染色的抗LAG-3抗體，而在另一較佳體系中，本發明提供藉由免疫組織化學法不使垂體組織染色的抗LAG-3抗體。
本發明較佳之抗體係人單株抗體。另外地或可替代地，該抗體可以是例如嵌合或人化單株抗體。
單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5
本發明之較佳抗體係如在實施例1和2中所說明進行分離及結構表徵的人類單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VH 胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：37至42中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VK 胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：43至48中。
考慮到該等抗體中的每一種均可結合人LAG-3，可將VH 和VL 序列進行“混合並匹配”以產生本發明的其他抗LAG-3結合分子。較佳的是，當VH 和VL 鏈被混合並匹配時，來自特定VH /VL 對的VH 序列被結構相似的VH 序列代替。同樣地，較佳的是來自特定VH /VL 對的VL 序列被結構相似的VL 序列代替。
因此，一方面，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含：
(a)一重鏈可變區，該重鏈可變區包含選自SEQ ID NO：37至42之胺基酸序列；及
(b)一輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含選自SEQ ID NO：43至48之胺基酸序列；
其中該抗體特異性結合人LAG-3。
較佳的重鏈及輕鏈組合包括：
(a)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：43)；
(b)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：38)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：44)；
(c)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：39)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：45)；
(d)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：40)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：46)；
(e)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：41)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：47)；或
(f)一重鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：42)及一輕鏈可變區(其包含胺基酸序列SEQ ID NO：48)。
另一方面，本揭露提供多種抗體，該等抗體包括25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的重鏈及輕鏈的CDR1、CDR2及CDR3，或彼等的組合。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VH CDR1的胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：37至42中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VH CDR2的胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：43至48中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VH CDR3的胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：13至14、GGY及SEQ ID NO：16至18中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VK CDR1的胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：19至24中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VK CDR2的胺基酸序列示於SEQ ID NO：25至30中。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的VK CDR3的胺基酸序列分別示於SEQ ID NO：31至36中。CDR區係用Kabat系統繪出(Kabatet al .(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S. Department of Health and Human Services,NIH Publication No. 91-3242)。
該等抗體中每一種均能結合人LAG-3，且抗原結合特異性主要由CDR1、CDR2及CDR3區提供的條件下，VH CDR1、CDR2及CDR3序列與VL CDR1、CDR2及CDR3序列可以被“混合並匹配”(即來自不同抗體的CDR可被混合並匹配，儘管每種抗體均必須包含VH CDR1、CDR2及CDR3以及VL CDR1、CDR2及CDR3)以產生本發明的其他抗LAG-3結合分子。使用以上所說明及實施例中的結合測定(例如ELISA、分析)可測定LAG-3與此類“混合並匹配”之抗體的結合。較佳的是，當VH CDR序列被混合並匹配時，來自特定VH 序列的CDR1、CDR2及/或CDR3序列被結構上相似的一或多種CDR序列代替。類似地，當VL CDR序列被混合並匹配時，來自特定VL 序列的CDR1、CDR2及/或CDR3序列較佳的是被結構上相似的一或多個CDR序列代替。對於本發明所屬技術領中具有通常知識者非常清楚的是，藉由使用來自在本揭露的單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的CDR序列的結構類似序列代替一或更多個VH 及/或VL CDR區序列可產生新穎的VH 及VL 序列。
因此，另一方面，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含選自SEQ ID NO：1至6之胺基酸序列；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含選自SEQ ID NO：7至12之胺基酸序列；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含選自SEQ ID NO：13至14、GGY或SEQ ID NO:16至18之胺基酸序列；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含選自SEQ ID NO：19至24之胺基酸序列；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含選自SEQ ID NO：25至30之胺基酸序列；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含選自SEQ ID NO：31至36之胺基酸序列；
其中該抗體特異性結合人LAG-3。
在一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：1；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：7；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：13；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：19；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：25；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：31。
在另一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：2；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：8；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：14；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：20；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：26；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：32。
在另一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：3；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：9；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含GGY；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：21；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：27；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：33。
在另一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：4；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：10；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：16；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：22；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：28；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：34。
在另一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：5；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：11；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：23；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：29；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：35。
在另一較佳體系中，該抗體包含：
(a)一重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：6；
(b)一重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：12；
(c)一重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：18；
(d)一輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：24；
(e)一輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：30；及
(f)一輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：36。
在本領域中熟知的是，CDR3結構域，獨立於一或多個CDR1及/或CDR2結構域，可以單獨確定抗體對同族抗原的結合特異性，並且可預測地產生多種抗體，該等抗體具有基於共同的CDR3序列的相同的結合特異性。參見，例如Klimkaet a1 .,British J. of Cancer 83(2):252-260(2000);Beiboeret al .,J. Mol. Biol. 296:833-849(2000);Raderet al .,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:8910-8915(1998);Barbaset al .,J. Am. Chem. Soc. 116:2161-2162(1994);Barbaset al .,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:2529-2533(1995);Ditzelet al .,J. Immunol. 157:739-749(1996);Berezovet al .,BIAjournal 8:Scientific Review 8(2001);Igarashiet al .,J. Biochem (Tokyo) 117:452-7(1995);Bourgeoiset al .,J. Virol 72:807-10(1998);Leviet al .,Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:4374-8(1993);Polymenis and Stoller,J. Immunol. 152:5218-5329(1994)andxu and Davis,Immunity 13:37-45(2000)。亦參見美國專利號6,951,646；6,914,128；6,090,382；6,818,216；6,156,313；6,827,925；5,833,943；5,762,905及5,760,185。該等參考文獻中每一篇的全文均併入本文作為參考。
因此，本揭露提供的單株抗體包含源自抗體的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，該抗體衍生自人或非人類動物，其中該單株抗體能夠特異性結合人LAG-3。在某些方面，本揭露提供的單株抗體包括源自非人抗體(如小鼠(mouse)或大鼠(rat)抗體)的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，其中該單株抗體能夠特異性結合LAG-3。在一些較佳體系中，此等創造性抗體包含源自非人抗體的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，與相應的親代非人抗體比較，(a)能與其競爭而進行結合；(b)保留功能特性；(c)結合相同的表位；及/或(d)具有相似的結合親和力。
在其他方面，本揭露提供的單株抗體包含源自人抗體(例如獲自非人動物的人抗體)的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，其中該人抗體能夠特異性結合人LAG-3。在其他方面，本揭露提供的單株抗體包含源自第一人抗體(例如獲自非人動物的人抗體)的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，其中該第一人抗體能夠特異性結合人LAG-3，並且其中源自該第一人抗體的CDR3結構域替換在一缺乏針對LAG-3的結合特異性的人抗體中的CDR3結構域以產生能特異性結合人LAG-3的第二人抗體。在某些較佳體系中，此等創造性抗體包含源自該第一人抗體的一或多個重鏈及/或輕鏈CDR3結構域，與相應的親代第一人抗體相比較，(a)能與其競爭而進行結合；(b)保留功能特性；(c)結合相同的表位；及/或(d)具有相似的結合親和力。
具有特定種系序列之抗體
在某些較佳體系中，本發明之抗體包含源自特定種系的重鏈免疫球蛋白基因的一重鏈可變區及/或源自特定種系的輕鏈免疫球蛋白基因的一輕鏈可變區。
例如，在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部位，其包含一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-20基因、人VH 4-34基因、人VH 3-33基因或人VH 1-24基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。在另一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L18基因、人VK L6基因或人VK A27基因的產物或是衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。又在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體包含一重鏈可變區，該重鏈可變區係一人VH 3-20基因的產物或衍生於該基因之產物，並包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L18基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。又在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體包括一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 4-34基因的產物或衍生自該基因之產物，並包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L6基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。又在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體包含一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-33基因的產物或衍生自該基因之產物，並包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK A27基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。又在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體包括一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 1-24基因的產物或衍生自該基因之產物，並包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L6基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。又在一較佳體系中，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其中該抗體包括一重鏈可變區，該重鏈可變區係人VH 3-33基因的產物或衍生自該基因之產物，並包含一輕鏈可變區，該輕鏈可變區係人VK L6基因的產物或衍生自該基因之產物，其中該抗體特異性結合人LAG-3。
該等抗體亦可擁有一或多個以上詳細說明的功能特徵，例如與人LAG-3結合高親和性的結合、與猴LAG-3結合、缺乏與小鼠LAG-3的結合、抑制LAG-3與MHC第II類分子結合的能力、及/或刺激抗原特異性T細胞應答的能力。
分別具有VH 3-20及VK L18的VH 及VL 之抗體的實例係25E3抗體。分別具有VH 4-34及VK L6的VH 及VL 之抗體的實例係25F7抗體及8B7抗體。分別具有VH 3-33及VK A27的VH 及VL 之抗體的實例係26H10抗體。分別具有VH 1-24及VK L6的VH 及VL 之抗體的實例係11F2抗體。分別具有VH 3-33及VK L6的VH 及VL 之抗體的實例係17E5抗體。
如在此所用，如果人抗體的可變區自使用人種系免疫球蛋白基因的系統中獲得，則該人抗體包含重鏈或輕鏈可變區，該等可變區係特定種系序列的“產物”或者“衍生自”該特定種系序列。此等系統包括使用所感興趣的抗原對帶有人免疫球蛋白基因的轉基因小鼠進行免疫，或者使用所感興趣的抗原對在噬菌體上進行展示的人免疫球蛋白基因庫進行篩選。人抗體係人種系免疫球蛋白序列的“產物”或“衍生自”該序列，藉由將該人抗體的胺基酸序列與多種人種系免疫球蛋白的胺基酸序列進行比較，並選擇在序列上最接近(即最大%同一性)該人抗體的序列的人種系免疫球蛋白序列，就可以將該人抗體鑒定為是此類抗體。人抗體係特定人種系免疫球蛋白序列的“產物”或“衍生自”該序列，與該種系序列相比，該人抗體可含有胺基酸差異，由於例如自然發生的體細胞突變或故意引入的定點突變。然而，一種經選擇的人抗體典型地與由人種系免疫球蛋白基因編碼的胺基酸序列在胺基酸序列上具有至少90%的同一性，並且當與其他物種(例如鼠種系序列)的種系免疫球蛋白胺基酸序列進行比較時，該經選擇的人抗體包含將該人抗體鑒定為人抗體的胺基酸殘基。在某些情況中，人抗體與由該種系免疫球蛋白基因編碼的胺基酸序列在胺基酸序列上可具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%，或99%的同一性。典型地，與由該人種系免疫球蛋白基因編碼的胺基酸序列相比，衍生於特定人種系序列的人抗體將展示不超過10個胺基酸差異。在某些情況中，與由該種系免疫球蛋白基因編碼的胺基酸序列相比，該人抗體可以展示出不超過5個，或甚至不超過4個、3個、2個，或1個胺基酸差異。
同源抗體
又在另一較佳體系例中，本發明之抗體包括含有與此處說明的較佳抗體的胺基酸序列同源的胺基酸序列的重鏈可變區及輕鏈可變區，並且其中該抗體保留本發明的抗LAG-3抗體的所欲的功能特性。例如，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含一重鏈可變區及一輕鏈可變區，其中：
(a)該重鏈可變區包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與選自SEQ ID NO：37至42之胺基酸序列具有至少80%的同源性；
(b)該輕鏈可變區包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與選自SEQ ID NO：43至48之胺基酸序列具有至少80%的同源性；且
(c)該抗體特異性地結合人LAG-3。
另外地或可替代地，該抗體還可擁有一或多個以上所討論的以下功能特性，例如與人LAG-3的高親和性結合、與猴LAG-3結合、缺乏與小鼠LAG-3的結合、抑制LAG-3與MHC第II類分子結合的能力、及/或刺激抗原特異性T細胞應答的能力。
在不同的較佳體系中，該抗體可為例如人抗體、人化抗體或嵌合抗體。
在其他較佳體系中，VH 及/或VL 胺基酸序列可與以上給出的序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的同源性。與以上給出的序列的VH 與VL 區具有高同源性(即80%或更大)的VH 與VL 區之抗體，可以藉由以下方式獲得：對編碼SEQ ID NO：49至54或55至60的核酸分子進行誘變(例如定點突變或PCR介導的誘變)，接著使用在此說明的功能測定針對保留的功能(即以上所給出的功能)檢測已編碼的經改變之抗體。
如在此所使用，兩個胺基酸序列之間的百分比同源性等同於兩個序列之間的百分比同一性。在這兩個序列之間的百分比同一性係該等序列共有的相同位置的數目的函數(即%同源性=相同位置的＃/位置的總＃x100)，考慮到空位(gap)的數目及每個空位的長度，需要將它們引入用於這兩個序列的最佳比對。正如在以下的非限制性實例中說明，使用數學演算法可以完成兩個序列之間的序列比較及百分比同一性的確定。
使用已經被整合至ALIGN程式中(2.0版本)的E. Meyers和W. Miller(Comput. Appl. Biosci .,4:11-17(1988))的演算法，使用PAM120權重殘基表，空位長度罰分為12以及空位罰分為4，可以確定兩個胺基酸序列的百分比同一性。此外，使用已經被整合至GCG套裝軟體中的GAP程式(可在www.gcg.com上獲得)內的Needleman和Wunsch(J. Mol. Biol. 48:444-453(1970))的演算法，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣，以及空位權重16、14、12、10、8、6、或4及長度權重1、2、3、4、5、或6，可以確定兩個胺基酸序列的百分比同一性。
另外地或者可替代地，本揭露的蛋白質序列可以作為“查詢序列”進一步被使用，對公共資料庫進行檢索，例如來鑒定相關序列。使用Altschul,et al.( 1990)J. Mol. Biol. 215:403-10的XBLAST程式(版本2.0)可以進行此類檢索。BLAST蛋白質檢索可採用XBLAST程式，記分=50，字長=3而進行，以獲得與本發明之抗體分子同源的胺基酸序列。為獲得用於比較目的的空位比對，如在Altschulet al .,(1997)Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402中所說明可使用Gapped BLAST。當使用BLAST及Gapped BLAST程式時，對應的程式(例如XBLAST及NBLAST)的默認參數係有用的。見www.ncbi.nlm.nih.gov。
具有保守性修飾之抗體
在某些較佳體系中，本發明之抗體包括含有CDR1、CDR2及CDR3序列的一重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3序列的一輕鏈可變區，其中該等CDR序列中的一或多個序列包括基於在此所說明的較佳抗體(例如，25F7、26H10、25E3、8B7、11F2、17E5)的限定的胺基酸序列、或彼等的保守性修飾，並且其中所述抗體保留本發明的抗LAG-3抗體的所欲的功能特性。在本領域中所理解的是，可以進行某些保守性序列修飾，該等保守性序列修飾並不去除抗原結合。參見，例如Brummellet al .(1993)Biochem 32:1180-8;de Wildtet al .(1997)Prot. Eng . 10:835-41;Komissarovet al .(1997)J. Biol. Chem . 272:26864-26870;Hallet al .(1992)J. Immunol . 149:1605-12;Kelley and O'Connell(1993)Biochem . 32:6862-35;Adib-Conquyet al .(1998)Int. Immunol . 10:341-6及Beerset al .(2000)Clin Can. Res . 6:2835-43。因此，本揭露提供經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包括含有CDR1、CDR2及CDR3序列的一重鏈可變區及含有CDR1、CDR2及CDR3序列的一輕鏈可變區，其中：
(a)該重鏈可變區CDR3序列包括選自SEQ ID NO：13至14、GGY或SEQ ID NO：16至18之胺基酸序列以及彼等的保守性修飾；
(b)該輕鏈可變區CDR3序列包括選自SEQ ID NO：31至36之胺基酸序列以及彼等的保守性修飾；且
(c)該抗體特異性結合人LAG-3。
另外地或可替代地，該抗體亦可擁有以上所說明的以下功能特性中的一或多個，例如與人LAG-3的高親和性結合、與猴LAG-3結合、缺乏與小鼠LAG-3的結合、抑制LAG-3與MHC第II類分子結合的能力、及/或刺激抗原特異性T細胞應答的能力。
在一較佳體系中，該重鏈可變區CDR2序列包含選自SEQ ID NO：7至12之胺基酸序列以及彼等的保守性修飾；並且該輕鏈可變區CDR2序列包含選自SEQ ID NO：25至30之胺基酸序列以及彼等的保守性修飾。在另一較佳體系中，該重鏈可變區CDR1序列包含選自SEQ ID NO：1至6之基酸序列以及彼等的保守性修飾；並且該輕鏈可變區CDR1.序列包含選自SEQ ID NO：19至24之胺基酸序列以及彼等的保守性修飾。
在不同的較佳體系中，該抗體可為例如人抗體、人化抗體或嵌合抗體。
如此處所使用，術語“保守性修飾”旨在表示胺基酸修飾，該等修飾不顯著影響或改變包含該胺基酸序列之抗體的結合特徵。此類保守性修飾包括胺基酸的置換、插入及缺失。修飾可藉由本領域已知的標準技術(如定點誘變及PCR介導的誘變)被引入本發明之抗體中。保守性胺基酸置換係以下該等置換，其中胺基酸殘基被具有一個相似側鏈的一胺基酸殘基替換。本領域中已經定義具有相似側鏈的胺基酸殘基的家族。該等家族包括具有鹼性側鏈的胺基酸(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)，具有酸性側鏈的胺基酸(例如天冬胺酸、谷胺酸)，具有不帶電荷的極性側鏈的胺基酸(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)，具有非極性側鏈的胺基酸(例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、蛋胺酸)，具有β分支側鏈的胺基酸(例如蘇胺酸、纈胺酸、異亮胺酸)，以及具有芳香側鏈的胺基酸(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)。因此，在本發明之抗體的CDR區中的一或多個胺基酸殘基可以被來自相同側鏈家族的其他胺基酸殘基所替代，並且使用在此說明的功能測定可以針對保留的功能(即以上給出的功能)測試被改變之抗體。
如抗LAG-3抗體結合相同表位之抗體
在另一較佳體系中，本揭露提供多種抗體，彼等在LAG-3上所結合的表位係與本發明的抗LAG-3單株抗體中的任何抗體在LAG-3上所結合的表位相同(即該等抗體有能力與本發明的該等單株抗體中的任何抗體進行交叉競爭而與人LAG-3相結合)。在較佳體系中，用於交叉競爭研究的參考抗體可為單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5。
此等交叉競爭之抗體可基於彼等與25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及/或17E5交叉競爭的能力在標準LAG-3結合測定中被識別。例如，可使用標準ELISA測定，其中將重組的人LAG-3蛋白固定在板上，該等抗體之一用螢光進行標記，並且評價未被標記之抗體進行競爭使被標記之抗體脫離結合(off the binding)的能力。另外地或可替代地，亦可以使用BIAcore分析來評價抗體的交叉競爭的能力。測試抗體抑制例如25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及/或17E5與人LAG-3相結合的能力以證明該測試抗體可與25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及/或17E5競爭而結合人LAG-3，並因此與25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及/或17E5一樣結合人類LAG-3上的相同表位。在一較佳體系中，與25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及/或17E5一樣結合人LAG-3的相同表位之抗體係人單株抗體。如在實施例中所說明者，可對此類人單株抗體進行製備並分離。
