本申請案主張對2016年10月18日申請之美國臨時申請案序列第62/409,813號之權利，該案以全文引用之方式併入本文中。 出於解釋本說明書之目的，將使用下列定義，及無論何時視需要，單數使用之術語亦將包括複數。 除非內文另有明確指示，否則本說明書中使用之術語具有下列含義： 如本文使用，術語「個體」係指動物。在某些態樣中，該動物係哺乳動物。個體亦係指(例如)靈長類動物(例如，人類)、奶牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥及類似物。在某些實施例中，該個體係人類。如本文使用之「病患」係指人類個體。 如本文使用，術語「抑制(inhibition或inhibiting)」係指給定病症、症狀或失調症或疾病之減少或抑制或生物活動或過程之基線活性之顯著降低。 如本文使用，術語任何疾病或失調症之「治療(treating或treatment)」在一個實施例中係指減輕該疾病或失調症(即，減慢或阻止或減少該疾病或其臨床症狀中之至少一者之發展)。在另一實施例中，「治療(treating或treatment)」係指緩解或減輕至少一種物理參數(包括彼等病患無法辨識者)。在又另一實施例中，「治療(treating或treatment)」係指物理(例如，可辨識症狀之穩定)、生理(例如，物理參數之穩定)或兩者兼而有之地調節該疾病或失調症。在又另一實施例中，「治療(treating或treatment)」係指預防或延遲該疾病或失調症之發病或發展或進展。 如本文使用，本發明之內文中(尤其在申請專利範圍之內文中)使用之術語「一」、「一個」、「該」及類似術語除非本文另有指示或內文中明確矛盾，否則應視為涵蓋單數及複數兩者。 除非本文另有指示或內文中明確矛盾，否則本文描述之所有方法可以任何合適之順序進行。除非另有要求，否則本文提供之任何及所有實例或示例性語言(例如，「諸如」)之使用係僅旨在更好地闡述本發明及非限制本發明之範圍。 「視需要經取代」意謂係指提及之基團可在一或更多個位置處經下文列舉之基團中之任何一者或任何組合取代。取代基之數量、放置及選擇應瞭解為包含僅彼等熟習化學家將預期相當穩定之取代基；因此「側氧基」將不為(例如)芳基或雜芳基環上之取代基及單一碳原子將不具有三個羥基或胺基取代基。除非另有規定，否則視需要之取代基係通常多達四個選自以下之基團：鹵基、側氧基、CN、胺基、羥基、-C
1-3
烷基、-OR*、-NR*
2
、-SR*、-SO
2
R*、-COOR*及-CONR*
2
，其中各R*獨立地係H或C
1-3
烷基。 除非另有規定，否則如本文使用之「芳基」係指苯基或萘基。除非另有規定，否則芳基可視需要經多達四個選自以下之基團取代：鹵基、CN、胺基、羥基、C
1-3
烷基、-OR*、-NR*
2
、-SR*、-SO
2
R*、-COOR*及-CONR*
2
，其中各R*獨立地係H或C
1-3
烷基。 如本文使用，「鹵基」或「鹵素」可為氟、氯、溴或碘。 如本文使用，「C
1-6
烷基」或「C
1
-C
6
烷基」指示具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷基。若規定碳原子之不同數量(諸如C
4
或C
3
)，則因此修改定義，諸如「C
1-4
烷基」將表示甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基。 如本文使用，「C
1-6
伸烷基」或「C
1
-C
6
伸烷基」指示具有1至6個碳原子及用於連接至兩個其他基團之兩個公開化合價之直鏈或分支鏈烷基。若規定碳原子之不同數量(諸如C
4
或C
3
)，則因此修改定義，諸如「C
1-4
伸烷基」將表示亞甲基(-CH
2
-)、伸乙基(-CH
2
CH
2
-)、直鏈或分支鏈伸丙基(-CH
2
CH
2
CH
2
-或-CH
2
-CHMe-CH
2
-)及類似物。 如本文使用，「C
1-6
烷氧基」指示具有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈烷氧基(-O-烷基)。若規定碳原子之不同數量(諸如C
4
或C
3
)，則因此修改定義，諸如「C
1-4
烷氧基」將表示甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基。 如本文使用，「C
1-4
鹵烷基」或「C
1
-C
4
鹵烷基」指示具有1至4個碳原子之直鏈或分支鏈烷基，其中至少一個氫已經鹵素置換。鹵素置換之數量在未經取代之烷基上可為自一至多達氫原子之數量。若規定碳原子之不同數量(諸如C
6
或C
3
)，則因此修改定義。因此「C
1-4
鹵烷基」將表示至少一個氫經鹵素取代之甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基及第三丁基，諸如其中該鹵素係氟：CF
3
CF
2
-、(CF
3
)
2
CH-、CH
3
-CF
2
-、CF
3
CF
2
-、CF
3
、CF
2
H-、CF
3
CF
2
CH(CF
3
)-或CF
3
CF
2
CF
2
CF
2
-。 如本文使用之「C
3-8
環烷基」係指具有3至8個碳原子之飽和單環形烴環。此等基團之實例包括環丙基、環丁基、環戊基及環己基。若規定碳原子之不同數量(諸如C
3
-C
6
)，則因此修改定義。 「4至8員雜環基」、「5至6員雜環基」、「3至10員雜環基」、「3至14員雜環基」、「4至14員雜環基」及「5至14員雜環基」分別係指4至8員、5至6員、3至10員、3至14員、4至14員及5至14員雜環形環；除非另有規定，否則此等環含有1至7、1至5或1至3個選自由氮、氧及硫之群之雜原子作為環成員，且該等環可為飽和或部分飽和但不為芳族的。該雜環基團可在氮或碳原子處連接至另一基團。術語「雜環基」包括單環基團、稠合環基團及橋接基團。此雜環基之實例包括(但不限於)吡咯啶、哌啶、哌嗪、吡咯啶酮、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、四氫噻喃、四氫哌喃、1,4-二噁烷、1,4-氧硫雜環己烷、8-氮雜-雙環[3.2.1]辛烷、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷、3-氧雜-8-氮雜-雙環[3.2.1]辛烷、8-氧雜-3-氮雜-雙環[3.2.1]辛烷、2-氧雜-5-氮雜-雙環[2.2.1]庚烷、2,5-二氮雜-雙環[2.2.1]庚烷、氮雜環丁烷、伸乙基二氧(ethylenedioxo)、氧雜環丁烷或噻唑。在某些實施例中，若未另有規定，則雜環基團具有1至2個選自N、O及S之雜原子作為環成員及4至7個環原子，及係視需要經多達四個選自以下之基團取代：鹵基、側氧基、CN、胺基、羥基、C
1-3
烷基、-OR*、-NR*
2
、-SR*、-SO
2
R*、-COOR*及-CONR*
2
，其中各R*獨立地係H或C
1-3
烷基。特定言之，含有硫原子之雜環基團係視需要在硫上經一或兩個側氧基取代。 「雜芳基」係完全不飽和(芳族)環。術語「雜芳基」係指5至14員單環形或雙環形或三環形芳族環系統，其具有1至8個選自N、O或S之雜原子。通常，該雜芳基係5至10員環或環系統(例如，5至7員單環形基團或8至10員雙環形基團)，通常為含有多達四個選自N、O及S之雜原子之5至6員環，然而通常為環中含有超過一個二價O或S之雜芳基環。典型之雜芳基包括呋喃、異噻唑、噻二唑、噁二唑、吲唑、吲哚、喹啉、2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-或3-吡咯基、2-、4-或5-咪唑基、3-、4-或5-吡唑基、2-、4-或5-噻唑基、3-、4-或5-異噻唑基、2-、4-或5-噁唑基、3-、4-或5-異噁唑基、3-或5-(1,2,4-三唑基)、4-或5-(1,2、3-三唑基)、四唑基、三嗪、嘧啶、2-、3-或4-吡啶基、3-或4-噠嗪基、3-、4-或5-吡嗪基、2-吡嗪基及2-、4-或5-嘧啶基。雜芳基係視需要經多達四個選自以下之基團取代：鹵基、CN、胺基、羥基、C
1-3
烷基、-OR*、-NR*
2
、-SR*、-SO
2
R*、-COOR*及-CONR*
2
，其中各R*獨立地係H或C
1-3
烷基。 術語「羥基(hydroxy或hydroxyl)」係指基團-OH。 本文描述本發明之各種實施例。將認知各實施例中規定之特徵可與其他規定之特徵組合以提供其他實施例。 下列枚舉型實施例代表本發明： 1. 一種式(I)化合物，
(I)，其中： R
1
係H、鹵基、C
1
-C
3
烷基或C
1
-C
3
鹵烷基； R
2
係H、鹵基、CN、C
1
-C
3
烷基、C
1
-C
3
鹵烷基、-OR或-C(O)NR
2
； W係-COOR
3
、-C(O)NH-SO
2
R、-C(O)NH-SO
2
NR
2
、5-四唑基或1,2,4-噁二唑-3-基-5(4H)-酮； R
3
係H或視需要經一至三個選自以下之基團取代之C
1
-C
6
烷基：鹵基、-OR、側氧基、CN及-NR
2
； Z
1
係N或CR
Z1
； Z
2
係N或CR
Z2
； Z
3
係N或CR
Z3
； Z
4
係N或CR
Z4
； 只要Z
1
、Z
2
、Z
3
及Z
4
中不超過一者為N； R
Z1
係H；OH；鹵基；CN；視需要經多達三個選自以下之基團取代之C
1
-C
3
烷基：側氧基、鹵基、-CN、R、-OR、-NR
2
及-C(O)NR
2
；或視需要經多達三個選自以下之基團取代之C
1
-C
3
烷氧基：鹵基、側氧基、CN、R、-OR、-NR
2
及-C(O)NR
2
； R
Z2
係選自H、鹵基、R
4
、-OR
4
、-SR
4
及-NRR
4
； R
4
係C
1
-C
4
烷基、C
3
-C
6
環烷基、氧雜環丁烷基、四氫呋喃基或四氫哌喃基，其等中之各者係視需要經多達三個選自以下之基團取代：鹵基、CN、-OR、C
1
-C
3
鹵烷氧基、-CONR
2
、C
3
-C
6
環烷基及含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之4至7員雜環基團，其中該等C
3
-C
6
環烷基及4至7員雜環基團係各視需要經一或兩個選自以下之基團取代：鹵基、側氧基、CN、R、-OR及-NR
2
； R在每次出現時係獨立地選自H及視需要經一至三個選自以下之基團取代之C
1
-C
3
烷基：鹵基、-OH、C
1
-C
3
烷氧基、側氧基、CN、-NH
2
、-NH(C
1
-C
3
烷基)、-N(C
1
-C
3
烷基)
2
及環丙基； 及直接連接至相同原子之兩個R基團可視需要一起形成3至6員環，該環可視需要含有選自N、O及S之雜原子作為環成員，且可經多達兩個選自-OH、側氧基、C
1
-C
3
烷基及C
1
-C
3
烷氧基之基團取代； R
Z3
係H、OH、鹵基、CN、C
1
-C
3
烷基、C
3
-C
6
環烷基、C
1
-C
3
鹵烷基或-OR； R
Z4
係H、OH、鹵基、CN、Me、OMe或CF
3
； R
6
係H、鹵基、C
1
-C
3
烷氧基或C
1
-C
6
烷基，或與R
9
一起形成如下文描述之環； R
7
係H、鹵基、C
1
-C
3
烷氧基或C
1
-C
6
烷基，或與R
9
一起形成如下文描述之環； R
8
係H或C
1
-C
6
烷基； R
9
係H、視需要經多達三個選自以下之基團取代之C
1
-C
6
烷基：C
3
-C
6
環烷基、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR、CONR
2
及側氧基， 或R
9
可為選自以下之環：C
3
-C
6
環烷基、苯基、含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5至6員雜環基及含有一或兩個選自N、O及S之雜原子作為環成員之5至6員雜芳基，其中此等環中之各者係視需要經多達三個選自以下之基團取代：C
1
-C
2
烷基、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR、CONR
2
及側氧基； 或R
9
與R
6
或R
7
一起形成3至7員環烷基環或含有N、O或S作為環成員之3至7員雜環形環；其中該環烷基或雜環形環係視需要經多達三個選自以下之基團取代：R、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR、CONR
2
及側氧基； 或其醫藥上可接受之鹽。 2. 如實施例1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R
1
係H或F。 3. 如前述實施例中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R
2
係H、Me、CN、鹵基或OMe。在此等實施例之一些中，R
2
係H或F。 4. 如實施例1至3中任一項之化合物，其中W係-COOR
3
；或其醫藥上可接受之鹽。在一些此等實施例中，R
3
係H、甲基或乙基。 5. 如實施例1至4中任一項之化合物，其中R
6
係H及R
7
係H；或其醫藥上可接受之鹽。 6. 如實施例1至5中任一項之化合物，其中R
9
係視需要經多達三個選自以下之基團取代之C
1
-C
6
烷基：C
3
-C
6
環烷基、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR、CONR
2
及側氧基；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例之一些中，R
8
係H。 7. 如實施例1至4中任一項之化合物，其中R
9
與R
6
或R
7
一起形成3至7員環烷基環或含有N、O或S作為環成員之3至7員雜環形環；其中該環烷基或雜環形環係視需要經多達三個選自以下之基團取代：R、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR、CONR
2
及側氧基；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例中，R
8
通常係H，及不與R
9
形成環之基團R
6
或R
7
亦通常為H。 8. 如實施例1至7中任一項之化合物，其中： Z
1
係CR
Z1
； Z
2
係CR
Z2
； Z
3
係CR
Z3
；及 Z
4
係CR
Z4
； 或其醫藥上可接受之鹽。 9. 如實施例1至7中任一項之化合物，其中Z
1
、Z
2
、Z
3
及Z
4
中之一者為N；或其醫藥上可接受之鹽。 10. 如實施例1至7中任一項之化合物，其具有下式：
、
、
或
， 其中Z
1
係CR
Z1
； Z
2
係CR
Z2
； Z
3
係CR
Z3
；及 Z
4
係CR
Z4
； 及R
3
係H或C
1
-C
4
烷基； 或其醫藥上可接受之鹽。 11. 如實施例1至5中任一項之化合物，其中R
9
係異丙基、第三丁基、環丙基、環丁基、苯基或噻吩，且係視需要經多達三個選自以下之基團取代：C
1
-C
2
烷基、-OR、-NR
2
、鹵基、CN、COOR及CONR
2
；或其醫藥上可接受之鹽。 12. 如實施例1至11中任一項之化合物，其中R
8
係H；或其醫藥上可接受之鹽。 13. 如實施例1至11中任一項之化合物，其中R
Z1
係H、鹵基、C
1-2
鹵烷基或-OR；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例之一些中，R
Z1
係甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。 14. 如實施例1至12中任一項之化合物，其中R
Z2
係選自H、鹵基、C
1-2
鹵烷基、-OMe及-OR；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例之一些中，R
Z2
係H、甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或氟甲氧基。 15. 如實施例1至12中任一項之化合物，其中R
Z3
係選自H、鹵基、C
1-2
鹵烷基及-OR；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例之一些中，R
Z3
係H。 16. 如實施例1至12中任一項之化合物，其中R
Z4
係H或鹵基；或其醫藥上可接受之鹽。在此等實施例之一些中，R
Z4
係H。 17. 如實施例1之化合物，其係選自表1中實例之化合物。 18. 一種醫藥組合物，其包含前述實施例中任一項之化合物與至少一種醫藥上可接受之載劑之混合。 19. 一種治療患有B型肝炎感染之個體之方法，其包括向該個體投與如實施例1至17中任一項之化合物或實施例18之醫藥組合物。 20. 如實施例19之方法，其中如技術方案1至17中任一項之化合物或實施例18之醫藥組合物係與選自以下之額外治療劑組合使用：干擾素或聚乙二醇干擾素、HBV聚合酶抑制劑、病毒進入抑制劑、病毒成熟抑制劑、蛋白殼組裝抑制劑、HBV核調節劑、逆轉錄酶抑制劑、TLR-促效劑或免疫調節劑。 21. 一種抑制B型肝炎病毒之複製之方法，其包括使B型肝炎病毒活體外或活體內與如實施例1至17中任一項之化合物接觸。 22. 一種醫藥組合，其包含如實施例1至17中任一項之化合物及至少一種額外治療劑。 23. 如實施例1至17中任一項之化合物，其用於治療中。 24. 如實施例23之化合物，其中該治療係細菌感染之治療。 25. 一種如實施例1至17中任一項之化合物之用途，其用於製造藥劑。 本發明之另一實施例提供如上文描述之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其作為藥劑使用。在一個態樣中，該藥劑係用於治療患有HBV感染之個體。在一特定實施例中，該個體係經診斷患有慢性HBV之人類。 亦於本發明之範圍內係式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽於製造藥劑之用途；在一些實施例中，此藥劑係用於治療或預防人類之病毒疾病及/或感染，特定言之涉及之病毒為HBV。 本發明之範圍內包括包含式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑或賦形劑之醫藥組合物。視需要，該組合物包含至少兩種醫藥上可接受之載劑及/或賦形劑。 根據本發明之另一態樣，根據本發明之醫藥組合物進一步包含治療有效量之至少一種其他抗病毒劑。 本發明亦提供如上文描述之醫藥組合物於治療患有感染或有患有該感染之風險之人類之HBV感染之用途。 本發明亦提供如上文描述之醫藥組合物於治療患有疾病或有患有該疾病之風險之人類之HBV感染之用途。 本發明之另一態樣涉及藉由向人類單獨或與至少一種其他抗病毒劑組合投與(一起投與或分別投與)抗病毒有效量之本發明之化合物、其醫藥上可接受之鹽或如上文描述之組合物以治療或預防人類之B型肝炎病毒疾病及/或感染之方法。 本發明之額外態樣係指包含有效治療B型肝炎病毒疾病及/或感染之本發明之組合物之製造物件；及包含指示該組合物可用以治療由B型肝炎病毒引起之疾病及/或感染之標籤之包裝材料；其中該組合物包含根據本發明之式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽。 本發明之又另一態樣涉及抑制HBV之複製之方法，其包括在其中病毒之複製經抑制之條件下將該病毒曝露於有效量之式(I)化合物或其鹽。此方法可活體外或活體內實踐。 本發明之範圍內包括式(I)化合物或其鹽用以抑制HBV之複製之用途。 在涉及式(I)化合物之所有實施例中，式(I)化合物可為如上文描述之實施例1至17中任一項之化合物。 在一些實施例中，式(I)化合物係與選自以下之至少一種額外治療劑共投與或組合使用：干擾素或聚乙二醇干擾素、HBV聚合酶抑制劑、病毒進入抑制劑、病毒成熟抑制劑、蛋白殼組裝抑制劑、HBV核調節劑、逆轉錄酶抑制劑、TLR-促效劑或免疫調節劑。視需要，該式(I)化合物可經製備以組合額外治療劑同時或順序使用；或該式(I)化合物可組合於包含式(I)化合物及至少一種額外治療劑之醫藥組合內。可與本發明之化合物組合使用之一些特定之治療劑包括本文描述之免疫調節劑、干擾素α 2a、干擾素α-2b、聚乙二醇化干擾素α-2a、聚乙二醇化干擾素α-2b、TLR-7及TLR-9促效劑、恩替卡韋、替諾福韋、西多福韋(cidofovir)、替比夫定(telbivudine)、去羥肌苷(didanosine)、扎西他濱(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韋(abacavir)、恩曲他濱(emtricitabine)、阿立他濱(apricitabine)、奈韋拉平(atevirapine)、利巴韋林(ribavirin)、阿昔洛韋(acyclovir)、泛昔洛韋(famciclovir)、伐昔洛韋(valacyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、阿德福韋(adefovir)、依非韋倫(efavirenz)、奈韋拉平(nevirapine)、地拉韋啶(delavirdine)及依曲韋林(etravirine)。合適之核調節劑係揭示於WO2013/096744中；合適之HBV蛋白殼抑制劑係描述於US2015/0252057中。 此等額外藥劑可與本發明之化合物組合以產生單一醫藥劑型。或者，此等額外藥劑可作為多種劑型之一部分向病患分開投與，例如，使用套組。此等額外藥劑可在投與本發明之化合物或其醫藥上可接受之鹽之前、同時或之後向病患投與。或者，此等額外治療劑可由不同投與途徑及在不同之給藥方案上與本發明之化合物分開及視需要投與，只要本發明之化合物及額外治療劑係同時使用以治療HBV感染或由HBV感染引起或併發之失調症。 每天適用之本發明之化合物之劑量範圍係通常自0.01至100 mg/kg體重，較佳自0.1至50 mg/kg體重。各劑量單元可便利地含有自5%至95%活性化合物(w/w)。較佳地，此等製劑含有自20%至80%活性化合物。 實際醫藥有效量或治療劑量將自然取決於熟習此項技術者已知的因素，諸如病患之年齡及體重、投與途徑及疾病之嚴重性。在任何情況下，組合將以容許醫藥有效量基於病患之獨特病症遞送之劑量及方式投與。 當本發明之組合物包含本發明之化合物及一或更多種額外治療劑或預防劑之組合時，化合物及額外藥劑兩者均應以在單一治療方案中通常投與之劑量之約10至100%之間，及更佳在約10與80%之間之劑量程度存在。 預期用於此組合治療之抗病毒劑包括有效抑制病毒在人類中之形成及/或複製之藥劑(化合物或生物製劑)，其等包括(但不限於)干擾病毒在人類中之形成及/或複製所需之宿主或病毒機制之藥劑。此等藥劑可選自恩替卡韋、替諾福韋、西多福韋、替比夫定、去羥肌苷、扎西他濱、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韋、恩曲他濱、阿立他濱、奈韋拉平、利巴韋林、阿昔洛韋、泛昔洛韋、伐昔洛韋、更昔洛韋、阿德福韋、依非韋倫、奈韋拉平、地拉韋啶及依曲韋林及本文描述之免疫調節劑(其等包括干擾素及聚乙二醇化干擾素、TLR-7促效劑及TLR-9促效劑)。 本發明之許多化合物含有一或更多個對掌性中心。此等化合物可呈單一異構物之形式或呈異構物之混合物之形式加以製造及使用。用於分離異構物(包括非對映異構物及對映體)之方法係此項技術中已知及合適之方法之實例係如本文描述。在某些實施例中，本發明之化合物係呈單一大體上純異構物之形式加以使用，其意謂化合物之樣本之至少90%係特定異構物及該樣本之小於10%係任何其他異構物或異構物之混合物。較佳地，該樣本之至少95%係單一異構物。合適之異構物之選擇係在一般技術者之認知內，因為一種異構物將通常在如本文描述用於量測HBV活性之活體內或活體外分析中更具活性，且將係較佳之異構物。其中在異構物之間的活體外活性差異係相對較小的，例如小於約4倍，較佳之異構物可基於在細胞培養中抗病毒複製之活性程度進行選擇，使用諸如彼等本文描述者之方法：具有較低MIC (最小抑制濃度)或EC-50之異構物較佳。 本發明之化合物可由下文闡述之一般合成途徑合成，該等途徑之特定實例係更詳細地描述於實例中。用以合成適用於此等合成之式(I)化合物及合成中間物之額外指導係揭示於已公開之PCT申請案WO2015/113990及WO2015/173164中。 方案1闡述用以製造本發明之化合物之一般方法，如本文實例中所示。各種吲哚-2-羧酸及氮雜吲哚-2-羧酸初始材料係此項技術中已知。羧酸可使用此項技術中已知的方法還原成醇，及該醇可用保護基諸如已知的矽醚(例如，TBS)保護。吲哚氮可經合適之α-鹵酮烷基化以引入含有R
9
之基團。還原胺化係一種於羰基中心處引入氮之方法。一級胺一經就位，則於吲哚/氮雜吲哚之C2處受保護之醇可經去保護及氧化至醛氧化態，在該狀態下其與一級胺環化以形成經R
9
取代之新6員環。 新環之亞胺係然後成環以藉由此項技術中已知的方法使用(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-3-側氧基丁酸乙酯形成額外之稠環。新環係然後經氧化以提供式(I)中顯示之吡啶酮環。適用於製備此等化合物之方法係揭示於已公開之PCT申請案WO2015/113990及WO2015/173164中。 方案1：合成式(I)化合物之一般方法。
使用此一般方法、其他已知初始材料及本文之實例，一般技術者可合成式(I)化合物。此等化合物之對映體可藉由對掌性HPLC及類似已知方法分離。雖然此式化合物之一種對映體通常比另一種對映體更具活性，但兩種異構物皆顯示如本文證實之對一種HBsAg之活性。 術語「光學異構物」或「立體異構物」係指各種立體異構構型中之任何一者，其可針對本發明之給定化合物存在及包括幾何異構物。應瞭解取代基可連接於碳原子之對掌性中心。術語「對掌性」係指具有與其鏡像配對物非重疊之性質之分子，而術語「非對掌性」係指與其鏡像配對物可重疊之分子。因此，本發明包括化合物之對映體、非對映異構物或外消旋物。「對映體」係互為非重疊鏡像之一對立體異構物。一對對映體之1:1混合物係「外消旋」混合物。該術語係用以指定視需要之外消旋混合物。「非對映異構物」係具有至少兩個非對稱原子但不互為鏡像之立體異構物。絕對立體化學係根據Cahn- lngold- Prelog R-S系統規定。當化合物係純對映體時，於各對掌性碳處之立體化學可由R或S規定。絕對構型未知的解析化合物可取決於其等在鈉D線之波長下旋轉平面偏振光的方向(右旋或左旋)而命名為(+)或(-)。本文描述之某些化合物含有一或更多個非對稱中心或軸線且可因此產生對映體、非對映異構物及可根據絕對立體化學定義為(R)-或(S)-的其他立體異構形式。 取決於初始材料及程序之選擇，取決於非對稱碳原子之數量，化合物可以可能異構物中之一種形式或其混合物 (例如呈純光學異構物或呈異構物混合物(諸如外消旋物及非對映異構物混合物))之形式存在。本發明係意欲包括所有此等可能之立體異構物，其等包括外消旋混合物、非對映異構混合物及光學純形式。光學活性(R)-及(S)-異構物可使用對掌性合成子或對掌性試劑製備或使用習知技術解析。若化合物含有雙鍵，則取代基可為E或Z構型。若該化合物含有經雙取代之環烷基，則環烷基取代基可具有順式或反式構型。所有互變異構形式係意欲包括於本發明內。 異構物之任何所得混合物可基於成分之物理化學差異分為純或大體上純幾何或光學異構物或非對映異構物，例如，藉由層析術及/或分步結晶。 最終產物或中間物之任何所得外消旋物可由已知方法(例如，藉由分離其非對映異構鹽(用光學活性酸或鹼獲得)及釋放光學活性酸性或鹼性化合物)解析為光學鏡像異構物。特定言之，鹼性部分可因此用以將本發明之化合物解析為其等光學鏡像異構物，例如，藉由與光學活性酸(例如，酒石酸、二苯甲醯酒石酸、二乙醯酒石酸、二-O,O'-對甲苯甲醯酒石酸、扁桃酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸)形成之鹽之分步結晶。外消旋產物亦可由對掌性層析術(例如，使用對掌性吸附劑之高壓液相層析術(HPLC))解析。 此外，本發明之化合物(包括其等鹽)亦可以其等水合物之形式獲得或包括用於其等結晶之其他溶劑。本發明之化合物可固有或與醫藥上可接受之溶劑(包括水)有意形成溶劑合物；因此，本發明意欲包含溶劑合物及非溶劑合物形式。術語「溶劑合物」係指本發明之化合物(包括其醫藥上可接受之鹽)與一或更多種溶劑分子之分子錯合物。此等溶劑分子係彼等已知對受體無害之常用於醫藥領域中者，例如，水、乙醇及類似物。術語「水合物」係指其中該溶劑分子為水之錯合物。 本發明之化合物(包括其鹽、水合物及溶劑合物)可固有或有意形成多晶型物。 如本文使用，術語「鹽」係指本發明之化合物之酸加成或鹼加成鹽。「鹽」包括特定言之「醫藥上可接受之鹽」。術語「醫藥上可接受之鹽」係指保留本發明之化合物之生物有效性及性質且通常並非生物學或其他方面不適宜的鹽。在許多情況下，本發明之化合物藉助於胺基及/或羧基或與其等類似之基團之存在可形成酸鹽及/或鹼鹽。 醫藥上可接受之酸加成鹽可用無機酸及有機酸形成，例如，乙酸鹽、天門冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡萄糖庚酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟乙酸鹽。 可衍生鹽之無機酸包括(例如)鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似物。 可衍生鹽之有機酸包括(例如)乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸及類似物。醫藥上可接受之鹼加成鹽可用無機及有機鹼形成。 可衍生鹽之無機鹼包括(例如)銨鹽及來自週期表之I至XII族之金屬。在某些實施例中，該等鹽係衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅及銅；特別合適之鹽包括銨、鉀、鈉、鈣及鎂鹽。 可衍生鹽之有機鹼包括(例如)一級胺、二級胺及三級胺、經取代之胺(包括天然生成之經取代之胺)、環胺、鹼性離子交換樹脂及類似物。某些有機胺包括異丙胺、芐星青黴素、膽鹼酸鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌嗪及氨丁三醇。 本發明之醫藥上可接受之鹽可藉由習知化學方法合成自鹼性或酸性部分。通常，此等鹽可藉由使此等化合物之游離酸形式與化學計量量之適當之鹼(諸如Na、Ca、Mg或K氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或類似物)反應或藉由使此等化合物之游離鹼形式與化學計量量之適當之酸反應製備。此等反應係通常在水或有機溶劑或兩者之混合物中進行。通常，在可行之情況下，非水性介質(諸如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)之使用係需要的。額外之合適之鹽之列表可(例如)參見「Remington's Pharmaceutical Sciences」，第20版，Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)及Stahl與Wermuth之「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use」 (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)中。 本文給定之任何式係意欲表示具有非天然同位素分佈(例如，富集氘或
