JP7038064B2 - ヒトｃｄ４０に結合するアゴニスト抗体およびその使用 - Google Patents

Description

（関連出願情報）
本出願は、２０１６年４月１８日出願の米国特許仮出願第６２／３２４，１７０号に基づく優先権を主張するものである。上記の出願の内容を参照により本明細書に援用する。

Ｔ細胞と抗原提示細胞との相互作用には、免疫反応の発現を促すさまざまなアクセサリー分子が関与している。そのような分子の１つに、ＣＤ４０Ｌに結合する腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ－Ｒ）スーパーファミリーのメンバーであるＣＤ４０がある（Ｒａｎｈｅｉｍ ＥＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ． １９９５ Ｊｕｎｅ １５；８５（１２）：３５５６－６５）。ＣＤ４０は、アミノ酸残基２７７個からなる４３～４８ｋＤａの膜貫通糖タンパク質である（Ｂｒａｅｓｃｈ－Ａｎｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９）。ＣＤ４０は抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって発現され、Ｔ細胞上のその天然リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の結合により、樹状細胞およびＢ細胞などのＡＰＣが活性化され（Ｋｈａｌｉｌ ａｎｄ Ｖｏｎｄｅｒｈｉｄｅ （２００７） Ｕｐｄａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ， ２（２）： ６１－６５）、免疫反応が促進される。ＣＤ４０は多くの腫瘍細胞でも発現され、こうした場面でのそのライゲーションは直接的細胞傷害作用を媒介し、例えば腫瘍細胞上のＣＤ４０との結合により、インビトロでアポトーシスが生じ、インビボでの腫瘍増殖が阻害される（Ｔａｉ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ６４（８）：２８４６－５２）。
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、癌治療をはじめとするさまざまな潜在的治療目的を与えるものである。例えば、アゴニストＣＤ４０抗体は、Ｔ細胞媒介性免疫のマウスモデルにおいてＣＤ４＋リンパ球により与えられるＴ細胞ヘルプに代わる機能を有することが示されており、ＣＤ４０アゴニストは、腫瘍を有する宿主において腫瘍関連抗原に対する効果的な免疫反応を誘発する（Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｎａｔｕｒｅ， ３９３（６６８４）：４７８－８０）。更に、ＣＤ４０抗体は、ワクチンにおける使用が有望視されている（Ｆｒａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：１６５４－１６６０）。しかしながら、免疫系を強力に調節する薬剤には潜在的な副作用がともなう（Ｓａｎｄｉｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ， ２：８０－９０）。そのため、ＣＤ４０抗体を治療上効果的なものとする特定の性質および機構の更なる理解、ならびに疾患を治療および／または予防するために使用することができる、ＣＤ４０に対する改良された治療抗体が求められている。

Ｒａｎｈｅｉｍ ＥＡ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ． １９９５ Ｊｕｎｅ １５；８５（１２）：３５５６－６５ Ｋｈａｌｉｌ ａｎｄ Ｖｏｎｄｅｒｈｉｄｅ （２００７） Ｕｐｄａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ， ２（２）： ６１－６５ Ｔａｉ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ６４（８）：２８４６－５２ Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｎａｔｕｒｅ， ３９３（６６８４）：４７８－８０ Ｆｒａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｖａｃｃｉｎｅ ３２：１６５４－１６６０ Ｓａｎｄｉｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４） Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ， ２：８０－９０

本発明は、有益かつ望ましい治療効果に結びつけることができる特定の機能性を有する単離された抗ＣＤ４０抗体を提供する。詳細には、抗原（例えば細胞上で発現された抗原）に対する免疫反応を増大させることが可能なアゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が作製および特性評価される。本明細書で使用するところの「抗体」なる用語は、完全長の抗体およびその抗原結合部分のことを言う。

一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、例えばＴ細胞媒介性免疫反応、Ｂ細胞活性化、および／またはサイトカイン産生を促すことにより、抗原に対する免疫反応を促進する。抗体は、単独で、または併用療法（例えばワクチン療法および／または化学療法）として投与することができる。

別の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）および／またはＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく抗原に対する免疫反応を増大させることが可能である。

別の実施形態では、抗体は、エフェクターレス定常領域を含む。一実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ２アイソタイプである（例えばヒトＩｇＧ２）。

更なる別の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、以下の性質、すなわち、
（ａ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、ヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合をブロックしない、
（ｂ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、ヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合をブロックする、
（ｃ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現されたヒトＣＤ４０の活性化、
（ｄ）腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、
（ｅ）Ｔ細胞刺激活性、
（ｆ）促進されたＢ細胞活性化、および／または
（ｇ）ＣＤ４０Ｌと相乗作用を示す能力、の１つまたはそれより多くを示す。

好ましくは、抗体はＦｃ受容体の相互作用とは無関係に作用する。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプの抗体である。

一実施形態では、アゴニスト抗体は、Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、免疫反応を増大させることができる。例えば、抗体は、ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と架橋することなく、強力なアゴニスト特性を示すことができる。これらのアゴニスト特性としては、例えば、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ８３ ＢＶ５１０、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＣＤ５４ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ３８および／またはＣＤ７１ ＰＥからなる群から選択される細胞表面マーカーの発現の増大により測定されるＴ細胞活性の増大および／またはＢ細胞活性の増大が挙げられる。

別の実施形態では、抗体は、ＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）へのＣＤ４０の結合をブロックする。特定の実施形態では、抗体は、ＣＤ４０発現細胞に対する可溶性ＣＤ４０Ｌの結合を、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％ 、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％阻害する。特定の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、例えばＦＡＣＳ、バイオレイヤー干渉法（ｂｉｏ－ｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）（ＢＬＩ）、またはＢｉａｃｏｒｅによって測定されるＣＤ４０Ｌの結合を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、例えばＦＡＣＳ、ＢＬＩ、またはＢｉａｃｏｒｅによって測定されるＣＤ４０Ｌの結合を少なくとも約８０％阻害する。

別の実施形態では、抗体は、例えばＣＤ９５の発現の増大によって測定される細胞のアポトーシスを誘導する。抗体は、特定のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、およびＦｃＲｎ）に対する特異性を有するＦｃ領域を含む様に構築することもできる。

別の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０に１０^－１０Ｍもしくはそれ未満、好ましくは１０^－１１Ｍもしくはそれ未満の平衡解離定数Ｋｄで結合することができ、かつ／またはカニクイザルＣＤ４０と交差反応することができる。

本発明の特定の抗ＣＤ４０抗体としては、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、３Ｂ６－ＮＳ、および下記に述べる関連する実施形態が挙げられる。

一実施形態では、抗体は、それらの保存的配列改変（例えば保存的アミノ酸置換）を含む、配列番号９、１０、２３、２４、３７、３８、５１、５２、６５、６６、６５、６６、７９、８０、９３、９４、１０７、１０８からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ３配列を含む。抗体は、それらの保存的配列改変を含む、配列番号１５、１６、２９、３０、４３、４４、５７、５８、７１、７２、８５、８６、９９、１００、１１３、１１４からなる群から選択される軽鎖可変領域のＣＤＲ３配列を更に含むことができる。別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ１配列は、それらの保存的配列改変を含む、配列番号７、８、２１、２２、３５、３６、４９、５０、６３、６４、７７、７８、９１、９２、１０５、１０６、および配列番号５、６、１９、２０、３３、３４、４７、４８、６１、６２、６１、６２、７５、７６、８９、９０、１０３、１０４からそれぞれ選択される。別の実施形態では、軽鎖ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ１配列は、それらの保存的配列改変を含む、配列番号１３、１４、２７、２８、４１、４２、５５、５６、６９、７０、８４、８５、９７、９８、１１１、１１２、および配列番号１１、１２、２５、２６、４０、４１、５３、５４、６７、６８、８１、８２、９５、９６、１０９、１１０からそれぞれ選択される。

別の実施形態では、抗体は、それらの保存的配列改変を含む、配列番号３、１７、３１、４５、５９、７３、８７、１０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。抗体は、それらの保存的配列改変を含む、配列番号４、１８、３２、４６、６０、７４、８８、１０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を更に含むことができる。

別の実施形態では、抗体は、以下のアミノ酸配列（それらの保存的配列改変を含む）：
（ａ）配列番号３および／または４、
（ｂ）配列番号１７および／または１８、
（ｃ）配列番号３１および／または３２、
（ｄ）配列番号４５および／または４６、
（ｅ）配列番号５９および／または６０、
（ｆ）配列番号７３および／または７４、
（ｇ）配列番号８７および／または８８、または
（ｈ）配列番号１０１および／または１０２をそれぞれ有する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む。

上記の配列のいずれかと、少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％、またはそれより大きな配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体も本発明に含まれる。上記に記載した値の間の範囲、例えば、上記の配列のいずれかと、少なくとも８０～８５％、８５～９０％、９０～９５％または９５～１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域もまた本発明に包含される。

更なる別の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域からのＣＤＲ配列を有する
（それぞれの場合で、１つまたはそれより多くのＣＤＲ内に１個の保存的配列改変、２個の保存的配列改変、または３個以下、４個以下、または５個以下の保存的配列改変を含む）。

別の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号５、７、９をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１１、１３、１５をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｂ）配列番号１９、２１、２３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号２５、２７、２９をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｃ）配列番号３３、３５、３７をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号３９、４１、４３をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号４７、４９、５１をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号５３、５５、５７をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｅ）配列番号６１、６３、６５をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号６７、６９、７１をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｆ）配列番号７５、７７、７９をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号８１、８３、８５をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｇ）配列番号８９、９１、９３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号９５、９７、９９をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号１０３、１０５、１０７をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１０９、１１１、１１３をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する（それぞれの場合で、場合により、前記ＣＤＲのうちの１つまたはそれより多くに１個の保存的配列改変、２個の保存的配列改変、または３個以下、４個以下、または５個以下の保存的配列改変を含む）。

更なる別の実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号６、８、１０をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１２、１４、１６をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｂ）配列番号２０、２２、２４をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号２６、２８、３０をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｃ）配列番号３４、３６、３８をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号４０、４２、４４をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号４８、５０、５２をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号５４、５６、５８をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｅ）配列番号６２、６４、６６をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号６８、７０、７２をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｆ）配列番号７６、７８、８０をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号８２、８４、８６をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｇ）配列番号９０、９２、９４をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号９６、９８、１００をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号１０４、１０６、１０８をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１１０、１１２、１１４をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を有する（それぞれの場合で、場合により、前記ＣＤＲのうちの１つまたはそれより多くに１個の保存的配列改変、２個の保存的配列改変、または３個以下、４個以下、または５個以下の保存的配列改変を含む）。

別の態様では、本発明は、上記に述べた特定の抗体と、ＣＤ４０に対する結合について競合する抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、ＣＤ４０に結合し、配列番号３および４、配列番号１７および１８、配列番号３１および３２、配列番号４５および４６、配列番号５９および６０、配列番号７３および７４、配列番号８７および８８、配列番号１０１および１０２にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体と、競合する。

別の態様では、本発明は、上記に述べた特定の抗体と同じエピトープに、または上記に述べた特定の抗体により認識されるＣＤ４０上のエピトープに結合する抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、配列番号３および４、配列番号１７および１８、配列番号３１および３２、配列番号４５および４６、配列番号５９および６０、配列番号７３および７４、配列番号８７および８８、配列番号１０１および１０２にそれぞれ記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体により認識されるＣＤ４０上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体３Ｃ３または３Ｇ５と同じエピトープに結合する。

別の態様では、本発明は、ヒトＣＤ４０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１３３）のアミノ酸残基１～５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸２５、２６、２８および３０からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に更に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４および３６からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３および３６に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４および３６に結合する。

上記の態様のいずれにおいても、本発明は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）の５位のアラニンのスレオニンへの置換が、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも３０％低下させる抗体を提供する。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０のＥＣＤの５位のアラニンのスレオニンへの置換は、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも５０％低下させる。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ４０のＥＣＤの５位のアラニンのスレオニンへの置換は、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも８０％低下させる。

上記の態様のいずれにおいても、本発明は、内因性のＣＤ４０ＬであってよいＣＤ４０Ｌと相乗作用を示す抗体を提供する。いくつかの実施形態では、相乗作用は、Ｒａｍｏｓ細胞とインキュベートされる場合のＣＤ９５の発現の誘導の増大である。いくつかの実施形態では、相乗作用は、ヒトＢ細胞とインキュベートされる場合のＢ細胞増殖の増大である。いくつかの実施形態では、相乗作用は、樹状細胞とインキュベートされる場合のＩＬ１２ｐ４０の発現の誘導の増大である。いくつかの実施形態では、相乗作用は、ＣＤ９５の発現に関して測定される。

別の態様では、本発明は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸残基１３～１５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基に結合する抗体を提供する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸３３、３４および３６からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に結合する。

本発明の抗体は、完全長、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体、またはこれらの配列変異体であってよい。また、抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ、単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、または２つまたはそれより多くの単離されたＣＤＲの組み合わせなどのフラグメントであってもよい。抗体は、これらに限定されるものではないが、完全なヒト抗体、ヒト化抗体、およびキメラ抗体を含む任意の既知の型または種の抗体であってよい。好ましくは、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。ＩｇＧ２配列に、Ｎ末端リシンの欠失および／または当該技術分野では周知のさまざまな他の突然変異などの特定の改変を行うことができる点は認識されるであろう。したがって、ＩｇＧ２抗体には、例えば、天然のヒトＩｇＧ２配列と少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、および好ましくは少なくとも９９％の配列同一性を有する定常ドメインを有する抗体が含まれる。

本発明は、腫瘍抗原、自己抗原、または病原体の成分などの抗原（フラグメント、エピトープ、および抗原決定基を含む）に連結された本発明の抗体からなる分子結合体も提供する。例えば、抗原には、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＴＲＰ－２、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＣＯ－５８、ＭＮ（ｇｐ２５０）、イディオタイプ、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、および高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）ＭＡＲＴ１、メラン－Ａ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＷＴ１、Ｈｅｒ２、メソセリン、または高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）などの腫瘍抗原が含まれ得る。

別の実施形態では、分子複合体は、細胞毒性剤、免疫抑制剤、または化学療法剤などの治療剤を更に含む。

別の態様では、本発明は、異なる結合特異性を有する第２の機能的部分に連結された本発明の抗体からなる二重特異性分子を提供する。例えば、一実施形態では、第２の分子は、Ｔ細胞受容体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４０、またはＣＴＬＡ－４）、ＮＫ受容体（例えば、ＣＤ５６）、Ｂ細胞受容体（例えば、ＣＤ２０）、または別の腫瘍壊死因子受容体（例えば、ＣＤ９５）に結合することができる。

薬学的に許容される担体と配合された、本明細書に記載の抗体、分子結合体、または二重特異性分子を含む組成物も提供される。組成物は更に、アジュバント、免疫賦活剤（例えば、ＣＤ４０リガンド、ＦＬＴ３リガンド、サイトカイン、コロニー刺激因子、抗ＣＴＬＡ－４抗体（これに限定されないが、イピリムマブを含む）、抗ＰＤ－１抗体（これに限定されないが、ＭＰＤＬ３２８０Ａまたはデュルバルマブを含む）、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ－４０抗体、ＬＰＳ（内毒素）、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、塩酸レバミソール、静脈内免疫グロブリンおよびＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト（例えば、Ｐｏｌｙ ＩＣなどのＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、およびＴＬＲ９アゴニスト））、免疫抑制剤、別の抗体、または抗原、またはＳＴＩＮＧアゴニストを更に含むことができる。

本発明の分子結合体または組成物中に（例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体と併用されるワクチンに）含まれ得る腫瘍抗原には、腫瘍細胞上に存在し（または関連し）、正常細胞上には通常存在しない任意の抗原または抗原決定基、または正常（非腫瘍）細胞よりも大きな量で腫瘍細胞上に存在するかまたは関連している抗原または抗原決定基、または正常（非腫瘍）細胞上にみられるものと異なる形態で腫瘍細胞上に存在する抗原または抗原決定基が含まれる。かかる抗原には、腫瘍特異的抗原（腫瘍特異的膜抗原を含む）、腫瘍関連抗原（腫瘍関連膜抗原を含む）、腫瘍上の胚抗原、増殖因子受容体、増殖因子リガンド、および癌に関連する任意の他のタイプの抗原が含まれる。腫瘍抗原は、例えば、上皮癌抗原（例えば、乳癌、胃腸管癌、肺癌）、前立腺特異的癌抗原（ＰＳＡ）または前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、膀胱癌抗原、肺（例えば、小細胞肺癌）癌抗原、結腸癌抗原、卵巣癌抗原、脳腫瘍抗原、胃癌抗原、腎細胞癌抗原、膵臓癌抗原、肝臓癌抗原、食道癌抗原、頭頸部癌抗原、または結腸直腸癌抗原であってよい。例えば、抗原には、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＴＲＰ－２、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＣＯ－５８、ＭＮ（ｇｐ２５０）、イディオタイプ、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２、ＭＵＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、および高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）ＭＡＲＴ１、メラン－Ａ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＷＴ１、Ｈｅｒ２、またはメソテリンなどの腫瘍抗原が含まれ得る。本発明により（例えば本発明の抗ＣＤ４０抗体と併用されるワクチンに）用いられる他の抗原としては、それらの例を本明細書に開示するウイルス、細菌、寄生虫および真菌などの感染症病原体由来の抗原が挙げられる。

本発明の抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域の全体または部分をコードする核酸分子、ならびにこれらの核酸を含む発現ベクター、およびかかる発現ベクターを有する宿主細胞も提供される。一実施形態では、核酸配列は、配列番号８７～１１２からなる群、またはこれらの核酸配列と例えば少なくとも約８５％、９０％、または９５％の同一性を有する核酸配列からそれぞれ選択される。

本発明は、本明細書に記載のアゴニスト抗体を用いて対象において抗原に対する免疫反応（例えば、Ｔ細胞媒介免疫反応、および／またはＮＫ媒介反応、および／またはＢ細胞媒介性免疫反応）を促進する方法も提供する。一実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ４０（各種の免疫細胞型で発現する）に結合することにより、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の細胞増殖および活性化を誘導し、Ｂ細胞、ならびにエフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞を活性化し、これにより、例えば腫瘍細胞に対する免疫反応を促進する。したがって、一実施形態では、本方法は、本発明の抗体（例えば、完全長抗体またはその抗原結合部分）、組成物、または二重特異性分子を抗原に対する免疫反応を誘導または促進するうえで有効な量で投与することを含む。別の実施形態では、本方法は、抗体、組成物、または二重特異性分子と同時に、別々に、または順次に抗原を投与することを更に含む。

ＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害する（例えば癌の治療において）ための方法も提供される。例えば、本発明のアゴニスト抗体は、免疫エフェクター細胞を動員する細胞表面分子の発現を増大させることが示されており、これにより、細胞死（例えばアポトーシス）をもたらす。したがって、別の実施形態では、本方法は、ＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害するうえで有効な量の本発明の抗体（例えば、完全長抗体またはその抗原結合部分）、組成物または二重特異性分子を投与するかまたはこれらと細胞を接触させることを含む。

抗原に連結された細胞上の受容体に結合する分子（例えば上記に述べたＣＤ４０抗体）を投与することにより、抗原を、対象内の細胞、例えば抗原提示が可能な細胞（末梢血単核球（ＰＢＭＣ）など）、単球（ＴＨＰ－１など）、Ｂリンパ芽球細胞（Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８Ｂ－ＬＣＬなど）および単球由来ＤＣにターゲティングさせるための方法が更に提供される。

本明細書に記載の方法は、さまざまな疾患、特に癌（例えば、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄単球性、単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、多血症ベラリンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および細胞癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（たとえば、唇、舌、口および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌および泌尿器系癌）の治療に有用である。特定の癌としては、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択されるＣＤ４０発現腫瘍が挙げられる。

別の実施形態では、本方法を使用して細菌、真菌、ウイルス、または寄生虫感染を治療または予防することができる。

ＣＤ４０発現細胞としては、これらに限定されるものではないが、樹状細胞（ＤＣ）、Ｂ細胞、マクロファージ、および単球などの抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む、ＣＤ４０を発現するあらゆる細胞が挙げられる。ＣＤ４０は、上皮細胞、内皮細胞、および血小板などの他の細胞型でも発現される。ＣＤ４０の発現は、Ｂ細胞リンパ腫及び腎臓癌細胞などのさまざまな腫瘍細胞で示されている。特定の実施形態では、ＣＤ４０発現細胞には、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、およびＤａｕｄｉ細胞などの細胞株が含まれる。別の実施形態では、ＣＤ４０発現細胞は、腫瘍細胞または癌細胞である。別の実施形態では、ＣＤ４０発現細胞には、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、腫瘍または癌細胞に浸潤することが見出されているＴ細胞（腫瘍浸潤リンパ球とも呼ばれる）が含まれる。

別の実施形態では、本発明は、対象において抗原（例えば腫瘍抗原）に対する免疫反応を誘導または促進するための薬剤の製造における、本明細書に記載の抗体、組成物、または二重特異性分子の使用を提供する。更なる実施形態では、本発明は、（１）抗原に対する免疫反応を増大させ、（２）ＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害し、かつ／または（３）抗原をＡＰＣにターゲティングするための薬剤の製造における本明細書に記載の抗体または組成物の使用を提供する。

本発明は、（１）生物学的試料を本明細書に記載の抗体と接触させ（この場合、抗体は検出可能な物質で標識される）、および（２）ＣＤ４０に結合した抗体を検出することにより、生物学的試料中のＣＤ４０の有無を検出するための方法も提供する。
本発明の組成物（例えば抗体および／または二重特異性分子）と、場合により使用説明書とを含むキットも提供される。キットは、サイトカインまたは補体などの少なくとも１つの更なる試薬、または１種またはそれより多くの本発明の更なる抗体を更に含むことができる。

本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲より明らかとなろう。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
ヒトＣＤ４０に結合するアゴニスト単離モノクローナル抗体であって、
（ａ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、
（ｂ）ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導することなく、
（ｃ）ＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく、かつ／または
（ｄ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、かつＣＤ４０Ｌと相乗作用を示すことが可能で、
のいずれかで、ＡＰＣを直接活性化し、かつ／または抗原に対する免疫反応を増大させる、抗体。
（項目２）
以下の性質：
（ａ）細胞アポトーシスを誘導すること、
（ｂ）ＩＬ－１２ｐ４０の発現の増大により測定される細胞のＴ細胞刺激活性を促進すること、
（ｃ）ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、およびＣＤ８３
ＢＶ５１０、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＣＤ５４ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５およびＣＤ７１ ＰＥからなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面マーカーの発現の増大により測定されるＢ細胞活性化を促進すること、
（ｄ）１０ ^－１０ Ｍもしくはそれ未満の平衡解離定数ＫｄでヒトＣＤ４０に結合すること、
（ｅ）カニクイザルＣＤ４０と交差反応すること、および／または
（ｆ）ヒトＣＤ４０に結合してＮＦｋＢ駆動型レポーター細胞株を用いて測定される細胞活性化を生じること、
の少なくとも１つを更に示す、項目１に記載の抗体。
（項目３）
ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む、項目１に記載の抗体。
（項目４）
ヒトＣＤ４０に結合し、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単離抗体であって、前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２
と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列をそれぞれ含む、抗体。
（項目５）
前記重鎖可変領域および軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２
と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をそれぞれ含む、項目４に記載の抗体。
（項目６）
ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号３および／または４、
（ｂ）配列番号１７および／または１８、
（ｃ）配列番号３１および／または３２、
（ｄ）配列番号４５および／または４６、
（ｅ）配列番号５９および／または６０、
（ｆ）配列番号７３および／または７４、
（ｇ）配列番号８７および／または８８、または
（ｈ）配列番号１０１および／または１０２
に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む、単離抗体。
（項目７）
ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２
に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域からのＣＤＲ配列を含む、単離抗体。
（項目８）
ヒトＣＤ４０に結合し、配列番号１７および１８に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離抗体。
（項目９）
ヒトＣＤ４０に結合し、配列番号１３５および１３６に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖および軽鎖を含む、単離抗体。
（項目１０）
ヒトＣＤ４０に結合し、
（ａ）配列番号５、７、９をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１１、１３、１５をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｂ）配列番号１９、２１、２３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号２５、２７、２９をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｃ）配列番号３３、３５、３７をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号３９、４１、４３をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｄ）配列番号４７、４９、５１をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号５３、５５、５７をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｅ）配列番号６１、６３、６５をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号６７、６９、７１をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｆ）配列番号７５、７７、７９をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号８１、８３、８５をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、
（ｇ）配列番号８９、９１、９３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号９５、９７、９９をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、または
（ｈ）配列番号１０３、１０５、１０７をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および／または配列番号１０９、１１１、１１３をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列
を含む、単離抗体。
（項目１１）
ヒトＣＤ４０に結合し、配列番号１９、２１、２３をそれぞれ含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、および配列番号２５、２７、２９をそれぞれ含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む、単離抗体。
（項目１２）
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２
に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体とヒトＣＤ４０上の同じエピトープに結合する、単離抗体。
（項目１３）
（ａ）配列番号３および４、
（ｂ）配列番号１７および１８、
（ｃ）配列番号３１および３２、
（ｄ）配列番号４５および４６、
（ｅ）配列番号５９および６０、
（ｆ）配列番号７３および７４、
（ｇ）配列番号８７および８８、または
（ｈ）配列番号１０１および１０２
に記載されるアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体と、ヒトＣＤ４０に対する結合について競合する、単離抗体。
（項目１４）
抗体３Ｃ３または３Ｇ５と同じエピトープに結合する、アゴニスト単離モノクローナル抗体。
（項目１５）
ヒトＣＤ４０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１３３）のアミノ酸残基１～５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基に結合する、アゴニスト単離モノクローナル抗体。
（項目１６）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸２５、２６、２８および３０からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に更に結合する、項目１５に記載の抗体。
（項目１７）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４および３６からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に結合する、項目１５または１６に記載の抗体。
（項目１８）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３および３６に結合する、項目１７に記載の抗体。
（項目１９）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４および３６に結合する、項目１８に記載の抗体。
（項目２０）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）の５位のアラニンのスレオニンへの置換が、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも３０％低下させる、項目１５～１９のいずれか１項に記載の抗体。
（項目２１）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）の５位のアラニンのスレオニンへの置換が、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも５０％低下させる、項目２０に記載の抗体。
（項目２２）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）の５位のアラニンのスレオニンへの置換が、抗体の結合をヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）への結合と比較して少なくとも８０％低下させる、項目２０に記載の抗体。
（項目２３）
ＣＤ４０Ｌと組み合わされる場合に相乗作用を示す、項目１４～１９のいずれか１項に記載の抗体。
（項目２４）
前記相乗作用が、Ｒａｍｏｓ細胞とインキュベートされる場合のＣＤ９５の発現の誘導の増大である、項目２３に記載の抗体。
（項目２５）
前記相乗作用が、ヒトＢ細胞とインキュベートされる場合のＢ細胞増殖の増大である、項目２３に記載の抗体。
（項目２６）
前記相乗作用が、樹状細胞とインキュベートされる場合のＩＬ１２ｐ４０の発現の誘導の増大である、項目２３に記載の抗体。
（項目２７）
前記相乗作用が、ＣＤ９５の発現に関して測定される、項目２３に記載の抗体。
（項目２８）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸残基１３～１５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基に結合する、アゴニスト単離モノクローナル抗体。
（項目２９）
ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸３３、３４および３６からなる群から選択される１つまたはそれより多くのアミノ酸に結合する、項目２８に記載の抗体。
（項目３０）
ヒト抗体である、項目１～２９のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３１）
ヒト定常領域を含む、項目１～３０のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３２）
抗原結合フラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、項目１～３０のいずれか１項に記載の抗体。
（項目３３）
抗原に連結された、項目１～３２のいずれか１項に記載の抗体を含む、分子結合体。
（項目３４）
前記抗体と異なる結合特異性を有する第２の分子に連結された、項目１～３２のいずれか１項に記載の抗体を含む、二重特異性分子。
（項目３５）
項目１～３２のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖、重鎖、または軽鎖と重鎖の両方の可変領域をコードする、単離核酸。
（項目３６）
項目３５に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目３７）
項目３６に記載の発現ベクターで形質転換された、細胞。
（項目３８）
項目１～３４のいずれか１項に記載の抗体、分子結合体、または二重特異性分子と、担体と、を含む、組成物。
（項目３９）
アジュバントを更に含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４０）
１種またはそれより多くの他の抗体を更に含む、項目３８に記載の組成物。
（項目４１）
前記１種以上の他の抗体が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＤＲ３またはＣＤ２８Ｈに結合する、項目４０に記載の組成物。
（項目４２）
対象において抗原に対する免疫反応を誘導または促進するための方法であって、抗原に対する免疫反応を誘導または促進するうえで有効な量の、項目１～３４および３８～４１のいずれか１項に記載の前記抗体、分子結合体、組成物、または二重特異性分子を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目４３）
前記抗原を投与する工程を更に含む、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記抗原が、前記抗体、組成物、または二重特異性分子から同時に、別々に、または順次投与される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
ＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害する方法であって、ＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害するうえで有効な量の、項目１～３４および３８～４１のいずれか１項に記載の前記抗体、組成物、または二重特異性分子と前記細胞を接触させることを含む、方法。
（項目４６）
対象の疾患を治療するための方法であって、前記疾患を治療するうえで有効な量の、項目１～３４および３８～４１のいずれか１項に記載の前記抗体、組成物、または二重特異性分子を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目４７）
前記疾患が、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される癌である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記抗体が、ヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合をブロックしない、項目４２～４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
１またはそれより多くの治療剤を前記対象に投与することを更に含む、項目４２～４
８のいずれか１項に記載の方法。
（項目５０）
前記治療剤が別の抗体である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記抗体が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／または抗ＣＴＬＡ－４抗体である、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記第１の抗体と前記第２の抗体とが同時に投与される、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記第１の抗体と前記第２の抗体とが順次投与される、項目５０に記載の方法。
（項目５４）
対象において抗原に対する免疫反応を誘導または促進するために使用するための、項目１～３２のいずれか１項に記載の抗体。
（項目５５）
癌の治療用の薬剤の製造における、項目１～３２のいずれか１項に記載の抗体の使用。

