EA023032B1 - Человеческие антитела, связывающие ген активации лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение - Google Patents

Человеческие антитела, связывающие ген активации лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA023032B1
EA023032B1 EA201100340A EA201100340A EA023032B1 EA 023032 B1 EA023032 B1 EA 023032B1 EA 201100340 A EA201100340 A EA 201100340A EA 201100340 A EA201100340 A EA 201100340A EA 023032 B1 EA023032 B1 EA 023032B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
human
antibodies
antigen
lac
Prior art date
Application number
EA201100340A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100340A1 (ru
Inventor
Кент Б. Тадиум
Алан Дж. Корман
Хейди Лебланк
Марк Яманака
Марк Селби
Кира Д. Зенс
Original Assignee
Медарекс, Л.Л.К.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41669613&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA023032(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Медарекс, Л.Л.К. filed Critical Медарекс, Л.Л.К.
Publication of EA201100340A1 publication Critical patent/EA201100340A1/ru
Publication of EA023032B1 publication Critical patent/EA023032B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Настоящее раскрытие включает выделенные моноклональные антитела, которые специфически связываются с LAG-3 с высокой аффинностью, в частности человеческие моноклональные антитела. Предпочтительно антитела связывают человеческий LAG-3. В некоторых вариантах изобретения антитела связывают как человеческий, так и обезьяний LAG-3, но не мышиный LAG-3. Изобретение включает антитела против LAG-3, которые могут ингибировать связывание LAG-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимосги (ГКГ, МНС) класса II и которые могут стимулировагь антигенспецифический Т-клеточный ответ (антигенспецифические Т-клеточные реакции). Изобретение также включает нуклеотидные молекулы, кодирующие антитела по изобретению, экспрессирующие векторы, клетки-хозяева и способы экспрессии антител. Также изобретение охватывает иммуноконъюгаты, биспецифические молекулы и фармацевтические композиции, содержащие антитела по изобретению. Данное раскрытие включает также способы детекции LAG-3, а также способы лечения стимулирующих иммунных реакций с помощью антитела против LAG-3 по изобретению. Также охватывается комбинированная терапия, в соответствии с которой антитело против LAG-3 вводят совместно по меньшей мере с одним дополнительным иммуностимулирующим антителом.