如在實施例3C中進一步所討論者，已經將25E3、25F7及8E7與人LAG-3的結合定位(map)於人LAG-3的第一個細胞外結構域內的一“額外環”區。該額外環區的序列在SEQ ID NO：79中給出。使用肽掃描實驗將25E3與額外環區的結合定位於以下胺基酸序列：PGHPLAPG(SEQ ID NO：76)，而將25F7與額外環區的結合定位於以下胺基酸序列：HPAAPSSW(SEQ ID NO：77)，並且8B7與額外環區的結合定位於以下胺基酸序列：PAAPSSWG(SEQ ID NO：78)。因此，在一較佳體系中，本發明提供抗LAG-3抗體，該抗體結合人LAG-3的表位，該人LAG-3包含胺基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID NO：76)。在另一較佳體系中，本發明提供抗LAG-3抗體，該抗體結合人LAG-3的表位，該人LAG-3包含胺基酸序列HPAPPSSW(SEQ ID NO：77)或PAAPSSWG(SEQ ID NO：78)。
經工程處理且經修飾之抗體
可進一步藉由下述方式製備本發明之抗體：使用具有本揭露的VH 及/或VL 序列中的一或多個序列之抗體作為起始材料以進行經修飾之抗體，這種經修飾之抗體可具有與起始抗體不同的特性。藉由在一或兩個可變區(即VH 及/或VL )中，例如在一或多個CDR區內及/或在一或多個框架區內中修飾一或多個殘基，可以對抗體進行工程處理。另外地或可替代地，藉由在一或多個恒定區中修飾殘基，例如改變該抗體的一或多種效應物功能，可以對抗體進行工程處理。
在某些較佳體系中，可以使用CDR移植對抗體的可變區進行工程處理。抗體與靶抗原主要藉由位於六個重鏈及輕鏈互補決定區(CDR)中的胺基酸殘基進行相互作用。由於這一原因，CDR中的胺基酸序列在各個抗體之間比在CDR之外的序列更具有多樣性。因為CDR序列負責大部分抗體-抗原相互作用，所以藉由構建包含源自被移植至框架序列(來自具有不同特性的不同抗體)上的特異的自然發生之抗體的CDR序列的表達載體，表達模擬特異的自然發生之抗體的特性的重組抗體係可能的(參見，例如Riechmannet al .(1998)Nature 332:323-327;Joneset al .(1986)Nature 321:522-525;Queenet al .(1989)Proc. Natl. Acad. See. U.S.A. 86:10029-10033；美國專利號5,225,539；5,530,101；5,585,089；/5,693,762以及6,180,370)。
因此，本發明的另一較佳體系涉及經分離之單株抗體或該抗體之抗原結合部分，其包含一重鏈可變區和一輕鏈可變區，該重鏈可變區包含CDR1、CDR2及CDR3序列，該CDR1、CDR2及CDR3序列包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：1至6、SEQ ID NO：7至12及SEQ ID NO：13至14、GGY、及16-18，且該輕鏈可變區包含CDR1、CDR2及CDR3序列，該CDR1、CDR2及CDR3序列包含選自下述的胺基酸序列SEQ ID NO：19至24、SEQ ID NO：25至30及SEQ ID NO：31至36。因此，包含單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的VH 及VL CDR序列的此類抗體可包含不同於該等抗體的框架序列。
此類框架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA資料庫或已公開的文獻中獲得。例如，針對人重鏈及輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列資料庫中找到(在網址http://www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase上可獲得)，連同在以下獻中找到：如上所引述的Kabat et al.(1991);Tomlinson et al.(1992)“The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops”J. Mol. BioI. 227:776-798；及Cox et al.(1994)”A Directory of Human Germ-line VH Segments Reveals a Strong Bias in their Usage”Eur. J. Immunol. 24:827-836；該等文獻中每一篇的內容均明確地併入本文作為參考。作為另一實例，針對人重鏈及輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在Genbank資料庫中找到。例如，在HCo7 HuMAb小鼠中發現的以下重鏈種系序列在所附的Genbank登錄號中可獲得：1-69(NG_0010109、NT_024637以及BC070333)、3-33(NG_0010109 & NT_024637)及3-7(NG_0010109 & NT_024637)。作為另一變例，在HCo12 HuMAb小鼠中發現的以下的重鏈種系序列在所附的Genbank登錄號中可獲得：1-69(NG_0010109、NT_024637以及BC070333)，5-51(NG_0010109 & NT_024637),4-34(NG_0010109 & NT_024637),3-30.3(CAJ556644)及3-23(AJ406678)。
使用被稱為Gapped BLAST的序列相似性檢索方法(Altschul et al.(1997)，如上所述)之一將抗體蛋白序列與已編輯的蛋白質序列資料庫進行比較，這對本發明所屬技術領中具有通常知識者而言係熟知的。
在本發明之抗體中使用的較佳框架序列係那些結構上與由本發明的已選擇之抗體所使用的框架序列相似的框架序列，例如類似由本發明較佳的單株抗體所使用的VH 3-20(SEQ ID NO：69)、VH 4-34(SEQ ID NO：61)、VH 3-33(SEQ ID NO：65)或VH 1-24(SEQ ID NO：73)框架序列及/或VK L18(SEQ ID NO：71)、VK L6(SEQ ID NO：63)或VK A27(SEQ ID NO：67)框架序列。VH CDR1、CDR2及CDR3序列，以及VK CDR1、CDR2及CDR3序列可以被移植至多個框架結構區上，該等框架結構區具有與在從中衍生出該框架序列的種系免疫球蛋白基因中所發現的序列相同的序列，或者該等CDR序列可以被移植至多個框架結構區上，該等框架結構區與該等種系序列相比含有一或多個突變。例如，已發現在某些情況下在框架區內對殘基進行突變可能是有益的，以保持或增強該抗體的抗原結合能力(參見例如美國專利號5,530,101；5,585,089；5,693,762及6,180,370)。
另一類型的可變區修飾係在VH 及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3區中對胺基酸殘基進行突變，由此改善所欲之抗體的一或多種結合特性(例如親和性)。可以進行定向誘變或PCR介導的誘變來引入一或多種突變，並且對抗體的結合、或其他所欲的功能特性的作用可以如在此說明的以及在實施例中提供的活體內或體外測定中進行評估。引入較佳的是保守性修飾(如以上所討論)。該等突變可以是胺基酸置換、插入或缺失，但較佳地是置換。此外，典型地在一CDR區中改變不超過一個、兩個、三個、四個或五個殘基。
因此，在另一方面，本揭露提供經分離之抗LAG-3單株抗體或彼等之抗原結合部分，其包含一重鏈可變區，該重鏈可變區包含：(a)VH CDR1區域，其包含選自下述的胺基酸序列SEQ ID NO：1至6、或與SEQ ID NO：1至6相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列；(b)VH CDR2區域，其包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：7至12、或與SEQ ID NO：7至12相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列；(c)VH CDR3區域，其包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：13至14、GGY及SEQ ID NO：16至18，或與SEQ ID NO：13至14、GGY及SEQ ID NO：16至18相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列；(d)VL CDR1區域，其包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：19至24、或與SEQ ID NO：19至24相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列；(e)VL CDR2區域，其包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：25至30、或與SEQ ID NO：25至30相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列；及(f)VL CDR3區域，其包含選自下述的胺基酸序列：SEQ ID NO：31至36、或與SEQ ID NO：31至36相比具有一個、兩個、三個、四個或五個胺基酸置換、缺失或插入的胺基酸序列。
本發明的工程化之抗體包括以下抗體：其中在VH 及/或VL 內已經對框架殘基進行修飾，例如改善抗體特性。典型地對此類框架進行修飾以降低抗體的免疫原性。例如，一方法係使一或多個骨架殘基進行“回復突變”為對應的種系序列。更確切地說，已經經歷體細胞突變之抗體可以包含與從中衍生出抗體的種系序列不同的框架殘基。此類殘基可以藉由將該抗體框架序列與從中衍生出抗體的種系序列進行比較而被鑒定。
例如，表A示出不同於種系的框架區胺基酸位置(使用Kabat編號系統)的區域，並示出這個位置如何藉由所指示的置換而回復突變為該種系：
另一類型的框架修飾涉及在框架結構區內，或甚至在一或多個CDR區內，對一或多個殘基進行突變，以去除T細胞表位，由此降低該抗體的潛在的免疫原性。這一方法也被稱為“去免疫化”，且美國專利公開號20030153043進一步詳細地說明該方法。
除了在框架區或CDR區內進行的修飾之外，或可替代地，亦可以對本發明之抗體進行工程處理以在Fc區內包含一些修飾，以便典型地改變該抗體的一或多種功能特性，如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合、及/或抗原依賴細胞的細胞毒性作用。此外，本發明之抗體可以進行化學修飾(例如一或多個化學物部分可以被附聯至抗體上)，或被修飾以改變其糖基化作用，再次改變該抗體的一或多個功能特性。以下對該等實施例中的每一個均進行更詳細的說明。Fc區中的殘基的編號係Kabat的EU索引號的編號。
在一較佳體系中，抗體係一IgG4同型抗體，該抗體包括在重鏈恒定區的鉸鏈區中對應於位置228(S228P；EU索引)的位置上的絲胺酸到脯胺酸的突變。已經報導這個突變消除鉸鏈區中重鏈之間二硫橋鍵的異質性(Angalet al .如上所述；位置241係基於Kabat編號系統)。例如，在不同較佳體系中，本發明的抗LAG-3抗體可包含連接人IgG4恒定區的25F7(SEQ ID NO：37)或26H10(SEQ ID NO：38)的重鏈可變區，在人IgG4恒定區中對應於位置241的位置上的絲胺酸如在以上所述之Angalet al .中所說明者已經被突變成脯胺酸。因此，對於連接人IgG4的恒定區的25F7或26H10重鏈可變區而言，這種突變對應於EU索引的S228P突變。
在一較佳體系中，對CH1的鉸鏈區進行修飾，這樣鉸鏈區中的半胱胺酸殘基數目發生變化，例如增加或減少。這個方法進一步說明於美國專利號5,677,425中。CH1的鉸鏈區中的半胱胺酸殘基數目發生變化，以例如便於組裝輕鏈及重鏈或者增大或減小抗體的穩定性。
在另一較佳體系中，對抗體的Fc鉸鏈區進行突變以減小該抗體的生物半衰期。更確切地說，將一或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段的CH2-CH3結構域的介面區，這樣相對於天然Fc鉸鏈結構域的葡萄球菌蛋白A(SpA)的結合而言，該抗體削弱SpA的結合。這方法更詳細地說明於美國專利號6,165,745中。
在另一較佳體系中，對該抗體進行修飾以增大其生物半衰期。多種不同的方法係可能的。例如，如在美國專利號6,277,375中所說明，可引入以下突變中的一或多個突變：T252L、T254S及T256F。可替代地，為增大生物半衰期，該抗體可以在CH1或CL區內進行改變以包含從IgG的Fc區的CH2結構域的兩個環中得到的補救受體(salvage receptor)的結合表位，如在美國專利號5,869,046及6,121,022中所說明。
又在其他較佳體系中，藉由使用不同的胺基酸殘基替換至少一個胺基酸殘基以改變Fc區，進而改變該抗體的一或多種效應物功能。例如，選自胺基酸殘基234、235、236、237、297、318、320及322的一或多個胺基酸可以被不同的胺基酸殘基所替換，這樣該抗體對於效應物配位體而言具有已改變的親和性，但仍保留親代抗體的抗原結合能力。例如，親和性被改變的效應物配位體可以是例如Fc受體或補體的Cl成分。這方法更詳細地說明於美國專利號5,624,821及5,648,260中。
在另一實例中，選自胺基酸殘基329、331及322的一或多個胺基酸殘基可以被不同的胺基酸殘基所替換，這樣該抗體具有已改變的C1q結合及/或降低或已消除的補體依賴的細胞毒性作用(CDC)。這方法更詳細地說明於美國專利號6,194,551中。
在另一實例中，改變胺基酸位置231及239中的一或多個胺基酸，由此改變抗體的固定補體的能力。這個方法進一步說明於PCT公開文件WO 94/29351中。
又在另一實例中，對Fc區域進行修飾以提高該抗體介導抗體依賴的細胞毒性(ADCC)的能力，及/或在以下位置中藉由修飾一或多個胺基酸而增加該抗體對Fcγ受體的親和力：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。這一方法進一步說明於PCT公開文件WO 00/42072中。而且，已經定位出針對FcγR1、FcγRII、FcγRIII及FcRn在人類IgGl上的結合位點，並且已經說明具有結合已被改善的變體(參見Shieldset al .(2001)J. Biol. Chem. 276:6591-6604)。已表明在位置256、290、298、333、334及339上特異的突變改善對FcγRIII的結合。額外地，已表明以下組合突變體改善FcγRIII結合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A及S298A/E333A/K334A。
又在另一較佳體系中，對抗體的糖基化進行修飾。例如，可製作去糖基化之抗體(即該抗體缺乏糖基化)。可改變糖基化以例如增加該抗體對抗原的親和性。例如，藉由在抗體序列中改變一或多個糖基化的位點可實現此類碳水化合物修飾。例如，可進行一或多個胺基酸的置換，這導致一或多個可變區框架的糖基化位點的消除，由此在該位點處消除糖基化作用。這種糖基化作用可增加該抗體對抗原的親和性。參見例如美國專利號5,714,350及6,350,861。
另外地或可替代地，可以製作具有被改變類型的糖基化作用的抗體，如具有減少量的岩藻糖殘基的低岩藻糖基化抗體或具有增加的二等分GlcNac結構的抗體。已經證明此類已改變的糖基化類型增加抗體的ADCC能力。例如，藉由在具有已改變的糖基化機制的宿主細胞中表達該抗體可以實現此類碳水化合物修飾。具有已改變的糖基化機制的細胞在本領域中係已知的，並可被用作表達本發明的重組抗體的宿主細胞，由此產生具有已改變的糖基化之抗體。例如，細胞系Ms704、Ms705及Ms709缺乏岩藻糖基轉移酶基因，FUT8(a(1,6)-岩藻糖基轉移酶)，如此在Ms704、Ms705及Ms709細胞系中表達之抗體缺乏在彼等的碳水化合物上的岩藻糖。Ms704、Ms705及Ms709FUT8-/- 細胞系係藉由使用兩種替換載體對CHO/DG44細胞中的FUT8基因的靶向破壞而產生(參見美國專利公開號20040110704及Yamane-Ohnukiet al. (2004)Biotechnol Bioeng 87:614-22)。作為另一實例，EP 1,176,195說明帶有在功能上被破壞的FUT8基因的細胞系(該基因編碼岩藻糖基轉移酶)，如此藉由減少或消除a-1,6鍵相關的酶，在這種細胞系中表達之抗體表現出低岩藻糖基化作用。EP 1,176,195亦說明這樣的細胞系：它們具有用於將岩藻糖加至與抗體的Fc區域相結合的N-乙醯基葡糖胺的低的酶活性，或者不具有該酶活性，例如鼠骨髓瘤細胞系YB2/0(ATCC CRL 1662)。PCT公開文件WO 03/035835說明一變種的CHO細胞系Lec13細胞，其具有降低的將岩藻糖附聯於與Asn(297)相連的碳水化合物的能力，這也導致在該宿主細胞中表達之抗體的低岩藻糖化作用(亦還可參見Shieldset al. (2002)J. Biol. Chem. 277:26733-26740)。具有經修飾的糖基化特性之抗體還可在雞蛋中產生，如在PCT公開文件WO 06/08923所說明。可替代地，具有經修飾的糖基化特性之抗體可在植物細胞(如浮萍(Lemna ))中產生。在植物系統中用於生產抗體的方法揭露於美國專利申請中，該專利申請對應於2006年8月11日提交的Alston & Bird LLP代理參考號040989/314911。PCT公開文件WO 99/54342說明經工程處理而表達糖蛋白修飾的糖基轉移酶(例如，β(1,4)-N-乙醯葡糖胺基轉移酶Ⅲ(GnTIII))的細胞系，這樣在經工程處理的細胞系中表達之抗體展示增多的二等分GlcNac結構，這導致抗體的ADCC活性提高(亦可參見Umanaet al. (1999)Nat. Biotech. 17:176-180)。可替代地，抗體的岩藻糖殘基可使用岩藻糖苷酶切掉；例如，岩藻糖苷酶(α-L-岩藻糖苷酶)從抗體中除去岩藻糖殘基(Tarentinoet al. (1975)Biochem. 14:5516-23)。
由本揭露在此所考慮之抗體的另一修飾係聚乙二醇化作用(pegylation)。可對抗體進行聚乙二醇化以例如增加該抗體的生物半衰期(例如血清半衰期)。為了對抗體進行聚乙二醇化，典型地在一或多個聚乙二醇(PEG)基團附聯於該抗體或其片段的條件下，將抗體或其抗體片段與PEG(如PEG的反應性酯或醛類衍生物)進行反應。較佳的是，藉由醯化反應或烷化反應使用反應性PEG分子(或類似反應性的水溶性聚合物)進行聚乙二醇化。在此使用之術語“聚乙二醇”旨在涵蓋已用於衍生其他蛋白質(如單(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來醯亞胺)的PEG的形式中的任何形式。在某些較佳體系中，有待聚乙二醇化之抗體係去糖基化之抗體。對蛋白質進行聚乙二醇化的方法在本領域中係已知的，並可應用至本發明之抗體。參見例如EP 0 154 316及EP 0 401 384。
抗體之物理特性
本揭露之抗體可藉由其不同的物理特性進行表徵以檢測及/或區分彼等的不同類別。
本揭露之抗體可在輕鏈或重鏈可變區中含有一或多個糖基化位點。此類糖基化位點可導致抗體的免疫原性提高或抗體的pK發生變化，這係因為抗原結合發生改變(Marshallet al (1972)Annu Rev Biochem 41:673-702;Gala and Morrison(2004)J Immunol 172:5489-94;Wallicket al (1988)J Exp Med 168:1099-109;Spiro(2002)Glyco-biology 12:43R-56R;Parekhet al (1985)Nature 316:452-7;Mimuraet al .(2000)Mol Immunol 37:697-706)。已知糖基化作用發生在包含N-X-S/T序列的基序中。在某些情況下，較佳地是具有不包含可變區糖基化的抗LAG-3抗體。這可以藉由選擇在可變區中不包含糖基化基序之抗體，或者藉由在糖基化區域內突變殘基來實現。
在一較佳體系中，本揭露之抗體不含有天冬醯胺同分異構位點。在N-G序列或D-G序列上有可能發生天冬醯胺的脫醯胺作用，並導致生成異天冬胺酸殘基，這將纏繞結構引入多肽鏈中並且降低其穩定性(異天冬胺酸效應)。
每種抗體均具有一獨特的等電點(pI)，等電點通常落在6至9.5的pH範圍內。IgG1抗體的pI典型地落在7至9.5的pH範圍內，並且IgG4抗體的pI典型地落在6至8的pH範圍內。推測pI在正常範圍之外之抗體在體內條件下可能會有一些解折疊及不穩定性。因此，較佳的是具有包含落入正常範圍內的pI值的抗LAG-3抗體。這可以藉由篩選pI在正常範圍內之抗體或者藉由對帶電荷的表面殘基進行突變來實現。
每種抗體均具有特徵性的熔點，熔點越高表明在體內的總體穩定性越好(Krishnamurthy R and Manning MC(2002)Curr Pharm Biotechnol 3:361-71)。通常，較佳的是TM1 (開始解折疊的溫度)大於60℃，較佳的是大於65℃，甚至更佳的是大於70℃。使用差示掃描熱量法(Chenet al (2003)Pharm Res 20:1952-60；Ghirlandoet al (1999)Immunol Lett 68:47-52)或者圓二色性法(Murrayet al .(2002)J. Chromatogr Sci 40:343-9)可以測量抗體的熔點。
在一較佳體系中，選擇不會快速降解之抗體。使用毛細管電泳法(CE)以及MALDI-MS可以測量抗體的降解(Alexander AJ and Hughes DE(1995)Anal Chem 67:3626-32)。
在另一較佳體系中，選擇具有最低限度的聚集作用之抗體，聚集作用可能導致觸發不需要的免疫反應及/或經改變的或不良的藥物動力學特性。總體上，可接受之抗體的聚集度係25%或低於25%，較佳地是20%或低於20%，甚至更佳地是15%或低於15%，甚至甚佳地是10%或低於10%，並甚至甚佳的是5%或低於5%。可以使用數種技術以測量聚集，所述技術包括大小排阻層析柱(SEC)、高效液相色譜(HPLC)及光散射法。
工程處理抗體的方法
如以上所討論，藉由修飾VH 及/或VL 序列，或其附聯的一或多個恒定區，可以使用具有在此揭露的VH 和VL 序列的抗LAG-3抗體以產生新的抗LAG-3抗體。因此，在本發明的另一方面，使用本發明的抗LAG-3抗體(如25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5)的結構特徵來產生在結構上相關的抗LAG-3抗體，該抗體保留了本發明之抗體的至少一功能特性，例如結合人LAG-3。例如，如以上所討論，可以將25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5的一或多個CDR區，或彼等的突變與已知的框架區及/或其他CDR重組地組合以產生另外的重組工程化的本發明的抗LAG-3抗體。其他類型的修飾包括上節中說明的那些修飾。用於工程處理方法的起始材料係在此提供的VH 及/或VL 序列中的一或多個序列，或彼等的一或多個CDR區。為了產生工程化之抗體，不必實際地製作抗體(即表達成蛋白)，該抗體具有在此提供的VH 及/或VL 序列中的一或多個序列、或彼等的一或多個CDR區。相反，在一或多個序列中所包含的資訊被用作起始材料來創造從一或多個原始序列所衍生的一或多個“第二代”序列，並接著製備這個或該等“第二代”序列並將其表達為蛋白質。
因此，在另一較佳體系中，本揭露提供用於製備抗LAG-3抗體的方法，其包含：
(a)提供：(i)一重鏈可變區抗體序列，其包含選自SEQ ID NO：1至6之CDR1序列、選自SEQ ID NO：7至12之CDR2序列及/或SEQ ID NO：13至14、GGY或SEQ ID NO：16至18之選自CDR3序列及/或(ii)一輕鏈可變區抗體序列，其包含選自SEQ ID NO：19至24之CDR1序列、選自SEQ ID NO：25至30之CDR2序列及/或選自SEQ ID NO：31至36之CDR3序列；
(b)改變該重鏈可變區抗體序列及/或輕鏈可變區抗體序列中的至少一個胺基酸殘基以產生至少一種經改變之抗體序列；及
(c)表達該經改變之抗體序列為蛋白。
可以使用標準的分子生物學技術來製備並表達被改變之抗體序列。
較佳的是，由一或一些經改變之抗體序列所編碼之抗體係以下序列，彼(等)保留在此說明的抗LAG-3抗體的一種、一些或全部功能特性，該等功能特性包括但不限於：
(i)與人LAG-3結合的高親和性；
(ii)結合猴LAG-3；
(iii)缺乏與小鼠LAG-3結合；
(iv)抑制LAG-3與MHC第II類分子相結合的能力；及/或
(v)刺激免疫反應(例如抗原特異性T細胞應答)的能力。
使用本領域可獲得的及/或在此所說明的標準測定(例如實施例中所給出那些測定)評定被改變之抗體的功能特性。
在本發明的工程處理抗體的方法的某些較佳體系中，可沿抗LAG-3抗體編碼序列的全長或一部分隨機地或選擇性地引入突變，並針對結合活性及/或在此說明的其他功能特性可對得到的經修飾的抗LAG-3抗體進行篩選。已在本領域中說明突變的方法(參見例如PCT公開文件WO 02/092780及WO 03/074679)。
編碼本發明抗體之核酸分子
本發明的另一方面涉及編碼本發明之抗體的核酸分子。該等核酸可存在於整個細胞中、細胞裂解液中、或者以部分純化或基本上純的形式存在。藉由標準的方法，包括用鹼性/SDS處理、CsCl成帶(CsCl banding)、柱色譜法、瓊脂糖凝膠電泳、以及其他的本領域熟知的方法，當將核酸從其他的細胞成分或其他污染物，如其他細胞核酸或蛋白中純化出來，核酸序列係“分離的”或“使之基本上是純的”。參見Ausubel,et al .,ed.(1987)Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley Interscience,New York。本發明的核酸可以是例如DNA或RNA，並且可以包含或可以不包含內含子序列。在一較佳體系中，該核酸為cDNA分子。
使用標準的分子生物學技術可獲得本發明的核酸。對於藉由雜交瘤表達之抗體(例如如以下進一步說明從帶有人類免疫球蛋白基因的轉基因小鼠中製備的雜交瘤)而言，藉由標準的PCR擴增或cDNA選殖技術可獲得由雜交瘤製作的編碼抗體的輕鏈及重鏈的cDNA。對於從免疫球蛋白基因庫中獲得之抗體(例如使用噬菌體展示技術)而言，可以從該基因文庫中回收編碼此類抗體的核酸。
本發明的較佳的核酸分子係編碼25E3、25F7、8B7、26H10、11F2及17E5單株抗體的VH 及VL 序列。編碼25E3、25F7、8B7、26H10、11F2及17E5的VH 序列的DNA序列分別示於SEQ ID NO：49至54。編碼25E3、25F7、8B7、26H10、11F2及17E5的VL 序列的DNA序列分別示於SEQ ID NO：55至60。
一旦獲得編碼VH 和VL 區段的DNA片段，則藉由標準的重組DNA技術(例如將可變區基因轉變成全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因)可對該等DNA片段進行進一步操作。在該等操作中，編碼VL 或VH 的DNA片段被可操作地連接至編碼另一蛋白(如抗體恒定區或柔性連接子)的另一DNA片段上。在本文中使用之術語“可操作地連接”旨在說明將這兩個DNA片段連接，這樣由這兩條DNA片段編碼的胺基酸序列仍在閱讀框內。
藉由將編碼VH 的DNA可操作地連接至另一編碼重鏈恒定區(CH1、CH2及CH3)的DNA分子，可將編碼VH 區的分離的DNA轉化成全長重鏈基因。人重鏈恒定區基因的序列在本領域中係已知的(參見例如Kabatet al. (1991)，如上所述)，並且包含該等區域的DNA片段可藉由PCR擴增獲得。該重鏈恒定區可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定區，但最佳地是IgG1或IgG4恒定區。對於Fab片段重鏈基因而言，可以將編碼VH 的DNA可操作地連接至另一僅編碼重鏈CH1恒定區的DNA分子。
藉由將編碼VL 的DNA可操作地連接至編碼輕鏈恒定區CL的另一DNA分子上，可將編碼VL 區的經分離的DNA轉化成全長輕鏈基因(連同Fab輕鏈基因)。人輕鏈恒定區基因的序列在本領域係已知的(參見例如Kabatet al .，如上所述)，並且涵蓋該等區域的DNA片段可藉由標準的PCR擴增獲得。在較佳體系中，該輕鏈恒定區可為K或λ恒定區。
為產生scFv基因，將編碼VH 和VL 的DNA片段可操作地連接至另一條編碼柔性連接子的片段，例如編碼胺基酸序列(Gly4 -Ser)3 ，如此VH 和VL 序列可被表達為相鄰的單鏈蛋白，其中VH 和VL 區域係藉由柔性連接子進行連接(參見例如Birdet al .(1988)Science 242:423-426;Hustonet al .(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883;McCaffertyet al .,(1990)Nature 348:552-554)。
本發明之單株抗體的產製
使用熟知的Kohler and Milstein(1975)Nature 256：495的體細胞雜交(雜交瘤)技術可以產生本揭露的單株抗體(mAb)。產生單株抗體的其他實施例包括B淋巴細胞的病毒性或致癌性轉化以及噬菌體展示技術。嵌合抗體或人化抗體在本領域也是熟知的。參見例如美國專利號4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762及6,180,370，彼等的全文內容係併入本文作為參考。
在一較佳體系中，本發明之抗體係人單株抗體。使用帶有部分的人免疫體系而不是小鼠體系的轉基因或轉染色體小鼠，可以產生直接針對人LAG-3的人單株抗體。該等轉基因小鼠或轉染色體小鼠包括在此分別指HuMAb及KM的小鼠，並在此共同指“人Ig小鼠”。
HuMAb(,Inc.)含有編碼非重排的人重鏈(μ及γ)及κ輕鏈免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微位點，並含有使內源性μ和γ鏈位點失活的靶向突變(參見例如Lonberg,et al .( 1994)Nature 368(6474):856-859)。因此，該等小鼠表現出小鼠IgM或κ的表達減少；並且回應於免疫，所引入的人重鏈及輕鏈轉基因經歷類別轉換以及體細胞突變以產生高親和性的人IgGκ單株抗體(Lonberget al .(1994)，如上所述；在Lonberg(1994)Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101進行綜述；Lonberg,N. and Huszar,D.(1995)Intern. Rev. Immunol . 13：65-93以及Harding and Lonberg(1995)Ann. N.Y. Acad. Sci . 764:536-546)。HuMAb小鼠的製備及用途，以及由這種小鼠帶有的基因組修飾，進一步說明於Tayloret al .(1992)Nucleic Acids Research 20:6287-6295;Chenet al .(1993)International Immunology 5:647-656；Tuaillonet al .(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724；Choiet al .(1993)Nature Genetics 4:117-123;Chenet al .(1993)EMBO J . 12:821-830;Tuaillonet al .(1994)J. Immunol . 152:2912-2920;Tayloret al .(1994)International Immunology 6:579-591；以及Fishwildet al .(1996)Nature Biotechnology 14:845-851中，所有該等文獻的全文內容均併入本文作為參考。進一步參見美國專利號5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,789,650；5,877,397；5,661,016；5,814,318；5,874,299；5,770,429；以及5,545,807；PCT公開號WO 92/03918；WO 93/12227；WO 94/25585；WO 97/13852；WO 98/24884；WO 99/45962以及WO 01/14424，彼等的全文內容均併入本文作為參考。