図１は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ^ｅ装置（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ社、カリフォルニア州、メンローパーク）を製造者のガイドラインにしたがって使用してバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）および反応結合速度定数（ｋ_ｏｎ）および解離速度定数（ｋ_ｏｆｆ）の値を示す。 図２は、ＥＬＩＳＡで吸光度（ＯＤ_４５０）を用い、組換え精製ヒトＣＤ４０をコートしたマイクロタイタープレートへのヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６を含む）の結合を抗体濃度の関数として示したグラフである。 図３は、ヒトＣＤ４０抗体濃度（３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６）の関数として、フローサイトメトリーによる平均蛍光強度（ＭＦＩ）として精製ヒトＰＢＭＣ（左）およびカニクイザルＰＢＭＣ（右）に対する結合を示したグラフである。 図４Ａおよび４Ｂは、ＥＬＩＳＡによる、ＣＤ４０タンパク質への可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）の結合に対するヒトＣＤ４０抗体の影響を示したグラフである。 図４Ａおよび４Ｂは、ＥＬＩＳＡによる、ＣＤ４０タンパク質への可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）の結合に対するヒトＣＤ４０抗体の影響を示したグラフである。 表面にヒトＣＤ４０を発現しているＲａｊｉ細胞上のＣＤ４０に対するヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６）の結合のフローサイトメトリーによる分析である。 図６は、表面にヒトＣＤ４０を発現しているＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ４０に対するヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６）の結合のフローサイトメトリーによる分析である。 図７Ａおよび７Ｂは、ヒトＣＤ４０抗体によるＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ９５の誘導を示すグラフである。 図８Ａおよび８Ｂは、示される以下のマーカー、すなわち、ＣＤ５４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８６、ＣＤ８３、および％ＣＤ８３＋細胞の発現レベルの変化に基づいた、ヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３および３Ｇ５）による樹状細胞（ＤＣ）の活性化を示すグラフである。 図８Ａおよび８Ｂは、示される以下のマーカー、すなわち、ＣＤ５４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ８６、ＣＤ８３、および％ＣＤ８３＋細胞の発現レベルの変化に基づいた、ヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３および３Ｇ５）による樹状細胞（ＤＣ）の活性化を示すグラフである。 図９Ａおよび９Ｂは、ヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３および３Ｇ５）によるＩＬ－１２ｐ４０の誘導を示すグラフである。 図１０Ａおよび１０Ｂは、示される以下のマーカー、すなわち、ＣＤ５４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２３、％ＣＤ２３ ＋細胞、ＣＤ６９、ＣＤ８６、ＣＤ３８、およびＣＤ７１の発現レベルの変化に基づいた、ヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３および３Ｇ５）によるＢ細胞の活性化を示すグラフである。 図１０Ａおよび１０Ｂは、示される以下のマーカー、すなわち、ＣＤ５４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２３、％ＣＤ２３ ＋細胞、ＣＤ６９、ＣＤ８６、ＣＤ３８、およびＣＤ７１の発現レベルの変化に基づいた、ヒトＣＤ４０抗体（３Ｃ３および３Ｇ５）によるＢ細胞の活性化を示すグラフである。 図１１Ａおよび１１Ｂは、ＣＤ４０を発現しているルシフェラーゼレポーター細胞株を用いた、ヒトＣＤ４０抗体によるＮＦｋＢ活性化を示すグラフである。 図１１Ａおよび１１Ｂは、ＣＤ４０を発現しているルシフェラーゼレポーター細胞株を用いた、ヒトＣＤ４０抗体によるＮＦｋＢ活性化を示すグラフである。 ＣＤ４０ヒト抗体クローン３Ｃ３および３Ｇ５の腹腔内投与（０．３ｍｇ／投与）による処理後のＳＣＩＤマウス腫瘍モデル（Ｒａｊｉ細胞）における腫瘍増殖および生存率の結果を示すグラフである。 ＣＤ４０ヒト抗体クローン３Ｃ３および３Ｇ５の腹腔内投与（０．３ｍｇ／投与）による処理後のＳＣＩＤマウス腫瘍モデル（Ｒａｍｏｓ細胞）における腫瘍増殖および生存率の結果を示すグラフである。 図１４Ａおよび１４Ｂは、示されるＣＤ４０抗体またはアイソタイプコントロール（ＩｇＧ２）とインキュベートした標識されたＰＢＭＣのＴ細胞増殖を示すグラフである。 図１４Ａおよび１４Ｂは、示されるＣＤ４０抗体またはアイソタイプコントロール（ＩｇＧ２）とインキュベートした標識されたＰＢＭＣのＴ細胞増殖を示すグラフである。 ＣＤ４０抗体３Ｃ３および３Ｇ５を用いた、Ｆｃ受容体相互作用とは無関係なＣＤ４０への結合を示すグラフである。 ＣＤ４０抗体３Ｃ３および３Ｇ５を用いたＮＦｋｂ活性化を示すグラフである。 ＣＤ４０抗体３Ｃ３および３Ｇ５を用いたＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ９５の誘導を示すグラフである。 抗ＣＤ４０／抗原融合ＡＰＣターゲティングワクチンコンストラクトの一例の概略図を示す。 Ｒａｍｏｓ細胞上のＣＤ９５発現に対するＣＤ４０抗体３Ｃ３と可溶性ＣＤ４０Ｌとの相乗作用を示すグラフである。 Ｎ末端ヒトκ系軽鎖およびＣ末端Ｆｌａｇタグを有する、アミノ酸残基１～１７３にわたった完全長細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードした可溶性ＣＤ４０のｃＤＮＡの概略図である。 サルＣＤ４０ ＥＣＤのアミノ酸配列（上）およびマウスＣＤ４０ ＥＣＤのアミノ酸配列（下）とヒトＣＤ４０ ＥＣＤのアミノ酸配列とのアラインメントを示す。生成するフラグメントが示されている。 異なる点突然変異またはそれらの組み合わせを有するヒトＣＤ４０ ＥＣＤフラグメントＡ（アミノ酸残基１～５、上）またはヒトＣＤ４０ ＥＣＤフラグメントＤ（アミノ酸残基３３～３６、下）に対するＣＤ４０抗体３Ｃ３の結合を示すグラフである。 図２３Ａ～２３Ｃは、示した時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定されたアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ、２３Ａ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ、２３Ｂ）、およびクレアチンキナーゼ（２３Ｃ）のレベルを示すグラフである。 図２３Ａ～２３Ｃは、示した時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定されたアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ、２３Ａ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ、２３Ｂ）、およびクレアチンキナーゼ（２３Ｃ）のレベルを示すグラフである。 図２３Ａ～２３Ｃは、示した時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定されたアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ、２３Ａ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ、２３Ｂ）、およびクレアチンキナーゼ（２３Ｃ）のレベルを示すグラフである。 図２４は、示した時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理したサルの血液で測定されたＩＬ－１２（ｐｇ／ｍＬ）のレベルを示すグラフである。 図２５Ａ～２５Ｃは、示される時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定された白血球（２５Ａ）、好中球（２５Ｂ）、およびリンパ球（２５Ｃ）の量を示すグラフである。 図２５Ａ～２５Ｃは、示される時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定された白血球（２５Ａ）、好中球（２５Ｂ）、およびリンパ球（２５Ｃ）の量を示すグラフである。 図２５Ａ～２５Ｃは、示される時点においてＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理する前後にサルで測定された白血球（２５Ａ）、好中球（２５Ｂ）、およびリンパ球（２５Ｃ）の量を示すグラフである。 図２６は、ＣＤ４０抗体３Ｃ３または３Ｇ５で処理したサルにおけるＢ細胞の量の、時間（日数）にともなうベースラインからの変化率（％）を示すグラフである。 図２７は、２ｍｇ（左）または０．２ｍｇ（右）のＣＤ４０抗体３Ｃ３（四角）、３Ｇ５（菱形）、または生理食塩水（丸）で処理後のベースラインと比較してのＢ細胞上でのＨＬＡ－ＤＲの発現を示すグラフである。 図２８は、細胞をいずれかの抗ＣＤ４０ｍＡｂ ３Ｃ３の存在下で培養した場合のＢ細胞の増殖を示すグラフである。 図２９および３０は、Ｂ細胞における抗ＣＤ４０ｍＡｂ ３Ｃ３とＣＤ４０Ｌとの組み合わせの相乗作用を示すグラフである。 図２９および３０は、Ｂ細胞における抗ＣＤ４０ｍＡｂ ３Ｃ３とＣＤ４０Ｌとの組み合わせの相乗作用を示すグラフである。 図３１は、抗ＣＤ４０ｍＡｂ ３Ｃ３とインキュベートした場合の全血中のサイトカイン応答を示した表である。

本発明は、免疫機能のアップレギュレーション（例えばワクチン療法におけるＴ細胞媒介性免疫反応、癌治療におけるＮＫ活性化など）、細胞増殖の阻害（例えば癌治療における）、および／またはＡＰＣによる抗原のプロセシングおよび提示の促進（例えばワクチン療法における）を含む有意な治療効果に相関する特定の機能性を示す抗ＣＤ４０抗体を提供する。これらの機能特性としては、例えば、Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、かつ／または抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく、抗原に対する免疫反応を増大させることが挙げられる。更なる機能特性としては、例えば（１）ＣＤ４０発現細胞へのＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）の結合の少なくとも５０％、少なくとも６０％または少なくとも７０％の阻害（例えば完全なまたは部分的なブロッキング）、（２）Ｆｃ受容体の結合とは無関係なヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合のブロッキング、（３）細胞アポトーシスの誘導（例えばＣＤ９５の発現の増大によって測定される）、（４）Ｔ細胞刺激活性の増大（例えばＩＬ－１２ｐ４０の発現の増大により測定される）、および／または（５）Ｂ細胞活性化の増大（例えばＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、およびＣＤ８３ ＢＶ５１０、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＣＤ５４ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５およびＣＤ７１ ＰＥからなる群から選択される少なくとも１種の細胞表面マーカーの発現の増大によって測定される）が挙げられる。

本発明をより容易に理解できるようにするため、特定の用語をまず定義する。更なる定義が、「発明を実施するための形態」の全体を通じて記載される。

「ＣＤ４０」（「ＣＤ４０分子」、「Ｂｐ５０」、「ＣＤＷ４０」、「ＴＮＦＲＳＦ５」、「ｐ５０」、「Ｂ細胞表面抗原ＣＤ４０」、「Ｂ細胞関連分子」、「ＣＤ４０抗原」、「ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー５」、「ＣＤ４０ＩＩ型アイソフォーム」、「ＣＤ４０Ｌ受容体」、「神経増殖因子受容体関連Ｂリンパ球活性化分子」、または「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５」とも称される）なる用語は、リガンドであるＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４とも称される）に結合するＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである受容体のことを言う。ＣＤ４０は、Ｔ細胞依存性のイムノグロブリンのクラススイッチおよびメモリーＢ細胞の発生を含む幅広い免疫および炎症反応を媒介する。「ＣＤ４０」なる用語には、細胞が自然に発現するＣＤ４０の任意の変異体またはアイソフォームが含まれる（例えば、アクセッション番号Ｐ２５９４２を有するＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）に寄託されたヒトＣＤ４０）。したがって、本発明の抗体は、ヒト以外の生物種からのＣＤ４０と交差反応することができる。あるいは、抗体はヒトＣＤ４０に対する特異性を有し、他の生物種との交差反応性を示さないものとすることもできる。ＣＤ４０またはその任意の変異体およびアイソフォームは、これらを自然に発現する細胞もしくは組織から単離するか、または当該技術分野では周知の手法および／または本明細書に記載の手法を用いて組換えにより作製することができる。好ましくは、抗体は、正常なグリコシル化パターンを有するｈＣＤ４０に対して標的化される。

Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）（アクセッション番号Ｐ２５９４２）は、ヒトＣＤ４０のアミノ酸配列を以下のものとして報告している（配列番号１）。すなわち、
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬ ＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰ ＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱ ＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬ ＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤ ＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬ ＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴ ＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨ ＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲ ＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤ ＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨ ＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶ ＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧ ＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤ ＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦ ＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫ ＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫ ＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮ ＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤ ＲＬＲＡＬＶＶＩＰＩ ＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬ ＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫ ＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫ ＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤ ＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰ ＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰ ＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲ ＩＳＶＱＥＲＱ

「ＣＤ４０Ｌ」（「ＣＤ４０リガンド」、「ＣＤ４０７Ｌ」、または「ＣＤ１５４」とも称される）なる用語は、ＣＤ４０のリガンドのことを言う（例えば、Ｓｃｈｏｅｎｂｅｃｋ ａｎｄ Ｌｉｂｂｙ （２００１） Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ， ５８（１）：４－４３を参照）。ＣＤ４０Ｌは、主として活性化したＴ細胞で発現され、ＴＮＦスーパーファミリーの分子のメンバーである。ＣＤ４０Ｌは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＣＤ４０に結合し、それにより標的細胞のタイプに応じて多くの作用がもたらされる（Ｐａｒｈａｍ， Ｐｅｔｅｒ （２００４）． Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ （２ｎｄ ｅｄ．）． Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ． Ｐｐ． １６９－１７３）。
Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）（アクセッション番号ＮＰ＿００００６５）は、ヒトＣＤ４０Ｌのアミノ酸配列を以下のものとして報告している（配列番号２）。すなわち、
ＭＩＥＴＹＮＱＴＳＰ ＲＳＡＡＴＧＬＰＩＳ ＭＫＩＦＭＹＬＬＴＶ ＦＬＩＴＱＭＩＧＳＡ ＬＦＡＶＹＬＨＲＲＬ ＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨ ＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱ ＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳ ＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱ ＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬ ＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳ ＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰ ＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡ ＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷ ＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮ ＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱ ＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹ ＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮ ＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩ ＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲ ＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮ ＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱ ＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥ ＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮ ＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧ ＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫ

本明細書で言うところの「抗体」なる用語には、全抗体およびその抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部分」）または１本鎖が含まれる。一つの好ましい実施形態では、「抗体」とは、ジスルフィド結合で相互連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖と２本の軽（Ｌ）鎖とからなる糖タンパク質、またはその抗原結合部位のことを言う。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略称する）と重鎖定常領域とからなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインで構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略称する）と軽鎖定常領域とからなる。軽鎖定常領域は、１個のドメインＣＬで構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が間に介在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に分けることができる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端へとＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列された３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成されている。重鎖および軽鎖の各可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含んでいる。抗体の定常領域は、免疫系のさまざまな細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第一成分（Ｃ１ｑ）をはじめとする、宿主の組織または因子に対するイムノグロブリンの結合を媒介し得る。

本明細書で使用するところの、抗体の「抗原結合部分」なる用語（または単純に「抗体部分」）とは、抗原（例えばヒトＣＤ４０）に特異的に結合する能力を保持した抗体の１またはそれより多くのフラグメントのことを言う。かかる「フラグメント」は、例えばアミノ酸約８個～約１５００個の長さ、好適にはアミノ酸約８個～約７４５個の長さ、好適にはアミノ酸約８個～約３００個、例えば約８個～約２００個、またはアミノ酸約１０個～約５０個もしくは１００個の長さである。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」なる用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価のフラグメントであるＦａｂフラグメント、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントからなる２価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント、（ｉｉｉ）Ｖ_ＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、（ｉｖ）抗体の一本のアームのＶ_ＬおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．， （１９８９） Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意に連結されてもよい２個またはそれより多くの単離ＣＤＲの組み合わせが挙げられる。更に、Ｆｖフラグメントの２個のドメインＶ_ＬとＶ_Ｈは別々の遺伝子によってコードされているが、これらのドメインは、組換え法を用い、Ｖ_Ｌ領域とＶ_Ｈ領域とが連結されて１価の分子を形成した１本のタンパク質鎖として生成されることを可能とする合成リンカーにより、連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６； およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照）。このような一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合部分」なる用語にも包含されるものとする。これらの抗体フラグメントは当業者には周知の従来の方法を用いて得られ、フラグメントは完全な抗体と同じ要領でスクリーニングされて使用に供される。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術、または完全なイムノグロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって作製することができる。

「二重特異性」または「二官能性抗体」とは、２つの異なる重鎖／軽鎖のペアおよび２つの異なる結合部位を有する人工的なハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含むさまざまな方法によって作製することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ， Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ７９：３１５－３２１ （１９９０）； Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４８， １５４７－１５５３ （１９９２）を参照。

本明細書で使用するところの「モノクローナル抗体」なる用語は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性およびアフィニティーを示す抗体のことを言う。したがって、「ヒトモノクローナル抗体」なる用語は、単一の結合特異性を示し、ヒト生殖細胞系のイムノグロブリン配列から得られる可変領域および場合により定常領域を有する抗体のことを言う。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞と融合されたヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、例えばトランスジェニックマウスなどのトランスジェニック非ヒト動物から得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。

本明細書で使用するところの「組換えヒト抗体」なる用語は、（ａ）ヒトイムノグロブリン遺伝子を遺伝子導入または染色体導入された動物（例えばマウス）、またはこれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え体、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作出、または単離されたあらゆるヒト抗体、および（ｄ）ヒトイムノグロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列に対するスプライシングをともなう他の任意の手段によって調製、発現、作出、または単離された抗体が挙げられる。このような組換えヒト抗体は、生殖細胞系遺伝子によってコードされた特定のヒト生殖細胞系イムノグロブリン配列を用いた可変領域および定常領域を含むが、例えば抗体の成熟過程で生じるその後の遺伝子再構成および突然変異を含む。当該技術分野では周知であるように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ （２００５） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２３（９）：１１１７－１１２５を参照）、可変領域は、再構成されて外来抗原に対して特異的な抗体を生成する異なる遺伝子によってコードされた抗原結合ドメインを含む。可変領域は、再構成以外に、外来抗原に対する抗体のアフィニティーを高めるために複数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異または超突然変異と呼ばれる）によって更に改変することができる。定常領域は更に抗原に応じて変化する（すなわちアイソタイプスイッチ）。したがって、抗原に応じて軽鎖および重鎖イムノグロブリンのポリペプチドをコードした、再構成および体細胞突然変異した核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有さないが、代わりに実質的に同一または同様のものとなる（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。

「ヒト抗体」なる用語には、ヒト生殖細胞系イムノグロブリン配列の可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体が含まれる。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系イムノグロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ランダムに、またはインビトロで部位特異的突然変異誘発により、またはインビボで体細胞突然変異により導入された突然変異）を含み得る（Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）： ８５６－８５９）； Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９４） Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１； Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｄ． （１９９５） Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｖｏｌ． １３： ６５－９３， およびＨａｒｄｉｎｇ， Ｆ． ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９５） Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ７６４：５３６－５４６を参照）。しかしながら、「ヒト抗体」なる用語には、例えばマウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系から得たＣＤＲ配列をヒトのフレームワーク配列上にグラフトした抗体（すなわちヒト化抗体）は含まれない。

本明細書で使用するところの「異種抗体」は、かかる抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関連して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物からなるものではない生物に見られるものに対応したアミノ酸配列またはコーディング核酸配列を有する抗体であって、一般にトランスジェニック非ヒト動物の生物種以外の種に由来する抗体のことを言う。

本明細書で使用するところの「単離抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体のことを言うものとする（例えば、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する単離抗体は、ヒトＣＤ４０以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ヒトＣＤ４０のエピトープに特異的に結合する単離抗体は、異なる種に由来する他のＣＤ４０タンパク質と交差反応性を有し得る。しかしながら、抗体は常にヒトＣＤ４０に結合することが好ましい。更に、単離抗体は、通常は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない。本発明の一実施形態では、異なるＣＤ４０特異性を有する「単離」抗体の組み合わせが、明確に定義された組成物中で組み合わされる。

「エピトープ」または「抗原決定基」なる用語は、イムノグロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位のことを言う。エピトープは、連続的なアミノ酸またはタンパク質の３次フォールディングによって隣接した非連続的アミノ酸から形成され得る。連続的なアミノ酸から形成されたエピトープが、変性溶媒に曝露される際に一般的に保持されるのに対して、３次フォールディングによって形成されたエピトープは一般的に変性溶媒で処理すると失われる。エピトープは通常、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を固有の空間的コンフォメーションで含む。どのエピトープが特定の抗体によって結合されるかを決定するための方法（すなわちエピトープマッピング）は当該技術分野では周知のものであり、例えば免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイが挙げられ、ＣＤ４０から得られた重なり合った、または連続したペプチドを特定の抗ＣＤ４０抗体との反応性について試験する。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法としては当該技術分野では周知の手法が挙げられ、例えばＸ線結晶解析および２次元核磁気共鳴法が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ６６， Ｇ． Ｅ． Ｍｏｒｒｉｓ， Ｅｄ． （１９９６）を参照）。

したがって、ＣＤ４０上の同じエピトープ、または本明細書に記載の特定の抗体によって認識されるエピトープの全体または一部を含むＣＤ４０上のエピトープ（例えば、同じまたは重複する領域、または領域間もしくは領域にまたがる領域）に結合する抗体もまた、本発明によって提供される。同じエピトープ、または特定の抗体によって認識されるエピトープの全体または一部を含むエピトープに結合する抗体は、常法を用いて同定することができる。かかる手法としては、例えば、エピトープの原子分解能を与える、抗原抗体複合体の結晶のＸ線解析などのエピトープマッピング法が挙げられる。他の方法としては、抗原フラグメントまたは抗原の突然変異体に対する抗体の結合を観察するものがあり、抗原配列内のアミノ酸残基の変化による結合の消失が、エピトープ要素の指標としばしばみなされる。更に、エピトープマッピング用の計算コンビナトリアル法を用いることもできる。これらの方法は、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特定の短鎖ペプチドをアフィニティー単離する対象抗体の能力に基づいたものである。そのため、これらのペプチドは、ペプチドライブラリーをスクリーニングするために用いられる抗体に対応したエピトープを定義するための手掛かりとみなされる。エピトープマッピングでは、コンフォメーション的に不連続なエピトープをマッピングできることが示されている計算アルゴリズムも開発されている。

本明細書に記載の抗体とヒトＣＤ４０との結合について競合する抗体も提供される。結合について競合する抗体は、常法を用いて同定することができる。かかる手法としては、例えば、ある抗体が標的抗原に対する別の抗体の結合を阻害する能力を示すイムノアッセイ、すなわち競合結合アッセイが挙げられる。競合結合は、試験されるイムノグロブリンが、例えばＣＤ４０などの共通の抗原に対する参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイで測定される。多くの種類の競合結合アッセイが知られており、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２ （１９８３）を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３７：３６１４ （１９８６）を参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （１９８８）を参照）、Ｉ－１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２５（１）：７ （１９８８）を参照）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６ （１９９０）を参照）、および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ３２：７７ （１９９０））が挙げられる。一般にこれらのアッセイは、標識されていない試験免疫グロブリンおよび標識された参照免疫グロブリンのいずれかを有する固体表面または細胞に結合した精製抗原の使用を伴う。競合阻害は、試験イムノグロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合する標識の量を決定することにより測定される。通常、試験イムノグロブリンは過剰量で存在する。通常、競合抗体が過剰量で存在する場合、参照抗体の共通抗体との特異的結合を少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％またはそれより大きく阻害する。

本明細書で使用するところの「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、および「特異的に結合する」なる用語は、所定の抗原上のエピトープに対する抗体の結合のことを言う。一般的に、抗体は、組換えヒトＣＤ４０を分析物とし、抗体をリガンドとして使用して、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ^ｅ装置を使用したバイオレイヤー干渉法（ｂｉｏ－ｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）（ＢＬＩ）により、またはＢＩＡＣＯＲＥ２０００装置による表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により測定した場合におよそ１０^－７Ｍ未満、例えばおよそ１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、または１０^－１０Ｍ未満、または更にそれよりも低い平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合し、所定の抗原または密接に関連した抗原以外の非特異的抗原（例えばＢＳＡ、カゼイン）との結合におけるそのアフィニティーよりも少なくとも２倍高いアフィニティーで所定の抗原と結合する。本明細書では、「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」なる語句は、「抗原と特異的に結合する抗体」なる用語と互換可能に用いられる。

また、本発明には、ヒトＣＤ４０に結合し、Ｆｃ受容体の結合とは無関係に免疫反応を増大させることが可能な抗体も含まれる。例えば、かかる抗体は、ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と架橋することなく、強力なアゴニスト特性を示す。これらのアゴニスト特性としては、例えば細胞表面マーカーの発現の増大によって測定されるＴ細胞活性の増大および／またはＢ細胞活性化の増大が挙げられる。

本明細書で使用するところの「Ｋ_Ｄ」なる用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離平衡定数のことを言うものとする。一般的に、本発明のヒト抗体は、組換えヒトＣＤ４０を分析物とし、抗体をリガンドとして使用して、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ^ｅ装置を使用したバイオレイヤー干渉法（ｂｉｏ－ｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）（ＢＬＩ）により、またはＢＩＡＣＯＲＥ２０００装置による表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術により測定した場合におよそ１０^－８Ｍもしくはそれ未満、例えばおよそ１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、もしくは１０^－１２Ｍ未満、または更にそれよりも低い平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ４０と結合する。

本明細書で使用するところの「ｋｄ」なる用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の解離速度定数（ｏｆｆ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）のことを言うものとする。

本明細書で使用するところの「ｋａ」なる用語は、抗体と抗原との会合の結合速度定数（ｏｎ ｒａｔｅ ｃｏｎｓｔａｎｔ）のことを言うものとする。

本明細書で使用するところの「ＥＣ５０」なる用語は、インビボまたはインビトロのアッセイにおいて、最大応答の５０％、すなわち最大応答とベースラインとの中間の応答を誘導する抗体またはその抗原結合部位の濃度のことを言う。

本明細書で使用するところの「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域の遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭまたはＩｇＧ１）のことを言う。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。別の実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。

「固定化されたＣＤ４０に結合する」なる用語は、例えば細胞の表面に発現されるかまたは固体支持体に付着されたＣＤ４０に結合する本発明のヒト抗体の能力のことを言う。

本明細書で使用するところの「交差反応する」なる用語は、異なる種に由来するＣＤ４０に結合する本発明の抗体の能力のことを言う。例えば、ヒトＣＤ４０に結合する本発明の抗体は、別の種のＣＤ４０にも結合し得る。本明細書で使用するところの交差反応性は、結合アッセイ（例えばＳＰＲ、ＥＬＩＳＡなど）における精製抗原との特異的反応性を検出することにより、または生理学的にＣＤ４０を発現している細胞と結合させるかもしくは機能的に相互作用させることにより測定される。交差反応性を測定するための方法としては、例えば、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫ^ｅ装置を使用したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるもの、またはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）２０００ＳＰＲ装置（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ社、スウェーデン、ウプサラ）を用いたＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によるもの、またはフローサイトメトリー法などの、本明細書に記載されるような標準的な結合アッセイが挙げられる。

本明細書で使用するところの「アイソタイプスイッチ」とは、抗体のクラス、またはアイソタイプが１つのＩｇクラスから他のＩｇクラスの１つに変化する現象のことを言う。

本明細書で使用するところの「非スイッチアイソタイプ」とは、アイソタイプスイッチが起きない場合に産生される重鎖のアイソタイプクラスのことを言う。非スイッチアイソタイプをコードするＣＨ遺伝子は通常、機能的に再構成されたＶＤＪ遺伝子のすぐ下流の最初のＣＨ遺伝子である。アイソタイプスイッチは、古典的または非古典的アイソタイプスイッチに分類されている。古典的アイソタイプスイッチは、導入遺伝子の少なくとも１つのスイッチ配列領域が関与する組換え事象によって生じる。非古典的アイソタイプスイッチは、例えば、ヒトσ_μとヒトΣ_μとの間の相同組換えによって生じ得る（δ関連欠失）。特に、導入遺伝子間および／または染色体間組換えのような別の非古典的スイッチ機構が生じてアイソタイプスイッチを引き起こす場合もある。

本明細書で使用するところの「スイッチ配列」なる用語は、スイッチ組換えの要因となるＤＮＡ配列のことを言う。「スイッチドナー」配列、一般的にはμスイッチ領域は、スイッチ組換えの際に欠失するコンストラクト領域の５’側（すなわち上流）にある。「スイッチアクセプター」領域は、欠失されるコンストラクト領域と置き換わる定常領域（例えばγ、εなど）との間にある。組換えは常に特定の部位で生じるわけではないため、最終的な遺伝子配列は一般的にコンストラクトからは予測できない。

本明細書で使用するところの「グリコシル化パターン」とは、タンパク質、より詳細にはイムノグロブリンタンパク質に共有結合される炭水化物単位のパターンとして定義される。異種抗体のグリコシル化パターンは、非ヒトトランスジェニック動物の種によって産生される抗体上に自然に生じるグリコシル化パターンと実質的に同様のものとして特徴付けることができるが、当業者には、異種抗体のグリコシル化パターンは、導入遺伝子のＣＨ遺伝子が由来する種よりも上記のような非ヒトトランスジェニック動物の種におけるグリコシル化のパターンにより近いものとして認識されるであろう。

対象に対して用いられる本明細書で使用するところの「自然に生じる」なる用語は、対象が自然に見出されることを言う。例えば、自然界の由来源から単離可能であり、実験室において人間により人為的に改変されていない、生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、自然に生じるものである。

本明細書で使用するところの「再構成された」なる用語は、ＶセグメントがＤ－ＪまたはＪセグメントに、それぞれ実質的に完全なＶ_ＨまたはＶ_Ｌドメインをコードした配置で直接隣接して配置された重鎖または軽鎖イムノグロブリンの遺伝子座の構成のことを言う。再構成されたイムノグロブリン遺伝子座は、生殖細胞系のＤＮＡとの比較によって同定することができ、再構成された遺伝子座は少なくとも１つの組換えられたヘプタマー／ノナマー相同エレメントを有する。

Ｖセグメントに関連して本明細書で使用するところの「再構成されていない」または「生殖細胞系構成」なる用語は、ＶセグメントがＤまたはＪセグメントに直接隣接するように組換えが行われていない構成のことを言う。

本明細書で使用するところの「核酸分子」なる用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むものとする。核酸分子は一本鎖または二本鎖であってよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。

ＣＤ４０に結合する抗体または抗体部分（例えばＶ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関連して本明細書で使用するところの「単離された核酸分子」なる用語は、そのような抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ＣＤ４０以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコードした、ヒトゲノムＤＮＡの核酸に自然に隣接し得る他のヌクレオチド配列を含まない核酸分子のことを言うものとする。

本発明にはまた、配列番号３～１３２に記載される配列の「保存的配列改変」、すなわち、これらのヌクレオチド配列によってコードされるかまたはこれらのアミノ酸配列を有する抗体の抗原との結合を阻害しないヌクレオチドおよびアミノ酸配列の改変も包含される。このような保存的配列改変には、保存的なヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、ならびにヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失が含まれる。例えば、改変は、部位特異的突然変異導入法およびＰＣＲ介在性突然変異導入法などの当該技術分野では周知の常法により配列番号３～１４８に導入することができる。保存的アミノ酸置換には、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものが含まれる。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝した側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、ヒト抗ＣＤ４０抗体の予想される非不可欠アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残基で好ましくは置換される。抗原との結合を阻害しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定するための方法は、当該技術分野では周知のものである（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． ３２：１１８０－１１８７ （１９９３）； Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． １２（１０）：８７９－８８４ （１９９９）； ａｎｄ Ｂｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：４１２－４１７ （１９９７）を参照）。

