KR20230124672A

KR20230124672A - 항원 제시 세포에 대한 momp vs4 항원의 표적화에 기반한클라미디아 백신

Info

Publication number: KR20230124672A
Application number: KR1020237024944A
Authority: KR
Inventors: 이브스 레비; 실방 카르디노; 미레유 센트리브르; 리디 디유돈; 산드라 주라브스키; 제라드 주라브스키
Original assignee: 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔); 아시스땅스 퍼블리끄-오삐또 드 빠리; 베일러 리서치 인스티튜트; 위니베르씨떼 빠리-에스뜨 끄레떼이으 발 드 마른느
Priority date: 2020-12-23
Filing date: 2021-12-22
Publication date: 2023-08-25
Also published as: EP4267176A1; JP2024500237A; WO2022136508A1; MX2023007610A; CA3205280A1; CN116940373A

Abstract

클라미디아는 다양한 감염증을 일으키는 세포내 박테리아 병원체이다. 본 발명자들은, 백신으로서 사용하기 위해 중쇄 및/또는 경쇄가 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)의 MOMP VS4 도메인에 접합된 항원 제시 세포(즉, 수지상 세포)의 표면 항원(즉, CD40)에 대해 지시된 항체를 생산했다.

Description

항원 제시 세포에 대한 MOMP VS4 항원의 표적화에 기반한 클라미디아 백신

본 발명은 의학, 특히 백신학 분야에 관한 것이다.

클라미디아는 다양한 감염을 일으키는 세포내 박테리아 병원균이다. 예를 들면, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)는 인간 성병 감염증 및 눈 감염증(트라코마)의 원인균이다. 세계적으로, 9,200만 명이 클라미디아 트라코마티스에 성적으로 감염된 것으로 추정된다. 클라미디아 트라코마티스에 의한 비뇨생식기 감염증은 이의 높은 유병률과 자궁외 임신 및 불임의 위험 인자라는 사실로 인해 공중 위생상의 관심사이다. 이 외에도, 클라미디아 트라코마티스 감염증은 HIV 전파를 촉진하고, HPV-유발 자궁경부암(cervical carcinoma)의 공-인자로서 작용하는 것으로 밝혀졌다. 미치료 성기 클라미디아 트라코마티스 감염증의 지속 기간은 연장될 수 있으며, 종종 최초 12개월 이내에 완전한 클리어런스에 도달하지 못한다. 인간 연구로부터, 성기 재감염에 대한 어느 정도의 보호 면역이 발달하는 것으로 공지되어 있지만, 기껏해야 부분적인 것으로 보인다. 감염은 항생제 치료에 의해 효과적으로 제어되고, 그러나, 무증상 사례의 높은 유병률은 효과적인 클라미디아 백신이 개발되는 경우에만 지속가능한 질환 관리를 기대할 수 있다는 것을 시사한다.

MOMP는 항체 중화를 위한 고전적 표적 항원이며, 기재되어 있는 최초의 항원 분자 중 하나이다. 이는 구조(포린) 특성을 갖는 표면에 노출된 막관통 단백질이다. MOMP는 클라미디아 트라코마티스 막에서 단백질의 약 60%를 구성하는 40kDa 단백질이고, 시험관내 및 생체내 둘 다에서 입증된 효능을 갖는 항체를 중화하는 표적이다. MOMP는 5개의 일정한 세그먼트로 분리된 4개의 가변 표면 노출 도메인(VS1 내지 VS4)으로 이루어져 있고, 이는 클라미디아의 혈청형(약 15) 그룹화의 분자적 기초이다. 클라미디아 트라코마티스 비뇨생식기 혈청형의 분포 프로파일은 세계 지역에 대해 설명되어 있으며, MOMP 기반 백신에 필요한 혈청형 커버리지에 대한 역학 데이터를 제공한다.

MOMP는 인간과 동물에서 면역원성이 높고, 따라서 자연적으로 정제된 단백질로서, 재조합 및 DNA 백신으로서 백신 후보로서 매우 상세하게 연구되어 왔다. 주로 VS4는, 이 영역이 가변 영역에 매립된 고도로 보존된 종-특이적 에피토프를 함유하는 것으로 밝혀졌기 때문에, 면역원으로서 관심을 받고 있다. 중요하게는, VS4 영역에 보존된 이 에피토프는 복수의 혈청형, 그 중에서도 가장 일반적 D, E 및 F를 중화할 수 있는, 광범위하게 교차-반응성 면역 반응을 유발할 수 있다. VS4 영역을 사용하는 경우의 보호 결여의 이유는 다수일 수 있고, 항원 제시 세포(antigen presenting cell)의 덜 효율적 표적화를 포함한다.

본 발명은 청구범위에 의해 정의된다. 특히, 본 발명은, 중쇄 및/또는 경쇄가 클라미디아 트라코마티스의 MOMP VS4 도메인에 접합(conjugating) 또는 융합(fusing)된 항원 제시 세포의 표면 항원에 대해 지시된 항체에 관한 것이다.

발명의 상세한 설명:

정의:

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "대상체(subject)" 또는 "이를 필요로 하는 대상체"라는 용어는 인간 또는 비인간 포유류를 의도한다. 통상, 환자는 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)에 감염되었거나 감염될 가능성이 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "클라미디아 트라코마티스"라는 용어는 당해 기술분야에서 일반적 의미를 가지며, 인간 성병 및 눈 감염증(트라코마)의 원인균인 박테리아를 지칭하고, 이는 트라코마(trachoma), 림프 육아종(lymphogranuloma venereum), 비임균성 요도염(nongonococcal urethritis), 자궁경부염(cervicitis), 난관염(salpingitis), 골반 염증성 질환(pelvic inflammatory disease) 등 다양한 방식으로 나타난다. 클라미디아 트라코마티스는 실명의 가장 일반적 전염성 원인이고, 가장 일반적 성병 박테리아이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "무증상"이라는 용어는 클라미디아 감염에 대해 검출가능한 증상이 없는 대상체를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "증후성"이라는 용어는 클라미디아 감염의 검출가능한 증상을 경험하는 대상체를 지칭한다. 클라미디아 감염의 증상에는 배뇨시 통증(pain), 비정상적 질 분비물, 배 또는 골반의 통증, 성관계시 통증, 성관계후 출혈, 여성의 생리 사이의 출혈, 배뇨시 통증, 음경 선단으로부터의 백색, 혼탁한 또는 묽은 분비물, 요도(소변을 체외로 운반하는 관)의 작열감 또는 가려움증, 또는 남성의 고환 통증 등이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"이라는 용어는 임의 길이의 아미노산 폴리머를 지칭하기 위해 본 명세서에서 호환적으로 사용된다. 또한, 이 용어는, 예를 들면, 디설파이드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 포스포릴화 또는 표지 성분과의 접합 등 변형된 아미노산 폴리머를 포함한다. 유전자 치료와 관련하여 논의되는 폴리펩티드는 각각의 무손상 폴리펩티드, 또는 무손상 단백질의 원하는 생화학적 기능을 유지하는 임의의 단편 또는 유전자 조작된 유도체를 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "폴리뉴클레오티드"라는 용어는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 또는 이들의 유사체를 포함하여 임의 길이의 뉴클레오티드의 폴리머 형태를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 비뉴클레오티드 성분에 의해 중단될 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 폴리머의 어셈블리 전후에 부여될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 폴리뉴클레오티드라는 용어는 이중-가닥 및 단일-가닥 분자를 호환적으로 지칭한다. 달리 명시되거나 요구되지 않는 한, 폴리뉴클레오티드인 본 명세서에 기재된 본 발명의 임의의 실시형태는 이중-가닥 형태, 및 이중-가닥 형태를 구성하는 것으로 공지되어 있거나 예측되는 2개의 상보적 단일-가닥 형태 각각을 모두 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "~로부터 유래하는"이라는 표현은 제1 성분(예: 제1 폴리펩티드) 또는 당해 제1 성분으로부터의 정보를 사용하여 상이한 제2 성분(예: 제1의 것과 상이한 제2 폴리펩티드)를 단리, 도출 또는 제조하는 프로세스를 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "코딩"이라는 용어는, 정의된 뉴클레오티드 서열(예: rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 정의된 아미노산 서열을 갖는 생물학적 프로세스에서 다른 폴리머 및 거대분자의 합성을 위한 주형으로서 사용되는, 예를 들면, 유전자, cDNA 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오티드에서 특정 뉴클레오티드 서열의 고유한 특성, 및 이로부터 발생하는 생물학적 특성을 지칭한다. 따라서, 유전자, cDNA 또는 RNA는 당해 유전자에 상응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 기타 생물학적 시스템에서 단백질을 생성하는 경우 단백질을 코딩한다. 뉴클레오티드 서열이 mRNA 서열과 동일하고 일반적으로 서열 목록에 제공되는 코딩 가닥, 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로 사용되는 비코딩 가닥 둘 다는 당해 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 기타 생성물을 코딩하는(encoding) 것으로 지칭될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열"에는 서로의 축퇴 버전이고 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열이 포함된다. "단백질 또는 RNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열"이라는 문구는 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 일부 버전에서 인트론(들)을 함유할 수 있는 정도까지 인트론을 포함할 수도 있다.

