JP2024508048A - Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の調製およびその使用 - Google Patents
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Abstract
本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の調製を提供し、具体的には、ＨＣＤＲ３を含んでなる単離された抗原結合タンパク質に関する。疾患の予防および治療における抗原結合タンパク質の使用が提供される。
Description
発明の分野
本願は、生物医学の分野に関し、特にＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の調製およびその使用に関する。
本願は、生物医学の分野に関し、特にＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の調製およびその使用に関する。
発明の背景
古典的な免疫グロブリン様レクチンの一種としてのＳｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫バランスを調節することができる。Ｓｉｇｌｅｃファミリーには３０ものメンバーが存在し、細胞表面に発現している。このファミリーメンバーの複数の分子の異常は多くの疾患と関連しており、Ｓｉｇｌｅｃ－１５はその一つである。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は細胞内領域に免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based inhibitiory motif)（ＩＴＩＭ）またはＩＴＩＭ様配列を含まず、細胞内Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、実験データから示されるように、免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based activating motif)（ＩＴＡＭ）シグナルを含むＤＡＰ１２またはＤＡＰ１０と関連している。しかし、Ｓｉｇｌｅｃの細胞内セグメントのほとんどは、免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフを含んでおり、それによって免疫抑制機能を発揮する。Ｓｉｇｌｅｃ－１５はシアリル－ＴｎおよびＮｅｕ５ Ａｃａ２－６ＧａｌＮＡｃａと結合できることが示されており、これはＳｉｇｌｅｃ－１５のリガンドであり得ることが示唆されている。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、正常ヒトでは主として骨髄系細胞で発現している。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は様々な固形腫瘍で異常に高発現している。前臨床のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験および動物腫瘍モデルから、Ｓｉｇｌｅｃ－１５抗体はＴ細胞を活性化し、腫瘍を抑制できることが示されている。しかしながら、現在のところ腫瘍治療に適したＳｉｇｌｅｃ－１５抗体は不足しており、治療効果を有するより多くのＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を開発することが当技術分野の急務となっている。
古典的な免疫グロブリン様レクチンの一種としてのＳｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫バランスを調節することができる。Ｓｉｇｌｅｃファミリーには３０ものメンバーが存在し、細胞表面に発現している。このファミリーメンバーの複数の分子の異常は多くの疾患と関連しており、Ｓｉｇｌｅｃ－１５はその一つである。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は細胞内領域に免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based inhibitiory motif)（ＩＴＩＭ）またはＩＴＩＭ様配列を含まず、細胞内Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、実験データから示されるように、免疫受容体チロシン依存性活性化モチーフ(immunoreceptor tyrosine-based activating motif)（ＩＴＡＭ）シグナルを含むＤＡＰ１２またはＤＡＰ１０と関連している。しかし、Ｓｉｇｌｅｃの細胞内セグメントのほとんどは、免疫受容体チロシン依存性抑制モチーフを含んでおり、それによって免疫抑制機能を発揮する。Ｓｉｇｌｅｃ－１５はシアリル－ＴｎおよびＮｅｕ５ Ａｃａ２－６ＧａｌＮＡｃａと結合できることが示されており、これはＳｉｇｌｅｃ－１５のリガンドであり得ることが示唆されている。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、正常ヒトでは主として骨髄系細胞で発現している。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は様々な固形腫瘍で異常に高発現している。前臨床のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験および動物腫瘍モデルから、Ｓｉｇｌｅｃ－１５抗体はＴ細胞を活性化し、腫瘍を抑制できることが示されている。しかしながら、現在のところ腫瘍治療に適したＳｉｇｌｅｃ－１５抗体は不足しており、治療効果を有するより多くのＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を開発することが当技術分野の急務となっている。
発明の概要
本願は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を提供する。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、（１）約１．５６Ｅ－１０Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有すること；（２）約３．２５ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有すること；（３）熱安定性などの良好な物理化学的特性を有すること；（４）免疫細胞の増殖に影響を与える、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５により引き起こされる免疫細胞の増殖抑制を逆転させる能力を有すること；（５）腫瘍抑制能を有する、例えば、約２３％以上の腫瘍体積抑制率で腫瘍を抑制し得ること；（６）サイトカイン分泌に影響を与える能力を有することからなる群から選択される１以上の効果を有し得る。
本願は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を提供する。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、（１）約１．５６Ｅ－１０Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有すること；（２）約３．２５ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有すること；（３）熱安定性などの良好な物理化学的特性を有すること；（４）免疫細胞の増殖に影響を与える、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５により引き起こされる免疫細胞の増殖抑制を逆転させる能力を有すること；（５）腫瘍抑制能を有する、例えば、約２３％以上の腫瘍体積抑制率で腫瘍を抑制し得ること；（６）サイトカイン分泌に影響を与える能力を有することからなる群から選択される１以上の効果を有し得る。