保存的置換は、例えば下記表にしたがって行うことができる。例えば、２列目の同じブロックのアミノ酸、好ましくは３列目の同じ行のアミノ酸を互いに置換することができる。

また、別の実施形態では、突然変異は、例えば飽和突然変異誘発などにより抗ＣＤ４０抗体の全体または一部に沿ってランダムに導入することもでき、得られた改変された抗ＣＤ４０抗体を結合活性についてスクリーニングすることができる。

核酸について、「実質的相同」なる用語は、２個の核酸、またはその指定配列を最適にアラインして比較した場合に、適当なヌクレオチドの挿入または欠失を有し、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常少なくとも約９０％～９５％、より好ましくは少なくとも約９８％～９９．５％において同一であることを示す。あるいは、実質的相同は、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下でその鎖の相補鎖とハイブリダイズする場合に存在する。

２個の配列間の同一率（％）は、２個の配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、２個の配列によって共有された同一位置の数の関数である（すなわち、相同率（％）＝同一位置の数／位置の総数×１００）。２個の配列間の配列の比較および同一率（％）の決定は、以下の非限定的な例に述べられるように数学的アルゴリズムを用いて実現することができる。

２個のヌクレオチド配列間の同一率（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍより入手可能）のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクスおよびギャップ重み＝４０、５０、６０、７０、または８０、および長さ重み＝１、２、３、４、５、または６を用いて求めることができる。２個のヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一率（％）は、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）に組み込まれたＥ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ， ４：１１－１７ （１９８９））を使用し、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ＝１２、ギャップペナルティー＝４を用いて求めることもできる。更に、２個のアミノ酸配列間の同一率（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍより入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． （４８）：４４４－４５３ （１９７０））を使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、およびギャップ重み＝１６、１４、１２、１０、８、６または４、および長さ重み＝１、２、３、４、５または６を用いて求めることができる。

本発明の核酸およびタンパク質配列を更に「クエリー配列」として用いて公開データベースに対する検索を行って、例えば関連する配列を同定することができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ， ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：４０３－１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索をＮＢＬＡＳＴプログラムを用い、スコア＝１００、ワード長さ＝１２として行うことで本発明の核酸分子に対して相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索をＸＢＬＡＳＴプログラムを用い、スコア＝５０、ワード長さ＝３として行うことで本発明のタンパク質分子に対して相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のギャップを含むアラインメントを得るには、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， （１９９７） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５（１７）： ３３８９－３４０２の記載にしたがって用いることができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合、各プログラム（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを用いることができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ．を参照。

核酸は、全細胞中、細胞ライセート中に、または部分精製された、もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、他の細胞成分または他の夾雑物（例えば他の細胞核酸もしくはタンパク質など）から、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当該技術分野では周知の他の方法を含む常法によって精製される場合に「単離される」または「実質的に純粋とされる」。Ｆ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．， ｅｄ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８７）を参照。

ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、またはそれらの混合物から得られる本発明の核酸組成物は、しばしば天然配列であるが（改変された制限部位などを除き）、常法にしたがって突然変異を導入することによって遺伝子配列を与えることができる。コーディング配列では、これらの突然変異によってアミノ酸配列に必要な影響を及ぼすことができる。詳細には、天然のＶ、Ｄ、Ｊ、定常領域、スイッチ配列および本明細書に記載される他のそのような配列と実質的に相同であるかまたはこれらに由来するＤＮＡ配列が想到される（「由来する」とは配列が別の配列と同一であるかまたは別の配列から改変されたものであることを示す）。

ある核酸は、別の核酸配列と機能的に関係する状態に置かれる場合に「機能的に連結される」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、あるコーディング配列と、その配列の転写に影響する場合に機能的に連結される。転写調節配列に関して、「機能的に連結された」とは、連結されたＤＮＡ配列が連続的であり、２個のタンパク質コーディング領域を連結することが必要である場合、連続的でかつリーディングフレーム内にあることを意味する。スイッチ配列では、「機能的に連結された」とは、配列同士がスイッチ組換えを起こすことが可能であることを示す。

本明細書で使用するところの「ベクター」なる用語は、その核酸分子に連結された別の核酸分子を輸送することが可能な核酸分子のことを言うものとする。１つの種類のベクターとして、更なるＤＮＡセグメントをライゲートすることができる環状二本鎖ＤＮＡループのことを指す「プラスミド」がある。別の種類のベクターとして、更なるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートすることができるウイルスベクターがある。特定のベクターは、ベクターが導入された宿主細胞内で自律的に複製することが可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム性の哺乳動物ベクターなど）。他のベクター（例えば非エピソーム性の哺乳動物ベクター）は、宿主細胞内に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれることにより、宿主ゲノムとともに複製され得る。更に、特定のベクターはベクターが機能的に連結された遺伝子の発現を誘導することができる。そのようなベクターは、本明細書では「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称する。一般的に組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態であることから、本明細書では「プラスミド」と「ベクター」とを互換可能に使用する場合がある。しかしながら、本発明には、同等の機能を有するウイルスベクター（例えば複製不能レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルスなど）などの他の形態の発現ベクターも含まれるものとする。

本明細書で使用するところの「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）とは、組換え発現ベクターが導入された細胞のことを言うものとする。かかる用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫のことも指すことは理解されるべきである。特定の改変は突然変異または環境の影響により後続世代で生じ得ることから、そのような子孫は実際には親細胞と同一でない場合もあるが、本明細書で使用するところの「宿主細胞」なる用語の範囲内に含まれる。

本明細書で使用するところの「抗原」なる用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンなどの任意の天然または合成免疫原性物質のことを言う。本発明における使用に適した抗原（例えば本発明の抗ＣＤ４０抗体と併用されるワクチンにおける）としては、例えば、それらに対する防御または治療的免疫反応が望ましい感染症抗原および腫瘍抗原、例えば腫瘍細胞もしくは病原性生物により発現される抗原、または感染症抗原などが挙げられる。例えば、適当な抗原としては、癌の予防または治療用の腫瘍関連抗原が挙げられる。腫瘍関連抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＷＴ１、メソテリン、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ－２、メランＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＣＯ－５８、ＭＮ （ｇｐ２５０）、イディオタイプ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－Ａ３、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２およびＭＵＣ－１抗原、ならびに生殖細胞由来腫瘍抗原の配列の全体または一部を含む配列が挙げられる。腫瘍関連抗原には、例えばＬｅ^ａ、Ｌｅ^ｂ、ＬｅＸ、ＬｅＹ、Ｈ２、Ｂ１、Ｂ２抗原などの血液型抗原も含まれる。また、複数の抗原が、本発明の抗原抗体コンストラクトに含まれてもよい。例えば、ＭＡＧＥ抗原を、メラニンＡ、チロシナーゼ、およびｇｐ１００などの他の抗原、ならびにＧＭ－ＣＳＦまたはＩＬ－１２などのアジュバントと組み合わせて、抗ＡＰＣ抗体に結合させることができる。

他の適当な抗原としては、ウイルス性疾患の予防および治療用のウイルス抗原が挙げられる。ウイルス性抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、ＨＩＶ－１ ｇａｇ、ＨＩＶ－１ ｅｎｖ、ＨＩＶ－１ ｎｅｆ、ＨＢＶ （表面またはコア抗原）、ＨＰＶ、ＦＡＳ、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、ｐ１７、ＯＲＦ２およびＯＲＦ３抗原が挙げられる。細菌抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）または梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）が挙げられる。本発明の抗体細菌抗原結合体は、炭疸、ボツリヌス症、破傷風、クラミジア、コレラ、ジフテリア、ライム病、梅毒、および結核などの各種の細菌性疾患の治療または予防に使用することができる。ウイルス、細菌、寄生虫、および真菌類などの感染症病原体に由来する他の適当な抗原も下記に開示される。

上記の抗原の配列は当該技術分野では周知のものである。例えば、ＭＡＧＥ－３ ｃＤＮＡ配列の例は米国特許第６，２３５，５２５号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＥＳＯ－１核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第５，８０４，３８１号および米国特許第６，０６９，２３３号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、メラン－Ａ核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第５，６２０，８８６号および米国特許第５，８５４，２０３（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＢＲ－１核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第６，７７４，２２６号および米国特許第６，９１１，５２９号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＣＯ－５８核酸配列およびタンパク質配列の例は国際公開第ＷＯ０２０９０９８６号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＨＥＲ－２／ｎｅｕタンパク質のアミノ酸配列の例はＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＡ５８６３７として入手可能であり、ヒト癌胎児性抗原様１（ＣＥＡ－１）のヌクレオチド配列（ｍＲＮＡ）はＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＭ＿０２０２１９として入手可能である。

本発明の組成物および方法に使用することができるＨＰＶ抗原としては、例えば、ＨＰＶ－１６抗原、ＨＰＶ－１８抗原、ＨＰＶ－３１抗原、ＨＰＶ－３３抗原、および／またはＨＰＶ－３５抗原が挙げられ、ＨＰＶ－１６抗原および／またはＨＰＶ－１８抗原が適当である。ＨＰＶ－１６のゲノムについては、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， １４５： １８１－１８５ （１９８５）に記載されており、ＨＰＶ－１８をコードするＤＮＡ配列については米国特許第５，８４０，３０６号に記載されており、これらの開示内容をその全容にわたって参照により本明細書に援用する。ＨＰＶ－１６抗原（例えば、ＨＰＶ－１６のＥ１および／またはＥ２タンパク質の血清反応領域）については米国特許第６，５３１，１２７号に記載されており、ＨＰＶ－１８抗原（例えば、ＨＰＶ－１８のＬ１および／またはＬ２タンパク質の血清反応領域）については米国特許第５，８４０，３０６号に記載されており、これらの開示内容をその全容にわたって参照により本明細書に援用する。同様に、ＨＢＶの完全なゲノムは、その開示内容を本明細書に援用するところのＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＣ＿００３９７７で入手可能である。ＨＣＶのゲノムについては、その開示内容を本明細書に援用するところの欧州特許出願第３１８ ２１６号に記載されている。その開示内容を参照により本明細書に援用するところの国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１３４８号は、ＨＣＶゲノムのクローンの配列情報、ＨＣＶウイルスタンパク質のアミノ酸配列、ならびにＨＣＶタンパク質およびこれに由来するペプチドを含むＨＣＶワクチン用のかかる組成物の製造および使用方法について開示している。

タンパク質の抗原ペプチド（すなわち、Ｔ細胞エピトープを含むもの）は、当該技術分野では周知の様々な方法で同定することができる。例えば、ウェブベースの予測アルゴリズム（ＢＩＭＡＳおよびＳＹＦＰＥＩＴＨＩ）を使用してタンパク質配列を分析することで、これまでにＣＴＬにより定義されている１０，０００種類の充分に特徴付けされたＭＨＣ結合ペプチドの内部データベースに一致する潜在的なＭＨＣクラスＩおよびＩＩ結合ペプチドを得ることによってＴ細胞エピトープを予想することができる。スコアが高かったペプチドをランク付けし、特定のＭＨＣ分子に対する高いアフィニティーに基づいて「興味深いペプチド」として選択することができる。

Ｔ細胞エピトープを含む抗原ペプチドの別の同定方法は、組換えにより、合成により、または特定の限定的条件下では、タンパク質の化学的切断により、生成することができる所望の長さの重複しないペプチドまたは所望の長さの重複するペプチドにタンパク質を分割し、免疫原性、例えば、Ｔ細胞の応答の誘導（すなわち、増殖またはリンホカイン分泌）について試験することによるものである。

例えば、精密マッピング技術によってタンパク質の正確なＴ細胞エピトープを決定するには、Ｔ細胞の生物学的手法により決定した場合にＴ細胞刺激活性を有し、したがって少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドを、ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかにアミノ酸残基を付加するかまたは欠失させることによって改変し、試験を行って改変ペプチドに対するＴ細胞反応性の変化を決定することができる。天然タンパク質配列中の重複領域を共有する２つまたはそれより多くのペプチドが、Ｔ細胞の生物学的手法により決定した場合にヒトＴ細胞刺激活性を有することが見出された場合、かかるペプチドの全体または一部を含む更なるペプチドを生成し、これらの更なるペプチドを同様の手順によって試験することができる。この手法の後、ペプチドを選択し、組換えまたは合成により生成する。ペプチドは、ペプチドに対するＴ細胞応答の強度（例えば、刺激指数）を含む異なる因子に基づいて選択される。次いで、これらの選択されたペプチドの物理的および化学的性質（例えば、溶解性、安定性）を調べることでペプチドが治療組成物における使用に適しているかどうか、またはペプチドに改変が必要かどうかを判定することができる。

「抗原提示細胞」またはＡＰＣなる用語は、ＭＨＣと複合体化された外来抗原をその表面に提示する細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこの複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、これらに限定されるものではないが、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球（ＴＨＰ－１など）、Ｂリンパ芽球細胞（Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８ Ｂ－ＬＣＬなど）および単球由来樹状細胞（ＤＣ）が挙げられる。ＡＰＣの一部のものは、食作用または受容体介在性エンドサイトーシスにより抗原を取り込む。ＡＰＣ受容体の例としては、これらに限定されるものではないが、ヒト樹状細胞および上皮細胞２０５受容体（ＤＥＣ－２０５）などのＣ型レクチン、およびヒトマクロファージマンノース受容体が挙げられる。

「抗原提示」なる用語は、ＡＰＣが抗原を捕捉してＴ細胞による抗原の認識（例えばＭＨＣ－Ｉおよび／またはＭＨＣ－ＩＩ結合体の構成成分として）を可能とするプロセスのことを言う。

「ＭＨＣ分子」には、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩの２つの種類がある。ＭＨＣクラスＩ分子は特定のＣＤ８＋Ｔ細胞に抗原を提示し、ＭＨＣクラスＩＩ分子は特定のＣＤ４＋Ｔ細胞に抗原を提示する。外因的にＡＰＣに与えられた抗原は、主としてＭＨＣクラスＩＩと結合されるために処理される。これに対して、内因的にＡＰＣに与えられた抗原は、主としてＭＨＣクラスＩと結合されるために処理される。

本明細書で使用するところの「免疫賦活剤」なる用語には、これらに限定されるものではないが、ＤＣおよびマクロファージなどのＡＰＣを刺激することが可能な化合物が含まれる。例えば、本発明における使用に適した免疫賦活剤はＡＰＣを刺激することが可能であるため、ＡＰＣの成熟プロセスが加速され、ＡＰＣの増殖が増大し、かつ／または共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ－１、ＭＨＣ分子およびＣＣＲ７）および炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、およびＩＦＮ－γ）の動員または放出が増加する。適当な免疫賦活剤は、Ｔ細胞増殖も増大させることができる。かかる免疫賦活剤としては、これらに限定されるものではないが、ＣＤ２７リガンド；ＦＬＴ３リガンド；ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γおよびＩＬ－２などのサイトカイン；Ｇ－ＣＳＦ （顆粒球コロニー刺激因子）およびＧＭ－ＣＳＦ（顆粒球・マクロファージコロニー刺激因子）などのコロニー刺激因子；抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗４１ＢＢ抗体、または抗ＯＸ－４０抗体；ＬＰＳ（エンドトキシン）；ｓｓＲＮＡ；ｄｓＲＮＡ；カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）；塩酸レバミゾール；および静脈内イムノグロブリンが挙げられる。一実施形態では、免疫賦活剤は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストであってよい。例えば、免疫賦活剤は、二本鎖イノシン：シトシンポリヌクレオチド（例えばＨｅｍｉｓｐｈｅｒｘ Ｂｉｐｈａｒｍａ社（ペンシルベニア州、米国）よりＡｍｐｌｉｇｅｎ（登録商標）として販売されるＰｏｌｙ Ｉ：Ｃ、またはＯｎｃｏｖｉｒ社より販売されるＰｏｌｙ ＩＣ：ＬＣ）またはＰｏｌｙ Ａ：ＵなどのＴＬＲ３アゴニスト；モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）またはＲＣ－５２９（例えば、ＧＳＫ社（英国）より販売されるもの）などのＴＬＲ４アゴニスト；フラジェリンなどのＴＬＲ５アゴニスト；イミダゾキノリンＴＬＲ７またはＴＬＲ８アゴニストなどのＴＬＲ７またはＴＬＲ８アゴニスト（例えば、イミキモド（例えば、Ａｌｄａｒａ（商標））またはレシキモドおよび関連イミダゾキノリン剤（例えば、３Ｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社より販売されるもの）など）；または、非メチル化ＣｐＧモチーフを有するデオキシヌクレオチドなどのＴＬＲ９アゴニスト（例えば、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ社より販売されるようないわゆる「ＣｐＧｓ」）であってよい。好ましい免疫賦活剤は、ＴＬＲ３アゴニスト、好ましくはＰｏｌｙ Ｉ：Ｃである。かかる免疫賦活剤は、本発明の抗体およびコンストラクトと同時に、別々に、または順次、投与することができ、抗体およびコンストラクトと物理的に連結することもできる。

本明細書で使用するところの「連結された」なる用語は、２個またはそれより多くの分子の結合のことを言う。連結は、共有または非共有結合であってよい。連結は、遺伝子的なものであってもよい（すなわち組換えにより融合されたもの）。かかる連結は、化学的結合または組換えタンパク質産生などの当該技術分野で認識されている幅広い技術を用いて実現することができる。

本明細書で使用するところの抗原の「交差提示」なる用語は、ＡＰＣ上のＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子を介したＴ細胞に対する外因性タンパク質抗原の提示のことを言う。

本明細書で使用するところの「Ｔ細胞媒介応答」なる用語は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８^＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋細胞）などのＴ細胞によって媒介される任意の応答のことを言う。Ｔ細胞媒介応答には、例えば、Ｔ細胞の細胞傷害作用および増殖が含まれる。

本明細書で使用するところの「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答」なる用語は、細胞傷害性Ｔ細胞によって誘導される免疫応答のことを言う。ＣＴＬ応答は、主としてＣＤ８^＋Ｔ細胞によって媒介される。

本明細書で使用するところの「阻害する」または「ブロックする」（例えば、細胞上のＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合の阻害／ブロッキングを指す）なる用語は、互換可能に用いられ、部分的および完全な阻害／ブロッキングの両方を包含する。ＣＤ４０Ｌの阻害／ブロッキングは、阻害またはブロッキングされることなくＣＤ４０Ｌの結合が生じる場合に生じる通常のレベルまたは活性の種類を好ましくは低減または変化させる。阻害またはブロッキングはまた、抗ＣＤ４０抗体と接触していないＣＤ４０Ｌと比較した場合に抗ＣＤ４０抗体と接触しているＣＤ４０Ｌの結合アフィニティーのあらゆる測定可能な減少も含むものとする（例えば、ＣＤ４０Ｌの結合を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％ 、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、ｏｒ １００％阻害する）。特定の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、例えばＢＬＩまたはＳＰＲ（Ｂｉａｃｏｒｅ）アッセイによって測定されるＣＤ４０Ｌの結合を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０Ｌの結合を少なくとも約８０％阻害する。

本明細書で使用するところの「増殖を阻害する」（例えば細胞について言う場合）なる用語は、細胞の増殖のあらゆる測定可能な減少を含むものとする（例えば細胞の増殖の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％の阻害）。

「免疫反応を誘導する」、「免疫反応を増大させる」、および「免疫反応を促進する」なる用語は、互換可能に用いられ、特定の抗原に対する免疫反応（すなわち受動免疫または適応免疫）の刺激のことを言う。

「ＣＤＣ」または「ＡＤＣＣ」の誘導に関連して用いられる「誘導する」または「増大させる」なる用語は、特定の直接的細胞殺傷機構の刺激のことを言う。例えば、一実施形態では、抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度でＣＤ４０発現細胞のＣＤＣを介して少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０％の細胞溶解を誘導する。一つの好ましい実施形態では、抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度でＣＤ４０発現細胞のＣＤＣを介して少なくとも約４０％の細胞溶解を誘導する。別の実施形態では、抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度でＣＤ４０発現細胞のＡＤＣＣ（少なくとも特異的細胞溶解）を介して少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、または８５％の細胞溶解を誘導する。一実施形態では、抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度でＣＤ４０発現細胞のＡＤＣＣを介して少なくとも約４０％の細胞溶解を誘導する。

本明細書で使用するところの「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」なる用語は、本明細書に記載される治療的または予防的措置のことを指す。「治療」の方法は、かかる治療を要する対象、例えば特定の抗原に対する高い免疫反応を要する対象または最終的にそのような疾患を得る可能性のある対象への投与を行うことによって、疾患または再発疾患の１つまたはそれより多くの症状を予防、治癒、遅延、その重症度を軽減、もしくは改善するか、またはかかる治療が行われない場合に予想される生存期間を超えて対象の生存期間を延ばすものである。

「有効量」または「有効投与量」なる用語は、所望の効果を得る、または少なくとも部分的に得るうえで充分な量として定義される。「治療上の有効量」なる用語は、すでに疾患を罹患している患者において疾患およびその合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に阻止するうえで充分な量として定義される。このような使用において効果的な量は、治療される疾患の重症度および患者自身の免疫系の一般的状態に応じて決められる。

本明細書で使用するところの「相乗的」なる用語は、２つの薬剤の投与が、２つの薬剤が併用される場合に、２つの成分の個々の効果を加え合わせることから予想される効果よりも高い、例えば、２つの成分の個々の効果を加え合わせることから予想される効果の２倍よりも高い、３倍よりも高い、５倍よりも高い、または１０倍よりも高い効果を生じることを意味する。例えば、薬剤の相互効果は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙのメジアン効果モデル（Ｃｈｏｕ， Ｔ．Ｃ． ＆ Ｔａｌａｌａｙ， Ｐ． （１９８４） Ａｄｖ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ． ２２， ２７－５５． Ｑｕａｎｔａｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ： ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）に基づいた、市販のソフトウェアパッケージであるＣａｌｃｕｓｙｎを用いて分析することができる。併用指数（Ｃ．Ｉ．）１が相加的な薬剤の相互作用を示したのに対して、１よりも大きいＣ．Ｉ．は拮抗性を示し、１よりも低いスコアは相乗性を示した。ＣＩ値は以下のように定義される。すなわち、１．４５～１．２は中度に拮抗的であり、１．２～１．１はわずかに拮抗的であり、１．１～０．９は相加的であり、０．９～０．８５はわずかに相乗的であり、０．８５～０．７は中度に相乗的であり、および０．７～０．３は相乗的である。

「患者」なる用語には、予防的または治療的処置を受けるヒトおよびその他の哺乳動物の対象が含まれる。

本明細書で使用するところの「対象」なる用語には、あらゆるヒトおよび非ヒト動物が含まれる。例えば、本発明の方法および組成物は、免疫疾患を有する対象を治療するために使用することができる。「非ヒト動物」なる用語には、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物および非哺乳動物などのすべての脊椎動物が含まれる。

本発明のさまざまな態様を以下のサブセクションにおいて更に詳細に説明する。
Ｉ．ＣＤ４０に対する抗体の作製
本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｎａｔｕｒｅ ２５６： ４９５ （１９７５）に記載される標準的な体細胞ハイブリダイゼーション法のような、各種の公知の手法を用いて作製することができる。原則的には体細胞ハイブリダイゼーション法を使用すればよいが、例えば、Ｂリンパ球のウイルスによる、または発癌性形質転換、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用したファージディスプレイ手法などの、モノクローナル抗体を作製するための他の手法も使用することができる。

特定の（例示的な）実施形態では、マウス（例えばＨａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスのＨ２Ｌ２系統）または他の適当な宿主動物を適当な抗原で免疫化することによって免疫化に用いられた抗原に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することが可能なリンパ球を誘導する。また、インビトロでリンパ球を免疫してもよい。次いで、リンパ球をポリエチレングリコールなどの適当な融合剤を用いてミエローマ細胞と融合させてハイブリドーマ細胞を作製することができる（Ｇｏｄｉｎｇ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， ｐｐ．５９－１０３ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９８６））。ハイブリドーマ細胞が増殖している培地を、抗原に対する特異性を有するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。所望の特異性、アフィニティー、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、限界希釈法によってクローンをサブクローニングし、常法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ， Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， ｐｐ． ５９－１０３ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９８６））。この目的に適した培地としては、例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。更に、ハイブリドーマ細胞を、動物の体内で腹水腫瘍としてインビボ増殖させることができる。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばＰｒｏｔｅｉｎＡセファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来のイムノグロブリン精製法により培地、腹水、または血清から分離することができる。

別の実施形態では、マウスの免疫系の代わりにヒト免疫系の部分を保有する遺伝子導入または染色体導入マウスを使用してＣＤ４０に対する特異性を有する抗体を作製する。一実施形態では、本発明は、再構成されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖イムノグロブリン配列をコードするヒトイムノグロブリン遺伝子のミニ遺伝子座と、内因性のμおよびκ遺伝子座を不活化する標的化突然変異を有する、本明細書で「ＨｕＭＡｂマウス」と称されるトランスジェニックマウスを用いる（Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）： ８５６－８５９）。したがって、このマウスは、ＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、免疫化に応じて、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子がクラススイッチおよび体細胞突然変異を起こして高アフィニティーのヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ｅｔ ａｌ． （１９９４）（前出）；Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９４） Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１； Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｄ． （１９９５） Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｖｏｌ． １３： ６５－９３およびＨａｒｄｉｎｇ， Ｆ． ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９５） Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ７６４：５３６－５４６）。ＨｕＭＡｂマウスの作製については、以下のセクションＩＩおよびＴａｙｌｏｒ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． （１９９２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７－６２９５； Ｃｈｅｎ， Ｊ． ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５： ６４７－６５６； Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ＵＳＡ ９０：３７２０－３７２４； Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７－１２３； Ｃｈｅｎ， Ｊ． ｅｔ ａｌ． （１９９３） ＥＭＢＯ Ｊ． １２： ８２１－８３０； Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：２９１２－２９２０； Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， （１９９４） Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）： ８５６－８５９； Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９４） Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１； Ｔａｙｌｏｒ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６： ５７９－５９１； Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ， Ｄ． （１９９５） Ｉｎｔｅｒｎ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｖｏｌ． １３： ６５－９３； Ｈａｒｄｉｎｇ， Ｆ． ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ， Ｎ． （１９９５） Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ ７６４：５３６－５４６； Ｆｉｓｈｗｉｌｄ， Ｄ． ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４： ８４５－８５１に詳細に記載されている。更に、いずれもＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙ、ならびにＧｅｎＰｈａｒｍ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社に付与された米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，７８９，６５０号、同第５，８７７，３９７号、同第５，６６１，０１６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８７４，２９９号、および同第５，７７０，４２９号、Ｓｕｒａｎｉらに付与された米国特許第５，５４５，８０７号、１９９８年６月１１日公開の国際公開第ＷＯ９８／２４８８４号、１９９４年１１月１０日公開の国際公開第ＷＯ９４／２５５８５号、１９９３年６月２４日公開の国際公開第ＷＯ９３／１２２７号、１９９２年１２月２３公開の国際公開第ＷＯ９２／２２６４５号、１９９２年３月１９日公開の国際公開第ＷＯ９２／０３９１８号を参照されたい。

別の実施形態では、ＣＤ４０に結合するヒトＣＤ４０は、例えば下記文献に記載される方法を用いて作製された抗体ファージライブラリーから単離することができる。すなわち、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４８：５５２－５５４ （１９９０）． Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３５２：６２４－６２８ （１９９１）， Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ２２２：５８１－５９７ （１９９１） およびＨｏｅｔ ｅｔ ａｌ （２００５） Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３， ３４４－３４８； Ｌａｄｎｅｒらに付与された米国特許第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、および同第５，５７１，６９８号、Ｄｏｗｅｒらに付与された米国特許第５，４２７，９０８号、および同第５，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ らに付与された米国特許第５，９６９，１０８号、および同第６，１７２，１９７号、ならびにＧｒｉｆｆｉｔｈｓらに付与された米国特許第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、および同第６，５９３，０８１号。更に、鎖シャッフリングによる高アフィニティー（ｎＭの範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， １０：７７９－７８３ （１９９２））、ならびに極めて大きなファージライブラリーを構築するための方策としてのコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃ． Ａｃｉｄｓ． Ｒｅｓ．， ２１：２２６５－２２６６ （１９９３））を用いることもできる。

特定の実施形態では、ヒトＣＤ４０に結合する抗体は、Ｈｏｅｔ ｅｔ ａｌ．（前出）により述べられるファージディスプレイ法を用いて作製される。この手法では、ヒトドナーから単離されたイムノグロブリン配列の固有の組み合わせを有するとともに重鎖ＣＤＲに合成による多様性を有するヒトＦａｂライブラリーの作製を行う。次いでこのライブラリーをヒトＣＤ４０に結合するＦａｂについてスクリーニングする。

本発明の抗体を産生するハイブリドーマを作製するための好ましい動物系はマウス系である。免疫化のプロトコールおよび免疫化された脾細胞を単離および融合するための方法を含む、マウスにおけるハイブリドーマ作製は当該技術分野では周知のものである。
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの作製

本発明の抗体は、当該技術分野では周知であるように、例えば組換えDNA技術と遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを用いて宿主細胞のトランスフェクトーマ中で産生させることもできる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓ． （１９８５） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２）。

例えば一実施態様では、例えばヒト抗体遺伝子などの目的遺伝子を、国際公開第ＷＯ８７／０４４６２号、国際公開第ＷＯ８９／０１０３６号及び欧州特許出願公開第ＥＰ３３８ ８４１号に開示されるＧＳ遺伝子発現系または当該技術分野では周知の他の発現系で用いられるもののような真核生物発現プラスミドなどの発現ベクターにライゲートすることができる。次いで、クローニングされた抗体遺伝子を有する精製プラスミドを、ＣＨＯ細胞、ＮＳＯ細胞などの真核生物宿主細胞、またはこれに代えて植物由来細胞、真菌もしくは酵母細胞のような他の真核細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するために用いられる方法は、エレクトロポレーション、リポフェクチン、リポフェクタミンまたは他の方法など、当該技術分野において記載されている方法とすることができる。これらの抗体遺伝子を宿主細胞に導入した後、抗体を発現する細胞を同定し、選択することができる。これらの細胞はトランスフェクトーマであり、この後、細胞の発現レベルを増幅させ、スケールアップして抗体を産生させることができる。この後、組換え抗体を、これらの培養上清および細胞から単離、精製することができる。