본 명세서에서 사용되는 사용되는 바와 같이, "벡터(vector)", "클로닝 벡터" 및 "발현 벡터"라는 용어는 숙주를 변형시키고 도입된 서열의 발현(예: 전사 및 번역)을 촉진하기 위해 DNA 또는 RNA 서열(예: 외래 유전자)을 숙주 세포에 도입할 수 있는 비히클을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "프로모터/조절 서열"이라는 용어는, 폴리뉴클레오티드 서열의 특이적 전사를 개시하기 위해 필요한, 세포의 합성 기계 또는 도입된 합성 기계에 의해 인식되는 핵산 서열(예를 들면, DNA 서열)을 지칭하고, 이에 의해 프로모터/조절 서열에 작동 가능하게 연결된 유전자 산물의 발현을 가능하게 한다. 일부 경우에, 이 서열은 코어 프로모터 서열일 수 있고, 다른 경우에, 이 서열은 유전자 산물의 발현에 필요한 인핸서 서열 및 기타 조절 요소를 포함할 수도 있다. 예를 들면, 프로모터/조절 서열은 조직 특이적 방식으로 유전자 산물을 발현하는 것일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "작동 가능하게 연결된" 또는 "전사 조절"이라는 용어는 후자의 발현을 초래하는 조절 서열과 이종 핵산 서열 사이의 기능적 연결을 지칭한다. 예를 들면, 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계로 배치되는 경우, 제1 핵산 서열은 제2 핵산 서열과 작동 가능하게 연결된다. 예를 들면, 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우, 프로모터는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 서로 인접할 수 있으며, 예를 들면, 2개 단백질 코딩 영역을 결합하기 위해 필요한 경우, 동일한 판독 프레임에 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "형질전환"이라는 용어는, 숙주 세포가 도입된 유전자 또는 서열을 발현하여 원하는 물질(전형적으로 도입된 유전자 또는 서열에 의해 코딩된 단백질 또는 효소)을 생성하도록, 숙주 세포에 대한 "외래"(즉, 외인성 또는 세포외) 유전자, DNA 또는 RNA 서열의 도입을 의미한다. 도입된 DNA 또는 RNA를 발현하는 숙주 세포는 "형질전환"되었다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "발현 시스템"이라는 용어는, 예를 들면, 벡터에 의해 운반되고 숙주 세포에 도입된 외래 DNA에 의해 코딩된 단백질의 발현을 위한, 적절한 조건하의 숙주 세포 및 호환성 벡터를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 2개 서열 사이의 "동일성(identity) 퍼센트"는 2개 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여, 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 동일성 퍼센트 = 동일한 위치 수/총 위치 수 × 100). 2개 서열 사이의 서열 비교 및 동일성 퍼센트의 결정은 하기에 설명된 바와 같이 수학적 알고리즘을 사용하여 달성할 수 있다. 2개 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 니들맨 및 운쉬(Needleman and Wunsch) 알고리즘[참조: Needleman, Saul B. & Wunsch, Christian D. (1970). "A general method applicable to the search for similarities in the amino acid sequence of two proteins". Journal of Molecular Biology. 48 (3): 443-53.]을 사용하여 결정할 수 있다. 2개 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는, 예를 들면, 엠보스 니들(EMBOSS Needle)[참조: 페어 와이즈 정렬, www.ebi.ac.uk에서 입수가능]과 같은 알고리즘을 사용하여 결정할 수도 있다. 예를 들면, 엠보스 니들(EMBOSS Needle)은 BLOSUM62 매트릭스, 10의 "갭 오픈 페널티", 0.5의 "갭 연장 페널티", 거짓 "엔드 갭 페널티", 10의 "엔드 갭 오픈 페널티", 0.5의 "엔드 갭 연장 페널티"로 사용할 수 있다. 일반적으로, "동일성 퍼센트"는 정합하는 위치 수를 비교된 위치 수로 나누어 100을 곱한 관수이다. 예를 들면, 정렬 후의 2개의 비교 서열 사이에서 10개의 서열 위치 중 6개가 동일한 경우, 동일성은 60%이다. 동일성 %는 통상 분석이 수행되는 쿼리 서열의 전체 길이에 걸쳐 결정된다. 동일한 1차 아미노산 서열 또는 핵산 서열을 갖는 2개 분자는 화학적 및/또는 생물학적 변형에 관계없이 동일하다. 본 발명에 따르면, 제2 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 제1 아미노산 서열은 제1 서열이 제2 아미노산 서열과 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%의 동일성을 갖는다는 것을 의미한다.　

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "MOMP"라는 용어는 클라미디아 트라코마티스의 주요 외막 단백질을 지칭한다. MOMP는 구조적(포린) 특성을 갖는 표면에 노출된 막관통 단백질이다. MOMP는 클라미디아 트라코마티스 막에서 단백질의 약 60%를 구성하는 40kDa 단백질이고, 시험관내 및 생체내 둘 다에서 입증된 효능을 갖는 중화 항체의 표적이다. MOMP는 5개의 상수 세그먼트로 분리된 4개의 가변 표면 노출 도메인(VS1 내지 VS4)으로 구성되어 있고, 클라미디아의 혈청형(약 15) 그룹화의 분자적 기초이다. MOMP의 예시적 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되어 있고, 여기서 VS4 도메인은 서열번호 1에서 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위이다.

서열번호 1>sp|Q46409|MOMPD_CHLTR 주요 외막 포린, 혈청형 D OS=클라미디아 트라코마티스(균주 D/UW-3/Cx) OX=272561 GN=ompA PE=2 SV=1. VS4 도메인은 서열에서 밑줄되어 있다.

MKKLLKSVLVFAALSSASSLQALPVGNPAEPSLMIDGILWEGFGGDPCDPCATWCDAISMRVGYYGDFVFDRVLKTDVNKEFQMGAKPTTDTGNSAAPSTLTARENPAYGRHMQDAEMFTNAACMALNIWDRFDVFCTLGATSGYLKGNSASFNLVGLFGDNENQKTVKAESVPNMSFDQSVVELYTDTTFAWSVGARAALWECGCATLGASFQYAQSKPKVEELNVLCNAAEFTINKPKGYVGKEFPLDLTAGTDAATGTKDASIDYHEWQASLALSYRLNMFTPYIGVKWSRASFDADTIRIAQPKSATAIFDTTTLNPTIAGAGDVKTGAEGQLGDTMQIVSLQLNKMKSRKSCGIAVGTTIVDADKYAVTVETRLIDERAAHVNAQFRF

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "접합체" 또는 호환적으로 "접합된 폴리펩티드"라는 용어는 하나 이상의 폴리펩티드의 공유 결합에 의해 형성된 복합체 또는 키메라 분자를 나타내는 것으로 의도된다. "공유 결합" "또는 "접합"이라는 용어는 폴리펩티드와 비펩티드 모이어티가 서로 직접적으로 공유 결합되거나, 또는 브릿지, 스페이서 또는 연결 모이어티 또는 모이어티들과 같은 중간 모이어티 또는 모이어티들을 통해 서로 간접적으로 공유 결합되어 있는 것을 의미한다. 특정 접합체는 융합 단백질이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "융합 단백질"이라는 용어는 별개의 단백질로부터 유래하는 2개 이상의 폴리펩티드의 부착을 통해 생성된 단백질을 나타낸다. 특히, 융합 단백질은 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있고, 통상 생물학적 연구 또는 치료법에 사용된다. 융합 단백질은 또한 융합 단백질의 폴리펩티드 부분 사이에 링커(linker)의 유무에 관계없이 화학적 공유 결합을 통해 생성될 수도 있다. 융합 단백질에서, 2개 이상의 폴리펩티드는 직접 또는 링커를 통해 융합된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "직접"이라는 용어는 제1 폴리펩티드의 N-말단에서 제1 아미노산이 제2 폴리펩티드의 C-말단(C-terminus)에서 최후 아미노산에 융합되어 있는 것을 의미한다. 이러한 직접 융합은 문헌[참조: (Vigneron et al., Science 2004, PMID 15001714), (Warren et al., Science 2006, PMID 16960008), (Berkers et al., J. Immunol. 2015a, PMID 26401000), (Berkers et al., J. Immunol. 2015b, PMID 26401003), (Delong et al., Science 2016, PMID 26912858) (Liepe et al., Science 2016, PMID 27846572), (Babon et al., Nat. Med. 2016, PMID 27798614)]에 기재된 바와 같이 자연적으로 발생할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "링커"라는 용어는 당해 기술분야에서 이의 일반적 의미를 갖고, 단백질이 적절한 2차 및 3차 구조를 형성하기에 충분한 길이의 아미노산 서열을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 링커는 적어도 1개, 그러나 30개 미만의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커, 예를 들면, 2 내지 30개 아미노산, 바람직하게는 10 내지 30개 아미노산, 더 바람직하게는 15 내지 30개 아미노산, 더 바람직하게는 19 내지 27개 아미노산, 가장 바람직하게는 20 내지 26개 아미노산의 펩티드 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11; 12; 13; 14; 15; 16; 17; 18; 19; 20; 21; 22; 23; 24; 25; 26; 27; 28; 29; 30개의 아미노산 잔기를 갖는다. 통상, 링커는 화합물이 적절한 입체구조를 채용할 수 있도록 하는 것들이다. 가장 적합한 링커 서열은 (1) 유연한 확장 입체구조를 채용하고, (2) 융합 단백질의 기능 도메인과 상호작용할 수 있는 질서화된 2차 구조를 개발하는 경향을 나타내지 않으며, (3) 기능성 단백질 도메인과의 상호작용을 촉진할 수 있는 최소 소수성 또는 하전 특성을 갖는다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "항체"라는 용어는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭한다. 설치류 및 영장류의 천연 항체에서, 2개의 중쇄는 디설파이드 결합에 의해 서로 연결되어 있고, 각 중쇄는 디설파이드 결합에 의해 경쇄에 연결되어 있다. 경쇄에는 람다(1) 및 카파(k)의 2개 유형이 있다. 항체 분자의 기능적 활성을 결정하는 5개 주요 중쇄 클래스(또는 동형)가 있다: IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE. 각 쇄는 개별 서열 도메인을 함유한다. 전형적 IgG 항체에서, 경쇄는 2개의 도메인, 즉 가변 도메인(VL) 및 불변 도메인(CL)을 포함한다. 중쇄는 4개의 도메인, 가변 도메인(VH) 및 3개의 불변 도메인(CH1, CH2, CH3, 통칭하여 CH라고 함)을 포함한다. 경쇄(VL) 및 중쇄(VH)의 가변 영역은 항원에 대한 결합 인식과 특이성을 결정한다. 경쇄(CL) 및 중쇄(CH)의 불변 영역 도메인은 항체 쇄 연결, 분비, 경과형(trans-placental) 이동성, 보체 결합, Fc 수용체(FcR)에 대한 결합과 같은 중요한 생물학적 특성을 부여한다. Fv 단편은 면역글로불린의 Fab 단편의 N-말단 부분이고, 1개의 경쇄와 1개의 중쇄의 가변 부분으로 구성된다. 항체의 특이성은 항체 조합 부위와 항원 결정인자 사이의 구조적 상보성에 존재한다. 항체 조합 부위는 주로 초가변 또는 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기로 구성된다. 때때로, 비초가변 또는 프레임워크 영역(FR)의 잔기가 항체 결합 부위에 관여하거나, 전체 도메인 구조, 따라서 조합 부위에 영향을 미칠 수 있다. 상보성 결정 영역 또는 CDR은 네이티브 면역글로불린 결합 부위의 천연 Fv 영역의 결합 친화성 및 특이성을 함께 정의하는 아미노산 서열을 지칭한다. 면역글로불린의 경쇄와 중쇄는 각각 L-CDR1, L-CDR2, L-CDR3 및 H-CDR1, H-CDR2, H-CDR3으로 지정된 3개의 CDR을 갖는다. 따라서, 항원 결합 부위는 통상 각각의 중쇄 및 경쇄 V 영역으로부터 설정된 CDR을 포함하는 6개의 CDR을 포함한다. 프레임워크 영역(FR)은 CDR 사이에 삽입된 아미노산 서열을 지칭한다. 따라서, 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 통상 다음과 같은 서열의 4개 프레임워크 영역 및 3개 CDR을 포함한다: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. 항체 가변 도메인의 잔기는 통상 카바트(Kabat) 등에 의해 고안된 시스템에 따라 넘버링되어 있다. 이 시스템은 카바트 등, 1987년, 미국 보건복지부, 미국 국립보건원(NIH)의 면역학적 관심 단백질 서열[참조: Kabat et al., 1992, 이하 "카바트 등"]에 기재되어 있다. 카바트 잔기 지정은 서열번호 서열의 아미노산 잔기의 선형 넘버링과 항상 대응하는 것은 아니다. 실제 선형 아미노산 서열은, 기본 가변 도메인 구조의 프레임워크 또는 상보성 결정 영역(CDR)이든지, 구조적 성분의 단축 또는 삽입에 상응하는 엄격한 카바트 넘버링보다 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 잔기의 정확한 카바트 넘버링은 항체 서열 중의 상동성 잔기를 "표준" 카바트 넘버링 서열과 정렬함으로써 제공된 항체에 대해 결정할 수 있다. 중쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 잔기 31-35(H-CDR1), 잔기 50-65(H-CDR2) 및 잔기 95-102(H-CDR3)에 위치한다. 경쇄 가변 도메인의 CDR은 카바트 넘버링 시스템에 따라 잔기 24-34(L-CDR1), 잔기 50-56(L-CDR2) 및 잔기 89-97(L-CDR3)에 위치한다. 이후 설명하는 작용제 항체의 경우, CDR은 www.bioinf.org.uk의 CDR 검색 알고리즘을 사용하여 결정되었다(항체 페이지 내의 "서열을 조사하여 CDR을 식별하는 방법"의 섹션 참조).