13
C或
15
N之位點)之多達三個原子之本發明之化合物之未標記形式及同位素標記形式。除一或更多個原子係經具有除天然豐度質量分佈外之選定原子質量或質量數之原子置換外，同位素標記化合物具有本文給定之式描述之結構。可有效併入本發明之化合物內之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，分別諸如
2
H、
3
H、
11
C、
13
C、
14
C、
15
N、
18
F
31
P、
32
P、
35
S、
36
Cl、
125
I。本發明包括本發明之各種同位素標記化合物，例如彼等其中放射性同位素(諸如
3
H及
14
C)或彼等其中非放射性同位素(諸如
2
H及
13
C)以基本上高於正常同位素分佈之水平存在者。此等同位素標記化合物適用於新陳代謝研究(例如，用
14
C)、反應動力學研究(例如，用
2
H或
3
H)、偵測或成像技術，諸如包括藥物或受質組織分佈研究之正電子發射斷層攝影術(PET)或單光子發射計算機斷層攝影術(SPECT)或於病患之放射性治療中。特定言之，本發明之
18
F標記化合物可特別適用於PET或SPECT研究。本發明之同位素標記化合物可通常藉由熟習此項技術者已知的習知技術或藉由類似於彼等隨附實例及製劑中描述者之方法使用適當同位素標記試劑替代常用之未標記試劑進行製備。標記樣本併入相當低之同位素後可為有用的，諸如其中放射性標記係用以偵測痕量之化合物。 此外，使用較重同位素(特定言之氘(即，
2
H或D))之位點特異性取代可提供源自較大新陳代謝穩定性之某些治療優勢，例如增加之活體內半衰期或減少之劑量需求或治療指標之改善。應瞭解此內文中之氘被視為本發明之化合物之取代基，及通常具有氘作為取代基之化合物樣本於標記位置處併入至少50%氘。此較重同位素(具體言之，氘)之濃度可由同位素富集因子定義。如本文使用之術語「同位素富集因子」意謂指定同位素之同位素豐度與天然豐度之間的比率。若本發明之化合物中之取代基指示為氘，則此化合物就各指定之氘原子而言具有至少3500 (在各指定氘原子處併入52.5%氘)、至少4000 (併入60%氘)、至少4500 (併入67.5%氘)、至少5000 (併入75%氘)、至少5500 (併入82.5%氘)、至少6000 (併入90%氘)、至少6333.3 (併入95%氘)、至少6466.7 (併入97%氘)、至少6600 (併入99%氘)或至少6633.3 (併入99.5%氘)之同位素富集因子。 根據本發明之醫藥上可接受之溶劑合物包括彼等其中結晶之溶劑可經同位素取代者，例如D
2
O、d
6
-丙酮、d
6
-DMSO。 含有可作為氫鍵之供體及/或受體之基團之本發明之化合物可與合適之共晶體形成劑形成共晶體。此等共晶體可藉由已知共晶體形成程序製備自本發明之化合物。此等程序包括研磨、加熱、共升華、共熔融或在溶液中使本發明之化合物與共晶體形成劑於結晶條件下接觸及單離藉此形成之共晶體。合適之共晶體形成劑包括彼等描述於WO 2004/078163中者。因此本發明進一步提供包含本發明之化合物之共晶體。 使用方法 除非本文另有指示或內文中明確矛盾，否則本文描述之所有方法可以任何合適之順序進行。本文提供之任何及所有實例或示例性語言(例如「諸如」)之使用係僅意欲更好地闡明本發明及非限制本發明另外主張之範圍。 本發明之化合物可由已知方法投與，包括經口、非經腸、吸入及類似物。在某些實施例中，本發明之化合物係呈丸劑、口含錠、片劑、膠囊、溶液或懸浮液之形式經口投與。在其他實施例中，本發明之化合物係由注射或輸注投與。輸注係通常通過靜脈進行，通常歷時約15分鐘與4小時之間的時間。在其他實施例中，本發明之化合物係鼻內或藉由吸入投與；吸入方法特別適用於治療呼吸道感染。本發明之化合物顯示經口生物利用度，因此經口投與有時較佳。 在本發明之某些實施例中，本發明之化合物係與第二抗病毒劑(諸如彼等本文指定者)組合使用。 術語「組合」意謂呈一種劑量單位形式之固定組合，呈適用於同時或依序一起使用之單獨劑型或呈用於組合投與之成分套組，在該組合投與中，本發明之化合物及組合配對物可同時獨立地投與或在尤其容許該組合配對物顯示合作(例如，協同)效應或其任何組合之時間間隔內分開投與。 第二抗病毒劑可與本發明之化合物組合投與，其中該第二抗病毒劑係在投與本發明之化合物之前、同時或之後投與。當需同時投與本發明之化合物及第二藥劑且投與途徑相同時，則本發明之化合物可與第二藥劑調配成相同劑型。含有本發明之化合物及第二藥劑之劑型之實例係錠劑或膠囊。 在一些實施例中，本發明之化合物及第二抗病毒劑之組合可提供協同活性。本發明之化合物及第二抗病毒劑可一起投與、分開但同時投與或依序投與。 化合物之「有效量」係治療或預防本文描述之病毒感染及/或疾病或病症所需之量或足以治療或預防本文描述之病毒感染及/或疾病或病症之量。在一實例中，式I化合物之有效量係足以治療個體之病毒感染之量。在另一實例中，有效量係足以治療需此治療之個體之HBV之量。該有效量可取決於諸如個體之尺寸及體重、疾病之類型或本發明之特定化合物之此等因素而變化。例如，本發明之化合物之選擇可影響構成「有效量」之成分。一般技術者將可研究本文含有之因素及關於本發明之化合物之有效量作出判定而無需過度實驗。 投與方案可影響構成有效量之成分。本發明之化合物可在個體之病毒感染發病之前或之後投與。此外，若干分開劑量及交錯劑量可每日或依序投與或該劑量可連續輸注或可為推注(bolus injection)。此外，如由治療或預防情況之緊急狀態指示，本發明之化合物之劑量可成比例增加或減小。 本發明之化合物可用於治療如本文描述之病症、失調症或疾病或用於製造用以治療此等疾病之醫藥組合物。本發明提供使用本發明之化合物治療此等疾病或製備具有本發明之化合物之用於治療此等疾病之醫藥組合物之方法。 語言「醫藥組合物」包括適用於向哺乳動物(例如，人類)投與之製劑。當本發明之化合物係呈藥物之形式向哺乳動物(例如，人類)投與時，其等可本身投與或呈含有(例如)0.1至99.5% (更佳地，0.5至90%)之作為活性成分至少一種式(I)化合物或其任何亞屬與醫藥上可接受之載劑或視需要兩種或更多種醫藥上可接受之載劑之組合之醫藥組合物之形式投與。 片語「醫藥上可接受之載劑」係經該領域認可且包括醫藥上可接受之材料、組合物或載體，其等適用於向哺乳動物投與本發明之化合物。該等載劑包括液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或囊封材料，其等涉及將標的藥劑自器官或身體之一部分運載或遞送至另一器官或身體之一部分。在可與調配物之其他成分相容且對病患無害之意義上，各載劑必須為「可接受」。可作為醫藥上可接受之載劑之材料之一些實例包括：糖，諸如乳糖、葡萄糖及蔗糖；澱粉，諸如玉米澱粉及土豆澱粉；纖維素及其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素及乙酸纖維素；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；賦形劑，諸如可可油及栓劑蠟；油，諸如花生油、棉籽油、紅花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油及大豆油；乙二醇，諸如丙二醇；多元醇，諸如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；酯，諸如油酸乙酯及月桂酸乙酯；瓊脂；緩衝劑，諸如氫氧化鎂及氫氧化鋁；褐藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格氏溶液；乙醇；磷酸鹽緩衝溶液；及用於醫藥調配物中之其他無毒可相容物質。通常，醫藥上可接受之載劑係無菌及/或大體上無熱原。 潤濕劑、乳化劑及潤滑劑(諸如月桂基硫酸鈉及硬脂酸鎂)及著色劑、釋離劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑、防腐劑及抗氧化劑亦可存在於組合物中。 醫藥上可接受之抗氧化劑之實例包括：水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉及類似物；油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、五倍子酸丙酯、a-生育酚及類似物；及金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸及類似物。 本發明之調配物包括彼等適用於經口、經鼻、吸入、局部、經皮、經頰、經直腸、經陰道及/或非經腸投與者。該等調配物可便利地存在於單元劑型中且可由藥學領域中熟知的任何方法製備。可與載劑材料組合以產生單一劑型之活性成分之量將通常為產生治療效應之化合物之量。通常，在100%中，此量將在自約1%至約99%之活性成分之範圍內，較佳在自約5%至約70%之範圍內，更佳在自約10%至約30%之範圍內。 製備此等調配物或組合物之方法包括使本發明之化合物與載劑及視需要一或更多種輔助成分結合之步驟。一般而言，該等調配物係藉由使本發明之化合物與液體載劑或微細固體載劑或兩者均質地及緊密地結合在一起，及然後視需要塑形產品進行製備。 適用於經口投與之本發明之調配物可呈膠囊、扁囊劑、丸劑、錠劑、口含錠(使用調味基質，例如，通常蔗糖及阿拉伯樹膠或黃蓍膠)、粉劑、顆粒之形式或呈溶於水性或非水性液體之溶液或懸浮液之形式或呈水包油或油包水液體乳液之形式或呈酏劑或糖漿之形式，或呈香錠(使用惰性基質，諸如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯樹膠)之形式及/或呈漱口水及類似物之形式，各含有既定量作為活性成分之本發明之化合物。本發明之化合物亦可呈大丸劑(bolus)、舐劑(electuary)或糊劑(paste)投與。 在用於經口投與之本發明之固體劑型(膠囊、錠劑、丸劑、糖衣丸、粉劑、顆粒及類似物)中，活性成分係與一或更多種醫藥上可接受之載劑混合，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣及/或下列中之任何一者：填充劑或增量劑，諸如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇及/或矽酸；黏合劑，諸如，例如羧基甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯啶酮、蔗糖及/或阿拉伯樹膠；潤濕劑，諸如甘油；崩解劑，諸如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、土豆或木薯澱粉、褐藻酸、某些矽酸鹽及碳酸鈉；溶液阻滯劑，諸如石蠟；吸收促進劑，諸如季銨化合物；潤濕劑，諸如，例如鯨蠟醇及甘油單硬脂酸鹽；吸附劑，諸如高嶺土及膨潤土；潤滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物；及著色劑。在膠囊、錠劑及丸劑之情況下，醫藥組合物亦可包含緩衝劑。相似類型之固體組合物亦可作為填充劑用於使用諸如乳糖或奶糖及高分子聚乙二醇及類似物之賦形劑之軟質及硬質填充之明膠膠囊中。 錠劑可藉由壓縮或模塑，視需要用一或更多種輔助成分製得。壓縮錠劑可使用黏合劑(例如，明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，羥乙酸澱粉鈉或交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑製備。模塑錠劑可藉由在合適之機器中模塑經惰性液體稀釋劑潤濕之粉狀化合物之混合物製得。 本發明之醫藥組合物之錠劑及其他固體劑型(諸如糖衣丸、膠囊、丸劑及顆粒)可視需要用包衣及外殼(諸如製藥領域中熟知的腸溶包衣及其他包衣)折疊或製備。其等亦可使用用於提供所需釋放曲線之(例如)不同比例之羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質、脂質體及/或微球加以調配以便於提供其中之活性成分之緩釋或控釋。其等可藉由(例如)濾過細菌保留過濾器或藉由併入呈可在使用前立即溶解於無菌水或一些其他無菌可注射介質中之無菌固體組合物之形式之滅菌劑進行滅菌。此等組合物亦可視需要含有遮光劑及可為其等僅或優先地在胃腸道之某一部分視需要以延遲方式釋放該(等)活性成分之組合物。可使用之包埋組合物之實例包括聚合物質及蠟。該活性成分亦可視需要與上文描述之賦形劑中之一或更多者呈微囊封形式。 用於經口投與本發明之化合物之液體劑型包括醫藥上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及酏劑。除活性成分外，液體劑型可含有該領域中常用之惰性稀釋劑，諸如，例如水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑(諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1,3-丁二醇)、油(特定言之，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇及山梨醇之脂肪酸酯及其混合物。 除惰性稀釋劑外，經口組合物亦可包括佐劑，諸如潤濕劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑、著色劑、芳香劑及防腐劑。 除活性化合物外，懸浮液可含有懸浮劑，諸如，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇及脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂及黃蓍膠及其混合物。 用於直腸或陰道投與之本發明之醫藥組合物之調配物可呈現為栓劑，其可藉由混合一或更多種本發明之化合物及一或更多種合適之無刺激性賦形劑或包含(例如)可可油、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸鹽之載劑製備及其在室溫下呈固體，但在體溫下為液體，且因此其等將在直腸或陰道腔中融化及釋放活性化合物。 適用於陰道投與之本發明之調配物亦包括含有諸如此項技術中已知適當之載劑之子宮托、棉條、乳霜、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧調配物。 用於局部或經皮投與本發明之化合物之劑型包括粉劑、噴霧、軟膏、糊劑、乳霜、洗劑、凝膠、溶液、貼片及吸入劑。該活性化合物可在無菌條件下與醫藥上可接受之載劑及與可能需要之任何防腐劑、緩衝劑或推進劑混合。 除本發明之活性化合物外，軟膏、糊劑、乳霜及凝膠亦可含有賦形劑，諸如動物及植物脂肪、油、蠟、石蠟、澱粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、聚矽氧、膨潤土、矽酸、滑石及氧化鋅或其混合物。 除本發明之化合物外，粉末及噴霧亦可含有賦形劑，諸如乳糖、滑石、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣及聚醯胺粉末或此等物質之混合物。噴霧可另外含有常用推進劑，諸如氯氟烴及揮發性未經取代之烴，諸如丁烷及丙烷。 經皮貼片具有向身體提供受控遞送本發明之化合物之額外優勢。此等劑型可藉由將該化合物溶解或分散於適當之介質中製得。亦可使用吸收增強劑以增強化合物跨皮膚之流量。此等流量之速率可藉由提供速率控制膜或將該活性化合物分散於聚合物基質或凝膠中進行控制。 眼用調配物、眼部軟膏、粉劑、溶液及類似物亦預期在本發明之範圍內。 適用於非經腸投與之本發明之醫藥組合物可包含一或更多種本發明之化合物與一或更多種醫藥上可接受之載劑之組合，諸如無菌等滲水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液或可僅在使用前復水成無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末，其等可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使調配物與預期受體之血液等滲之溶質或懸浮劑或增稠劑。 可用於本發明之醫藥組合物中之合適之水性及非水性載劑包括水、乙醇、二醇醚、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇及類似物)及其合適之混合物、植物油(諸如橄欖油)及可注射之有機酯(諸如油酸乙酯)。適當之流動性可(例如)藉由使用包衣材料(諸如卵磷脂)；在分散液之情況下藉由維持所需粒度維持；及藉由使用表面活性劑維持。 此等組合物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑及分散劑。微生物作用之預防可由內含各種抗菌劑及抗真菌劑(例如，對羥苯甲酸甲酯、氯丁醇、苯酚山梨酸及類似物)確保。亦可視需要包括等滲劑，諸如糖、氯化鈉及類似物於該等組合物內。另外，可注射醫藥形式之經延長之吸收可由內含延遲吸收之藥劑(諸如單硬脂酸鋁及明膠)引起。 在一些情況下，為延長藥物之效應，需減緩對來自皮下或肌內注射之藥物之吸收。此可藉由使用具有較差水溶性之結晶或非晶型材料之液體懸浮液完成。藥物之吸收速率則取決於其溶解速率，其進一步可取決於結晶大小及晶型。或者，非經腸投與之藥物形式之經延遲之吸收係藉由使該藥物溶解或懸浮於油載體中完成。 可注射之儲備形式係藉由在可生物降解之聚合物(諸如聚乳酸-聚乙交酯)中形成標的化合物之微膠囊基質製得。取決於藥物與聚合物之比率及採用之特定聚合物之性質，藥物釋放之速率可受控制。其他可生物降解之聚合物之實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。儲備可注射調配物亦藉由將藥物包埋於與身體組織相容之脂質體或微乳液中製備。 本發明之製劑可經口、非經腸、局部或經直腸給定。其等當然由適用於各投與途徑之形式給定。例如，其等係以錠劑或膠囊形式、藉由注射、吸入、眼部洗劑、軟膏、栓劑等投與；藉由注射、輸注或吸入投與；藉由洗劑或軟膏局部投與；及藉由栓劑直腸投與。 如本文使用之片語「非經腸投與」及「非經腸地投與」意謂除腸內及局部投與外之投與模式，通常藉由注射，且包括(但不限於)靜脈內、肌內、動脈內、鞘內、囊內、眼眶內、心臟內、皮膚內、腹腔內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下、椎管內及胸骨內注射及輸注。靜脈內輸注有時係用於遞送本發明之化合物之較佳方法。輸注可用以遞送單一每日劑量或多劑量。在一些實施例中，本發明之化合物係藉由輸注經在15分鐘與4小時之間，通常在0.5與3小時之間的間隔投與。此輸注可使用每日一次、每日兩次或多達每日三次。 如本文使用之片語「全身投與」、「全身地投與」、「外周投與」及「外周地投與」意謂化合物、藥物或其他材料之除直接進入中樞神經系統內以外之投與，使得其進入病患之系統及因此經新陳代謝及其他類似過程，例如，皮下投與。 此等化合物可藉由任何合適之投與途徑向人類及其他動物投與以用於治療，該投與途徑包括經口、經鼻；諸如(例如)噴霧藉由直腸、陰道、非經腸、腦池內及局部；諸如藉由粉劑、軟膏或滴劑(包括)經頰及舌下。 無論選擇何種投與途徑，可以合適之水合形式使用之本發明之化合物及/或本發明之醫藥組合物係藉由熟習此項技術者已知的習知技術調配成醫藥上可接受之劑型。 本發明之醫藥組合物中活性成分之實際劑量程度可變化以便於獲得針對特定病患、組合物及投與模式有效達成所需治療反應且對該病患無毒之活性成分之量。 所選劑量程度將取決於各種因素，其等包括採用之本發明之特定化合物或其酯、鹽或醯胺之活性、投與途徑、投與時間、所採用之特定化合物之排泄速率、治療之持續時間、與採用之特定化合物組合使用之其他藥物、化合物及/或材料、所治療之病患之年齡、性別、體重、病症、一般健康及先前醫學病史及醫藥領域中熟知的類似因素。 具有此領域之一般技術之醫師或獸醫可容易判定及規定所需醫藥組合物之有效量。例如，醫師或獸醫可以低於所需程度之程度用於醫藥組合物中之本發明之化合物之劑量開始以達成所需治療效應及逐漸增加劑量直至達成所需效應。 一般而言，本發明之化合物之合適之每日劑量將係有效產生治療效應之最低劑量之化合物之劑量。此有效劑量將通常取決於上文描述之因素。通常，用於病患之本發明之化合物之靜脈內及皮下劑量在用於指定效應時將在自約0.0001至約100 mg/kg體重/天之範圍內，更佳在自約0.01至約50 mg/kg體重/天之範圍內及又更佳在自約0.1至約20 mg/kg體重/天之範圍內。有效量係預防或治療病毒感染(諸如HBV)之量。 使用本文描述之化合物或組合物之治療可每日重複足以減少或大體上消除HBV感染或病毒負荷之時間。例如，治療可持續一週或兩週或3至4週或4至8週或8至12週、2至6個月或更長，例如，直至病毒負荷或感染之其他量度顯示病毒負荷或病毒活性或HBV感染之其他病症或症狀之實際減少。熟練之治療醫師可容易判定治療之合適之持續時間。 視需要，活性化合物之有效每日劑量可以每日單一劑量投與或以在一天內以適當之間隔分開投與之二、三、四、五、六或更多個子劑量進行投與，視需要，以單元劑型。經口或藉由吸入遞送之化合物通常以每日一至四個劑量投與。藉由注射遞送之化合物通常每日一次或每隔一日一次投與。藉由輸注遞送之化合物通常以每日一至三個劑量投與。當在一天內投與多個劑量時，該等劑量可以約4小時、約6小時、約8小時或約12小時之間隔投與。 儘管本發明之化合物可單獨投與，但較佳呈醫藥組合物(諸如彼等本文描述者)之形式投與該化合物。因此使用本發明之化合物之方法包括投與呈醫藥組合物之形式的該化合物，其中至少一種本發明之化合物係與醫藥上可接受之載劑在投與之前混合。 本發明之化合物與免疫調節劑組合使用 本文描述之化合物及組合物可與作為免疫調節劑之一或更多種治療劑(例如，共刺激分子之活化劑或免疫抑制分子之抑制劑或疫苗)組合使用或投與。程序性死亡1 (PD-1)蛋白係T細胞調節劑之經延伸CD28/CTLA4家族之抑制成員(Okazaki等人，(2002) Curr. Opin. Immunol. 14: 391779-82；Bennett等人，(2003) J. Immunol. 170:711-8)。PD-1係表現於經活化之B細胞、T細胞及單核細胞上。PD-1係負向調節TCR信號之免疫抑制蛋白(Ishida, Y.等人，(1992) EMBO J. 11:3887-3895；Blank, C.等人，(Epub 2006 Dec. 29) Immunol. Immunother. 56(5):739-745)，及在慢性感染中經上調。PD-1與PD-L1之間的相互作用可作為免疫核查點，其可導致(例如)浸潤淋巴細胞之減少、T細胞受體介導之增殖之減少及/或由癌細胞或受感染之細胞引起之免疫逃避之減少(Dong等人，(2003) J. Mol. Med. 81:281-7；Blank等人，(2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314；Konishi等人，(2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100)。免疫抑制可藉由抑制PD-1與PD-L1或PD-L2之局部相互作用逆轉；當PD-1與PD-L2之相互作用亦經阻斷時，該效應係附加的(Iwai等人，(2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7；Brown等人，(2003) J. Immunol. 170:1257-66)。免疫調節可藉由結合至免疫抑制蛋白(例如，PD-1)或結合至調節抑制蛋白(例如，PD-L1、PD-L2)之結合蛋白達成。 在一個實施例中，本發明之組合治療包括為免疫核查點分子之抑制分子之抑制劑或拮抗劑之免疫調節劑。在另一實施例中，該免疫調節劑結合至天然抑制免疫抑制核查點分子之蛋白質。當與抗病毒化合物組合使用時，此等免疫調節劑可增強抗病毒反應，及因此增強與單獨使用抗病毒化合物之治療相關聯之效應。 術語「免疫核查點」係指在CD4及CD8 T細胞之細胞表面上之一群分子。此等分子可有效充當「制動器」以下調或抑制自適應免疫反應。免疫核查點分子包括(但不限於)程序性死亡1 (PD-1)、細胞毒性T-淋巴細胞抗原4 (CTLA-4)、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40及LAG3，其等直接抑制免疫細胞。可作為用於本發明之方法中之免疫核查點抑制劑之免疫治療劑包括(但不限於)以下之抑制劑：PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4及/或TGFR β。抑制分子之抑制可藉由在DNA、RNA或蛋白質水平下之抑制進行。在一些實施例中，抑制核酸(例如，dsRNA、siRNA或shRNA)可用以抑制抑制分子之表現。在其他實施例中，抑制信號之抑制劑係結合至該抑制分子之多肽，例如，可溶性配體或抗體或其抗原結合片段。 「組合」非意欲暗示治療或治療劑必須同時投與及/或針對一起遞送進行調配，然而此等遞送方法係在本文描述之範圍內。免疫調節劑可在投與一或更多種本發明之化合物及視需要一或更多種額外之治療或治療劑之同時、之前或之後投與。組合中之治療劑可以任何順序投與。一般而言，各藥劑將以針對該藥劑決定之劑量及/或按時間計劃表進行投與。另外知曉此組合中利用之該等治療劑可在單一組合物中一起投與或在不同組合物中分開投與。一般而言，預計組合物中利用之各治療劑係以不超過其等個別使用之水平加以利用。在一些實施例中，用於組合中之水平將低於彼等個別使用者。 在某些實施例中，本文描述之抗病毒化合物係與一或更多種免疫調節劑組合投與，該等免疫調節劑係以下之抑制劑：PD-1、PD-L1及/或PD-L2。各此抑制劑可為抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白或寡肽。