在另一較佳體系中，使用在轉基因及轉染色體上帶有人免疫球蛋白序列的小鼠可生產本發明的人抗體，所述小鼠例後如帶有人重鏈轉基因及人輕鏈轉染色體的小鼠。這種小鼠在此處稱作“KM”，並詳細地說明於PCT公開文件WO 02/43478中。這種小鼠的一種經修飾的形式(該形式進一步包括內源性FcγRIIB受體基因的純合破壞)亦說明於PCT公開文件WO 02/43478中，並在此處稱作“KM/FCGR2D”。此外，亦可使用帶有HCo7或HCo12重鏈轉基因或帶有該二者的小鼠。
另外的轉基因動物較佳體系包括Xenomouse(Abgenix,Inc.，美國專利號5,939,598；6,075,181；6,114,598；6,150,584以及6,162,963)。另外的較佳體系包括“TC小鼠”(Tomizukaet al .(2000)Proc .Natl .Acad .Sci .USA 97:722-727)及帶有人重鏈及輕鏈轉染色體的牛(Kuroiwaet al .(2002)Nature Biotechnology 20:889-894；PCT公開文件WO 02/092812)。該等專利的全文內容及公開文件均併入本文作為參考。
在一較佳體系中，使用篩選入免疫球蛋白基因庫的噬菌體展示方法以製備本發明的人單株抗體。參見例如美國專利號5,223,409；5,403,484；5,571,698；5,427,908；5,580,717；5,969,108；6,172,197；5,885,793；6,521,404；6,544,731；6,555,313；6,582,915；及6,593,081，彼等的全文內容均併入本文作為參考。
使用SCID小鼠亦可製備本發明的人單株抗體，其中人免疫細胞已被重組進入SCID小鼠，這樣在免疫接種時可產生人抗體應答。參見例如美國專利號5,476,996及5,698,767，彼等的全文內容均併入本文作為參考。
在另一較佳體系中，使用噬菌體展示可製備人抗LAG-3抗體，其中該噬菌體包括編碼之前用LAG-3進行免疫的轉基因動物所產生之抗體的核酸。在一較佳體系中，該轉基因動物係HuMab、KM或Kirin小鼠。參見例如美國專利號6,794,132，其全文內容係併入本文作為參考。
人Ig小鼠之免疫接種
在本發明的一較佳體系中，用經純化的或富含製備的LAG-3抗原、重組LAG-3蛋白、或表達LAG-3蛋白的細胞對人Ig小鼠進行免疫。參見例如Lonberget al .(1994)，如上所述；Fishwildet al .(1996)，如上所述；PCT公開文件WO 98/24884或WO 01/14424，彼等的全文內容係併入本文作為參考。在一較佳體系中，用5至50μg的LAG-3蛋白對6至16周大的小鼠進行免疫。可替代地，使用與非LAG-3多肽相融合的一部分LAG-3。
在一較佳體系中，轉基因小鼠用完全弗氏佐劑中的LAG-3經腹膜內(IP)或靜脈內(IV)進行免疫，接著用非完全弗氏佐劑中的抗原進行後續IP或IV免疫。在其他較佳體系中，使用除弗氏佐劑之外的佐劑或在佐劑缺失下的全細胞。藉由ELISA可對血漿進行篩選，並且可將來自小鼠的具有足夠滴度的抗LAG-3人免疫球蛋白的細胞用於融合。
產生本發明的人單株抗體的雜交瘤的生成
為生成產生本發明的人單株抗體的雜交瘤，可從被免疫的小鼠中分離出脾細胞及/或淋巴結細胞，並與適合的無限增殖化細胞系(如小鼠骨髓瘤細胞系)進行融合。為產生抗原特異性抗體，可對得到的雜交瘤進行篩選。雜交瘤的產生在本領域係熟知的。參見例如Harlow and Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual ,Cold Spring Harbor Publications,New York。
產生本發明之單株抗體轉染瘤之生成
使用例如重組DNA技術與基因轉染方法的組合亦可在宿主細胞轉染瘤中產生本發明之抗體，如在本領域中所熟知者(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)。在一較佳體系中，對藉由標準的分子生物學技術獲得的部分或全長的輕鏈或重鏈進行編碼的DNA被插入到一或多個表達載體中，這樣該等基因被可操作地連接至轉錄或轉譯調節序列上。在本文中，術語“可操作地連接”旨在表示將抗體基因連接至載體中，如此該載體中轉錄和轉譯的控制序列達到其調節抗體基因的轉錄和轉譯的預期功能。
術語“調節序列”旨在包括啟動子、增強子及控制抗體鏈基因的轉錄或轉譯的其他表達控制元件(例如多腺苷酸化信號)。此類調節序列說明於例如Goeddel(Gene Expression Technology. Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,CA(1990))中。較佳的用於哺乳動物宿主細胞表達的調節序列包括在哺乳動物細胞中指導高水平蛋白質表達的病毒元件，例如衍生自細胞巨病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))及多瘤病毒的啟動子及/或增強子。可替代地，可使用非病毒調節序列，如泛蛋白啟動子或β-球蛋白啟動子。再者，調控元件由來自不同來源的序列組成，如SRa 啟動子系統，其包含來自SV40早期啟動子及第I型人T細胞白血病病毒的長末端重複序列(Takebeet al .(1988)Mol .Cell .Biol . 8:466-472)。對表達載體及表達控制序列進行選擇以便與所使用的表達宿主細胞相容。
可以將抗體輕鏈基因與抗體重鏈基因插入該等相同的或分別的表達載體中。在較佳體系中，使用可變區，藉由將該等可變區插入已經對所欲的同型重鏈恒定區及輕鏈恒定區進行編碼的表達載體中而生成任何抗體同型的全長抗體基因，這樣VH 片段被可操作地連接至載體中的一或多個CH 片段上，且VL 片段被可操作地連接至載體中的CL 片段上。另外地或可替代地，重組的表達載體可對信號肽進行編碼，該信號肽有助於從宿主細胞分泌抗體鏈。可將抗體鏈基因選殖進入該載體中，這樣該信號肽在框架內被連接至該抗體鏈基因的胺基末端。該信號肽可以是免疫球蛋白信號肽或異源信號肽(即來自非免疫球蛋白的信號肽)。
本發明的重組表達載體除了帶有該等抗體鏈基因及調節序列之外，還可帶有另外的序列，例如在宿主細胞中調節載體複製的序列(如複製的起始點)及可選擇的標記物基因。可選擇的標記物基因促進其中已經導入載體的宿主細胞的選擇(參見例如美國專利號4,399,216；4,634,665及5,179,017)。例如，可選擇的標記物基因典型地賦予已引入載體的宿主細胞，對諸如G418、潮黴素或甲氨喋呤的抗藥性。較佳的選擇性標記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(在dhfr-宿主細胞中用於甲氨喋呤選擇/擴增)以及neo基因(用於G418選擇)。
對輕鏈及重鏈的表達，藉由標準技術將編碼該等重鏈及輕鏈的一或多個表達載體轉染進入宿主細胞中。術語“轉染”的不同形式旨在涵蓋範圍寬廣的多種技術，該等技術一般被用於將外源DNA引入原核的或真核的宿主細胞，例如電穿孔、磷酸鈣沉澱、DEAE-葡聚糖轉染、以及類似技術。雖然在理論上可能在原核或真核宿主細胞中表達本發明之抗體，但是在真核細胞(並且最佳地是哺乳動物宿主細胞)中表達係最較佳的，因為此類真核細胞，並且特別是哺乳動物細胞比原核細胞更有可能組裝並分泌適當折疊並且具有免疫活性之抗體。
用於表達本發明的重組抗體的較佳的哺乳動物宿主細胞包括中國倉鼠卵巢細胞(CHO細胞)(包括dhfr- CHO細胞，說明於Urlaub and Chasin,(1980)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220中，使用DHFR可選擇的標記物，例如在R. J. Kaufman and P. A. Sharp(1982)J. Mol. Biol. 159:601-621中所說明)、NSO骨髓瘤細胞、COS細胞及SP2細胞。特別地，對於使用NSO骨髓瘤細胞而言，另一較佳的表達體系係GS基因表達體系，該GS基因表達體系被揭露在WO 87/04462、WO 89/01036及EP 338,841中。當將對抗體基因進行編碼的重組表達載體引入至哺乳動物宿主細胞時，藉由將宿主細胞培養一段時間足以使該抗體在該宿主細胞中得到表達，或者更佳的是，使該抗體分泌進入宿主細胞生長所的培養基，而產生該等抗體。使用標準的蛋白質純化方法可以從培養物中回收抗體。
抗體與抗原結合的表徵
藉由例如標準的ELISA可檢測本發明之抗體與人LAG-3的結合。藉由蛋白質印跡法可進一步測試抗LAG-3人IgG與LAG-3抗原的反應性。本發明之抗體的結合特異性亦可藉由監測抗體與表達LAG-3蛋白的細胞的結合(例如流式細胞術)而確定。該等方法在本領域係已知的。參見例如在以上所引用的Harlow and Lane(1988)。
免疫共軛物
本發明之抗體可與治療劑相偶聯以形成免疫共軛物，如抗體-藥物共軛物(ADC)。適宜的治療劑包括抗代謝藥、烷化劑、DNA小溝結合劑、DNA嵌入劑、DNA交聯劑、組蛋白脫乙醯基酶抑制劑、核輸出抑制劑、蛋白酶體抑制劑、拓撲異構酶1或拓撲異構酶11抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑、抗生素、以及抗有絲分裂劑。在ADC中，抗體及治療劑較佳的是藉由可切割的連接子(如肽基、二硫化物或腙連接子)進行偶聯。更佳的是，該連接子係肽連接子，如Val-Cit、Ala-Val、Val-Ala-Val、Lys-Lys、Pro-Val-Gly-Val-Val(SEQ lD NO：15)、Ala-Asn-Val、Val-Leu-Lys、Ala-Ala-Asn、Cit-Cit、Val-Lys、Lys、Cit、Ser、或Glu。ADC可如以下文獻中所說明進行製備：美國專利號7,087,600；6,989,452；以及7,129,261；PCT公開文件WO 02/096910；WO 07/038658；WO 07/051081；WO 07/059404；WO 08/083312；以及WO 08/103693；美國專利公開文件20060024317；20060004081；以及20060247295；彼等的揭露內容係併入本文作為參考。
雙特異性分子
在另一方面，本揭露以雙特異性分子為特徵，該雙特異性分子包含連接至少一個其他功能分子的抗LAG-3抗體，該其他功能分子例如是另一肽或蛋白質(例如另一抗體或針對受體的配位體)，以產生結合至少兩個不同結合位點或靶分子的雙特異性分子。因此，如此處所使用，“雙特異性分子”包括具有三種或更多種特異性的分子。在一較佳體系中，雙特異性分子包括對LAG-3的第一結合特異性及對觸發分子的第二結合特異性，該觸發分子招募(recruit)可殺傷表達LAG-3的靶細胞的細胞毒性效應細胞。適宜的觸發分子的實例係CD64、CD89、CD16及CD3。參見例如Kuferet al .,TRENDS in Biotechnology ,22(5),238-244(2004)。
在一較佳體系中，雙特異性分子具有除抗Fc結合特異性及抗LAG-3結合特異性以外的第三特異性。該第三特異性可針對抗增強因子(EF)，例如與涉及細胞毒性活性之表面蛋白質結合並因而增強針對標靶細胞之免疫反應的分子。例如，抗增強因子可結合細胞毒性T細胞(例如經由CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40或ICAM-1)或其他免疫細胞，導致針對該靶細胞的免疫反應的增強。
雙特異性分子能夠以許多不同的形式及大小所生產。在大小譜的一端，雙特異性分子除了不具有完全相同特異性的兩個結合臂而是具有兩個各自均具有不同特異性的結合臂外，保留傳統之抗體設計。在另一極端處，是由兩個單鏈抗體片段(scFv's)構成的雙特異性分子，該等抗體片段藉由一肽鏈(所謂的Bs(scFv)2 構建體)相連接。中間大小的雙特異性分子包括由一肽連接子所連接的兩個不同的F(ab)片段。該等形式及其他形式的雙特異性分子可藉由基因工程、體細胞雜交、或化學方法製備。參見例如在以上引用的Kuferet al ;Cao and Suresh,Bioconjugate Chemistry ,9(6),635-644(1998)；以及Sprielet al .,Immunology Today ,21(8),391-397(2000)以及其中所引用的參考文獻。
醫藥組成物
另一方面，本揭露提供醫藥組成物，該醫藥組成物包含與藥學上可接受的載體配製的本揭露之抗體。彼可任選地包含一或多種另外的藥學活性成分，如另一抗體或藥物。本發明的醫藥組成物亦可在與例如另一免疫刺激劑、抗癌劑、抗病毒劑、或疫苗在組合治療中進行給藥，這樣該抗LAG-3抗體增強針對疫苗的免疫反應。
醫藥組成物可包含任何數目的賦形劑。可使用的賦形劑包括載體、表面活化劑、增稠劑或乳化劑、固體黏合劑、分散助劑或懸浮助劑、增溶劑、著色劑、調味劑、塗層、崩解劑、潤滑劑、增甜劑、防腐劑、等滲劑、以及彼等的組合。適宜的賦形劑的選擇以及使用在Gennaro,ed.,Remington：The science and Prac1ice of Pharmacy ,20th Ed.(Lippincott Williams ＆ Wilkins 2003)中被傳授，該文獻的揭露內容係併入本文作為參考。
較佳的是，醫藥組成物適宜於經靜脈內、肌內、皮下、胃腸外、脊髓或表皮給藥(例如藉由注射或輸注)。依據給藥途徑，活性化合物可用某種材料包覆以使其免受可能導致其失活的酸以及其他自然條件的作用。此處所用的短語“胃腸外給藥”是指除了腸內及局部給藥外的多種給藥方式，通常藉由注射，並且包括但不限於靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眼眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。可替代地，可經非胃腸外途徑給予本發明之抗體，非胃腸外途徑例如局部、表皮或黏膜給藥途徑，如鼻內、口服、陰道、直腸、舌下或局部給藥。
本發明的醫藥組成物可以呈藥學上可接受的鹽的形式。“藥學上可接受的鹽”是指一種鹽，其保留母體化合物的所欲的生物活性但不會引起任何不欲的毒理學效應。此類鹽的例子包括酸加成鹽或鹼加成鹽。酸加成鹽包括那些衍生自無毒無機酸的鹽，例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等，以及衍生自無毒有機酸的鹽，如脂肪族單羧酸及二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸、芳香酸、脂肪族及芳香族磺酸等。鹼性加成鹽包括那些衍生自鹼土金屬(如鈉、鉀、鎂、鈣等)的鹽，以及衍生自無毒有機胺的鹽，例如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲葡糖胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、氨茶鹼及普魯卡因等。
醫藥組成物可以呈無菌水溶液或分散體的形式。彼等亦可被配製成微乳液、脂質體、或者其他適合於高藥物濃度的有序結構。
與載體材料相組合產生單一劑型的活性組分的量會依賴於正在進行治療的個體以及給藥的特定方式而變化，並且通常會是產生治療效果的組成物的量。總體上講，在100%的範圍內，與藥學上可接受的載體相組合的活性成分的量將是從大約0.01%到大約99%的範圍內，較佳地是從大約0.1%到大約70%，最佳地是從大約1%到大約30%。
對劑量方案進行調整以提供最佳希望的反應(例如治療反應)。例如，可給予快速灌注劑，可以隨時間分劑量給予，或者如治療情況的緊急程度所示按比例減少或增加劑量。為給藥方便以及劑量統一而按劑量單位形式配製成腸胃外用的組成物尤為有利。在此使用的劑量單位形式是指用於有待治療的個體、適宜作為單一劑量的在物理上不連續的單位；每個單位包括經計算能產生與所需的藥學載體相關的所欲的療效的預定量的活性化合物。可替代地，抗體可以作為緩釋配製品給藥，在這種情況中需要以較低頻率給藥。
對於抗體的給藥，根據使用者的體重，劑量在大約0.0001至100mg/kg的範圍內，並且更經常是0.01至5mg/kg。例如，劑量可以是0.3mg/kg體重、1mg/kg體重、3mg/kg體重、5mg/kg體重或10mg/kg體重或者在1至10mg/kg的範圍內。示例性治療方案要求每週給藥一次、每兩週一次、每三週一次、每四周一次、每月一次、每三個月一次或每3到6個月一次。本發明的抗LAG-3抗體的較佳的劑量方案包括1mg/kg體重或3mg/kg體重藉由靜脈內給藥，使用以下給藥方案之一給予抗體：(i)每四周給予六個劑量，然後每三個月給藥；(ii)每三周給藥；(iii)3mg/kg體重給藥一次，接著每三周按1mg/kg體重給藥。在一些方法中，調整劑量使血漿抗體濃度大約是1至1000μg/ml並且在一些方法中大約是25至300μg/ml。
本發明的抗LAG-3抗體的“治療有效劑量”較佳的是導致減輕疾病症狀的嚴重程度、增加無疾病症狀時間的頻率及持續時間、或防止由於該病痛產生的損害或殘疾。例如，對於帶有腫瘤的個體來說，相對於未經治療的個體，“治療有效劑量”較佳地是抑制至少大約20%，較佳的是至少大約40%，甚至更佳的是至少大約60%，並又最佳的是至少約80%的腫瘤生長。治療有效量的治療性化合物可減小腫瘤的大小，或者改善個體的症狀，該個體典型地是人或是其他哺乳動物。
該醫藥組成物可以是受控釋放配製品，其包括植入劑、經皮貼劑、以及微囊化遞送系統。可以使用可生物降解的、生物相容性的聚合物，如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯、以及聚乳酸。參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems ,J.R. Robinson,ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978。
可經由以下醫療裝置給予治療組成物，如(1)無針皮下注射裝置(例如US 5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；以及4,596,556)；(2)微輸注泵(US 4,487,603)；(3)經皮裝置(US 4,486,194)；(4)輸注器具(US 4,447,233以及4,447,224)；以及(5)滲透裝置(US 4,439,196以及4,475,196)；該等文獻的揭露內容均併入本文作為參考。
在某些較佳體系中，對本發明的人單株抗體進行配製以確保其在體內的適當分佈。例如，為確保本發明的治療化合物穿過血腦屏障，可將它們配製在脂質體中，該脂質體可另外地包括靶向部分以增強向特定細胞或器官的選擇性運輸。參見例如US 4,522,811；5,374,548；5,416,016；以及5,399,331；/V.V. Ranade(1989)J. Clin. Pharmacol . 29:685;Umezawaet al .,(1988)Biochem. Biophys. Res. Commun . 153:1038；Bloemanet al .(1995)FEBS Lett . 357:140;M. Owaiset al .(1995)Antimicrob. Agents Chemother . 39:180;Briscoeet al .(1995)Am. J. Physiol . 1233:134；Schreieret al .(1994)J. Biol. Chem . 269:9090;Keinanen and Laukkanen(1994)FEBS Lett . 346:123；以及Killion and Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
本發明之用途和方法
本發明中之抗體、抗體組成物及方法在活體內和體外具有多種用處，涉及例如檢測LAG-3或是藉由阻斷LAG-3而增強免疫反應。在一較佳體系中，本發明之抗體為人抗體。例如，該等分子可以被給予至在體外或活體外培養的細胞，或者給予人體(例如在體內)以增強多種情形下的免疫性。因此，在一方面，本發明提供改變個體體內的免疫反應的方法，其包含給予該個體本發明之抗體或該抗體之抗原結合部分，以使該個體體內的免疫反應發生改變。較佳的是，該應答得到增強、受到刺激或被上調。
較佳的個體包括需要增加免疫反應的人患者。該方法還特別適宜於治療患有可藉由增強免疫反應(例如T細胞介導的免疫反應)來治療的病症的病人。在特定較佳體系中，該等方法特別適宜於治療體內癌症。為達到免疫性的抗原特異性增強，抗LAG-3抗體可與所感興趣的抗原一起給藥，或者該抗原可早已存在於待治療的個體(例如帶有腫瘤或帶有病毒的個體)體內。當針對LAG-3之抗體與另一藥物一起給藥時，這兩種物質可以依次或者同時給藥。
本發明還提供用於檢測樣本中是否存在人LAG-3抗原或者測量人LAG-3抗原的量的方法，其包含令所述樣本、以及對照樣本與可於一定條件下特異性結合人LAG-3的人單株抗體或該抗體之抗原結合部分相接觸，所述條件使得在該抗體或其部分與人LAG-3之間形成複合物。然後檢測複合物的形成，其中與對照樣本相比，在該樣本之間形成差異複合物指示在該樣本中存在人LAG-3抗原。此外，可使用本發明的抗LAG-3抗體經由免疫親和純化法來純化人LAG-3。
考慮到本發明的抗LAG-3抗體抑制LAG-3與MHC第II類分子的結合的能力以及刺激抗原特異性T細胞應答的能力，本發明還提供使用本發明之抗體在體內以及體外刺激、增強、或上調抗原特異性T細胞應答的方法。例如，本發明提供刺激抗原特異性T細胞應答的方法，該方法包括使所述T細胞與本發明之抗體相接觸，如此刺激抗原特異性T細胞應答。可使用抗原特異性T細胞應答的任何適宜的指示物來測量該抗原特異性T細胞應答。此類適宜的指示物的非限制性實例包括在該抗體的存在下T細胞增殖增加及/或在該抗體的存在下增加細胞因子的產生。在一較佳體系中，刺激由抗原特異性T細胞產生的介白素2。
本發明還提供一種在個體體內刺激免疫反應(例如抗原特異性T細胞應答)的方法，該方法包含給予該個體本發明之抗體，如此刺激該個體體內的免疫反應(例如抗原特異性T細胞應答)。在一較佳體系中，該個體係帶有腫瘤的個體，並且刺激針對該腫瘤的免疫反應。在另一較佳體系中，該個體係帶有病毒的個體，並且刺激了針對該病毒的免疫反應。
又在另一方面，本發明提供一種抑制個體體內腫瘤細胞生長的方法，該方法包含給予該個體者一本發明之抗體，如此該個體體內的腫瘤生長受到抑制。又在另一方面，本發明提供一種治療個體體內病毒感染的方法，該方法包含給予該個體一本發明之抗體，如此該個體體內的病毒感染得到治療。
本發明的該等方法以及其他方法在以下作進一步詳盡的討論。
癌症
藉由抗體阻斷LAG-3可增強患者體內對癌細胞的免疫反應。一方面，本揭露涉及使用抗LAG-3抗體對個體進行體內治療，如此癌性腫瘤的生長受到抑制。抗LAG-3抗體可單獨使用以抑制癌性腫瘤的生長。可替代地，如下所說明，抗LAG-3抗體可與其他免疫原性藥劑、標準癌症治療、或其他抗體結合使用。
因此，在一較佳體系中，本發明提供一種抑制個體體內腫瘤細胞生長的方法，其包含對個體給予治療有效量的抗LAG-3抗體或其抗原結合部分。較佳的是，該抗體為人抗LAG-3抗體(如在此說明的人抗-人LAG-3抗體中的任何抗體)。另外地或者可替代地，該抗體可以是嵌合或人化抗LAG-3抗體。
較佳的使用本發明之抗體可抑制生長的癌症包括通常對免疫療法典型地產生應答的癌症。用於治療的較佳的癌症的非限制性實例包括黑色素瘤(如轉移性惡性黑色素瘤)、腎癌(例如透明細胞癌)、前列腺癌(例如激素抵抗性前列腺癌)、乳癌、結腸癌以及肺癌(例如非小細胞肺癌)。另外地，本發明包括頑固性或復發性惡性腫瘤，它們的生長可使用本發明之抗體進行抑制。
使用本發明的方法可治療的其他癌症的實例包括骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭頸部癌、表皮或眼內惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區的癌症、胃癌、睾丸癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、宮頸癌、陰道癌、陰戶癌(carcinoma of the vulva)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性髓細胞樣白血病、慢性髓細胞樣白血病、急性淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病)、兒童期的實體瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)瘤、原發性中樞神經淋巴瘤、腫瘤血管發生、脊柱軸瘤、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、由環境所誘發的癌症(包括那些由石棉誘發的癌症)、以及所述癌症的多個組合。本發明對於治療轉移性癌症，特別是表達PD-L1的轉移性癌症也是有用的(Iwaiet al .(2005)Int. Immunol. 17:133-144)。
任選地，LAG-3之抗體可與免疫原性藥劑進行組合，該免疫原性藥劑例如癌細胞、經純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白、肽及碳水化合物分子)、細胞、及轉染編碼免疫刺激細胞因子的基因的細胞(Heet al (2004)J. Immunol. 173:4919-28)。可使用的腫瘤疫苗的非限制性實例包括黑色素瘤抗原的肽，如肽gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1及/或酪胺酸酶、或經轉染以表達細胞因子GM-CSF的腫瘤細胞(以下進一步討論)。
在人體中，已經表明一些腫瘤具有免疫原性，例如黑色素瘤。藉由提高由LAG-3阻斷的T細胞啟動的閾值，可啟動宿主體內的腫瘤應答。
當與免疫接種方案組合時，LAG-3阻斷可能是更有效的。已經設計很多針對腫瘤的實驗性疫苗接種方案(參見Rosenberg,S.(2000)Development of Cancer Vaccines,ASCO Educational Book Spring:60-62；Logothetis,C,2000,ASCO Educational Book Spring:300-302;Khayat,D.(2000)ASCO Educational Book Spring:414-428;Foon,K.(2000),ASCO Educational Book Spring:730-738；還參見Restifo,N. and Sznol,M.,Cancer Vaccines,Ch. 61,pp. 3023-3043 in DeVitaet al .(eds.),1997,Cancer:Principles and Practice of Oncology,Fifth Edition)。在該等方法之一中，使用自體或異體的腫瘤細胞製備疫苗。已表明當腫瘤細胞被轉導以表達GM-CSF時，該等細胞疫苗係最為有效的。已表明，對於腫瘤疫苗接種而言，GM-CSF係抗原呈現的有效力啟動劑(Dranoffet al .(1993)Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A . 90:3539-43)。
對不同腫瘤中的基因表達及大規模基因表達模式的研究對所謂的腫瘤特異性抗原給出定義(Rosenberg,SA(1999)Immunity 10:281-7)。在很多情況下，該等腫瘤特異性抗原係在腫瘤中以及從其中產生腫瘤的細胞中所表達的分化抗原，例如黑色素細胞抗原gp100、MAGE抗原及Trp-2。更重要地，已顯示該等抗原中有許多抗原係在宿主體內發現的腫瘤特異性T細胞的靶點。LAG-3阻斷可與在腫瘤中所表達的重組蛋白及/或肽的集合進行組合使用，以對該等蛋白質產生免疫反應。該等蛋白質通常被免疫系統視為係自體抗原並因此具有耐受性。腫瘤抗原可包括蛋白質端粒末端轉移酶，該酶係合成染色體的端粒所需要的，並且在超過85%的人癌症中並且僅在一定數量的體細胞組織中表達(Kimet al .(1994)Science 266:2011-2013)。(該等體細胞組織藉由各種手段免受免疫攻擊)。由於改變蛋白質序列或在兩個無關的序列(即在費城染色體中的bcr-abl)之間生成融合蛋白的體細胞突變，或者來自B細胞腫瘤的個體基因型，所有腫瘤抗原也可能是在癌細胞中表達的“新抗原”。
其他腫瘤疫苗可包含源自牽涉人癌症的病毒的蛋白質，例如人乳頭瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV及HCV)及卡波西氏皰疹肉瘤病毒(KHSV)。可與LAG-3阻斷進行組合使用的腫瘤特異性抗原的另一形式係從腫瘤組織自體分離出來的經純化的熱休克蛋白(HSP)。該等熱休克蛋白包含來自腫瘤細胞的蛋白質片段，並且該等HSP在遞送至抗原呈現細胞時對於引發腫瘤免疫性係高度有效的(Suot ＆ Srivastava(1995)Science 269:1585-1588;Tamuraet al .(1997)Science 278:117-120)。
樹突細胞(DC)係有效力的抗原呈現細胞，其可以用於啟動抗原特異性應答。DC可在活體外產生，並且負載有不同蛋白及肽抗原、以及腫瘤細胞萃取物(Nestleet al .(1998)Nature Medicine 4:328-332)。還可以藉由遺傳的方法對DC進行轉導以表達該等腫瘤抗原。為進行免疫接種，還將DC直接與腫瘤細胞進行融合(Kugleret al .(2000)Nature Medicine 6:332-336)。作為疫苗接種方法，DC免疫接種可與LAG-3阻斷有效地組合以啟動更有效力的抗腫瘤應答。
LAG-3阻斷還可與標準的癌症治療進行組合。LAG-3阻斷可與化學療法的方案有效地組合。在該等情況下，降低所給予的化療試劑的劑量係可能的(Mokyret al. (1998)Cancer Research 58:5301-5304)。此類組合的實例係用於治療黑色素瘤的氨烯咪胺(decarbazine)與抗LAG-3抗體之組合。這種組合的另一實例係用於治療黑色素瘤的介白素-2(IL-2)與抗LAG-3抗體的組合。LAG-3阻斷與化學治療的聯合使用，其背後的科學理論在於：細胞死亡(這係大部分化療化合物的細胞毒性作用的結果)應導致在抗原呈現途徑中腫瘤抗原水平的升高。藉由細胞死亡可能導致與LAG-3阻斷達到協同作用的其他組合療法係放射、外科手術及激素剝奪(hormone deprivation)。該等方法中每一種方法在宿主中均生成腫瘤抗原的來源。血管發生抑制劑也可以與LAG-3阻斷進行組合。血管發生的抑制作用導致腫瘤細胞死亡，這可能使腫瘤抗原進入宿主抗原呈現途徑。
LAG-3阻斷抗體可與雙特異性抗體組合使用，該等雙特異性抗體可以將表達Fcα或Fcγ受體的效應細胞靶向到腫瘤細胞(參見例如美國專利號5,922,845及5,837,243)。雙特異性抗體可以用於靶向兩個分別的抗原。例如抗Fc受體/抗腫瘤抗原(例如Her-2/neu)雙特異性抗體已經被用於將巨噬細胞靶向腫瘤位點。該靶向可更有效地活化腫瘤特異性應答。該等應答的T細胞分支(arm)可藉由使用LAG-3阻斷得到增大。可替代地，藉由使用雙特異性抗體可將抗原直接送遞至DC，該等雙特異性抗體結合腫瘤抗原及樹突細胞特異性的細胞表面標記。
腫瘤藉由多種機制躲避宿主免疫監督。可能藉由由腫瘤表達並且具有免疫抑制性的蛋白質的失活來克服許多該等機制中的許多機制。該等蛋白除其他者外還包括TGF-β(Kehrlet al. (1986)J. Exp. Med. 163:1037-1050)、IL-10(Howard ＆ O'Garra(1992)Immunology Today 13:198-200)以及Fas配位體(Hahneet al. (1996)Science 274:1363-1365)。針對該等實體中每個實體之抗體可與抗LAG-3組合使用以抵制免疫抑制劑的作用，並有助於宿主的腫瘤免疫反應。