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "면역글로불린 도메인"이라는 용어는 항체 쇄(예: 중쇄 항체 또는 경쇄 항체의 쇄)의 구형 영역 또는 본질적으로 이러한 구형 영역으로 이루어진 폴리펩티드를 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "Fc 영역"이라는 용어는 네이티브 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하여 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226 또는 P230으로부터 IgG 항체의 카복실 말단까지의 아미노산 잔기를 포함하는 것으로 정의된다. Fc 영역의 잔기의 넘버링은 카바트의 EU 지수의 것이다. Fc 영역의 C-말단 라이신(잔기 K447)은, 예를 들면, 항체의 생산 또는 정제 중에 제거될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 모집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 모집단 및 K447 잔기의 유무에 관계없이 항체의 혼합물을 갖는 항체 모집단을 포함할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "키메라 항체(chimeric antibody)"라는 용어는 비인간 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인, 및 인간 항체의 CH 도메인 및 CL 도메인을 포함하는 항체를 지칭한다. 일 실시형태에서, "키메라 항체"는 (a) 항원 결합 부위(가변 영역)가 상이한 또는 변경된 클래스, 이펙터 기능 및/또는 종의 불변 영역 또는 키메라 항체에 새로운 특성을 부여하는 완전히 상이한 분자에 연결되도록 불변 영역(즉, 중쇄 및/또는 경쇄) 또는 이의 일부가 변경, 치환 또는 교환되는 항체 분자, 예를 들면, 효소, 독소, 작용제 분자(예: CD40 리간드, 호르몬, 성장 인자, 약물 등); 또는 (b) 가변 영역 또는 이의 일부가 상이한 또는 변경된 항원 특이성을 갖는 가변 영역으로 변경, 치환 또는 교환되는 항체 분자이다. 키메라 항체는 또한 영장류화 항체, 및 특히 인간화(humanized) 항체를 포함한다. 추가로, 키메라 항체는 수용체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 개선하기 위해 이루어진다. 상세한 내용은 문헌[참조: Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992). (see U.S. Pat. No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]을 참조한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "인간화 항체"라는 용어는 뮤린 항체의 6개 CDR을 갖지만, 인간화된 프레임워크 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 보다 구체적으로, 본 명세서에서 사용되는 "인간화 항체"라는 용어는 마우스와 같은 또 다른 포유류 종의 생식세포로부터 유래한 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프트된 항체를 포함할 수 있다.　

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "인간 모노클로날 항체"라는 용어는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 본 발명의 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기(예를 들면, 시험관내에서 랜덤 또는 부위-특이적 돌연변이유발 또는 생체내에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 일 실시형태에서, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "인간 모노클로날 항체"라는 용어는 마우스와 같은 또 다른 포유류 종의 생식세포로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프트된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "면역 반응"이라는 용어는 항원-특이적 항체 및/또는 세포 세포독성 반응의 생성을 포함하는 숙주 체내의 항원에 대한 면역계의 반응을 지칭한다. 초기 항원 노출에 대한 면역 반응(1차 면역 반응)은 통상 수일로부터 2주의 지연 기간 후에 검출할 수 있으며; 동일한 항원에 의한 후속 자극에 대한 면역 반응(2차 면역 반응)은 1차 면역 반응의 경우보다 더 신속하다. 형질전환 산물에 대한 면역 반응은 도입유전자에 의해 코딩된 면역원성 산물에 대해 유발될 수 있는 체액성(예: 항체 반응) 및 세포성(예: 세포용해성 T 세포 반응) 면역 반응을 모두 포함할 수 있다. 면역 반응의 수준은 당해 기술분야에 공지된 방법(예: 항체 역가의 측정)에 의해 측정할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "APC" 또는 "항원 제시 세포"라는 용어는 T-세포를 활성화할 수 있는 세포를 의미하며, 특정 마크로파지, B 세포 및 수지상 세포를 포함하지만 이들로 한정되지 않는다.　

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "수지상 세포" 또는 "DC"라는 용어는 림프 조직 또는 비림프 조직에서 발견되는 형태학적으로 유사한 세포 유형의 다양한 모집단의 임의의 구성원을 지칭한다. 이러한 세포는 이들의 독특한 형태, 높은 수준의 표면 MHC-클래스 II 발현을 특징으로 한다[참조: Steinman, et al., Ann. Rev. Immunol. 9:271 (1991); 이러한 세포에 대한 설명을 위해 본원에 참조에 의해 통합됨].

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "CD40"이라는 용어는 당해 기술분야에서 일반적 의미를 갖고, 인간 CD40 폴리펩티드 수용체를 지칭한다. 일부 실시형태에서, CD40은 UniProtKB-P25942(인간 TNR5라고도 함)에 의해 보고된 바와 같이 인간 표준 서열의 동형이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "CD40L"이라는 용어는 당해 기술분야에서 일반적 의미를 가지며, 예를 들면, UniProtKB-P25942에 의해 보고된 바와 같이 인간 CD40L 폴리펩티드(서열번호 2의 CD40-결합 도메인을 포함)를 지칭한다. CD40L은 가용성 폴리펩티드로 발현될 수 있으며, CD40 수용체의 천연 리간드이다.

서열번호 2>CD40L 결합 도메인

MQKGDQNPQIAAHVISEASSKTTSVLQWAEKGYYTMSNNLVTLENGKQLTVKRQGLYYIYAQVTFCSNREASSQAPFIASLCLKSPGRFERILLRAANTHSSAKPCGQQSIHLGGVFELQPGASVFVNVTDPSQVSHGTGFTSFGLLKL

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "CD40 작용제 항체"라는 용어는 B 세포 증식 검정과 같은 세포-기반 검정에서 CD40L의 부재하에 CD40 매개 신호전달 활성을 증가시키는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다. 특히, CD40 작용제 항체는 (i) 유세포 분석 또는 CFSE-표지 세포의 복제 희석의 분석에 의해 시험관내에서 측정된 바와 같이 B 세포의 증식을 유도하고/하거나; (ii) 수지상 세포 활성화 검정에 의해 시험관내에서 측정된 바와 같이 IL-6, IL-12 또는 IL-15와 같은 사이토카인의 분비를 유도한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "랑게린(Langerin)"이라는 용어는 당해 기술분야에서 일반적 의미를 갖고, 인간 C-타입 렉틴 도메인 패밀리 4 멤버 K 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 랑게린은 UniProtKB-Q9UJ71(인간 CD207이라고도 함)에 의해 보고된 바와 같이 인간 표준 서열의 이소형이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료" 또는 "치료하다"라는 용어는, 질환에 걸릴 위험이 있거나 질환에 걸린 것으로 의심되는 환자, 질환 또는 의학적 병태를 앓고 있거나 앓고 있다고 진단받은 환자의 치료를 포함하여 예방적 또는 예방적 치료와 치유적 또는 질환 수정 치료를 모두 지칭하며, 임상적 재발의 억제를 포함한다. 치료는 의학적 장애가 있거나 최종적으로 장애를 획득할 가능성이 있는 환자에게 장애 또는 재발성 장애의 하나 이상의 증상을 예방, 치유, 개시 지연, 중증도 감소 또는 개선하기 위해 또는 이러한 치료의 부재하에 예상되는 것보다 환자의 생존을 연장하기 위해 투여될 수 있다. "치료 섭생"이란 질병의 치료 패턴(예: 치료 중에 사용되는 투약 패턴)을 의미한다. 치료 섭생에는 유도 섭생 및 유지 섭생이 포함될 수 있다. "유도 섭생" 또는 "유도 기간"이라는 문구는 질환의 초기 치료에 사용되는 치료 섭생(또는 치료 섭생의 일부)을 지칭한다. 유도 섭생의 일반적 목표는 치료 섭생의 초기 기간 중에 환자에게 높은 수준의 약물을 제공하는 것이다. 유도 섭생은 "부하 섭생"을 (일부 또는 전체적으로) 사용할 수 있고, 이는 의사가 유지 섭생 중에 사용하는 것보다 더 많은 용량의 약물을 투여하거나, 의사가 유지 섭생 중에 약물을 투여하는 것보다 더 빈번하게 약물을 투여하거나, 또는 둘 다를 포함할 수 있다. "유지 섭생" 또는 "유지 기간"이라는 문구는 질환 치료 중 환자의 유지, 예를 들면, 환자를 장기간(수개월 또는 수년) 동안 관해 상태로 유지하기 위해 사용되는 치료 섭생(또는 치료 섭생의 일부)을 지칭한다. 유지 섭생은 지속적 치료(예: 매주, 매월, 매년 등 정기적 간격으로 약물을 투여) 또는 간헐적 치료(예: 중단된 치료, 간헐적 치료, 재발시 치료 또는 소정의 특정 기준[예: 통증, 질환 증상 등] 달성시의 치료)를 사용할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약제학적 조성물"이라는 용어는 담체 및/또는 부형제와 같은 다른 약제와 함께 본 명세서에 기재된 조성물 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 지칭한다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 전형적으로 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다.　