１つの側面において、本願は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３を含んでなる単離された抗原結合タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号１３または配列番号１４．に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１を含んでなり、Ｈ－ＦＲ１のＣ末端は、ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結され、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号１５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ２を含んでなり、Ｈ－ＦＲ２は、ＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に位置し、Ｈ－ＦＲ２は、配列番号１６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ３を含んでなり、Ｈ－ＦＲ３は、ＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に位置し、Ｈ－ＦＲ３は、配列番号１７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ４を含んでなり、Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は、ＨＣＤＲ３のＣ末端に直接または間接的に連結され、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号１８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１を含んでなり、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は、ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結され、Ｌ－ＦＲ１は、配列番号１９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ２を含んでなり、Ｌ－ＦＲ２は、ＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に位置し、Ｌ－ＦＲ２は、配列番号２０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ３を含んでなり、Ｌ－ＦＲ３は、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に位置し、Ｌ－ＦＲ３は、配列番号２１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ４を含んでなり、Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は、ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接または間接的に連結され、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号２２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号１３または配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３または配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ２は配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＨＣＤＲ１は配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ３は配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ２は配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり、ＬＣＤＲ１は配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号３０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号３１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨおよび配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体重鎖定常領域は、ヒト抗体由来の重鎖定常領域を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ由来の重鎖定常領域を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体重鎖定常領域は、ＩｇＧ１由来の重鎖定常領域を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体軽鎖定常領域は、ヒト抗体由来の軽鎖定常領域を含んでなる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体軽鎖定常領域は、ヒトＩｇκ由来の定常領域を含んでなる。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および完全ヒト抗体からなる群の１以上から選択される。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、およびｄＡｂからなる群の１以上から選択される。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）またはその機能的に活性なフラグメントに特異的に結合することができる。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、ヒトＳｉｇｌｅｃ、サルＳｉｇｌｅｃ、および／またはマウスＳｉｇｌｅｃを含む。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、約１．５６Ｅ－１０Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有する。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、約３．２５ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有する。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントは、細胞上に発現するＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、免疫細胞の増殖に影響を与える能力を有する。