此等免疫調節劑之實例係此項技術中已知。 在一些實施例中，該免疫調節劑係選自MDX-1106、Merck 3475或CT-011之抗-PD-1抗體。 在一些實施例中，該免疫調節劑係免疫黏附素(例如，包含稠合至恆定區(例如，免疫球蛋白序列之Fc區)之PD-Ll或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分之免疫黏附素)。 在一些實施例中，該免疫調節劑係PD-1抑制劑，諸如AMP-224。 在一些實施例中，該免疫調節劑係PD-Ll抑制劑，諸如抗-PD-Ll抗體。 在一些實施例中，該免疫調節劑係選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105之抗-PD-Ll結合拮抗劑。MDX-1105(亦稱為BMS-936559)係WO2007/005874中描述之抗-PD-Ll抗體。抗體YW243.55.S70係WO 2010/077634中描述之抗-PD-Ll。 在一些實施例中，該免疫調節劑係尼魯單抗(nivolumab) (CAS註冊編號：946414-94-4)。尼魯單抗之替代名稱包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。尼魯單抗係全人類IgG4單株抗體，其特異性阻斷PD-1。尼魯單抗(純系5C4)及特異性結合至PD-1之其他人類單株抗體係揭示於US 8,008,449、EP2161336及WO2006/121168中。 在一些實施例中，該免疫調節劑係抗-PD-1抗體派姆單抗(Pembrolizumab)。派姆單抗(亦稱為蘭利珠單抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®；Merck)係結合至PD-1之人類化IgG4單株抗體。派姆單抗及其他人類化抗-PD-1抗體係揭示於Hamid, O.等人，(2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134–44、US 8,354,509、WO2009/114335及WO2013/079174中。 在一些實施例中，該免疫調節劑係皮地珠單抗(Pidilizumab) (CT-011; Cure Tech)，一種結合至PD1之人類化IgG1k單株抗體。皮地珠單抗及其他人類化抗-PD-1單株抗體係揭示於WO2009/101611中。 作為免疫調節劑適用於本文揭示之方法中之其他抗-PD1抗體包括AMP 514 (Amplimmune)及揭示於US 8,609,089、US 2010028330及/或US 20120114649中之抗-PD1抗體。在一些實施例中，該抗-PD-L1抗體係MSB0010718C。MSB0010718C (亦稱為A09-246-2；Merck Serono)係結合至PD-L1之單株抗體。 在一些實施例中，該免疫調節劑係MDPL3280A (Genentech / Roche)，一種結合至PD-L1之人類Fc最佳化IgG1單株抗體。MDPL3280A及結合至PD-L1之其他人類單株抗體係揭示於美國專利案第7,943,743號及美國公開案第20120039906號中。作為免疫調節劑適用於本發明之方法之其他抗-PD-L1結合劑包括YW243.55.S70 (參見WO2010/077634)、MDX-1105 (亦稱為BMS-936559)及WO2007/005874中揭示之抗-PD-L1結合劑。 在一些實施例中，該免疫調節劑係AMP-224 (B7-DCIg；Amplimmune；例如，揭示於WO2010/027827及WO2011/066342中)，其係阻斷PD1與B7-H1間之相互作用之PD-L2 Fc融合可溶性受體。 在一些實施例中，該免疫調節劑係抗-LAG-3抗體，諸如BMS-986016。BMS-986016 (亦稱為BMS986016)係結合至LAG-3之單株抗體。BMS-986016及其他人類化抗-LAG-3抗體係揭示於US 2011/0150892、WO2010/019570及WO2014/008218中。 在某些實施例中，本文揭示之組合治療包括共刺激分子或抑制分子(例如，共抑制配體或受體)之調節劑。 在一個實施例中，共刺激分子之共刺激調節劑(例如，促效劑)係選自以下之促效劑(例如，促效抗體或其抗原結合片段或可溶性融合)：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3或CD83配體。 在另一實施例中，本文揭示之組合治療包括係共刺激分子之免疫調節劑，例如，與正信號相關聯之促效劑，其包括CD28、CD27、ICOS及/或GITR之共刺激域。 示例性GITR促效劑包括(例如)GITR融合蛋白及抗-GITR抗體(例如，二價抗-GITR抗體)，諸如美國專利案第6,111,090號、歐洲專利案第090505B1號、美國專利案第8,586,023號、PCT公開案第WO 2010/003118號及2011/090754中描述之GITR融合蛋白或(例如)美國專利案第7,025,962號、歐洲專利案第1947183B1號、美國專利案第7,812,135號、美國專利案第8,388,967號、美國專利案第8,591,886號、歐洲專利案第EP 1866339號、PCT公開案第WO 2011/028683號、PCT公開案第WO 2013/039954號、PCT公開案第WO2005/007190號、PCT公開案第WO 2007/133822號、PCT公開案第WO2005/055808號、PCT公開案第WO 99/40196號、PCT公開案第WO 2001/03720號、PCT公開案第WO99/20758號、PCT公開案第WO2006/083289號、PCT公開案第WO 2005/115451號、美國專利案第7,618,632號及PCT公開案第WO 2011/051726號中描述之抗-GITR抗體。 在一個實施例中，使用之免疫調節劑係可溶性配體(例如，CTLA-4-Ig)或結合至PD-L1、PD-L2或CTLA4之抗體或抗體片段。例如，抗-PD-1抗體分子可與抗-CTLA-4抗體(舉例而言，例如，伊匹單抗(ipilimumab))組合投與。示例性抗-CTLA4抗體包括曲美目單抗(Tremelimumab)(可獲得自Pfizer之IgG2單株抗體，原名為替西木單抗(ticilimumab)，CP-675,206)；及伊匹單抗(CTLA-4抗體，亦稱為MDX-010，CAS No. 477202-00-9)。 在一個實施例中，抗-PD-1抗體分子係在用如本文描述之本發明之化合物治療後投與。 在另一實施例中，抗-PD-1或PD-L1抗體分子係與抗-LAG-3抗體或其抗原結合片段組合投與。在另一實施例中，該抗-PD-1或PD-L1抗體分子係與抗-TIM-3抗體或其抗原結合片段組合投與。在又其他實施例中，該抗-PD-1或PD-L1抗體分子係與抗-LAG-3抗體及抗-TIM-3抗體或其抗原結合片段組合投與。本文列舉之抗體之組合可分開投與(例如，作為單獨之抗體)或連接(例如作為雙特異性或三特異性抗體分子)。在一個實施例中，投與包括抗-PD-1或PD-L1抗體分子及抗-TIM-3或抗-LAG-3抗體之雙特異性抗體或其抗原結合片段。在某些實施例中，本文列舉之抗體之組合係用以治療癌症，例如，如本文描述之癌症(例如，固體腫瘤)。前述組合之效應可在此項技術中已知的動物模型中測試。例如，用以測試抗-PD-1及抗-LAG-3之協同效應之動物模型係描述(例如)於Woo等人，(2012) Cancer Res. 72(4):917-27)中。 可用於組合治療中之示例性免疫調節劑包括(但不限於)例如，阿夫土珠(afutuzumab)(可獲得自Roche®)；培非司亭(pegfilgrastim)(Neulasta®)；來那度胺(lenalidomide)(CC-5013, Revlimid®)；沙利度胺(thalidomide)(Thalomid®)；泊利度胺(actimid)(CC4047)；及細胞介素，例如，IL-21或IRX-2 (包括白介素1、白介素2及干擾素γ之人類細胞介素之混合物，CAS 951209-71-5，可獲得自IRX Therapeutics)。 可與本發明之抗病毒化合物組合使用之此等免疫調節劑之示例性劑量包括約1至10 mg/kg(例如，3 mg/kg)之抗-PD-1抗體分子之劑量及約3 mg/kg之抗-CTLA-4抗體(例如，伊匹單抗)之劑量。 使用本發明之抗病毒化合物與免疫調節劑之組合之方法之實施例之實例包括此等可與式I化合物或本文揭示之其任何亞屬或物質一起使用者： i.一種治療個體之病毒感染之方法，其包括向該個體投與如本文描述之式(I)化合物及免疫調節劑。 ii.如實施例i之方法，其中該免疫調節劑係共刺激分子之活化劑或免疫核查點分子之抑制劑。 iii.如實施例i及ii中任一項之方法，其中共刺激分子之活化劑係以下中之一或更多者之促效劑：OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1 (CD11a/CD18)、ICOS (CD278)、4-1BB (CD137)、GITR、CD30、CD40、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、NKG2C、SLAMF7、NKp80、CD160、B7-H3及CD83配體。 iv.如上文實施例i至iii中任一項之方法，其中免疫核查點分子之抑制劑係選自PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4及TGFR β。 v.如實施例i至iii中任一項之方法，其中免疫核查點分子之抑制劑係選自PD-1、PD-L1、LAG-3、TIM-3或CTLA4或其任何組合之抑制劑。 vi.如實施例i至v中任一項之方法，其中免疫核查點分子之抑制劑係結合至該免疫核查點分子之可溶性配體或抗體或其抗原結合片段。 vii.如實施例i至vi中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段係來自IgG1或IgG4 (例如，人類IgG1或IgG4)。 viii.如實施例i至vii中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段係經改變(例如，經突變)以增加或減少以下中之一或更多者：Fc受體結合、抗體醣化、半胱胺酸之數量、效應細胞功能或補體功能。 ix.如實施例i至viii中任一項之方法，其中該抗體分子係雙特異性或多特異性抗體分子，其具有針對PD-1或PD-L1之第一結合特異性及針對TIM-3、LAG-3或PD-L2之第二結合特異性。 x.如實施例i至ix中任一項之方法，其中該免疫調節劑係選自尼魯單抗、派姆單抗或皮地珠單抗之抗-PD-1抗體。 xi.如實施例i至x中任一項之方法，其中該免疫調節劑係選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C或MDX-1105之抗-PD-L1抗體。 xii.如實施例i至x中任一項之方法，其中該免疫調節劑係抗-LAG-3抗體分子。 xiii.如實施例xii之方法，其中該抗-LAG-3抗體分子係BMS-986016。 xiv.如實施例i至x中任一項之方法，其中該免疫調節劑係抗-PD-1抗體分子，其係藉由注射(例如，皮下或靜脈內注射)以約1至30 mg/kg，例如，約5至25 mg/kg、約10至20 mg/kg、約1至5 mg/kg或約3 mg/kg之劑量，例如，每週一次至每2、3或4週一次進行投與。 xv.如實施例xiv之方法，其中該抗-PD-1抗體分子係以自約10至20 mg/kg之劑量每隔一週進行投與。 xvi.如實施例xv之方法，其中該抗-PD-1抗體分子(例如，尼魯單抗)係以自約1 mg/kg至3 mg/kg，例如，約1 mg/kg、2 mg/kg或3 mg/kg之劑量每兩週一次靜脈內投與。 xvii.如實施例xv之方法，其中該抗-PD-1抗體分子(例如，尼魯單抗)係以約2 mg/kg之劑量以3週為間隔靜脈內投與。 如本文描述之化合物可藉由下文之一般合成途徑合成，其等之特定實例係更詳細描述於實例中。 一般合成製程 用以合成本發明之化合物之所有初始材料、建構嵌段、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑及觸媒可購買獲得或可藉由一般技術者已知的有機合成方法製備(Houben-Weyl，第4版，1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme，第21卷)。用於合成本發明之化合物之一般方法係由下文之實例、方案1中之一般方法及由已公開之PCT申請案WO2015/113990及WO2015/173164中揭示之方法闡述。 縮寫之列表 Ac 乙醯基 ACN 乙腈 AcOEt / EtOAc 乙酸乙酯 AcOH 乙酸 aq 水性 Bn 苄基 Bu 丁基(nBu =正丁基，tBu =第三丁基) CDI 羰基二咪唑 DBU 1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-十一-7-烯 Boc2O 二碳酸二第三丁酯 DCE 1,2-二氯乙烷 DCM 二氯甲烷 DIAD 偶氮二羧酸二異丙酯 DiBAl-H 氫化二異丁基鋁 DIPEA N-乙基二異丙胺 DMA N,N-二甲基乙醯胺 DMAP 二甲基胺基吡啶 DMF N,N’-二甲基甲醯胺 DMSO 二甲基亞碸 EDCI 1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺 EI 電灑游離 Et
2
O 乙醚 Et
3
N 三乙胺 Ether 乙醚 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 FA 甲酸 FC 急驟層析術 h 小時 HCl 鹽酸 HOBt 1-羥基苯并三唑 HPLC 高效液相層析術 H
2
O 水 IPA 異丙醇 L 公升 LC-MS 液相層析質譜術 LiHMDS 雙(三甲基甲矽烷基)醯胺鋰 Me 甲基 MeI 碘甲烷 MeOH 甲醇 mg 毫克 min 分鐘 mL 毫升 MS 質譜術 Pd/C 碳載鈀 PG 保護基 Ph 苯基 Ph
3
P 三苯基膦 Prep 製備型 Rf 前端之比率 RP 逆相 Rt 滯留時間 rt 室溫 SFC 超臨界流體層析術 SiO
2
矽膠 T3P® 丙基膦酸酸酐 TBAF 四丁基氟化銨 TBDMS 第三丁基二甲基甲矽烷基 TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 TLC 薄層層析術 TsCl 甲苯磺醯氯 在本內文之範圍內，除非內文另有指示，否則非本發明之化合物之特定所需最終產物之構成之容易移除之基團被指定為「保護基」。官能基受此等保護基之保護、保護基本身及其等裂解反應係描述(例如)於標準參考著作中，諸如(例如)Science of Synthesis: Houben-Weyl Methods of Molecular Transformation. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Germany. 2005.，第41627頁(URL: http://www.science-of-synthesis.com (Electronic Version，第48卷))；J. F. W. McOmie, 「Protective Groups in Organic Chemistry」, Plenum Press, London and New York 1973，於T. W. Greene及P. G. M. Wuts之「Protective Groups in Organic Synthesis」中，第3版，Wiley, New York 1999，於「The Peptides」中；第3卷(編輯者：E. Gross及J. Meienhofer)，Academic Press, London and New York 1981，於「Methoden der organischen Chemie」 (Methods of Organic Chemistry)中，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974，於H.-D. Jakubke及H. Jeschkeit之「Aminosäuren, Peptide, Proteine」中(Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach及Basel 1982，及於Jochen Lehmann之「Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate」(Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives)中, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974。保護基之特性係其等易於(例如)藉由溶劑分解、還原、光分解或或者在生理學條件下(例如，藉由酶促裂解)移除(即，不發生非所需之次要反應)。 具有至少一個成鹽基團之本發明之化合物之鹽可以本身已知的方式製備。例如，具有酸基團之本發明之化合物之鹽可(例如)藉由用金屬化合物(諸如合適之有機羧酸之鹼金屬鹽，例如，2-乙基己酸之鈉鹽)、有機鹼金屬或鹼土金屬化合物(諸如相應之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，諸如氫氧化鈉或氫氧化鉀、碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸氫鈉或碳酸氫鉀)、相應之鈣化合物或氨或合適之有機胺處理該等化合物形成，較佳使用化學計量量或僅少量過量之成鹽劑進行處理。本發明之化合物之酸加成鹽係以常用方式獲得，例如，藉由用酸或合適之陰離子交換劑處理該等化合物。含有酸及鹼性成鹽基團(例如，游離羧基及游離胺基)之本發明之化合物之內鹽可(例如)藉由例如用弱鹼將鹽(諸如酸加成鹽)中和至等電位點或藉由用離子交換劑處理而形成。 鹽可以常用方式轉化為游離化合物；金屬及銨鹽可例如藉由用合適之酸及酸加成鹽處理；例如藉由用合適之鹼性試劑處理而經轉化。 根據本發明可獲得之異構物之混合物可用本身已知的方式分為個別異構物；非對映異構物可(例如)藉由分配在多相溶劑混合物之間；重結晶及/或層析分離(例如在矽膠上或藉由(例如)在逆相管柱上之中壓液相層析術)進行分離，及外消旋物可(例如)藉由與光學純成鹽試劑形成鹽及分離可如此獲得之非對映異構物之混合物，例如藉助於分步結晶或藉由在光學活性管柱材料上之層析術進行分離。 中間物及最終產物可根據標準方法進行處理及/或純化，例如，使用層析方法、分配方法、(重)結晶及類似方法。 實例 本發明係藉由下列實例闡述，但該等實例不應視為對本發明之限制。用以證實式(I)化合物於此等分析中之效應之分析通常被視為對個體中效應之預測。 一般條件： 質譜術係在使用電灑游離之LC-MS系統上運行。此等係WATERS Acquity Single Quard偵測器。[M+H]
+
係指單同位素分子量。 NMR譜係於公開取用之Varian 400或Varian 500 NMR分光計上運行。該等NMR譜係在298K下量測及使用溶劑峰值參考。
1
H NMR之化學位移係以百萬分率(ppm)記錄。 質譜術係於具有下列條件中之任何一者之LC-MS系統上運行： 配備SQD偵測器之Waters Acquity UPLC-H分類系統。 管柱：ACQUITY UPLC HSS C18 (50*2.1) mm, 1.8 u。 管柱溫度：周圍溫度。 移動相：A) 0.1% FA +於水中之5 mm乙酸銨。 B)於乙腈中之0.1% FA。 梯度：在0.40 min內，5-5%溶劑B，在0.80 min內，5-35%溶劑B，在1.2 min內，35-55%溶劑B，在2.5 min內，55-100%溶劑B。 流動速率：0.55 ml/min。 化合物係藉由Waters光電二極體陣列偵測器偵測。 配備ZQ 2000偵測器之Waters LCMS系統。 管柱：X-BRIDGE C18 (50*4.6) mm, 3.5 μ。 管柱溫度：周圍溫度。 移動相：A)於水中之0.1% NH
3
。 B)於乙腈中之0.1% NH
3
。 梯度：在5.00 min內，5-95%溶劑B。 流動速率：1.0 ml/min。 化合物係藉由Waters光電二極體陣列偵測器偵測。 Waters ACQUITY UPLC系統且配備ZQ 2000 MS系統。 管柱：Phenomenex之Kinetex，2.6 μm, 2.1 x 50 mm 管柱溫度：50℃ 梯度：在1.29 min週期內，2-88% (或00-45%或65-95%)溶劑B 流動速率：1.2 ml/min。 化合物係藉由Waters光電二極體陣列偵測器偵測。 對掌性分離係用下列管柱進行： AD：對掌性Pak AD-H, SFC 21x250 mm OD：對掌性Pak OD-H, SFC 21x250 mm 實例1.1： 6-(第三丁基)-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.1-I]及[1.1-II]
步驟1：(4,5-二甲氧基-1H-吲哚-2-基)甲醇[1.1a]
向4,5-二甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸(900 mg, 4.07 mmol)添加THF (體積：30 mL)，冷卻至約0℃，然後添加於THF中之LAH 2 M (4.07 mL, 8.14 mmol)。讓反應升溫至室溫及在室溫下攪拌3小時或直至由LCMS測定完成。讓該反應在冰浴中冷卻，然後藉由滴加過量水(2.0 ml)小心中止，攪拌10分鐘，然後添加350 ml乙酸乙酯。有機層係用最小量之水3x，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物1.1a，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 208.2 [M+H]
+
, 0.39 min。 步驟2：2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-4,5-二甲氧基-1H-吲哚[1.1b]
向1.1a (775 mg, 3.74 mmol)添加DCM (體積：30 mL)、咪唑(815 mg, 11.97 mmol)及在室溫下攪拌5分鐘。然後添加TBDMSCl (1691 mg, 11.22 mmol)及在室溫下攪拌1小時或直至由LCMS測定完成。向反應中添加200 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物1.1b，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 322.3 [M+H]
+
, 0.94 min。 步驟3：1-(2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-4,5-二甲氧基-1H-吲哚-1-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[1.1c]
向1.1b (1180 mg, 3.67 mmol)添加DMF (體積：30 mL)、碳酸銫(3588 mg, 11.01 mmol)及在35至40℃下攪拌15分鐘。然後添加1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮(1643 mg, 9.18 mmol)及在35至40℃下攪拌14小時或直至由LCMS測定完成。向反應中添加200 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由矽膠管柱層析術，使用0至40% EtOAc/庚烷純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生1510 mg所需產物1.1c (98%產率)。LC-MS (m/z): 420.4 [M+H]
+
, 1.07 min。 步驟4：(1-(2-胺基-3,3-二甲基丁基)-4,5-二甲氧基-1H-吲哚-2-基)甲醇[1.1d]
向1.1c (1510 mg, 3.60 mmol)添加MeOH (體積：11 mL)、乙酸銨(4161 mg, 54.0 mmol)及氰基硼氫化鈉(678 mg, 10.80 mmol)。隨後在55℃下將反應攪拌40小時或直至由LCMS測定完成。向粗反應添加350 ml DCM及25 ml甲醇，用(6 M NaOH及飽和鹽溶液)之1:1溶液萃取。水層係用DCM反萃取。有機物係用飽和鹽溶液組合清洗，用硫酸鈉乾燥，濾過1 cm x 2cm矽藻土過濾器塞，用具有10%甲醇之DCM之溶液清洗，濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物1.1d，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 307.3 [M+H]
+
, 0.59 min。 步驟5：3-(第三丁基)-8,9-二甲氧基-3,4-二氫吡嗪并[1,2-a]吲哚[1.1e]
向1.1d (1100 mg, 3.59 mmol)添加DCM (體積：18 mL)及二氧化錳(3121 mg, 35.9 mmol)。然後在室溫下將反應攪拌2小時。然後添加額外之二氧化錳(1561 mg, 17.95 mmol)及攪拌整夜，總計20小時或直至由LCMS測定完成。視需要可添加額外之二氧化錳。向粗材料添加60 ml DCM，攪拌30分鐘，然後濾過1 cm x 2 cm矽藻土過濾器塞，用DCM沖洗及濃縮至殘餘物。將該殘餘物溶解於5 ml DCM中，添加過量TFA (0.830 mL, 10.77 mmol)，在室溫下攪拌5分鐘及然後濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物1.1e，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 287.2 [M+H]
+
, 0.69 min。 步驟6：6-(第三丁基)-11,12-二甲氧基-2-側氧基-2,6,7,13b-四氫-1H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[1.1f]
向1.1e (1400 mg, 3.50 mmol)添加乙醇(體積：12 mL)及(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-3-側氧基丁酸乙酯(1953 mg, 10.49 mmol)。然後在90至95℃下將反應攪拌24小時或直至由LCMS測定完成。該反應係濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物1.1f，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 427.4 [M+H]
+
, 0.89 min。 步驟7：6-(第三丁基)-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[1.1g-I]及[1.1g-II]
1.1g-I及1.1g-II 向1.1f (1490 mg, 3.49 mmol)添加DME (體積：15 mL)及然後添加四氯苯醌(859 mg, 3.49 mmol)。在90至95℃下將反應攪拌90分鐘或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑至殘餘物。粗材料係藉由矽膠管柱層析術，使用0至90% EtOAc(具有20%乙醇)/庚烷純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生580 mg所需之外消旋產物1.1g (以39%產率)。LC-MS (m/z): 425.4 [M+H]
+