Description

Уровень техники
Ген активации лимфоцитов-3, или ЬЛС-3 (также известный как СЭ223). является членом семейства иммуноглобулинового супергена (супергена иммуноглобулинов) и структурно и генетически связан с СЭ4. ЬЛС-3 не экспрессируется на спящих лимфоцитах периферической крови, но экспрессируется на активированных Т-клетках и ΝΚ-клетках. ЬЛС-3 представляет собой мембранный белок, кодируемый геном, локализованным на дистальном участке короткого плеча хромосомы 12, близ гена СЭ4. это наводит на мысль, что ген ЬЛС-3 можно выделять генной дупликацией (ТпеЬе1 е! а1. (1990) 1. Ехр. Меб. 171: 1393-1405).
Показано, что аналогично СЭ4 ЬЛС-3 не взаимодействует с молекулами ГКГ (МНС) класса II, но в отличие от СЭ4 ЬЛС-3 не взаимодействует с др120 белком вируса иммунодефицита человека (Ва1хегак е! а1. (1992) I. Ехр. Меб. 176: 327-337). Исследования с использованием белка слияния ЬЛС-3 с иммуноглобулином (8ЬЛС-31§) демонстрируют прямое и специфическое связывание ЬЛС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II на поверхности клетки (Ниагб е! а1. (1996) Еиг. I. 1ттипо1. 26: 1180-1186).
В ίη νίίτο исследованиях антиген-специфических Т-клеточных реакций добавление антител против ЬЛС-3 приводит к повышенной пролиферации Т-клеток, повышенной экспрессии антигенов активации, таких как СИ25, и к повышенным концентрациям цитокинов, таких как интерферон-гамма и интерлейкин-4, подтверждая роль взаимодействия ЬЛС-/МНС класса II в даунрегуляции антигензависимой стимуляции СИ4+ Т лимфоцитов (Ниагб е! а1. (1994) Еиг. I. Iттиηο1. 24: 3216- 3221). Показано, что интраплазматическая область ЬЛС-3 взаимодействует с белком, называемым ЬЛР, который предположительно является молекулой сигнальной трансдукции, участвующей в даунрегуляции пути активации СЭ3/ТСК (Тоигакп е! а1. (2001) Еиг. I. Iттиηο1. 31: 2885- 2891). Кроме того, показано, что СИ4+СИ25+ регуляторные Т клетки (Тгед) экспрессируют ЬЛС-3 при активации, а антитела к ЬЛС-3 ингибируют супрессию индуцированными клетками Тгед как ίη νίίτο, так и ίη νίνο, это позволяет предположить, что ЬЛС-3 вносит вклад в супрессорную активность Тгед клеток (Ниапд, С. е! а1. (2004) ЕптипПу 21: 503-513).
Более того, показано, что ЬЛС-3 негативно регулирует Т-клеточный гомеостаз с помощью регуляторных Т-клеток как по Т-клеточно-зависимому, так и по Т-клеточно-независимому механизму (\Уогктап, С.1. апб У^паИ И.Л. (2005) I. Iттиηο1. 174: 688-695).
Показано, что в некоторых условиях ЬЛС-3 вызывает также иммуностимулирующий эффект. Например, трансфецированные с помощью ЬЛС-3 опухолевых клеток, трансплантированные в сингенных мышей, проявляют заметный рост снижения или полную регрессию по сравнению с нетрансфецированными опухолевыми клетками, это позволяет предположить, что экспрессия ЬЛС-3 на опухолевых клетках стимулирует противоопухолевый ответ за счёт инициирования (запуска, включения) антигенпрезентирующих клеток с помощью молекул ГКГ (МНС) класса II (Рпдеп! е! а1. (1999) Еиг. I. Iттиηο1. 29: 3867-3876). Помимо этого, показано, что растворимый слитый белок ЬЛСШд стимулирует как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ при введении мышам вместе с антигеном, это показывает, что растворимый БАС-.Пд может действовать как адъювант в вакцине (Е1 Μίτ апб ТпеЬе1 (2000) I. Iттипо1. 164: 5583-5589). Показано далее, что растворимый человеческий БАС-.Пд усиливает ш νί!το выработку типа I опухоль-специфического иммунитета (Сакаб е! а1. (2006) Сапсег Кек. 66: 4450-4460). Обзор функциональной активности ЬАС-3 приводится в ТпеЬе1 (2003) Тгепбк Iттиηο1. 24: 619-622. На основании вышесказанного становится понятным, что дополнительные агенты для модуляции активности ЬАС3 представляют интерес.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение включает выделенные моноклональные антитела или их антегенсвязывающие участки, которые специфически связывают человеческий ЬАС-3.
В одном варианте изобретения антитело по изобретению содержит вариабельную область тяжёлой и/или лёгкой цепи, содержащую аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 85% гомологичные аминокислотной последовательности БЕС ГО ΝΟ: 37 и БЕС ГО ΝΟ: 43.
В другом варианте изобретения антитело по изобретению содержит вариабельную область тяжёлой и/или лёгкой цепи, содержащую аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 90% гомологичные аминокислотной последовательности БЕС ГО ΝΟ: 37 и БЕС ГО ΝΟ: 43.
В другом варианте антитело или его антигенсвязывающий участок по изобретению содержит последовательности СЭК1, СГОК2 и СГОК3 вариабельной области тяжёлой цепи, как указано в БЕС ГО ΝΟ: 1, 7 и 13 соответственно, и последовательности СЭК.1, СЭК2 и СЭК3 вариабельной области легкой цепи, как указано в БЕС ГО ΝΟ: 19, 25 и 31 соответственно.
В одном варианте моноклональные антитела, их антигенсвязывающие участки, соответствующие настоящему изобретению, обладают нужными функциональными свойствами. Эти свойства включают высокоаффинное связывание с человеческим ЬАС-3, связывание с ЬАС-3 человека и обезьяны (например, ЬАС-3 макака циномолгус и/или резус), но не с мышиным ЬАС-3, способность ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами главного комплекса гистосовместимости (ГКГ, МНС) класса II и/или способность стимулировать антиген-специфические Т-клеточные реакции (ответы). Антитела по изобретению можно применять, например, для обнаружения (детекции) белка ЬАС-3 или для стимуляции антиген-специфических Т-клеточных реакций, таких как у носителя опухоли или носителя вируса.
- 1 023032
В одном аспекте изобретение относится к выделенному человеческому моноклональному антителу или к его антигенсвязывающему участку, отличающемуся тем, что это антитело связывает человеческий ЬАС-3 и проявляет по меньшей мере одно из нижеследующих свойств:
(а) связывает ЬЛС-3 обезьян;
(б) не связывает мышиный ЬЛС-3;
(в) ингибирует связывание ЬЛС-3 с молекулами класса II главного комплекса гистосовместимости (ГКГ, МНС) и (г) стимулирует иммунный ответ.
Предпочтительно антитело проявляет по меньшей мере два из этих свойств (а), (б), (в) и (г). Более предпочтительно антитело проявляет по меньшей мере три из этих свойств (а), (б), (в) и (г). Ещё более предпочтительно антитело проявляет все четыре из этих свойств (а), (б), (в) и (г).
В предпочтительном варианте изобретения антитело стимулирует антиген-специфический Тклеточный ответ, такой как продуцирование интерлейкина-2 (1Ь-2) в процессе антиген-специфического Т-клеточного ответа. В других вариантах изобретения антитело стимулирует иммунный ответ, такой как противоопухолевый ответ (противоопухолевую реакцию), например ингибирует рост опухоли на ίη νίνο модели опухолевого трансплантата), или аутоиммунный ответ (например, стимулирует развитие диабета у ΝΘΌ мышей). В предпочтительном варианте изобретения антитело связывает эпитоп человеческого ЬЛС-3, содержащий аминокислотную последовательность ΗΡΛΛΡδδ^ (5>ЕС ГО N0: 77) или РААР§§^С (8ЕЦ ГО N0: 78). В других вариантах изобретения антитело связывается с человеческим ЬЛС-3 с Ки 1х10-7 М или менее, или связывается с человеческим ЬЛС-3 с Кс 1х10-8 М или менее, или связывается с человеческим ЬЛС-3 с Кс 5х10-9 М или менее, или связывается с человеческим ЬЛС-3 с Кс 1 х 10-9 М или менее. В одном варианте изобретения антитело окрашивает слизистую ткань в иммуногистохимическом исследовании, тогда как в другом варианте изобретения антитело не окрашивает слизистую ткань в иммуногистохимическом исследовании.
В другом аспекте изобретение относится к выделенному моноклональному антителу или к его антигенсвязывающему участку, содержащему:
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 37-42;
(б) вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 43-48;
причём антитело специфически связывает человеческий ЬЛС-3.
Предпочтительная комбинация включает:
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность §ЕЦ ГО N0: 37; и (б) вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность §ЕЦ ГО N0: 43.
Антитела по изобретению могут представлять собой, например, полноразмерные антитела (антитела полной длины), например 1дС1, 1дС2 или 1дС4 изотипа. В предпочтительном варианте изобретения антитело представляет собой антитело 1дС4 изотипа. В другом предпочтительном варианте изобретения антитело представляет собой антитело 1дС4 изотипа, содержащее мутационную замену серина на пролин на шарнирном участке константной области тяжёлой цепи (в положении, соответствующем положению 241 в соответствии с описанием в Апда1 е! а1. (1993) Μοί. 1ттипо1. 30: 105-108), так что уменьшается или отменяется гетерогенность за счёт дисульфидного мостика между тяжёлыми цепями. Или же антитела могут представлять собой фрагменты антител, такие как РаЬ, РаЬ' или РаЬ'2 фрагменты, или одноцепочечные антитела.
Данное раскрытие включает также иммуноконъюгат, содержащий антитело по изобретению или его антигенсвязывающий участк, связанное(ый) с терапевтическим агентом, например цитотоксином или радиоактивным изотопом.
Изобретение также включает композиции для стимуляции иммунного ответа, содержащие эффективное количество антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Также данное изобретение охватывает молекулы выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующие вариабельную область антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению, а также экспрессирующие векторы, содержащие такие нукленовые кислоты, и клетки-хозяева, содержащие такие экспрессирующие векторы. Также данное изобретение включает способы получения антител против ЬАС-3 с применением таких экспрессирующих векторов, эти способы могут включать стадии (ί) экспрессии антитела в клетке-хозяине и (ίί) выделения антитела из клетки-хозяина.
Другой аспект изобретения относится к способам стимуляции иммунного ответа (иммунных реакций) с помощью антител против ЬАС-3 по изобретению. Например, в одном варианте изобретение включает способ стимуляции антигенспецифического Т-клеточного ответа, заключающийся в контактировании указанной Т-клетки с антителом или его антигенсвязывающим участком или композицией по изо- 2 023032 бретению, в результате чего стимулируется антигенспецифический Т-клеточный ответ. В указанном способе стимуляции Т-клетка присутствует ίη νίίτο или ίη νίνο за исключением тела человека. В предпочтительном варианте изобретения стимулируется продукция интерлейкина-2 антигенспецифической Тклеткой. Другой вариант изобретения включает способ стимуляции иммунного ответа (например, антиген-специфического Т-клеточного ответа) у субъекта, заключающийся во введении субъекту антитела по изобретению, в результате чего стимулируется иммунный ответ организма субъекта (например, антигенспецифический Т-клеточный ответ). В предпочтительном варианте изобретения субъект является носителем опухоли, и стимулируется иммунный ответ против опухоли. В другом предпочтительном варианте изобретения субъект является носителем вируса, и стимулируется иммунный ответ против вируса.
Ещё один вариант изобретения включает способ стимуляции иммунного ответа у субъекта, заключающийся во введении субъекту антитела против ЬЛС-3 и по меньшей мере одного дополнительного иммуностимулирующего антитела, такого как антитело против ΡΌ-1, антитело против ΡΌ-Ы и/или антитела против СТЬЛ-4, с тем, чтобы у субъекта стимулировался иммунный ответ, например для ингибирования роста опухоли или для стимуляции антивирусной реакции. В одном варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬЛС-3 и антитело против ΡΌ-1. В другом варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬЛС-3 и антитело против ΡΌ-Ы. Ещё в одном варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬЛС-3 и антитело против ΡΌ. В еще одном варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬЛС-3 и антитело против СТЬЛ-4. В одном варианте изобретения антитело против ЬЛС-3 представляет собой человеческое антитело, такое как антитело по данному описанию. Или же антитело против ЬЛС-3 может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело. В другом варианте изобретения по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело (например, антитело против ΡΌ-1, против ΡΌ-Ы и/или против СТЬЛ-4) является человеческим антителом. Или же по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело.
Ещё в одном аспекте изобретение относится к способу получения антитела против ЬЛС-3. Этот способ включает:
(а) предоставление (ί) последовательности вариабельной области тяжёлой цепи, содержащей последовательность СЭР!, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 1-6, последовательность СЭР2. выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 7-12, и/или последовательность СЭР3, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 13-14, ССУ и 16-18; и/или (ίί) последовательности вариабельной области лёгкой цепи, содержащей последовательность СЭР1, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 19-24, последовательность СЭР2, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 25-30, и/или последовательность СЭР3, выбранную из группы, состоящей из 8ЕС ГО N0: 31-36;
(б) изменение по меньшей мере одного аминокислотного остатка в последовательности вариабельной области тяжёлой цепи антитела и/или в последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела с целью создать по меньшей мере одну изменённую последовательность антитела; и (в) экспрессию антитела с изменённой последовательностью в виде белка.
Еще в одном аспекте изобретение относится к применению антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению или их композиции в иммунотерапии, в частности для стимулирования иммунного ответа у субъекта, ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, лечения вирусной инфекции у субъекта.
В одном аспекте изобретение относится к применению антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению или их композиции для изготовления лекарственного средства для иммунотерапии.
Другие признаки и преимущества настоящего раскрытия будут очевидны из нижеприведённого подробного описания и примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие. Содержание всех ссылочных материалов, данных из СепЬапк, патентов и опубликованных патентных заявок, цитируемых в данной заявке, однозначно вводится в данное описание в качестве ссылки.
Краткое описание фигур
На фиг. 1А показана нуклеотидная последовательность (8ЕС ГО N0: 49) и аминокислотная последовательность (8ЕС ГО N0: 37) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 25Р7. Области СЭР1 (8ЕС ГО N0: 1), СЭР2 (8ЕС ГО N0: 7) и СЭР3 (8ЕС ГО N0: 13) выделены, а деривации (источники) V, Ό и ί зародышевой линии указаны.
На фиг. 1В показана нуклеотидная последовательность (8ЕС ГО N0: 55) и аминокислотная последовательность (8ЕС ГО N0: 43) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 25Р7. Области СЭР1 (8ЕС ГО N0: 19), СЭР2 (НЕС) ГО N0: 25) и СЭР3 (8ЕС ГО N0: 31) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. 2А показана нуклеотидная последовательность (8ЕС ГО N0: 50) и аминокислотная последовательность (8ЕС ГО N0: 38) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 26Н10. Области СГОР1 (8ЕС ГО N0: 2), СЭР2 (8ЕС ГО N0: 8) и СЭР3 (8ЕС ГО N0: 14) выделены, а деривации (источники) V, Ό и ί зародышевой линии указаны.
На фиг. 2В показана нуклеотидная последовательность (8ЕС ГО N0: 56) и аминокислотная после- 3 023032 довательность (8ЕЦ ΙΌ N0: 44) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 26Н10. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 20), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 26) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 32) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. ЗА показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 51) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 39) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 25Е3. Области 0ΌΚ1 (8ЕЦ ГО N0: 3), 0ΌΚ2 (8ЕЦ ГО N0: 9) и 0ΌΚ3 выделены, а деривации (источники^, Ό и 1 зародышевой линии указаны.
На фиг. 3В показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 57) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 45) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 25Е3. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 21), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 27) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 33) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. 4А показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 52) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 40) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 8В7. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 4), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 10) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 16) выделены, а деривации (источники) V, Ό и 1 из зародышевой линии указаны.
На фиг. 4В показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 58) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 46) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 8В7. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 22), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 28) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 34) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. 5А показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 53) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 41) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 11Р2. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 5), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 11) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0:17) выделены, а деривации (источники) V, Ό и 1 из зародышевой линии указаны.
На фиг. 5В показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 59) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 47) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 11Р2. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 23), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 29) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 35) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. 6А показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 54) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 42) вариабельной области тяжёлой цепи человеческого моноклонального антитела 17Е5. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 6), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 12) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 18) выделены, а деривации (источники) V, Ό и 1 из зародышевой линии указаны.
На фиг. 6В показана нуклеотидная последовательность (8ЕЦ ГО N0: 60) и аминокислотная последовательность (8Е0 ГО N0: 48) вариабельной области лёгкой цепи κ-человеческого моноклонального антитела 17Е5. Области 0ΌΚ1 (8ЕО ГО N0: 24), 0ΌΚ2 (8ЕО ГО N0: 30) и 0ΌΚ3 (8ЕО ГО N0: 36) выделены, а деривации (источники) V и Ό зародышевой линии указаны.
На фиг. 7 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 25Р7 (8ЕЦ ГО N0: 37) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии 4-34 и 1Н5Ь (8ЕЦ ГО N0: 61 и 62 соответственно).
На фиг. 8 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 25Р7 (8ЕЦ ГО N0: 43) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии Vк Ь6 и Ж2 (8Е0 ГО N0: 63 и 64 соответственно).
На фиг. 9 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 26Н10 (8ЕЦ ГО N0: 38) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии 3-33 И Ш6В (8ЕЦ ГО N0: 65 и 66 соответственно).
На фиг. 10 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 26Н10 (8ЕЦ ГО N0: 44) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии V А27 и Ж3 (8ЕЦ ГО N0: 67 и 68 соответственно).
На фиг. 11 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 25Е3 (8ЕЦ ГО N0: 39) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии 3-20 И 1Н4Ь (8ЕЦ ГО N0: 69 и 70 соответственно).
На фиг. 12 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 25Е3 (8ЕЦ ГО N0: 45) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии Vк Ь18 и Ж2 (8ЕЦ ГО N0: 71 и 64 соответственно).
На фиг. 13 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 8В7 (8ЕЦ ГО N0: 40) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии 4-34 и Ж5Ь (8ЕЦ ГО N0: 61 и 62 соответственно).
На фиг. 14 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 8В7 (8ЕЦ ГО N0: 46) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии Vк Ь6 и Ж4 (8Е0 ГО N0: 63 и 72 соответственно).
На фиг. 15 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 11Р2 (8ЕЦ ГО N0: 41) с аминокислотными последовательностями человеческой
- 4 023032 зародышевой линии νΗ 1-24 И 1Н4Ь (8ЕЦ ГО N0: 73 и 70 соответственно).
На фиг. 16 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 11Р2 (8ЕЦ ГО N0: 47) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии V Ь6 и Л<1 (8ЕЦ ГО N0: 63 и 74 соответственно).
На фиг. 17 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельных областей тяжёлой цепи антитела 17Е5 (8ЕЦ ГО N0: 42) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии νΗ 3-33 и 2-2 (8ЕЦ ГО N0: 65 и 70 соответственно).
На фиг. 18 показано выравнивание аминокислотной последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела 17Е5 (8ЕЦ ГО N0: 48) с аминокислотными последовательностями человеческой зародышевой линии V Ь6 (8ЕЦ ГО N0: 63 и 75 соответственно).
На фиг. 19 показано выравнивание белковой последовательности, кодированной кДНК ЬЛС-3 обезьян клон ра23-5 (8ЕЦ ГО N0: 93), с депонированной в СеиЬаик белковой последовательностью ЬЛС-3 макак- резус (8ЕЦ ГО N0: 94) (регистрационный № в СеиЬаик ХМ_001108923). Область внешней пептидной петли и трансмембранный домен подчёркнуты. Одно аминокислотное различие между двумя последовательностями (аминокислотное положение 419) выделено полужирным шрифтом.
Подробное описание изобретения
Настоящее раскрытие относится к выделенным моноклональным антителам, в частности к человеческим моноклональным антителам, которые связываются с человеческим ЬЛС-3 и обладают требуемыми функциональными свойствами. В некоторых вариантах изобретения антитела по изобретению образованы из конкретных последовательностей тяжёлых и лёгких цепей зародышевой линии и/или имеют конкретные структурные признаки, такие как СОК области, содержащие конкретные аминокислотные последовательности. Данное раскрытие включает выделенные антитела, способы получения таких антител, иммуноконъюгаты и биспецифические молекулы, содержащие такие антитела, и фармацевтические композиции, содержащие антитела, иммуноконъюгаты или биспецифические молекулы по изобретению. Данное раскрытие относится также к способам применения антител, таким как детекция ЬЛС-3 белка, а также к способам применения антител против ЬЛС-3 по изобретению для стимуляции иммунного ответа, самостоятельно или в комбинации с другими иммуностимулирующими антителами. Соответственно, данное раскрытие также включает способы применения антител против ЬЛС-3 по изобретению, например для ингибирования роста опухоли или лечения вирусной инфекции.
Для того чтобы настоящее раскрытие стало понятнее, прежде всего даётся определение некоторых терминов. Дополнительные определения даются по ходу подробного описания.
Термин ЬЛС-3 относится к гену активации лимфоцитов-3. Термин ЬЛС-3 включает варианты, изоформы, гомологи, ортологи и паралоги. Например, антитела, специфические к человеческому белку ЬЛС-3, могут в некоторых случаях перекрёстно реагировать с белком ЬЛС-3 другого вида, нежели человеческий белок ЬЛС-3. В других вариантах изобретения антитела, специфические к человеческому белку ЬЛС-3, могут быть полностью специфическими к человеческому белку ЬЛС-3 и могут не проявлять видовую или другого типа перекрёстную реактивность или могут перекрёстно реагировать с ЬЛС-3 некоторых, но не всех (например, перекрёстно реагировать с ЬЛС-3 обезьяны, но не с мышиным ЬЛС-3). Термин человеческий ЬЛС-3 относится к человеческой последовательности ЬЛС-3, такой как полная аминокислотная последовательность человеческого ЬЛС-3, имеющая регистрационный номер в СеиЬаик МР_002277. Термин мышиный ЬЛС-3 относится к мышиной последовательности ЬЛС-3, такой как полная аминокислотная последовательность мышиного ЬЛС-3, имеющая регистрационный номер в СепЬапк НР_032505. В уровне техники ЬЛС-3 также известен, например, как СО223. Последовательность человеческого ЬЛС-3 может отличаться от человеческой последовательности ЬЛС-3, имеющей регистрационный номер в СепЬапк НР_002277. тем, что она может иметь, например, консервативные мутации или мутации в неконсервативных областях, и ЬЛС-3 имеет практически такую же биологическую функцию, что и человеческий ЬЛС-3 из СепЬапк регистрационный № НР_002277.
Например, биологическая функция человеческого ЬЛС-3 заключается в том, что он имеет эпитоп во внеклеточном домене ЬЛС-3, который специфически связан с антителом по настоящему раскрытию, или биологической функцией ЬЛС-3 является связывание с молекулами класса II ГКГ (МНС).
Предполагается, что термин обезьяний ЬЛС-3 (ЬЛС-3 обезьяны) охватывает ЬЛС-3 белки, экспрессируемые в клетках обезьян Старого и Нового Света, включая, но без ограничения, ЬЛС-3 обезьян циномолгус и ЬЛС-3 обезьян (макак) резус. Репрезентативная аминокислотная последовательность обезьяньего ЬЛС-3 представляет собой аминокислотную последовательность ЬЛС-3 макак-резус, показанную на фиг. 19 и 8ЕС ГО N0: 85, которая также депонирована в СепЬапк, регистрационный № ХМ_001108923. Другая репрезентативная аминокислотная последовательность обезьяньего ЬЛС-3 представляет собой альтернативную последовательность макак-резус клона ра23-5, показанную на фиг. 19 и 8ЕЦ ГО N0: 84, выделенную, как описано в примере 3А, подраздел 3. Эта альтернативная аминокислотная последовательность макак-резус имеет единственное отличие в положении 419 от аминокислотной последовательности, депонированной в СепЬапк.
Конкретная последовательность человеческого ЬАС-3 обычно по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности человеческого ЬАС-3, депонированной в СепЬапк, регистрацион- 5 023032 ный № ΝΡ_002277, и содержит аминокислотные остатки, которые определяют аминокислотную последовательность как человеческую последовательность при сравнении с аминокислотными последовательностями ЬАС-3 других видов (например, мышиного ЬАС-3). В некоторых случаях аминокислотная последовательность человеческого ЬЛС-3 может быть по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентична аминокислотной последовательности ЬЛС-3 из СеиЪаик, регистрационный № ΝΡ_002277. В некоторых вариантах изобретения имеется не более 10 аминокислотных различий между человеческой последовательностью ЬЛС-3 и последовательностью ЬЛС-3 из СеиЪаик, регистрационный № ΝΡ_002277. В некоторых вариантах изобретения имеется не более 5 или даже не более 4, 3, 2 или 1 аминокислотного различия между человеческой последовательностью ЬЛС-3 и последовательностью ЬЛС-3 из СеиЪаик, регистрационный № ΝΡ_002277. Идентичность в процентах определяют, как указано в данном описании.
Термин иммунный ответ (иммунная реакция) относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитарных клеток, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых вышеуказанными клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), которое приводит к селективному поражению, деструкции или удалению из человеческого организма инвазивных патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случае аутоиммунитета или патологического воспаления, нормальных человеческих клеток или тканей.
Выражение антигенспецифический Т-клеточный ответ относится к ответу (реакциям) Т-клетки, который(ые) является результатом стимуляции Т-клетки антигеном, к которому специфична Т-клетка. Неограничивающие примеры ответов Т-клетки на антигенспецифическую стимуляцию включают пролиферацию и продукцию цитокинов (например, продукцию 1Ь-2).
Термин антитело по данному описанию включает целые антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент (т.е. антигенсвязывающий участок) или их одиночные цепи. Целые антитела представляют собой гликопротеины, содержащие по меньшей мере две тяжёлых (Н) цепи и две лёгких (Ь) цепи, связанных между собой дисульфидными связями. Каждая тяжёлая цепь состоит из вариабельной области тяжёлой цепи (сокращённо обозначаемой в данном описании νΗ) и константной области тяжёлой цепи. Константная область тяжёлой цепи состоит из трёх доменов, Сн1, Сн2 и Сн3. Каждая лёгкая цепь состоит из вариабельной области лёгкой цепи (сокращённо обозначаемой в данном описании УД и константной области лёгкой цепи. Константная область лёгкой цепи состоит из одного домена, Сь. Области νΗ и могут также подразделяться на гипервариабельные области, называемые областями, определяющими комплементарность (СИК), перемежающимися с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (РК). Каждая область νΗ и состоит из трёх СИК и четырёх РК, расположенных от аминоконца к карбоксиконцу в следующем порядке: РК1, СЭК1, РК2, СЭК2, РК3, СЭК3, РК4. Вариабельные области тяжёлой и лёгкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (С'1с.|) классического пути системы комплемента.
Термин антигенсвязывающий участок антитела (или просто участок антитела) по данному описанию относится к одному или более фрагментов антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, с ЬЛС-3 белком). Было показано, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином антигенсвязывающий участок антитела, включают (ί) фрагмент РаЪ, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов Уь, νΗ, С, и Сн1; (ίί) фрагмент Р(аЪ')2, двухвалентный фрагмент, который практически представляет собой РаЪ с участком шарнирной области (см., Рипбатеп!а1 1ттипо1о§у (Раи1 еб., 3.8ир.гб еб. 1993); (ΐν) фрагмент Рб, состоящий из доменов νΗ и Сц1; (ν) фрагмент Ρν, состоящий из доменов Уь и νΗ единичного плеча (фрагмента РаЪ) антитела, (νί) фрагмент бАЪ (^атб е! а1., (1989) №Циге 341: 544-546), который состоит из νΗ домена; (νίί) выделенную гипервариабельную область (СИК) и (νίίί) нанотело, вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую один вариабельный домен и два константных домена. Помимо этого, хотя два домена фрагмента Ρν, Уь и νΗ кодируются отдельными генами, их можно связывать, используя методы рекомбинантной ДНК, синтетическим линкером, который позволяет их получать в виде единой белковой цепи, в которой области Уь и νΗ спариваются с образованием одновалентных молекул (известных как одноцепочечный фрагмент Ρν (δεΡν); см. например., Биб е! а1. (1988) §с1еисе 242: 423-426; и ΗιΐδΙοη е! а1. (1988) Ргос. №И. Асаб. 8с1. И8А 85: 5879-5883). Предполагается, что такие одноцепочечные антитела также охватываются термином антигенсвязывающий участок антитела. Эти фрагменты антитела получают обычными методами, известными специалистам в данной области техники, и эти фрагменты подвергают скринингу на полезность такими же методами, как и интактные антитела.
Предполагается, что выражение выделенное антитело по данному описанию относится к антителу, которое практически свободно от других антител, имеющих отличную антигенную специфичность (например, выделенное антитело, которое специфически связывает белок ЬАС-3, практически не содержат (свободно от) антител, которые специфически связывают антигены, отличные от белков ЬАС-3). Выделенное антитело, которое специфически связывает человеческий белок ЬАС-3, может, однако, уча- 6 023032 ствовать в перекрёстных реакциях с другими антигенами, такими как белок ЬЛО-3 других видов. Кроме того, выделенное антитело может практически не содержать другого клеточного материала и/или химических агентов.
Термины моноклональное антитело или композиция моноклонального антитела по данному описанию относятся к препарату молекул антитела единого молекулярного состава. Композиция моноклонального антитела проявляет единственную специфичность связывания и аффинность к конкретному эпитопу.
Предполагается, что термин человеческое антитело по данному описанию включает антитела, имеющие вариабельные области, в которых как каркасные, так и СЭК области образованы из иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии. Кроме того, если антитело содержит константную область, константная область также образована из человеческих иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии. Человеческие антитела по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодированные генами для человеческих иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии (например, мутации, вводимые случайным или сайт-специфическим мутагенезом ίη νίίτο или соматической мутацией ίη νίνο). Однако предполагается, что термин человеческое антитело по данному описанию не включает антитела, у которых последовательности СЭК. образованные из зародышевой линии другого вида млекопитающих, такого как мышь, привиты к человеческим каркасным последовательностям.
Выражение человеческое моноклональное антитело относится к антителам, проявляющим единственную специфичность связывания, имеющим вариабельные области, в которых как каркасные, так и СЭК области образованы из человеческих иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии. В одном варианте изобретения человеческие моноклональные антитела продуцируются гибридомой, которая включает В-клетку, полученную от трансгенного животного, отличного от человека, например трансгенной мыши, имеющей геном, содержащий трансген человеческой тяжёлой цепи и трансген лёгкой цепи, слитую с иммортализованной клеткой.
Выражение рекомбинантное человеческое антитело по данному описанию включает все человеческие антитела, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантным методом, такие как (а) антитела, выделенные из животного (например, мыши), которые являются трансгенными или транс-хромосомными по человеческим генам иммуноглобулинов, или полученные при их использовании гибридомы (подробнее описаны ниже), (б) антитела, выделенные при использовании клеткихозяина, трансформированной с целью экспрессировать человеческое антитело, например трансфектомы, (в) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки человеческих антител, и (г) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими методами, которые включают сплайсинг последовательностей генов человеческих иммуноглобулинов с другими ДНК- последовательностями. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные области, в которых каркасные и СЭК области образованы из человеческих иммуноглобулиновых последовательностей зародышевой линии. Однако в некоторых вариантах изобретения такие рекомбинантные человеческие антитела могут подвергаться ίη νίίτο мутагенезу (или если животное является трансгенным по человеческим 1д последовательностям, ίη νίνο мутагенезу), и, следовательно, аминокислотные последовательности областей νΗ и V рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые будучи образованы из последовательностей νΗ и ν2 человеческой зародышевой линии могут не существовать в природе в спектре человеческих антител зародышевой линии ίη νίνο.
Термин изотип относится к классу антител (например, 1дМ или 1дО1), который кодируется генами константной области тяжёлой цепи.
Выражения антитело, узнающее (распознающее) антиген и антитело, специфическое к антигену употребляются в данном описании взаимозаменяемо с выражением антитело, которое специфически связывается с антигеном.
Выражение производные человеческого антитела относится к любой модифицированной форме человеческого антитела, например конъюгату антитела и другому агенту или антителу.
Предполагается, что термин гуманизированное антитело относится к антителам, у которых последовательности СЭК, образованные из зародышевой последовательностей млекопитающего другого вида, такого как мышь, привит к человеческим каркасным последовательностям. В человеческих каркасных последовательностях можно осуществить другие модификации каркасной области.
Предполагается, что термин химерное антитело относится к антителам, у которых последовательности вариабельной области получены из одного вида, а последовательности константной области получены из другого вида, например антитело, у которого последовательности вариабельной области получены из мышиного антитела, а последовательности константных областей получены из человеческого антитела.
Предполагается, что выражение по данному описанию антитело, которое специфически связывает человеческий ЬЛО-3 относится к антителу, которое связывается с человеческим белком ЬЛО-3 (и, возможно, с белком ЬЛО-3 одного или более других видов, отличных от человека), но практически не связывается с белками, отличными от белка ЬЛО-3. Предпочтительно антитело связывается с человеческим
- 7 023032
ЬАО-3 белком с высокой аффинностью, а именно, с Кс 1х 10-7 М или менее, более предпочтительно 5х108 М или менее, более предпочтительно 3х10-8 М или менее, более предпочтительно 1х10-8 М или менее, более предпочтительно 5х 10-9 М или менее или даже более предпочтительно 1х 10-9 М или менее.
Выражение по данному описанию практически не связывается с белком или клеткой означает не связывается или не связывается с высокой аффинностью с белком или клеткой, т.е. связывается с белком или клеткой с К 1 х 10-6 М или более, более предпочтительно 1 х 10-5 М или более, более предпочтительно 1х 10-4 М или более, более предпочтительно 1х 10-3 М или более, ещё более предпочтительно 1х 10-2 М или более.
Предполагается, что термин Кажос или Ка по данному описанию относится к конкретному взаимодействию антитело-антиген, тогда как полагают, что термин Κ^ или К, по данному описанию относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Предполагается, что термин Кс по данному описанию относится к константе диссоциации, которую получают из отношения Кс к Ка (т.е., К,/Ка) и выражают в виде молярной концентрации (М). Величины Кс для антител можно определять методами, общепринятыми в уровне техники. Предпочтительным методом определения К антитела является метод поверхностного плазмонного резонанса, предпочтительно с применением биосенсорной системы, такой как система Ыасоге®.
Термин высокоаффинное по отношению к 1дО антителу, относится к антителу, имеющему Кс 1х 10-7 М или менее, более предпочтительно 5х10-8 М или менее, более предпочтительно 1х 10-8 М или менее, более предпочтительно 5х10-9 М или менее, более предпочтительно, 1 х 10-9 М или менее по отношению к антигену-мишени. Однако высокоаффинное связывание может меняться для других изотипов антител. Например, высокоаффинное для 1дМ изотипа относится к антителу, имеющему Кс 10-6 М или менее, более предпочтительно 10-7 М или менее, ещё более предпочтительно 10-8 М или менее.
Термин субъект включает человека или отличного от человека животного. Термин отличное от человека животное включает всех позвоночных, например млекопитающих и не млекопитающих, таких как нечеловекообразные приматы, овцы, собаки, крупный рогатый скот, кошки, лошади, куры, земноводные и рептилии, хотя предпочтительными являются млекопитающие, такие как нечеловекообразные приматы, овцы, собаки, кошки, крупный рогатый скот и лошади.
Различные аспекты изобретения более подробно описаны в нижеприведённых подразделах.
Антитела против ЬЛО-3, обладающие специфическими функциональными свойствами.
Антитела по изобретению характеризуются специфическими функциональными признаками или свойствами антител. Например, антитела специфически связываются с человеческим ЬАО-3 и могут связываться с ЬАО-3 некоторых других видов, например ЬАО-3 обезьян (например, обезьян (макак) циномолгус, макак-резус), но практически не связываются с ЬАО-3 некоторых других видов, например мышиным ЬАО-3. Предпочтительно антитело по изобретению связывается с человеческим ЬАО-3 с высокой аффинностью.
На способность антитела стимулировать иммунный ответ, такой как антиген-специфический Тклеточный ответ, может указывать, например, способность антитела стимулировать продукцию интерлейкина-2 (10-2) при антиген-специфическом Т-клеточном ответе. В некоторых вариантах изобретения антитело по изобретению связывается с человеческим ЬАО-3 и проявляет способность стимулировать антигенспецифический Т-клеточный ответ. В других вариантах изобретения антитело по изобретению связывается с человеческим ЬАО-3, но не проявляет способности стимулировать антиген-специфический Т-клеточный ответ. Другие способы определения способности антитела стимулировать иммунный ответ включают способность антитела ингибировать рост опухоли, например, как на ίη νίνο модели трансплантата опухоли (см, например, пример 6), или способность антитела стимулировать аутоиммунный ответ, такую как способность инициировать (промотировать) развитие аутоиммунного заболевания на аутоиммунной модели, напримеръ, способность промотировать развитие диабета на ΝΘΌ мышиной модели (см., например, пример 7).
Связывание антитела по изобретению с ЬАО-3 можно оценивать одним или более методами, общепринятыми в уровне техники. Например, в предпочтительном варианте изобретения антитело можно проверять методом проточной цитометрии, в котором антитело реагирует с линией клеток, экспрессирующих человеческий ЬАО-3, таких как клетки СНО, трансфецированные таким образом, чтобы экспрессировать ЬАО-3 (например, человеческий ЬАО-3 или обезьяний ЬАО-3 (например, макак-резус или циномолгус) или мышиный ЬАО-3) на своей клеточной поверхности (соответствующий анализ см., например, в примере 3А). Другие подходящие клетки для применения в методах проточной цитометрии включают стимулированные антителами против ΟΌ3 активированные С.П4' Т-клетки, которые экспрессируют нативный ЬАО-3. Помимо этого или в качестве альтернативы, связывание антитела, включая кинетику связывания (например, величину Кс), можно определять с помощью анализов связывания В1Асоге Ьшбшд аззауз (соответствующие анализы см., например, в примере 3В). Другие подходящие анализы связывания включают методы ЕЫ8А, например, с использованием рекомбинантного ЬАО-3 белка (соответствующие анализы см., например, в примере 1).
Предпочтительно антитело по изобретению связывается с ЬАО-3 белком с Кс 5х10-8 М или менее,
- 8 023032 связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 2х10-8 М или менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 5х10-9 М или менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 4х10-9 М или менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 3х10-9 М или менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 2х10-9 М ИЛИ менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 1х10-9 М или менее, связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 5х 10-10 М или менее, или связывается с ЬЛС-3 белком с Кс 1х 10-10 М или менее.
Как правило, антитело по изобретению связывается с ЬЛС-3 в лимфоидных тканях, таких как миндалины, селезёнка или вилочковая железа (тимус), что можно обнаружить иммуногистохимическими методами. Помимо этого, как описано далее в примере 8, некоторые антитела против ЬЛС-3 по изобретению окрашивают ткань гипофиза (например, задерживаются в гипофизе) при иммуногистохимическом исследовании, тогда как другие антитела против ЬЛС-3 по изобретению не окрашивают ткань гипофиза (например, не задерживаются в гипофизе) при иммуногистохимическом исследовании. Так, в одном варианте изобретение включает человеческое антитело против ЬЛС-3, которое окрашивает ткань гипофиза при иммуногистохимическом исследовании, тогда как в другом варианте изобретение включает человеческое антитело против ЬЛС-3, которое не окрашивает ткань гипофиза при иммуногистохимическом исследовании.
В одном варианте выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок конкурирует за связывание с человеческим ЬЛС-3 с эталонным антителом, причём эталонное антитело включает:
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 37, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 43;
(б) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 38, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 44;
(в) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 39, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 45;
(г) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 40, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 46;
(д) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 41, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 47; или (е) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 42, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 48.
В предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 37, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 43. В другом предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 38, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 44. В другом предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 39, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 45. В другом предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 40, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 46. В другом предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 41, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 47. В другом предпочтительном варианте изобретения эталонное антитело содержит вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 42, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0: 48.
Предпочтительными антителами по изобретению являются человеческие моноклональные антитела. Помимо этого или в качестве альтернативы, антитела могут представлять собой, например, химерные или гуманизированные антитела.
Моноклональные антитела 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5.
Предпочтительными антителами по изобретению являются человеческие моноклональные антитела 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5, выделенные и структурно охарактеризованные, как описано в примерах 1 и 2. νΗ аминокислотные последовательности антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕС ГО N0: 37-42 соответственно. V. аминокислотные последовательности антител 25Р7, 26Н10,
- 9 023032
25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 43-48 соответственно.
С учётом того, что каждое из этих антител может связываться с человеческим ЬАС-3, последовательности νΗ и У[, можно смешивать (технология пихеб апб таЮНеб), чтобы создать молекулы других связывающих антител против ЬАС-3 по изобретению. Предпочтительно, когда смешиваются цепи νΗ и Уь, νΗ последовательность в конкретной паре νΗ/νΣ заменяется на сходную по структуре νΗ последовательность. Аналогично, предпочтительно Уь последовательность в конкретной паре Ун/Уь заменяется на сходную по структуре Уь последовательность.
Соответственно, в одном аспекте данное изобретение включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий):
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 47-42; и (б) вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 43-48;
причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3.
Предпочтительные комбинации тяжёлой и лёгкой цепи включают:
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 37, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 43;
(б) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 38, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 44;
(в) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 39, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 45;
(г) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 40, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 46;
(д) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 41, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 47; или (е) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 42, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 48.
В другом аспекте данное раскрытие включает антитела, которые содержат области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 тяжёлой и лёгкой цепей антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5 или их комбинации. Аминокислотные последовательности νΗ СГОК1 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 37-42 соответственно. Аминокислотные последовательности νΗ СГОК2 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 43-48 соответственно. Аминокислотные последовательности νΗ СГОК3 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в ЗЕЦ ГО N0: 13-14, ССУ и 16-18 соответственно. Аминокислотные последовательности νκ СГОК1 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 19-24 соответственно. Аминокислотные последовательности νκ СГОК28 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 25-30. Аминокислотные последовательности νκ СГОК3 антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 показаны в 8ЕЦ ГО N0: 31-36 соответственно. Области СОК выделены (очерчены) с применением системы КаЬа! (КаЬа! е! а1. (1991) Зедиепсек οί Рго1ею5 οί 1ттипо1од1са1 1теге5Е ΕίΓΐΗ Еббюп, И.8. ЬераПтеЩ οί Иеа11Н апб Иитап Зетсех №Η РиЬНсабоп №. 91-3242).
С учётом того, что каждое из антител может связываться с человеческим ЬАС-3 и что специфическое связывание с антигеном обеспечивается прежде всего областями СГОКЕ СГОК2 и СГОК3, последовательности νΗ СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 и последовательности У,, СГОК1, СГОК2 и СГОК3 можно смешивать (т1хеб апб таЮЬеб) (т.е. можно смешивать области СОК из различных антител, хотя каждое антитело должно содержать νΗ СГОК1, СГОК2 и СГОК3 и Уъ СГОКЕ СГОК2 и СГОК3), чтобы создать молекулы других связывающих антител против ЬАС-3 по изобретению. Связывание ЬАС-3 такими смешанными (спутанными) (т1хеб апб та1сНеб) антителами можно анализировать, используя описанные выше методы анализа и примеры (например, анализы ЕЫ8А, Ыасоге®). Предпочтительно, когда последовательности νΗ СОК смешиваются (смесь), последовательность СГОКЕ СГОК2 и/или СГОК3 из конкретной νΗ последовательности заменяют на структурно аналогичную(ые) СОК последовательность(и). Аналогично, когда последовательности Уъ СОК смешиваются, последовательность СГОК1, СГОК2 и/или СГОК3 из конкретной Уь последовательности предпочтительно заменяют на структурно аналогичную(ые) СОК последовательность^). Опытному специалист в данной области техники ясно, что новые νΗ и Уъ последовательности можно создать, заменяя последовательности одной или более областей СОК цепей νΗ и/или Уъ на сходные по структуре последовательности из СОК последовательностей, раскрываемых в данном описании для моноклональных антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5.
- 10 023032
Соответственно, в другом аспекте данное раскрытие включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий):
(а) домен СОК1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0: 1-6;
(б) домен СГОК2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0: 7-12;
(в) домен СЭК3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 13-14, ОСУ и 16-18;
(г) домен СГОК1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 19-24;
(д) домен СГОК2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0:25-30; и (е) домен СЭК3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ГО N0: 31-36;
причём антитело специфически связывает человеческий ЬЛС-3. В предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен СЭК1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ГО N0: 1;
(б) домен СГОК2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 7;
(в) домен СЭК3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ГО N0: 13;
(г) домен СГОВ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 19;
(д) домен СГОК2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 25; и (е) домен СЭК3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 31.
В другом предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен СЭК1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ГО N0: 2;
(б) домен 0ΌΚ2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 8;
(в) домен С0К3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 14;
(г) домен 0ΌΚ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 20;
(д) домен С0К2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 26; и (е) домен С0К3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 32.
В другом предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен С0К1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 3;
(б) домен 0ΌΚ2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 9;
(в) домен С0К3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий ОСУ;
(г) домен 0ΌΚ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 21;
(д) домен 0ΌΚ2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 27; и (е) домен С0К3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 33.
В другом предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен С0К1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 4;
(б) домен 0ΌΚ2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 10;
(в) домен С0К3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 16;
(г) домен 0ΌΚ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 22;
(д) домен 0ΌΚ2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 28; и (е) домен С0К3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 34.
В другом предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен С0К1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 5;
(б) домен 0ΌΚ2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 11;
(в) домен С0К3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащую δΕΟ ΙΌ N0: 17;
(г) домен 0ΌΚ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 23;
(д) домен 0ΌΚ2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 29; и (е) домен С0К3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 35.
В другом предпочтительном варианте изобретения антитело содержит:
(а) домен С0К1 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 6;
(б) домен 0ΌΚ2 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 12;
(в) домен С0К3 вариабельной области тяжёлой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 18;
(г) домен 0ΌΚ1 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 24;
(д) домен 0ΌΚ2 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 30; и (е) домен С0К3 вариабельной области лёгкой цепи, содержащий δΕΟ ΙΌ N0: 36.
Хорошо известно в уровне техники, что домен С0К3 независимо от домена(ов) С0К1 и/или С0К2 один может определять специфичность связывания антитела со своим антигеном и что на основе общей С0К3 последовательности можно с уверенностью получать несколько антител с одинаковой специфичностью связывания. См., например., КНтка с1 а1., ΒτίίίδΗ ί οί Сапсег 83(2): 252-260 (2000); ВеЛоет с1 а1., ί. Мо1. Βΐο1. 296: 833-849 (2000); Кабег е1 а1., Ргос. №11. Асаб. δα. υ.δ.Α. 95: 8910-8915 (1998); Ва±а5
- 11 023032 е! а1., I. Ат. СЬет. 8ос. 116: 2161-2162 (1994); ВагЬаз е! а1., Ргос. ЫаЙ. Асай. 8с1. И.8.А. 92: 2529-2533 (1995); Окхе1 е! а1., 1. 1ттипо1. 157: 739-749 (1996); Веге/о\' е! а1., В1А_)оита1 8: 8тепййс Ве\зе\у 8 (2001); 1дагазЫ е! а1., 1. ВюсЬет (Токуо) 117: 452-7 (1995); Воиг§ео15 е! а1., 1. Уйо1. 72: 807-10 (1998); Ье\з е! а1., Ргос. Ыа!1. Асай. 8сЬ И.8.А. 90: 4374-8 (1993); Ро1утетз апй 8!о11ег, 1. 1ттипо1. 152: 5218-5329 (1994) и Хи апй Όπνίδ, 1ттипЪу 13: 37-45 (2000). См. также патенты США №№ 6951646; 6914128; 6090382; 6818216; 6156313; 6827925; 5833943; 5762905 и 5760185. Каждый из этих ссылочных материалов вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
Соответственно, настоящее раскрытие включает моноклональные антитела, содержащие один или более СЭК.3 доменов тяжёлой и/или лёгкой цепи из антитела человека или отличного от человека животного, причём моноклональное антитело способно специфически связываться с человеческим ЬАС-3. В некоторых аспектах настоящее раскрытие включает моноклональные антитела, содержащие один или более СЭК.3 домен тяжёлой и/или лёгкой цепи из нечеловеческого антитела, такого как антитело мыши или крысы, причём моноклональное антитело способно специфически связываться с человеческим ЬАС3. В некоторых вариантах изобретения такие антитела по изобретению, содержащие один или более СЭК.3 домен тяжёлой и/или лёгкой цепи из нечеловеческого антитела: (а) способны конкурировать за связывание с соответствующим исходным нечеловеческим антителом; (б) сохраняют функциональные характеристики соответствующего исходного нечеловеческого антитела; (в) связываются с тем же самым эпитопом, что и соответствующее исходное нечеловеческое антитело; и/или (г) имеют аффинность связывания, аналогичную аффинности связывания соответствующего исходного нечеловеческого антитела.
В других аспектах настоящее раскрытие включает моноклональные антитела, содержащие один или более СЭК.3 домен тяжёлой и/или лёгкой цепи из человеческого антитела, например, такого как человеческое антитело, полученное при использовании нечеловеческого животного, причём человеческое антитело способно специфически связываться с человеческим ЬАС-3. В других аспектах настоящее раскрытие включает моноклональные антитела, содержащие один или более СЭК.3 домен тяжёлой и/или лёгкой цепи первого человеческого антитела, например, такого как человеческое антитело, полученное при использовании нечеловеческого животного, причём человеческое антитело способно специфически связываться с человеческим ЬАС-3, а домен СЭК.3 из первого человеческого животного заменяет домен СЭК.3 в человеческом антителе, у которого отсутствует специфичность связывания с ЬАС-3, при этом получают второе человеческое антитело, которое способно специфически связываться с человеческим ЬАС-3. В некоторых вариантах изобретения такие антитела по изобретению, содержащие один или более СЭК.3 домен тяжёлой и/или лёгкой цепи из первого человеческого антитела: (а) способны конкурировать за связывание с соответствующим исходным первым человеческим антителом; (б) сохраняют функциональные характеристики соответствующего исходного первого человеческого антитела; (в) связываются с тем же самым эпитопом, что и соответствующее исходное первое человеческое антитело; и/или (г) имеют аффинность связывания, аналогичную аффинности связывания соответствующего исходного первого человеческого антитела.
Антитела, имеющие последовательности конкретной зародышевой линии.
В некоторых вариантах изобретения антитела по изобретению содержат вариабельную область тяжёлой цепи, полученную при использовании гена тяжёлой цепи иммуноглобулина конкретной зародышевой линии и/или гена лёгкой цепи иммуноглобулина конкретной зародышевой линии.
Например, предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-20, человеческого гена νΗ 4-34, человеческого гена Ун 3-33 или человеческого гена Ун 1-24, причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3. Другой предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ь18, человеческого гена Ук Ь6 или человеческого гена Ук А27, причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3 белок. Ещё один предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-20, и включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ь18, причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3 белок. Ещё один предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 4-34, и включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ь6, причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3 белок. Ещё один предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована
- 12 023032 при использовании человеческого гена Ун 3-33, и включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук А27, причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3 белок. Ещё один предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 1-24, и включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ьб, причём антитело специфически связывает человеческий ЬЛС-3 белок. Ещё один предпочтительный вариант изобретения включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-33, и включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ьб, причём антитело специфически связывает человеческий ЬЛС-3 белок.
В предпочтительном варианте изобретение включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий):
(а) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 4-34, и вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ьб;
(б) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-33, и вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук А27;
(в) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-20, и вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ь18;
(г) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 1-24, и вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ьб; или (д) вариабельную область тяжёлой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ун 3-33, и вариабельную область лёгкой цепи, которая является продуктом или образована при использовании человеческого гена Ук Ьб;
причём антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3.
Такие антитела могут иметь также одну или более функциональных характеристик, подробно описанных выше, таких как высокоаффинное связывание с человеческим ЬАС-3, связывание с обезьяньим ЬАС-3, отсутствие связывания с мышиным ЬАС-3, способность ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II и/или способность стимулировать антигенспецифические Т-клеточные реакции (ответы).
Примером антитела, у которого Ун и Уъ представляют собой Ун 3-20 и Ук Ь18 соответственно, является антитело 25Е3. Примерами антител, у которых Ун и Уъ представляют собой Ун 4-34 и Ук Ьб соответственно, являются антитела 25Р7 и 8В7. Примером антитела, у которого Ун и Уъ представляют собой Ун 3-33 и Ук А27 соответственно, является антитело 2бН10. Примером антитела, у которого Ун и Уъ представляют собой Ун 1-24 и Ук Ьб соответственно, является антитело 11Р2. Примером антитела, у которого Ун и Уъ представляют собой Ун 3-33 и Ук Ьб соответственно, является антитело 17Е5.
В данном описании человеческое антитело содержит вариабельные области тяжёлой или лёгкой цепи, которые являются продуктом или образованы при использовании последовательности конкретной зародышевой линии, если вариабельные области антитела получают с помощью системы, которая использует гены человеческого иммуноглобулина. Такие системы включают иммунизацию трансгенных мышей, несущих гены человеческого иммуноглобулина с целевым антигеном или скрининг фагдисплейной библиотеки человеческого иммуноглобулина, визуализируемой целевым антигеном. Человеческое антитело, которое является продуктом или образовано при использовании генов зародышевой линии для человеческих иммуноглобулиновых последовательностей, можно идентифицировать, сравнивая аминокислотную последовательность человеческого антитела с аминокислотными последовательностями человеческих иммуноглобулинов зародышевой линии и отбирая последовательность человеческого иммуноглобулина зародышевой линии, наиболее близкую (т.е. имеющую наибольший % идентичности) последовательности человеческого антитела. Человеческое антитело, которое является продуктом или образовано при использовании генов зародышевой линии для человеческих иммуноглобулиновых последовательностей, могут содержать аминокислотные различия по сравнению с последовательностью зародышевой линии вследствие, например, природных соматических мутаций или прицельного введения сайт-направленной мутации. Однако, как правило, аминокислотная последовательность выбранного человеческого антитела по меньшей мере на 90% идентична аминокислотной последовательности, кодированной геном иммуноглобулина зародышевой линии, и содержит аминокислотные остатки, которые
- 13 023032 идентифицируют человеческое антитело именно как человеческое по сравнению с аминокислотными последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии других видов (например, последовательностями зародышевой линии мыши). В некоторых случаях аминокислотная последовательность человеческого антитела может быть идентичной по меньшей мере на 95% или даже по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% аминокислотной последовательности, кодированной геном иммуноглобулина зародышевой линии. Обычно человеческое антитело, образованное из конкретной последовательности человеческой зародышевой линии, обнаруживает не более 10 аминокислотных различий по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодированной геном человеческого иммуноглобулина зародышевой линии. В некоторых случаях человеческое антитело может иметь не более 5 или даже не более 4, 3, 2 или 1 аминокислотного различия по сравнению с аминокислотной последовательностью, кодированной геном человеческого иммуноглобулина зародышевой линии.
