CN115052662A - 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途 - Google Patents

抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途 Download PDF

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Abstract

披露了使用TGF‑β抑制剂和/或PD‑1抑制剂的疗法。这些药物在一定的剂量(包括平稳给药)和方案下可用于治疗或预防增殖性疾病，例如实体瘤，包括胰腺癌。还披露了另外的组合及其用途。

Description

抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月20日提交的美国临时申请号62/951,632、2020年2月18日提交的美国临时申请号62/978,267、2020年7月22日提交的美国临时申请号63/055,230、2020年10月11日提交的美国临时申请号63/090,259、2020年10月11日提交的美国临时申请号63/090,264和2020年11月23日提交的美国临时申请号的优先权益，所有申请的内容通过引用以其全文并入本文。
通过引用并入
本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请和其他文献出于所有目的通过引用以其全文并入本文中，其程度如同每个单独的出版物、专利、专利申请或其他文献出于所有目的被单独指出以通过引用并入。在本文并入的一个或多个参考文献和本披露的教导之间存在任何不一致的情况下，以本说明书的教导为准。
序列表
本申请含有已经以ASCII格式电子递交的序列表并且所述序列表特此通过引用以其全文并入。所述ASCII副本创建于2020年11月29日，名为PAT058932_SL.txt，大小为360,965字节。
背景技术
转化生长因子β(TGFβ)蛋白家族由在哺乳动物中发现的三种不同的同种型(TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3)组成。TGFβ蛋白活化并调节影响疾病状态的多种基因应答，包括细胞增殖、炎症和心血管病症。TGFβ是多功能细胞因子，最初以其将正常成纤维细胞转化为能锚定非依赖性生长的细胞的能力而命名。TGFβ分子主要由造血和肿瘤细胞产生，并且可以调节(即刺激或抑制)来自多种正常和肿瘤组织来源的细胞的生长和分化(Sporn等人,Science[科学],233:532(1986))，并且刺激各种基质细胞的形成和扩增。
已知TGFβ参与许多增殖和非增殖的细胞过程，如细胞增殖和分化、胚胎发育、细胞外基质形成、骨发育、伤口愈合、造血、以及免疫和炎症应答。参加例如，Pircher等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.[生物化学与生物物理学研究通讯],136:30-37(1986)；Wakefield等人,Growth Factors[生长因子]，1:203-218(1989)；Roberts和Sporn，在M.B.Sporn&A.B.Roberts(斯普林格，海德堡，1990)编辑的Handbook of ExperimentalPharmacology[实验药理学手册],第419-472页；Massague等人,Annual Rev.Cell Biol.[细胞与发育生物学年鉴],6:597-646(1990)；Singer和Clark,New Eng.J.Med.[新英格兰医学杂志],341:738-745(1999)。此外，TGFβ还用于治疗和预防肠粘膜疾病(WO 2001/24813)。已知TGFβ还具有对各种免疫细胞类型的强烈的免疫抑制作用，包括细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抑制(Ranges等人,J.Exp.Med.[实验医学杂志],166:991,1987；Espevik等人,J.Immunol.[免疫学杂志],140:2312,1988)、降低B细胞淋巴细胞生成和κ轻链表达(Lee等人,J.Exp.Med.[实验医学杂志],166:1290,1987)、造血的负调节(Sing等人,Blood[血液],72:1504,1988)、肿瘤细胞上HLA-DR表达的下调(Czarniecki等人,J.Immunol.[免疫学杂志],140:4217,1988)、以及应答于B细胞生长因子的抗原活化B淋巴细胞增殖的抑制(Petit-Koskas等人,Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志],18:111,1988)。还参见美国专利7,527,791。
对于使用TGFβ抑制剂(如抗TGFβ抗体)来靶向各种疾病和医学病症存在未满足的需求。此外，存在以一定方式施用这些TGFβ抑制剂以有效治疗各种疾病和医学病症(包括增殖性疾病)同时保持给药方便的需求。
发明内容
本文披露了治疗受试者增殖性疾病的方法。治疗增殖性疾病可以包括以约16mg/kg至约50mg/kg的剂量向受试者施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，受试者可以意识到他们患有增殖性疾病，例如，是有需要的受试者。在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂包含分别是SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3，以及分别是SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR1、CDR2和CDR3。此外，在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂包含分别在氨基酸序列SEQ ID NO:7和8中所示的重链可变区和轻链可变区。在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂包含分别在SEQID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂基本上由分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链组成。在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂由分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链组成。
有时可以不同的剂量施用TGF-β抑制剂。这些剂量可有效预防、治疗或改善增殖性疾病，如癌症或其他实体瘤。在一些实施例中，以约20mg/kg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约30mg/kg的剂量施用TGF-β抑制剂。
所治疗的受试者体重可以不同。在一些实施例中，受试者可以是约50kg至90kg。在一些实施例中，受试者可以是约70kg。
还可以固定剂量向受试者施用TGF-β抑制剂。例如，在一些实施例中，以约1200mg至约1600mg的剂量向受试者施用TGF-β抑制剂。在其他实施例中，以约1400mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1900mg至约2300mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2100mg的剂量施用TGF-β抑制剂。
以不同间隔，可以多于一次施用TGF-β抑制剂。例如，可以每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每两周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每三周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每四周一次施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，经约20至约40分钟的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约30分钟的时间段来施用TGF-β抑制剂。
向受试者施用的TGF-β抑制剂可以是任何形式，如小化学分子、核酸或蛋白质。例如，在一些实施例中，TGF-β抑制剂是抗体。在一些实施例中，抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗体是单特异性抗体。在一些实施例中，所述TGF-β抗体是多特异性抗体。如果TGF-β抗体是多特异性的，则所述多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施例中，所述多特异性抗体可以是三特异性抗体。在一些实施例中，所述多特异性抗体可以特异性结合至四个或更多个靶标。
本文所述的治疗方法还可包括将检查点抑制剂与TGF-β抑制剂组合向受试者施用。在一些实施例中，所述检查点抑制剂是PD1抑制剂。所述PD1抑制剂可以是小化学分子、核酸或蛋白质。在一些实施例中，所述PD1抑制剂是抗PD1抗体。例如，抗PD1抗体可以是斯巴达珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-A317、BGB-108、INCSHR1210、AMP-224、或其任何组合。
在一些实施例中，检查点抑制剂是抗PD1抗体。例如，斯巴达珠单抗可以用作抗PD1抗体。如果使用斯巴达珠单抗，则可以平稳剂量施用。在一些实施例中，以约300mg或约400mg施用斯巴达珠单抗。在另外的实施例中，每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次施用斯巴达珠单抗。例如，每三周一次施用斯巴达珠单抗。在一些实施例中，每四周一次施用斯巴达珠单抗。
在一些实施例中，静脉内施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，静脉内施用PD1抑制剂。
对于组合治疗，在一些实施例中，将TGF-β抑制剂与检查点抑制剂在同一天施用。在其他实施例中，在施用检查点抑制剂之前施用TGF-β抑制剂。在另外的实施例中，在施用检查点抑制剂之后施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，将TGF-β抑制剂与检查点抑制剂同时施用。在一些实施例中，施用TGF-β抑制剂一个或多个给药周期直至(部分或完全)缓解。在一些实施例中，施用检查点抑制剂一个或多个给药周期直至(部分或完全)缓解。
所描述的方法可用于治疗增殖性疾病。在一些实施例中，所述增殖性疾病是癌症(例如，实体瘤)。在一些实施例中，所述癌症是骨髓纤维化、骨髓增生异常综合征(例如，低风险或高风险骨髓增生异常综合征)、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、肺癌、胃肠癌、皮肤癌、卵巢癌、间皮瘤、膀胱癌、软组织肉瘤、骨癌、肾癌、肝癌、胆管癌、肉瘤、前列腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、结直肠癌、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌、头颈癌、肛门癌、胃食道癌、甲状腺癌、宫颈癌、或神经内分泌肿瘤。可以通过所述方法治疗的癌症类型可以是胰腺癌。在一些实施例中，所述胰腺癌是胰腺导管腺癌(PDAC)。在一些实施例中，可以通过所描述的方法治疗的癌症类型可以是胃肠癌。在一些实施例中，所述胃肠癌是结直肠癌。在一些实施例中，可以通过所描述的方法治疗的癌症类型可以是骨髓纤维化。在一些实施例中，可以通过所描述的方法治疗的癌症类型可以是骨髓增生异常综合征。在一些实施例中，可以通过所描述的方法治疗的癌症类型可以是乳腺癌。例如，所述乳腺癌可以是三阴性乳腺癌。在一些实施例中，施用TGF-β抑制剂和/或检查点抑制剂一个或多个给药周期直至缓解。
在一些实施例中，所述方法进一步包括施用一种或多种抗癌疗法。在一些实施例中，抗癌疗法是化学疗法、靶向疗法(例如，抗体或CAR T)、放射、本文所述的任何疗法。在一些实施例中，抗癌疗法是标准护理疗法。
本文披露了一种治疗胰腺导管腺癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每两周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
本文披露了一种治疗胰腺导管腺癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
本文披露了一种治疗结直肠癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每两周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
本文披露了一种治疗结直肠癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
本文披露了一种治疗胰腺导管腺癌的方法，所述方法包括以1400mg的剂量，每两周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
本文披露了一种治疗结直肠癌的方法，所述方法包括以1400mg的剂量，每三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
在一些实施例中，所述方法可以进一步包括以约300mg的剂量，每三周一次施用斯巴达珠单抗。在一些实施例中，所述方法可以进一步包括以约400mg的剂量，每四周一次施用斯巴达珠单抗。
本文披露了一种药物组合物，其包含TGF-β抗体和药学上可接受的赋形剂，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。在一些实施例中，所述TGF-β抗体以100mg/mL的浓度存在。在一些实施例中，所述药物组合物包含组氨酸缓冲液，其浓度为20mM，具有5.5的pH。在一些实施例中，所述药物组合物包含蔗糖，其浓度为220mM。在一些实施例中，所述药物组合物包含表面活性剂或聚山梨酯20，其以0.04％(w/w)的浓度存在。
根据说明书和附图并且根据权利要求书，本发明的其他特征、目标和优点将是显而易见的。
附图说明
图1示出了第1周期NIS793的每个剂量群组的平均浓度-时间曲线。
图2示出了第3周期NIS793的每个剂量群组的平均浓度-时间曲线。
具体实施方式
免疫系统负责癌细胞的早期检测和破坏。癌细胞可以通过各种机制逃逸免疫监视，如免疫识别降低、对免疫细胞攻击的抗性增强或由于免疫抑制性肿瘤微环境(Mittal等人，2014)。一些癌症产生TGFβ(有效的免疫抑制细胞因子)，其拮抗细胞毒性淋巴细胞，并且促进抑制性免疫细胞的募集，从而有利于肿瘤生长和进展(Wojtowicz-Praga-2003，Teicher，2007，Yang等人，2010)。
TGFβ属于结构相关的细胞因子的大家族，包括：骨形态发生蛋白(BMP)、生长和分化因子、活化素和抑制素。在哺乳动物中表达的TGFβ配体有3种同种型，TGFβ1、2和3。在正常条件下，TGFβ维持体内平衡并限制上皮细胞、内皮细胞、神经细胞和造血细胞谱系的生长(通过诱导抗增殖和凋亡应答)。因此，据信TGFβ信号传导通路的改变与人类疾病(包括心血管疾病、纤维化、生殖障碍、伤口愈合和癌症)有关(Wakefield和Hill，2013)。
NIS793是完全人IgG2、人/小鼠交叉反应、TGF-β中和抗体。NIS793在配体-受体水平起作用。与夫苏木单抗(fresolimumab)(其是中和所有TGFβ同种型的泛TGFβ抑制剂)相比，NIS793更特异性地拮抗TGFβ1和2，并在较小程度上拮抗TGFβ3。
为了逃逸免疫监视，癌细胞可以另外利用严格调节T细胞活化的免疫检查点通路，如PD-1/PD-L1轴(Pardoll，2012)。因此，TGFβ单独或与免疫检查点阻断组合的拮抗作用可以刺激更有效的抗肿瘤免疫。
定义
另外的术语在下面和整个申请中定义。
如本文所用，冠词“一个/种(a和an)”是指所述冠词的一个/种或多于一个/种(例如，至少一个/种)语法宾语。
除非上下文另外明确指明，否则术语“或”在本文中意指术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。
“约”和“大约”意指在给定测量的性质或精度的情况下测量的量的可接受的误差度。示例性误差度在给定值或值范围的20％内，典型地在10％内，并且更典型地，在5％内。在一些实施例中，当数值引用术语“约”时，数字旨在还包括所述数字的确切值。例如，“约10”包括但不限于值10。其还包括10±2、10±1或10±0.5。
所谓“组合”或“与……组合”并不旨在暗示疗法或治疗剂必需同时施用和/或将这些疗法或治疗剂配制用于一起递送，尽管这些递送方法也在本文所述的范围内。组合中的治疗剂可以与一种或多种其他另外的疗法或治疗剂同时、在其之前或之后施用。这些治疗剂或治疗方案可以以任何顺序施用。通常，每种药剂将以针对所述药剂确定的剂量和/或日程表给予。还应理解，所述组合中使用的另外的治疗剂可以按单一组合物一起施用或按不同组合物分开施用。治疗剂的施用可以是任何顺序。第一药剂和另外的药剂(例如第二、第三药剂)可以通过相同的施用途径或通过不同的施用途径施用。通常，预期组合中使用的其他治疗剂的以不超过它们单独使用时的水平使用。在一些实施例中，组合中使用的水平将低于单独使用的水平。
在一些实施例中，另外的治疗剂以治疗剂量或低于治疗剂量施用。在某些实施例中，当第二治疗剂与第一治疗剂(例如抗TGFβ抗体分子)组合施用时，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度比单独施用第二治疗剂(例如，抗PD1抗体分子)时低。在某些实施例中，当第一治疗剂与第二治疗剂组合施用时，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度比单独施用第一治疗剂时低。在某些实施例中，在组合疗法中，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第二治疗剂的浓度比作为单一疗法的第二治疗剂的治疗剂量低，例如低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％、或80-90％。在某些实施例中，在组合疗法中，实现抑制(例如，生长抑制)所需的第一治疗剂的浓度比作为单一疗法的第一治疗剂的治疗剂量低，例如低10-20％、20-30％、30-40％、40-50％、50-60％、60-70％、70-80％、或80-90％。
术语“抑制”、“抑制剂”或“拮抗剂”包括给定分子(例如免疫检查点抑制剂或TGFβ抑制剂)的某些参数(例如活性)的降低。例如，该术语包括抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性(例如TGFβ、PD-1或PD-L1活性)。因此，抑制不必是100％。
术语“活化”、“活化剂”或“激动剂”包括给定分子(例如共刺激分子)的某些参数(例如活性)的增加。例如，该术语包括至少5％、10％、25％、50％、75％或更多的活性(例如共刺激活性)的增加。
术语“抗癌作用”是指可以通过各种手段显现的生物学作用，包括但不限于例如肿瘤体积减小、癌细胞数量减少、转移数量减少、预期寿命延长、癌细胞增殖减少、癌细胞存活率降低、或与癌症相关的各种生理症状的改善。“抗癌作用”还可以通过肽、多核苷酸、细胞和抗体首先预防癌症发生的能力来显现。
术语“抗肿瘤作用”是指可以通过各种手段显现的生物学作用，包括但不限于例如肿瘤体积减小、肿瘤细胞数量减少、肿瘤细胞增殖减少、或肿瘤细胞存活率降低。
术语“癌症”是指以异常细胞的快速和不受控制的生长为特征的疾病(例如，增殖性疾病)。癌细胞可以局部或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。本文描述了各种癌症的实例并且所述实例包括但不限于实体瘤(例如，肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结直肠癌、肾癌、肝癌、和脑癌)和血液恶性肿瘤(例如，淋巴瘤和白血病等)。术语“肿瘤”和“癌症”在本文中可互换使用，例如，这两个术语涵盖实体和液体瘤，例如，弥散或循环肿瘤。如本文所用，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶化前以及恶性癌症和肿瘤。
术语“抗原呈递细胞”或“APC”是指免疫系统细胞如辅助细胞(例如，B细胞、树突细胞等)，所述免疫系统细胞在其表面上展示与主要组织相容性复合物(MHC)复合的外来抗原。T细胞可以使用它们的T细胞受体(TCR)识别这些复合物。APC处理抗原并将它们呈递给T细胞。
术语“共刺激分子”是指T细胞上的同源结合配偶体，所述同源结合配偶体与共刺激配体特异性地结合，从而介导T细胞的共刺激应答，如但不限于增殖。共刺激分子是有效免疫应答所需的除抗原受体或其配体之外的细胞表面分子。共刺激分子包括但不限于MHCI类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导淋巴细胞活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、4-1BB(CD137)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、以及与CD83特异性结合的配体。
当该术语在本文中使用时，“免疫效应细胞”或“效应细胞”是指参与免疫应答(例如促进免疫效应子应答)的细胞。免疫效应细胞的实例包括T细胞，例如α/βT细胞和γ/δT细胞、B细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T(NKT)细胞、肥大细胞、和骨髓源性吞噬细胞。
当该术语在本文中使用时，“免疫效应子”或“效应子”“功能”或“应答”是指例如免疫效应细胞的增强或促进靶细胞的免疫攻击的功能或应答。例如，免疫效应子功能或应答是指促进靶细胞的杀伤或抑制生长或增殖的T或NK细胞的特性。在T细胞的情况下，初级刺激和共刺激是免疫效应子功能或应答的实例。
术语“效应子功能”是指细胞的特化功能。例如，T细胞的效应子功能可以是细胞溶解活性或辅助活性(包括分泌细胞因子)。
如本文所用，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指减少或改善由施用一种或多种疗法引起的障碍(例如增殖性障碍)的进展、严重程度和/或持续时间，或者改善所述障碍的一种或多种症状(优选地，一种或多种可辨别的症状)。在具体实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指增殖性障碍的至少一种可测量的物理参数(诸如肿瘤的生长)的改善，但所述物理参数不一定是患者可辨别的。在其他实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指通过例如稳定可辨别的症状来物理地，或通过例如稳定物理参数来生理地，或通过两者，抑制增殖性障碍的进展。在其他实施例中，术语“治疗(treat、treatment和treating)”是指减少或稳定肿瘤大小或癌细胞计数。
本发明的组合物、配制品和方法涵盖具有指定序列，或具有与指定序列基本上相同或相似的序列(例如与指定序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同或更高地相同的序列)的多肽和核酸。在氨基酸序列的语境中，术语“基本上相同”在本文中用于指这样的第一氨基酸：它含有i)与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基相同的，或ii)为第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基的保守置换的足够或最小数量的氨基酸残基，以使得第一氨基酸序列和第二氨基酸序列可以具有共同结构域和/或共同功能活性。例如含有与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的共同结构域的氨基酸序列。
在核苷酸序列的语境中，术语“基本上相同”在本文中用于指这样的第一核酸序列：它含有与第二核酸序列中比对的核苷酸相同的足够或最小数量的核苷酸，以使得第一核苷酸序列和第二核苷酸序列编码具有共同功能活性的多肽，或编码共同结构多肽域或具有共同功能多肽活性。例如与参考序列(例如，本文提供的序列)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的核苷酸序列。
术语“功能性变体”是指与天然存在的序列具有基本上相同的氨基酸序列，或由基本上相同的核苷酸序列编码，并且能够具有天然存在的序列的一种或多种活性的多肽。
如下所述进行序列之间的同源性或序列同一性(这些术语在本文中可互换地使用)的计算。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的百分比同一性，出于最佳比较目的对序列进行比对(例如，在第一氨基酸和第二氨基酸或第一核酸序列和第二核酸序列的一者或二者中引入空位以用于最佳比对，并且出于比较目的，非同源序列可以忽略)。在优选的实施例中，出于比较目的而比对的参考序列的长度为参考序列的长度的至少30％、优选地至少40％、更优选地至少50％、60％、并且甚至更优选地至少70％、80％、90％、100％。然后比较对应的氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中的对应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则这些分子在所述位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。
将空位的数量和每个空位的长度考虑在内,两个序列之间的百分比同一性是这些序列共有的相同位置的数量的函数，需要引入这些空位以进行两个序列的最佳比对。
两个序列之间的序列比较和百分比同一性确定可以使用数学算法来完成。在优选的实施例中，使用Needleman和Wunsch((1970)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:444-453)算法(所述算法已并入GCG软件包中的GAP程序中(可从www.gcg.com获取))，使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定两个氨基酸序列之间的百分比同一性。在又另一个优选的实施例中，使用GCG软件包中的GAP程序(可从www.gcg.com获取)，使用NWSgapdna.CMP矩阵以及40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定两个核苷酸序列之间的百分比同一性。一组特别优选的参数(以及除非另外指定否则应所述使用的参数)是Blossum 62评分矩阵，其中空位罚分为12，空位延伸罚分为4，移码空位罚分为5。
可以使用E.Meyers和W.Miller((1989)CABIOS[生物科学中的计算机应用]4:11-17)的算法(所述算法已并入ALIGN程序(版本2.0)中)，使用PAM120权重残基表、12的空位长度罚分和4的空位罚分来确定两个氨基酸序列或核苷酸序列之间的百分比同一性。
本文所述的核酸序列和蛋白序列可以用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索，从而例如鉴定其他家族成员或相关序列。可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)来进行这些搜索。可以用NBLAST程序(得分＝100，字长＝12)来进行BLAST核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序(得分＝50，字长＝3)来进行BLAST蛋白搜索，以获得与本发明的蛋白分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的的空位比对，可以如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402中所述使用空位BLAST(GappedBLAST)。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文所用，术语“在低严格性、中等严格性、高严格性或非常高严格性条件下杂交”描述了杂交和洗涤的条件。用于进行杂交反应的指导可见于Current Protocols inMolecular Biology[当代分子生物学实验室指南],约翰·威利父子出版社(John Wiley&Sons),纽约(1989),6.3.1-6.3.6。在所述参考文献中描述了水性和非水性方法，并且可以使用任一种。本文涉及的特定杂交条件如下：1)低严格性杂交条件：在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中约45℃下杂交，然后在0.2X SSC、0.1％SDS中至少50℃下洗涤两次(对于低严格性条件，洗涤的温度可以增加至55℃)；2)中等严格性杂交条件：在6X SSC中约45℃下杂交，然后在0.2X SSC、0.1％SDS中60℃下洗涤一次或多次；3)高严格性杂交条件：在6X SSC中约45℃下杂交，然后在0.2X SSC、0.1％SDS中65℃下洗涤一次或多次；以及优选地，4)非常高严格性杂交条件是0.5M磷酸钠、7％SDS，65℃下，然后在0.2X SSC、1％SDS中65℃下洗涤一次或多次。非常高严格性条件(4)是优选的条件以及除非另外指明否则应该使用的条件。
应当理解，本发明的分子可以具有另外的保守或非必需氨基酸置换，这些置换对分子的功能没有实质性影响。
术语“氨基酸”旨在包括所有无论是天然的还是合成的分子，这些分子包括氨基官能团和酸官能团二者，并且能够包括在天然存在的氨基酸的聚合物中。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；它们的类似物、衍生物和同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任一项的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括D-光学异构体或L-光学异构体和肽模拟物。
“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替换的置换。具有相似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中进行了定义。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)、以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(如果是单链的)在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。所述聚合物可以是直链或支链的，它可以包含经修饰的氨基酸，并且它可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖已经修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，诸如与标记性组分缀合。多肽可以从天然来源分离，可以通过重组技术从宿主真核或原核宿主产生，或者可以是合成程序的产物。
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”可互换使用。它们是指任何长度的聚合形式的核苷酸，即脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或它们的类似物。多核苷酸可以是单链的或双链的，并且如果是单链的，多核苷酸可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可以包括经修饰的核苷酸，诸如甲基化的核苷酸和核苷酸的类似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可以在聚合后进一步修饰，如通过与标记性组分缀合来修饰。核酸可以是重组多核苷酸，或基因组、cDNA、半合成或合成来源的多核苷酸，它们在自然界中不存在或以非天然排列连接至另一个多核苷酸。
如本文所用，术语“分离的”是指从其原始或天然环境(例如其天然存在的天然环境)中移除的材料。例如，不分离存在于活动物中的天然存在的多核苷酸或多肽，而是分离通过人为干预从天然系统中的一些或所有共存材料中分出的相同多核苷酸或多肽。此类多核苷酸可以是载体的一部分和/或此类多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且仍然是分离的，因为这种载体或组合物不是其天然存在的环境的一部分。
下面进一步详细描述了本发明的各个方面。另外的定义在整个申请书中陈述。
TGF-β抑制剂
TGF-β属于结构相关的细胞因子的大家族，包括例如骨形态发生蛋白(BMP)、生长和分化因子、活化素和抑制素。在一些实施例中，本文所述的TGF-β抑制剂可以结合和/或抑制TGF-β的一种或多种同种型(例如，TGF-β1、TGF-β2、或TGF-β3中的一种、两种、或全部)。
全文描述了转化生长因子β(也称为TGF-β、TGFβ、TGFb、或TGF-β，在本文中可互换使用)抑制剂(例如，抗TGF-β抗体分子)，并且可用于全文描述的方法。
在一些实施例中，TGF-β抑制剂是NIS793、夫苏木单抗、PF-06952229、或AVID200。
在一些实施例中，TGF-β抑制剂包含NIS973或国际申请公开号WO 2012/167143中所披露的化合物。NIS793还被称为XOMA 089或XPA.42.089。NIS793是完全人单克隆抗体，其特异性结合并中和TGF-β1和2配体。
NIS793的重链CDR1、CDR2和CDR3分别具有以下氨基酸序列：GGTFSSYAIS(SEQ IDNO:1)；GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:2)；和GLWEVRALPSVY(SEQ ID NO:3)。
NIS793的轻链CDR1、CDR2和CDR3分别具有以下氨基酸序列：GANDIGSKSVH(SEQ IDNO:4)；EDIIRPS(SEQ ID NO:5)；QVWDRDSDQYV(SEQ ID NO:6)。
NIS793的重链可变区具有以下氨基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLWEVRALPSVYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)(披露为WO 2012/167143中的SEQ ID NO:6)。NIS793的轻链可变区具有以下氨基酸序列：SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGANDIGSKSVHWYQQKAGQAPVLVVSEDIIRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTGTKVTVLG(SEQ ID NO:8)(在WO2012/167143中披露为SEQ ID NO:8)。
NIS793的重链具有以下氨基酸序列：QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLWEVRALPSVYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)。NIS793的轻链具有以下氨基酸序列：SYELTQPPSVSVAPGQTARITCGANDIGSKSVHWYQQKAGQAPVLVVSEDIIRPSGIPERISGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRDSDQYVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO:10)。
NIS793以高亲和力结合人TGF-β同种型。通常，NIS793以高亲和力结合TGF-β1和TGF-β2，并且在较小程度上结合TGF-β3。在Biacore测定中，人TGF-β上的NIS793的KD是14.6pM(对于TGF-β1)、67.3pM(对于TGF-β2)、和948pM(对于TGF-β3)。鉴于与所有三种TGF-β同种型的高亲和力结合，在某些实施例中，预期NIS793以如本文所述的NIS793的剂量结合TGF-β1、2和3。NIS793与啮齿动物和食蟹猴TGF-β交叉反应，并在体外和体内显示出功能活性，从而使啮齿动物和食蟹猴成为用于毒理学研究的相关物种。
在某些实施例中，TGF-β抑制剂用于治疗癌症(例如，胰腺癌(如PDAC)或胃肠癌(如结直肠癌)。在一些实施例中，将所述TGF-β抑制剂与检查点抑制剂(例如，本文所述的PD1的抑制剂)组合使用，用于治疗癌症。
在一些实施例中，以大于15mg/kg的剂量施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。例如，以介于15.1mg/kg与约50mg/kg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约16mg/kg与约50mg/kg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于16mg/kg与约50mg/kg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约20mg/kg与约40mg/kg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约25mg/kg与约35mg/kg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约20mg/kg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约30mg/kg的剂量施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，以固定剂量施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。例如，在一些实施例中，以介于约1000mg至约1600mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1100mg至约1500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1200至约1400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1300mg至约1400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1300mg至约1500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1300mg至约1600mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1200mg至约1500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1200mg至约1600mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1400mg至约1500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1400mg至约1600mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1100mg至约1600mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于1100mg至约1400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1100mg至约1300mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1100mg至约1200mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1000mg至约1500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1000mg至约1400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1000mg至约1300mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1000mg至约1200mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1000mg至约1100mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1000mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1100mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1200mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1300mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1400mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1500mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约1600mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1200mg至约2100mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，以介于约2000mg至约2500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1900mg至约2300mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约1900mg至约2200之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2100mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2100mg至约2500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2100至约2400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2100至约2300mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2100至约2200mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2200至约2500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2200至约2400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2200至约2300mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2300mg至约2500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2300mg至约2400mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以介于约2400mg至约2500mg之间的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2000mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2100mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2200mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2300mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2400mg的剂量施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，以约2500mg的剂量施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，每周一次、每两周一次、每三周一次、或每四周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每两周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每三周一次施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，每四三周一次施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，静脉内施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，经约20分钟至约40分钟的时间段来施用TGF-β抑制剂。例如，经约30分钟的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约一小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约两小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约三小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约四小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约五小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，经约六小时的时间段来施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，以介于约1300mg至约1500mg(例如，约1400mg)的剂量，每两周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2200mg(例如，约2100mg)的剂量，每两周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2200mg(例如，约2100mg)的剂量，每三周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。
在一些实施例中，以介于约1300mg至约1500mg(例如，约1400mg)的剂量，经约20分钟至约40分钟(例如，约30分钟)的时间段，每两周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2200mg(例如，约2100mg)的剂量，经约20分钟至约40分钟(例如，约30分钟)的时间段，每两周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。在一些实施例中，以介于约2000mg至约2200mg(例如，约2100mg)的剂量，经约20分钟至约40分钟(例如，约30分钟)的时间段，每三周一次，静脉内施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)。
在一些实施例中，本文所述的方法可进一步包括一种或多种其他治疗剂、程序或模式。在一些实施例中，将TGF-β抑制剂(例如，NIS793)与PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子)和/或PD-L抑制剂(PD-L1和/或PD-L2)组合施用。在一个实施例中，本文所述的方法包括施用抑制性(或免疫检查点)分子PD-1、PD-L1、PD-L2和/或TGFβ的抑制剂。在一个实施例中，所述抑制剂是与PD-1、PD-L1、PD-L2和/或TGFβ结合的抗体或抗体片段。
可替代地，或与前述方法组合，本文所述的方法可与以下中的一种或多种施用或使用：免疫调节剂(例如共刺激分子的活化剂或抑制分子的抑制剂，例如免疫检查点分子)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。
在某些实施例中，本文所述的方法与共刺激分子或抑制性分子(例如共抑制性配体或受体)的调节子一起施用或使用。
其他示例性TGF-β抑制剂
在一些实施例中，TGF-β抑制剂包含夫苏木单抗(fresolimumab)(CAS登记号：948564-73-6)。夫苏木单抗也称为GC1008。夫苏木单抗是结合和抑制TGF-β同种型1、2和3的人单克隆抗体。
夫苏木单抗的重链具有以下氨基酸序列：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSNVISWVRQAPGQGLEWMGGVIPIVDIANYAQRFKGRVTITADESTSTTYMELSSLRSEDTAVYYCASTLGLVLDAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:11)。
夫苏木单抗的轻链具有以下氨基酸序列：
ETVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSLGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRAPGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYADSPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:12)。
夫苏木单抗披露于例如国际申请公开号WO 2006/086469、和美国专利号8,383,780和8,591,901中。
在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂是PF-06952229。PF-06952229是TGF-βR1的抑制剂，预防通过受体的信号传导和TGF-βR1-介导的免疫抑制，从而增强抗肿瘤免疫应答。PF-06952229披露于例如，Yano等人.Immunology[免疫学]2019；157(3)232-47中。
在一些实施例中，所述TGF-β抑制剂是AVID200。AVID200是TGF-β受体胞外结构域-IgG Fc融合蛋白，其选择性地靶向并中和TGF-β同种型1和3。AVID200披露于，例如O’Connor-McCourt,MD等人.Can.Res.[癌症研究]2018.78(13)中。
PD-1抑制剂
PD-1是CD28/CTLA-4家族成员，其在例如活化的CD4+和CD8+T细胞、Treg、和B细胞上表达。它负调节效应T细胞信号传导和功能。PD-1在肿瘤浸润性T细胞上被诱导，并且可导致功能性衰竭或功能障碍(Keir等人(2008)Annu.Rev.Immunol.[免疫学年评]26:677-704；Pardoll等人(2012)Nat Rev Cancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。PD-1在与其两种配体(程序性死亡-配体1(PD-L1)或程序性死亡-配体2(PD-L2))之一结合时递送共抑制信号。PD-L1在许多细胞类型(包括T细胞、天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、B细胞、上皮细胞、血管内皮细胞)以及许多类型的肿瘤上表达。PD-L1在鼠和人肿瘤上的高表达与多种癌症中的不良临床结果相关(Keir等人(2008)Annu.Rev.Immunol.[免疫学年评]26:677-704；Pardoll等人(2012)Nat Rev Cancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。PD-L2在树突细胞、巨噬细胞和一些肿瘤上表达。已经针对癌症免疫疗法在临床前和临床上验证了阻断PD-1通路。临床前和临床研究都证明，抗PD-1阻断可以恢复效应T细胞的活性，并产生强大的抗肿瘤应答。例如，阻断PD-1通路可以恢复衰竭/功能障碍的效应T细胞功能(例如，增殖、IFN-γ分泌或细胞溶解功能)和/或抑制Treg细胞功能(Keir等人(2008)Annu.Rev.Immunol.[免疫学年评]26:677-704；Pardoll等人(2012)Nat Rev Cancer[癌症自然评论]12(4):252-64)。PD-1通路的阻断可以用抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或PD-1、PD-L1和/或PD-L2的寡肽实现。
如本文所用，术语“程序性死亡1”或“PD-1”包括同种型、哺乳动物(例如人PD-1)、人PD-1的物种同源物、以及包含至少一个与PD-1共同表位的类似物。PD-1(例如人PD-1)的氨基酸序列是本领域已知的，例如，Shinohara T等人(1994)Genomics[基因组学]23(3):704-6；Finger LR等人Gene[基因](1997)197(1-2):177-87。
在某些实施例中，将如本文所述的TGFβ抑制剂与PD-1抑制剂组合施用。在一些实施例中，所述PD-1抑制剂是斯巴达珠单抗(PDR001，诺华公司(Novartis))、纳武单抗(百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))、派姆单抗(默克公司(Merck&Co))、匹地利珠单抗(医好科技公司(CureTech))、MEDI0680(英商梅迪缪思有限公司(Medimmune))、REGN2810(再生元公司(Regeneron))、TSR-042(泰萨罗公司(Tesaro))、PF-06801591(辉瑞公司(Pfizer))、BGB-A317(百济神州公司(Beigene))、BGB-108(百济神州公司)、INCSHR1210(因赛特公司(Incyte))、或AMP-224(安普利公司(Amplimmun))。
示例性PD-1抑制剂
在一个实施例中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子。在一个实施例中，所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体分子，如题为“Antibody Molecules to PD-1and Uses Thereof[PD-1的抗体分子及其用途]”的2015年7月30日公开的US 2015/0210769中所述的。在一个实施例中，抗PD-1抑制剂是斯巴达珠单抗，也称为PDR001。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链和轻链可变区包含表1(例如，来自表1中披露的BAP049-克隆-E或BAP049-克隆-B的重链和轻链可变区序列)中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，CDR根据卡巴特定义(例如，如表1中所列出的)。在一些实施例中，这些CDR根据乔西亚定义(例如，如表1中所列出的)。在一些实施例中，所述CDR根据卡巴特和乔西亚二者的组合CDR定义(例如，如表1中所列出的)。在一个实施例中，VH CDR1的卡巴特和乔西亚CDR的组合包含氨基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO:13)。在一个实施例中，相对于表1中所示的氨基酸序列，或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)或缺失。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:14的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:15的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:16的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:23的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:24的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:25的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表1中。
在一个实施例中，抗体分子包含：含有由SEQ ID NO:37的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:38的核苷酸序列编码的VHCDR2、和由SEQ ID NO:39的核苷酸序列编码的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO:42的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:43的核苷酸序列编码的VLCDR2、和由SEQ ID NO:44的核苷酸序列编码的VLCDR3的VL，各自披露于表1中。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:19具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:33具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:29具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:20的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:20具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:34或30的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:34或30具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:20的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:34或30的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:21具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:35具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:31具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含：含有SEQID NO:21的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:22的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:22具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:36或32的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:36或32具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:22的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:36或32的核苷酸序列编码的轻链。
本文所述的抗体分子可以通过载体、宿主细胞、和在US2015/0210769中描述的方法制得。
在一些实施例中，以介于约100mg至约600mg之间的平稳剂量施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，以介于约100mg至约500mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约100mg至约400mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约100mg至约300mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约100mg至约200mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约200mg至约600mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约200mg至约500mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约200mg至约400mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约200mg至约300mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约300mg至约600mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约300mg至约500mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约300mg至约400mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约400mg至约600mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约400mg至约500mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以介于约500mg至约600mg之间的剂量施用PD-1抑制剂。
在一些实施例中，以约100mg的平稳剂量施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，以约200mg的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以约300mg的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以约400mg的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以约500mg的剂量施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以约600mg的剂量施用PD-1抑制剂。
在一些实施例中，每四周一次施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，每三周一次施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，每两周一次施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，每周一次施用PD-1抑制剂。
在一些实施例中，静脉内施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，经约20分钟至40分钟(例如，约30分钟)的时间段来施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，经约30分钟的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约一小时的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约两小时的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约三小时的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约四小时的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约五小时的时间段来施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，经约六小时的时间段来施用PD-1抑制剂。
在一些实施例中，以介于约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量，每四周一次，静脉内施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，以介于约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量，每三周一次，静脉内施用PD-1抑制剂。在一些实施例中，以400mg的剂量，每四周一次，施用斯巴达珠单抗。在一些实施例中，以300mg的剂量，每三周一次，施用斯巴达珠单抗。
在一些实施例中，以介于约300mg至约500mg(例如，约400mg)的剂量，经约20分钟至约40分钟(例如，约30分钟)的时间段，每两周一次，静脉内施用PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)。在一些实施例中，以介于约200mg至约400mg(例如，约300mg)的剂量，经约20分钟至约40分钟(例如，约30分钟)的时间段，每三周一次，静脉内施用PD-1抑制剂。
在一些实施例中，将PD-1抑制剂(例如，斯巴达珠单抗)与TGF-β抑制剂(例如，NIS793)组合施用。
表1.示例性抗PD-1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430000281
Figure BDA0003757898430000291
Figure BDA0003757898430000301
Figure BDA0003757898430000311
Figure BDA0003757898430000321
Figure BDA0003757898430000331
Figure BDA0003757898430000341
Figure BDA0003757898430000351
其他示例性PD-1抑制剂
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是纳武单抗(Bristol-Myers Squibb)，也称为MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558、或
Figure BDA0003757898430000352
纳武单抗(克隆5C4)和其他抗PD-1抗体披露在US8,008,449和WO 2006/121168中。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：纳武单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表2中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是派姆单抗(默克公司(Merck&Co))，也称为Lambrolizumab、MK-3475、MK03475、SCH-900475、或
Figure BDA0003757898430000353
派姆单抗和其他抗PD-1抗体披露于Hamid,O.等人,(2013)New England Journal of Medicine[新英格兰医学期刊]369(2):134-44、US 8,354,509、和WO 2009/114335中。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：帕姆单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表2中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是匹地利珠单抗(CureTech)，也称为CT-011。匹地利珠单抗和其他抗PD-1抗体披露于Rosenblatt,J.等人,(2011)J Immunotherapy[免疫疗法杂志]34(5):409-18；US 7,695,715；US 7,332,582；和US 8,686,119中。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：匹地利珠单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表2中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是MEDI0680(英商梅迪缪思有限公司)，也称为AMP-514。MEDI0680和其他抗PD-1抗体披露于US 9,205,148和WO 2012/145493中。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：MEDI0680的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是REGN2810(再生元公司)。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：REGN2810的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是PF-06801591(辉瑞公司)。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：PF-06801591的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是BGB-A317或BGB-108(百济神州公司)。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：BGB-A317、或BGB-108的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是INCSHR1210(因赛特公司)，也称为INCSHR01210或SHR-1210。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：INCSHR1210的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗PD-1抗体分子是TSR-042(泰萨罗公司)，也称为ANB011。在一个实施例中，抗PD-1抗体分子包含以下中的一种或多种：TSR-042的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
其他已知的抗PD-1抗体包括描述于例如以下中的那些：WO 2015/112800、WO2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731、和US 9,102,727。
在一个实施例中，抗PD-1抗体是与本文所述的抗PD-1抗体之一竞争PD-1上的相同表位结合和/或结合至PD-1上的相同表位的抗体。
在一个实施例中，所述PD-1抑制剂是例如如美国8,907,053中所述抑制PD-1信号传导通路的肽。在一个实施例中，PD-1抑制剂是免疫粘附素(例如包含融合到恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素。在一个实施例中，PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg(安普利公司)，例如披露于WO2010/027827和WO2011/066342中)。
表2.其他示例性抗PD-1抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430000371
Figure BDA0003757898430000381
PD-L1抑制剂
在某些实施例中，描述的方法进一步包括施用PD-L1抑制剂。在一些实施例中，PD-L1抑制剂是FAZ053(诺华公司)、阿特珠单抗(基因泰克公司/罗氏公司(Genentech/Roche))、阿维鲁单抗(默克雪兰诺公司(Merck Serono)和辉瑞公司)、度伐单抗(英商梅迪缪思有限公司/阿斯利康公司(AstraZeneca))、或BMS-936559(百时美施贵宝公司)。
示例性PD-L1抑制剂
在一个实施例中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子。在一个实施例中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体分子，如题为“Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof[PD-L1的抗体分子及其用途]”的2016年4月21日公开的US 2016/0108123中披露的。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链和轻链可变区包含表3(例如，来自表3中披露的BAP058-克隆O、或BAP058-克隆N的重链和轻链可变区序列)中所示的氨基酸序列、或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，CDR根据卡巴特定义(例如，如表3中所列出的)。在一些实施例中，这些CDR根据乔西亚定义(例如，如表3中所列出的)。在一些实施例中，所述CDR根据卡巴特和乔西亚二者的组合CDR定义(例如，如表3中所列出的)。在一个实施例中，VH CDR1的卡巴特和乔西亚CDR的组合包含氨基酸序列GYTFTSYWMY(SEQ ID NO:100)。在一个实施例中，相对于表3中所示的氨基酸序列，或由表3中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)或缺失。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:54的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:55的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:56的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:62的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:63的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:64的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表3中。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有由SEQ ID NO:81的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:82的核苷酸序列编码的VHCDR2、和由SEQ ID NO:83的核苷酸序列编码的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO:86的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:87的核苷酸序列编码的VLCDR2、和由SEQ ID NO:88的核苷酸序列编码的VLCDR3的VL，各自披露于表3中。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:59具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列、或与SEQ IDNO:69具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:73具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:77具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:60的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:60具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:70的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:70具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:74的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:74具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:78的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:78具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:60的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:70的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:72的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:78的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:61具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列、或与SEQ IDNO:71具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:75具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:79具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含：含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:68的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:68具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:72的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:72具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:76的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:76具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:80的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:80具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ IDNO:68的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:72的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:76的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:80的核苷酸序列编码的轻链。