活化宿主免疫反應性的其他抗體可與抗LAG-3組合使用。該等包括樹突細胞表面上的分子活化DC功能及抗原呈現。抗-CD40抗體能夠有效地取代T細胞輔助細胞的活性(Ridgeet al. (1998)Nature 393:474-478)並且可以與LAG-3抗體組合使用(Itoet al. (2000)Immunobiology 201(5)527-40)。活化T細胞共刺激分子之抗體，例如CTLA-4(美國專利號5,811,097)、OX-40(Weinberget al. (2000)Immunol 164:2160-2169)、4-1BB(Meleroet al. (1997)Nature Medicine 3:682-685(1997)、以及ICOS(Hutloffet a1. (1999)Nature 397:262-266)也可被提供用於使T細胞的活化水平增加。
目前，骨髓移植正被用來治療造血性起源的多種腫瘤。儘管移植物抗宿主病係由這種治療所致，但是從移植物抗腫瘤的應答中可獲得治療益處。LAG-3阻斷可用於提高移植供體腫瘤特異性T細胞的有效性。
還有幾個實驗性治療方案，該等治療方案涉及抗原特異性T細胞的活體外活化以及擴大，以及將該等細胞過繼轉移進入接受者，以便刺激抗原特異性T細胞對抗腫瘤(Greenberg ＆ Riddell(1999)Science 285:546-51)。該等方法還可以用於活化對於諸如CMV的傳染源的T細胞應答。在抗LAG-3抗體存在時，活體外活化可增加過繼轉移的T細胞的頻率及活性。
傳染病
本發明的其他方法可用於治療暴露於特定毒素或病原體中的患者。因此，本發明的另一方面提供在個體體內治療傳染病的方法，其包含給予個體抗LAG-3抗體或其抗原結合部分，如此該個體的傳染病得以治療。較佳的是，該抗體為人抗人LAG-3抗體(例如在此說明的人抗-LAG-3抗體中的任何抗體)。另外地或可替代地，該抗體可以是嵌合或人化抗體。
類似於以上討論的應用於腫瘤，抗體介導的LAG-3阻斷可以單獨使用，或作為佐劑與疫苗組合，以刺激針對病原體、毒素及自體抗原的免疫反應。特別適用於本治療方法的病原體的實例包括：目前沒有有效疫苗的病原體、或者常規疫苗不完全有效的病原體。該等病原體包括但不限於HIV、肝炎(A型、B型及C型)、流感、皰疹、賈第蟲屬、瘧疾、利什曼原蟲、金黃色葡萄球菌、綠膿假單胞菌。LAG-3阻斷對於由在感染期間呈現已改變抗原的病因(如HIV所致的已確定感染)尤其有用。該等新穎的表位在抗-人LAG-3給藥期間被識別為外源的，因此引起強烈的T細胞應答，該應答不會藉由LAG-3被負性信號減弱。
引起藉由本發明方法可治療的感染的病原性病毒的一些實例包括HIV、肝炎(A型、B型、或C型)、皰疹病毒(如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II及CMV、愛潑斯坦-巴爾病毒)、腺病毒、流感病毒、黃病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯薩奇病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻疹病毒、風疹病毒、細小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革熱病毒、乳頭瘤病毒、軟疣病毒、脊髓灰質炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒、以及蟲媒病毒性腦炎病毒。
引起本發明的方法可治療的感染的病原性細菌的一些實例包括衣原體、立克次氏體細菌、分枝桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌以及淋球菌、克雷白氏菌屬、變形菌、沙雷氏菌、假單胞菌、軍團桿菌、白喉、沙門氏菌、桿菌、霍亂、破傷風、肉毒桿菌中毒、炭疽、鼠疫、鉤端螺旋體病、以及萊姆氏病細菌。
引起本發明的方法可治療的感染的病原性真菌的一些實例包括念珠菌(candida)(白色念珠菌(albicans)、克柔念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、熱帶念珠菌(tropicalis)等)、新型隱球菌、麯黴(煙麯黴、黑麯黴等)、毛黴菌屬(毛黴菌、犁頭黴(absidia)、根黴)、申克孢子絲菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌以及莢膜組織胞漿菌。
引起本發明的方法可治療的感染的病原性寄生物的一些實例包括痢疾內變形蟲、結腸小袋纖毛蟲、福勒氏耐格裡原蟲、棘阿米巴屬種、蘭伯賈第蟲、隱孢子蟲屬種、卡氏肺囊蟲、間日瘧原蟲、果氏巴貝蟲、布氏錐蟲、克氏錐蟲、杜氏利什曼原蟲、鼠弓形體、巴西日圓線蟲。
在全部上述方法中，LAG-3阻斷可與其他形式的免疫療法例如細胞因子治療(例如干擾素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)或雙特異性抗體療法進行組合，此提供增強的腫瘤抗原呈現(參見例如Holliger(1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448;Poljak(1994)Structure 2:1121-1123)。
自體免疫反應
抗LAG-3抗體可引發並擴大自體免疫反應。的確，使用腫瘤細胞及肽疫苗誘導抗腫瘤應答顯示許多抗腫瘤應答涉及抗自體反應性(van Elsaset al. (2001)J. Exp. Med. 194:481-489;Overwijk,et al .(1999)Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:2982-2987;Hurwitz,(2000)如上所述；Rosenberg & White(1996)J. Immunother Emphasis Tumor Immunol 19(1):81-4)。因此，可能考慮使用與不同的自體蛋白進行組合的抗-LAG-3阻斷來設計接種疫苗方案以有效地產生用於疾病治療的、針對該等自體蛋白的免疫反應。例如，阿茲海默氏病涉及腦內澱粉樣沉積物中Aβ肽的不適當累積；針對澱粉狀蛋白之抗體應答能夠清除該等澱粉樣沉積物(Schenk et al.,(1999)Nalure 400:173-177)。
其他自體蛋白也可以用作靶標，例如用於治療過敏症以及哮喘的IgE，以及用於治療類風濕性關節炎的TNFα。最後，針對不同激素之抗體應答可能藉由使用抗LAG-3抗體來誘導。針於生殖激素的中和抗體的應答可用於避孕。特定腫瘤生長所要求的激素以及其他可溶性因子的中和抗體的應答也被認為是可能的接種疫苗靶標。
與以上所說明的抗LAG-3抗體的使用相似的方法可以用於誘導治療性自體免疫反應以治療具有其他自體抗原不適當累積的患者，該等自體抗原例如澱粉樣沉積物，包括阿茲海默氏病中的Aβ、細胞因子(如TNFα)及IgE。
疫苗
藉由將抗LAG-3抗體與感興趣的抗原(例如疫苗)進行同時給藥，抗LAG-3抗體可用於刺激抗原特異性免疫反應。因此，在其他方面，本發明提供在個體體內增強針對抗原的免疫反應的方法，其包含對個體給予：(i)抗原；以及(ii)抗LAG-3抗體或其抗原結合部分，如此在該個體體內的針對該抗原的免疫反應得以增強。較佳的是，該抗體為人抗人LAG-3抗體(例如在此說明的人抗LAG-3抗體中的任何抗體)。另外地或可替代地，該抗體可以是嵌合或人源化抗體。該抗原可以是，例如腫瘤抗原、病毒抗原、細菌抗原或來自病原體的抗原。此類抗原的非限制性實例包括在以上部分所討論的那些抗原，例如以上所討論的腫瘤抗原(或腫瘤疫苗)、或來自以上所說明的病毒、細菌或其他病原體的抗原。
本發明之抗體組成物(例如人單株抗體、多特異性及雙特異性分子及免疫共軛物)的體內及體外的合宜給藥途徑在本領域內係熟知的，並且可由普通技術人員進行選擇。例如，抗體組合物可藉由注射(例如靜脈內或皮下)進行給藥。所用分子的適宜劑量將取決於個體的年齡及體重、以及抗體組成物的濃度及/或配方。
如之前所說明，本發明的人抗LAG-3抗體可與一或其他多種的治療劑(例如細胞毒劑、放射性毒劑或免疫抑制劑)共同給藥。可將抗體連接治療劑(作為免疫複合物)上，或者可與該治療劑分開給藥。在後者(分開給藥)情況下，抗體可以在該治療劑給藥之前、之後、或與該治療劑同時給藥、或者可以與其他已知治療(例如抗癌治療，如放射)共同給予。除其他之外，此類治療劑包括抗腫瘤劑，如多柔比星(阿黴素)、順鉑硫酸博來黴素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、達卡巴嗪以及環磷醯胺羥基脲，彼等本身只在對患者有毒性或亞毒性的水平時才是有效的。每四周一次經靜脈內給予100mg/ml劑量的順鉑，並且每21天一次經靜脈內給予60至75mg/ml劑量的阿黴素。本發明的人抗LAG-3抗體或彼等的抗原結合片段與化學治療劑的共同給藥提供兩種抗癌劑，這兩種抗癌劑藉由不同的機制起作用，產生針對人腫瘤細胞的細胞毒效應。這種共同給藥可以解決由於腫瘤細胞抗藥性的形成或者抗原性的改變方面的問題，形成抗藥性或抗原性改變會使腫瘤細胞與抗體不反應。
本發明的範圍內還涵蓋試劑盒，該等試劑盒包括本發明之抗體組成物(例如人抗體、雙特異性或多特異性分子、或免疫共軛物)以及其使用說明。該試劑盒可進一步包含至少一種另外的試劑、或者一或多種另外的本發明人抗體(例如人抗體，該人抗體具有互補活性、結合不同於第一人抗體的LAG-3抗原中的一個表位)。試劑盒典型地包括一標籤，該標籤指示該試劑盒的內容物的預期用途。術語標籤包括在試劑盒上或與該試劑盒一起提供的，或者隨附該試劑盒的任何書面，或記錄材料。
組合治療
在另一方面，本發明提供組合治療的方法，其中抗LAG-3抗體與在刺激免疫反應中有效的一或多種另外之抗體共同給藥，由此進一步增強、刺激、或上調接受者體內的免疫反應。例如，本發明提供在個體體內刺激免疫反應的方法，該方法包含給予該個體一抗LAG-3抗體及一或多種另外的免疫刺激性抗體，如抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體及/或抗CTLA-4抗體，如此在該個體體內刺激免疫反應，例如抑制腫瘤生長或刺激抗病毒應答。在一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗PD-1抗體。在另一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗PD-L1抗體。在又另一較佳體系中，給予個體抗LAG-3抗體及抗CTLA-4抗體。在一較佳體系中，抗LAG-3抗體係人抗體，如本揭露的抗體。可替代地，該抗LAG-3抗體可以是例如嵌合或人化抗體(例如從小鼠LAG-3 mAb中製備)。在另一較佳體系中，該至少一種另外的免疫刺激性抗體(例如抗PD-1、抗PD-L1及/或抗CTLA-4抗體)係人抗體。可替代地，該至少一種另外的免疫刺激性抗體可以是例如嵌合或人化抗體(例如從小鼠抗PD-1、抗PD-L1及/或抗CTLA-4抗體中製備)。
在一較佳體系中，本發明提供一種治療過度增殖疾病(例如癌症)的方法，該方法包含給予個體LAG-3抗體及CTLA-4抗體。在其他較佳體系中，給予亞治療劑量的抗LAG-3抗體，給予亞治療劑量的抗CTLA-4抗體，或者兩者均以亞治療劑量進行給藥。在另一較佳體系中，本發明提供一種改變與用免疫刺激劑治療過度增殖的疾病有關的不良事件的方法，該方法包含給予個體抗LAG-3抗體及亞治療劑量的抗CTLA-4抗體。在某些較佳體系中，該個體係人。在某些較佳體系中，抗CTLA-4抗體係人序列單株抗體10D1(說明於PCT公開文件WO 01/14424中)，而抗LAG-3抗體係人序列單株抗體，如此處所說明的25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5。由本發明的方法涵蓋的其他抗CTLA-4抗體包括例如揭露於以下文獻之抗體：WO 98/42752;WO 00/37504；美國專利號6,207,156;Hurwitzet al .(1998)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95(17):10067-10071;Camachoet al .(2004)J. Clin. Oncology 22(145):Abstract No. 2505(抗體CP-675206)；以及Mokyret al .(1998)Cancer Res . 58:5301-5304。在某些較佳體系中，抗CTLA-4抗體以5×10-3 M或低於5×10-3 M的KD 值與人CTLA-4相結合，以1×10-3 M或低於1×10-3 M的KD 值與人CTLA-4相結合，以5×10-9 M或低於5×10-9 M的KD 值與人CTLA-4相結合，或以在1×10-8 M與1×10-10 M或低於1×10-10 M之間的KD 值與人CTLA-4相結合。
在一較佳體系中，本發明提供一種治療過度增殖的疾病(例如癌症)的方法，該方法包含給予個體LAG-3抗體及PD-1抗體。在另外的較佳體系中，給予亞治療劑量的抗LAG-3抗體，給予亞治療劑量的抗PD-1抗體，或者兩者均以亞治療劑量進行給藥。在另一較佳體系中，本發明提供一種改變與用免疫刺激劑治療過度增殖的疾病有關的不良事件的方法，該方法包含給予個體抗LAG-3抗體以及亞治療劑量的抗PD-1抗體。在某些較佳體系中，該個體係人。在某些較佳體系中，抗PD-1抗體係人序列單株抗體，而抗LAG-3抗體係人序列單株抗體，如此處所說明的25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5。人序列抗PD-1抗體的實施例包括17D8、2D3、4H1、5C4及4A11，彼等說明於PCT公開文件WO 06/121168中。在某些較佳體系中，抗PD-1抗體以5×10-8 M或低於5×10-8 M的KD 值與人PD-1相結合，以1×10-8 M或低於1×10-8 M的KD 值與人PD-1相結合，以5×10-9 M或低於5×10-9 M的KD 值與人PD-1相結合，或以在1×10-8 M與1×10-10 M或低於1×10-10 M之間的KD 值與人PD-1相結合。
在一較佳體系中，本發明提供一種治療過度增殖的疾病(例如癌症)的方法，該方法包含給予個體LAG-3抗體以及PD-L1抗體。在另外的較佳體系中，給予亞治療劑量的抗LAG-3抗體，給予亞治療劑量的抗PD-L1抗體，或者兩者均以亞治療劑量進行給藥。在另一較佳體系中，本發明提供一種改變與用免疫刺激劑治療過度增殖的疾病有關的不良事件的方法，該方法包含給予個體抗LAG-3抗體以及亞治療劑量的抗PD-L1抗體。在某些較佳體系中，該個體係人。在某些較佳體系中，抗PD-L1抗體係人序列單株抗體，而抗LAG-3抗體係人序列單株抗體，如此處所說明的25F7、26H10、25E3、8B7、11F2或17E5。人序列抗PD-L1抗體的實例包括3G10、12A4、10A5、5F8、10H10、1B12、7H1、11E6、12B7及13G4，彼等說明於PCT公開文件WO 07/005874中。在某些較佳體系中，抗PD-L1抗體以5×10-8 M或低於5×10-8 M的KD 值與人PD-L1相結合，以1×10-8 M或低於1×10-8 M的KD 值與人PD-L1相結合，以5×10-9 M或低於5×10-9 M的KD 值與人PD-L1相結合，或以在1×10-8 M與1×10-10 M或低於1×10-10 M之間的KD 值與人PD-L1相結合。
由抗體阻斷LAG-3以及一或多種第二靶抗原(如CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1)可增強針對患者體內癌細胞的免疫反應。一些癌症(其生長使用本揭露之抗體可被抑制)包括典型地針對免疫療法進行回應的癌症。使用本揭露的組合療法進行治療的癌症的代表性實例包括以上在用抗LAG-3抗體的單一療法的討論中確切地列出的癌症。
在某些較佳體系中，此處所討論的治療性抗體的組合可作為藥學上可接受的載體中的單一組成物同時給予，或者作為分別的組成物同時給予，其中各抗體在藥學上可接受的載體中。在另一較佳體系中，治療性抗體的組成可依序地進行給藥。例如，抗CTLA-4抗體及抗LAG-3抗體可依序地進行給藥，例如先給予抗CTLA-4抗體，而再給予抗LAG-3抗體，或者先給予抗LAG-3抗體，而再給予抗CTLA-4抗體。另外地或可替代地，抗PD-1抗體以及抗LAG-3抗體可依序地進行給藥，例如先給予抗PD-1抗體，而再給予抗LAG-3抗體，或者先給予抗LAG-3抗體，而再給予抗PD-1抗體。另外地或可替代地，抗PD-L1抗體以及抗LAG-3抗體可依序地進行給藥，例如先給予抗PD-L1抗體，而再給予抗LAG-3抗體，或者先給予抗LAG-3抗體，而再給予抗PD-L1抗體。
此外，若依序地給予多於一個劑量的組合療法，如此在每個給藥時間點上依序給藥的順序可相反或者保持相同的順序，而依序給藥可與共同給藥或其任何組合進行組合。例如，抗CTLA-4抗體及抗LAG-3抗體的組合的第一次給藥可同時進行，第二次給藥可依序進行，先給予抗CTLA-4，而再給予抗LAG-3，並且第三次給藥可依序進行，先給予抗LAG-3，而再給予抗CTLA-4等等。另外地或可替代地，抗PD-1抗體及抗LAG-3抗體的組合的第一次給藥可同時進行，第二次給藥可依序進行，先給予抗PD-1，而再給予抗LAG-3，並且第三次給藥可依序進行，先給予抗LAG-3，而再給予抗PD-1等等。另外地或可替代地，抗PD-L1抗體及抗LAG-3抗體的組合的第一次給藥可同時進行，第二次給藥可依序進行，先給予抗PD-L1，而再給予抗LAG-3，並且第三次給藥可依序進行，先給予抗LAG-3，而再給予抗PD-L1等等。另一代表性給藥方案涉及第一次給藥係依序進行，先給予抗LAG-3，而再給予抗CTLA-4(及/或抗PD-1及/或抗PD-L1)，而隨後的給藥可同時進行。
任選地，抗LAG-3與一或多種另外抗體(抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1抗體)的組合可進一步與免疫原性試劑組合，所述免疫原性試劑例如癌細胞、經純化的腫瘤抗原(包括重組蛋白、肽及碳水化合物分子)、細胞、及使用編碼免疫刺激性細胞因子的基因進行轉染的細胞(Heet al .(2004)J. Immunol . 173:4919-28)。可使用的腫瘤疫苗的非限制性實例包括黑色素瘤抗原的肽、如肽gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1及/或酪胺酸酶、或經轉染以表達細胞因子GM-CSF腫瘤細胞(以下進一步討論)。經組合的LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷可進一步與接種疫苗方案進行組合，所述接種疫苗方案例如以上所詳細討論的關於使用抗LAG-3抗體的單一療法接種疫苗方案。
經組合的LAG-3與CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷亦可進一步與標準的癌症治療進行組合。例如，經組合的LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷可有效地與化學療法方案進行組合。在該等情況下，降低與本揭露的組合進行給藥的化療試劑的劑量係可能的(Mokyret al. (1998)Cancer Research 58：5301-5304)。這種組合的實例係抗LAG-3與抗CTLA-4抗體及/或抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體的組合進一步與氨烯咪胺組合用於治療黑色素瘤。另一實例係抗LAG-3與抗CTLA-4抗體及/或抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體的組合進一步與介白素2(1L-2)組合用於治療黑色素瘤。LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷與化學療法組合使用，其背後的科學理論在於：細胞死亡(其係大部分化療化合物的細胞毒性作用的後果)應導致抗原呈現途徑中腫瘤抗原的水平升高。導致與經組合的LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷藉由細胞死亡達到協同作用的其他組合療法包括輻射、外科手術及激素剝奪。該等方法中每一種方法在宿主中均生成腫瘤抗原來源。血管生成抑制劑還可以與經組合的LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷進行組合。抑制血管發生導致腫瘤細胞死亡，這也是進入宿主抗原呈現途徑的腫瘤抗原的來源。
LAG-3與CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷抗體的組合還可與將表達Fcα或Fcγ受體的效應細胞靶向腫瘤細胞的雙特異性抗體組合使用(參見例如美國專利號5,922,845及5,837,243)。雙特異性抗體可用於靶向兩個分別的抗原。該等應答的T細胞分支(arm)可藉由使用經組合的LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷而得到增大。
在另一實例中，抗LAG-3與抗CTLA-4及/或抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體的組合可與以下抗腫瘤之抗體組合使用，如(利妥昔單抗)、(曲妥單抗)、(托西莫單抗)、(替伊莫單抗(ibritumomab))、(阿侖單抗)、(eprtuzumab)、(貝伐單抗)及(erlotinib)等。藉由舉例並且不希望被理論約束，採用抗癌抗體或偶合毒素的抗癌抗體進行治療會導致癌細胞死亡(例如腫瘤細胞)，這將會增強受CTLA-4、PD-1、PD-L1或LAG-3介導的免疫反應。在示例性實施例中，過度增殖的疾病(例如癌性腫瘤)的治療可包括與抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1抗體組合(同時或依序或其任何組合)的抗癌抗體，此會增強宿主的抗腫瘤免疫反應。
腫瘤藉由多種機制躲避宿主免疫監督。該等機制中的許多機制可藉由使由腫瘤表達並且具有免疫抑制性的蛋白失活來克服。該等蛋白除其他者之外亦包括TGF-β(Kehrlet al .(1986)J. Exp. Med. 163:1037-1050)、IL-10(Howard & O'Garra(1992)Immunology Today 13:198-200)及Fas配位體(Hahneet al. (1996)Science 274:1363-1365)。在另一實例中，針對該等實體中每個實體之抗體可與抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1的組合進行進一步組合以抵制免疫抑制劑的作用，並有助於宿主的腫瘤免疫反應。
可用於活化宿主免疫反應性的其他抗體可與抗LAG-3以及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1的抗體組合聯合進行進一步使用。該等抗體包括在樹狀突細胞的表面上的活化DC功能及抗原呈現的分子。抗CD40抗體(Ridgeet al. ，如上所述)可與抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1的組合進行結合而使用(Itoet al. ，如上所述)。還提供針對T細胞共刺激分子(Weinberget al. ，如上所述，Meleroet al .如上所述，Hutloffet al. ，如上所述)的其他活化抗體以提高T細胞活化的水平。
如以上所討論，骨髓移植正被用來治療造血性起源的多種腫瘤。經組合的LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1阻斷可用於提高移植供體的腫瘤特異性T細胞的有效性。
數個實驗性治療方案涉及抗原特異性T細胞的活體外活化以及擴大，以及將該等細胞過繼轉移進入接受者以刺激抗原特異性T細胞對抗腫瘤(Greenberg & Riddell，如上所述)。該等方法還可用於活化針對諸如CMV的傳染源的T細胞應答。在抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1存在下預期活體外活化可增加過繼轉移的T細胞的頻率及活性。
在某些較佳體系中，本發明提供一種改變與用免疫刺激劑治療過度增殖的疾病(例如癌症)有關的不良事件的方法，該方法包含給予個體抗LAG-3抗體以及亞治療劑量的抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1抗體。例如，本發明的方法提供藉由給予個體非吸收性的類固醇以降低由免疫刺激性治療性抗體所誘發的結腸炎或腹瀉的發病率。由於任何接受免疫刺激性治療性抗體的患者都處於出現由此類抗體誘發的結腸炎或腹瀉的風險中，所以這整個患者群適宜根據本發明方法的療法。儘管已給予類固醇以治療炎症性腸病(IBD)並防止IBD的惡化，但是它們尚未被用來預防尚未被診斷患有IBD的患者中的IBD(降低該等患者中的IBD的發病率)。與類固醇、甚至非吸收性的類固醇有關的顯著的副作用已經妨礙預防性使用。
在另外的較佳體系中，抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或抗PD-L1阻斷的組合(即免疫刺激性治療抗體抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體)可與任何非吸收性的類固醇進一步組合使用。在此所使用的“非吸收性類固醇”係糖皮質激素，該激素顯示出廣泛的首過代謝，這樣經肝臟代謝後這種類固醇的生物利用率係低的，即小於約20%。在本發明的一較佳體系中，非吸收性的類固醇係布地奈德。布地奈德係局部作用的糖皮質激素，其在口服後主要經肝臟被廣泛代謝。ENTOCORT(Astra-Zeneca)係經開發的pH依賴及時間依賴的布地奈德口服配置品，以優化藥物遞送至回腸以及整個結腸。在美國被批准用於治療輕度至中度涉及回腸及/或升結腸的克羅恩病。用於治療克羅恩病的的通常口服劑量係6至9mg/天。在被吸收之前被釋放於腸道中，並且停留在腸黏膜中。一旦穿過腸黏膜靶組織，其就會被肝臟的細胞色素P450系統強代謝成為糖皮質激素活性可忽略不計的代謝產物。因此，生物利用度低(大約10%)。與首過代謝不太全面的其他糖皮質激素相比較，布地奈德的低生物利用度導致提高的治療比率。與全身作用的皮質類固醇相比較，布地奈德產生較少的不良作用，其包含較低的下丘腦-垂體抑制。但是，長期給予ENTOCORT會導致全身性糖皮質激素效應，如腎上腺皮質功能亢進以及腎上腺抑制。參見PDR 58th ed. 2004;608-610。
又在另外的較佳體系中，LAG-3及CTLA-4及/或PD-1及/或PD-L1阻斷(即免疫刺激性治療抗體抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體)的組合與非吸收性的類固醇結合可進一步與水楊酸鹽(酯)進行組合。水楊酸鹽(酯)包括5-ASA試劑，例如柳氮磺吡啶(sulfasalazine)(,Pharmacia ＆ UpJohn)；奧沙拉秦(olsalazine)(,Pharmacia ＆ UpJohn)；巴柳氮(balsalazide)(,Salix Pharmaceuticals,Inc.)；以及美沙拉秦(mesalamine)(,Procter ＆ Gamble Pharmaceuticals;,Shire US;,Axcan Scandipharm,Inc.;,Solvay)。
根據本發明的方法，與抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或PD-L1抗體以及非吸收性的類固醇進行組合給藥的水楊酸鹽(酯)包括該水楊酸鹽(酯)與該非吸收性的類固醇的任何重疊給藥(overlapping adminstration)或依序給藥，目的係降低由免疫刺激性抗體誘發的回腸炎的發病率。因此，例如，根據本發明降低由免疫刺激性抗體誘發的回腸炎的發病率的方法涵蓋同時或依序地給予水楊酸鹽(酯)以及非吸收性類固醇(例如在非吸收性的類固醇之後6小時給予水楊酸鹽(酯))或彼等的任何組合。此外，根據本發明，水楊酸鹽(酯)及非吸收性類固醇可藉由相同途徑(例如這兩者均藉由口服進行給藥)或藉由不同途徑(例如水楊酸鹽(酯)藉由口服進行給藥，而非吸收性類固醇藉由直腸進行給藥)進行給藥，該等途徑可不同於用於給予抗LAG-3及抗CTLA-4及/或抗PD-1及/或PD-L1抗體的一或多種途徑。
藉由不應被解釋為進一步限定的以下實施例對本揭露進行進一步闡述。本申請通篇引用的所有附圖及所有參考文獻、Genbank序列、專利及已公開的專利申請的內容均併入本文作為參考。特別地，PCT公開文件WO 09/045957、WO 09/073533、WO 09/073546、及WO 09/054863的揭露內容係併入本文作為參考。
 實施例1：針對LAG-3的人單株抗體的產生
使用表達人抗體基因的轉基因小鼠，按照以下步驟，產生抗LAG-3人單株抗體。
抗原
使用重組人LAG-3融合蛋白作為免疫原以產生抗人LAG-3抗體。在某些免疫接種中，使用融合蛋白作為免疫原，該融合蛋白包含與人免疫球蛋白Fc結構域(R&D Systems，Catalog #2319-L3)(D1-D4 hFc)或小鼠免疫球蛋白Fc結構域(D1-D4 mFc)相融合的人LAG-3的整個細胞外區域(結構域1至4)。對於其他免疫接種而言，使用與小鼠免疫球蛋白Fc結構域(D1-D2 mFc)相融合的、僅包含人LAG-3的前兩個細胞外結構域的融合蛋白作為免疫原。使用標準的重組DNA技術製備LAG-3融合蛋白。
轉基因轉染色體的KM MouseTM 及KM/FCGR2D MouseTM 品系
使用表達人抗體基因的轉基因轉染色體的小鼠的KM MouseTM 及KM/FCGR2D MouseTM 品系製備人LAG-3的完全人單株抗體。
在KM MouseTM 品系中，內源性小鼠κ輕鏈基因已經被同型結合地破壞，如在Chenet al .(1993)EMBO J . 12:811-820中所說明的，並且內源性小鼠重鏈基因已經被同型結合地破壞，如在PCT公開文件WO 01/09187的實施例1中所說明。此外，這種小鼠品系帶有人κ輕鏈轉基因KCo5，如在以上所述之Fishwildet al .中所說明。如在PCT公開文件WO 02/43478中所說明，該品系還包含帶有人免疫球蛋白重鏈基因座的SC20轉染色體。KM/FCGR2D MouseTM 品系除了基因組還包括內源性FcγRIIB基因的純合破壞之外，與KM MouseTM 品系係相同的。KM MouseTM 及KM/FCGR2D MouseTM 品系還詳細地說明於美國專利申請公開號20020199213中。
KM MouseTM 及KM/FCGR2D MouseTM 的免疫：
為產生針對LAG-3的完全人單株抗體，KMMouseTM 及KM/FCGR2D MouseTM 品系的小鼠用以上所說明的三種不同的重組LAG-3融合蛋白(D1-D4 hFc、D1-D4 mFc、D1-D2,mFc)中之一進行免疫。通常的免疫方案說明於Lonberget al .(1994)如上所述；Fishwildet al .，如上所述以及PCT公開文件WO 98/24884中。第一次輸注抗原時，小鼠係6至16周齡。小鼠經腹膜內(IP)及/或皮下(SC)進行免疫。小鼠用10μg的重組LAG-3融合蛋白每兩周免疫四次，隨後用20μg相同的免疫原(在Ribi中)作為佐劑免疫兩次。藉由眶後取血監測免疫反應。藉由ELISA(如以下說明)對血漿進行篩選，並且將具有足夠滴度的抗LAG-3人免疫球蛋白的小鼠用於融合。用20μg抗原經靜脈內以及腹膜內對小鼠加強免疫，隨後用20μg抗原靜脈內加強免疫，然後處死小鼠並去除脾臟。
產生抗LAG-3抗體的KM及KM/FCGR2D小鼠的選擇
為選擇產生結合LAG-3蛋白之抗體的小鼠，藉由最初由Fishwildet al .(1996)所說明的改良的ELISA對來自從D1-D4hFc融合蛋白進行免疫的小鼠的血清進行測試。簡言之，用PBS中的1μg/ml經純化的重組LAG-3融合蛋白對微量滴定板進行包覆，每孔50μl，在4℃下培育過夜，然後用PBS中的5%的BSA以每孔200μl進行封閉。將來自被LAG-3免疫的小鼠的血漿的稀釋液加至每個孔，並在環境溫度下培育1至2小時。用PBS/Tween洗滌該等板，並接著用偶合有辣根(horse radish)過氧化物酶(HRP)的山羊-抗人κ輕鏈多株抗體在環境溫度下培育1小時。洗滌後，用ABTS底物對該板進行顯色，並由分光光度計在OD 405進行分析。