Г омологичные антитела.
Ещё в одном варианте изобретения антитело по изобретению содержит вариабельные области тяжёлой и лёгкой цепи, имеющие аминокислотные последовательности, гомологичные аминокислотным последовательностям предпочтительных антител по данному описанию, и при этом антитела сохраняют необходимые функциональные свойства антител против ЬЛО-3 по изобретению. Например, данное раскрытие включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи и вариабельную область лёгкой цепи, отличающиеся тем, что:
(a) вариабельная область тяжёлой цепи содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% гомологичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 5ЕС) ГО N0: 37-42;
(b) вариабельная область лёгкой цепи содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% гомологичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из 5ЕС) ГО N0: 43-48; и (c) антитело специфически связывается с человеческим ЬЛО-3.
Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело может обладать одним или более следующих функциональных свойств, обсуждавшихся выше, таких как высокоаффинное связывание с человеческим ЬЛО-3, связывание с обезьяньим ЬЛО-3, отсутствие связывания с мышиным ЬЛО-3, способность ингибировать связывание ЬЛО-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II и/или способность стимулировать антиген-специфические Т-клеточные реакции (ответы).
В различных вариантах изобретения антитело может представлять собой, например, человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
В других вариантах изобретения Ун и/или Уъ аминокислотные последовательности могут быть на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% гомологичны представленным выше последовательностям. Антитело, имеющее последовательности Ун и Уъ областей, обладающие с высокой гомологией (т.е. 80% или выше) с последовательностями Ун и Уъ областей, представленными выше, можно получать мутагенезом (например, сайт-направленным или ПЦР-опосредованным мутагенезом) нуклеотидных молекул, кодирующих 8Е0 ГО N0: 49-54 или 55-60, с последующим тестированием кодированного изменённого антитела на сохранённую функцию (т.е. на представленные выше функции) с применением функциональных анализов, представленных в данном описании.
В данном описании процент гомологии (степень гомологии в процентах) между двумя аминокислотными последовательностями эквивалентен проценту идентичности (степени идентичности в процентах) между двумя последовательностями. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой функцию числа идентичных положений, общих для последовательностей (т.е. % гомологии = число идентичных положений/общее число положений х 100), с учётом числа гэпов и длины каждого гэпа, которые необходимо ввести для оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя последовательностями можно провести, используя математический алгоритм, как описано в приведённых ниже неограничивающих примерах.
Процент идентичности между двумя аминокислотными последовательностями можно определить с помощью алгоритма Е. Майерса и У. Миллера (Е. Меуетз апб V. МШет) (Сотри!. Αρρί. Βΐοδά., 4: 11-17 (1988)), который включён в программу АЬГОН (версия 2.0), используя таблицу веса остатков РАМ 120, штраф за длину гэпа 12 и штраф за гэп 4. Помимо этого, процент идентичности между двумя аминокислотными последовательностями можно определять, используя алгорит Нидельмана-Вунша (№еб1етап апб ХУшъсН) (I. Мо1. ΒίοΙ. 48: 444-453 (1970)), который включён в программу ОАР в программном обеспечении ОСО (доступный по адресу йбр://№№№.дсд.сот), используя либо матрицу В1о88ит 62, либо матрицу РАМ250, вес (средневзвешенное) гэпа 16, 14, 12, 10, 8, 6 или 4 и средневзвешенное длины гэпа 1, 2, 3, 4, 5 или 6.
Помимо этого или в качестве альтернативы, белковые последовательности по настоящему раскрытию можно дополнительно использовать в качестве запрашиваемой последовательности для проведения поиска в общедоступных базах данных, например для идентификации родственных последователь- 14 023032 ностей. Такой поиск можно проводить, используя программу ХВЬА§Т (версия 2.0) АЬкс1ш1 е! а1. (1990) 1. Мо1. ΒίοΙ. 215: 403-10. Поиск ВЬА§Т белков можно осуществлять с помощью программы ХВЬА§Т, оценка = 50, длина слова = 3, получая аминокислотные последовательности, гомологичные молекулам антител по изобретению. Для проведения с применением гэпов с целью сравнения можно использовать программу Саррей ВЬА§Т, описанную А1!ксЬи1 е! а1., (1997) ЫисШс Ас1йк Кек. 25(17): 3389-3402. При использовании программ ВЬА§Т и Саррей ВЬА§Т применяют параметры по умолчанию соответствующих программ (например, ХВЬА§Т и ИВЬА§Т). См. №№№.псЫ.и1т.и1Ь.§оу.
Антитела с консервативными модификациями.
В некоторых вариантах изобретения антитела по изобретению содержат вариабельную область тяжёлой цепи, включающую последовательности СИК1, СИК2 и СИК3, вариабельную область лёгкой цепи, включающую последовательности СИК1, СИК2 и СИК3, причём одна или более из этих СОК последовательностей содержат конкретные аминокислотные последовательности на основе предпочтительных антител, представленных в данном описании (например, 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2, 17Е5), или их консервативные модификации, и при этом антитела сохраняют необходимые функциональные свойства антител против ЬЛС-3 по изобретению. Из уровня техники ясно, что можно осуществить определённую модификацию консервативной последовательности, которая не затронет связывания с антигеном. См., например, Вгитте11 е! а1. (1993) ВюсЬет 32: 1180-8; йе \УПй1 е! а1. (1997) Рго!. Епд. 10: 835-41; Кот1ккагоу е! а1. (1997) 1. Вю1. СЬет. 272. 26864-26870; На11 е! а1. (1992) 1. 1ттипо1. 149: 1605-12; Ке11еу апй О'Соипе11 (1993) ВюсЬет. 32: 6862-35; АФЬ-Сопциу е! а1. (1998) 1п!. 1ттипо1. 10: 341-6 и Веегк е! а1. (2000) СЬп. Сап. Кек. 6: 2835- 43. Соответственно, данное раскрытие включает выделенное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий участок, включающее(ий) вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую последовательности СИК1, СИК2 и СИК3, и вариабельную область лёгкой цепи, содержащую последовательности СИК1, СИК2 и СИК3, где (а) СИК3 последовательность вариабельной области тяжёлой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 13-14, ССУ и 16-18 и их консервативных модификаций;
(б) СИК3 последовательность вариабельной области лёгкой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 31-36 и их консервативных модификаций; и (в) антитело специфически связывает человеческий ЬАС-3.
Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело может обладать одним или более следующих функциональных свойств, описанных выше, таких как высокоаффинное связывание с человеческим ЬАС-3, связывание с обезьяньим ЬАС-3, отсутствие связывания с мышиным ЬАС-3, способность ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II и/или способность стимулировать антигенспецифические Т-клеточные реакции (ответы).
В предпочтительном варианте изобретения СИК2 последовательность вариабельной области тяжёлой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 7-12 и их консервативных модификаций; а СИК2 последовательность вариабельной области лёгкой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 25-30 и их консервативных модификаций. В другом предпочтительном варианте изобретения СИК1 последовательность вариабельной области тяжёлой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 1-6 и их консервативных модификаций; а СИК1 последовательность вариабельной области лёгкой цепи представляет собой аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из аминокислотных последовательностей §ЕЦ ГО N0: 19-24.
В различных вариантах изобретения антитело может представлять собой, например, человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело.
Предполагается, что выражение модификации консервативной последовательности (консервативные модификации) по данному описанию относится к аминокислотным модификациям, которые незначительно влияют или незначительно изменяют характеристики связывания антитела, содержащего эту аминокислотную последовательность. Такие консервативные модификации включают аминокислотные замены, добавления и делеции. Модификации можно вводить в антитело по изобретению обычными методами, известными в уровне техники, такими как сайт-направленный мутагенез и ПЦРопосредованный мутагенез. Консервативные аминокислотные замены представляют собой такие замены, при которых аминокислотный остаток заменяется аминокислотным остатком, имеющим сходную боковую цепь. Семейства аминокислотных остатков со сходными (аналогичными) боковыми цепями определены в уровне техники. Эти семейства включают аминокислоты с основными боковыми цепями (например, лизин, аргинин, гистидин), кислыми боковыми цепями (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота), незаряженными полярными боковыми цепями (например, глицин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, тирозин, цистеин, триптофан), неполярными боковыми цепями (например, аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин), β-разветвлёнными боковыми цепями (напри- 15 023032 мер, треонин, валин, изолейцин) и ароматическими боковыми цепями (например, тирозин, фенилаланин, триптофан, гистидин). Таким образом, один или более аминокислотных остатков в СЭК областях антитела по изобретению можно заменить на другие аминокислотные остатки из того же самого семейства боковых цепей, а изменённое антитело можно тестировать на сохранённую функцию (т.е. функции, представленные выше) с помощью функциональных анализов по данному описанию.
Антитела, связывающиеся с тем же эпитопом, что и антитела против ЬЛО-3 В другом варианте изобретение включает антитела, которые связываются с тем же эпитопом на ЬАО-3, что и любое из моноклональных антител против ЬАО-3 по изобретению (т.е. антитела, обладающие способностью конкурировать за связывание с человеческим ЬАО-3 с любым из моноклональных антител по изобретению). В предпочтительных вариантах изобретения эталонное антитело для изучения конкурентных реакций может представлять собой одно из моноклональных антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5.
Такие конкурентные антитела можно идентифицировать на основании их способности конкурировать с 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и/или 17Е5 в стандартных анализах связывания ЬАО-3. Например, можно использовать стандартные методы анализа ЕЫ§А, в которых рекомбинантный человеческий ЬАО-3 белок иммобилизуют на плашке, одно из антител метят флуоресцентной меткой и оценивают способность немеченых антител конкурировать с немеченым антителом за связывание. Кроме того или в качестве альтернативы, для оценки способности антител конкурировать можно использовать анализ ΒΙΛαοϊΌ. Способность тестируемого антитела ингибировать связывание, например, 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и/или 17Е5 антител с человеческим ЬАО-3 показывает, что тестируемое антитело может конкурировать с антителом 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и/или 17Е5 за связывание с человеческим ЬАО-3 и, следовательно, связывается с тем же самым эпитопом на человеческом ЬАО-3, что и 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и/или 17Е5. В предпочтительном варианте изобретения антитело, которое связывается с тем же самым эпитопом на человеческом ЬАО-3, что и 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10, 11Р2 или 17Е5, является человеческим моноклональным антителом. Такие человеческие моноклональные антитела можно получать и выделять как описано в примерах.
Как обсуждается далее в примере 3С, связывание 25Е3, 25Р7 и 8В7 с человеческим ЬАО-3 картировано в области внешней петли (ехРа Ιοορ) в первом внеклеточном домене человеческого ЬАО-3. Последовательность области внеклеточной (внешней) петли представлена в δΕΟ ΙΌ N0: 79. С помощью пептидного сканирования связывание 25Е3 с областью внешней петли картировано в следующей аминокислотной последовательности: РОНРЬАРО (δΕβ ΙΌ N0: 76), тогда как связывание 25Р7 с областью внешней петли картировано в следующей аминокислотной последовательности: ΗРΛΛРδδ\V (δΕΟ ΙΌ N0: 77), а связывание 8В7 с областью внешней петли картировано в следующей аминокислотной последовательности: РΛΛРδδ\VС (δΕΟ ΙΌ N0: 78). Соответственно, в предпочтительном варианте изобретение включает антитело против ЬАО-3, которое связывает эпитоп человеческого ЬАО-3, содержащий аминокислотную последовательность РОНРЬАРО (δΕΟ ΙΌ N0: 76). В другом предпочтительном варианте изобретение включает антитело против ЬАО-3, которое связывает эпитоп человеческого ЬАО-3, содержащий аминокислотную последовательность ΗРΛΛРδδ\V (δΕΟ ΙΌ N0: 77) или РΛΛРδδ\VС (δΕΟ ΙΌ N0: 78).
Генно-инженерные и модифицированные антитела.
Помимо этого, можно получать антитело по изобретению, используя антитело, имеющее одну или более последовательностей νΗ и/или по данному описанию в качестве исходного материала для создания модифицированного антитела, причём это модифицированное антитело может иметь изменённые свойства по сравнению с исходным антителом. Антитело можно конструировать (создавать, получать), модифицируя один или более остатков в одной или в обеих вариабельных областях (т.е. νΗ и/или Уц), например в одном или более СЭР доменов и/или в одной или более каркасных областей. Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело можно создавать (конструировать), модифицируя остатки в константной(ых) области(ях), например, с целью изменения эффекторной(ых) функции(й) антитела.
В некоторых вариантах изобретения для создания вариабельных областей антител можно использовать СЭК-прививку. Антитела взаимодействуют с целевыми антигенами преимущественно за счёт аминокислотных остатков, локализованных в шести гипервариабельных доменах (СЭР) тяжёлой и лёгкой цепей. По этой причине аминокислотные последовательности в СЭК индивидуальных антител более различны между собой, нежели последовательности вне СЭК. Так как последовательности СЭК отвечают за большинство взаимодействий антитело-антиген, то можно экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства специфических природных антител, конструируя экспрессирующие векторы, которые включают СЭК последовательности из специфического природного антитела, привитые к каркасным последовательностям из другого антитела с другими свойствами (см., например, КтесЬтаηη е1 а1. (1998) №1иге 332: 323-327; ГОиех е1 а1. (1986) №щ.пе 321: 522-525; Оиееп е1 а1. (1989) Ргос.
Асай. 8с1. и.8.А. 86: 10029-10033; патенты США №№ 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370).
Соответственно, другой вариант изобретения относится к выделенному моноклональному антителу или его антигенсвязывающему участку, содержащему вариабельную область тяжёлой цепи, включающую последовательности СЭК1, СЭК2 и СЭК3, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 1-6, δΕΟ ΙΌ N0: 7-12 и δΕΟ ΙΌ N0: 13-14, ООУ и 16-18
- 16 023032 соответственно, и вариабельную область лёгкой цепи, включающую последовательности СГОКЕ СЭР2 и СГОК3, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 19-24, 8ЕЦ ГО N0: 25-30 и 8ЕЦ ГО N0: 31-36 соответственно. Таким образом, эти антитела, содержащие νΗ V,, СОК последовательности моноклональных антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Ε2 или 17Е5, могут содержать каркасные последовательности, отличные от этих антител.
Такие каркасные последовательности можно получать из общедоступной базы данных ДНК или из опубликованных ссылочных материалов, которые включают последовательности генов антител зародышевой линии. Например, ДНК-последовательности зародышевой линии для генов вариабельных областей тяжёлой и лёгкой цепи можно найти в базе данных последовательности зародышевой линии человека УВаке (находящейся в Интернете на сайте ллл.тгс-сре.сат.ас.нк/уЬаке), а также в КаЬа1 е1 а1. (1991), см. выше; Тотйпкои е1 а1. (1992) Тйе Керейойе οί Нитап Сегтйпе νΗ 8едиепсек Кеуеак аЬон! ΕίΓΐν Сгоирк οί νΗ 8едтеп1к \\йй ОГГегеШ НурегуапаЫе Ьоорк ί. Мо1. Βίο1. 227: 776-798; и Сох е1 а1. (1994) А ОйесЮгу оГ Нитап Сегт-йпе νΗ 8едтеп1к Кеуеа1к а 8йопд Βίηκ ш 1йей Икаде Еиг. ί. 1ттипо1. 24: 827836; содержание каждого из этих материалов однозначно вводится в данное описание в качестве ссылки. В качестве другого примера ДНК-последовательности зародышевой линии для человеческих генов вариабельных областей тяжёлой и лёгкой цепи можно найти в базе данных СепЬапк. Например, следующие последовательности зародышевой линии для тяжёлой цепи, найденные в НСо7 ΗиМАЬ мыши, имеются в СепЬапк под прилагаемыми регистрационными №№ 1-69 ®С_0010109, ЭТ_024637 & ВС070333), 3-33 ®С_0010109 & ЭТ_024637) и 3-7 ®С_0010109 & ЭТ_024637). В качестве другого примера следующие последовательности зародышевой линии для тяжёлой цепи, найденные в НСо7 ΗиМАЬ мыши, имеются в СепЬапк под прилагаемыми регистрационными №№ 1-69 ®С_0010109, ЭТ_024637 & ВС070333), 5-51 ®С_0010109 & N^024637), 4-34 ®С_0010109 & ЭТ_024637), 3-30.3 (СА6556644) & 3-23 (А406678).
Белковые последовательности антитела сравнивают с собранной базой данных белковых последовательностей, используя один из методов поиска сходства последовательностей, называемый Сарреб ВЬА8Т (Айксйи1 е1 а1. (1997), кирга), общеизвестный в уровне техники.
Предпочтительными каркасными последовательностями для применения в антителах по изобретению являются последовательности, аналогичные по структуре с каркасными последовательностями, используемыми в выбранных антителах по изобретению, например аналогичные каркасным последовательностям νΗ 3-20 (81 ГО) ГО N0: 69), νΗ 4-34 (81 ГО) ГО N0: 61), νΗ 3-33 (81 ГО) ГО N0: 65) или каркасным последовательностям νΗ 1-24 (8ЕЦ ГО N0: 73) и/или каркасным последовательностям νκ Е18 (8ЕЦ ГО N0: 71), νκ Ь6 (8ЕЦ ГО N0: 63) или νκ А27 (8ЕЦ ГО N0: 67), используемым в предпочтительных моноклональных антителах по изобретению. Последовательности νΗ СОК1, СОК2 и СОК3 и последовательности νκ СОК1, СОК2 и СОК3 можно привить к каркасным областям, имеющим последовательность, идентичную последовательности, имеющейся в гене иммуноглобулина зародышевой линии, из которого происходит эта каркасная последовательность, или СОК последовательности можно привить к каркасным областям, которые содержат одну или более мутаций по сравнению с последовательностями зародышевой линии. Например, найдено, что в некоторых случаях целесообразно осуществлять мутацию остатков в каркасных областях, чтобы сохранить или повысить антигенсвязывающую способность антитела (см., например, патенты США №№ 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370).
Другой тип модификации вариабельной области представляет собой мутацию аминокислотных остатков в νΗ и/или ν7 СОК1, СОК2 и/или СОК3 областях с целью повысить одно или более связывающих свойств (например, аффинность целевого антитела). Можно осуществлять сайт-направленный или ПЦРопосредованный мутагенез для введения мутации(ий), а влияние на связывание или другое целевое функциональное свойство антитела можно определять с помощью анализов ш уйго или ш У1уо, представленных в данном описании и включённых в примеры. Предпочтительно вводят консервативные мутации (обсуждавшиеся выше). Мутации могут представлять собой аминокислотные замены, добавления или делеции, но предпочтительно они являются заменами. Помимо этого, как правило в СОК области изменяют не более одного, двух, трёх, четырёх или пяти остатков.
Соответственно, другой вариант изобретения включает выделенные моноклональные антитела против ЬАС-3 или их антигенсвязывающие участки, содержащие вариабельную область тяжёлой цепи, имеющую: (а) νΗ СОК1 домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 1-6, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с 8ЕЦ ГО N0: 1-6; (б) νΗ СОК2 домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 7-12, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с 8ЕЦ ГО N0: 7-12; (в) νΗ СОК3 домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 1314, ССУ и 16-18, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с 8ЕЦ ГО N0: 13-14, ССУ и 16-18; (г) ν7 СОК1 домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8ЕЦ ГО N0: 19-24, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с 8ЕЦ ГО N0: 19-24; (д) ν7 СОК2 домен,
- 17 023032 содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из БЕС ГО ΝΟ: 2530, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с БЕС ГО ΝΟ: 25-30; и (е) Уъ СИК3 домен, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из БЕС ГО ΝΟ: 31-36, или аминокислотную последовательность, имеющую одну, две, три, четыре или пять аминокислотных замен, делеций или добавлений по сравнению с БЕС ГО ΝΟ: 31-36.
Генно-инженерные (созданные) антитела по изобретению включают такие антитела, в которых сделаны модификации в каркасных остатках в УН и/или Уъ, например, с целью улучшить свойства антитела. Как правило, такие модификации каркасной последовательности делают, чтобы понизить иммуногенность антитела. Например, один метод представляет собой обратную мутацию одного или более каркасных остатков в соответствующую последовательность зародышевой линии. Более конкретно, антитело, которое подвергается соматической мутации, может содержать каркасные остатки, отличающиеся от последовательности зародышевой линии, из которой образовано антитело. Такие остатки можно идентифицировать, сравнивая каркасные последовательности антитела с последовательностями зародышевой линии, из которых образовано антитело.
Например, в табл. А показаны области, в которых аминокислотное положение в каркасной области (используется система нумерации КаЬа!) отличается от зародышевой линии, и какую обратную мутацию в зародышевую линию можно осуществить в этом положении с помощью указанных замен
Таблица А —Типичные обратные мутации
Область Аминокислотное положение в каркасной области (Нумерация по КаЬа1) Обратная мутация
25ЕЗ νΗ 72 О72К
25ЕЗ νΗ 95 Υ95Η
25ЕЗ νΗ 97 Т97А
25ЕЗ νΗ 98 Т98К
25Ρ7 νΗ 69 Ь691
25Ρ7 νΗ 71 ί7ΐν
25Ρ7 νΗ 83 К833
25Ρ7 νΗ 97 Р97К
8Β7 νΗ 76 Κ76Ν
8Β7 νΗ 79 А793
8Β7 νΗ 83 N838
8Β7 νΗ 112 Р1120
11Ρ2 νΗ 3 БЗА
17Ε5 νΗ 3 изо
8Β7 νΗ 59 С59У
8Β7 ΥΗ 59 С598
Другой тип каркасной модификации включает мутацию одного или более остатков в каркасной области или даже в одной или более СОК областей для удаления Т-клеточных эпитопов с целью понизить потенциальную иммуногенность антитела. Этот метод также называется деиммунизацией, он более подробно описан в опубликованной патентной заявке США № 20030153043.
Помимо этого или в качестве альтернативы, модификациям в каркасной или СОК областях можно создавать (конструировать) антитела по изобретению, которые включают модификации в Рс области, как правило, с целью изменить одно или более функциональных свойств антитела, таких как сывороточный период полужизни, фиксацию комплемента, Рс-рецепторное связывание и/или антигензависимую клеточную цитотоксичность. Помимо этого, антитело по изобретению можно модифицировать химическими методами (например, одну или более химических групп можно связать с антителом), или его можно модифицировать, изменяя его гликозилирование, чтобы изменить одно или более функциональных свойств антитела. Каждый из этих вариантов изобретения более подробно описан ниже. Нумерация остатков в Рс области соответствует ЕЙ указателю КаЬа!.
В предпочтительном варианте изобретения антитело представляет собой антитело ^С4 изотипа, содержащее мутацию серина в пролин в положении, соответствующем положению 228 (Б228Р; ЕЙ указатель) на шарнирном участке константной области тяжёлой цепи. Сообщалось, что эта мутация вызывает отмену гетерогенности межцепных дисульфидных мостиков в шарнирной области (Апда1 е! а1., см. выше; положение 241 соответствует системе нумерации КаЬа!). Например, в различных вариантах изобретения антитело против ЬАС-3 по изобретению может содержать вариабельную область тяжёлой цепи антитела 25Р7 (БЕС ГО ΝΟ: 37) или 26Н10 (БЕС ГО ΝΟ: 38), связанную с константным доменом человеческого !8С4, в котором серин в положении, соответствующем положению 241, описанному Апда1 е! а1., см. выше, мутировал в пролин. Так, в вариабельных областях тяжёлой цепи антител 25Р7 и 26Н10, связанных с константной областью [8С4, эта мутация соответствует мутации Б228Р по ЕЙ шбех (указателю).
В одном варианте изобретения шарнирную область домена СН1 модифицируют таким образом, чтобы число цистеиновых остатков в шарнирной области менялось, например увеличивалось или уменьшалось. Данный метод подробнее описан в патенте США № 5677425. Число цистеиновых остатков в шарнирной области домена СН1 изменяют, например, с целью способствовать сборке лёгкой и тяжёлой цепей или повысить или понизить устойчивость антитела.
- 18 023032
В другом варианте изобретения осуществляют мутации в Рс-шарнирной области антитела, чтобы повысить или понизить биологический период полужизни антитела. Более конкретно, одну или более аминокислотных мутаций вводят в область границы раздела ί'.Ή2-ίΉ3 доменов Рс-шарнирного фрагмента таким образом, чтобы связывание антитела со стафилококковым белком А (8рА) ослаблялось по сравнению со связыванием нативного Рс-шарнирного домена с 8рА. Этот метод описан более подробно в патенте США № 6165745.
В другом варианте изобретения антитело модифицируют для повышения его биологического периода полужизни. Возможны различные подходы. Например, можно ввести одну или более нижеприведённых мутаций Т252Ь, Т2548, Т256Р, как описано в патенте США № 6277375. Или же для повышения биологического периода полужизни антитело можно изменять в СН1 или СЬ области таким образом, чтобы оно содержало эпитоп связывания с рецептором-мусорщиком, образованный с помощью двух петель СН2 домена Рс области 1дС, как описано в патентах США №№ 5869046 и 6121022.
В других вариантах изобретения Рс область меняют, заменяя по меньшей мере один аминокислотный остаток на другой аминокислотный остаток, чтобы изменить эффекторную(ые) функцию(и). Например, одну или более аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 и 322, можно заменить другим аминокислотным остатком таким образом, чтобы антитело изменяло аффинность к эффекторной молекуле-лиганду, но сохраняло антигенсвязывающую способность исходного антитела. Эффекторный лиганд, аффинность к которому изменяют, может представлять собой, например, Рс рецептор или С1 компонент комплемента. Этот подход описан более подробно в патентах США №№ 5624821 и 5648260.
В другом примере одну или более аминокислот, выбранных из аминокислотных остатков 329, 331 и 322, можно заменить на другой аминокислотный остаток таким образом, чтобы антитело изменяло С1с.| связывание и/или снижало или отменяло комплементзависимую цитотоксичность (КЗС, СЭС). Подробнее такой подход описан в патенте США № 6194551.
В другом примере изменяют один или более аминокислотных остатков в аминокислотных положениях 231 и 239, при этом меняется способность антитела фиксировать комплемент. Этот метод более подробно описан в опубликованной международной заявке РСТ \УО 94/29351.
Ещё в одном примере Рс область модифицируют для повышения способности антитела опосредовать антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ, ЛЬСС) и/или для повышения аффинности антитела к Рсу-рецептору за счёт модификации одной или более аминокислот в следующих положениях: 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 или 439. Более подробно этот метод изложен в опубликованной международной заявке РСТ \УО 00/42072. Помимо этого, на человеческом 1дС1 были картированы сайты связывания с РсуК1, РсуКП, РсуКШ и РсКп и описаны варианты с повышенным связыванием (см. §Ые1б8 е! а1. (2001) ί. Βίο1. СЬет. 276: 65916604). Показано, что специфические мутации в положениях 256, 290, 298, 333, 334 и 339 повышают связывание с РсуКШ. Помимо этого, показано, что следующие комбинированные мутанты повышают связывание РсуКШ: Т256А/8298А, 8298А/Е333А, 8298А/К224А и 8298А/Е333А/К334А.
Ещё в одном варианте изобретения модифицируют гликозилирование антитела. Например, можно получать негликозилированное (агликозилированное) антитело (т.е. гликозилирование антитела отсутствует). Гликозилирование можно изменять, например, чтобы повысить аффинность антитела к антигену. Такие углеводные модификации можно осуществлять, например, изменяя один или более сайтов гликозилирования в аминокислотной последовательности. Например, можно провести одну или более аминокислотных замен, в результате чего элиминируется один или более сайтов гликозилирования в каркасном участке вариабельной области, тем самым исключается гликозилирование по этому сайту. Такое агликозилирование (отсутствие гликозилирования) может повысить аффинность антитела к антигену. См., например, патенты США №№ 5714350 и 6350861.
Помимо этого или в качестве альтернативы, можно получать антитело с изменённым типом гликозилирования, такое как гипофукозилированное антитело, имеющее пониженное число фукозильных остатков, или антитело, имеющее улучшенные структуры С1с№ю с биссекторной плоскостью. Показано, что такие изменённые паттерны гликозилирования повышают АЭСС способность антител. Такие углеводные модификации можно осуществлять, например, экспрессируя антитело в клетке-хозяине с изменённым механизм гликозилирования. Клетки с изменённым механизмом гликозилирования описаны в уровне техники и могут использоваться в качестве клеток-хозяев для экспрессии в них рекомбинантных антител по изобретению с целью продуцировать таким образом антитело с изменённым паттерном гликозилирования. Например, в линиях клеток Μδ704, Μδ705 и Μδ709 отсутствует ген фукозилтрансферазы, РИТ8 (а(1,6)-фукозилтрансферазы), так среди углеводов антител, экспрессированных в клеточных линиях Μδ704, Μδ705 и Μδ709, отсутствует фукоза. Клеточные линии Μδ704, Μδ705 и Μδ709 РИТ8-/- получают нацеленным распадом (разрушением) гена РИТ8 в клетках СИО/ОС44. используя два замещающих вектора (опубликованная патентная заявка США № 20040110704 и Уатапе-ОЬпик! е! а1. (2004) Вю1есЬпо1
- 19 023032
Вюепд 87: 614-22). Другой пример, в европейском патенте ЕР 1176195 описывается линия клеток с нарушенной функцией гена РИТ8, который кодирует фукозилтрансферазу, поэтому наблюдается гипофукозилирование антител, экспрессированных в такой линии клеток за счёт уменьшения или исключения фермента с α-1,6 связью. В европейском патенте ЕР 1176195 также описываются линии клеток, обладающих пониженной ферментной активностью в реакции присоединения фукозы к ^глюкозамину, который связывается с Рс областью антитела, или не обладающих активностью, например линия клеток миеломы ΥΒ2/0 (АТСС СКЬ 1662). В опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 03/035835 описывается вариант СНО клеточной линии, клетки Ьес 13 с пониженной способностью присоединять фукозу к Л8п(297)-связанным углеводам, что также приводит к гипофукозилированию антител, экспрессированных в этой клетке-хозяине (см. также 8Ые1Д5 е! а1. (2002) ί. ΒίοΙ. СНеш. Т1Т. 2673326740). Антитела с модифицированным профилем гликозилирования также можно получать в куриных яйцах, как описано в опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 06/089231. Или же антитела с модифицированным профилем гликозилирования можно получать в растительных клетках, таких как Ьешпа. Методы получения антител в растительной системе раскрываются в патентной заявке США, соответствующей заявке с регистрационным номером в патентном реестре ΑΙδΐοη & ΒίΜ ΡΡΡ N0. 040989/314911, поданной 11 августа 2006 г. В опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 99/54342 описываются линии клеток, созданные таким образом, чтобы экспрессировать гликопротеин-модифицирующие гликозилтрансферазы (например, в(1,4)-Ы-ацетилглюкозаминилтрансферазу III (СпТ111)), так что у этих антител, экспрессированных в генно-инженерных линиях клеток, наблюдаются усовершенствованные С1с№с структуры с биссекторной плоскостью, что вызывает повышенную АЭСС активность антител (см. также Итапа е! а1. (1999) №1. Вю!есЬ. 17. 176- 180). Или же, фукозные остатки антитела можно отщеплять, используя фермент глюкозидазу; например фукозидаза α-Ь-фукозидаза удаляет фукозильные остатки из антител (Та^еη!^ηο е! а1. (1975) ВюсЬет. 14: 5516-23).
Другой модификацией антител по данному описанию, рассматриваемой в данном раскрытии, является пегилирование. Антитело можно пегилировать, например, для повышения биологического (например, сывороточного) периода полужизни. Для пегилирования антитело или его фрагмент, как правило, реагирует с полиэтиленгликолем (ПЭГ, ΡΕΟ), таким как реакционноспособное сложноэфирное или альдегидное производное ПЭГ, в условиях, в которых одна или более групп ПЭГ присоединяется к антителу или к фрагменту антитела. Предпочтительно пегилирование осуществляют реакцией ацилирования или алкилирования реакционноспособной молекулой ПЭГ (или аналогичным реакционноспособным водорастворимым полимером). Предполагается, что термин полиэтиленгликоль по данному описанию охватывает любую из форм ПЭГ, которую используют для дериватизации других белков, такую как моно (С1-С10)алкокси- или арилоксиполиэтиленгликоль или полиэтиленгликольмалеимид. В некоторых вариантах изобретения пегилируемое представляет собой негликозилированное (агликозилированное) антитело. Методы пегилирования белков известны в уровне техники и могут применяться для пегилирования антител по изобретению См., например, европейские патенты ЕР 0154316 и ЕР 0401384.
Физические свойства антител.
Антитела по данному изобретению можно характеризовать различными физическими свойствами, чтобы их детектировать и/или дифференцировать различными классами антител.
Антитела по настоящему изобретению могут содержать один или более сайтов гликозилирования в каждой вариабельной области лёгкой или тяжёлой цепи. Такие сайты гликозилирования могут вызывать повышенную иммуногенность антитела или изменение рК антитела вследствие изменения связывания с антигеном (МагзЬаЬ е! а1. (1972) Аппи Реν ВюсЬет 41: 673- 02; Са1а апй Μοιτίδοπ (2004) I. Iттиηο1. 172: 5489-94; ШШск е! а1. (1988) I. Ехр. МеД 168: 1099-109; δρύο (2002) Ο1γςοΜο1ο§γ 12: 43Р-56Р; ЕагекН е! а1. (1985) №1иге 316: 452-7; Мнпига е! а1. (2000) Μο1. Iттиηο1. 37. 697-706). Известно, что гликозилирование происходит в мотивах, содержащих последовательность Κ-Χ-δ/Т. В некоторых случаях предпочтительно иметь антитело против ЬАС-3, которое не является гликозилированным в вариабельной области. Этого можно достичь отбором антител, которые не содержат мотива гликозилирования в вариабельной области, или мутацией остатков в области гликозилирования.
В предпочтительном варианте изобретения антитела по настоящему раскрытию не содержат сайтов изомерии аспарагина. Деамидирование аспарагина может происходить по последовательностям Х-С или Ό-С, приводя к образованию остатка изоаспарагиновой кислоты, которая вызывает изгиб (петлю) полипептидной цепи и снижает её устойчивость (эффект изоаспарагиновой кислоты).
Каждое антитело имеет уникальную изоэлектрическую точку (р1), которая обычно находится в интервале рН между 6 и 9,5. р1 для антитела 1дС1, как правило, попадает в интервал рН 7-9,5, а р1 для антитела 1дС4, как правило, попадает в интервал рН 6-8. Существует гипотеза, что антитела с р1 вне интервала нормальных значений рН могут до некоторой степени претерпевать раскручивание и неустойчивость в условиях ш νίνο. Таким образом, предпочтительно иметь антитело против ЬАС-3, значение р1 которого попадает в интервал нормальных значений рН. Этого можно достичь либо отбором антител со значением р1 в интервале нормальных значений рН, либо мутацией заряжённых поверхностных остатков.
Каждое антитело имеет характеристическую температуру плавления, причём более высокая темпе- 20 023032 ратура плавления указывает на повышенную общую стабильность (устойчивость) ίη νίνο (КпкЬпатийЬу К. апб Маптпд М.С. (2002) Сигг. РЬагт. Вю!ееЬпо1. 3: 361-71). Как правило, предпочтительно, чтобы ТМ1 (температура начального раскручивания) была выше 60°С, предпочтительно выше 65°С, ещё более предпочтительно выше 70°С. Точку плавления антитела можно определять методом дифференциальной сканирующей калориметрии (СЬеп е! а1. (2003) РЬагт. Кек. 20: 1952-60; СИг1апбо е! а1. (1999) 1ттипо1. Ьей. 68: 47-52) или методом кругового дихроизма (Миггау е! а1. (2002) 1. СЬготаЮдг δα 40: 343-9).
В предпочтительном варианте изобретения выбирают антитела, которые не распадаются быстро. Распад антитела можно количественно определять методами капиллярного электрофореза (СЕ) и ΜΑΣΌΙ-Μδ (А1ехапбег АД. апб Ни§Ьек Ό.Ε. (1995) Апа1 СЬет 67: 3626-32).
В другом предпочтительном варианте изобретения выбирают антитела с минимальным агрегационным эффектом, который может привести к запуску нежелательного иммунного ответа и/или изменённым или нежелательным фармакокинетическим свойствам. Как правило, приемлемыми являются антитела с агрегацией 25% или менее, предпочтительно 20% или менее, ещё более предпочтительно 15% или менее, ещё более предпочтительно 10% или менее и ещё более предпочтительно 5% или менее. Агрегацию количественно определяют несколькими методами, включая колоночную высокоэффективную гельхроматографию ^ЕС), высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ, НРЬС) и рассеяние света.
Методы инжиниринга антител.
Как обсуждается выше, антитела против ЬАС-3, имеющие УН и Уъ последовательности по данному описанию, можно использовать для создания новых антител против ЬАС-3 модификацией последовательностей УН и/или Уъ или связанных с ними константных областей. Так, в другом аспекте изобретения структурные признаки антитела против ЬАС-3 по изобретению, например 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5, используют для создания родственных по структуре антител против ЬАС-3, которые сохраняют по меньшей мере одно функциональное свойство антител по изобретению, такое как связывание с человеческим ЬАС-3. Например, одну или более областей СЭР антител 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5 или их мутанты можно объединять методами рекомбинантной ДНК с известными каркасными областями и/или другими СЭР с целью создания дополнительных полученных методами рекомбинантной ДНК антител против ЬАС-3 по изобретению, обсуждавшихся выше. Другие типы модификации включают типы модификации, описанные в предыдущем разделе. Исходным материалом для метода инжиниринга является одна или более последовательностей УН и/или Уъ по данному описанию или их один или более СЭР доменов. Для создания генно-инженерного антитела нет необходимости действительно получать (т.е. экспрессировать в виде белка) антитело, имеющее одну или более последовательностей УН и/или Уъ по данному описанию или её один или более СЭР доменов. Скорее информация, содержащаяся в последовательности(ях), используется как исходный материал для создания последовательности(ей) второго поколения, образованной(ых) из оригинальной(ых) последовательности(ей), а затем последовательность^) второго поколения получают и экспрессируют в виде белка.
Соответственно, другой вариант изобретения включает способ получения антитела против ЬАС-3, содержащий:
(а) предоставление (ί) последовательности вариабельной области тяжёлой цепи антитела, содержащей последовательность СЭРЕ выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 1-6, последовательность СЭР2. выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 7-12, и/или последовательность СПР3, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 13-14, ССУ и 16-18; и/или (ίί) последовательности вариабельной области лёгкой цепи антитела, содержащей последовательность СЭР1, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 19-24, последовательность СПР2, выбранную из группы, состоящей из δΕΟ ΙΌ N0: 25-30, и/или последовательность СЭР3, выбранную из группы, состоящей из δΕΟΙΌ N0: 3136;
(б) изменение по меньшей мере одного аминокислотного остатка в последовательности вариабельной области тяжёлой цепи антитела и/или последовательности вариабельной области лёгкой цепи для создания по меньшей мере одной изменённой последовательности антитела; и (в) экспрессирование изменённой последовательности антитела в виде белка.
Для получения и экспрессии антитела с изменённой последовательностью можно применять стандартные методы молекулярной биологии.
Предпочтительно антитело, кодированное изменённой(ыми) последовательностью(ями) гена антитела, представляет собой антитело, которое сохраняет одно, некоторые или все функциональные свойства антител против ЬАС-3 по данному описанию, причём эти функциональные свойства включают, но без ограничения:
(ί) высокоаффинное связывание с человеческим ЬАС-3;
(ίί) связывание с ЬАС-3 обезьян;
(ίίί) отсутствие связывания с мышиным ЬАС-3;
(ίν) способность ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами МНС класса ΙΙ и (ν) способность стимулировать иммунный ответ (например, антиген-специфический Т-клеточный ответ).
- 21 023032
Функциональные свойства изменённых антител можно оценивать стандартными методами анализа, известными в уровне техники и/или представленными в данном описании, такими как методы, приведённые в примерах.
В некоторых вариантах методов инжиниринга антител по изобретению можно вводить мутации, случайно или селективно, в последовательность, кодирующую целое антитело или участок антитела, а полученные модифицированные антитела против ЬАО-3 можно подвергнуть скринингу на связывающую активность и/или другие функциональные свойства по данному описанию. Мутационные методы описаны в уровне техники (см., например, опубликованные международные заявки РСТ \νθ 02/092780 и \νθ 03/074679).
Нуклеотидные молекулы, кодирующие антитела по изобретению.
Другой аспект изобретения относится к нуклеотидным молекулам, которые кодируют антитела по изобретению. Нуклеиновые кислоты могут находиться в целых клетках, клеточном лизате или в частично очищенном или практически чистом виде. Нуклеиновая кислота является выделенной или приведённой в практически чистое состояние, если она очищена от других клеточных компонентов или других примесей, например других клеточных нуклеиновых кислот или белков, стандартными методами, включая обработку в щелочной электрофоретической системе с 8Ό8, центрифугирование в растворах С§С1, колоночную хроматографию, электрофорез в агарозном геле и другие методы, общеизвестные в уровне техники. См. Аи8иЬе1, е1 а1., еб. (1987) Сиггеп! РгоЮсоЬ ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Огеепе РиЫЫнпд апб \νίΕ\' 1п1ег8аепсе, Νον Уогк. Нуклеиновая кислота по изобретению может представлять собой ДНК, РНК и может содержать или не содержать интронные последовательности или не содержать их. В предпочтительном варианте изобретения нуклеиновая кислота представляет собой ДНК.
Нуклеиновые кислоты по изобретению можно получать обычными методами молекулярной биологии. В случае антител, экспрессируемых гибридомами (например, гибридомами, полученными от трансгенных мышей, несущих гены человеческих иммуноглобулинов, подробнее описанные ниже), к ДНК кодирующие лёгкую и тяжёлую цепи антитела, продуцируемого гибридомой, можно получать стандартной ПНР-амплификацией или клонированием кДНК. В случае антител, получаемых из библиотеки генов иммуноглобулинов (например, с применением методов фагового дисплея), нуклеиновую кислоту, кодирующую такие антитела, можно выделять из библиотеки генов.
Предпочтительные нуклеотидные молекулы по изобретению представляют собой такие нуклеотидные молекулы, которые кодируют νΗ и Уъ последовательности моноклональных антител 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10, 11Р2 и 17Е5. Последовательности ДНК, кодирующие νΗ последовательности 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10, 11Р2 и 17Е5, показаны в 8Еф ГО ΝΟ: 49-54 соответственно. Последовательности ДНК, кодирующие V последовательности антител 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10, 11Р2 и 17Е5, показаны в 8Еф ГО ΝΟ: 55-60 соответственно.
Когда получены ДНК-фрагменты, кодирующие сегменты νΗ и Уъ, эти ДНК фрагменты можно далее обрабатывать обычными методами ркомбинантной ДНК, например, чтобы превратить гены вариабельной области в гены полноразмерного антитела, в гены фрагмента РаЬ или в ген 8сΡν. При этом ДНКфрагмент, кодирующий Уъ- или νΗ-, функционально связывают с другим ДНК-фрагментом, кодирующим другой белок, такой как константная область антитела или гибкий линкер. Предполагается, что выражение функционально связанный в данном контексте означает, что два фрагмента ДНК связываются таким образом, чтобы аминокислотные последовательности, кодируемые двумя фрагментами ДНК, оставались в рамке считывания.
Выделенную ДНК, кодирующую область νΗ, можно превратить в ген полноразмерной тяжёлой цепи, функционально связывая ДНК, кодирующую νΗ, с другой молекулой ДНК, кодирующей константные области тяжёлой цепи (СШ, СИ2 и СН3). Последовательности генов константных областей тяжёлой цепи известны в уровне техники (например, см. выше, КаЬа! е1 а1. (1991)), а фрагменты ДНК, охватывающие эти области, можно получать обычной ПЦР-амплификацией. Константная область тяжёлой цепи может представлять собой константную область 1§О1, 1§О2, 1§О3, 1§О4, 1дА, 1дЕ, 1дМ или 1§ϋ, но наиболее предпочтительно является константной областью 1дО1 или 1дО4. Для гена тяжёлой цепи фрагмента РаЬ ДНК, кодирующая νΗ, может функционально связываться с молекулой другой ДНК, кодирующей только константную область СН1 тяжёлой цепи.
Выделенную ДНК, кодирующую область Уъ, можно превратить в ген полноразмерной лёгкой цепи (а также ген лёгкой цепи РаЬ) за счёт функционального связывания ДНК, кодирующей Уъ, с молекулой другой ДНК, кодирующей константную область лёгкой цепи, СЬ. Последовательности человеческих генов константной области лёгкой цепи известны в уровне техники (например, КаЬа! е1 а1., см. выше), а ДНК-фрагменты, охватывающие эти области, можно получать обычной ПЦР-амплификацией. В предпочтительных вариантах изобретения константная область лёгкой цепи может представлять собой константную область каппа или лямбда.
Для создания 8сРν гена ДНК-фрагменты, кодирующие νΗ- и Ун-области, функционально связывают с другим фрагментом, кодирующим гибкий линкер, например кодирующий аминокислотную последовательность (О1у4-8ег)3, так что последовательности νΗ и Уъ могут экспрессироваться в виде непрерывного одноцепочечного белка, в котором области Уъ и νΗ связаны гибким линкером (см., например, Вгтб е1 а1.
- 22 023032 (1988) §с1епсе 242: 423-426; Никйпе1 а1. (1988) Ргос. N3(1. Асай. δοΐ. И8Л 85: 5879-5883; МсСайеПу е1 а1., (1990) №Ште 348: 552-554).
Получение моноклональных антител по изобретению.
Моноклональные антитела (тАЪк) по настоящему раскрытию можно получать хорошо известным методом гибридизации соматических клеток (методом гибридом) КоЫег апй МПк1ет (1975) №1иге 256: 495. Другие варианты получения моноклональных антител включают трансформацию В лимфоцитов с помощью вирусов или онкогенов и методы фагового дисплея. Химерные или гуманизированные антитела также общеизвестны в уровне техники. См., например, патенты США №№ 4816567; 5225539; 5530101; 5585089; 5693762 и 6180370, содержание которых специально вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
В предпочтительном варианте изобретения антитела по изобретению представляют собой человеческие моноклональные антитела. Такие человеческие моноклональные антитела, специфические к человеческому ЬЛС-3, можно получать, используя трансгенных или транс-хромосомных мышей, несущих скорее компоненты иммунной системы человека, нежели компоненты мышиной системы. Эти трансгенные и транс-хромосомные мыши включают мышей, называемых в данном описании мышь НиМАЪ (НиМАЪ Мойке®) и мышь КМ (КМ Мойке®) соответственно и в целом называемых в данном описании мыши с (несущие) 1д человека.
Мыши НиМАЪ (Мейагех®, 1пс.) содержат минилокусы неаранжированных генов человеческого иммуноглобулина, которые кодируют человеческие последовательности тяжёлой (μ и γ) и лёгкой цепи к иммуноглобулина, совместно с нацеленными мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы μ и к цепей (см., например, ЬопЪегд е( а1. (1994) №-11иге 368(6474): 856-859). Соответственно, у этих мышей наблюдается пониженная экспрессия мышиного 1дМ или к цепи, и в ответ на иммунизацию введённые человеческие трансгены тяжёлой и лёгкой цепи вызывают переключение класса антител и соматическую мутацию, генерируя высокоаффинные человеческие моноклональные антитела 1дСк (ЬопЪетд е( а1. (1994), см. выше; обзор в ЬопЪетд (1994) НапйЪоок о£ Ехрептеп1а1 РЪаттасо1о§у 113: 49-101; ЬопЪетд, N. апй Ник/аг, Ό. (1995) 1п1егп. Кеу. 1ттипо1. 13: 65-93, и Нагйтд апй ЬопЪегд (1995) Апп. КУ. Асай. 8ск 764: 536-546). Получение и использование мышей НиМАЪ Мойке® и геномные модификации, которые несут эти мыши, подробнее описаны в Тау1ог е( а1. (1992) №с1ею Аайк КекеатсЪ 20: 6287-6295; СЪеп е( а1. (1993) 1п1егпаЪопа1 1ттипо1оду 5: 647-656; ТиаШоп е( а1. (1993) Ргос. №Ш. Асай. δα. ^А 90: 3720-3724; СЪо1 е1 а1. (1993) №Ште СепеЪск 4: 117-123; СЪеп е1 а1. (1993) ЕМВ0 I. 12: 821-830; ТиаШоп е1 а1. (1994) I. 1ттипо1. 152: 2912-2920; Тау1ог е( а1. (1994) 1п1егпаЪопа1 1ттипо1оду 6: 579-591; и ИкЪуПй е( а1. (1996) №-11иге Вю1есЪпо1оду 14: 845-851, содержание всех этих материалов вводится специально в данное описание ссылкой во всей полноте. Помимо этого, см. патенты США № 5545806; 5569825; 5625126; 5633425; 5789650; 5877397; 5661016; 5814318; 5874299; 5770429 и 5545807; опубликованные международные патентные заявки РСТ №№ А0 92/03918; \\'0 93/12227; \\'0 94/25585; \\'0 97/13852; \\'0 98/24884; \У0 99/45962 и \У0 01/14424, содержание которых вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
В другом варианте изобретения можно вызвать образование человеческих антител по изобретению, используя мышь, которая несёт последовательности генов человеческого иммуноглобулина на трансгенах и транс-хромосомах, такую как мышь, которая несёт трансген человеческой тяжёлой цепи и транс-хромосому человеческой лёгкой цепи. Такую мышь в данном описании называют КМ тоике®, она подробно описана в опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 02/43478. Модифицированная форма этой мыши, которая дополнительно включает дизрупцию гена эндогенного ΡсγКIIВ рецептора в гомозиготном состоянии, также описана в опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 02/43478 и называется в данном описании мышью КМ/РССК2П тоике®. Помимо этого, можно использовать мышей с трансгенами тяжёлой цепи либо НСо7, либо НСо12.
Другие варианты трансгенных животных включают ХепоМоике (АЪдетх, 1пс., патенты США №№ 5939598; 6075181; 6114598; 6150584 и 6162963). Другие варианты изобретения включают ТС мышей (Тони/ика е( а1. (2000) Ргос. №И. Асай. 5с1. ^А 97: 722-727) и коров (крупный рогатый скот), несущих транс-хромосомы человеческой тяжёлой и лёгкой цепи (КшШуа е( а1. (2002) Шипе Вю1есЪпо1оду 20: 889-894; опубликованная международная заявка РСТ \У0 02/092812). Содержание этих патентов и опубликованной патентной заявки вводится специально в данное описание ссылкой во всей полноте.
В одном варианте изобретения человеческие моноклональные антитела по изобретению получают методами фагового дисплея для скрининга библиотек генов человеческого иммуноглобулина. См., например, патенты США №№ 5223409; 5403484; 5571698; 5427908; 5580717; 5969108; 6172197; 5885793; 6521404; 6544731; 6555313; 6582915 и 6593081, содержание которых вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
Человеческие моноклональные антитела по изобретению можно получать, используя мышей δΟΊΌ, в которых проведена такая реконституция человеческих иммунных клеток, что при иммунизации вырабатываются человеческие антитела (антительный ответ). См., например, патенты США № 5476996 и 5698767, содержание которых вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
- 23 023032
В другом варианте изобретения человеческие антитела против ЬАС-3 получают методом фагового дисплея, в котором фаги содержат нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, вырабатывающиеся в организме трансгенных животных, заранее иммунизированных белком ЬАС-3. В предпочтительном варианте изобретения трансгенное животное представляет собой мышь ниМаЬ, КМ или Ктп. См., например, патент США № б794132, содержание которого вводится в данное описание ссылкой во всей полноте.
Иммунизация мышей, несущих человеческий 1д (нитап 1д).
В одном варианте изобретения мышей с человеческим 1д иммунизируют очищенным или обогащенным препаратом ЬАС-3 антигена, рекомбинантного белка ЬАС-3 или клетками, экспрессирующими белок ЬАС-3. Например, ЬопЬегд с1 а1. (1994), см. выше; РЫиуПД с1 а1. (199б), см. выше; опубликованные международные заявки РСТ \УО 98/24884 или \УО 01/14424, содержание которых вводится в данное описание ссылкой во всей полноте. В предпочтительном варианте изобретения мышей в возрасте б-1б недель иммунизируют, вводя 5-50 мкг белка ЬАС-3. Или же используют участок ЬАС-3, слитый с отличным от ЬАС-3 полипептидом.
В одном варианте изобретения трансгенных мышей иммунизируют интраперитонеально (ΙΡ) или внутривенно (1У, в.в.) ЬАС-3 антигеном в полном адъюванте Фрейнда с последующей ΙΡ или 1У иммунизацией в неполном адъюванте Фрейнда. В других вариантах изобретения используют адъюванты, отличные от адъюванта Фрейнда, или целые клетки в отсутствие адъюванта. Плазму можно подвергнуть скринингу методом ЕЫ8А, а клетки мышей с удовлетворительными титрами человеческого иммуноглобулина против ЬАС-3 можно использовать для слияния.
Получение гибридом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела по изобретению.
Для получения гибридом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела по изобретению, спленоциты и/или клетки лимфатических узлов иммунизированных мышей можно выделять и сливать с соответствующей линией иммортализованных клеток, такой как линия клеток мышиной миеломы. Полученные гибридомы можно подвергнуть скринингу на продукцию антиген-специфических антител. Получение гибридом хорошо известно в уровне техники. См., например, наг1о\у апД Ьапе (1988) АпДЬоД1ек, А ЬаЬогаФгу Мапиа1, Со1Д 8рппд нагЬог РиЬЬсаДопк, Ыете Уогк.
Получение трансфектом, продуцирующих человеческие моноклональные антитела по изобретению.
Антитела по изобретению можно также продуцировать в клетках-хозяевах-трансфектомах, используя, например, комбинацию методов рекомбинантной ДНК и трансфекции генов, хорошо известных в уровне техники (е.д., Моткоп, 8. (1985) 8аепсе 229: 1202). В одном варианте изобретения ДНК, кодирующую частичную или полноразмерную лёгкую и тяжёлую цепь, полученную обычными методами молекулярной биологии, встраивают в один или более экспрессирующих векторов таким образом, чтобы гены функционально связывались с последовательностями, регулирующими (регуляторными) транскрипцию и трансляцию. Предполагается, что в этом контексте выражение функционально связанный означает, что ген антитела сшивают с вектором таким образом, чтобы последовательности контроля транскрипции и трансляции в векторе служили их заданной функции регуляции транскрипции и трансляции гена антитела.
Предполагается, что термин регуляторная последовательность включает промоторы, энхансеры и другие элементы контроля экспрессии (например, сигналы полиаденилирования), которые контролируют транскрипцию или трансляцию генов цепи антитела. Такие регуляторные последовательности описаны, например, в СоеДДе1 (Сепе Ехргеккюп ТесЬпо1о§у. МеДюДк ш Еп/уто1оду 185, АсаДетю Ргекк, 8ап Э1едо, СА (1990)). Предпочтительные регуляторные последовательности для экспрессии в клетках-хозяевах млекопитающих включают вирусные элементы, которые контролируют высокий уровень экспрессии белка в клетках млекопитающих, такие как промоторы и/или энхансеры из цитомегаловируса (СМУ), вируса обезьян 40 (8У40), аденовируса (например, главный поздний промотор аденовируса (АДМЬР) и вируса полиомы. Или же можно использовать невирусные регуляторные последовательности, такие как промотор убиквитина или промотор β-глобина. Помимо этого, регуляторные элементы, состоящие из последовательностей из разных источников, такие как промоторная система промотора 8Κα, которая содержит последовательности из раннего промотора 8У40 и длинный концевой повтор вируса Тклеточного лейкоза типа 1 (ТакеЬе е1 а1. (1988) Мо1. Се11. Бю1. 8: 4бб-72). Экспрессирующий вектор и последовательности контроля экспрессии выбирают таким образом, чтобы они были совместимы с используемой для экспрессией клеткой-хозяином.
Ген лёгкой цепи антитела и ген тяжёлой цепи антитела можно встроить в один и тот же экспрессирующий вектор или в разные экспрессирующие векторы. В предпочтительных вариантах изобретения вариабельные области используют для создания генов полноразмерных антител любого изотипа путём встраивания их в экспрессирующие векторы, уже кодирующие константные области тяжёлой и лёгкой цепи заданного изотипа, так чтобы Ун сегмент функционально связывался с Сн сегментом (сегментами) в векторе, а Уъ сегмент функционально связывался с С[, сегментом в векторе. Помимо этого или в качестве альтернативы, вектор для экспрессии рекомбинантных генов может кодировать сигнальный пептид, который способствует секреции цепи антитела клеткой- хозяином. Ген цепи антитела можно клонировать в вектор таким образом, чтобы сигнальный пептид связывался в рамке считывания с аминоконцом цепи
- 24 023032 антитела. Сигнальный пептид может представлять собой сигнальный пептид иммуноглобулина или гетерологичный сигнальный пептид (например, сигнальный пептид из неиммуноглобулинового белка).
Помимо генов цепи антитела и регуляторных последовательностей, вектор для экспрессии рекомбинантных генов по изобретению могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, ориджины репликации) и селективные маркерные гены. Селективный маркерный ген способствует селекции клетокхозяев, в которые вводят вектор (см., например, патенты США №№ 4399216; 4634665 и 5179017). Например, как правило, селективный маркерный ген придаёт устойчивость к лекарствам, таким как 0418, гигромицин или метотрексат, клетке-хозяину, в которую водится вектор. Предпочтительные селективные маркерные гены включают ген дигидрофолатредуктазы (ΌΗΡΚ) (для применения в селекции/амплификации в йЫт-клетках-хозяевах в присутствии метотрексата) и ген пео (для 0418 селекции).
Для экспрессии лёгкой и тяжёлой цепей экспрессирующий(е) вектор(ы), кодирующий(е) тяжёлую и лёгкую цепи, транфецируют в клетку-хозяина стандартными методами. Предполагается, что различные формы термина трансфекция охватывают широкий ряд методов, обычно используемых для введения экзогенной ДНК в прокариотическую или эукариотическую клетку-хозяина, например электропорацию, осаждение фосфатом кальция, трансфекцию с использованием полимера ДЭАЭ (ПЕАЕ)-декстрана и т.п. Хотя теоретически возможно экспрессировать антитела по изобретению как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах, экспрессия антител в эукариотических клетках и наиболее предпочтительно в клетках-хозяевах млекопитающих, является наиболее предпочтительной, потому что такие эукариотические клетки и, в частности, клетки млекопитающих, скорее чем прокариотические клетки, собирают и секретируют соответствующим образом сложенное (имеющее подходящую пространственную структуру) и иммунологически активное антитело.
Предпочтительные клетки-хозяева млекопитающих включают клетки яичника китайского хомячка (СНО клетки) (включая ДЛГг- СН0 клетки, описанные в Иг1аиЬ апД Сйахш, (1980) Ргос. №ύ. АсаД 8с1. И8А 77: 4216-4220, применяемые с ΌΗΡΚ селективным маркером, например, как описано в К.1. КаиГтап апД Р.А. 8йагр (1982) 1. Мо1. ΒίοΙ. 159: 601-621), N80 миеломные клетки, клетки С08 и клетки 8Р2. В частности, другая предпочтительная система экспрессии для применения с N80 миеломными клетками представляет собой 08 систему экспрессии генов, раскрываемую в международных патентных заявках \У0 87/04462, \У0 89/01036 и в европейском патенте ЕР 338841. Если векторы для рекомбинантной экспрессии, кодирующие гены антител, вводят в клетки-хозяева млекопитающих, антитела продуцируются при культивировании клеток-хозяев в течение периода времени, достаточного для экспрессии антитела в клетках-хозяевах или более предпочтительн, для секреции антитела в культуральную среду, в которой выращиваются клетки-хозяева. Антитела можно выделять из культуральной среды обычными методами очистки белков.
Характеристика связывания антитела с антигеном.
Антитела по изобретению можно тестировать на связывание с человеческим ЬА0-3, например, стандартными методами ЕЬ18А. Человеческие 1д0 против ЬА0-3 можно дополнительно проверять на реактивность в отношении ЬА0-3 антигена Вестерн-Блоттингом. Специфичность связывания антитела по изобретению можно также определять, проводя мониторинг связывания антитела с клетками, экспрессирующими белок ЬА0-3, например, методами проточной цитометрии. Эти методы известны в уровне техники. См., например, Наг1оте апД Ьапе (1988), хирга.
Иммуноконъюгаты.
Антитела по данному изобретению могут конъюгироваться с терапевтическим агентом с образованием иммуноконъюгата, такого как конъюгат антитело-лекарство (АЭС). Подходящие терапевтические агенты включают антиметаболиты, алкилирующие агенты, связующие малых бороздок ДНК, ДНК интеркаляторы, ДНК кросс-линкеры, ингибиторы деацетилазы гистонов, ингибиторы экспорта из ядра, ингибиторы протеасом, ингибиторы топоизомеразы Ι или ΙΙ, ингибиторы белков теплового шока, ингибиторы тирозинкиназ, антибиотики и антимитотические агенты. В АЭС антитело и терапевтический агент предпочтительно конъюгируются с помощью отщепляемого линкера, такого как пептидильный, дисульфидный или гидразоновый линкер. Более предпочтительно линкер представляет собой пептидильный линкер, такой как Уа1-СД А1а-Уа1, Vа1-А1а-Vа1, Ьух-Еух, Рго-Уа1-01у-Уа1-Уа1 (8ЕЦ ГО N0: 15), А1а-АхпVа1, Vа1-^еи-^у5, Л1а-Л1а-Л5п, СП-СП, Vа1-^у5, Ьух, СП, 8ег или 01и. Конъюгаты АЭС можно получать, как описано в патентах США №№ 7087600; 6989452 и 7129261; опубликованных международных заявках РСТ \У0 07/038658; \У0 07/051081; \У0 07/059404; \У0 08/083312 и \У0 08/103693; опубликованных патентных заявках США 20060024317; 20060004081 и 20060247295; раскрытие которых вводится в данное описание в качестве ссылки.
Биспецифические молекулы.
В другом аспекте настоящее раскрытие включает биспецифические молекулы, содержащие антитело против ЬАО-3, связанное по меньшей мере с одной отличной функциональной молекулой, например с другим пептидом или белком (например, другим антителом или лигандом для рецептора), образуя биспецифическую молекулу, которая связывается по меньшей мере с двумя различными сайтами связывания или молекулами-мишенями. Таким образом, биспецифическая молекула по данному описанию
- 25 023032 включает молекулы, которые имеют три или более специфичностей. В предпочтительном варианте изобретения биспецифическая молекула содержит первую специфичность связывания с ЬАО-3 и вторую специфичность связывания с молекулой, обладающей триггерными свойствами, которая рекрутирует цитотоксические эффекторные клетки, способные убивать экспрессирующую ЬАО-3 клетку-мишень. Примерами подходящих триггерных (запускающих, инициирующих) молекул являются СЭ64, СЭ89, СЭ16 и СЭ3. См., например, КиТег е! а1, ΤΚΕΝΏδ ίη Вю!есЬпо1о§у, 22 (5), 238-244 (2004).
В одном варианте изобретения биспецифическая молекула содержит третью специфичность, помимо специфичности связывания против Рс и специфичности связывания против ЬАО-3. Третья специфичность может представлять собой специфичность к антифактору усиления (ЕР), например к молекуле, связывающейся с поверхностным белком, который задействован в цитотоксической активности и тем самым усиливает иммунный ответ против клетки-мишени. Например, антифактор усиления может связывать цитотоксическую Т-клетку (например, с помощью СЭ2, СЭ3, СЭ8, СЭ28, СЭ4, СЭ40 или 1САМ1) или другую иммунную клетку, вызывая в результате усиленный иммунный ответ против клеткимишени.