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞の増殖に影響を与えることは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５関連免疫細胞の増殖抑制を低減することを含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ヒト由来の免疫細胞を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、リンパ球を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、末梢血リンパ球を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ８＋細胞を含む。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍抑制能を有する。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、腫瘍抑制能は、腫瘍の体積に影響を与えることを含む。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、約２３％以上の腫瘍体積抑制率で腫瘍を抑制する能力を有する。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、サイトカイン分泌に影響を与える能力を有する。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、分泌は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ分泌を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、サイトカイン分泌は、リポ多糖により誘導されるサイトカイン分泌を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、サイトカインは、炎症性因子を含む。
単離された抗原結合タンパク質のいくつかの実施形態では、サイトカインは、ＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－６を含む。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質を含んでなるポリペプチドも提供する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、融合タンパク質を含んでなる。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質および／または本願のポリペプチドをコードする核酸分子も提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の核酸分子を含んでなるベクターも提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質および／または本願のポリペプチドを含んでなる免疫複合体も提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質を含んでなる、かつ／もしくは細胞、本願のポリペプチドを含んでなる、かつ／もしくは発現する細胞、本願の核酸分子を含んでなる細胞、本願のベクターを含んでなる細胞および／または本願の免疫複合体を含んでなる細胞も提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、および／または本願の細胞、ならびに場合により薬学上許容可能なビヒクルを含んでなる医薬組成物も提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、および／または本願の医薬組成物を含んでなる医薬組合せも提供する。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、本願の医薬組成物、および／または本願の医薬組合せを含んでなるキットも提供する。
いくつかの実施形態では、キットは、サンプル中のＳｉｇｌｅｃの存在および／または量を検出するために使用される。
キットのいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
別の側面において、本願はまた、本願の抗原結合タンパク質および／またはポリペプチドを調製する方法であって、当該抗原結合タンパク質および／またはポリペプチドを発現することができる条件下で培養することを含んでなる方法も提供する。
いくつかの実施形態では、この方法は、細胞を、当該抗原結合タンパク質を発現することができる条件下で培養することを含んでなる。
いくつかの実施形態では、この方法は、細胞を、当該ポリペプチドを発現することができる条件下で培養することを含んでなる。
別の側面において、本願はまた、サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法であって、本願の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、本願のポリペプチドを投与すること、本願の核酸分子を投与すること、本願のベクターを投与すること、本願の免疫複合体を投与すること、本願の細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを使用することを含んでなる方法も提供する。
この方法のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
別の側面において、本願はまた、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントのそのリガンドへの結合に影響を与える方法であって、本願の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、本願のポリペプチドを投与すること、本願の核酸分子を投与すること、本願のベクターを投与すること、本願の免疫複合体を投与すること、本願の細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを使用することを含んでなる方法も提供する。
いくつかの実施形態では、この方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ法を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントを含む。
この方法のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃのリガンドは、ロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃおよび／またはシアリル化Ｔｎ（シアリル－Ｔｎ）を含む。
別の側面において、本願はまた、免疫細胞の増殖に影響を与える方法であって、本願の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、本願のポリペプチドを投与すること、本願の核酸分子を投与すること、本願のベクターを投与すること、本願の免疫複合体を投与すること、本願の細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを使用することを含んでなる方法も提供する。