本文所述的抗体分子可以通过载体、宿主细胞、和在US2016/0108123中描述的方法制得。
表3.示例性抗PD-L1抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430000421
Figure BDA0003757898430000431
Figure BDA0003757898430000441
Figure BDA0003757898430000451
Figure BDA0003757898430000461
Figure BDA0003757898430000471
Figure BDA0003757898430000481
其他示例性PD-L1抑制剂
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子是阿特利珠单抗(基因泰克公司/罗氏公司(Genentech/Roche))，也称为MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70、或TECENTRIQTM。阿特利珠单抗和其他抗PD-L1抗体披露于US 8,217,149中。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含以下中的一种或多种：阿特珠单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表4中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子是阿维鲁单抗(默克雪兰诺公司和辉瑞公司)，也称为MSB0010718C。阿维鲁单抗和其他抗PD-L1抗体披露于WO 2013/079174中。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含以下中的一种或多种：阿维鲁单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表4中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子是度伐鲁单抗(英商梅迪缪思有限公司/阿斯利康公司)，也称为MEDI4736。度伐鲁单抗和其他抗PD-L1抗体披露于US 8,779,108中。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含以下中的一种或多种：度伐单抗的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表4中所披露的。
在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子是BMS-936559(百时美施贵宝公司)，也称为MDX-1105或12A4。BMS-936559和其他抗PD-L1抗体披露于US 7,943,743和WO 2015/081158中。在一个实施例中，抗PD-L1抗体分子包含以下中的一种或多种：BMS-936559的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表4中所披露的。
其他已知的抗PD-L1抗体包括描述于例如以下中的那些：WO 2015/181342、WO2014/100079、WO 2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO2013/079174、WO 2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927、和US 9,175,082。
在一个实施例中，抗PD-1抗体是与本文所述的抗PD-L1抗体之一竞争与PD-L1上的相同表位结合和/或结合至PD-L1上的相同表位的抗体。
表4.其他示例性抗PD-L1抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430000501
Figure BDA0003757898430000511
抗体和抗体样分子
如本文所用，术语“抗体分子”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)。在实施例中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链。在实施例中，抗体分子包含全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合或功能性片段。在实施例中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位(例如，第一靶标)具有结合特异性并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位(例如，第二靶标)具有结合特异性。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。
在实施例中，抗体分子是单特异性抗体分子并结合单一表位(例如，单一靶标(如TGFβ，像NIS793))。例如，单特异性抗体分子可具有多个免疫球蛋白可变结构域序列，每个免疫球蛋白可变结构域序列结合相同的表位。
在实施例中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位(例如，第一靶标)具有结合特异性并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位(例如，第二靶标)具有结合特异性。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一表位和第二表位重叠。在实施例中，第一表位和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施例中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于具有对第一表位的结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列、和具有对第二表位的结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一表位和第二表位重叠。在一个实施例中，第一表位和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在一个实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列，以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体、或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的半抗体、或其片段。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv、或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv、或其片段。在实施例中，所述第一表位位于TGFβ(1、2和/或3)上并且所述第二表位位于PD-1(或PD-L1、或PD-L2)上。
用于产生多特异性(例如，双特异性或三特异性)或异二聚体的抗体分子的方案在本领域中是已知的；这些方案包括但不限于：“杵臼结构(knob in a hole)”途径，例如在US5,731,168中所述；静电导向Fc配对，如例如在WO 09/089004、WO 06/106905和WO 2010/129304中所述；链交换工程化结构域(SEED)异源二聚体形成，如例如在WO 07/110205中所述；Fab臂交换，如例如在WO 08/119353、WO 2011/131746和WO 2013/060867中所述；双抗体缀合物，例如使用具有胺反应性基团和巯基反应性基团的异双官能试剂，通过抗体交联以产生双特异性结构，如例如在US 4,433,059中所述；通过对两条重链之间的二硫键进行还原和氧化的循环，通过重组来自不同抗体的半抗体(重-轻链对或Fab)产生的双特异性抗体决定簇，如例如在US 4,444,878中所述；三功能抗体，例如通过巯基反应性基团交联的三个Fab'片段，如例如在US 5,273,743中所述；生物合成结合蛋白，例如通过C-末端尾优选通过二硫键或胺反应性化学交联作用交联的scFv对，如例如在US 5,534,254中所述；双功能抗体，例如具有不同结合特异性的Fab片段，这些Fab片段通过已经替代恒定结构域的亮氨酸拉链(例如，c-fos和c-jun)二聚化，如例如在US 5,582,996中所述；双特异性和寡特异性单价和寡价受体，例如两个抗体(两个Fab片段)的VH-CH1区，这些VH-CH1区通过介于一个抗体的CH1区与另一个抗体的VH区(典型地具有相关联的轻链)之间的多肽间隔子连接，如例如在US 5,591,828中所述；双特异性DNA-抗体缀合物，例如抗体或Fab片段通过DNA的双链段交联，如例如在US 5,635,602中所述；双特异性融合蛋白，例如含有两个scFv(它们之间具有亲水性螺旋肽接头)和一个完全恒定区的表达构建体，如例如在US 5,637,481中所述；多价和多特异性结合蛋白，例如具有Ig重链可变区结合区的第一结构域和Ig轻链可变区结合区的第二结构域的多肽二聚体，通常称为双抗体(还披露了更高级结构，产生双特异性、三特异性或四特异性分子，如例如在US 5,837,242中所述；具有连接的VL和VH链(它们进一步用肽间隔子连接至抗体铰链区和CH3区)的微型抗体构建体，其可以二聚化以形成双特异性/多价分子，如例如在US 5,837,821中所述；用短肽接头(例如5或10个氨基酸)连接的或在任一取向上完全没有接头连接的VH和VL结构域，这些VH和VL结构域可以形成二聚体以形成双特异性双体抗体；三聚体和四聚体，如例如在US 5,844,094中所述；VH结构域(或家族成员中的VL结构域)的串，其通过肽键与C-末端的可交联基团连接，这些可交联基团进一步与VL结构域相关联以形成一系列FV(或scFv)，如例如在US 5,864,019中所述；以及具有经肽接头连接的VH和VL结构域二者的单链结合多肽通过非共价或化学交联组合成多价结构，以使用scFV或双抗体类型形式形成例如同二价、异二价、三价和四价结构，如例如在US 5,869,620中所述。另外的示例性多特异性和双特异性分子及其制备方法见于例如，US 5,910,573、US 5,932,448、US 5,959,083、US 5,989,830、US 6,005,079、US 6,239,259、US6,294,353、US 6,333,396、US 6,476,198、US 6,511,663、US 6,670,453、US 6,743,896、US6,809,185、US 6,833,441、US 7,129,330、US 7,183,076、US 7,521,056、US 7,527,787、US7,534,866、US 7,612,181、US 2002/004587A1、US 2002/076406A1、US 2002/103345A1、US2003/207346A1、US 2003/211078A1、US 2004/219643A1、US 2004/220388A1、US 2004/242847A1、US 2005/003403A1、US 2005/004352A1、US 2005/069552A1、US 2005/079170A1、US 2005/100543A1、US 2005/136049A1、US 2005/136051A1、US 2005/163782A1、US 2005/266425A1、US 2006/083747A1、US 2006/120960A1、US 2006/204493A1、US 2006/263367A1、US 2007/004909A1、US 2007/087381A1、US 2007/128150A1、US 2007/141049A1、US 2007/154901A1、US 2007/274985A1、US 2008/050370A1、US 2008/069820A1、US 2008/152645A1、US 2008/171855A1、US 2008/241884A1、US 2008/254512A1、US 2008/260738A1、US 2009/130106A1、US 2009/148905A1、US 2009/155275A1、US 2009/162359A1、US 2009/162360A1、US 2009/175851A1、US 2009/175867A1、US 2009/232811A1、US 2009/234105A1、US 2009/263392A1、US 2009/274649A1、EP 346087A2、WO 00/06605A2、WO 02/072635A2、WO 04/081051A1、WO 06/020258A2、WO 2007/044887A2、WO 2007/095338A2、WO 2007/137760A2、WO2008/119353A1、WO 2009/021754A2、WO 2009/068630A1、WO 91/03493A1、WO 93/23537A1、WO 94/09131A1、WO 94/12625A2、WO 95/09917A1、WO 96/37621A2、WO 99/64460A1。
“融合蛋白”和“融合多肽”是指具有至少两个共价连接在一起的部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。所述特性可以是生物学特性，例如体外或体内活性。所述特性也可以是简单的化学或物理特性，例如与靶分子的结合，反应的催化等。所述两个部分可以通过单个肽键或通过肽接头直接连接，但彼此处于一个阅读框中。
在实施例中，抗体分子包括双抗体、和单链分子、以及抗体的抗原结合片段(例如，Fab、F(ab’)2、和Fv)。例如，抗体分子可以包含重(H)链可变结构域序列(在本文缩写为VH)、和轻(L)链可变结构域序列(在本文缩写为VL)。在实施例中，抗体分子包含重链和轻链(在本文中称为半抗体或由其组成。在另一个实例中，抗体分子包括两个重(H)链可变结构域序列和两个轻(L)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，所述抗体分子例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc、Fd、Fd’、Fv、单链抗体(例如scFv)、单可变结构域抗体、双抗体(Dab)(二价和双特异性)、以及嵌合(例如，人源化)抗体，它们可通过修饰完整抗体而产生或可以是使用重组DNA技术从头合成的那些。这些功能抗体片段保留了与其各自的抗原或受体选择性结合的能力。抗体和抗体片段可以来自任何类别的抗体，包括但不限于IgG、IgA、IgM、IgD和IgE，以及来自任何亚类的抗体(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。抗体分子的制剂可以是单克隆或多克隆的。抗体分子也可以是人、人源化、CDR移植或体外产生的抗体。抗体可具有例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。抗体还可以具有例如κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白”(Ig)与术语“抗体”在本文中可互换地使用。
抗体分子的抗原结合片段的实例包括：(i)Fab片段，所述片段是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的双抗体(dAb)片段；(vi)骆驼科(camelid)或骆驼化(camelized)可变结构域；(vii)单链Fv(scFv)(参见例如Bird等人(1988)Science[科学]242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)；(viii)单一结构域抗体。这些抗体片段是使用本领域的技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式针对效用来筛选这些片段。
术语“抗体”包括完整分子及其功能性片段。可以改变(例如突变)抗体的恒定区以修饰抗体的性质(例如，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能)。
抗体分子也可以是单结构域抗体。单结构域抗体可以包括其互补决定区是单结构域多肽的一部分的抗体。实例包括但不限于重链抗体、天然缺乏轻链的抗体、衍生自常规4-链抗体的单结构域抗体、工程抗体和除衍生自抗体的那些以外的单结构域支架。单结构域抗体可以是任何本领域所述的抗体，或任何未来的单结构域抗体。单结构域抗体可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、人、骆驼、美洲驼、鱼、鲨鱼、山羊、兔和牛。根据本发明的另一个方面，单结构域抗体是天然存在的单结构域抗体，称为缺乏轻链的重链抗体。例如在WO94/04678中披露了这种单结构域抗体。出于清楚的原因，衍生自天然缺乏轻链的重链抗体的这种可变结构域在本文中称为VHH或纳米抗体，以将其与四链免疫球蛋白的常规VH区分开。这种VHH分子可以衍生自骆驼科物种，例如骆驼、美洲驼、单峰骆驼、羊驼和原驼中产生的抗体。除骆驼科外的其他物种可产生天然缺乏轻链的重链抗体；此类VHH在本发明的范围内。
VH和VL区可以细分为被称为“互补决定区”(CDR)的高变区，其间插入被称为“框架区”(FR或FW)的更保守的区域。
框架区和CDR的范围已经通过许多方法精确定义(参见Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列],第5版,U.S.Department of Health and Human Services[美国卫生与公众服务部],NIH公开号91-3242；Chothia,C.等人(1987)J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]196:901-917；以及由牛津分子AbM抗体建模软件(Oxford Molecular’s AbM antibody modeling software)使用的AbM定义)。通常参见例如，Protein Sequence and Structure Analysis of AntibodyVariable Domains[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析]在Antibody EngineeringLab Manual[抗体工程实验室手册](编辑：Duebel,S.和Kontermann,R.，施普林格出版社(Springer-Verlag)，海德尔堡)中。
如本文所用，术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内的赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，并且每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
给定CDR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任何一种来确定，这些方案包括描述于以下的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest[免疫学目的蛋白质序列]”,第5版，公共卫生署(Public HealthService)，美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)，马里兰州贝塞斯达市(Bethesda,MD)(“卡巴特”编号方案)、Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“乔西亚”编号方案)。如本文所用，根据“乔西亚”编号方案定义的CDR有时也称为“高变环”。
例如，根据卡巴特，将重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并将轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。根据乔西亚，将VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；并将VL中的氨基酸残基编号为26-32(LCDR1)、50-52(LCDR2)和91-96(LCDR3)。通过结合卡巴特和乔西亚两者的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的氨基酸残基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)组成。
通常，除非特别指出，否则抗体分子可包括一种或多种卡巴特CDR和/或乔西亚高变环的任何组合。在一个实施例中，以下定义用于表1中所述的抗体分子：HCDR1(根据卡巴特和乔西亚二者的组合CDR定义)以及HCCDR 2-3和LCCDR 1-3(根据卡巴特的CDR定义)。根据所有定义，每个VH和VL典型地包括三个CDR和四个FR，从氨基末端到羧基末端按照以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用，“免疫球蛋白可变结构域序列”是指可以形成免疫球蛋白可变结构域的结构的氨基酸序列。例如，所述序列可包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，所述序列可以包括或可以不包括一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，或者可以包括与蛋白质结构的形成相容的其他改变。
术语“抗原结合位点”是指抗体分子的一部分，其包含形成与靶标(例如，TGFβ)或其表位结合的界面的决定簇。关于蛋白质(或蛋白质模拟物)，抗原结合位点典型地包括形成与靶多肽结合的界面的一个或多个环(具有至少四个氨基酸或氨基酸模拟物)。典型地，抗体分子的抗原结合位点包括至少一个或两个CDR和/或高变环，或更典型地至少三个、四个、五个或六个CDR和/或高变环。
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文可互换使用，是指抗体分子干扰另一抗体分子(例如，本文提供的抗TGFβ抗体分子)与靶标(例如TGFβ1、2或3)结合的能力。对结合的干扰可以是直接的或间接的(例如，通过抗体分子或靶的变构调节)。抗体分子能够干扰另一种抗体分子与靶标结合的程度以及因此是否可以称为竞争，可以使用竞争结合测定法(例如FACS测定、ELISA或BIACORE测定)来确定。在一些实施例中，竞争结合测定法是定量竞争测定法。在一些实施例中，在竞争结合测定(例如，本文所述的竞争测定)中，当第一抗体分子与靶标的结合降低10％或更高，例如20％或更高、30％或更高、40％或更高、50％或更高、55％或更高、60％或更高、65％或更高、70％或更高、75％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、95％或更高、98％或更高、99％或更高时，第一抗TGFβ抗体分子被认为与第二抗TGFβ抗体分子竞争结合靶标。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子组合物的抗体分子的制品。单克隆抗体组合物表现出对特定表位的单一结合特异性和亲和力。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术或不使用杂交瘤技术的方法(例如重组方法)制备。
“有效的人”蛋白是不引起中和抗体应答，例如人抗鼠抗体(HAMA)应答的蛋白。在许多情况下，例如，如果抗体分子被重复施用，例如在治疗慢性或复发性疾病情况中，HAMA可能会成问题。由于增加的血清中抗体清除(参见例如，Saleh等人,CancerImmunol.Immunother.[癌症免疫学，免疫疗法],32:180-190(1990))，并且还由于潜在的过敏性反应(参见例如，LoBuglio等人,Hybridoma[杂交瘤],5:5117-5123(1986))，HAMA应答可使重复的抗体施用可能无效。
所描述的抗体分子可以是多克隆或单克隆抗体。在其他实施例中，可以重组地产生抗体，例如通过噬菌体展示或通过组合方法产生。
用于产生抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如以下中所述，例如：Ladner等人,美国专利号5,223,409；Kang等人,国际公开号WO 92/18619；Dower等人,国际公开号WO 91/17271；Winter等人,国际公开WO 92/20791；Markland等人,国际公开号WO92/15679；Breitling等人,国际公开WO 93/01288；McCafferty等人,国际公开号WO 92/01047；Garrard等人,国际公开号WO 92/09690；Ladner等人,国际公开号WO 90/02 809；Fuchs等人,(1991)Bio/Technology[生物技术]9:1370-1372；Hay等人,(1992)HumAntibody Hybridomas[人抗体杂交瘤]3:81-85；Huse等人,(1989)Science[科学]246:1275-1281；Griffths等人,(1993)EMBO J[欧洲分子生物学学会会刊]12:725-734；Hawkins等人,(1992)J Mol Biol[分子生物学杂志]226:889-896；Clackson等人,(1991)Nature[自然]352:624-628；Gram等人,(1992)PNAS[美国国家科学院院刊]89:3576-3580；Garrad等人(1991)Bio/Technology[生物技术]9:1373-1377；Hoogenboom等人,(1991)Nuc Acid Res[核酸研究]19:4133-4137；以及Barbas等人(1991)PNAS[美国国家科学院院刊]88:7978-7982)。
在一个实施例中，抗体是完全人抗体(例如，在已经基因工程化为从人免疫球蛋白序列产生抗体的小鼠中制备的抗体)，或非人抗体，例如啮齿动物(小鼠或大鼠)、山羊、灵长类动物(例如，猴)、骆驼抗体。优选地，所述非人抗体是啮齿动物(小鼠或大鼠抗体)。用于生产啮齿动物抗体的方法是已知的。
可以使用携带人免疫球蛋白基因而不是小鼠系统的转基因小鼠产生人单克隆抗体。使用来自用目标抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞产生分泌人mAb的杂交瘤，所述人mAb对来自人蛋白质的表位具有特异性亲和力(参见例如：Wood等人,国际申请WO 91/00906；Kucherlapati等人,PCT公开WO 91/10741；Lonberg等人,国际申请WO 92/03918；Kay等人,国际申请92/03917；Lonberg,N.等人,1994Nature[自然]368:856-859；Green,L.L.等人,1994Nature Genet.[自然遗传学]7:13-21；Morrison,S.L.等人,1994Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]81:6851-6855；Bruggeman等人,1993Year Immunol[免疫学年评]7:33-40；Tuaillon等人,1993PNAS 90:3720-3724；Bruggeman等人,1991Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志]21:1323-1326)。
抗体可以是可变区或其一部分(例如，CDR)在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中产生的抗体分子。嵌合抗体、CDR移植的抗体、和人源化抗体属于本发明。在非人生物(例如，大鼠或小鼠)中产生并且然后在例如可变框架或恒定区中修饰以降低在人中的抗原性的抗体属于本发明。
嵌合抗体可以通过本领域已知的重组DNA技术来产生(参见：Robinson等人,国际专利公开PCT/US 86/02269；Akira等人,欧洲专利申请184,187；Taniguchi,M.,欧洲专利申请171,496；Morrison等人,欧洲专利申请173,494；Neuberger等人,国际申请WO 86/01533；Cabilly等人美国专利号4,816,567；Cabilly等人,欧洲专利申请125,023；Better等人(1988Science[科学]240:1041-1043)；Liu等人(1987)PNAS84:3439-3443；Liu等人,1987,J.Immunol.[免疫学杂志]139:3521-3526；Sun等人(1987)PNAS 84:214-218；Nishimura等人,1987,Canc.Res.[癌症研究]47:999-1005；Wood等人(1985)Nature[自然]314:446-449；以及Shaw等人,1988,J.Natl Cancer Inst.[美国国立癌症研究所杂志]80:1553-1559)。
人源化抗体或CDR移植抗体的至少一个或两个但通常所有三个(重和/或轻免疫球蛋白链的)受体CDR被供体CDR替换。抗体可以被至少一部分非人CDR替换，或者仅一些CDR可以被非人CDR替换。仅需要替换人源化抗体与其靶标(例如，TGFβ)结合所需的CDR的数量。优选地，供体是啮齿动物抗体，例如大鼠或小鼠抗体，并且接受者将是人框架或人共有框架。典型地，提供CDR的免疫球蛋白称为“供体”，并且提供框架的免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施例中，供体免疫球蛋白是非人(例如啮齿动物)。受体框架是天然存在的(例如人类)框架或共有框架，或与其具有约85％或更高、优选90％、95％、99％或更高同一性的序列。
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见例如Winnaker,From Genes to Clones[从基因到克隆](德国魏因海姆出版社(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany)1987)。在蛋白质家族中，共有序列中的每个位置被在所述家族中所述位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨基酸同样频繁出现，则任一个均可以包括在共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
抗体可以通过本领域已知的方法人源化(参见例如Morrison,S.L.,1985,Science[科学]229:1202-1207、Oi等人,1986,BioTechniques[生物技术]4:214、以及Queen等人US5,585,089、US 5,693,761和US 5,693,762)。
可以通过CDR移植或CDR置换产生人源化抗体或CDR移植抗体，其中免疫球蛋白链的一个、两个或所有CDR可以被替换。参见例如，美国专利5,225,539；Jones等人1986Nature[自然]321:552-525；Verhoeyan等人1988Science[科学]239:1534；Beidler等人1988J.Immunol.[免疫学杂志]141:4053-4060；Winter US 5,225,539。Winter描述了CDR移植方法，其可用于制备本发明的人源化抗体(1987年3月26日提交的英国专利申请GB2188638A；Winter US 5,225,539)。
人源化抗体也在本发明的范围内，其中特定氨基酸已被取代、缺失或添加。从供体中选择氨基酸的标准描述于US 5,585,089，例如US 5,585,089的第12-16栏中，例如US 5,585,089的第12-16栏中。用于人源化抗体的其他技术描述于1992年12月23日公开的Padlan等人,EP 519596 A1中。
抗体分子可以是单克隆抗体。可以对单链抗体(scFV)进行工程化(参见例如，Colcher,D.等人(1999)Ann N Y Acad Sci[纽约科学院年鉴]880:263-80；和Reiter,Y.(1996)Clin Cancer Res[临床癌症研究]2:245-52)。可以将单链抗体二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。
在又其他实施例中，抗体分子具有重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、和IgE的重链恒定区；具体地，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的(人)重链恒定区。在另一个实施例中，抗体分子具有轻链恒定区，例如κ或λ的(人)轻链恒定区。可以改变(例如突变)恒定区以修饰抗体的性质(例如，以增加或减少以下中的一种或多种：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施例中，抗体分子具有效应子功能并且可以固定补体。在其他实施例中，抗体不募集效应细胞或固定补体。在另一个实施例中，抗体具有降低的结合Fc受体的能力或没有所述能力。例如，它是同种型或亚型、片段或其他突变体，其不支持与Fc受体结合，例如，它具有诱变或缺失的Fc受体结合区。
用于改变抗体恒定区的方法是本领域已知的。具有改变功能(例如，改变的对效应配体(如细胞上的FcR)或补体的C1组分的亲和力)的抗体可以通过用不同的残基替换抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基而产生(参见例如EP 388,151 A1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260)。可以描述类似类型的改变，所述改变如果应用于鼠或其他物种免疫球蛋白将减少或消除这些功能。
抗体分子可以被衍生化或连接至另一功能分子(例如，另一种肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生的”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化方法包括但不限于添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体例如生物素。因此，本发明的抗体分子旨在包括本文所述的抗体的衍生形式和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可以功能性地连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价缔合或其他方式)至一个或多个其他分子实体，例如另一种抗体(例如，双特异性抗体或双抗体)、可检测的试剂、细胞毒性剂、药剂和/或可以介导抗体或抗体部分与另一个分子(例如链霉亲和素核心区域或多组氨酸标签)缔合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生抗体分子是通过交联两种或更多种抗体(相同类型或不同类型的，例如以生成双特异性抗体)而产生的。合适的交联剂包括为异双功能(具有两个被适当的间隔物(例如，间马来酰亚胺基苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)隔开的明显不同的反应性基团)或同双功能(例如，辛二酸二琥珀酰亚胺酯)的那些。此类接头可从伊利诺伊州罗克福德的皮尔斯化学公司(Pierce Chemical Company,Rockford,Ill)获得。
可用本发明的抗体分子衍生(或标记)的有用的可检测剂包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、发射荧光的金属原子(例如铕(Eu))和其他镧系元素以及放射性材料(如下所述)。示例性荧光可检测剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。抗体也可以用可检测的酶衍生，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等。用可检测的酶衍生抗体时，可通过添加酶使用其产生可检测的反应产物的其他试剂进行检测。例如，当存在可检测剂辣根过氧化物酶时，过氧化氢和二氨基联苯胺的添加导致可检测的有色反应产物。抗体分子也可以用辅基(例如，链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)衍生化。例如，抗体可以用生物素衍生化，并通过抗生物素蛋白或链霉亲和素结合的间接测量来检测。合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；以及生物发光材料的实例包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白。
标记的抗体分子可以在多种情况下例如在诊断和/或实验中使用，包括(i)通过诸如亲和色谱或免疫沉淀等标准技术分离预定抗原；(ii)检测预定抗原(例如在细胞裂解液或细胞上清液中)，以评估蛋白质的丰度和表达模式；(iii)作为临床测试程序的一部分，监视组织中的蛋白质水平，例如，来确定给定治疗方案的功效。
抗体分子可以与另一分子实体(典型地是标记物或治疗剂(例如，细胞毒性剂或细胞抑制剂)或部分)缀合。放射性同位素可用于诊断或治疗应用。
本发明提供了放射性标记的抗体分子及其标记方法。在一个实施例中，披露了标记抗体分子的方法。所述方法包括使抗体分子与螯合剂接触，从而产生缀合的抗体。
如上所述，抗体分子可以与治疗剂缀合。已经提到了治疗活性的放射性同位素。其他治疗剂的实例包括紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、美登木素生物碱例如美登醇(参见，例如美国专利号5,208,020)、CC-1065(参见，例如美国专利号5,475,092、5,585,499、5,846,545)及其类似物或同源物。治疗剂包括但不限于抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷基化剂(例如氮芥、苯丁酸氮芥、CC-1065、美法仑、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C和顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类(例如柔红霉素(旧称道诺霉素)和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素(旧称放线菌素)、博来霉素、光神霉素和安曲霉素(AMC))以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱、长春碱、紫杉醇和美登木素生物碱)。
在一个方面，本披露提供了一种提供特异性结合贯穿本披露的靶标的靶结合分子的方法。例如，靶结合分子是抗体分子。所述方法包括：提供包含非人蛋白的至少一部分的靶蛋白，所述部分与人靶蛋白的相应部分同源(至少70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同)，但相差至少一个氨基酸(例如，至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个氨基酸)；获得结合抗原的抗体分子；和评估结合剂在调节靶蛋白活性中的功效。所述方法可以进一步包括向人受试者施用结合剂(例如抗体分子)或衍生物(例如人源化抗体分子)。
本披露提供了编码全文所述的任何抗体分子的分离的核酸分子(即，多核苷酸)。还披露了包含核酸分子的载体及其宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
组合
本文所述的治疗方法可包括组合施用的两种或更多种其他治疗剂、程序或模式。
在一些实施例中，将TGF-β抑制剂(例如，NIS793)与PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子)组合施用。在一些实施例中，将TGF-β抑制剂与PD1抑制剂在同一天施用。在一些实施例中，在PD1抑制剂的施用开始后，施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，在抗PD1抑制剂的施用完成后，施用TGF-β抑制剂。
在一些实施例中，以介于1300mg与1500mg之间(例如，约1400mg)的剂量，例如每两周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于300mg至500mg之间(例如，400mg)的剂量，例如每四周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，以介于1300mg与1500mg之间(例如，约1400mg)的剂量，例如每两周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于200mg至400mg之间(例如，300mg)的剂量，例如每三周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，以介于2000mg与2200mg之间(例如，约2100mg)的剂量，例如每两周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于300mg至500mg之间(例如，400mg)的剂量，例如每四周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，以介于2000mg与2200mg之间(例如，约2100mg)的剂量，例如每两周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于200mg至400mg之间(例如，300mg)的剂量，例如每三周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，以介于2000mg与2200mg之间(例如，约2100mg)的剂量，例如每三周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于300mg至500mg之间(例如，400mg)的剂量，例如每四周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在一些实施例中，以介于2000mg与2200mg之间(例如，约2100mg)的剂量，例如每三周一次，施用TGF-β抑制剂(例如，NIS793)，并且以介于200mg至400mg之间(例如，300mg)的剂量，例如每三周一次，施用PD1抑制剂(例如，抗PD1抗体分子，例如斯巴达珠单抗)。
在某些实施例中，可以将本文所述的方法与其他治疗剂(包括抗体分子、化学治疗剂)、其他抗癌疗法(例如，靶向抗癌疗法、基因疗法、病毒疗法、RNA疗法骨髓移植、纳米疗法或溶瘤药)、细胞毒性剂、基于免疫的疗法(例如，细胞因子或基于细胞的免疫疗法)、外科手术(例如，乳房肿瘤切除术或乳房切除术)或放射程序、或前述中任何的组合中的一种或多种组合施用。另外的疗法可以是辅助疗法或新辅助疗法的形式。在一些实施例中，另外的疗法是酶抑制剂(例如，小分子酶抑制剂)或转移抑制剂。可以组合施用的示例性细胞毒性剂包括抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷基化剂、蒽环类药物、长春花生物碱、嵌入剂、能够干扰信号转导通路的试剂、促进细胞凋亡的试剂、蛋白酶体抑制剂和放射(例如局部或全身辐照(例如γ辐照))。在其他实施例中，另外的疗法是手术或放射，或它们的组合。在其他实施例中，另外的疗法是靶向PI3K/AKT/mTOR路径、HSP90抑制剂或微管蛋白抑制剂中的一者或多者的疗法。
可替代地，或与前述组合，本文所述的方法可与以下中的一种或多种施用或使用：免疫调节剂(例如共刺激分子的活化剂或抑制分子的抑制剂，例如免疫检查点分子)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或其他形式的细胞免疫疗法。
在某些实施例中，本文所述的组合与共刺激分子或抑制性分子(例如共抑制性配体或受体)的调节子施用或使用。
在一个实施例中，本文所述的组合与抑制性(或免疫检查点)分子PD-1、PD-L1、PD-L2和/或TGFβ的抑制剂组合施用或使用。在一个实施例中，所述抑制剂是与PD-1、PD-L1、PD-L2或TGFβ结合的抗体或抗体片段。
对于组合治疗，在一些实施例中，将TGF-β抑制剂与检查点抑制剂在同一天施用。在其他实施例中，在检查点抑制剂的施用完成之前施用TGF-β抑制剂。在另外的实施例中，在检查点抑制剂的施用完成之后施用TGF-β抑制剂。在一些实施例中，将TGF-β抑制剂与检查点抑制剂同时施用。在一些实施例中，给予TGF-β抑制剂直至(部分或完全)缓解。在一些实施例中，给予检查点抑制剂直至(部分或完全)缓解。
本披露的化合物可以在与一种或多种治疗剂(药物组合)或模式(例如，非药物疗法)的组合疗法中以治疗有效量施用。例如，其他癌症药剂可以发生协同效应。当本申请的化合物与其他疗法联合施用时，共同施用的化合物的剂量当然将根据所用的联合药物的类型、所用的特定药物、所治疗的病症等而变化。
化合物可以与其他药物疗法或治疗模式同时地(作为单个制剂或单独制剂)顺序地、分开地或在一段时间施用。一般而言，组合疗法设想在单个周期或疗程期间施用两种或更多种药物。治疗剂是例如化学化合物、肽、抗体、抗体片段或核酸，当将所述治疗剂与本披露的化合物组合施用于患者时，所述治疗剂具有治疗活性或增强治疗活性。
在一个方面，可以将TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与其他治疗剂(如其他抗癌剂、抗过敏剂、抗恶心剂(或抗呕剂)、止痛剂、细胞保护剂、及其组合)组合。
在一些实施例中，将TGFβ抑制剂与一种或多种第二药剂(选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、LAG-3抑制剂、细胞因子、A2A拮抗剂、GITR激动剂、TIM-3抑制剂、STING激动剂、和TLR7激动剂)组合施用，以治疗疾病(例如癌症)。
在另一个实施例中，将一种或多种化学治疗剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)，其中所述化学治疗剂包括但不限于阿那曲唑
Figure BDA0003757898430000681
比卡鲁胺
Figure BDA0003757898430000682
硫酸博来霉素
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白消安
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白消安注射液
Figure BDA0003757898430000685
卡培他滨
Figure BDA0003757898430000686
N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂
Figure BDA0003757898430000687
卡莫司汀
Figure BDA0003757898430000688
苯丁酸氮芥
Figure BDA0003757898430000689
顺铂
Figure BDA00037578984300006810
克拉屈滨
Figure BDA00037578984300006811
环磷酰胺(
Figure BDA00037578984300006812
或
Figure BDA00037578984300006813
)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷
Figure BDA00037578984300006814
阿糖胞苷脂质体注射液
Figure BDA00037578984300006815
达卡巴嗪
Figure BDA0003757898430000691
更生霉素(放线菌素D，Cosmegan)、盐酸柔红霉素
Figure BDA0003757898430000692
柠檬酸柔红霉素脂质体注射液
Figure BDA0003757898430000693
地塞米松、多西他赛
Figure BDA0003757898430000694
盐酸多柔比星
Figure BDA0003757898430000695
Figure BDA0003757898430000696
依托泊苷
Figure BDA0003757898430000697
磷酸氟达拉滨
Figure BDA0003757898430000698
5-氟尿嘧啶
Figure BDA0003757898430000699
氟他胺
Figure BDA00037578984300006910
替扎他滨(tezacitibine)、吉西他滨(二氟脱氧胞苷(difluorodeoxycitidine))、羟基脲
Figure BDA00037578984300006911
伊达比星
Figure BDA00037578984300006912
异环磷酰胺
Figure BDA00037578984300006913
伊立替康
Figure BDA00037578984300006914
L-天冬酰胺酶
Figure BDA00037578984300006915
亚叶酸钙、美法仑
Figure BDA00037578984300006916
6-巯基嘌呤
Figure BDA00037578984300006917
甲氨蝶呤
Figure BDA00037578984300006918
米托蒽醌
Figure BDA00037578984300006919
吉妥珠单抗(mylotarg)、紫杉醇
Figure BDA00037578984300006920
phoenix(Yttrium90/MX-DTPA)、喷司他汀、聚苯丙生(polifeprosan)20与卡莫司汀的植入物
Figure BDA00037578984300006921
柠檬酸他莫昔芬
Figure BDA00037578984300006922
替尼泊苷
Figure BDA00037578984300006923
6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉扎明
Figure BDA00037578984300006924
注射用盐酸拓扑替康
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长春碱
Figure BDA00037578984300006926
长春新碱
Figure BDA00037578984300006927
长春瑞滨
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表柔比星
Figure BDA00037578984300006929
奥沙利铂
Figure BDA00037578984300006930
依西美坦
Figure BDA00037578984300006931
来曲唑
Figure BDA00037578984300006932
和氟维司群
Figure BDA00037578984300006933
在其他实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种其他抗HER2抗体(例如，上文所述的曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、玛格妥昔单抗(margetuximab)、或HT-19)或与其他抗HER2缀合物(例如，ado-曲妥珠单抗-美坦新偶联物(emtansine)(也称为
Figure BDA00037578984300006934
或T-DM1))组合使用。
在其他实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种酪氨酸激酶抑制剂(包括但不限于EGFR抑制剂、Her3抑制剂、IGFR抑制剂、和Met抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。
例如，酪氨酸激酶抑制剂包括但不限于盐酸埃罗替尼(erlotinib)
Figure BDA00037578984300006935
利尼法尼(Linifanib)(N-[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯基]-N'-(2-氟-5-甲基苯基)脲，也称为ABT 869，可购自基因泰克公司(Genentech))；苹果酸舒尼替尼
Figure BDA0003757898430000701
柏舒替尼(Bosutinib)(4-[(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹啉-3-甲腈，也称为SKI-606，并且描述于美国专利号6,780,996中)；达沙替尼
Figure BDA0003757898430000702
帕唑帕尼
Figure BDA0003757898430000703
索拉非尼
Figure BDA0003757898430000704
凡德他尼(ZD6474)；和伊马替尼或甲磺酸伊马替尼(
Figure BDA0003757898430000705
和
Figure BDA0003757898430000706
表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂包括但不限于盐酸埃罗替尼(erlotinib)
Figure BDA0003757898430000707
吉非替尼
Figure BDA0003757898430000708
N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3″S″)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺，
Figure BDA0003757898430000709
)；凡德他尼(Vandetanib)
Figure BDA00037578984300007010
拉帕替尼
Figure BDA00037578984300007011
(3R,4R)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(BMS690514)；二盐酸卡奈替尼(CI-1033)；6-[4-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]苯基]-N-[(1R)-1-苯基乙基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(AEE788，CAS 497839-62-0)；木利替尼(Mubritinib)(TAK165)；培立替尼(EKB569)；阿法替尼(Afatinib)
Figure BDA00037578984300007012
来那替尼(Neratinib)(HKI-272)；N-[4-[[1-[(3-氟苯基)甲基]-1H-吲唑-5-基]氨基]-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-氨基甲酸，(3S)-3-吗啉基甲酯(BMS599626)；N-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(XL647，CAS781613-23-8)；和4-[4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚(PKI166，CAS187724-61-4)。
EGFR抗体包括但不限于西妥昔单抗
Figure BDA00037578984300007014
帕尼单抗
Figure BDA00037578984300007013
马妥珠单抗(EMD-72000)；尼妥珠单抗(Nimotuzumab)(hR3)；扎妥木单抗(Zalutumumab)；TheraCIM h-R3；MDX0447(CAS339151-96-1)；和ch806(mAb-806，CAS 946414-09-1)。
其他HER2抑制剂包括但不限于来那替尼(Neratinib)(HKI-272，(2E)-N-[4-[[3-氯-4-[(吡啶-2-基)甲氧基]苯基]氨基]-3-氰基-7-乙氧基喹啉-6-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺，并且描述于PCT公开号WO 05/028443)；拉帕替尼或二甲苯磺酸拉帕替尼
Figure BDA0003757898430000712
(3R,4R)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(BMS690514)；(2E)-N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺(BIBW-2992，CAS 850140-72-6)；N-[4-[[1-[(3-氟苯基)甲基]-1H-吲唑-5-基]氨基]-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-氨基甲酸、(3S)-3-吗啉基甲酯(BMS 599626，CAS 714971-09-2)；二盐酸卡奈替尼(PD183805或CI-1033)；和N-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(XL647，CAS 781613-23-8)。
HER3抑制剂包括但不限于LJM716、MM-121、AMG-888、RG7116、REGN-1400、AV-203、MP-RM-1、MM-111、和MEHD-7945A。
MET抑制剂包括但不限于卡博替尼(Cabozantinib)(XL184，CAS 849217-68-1)；氟列替布(Foretinib)(GSK1363089，以前称为XL880，CAS 849217-64-7)；替万替尼(Tivantinib)(ARQ197，CAS 1000873-98-2)；1-(2-羟基-2-甲基丙基)-N-(5-(7-甲氧基喹啉-4-基氧基)吡啶-2-基)-5-甲基-3-氧代-2-苯基-2,3-二氢-1H-吡唑-4-甲酰胺(AMG458)；克唑替尼(
Figure BDA0003757898430000711
PF-02341066)；(3Z)-5-(2,3-二氢-1H-吲哚-1-基磺酰基)-3-({3,5-二甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-1H-吡咯-2-基}亚甲基)-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮(SU11271)；(3Z)-N-(3-氯苯基)-3-({3,5-二甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-1H-吡咯-2-基}亚甲基)-N-甲基-2-氧代吲哚啉-5-磺酰胺(SU11274)；(3Z)-N-(3-氯苯基)-3-{[3,5-二甲基-4-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡咯-2-基]亚甲基}-N-甲基-2-氧代吲哚啉-5-磺酰胺(SU11606)；6-[二氟[6-(1-甲基-1H吡唑-4-基)-1,2,4-三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]甲基]-喹啉(JNJ38877605，CAS 943540-75-8)；2-[4-[1-(喹啉-6-基甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡嗪-6-基]-1H-吡唑-1-基]乙醇(PF04217903，CAS 956905-27-4)；N-((2R)-1,4-二噁烷-2-基甲基)-N-甲基-N'-[3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-氧代-5H-苯并[4,5]环庚并[1,2-b]吡啶-7-基]磺酰胺(MK2461，CAS 917879-39-1)；6-[[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1,2,4-三唑并[4,3-b]哒嗪3-基]硫代]-喹啉(SGX523，CAS 1022150-57-7)；和(3Z)-5-[[(2,6-二氯苯基)甲基]磺酰基]-3-[[3,5-二甲基-4-[[(2R)-2-(1-吡咯烷基甲基)-1-吡咯烷基]羰基]-1H-吡咯-2-基]亚甲基]-1,3-二氢-2H-吲哚-2-酮(PHA665752，CAS 477575-56-7)。
IGFR抑制剂包括但不限于BMS-754807、XL-228、OSI-906、GSK0904529A、A-928605、AXL1717、KW-2450、MK0646、AMG479、IMCA12、MEDI-573、和BI836845。参见例如，Yee,JNCI[国家癌症研究所杂志],104；975(2012)的综述。
在另一个实施例中，将TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种增殖信号传导通路抑制剂(包括但不限于MEK抑制剂、BRAF抑制剂、PI3K/Akt抑制剂、SHP2抑制剂、以及还有mTOR抑制剂和CDK抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。
例如，促分裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂包括但不限于XL-518(也称为GDC-0973、CAS号1029872-29-4，可从ACC集团(ACC Corp.)获得)；2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也称为CI-1040或PD184352，并描述于PCT公开号WO2000035436)；N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也称为PD0325901，并描述于PCT公开号WO 2002006213)；2,3-双[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亚甲基]-丁二腈(也称为U0126，并描述于美国专利号2,779,780)；N-[3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6-甲氧基苯基]-1-[(2R)-2,3-二羟基丙基]-环丙烷磺酰胺(也称为RDEA119或BAY869766，并描述于PCT公开号WO 2007014011)；(3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(乙基氨基)-8,9,16-三羟基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氢-1H-2-苯并氧杂环四癸炔-1,7(8H)-二酮](也称为E6201，并描述于PCT公开号WO 2003076424)；2'-氨基-3'-甲氧基黄酮(也称为PD98059，可从德国比亚芬股份有限公司(Biaffin GmbH&Co.,KG)获得)；(R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733，CAS 1035555-63-5)；匹玛舍替(Pimasertib)(AS-703026，CAS 1204531-26-9)；和二甲亚砜曲美替尼(GSK-1120212，CAS 1204531-25-80)。
BRAF抑制剂包括但不限于维莫非尼(Vemurafenib)(或
Figure BDA0003757898430000731
PLX-4032，CAS 918504-65-1)、GDC-0879、PLX-4720(可从赛门斯公司(Symansis)获得)、达拉菲尼(或GSK2118436)、LGX 818、CEP-32496、UI-152、RAF 265、瑞戈非尼(Regorafenib)(BAY 73-4506)、CCT239065、或索拉非尼(或甲苯磺酸索拉非尼或
Figure BDA0003757898430000732
)。
磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂包括但不限于4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也称为GDC0941、RG7321、GNE0941、皮特里昔布(Pictrelisib)、或匹替利司(Pictilisib)；并描述于PCT公开号WO09/036082和WO 09/055730)；托扎舍替(Tozasertib)(VX680或MK-0457，CAS 639089-54-6)；(5Z)-5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮(GSK1059615，CAS958852-01-2)；(1E,4S,4aR,5R,6aS,9aR)-5-(乙酰基氧基)-1-[(二-2-丙烯基氨基)亚甲基]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-八氢-11-羟基-4-(甲氧基甲基)-4a,6a-二甲基环戊[5,6]萘并[1,2-c]吡喃-2,7,10(1H)-三酮(PX866，CAS 502632-66-8)；8-苯基-2-(吗啉-4-基)-色原烯-4-酮(LY294002，CAS 154447-36-6)；(S)-N1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺(也称为BYL719或阿培利司)；2-(4-(2-(1-异丙基-3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧氮杂卓-9-基)-1H-吡唑-1-基)-2-甲基丙酰胺(也称为GDC0032、RG7604、或他塞利司(Taselisib))。
mTOR抑制剂包括但不限于坦罗莫司
Figure BDA0003757898430000733
地磷莫司(ridaforolimus)(正式地称为deferolimus，(1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-二羟基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五氧代-11,36-二氧杂-4-氮杂三环[30.3.1.04,9]三十六-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基环己基二甲基次膦酸酯，也称为AP23573和MK8669，并描述于PCT公开号WO 03/064383)；依维莫司(
Figure BDA0003757898430000741
或RAD001)；雷帕霉素(AY22989，
Figure BDA0003757898430000742
)；塞马莫德(simapimod)(CAS164301-51-3)；(5-{2,4-双[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(AZD8055)；2-氨基-8-[反式-4-(2-羟基乙氧基)环己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF04691502，CAS 1013101-36-4)；和N2-[1,4-二氧代-4-[[4-(4-氧代-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-2-基)吗啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精氨酰甘氨酰-L-α-天冬氨酰L-丝氨酸-，内盐(SF1126，CAS 936487-67-1)。
CDK抑制剂包括但不限于帕柏西利(也称为PD-0332991，
Figure BDA0003757898430000743
6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-{[5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮)。
在又另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种促凋亡剂(pro-apoptotics)(包括但不限于IAP抑制剂、BCL2抑制剂、MCL1抑制剂、TRAIL药剂、CHK抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。
例如，IAP抑制剂包括但不限于LCL161、GDC-0917、AEG-35156、AT406、和TL32711。IAP抑制剂的其他实例包括但不限于WO 04/005284、WO 04/007529、WO 05/097791、WO 05/069894、WO 05/069888、WO 05/094818、US 2006/0014700、US 2006/0025347、WO 06/069063、WO 06/010118、WO 06/017295、和WO 08/134679中披露的那些。
BCL-2抑制剂包括但不限于4-[4-[[2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-吗啉基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-[(三氟甲基)磺酰基]苯基]磺酰基]苯甲酰胺(也称为ABT-263，并描述于PCT公开号WO 09/155386)；四制癌素A；抗霉素；棉酚((-)BL-193)；奥巴妥拉(Obatoclax)；乙基-2-氨基-6-环戊基-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧乙基)-4H色酮-3-甲酸酯(HA14–1)；奥利默森(Oblimersen)(G3139，
Figure BDA0003757898430000752
)；Bak BH3肽；(-)-棉酚乙酸(AT-101)；4-[4-[(4'-氯[1,1'-联苯基]-2-基)甲基]-1-哌嗪基]-N-[[4-[[(1R)-3-(二甲基氨基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基]-苯甲酰胺(ABT-737，CAS 852808-04-9)；和那维托克莱克斯(Navitoclax)(ABT-263，CAS 923564-51-6)。
促凋亡受体激动剂(PARA)包括DR4(TRAILR1)和DR5(TRAILR2)，包括但不限于杜拉乐明(Dulanermin)(AMG-951，RhApo2L/TRAIL)；玛帕妥木单抗(Mapatumumab)(HRS-ETR1，CAS 658052-09-6)；来沙木单抗(Lexatumumab)(HGS-ETR2，CAS 845816-02-6)；Apomab
Figure BDA0003757898430000751
西他土珠(Conatumumab)(AMG655，CAS 896731-82-1)；和替加妥珠单抗(Tigatuzumab)(CS1008，CAS 946415-34-5，可从第一三共株式会社(Daiichi Sankyo)获得)。
检查点激酶(CHK)抑制剂包括但不限于7-羟基星形孢菌素(UCN-01)；6-溴-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(3R)-3-哌啶基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(SCH900776，CAS891494-63-6)；5-(3-氟苯基)-3-脲基噻吩-2-羧酸N-[(S)-哌啶-3-基]酰胺(AZD7762，CAS860352-01-8)；4-[((3S)-1-氮杂二环[2.2.2]辛-3-基)氨基]-3-(1H-苯并咪唑-2-基)-6-氯喹啉-2(1H)-酮(CHIR 124，CAS 405168-58-3)；7-氨基更生霉素(7-AAD)、Isogranulatimide、debromohymenialdisine；N-[5-溴-4-甲基-2-[(2S)-2-吗啉基甲氧基]-苯基]-N'-(5-甲基-2-吡嗪基)脲(LY2603618，CAS 911222-45-2)；萝卜硫素(CAS4478-93-7、4-甲基亚磺酰基丁基异硫氰酸盐)；9,10,11,12-四氢-9,12-环氧-1H-二吲哚[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]吡咯并[3,4-i][1,6]苯并二氮芳辛-1,3(2H)-二酮(SB-218078，CAS 135897-06-2)；和TAT-S216A(YGRKKRRQRRRLYRSPAMPENL(SEQ ID NO:318))、和CBP501((d-Bpa)sws(d-Phe-F5)(d-Cha)rrrqrr)。
在另外的实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种免疫调节剂(例如，共刺激分子的活化剂或免疫检查点分子的抑制剂中的一种或多种)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。
在某些实施例中，免疫调节剂是共刺激分子的活化剂。在一个实施例中，共刺激分子的激动剂选自OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配体的激动剂(例如，激动性抗体或其抗原结合片段、或可溶性融合物)。