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 담체"라는 용어는, 원하는 특정 제형에 적합한 임의의 및 모든 용매, 희석제 또는 기타 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보조제, 표면 활성제, 등장제, 농축 또는 유화제, 방부제, 고체 결합제, 윤활제 등을 포함한다. 문헌[참조: Remington's Pharmaceutical-Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980)]은 약제학적 조성물의 제형에 사용되는 다양한 담체 및 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시하고 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "백신접종(vaccinating)" 또는 "백신화"라는 용어는 특정 항원에 대한 대상체의 면역 반응을 유발하는 프로세스를 의미하지만, 이들로 한정되지 않는다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "백신 조성물"이라는 용어는 면역계 반응을 유발하기 위해 인간 또는 동물에게 투여될 수 있는 조성물을 의미하는 것으로 의도되며; 이러한 면역계 반응은 특정 세포, 특히 APC, T 림프구 및 B 림프구의 활성화를 초래할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 사용되는 바와 같이, "항원"이라는 용어는, MHC 분자에 의해 처리 및 제시되는 경우, 항체 또는 T 세포 수용체(TCR)에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 분자를 지칭한다. 항원은 추가로 면역계에 의해 인식될 수 있고/있거나, 체액성 면역 반응 및/또는 세포성 면역 반응을 유도하여 B-림프구 및/또는 T-림프구의 활성화를 유도할 수 있다. 항원은 하나 이상의 에피토프 또는 항원 부위(B- 및 T-에피토프)를 가질 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "보조제"라는 용어는 대상체 또는 동물에게 투여될 때에 항원에 대한 면역 반응을 유도 및/또는 증강시킬 수 있는 화합물을 지칭한다. 또한, 특정 항원에 대한 특정 면역 반응의 품질을 일반적으로 가속화, 연장 또는 증강시키기 위해 작용하는 물질을 의미하는 것으로 의도된다. 본 발명의 맥락에서, "보조제"라는 용어는, 선천성 면역 반응의 일시적 반응에 영향을 미침으로써 선천성 면역 반응을 증강시키고, 항원-제시 세포(APC), 특히 수지상 세포(DC)의 활성화 및 성숙에 의한 적응 면역 반응의 보다 장기간-생존 효과를 증강시키는 화합물을 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "치료학적 유효량"이라는 표현은 의학적 치료에 적용가능한 합리적 유익성/위험성 비율로 면역 반응을 유도하기에 충분한 양의 본 발명의 활성 성분을 의미한다.

본 발명의 항체:

본 발명의 제1 목적은 항원 제시 세포의 표면 항원에 대해 지시된 항체에 관한 것이고, 여기서 중쇄 및/또는 경쇄는 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 폴리펩티드(즉, VS4 폴리펩티드)에 접합 또는 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 항체의 중쇄는 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 폴리펩티드(즉, VS4 폴리펩티드)에 접합 또는 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 항체의 경쇄는 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 폴리펩티드(즉, VS4 폴리펩티드)에 접합 또는 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 모두, 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 폴리펩티드(즉, VS4 폴리펩티드)에 접합 또는 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 항체는 IgG 항체이고, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 더욱 바람직하게는 IgG4 항체이다.

일부 실시형태에서, 항체는 키메라 항체, 특히 키메라 마우스/인간 항체이다.

일부 실시형태에서, 항체는 인간화 항체이다.

키메라 또는 인간화 항체는 상기 기재된 바와 같이 제조된 뮤린 모노클로날 항체의 서열에 기초하여 제조할 수 있다. 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 코딩하는 DNA는 목적의 뮤린 하이브리도마로부터 수득될 수 있고, 표준 분자생물학 기술을 사용하여 비-뮤린(예: 인간) 면역글로불린 서열을 함유하도록 조작될 수 있다. 예를 들면, 키메라 항체를 생성하기 위해, 당해 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 뮤린 가변 영역을 인간 불변 영역에 연결할 수 있다(예: 카빌리(Cabilly) 등의 미국 특허 제4,816,567호 참조). 인간화 항체를 생성하기 위해, 당해 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 뮤린 CDR 영역을 인간 프레임워크에 삽입할 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 제5,225,539호(Winter), 및 미국 특허 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,762호 및 제6,180,370호(Queen et al.)를 참조한다.

일부 실시형태에서, 항체는 인간 항체이다. 일부 실시형태에서, 인간 항체는 마우스 시스템이 아닌 인간 면역계의 일부를 갖는 유전자도입 마우스 또는 염색체도입 마우스를 사용하여 동정될 수 있다. 이러한 유전자도입 마우스 및 염색체도입 마우스는 본 명세서에서 각각 HuMAb 마우스 및 KM 마우스로 지칭되는 마우스를 포함하고, 본 명세서에서 총칭하여 "인간 Ig 마우스"로 지칭된다. HuMAb 마우스^®(Medarex, Inc.)는, 내인성 μ 및 κ 쇄 유전자좌를 불활성화시키는 표적 돌연변이와 함께, 재배열되지 않은 인간 중쇄(μ 및 γ) 및 κ 경쇄 면역글로불린 서열을 코딩하는 인간 면역글로불린 유전자 미니로시(miniloci)를 함유한다[참조: Lonberg, et al., 1994 Nature 368(6474): 856-859]. 또 다른 실시형태에서, 인간 항체는 인간 중쇄 도입유전자 및 인간 경쇄 도입염색체를 갖는 마우스와 같은 도입유전자 및 도입염색체에 인간 면역글로불린 서열을 갖는 마우스를 사용하여 생성될 수 있다. 본 명세서에서 "KM 마우스"로 지칭되는 이러한 마우스는 이시다 등(Ishida et al.)의 PCT 공보 제WO 02/43478호에 상세히 기재되어 있다.

일부 실시형태에서, 항체는 프로페셔널 APC의 세포 표면 마커에 특이적이다. 항체는 B 세포 또는 마크로파지와 같은 또 다른 프로페셔널 APC의 세포 표면 마커에 특이적일 수 있다.

일부 실시형태에서, 항체는 DC 면역수용체(DCIR), MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CDl lb, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린, DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, 페이(Fey) 수용체, LOX-1 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택된다.　

일부 실시형태에서, 항체는 CD40에 특이적이다.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 12E12 항체로부터 유래하고, 하기를 포함한다:

- 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GFTFSDYYMY(서열번호 3)을 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 YINSGGSTYYPDTVKG(서열번호 4)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 RGLPFHAMDY(서열번호 5)를 갖는 중쇄,　및

- 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 SASQGISNYLN(서열번호 6)을 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 YTSILHS(서열번호 7)을 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 QQFNKLPPT(서열번호 8)를 갖는 경쇄.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 11B6 항체로부터 유래하고, 하기를 포함한다:

- 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GYSFTGYYMH(서열번호 9)를 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 RINPYNGATSYNQNFKD(서열번호 10)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 EDYVY(서열번호 11)를 갖는 중쇄, 및

- 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNGNTYLH(서열번호 12)를 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 KVSNRFS(서열번호 13)를 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 SQSTHVPWT(서열번호 14)를 갖는 경쇄.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 12B4 항체로부터 유래하고, 하기를 포함한다:

- 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GYTFTDYVLH(서열번호 15)를 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 YINPYNDGTKYNEKFKG(서열번호 16)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 GYPAYSGYAMDY(서열번호 17)를 갖는 중쇄, 및

- 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 RASQDISNYLN(서열번호 18)을 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 YTSRLHS(서열번호 19)를 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 HHGNTLPWT(서열번호 20)를 갖는 경쇄.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 표 A에 기재된 바와 같이 선택된 mAb1, mAb2, mAb3, mAb4, mAb5 및 mAb6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

[표 A]

서열번호 21 (인간화 11B6의 가변 중쇄 영역(VH) (v2)의 아미노산 서열)

EVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYSFTGYYMHWVKQAHGQGLEWIGRINPYNGATSYNQNFKDRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYVYWGQGTTVTVSSAS

서열번호 22 (인간화 11B6 VL의 가변 경쇄(VL) Vk (v2)의 아미노산 서열)

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYQQRPGQSPRLLYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCSQSTHVPWTFGGGTK

서열번호 23 (인간화 11B6의 가변 중쇄 영역 VH (v3)의 아미노산 서열)

EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYYMHWVRQAPGQGLEWIGRINPYNGATSYNQNFKDRVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYVYWGQGTTVTVSSAS

서열번호 24(mAb3(12B4)의 VH 아미노산 서열)

EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTDYVLHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGYPAYSGYAMDYWGQGTSVTVSSAS

서열번호 25 (mAb3(12B4)의 VL 아미노산 서열)

DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRAQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCHHGNTLPWTFGGGTK

서열번호 26 (mAb4(24A3 HC)의 VH 아미노산 서열)

DVQLQESGPDLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYSWIRQFPGNKLEWMGYYYSGSTNYNPSLKSRISITRTSKNQFFLQLNSVTTEDSATYFARFYYGYSFFDYWGQGTTLTVSSAS

서열번호 27 (mAb4(24A3 KC)의 VL 아미노산 서열)

QIVLTQSPAFMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYYCQQWSSNPLTFGAGTK

서열번호 28 (mAb5의 VH 아미노산 서열)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPDSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELNRLRSDDTAVYYCARDQPLGYCTNGVCSYFDYWGQGTLVTVSSAS