對於用D1-D4mFc或D1-D2mFc融合蛋白進行免疫的小鼠而言，在用該抗原進行包覆以消除與小鼠Fc部分的非特異性結合之前，使用山羊抗小鼠IgG對平板進行1小時的包覆藉由間接的ELISA對來自該等小鼠的血清進行測試。接著如以上所說明執行相同的ELISA步驟。
將形成抗最高滴度的LAG-3抗體的小鼠用於融合。如下說明進行融合，並藉由ELISA針對抗LAG-3活性對雜交瘤上清液進行測試。
生產針對LAG-3蛋白的人單株抗體的雜交瘤的產生
使用Cyto Pulse大腔細胞融合電穿孔儀(Cyto Pulse Sciences,Inc.,Glen Burnie,MD)藉由基於電場的電融合將從KM或KM/FCGR2D小鼠分離出的小鼠脾細胞融合小鼠骨髓瘤細胞系。然後對得到的雜交瘤進行篩選用於產生抗原特異之抗體。將來自經免疫小鼠的脾淋巴細胞的單細胞懸液與四分之一數目的P3X63 Ag8.6.53(ATCC,CRL 1580)非分泌性小鼠骨髓瘤細胞進行融合。將細胞以大約1×105 個/孔接種於平底微孔滴定板中，接著在含10%胎牛血清的選擇性培養基中培育約兩周，該選擇性培養基中補充有RPMI中的origen(IGEN)、L-麩胺醯胺、丙酮酸鈉、HEPES、青黴素、鏈黴素(streptamycin)、慶大黴素、1×HAT、以及β-巰基乙醇。1至2周後，用其中HAT被HT替換的培養基培養細胞。然後藉由ELISA(如上說明)針對人抗LAG-3單株系IgG抗體對各個孔進行篩選。一旦雜交瘤廣泛生長發生，則通常在10至14天後監測培養基。將分泌抗體的雜交瘤進行再次接種，再次篩選，並且如果對人IgG仍呈陽性，則藉由有限稀釋將抗LAG-3單株抗體進行次選殖系至少兩次。然後將穩定的次選殖系在體外進行培養，以便在組織培養基中產生少量抗體用於進一步表徵。
選擇雜交瘤選殖系25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5用於進一步分析及定序。
實施例2：人抗LAG-3單株抗體25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的結構特徵
使用以下方案對編碼由該等25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5選殖系(如述於實施例1中)所表達的mAb的重鏈及輕鏈可變區的cDNA序列進行定序。使用RNeasy Mini Kit(Qiagen,Valencia,CA)從5×106 個雜交瘤細胞中製備總RNA。用SMART RACE cDNA放大套組(Clontech Laboratories,Inc.,Mountain View,CA)及SuperScript II逆轉錄酶(Invitrogen,Carlsbad,CA)藉由5'-RACE方案製備cDNA。使用與5' RACE通用引子混合物進行配對的3'人特異性的恒定區引子對每種抗體的V-區進行擴增。將包含V-區的PCR產物選殖進入pCR4-TOPO載體(Invitrogen,Carlsbad,CA)中並轉形進入大腸桿菌菌株TOP10(Invitrogen,Carlsbad,CA)。製備小量DNA或Templiphi(GE Healthcare Biosciences,Piscataway,NJ,USA)樣品，並進行DNA定序(Sequetech,Mountain View,CA)。分析生成的DNA序列的框內重排及其他抗體特徵。經表達的蛋白藉由標準的蛋白質化學分析以特徵化。發現該等25E3、25F7及26H10選殖系表達包含IgG1重鏈及κ輕鏈之抗體，而該等8B7及17E5選殖系表達包含IgG4重鏈及κ輕鏈之抗體，且11F2選殖系表達包含IgG2重鏈及κ輕鏈之抗體。
25F7的重鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列分別顯示在圖1A及SEQ ID NO：49及SEQ ID NO：37中。25F7的κ輕鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖1B及SEQ ID NO：55及SEQ ID NO：43中。將25F7重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖7)進行比較，顯示25F7重鏈利用源自人種系VH 4-34的VH 區段(SEQ ID NO：61)，及源自人種系JH5b的JH區段(SEQ ID NO：62)。使用CDR區測定的Kabat系統對25F7 VH 序列進行進一步分析，得到分別如在圖1A及SEQ ID NO：1、7及13中所示的重鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。將25F7輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖8)進行比較，顯示25F7的κ輕鏈利用源自人種系VK L6的VK 區段(SEQ ID NO：63)，及源自人種系JK2的JK 區段(SEQ ID NO：64)。使用CDR區測定的Kabat系統對25F7 VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖1B及SEQ ID NO：19、25及31所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
26H10的重鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖2A及SEQ ID NO：50及38中。26H10的輕鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖2B及SEQ ID NO：56及44中。將26H10重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖9)進行比較，顯示26H10重鏈利用源自人種系VH 3-33的VH 區段(SEQ ID NO：65)，及源自人種系JH6B的JH區段(SEQ ID NO：66)。使用CDR區測定的Kabat系統對26H10 VH 序列進行進一步分析，得到分別如在圖2A及SEQ ID NO：2、8及14中所示的重鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。將26H10輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖10)進行比較，顯示26H10的κ輕鏈利用源自人種系VK A27的VK 區段(SEQ ID NO：67)，及源自人種系JK3的JK 區段(SEQ ID NO：68)。使用CDR區測定的Kabat系統對26H10 VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖2B及SEQ ID NO：20、26及32所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
25E3的重鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列分別顯示在圖3A及SEQ ID NO：51及SEQ ID NO：39中。25E3的輕鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列分別顯示在圖3B及SEQ ID NO：57及SEQ ID NO：45中。將25E3重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖11)進行比較，顯示25E3重鏈利用源自人種系VH 3-20的VH 區段(SEQ ID NO：69)，及源自人種系JH4b的JH區段(SEQ ID NO：70)。使用CDR區測定的Kabat系統對25E3VH 序列進行進一步分析，得到分別如在圖3A及SEQ ID NO：3、9及GGY中所示的重鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。將25E3輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖12)進行比較，顯示25E3的κ輕鏈利用源自人種系VK L18的VK 區段(SEQ ID NO：71)，及源自人種系JK 2的JK 區段(SEQ ID NO：64)。使用CDR區測定的Kabat系統對25E3 VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖3B及SEQ ID NO：21、27及33中所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
8B7的重鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖4A及SEQ ID NO：52及40中。8B7的輕鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖4B及SEQ ID NO：58及46中。將8B7重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖13)進行比較，顯示8B7重鏈利用源自於人種系VH 4-34的VH 區段(SEQ ID NO：61)，以及源自人種系JH5B的JH區段(SEQ ID NO：62)。使用CDR區測定的Kabat系統對8B7 VH 序列進一步分析，得到分別如在圖4A及SEQ ID NO：4、10及16中所示的重鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。將8B7輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖14)進行比較，顯示8B7的κ輕鏈利用源自人種系VK L6的VK 區段(SEQ ID NO：63)，及源自人種系JK 4的JK 區段(SEQ ID NO：72)。使用CDR區測定的Kabat系統對26H10 VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖4B及SEQ ID NO：22、28及34中所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
11F2的重鏈可變區的核苷酸序列及胺基酸序列分別顯示在圖5A以及SEQ ID NO：53及41中。11F2的輕鏈可變區的核苷酸序列以及胺基酸序列分別顯示在圖5B及SEQ ID NO：59及47中。將11F2重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖15)進行比較，顯示11F2重鏈利用源自人種系VH 1-24的VH 區段(SEQ ID NO：73)、源自人種系2-15的D區段、及源自人種系JH 4B 的JH區段(SEQ ID NO：70)。使用CDR區測定的Kabat系統對11F2 VH 序列進一步分析，得到分別如在圖13A及SEQ ID NO：5、11及17中所示的重鏈CDRJ、CDR2及CDR3區的示意圖。將11F2輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖16)進行比較，顯示11F2的κ輕鏈利用源自人種系VK L6的VK 區段(SEQ ID NO：63)，以及源自人種系JK 1的JK 區段(SEQ ID NO：74)。使用CDR區測定的Kabat系統對11F2的VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖5B及SEQ ID NO：23、29及35中所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
17E5的重鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列分別顯示在圖6A及SEQ ID NO：54及42中。17E5的輕鏈可變區的核苷酸及胺基酸序列分別顯示在圖6B及SEQ ID NO：60及48中。將17E5重鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白重鏈序列(圖17)進行比較，顯示17E5重鏈利用源自人種系VH 3-33的VH 區段(SEQ ID NO：65)、源自人種系2-2的D區段、及源自於人種系JH 4B的JH區段(SEQ ID NO：70)。使用CDR區測定的Kabat系統對17E5的VH 序列進一步分析，得到分別如在圖6A及SEQ ID NO：6、12及18所示的重鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。將17E5輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人種系免疫球蛋白輕鏈序列(圖18)進行比較，顯示17E5的κ輕鏈利用了源自人種系VK L6的VK 區段(SEQ ID NO：63)，及源自人種系JK 5的JK 區段(SEQ ID NO：75)。使用CDR區測定的Kabat系統對17E5的VK 序列進行進一步分析，得到分別如在圖6B及SEQ ID NO：24、30及36中所示的輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的示意圖。
使用標準的重組DNA技術可將25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5的可變區轉化為任何所欲的同型的全長抗體。例如，可將編碼VH 及VL 區的DNA選殖系進入表達載體中，該表達載體帶有該重鏈及輕鏈恒定區，如此該等可變區被可操作性地連接到恒定區上。可替代地，多個分別的載體可以被用於表達全長重鏈及全長輕鏈。適宜用於產生全長抗體的表達載體的非限制性實例包括在美國專利公開號20050153394中說明的pIE載體。
實施例3：LAG-3單株抗體的結合特性的表徵
在這個實施例中，藉由流式細胞法檢查人抗LAG-3抗體與細胞表面LAG-3(人、猴及小鼠LAG-3)的結合。此外，藉由BIACORE分析以分析針對LAG-3的結合動力學。此外使用肽掃描實驗進行表位圖譜。
A.流式細胞法研究 1.CHO-人LAG-3細胞結合
為測試抗體與細胞表面LAG-3蛋白結合的能力，將該等抗體與CHO細胞系一起培育，該CHO細胞系已經轉染以便在細胞表面上表達人LAG-3。25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5單株抗體經冷1×PFAE緩衝液(1×PBS+2% FBS，0.02%疊氮化鈉，2mM Na EDTA)系列稀釋。對於結合反應，將50μl經稀釋之抗體溶液加入至包含2×105 個細胞的50μl細胞懸浮液中，並將混合物在冰上培育30分鐘。然後用1×PFAE緩衝液將細胞洗滌兩次。加入1:100稀釋的經FITC標記的山羊抗人κ輕鏈抗體(Bethyl Laboratories,Inc.,Cat. # A80-115F)，並將混合物在4℃下培育30分鐘，之後用冷1×PFAE緩衝液洗滌兩次。在最後洗滌後，將含有10μg/mL碘化丙啶(Roche Applied Science,Cat #1_348_639)的150μl冷1×PFAE加入至每個溶液中，並使用FACScalibur流式細胞儀(BD Bioscience)藉由流式細胞法進行抗體結合分析。
在下述表1中總結流式細胞法分析的結果，該表1顯示與CHO-人LAG-3結合的EC50 值，其證明25F7、26H10、25E3、8B7、11F2及17E5有效地與細胞表面的人LAG-3結合，其中25F7具有的EC50 比25E3低約20倍，但與8B7及26H10的EC50 近似相等。11F2及17E5的EC50 結果與25E3的結果在相同的範圍內。
2.被活化的人CD4+ T細胞結合
為測試抗體與在被活化的人T細胞表面上的天然人LAG-3結合的能力，從經純化的周圍血單核細胞中分離出靜止的CD4+ T細胞，並用附著於聚苯乙烯珠粒的抗CD3與抗CD28抗體的組合使該CD4+ T細胞經受3天的刺激。25F7、8B7及26H10單株抗體經冷1×PFAE緩衝液(1×PBS+2% FBS，0.02%疊氮化鈉，2mM Na EDTA)系列稀釋。對於結合反應，將50μl經稀釋之抗體溶液與50μl經PE標記的抗人CD4(BD Bioscience,Cat # 555347)進行混合。藉由以上所說明的相同的方案對被活化的T細胞進行處理。如以上所說明進行抗體結合分析。
在下述表2中總結流式細胞法分析的結果，該表2顯示與被活化的人CD4+ T細胞結合的EC50 值，其證明所有3種抗體皆類似地與細胞表面的人LAG-3結合。
3.猴LAG-3抗原結合
為確定抗LAG-3抗體與猴LAG-3是否進行交叉反應，藉由RT-PCR自混合的cDNA製備物中選殖出cDNA序列，該混合的cDNA係藉由RNA的逆轉錄從食蟹猴及恒河猴的組織樣本收集所製備。使用引子(5'正向引子：5Mcyn1408；5'-atgtgggaggctcagttcctg-3'(SEQ ID NO：91)及3'反向引子：3Mcyn1408a;5'-gtcagagctgctccggctc-3'(SEQ ID NO：92))使用富含GC的PCR擴增系統(Roche)自該cDNA庫對該序列進行擴增，並將其選殖入接受者TOPO選殖載體(Invitrogen)中以供序列分析。與參考Genbank恒河猴LAG-3序列(Genbank登錄號XM_001108923)相匹配的選殖系隨後經使用第二組引子從TOPO選殖的載體DNA進行再次擴增，該組引子併有用於在哺乳動物細胞表達載體中定向選殖的限制性內切酶位點。
對猴的LAG-3選殖系pa23-5進行分離並定序。分離的猴序列顯示與參考Genbank恒河猴LAG-3序列有99.6%的同一性。cDNA選殖系pa23-3(SEQ ID NO：93)的胺基酸序列與源自Genbank的恒河猴LAG-3(SEQ ID NO：94)(登錄號XM_001108923)的比較係示於圖19。除在位置419上的一個胺基酸不同(在選殖系pa23-5中的精胺酸與在Genbank恒河猴序列中的蘇胺酸進行比較)外，這兩個序列係相同的，並且在這個基礎上推斷cDNA選殖系pa23-5代表恒河猴LAG-3基因序列。
選殖系pa23-5的cDNA被插入至表達構建體中，該構建體藉由核轉染(Amaxa)被轉染進入CHO-S懸浮細胞中。由經過分選的、耐受選擇藥物的選殖系所表達的恒河猴LAG-3藉由FACS分析進行驗證。在類似於上述所說明的FACS測定的測定中使用過量表達恒河猴LAG-3的選殖系的CHO細胞系以測量抗體對此種猴的蛋白的交叉反應性。簡言之，25F7、8B7及26H10單株抗體經冷1×PFAE緩衝液進行系列稀釋(1×PBS+2% FBS，0.02%疊氮化鈉，2mM Na EDTA)。對於結合反應，將50μl被稀釋之抗體溶液加入至包含2×105 個細胞的50μl細胞懸浮液中，並將混合物在冰上培育30分鐘。藉由上述說明的相同方案對細胞進行處理。如上述說明進行抗體結合分析。
在分別實驗中，使用被活化的食蟹猴T細胞測試抗體與食蟹猴LAG-3的結合。該等猴的T細胞的體外活化係憑藉與上述所說明的人T細胞體外活化基本上相同的方案藉由對T細胞的抗CD3/抗CD28處理而實現，隨後如上述對活體外被活化的人CD4+ T細胞的染色所說明之流式細胞法分析。
在下述表3中總結使用CHO-恒河猴LAG-3細胞及被活化的食蟹猴T細胞的流式細胞法分析的結果，該表3顯示與表達猴LAG-3的兩種不同類型的細胞結合的EC50 。該等結果顯示所有之抗體有效地結合經活化的食蟹猴T細胞上之LAG-3及經轉染至CHD細胞之恒河猴LAG-3(SEQ ID NO：93)。然而，有結合親和性的層級，選殖系26H10表現最高的親和性，該親和性比選殖系8B7及25F7分別優約2.5倍及6倍。在兩種細胞類型之間的結合層級的差別可反映在恒河猴及食蟹猴LAG-3之間的胺基酸差別。
4.小鼠LAG-3抗原結合
為確定抗體是否與小鼠LAG-3進行交叉反應，使用小鼠T細胞淋巴瘤細胞系(3A9)(其已經轉染以便在其細胞表面表達小鼠LAG-3)作為靶細胞進行類似於上述所說明的流式細胞法研究，隨後進行FACS分析以檢測抗體結合。結果顯示，與顯示出強染色的對照抗小鼠LAG-3對照抗體相比，人抗體25E3、25F7、8B7或26H10均未顯示背景水平以上的與細胞表面小鼠LAG-3的結合，證明該等抗體皆不與小鼠LAG-3進行交叉反應。
B. BIACORE分析
使用捕獲方法藉由BIAcoreTM 檢驗25E3、25F7、8B7、26H10及17E5抗體與重組LAG-3蛋白的結合。使用抗CH1(試劑抗體)分別捕獲25E3、25F7、8B7、26H10及17E5抗體，該抗CH1對人抗體的重鏈恒定區1具特異性(Zymed，選殖系HP6045，儲存濃度1.0mg/ml)。將抗CH1以高密度(9700-11500 RU)包覆在CM5晶片(BR-1000-14，研究級)上。基於由生產商推薦的標準固定操作進行包覆。然後在抗CH1包覆的表面上以10uL/分鐘的流速對濃度範圍自0.5至3μg/mL的25E3、25F7、8B7、26H10或17E5經純化之抗體進行捕獲，持續1分鐘。將單一濃度的重組人LAG-3融合蛋白(20nM)以25μg/mL的流速對被捕獲之抗體注射3分鐘。允許抗原解離7.5分鐘。每次循環後，使用25μl的25mM NaOH對晶片表面進行再生，然後使用30μl的HBS-EP進行洗滌。在晶片上進行同型對照，並且使用該等資料來減去非特異性結合。使用BIAcore控制軟體版本3.2，在Biacore 3000表面等離振子共振儀上進行所有實驗。使用BiaEvaluation版本3.2軟體進行資料分析。結果顯示在下述表4中。25E3、25F7、8B7、26H10及17E5的BIAcore結果證實流式細胞法之結果，即所有5種抗體皆能夠以高親和性與人LAG-3結合。
C.　表位圖譜
在LAG-3蛋白中，細胞外區域的似免疫球蛋白第一結構域含有一具有下述胺基酸序列的暴露“額外環”：GPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRY(SEQ ID NO：79)。為檢驗25E3、25F7、8B7及26H10與LAG-3的該區域的結合並對由每種抗體所結合的表位圖譜，在整個該區域內進行肽掃描實驗。製備對額外環序列的全長進行掃描的一系列10種重疊肽並將其與生物素偶合。為ELISA分析，使用以鏈黴抗生物素蛋白(Sigma-Aldrich，Cat #M5432)預包覆的微孔滴定板來捕獲生物素醯化的環肽共軛物(該共軛物係以2μg/mL的濃度以100μl體積施用)，並在4℃下培育18小時，之後將該板洗滌3次並用阻斷緩衝液(1×PBS+10% FBS)在室溫下進行阻斷1小時。隨後，應用在阻斷緩衝液中被系列稀釋3倍(自正在使用的10μg/mL)的人抗LAG-3抗體並將該等板在室溫培育2小時，並接著經洗滌三次。為檢測所結合的人抗體，將與HRP共軛的山羊抗人K輕鏈抗體(Bethyl Laboratories，Cat #A80-115P)在阻斷緩衝液中稀釋至1μg/mL，並施用至測定孔中達1小時，隨後經洗滌三次並施用TMB受質(eBioscience，Cat #00-4201-56)。在Spectrama×340PC分光光度計(Molecular Dynamics,Inc.)上且在650nm波長下進行光密度讀數。在下述表5中總結肽掃描實驗的結果。
基於該等結果，確定25E3抗體識別在包含胺基酸序列PGHPLAPG(SEQ ID NO：76)的細胞外環內的區域，而25F7抗體識別在包含胺基酸序列HPAAPSSW(SEQ ID NO：77)的額外環內的區域，且8B7似乎識別在包含胺基酸序列PAAPSSWG(SEQ ID NO：78)的細胞外環內的區域。相比之下，可檢測到26H10抗體不結合全長額外環肽或更短的掃描肽中的任何肽。
在全長額外環序列中對在這此研究所識別的區域添加底線：
因此，該肽掃描結果表明25E3、25F7及8B7抗體與人LAG-3內不同但位置接近的表位進行結合。
為進一步檢驗該等抗體與額外環肽區域的結合，進行另外的ELISA測定。在使用人全長額外環肽(SEQ ID NO：79)的ELISA測定中，確定25E3、25F7及8B7的結合EC50 值。另外地，使用源自恒河猴LAG-3的全長額外環肽序列(具有序列GPPAPAPGHPPAPGHRPAAP YSWGPRPRRY(SEQ ID NO：90))進行類似的肽ELISA，並確定25F7及8B7的結合EC50 值。在下述的表6中總結結果。該等結果證實抗體25E3、25F7及8B7能夠識別人LAG-3額外環肽區域。此外，抗體25F7及8B7亦與恒河猴LAG-3額外環肽區域結合，儘管與人序列相比結合欠佳，這可能是由於在該多肽中的物種序列趨異的緣故。該等結果亦證實26H10抗體不能夠識別LAG-3額外環肽。
實施例4：抗LAG-3mAb對LAG-3與MHC第II類結合的抑制作用
為測試抗LAG-3抗體抑制LAG-3與MHC第II類分子結合的能力，進行體外結合測定，其中一種LAG-3融合蛋白(包括與小鼠Fc相融合的人LAG-3細胞外結構域(hLAG-3-mIg))與表達人MHC第II類分子的Daudi細胞進行反應。
為測試抗體對LAG-3與MHC第II類的結合的抑制作用，將25E3、25F7、8B7及26H10在PFAE緩衝液中自20μg/mL進行系列稀釋，並對該等系列稀釋液加入1μg/ml的hLAG-3-mIg融合蛋白。將該混合物在室溫下培育20分鐘，然後加入2×105 個經1xPFAE洗滌的Daudi細胞。將該混合物應用於Daudi細胞並在4℃下培育30分鐘。將細胞粒化(pellet)(3分鐘，400xg)，用1xPFAE緩衝液洗滌1次，並再次粒化，並且使用重組經PE標記的抗mIgG Fcγ第二試劑檢測hLAG-3-mIg與Daudi細胞的結合。使用FACScalibur流式細胞儀(BD Bioscience)進行LAG-3-mIg結合分析。在下述的表7中總結結果，該表顯示以nM計量的IC50 值。
該等結果證明所有4種抗體在抑制LAG-3與MHC第II類抗體的結合中皆屬有效，其中25F7、8B7及26H10顯示的IC50 值比25E3顯示的IC50 值低約7到13倍。
實施例5：抗LAG-3mAb對抗原特異性T細胞應答的刺激
為測試抗LAG-3抗體刺激抗原特異性T細胞應答的能力，使用3A9T細胞肽刺激測定(參見例如Workmanet al .(2003)J. Immunol . 169:5392-5395;Workmanet al .(2002)Eur. J. Immunol. 32:2255-2263)。
在該測定中，使用對肽HEL48-62 特異的小鼠T細胞雜交瘤3A9作為反應者T細胞(responder T cell)。將反應者3A9T細胞以逆轉錄病毒的方式進行轉導以在其細胞表面上表達人LAG-3或小鼠LAG-3。用來將HEL48-62 肽抗原呈現給3A9細胞的抗原呈現細胞(APC)係小鼠MHC第II類陽性細胞系LK35.2。多個分別的研究確定人LAG-3融合蛋白能夠與小鼠MHC第II類分子結合，由此確認小鼠APC在該測定中LK35.2的用途。藉由介白素2(IL-2)的產生表明3A9細胞的抗原特異性刺激，藉由ELISA測量介白素2的分泌(小鼠IL-2 OptEIA試劑盒，BD Bioscience，Cat #555148根據製造商的建議)。
當經轉染的T細胞與呈現HEL48-62 肽抗原的LK35.2 APC一起培育時，人或小鼠LAG-3在3A9 T細胞上的異位表達在不存在任何抗體時導致對抗原特異性反應的抑制作用，正如下述所顯示者：與參照3A9T細胞的肽的劑量反應性質相比，刺激3A9細胞產生IL-2所需的肽抗原的量增加。
為測試抗原特異性T細胞應答的刺激，首先將APC(2.5×104 個細胞)與抗原的肽(200nM)在37℃下進行預培育30分鐘，並將3A9T細胞(5.0×104 個表達mLAG-3、hLAG-3的細胞或參照細胞)與從25μg/mL起經三倍系列稀釋的抗hLAG-3抗體(25E3、25F7、8B7、26H10、11F2、17E5)在37℃下預培育15分鐘。然後將3A9T加入至抗原脈動(antigen-pulsed)的APC中，並將培養物在37℃下預培育24小時。然後收集上清液並對其測量小鼠IL-2的產生。表達人LAG-3的3A9T細胞的結果示於圖8，該圖8顯示以nM計量的IC50 值。
該等結果顯示在抗原特異性T細胞應答測定中，抗體25F7、8B7及26H10，以及(較小程度)25E3能夠刺激IL-2產生，而抗體11F2表現出最小的抑制能力，並且抗體17E5在該測定中沒有功能。該等抗體均不能改變測量出由參照3A9T細胞或轉染小鼠LAG-3蛋白的3A9T細胞產生的IL-2，證明該刺激效應的特異性。
實施例6：單獨的或組合的抗LAG-3mAb對腫瘤生長的抑制作用
為測試抗LAG-3抗體單獨或與另一免疫刺激性抗體相組合在活體外抑制腫瘤細胞生長的能力，使用兩個不同的同系基因小鼠的腫瘤移植模型。第一模型使用鼠Sa1N纖維肉瘤細胞。第二個模型使用鼠MC38結腸癌細胞系。
在第一實驗中，小鼠(A/J品系)在第0天各自植入2×106 個Sa1N纖維肉瘤細胞，並允許腫瘤細胞生長7天。在植入後第7天、第10天及第12天，用10mg/kg的下述抗體對小鼠進行處理：單獨使用抗LAG-3mAb(大鼠抗小鼠LAG-3 mAb C9B7W;eBioscience,Cat. No. 14-2231)、單獨用抗PD-L1抗體(抗小鼠PD-L1 mAb 14D8)、抗LAG-3與抗PD-L1抗體之組合、或IgG1同型對照抗體。14D8 mAb係一大鼠抗小鼠PD-L1抗體，該抗體已經被嵌合而包含小鼠IgG1及小鼠κ恒定區。
在植入後測量小鼠體內腫瘤體積，持續超過50天，並確定平均腫瘤體積及腫瘤體積中位數。計算平均腫瘤生長抑制(基於同型對照IgG1抗體為0%抑制的處理)。在下述表9中總結植入後第24天的結果：
因此，單獨使用抗LAG-3抗體、或單獨使用抗PD-L1抗體的處理導致腫瘤生長的抑制作用，而這兩種抗體的組合導致更大的腫瘤生長抑制作用。就處理組而言，到實驗結束時結果是單獨使用抗LAG-3處理的10隻小鼠中有4隻沒有腫瘤，而使用參照IgG1抗體處理的10隻小鼠中只有1隻沒有腫瘤。類似地，單獨使用抗PD-L1處理的11隻小鼠中有4隻變成沒有腫瘤。使用抗LAG-3及抗PD-L1的組合對小鼠的處理導致10隻小鼠中有9隻沒有腫瘤；剩餘小鼠(並非沒有腫瘤)具有無痛腫瘤，這種無痛腫瘤在整個研究中仍是很小。
兩項另外的研究使用移植鼠MC38結腸癌細胞系的小鼠。在第一實驗中，C57B1/6小鼠在第0天各自植入2×106 個MC38細胞，並在植入後第7天、第10天及第12天單獨使用200μg/劑量的抗LAG-3(C9B7W mAb)、單獨使用抗PD-1(4H2mAb)或抗LAG-3與抗PD-1的組合進行處理。使用400μg/劑量的IgG1同型匹配之抗體作為對照。4H2mAb係一大鼠抗小鼠PD-1抗體，該抗體已經被嵌合而包含小鼠IgG1及小鼠κ恒定區。
在植入後80天確定平均腫瘤體積、腫瘤體積中位數及%存活。該等結果顯示在該腫瘤模型(MC38)中的LAG-3單一療法在抑制腫瘤生長上顯示很小的活性或沒有顯示活性，並且經處理的小鼠在實驗的持續時間內均未存活。相比之下，抗PD-1單一療法顯示出顯著的活性，其中10隻小鼠中有4隻在實驗結束時沒有腫瘤。此外，類似於SalN模型的結果，抗LAG-3加上抗PD-1的聯合治療比單獨使用任一處理更為有效，其中8隻小鼠中有7隻在實驗結束時沒有腫瘤。
在MC38模型的第二個實驗中，C57B1/6小鼠在第0天各自植入2×106 MC38個細胞，並在植入後第5天、第8天及第11天使用200μg/劑量的測試抗體及/或400μg/劑量的對照IgG抗體進行處理如下：(i)抗IgG1對照抗體；(ii)抗LAG-3mAb(C9B7W mAb)與參照IgG1一起；(iii)抗PD-1抗體(4H2)與參照IgG1一起；(iv)抗CTLA-4抗體(9D9小鼠的抗小鼠CTLA-4mAb)與參照IgG1一起；(v)抗LAG-3 mAb與抗PD-1 mAb一起；或者(vi)抗LAG-3 mAb與抗CTLA-4 mAb一起。9D9 mAb係在小鼠中產生的小鼠抗小鼠CTLA-4抗體，在這種小鼠內源性的小鼠CTLA-4已被去除。