GITR激动剂
在一些实施例中，将GITR激动剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，GITR激动剂是GWN323(诺华公司(Novartis))、BMS-986156、MK-4166或MK-1248(默克公司(Merck))、TRX518(利普治疗公司(Leap Therapeutics))、INCAGN1876(因赛特公司(Incyte)/艾吉纳斯公司(Agenus))、AMG228(美商安进公司(Amgen))或INBRX-110(印希彼公司(Inhibrx))。
示例性GITR激动剂
在一个实施例中，GITR激动剂是抗GITR抗体分子。在一个实施例中，GITR激动剂是抗GITR抗体分子，如题为“Compositions and Methods of Use for Augmented ImmuneResponse and Cancer Therapy[用于增强免疫应答和癌症治疗的组合物和方法]”的2016年4月14日公开的WO 2016/057846中所述的。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链和轻链可变区包含表5(例如，来自表5中披露的MAB7的重链和轻链可变区序列)中所示的氨基酸序列、或由表5中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，所述CDR根据卡巴特定义。在一些实施例中，所述CDR根据乔西亚定义。在一个实施例中，相对于氨基酸序列，或由核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)或缺失。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:109的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:111的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:113的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:114的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:116的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:118的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表5中。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:101具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:102具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:101的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:102的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:105的核苷酸序列、或与SEQ IDNO:105具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:106的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:106具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:105的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:106的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:103具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:104具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含：含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:107的核苷酸序列、或与SEQ IDNO:107具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:108的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:108具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:107的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:108的核苷酸序列编码的轻链。
本文所述的抗体分子可以通过载体、宿主细胞、和在WO2016/057846中描述的方法制得。
表5：示例性抗GITR抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430000781
Figure BDA0003757898430000791
Figure BDA0003757898430000801
其他示例性GITR激动剂
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是BMS-986156(百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb))，也称为BMS 986156或BMS986156。BMS-986156和其他抗GITR抗体披露于例如，US 9,228,016和WO 2016/196792中。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含以下的一种或多种：BMS-986156的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，在表6中所披露的。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是MK-4166或MK-1248(默克公司)。MK-4166、MK-1248、和其他抗GITR抗体披露于例如，US 8,709,424、WO 2011/028683、WO 2015/026684、和Mahne等人,Cancer Res.[癌症研究]2017；77(5):1108-1118。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含以下中的一种或多种：MK-4166或MK-1248的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是TRX518(利普治疗公司)。TRX518和其他抗GITR抗体披露于例如，US 7,812,135、US 8,388,967、US 9,028,823、WO 2006/105021、和Ponte J等人,(2010)Clinical Immunology[临床免疫学]；135:S96。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含以下中的一种或多种：TRX518的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是INCAGN1876(因赛特公司/艾吉纳斯公司)。INCAGN1876和其他抗GITR抗体披露于例如，US2015/0368349和WO 2015/184099中。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含以下中的一种或多种：INCAGN1876的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是AMG 228(美商安进公司)。AMG 228和其他抗GITR抗体披露于例如，US 9,464,139和WO 2015/031667中。在一个实施例中，抗GITR抗体分子包含以下的一种或多种：AMG 228的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗GITR抗体分子是INBRX-110(印希彼公司)。INBRX-110和其他抗GITR抗体披露于例如，US 2017/0022284和WO 2017/015623中。在一个实施例中，GITR激动剂包含以下中的一种或多种：INBRX-110的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，GITR激动剂(例如，融合蛋白)是MEDI 1873(英商梅迪缪思有限公司(MedImmune))，也称为MEDI1873。MEDI1873和其他GITR激动剂披露于例如US 2017/0073386、WO 2017/025610，以及Ross等人,Cancer Res[癌症研究]2016；76(14增刊):摘要nr 561。在一个实施例中，GITR激动剂包含MEDI 1873的IgG Fc结构域、功能性多聚化结构域、和糖皮质激素诱导的TNF受体配体(GITRL)的受体结合结构域中的一种或多种。
另外的已知GITR激动剂(例如，抗GITR抗体)包括例如在WO 2016/054638中描述的那些。
在一个实施例中，抗GITR抗体是与本文所述的抗GITR抗体之一竞争与GITR上的相同表位结合和/或结合至GITR上的相同表位的抗体。
在一个实施例中，GITR激动剂是活化GITR信号传导通路的肽。在一个实施例中，GITR激动剂是与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的免疫黏附素结合片段(例如，包含GITRL的细胞外或GITR的结合部分的免疫黏附素结合片段)。
表6：其他示例性抗GITR抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430000821
在某些实施例中，免疫调节剂是免疫检查点分子的抑制剂。在一个实施例中，免疫调节剂是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ的抑制剂。在一个实施例中，免疫检查点分子的抑制剂抑制PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4、或其任何组合。
抑制性分子的抑制可以在DNA、RNA或蛋白水平进行。在一些实施例中，抑制性核酸(例如，dsRNA、siRNA或shRNA)可以用于对抑制性分子的表达进行抑制。在其他实施例中，抑制信号的抑制剂是多肽，例如，可溶性配体(例如，PD-1-Ig或CTLA-4Ig)或与抑制性分子结合的抗体或其抗原结合片段；例如，与PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFRβ、或其组合结合的抗体或其片段(在本文中也称为“抗体分子”)。
在一个实施例中，抗体分子是完全抗体或其片段(例如，Fab、F(ab')2、Fv、或单链Fv片段(scFv))。在又其他实施例中，抗体分子具有重链恒定区(Fc)，所述重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、和IgE的重链恒定区；特别地，选自例如IgG1、IgG2、IgG3、和IgG4的重链恒定区，更特别地，IgG1或IgG4(例如，人IgG1或IgG4)的重链恒定区。在一个实施例中，重链恒定区是人IgG1或人IgG4。在一个实施例中，将恒定区改变(例如突变)以修饰抗体分子的特性(例如，以增加或减少Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数目、效应细胞功能、或补体功能中的一种或多种)。
在某些实施例中，抗体分子处于双特异性或多特异性抗体分子的形式。在一个实施例中，所述双特异性抗体分子具有针对PD-1或PD-L1的第一结合特异性，和第二结合特异性，例如针对TGFβ、TIM-3、LAG-3、或PD-L2的第二结合特异性。在一个实施例中，双特异性抗体分子与PD-1或PD-L1和TIM-3结合。在另一个实施例中，所述双特异性抗体分子与PD-1或PD-L1和TGFβ结合。在另一个实施例中，所述双特异性抗体分子与PD-1和TGFβ结合。前述分子的任何组合可以在多特异性抗体分子(例如，包括针对PD-1或PD-1的第一结合特异性，以及针对TGFβ、TIM-3、LAG-3、或PD-L2中的两种或更多种的第二和第三结合特异性的三特异性抗体)中制备。
在某些实施例中，免疫调节剂是PD-1(例如，人PD-1)的抑制剂。在另一个实施例中，免疫调节剂是PD-L1(例如，人PD-L1)的抑制剂。在一个实施例中，PD-1或PD-L1的抑制剂是PD-1或PD-L1的抗体分子。PD-1或PD-L1抑制剂可以单独施用、或与其他免疫调节剂组合施用，例如与TGFβ、LAG-3、TIM-3或CTLA4的抑制剂组合施用。在示例性实施例中，将PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗TGFβ、或抗PD-1或PD-L1抗体分子)与LAG-3抑制剂(例如，抗LAG-3抗体分子)组合施用。在另一个实施例中，将TGFβ、PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗TGFβ、或抗PD-1或PD-L1抗体分子)与TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用。在又其他实施例中，将TGFβ、PD-1或PD-L1的抑制剂(例如，抗TGFβ或抗PD-L1抗体分子)与LAG-3抑制剂(例如，抗LAG-3抗体分子)和TIM-3抑制剂(例如，抗TIM-3抗体分子)组合施用。
免疫调节剂与PD-1抑制剂(例如，PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4和/或TGFR中的一种或多种)的其他组合也包含在本披露内。本领域已知的或本文披露的任何抗体分子均可用于上述检查点分子抑制剂的组合中。
CTLA-4抑制剂
在一些实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与CTLA-4抑制剂组合使用以治疗疾病(例如，癌症)。在一些实施例中，PD-1抑制剂选自艾匹利木单抗(Ipilimumab)(MDX-010、MDX-101、或Yervoy，百时美施贵宝公司)、曲美利木单抗(tremelilumab)(替西木单抗(ticilimumab)，辉瑞公司/阿斯利康公司)、AGEN1181(艾吉纳斯公司)、泽弗利单抗(Zalifrelimab)(AGEN1884，艾吉纳斯公司)、IBI310(信达生物公司(Innovent Biologics))，
LAG-3抑制剂
在一些实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与LAG-3抑制剂组合使用以治疗疾病(例如，癌症)。在一些实施例中，LAG-3抑制剂选自LAG525(诺华公司)、BMS-986016(百时美施贵宝公司)或TSR-033(泰萨罗公司)。
示例性LAG-3抑制剂
在一个实施例中，LAG-3抑制剂是抗LAG-3抗体分子。在一个实施例中，LAG-3抑制剂是抗LAG-3抗体分子，如题为“Antibody Molecules to LAG-3and Uses Thereof[LAG-3的抗体分子及其用途]”的2015年9月17日公开的US 2015/0259420中披露的。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链和轻链可变区包含表7(例如，来自表7中披露的BAP050-克隆I、或BAP050-克隆J的重链和轻链可变区序列)中所示的氨基酸序列、或由表7中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，这些CDR根据卡巴特定义(例如，如表7中所列出的)。在一些实施例中，这些CDR根据乔西亚定义(例如，如表7中所列出的)。在一些实施例中，这些CDR根据卡巴特和乔西亚二者的组合CDR定义(例如，如表7中所列出的)。在一个实施例中，VH CDR1的卡巴特和乔西亚CDR的组合包含氨基酸序列GFTLTNYGMN(SEQ ID NO:122)。在一个实施例中，相对于表7中所示的氨基酸序列，或由表7中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)或缺失。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:123的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:124的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:125的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:132的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:133的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:134的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表7中。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有由SEQ ID NO:158或159的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:160或161的核苷酸序列编码的VHCDR2、和由SEQ ID NO:162或163的核苷酸序列编码的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO:168或169的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:170或171的核苷酸序列编码的VLCDR2、和由SEQ ID NO:172或173的核苷酸序列编码的VLCDR3的VL，各自披露于表7中。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有由SEQ ID NO:180或159的核苷酸序列编码的VHCDR1、由SEQ ID NO:181或161的核苷酸序列编码的VHCDR2、和由SEQ ID NO:182或163的核苷酸序列编码的VHCDR3的VH；以及含有由SEQ ID NO:168或169的核苷酸序列编码的VLCDR1、由SEQ ID NO:170或171的核苷酸序列编码的VLCDR2、和由SEQ ID NO:172或173的核苷酸序列编码的VLCDR3的VL，各自披露于表7中。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:128的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:128具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:140的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:140具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:146的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:146具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:152的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:152具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:128的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:140的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:146的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:152的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:129或130的核苷酸序列，或与SEQID NO:129或130具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:141或142的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:141或142具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:147或148的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:147或148具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:153或154的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:153或154具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:129或130的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:141或142的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:147或148的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:153或154的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:131的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:131具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:143的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:143具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:149的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:149具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:155的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:155具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:131的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:143的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:149的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:155的氨基酸序列的轻链。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:138或139的核苷酸序列，或与SEQID NO:138或139具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:144或145的核苷酸序列，或与SEQ IDNO:144或145具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:150或151的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:150或151具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:156或157的核苷酸序列，或与SEQ ID NO:156或157具有至少85％、90％、95％、或99％或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:138或139的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:144或145的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:150或151的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:156或157的核苷酸序列编码的轻链。
本文所述的抗体分子可以通过载体、宿主细胞、和在US 2015/0259420中描述的方法制得。
表7.示例性抗LAG-3抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430000881
Figure BDA0003757898430000891
Figure BDA0003757898430000901
Figure BDA0003757898430000911
Figure BDA0003757898430000921
Figure BDA0003757898430000931
Figure BDA0003757898430000941
Figure BDA0003757898430000951
Figure BDA0003757898430000961
Figure BDA0003757898430000971
Figure BDA0003757898430000981
其他示例性LAG-3抑制剂
在一个实施例中，LAG-3抑制剂是抗LAG-3抗体分子。在一个实施例中，LAG-3抑制剂是BMS-986016(百时美施贵宝公司)，也称为BMS986016。BMS-986016和其他抗LAG-3抗体披露于WO 2015/116539和US 9,505,839中。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含以下中的一种或多种：BMS-986016的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表8中所披露的。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子是TSR-033(泰萨罗公司)。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含以下的一种或多种：TSR-033的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子是IMP731或GSK2831781(GSK公司和普瑞马生物医药公司(Prima BioMed))。IMP731和其他抗LAG-3抗体披露于WO 2008/132601和US 9,244,059中。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含以下的一种或多种：IMP731的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，在表8中所披露的。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含以下中的一种或多种：GSK2831781的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子是IMP761(普瑞马生物医药公司)。在一个实施例中，抗LAG-3抗体分子包含以下的一种或多种：IMP761的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
其他已知的抗LAG-3抗体包括例如WO 2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO 2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839中描述的那些。
在一个实施例中，抗LAG-3抗体是与本文所述的抗LAG-3抗体之一竞争与LAG-3上的相同表位结合和/或结合至LAG-3上的相同表位的抗体。
在一个实施例中，抗LAG-3抑制剂是可溶性LAG-3蛋白质，例如，IMP321(普瑞马生物医药公司)，例如，如披露于WO 2009/044273中。
表8.其他示例性抗LAG-3抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430000991
Figure BDA0003757898430001001
TIM-3抑制剂
在某些实施例中，免疫检查点分子的抑制剂是TIM-3的抑制剂。在一些实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与TIM-3抑制剂组合使用以治疗疾病(例如，癌症)。在一些实施例中，TIM-3抑制剂是MGB453(诺华公司)、LY3321367(礼来公司(Eli Lilly))、Sym023(Symphogen公司)、BGB-A425(百济神州公司)、INCAGN-2390(艾吉纳斯公司/因赛特公司)、MBS-986258(BMS/五柱公司(Five Prime))、RO-7121661(罗氏公司)、LY-3415244(礼来公司)、或TSR-022(泰萨罗公司)。
示例性TIM-3抑制剂
在一个实施例中，TIM-3抑制剂是抗TIM-3抗体分子。在一个实施例中，TIM-3抑制剂是抗TIM-3抗体分子，如题为“Antibody Molecules to TIM-3and Uses Thereof[TIM-3的抗体分子及其用途]”的2015年8月6日公开的US 2015/0218274中披露的。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个互补决定区(CDR)(或总体上全部CDR)，所述重链和轻链可变区包含表9(例如，来自表9中披露的ABTIM3-hum11、或ABTIM3-hum03的重链和轻链可变区序列)中所示的氨基酸序列、或由表9中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一些实施例中，这些CDR根据卡巴特定义(例如，如表9中所列出的)。在一些实施例中，这些CDR根据乔西亚定义(例如，如表9中所列出的)。在一个实施例中，相对于表9中所示的氨基酸序列，或由表9中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)或缺失。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:189的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:190的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:191的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:198的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:199的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:200的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表9中。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:189的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:208的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:191的VHCDR3氨基酸序列的重链可变区(VH)；以及含有SEQ ID NO:198的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:199的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ IDNO:200的VLCDR3氨基酸序列的轻链可变区(VL)，各自披露于表9中。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:194的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:194具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:204的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:204具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:210的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:210具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VH。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:214的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:214具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:194的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:204的氨基酸序列的VL。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:210的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:214的氨基酸序列的VL。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:195的核苷酸序列、或与SEQ IDNO:195具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:205的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:205具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:211的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:211具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VH。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ IDNO:215的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:215具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:195的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:205的核苷酸序列编码的VL。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:211的核苷酸序列编码的VH和由SEQ ID NO:215的核苷酸序列编码的VL。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:196的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:196具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:206的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:206具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:212的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:212具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的重链。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:216的氨基酸序列、或与SEQ ID NO:216具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:196的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的轻链。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含：含有SEQ ID NO:212的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:216的氨基酸序列的轻链。
在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:197的核苷酸序列、或与SEQ IDNO:197具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:207的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:207具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQ ID NO:213的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:213具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的重链。在一个实施例中，抗体分子包含：由SEQID NO:217的核苷酸序列、或与SEQ ID NO:217具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:197的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:207的核苷酸序列编码的轻链。在一个实施例中，抗体分子包含由SEQ ID NO:213的核苷酸序列编码的重链和由SEQ ID NO:217的核苷酸序列编码的轻链。
本文所述的抗体分子可以通过载体、宿主细胞、和在US2015/0218274中描述的方法制得。
表9.示例性抗TIM-3抗体分子的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430001031
Figure BDA0003757898430001041
Figure BDA0003757898430001051
Figure BDA0003757898430001061
Figure BDA0003757898430001071
其他示例性TIM-3抑制剂
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是TSR-022(安奈普泰斯生物有限公司(AnaptysBio)/泰萨罗公司)。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：TSR-022的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：APE5137、或APE5121的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列，例如，如表10中所披露的。APE5137、APE5121、和其他抗TIM-3抗体披露于WO 2016/161270中。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是抗体克隆F38-2E2。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：F38-2E2的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是LY3321367(礼来制药公司(Eli Lilly))。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：LY3321367的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是Sym023(Symphogen公司)。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：Sym023的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是BGB-A425(百济神州公司(Beigene))。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：BGB-A425的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是INCAGN-2390(艾吉纳斯公司/因赛特公司(Agenus/Incyte))。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：INCAGN-2390的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子是BMS-986258(BMS/五柱公司)。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：BMS-986258的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体或抑制剂分子是RO-7121661(罗氏公司)。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：RO-7121661的TIM-3结合臂的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体或抑制剂分子是LY-3415244(礼来公司)。在一个实施例中，抗TIM-3抗体分子包含以下中的一种或多种：LY-3415244的TIM-3结合臂的CDR序列(或总体上全部CDR序列)、重链可变区序列和/或轻链可变区序列、或重链序列和/或轻链序列。
其他已知的抗TIM-3抗体包括例如，在WO 2016/111947、WO 2016/071448、WO2016/144803、US 8,552,156、US 8,841,418、和US 9,163,087中描述的那些。
在一个实施例中，抗TIM-3抗体是与本文所述的抗TIM-3抗体之一竞争与TIM-3上的相同表位结合和/或结合至TIM-3上的相同表位的抗体。
表10.其他示例性抗TIM-3抗体分子的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430001091
Figure BDA0003757898430001101
细胞因子
在又另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种细胞因子(包括但不限于干扰素、IL-2、IL-15、IL-7、或IL21)组合使用。在某些实施例中，将TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与IL-15/IL-15Ra复合物组合施用。在一些实施例中，IL-15/IL-15Ra复合物选自NIZ985(诺华公司)、ATL-803(亚拉斯托公司(Altor))或CYP0150(赛腾制药(Cytune))。
示例性IL-15/IL-15Ra复合物
在一个实施例中，所述细胞因子是与可溶形式的IL-15受体α(IL-15Ra)复合的IL-15。IL-15/IL-15Ra复合物可以包含共价或非共价结合至IL-15Ra的可溶形式的IL-15。在具体的实施例中，人IL-15非共价地与可溶形式的IL-15Ra结合。在特定实施例中，配制品的人IL-15包含表11中的SEQ ID NO:222的氨基酸序列或与SEQ ID NO:222具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列，并且可溶形式的人IL-15Ra包含表11中的SEQID NO:223的氨基酸序列或与SEQ ID NO:223具有至少85％、90％、95％、或99％、或更高同一性的氨基酸序列，如WO 2014/066527)中所述。本文所述的分子可以通过载体、宿主细胞、和在WO 2007084342中描述的方法制得。
表11.示例性IL-15/IL-15Ra复合物的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430001102
其他示例性IL-15/IL-15Ra复合物
在一个实施例中，IL-15/IL-15Ra复合物是ALT-803(IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白(IL-15N72D:IL-15RaSu/Fc可溶性复合物))。ALT-803描述于WO 2008/143794中。在一个实施例中，IL-15/IL-15Ra Fc融合蛋白包含如表12中所披露的序列。
在一个实施例中，IL-15/IL-15Ra复合物包含与IL-15Ra的sushi结构域融合的IL-15(CYP0150，赛腾制药)。IL-15Ra的sushi结构域是指在IL-15Ra的信号肽之后的第一半胱氨酸残基处开始并且在所述信号肽之后的第四个半胱氨酸残基处结束的结构域。与IL-15Ra的sushi结构域融合的IL-15的复合物描述于WO 2007/04606和WO 2012/175222中。在一个实施例中，IL-15/IL-15Ra sushi结构域融合物包含如在表12中所披露的序列。
表12其他示例性IL-15/IL-15Ra复合物的氨基酸序列
Figure BDA0003757898430001111
在又另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种toll样受体(TLR，例如TLR7、TLR8、TLR9)的激动剂组合使用以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，将本披露的化合物可以与TLR7激动剂或TLR7激动剂缀合物组合使用。
在一些实施例中，TLR7激动剂包含国际申请公开号WO2011/049677中所披露的化合物。在一些实施例中，TLR7激动剂包含3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦酰基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸。在一些实施例中，TLR7激动剂包含具有以下式的化合物：
Figure BDA0003757898430001121
在另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种血管生成抑制剂组合使用以治疗癌症，例如：贝伐珠单抗
Figure BDA0003757898430001122
阿西替尼(axitinib)
Figure BDA0003757898430001123
丙氨酸布立尼布(Brivanib alaninate)(BMS-582664，(S)-((R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙-2-基)2-氨基丙酸)；索拉非尼
Figure BDA0003757898430001124
帕唑帕尼
Figure BDA0003757898430001125
苹果酸舒尼替尼
Figure BDA0003757898430001126
西地尼布(Cediranib)(AZD2171，CAS288383-20-1)；维加特(Vargatef)(BIBF1120，CAS 928326-83-4)；氟列替布(Foretinib)(GSK1363089)；替拉替尼(Telatinib)(BAY57-9352，CAS 332012-40-5)；阿帕替尼(Apatinib)(YN968D1，CAS811803-05-1)；伊马替尼(Imatinib)
Figure BDA0003757898430001127
普纳替尼(Ponatinib)(AP24534，CAS943319-70-8)；替沃扎尼(Tivozanib)(AV951，CAS 475108-18-0)；瑞戈非尼(Regorafenib)(BAY73-4506，CAS 755037-03-7)；瓦他拉尼二盐酸盐(Vatalanib dihydrochloride)(PTK787，CAS 212141-51-0)；布立尼布(Brivanib)(BMS-540215，CAS 649735-46-6)；凡德他尼(
Figure BDA0003757898430001128
或AZD6474)；莫特塞尼二磷酸盐(Motesanib diphosphate)(AMG706，CAS857876-30-3，N-(2,3-二氢-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，描述于PCT公开号WO02/066470中)；多韦替尼二乳酸(Dovitinib dilacticacid)(TKI258，CAS 852433-84-2)；林夫尼(Linfanib)(ABT869，CAS 796967-16-3)；卡博替尼(XL184，CAS 849217-68-1)；来他替尼(Lestaurtinib)(CAS111358-88-4)；N-[5-[[[5-(1,1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(BMS38703，CAS345627-80-7)；(3R,4R)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(BMS690514)；N-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(XL647，CAS781613-23-8)；4-甲基-3-[[1-甲基-6-(3-吡啶基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺(BHG712，CAS 940310-85-0)；或阿普西柏
Figure BDA0003757898430001131
在另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种热休克蛋白抑制剂组合使用以治疗癌症，例如：坦螺旋霉素(Tanespimycin)(17-烯丙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素，也称为KOS-953和17-AAG，可从西格玛公司(SIGMA)获得，并描述于美国专利号4,261,989中)；瑞他霉素(Retaspimycin)(IPI504)、加特司匹(Ganetespib)(STA-9090)；[6-氯-9-(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基甲基)-9H-嘌呤-2-基]胺(BIIB021或-CNF2024，CAS848695-25-0)；反式-4-[[2-(氨基羰基)-5-[4,5,6,7-四氢-6,6-二甲基-4-氧代-3-(三氟甲基)-1H-吲唑-1-基]苯基]氨基]环己基甘氨酸酯(SNX5422或PF04929113，CAS 908115-27-5)；5-[2,4-二羟基-5-(1-甲基乙基)苯基]-N-乙基-4-[4-(4-吗啉基甲基)苯基]-3-异噁唑甲酰胺(AUY922，CAS747412-49-3)；或17-二甲基氨基乙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)。
在又另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与一种或多种HDAC抑制剂或其他表观遗传修饰剂组合使用。示例性HDAC抑制剂包括但不限于伏立诺他(Voninostat)
Figure BDA0003757898430001132
洛米迪星(Romidepsin)
Figure BDA0003757898430001133
曲古抑菌素A(Treichostatin A)(TSA)；Oxamflatin；伏立诺他(Vorinostat)
Figure BDA0003757898430001134
辛二酰苯胺异羟肟酸)；Pyroxamide(香柏酰基(syberoyl)-3-氨基吡啶酰胺异羟肟酸)；TrapoxinA(RF-1023A)；Trapoxin B(RF-10238)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-O-甲基-D-酪氨酰-L-异亮氨酰基-L-脯氨酰](Cyl-1)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-O-甲基-D-酪氨酰-L-异亮氨酰基-(2S)-2-哌啶羰基](Cyl-2)；环[L-丙氨酰-D-丙氨酰-(2S)-η-氧代-L-α-氨基环氧乙烷辛酰基-D-脯氨酰](HC-毒素)；环[(αS,2S)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-D-苯基丙氨酰-L-亮氨酰基-(2S)-2-哌啶羰基](WF-3161)；氯洁霉素(Chlamydocin)((S)-环(2-甲基丙氨酰-L-苯基丙氨酰-D-脯氨酰-η-氧代-L-α-氨基环氧乙烷辛酰基)；组蛋白脱乙酰酶抑制剂(Apicidin)(环(8-氧代-L-2-氨基癸酰基-1-甲氧基-L-色氨酰基-L-异亮氨酰基-D-2-哌啶羰基)；洛米迪星(
Figure BDA0003757898430001141
FR-901228)；4-苯基丁酸酯；Spiruchostatin A；Mylproin(丙戊酸)；恩诺司他(Entinostat)(MS-275，N-(2-氨基苯基)-4-[N-(吡啶-3-基-甲氧基羰基)-氨基-甲基]-苯甲酰胺)；Depudecin(4,5:8,9-双酐-1,2,6,7,11-五脱氧-D-苏式-D-ido-十一-1,6-二烯醇)；4-(乙酰基氨基)-N-(2-氨基苯基)-苯甲酰胺(也称为CI-994)；N1-(2-氨基苯基)-N8-苯基-辛二酰胺(也称为BML-210)；4-(二甲基氨基)-N-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)苯甲酰胺(也称为M344)；(E)-3-(4-(((2-(1H-吲哚-3-基)乙基)(2-羟基乙基)氨基)-甲基)苯基)-N-羟基丙烯酰胺；帕比司他
Figure BDA0003757898430001142
莫诺司他(Mocetinostat)和贝利司他(也称为PXD101、
Figure BDA0003757898430001143
或(2E)-N-羟基-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酰胺)或西达本胺(chidamide)(也称为CS055或HBI-8000，(E)-N-(2-氨基-5-氟苯基)-4-((3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)甲基)苯甲酰胺)。其他表观修饰剂包括但不限于EZH2的抑制剂(zeste同源物2的增强剂)、EED(胚胎外胚层发育)或LSD1(赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1A或KDM1A)。
在又另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶(IDO)(例如，英多莫德(Indoximod)(也称为NLG-8189)、α-环己基-5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-乙醇(也称为NLG919)或(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亚硝基亚甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺(也称为INCB024360))的一种或多种抑制剂组合使用，以治疗癌症。
嵌合抗原受体
本披露提供TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)，用于在与过继免疫疗法方法和试剂(如嵌合抗原受体(CAR)免疫效应细胞(例如T细胞)、或嵌合TCR转导的免疫效应细胞(例如，T细胞)组合中使用。本节描述了通常用于与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合的CAR技术，并且描述了CAR试剂(例如，细胞和组合物)和方法。
一般而言，本披露的方面涉及或包括编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，其中所述CAR包含与如本文所述的肿瘤抗原结合的抗原结合结构域(例如，抗体或抗体片段、TCR或TCR片段)、跨膜结构域(例如，本文所述的跨膜结构域)、和细胞内信号传导结构域(例如，本文所述的细胞内信号传导结构域)(例如，包含共刺激结构域(例如，本文所述的共刺激结构域)的细胞内信号传导结构域和/或初级信号传导结构域(例如，本文所述的初级信号传导结构域)。在其他方面，本披露包括：含有上述核酸和由此类核酸分子编码的分离的蛋白质的宿主细胞。与本披露有关的CAR核酸构建体、编码的蛋白质、含有的载体、宿主细胞、药物组合物以及施用和治疗的方法在国际专利申请公开号WO 2015142675中详细地披露。
在一方面，本披露涉及编码嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，其中所述CAR包含与支持肿瘤的抗原(例如，如本文所述的支持肿瘤的抗原)结合的抗原结合结构域(例如，抗体或抗体片段、TCR或TCR片段)、跨膜结构域(例如，本文所述的跨膜结构域)、和细胞内信号传导结构域(例如，本文所述的细胞内信号传导结构域)(例如，包含共刺激结构域(例如，本文所述的共刺激结构域)的细胞内信号传导结构域和/或初级信号传导结构域(例如，本文所述的级信号传导结构域)。在一些实施例中，支持肿瘤的抗原是存在于基质细胞或骨髓源性抑制细胞(MDSC)上的抗原。在其他方面，本披露的特征在于由此类核酸编码的多肽以及含有此类核酸和/或多肽的宿主细胞。
可替代地，本披露的方面涉及编码嵌合T细胞受体(TCR)(包含TCRα和/或TCRβ可变结构域，针对本文所述的癌症抗原具有特异性)的分离的核酸。参见例如，Dembic等人,Nature[自然],320,232-238(1986)，Schumacher,Nat.Rev.Immunol.[免疫学自然综述],2,512-519(2002)，Kershaw等人,Nat.Rev.Immunol.[免疫学自然综述],5,928-940(2005)，Xue等人,Clin.Exp.Immunol.[临床与实验免疫学],139,167-172(2005)，Rossig等人,Mol.Ther.[分子疗法],10,5-18(2004)，以及Murphy等人,Immunity[免疫学],22,403-414(2005)；Morgan等人J.Immunol.[免疫学杂志],171,3287-3295(2003)，Hughes等人,Hum.Gene Ther.[人类基因治疗],16,1-16(2005)，Zhao等人,J.Immunol.[免疫学杂志],174,4415-4423(2005)，Roszkowski等人,Cancer Res.[癌症研究],65,1570-1576(2005)，以及Engels等人,Hum.Gene Ther.[人类基因治疗],16,799-810(2005)；US 2009/03046557。此类嵌合TCR可以识别例如癌症抗原，如MART-1、gp-100、p53、和NY-ESO-1、MAGEA3/A6、MAGEA3、SSX2、HPV-16E6或HPV-16E7。在其他方面，本披露的特征在于由此类核酸编码的多肽以及含有此类核酸和/或多肽的宿主细胞。
可以是CAR的一部分的不同组分的非限制性实例的序列在表11a中列出，其中“aa”代表氨基酸，并且“na”代表编码相应肽的核酸。
表11a.CAR的不同组分的序列(aa–氨基酸序列，na–核酸序列)。
Figure BDA0003757898430001161
Figure BDA0003757898430001171
Figure BDA0003757898430001181
Figure BDA0003757898430001191
Figure BDA0003757898430001201
Figure BDA0003757898430001211
Figure BDA0003757898430001221
靶标
本披露提供细胞，例如包含或在任何时间包含如本文所述的gRNA分子或CRISPR系统的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞)，将这些免疫效应细胞进一步工程化以含有将免疫效应细胞导向不希望的细胞(例如，癌细胞)的一个或多个CAR。这通过CAR上的抗原结合结构域实现，所述抗原结合结构域对癌症相关抗原具有特异性。存在两类可以通过本披露的CAR靶向的癌症相关抗原(肿瘤抗原)：(1)在癌细胞表面上表达的癌症相关抗原；和(2)本身在细胞内的癌症相关抗原，然而，这种抗原(肽)的片段通过MHC(主要组织相容性复合物)呈递在癌细胞的表面上。
在一些实施例中，所述肿瘤抗原选自以下中的一种或多种：CD19；CD123；CD22；CD30；CD171；CS-1(也称为CD2亚群1、CRACC、SLAMF7、CD319、以及19A24)；C型凝集素样分子- 1(CLL-1或CLECL1)；CD33；表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)；神经节苷脂G2(GD2)；神经节苷脂GD3(aNeu5Ac(2-8)aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer)；TNF受体家族成员B细胞成熟(BCMA)；Tn抗原((Tn Ag)或(GalNAcα-Ser/Thr))；前列腺特异性膜抗原(PSMA)；受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)；Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)；肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)；CD38；CD44v6；癌胚抗原(CEA)；上皮细胞粘附分子(EPCAM)；B7H3(CD276)；KIT(CD117)；白细胞介素-13受体亚基α-2(IL-13Ra2或CD213A2)；间皮素；白细胞介素11受体α(IL-11Ra)；前列腺干细胞抗原(PSCA)；蛋白酶丝氨酸21(睾蛋白或PRSS21)；血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)；Lewis(Y)抗原；CD24；血小板衍生的生长因子受体β(PDGFR-β)；阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)；CD20；叶酸受体α；受体酪氨酸蛋白激酶ERBB2(Her2/neu)；黏蛋白1，细胞表面相关的(MUC1)；表皮生长因子受体(EGFR)；神经细胞粘附分子(NCAM)；前列腺酶；前列腺酸性磷酸酶(PAP)；突变的延伸因子2(ELF2M)；肝配蛋白B2；成纤维细胞活化蛋白α(FAP)；胰岛素样生长因子1受体(IGF-I受体)，碳酸酐酶IX(CAIX)；蛋白酶体(Prosome，Macropain)亚基，β型，9(LMP2)；糖蛋白100(gp100)；由断裂点簇集区(BCR)和Abelson鼠白血病病毒致癌基因同源物1(Abl)组成的致癌基因融合蛋白(bcr-abl)；酪氨酸酶；肝配蛋白A型受体2(EphA2)；岩藻糖基GM1；唾液酸Lewis粘附分子(sLe)；神经节苷脂GM3(aNeu5Ac(2-3)bDGalp(1-4)bDGlcp(1-1)Cer)；转谷氨酰胺酶5(TGS5)；高分子量-黑素瘤相关抗原(HMWMAA)；o-乙酰基-GD2神经节苷脂(OAcGD2)；叶酸受体β；肿瘤内皮标记1(TEM1/CD248)；肿瘤内皮标记7相关的(TEM7R)；密封蛋白6(CLDN6)；促甲状腺激素受体(TSHR)；G蛋白偶联受体C类5组，成员D(GPRC5D)；染色体X可读框61(CXORF61)；CD97；CD179a；间变性淋巴瘤激酶(ALK)；聚唾液酸；胎盘特异性1(PLAC1)；globoH糖基神经酰胺(GloboH)的六糖部分；乳腺分化抗原(NY-BR-1)；尿溶蛋白2(UPK2)；甲型肝炎病毒细胞受体1(HAVCR1)；肾上腺素受体β3(ADRB3)；泛连接蛋白3(PANX3)；G蛋白偶联受体20(GPR20)；淋巴细胞抗原6复合物，基因座K 9(LY6K)；嗅觉受体51E2(OR51E2)；TCRγ替代性阅读框蛋白(TARP)；肾母细胞瘤蛋白(WT1)；癌/睾丸抗原1(NY-ESO-1)；癌/睾丸抗原2(LAGE-1a)；黑色素瘤相关抗原1(MAGE-A1)；ETS易位变异基因6，位于染色体12p上(ETV6-AML)；精子蛋白17(SPA17)；X抗原家族，成员1A(XAGE1)；血管生成素结合细胞表面受体2(Tie 2)；黑素瘤癌睾丸抗原-1(MAD-CT-1)；黑素瘤癌睾丸抗原-2(MAD-CT-2)；Fos相关的抗原1；肿瘤蛋白p53(p53)；p53突变体；前列腺特异性蛋白(prostein)；存活蛋白(surviving)；端粒酶；前列腺癌肿瘤抗原-1(PCTA-1或半乳糖蛋白8)、T细胞1识别的黑色素瘤抗原(MelanA或MART1)；大鼠肉瘤(Ras)突变体；人端粒酶逆转录酶(hTERT)；肉瘤易位断点；黑素瘤细胞凋亡抑制剂(ML-IAP)；ERG(跨膜蛋白酶、丝氨酸2(TMPRSS2)ETS融合基因)；N-乙酰葡糖胺基转移酶V(NA17)；配对盒蛋白Pax-3(PAX3)；雄激素受体；细胞周期蛋白B1；v-myc禽类骨髓细胞瘤病毒致癌基因神经母细胞瘤来源同源物(MYCN)；Ras同源物家族成员C(RhoC)；酪氨酸酶相关蛋白2(TRP-2)；细胞色素P450 1B1(CYP1B1)；CCCTC-结合因子(锌指蛋白)样(BORIS或印记位点调节因子样蛋白(Brother ofthe Regulator of Imprinted Sites))，T细胞3识别的鳞状细胞癌抗原(SART3)；配对盒蛋白Pax-5(PAX5)；前顶体蛋白结合蛋白sp32(OY-TES1)；淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)；激酶锚蛋白4(AKAP-4)；滑膜肉瘤，X断点2(SSX2)；晚期糖基化终产物受体(RAGE-1)；肾遍在蛋白1(RU1)；肾遍在蛋白2(RU2)；豆荚蛋白；人乳头状瘤病毒E6(HPV E6)；人乳头状瘤病毒E7(HPV E7)；肠羧酸酯酶；突变的热休克蛋白70-2(mut hsp70-2)；CD79a；CD79b；CD72；白细胞相关的免疫球蛋白样受体1(LAIR1)；IgA受体的Fc片段(FCAR或CD89)；白细胞免疫球蛋白样受体亚家族A成员2(LILRA2)；CD300分子样家族成员f(CD300LF)；C型凝集素结构域家族12成员A(CLEC12A)；骨髓基质细胞抗原2(BST2)；含EGF样模块的粘蛋白样激素受体样2(EMR2)；淋巴细胞抗原75(LY75)；磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)；Fc受体样5(FCRL5)；以及免疫球蛋白λ样多肽1(IGLL1)。
本文所述的CAR可以包含与支持肿瘤的抗原(例如，如本文所述的支持肿瘤的抗原)结合的抗原结合结构域(例如，抗体或抗体片段，TCR或TCR片段)。在一些实施例中，支持肿瘤的抗原是存在于基质细胞或骨髓源性抑制细胞(MDSC)上的抗原。基质细胞可以分泌生长因子以促进微环境中的细胞分裂。MDSC细胞可以抑制T细胞增殖和活化。不希望受理论束缚，在一些实施例中，表达CAR的细胞破坏支持肿瘤的细胞，从而间接地抑制肿瘤生长或存活。
在实施例中，所述基质细胞抗原选自以下中的一种或多种：骨髓基质细胞抗原2(BST2)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)和腱生蛋白。在实施例中，FAP特异性抗体是西罗珠单抗，与西罗珠单抗竞争结合、或具有与西罗珠单抗相同的CDR。在实施例中，MDSC抗原选自以下中的一种或多种：CD33、CD11b、C14、CD15和CD66b。因此，在一些实施例中，所述支持肿瘤的抗原选自以下中的一种或多种：骨髓基质细胞抗原2(BST2)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)或腱生蛋白、CD33、CD11b、C14、CD15、以及CD66b。
抗原结合结构域结构
在一些实施例中，编码的CAR分子的抗原结合结构域包含抗体、抗体片段、scFv、Fv、Fab、(Fab’)2、单结构域抗体(SDAB)、VH或VL结构域、骆驼科VHH结构域或双官能(例如双特异性)杂合抗体(例如，Lanzavecchia等人,Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]17,105(1987))。
在一些情况下，可以根据本领域已知的方法制备scFv(参见例如，Bird等人,(1988)Science[科学]242:423-426和Huston等人,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883)。可以通过使用柔性多肽接头将VH和VL区连接在一起来产生ScFv分子。scFv分子包含具有优化的长度和/或氨基酸组成的接头(例如，Ser-Gly接头)。接头长度可以极大地影响scFv的可变区折叠和相互作用的方式。事实上，如果采用短多肽接头(例如，在5-10个氨基酸之间)，则可以防止链内折叠。还需要链间折叠以将两个可变区组合在一起以形成功能性表位结合位点。对于接头方向和大小的实例，参见例如，Hollinger等人1993Proc Natl Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]90:6444-6448，美国专利申请公开号2005/0100543、2005/0175606、2007/0014794，以及PCT公开号WO 2006/020258和WO 2007/024715。
scFv可以在其VL与VH区之间包含具有至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、或更多个氨基酸残基的接头。接头序列可以包含任何天然存在的氨基酸。在一些实施例中，接头序列包含氨基酸甘氨酸和丝氨酸。在另一个实施例中，接头序列包含甘氨酸和丝氨酸重复序列组，如(Gly4Ser)n，其中n为等于或大于1的正整数(SEQ ID NO:232)。在一个实施例中，接头可以是(Gly4Ser)4(SEQ ID NO:230)或(Gly4Ser)3(SEQ ID NO:231)。接头长度的变化可以保留或增强活性，从而在活性研究中产生优异的功效。
在另一方面，抗原结合结构域是T细胞受体(“TCR”)或其片段，例如单链TCR(scTCR)。用于制备此类TCR的方法是本领域中已知的。参见例如Willemsen RA等人,GeneTherapy[基因疗法]7:1369–1377(2000)；Zhang T等人,Cancer Gene Ther[癌症基因疗法]11:487–496(2004)；Aggen等人,Gene Ther.[基因疗法]19(4):365-74(2012)。例如，scTCR可以工程化为含有来自通过接头(例如柔性肽)连接的T细胞克隆的Vα和Vβ基因。此途径对于本身在细胞内的与癌症相关的靶标非常有用，然而，这种抗原(肽)的片段通过MHC呈递在癌细胞的表面上。
在某些实施例中，编码的抗原结合结构域具有10-4M至10-8M的结合亲和力KD。
在一个实施例中，编码的CAR分子包含如下抗原结合结构域，所述抗原结合结构域对靶抗原的结合亲和力KD为10-4M至10-8M，例如10-5M至10-7M，例如10-6M或10-7M。在一个实施例中，抗原结合结构域的结合亲和力比参考抗体(例如本文所述的抗体)的结合亲和力低至少5倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或1,000倍。在一个实施例中，编码的抗原结合结构域的结合亲和力比参考抗体(例如，所述抗原结合结构域所衍生的抗体)的结合亲和力低至少5倍。在一方面，此类抗体片段是功能性的，因为它们提供生物学应答，所述生物学应答可以包括但不限于免疫应答的活化、起源于其靶抗原的信号转导的抑制、激酶活性的抑制等，如熟练技术人员所理解的那样。
在一方面，CAR的抗原结合结构域是scFv抗体片段，所述scFv抗体片段与它所衍生的scFv的鼠序列相比是人源化的。
在一方面，本披露的CAR的抗原结合结构域(例如，scFv)由核酸分子编码，所述核酸分子的序列已进行密码子优化以在哺乳动物细胞中表达。在一方面，本披露的整个CAR构建体由核酸分子编码，所述核酸分子的整个序列已进行密码子优化以在哺乳动物细胞中表达。密码子优化是指如下发现：在编码DNA中同义密码子(即编码相同氨基酸的密码子)的出现频率在不同物种中有偏差。这种密码子简并性允许相同的多肽由各种核苷酸序列编码。各种密码子优化方法是本领域已知的，并且包括例如在至少美国专利号5,786,464和6,114,148中披露的方法。
抗原结合结构域(和靶向抗原)
在一个实施例中，针对CD19的抗原结合结构域是描述于例如以下中的CAR、抗体或其抗原结合片段的抗原结合部分(例如CDR)：PCT公开WO 2012/079000；PCT公开WO 2014/153270；Kochenderfer,J.N.等人,J.Immunother.[免疫疗法杂志]32(7),689-702(2009)；Kochenderfer,J.N.,等人,Blood[血液],116(20),4099-4102(2010)；PCT公开WO 2014/031687；Bejcek,Cancer Research[癌症研究],55,2346-2351,1995；或美国专利号7,446,190。
在一个实施例中，针对间皮素的抗原结合结构域是描述于例如PCT公开WO 2015/090230中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对间皮素的抗原结合结构域是描述于例如PCT公开WO 1997/025068、WO 1999/028471、WO 2005/014652、WO 2006/099141、WO 2009/045957、WO 2009/068204、WO 2013/142034、WO 2013/040557、或WO 2013/063419中的抗体、抗原结合片段、或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对间皮素的抗原结合结构域是描述于WO/2015/090230中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD123的抗原结合结构域是描述于例如PCT公开WO 2014/130635中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对CD123的抗原结合结构域是描述于例如PCT公开WO 2014/138805、WO 2014/138819、WO2013/173820、WO 2014/144622、WO 2001/66139、WO 2010/126066、WO 2014/144622、或US2009/0252742中的抗体、抗原结合片段、或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对CD123的抗原结合结构域是描述于WO/2016/028896中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对EGFRvIII的抗原结合结构域是描述于例如WO/2014/130657中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD22的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Haso等人,Blood[血液],121(7):1165-1174(2013)；Wayne等人,ClinCancer Res[临床癌症研究]16(6):1894-1903(2010)；Kato等人,Leuk Res[白血病研究]37(1):83-88(2013)；Creative BioMart[创意生物公司](creativebiomart.net):MOM-18047-S(P)。