Биспецифические молекулы могут быть различных форматов и размеров. Одну крайность представляют собой биспецифические молекулы, сохраняющие обычный формат антитела за исключением того, что вместо двух связывающих плеч с идентичной специфичностью они имеют два связывающих плеча с различной специфичностью. Другую крайность представляют собой биспецифические молекулы, состоящие из двух фрагментов одноцепочечного антитела (ксРу), связанных пептидной цепью, так называемая конструкция Вк(ксРу)2. Биспецифические молекулы промежуточного размера включают два различных фрагмента Р(аЬ), связанных пептидильным линкером. Биспецифические молекулы этих и других форматов можно получать генной инженерией (методами рекомбинантной ДНК), соматической гибридизацией или химическими методами. См., например, КиТег е! а1., кирга; Сао апб ЗигекЬ, Вюсоп)ида!е Сйет151гу, 9 (6), 635-644 (1998); уап 8рпе1 е! а1., 1ттипо1оду Тобау, 21 (8), 391-397 (2000) и приведённые в этих материалах ссылки.
Фармацевтические композиции.
В другом аспекте настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию, содержащую антитело по настоящему раскрытию, приготовленное совместно с фармацевтически приемлемым носителем. Она (композиция) может содержать один или более фармацевтически активных ингредиентов, таких как другое антитело или лекарство. Фармацевтические композиции по изобретению можно также применять в комбинированной терапии, например, с другим иммуностимулирующим агентом, противораковым агентом и антивирусным агентом или вакциной с тем, чтобы антитело против ЬАО-3 усиливало иммунный ответ против вакцины.
Фармацевтическая композиция может содержать некоторое число эксципиентов. Эксципиенты, которые можно использовать, включают носители, поверхностно-активные агенты, загустители или эмульгаторы, твёрдые связующие, диспергирующие или суспендирующие агенты, солюбилизаторы, красители, корригенты вкуса или запаха, покрытия, разрыхлители, смазки, подсластители, консерванты, изотонические агенты и их комбинации. Отбор и применение подходящих эксципиентов описаны в руководстве-справочнике Оеппаго, еб., БепнпдЮп: ТЬе Заепсе апб Ргасйсе оТ РЬагтасу, 20'1' Еб. (Ырршсой \УПЬатк & ХУПктк 2003), раскрытие которого вводится ссылкой в данное описание.
Предпочтительно фармацевтическая композиция применима для внутривенного, внутримышечного, подкожного, парентерального, спинального или эпидермального введения (например, в виде инъекции или инфузии (вливания)). В зависимости от способа введения активное соединение можно покрывать материалом для его защиты от действия кислот и других естественных условий, которые могут его инактивировать. Выражение парентеральное введение по данному описанию означает способы введения, отличные от энтерального (тонкокишечного) и местного введения, обычно в виде инъекций, и включает, но без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную (подоболочечную), внутрикапсульную, интраорбитальную (внутриглазничную), внутрисердечную, интрадермальную, интраперитонеальную (внутрибрюшинную), транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, подкапсульную, субарахноидальную, интраспинальную и подложечную (надчревную) инъекцию и инфузию. Или же антитело по изобретению можно вводить непарентеральным путём, таким как топический (локальный, местный), эпидермальный или чресслизистый (в слизистую оболочку) путь введения, например, интраназально, перорально, вагинально, ректально, сублингвально (подъязычно) или местно.
Фармацевтические соединения по изобретению могут быть в виде фармацевтически приемлемых солей. Выражение фармацевтически приемлемая соль относится к соли, которая сохраняет нужную биологическую активность исходного соединения и не вызывает нежелательных токсикологических эффектов. Примеры таких солей включают соли присоединения кислоты и соли присоединения основания. Соли присоединения кислоты включают соли, образованные из нетоксических неорганических кислот, таких как хлористо-водородная, азотная, фосфорная, серная, бромисто-водородная, йодисто-водородная, фосфористая и т.п., а также из нетоксических органических кислот, таких как алифатические моно- и дикарбоновые кислоты, фенилзамещённые алкановые кислоты, гидроксиалкановые кислоты, ароматиче- 26 023032 ские кислоты, алифатические и ароматические сульфоновые кислоты и т.п. Соли присоединения основания включают соли, образованные из щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как натрий, калий, магний, кальций и т.п., а также из нетоксических органических аминов, таких как Ν,Νдибензилэтилендиамин, Ν-метилглюкамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, прокаин и т.п.
Фармацевтические композиции могут быть в виде стерильных водных растворов или дисперсий. Их можно приготовить также в виде микроэмульсий, липосом или других упорядоченных структур, применимых для высоких концентраций лекарства.
Количество активного ингредиента, которое можно смешивать с материалом носителя для получения разовой (стандартной) лекарственной формы, меняется в зависимости от субъекта, проходящего лечение, и конкретного способа введения и обычно представляет собой количество композиции, которое вызывает терапевтический эффект. Как правило, из 100% это количество составляет примерно от 0,01 примерно до 99% активного ингредиента, предпочтительно примерно, 0,1-70%, наиболее предпочтительно примерно 1-30% активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
Схемы приёма лекарственного средства корректируют таким образом, чтобы вызвать оптимальный заданный ответ (например, терапевтический ответ). Например, можно вводить единичный болюс, можно вводить несколько небольших доз через определённые промежутки времени, или дозу можно пропорционально снижать или увеличивать в зависимости от терапевтической ситуации. Особенно предпочтительно готовить композиции для парентерального введения в виде стандартной (однократной) лекарственной дозы для простоты введения и однородности доз. Выражение разовая (однократная) лекарственная доза по данному описанию относится к физически дискретным единицам, применимым в качестве единичной лекарственной формы для субъектов, подлежащих лечению; каждая единица содержит заданное количество активного соединения, рассчитанное на достижение заданного терапевтического эффекта, в сочетании с нужным фармацевтическим носителем. Или же антитело можно вводить в виде препарата с пролонгированным высвобождением, в этом случае требуется не такое частое введение.
Вводимые дозы антитела составляют примерно 0,0001-100 мг/кг, чаще 0,0-5 мг/кг массы тела хозяина. Например, дозы могут быть 0,3, 1, 3, 5 или 10 мг/кг массы тела или составлять интервал 1-10 мг/кг. Типичная схема лечения включает введение один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в 3 месяца или один раз через каждые 3-6 месяцев. Предпочтительные схемы введения антитела против ЬАС-3 по изобретению включают введение 1 или 3 мг/кг массы тела внутривенно, причём антитело дают, используя одну из нижеприведённых схем введения доз: (ί) шесть доз каждые четыре недели, затем каждые три месяца; (ίί) каждые три недели; (ίίί) 3 мг/кг массы тела однократно, затем 1 мг/кг массы тела каждые три недели. В некоторых методах дозу корректируют таким образом, чтобы достичь концентрации антитела в плазме примерно 11000 мкг/мл, а в некоторых методах около 25-300 мкг/мл.
Терапевтически эффективная доза антитела против ЬАС-3 по изобретению предпочтительно вызывает снижение тяжести симптомов заболевания, увеличение частоты и длительности бессимптомных периодов заболевания или предупреждение ухудшения состояния или нетрудоспособности вследствие болезни. Например, у лечения носителей опухолей терапевтически эффективная доза предпочтительно ингибирует рост опухоли по меньшей мере примерно на 20%, более предпочтительно по меньшей мере примерно на 40%, ещё более предпочтительно по меньшей мере примерно на 60% и ещё более предпочтительно по меньшей мере примерно на 80% по сравнению с непролеченными субъектами. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может уменьшить размер опухоли или иным образом уменьшить интенсивность симптомов у субъекта, которым, как правило, является человек или может быть другое млекопитающее.
Фармацевтическая композиция может представлять собой препарат с контролируемым высвобождением, включая имплантаты, трансдермальные пэтчи (пластыри) и системы доставки микроинкапсулированных продуктов. Можно применять биоразрушаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. См., например, 8из1ашей апй Соп!го11ей Ке1еазе Игид Ие1щегу 8уз!етз, ЬК. КоЬтзоп, ей., Магсе1 Ьеккег, 1пс., №ν Уогк, 1978.
Терапевтические композиции можно вводить с помощью медицинских устройств, таких как (1) безыгольные гиподермические инъекторы (см., например, патенты США 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 и 4596556); (2) микроинфузионные насосы (патент США 4487603); (3) устройства для трансдермальной доставки (патент США 4486194); (4) инфузионные аппараты (патенты США 4447233 и 4447224) и (5) осмотические устройства (патенты США 4439196 и 4475196); раскрытие этих патентов вводится в данное описание ссылкой.
В некоторых вариантах изобретения человеческие моноклональные антитела по изобретению можно приготовить таким образом, чтобы гарантировать необходимое распределение ш νί\Ό. Например, чтобы гарантировать, что терапевтическое соединение по изобретению проникает через гематоэнцефалический барьер, их можно приготовить в липосомах, которые, помимо этого, могут содержать нацеливаю- 27 023032 щие частицы для активизации селективного переноса к конкретным клеткам или органам. См., например, патенты США 4522811; 5374548; 5416016 и 5399331; У.У. Капабе (1989) I. СЬп. РЬагтасо1. 29: 685; ите/а\уа е! а1., (1988) ВюсЬет. ВюрЬук. Кек. Соттип. 153: 1038; В1оетап е! а1. (1995) РЕВБ Ье!!. 357: 140; Μ. Ο\\Ήίκ е! а1. (1995) АпЬт1сгоЬ. Адеп!к СЬето!Ьег. 39: 180; Впксое е! а1. (1995) Ат. I. РЬукю1. 1233: 134; БсЬгаег е! а1. (1994) I. Вю1. СЬет. 269: 9090; Кешапеп апб Ьаиккапеп (1994) РЕВБ Ье!!. 346: 123; и КПЬоп апб Р1б1ег (1994) Iттиηοте!Ьοбκ 4: 273.
Применение и методы по изобретению.
Антитела, композиции антител и методы по настоящему изобретению имеют различную ш уЬго и ш νί\Ό полезность, включая, например, обнаружение ЬАС-3 или усиление иммунного ответа с помощью блокады ЬАС-3. В предпочтительном варианте изобретения антитела по настоящему изобретению представляют собой человеческие антитела. Например, эти молекулы можно вводить в клетки в культуре ш уЬго или ех У1уо, или людям, например ш νίνυ, для повышения иммунитета в различных ситуациях. Соответственно, в одном аспекте изобретение включает метод модификации иммунного ответа у субъекта, заключающийся в введении субъекту антитела или его антигенсвязывающего участка по изобретению таким образом, чтобы иммунный ответ у субъекта модифицировался. Предпочтительно ответ усиливается, стимулируется или апрегулируется.
Предпочтительные субъекты включают больных людей, нуждающихся в усилении иммунного ответа. Методы особенно применимы для лечения больных людей с расстройством, которое можно лечить, усиливая (повышая) иммунный ответ (например, опосредованный Т-клетками иммунный ответ). В конкретном варианте изобретения методы особенно пригодны для лечения рака ш угуо. Для достижения антиген-специфического усиления иммунитета антитела против ЬАС-3 можно вводить вмести с целевым антигеном или антиген может уже присутствовать в организме подлежащего лечению субъекта (например, субъект-носитель опухоли или носитель вируса). Когда антитела к ЬАС-3 вводят вместе с другим агентом, два агента можно вводить в любом порядке или одновременно.
Помимо этого, изобретение включает методы обнаружения (детекции) человеческого ЬАС-3 антигена в образце или количественное определения человеческого ЬАС-3 антигена, заключающиеся в контактировании образца и контрольного образца с человеческим моноклональным антителом или его антигенсвязывающим участком, которое(ый) специфически связывается с человеческим ЬАС-3 в условиях, которые способствуют образованию комплекса между антителом или его антигенсвязывающим участком и человеческим ЬАС-3. Затем детектируют образование комплекса, причём различие в образовании комплекса между образцом по сравнению с контрольным образцом свидетельствует о присутствии человеческого ЬАС-3 антигена в образце. Более того, антитела против ЬАС-3 по изобретению можно использовать для очистки человеческого ЬАС-3 с помощью иммуноаффинной хроматографии.
Принимая во внимание способность антител против ЬАС-3 по изобретению ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II и стимулировать антиген-специфический Т-клеточный ответ, изобретение также включает ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό методы применения антител по изобретению для стимуляции, усиления или апрегуляции антиген-специфических Т-клеточных реакций (ответов). Например, изобретение включает метод стимуляции антиген-специфического Т-клеточного ответа, заключающийся в контактировании указанной Т-клетки с антителом по изобретению таким образом, чтобы стимулировался антиген-специфический Т-клеточный ответ. Для количественного определения антигенспецифического Т-клеточного ответа можно использовать любой подходящий индикатор антигенспецифического Т-клеточного ответа. Неограничивающие примеры подходящих индикаторов (указателей) включают повышенную пролиферацию Т-клеток в присутствии антитела и/или повышение продукции цитокинов в присутствии антитела. В предпочтительном варианте изобретения антигенспецифический Т-клеточный ответ стимулирует продукцию интерлейкина-2.
Изобретение включает также метод стимуляции иммунного ответа (например, антигенспецифического Т-клеточного ответа) у субъекта, заключающийся во введении антитела по изобретению субъекту таким образом, чтобы у субъекта стимулировался иммунный ответ (например, антигенспецифический Т-клеточный ответ). В предпочтительном варианте изобретения субъектом является носитель опухоли, а стимулируется иммунный ответ против опухоли. В другом предпочтительном варианте изобретения субъектом является носитель вируса, а стимулируется иммунный ответ против вируса.
В другом аспекте изобретение включает метод ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта, заключающийся в введении субъекту антитела по изобретению таким образом, чтобы у субъекта ингибировался рост опухоли. Ещё в одном аспекте изобретение включает метод лечения вирусной инфекции у субъекта, заключающийся в введении субъекту антитела по изобретению таким образом, чтобы проводилось лечение инфекции у субъекта.
Эти и другие методы по изобретению подробнее обсуждаются ниже.
Рак.
Блокада ЬАС-3 антителами может усилить иммунный ответ на раковые клетки у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к лечению субъекта ш угуо с помощью антитела против ЬАС-3 таким образом, чтобы ингибировался рост раковых опухолей. Антитело против ЬАС-3 можно использовать самостоятельно для ингибирования роста раковых опухолей. Или же антитело против ЬАС-3 можно
- 28 023032 использовать в сочетании с другими иммуногенными агентами, обычными противораковыми лекарственными средствами или другими антителами, как описывается ниже.
Соответственно, в одном варианте изобретение включает метод ингибирования роста раковых клеток у субъекта, заключающийся в введении субъекту терапевтически эффективного количества антитела против ЬАО-3 или его антигенсвязывающего участка. Предпочтительно антитело представляет собой человеческое антитело против ЬАО-3 (такое как любое из человеческих антител против человеческого ЬАО-3 по данному описанию). Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело может являться химерным или гуманизированным антителом против ЬАО-3.
Предпочтительные раковые опухоли, рост которых можно ингибировать, используя антитела по изобретению, включают раковые опухоли, как правило, восприимчивые к иммунотерапии. Неограничивающие примеры предпочтительных для лечения раковых заболеваний включают меланому (например, метастатическую злокачественную меланому), рак почки (например, светло-клеточную карциному), рак предстательной железы (например, гормон-резистентную аденокарциному предстательной железы), рак молочной железы, рак толстой кишки и рак лёгкого (например, немелкоклеточный рак лёгкого). Помимо этого, изобретение включает стойкие (резистентные или рецидивирующие злокачественные опухоли, рост которых может ингибироваться под действием антител по изобретению.
Примеры других раковых заболеваний, которые можно лечить методами по изобретению, включают рак кости, рак поджелудочной железы, рак головы и шеи, кожную или внутриглазную злокачественную меланому, рак матки, рак яичника, ректальный рак, рак анальной области, рак желудка, тестикулярный рак, карциному фаллопиевых труб, карциному эндометрия, карциному шейки матки, карциному влагалища, карциному наружных половых органов, болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому, рак пищевода, рак тонкого кишечника, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечника, саркому мягкой ткани, рак уретры, рак пениса, хронические или острые лейкозы, включая острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфобластный лейкоз, солидные опухоли у детей, лимфоцитарную лимфому, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, карциному почечной лоханки, опухоль центральной нервной системы (ЦНС, СК8), первичную лимфому ЦНС, ангиогенез опухолей, опухоль позвоночника, глиому ствола головного мозга, аденому гипофиза, саркому Капоши, эпидермоидный рак, плоскоклеточный рак. Т-клеточную лимфому, раковые заболевания, вызванные экологическими причинами, включая раковые заболевания, вызванные асбестозом, и комбинации указанных раковых заболеваний. Настоящее изобретение применимо также для лечения метастатических форм рака, в частности метастатической раковой опухоли, экспрессирующей РИ-Ы (Ι\νί·ιί е1 а1. (2005) Ιηί. Iттиηο1. 17: 133-144).
Необязательно, антитела к ЬАО-3 можно объединять с иммуногенным агентом, таким как раковые клетки, очищенные опухолевые антигены (включая молекулы рекомбинантных белков, пептидов и углеводов), клетки и клетки, трансфецированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (Не е1 а1. (2004) ί. Iттиηο1. 173: 4919-28). Неограничивающие примеры опухолевых вакцин, которые можно использовать, включают пептиды антигенов меланомы, такие как пептиды др100, МАОΕ антигенов, Тгр-2, МАКТ1 и/или тирозиназы, или опухолевые клетки, трансфецированные для экспрессии цитокина ОМ-СδΡ (подробно обсуждается ниже).
Показано, что у людей некоторые опухоли являются иммуногенным, такие как меланомы. Повышая порог активации Т-клеток с помощью блокады ЬАО-3, можно активировать ответ (реакцию) хозяина на опухоль.
По-видимому, блокада ЬАО-3 является более эффективной в сочетании с протоколом вакцинации. Разработано множество экспериментальных методик (стратегий) вакцинации против опухолей (см. ΗοδемЬегд, δ., 2000, ^еνе1ορтеηί οΓ Сапсег Уасстех, АδС0 Εйисаί^οиа1 Βοο1< δρτίη^: 60-62; Ρο^οί^ίίδ, С, 2000, АδС0 Εйисаί^οиа1 Βοο1< δρτίη§: 300-302; КЬауа1, Ό. 2000, АδС0 Εйисаί^οηа1 Βοο1< δρτίη§: 414-428; Ροοη, К. 2000, АδС0 Εйисаί^οиа1 Βοο1< δρτίη§: 730-738; см. также К.е8Й&, N. и δζηο1, М., Сапсег Vасс^ηе8, СЬ. 61, ρρ. 3023-3043 в ОеУЬа е1 а1. (ейх.), 1997, Сапсег: Рт^кв апй Ргасйсе οΓ 0ικο1ο8\\ ΡίΓίΙι ΕώΙίοη). По одной из этих методик вакцину готовят, используя аутологичные или аллогенные опухолевые клетки. Показано, что эти клеточные вакцины наиболее эффективны, если опухолевые клетки трансфецированы таким образом, чтобы экспрессировать ОМ-СδΡ. Обнаружено, что ОМ-СδΡ является мощным активатором презентации антигенов для вакцинации против опухолей (Όπ-ιηοΓΓ е1 а1. (1993) Ргос. №11. Асай. δα и.8.А. 90: 3539-43).
Изучение экспрессии генов и примеров крупномасштабной экспрессии генов различных опухолях позволило дать определение так называемых опухолеспецифических антигенов (Кο8еηЬе^§, 8.А. (1999) ΙιηιηιιηίΚ 10. 281-7). Во многих случаях эти опухолеспецифические антигены представляют собой дифференцировочные антигены, экспрессируемые в опухолях и в клетке, из которой образована опухоль, например меланоцитарные антигены §ρ100, МАОΕ антигены и Ττρ-2. Более того, можно показать, что многие из этих антигенов представляют собой мишени опухолеспецифических Т-клеток, обнаруживаемых у хозяина. Блокаду ЬАО-3 можно использовать в сочетании с группой рекомбинантных белков и/или пептидов, экспрессируемых в опухоли, чтобы выработать иммунный ответ на эти белки. Эти белки в норме рассматриваются иммунной системой как аутоантигены, и, следовательно, к ним поддерживает- 29 023032 ся толерантность. Опухолевый антиген может включать белок теломеразы, который требуется для синтеза теломеров хромосом и который экспрессируется более чем в 85% случаев раковых заболеваний человека и лишь в ограниченном числе соматических тканей (К1т е! а1. (1994) §аепсе 266: 2011-2013). (Эти соматические ткани могут быть защищены от иммунной атаки различными способами). Опухолевый антиген может также представлять собой неоантиген, экспрессирующийся в раковых клетках вследствие соматических мутаций, которые изменяют белковую последовательность, или создавать слитые белки между двумя несвязанными последовательностями (т.е. Ьсг-аЫ в филадельфийской хромосоме (хромосоме РЫ1айе1рЫа)) или идиотип из В-клеточных опухолей.
Другие опухолевые вакцины могут включать белки вирусов, органически связанных с раковыми заболеваниями человека, таких как вирусы папилломы человека (ВПЧ, НРУ), вирусы гепатита (ВГВ (НВУ) и ВГС (НСУ)) и вирус герпеса, ассоциированный с саркомой Капоши (ВГСК, КН8У). Другим видом опухолеспецифического антигена, который можно использовать в сочетании с блокадой ЬАС-3, являются очищенные белки теплового шока (БТШ, Н8Р), выделенные из самой опухолевой ткани. Эти белки теплового шока содержат фрагменты белков из опухолевых клеток и эти Н8Р являются высокоэффективными при доставке к антигенпрезентирующим клеткам для выявления иммунитета к опухолям (§ио! & 8т1уак!ауа (1995) §аепсе 269: 1585-1588; Татига е! а1. (1997) §с1епсе 278: 117- 120).
Дендритные клетки (ДК, ОС) представляют собой мощные антигенпрезентирующие клетки, которые можно использовать для того, чтобы вызвать антигенспецифический ответ. ОС могут быть получены ех У1уо и нагружены различными белковыми и пептидными антигенами, а также экстрактами опухолевых клеток (№к(1е е! а1. (1998) №Циге Мейюше 4: 328-332). ОС можно также трансфецировать генетическими методами с целью экспрессировать эти опухолевые антигены. Для иммунизации ОС также непосредственно сливали с опухолевыми клетками (Кид1ег е! а1. (2000) №Лиге Мейюше 6: 332-336). В качестве эффективного метода вакцинации с целью активации более мощного противоопухолевого ответа можно использовать ОС иммунизацию в сочетании с блокадой ЬАС-3.
Блокаду ЬАС-3 можно также комбинировать с обычными противораковыми терапевтическими средствами. Блокаду ЬАС-3 можно эффективно сочетать с химиотерапией. В этих случаях можно снизить дозу назначаемого химиотерапевтического агента (Мокуг е! а1. (1998) Сапсег КекеагсЬ 58: 53015304). Примером такого сочетания является применение антитела против ЬАС-3 в комбинации с дакарбазином для лечения меланомы. Другим примером такой комбинации является комбинация антитела против ЬАС-3 с интерлейкином-2 (1Ь-2) для лечения меланомы. Научным объяснением комбинированного применения блокады ЬАС-3 и химиотерапии является то, что гибель клеток, являющаяся следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна вызвать повышенные уровни опухолевого антигена на пути презентации антигена. Другими видами терапевтических средств, которые в комбинации с блокадой ЬАС-3 могут оказывать синергическое действие за счёт гибели клеток, является облучение, хирургическая операция и гормональная депривация. Каждый из этих протоколов создаёт источник опухолевого антигена в организме хозяина. Ингибиторы ангиогенеза также можно сочетать с блокадой ЬАС-3. Ингибирование ангиогенеза приводит к смерти опухолевых клеток, что может обеспечить поступление (подпитку) опухолевого антигена на пути презентации антигена хозяина.
Антитела, блокирующие ЬАС-3, можно также применять в комбинации с биспецифическими антителами, которые нацеливают эффекторные клетки, экспрессирующие Рса или Рсу рецептор, на опухолевые клетки (см., например, патенты США № 5922845 и 5837243). Биспецифические антитела можно применять для нацеливания на два отдельных антигена. Например, биспецифические антитела против Рс рецептора/против опухолевого антигена (например, Нег-2/пеи) можно применять для нацеливания макрофагов на участки опухоли. Это нацеливание может более эффективно активировать опухолеспецифические реакции. Т-клеточная составляющая (плечо) этих ответов усиливается при использовании блокады ЬАС-3. Или же антиген можно доставлять непосредственно к ОС, применяя биспецифические антитела, которые связываются с опухолевым антигеном и специфическим маркером клеточной поверхности дендритных клеток.
Опухоли уклоняются от иммунного контроля, используя целый ряд механизмов. Многие из этих механизмов можно преодолеть с помощью инактивации белков, которые экспрессируются опухолями и которые обладают иммуносупрессорной активностью. Эти белки включают, среди прочих, ТСР-β (КеЬг1 е! а1. (1986) I. Ехр. Мей. 163: 1037-1050), 1Ь-10 (Но^агй & 0'Сагга (1992) 1ттипо1о§у Тойау 13: 198-200), и Рак лиганд (НаЬпе е! а1. (1996) §аепсе 274: 1363-1365). Антитела к этим структурам можно использовать в комбинации с антителом против ЬАС-3 для противодействия действию иммуносупрессора и содействия иммунному ответу хозяина на опухоль.
В комбинации с антителом против ЬАС-3 можно применять другие антитела, которые активируют иммунный ответ хозяина. Эти антитела включают молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют ОС функцию и презентацию антигена. Антитела против СО40 способны эффективно замещать хелперную активность Т-клеток (Шйде е! а1. (1998) №Циге 393: 474-478) и могут применяться в сочетании с антителами против ЬАС-3 (1!о е! а1. (2000) 1ттипоЬю1о§у 201 (5) 527-40). Активирующие
- 30 023032 антитела к костимуляторным молекулам Т-клеток, таким как СТЬА-4 (например, патент США № 5811097), ОХ-40 (№ешЪег§ е1 а1. (2000) Ιιιιιιιιιιιοί 164: 2160-2169), 4-ΙΒΒ (Ме1его е1 а1. (1997) №Шге Меб1сше 3: 682-685 (1997) и Κ',Όδ (НиИоГГ е! а1. (1999) №1иге 397: 262-266), также могут обеспечивать повышенный уровень активации Т-клеток. В настоящее время трансплантация костного мозга применяется для лечения различных опухолей гемопоэтического происхождения. Хотя последствием этого лечения является гомологичная болезнь (трансплантата-против-хозяина), ответ трансплантата на опухоль может принести терапевтическую пользу. Блокаду ЬАС-3 можно применять для повышения эффективности пересаженных донорских опухолеспецифических Т-клеток.
Имеются также некоторые экспериментальные протоколы лечения, которые включают ех νίνο активацию и экспансию антиген-специфических Т-клеток и адоптивный перенос этих клеток реципиентам с целью стимулировать антиген-специфические Т-клетки против опухоли (СгеепЪегд & К1ббе11 (1999) δ^ΐ'^ 285: 546-51). Эти методы также можно применять для активации Т-клеточных реакций на инфекционные агенты, такие как СМУ. Εχ νίνο активация в присутствии антител против ЬАС-3 может повысить частоту и активность адоптивно перенесённых Т-клеток.
Инфекционные заболевания.
Другие методы по изобретению применяются для лечения пациентов, подвергшихся действию конкретных токсинов или патогенов. Соответственно, другой аспект изобретения включает метод лечения инфекционного заболевания у субъекта, заключающийся во введении субъекту антитела против ЬАС-3 или его антигенсвязывающего участка таким образом, чтобы проводилось лечение инфекционного заболевания. Предпочтительно антитело представляет собой человеческое антитело против человеческого ЬАС-3 (такое как любое из человеческих антител против ЬАС-3 по данному описанию). Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело.
Подобно обсуждавшемуся выше применению для лечения опухолей антителоопосредованная блокада ЬАС-3 может применяться индивидуально (самостоятельно) или в качестве адъюванта в комбинации с вакцинами для стимуляции иммунного ответа на патогенны, токсины и аутоантигены. Примеры патогенов, в отношении которых этот терапевтический метод может быть особенно полезен, включают патогены, эффективная вакцина против которых в настоящее время отсутствует, или патогены, против которых обычные вакцины недостаточно эффективны. Эти патогены включают, но без ограничения, ВИЧ, гепатит (А, В и С), грипп, герпес, лямблиоз, малярию, лейшманиоз, золотистый стафилококк, синегнойную палочку (Р8еиботопа8 аетидто8а). Блокада ЬАС-3 особенно применима против устойчивых инфекций агентами, такими как ВИЧ, которые презентируют изменяющиеся антигены в процессе инфицирования. Эти новые эпитопы распознаются как чужеродные во время введения антитела против человеческого ЬАС-3, тем самым вызывается сильный Т-клеточный ответ, который не ослабляется (не гасится) негативными сигналами с помощью ЬАС-3.
Некоторые примеры патогенных вирусов, вызывающих инфекции, восприимчивые к лечению методами по изобретению, включают ВИЧ, гепатит (А, В или С), герпес-вирус (например, νζν, Ηδν-1, НАУ-6, Ηδν-ΙΙ и СМУ, вирус Эпштейна-Барр), аденовирус, вирус гриппа, флавивирусы, эховирус, риновирус, вирус Коксаки, коронавирус, респираторно-синцитиальный вирус, вирус свинки, ротавирус, вирус кори, вирус коревой краснухи, вирус парвовирус, вирус коровьей оспы, НТЬУ вирус, вирус денге, вирус папилломы, вирус контагиозного моллюска, вирус полиомы, вирус бешенства, вирус 1С и вирус арбовирусного энцефалита.
Некоторые примеры патогенных бактерий, вызывающих инфекции, восприимчивые к лечению методами по настоящему изобретению, включают хламидии, риккетсиозные микроорганизмы, микобактерии, стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки и гонококки, клебсиеллу, протей, серратию, ρ8еибοтοηа8, легионеллы, дифтерийные бактерии, сальмонеллу, палочковидные бактерии, бактерии-возбудители холеры (холерный вибрион), столбняка, ботулизма, сибирской язвы, чумы, лептоспироза и болезни Лайма.
Некоторые примеры патогенных грибов, вызывающих инфекции, восприимчивые к лечению методами по изобретению, включают грибы Сапб1ба (С. а1Ъюап8, С. кги8ек С. д1аЪта!а, С. ЛорюаТО, е1с.). Сгур1ососси8 пеоГогтап8, аспергиллы (А8ретдШи8) (А. Гит1да1и8. А. тдег, е1с.). грибы семейства мукоровых (Сепи8 Мисога1е8) (рода тисог, аЪ81б1а, т^ори8), грибы δροτοΐΗτίχ 8сйепки, бластомицеты Β1а8ΐοтусе8 беттаШ1б18, возбудитель бластомикоза Рагасосс1б1о1бе8 Ъта8Шеп818, возбудитель кокцидиоидоза СосабБ о1бе8 ипата1е8 и возбудитель гистоплазмоза Ш81ор1а8та сар8и1а1ит.
Некоторые примеры патогенных паразитов, вызывающих инфекции, восприимчивые к лечению методами по изобретению, включают дизентерийную амёбу (ΕηΐатοеЪа Н181о1у11са), инфузории Балантидиум коли Ща^ибшт соИ), амёбы №ед1епаГо\у1егк АсаШйатоеЪа 8р., лямблии или жиардии (С1агб1а 1атЪйа), криптоспоридии (Сгур1о8ропбшт 8р.), возбудитель пневмоцистоза Рпеитосу8И8 саппи, возбудитель малярии Р1а8тобшт νινίΐ.χ, бабезии ΒаЪе8^а тютой, трипаносомы вида Тгурапо8ота Ьгисек вида Тгурапо8ота спмк лейшманию вида Ье18Йтата бопо\'апк токсоплазму (Тохор1а8та допби), нематоду №рро81гопду1и8 Ъта8Шеп818.
Во всех вышеуказанных методах блокаду ЬАС-3 можно комбинировать с другими формами имму- 31 023032 нотерапии, такой как лечение цитокинами (например, интерферонами, СМ-С8Р, С-С8Р, 1Ь-2), или терапией биспецифическими антителами, что обеспечивает повышенную презентацию опухолевых антигенов (см., например, НоШдег (1993) Ргос. №!1. Асаб. 8ск И8А 90: 6444-6448; РоЦак (1994) 8!гис!иге 2: 1121-1123).
Аутоиммунные реакции.
Антитела против ЬАС-3 могут вызывать и усиливать аутоиммунные реакции. Действительно, индукция противоопухолевых реакций с использованием опухолевой клетки и пептидных вакцин показывает, что многие противоопухолевые реакции включают антиаутореактивность (реакцию против аутоантигенов) (уап Екак е! а1. (2001) I. Ехр. Меб. 194: 481-489; 0уег\\рк, е! а1. (1999) Ргос. №·ιΐ1. Асаб. 8ск и.8.А. 96: 2982-2987; НигуП/, (2000), см. выше; КокепЬегд & ^Ы!е (1996) I. 1ттипо(кег ЕтрЬа818 Титог 1ттипо1 19 (1): 81-4). Следовательно, можно рассматривать применение блокады антителами против ЬАС-3 в сочетании с различными собственными белками для разработки протоколов вакцинации с целью эффективной выработки иммунных реакций против этих собственных белков для лечения заболевания. Например, болезнь Альцгеймера включает неадекватную аккумуляцию Ав пептида в амилоидных отложениях в головном мозге; антительный ответ на миелоид способен устранить эти амилоидные отложения (8сЬепк е! а1., (1999) №!иге 400: 173-177).
Другие собственные белки можно также использовать в качестве мишеней, таких как 1дЕ, для лечения аллергии и астмы, и Т№а для лечения ревматоидного артрита. Наконец, антительный ответ на различные гормоны можно индуцировать, применяя антитело против ЬАС-3. Нейтрализующий антительный ответ на репродуктивные гормоны можно использовать для контрацепции. Нейтрализующий антительный ответ на гормоны и другие растворимые факторы, необходимые для роста конкретных опухолей, также можно рассматривать как возможные мишени вакцинации.
Методы, аналогичные вышеописанным методам применения антитела против ЬАС-3, можно применять для индукции терапевтического аутоиммунного ответа с целью лечения пациентов с неадекватной аккумуляцией других аутоантигенов, такой как амилоидные отложения, включая Ав-пептид при болезни Альцгеймера, цитокины, такие как Т№а, и 1дЕ.
Вакцины.
Антитела против ЬАС-3 можно применять для стимуляции антигенспецифических иммунных реакций, используя совместное введение антитела против ЬАС-3 с целевым антигеном (например, вакцину). Соответственно, в другом аспекте изобретение включает метод усиления иммунного ответа на антиген у субъекта, заключающийся во введении субъекту: (ί) антигена; и (ίί) антитела против ЬАС-3, или его антигенсвязывающего участка, таким образом, чтобы иммунный ответ на антиген усиливался. Предпочтительно, антитело является человеческим антителом против человеческого ЬАС-3 (таким как любое из человеческих антител против ЬАС-3 по данному описанию). Помимо этого, или в качестве альтернативы, антитело может представлять собой химерное или гуманизированное антитело. Антиген может представлять собой, например, опухолевый антиген, вирусный антиген, бактериальный антиген или антиген из патогенна. Неограничивающие примеры таких антигенов включают антигены, обсуждавшиеся в предыдущем разделе, такие как опухолевые антигены (или опухолевые вакцины), обсуждавшиеся выше, или антигены из вирусов, бактерий или других патогенов, описанных выше.
Соответствующие пути введения композиций антитела (например, человеческих моноклональных антител, мультиспецифических (полиспецифических) и биспецифических молекул и иммуноконъюгатов) по изобретению ш νίνο и ш νίίτο общеизвестны в уровне техники, и их может выбирать рядовой специалист. Например, композиции антител можно вводить с помощью инъекции (например, внутривенной или подкожной). Соответствующие применяемые дозы молекул зависят от возраста и массы тела субъекта и концентрации и/или состава композиции антитела.
Как описывается выше, человеческие антитела против ЬАС-3 по изобретению можно вводить совместно с одним или более других терапевтических агентов, например с цитотоксическим агентом, радиотоксическим агентом или иммуносупрессором (иммунодепрессантом). Антитело может быть связано с агентом (в виде иммунокомплекса) или его можно вводить отдельно от агента. В последнем случае (раздельное введение) антитело можно вводить до, после введения агента или одновременно с введением агента или его можно вводить совместно с другими терапевтическими средствами, например с противораковой терапией, например облучением. Такие терапевтические агенты включают, среди прочего, противоопухолевые агенты, такие как доксорубицин (адриамицин), цисплатин, блеомицина сульфат, кармустин, хлорамбуцил, дакарбазин и циклофосфамид, гидроксимочевина, которые самостоятельно эффективны только при уровнях, токсических или субтоксических для пациента. Цисплатин вводят внутривенно в виде дозы 100 мг/мл один раз в четыре недели, а адриамицин вводят внутривенно в виде дозы 60-75 мг/мл раз через 21 день. Совместное введение человеческих антител против ЬАС-3 или их антигенсвязывающих фрагментов по настоящему изобретению с химиотерапевтическим агентом обеспечивает два противораковых агента, которые действуют по различным механизмам, это оказывает цитотоксическое действие на человеческие опухолевые клетки. Такое совместное введение позволяет решить проблемы, вызванные развитием резистентности к лекарствам или изменением антигенности опухолевых клеток,
- 32 023032 которые могли бы сделать их нереакционноспособными в отношении антитела.
Также в объём настоящего изобретения входят наборы, содержащие композиции антител по изобретению (например, человеческих антител, биспецифических или мультиспецифических молекул или иммуноконъюгатов) и инструкции для применения. Кроме того, набор может содержать дополнительный реагент или одно или более дополнительных человеческих антител по изобретению (например, человеческое антитело, имеющее дополнительную активность, которое связывается с эпитопом на ЬАС-3 антигене, отличным от первого человеческого антитела). Наборы, как правило, включают этикетку, указывающую на предполагаемое применение содержимого набора. Термин этикетка включает любую документацию или письменный материал, поставляемые на наборе или с набором, или иным способом сопровождающие набор.
Комбинированная терапия.
В другом аспекте изобретение включает метод комбинированной терапии, в котором антитело против ЬАС-3 вводят совместно с одним или более дополнительных антител, эффективно стимулирующих иммунный ответ, тем самым дополнительно усиливают, стимулируют или апрегулируют иммунный ответ у субъекта. Например, изобретение включает метод стимуляции иммунного ответа у субъекта, заключающийся во введении субъекту антитела против ЬАС-3 и одного или более дополнительных иммуностимулирующих антител, таких как антитело против ΡΌ-1, антитело против ΡΌ-Ы и/или антитело против СТЬА-4, таким образом, чтобы у субъекта стимулировался иммунный ответ, например, ингибировался рост опухоли или стимулировался антивирусный ответ. В одном варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬАС-3 и антитело против ΡΌ-1. В другом варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬАС-3 и антитело против ΡΌ-Ы. Ещё в одном варианте изобретения субъекту вводят антитело против ЬАС-3 и антитело против СТЬА-4. В одном варианте изобретения антитело против ЬАС-3 представляет собой человеческое антитело, такое как антитело по данному раскрытию. Или же антитело против ЬАС-3 может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из мышиного тАЪ против ЬАС-3). В другом варианте изобретения по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело (например, антитело против ΡΌ-1, против ΡΌ-Ы и/или против СТЬА-4) представляет собой человеческое антитело. Или же по меньшей мере одно дополнительное иммуностимулирующее антитело может представлять собой, например, химерное или гуманизированное антитело (например, полученное из мышиного антитела против ΡΌ-1, против ΡΌ-Ы и/или против СТЬА-4).
В одном варианте настоящее изобретение включает метод лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), заключающийся во введении антитела к ЬАС-3 и антитела к СТЬА-4. В других вариантах изобретения антитело против ЬАС-3 вводят в субтерапевтической дозе, антитело против СТЬА-4 вводят в субтерапевтической дозе, или оба антитела вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте изобретения настоящее изобретение включает метод изменения побочных явлений, ассоциированных с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, содержащий введение антитела против ЬАС-3 и субтерапевтической дозы антитела против СТЬА-4 субъекту. В некоторых вариантах изобретения антитело против СТЬА-4 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью 10Ό1 (описанное в опубликованной международной патентной заявке РСТ \УО 01/14424), а антитело против ЬАС-3 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5 по данному описанию. Другие антитела против СТЬА-4, охватываемые методами по настоящему изобретению, включают, например, антитела, раскрываемые в: международных патентных заявках \УО 98/42752; \УО 00/37504; патенте США № 6207156; 11ип\П/ е! а1. (1998) Ρϊος. №И. Асаб. δοΐ. И8А 95(17): 10067-10071; СатасЬо е! а1. (2004) ί. СЬп. Опсо1оду 22(145): АЪδ!^ас! № 2505 (антитело СР-675206); и Μοку^ е! а1. (1998) Сапсег ^δ. 58: 5301-5304. В некоторых вариантах изобретения антитело против СТЬА-4 связывается с человеческим СТЬА-4 с Кс 5х 10-8 М или менее, связывается с человеческим СТЬА-4 с Кс 1х 10-8 М или менее, связывается с человеческим СТЬА-4 с Кс 5х10-9 М или менее или связывается с человеческим СТЬА-4 с Кс от 1х10-8 М до 1х10-10 М или менее.
В одном варианте настоящее изобретение включает метод лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), заключающийся во введении антитела к ЬАС-3 и антитела к ΡΌ-1. В других вариантах изобретения антитело против ЬАС-3 вводят в субтерапевтической дозе, антитело против ΡΌ-1 вводят в субтерапевтической дозе, или оба антитела вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте изобретения настоящее изобретение включает метод изменения побочных явлений, ассоциированных с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, содержащий введение антитела против ЬАС-3 и субтерапевтической дозы антитела против ΡΌ-1 субъекту. В некоторых вариантах изобретения субъектом является человек. В некоторых вариантах изобретения антитело против ΡΌ-1 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью и антитело против ЬАС-3 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5 по данному описанию. Примеры антител против ΡΌ-1 с человеческой последовательностью включают антитела 17Ό8, 2Ό3, 4Н1, 5С4 и 4А11, описанные в опублико- 33 023032 ванной международной патентной заявке РСТ \У0 06/121168. В некоторых вариантах изобретения антитело против ΡΌ-1 связывается с человеческим ΡΌ-1 с Кс 5х 10-8 М или менее, связывается с человеческим ΡΌ-1 с Кс 1х10-8 М или менее, связывается с человеческим ΡΌ-1 с Кс 5х10-9 М или менее или связывается с человеческим ΡΌ-1 с величиной Кс между 1х 10-8 М и 1х 10-10 М или менее.
В одном варианте настоящее изобретение включает метод лечения гиперпролиферативного заболевания (например, рака), заключающийся во введении антитела к ЬАС-3 и антитела к ΡΌ-Ы. В других вариантах изобретения антитело против ЬАС-3 вводят в субтерапевтической дозе, антитело против ΡΌЬ1 вводят в субтерапевтической дозе, или оба антитела вводят в субтерапевтической дозе. В другом варианте изобретения настоящее изобретение включает метод изменения побочных явлений, ассоциированных с лечением гиперпролиферативного заболевания иммуностимулирующим агентом, содержащий введение антитела против ЬАС-3 и субтерапевтической дозы антитела против ΡΌ-Ы субъекту. В некоторых вариантах изобретения субъектом является человек. В некоторых вариантах изобретения антитело против ΡΌ-Ы представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью и антитело против ЬАС-3 представляет собой моноклональное антитело с человеческой последовательностью, такое как 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 или 17Е5 по данному описанию. Примеры антител против ΡΌ-Ы с человеческой последовательностью включают антитела 3С10, 12А4, 10А5, 5Р8, 10Н10, 1В12, 7Н1, 11Е6, 12В7 и 13С4, описанные в опубликованной международной патентной заявке РСТ \У0 07/005874. В некоторых вариантах изобретения антитело против ΡΌ-Ы связывается с человеческим ΡΌЬ1 с Кс 5х10-8 М или менее, связывается с человеческим ΡΌ-Ы с Кс 1 х 10-8 М или менее, связывается с человеческим ΡΌ-Ы с Кс 5х10-9 М или менее или связывается с человеческим ΡΌ-Ы с величиной Кс между 1 х 10-8 М и 1 х 10-10 М или менее.
Блокада ЬАС-3 и одного или более вторых целевых антигенов, таких как СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы антителами, может усилить иммунный ответ на раковые клетки у пациента. Раковые клетки, рост которых может ингибироваться с помощью антител по настоящему раскрытию, включают раковые клетки, как правило, отвечающие на иммунотерапию. Репрезентативные примеры раковых заболеваний для лечения комбинированной терапией по настоящему раскрытию включают раковые заболевания, конкретно перечисленные выше при обсуждении монотерапии с помощью антител против ЬАС-3.
В некоторых вариантах изобретения комбинацию терапевтических антител, обсуждаемую в данном описании, можно вводить одновременно в виде единой композиции в фармацевтически приемлемом носителе, или одновременно в виде раздельных композиций с каждым антителом в фармацевтически приемлемом носителе. В одном варианте изобретения комбинацию терапевтических антител можно вводить последовательно. Например, антитело против СТЬА-4 и антитело против ЬАС-3 можно вводить последовательно, таким образом, что антитело против СТЬА-4 вводится первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, или антитело против ЬАС-3 вводится первым, а антитело против СТЬА-4 вторым. Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело против ΡΌ-1 и антитело против ЬАС-3 можно вводить последовательно, так что антитело против ΡΌ-1 вводится первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, или антитело против ЬАС-3 вводится первым, а антитело против ΡΌ-1 вторым. Помимо этого или в качестве альтернативы, антитело против ΡΌ-Ы и антитело против ЬАС-3 можно вводить последовательно, так что антитело против ΡΌ-Ы вводится первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, или антитело против ЬАС-3 вводится первым, а антитело против ΡΌ-Ы вторым.
Далее, если более одной дозы комбинированного терапевтического препарата вводят последовательно, порядок последовательного введения можно изменить на обратный или оставить тот же самый порядок введения в каждой временной точке, последовательное введение можно совмещать с одновременным введением или использовать любую их комбинацию. Например, первое введение комбинации антитела против СТЬА-4 и антитела против ЬАС-3 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причём антитело против СТЬА-4 вводят первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, а третье введение может быть последовательным, причём антитело против ЬАС-3 вводят первым, а антитело против СТЬА-4 вторым, и т.д. Помимо этого или в качестве альтернативы, первое введение комбинации антитела против ΡΌ-1 и антитела против ЬАС-3 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причём антитело против ΡΌ-1 вводят первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, а третье введение может быть последовательным, причём антитело против ЬАС-3 вводят первым, а антитело против ΡΌ-1 вторым, и т.д. Помимо этого или в качестве альтернативы, первое введение комбинации антитела против ΡΌ-Ы и антитела против ЬАС-3 может быть одновременным, второе введение может быть последовательным, причём антитело против ΡΌ-Ы вводят первым, а антитело против ЬАС-3 вторым, а третье введение может быть последовательным, причём антитело против ЬАС-3 вводят первым, а антитело против ΡΌ-Ы вторым, и т.д. Другая типичная схема введения лекарственного средства может включать первое введение, являющееся последовательным, причём антитело против ЬАС-3 вводят первым, а антитело против СТЬА-4 (и/или против ΡΌ-1 и/или против ΡΌ-Ы) вторым, а последующие введения могут быть одновременными (конкурентными).
Необязательно, комбинацию антитела против ЬАС-3 и одного или более дополнительных антител (например, антител против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы) можно далее объединять с
- 34 023032 иммуногенным агентом, таким как раковые клетки, очищенные опухолевые антигены (включая молекулы рекомбинантных белков, пептидов и углеводов), клетки и клетки, трансфецированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины (Не е1 а1. (2004) ί. 1ттипо1. 173: 4919-28). Неограничивающие примеры опухолевых вакцин, которые можно использовать, включают пептиды или меланомные антигены, такие как пептиды белка др100, МАСЕ антигенов, Тгр-2, МАКТ1 и/или тирозиназы, или опухолевые клетки, трансфецированные таким образом, чтобы экспрессировать цитокин СМ-С8Е (подробнее обсуждающийся ниже). Комбинированную блокаду ЬАС-3 и СТЬА-4 и/или ΡΌ-1 и/или ΡΌ-Ы можно далее совмещать с протоколом вакцинации, таким как любой из протоколов вакцинации, подробно обсуждавшихся выше при описании монотерапии антителами против ЬАС-3.
Комбинированную блокаду ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы можно далее совмещать со стандартными противораковыми терапевтическими средствами. Например, комбинированную блокаду ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы можно далее совмещать с химиотерапевтическими схемами. В этих случаях возможно снизить дозу другого химиотерапевтического реагента, вводимого с комбинацией по настоящему раскрытию (Мокуг е1 а1. (1998) Сапсег Кекеагсй 58: 5301-5304). Примером такой комбинации является комбинация антител против ЬАС-3 и антител против СТЬА-4, и/или антител против ΡΌ-1, и/или антител против ΡΌ-Ы в сочетании с дакарбазином для лечения меланомы. Другим примером является комбинация антител против ЬАС-3 и антител против СТЬА-4, и/или антител против ΡΌ1, и/или антител против ΡΌ-Ы в сочетании с интерлейкином-2 (1Ь-2) для лечения меланомы. Научным объяснением комбинированного применения блокады ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы совместно с химиотерапией является то, что гибель клеток, являющаяся следствием цитотоксического действия большинства химиотерапевтических соединений, должна вызвать повышенные уровни опухолевого антигена на пути презентации антигена. Другие виды комбинированной терапии, которые в комбинации с комбинированной блокадой ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы могут оказывать синергическое действие за счёт гибели клеток, включают облучение, хирургическую операцию или гормональную депривацию. Каждый из этих протоколов создаёт источник опухолевого антигена в организме хозяина. Ингибиторы ангиогенеза также можно сочетать с блокадой ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы. Ингибирование ангиогенеза приводит к смерти опухолевых клеток, что может обеспечить поступление (подпитку) опухолевого антигена на пути презентации антигена хозяина.
Комбинацию блокирующих антител к ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы можно также применять в сочетании с биспецифическими антителами, которые нацеливают эффекторные клетки, экспрессирующие Еса или Есу рецептор, на опухолевые клетки (см., например, патенты США №№ 5922845 и 5837243). Биспецифические антитела можно применять для нацеливания на два отдельных антигена. Тклеточная составляющая (плечо) этих ответов усиливается при использовании комбинированной блокады ЬАС-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы.
В другом примере комбинацию антител против ЬАС-3 и против СТЬА-4, и/или антител против ΡΌ1, и/или антител против ΡΌ-Ы можно использовать в сочетании с противоопухолевыми антителами, такими как ритуксан® (ритуксимаб), герцептин® (трастузумаб), бексар (Веххаг®, тозитумомаб), зевалин® (ибритумомаб), КЭМПАС (СатраГй®, алемтузумаб), Ьутрйоабе® (эпратузумаб), авастин® (бевацизумаб) и тарцева (Тагсеуа®, эрлотиниб) и т.п. В качестве примера и не желая связывать себя теорией, лечение противораковым антителом или противораковым антителом, конъюгированным с токсином, может вызвать смерть раковых клеток (например, опухолевых клеток), что могло бы усиливать иммунный ответ, опосредованный СТЬА-4, ΡΌ-1, ΡΌ-Ы или ЬАС-3. Типичный пример лечения гиперпролиферативного заболевания (например, раковой опухоли) может включать противораковое антитело в комбинации с антителами против ЬАС-3 и антителами против СТЬА-4, и/или антителами против ΡΌ-1, и/или антителами против ΡΌ-Ы одновременно или последовательно или в комбинации одновременного и последовательного введения, что может усиливать противоопухолевый иммунный ответ хозяина.
Опухоли уклоняются от иммунного контроля, используя целый ряд механизмов. Многие из этих механизмов можно преодолеть с помощью инактивации белков, которые экспрессируются опухолями и которые обладают иммуносупрессорной активностью. Эти белки включают, среди прочих, ТСЕ-β (Кейг1 еГ а1. (1986) I. Ехр. Меб. 163: 1037-1050), 1Ь-10 (Иомагб & 0'Сагга (1992) 1ттипо1оду Тобау 13: 198-200), и Еак лиганд ®айпе еГ а1. (1996) 8аепсе 274: 1363-1365). В другом примере антитела к каждой из этих структур можно далее объединять с комбинацией антител против ЬАС-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы для противодействия действию иммуносупрессора и содействия иммунному ответу хозяина на опухоль.
С комбинацией антител против ЬАС-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы можно дополнительно применять другие антитела, которые активируют иммунный ответ хозяина. Эти антитела включают молекулы на поверхности дендритных клеток, которые активируют ЭС функцию и презентацию антигена. Антитела против СГО40 (К1бде еГ а1., см. выше) могут применяться в сочетании с комбинацией антител против ЬАС-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы (1Го еГ а1., см. выше (2000). Другие активирующие антитела к костимуляторным молекулам Т-клеток (ХУетЬегд еГ а1., см. выше, Ме1его еГ а1.,см. выше, Ηυ^ΓΓ еГ а1. (1999), см. выше), также могут обеспечивать повышен- 35 023032 ный уровень активации Т-клеток.
Как обсуждается выше, в настоящее время трансплантация костного мозга применяется для лечения различных опухолей гемопоэтического происхождения. Комбинированную блокаду ЬАО-3 и СТЬА4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы можно применять для повышения эффективности пересаженных донорских опухолеспецифических Т-клеток.
Имеются также некоторые экспериментальные протоколы лечения, которые включают ех νί\Ό активацию и экспансию антиген-специфических Т-клеток и адоптивный перенос этих клеток реципиентам с целью стимулировать антиген-специфические Т-клетки против опухоли (ОгеепЬегд & Ктббей, см. выше). Эти методы также можно применять для активации Т-клеточных реакций на инфекционные агенты, такие как СМУ. Можно предполагать, что ех νί\Ό активация в присутствии антител против ЬАО-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы может повысить частоту и активность адоптивно перенесённых Т-клеток.
Некоторые варианты настоящего изобретения включают метод изменения побочного явления, ассоциированного с лечением гиперпролиферативного заболевания (например, рака) иммуностимулирующим агентом, содержащий введение субъекту антитела против ЬАО-3 и субтерапевтической дозы антитела против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы. Например, методы по настоящему изобретению включают метод снижения частоты колита или диареи, вызываемых иммуностимулирующим терапевтическим антителом, введением пациенту не всасываемого в ЖКТ стероида. Так как у любого пациента, получающего иммуностимулирующее терапевтическое антитело, имеется повышенный риск появления колита или диареи, вызываемых таким антителом, для всей этой группы пациентов применима терапия методами по настоящему изобретению. Хотя стероиды применяются для лечения воспалительного заболевания кишечника (ΙΒΌ) и для предупреждения рецидива (обострения) ΙΒΌ, их можно применять для предупреждения (снижения частоты) ΙΒΌ у пациентов, которым не поставлен диагноз ΙΒΌ. Заметные побочные эффекты, обусловленные стероидами, даже невсасываемыми стероидами, препятствуют их применению с целью профилактики.
В других вариантах комбинация блокады ЬАО-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы (т.е. иммуностимулирующие терапевтические антитела против ЬАО-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы) можно дополнительно комбинировать с применением невсасываемого стероида. Термин невсасываемый стероид означает глюкокортикоид, у которого наблюдается интенсивный пресистемный метаболизм, при котором после метаболизма в печени биодоступность стероида является низкой, а именно ниже, примерно 20%. В одном варианте изобретения невсасываемый стероид представляет собой буденозид. Буденозид представляет собой глюкокортикостероид местного действия, который после перорального приёма подвергается интенсивному метаболизму в печени. ЕЭТОСОКТ ЕС® (А§1га-2епеса) представляет собой рН- и время-зависимый пероральный препарат буденозида, разработанный таким образом, чтобы оптимизировать доставку лекарства в подвздошную кишку и на всём протяжении толстой кишки. Препарат ЕNТΟСΟΚТ ЕС® одобрен в США для лечения болезни Крона в степени от слабой до умеренной, затрагивающей подвздошную кишку и/или прилегающую толстую кишку. Обычная пероральная доза ЕЭТОСОКТ ЕС® для лечения болезни Крона составляет 6-9 мг/день. ЕЭТОСОКТ ЕС® высвобождается в кишечнике перед тем, как он всасывается и сохраняется в слизистой кишечника. При прохождении целевой ткани слизистой кишечника ЕNТΟСΟΚТ ЕС® подвергается интенсивному метаболизму под действием системы цитохрома Р450 в печени до метаболитов с незначительной глюкокортикоидной активностью. Поэтому биодоступность является низкой (около 10%). В результате низкой биодоступности терапевтический индекс буденозида является низким по сравнению с другими глюкокортикоидами с менее интенсивным пресистемным метаболизмом. Буденозид вызывает меньше побочных эффектов, включая меньшую гипоталамо-гипофизарную недостаточность, чем у системных стероидов. Однако постоянное применение ЕкГОСОКТ ЕС® может вызвать системные глюкокортикоидные эффекты, такие как гиперкортицизм и подавление функции надпочечников. См. ΡΌΚ 58'1' еб. 2004; 608610.
В других вариантах изобретения комбинация блокады ЬАО-3 и СТЬА-4, и/или ΡΌ-1, и/или ΡΌ-Ы (т.е. иммуностимурующие терапевтические антитела против ЬАО-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ1, и/или против ΡΌ-Ы) в сочетании с применением невсасываемого стероида можно далее комбинировать с салицилатом. Салицилаты включают агенты 5-А8А, например, такие как сульфасалазин (А2ИЬΡΙΌΙΝΒ®, РЬагтааа & Ир1оЬп); осалазин (Э1РЕетиМ®, РЬагтааа & Ьр1оЬп); балсалазид (СОЬА2АЬ, 8аЬх РЬагтасеиЬсак, Шс.) и месаламин (А8АСОЬ®, Ргос!ег & ОатЬ1е РЬагтасеиЬсак; РЕЭТА8А®, 81нге И8; САNА8А®, Ахсап 8сапб1рЬагт, Шс.; КО^А8А®, 8окау).
В соответствии с методами по настоящему изобретению схема применения салицилата, вводимого в комбинации с антителами против ЬАО-3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы и невсасываемым стероидом, может включать любое перекрывающееся (по времени) или последовательное введение салицилата и невсасываемого стероида с целью снижения частоты колита, вызываемого иммуностимулирующими антителами. Так, например, методы снижения частоты заболевания колитом, вызванным иммуностимулирующими антителами по настоящему изобретению, охватывают введения
- 36 023032 салицилата и невсасываемого стероида одновременно или последовательно (например, салицилат вводят через 6 ч после невсасываемого стероида) или в любой их комбинации. Далее в соответствии с настоящим изобретением салицилат и невсасываемый стероид можно вводить тем же путём (например, оба вводятся перорально) или различными путями (например, салицилат вводят перорально, а невсасываемый стероид вводят ректально), которые могут отличаться от пути(путей) введения антител против ЬАС3 и против СТЬА-4, и/или против ΡΌ-1, и/или против ΡΌ-Ы.
Настоящее изобретение иллюстрируется далее нижеприведёнными примерами, которые не следует рассматривать как дополнительно ограничивающие. Содержание всех фигур и всех ссылочных материалов, последовательностей из СепЬапк, патентов и опубликованных патентных заявок однозначно вводится в данное описание в качестве ссылки. В частности, раскрытие опубликованных международных заявок РСТ \У0 09/045957, \У0 09/073533, \У0 09/073546 и \У0 09/054863 однозначно вводится в данное описание в качестве ссылки.
Пример 1. Получение человеческих моноклональных антител против ЬАС-3.
Человеческие моноклональные антитела против ЬАС-3 получают от трансгенных мышей, которые экспрессируют гены антител, как указано ниже.
Антигены.
Слитые белки рекомбинантного человеческого ЬАС-3 используют в качестве иммуногена для выработки антител против человеческого ЬАС-3. В некоторых схемах иммунизации в качестве иммуногена используют слитый белок, содержащий полную внеклеточную область (домены 1-4) человеческого ЬАС3, слитую с Рс доменом человеческого иммуноглобулина (Κ&Ό 8у8!ет8, ΟιΙη1ο§ #2319-Ь3) (Ό1-Ό4 ЬРс) или Рс доменом мышиного иммуноглобулина (Ό1-Ό4 тРс). В других схемах иммунизации в качестве иммуногена используют слитый белок, содержащий только первые два внеклеточных домена человеческого ЬАС-3, слитые с Рс доменом мышиного иммуноглобулина (Ό1-Ό2 тРс). Слитые белки ЬАС-3 получают обычными методами рекомбинантной ДНК.
Линии трансгенных транс-хромосомных мышей КМ Μοи8е™ и КМ/РССК2Э.
Μοи8е™.
Полностью человеческие моноклональные антитела к человеческому ЬАС-3 получают от мышей трансгенных транс-хромосомных линий КМ Μοи8е™ и КМ/РССК2Э Μοи8е™, которые экспрессируют гены человеческих антител.
У мышей линии КМ Μοи8е™ эндогенный мышиный ген лёгкой цепи к подвергают гомозиготной дизрупции, как описано в СЬеп е! а1. (1993) ЕМВ0 I. 12: 811-820, а эндогенный мышиный ген тяжёлой цепи подвергают гомозиготной дизрупции, как описано в примере 1 опубликованной патентной заявки РСТ \У0 01/09187. Помимо этого, эта линия мышей несёт трансген человеческой лёгкой цепи к, КСо5, описанный в Εί8ΐι\νί1ύ е! а1., см. выше. Мыши этой линии несут также транс-хромосому §С20, которая имеет локус тяжёлой цепи человеческого 1д, как описано в опубликованной международной заявке РСТ \У0 02/43478. Линия КМ/РССР2О Μοи8е™ аналогична линии КМ Μοи8е™ за исключением того, что её геном также содержит гомозиготную дизрупцию эндогенного гена РсуРПВ. Линии мышей КМ Μοи8е™ и КМ/РССР2О Μοи8е™ подробно описаны также в опубликованной патентной заявке США № 20020199213.
Иммунизация мышей линий КМ Μοи8е™ и КМ/РССК2Э Μοи8е™.
Чтобы получить полностью моноклональные антитела к ЬАС-3, мышей линий КМ Μοи8е™ и КМ/РССР2П Μοи8е™ иммунизируют одним из трёх описанных выше различных слитых белков рекомбинантного ЬАС-3 (Ό1-Ό4 ЬРс, Ό1-Ό4 тРс, Ό1-Ό2, тРс). Общие схемы иммунизации описаны в ^пЬе^ е! а1. (1994), см. выше; Εί8ΐι\γί1ύ е! а1., см. выше; и в опубликованной международной заявке РСТ \У0 98/24884. Перед первой инфузией антитела возраст мышей составляет 6-16 недель. Мышей иммунизируют интраперитонеально (в брюшную полость) (ΙΡ) и/или подкожно (§С). Мышей иммунизируют раз в две недели четыре раза, вводя 10 мкг слитого белка рекомбинантного ЬАС-3, затем дважды иммунизируют, вводя 20 мкг того же иммуногена, используя ЫЫ в качестве адъюванта. Иммунный ответ контролируют, отбирая пробу крови из ретроорбитального синуса. Скрининг плазмы проводят методом ЕЫ8А (как описано ниже), и мышей с удовлетворительными титрами анти-ЬАС-3 человеческого иммуноглобулина используют для слияний. Мышам внутривенно и интраперитонеально вводят бустерную дозу 20 мкг антигена с последующим внутривенным введением бустерной дозы 20 мкг антигена, затем умерщвляют и удаляют селезёнку.
Отбор мышей КМ и КМ/РССР2П, продуцирующих антитела против ЬАС-3.
Для отбора мышей, продуцирующих антитела, связывающие белок ЬАС-3, сыворотку мышей, иммунизированных слитым белком Ό1-4 ЬРс, тестируют модифицированным методом ЕЫ8А, как первоначально описано Εΐ8Ηνι1ά е! а1. (1996). Коротко говоря, на микротитрационных планшетах иммобилизуют слитый белок рекомбинантного ЬАС-3 с концентрацией 1 мкг/мл в ΡΒ§, 50 мкл/лунка, инкубируют при 4°С в течение ночи, затем блокируют с 200 мкл/лунка 5% В8А в ΡΒ§. Разведения плазмы мышей, иммунизированных ЬАС-3, добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 1-2 ч при комнатной температуре. Планшеты отмывают в ΡΒ§/Т№ееη, а затем инкубируют с поликлональным антителом козы против