在植入後100天確定平均腫瘤體積、腫瘤體積中位數及%存活。該等結果與第一實驗相類似，在第一實驗中LAG-3單一療法在抑制MC38腫瘤生長中顯示很小的活性或沒有顯示活性，並且經處理的小鼠在實驗的持續時間內均未存活。CTLA-4單一療法也在抑制MC38腫瘤生長上顯示很小的活性或沒有顯示活性，並且經處理的小鼠在實驗的持續時間內均未存活。相比之下，抗PD-1單一療法再次顯示顯著的活性，其中10隻小鼠中有4隻在實驗結束時沒有腫瘤。此外，再一次顯示聯合療法比單一療法更為有效。對於使用抗LAG-3與抗CTLA-4的組合處理的小鼠而言，10隻中有3隻在實驗結束時沒有腫瘤，而對於使用抗LAG-3與抗PD-1的組合處理的小鼠而言，10隻只中有8隻在實驗結束時沒有腫瘤。
因此，以上所說明的活體內腫瘤移植研究證明，對於至少某些腫瘤模型而言，單獨用抗LAG抗體處理導致在體內腫瘤生長的顯著抑制。此外，對於多種腫瘤模型而言，與單獨的單一療法相比，抗LAG-3抗體與無論抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體或抗CTLA-4抗體的聯合治療導致更大的抗腫瘤活性。
實施例7：藉由抗LAG-3mAb的抑制作用促進NOD小鼠中自體免疫
為測試抗LAG-3抗體刺激免疫反應的能力，如自體免疫的形成所顯示的，使用糖尿病的NOD小鼠模型。已知NOD小鼠易於形成自體免疫性糖尿病。在雌性NOD小鼠中，可藉由測量血清葡萄糖追蹤糖尿病的進展。因此，檢查抗LAG-3治療單獨或與任一免疫刺激性抗體進行組合對雌性NOD小鼠之糖尿病形成的效果。
在第0天、第2天及第5天使用250μg/劑量的下述任一抗體對雌性NOD小鼠進行處理：(i)抗IgGl同型對照抗體；(ii)單獨的抗LAG-3mAb(C9B7W mAb)；(iii)單獨的抗PD-1 mAb(4H2mAb)；(iv)單獨的抗CTLA-4mAb(9D9 mAb)；(v)抗LAG-3 mAb與抗PD-1 mAb一起；或者(vi)抗LAG-3mAb與抗CTLA-4一起。該等結果證明單獨的抗LAG-3處理或單獨的抗PD-1處理(但沒有單獨的抗CTLA-4處理)提高轉變為糖尿病表型的小鼠的數目。此外，抗LAG-3加上抗PD-1、或抗LAG-3加上抗CTLA-4的組合處理在將小鼠轉變為糖尿病表型中甚至更為有效。
因此，該等結果證明在NOD小鼠中，阻斷LAG-3與其受體的相互作用干擾在NOD小鼠中允許更大的免疫活性的負性免疫調節信號，並且在經LAG-3處理的小鼠中這種更大的免疫活性可藉由用抗PD-1或抗CTLA-4抗體的組合處理得到增強。
實施例8：使用抗LAG-3 mAb的免疫組織化學
在這個實驗中，將經螢光標記的抗LAG-3人抗體用於免疫組織化學實驗。使用下述經FITC標記的人抗LAG-3抗體：25F7-FITC(F:P=2.9；IgG1形式)；25F7-G4-FITC(F:P=2.7；IgG4形式)；8B7-FITC(F:P=2.6)及26H10-FITC(F:P=3.4)。一組淋巴樣組織(確切地是扁桃體(二個樣本)、脾臟(二個樣本)及胸腺(二個樣本))與垂體組織(四個樣本)一起進行檢驗。亦使用經LAG-3轉染的CHO細胞作為對照。使用經丙酮固定的冷凍切片。該等切片使用經FITC標記的抗LAG-3抗體(0.2至5μg/ml)進行染色，隨後使用兔抗FITC抗體作為搭橋抗體(bridge antibody)進行染色，並接著使用兔EnVisionTM +System Kit(Dako USA,Carpinteria,CA)進行顯影。結果總結在下述表10中。
如所預期，在該組淋巴樣組織中檢測LAG-3表達。另外地，所檢驗的這三種抗LAG-3抗體中有兩種(25F7(IgG1以及IgG4形式)以及26H10)顯示出保留在垂體組織中，而所檢驗的抗體8B7並未顯示出保留在垂體組織中。因此，免疫組織化學實驗鑒定抗LAG-3抗體的兩個亞型，其中一亞型被保留在垂體組織中，而另一亞型未保留在垂體組織中。
圖1A示出25F7人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：49)及胺基酸序列(SEQ ID NO：37)。描繪CDR1(SEQ ID NO：1)、CDR2(SEQ ID NO：7)及CDR3(SEQ ID NO：13)區，並指明V、D及J種系來源。
圖1B示出25F7人單株抗體的K輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：55)及胺基酸序列(SEQ ID NO：43)。描繪CDR1(SEQ ID NO：19)、CDR2(SEQ ID NO：25)及CDR3(SEQ ID NO：31)區，並指明V與J種系來源。
圖2A示出26H10人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：50)及胺基酸序列(SEQ ID NO：38)。描繪CDR1(SEQ ID NO：2)、CDR2(SEQ ID NO：8)及CDR3(SEQ ID NO：14)區，並指明V、D及J種系來源。
圖2B示出26H10人單株抗體的κ輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：56)及胺基酸序列(SEQ ID NO：44)。描繪CDR1(SEQ ID NO：20)、CDR2(SEQ ID NO：26)及CDR3(SEQ ID NO：32)區，並指明V與J種系來源。
圖3A示出25E3人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：51)及胺基酸序列(SEQ ID NO：39)。描繪CDR1(SEQ ID NO：3)、CDR2(SEQ ID NO：9)及CDR3區，並指明V、D及J種系來源。
圖3B示出25E3人單株抗體的κ輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：57)及胺基酸序列(SEQ ID NO：45)。描繪CDR1(SEQ ID NO：21)、CDR2(SEQ ID NO：27)及CDR3(SEQ ID NO：33)區，並指明V與J種系來源。
圖4A示出8B7人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：52)及胺基酸序列(SEQ ID NO：40)。描繪CDR1(SEQ ID NO：4)、CDR2(SEQ ID NO：10)及CDR3(SEQ ID NO：16)區，並指明V、D及J種系來源。
圖4B示出8B7人單株抗體的κ輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：58)及胺基酸序列(SEQ ID NO：46)。描繪CDR1(SEQ ID NO：22)、CDR2(SEQ ID NO：28)及CDR3(SEQ ID NO：34)區，並指明V與J種系來源。
圖5A示出11F2人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：53)及胺基酸序列(SEQ ID NO：41)。描繪CDR1(SEQ ID NO：5)、CDR2(SEQ ID NO：11)及CDR3(SEQ ID NO：17)區，並指明V、D及J種系來源。
圖5B示出11F2人單株抗體的κ輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：59)及胺基酸序列(SEQ ID NO：47)。描繪CDR1(SEQ ID NO：23)、CDR2(SEQ ID NO：29)及CDR3(SEQ ID NO：35)區，並指明V與J種系來源。
圖6A示出17E5人單株抗體的重鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：54)及胺基酸序列(SEQ ID NO：42)。描繪CDR1(SEQ ID NO：6)、CDR2(SEQ ID NO：12)及CDR3(SEQ ID NO：18)區，並指明V、D及J種系來源。
圖6B示出17E5人單株抗體的κ輕鏈可變區的核苷酸序列(SEQ ID NO：60)及胺基酸序列(SEQ ID NO：48)。描繪CDR1(SEQ ID NO：24)、CDR2(SEQ ID NO：30)及CDR3(SEQ ID NO：36)區，並指明V與J種系來源。
圖7示出25F7的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：37)與人種系VH 4-34及JH5b胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：61及62)的比對。
圖8示出25F7的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：43)與人種系Vk L6及JK2胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：63及64)的比對。
圖9示出26H10的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：38)與人種系VH 3-33及JH6B胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：65及66)的比對。
圖10示出26H10的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：44)與人種系Vk A27及JK3胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：67及68)的比對。
圖11示出25E3的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：39)與人種系VH 3-20及JH4b胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：69及70)的比對。
圖12示出25E3的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：45)與人種系Vk L18及JK2胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：71及64)的比對。
圖13示出8B7的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：40)與人種系VH 4-34及JH5b胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：61及62)的比對。
圖14示出8B7的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：46)與人種系Vk L6及JK4胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：63及72)的比對。
圖15示出11F2的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：41)與人種系VH 1-24及JH4b胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：73及70)的比對。
圖16示出11F2的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：47)與人種系Vk L6及JK1胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：63及74)的比對。
圖17示出17E5的重鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：42)與人種系VH 3-33及VH 2-2胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：65及70)的比對。
圖18示出17E5的輕鏈可變區的胺基酸序列(SEQ ID NO：48)與人種系Vk L6胺基酸序列(分別是SEQ ID NO：63及75)的比對。
圖19示出由猴LAG-3 cDNA選殖系pa23-5編碼的蛋白質序列(SEQ ID NO：93)與Genbank存儲的恒河猴LAG-3蛋白質序列(SEQ ID NO：94)(Genbank登錄號XM_001108923)的比對。額外環肽區及跨膜結構域係由底線表示。在兩個序列之間的一個胺基酸差異(胺基酸位置419)係以粗體字強調。

Claims (26)

  1. 一種經分離之單株抗體或彼之抗原結合部分，其結合人淋巴細胞活化基因3(LAG-3)，其中該抗體包含重鏈可變區序列和輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列具有與SEQ ID NO：37至少95%胺基酸序列同源性，且該輕鏈可變區序列具有與SEQ ID NO：43至少95%胺基酸序列同源性。
  2. 一種經分離之單株抗體或彼之抗原結合部分，其結合人淋巴細胞活化基因3(LAG-3)，其中該抗體包含重鏈可變區序列和輕鏈可變區序列，該重鏈可變區序列具有與SEQ ID NO：37至少98%胺基酸序列同源性，且該輕鏈可變區序列具有與SEQ ID NO：43至少98%胺基酸序列同源性。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之單株抗體或彼之抗原結合部分，其包含分別如SEQ ID NO：1、7及13所示之重鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3序列和分別如SEQ ID NO：19、25及31所示之輕鏈可變區CDR1、CDR2及CDR3序列。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分，其包含重鏈可變區及/或輕鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列。
  5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分，其抑制LAG-3與主要組織相容性(MHC)第II類分子之結合及/或刺激免疫反應。
  6. 一種經分離之單株抗體或彼之抗原結合部分，其結合表位，該表位包含胺基酸序列HPAAPSSW(SEQ ID NO：77)。
  7. 一種經分離之單株抗體或彼之抗原結合部分，其與如申請專利範圍第4項之單株抗體或彼之抗原結合部分結合相同之表位。
  8. 如申請專利範圍第1至3、6及7項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分，其係以1×10-9 M或低於1×10-9 M的KD 值與人LAG-3蛋白結合。
  9. 如申請專利範圍第1至3、6及7項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分，其係以5×10-10 M或低於5×10-10 M的KD 值與人LAG-3蛋白結合。
  10. 一種組成物，其包含如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分及藥學上可接受之載體。
  11. 如申請專利範圍第10項之組成物，其另包含至少一種額外之免疫刺激性抗體。
  12. 如申請專利範圍第11項之組成物，其中該免疫刺激性抗體係抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體及/或抗CTLA-4抗體。
  13. 如申請專利範圍第11項之組成物，其中該免疫刺激性抗體係抗PD-1抗體。
  14. 一種免疫共軛物，其包含與治療劑連接之如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分。
  15. 一種經分離之核酸分子，其編碼如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分的可變區。
  16. 一種表現載體，其包含如申請專利範圍第15項之核酸分子。
  17. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第16項之表現載 體，唯該宿主細胞不存在於人體。
  18. 一種用於製備抗LAG-3抗體之方法，該方法包含在如申請專利範圍第17項之宿主細胞中表現該抗體，及自該宿主細胞分離該抗體。
  19. 一種活體外刺激抗原特異性T細胞應答之方法，其包含使該T細胞與如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分或如申請專利範圍第10至13項中任一項之組成物接觸，藉以刺激抗原特異性T細胞應答。
  20. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分或如申請專利範圍第12至13項中任一項之組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於刺激抗原特異性T細胞應答。
  21. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分或如申請專利範圍第10至13項中任一項之組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於刺激個體之免疫反應。
  22. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分或如申請專利範圍第10至13項中任一項之組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於抑制個體之腫瘤細胞生長。
  23. 一種如申請專利範圍第1至9項中任一項之單株抗體或彼之抗原結合部分或如申請專利範圍第10至13項中任一項之組成物於製備藥物之用途，該藥物係用於治療個體之病毒感染。
  24. 如申請專利範圍第20至23項中任一項之用途，其係與至少一種額外之免疫刺激性抗體結合。
  25. 如申請專利範圍第24項之用途，其中該免疫刺激性抗體係抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體及/或抗CTLA-4抗體。
  26. 如申請專利範圍第25項之用途，其中該免疫刺激性抗體係抗PD-1抗體。
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Families Citing this family (597)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI1957539T1 (sl) 2005-12-08 2013-05-31 Medarex, Inc. Humana monoklonska protitelesa proti protein tirozin kinazi 7 (PTK7) in njihova uporaba
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
BR112013013311A2 (pt) 2010-11-30 2017-09-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd agente terapêutico de indução de citotoxicidade
US8440797B2 (en) 2010-12-06 2013-05-14 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody
CN103249833B (zh) * 2010-12-06 2016-06-29 大日本住友制药株式会社 人单克隆抗体
MX354922B (es) * 2011-06-30 2018-03-26 Genzyme Corp Inhibidores de la activación de las células t.
ES2834093T3 (es) 2011-07-21 2021-06-16 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology Inc Inhibidores de proteína quinasa heterocíclicos
UY34887A (es) * 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
AU2014230741B2 (en) * 2013-03-15 2017-04-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-LAG-3 binding proteins
ES2935257T3 (es) 2013-03-15 2023-03-03 Univ Chicago Métodos y composiciones relacionadas con la actividad de las células T
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
EP2992017B1 (en) 2013-05-02 2020-11-18 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
AU2014296887A1 (en) 2013-08-02 2016-01-28 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Combining CD27 agonists and immune checkpoint inhibition for immune stimulation
US11273204B2 (en) 2013-08-08 2022-03-15 Cytune Pharma IL-15 and IL-15RAPLHA sushi domain based immunocytokines
KR102457731B1 (ko) 2013-08-08 2022-10-21 싸이튠 파마 병용 약학 조성물
RS64268B1 (sr) * 2013-09-20 2023-07-31 Bristol Myers Squibb Co Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora
EP3049445A4 (en) 2013-09-24 2017-10-25 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
WO2015066413A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Novartis Ag Oxazolidinone hydroxamic acid compounds for the treatment of bacterial infections
KR20240017102A (ko) * 2013-12-17 2024-02-06 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 탁산을 이용한 암 치료 방법
BR112016013741A2 (pt) * 2013-12-17 2017-10-03 Genentech Inc Usos de antagonistas de ligação de eixo de pd-1 e um anticorpo de anti-cd20, e kit compreendendo os mesmos
WO2015090230A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Novartis Ag Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof
GB201322626D0 (en) 2013-12-19 2014-02-05 Immutep S A Combined preparations for the treatment of cancer
CN106029663B (zh) 2013-12-24 2018-06-01 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的新颖三环化合物
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
EA201691361A1 (ru) 2014-01-28 2016-12-30 Бристол-Маерс Сквибб Компани Антитела к lag-3 для лечения гематологических злокачественных опухолей
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10144778B2 (en) 2014-03-12 2018-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
ME03558B (me) * 2014-03-14 2020-07-20 Novartis Ag Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe
EP3593812A3 (en) 2014-03-15 2020-05-27 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
AU2015236369B2 (en) 2014-03-24 2017-02-16 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
TWI726842B (zh) 2014-04-07 2021-05-11 日商中外製藥股份有限公司 免疫活化抗原結合分子
IL293603B2 (en) 2014-04-07 2024-03-01 Novartis Ag Cancer treatment using chimeric antigen receptor (CAR) against CD19
CA2946398A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
MX2016014434A (es) 2014-05-13 2017-02-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno redirigida a celulas t para celulas que tienen funcion de inmunosupresion.
BR122018009619B1 (pt) 2014-05-16 2024-01-02 Ablynx N.V Domínios variáveis de imunoglobulina aperfeiçoados
RU2746738C2 (ru) 2014-05-16 2021-04-20 Аблинкс Нв Улучшенные вариабельные домены иммуноглобулина
NZ726513A (en) 2014-05-28 2023-07-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
SG11201610074YA (en) 2014-06-06 2016-12-29 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
CA2951259A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Flexus Biosciences, Inc. Immunoregulatory agents
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
US9777061B2 (en) 2014-07-21 2017-10-03 Novartis Ag Treatment of cancer using a CD33 chimeric antigen receptor
WO2016014553A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
JP2017528433A (ja) 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
ES2781175T3 (es) 2014-07-31 2020-08-31 Novartis Ag Subconjunto optimizado de células T que contienen un receptor de antígeno quimérico
EP3177593A1 (en) 2014-08-06 2017-06-14 Novartis AG Quinolone derivatives as antibacterials
US20170216403A1 (en) 2014-08-12 2017-08-03 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and an immune checkpoint blocker
DK3180018T3 (da) 2014-08-12 2019-10-28 Massachusetts Inst Technology Synergistisk tumorbehandling med IL-2 og integrinbindende Fc-fusionsprotein
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
JP7084138B2 (ja) 2014-08-19 2022-06-14 ノバルティス アーゲー 癌処置に使用するための抗ｃｄ１２３キメラ抗原受容体（ｃａｒ）
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
EP3191126B1 (en) 2014-09-13 2020-05-13 Novartis AG Combination therapies of alk inhibitors
CA2961636A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Boris ENGELS Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
AU2015327868A1 (en) 2014-10-03 2017-04-20 Novartis Ag Combination therapies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
CA2963935A1 (en) 2014-10-08 2016-04-14 Novartis Ag Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof
KR20170072244A (ko) 2014-10-10 2017-06-26 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 관문 억제제를 가지는 tlr9 효능제를 이용한 암 치료
CU20170052A7 (es) 2014-10-14 2017-11-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1
MX2017005462A (es) 2014-11-05 2017-07-28 Flexus Biosciences Inc Agentes inmunorreguladores.