在一个实施例中，针对CS-1的抗原结合结构域是埃洛妥珠单抗(BMS)的CDR抗原结合部分(例如CDR)，参见例如，Tai等人,2008,Blood[血液]112(4):1329-37；Tai等人,2007,Blood.[血液]110(5):1656-63。
在一个实施例中，针对CLL-1的抗原结合结构域是可从R&D公司、电子生物科学公司(ebiosciences)、艾博抗公司(Abcam)获得的抗体的抗原结合部分(例如CDR)，所述抗体为例如PE-CLL1-hu目录号353604(百进生物科技公司(BioLegend))；和PE-CLL1(CLEC12A)目录号562566(BD)。在一个实施例中，针对CLL-1的抗原结合结构域是描述于WO/2016/014535中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD33的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Bross等人,Clin Cancer Res[临床癌症研究]7(6):1490-1496(2001)(吉妥珠单抗奥佐米星，hP67.6)；Caron等人,Cancer Res[癌症研究]52(24):6761-6767(1992)(林妥珠单抗，HuM195)；Lapusan等人,Invest New Drugs[新药物研究]30(3):1121-1131(2012)(AVE9633)；Aigner等人,Leukemia[白血病]27(5):1107-1115(2013)(AMG330，CD33 BiTE)；Dutour等人,Adv hematol[血液学进展]2012:683065(2012)；以及Pizzitola等人,Leukemia[白血病]doi:10.1038/Lue.2014.62(2014)。在一个实施例中，针对CD33的抗原结合结构域是描述于WO/2016/014576中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对GD2的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Mujoo等人,Cancer Res[癌症研究]47(4):1098-1104(1987)；Cheung等人,Cancer Res[癌症研究]45(6):2642-2649(1985)；Cheung等人,J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志]5(9):1430-1440(1987)；Cheung等人,J Clin Oncol[临床肿瘤学杂志]16(9):3053-3060(1998)；Handgretinger等人,Cancer Immunol Immunother[癌症免疫学和免疫疗法]35(3):199-204(1992)。在一些实施例中，针对GD2的抗原结合结构域是选自以下的抗体的抗原结合部分：mAb 14.18、14G2a、ch14.18、hu14.18、3F8、hu3F8、3G6、8B6、60C3、10B8、ME36.1、和8H9，参见例如WO 2012033885、WO 2013040371、WO 2013192294、WO 2013061273、WO 2013123061、WO 2013074916、和WO 201385552。在一些实施例中，针对GD2的抗原结合结构域是美国公开号20100150910或PCT公开号WO 2011160119中描述的抗体的抗原结合部分。
在一个实施例中，针对BCMA的抗原结合结构域是描述于例如WO 2012163805、WO200112812、和WO 2003062401中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对BCMA的抗原结合结构域是描述于WO/2016/014565中的抗体、抗原结合片段或CAR的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对Tn抗原的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 8,440,798；Brooks等人,PNAS[美国国家科学院院刊]107(22):10056-10061(2010)；以及Stone等人,OncoImmunology[肿瘤免疫学]1(6):863-873(2012)。
在一个实施例中，针对PSMA的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Parker等人,Protein Expr Purif[蛋白表达与纯化]89(2):136-145(2013),US 20110268656(J591 ScFv)；Frigerio等人,European J Cancer[欧洲癌症杂志]49(9):2223-2232(2013)(scFvD2B)；WO 2006125481(mAbs 3/A12，3/E7和3/F11)和单链抗体片段(scFv A5和D7)。
在一个实施例中，针对ROR1的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Hudecek等人,Clin Cancer Res[临床癌症研究]19(12):3153-3164(2013)；WO 2011159847；和US20130101607。
在一个实施例中，针对FLT3的抗原结合结构域是描述于例如WO2011076922、US5777084、EP 0754230、US 20090297529中的抗体以及若干种商业目录抗体(R&D公司、电子生物科学公司、艾博抗公司)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对TAG72的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：描述于例如Hombach等人,Gastroenterology[肠胃病学]113(4):1163-1170(1997)中的抗体；和Abcam ab691。
在一个实施例中，针对FAP的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：描述于例如Ostermann等人,Clinical Cancer Research[临床癌症研究]14:4584-4592(2008)(FAP5)，美国专利公开号2009/0304718中的抗体；西罗珠单抗(参见例如，Hofheinz等人,Oncology Research and Treatment[肿瘤学研究和治疗]26(1),2003)；和Tran等人,J Exp Med[实验医学杂志]210(6):1125-1135(2013)。
在一个实施例中，针对CD38的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：达雷木单抗(daratumumab)(参见例如，Groen等人,Blood[血液]116(21):1261-1262(2010)；MOR202(参见例如，US 8,263,746)；或描述于US 8,362,211中的抗体。
在一个实施例中，针对CD44v6的抗原结合结构域是描述于例如Casucci等人,Blood[血液]122(20):3461-3472(2013)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CEA的抗原结合结构域是描述于例如Chmielewski等人,Gastoenterology[肠胃病学]143(4):1095-1107(2012)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对EPCAM的抗原结合结构域是选自以下的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：MT110、EpCAM-CD3双特异性Ab(参见例如clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00635596)；依决洛单抗；3622W94；ING-1；和阿德木单抗(MT201)。
在一个实施例中，针对PRSS21的抗原结合结构域是描述于美国专利号8,080,650中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对B7H3的抗原结合结构域是抗体MGA271(宏观基因公司(Macrogenics))的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对KIT的抗原结合结构域是描述于例如US 7915391、US20120288506中的抗体和若干种商业目录抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对IL-13Ra2的抗原结合结构域是描述于例如WO 2008/146911、WO 2004087758中的抗体、若干种商业目录抗体和WO 2004087758中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD30的抗原结合结构域是描述于例如US 7090843 B1和EP0805871中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对GD3的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 7253263；US 8,207,308；US 20120276046；EP1013761；WO2005035577；以及US 6437098。
在一个实施例中，针对CD171的抗原结合结构域是描述于例如Hong等人,JImmunother[免疫疗法杂志]37(2):93-104(2014)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对IL-11Ra的抗原结合结构域是可从艾博抗公司(目录号ab55262)或罗福斯生物制剂公司(Novus Biologicals)(目录号EPR5446)获得的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。在另一个实施例中，针对IL-11Ra的抗原结合结构域是肽，参见例如Huang等人,Cancer Res[癌症研究]72(1):271-281(2012)。
在一个实施例中，针对PSCA的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Morgenroth等人,Prostate[前列腺]67(10):1121-1131(2007)(scFv7F5)；Nejatollahi等人,J of Oncology[肿瘤学杂志]2013(2013)，文章ID 839831(scFvC5-II)；和美国专利公开号20090311181。
在一个实施例中，针对VEGFR2的抗原结合结构域是描述于例如Chinnasamy等人,JClin Invest[临床研究杂志]120(11):3953-3968(2010)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对LewisY的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Kelly等人,Cancer Biother Radiopharm[癌症生物治疗和放射性药物]23(4):411-423(2008)(hu3S193Ab(scFvs))；Dolezal等人,Protein Engineering[蛋白质工程]16(1):47-56(2003)(NC10 scFv)。
在一个实施例中，针对CD24的抗原结合结构域是描述于例如Maliar等人,Gastroenterology[肠胃病学]143(5):1375-1384(2012)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对PDGFR-β的抗原结合结构域是抗体Abcam ab32570的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对SSEA-4的抗原结合结构域是抗体MC813(细胞信号传导公司(Cell Signalling))、或其他可商购的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD20的抗原结合结构域是抗体利妥昔单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗、维妥珠单抗、或GA101的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对叶酸受体α的抗原结合结构域是抗体IMGN853或描述于US20120009181、US 4851332、LK26:US 5952484中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对ERBB2(Her2/neu)的抗原结合结构域是抗体曲妥珠单抗、或帕妥珠单抗的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对MUC1的抗原结合结构域是抗体SAR566658的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对EGFR的抗原结合结构域是抗体西妥昔单抗、帕尼单抗、扎妥木单抗、尼妥珠单抗、或马妥珠单抗的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对NCAM的抗原结合结构域是抗体克隆2-2B：MAB5324(EMD密理博公司(EMD Millipore))的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对肝配蛋白B2的抗原结合结构域是描述于例如Abengozar等人,Blood[血液]119(19):4565-4576(2012)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对IGF-I受体的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 8344112 B2；EP2322550 A1；WO 2006/138315、或PCT/US2006/022995。
在一个实施例中，针对CAIX的抗原结合结构域是抗体克隆303123(R&D系统公司(R&D Systems)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对LMP2的抗原结合结构域是描述于例如US 7,410,640、或US20050129701中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对gp100的抗原结合结构域是抗体HMB45、NKIβB、或描述于WO2013165940或US 20130295007中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对酪氨酸酶的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 5843674；或US 19950504048。
在一个实施例中，针对EphA2的抗原结合结构域是描述于例如Yu等人,Mol Ther[分子疗法]22(1):102-111(2014)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对GD3的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 7253263；US 8,207,308；US 20120276046；EP1013761 A3；20120276046；WO 2005035577；或US 6437098。
在一个实施例中，针对岩藻糖基GM1的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 20100297138；或WO 2007/067992。
在一个实施例中，针对sLe的抗原结合结构域是抗体G193(对于lewis Y)的抗原结合部分(例如CDR)，参见Scott AM等人,Cancer Res[癌症研究]60:3254-61(2000)，也如Neeson等人,J Immunol[免疫学杂志]2013年5月190(会议摘要补充)177.10中所述的。
在一个实施例中，针对GM3的抗原结合结构域是抗体CA 2523449(mAb 14F7)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对HMWMAA的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Kmiecik等人,Oncoimmunology[肿瘤免疫学]3(1):e27185(2014)(PMID:24575382)(mAb9.2.27)；US 6528481；WO 2010033866；或US 20140004124。
在一个实施例中，针对o-乙酰基-GD2的抗原结合结构域是抗体8B6的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对TEM1/CD248的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Marty等人,Cancer Lett[癌症快报]235(2):298-308(2006)；Zhao等人,J Immunol Methods[免疫法杂志]363(2):221-232(2011)。
在一个实施例中，针对CLDN6的抗原结合结构域是抗体IMAB027(咖尼米德制药公司(Ganymed Pharmaceuticals))的抗原结合部分(例如CDR)，参见例如clinicaltrial.gov/show/NCT02054351。
在一个实施例中，针对TSHR的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 8,603,466；US 8,501,415；或US 8,309,693。
在一个实施例中，针对GPRC5D的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：抗体FAB6300A(R&D系统公司)；或LS-A4180(莱仕邦生物科技公司(LifespanBiosciences))。
在一个实施例中，针对CD97的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：US 6,846,911；de Groot等人,J Immunol[免疫学杂志]183(6):4127-4134(2009)；或来自R&D:MAB3734的抗体。
在一个实施例中，针对ALK的抗原结合结构域是描述于例如Mino-Kenudson等人,Clin Cancer Res[临床癌症研究]16(5):1561-1571(2010)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对聚唾液酸的抗原结合结构域是描述于例如Nagae等人,JBiol Chem[生物化学杂志]288(47):33784-33796(2013)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对PLAC1的抗原结合结构域是描述于例如Ghods等人,Biotechnol Appl Biochem[生物化学生物技术应用]2013doi:10.1002/bab.1177中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对GloboH的抗原结合结构域是以下的抗原结合部分(例如CDR)：抗体VK9；或描述于例如Kudryashov V等人,Glycoconj J.[糖缀合物杂志]15(3):243-9(1998)，Lou等人,Proc Natl Acad Sci USA[美国国家科学院院刊]111(7):2482-2487(2014)中的抗体；MBr1：Bremer E-G等人J Biol Chem[生物化学杂志]259:14773–14777(1984)。
在一个实施例中，针对NY-BR-1的抗原结合结构域是描述于例如Jager等人,ApplImmunohistochem Mol Morphol[应用免疫组织化学分子形态学]15(1):77-83(2007)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对WT-1的抗原结合结构域是描述于以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：例如Dao等人,Sci Transl Med[科学转化医学]5(176):176ra33(2013)；或WO 2012/135854。
在一个实施例中，针对MAGE-A1的抗原结合结构域是描述于例如Willemsen等人,JImmunol[免疫学杂志]174(12):7853-7858(2005)(TCR样scFv)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对sperm蛋白17的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：Song等人,Target Oncol[靶标肿瘤学]2013年8月14日(PMID:23943313)；Song等人,Med Oncol[医学肿瘤学]29(4):2923-2931(2012)。
在一个实施例中，针对Tie 2的抗原结合结构域是抗体AB33(细胞信号传导技术公司(Cell Signaling Technology))的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对MAD-CT-2的抗原结合结构域是描述于例如以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：PMID:2450952；US 7635753。
在一个实施例中，针对Fos相关抗原1的抗原结合结构域是抗体12F9(罗福斯生物制剂公司)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对MelanA/MART1的抗原结合结构域是描述于以下中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)：EP 2514766 A2；或US 7,749,719。
在一个实施例中，针对肉瘤易位断点的抗原结合结构域是描述于例如Luo等人,EMBO Mol.Med.[EMBO分子医学]4(6):453-461(2012)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对TRP-2的抗原结合结构域是描述于例如Wang等人,J ExpMed.[实验医学杂志]184(6):2207-16(1996)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CYP1B1的抗原结合结构域是描述于例如Maecker等人,Blood[血液]102(9):3287-3294(2003)中的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对RAGE-1的抗原结合结构域是抗体MAB5328(EMD密理博公司)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对人端粒酶逆转录酶的抗原结合结构域是抗体目录号LS-B95-100(Lifespan Biosciences公司)的抗体的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对肠羧基酯酶的抗原结合结构域是抗体4F12：目录号LS-B6190-50(Lifespan Biosciences公司)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对mut hsp70-2的抗原结合结构域是抗体LifespanBiosciences：单克隆：目录号LS-C133261-100(Lifespan Biosciences公司)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD79a的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：可从艾博抗公司获得的抗体抗CD79a抗体[HM47/A9](ab3121)；可从细胞信号传导技术公司获得的抗体CD79A抗体号3351；或产生自兔的、可从西格玛奥德里奇公司(SigmaAldrich)获得的抗体HPA017748-抗CD79A抗体。
在一个实施例中，针对CD79b的抗原结合结构域是以下的抗原结合部分(例如CDR)：抗体维汀-珀拉妥珠单抗(polatuzumab vedotin)；描述于Dornan等人,“Therapeuticpotential of an anti-CD79b antibody-drug conjugate,anti-CD79b-vc-MMAE,for thetreatment of non-Hodgkin lymphoma[抗CD79b抗体-药物缀合物、抗CD79b-vc-MMAE用于治疗非霍奇金淋巴瘤的治疗潜力]”Blood.[血液]2009年9月24日；114(13):2721-9.doi:10.1182/blood-2009-02-205500.电子版2009年7月24日中的抗CD79b；或描述于“4507Pre-Clinical Characterization of T Cell-Dependent Bispecific Antibody Anti-CD79b/CD3As a Potential Therapy for B Cell Malignancies[T细胞依赖性双特异性抗体抗CD79b/CD3作为B细胞恶性肿瘤的潜在疗法的4507临床前表征]”Abstracts of 56th ASHAnnual Meeting and Exposition[第56届ASH年会和博览会摘要],旧金山,加利福利亚州2014年12月6日-9日中的双特异性抗体抗CD79b/CD3。
在一个实施例中，针对CD72的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：描述于Myers,和Uckun,“An anti-CD72immunotoxin against therapy-refractoryB-lineage acute lymphoblastic leukemia.[针对治疗难治性B谱系急性淋巴母细胞白血病的抗CD72免疫毒素]”Leuk Lymphoma.[白血病和淋巴瘤]1995年6月；18(1-2):119-22中的抗体J3-109；或描述于Polson等人,“Antibody-Drug Conjugates for the Treatmentof Non-Hodgkin's Lymphoma:Target and Linker-Drug Selection[用于治疗非霍奇金淋巴瘤的抗体-药物缀合物：靶标和接头-药物选择]”Cancer Res[癌症研究]2009年3月15日69；2358中的抗CD72(10D6.8.1，mIgG1)。
在一个实施例中，针对LAIR1的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：可从ProSpec公司获得的抗体ANT-301LAIR1抗体；或可从百进生物科技公司获得的抗人CD305(LAIR1)抗体。
在一个实施例中，针对FCAR的抗原结合结构域是可从Sino Biological公司获得的抗体CD89/FCAR抗体(目录号10414-H08H)的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对LILRA2的抗原结合结构域是可从亚诺法公司(Abnova)获得的抗体LILRA2单克隆抗体(M17)(克隆3C7)，或可从莱仕邦生物科技公司获得的小鼠抗LILRA2抗体(单克隆(2D7))的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CD300LF的抗原结合结构域是可从百进生物科技公司获得的抗体小鼠抗CMRF35样分子1抗体(单克隆[UP-D2])；或可从R&D系统公司获得的大鼠抗CMRF35样分子1抗体(单克隆[234903])的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对CLEC12A的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：抗体双特异性T细胞衔接器(BiTE)scFv-抗体和ADC(描述于Noordhuis等人,“Targeting of CLEC12A In Acute Myeloid Leukemia by Antibody-Drug-Conjugatesand Bispecific CLL-1xCD3 BiTE Antibody[通过抗体-药物-缀合物和双特异性CLL-1xCD3 BiTE抗体靶向急性骨髓性白血病中的CLEC12A]”53rd ASH Annual Meeting andExposition[第53届ASH年会和博览会],2011年12月10日至13日中)，以及MCLA-117(梅鲁斯公司(Merus))。
在一个实施例中，针对BST2(也称为CD317)的抗原结合结构域是可从抗体在线(Antibodies-Online)获得的抗体小鼠抗CD317抗体(单克隆[3H4])或可从R&D系统公司获得的小鼠抗CD317抗体(单克隆[696739])的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对EMR2(也称为CD312)的抗原结合结构域是可从莱仕邦生物科技公司获得的抗体小鼠抗CD312抗体(单克隆[LS-B8033])或可从R&D系统公司获得的小鼠抗CD312抗体(单克隆[494025])的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对LY75的抗原结合结构域是可从EMD密理博公司获得的抗体小鼠抗淋巴细胞抗原75抗体(单克隆[HD30])或可从生命科技公司(Life Technologies)获得的小鼠抗淋巴细胞抗原75抗体(单克隆[A15797])的抗原结合部分(例如CDR)。
在一个实施例中，针对GPC3的抗原结合结构域是以下的抗原结合部分(例如CDR)：描述于Nakano K,Ishiguro T,Konishi H,等人Generation of a humanized anti-glypican 3antibody by CDR grafting and stability optimization[通过CDR移植和稳定性优化产生人源化抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体].Anticancer Drugs.[抗癌药物]2010年11月；21(10):907–916中的抗体hGC33；或MDX-1414、HN3或YP7，这三者全部都描述于Feng等人,“Glypican-3antibodies:a new therapeutic target for liver cancer[磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体：肝癌的新治疗靶标].”FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]2014年1月21日；588(2):377-82中。
在一个实施例中，针对FCRL5的抗原结合结构域是描述于Elkins等人,“FcRL5 asa target of antibody-drug conjugates for the treatment of multiple myeloma[FcRL5作为用于治疗多发性骨髓瘤的抗体-药物缀合物的靶标]”Mol Cancer Ther.[分子癌症治疗]2012Oct；11(10):2222-32中的抗FcRL5抗体的抗原结合部分(例如CDR)。在一个实施例中，针对FCRL5的抗原结合结构域是描述于以下中的抗FcRL5抗体的抗原结合部分(例如CDR)：例如，WO 2001/038490、WO/2005/117986、WO 2006/039238、WO 2006/076691、WO2010/114940、WO 2010/120561、或WO 2014/210064。
在一个实施例中，针对IGLL1的抗原结合结构域是以下抗体的抗原结合部分(例如CDR)：可从莱仕邦生物科技公司获得的抗体小鼠抗免疫球蛋白λ样多肽1(单克隆[AT1G4])，可从百进生物科技公司获得的小鼠抗免疫球蛋白λ样多肽1抗体(单克隆[HSL11])。
在一个实施例中，抗原结合结构域包含来自上文列出的抗体的一个、两个、三个(例如全部三个)重链CDR(HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3)，和/或来自上文列出的抗体的一个、两个、三个(例如全部三个)轻链CDR(LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3)。在一个实施例中，抗原结合结构域包含上文列出抗体的重链可变区和/或可变轻链区。
在另一方面，抗原结合结构域包含人源化抗体或抗体片段。在一些方面，非人抗体是人源化的，其中抗体的特定序列或区域被修饰以增加与在人中天然产生的抗体或其片段的相似度。在一方面，抗原结合结构域是人源化的。
在实施例中，CAR(例如由本披露的细胞表达的CAR)的抗原结合结构域结合CD19。在从前/祖B细胞阶段直到终末分化的浆细胞阶段的整个谱系分化中，在B细胞上发现CD19。在实施例中，抗原结合结构域是结合人CD19的鼠scFv结构域，例如CTL019的抗原结合结构域(例如SEQ ID NO:252)。在实施例中，抗原结合结构域是衍生自鼠CTL019scFv的人源化抗体或抗体片段(例如scFv结构域)。在实施例中，抗原结合结构域是与人CD19结合的人抗体或抗体片段。表12a中提供了结合CD19的示例性scFv结构域(及其序列，例如CDR、VL和VH序列)。表12a中提供的scFv结构域序列包括轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)。VL和VH通过包含序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:231)的接头附接，例如，处于以下方向：VL-接头-VH。
表12a.结合CD19的抗原结合结构域
Figure BDA0003757898430001411
Figure BDA0003757898430001421
Figure BDA0003757898430001431
表12a中提供的CD19抗原结合结构域的scFv结构域的CDR序列的序列示于表12b(针对重链可变结构域)和表12c中(针对轻链可变结构域)。“ID”代表每个CDR的相应SEQ IDNO。
表12b.重链可变结构域CDR
Figure BDA0003757898430001432
表12c.轻链可变结构域CDR
描述 FW LCDR1 ID LCDR2 ID LCDR3 ID
鼠_CART19 RASQDISKYLN 251 HTSRLHS 250 QQGNTLPYT 247
人源化_CART19a VK3 RASQDISKYLN 251 HTSRLHS 250 QQGNTLPYT 247
人源化_CART19b VK3 RASQDISKYLN 251 HTSRLHS 250 QQGNTLPYT 247
人源化_CART19c VK3 RASQDISKYLN 251 HTSRLHS 250 QQGNTLPYT 247
在实施例中，抗原结合结构域包含抗CD19抗体或其片段(例如scFv)。例如，抗原结合结构域包含表12d中列出的可变重链和可变轻链。连接可变重链和可变轻链的接头序列可以是本文所述的接头序列中的任一个、或可替代地可以是GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ IDNO:248)。scFv的轻链可变区和重链可变区可以是例如处于以下取向中的任一个：轻链可变区-接头-重链可变区或重链可变区-接头-轻链可变区。
表12d.另外的抗CD19抗体结合结构域
Figure BDA0003757898430001441
在一个实施例中，CD19结合结构域包含本文所述的CD19结合结构域(例如在表12a或15中提供的)的一个或多个(例如全部三个)轻链互补决定区1(LC CDR1)、轻链互补决定区2(LC CDR2)和轻链互补决定区3(LC CDR3)，和/或本文所述的CD19结合结构域(例如在表12a或16中提供的)的一个或多个(例如全部三个)重链互补决定区1(HC CDR1)、重链互补决定区2(HC CDR2)和重链互补决定区3(HC CDR3)。在一个实施例中，CD19结合结构域包含具有如表12c中提供的任何氨基酸序列的LC CDR1、LC CDR2和LC CDR3中的一个、两个或全部；以及具有如表12b中提供的任何氨基酸序列的HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3中的一个、两个或全部。
可以根据本披露使用本领域中任何已知的CD19 CAR，例如任何已知CD19 CAR的CD19抗原结合结构域来构建CAR。例如，LG-740；CD19 CAR，描述于美国专利号8,399,645；美国专利号7,446,190；Xu等人,Leuk Lymphoma.[白血病和淋巴瘤]2013 54(2):255-260(2012)；Cruz等人,Blood[血液]122(17):2965-2973(2013)；Brentjens等人,Blood[血液]118(18):4817-4828(2011)；Kochenderfer等人,Blood[血液]116(20):4099-102(2010)；Kochenderfer等人,Blood[血液]122(25):4129-39(2013)；以及第16届美国基因与细胞治疗学会年会(Annu Meet Am Soc Gen Cell Ther(ASGCT))(5月15日至18日,盐湖城(SaltLake City))2013,摘要10。在一个实施例中，针对CD19的抗原结合结构域是描述于例如以下中的CAR、抗体或其抗原结合片段的抗原结合部分(例如CDR)：PCT公开WO 2012/079000；PCT公开WO 2014/153270；Kochenderfer,J.N.等人,J.Immunother.[免疫疗法杂志]32(7),689-702(2009)；Kochenderfer,J.N.,等人,Blood[血液],116(20),4099-4102(2010)；PCT公开WO 2014/031687；Bejcek,Cancer Research[癌症研究],55,2346-2351,1995；或美国专利号7,446,190。
在实施例中，CAR(例如由本披露的细胞表达的CAR)的抗原结合结构域结合BCMA。发现BCMA优先在成熟B淋巴细胞中表达。在实施例中，抗原结合结构域是与人BCMA结合的鼠scFv结构域。在实施例中，抗原结合结构域是结合人BCMA的人源化抗体或抗体片段(例如scFv结构域)。在实施例中，抗原结合结构域是与人BCMA结合的人抗体或抗体片段。在实施例中，使用来自PCT公开WO 2012/0163805的VH和VL序列产生的示例性BCMA CAR构建体。在实施例中，使用来自PCT公开WO 2016/014565的VH和VL序列产生另外的示例性BCMA CAR构建体。在实施例中，使用来自PCT公开WO 2014/122144的VH和VL序列产生另外的示例性BCMACAR构建体。在实施例中，使用来自PCT公开WO 2016/014789的CAR分子、和/或VH和VL序列产生另外的示例性BCMA CAR构建体。在实施例中，使用来自PCT公开WO 2014/089335的CAR分子、和/或VH和VL序列产生另外的示例性BCMA CAR构建体。在实施例中，使用来自PCT公开WO2014/140248的CAR分子、和/或VH和VL序列产生另外的示例性BCMA CAR构建体。
可以根据本披露使用本领域中任何已知的BCMA CAR，例如任何已知BCMA CAR的BMCA抗原结合结构域。例如，本文所述的那些。
示例性CAR分子
在一方面，CAR(例如由本披露的细胞表达的CAR)包含CAR分子，所述分子含有与B细胞抗原(例如，如本文所述的例如CD19或BCMA)结合的抗原结合结构域。
在一个实施例中，所述CAR包含CAR分子，所述分子包含CD19抗原结合结构域(例如，特异性结合CD19的鼠、人或人源化抗体或抗体片段)、跨膜结构域、和细胞内信号传导结构域(例如，包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域的细胞内信号传导结构域)。
表12e中提供了本文所述的示例性CAR分子。表12e中的CAR分子包含CD19抗原结合结构域，例如表12a中提供的任何CD19抗原结合结构域的氨基酸序列。
表12e.示例性CD19 CAR分子
Figure BDA0003757898430001461
Figure BDA0003757898430001471
Figure BDA0003757898430001481
Figure BDA0003757898430001491
在一方面，CAR(例如由本披露的细胞表达的CAR)包含CAR分子，所述分子包含与BCMA结合的抗原结合结构域，例如包含BCMA抗原结合结构域(例如，特异性结合BCMA(例如，人BCMA)的鼠、人或人源化抗体或抗体片段)、跨膜结构域、和细胞内信号传导结构域(例如，包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域的细胞内信号传导结构域)。
WO 2016/014565的表1中提供了本文所描述的CAR的示例性CAR分子。
跨膜结构域
关于跨膜结构域，在各种实施例中，CAR可以设计成包含附接至CAR的细胞外结构域的跨膜结构域。跨膜结构域可以包括与跨膜区相邻的一个或多个另外的氨基酸，例如与跨膜衍生的蛋白质的细胞外区域相关的一个或多个氨基酸(例如所述细胞外区域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10至15个氨基酸)和/或与跨膜蛋白衍生的蛋白质的细胞内区域相关的一个或多个另外的氨基酸(例如所述细胞内区域的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10多至15个氨基酸)。在一方面，跨膜结构域是与CAR的其他结构域之一相关的结构域，例如，在一个实施例中，跨膜结构域可以来自衍生出信号传导结构域、共刺激结构域或铰链结构域的相同蛋白质。在另一方面，跨膜结构域不衍生自衍生出CAR的任何其他结构域的相同蛋白质。在一些情况下，可以选择或通过氨基酸置换修饰跨膜结构域，以避免此类域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，例如以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。在一方面，跨膜结构域能够与表达CAR的细胞的细胞表面上的另一种CAR同源二聚化。在不同的方面，可以修饰或取代跨膜结构域的氨基酸序列，以便最小化与存在于相同表达CAR的细胞中的天然结合配偶体的结合结构域的相互作用。
跨膜结构域可以源自天然衍生或来自重组衍生。在来源是天然的情况下，所述结构域可以衍生自任何膜结合或跨膜蛋白。在一方面，每当CAR结合靶标时，跨膜结构域能够将信号传导至一个或多个细胞内结构域。在本披露中特别使用的跨膜结构域可以至少包括例如T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD27、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154的一个或多个跨膜区。在一些实施例中，跨膜结构域可至少包括例如KIRDS2、OX40、CD2、CD27、LFA-1(CD11a、CD18)、ICOS(CD278)、4-1BB(CD137)、GITR、CD40、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD160、CD19、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKG2D、NKG2C的一个或多个跨膜区。
在一些情况下，跨膜结构域可以通过铰链(例如来自人蛋白质的铰链)附接到CAR的细胞外区域(例如CAR的抗原结合结构域)。例如，在一个实施例中，铰链可以是人Ig(免疫球蛋白)铰链(例如IgG4铰链、IgD铰链)、GS接头(例如本文所述的GS接头)、KIR2DS2铰链或CD8a铰链。在一个实施例中，所述铰链或间隔子包含SEQ ID NO:265的氨基酸序列(例如由其组成)。在一方面，跨膜结构域包含SEQ ID NO:266的跨膜结构域(例如由其组成)。
在某些实施例中，编码的跨膜结构域包含具有SEQ ID NO:266的氨基酸序列的至少一个、两个或三个修饰、但不超过20、10或5个修饰的CD8跨膜结构域的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:266的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列。在一个实施例中，编码的跨膜结构域包含SEQ ID NO:266的序列。
在其他实施例中，编码CAR的核酸分子包含CD8跨膜结构域的核苷酸序列，例如包含SEQ ID NO:267或SEQ ID NO:304的序列，或其具有至少95％同一性的序列。
在某些实施例中，编码的抗原结合结构域通过铰链区与跨膜结构域连接。在一个实施例中，编码的铰链区包含CD8铰链的氨基酸序列，例如SEQ ID NO:265；或IgG4绞链的氨基酸序列，例如SEQ ID NO:268，或与SEQ ID NO:265或SEQ ID NO:268具有至少95％同一性的序列。在其他实施例中，编码铰链区的核酸序列包含分别对应于CD8铰链或IgG4铰链的SEQ ID NO:269或SEQ ID NO:270的序列，或与SEQ ID NO:269或270具有至少95％同一性的序列。
在一方面，铰链或间隔子包含IgG4铰链。例如，在一个实施例中，所述铰链或间隔子包含氨基酸序列ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM(SEQ ID NO:268)的铰链。在一些实施例中，所述绞链或间隔子包含由GAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCTTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAGGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAGCAGTTCAATAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAATACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCAGCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAGGGCAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGATG(SEQ ID NO:270)的核苷酸序列编码的绞链。
在一方面，铰链或间隔子包含IgD铰链。例如，在一个实施例中，所述铰链或间隔子包含RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH的氨基酸序列(SEQ IDNO:271)的铰链。在一些实施例中，所述绞链或间隔子包含由AGGTGGCCCGAAAGTCCCAAGGCCCAGGCATCTAGTGTTCCTACTGCACAGCCCCAGGCAGAAGGCAGCCTAGCCAAAGCTACTACTGCACCTGCCACTACGCGCAATACTGGCCGTGGCGGGGAGGAGAAGAAAAAGGAGAAAGAGAAAGAAGAACAGGAAGAGAGGGAGACCAAGACCCCTGAATGTCCATCCCATACCCAGCCGCTGGGCGTCTATCTCTTGACTCCCGCAGTACAGGACTTGTGGCTTAGAGATAAGGCCACCTTTACATGTTTCGTCGTGGGCTCTGACCTGAAGGATGCCCATTTGACTTGGGAGGTTGCCGGAAAGGTACCCACAGGGGGGGTTGAGGAAGGGTTGCTGGAGCGCCATTCCAATGGCTCTCAGAGCCAGCACTCAAGACTCACCCTTCCGAGATCCCTGTGGAACGCCGGGACCTCTGTCACATGTACTCTAAATCATCCTAGCCTGCCCCCACAGCGTCTGATGGCCCTTAGAGAGCCAGCCGCCCAGGCACCAGTTAAGCTTAGCCTGAATCTGCTCGCCAGTAGTGATCCCCCAGAGGCCGCCAGCTGGCTCTTATGCGAAGTGTCCGGCTTTAGCCCGCCCAACATCTTGCTCATGTGGCTGGAGGACCAGCGAGAAGTGAACACCAGCGGCTTCGCTCCAGCCCGGCCCCCACCCCAGCCGGGTTCTACCACATTCTGGGCCTGGAGTGTCTTAAGGGTCCCAGCACCACCTAGCCCCCAGCCAGCCACATACACCTGTGTTGTGTCCCATGAAGATAGCAGGACCCTGCTAAATGCTTCTAGGAGTCTGGAGGTTTCCTACGTGACTGACCATT(SEQ ID NO:272)的核苷酸序列编码的铰链。
在一方面，跨膜结构域可以是重组的，在这种情况下其将主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一方面，可以在重组跨膜结构域的每个末端处发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。
任选地，长度在2与10个氨基酸之间的短的寡肽或多肽接头可以在CAR的跨膜结构域与胞质区域之间形成键联。甘氨酸-丝氨酸双联体提供特别适合的接头。例如，在一方面，接头包含GGGGSGGGGS(SEQ ID NO:273)的氨基酸序列。在一些实施例中，接头由GGTGGCGGAGGTTCTGGAGGTGGAGGTTCC(SEQ ID NO:274)的核苷酸序列编码。
在一方面，铰链或间隔子包含KIR2DS2铰链。
信号传导结构域
在具有细胞内信号传导结构域的本披露的实施例中，这种结构域可以含有例如初级信号传导结构域和/或共刺激信号传导结构域中的一个或多个。在一些实施例中，细胞内信号传导结构域包含编码初级信号传导结构域的序列。在一些实施例中，细胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域。在一些实施例中，细胞内信号传导结构域包含初级信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。
本披露的CAR的胞质部分内的细胞内信号传导序列可以按随机或指定的顺序彼此连接。任选地，短的寡肽或多肽接头，例如，长度在2与10个氨基酸之间(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)可以形成细胞内信号传导序列之间的键联。在一个实施例中，甘氨酸-丝氨酸双联体可以用作适合的接头。在一个实施例中，单个氨基酸(例如丙氨酸、甘氨酸)可以用作适合的接头。
在一方面，细胞内信号传导结构域被设计成包含两个或更多个(例如2、3、4、5、或更多个)共刺激信号传导结构域。在实施例中，两个、或更多个(例如2、3、4、5、或更多个)共刺激信号传导结构域通过接头分子(例如本文所述的接头分子)分开。在一个实施例中，细胞内信号传导结构域包含两个共刺激信号传导结构域。在一些实施例中，接头分子是甘氨酸残基。在一些实施例中，接头是丙氨酸残基。
初级信号传导结构域
初级信号传导结构域以刺激方式、或以抑制方式调控TCR复合物的初级活化。以刺激方式起作用的初级细胞内信号传导结构域可以含有被称为基于免疫受体酪氨酸的活化基序或ITAM的信号传导基序。
含有在本发明中特别使用的初级细胞内信号传导结构域的ITAM的实例包括以下的那些：CD3ζ、常见FcRγ(FCER1G)、FcγRIIa、FcRβ(FcεR1b)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD79a、CD79b、DAP10、以及DAP12。在一个实施例中，本披露的CAR包含细胞内信号传导结构域，例如CD3-ζ的初级信号传导结构域。
在一个实施例中，编码的初级信号传导结构域包含CD3ζ的功能性信号传导结构域。编码的CD3ζ初级信号传导结构域可以包含具有SEQ ID NO:275或SEQ ID NO:276的氨基酸序列的至少一个、两个或三个修饰、但不超过20、10或5个修饰的氨基酸序列，或与SEQ IDNO:275或SEQ ID NO:276的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列。在一些实施例中，编码的初级信号传导结构域包含SEQ ID NO:275或SEQ ID NO:276的序列。在其他实施例中，编码初级信号传导结构域的核酸序列包含SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:303、或SEQ ID NO:278的序列，或其具有至少95％同一性的序列。
共刺激信号传导结构域
在一些实施例中，编码的细胞内信号传导结构域包含共刺激信号传导结构域。例如，细胞内信号传导结构域可以包含初级信号传导结构域和共刺激信号传导结构域。在一些实施例中，编码的共刺激信号传导结构域包含选自以下中的一种或多种的蛋白质的功能性信号传导结构域：CD27、CD28、4-1BB(CD137)、OX40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3、特异性结合CD83的配体、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、或NKG2D。
在某些实施例中，编码的共刺激信号传导结构域包含具有SEQ ID NO:279或SEQID NO:280的氨基酸序列的至少一个、两个或三个修饰、但不超过20、10或5个修饰的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:279或SEQ ID NO:280的氨基酸序列具有至少95％同一性的序列。在一个实施例中，编码的共刺激信号传导结构域包含SEQ ID NO:279或SEQ ID NO:280的序列。在其他实施例中，编码共刺激信号传导结构域的核酸序列包含SEQ ID NO:281、SEQ IDNO:305、或SEQ ID NO:282的序列，或其具有至少95％同一性的序列。
在其他实施例中，编码的细胞内结构域包含SEQ ID NO:279或SEQ ID NO:280的序列，和SEQ ID NO:275或SEQ ID NO:276的序列，其中包含细胞内信号传导结构域的序列在同一框架中表达并且表达为单个多肽链。
在某些实施例中，编码细胞内信号传导结构域的核酸序列包含SEQ ID NO:281、SEQ ID NO:305、或SEQ ID NO:282的序列或其具有至少95％同一性的序列，以及SEQ IDNO:277、SEQ ID NO:306、或SEQ ID NO:278的序列或其具有至少95％同一性的序列。
在一些实施例中，所述核酸分子进一步编码前导序列。在一个实施例中，所述前导序列包含SEQ ID NO:283的序列。
在一方面，细胞内信号传导结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域和CD28的信号传导结构域。在一方面，细胞内信号传导结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域和4-1BB的信号传导结构域。在一方面，4-1BB的信号传导结构域是SEQ ID NO:279的信号传导结构域。在一方面，CD3-ζ的信号传导结构域是SEQ ID NO:275的信号传导结构域。
在一方面，细胞内信号传导结构域被设计成包含CD3-ζ的信号传导结构域和CD27的信号传导结构域。在一方面，CD27的信号传导结构域包含
QRRKYRSNKGESPVEPAEPCRYSCPREEEGSTIPIQEDYRKPEPACSP(SEQ ID NO:280)的氨基酸序列。在一方面，CD27的信号传导结构域由
CAACGAAGGAAATATAGATCAAACAAAGGAGAAAGTCCTGTGGAGCCTGCAGAGCCTTGTCGTTACAGCTGCCCCAGGGAGGAGGAGGGCAGCACCATCCCCATCCAGGAGGATTACCGAAAACCGGAGCCTGCCTGCTCCCCC(SEQ ID NO:282)的核酸序列编码。
载体
在另一方面，本披露涉及包含编码本文所述的CAR的核酸序列的载体。在一个实施例中，所述载体选自DNA载体、RNA载体、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体。在一个实施例中，载体是慢病毒载体。这些载体或其部分除其他之外可以用于产生模板核酸，如本文所述的用于与本文所述的CRISPR系统一起使用。可替代地，载体可以用于将核酸直接递送至细胞，例如免疫效应细胞，例如T细胞，例如同种异体T细胞(独立于CRISPR系统)。
本披露还提供了其中插入本披露的DNA的载体。衍生自逆转录病毒如慢病毒的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为它们允许转基因的长期稳定整合及其在子细胞中的繁殖。慢病毒载体相对于衍生自肿瘤逆转录病毒如鼠白血病病毒的载体具有附加优点，因为它们可以转导非增殖性细胞，例如肝细胞。它们还具有低免疫原性的另外优点。逆转录病毒载体还可以是例如γ逆转录病毒载体。γ逆转录病毒载体可以包括例如启动子、包装信号(ψ)、引物结合位点(PBS)、一个或多个(例如两个)长末端重复序列(LTR)、和感兴趣的转基因(例如编码CAR的基因)。γ逆转录病毒载体可能缺少病毒结构基因(如gag、pol、和env)。示例性γ逆转录病毒载体包括鼠白血病病毒(MLV)、形成脾脏病灶病毒(SFFV)、和骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)，以及由其衍生的载体。其他γ逆转录病毒载体描述于例如Tobias Maetzig等人,“Gammaretroviral Vectors:Biology,Technology andApplication[γ逆转录病毒载体：生物学、技术和应用]”Viruses.[病毒]2011年6月；3(6):677-713。
在另一个实施例中，包含编码本披露所希望CAR的核酸的载体是腺病毒载体(A5/35)。在另一个实施例中，编码CAR的核酸的表达可以使用转座子如睡美人系统、crisper、CAS9和锌指核酸酶完成。参见June等人2009Nature Reviews Immunology[自然免疫学综述]9.10:704-716。
可以将核酸克隆至许多类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，所述载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。
本文披露了用于产生体外转录的RNA CAR的方法。本披露还包括CAR编码RNA构建体，其可以直接转染到细胞中。产生用于在转染中使用的mRNA的方法可以包括用特别设计的引物对模板进行体外转录(IVT)，随后添加polyA，以产生含有3'和5'非翻译序列(“UTR”)、5'帽和/或内部核糖体进入位点(IRES)、有待表达的核酸、和polyA尾的构建体，典型地长度为50-2000个碱基(SEQ ID NO:310)。这样产生的RNA可以有效地转染不同类型的细胞。在一方面，模板包括CAR的序列。
非病毒递送方法
在一些方面，可以使用非病毒方法将编码本文所述的CAR的核酸递送至细胞或组织或受试者中。
在一些实施例中，非病毒方法包括使用转座子(也称为转座元件)。在一些实施例中，转座子是可以将自身插入基因组中一位置的一条DNA，例如，能够自我复制并将其拷贝插入基因组的一条DNA，或者是可以从较长的核酸中剪接出并插入基因组中的另一个位置的一条DNA。例如，转座子包含由侧接基因的用于转座的反向重复序列构成的DNA序列。
在一些实施例中，通过使用基因插入(使用SBTS)和基因编辑(使用核酸酶(例如，锌指核酸酶(ZFN)、转录活化子样效应子核酸酶(TALEN)、CRISPR/Cas系统、或工程化大范围核酸酶重新工程化的归巢内切核酸酶))的组合产生表达本文所述的CAR的细胞，例如T细胞或NK细胞。
在一些实施例中，通过将细胞与(a)包含(例如，如本文所述的)一个或多个gRNA分子和(例如，如本文所述的)一个或多个Cas分子(例如，Cas9分子)的组合物，和(b)包含编码(例如，本文所述的)CAR序列的核酸(例如，如本文所述的模板核酸分子)进行接触，产生本披露的细胞，例如T或NK细胞，例如同种异体T细胞(例如，本文所述的)(例如，表达本文所述的CAR)。不受理论束缚，上述(a)的所述组合物将在一个或多个gRNA分子的靶向结构域靶向的基因组DNA处或附近诱导断裂，并且(b)的核酸将在所述断裂处或附近掺入(例如，部分或全部地)基因组中，使得在整合时，表达编码的CAR分子。在实施例中，CAR的表达将由基因组内源的启动子或其他调节性元件(例如，控制来自插入(b)的核酸的基因的表达的启动子)控制。在其他实施例中，(b)的核酸进一步包含(例如，如本文所述的)启动子和/或其他调节性元件(例如EF1-α启动子)，其可操作地连接至编码CAR的序列)，使得在整合时CAR的表达受所述启动子和/或其他调节元件的控制。关于使用(例如，如本文所述的)CRISPR/Cas9系统以指导编码(例如，如本文所述的)CAR的核酸序列的掺入，本披露的另外的特征描述于本申请的其他地方，例如在关于基因插入和同源重组的部分中。在实施例中，上述a)的组合物是包含RNP(含有一个或多个gRNA分子)的组合物。在实施例中，将包含靶向独特靶序列的gRNA的RNP同时地引入细胞中，例如，作为包含一个或多个gRNA的RNP的混合物。在实施例中，将包含靶向独特靶序列的gRNA的RNP顺序地引入细胞中。
在一些实施例中，使用非病毒递送方法允许细胞例如T细胞或NK细胞的重编程，并且将这些细胞直接输注到受试者体内。非病毒载体的优点包括但不限于容易且相对低成本地产生满足患者群体所需的足够量、储存期间的稳定性和缺乏免疫原性。
启动子
在一个实施例中，载体进一步包含启动子。在一些实施例中，所述启动子选自EF-1启动子、CMV IE基因启动子、EF-1α启动子、泛素C启动子、或磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子。在一个实施例中，启动子是EF-1启动子。在一个实施例中，EF-1启动子包含SEQ ID NO:285的序列。
用于CAR表达的宿主细胞
如上所述的，在一些方面，本发明涉及细胞，例如免疫效应细胞(例如，细胞群体，例如免疫效应细胞群体)，所述细胞包含如本文所述的核酸分子、CAR多肽分子或载体。
在本披露的某些方面，可以使用任何数量的本领域技术人员已知的技术(如FicollTM分离)从自受试者收集的血液单位获得免疫效应细胞，例如T细胞。在一个优选的方面，通过单采血液成分术获得来自个体的循环血液的细胞。单采血液成分术产物典型地含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞、和血小板。在一方面，可以洗涤通过单采血液成分术收集的细胞以除去血浆部分并且任选地将细胞置于适当的缓冲液或培养基中用于后续加工步骤。在本发明的一个实施例中，使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤这些细胞。在替代性实施例中，洗涤溶液缺少钙并且可能缺少镁，或者可能缺少许多(如果不是全部)二价阳离子。
在不存在钙的情况下的初始活化步骤可以导致放大的活化。如本领域普通技术人员将容易理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如通过根据制造商的说明使用半自动“流通”离心机(例如，Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate、或Haemonetics Cell Saver5)。在洗涤后，可以将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液中，例如像无Ca、无Mg的PBS、勃脈力-A(PlasmaLyte A)、或者含有或不含缓冲液的其他盐溶液。可替代地，可以除去单采血液成分术样品中不希望的组分，并将细胞直接重悬于培养基中。
应当认识到，本申请的方法可利用包含5％或更少(例如2％)的人AB血清的培养基条件，并使用已知的培养基条件和组合物，例如描述于以下的那些：Smith等人,“Ex vivoexpansion of human T cells for adoptive immunotherapy using the novel Xeno-free CTS Immune Cell Serum Replacement[使用新型无Xeno CTS免疫细胞血清替代物进行过继免疫治疗的人T细胞的离体扩增]”Clinical&Translational Immunology[临床和移植免疫学](2015)4,e31；doi:10.1038/cti.2014.31。
在一方面，通过例如通过PERCOLLTM梯度离心或通过逆流离心淘洗来裂解红细胞和耗减单核细胞，从外周血淋巴细胞分离T细胞。
本文所述的方法可以包括，例如使用例如(例如本文所述的)阴性选择技术选择免疫效应细胞(例如T细胞)的特定亚群，所述亚群是T调节性细胞耗减的群体，CD25+耗减的细胞。优选地，T调节性耗减的细胞群体含有少于30％、25％、20％、15％、10％、5％、4％、3％、2％、1％的CD25+细胞。
在一个实施例中，使用抗CD25抗体或其片段、或CD25结合配体IL-2从所述群体除去T调节性细胞(例如CD25+T细胞)。在一个实施例中，将抗CD25抗体或其片段、或CD25结合配体与底物(例如珠)缀合、或以其他方式包被在底物(例如珠)上。在一个实施例中，将抗CD25抗体或其片段与如本文所述的底物缀合。
在一个实施例中，使用来自MiltenyiTM的CD25耗减药剂从所述群体除去T调节性细胞(例如CD25+T细胞)。在一个实施例中，细胞与CD25耗减药剂的比率是1e7个细胞至20uL、或1e7个细胞至15uL、或1e7个细胞至10uL、或1e7个细胞至5uL、或1e7个细胞至2.5uL、或1e7个细胞至1.25uL。在一个实施例中，例如对于T调节性细胞(例如CD25+)耗减，使用大于5亿个细胞/ml。在另外的方面，使用600、700、800、或900百万个细胞/ml的细胞浓度。
在一个实施例中，有待耗减的免疫效应细胞群体包括约6x109个CD25+T细胞。在其他方面，有待耗减的免疫效应细胞群体包括约1x109至1x1010个CD25+T细胞，以及其间的任何整数值。在一个实施例中，所得群体T调节性耗减的细胞具有2x109个T调节性细胞(例如，CD25+细胞)或更少(例如，1x109个、5x108个、1x108个、5x107个、1x107个或更少的CD25+细胞)。
在一个实施例中，使用具有耗减管组(例如像管162-01)的CliniMAC系统从所述群体除去T调节性细胞(例如CD25+细胞)。在一个实施例中，将CliniMAC系统在耗减设置(例如像DEPLETION2.1)上运行。
不希望受特定理论的束缚，在单采血液成分术之前或在制造表达CAR的细胞产物期间降低受试者中免疫细胞的阴性调节剂水平(例如，减少不需要的免疫细胞(例如TREG细胞)的数量)可以降低受试者复发的风险。例如，耗减TREG细胞的方法是本领域已知的。减少TREG细胞的方法包括但不限于环磷酰胺、抗GITR抗体(本文所述的抗GITR抗体)、CD25耗减、及其组合。
在一些实施例中，制造方法包括在制造表达CAR的细胞之前降低例如，耗减)TREG细胞的数量。例如，制造方法包括使样品(例如单采血液成分术样品)与抗GITR抗体和/或抗CD25抗体(或其片段、或CD25结合配体)接触，例如以在制造表达CAR的细胞(例如T细胞、NK细胞)产物之前耗减TREG细胞。
在实施例中，在收集用于表达CAR的细胞产物制造的细胞之前，用一种或多种减少TREG细胞的疗法预先治疗受试者，从而降低受试者对表达CAR的细胞治疗复发的风险。在实施例中，减少TREG细胞的方法包括但不限于向受试者施用环磷酰胺、抗GITR抗体、CD25耗减、或其组合中的一种或多种。施用环磷酰胺、抗GITR抗体、CD25耗减、或其组合中的一种或多种可以在输注表达CAR的细胞产物之前、期间、或之后发生。
在实施例中，在收集用于表达CAR的细胞产物制造的细胞之前，用环磷酰胺预先治疗受试者，从而降低受试者对表达CAR的细胞治疗复发的风险。在实施例中，在收集用于表达CAR的细胞产物制造的细胞之前，用抗GITR抗体预先治疗受试者，从而降低受试者对表达CAR的细胞治疗复发的风险。
在一个实施例中，有待除去的细胞群体既不是调节性T细胞、或肿瘤细胞，也不是以其他方式对CART细胞的扩增和/或功能产生负面影响的细胞(例如表达CD14、CD11b、CD33、CD15、或由潜在免疫抑制细胞表达的其他标记的细胞)。在一个实施例中，设想将此类细胞与调节性T细胞和/或肿瘤细胞并行除去、或者在所述耗减之后、或以另一种顺序除去。
本文所述的方法可以包括多于一个的选择步骤，例如多于一个的耗减步骤。可以例如用针对阴性选择的细胞特有的表面标记的抗体组合来完成通过阴性选择富集T细胞群体。一种方法是通过负磁性免疫吸附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，所述负磁性免疫吸附或流式细胞术使用针对存在于阴性选择的细胞上的细胞表面标记的单克隆抗体的混合物。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物可以包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR、和CD8的抗体。
本文所述的方法可以进一步包括从表达肿瘤抗原(例如不包含CD25的肿瘤抗原，例如CD19、CD30、CD38、CD123、CD20、CD14或CD11b)的群体除去细胞，从而提供T调节性耗减的(例如CD25+耗减的)和肿瘤抗原耗减的细胞群体，所述细胞群体适于表达CAR(例如本文所述的CAR)。在一个实施例中，将表达肿瘤抗原的细胞与T调节性例如CD25+细胞同时除去。例如，抗CD25抗体或其片段、和抗肿瘤抗原抗体或其片段可以附接至可以用于除去细胞、或抗CD25抗体或其片段、或抗肿瘤抗原抗体或其片段的同一底物(例如珠)，可以附接至分开的珠(其混合物可以用于除去细胞)。在其他实施例中，T调节性细胞(例如CD25+细胞)的除去和表达肿瘤抗原的细胞的除去是连续的，并且可以例如以任何顺序发生。
还提供了包括以下的方法：从表达检查点抑制剂(例如本文所述的检查点抑制剂)的群体除去细胞(例如PD1+细胞、LAG3+细胞、和TIM3+细胞中的一种或多种)，从而提供T调节性耗减的(例如CD25+耗减的)细胞和检查点抑制剂耗减的细胞(例如PD1+、LAG3+和/或TIM3+耗减的细胞)的群体。示例性检查点抑制剂包括B7-H1、B7-1、CD160、P1H、2B4、PD1、TIM3、CEACAM(例如CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、LAG3、TIGIT、CTLA-4、BTLA和LAIR1。在一个实施例中，将表达检查点抑制剂的细胞与T调节性例如CD25+细胞同时除去。例如，抗CD25抗体或其片段、和抗检查点抑制剂抗体或其片段可以附接至可以用于除去细胞、或抗CD25抗体或其片段、和抗检查点抑制剂抗体或其片段的同一珠，可以附接至分开的珠(其混合物可以用于除去细胞)。在其他实施例中，T调节性细胞(例如CD25+细胞)的除去和表达检查点抑制剂的细胞的除去是连续的，并且可以例如以任何顺序发生。
本文所述的方法可以包括阳性选择步骤。例如，可以通过与抗CD3/抗CD28(例如3x28)缀合的珠(如
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M-450 CD3/CD28 T)孵育足以阳性选择所希望的T细胞的时间段来分离T细胞。在一个实施例中，所述时间段是约30分钟。在另外的实施例中，所述时间段的范围为从30分钟至36小时或更长以及其间的所有整数值。在另外的实施例中，所述时间段是至少1、2、3、4、5、或6小时。在又另一个实施例中，所述时间段是10至24小时，例如24小时。与其他细胞类型相比，在存在较少T细胞的任何情况下，如从肿瘤组织或免疫受损个体分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，可以使用更长的孵育时间来分离T细胞。此外，使用更长的孵育时间可以提高CD8+T细胞捕获的效率。因此，通过简单地缩短或延长使T细胞与CD3/CD28珠结合的时间和/或通过增加或减少珠与T细胞的比率(如本文进一步描述的)，可以在培养起始时或在所述过程期间的其他时间点优先地选择或针对T细胞亚群。另外，通过增加或减少抗CD3和/或抗CD28抗体在珠或其他表面上的比率，可以在培养起始时或在其他希望的时间点优先地选择或针对T细胞亚群。
在一个实施例中，可以选择表达以下中的一种或多种的T细胞群体：IFN-γ、TNFα、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-13、颗粒酶B、和穿孔素、或其他适当的分子(例如其他细胞因子)。用于筛选细胞表达的方法可以通过例如PCT公开号：WO 2013/126712中所述的方法确定。
为了通过阳性或阴性选择分离希望的细胞群体，可以改变细胞和表面(例如颗粒(如珠))的浓度。在某些方面，可能希望显著减小其中珠和细胞混合在一起的体积(例如，增加细胞的浓度)，以确保细胞和珠的最大接触。例如，在一方面，使用100亿个细胞/ml、90亿/ml、80亿/ml、70亿/ml、60亿/ml、或50亿/ml的浓度。在一方面，使用10亿个细胞/ml的浓度。在又一个方面，使用75、80、85、90、95、或100百万个细胞/ml的细胞浓度。在另外的方面，可以使用125或150百万个细胞/ml的浓度。
使用高浓度可以导致细胞产量增加、细胞活化、和细胞扩增。此外，使用高细胞浓度允许更有效地捕获可能弱表达感兴趣的靶抗原的细胞(如CD28阴性T细胞)、或来自存在许多肿瘤细胞的样品(例如白血病的血、肿瘤组织等)的细胞。此类细胞群体可能具有治疗价值，并且是希望获得的。例如，使用高浓度的细胞允许更有效地选择通常具有较弱CD28表达的CD8+T细胞。
在相关方面，可能希望使用较低的细胞浓度。通过显著稀释T细胞和表面的混合物(例如颗粒(如珠))，使颗粒与细胞之间的相互作用最小化。这选择了表达大量有待结合颗粒的所希望抗原的细胞。例如，CD4+T细胞表达较高水平的CD28，并且在稀释浓度下比CD8+T细胞更有效地捕获。在一方面，所使用的细胞的浓度是5x106/ml。在其他方面，所使用的浓度可以是从约1x105/ml至1x106/ml，以及其间的任何整数值。
在其他方面，可以将这些细胞在旋转器上以不同的速度在2℃-10℃或室温下孵育不同的时间长度。
用于刺激的T细胞也可以在洗涤步骤后冷冻。不希望受理论束缚，冷冻和随后的解冻步骤通过在细胞群体中去除粒细胞及在一定程度上去除单核细胞提供更均匀的产物。在除去血浆和血小板的洗涤步骤之后，可以将细胞悬浮在冷冻溶液中。虽然许多冷冻溶液和参数是本领域已知的并且在这种情况下将是有用的，但一种方法涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白的PBS，或含有10％葡聚糖40和5％葡萄糖、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO的培养基，或含有31.25％勃脈力-A、31.25％葡萄糖5％、0.45％NaCl、10％葡聚糖40和5％葡萄糖、20％人血清白蛋白和7.5％DMSO的培养基，或含有例如Hespan和勃脈力-A的其他适合的细胞冷冻培养基，然后将细胞以每分钟1°的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。可以使用其他控制冷冻的方法以及在-20℃或液氮中立即不受控制的冷冻。