また、これらのクローニングされた抗体遺伝子は、大腸菌または完全な生物などの他の発現系で発現させるか、または合成的に発現させることもできる。
インタクトな抗体を発現させるための部分抗体配列の使用

抗体は主に、６個の重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に存在するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列と比較して個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体抗原相互作用を担っていることから、異なる性質を有する異なる抗体から得られたフレームワーク配列上にグラフトされた特異的な天然に存在する抗体から得たＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特異的な天然に存在する抗体の性質を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ， Ｌ． ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７； Ｊｏｎｅｓ， Ｐ． ｅｔ ａｌ．， １９８６， Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５； およびＱｕｅｅｎ， Ｃ． ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｅｅ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８６：１００２９－１００３３を参照）。かかるフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む公開ＤＮＡデータベースから得ることができる。これらの生殖細胞系配列は、Ｂ細胞の成熟過程におけるＶ（Ｄ）Ｊ連結により形成される完全にアセンブリされた可変遺伝子を含んでいないため、成熟抗体遺伝子配列とは異なっている。生殖細胞系遺伝子配列は、高アフィニティーの二次レパートリー抗体の配列とも、個々の可変領域にわたって一様に異なっている。例えば、体細胞突然変異は、フレームワーク領域のアミノ末端部分では相対的に稀である。例えば、体細胞突然変異は、フレームワーク領域１のアミノ末端部分およびフレームワーク領域４のカルボキシ末端部分で相対的に稀である。更に、多くの体細胞変異は抗体の結合性を大きく変化させない。このため、元の抗体と同様の結合性を有するインタクトな組換え抗体を再作製するには特定の抗体の全ＤＮＡ配列を得る必要はない（１９９９年３月１２日出願の国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９９／０５５３５号を参照）。一般的には、各ＣＤＲ領域にわたった部分的な重鎖および軽鎖配列がこの目的に充分である。このような部分配列を用いることで、どの生殖細胞系の可変の連結される遺伝子セグメントが、組換え後の抗体可変遺伝子に寄与したかが決定される。次いで、生殖細胞系配列を使用して可変領域の欠損した部分を充填する。重鎖および軽鎖のリーダー配列はタンパク質の成熟過程で切断されるため、最終的な抗体の性質に寄与しない。欠損配列を付加するには、クローニングしたｃＤＮＡ配列をライゲーションまたはＰＣＲ増幅により合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。また、全可変領域を短鎖の重複するオリゴヌクレオチド群として合成し、ＰＣＲ増幅により組み合わせることで完全に合成された可変領域クローンを作製することもできる。このプロセスは、特定の制限部位を除去するかもしくは含めることができる点、または特定のコドンを最適化できる点などの一定の利点を有する。

ハイブリドーマ由来の重鎖転写産物および軽鎖転写産物のヌクレオチド配列を用いて重複する合成オリゴヌクレオチド群を設計することで、天然配列と同一のアミノ酸コーディング能を有する合成Ｖ配列を作製する。これらの合成重鎖およびκ鎖配列は、以下の３つの点で天然配列と異なり得る。すなわち、繰り返しヌクレオチド塩基の配列が介在しているためにオリゴヌクレオチド合成およびＰＣＲ増幅が容易である点、Ｋｏｚａｋ則にしたがって最適な翻訳開始部位が組み込まれている点（Ｋｏｚａｋ， １９９１， Ｊ．Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．２６６：１９８６７－１９８７０）、および翻訳開始部位の上流にＨｉｎｄＩＩＩ部位が操作により組み込まれている点、である。

重鎖可変領域および軽鎖可変領域の両方について、最適化されたコード鎖配列および対応する非コード鎖配列を、対応する非コードオリゴヌクレオチドのおよそ中間点で３０～５０ヌクレオチドに分解する。したがって、各鎖について、オリゴヌクレオチドを、１５０～４００ヌクレオチドのセグメントにわたる重複二本鎖群にアセンブリすることができる。次いで、これらのプールを鋳型として用いて１５０～４００ヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を生成する。一般的には、１つの可変領域オリゴヌクレオチド群を２つのプールに分解し、これらを別々に増幅して２つの重複するＰＣＲ産物を生成する。次いで、これらの重複産物をＰＣＲ増幅によって組み合わせることで完全な可変領域を形成する。また、ＰＣＲ増幅に重鎖または軽鎖定常領域の重複フラグメント（κ軽鎖のＢｂｓＩ部位またはγ重鎖の場合のＡｇｅＩ部位を含む）を含めることで、発現ベクターコンストラクトに容易にクローニングすることができるフラグメントを生成することが望ましい場合もある。

次いで、これらの再構築した重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、クローニングしたプロモーター配列、リーダー配列、翻訳開始配列、リーダー配列、定常領域、３’非翻訳配列、ポリアデニル化配列、および転写終結配列と組み合わせて発現ベクターコンストラクトを形成する。重鎖および軽鎖発現コンストラクトを、単一のベクターに組み込み、宿主細胞に同時トランスフェクトするか、連続的にトランスフェクトするか、または別々にトランスフェクトし、この宿主細胞を融合することで、両鎖を発現する宿主細胞を形成することができる。

ＰＣＲ増幅されたＶ重鎖およびＶκ軽鎖のｃＤＮＡ配列を用いて完全な重鎖および軽鎖ミニ遺伝子を構築することができるように、発現ベクターの構築に用いるプラスミドを構築した。これらのプラスミドを使用して、完全なヒトＩｇＧ_１κまたはＩｇＧ_４κ抗体を発現させることができる。本発明の完全なヒト抗体およびキメラ抗体には、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤ抗体も含まれる。同様のプラスミドを、他の重鎖アイソタイプの発現、またはλ軽鎖を含む抗体の発現用に構築することができる。

したがって、本発明の別の態様では、本発明の抗ＣＤ４０抗体の構造的特徴を利用することで、例えば以下のような本発明の抗体の少なくとも１つの機能性を保持した構造的に関連した抗ＣＤ４０抗体が作製される。すなわち、
（ａ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に免疫反応を誘導または促進すること、
（ｂ）ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導することなく抗原に対する免疫反応を誘導または促進すること、
（ｃ）ＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく抗原に対する免疫反応を誘導または促進すること、および／または
（ｄ）ＣＤ４０Ｌと相乗作用を示すことができること。

更なる特徴としては、例えば、
（ｄ）ＣＤ４０Ｌの結合を阻害しない、またはブロックしないこと、
（ｄ）ＣＤ４０Ｌの結合を阻害する、またはブロックすること、
（ｆ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係にヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合を阻害する、またはブロックすること、
（ｇ）腫瘍細胞の細胞アポトーシスを誘導または促進すること、
（ｈ）細胞のＴ細胞刺激活性（例えばＩＬ－１２ｐ４０の発現の増大により測定される）を誘導または促進すること、および／または
（ｉ）Ｂ細胞活性化を誘導または促進すること（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、およびＣＤ８３ ＢＶ５１０、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＣＤ５４ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５およびＣＤ７１ ＰＥからなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面マーカーの発現の増大により測定される）。

一実施形態では、本発明の抗体の１つまたはそれより多くのＣＤＲ領域を既知のフレームワーク領域およびＣＤＲと組換えにより組み合わせることで本発明の更なる組換え操作された抗ＣＤ４０抗体を作製することができる。重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域は、同じまたは異なる抗体配列に由来するものとすることができる。これらの抗体配列は、天然に存在する抗体の配列であってもよく、または複数の抗体のコンセンサス配列であってもよい（Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３ （１９９１）； Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６：９７１ （１９９３） およびＣａｒｔｅｒらによる国際公開第ＷＯ９２／２２６５３号を参照）。

したがって、別の実施形態では、本発明は、抗ＣＤ４０抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖フレームワーク領域、および重鎖ＣＤＲであってその少なくとも１つが配列番号５、６、７、８、９、１０、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４７、４８、４９、５１、５２、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８９、９０、９１、９２、９３、９４、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、（２）軽鎖フレームワーク領域、および軽鎖ＣＤＲであってその少なくとも１つが配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３９、４０、４１、４２、４３、４４、５３、５４、５５、５６、５７、５８、６７、６８、６９、７０、７１、７２、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する抗体であって、ＣＤ４０に結合する能力を保持している抗体を調製することを含む、方法を提供する。ＣＤ４０に結合する抗体の能力は、実施例に記載されるもののような標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を用いて測定することができる。

抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ３ドメインが、抗原に対する抗体の結合特異性／アフィニティーに特に重要な役割を担っていることは当該技術分野ではよく知られている（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｕｎｏｌ．， １４９：１６０５－１６１２ （１９９２）； Ｐｏｌｙｍｅｎｉｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５２：５３１８－５３２９ （１９９４）； Ｊａｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．， １９３：４００－４１９ （１９９５）； Ｋｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒｉｔ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ８３：２５２－２６０ （２０００）； Ｂｅｉｂｏｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ， ２９６：８３３－８４９ （２０００）； Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９５：８９１０－８９１５ （１９９８）； Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１６：２１６１－２１６２ （１９９４）； Ｄｉｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １５７：７３９－７４９ （１９９６）を参照）。したがって、上記に記載されるようにして調製される本発明の組換え抗体は、好ましくは、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、および３Ｂ６－ＮＳの重鎖および／または軽鎖のＣＤＲ３を有する。抗体は更に、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、および３Ｂ６－ＮＳのＣＤＲ２を含んでもよい。抗体は更に、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、および３Ｂ６－ＮＳのＣＤＲ１を含んでもよい。抗体は更に、ＣＤＲの任意の組み合わせを含んでもよい。

したがって、別の実施形態では、本発明は更に、抗ＣＤ４０抗体であって、（１）重鎖フレームワーク領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、および、３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳのＣＤＲ３から選択される重鎖ＣＤＲ３領域と、（２） 軽鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、および、３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳのＣＤＲ３から選択される軽鎖ＣＤＲ３領域と、を有し、ＣＤ４０に結合する抗ＣＤ４０抗体を更に提供する。抗体は、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳの重鎖ＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ２を更に含んでもよい。抗体は、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳの重鎖ＣＤＲ１および／または軽鎖ＣＤＲ１を更に含んでもよい。
改変された配列を有する抗体の作製

別の実施形態では、本発明の抗ＣＤ４０抗体の可変領域配列、またはその部分を改変することにより、結合性（すなわち、未改変の抗体と同一のエピトープとの）を保持し、したがって機能的に同等である、構造的に関連した抗ＣＤ４０抗体が作製される。抗原結合性を除去することなく変化させることができる残基を同定する方法は、当該技術分野では周知のものである（例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ． （Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ （１９９２） １０（７）：７７９－８３ （ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ， ｔｈｅｎ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｆｉｘｅｄ ＣＤＲ３ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｈａｎｇｅｓ）， Ｊｅｓｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（１９９４） Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２（９）：８９９－９０３ （ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ ｔｏ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ）， Ｓｈａｒｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９８６） ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８３（８）：２６２８－３１ （ｓｉｔｅ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ａｎ ｉｎｖａｒｉａｎｔ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅ ａｔ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ－ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）； Ｃａｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５５（１２）：５６４７－５４ （ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｓｓ ａｎｄ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｆｒｏｍ ｒａｎｄｏｍ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎを参照）。

したがって、本発明の一態様では、上記に述べた操作された抗体のＣＤＲ１、２、および／または３領域は、本明細書に開示される抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳのものと正確に同じアミノ酸配列を有することができる。しかしながら、本発明の他の態様では、抗体は、３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳの正確なＣＤＲ配列からの誘導体でありながら、ＣＤ４０と効果的に結合する能力を依然、保持する誘導体を含む。そのような配列の改変には、１個または複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換（例えば、上記に述べた保存的な配列の改変）が含まれる。配列の改変は、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳの特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列について上記に述べたコンセンサス配列に基づたものであってもよい。

したがって、別の実施形態では、操作された抗体は、例えば、抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、または３Ｂ６－ＮＳの１つまたはそれより多くのＣＤＲと９０％、９５％、９８％、または９９．５％の同一性を有する１つまたはそれより多くのＣＤＲで構成され得る。上記に記載の値の間の範囲、すなわち、上記の配列の１つまたはそれより多くと９０～９５％、９５～９８％、または９８～１００％の同一性を有するＣＤＲも本発明に包含されるものとする。

別の実施形態では、ＣＤＲの１つまたはそれより多くの残基を変えて結合性を改変することでより好ましい結合速度、より好ましい解離速度、またはその両方を実現して、理想的な結合定数を実現することができる。この手法を用いて、例えば、１０^１０Ｍ^－１またはそれより大きな超高結合アフィニティーを有する抗体を得ることができる。当該技術分野では周知であり、本明細書に記載のアフィニティー成熟技術を用いてＣＤＲ領域を変化させた後、得られた結合分子を所望の結合の変化についてスクリーニングすることができる。したがって、ＣＤＲを変化させる際に、結合アフィニティーの変化および免疫原性を監視してスコア評価することにより、結合性と低免疫原性とが最良に組み合わされるように最適化された抗体を得ることができる。

ＣＤＲ内の改変に加えて、またはその代わりに、これらの改変が抗体の結合アフィニティーを消失させない限り、抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４の１つまたはそれより多くに改変を行うことも可能である。例えば、本発明の抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のフレームワーク領域内の１つまたはそれより多くの非生殖細胞系アミノ酸残基を、生殖細胞系アミノ酸残基（すなわち、抗体が有意な配列同一性を有するヒト生殖細胞系配列内の重鎖または軽鎖可変領域に対応するアミノ酸残基）と置換する。例えば、抗体鎖をその抗体鎖が有意な配列同一性を共有する生殖細胞系抗体鎖とアラインすることができ、抗体のフレームワーク配列と生殖細胞系鎖のフレームワークとの間で一致していないアミノ酸残基を生殖細胞系配列からの対応する残基と置換することができる。抗体の可変フレームワーク領域とこれに相当するヒト生殖細胞系配列の可変フレームワーク領域との間でアミノ酸が異なる場合、そのアミノ酸が以下のカテゴリーの１つに含まれると妥当に予想される場合に、通常は抗体のフレームワークのアミノ酸を相当するヒト生殖細胞系配列のアミノ酸と置換する。すなわち、
（１）抗原に直接非共有結合するアミノ酸残基、
（２）ＣＤＲ領域に隣接したアミノ酸残基、
（３）他の形でＣＤＲ領域と相互作用するアミノ酸残基（例えば、コンピュータモデリングによって決定した場合にＣＤＲ領域の約３～６Å以内）、または
（４）ＶＬ－ＶＨ界面に関与するアミノ酸残基。

「抗原に直接非共有結合する」残基には、例えば、水素結合、ファンデルワールス力、および疎水性相互作用などの確立された化学力によって抗原上のアミノ酸と高い確率で直接相互作用するフレームワーク領域内の位置のアミノ酸が含まれる。したがって、一実施形態では、本発明の抗体のフレームワーク領域内のアミノ酸残基を、抗原に直接非共有結合する対応する生殖細胞系アミノ酸残基と置換する。

「ＣＤＲ領域に隣接した」残基には、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されたＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲに直接隣接する位置などの、抗体の一次配列中の１つまたはそれより多くのＣＤＲに直接隣接した位置のアミノ酸残基が含まれる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１ （１９８７）を参照）。したがって、一実施形態では、本発明の抗体のフレームワーク領域内のアミノ酸残基を、ＣＤＲ領域に隣接した対応する生殖細胞系アミノ酸残基により置換する。

「他の形でＣＤＲ領域と相互作用する」残基には、二次構造分析によってＣＤＲ領域に影響を及ぼすのに充分な空間的配向にあると決定された残基が含まれる。かかるアミノ酸は、一般に、ＣＤＲ内の特定の原子の約３オングストローム単位（Å）内に側鎖原子を有し、上記に挙げた化学力などの確立された化学力によってＣＤＲの原子と相互作用することができる原子を含まなければならない。したがって、一実施形態では、本発明の抗体のフレームワーク領域内のアミノ酸残基を、他の形でＣＤＲ領域と相互作用する、対応する生殖細胞系アミノ酸残基により置換する。

フレームワーク中のいくつかの位置のアミノ酸は、多くの抗体のＣＤＲのコンフォメーション（例えば、ＣＤＲと相互作用することができる）を決定するうえで重要であることが知られている（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ， 前出 Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， 前出および Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５：１７５ （１９９０），当該文献をいずれも参照により本明細書に援用する）。これらの著者によって、いくつかの既知の抗体の構造の分析により、ＣＤＲのコンフォメーションにとって重要な保存されたフレームワーク残基が同定されている。分析された抗体は、ＣＤＲのコンフォメーションに基づいて限られた数の構造的または「カノニカル（ｃａｎｏｎｉｃａｌ）」クラスに当てはまった。カノニカルクラスのメンバー内で保存されたフレームワーク残基を、「カノニカル」残基という。カノニカル残基には、軽鎖の残基２、２５、２９、３０、３３、４８、６４、７１、９０、９４、および９５、ならびに重鎖の残基２４、２６、２９、３４、５４、５５、７１、および９４が含まれる。更なる残基（例えば、ＣＤＲ構造決定残基）を、Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｔｏｎ （１９９６） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２６３：８００に記載の方法にしたがって同定することができる。特に、軽鎖の２位、４８位、６４位、および７１位ならびに重鎖の２６～３０位、７１位、および９４位のアミノ酸（Ｋａｂａｔにしたがって番号付けしたもの）は、多くの抗体のＣＤＲと相互作用することができることが知られている。軽鎖の３５位と重鎖の９３位および１０３位のアミノ酸もＣＤＲと相互作用する可能性が高い。ＣＤＲのコンフォメーションに影響を及ぼし得る更なる残基を、Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ （１９９２） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２２４：４８７に記載の方法にしたがって同定することができる。かかる残基は「バーニア」残基と称され、ＣＤＲの基礎を与える（すなわち、ＣＤＲの「プラットフォーム」を形成する）フレームワーク領域中の残基である。

「ＶＬ－ＶＨ界面に関与する」残基,または「パッキング残基」には、例えば、Ｎｏｖｏｔｎｙ ａｎｄ Ｈａｂｅｒ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ８２：４５９２－６６ （１９８５） またはＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ， 前出によって定義されたＶＬとＶＨとの間の界面の残基が含まれる。

特定のアミノ酸が１つまたはそれより多くの上記のカテゴリーに当てはまるかどうかが幾分、不明確である場合がある。そのような場合、一方が特定の置換を有し、他方は有さない代替的な変異抗体を作製する。このようにして作製された代替的な変異抗体を、本明細書に記載されるアッセイのいずれかで所望の活性について試験し、好ましい抗体を選択することができる。

フレームワーク領域内の置換の更なる候補として、ある抗体についてその位置では珍しい、すなわち「稀な」アミノ酸である。これらのアミノ酸を、ヒト生殖細胞系配列の相当する位置またはより一般的な抗体の相当する位置からのアミノ酸と置換することができる。例えば、抗体のフレームワーク領域内のアミノ酸がその位置で稀であり、生殖細胞系配列内の対応するアミノ酸が免疫グロブリン配列内のその位置において普通である場合、または、抗体内のアミノ酸がその位置で稀であり、生殖細胞系配列内の対応するアミノ酸も他の配列と比較してやはり稀である場合に置換を行うことが望ましい場合がある。稀なアミノ酸を、たまたま抗体で一般的である生殖細胞系配列からのアミノ酸と置換することにより、その抗体の免疫原性を低くすることができると考えられる。置換は、例えば対をなさないシステイン残基、または想定されるＮ結合型グリコシル化部位の場合にも望ましい場合がある。

本明細書で使用するところの「稀な」なる用語は、代表的な配列試料中の配列の約２０％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、更により好ましくは約３％未満、更により好ましくは約２％未満、更により好ましくは約１％未満においてその位置に存在するアミノ酸を示し、本明細書で使用するところの「普通な」なる用語は、代表的な試料中の配列の約２５％超、通常は約５０％超に存在するアミノ酸を示す。例えば、すべての軽鎖および重鎖可変領域の配列は、互いに特に相同であり、特定の重要な位置に同じアミノ酸を有する配列の「サブグループ」にそれぞれ分類される（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ． 前出）。ある抗体配列内のアミノ酸が配列間で「稀」であるかまたは「普通」であるかを決定する際、その抗体配列と同じサブグループの配列のみを考慮することがしばしば好ましい。

一般に、抗体のフレームワーク領域は、それらが由来するヒト生殖細胞系配列のフレームワーク領域と通常は実質的に同一であり、より通常には同一である。いうまでもなく、フレームワーク領域内のアミノ酸の多くは、抗体の特異性またはアフィニティーに直接的にはほとんどまたはまったく寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多くの個々の保存的置換は、得られる免疫グロブリンの特異性または親和性を大きく変化させることなく許容され得る。したがって、一実施形態では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系可変フレームワーク領域配列またはかかる配列のコンセンサス配列と少なくとも８５％の配列同一性を共有する。別の実施形態では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系可変フレームワーク領域配列またはかかる配列のコンセンサス配列と少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有する。

抗体は、ＣＤ４０に単純に結合する以外に、例えば以下のような本発明の抗体の他の機能性の保持について選択することができる。すなわち、
（ａ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に免疫反応を誘導または促進すること、
（ｂ）ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導することなく抗原に対する免疫反応を誘導または促進すること、
（ｃ）ＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく抗原に対する免疫反応を誘導または促進すること、および／または
（ｄ）ＣＤ４０Ｌと相乗作用を示す能力。

更なる特徴としては、例えば、
（ｅ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係にヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合を阻害しない、
（ｆ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係にヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合を阻害する、
（ｇ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係なＡＰＣ上で発現されたヒトＣＤ４０の活性化、
（ｈ）腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、
（ｉ）Ｔ細胞刺激活性、および／または
（ｊ）促進されたＢ細胞活性化が挙げられる。
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体の特徴付け

本発明のモノクローナル抗体は、さまざまな公知の技術を使用してＣＤ４０との結合性について特徴付けることができる。一般的に、抗体は最初にＥＬＩＳＡによって特徴付けられる。簡単に言うと、精製したＣＤ４０を含むＰＢＳでマイクロタイタープレートをコーティングした後、ＰＢＳで希釈したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などの無関係のタンパク質でブロッキングすることができる。ＣＤ４０で免疫化したマウス由来の血漿の希釈物を各ウェルに添加し、３７℃で１～２時間インキュベートする。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄してから、アルカリホスファターゼと結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬と３７℃で１時間インキュベートする。洗浄後、プレートをＡＢＴＳ基質で発色させ、ＯＤ４０５で分析する。最も高い力価を生じるマウスを融合に使用することが好ましい。

上記に述べたようなＥＬＩＳＡアッセイを用いて抗体について、ひいては、ＣＤ４０免疫原と正の反応性を示す抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニングすることができる。次いで、好ましくは高いアフィニティーでＣＤ４０に結合するハイブリドーマをサブクローニングし、さらに特徴付けることができる。次いで、親細胞の反応性を保持する各ハイブリドーマから１個のクローン（ＥＬＩＳＡにより）を、細胞バンクの作製および抗体精製のために選択することができる。

抗ＣＤ４０抗体を精製するには、選択したハイブリドーマを、回転ビン、２Ｌのスピナーフラスコ、または他の培養システムで増殖させることができる。上清を濾過し、濃縮した後、プロテインＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用してアフィニティークロマトグラフィーを行ってタンパク質を精製することができる。ＰＢＳとの緩衝液交換後、吸光係数１．４３を用い、ＯＤ_２８０で、または好ましくは比濁分析によって濃度を決定することができる。ＩｇＧは、ゲル電気泳動および抗原特異的方法によって確認することができる。

選択された抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを決定するために、各抗体を、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ社、イリノイ州ロックフォード）を使用してビオチン化することができる。ビオチン化したＭＡｂの結合を、ストレプトアビジン標識プローブで検出することができる。精製抗体のアイソタイプを決定するには、当該技術分野で認識されている方法を用いてアイソタイプＥＬＩＳＡを行うことができる。例えば、マイクロタイタープレートの各ウェルを、１０μｇ／ｍｌの抗Ｉｇで４℃で一晩コーティングすることができる。５％ＢＳＡによるブロッキング後、プレートを１０μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体または精製アイソタイプのコントロールと周囲温度で２時間反応させる。次いで、各ウェルをＩｇＧｌまたは他のアイソタイプ特異的結合体化プローブのいずれかと反応させることができる。上記に述べたようにプレートを発色させ、分析する。

ＣＤ４０を発現する生細胞に対するモノクローナル抗体の結合を試験するには、フローサイトメトリーを使用することができる。簡単に言うと、膜結合ＣＤ４０を発現する細胞株および／またはヒトＰＢＭＣ（標準的な培養条件下で増殖させたもの）を、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で異なる濃度のモノクローナル抗体と４℃で１時間混合する。洗浄後、細胞を、一次抗体染色と同じ条件下でフルオレセイン標識した抗ＩｇＧ抗体と反応させる。各試料を光および側方散乱性を利用したＦＡＣＳｃａｎ装置により分析することで単一の細胞にゲーティングすることができ、標識抗体の結合性が測定される。蛍光顕微鏡法を用いた別のアッセイを、フローサイトメトリーアッセイ（に加えてまたはその代わりに）使用することができる。細胞を上記に述べたのとまったく同様にして染色し、蛍光顕微鏡法により調べることができる。この方法は、個々の細胞を視覚化することが可能であるが、抗原の密度に依存して感度が低下し得る。

抗ＣＤ４０ ＩｇＧを、ウェスタンブロッティングによりＣＤ４０抗原との反応性について更に試験することができる。簡単に言うと、ＣＤ４０を発現する細胞からの細胞抽出物を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけることができる。電気泳動後、分離した抗原をニトロセルロース膜に転写し、２０％マウス血清でブロッキングし、試験しようとするモノクローナル抗体でプロ－ビングする。抗ＩｇＧアルカリホスファターゼを使用してＩｇＧ結合を検出し、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質タブレット（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ． Ｃｏ．社、ミズーリ州セントルイス）により発色させることができる。

さまざまな抗ＣＤ４０抗体の結合アフィニティー、交差反応性、および結合反応速度の分析方法としては、例えば、実施例に述べられるようなＢｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ装置（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ社、スウェーデン、ウプサラ）を用いたＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析、またはＯｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫｅ装置を用いたバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）などの当該技術分野では周知の標準的なアッセイが含まれる。
抗ＣＤ４０抗体３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、および３Ｂ６－ＮＳと同じエピトープに結合するアゴニスト抗ＣＤ４０抗体（特定のエピトープマッピング法により決定される）も本明細書において提供される。例えば、実施例１７に述べられるように、本発明の抗体（例えば抗体３Ｃ３）は、ヒトＣＤ４０の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号１３３）のアミノ酸残基１～５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基、例えばヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４、および／または３６に結合する。抗体３Ｃ３は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）の１つまたはそれより多くのアミノ酸２６、３８、および／または３０、例えばヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸５、３３、３４および３６、またはヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸残５、３３および３６に更に結合することも示されている。

本発明の他の抗体（例えば抗体３Ｇ５）は、ヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸残基１３～１５および３３～３６内の１つまたはそれより多くの残基、例えばヒトＣＤ４０のＥＣＤ（配列番号１３３）のアミノ酸３３、３４、および３６に結合する。

本明細書に記載のヒトＣＤ４０上のエピトープ（例えば例示される抗体と同じエピトープ）に結合する抗体は、治療的に有用な性質を示す。例えば、実施例１６および２０に示されるように、抗体３Ｃ３は、例えば、Ｒａｍｏｓ細胞とインキュベートした場合のＣＤ９５の発現の誘導の増大、ヒトＢ細胞とインキュベートした場合のＢ細胞増殖の増大、および／または樹状細胞とインキュベートした場合のＩＬ１２ｐ４０の発現の誘導の増大によって測定される可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）と相乗的アゴニスト作用を示す。

したがって、３Ｃ３と同じエピトープに結合する抗体は、ヒトＣＤ４０のリガンド結合部位に結合するものを含む他の治療剤と相乗作用を示す能力を有する。代表的な相乗作用としては、例えば、免疫機能のアップレギュレーション（例えばワクチン療法におけるＴ細胞媒介性免疫反応、癌治療におけるＮＫ活性化など）、細胞増殖の阻害（例えば癌治療における）、および／またはＡＰＣによる抗原のプロセシングおよび提示の促進（例えばワクチン療法における）が挙げられる。

本明細書に記載されるように、本明細書に記載の抗体と「ＣＤ４０上の同じエピトープ」に結合する抗体を決定するための手法としては、例えば、エピトープの原子分解能を与える、抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析などのエピトープマッピング法が挙げられる。他の方法としては、抗原フラグメントまたは抗原の突然変異体に対する抗体の結合を観察するものがあり、抗原配列内のアミノ酸残基の変化による結合の消失が、エピトープ要素の指標としばしばみなされる。更に、エピトープマッピング用の計算コンビナトリアル法を用いることもできる。方法は、コンビナトリアルファージディスプレイライブラリーから特異的な短鎖ペプチド（天然の３次元形態、または変性した形態の）をアフィニティー単離する、対象とする抗体の能力に基づいたものとすることもできる。そのため、これらのペプチドは、ペプチドライブラリーをスクリーニングするために用いられる抗体に対応したエピトープを定義するための手掛かりとみなされる。エピトープマッピングでは、コンフォメーション的に不連続なエピトープをマッピングできることが示されている計算アルゴリズムも開発されている。
ＩＩ．分子結合体／免疫毒素

本発明は、ＡＰＣ上の受容体に結合する抗体、例えばＣＤ４０に結合する抗体に連結された腫瘍抗原またはウイルス抗原などの抗原を含む、さまざまな治療的分子結合体（例えばワクチン結合体）を提供する。これにより、ＣＤ４０を発現する細胞（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞、およびマクロファージ）などのＡＰＣにこの抗原をターゲティングして、抗原に対するプロセシング、提示、および最終的には免疫応答を促進することができる。 かかる結合体の概略図を図１８に示す。図１８では、例えば抗原は、実質的に完全な抗ＣＤ４０抗体の各重鎖のＣＨ３ドメインに遺伝子的に融合されている。しかしながら、以下でさらに検討されるように、これに代えて、抗原をかかる抗体またはそのフラグメントの他の部分に連結してもよく、化学結合などの他の形の結合を利用することもできる点は認識されよう。