, 0.83 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.43 (s, 1H), 7.41 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.12 (d, J=9.1 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.90 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.57 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.38 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 4.23 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 1.28 (t, J=7.1 Hz, 3H), 0.73 (s, 9H)。 上文外消旋材料562 mg係藉由使用(OD管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/EtOH=70/30, 276 bar)之對掌性層析術分離以產生196 mg之產物1.1g-I (峰值1, tR 3.12 min.)及192 mg之產物1.1g-II (峰值2, tR 7.26 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.1-I]及[1.1-II]
1.1-I及1.1-II 向1.1g-I (195 mg, 0.459 mmol)添加THF (體積：1 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：1 mL，比率：1.000)及然後NaOH 3 M aq (0.459 mL, 1.378 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之5 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之148.5 mg所需產物1.1-I (62%產率)。LC-MS (m/z): 397.3 [M+H]
+
, 0.85 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.85 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.45 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J=9.1 Hz, 1H), 4.98 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.45 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 0.73 (s, 9H)。 向1.1g-II (96 mg, 0.226 mmol)添加THF (體積：1 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：1 mL，比率：1.000)及然後添加NaOH 3 M aq (0.226 mL, 0.678 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之3 ml DMSO中，藉由逆相製備LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之71.1 mg所需產物1.1-II (60%產率)。LC-MS (m/z): 397.4 [M+H]
+
, 0.85 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.85 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.45 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.98 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.45 (dd, J=14.0, 4.9 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 0.73 (s, 9H)。 實例1.2： 6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.2-I]及[1.2-II]
1.2-I及1.2-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[1.2g-I]及[1.2g-II]
1.2g-I及1.2g-II 化合物1.2g係合成自初始材料；4-(二氟甲氧基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸藉由實例1.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物1.2g。LC-MS (m/z): 461.3 [M+H]
+
, 0.90 min。 上文外消旋材料(300 mg)係藉由使用(OD管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/MeOH=85/15, 236 bar)之對掌性層析術分離以產生84 mg產物1.2g-I (峰值1, tR 5.76 min.)及88 mg產物1.2g-II (峰值2, tR 11.98 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.2-I]及[1.2-II]
1.2-I及1.2-II 向1.2g-I (84 mg, 0.182 mmol)添加THF (體積：0.2 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 mL，比率：1.000)及然後添加NaOH 3 M aq (0.182 mL, 0.547 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之4 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之59.7 mg所需產物1.2-I (60%產率)。LC-MS (m/z): 433.2 [M+H]
+
, 1.03 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.84 (s, 1H), 7.71 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.29 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.85-7.26 (m, 1H), 5.02 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.83 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.47 (dd, J=14.1, 4.8 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 0.70 (s, 9H)。 向1.2g-II (84 mg, 0.182 mmol)添加THF (體積：1 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：1 mL，比率：1.000)及然後添加NaOH 3 M aq (0.182 mL, 0.547 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之4 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之60.6 mg所需產物1.2-II (61%產率)。433.2 [M+H]
+
, 1.03 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.84 (s, 1H), 7.71 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.29 (d, J=9.1 Hz, 1H), 6.87-7.27 (m, 1H), 5.02 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.83 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.47 (dd, J=14.1, 4.7 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 0.70 (s, 9H)。 實例1.3： 6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.3-I]及[1.3-II]
1.3-I及1.3-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[1.3g-I]及[1.3g-II]
1.3g-I及1.3g-II 化合物1.3g係合成自初始材料；4-甲氧基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯藉由實例1.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物1.3g。LC-MS (m/z): 396.3 [M+H]
+
, 0.70 min。 上文外消旋材料(398 mg)係藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/MeOH=75/25, 256 bar)之對掌性層析術分離以產生95 mg產物1.3g-I (峰值1, tR 2.79 min.)及90 mg產物1.3g-II (峰值2, tR 5.88 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.3-I]及[1.3-II]
1.3-I及1.3-II 向1.3g-I (16 mg, 0.040 mmol)添加THF (體積：0.2 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 mL，比率：1.000)及然後添加NaOH 3 M aq (0.040 mL, 0.121 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之7.3 mg所需產物1.3-I (37%產率)。LC-MS (m/z): 368.2 [M+H]+, 0.86 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.87 (s, 1H), 8.30 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J=0.9 Hz, 2H), 6.80 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.04 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.46 (dd, J=14.2, 4.8 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 0.68 (s, 9H)。 向1.3g-II (16 mg, 0.040 mmol)添加THF (體積：0.2 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 mL，比率：1.000)及然後添加NaOH 3 M aq (0.040 mL, 0.121 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之7.3 mg所需產物1.3-II (以37%產率)。LC-MS (m/z): 368.2 [M+H]+, 0.86 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.87 (s, 1H), 8.30 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J=0.9 Hz, 2H), 6.80 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.04 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.46 (br dd, J=14.2, 4.8 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 0.68 (s, 9H)。 實例1.4： 6-(第三丁基)-12-羥基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.4]
向1.3g (16 mg, 0.040 mmol)添加DMF (體積：0.6 mL)及然後添加甲硫醇鈉(11.34 mg, 0.162 mmol)。攪拌反應及加熱至75℃，歷時1小時。然後添加額外之甲硫醇鈉(11.34 mg, 0.162 mmol)及在95℃下將反應加熱90分鐘，接著進行LCMS。使該反應冷卻，溶解於具有5%水之0.6 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之6.0 mg所需外消旋產物1.4 (以31%產率)。LC-MS (m/z): 354.2 [M+H]+, 0.64min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.86 (s, 1H), 8.13 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J=9.4 Hz, 2H), 6.57 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.02 (d, J=14.0 Hz, 1H), 4.82 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.43 (dd, J=14.1, 4.8 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 實例1.5： 6-(第三丁基)-12-羥基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.5-I]及[1.5-II]
1.5-I及1.5-II 向1.3g-I (38 mg, 0.096 mmol)添加DMF (體積：1 mL)及甲硫醇鈉(33.7 mg, 0.480 mmol)。在95℃至100℃下將反應加熱2小時，接著進行LCMS。然後添加額外之甲硫醇鈉(33.7 mg, 0.480 mmol)及在95℃下加熱另一2小時或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻。向該粗反應添加具有5%水之2.0 ml DMSO，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之23 mg所需產物1.5-I (51%產率)。LC-MS (m/z): 354.5 [M+H]+, 0.63 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.86 (s, 1H), 8.14 (d, J=5.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J=11.9 Hz, 2H), 6.59 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.03 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.82 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 4.43 (br dd, J=14.1, 4.7 Hz, 2H), 0.69 (s, 9H)。 向1.3g-II (38 mg, 0.096 mmol)添加DMF (體積：1 mL)及甲硫醇鈉(33.7 mg, 0.480 mmol)。在95℃至100℃下將反應加熱2小時，接著進行LCMS。然後添加額外之甲硫醇鈉(33.7 mg, 0.480 mmol)及在95℃下加熱另一2小時或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻。向粗反應添加具有5%水之2.0 ml DMSO，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之33 mg所需產物1.5-II (73%產率)。LC-MS (m/z): 354.3 [M+H]+, 0.56 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.86 (s, 1H), 8.13 (d, J=5.6 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.58 (d, J=5.5 Hz, 1H), 5.02 (d, J=14.0 Hz, 1H), 4.82 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.43 (br dd, J=14.1, 4.7 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 實例1.6： 6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.6-I]及[1.6-II]
1.6-I及1.6-II 向1.5-I (20 mg, 0.057 mmol)添加DMF (體積：1.5 mL)及碳酸鉀(39.1 mg, 0.283 mmol)及在室溫下攪拌25分鐘。然後添加2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(92 mg, 0.453 mmol)及在40℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。向反應添加1 ml甲醇及0.2 ml水且在室溫下攪拌1小時。濃縮該反應以移除甲醇中之一些，添加額外之1.5 ml DMF，藉由逆相製備型LC純化，及收集所需峰值且凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之3.3 mg所需產物1.6-I (11%產率)。LC-MS (m/z): 404.5 [M+H]+, 0.84 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.91 (s, 1H), 8.42 (d, J=5.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J=8.5 Hz, 2H), 7.46-7.85 (m, 1H), 7.03 (d, J=5.4 Hz, 1H), 5.08 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.88 (br d, J=4.5 Hz, 1H), 4.51 (br dd, J=14.1, 4.7 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 向1.5-II (25 mg, 0.071 mmol)添加DMF (體積：1.5 mL)及碳酸鉀(48.9 mg, 0.354 mmol)及在室溫下攪拌25分鐘。然後添加2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(115 mg, 0.566 mmol)及在40℃下攪拌4小時或直至由LCMS測定完成。向反應添加1 ml甲醇及0.2 ml水且在室溫下攪拌1小時。濃縮該反應以移除甲醇中之一些，添加額外之1.5 ml DMF，藉由逆相製備型LC純化，及收集所需峰值並凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之3.3 mg所需產物1.6-II (9%產率)。LC-MS (m/z): 404.5 [M+H]+, 0.88 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.91 (s, 1H), 8.42 (d, J=5.4 Hz, 1H), 7.61 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.45-7.87 (m, 1H), 7.03 (br d, J=5.3 Hz, 1H), 5.08 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.88 (br d, J=4.1 Hz, 1H), 4.51 (br dd, J=14.1, 4.5 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 實例1.7： 6-(第三丁基)-13-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.7-I]及[1.7-II]
1.7-I及1.7-II 步驟1：6-(第三丁基)-13-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[1.7a]
向1.1g (475 mg, 1.119 mmol)添加DCM (體積：16 mL)，在冰浴中冷卻及然後添加攪拌SELECTFLUOR (396 mg, 1.119 mmol)。讓反應升溫至室溫及攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。向反應添加16 ml DCM，濾過0.5 cm x 2 cm二氧化矽墊，用30 ml DCM，然後(具有15%乙醇之DCM)之30 ml溶液沖洗。濃縮去除溶劑以得到粗殘餘物，將其溶解於6 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化以產生假定15%產率之呈具有0.1% TFA之150 ml 1:1 ACN/水溶液中之溶液形式之所需產物1.7a，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 443.2 [M+H]+, 0.92 min。 步驟2：6-(第三丁基)-13-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.7-I]及[1.7-II]
1.7-I及1.7-II 向已於乙腈(體積：75 mL，比率：1.000)、具有0.1% TFA之水(體積：75 mL，比率：1.000)之溶液中之1.7a (75 mg, 0.135 mmol)添加NaOH 3 M aq (0.898 mL, 2.70 mmol)，直至pH為13或更大。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。該反應係用TFA中和以產生3至4之pH及經凍乾以得到殘餘物。將粗殘餘物溶解於具有5%水之3 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之12.5 mg所需外消旋產物1.7 (17%產率)。LC-MS (m/z): 415.3 [M+H]+, 0.86 min.；1H NMR (DMSO) δ: 8.87 (s, 1H), 7.53 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.06 (s, 1H), 5.02 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.40 (dd, J=14.0, 4.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 0.75 (s, 9H)。 將上文外消旋材料(12.5 mg)溶解於甲醇中及添加100 ul DEA且係藉由使用(AD管柱，SFC=80 ml/min, CO2/EtOH=85/15, 256 bar)之對掌性層析術分離以產生2.2 mg產物1.7-I (峰值1, tR 7.84 min.)及3.4 mg產品1.7-II (峰值2, tR 10.33 min.)。 1.7-I LC-MS (m/z): 415.3 [M+H]+, 0.90 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.74 (br s, 1H), 7.47 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 7.22 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 6.96 (br s, 1H), 4.95 (br d, J=13.8 Hz, 1H), 4.74 (br s, 1H), 4.33 (br d, J=10.2 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 0.69 (s, 9H)。 1.7-II LC-MS (m/z): 415.3 [M+H]+, 0.90 min.；1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.58 (br s, 1H), 7.50 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 7.23 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 6.84 (br s, 1H), 4.96 (br d, J=13.7 Hz, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.33 (br d, J=10.5 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 0.74 (s, 9H)。 實例1.8： 6-(第三丁基)-11-氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.8-I]及[1.8-II]
1.8-I及1.8-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-11-氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[1.8g-I]及[1.8g-II]
1.8g-I及1.8g-II 化合物1.8g係合成自初始材料；5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸藉由實例1.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物1.8g。LC-MS (m/z): 384.5 [M+H]
+
, 0.82 min。1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.48 (s, 1H), 8.35-8.41 (m, 1H), 8.01 (dd, J=9.3, 2.7 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.01 (d, J=14.0 Hz, 1H), 4.62 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.44 (dd, J=14.0, 4.8 Hz, 1H), 4.21 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3H), 0.68 (s, 9H)。 上文外消旋材料(740 mg)係藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/EtOH=80/20, 216 bar)之對掌性層析術分離以產生230 mg產物1.8g-I (峰值1, tR 5.25 min.)及282 mg產物1.8g-II (峰值2, tR 8.17 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-11-氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.8-I]及[1.8-II]