- 37 023032 лёгкой цепи к человеческого иммуноглобулина, конъюгированным с пероксидазой хрена (НКР), 1 ч при комнатной температуре. Планшеты отмывают, обрабатывают субстратом АВТЗ и анализируют на спектрофотометре при 0Ό 405.
Сыворотку мышей, иммунизированных слитыми белками Ό1-Ό4 тРс или Ό1-Ό2 тРс, анализируют непрямым методом ЕЫЗА, используя антитело козы против мышиного 1дО для иммобилизации на планшетах в течение 1 ч перед иммобилизацией антигена для того, чтобы исключить неспецифическое связывание с мышиным Рс участком. Затем проводят те же стадии ЕЫЗА, которые описаны выше.
Мышей, которых обрабатывали наивысшими титрами антител против ЬАО-3, используют для слияний. Слияния осуществляют как описано ниже, а супернатанты гибридомных клеток испытывают на активность против ЬАО-3 методом ЕЫЗА.
Получение гибридомных клеток, продуцирующих человеческие моноклональные антитела против белков ЬАО-3.
Мышиные спленоциты, выделенные из мышей КМ или КМ/РСОК2О, сливают методом электрослияния под действием электрического поля, используя электропоратор с большими кюветными камерами для слияния клеток Су!о Ри1ке (Су!о Ри1ке Заепсек, 1пс., О1еп Вште, МО) для линии клеток мышиной миеломы. Полученные гибридомы затем подвергают скринингу на продукцию антиген-специфических антител. Суспензии одиночных клеток лимфоцитов селезёнки иммунизированных мышей сливают с одной четвёртой частью от числа Р3Х63 Ад8.6.53 (АТСС СКЬ 1580) несекретирующих миеломных клеток мыши. Клетки засевают при плотности примерно 1х105/лунка в плоскодонный микротитрационный планшет, а затем около двух недель инкубируют в селективной среде, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки, дополненной геном оп (ЮЕИ) в КРМ1, Ь-глутамином, пируватом натрия, НЕРЕЗ, пенициллином, стрептамицином, гентамицином, 1хНАТ и β-меркаптоэтанолом. Через 1-2 недели клетки культивируют в среде, в которой НАТ заменяют на НТ. Затем отдельные лунки подвергают скринингу методом ЕЫЗА (описанным выше) на человеческие моноклональные 1дО антитела против ЬАО-3. Когда начинается интенсивный рост гибридом, обычно через 10-14 дней, контролируют среду. Гибридомы, секретирующие антитела, пересевают, снова подвергают скринингу и, если они всё ещё позитивны в отношении человеческого 1дО, моноклональные антитела против ЬАО-3 субклонируют, по меньшей мере, дважды методом серийных разведений. Стабильные субклоны затем культивируют ш уйго для получения малых количеств антитела в тканевой культуральной среде для дальнейшего изучения.
Клоны гибридомных клеток 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 отбирают для дальнейшего анализа и секвенирования.
Пример 2. Структурные характеристики человеческих моноклональных антител против ЬАО-3 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7,11Р2 и 17Е5.
Последовательности кДНК, кодирующие вариабельные области тяжёлой и лёгкой цепей тАЬк, экспрессируемых клонами 25Р7, 26Н10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5, описанными в примере 1, секвенируют в соответствии со следующим протоколом. Тотальную РНК получают, используя 5х106 гибридомных клеток с применением набора КЫеаку Мни Κι! ^адеп, Уа1епс1а, СА). кДНК получают в соответствии с протоколом 5'-КАСЕ с набором для амплификации кДНК ЗМАКТ КАСЕ сЭНА Атрййса!юп Κι! (С1оп!есЬ ЬаЬога!опек, 1пс., Моийаш У1е\у, СА) и Зирегкспр! II обратной транскриптазой (1пуйгодеп, Саг1кЬаб, СА). У-области каждого антитела амплифицируют, используя 3' праймер, к человеческой константной области 3' праймер, специфический к константной области человеческого иммуноглобулина, в паре с 5' КАСЕ универсальной смесью праймеров. Продукты ПЦР, содержащие У-область, клонируют в вектор рСК4Т0Р0 (ЫуПгодеп, Саг1кЬаб, СА) и переносят в штамм Е. сой ТОР10 (ЫуПгодеп, Саг1кЬаб, СА). Готовят образцы либо ДНК тЫргер, либо ТетрйрЫ (ОЕ НеаЙЬсаге Вюкшепсек, Ршсайтау, Νί, ИЗА) и подвергают ДНК-секвенированию ДНК (Зецие1есй, Моийаш У1е\у, СА). Полученные последовательности ДНК анализируют на реаранжировки в рамке считывания и другие характеристики. Экпрессированные белки исследуют обычными методами химии белков. Найдено, что клоны 25Е3, 25Р7 и 26Н10 экспрессируют антитело, содержащее тяжёлую цепь и к лёгкую цепь [дО1, тогда как клоны 8В7 и 17Е5 экспрессируют антитело, содержащее тяжёлую цепь и каппа лёгкую цепь [8О4, а клон 11Р2 экспрессирует антитело, содержащее тяжёлую цепь и к лёгкую цепь ^ОЗ.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 25Р7 показаны на фиг. 1А и в ЗЕО ГО N0: 49 и 37 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи к 25Р7 показаны на фиг. 1В и в ЗЕО ГО N0: 55 и 43 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 25Р7 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 7) показывает, что тяжёлая цепь 25Р7 использует УН сегмент из человеческой зародышевой линии УН 4-34 (ЗЕО ГО N0: 61) и Ш сегмент из человеческой зародышевой линии Ш5Ь (ЗЕО ГО N0:62). Более подробный анализ последовательности 25Р7 УН С применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. 1А и в ЗЕО ГО N0: 1, 7 и 13 соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 25Р7 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 8) показывает, что лёгкая цепь к 25Р7
- 38 023032 использует Ук сегмент из человеческой зародышевой линии УКЬ6 (8Е0 ГО N0: 63) и 1К сегмент из человеческой зародышевой линии Ж2 (8Е0 ГО N0: 64). Более подробный анализ последовательности 25Р7 Ук с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 лёгкой цепи, показанные на фиг. 1В и в 8Е0 ГО N0: 19, 25 и 31 соответственно.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 26Н10 показаны на фиг. 2А и в 8Е0 ГО N0: 50 и 38 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи 26Н10 показаны на фиг. 2В и в 8Е0 ГО N0: 56 и 44 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 26Н10 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 9) показывает, что тяжёлая цепь 26Н10 использует Ун сегмент из человеческой зародышевой линии Ун 3-33 (8Е0 ГО N0: 65) и Ш сегмент из человеческой зародышевой линии Ш6В (8Е0 ГО N0: 66). Более подробный анализ последовательности 26Н10 Ун с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. 2А и в 8Е0 ГО N0: 2, 8 и 14 соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 26Н10 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 10) показывает, что лёгкая цепь к 26Н10 использует Ук сегмент из человеческой зародышевой линии УКА27 (8Е0 ГО N0: 67) и 1К сегмент из человеческой зародышевой линии ДК3 (8Е0 ГО N0: 68). Более подробный анализ последовательности 26Н10 Ук с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 лёгкой цепи, показанные на фиг. 2В и в 8Е0 ГО N0: 20, 26 и 32 соответственно.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 25Е3 показаны на фиг. 3А и в 8Е0 ГО N0: 51 и 39 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи 25Е3 показаны на фиг. 3В и в 8Е0 ГО N0: 57 и 45 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 25Е3 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 11) показывает, что тяжёлая цепь 25Е3 использует Ун сегмент из человеческой зародышевой линии Ун 3-20 (8Е0 ГО N0: 69) и Ш сегмент из человеческой зародышевой линии Ш4В (8Е0 ГО N0:70). Более подробный анализ последовательности 25Е3 Ун с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СОК1, СГОК2 и СГОК3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. 3А и в 8Е0 ГО N0: 3, 9 и ССУ соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 25Е3 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 12) показывает, что лёгкая цепь к 25Е3 использует УК сегмент из человеческой зародышевой линии УК Ь18 (8Е0 ГО N0: 71) и 1К сегмент из человеческой зародышевой линии Ж2 (8Е0 ГО N0: 64). Более подробный анализ последовательности 25Е3 УК с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 лёгкой цепи, показанные на фиг. 3В и в 8Е0 ГО N0: 21, 27 и 33 соответственно.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 8В7 показаны на фиг. 4А и в 8Е0 ГО N0: 52 и 40 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи 8В7 показаны на фиг. 4В и в 8Е0 ГО N0: 58 и 46 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 8В7 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 13) показывает, что тяжёлая цепь 8В7 использует Ун сегмент из человеческой зародышевой линии Ун 4-34 (8Е0 ГО N0: 61) и Ш сегмент из человеческой зародышевой линии Ш5В (8Е0 ГО N0: 62). Более подробный анализ последовательности 8В7 Ун с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СОК1, СГОК2 и СГОК3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. 4А и в 8Е0 ГО N0: 4, 10 и 16 соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 8В7 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 14) показывает, что лёгкая цепь к 8В7 использует УК сегмент из человеческой зародышевой линии УК Ь6 (8Е0 ГО N0: 63) и 1К сегмент из человеческой зародышевой линии Ж4 (8Е0 ГО N0: 72). Более подробный анализ последовательности 8В7 УК с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 лёгкой цепи, показанные на фиг. 4В и в 8Е0 ГО N0: 22, 28 и 34 соответственно.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 11Р2 показаны на фиг. 5А и в 8Е0 ГО N0: 53 и 41 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи 11Р2 показаны на фиг. 5В и в 8Е0 ГО N0: 59 и 47 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 11Р2 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 15) показывает, что тяжёлая цепь 11Р2 использует Ун сегмент из человеческой зародышевой линии Ун 1-24 (8Е0 ГО N0: 73), Ό сегмент из человеческой зародышевой линии 2-15 и Ш сегмент из человеческой зародышевой линии Ш 4В (8Е0 ГО N0: 70). Более подробный анализ последовательности 11Р2 Ун с применением системы КаЬа! определения области СОК позволяет изобразить области СГОКЕ СГОК2 и СГОК3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. 13А и в 8Е0 ГО N0: 5, 11 и 17 соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 11Р2 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 16) показывает, что лёгкая цепь к 11Р2 использует УК сегмент из человеческой зародышевой линии
- 39 023032
Ук Ьб (8Е0 ΙΌ N0: б3) и 1к сегмент из человеческой зародышевой линии Ж 1 (8Е0 ГО N0: 72). Более подробный анализ последовательности 11Р2 Ук с применением системы каЬа! определения области СЭР позволяет изобразить области СГОР1, СЭР2 и СГОР3 лёгкой цепи, показанные на фиг. 5В и в 8Е0 ГО N0:
23, 29 и 35 соответственно.
Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области тяжёлой цепи 17Е5 показаны на фиг. бА и в 8Е0 ГО N0: 54 и 42 соответственно. Нуклеотидная и аминокислотная последовательности вариабельной области лёгкой цепи 17Е5 показаны на фиг. бВ и в 8Е0 ГО N0: б0 и 48 соответственно. Сравнение последовательности тяжёлой цепи иммуноглобулина 17Е5 с известными последовательностями тяжёлой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 17) показывает, что тяжёлая цепь 17Е5 использует Ун сегмент из человеческой зародышевой линии Ун 3-33 (8Е0 ГО N0: б5), Ό сегмент из человеческой зародышевой линии 2-2 и 1И сегмент из человеческой зародышевой линии Ш 4В (8Е0 ГО N0: 70). Более подробный анализ последовательности 17Е5 Ун С применением системы каЬа! определения области СЭР позволяет изобразить области СЭР1, СЭР2 и СЭР3 тяжёлой цепи, показанные на фиг. бА и в 8Е0 ГО N0: б, 12 и 19 соответственно. Сравнение последовательности лёгкой цепи иммуноглобулина 17Е5 с известными последовательностями лёгкой цепи иммуноглобулина зародышевой линии (фиг. 18) показывает, что лёгкая цепь к 17Е5 использует Ук сегмент из человеческой зародышевой линии Ук Ьб (8Е0 ГО N0: б3) и 1к сегмент из человеческой зародышевой линии Ж 5 (8Е0 ГО N0: 75). Более подробный анализ последовательности 17Е5 Ук с применением системы каЬа! определения области СЭР позволяет изобразить области СГОРИ СГОР2 и СГОР3 лёгкой цепи, показанные на фиг. бВ и в 8Е0 ГО N0:
24, 30 и 3б соответственно.
Вариабельные области антител 25Р7, 2бН10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 можно превратить в полноразмерные антитела любого нужного изотипа стандартными методами рекомбинантной ДНК. Например, ДНК, кодирующую области Ун и Уъ, можно клонировать в экспрессирующий вектор, который несёт константные области тяжёлой и лёгкой цепей так, чтобы вариабельные области функционально связывались с константными областями. Или же для экспрессии полноразмерной тяжёлой цепи и полноразмерной лёгкой цепи можно применять раздельные векторы. Неограничивающие примеры применения экспрессирующих векторов для создания полноразмерных антител включают векторы р1Е, описанные в опубликованной патентной заявке США № 20050153394.
Пример 3. Характеристики связывающих свойств моноклональных антител против ЬАС-3.
В данном примере методом проточной цитометрии изучают связывание человеческих антител против ЬАС-3 с ЬАС-3 (человеческим, обезьяньим и мышиным ЬАС-3) клеточной поверхности. Помимо этого, изучают кинетику связывания с ЬАС-3 с применением оптического биосенсора В1АС0РЕ. Кроме того, проводят эпитопное картирование методом пептидного сканирования.
А. Исследование методом проточной цитометрии
1. Связывание клеток СНО-человеческий ЬАС-3.
Для проверки способности антител связываться с ЬАС-3 белком клеточной поверхности антитела инкубируют с линией клеток СНО, трансфецированной таким образом, чтобы экспрессировать человеческий ЬАС-3 на поверхности клетки. Делают серийные разведения моноклональных антител 25Р7, 2бН10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 в холодном 1хРРАЕ буфере (1хРВ8+2% РВ8, 0.02% азида натрия, 2мМ № ЕЭТА).
Для реакции связывания 50 мкл разведённого раствора антитела прибавляют к 50 мкл клеточной суспензии, содержащей 2х105 клеток, и смесь инкубируют на льду в течение 30 мин. Затем клетки отмывают дважды 1хРРАЕ буфером. Добавляют меченное ПТС антитело козы против лёгкой цепи к человеческого иммуноглобулина (Ве1ку1 ИаЬогаЮпек, 1пс., Са!. # А80-115Р) в разведении 1:100 и смесь инкубируют в течение 30 мин при 4°С, а затем дважды отмывают холодным 1хРРАЕ буфером. После последней отмывки к каждому раствору прибавляют 150 мкл холодного 1хРРАЕ буфера, содержащего 10 мкг/мл пропидия йодида (Коске АрркеД 8с1епсе, Са! #1348б39) и проводят анализ связывания антитела проточной цитометрией на проточном цитометре РАС8саПЬиг (ВЭ Вюкаепсе).
Результаты анализа с помощью проточной цитометрии суммированы ниже в табл. 1, в которой приводятся значения ЕС50 для связывания с СНО-человеческий ЬАС-3, показывающие, что антитела 25Р7, 2бН10, 25Е3, 8В7, 11Р2 и 17Е5 эффективно связываются с человеческим ЬАС-3 клеточной поверхности, причём значение ЕС50 антитела 25Р7 примерно в 20 раз ниже, чем ЕС50 для 25Е3, но приблизительно эквивалентно ЕС50 для антител 8В7 и 2бН10. Значения ЕС50 для 11Р2 и 17Е5 находятся в том же интервале, что и для 25Е3.
- 40 023032
Таблица 1
Связывание антител против ЬАО-3 с клетками СНО, экспрессирующими человеческий ЬАО-3
Антитело ЕС.ч| (нМ)
25Р7 0.45-2.52
8В7 1.93-4.44
26Н10 1.81-3,64
11Р2 15.12
25ЕЗ 14.9 - 25.39
17Е5 123
2. Связывание активированных человеческих СГО4' Т-клеток.
Для проверки способности антител связываться с нативным ЬАО-3 на поверхности активированных человеческих Т-клеток, покоящиеся СГО4' Т-клетки выделяют из очищенных мононуклеарных клеток периферической крови и подвергают стимуляции в течение трёх дней комбинацией антител против СГО3 и против ΤΌ28, фиксированных на полистирольных гранулах. Делают серийные разведения моноклональных антител 25Р7, 8В7 и 26Н10 в холодном 1хРРАЕ буфере (1хРВ8+2% РВ8, 0.02% азида натрия, 2 мМ № БОТА). Для реакции связывания 50 мкл разведённого раствора антитела смешивают с 50 мкл меченного РЕ антитела против человеческого СГО4 (ΒΌ Вюхиепсе, Са1 # 555347). Активированные Т-клетки обрабатывают в соответствии с приведённым выше протоколом. Анализ связывания антитела проводят, как описано выше.
Результаты анализа с помощью проточной цитометрии суммированы ниже в табл. 2, в которой приводятся значения ЕС50 для связывания с активированными человеческими СЭ4' Т-клетками, показывающие, что все три антитела аналогично связываются с человеческим ЬАО-3 клеточной поверхности.
Таблица 2
Связывание антител против ЬАО-3 с активированными человеческими СЭ4 Т-клетками
Антитело ЕС,,, 1нМ1
25Р7 0 27-045
26Н10 0.41-0.84
8В7 0.69-1.80
3. Связывание мышиного ЬАО-3 антигена.
Для того чтобы определить, вступают ли антитела против ЬАО-3 в перекрёстную реакцию с мышиным ЬАО-3, последовательность кДНК клонируют методом КТ-РСК с использованием препарата пула кДНК, полученной обратной транскрипцией РНК из коллекции тканевых образцов макак циномолгус и резус. Последовательность сначала амплифицируют с использованием пула кДНК с помощью праймеров (5' прямой праймер: 5Мсуп1408; 5'-а1д1дддаддс1сад11сс1д-3' (8ЕЦ ГО N0: 91) и 3' обратный праймер: 3Мсуп1408а; 5'-д1сададс1дс1ссддс1с-3' (8ЕЦ ГО N0: 92)) с применением обогащенной ОС ПЦРамплификационной системы (Косйе) и клонируют в ТОРО клонирующий вектор реципиента (1пуйгодеп) для анализа последовательности. Клоны, соответствующие эталонной последовательности ЬАО-3 макакрезус в ОепЬапк (ОепЬапк Ассеххюп №. ХМ_001108923), затем повторно амплифицируют при использовании клонирующего ДНК вектора ТОРО с применением второго набора праймеров, которые вводят сайты рестриктаз для направленного клонирования в векторе, экспрессирующем в клетках млекопитающего.
Клон ра23-5 с обезьяньим ЬАО-3 выделяют и секвенируют. Выделенная обезьянья последовательность на 99,6% идентична эталонной последовательности ЬАО-3 макак-резус в ОепЬапк. Сравнение аминокислотной последовательности кДНК клона ра23-3 (8ЕЦ ГО N0: 93) с последовательностью ЬАО-3 макак-резус (8ЕЦ ГО N0: 94) из ОепЬапк (Ассеххюп №. ХМ_001108923) показано на фиг. 19. Две последовательности идентичны за исключением одного аминокислотного различия в положении 419 (аргинин в клоне ра23-5 по сравнению с треонином в последовательности макак-резус в ОепЬапк), и на основании этого делают вывод, что кДНК клон ра23-5 представляет собой последовательность гена ЬАО-3 макакрезус.
кДНК клона ра23-5 вводят в экспрессирующую конструкцию, которую трансфецируют суспензию клеток СНО-8 с помощью нуклеофекции (Атаха). Экспрессию ЬАО-3 макак-резус отсортированными, отобранными по устойчивости к лекарствам клонами проверяют ЕАС8 анализом. Эту клональную СНОклеточную линию, сверхэкспрессирующую ЬАО-3 макак-резус, используют в ЕАС8 анализах, аналогичных описанным выше, для количественного определения перекрёстной реактивности к обезьяньему белку. Коротко говоря, делают серийные разведения моноклональных антител 25Р7, 8В7 и 26Н10 в холодном 1хРРАЕ буфере (1хРВ8+2% РВ8, 0.02% азида натрия, 2 мМ № ЕЭТА). Для реакции связывания 50 мкл разведённого раствора антитела прибавляют к 50 мкл клеточной суспензии, содержащей 2х105 клеток, и смесь инкубируют на льду в течение 30 мин. Клетки обрабатывают в соответствии с вышеописанным протоколом. Анализ связывания антитела проводят, как описано выше.
В отдельном эксперименте антитела проверяют на связывание с ЬАО-3 обезьян циномолгус, используя активированные Т-клетки этих обезьян. 1п νίΙΐΌ активацию этих обезьяньих Т-клеток осуществляют обработкой Т-клеток антителами против СГО3/против СГО28 практически в соответствии с тем же
- 41 023032 самым протоколом, описанным выше для ш У11го активации человеческих Т-клеток, с последующим анализом методом проточной цитометрии, осуществляемым, как описано выше для окрашивания ш νί!ΐΌ активированных человеческих СГО4' Т-клеток.
Результата анализа методом проточной цитометрии с применением СНО-резус ЬАС-3 клеток и активированных Т-клеток обезьян циномолгус суммированы ниже в табл. 3, где представлены значения ЕС50 для связывания с двумя различными типами клеток, экспрессирующих обезьяний ЬАС-3. Эти результаты показывают, что все антитела эффективно связываются как с ЬАС-3 на активированных Тклетках обезьян циномолгус, так и с ЬАС-3 макак-резус (БЕС ГО ΝΟ: 93), трансфецированным в клетки СНО. Однако существует иерархия, шкала аффинностей связывания, причём клон 26Н10 проявляет наивысшую аффинность, которая примерно в 2,5 и в 6 раз выше, чем у клонов 8В7 и 25Р7 соответственно. Различия в порядке (иерархии) связывания между двумя типами клеток может отражать различия между аминокислотными последовательностями белков ЬАС-3 макак резус и циномолгус.
Таблица 3
Связывание антител против ЬАС-3 с ЬАС-3 обезьян
Антитело ЕОп (нМ1 Активированные Супо СВ4+ Т клетки ЕСчп 1нМ> СНО- пенс ЬАСЗ
26Н10 5.19 4.684
25Р7 14.18 22.72
8В7 30.45 10.01
4. Связывание мышиного ЬАС-3 антигена.
Чтобы определить, вступают ли антитела в перекрёстную реакцию с мышиным ЬАС-3, проводят исследования методом проточной цитометрии, аналогичные описанным выше, используя в качестве клеток-мишеней линию мышиных Т-клеточных гибридом (3А9), трансфецированных таким образом, чтобы экспрессировать мышиный ЬАС-3 на поверхности клеток, с последующим РАСБ анализом для детекции связывания антитела, апа1уык !о бе!ес! апбЬобу Ьшбшд. Результаты показывают, что в отличие от контрольного антитела против мышиного ЬАС-3, которое даёт интенсивное окрашивание, ни одно из человеческих антител 25Е3, 25Р7, 8В7 или 26Н10 не показывает связывания выше фоновых уровней с мышиным ЬАС-3, т.е. ни одно из этих антител не вступает в перекрёстную реакцию с мышиным ЬАС-3.
Б. Анализ с помощью системы В1Асоге
Связывание антител 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10 и 17Е5 с рекомбинантным ЬАС-3 белком изучают с помощью системы Высоте™, используя метод захвата. Каждое из антител 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10 и 17Е5 иммобилизуют (захватывают), используя антитело к СН1 (анти-СН1), антитело-реагент, специфическое к константной области 1 тяжёлой цепи человеческого антитела (2утеб, С1опе РЬР6045, исходная конц. 1,0 мг/мл). Анти-СН1 наносят на чип СМ5 (ВК-1000-14, для научно-исследовательских работ) с высокой плотностью (9700-11500КИ (относительных единиц)). Нанесение проводят обычным методом иммобилизации, рекомендованным производителем. Затем очищенное антитело 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10 или 17Е5 с концентрацией в интервале 0,5-3 мкг/мл, иммобилизуют (захватывают) на поверхности, покрытой анти-СН1, при скорости потока 10 мкл/мин в течение 1 мин. Слитый белок рекомбинантного человеческого ЬАС-3 с единственной концентрацией (20 нМ) инъецируют выше антитела (пропускают через антитело) в течение 3 мин при скорости потока 25 мкг/мл. Антиген оставляют диссоциировать в течение 7,5 мин. Поверхность биосенсора (чипа) регенерируют после каждого цикла, промывая её с помощью 25 мкл 25 мМ раствора ΝοΟΚ а затем 30 мкл НВБ-ЕР. Контроль изотипа наносят на чип, полученные результаты применяют, чтобы вычесть неспецифическое связывание. Все эксперименты проводят на приборе поверхностного плазмонного резонанса В1асоге 3000, используя Управляющую программу ЫАсоге ν3.2. Анализ данных, используя программу В1аЕуа1иа1юп ν3.2. Результаты показаны ниже в табл. 4. Результаты ЫАсоге анализа для 25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10 и 17Е5 подтверждают результаты, полученные методом проточной цитометрии, что все пять антител способны связываться с человеческим ЬАС-3 с высокой аффинностью.
Таблица 4
Кинетика связывания антитела против ЬАС-3 с рекомбинантным человеческим ЬАС-3
В белке ЬАС-3 иммуноглобулиноподобный первый домен внеклеточной области содержит экспонированную (открытую) внеклеточную петлю, имеющую аминокислотную последовательность
- 42 023032
ОРРААΛРОΗР^ΛРОРΗРАΛРδδ№ОРКРККΥ (δΕΟ ΙΌ N0: 79). Для изучения связывания антител 25Е3, 25Ρ7, 8В7 и 26Н10 с этой областью ЬАО-3 и картирования эпитопа, связываемого каждым антителом по всей этой области проводят пептидное сканирование. Получают группу из 10 перекрывающихся пептидов, которые сканируют (просматривают) по полной последовательности внешней петли, и конъюгируют их с биотином. Для анализа Ε^IδА используют микротитрационные планшеты с предварительно иммобилизованным стрептавидином (δ^дта-Λ1й^^сЬ, Са1 # М5432) используют для захвата конъюгатов биотинилированных пептидов петли, которые наносят в объёме 100 мкл с концентрацией 2 мкг/мл, и инкубируют 18 ч при 4°С, после чего планшеты отмывают 3 раза и блокируют при комнатной температуре в течение 1 ч блокирующим буфером (1хРВ8+10% ΡΒδ). Затем в планшеты помещают 3-кратные серийные разведения человеческих антител против ЬАО-3 в блокирующем буфере, исходя из начальной концентрации 10 мкг/мл, и планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч, а затем трижды отмывают. Для детекции связанного человеческого антитела конъюгированное с ИКР антитела козы против лёгкой цепи к человеческого иммуноглобулина (Ве1Ьу1 ^аЬο^аίο^^е8, Са1 #А80-115Р) разводят до концентрации 1 мкг/мл в блокирующем буфере и помещают в лунки для анализа на 1 ч, а затем трижды отмывают и наносят субстрат ТМВ (еΒ^08С^еηсе, Са1 #00-4201-56). Оптическую плотность определяют при длине волны 650 нм на спектрофотометре δρесί^атаx 340РС (Мο1еси1а^ ^уиат^с8, Ιηα). Результаты пептидного сканирования представлены в табл. 5.
Таблица 5
Связывание антител против ЬАО с с пептидным сканированием внеклеточной петли (Ьх(га Ροορ) ЬАО-3
Пептидное сканирование внешней петли ЬЛС-3 3Γ.Γ>
ОРРАААРОНРЬАРОРНРААР88\УОРКРККУ 79 25Ε3 8Β7 25Ρ7 26Η10
ОРРАААРОНРЬА 80 - - - -
РАААРОНРЬАРО 81 ++ - - -
ААРОНРЬАРОРН 82 ++ - - -
РОНРЬАРСРНРА 83 + - - -
НРЬАРОРНРААР 84 ± - - -
ЬАРОРНРААР88 85 - - - -
ΡΟΡΗΡΑΑΡ88\νθ 86 - ++ ++ -
РНРААР88\¥СРР 87 - ++ ++ -
РААРЗЗ\УСРКРК 88 - ++ + -
ΑΡ553ΥΟΡΚΡΚΡ.Υ 89 - - - -
На основании этих результатов определяют, что антитело 25Е3 узнаёт область во внеклеточной петле, содержащую аминокислотную последовательность РС^Е-АРС (δΕΟ ΙΌ N0: 76), тогда как антитело 25Ρ7 узнаёт область во внеклеточной петле, содержащую аминокислотную последовательность ΗРΛΛРδδ\V (δΕΟ ΙΌ N0: 77), а 8В7, по- видимому, узнаёт область во внеклеточной петле, содержащую аминокислотную последовательность РААР88^О (δΕΟ ΙΌ N0: 78). Напротив, нельзя обнаружить никакого связывания полноразмерного петлевидного пептида или любого из более коротких сканирующих пептидов антителом 26Н10.
Области, идентифицированные в данном исследовании, подчёркнуты в полноразмерной последовательности внеклеточной петли
ОРР АААРОНРЬ АРОРНРААР5 5\У ОРКРКВ.У (8Е0 ГО ΝΟ: 79)
1г5ЕЗ Ι25Ρ7 [вВ7
Таким образом, результаты пептидного сканирования показывают, что антитела 25Е3, 25Ρ7 и 8В7 связываются с различными, хотя близко расположенными эпитопами в человеческом ЬАО-3.
Для более подробного изучения связывания этих антител с областью пептида внешней петли проводят дополнительные анализы Ε^IδА. В анализе Ε^IδА с применением человеческого полноразмерного пептида внеклеточной петли (ΕχΙπι Ροορ) (δΕΟ ΙΌ N0: 79) определяют значения ΕС50 для связывания 25Е3, 25Ρ7 и 8В7. Помимо этого, аналогичный пептидный анализ Ε^IδА проводят, используя полноразмерную последовательность пептида внеклеточной петли (ΕχΙπι Όοορ) белка ЬАО-3 макак-резус, имеющей последовательность СРРΛРΛРСΗРРΛРСΗКРΛΛРΥδ\VСРКРККΥ (δΕΟ ΙΌ N0: 90), и значения ΕС50 для связывания определяют для антител 25Ρ7 и 8В7. Результаты представлены ниже в табл. 6. Эти результаты подтверждают, что антитела 25Е3, 25Ρ7 и 8В7 способны узнавать пептид области человеческого белка ЬАО-3. Кроме того, антитела 25Ρ7 и 8В7 также связываются с пептидной последовательностью внеклеточной петли белка ЬАО-3 макак-резус, хотя и хуже, чем с человеческой последовательностью, что может быть вызвано расхождением последовательности данного полипептида, связанным с видом. Результаты также подтверждают, что антитело 26Н10 не способно узнавать пептид внеклеточной петли белка ЬАО-3.
- 43 023032
Таблица 6
Связывание антител против ЬАС-3 с пептидом внеклеточной петли белка ЬАС-3 человека и макак-резус
Антитело ЕС$« |нМ| человеческая ЕС™ (нМ) внеклеточная петля макак- оезус
внеклеточная петля
25ЕЗ 0.55 Не проверяли
25Р7 0.29-0.95 13.09
8В7 0.28-1.35 0.60
26Н10 Связывание отсутствует Связывание отсутствует
Пример 4. Ингибирование связывания ЬАС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II с помощью антител против ЬАС-3.
Для проверки способности антител против ЬАС-3 ингибировать связывание ЬАС-3 с молекулами ГКГ (МНС) класса II, проводят анализ связывания ш уйго, в котором слитый белок ЬАС-3, содержащий внеклеточный домен человеческого ЬАС-3, слитый с мышиным Рс (ЬЬАС-3-щ[§), реагирует с клетками Дауди, экспрессирующими молекулы антигенов главного комплекса гистосовместимости (ГКГ, МНС) класса II человека.
Для тестирования ингибирования антителом связывания ЬАС-3 с МНС класса II делают серийные разведения антител 25Е3, 25Р7, 8В7 и 26Н10, начиная с концентрации 20 мкг/мл в РРАЕ буфере, и к этим серийным разведениям прибавляют 1 мкг/мл слитого белка ЬЬАС-3-т!§. Эту смесь инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре, а затем добавляют к 2х105 клеток Дауди, отмытых в 1хРРАЕ. Смесь инкубируют при 4°С в течение 30 мин. Клетки осаждают центрифугированием (3 мин, 400 хд), отмывают один раз 1хРРАЕ буфером и снова осаждают центрифугированием, и определяют связывание ЬЬАС-3- с клетками Дауди с помощью РЕ-меченного вторичного антитела (реагента) против тЦС Рсу. Анализ связывания ЬАС-3- тЦ проводят на проточном цитометре РАСЗсаЬЬит (ВО Вюкаепсе). Результаты представлены ниже в табл. 7, в которой приводятся значения !С50 в нМ.
Таблица 7
Ингибирование связывания ЬАС-3 с МНС класса II антителами против ЬАС-3
Антитело КУ„ (нМ)
25ЕЗ 0.8-6.78
25Р7 0.12-0.92
8В7 0.19-0.95
26Н10 0.10
Результаты показывают, что все четыре антитела эффективно ингибируют связывание ЬАС-3 с молекулами антигенов ГКГ (МНС) класса II, причём величины Ю50 для 25Р7, 8В7 и 26Н10 примерно в 7-13 раз меньше, чем для 25Е3.
Пример 5. Стимуляция антигенспецифического Т-клеточного ответа с помощью тАЬк против ЬАС-3.
Для проверки способности антител против ЬАС-3 стимулировать антигенспецифический Тклеточный ответ применяют анализ стимуляции 3А9 Т-клеток пептидами (см., например, ХУогктап е! а1. (2003) I. Iттипο1. 169: 5392-5395; ^огктап е! а1. (2002) Ет. I. Iттипο1. 32: 2255-2263).
В этом анализе мышиные Т-клеточные гибридомы, 3А9, специфические к пептиду НЕЬ48-62, используют в качестве иммунореактивной Т-клетки.
Иммунореактивную 3А9 Т-клетку трансдуцируют с помощью ретровируса таким образом, чтобы она экспрессировала либо человеческий ЬАС-3, либо мышиный ЬАС-3 на своей поверхности. Антигенпрезентирующей клеткой (АРС), используемой для представления НЕЬ48-62 пептидного антигена клеткам 3А9, является линия клеток ЬК35.2 мыши, позитивная к МНС класса II. В отдельном исследовании определяют, что слитый белок человеческого ЬАС-3 способен связываться с молекулами ГКГ (МНС) класса II мыши, тем самым подтверждается правильность применения ЬК35.2 мышиных АРС в данном анализе. На антиген-специфическую стимуляцию клеток 3А9 указывает продукция интерлейкина-2 (ГЬ2), секрецию которого количественно определяют с помощью ЕЫ8А (набор с мышиным Ю-2 0р1ИА кН. ВО Вюкаепсе, Са! #555148 в соответствии с рекомендациями изготовителя).
Эктопическая экспрессия человеческого или мышиного ЬАС-3 на 3А9 Т-клетках в отсутствие какого-либо антитела оказывает ингибирующее действие на антиген-специфические реакции, если трансфецированные Т-клетки инкубируют с ЬК35.2 АРС, представляющими НЕЬ48-62 пептидный антиген, на что указывает увеличение количества пептидного антигена, необходимого для стимуляции продукции Κ-Σ клетками 3А9, по сравнению с профилем доза пептида-эффект контрольных 3А9 Т-клеток.
Для проверки стимуляции антигенспецифического Т-клеточного ответа АРС (2,5х 10 клеток) сначала преинкубируют с антигенным пептидом (200 нМ) в течение 30 мин при 37°С, а 3А9 Т-клетки (5,0х104 клетки, экспрессирующие тЬАС-3, ЬЬАС-3 или контрольные клетки) преинкубируют с антителом против ЬЬАС-3 (25Е3, 25Р7, 8В7, 26Н10, 11Р2, 17Е5), в трёхкратном серийном разведении, начиная с 25 мкг/мл) в течение 15 мин при 37°С. Затем клетки 3А9Т прибавляют к активированным антигеном АРС и
- 44 023032 культуры инкубируют в течение 24 ч при 37°С. Затем супернатанты собирают и количественно определяют продукцию мышиного 1Ь-2. Результаты для 3А9 Т клеток, экспрессирующих человеческий ЬАС-3, представлены в табл. 8, в которой приводятся значения 1С50 в нМ.
Таблица 8
Стимуляция антигенспецифического Т-клеточного ответа антителами против ЬАС-3
Антитело ЗА9-ЬЬАС-3 пептидный анализ 1С,« (нМ)
25Р7 0 14 - 1 94
26Н10 1.45-6.49
8В7 3.25-13.90
25ЕЗ 3.88-70.78
11Р2 81.50-240
17Е5 Ингибирование отсутствует
Результаты показывают, что антитела 25Р7, 8В7 и 26Н10 и в меньшей степени 25Е3 способны стимулировать продукцию 1Ь-2 в анализе антиген-специфического Т-клеточного ответа, тогда как антитело 11Р2 проявляет минимальную способность ингибировать, а антитело 17Е5 не является активным в этом анализе. Ни одно из антител не изменяет количественно определённую продукцию 1Ь-2 контрольными 3А9 Т-клетками или клетками 3А9 Т, трансфецированными мышиным ЬАС-3 белком, это демонстрирует специфичность этого эффекта.
Пример 6. Ингибирование роста опухоли с помощью тАЬ против ЬАС-3 самостоятельно или в комбинации.
Для проверки способности антитела против ЬАС-3 самостоятельно или в комбинации с другим иммуностимулирующим антителом ингибировать рост опухолевых клеток ш νίνο используют две различные мышиные модели сингенных опухолевых трансплантатов. На первой модели используют клетки мышиной фибросаркомы 8аШ. На второй модели используют мышиную линию клеток рака толстой кишки МС38.
В первом эксперименте каждой мыши (А/б линии) имплантируют 2х106 клеток фибросаркомы 8аШ в день 0 и опухолевые клетки оставляют расти в течение семи дней. На 7, 10 и 12 дни после имплантации мышам вводят 10 мг/кг либо одного тАЬ против ЬАС-3 (антитело крысы против мышиного ЬАС-3, тАЬ С9В7\У; еВюктепсе, Са!. №. 14-2231), одного антитела против РЬ-Ь1 (мышиное антитело против РЬ-Ь1, тАЬ 14Ό8), антитело против ЬАС-3 и антитело против РЬ-Ь1 в комбинации, либо контрольное антитело 1дС1 изотипа. тАЬ 14Ό8 представляет собой антитело крысы против мышиного РЬ-Ы, которое превращено в химерное антитело таким образом, чтобы содержать константные области мышиного 1дС1 и мышиной к цепи.
Объёмы опухолей у мышей измеряют в течение более чем 50 дней после имплантации и определяют средние и серединные (медианные) объёмы опухолей. Рассчитывают среднее ингибирование роста опухоли (с учётом того, что ингибирование контрольного антитела изотипа 1дС1 составляет 0%). Результаты на 24 день после имплантации представлены ниже в табл. 9.
Таблица 9
Среднее ингибирование роста опухоли на модели опухоли 8аШ
Лень 1еС1 ЬАС-3 рц-ы СотЬо
24 - 68 74.9 95.8
Таким образом, введение лишь одного антитела против ЬАС3 или лишь одного антитела против РЬ-Ь1 приводит к ингибированию роста опухоли, тогда как комбинация обоих антител вызывает значительно ещё более значительное ингибирование роста опухоли. Что касается экспериментальных групп, к концу эксперимента у 4 из 10 мышей, получавших только антитело против ЬАС3, опухоли отсутствуют, тогда как только у 1 из 10 мышей, пролеченных контрольным 1дС1 антителом, к концу эксперимента отсутствует опухоль. Аналогично, у 4 из 11 мышей, пролеченных одним антителом против РЬ-Ь1, опухоль отсутствует. Лечение мышей комбинацией антитела против ЬАС3 и антитела против РЬ-Ь1 приводит к тому, что у 9 из 10 мышей опухоли отсутствуют; у последней мыши остаётся медленно заживающая опухоль, которая остаётся маленькой в течение исследования.
В двух дополнительных исследованиях подопытным мышам имплантируют мышиные клетки линии МС38 рака толстой кишки. В первом эксперименте в день 0 каждой мыши С57В1/6 имплантируют 2х106 МС38 клеток и на 7, 10 и 12 день после имплантации вводят по 200 мкг/доза одного антитела против ЬАС-3 (С9В7\У тАЬ), одного антитела против РЬ-1 (4Η2 тАЬ) или комбинацию антитела против ЬАС-3 и антитела против РЬ-1. В качестве контрольного антитела использую антитело, родственное по 1дС1 изотипу, в количестве 400 мкг/доза. 4Н2 тАЬ представляет собой антитело крысы против мышиного РЬ-Ы, которое превращено в химерное антитело таким образом, чтобы содержать константные области мышиного 1дС1 и мышиной к цепи.
Средний объём опухоли, серединный (медианный) объём опухоли и % выживаемости определяют
- 45 023032 через 80 дней после имплантации. Результаты показывают, что на этой модели опухоли (МС38) монотерапия антителом против ЬАС-3 показывает слабую активность или не показывает активности в отношении ингибирования роста опухоли, и ни одна из пролеченных мышей не выжила в ходе эксперимента. Напротив, в случае монотерапии антителом против РО-1 наблюдается значительная активность, так что к концу эксперимента у 4 из 10 мышей опухоль исчезает. Помимо этого, аналогично результатам, полученным на 8аШ модели опухоли, комбинированная терапия антителом против ЬАС-3 плюс антитело против РО-1 более эффективна, чем терапия любым одним антителом, к концу эксперимента у 7 из 8 мышей опухоль отсутствует.
Во втором эксперименте на МС38 модели в день 0 каждой мыши С57В1/6 имплантируют 2х106 МС38 клеток, а на 5, 8 и 11 день после имплантации вводят по 200 мкг/доза тестируемого антитела и/или 400 мкг/доза контрольного 1дС антитела следующим образом: (ί) контрольное 1дС1 антитело; (ίί) тАЪ против ЬАС-3 (С9В7\У тАЪ) совместно с контрольным 1дС1 антителом; (ίίί) антитело против РО-1 (4Н2) совместно с контрольным 1дС1 антителом; (ίν) антитело против СТЬА-4 (мышиное тАЪ 9Ό9 против мышиного СТЬА-4) совместно с контрольным 1дС1 антителом; (ν) тАЪ против ЬАС-3 совместно с тАЪ против РО-1 или (νί) тАЪ против ЬАС-3 совместно с тАЪ против СТЬА-4. 9Ό9 тАЪ представляет собой мышиное антитело против мышиного СТЬА-4, вырабатывающееся у мыши, нокаутированной по эндогенному мышиному СТЬА-4.
Средний объём опухоли, серединный (медианный) объём опухоли и % выживаемости определяют через 100 дней после имплантации. Результаты аналогичны результатам первого эксперимента, а именно, монотерапия, направленная против ЬАС-3, имеет слабую активность или неактивна в отношении ингибирования роста опухоли МС38, и ни одна из пролеченных мышей не выжила в ходе эксперимента. В случае монотерапии антителом против СТЬА-4 также имеет слабую активность или неактивна в отношении ингибирования роста опухоли МС38, и ни одна из пролеченных мышей не выжила в ходе эксперимента. Напротив, при монотерапии антителом против РО-1 наблюдается значительная активность, так что к концу эксперимента у 4 из 10 мышей опухоль исчезает. Помимо этого, опять же комбинированная терапия более эффективна, чем монотерапия. В группе мышей, пролеченных комбинацией антитела против ЬАС-3 и антитела против СТЬА-4, к концу эксперимента у 3 из 10 отсутствует опухоль, а в группе мышей, пролеченных комбинацией антитела против ЬАС-3 и антитела против РО-1, у 8 из 10 мышей исчезает опухоль к концу эксперимента.
Таким образом, вышеописанные ш νί\Ό исследования трансплантатов опухолевых клеток показывают, что, по меньшей мере, на некоторых моделях опухолей лечение одним антителом против ЬАС приводит к заметному ингибированию роста опухоли ш νί\Ό. Кроме того, на моделях сложных опухолей комбинированная терапия антителом против ЬАС-3 совместно либо с антителом против РО-1, либо с антителом против РО-Ь1, либо с антителом против СТЬА-4 имеет ещё более высокую противоопухолевую активность, чем одна монотерапия.
Пример 7. Стимуляция аутоиммунитета у N00 мышей путём ингибирования моноклональными антителами (тАЪ) против ЬАС-3.
Для проверки способности антитела против ЬАС-3 стимулировать иммунный ответ, свидетельствующий о развитии аутоиммунитета, используют N00 мышиную модель диабета. Известно, что N00 мыши предрасположены к развитию аутоиммунного диабета. За прогрессированием диабета у самок N00 мышей следят, количественно определяя сывороточную глюкозу. Таким образом, изучают влияние лечения антителом против ЬАС-3, одним или в комбинации с любым иммуностимулирующим антителом, на развитие диабета у самок N00 мышей.
Самкам N00 мышей в день 0, на 2 и 5 день вводят 250 мкг/доза реагента следующим образом: (ί) контрольное 1дС1 антитело; (ίί) одно тАЪ против ЬАС-3 (С9В7\У тАЪ); (ίίί) одно антитело против РО-1 (4Н2 тАЪ); (ίν) одно тАЪ против СТЬА-4 (909 тАЪ); (ν) тАЪ против ЬАС-3 совместно с тАЪ против РО-1 или (νί) тАЪ против ЬАС-3 совместно с тАЪ против СТЬА-4. Результаты показывают, что обработка только антителом против ЬАС-3 или только антителом против РО-1 1геа1теп1 а1опе (но не обработка только антителом против СТЬА 4) увеличивает число мышей, превращающихся в диабетический фенотип. Кроме того, комбинированная обработка антителом против ЬАС-3 плюс антитело против РО-1 или антитело против ЬАС-3 плюс антитело против СТЬА-4 ещё более эффективно превращает мышей в диабетический фенотип.
Таким образом, результаты показывают, что блокада взаимодействия ЬАС-3 со своим рецептором накладывается на негативный иммунорегуляторный сигнал, что способствует более высокой иммунологической активности N00 мышей, и эту более высокую иммунологическую активность у мышей, получавших ЬАС- 3, можно повысить с помощью комбинированного введения либо с антителом против РО1, либо с антителом против СТЬА-4.
Пример 8. Иммуногистохимическое исследование с применением тАЪк против ЬАС-3.
В данном эксперименте флуоресцентно меченные человеческие антитела против ЬАС-3 используют в иммуногистохимических исследованиях. Используются следующие ИТС-меченные человеческие антитела против ЬАС-3: 25Р7-ИТС (Р:Р = 2.9; 1дС1 вариант); 25Р7-С4-ИТС (Р:Р = 2.7; 1дС4 вариант); 8В7ИТС (Р:Р = 2.6) и 26Н10-ИТС (Р:Р = 3.4). Изучают панель лимфоидных тканей, конкретно миндалин
- 46 023032 (два образца), селезёнки (два образца) и тимуса (два образца), наряду с тканью гипофиза (четыре образца). Трансфецированные с помощью ЬАС-3 клетки СНО используют также в качестве контроля. Используют криостатные срезы, фиксированные в ацетоне. Срезы окрашивают НТС-меченным антителом против ЬАС-3 (0,2-5 мкг/мл), а затем окрашивают кроличьим анти-ИТС антителом в качестве мостикового (соединяющего) антитела, а затем проводят визуализацию, используя набор для визуализации кроличьих антител ΕηV^8^οη™+δу8ίет Кб (Ьако ^А, Сагрт!:епа, СА). Результаты приводятся в табл. 10.
Т аблица 10
Иммуногистохимические исследования с применением тАЬк против ЬАС-3
Ткань 25Р7- Р1ТС 25Г7- С4- Р1ТС 8В7- Р1ТС 26Н10- Г1ТС
СНО/ЬАС-З + + + +
ЕСпетки (сильное) (сильное) (сильное) (сильное)
Миндалины + + + +
<п=2) (сильное; редкое в отдельных ЬС, 2/2) (сильное; редкое в отдельных ЬС, 2/2) (сильное, редкое в отдельных ЬС, 2/2) (сильное; редкое в отдельных ЬС, 2/2)
Селезенка + + + +
<п=2) (очень слабое, главным образом в красной пульпе, 2/2) (очень слабое, главным образом в красной пульпе, 2/2) (очень слабое, главным образом в красной пульпе, 2/2) ' (очень слабое, главным образом в красной пульпе, 2/2)
Тимус + + + +
<п=2) (сильное, очень редкое в отдельных ЬС, 1/2) (сильное, очень редкое в отдельных ЬС, 1/2) (сильное; очень редкое в отдельных ЬС, 1/2) (сильное; очень редкое в отдельных ЬС, 1/2)
Гипофиз + + +
<п=4) (сильное, эпизодическое в аденогипофизе, 3/4) (сильное, эпизодическое в аденогипофизе, 3/4) (сильное; эпизодическое в аденогипофизе, 3/4, слабоумеренное, редкое, 1/4)
ЬС - лимфоцит; + - позитивное окрашивание; - - негативное окрашивание
Как ожидалось, экспрессию ЬАС-3 детектируют на панели лимфоидной ткани. Помимо того, для двух из трёх изученных антител против ЬАС-3, 25Р7 (!дС1 и Ι§04 варианты) и 26Н10, наблюдается удерживание в ткани гипофиза, тогда как для одного из изученных антител, 8В7, не наблюдается такое удерживание в гипофизарной ткани. Таким образом, иммуногистохимические исследования позволяют идентифицировать две субпопуляции антител против ЬАС-3, причём одна субпопуляция удерживается в гипофизарной ткани, а другая субпопуляция не удерживается в гипофизарной ткани.
Сводный список последовательностей
£ЕО ГО ΝΟ; Дослетпвате.пьнпсть £ЕО ГО ΝΟ; Последовательность
1 νΗ СЭК1 а а. 25Р7 49 νΗ η.ί. 25Р7
2 νΗ СЭК.1 а,а. 26Н10 50 νΗ η.ί. 26Η10
3 νΗ СОК1 а а 25ЕЗ 51 νΗ η.ί. 25Ε3
4 νΗ СЭК1 а.а. 8В7 52 νΗ η.ί. 8Β7
5 νΗ СОК1 а,а 11Р2 53 νΗ η.ί. 11Ρ2
6 νΗ СОК1 а.а. 17Е5 54 νΗ η.ί. 17Ε5
7 νΗ СОК2 а а, 25Р7 55 νκ η.ί. 25Ρ7
8 νΗ СОК2 а а, 26Н10 56 νκ η.ί. 26Η10
9 νΗ СОК2 а.а. 25ЕЗ 57 νκ η.ί. 25Ε3
10 νΗ СОК2 а-а 8В7 58 νκ η.ί. 8Β7
11 νΗ СОК2 а.а 11Р2 59 νκ η.ί. 11Ρ2
12 νΗ СЭК2аа. 17Е5 60 νκ η.ί. 17Ε5
13 νΗ СЭКЗ а.а 25Р7 61 Ун 4-34 зародышевой линии а.а
14 νΗ СОЮ а.а. 26Н10 62 Ун РН5Ь зародышевой линии а-а.
15 ρνονν 63 Ук Ь6 зародышевой линии а.а.
16 νΗ СОК.З аа. 8В7 64 Ук Ж2 зародышевой линии а-а.
17 νΗ СЭЮ а а. 11Р2 65 Ун 3-33 зародышевой линии а.а.
18 νΗ СОЮ а а, 17Е5 66 Ун 1Н6Ь зародышевой линии а-а.
67 Ук А 27 зародышевой линии а.а
19 νκ СОК1 а а- 25Р7 68 Ук ЖЗ зародышевой линии а. а.
20 νκ СОК1 а.а. 26Н10 69 Ун 3-20 зародышевой линии а. а.
21 νκ СЭК1 а.а. 25ЕЗ
22 νκ СОК1 а а. 8В7 70 Ун 1Н4Ь зародышевой линии а.а
23 νκ СОЮ а а 1ΙΡ2 71 Ук Ь-18 зародышевой линии а-а.
24 Ук СОК1 а.а 17Е5 72 Ук Ж4 зародышевой линии а.а.
- 47 023032
73 Ун 1-24 зародышевой линии а,а
25 νκ СОК2 аа 25Р7 74 УкЖ.1 зародышевой линии а.а.
26 УкСОК2 а.а 26Н10 75 Ук Ж5 зародышевой линии а а.
27 νκ СОК2 аа. 25ЕЗ
28 νκ СДК2 а а 8В7 76 РСНРЬАРС
29 Ук СОК2 аа. 11Р2 77 НРААР88\У
30 νκ СОК2 аа. 17Е5 78 РААР88ХУО
79 0ΡΡΑΑΑΡ0ΗΡΙ_ΑΡ0ΡΗΡΑΑΡ$$\ν ΟΡΚΡΚ.Κ.Υ
31 Ук СОЮ аа. 25Р7 80 СРРАААРОНРЬА
32 У,-СОЮ аа. 26Н10 81 РАААРСНРЬАРС
33 νκ СОЮ а.а. 25ЕЗ 82 ААРОНРЬАРОРН
34 Ук СОЮ аа 8В7 83 РСНРЬАРСРНРА
35 Ук СОЮ а а. 11Р2 84 НРЬАРОРНРААР
36 νκ СОЮ а.а. 17Е5 85 ЬАРСРНРААР55
86 ΡΟΡΗΡΑΑΡδδΧΥΟ
37 ν„ аа 25Р7 87 РНРААР88ХУОРК
38 ν„ аа 26Н10 88 РААР55ТОРКРК
39 Ун аа 25ЕЗ 89 АРЗЗЗУОРКРККУ
40 νΗ аа 8В7 90 СРРАРАРСНРРАРОНКР ΑΑΡΥδΧνΟΡΚΡΕΚΥ
41 Ун аа 11Р2
42 Ун аа 17Е5 91 а1§1£2£а£8С1са£Нсс1£
92 §1са§а§с1§с1сс§§с1с
43 νκ аа 25Р7 93 ЬАС-3 макак- резус клонра23-5 а.а.
44 Ук а.а 26Н10 94 ЬАС-3 макак- резус (ХМ 001108923}
45 Ук аа. 25ЕЗ
46 Ук а.а. 8В7
47 Ук аа 11Р2
48 Ук аа. 17Е5
а.а. = аминокислота; п.!. = нуклеотид
Термин содержащий, используемый в данном описании и формуле изобретения, означает состоящий по крайней мере в части. При интерпретации предложений в данном описании и формуле изобретения, которые включают термин содержащий, другие признаки, кроме признаков, подразумеваемых под этим термином, также могут присутствовать в каждом предложении. Связанные термины, такие как содержит и состоит из следует интерпретировать аналогичным образом.
В этом описании, где была сделана ссылка на описания патентов, других внешних документов или других источников информации, как правило с целью создания контекста для обсуждения признаков изобретения. Если специально не указано иное, ссылка на такие внешние документы не должна быть истолкована как признание того, что такие документы или такие источники информации в любой юрисдикции являются уровнем техники или являются частью общепринятых сведений в данной области техники.
Перечень последовательностей <1Ю ТАДИУМ, Кент, Б.
СЕЛБИ, Марк КОРМАН, Алан, Дж.
ЛЕБЛАНК, Хейди Н.
ЗЕКС, Кира, Д.
ЯМАНАКА, Марк <]20 ЧЕЛОВЕЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ГЕН АКТИВАТОР ЛИМФОЦИТОВ- 3 (ДАО - 3) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ <130 0221ВС1 <140 КО ОО/ОСОООО <140 20С9-СЗ-11 <150 ив 61/1ЭЗ.ОР <150 СОЗ-О-и <21С> 1 <211> 5 <212> БЕЛОК <213> Ното зартепз <4С0> 1
Азр Туг Туг Тгр Азп 1 5 <210 2 <211> 5 <212> БЕЛОК <2О> Ното зартепз
Зег туг С1у Мет Ηίδ <210> 3 <4С0> 3
Азр Туг С1у МеЬ Зег <210> 4 <210 5 <21 2> БЕЛОК <213> Нопо зартепз <4С0> 4
- 48 023032
- 49 023032
- 50 023032
•'21':'· 26
<2 11> <2 12 > < 2 1 3> БЕЛОК лото заргепз
< '1С о 26
31у АО 1 зег Зег Агд А1а ТО
<210> <211 > <212> <2 13> 27 БЕЛОК Ното заргепз
<400 27
Азр АО ι Зег Зег Ьеи С1и Зег
<210 < 211 > < 2.1 2 > <213> 23 7 БЕЛОК Ното заргепз
<430
1 = Зег Азп Агд А1а 'ГЬ-
<210 <21 1> <2 12 > <213> 29 БЕЛОК Нотс заргепз
<400> 29
Азр А1а Зег Азп Агд А1а ТЬг
<210 > <211 > <212 > < 21 3 > ЗС 7 БЕЛОК Ното заргепз
400
О А1. а Зег А.5П Агд А1а ТЬс 5
<210 <2 11 > <212> <213> 31 9 БЕЛОК Исто заргепз
<4 00 > 31
С1п 31г. Агд Зег Азп Тгр Рго Ьеи ТЬг ό
<210 <210 <212> <21.0 32 9 БЕЛОК Ноле заргепз
<400 32
С1п С-1 1 .п Туг Сгу 5ег Зег Рго РКе ТЬс 5
<210 <210 <2.1 2а 33 БЕЛОК
<2 1 3 > Ното заргепз
<400> 33
С1п С. 1 ίη РКе Азп Зег Туг Рго Туг ТЬг
<210 34
<21 2> <2 13> БЕЛОК лото заргепз
<400 34
С1п 01п Агд Зег Азп Тгр Рго Теи ТЬг 1 5
<210 <211> 35 9
<213> БЕЛОК Ното заргепз
<400> 35
С1п 31п Агд 5ег Азп Тгр Рго Тгр ТЬг 1 5 <210 36 <210 9
<21 2 > <2.1 3> БЕЛОК Нот,с заргепз
< 4 ОО 36
1 1п Агд 5ег Азп Тгр Ргс Не ТЬг 5
<210> 37 <210 120 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз
- 51 023032
- 52 023032
С1у 01и Т1е Азп НЬз Агд С1у Азп ТЬг Азп Суз Азп Рго Зег Ьеи Ьуз
Зег Агд Уа! ТЬг 11е Зег Оу Азр ТЬг Зег Ьуэ Ьуз С1п РЬе АТ;
Туг Туг СУ? АТ
Агд СЬу Туг Азр 11е Ьеи ТЬг С1у Туг Туг С1и Азр Зег Тгр С1 у Рго 100 105 110
СЬу ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг Уа1 Зег Зег 115 12 С <210> 41 <211> 123 <212> БЕЛОК <213> Ното зарЬепБ <4С0> 41
ТЬг НЬз Азр С1п УэЬ С-1п Ьеи УаЬ С1п Зег СЬу А1а С1и Уа! Ьуз Ьуз
АЬа Зег УаЬ Ьуз УаЬ $ог Суз Ьуз Уз1 Зег СЬу Туг ТЬг Ьеи
ТЬг СЬи УаЬ Зег МеЬ НЬз Тгр Уа 1 Агд С.! п А1а Нго СЬу Ьуз СЬу Ьеи
СЬу С1у РЬе Азр Рго С-1и Азр С1у СГ.: ТЬг Ые Туг А1а
С1п Ьуз РЬе С1п С1у Агд УаЬ ТЬг МеЬ ТЬг С1и Азр ТЬг Зег ТЬг Азр
ТЬг АЬэ Туг МеЬ СЬи Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СЬи Аэр ТЬг А1а Уа1
Туг Туг Суз А1а ТЬг А1а РЬе Уа1 Уа1 Уа! Уа1 А1а АЬа Зег Азр Туг 100 105 110
Тгр 01у С1с. С1у ТЬг Ьеи УаЬ ТЬг Уа! Зег Зег <211> 123 <212> БЕЛОК
- 53 023032
С1и Азр Рпе А1а Уа1 Туг Туг Суз С·' г, С 1 п 90 Агд Зег Азп Тгр Рго Ьои
,„г р,„ С|у с,р с.у Ьг А сп 1,пи 7 1 » Ьуз
10 0
<2Ь0> 44 <211> 108 <212> ЗЕЛОК <213> Ното зархепз
<400> 44
СЬи Не УаЬ Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго СЬу ТЬг Ьеи Бег Ьеи Бег Рго СЬу
1 5 10 Ь5
ОЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег УаЬ Бег Зег Зег
20 25 30
Туг Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп с,и. Ьуз Р,о Су С', п АП Рго Агд Ьеи Ьеи
71е Туг СЬу АЬа Зег Зег Агд АЬа ТЬг С-Ьу Пе Рго Азр Агд РЬе
5 5 60
СЬу Зег 31 у Зег 31 у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 1 Ьо Зег Ат Ьеи СЬи
63 70 7 5 8С
Рго СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Туг СЬу Бег Бег Рго
85 90 95
РЬе ТЬг РЬе СЬу Рго СЬу ТЬг Ьу5 УаЬ Азр Пе Ьу5
100 105
<210 45 <210 107 <2Ь2> ьЕ.ЛОК
<403> 45
АЬа Не СЬп Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго Зег Зег Ьеи Зег АЬа Зег Уа. С.у
1 5 ЬО Ϊ5
Азр Агд Уа1 ТЬг Не ТЬг Суз Агд АЬа Зег СЬп СЬу Пе Агд Зег АЬа
20 2 5 30
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СЬп Ьуз Рго СЬу Ьуз АЬа Рго Ьу5 Ьеи Ьеи Пе
35 40 45
Туг Азр АЬа Зег Зег Ьеи СЬи Зег СЬу УаЬ Рго Зег Агд РЬе Зег СЬу
н 55 60
5,->г г;, у рг-,г -ρ, 7у,г Азр РЬе ТЬг - е1) μ п 11с 1,1=·- 01 п Рго
6 5 70 80
СЬи Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз СЬп ст РЬе Азп Зы Туг Рго Туг
65 ос 95
ТЬг Рпе СЬу СЬп С1у ТЬг Ьуз Ьеи СЬи Пе Ьуз
100 105
<210> 46 <210 107 <212> БЕЛОК <213> Кото зарЬепз
<400 46
СЬи Не Уа1 Ьеи ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬу
Ь 5 ЬО 15
СЬи Агд АЬа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1з Зег С,1п Зег УаЬ Зег Зег Гу-
2 0 2 5 Н
Ьеи АЬа Тгр Туг СЬп СО Ьуз Рго Пу- СЬп АЬа Рго Агд Ьеи Ьеи не
3 5 40 4 5 ”
Туг Азп АЬа Зег Азп Агд АЬа Ьг Пу ЬЬе Рго АЬа Агд РЬе Зег ОЬу
50 55 60
Зег СЬу Зег СЬу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Пе Зег Зег Ьеи СЬи Рго
65 70 75 90
СЬи Азр РЬе АЬа УаЬ Туг Туг Суз СЬп СЬп Агд Зег Азп Тгр Рго Ьеи
85 90 95
ТЬг РЬе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьуз УзЬ СЬи Пе Ьуз
100 105
<210 4“ <211 > 10 <212> БЕ.ЛОК <213> Кето зарЬепз
<400 47
С1и Пе Уа1 Беи ТЬг СЬп Зег Рго АЬа ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго СЬ у
1 5 10 15
С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Агд АЬа Зег СЬп Зег УаЬ Зег Зег Туг
20 25 30
садд1 дсадс гасадсздЕд дддсдсадда сЕдЕЕдаадс сЕЕсддадас ссЕдЕсссЕс асст.дсдсЕд ЕсЕаЕддЕдд дЕссЕЕсадЕ даЕсасЕ.асЕ ддаасЕддаЕ ссдссадссс ссадддаадд ддсЕддадЕ.д даЕЕддддаа ассаае.еаЕа аЕддааасас саассссаас ссдссссЕса ададЕсдадЕ сасссгаЕсэ сЕадасасдЕ ссаадаасса дЕЕсЕссссд аадсЕдаддс сЕдЕдассдс сдсддасасд дсЕдЕдЕзЕЕ асЕдЕдсдЕЕ гддаСагадЕ дасЕасдадЕ асаасЕддЕЕ сдассссЕдд ддссадддаа сссЕддЕсас сдЕсЕссЕса <21С> 50 <211> 366 <212> ДНК <213> Ногте заргепа <4С0> 5С саддЕдсадс ЕддЕддадЕс Едд ддд аддс д+сд (: осаде -’-дддаддЕс ссЕдадасЕс гссЕдЕдсад сдтсЕддаЕЕ сассЕЕс.адЕ адсЕ-зЕддса ЕдсасЕсддЕ ссдссаддсе ссаддсаадд ддотддадсд ддеддсадЕЕ аЕаЕддЕдЕд аЕддаадЕаа ЕаэаЕасеаЕ дсадасЕссд Едаададсед аЕЕсассаЕс Ессададаса аЕЕссаадаа сасдсЕдгаЕ сЕдсааагда асадссЕдад адссдаддас асддс.ЕдЕдЕ аЕЕас.Едедс дададааЕдд дсадЕддссг ссЕсддасЕа сддЕаЕддас сЕсЕддддсс аадддассас ддЕсассдЕс
120
С
240
ЗСО
360
120
130
240
300
360
366 <210> 51 <211> 336 <212> ДНК <213> Кото зар1еп5 < 4 0 0 > 51 дадегдеадг ЕддЕддаддс ЕдддддаддЕ дЕддЕасддс сЕддддддЕс ссЕдадасЕс
ЕССЕдЕ.дсад ссЕсЕддаЕЕ сассЕЕЕдаЕ даЕЕаЕддса ЕдадсЕдддЕ ссдссаадсЕ ссадддаадд ддег.ддад-д ддЕс.ЕсЕддЕ аЕЕаагедда аЕддЕддсад саслсаЕЕаЕ дсадасЕстд гдаадддссд аЕЕсассаЕс Ессддадзоа асдссаадаа сЕсссгдЕаг егдеааагда асадЕсЕдад адссдаддас асддссЕЕдЕ аЕЕасЕдЕас сасЕдддддс
ЕасЕддддсс адддаасссЕ ддЕсассдЕс ЕссЕса
120
130
4 О
ЗОС
336 <210> 52 <211> 360 <212> ДНК <213> Ногг.о зарЬепг <400 52 саддедсадс ЕасадсадЕд дддсдсадда сЕдЕЕдаадс саЕсддааас ссЕдесссЕс ассЕдсдсЕд ЕсЕаЕддЕдд дЕссЕЕсадЕ ддЕЕасЕасЕ ддадсЕддаЕ ссдссадссс
120
- 55 023032 ссадддаадд дссЬддадСд даЬЬддддаа аСсааСсаС.с дьддааасас саасг.дсаас ссдьсссЬс.а ададЬсдад: сассаЬаЬса ддадагасдЬ ссаадаааса дЬЬсдсссЬд аадсЬдаасС сСдЬдассдс сдсдсасэсд дсСдЬсЬаЫ: асгдЬдсдад аддаСасааЬ аь!;(·.7дасьд дсьадЬаЬда ддасьссЬдд ддсссдддаа сссьддьсас сдссЬссЬса <210> 53 <?11> 369 <л12> ДНК <213> Нсто рарюп.?
<4С0> 53 асссасдасс 343-,(:309::6 ддбасач*'ддсдс-.дадд - дладаадсс '..ддддссг.за д-.саасдбс: сс-.дсааддб биссдда-.ас ассстсасСд аадсаьсса: дсассдсдбд сдасаддс+.с сьддазаадд дсЬ-дадбдд аСдддадд-6 ЫдаСссбда адабддсдаа асааЬсбасд сасадаады ссадддсада дбсассаода ссдаддэсас аьсьасасас асадссьаса ьддадсгдад садссбдада ьсбдаддаса сддссдбдба С Ьаст.дОдса асадссьььд ЬадЬддьддс адссдсысь дасг.асЬддд дссадддаас сссддьсасс дьсИсст.са <210> 54 <211> 369 <212> ДНК <213> Ното аарЬепз <40С> 54
з.адд-дгасс Ьддг.ддадОс ’дддддаддс дг.ддОссадс сЬдддаддЬс ссбдадасоо осс.ододсад сдСсгдсзЫ сассгьсадг адсоагсдса г дсасЬсддг. с;-дсса>дссЬ ссаддсаадд ддсьддадЬд ддг.ддсадь: аг.абдд-.абд абддаадг.аа : аааЬасьа:.
ссэдасгссд Ьдаздддссд асг.сассаьс Ьссададаса абьссаадаа сасдс-дЬаЬ сСдсааабда асадсог.дад адссдаддас асдссбдЬдЬ аьЬасСдбдс дададабссс
с.асЬдЬадба дбассаасбд сЬассЬ-бьс дасбасбддд дссадсдаас ссЬддссасс дЬсгссЬса <210> 55 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното зарЬепз <430 55 даааЬЬдгдЬ Ьдасасасьс ьссадссасс седьсьььдь сьссадддда аададссасс сЬсг.ссЬдса дддссадг.са дадьа:г.адс адсьасьсад ссЬддьасса асадазассс ддосаддсгс ссаддсосс: са :.сг аОдаЬ доаг.ссаэса дддссаскдд саОсссадсс аддОсадСд дсадьдддсс Сдддасадас ССсасссьса ссаСсадсад сссададссь даадасг.г.сд садСССаСьа сСдСсадсад сд:адсаасС ддссСсСсас ССССддссад дддассаасс г.ддадассаа а <210 56 <211> 324 <2!2> ДНК <213> Ното аарЬепэ <4С0> 56 даааССдСс: бдасдсадбс Т'-саддсасс ее д-. οι.: ί д: с-осадддда аададссасс
СсСссНдса дддссадбса дадСсССадс адсадсСасг. г.адссбддЬа ссздсадаза ссСддссадд сСсссаддсс ссСс.абсСа: ддСдсабсса дсадддссас сддсасссса дасаддССса дбддсадСдд дбсбдддаса дасЬ'сасСс СсассаСсас садассддад сссдаадасс ссдсадсдСа сг.ассдг.сад садсасддса дсСсассасе сасиСссддс ссСдсдасса аадсддасас сааа <210> 57 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното заргепз <4С0> 57 дссаСссадС ГдасссадСс :.сса-<;с:сс оодссбдсаг. сгдСаддада сададссасс а-сэсле.дсс. дддс-засбоа дддсасг.адд ад: дс-. >7 а д (-οΐ-дст.ат.са доадаааооа дддааадсСс ссзадс) со: дассСа!дас дссбссад::. сддааадсдс дд-.сссасса аддсссадсд дсадсддасс сдддасадас с:сасссСса ссассадсад ссСдсадссс даасассссд саасС-аССа сСдСсаасад сссаасадсс. асссдс.асас ССССддссад ддсассаадс сддадассэа а <210> 58 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното зарЬепг <400> 58 дааассссдс сдасасадсс Сссадссасс ссдсссссдс ссссадддда аададссасс сСссссСдса дддссадг.са дадСдссадс адссасССад ссСддСасса асадааассс ддссаддссс ссаддсг.сс: саСсСаСааС дсаСссааса дддссасСдд саСсссадсс аадССсадсд дсадСсддсс Сдддасадас сс.сасСсСса ссассадсад сссададссС даааассссд садсСсаСса сСдСсадсад сдСадсаасс ддссдсссас с.сссддсдда дддассаадд еддэдаСсаа а
0
240
300
360
120
180
240
ЗОС
360
369
2 С
180
240
300
360
369
120
180
240
300
321
0
180
240
300
324
I 2 О
8 0
0
ЗСО
321
12С
180
240
300
321
- 5б <210 59 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното заргепз <400 59 даааЛЛдЛдЛ лдэсасздЛс Лссадссасс сЛдпсЛллдл сЛссасддда аададссасс 60 слсЛ'слдеа дддссадл.са дадлдлладс адоасоад сслддлассз асадааассл 120 ддссаддслс ссасдсЛссЛ саЛслаЛдал. дсаЛссааса дддссаслдд сзЛсссадсс 160 аддЛЛсадЛд дсадЛдддЛс Лдддасадас ллсаслслса ссалсассад сслададссЛ 240 даадаллллд садлллалла слдлсадсад сдладсаасл ддссдЛддас. дЛлсддссаа 30 0 дддассаадд ЛддаааЛсаа а 321 <210 60 <211> 321 <212> ДНК <213> Ното заргепа <400> 60 даааллдЛдЛ л сЛсЛссЛдса д ддссасдсЛс с аддЛЛсадЛд д даадаллллд садлллалла слдлсадсад сдладсаасл ддссЛаЛсас сЛлсддссаа дддасасдас лддадасЛаа а
300
321 <210> 61 <211> 98 <2Т2> БЕЛОК <213> Ногг.о зарЬепз <220 <22 0 СМЕШ_ПРИЗНАК <222> {961..:98) <223> Остаток 98 представлен только в субпопуляции на фигурах.
< 4 0 0· > 61
С1п УаТ Ή Теи С1п 01г. Тгр С,1у А1а С1у Леи Леи Луз Рго Зег С1и
ТЬг Лес Зег :
ТЬг Суз А1а УаТ Туг С1у СТу Зег РЬе Зег СТу Туг
Туг Тгр 5ег Тгр Не Агд С1п Рго Рго С?1у Луз СТу Леи С1и Тгр 11е ~,1у С1и 1с Азп НН Бог С.1у
Азг. Туг Азп Рг
5ег Агд Ю1 ТЫ Пе Бег Уа’. Азр Тг.г Зег Ьуз Азп С1п РЬе Зег Ьеи
Ьуз Ьеи 2ег Зег УаТ ТЬг А1а АТа Азр ТЬг АТа Уа 1. Туг Туг Суз А1а <210> 62 <210 16 <212> БЕЛОК <213> Ноглс зарте <220 <22 0 СМЕ1Т_ПРИ'ЗНАК <222> {1)..(3;
<223> Остатки 1-2 представлены только в еуОпспуллиик на фигурах.
<400 62
Азп Тгр РЬе Азр Рго Тгр СТу СТп С1у ТЬг Ьес Ό ТЬг УаТ 5ег 5ег <?10> 63 <211> 95 <212> БЕДОК <213> Ното зарЬепз <400> 63
31с 11е Уа1 Ьес ТЫ 21л Бег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15
С1и Агд АТа ТЬг Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег С1г· Зег Уа1 Зег Зег Туг ' 20 25 30
Ьеи АП Тгр Тук С1п СТп Ьук Ргь (Ту Ып АТа ?го Агд Ьеи Ьеи По
5 4 0 4 5
Туг Азр А1а Зег Азг, Агд А1а ТЬг С1у 11е Рго АТа Агд РЬе Зег 51у 50 55 60
Зег СТу Зег СТу ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг ТТе Зег Зег Ьеи С1и Рго
С1и Азр РЬе АТа Уа1 Туг Туг Суз СТп С1п Агд Зег Азп Тгр Рго
- 57 023032 <2Т0> 64 <2ТТ> 12 <212> БЕЛОК <2ТЗ> 'Ното зар?1епз <220 <221> СМЕИСПРИЗНАК <222> (1)..(1) <223> Остаток 1 представлен только в субполулянии на фигурах.
<400> 64
Туг ТЬг РЬе СТу СТп СТу ТЬг Ьуз Ьеи С1и Пе Ьуз <2Т0> 65 <2П> 98 <212> БЕЛОК <2ЬЗ> Ното зарТепз <400 65
СТп УаТ 31п Ьеи УаТ СЬи Лег Сиу СТу СТу УаТ УаТ СТп Рго С-Ту Агд
Зег „ей Агд Ьеи Зег Суз АТа А1а Зег 31у РЬе ТЬг РЬе Зег 5ег Туг 20 25 30
СТу Мел НЬз Тгр УаТ Агд СТп АТа Рго СТу Ьуз СТу Ьеи СТи Тгр УаТ
Уа1 Не Тгр Туг Азр СТу Зег Азп Ьуз Туг Туг А1а Азр Зег УаТ
Ьуз СТу Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Акр Азп Зег Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг
Ьеи СТп МеЛ Азп
УаТ Туг Туг Суз <210 66 <2П> 16 <212> БЕЛОК <213> Ногго заргепз <400 66
Туг С1у Мел Азр Уа1 Тгр С1у С1п С1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Зег 15 10 15 <210> 67 <210 96 <212> БЕЛОК <213> Ното зар1епз <400> 67
С1и Не Уа1 Ьеи ТЬг С1п Бег Рго С1у ТЬг Ьеи Бег Ьеи Бег Рго С1у
2Ги Агд АТа Ьг Ьеи Бег Суз Агд АО 5ег С’.п Бег Уа'. Зег Зег Зег
Туг Г,пи АТа 'гр Туг СТп СТп Ьуз Рго СТу Пп АТа Рго Агд Ьеи Ьеи 35 40 45
Пе Туг СТу АТа Зег Зег Агд АТа ТЬг С1у Пе Рго Азр Агд РЬе Бег 50 55 60
СТу Зег С1у Зег С1 у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Агд Ьеи С1и 'Ό 75 80
Ргс СЬи Азр РЬе АТа Уа1 Туг Туг Суз 01п С1п Туг С1у Бег Бег Рго
90 95 <210> 68 <211> 12 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз <40С> 68
РЬе ТЬг РЬе С1у Рго СТу ТЬг Ьуз УаТ Азр Нс Ьуз
5 ТО <21С> 69 <2П> 93 <212> БЕЛОК <213> Ното заргепз <400> 69
С1и УаТ СТп Ьеи УаТ СТи Бег СТу СТу СТу УаТ УаТ Агд Рго 31у СТу
ТО
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз АТа АТа Бег С1у РЬе ТЬг РЬе Азр Азр Туг 20 25 30
СТу МеС Зег Тгр УаТ Агд СТп АТа Рго СТу Ьуз СТу Ьеи СТи Тгр УаТ
- 58 023032
Ьеи Гг.г- РКе СЬу СЬу СЬу ТЬг Ьу» Та, СЬи II-: Г,у <Т12> БЕЛОК <21С> Кото зарЬег.3 <40С> ?3
ТКг НЬз АЬа СЬп УаЬ С1п Ьеи УаЬ С1п Зег СЬу А1а СЬи Ϋ5ΐ Ьуз Ьуз
Рго 01/ АЬа Зег 7аЬ Ьуз 7аЬ 5ег Суз Ьуз УаЬ Зег СЬу Туг ТКг Ьеи
ТКг СЬи Ьеи Зег Мер НЬз Тгр УаЬ Агд СЬп А1а ?го СЬу Ьуз СЬу Ьеи
СЬи Ьгр ?4еи С'.у СЬу РЬе Азр Рго
ТКг Ые Туг АЬа
01л Ьуз РКе СЬл СЬу Агд УаЬ ТКг Кес ТКг СЬи Азр ТКг Зег ТКг Азр
ТКг АЬа Туг МеС СЬи Ьеи 2ег 5е< Ьеи Агд 2ег СЬи Азр ТКг АЬа УаЬ <210 74 <211> 12 <212> БЕЛОК <2ЬЗ> Нотс зарЬепз <400 74
Тгр ТКг РКе СЬу СЬп СЬу ТКг Ьуз Уа! СЬи П.е Ьуз • 5 ]0 < 210 > 7 5 <2Ы> 12 <212> ЕЕЛОК <213> Ногг.о зарЬепз
- 59 023032
<400 '5 11е ТЬг РЬе С1у С1п С1у ТЬг Агд Ьеи С1и Не ЬУз
1 5 10
<2 1 0 > 76
<210 8
<2 12 > БЕДОК
<213> Ното заргепз
< 4 С П > 7 6
Рго С-_у Ηί = Рго Ьеи А1а Рго 31у
<210 >
<2 1. О 8
<212> ЗЕНОК
<2: 3 > Ьогг.с заргепз
<4С0>
Н1з Рго 1 А1а А1а Рго Зег 5 Зег Тгр
<2: о 73
<210 3
<212> ЗЕЛОК
< 2 1 3> Ното зар1епз
<400 78
Рго о 1 а А1а Рго Зег Зег Тгр С1у
<210 7 9
< 2 11 > ЗС
<2 12> БЕЛОК
<213> Ното заргепз
<400> 79
С1у Ргс > Рго А1а А1а А1а Рго С1у Нтз Рго Ьеи А1а Рго С1у Рго Нтз
1 5 10 15
Рго А1е ι А1а Рго Зег Зег Тгр 01у Рго Агд Рго Агд Агд Туг
20 25 30
<210 > 80
<21 О 12
<2 12 > БЕЛОК
<21 3> Ното зартепз
<400 80
1 ; Рго Л1з А1а Λ1 а Рго о!у Нт 5 Гго Ьеи А1 а
<210> 81
<211> 12
<212 > БЕЛОК
<213> Ноте зар!ег.5
<400 81
Ргс· А1й А1а А1а Рго Шу Ϊ5ΐ ?т Ььи А1а Рго <Ну
1 К
<20 > О
<212> БЕЛОК
<2 13> К с; по зардела
<400 32
А1а Ά1 а Рго 01у Н1з Рго Ьеи А)а Рго С1у РГО ΗΪ3
1 5 10
<21 С> 83
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213 > Исто зар1еп5
<400 83
?гс· с: у :-115. Рго Ьеи А1а Его 01у Рго Ηί5 Рго А1а
а 13
<210 84
<211> 12
<21 2 > БЕЛОК
<213 > Ното зароет,з
<400 34
Ηΐ5 Рго Ьеи А1а Рго БЬу Рго ΗΪ5 Рго А1а А1а Рго
1 5 1С
<210> 65
< 211 > 12
<2 12> БЕЛОК
<213> Ното Барьеге
<400> 85
Ьеи А1а Ргс Е1у Рго ΚίΞ : Рго А1а А1а Рго Зег Зег
1 5 10
<210 86
<211> 12
<2 12> БЕЛОК
<2 13> Нолю яарьел.з
<400 3 5
- 61 023032
- 62 023032
Агд Ьеи Рго Ьеи СЬп Рго Агд УаЬ 6Ьп Ьеи Азр СЬи Агд СЬу Агд СЬп 115 120 125
Агд СЬу Азр РЪе Зег Ьеи Тгр Ьеи Агд Рго АЬа Агд Агд АЬа Азр АЬа ЬЗО 135 140
Агд А1 а Ъг '/а! Ш? 150
А)а Ьеи Зет Суз
Агд Ьеи Агс :
С1п АЬа Зет Мер ТЪг А1а Зег Рго ?г
Азр Тгр Уа1 1_е Ьеи Азп Суз Зег РЪе Зет
Агд Рго Азр Агд Рго А1а Зег УаЬ Ηίδ Тор РЪе Агд Зег Агд С1у СЬп 195 200 205
СЬу Агд Уа! Рго Уа1 СЬп СЬу Зег Рго НЬз НЬз НЬз Ьеи АЬа С1и Зег 210 215 22С
РЪе Ьеи РЪе Ьеи Рго НЬз УаЬ СЬу Рго МеЪ Азр Зег СЬу Ьеи Тгр СЬу 225 230 235 240
Ьеи ТЪг Уа1 Ьеи СЬу Ьеи 1 260
ТЪг Рго Ьеи ТЪг Уа] Тут А1а 270
СЬу АЬа СЬу Зег Агд Уаь С1и Ьеи Рго Суз Агд Ьеи Рго Рго А1а УаЬ 275 280 ' 235
СЬу ТЪг С1п Зег РЪе Ьеи ТЪг АЬа Ьуз Тгр АЬа Рго Рго С1у С1у С1у 290 295 300
СЬи Азр Уа1 Зет СЬп А1а СЬп АЬа СЬу ТЪг Туг Не Суэ Ηΐ5 11е Агд 325 330 335
Ьеи СЬп СЬу С1п СЬп Ье„ Азп АЬа
ТЪг Ьеи Л1а Пе
УаЬ ТЪг Рго Ьуэ Зег РЪе СЬу Зег Рго СЬу Зег Ьеи СЬу Ьуз Ьеи Ьеи 355 360 365
Суэ СЬи УаЬ ТЪг Рго АЬа Зег СЬу СЬп СЬи НЬй РЪе УаЬ Тгр Зет Рго 330 375 360
Ьеи Азп ТЪг Рго Зег С_п Агд Зег РЪе Зег СЬу Рго Тгр Ьеи СЬи АЬе 385 390 305 400
СЬп С1и АЬа СЬп Ьеи Ьеи дог СЬп ?го Тгр СЬп Суз СЬп Ьеи НЬз СЬп 435 413 415
С1у СЬи ТЪг Ьеи Ьеи СЬу АЬа АЬа Уа1 Руг РЪе ТЪг СЬи Ьеи Зег Зег 42С 425 430
Рго СЬу АЬа СЬп Агд Зег СЬу Агд АЬа Ргс СЬу АЬа Ьеи Агд АЬа СЬу 435 440 445
НЬз Ьеи Рго Ьеи РЪе Ьеи Не Ьеи С1у УаЬ Ьеи РЪе Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи 450 455 460
УаЬ ТЪг СЬу АЬа РЪе СЬу РЪе НЬз Ьеи Тгр Агд Агд С1п Тгр Агд Рго 4 65 ПО 475 480
Агд Агд РЪе Зег АЬа Ьеи СЬи СЬп СЬу ТЬе НЬз Рго Ргс СЬп АЬа СЬп 485 490 495
СЬи СЬи Ьеи СЬи СЬп СЬи Рго СЬи Ьеи СЬи Ргс СЬи
С'и Ьеи СЬи Агд СЬи Ьеи СЬу Ргс СЬи Ргс СЬи Рго СЬу Рго СЬи Рго 5Ь5 52С 525
С1и Рго СЬи СЬп Ьеи