本発明での使用に適した抗原としては、例えば、それらに対する予防的または治療的免疫反応が望ましい感染症抗原および腫瘍抗原、例えば、腫瘍細胞または病原性生物によって発現される抗原もしくは感染症抗原が含まれる。例えば、適当な抗原としては、癌の予防または治療のための腫瘍関連抗原が挙げられる。腫瘍関連抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＷＴ１、メソテリン、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ－２、メランＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＢＲ－１、ＮＹ－ＣＯ－５８、ＭＮ （ｇｐ２５０）、イディオタイプ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－Ａ３、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２およびＭＵＣ－１抗原、ならびに生殖細胞由来腫瘍抗原の配列の全体または一部を含む配列が挙げられる。腫瘍関連抗原には、例えばＬｅ^ａ、Ｌｅ^ｂ、ＬｅＸ、ＬｅＹ、Ｈ２、Ｂ１、Ｂ２抗原などの血液型抗原も含まれる。また、複数の抗原が、本発明の抗原抗体コンストラクトに含まれてもよい。例えば、ＭＡＧＥ抗原を、メラニンＡ、チロシナーゼ、およびｇｐ１００などの他の抗原、ならびにＧＭ－ＣＳＦまたはＩＬ－１２などのアジュバントと組み合わせて、抗ＡＰＣ抗体に結合させることができる。

他の適当な抗原としては、ウイルス性疾患の予防および治療用のウイルス抗原が挙げられる。ウイルス性抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、ＨＩＶ－１ ｇａｇ、ＨＩＶ－１ ｅｎｖ、ＨＩＶ－１ ｎｅｆ、ＨＢＶ （表面またはコア抗原）、ＨＰＶ、ＦＡＳ、ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２、ｐ１７、ＯＲＦ２およびＯＲＦ３抗原が挙げられる。細菌抗原の例としては、これらに限定されるものではないが、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）または梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）が挙げられる。本発明の抗体細菌抗原結合体は、炭疸、ボツリヌス症、破傷風、クラミジア、コレラ、ジフテリア、ライム病、梅毒、および結核などの各種の細菌性疾患の治療または予防に使用することができる。

上記の抗原の配列は当該技術分野では周知のものである。例えば、ＭＡＧＥ－３ ｃＤＮＡ配列の例は米国特許第６，２３５，５２５号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＥＳＯ－１核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第５，８０４，３８１号および米国特許第６，０６９，２３３号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、メラン－Ａ核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第５，６２０，８８６号および米国特許第５，８５４，２０３（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＢＲ－１核酸配列およびタンパク質配列の例は米国特許第６，７７４，２２６号および米国特許第６，９１１，５２９号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＮＹ－ＣＯ－５８核酸配列およびタンパク質配列の例は国際公開第ＷＯ０２０９０９８６号（Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）に記載されており、ＨＥＲ－２／ｎｅｕタンパク質のアミノ酸配列の例はＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＡ５８６３７として入手可能であり、ヒト癌胎児性抗原様１（ＣＥＡ－１）のヌクレオチド配列（ｍＲＮＡ）はＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＭ＿０２０２１９として入手可能である。

一実施形態では、抗原は、例えば、ＨＰＶ－１６抗原、ＨＰＶ－１８抗原、ＨＰＶ－３１抗原、ＨＰＶ－３３抗原、および／またはＨＰＶ－３５抗原などのＨＰＶ抗原である。ＨＰＶ－１６のゲノムについては、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， １４５： １８１－１８５ （１９８５）に記載されており、ＨＰＶ－１８をコードするＤＮＡ配列については米国特許第５，８４０，３０６号に記載されており、これらの開示内容をその全容にわたって参照により本明細書に援用する。ＨＰＶ－１６抗原（例えば、ＨＰＶ－１６のＥ１および／またはＥ２タンパク質の血清反応領域）については米国特許第６，５３１，１２７号に記載されており、ＨＰＶ－１８抗原（例えば、ＨＰＶ－１８のＬ１および／またはＬ２タンパク質の血清反応領域）については米国特許第５，８４０，３０６号に記載されており、これらの開示内容をその全容にわたって参照により本明細書に援用する。同様に、ＨＢＶの完全なゲノムは、その開示内容を本明細書に援用するところのＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＣ＿００３９７７で入手可能である。ＨＣＶのゲノムについては、その開示内容を本明細書に援用するところの欧州特許出願第３１８ ２１６号に記載されている。その開示内容を参照により本明細書に援用するところの国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１３４８号は、ＨＣＶゲノムのクローンの配列情報、ＨＣＶウイルスタンパク質のアミノ酸配列、ならびにＨＣＶタンパク質およびこれに由来するペプチドを含むＨＣＶワクチン用のかかる組成物の製造および使用方法について開示している。

タンパク質の抗原ペプチド（すなわち、Ｔ細胞エピトープを含むもの）は、当該技術分野では周知の様々な方法で同定することができる。例えば、ウェブベースの予測アルゴリズム（ＢＩＭＡＳおよびＳＹＦＰＥＩＴＨＩ）を使用してタンパク質配列を分析することで、これまでにＣＴＬにより定義されている１０，０００種類の充分に特徴付けされたＭＨＣ結合ペプチドの内部データベースに一致する潜在的なＭＨＣクラスＩおよびＩＩ結合ペプチドを得ることによってＴ細胞エピトープを予想することができる。スコアが高かったペプチドをランク付けし、特定のＭＨＣ分子に対する高いアフィニティーに基づいて「興味深いペプチド」として選択することができる。

Ｔ細胞エピトープを含む抗原ペプチドの別の同定方法は、組換えにより、合成により、または特定の限定的条件下では、タンパク質の化学的切断により、生成することができる所望の長さの重複しないペプチドまたは所望の長さの重複するペプチドにタンパク質を分割し、免疫原性、例えば、Ｔ細胞の応答の誘導（すなわち、増殖またはリンホカイン分泌）について試験することを含む。

例えば、精密マッピング技術によってタンパク質の正確なＴ細胞エピトープを決定するには、Ｔ細胞の生物学的手法により決定した場合にＴ細胞刺激活性を有し、したがって少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドを、ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかにアミノ酸残基を付加するかまたは欠失させることによって改変し、試験を行って改変ペプチドに対するＴ細胞反応性の変化を決定することができる。天然タンパク質配列中の重複領域を共有する２つまたはそれより多くのペプチドが、Ｔ細胞の生物学的手法により決定した場合にヒトＴ細胞刺激活性を有することが見出された場合、かかるペプチドの全体または一部を含む更なるペプチドを生成し、これらの更なるペプチドを同様の手順によって試験することができる。この手法の後、ペプチドを選択し、組換えまたは合成により生成する。ペプチドは、ペプチドに対するＴ細胞応答の強度（例えば、刺激指数）を含む異なる因子に基づいて選択される。次いで、これらの選択されたペプチドの物理的および化学的性質（例えば、溶解性、安定性）を調べることでペプチドが治療組成物における使用に適しているかどうか、またはペプチドに改変が必要かどうかを判定することができる。

更に、ワクチン結合体は、やはり抗原に対する免疫反応を促進する１種またはそれより多くの免疫賦活剤を含むことができる。本発明の抗体抗原ワクチン結合体は、遺伝子的にまたは化学的に作製することができる。いずれの場合も、結合体の抗体部分は、全抗体またはＦａｂフラグメントもしくは一本鎖Ｆｖのような抗体の部分で構成することができる。更に、複数の抗原および／または免疫賦活剤が結合体に含まれてもよい。

化学的に構築された抗体抗原結合体は、各種の周知の容易に入手可能な架橋剤を使用して作製することができる。これらの架橋剤は、抗樹状細胞抗体および選択された抗原上の異なる反応性アミノ酸または炭水化物側鎖と共有結合を形成する（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチル－チオアセタート（ＳＡＴＡ）、スルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシラート（スルホ－ＳＭＣＣ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）などのホモ官能性またはヘテロ官能性化合物であってよい。プロテインＡ、カルボジイミド、およびｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）などの他のカップリング剤および架橋剤を使用して共有結合を生成することもできる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６０：１６８６； Ｌｉｕ， ＭＡ ｅｔ ａｌ． （１９８５） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８２：８６４８を参照）。他の方法としては、Ｐａｕｌｕｓ （Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ． Ｍｉｔｔ． （１９８５） Ｎｏ． ７８， １１８－１３２）、Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ． （Ｓｃｉｅｎｃｅ （１９８５） ２２９：８１－８３）、およびＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ． （Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． （１９８７） １３９： ２３６７－２３７５）に記載されるものが挙げられる。好ましい結合化剤は、いずれもＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ社（イリノイ州ロックフォード）より販売されるＳＡＴＡおよびスルホ－ＳＭＣＣである。免疫賦活薬を、上記に述べたのと同じ連結方法を用いて本発明の分子結合体に化学的に連結することもできる。

別の実施形態では、本発明の抗体は、細胞毒素、薬物、または放射性同位体などの治療部分に連結される。細胞毒素と結合される場合、これらの抗体結合体は「免疫毒素」と呼ばれる。細胞毒素または細胞毒性剤には、細胞に有害な（例えば、殺滅する）任意の薬剤が含まれる。例として、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにその類似体またはホモログが含まれる。治療薬としては、これらに限定されるものではないが、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）など）、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。本発明の抗体を、例えば放射性ヨウ素などの放射性同位体と結合させることで自己免疫疾患または炎症性疾患などの樹状細胞関連疾患、または移植片対宿主疾患を治療するための細胞傷害性放射性医薬品を生成することができる。

本発明の抗体結合体を使用して特定の生物学的反応を改変することができるが、薬剤部分は古典的な化学治療薬に限定されるものと解釈されるべきではない。例えば、薬剤部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドとすることができる。かかるタンパク質としては、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素などの酵素活性毒素または活性を有するそのフラグメント；腫瘍壊死因子またはインターフェロン－γなどのタンパク質；または、例えば、リンホカイン、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、または他の増殖因子などの生物反応調節物質を挙げることができる。

かかる治療部分を抗体と結合する技術は周知のものである（例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．， ”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ２４３－５６ （Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ． １９８５）； Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．， ”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”， ｉｎ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ （２ｎｄ Ｅｄ．）， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ６２３－５３ （Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ． １９８７）； Ｔｈｏｒｐｅ， ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４： Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ４７５－５０６ （１９８５）； ”Ａｎａｌｙｓｉｓ， Ｒｅｓｕｌｔｓ， Ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ Ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”， ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ， Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ．）， ｐｐ． ３０３－１６ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）， およびＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， ”Ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”， Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ．， ６２：１１９－５８ （１９８２）を参照）。
ＩＩＩ．組成物

別の実施形態では、本発明は、組成物、例えば、担体（例えば、薬学的に許容される担体）とともに製剤化した本発明のモノクローナル抗体の１つまたは組み合わせを含む組成物を提供する。本発明の抗体を含む二重特異的分子を含む組成物も提供される。一実施形態では、組成物は、複数の（例えば、２種またはそれより多くの）本発明の単離抗体の組み合わせを含む。好ましくは、組成物の抗体のそれぞれは、ＣＤ４０の予め選択された異なるエピトープに結合する。

本発明の薬学的組成物を、併用療法として（すなわち、他の薬剤と組み合わせて）投与することもできる。例えば、併用療法は、本発明の組成物を、抗炎症剤、ＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ薬）、免疫抑制剤、および化学療法剤などの少なくとも１つまたはそれより多くの更なる治療薬とともに含むことができる。本発明の医薬組成物は、放射線治療と組み合わせて投与することもできる。他の抗体との同時投与も本発明に包含される。

本明細書で使用するところの「担体」および「薬学的に許容される担体」なる用語としては、生理学的適合性を有する任意およびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適したものであることが好ましい。投与経路に応じて、活性化合物（すなわち、抗体、二重特異性分子、および多重特異性分子）を、材料中にコーティングして、化合物を不活化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護することができる。

本発明の抗体およびコンストラクトとともに使用することができるアジュバントの例としては、フロイント不完全アジュバントおよび完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ミシガン州、デトロイト）；Ｍｅｒｃｋアジュバント６５（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｉｎｃ．社、ニュージャージー州、ラーウェイ）；ＡＳ－２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ社、ペンシルベニア州、フェラデルフィア）、アルミニウム塩（水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウムなど）；カルシウム、鉄、または亜鉛の塩；アシル化チロシンの不溶性懸濁液；アシル化糖；カチオンまたはアニオン性誘導体化多糖類；ポリホスファゼン；生分解性ミクロスフィア；ＧＭ－ＣＳＦ、インターロイキン－２、－７、－１２、および他の同様の因子などのサイトカイン類；３Ｄ－ＭＰＬ；ＣｐＧオリゴヌクレオチド；およびモノホスホリル脂質Ａ（例えば、３－デ－Ｏ－アシル化モノホスホリル脂質Ａ）が挙げられる。

ＭＰＬアジュバントは、Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社（ワシントン州、シアトル、例えば米国特許第４，４３６，７２７号、同第４，８７７，６１１号、同第４，８６６，０３４号、および同第４，９１２，０９４号を参照）より販売されている。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧジヌクレオチドがメチル化されていない）が周知であり、例えば、国際公開第ＷＯ９６／０２５５５号、同第ＷＯ９９／３３４８８号、および米国特許第６，００８，２００号および同第５，８５６，４６２号に記載されている。免疫賦活剤のＤＮＡ配列も、例えば、Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７３：３５２， １９９６に記載されている。

更なる別のアジュバントには、例えば、サポニン（Ｑｕｉｌ Ａまたはその誘導体（ＱＳ２１およびＱＳ７（Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．社、マサチューセッツ州、フラミンガム）が含まれる）；エスチン；ジギトニン；またはカスミソウもしくはキノアのサポニンなど）；モンタニドＩＳＡ ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ社、フランス）；ＳＡＦ（Ｃｈｉｒｏｎ社、米国、カリフォルニア州）；ＩＳＣＯＭＳ（ＣＳＬ社）、ＭＦ－５９（Ｃｈｉｒｏｎ社）；ＳＢＡＳシリーズのアジュバント（例えば、ＳＢＡＳ－２またはＳＢＡＳ－４、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ社、ベルギー、リクセンサールより販売されるもの）；Ｄｅｔｏｘ（Ｅｎｈａｎｚｙｎ（商標））（Ｃｏｒｉｘａ社、モンタナ州、ハミルトン）；ＲＣ－５２９（Ｃｏｒｉｘａ社、モンタナ州、ハミルトン）、および他のアミノアルキルグルコサミニド４－リン酸（ＡＧＰ）；国際公開第ＷＯ９９／５２５４９Ａ１号に記載のものなどのポリオキシエチレンエーテルアジュバント；合成イミダゾキノリン（イミキモド ［Ｓ－２６３０８、Ｒ－８３７］（Ｈａｒｒｉｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ １９： １８２０－１８２６， ２００１）；およびレシキモド［Ｓ－２８４６３、Ｒ－８４８］（Ｖａｓｉｌａｋｏｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０４： ６４－７４， ２０００；ツカレソールなどの抗原提示細胞およびＴ細胞の表面上で構成的に発現されるカルボニルおよびアミンのシッフ塩基（Ｒｈｏｄｅｓ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３７７： ７１－７５， １９９５）；タンパク質またはペプチドとしてのサイトカイン、ケモカイン、および共刺激分子（例えば、炎症促進性サイトカイン（インターフェロン、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＴＧＦ－α、およびＴＧＦ－βなど）、Ｔｈ１インデューサー（インターフェロンγ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、およびＩＬ－２１など）、Ｔｈ２インデューサー（ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、およびＩＬ－１３など）、ならびに他のケモカインおよび共刺激遺伝子（ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＣＡ－３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ７０など）が含まれる）；免疫賦活剤ターゲティングリガンド（ＣＴＬＡ－４およびＬ－セレクチンなど）、アポトーシス刺激タンパク質およびペプチド（Ｆａｓなど）；合成脂質ベースのアジュバント（バックスフェクチン（Ｒｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｖａｃｃｉｎｅ １９： ３７７８－３７８６， ２００１）、スクアレン、α－トコフェロール、ポリソルベート８０、ＤＯＰＣ、およびコレステロールなど）；内毒素、［ＬＰＳ］（Ｂｅｕｔｌｅｒ， Ｂ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ３： ２３－３０， ２０００）；Ｔｏｌｌ受容体を誘導してＴｈ１誘導性サイトカインを産生させるリガンド（合成微生物リポタンパク質、微生物タンパク質ｐ１９、ペプチドグリカン、テイコ酸、および脂質Ａなど）；およびＣＴ（コレラ毒素のサブユニットＡおよびＢ）およびＬＴ（大腸菌由来の熱不安定性エンテロトキシンのサブユニットＡおよびＢ）、熱ショックタンパク質ファミリー（ＨＳＰ）、およびＬＬＯ（リステリオリシンＯ；国際公開第ＷＯ０１／７２３２９号）が挙げられる。これらおよびさまざまな更なるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストが、例えば、Ｋａｎｚｌｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｍａｙ ２００７， Ｖｏｌ １３， Ｎｏ ５に記載されている。本発明の抗ＣＤ４０抗体と併用される好ましい免疫賦活剤は、Ｐｏｌｙ ＩＣなどのＴＬＲ３アゴニストである。

「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、かついかなる望ましくない毒物学的作用ももたらさない塩のことを言う（例えば、Ｂｅｒｇｅ， Ｓ．Ｍ．， ｅｔ ａｌ． （１９７７） Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ６６：１－１９を参照）。かかる塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、および亜リン酸などの非毒性無機酸、ならびに、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸から誘導される酸付加塩が挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、およびカルシウムなどのアルカリ土類金属、ならびにＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、およびプロカインなどの非毒性有機アミンから誘導される塩基付加塩が含まれる。

本発明の組成物は、当該技術分野では周知のさまざまな方法によって投与することができる。当業者には認識されるように、投与経路および／または形態は、所望の結果に応じて変わる。活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系をはじめとする徐放製剤などの、化合物を急速な放出から保護する担体を用いて製剤化することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる製剤を調製する方法は特許が取得されているか、または一般的に当業者には周知のものである。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ｊ．Ｒ． Ｒｏｂｉｎｓｏｎ， ｅｄ．， Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７８を参照されたい。

特定の投与経路によって本発明の化合物を投与するため、その不活化を防止するための物質で化合物をコーティングするか、かかる物質と化合物を同時投与する必要がある場合がある。例えば、化合物を、リポソームなどの適当な担体または希釈剤中で対象に投与することができる。薬学的に許容される希釈剤としては、生理食塩水および水性緩衝液が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水型ＣＧＦエマルジョンおよび従来のリポソームが挙げられる（Ｓｔｒｅｊａｎ ｅｔ ａｌ． （１９８４） Ｊ． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ． ７：２７）。

担体には、滅菌注射液または注射懸濁液の即時調製のための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末が含まれる。薬学的に活性な物質用のかかる媒質および剤の使用は当該技術分野では周知のものである。いずれかの従来の媒質または剤が活性化合物と不適合性である場合以外は、本発明の医薬組成物中でのその使用が考えられる。補助的な活性化合物を組成物に添加することもできる。

治療組成物は、通常、製造および保存条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物を、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬剤濃度に適した他の規則的構造として配合することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適当な混合物を含む溶媒または分散媒とすることができる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合の必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。多くの場合、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に加えることが好ましい。例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンなどの吸収を遅延させる剤を組成物に加えることによって注射用組成物の吸収を遅延させることができる。

必要な量の活性化合物を適切な溶媒中に、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせとともに加えた後、滅菌精密濾過を行うことによって滅菌注射液を調製することができる。一般的に、分散液は、塩基性分散媒および上記に列挙したものからの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに活性化合物を添加することによって調製される。滅菌注射液の調製用の滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）であり、予め滅菌濾過したその溶液から有効成分および任意の更なる所望の成分の粉末が得られる。

投薬レジメンは、最適な所望の反応（例えば、治療反応）が得られるように調整される。例えば、単回ボーラスを投与するか、複数の分割された用量を一定期間にわたって投与するか、または治療状況の必要性により示されるように用量を比例して減らすかまたは増やすことができる。例えば、本発明の抗体は、週１回または２回、皮下または筋肉内注射により投与するか、または月１回または２回、皮下または筋肉内注射により投与することができる。

投与の容易さおよび用量の均一性から、非経口組成物は単位剤形として配合することが特に有利である。本明細書で使用するところの単位剤形とは、治療される対象の単位用量として適当な物理的に個別の単位のことを言い、各単位は、所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性化合物を必要な医薬担体とともに含む。本発明の単位剤形の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および得ようとする特定の治療効果、ならびに（ｂ）個人の感受性を治療するためのかかる活性化合物の調合技術に特有の制限によって規定され、これらに直接依存する。

薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および亜硫酸ナトリウムなどの水溶性酸化防止剤、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、およびα－トコフェロールなどの脂溶性酸化防止剤、ならびに（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、およびリン酸などの金属キレート剤が挙げられる。

治療組成物では、本発明の製剤には、経口、鼻腔内、局所（口内および舌下が含まれる）、直腸、膣内および／または非経口投与に適した製剤が含まれる。かかる製剤は単位剤形として便宜よく提供するができ、薬学分野では周知の任意の方法によって調製することができる。担体材料と組み合わせて単回剤形を与えることができる有効成分の量は、治療される対象、および特定の投与様式に応じて異なる。担体材料と組み合わせることで単回剤形を与えることができる有効成分の量は、一般的に治療効果を与える組成物の量である。一般的に、１００％のうち、この量は、約０．００１％～約９０％の有効成分、好ましくは約０．００５％～約７０％、最も好ましくは約０．０１％～約３０％の範囲である。

膣内投与に適した本発明の製剤には、当該技術分野で適切であることが知られている担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレー製剤も含まれる。本発明の組成物の局所または経皮投与用の剤形としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤が含まれる。活性化合物を、薬学的に許容される担体、および必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液、または噴射剤と滅菌条件下で混合することができる。

本明細書で使用するところの「非経口投与」および「非経口で投与する」なる語句は、腸内および局所投与以外の投与様式（通常、注射による）を意味し、これらに限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内への注射および注入が含まれる。

本発明の医薬組成物に使用することができる適当な水性および非水性の担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、およびポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適当な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。例えばレシチンなどのコーティング物質の使用、分散液の場合には必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって適当な流動性を維持することができる。

これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などの補助剤を含むこともできる。微生物の存在を、滅菌法（前出）ならびに各種抗細菌および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、およびフェノールソルビン酸など）を添加することによって確実に防止することができる。糖および塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に含有させることが望ましい場合もある。更に、注射可能な医薬剤形の吸収を、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を添加することによって遅延させることができる。

本発明の化合物を医薬品としてヒトおよび動物に投与する場合、本発明の化合物は、単独で投与するか、例えば、０．００１～９０％（より好ましくは、０．００５～７０％（０．０１～３０％など））の有効成分を薬学的に許容される担体と組み合わせて含む医薬組成物として投与することができる。

選択される投与経路とは無関係に、適当な水和形態で使用することができる本発明の化合物および／または本発明の医薬組成物は、当業者には周知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形として製剤化される。

本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量を変えることで、患者に毒性を示すことなく、特定の患者に望ましい治療反応、組成物、および投与様式を実現するうえで有効な有効成分の量を得ることができる。選択される用量は、使用される本発明の特定の組成物、そのエステル、またはアミドの活性、投与経路、投与期間、使用される特定の化合物の排泄率、治療期間、使用される特定の組成物と併用される他の薬剤、化合物、および／または材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態、および病歴、ならびに医療分野では周知の同様の要因を含む、各種の薬物動態学的要因に依存する。当該技術分野における通常の技術を有する医師または獣医師であれば、必要な医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、医薬組成物中に使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を得るために必要な量より低い量で開始し、所望の効果が得られるまで用量を段階的に増加させることができる。一般的に、本発明の組成物の適当な日用量は、治療効果を得るのに有効な最も低い用量である化合物の量である。かかる有効用量は、一般的に上記に述べた要因によって決まる。投与は静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下であることが好ましく、標的部位に近接して投与されることが好ましい。必要な場合、治療組成物の有効な日用量を、必要に応じて単位剤形で１日を通じて適当な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回、またはそれよりも多い分割用量として投与することができる。本発明の化合物は単独で投与することが可能であるが、化合物は医薬製剤（組成物）として投与されることが好ましい。

治療組成物は、当該技術分野では周知の医療器具により投与することができる。例えば、好ましい一実施形態では、本発明の治療組成物を、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号に開示される器具などの無針皮下注射器具を使用して投与することができる。本発明で有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御された速度で薬剤を吐出するための埋め込み式微小注入ポンプを開示）；米国特許第４，４８６，１９４号（皮膚を通じて薬物を投与するための治療器具を開示）；米国特許第４，４４７，２３３号（正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示）；米国特許第４，４４７，２２４号（連続的な薬物送達のための可変流量埋め込み式注入装置を開示）；米国特許第４，４３９，１９６号（多室隔室を有する浸透圧薬剤送達システムを開示）；および米国特許第４，４７５，１９６号（浸透圧薬剤送達システムを開示）が挙げられる。多くの他のこうしたインプラント、送達システム、およびモジュールが当業者に知られている。

特定の実施形態では、本発明の抗体を、インビボで適切に分配されるように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は多くの高親水性化合物を排除する。本発明の治療化合物をＢＢＢを通過させるために（必要な場合）、治療化合物を例えばリポソームとして製剤化することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官に選択的に輸送されることでターゲティングされた薬物送達を促進する１つまたは複数の部分を有することができる（例えば、Ｖ．Ｖ． Ｒａｎａｄｅ （１９８９） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２９：６８５を参照）。例示的なターゲティング部分には、葉酸塩またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらに付与された米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ ｅｔ ａｌ．， （１９８８） Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． １５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ． Ｂｌｏｅｍａｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３５７：１４０； Ｍ． Ｏｗａｉｓ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ． Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ． ３９：１８０）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． １２３３：１３４）が挙げられ、これらのうちの異なる種が、本発明の製剤および本発明の分子の成分をを構成し得る； ｐ１２０ （Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６９：９０９０）； Ｋ． Ｋｅｉｎａｎｅｎ； Ｍ．Ｌ． Ｌａｕｋｋａｎｅｎ （１９９４） ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ． ３４６：１２３； Ｊ．Ｊ． Ｋｉｌｌｉｏｎ； Ｉ．Ｊ． Ｆｉｄｌｅｒ （１９９４） Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３も参照されたい）。本発明の一実施形態では、本発明の治療化合物はリポソームとして製剤化され、より好ましい実施形態ではリポソームはターゲティング部分を含む。最も好ましい実施形態では、リポソーム中の治療化合物は、腫瘍または感染の近くの部位にボーラス注射により送達される。組成物は、容易に注射器で使用できる程度の流動性を有する必要がある。組成物は、製造および保存条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。

化合物が癌を阻害する能力を、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系で評価することができる。また、組成物のこのような性質を、当業者には周知のアッセイにより化合物の阻害能力（ｉｎ ｖｉｔｒｏでのかかる阻害）を調べることによって評価することができる。治療有効量の治療化合物は、対象における腫瘍サイズを減少させることができるか、または他の形で症状を改善することができる。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択される特定の組成物または投与経路などの要因に基づいてかかる量を決定することが可能である。

組成物は無菌でなければならず、また、組成物を注射器で送達することができる程度の流動性を有さなければならない。担体は、水以外に、等張緩衝生理食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適当な混合物とすることができる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合の必要な粒径の維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。多くの場合、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に加えることが好ましい。例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンなどの吸収を遅延させる剤を組成物に加えることによって注射用組成物の長期的吸収をもたらすことができる。

上記に述べたように活性化合物が適当に保護される場合、化合物を例えば不活性希釈剤または同化可能な食用担体とともに経口投与することができる。
ＩＶ．本発明の使用および方法

本発明の抗体、分子結合体、二重特異性分子、および組成物は、さまざまな疾患および状態を治療および／または予防（例えば、それらに対する免疫化を行う）するために使用することができる。

原発性疾患の適応症の１つは癌である。癌の種類としては、これらに限定されるものではないが、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄単球性、単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、多血症ベラリンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および細胞癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（たとえば、唇、舌、口および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌および泌尿器系癌が挙げられる。特定の癌としては、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択されるＣＤ４０発現腫瘍が挙げられる。

本発明の抗体および結合体は、細菌、真菌、ウイルス、および寄生虫による感染症を治療するために使用することもできる。

治療に使用される場合、本発明の抗体は、単独で、または免疫賦活剤、ワクチン、化学療法、または放射線治療などの他の療法とともに対象に直接（すなわちインビボで）投与することができる。いずれの場合も、抗体、結合体、二重特異性分子、組成物、および免疫賦活剤、ならびに他の療法は、それらの所望の治療効果を示すうえで有効な量で投与される。「有効量」なる用語は、所望の生物学的効果を実現するうえで必要または充分なな量のことを言う。例えば、有効量は、腫瘍、癌、または細菌、ウイルス、もしくは真菌の感染を排除するのに必要な量とすることができる。任意の特定の用途における有効量は、治療される疾患もしくは状態、投与される特定の抗体、対象のサイズ、または疾患もしくは状態の重症度などの要因に応じて変わり得る。当業者であれば、不要な実験を必要とすることなく、特定の分子の有効量を経験的に決定することができる。

好ましい投与経路としては、例えば、注射（例えば、皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）が挙げられる。注射は、ボーラス注射または連続注入であってよい。他の投与経路としては経口投与が挙げられる。