1.8-I及1.8-II 向1.8g-I (20 mg, 0.052 mmol)添加DMF (體積：1 mL)及LiOH 1 M aq (0.209 mL, 0.209 mmol)。在室溫下將反應攪拌30分鐘或直至由LCMS測定完成。視需要可添加額外之LiOH 1 M aq.。該反應係藉由逆相製備型LC純化及凍乾以產生呈TFA鹽之13.5 mg所需產物1.8-I (54%產率)。LC-MS (m/z): 356.3 [M+H]
+
, 0.81 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.92 (s, 1H), 8.42-8.48 (m, 1H), 8.08 (dd, J=9.2, 2.7 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.06 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.88 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=14.2, 4.9 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 向1.8g-II (18 mg, 0.047 mmol)添加DMF (體積：1 mL)及LiOH 1 M aq (0.188 mL, 0.188 mmol)。在室溫下將反應攪拌30分鐘或直至由LCMS測定完成。視需要可添加額外之LiOH 1 M aq.。該反應係藉由逆相製備型LC純化及凍乾以產生呈TFA鹽之9.2 mg所需產物1.8-II (41%產率)。LC-MS (m/z): 356.3 [M+H]
+
, 0.81 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.92 (s, 1H), 8.42-8.49 (m, 1H), 8.08 (dd, J=9.2, 2.7 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 5.06 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.88 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=14.2, 4.8 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 實例1.9： 6-(第三丁基)-11,13-二氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.9-I]及[1.9-II]
1.9-I及1.9-II 步驟1：6-(第三丁基)-11,13-二氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[1.9a-I]及[1.9a-II]
1.9a-I及1.9a-II 向1.8g (400 mg, 1.043 mmol)添加乙腈(體積：35 mL)、碳酸氫鈉(2.087 mL, 2.087 mmol)及在冰浴中冷卻。當在冰浴中時，添加SELECTFLUOR (517 mg, 1.461 mmol)及攪拌5分鐘。然後讓反應升溫至室溫及攪拌6小時或直至由LCMS測定完成。該反應係用300 ml乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至70% (具有25%乙醇之乙酸乙酯)及庚烷之矽膠層析術純化，將所需溶離份濃縮至殘餘物。將粗產物溶解於具有5%水之4 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化，組合及凍乾所需溶離份。將該產物再溶解於ACN/水中及凍乾以產生呈TFA鹽之175 mg所需外消旋產物1.9a (33%產率)。LC-MS (m/z): 402.4 [M+H]
+
, 0.83 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.52 (s, 1H), 8.48-8.51 (m, 1H), 8.19 (dd, J=8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 5.06 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 4.64 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 4.41 (br dd, J=14.0, 4.7 Hz, 1H), 4.22 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3H), 0.71 (s, 9H)。 上文外消旋材料(160 mg)係藉由使用(AS管柱，SFC=100 ml/min, CO2/EtOH=80/20, 216 bar)之對掌性層析術分離以產生54 mg產物1.9a-I (峰值1, tR 2.46 min.)及56 mg產物1.9a-II (峰值2, tR 6.34 min.)。 步驟2：6-(第三丁基)-11,13-二氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.9-I]及[1.9-II]
1.9-I及1.9-II 向1.9a-I (54 mg, 0.135 mmol)添加ACN (體積：2 mL，比率：1.000)、水(體積：2，比率：1.000)及然後LiOH 1 M aq (0.538 mL, 0.538 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。該反應係用經1 M HCl酸化至2至3之pH之10 ml水稀釋，然後添加具有3%乙醇之80 ml DCM及10 ml飽和氯化鈉溶液。分離有機層，水層係用具有2%乙醇之1 x 40 ml DCM再次催化。有機層係經組合，用水(3x)清洗，過濾及濃縮至殘餘物。將殘餘物溶解於1:1 ACN/水中，過濾及凍乾以產生呈游離鹼之46.2 mg所需產物1.9-I (90%產率)。LC-MS (m/z): 374.4 [M+H]
+
, 0.86 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.92 (s, 1H), 8.55 (t, J=2.0 Hz, 1H), 8.24 (dd, J=8.6, 2.6 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.11 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.87 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J=14.1, 4.6 Hz, 1H), 0.71 (s, 9H)。 向1.9a-II (54 mg, 0.135 mmol)添加ACN (體積：2 mL，比率：1.000)、水(體積：2，比率：1.000)及然後LiOH 1 M aq (0.538 mL, 0.538 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。該反應係用經1 M HCl酸化至2至3之pH之10 ml水稀釋，然後添加具有3%乙醇之80 ml DCM及10 ml飽和氯化鈉溶液。分離有機層，水層係用具有2%乙醇之1 x 40 ml DCM再次萃取。有機層係經組合，用水(3x)清洗，過濾及濃縮至殘餘物。將殘餘物溶解於1:1 ACN/水中，過濾及凍乾以產生呈游離鹼之46.4 mg所需產物1.9-II (以91%產率)。LC-MS (m/z): 374.4 [M+H]
+
, 0.86 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.94 (s, 1H), 8.55 (t, J=2.1 Hz, 1H), 8.24 (dd, J=8.6, 2.6 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.11 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.88 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.46 (dd, J=14.1, 4.6 Hz, 1H), 0.71 (s, 9H)。 實例1.10： 6-(第三丁基)-1-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.10-I]及[1.10-II]
1.10-I及1.10-II 步驟1：(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4-二氟-3-((三甲基甲矽烷基)氧基)丁-3-烯酸乙酯[1.10a]
在氬氣氛下，Mg (0.810 g, 33.3 mmol))及TMSCl (4.26 mL, 33.3 mmol)之混合物係最初經超音波處理15至20分鐘。然後向此混合物添加3 ml無水DMF。然後在5至6分鐘內在50℃下在氬氣氛下滴加(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4,4-三氟-3-側氧基丁酸乙酯(1.00 g, 4.16 mmol)於無水DMF (體積：6 mL，比率：2.000)中之溶液。在50℃下將反應混合物再攪拌10分鐘。在減壓下暫時移除過量TMSCl中之一些。然後將粗混合物濾過具有聚乙烯玻璃料之一次性過濾漏斗。具有所需產物之所得DMF溶液無需純化即可用於下一步驟中，假定約90%產率，其係按原樣使用。 步驟2：6-(第三丁基)-1-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[1.10b]
向碘化鋅(334 mg, 1.048 mmol)及1.1e (300 mg, 1.048 mmol)添加無水乙腈(體積：3 mL)。向此懸浮液滴加來自先前步驟之1.10a (1079 mg, 3.67 mmol)，其已歷時6至8分鐘在50℃下溶於DMF (體積：9 mL，比率：3.00)中，及另外放出熱量。在50℃下將反應攪拌18小時或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻，然後將其倒入20 ml 10% HCl aq內。該溶液經攪拌10至15分鐘，然後用二氯甲烷(2x)萃取。組合有機層及用飽和鹽溶液清洗，於硫酸鈉上乾燥，濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至80% (具有20%乙醇之乙酸乙酯)及庚烷之矽膠層析術純化，將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生375 mg所需產物1.10b (81%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 443.4 [M+H]+, 0.86 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.50 (s, 1H), 7.45 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.16 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J=3.9 Hz, 1H), 4.94 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.70 (br d, J=4.4 Hz, 1H), 4.41 (dd, J=14.0, 4.6 Hz, 1H), 4.24 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3H), 0.69 (s, 9H)。 步驟3：6-(第三丁基)-1-氟-11,12-二甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[1.10-I]及[1.10-II]
1.10-I及1.10-II 向1.10b (317 mg, 0.716 mmol)添加THF (體積：2.5 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：2.5 mL，比率：1.000)及然後NaOH 3 M aq (0.716 mL, 2.149 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑以留下殘餘物，然後添加20 ml水，用1 M HCl酸化至pH約2至3，用125 ml DCM萃取，然後用75 ml DCM 2x萃取，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物以產生279 mg所需外消旋產物1.10 (94%產率)。LC-MS (m/z): 415.4 [M+H]+, 0.89 min.。 將上文外消旋材料(279 mg)溶解於甲醇中及添加400 ul DEA及藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/IPA=75/25, 256 bar)之對掌性層析術分離以產生65 mg產物1.10-I (峰值1, tR 3.09 min.)及90 mg產物1.10-II (峰值2, tR 5.28 min.)。將產物1.10-II (90 mg)溶解於具有100 ul DEA之甲醇中及藉由使用(OJ管柱，SFC=100 ml/min, CO2/MeOH=80/20, 276 bar )之對掌性層析術進一步純化以產生49.5 mg 1.10-II (峰值1, tR 4.33 min.)及副產物1.10-I (峰值2, tR 6.09 min.)。 1.10-I LC-MS (m/z): 415.4 [M+H]+, 0.88 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.84 (s, 1H), 7.49 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.17-7.24 (m, 2H), 5.01 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.91 (br d, J=4.2 Hz, 1H), 4.45 (dd, J=14.1, 4.6 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 0.70 (s, 9H)。 1.10-II LC-MS (m/z): 415.4 [M+H]+, 0.88 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.84 (s, 1H), 7.49 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.18-7.25 (m, 2H), 5.01 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.91 (br d, J=3.5 Hz, 1H), 4.45 (br dd, J=14.0, 4.2 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 0.70 (s, 9H))。 實例1.11： 6-(第三丁基)-13-氟-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.11-I]
步驟1：6-(第三丁基)-13-氟-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[1.11a-I]
向1.3g-1 (42 mg, 0.106 mmol)添加乙腈(體積：2.5 mL)、碳酸氫鈉(0.149 mL, 0.149 mmol)，在冰浴中冷卻及然後添加SELECTFLUOR (43.3 mg, 0.122 mmol)。讓攪拌反應升溫至室溫及攪拌30分鐘或直至由LCMS測定完成。將溶液濃縮至殘餘物，將其溶解於3 ml DMF中，藉由逆相製備型LC純化。組合所需溶離份，添加30 ml飽和碳酸氫鈉溶液，用DCM 2x萃取，組合有機層，用飽和鹽溶液，無水硫酸鈉清洗，過濾及濃縮至殘餘物以產生12.5 mg所需產物1.11a-1 (29%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 414.4 [M+H]
+
, 0.79 min。 步驟2：6-(第三丁基)-13-氟-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[1.11-I]
向1.11a-I (12.5 mg, 0.030 mmol)添加THF (體積：0.5 mL，比率：1.000)、MeOH (體積：0.5 mL，比率：1.000)及然後NaOH 3 M aq (0.030 mL, 0.091 mmol)。在室溫下將反應攪拌1小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑至殘餘物，將其溶解於1 ml DMSO中及藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之4.3 mg所需產物1.11-I (28%產率)。LC-MS (m/z): 386.3 [M+H]
+
, 0.80 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.90 (s, 1H), 8.35 (d, J=5.5 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.86 (d, J=5.6 Hz, 1H), 5.08 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.40 (dd, J=14.0, 4.6 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 0.71 (s, 9H)。 實例2.1： 6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.1-I]及[2.1-II]
2.1-I及2.1-II 步驟1：(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲醇[2.1a]
向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-羧酸甲酯(1200 mg, 6.81 mmol)添加THF (體積：40 mL)，冷卻至約0℃然後添加於THF (5.11 mL, 10.22 mmol)中之LAH 2 M。讓反應升溫至室溫及在室溫下攪拌1小時或直至由LCMS測定完成。讓該反應在冰浴中冷卻，然後藉由滴加過量水(0.8 ml)小心中止。然後隨鹽形成，添加硫酸鎂及然後添加硫酸鈉。該反應係自冰浴移除及攪拌1小時，濾過矽藻土，用THF沖洗及濃縮至殘餘物以產生930 mg所需產物2.1a (以92%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 149.1 [M+H]
+
, 0.19 min。 步驟2：2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶[2.1b]
向2.1a (930 mg, 6.28 mmol)添加DMF (體積：20 mL)、咪唑(513 mg, 7.53 mmol)及TBDMSCl (1041 mg, 6.90 mmol)。在室溫下將反應攪拌16小時或直至由LCMS測定完成。向反應添加150 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物2.1b，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 263.3 [M+H]
+
, 0.75 min。 步驟3：1-(2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[2.1c]
在室溫下向2.1b (1580 mg, 6.02 mmol)添加DMF (體積：16 mL)、NaH (385 mg, 9.63 mmol)及攪拌10分鐘。然後添加1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮(1294 mg, 7.22 mmol)及在室溫下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。向反應添加150 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至100% EtOAc/庚烷之矽膠管柱層析術純化。所需局部異構物首先溶析及濃縮至恆定質量以產生450 mg所需產物2.1c (以21%產率)。LC-MS (m/z): 361.4 [M+H]
+
, 1.00 min。 步驟4：(1-(2-胺基-3,3-二甲基丁基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲醇[2.1d]
向2.1c (450 mg, 1.248 mmol)添加MeOH (體積：5 mL)、乙酸銨(1443 mg, 18.72 mmol)及氰基硼氫化鈉(235 mg, 3.74 mmol)。然後在50℃下將反應攪拌48小時或直至由LCMS測定完成。向粗反應添加200 ml DCM及15 ml甲醇，用(6 M NaOH、飽和鹽溶液)之1:1溶液萃取。水層係用DCM反萃取。組合有機物，用飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，濾過1 cm x 2cm矽藻土過濾器塞，用具有10%甲醇之DCM之溶液清洗，濃縮至殘餘物以產生255 mg所需產物2.1d (以83%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 248.3 [M+H]
+
, 0.41 min。 步驟5：8-(第三丁基)-8,9-二氫吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[1,2-a]吡嗪[2.1e]
向2.1d (255 mg, 1.031 mmol)添加DCM (體積：5 mL)及二氧化錳(896 mg, 10.31 mmol)。然後在室溫下將反應攪拌2小時。然後添加額外之二氧化錳(448 mg, 5.15 mmol)及攪拌整夜，總計18小時或直至由LCMS測定完成。視需要添加額外之二氧化錳。向粗材料中添加30 ml DCM，攪拌30分鐘，然後濾過1 cm x 2 cm矽藻土過濾器塞，用DCM沖洗及濃縮至殘餘物。將殘餘物溶解於5 ml DCM中及添加過量TFA (0.238 mL, 3.09 mmol)，在室溫下攪拌15分鐘，然後濃縮以產生假定呈定量產率之所需產物2.1e，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 228.3 [M+H]
+
, 0.41 min。 步驟6：6-(第三丁基)-2-側氧基-2,6,7,13b-四氫-1H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[2.1f]
向2.1e (220 mg, 0.968 mmol)添加乙醇(體積：3.58 mL)及(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-3-側氧基丁酸乙酯(541 mg, 2.90 mmol)。然後在95℃下將反應攪拌5小時或直至由LCMS測定完成。將該反應濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物2.1f，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 368.4 [M+H]
+
, 0.61 min。 步驟7：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[2.1g-I]及[2.1g-II]
2.1g-I及2.1g-II 向2.1f (350 mg, 0.953 mmol)添加DME (體積：5 mL)及然後四氯苯醌(234 mg, 0.953 mmol)。在90至95℃下將反應攪拌90分鐘或直至由LCMS測定完成。粗反應係用過量TEA中和及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至100% EtOAc(具有20%乙醇)/庚烷之矽膠管柱層析術純化。所需溶離份係經濃縮至恆定質量以產生245 mg所需外消旋產物2.1g (70%產率)。LC-MS (m/z): 366.3 [M+H]
+
, 0.66 min。 上文外消旋材料(224 mg)係藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/EtOH=70/30, 262 bar)之對掌性層析術分離以產生74 mg產物2.1g-I (峰值1, tR 2.85 min.)及72 mg產物2.1g-II (峰值2, tR 4.04 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.1-I]及[2.1-II]
2.1-I及2.1-II 向2.1g-I (74 mg, 0.203 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.203 ml, 0.608 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之3 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之38 mg所需產物2.1-I (41%產率)。LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]
+
, 0.66 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.93 (s, 1H), 8.45 (dd, J=4.6, 1.4 Hz, 1H), 8.16 (dd, J=7.9, 1.6 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.26 (dd, J=7.9, 4.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.52 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 0.72 (s, 9H)。 向2.1g-II (72 mg, 0.197 mmol)添加THF (體積：0.4 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.4 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.197 ml, 0.591 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之3 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之43 mg所需產物2.1-II (47%產率)。LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]