UY36390A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen
AR102537A1 (es) 2014-11-05 2017-03-08 Flexus Biosciences Inc Agentes inmunomoduladores
EP3789399A1 (en) 2014-11-21 2021-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2023-08-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
WO2016094639A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Wisconsin Alumni Research Foundation Mini-intronic plasmid dna vaccines in combination with lag3 blockade
CN107001295B (zh) 2014-12-16 2021-02-02 诺华股份有限公司 作为LpxC抑制剂的异噁唑异羟肟酸化合物
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
AR103232A1 (es) 2014-12-22 2017-04-26 Bristol Myers Squibb Co ANTAGONISTAS DE TGFbR
MA40662B1 (fr) 2014-12-23 2020-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorps contre tigit
GB201500374D0 (en) * 2015-01-09 2015-02-25 Immutep S A Combined preparations for the treatment of cancer
WO2016126608A1 (en) 2015-02-02 2016-08-11 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
MA41463A (fr) * 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
US10983128B2 (en) 2015-02-05 2021-04-20 Bristol-Myers Squibb Company CXCL11 and SMICA as predictive biomarkers for efficacy of anti-CTLA4 immunotherapy
ES2789331T3 (es) 2015-03-02 2020-10-26 Rigel Pharmaceuticals Inc Inhibidores de TGF-beta
KR20170129802A (ko) 2015-03-10 2017-11-27 아두로 바이오테크, 인코포레이티드 ＂인터페론 유전자의 자극인자＂-의존적 신호전달을 활성화하는 조성물 및 방법
US20180133327A1 (en) 2015-03-16 2018-05-17 Amal Therapeutics Sa Cell Penetrating Peptides and Complexes Comprising the Same
AU2016243937A1 (en) 2015-04-03 2017-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase for the treatment of cancer
WO2016164580A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Novartis Ag Combination of chimeric antigen receptor therapy and amino pyrimidine derivatives
WO2016162505A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 F-Star Biotechnology Limited Her2 binding agent therapies
RU2021121771A (ru) 2015-04-08 2022-01-12 Новартис Аг Cd20 терапия, cd22 терапия и комбинированная терапия клетками, экспрессирующими химерный антигенный рецептор (car) к cd19
BR112017020952A2 (pt) 2015-04-13 2018-07-10 Five Prime Therapeutics Inc método de tratamento de câncer, composição e uso da composição
HUE050894T2 (hu) 2015-04-17 2021-01-28 Bristol Myers Squibb Co Kompozíciók, amelyek tartalmazzák ipilimumab és nivolumab kombinációját
WO2016168595A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Barrett David Maxwell Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
WO2016172583A1 (en) 2015-04-23 2016-10-27 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
PL3291679T3 (pl) 2015-05-06 2022-04-25 Snipr Technologies Limited Zmiana populacji drobnoustrojowych i modyfikowanie mikrobioty
ES2815683T3 (es) 2015-05-11 2021-03-30 Bristol Myers Squibb Co Compuestos tricíclicos como agentes antineoplásicos
US10174024B2 (en) 2015-05-12 2019-01-08 Bristol-Myers Squibb Company 5H-pyrido[3,2-B]indole compounds as anticancer agents
US9725449B2 (en) 2015-05-12 2017-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
DK3303394T3 (da) 2015-05-29 2020-07-06 Agenus Inc Anti-ctla-4-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
MY188049A (en) 2015-05-29 2021-11-12 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against ox40 and uses thereof
EA039293B1 (ru) * 2015-06-05 2021-12-30 Мерк Шарп И Доум Корп. Антитела против lag3 и антигенсвязывающие фрагменты
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
US20160376373A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
EA201890162A1 (ru) 2015-06-29 2018-07-31 Бристол-Маерс Сквибб Компани Антитела к cd40 с повышенной агонистической активностью
HUE053966T2 (hu) 2015-07-14 2021-08-30 Bristol Myers Squibb Co Eljárás rák kezelésére immunellenõrzõpont inhibitorral, antitest, amely köt programozott halál-1 receptorhoz (PD-1) vagy programozott halál ligandum 1-hez (PD-L1)
JP2018521983A (ja) 2015-07-16 2018-08-09 バイオカイン セラピューティックス リミテッド がんを治療するための組成物および方法
AU2016297014B2 (en) 2015-07-21 2021-06-17 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
US9902772B2 (en) * 2015-07-22 2018-02-27 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind LAG3
EP3328861A1 (en) 2015-07-28 2018-06-06 Bristol-Myers Squibb Company Tgf beta receptor antagonists
SI3317301T1 (sl) 2015-07-29 2021-10-29 Novartis Ag Kombinirane terapije, ki obsegajo molekule protitelesa na LAG-3
WO2017019897A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
PT3328419T (pt) 2015-07-30 2021-11-26 Macrogenics Inc Moléculas de ligação pd-1 e métodos de utilização
EP3331919A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination therapy comprising anti ctla-4 antibodies
JP2018525415A (ja) 2015-08-25 2018-09-06 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｔｇｆベータ受容体アンタゴニスト
MA48579A (fr) 2015-09-01 2020-03-18 Agenus Inc Anticorps anti-pd1 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
KR20180042412A (ko) 2015-09-02 2018-04-25 이뮤텝 에스.에이.에스. 항-lag-3 항체
US11747346B2 (en) 2015-09-03 2023-09-05 Novartis Ag Biomarkers predictive of cytokine release syndrome
WO2017055404A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
TWI756187B (zh) * 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
US10149887B2 (en) 2015-10-23 2018-12-11 Canbas Co., Ltd. Peptides and peptidomimetics in combination with t cell activating and/or checkpoint inhibiting agents for cancer treatment
EP3371208A1 (en) 2015-11-02 2018-09-12 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
BR112018008891A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a pd-1 e tim-3 e seus usos
WO2017079746A2 (en) 2015-11-07 2017-05-11 Multivir Inc. Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer
JP6945456B2 (ja) * 2015-11-13 2021-10-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
KR102317574B1 (ko) * 2015-11-18 2021-10-26 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Pd1 및/또는 lag3 결합제
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
JP6925278B2 (ja) 2015-11-18 2021-08-25 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
WO2017087901A2 (en) * 2015-11-19 2017-05-26 Sutro Biopharma, Inc. Anti-lag3 antibodies, compositions comprising anti-lag3 antibodies and methods of making and using anti-lag3 antibodies
EA201891121A1 (ru) 2015-11-19 2018-12-28 Бристол-Майерс Сквибб Компани Антитела к глюкокортикоид-индуцированному рецептору фактора некроза опухоли (gitr) и их применения
SI3376857T1 (sl) * 2015-11-20 2021-09-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nehumane živali, ki imajo humaniziran gen 3 za aktivacijo limfocitov
BR112018010410A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Five Prime Therapeutics Inc método para tratar câncer em um sujeito, composição e métodos de aumento do número de células nk e de aumento do número de uma ou mais células positivas para pd-l1
CA3007233A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
SG11201804839WA (en) 2015-12-14 2018-07-30 Macrogenics Inc Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof
US10450318B2 (en) 2015-12-15 2019-10-22 Bristol-Myers Squibb Company CXCR4 receptor antagonists
KR20180086502A (ko) * 2015-12-16 2018-07-31 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-lag3 항체 및 항원-결합 단편
JP2019503349A (ja) 2015-12-17 2019-02-07 ノバルティス アーゲー Ｐｄ−１に対する抗体分子およびその使用
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
JP2019506844A (ja) 2015-12-18 2019-03-14 ノバルティス アーゲー ＣＤ３２ｂを標的とする抗体およびその使用方法
WO2017106630A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 The General Hospital Corporation Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
EP3393504A1 (en) 2015-12-22 2018-10-31 Novartis AG Mesothelin chimeric antigen receptor (car) and antibody against pd-l1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
CN108473569B (zh) 2016-01-11 2022-11-22 苏黎世大学 针对人白介素-2的免疫刺激性人源化单克隆抗体及其融合蛋白
EA038098B1 (ru) 2016-02-19 2021-07-06 Новартис Аг Тетрациклические пиридоновые соединения в качестве противовирусных средств
SG10201913033UA (en) 2016-03-04 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy with anti-cd73 antibodies
SG10201601719RA (en) * 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
BR112018067679A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-15 Novartis Ag células que expressam múltiplas moléculas do receptor de antígeno quimérico (car) e seu uso
MX2018011204A (es) 2016-03-15 2019-03-07 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco dirigidos a napi2b y sus metodos de uso.
AU2017234192B2 (en) 2016-03-16 2024-04-04 Amal Therapeutics Sa Combination of an immune checkpoint modulator and a complex comprising a cell penetrating peptide, a cargo and a TLR peptide agonist for use in medicine
ES2962269T3 (es) 2016-03-24 2024-03-18 Novartis Ag Análogos de nucleósidos alquinil como inhibidores del rinovirus humano
JP7038353B2 (ja) 2016-04-13 2022-03-18 ヴィヴィア バイオテック，エス．エル エクスビボのｂｉｔｅ活性化ｔ細胞
JP7038064B2 (ja) 2016-04-18 2022-03-17 セルデックス セラピューティクス インコーポレイテッド ヒトｃｄ４０に結合するアゴニスト抗体およびその使用
KR20190004743A (ko) 2016-05-04 2019-01-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제 및 그의 사용 방법
WO2017192813A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
EP3452029A4 (en) 2016-05-04 2019-10-30 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
US10696648B2 (en) 2016-05-04 2020-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
JP2019516682A (ja) 2016-05-04 2019-06-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤およびその使用方法
DK3458478T3 (da) * 2016-05-18 2021-03-22 Boehringer Ingelheim Int Anti-pd-1- og anti-lag3-antistoffer til cancerbehandling
MX2018013868A (es) 2016-05-20 2019-02-21 Biohaven Pharm Holding Co Ltd Uso de agentes de modulacion de glutamato con inmunoterapias para tratar cancer.
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
CN109789177A (zh) 2016-05-27 2019-05-21 德那翠丝有限公司 腺病毒和免疫调节剂组合治疗
CN115671292A (zh) 2016-06-10 2023-02-03 Io治疗公司 用于癌症免疫疗法的受体选择性类视黄醇和rexinoid化合物和免疫调节剂
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
CA3026356A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Novartis Ag Crystalline form of (r)-4-(5-(cyclopropylethynyl)isoxazol-3-yl)-n-hydroxy-2-methyl-2-(methylsulfonyl)butanamide as an antibacterial agent
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
JP7461741B2 (ja) 2016-06-20 2024-04-04 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１およびｉｌ－２サイトカイン
CN109311993B (zh) 2016-06-20 2022-12-20 F-星治疗有限公司 Lag-3结合元件
SG11201811064TA (en) 2016-06-20 2019-01-30 F Star Delta Ltd Binding molecules binding pd-l1 and lag-3
TWI757304B (zh) * 2016-06-23 2022-03-11 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 Lag-3抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
WO2017223422A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
AU2017290828A1 (en) 2016-06-30 2019-01-24 Virogin Biotech Canada Ltd Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
AU2017297506A1 (en) 2016-07-14 2019-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against TIM3 and uses thereof
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
WO2018017708A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 University Of Utah Research Foundation Cd229 car t cells and methods of use thereof
WO2018017633A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Bristol-Myers Squibb Company TGF Beta RECEPTOR ANTAGONISTS
EA039718B1 (ru) * 2016-07-21 2022-03-03 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела к lag3 и их применения
EP3498840A4 (en) * 2016-08-15 2020-05-06 National University Corporation Hokkaido University ANTI-LAG-3 ANTIBODIES
DK3347379T5 (da) 2016-08-17 2020-06-15 Compugen Ltd Anti-tigit-antistoffer, anti-pvrig-antistoffer og kombinationer deraf
CN109843322A (zh) 2016-08-26 2019-06-04 百时美施贵宝公司 吲哚胺2,3-双加氧酶的抑制剂及其使用方法
TW201811788A (zh) 2016-09-09 2018-04-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之多環吡啶酮化合物
US10647767B2 (en) 2016-09-19 2020-05-12 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Anti-GM-CSF antibodies and uses thereof
CA3031170A1 (en) 2016-09-21 2018-03-29 Amal Therapeutics Sa Fusion comprising a cell penetrating peptide, a multi epitope and a tlr peptide agonist for treatment of cancer
CA3036564A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific antibody molecules comprising lambda and kappa light chains
JP2020500151A (ja) 2016-09-27 2020-01-09 ボード オブ リージェンツ， ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム マイクロバイオームをモジュレートすることにより、免疫チェックポイント遮断療法を増強するための方法
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز
WO2018067992A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Novartis Ag Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN117586403A (zh) * 2016-10-11 2024-02-23 艾吉纳斯公司 抗lag-3抗体及其使用方法
RU2755903C2 (ru) 2016-10-12 2021-09-22 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Способы и композиции для tusc2-иммунотерапии
JP7212821B2 (ja) 2016-10-13 2023-01-26 チア・タイ・ティエンチン・ファーマシューティカル・グループ・カンパニー・リミテッド 抗ｌａｇ－３抗体および組成物
TW201819380A (zh) 2016-10-18 2018-06-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之稠合四環吡啶酮化合物
AU2017354070A1 (en) 2016-11-01 2019-05-16 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (PD-1)
UY37463A (es) 2016-11-02 2018-05-31 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Proteínas de unión
US10660909B2 (en) 2016-11-17 2020-05-26 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
BR112019010878A2 (pt) 2016-11-29 2019-10-01 Lindhofer Horst combinação de anticorpos multifuncionais de redirecionamento de células t com moduladores de ponto de verificação imunológico e usos dos mesmos
WO2018102786A1 (en) 2016-12-03 2018-06-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for modulation of car-t cells
WO2018106738A1 (en) 2016-12-05 2018-06-14 Massachusetts Institute Of Technology Brush-arm star polymers, conjugates and particles, and uses thereof
EA201991383A1 (ru) 2016-12-07 2019-12-30 Эйдженус Инк. Антитела против ctla-4 и способы их применения
WO2018111902A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Multivir Inc. Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases
US20200095301A1 (en) 2016-12-14 2020-03-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Il-13 superkine: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
CN108204958A (zh) * 2016-12-19 2018-06-26 伊缪泰普有限公司 结合测定
US10961239B2 (en) 2017-01-05 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company TGF beta receptor antagonists
BR112019014187A2 (pt) 2017-01-09 2020-02-11 Tesaro, Inc. Métodos de tratamento de câncer com anticorpos anti-pd-1
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
AU2018207303A1 (en) 2017-01-10 2019-07-25 xCella Biosciences, Inc. Combination tumor treatment with an integrin-binding-Fc fusion protein and immune modulator
KR102611446B1 (ko) 2017-01-20 2023-12-06 아르커스 바이오사이언시즈 인코포레이티드 암-관련 장애의 치료를 위한 아졸로피리미딘
CN110650974B (zh) 2017-02-10 2024-04-19 瑞泽恩制药公司 用于免疫-pet成像的放射性标记的抗-lag3抗体
US20200291089A1 (en) 2017-02-16 2020-09-17 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
CA3051839A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to alpha-synuclein and uses thereof
EP3389702A4 (en) 2017-02-22 2019-08-14 I-Mab ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2018152687A1 (en) * 2017-02-22 2018-08-30 I-Mab Anti-lymphocyte activation gene-3 (lag-3) antibodies and uses thereof
TW201834697A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商梅爾莎納醫療公司 Her2標靶抗體－藥物結合物之組合療法
CA3057687A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer using anti-gitr antibodies
US20210101980A1 (en) 2017-03-31 2021-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
KR102461885B1 (ko) 2017-04-03 2022-11-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-pd-1 항체와 돌연변이 il-2 또는 il-15의 면역접합체
MX2019011916A (es) 2017-04-05 2020-01-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-lag3.
CA3185303A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Symphogen A/S Combination therapies targeting pd-a, tim-3, and lag-3
KR102346336B1 (ko) * 2017-04-05 2022-01-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 lag3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
CN110709422B (zh) 2017-04-19 2023-12-26 马伦戈治疗公司 多特异性分子及其用途
US20200085891A1 (en) 2017-04-21 2020-03-19 Sillajen, Inc Oncolytic vaccinia virus and checkpoint inhibitor combination therapy
CN110831600B (zh) 2017-04-21 2023-10-17 医肯纳肿瘤学公司 吲哚ahr抑制剂和其用途
JP2020517699A (ja) 2017-04-26 2020-06-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ジスルフィド結合の還元を最小限にする抗体製造法
BR112019022515A2 (pt) * 2017-04-27 2020-06-16 Tesaro, Inc. Agentes de anticorpo direcionados contra o gene 3 de ativação linfocitária (lag-3) e usos dos mesmos
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
EP3615055A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
CA3059769A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules comprising a non-immunoglobulin heterodimerization domain and uses thereof
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US11789010B2 (en) 2017-04-28 2023-10-17 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treatment with CD80 extracellular domain polypeptides
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AR111658A1 (es) 2017-05-05 2019-08-07 Novartis Ag 2-quinolinonas tricíclicas como agentes antibacteriales
US11339218B2 (en) 2017-05-10 2022-05-24 Zhejiang Shimai Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies against LAG3 and uses thereof
JP7090347B2 (ja) 2017-05-12 2022-06-24 ハープーン セラピューティクス，インク． メソテリン結合タンパク質
WO2018209049A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2018213297A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of cancer with anti-gitr agonist antibodies
PL3634417T3 (pl) 2017-05-17 2023-09-25 Arcus Biosciences, Inc. Pochodne chinazolino-pirazolowe do leczenia chorób związanych z nowotworem
CA3064321A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
CA3064333A1 (en) 2017-05-29 2018-12-06 Gamamabs Pharma Cancer-associated immunosuppression inhibitor
BR112019021847A2 (pt) 2017-05-30 2020-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Composições compreendendo um anticorpo anti-lag-3 ou um anticorpo anti-lag-3 e um anticorpo anti-pd-1 ou anti-pd-l1
SI3631454T1 (sl) 2017-05-30 2023-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Zdravljenje lag-3 pozitivnih tumorjev
EP3630842A2 (en) 2017-05-30 2020-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
EP3630836A1 (en) 2017-05-31 2020-04-08 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof
WO2018223002A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd 123 cd3
WO2018223004A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd20 and cd3
AU2018275894A1 (en) 2017-06-02 2019-12-12 Juno Therapeutics, Inc. Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
US11542312B2 (en) 2017-06-19 2023-01-03 Medicenna Therapeutics, Inc. IL-2 superagonists in combination with anti-PD-1 antibodies
WO2018237157A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF
WO2018234879A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag USE OF IL-1β BINDING ANTIBODIES IN THE TREATMENT OF CANCER
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
CA3066747A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof
CA3067602A1 (en) 2017-06-29 2019-01-03 Juno Therapeutics, Inc. Mouse model for assessing toxicities associated with immunotherapies
EP3644993B1 (en) 2017-06-30 2023-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Amorphous and crystalline forms of ido inhibitors
TW201920275A (zh) 2017-07-06 2019-06-01 荷蘭商米樂斯股份有限公司 藉由細胞表現之調控生物活性的抗體
IL302133A (en) 2017-07-13 2023-06-01 Io Therapeutics Inc A combination of a rexinoid and retinoid substance with immunomodulatory properties and immunomodulatory substances for cancer treatment
CN110914303B (zh) * 2017-07-13 2023-06-02 南京维立志博生物科技有限公司 结合lag-3的抗体及其用途
CN111163798A (zh) 2017-07-20 2020-05-15 诺华股份有限公司 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途
ES2932354T3 (es) 2017-07-28 2023-01-18 Bristol Myers Squibb Co Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
MX2020001793A (es) 2017-08-17 2020-07-22 Ikena Oncology Inc Inhibidores del receptor de hidrocarburos de arilo (ahr) y usos de los mismos.
WO2019035985A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Tragara Pharmaceuticals, Inc. POLYMORPHIC FORM OF TG02
CA3073733A1 (en) * 2017-08-30 2019-03-07 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-lag-3 antibodies and uses thereof
US10953032B2 (en) 2017-08-31 2021-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019046496A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
EP3676278B1 (en) 2017-08-31 2023-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
AU2018326617B2 (en) 2017-08-31 2022-12-01 Io Therapeutics, Inc. Rar selective agonists in combination with immune modulators for cancer immunotherapy
JP7196160B2 (ja) 2017-09-12 2022-12-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン
EP3684366A4 (en) 2017-09-22 2021-09-08 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND USES OF THE LATEST
AU2018338314A1 (en) 2017-09-22 2020-04-09 Kymera Therapeutics, Inc Protein degraders and uses thereof
JP7384668B2 (ja) * 2017-10-05 2023-11-21 第一三共株式会社 細胞傷害性ｔ細胞枯渇用組成物
WO2019074824A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
US11649212B2 (en) 2017-10-09 2023-05-16 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US11660311B2 (en) 2017-10-10 2023-05-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019075090A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Tilos Therapeutics, Inc. ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF
CR20200195A (es) 2017-10-13 2020-08-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión a antigenos de maduraciòn de celulas b
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP7254821B2 (ja) 2017-10-16 2023-04-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗がん剤としての環状ジヌクレオチド
WO2019076277A1 (zh) * 2017-10-17 2019-04-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗pd-1抗体和抗lag-3抗体联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
US20210189336A1 (en) 2017-10-18 2021-06-24 Vivia Biotech, S.L. Bite-activated car-t cells
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
CN111902159A (zh) 2017-11-01 2020-11-06 朱诺治疗学股份有限公司 对b细胞成熟抗原（bcma）具有特异性的嵌合抗原受体
US11603410B2 (en) 2017-11-01 2023-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Immunostimulatory agonistic antibodies for use in treating cancer
US11623961B2 (en) 2017-11-01 2023-04-11 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
JP7167146B2 (ja) 2017-11-06 2022-11-08 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｈｐｋ１阻害剤として有用なイソフラノン化合物
CA3081602A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies
US20210079015A1 (en) 2017-11-17 2021-03-18 Novartis Ag Novel dihydroisoxazole compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2019104289A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3717907A1 (en) 2017-11-30 2020-10-07 Novartis AG Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
JP7348899B2 (ja) 2017-12-08 2023-09-21 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 多重特異性分子及びその使用
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
CA3086098A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 F-Star Beta Limited Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
JP2021507906A (ja) 2017-12-20 2021-02-25 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス剤としての融合三環式ピラゾロ−ジヒドロピラジニル−ピリドン化合物
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3714901A4 (en) 2017-12-22 2022-03-02 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. ANTI-LAG-3 ANTIBODY PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE THEREOF
US10874743B2 (en) 2017-12-26 2020-12-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAK degraders and uses thereof
CN109970857B (zh) * 2017-12-27 2022-09-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019133747A1 (en) 2017-12-27 2019-07-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd40 antibodies and uses thereof
WO2019129137A1 (zh) * 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019133847A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Oncorus, Inc. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
US11447449B2 (en) 2018-01-05 2022-09-20 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN112218651A (zh) 2018-01-08 2021-01-12 诺华公司 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna
EP3737675A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND THEIR USES
WO2019140229A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
EP3737666A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. PROTEIN DEGRADANTS AND USES THEREOF
WO2019141092A1 (zh) * 2018-01-18 2019-07-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗lag-3抗体及其用途
SG11202006832YA (en) 2018-01-29 2020-08-28 Merck Patent Gmbh Gcn2 inhibitors and uses thereof
KR20200116481A (ko) 2018-01-29 2020-10-12 메르크 파텐트 게엠베하 Gcn2 억제제 및 이의 용도
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200354457A1 (en) 2018-01-31 2020-11-12 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibodies comprising an antigen-binding site binding to lag3
WO2019149715A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Stabilized immunoglobulin domains
WO2019152743A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Celgene Corporation Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
EP3752203A1 (en) 2018-02-13 2020-12-23 Novartis AG Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019165315A1 (en) 2018-02-23 2019-08-29 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists alone or in combination
EP3758751A4 (en) 2018-02-28 2021-11-17 Wuxi Biologics Ireland Limited. MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST HUMAN LAG-3, METHOD OF MANUFACTURING AND USING THEREOF
US20200407365A1 (en) 2018-02-28 2020-12-31 Novartis Ag Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
KR20200130362A (ko) 2018-03-08 2020-11-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
WO2019178364A2 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
EP3768698A4 (en) 2018-03-19 2022-03-30 MultiVir Inc. METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING TUMOR SUPPRESSIVE GENE THERAPY AND CD122/CD132 AGONISTS FOR THE TREATMENT OF CANCER
US11661452B2 (en) 2018-03-20 2023-05-30 WuXi Biologics Ireland Limited Anti-lag-3 antibody polypeptide
AU2019239747A1 (en) 2018-03-21 2020-10-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to VISTA at acidic pH
SG11202008802QA (en) * 2018-03-22 2020-10-29 Keires Ag Antagonistic pd-1, pd-l1 and lag-3 binding proteins
PE20210665A1 (es) 2018-03-23 2021-03-31 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra mica y/o micb y sus usos
BR112020019418A2 (pt) 2018-03-25 2021-02-17 Snipr Biome Aps. tratamento e prevenção de infecções microbianas
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
CN111971306A (zh) 2018-03-30 2020-11-20 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
WO2019192432A1 (zh) 2018-04-02 2019-10-10 上海博威生物医药有限公司 结合淋巴细胞活化基因-3(lag-3)的抗体及其用途
CN110343178B (zh) * 2018-04-03 2022-07-22 上海开拓者生物医药有限公司 抗人lag-3单克隆抗体及其应用
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
CA3096546A1 (en) 2018-04-16 2019-10-24 Arrys Therapeutics, Inc. Ep4 inhibitors and use thereof
WO2019204592A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Il-15/il-15ra heterodimeric fc fusion proteins and uses thereof
EP3781599A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
EP3784351A1 (en) 2018-04-27 2021-03-03 Novartis AG Car t cell therapies with enhanced efficacy
EP3788369A1 (en) 2018-05-01 2021-03-10 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
US20230339891A1 (en) 2018-05-03 2023-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as mer-axl inhibitors
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3801617A1 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that bind cd123 and cd3
CA3098420A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Novartis Ag Binding molecules against bcma and uses thereof
CN113166972A (zh) * 2018-06-11 2021-07-23 耶鲁大学 新型免疫检查点抑制剂
EP3806962A1 (en) 2018-06-13 2021-04-21 Novartis AG Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof
CN110606892B (zh) * 2018-06-14 2023-09-26 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种高亲和力高生物活性的lag-3抗体及其应用
CN110615840A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗lag-3抗体及其应用
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
WO2020006018A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Substituted naphthyridinone compounds useful as t cell activators
CA3104647A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Naphthyridinone compounds useful as t cell activators
KR102250234B1 (ko) * 2018-06-29 2021-05-10 주식회사 와이바이오로직스 Lag-3에 특이적으로 결합하는 단클론항체 및 이의 용도
EP3818083A2 (en) 2018-07-03 2021-05-12 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
US11292792B2 (en) 2018-07-06 2022-04-05 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic CRBN ligands and uses thereof
AU2019302454A1 (en) 2018-07-09 2021-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to ILT4
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
SG11202011872QA (en) 2018-07-10 2021-01-28 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and their use in the treatment of ikaros family zinc finger 2 (ikzf2)-dependent diseases
WO2020014327A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
WO2020018503A2 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-il36r antibodies
CA3106114A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Surface Oncology, Inc. Anti-cd112r compositions and methods
WO2020023355A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US20210355113A1 (en) 2018-07-23 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
CN112739371A (zh) 2018-07-26 2021-04-30 百时美施贵宝公司 用于治疗癌症的lag-3组合疗法
WO2020038397A1 (en) * 2018-08-21 2020-02-27 I-Mab Anti-pd-l1/anti-lag3 bispecific antibodies and uses thereof
US10959986B2 (en) 2018-08-29 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US11253525B2 (en) 2018-08-29 2022-02-22 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
JP2022500499A (ja) 2018-09-07 2022-01-04 ピク セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｅｉｆ４ｅ阻害剤およびその使用
EP3849979A1 (en) 2018-09-12 2021-07-21 Novartis AG Antiviral pyridopyrazinedione compounds
CN112105633B (zh) 2018-09-21 2024-03-12 信达生物制药(苏州)有限公司 新型白介素2及其用途
TWI801664B (zh) 2018-09-21 2023-05-11 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 新型白介素２及其用途
US10815311B2 (en) 2018-09-25 2020-10-27 Harpoon Therapeutics, Inc. DLL3 binding proteins and methods of use
AU2019346645A1 (en) 2018-09-27 2021-04-29 Marengo Therapeutics, Inc. CSF1R/CCR2 multispecific antibodies
EP3856782A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Novartis AG Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies
US20220047633A1 (en) 2018-09-28 2022-02-17 Novartis Ag Cd22 chimeric antigen receptor (car) therapies
EP4282416A3 (en) 2018-09-29 2024-03-06 Novartis AG Process of manufacture of a compound for inhibiting the activity of shp2
US11358999B2 (en) 2018-10-03 2022-06-14 Xencor, Inc. IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins
US11130802B2 (en) 2018-10-10 2021-09-28 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants
MX2021004059A (es) 2018-10-12 2021-09-23 Xencor Inc Proteínas de fusión de il-15/il-15ralfa-fc dirigidas a pd-1 y usos de las mismas en terapias combinadas.
SG11202102864XA (en) 2018-10-19 2021-05-28 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy for melanoma
US20230021500A1 (en) 2018-10-29 2023-01-26 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
EP3873943A2 (en) 2018-11-01 2021-09-08 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
AU2019374103A1 (en) 2018-11-01 2021-05-20 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for G Protein-Coupled Receptor Class C Group 5 Member D (GPRC5D)
SG11202105084VA (en) 2018-11-16 2021-06-29 Juno Therapeutics Inc Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies
AU2019380307A1 (en) 2018-11-16 2021-07-01 Bristol-Myers Squibb Company Anti-NKG2A antibodies and uses thereof
JP2022513685A (ja) 2018-11-30 2022-02-09 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法を用いた処置のための方法
BR112021010484A2 (pt) 2018-11-30 2021-08-24 Kymera Therapeutics, Inc. Degradadores de irak e usos dos mesmos
MX2021006544A (es) 2018-12-04 2021-07-07 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer.