別の実施形態では、抗体をワクチン抗原と組み合わせて投与することによって腫瘍抗原（これにより、腫瘍に対する免疫反応を促進する)または感染症病原体由来の抗原（これにより、感染症病原体に対する免疫反応を促進する）などのワクチン抗原に対する免疫反応を促進する。ワクチン抗原は、腫瘍に対する、またはウイルス、細菌、寄生虫、もしくは真菌などの感染症病原体に対する免疫反応を誘導することが可能なあらゆる抗原または抗原性組成物とすることができる。ワクチン抗原は、患者の腫瘍のシークエンシングから誘導されるもののようなネオアンチゲンとすることもできる。このような１乃至複数の抗原は、例えばペプチド／タンパク質、多糖類および／または脂質であってもよく、またはインビボで発現させることができるペプチドまたはタンパク質抗原をコードする核酸（例えばＤＮＡ）として投与することもできる。このような１乃至複数の抗原は、本明細書において上記に開示した各種腫瘍抗原のような、腫瘍由来のものであってもよい。また、このような１乃至複数の抗原は、本明細書において上記に開示した各種病原体抗原のような、ウイルス、細菌、寄生虫、および／または真菌などの病原体由来のものであってもよい。適当な病原体抗原の更なる例としては、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる。すなわち、
ウイルス性の抗原または抗原決定基は、例えば、サイトメガロウイルス（特にｇＢなどのヒトサイトメガロウイルス、またはそれらの誘導体）；エプスタイン・バール・ウイルス（ｇｐ３５０など）；フラビウイルス（例えば、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）；Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、欧州特許出願公開第ＥＰ－Ａ－４１４ ３７４号、同第ＥＰ－Ａ－０３０４ ５７８号、および同第ＥＰ－Ａ－１９８４７４に記載されるＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２およびＳ抗原などのＢ型肝炎表面抗原）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルス；ＨＩＶ－１（例えば、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０またはｇｐ１６０など）；ｇＤもしくはその誘導体、またはＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７などの最初期タンパク質などのヒトヘルペスウイルス；ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８）；インフルエンザウイルス（鶏卵またはＭＤＣＫ細胞、またはＶｅｒｏ細胞若しくは全流感ビロソームで増殖させた、全生ウイルスまたは不活化ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス（Ｇｌｕｃｋ， Ｖａｃｃｉｎｅ， １９９２，１０， ９１５－９２０に記載のもの）、またはＮＰ、ＮＡ、ＨＡ、またはＭタンパク質などのそれらの精製もしくは組換えタンパク質）；麻疹ウイルス；耳下腺炎ウイルス；パラインフルエンザウイルス；狂犬病ウイルス；呼吸器多核体ウイルス（例えばＦおよびＧタンパク質）；ロタウイルス（生弱毒化ウイルス）；天然痘ウイルス；帯状疱疹ウイルス（例えばｇｐＩ、ＩＩおよびＩＥ６３）；ならびに子宮頸癌の原因となるＨＰＶウイルス（例えば、初期タンパク質Ｅ６またはＥ７をＰｒｏｔｅｉｎＤキャリアと融合させた、ＨＰＶ１６由来のＰｒｏｔｅｉｎ Ｄ－Ｅ６またはＥ７融合タンパク質、またはこれらの組み合わせ；またはＥ６もしくはＥ７とＬ２との組み合わせ（例えば国際公開第ＷＯ９６／２６２７７号を参照）に由来するものとすることができる。

細菌性の抗原または抗原決定基は、例えば、炭疽菌（例えば、ボツリヌス毒素）を含むバシラス属菌；百日咳菌（例えば、ペルタクチン、百日咳毒素、繊維状ヘマグルチニン、アデニル酸シクラーゼ、フィムブリエ）を含むボルデテラ属菌；Ｂ．ブルグドルフェリ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ガリニ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．アフゼリ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．アンデルソニー（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ヘルムシーを含むボレリア属菌；Ｃ．ジェジュニ（例えばトキシン、アドヘシン、およびインベイシン）およびＣ．コリを含むカンピロバクタ属菌；Ｃ．トラコマチス（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、肺炎クラミジア（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、オウム病クラミジアを含むクラミジア属菌；破傷風菌（例えば、破傷風毒素）、ボツリヌス菌（例えば、ボツリヌス毒素）、Ｃ．ディフィシル（例えば、Ａ型またはＢ型クロストリジウム毒素）を含むクロストリジウム属菌；ジフテリア菌（例えば、ジフテリア毒素）を含むコリネバクテリウム菌種；Ｅ．エクイおよびヒト顆粒球エーリキア症の病原体を含むエーリキア属菌；Ｒ．リケッチを含むリケッチア属菌；Ｅ．フェカリス、Ｅ．フェシウムを含むエンテロコッカス属菌；腸管毒素原生大腸菌（例えば、定着因子、易熱性毒素またはその誘導体、または耐熱性毒素）、腸管出血性大腸菌、腸管病原性大腸菌（例えば、志賀毒素様毒素）を含むエシェリキア属菌；インフルエンザＢ型（例えば、ＰＲＰ）、型別不能インフルエンザ、例えばＯＭＰ２６、高分子量アドヘシンＰ５、Ｐ６ ＰｒｏｔｅｉｎＤおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（例えば、米国特許第５，８４３，４６４号を参照）を含むヘモフィルス属菌；ピロリ菌（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含むヘリコバクターゾク菌；緑膿菌を含むシュードモナス属菌；Ｌ．ニューモフィラを含むレジオネラ属菌；Ｌ．インターロガンスを含むレプトスピラ属；Ｌ．モノサイトゲネスを含むリステリア属菌；カタル球菌としても知られるＭ．カタラーリス（例えば、高分子量および低分子量のアドヘシンおよびインベイシン）を含むモラクセラ属菌；モラクセラ・カタラーリス（その外膜小胞、およびＯＭＰ１０６（例えば国際公開第Ｗ０９７／４１７３１号を参照））； ヒト型結核菌（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、抗原８５Ｂ、または抗原８５Ｃ）、ウシ型結核菌、らい菌、トリ型結核菌、副結核菌、スメグマ菌を含むマイコバクテリウム属菌；淋菌および髄膜炎菌（例えば莢膜多糖類およびそのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）を含むナイセリア属菌；Ｂ群髄膜炎（その外膜小胞、およびＮｓｐＡ（例えば国際公開第ＷＯ９６／２９４１２号を参照); 腸チフス菌、パラチフス菌、豚コレラ菌、腸炎菌を含むサルモネラ属菌；ソネイ菌、志賀赤痢菌、フレキシネル赤痢菌を含む赤痢菌属；黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌を含むブドウ球菌属；肺炎連鎖球菌（たとえば、莢膜多糖およびそのコンジュゲート、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリシン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， １９８９，６７，１００７； Ｒｕｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ， ２５，３３７－３４２）、ならびにそれらの変異無毒化誘導体（例えば、国際公開第ＷＯ９０／０６９５１号、同第ＷＯ９９／０３８８４号を参照）を含むレンサ球菌属； 梅毒トレポネーマ（たとえば、外膜タンパク質）、Ｔ．デンティコラ、Ｔ．ヒオディセンテリアを含むトレポネーマ属菌；コレラ菌（例えば、コレラ毒素）を含むビブリオ属菌；ならびにエンテロコリチカ菌（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、ペスト菌、偽結核菌を含むエルシニア属菌に由来するものとすることができる。

寄生虫／真菌性の抗原または抗原決定基は、例えば、Ｂ．ミクロティを含むバベシア属菌；Ｃ．アルビカンスを含むカンジダ属菌；Ｃ．ネオフォルマンスを含むクリプトコッカス属菌；赤痢アメーバを含むエントアメーバ属； ランブル鞭毛虫を含むジアルジア属；森林型熱帯リーシュマニアを含むリーシュマニア属；熱帯熱マラリア原虫（ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、セクエストリン、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰｌ、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７／２５、Ｐｆｓｌ６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０ およびプラスモジウム属種のそれらの類似体）； Ｐ．カリニを含むニューモスティス属； マンソン住血吸虫を含む住血吸虫属； 膣トリコモナスを含むトリコモナス属；Ｔ．ゴンジ（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）を含むトキソプラズマ属；Ｔ．クルージを含むトリパノソーマ属に由来するものとすることができる。

本発明のこの態様によれば、抗原および抗原決定基は、多くの異なる形態で使用することができる点は認識されよう。例えば、抗原または抗原決定基は、単離されたタンパク質またはペプチドとして（例えばいわゆる「サブユニットワクチン」として）、または例えば細胞関連またはウイルス関連抗原または抗原決定基として（例えば生きた、または殺した病原体株として）存在してよい。生きた病原体は、既知の方法で弱毒化されることが好ましい。また、抗原または抗原決定基は、抗原または抗原決定基をコードしたポリヌクレオチドの使用により対象の体内でインサイチューで生成させることもできる（いわゆる「ＤＮＡワクチン接種」）が、この手法で使用できるポリヌクレオチドはＤＮＡに限定されず、上記に述べたようなＲＮＡおよび改変ポリヌクレオチドも含み得る点は認識されよう。

治療に使用される場合、本発明の分子結合体（すなわちワクチン結合体）は、単独で、または免疫賦活剤とともに、対象に直接（すなわちインビボで）投与することができる。一態様では、免疫賦活剤は結合体に連結される。また、結合体は、最初に結合体を樹状細胞などのＡＰＣと接触させ（例えば培養またはインキュベートすることにより）、次いでこの細胞を対象に投与する（すなわち、エクスビボで）ことにより対象に間接的に投与することもできる。このように、投与に先立って結合体がＡＰＣによりプロセシングされて提示されるように、結合体をＡＰＣと接触させ、ＡＰＣに送達することは、抗原または細胞「ローディング」とも呼ばれる。抗原をＡＰＣにローディングするための手法は当該技術分野では周知のものであり、例えば、Ｇｕｎｚｅｒ ａｎｄ Ｇｒａｂｂｅ， Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１ （１－３）：１３３－４５ （２００１） およびＳｔｅｉｎｍａｎ， Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ ２４（８）： ８５９－６２ （１９９６）に記載のものが挙げられる。

いずれの場合も、ワクチン結合体および免疫賦活剤をそれらの所望の治療効果を奏する有効量で投与する。

本発明の抗体、分子結合体、二重特異性分子、および組成物は、アジュバントおよびタンパク質の治療剤と同時投与することもできる。本明細書で使用するところの「同時投与」なる用語は、投与レジメンの一環としての投与を含む、本発明の抗体および結合体と、アジュバントおよび他の剤との同時、別々、または順次の投与のいずれかまたはすべてを含む。抗体は、一般的に、担体のみに、またはかかる剤と組み合わせて配合される。かかる担体の例としては、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤、エマルジョン、などが挙げられる。薬学的に活性な物質用のかかる媒質の使用は、当該技術分野では周知のものである。かかる分子とともに使用するのに適した他のあらゆる従来の担体は、本発明の範囲に含まれる。

抗体、結合体、二重特異性分子、および組成物との同時投与に適した剤としては、他の抗体、細胞毒素、および／または薬剤、ならびにアジュバント、免疫賦活剤および／または免疫抑制剤が挙げられる。一実施形態では、剤は、化学療法剤である。抗体、二重特異性分子、および組成物は、放射線と組み合わせて投与することもできる。

腫瘍の治療において本発明の抗体および結合体との同時投与に適した化学療法剤としては、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにその類似体またはホモログが挙げられる。更なる剤としては、例えば、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン類（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ）など）、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）およびテモゾロミドが挙げられる。

免疫細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、未成熟または抑制性樹状細胞など）または腫瘍の局所微小環境中の腫瘍または宿主細胞が産生する抑制因子（例えばＴＧＦβ、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ））によって免疫抑制活性を消失または阻害する剤を、本発明の抗体および結合体とともに投与することもできる。かかる剤としては、抗体、および１－メチルトリプトファンまたは誘導体などのＩＤＯ阻害剤などの小分子が挙げられる。

免疫反応を誘導または促進するために本発明の抗体、結合体、および二重特異性分子と同時投与するのに適した剤としては、例えば、その非限定的な例を上記に開示したアジュバントおよび／または免疫賦活剤が挙げられる。好ましい免疫賦活剤の１つとして、Ｐｏｌｙ Ｉ：ＣのようなＴＬＲ３アゴニストがある。
Ｖ． 併用療法

本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、例えば癌を治療するための併用療法で使用することもできる。そこで、本明細書では、抗ＣＤ４０抗体を、例えば、免疫反応を刺激することにより対象における免疫反応を更に促進、刺激、または増加させるうえで有効な小分子薬剤、抗体およびその抗原結合部分、および／またはタンパク質リガンドなどの１種またはそれより多くの更なる剤と同時投与する併用療法の方法を提供する。更に、本明細書の実施例で示されるように、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体および可溶性ＣＤ４０リガンドの投与は、例えば腫瘍細胞におけるＣＤ９５の発現の増大により示されるように、Ｔ細胞受容体により媒介されるシグナルを誘導するうえで相乗作用を示した。

例えば、抗ＣＤ４０抗体（例えば本明細書に記載のもの）を、（ｉ）刺激（例えば共刺激）分子のアゴニスト、および／または（ｉｉ）Ｔ細胞などの免疫細胞上の阻害シグナルまたは分子（例えば受容体またはリガンド）のアンタゴニストと併用することができ、いずれの場合も、抗原特異的Ｔ細胞応答などの免疫反応が増幅される。特定の態様では、癌免疫療法剤は、（ｉ）刺激（共刺激を含む）分子（例えば受容体またはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）例えばＮＫ細胞などの自然免疫に関与する細胞上の阻害（共阻害を含む）分子（例えば受容体またはリガンド）のアンタゴニストであり、かかる癌免疫療法剤が自然免疫を促進するものである。かかる癌免疫療法剤はしばしば、免疫チェックポイント制御物質、例えば免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。

一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである刺激分子または阻害分子を標的とする剤とともに投与される。例えば、抗ＣＤ４０抗体（例えば本明細書に記載のもの）を、ＩｇＳＦファミリーのメンバーを標的とする剤とともに対象に投与することで免疫反応を増大させることができる。例えば、抗ＣＤ４０抗体を、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１ （ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ （ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２ （ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５ （ＶＩＳＴＡ）、およびＢ７－Ｈ６を含む膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバーを標的とする（すなわち、これと特異的に結合する）剤、またはＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激もしくは共阻害受容体とともに投与することができる。

抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ（例えば、ヒトＣＤ４０およびヒトＣＤ４０Ｌ）、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンフォトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンフォトキシンα １β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、およびＮＧＦＲなどのＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリーの分子（リガンドまたは受容体）のメンバーを標的とする剤とともに投与することもできる（例えば、Ｔａｎｓｅｙ （２００９） Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ００：１を参照）。

Ｔ細胞応答は、例えば３Ｃ３および３Ｇ５などの本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体と、上記に述べた、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、およびＬＡＧ－３などのＴ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、ならびに以下のタンパク質、すなわち、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、およびＴＩＭ－４のいずれかのアンタゴニスト（阻害剤またはブロッキング剤）の１つまたはそれより多く、および／またはＢ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３、およびＣＤ２８ＨなどのＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストの１つまたはそれより多くとの組み合わせによって刺激することができる。

上記のタンパク質の１つを調節し、癌を治療するために、例えば本明細書に記載のものなどのアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と併用することができる例示的な剤としては、ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（ ＣＴＬＡ－４に対する）、ガリキシマブ（Ｂ７．１に対する）、ＢＭＳ－９３６５５８／ニボルマブ（ＰＤ－１に対する）、ＭＫ－３４７５／ペムブロリズマブ（ＰＤ－１に対する）、ＡＭＰ２２４ （Ｂ７ＤＣに対する）、ＢＭＳ－９３６５５９ （Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／アテゾリズマブ（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＥＤＩ－５７０ （ＩＣＯＳに対する）、ＡＭＧ５５７ （Ｂ７Ｈ２に対する）、ＭＧＡ２７１ （Ｂ７Ｈ３に対する）、ＩＭＰ３２１ （ＬＡＧ－３に対する）、ＢＭＳ－６６３５１３ （ＣＤ１３７に対する）、ＰＦ－０５０８２５６６ （ＣＤ１３７に対する）、ＣＤＸ－１１２７ （ＣＤ２７に対する）、抗ＯＸ４０ （Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社）、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ （ＯＸ４０Ｌに対する）、アタシセプト（ＴＡＣＩに対する）、ＣＰ－８７０８９３ （ＣＤ４０に対する）、ルカツムマブ（ＣＤ４０に対する）、デカツズマブ（ＣＤ４０に対する）、ムロモナブ－ＣＤ３（ＣＤ３に対する）、イピリムマブ（ＣＴＬＡ－４に対する）が挙げられる。

癌の治療用にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体と併用することができる他の分子としては、ＮＫ細胞上の抑制性受容体のアンタゴニスト、またはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、ＫＩＲ（例えば、リリルマブ）のアンタゴニストと併用することができる。

Ｔ細胞活性化は可溶性サイトカインによっても制御されるため、抗ＣＤ４０抗体を、例えば癌を有する対象に、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストとともに投与することができる。

別の実施形態では、抗ＣＤ４０抗体を、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するＩｇＳＦファミリーまたはＢ７ファミリーまたはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト（または阻害剤もしくはブロッキング剤）、またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦなどの「免疫抑制性サイトカイン」）のアンタゴニスト、および／または（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激する、ＩｇＳＦファミリーまたはＢ７ファミリーまたはＴＮＦファミリーの刺激受容体の、またはサイトカインのアゴニストと併用することで、免疫反応を刺激する（例えば、癌などの増殖性疾患を治療する）ことができる。

併用療法用の他の剤としては、これらに限定されるものではないが、ＲＧ７１５５ （国際公開第ＷＯ１１／７００２４号、同第ＷＯ１１／１０７５５３号、同第ＷＯ１１／１３１４０７号、同第ＷＯ１３／８７６９９号、同第ＷＯ１３／１１９７１６号、同第ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ－００８（国際公開第ＷＯ１１／１４０２４９号、同第ＷＯ１３１６９２６４号、同第ＷＯ１４／０３６３５７号）を含む、ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ－１Ｒアンタゴニストを含む、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる剤が挙げられる。

抗ＣＤ４０抗体は、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する剤とともに投与することもできる。

抗ＣＤ４０抗体と併用することができる更なる剤としては、例えば樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、およびイミキモドなどの腫瘍抗原提示を促進する剤、または腫瘍細胞の免疫原性を高める療法（例えばアントラサイクリン）が挙げられる。

抗ＣＤ４０抗体と併用することができる他の療法として、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇またはブロックする療法（例えばＣＤ２５に特異的に結合する剤など）が挙げられる。

抗ＣＤ４０抗体と併用することができる別の療法として、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素などの代謝酵素を阻害する療法がある。

抗ＣＤ４０抗体と併用することができる別のクラスの剤として、アデノシンの生成を阻害するかまたはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する剤が挙げられる。

癌を治療するために抗ＣＤ４０抗体と併用することができる他の療法としては、Ｔ細胞のアナジーまたは疲弊を逆転／防止する療法、ならびに腫瘍部位における自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法が挙げられる。

抗ＣＤ４０抗体は、複数の癌免疫療法剤と併用が可能であり、以下の療法の１つまたはそれより多くのような免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルなアプローチと組み合わせることができる。すなわち、腫瘍抗原提示を促進する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、およびイミキモドなど）；例えば、ＣＴＬＡ－４および／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害することにより、および／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇もしくはブロックすることにより負の免疫制御を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、および／またはＧＩＴＲ経路を刺激するかかつ／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫制御を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大させる療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えばガクリズマブ）を用いるかまたはエクスビボの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇により、腫瘍内のＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇または阻害する療法；腫瘍内の抑制性骨髄細胞の機能に影響を与える療法；腫瘍細胞の免疫原性を高める療法（例えば、アントラサイクリン）；例えばキメラ抗原受容体により改変された細胞などの遺伝子改変細胞を含む、養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移植（ＣＡＲ－Ｔ療法）；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素などの代謝酵素を阻害する療法；Ｔ細胞のアナジーまたは疲弊を逆転／防止する療法；腫瘍部位における自然免疫活性化および／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与；または免疫抑制性サイトカインのブロッキング。

本明細書に記載のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、正の共刺激受容体を連結するアゴニスト剤、抑制性受容体を介してシグナル伝達を減弱するブロッキング剤、アンタゴニストのうちの１つまたはそれより多く、および抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増加させる剤、腫瘍微小環境内の異なる免疫抑制経路を克服する（例えば、抑制性受容体の結合を遮断する（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用）、Ｔｒｅｇを枯渇または阻害する（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えばダクリズマブ）を用いるか、またはエクスビボの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇により）、ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害する、またはＴ細胞のアネルギーもしくは疲弊を逆行／防止する）剤、および腫瘍部位での自然免疫の活性化および／または炎症を誘発する剤の１つまたはそれより多くとともに使用することができる。

本明細書では、対象の免疫反応を刺激するための方法であって、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体（例えば抗体）と、抗ＰＤ－１アンタゴニスト（例えばアンタゴニスト抗体）、抗ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えばアンタゴニスト抗体）、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えばアンタゴニスト抗体）および／または抗ＬＡＧ３アンタゴニスト（例えばアンタゴニスト抗体）などの１またはそれより多くの更なる免疫賦活抗体とを対象に投与することを含み、これにより、対象の免疫反応が刺激されることで、例えば、腫瘍増殖を阻害する、または抗ウイルス反応を刺激する、方法が提供される。一実施形態では、更なる免疫賦活抗体（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ－１、アンタゴニスト抗ＰＤ－Ｌ１、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ－４、および／またはアンタゴニスト抗ＬＡＧ３抗体）は、ヒト抗体である。

本明細書では、過剰増殖性疾患（例えば癌）を治療するための方法であって、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびアンタゴニストＰＤ－１抗体を対象に投与することを含む方法も提供される。一実施形態では、対象はヒトである。別の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ヒト配列モノクローナル抗体であり、抗ＣＤ４０抗体は、例えば本明細書に記載の３Ｃ３および３Ｇ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体などのヒト配列モノクローナル抗体、または本明細書に記載の別のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。

本明細書に記載の方法で使用するのに適したＰＤ－１アゴニストとしては、これらに限定されるものではないが、リガンド、抗体（例えばモノクローナル抗体および二重特異性抗体）、および多価剤が挙げられる。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、融合タンパク質、例えばＡＭＰ－２４４などのＦｃ融合タンパク質である。一実施形態では、ＰＤ－１アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

例示的な抗ＰＤ－１抗体の１つとして、ニボルマブ（ＢＭＳ－９３６５５８）、または国際公開第ＷＯ２００６／１２１１６８号に記載の抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、７Ｄ３、５Ｆ４ ａｎｄ ４Ａ１１のいずれかのＣＤＲまたは可変領域を含む抗体がある。特定の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、国際公開第ＷＯ２０１２／１４５４９３号に記載のＭＫ－３４７５ （ラムブロリズマブ）、および国際公開第ＷＯ２０１２／１４５４９３号に記載のＡＭＰ－５１４である。更なる既知のＰＤ－１抗体および他のＰＤ－１阻害剤としては、国際公開第ＷＯ２００９／０１４７０８号、同第ＷＯ０３／０９９１９６号、同第ＷＯ２００９／１１４３３５号、同第ＷＯ２０１１／０６６３８９号、同第ＷＯ２０１１／１６１６９９号、同第ＷＯ２０１２／１４５４９３、米国特許第７，６３５，７５７号、および同第８，２１７，１４９号、ならびに米国特許出願公開第２００９／０３１７３６８号に記載のものが挙げられる。国際公開第ＷＯ２０１３／１７３２２３号に開示される抗ＰＤ－１抗体のいずれを使用することもできる。これらの抗体の１つと同じＰＤ－１上のエピトープへの結合について競合するか、かつ／またはそのようなエピトープに結合する抗ＰＤ－１抗体も併用療法で使用することができる。ＰＤ－１受容体を標的とする別の手法は、ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合させたＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインからなる組換えタンパク質である。

本明細書では、過剰増殖性疾患（例えば癌）を治療するための方法であって、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体およびアンタゴニストＰＤ－Ｌ１抗体を対象に投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、対象はヒトである。別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒト配列モノクローナル抗体であり、抗ＣＤ４０抗体は、例えば本明細書に記載の３Ｃ３および３Ｇ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体などのヒト配列モノクローナル抗体、または本明細書に記載の別のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９ （国際公開第ＷＯ２００７／００５８７４号および米国特許第７，９４３，７４３号において１２Ａ４と称されるもの）、または国際公開ＷＯ０７／００５８７４号および米国特許第７，９４３，７４３号に記載の３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体である。特定の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６（抗Ｂ７－Ｈ１としても知られる）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６としても知られる）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（国際公開第ＷＯ２０１３／７９１７４号）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７である。国際公開第ＷＯ２０１３／１７３２２３号、同第ＷＯ２０１１／０６６３８９号、同第ＷＯ２０１２／１４５４９３号、米国特許第７，６３５，７５７号、同第８，２１７，１４９号、および米国特許出願公開第２００９／１４５４９３号に開示される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれを使用することもできる。これらの抗体のいずれかと同じエピトープについて競合するか、かつ／または同じエピトープに結合する抗ＰＤ－Ｌ１抗体も併用療法で使用することができる。

本明細書では、過剰増殖性疾患（例えば癌）を治療するための方法であって、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体およびＣＴＬＡ－４アンタゴニスト抗体を対象に投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、対象はヒトである。別の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ヤーボイ（登録商標）（イピリムマブまたは抗体１０Ｄ１、国際公開第ＷＯ０１／１４４２４号に記載）、トレメリムマブ（以前のチシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）、以下の文献、すなわち、国際公開第ＷＯ９８／４２７５２号、国際公開第ＷＯ００／３７５０４号、米国特許第６，２０７，１５６号； Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９５（１７）：１００６７－１００７１； Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２（１４５）： Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ． ２５０５ （抗体ＣＰ－６７５２０６）； およびＭｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５８：５３０１－５３０４のいずれかに記載のモノクローナル抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体の群から選択される抗体である。国際公開第ＷＯ２０１３／１７３２２３号に開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体のいずれを使用することもできる。

本明細書では、過剰増殖性疾患（例えば癌）を治療するための方法であって、抗ＣＤ４０抗体および抗ＬＡＧ３抗体を対象に投与することを含む方法が提供される。一実施形態では、対象はヒトである。別の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒト配列モノクローナル抗体であり、抗ＣＤ４０抗体は、例えば本明細書に記載の３Ｃ３または３Ｇ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体などのヒト配列モノクローナル抗体、または本明細書に記載の別のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。抗ＬＡＧ３抗体の例としては、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０１５０８９２号、国際公開第ＷＯ１０／１９５７０号、および国際公開第ＷＯ２０１４／００８２１８号に記載の抗体２５Ｆ７、２６Ｈ１０、２５Ｅ３、８Ｂ７、１１Ｆ２または１７Ｅ５のＣＤＲまたは可変領域を含む抗体が挙げられる。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６である。使用可能な他の当該技術分野で認識されている抗ＬＡＧ３抗体としては、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／００７０２３号、国際公開第ＷＯ０８／１３２６０１号、および国際公開第ＷＯ０９／４４２７３号に記載のＩＭＰ７３１およびＩＭＰ－３２１が挙げられる。これらの抗体のいずれかと同じエピトープについて競合するか、かつ／または同じエピトープに結合する抗ＬＡＧ３抗体も併用療法で使用することができる。

本明細書に記載される抗ＣＤ４０抗体、およびＬＡＧ－３および／またはＣＴＬＡ－４および／またはＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１などの１種またはそれより多くの第２の標的抗原に対するアンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗体）の投与により、患者の癌細胞に対する免疫反応を促進することができる。本開示の抗体を使用して増殖を阻害することができる癌には、免疫療法に通常反応を示す癌、および免疫療法に通常は反応を示さない癌が含まれる。本開示の併用療法により治療される癌の代表的な例としては、本明細書に記載の癌が挙げられる。

特定の実施形態では、本明細書で検討される治療抗体の組み合わせを、薬学的に許容される担体に含まれた単一の組成物として同時に、またはそれぞれの抗体が薬学的に許容される担体に含まれた別々の組成物として同時に、投与することができる。別の実施形態では、治療抗体の組み合わせを、順次投与することができる。例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体と抗ＣＤ４０抗体とを順次投与することができ、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体を最初に投与し、抗ＣＤ４０抗体を次に投与する、または抗ＣＤ４０抗体を最初に投与し、抗ＣＴＬＡ－４抗体を次に投与することができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＤ４０抗体を順次投与する、例えば、抗ＰＤ－１抗体を最初に投与し、抗ＣＤ４０抗体を次に投与する、または抗ＣＤ４０抗体を最初に投与し、抗ＰＤ－１抗体を次に投与することができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＤ４０抗体を順次投与する、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を最初に投与し、抗ＣＤ４０抗体を次に投与する、または抗ＣＤ４０抗体を最初に投与し、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を次に投与することができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＬＡＧ－３抗体と抗ＣＤ４０抗体を順次投与する、例えば、抗ＬＡＧ－３抗体を最初に投与し、抗ＣＤ４０抗体を次に投与する、または抗ＣＤ４０抗体を最初に投与し、抗ＬＡＧ－３抗体を次に投与することができる。

更に、併用療法の複数の用量が順次投与される場合、順次投与の順序を、それぞれの投与の時点で逆とするかまたは同じに保つことができ、順次投与を同時投与と組み合わせるか、またはこれらの任意の組み合わせとすることができる。例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせの第１の投与を同時とし、第２の投与を順次として最初に抗ＣＴＬＡ－４抗体、次に抗ＣＤ４０抗体を投与し、第３の投与を順次として最初に抗ＣＤ４０抗体、次に抗ＣＴＬＡ－４抗体を投与する、といった具合で行うことができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＰＤ－１抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせの第１の投与を同時とし、第２の投与を順次として最初に抗ＰＤ－１抗体、次に抗ＣＤ４０抗体を投与し、第３の投与を順次として最初に抗ＣＤ４０抗体、次に抗ＰＤ－１抗体を投与する、といった具合で行うことができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせの第１の投与を同時とし、第２の投与を順次として最初に抗ＰＤ－Ｌ１抗体、次に抗ＣＤ４０抗体を投与し、第３の投与を順次として最初に抗ＣＤ４０抗体、次に抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与する、といった具合で行うことができる。これに加えるかまたはこれに代えて、抗ＬＡＧ－３抗体と抗ＣＤ４０抗体との組み合わせの第１の投与を同時とし、第２の投与を順次として最初に抗ＬＡＧ－３抗体、次に抗ＣＤ４０抗体を投与し、第３の投与を順次として最初に抗ＣＤ４０抗体、次に抗ＬＡＧ－３抗体を投与する、といった具合で行うことができる。別の代表的な投与スキームでは、第１の投与を順次として最初に抗ＣＤ４０抗体を、次に抗ＣＴＬＡ－４抗体（および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体）を投与し、その後の投与を同時とすることができる。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニストである。適当なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－０５０８２５６６（国際公開第ＷＯ１２／３２４３３号）が挙げられる。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストである。適当なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；国際公開第ＷＯ０６／０２９８７９号）が挙げられる。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、別のアゴニストＣＤ４０抗体などの第２のＣＤ４０アゴニストである。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストである。適当なＣＤ２７抗体としては、例えば、バルリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）（国際公開第ＷＯ１１／１０９４００号）である。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、リリルマブなどのＫＩＲアンタゴニストである。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。適当なＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０ （国際公開第ＷＯ２００６／１２２１５０号、同第ＷＯ０７／７５５９８号、同第ＷＯ０８／３６６５３号、同第ＷＯ０８／３６６４２号）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９ （国際公開第ＷＯ０９／７３６２０号、同第ＷＯ０９／１１５６６５２号、同第ＷＯ１１／５６６５２号、同第ＷＯ１２／１４２２３７号） またはＦ００１２８７が挙げられる。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、例えばＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ））、ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ヒルトノールまたはイミキモド）、ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、レシキモド）、またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）などのＴｏｌｌ様受容体アゴニストである。