いくつかの実施形態では、この方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ法を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞の増殖に影響を与えることは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５関連免疫細胞の増殖抑制を低減することを含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ヒト由来免疫細胞を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、リンパ球を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、末梢血リンパ球を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ８＋細胞を含む。
別の側面において、本願はまた、サイトカイン分泌に影響を与える方法であって、本願の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、本願のポリペプチドを投与すること、本願の核酸分子を投与すること、本願のベクターを投与すること、本願の免疫複合体を投与すること、本願の細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、を本願の医薬組合せ投与すること、および／または本願のキットを使用することを含んでなる方法も提供する。
この方法のいくつかの実施形態では、分泌は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ分泌を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、サイトカイン分泌は、リポ多糖関連サイトカイン分泌を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、サイトカインは、炎症性因子を含む。
この方法のいくつかの実施形態では、サイトカインは、ＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－６を含む。
別の側面において、本願はまた、キットの製造における本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、本願の医薬組成物、および／または本願の医薬組合せの使用も提供する。
この使用のいくつかの実施形態では、キットは、サンプル中のＳｉｇｌｅｃの存在および／または量を検出するために使用される。
この使用のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
別の側面において、本願はまた、疾患および／または病態の予防および／または治療のための薬剤の製造における本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、本願の医薬組成物、本願の医薬組合せ、および／または本願のキットの使用も提供する。
この使用のいくつかの実施形態では、疾患および／または病態は、腫瘍を含む。
この使用のいくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ関連腫瘍を含む。
この使用のいくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
この使用のいくつかの実施形態では、疾患および／または病態は、固形腫瘍を含む。
この使用のいくつかの実施形態では、疾患および／または病態は、結腸癌を含む。
別の側面において、本願はまた、疾患および／または病態の予防および／または治療における使用のための、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、本願の医薬組成物、本願の医薬組合せ、および／または本願のキットも提供する。
いくつかの実施形態では、疾患および／または病態は、腫瘍を含む。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ関連腫瘍を含む。
いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
いくつかの実施形態では、疾患および／または障害は、固形腫瘍を含んでなる。
いくつかの実施形態では、疾患および／または障害は、結腸癌を含んでなる。
別の側面において、本願はまた、疾患および／または病態の予防および／または治療のための方法であって、それを必要とする対象に本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の免疫複合体、本願の細胞、本願の医薬組成物、本願の医薬組合せ、および／または本願のキットを投与することを含んでなる方法も提供する。
いくつかの実施形態では、疾患および／または病態は、腫瘍を含む。
いくつかの実施形態では、腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ関連腫瘍を含む。
いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を含む。
いくつかの実施形態では、疾患および／または障害は、固形腫瘍を含んでなる。
いくつかの実施形態では、疾患および／または障害は、結腸癌を含んでなる。
本願の他の側面および利点は、以下の詳細な説明から当業者には容易に明らかになるであろう。以下の詳細な説明では、単に本願の例示的な実施形態を示し、説明する。当業者に認識されるように、本願の内容は、当業者が、本願が関係する本願の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態に修正を加えることを可能にする。従って、本明細書の図面および説明は、本質的に例示的なものであって限定なものでないと考えられる。
本願が関連する本願の具体的な特徴は、添付の特許請求の範囲に記載されている。本願が関係する本願の特徴および利点は、以下に詳細に説明される例示的な実施形態および図面を参照することによってよりよく理解される。図面の簡単な説明は以下の通りである。
特定の実施形態の詳細な説明
本願の他の利点および効果は、以下の特定の実施形態の説明から当業者には容易に明らかになるであろう。
本願の他の利点および効果は、以下の特定の実施形態の説明から当業者には容易に明らかになるであろう。
用語の定義
本願において、用語「シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン」、「シアル酸結合Ｉｇ様レクチン」または「Ｓｉｇｌｅｃ」は一般に、シアル酸を含有する糖構造を認識する能力を有し得る免疫グロブリン様レクチンを指す。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ－１５組換えタンパク質は、ヒトおよびマウスＴ細胞の増殖ならびにＩＦＮ－γの分泌を抑制することができ、オボアルブミン（ＯＶＡ）抗原活性化ＯＴ－１ Ｔ細胞を抑制することもできる。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、マクロファージでは発現が低く、マクロファージコロニー刺激因子Ｍ－ＣＳＦで刺激した後に発現の有意なアップレギュレーションを示す。正常なマクロファージと比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－１５遺伝子ノックアウトマクロファージは、Ｔ細胞増殖をさらに誘導することができ、このことはＳｉｇｌｅｃ－１５Ｔ細胞活性を直接抑制し得ることを示す。前臨床ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験および動物腫瘍モデルでは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５抗体またはＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質がＴ細胞を活性化し、腫瘍を抑制し得ることが示されている。