在某些方面，如本文所述的将冷冻保存的细胞解冻并洗涤，并在使用本披露的方法活化之前将其在室温下静置1小时。
在本披露的上下文中还考虑了在可能需要如本文所述的扩增细胞之前的时间段从受试者收集血液样品或单采血液成分术产物。因此，可以在任何必要的时间点收集待扩增细胞的来源，并且分离和冷冻所需的细胞(如T细胞)以便后续用于免疫效应细胞疗法中，以用于将受益于免疫效应细胞疗法的任意数目的疾病或病症，如本文所述的那些。在一方面，血液样品或单采血液成分术取自基本健康的受试者。在某些方面，血液样品或单采血液成分术取自基本健康的受试者，所述受试者处于发展疾病的风险中，但尚未患发展疾病，并且将感兴趣的细胞分离并冷冻供以后使用。在某些方面，T细胞可以扩增、冷冻，并在以后使用。在某些方面，在诊断如本文所述的特定疾病之后但在任何治疗之前不久从患者收集样品。在另外的方面，在任何数量的相关治疗模式之前，从受试者的血液样品或单采血液成分术分离细胞，这些相关治疗模式包括但不限于用以下进行治疗：药剂(如那他珠单抗(natalizumab)、依法珠单抗、抗病毒剂)、化疗、放射、免疫抑制剂(如环孢菌素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、霉酚酸酯、和FK506)、抗体或其他免疫清除剂(如CAMPATH、抗CD3抗体、环磷酰胺、氟达拉滨(fludarabine)、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸、类固醇、FR901228)、和照射。
在本披露的另外的方面，在使受试者离开功能性T细胞的治疗之后直接从患者获得T细胞。在这点上，已观察到在某些癌症治疗(特别是使用破坏免疫系统的药物的治疗)之后，在患者通常将从治疗恢复期间治疗后不久，所获得的T细胞的质量因其离体扩增的能力可能是最佳或改善的。同样地，在使用本文所述的方法进行离体操作之后，这些细胞可以处于优选的状态以增强植入和体内扩增。因此，在本披露的上下文中考虑了在所述恢复阶段期间收集血细胞，包括T细胞、树突细胞、或造血谱系的其他细胞。此外，在某些方面，动员(例如，用GM-CSF动员)和调整方案可以用于在受试者中产生病状，其中特定细胞类型的再增殖、再循环、再生、和/或扩增是有利的，尤其是在治疗后确定的时间窗口。说明性细胞类型包括免疫系统的T细胞、B细胞、树突细胞、和其他细胞。
在一个实施例中，表达CAR分子(例如，本文所述的CAR分子)的免疫效应细胞获自已接受低免疫增强剂量的mTOR抑制剂的受试者。在实施例中，在足够的时间后(或在足够剂量的低免疫增强剂量的mTOR抑制剂后)收获被工程化以表达CAR的免疫效应细胞(例如T细胞)的群体，使得受试者中或从受试者收获的PD1阴性免疫效应细胞(例如T细胞)的水平、或PD1阴性免疫效应细胞(例如T细胞)/PD1阳性免疫效应细胞(例如T细胞)的比率已经至少是短暂的增加了。
在其他实施例中，已经被、或将被工程化以表达CAR的免疫效应细胞(例如T细胞)的群体可以通过接触一定量的mTOR抑制剂离体进行处理，所述mTOR抑制剂增加PD1阴性免疫效应子细胞(例如T细胞)的数量、或增加PD1阴性免疫效应细胞(例如T细胞)/PD1阳性免疫效应细胞(例如T细胞)的比率。
在一个实施例中，T细胞群体是二酰基甘油激酶(DGK)缺陷型。DGK缺陷型细胞包括不表达DGK RNA、或蛋白质、或具有降低、或抑制的DGK活性的细胞。DGK缺陷型细胞可以通过遗传方法产生，例如施用RNA干扰剂(例如siRNA、shRNA、miRNA)以降低或预防DGK表达。可替代地，可以通过用本文所述的DGK抑制剂处理产生DGK缺陷型细胞。
在一个实施例中，T细胞群体是Ikaros缺陷型。Ikaros缺陷型细胞包括不表达Ikaros RNA、或蛋白质、或具有降低或抑制的Ikaros活性的细胞，Ikaros缺陷型细胞可以通过遗传方法产生，例如施用RNA干扰剂(例如siRNA、shRNA、miRNA)以减少或预防Ikaros表达。可替代地，可以通过用Ikaros抑制剂(例如，来那度胺(lenalidomide))处理产生Ikaros缺陷型细胞。
在实施例中，T细胞群体是DGK缺陷型且Ikaros缺陷型的，例如不表达DGK和Ikaros、或者具有降低、或抑制的DGK和Ikaros活性。可以通过本文所述的任何方法产生此类DGK和Ikaros缺陷型细胞。
在实施例中，从受试者获得NK细胞。在另一个实施例中，NK细胞是NK细胞系，例如NK-92细胞系(Conkwest公司)。
在一些方面，本披露的细胞(例如，本披露的免疫效应细胞，例如，本披露的CAR-表达细胞)是诱导的多能干细胞(“iPSC”)或胚胎干细胞(ESC)，或是从所述iPSC和/或ESC产生(例如，从其分化)的T细胞。例如，通过本领域已知的方法，可以从外周血T淋巴细胞(例如从健康志愿者分离的外周血T淋巴细胞)产生iPSC。同样，此类细胞可以通过本领域已知的方法分化成T细胞。参见例如，Themeli M.等人,Nat.Biotechnol.[自然生物技术],31,928-933页(2013)；doi:10.1038/nbt.2678；WO 2014/165707。
在另一个实施例中，将本披露的TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)与表13中列出的或表13中引用的专利和专利申请中列出的治疗剂中的一种或多种组合使用，以治疗癌症。表13中列出了每个出版物(包括其中的所有结构式)。
表13.
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雌激素受体拮抗剂
在一些实施例中，将雌激素受体(ER)拮抗剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，所述雌激素受体拮抗剂是选择性雌激素受体降解剂(SERD)。SERD是与受体结合并导致例如受体的降解或下调的雌激素受体拮抗剂(Boer K.等人,(2017)Therapeutic Advances in Medical Oncology[肿瘤医学治疗进展]9(7):465-479)。ER是激素活化的转录因子，其对于例如人生殖系统的生长、发育和生理学是重要的。ER被例如激素雌激素(17β雌二醇)活化。ER表达和信号传导涉及癌症(例如，乳腺癌)，例如ER阳性(ER+)乳腺癌。在一些实施例中，SERD选自LSZ102、氟维司群、布利司群(brilanestrant)、或依拉司群(elacestrant)。
示例性雌激素受体拮抗剂
在一些实施例中，SERD包含国际申请公开号WO 2014/130310中所披露的化合物。在一些实施例中，SERD包含LSZ102。LSZ102具有化学名称：(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-羟基苯并[b]噻吩-3-基)氧基)苯基)丙烯酸。
其他示例性雌激素受体拮抗剂
在一些实施例中，SERD包含氟维司群(CAS登记号：129453-61-8)或国际申请公开号WO 2001/051056中所披露的化合物。氟维司群也称为ICI 182780、ZM 182780、
Figure BDA0003757898430001791
或(7α,17β)-7-{9-[(4,4,5,5,5-五氟戊基)亚磺酰基]壬基}雌-1,3,5(10)-三烯-3,17-二醇。氟维司群是具有0.29nM的IC50的高亲和力的雌激素受体拮抗剂。
在一些实施例中，SERD包含依拉司群(CAS登记号：722533-56-4)或美国专利号7,612,114中所披露的化合物。依拉司群也称为RAD1901、ER-306323或(6R)-6-{2-[乙基({4-[2-(乙基氨基)乙基]苯基}甲基)氨基]-4-甲氧基苯基}-5,6,7,8-四氢萘-2-醇。依拉司群是口服生物可利用的、非甾体结合选择性雌激素受体调节剂(SERM)和SERD。依拉司群还披露于例如Garner F等人,(2015)Anticancer Drugs[抗癌药物]26(9):948-56中。
在一些实施例中，SERD是布利司群(CAS登记号：1365888-06-7)或国际申请公开号WO 2015/136017中所披露的化合物。布利司群也称为GDC-0810、ARN810、RG-6046、RO-7056118或(2E)-3-{4-[(1E)-2-(2-氯-4-氟苯基)-1-(1H-吲唑-5-基)丁-1-烯-1-基]苯基}丙-2-烯酸。布利司群是具有0.7nM的IC50的下一代口服生物可利用的选择性SERD。布利司群是还披露于例如Lai A.等人(2015)Journal of Medicinal Chemistry[医药化学杂志]58(12):4888–4904中。
在一些实施例中，SERD选自RU 58668、GW7604、AZD9496、巴多昔芬、哌喷昔芬(pipendoxifene)、阿佐昔芬、OP-1074、或阿考比芬，例如，如McDonell等人(2015)Journalof Medicinal Chemistry[医药化学杂志]58(12)4883-4887中所披露的。其他示例性雌激素受体拮抗剂披露于，例如WO 2011/156518、WO 2011/159769、WO 2012/037410、WO 2012/037411、和US 2012/0071535中。
CDK4/6抑制剂
在一些实施例中，将周期蛋白依赖性激酶4或6(CDK4/6)的抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，CDK4/6抑制剂选自利波西利、阿贝西利(abemaciclib)(礼来公司)或帕柏西利。
示例性CDK4/6抑制剂
在一些实施例中，CDK4/6抑制剂包含利波西利(CAS登记号：1211441-98-3)或美国专利号8,415,355和8,685,980中所披露的化合物。
在一些实施例中，CDK4/6抑制剂包含国际申请公开号WO 2010/020675，以及美国专利号8,415,355和8,685,980(中所披露的化合物。
在一些实施例中，CDK4/6抑制剂包含利波西利(CAS登记号：1211441-98-3)。利波西利也称为LEE011、
Figure BDA0003757898430001801
或7-环戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺。
其他示例性CDK4/6抑制剂
在一些实施例中，CDK4/6抑制剂包含阿贝西利(CAS登记号：1231929-97-7)。阿贝西利也称为LY835219或N-[5-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶基]-5-氟-4-[4-氟-2-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-6-基]-2-嘧啶胺。阿贝西利是对CDK4和CDK6具有选择性的CDK抑制剂，并披露于例如Torres-Guzman R等人(2017)Oncotarget[肿瘤靶标]10.18632/oncotarget.17778中。
在一些实施例中，CDK4/6抑制剂包含帕柏西利(CAS登记号：571190-30-2)。帕柏西利也称为PD-0332991、
Figure BDA0003757898430001802
或6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-{[5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。帕柏西利抑制CDK4(具有11nM的IC50)和抑制CDK6(具有16nM的IC50)，并披露于例如Finn等人(2009)Breast Cancer Research[乳腺癌研究]11(5):R77中。
CXCR2抑制剂
在一些实施例中，将趋化因子(C-X-C基序)受体2(CXCR2)的抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，CXCR2抑制剂选自6-氯-3-((3,4-二氧代-2-(戊烷-3-基氨基)环丁-1-烯-1-基)氨基)-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基苯磺酰胺、达尼利星(danirixin)、瑞帕利星(reparixin)、或那伐利星(navarixin)。
示例性CXCR2抑制剂
在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含美国专利号7989497、8288588、8329754、8722925、9115087，美国申请公开号US 2010/0152205、US 2011/0251205和US 2011/0251206，以及国际申请公开号WO 2008/061740、WO 2008/061741、WO 2008/062026、WO2009/106539、WO 2010/063802、WO 2012/062713、WO 2013/168108、WO 2010/015613和WO2013/030803中所披露的化合物。在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含6-氯-3-((3,4-二氧代-2-(戊烷-3-基氨基)环丁-1-烯-1-基)氨基)-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基苯磺酰胺或其胆碱盐。在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含6-氯-3-((3,4-二氧代-2-(戊烷-3-基氨基)环丁-1-烯-1-基)氨基)-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基苯磺酰胺胆碱盐。在一些实施例中，CXCR2抑制剂是2-羟基-N,N,N-三甲基乙-1-铵3-氯-6-({3,4-二氧代-2-[(戊烷-3-基)氨基]环丁-1-烯-1-基}氨基)-2-(N-甲氧基-N-甲基氨磺酰基)苯酚酯(即，6-氯-3-((3,4-二氧代-2-(戊烷-3-基氨基)环丁-1-烯-1-基)氨基)-2-羟基-N-甲氧基-N-甲基苯磺酰胺胆碱盐)并具有以下化学结构：
Figure BDA0003757898430001821
其他示例性CXCR2抑制剂
在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含达尼利星(CAS登记号：954126-98-8)。达尼利星也称为GSK1325756或1-(4-氯-2-羟基-3-哌啶-3-基磺酰基苯基)-3-(3-氟-2-甲基苯基)脲。达尼利星披露于例如Miller等人Eur J Drug Metab Pharmacokinet[欧洲药物代谢和药代动力学杂志](2014)39:173–181；和Miller等人BMC Pharmacology and Toxicology[BMC药理学和毒理学](2015),16:18。
在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含瑞帕利星(CAS登记号：266359-83-5)。瑞帕利星也称为repertaxin或(2R)-2-[4-(2-甲基丙基)苯基]-N-甲基磺酰基丙酰胺。瑞帕利星是CXCR1/2的非竞争性变构抑制剂。瑞帕利星披露于例如Zarbock等人Br J Pharmacol.[英国药理学杂志]2008；155(3):357-64。
在一些实施例中，CXCR2抑制剂包含那伐利星。那伐利星也称为MK-7123、SCH527123、PS291822、或2-羟基-N,N-二甲基-3-[[2-[[(1R)-1-(5-甲基呋喃-2-基)丙基]氨基]-3,4-二氧代环丁烯-1-基]氨基]苯甲酰胺。那伐利星披露于例如Ning等人Mol CancerTher.[分子癌症治疗学]2012；11(6):1353-64。
CSF-1/1R结合剂
在一些实施例中，将CSF-1/1R结合剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂选自巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂，例如，M-CSF的单克隆抗体或Fab(例如，MCS110)，CSF-1R酪氨酸激酶抑制剂(例如，4-((2-(((1R,2R)-2-羟基环己基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶酰胺或BLZ945)，受体酪氨酸激酶抑制剂(RTK)(例如，培达替尼(pexidartinib))或靶向CSF-1R的抗体(例如，依米妥珠单抗(emactuzumab)或FPA008)。在一些实施例中，CSF-1/1R抑制剂是BLZ945。在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂是MCS110。在其他实施例中，CSF-1/1R结合剂是培达替尼。
示例性CSF-1结合剂
在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂包含巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂。M-CSF有时也称为CSF-1。在某些实施例中，CSF-1/1R结合剂是CSF-1的抗体(例如，MCS110)。在其他实施例中，CSF-1/1R结合剂是CSF-1R的抑制剂(例如，BLZ945)。
在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂包含M-CSF的单克隆抗体或Fab(例如，MCS110/H-RX1)或CSF-1的结合剂，披露于国际申请公开号WO 2004/045532和WO 2005/068503(包括H-RX1或5H4，例如，针对M-CSF的抗体分子或Fab片段)和US 9079956中。
表13a.示例性抗M-CSF抗体分子(MCS110)的氨基酸和核苷酸序列
Figure BDA0003757898430001831
Figure BDA0003757898430001841
在另一个实施例中，CSF-1/1R结合剂包含CSF-1R酪氨酸激酶抑制剂、4-((2-(((1R,2R)-2-羟基环己基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶酰胺(BLZ945)、或国际申请公开号WO 2007/121484和美国专利号7,553,854、8,173,689和8,710,048中所披露的化合物。
其他示例性CSF-1/1R结合剂
在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂包含培达替尼(CAS登记号1029044-16-3)。培达替尼也称为PLX3397或5-((5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基)-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2-胺。培达替尼是KIT、CSF1R和FLT3的小分子受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂。FLT3、CSF1R和FLT3在许多癌细胞类型中过表达或突变，并且在肿瘤细胞增殖和转移中起主要作用。PLX3397可以结合并抑制干细胞因子受体(KIT)、集落刺激因子-1受体(CSF1R)和FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的磷酸化，这可能导致抑制肿瘤细胞增殖和下调参与溶骨性转移性疾病的巨噬细胞、破骨细胞和肥大细胞。
在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂是依米妥珠单抗(emactuzumab)。依米妥珠单抗也称为RG7155或RO5509554。依米妥珠单抗是人源化IgG1 mAb靶向的CSF1R。在一些实施例中，CSF-1/1R结合剂是FPA008。FPA008是抑制CSF1R的人源化mAb。
A2aR拮抗剂
在一些实施例中，将腺苷A2a受体(A2aR)拮抗剂(例如，A2aR通路的抑制剂，例如腺苷抑制剂，例如A2aR或CD-73的抑制剂)与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，A2aR拮抗剂选自PBF509/NIR178(帕罗生物制药公司/诺华公司(Palobiofarma/Novartis))、CPI444/V81444(卡沃斯公司/基因泰克公司(Corvus/Genentech))、AZD4635/HTL-1071(阿斯利康公司/海普泰公司(AstraZeneca/Heptares))、维帕迪南(Vipadenant)(雷达思公司/朱诺公司(Redox/Juno))、GBV-2034(Globavir公司)、AB928(阿克斯生物科学公司(Arcus Biosciences))、茶碱、伊曲茶碱(协和发酵工业株式会社(Kyowa Hakko Kogyo))、托扎迪南/SYN-115(阿索尔公司(Acorda))、KW-6356(协和发酵工业株式会社)、ST-4206(理地安生物科学公司(LeadiantBiosciences))、和普瑞迪南/SCH 420814(默克公司/谢林公司(Merck/Schering))。
示例性A2aR拮抗剂
在一些实施例中，A2aR拮抗剂包含PBF509(NIR178)或美国专利号8,796,284或国际申请公开号WO 2017/025918中所披露的化合物。PBF509(NIR178)也称为NIR178。
其他示例性A2aR拮抗剂
在某些实施例中，A2aR拮抗剂包含CPI444/V81444。CPI-444和其他A2aR拮抗剂披露于国际申请公开号WO 2009/156737中。在某些实施例中，A2aR拮抗剂是(S)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氢呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。在某些实施例中，A2aR拮抗剂是(R)-7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氢呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺，或其外消旋体。在某些实施例中，A2aR拮抗剂是7-(5-甲基呋喃-2-基)-3-((6-(((四氢呋喃-3-基)氧基)甲基)吡啶-2-基)甲基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。
在某些实施例中，A2aR拮抗剂是AZD4635/HTL-1071。A2aR拮抗剂披露于国际申请公开号WO 2011/095625中。在某些实施例中，A2aR拮抗剂是6-(2-氯-6-甲基吡啶-4-基)-5-(4-氟苯基)-1,2,4-三嗪-3-胺。
在某些实施例中，A2aR拮抗剂是ST-4206(理地安生物科学公司)。在某些实施例中，A2aR拮抗剂是描述于美国专利号9,133,197中的A2aR拮抗剂。
在某些实施例中，A2aR拮抗剂是描述于美国专利号8,114,845和9,029,393、美国申请公开号2017/0015758和2016/0129108中的A2aR拮抗剂。
在一些实施例中，A2aR拮抗剂是伊曲茶碱(CAS登记号：155270-99-8)。伊曲茶碱也称为KW-6002或8-[(E)-2-(3,4-二甲氧基苯基)乙烯基]-1,3-二乙基-7-甲基-3,7-二氢-1H-嘌呤-2,6-二酮。例如，在LeWitt等人,(2008)Annals of Neurology[神经病学年鉴]63(3):295–302)中披露了伊曲茶碱。
在一些实施例中，A2aR拮抗剂是托扎迪南(Biotie公司)。托扎迪南也称为SYN115或4-羟基-N-(4-甲氧基-7-吗啉-4-基-1,3-苯并噻唑-2-基)-4-甲基哌啶-1-甲酰胺。托扎迪南阻断在A2a受体上的内源性腺苷的作用，导致多巴胺对D2受体的作用增强，并抑制mGluR5受体上的谷氨酸的作用。在一些实施例中，A2aR拮抗剂是普瑞迪南(CAS登记号：377727-87-2)。普瑞迪南也称为SCH 420814或2-(2-呋喃基)-7-[2-[4-[4-(2-甲氧基乙氧基)苯基]-1-哌嗪基]乙基]7H-吡唑并[4,3-e][1,2,4]三唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺。普瑞迪南被开发为一种药物，可作为腺苷A2A受体的有效和选择性拮抗剂。
在一些实施例中，A2aR拮抗剂是维帕迪南。维帕迪南也称为BIIB014、V2006、或3-[(4-氨基-3-甲基苯基)甲基]-7-(呋喃-2-基)三唑并[4,5-d]嘧啶-5-胺。其他示例性A2aR拮抗剂包括，例如ATL-444、MSX-3、SCH-58261、SCH-412,348、SCH-442,416、VER-6623、VER-6947、VER-7835、CGS-15943、和ZM-241,385。
在一些实施例中，A2aR拮抗剂是A2aR通路拮抗剂(例如，CD-73抑制剂，例如抗CD73抗体)是MEDI9447。MEDI9447是对CD73具有特异性的单克隆抗体。通过CD73靶向腺苷的细胞外产生可降低腺苷的免疫抑制作用。MEDI9447报道为具有一系列活性，例如，抑制CD73外核苷酸酶活性、减轻AMP介导的淋巴细胞抑制、以及抑制同基因肿瘤生长。MEDI9447可以驱动肿瘤微环境中骨髓和淋巴浸润白细胞群体两者的变化。这些变化包括例如CD8效应细胞和活化的巨噬细胞的增加，以及骨髓源性抑制细胞(MDSC)和调节性T淋巴细胞的比例的降低。
IDO抑制剂
在一些实施例中，将吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和/或色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)的抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，IDO抑制剂选自(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亚硝基亚甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺(也称为依多司他(epacadostat)或INCB24360)、英多莫德()、(1-甲基-D-色氨酸)、α-环己基-5H-咪唑并[5,1-a]异吲哚-5-乙醇(也称为NLG919)、英多莫德、和BMS-986205(以前称为F001287)。
示例性IDO抑制剂
在一些实施例中，IDO/TDO抑制剂是英多莫德(纽琳基因公司(New LinkGenetics))。英多莫德，1-甲基-色氨酸的D异构体，是一种口服施用的小分子吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)通路抑制剂，所述抑制剂破坏了由肿瘤逃避免疫介导的破坏的机制。
在一些实施例中，IDO/TDO抑制剂是NLG919(纽琳基因公司)。NLG919是有效的IDO(吲哚胺-(2,3)-双加氧酶)通路抑制剂，在无细胞测定中具有7nM/75nM的Ki/EC50。
在一些实施例中，IDO/TDO抑制剂是依多司他(CAS登记号：1204669-58-8)。依多司他也称为INCB24360或INCB024360(因赛特公司)。依多司他是有效的和选择性的吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO1)抑制剂，具有10nM的IC50，对其他相关酶(例如IDO2或色氨酸2,3-双加氧酶(TDO))具有高选择性。
在一些实施例中，IDO/TDO抑制剂是F001287(福克斯公司/BMS公司(Flexus/BMS))。F001287是吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)的小分子抑制剂。
STING激动剂
在一些实施例中，将STING激动剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，STING激动剂是环二核苷酸，例如包含嘌呤或嘧啶核碱基(例如，腺苷、鸟嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶、或胞嘧啶核碱基)的环二核苷酸。在一些实施例中，环二核苷酸的核碱基包含相同核碱基或不同核碱基。
在一些实施例中，STING激动剂包含腺苷或鸟苷核碱基。在一些实施例中，STING激动剂包含一个腺苷核碱基和一个鸟苷核碱基。在一些实施例中，STING激动剂包含两个腺苷核碱基或两个鸟苷核碱基。
在一些实施例中，STING激动剂包含修饰的环二核苷酸，例如包含修饰的核碱基、修饰的核糖、或修饰的磷酸酯键。在一些实施例中，经修饰的环二核苷酸包含修饰的磷酸酯键，例如硫代磷酸键。
在一些实施例中，STING激动剂包含具有2’,5’或3’,5’磷酸酯键的环二核苷酸(例如，修饰的环二核苷酸)。在一些实施例中，STING激动剂包含在磷酸酯键周围具有Rp或Sp立体化学的环二核苷酸(例如，修饰的环二核苷酸)。
在一些实施例中，STING激动剂是MK-1454(默克公司)。MK-1454是活化STING通路的干扰素基因(STING)激动剂的环二核苷酸刺激剂。示例性STING激动剂披露于例如PCT公开号WO 2017/027645中。
半乳凝素抑制剂
在一些实施例中，将半乳凝素(例如，半乳凝素-1或半乳凝素-3)抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，所述组合包含半乳凝素-1抑制剂和半乳凝素-3抑制剂。在一些实施例中，所述组合包含靶向半乳凝素-1和半乳凝素-3两者的双特异性抑制剂(例如，双特异性抗体分子)。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂选自抗半乳凝素抗体分子、GR-MD-02(半乳凝素治疗学公司(Galectin Therapeutics))、半乳凝素-3C(曼德勒医学院(Mandal Med))、Anginex、或OTX-008(翁科埃斯克斯公司(OncoEthix)，默克公司)。半乳凝素是与β-半乳糖苷酶糖结合的蛋白质家族。
蛋白质的半乳凝素家族包含至少半乳凝素-1、半乳凝素-2、半乳凝素-3、半乳凝素-4、半乳凝素-7、和半乳凝素-8。半乳凝素也称为S型凝集素，并且是具有例如细胞内和细胞外功能的可溶性蛋白质。
半乳凝素-1和半乳凝素-3在不同肿瘤类型中高度表达。半乳凝素-1和半乳凝素-3可以促进血管生成和/或将骨髓细胞重编程为前肿瘤表型，例如增强骨髓细胞的免疫抑制。可溶性半乳凝素-3也可以结合和/或灭活浸润性T细胞。
示例性半乳凝素抑制剂
在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是抗体分子。在实施例中，抗体分子是单特异性抗体分子并结合单一表位。例如，具有多个免疫球蛋白可变结构域序列的单特异性抗体分子，每个免疫球蛋白可变结构域序列结合相同的表位。在实施例中，半乳凝素抑制剂是抗半乳凝素(例如抗半乳凝素-1或抗半乳凝素-3)抗体分子。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是抗半乳凝素-1抗体分子。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是抗半乳凝素-3抗体分子。
在实施例中，抗体分子是多特异性抗体分子，例如它包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一表位和第二表位重叠。在实施例中，第一表位和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施例中，多特异性抗体分子包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子、或四特异性抗体分子。
在实施例中，半乳凝素抑制剂是多特异性抗体分子。在实施例中，多特异性抗体分子是双特异性抗体分子。双特异性抗体对不多于两种抗原具有特异性。双特异性抗体分子的特征在于具有对第一表位的结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列、和具有对第二表位的结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在实施例中，第一和第二表位在相同的抗原(例如相同的蛋白质(或多聚体蛋白质的亚基))上。在实施例中，第一表位和第二表位重叠。在实施例中，第一表位和第二表位不重叠。在实施例中，第一和第二表位在不同的抗原(例如不同的蛋白质(或多聚体蛋白质的不同亚基))上。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体和对第二表位具有结合特异性的半抗体。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的半抗体、或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的半抗体、或其片段。在实施例中，双特异性抗体分子包含对第一表位具有结合特异性的scFv、或其片段，以及对第二表位具有结合特异性的scFv、或其片段。在实施例中，半乳凝素抑制剂是双特异性抗体分子。在实施例中，第一表位位于半乳凝素-1上，并且第二表位位于半乳凝素-3上。
用于产生双特异性或异源二聚体抗体分子的方案在本领域中是已知的；这些方案包括但不限于：“杵臼结构”途径，例如在US 5731168中所述；静电导向Fc配对，如例如在WO09/089004、WO 06/106905和WO 2010/129304中所述；链交换工程化结构域(SEED)异源二聚体形成，如例如在WO 07/110205中所述；Fab臂交换，如例如在WO 08/119353、WO 2011/131746和WO 2013/060867中所述；双抗体缀合物，例如使用具有胺反应性基团和巯基反应性基团的异双官能试剂，通过抗体交联以产生双特异性结构，如例如在US 4433059中所述；通过对两条重链之间的二硫键进行还原和氧化的循环，通过重组来自不同抗体的半抗体(重-轻链对或Fab)产生的双特异性抗体决定簇，如例如在US 4444878中所述；三功能抗体，例如通过巯基反应性基团交联的三个Fab'片段，如例如在US 5273743中所述；生物合成结合蛋白，例如通过C-末端尾优选通过二硫键或胺反应性化学交联作用交联的scFv对，如例如在US 5534254中所述；双功能抗体，例如具有不同结合特异性的Fab片段，这些Fab片段通过已经替代恒定结构域的亮氨酸拉链(例如，c-fos和c-jun)二聚化，如例如在US 5582996中所述；如例如US 5591828中所述的双特异性和寡特异性单价和低价受体，例如通过一个抗体的CH1区与典型地具有相关轻链的另一个抗体的VH区之间的多肽间隔区连接的两个抗体(两个Fab片段)的VH-CH1区；双特异性DNA-抗体缀合物，例如抗体或Fab片段通过DNA的双链段交联，如例如在US 5635602中所述；双特异性融合蛋白，例如含有两个scFv(它们之间具有亲水性螺旋肽接头)和一个完全恒定区的表达构建体，如例如在US 5637481中所述；多价和多特异性结合蛋白，例如具有Ig重链可变区结合区的第一结构域和Ig轻链可变区结合区的第二结构域的多肽二聚体，通常称为双体抗体(也披露了更高级结构，产生双特异性、三特异性或四特异性分子，如例如在US 5837242中所述；具有连接的VL和VH链(它们进一步用肽间隔区连接至抗体铰链区和CH3区)的微型抗体构建体，其可以二聚化形成双特异性/多价分子，如例如在US 5837821所述；用短肽接头(例如5或10个氨基酸)连接的或在任一取向上完全没有接头连接的VH和VL结构域，这些VH和VL结构域可以形成二聚体以形成双特异性双体抗体；三聚体和四聚体，如例如在US 5844094中所述；VH结构域(或家族成员中的VL结构域)的串，其通过肽键与C-末端的可交联基团连接，这些可交联基团进一步与VL结构域相关联以形成一系列FV(或scFv)，如例如在US 5864019中所述；以及具有经肽接头连接的VH和VL结构域两者的单链结合多肽通过非共价或化学交联组合成多价结构，以使用scFV或双体抗体类型形式形成例如同二价、异二价、三价和四价结构，如例如在US 5869620中所述。另外的示例性多特异性和双特异性分子及其制备方法发现于例如US 5910573、US5932448、US 5959083、US 5989830、US 6005079、US 6239259、US 6294353、US 6333396、US6476198、US 6511663、US 6670453、US 6743896、US 6809185、US 6833441、US 7129330、US7183076、US 7521056、US 7527787、US 7534866、US 7612181、US 2002/004587 A1、US2002/076406 A1、US 2002/103345 A1、US 2003/207346 A1、US 2003/211078 A1、US 2004/219643 A1、US 2004/220388 A1、US 2004/242847 A1、US 2005/003403 A1、US 2005/004352 A1、US 2005/069552 A1、US 2005/079170 A1、US 2005/100543 A1、US 2005/136049 A1、US 2005/136051 A1、US 2005/163782 A1、US 2005/266425 A1、US 2006/083747 A1、US 2006/120960 A1、US 2006/204493 A1、US 2006/263367 A1、US 2007/004909 A1、US 2007/087381 A1、US 2007/128150 A1、US 2007/141049 A1、US 2007/154901 A1、US 2007/274985 A1、US 2008/050370 A1、US 2008/069820 A1、US 2008/152645 A1、US 2008/171855 A1、US 2008/241884 A1、US 2008/254512 A1、US 2008/260738 A1、US 2009/130106 A1、US 2009/148905 A1、US 2009/155275 A1、US 2009/162359 A1、US 2009/162360 A1、US 2009/175851 A1、US 2009/175867 A1、US 2009/232811 A1、US 2009/234105 A1、US 2009/263392 A1、US 2009/274649 A1、EP 346087A2、WO 00/06605 A2、WO 02/072635 A2、WO 04/081051 A1、WO 06/020258 A2、WO 2007/044887A2、WO 2007/095338 A2、WO 2007/137760 A2、WO 2008/119353 A1、WO 2009/021754 A2、WO2009/068630 A1、WO 91/03493 A1、WO 93/23537 A1、WO 94/09131 A1、WO 94/12625 A2、WO95/09917 A1、WO 96/37621 A2、WO 99/64460 A1。
在其他实施例中，抗半乳凝素(例如抗半乳凝素-1或抗半乳凝素-3)抗体分子(例如，单特异性、双特异性、或多特异性抗体分子)与另一个配偶体(蛋白质，例如作为融合分子，如融合蛋白)共价地连接(例如融合)。在一个实施例中，双特异性抗体分子对第一靶标(例如，针对半乳凝素-1)具有第一结合特异性，对第二靶标(例如，半乳凝素-3)具有第二结合特异性。
本发明提供了分离的核酸分子(其编码上述抗体分子)其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于RNA、基因组DNA和cDNA。
在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是可以结合和抑制半乳凝素(例如半乳凝素-1或半乳凝素-3)功能的肽，例如蛋白质。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是可以结合和抑制半乳凝素-3功能的肽。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是肽半乳凝素-3C。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是披露于美国专利6,770,622中的半乳凝素-3。
半乳凝素-3C是半乳凝素-3的N-末端截短的蛋白质，并且例如作为半乳凝素-3的竞争性抑制剂起作用。半乳凝素-3C预防内源性半乳凝素-3与例如癌细胞(例如表面上的层粘连蛋白)和细胞外基质(ECM)上的其他β-半乳糖苷酶的糖缀合物结合。半乳凝素-3C和其他示例性半乳凝素抑制肽披露于美国专利6,770,622中。
在一些实施例中，半乳凝素-3C包含SEQ ID NO:294或与其基本相同(例如，90％、95％或99％同一性)的氨基酸的氨基酸序列。
GAPAGPLIVPYNLPLPGGVVPRMLITILGTVKPNANRIALDFQRGNDVAFHFNPRFNENNRRVIVCNTKLDNNWGREERQSVFPFESGKPFKIQVLVEPDHFKVAVNDAHLLQYNHRVKKLNEISKLGISGDIDITSASYTMI(SEQ ID NO:294)。
在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是可以结合并抑制半乳凝素-1功能的肽。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是肽Anginex：Anginex是结合半乳凝素-1的抗血管生成肽(Salomonsson E,等人,(2011)Journal of Biological Chemistry[生物化学杂志],286(16):13801-13804。Anginex与半乳凝素-1的结合可以干扰例如半乳凝素-1的促血管生成作用。
在一些实施例中，半乳凝素(例如半乳凝素-1或半乳凝素-3)抑制剂是非肽的拓扑模拟(topomimetic)分子。在一些实施例中，所述非肽的拓扑模拟(topomimetic)半乳凝素抑制剂是OTX-008(OncoEthix)。在一些实施例中，所述非肽的拓扑模拟是披露于美国专利8,207,228中的非肽的拓扑模拟。OTX-008(也称为PTX-008或Calixarene 0118)是半乳凝素-1的选择性变构抑制剂。OTX-008具有化学名称：N-[2-(二甲基氨基)乙基]-2-{[26,27,28-三({[2-(二甲基氨基)乙基]氨基甲酰基}甲氧基)五环[19.3.1.1,7.1,.15,]二十八-1(25),3(28),4,6,9(27),1012,15,17,19(26),21,23-十二烯-25-基]氧基}乙酰胺。
在一些实施例中，半乳凝素(例如半乳凝素-1或半乳凝素-3)抑制剂是基于碳水化合物的化合物。在一些实施例中，半乳凝素抑制剂是GR-MD-02(半乳凝素治疗学公司(Galectin Therapeutics))。
在一些实施例中，GR-MD-02是半乳凝素-3抑制剂。GR-MD-02是半乳糖-叉状多糖，也称为例如半乳糖阿拉伯-鼠李半乳糖醛酸酯。GR-MD-02和其他半乳糖-叉状多糖聚合物(例如，如半乳糖阿拉伯-鼠李半乳糖醛酸酯)披露于美国专利号：8,236,780和美国公开2014/0086932中。
MEK抑制剂
在一些实施例中，将MEK抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，MEK抑制剂选自曲美替尼、司美替尼、AS703026、BIX 02189、BIX02188、CI-1040、PD0325901、PD98059、U0126、XL-518、G-38963、或G02443714。在一些实施例中，MEK抑制剂是曲美替尼。
示例性MEK抑制剂
在一些实施例中，MEK抑制剂是曲美替尼。曲美替尼也称为JTP-74057、TMT212、N-(3-{3-环丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙酰胺、或Mekinist(CAS号871700-17-3)。
其他示例性MEK抑制剂
在一些实施例中，MEK抑制剂包含司美替尼，其具有化学名称：(5-[(4-溴-2-氯苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑e-6-甲酰胺。司美替尼也称为AZD6244或ARRY 142886，例如，如PCT公开号WO 2003077914中所述。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含AS703026、BIX 02189或BIX02188。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也称为CI-1040或PD184352)，例如，如PCT公开号WO 2000035436中所述)。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也称为PD0325901)，例如，如PCT公开号WO 2002006213中所述)。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含2’-氨基-3’-甲氧基黄酮(也称为PD98059)，其可从德国比亚芬股份有限公司(Biaffin GmbH&Co.,KG)获得。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含2,3-双[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亚甲基]-丁二腈(也称为U0126)，例如，如美国专利号2,779,780中所述)。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含XL-518(也称为GDC-0973)，其具有CAS号1029872-29-4，并且可从ACC集团(ACC Corp.)获得。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含G-38963。
在一些实施例中，MEK抑制剂包含G02443714(也称为AS703206)。
MEK抑制剂的另外的实例披露于WO 2013/019906、WO 03/077914、WO 2005/121142、WO 2007/04415、WO 2008/024725和WO 2009/085983中。MEK抑制剂另外的实例包括但不限于2,3-双[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亚甲基]-丁二腈(也称为U0126，并描述于美国专利号2,779,780中)；(3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(乙基氨基)-8,9,16-三羟基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氢-1H-2-苯并氧杂环四癸炔-1,7(8H)-二酮](也称为E6201，描述于PCT公开号WO 2003076424中)；威罗菲尼(PLX-4032，CAS 918504-65-1)；(R)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733，CAS 1035555-63-5)；匹玛舍替(pimasertib)(AS-703026，CAS 1204531-26-9)；2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(AZD8330)；和3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-N-(2-羟基乙氧基)-5-[(3-氧代-[1,2]噁嗪烷-2-基)甲基]苯甲酰胺(CH 4987655或Ro 4987655)。
c-MET抑制剂
在一些实施例中，将c-MET抑制剂与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。c-MET(在许多肿瘤细胞类型中过表达或突变的受体酪氨酸激酶)在肿瘤细胞增殖、存活、侵袭、转移和肿瘤血管生成中起关键作用。c-MET的抑制可以在过表达c-MET蛋白或表达组成型活化的c-MET蛋白的肿瘤细胞中诱导细胞死亡。
在一些实施例中，c-MET抑制剂选自卡玛替尼(INC280)、JNJ-3887605、AMG 337、LY2801653、MSC2156119J、克唑替尼(crizotinib)、替万替尼、或戈伐替尼(golvatinib)。
示例性c-MET抑制剂
在一些实施例中，c-MET抑制剂包含卡玛替尼(INC280)或美国专利号7,767,675和US 8,461,330中描述的化合物。
其他示例性c-MET抑制剂
在一些实施例中，c-MET抑制剂包含JNJ-38877605。JNJ-38877605是口服可用的c-Met的小分子抑制剂。JNJ-38877605选择性结合c-MET，从而抑制c-MET磷酸化并破坏c-Met信号转导通路。
在一些实施例中，c-Met抑制剂是AMG 208。AMG 208是c-MET的选择性小分子抑制剂。AMG 208抑制c-MET的配体依赖性和配体非依赖性活化，抑制其酪氨酸激酶活性，这可能导致过表达c-Met的肿瘤中的细胞生长抑制。
在一些实施例中，c-Met抑制剂包含AMG 337。AMG 337是c-Met的口服生物可利用的抑制剂。AMG 337选择性结合c-MET，从而破坏c-MET信号转导通路。
在一些实施例中，c-Met抑制剂包含LY2801653。LY2801653是口服可用的c-Met的小分子抑制剂。LY2801653选择性结合c-MET，从而抑制c-MET磷酸化作用并破坏c-Met信号转导通路。
在一些实施例中，c-Met抑制剂包含MSC2156119J。MSC2156119J是口服生物可利用的c-Met抑制剂。MSC2156119J选择性结合c-MET，抑制c-MET磷酸化作用并破坏c-Met介导的信号转导通路。
在一些实施例中，c-MET抑制剂是卡玛替尼。卡玛替尼也称为INCB028060。卡玛替尼是口服生物可利用的c-MET抑制剂。卡玛替尼选择性结合c-Met，从而抑制c-Met磷酸化作用并破坏c-Met信号转导通路。
在一些实施例中，c-MET抑制剂包含克唑替尼。克唑替尼也称为PF-02341066。克唑替尼是口服可用的受体酪氨酸激酶间变性淋巴瘤激酶(ALK)和c-Met/肝细胞生长因子受体(HGFR)的基于氨基吡啶的抑制剂。克唑替尼以ATP竞争方式结合并抑制ALK激酶和ALK融合蛋白。此外，克唑替尼抑制c-Met激酶，并破坏c-Met信号传导通路。总之，所述药剂抑制肿瘤细胞生长。
在一些实施例中，c-MET抑制剂包含戈伐替尼。戈伐替尼是口服生物可利用的c-MET和VEGFR-2的双激酶抑制剂，所述抑制剂具有潜在的抗肿瘤活性。戈伐替尼结合并抑制c-MET和VEGFR-2的活性，这可能抑制肿瘤细胞生长和过表达这些受体酪氨酸激酶的肿瘤细胞的存活。
在一些实施例中，c-MET抑制剂是替万替尼。替万替尼也称为ARQ197。替万替尼是口服生物可利用的c-MET小分子抑制剂。替万替尼结合c-MET蛋白并破坏c-Met信号转导通路，可在过表达c-MET蛋白或表达组成型活化的c-Met蛋白的肿瘤细胞中诱导细胞死亡。
IL-1β抑制剂
白细胞介素-1(IL-1)细胞因子家族是一组分泌型多效性细胞因子，在炎症和免疫应答中起重要作用。在包括癌症的多种临床背景中观察到IL-1的增加(Apte等人(2006)Cancer Metastasis Rev.[癌症和转移综述]387-408页；Dinarello(2010)Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]599-606页)。IL-1家族尤其包含IL-1β(IL-1b)和IL-1α(IL-1a)。IL-1b在肺癌、乳腺癌和结直肠癌中升高(Voronov等人(2014)Front Physiol.[生物学前沿]114页)并且与预后不良相关(Apte等人(2000)Adv.Exp.Med.Biol.[实验医学与生物学进展]277-88页)。不希望受理论束缚，据信在一些实施例中，衍生自肿瘤微环境和通过恶性细胞的分泌型IL-1b促进肿瘤细胞增殖、增加侵袭性并抑制抗肿瘤免疫应答(部分通过招募抑制性嗜中性粒细胞)(Apte等人(2006)Cancer Metastasis Rev.[癌症和转移综述]387-408页；Miller等人(2007)J.Immunol.[免疫学杂志]6933-42页)。实验数据指示IL-1b的抑制导致肿瘤负荷和转移的减少(Voronov等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]U.S.A.2645-50页)。
在一些实施例中，将白细胞介素-1β(IL-1β)与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。在一些实施例中，IL-1β抑制剂选自卡那单抗(canakinumab)、格沃吉珠单抗(gevokizumab)、阿那白滞素、或利纳西普(Rilonacept)。在一些实施例中，IL-1β抑制剂是卡那单抗。
示例性IL-1β抑制剂
在一些实施例中，IL-1β抑制剂是卡那单抗。卡那单抗也称为ACZ885或
Figure BDA0003757898430001981
卡那单抗是人单克隆IgG1/κ抗体，其中和人IL-1β的生物活性。
卡那单抗披露于例如WO 2002/16436、US 7,446,175、和EP 1313769中。卡那单抗的重链可变区具有以下氨基酸序列：MEFGLSWVFLVALLRGVQCQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSVYGMNWVRQAPGKGLEWVAIIWYDGDNQYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNGLRAEDTAVYYCARDLRTGPFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:297)(在US 7,446,175中披露为SEQ ID NO:1)。卡那单抗的轻链可变区具有以下氨基酸序列：MLPSQLIGFLLLWVPASRGEIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASQSIGSSLHWYQQKPDQSPKLLIKYASQSFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAAAYYCHQSSSLPFTFGPGTKVDIK(SEQ ID NO:298)(在US 7,446,175中披露为SEQ ID NO:2)。
卡那单抗已被用于例如成人和儿童中的Cryopyrin蛋白相关周期综合征(CAPS)的治疗、用于系统性幼年型特发性关节炎(SJIA)的治疗、用于成人中急性痛风性关节炎发作的对症治疗、和用于其他IL-1β驱动的炎性疾病。不希望受理论束缚，据信在一些实施例中，IL-1β抑制剂(例如，卡那单抗)可以增加抗肿瘤免疫应答，例如通过阻断IL-1b的一种或多种功能，包括例如募集免疫抑制性中性粒细胞对肿瘤微环境的影响、刺激肿瘤血管生成和/或促进转移(Dinarello(2010)Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]599-606页)。
在一些实施例中，本文所述的组合包括IL-1β抑制剂、卡那单抗或WO 2002/16436中所披露的化合物、以及免疫检查点分子的抑制剂(例如，PD-1的抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子))。IL-1是分泌型多效性细胞因子，在炎症和免疫应答中起重要作用。在包括癌症的多种临床背景中观察到IL-1的增加(Apte等人(2006)Cancer Metastasis Rev.[癌症和转移综述]387-408页；Dinarello(2010)Eur.J.Immunol.[欧洲免疫学杂志]599-606页)。IL-1b在肺癌、乳腺癌和结直肠癌中升高(Voronov等人(2014)Front Physiol.[生物学前沿]114页)并且与预后不良相关(Apte等人(2000)Adv.Exp.Med.Biol.[实验医学与生物学进展]277-88页)。不希望受理论束缚，据信在一些实施例中，衍生自肿瘤微环境和通过恶性细胞的分泌型IL-1b促进肿瘤细胞增殖、增加侵袭性并抑制抗肿瘤免疫应答(部分通过招募抑制性嗜中性粒细胞)(Apte等人(2006)Cancer Metastasis Rev.[癌症和转移综述]387-408页；Miller等人(2007)J.Immunol.[免疫学杂志]6933-42页)。实验数据指示IL-1b的抑制导致肿瘤负荷和转移的减少(Voronov等人(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]U.S.A.2645-50页)。卡那单抗可以结合IL-1b并抑制IL-1介导的信号传导。因此，在某些实施例中，IL-1β抑制剂(例如，卡那单抗)增强或用于增强PD-1抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子)的免疫介导的抗肿瘤作用。
在一些实施例中，IL-1β抑制剂、卡那单抗或WO 2002/16436中所披露的化合物、以及免疫检查点分子的抑制剂(例如，PD-1的抑制剂(例如，抗PD-1抗体分子))各自以剂量和/或时间表施用，组合以实现所希望的抗肿瘤活性。
MDM2抑制剂
在一些实施例中，将小鼠双微体2同源物(MDM2)与TGFβ抑制剂(和/或PD1、PD-L1、或PD-L2抑制剂)组合使用，以治疗疾病(例如癌症)。MDM2的人同源物也称为HDM2。在一些实施例中，本文所述的MDM2抑制剂也称为HDM2抑制剂。在一些实施例中，MDM2抑制剂选自HDM201或CGM097。
在实施例中，MDM2抑制剂包含(S)-1-(4-氯苯基)-7-异丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1r,4S)-4-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-基)环己基)甲基)氨基)苯基)-1,2-二氢异喹啉-3(4H)-酮(也称为CGM097)或PCT公开号WO 2011/076786中所披露的化合物，以治疗障碍，例如本文所述的障碍)。在一个实施例中，将本文披露的治疗剂与CGM097组合使用。
在实施例中，MDM2抑制剂包含p53和/或p53/Mdm2相互作用的抑制剂。在实施例中，MDM2抑制剂包含(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)-6-(4-氯苯基)-2-(2,4-二甲氧基嘧啶-5-基)-1-异丙基-5,6-二氢吡咯并[3,4-d]咪唑-4(1H)-酮(也称为HDM201)或PCT公开号WO 2013/111105中所披露的化合物，以治疗障碍，例如本文所述的障碍。在一个实施例中，将本文披露的治疗剂与HDM201组合使用。在一些实施例中，口服施用HDM201。
在一个实施例中，本文披露的组合适用于体内癌症的治疗。例如，所述组合可用于抑制癌性肿瘤的生长。所述组合还可以与以下中的一种或多种组合使用：标准护理治疗(standard of care treatment)(例如，用于癌症或感染性障碍)、疫苗(例如治疗性癌症疫苗)、细胞疗法、放射疗法、手术或任何其他治疗剂或模式，以治疗本文的障碍。例如，为了实现免疫的抗原特异性增强，可以将所述组合与感兴趣的抗原一起施用。
药物组合物、配制品和试剂盒
在另一个方面，本披露提供了组合物，例如药学上可接受的组合物，其包括与药学上可接受的载剂一起配制的本文所述的组合。如本文所用，“药学上可接受的载剂”包括生理学上相容的任何和所有溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。载剂可适用于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。
本文所述的组合物可以呈多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)，分散体或悬浮液，脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。所述抑制剂(包括抗体抑制剂)可以呈可注射或可输注溶液的形式。施用方式是肠胃外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在实施例中，将抗体通过静脉内输注或注射施用。在另一个实施例中，将抗体通过肌肉内或皮下注射施用。
如本文所用，短语“肠胃外施用”和“经肠胃外施用”意指除了肠道和局部施用以外的施用方式，通常通过注射施用，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬脑膜外以及胸骨内注射和输注。
治疗组合物在制造和贮藏条件下典型地应该是无菌和稳定的。所述组合物可以被配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或其他适合于高抗体浓度的有序结构。可以通过以下来制备无菌可注射溶液：将活性化合物(例如，抗体或抗体部分)以所需的量，根据需要，与一种以上列举的成分或这些成分的组合并入适当的溶剂中，然后进行过滤灭菌。总体上，通过将有效化合物掺入无菌媒介物来制备分散体，所述无菌媒介物含有基础分散介质以及来自以上列举的所需其他成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这些方法产生活性成分的粉末以及来自其以前的无菌过滤溶液的任何其他所需成分。例如，可以通过使用包衣(如卵磷脂)、通过在分散体的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持溶液的适当流动性。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸盐和明胶)来延长可注射组合物的吸收。
可以将本文所述的组合或组合物配制成适合于向本文所述的受试者施用(例如静脉内施用)的配制品(例如，剂量配制品或剂型)。本文所述的配制品可以是液体配制品、冻干配制品、或重构的配制品。
在某些实施例中，所述配制品是液体配制品。在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含TGFβ抑制剂(例如，如本文所述的抗TGFβ抗体分子)和缓冲剂。在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含PD-1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-1抗体分子)和缓冲剂。在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含PD-L1抑制剂(例如，本文所述的抗PD-L1抗体分子)和缓冲剂。在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含PD-L2抑制剂(例如，抗PD-L2抗体)和缓冲剂。
在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含如本文披露的抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子以约25mg/mL至约250mg/mL的浓度存在。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约60mg/mL至约180mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约70mg/mL至约150mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL至约120mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约90mg/mL至约110mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约150mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约100mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约150mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约100mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约60mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约70mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约90mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约100mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约110mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约120mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约130mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约140mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约150mg/mL。在一些实施例中，所述配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/L2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL至约120mg/mL(例如，约100mg/mL)。
在一些实施例中，所述配制品(例如，液体配制品)包含含有组氨酸的缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)。在某些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)以以下浓度存在：约1mM至约100mM，例如约2mM至约50mM、约5mM至约40mM、约10mM至约30mM、约15至约25mM、约5mM至约40mM、约5mM至约30mM、约5mM至约20mM、约5mM至约10mM、约40mM至约50mM、约30mM至约50mM、约20mM至约50mM、约10mM至约50mM，或约5mM至约50mM，例如约2mM、约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)以约15mM至约25mM(例如，约20mM)的浓度存在。在其他实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)具有约4至约7(例如，约5至约6(例如，约5、约5.5或约6))的pH。在一些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)具有约5至约6(例如，约5.5)的pH。在某些实施例中，缓冲剂包含组氨酸缓冲液，所述缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM(例如，20mM)，并且具有约5至约6(例如，5.5)的pH。在某些实施例中，缓冲剂包含组氨酸和组氨酸-HCl。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以80mg/mL至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；以及含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为15mM至25mM(例如，20mM)，并且具有5至6(例如，5.5)的pH。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)进一步包含碳水化合物。在某些实施例中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施例中，碳水化合物(例如，蔗糖)以以下浓度存在：约50mM至约500mM，例如约100mM至约400mM、约150mM至约300mM、约180mM至约250mM、约200mM至约240mM、约210mM至约230mM、约100mM至约300mM、约100mM至约250mM、约100mM至约200mM、约100mM至约150mM、约300mM至约400mM、约200mM至约400mM，或约100mM至约400mM，例如约100mM、约150mM、约180mM、约200mM、约220mM、约250mM、约300mM、约350mM或约400mM。在一些实施例中，配制品包含碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以约200mM至约250mM(例如，约220mM)的浓度存在。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以80mg/mL至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为15mM至25mM(例如，20mM)，并且具有5至6(例如，5.5)的pH；以及碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)进一步包含表面活性剂。在某些实施例中，表面活性剂是聚山梨酯20。在一些实施例中，表面活性剂或聚山梨酯20以以下浓度存在：约0.005％至约0.1％(w/w)，例如约0.01％至约0.08％、约0.02％至约0.06％、约0.03％至约0.05％、约0.01％至约0.06％、约0.01％至约0.05％、约0.01％至约0.03％、约0.06％至约0.08％、约0.04％至约0.08％，或约0.02％至约0.08％(w/w)，例如约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.04％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％(w/w)。在一些实施例中，配制品包含表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以约0.03％至约0.05％(例如，约0.04％)(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以约80mg/mL至120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为15mM至25mM(例如，20mM)，并且具有5至6(例如，5.5)的pH；碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以200mM至250mM(例如，220mM)的浓度存在；以及表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以0.03％至0.05％(例如，0.04％)(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，配制品(例如，液体配制品)包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以100mg/mL的浓度存在；含有组氨酸缓冲液(例如，组氨酸/组氨酸-HCL)的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为20mM，并且具有5.5的pH；碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以220mM的浓度存在；以及表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以0.04％(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，通过稀释包含本文所述抗体分子的配制品，制备液体配制品。例如，可以将药物物质配制品用包含一种或多种赋形剂(例如，浓赋形剂)的溶液稀释。在一些实施例中，所述溶液包含组氨酸、蔗糖或聚山梨酯20的一种、两种或全部。在某些实施例中，所述溶液包含与药物物质配制品相同的一种或多种赋形剂。示例性赋形剂包括但不限于，氨基酸(例如，组氨酸)、碳水化合物(例如，蔗糖)、或表面活性剂(例如，聚山梨酯20)。在某些实施例中，液体配制品不是重构的冻干配制品。在其他实施例中，液体配制品是重构的冻干配制品。在一些实施例中，将配制品作为液体储存。在其他实施例中，将配制品制备为液体，然后在储存前干燥(例如，通过冻干或喷雾干燥)。
在某些实施例中，每个容器(例如，小瓶)填充有约0.5mL至约10mL(例如，约0.5mL至约8mL、约1mL至约6mL，或约2mL至约5mL，例如约1mL、约1.2mL、约1.5mL、约2mL、约3mL、约4mL、约4.5mL、约5mL、约5.5mL、约6mL、约6.5mL、约7mL、约7.5mL、约8mL、约8.5mL、约9mL、约9.5mL、或约10mL)的液体配制品。在其他实施例中，将液体配制品填充到容器(例如，小瓶)中，使得每个容器(例如，小瓶)可抽出的液体配制品的可提取体积为至少1mL(例如，至少1.2mL、至少1.5mL、至少2mL、至少3mL、至少4mL、或至少5mL)。在某些实施例中，将液体配制品从容器(例如，小瓶)中提取，不在临床地点稀释。在某些实施例中，将液体配制品从药物物质配制品稀释，并且在临床地点从容器(例如，小瓶)中提取。在某些实施例中，在向患者输注开始前的1小时内(例如，在45分钟、30分钟、或15分钟内)，将配制品(例如，液体配制品)注射到输注袋中。
可以将本文所述的配制品存储在容器中。用于本文所述的任何一种配制品的容器可以包括，例如，小瓶，以及任选地，塞子、盖、或二者。在某些实施例中，所述小瓶是玻璃小瓶，例如，6R白色玻璃小瓶。在其他实施例中，所述塞子是橡胶塞，例如，灰色橡胶塞。在其他实施例中，所述盖是翻盖，例如，铝制翻盖。在一些实施例中，容器包含6R白色玻璃小瓶，灰色橡胶塞，和铝制翻盖。在一些实施例中，所述容器(例如，小瓶)是用于一次性使用的容器。在某些实施例中，在所述容器中存在约250mg至约1500mg如本文所述的抗体分子。在一些实施例中，所述容器包含约300mg至约1250mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约350mg至约1200mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约400mg至约1100mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约450mg至约1000mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约500mg至约900mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约600mg至约800mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约300mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约400mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约500mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约600mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约700mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约800mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约900mg抗体。在一些实施例中，所述容器包含约1000mg抗体。
在一些实施例中，配制品是冻干配制品。在某些实施例中，冻干配制品从包含本文所述的抗体分子的液体配制品冻干或干燥。每个容器(例如，小瓶)可以填充例如,约1mL至约10mL，例如约6mL至约8mL的液体配制品，并将其冻干。
在一些实施例中，配制品是重构的配制品。在某些实施例中，重构的配制品从包含本文所述的抗体分子的冻干配制品重构。例如，通过溶解冻干配制品于稀释剂中来制备重构的配制品，使得蛋白质分散在重构的配制品中。在一些实施例中，将冻干配制品用约1mL至约15mL，例如，约5mL至约9mL或约7mL的注射用水或缓冲液重构。在某些实施例中，例如在临床地点，将冻干配制品用约6mL至约8mL的注射用水重构。