一実施形態では、例えば癌または感染症などの、免疫系の刺激による恩恵を受けることができる疾患を有する対象を、抗ＣＤ４０抗体および癌免疫療法剤を対象に投与することにより治療し、この場合、癌免疫療法剤は、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１などのＴＧＦ－β阻害剤である。

一態様では、抗ＣＤ４０抗体は、第２の剤（癌免疫療法剤）の投与の前に順次投与される。一態様では、抗ＣＤ４０抗体は、第２の剤（癌免疫療法剤）と同時投与される。更なる一態様では、抗ＣＤ４０抗体は、第２の剤の投与後に順次投与される。２つの剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日または１もしくはそれより多くの週間間隔をあけた時点で開始することができ、または第２の剤の投与を、例えば、第１の剤が投与されてから３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日後、または１もしくはそれより多くの週間後に開始することができる。

特定の態様では、抗ＣＤ４０抗体と第２の剤（例えば、癌免疫療法剤）とは、患者に同時に投与され、例えば、同時に点滴される（例えば、３０分間または６０分間にわたって）。また、抗ＣＤ４０抗体は第２の剤（例えば、癌免疫療法剤）と共配合することができる。

場合により、抗ＣＤ４０を唯一の癌免疫療法剤として投与するか、または抗ＣＤ４０抗体と１種またはそれより多くの更なる免疫療法抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体）との組み合わせを、癌細胞、精製腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、および／または炭水化物分子を含む）、細胞、および免疫刺激サイトカインをコードした遺伝子をトランスフェクトした細胞 （Ｈｅ ｅｔ ａｌ． （２００４） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７３：４９１９－２８）などの免疫原性剤と更に組み合わせることができる。使用することが可能な腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１および／またはチロシナーゼのペプチドなどメラノーマ抗原のペプチド、またはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトした腫瘍細胞が挙げられる（下記で更に検討する）。抗ＣＤ４０抗体および１種またはそれより多くの更なる抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体）を、標準的な癌治療と更に併用することもできる。例えば、抗ＣＤ４０抗体および１種またはそれより多くの更なる抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体）は、化学療法レジメンと効果的に併用することができる。これらの場合では、本開示の組み合わせとともに投与される他の化学療法剤の用量を低減させることが可能である（Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８： ５３０１－５３０４）。かかる組み合わせの１つの例として、メラノーマを治療するための抗ＣＤ４０アゴニスト抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体などの更なる抗体の併用をともなうかまたはともなわない）とダカルバジンとの組み合わせがある。別の例として、メラノーマを治療するための抗ＣＤ４０アゴニスト抗体（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体の併用をともなうかまたはともなわない）とインターロイキン－２（ＩＬ－２）との組み合わせがある。抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体と化学療法との併用の背後にある科学的根拠は、多くの化学療法化合物の細胞毒性作用の結果としての細胞死によって、抗原提示経路における腫瘍抗原の量の増大がもたらされるはずであるということである。抗ＣＤ４０抗体（抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体の併用をともなうかまたはともなわない）との相乗作用をもたらし得る他の併用療法としては、放射線、外科手術、またはホルモン枯渇がある。これらのプロトコールのそれぞれが宿主体内の腫瘍抗原の供給源を生じる。血管新生阻害剤を、抗ＣＤ４０抗体および抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体と組み合わせることもできる。血管新生の阻害は腫瘍細胞の死をもたらし、これが宿主の抗原提示経路に腫瘍抗原の供給源となり得る。

唯一の免疫療法剤としての抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、またはＣＤ４０アゴニストとＣＴＬＡ－４および／またはＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１および／またはＬＡＧ－３ブロッキング抗体との組み合わせを、ＦｃαまたはＦｃγ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞にターゲティングする二重特異性抗体と併用することもできる（例えば、米国特許第５，９２２，８４５号および同第５，８３７，２４３号を参照）。二重特異性抗体を使用することで２つの別々の抗原を標的とすることができる。これらの応答のＴ細胞アームは、抗ＣＤ４０抗体と抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体との組み合わせの使用により強化される。

別の例では、唯一の免疫療法剤としての抗ＣＤ４０アゴニスト抗体、または抗ＣＤ４０抗体と更なる免疫賦活剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／またはＬＡＧ－３剤（例えば、抗体）との組み合わせを、リツキサン（登録商標）（リツキシマブ）、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、ベキサール（登録商標）（トシツモマブ）、ゼヴァリン（登録商標）（イブリツモマブ）、キャンパス（登録商標）（アレムツズマブ）、リムフォシド（登録商標）（エプラツズマブ）、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）、およびタルセバ（登録商標）（エルロチニブ）などの抗新生物抗体と併用することができる。例として、また、理論に縛られることを望まずに言えば、抗癌抗体または毒素と結合させた抗癌抗体による治療は、癌細胞死（例えば、腫瘍細胞の）をもたらし、これにより、免疫賦活剤、例えば、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１またはＬＡＧ－３剤（例えば、抗体）により媒介される免疫反応を増強するものと考えられる。例示的な一態様では、過剰増殖性疾患（例えば、癌腫瘍）の治療は、同時または順次またはこれらの任意の組み合わせで投与される、抗癌剤（例えば、抗体）と、抗ＣＤ４０および場合により更なる免疫賦活剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３剤（例えば、抗体）との組み合わせを含んでよく、これにより、宿主による抗腫瘍免疫反応を増強することができる。

腫瘍はさまざまな機構により宿主免疫監視を免れる。これらの機構の多くは、腫瘍により発現される免疫抑制性のタンパク質の不活性化により克服することができると考えられる。これらのタンパク質としては、特にＴＧＦ－β（Ｋｅｈｒｌ ｅｔ ａｌ． （１９８６） Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １６３： １０３７－１０５０）、ＩＬ－１０（Ｈｏｗａｒｄ ＆ Ｏ’Ｇａｒｒａ （１９９２） Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １３： １９８－２００）、およびＦａｓリガンド（Ｈａｈｎｅ ｅｔ ａｌ． （１９９６） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４： １３６３－１３６５）が挙げられる。これらのタンパク質のそれぞれに対する抗体を、更なる免疫賦活剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３剤（例えば抗体）の併用をともなうかまたはともなわない抗ＣＤ４０抗体と更に併用することで、免疫抑制因子の作用を中和し、宿主による抗腫瘍免疫反応を支援することができる。

宿主免疫反応を活性化するために使用することが可能な他の剤（例えば、抗体）を、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３抗体などの更なる免疫賦活剤の併用をともなうかまたはともなわない抗ＣＤ４０抗体と更に併用することができる。これらの剤としては、ＤＣの機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面上の分子が挙げられる。抗ＣＤ４０抗体（Ｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ．， 前出）を、抗ＣＤ４０抗体および場合により更なる免疫賦活剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３剤（例えば、抗体）と併用することができる。Ｔ細胞共刺激分子に対する他の活性化抗体（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， 前出， Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ． 前出， Ｈｕｔｌｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， 前出）も、Ｔ細胞活性化レベルを高めることができる。

上記に述べたように、造血細胞由来の各種の腫瘍を治療するために骨髄移植が現在用いられている。抗ＣＤ４０免疫療法を単独で、または抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体と併用して用いることで、ドナーから移植された腫瘍特異的Ｔ細胞の効果を高めることができる。

いくつかの実験的治療プロトコールでは、抗原特異的Ｔ細胞をエクスビボで活性化および増殖させ、これらの細胞をレシピントに養子移植することで腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を刺激することを行っている（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ＆ Ｒｉｄｄｅｌｌ， 前出）。これらの方法を用いて、ＣＭＶなどの感染因子に対するＴ細胞応答を活性化することもできる。エクスビボ活性化を、更なる免疫賦活療法、例えば、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３抗体の併用をともなうかまたはともなわない抗ＣＤ４０の存在下で行うことにより、養子移植されたＴ細胞の発生頻度および活性が高められるものと予想される。

本明細書では、免疫賦活剤による過剰増殖性疾患（例えば、癌）の治療にともなう有害事象を改変する方法であって、抗ＣＤ４０抗体を、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３剤（例えば、抗体）の併用をともなうかまたはともなわずに対象に投与することを含む方法が提供される。例えば、本明細書に記載の方法は、非吸収性ステロイドを患者に投与することにより、免疫賦活性治療抗体により誘発される大腸炎または下痢の発症を低減する方法を提供する。本明細書で使用するところの「非吸収性ステロイド」とは、高い初回通過代謝を示すために、肝臓での代謝後のステロイドの生物学的利用率が低くなる（すなわち、約２０％未満）糖質コルチコイドのことである。本明細書に記載される一実施形態では、非吸収性ステロイドはブデソニドである。ブデソニドは、経口投与後に主として肝臓により大半が代謝される局所作用性糖質コルチコステロイドである。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）（アストラゼネカ社）は、回腸および結腸全体にわたった薬物送達を最適化するために開発された、ブデソニドのｐＨおよび時間依存性経口製剤である。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）は、回腸および／または上行結腸が関与する軽度～中度のクローン病の治療に米国内で承認されている。クローン病治療におけるＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）の通常の経口用量は６～９ｍｇ／日である。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）は、吸収される前に腸内に放出され、腸粘膜に維持される。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）は、腸粘膜標的組織を通過した後、肝臓のチトクロムＰ４５０系によってわずかな糖質コルチコイド活性を有する代謝産物に大半が代謝される。したがって、生物学的利用率は低い（約１０％）。ブデソニドの低い生物学的利用率は、初回通過代謝がそれほど高くない他の糖質コルチコイドと比較して高い治療可能比をもたらす。ブデソニドがもたらす有害作用は、全身作用性の糖質コステロイドと比較して低い視床下部－下垂体抑制など、より少ない。しかしながら、ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）の慢性投与は、副腎皮質亢進および副腎抑制などの全身性の糖質コルチコイド作用をもたらし得る。ＰＤＲ ５８^ｔｈ ｅｄ． ２００４； ６０８－６１０を参照。

更なる態様において、非吸収性ステロイドと併用される、免疫賦活性治療抗体である抗ＣＤ４０、および場合により、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３抗体の併用をともなうかまたはともなわない抗ＣＤ４０抗体は、更にサリチル酸塩と併用することができる。サリチル酸塩としては、例えば、スルファサラジン（アザルフィジン（登録商標） Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ ＵｐＪｏｈｎ社）、オルサラジン（ジペンタム（登録商標） Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ ＵｐＪｏｈｎ社）、バルサラジド（コラザル（登録商標） Ｓａｌｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ社）、およびメサラミン（アサコール（登録商標） Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社、ペンタサ（登録商標） Ｓｈｉｒｅ Ｕｓ社、カナサ（登録商標） Ａｘｃａｎ Ｓｃａｎｄｉｐｈａｒｍ， Ｉｎｃ社、ロワザ（登録商標） Ｓｏｌｖａｙ社）などの５－ＡＳＡ剤が挙げられる。

本明細書に記載の方法によれば、サリチル酸塩は、免疫賦活抗体により誘発される大腸炎の発症を低下させる目的で、抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３抗体の併用をともなうかまたはともなわない抗ＣＤ４０、および非吸収性ステロイドと組み合わせて投与される。したがって、例えば、本明細書に記載の免疫賦活抗体により誘発される大腸炎の発症を低減するための方法は、サリチル酸塩と非吸収性ステロイドとを同時、または順次（例えば、サリチル酸塩を非吸収性ステロイドの６時間後に投与する）、またはこれらの任意の組み合わせで投与することを含む。更に、サリチル酸塩と非吸収性ステロイドとは、同じ経路（例えば、両方を経口投与する）、または異なる経路（例えば、サリチレートを経口投与し、非吸収性ステロイドを直腸投与する）で投与することができ、これらの経路は、抗ＣＤ４０および抗ＣＴＬＡ－４および／または抗ＰＤ－１および／または抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＬＡＧ－３抗体の投与に用いられる経路と異なってもよい。

本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体および併用抗体療法は、治療される適応症（例えば、癌）に対する特定の有用性について選択される他の周知の療法と併用することもできる。本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体の組み合わせは、既知の薬学的に許容される剤と順次使用することができる。

例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体および併用抗体療法は、放射線、化学療法(例えば、カンプトテシン（ＣＰＴ－１１）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シスプラチン、ドキソルビシン、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン－パクリタキセル（タキソール）、ドキソルビシン、５－ｆｕまたはカンプトテシン＋ａｐｏ２ｌ／ＴＲＡＩＬ（６Ｘ ｃｏｍｂｏ）を使用する）、１またはそれより多くのプロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブまたはＭＧ１３２）、１またはそれより多くのＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ＢＨ３Ｉ－２’（ｂｃｌ－ｘｌ阻害剤）、インドールアミンジオキシゲナーゼ－１阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９、またはＦ００１２８７）、ＡＴ－１０１（Ｒ－（－）－ゴシポール誘導体）、ＡＢＴ－２６３（小分子）、ＧＸ－１５－０７０（オバトクラックス）、またはＭＣＬ－１（骨髄性白血病細胞分化タンパク質－１）アンタゴニスト）、ｉＡＰ（アポトーシスタンパク質の阻害因子）アンタゴニスト（例えば、ｓｍａｃ７、ｓｍａｃ４、小分子ｓｍａｃ模倣体、合成ｓｍａｃペプチド（Ｆｕｌｄａ ｅｔ ａｌ．， ＮａｔＭｅｄ ２００２；８：８０８－１５を参照）、ＩＳＩＳ２３７２２（ＬＹ２１８１３０８）、またはＡＥＧ－３５１５６（ＧＥＭ－６４０））、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）阻害剤、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲを標的とする抗血管新生剤（例えば、アバスチン）、合成トリテルペノイド（ＨＨｙｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００５；６５：４７９９－８０８を参照）、ｃ－ＦＬＩＰ（細胞ＦＬＩＣＥ抑制性タンパク質）モジュレーター（例えば、ＰＰＡＲγ（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体γ）の天然および合成リガンド、５８０９３５４または５５６９１００）、キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ）、トラスツズマブ、セツキシマブ、テムシロリムス、ラパマイシンおよびテムシロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤、ボルテゾミブ、ＪＡＫ２阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ阻害剤、レナリドマイド、ＧＳＫ３β阻害剤、ＩＡＰ阻害剤および／または遺伝毒性薬物などの更なる治療と併用（例えば、同時または別々に）することができる。

本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体および併用抗体療法は、１種またはそれより多くの抗増殖性細胞毒性剤と更に併用することができる。抗増殖性細胞毒性剤として使用することができる化合物のクラスには、これらに限定されるものではないが、以下のものが含まれる。すなわち、

アルキル化剤（窒素マスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレアおよびトリアゼンを含むが、これらに限定されない）：ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標））、フォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、およびテモゾロミド。

代謝拮抗剤(葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない)：メトトレキサート、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチンおよびゲムシタビン。

アゴニスト抗ＣＤ４０抗体と併用するのに適した抗増殖剤としては、これらに限定されるものではないが、タキサン類、パクリタキセル（パクリタキセルは、タキソール（登録商標）として市販されている）、ドセタキセル、ディスコデルモライド（ＤＤＭ）、ジクチオスタチン（ＤＣＴ）、ペロルシドＡ、エポチロン類、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、フラノエポチロンＤ、デスオキシエポチロンＢ１、［１７］－デヒドロデスオキシエポチロンＢ、［１８］デヒドロデスオキシエポチロンＢ、Ｃ１２，１３－シクロプロピル－エポチロンＡ、Ｃ６～Ｃ８架橋エポチロンＡ、ｔｒａｎｓ－９，１０－デヒドロエポチロンＤ、ｃｉｓ－９，１０－デヒドロエポチロンＤ、１６－デスメチルエポチロンＢ、エポチロンＢ１０、ディスコデルモライド、パツピロン（ＥＰＯ－９０６）、ＫＯＳ－８６２、ＫＯＳ－１５８４、ＺＫ－ＥＰＯ、ＡＢＪ－７８９、ＸＡＡ２９６Ａ（ディスコデルモライド）、ＴＺＴ－１０２７（ソブリドチン）、ＩＬＸ－６５１（タシドチン塩酸塩）、ハリコンドリンＢ、エリブリンメシル酸塩（Ｅ－７３８９）、ヘミアステリン（ＨＴＩ－２８６）、Ｅ－７９７４、クリプトフィシン、ＬＹ－３５５７０３、メイタンシノイドイムノコンジュゲート（ＤＭ－１）、ＭＫＣ－１、ＡＢＴ－７５１、Ｔ１－３８０６７、Ｔ－９００６０７、ＳＢ－７１５９９２（イスピネシブ）、ＳＢ－７４３９２１、ＭＫ－０７３１、ＳＴＡ－５３１２、エリュテロビン、１７β－アセトキシ－２－エトキシ－６－オキソ－Ｂ－ｈｏｍｏ－ｅｓｔｒａ－１，３，５（１０）－トリエン－３－オール、シクロストレプチン、イソラウリマリド、ラウリマリド、４－ｅｐｉ－７－デヒドロキシ－１４，１６－ジデメチル－（＋）－ディスコデルモライドおよびクリプトチロン１、ならびに当該技術分野では周知の他の微小管安定化剤が挙げられる。

異常増殖性細胞を、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体による治療とともに、または治療に先立って休止状態とすることが望ましい場合、ホルモンおよびステロイド（合成アナログを含む）、例えば１７ａ－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチル－テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン 、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックス（登録商標）を患者に投与することもできる。

本明細書に記載の方法または組成物を用いる際、抗模倣薬などの、臨床の現場において腫瘍の増殖または転移の調節に使用される他の薬剤を必要に応じて投与することもできる。

化学療法剤の安全かつ効果的な投与のための方法は、当業者には周知のものである。更に、それらの投与は標準的な文献に記載されている。例えば、多くの化学療法剤の投与について、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）の例えば１９９６年版（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｍｏｎｔｖａｌｅ， Ｎ．Ｊ． ０７６４５－１７４２， ＵＳＡ）に記載されており、その開示を参照により本明細書に援用する。

化学療法剤および／または放射線治療は、当該技術分野では周知の治療プロトコールにしたがって投与することができる。化学療法剤および／または放射線治療の投与は、治療される疾患ならびにその疾患に対する化学療法剤および／または放射線治療の既知の効果に応じて変更することができる点は当業者には明らかであろう。また、熟練した臨床医の知識に基づいて、投与された治療剤の患者に対する観察された効果を考慮し、また投与された治療薬に対する観察された疾患の反応を考慮して、治療プロトコール(例えば、投与量および投与の時間)を変更することができる。
ＶＩ． 転帰

本明細書の実施例に示されるように、抗ＣＤ４０抗体と１またはそれより多くの更なる治療剤（例えば、可溶性ＣＤ４０リガンド、または抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体および／または抗ＬＡＧ－３抗体などの別の抗体）との同時投与は、抗体単独、または抗体療法をともなわない１種またはそれより多くの更なる治療剤による治療と比較して高い効果を与えるものである。好ましくは、抗ＣＤ４０抗体と１またはそれより多くの更なる治療剤との併用は治療上の相乗作用を示す。

「治療上の相乗作用」とは、複数の治療剤の組み合わせによる患者の治療が、その最適用量で使用される組み合わせのそれぞれの個々の成分によって得られる転帰に対して治療的に優れた転帰をもたらす現象のことを言う（Ｔ． Ｈ． Ｃｏｒｂｅｔｔ ｅｔ ａｌ．， １９８２， Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ， ６６， １１８７）。これに関連して、治療上の優れた転帰とは、患者が、ａ）組み合わせの個々の成分が組み合わせにおけるのと同じ用量で単独治療としてそれぞれ投与される場合に等しいかまたはそれよりも高い治療効果を得る一方でより少ない有害事象を示すか、またはｂ）各成分が個々の成分として投与される場合と同じ用量で組み合わせで投与される場合に組み合わせのそれぞれの個々の成分による治療よりも高い治療効果を得る一方で用量制限的毒性を示さない転帰である。異種移植片モデルにおいては、成分のそれぞれがその個々の最大の許容用量を概ね上回らない用量で存在する、その最大の許容用量で使用されるある組み合わせは、例えば、その組み合わせの投与によって、成分が単独で投与される場合に最も効果的な成分による腫瘍増殖の減少の値よりも大きい腫瘍増殖の減少が実現される場合に治療上の相乗作用を示す。

したがって、かかる組み合わせの各成分は、組み合わせとして、抗ＣＤ４０抗体による単独治療または抗体療法をともなわない更なる治療剤による治療と比較して腫瘍増殖を抑制するうえで相加的または超相加的作用を有する。「相加的」とは、それぞれの個別の成分による単独治療によって得られる最良の別々の結果よりもその程度において（例えば、腫瘍分裂指数または腫瘍増殖の低下度、または腫瘍縮小度または無症状もしくは症状緩和期間の頻度および／または長さ）より大きい結果を意味し、「超相加的」とは、かかる別々の結果の総和よりもその程度において上回る結果を示すために用いられる。一実施形態では、相加的作用は、腫瘍増殖の鈍化または停止として測定される。相加的作用は、例えば、腫瘍のサイズの減少、腫瘍分裂指数の低下、時間の経過にともなう転移性病変の数の減少、全体の応答速度の増大、またはメジアンもしくは全生存率の増大として測定することもできる。別の実施形態では、相加的作用は、Ｒａｍｏｓ細胞とインキュベートした場合のＣＤ９５の誘導の増大、ヒトＢ細胞とインキュベートした場合のＢ細胞増殖の増大、および／または樹状細胞とインキュベートした場合のＩＬ１２ｐ４０の発現の誘導の増大として測定される。

治療処置の有効性を定量化することができる尺度の非限定的な例の１つとして、下式にしたがって求められるｌｏｇ１０細胞死滅率を計算することがある。すなわち、
ｌｏｇ１０細胞死滅率＝ＴＣ（日）／３．３２ × Ｔｄ
式中、ＴＣは、処置群（Ｔ）の腫瘍およびコントロール群（Ｃ）の腫瘍が所定の値（例えば、１ｇまたは１０ｍＬ）に達した平均時間（日数）としての細胞増殖の遅延を表し、Ｔｄは、コントロール動物において腫瘍の体積が２倍になるのに必要な時間（日数）を表す。この尺度を適用する場合、ある産物は、ｌｏｇ１０細胞死滅率が０．７より大きいかまたは０．７に等しい場合に活性であるとみなされ、また、ある産物はｌｏｇ１０細胞死滅率が２．８より大きい場合に極めて活性が高いとみなされる。この尺度を用いると、成分のそれぞれが概ねその最大の許容用量以下の用量で存在する、それ自体の最大の許容用量で使用されるある組み合わせは、ｌｏｇ１０細胞死滅率が、最も効果的な成分が単独で投与される場合のそのｌｏｇ１０細胞死滅率の値よりも大きい場合に治療上の相乗作用を示す。例示的な場合では、組み合わせのｌｏｇ１０細胞死滅率は、その組み合わせの最も効果的な成分のｌｏｇ１０細胞死滅率の値を、少なくとも０．１ｌｏｇ細胞死滅率、少なくとも０．５ｌｏｇ細胞死滅率、または少なくとも１．０ｌｏｇ細胞死滅率だけ上回る。

本発明を以下の実施例により更に説明するが、実施例は更なる限定として解釈されるべきではない。本出願の全体にわたって引用される配列表、図面、およびすべての参照文献、特許、および公開された特許出願を、参照により本明細書に明示的に援用するものである。

実施例１
ＣＤ４０特異的ヒトモノクローナル抗体の作製
Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスのＨ２Ｌ２系統を可溶性ヒト抗ＣＤ４０抗原で免疫化することにより、ヒト抗ＣＤ４０抗体を作製した。Ｈａｒｂｏｕｒ（登録商標）トランスジェニックマウスは、内因性のマウス重鎖（ＨＣ）およびκ軽鎖（κ鎖）のＤＮＡ配列をノックアウトし、ヒト可変（Ｖ）領域およびラット定常（Ｃ）領域の配列をマウスゲノムに安定的に組み込んだものである。

抗原および免疫化：抗原は、ＣＤ４０の細胞外ドメインを抗体Ｆｃドメインと融合させた可溶性融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）、または組換えヒトＣＤ４０－ｍｓＧ２ａキメラタンパク質（自社で作製）とした。抗原を、最初の免疫化用に完全フロイント（Ｓｉｇｍａ社）アジュバントと混合した。この後、抗原を不完全フロイントアジュバントと混合した。更なるマウスを、ＭＰＬ＋ＴＤＭアジュバントシステム（Ｓｉｇｍａ社）に加えた可溶性ＣＤ４０タンパク質で免疫した。ＰＢＳに加えた５～２５μｇの可溶性組換えＣＤ４０抗原、またはＰＢＳに加えた、ヒトＣＤ４０を表面発現するようにトランスフェクトした５×１０^６個のＮＳＯ細胞を、アジュバントと１：１で混合した。マウスの腹腔内に２００μＬの調製した抗原を１４日ごとに注射した。抗ＣＤ４０力価を示した動物に、融合の３～４日前に５～１０μｇの可溶性組換えＣＤ４０抗原を静脈内投与した。マウス脾臓を採取し、単離した脾臓細胞をハイブリドーマの調製に使用した。

ハイブリドーマの調製：Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３マウスミエローマ細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １５８０）を融合に使用した。１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてミエローマ細胞を培養した。１０％以下のハイブリドーマ増強サプリメント（Ｓｉｇｍａ社）、１０％ ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ社）、Ｌ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ社）、０．１％ ゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ社）、２－メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ社）を、ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ社、１．０ｘ１０^４Ｍ ヒポキサンチン、４．０ｘ１０^－７Ｍ アミノプテリン、１．６ｘ１０^－５Ｍ チミジンを含む培地）とともに含む、更なる培地サプリメントをハイブリドーマ増殖培地に加えた。

脾臓細胞をＰ３ｘ６３Ａｇ８．６５３ミエローマ細胞と６：１の非で混合し、遠心分離によってペレット化した。融合を促進するため、ポリエチレングリコールを静かに混合しながら滴下した。ハイブリドーマを、視認されるコロニーが確立されるまで１～２週間増殖させた。上清を採取し、ヒト可溶性ＣＤ４０融合タンパク質およびラットＦｃに特異的な検出を用いたＥＬＩＳＡにより、ラットＩｇＧについての最初のスクリーニングに使用した。次いで、ＩｇＧ陽性上清を、フローサイトメトリーによりＣＤ４０特異性についてアッセイした。ハイブリドーマを、カニクイザルＣＤ４０との交差反応性についてもスクリーニングしたところ、いずれも結合について陽性であった。

ハイブリドーマ細胞を増殖させ、ＲＮＡ単離およびシークエンシング用に細胞ペレットを凍結した。ヒトｍＡｂのＶＨおよびＶＬコード領域を、対応するハイブリドーマからのＲＮＡを用いて同定した。ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、Ｖコード領域をＰＣＲにより増幅し、ＰＣＲ産物をシークエンシングし、ヒトＩｇＧ２ベクターに挿入して一過性に発現させ、ＰｒｏｔｅｉｎＡカラムクロマトグラフィーにより精製したところ、多くの特に興味深い抗体が単離され、これらを、３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ（この場合、重鎖のＦＲ３のＮ７５Ｋ改変後のもの）、および３Ｂ６－ＮＳ （抗体３Ｂ６の軽鎖のＦＲ３をＮ６３Ｓ改変してＮ結合グリコシル化部位を除去した後のもの）と指定した。

表１、２、および３に、ヒトｍＡｂのＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域の生殖細胞系の情報およびアミノ酸配列をまとめる（アミノ酸配列の場合、相補性決定領域（ＣＤＲ）を下線で示す）。対応する核酸配列を、これらの実施例の最後で、「配列表の概要」とタイトルした配列表に示す。

抗体３Ｃ３の重鎖および軽鎖の完全なアミノ酸配列は以下のとおりである。
軽鎖配列（リーダー配列は除去してある）（配列番号１３６）

重鎖配列（リーダー配列は除去してある）（配列番号１３５）

それぞれの場合で、可変配列はイタリック体で示し、定常ドメインは太字で示している。定常ドメイン配列は、Ｃ末端のリシンを除去したＩｇＧ２配列である。
同じ定常ドメイン配列を、上記に示したそれぞれの可変配列とともに他の抗体で使用した。

実施例２
バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるヒトｍＡｂのアフィニティー及び速度定数の測定
異なるヒト抗ＣＤ４０抗体の結合アフィニティーおよび結合速度を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＱＫｅ装置（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ社、カリフォルニア州、メンローパーク）を製造者のガイドラインにしたがって使用してバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により調べた。

実施例１で得られた精製抗体を、Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ Ｆｃ Ｃａｐｔｕｒｅ （ＡＨＣ）バイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社、製品番号１８－５０６０）上に捕捉した。各抗体は、希釈バッファー（１０ｍＭ ＰＯ４＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ＋１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ＋ ０．５％Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ ７．２）で０．５μｇ／ｍＬに調製し、新たに水を加えたばかりのＡＨＣバイオセンサーに、２５℃、１０００ｒｐｍのプレート振盪速度で３５～５０秒間ロードし、０．２ｎｍのターゲット応答を得た。反応速度パラメータに対する被検質の質量輸送の影響を制限するために低濃度のリガンドを捕捉させた。１つのアッセイにつき、８個のバイオセンサーに同じ抗体をロードした。

抗体をロードしたバイオセンサーの６個を、被検質として可溶性ヒトＣＤ４０－ＭｓＩｇＧ２ａ（Ｃｅｌｌｄｅｘ社、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで６０ｋＤ）に曝露することにより、結合を測定した。アフィニティー測定値は、被検質を、２５℃および１０００ｒｐｍのプレート振盪速度にて希釈バッファーで３．１３～０．０９８ｎＭの範囲に２倍連続希釈することにより求めた。抗体をロードしたバイオセンサーを各被検質ウェル内で１２００秒間、結合させた後、各バイオセンサーを希釈バッファーウェルに２．５時間（９０００秒）移して解離測定を行った。