Claims (35)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенное моноклональное антитело, связывающее человеческий ген активации лимфоцитов-3 (ЕАО-3), или его антигенсвязывающий участок, отличающееся тем, что оно содержит вариабельную область тяжёлой и/или лёгкой цепи, содержащую аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 85% гомологичные 5ЕО ГО N0: 37 и 5ЕО ГО N0: 43 соответственно.
  2. 2. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, отличающееся тем, что оно содержит вариабельную область тяжёлой и лёгкой цепи, содержащую аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 90% гомологичные 8ЕЦ ГО N0: 37 и 8ЕЦ ГО N0: 43 соответственно.
  3. 3. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, содержащее последовательности СЭК.1, СГОК2 и СГОК3 вариабельной области тяжёлой цепи, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 1, 7 и 13 соответственно, и последовательности СГОК1, СГОК2 и СГОК3 вариабельной области лёгкой цепи, как указано в 8ЕЦ ГО N0: 19, 25 и 31 соответственно.
  4. 4. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, содержащее вариабельную область тяжёлой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 37, и/или вариабельную область лёгкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0: 43.
  5. 5. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-4, которое ингибирует связывание ЬАС-3 с молекулами класса II главного комплекса гистосовместимости (МНС) и/или стимулирует иммунный ответ.
  6. 6. Антитело или его антигенсвязывающий участок по п.1, которое связывается с эпитопом на человеческом ЬАС-3, отличающееся тем, что эпитоп содержит аминокислотную последовательность ПРААР88А (81Ь) ГО N0: 77).
  7. 7. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое связывается с человеческим ЬАС-3 белком с Кс 1х 10-9 М или менее.
  8. 8. Антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из предыдущих пунктов, которое связывается с человеческим ЬАС-3 белком с Кс 5х 10-10 М или менее.
  9. 9. Композиция для стимуляции иммунного ответа, содержащая эффективное количество антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из предыдущих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель.
  10. 10. Композиция по п.9, дополнительно содержащая по меньшей мере одно иммуностимулирующее антитело.
  11. 11. Композиция по п.10, где иммуностимулирующее антитело представляет собой анти-РЭ-1 антитело, анти-РЭ-Ы антитело и/или анти-СТЬА-4 антитело.
  12. 12. Композиция по п.10, где иммуностимулирующее антитело представляет собой анти-РЭ-1 антитело.
  13. 13. Иммуноконъюгат, содержащий антитело или его антигенсвязывающий участок по любому из пп.1-8, связанное(ый) с терапевтическим агентом.
  14. 14. Молекула выделенной нуклеиновой кислоты, кодирующая вариабельную область антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8.
  15. 15. Экспрессирующий вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.14.
  16. 16. Клетка-хозяин, содержащая экспрессирующий вектор по п.15, находящаяся ш νίίτο или ш νίνο, за исключением тела человека.
  17. 17. Способ получения антитела против ЬАС-3, включающий экспрессию антитела в клетке-хозяине по п.16 и выделение антитела из клетки-хозяина.
  18. 18. Способ стимуляции антиген-специфического Т-клеточного ответа, включающий контактирование Т-клетки с антителом или его антигенсвязывающим участком по любому из пп.1-8, где Т-клетка находится ш νί!το или ш νίνο, за исключением тела человека.
  19. 19. Способ стимуляции антиген-специфического Т-клеточного ответа, включающий контактирование указанной Т-клетки с композицией по любому из пп.9-12, где Т-клетка находится ш νί!το или ш νίνο, за исключением тела человека.
  20. 20. Применение антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8 в иммунотерапии.
  21. 21. Применение по п.20, где иммунотерапия предназначена для стимулирования иммунного ответа у субъекта.
  22. 22. Применение по п.20, где иммунотерапия предназначена для стимулирования антигенспецифического Т-клеточного ответа.
  23. 23. Применение по п.20, где иммунотерапия предназначена для ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта.
  24. 24. Применение по п.20, где иммунотерапия предназначена для лечения вирусной инфекции у субъекта.
  25. 25. Применение композиции по любому из пп.9-12 в иммунотерапии.
  26. 26. Применение по п.25, где иммунотерапия предназначена для стимулирования антигенспецифического Т-клеточного ответа.
  27. 27. Применение по п.25, где иммунотерапия предназначена для стимулирования иммунного ответа у субъекта.
  28. 28. Применение по п.25, где иммунотерапия предназначена для ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта.
  29. 29. Применение по п.25, где иммунотерапия предназначена для лечения вирусной инфекции у субъекта.
    - 64 023032
  30. 30. Применение антитела или его антигенсвязывающего участка по любому из пп.1-8 для изготовления лекарственного средства для иммунотерапии.
  31. 31. Применение композиции по любому из пп.9-12 для изготовления лекарственного средства для иммунотерапии.
  32. 32. Применение по любому из пп.30, 31, при котором лекарственное средство предназначено для стимулирования иммунного ответа у субъекта.
  33. 33. Применение по любому из пп.30, 31, при котором лекарственное средство предназначено для стимулирования антиген-специфического Т-клеточного ответа.
  34. 34. Применение по любому из пп.30, 31, при котором лекарственное средство предназначено для ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта.
  35. 35. Применение по любому из пп.30, 31, при котором лекарственное средство предназначено для лечения вирусной инфекции у субъекта.
EA201100340A 2008-08-11 2009-08-11 Человеческие антитела, связывающие ген активации лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение EA023032B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18854808P 2008-08-11 2008-08-11
PCT/US2009/053405 WO2010019570A2 (en) 2008-08-11 2009-08-11 Human antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (lag-3), and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201100340A1 EA201100340A1 (ru) 2011-08-30
EA023032B1 true EA023032B1 (ru) 2016-04-29