+
, 0.65 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.93 (s, 1H), 8.45 (dd, J=4.6, 1.4 Hz, 1H), 8.16 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.26 (dd, J=8.0, 4.6 Hz, 1H), 5.13 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.52 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 0.72 (s, 9H)。 實例2.2： 6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.2-I]及[2.2-II]
2.2-I及2.2-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[2.2g-I]及[2.2g-II]
2.2g-I及2.2g-II 化合物2.2g係合成自初始材料；1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-2-羧酸甲酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.2g。LC-MS (m/z): 366.3 [M+H]
+
, 0.47 min。 上文外消旋材料(79 mg)係藉由使用(OD管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/MeOH=80/20, 218 bar)之對掌性層析術分離以產生15 mg產物2.2g-I (峰值1, tR 5.55 min.)及14 mg產物2.2g-II (峰值2, tR 7.72 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[4',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.2-I]及[2.2-II]
2.2-I及2.2-II 向2.2g-I (15 mg, 0.041 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.041 ml, 0.123 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之8.9 mg所需產物2.2-I (47%產率)。LC-MS (m/z): 338.2 [M+H]
+
, 0.44 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 9.70 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.45 (d, J=6.3 Hz, 1H), 8.25 (d, J=6.3 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 5.37 (d, J=14.2 Hz, 1H), 5.00 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.77 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 0.76 (s, 9H)。 向2.2g-II (14 mg, 0.038 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.038 ml, 0.115 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之7.7 mg所需產物2.2-II (44%產率)。LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]
+
, 0.44 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 9.69 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.45 (d, J=6.3 Hz, 1H), 8.24 (br d, J=6.3 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 5.37 (d, J=14.2 Hz, 1H), 5.00 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.76 (dd, J=14.3, 4.9 Hz, 1H), 0.76 (s, 9H)。 實例2.3： 6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',4':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.3-I]及[2.3-II]
2.3-I及2.3-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',4':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[2.3g]
化合物2.3g係合成自初始材料；1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-2-羧酸乙酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.3g。LC-MS (m/z): 366.3 [M+H]
+
, 0.46 min。 步驟8：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[3',4':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.3-I]及[2.3-II]
2.3-I及2.3-II 向2.3g (35 mg, 0.096 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.128 ml, 0.383 mmol)。在30分鐘時，添加額外之NaOH 3 M (0.128 ml, 0.383 mmol)及在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於5 ml DMSO、2 ml水中，用TFA中和，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之31 mg所需外消旋產物2.3 (70%產率)。LC-MS (m/z): 338.2 [M+H]
+
, 0.42 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 9.48 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.65 (d, J=6.6 Hz, 1H), 8.46 (d, J=6.6 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 5.35 (d, J=14.2 Hz, 1H), 5.00 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.71 (dd, J=14.3, 4.9 Hz, 1H), 0.74 (s, 9H)。 將上文外消旋材料(28 mg)溶解於甲醇中及添加40 μl DEA及藉由使用(AD管柱，SFC = 100 ml/min, CO
2
/MeOH = 83/17, 216 bar)之對掌性層析術分離以產生產率為13%之3.7 mg產物2.3-I (峰值1, tR 9.32 min.)及產率為25%之8.1 mg產物2.3-II (峰值2, tR 10.88 min.)。 2.3-I LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]+, 0.49 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.95 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.34 (d, J=5.9 Hz, 1H), 7.82 (d, J=5.9 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 5.09 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.87 (br d, J=4.3 Hz, 1H), 4.53 (dd, J=14.2, 4.8 Hz, 1H), 0.69 (s, 9H)。 2.3-II LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]+, 0.49 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.90 (s, 1H), 8.51 (br s, 1H), 8.30 (br d, J=5.7 Hz, 1H), 7.79 (br d, J=5.7 Hz, 1H), 7.42 (br s, 1H), 7.07 (br s, 1H), 5.03 (br d, J=14.0 Hz, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.45 (br d, J=10.7 Hz, 1H), 0.68 (s, 9H)。 實例2.4： 6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.4-I]及[2.4-II]
2.4-I及2.4-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸乙酯[2.4g-I]及[2.4g-II]
2.4g-I及2.4g-II 化合物2.4g係合成自初始材料；1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-羧酸甲酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.4g。LC-MS (m/z): 366.4 [M+H]
+
, 0.46 min。 上文外消旋材料(149 mg)係藉由使用(OD管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/MeOH=80/20, 228 bar)之對掌性層析術分離以產生15 mg產物2.4g-I (峰值1, tR 4.3 min.)及15 mg產物2.4g-II (峰值2, tR 5.83 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡啶并[2',3':4,5]吡咯并[2,1-c]吡嗪-3-羧酸[2.4-I]及[2.4-II]
2.4-I及2.4-II 向2.4g-I (15 mg, 0.041 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.055 ml, 0.164 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之7.5 mg所需產物2.4-I (40%產率)。LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]
+
, 0.56 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.89 (s, 1H), 8.61 (d, J=4.7 Hz, 1H), 8.57 (br d, J=8.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J=5.0 Hz, 2H), 7.53 (dd, J=8.3, 4.9 Hz, 1H), 5.17 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.92 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.60 (dd, J=14.2, 4.8 Hz, 1H), 0.71 (s, 9H)。 向2.4g-II (15 mg, 0.041 mmol)添加THF (體積：0.2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.055 ml, 0.164 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之7.8 mg所需產物2.4-II (41%產率)。LC-MS (m/z): 338.3 [M+H]
+
, 0.56 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.89 (s, 1H), 8.61 (d, J=4.7 Hz, 1H), 8.57 (br d, J=8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J=5.1 Hz, 2H), 7.53 (dd, J=8.3, 4.9 Hz, 1H), 5.17 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.92 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.60 (dd, J=14.2, 4.9 Hz, 1H), 0.71 (s, 9H)。 實例2.5： 6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.5-I]及[2.5-II]
2.5-I及2.5-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.5g-I]及[2.5g-II]
2.5g-I及2.5g-II 化合物2.5g係合成自初始材料；4-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.5g。LC-MS (m/z): 395.4 [M+H]
+
, 0.76 min。 上文外消旋材料(273 mg)係藉由使用(OJ管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/MeOH=80/20, 236 bar)之對掌性層析術分離以產生94 mg產物2.5g-I (峰值1, tR 2.23 min.)及88 mg產物2.5g-II (峰值2, tR 3.41 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-12-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.5-I]及[2.5-II]
2.5-I及2.5-II 向2.5g-I (94 mg, 0.238 mmol)添加THF (體積：0.4 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.4 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.238 ml, 0.715 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之56.5 mg所需產物2.5-I (48%產率)。LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]
+
, 0.77 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.84 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.27 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J=7.6 Hz, 1H), 5.00 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 0.72 (s, 9H)。 向2.5g-II (88 mg, 0.223 mmol)添加THF (體積：0.4 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.4 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.223 ml, 0.669 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之55.5 mg所需產物2.5-II (51%產率)。LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]
+
, 0.77 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.84 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.36 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.27 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.64 (d, J=7.9 Hz, 1H), 5.00 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 0.72 (s, 9H)。 實例2.6： 6-(第三丁基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.6-I]及[2.6-II]
2.6-I及2.6-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.6g]
化合物2.6g係合成自初始材料；5-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.6g。LC-MS (m/z): 395.4 [M+H]
+
, 0.76 min。 步驟8：6-(第三丁基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.6-I]及[2.6-II]
2.6-I及2.6-II 向2.6g (120 mg, 0.304 mmol)添加THF (體積：2 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：2 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.406 ml, 1.217 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之5 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產品再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之65 mg所需外消旋產物2.6 (45%產率)。LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]
+
, 0.76 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.85 (s, 1H), 7.71 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.13 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.99 (dd, J=9.0, 2.4 Hz, 1H), 5.01 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.84 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.48 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 0.73 (s, 9H)。 將上文外消旋材料(56 mg)溶解於甲醇中及添加200 μl DEA及藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/MeOH = 65/35, 216 bar)之對掌性層析術分離以產生產率為35%之19.7 mg產物2.6-I (峰值1, tR 2.17 min.)及產率為36%之21.0 mg產物2.6-II (峰值2, tR 4.13 min.)。 2.6-I LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]+, 0.76 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.81 (s, 1H), 7.68 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.10 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.96 (dd, J=9.0, 2.2 Hz, 1H), 4.98 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.80 (br d, J=4.1 Hz, 1H), 4.45 (br dd, J=14.1, 4.6 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 0.70 (s, 9H)。 2.6-II LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]+, 0.76 min.；
1
H NMR (＜dmso＞) δ: 8.79 (br s, 1H), 7.68 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.36 (br s, 1H), 7.32 (br s, 1H), 7.09 (d, J=2.2 Hz, 1H), 6.95 (dd, J=9.0, 2.2 Hz, 1H), 4.97 (br d, J=14.1 Hz, 1H), 4.79 (br s, 1H), 4.45 (br dd, J=14.1, 4.4 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 0.70 (s, 9H)。 實例2.7： 6-(第三丁基)-10-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.7-I]及[2.7-II]
2.7-I及2.7-II 步驟1至7：6-(第三丁基)-10-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.7g-I]及[2.7g-II]
2.7g-I及2.7g-II 化合物2.7g係合成自初始材料；6-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.7g。LC-MS (m/z): 395.4 [M+H]
+
, 0.76 min。 上文外消旋材料(273 mg)係藉由使用(OJ管柱，SFC=100 ml/min, CO
2
/MeOH=85/15, 229 bar)之對掌性層析術分離以產生70 mg產物2.7g-I (峰值1, tR 1.93 min.)及82 mg產物2.7g-II (峰值2, tR 3.55 min.)。 步驟8：6-(第三丁基)-10-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.5-I]及[2.5-II]
2.7-I及2.7-II 向2.7g-I (70 mg, 0.177 mmol)添加THF (體積：0.4 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.4 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.177 ml, 0.532 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之24.4 mg所需產物2.7-I (28%產率)。LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]
+
, 0.78 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.81 (s, 1H), 7.54 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (s, 2H), 6.80 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 5.06 (d, J=14.2 Hz, 1H), 4.83 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.45 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 0.75 (s, 9H)。 向2.7g-II (82 mg, 0.208 mmol)添加THF (體積：0.4 ml，比率：1.000)、MeOH (體積：0.4 ml，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (0.208 ml, 0.624 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之1.2 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產物再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之28.8 mg所需產物2.7-II (28%產率)。LC-MS (m/z): 367.3 [M+H]
+
, 0.77 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.81 (s, 1H), 7.54 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (s, 2H), 6.80 (dd, J=8.7, 2.0 Hz, 1H), 5.06 (d, J=13.9 Hz, 1H), 4.83 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.45 (dd, J=14.2, 4.7 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 0.74 (s, 9H)。 實例2.8： 6-(第三丁基)-12-(3-甲氧基丙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.8]
步驟1至7：12-(芐氧基)-6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.8g]