在一些实施例中，重构的配制品包含抗体分子(例如，如本文所述的抗TGF-β或抗PD-1(或抗PD-L1/2)抗体分子)和缓冲剂。
在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子的浓度为约25mg/mL至约250mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子的浓度为约60mg/mL至约180mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约70mg/mL至约150mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL至约120mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子的浓度为约90mg/mL至约110mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约150mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL至约100mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约150mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约100mg/mL至约200mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约50mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约60mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约70mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约90mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约100mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约110mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约120mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约130mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约140mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约150mg/mL。在一些实施例中，重构的配制品包含抗TGF-β或抗PD1(或抗PD-L1/2)抗体分子，所述抗体分子浓度为约80mg/mL至约120mg/mL(例如，约100mg/mL)。
在一些实施例中，重构的配制品包含含有组氨酸的缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)。在某些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)以以下浓度存在：约1mM至约100mM，例如约2mM至约50mM、约5mM至约40mM、约10mM至约30mM、约15至约25mM、约5mM至约40mM、约5mM至约30mM、约5mM至约20mM、约5mM至约10mM、约40mM至约50mM、约30mM至约50mM、约20mM至约50mM、约10mM至约50mM，或约5mM至约50mM，例如约2mM、约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)以约15mM至约25mM(例如，约20mM)的浓度存在。在其他实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)具有约4至约7(例如，约5至约6(例如，约5、约5.5或约6))的pH。在一些实施例中，缓冲剂(例如，组氨酸缓冲液)具有约5至约6(例如，约5.5)的pH。在某些实施例中，缓冲剂包含组氨酸缓冲液，所述缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM(例如，20mM)，并且具有约5至约6(例如，5.5)的pH。在某些实施例中，缓冲剂包含组氨酸和组氨酸-HCl。
在一些实施例中，重构的配制品包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以约80mg/mL至约120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；以及含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM(例如，20mM)，并且具有5至6(例如，5.5)的pH。
在一些实施例中，重构的配制品进一步包含碳水化合物。在某些实施例中，碳水化合物是蔗糖。在一些实施例中，碳水化合物(例如，蔗糖)以以下浓度存在：50mM至约500mM，例如约100mM至约400mM、约150mM至约300mM、约180mM至约250mM、约200mM至约240mM、约210mM至约230mM、约100mM至约300mM、约100mM至约250mM、约100mM至约200mM、约100mM至约150mM、约300mM至约400mM、约200mM至约400mM，或约100mM至约400mM，例如约100mM、约150mM、约180mM、约200mM、约220mM、约250mM、约300mM、约350mM或约400mM。在一些实施例中，配制品包含碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以约200mM至约250mM(例如，约220mM)的浓度存在。
在一些实施例中，重构的配制品包含：本文披露的抗体分子，所述抗体分子以约80mg/mL至约120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM(例如，20mM)，并且具有约5至约6(例如，5.5)的pH；以及碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以约200mM至约250mM(例如，220mM)的浓度存在。
在一些实施例中，重构的配制品进一步包含表面活性剂。在某些实施例中，表面活性剂是聚山梨酯20。在一些实施例中，表面活性剂或聚山梨酯20以以下浓度存在：约0.005％至约0.1％(w/w)，例如约0.01％至约0.08％、约0.02％至约0.06％、约0.03％至约0.05％、约0.01％至约0.06％、约0.01％至约0.05％、约0.01％至约0.03％、约0.06％至约0.08％、约0.04％至约0.08％，或约0.02％至约0.08％(w/w)，例如约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.04％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％(w/w)。在一些实施例中，配制品包含表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以约0.03％至约0.05％(例如，约0.04％)(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，重构的配制品包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以约80mg/mL至约120mg/mL(例如，100mg/mL)的浓度存在；含有组氨酸缓冲液的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM(例如，20mM)，并且具有约5至约6(例如，5.5)的pH；碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以约200mM至约250mM(例如，220mM)的浓度存在；以及表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以约0.03％至约0.05％(例如，0.04％)(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，重构的配制品包含：如本文披露的抗体分子，所述抗体分子以100mg/mL的浓度存在；含有组氨酸缓冲液(例如，组氨酸/组氨酸-HCL)的缓冲剂，所述缓冲剂的浓度为20mM，并且具有5.5的pH；碳水化合物或蔗糖，所述碳水化合物或蔗糖以220mM的浓度存在；以及表面活性剂或聚山梨酯20，所述表面活性剂或聚山梨酯20以0.04％(w/w)的浓度存在。
在一些实施例中，配制品是重构的，使得可从含有重构的配制品的容器(例如，小瓶)中抽出的重构的配制品的可提取体积为至少1mL(例如，至少1.2mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、4.5mL、5mL、5.5mL、6mL、6.5mL、7mL、7.5mL、8mL、8.5mL、9mL、9.5mL或10mL)。在某些实施例中，在临床地点，将配制品重构和/或从容器(例如，小瓶)中提取。在某些实施例中，在向患者输注开始前的1小时内(例如，在45分钟、30分钟、或15分钟内)，将配制品(例如，重构的配制品)注射到输注袋中。
在一些实施例中，重构的配制品具有约1mL至约5mL的填充体积。在某些实施例中，重构的配制品具有约2mL至约4mL的填充体积。在一些实施例中，重构的配制品具有约3mL的填充体积。在一些实施例中，重构的配制品具有约3.2mL的填充体积。在一些实施例中，重构的配制品具有约3.4mL的填充体积。在一些实施例中，重构的配制品具有约3.6mL的填充体积。在一些实施例中，重构的配制品具有约3.8mL的填充体积。
可用于本文所述的配制品中的其他示例性缓冲剂包括但不限于，精氨酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、或磷酸盐缓冲液。可用于本文所述的配制品中的其他示例性碳水化合物包括但不限于，海藻糖、甘露醇、山梨糖醇、或其组合。本文所述的配制品还可以含有张度剂(例如，氯化钠)和/或稳定剂(例如，氨基酸(例如，甘氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、或其组合))。
抗体分子可以通过本领域已知的多种方法施用，但是对于许多治疗性应用，优选的施用途径/方式是静脉内注射或输注。例如，可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20mg/min-40mg/min，并且典型地大于或等于40mg/min的速率施用抗体分子，以达到约35mg/m2至440mg/m2，典型地约70mg/m2至约310mg/m2并且更典型地约110mg/m2至约130mg/m2的剂量。在实施例中，抗体分子可以通过静脉内输注以小于10mg/min的速率给予；优选地小于或等于5mg/min，以达到约1mg/m2至约100mg/m2，优选约5mg/m2至约50mg/m2，约7mg/m2至约25mg/m2并且更优选约10mg/m2的剂量。如本领域技术人员将理解的，施用途经和/或模式将根据所希望结果而变化。在某些实施例中，活性化合物可与将保护所述化合物避免快速释放的载剂一起制备，如控释配制品，包括植入物、经皮贴片和微胶囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类和聚乳酸。用于制备此类配制品的许多方法是获得专利权的或是本领域技术人员通常已知的。参见例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems[缓控释药物递送系统],J.R.Robinson编辑,马塞尔德克尔公司(Marcel Dekker,Inc.),纽约,1978。
在某些实施例中，抗体分子可以口服给予，例如，与惰性稀释剂或可同化的可食用载剂一起。化合物(和其他成分，如果希望的话)也可以包封在硬壳或软壳明胶胶囊中、压制成片剂、或直接掺入受试者的饮食中。对于口服治疗施用，化合物可与赋形剂混合并以可摄入的片剂、口含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂(wafer)等形式使用。为了通过除肠胃外施用以外的其他方式施用本发明化合物，可能需要用材料包所述该化合物或所述所述化合物与材料共同施用以防止其失活。治疗组合物还可以用本领域已知的医疗装置给予。
调节剂量方案以提供最佳的希望应答(例如，治疗应答)。例如，如由治疗情况的紧急状态所指示的，可以施用单次推注，可以随着时间施用若干个分次剂量，或可以按比例减少或增加剂量。可以特别有利地以单位剂型配制肠胃外组合物以易于施用和实现剂量均匀性。如本文所用，单位剂型是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散的单位；每个单位含有经计算产生期望治疗作用的预定量的活性化合物以及所需药物载剂。本发明剂量单位形式的规格是通过以下指定并且直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特征和有待实现的具体治疗效果，以及(b)在混配这种活性化合物用于治疗个体的敏感性的领域中的固有限制。
可以通过静脉内输注以超过20mg/min，例如20mg/min-40mg/min，并且典型地大于或等于40mg/min的速率施用抗体分子，以达到约35mg/m2至约440mg/m2，典型地约70mg/m2至约310mg/m2，并且更典型地约110mg/m2至约130mg/m2的剂量。在实施例中，约110mg/m2至约130mg/m2的输注速率达到约3mg/kg的水平。在其他实施例中，可以通过静脉内输注以小于10mg/min，例如小于或等于5mg/min的速率施用抗体分子，以达到约1mg/m2至约100mg/m2，例如约5mg/m2至约50mg/m2、约7mg/m2至约25mg/m2，或约10mg/m2的剂量。在一些实施例中，抗体在约30min的时间内输注。应注意，剂量值可随待缓解的病症的类型和严重程度而变化。应进一步理解，对于任何特定受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整特定剂量方案，并且本文所述的剂量范围仅是示例性的，并不旨在限制所要求保护的组合物的范围或实践。
本发明的药物组合物可包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或抗体部分。“治疗有效量”是指以必要的剂量和在必要的时间段内有效实现所需治疗结果的量。治疗有效量的经修饰抗体或抗体片段可根据诸如疾病状态、年龄、性别和个体体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引发所希望应答的能力而变化。治疗有效量也是其中治疗有益效果超过经修饰抗体或抗体片段的任何毒性或有害作用的量。“治疗有效剂量”优选抑制可测量的参数，例如相对于未治疗的受试者，肿瘤生长速率抑制至少约20％，更优选至少约40％、甚至更优选至少约60％，并且仍更优选至少约80％。可以在预测人肿瘤功效的动物模型系统中评估化合物抑制可测量参数(例如癌症)的能力。可替代地，组合物的这种性质可以通过检查化合物抑制的能力来评估，这种抑制在体外通过本领域技术人员已知的测定进行。
“预防有效量”是指以剂量计并且持续所需的时间段以实现所希望的预防结果的有效的量。典型地，因为预防的剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以这种预防有效量将小于治疗有效量。
包含本文所述组合、组合物或配制品的试剂盒也在本发明的范围内。所述试剂盒可包括一种或多种其他要素，包括：使用说明说(例如，根据本文所述的剂量方案)；其他试剂，例如标记物、治疗剂、或用于螯合或以其他方式偶联抗体与标记物或治疗剂或辐射防护组合物的试剂；用于制备用于施用的抗体的装置或其他材料；药学上可接受的载剂；和用于对受试者施用的装置或其他材料。
诊断受试者和治疗受试者
如本文所用，术语“受试者”意在包括人和非人动物。在一些实施例中，所述受试者是人受试者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，所述受试者是需要增强免疫应答的人患者。本文所述的组合适用于治疗患有可通过调节(例如，增强或抑制)免疫应答来治疗的障碍的人患者。在某些实施例中，患者患有本文所述障碍，例如，本文所述的癌症，或处于其风险中。
在一些情况下，使用本文公开的方法治疗的受试者知道他们患有疾病或病症，在一些情况下，所述疾病或病症将受益于在此所述的方法。例如，在一些情况下，受试者已被检测和/或诊断出疾病。所述检测和/或诊断可来自医师或其他合格的医疗人员。在一些情况下，可以基于一种或多种症状(如凸起的团块、肿块等)自行进行检测和/或诊断。因此，在一些实施例中，受试者可能需要本文所述的方法以治疗其疾病或病症。术语“有需要”意指说明受试者(或治疗所述受试者的人)了解病症或疾病(例如，增殖性疾病，如癌症)的存在。
在某些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中具有TGFβ(1、2、或3)表达。在某些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中具有PD-1表达。在某些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中具有PD-L1表达。在某些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中具有PD-L2表达。在一些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中同时具有TGFβ(1、2、或3)和PD-1表达。在一些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中同时具有TGFβ(1、2、或3)和PD-L1表达。在一些实施例中，受试者已经被鉴定为在其一个或多个肿瘤(或肿瘤微环境)中同时具有TGFβ(1、2、或3)和PD-L2表达。一旦发现这些生物标记，就可以使用所描述的方法进行治疗。
在一些实施例中，受试者介于约5kg至约500kg之间。在一些实施例中，受试者介于约10kg至约400kg之间。在一些实施例中，受试者介于约15kg至约300kg之间。在一些实施例中，受试者介于约20kg至约200kg之间。在一些实施例中，受试者介于约25kg至约150kg之间。在一些实施例中，受试者介于约40kg至约125kg之间。在一些实施例中，受试者介于约50kg至约100kg之间。在一些实施例中，受试者介于约65kg至约85kg之间。在一些实施例中，受试者是约40kg。在一些实施例中，受试者是约45kg。在一些实施例中，受试者是约50kg。在一些实施例中，受试者是约55kg。在一些实施例中，受试者是约60kg。在一些实施例中，受试者是约65kg。在一些实施例中，受试者是约70kg。在一些实施例中，受试者是约75kg。在一些实施例中，受试者是约80kg。在一些实施例中，受试者是约85kg。在一些实施例中，受试者是约90kg。在一些实施例中，受试者是约95kg。在一些实施例中，受试者是约100kg。在一些实施例中，受试者是约110kg。在一些实施例中，受试者是约120kg。在一些实施例中，受试者是约130kg。在一些实施例中，受试者是约140kg。在一些实施例中，受试者是约150kg。
癌症XXXX
在一些实施例中，所述方法用于治疗癌症，如骨髓纤维化(例如，原发性骨髓纤维化(PMF)、原发性血小板增多症后骨髓纤维化(PET-MF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PPV-MF))、白血病(例如，急性髓性白血病(AML)，例如复发或难治性AML或初发AML；或慢性淋巴细胞白血病(CLL))、淋巴瘤(例如，T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、或小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL))、骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)(例如，鳞状和/或非鳞状组织学的NSCLC、或NSCLC腺癌)、或小细胞肺癌(SCLC)、皮肤癌(例如，梅克尔细胞癌或黑素瘤(例如，晚期黑素瘤))、卵巢癌、间皮瘤、膀胱癌、软组织肉瘤(例如，血管外皮细胞瘤(HPC))、骨癌(骨肉瘤)、肾癌(例如，肾癌症(例如，肾细胞癌))、肝癌(例如，肝细胞癌)、胆管癌、肉瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)(例如，低风险MDS)、前列腺癌、乳腺癌(例如，不表达雌激素受体、孕酮受体、或Her2/neu的一种、两种或所有的乳腺癌，例如，三阴性乳腺癌)、结直肠癌、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌(例如，胰腺导管腺癌(PDAC))、头颈癌(例如，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC))、肛门癌、胃食道癌、甲状腺癌(例如，甲状腺未分化癌)、宫颈癌、或神经内分泌肿瘤(NET)(例如，非典型肺类癌)。
在某些实施例中，患者不适合于在患有本文所述的一种或多种癌症的患者中具有既定益处的标准治疗方案。在一些实施例中，受试者不适合化学疗法。在一些实施例中，所述化学疗法是强化诱导化学疗法。例如，本文所述的方法可用于治疗患有如所述的一种或多种癌症的成人患者。在某些实施例中，将抑制剂(TGFβ和/或PD1)以治疗癌症或其症状的有效量施用。
本文所述的组合物、配制品、或方法可用于抑制癌性肿瘤的生长。可替代地，本文所述的组合物、配制品、或方法可与以下中的一种或多种组合使用：针对癌症的标准护理治疗、另一种抗体或其抗原结合片段、免疫调节剂(例如，共刺激性分子的活化剂或抑制性分子的抑制剂)；疫苗，例如治疗性癌症疫苗；或如本文所述的其他形式的细胞免疫疗法。在一个实施例中，方法适用于体内癌症的治疗。
在另一个方面，提供了一种治疗受试者，例如减轻或改善受试者的过度增生性病状或障碍(例如，癌症)、例如实体瘤、血液癌、软组织肿瘤或转移性病灶的方法。所述方法包括根据本文所述的剂量方案进行本文所述的方法、或本文所述的组合物或配制品。
如本文所用，术语“癌症”意指包括所有类型的癌性生长或致癌过程、转移性组织或恶性转化的细胞、组织或器官，而不考虑组织病理学类型或侵袭的阶段。癌症障碍的实例包括，但不限于血液癌、实体瘤，软组织肿瘤、和转移性病变。
实体瘤的实例包括但不限于，各种器官系统的恶性肿瘤(例如肉瘤)和癌(包括腺癌和鳞状细胞癌)，如影响肝、肺、乳腺、淋巴、胃肠(例如，结肠)、肛门、生殖器和泌尿生殖道(例如，肾、尿路上皮、膀胱)、前列腺、CNS(例如，脑、神经或神经胶质细胞)、头颈部、皮肤、胰腺和咽部的那些。腺癌包括恶性肿瘤，例如大多数结肠癌、直肠癌、肾癌(例如，肾细胞癌(例如，透明细胞或非透明细胞肾细胞癌))、肝癌、肺癌(例如非小细胞肺癌(例如，鳞状或非鳞状非小细胞肺癌))、小肠癌和食道癌。鳞状细胞癌包括例如肺、食管、皮肤、头颈部区域、口腔、肛门和子宫颈中的恶性肿瘤。在一个实施例中，癌症是黑素瘤，例如晚期黑素瘤。癌症可以处于早期、中期、晚期或可以是转移性癌症。还可以使用本文所述的组合来治疗或预防上述癌症的转移性病变。
在某些实施例中，癌症是实体瘤。在一些实施例中，癌症是卵巢癌。在其他实施例中，癌症是肺癌，例如小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC)。在其他实施例中，癌症是间皮瘤。在其他实施例中，癌症是皮肤癌，例如梅克尔细胞癌或黑素瘤。在其他实施例中，癌症是肾癌，例如肾细胞癌(RCC)。在其他实施例中，癌症是膀胱癌。在其他实施例中，癌症是软组织肉瘤，例如血管外皮细胞瘤(HPC)。在其他实施例中，癌症是骨癌，例如骨肉瘤。在其他实施例中，癌症是结直肠癌。在其他实施例中，癌症是胰腺癌(例如，PDAC)。在其他实施例中，癌症是鼻咽癌。在其他实施例中，癌症是乳腺癌。在其他实施例中，癌症是十二指肠癌。在其他实施例中，癌症是子宫内膜癌。在其他实施例中，癌症是腺癌，例如未知腺癌。在其它实施例中，癌症是肝癌，例如肝细胞癌。在其它实施例中，所述癌症是胆管癌。在其它实施例中，癌症是肉瘤。在某些实施例中，癌症是骨髓增生异常综合征(MDS)(例如，高风险MDS或低风险MDS)。
在另一个实施例中，癌症是癌(例如，晚期或转移性癌)、黑素瘤或肺癌(例如，非小细胞肺癌)。在一个实施例中，癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌或小细胞肺癌。在一些实施例中，非小细胞肺癌是I期(例如，Ia期或Ib期)、II期(例如，IIa期或IIb期)、III期(例如，IIIa期或IIIb)、或IV期非小细胞肺癌。在一个实施例中，癌症是黑素瘤，例如晚期黑素瘤。在一个实施例中，癌症是对其他疗法无反应的晚期或不可切除的黑素瘤。在其他实施例中，癌症是具有BRAF突变(例如，BRAF V600突变)的黑素瘤。在另一个实施例中，癌症是伴有或不伴有病毒感染(例如，慢性病毒性肝炎)的肝癌(例如，晚期肝癌)。在另一个实施例中，癌症是前列腺癌，例如晚期前列腺癌。在又另一个实施例中，癌症是骨髓瘤，例如多发性骨髓瘤。在又另一个实施例中，癌症是肾癌，例如肾细胞癌(RCC)(例如，转移性RCC、非透明细胞肾细胞癌(nccRCC)、或透明细胞肾细胞癌(CCRCC))。
在一些实施例中，癌症是高MSI的癌症。在一些实施例中，癌症是转移性癌症。在其他实施例中，癌症是晚期癌症。在其他实施例中，癌症是复发或难治性癌症。
可以使用本文披露的方法、组合物或配制品抑制其生长的示例性癌症包括通常对免疫疗法有应答的癌症。另外，可以使用本文描述的组合来治疗难治性或复发性恶性肿瘤。
可以治疗的其他癌症的实例包括但不限于，基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和CNS癌；原发性CNS淋巴瘤；中枢神经系统(CNS)肿瘤；乳腺癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌症；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌；上皮内肿瘤；肾癌；喉癌；白血病(包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性或急性白血病)；肝癌；肺癌(例如，小细胞和非小细胞)；淋巴瘤(包括霍奇金和非霍奇金淋巴瘤)；淋巴细胞性淋巴瘤；黑色素瘤，例如，皮肤或眼内恶性黑素瘤；骨髓瘤；神经母细胞瘤；口腔癌(例如，唇、舌、嘴和咽部)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌症；肉瘤；皮肤癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫癌；泌尿系统癌症、肝癌、肛区癌、输卵管癌、阴道癌、外阴癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、脊髓轴肿瘤、脑干胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症(包括石棉诱导的那些)、以及其他癌和肉瘤、以及所述癌症的组合。
本文所述的方法和治疗剂可包括与一种或多种治疗剂(例如，一种或多种抗癌剂、细胞毒性剂或细胞抑制剂、激素治疗、疫苗和/或其他免疫疗法)共同配制和/或共同施用的组合物。在其他实施例中，抗体分子与其他治疗性治疗模式组合给予，包括手术、放射、冷冻手术和/或热疗。此类组合疗法可以有利地使用较低剂量的所给予的治疗剂，从而避免与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。
当组合施用时，可以将TGF-β抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、或PD-L2抑制剂、一种或多种另外的药剂、或全部以比单独使用(例如，作为单一疗法)的每种药剂的量或剂量更高、更低或相同的量或剂量施用。在某些实施例中，TGF-β抑制、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、或PD-L2抑制剂、一种或多种另外的药剂、或全部的施用量或剂量比单独使用(例如，作为单一疗法)的每种药剂的量或剂量低(例如，至少20％、至少30％、至少40％、或至少50％)。在其他实施例中，导致所希望的效果(例如，癌症的治疗)的TGF-β抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、或PD-L2抑制剂、一种或多种另外的药剂、或全部的量或剂量更低(例如，低至少20％、至少30％、至少40％、或至少50％)。
在其他实施例中，另外的治疗剂来自于WO 2017/019897的表6中列出的药剂。在一些实施例中，另外的治疗剂是以下的一种或多种：1)蛋白激酶C(PKC)抑制剂；2)热休克蛋白90(HSP90)抑制剂；3)磷酸肌醇3-激酶(PI3K)和/或雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂；4)细胞色素P450的抑制剂(例如，CYP17抑制剂或17α-羟化酶/C17-20裂解酶抑制剂)；5)铁螯合剂；6)芳香酶抑制剂；7)p53抑制剂，例如，p53/Mdm2相互作用的抑制剂；8)细胞凋亡诱导剂；9)血管生成抑制剂；10)醛固酮合酶抑制剂；11)平滑(SMO)受体抑制剂；12)催乳素受体(PRLR)抑制剂；13)Wnt信号传导抑制剂；14)CDK4/6抑制剂；15)成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)/成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)抑制剂；16)巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抑制剂；17)c-KIT、组胺释放、Flt3(例如FLK2/STK1)或PKC中的一种或多种的抑制剂；18)VEGFR-2(例如FLK-1/KDR)、PDGFRβ、c-KIT或Raf激酶C中一种或多种的抑制剂；19)生长激素抑制素激动剂和/或生长激素释放抑制剂；20)间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂；21)胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂；22)P-糖蛋白1抑制剂；23)血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂；24)BCR-ABL激酶抑制剂；25)FGFR抑制剂；26)CYP11B2的抑制剂；27)HDM2抑制剂，例如HDM2-p53相互作用的抑制剂；28)酪氨酸激酶的抑制剂；29)c-MET的抑制剂；30)JAK的抑制剂；31)DAC的抑制剂；32)11β-羟化酶的抑制剂；33)IAP的抑制剂；34)PIM激酶的抑制剂；35)博库派恩的抑制剂；36)BRAF(例如BRAF V600E或野生型BRAF)的抑制剂；37)HER3的抑制剂；38)MEK的抑制剂；或39)脂质激酶(例如，如描述于WO 2017/019897的表6中)的抑制剂。
实例
实例1：药物产品
将称为NIS793的TGFβ抑制剂制成粉末，其可以用作输注溶液。所述粉末在带有橡胶塞的玻璃小瓶中提供，所述玻璃小瓶用翻盖密封。每个小瓶含有100mg的NIS793冻干物。使用标准无菌工艺生产药物产品。除NIS793外，所述药物产品含有以下药物赋形剂：L-组氨酸/L-组氨酸盐酸盐一水合物、聚山梨酯20和蔗糖。所述小瓶具有20％的过量灌装以允许抽出整个剂量。
所述药物产品被设计为在施用前用1mL无菌注射用水重构，以得到100mg/mL的NIS793溶液。
用于输注溶液的NIS793浓缩物在带有橡胶塞的玻璃小瓶中提供，所述玻璃小瓶用翻盖密封。每个小瓶在7mL溶液中含有700mg NIS793。药物产品溶液含有与NIS793粉末(用于在无菌水中重构后的输注溶液)相同的定量和定性的赋形剂。类似地，提供7％的过量灌装以允许抽出整个剂量。
实例2：人研究
将如在实例1中所述的含有NIS793的药物产品用于临床试验。下表5提供了正在进行的人试验的概述。
表0正在进行的人研究
Figure BDA0003757898430002221
Figure BDA0003757898430002231
一项人研究已经开始，并且正在进行：首次人中研究，CNIS793X2101，“NIS793与PDR001组合在患有晚期恶性肿瘤的成年患者中的I/Ib期、开放标签、多中心剂量递增研究”。共120个患者使用NIS793作为单一药剂或与PDR001组合治疗(表5)。
人中的药代动力学、代谢和药效学
表征了来自CNIS793X2101研究的NIS793的PK数据(75个患者，截止日期为2020年5月4日)。在递增群组中，针对NIS793作为单一药剂(NIS793：0.3-1mg/kg Q3W)以及与PDR001组合(NIS793/PDR001：0.3mg/kg/100mg Q3W、0.3-30mg/kg/300mg Q3W和20-30mg/kg Q2W/400mg Q4W)衍生的PK参数估计的概述呈现于表6(周期1)和表7(周期3)中。另外，在MSS-CRC和NSCLC的扩展群组中，针对NIS793与PDR001组合(NIS793/PDR001：2100mg/300mg Q3W)衍生的PK参数估计的概述呈现于表8中。NIS793的每个剂量群组的平均浓度-时间曲线绘制在图1(周期1)和图2(周期3)中。
在经过30分钟静脉内输注施用NIS793后，观察到在NIS793暴露(即，周期1Cmax和AUClast)方面的大约剂量比例从0.3mg/kg增加至30mg/kg。基于在周期3时相比于在周期1时的AUClast和Cmax的比例，观察到NIS793的中度积累(大约高达2.0倍)。如受试者之间变异性(CV％)所示，PK变异性为低至中度(如Cmax为12.1％至73.3％)。
以三种剂量和两种给药方案，将PDR001与NIS793组合施用(100或300mg Q3W和400mg Q4W)。PDR001与NIS793组合的PK与来自PDR001临床试验研究的单一药剂数据类似。
表6通过在单一药剂和组合研究(递增)中周期1治疗的NIS793的PK参数的概述
Figure BDA0003757898430002241
Figure BDA0003757898430002251
Figure BDA0003757898430002261
N：具有初步PK的患者数量；n：具有可获得PK参数值的患者数量；"-"：不适用；CV％：变异系数(％)＝sd/平均值*100。
表7通过在单一药剂和组合研究(递增)中周期3治疗的NIS793的PK参数的概述
Figure BDA0003757898430002262
Figure BDA0003757898430002271
Figure BDA0003757898430002281
N：具有初步PK的患者数量；n：具有可获得PK参数值的患者数量；"-"：不适用；CV％：变异系数(％)＝sd/平均值*100。
表8在组合研究(扩展)中在周期1和3的NIS793 2100mg Q3W的PK参数的概述
Figure BDA0003757898430002282
Figure BDA0003757898430002291
N：具有初步PK的患者数量；n：具有可获得PK参数值的患者数量；"-"：不适用；CV％：变异系数(％)＝sd/平均值*100。
使用来自研究CNIS793X2101的剂量递增阶段的浓度数据进行的群体PK分析来描述NIS793的药代动力学特征，包括体重作为协变量对清除率和分布体积的影响。分析表明，使用具有从中央隔室一级消除的二室模型可以很好地描述NIS793的药代动力学。这与基于非隔室分析的NIS793 PK呈剂量比例性和时间依赖性的观察结果一致。
虽然体重(BW)是群体PK模型中清除率的协变量，幂模型的估计指数为0.55(CV％＝40％)，基于体重的给药方案和固定给药方案之间的预测暴露量和稳态下的谷浓度跨不同的BW类别具有可比性。该分析支持在mg基础上使用固定或平稳给药，而不考虑患者体重，因为基于体重的给药不会减少个体间变异性。基于模型的模拟表明2100mg的剂量将与在30mg/kg观察到的暴露量相匹配。此外，1400mg的剂量将与在20mg/kg观察到的暴露量相匹配。
等效物
虽然已经讨论了本发明的特定实施例，但上述说明是说明性而非限制性的。在综述本说明书和以下权利要求书之后，本发明的许多修改对于本领域的技术人员将是显而易见的。应当通过参考权利要求书及其等同形式的全范围以及说明书连同此类变化来确定本发明的全范围。
序列表
<110> 诺华生物医学研究所（Novartis Institute for Biomedical Research）
<120> 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
<130> PAT058932
<160> 320
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 1
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 2
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 3
Gly Leu Trp Glu Val Arg Ala Leu Pro Ser Val Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 4
Gly Ala Asn Asp Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 5
Glu Asp Ile Ile Arg Pro Ser
1 5
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 6
Gln Val Trp Asp Arg Asp Ser Asp Gln Tyr Val
1 5 10
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Trp Glu Val Arg Ala Leu Pro Ser Val Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 8
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asp Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Ser
35 40 45
Glu Asp Ile Ile Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Ile Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Arg Asp Ser Asp Gln
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 9
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Leu Trp Glu Val Arg Ala Leu Pro Ser Val Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Thr Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys
210 215 220
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Met Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 10
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asp Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Ser
35 40 45
Glu Asp Ile Ile Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Ile Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Arg Asp Ser Asp Gln
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 11
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Val Ile Pro Ile Val Asp Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Thr Leu Gly Leu Val Leu Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 12
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 12
Glu Thr Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Pro Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Asp Ser Pro
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 13
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Trp Met His
1 5 10
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 14
Thr Tyr Trp Met His
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 15
Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asn
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 16
Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr
1 5
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 17
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
1 5
<210> 18
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 18
Tyr Pro Gly Thr Gly Gly
1 5
<210> 19
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 20
gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60
agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct 120
accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc 180
gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240
atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact 300
accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag c 351
<210> 21
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 22
<211> 1329
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 22
gaggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaagc ccggcgagtc actgagaatt 60
agctgtaaag gttcaggcta caccttcact acctactgga tgcactgggt ccgccaggct 120
accggtcaag gcctcgagtg gatgggtaat atctaccccg gcaccggcgg ctctaacttc 180
gacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240
atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcac taggtggact 300
accggcacag gcgcctactg gggtcaaggc actaccgtga ccgtgtctag cgctagcact 360
aagggcccgt ccgtgttccc cctggcacct tgtagccgga gcactagcga atccaccgct 420
gccctcggct gcctggtcaa ggattacttc ccggagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480
ggagccctga cctccggagt gcacaccttc cccgctgtgc tgcagagctc cgggctgtac 540
tcgctgtcgt cggtggtcac ggtgccttca tctagcctgg gtaccaagac ctacacttgc 600
aacgtggacc acaagccttc caacactaag gtggacaagc gcgtcgaatc gaagtacggc 660
ccaccgtgcc cgccttgtcc cgcgccggag ttcctcggcg gtccctcggt ctttctgttc 720
ccaccgaagc ccaaggacac tttgatgatt tcccgcaccc ctgaagtgac atgcgtggtc 780
gtggacgtgt cacaggaaga tccggaggtg cagttcaatt ggtacgtgga tggcgtcgag 840
gtgcacaacg ccaaaaccaa gccgagggag gagcagttca actccactta ccgcgtcgtg 900
tccgtgctga cggtgctgca tcaggactgg ctgaacggga aggagtacaa gtgcaaagtg 960
tccaacaagg gacttcctag ctcaatcgaa aagaccatct cgaaagccaa gggacagccc 1020
cgggaacccc aagtgtatac cctgccaccg agccaggaag aaatgactaa gaaccaagtc 1080
tcattgactt gccttgtgaa gggcttctac ccatcggata tcgccgtgga atgggagtcc 1140
aacggccagc cggaaaacaa ctacaagacc acccctccgg tgctggactc agacggatcc 1200
ttcttcctct actcgcggct gaccgtggat aagagcagat ggcaggaggg aaatgtgttc 1260
agctgttctg tgatgcatga agccctgcac aaccactaca ctcagaagtc cctgtccctc 1320
tccctggga 1329
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 23
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1 5 10 15
Thr
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 24
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 25
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 25
Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 26
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 26
Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Gly Asn Gln Lys Asn Phe
1 5 10
<210> 27
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 27
Trp Ala Ser
1
<210> 28
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 28
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr
1 5
<210> 29
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 29
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 30
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 30
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tgcagcccga ggatatcgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaag 339
<210> 31
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 32
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 32
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg taaagcccct aagctgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tgcagcccga ggatatcgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 33
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 33
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 34
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 34
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaag 339
<210> 35
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 35
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 36
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 36
gagatcgtcc tgactcagtc acccgctacc ctgagcctga gccctggcga gcgggctaca 60
ctgagctgta aatctagtca gtcactgctg gatagcggta atcagaagaa cttcctgacc 120
tggtatcagc agaagcccgg tcaagcccct agactgctga tctactgggc ctctactaga 180
gaatcaggcg tgccctctag gtttagcggt agcggtagtg gcaccgactt caccttcact 240
atctctagcc tggaagccga ggacgccgct acctactact gtcagaacga ctatagctac 300
ccctacacct tcggtcaagg cactaaggtc gagattaagc gtacggtggc cgctcccagc 360
gtgttcatct tcccccccag cgacgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgc 420
ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caacgccctg 480
cagagcggca acagccagga gagcgtcacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540
ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcataaggt gtacgcctgc 600
gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaacag gggcgagtgc 660
<210> 37
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 生物的
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acctactgga tgcac 15
<210> 38
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 38
aatatctacc ccggcaccgg cggctctaac ttcgacgaga agtttaagaa t 51
<210> 39
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 39
tggactaccg gcacaggcgc ctac 24
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 40
ggctacacct tcactaccta c 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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taccccggca ccggcggc 18
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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aaatctagtc agtcactgct ggatagcggt aatcagaaga acttcctgac c 51
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 生物的
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tgggcctcta ctagagaatc a 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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cagaacgact atagctaccc ctacacc 27
<210> 45
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 45
agtcagtcac tgctggatag cggtaatcag aagaacttc 39
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<213> 人工序列
<220>
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tgggcctct 9
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 47
gactatagct acccctac 18
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<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 49
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 50
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
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Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
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Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
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His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 53
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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Ser Tyr Trp Met Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
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Asn
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<213> 人工序列
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<223> 生物的
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Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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Asp Pro Asn Ser Gly Ser
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 60
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agagggcaaa gactggagtg gatcggtaga atcgacccta atagcggctc tactaagtat 180
aacgagaagt ttaagaatag gttcactatt agtagggata actctaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga atagcctgag agccgaggac accgccgtct actactgcgc tagagactat 300
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<210> 61
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
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Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
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<213> 人工序列
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<223> 生物的
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Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala Val Ala
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<220>
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Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
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<211> 3
<212> PRT
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<220>
<223> 生物的
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Trp Ala Ser
1
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<211> 6
<212> PRT
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<220>
<223> 生物的
<400> 67
Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
1 5
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 68
gaagtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggcgctac cgtgaagatt 60
agctgtaaag tctcaggcta caccttcact agctactgga tgtactgggt ccgacaggct 120
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tacacttgca acgtggacca caagccttcc aacactaagg tggacaagcg cgtcgaatcg 660
aagtacggcc caccgtgccc gccttgtccc gcgccggagt tcctcggcgg tccctcggtc 720
tttctgttcc caccgaagcc caaggacact ttgatgattt cccgcacccc tgaagtgaca 780
tgcgtggtcg tggacgtgtc acaggaagat ccggaggtgc agttcaattg gtacgtggat 840
ggcgtcgagg tgcacaacgc caaaaccaag ccgagggagg agcagttcaa ctccacttac 900
cgcgtcgtgt ccgtgctgac ggtgctgcat caggactggc tgaacgggaa ggagtacaag 960
tgcaaagtgt ccaacaaggg acttcctagc tcaatcgaaa agaccatctc gaaagccaag 1020
ggacagcccc gggaacccca agtgtatacc ctgccaccga gccaggaaga aatgactaag 1080
aaccaagtct cattgacttg ccttgtgaag ggcttctacc catcggatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc ggaaaacaac tacaagacca cccctccggt gctggactca 1200
gacggatcct tcttcctcta ctcgcggctg accgtggata agagcagatg gcaggaggga 1260
aatgtgttca gctgttctgt gatgcatgaa gccctgcaca accactacac tcagaagtcc 1320
ctgtccctct ccctggga 1338
<210> 69
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 69
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 70
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 70
gctattcagc tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta aagcctctca ggacgtgggc accgccgtgg cctggtatct gcagaagcct 120
ggtcaatcac ctcagctgct gatctactgg gcctctacta gacacaccgg cgtgccctct 180
aggtttagcg gtagcggtag tggcaccgac ttcaccttca ctatctcttc actggaagcc 240
gaggacgccg ctacctacta ctgtcagcag tataatagct accccctgac cttcggtcaa 300
ggcactaagg tcgagattaa g 321
<210> 71
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 71
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 72
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 72
gctattcagc tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta aagcctctca ggacgtgggc accgccgtgg cctggtatct gcagaagcct 120
ggtcaatcac ctcagctgct gatctactgg gcctctacta gacacaccgg cgtgccctct 180
aggtttagcg gtagcggtag tggcaccgac ttcaccttca ctatctcttc actggaagcc 240
gaggacgccg ctacctacta ctgtcagcag tataatagct accccctgac cttcggtcaa 300
ggcactaagg tcgagattaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
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<210> 73
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 74
gaagtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggcgctac cgtgaagatt 60
agctgtaaag tctcaggcta caccttcact agctactgga tgtactgggt ccgacaggct 120
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aacgagaagt ttaagaatag agtgactatc accgccgata agtctactag caccgcctat 240
atggaactgt ctagcctgag atcagaggac accgccgtct actactgcgc tagagactat 300
agaaagggcc tgtacgctat ggactactgg ggtcaaggca ctaccgtgac cgtgtcttca 360
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<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
<210> 76
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 76
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agctgtaaag tctcaggcta caccttcact agctactgga tgtactgggt ccgacaggct 120
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tgcaaagtgt ccaacaaggg acttcctagc tcaatcgaaa agaccatctc gaaagccaag 1020
ggacagcccc gggaacccca agtgtatacc ctgccaccga gccaggaaga aatgactaag 1080
aaccaagtct cattgacttg ccttgtgaag ggcttctacc catcggatat cgccgtggaa 1140
tgggagtcca acggccagcc ggaaaacaac tacaagacca cccctccggt gctggactca 1200
gacggatcct tcttcctcta ctcgcggctg accgtggata agagcagatg gcaggaggga 1260
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ctgtccctct ccctggga 1338
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 77
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 78
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 78
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 79
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 80
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 80
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gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
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ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 81
agctactgga tgtac 15
<210> 82
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 82
agaatcgacc ctaatagcgg ctctactaag tataacgaga agtttaagaa t 51
<210> 83
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 83
gactatagaa agggcctgta cgctatggac tac 33
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 84
ggctacacct tcactagcta c 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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gaccctaata gcggctct 18
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<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 86
aaagcctctc aggacgtggg caccgccgtg gcc 33
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 87
tgggcctcta ctagacacac c 21
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<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 88
cagcagtata atagctaccc cctgacc 27
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 89
tctcaggacg tgggcaccgc c 21
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<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 90
tgggcctct 9
<210> 91
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 91
tataatagct accccctg 18
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<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
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Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 94
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 94
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 95
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 95
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 96
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 96
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 97
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
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115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 99
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 100
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met Tyr
1 5 10
<210> 101
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 101
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Met
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Arg His Ala Tyr Gly His Asp Gly Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 102