例えば、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ６ＺＭＣ９を有し得るＳｉｇｌｅｃ－１５であり得る。本願のＳｉｇｌｅｃタンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントも包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＳｉｇｌｅｃタンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン」、「シアル酸結合Ｉｇ様レクチン」または「Ｓｉｇｌｅｃ」は一般に、シアル酸を含有する糖構造を認識する能力を有し得る免疫グロブリン様レクチンを指す。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ－１５組換えタンパク質は、ヒトおよびマウスＴ細胞の増殖ならびにＩＦＮ－γの分泌を抑制することができ、オボアルブミン（ＯＶＡ）抗原活性化ＯＴ－１ Ｔ細胞を抑制することもできる。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、マクロファージでは発現が低く、マクロファージコロニー刺激因子Ｍ－ＣＳＦで刺激した後に発現の有意なアップレギュレーションを示す。正常なマクロファージと比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－１５遺伝子ノックアウトマクロファージは、Ｔ細胞増殖をさらに誘導することができ、このことはＳｉｇｌｅｃ－１５Ｔ細胞活性を直接抑制し得ることを示す。前臨床ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験および動物腫瘍モデルでは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５抗体またはＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質がＴ細胞を活性化し、腫瘍を抑制し得ることが示されている。例えば、Ｓｉｇｌｅｃは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ６ＺＭＣ９を有し得るＳｉｇｌｅｃ－１５であり得る。本願のＳｉｇｌｅｃタンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントも包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＳｉｇｌｅｃタンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「ロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃ」または「ＬＲＲＣ ４Ｃ」は互換的に使用され、一般に、リピートロイシン配列に富むタンパク質を指す。ＬＲＲＣ４は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５に結合して活性化するＳｉｇｌｅｃｔ－１５のリガンドとして働き得る。ＬＲＲＣ４Ｃは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９ＨＣＪ２を有し得る。本願のＬＲＲＣ４Ｃタンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントも包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＬＲＲＣ４Ｃタンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「シアリル化Ｔｎ」または「シアリル－Ｔｎ」は一般に、シアリル基を含むＴｎ抗原を指す。抗原は、グリコシド結合を介してセリンまたはトレオニンに連結されたＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）オリゴ糖であり得る。シアリル－Ｔｎ発現は、異常なグリコシル化経路の活性化から生じ、一般に腫瘍細胞内で起こり得る。本願のシアリル化Ｔｎタンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントも包含し得る。
本願において、用語「リポ多糖」または「ＬＰＳ」は一般に、脂質と多糖からなる物質を指す。リポ多糖は一般に、グラム陰性菌の細胞壁の外壁の成分である。リポ多糖は、ヒト細胞による種々のサイトカインの合成および／または分泌を促進して、人体に作用しつつ免疫応答を惹起することができる。
本願において、用語「機能的に活性なフラグメント」は一般に、全長タンパク質または核酸の部分的領域を有するが、全長タンパク質または核酸の生物活性または機能を保有するまたは部分的に保有するフラグメントを指す。例えば、機能的に活性なフラグメントは、別の分子に結合する全長タンパク質の能力を保有し得るか、または部分的に保有し得る。例えば、Ｓｉｇｌｅｃの機能的に活性なフラグメントは、シアル酸含有糖構造を認識する、かつ／または免疫系の機能を抑制する全長Ｓｉｇｌｅｃの機能を保有し得るか、または部分的に保有し得る。
本願において、用語「分泌」は一般に、細胞による発現したポリペプチドまたはタンパク質の細胞外環境への移行を指す。例えば、本願において、それは免疫細胞による発現したサイトカインの細胞外環境への移行を意味する場合がある。
本願において、用語「サイトカイン」は一般に、細胞間モジュレーターとして別の細胞に作用する、ある細胞集団によって放出されたタンパク質を指す。本願のサイトカインは、ＩＬ－６などのインターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ－αなどの腫瘍壊死因子、およびその他のポリペプチド因子であり得る。本願において、本願のサイトカインはその機能的に活性なフラグメントを包含することができ、また、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質、ならびに天然配列のサイトカインの、生物学的に活性な等価物も含み得る。
本願において、用語「炎症性因子」は一般に、炎症を促進するサイトカインを指す。本願の炎症性因子は、インターロイキンＩＬ－６、および／または腫瘍壊死因子ＴＮＦ－αを含み得る。本願において、本願の炎症性サイトカインは、その機能的に活性なフラグメントを包含してもよく、また、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質、ならびに天然配列のサイトカインの、生物学的に活性な等価物も含み得る。
本願において、用語「ＩＬ－６」は一般に、インターロイキンを指す。本願のＩＬ－６は、炎症を促進し得る。ＩＬ－６は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ０５２３１を受けているものであり得る。本願のＩＬ－６タンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントも包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＩＬ－６タンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「ＴＮＦα」または「ＴＮＦ－α」は一般に、腫瘍壊死因子αを指す。ＴＮＦ－αは、炎症応答、免疫応答および病態生理学的応答の主要なメディエーターであり得る。ＴＮＦ－αは、野生型ＴＮＦ－α、ＴＮＦ－αの多型変異体、および種々の種（例えば、ヒト、マウス、およびサル）由来のＴＮＦ－αの機能的等価物を含み得る。ＴＮＦ－αは、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ０１３７５を受けているものであり得る。本願のＴＮＦ－αタンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントを包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＴＮＦ－αタンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「リンパ球」は一般に、血液、リンパ液およびリンパ系組織に見られる白血球を指す。例えば、リンパ球は、任意の単球および／または非貪食性白血球を含み得る。