化合物2.8g係合成自初始材料；4-(芐氧基)-1H-吲哚-2-羧酸藉由實例2.1之方法遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.8g。LC-MS (m/z): 471.4 [M+H]
+
, 1.03 min。 步驟8：6-(第三丁基)-12-羥基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.8h]
在用氮淨化後向於EtOAc (體積：7 mL)及MeOH (體積：1 mL)中之2.8g (472 mg, 1.003 mmol)添加10% Pd-C (200 mg, 0.188 mmol)。粗材料係用氫(來自氣球)再次淨化及反應在氫下運行整夜，歷時18小時或直至由LCMS測定完成。粗材料係經過濾及濃縮以產生假定呈定量產率之408 mg所需產物2.8h，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 381.4 [M+H]
+
, 0.75 min。 步驟9：6-(第三丁基)-12-(3-甲氧基丙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.8i]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (40 mg, 0.105 mmol)及1-溴-3-甲氧基丙烷(0.2 mL, 0.105 mmol)添加碳酸銫(68.5 mg, 0.210 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.8i之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 453.4 [M+H]
+
, 0.93 min。 步驟10：6-(第三丁基)-12-(3-甲氧基丙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.8]
向來自步驟9含有2.8i (40 mg, 0.088 mmol)之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生24 mg所需產物2.8 (60.8%產率) (經2個步驟)。LC-MS (m/z): 425.3 [M+H]
+
, 0.99 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.53 (s, 1 H) 7.21 - 7.31 (m, 2 H) 7.19 (s, 1 H) 6.89 - 7.09 (m, 1 H) 6.59 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 4.80 (d, J=13.69 Hz, 1 H) 4.42 (dd, J=13.74, 4.74 Hz, 1 H) 4.12 - 4.31 (m, 3 H) 3.64 (t, J=6.14 Hz, 2 H) 3.30 - 3.48 (m, 3 H) 2.17 (五重峰，J=6.19 Hz, 2 H) 0.84 (s, 9 H)。 實例2.9： 6-(第三丁基)-12-(2-羥基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.9]
步驟1：6-(第三丁基)-12-(2-羥基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.9a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (35 mg, 0.092 mmol)及2-溴乙-1-醇(23 mg, 0.184 mmol)添加碳酸銫(90 mg, 0.276 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.9a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 425.2 [M+H]
+
, 0.84 min。 步驟2：6-(第三丁基)-12-(2-羥基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.9]
向來自步驟1含有2.9a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生2.8 mg所需產物2.9 (7.1%產率)。LC-MS (m/z): 397.4 [M+H]
+
, 0. 74 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.48 (s, 1 H) 7.27 - 7.35 (m, 2 H) 7.11 - 7.17 (m, 1 H) 6.99 (d, J=7.87 Hz, 1 H) 6.60 (d, J=7.87 Hz, 1 H) 4.81 (br d, J=13.89 Hz, 1 H) 4.42 (br dd, J=13.84, 4.70 Hz, 1 H) 4.22 - 4.31 (m, 2 H) 4.03 - 4.15 (m, 3 H) 0.84 (s, 9 H)。 實例2.10： 6-(第三丁基)-12-(2,2-二氟乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.10]
步驟1：6-(第三丁基)-12-(2,2-二氟乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.10a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (30 mg, 0.079 mmol)及2-溴-1,1-二氟乙烷(60 mg, 0.414 mmol)添加碳酸銫(60 mg, 0.184 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.10a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 445.4 [M+H]
+
, 0.9 min。 步驟2：6-(第三丁基)-12-(2,2-二氟乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.10]
向來自步驟1含有2.10a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生7.8 mg所需產物2.10 (22.5%產率)。LC-MS (m/z): LC-MS (m/z): 417.3 [M+H]
+
, 0. 91 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.51 (s, 1 H) 7.31 (t, J=8.09 Hz, 1 H) 7.26 (s, 1 H) 7.18 (s, 1 H) 6.91 - 7.11 (m, 1 H) 6.57 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 6.22 (t, J=4.08 Hz, 1 H) 4.81 (d, J=13.79 Hz, 1 H) 4.26 - 4.51 (m, 3 H) 4.16 (br d, J=4.50 Hz, 1 H) 0.84 (s, 9 H)。 實例2.11： 6-(第三丁基)-12-(2-甲氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.11]
步驟1：6-(第三丁基)-12-(2-甲氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.11a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (30 mg, 0.079 mmol)及1-溴-2-甲氧基乙烷(60mg, 0.432 mmol)添加碳酸銫(60 mg, 0.184 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.11a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 439.4 [M+H]
+
, 0.95 min。 步驟2：6-(第三丁基)-12-(2-甲氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.11]
向來自步驟1含有2.11a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生4 mg所需產物2.11 (11.7%產率)。LC-MS (m/z): 411.4 [M+H]
+
, 0. 87 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.51 (s, 1 H) 7.25 - 7.31 (m, 10 H) 7.17 (s, 1 H) 6.85 - 7.08 (m, 1 H) 6.58 (d, J=7.82 Hz, 1 H) 4.80 (d, J=13.74 Hz, 1 H) 4.42 (dd, J=13.72, 4.67 Hz, 2 H) 4.29 (t, J=4.67 Hz, 2 H) 4.15 (d, J=4.45 Hz, 1 H) 3.75 - 4.00 (m, 2 H) 3.51 (s, 3 H) 0.83 (s, 9 H)。 實例2.12： 6-(第三丁基)-12-(2-(甲基胺基)-2-側氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.12]
步驟1：6-(第三丁基)-12-(2-(甲基胺基)-2-側氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2:12a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (30 mg, 0.079 mmol)及2-溴-N-甲基乙醯胺(30 mg, 0.197 mmol)添加碳酸銫(60 mg, 0.184 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.12a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 452.4 [M+H]
+
, 0.75 min。 步驟2：6-(第三丁基)-12-(2-(甲基胺基)-2-側氧基乙氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.12]
向來自步驟1含有2.12a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生8 mg所需產物2.12 (22.7%產率) (經2個步驟)。LC-MS (m/z): 424.4 [M+H]
+
, 0.74 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.50 (s, 1 H) 7.30 - 7.36 (m, 1 H) 7.21 (d, J=19.86 Hz, 2 H) 7.07 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 6.55 - 6.63 (m, 1 H) 6.59 (br d, J=7.87 Hz, 1 H) 4.84 (br d, J=14.18 Hz, 1 H) 4.70 (s, 2 H) 4.38 - 4.51 (m, 1H) 4.09 - 4.22 (m, 1 H) 2.98 (d, J=4.94 Hz, 3 H) 0.86 (s, 9 H)。 實例2:13： 6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2:13]
步驟1：6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2:13a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (35 mg, 0.092 mmol)及4-(溴甲基)四氫-2H-哌喃(33 mg, 0.184 mmol)添加碳酸銫(90 mg, 0.276 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.13a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 479.2 [M+H]
+
, 1.01 min。 步驟2：6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)甲氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2:13]
向來自步驟1含有2:13a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生2 mg所需產物2:13 (以6.1%產率) (經2個步驟)。LC-MS (m/z): 451.4 [M+H]
+
, 0.96 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.47 (s, 1 H) 7.28 - 7.32 (m, 1 H) 7.13 - 7.23 (m, 2 H) 6.96 (d, J=8.27 Hz, 1 H) 6.56 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 4.80 (br d, J=13.99 Hz, 1 H) 4.41 (br dd, J=14.06, 4.87 Hz, 2 H) 4.12 (br d, J=4.84 Hz, 1 H) 4.06 (br d, J=15.85 Hz, 2 H) 3.95 - 4.01 (m, 2 H) 3.50 (br t, J=11.52 Hz, 2 H) 1.84 (br d, J=13.55 Hz, 2 H) 0.84 (s, 9 H)。 實例2:14： 6-(第三丁基)-12-((3,3-二氟環丁基)甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.14]
步驟1：6-(第三丁基)-12-((3,3-二氟環丁基)甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.14a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (35 mg, 0.092 mmol)及3-(溴甲基)-1,1-二氟環丁烷(34 mg, 0.184 mmol)添加碳酸銫(90 mg, 0.276 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.14a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 485.2 [M+H]
+
, 1.06 min。 步驟2：6-(第三丁基)-12-((3,3-二氟環丁基)甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.14]
向來自步驟1之含有2.14a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5 ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生7.4 mg所需產物2.14 (18.6%產率) (經2個步驟)。LC-MS (m/z): 457.3 [M+H]
+
, 1.03 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.53 (s, 1 H) 7.28 - 7.33 (m, 1 H) 7.20 (d, J=14.57 Hz, 2 H) 6.98 (d, J=8.36 Hz, 1 H) 6.56 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 4.80 (br d, J=13.69 Hz, 1 H) 4.43 (br dd, J=13.52, 4.23 Hz, 1 H) 4.08 - 4.26 (m, 3 H) 2.69 - 2.93 (m, 3 H) 2.41 - 2.69 (m, 2 H) 0.75 - 0.89 (m, 9 H)。 實例2.15： 12-(2-胺基-2-側氧基乙氧基)-6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.15]
步驟1：12-(2-胺基-2-側氧基乙氧基)-6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.15a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (35 mg, 0.092 mmol)及2-溴-N-甲基乙醯胺(25 mg, 0.184 mmol)添加碳酸銫(90 mg, 0.276 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.15a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 438.2 [M+H]
+
, 0.81 min。 步驟2：12-(2-胺基-2-側氧基乙氧基)-6-(第三丁基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.15]
向來自步驟1之含有2.15a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生12 mg所需產物2.15 (30.5%產率)。LC-MS (m/z): 411.4 [M+H]
+
, 0.73 min.；
1
H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.65 (s, 1 H) 7.43 (s, 1 H) 7.22 (s, 1 H) 7.19 (br d, J=15.80 Hz, 1 H) 7.06 - 7.14 (m, 1 H) 6.46 (d, J=7.48 Hz, 1 H) 4.82 - 5.03 (m, 1 H) 4.61 - 4.75 (m, 2 H) 4.54 (br d, J=3.67 Hz, 1 H) 4.37 (br dd, J=14.04, 4.11 Hz, 1 H) 0.62 - 0.87 (m, 9 H)。 實例2.16： 6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)側氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.16]
步驟1：6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)側氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.16a]
向於DMSO (體積：1 mL)中之2.8h (30 mg, 0.079 mmol)及4-溴四氫-2H-哌喃(91 mg , 0.552 mmol)添加碳酸銫(90 mg, 0.276 mmol)及在60℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。含有所需產物2.16a之粗溶液假定呈定量產率用於下一步驟中，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 465.4 [M+H]
+
, 0.89 min。 步驟2：6-(第三丁基)-2-側氧基-12-((四氫-2H-哌喃-4-基)側氧基)-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.16]
向來自步驟1之含有2.16a之粗溶液添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生15 mg所需產物2.16 (50.6%產率) (經2個步驟)。LC-MS (m/z): 437.4 [M+H]
+
, 0.89 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.54 (s, 1 H) 7.25 - 7.31 (m, 2H) 7.22 (s, 1 H) 6.96 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 6.60 (d, J=7.87 Hz, 1 H) 4.81 (d, J=13.69 Hz, 1 H) 4.71 (br d, J=3.77 Hz, 1 H) 4.42 (dd, J=13.77, 4.72 Hz, 1 H) 4.13 - 4.28 (m, 1 H) 3.87 - 4.12 (m, 2 H) 3.50 - 3.74 (m, 2 H) 1.77 - 2.04 (m, 4 H) 0.85 (s, 9 H)。 實例2.17： 6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.17]
步驟1：6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.17a]
向於經冷卻至0至5℃之乙腈(體積：2 mL，比率：10.00)-水(體積：0.2 mL，比率：1.000)中之2.8h (30 mg, 0.079 mmol)添加氫氧化鈉(95 mg, 0.237 mmol)，接著添加於1 ml MeCN中之(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(63.2 mg, 0.237 mmol)。在水冷下將粗材料攪拌3小時。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生5 mg所需產物2.17a (14%產率)。LC-MS (m/z): 431.3 [M+H]
+
, 0.90 min.。 步驟2：6-(第三丁基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.17]
向於甲醇(體積：1 mL，比率：1.000)中之2.17a (30 mg, 0.070 mmol)添加15%氫氧化鈉溶液(1 mL, 3.75 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生4 mg所需產物2.17 (13.5%產率)。LC-MS (m/z): 403.3 [M+H]
+
, 0.91 min.；
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.53 (s, 1 H) 7.29 - 7.43 (m, 1 H) 7.26 (m, 2 H) 7.22 (d, J=6.46 Hz, 1 H) 6.94 (m, 1 H) 6.70 (m, 1 H) 4.84 (d, J=13.74 Hz, 1 H) 4.46 (br dd, J=13.74, 4.79 Hz, 1 H) 4.18 (br d, J=4.50 Hz, 1 H) 0.85 (s, 9 H)。 實例2.18： 12-(二氟甲氧基)-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.18-I]及[2.18-II]
步驟1至7：6-(1-(芐氧基)-2-甲基丙-2-基)-12-(二氟甲氧基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.18g]
化合物2.18g係合成自初始材料；4-(二氟甲氧基)-5-甲氧基-1H-吲哚-2-羧酸藉由實例2.1之方法及如於步驟3中作為4.1b之4-(芐氧基)-1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮遵循步驟1至7導致呈外消旋物之所需產物2.18g。 步驟8：12-(二氟甲氧基)-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[2.18h]
在用氮淨化後向於EtOH (體積：30 mL)中之2.18g (841 mg, 1.484 mmol)添加Pd-C，10% Pd-C (1.2 g, 5.64 mmol)。連接氫氣球及將該溶液攪拌6小時或直至由LCMS測定完成。過濾該溶液及殘餘物用甲醇沖洗且將有機物濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至15%甲醇及DCM之矽膠層析術純化，將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生470 mg所需產物2.18h (66.5%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 477.3 [M+H]
+
, 0.82 min。 步驟9：12-(二氟甲氧基)-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-11-甲氧基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[2.18-I]及[2.18-II]
2.18-I及2.18-II 向於甲醇(5 ml)中之2.18h (470 mg, 0.088 mmol)添加10%氫氧化鈉溶液(5 mL, 1.25 mmol)及在室溫下攪拌1小時。該溶液係經酸化(濃HCl, 0.2 ml)及添加0.5ml甲醇。粗材料係於逆相製備型LC上純化以產生38 mg所需外消旋產物2.18 (8.59%產率)。LC-MS (m/z): 449.3 [M+H]
+
, 0.78 min。
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
) δ ppm 8.77 (s, 1 H) 7.69 (d, J=9.22 Hz, 1 H) 7.51 (s, 1 H) 7.43 (s, 1 H) 7.31 (d, J=9.22 Hz, 1 H) 6.90 - 7.26 (m, 2 H) 5.18 (br s, 1 H) 5.03 (br d, J=14.42 Hz, 1 H) 4.94 (br d, J=4.02 Hz, 1 H) 4.47 (br dd, J=13.83, 4.61 Hz, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 2.91 - 3.17 (m, 2 H) 0.75 (s, 3 H) 0.36 (s, 3 H)。 上文外消旋材料(38 mg)係藉由使用(AD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/MeOH=75/25, 256 bar)之對掌性層析術分離以產生7 mg產物2.18-I (峰值1, tR 2.74 min.)及8 mg產物2.18-II (峰值2, tR 5.72 min.)。 2.18-I: LC-MS (m/z): 449.5 [M+H]
+
, 0.82 min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.83 (s, 1 H) 7.50 (d, J=9.05 Hz, 1 H) 7.23 - 7.38 (m, 3 H) 6.86 (m, 1 H) 5.02 (br d, J=14.13 Hz, 1 H) 4.87 - 4.93 (m, 1 H) 4.41 - 4.57 (m, 1 H) 3.93 (s, 3 H) 3.19 - 3.34 (m, 2H) 1.30 (br t, J=7.24 Hz, 1 H) 0.88 (s, 3 H) 0.44 (s, 3 H)。 2.18-II: LC-MS (m/z): 449.5 [M+H]