JP2022514315A (ja) 2018-12-20 2022-02-10 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与計画及び薬剤組み合わせ
CN113438961A (zh) 2018-12-20 2021-09-24 Xencor股份有限公司 含有IL-15/IL-15Rα和NKG2D抗原结合结构域的靶向异二聚体Fc融合蛋白
EP3670659A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Biomarkers, and uses in treatment of viral infections, inflammations, or cancer
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
EP3897613A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1beta binding antibodies
AU2019406840A1 (en) 2018-12-21 2021-06-03 Novartis Ag Use of IL-1 beta antibodies in the treatment or prevention of myelodysplastic syndrome
WO2020128620A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
JP2022514702A (ja) 2018-12-21 2022-02-14 オーエスイー・イミュノセラピューティクス 二機能性抗ｐｄ－１／ｉｌ－７分子
EP3898974A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2020154032A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
US20220096651A1 (en) 2019-01-29 2022-03-31 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
CN113412262A (zh) 2019-02-12 2021-09-17 大日本住友制药肿瘤公司 包含杂环蛋白激酶抑制剂的制剂
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CA3124935A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
KR20210129672A (ko) 2019-02-15 2021-10-28 노파르티스 아게 치환된 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체 및 이의 용도
CN111620949A (zh) * 2019-02-28 2020-09-04 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途
CA3133155A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundacio Privada Institut D'investigacio Oncologica De Vall Hebron Combination therapy for the treatment for cancer
WO2020191326A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure
WO2020198077A1 (en) 2019-03-22 2020-10-01 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising pkm2 modulators and methods of treatment using the same
CA3134822A1 (en) 2019-03-26 2020-10-01 The Regents Of The Universtiy Of Michigan Small molecule degraders of stat3
WO2020205467A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 The Regents Of The University Of Michigan Stat3 protein degraders
CA3135569A1 (en) 2019-04-02 2020-10-08 Bicycletx Limited Bicycle toxin conjugates and uses thereof
US11485750B1 (en) 2019-04-05 2022-11-01 Kymera Therapeutics, Inc. STAT degraders and uses thereof
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
GB201906118D0 (en) 2019-05-01 2019-06-12 Immutep S A Anti-LAG-3 binding molecules
WO2020231766A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
JP2022532490A (ja) 2019-05-13 2022-07-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 癌の治療における有効性の増強のためのｐｄ－１阻害剤とｌａｇ－３阻害剤の組み合わせ
US20230242478A1 (en) 2019-05-13 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
CN114127315A (zh) 2019-05-30 2022-03-01 百时美施贵宝公司 鉴定适合于免疫肿瘤学(i-o)疗法的受试者的方法
US20220233691A1 (en) 2019-05-30 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
EP3976831A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN110320367A (zh) * 2019-05-30 2019-10-11 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 基于lag-3的诊断试剂盒及其在帕金森病诊断产品上的应用
KR20220034739A (ko) 2019-05-31 2022-03-18 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Tead 억제제 및 이의 용도
CN114341189A (zh) 2019-06-12 2022-04-12 奥美药业有限公司 全新il-15前药及其应用
US20220265590A1 (en) 2019-06-12 2022-08-25 Vanderbilt University Dibenzylamines as amino acid transport inhibitors
EP3983084A1 (en) 2019-06-12 2022-04-20 Vanderbilt University Amino acid transport inhibitors and the uses thereof
US11642409B2 (en) 2019-06-26 2023-05-09 Massachusetts Insttute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
CN114302878A (zh) 2019-07-03 2022-04-08 大日本住友制药肿瘤公司 酪氨酸激酶非受体1(tnk1)抑制剂及其用途
IT201900011676A1 (it) 2019-07-12 2021-01-12 St Superiore Di Sanita Anticorpo ricombinante umano contro il recettore di membrana LAG3, suoi usi medici e diagnostici.
KR20220035116A (ko) 2019-07-16 2022-03-21 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 Eed 억제제로서의 이미다조피리미딘 및 이의 용도
WO2021026179A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
US20220388978A1 (en) 2019-08-27 2022-12-08 Regents Of The University Of Michigan Cereblon e3 ligase inhibitors
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
KR20220105631A (ko) 2019-09-13 2022-07-27 님버스 새턴 인코포레이티드 Hpk1 길항제 및 이의 용도
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
EP4031575A1 (en) 2019-09-19 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
JP2022548775A (ja) 2019-09-19 2022-11-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン スピロ環式アンドロゲン受容体タンパク質分解剤
CA3153777A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
AR120045A1 (es) 2019-09-26 2022-01-26 Novartis Ag Compuestos antivirales de pirazolopiridinona
CA3157024A1 (en) 2019-10-03 2021-04-08 Xencor, Inc. Targeted il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
TW202128757A (zh) 2019-10-11 2021-08-01 美商建南德克公司 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
KR20220103947A (ko) 2019-10-21 2022-07-25 노파르티스 아게 베네토클락스 및 tim-3 억제제를 사용한 조합 요법
US11459389B2 (en) 2019-10-24 2022-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Monoclonal antibodies that bind human CD161
BR112022007632A2 (pt) * 2019-10-25 2022-07-12 Daiichi Sankyo Co Ltd Composição farmacêutica e preparação de kit para tratamento de câncer, e, métodos para tratamento de câncer e de um paciente com câncer
US20220409642A1 (en) 2019-11-04 2022-12-29 Astrazeneca Ab Combination therapy for treating cancer
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
CA3160479A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for melanoma
CN114728950A (zh) 2019-11-19 2022-07-08 百时美施贵宝公司 可作为helios蛋白质抑制剂的化合物
US11591339B2 (en) 2019-11-26 2023-02-28 Ikena Oncology, Inc. Solid forms of (R)-N-(2-(5-fluoropyridin-3-yl)-8-isopropylpyrazolo[ 1,5-a][1,3,5]triazin-4-yl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazol-3-amine maleate as aryl hydrocarbon receptor (AHR) inhibitors
CN115151306A (zh) 2019-11-26 2022-10-04 百时美施贵宝公司 (r)-n-(4-氯苯基)-2-((1s，4s)-4-(6-氟喹啉-4-基)环己基)丙酰胺的盐/共晶
US11975026B2 (en) 2019-11-26 2024-05-07 Novartis Ag CD19 and CD22 chimeric antigen receptors and uses thereof
WO2021113644A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Multivir Inc. Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer
EP4076524A4 (en) 2019-12-17 2023-11-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAQ DEGRADERS AND USES THEREOF
BR112022011651A2 (pt) 2019-12-17 2022-08-23 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de irak e usos dos mesmos
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
CN115052662A (zh) 2019-12-20 2022-09-13 诺华股份有限公司 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
WO2021126967A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Lag3 antagonist cell based potency assay
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t
KR20220119454A (ko) 2019-12-23 2022-08-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 T 세포 활성화제로서 유용한 치환된 퀴나졸리닐 화합물
CN115175907A (zh) 2019-12-23 2022-10-11 百时美施贵宝公司 可用作t细胞激活剂的经取代的哌嗪衍生物
WO2021133748A1 (en) 2019-12-23 2021-07-01 Bristol-Myers Squibb Company Substituted quinolinonyl piperazine compounds useful as t cell activators
BR112022012204A2 (pt) 2019-12-23 2022-09-13 Bristol Myers Squibb Co Compostos de heteroarila substituída úteis como ativadores de célula t
IL294150A (en) 2019-12-23 2022-08-01 Kymera Therapeutics Inc Smarca joints and their uses
WO2021138407A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
AU2021206618A1 (en) 2020-01-06 2022-08-18 Hifibio (Hk) Limited Anti-TNFR2 antibody and uses thereof
US11534441B2 (en) 2020-01-15 2022-12-27 Blueprint Medicines Corporation MAP4K1 inhibitors
MX2022008763A (es) 2020-01-17 2022-07-27 Novartis Ag Combinacion que comprende un inhibidor de tim-3 y un agente hipometilante para usarse en el tratamiento del sindrome mielodisplasico o leucemia mielomonocitica cronica.
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
WO2021171264A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that binds cd123 and cd3
KR20220164706A (ko) 2020-03-03 2022-12-13 피아이씨 테라퓨틱스 인코포레이티드 Eif4e 억제제 및 이의 용도
JP2023516459A (ja) 2020-03-09 2023-04-19 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 増強されたアゴニスト活性を有するｃｄ４０に対する抗体
BR112022018600A2 (pt) 2020-03-19 2022-11-08 Arcus Biosciences Inc Compostos, composição farmacêutica, método de tratamento de uma doença e combinação
EP4121043A1 (en) 2020-03-19 2023-01-25 Kymera Therapeutics, Inc. Mdm2 degraders and uses thereof
TW202140441A (zh) 2020-03-23 2021-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 經取代之側氧基異吲哚啉化合物
US20230159573A1 (en) 2020-03-26 2023-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule stat protein degraders
US20230272056A1 (en) 2020-04-09 2023-08-31 Merck Sharp & Dohme Llc Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
AU2021251265A1 (en) 2020-04-10 2022-11-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting B-cell maturation antigen
WO2021231732A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
CA3176564A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Agilent Technologies, Inc. Anti-human lag-3 antibodies and their use in immunohistochemistry (ihc)
WO2021247591A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to tigit
WO2021245071A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Mv Biotherapeutics Sa Combination of an atp-hydrolyzing enzyme and an immune checkpoint modulator and uses thereof
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
CN114605544B (zh) * 2020-06-05 2023-08-01 北京天广实生物技术股份有限公司 Lag3抗体及其用途
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
WO2021258010A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime compounds useful as t cell activators
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
KR20230035576A (ko) 2020-07-07 2023-03-14 비온테크 에스이 Hpv 양성 암 치료용 rna
US20230233690A1 (en) 2020-07-10 2023-07-27 The Regents Of The University Of Michigan Androgen receptor protein degraders
WO2022011204A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule androgen receptor protein degraders
EP4188374A1 (en) 2020-07-30 2023-06-07 Kymera Therapeutics, Inc. Methods of treating mutant lymphomas
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
CN116724051A (zh) 2020-08-10 2023-09-08 上海寻百会生物技术有限公司 用于通过靶向igsf8来治疗自身免疫性疾病和癌症的组合物和方法
KR20230050389A (ko) 2020-08-13 2023-04-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-2를 관심 표적 세포로 재지시하는 방법
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
CN116761818A (zh) 2020-08-26 2023-09-15 马伦戈治疗公司 检测trbc1或trbc2的方法
JP2023540255A (ja) 2020-08-28 2023-09-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 肝細胞癌のためのｌａｇ－３アンタゴニスト療法
WO2022047412A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4204020A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
JP2023542297A (ja) 2020-09-14 2023-10-06 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 異種プライムブーストワクチン
CA3187272A1 (en) 2020-10-08 2022-04-14 Thorsten Ross Trispecific binders
AU2021360782A1 (en) 2020-10-14 2023-06-08 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
CA3196496A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 Laurence David TOMS Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
KR20230104651A (ko) 2020-11-06 2023-07-10 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022120354A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2022120353A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
WO2022125497A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Eganelisib for use in the treatment of pd-l1 negative cancer
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
CN114621344B (zh) * 2020-12-10 2022-08-30 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗lag-3单克隆抗体的纯化方法
CA3202330A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Anthony Casarez Compounds useful as t cell activators
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022146948A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
IL303648A (en) 2020-12-28 2023-08-01 Bristol Myers Squibb Co Antibody preparations and methods of using them
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
EP4274597A1 (en) 2021-01-11 2023-11-15 BicycleTX Limited Methods for treating cancer
AU2022216810A1 (en) 2021-02-02 2023-08-24 Liminal Biosciences Limited Gpr84 antagonists and uses thereof
AU2022215844A1 (en) 2021-02-02 2023-09-14 Liminal Biosciences Limited Gpr84 antagonists and uses thereof
JP2024505600A (ja) 2021-02-03 2024-02-06 モーツァルト セラピューティクス， インコーポレイテッド 結合剤およびそれを使用する方法
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
WO2022171745A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives for the treatment of cancer
KR20230145446A (ko) 2021-02-15 2023-10-17 카이메라 쎄라퓨틱스 인코포레이티드 Irak4 분해제 및 이의 용도
US20220275090A1 (en) 2021-02-22 2022-09-01 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors
WO2022187419A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule degraders of androgen receptor
WO2022187423A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon ligands
JP2024509192A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ニンバス サターン， インコーポレイテッド Ｈｐｋ１アンタゴニスト及びその使用
EP4305041A1 (en) 2021-03-08 2024-01-17 Blueprint Medicines Corporation Map4k1 inhibitors
US11918582B2 (en) 2021-03-15 2024-03-05 Rapt Therapeutics, Inc. Pyrazole pyrimidine compounds and uses thereof
KR20240005700A (ko) 2021-03-29 2024-01-12 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 체크포인트 억제제 요법 및 car t 세포 요법의 조합을 사용한 투여 및 치료 방법
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
KR20230167067A (ko) 2021-04-05 2023-12-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암의 치료를 위한 피리디닐 치환된 옥소이소인돌린 화합물
PE20231941A1 (es) 2021-04-06 2023-12-05 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de oxoisoindolina sustituidos con piridinilo
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AU2022255506A1 (en) 2021-04-08 2023-11-09 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
IL307419A (en) 2021-04-09 2023-12-01 Ose Immunotherapeutics A new scaffold for bifunctional molecules with improved properties
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
PE20240327A1 (es) 2021-04-13 2024-02-22 Nuvalent Inc Heterociclos con sustitucion amino para tratar canceres con mutaciones de egfr
KR20230172548A (ko) 2021-04-16 2023-12-22 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Mek 억제제 및 이의 용도
EP4337694A1 (en) 2021-05-12 2024-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
CN117337288A (zh) 2021-05-21 2024-01-02 艾库斯生物科学有限公司 Axl抑制剂化合物
CN117295741A (zh) 2021-05-21 2023-12-26 艾库斯生物科学有限公司 Axl化合物
AU2022281461A1 (en) 2021-05-25 2024-01-04 Edelweiss Immune Inc C-x-c motif chemokine receptor 6 (cxcr6) binding molecules, and methods of using the same
TW202307210A (zh) 2021-06-01 2023-02-16 瑞士商諾華公司 Ｃｄ１９和ｃｄ２２嵌合抗原受體及其用途
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
AU2022312496A1 (en) 2021-07-14 2024-02-22 Blueprint Medicines Corporation Heterocyclic compounds as map4k1 inhibitors
AR126453A1 (es) 2021-07-15 2023-10-11 Blueprint Medicines Corp Inhibidores de map4k1
CA3216098A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Uwe Reusch Duplexbodies
IL310924A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Pic Therapeutics Inc EIF4E inhibitors and their uses
WO2023028238A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
TW202328090A (zh) 2021-09-08 2023-07-16 美商雷度納製藥公司 Ｐａｐｄ５及／或ｐａｐｄ７抑制劑
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
WO2023077090A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
US20230159466A1 (en) 2021-10-29 2023-05-25 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hif-2alpha and methods of use thereof
WO2023079494A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
WO2023111203A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2023114984A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2023122777A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023122772A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023122778A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Pyridazinone derivatives useful as t cell activators
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023150186A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Arvinas Operations, Inc. Dgk targeting compounds and uses thereof
WO2023154905A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Gilead Sciences, Inc. Antiviral pyrazolopyridinone compounds
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023173057A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023173053A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023178201A2 (en) * 2022-03-15 2023-09-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of identifying anti-lag-3 agents
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023211889A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Ikena Oncology, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023230205A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023250400A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Juno Therapeutics, Inc. Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024015251A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hpk1 and methods of use thereof
WO2024020034A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Arcus Biosciences, Inc. Cbl-b inhibitors and methods of use thereof
WO2024028363A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Heteroaryl carboxamide and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028364A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Aryl-triazolyl and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
WO2024028365A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Substituted pyridone gpr84 antagonists and uses thereof
US20240041929A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma
WO2024036100A1 (en) 2022-08-08 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrazolyl compounds useful as t cell activators
WO2024036101A1 (en) 2022-08-09 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Tertiary amine substituted bicyclic compounds useful as t cell activators
WO2024033457A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033389A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033388A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033458A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
WO2024059142A1 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Arcus Biosciences, Inc. Dispersions of etrumadenant
WO2024081385A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Arcus Biosciences, Inc. Hpk1 inhibitors and methods of use thereof
WO2024086718A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Arcus Biosciences, Inc. Lyophilized formulations of cd73 compounds
WO2024089417A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Tumour stratification for responsiveness to an immune checkpoint inhibitor
WO2024089418A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Cancer Research Technology Limited Tumour sensitisation to checkpoint inhibitors with redox status modifier

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060240024A1 (en) * 2003-02-28 2006-10-26 The Johns Hopkins University T cell regulation

Family Cites Families (151)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US153043A (en) 1874-07-14 Improvement in middlings-separators
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0401384B1 (en) 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
FR2656800B1 (fr) * 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5976877A (en) 1990-01-08 1999-11-02 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Proteins produced by human lymphocytes DNA sequence encoding these proteins and their pharmaceutical and biological uses
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9108652D0 (en) 1991-04-23 1991-06-12 Antisoma Ltd Immunoreactive compounds
ES2227512T3 (es) 1991-12-02 2005-04-01 Medical Research Council Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago.
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
JP3976333B2 (ja) 1992-09-16 2007-09-19 ザ スクリップス リサーチ インスティチュート 呼吸合胞体ウイルスに対するヒト中和性モノクローナル抗体
JP3919830B2 (ja) 1992-11-28 2007-05-30 財団法人化学及血清療法研究所 抗ネコヘルペスウイルス−１組換え抗体および該抗体をコードする遺伝子断片
CA2161351C (en) 1993-04-26 2010-12-21 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
CA2109377C (en) * 1993-07-23 1998-08-04 Joseph C. Kahr Disc brake shoe assembly
AU1866895A (en) 1994-01-04 1995-08-01 Scripps Research Institute, The Human monoclonal antibodies to herpes simplex virus and methods therefor
USRE38313E1 (en) 1994-05-06 2003-11-11 Institut Gustave Roussy Soluble polypeptide fractions of the LAG-3 protein, production method, therapeutic composition, anti-idiotype antibodies
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
CA2227334A1 (en) * 1995-07-21 1997-02-06 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods for detecting, identifying, isolating, and selectively labelling and targeting th1 lymphocytes by means of the lag-3 protein
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
WO1997032733A1 (en) * 1996-03-07 1997-09-12 Eastman Chemical Company Near infrared fluorescent security thermal transfer printing and marking ribbons
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
IL130123A (en) * 1996-11-28 2007-07-24 Roussy Inst Gustave LAG-3 protein mutants, their expression, use and method of production
PT941329E (pt) * 1996-11-29 2004-11-30 Applied Research Systems Metodo para prevenir a rejeicao de enxertos em transplantacao e para produzir uma celula-hospedeiro para terapia genetica universal utilizando activacao de linfocitos (lag-3)
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
AU6703198A (en) 1997-03-21 1998-10-20 Brigham And Women's Hospital Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
EP1724282B1 (en) 1997-05-21 2013-05-15 Merck Patent GmbH Method for the production of non-immunogenic proteins
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
GB9814383D0 (en) 1998-07-02 1998-09-02 Cambridge Antibody Tech Improvements relating to antibodies
US6951646B1 (en) 1998-07-21 2005-10-04 Genmab A/S Anti hepatitis C virus antibody and uses thereof
ES2340745T3 (es) 1998-12-23 2010-06-08 Pfizer Inc. Anticuerpos monoclonales humanos contra ctla-4.
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
PT1914244E (pt) 1999-04-09 2013-07-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para regular a actividade de moléculas funcionais sob o ponto de vista imunológico
GB9911569D0 (en) * 1999-05-18 1999-07-21 Oxford Biomedica Ltd Antibodies
NZ517372A (en) 1999-07-29 2004-04-30 Medarex Inc Human monoclonal antibodies to HER2/neu
PT1210428E (pt) 1999-08-23 2015-07-21 Genetics Inst Llc Pd-1, um recetor para b7-4 e suas utilizações
US7605238B2 (en) * 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1212422B1 (en) 1999-08-24 2007-02-21 Medarex, Inc. Human ctla-4 antibodies and their uses
US6794132B2 (en) 1999-10-02 2004-09-21 Biosite, Inc. Human antibodies
NZ522700A (en) * 2000-06-16 2006-02-24 Human Genome Sciences Inc Antibodies that immunospecifically bind to blys
US6818216B2 (en) 2000-11-28 2004-11-16 Medimmune, Inc. Anti-RSV antibodies
ATE378403T1 (de) 2000-11-30 2007-11-15 Medarex Inc Transchromosomale transgen-nagetiere zur herstellung von humänen antikörpern
US7538206B2 (en) * 2001-02-22 2009-05-26 Institut Pasteur Comparative mycobacterial geneomics as a tool for identifying targets for the diagnosis, prophylaxis or treatment of mycobacterioses
US20020146753A1 (en) * 2001-04-06 2002-10-10 Henrik Ditzel Autoantibodies to glucose-6-phosphate isomerase and their participation in autoimmune disease
CA2508763C (en) 2001-05-11 2012-01-24 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Human antibody producing mouse and method for producing human antibody using the same
WO2002092780A2 (en) 2001-05-17 2002-11-21 Diversa Corporation Novel antigen binding molecules for therapeutic, diagnostic, prophylactic, enzymatic, industrial, and agricultural applications, and methods for generating and screening thereof
KR20030033007A (ko) 2001-05-31 2003-04-26 코울터 파머수티컬, 인코포레이티드 세포독소, 약물전구체, 링커 및 이에 유용한 안정화제
AU2002341752B2 (en) * 2001-09-19 2008-04-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Engineered templates and their use in single primer amplification
ATE519779T1 (de) * 2001-09-19 2011-08-15 Roussy Inst Gustave An das glu-pro motiv-bindende proteine und peptide, diese enthaltende therapeutische zusammensetzungen und deren anwendungen
EP1443961B1 (en) 2001-10-25 2009-05-06 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
WO2003072035A2 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
JPWO2003085107A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
KR20040101502A (ko) 2002-04-16 2004-12-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물
EP3287144A1 (en) 2002-07-03 2018-02-28 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions
EP2322203A3 (en) 2002-10-29 2011-07-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2005035732A2 (en) * 2003-02-19 2005-04-21 Dyax Corporation Papp-a ligands
US7674618B2 (en) 2003-09-04 2010-03-09 Medarex, Inc. Expression vector
AU2004279441B2 (en) * 2003-10-08 2010-07-01 The Feinstein Institute For Medical Research Methods and compositions for diagnosis and treatment of B cell chronic lymphocytic leukemia
CA2885854C (en) * 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
WO2005103081A2 (en) * 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
AU2005263331B8 (en) * 2004-07-20 2011-06-16 Symphogen A/S Anti-Rhesus D recombinant polyclonal antibody and methods of manufacture
CA2575791A1 (en) * 2004-08-03 2006-02-16 Dyax Corp. Hk1-binding proteins
US20090252741A1 (en) 2004-09-08 2009-10-08 Ohio State University Research Foundation Human monoclonal anti-ctla4 antibodies in cancer treatment
AU2005292227A1 (en) * 2004-10-01 2006-04-13 Medarex, Inc. Methods of treating CD30 positive lymphomas
JP5303146B2 (ja) 2004-10-06 2013-10-02 メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ Ｂ７−ｈ１ならびに癌の診断、予後診断および処置の方法
US7875278B2 (en) 2005-02-18 2011-01-25 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against prostate specific membrane antigen (PSMA) lacking in fucosyl residues
EP1868644A1 (en) 2005-03-23 2007-12-26 Pfizer Products Incorporated Therapy of prostate cancer with ctla4 antibodies and hormonal therapy
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
CA2970873C (en) 2005-05-09 2022-05-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907000T2 (sl) * 2005-06-08 2020-07-31 Dana-Farber Cancer Institute Postopki in sestavki za zdravljenje persistentne HIV infekcije z inhibicijo programiranih celični smrtnih 1 (PD-1) poti
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
BRPI0617546A2 (pt) 2005-09-26 2011-07-26 Medarex Inc conjugado de fÁrmaco-anticorpo, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula de tumor, mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de um tumor em um sujeito mamÍfero e composto
CA2627046C (en) 2005-10-26 2015-09-15 Medarex, Inc. Methods and compounds for preparing cc-1065 analogs
WO2007056441A2 (en) * 2005-11-07 2007-05-18 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
US7850965B2 (en) * 2005-12-05 2010-12-14 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
EP2975057A1 (en) * 2006-07-10 2016-01-20 Fujita Health University Novel anti-cd73 antibody
WO2008073160A2 (en) 2006-08-17 2008-06-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for converting or inducing protective immunity
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
TW200900059A (en) 2007-02-21 2009-01-01 Medarex Inc Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
WO2009014708A2 (en) * 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
PL2201100T3 (pl) 2007-09-14 2016-10-31 Wzmacnianie zdolności ludzkich komórek prezentujących antygen do stymulacji komórek T i ich zastosowanie w szczepieniu
CA2700860C (en) 2007-10-01 2016-07-19 Jonathan A. Terrett Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
WO2009073546A2 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Medarex, Inc. Monoclonal antibody partner molecule conjugates directed to protein tyrosine kinase 7 (ptk7)
EP2224958A2 (en) 2007-11-30 2010-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Anti-b7h4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
US9856320B2 (en) 2012-05-15 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting PD-1/PD-L1 signaling
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
HUE050894T2 (hu) 2015-04-17 2021-01-28 Bristol Myers Squibb Co Kompozíciók, amelyek tartalmazzák ipilimumab és nivolumab kombinációját
KR20180042412A (ko) 2015-09-02 2018-04-25 이뮤텝 에스.에이.에스. 항-lag-3 항체
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060240024A1 (en) * 2003-02-28 2006-10-26 The Johns Hopkins University T cell regulation

Also Published As

Publication number Publication date
PE20110306A1 (es) 2011-05-21
US11512130B2 (en) 2022-11-29
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US11236165B2 (en) 2022-02-01
WO2010019570A3 (en) 2010-06-17
EP3597216B1 (en) 2022-08-24
US11236163B2 (en) 2022-02-01
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US20200385467A1 (en) 2020-12-10
IL261718A (en) 2018-10-31
US20200385466A1 (en) 2020-12-10
US20110150892A1 (en) 2011-06-23
IL210731A0 (en) 2011-03-31
EA201100340A1 (ru) 2011-08-30
ZA201101009B (en) 2012-11-28
US10344089B2 (en) 2019-07-09
JP5647981B2 (ja) 2015-01-07
JP2021091696A (ja) 2021-06-17
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ES2927547T3 (es) 2022-11-08
EP2320940A2 (en) 2011-05-18
BRPI0917470B1 (pt) 2020-09-24
IL210731A (en) 2017-08-31
EP2905030B1 (en) 2019-11-06
AU2009282134B2 (en) 2014-07-03
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US10988535B2 (en) 2021-04-27
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US20220204612A1 (en) 2022-06-30
EA023032B1 (ru) 2016-04-29
NZ590991A (en) 2012-11-30
JP2019030307A (ja) 2019-02-28
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US20190276539A1 (en) 2019-09-12
SI2320940T1 (sl) 2015-07-31
LT2905030T (lt) 2020-02-10
CO6351751A2 (es) 2011-12-20
HRP20150453T1 (hr) 2015-06-19
US11001630B2 (en) 2021-05-11
AR117774A2 (es) 2021-08-25
PL2320940T3 (pl) 2015-08-31
AR115072A2 (es) 2020-11-25

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