それぞれの場合で、捕捉された抗体を有する残りの２個のバイオセンサーを、結合および解離段階で希釈バッファーウェルに入れておくことで対応するコントロールとした。バックグランドを差し引いて、バイオセンサーのドリフトおよびバイオセンサーからの抗体の解離を説明するためにコントロールバイオセンサーのデータを用いた。

Ｆｏｒｔｅｂｉｏ社のデータ解析ソフトウェアのバージョン８．２．０．７（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ社、カリフォルニア州、メンローパーク）をそれぞれの場合で使用して、捕捉抗体に対する希釈バッファー中の一連の濃度の被検質の結合から反応速度パラメータを導出した。結合および解離曲線を、データ解析ソフトウェアを製造者のガイドラインにしあがって使用して１：１の結合モデルに当てはめた。

このようにして求めたアフィニティーおよび反応速度パラメータ（バックグラウンドを引いたもの）を図１に示す。なお、図中、ｋｏｎ＝結合速度定数、ｋｄｉｓ＝解離速度定数、Ｋ_Ｄ＝ｋｄｉｓ／ｋｏｎの比によって求められる解離平衡結合定数である。

実施例３
ＣＤ４０に対するヒトｍＡｂの結合特性を測定するためのアッセイ
マイクロタイタープレートに、ＰＢＳに加えた組換えヒトＣＤ４０－Ｆｃをコーティングし、その後、ＰＢＳに加えた５％ウシ血清アルブミンでブロッキングした。実施例１で得られた、ＰｒｏｔｅｉｎＡで精製した各ヒトｍＡｂおよびアイソタイプコントロールを異なる濃度で加え、３７℃でインキュベートした。各プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄してから、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）２特異的ポリクローナル試薬と３７℃でインキュベートした。洗浄の後、各プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを用いてＯＤ４５０～６５０で分析した。代表的な結合曲線を図２に示す。

カニクイザルが抗ＣＤ４０ｍＡｂについて試験を行ううえで関連のあるモデルであることを確立するため、精製したカニクイザルＰＢＭＣまたはヒトＰＢＭＣを異なる濃度の抗ヒトＣＤ４０ｍＡｂと、プレートシェーカー上で室温で２０分間インキュベートした。次いで、細胞を、０／１％ＢＳＡおよび０．０５％ＮａＮ_３を含んだＰＢＳ（ＰＢＡ）で２回洗浄した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＰＥ抗体をプレートシェーカー上で室温で２０分間加えた。この後、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）結合ＣＤ２０抗体で染色してＢ細胞を同定した。細胞をフローサイトメトリーにより分析し、結合曲線を図３に示した。図はカニクイザルとヒトでＣＤ４０に対する同様の結合を示している。

実施例４
ＥＬＩＳＡによるｓＣＤ４０Ｌの結合のブロッキング
可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）のＣＤ４０タンパク質への結合に対する、実施例１で得られたヒトｍＡｂの影響をＥＬＩＳＡにより測定した。マイクロタイタープレートをＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社より販売される２μｇ／ｍｌの可溶性組換えヒトＣＤ４０／Ｆｃキメラでコーティングした後、５％ＰＢＡでブロッキングした。抗ＣＤ４０抗体（［最終］＝１００μｇ／ｍＬ）プレートに加え、次いで、Ｉｍｍｕｎｅｘ社より販売される可溶性ヒト組換えＣＤ４０Ｌ／ビオチン（［最終］＝５０μｇ／ｍＬ）を加えた。ＣＤ４０に捕捉されたｒＣＤ４０Ｌを、ストレプトアビジン－ＨＲＰおよび基質としてＳｕｐｅｒ Ｂｌｕｅ ＴＭＢを用いて検出した。結果を図４ＡおよびＢに、示されるようなコントロールとともに示す。

実施例５
ＣＤ４０細胞への結合
ヒトＣＤ４０をその表面上に発現している細胞上のＣＤ４０に結合する抗ＣＤ４０ヒトｍＡｂの能力を、以下のようにしてフローサイトメトリーにより調べた。

実施例１で得られた抗体を、ヒトＣＤ４０をその表面上に発現しているヒト細胞株に対する結合について試験した。ＰｒｏｔｅｉｎＡで精製したヒトｍＡｂである３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、および６Ｈ６を、ヒトＣＤ４０を発現しているＲａｊｉ細胞及びＲａｍｏｓ細胞とプレートシェーカー上で室温でインキュベートした。２０分後、細胞を、、０／１％ＢＳＡおよび０．０５％ＮａＮ_３を含んだＰＢＳ（ＰＢＡ）で洗浄し、結合した抗体を、細胞をＰＥ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的プローブとインキュベートすることにより検出した。余分なプローブをＰＢＡで細胞から洗い流し、細胞にともなう蛍光を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）を製造者の指示にしたがって使用して測定した。

図５（Ｒａｊｉ細胞に対する結合）および図６（Ｒａｍｏｓ細胞に対する結合）に示されるように、ヒトｍＡｂは、抗体濃度の関数として、ヒトＣＤ４０を発現する細胞に高いレベルの結合を示した。

実施例６
Ｒａｍｏｓ細胞上でのＣＤ９５の誘導
Ｒａｍｏｓ細胞を、２μｇ／ｍＬの実施例１で得られたヒト抗ＣＤ４０ｍＡｂと、３７℃、６％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、細胞をＰＢＡで１回洗い、ＰＥ結合抗ＣＤ９５抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）により、振盪しながら、室温で２０分間染色した。余分な標識抗体を洗い流し、各試料を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で読み取った。図７Ａおよび７Ｂ（図中、示されるように、影付きで示したプロットは非処理／コントロール細胞を示し、実線は抗体で処理した細胞を示す）に示されるように、３Ｃ３および１Ｂ５－ＮＫ抗体ではＣＤ９５の増大を示し、他の抗体３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、および３Ｂ６－ＮＳは、表面に発現されるＣＤ９５の発現の強い増大を誘導することができた。

実施例７
樹状細胞の活性化
樹状細胞を、以下のようにしてヒト単球から誘導した。
ＰＢＭＣをＴ１７５ｃｍ２のフラスコに加え、単球を約２時間、３７℃、６％ＣＯ_２で接着させた。細胞を取り出し、単球を１０％ＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬ ＩＬ－４ （Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）および１００ｎｇ／ｍＬ ＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を含むＲＰＭＩ中で７日間培養した。細胞を収穫し、ＣＤ１１ｃの発現により樹状細胞であることを確認した（図示せず）。

次いで、細胞をｇ／ｍＬの実施例１で得られた３Ｃ３および３Ｇ５ヒト抗ＣＤ４０抗体、および適当なコントロールの存在下で、３７℃、６％ＣＯ_２にてインキュベートした。７２時間後に細胞を収穫し、上清を回収して保存し、サイトカイン分析を行った。細胞を、振盪下、室温で２０分間、以下の標識した抗体、すなわち、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、およびＣＤ８３ ＢＶ５１０（いずれもＢＤ社より販売されるもの）で染色した。この後、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で分析した。図８Ａは、示される抗体またはコントロールとインキュベートした際のこれらのマーカーのそれぞれについて発現レベルを示している。

ＩＬ－１２ｐ４０の誘導を、これらの７２時間培養物から得られた上清でＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）によって評価した。図９Ａは、示されるように、コントロールと比較しての３Ｃ３および３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体によるＩＬ－１２ｐ４０産生の増大を示している。

更なる実験において、細胞を、１０、１および０．１μｇ／ｍＬの実施例１で得られた３Ｃ３および３Ｇ５ヒト抗ＣＤ４０抗体の存在下で、３７℃、６％ＣＯ_２にてインキュベートした。４８時間後に細胞を収穫し、上清を回収して保存し、サイトカイン分析を行った。細胞を、振盪下、室温で２０分間、ＣＤ５４で標識した抗体（ＢＤ社）で染色した。この後、細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で分析した。図８Ｂは、示される抗体またはコントロールとインキュベートした際のＣＤ５４の発現レベルを示している。

ＩＬ－１２ｐ４０の誘導を、これらの４８時間培養物から得られた上清でＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）によって評価した。図９Ｂは、示されるように、コントロールと比較しての３Ｃ３および３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体によるＩＬ－１２ｐ４０産生の増大を示している。

実施例８
Ｂ細胞の活性化
全血を１０μｇ／ｍＬの実施例１で得られた３Ｃ３および３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体と、３７℃、６％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、以下の標識抗体、すなわち、ＣＤ５４ ＰＥ、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５およびＣＤ７１ ＰＥを用いてＢ細胞および活性化マーカーを染色した。細胞を振盪下、室温で２０分間、染色し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で読み取った。図１０Ａは、示されるように、これらのマーカーのそれぞれについてコントロールと比較しての発現レベルの変化を示す。

更なる実験において、全血を１０、１、および０．１μｇ／ｍＬの実施例１で得られた３Ｃ３および３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体と、３７℃、６％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、以下の標識抗体、すなわち、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ８６ ＡＰＣ（いずれもＢＤ社より販売されるもの）を用いてＢ細胞および活性化マーカーを染色した。細胞を振盪下、室温で２０分間、染色し、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で読み取った。図１０Ｂは、示されるように、これらのマーカーのそれぞれについてコントロールと比較しての発現レベルの変化を示す。

実施例９ ＮＦκβの活性化
ＣＤ４０を発現するルシフェラーゼレポーター細胞株を、異なる濃度の実施例１で得られたヒト抗ＣＤ４０抗体と３７℃、６％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。ルシフェラーゼの発現を、製造者のガイドラインにしたがってＰｒｏｍｅｇａ社によるルシフェラーゼアッセイシステムで検出した。図１１Ａおよび１１Ｂは、抗体濃度の関数として３Ｃ３、３Ｇ５、１Ｂ４、３Ｂ６、６Ｈ６、２Ｅ１．２、１Ｂ５－ＮＫ、および３Ｂ６－ＮＳ抗体により誘導された高いレベルのＮＦｋＢ活性化を示す。

実施例１０
Ｒａｊｉ異種移植片ＳＣＩＤマウスモデルにおける腫瘍殺滅
ＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ社より購入したもの）を病原体のないマウス施設で飼育した。リンパ腫Ｒａｊｉ細胞（１ ｘ １０^６個）を、１群５匹としたＳＣＩＤマウスに皮下注射した。１、５、１１日目にこれらのマウスを、ＣＤ４０ヒトｍＡｂクローン３Ｃ３および３Ｇ５を投与１回当たり０．３ｍｇ腹腔内投与して処理した。腫瘍の増殖をノギスを用いて週２回測定した。腫瘍増殖および生存率分析の結果を図１２に示すが、これらの結果より、腫瘍チャレンジを行ったマウスでは、抗ＣＤ４０抗体による処理により腫瘍の増殖が阻害され、生理食塩水で処理したコントロールと比較して生存期間が有意に延びたことが理解できる。

実施例１１
Ｒａｍｏｓ異種移植片ＳＣＩＤマウスモデルにおける腫瘍殺滅
ＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ社より購入したもの）を病原体のないマウス施設で飼育した。ヒトリンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞（１ ｘ １０^６個）を、１群５匹としたＳＣＩＤマウスに０日目に皮下注射した。１、５、１１日目にこれらのマウスを、抗ＣＤ４０ヒトｍＡｂ３Ｃ３および３Ｇ５を投与１回当たり０．３ｍｇ腹腔内投与して処理した。腫瘍の増殖をノギスを用いて週２回測定した。

図１３に示される結果は、抗ＣＤ４０ｍＡｂが、生理食塩水で処理したコントロールと比較して腫瘍体積の成長を有意に阻害し、腫瘍チャレンジを行ったマウスで１００％（３Ｇ５）または８０％（３Ｃ３）の生存率が得られたことを示している。

実施例１２
Ｔ細胞の増殖
バフィーコート製剤から単離したヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を０．５μＭのカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で、５分間、回転させながら室温で標識した。ＣＦＳＥ標識したＰＢＭＣ（１．５ ｘ １０^６個）を、０．２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）をドライコートした各ウェルに分注した。
ＣＤ４０抗体（３Ｇ５、３Ｃ３、１４１２）またはアイソタイプコントロール（ＩｇＧ２）を各ウェルに可溶形態で１０μｇ／ｍＬの最終濃度で分注した。各プレートを、３７℃（５％ＣＯ_２）でインキュベートし、６日目に細胞を収穫し、抗ＣＤ３ＡＰＣまたはアイソタイプコントロールで染色し、フローサイトメトリーにより分析した。代表的なプロットを図１４Ａに示すが、この図より、ＣＤ３＋ゲートにおけるＣＦＳＥ染色の強度の低下によって示されるように、各抗体がＴ細胞の増殖を有意に促進したことが理解できる。繰り返し実験の結果を図１４Ｂに示すが、図は、アイソタイプコントロールと比較しての抗ＣＤ４０抗体による分裂細胞の増加を示している。

実施例１３
Ｆｃ受容体相互作用とは無関係なＣＤ４０への結合
マイクロタイタープレートに、ＰＢＳに加えた組換えヒトＣＤ４０－Ｆｃをコーティングし、その後、ＰＢＳに加えた５％ウシ血清アルブミンでブロッキングした。ＰｒｏｔｅｉｎＡで精製したヒトｍＡｂ（記載される全ＩｇＧおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を異なる濃度で加え、３７℃でインキュベートした。各プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄してから、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させたヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）２特異的ポリクローナル試薬と３７℃でインキュベートした。洗浄の後、各プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを用いてＯＤ４５０～６５０で分析した。結果を図１５に示す。各抗体のＩｇＧ２およびＦ（ａｂ’）２部分は、ＣＤ４０－Ｆｃとの結合について同様の濃度依存性を示している。

実施例１４
Ｆｃ受容体相互作用とは無関係なＣＤ４０の活性化
上記実施例９で得られた、ＣＤ４０を発現するルシフェラーゼレポーター細胞株を、異なる濃度のヒト抗ＣＤ４０抗体（記載されるような全ＩｇＧおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）と３７℃、６％ＣＯ_２で６時間インキュベートした。ルシフェラーゼの発現を、製造者のガイドラインにしたがってＰｒｏｍｅｇａ社のルシフェラーゼアッセイシステムで検出した。結果を図１６に示す。これらの結果は、Ｆｃドメインを有する完全な抗体およびＦｃドメインを有さない対応するＦ（ａｂ’）２部分がいずれもレポーター細胞株においてＮＦｋＢを活性化できることから、３Ｃ３および３Ｇ５によるレポーター細胞株のＣＤ４０媒介活性化にとってＦｃ受容体への結合が必要ではないことを示している。

実施例１５
Ｆｃ受容体相互作用とは無関係なＣＤ９５の誘導
Ｒａｍｏｓ細胞を、異なる濃度のヒト抗ＣＤ４０ｍＡｂ（記載されるような全ＩｇＧおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）と、３７℃、６％ＣＯ_２で一晩インキュベートした。翌日、細胞をＰＢＡで１回洗い、ＰＥ結合抗ＣＤ９５抗体（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）により、振盪しながら、室温で２０分間染色した。余分な標識抗体を洗い流し、各試料を、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（登録商標）装置（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、米国、ニュージャージー州）で読み取った。結果を図１７に示す。これらのデータは、３Ｇ５がＣＤ４０＋ヒトリンパ芽球株Ｒａｍｏｓ上にＣＤ９５の発現を誘導するうえでＦｃ受容体相互作用が必要でないことを示している。

実施例１６
ｓＣＤ４０Ｌとの相乗作用
Ｒａｍｏｓ細胞を、抗体３Ｃ３と、０．１ｍｇ／ｍｌの可溶性ＣＤ４０リガンドの存在下または非存在下で一晩インキュベートした。この後、細胞を抗ＣＤ９５－ＰＥ抗体で染色し、フローサイトメトリーで分析した。結果を図１９に示すが、この結果は、抗ＣＤ４０抗体３Ｃ３がｓＣＤ４０Ｌと相乗的に作用することを示すものである。したがって、抗体３Ｃ３（および３Ｃ３と同じエピトープに結合する抗ＣＤ４０抗体）は、可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）と相乗的なアゴニスト作用を示し、したがって、ヒトＣＤ４０のリガンド結合部位に結合するものを含む他の治療薬と相乗作用を示すことができる。代表的な相乗作用としては、例えば、免疫機能のアップレギュレーション（例えばワクチン療法におけるＴ細胞媒介性免疫反応、癌治療におけるＮＫ活性化など）、細胞増殖の阻害（例えば癌治療における）、および／またはＡＰＣによる抗原のプロセシングおよび提示の促進（例えばワクチン療法における）が挙げられる。

実施例１７
抗ＣＤ４０ヒト抗体３Ｃ３および３Ｇ５およびｓＣＤ４０のエピトープマッピング
可溶性ＣＤ４０（ｓＣＤ４０）の短縮型および変異型フラグメントの作製
アミノ酸残基１～１７３（配列番号１３３）にわたる完全長の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）をコードした可溶性ＣＤ４０（ｓＣＤ４０）のｃＤＮＡ、ならびにアミノ酸１～９４、３６～１３０、および８４～１７３をコードした３つのより小さなフラグメントをＧｅｎＳｃｒｉｐｔにより合成し、Ｎ末端ヒトκ軽鎖およびＣ末端Ｆｌａｇタグとともに哺乳動物発現ベクターにインフレームで挿入した。得られたκ－ｓＣＤ４０Ｌ－Ｆｌａｇ融合タンパク質を一過性トランスフェクションによりＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（ＳＡＦＣ社）で発現させた。ＣＤ４０抗体３Ｃ３はヒトおよびサルを認識するが、マウスＣＤ４０は認識しないため、一連の変異ｓＣＤ４０ａａ１～９４ ｃＤＮＡを、図２０および２１のアラインメントに示されるようなヒト配列とマウス配列との相違に基づいて設計した。これらの変異体を合成し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔによりクローニングした。これらの短縮型または変異型フラグメントのすべてを、上記に述べたように同じベクターにクローニングし、同じ細胞株によって発現させた。

ＥＬＩＳＡによる結合の測定
一連のｓＣＤ４０フラグメントに対する３Ｃ３の結合をＥＬＩＳＡにより試験した。１μｇ／ｍｌの精製κ－ｓＣＤ４０－Ｆｌａｇ融合タンパク質またはｓＣＤ４０融合タンパク質を含んだＣＨＯ細胞上清を、ＰＢＳに加えた５μｇ／ｍｌのマウス抗Ｆｌａｇ抗体（Ｓｉｇｍａ社）で予めコーティングしたマイクロタイタープレートに捕捉させ、ＰＢＳに加えた５％ウシ血清アルブミンでブロッキングした。ＣＤ４０抗体とのインキュベーション後に、各マイクロタイタープレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼに結合したヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃポリクローナル試薬とインキュベートした。洗浄の後、各プレートをＨＲＰ基質で発色させ、マイクロタイタープレートリーダーを用いてＯＤ４５０～６５０で分析した。κ鎖の結合を測定するためのヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆａｂ２－ＨＲＰを用いたＥＬＩＳＡを平行して行って、異なるトランスフェクションからのｓＣＤ４０融合タンパク質の発現を評価した。

約１μｇ／ｍｌの完全長ｓＣＤ４０および３つの短縮型フラグメントを用いたＥＬＩＳＡ分析により、アミノ酸残基１～９４をコードしたフラグメントは３Ｃ３及び完全なＥＣＤに結合したが、アミノ酸残基３６～１３０または８４～１７３をコードしたフラグメントはまったく結合しなかった（表４を参照）ことから、ｓＣＤ４０のＮ末端側残基１～９４は、３Ｃ３の結合に必要かつ充分であることが示された。

これらの結果に基づくと、３Ｃ３の重要な認識部位はアミノ酸１～３５内に存在する。
３Ｃ３の結合部位のコンフォメーションを組織するための重要な領域およびアミノ酸残基を更に同定するため、約２μｇ／ｍｌの１３種類の突然変異ｓＣＤ４０（アミノ酸残基１～９４）フラグメント（４種類の領域多重突然変異および９種類の単一突然変異）をＥＬＩＳＡにより試験した（別々の実験の結果を示す表５および６、ならびに図２２を参照）。

残基１～５の多重突然変異は３Ｃ３をほとんど完全に阻害した。残基１～４の点突然変異は３Ｃ３に対する結合を低下させなかった。残基５の点突然変異は結合を著しく低下させたが、多重突然変異タンパク質ほどではなかった。

残基１３～１５の多重突然変異は３Ｃ３の結合を低下させなかった。残基２５、２６、２８および３０の多重突然変異は３Ｃ３の若干の低下を引き起こした。点突然変異はこれらの領域では試験しなかった。

残基３３～３６の多重突然変異は３Ｃ３の結合をほとんど完全に阻害した。残基３５の点突然変異は結合に影響しなかった。３３、３４および３６の点突然変異は３Ｃ３の結合を低下させたが、多重突然変異タンパク質ほどではなかった。別のＣＤ４０抗体として３Ｇ５を、すべてのフラグメントおよび突然変異体について試験したところ、３Ｃ３とは異なることが示された（表６）。残基１～５の多重突然変異は結合を低下させなかったが残基３３～３６の突然変異は結合を消失させた。３Ｃ３と異なり、残基３３の点突然変異は結合を完全に消失させ、３４の突然変異は結合を著しく低下させた。

実施例１８
生物学的および毒性プロファイル
非ＧＬＰのパイロット実験をナイーブなカニクイザルで行った。この実験は、３Ｃ３の生物学的および毒性プロファイルについての予備データを得るために設計した。別の抗ＣＤ４０抗体（３Ｇ５）も評価した。被検物質は、１日目に伏在静脈に静脈内注射することにより投与し（０．２ｍｇ／ｋｇまたは溶媒）、２９日目に再び投与した（２ｍｇ／ｋｇまたは溶媒）。１日目および２９日目にキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）も動物に皮下注射した（１ｍｇ）。潜在的な被検物質に関連した作用の評価は、臨床徴候、体温、臨床病理学パラメータ（血液学的所見、凝集、臨床化学的所見、および尿検査）、抗薬剤抗体、サイトカイン、Ｔ細胞依存性抗体反応分析（ＴＤＡＲ）、フローサイトメトリー、および毒物動態学パラメータに基づいて行った。体重を被検物質の投与に先立って１回記録し、その後、週１回記録した。これは、剖検を行わない生存試験として設計した。

この実験の３Ｃ３または３Ｇ５の投与は、カニクイザルで、いずれの毒性パラメータもコントロールレベルの有意に外側となることなく、高い忍容性を示した。注目すべき点として、３Ｃ３を投与したサルでは、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびクレアニンキナーゼの上昇はわずかであった（図２３Ａ～２３Ｃ）。いずれの抗ＣＤ４０抗体を投与した動物においても、薬理学的低下がＩＬ－１２（図２４）、白血球（図２５Ａ）、好中球（図２５Ｂ）、およびリンパ球（図２５Ｃ）が認められ、Ｂ細胞の一過性の減少が最も顕著であった（図２６および２７）。結論として、この条件下では３Ｃ３および３Ｇ５が示した毒性のエビデンスは最小限であった。

実施例１９
Ｆｃ相互作用とは無関係なＢ細胞の増殖

ヒトＢ細胞を、ＣＤ１９ビーズを用いた磁気選択により末梢血単核球から単離した。細胞を、５分間回転させながら、室温で０．５μＭのカルボキシフルオロセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。標識した細胞を、抗ＣＤ４０ｍＡｂとして３Ｃ３、またはアイソタイプコントロール（全ＩｇＧおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントの両方）の存在下で６日間、培養した。この後、細胞を収穫し、フローサイトメトリーにより増殖について分析した。結果を図２８に示すが、この結果は、Ｆｃドメインを有する完全な抗体およびＦｃドメインを有さないその対応するＦ（ａｂ’）２部分がいずれもＢ細胞の増殖を誘導できることから、３Ｃ３によるＣＤ４０媒介増殖にＦｃ受容体への結合は必要ではないことを示している。

実施例２０
ヒトＢ細胞におけるＣＤ４０Ｌとの相乗作用
ヒトＢ細胞を単離し、実施例１９と同様にして標識した。抗ＣＤ４０ｍＡｂとして３Ｃ３、またはアイソタイプコントロール０．１μｇ／ｍＬを、０．１μｇ／ｍＬの可溶性ＣＤ４０Ｌ（Ｉｍｍｕｎｅｘ社）の存在下または非存在下で細胞と６日間、インキュベートした。図２９は、３Ｃ３単独またはアイソタイプコントロール抗体をＣＤ４０Ｌと組み合わせた場合のいずれにおいても有意な増殖は認められないが、培養中でＣＤ４０Ｌを３Ｃ３と組み合わせた場合に増殖が誘導されることを示している。

樹状細胞を調製し、０．１μｇ／ｍＬの可溶性ＣＤ４０Ｌを加えるかまたは加えずに、実施例７と同様にして０．５μｇ／ｍＬの３Ｃ３と培養した。ＩＬ－１２ｐ４０の産生をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により測定した。図３０は、３Ｃ３単独またはアイソタイプとＣＤ４０Ｌの組み合わせによる低い産生レベルと比較して、３Ｃ３とＣＤ４０Ｌとの組み合わせはより高いレベルのＩＬ－１２ｐ４０を誘導したことを示している。

実施例２１
全血中のサイトカイン応答
全血を１０μｇ／ｍＬのアイソタイプコントロールまたは３Ｃ３、またはポジティブコントロールとしてＬＰＳと一晩インキュベートした。翌日、血漿を回収し、サイトカインをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により測定した。結果を図３１に示すが、この結果は、炎症性サイトカインの有意な産生が見られなかったことを示している。
均等物
当業者であれば、通常の実験以上のことを行うことなく、本明細書に記載される発明の特定の実施形態の多くの均等物が認識されるか、または確認できるであろう。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
配列表

Claims (31)

1. 重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含むヒトＣＤ４０に結合するアゴニスト単離モノクローナル抗体であって、
   前記重鎖可変領域が、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、
   前記軽鎖可変領域が、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２９に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、
   前記抗体は、
   （ａ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、
   （ｂ）ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を誘導することなく、
   （ｃ）ＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を誘導することなく、かつ／または
   （ｄ）Ｆｃ受容体の結合とは無関係に、かつＣＤ４０Ｌと相乗作用を示すことが可能で、
   のいずれかで、ＡＰＣを直接活性化し、かつ／または抗原に対する免疫反応を増大させる、抗体。
2. 請求項１に記載の抗体であって、配列番号１７と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１８と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗体。
3. 請求項１に記載の抗体であって、配列番号１７と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１８と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗体。
4. 請求項１に記載の抗体であって、それぞれ、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗体。
5. （ａ）ヒト抗体である、および／または
   （ｂ）ヒト定常領域を含む、
   請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
6. 抗原結合フラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖフラグメントである、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体。
7. 以下の性質：
   （ａ）細胞アポトーシスを誘導すること、
   （ｂ）ＩＬ－１２ｐ４０の発現の増大により測定される細胞のＴ細胞刺激活性を促進すること、
   （ｃ）ＨＬＡ－ＤＲ Ｖ４５０、ＣＤ５４ ＰＥ、ＣＤ８６ ＡＰＣ、およびＣＤ８３ ＢＶ５１０、ＣＤ１９ Ｖ５００、ＣＤ２３ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５、ＣＤ６９ ＡＰＣ、ＣＤ３８ ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５およびＣＤ７１ ＰＥからなる群から選択される少なくとも１つの細胞表面マーカーの発現の増大により測定されるＢ細胞活性化を促進すること、
   （ｄ）１０^－１０Ｍもしくはそれ未満の平衡解離定数ＫｄでヒトＣＤ４０に結合すること、および／または
   （ｅ）カニクイザルＣＤ４０と交差反応すること、
   の少なくとも１つを更に示す、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。
8. ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む、請求項５に記載の抗体。
9. 抗原に連結された、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体を含む、分子結合体。
10. 前記抗体と異なる結合特異性を有する第２の分子に連結された、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体を含む、二重特異性分子。
11. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体の軽鎖と重鎖の両方の可変領域をコードする、単離核酸。
12. 請求項１１に記載の単離核酸を含む、発現ベクター。
13. 請求項１２に記載の発現ベクターで形質転換された、細胞。
14. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体、請求項９に記載の分子結合体、または請求項１０に記載の二重特異性分子と、担体と、を含む、組成物。
15. アジュバントならびに／あるいは１種またはそれより多くの他の抗体を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
16. 前記１種以上の他の抗体が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＤＲ３またはＣＤ２８Ｈに結合する、請求項１５に記載の組成物。
17. 対象において抗原に対する免疫反応を誘導または促進するための、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体、請求項９に記載の分子結合体、または請求項１０に記載の二重特異性分子を含む組成物、あるいは請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組成物。
18. 前記組成物が前記抗原と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１７に記載の組成物。
19. 前記抗原が、前記組成物から同時に、別々に、または順次投与されることを特徴とする、請求項１８に記載の組成物。
20. 対象においてＣＤ４０発現細胞の増殖を阻害するための、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体、請求項９に記載の分子結合体、または請求項１０に記載の二重特異性分子を含む組成物、あるいは請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組成物。
21. 対象の疾患を治療するための、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体、請求項９に記載の分子結合体、または請求項１０に記載の二重特異性分子を含む組成物、あるいは請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組成物。
22. 前記疾患が、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される癌である、請求項２１に記載の組成物。
23. 前記抗体が、ヒトＣＤ４０に対するＣＤ４０Ｌの結合をブロックしない、請求項１７～２２のいずれか１項に記載の組成物。
24. 前記組成物が、１またはそれより多くの治療剤と組み合わせて前記対象に投与されることを特徴とする、請求項１７～２３のいずれか１項に記載の組成物。
25. 前記治療剤が別の抗体である、請求項２４に記載の組成物。
26. 前記別の抗体が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および／または抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項２５に記載の組成物。
27. 前記組成物と前記治療剤とが同時に投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
28. 前記組成物と前記治療剤とが順次投与されることを特徴とする、請求項２５に記載の組成物。
29. 対象において抗原に対する免疫反応を誘導または促進するために使用するための、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体を含む組成物。
30. 癌の治療用の薬剤の製造における、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体の使用。
31. 癌の治療用の、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体を含む組成物。
    

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