+
, 0.82min; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.86 (s, 1 H) 7.53 (d, J=9.00 Hz, 1 H) 7.26 - 7.41 (m, 3 H) 6.89 (m, 1 H) 5.05 (br d, J=14.18 Hz, 1 H) 4.90 - 4.95 (m, 1 H) 4.51 (br dd, J=13.94, 4.35 Hz, 1H) 3.96 (s, 3 H) 3.22 - 3.39 (m, 2 H) 1.33 (br t, J=7.16 Hz, 1 H) 0.91 (s, 3 H) 0.47 (s, 3 H)。 實例3.1： (R)-6-異丙基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[3.1]
步驟1：(R)-甲磺酸2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁酯[3.1a]
向(R)-(1-羥基-3-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(5000 mg, 24.60 mmol)添加DCM (體積：75 mL)、TEA (6.86 mL, 49.2 mmol)及冷卻至0℃。然後添加甲磺醯氯(2.300 mL, 29.5 mmol)。在0℃下將反應攪拌1小時及容許升溫至室溫，歷時1小時，接著進行LCMS。向反應添加飽和氯化銨溶液，產品係用DCM萃取，有機層係用飽和氯化鈉溶液清洗，經MgSO
4
乾燥，過濾及濃縮至殘餘物以產生6.5 g所需產物3.1a (94%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 282.2 [M+H]
+
, 0.62 min。注意：(就LCMS而言，親代[M+H]
+
存在但微弱，針對BOC基團具有特徵為片段模式之顯著質量峰值：[M+H]
+
, -56 = 226.2及[M+H]
+
, -100 = 182.2)。 步驟2：(R)-(1-(2-甲醯基-1H-吲哚-1-基)-3-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯[3.1b]
向1H-吲哚-2-甲醛(950 mg, 6.54 mmol) (950 mg, 6.54 mmol)添加DMF (體積：25 mL)及然後添加NaH (524 mg, 13.09 mmol)。在室溫下將反應攪拌5分鐘及然後在60℃下加熱20分鐘。然後在60℃下添加3.1a (2762 mg, 9.82 mmol)及在60℃下攪拌16小時，接著進行LCMS。同時，添加額外之NaH (320 mg, 7.99 mmol)及在60℃下攪拌20分鐘。然後添加額外之3.1a (1124 mg, 4.00 mmol)及在60℃下攪拌3小時以上，接著進行LCMS。向反應添加250 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉溶液，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至60% EtOAc/庚烷之矽膠管柱層析術純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生105 mg所需產物3.1b (5%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 331.3 [M+H]
+
, 0.86 min。注意：(就LCMS而言，親代[M+H]
+
存在但微弱，針對BOC基團具有特徵為片段模式之顯著質量峰值：[M+H]
+
, -56 = 275.2及[M+H]
+
, -100 = 231.3)。 步驟3：(R)-3-異丙基-3,4-二氫吡嗪并[1,2-a]吲哚[3.1c]
向3.1b (100 mg, 0.303 mmol)添加DCM (體積：2 mL)及然後添加TFA (1 mL, 12.98 mmol)。在室溫下將反應攪拌1小時，接著進行LCMS。將反應濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物3.1c，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 213.1 [M+H]+, 0.51 min。 步驟4：(6R)-6-異丙基-2-側氧基-2,6,7,13b-四氫-1H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[3.1d]
向3.1c (64 mg, 0.301 mmol)添加乙醇(體積：2 mL)及然後添加(Z)-2-(甲氧基亞甲基)-3-側氧基丁酸乙酯(156 mg, 0.904 mmol)。在95至100℃下將反應攪拌26小時或直至由LCMS測定完成。將反應濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物3.1d，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 353.3 [M+H]+, 0.75 min。 步驟5：6-異丙基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸(R)-乙酯[3.1e]
向3.1d (105 mg, 0.298 mmol)添加DME (體積：0.2 mL)及然後添加四氯苯醌(73.3 mg, 0.298 mmol)。在90至95℃下將反應攪拌90分鐘或直至由LCMS測定完成。將粗反應濃縮至殘餘物及藉由使用0至100% (具有10%甲醇之EtOAc)/庚烷之矽膠管柱層析術純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生80 mg所需產物3.1e (77%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 351.3 [M+H]
+
, 0.71 min。 步驟6：(R)-6-異丙基-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[3.1]
向3.1e (60 mg, 0.171 mmol)添加THF (體積：2，比率：1.000)、MeOH (體積：2，比率：1.000)及然後NaOH 3 M (228 µl, 0.685 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。濃縮去除溶劑，將殘餘物溶解於具有5%水之2.5 ml DMSO中，藉由逆相製備型LC純化及凍乾。將產品再溶解於1:1 ACN/水中及再凍乾以產生呈TFA鹽之37.5 mg所需產物3.1 (49%產率)。LC-MS (m/z): 323.2 [M+H]
+
, 0.75 min.；
1
H NMR (DMSO-d
6
) δ: 8.92 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (t, J=7.3 Hz, 1H), 7.16 (t, J=7.3 Hz, 1H), 5.00 (d, J=13.6 Hz, 1H), 4.81 (br dd, J=9.0, 2.7 Hz, 1H), 4.47 (dd, J=13.7, 3.6 Hz, 1H), 1.62 (br dd, J=15.4, 6.6 Hz, 1H), 0.90 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.74 (d, J=6.6 Hz, 3H)。 實例4.1： 12-(二氟甲氧基)-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[4.1-I]及[4.1-II]
步驟1：4-(芐氧基)-3,3-二甲基丁-2-酮[4.1a]
將4-羥基-3,3-二甲基丁-2-酮(43 g, 370 mmol)及溴化芐(48.4 ml, 407 mmol)於DIPEA (71.1 ml, 407 mmol)中之混合物在150℃下加熱1小時。在冷卻至室溫後，將該混合物分配於乙酸乙酯與水之間。用2 M鹽酸將水層調整至pH=1至2。然後分離有機層，在無水Na
2
SO
4
上乾燥及濃縮以產生76 g所需產物4.1a (100 %產率)。LC-MS (m/z): 207.3 [M+H]+, 0.93 min。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.26 - 7.38 (m, 5 H), 4.47 - 4.53 (m, 2 H), 3.45 - 3.54 (m, 2 H), 2.16 (s, 3 H), 1.11 - 1.17 (m, 6 H)。 步驟2：4-(芐氧基)-1-溴-3,3-二甲基丁-2-酮[4.1b]
向於用冰-甲醇冷卻至0℃以下之甲醇(體積：300 mL)中之4.1a (5 g, 24.24 mmol)滴加於50 ml甲醇中之溴(1.436 mL, 27.9 mmol)。在該溫度下將反應攪拌1小時及然後在室溫下攪拌整夜。粗材料係經濃縮，再溶解於DCM中，用飽和碳酸氫鈉清洗及有機物經濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物4.1b，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 285.1/287.1 [M+H]+, 1.06 min。
1
H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.24 - 7.38 (m, 5 H), 4.48 - 4.51 (m, 2 H), 4.21 - 4.25 (m, 2 H), 3.40 - 3.48 (m, 2 H), 1.22 - 1.25 (m, 6 H)。 步驟3：(4-(二氟甲氧基)-1H-吲哚-2-基)甲醇[4.1c]
向4-(二氟甲氧基)-1H-吲哚-2-羧酸(1950 mg, 8.58 mmol)添加THF (體積：50 mL)，加熱至溶解然後冷卻至約室溫。然後添加於THF (6.44 mL, 12.88 mmol)中之LAH 2 M。在室溫下將反應攪拌3小時或直至由LCMS測定完成。讓該反應在冰浴中冷卻，然後藉由滴加過量水(2 ml)小心中止及隨鹽形成添加硫酸鎂。該反應係自冰浴移除及攪拌1小時，濾過矽藻土塞及濃縮至殘餘物以產生1800 mg所需產物4.1c (98%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 214.0 [M+H]
+
, 0.63 min。 步驟4：2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)側氧基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1H-吲哚[4.1d]
向4.1c (1790 mg, 8.40 mmol)添加DCM (體積：65 mL)及咪唑(1829 mg, 26.9 mmol)，在室溫下攪拌5分鐘。然後添加TBDMSCl (3797 mg, 25.2 mmol)。在室溫下將反應攪拌90分鐘或直至由LCMS測定完成。向反應添加10 ml甲醇及濃縮去除溶劑中之大部分。然後添加250 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉，水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至25%庚烷及乙酸乙酯之矽膠層析術純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生假定以100%產率之2740 mg所需產物4.1d，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 328.4 [M+H]
+
, 1.16 min。 步驟5：4-(芐氧基)-1-(2-(((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)甲基)-4-(二氟甲氧基)-1H-吲哚-1-基)-3,3-二甲基丁-2-酮[4.1e]
向4.1d (2740 mg, 8.37 mmol)添加DMF (體積：40 mL)、碳酸銫(6816 mg, 20.92 mmol)及在45至50℃下攪拌15分鐘。然後添加4.1b (4295 mg, 15.06 mmol)及在45至50℃下攪拌2小時或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻，然後添加具有20%庚烷之250 ml乙酸乙酯，用飽和碳酸氫鹽，水2x，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至20%乙酸乙酯及庚烷之矽膠層析術純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生4200 mg所需產物4.1e (94%產率)。LC-MS (m/z): 532.5 [M+H]+, 1.48 min。 步驟6：(1-(2-胺基-4-(芐氧基)-3,3-二甲基丁基)-4-(二氟甲氧基)-1H-吲哚-2-基)甲醇[4.1f]
向4.1e (4215 mg, 7.93 mmol)添加MeOH (體積：30 mL)、乙酸銨(9166 mg, 119 mmol)及氰基硼氫化鈉(1495 mg, 23.78 mmol)。然後在60至65℃下將反應攪拌20小時。然後添加額外之乙酸銨(9166 mg, 119 mmol)及氰基硼氫化鈉(1495 mg, 23.78 mmol)及在60至65℃下攪拌整夜，總計40小時或直至由LCMS測定完成。向粗反應添加750 ml DCM及用(6 M NaOH，飽和鹽溶液)之1:1溶液萃取。水層係用DCM反萃取。組合有機物，用飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，濾過1 cm x 2 cm矽藻土過濾器塞，用具有10%甲醇之DCM之溶液清洗，濃縮至殘餘物以產生3310 mg所需產物4.1f (100%產率)，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 419.5 [M+H]
+
, 0.88 min。 步驟7：3-(1-(芐氧基)-2-甲基丙-2-基)-9-(二氟甲氧基)-3,4-二氫吡嗪并[1,2-a]吲哚[4.1g]
向4.1f (3310 mg, 7.91 mmol)添加DCM (體積：45 mL)及二氧化錳(6876 mg, 79 mmol)。在室溫下將反應攪拌2小時。然後添加額外之二氧化錳(3438 mg, 39.5 mmol)及攪拌整夜，總計20小時或直至由LCMS測定完成。視需要可添加額外之二氧化錳。向粗材料添加50 ml DCM，攪拌30分鐘，然後濾過1 cm x 4 cm矽藻土過濾器塞，用DCM沖洗及濃縮至殘餘物。將游離鹼溶解於5 ml DCM中及添加過量之TFA (1.828 mL, 23.73 mmol)，在室溫下攪拌15分鐘，然後濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物4.1g，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 399.4 [M+H]
+
, 0.90 min。 步驟8：6-(1-(芐氧基)-2-甲基丙-2-基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-2,6,7,13b-四氫-1H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[4.1h]
向4.1g (1550 mg, 3.89 mmol)添加乙醇(體積：15 mL)及(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-3-側氧基丁酸乙酯(2173 mg, 11.67 mmol)。在85至90℃下將反應攪拌16小時或直至由LCMS測定完成。將反應濃縮至殘餘物以產生假定呈定量產率之所需產物4.1h，其係按原樣使用。LC-MS (m/z): 539.5 [M+H]
+
, 1.14 min。 步驟9：6-(1-(芐氧基)-2-甲基丙-2-基)-12-(二氟甲氧基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[4.1i]
向4.1h (2090 mg, 3.88 mmol)添加DME (體積：20 mL)及然後添加四氯苯醌(954 mg, 3.88 mmol)。在90至95℃下將反應攪拌90分鐘或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻，添加1 ml水，攪拌5分鐘，然後用具有2%乙醇之300 ml DCM稀釋。然後添加飽和碳酸氫鈉75 ml及150 ml水，攪拌5分鐘，過濾及然後分離層。有機層係用水2x，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至70% (具有25%乙醇之乙酸乙酯)及庚烷之矽膠層析術純化。將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生801 mg所需外消旋產物4.1i (39%產率)。LC-MS (m/z): 537.4 [M+H]
+
, 1.06 min。 步驟10：12-(二氟甲氧基)-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[4.1-I]及[4.1-II]
4.1-I及4.1-II 向4.1i (660 mg, 1.230 mmol)添加DCM (體積：7 mL)及攪拌至溶解。然後添加於DCM (8.61 mL, 17.22 mmol)中之三氯化硼、甲硫醚2 M及在25至30℃下將反應攪拌40小時或直至由LCMS測定完成。使該反應冷卻，添加30 ml DCM，將其放置於-10℃浴中及邊攪拌邊緩慢添加過量乙酸乙酯。然後仍在-10℃浴中，添加過量之水(5ml)及邊攪拌邊容許升溫至室溫。水層係用1N HCL酸化及攪拌15分鐘。然後水層係用具有5%乙醇(2x)之75 ml DCM萃取，有機層係經組合，用水，飽和鹽溶液清洗，用硫酸鈉乾燥，過濾及濃縮至殘餘物。粗材料係藉由使用0至100% (具有40%乙醇之乙酸乙酯)及庚烷之矽膠層析術純化，將所需溶離份濃縮至殘餘物。然後將粗材料溶解於具有5%水之10 ml DMSO中及藉由逆相製備型LC純化及凍乾以產生呈TFA鹽之145 mg所需外消旋產物4.1 (21%產率)。LC-MS (m/z): 419.4 [M+H]
+
, 0.82 min。1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.76 (s, 1H), 7.64 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.32 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.19-7.59 (m, 1H), 6.90 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.17 (br s, 1H), 5.06 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.49 (dd, J=14.1, 4.6 Hz, 1H), 2.99-3.15 (m, 2H), 0.72 (s, 3H), 0.33 (s, 3H)。 將上文外消旋材料(142 mg)溶解於甲醇中及添加100 ul DEA及係藉由使用(OD管柱，SFC=100 ml/min, CO2/EtOH=70/30, 246 bar)之對掌性層析術分離以產生53.6 mg產物4.1-I (峰值1, tR 2.57 min.) (37%產率)及52.5 mg產品4.1-II (峰值2, tR 7.05 min.) (37%產率)。 4.1-I LC-MS (m/z): 419.3 [M+H]+, 0.82 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.76 (s, 1H), 7.64 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.32 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.17-7.59 (m, 1H), 6.90 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.17 (t, J=4.7 Hz, 1H), 5.06 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.49 (dd, J=14.2, 4.6 Hz, 1H), 2.98-3.16 (m, 2H), 0.72 (s, 3H), 0.33 (s, 3H)。 4.1-II LC-MS (m/z): 419.4 [M+H]+, 0.82 min.；1H NMR (＜dmso＞) δ: 8.76 (s, 1H), 7.64 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.32 (t, J=8.1 Hz, 1H), 7.19-7.59 (m, 1H), 6.90 (d, J=7.7 Hz, 1H), 5.17 (t, J=4.6 Hz, 1H), 5.06 (d, J=14.1 Hz, 1H), 4.94 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.49 (dd, J=14.2, 4.6 Hz, 1H), 2.99-3.15 (m, 2H), 0.72 (s, 3H), 0.33 (s, 3H)。 實例4.2： 12-(二氟甲氧基)-1-氟-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[4.2]
步驟1：(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4-二氟-3-((三甲基甲矽烷基)氧基)丁-3-烯酸乙酯[4.2a]
在氬氣氛下，鎂粉(1.518 g, 62.5 mmol)及三甲基氯矽烷(7.40 mL, 58.3 mmol))之混合物在反應前係經超音波處理15至20分鐘。然後在50℃下在氬氣氛下滴加(Z)-2-(乙氧基亞甲基)-4,4,4-三氟-3-側氧基丁酸乙酯(2 g, 8.33 mmol)於無水DMF(3 ml)中之溶液，歷時5至6分鐘。在50℃下將反應混合物再攪拌30 min。粗混合物係然後濾過具有聚乙烯玻璃料之一次性過濾漏斗。所得之DMF溶液具有假定呈定量產率之所需產物4.2a，其係按原樣使用。 步驟2：6-(1-(芐氧基)-2-甲基丙-2-基)-12-(二氟甲氧基)-1-氟-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸乙酯[4.2b]
向4.1g (950 mg, 2.384 mmol)添加來自上文之粗材料4.2a (3509 mg, 11.92 mmol)。然後添加乙腈(體積：10 mL)及碘化鋅(761 mg, 2.384 mmol)及在50至60℃下使粗材料回流整夜。該粗材料係藉由使用0至100% (EtOAc:EtOH= 75:25)及庚烷之矽膠層析術純化，將所需溶離份濃縮至恆定質量以產生1.14 g所需產物4.2b (86%產率)。LC-MS (m/z): 555.5 [M+H]
+
, 1.05 min。 步驟3：12-(二氟甲氧基)-1-氟-6-(1-羥基-2-甲基丙-2-基)-2-側氧基-6,7-二氫-2H-吡啶并[2',1':3,4]吡嗪并[1,2-a]吲哚-3-羧酸[4.2]
向4.2b (1.1 g, 1.984 mmol)添加於DCM (20 mL, 40.0 mmol)中之三氯化硼Me2S，2 M及在28℃下攪拌整夜，歷時17小時。粗材料係藉由倒入碎冰內中止及用DCM萃取粗材料。濃縮有機物及於逆相製備型LC上純化以產生14 mg所需產物4.2 (2%產率)。LC-MS (m/z): 437.4 [M+H]
+
, 0.83 min;
1
H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.75 (s, 1 H) 7.43 (br d, J=8.22 Hz, 1 H) 7.19 - 7.36 (m, 2 H) 6.73-7.10 (m, 1 H) 6.79 - 6.88 (m, 1 H) 4.98 - 5.09 (m, 1 H) 4.84 - 4.98 (m, 1 H) 4.39 - 4.57 (m, 1 H) 3.07 - 3.18 (m, 2 H) 0.79 (s, 3 H) 0.34 (s, 3 H)。 生物實例 HBV細胞系 基於具有略微修飾之Tet-可誘導HepAD38細胞系產生HepG2-純系42(一種具有HBV ayw品系之經穩定整合之1.3 mer複製之Tet-可誘導HBV表現細胞系)。Ladner SK等人，Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 41(8):1715-1720 (1997)。將HepG2-純系42細胞培養於DMEM/F-12 + Glutamax™ (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)中，其用10%胎牛血清(Life Technologies)、最終濃度為0.5 mg/ mL之G-418 (Corning, Manassas, VA, USA)及5 µg/ mL多西環素(Doxycycline) (Sigma, St. Louis, MO, USA)補充及在37℃下保持於5% CO
2
中。 HBsAg分析 將HepG2-純系42細胞以6.0 x 10
4
個細胞/孔之濃度接種於黑色透明底部96孔盤中。接種後24小時，該等細胞用200 µl/孔之培養基處理，該等培養基含有在DMSO中五倍連續稀釋之化合物。單獨DMSO係用作無藥物對照。所有孔中之最終DMSO濃度為0.5%。 使用HBsAg ELISA套組(Alpha Diagnostic International, San Antonio, TX, USE, Catalog # 4110)以測定經分泌之HBV sAg之含量(半定量)。該HBSAg ELISA分析係遵循如本文描述之製造商之方案進行。 步驟1：用移液管將100 µL經化合物或DMSO處理之樣本中之各者移至HBsAg ELISA盤內。密封盤及在室溫下培養60分鐘。 步驟2：吸取樣本及用清洗緩衝劑清洗三次。將100 µL抗體-HRP結合物分配至各孔。在室溫下培養30分鐘。 步驟3：吸取樣本及用清洗緩衝劑清洗三次。向所有孔添加100 µL TMB受質及在室溫下培養15分鐘。 步驟4：將100 µL終止溶液分配至各孔。在450 nm下量測ELISA盤之吸光度。 劑量反應曲線 產生劑量反應曲線及EC
50
值係定義為其中相較於DMSO對照，HBsAg分泌係降低50%之化合物濃度。 EC
50
值係如下測定： 測定HBsAg分泌抑制之百分率。使用下式計算HBsAg分泌抑制之抑制百分率： (X
C
– M
B
)/(M
D
– M
B
) 其中X
C
係來自經化合物處理之孔之吸光度信號；M
B
係針對管柱12 (無細胞+ HBsAg ELISA樣本緩衝劑)之平均吸光度信號(背景信號)及M
D
係來自經DMSO處理之孔之平均吸光度信號。然後藉由使用四參數曲線對數方程之非線性回歸計算EC
50
值。 採用之曲線擬合模型係XLFit劑量反應一位點模型204：y = (A+((B-A)/(1+(10^((C-x)*D)))))，其中A係最小y值，B係最大y值，C係logEC50值及D係斜率因子。 表1：所選式(I)化合物之活體外活性。