서열번호 29 (mAb5의 VL 아미노산 서열)

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIYSWLAWYQQKPGKAPNLLIYTASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANIFPLTFGGGTK

서열번호 30 (mAb6(12E12 H3 인간화 HC)의 VH 아미노산 서열 )

EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAYINSGGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGLPFHAMDYWGQGTLVTVSSAS

서열번호 31(mAb6(인간화 K2 12E12)의 VL 아미노산 서열)

DIQMTQSPSSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAVKLLYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQFNKLPPTFGGGTK

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 CD40 작용제 항체이다. CD40 작용제 항체는 제WO2010/009346호, 제WO2010/104747호 및 제WO2010/104749호에 기재되어 있다. 개발 중의 기타 항-CD40 작용제 항체에는 화이자(Pfizer)가 개발한 완전 인간 IgG2 CD40 작용제 항체인 CP-870,893이 포함된다. 이는 3.48×10-10M의 KD로 CD40에 결합하지만, CD40L(예: 미국 특허 제7,338,660호 참조) 및 SGN-40의 결합을 차단하지 않고, SGN-40은 면역원으로 인간 방광암 세포주를 사용하여 생성된 마우스 항체 클론 S2C6로부터 시애틀 제네틱스에 의해 개발된 인간화 IgG1 항체이다. 이는 1.0×10^-9 M의 KD로 CD40에 결합하고, CD40 및 CD40L 사이의 상호작용을 증강시키는 것을 통해 기능하고, 따라서 부분적 작용제 효과를 나타낸다[참조: Francisco J A, et al., Cancer Res, 60: 3225-31, 2000]. 더욱 특히, CD40 작용제 항체는 표 A에 기재된 바와 같이 선택된 mAb1, mAb2, mAb3, mAb4, mAb5 및 mAb6으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, CD40 작용제 항체의 중쇄 또는 경쇄(즉, VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합되지 않은 쇄)는 CD40L의 CD40 결합 도메인에 접합 또는 융합된다.　

일부 실시형태에서, CD40L의 CD40 결합 도메인은, 임의로 링커, 바람직하게는 본 명세서에서 후술하는 FlexV1 링커를 통해, 상기 CD40 작용제 항체의 경쇄 또는 중쇄의 C-말단에 융합된다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 항체는 항체의 중쇄가 VS4 폴리펩티드에 융합 또는 접합되고, 경쇄가 CD40L의 CD40 결합 도메인에 융합 또는 접합되는 CD40 작용제 항체로 이루어진다(서열번호 2).

일부 실시형태에서, 항체는 랑게린(Langerin)에 특이적이다. 일부 실시형태에서, 항체는 ATCC 수탁 번호 PTA-9852를 갖는 항체 15B10으로부터 유래한다. 일부 실시형태에서, 항체는 ATCC 수탁 번호 PTA-9853을 갖는 항체 2G3으로부터 유래한다. 일부 실시형태에서, 항체는 제WO2011032161호에 기재된 바와 같이 항체 91E7, 37C1 또는 4C7로부터 유래한다.

일부 실시형태에서, 항-랑게린 항체는 15B10 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 15B10 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시형태에서, 항-랑게린 항체는 2G3 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 2G3 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시형태에서, 항-랑게린 항체는 4C7 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 4C7 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시형태에서, 항체는 표 B 에 기재된 바와 같이 선택된 mAb7, mAb8, mAb9, mAb10, mAb11 및 mAb12로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

[표 B]

서열번호 32 (15B10의 가변 중쇄 영역(VH)의 아미노산 서열)

SVKMSCKASGYTFTDYVISWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYNENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA

서열번호 33 (15B10의 가변 경쇄(VL)의 아미노산 서열)

ASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTNFTLKISRVEAEDLGLYFCS

서열번호 34 (2G3의 가변 중쇄 영역(VH)의 아미노산 서열)

SSVKMSCKASGYTFTDIVSWVKQRTGQGLEWIGDIYPGSGYSFYENFKGKATLTADKSSTTAYMQLSSLTSEDSAVYFCA

서열번호 35 (2G3의 가변 경쇄(VL)의 아미노산 서열)

VTLTCRSSTGAVTTSNANWVQEKPDHLFTGLIGGTNRVSGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDAIYFCA

서열번호 36 (4C7의 중쇄의 아미노산 서열)

QVQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFIDHDMHWVQQTPVYGLEWIGAIDPETGDTGYNQKFKGKAILTADKSSRTAYMELRSLTSEDSAVYYCTIPFYYSNYSPFAYWGQGALVTVSAAKTTAPSVYPLAPVCGGTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPALLQSGLYTLSSSVTVTSNTWPSQTITCNVAHPASSTKVDKKIEPRVPITQNPCPPLKECPPCADLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPMVTCVVVDVSEDDPDAQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNRALPSPIEKTISKPRGPVRAPQVYVLPPPAEEMTKKEFSLTCMITGFLPAEIAVDWTSNGRTEQNYKNTATVLDSDGSYFMYSKLRVQKSTWERGSLFACSVVHEGLHNHLTTKTISRSLGKAS

서열번호 37 (4C7의 경쇄의 아미노산 서열)

QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYMHWYQRKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

본 발명의 항체는, 단독으로 또는 조합하여, 예를 들면, 제한 없이, 화학적, 생물학적, 유전적 또는 효소적 기술과 같은 당해 기술분야에 자체로 공지된 임의의 기술에 의해 생산할 수 있다. 원하는 서열의 아미노산 서열을 알면, 당업자는 폴리펩티드의 생산을 위한 표준 기술에 의해 상기 폴리펩티드를 용이하게 생산할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항체는 당해 기술분야에 공지된 바와 같이 재조합 DNA 기술에 의해 합성될 수 있다. 예를 들면, 이러한 단편은, 원하는 (폴리)펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 발현 벡터에 도입하고, 이러한 벡터를 원하는 폴리펩티드를 발현할 적절한 진핵생물 또는 원핵생물 숙주에 도입한 후, DNA 발현 산물로서 수득할 수 있고, 이로부터 이후에 공지된 기술을 사용하여 단리할 수 있다.

항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 이의 C-말단을 통해 VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합된다. 일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 VS4 폴리펩티드의 N-말단에 융합된다.

일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 화학적 커플링을 사용하여 VS4 폴리펩티드에 접합된다. 이의 접합 모이어티에 대한 항체의 부착 또는 접합을 위한 몇몇 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다.　모이어티를 항체에 접합하기 위해 사용되는 링커 유형의 예로는 하이드라존, 티오에테르, 에스테르, 디설파이드 및 발린-시트룰린 링커와 같은 펩티드-함유 링커가 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 예를 들면, 리소좀 구획 내에서 낮은 pH에 의해 절단되기 쉽거나, 카텝신(예: 카텝신 B, C, D)과 같이 종양 조직에서 우선적으로 발현되는 프로테아제와 같은 프로테아제에 의해 절단되기 쉬운 링커를 선택할 수 있다. 특히, 폴리펩티드를 접합하는 기술은 당해 기술분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (Reisfeld et al. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery (Robinson et al. eds., Marcel Deiker, Inc., 2nd ed. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (Pinchera et al. eds., 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy (Baldwin et al. eds., Academic Press, 1985); and Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; 또한, 예를 들면, PCT 공보 WO 89/12624]. 통상, 펩티드는 항체의 라이신 또는 시스테인 잔기에 각각 N-하이드록시숙신이미드 에스테르 또는 말레아미드 기능을 통해 공유 부착된다. 조작된 시스테인을 사용한 접합 방법 또는 비천연 아미노산의 도입은 접합체의 균일성을 개선시키는 것으로 보고되었다[참조: Axup, J.Y., Bajjuri, K.M., Ritland, M., Hutchins, B.M., Kim, C.H., Kazane, S.A., Halder, R., Forsyth, J.S., Santidrian, A.F., Stafin, K., et al. (2012). Synthesis of site-specific antibody-drug conjugates using unnatural amino acids. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109, 16101-16106.; Junutula, J.R., Flagella, K.M., Graham, R.A., Parsons, K.L., Ha, E., Raab, H., Bhakta, S., Nguyen, T., Dugger, D.L., Li, G., et al. (2010). Engineered thio-trastuzumab-DM1 conjugate with an improved therapeutic index to target human epidermal growth factor receptor 2-positive breast cancer. Clin. Cancer Res.16, 4769-4778]. 주누툴라 등(Junutula et al.)[참조: Nat Biotechnol. 2008; 26:925-32]은, 종래 접합 방법과 비교하여 개선된 치료 지수를 나타낸다고 주장하는, "THIOMAB"(TDC)이라고 시스테인-기반 부위-특이적 접합체를 개발했다. 항체에 도입된 비천연 아미노산에 대한 접합도 또한 ADC를 위해 조사되고 있지만; 이 접근법의 일반성은 아직 확립되지 않았다[참조: Axup et al., 2012]. 특히, 당업자는 또한 아실 공여체 글루타민-함유 태그(예: Gin-함유 펩티드 태그 또는 Q-태그) 또는 폴리펩티드 조작(예: 폴리펩티드의 아미노산 결실, 삽입, 치환 또는 돌연변이를 통해)에 의해 반응성을 갖는 내인성 글루타민으로 조작된 Fc-함유 폴리펩티드도 상정할 수 있다. 이어서, 트랜스글루타미나제는 아민 공여제(예: 반응성 아민을 포함하거나 이에 부착된 소분자)와 공유 결합하여, 아실 공여체 글루타민-함유 태그 또는 접근성/노출된/반응성 내인성 글루타민을 통해 Fc-함유 폴리펩티드에 부위-특이적으로 결합되는 아민 공여제와 조작된 Fc-함유 폴리펩티드 접합체의 안정한 및 균일한 모집단을 형성할 수 있다(WO 2012059882).

일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 US20160031988A1 및 US20120039916A1에 기재된 바와 같이 코헤신 융합 단백질에 비공유 결합을 가능하게 하기 위해 독케린 도메인(dockerin domain) 또는 복수의 도메인에 의해 VS4 폴리펩티드에 접합된다. 일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 또는 경쇄는 독케린 도메인을 통해 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 코헤신 융합 단백질에 접합된다.