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ser Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Met
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Ala Tyr Gly His Asp Gly Gly Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 104
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 104
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 105
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 105
gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagt ccggcggctc tctgagactg 60
tcttgcgctg cctccggctt ctccctgtcc tcttacggcg tggactgggt gcgacaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgggagtg atctggggcg gaggcggcac ctactacgcc 180
tcttccctga tgggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag acacgcctac 300
ggccacgacg gcggcttcgc catggattat tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360
tcc 363
<210> 106
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 106
gagatcgtga tgacccagtc ccccgccacc ctgtctgtgt ctcccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagcctccga gtccgtgtcc tccaacgtgg cctggtatca gcagagacct 120
ggtcaggccc ctcggctgct gatctacggc gcctctaacc gggccaccgg catccctgcc 180
agattctccg gctccggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatctcccg gctggaaccc 240
gaggacttcg ccgtgtacta ctgcggccag tcctactcat accccttcac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa g 321
<210> 107
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 107
gaggtgcagc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagt ccggcggctc tctgagactg 60
tcttgcgctg cctccggctt ctccctgtcc tcttacggcg tggactgggt gcgacaggcc 120
cctggcaagg gcctggaatg ggtgggagtg atctggggcg gaggcggcac ctactacgcc 180
tcttccctga tgggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgcgccag acacgcctac 300
ggccacgacg gcggcttcgc catggattat tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360
tccgctagca ccaagggccc aagtgtgttt cccctggccc ccagcagcaa gtctacttcc 420
ggcggaactg ctgccctggg ttgcctggtg aaggactact tccccgagcc cgtgacagtg 480
tcctggaact ctggggctct gacttccggc gtgcacacct tccccgccgt gctgcagagc 540
agcggcctgt acagcctgag cagcgtggtg acagtgccct ccagctctct gggaacccag 600
acctatatct gcaacgtgaa ccacaagccc agcaacacca aggtggacaa gagagtggag 660
cccaagagct gcgacaagac ccacacctgc cccccctgcc cagctccaga actgctggga 720
gggccttccg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg tcccacgagg acccagaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agcccagaga ggagcagtac 900
aacagcacct acagggtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggactg gctgaacggc 960
aaagaataca agtgcaaagt ctccaacaag gccctgccag ccccaatcga aaagacaatc 1020
agcaaggcca agggccagcc acgggagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgtctggtga agggcttcta ccccagcgat 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac caccccccca 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagtccagg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgagcct gagccccggc aag 1353
<210> 108
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 108
gagatcgtga tgacccagtc ccccgccacc ctgtctgtgt ctcccggcga gagagccacc 60
ctgagctgca gagcctccga gtccgtgtcc tccaacgtgg cctggtatca gcagagacct 120
ggtcaggccc ctcggctgct gatctacggc gcctctaacc gggccaccgg catccctgcc 180
agattctccg gctccggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatctcccg gctggaaccc 240
gaggacttcg ccgtgtacta ctgcggccag tcctactcat accccttcac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
ctgtccagcc ccgtgaccaa gagcttcaac aggggcgagt gc 642
<210> 109
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 109
Ser Tyr Gly Val Asp
1 5
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 110
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
1 5
<210> 111
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 111
Val Ile Trp Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Met Gly
1 5 10 15
<210> 112
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 112
Trp Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 113
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 113
His Ala Tyr Gly His Asp Gly Gly Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 114
Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn Val Ala
1 5 10
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 115
Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 116
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 117
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 117
Gly Ala Ser
1
<210> 118
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 118
Gly Gln Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr
1 5
<210> 119
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 119
Ser Tyr Ser Tyr Pro Phe
1 5
<210> 120
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 120
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Met Val Arg Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 121
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 122
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 122
Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5 10
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 123
Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 124
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 124
Trp Ile Asn Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 125
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 125
Asn Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Asn Asn Ala Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 126
Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr
1 5
<210> 127
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 127
Asn Thr Asp Thr Gly Glu
1 5
<210> 128
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 128
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Asn Asn Ala Glu Ala Met
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 129
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 129
caagtgcagc tggtgcagtc gggagccgaa gtgaagaagc ctggagcctc ggtgaaggtg 60
tcgtgcaagg catccggatt caccctcacc aattacggga tgaactgggt cagacaggcc 120
cggggtcaac ggctggagtg gatcggatgg attaacaccg acaccgggga gcctacctac 180
gcggacgatt tcaagggacg gttcgtgttc tccctcgaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctccaaatct cctcactgaa agcggaggac accgccgtgt actattgcgc gaggaacccg 300
ccctactact acggaaccaa caacgccgaa gccatggact actggggcca gggcaccact 360
gtgactgtgt ccagc 375
<210> 130
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 130
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggctt caccctgacc aactacggca tgaactgggt gcgacaggcc 120
aggggccagc ggctggaatg gatcggctgg atcaacaccg acaccggcga gcctacctac 180
gccgacgact tcaagggcag attcgtgttc tccctggaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatct ccagcctgaa ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggaacccc 300
ccttactact acggcaccaa caacgccgag gccatggact attggggcca gggcaccacc 360
gtgaccgtgt cctct 375
<210> 131
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 131
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Asn Asn Ala Glu Ala Met
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly
450
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 132
Ser Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 133
Tyr Thr Ser Thr Leu His Leu
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 134
Gln Gln Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 135
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 135
Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 136
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 136
Tyr Thr Ser
1
<210> 137
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 137
Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp
1 5
<210> 138
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 138
caagtgcagc tggtgcagtc gggagccgaa gtgaagaagc ctggagcctc ggtgaaggtg 60
tcgtgcaagg catccggatt caccctcacc aattacggga tgaactgggt cagacaggcc 120
cggggtcaac ggctggagtg gatcggatgg attaacaccg acaccgggga gcctacctac 180
gcggacgatt tcaagggacg gttcgtgttc tccctcgaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctccaaatct cctcactgaa agcggaggac accgccgtgt actattgcgc gaggaacccg 300
ccctactact acggaaccaa caacgccgaa gccatggact actggggcca gggcaccact 360
gtgactgtgt ccagcgcgtc cactaagggc ccgtccgtgt tccccctggc accttgtagc 420
cggagcacta gcgaatccac cgctgccctc ggctgcctgg tcaaggatta cttcccggag 480
cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc ctgacctccg gagtgcacac cttccccgct 540
gtgctgcaga gctccgggct gtactcgctg tcgtcggtgg tcacggtgcc ttcatctagc 600
ctgggtacca agacctacac ttgcaacgtg gaccacaagc cttccaacac taaggtggac 660
aagcgcgtcg aatcgaagta cggcccaccg tgcccgcctt gtcccgcgcc ggagttcctc 720
ggcggtccct cggtctttct gttcccaccg aagcccaagg acactttgat gatttcccgc 780
acccctgaag tgacatgcgt ggtcgtggac gtgtcacagg aagatccgga ggtgcagttc 840
aattggtacg tggatggcgt cgaggtgcac aacgccaaaa ccaagccgag ggaggagcag 900
ttcaactcca cttaccgcgt cgtgtccgtg ctgacggtgc tgcatcagga ctggctgaac 960
gggaaggagt acaagtgcaa agtgtccaac aagggacttc ctagctcaat cgaaaagacc 1020
atctcgaaag ccaagggaca gccccgggaa ccccaagtgt ataccctgcc accgagccag 1080
gaagaaatga ctaagaacca agtctcattg acttgccttg tgaagggctt ctacccatcg 1140
gatatcgccg tggaatggga gtccaacggc cagccggaaa acaactacaa gaccacccct 1200
ccggtgctgg actcagacgg atccttcttc ctctactcgc ggctgaccgt ggataagagc 1260
agatggcagg agggaaatgt gttcagctgt tctgtgatgc atgaagccct gcacaaccac 1320
tacactcaga agtccctgtc cctctccctg gga 1353
<210> 139
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 139
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggctt caccctgacc aactacggca tgaactgggt gcgacaggcc 120
aggggccagc ggctggaatg gatcggctgg atcaacaccg acaccggcga gcctacctac 180
gccgacgact tcaagggcag attcgtgttc tccctggaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatct ccagcctgaa ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggaacccc 300
ccttactact acggcaccaa caacgccgag gccatggact attggggcca gggcaccacc 360
gtgaccgtgt cctctgcttc taccaagggg cccagcgtgt tccccctggc cccctgctcc 420
agaagcacca gcgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag 480
cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc 540
gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc 600
ctgggcacca agacctacac ctgtaacgtg gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagggtgg agagcaagta cggcccaccc tgccccccct gcccagcccc cgagttcctg 720
ggcggaccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagcaga 780
acccccgagg tgacctgtgt ggtggtggac gtgtcccagg aggaccccga ggtccagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcccag agaggagcag 900
tttaacagca cctaccgggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgtaa ggtctccaac aagggcctgc caagcagcat cgaaaagacc 1020
atcagcaagg ccaagggcca gcctagagag ccccaggtct acaccctgcc acccagccaa 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctgg tgaagggctt ctacccaagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200
ccagtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca ggctgaccgt ggacaagtcc 1260
agatggcagg agggcaacgt ctttagctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320
tacacccaga agagcctgag cctgtccctg ggc 1353
<210> 140
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 141
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 141
gatattcaga tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta gctctagtca ggatatctct aactacctga actggtatct gcagaagccc 120
ggtcaatcac ctcagctgct gatctactac actagcaccc tgcacctggg cgtgccctct 180
aggtttagcg gtagcggtag tggcaccgag ttcaccctga ctatctctag cctgcagccc 240
gacgacttcg ctacctacta ctgtcagcag tactataacc tgccctggac cttcggtcaa 300
ggcactaagg tcgagattaa g 321
<210> 142
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 142
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtctgctt ccgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtt cctccagcca ggacatctcc aactacctga actggtatct gcagaagccc 120
ggccagtccc ctcagctgct gatctactac acctccaccc tgcacctggg cgtgccctcc 180
agattttccg gctctggctc tggcaccgag tttaccctga ccatcagctc cctgcagccc 240
gacgacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacaacc tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 143
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 143
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu His Leu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 144
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 144
gatattcaga tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta gctctagtca ggatatctct aactacctga actggtatct gcagaagccc 120
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aggtttagcg gtagcggtag tggcaccgag ttcaccctga ctatctctag cctgcagccc 240
gacgacttcg ctacctacta ctgtcagcag tactataacc tgccctggac cttcggtcaa 300
ggcactaagg tcgagattaa gcgtacggtg gccgctccca gcgtgttcat cttccccccc 360
agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
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ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
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<210> 145
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 145
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtctgctt ccgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtt cctccagcca ggacatctcc aactacctga actggtatct gcagaagccc 120
ggccagtccc ctcagctgct gatctactac acctccaccc tgcacctggg cgtgccctcc 180
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agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gtctgctgaa caacttctac 420
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gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
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<210> 146
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Asn Asn Ala Glu Ala Met
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 147
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 147
caggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggcgctag tgtgaaagtc 60
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ccctactact acggcactaa caacgccgag gctatggact actggggtca aggcactacc 360
gtgaccgtgt ctagc 375
<210> 148
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 148
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggctt caccctgacc aactacggca tgaactgggt gcgacaggcc 120
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gccgacgact tcaagggcag attcgtgttc tccctggaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatct ccagcctgaa ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggaacccc 300
ccttactact acggcaccaa caacgccgag gccatggact attggggcca gggcaccacc 360
gtgaccgtgt cctct 375
<210> 149
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 149
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Asn Asn Ala Glu Ala Met
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly
450
<210> 150
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 150
caggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggcgctag tgtgaaagtc 60
agctgtaaag ctagtggctt caccctgact aactacggga tgaactgggt ccgccaggcc 120
ccaggtcaag gcctcgagtg gatgggctgg attaacaccg acaccggcga gcctacctac 180
gccgacgact ttaagggcag attcgtgttt agcctggaca ctagtgtgtc taccgcctac 240
ctgcagatct ctagcctgaa ggccgaggac accgccgtct actactgcgc tagaaacccc 300
ccctactact acggcactaa caacgccgag gctatggact actggggtca aggcactacc 360
gtgaccgtgt ctagcgctag cactaagggc ccgtccgtgt tccccctggc accttgtagc 420
cggagcacta gcgaatccac cgctgccctc ggctgcctgg tcaaggatta cttcccggag 480
cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc ctgacctccg gagtgcacac cttccccgct 540
gtgctgcaga gctccgggct gtactcgctg tcgtcggtgg tcacggtgcc ttcatctagc 600
ctgggtacca agacctacac ttgcaacgtg gaccacaagc cttccaacac taaggtggac 660
aagcgcgtcg aatcgaagta cggcccaccg tgcccgcctt gtcccgcgcc ggagttcctc 720
ggcggtccct cggtctttct gttcccaccg aagcccaagg acactttgat gatttcccgc 780
acccctgaag tgacatgcgt ggtcgtggac gtgtcacagg aagatccgga ggtgcagttc 840
aattggtacg tggatggcgt cgaggtgcac aacgccaaaa ccaagccgag ggaggagcag 900
ttcaactcca cttaccgcgt cgtgtccgtg ctgacggtgc tgcatcagga ctggctgaac 960
gggaaggagt acaagtgcaa agtgtccaac aagggacttc ctagctcaat cgaaaagacc 1020
atctcgaaag ccaagggaca gccccgggaa ccccaagtgt ataccctgcc accgagccag 1080
gaagaaatga ctaagaacca agtctcattg acttgccttg tgaagggctt ctacccatcg 1140
gatatcgccg tggaatggga gtccaacggc cagccggaaa acaactacaa gaccacccct 1200
ccggtgctgg actcagacgg atccttcttc ctctactcgc ggctgaccgt ggataagagc 1260
agatggcagg agggaaatgt gttcagctgt tctgtgatgc atgaagccct gcacaaccac 1320
tacactcaga agtccctgtc cctctccctg gga 1353
<210> 151
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 151
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctctggctt caccctgacc aactacggca tgaactgggt gcgacaggcc 120
cctggacagg gcctggaatg gatgggctgg atcaacaccg acaccggcga gcctacctac 180
gccgacgact tcaagggcag attcgtgttc tccctggaca cctccgtgtc caccgcctac 240
ctgcagatct ccagcctgaa ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc ccggaacccc 300
ccttactact acggcaccaa caacgccgag gccatggact attggggcca gggcaccacc 360
gtgaccgtgt cctctgcttc taccaagggg cccagcgtgt tccccctggc cccctgctcc 420
agaagcacca gcgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tgaaggacta cttccccgag 480
cccgtgaccg tgtcctggaa cagcggagcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttccccgcc 540
gtgctgcaga gcagcggcct gtacagcctg agcagcgtgg tgaccgtgcc cagcagcagc 600
ctgggcacca agacctacac ctgtaacgtg gaccacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagggtgg agagcaagta cggcccaccc tgccccccct gcccagcccc cgagttcctg 720
ggcggaccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagcaga 780
acccccgagg tgacctgtgt ggtggtggac gtgtcccagg aggaccccga ggtccagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcccag agaggagcag 900
tttaacagca cctaccgggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgtaa ggtctccaac aagggcctgc caagcagcat cgaaaagacc 1020
atcagcaagg ccaagggcca gcctagagag ccccaggtct acaccctgcc acccagccaa 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctgg tgaagggctt ctacccaagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1200
ccagtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca ggctgaccgt ggacaagtcc 1260
agatggcagg agggcaacgt ctttagctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320
tacacccaga agagcctgag cctgtccctg ggc 1353
<210> 152
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 152
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu His Leu Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 153
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 153
gatattcaga tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta gctctagtca ggatatctct aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
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aggtttagcg gtagcggcta cggcaccgac ttcaccctga ctattaacaa tatcgagtca 240
gaggacgccg cctactactt ctgtcagcag tactataacc tgccctggac cttcggtcaa 300
ggcactaagg tcgagattaa g 321
<210> 154
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 154
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtctgctt ccgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtt cctccagcca ggacatctcc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctactac acctccaccc tgcacctggg catcccccct 180
agattctccg gctctggcta cggcaccgac ttcaccctga ccatcaacaa catcgagtcc 240
gaggacgccg cctactactt ctgccagcag tactacaacc tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggaaatcaa g 321
<210> 155
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 155
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Thr Leu His Leu Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr Asn Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 156
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 156
gatattcaga tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
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agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
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gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
ctgagcaagg ccgactacga gaagcataag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
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<210> 157
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 157
gacatccaga tgacccagtc cccctccagc ctgtctgctt ccgtgggcga cagagtgacc 60
atcacctgtt cctccagcca ggacatctcc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctactac acctccaccc tgcacctggg catcccccct 180
agattctccg gctctggcta cggcaccgac ttcaccctga ccatcaacaa catcgagtcc 240
gaggacgccg cctactactt ctgccagcag tactacaacc tgccctggac cttcggccag 300
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agcgacgagc agctgaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gtctgctgaa caacttctac 420
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gagagcgtca ccgagcagga cagcaaggac tccacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
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<210> 158
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 158
aattacggga tgaac 15
<210> 159
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 159
aactacggca tgaac 15
<210> 160
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 160
tggattaaca ccgacaccgg ggagcctacc tacgcggacg atttcaaggg a 51
<210> 161
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 161
tggatcaaca ccgacaccgg cgagcctacc tacgccgacg acttcaaggg c 51
<210> 162
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 162
aacccgccct actactacgg aaccaacaac gccgaagcca tggactac 48
<210> 163
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 163
aacccccctt actactacgg caccaacaac gccgaggcca tggactat 48
<210> 164
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 164
ggattcaccc tcaccaatta c 21
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 165
ggcttcaccc tgaccaacta c 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 166
aacaccgaca ccggggag 18
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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aacaccgaca ccggcgag 18
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<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 168
agctctagtc aggatatctc taactacctg aac 33
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<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 169
tcctccagcc aggacatctc caactacctg aac 33
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 170
tacactagca ccctgcacct g 21
<210> 171
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 171
tacacctcca ccctgcacct g 21
<210> 172
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 172
cagcagtact ataacctgcc ctggacc 27
<210> 173
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 173
cagcagtact acaacctgcc ctggacc 27
<210> 174
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 174
agtcaggata tctctaacta c 21
<210> 175
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 175
agccaggaca tctccaacta c 21
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<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 176
tacactagc 9
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<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 177
tacacctcc 9
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 178
tactataacc tgccctgg 18
<210> 179
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 179
tactacaacc tgccctgg 18
<210> 180
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 180
aactacggga tgaac 15
<210> 181
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 181
tggattaaca ccgacaccgg cgagcctacc tacgccgacg actttaaggg c 51
<210> 182
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 182
aaccccccct actactacgg cactaacaac gccgaggcta tggactac 48
<210> 183
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 183
ggcttcaccc tgactaacta c 21
<210> 184
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 184
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Ser Thr Asn Ser Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Phe Gly Tyr Ser Asp Tyr Glu Tyr Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 185
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 185
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 186
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 186
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr
20 25 30
Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 187
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 187
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln
85 90 95
His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 188
Gly Phe Thr Leu Thr Asn Tyr Gly Met Asn
1 5 10
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 189
Ser Tyr Asn Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 190
Asp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 191
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 191
Val Gly Gly Ala Phe Pro Met Asp Tyr
1 5
<210> 192
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 192
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 193
Tyr Pro Gly Asn Gly Asp
1 5
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<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 194
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Val Gly Gly Ala Phe Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
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Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 195
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 195
caggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggctctag cgtgaaagtt 60
tcttgtaaag ctagtggcta caccttcact agctataata tgcactgggt tcgccaggcc 120
ccagggcaag gcctcgagtg gatgggcgat atctaccccg ggaacggcga cactagttat 180
aatcagaagt ttaagggtag agtcactatc accgccgata agtctactag caccgtctat 240
atggaactga gttccctgag gtctgaggac accgccgtct actactgcgc tagagtgggc 300
ggagccttcc ctatggacta ctggggtcaa ggcactaccg tgaccgtgtc tagc 354
<210> 196
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 196
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Gly Ala Phe Pro Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
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325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 197
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 197
caggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggctctag cgtgaaagtt 60
tcttgtaaag ctagtggcta caccttcact agctataata tgcactgggt tcgccaggcc 120
ccagggcaag gcctcgagtg gatgggcgat atctaccccg ggaacggcga cactagttat 180
aatcagaagt ttaagggtag agtcactatc accgccgata agtctactag caccgtctat 240
atggaactga gttccctgag gtctgaggac accgccgtct actactgcgc tagagtgggc 300
ggagccttcc ctatggacta ctggggtcaa ggcactaccg tgaccgtgtc tagcgctagc 360
actaagggcc cgtccgtgtt ccccctggca ccttgtagcc ggagcactag cgaatccacc 420
gctgccctcg gctgcctggt caaggattac ttcccggagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480
agcggagccc tgacctccgg agtgcacacc ttccccgctg tgctgcagag ctccgggctg 540
tactcgctgt cgtcggtggt cacggtgcct tcatctagcc tgggtaccaa gacctacact 600
tgcaacgtgg accacaagcc ttccaacact aaggtggaca agcgcgtcga atcgaagtac 660
ggcccaccgt gcccgccttg tcccgcgccg gagttcctcg gcggtccctc ggtctttctg 720
ttcccaccga agcccaagga cactttgatg atttcccgca cccctgaagt gacatgcgtg 780
gtcgtggacg tgtcacagga agatccggag gtgcagttca attggtacgt ggatggcgtc 840
gaggtgcaca acgccaaaac caagccgagg gaggagcagt tcaactccac ttaccgcgtc 900
gtgtccgtgc tgacggtgct gcatcaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaaa 960
gtgtccaaca agggacttcc tagctcaatc gaaaagacca tctcgaaagc caagggacag 1020
ccccgggaac cccaagtgta taccctgcca ccgagccagg aagaaatgac taagaaccaa 1080
gtctcattga cttgccttgt gaagggcttc tacccatcgg atatcgccgt ggaatgggag 1140
tccaacggcc agccggaaaa caactacaag accacccctc cggtgctgga ctcagacgga 1200
tccttcttcc tctactcgcg gctgaccgtg gataagagca gatggcagga gggaaatgtg 1260
ttcagctgtt ctgtgatgca tgaagccctg cacaaccact acactcagaa gtccctgtcc 1320
ctctccctgg ga 1332
<210> 198
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 198
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu Met Gln
1 5 10 15
<210> 199
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 199
Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser
1 5
<210> 200
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 200
Gln Gln Ser Arg Lys Asp Pro Ser Thr
1 5
<210> 201
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 201
Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr Gly Thr Ser Leu
1 5 10
<210> 202
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 202
Ala Ala Ser
1
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 203
Ser Arg Lys Asp Pro Ser
1 5
<210> 204
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 204
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 205
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 205
gctattcagc tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta gagctagtga atcagtcgag tactacggca ctagcctgat gcagtggtat 120
cagcagaagc ccgggaaagc ccctaagctg ctgatctacg ccgcctctaa cgtggaatca 180
ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcaccct gactatctct 240
agcctgcagc ccgaggactt cgctacctac ttctgtcagc agtctaggaa ggaccctagc 300
accttcggcg gaggcactaa ggtcgagatt aag 333
<210> 206
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 206
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 207
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 207
gctattcagc tgactcagtc acctagtagc ctgagcgcta gtgtgggcga tagagtgact 60
atcacctgta gagctagtga atcagtcgag tactacggca ctagcctgat gcagtggtat 120
cagcagaagc ccgggaaagc ccctaagctg ctgatctacg ccgcctctaa cgtggaatca 180
ggcgtgccct ctaggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcaccct gactatctct 240
agcctgcagc ccgaggactt cgctacctac ttctgtcagc agtctaggaa ggaccctagc 300
accttcggcg gaggcactaa ggtcgagatt aagcgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420
aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcata aggtgtacgc ctgcgaggtg 600
acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgc 654
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 208
Asp Ile Tyr Pro Gly Gln Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 209
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 209
Tyr Pro Gly Gln Gly Asp
1 5
<210> 210
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 210
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 211
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 211
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ccaggtcaag gcctcgagtg gatcggcgat atctaccccg gtcaaggcga cacttcctat 180
aatcagaagt ttaagggtag agctactatg accgccgata agtctacttc taccgtctat 240
atggaactga gttccctgag gtctgaggac accgccgtct actactgcgc tagagtgggc 300
ggagccttcc caatggacta ctggggtcaa ggcaccctgg tcaccgtgtc tagc 354
<210> 212
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gln Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 213
<211> 1332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 213
caggtgcagc tggtgcagtc aggcgccgaa gtgaagaaac ccggcgctag tgtgaaagtt 60
agctgtaaag ctagtggcta tactttcact tcttataata tgcactgggt ccgccaggcc 120
ccaggtcaag gcctcgagtg gatcggcgat atctaccccg gtcaaggcga cacttcctat 180
aatcagaagt ttaagggtag agctactatg accgccgata agtctacttc taccgtctat 240
atggaactga gttccctgag gtctgaggac accgccgtct actactgcgc tagagtgggc 300
ggagccttcc caatggacta ctggggtcaa ggcaccctgg tcaccgtgtc tagcgctagc 360
actaagggcc cgtccgtgtt ccccctggca ccttgtagcc ggagcactag cgaatccacc 420
gctgccctcg gctgcctggt caaggattac ttcccggagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480
agcggagccc tgacctccgg agtgcacacc ttccccgctg tgctgcagag ctccgggctg 540
tactcgctgt cgtcggtggt cacggtgcct tcatctagcc tgggtaccaa gacctacact 600
tgcaacgtgg accacaagcc ttccaacact aaggtggaca agcgcgtcga atcgaagtac 660
ggcccaccgt gcccgccttg tcccgcgccg gagttcctcg gcggtccctc ggtctttctg 720
ttcccaccga agcccaagga cactttgatg atttcccgca cccctgaagt gacatgcgtg 780
gtcgtggacg tgtcacagga agatccggag gtgcagttca attggtacgt ggatggcgtc 840
gaggtgcaca acgccaaaac caagccgagg gaggagcagt tcaactccac ttaccgcgtc 900
gtgtccgtgc tgacggtgct gcatcaggac tggctgaacg ggaaggagta caagtgcaaa 960
gtgtccaaca agggacttcc tagctcaatc gaaaagacca tctcgaaagc caagggacag 1020
ccccgggaac cccaagtgta taccctgcca ccgagccagg aagaaatgac taagaaccaa 1080
gtctcattga cttgccttgt gaagggcttc tacccatcgg atatcgccgt ggaatgggag 1140
tccaacggcc agccggaaaa caactacaag accacccctc cggtgctgga ctcagacgga 1200
tccttcttcc tctactcgcg gctgaccgtg gataagagca gatggcagga gggaaatgtg 1260
ttcagctgtt ctgtgatgca tgaagccctg cacaaccact acactcagaa gtccctgtcc 1320
ctctccctgg ga 1332
<210> 214
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 214
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 215
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 215
gatatcgtcc tgactcagtc acccgatagc ctggccgtca gcctgggcga gcgggctact 60
attaactgta gagctagtga atcagtcgag tactacggca ctagcctgat gcagtggtat 120
cagcagaagc ccggtcaacc ccctaagctg ctgatctacg ccgcctctaa cgtggaatca 180
ggcgtgcccg ataggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcaccct gactattagt 240
agcctgcagg ccgaggacgt ggccgtctac tactgtcagc agtctaggaa ggaccctagc 300
accttcggcg gaggcactaa ggtcgagatt aag 333
<210> 216
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 216
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Tyr
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Lys Asp Pro Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<223> 生物的
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gatatcgtcc tgactcagtc acccgatagc ctggccgtca gcctgggcga gcgggctact 60
attaactgta gagctagtga atcagtcgag tactacggca ctagcctgat gcagtggtat 120
cagcagaagc ccggtcaacc ccctaagctg ctgatctacg ccgcctctaa cgtggaatca 180
ggcgtgcccg ataggtttag cggtagcggt agtggcaccg acttcaccct gactattagt 240
agcctgcagg ccgaggacgt ggccgtctac tactgtcagc agtctaggaa ggaccctagc 300
accttcggcg gaggcactaa ggtcgagatt aagcgtacgg tggccgctcc cagcgtgttc 360
atcttccccc ccagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcgtggt gtgcctgctg 420
aacaacttct acccccggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc 480
ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagc 540
agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcata aggtgtacgc ctgcgaggtg 600
acccaccagg gcctgtccag ccccgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgc 654
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 218
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp
35 40 45
Val Ser Thr Ile Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Gln Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 219
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Arg Arg Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 220
Glu Val Gln Val Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Tyr Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Ser