Family

ID=41669613

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590777A EA201590777A1 (ru) 2008-08-11 2009-08-11 Человеческие антитела, связывающие ген активатор лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение
EA201100340A EA023032B1 (ru) 2008-08-11 2009-08-11 Человеческие антитела, связывающие ген активации лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590777A EA201590777A1 (ru) 2008-08-11 2009-08-11 Человеческие антитела, связывающие ген активатор лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение

Country Status (32)

Country Link
US (13) US20110150892A1 (ru)
EP (4) EP2905030B1 (ru)
JP (6) JP5647981B2 (ru)
KR (6) KR101700459B1 (ru)
CN (4) CN103923213A (ru)
AR (3) AR072999A1 (ru)
AU (2) AU2009282134B2 (ru)
BR (1) BRPI0917470B8 (ru)
CA (1) CA2734335C (ru)
CL (4) CL2011000308A1 (ru)
CO (1) CO6351751A2 (ru)
CY (2) CY1116582T1 (ru)
DK (3) DK3597216T3 (ru)
EA (2) EA201590777A1 (ru)
ES (3) ES2927547T3 (ru)
HK (2) HK1151985A1 (ru)
HR (3) HRP20221191T1 (ru)
HU (2) HUE025250T2 (ru)
IL (4) IL210731A (ru)
LT (2) LT2905030T (ru)
MX (2) MX2011001250A (ru)
NZ (3) NZ602780A (ru)
PE (3) PE20110306A1 (ru)
PL (3) PL2320940T3 (ru)
PT (3) PT3597216T (ru)
SG (1) SG10201706497QA (ru)
SI (2) SI2320940T1 (ru)
SM (1) SMT201500125B (ru)
TN (1) TN2011000025A1 (ru)
TW (1) TWI491408B (ru)
WO (1) WO2010019570A2 (ru)
ZA (1) ZA201101009B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2744866C2 (ru) * 2016-08-15 2021-03-16 Нэшнл Юниверсити Корпорейшн Хоккайдо Юниверсити Антитело против lag-3
RU2793400C2 (ru) * 2016-10-28 2023-03-31 МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи Способ очистки для удаления вариантов антител с сульфатированием тирозина; очищенные композиции

Families Citing this family (596)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI1957539T1 (sl) 2005-12-08 2013-05-31 Medarex, Inc. Humana monoklonska protitelesa proti protein tirozin kinazi 7 (PTK7) in njihova uporaba
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
BR112013013311A2 (pt) 2010-11-30 2017-09-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd agente terapêutico de indução de citotoxicidade
US8440797B2 (en) 2010-12-06 2013-05-14 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Human monoclonal antibody
CN103249833B (zh) * 2010-12-06 2016-06-29 大日本住友制药株式会社 人单克隆抗体
MX354922B (es) * 2011-06-30 2018-03-26 Genzyme Corp Inhibidores de la activación de las células t.
ES2834093T3 (es) 2011-07-21 2021-06-16 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology Inc Inhibidores de proteína quinasa heterocíclicos
UY34887A (es) * 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
AU2014230741B2 (en) * 2013-03-15 2017-04-13 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Anti-LAG-3 binding proteins
ES2935257T3 (es) 2013-03-15 2023-03-03 Univ Chicago Métodos y composiciones relacionadas con la actividad de las células T
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
EP2992017B1 (en) 2013-05-02 2020-11-18 AnaptysBio, Inc. Antibodies directed against programmed death-1 (pd-1)
AU2014296887A1 (en) 2013-08-02 2016-01-28 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Combining CD27 agonists and immune checkpoint inhibition for immune stimulation
US11273204B2 (en) 2013-08-08 2022-03-15 Cytune Pharma IL-15 and IL-15RAPLHA sushi domain based immunocytokines
KR102457731B1 (ko) 2013-08-08 2022-10-21 싸이튠 파마 병용 약학 조성물
RS64268B1 (sr) * 2013-09-20 2023-07-31 Bristol Myers Squibb Co Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora
EP3049445A4 (en) 2013-09-24 2017-10-25 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
WO2015048312A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
WO2015066413A1 (en) 2013-11-01 2015-05-07 Novartis Ag Oxazolidinone hydroxamic acid compounds for the treatment of bacterial infections
KR20240017102A (ko) * 2013-12-17 2024-02-06 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 탁산을 이용한 암 치료 방법
BR112016013741A2 (pt) * 2013-12-17 2017-10-03 Genentech Inc Usos de antagonistas de ligação de eixo de pd-1 e um anticorpo de anti-cd20, e kit compreendendo os mesmos
WO2015090230A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Novartis Ag Human mesothelin chimeric antigen receptors and uses thereof
GB201322626D0 (en) 2013-12-19 2014-02-05 Immutep S A Combined preparations for the treatment of cancer
CN106029663B (zh) 2013-12-24 2018-06-01 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的新颖三环化合物
JO3517B1 (ar) 2014-01-17 2020-07-05 Novartis Ag ان-ازاسبيرو الكان حلقي كبديل مركبات اريل-ان مغايرة وتركيبات لتثبيط نشاط shp2
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
EA201691361A1 (ru) 2014-01-28 2016-12-30 Бристол-Маерс Сквибб Компани Антитела к lag-3 для лечения гематологических злокачественных опухолей
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US9394365B1 (en) 2014-03-12 2016-07-19 Yeda Research And Development Co., Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease
US10144778B2 (en) 2014-03-12 2018-12-04 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
ME03558B (me) * 2014-03-14 2020-07-20 Novartis Ag Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe
EP3593812A3 (en) 2014-03-15 2020-05-27 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
AU2015236369B2 (en) 2014-03-24 2017-02-16 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
TWI726842B (zh) 2014-04-07 2021-05-11 日商中外製藥股份有限公司 免疫活化抗原結合分子
IL293603B2 (en) 2014-04-07 2024-03-01 Novartis Ag Cancer treatment using chimeric antigen receptor (CAR) against CD19
CA2946398A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Superagonists, partial agonists and antagonists of interleukin-2
MX2016014434A (es) 2014-05-13 2017-02-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union a antigeno redirigida a celulas t para celulas que tienen funcion de inmunosupresion.
BR122018009619B1 (pt) 2014-05-16 2024-01-02 Ablynx N.V Domínios variáveis de imunoglobulina aperfeiçoados
RU2746738C2 (ru) 2014-05-16 2021-04-20 Аблинкс Нв Улучшенные вариабельные домены иммуноглобулина
NZ726513A (en) 2014-05-28 2023-07-28 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-gitr antibodies and methods of use thereof
SG11201610074YA (en) 2014-06-06 2016-12-29 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
CA2951259A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Flexus Biosciences, Inc. Immunoregulatory agents
TWI693232B (zh) * 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
US9777061B2 (en) 2014-07-21 2017-10-03 Novartis Ag Treatment of cancer using a CD33 chimeric antigen receptor
WO2016014553A1 (en) 2014-07-21 2016-01-28 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
JP2017528433A (ja) 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
ES2781175T3 (es) 2014-07-31 2020-08-31 Novartis Ag Subconjunto optimizado de células T que contienen un receptor de antígeno quimérico
EP3177593A1 (en) 2014-08-06 2017-06-14 Novartis AG Quinolone derivatives as antibacterials
US20170216403A1 (en) 2014-08-12 2017-08-03 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and an immune checkpoint blocker
DK3180018T3 (da) 2014-08-12 2019-10-28 Massachusetts Inst Technology Synergistisk tumorbehandling med IL-2 og integrinbindende Fc-fusionsprotein
AU2015301460B2 (en) 2014-08-14 2021-04-08 Novartis Ag Treatment of cancer using GFR alpha-4 chimeric antigen receptor
JP7084138B2 (ja) 2014-08-19 2022-06-14 ノバルティス アーゲー 癌処置に使用するための抗ｃｄ１２３キメラ抗原受容体（ｃａｒ）
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
EP3191126B1 (en) 2014-09-13 2020-05-13 Novartis AG Combination therapies of alk inhibitors
CA2961636A1 (en) 2014-09-17 2016-03-24 Boris ENGELS Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
AU2015327868A1 (en) 2014-10-03 2017-04-20 Novartis Ag Combination therapies
MA41044A (fr) 2014-10-08 2017-08-15 Novartis Ag Compositions et procédés d'utilisation pour une réponse immunitaire accrue et traitement contre le cancer
CA2963935A1 (en) 2014-10-08 2016-04-14 Novartis Ag Biomarkers predictive of therapeutic responsiveness to chimeric antigen receptor therapy and uses thereof
KR20170072244A (ko) 2014-10-10 2017-06-26 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 관문 억제제를 가지는 tlr9 효능제를 이용한 암 치료
CU20170052A7 (es) 2014-10-14 2017-11-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1
MX2017005462A (es) 2014-11-05 2017-07-28 Flexus Biosciences Inc Agentes inmunorreguladores.
UY36390A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen
AR102537A1 (es) 2014-11-05 2017-03-08 Flexus Biosciences Inc Agentes inmunomoduladores
EP3789399A1 (en) 2014-11-21 2021-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
KR102569813B1 (ko) 2014-11-21 2023-08-24 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Cd73에 대항한 항체 및 그의 용도
US20180334490A1 (en) 2014-12-03 2018-11-22 Qilong H. Wu Methods for b cell preconditioning in car therapy
WO2016094639A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Wisconsin Alumni Research Foundation Mini-intronic plasmid dna vaccines in combination with lag3 blockade
CN107001295B (zh) 2014-12-16 2021-02-02 诺华股份有限公司 作为LpxC抑制剂的异噁唑异羟肟酸化合物
WO2016100882A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Novartis Ag Combination therapies
AR103232A1 (es) 2014-12-22 2017-04-26 Bristol Myers Squibb Co ANTAGONISTAS DE TGFbR
MA40662B1 (fr) 2014-12-23 2020-12-31 Bristol Myers Squibb Co Anticorps contre tigit
GB201500374D0 (en) * 2015-01-09 2015-02-25 Immutep S A Combined preparations for the treatment of cancer
WO2016126608A1 (en) 2015-02-02 2016-08-11 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
MA41463A (fr) * 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
US10983128B2 (en) 2015-02-05 2021-04-20 Bristol-Myers Squibb Company CXCL11 and SMICA as predictive biomarkers for efficacy of anti-CTLA4 immunotherapy
ES2789331T3 (es) 2015-03-02 2020-10-26 Rigel Pharmaceuticals Inc Inhibidores de TGF-beta
KR20170129802A (ko) 2015-03-10 2017-11-27 아두로 바이오테크, 인코포레이티드 ＂인터페론 유전자의 자극인자＂-의존적 신호전달을 활성화하는 조성물 및 방법
US20180133327A1 (en) 2015-03-16 2018-05-17 Amal Therapeutics Sa Cell Penetrating Peptides and Complexes Comprising the Same
AU2016243937A1 (en) 2015-04-03 2017-11-23 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase for the treatment of cancer
WO2016164580A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Novartis Ag Combination of chimeric antigen receptor therapy and amino pyrimidine derivatives
WO2016162505A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 F-Star Biotechnology Limited Her2 binding agent therapies
RU2021121771A (ru) 2015-04-08 2022-01-12 Новартис Аг Cd20 терапия, cd22 терапия и комбинированная терапия клетками, экспрессирующими химерный антигенный рецептор (car) к cd19
BR112017020952A2 (pt) 2015-04-13 2018-07-10 Five Prime Therapeutics Inc método de tratamento de câncer, composição e uso da composição
HUE050894T2 (hu) 2015-04-17 2021-01-28 Bristol Myers Squibb Co Kompozíciók, amelyek tartalmazzák ipilimumab és nivolumab kombinációját
WO2016168595A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Barrett David Maxwell Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells
WO2016172583A1 (en) 2015-04-23 2016-10-27 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
PL3291679T3 (pl) 2015-05-06 2022-04-25 Snipr Technologies Limited Zmiana populacji drobnoustrojowych i modyfikowanie mikrobioty
ES2815683T3 (es) 2015-05-11 2021-03-30 Bristol Myers Squibb Co Compuestos tricíclicos como agentes antineoplásicos
US10174024B2 (en) 2015-05-12 2019-01-08 Bristol-Myers Squibb Company 5H-pyrido[3,2-B]indole compounds as anticancer agents
US9725449B2 (en) 2015-05-12 2017-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
DK3303394T3 (da) 2015-05-29 2020-07-06 Agenus Inc Anti-ctla-4-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse deraf
MY188049A (en) 2015-05-29 2021-11-12 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against ox40 and uses thereof
EA039293B1 (ru) * 2015-06-05 2021-12-30 Мерк Шарп И Доум Корп. Антитела против lag3 и антигенсвязывающие фрагменты
TWI773646B (zh) * 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
US20160376373A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 Janssen Biotech, Inc. Immune Modulation and Treatment of Solid Tumors with Antibodies that Specifically Bind CD38
EA201890162A1 (ru) 2015-06-29 2018-07-31 Бристол-Маерс Сквибб Компани Антитела к cd40 с повышенной агонистической активностью
HUE053966T2 (hu) 2015-07-14 2021-08-30 Bristol Myers Squibb Co Eljárás rák kezelésére immunellenõrzõpont inhibitorral, antitest, amely köt programozott halál-1 receptorhoz (PD-1) vagy programozott halál ligandum 1-hez (PD-L1)
JP2018521983A (ja) 2015-07-16 2018-08-09 バイオカイン セラピューティックス リミテッド がんを治療するための組成物および方法
AU2016297014B2 (en) 2015-07-21 2021-06-17 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
US9902772B2 (en) * 2015-07-22 2018-02-27 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind LAG3
EP3328861A1 (en) 2015-07-28 2018-06-06 Bristol-Myers Squibb Company Tgf beta receptor antagonists
SI3317301T1 (sl) 2015-07-29 2021-10-29 Novartis Ag Kombinirane terapije, ki obsegajo molekule protitelesa na LAG-3
WO2017019897A1 (en) 2015-07-29 2017-02-02 Novartis Ag Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
PT3328419T (pt) 2015-07-30 2021-11-26 Macrogenics Inc Moléculas de ligação pd-1 e métodos de utilização
EP3331919A1 (en) 2015-08-07 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination therapy comprising anti ctla-4 antibodies
JP2018525415A (ja) 2015-08-25 2018-09-06 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｔｇｆベータ受容体アンタゴニスト
MA48579A (fr) 2015-09-01 2020-03-18 Agenus Inc Anticorps anti-pd1 et méthodes d'utilisation de ceux-ci
KR20180042412A (ko) 2015-09-02 2018-04-25 이뮤텝 에스.에이.에스. 항-lag-3 항체
US11747346B2 (en) 2015-09-03 2023-09-05 Novartis Ag Biomarkers predictive of cytokine release syndrome
WO2017055404A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
TWI756187B (zh) * 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
US10149887B2 (en) 2015-10-23 2018-12-11 Canbas Co., Ltd. Peptides and peptidomimetics in combination with t cell activating and/or checkpoint inhibiting agents for cancer treatment
EP3371208A1 (en) 2015-11-02 2018-09-12 Five Prime Therapeutics, Inc. Cd80 extracellular domain polypeptides and their use in cancer treatment
BR112018008891A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Janssen Biotech Inc anticorpos que se ligam especificamente a pd-1 e tim-3 e seus usos
WO2017079746A2 (en) 2015-11-07 2017-05-11 Multivir Inc. Methods and compositions comprising tumor suppressor gene therapy and immune checkpoint blockade for the treatment of cancer
JP6945456B2 (ja) * 2015-11-13 2021-10-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
KR102317574B1 (ko) * 2015-11-18 2021-10-26 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Pd1 및/또는 lag3 결합제
JP6931329B2 (ja) 2015-11-18 2021-09-01 中外製薬株式会社 免疫抑制機能を有する細胞に対するｔ細胞リダイレクト抗原結合分子を用いた併用療法
JP6925278B2 (ja) 2015-11-18 2021-08-25 中外製薬株式会社 液性免疫応答の増強方法
WO2017087901A2 (en) * 2015-11-19 2017-05-26 Sutro Biopharma, Inc. Anti-lag3 antibodies, compositions comprising anti-lag3 antibodies and methods of making and using anti-lag3 antibodies
EA201891121A1 (ru) 2015-11-19 2018-12-28 Бристол-Майерс Сквибб Компани Антитела к глюкокортикоид-индуцированному рецептору фактора некроза опухоли (gitr) и их применения
SI3376857T1 (sl) * 2015-11-20 2021-09-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nehumane živali, ki imajo humaniziran gen 3 za aktivacijo limfocitov
BR112018010410A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Five Prime Therapeutics Inc método para tratar câncer em um sujeito, composição e métodos de aumento do número de células nk e de aumento do número de uma ou mais células positivas para pd-l1
CA3007233A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Agenus Inc. Antibodies and methods of use thereof
SG11201804839WA (en) 2015-12-14 2018-07-30 Macrogenics Inc Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof
US10450318B2 (en) 2015-12-15 2019-10-22 Bristol-Myers Squibb Company CXCR4 receptor antagonists
KR20180086502A (ko) * 2015-12-16 2018-07-31 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-lag3 항체 및 항원-결합 단편
JP2019503349A (ja) 2015-12-17 2019-02-07 ノバルティス アーゲー Ｐｄ−１に対する抗体分子およびその使用
US10392442B2 (en) 2015-12-17 2019-08-27 Bristol-Myers Squibb Company Use of anti-PD-1 antibody in combination with anti-CD27 antibody in cancer treatment
JP2019506844A (ja) 2015-12-18 2019-03-14 ノバルティス アーゲー ＣＤ３２ｂを標的とする抗体およびその使用方法
WO2017106630A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 The General Hospital Corporation Polyacetal polymers, conjugates, particles and uses thereof
EP3393504A1 (en) 2015-12-22 2018-10-31 Novartis AG Mesothelin chimeric antigen receptor (car) and antibody against pd-l1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
CN108473569B (zh) 2016-01-11 2022-11-22 苏黎世大学 针对人白介素-2的免疫刺激性人源化单克隆抗体及其融合蛋白
EA038098B1 (ru) 2016-02-19 2021-07-06 Новартис Аг Тетрациклические пиридоновые соединения в качестве противовирусных средств
SG10201913033UA (en) 2016-03-04 2020-03-30 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy with anti-cd73 antibodies
SG10201601719RA (en) * 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
BR112018067679A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-15 Novartis Ag células que expressam múltiplas moléculas do receptor de antígeno quimérico (car) e seu uso
MX2018011204A (es) 2016-03-15 2019-03-07 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco dirigidos a napi2b y sus metodos de uso.
AU2017234192B2 (en) 2016-03-16 2024-04-04 Amal Therapeutics Sa Combination of an immune checkpoint modulator and a complex comprising a cell penetrating peptide, a cargo and a TLR peptide agonist for use in medicine
ES2962269T3 (es) 2016-03-24 2024-03-18 Novartis Ag Análogos de nucleósidos alquinil como inhibidores del rinovirus humano
JP7038353B2 (ja) 2016-04-13 2022-03-18 ヴィヴィア バイオテック，エス．エル エクスビボのｂｉｔｅ活性化ｔ細胞
JP7038064B2 (ja) 2016-04-18 2022-03-17 セルデックス セラピューティクス インコーポレイテッド ヒトｃｄ４０に結合するアゴニスト抗体およびその使用
KR20190004743A (ko) 2016-05-04 2019-01-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 인돌아민 2,3-디옥시게나제의 억제제 및 그의 사용 방법
WO2017192813A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
EP3452029A4 (en) 2016-05-04 2019-10-30 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
US10696648B2 (en) 2016-05-04 2020-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
JP2019516682A (ja) 2016-05-04 2019-06-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤およびその使用方法
DK3458478T3 (da) * 2016-05-18 2021-03-22 Boehringer Ingelheim Int Anti-pd-1- og anti-lag3-antistoffer til cancerbehandling
MX2018013868A (es) 2016-05-20 2019-02-21 Biohaven Pharm Holding Co Ltd Uso de agentes de modulacion de glutamato con inmunoterapias para tratar cancer.
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
CN109789177A (zh) 2016-05-27 2019-05-21 德那翠丝有限公司 腺病毒和免疫调节剂组合治疗
CN115671292A (zh) 2016-06-10 2023-02-03 Io治疗公司 用于癌症免疫疗法的受体选择性类视黄醇和rexinoid化合物和免疫调节剂
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
CA3026356A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Novartis Ag Crystalline form of (r)-4-(5-(cyclopropylethynyl)isoxazol-3-yl)-n-hydroxy-2-methyl-2-(methylsulfonyl)butanamide as an antibacterial agent
WO2017216685A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag Pentacyclic pyridone compounds as antivirals
WO2017216686A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Novartis Ag 8,9-fused 2-oxo-6,7-dihydropyrido-isoquinoline compounds as antivirals
JP7461741B2 (ja) 2016-06-20 2024-04-04 カイマブ・リミテッド 抗ｐｄ－ｌ１およびｉｌ－２サイトカイン
CN109311993B (zh) 2016-06-20 2022-12-20 F-星治疗有限公司 Lag-3结合元件
SG11201811064TA (en) 2016-06-20 2019-01-30 F Star Delta Ltd Binding molecules binding pd-l1 and lag-3
TWI757304B (zh) * 2016-06-23 2022-03-11 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 Lag-3抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途
WO2017223422A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies
AU2017290828A1 (en) 2016-06-30 2019-01-24 Virogin Biotech Canada Ltd Pseudotyped oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
AU2017297506A1 (en) 2016-07-14 2019-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against TIM3 and uses thereof
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
WO2018017708A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 University Of Utah Research Foundation Cd229 car t cells and methods of use thereof
WO2018017633A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Bristol-Myers Squibb Company TGF Beta RECEPTOR ANTAGONISTS
EA039718B1 (ru) * 2016-07-21 2022-03-03 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела к lag3 и их применения
DK3347379T5 (da) 2016-08-17 2020-06-15 Compugen Ltd Anti-tigit-antistoffer, anti-pvrig-antistoffer og kombinationer deraf
CN109843322A (zh) 2016-08-26 2019-06-04 百时美施贵宝公司 吲哚胺2,3-双加氧酶的抑制剂及其使用方法
TW201811788A (zh) 2016-09-09 2018-04-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之多環吡啶酮化合物
US10647767B2 (en) 2016-09-19 2020-05-12 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Anti-GM-CSF antibodies and uses thereof
CA3031170A1 (en) 2016-09-21 2018-03-29 Amal Therapeutics Sa Fusion comprising a cell penetrating peptide, a multi epitope and a tlr peptide agonist for treatment of cancer
CA3036564A1 (en) 2016-09-23 2018-03-29 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific antibody molecules comprising lambda and kappa light chains
JP2020500151A (ja) 2016-09-27 2020-01-09 ボード オブ リージェンツ， ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム マイクロバイオームをモジュレートすることにより、免疫チェックポイント遮断療法を増強するための方法
JOP20190061A1 (ar) 2016-09-28 2019-03-26 Novartis Ag مثبطات بيتا-لاكتاماز
WO2018067992A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Novartis Ag Chimeric antigen receptors for the treatment of cancer
CN117586403A (zh) * 2016-10-11 2024-02-23 艾吉纳斯公司 抗lag-3抗体及其使用方法
RU2755903C2 (ru) 2016-10-12 2021-09-22 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Способы и композиции для tusc2-иммунотерапии
JP7212821B2 (ja) 2016-10-13 2023-01-26 チア・タイ・ティエンチン・ファーマシューティカル・グループ・カンパニー・リミテッド 抗ｌａｇ－３抗体および組成物
TW201819380A (zh) 2016-10-18 2018-06-01 瑞士商諾華公司 作為抗病毒劑之稠合四環吡啶酮化合物
AU2017354070A1 (en) 2016-11-01 2019-05-16 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against programmed death- 1 (PD-1)
UY37463A (es) 2016-11-02 2018-05-31 Glaxosmithkline Ip No 2 Ltd Proteínas de unión
US10660909B2 (en) 2016-11-17 2020-05-26 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists
US11279694B2 (en) 2016-11-18 2022-03-22 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
BR112019010878A2 (pt) 2016-11-29 2019-10-01 Lindhofer Horst combinação de anticorpos multifuncionais de redirecionamento de células t com moduladores de ponto de verificação imunológico e usos dos mesmos
WO2018102786A1 (en) 2016-12-03 2018-06-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for modulation of car-t cells
WO2018106738A1 (en) 2016-12-05 2018-06-14 Massachusetts Institute Of Technology Brush-arm star polymers, conjugates and particles, and uses thereof
EA201991383A1 (ru) 2016-12-07 2019-12-30 Эйдженус Инк. Антитела против ctla-4 и способы их применения
WO2018111902A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Multivir Inc. Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases
US20200095301A1 (en) 2016-12-14 2020-03-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Il-13 superkine: immune cell targeting constructs and methods of use thereof
CN108204958A (zh) * 2016-12-19 2018-06-26 伊缪泰普有限公司 结合测定
US10961239B2 (en) 2017-01-05 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company TGF beta receptor antagonists
BR112019014187A2 (pt) 2017-01-09 2020-02-11 Tesaro, Inc. Métodos de tratamento de câncer com anticorpos anti-pd-1
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
AU2018207303A1 (en) 2017-01-10 2019-07-25 xCella Biosciences, Inc. Combination tumor treatment with an integrin-binding-Fc fusion protein and immune modulator
KR102611446B1 (ko) 2017-01-20 2023-12-06 아르커스 바이오사이언시즈 인코포레이티드 암-관련 장애의 치료를 위한 아졸로피리미딘
CN110650974B (zh) 2017-02-10 2024-04-19 瑞泽恩制药公司 用于免疫-pet成像的放射性标记的抗-lag3抗体
US20200291089A1 (en) 2017-02-16 2020-09-17 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules comprising a trimeric ligand and uses thereof
CA3051839A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to alpha-synuclein and uses thereof
EP3389702A4 (en) 2017-02-22 2019-08-14 I-Mab ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2018152687A1 (en) * 2017-02-22 2018-08-30 I-Mab Anti-lymphocyte activation gene-3 (lag-3) antibodies and uses thereof
TW201834697A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商梅爾莎納醫療公司 Her2標靶抗體－藥物結合物之組合療法
CA3057687A1 (en) 2017-03-31 2018-10-04 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer using anti-gitr antibodies
US20210101980A1 (en) 2017-03-31 2021-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
KR102461885B1 (ko) 2017-04-03 2022-11-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-pd-1 항체와 돌연변이 il-2 또는 il-15의 면역접합체
MX2019011916A (es) 2017-04-05 2020-01-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-lag3.
CA3185303A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Symphogen A/S Combination therapies targeting pd-a, tim-3, and lag-3
KR102346336B1 (ko) * 2017-04-05 2022-01-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd1 및 lag3에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
CN110709422B (zh) 2017-04-19 2023-12-26 马伦戈治疗公司 多特异性分子及其用途
US20200085891A1 (en) 2017-04-21 2020-03-19 Sillajen, Inc Oncolytic vaccinia virus and checkpoint inhibitor combination therapy
CN110831600B (zh) 2017-04-21 2023-10-17 医肯纳肿瘤学公司 吲哚ahr抑制剂和其用途
JP2020517699A (ja) 2017-04-26 2020-06-18 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ジスルフィド結合の還元を最小限にする抗体製造法
BR112019022515A2 (pt) * 2017-04-27 2020-06-16 Tesaro, Inc. Agentes de anticorpo direcionados contra o gene 3 de ativação linfocitária (lag-3) e usos dos mesmos
AR111419A1 (es) 2017-04-27 2019-07-10 Novartis Ag Compuestos fusionados de indazol piridona como antivirales
EP3615055A1 (en) 2017-04-28 2020-03-04 Novartis AG Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
CA3059769A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules comprising a non-immunoglobulin heterodimerization domain and uses thereof
US20200179511A1 (en) 2017-04-28 2020-06-11 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
US11789010B2 (en) 2017-04-28 2023-10-17 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treatment with CD80 extracellular domain polypeptides
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
AR111658A1 (es) 2017-05-05 2019-08-07 Novartis Ag 2-quinolinonas tricíclicas como agentes antibacteriales
US11339218B2 (en) 2017-05-10 2022-05-24 Zhejiang Shimai Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies against LAG3 and uses thereof
JP7090347B2 (ja) 2017-05-12 2022-06-24 ハープーン セラピューティクス，インク． メソテリン結合タンパク質
WO2018209049A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2018213297A1 (en) 2017-05-16 2018-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of cancer with anti-gitr agonist antibodies
PL3634417T3 (pl) 2017-05-17 2023-09-25 Arcus Biosciences, Inc. Pochodne chinazolino-pirazolowe do leczenia chorób związanych z nowotworem
CA3064321A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions
CA3064333A1 (en) 2017-05-29 2018-12-06 Gamamabs Pharma Cancer-associated immunosuppression inhibitor
BR112019021847A2 (pt) 2017-05-30 2020-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Composições compreendendo um anticorpo anti-lag-3 ou um anticorpo anti-lag-3 e um anticorpo anti-pd-1 ou anti-pd-l1
SI3631454T1 (sl) 2017-05-30 2023-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Zdravljenje lag-3 pozitivnih tumorjev
EP3630842A2 (en) 2017-05-30 2020-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
EP3630836A1 (en) 2017-05-31 2020-04-08 Elstar Therapeutics, Inc. Multispecific molecules that bind to myeloproliferative leukemia (mpl) protein and uses thereof
WO2018223002A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd 123 cd3
WO2018223004A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Xencor, Inc. Bispecific antibodies that bind cd20 and cd3
AU2018275894A1 (en) 2017-06-02 2019-12-12 Juno Therapeutics, Inc. Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
US11542312B2 (en) 2017-06-19 2023-01-03 Medicenna Therapeutics, Inc. IL-2 superagonists in combination with anti-PD-1 antibodies
WO2018237157A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag CD73 BINDING ANTIBODY MOLECULES AND USES THEREOF
WO2018234879A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag USE OF IL-1β BINDING ANTIBODIES IN THE TREATMENT OF CANCER
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
CA3066747A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag Dosage regimens for anti-tim-3 antibodies and uses thereof
CA3067602A1 (en) 2017-06-29 2019-01-03 Juno Therapeutics, Inc. Mouse model for assessing toxicities associated with immunotherapies
EP3644993B1 (en) 2017-06-30 2023-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Amorphous and crystalline forms of ido inhibitors
TW201920275A (zh) 2017-07-06 2019-06-01 荷蘭商米樂斯股份有限公司 藉由細胞表現之調控生物活性的抗體
IL302133A (en) 2017-07-13 2023-06-01 Io Therapeutics Inc A combination of a rexinoid and retinoid substance with immunomodulatory properties and immunomodulatory substances for cancer treatment
CN110914303B (zh) * 2017-07-13 2023-06-02 南京维立志博生物科技有限公司 结合lag-3的抗体及其用途
CN111163798A (zh) 2017-07-20 2020-05-15 诺华股份有限公司 用于抗lag-3抗体的给药方案及其用途
ES2932354T3 (es) 2017-07-28 2023-01-18 Bristol Myers Squibb Co Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer
WO2019035938A1 (en) 2017-08-16 2019-02-21 Elstar Therapeutics, Inc. MULTISPECIFIC MOLECULES BINDING TO BCMA AND USES THEREOF
MX2020001793A (es) 2017-08-17 2020-07-22 Ikena Oncology Inc Inhibidores del receptor de hidrocarburos de arilo (ahr) y usos de los mismos.
WO2019035985A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Tragara Pharmaceuticals, Inc. POLYMORPHIC FORM OF TG02
CA3073733A1 (en) * 2017-08-30 2019-03-07 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-lag-3 antibodies and uses thereof
US10953032B2 (en) 2017-08-31 2021-03-23 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019046496A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
EP3676278B1 (en) 2017-08-31 2023-04-12 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
AU2018326617B2 (en) 2017-08-31 2022-12-01 Io Therapeutics, Inc. Rar selective agonists in combination with immune modulators for cancer immunotherapy
JP7196160B2 (ja) 2017-09-12 2022-12-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン
EP3684366A4 (en) 2017-09-22 2021-09-08 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND USES OF THE LATEST
AU2018338314A1 (en) 2017-09-22 2020-04-09 Kymera Therapeutics, Inc Protein degraders and uses thereof
JP7384668B2 (ja) * 2017-10-05 2023-11-21 第一三共株式会社 細胞傷害性ｔ細胞枯渇用組成物
WO2019074824A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
US11649212B2 (en) 2017-10-09 2023-05-16 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US11660311B2 (en) 2017-10-10 2023-05-30 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
WO2019075090A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Tilos Therapeutics, Inc. ANTI-LAP ANTIBODIES AND USES THEREOF
CR20200195A (es) 2017-10-13 2020-08-14 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas de unión a antigenos de maduraciòn de celulas b
EP3694884A1 (en) 2017-10-15 2020-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
JP7254821B2 (ja) 2017-10-16 2023-04-10 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗がん剤としての環状ジヌクレオチド
WO2019076277A1 (zh) * 2017-10-17 2019-04-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗pd-1抗体和抗lag-3抗体联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
US20210189336A1 (en) 2017-10-18 2021-06-24 Vivia Biotech, S.L. Bite-activated car-t cells
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
CN111902159A (zh) 2017-11-01 2020-11-06 朱诺治疗学股份有限公司 对b细胞成熟抗原（bcma）具有特异性的嵌合抗原受体
US11603410B2 (en) 2017-11-01 2023-03-14 Bristol-Myers Squibb Company Immunostimulatory agonistic antibodies for use in treating cancer
US11623961B2 (en) 2017-11-01 2023-04-11 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for B-cell maturation antigen
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
JP7167146B2 (ja) 2017-11-06 2022-11-08 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｈｐｋ１阻害剤として有用なイソフラノン化合物
CA3081602A1 (en) 2017-11-16 2019-05-23 Novartis Ag Combination therapies
US20210079015A1 (en) 2017-11-17 2021-03-18 Novartis Ag Novel dihydroisoxazole compounds and their use for the treatment of hepatitis b
WO2019104289A1 (en) 2017-11-27 2019-05-31 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3717907A1 (en) 2017-11-30 2020-10-07 Novartis AG Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
JP7348899B2 (ja) 2017-12-08 2023-09-21 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 多重特異性分子及びその使用
WO2019118937A1 (en) 2017-12-15 2019-06-20 Juno Therapeutics, Inc. Anti-cct5 binding molecules and methods of use thereof
CA3086098A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 F-Star Beta Limited Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
JP2021507906A (ja) 2017-12-20 2021-02-25 ノバルティス アーゲー 抗ウイルス剤としての融合三環式ピラゾロ−ジヒドロピラジニル−ピリドン化合物
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
EP3714901A4 (en) 2017-12-22 2022-03-02 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. ANTI-LAG-3 ANTIBODY PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND USE THEREOF
US10874743B2 (en) 2017-12-26 2020-12-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAK degraders and uses thereof
CN109970857B (zh) * 2017-12-27 2022-09-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗pd-l1抗体及其用途
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019133747A1 (en) 2017-12-27 2019-07-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-cd40 antibodies and uses thereof
WO2019129137A1 (zh) * 2017-12-27 2019-07-04 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
WO2019133847A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Oncorus, Inc. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
US11447449B2 (en) 2018-01-05 2022-09-20 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN112218651A (zh) 2018-01-08 2021-01-12 诺华公司 用于与嵌合抗原受体疗法组合的免疫增强rna
EP3737675A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND THEIR USES
WO2019140229A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against tim3 and uses thereof
EP3737666A4 (en) 2018-01-12 2022-01-05 Kymera Therapeutics, Inc. PROTEIN DEGRADANTS AND USES THEREOF
WO2019141092A1 (zh) * 2018-01-18 2019-07-25 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 抗lag-3抗体及其用途
SG11202006832YA (en) 2018-01-29 2020-08-28 Merck Patent Gmbh Gcn2 inhibitors and uses thereof
KR20200116481A (ko) 2018-01-29 2020-10-12 메르크 파텐트 게엠베하 Gcn2 억제제 및 이의 용도
CA3090249A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20200354457A1 (en) 2018-01-31 2020-11-12 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibodies comprising an antigen-binding site binding to lag3
WO2019149715A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Stabilized immunoglobulin domains
WO2019152743A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Celgene Corporation Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
EP3752203A1 (en) 2018-02-13 2020-12-23 Novartis AG Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019165315A1 (en) 2018-02-23 2019-08-29 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists alone or in combination
EP3758751A4 (en) 2018-02-28 2021-11-17 Wuxi Biologics Ireland Limited. MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST HUMAN LAG-3, METHOD OF MANUFACTURING AND USING THEREOF
US20200407365A1 (en) 2018-02-28 2020-12-31 Novartis Ag Indole-2-carbonyl compounds and their use for the treatment of hepatitis b
KR20200130362A (ko) 2018-03-08 2020-11-18 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항암제로서의 시클릭 디뉴클레오티드
WO2019178364A2 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules and uses thereof
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
EP3768698A4 (en) 2018-03-19 2022-03-30 MultiVir Inc. METHODS AND COMPOSITIONS COMPRISING TUMOR SUPPRESSIVE GENE THERAPY AND CD122/CD132 AGONISTS FOR THE TREATMENT OF CANCER
US11661452B2 (en) 2018-03-20 2023-05-30 WuXi Biologics Ireland Limited Anti-lag-3 antibody polypeptide
AU2019239747A1 (en) 2018-03-21 2020-10-08 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to VISTA at acidic pH
SG11202008802QA (en) * 2018-03-22 2020-10-29 Keires Ag Antagonistic pd-1, pd-l1 and lag-3 binding proteins
PE20210665A1 (es) 2018-03-23 2021-03-31 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra mica y/o micb y sus usos
BR112020019418A2 (pt) 2018-03-25 2021-02-17 Snipr Biome Aps. tratamento e prevenção de infecções microbianas
US10760075B2 (en) 2018-04-30 2020-09-01 Snipr Biome Aps Treating and preventing microbial infections
CN111971306A (zh) 2018-03-30 2020-11-20 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
WO2019192432A1 (zh) 2018-04-02 2019-10-10 上海博威生物医药有限公司 结合淋巴细胞活化基因-3(lag-3)的抗体及其用途
CN110343178B (zh) * 2018-04-03 2022-07-22 上海开拓者生物医药有限公司 抗人lag-3单克隆抗体及其应用
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
CA3096546A1 (en) 2018-04-16 2019-10-24 Arrys Therapeutics, Inc. Ep4 inhibitors and use thereof
WO2019204592A1 (en) 2018-04-18 2019-10-24 Xencor, Inc. Il-15/il-15ra heterodimeric fc fusion proteins and uses thereof
EP3781599A1 (en) 2018-04-18 2021-02-24 Xencor, Inc. Pd-1 targeted heterodimeric fusion proteins containing il-15/il-15ra fc-fusion proteins and pd-1 antigen binding domains and uses thereof
EP3784351A1 (en) 2018-04-27 2021-03-03 Novartis AG Car t cell therapies with enhanced efficacy
EP3788369A1 (en) 2018-05-01 2021-03-10 Novartis Ag Biomarkers for evaluating car-t cells to predict clinical outcome
US20230339891A1 (en) 2018-05-03 2023-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Uracil derivatives as mer-axl inhibitors
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
WO2019232244A2 (en) 2018-05-31 2019-12-05 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
EP3801617A1 (en) 2018-06-01 2021-04-14 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that bind cd123 and cd3
CA3098420A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Novartis Ag Binding molecules against bcma and uses thereof
CN113166972A (zh) * 2018-06-11 2021-07-23 耶鲁大学 新型免疫检查点抑制剂
EP3806962A1 (en) 2018-06-13 2021-04-21 Novartis AG Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof
CN110606892B (zh) * 2018-06-14 2023-09-26 华博生物医药技术（上海）有限公司 一种高亲和力高生物活性的lag-3抗体及其应用
CN110615840A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗lag-3抗体及其应用
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
WO2020006018A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Substituted naphthyridinone compounds useful as t cell activators
CA3104647A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Naphthyridinone compounds useful as t cell activators
KR102250234B1 (ko) * 2018-06-29 2021-05-10 주식회사 와이바이오로직스 Lag-3에 특이적으로 결합하는 단클론항체 및 이의 용도
EP3818083A2 (en) 2018-07-03 2021-05-12 Elstar Therapeutics, Inc. Anti-tcr antibody molecules and uses thereof
US11292792B2 (en) 2018-07-06 2022-04-05 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic CRBN ligands and uses thereof
AU2019302454A1 (en) 2018-07-09 2021-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to ILT4
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
SG11202011872QA (en) 2018-07-10 2021-01-28 Novartis Ag 3-(5-hydroxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and their use in the treatment of ikaros family zinc finger 2 (ikzf2)-dependent diseases
WO2020014327A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to vista at acidic ph
WO2020018503A2 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-il36r antibodies
CA3106114A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Surface Oncology, Inc. Anti-cd112r compositions and methods
WO2020023355A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US20210355113A1 (en) 2018-07-23 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
CN112739371A (zh) 2018-07-26 2021-04-30 百时美施贵宝公司 用于治疗癌症的lag-3组合疗法
WO2020038397A1 (en) * 2018-08-21 2020-02-27 I-Mab Anti-pd-l1/anti-lag3 bispecific antibodies and uses thereof
US10959986B2 (en) 2018-08-29 2021-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
US11253525B2 (en) 2018-08-29 2022-02-22 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
JP2022500499A (ja) 2018-09-07 2022-01-04 ピク セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｅｉｆ４ｅ阻害剤およびその使用
EP3849979A1 (en) 2018-09-12 2021-07-21 Novartis AG Antiviral pyridopyrazinedione compounds
CN112105633B (zh) 2018-09-21 2024-03-12 信达生物制药(苏州)有限公司 新型白介素2及其用途
TWI801664B (zh) 2018-09-21 2023-05-11 大陸商信達生物製藥（蘇州）有限公司 新型白介素２及其用途
US10815311B2 (en) 2018-09-25 2020-10-27 Harpoon Therapeutics, Inc. DLL3 binding proteins and methods of use
AU2019346645A1 (en) 2018-09-27 2021-04-29 Marengo Therapeutics, Inc. CSF1R/CCR2 multispecific antibodies
EP3856782A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Novartis AG Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies
US20220047633A1 (en) 2018-09-28 2022-02-17 Novartis Ag Cd22 chimeric antigen receptor (car) therapies
EP4282416A3 (en) 2018-09-29 2024-03-06 Novartis AG Process of manufacture of a compound for inhibiting the activity of shp2
US11358999B2 (en) 2018-10-03 2022-06-14 Xencor, Inc. IL-12 heterodimeric Fc-fusion proteins
US11130802B2 (en) 2018-10-10 2021-09-28 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants
MX2021004059A (es) 2018-10-12 2021-09-23 Xencor Inc Proteínas de fusión de il-15/il-15ralfa-fc dirigidas a pd-1 y usos de las mismas en terapias combinadas.
SG11202102864XA (en) 2018-10-19 2021-05-28 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy for melanoma
US20230021500A1 (en) 2018-10-29 2023-01-26 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
EP3873943A2 (en) 2018-11-01 2021-09-08 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
AU2019374103A1 (en) 2018-11-01 2021-05-20 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for G Protein-Coupled Receptor Class C Group 5 Member D (GPRC5D)
SG11202105084VA (en) 2018-11-16 2021-06-29 Juno Therapeutics Inc Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies
AU2019380307A1 (en) 2018-11-16 2021-07-01 Bristol-Myers Squibb Company Anti-NKG2A antibodies and uses thereof
JP2022513685A (ja) 2018-11-30 2022-02-09 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 養子細胞療法を用いた処置のための方法
BR112021010484A2 (pt) 2018-11-30 2021-08-24 Kymera Therapeutics, Inc. Degradadores de irak e usos dos mesmos
MX2021006544A (es) 2018-12-04 2021-07-07 Sumitomo Pharma Oncology Inc Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer.
JP2022514315A (ja) 2018-12-20 2022-02-10 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与計画及び薬剤組み合わせ
CN113438961A (zh) 2018-12-20 2021-09-24 Xencor股份有限公司 含有IL-15/IL-15Rα和NKG2D抗原结合结构域的靶向异二聚体Fc融合蛋白
EP3670659A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Biomarkers, and uses in treatment of viral infections, inflammations, or cancer
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
EP3897613A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Novartis AG Use of il-1beta binding antibodies
AU2019406840A1 (en) 2018-12-21 2021-06-03 Novartis Ag Use of IL-1 beta antibodies in the treatment or prevention of myelodysplastic syndrome
WO2020128620A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
JP2022514702A (ja) 2018-12-21 2022-02-14 オーエスイー・イミュノセラピューティクス 二機能性抗ｐｄ－１／ｉｌ－７分子
EP3898974A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2020154032A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
US20220096651A1 (en) 2019-01-29 2022-03-31 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
CN113412262A (zh) 2019-02-12 2021-09-17 大日本住友制药肿瘤公司 包含杂环蛋白激酶抑制剂的制剂
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CA3124935A1 (en) 2019-02-15 2020-08-20 Novartis Ag 3-(1-oxo-5-(piperidin-4-yl)isoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
KR20210129672A (ko) 2019-02-15 2021-10-28 노파르티스 아게 치환된 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체 및 이의 용도
CN111620949A (zh) * 2019-02-28 2020-09-04 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人lag-3的抗体、其制备方法和用途
CA3133155A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundacio Privada Institut D'investigacio Oncologica De Vall Hebron Combination therapy for the treatment for cancer
WO2020191326A1 (en) 2019-03-20 2020-09-24 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure
WO2020198077A1 (en) 2019-03-22 2020-10-01 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Compositions comprising pkm2 modulators and methods of treatment using the same
CA3134822A1 (en) 2019-03-26 2020-10-01 The Regents Of The Universtiy Of Michigan Small molecule degraders of stat3
WO2020205467A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 The Regents Of The University Of Michigan Stat3 protein degraders
CA3135569A1 (en) 2019-04-02 2020-10-08 Bicycletx Limited Bicycle toxin conjugates and uses thereof
US11485750B1 (en) 2019-04-05 2022-11-01 Kymera Therapeutics, Inc. STAT degraders and uses thereof
EP3725370A1 (en) 2019-04-19 2020-10-21 ImmunoBrain Checkpoint, Inc. Modified anti-pd-l1 antibodies and methods and uses for treating a neurodegenerative disease
GB201906118D0 (en) 2019-05-01 2019-06-12 Immutep S A Anti-LAG-3 binding molecules
WO2020231766A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
JP2022532490A (ja) 2019-05-13 2022-07-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 癌の治療における有効性の増強のためのｐｄ－１阻害剤とｌａｇ－３阻害剤の組み合わせ
US20230242478A1 (en) 2019-05-13 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
CN114127315A (zh) 2019-05-30 2022-03-01 百时美施贵宝公司 鉴定适合于免疫肿瘤学(i-o)疗法的受试者的方法
US20220233691A1 (en) 2019-05-30 2022-07-28 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
EP3976831A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN110320367A (zh) * 2019-05-30 2019-10-11 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 基于lag-3的诊断试剂盒及其在帕金森病诊断产品上的应用
KR20220034739A (ko) 2019-05-31 2022-03-18 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Tead 억제제 및 이의 용도
CN114341189A (zh) 2019-06-12 2022-04-12 奥美药业有限公司 全新il-15前药及其应用
US20220265590A1 (en) 2019-06-12 2022-08-25 Vanderbilt University Dibenzylamines as amino acid transport inhibitors
EP3983084A1 (en) 2019-06-12 2022-04-20 Vanderbilt University Amino acid transport inhibitors and the uses thereof
US11642409B2 (en) 2019-06-26 2023-05-09 Massachusetts Insttute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
CN114302878A (zh) 2019-07-03 2022-04-08 大日本住友制药肿瘤公司 酪氨酸激酶非受体1(tnk1)抑制剂及其用途
IT201900011676A1 (it) 2019-07-12 2021-01-12 St Superiore Di Sanita Anticorpo ricombinante umano contro il recettore di membrana LAG3, suoi usi medici e diagnostici.
KR20220035116A (ko) 2019-07-16 2022-03-21 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 Eed 억제제로서의 이미다조피리미딘 및 이의 용도
WO2021026179A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
US20220388978A1 (en) 2019-08-27 2022-12-08 Regents Of The University Of Michigan Cereblon e3 ligase inhibitors
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
KR20220105631A (ko) 2019-09-13 2022-07-27 님버스 새턴 인코포레이티드 Hpk1 길항제 및 이의 용도
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
EP4031575A1 (en) 2019-09-19 2022-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies binding to vista at acidic ph
JP2022548775A (ja) 2019-09-19 2022-11-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン スピロ環式アンドロゲン受容体タンパク質分解剤
CA3153777A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
AR120045A1 (es) 2019-09-26 2022-01-26 Novartis Ag Compuestos antivirales de pirazolopiridinona
CA3157024A1 (en) 2019-10-03 2021-04-08 Xencor, Inc. Targeted il-12 heterodimeric fc-fusion proteins
TW202128757A (zh) 2019-10-11 2021-08-01 美商建南德克公司 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白
BR112022007179A2 (pt) 2019-10-21 2022-08-23 Novartis Ag Inibidores de tim-3 e usos dos mesmos
KR20220103947A (ko) 2019-10-21 2022-07-25 노파르티스 아게 베네토클락스 및 tim-3 억제제를 사용한 조합 요법
US11459389B2 (en) 2019-10-24 2022-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Monoclonal antibodies that bind human CD161
BR112022007632A2 (pt) * 2019-10-25 2022-07-12 Daiichi Sankyo Co Ltd Composição farmacêutica e preparação de kit para tratamento de câncer, e, métodos para tratamento de câncer e de um paciente com câncer
US20220409642A1 (en) 2019-11-04 2022-12-29 Astrazeneca Ab Combination therapy for treating cancer
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
CA3160479A1 (en) 2019-11-08 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for melanoma
CN114728950A (zh) 2019-11-19 2022-07-08 百时美施贵宝公司 可作为helios蛋白质抑制剂的化合物
US11591339B2 (en) 2019-11-26 2023-02-28 Ikena Oncology, Inc. Solid forms of (R)-N-(2-(5-fluoropyridin-3-yl)-8-isopropylpyrazolo[ 1,5-a][1,3,5]triazin-4-yl)-2,3,4,9-tetrahydro-1H-carbazol-3-amine maleate as aryl hydrocarbon receptor (AHR) inhibitors
CN115151306A (zh) 2019-11-26 2022-10-04 百时美施贵宝公司 (r)-n-(4-氯苯基)-2-((1s，4s)-4-(6-氟喹啉-4-基)环己基)丙酰胺的盐/共晶
US11975026B2 (en) 2019-11-26 2024-05-07 Novartis Ag CD19 and CD22 chimeric antigen receptors and uses thereof
WO2021113644A1 (en) 2019-12-05 2021-06-10 Multivir Inc. Combinations comprising a cd8+ t cell enhancer, an immune checkpoint inhibitor and radiotherapy for targeted and abscopal effects for the treatment of cancer
EP4076524A4 (en) 2019-12-17 2023-11-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAQ DEGRADERS AND USES THEREOF
BR112022011651A2 (pt) 2019-12-17 2022-08-23 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de irak e usos dos mesmos
AU2020406083A1 (en) 2019-12-17 2022-06-16 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an IL-7 variant
CN115052662A (zh) 2019-12-20 2022-09-13 诺华股份有限公司 抗TGFβ抗体和检查点抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途
WO2021126967A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Lag3 antagonist cell based potency assay
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t
KR20220119454A (ko) 2019-12-23 2022-08-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 T 세포 활성화제로서 유용한 치환된 퀴나졸리닐 화합물
CN115175907A (zh) 2019-12-23 2022-10-11 百时美施贵宝公司 可用作t细胞激活剂的经取代的哌嗪衍生物
WO2021133748A1 (en) 2019-12-23 2021-07-01 Bristol-Myers Squibb Company Substituted quinolinonyl piperazine compounds useful as t cell activators
BR112022012204A2 (pt) 2019-12-23 2022-09-13 Bristol Myers Squibb Co Compostos de heteroarila substituída úteis como ativadores de célula t
IL294150A (en) 2019-12-23 2022-08-01 Kymera Therapeutics Inc Smarca joints and their uses
WO2021138407A2 (en) 2020-01-03 2021-07-08 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to cd33 and uses thereof
AU2021206618A1 (en) 2020-01-06 2022-08-18 Hifibio (Hk) Limited Anti-TNFR2 antibody and uses thereof
US11534441B2 (en) 2020-01-15 2022-12-27 Blueprint Medicines Corporation MAP4K1 inhibitors
MX2022008763A (es) 2020-01-17 2022-07-27 Novartis Ag Combinacion que comprende un inhibidor de tim-3 y un agente hipometilante para usarse en el tratamiento del sindrome mielodisplasico o leucemia mielomonocitica cronica.
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
WO2021171264A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Novartis Ag Dosing of a bispecific antibody that binds cd123 and cd3
KR20220164706A (ko) 2020-03-03 2022-12-13 피아이씨 테라퓨틱스 인코포레이티드 Eif4e 억제제 및 이의 용도
JP2023516459A (ja) 2020-03-09 2023-04-19 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 増強されたアゴニスト活性を有するｃｄ４０に対する抗体
BR112022018600A2 (pt) 2020-03-19 2022-11-08 Arcus Biosciences Inc Compostos, composição farmacêutica, método de tratamento de uma doença e combinação
EP4121043A1 (en) 2020-03-19 2023-01-25 Kymera Therapeutics, Inc. Mdm2 degraders and uses thereof
TW202140441A (zh) 2020-03-23 2021-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 經取代之側氧基異吲哚啉化合物
US20230159573A1 (en) 2020-03-26 2023-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule stat protein degraders
US20230272056A1 (en) 2020-04-09 2023-08-31 Merck Sharp & Dohme Llc Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
AU2021251265A1 (en) 2020-04-10 2022-11-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting B-cell maturation antigen
WO2021231732A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to garp
CA3176564A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Agilent Technologies, Inc. Anti-human lag-3 antibodies and their use in immunohistochemistry (ihc)
WO2021247591A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to tigit
WO2021245071A1 (en) 2020-06-03 2021-12-09 Mv Biotherapeutics Sa Combination of an atp-hydrolyzing enzyme and an immune checkpoint modulator and uses thereof
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
CN114605544B (zh) * 2020-06-05 2023-08-01 北京天广实生物技术股份有限公司 Lag3抗体及其用途
AR122644A1 (es) 2020-06-19 2022-09-28 Onxeo Nuevas moléculas de ácido nucleico conjugado y sus usos
WO2021258010A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime compounds useful as t cell activators
JP2023531676A (ja) 2020-06-23 2023-07-25 ノバルティス アーゲー ３－（１－オキソイソインドリン－２－イル）ピぺリジン－２，６－ジオン誘導体を含む投与レジメン
KR20230035576A (ko) 2020-07-07 2023-03-14 비온테크 에스이 Hpv 양성 암 치료용 rna
US20230233690A1 (en) 2020-07-10 2023-07-27 The Regents Of The University Of Michigan Androgen receptor protein degraders
WO2022011204A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule androgen receptor protein degraders
EP4188374A1 (en) 2020-07-30 2023-06-07 Kymera Therapeutics, Inc. Methods of treating mutant lymphomas
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
CN116724051A (zh) 2020-08-10 2023-09-08 上海寻百会生物技术有限公司 用于通过靶向igsf8来治疗自身免疫性疾病和癌症的组合物和方法
KR20230050389A (ko) 2020-08-13 2023-04-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Il-2를 관심 표적 세포로 재지시하는 방법
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
CN116761818A (zh) 2020-08-26 2023-09-15 马伦戈治疗公司 检测trbc1或trbc2的方法
JP2023540255A (ja) 2020-08-28 2023-09-22 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 肝細胞癌のためのｌａｇ－３アンタゴニスト療法
WO2022047412A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and immunotherapy
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4204020A1 (en) 2020-08-31 2023-07-05 Advanced Accelerator Applications International S.A. Method of treating psma-expressing cancers
JP2023542297A (ja) 2020-09-14 2023-10-06 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 異種プライムブーストワクチン
CA3187272A1 (en) 2020-10-08 2022-04-14 Thorsten Ross Trispecific binders
AU2021360782A1 (en) 2020-10-14 2023-06-08 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
CA3196496A1 (en) 2020-10-23 2022-04-28 Laurence David TOMS Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
KR20230104651A (ko) 2020-11-06 2023-07-10 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022120354A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2022120353A1 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
WO2022125497A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Infinity Pharmaceuticals, Inc. Eganelisib for use in the treatment of pd-l1 negative cancer
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
CN114621344B (zh) * 2020-12-10 2022-08-30 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗lag-3单克隆抗体的纯化方法
CA3202330A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Anthony Casarez Compounds useful as t cell activators
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022146948A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
IL303648A (en) 2020-12-28 2023-08-01 Bristol Myers Squibb Co Antibody preparations and methods of using them
WO2022148781A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Institut Curie Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors
EP4274597A1 (en) 2021-01-11 2023-11-15 BicycleTX Limited Methods for treating cancer
AU2022216810A1 (en) 2021-02-02 2023-08-24 Liminal Biosciences Limited Gpr84 antagonists and uses thereof
AU2022215844A1 (en) 2021-02-02 2023-09-14 Liminal Biosciences Limited Gpr84 antagonists and uses thereof
JP2024505600A (ja) 2021-02-03 2024-02-06 モーツァルト セラピューティクス， インコーポレイテッド 結合剤およびそれを使用する方法
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
WO2022171745A1 (en) 2021-02-12 2022-08-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives for the treatment of cancer
KR20230145446A (ko) 2021-02-15 2023-10-17 카이메라 쎄라퓨틱스 인코포레이티드 Irak4 분해제 및 이의 용도
US20220275090A1 (en) 2021-02-22 2022-09-01 Janssen Biotech, Inc. Combination Therapies with Anti-CD38 Antibodies and PARP or Adenosine Receptor Inhibitors
WO2022187419A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule degraders of androgen receptor
WO2022187423A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon ligands
JP2024509192A (ja) 2021-03-05 2024-02-29 ニンバス サターン， インコーポレイテッド Ｈｐｋ１アンタゴニスト及びその使用
EP4305041A1 (en) 2021-03-08 2024-01-17 Blueprint Medicines Corporation Map4k1 inhibitors
US11918582B2 (en) 2021-03-15 2024-03-05 Rapt Therapeutics, Inc. Pyrazole pyrimidine compounds and uses thereof
KR20240005700A (ko) 2021-03-29 2024-01-12 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 체크포인트 억제제 요법 및 car t 세포 요법의 조합을 사용한 투여 및 치료 방법
EP4314068A1 (en) 2021-04-02 2024-02-07 The Regents Of The University Of California Antibodies against cleaved cdcp1 and uses thereof
KR20230167067A (ko) 2021-04-05 2023-12-07 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 암의 치료를 위한 피리디닐 치환된 옥소이소인돌린 화합물
PE20231941A1 (es) 2021-04-06 2023-12-05 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de oxoisoindolina sustituidos con piridinilo
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AU2022255506A1 (en) 2021-04-08 2023-11-09 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
IL307419A (en) 2021-04-09 2023-12-01 Ose Immunotherapeutics A new scaffold for bifunctional molecules with improved properties
EP4320156A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
PE20240327A1 (es) 2021-04-13 2024-02-22 Nuvalent Inc Heterociclos con sustitucion amino para tratar canceres con mutaciones de egfr
KR20230172548A (ko) 2021-04-16 2023-12-22 이케나 온콜로지, 인코포레이티드 Mek 억제제 및 이의 용도
EP4337694A1 (en) 2021-05-12 2024-03-20 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
CN117337288A (zh) 2021-05-21 2024-01-02 艾库斯生物科学有限公司 Axl抑制剂化合物
CN117295741A (zh) 2021-05-21 2023-12-26 艾库斯生物科学有限公司 Axl化合物
AU2022281461A1 (en) 2021-05-25 2024-01-04 Edelweiss Immune Inc C-x-c motif chemokine receptor 6 (cxcr6) binding molecules, and methods of using the same
TW202307210A (zh) 2021-06-01 2023-02-16 瑞士商諾華公司 Ｃｄ１９和ｃｄ２２嵌合抗原受體及其用途
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
AU2022312496A1 (en) 2021-07-14 2024-02-22 Blueprint Medicines Corporation Heterocyclic compounds as map4k1 inhibitors
AR126453A1 (es) 2021-07-15 2023-10-11 Blueprint Medicines Corp Inhibidores de map4k1
CA3216098A1 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Uwe Reusch Duplexbodies
IL310924A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Pic Therapeutics Inc EIF4E inhibitors and their uses
WO2023028238A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 PIC Therapeutics, Inc. Eif4e inhibitors and uses thereof
TW202328090A (zh) 2021-09-08 2023-07-16 美商雷度納製藥公司 Ｐａｐｄ５及／或ｐａｐｄ７抑制劑
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
WO2023077090A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hematological cancer
US20230159466A1 (en) 2021-10-29 2023-05-25 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hif-2alpha and methods of use thereof
WO2023079494A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Janssen Biotech, Inc. Corticosteriod reduction in treatment with anti-cd38 antibodies
WO2023111203A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Onxeo New conjugated nucleic acid molecules and their uses
WO2023114984A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Ikena Oncology, Inc. Tead inhibitors and uses thereof
WO2023122777A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023122772A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Oxime derivatives useful as t cell activators
WO2023122778A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gossamer Bio Services, Inc. Pyridazinone derivatives useful as t cell activators
WO2023147371A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for hepatocellular carcinoma
WO2023150186A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Arvinas Operations, Inc. Dgk targeting compounds and uses thereof
WO2023154905A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Gilead Sciences, Inc. Antiviral pyrazolopyridinone compounds
WO2023164638A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023173057A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023173053A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023178192A1 (en) 2022-03-15 2023-09-21 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023178201A2 (en) * 2022-03-15 2023-09-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of identifying anti-lag-3 agents
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023211889A1 (en) 2022-04-25 2023-11-02 Ikena Oncology, Inc. Polymorphic compounds and uses thereof
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023230205A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Ikena Oncology, Inc. Mek inhibitors and uses thereof
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2023250400A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Juno Therapeutics, Inc. Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
WO2024015251A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hpk1 and methods of use thereof
WO2024020034A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Arcus Biosciences, Inc. Cbl-b inhibitors and methods of use thereof
WO2024028363A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Heteroaryl carboxamide and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028364A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Aryl-triazolyl and related gpr84 antagonists and uses thereof
WO2024028386A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Ose Immunotherapeutics Multifunctional molecule directed against cd28
WO2024028365A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Liminal Biosciences Limited Substituted pyridone gpr84 antagonists and uses thereof
US20240041929A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma
WO2024036100A1 (en) 2022-08-08 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrazolyl compounds useful as t cell activators
WO2024036101A1 (en) 2022-08-09 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Tertiary amine substituted bicyclic compounds useful as t cell activators
WO2024033457A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033389A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033388A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033458A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives
WO2024040194A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering
WO2024059142A1 (en) 2022-09-14 2024-03-21 Arcus Biosciences, Inc. Dispersions of etrumadenant
WO2024081385A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Arcus Biosciences, Inc. Hpk1 inhibitors and methods of use thereof
WO2024086718A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Arcus Biosciences, Inc. Lyophilized formulations of cd73 compounds
WO2024089417A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Tumour stratification for responsiveness to an immune checkpoint inhibitor
WO2024089418A1 (en) 2022-10-24 2024-05-02 Cancer Research Technology Limited Tumour sensitisation to checkpoint inhibitors with redox status modifier