서열번호 38 optSLAML- Avitag- ThermoCohesin- FlexV1- Momp_ChTrD_VS4- EPEA 태그

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGSRGLNDIFEAQKIEWHETSDDLDAVRIKVDTVNAKPGDTVRIPVRFSGIPSKGIANCDFVYSYDPNVLEIIEIEPGDIIVDPNPDKSFDTAVYPDRKIIVFLFAEDSGTGAYAITKDGVFATIVAKVKEGAPNGLSVIKFVEVGGFANNDLVEQKTQFFDGGVNVGDTTEPATPTTPVTTPTTTDDLDAIDQTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNPASNMFTPYIGVKWSRASFDADTIRIAQPKSATAIFDTTTLNPTIAGAGDVKTGAEGQLGDTMQIVSLQLNKMKSRKSCGEPEA

일부 실시형태에서, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 VS4 폴리펩티드에 융합되어 융합 단백질을 형성한다.　

일부 실시형태에서, VS4 폴리펩티드는 직접 또는 링커를 통해 중쇄 및/또는 경쇄에 융합된다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "직접"이라는 용어는 VS4 폴리펩티드의 N-말단에서의 제1 아미노산이 중쇄 또는 경쇄의 C-말단의 최후 아미노산에 융합되는 것을 의미한다. 이러한 직접 융합은 문헌[참조: (Vigneron et al., Science 2004, PMID 15001714), (Warren et al., Science 2006, PMID 16960008), (Berkers et al., J. Immunol. 2015a, PMID 26401000), (Berkers et al., J. Immunol. 2015b, PMID 26401003), (Delong et al., Science 2016, PMID 26912858) (Liepe et al., Science 2016, PMID 27846572), (Babon et al., Nat. Med. 2016, PMID 27798614)]에 기재된 바와 같이 자연적으로 발생할 수 있다.

일부 실시형태에서, 링커는 하기 기재된 바와 같이 FlexV1, f1, f2, f3 또는 f4로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

QTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNP (flexV1, 서열번호 39)

ASSSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSPAS (f1, 서열번호 40)

PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG (f2, 서열번호 41)

TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP (f3, 서열번호 42)

TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA (f4, 서열번호 43)

일부 실시형태에서, 본 발명의 항체는 항-CD40 항체(CD40.MOMP-VS4"로 명명됨)로 이루어지고, 여기서 항-CD40 항체의 중쇄는 서열번호 1에서 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 VS4 폴리펩티드에 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 항체는 항-CD40 항체(CD40.MOMP-VS4"로 명명됨)로 이루어지고, 여기서 항-CD40 항체의 중쇄는 서열번호 1에서 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열을 갖는 VS4 폴리펩티드에 융합되어 있다.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체의 중쇄는 링커를 통해, 특히 FlexV1을 통해 VS4 폴리펩티드에 융합된다.

일부 실시형태에서, 항-CD40 항체는 12E12 항체로부터 유래한다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 항체는 서열번호 44에 제시된 중쇄, 및 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함한다.　

서열번호 44> [hAnti-CD40VH3-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-hMOMP/VS4-EPEA]

EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMYWVRQAPGKGLEWVAYINSGGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRGLPFHAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKASQTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNPASNMFTPYIGVKWSRASFDADTIRIAQPKSATAIFDTTTLNPTIAGAGDVKTGAEGQLGDTMQIVSLQLNKMKSRKSCGEPEA

서열번호 45> [hAnti-CD40VK2-LV-hIgG4H-C]

DIQMTQSPSSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKAVKLLIYYTSILHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQFNKLPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNFYPRAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSPVTKSFNRGEC

본 발명의 핵산, 벡터 및 숙주 세포:

본 발명의 추가의 목적은, VS4 폴리펩티드에 융합된 항원 제시 세포의 표면 항원에 대해 지시된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 핵산에 관한 것이다.

통상, 상기 핵산은 플라스미드, 코스미드, 에피솜, 인공 염색체, 파지 또는 바이러스 벡터와 같은 임의의 적합한 벡터에 포함될 수 있는 DNA 또는 RNA 분자이다.　

따라서, 본 발명의 추가의 목적은 본 발명의 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다.　

이러한 벡터는 대상체에 투여시 상기 항체의 발현을 유발하거나 유도하기 위해 프로모터, 인핸서, 터미네이터 등과 같은 조절 요소를 포함할 수 있다. 동물 세포용 발현 벡터에 사용되는 프로모터 및 인핸서의 예로는 SV40의 초기 프로모터 및 인핸서, 몰로니 마우스 백혈병 바이러스의 LTR 프로모터 및 인핸서, 면역글로불린 H 쇄의 프로모터 및 인핸서 등이 포함된다. 인간 항체 C 영역을 코딩하는 유전자가 삽입되어 발현될 수 있는 한, 동물 세포용의 임의의 발현 벡터를 사용할 수 있다. 적합한 벡터의 예로는 pAGE107, pAGE103, pHSG274, pKCR, pSG1 베타 d2-4 등이 포함된다. 플라스미드의 다른 예로는 복제 기원을 포함하는 복제 플라스미드 또는 통합 플라스미드(예: pUC, pcDNA, pBR 등)이 포함된다. 바이러스 벡터의 다른 예로는 아데노바이러스, 레트로바이러스, 헤르페스 바이러스 및 AAV 벡터가 포함된다. 이러한 재조합 바이러스는 패키징 세포를 형질감염시키거나 헬퍼 플라스미드 또는 바이러스를 일시적으로 형질감염시키는 등 당해 기술분야에 공지된 기술에 의해 생산될 수 있다. 바이러스 패키징 세포의 전형적 예로는 PA317 세포, PsiCRIP 세포, GPenv+ 세포, 293 세포 등이 포함된다. 이러한 복제-결함 재조합 바이러스를 생산하기 위한 상세한 프로토콜은, 예를 들면, WO 95/14785, WO 96/22378, US 5,882,877, US 6,013,516, US 4,861,719, US 5,278,056 및 WO 94/19478에서 발견할 수 있다.

본 발명의 추가의 목적은 본 발명에 따른 핵산 및/또는 벡터에 의해 형질감염, 감염 또는 형질전환된 숙주 세포에 관한 것이다.　

본 발명의 핵산은 적절한 발현 시스템에서 본 발명의 항체를 생산하기 위해 사용될 수 있다. 일반적 발현 시스템에는 이. 콜라이(E. coli) 숙주 세포 및 플라스미드 벡터, 곤충 숙주 세포 및 바쿨로바이러스(Baculovirus) 벡터, 및 포유류 숙주 세포 및 벡터가 포함된다. 숙주 세포의 다른 예로는, 제한 없이, 원핵 세포(예: 박테리아) 및 진핵 세포(예: 효모 세포, 포유류 세포, 곤충 세포, 식물 세포 등)가 포함된다. 구체적 예로는 이. 콜라이(E. coli), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces) 효모가 포함된다. 포유류 숙주 세포에는 DHFR 선택가능한 마커와 함께 사용되는 dhfr-CHO 세포(Urlaub and Chasin, 1980에 기재)를 포함한 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포), CHOK1 dhfr+ 세포주, NSO 골수종(myeloma) 세포, COS 세포 및 SP2 세포, 예를 들면, GS Xceed^TM 유전자 발현 시스템(Lonza)과 함께 GS CHO 세포주, 또는 HEK 세포가 포함된다.　

본 발명은 또한 본 발명에 따른 폴리펩티드를 발현하는 재조합 숙주 세포를 제조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 (i) 상기 기재한 바와 같은 재조합 핵산 또는 벡터를 적격 숙주 세포에 시험관내 또는 생체외에서 도입하는 단계, (ii) 수득된 재조합 숙주 세포를 시험관내 또는 생체외에서 배양하는 단계 및 (iii) 임의로, 상기 항체를 발현 및/또는 분비하는 세포를 선택하는 단계를 포함한다. 이러한 재조합 숙주 세포는 본 발명의 항체의 생산에 사용될 수 있다.　

따라서, 본 명세서에 개시된 숙주 세포는 본 발명의 항체를 생산하기에 특히 적합하다. 실제로, 재조합 발현이 포유류 숙주 세포에 도입될 때, 폴리펩티드는 숙주 세포에서 항체의 발현에 충분한 기간 동안 숙주 세포를 배양하고, 임의로 숙주 세포가 성장하는 배양 배지로 항체를 분비함으로써 생산된다. 항체는, 예를 들면, 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 이들의 분비 후에 배양 배지로부터 회수 및 정제할 수 있다.　

약제 및 백신 조성물:

본 명세서에 기재된 항체는 하나 이상의 약제학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 임의의 종래의 담체가 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과를 생성하거나 약제학적 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용하는 것과 같이 본 발명의 항체와 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 이의 사용은 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주된다. 약제학적으로 허용되는 담체로서 기능할 수 있는 물질의 몇몇 예로는 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당류; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 셀룰로스 및 이의 유도체(예: 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트); 분말화 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 활석; 코코아 버터 및 좌제 왁스와 같은 부형제; 땅콩 오일, 면실유; 홍화 오일, 참기름; 올리브 오일; 옥수수 오일 및 대두 오일과 같은 오일; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; 아가; 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; 알긴산; 피로겐 비함유 물; 등장성 생리식염수; 링거 용액; 에틸 알코올 및 인산염 완충액, 게다가 나트륨 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 기타 무독성 상용성 윤활제가 포함되지만 이들로 한정되지 않고, 게다가 착색제, 이형제, 코팅제, 감미료, 향미제 및 향료, 방부제 및 항산화제도 또한 제형업자의 판단에 따라 조성물에 존재할 수 있다.

본 명세서에 기재된 항체는 백신 조성물의 제조에 특히 적합하다. 따라서, 본 발명의 추가의 목적은 본 발명의 항체를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.

일부 실시형태에서, 본 발명의 백신 조성물은 보조제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 보조제는 알룸(alum)이다. 일부 실시형태에서, 보조제는 30 내지 70%, 바람직하게는 40 내지 60%, 더 바람직하게는 45 내지 55% 중량 대 중량(w/w) 비율로 존재하는 불완전 프로인트 보조제(IFA) 또는 기타 오일 기반 보조제이다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 백신 조성물은 적어도 하나의 톨-유사 수용체(TLR) 작용제를 포함하고, 이는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7 및 TLR8 작용제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

치료 방법:

본 명세서에 기재된 바와 같이 항체 및 약제학적 또는 백신 조성물은 클라미디아 트라코마티스에 대한 면역 반응을 유도하는 데 특히 적합하고, 따라서 백신 목적으로 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명의 추가의 목적은 치료학적 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 클라미디아 트라코마티스에 대해 이를 필요로 하는 대상체를 백신접종하기 위한 방법에 관한 것이다.