20 25 30
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
65 70 75 80
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<220>
<223> 生物的
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
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Tyr Tyr Ser Ser Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Ile Glu Val
100 105 110
Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 222
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 223
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
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50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
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100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
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130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
145 150 155 160
His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly
165 170
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<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 224
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asp Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
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Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 225
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
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50 55 60
Arg Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
65 70 75 80
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
85 90 95
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
100 105 110
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
115 120 125
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
130 135 140
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
145 150 155 160
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
165 170 175
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
180 185 190
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
195 200 205
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
210 215 220
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
225 230 235 240
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
245 250 255
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
260 265 270
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
275 280 285
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
290 295
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<211> 114
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 226
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 227
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro
65 70 75
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<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 228
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
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Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro
115 120 125
Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Tyr Phe Cys Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Glu Ile Lys Arg Arg Ser
245
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 229
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Tyr Phe Cys Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro
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Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Arg Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 231
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 232
Gly Gly Gly Ser
1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 233
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
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Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
195 200 205
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Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
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<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 234
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr
195 200 205
Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
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Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
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<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 235
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
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Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu
115 120 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145 150 155 160
Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Gln Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser
180 185 190
Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr
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Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 236
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20 25 30
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Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Leu Lys
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Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
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Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala
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Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
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Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
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130 135 140
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145 150 155 160
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
165 170 175
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180 185 190
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Leu Lys Ser
195 200 205
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245 250 255
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325 330 335
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
340 345 350
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
355 360 365
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
370 375 380
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
385 390 395 400
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
405 410 415
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
420 425 430
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
435 440 445
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
450 455 460
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
465 470 475 480
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 262
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 262
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu
20 25 30
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
50 55 60
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Ile Pro
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
100 105 110
Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val
145 150 155 160
Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser
165 170 175
Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
180 185 190
Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn
195 200 205
Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn
210 215 220
Gln Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
225 230 235 240
Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp
245 250 255
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro
260 265 270
Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu
275 280 285
Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His
290 295 300
Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu
305 310 315 320
Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
325 330 335
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
340 345 350
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
355 360 365
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
370 375 380
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
385 390 395 400
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
405 410 415
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
420 425 430
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
435 440 445
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
450 455 460
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
465 470 475 480
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
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<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 263
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu
20 25 30
Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val
35 40 45
Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys
50 55 60
Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr
65 70 75 80
Asn Ser Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Gln Val Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
145 150 155 160
Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro
165 170 175
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys
180 185 190
Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
195 200 205
Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
225 230 235 240
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro
245 250 255
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro
260 265 270
Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu
275 280 285
Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His
290 295 300
Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu
305 310 315 320
Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
325 330 335
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
340 345 350
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
355 360 365
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
370 375 380
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
385 390 395 400
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
405 410 415
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
420 425 430
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
435 440 445
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
450 455 460
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
465 470 475 480
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 264
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu
20 25 30
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
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Pro Arg Leu Leu Ile Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Ile Pro
65 70 75 80
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile
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Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Gly
100 105 110
Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr
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Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly
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Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
180 185 190
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser
195 200 205
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Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
225 230 235 240
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
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Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
275 280 285
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
290 295 300
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
305 310 315 320
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
325 330 335
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
340 345 350
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
355 360 365
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
370 375 380
Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
385 390 395 400
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
405 410 415
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
420 425 430
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
435 440 445
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
450 455 460
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
465 470 475 480
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485
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<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 265
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 266
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 267
atctacatct gggcgccctt ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc 60
accctttact gc 72
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<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 268
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
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Leu Ser Leu Gly Lys Met
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 269
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
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<211> 690
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 270
gagagcaagt acggccctcc ctgcccccct tgccctgccc ccgagttcct gggcggaccc 60
agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg gacccccgag 120
gtgacctgtg tggtggtgga cgtgtcccag gaggaccccg aggtccagtt caactggtac 180
gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggagca gttcaatagc 240
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggaa 300
tacaagtgta aggtgtccaa caagggcctg cccagcagca tcgagaaaac catcagcaag 360
gccaagggcc agcctcggga gccccaggtg tacaccctgc cccctagcca agaggagatg 420
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 480
gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 540
gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc cggctgaccg tggacaagag ccggtggcag 600
gagggcaacg tctttagctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 660
aagagcctga gcctgtccct gggcaagatg 690
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<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 271
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
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Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
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Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 272
<211> 847
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 272
aggtggcccg aaagtcccaa ggcccaggca tctagtgttc ctactgcaca gccccaggca 60
gaaggcagcc tagccaaagc tactactgca cctgccacta cgcgcaatac tggccgtggc 120
ggggaggaga agaaaaagga gaaagagaaa gaagaacagg aagagaggga gaccaagacc 180
cctgaatgtc catcccatac ccagccgctg ggcgtctatc tcttgactcc cgcagtacag 240
gacttgtggc ttagagataa ggccaccttt acatgtttcg tcgtgggctc tgacctgaag 300
gatgcccatt tgacttggga ggttgccgga aaggtaccca cagggggggt tgaggaaggg 360
ttgctggagc gccattccaa tggctctcag agccagcact caagactcac ccttccgaga 420
tccctgtgga acgccgggac ctctgtcaca tgtactctaa atcatcctag cctgccccca 480
cagcgtctga tggcccttag agagccagcc gcccaggcac cagttaagct tagcctgaat 540
ctgctcgcca gtagtgatcc cccagaggcc gccagctggc tcttatgcga agtgtccggc 600
tttagcccgc ccaacatctt gctcatgtgg ctggaggacc agcgagaagt gaacaccagc 660
ggcttcgctc cagcccggcc cccaccccag ccgggttcta ccacattctg ggcctggagt 720
gtcttaaggg tcccagcacc acctagcccc cagccagcca catacacctg tgttgtgtcc 780
catgaagata gcaggaccct gctaaatgct tctaggagtc tggaggtttc ctacgtgact 840
gaccatt 847
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 273
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 274
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 274
ggtggcggag gttctggagg tggaggttcc 30
<210> 275
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 275
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 276
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 276
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 277
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 277
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtaca agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336
<210> 278
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 278
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 336
<210> 279
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 279
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 280
<211> 48
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 280
Gln Arg Arg Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Gly Glu Ser Pro Val Glu Pro
1 5 10 15
Ala Glu Pro Cys Arg Tyr Ser Cys Pro Arg Glu Glu Glu Gly Ser Thr
20 25 30
Ile Pro Ile Gln Glu Asp Tyr Arg Lys Pro Glu Pro Ala Cys Ser Pro
35 40 45
<210> 281
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 281
aaacggggca gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 282
<211> 144
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 282
caacgaagga aatatagatc aaacaaagga gaaagtcctg tggagcctgc agagccttgt 60
cgttacagct gccccaggga ggaggagggc agcaccatcc ccatccagga ggattaccga 120
aaaccggagc ctgcctgctc cccc 144
<210> 283
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 283
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro
20
<210> 284
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 284
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 285
<211> 1184
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 285
cgtgaggctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc gcccacagtc cccgagaagt 60
tggggggagg ggtcggcaat tgaaccggtg cctagagaag gtggcgcggg gtaaactggg 120
aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg tgggggagaa ccgtatataa 180
gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt tgccgccaga acacaggtaa 240
gtgccgtgtg tggttcccgc gggcctggcc tctttacggg ttatggccct tgcgtgcctt 300
gaattacttc cacctggctg cagtacgtga ttcttgatcc cgagcttcgg gttggaagtg 360
ggtgggagag ttcgaggcct tgcgcttaag gagccccttc gcctcgtgct tgagttgagg 420
cctggcctgg gcgctggggc cgccgcgtgc gaatctggtg gcaccttcgc gcctgtctcg 480
ctgctttcga taagtctcta gccatttaaa atttttgatg acctgctgcg acgctttttt 540
tctggcaaga tagtcttgta aatgcgggcc aagatctgca cactggtatt tcggtttttg 600
gggccgcggg cggcgacggg gcccgtgcgt cccagcgcac atgttcggcg aggcggggcc 660
tgcgagcgcg gccaccgaga atcggacggg ggtagtctca agctggccgg cctgctctgg 720
tgcctggcct cgcgccgccg tgtatcgccc cgccctgggc ggcaaggctg gcccggtcgg 780
caccagttgc gtgagcggaa agatggccgc ttcccggccc tgctgcaggg agctcaaaat 840
ggaggacgcg gcgctcggga gagcgggcgg gtgagtcacc cacacaaagg aaaagggcct 900
ttccgtcctc agccgtcgct tcatgtgact ccacggagta ccgggcgccg tccaggcacc 960
tcgattagtt ctcgagcttt tggagtacgt cgtctttagg ttggggggag gggttttatg 1020
cgatggagtt tccccacact gagtgggtgg agactgaagt taggccagct tggcacttga 1080
tgtaattctc cttggaattt gccctttttg agtttggatc ttggttcatt ctcaagcctc 1140
agacagtggt tcaaagtttt tttcttccat ttcaggtgtc gtga 1184
<210> 286
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 286
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Phe Asp Tyr Ala His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 287
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 287
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Phe Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Asp Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn Ser Trp Pro Thr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 288
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 288
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 289
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 289
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 290
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 290
Phe Asp Tyr Ala His Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 291
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 291
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser Ile His
1 5 10
<210> 292
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 292
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 293
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 293
Gln Gln Ile Asn Ser Trp Pro Thr Thr
1 5
<210> 294
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 294
Gly Ala Pro Ala Gly Pro Leu Ile Val Pro Tyr Asn Leu Pro Leu Pro
1 5 10 15
Gly Gly Val Val Pro Arg Met Leu Ile Thr Ile Leu Gly Thr Val Lys
20 25 30
Pro Asn Ala Asn Arg Ile Ala Leu Asp Phe Gln Arg Gly Asn Asp Val
35 40 45
Ala Phe His Phe Asn Pro Arg Phe Asn Glu Asn Asn Arg Arg Val Ile
50 55 60
Val Cys Asn Thr Lys Leu Asp Asn Asn Trp Gly Arg Glu Glu Arg Gln
65 70 75 80
Ser Val Phe Pro Phe Glu Ser Gly Lys Pro Phe Lys Ile Gln Val Leu
85 90 95
Val Glu Pro Asp His Phe Lys Val Ala Val Asn Asp Ala His Leu Leu
100 105 110
Gln Tyr Asn His Arg Val Lys Lys Leu Asn Glu Ile Ser Lys Leu Gly
115 120 125
Ile Ser Gly Asp Ile Asp Ile Thr Ser Ala Ser Tyr Thr Met Ile
130 135 140
<210> 295
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 295
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Gln Ser Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 296
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 296
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 297
<211> 137
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 297
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Val Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Ile Ile Trp Tyr Asp Gly Asp Asn Gln Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Leu Arg Thr Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135
<210> 298
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 298
Met Leu Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala
1 5 10 15
Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val
20 25 30
Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile
35 40 45
Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys
50 55 60
Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser
85 90 95
Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser
100 105 110
Leu Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
115 120 125
<210> 299
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 299
atggccctgc ctgtgacagc cctgctgctg cctctggctc tgctgctgca tgccgctaga 60
ccc 63
<210> 300
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 300
atggccctcc ctgtcaccgc cctgctgctt ccgctggctc ttctgctcca cgccgctcgg 60
ccc 63
<210> 301
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 301
atctacattt gggcccctct ggctggtact tgcggggtcc tgctgctttc actcgtgatc 60
actctttact gt 72
<210> 302
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 302
aagcgcggtc ggaagaagct gctgtacatc tttaagcaac ccttcatgag gcctgtgcag 60
actactcaag aggaggacgg ctgttcatgc cggttcccag aggaggagga aggcggctgc 120
gaactg 126
<210> 303
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 303
cgcgtgaaat tcagccgcag cgcagatgct ccagcctaca agcaggggca gaaccagctc 60
tacaacgaac tcaatcttgg tcggagagag gagtacgacg tgctggacaa gcggagagga 120
cgggacccag aaatgggcgg gaagccgcgc agaaagaatc cccaagaggg cctgtacaac 180
gagctccaaa aggataagat ggcagaagcc tatagcgaga ttggtatgaa aggggaacgc 240
agaagaggca aaggccacga cggactgtac cagggactca gcaccgccac caaggacacc 300
tatgacgctc ttcacatgca ggccctgccg cctcgg 336
<210> 304
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 304
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 305
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 305
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val
145 150
<210> 306
<211> 450
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 306
cccggatggt ttctggactc tccggatcgc ccgtggaatc ccccaacctt ctcaccggca 60
ctcttggttg tgactgaggg cgataatgcg accttcacgt gctcgttctc caacacctcc 120
gaatcattcg tgctgaactg gtaccgcatg agcccgtcaa accagaccga caagctcgcc 180
gcgtttccgg aagatcggtc gcaaccggga caggattgtc ggttccgcgt gactcaactg 240
ccgaatggca gagacttcca catgagcgtg gtccgcgcta ggcgaaacga ctccgggacc 300
tacctgtgcg gagccatctc gctggcgcct aaggcccaaa tcaaagagag cttgagggcc 360
gaactgagag tgaccgagcg cagagctgag gtgccaactg cacatccatc cccatcgcct 420
cggcctgcgg ggcagtttca gaccctggtc 450
<210> 307
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 307
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro
20 25 30
Trp Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly
35 40 45
Asp Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe
50 55 60
Val Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu
65 70 75 80
Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe
85 90 95
Arg Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val
100 105 110
Arg Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser
115 120 125
Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg
130 135 140
Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser
145 150 155 160
Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Thr Thr Thr Pro Ala
165 170 175
Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser
180 185 190
Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr
195 200 205
Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala
210 215 220
Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
225 230 235 240
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
245 250 255
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
260 265 270
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
275 280 285
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
290 295 300
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
305 310 315 320
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
325 330 335
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
340 345 350
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
355 360 365
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
370 375 380
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
385 390
<210> 308
<211> 1182
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 308
atggccctcc ctgtcactgc cctgcttctc cccctcgcac tcctgctcca cgccgctaga 60
ccacccggat ggtttctgga ctctccggat cgcccgtgga atcccccaac cttctcaccg 120
gcactcttgg ttgtgactga gggcgataat gcgaccttca cgtgctcgtt ctccaacacc 180
tccgaatcat tcgtgctgaa ctggtaccgc atgagcccgt caaaccagac cgacaagctc 240
gccgcgtttc cggaagatcg gtcgcaaccg ggacaggatt gtcggttccg cgtgactcaa 300
ctgccgaatg gcagagactt ccacatgagc gtggtccgcg ctaggcgaaa cgactccggg 360
acctacctgt gcggagccat ctcgctggcg cctaaggccc aaatcaaaga gagcttgagg 420
gccgaactga gagtgaccga gcgcagagct gaggtgccaa ctgcacatcc atccccatcg 480
cctcggcctg cggggcagtt tcagaccctg gtcacgacca ctccggcgcc gcgcccaccg 540
actccggccc caactatcgc gagccagccc ctgtcgctga ggccggaagc atgccgccct 600
gccgccggag gtgctgtgca tacccgggga ttggacttcg catgcgacat ctacatttgg 660
gctcctctcg ccggaacttg tggcgtgctc cttctgtccc tggtcatcac cctgtactgc 720
aagcggggtc ggaaaaagct tctgtacatt ttcaagcagc ccttcatgag gcccgtgcaa 780
accacccagg aggaggacgg ttgctcctgc cggttccccg aagaggaaga aggaggttgc 840
gagctgcgcg tgaagttctc ccggagcgcc gacgcccccg cctataagca gggccagaac 900
cagctgtaca acgaactgaa cctgggacgg cgggaagagt acgatgtgct ggacaagcgg 960
cgcggccggg accccgaaat gggcgggaag cctagaagaa agaaccctca ggaaggcctg 1020
tataacgagc tgcagaagga caagatggcc gaggcctact ccgaaattgg gatgaaggga 1080
gagcggcgga ggggaaaggg gcacgacggc ctgtaccaag gactgtccac cgccaccaag 1140
gacacatacg atgccctgca catgcaggcc cttccccctc gc 1182
<210> 309
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 309
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 310
<211> 50
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 310
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 50
<210> 311
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 311
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr
145 150 155 160
Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala
165 170 175
Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe
180 185 190
Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val
195 200 205
Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys
210 215 220
Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
225 230 235 240
Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
245 250 255
Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
260 265 270
Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
275 280 285
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
290 295 300
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
305 310 315 320
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
325 330 335
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
340 345 350
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
355 360 365
Ala Leu Pro Pro Arg
370
<210> 312
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 312
Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro Asn Gly Glu Tyr
1 5 10 15
Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser Arg Leu Thr Asp
20 25 30
Val Thr Leu
35
<210> 313
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 313
acaaaaaaga agtattcatc cagtgtgcac gaccctaacg gtgaatacat gttcatgaga 60
gcagtgaaca cagccaaaaa atccagactc acagatgtga cccta 105
<210> 314
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 314
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Phe Trp Leu
35 40 45
Pro Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile
50 55 60
Leu Ile Cys Trp Leu
65
<210> 315
<211> 207
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 315
accacgacgc cagcgccgcg accaccaaca ccggcgccca ccatcgcgtc gcagcccctg 60
tccctgcgcc cagaggcgtg ccggccagcg gcggggggcg cagtgcacac gagggggctg 120
gacttcgcct gtgatttctg gttacccata ggatgtgcag cctttgttgt agtctgcatt 180
ttgggatgca tacttatttg ttggctt 207
<210> 316
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 316
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 317
<211> 123
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 317
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 318
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 318
Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Tyr Arg Ser Pro
1 5 10 15
Ala Met Pro Glu Asn Leu
20
<210> 319
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 319
Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
1 5 10
<210> 320
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 生物的
<400> 320
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15

Claims (55)

1.一种治疗有需要的受试者的增殖性疾病的方法，所述方法包括以约16mg/kg至约50mg/kg的剂量，每两周或三周一次，向所述受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别是SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3，以及分别是SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述TGF-β抗体以约20mg/kg的剂量施用。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述TGF-β抗体以约30mg/kg的剂量施用。
4.一种治疗有需要的受试者的增殖性疾病的方法，所述方法包括以约1200mg至约1600mg的剂量，每两周或三周一次，向所述受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别是SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3，以及分别是SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述TGF-β抗体以约1400mg的剂量施用。
6.如权利要求4或5所述的方法，其中所述TGF-β抗体每两周施用。
7.一种治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括以约1900mg至约2300mg的剂量，每两周或三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别是SEQ IDNO:1、2和3的重链CDR1、CDR2和CDR3，以及分别是SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述TGF-β抗体以约2100mg的剂量施用。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述TGF-β抗体每三周施用。
10.如权利要求7或8所述的方法，其中所述TGF-β抗体每两周施用。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述TGF-β抗体包含分别在氨基酸序列SEQ ID NO:7和8中所示的重链可变区和轻链可变区。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述TGF-β抗体包含分别在氨基酸序列SEQ ID NO:9和10中所示的重链和轻链。
13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述TGF-β抗体是单克隆抗体。
14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述抗体是多特异性抗体。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
16.如权利要求14所述的方法，其中所述多特异性抗体是三特异性抗体。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中经约20至约40分钟的时间段施用所述TGF-β。
18.如权利要求17所述的方法，其中经约30分钟的时间段施用所述TGF-β抑制剂。
19.如权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述受试者是约70kg。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用检查点抑制剂。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述检查点抑制剂是PD1抑制剂。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述PD1抑制剂是抗PD1抗体。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述抗PD1抗体是斯巴达珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、MEDI0680、REGN2810、TSR-042、PF-06801591、BGB-A317、BGB-108、INCSHR1210、AMP-224、或其任何组合。
24.如权利要求22或23所述的方法，其中所述抗PD1抗体是斯巴达珠单抗。
25.如权利要求24所述的方法，其中以平稳剂量施用斯巴达珠单抗。
26.如权利要求25所述的方法，其中每三周一次或每四周一次以约300mg或约400mg的剂量施用斯巴达珠单抗。
27.如权利要求23至26中任一项所述的方法，其中每三周一次以约300mg斯巴达珠单抗的剂量施用斯巴达珠单抗。
28.如权利要求23至26中任一项所述的方法，其中每四周一次以约400mg斯巴达珠单抗的剂量施用斯巴达珠单抗。
29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其中静脉内施用所述TGF-β抑制剂和/或PD1抑制剂。
30.如权利要求20至29中任一项所述的方法，其中将所述TGF-β抑制剂与所述检查点抑制剂在同一天施用。
31.如权利要求20至29中任一项所述的方法，其中在施用所述检查点抑制剂之前施用所述TGF-β抑制剂。
32.如权利要求20至29中任一项所述的方法，其中在施用所述检查点抑制剂之后施用所述TGF-β抑制剂。
33.如权利要求20至29中任一项所述的方法，其中将所述TGF-β抑制剂与所述检查点抑制剂同时施用。
34.如权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述增殖性疾病是癌症。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述癌症是骨髓纤维化、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、肺癌、皮肤癌、卵巢癌、间皮瘤、胃肠癌、膀胱癌、软组织肉瘤、骨癌、肾癌、肝癌、胆管癌、肉瘤、骨髓增生异常综合征(例如，低风险或高风险骨髓增生异常综合征)、前列腺癌、乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌)、结直肠癌、鼻咽癌、十二指肠癌、子宫内膜癌、胰腺癌、头颈癌、肛门癌、胃食道癌、甲状腺癌、宫颈癌、或神经内分泌肿瘤。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述胰腺癌是胰腺导管腺癌(PDAC)。
38.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症是胃肠癌。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述胃肠癌是结直肠癌。
40.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症是骨髓纤维化。
41.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症是骨髓增生异常综合征。
42.如权利要求35所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述乳腺癌是三阴性乳腺癌。
44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中给予所述TGF-β抑制剂和/或检查点抑制剂直至缓解。
45.如权利要求1至44中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用一种或多种抗癌疗法。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述抗癌疗法是标准护理疗法或抗癌治疗。
47.一种治疗胰腺导管腺癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每两周或三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
48.一种治疗结直肠癌的方法，所述方法包括以2100mg的剂量，每两周或三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
49.一种治疗胰腺导管腺癌的方法，所述方法包括以1400mg的剂量，每两周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
50.一种治疗结直肠癌的方法，所述方法包括以1400mg的剂量，每三周一次，向有需要的受试者施用TGF-β抗体，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
51.如权利要求47至50中任一项所述的方法，所述方法进一步包括以约300mg的剂量，每三周一次，施用斯巴达珠单抗。
52.如权利要求47至50中任一项所述的方法，所述方法进一步包括以约400mg的剂量，每四周一次，施用斯巴达珠单抗。
53.一种药物组合物，所述药物组合物包含TGF-β抗体和药学上可接受的赋形剂，其中所述TGF-β抗体包含分别在SEQ ID NO:9和10的氨基酸序列中所示的重链和轻链。
54.如权利要求53所述的药物组合物，其中所述TGF-β抗体以100mg/mL的浓度存在。
55.如权利要求53或54所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含(a)组氨酸缓冲液，其浓度为20mM，具有5.5的pH；(b)蔗糖，其浓度为220mM；以及(c)表面活性剂或聚山梨酯20，其以0.04％(w/w)的浓度存在。
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