Citations (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997003695A1 (en) * 1995-07-21 1997-02-06 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods for detecting, identifying, isolating, and selectively labelling and targeting th1 lymphocytes by means of the lag-3 protein
US6143273A (en) * 1994-05-06 2000-11-07 Institut Gustave Roussy Therapeutic composition containing antibodies to soluble polypeptide fractions of LAG-3 protein
WO2000069914A2 (en) * 1999-05-18 2000-11-23 Oxford Biomedica (Uk) Limited Humanized antibodies specific for egp-2
US20020146753A1 (en) * 2001-04-06 2002-10-10 Henrik Ditzel Autoantibodies to glucose-6-phosphate isomerase and their participation in autoimmune disease
US20030059937A1 (en) * 2000-06-16 2003-03-27 Ruben Steven M. Antibodies that immunospecifically bind BLyS
US20030129601A1 (en) * 2001-02-22 2003-07-10 Cole Stewart T. Comparative mycobacterial genomics as a tool for identifying targets for the diagnosis, prophylaxis or treatment of mycobacterioses
US20040072164A1 (en) * 2001-09-19 2004-04-15 Toshiaki Maruyama Engineered templates and their use in single primer amplification
US20050009136A1 (en) * 2003-02-19 2005-01-13 Dyax Corporation PAPP-A ligands
WO2005034733A2 (en) * 2003-10-08 2005-04-21 North Shore-Long Island Jewish Research Institute Methods and compositions for diagnosis and treatment of b cell chronic lymphocytic leukemia
US20050226876A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Yvo Graus Anti-P-selectin antibodies
WO2006007850A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Symphogen A/S Anti-rhesus d recombinant polyclonal antibody and methods of manufacture
US20060177442A1 (en) * 2004-10-01 2006-08-10 Medarex, Inc. Method of treating CD30 positive lymphomas
US20060240024A1 (en) * 2003-02-28 2006-10-26 The Johns Hopkins University T cell regulation
US20070004910A1 (en) * 2004-08-03 2007-01-04 Sexton Daniel J HK1-binding proteins
US20070160598A1 (en) * 2005-11-07 2007-07-12 Dennis Mark S Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2008007648A1 (fr) * 2006-07-10 2008-01-17 Institute For Antibodies Co., Ltd. Procédé de classification d'antigène, procédé d'identification d'antigène, procédé d'obtention d' un ensemble d'antigènes ou d'anticorps, procédés de construction d'un panel d'anticorps, anticorps et ens
US20080069822A1 (en) * 2005-12-05 2008-03-20 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
WO2008132601A1 (en) * 2007-04-30 2008-11-06 Immutep Cytotoxic anti-lag-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US153043A (en) 1874-07-14 Improvement in middlings-separators
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
DE3572982D1 (en) 1984-03-06 1989-10-19 Takeda Chemical Industries Ltd Chemically modified lymphokine and production thereof
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US5374548A (en) 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
MX9203291A (es) 1985-06-26 1992-08-01 Liposome Co Inc Metodo para acoplamiento de liposomas.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5476996A (en) 1988-06-14 1995-12-19 Lidak Pharmaceuticals Human immune system in non-human animal
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
EP0401384B1 (en) 1988-12-22 1996-03-13 Kirin-Amgen, Inc. Chemically modified granulocyte colony stimulating factor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
FR2656800B1 (fr) * 1990-01-08 1992-05-15 Roussy Inst Gustave Nouvelles proteines produits par les lymphocytes humains, sequence d'adn codant pour ces proteines et applications pharmaceutiques et biologiques.
US5976877A (en) 1990-01-08 1999-11-02 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Proteins produced by human lymphocytes DNA sequence encoding these proteins and their pharmaceutical and biological uses
WO1991010741A1 (en) 1990-01-12 1991-07-25 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9108652D0 (en) 1991-04-23 1991-06-12 Antisoma Ltd Immunoreactive compounds
ES2227512T3 (es) 1991-12-02 2005-04-01 Medical Research Council Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago.
CA2124967C (en) 1991-12-17 2008-04-08 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
WO1993022332A2 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
JP3976333B2 (ja) 1992-09-16 2007-09-19 ザ スクリップス リサーチ インスティチュート 呼吸合胞体ウイルスに対するヒト中和性モノクローナル抗体
JP3919830B2 (ja) 1992-11-28 2007-05-30 財団法人化学及血清療法研究所 抗ネコヘルペスウイルス−１組換え抗体および該抗体をコードする遺伝子断片
CA2161351C (en) 1993-04-26 2010-12-21 Nils Lonberg Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
EP0714409A1 (en) 1993-06-16 1996-06-05 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
CA2109377C (en) * 1993-07-23 1998-08-04 Joseph C. Kahr Disc brake shoe assembly
AU1866895A (en) 1994-01-04 1995-08-01 Scripps Research Institute, The Human monoclonal antibodies to herpes simplex virus and methods therefor
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
WO1997032733A1 (en) * 1996-03-07 1997-09-12 Eastman Chemical Company Near infrared fluorescent security thermal transfer printing and marking ribbons
US5922845A (en) 1996-07-11 1999-07-13 Medarex, Inc. Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies
IL130123A (en) * 1996-11-28 2007-07-24 Roussy Inst Gustave LAG-3 protein mutants, their expression, use and method of production
PT941329E (pt) * 1996-11-29 2004-11-30 Applied Research Systems Metodo para prevenir a rejeicao de enxertos em transplantacao e para produzir uma celula-hospedeiro para terapia genetica universal utilizando activacao de linfocitos (lag-3)
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
AU6703198A (en) 1997-03-21 1998-10-20 Brigham And Women's Hospital Immunotherapeutic ctla-4 binding peptides
EP1724282B1 (en) 1997-05-21 2013-05-15 Merck Patent GmbH Method for the production of non-immunogenic proteins
EP0900841A1 (en) 1997-06-18 1999-03-10 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) LAG-3 splice variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
GB9814383D0 (en) 1998-07-02 1998-09-02 Cambridge Antibody Tech Improvements relating to antibodies
US6951646B1 (en) 1998-07-21 2005-10-04 Genmab A/S Anti hepatitis C virus antibody and uses thereof
ES2340745T3 (es) 1998-12-23 2010-06-08 Pfizer Inc. Anticuerpos monoclonales humanos contra ctla-4.
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
PT1914244E (pt) 1999-04-09 2013-07-26 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para regular a actividade de moléculas funcionais sob o ponto de vista imunológico
NZ517372A (en) 1999-07-29 2004-04-30 Medarex Inc Human monoclonal antibodies to HER2/neu
PT1210428E (pt) 1999-08-23 2015-07-21 Genetics Inst Llc Pd-1, um recetor para b7-4 e suas utilizações
US7605238B2 (en) * 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1212422B1 (en) 1999-08-24 2007-02-21 Medarex, Inc. Human ctla-4 antibodies and their uses
US6794132B2 (en) 1999-10-02 2004-09-21 Biosite, Inc. Human antibodies
US6818216B2 (en) 2000-11-28 2004-11-16 Medimmune, Inc. Anti-RSV antibodies
ATE378403T1 (de) 2000-11-30 2007-11-15 Medarex Inc Transchromosomale transgen-nagetiere zur herstellung von humänen antikörpern
CA2508763C (en) 2001-05-11 2012-01-24 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Human antibody producing mouse and method for producing human antibody using the same
WO2002092780A2 (en) 2001-05-17 2002-11-21 Diversa Corporation Novel antigen binding molecules for therapeutic, diagnostic, prophylactic, enzymatic, industrial, and agricultural applications, and methods for generating and screening thereof
KR20030033007A (ko) 2001-05-31 2003-04-26 코울터 파머수티컬, 인코포레이티드 세포독소, 약물전구체, 링커 및 이에 유용한 안정화제
ATE519779T1 (de) * 2001-09-19 2011-08-15 Roussy Inst Gustave An das glu-pro motiv-bindende proteine und peptide, diese enthaltende therapeutische zusammensetzungen und deren anwendungen
EP1443961B1 (en) 2001-10-25 2009-05-06 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
WO2003072035A2 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
JPWO2003085107A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
KR20040101502A (ko) 2002-04-16 2004-12-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물
EP3287144A1 (en) 2002-07-03 2018-02-28 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions
EP2322203A3 (en) 2002-10-29 2011-07-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US7674618B2 (en) 2003-09-04 2010-03-09 Medarex, Inc. Expression vector
WO2005103081A2 (en) * 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US7691962B2 (en) 2004-05-19 2010-04-06 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
CA2564076C (en) 2004-05-19 2014-02-18 Medarex, Inc. Chemical linkers and conjugates thereof
US20090252741A1 (en) 2004-09-08 2009-10-08 Ohio State University Research Foundation Human monoclonal anti-ctla4 antibodies in cancer treatment
JP5303146B2 (ja) 2004-10-06 2013-10-02 メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ Ｂ７−ｈ１ならびに癌の診断、予後診断および処置の方法
US7875278B2 (en) 2005-02-18 2011-01-25 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against prostate specific membrane antigen (PSMA) lacking in fucosyl residues
EP1868644A1 (en) 2005-03-23 2007-12-26 Pfizer Products Incorporated Therapy of prostate cancer with ctla4 antibodies and hormonal therapy
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
CA2970873C (en) 2005-05-09 2022-05-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
SI1907000T2 (sl) * 2005-06-08 2020-07-31 Dana-Farber Cancer Institute Postopki in sestavki za zdravljenje persistentne HIV infekcije z inhibicijo programiranih celični smrtnih 1 (PD-1) poti
CN104356236B (zh) 2005-07-01 2020-07-03 E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体
BRPI0617546A2 (pt) 2005-09-26 2011-07-26 Medarex Inc conjugado de fÁrmaco-anticorpo, formulaÇço farmacÊutica, mÉtodo para matar uma cÉlula de tumor, mÉtodo para retardar ou interromper o crescimento de um tumor em um sujeito mamÍfero e composto
CA2627046C (en) 2005-10-26 2015-09-15 Medarex, Inc. Methods and compounds for preparing cc-1065 analogs
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
WO2008073160A2 (en) 2006-08-17 2008-06-19 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for converting or inducing protective immunity
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
TW200900059A (en) 2007-02-21 2009-01-01 Medarex Inc Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
WO2009014708A2 (en) * 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
PL2201100T3 (pl) 2007-09-14 2016-10-31 Wzmacnianie zdolności ludzkich komórek prezentujących antygen do stymulacji komórek T i ich zastosowanie w szczepieniu
CA2700860C (en) 2007-10-01 2016-07-19 Jonathan A. Terrett Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
WO2009073546A2 (en) 2007-11-30 2009-06-11 Medarex, Inc. Monoclonal antibody partner molecule conjugates directed to protein tyrosine kinase 7 (ptk7)
EP2224958A2 (en) 2007-11-30 2010-09-08 Bristol-Myers Squibb Company Anti-b7h4 monoclonal antibody-drug conjugate and methods of use
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
US9856320B2 (en) 2012-05-15 2018-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Cancer immunotherapy by disrupting PD-1/PD-L1 signaling
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
HUE050894T2 (hu) 2015-04-17 2021-01-28 Bristol Myers Squibb Co Kompozíciók, amelyek tartalmazzák ipilimumab és nivolumab kombinációját
KR20180042412A (ko) 2015-09-02 2018-04-25 이뮤텝 에스.에이.에스. 항-lag-3 항체
TWI756187B (zh) 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途

Patent Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143273A (en) * 1994-05-06 2000-11-07 Institut Gustave Roussy Therapeutic composition containing antibodies to soluble polypeptide fractions of LAG-3 protein
WO1997003695A1 (en) * 1995-07-21 1997-02-06 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Methods for detecting, identifying, isolating, and selectively labelling and targeting th1 lymphocytes by means of the lag-3 protein
US6197524B1 (en) * 1995-07-21 2001-03-06 Institute National De La Sante Et De La Recherche Medicale Methods for detecting, identifying, isolating, and selectively labelling and targeting TH1 lymphocyte by means of the LAG-3 protein
WO2000069914A2 (en) * 1999-05-18 2000-11-23 Oxford Biomedica (Uk) Limited Humanized antibodies specific for egp-2
US20030059937A1 (en) * 2000-06-16 2003-03-27 Ruben Steven M. Antibodies that immunospecifically bind BLyS
US20030129601A1 (en) * 2001-02-22 2003-07-10 Cole Stewart T. Comparative mycobacterial genomics as a tool for identifying targets for the diagnosis, prophylaxis or treatment of mycobacterioses
US20020146753A1 (en) * 2001-04-06 2002-10-10 Henrik Ditzel Autoantibodies to glucose-6-phosphate isomerase and their participation in autoimmune disease
US20040072164A1 (en) * 2001-09-19 2004-04-15 Toshiaki Maruyama Engineered templates and their use in single primer amplification
US20050009136A1 (en) * 2003-02-19 2005-01-13 Dyax Corporation PAPP-A ligands
US20060240024A1 (en) * 2003-02-28 2006-10-26 The Johns Hopkins University T cell regulation
WO2005034733A2 (en) * 2003-10-08 2005-04-21 North Shore-Long Island Jewish Research Institute Methods and compositions for diagnosis and treatment of b cell chronic lymphocytic leukemia
US20050226876A1 (en) * 2004-04-13 2005-10-13 Yvo Graus Anti-P-selectin antibodies
WO2006007850A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Symphogen A/S Anti-rhesus d recombinant polyclonal antibody and methods of manufacture
US20070004910A1 (en) * 2004-08-03 2007-01-04 Sexton Daniel J HK1-binding proteins
US20060177442A1 (en) * 2004-10-01 2006-08-10 Medarex, Inc. Method of treating CD30 positive lymphomas
US20070160598A1 (en) * 2005-11-07 2007-07-12 Dennis Mark S Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
US20080069822A1 (en) * 2005-12-05 2008-03-20 Symphogen A/S Anti-orthopoxvirus recombinant polyclonal antibody
WO2008007648A1 (fr) * 2006-07-10 2008-01-17 Institute For Antibodies Co., Ltd. Procédé de classification d'antigène, procédé d'identification d'antigène, procédé d'obtention d' un ensemble d'antigènes ou d'anticorps, procédés de construction d'un panel d'anticorps, anticorps et ens
WO2008132601A1 (en) * 2007-04-30 2008-11-06 Immutep Cytotoxic anti-lag-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUBRAMANY A.M. et al. Soluble human lymphocyte activation gene-3 modulates allospecilic T cell responses. Int, Immunol, May 1993, 10(5):679-689; abstract *
U3-A1-20020086014 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2744866C2 (ru) * 2016-08-15 2021-03-16 Нэшнл Юниверсити Корпорейшн Хоккайдо Юниверсити Антитело против lag-3
US11198730B2 (en) 2016-08-15 2021-12-14 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Anti-LAG-3 antibody
RU2793400C2 (ru) * 2016-10-28 2023-03-31 МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи Способ очистки для удаления вариантов антител с сульфатированием тирозина; очищенные композиции

Also Published As

Publication number Publication date
PE20110306A1 (es) 2011-05-21
US11512130B2 (en) 2022-11-29
HK1212911A1 (zh) 2016-06-24
EP2905030A1 (en) 2015-08-12
CL2016002624A1 (es) 2017-06-09
SG10201706497QA (en) 2017-09-28
ES2537203T3 (es) 2015-06-03
KR20190000922A (ko) 2019-01-03
PE20141658A1 (es) 2014-11-08
NZ602780A (en) 2014-04-30
IL281876A (en) 2021-05-31
EP3597216A1 (en) 2020-01-22
EA201590777A1 (ru) 2016-01-29
US20220195040A1 (en) 2022-06-23
CY1122576T1 (el) 2021-01-27
PT2320940E (pt) 2015-06-19
CN107474137A (zh) 2017-12-15
KR101700459B1 (ko) 2017-01-26
KR20220032636A (ko) 2022-03-15
HRP20221191T1 (hr) 2022-12-09
US20210261660A1 (en) 2021-08-26
WO2010019570A2 (en) 2010-02-18
CL2011000308A1 (es) 2011-05-27
EP2320940B1 (en) 2015-03-04
PE20190373A1 (es) 2019-03-08
HUE060029T2 (hu) 2023-01-28
US20230322919A1 (en) 2023-10-12
DK2320940T3 (en) 2015-05-26
US20190276538A1 (en) 2019-09-12
AU2009282134A1 (en) 2010-02-18
HRP20200070T1 (hr) 2020-04-03
JP2012500006A (ja) 2012-01-05
NZ623319A (en) 2015-08-28
CN102176921A (zh) 2011-09-07
PL2905030T3 (pl) 2020-04-30
MX2011001250A (es) 2011-03-29
CA2734335A1 (en) 2010-02-18
PT3597216T (pt) 2022-09-28
US11236164B2 (en) 2022-02-01
HRP20200070T8 (hr) 2021-03-05
US20210261661A1 (en) 2021-08-26
ES2768576T3 (es) 2020-06-23
TW201019958A (en) 2010-06-01
KR102370201B1 (ko) 2022-03-04
LT3597216T (lt) 2022-11-10
US20210261662A1 (en) 2021-08-26
CA2734335C (en) 2018-01-16
KR20230165352A (ko) 2023-12-05
JP7286692B2 (ja) 2023-06-05
TN2011000025A1 (en) 2012-09-05
AU2014221286A1 (en) 2014-10-02
CL2018001903A1 (es) 2018-11-09
CN103923213A (zh) 2014-07-16
MX2019000094A (es) 2023-04-12
JP2023113722A (ja) 2023-08-16
KR20200068749A (ko) 2020-06-15
SMT201500125B (it) 2015-07-09
DK2905030T3 (da) 2020-02-17
US20180066054A1 (en) 2018-03-08
JP2017052765A (ja) 2017-03-16
KR102121141B1 (ko) 2020-06-10
BRPI0917470A2 (pt) 2015-12-01
TWI491408B (zh) 2015-07-11
AR072999A1 (es) 2010-10-06
PT2905030T (pt) 2020-01-29
US10988536B2 (en) 2021-04-27
PL3597216T3 (pl) 2022-11-14
CY1116582T1 (el) 2017-03-15
US11530267B2 (en) 2022-12-20
DK3597216T3 (da) 2022-10-31
SI2905030T1 (sl) 2020-02-28
HK1151985A1 (en) 2012-02-17
CN102176921B (zh) 2014-05-07
EP2320940A4 (en) 2013-01-23
JP2015096503A (ja) 2015-05-21
BRPI0917470B8 (pt) 2021-05-25
US11236165B2 (en) 2022-02-01
WO2010019570A3 (en) 2010-06-17
EP3597216B1 (en) 2022-08-24
US11236163B2 (en) 2022-02-01
KR20110050507A (ko) 2011-05-13
IL253868A0 (en) 2017-10-31
US20200385467A1 (en) 2020-12-10
IL261718A (en) 2018-10-31
US20200385466A1 (en) 2020-12-10
US20110150892A1 (en) 2011-06-23
IL210731A0 (en) 2011-03-31
EA201100340A1 (ru) 2011-08-30
ZA201101009B (en) 2012-11-28
US10344089B2 (en) 2019-07-09
JP5647981B2 (ja) 2015-01-07
JP2021091696A (ja) 2021-06-17
CN113773386A (zh) 2021-12-10
US20200231671A1 (en) 2020-07-23
EP4147714A1 (en) 2023-03-15
ES2927547T3 (es) 2022-11-08
EP2320940A2 (en) 2011-05-18
BRPI0917470B1 (pt) 2020-09-24
IL210731A (en) 2017-08-31
EP2905030B1 (en) 2019-11-06
AU2009282134B2 (en) 2014-07-03
CL2013002062A1 (es) 2014-01-10
US10988535B2 (en) 2021-04-27
KR20170010901A (ko) 2017-02-01
US20220204612A1 (en) 2022-06-30
NZ590991A (en) 2012-11-30
JP2019030307A (ja) 2019-02-28
HUE025250T2 (en) 2016-02-29
US20190276539A1 (en) 2019-09-12
SI2320940T1 (sl) 2015-07-31
LT2905030T (lt) 2020-02-10
CO6351751A2 (es) 2011-12-20
HRP20150453T1 (hr) 2015-06-19
US11001630B2 (en) 2021-05-11
AR117774A2 (es) 2021-08-25
PL2320940T3 (pl) 2015-08-31
AR115072A2 (es) 2020-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA023032B1 (ru) Человеческие антитела, связывающие ген активации лимфоцитов-3 (lag-3), и их применение
US11345752B2 (en) Optimization of antibodies that bind lymphocyte activation gene-3 (LAG-3), and uses thereof
TWI390034B (zh) Novel anti-CD98 antibody
CN110914303A (zh) 结合lag-3的抗体及其用途
EA019344B1 (ru) Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения
EA017086B1 (ru) Человеческие моноклональные антитела против о8е и их применение
EA017491B1 (ru) Человеческие моноклональные антитела к фукозил-gm1 и способы применения антифукозил-gm1 антител
KR20140005837A (ko) Cldn6 생체내 표적-지향된 항체를 이용하는 암 치료법
EA043093B1 (ru) Способ лечения рака с использованием человеческих антител к lag -3

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title