일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체 및 약제학적 또는 백신 조성물은 트라코마(Trachoma)의 치료에 특히 적합하다.

일부 실시형태에서, 대상체는 인간 또는 클라미디아 감염증에 감수성인 임의의 기타 동물(예: 조류 및 포유류)(예: 고양이 및 개와 같은 가축; 말, 소, 돼지, 닭 등과 같은 가축 및 농장 동물)일 수 있다. 통상, 상기 대상체는 비영장류(예: 낙타, 당나귀, 얼룩말, 소, 돼지, 말, 염소, 양, 고양이, 개, 랫트 및 마우스) 및 영장류(예: 원숭이, 침팬지 및 인간)를 포함하는 포유류이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 비인간 동물이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 농장 동물 또는 애완동물이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 유아이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 어린이이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 성인이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 고령자 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 미숙아이다.

일부 실시형태에서, 대상체는 증상이 있거나 무증상일 수 있다.

통상, 본 발명의 활성 성분(즉, 본 명세서에 기재된 항체 및 약제학적 또는 백신 조성물)은 치료학적 유효량으로 대상체에게 투여된다. 본 발명의 화합물 및 조성물의 1일 총 사용량은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 것임을 이해할 수 있을 것이다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정 치료학적 유효량 수준은 치료되는 질환 및 질환의 중증도; 사용되는 특정 화합물의 활성; 사용되는 특정 조성물, 대상체의 연령, 체중, 일반 건강, 성별 및 식이, 사용되는 특정 화합물의 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도; 치료 기간; 사용되는 특정 폴리펩티드와 함께 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의료 기술분야에서 공지된 요인을 포함한 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 원하는 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 수준보다 낮은 수준에서 화합물의 용량을 개시하고 원하는 효과가 달성될 때까지 점차적으로 용량을 증가시키는 것은 당업자의 기술 범위 내이다. 그러나, 제품의 1일 투여량은 성인 1일당 0.01 내지 1,000mg의 넓은 범위에 걸쳐 다양할 수 있다. 특히, 상기 조성물은, 치료되는 대상체에 대한 투여량을 증상별로 조절하기 위해, 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 50.0, 100, 250 및 500mg의 활성 성분을 함유할 수 있다. 의약은 통상 약 0.01mg 내지 약 500mg의 활성 성분, 특히 1mg 내지 약 100mg의 활성 성분을 함유한다. 약물의 유효량은 통상 1일당 약 0.0002mg/체중 kg 내지 약 20mg/체중 kg, 특히 1일당 약 0.001mg/체중 kg 내지 약 7mg/체중 kg의 투여량 수준으로 공급된다.

본 명세서에 기재된 항체 및 약제학적 또는 백신 조성물은 임의의 투여 경로에 의해, 및 특히 경구, 비강, 직장, 국소, 협측(예: 설하), 비경구(예: 피하, 근육내, 경피내 또는 정맥내) 및 경피 투여에 의해 대상체에게 투여될 수 있지만, 임의의 특정의 경우에 가장 적합한 경로는 치료되는 상태의 성질 및 중증도 및 사용되는 특정 활성제의 성질에 따라 달라질 것이다.

본 발명은 하기의 도면 및 실시예에 의해 추가로 설명될 것이다. 그러나, 이러한 실시예 및 도면은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

도-1: 재조합 DC-표적화 백신의 결합 분석 A. MOMP/VS4-코헤신 항원과 독케린 항-CD40 DC-표적화 벡터의 연결의 모식도 B. 백신에 의해 표적화된 인간 DC는 항-hIgG 항체를 사용하여 밝혀졌고, 항-CD40에 대한 클라미디아 MOMP 비오틴화 코헤신 항원의 연결은 형광 스트렙트아비딘에 의해 검출되었다.
도-2: 백신 항원에 대한 체액성 반응. 10명의 HIV+ 환자를 포함한 21명의 클라미디아-감염된 환자의 혈장을 MOMP/VS4 백신 항원에 대해 ELISA에 의해 시험했다. 제대혈로부터의 4개 혈장이 대조군으로서 포함되었다. 모든 환자(HIV+ 여부에 관계없이)는 검출가능한 수준의 MOMP/VS4-특이적 IgG를 나타냈다(평균 역가 1.64). 홀름-시닥(Holm-Sidak) 다중 비교 테스트(****, P <0.0001; ***, P <0.001)
도-3: 항-CD40 백신 작제물에 의한 씨. 트라코마티스 MOMP-특이적 메모리 T 세포의 시험관내 확장. 9명의 공여자의 PBMC를 MOMP/VS4 항원 또는 에볼라 GP와 연관된 항-CD40 mAb로 무관계 대조군으로서 자극했다. A. 배양 10일 후에 IFN-γ을 생성하는 CD4+ T 세포의 백분율. 유의한 클라미디아 반응이 검출되었다(윌콕슨(Wilcoxon) 테스트, p<0.05). B. 백신-자극된 CD4+ T-세포(IFN-γ 반응자)를 생성한 Th1 및 Th2 사이토카인의 프로파일. C. 항-CD40.MOMP/VS4(클라미디아, Chltr) 대 GP(에볼라) 항원으로 자극한 후에 공여자 918명의 항-MOMP/VS4 다기능 프로파일(CD4+T-세포; 생성된 사이토카인 동시성의 수가 표시됨). D. Th17+ 세포(IL-17A+ IL-17E+IL-22+)는 항-CD40.Mom/VS4 작제물로 약간 확장된 것으로 나타났다(n=5).
도-4: 표적화 백신(항-CD40) 대 비-표적화 백신(IgG4 대조군)을 사용한 PBMC의 시험관내 자극. 2일차에 배양 상청액을 수집했다. IFN-γ의 농도는 사내 ELISA에 의해 평가했다. 비-특이적 배경(점선)은 에볼라의 당단백질과 연관된 항-CD40 mAb를 사용하여 평가했다. 2명의 공여체에 대해 예비적 시험을 실시하고, CD40 수용체를 통한 클라미디아 항원의 표적화가 항원-특이적 T 세포 반응을 개선시키는 것으로 나타났다.　
도-5: 항-CD40 DC-표적화 항체에 대한 FlexV1 링커를 통한 MOMP/VS4 항원의 접합의 개략도.　

실시예:

항-CD40-MOMP/VS4 백신의 면역원성, 즉 중쇄가 독케린 도메인에 의해 MOMP/VS4-코헤신에 접합된 항-CD40 항체가 생성되었다( 도 1A) . 결과는 도 1-4 에 도시되어 있다.

본 발명자들은 또한 중쇄가 링커 FlexV1을 통해 MOMP/VS4에 접합되어 있는 항-CD40 항체를 생성했다(도 5).

참고문헌:

본 출원 전반에 걸쳐, 다양한 참고문헌이 본 발명이 관련되는 기술 상태를 설명한다. 이러한 참고문헌의 개시는 본 개시에 참조에 의해 통합된다.

SEQUENCE LISTING <110> Inserm <120> CHLAMYDIA VACCINE BASED ON TARGETING MOMP VS4 ANTIGEN TO ANTIGEN PRESENTING CELLS <130> BIO20450 LEVY / MC <160> 45 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 393 <212> PRT <213> Chlamydia trachomatis <400> 1 Met Lys Lys Leu Leu Lys Ser Val Leu Val Phe Ala Ala Leu Ser Ser 1 5 10 15 Ala Ser Ser Leu Gln Ala Leu Pro Val Gly Asn Pro Ala Glu Pro Ser 20 25 30 Leu Met Ile Asp Gly Ile Leu Trp Glu Gly Phe Gly Gly Asp Pro Cys 35 40 45 Asp Pro Cys Ala Thr Trp Cys Asp Ala Ile Ser Met Arg Val Gly Tyr 50 55 60 Tyr Gly Asp Phe Val Phe Asp Arg Val Leu Lys Thr Asp Val Asn Lys 65 70 75 80 Glu Phe Gln Met Gly Ala Lys Pro Thr Thr Asp Thr Gly Asn Ser Ala 85 90 95 Ala Pro Ser Thr Leu Thr Ala Arg Glu Asn Pro Ala Tyr Gly Arg His 100 105 110 Met Gln Asp Ala Glu Met Phe Thr Asn Ala Ala Cys Met Ala Leu Asn 115 120 125 Ile Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala Thr Ser Gly 130 135 140 Tyr Leu Lys Gly Asn Ser Ala Ser Phe Asn Leu Val Gly Leu Phe Gly 145 150 155 160 Asp Asn 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80 Cys Ala <210> 35 <211> 74 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> VL domain <400> 35 Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn 1 5 10 15 Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly Leu 20 25 30 Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg Val Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 35 40 45 Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln 50 55 60 Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Ala 65 70 <210> 36 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> heavy chain <400> 36 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp His 20 25 30 Asp Met His Trp Val Gln Gln Thr Pro Val Tyr Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ala Ile Asp Pro Glu Thr Gly Asp Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Ile Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ile Pro Phe Tyr Tyr Ser Asn Tyr Ser Pro Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser 115 120 125 Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Gly Thr Thr Gly Ser Ser Val 130 135 140 Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu 145 150 155 160 Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Leu Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr 180 185 190 Ser Asn Thr Trp Pro Ser Gln Thr Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro 195 200 205 Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Val Pro Ile 210 215 220 Thr Gln Asn Pro Cys Pro Pro Leu Lys Glu Cys Pro Pro Cys Ala Asp 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp 245 250 255 Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Met Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Ala Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn 275 280 285 Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro 325 330 335 Ser Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Pro Arg Gly Pro Val Arg Ala 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Met Thr Lys Lys 355 360 365 Glu Phe Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Gly Phe Leu Pro Ala Glu Ile 370 375 380 Ala Val Asp Trp Thr Ser Asn Gly Arg Thr Glu Gln Asn Tyr Lys Asn 385 390 395 400 Thr Ala Thr Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Arg Val Gln Lys Ser Thr Trp Glu Arg Gly Ser Leu Phe Ala Cys 420 425 430 Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His Leu Thr Thr Lys Thr Ile 435 440 445 Ser Arg Ser Leu Gly Lys Ala Ser 450 455 <210> 37 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> light chain <400> 37 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr 85 90 95 Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 105 110 Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn 130 135 140 Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn 145 150 155 160 Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr 180 185 190 Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Asn Glu Cys 210 <210> 38 <211> 325 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> fusion protein comprising the VS4 polypeptide <400> 38 Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser 1 5 10 15 Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Ser Arg Gly Leu Asn Asp Ile Phe 20 25 30 Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu Thr Ser Asp Asp Leu Asp Ala 35 40 45 Val Arg Ile Lys Val Asp Thr Val Asn Ala Lys Pro Gly Asp Thr Val 50 55 60 Arg Ile Pro Val Arg Phe Ser Gly Ile Pro Ser Lys Gly Ile Ala Asn 65 70 75 80 Cys Asp Phe Val Tyr Ser Tyr Asp Pro Asn Val Leu Glu Ile Ile Glu 85 90 95 Ile Glu Pro Gly Asp Ile Ile Val Asp Pro Asn Pro Asp Lys Ser Phe 100 105 110 Asp Thr Ala Val Tyr Pro Asp Arg Lys Ile Ile Val Phe Leu Phe Ala 115 120 125 Glu Asp Ser Gly Thr Gly Ala Tyr Ala Ile Thr Lys Asp Gly Val Phe 130 135 140 Ala Thr Ile Val Ala Lys Val Lys Glu Gly Ala Pro Asn Gly Leu Ser 145 150 155 160 Val Ile Lys Phe Val Glu Val Gly Gly Phe Ala Asn Asn Asp Leu Val 165 170 175 Glu Gln Lys Thr Gln Phe Phe Asp Gly Gly Val Asn Val Gly Asp Thr 180 185 190 Thr Glu Pro Ala Thr Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Pro Thr Thr Thr 195 200 205 Asp Asp Leu Asp Ala Ile Asp Gln Thr Pro Thr Asn Thr Ile Ser Val 210 215 220 Thr Pro Thr Asn Asn Ser Thr Pro Thr Asn Asn Ser Asn Pro Lys Pro 225 230 235 240 Asn Pro Ala Ser Asn Met Phe Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser 245 250 255 Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser 260 265 270 Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly 275 280 285 Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met 290 295 300 Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu Asn Lys Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys 305 310 315 320 Gly Glu Pro Glu Ala 325 <210> 39 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> linker <400> 39 Gln Thr Pro Thr Asn Thr Ile Ser Val Thr Pro Thr Asn Asn Ser Thr 1 5 10 15 Pro Thr Asn Asn Ser Asn Pro Lys Pro Asn Pro 20 25 <210> 40 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> linker <400> 40 Ala Ser Ser Ser Val Ser Pro Thr Thr Ser Val His Pro Thr Pro Thr 1 5 10 15 Ser Val Pro Pro Thr Pro Thr Lys Ser Ser Pro Ala Ser 20 25 <210> 41 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> linker <400> 41 Pro Thr Ser Thr Pro Ala Asp Ser Ser Thr Ile Thr Pro Thr Ala Thr 1 5 10 15 Pro Thr Ala Thr Pro Thr Ile Lys Gly 20 25 <210> 42 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> linker <400> 42 Thr Val Thr Pro Thr Ala Thr Ala Thr Pro Ser Ala Ile Val Thr Thr 1 5 10 15 Ile Thr Pro Thr Ala Thr Thr Lys Pro 20 25 <210> 43 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> linker <400> 43 Thr Asn Gly Ser Ile Thr Val Ala Ala Thr Ala Pro Thr Val Thr Pro 1 5 10 15 Thr Val Asn Ala Thr Pro Ser Ala Ala 20 25 <210> 44 <211> 558 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hAnti-CD40VH3-LV-hIgG4H-C-Flex-v1- hMOMP/VS4-EPEA <400> 44 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Gly Leu Pro Phe His Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser 435 440 445 Gln Thr Pro Thr Asn Thr Ile Ser Val Thr Pro Thr Asn Asn Ser Thr 450 455 460 Pro Thr Asn Asn Ser Asn Pro Lys Pro Asn Pro Ala Ser Asn Met Phe 465 470 475 480 Thr Pro Tyr Ile Gly Val Lys Trp Ser Arg Ala Ser Phe Asp Ala Asp 485 490 495 Thr Ile Arg Ile Ala Gln Pro Lys Ser Ala Thr Ala Ile Phe Asp Thr 500 505 510 Thr Thr Leu Asn Pro Thr Ile Ala Gly Ala Gly Asp Val Lys Thr Gly 515 520 525 Ala Glu Gly Gln Leu Gly Asp Thr Met Gln Ile Val Ser Leu Gln Leu 530 535 540 Asn Lys Met Lys Ser Arg Lys Ser Cys Gly Glu Pro Glu Ala 545 550 555 <210> 45 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hAnti-CD40VK2-LV-hIgG4H-C <400> 45 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Ile Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Lys Leu Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims

항원 제시 세포(antigen presenting cell)의 표면 항원에 대해 지시된 항체로서,
중쇄 및/또는 경쇄가, 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성(identity)을 갖는 VS4 폴리펩티드에 접합(conjugating) 또는 융합(fusing)되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, 상기 항체의 중쇄가, 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, 상기 항체의 경쇄가, 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, 항체의 중쇄 및 경쇄가 모두, 서열번호 1의 위치 282의 아미노산 잔기로부터 위치 358의 아미노산 잔기까지의 범위의 아미노산 서열과 적어도 80%의 동일성을 갖는 VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, IgG 항체, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 항체, 또는 더욱 바람직하게는 IgG4 항체인, 항체.
제1항에 있어서, 키메라 항체(chimeric antibody), 특히 키메라 마우스/인간 항체 또는 인간화(humanized) 항체인, 항체.
제1항에 있어서, DC 면역수용체(DCIR), MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CDl lb, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린(Langerin), DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, 페이(Fey) 수용체, LOX-1 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택되는, 항체.　
제1항에 있어서, CD40에 특이적인, 항체.
제8항에 있어서,
- 12E12 항체로부터 유래하고,
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GFTFSDYYMY(서열번호 3)을 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 YINSGGSTYYPDTVKG(서열번호 4)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 RGLPFHAMDY(서열번호 5)를 갖는 중쇄,　및
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 SASQGISNYLN(서열번호 6)을 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 YTSILHS(서열번호 7)를 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 QQFNKLPPT(서열번호 8)를 갖는 경쇄를 포함하거나, 또는
- 11B6 항체로부터 유래하고,
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GYSFTGYYMH(서열번호 9)를 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 RINPYNGATSYNQNFKD(서열번호 10)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 EDYVY(서열번호 11)를 갖는 중쇄, 및
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 RSSQSLVHSNGNTYLH(서열번호 12)를 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 KVSNRFS(서열번호 13)를 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 SQSTHVPWT(서열번호 14)를 갖는 경쇄를 포함하거나, 또는
- 12B4 항체로부터 유래하고,
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄로서, 상기 CDR1H는 아미노산 서열 GYTFTDYVLH(서열번호 15)를 갖고, 상기 CDR2H는 아미노산 서열 YINPYNDGTKYNEKFKG(서열번호 16)를 갖고, 상기 CDR3H는 아미노산 서열 GYPAYSGYAMDY(서열번호 17)를 갖는 중쇄, 및
ｏ 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄로서, 상기 CDR1L은 아미노산 서열 RASQDISNYLN(서열번호 18)을 갖고, 상기 CDR2L은 아미노산 서열 YTSRLHS(서열번호 19)를 갖고, 상기 CDR3L은 아미노산 서열 HHGNTLPWT(서열번호 20)를 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
제8항에 있어서, 상기 항-CD40 항체가 표 A에 기재된 바와 같이 선택된 mAb1, mAb2, mAb3, mAb4, mAb5 및 mAb6으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 항체.
제8항에 있어서, CD40 작용제 항체인, 항체.
제11항에 있어서, 상기 CD40 작용제 항체의 중쇄 또는 경쇄(즉, VS4 폴리펩티드에 접합 또는 융합되지 않은 쇄)가 CD40L(서열번호 2)의 CD40 결합 도메인에 접합 또는 융합되어 있는, 항체.　
제12항에 있어서, 상기 CD40L의 CD40 결합 도메인이, 임의로 링커(linker), 바람직하게는 FlexV1 링커를 통해, 상기 CD40 작용제 항체의 경쇄 또는 중쇄의 C-말단(C-terminus)에 융합되어 있는, 항체.
제12항에 있어서, 상기 항체의 중쇄가 VS4 폴리펩티드에 융합 또는 접합되어 있고, 상기 경쇄가 CD40L(서열번호 2)의 CD40 결합 도메인에 융합 또는 접합되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, 랑게린(Langerin)에 특이적인, 항체.　
제15항에 있어서,
- 15B10 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 15B10 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄, 또는　
- 2G3 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 2G3 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄, 또는　
- 4C7 항체의 상보성 결정 영역 CDR1H, CDR2H 및 CDR3H를 포함하는 중쇄 및 4C7 항체의 상보성 결정 영역 CDR1L, CDR2L 및 CDR3L을 포함하는 경쇄
를 포함하는, 항체.
제15항에 있어서, 표 B에 기재된 바와 같이 선택된 mAb7, mAb8, mAb9, mAb10, mAb11 및 mAb12로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 항체.
제1항에 있어서, 상기 중쇄 및/또는 경쇄가 FlexV1, f1, f2, f3 및 f4로 이루어진 그룹으로부터 선택된 링커를 통해 VS4 폴리펩티드에 융합되어 있는, 항체.
제1항에 있어서, i) 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 코헤신(cohesin) 융합 단백질에 독케린 도메인(dockerin domain)을 통해 접합된 중쇄 또는 경쇄를 포함하는, 항체.
제9항에 있어서, 서열번호 44에 제시된 중쇄, 및 서열번호 45에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 항체.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는(encoding) 핵산.
제21항의 핵산을 포함하는 벡터(vector).
제21항의 핵산 및/또는 제22항의 벡터에 의해 형질감염, 감염 또는 형질전환된 숙주 세포.　
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 백신 조성물.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 치료 유효량의 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis)에 대해 이를 필요로 하는 대상체(subject)를 백신접종(vaccinating)하기 위한 방법.