本願において、用語「免疫細胞」は一般に、免疫応答に関与する細胞を指す。免疫細胞としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、肥満細胞、および／または骨髄由来の貪食細胞を含み得る。
本願において、用語「末梢血リンパ球」は一般に、血中に循環し、脾臓またはリンパ節などの器官に局在しない成熟リンパ球を指す。末梢血リンパ球としては、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および／またはＢ細胞を含み得る。
本願において、用語「Ｔ細胞」は一般に、胸腺由来の細胞を指す。様々な細胞媒介免疫応答に関与し得るＴ細胞としては、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球または活性化Ｔリンパ球が含まれる。Ｔ細胞集団としては、限定するものではないが、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－Ｔ細胞またはＴ細胞の他の任意の亜集団が含まれる。
本願において、用語「ＣＤ４」は一般に、細胞により発現される分化抗原群４タンパク質を指す。ＣＤ４は、Ｔ細胞認識抗原の共受容体であり得、ＭＨＣクラスＩＩ分子の非ポリペプチド領域に結合することができる。ＣＤ４を発現するＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ４陽性Ｔ細胞）は、活性化されるとヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）に分化することができ、免疫応答を調節することができる。ＣＤ４は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ０１７３０を受けているものであり得る。本願のＣＤ４タンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントを包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＣＤ４タンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「ＣＤ８」は一般に、細胞により発現される分化抗原群８タンパク質を指す。ＣＤ８は、Ｔ細胞認識抗原の共受容体であり得、ＭＨＣクラスＩＩ分子の非ポリペプチド領域に結合することができる。ＣＤ８を発現するＴ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８陽性Ｔ細胞）は、活性化されると細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）に分化することができ、標的細胞を特異的に殺傷することができる。ＣＤ８は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｐ１０９６６受けているものであり得る。本願のＣＤ８タンパク質はまた、その機能的に活性なフラグメントを包含してもよく、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるＣＤ８タンパク質の機能的に活性なフラグメントを含んでなるタンパク質に限定されない。
本願において、用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」は一般に、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて対象で起こる事象を指す。
本願において、用語「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」は一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて対象で起こる事象を指す。
本願において、用語「ｅｘ ｖｉｖｏ」は一般に、対象の身体から取り出された細胞、組織および／または器官の処置または手術を含む事象を指す。１つの実施形態では、これらの細胞、組織および／または器官は、手術または処置により対象の身体に戻すことができる。
本願において、用語「ＥＣ５０値」または「ＥＣ５０値」は一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイに関してベースライン値と結合物質（例えば抗体）の応答の最大値の間の５０％を指し、５０％有効濃度ＥＣ５０値が低いほど高い薬物親和性および有効性を示し得る。
本願において、用語「ＫＤ値」または「ＫＤ値」は一般に、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定することができる解離定数を指す。一般に、ＳＰＲ分析では、リガンド（バイオセンサーマトリックス上に固定されている物質）と被分析物（溶液中の物質）の間のリアルタイムの結合相互作用がＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｅｒ、ピスカタウェイ、ＮＪ）を用いるＳＰＲにより測定される。表面プラズマ分析もまた、被分析物（バイオセンサーマトリックス上の物質）を固定し、リガンドを提供することによって行うことができる。
本願において、用語「腫瘍抑制能」は一般に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける腫瘍細胞増殖またはｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍成長に関する測定可能な任意の抑制能、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける腫瘍細胞増殖またはｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍成長の少なくとも５％（少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％以上、例えば少なくとも１００％であり得る）の減少を指す。
本願において、用語「単離された」とは、一般に、人工的手段により天然状態から得られた物質を指す。例えば、単離されていないポリヌクレオチドまたはポリペプチドは生きている動物に天然に存在し、その天然状態から高純度で単離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されたということができる。用語「単離された」は、人工物質または合成物質の混入も、物質の活性に影響を与えない他の不純物の存在も排除するものではない。
本願において、用語「単離された抗原結合タンパク質」は一般に、その天然状態から取り出された、抗原結合能を有するタンパク質を指す。本願の「単離された抗原結合タンパク質」は、抗原に結合する部分、場合により、抗原に結合する部分が抗原結合部分の抗原への結合を促進する立体配座をとることを可能とするフレームワークまたはフレームワーク部分を含んでなり得る。抗原結合タンパク質は、例えば、抗体由来のタンパク質フレームワーク領域（ＦＲ）または別のタンパク質フレームワーク領域またはＣＤＲもしくはＣＤＲ誘導体がグラフトされた人工フレームワーク領域を含んでなり得る。このようなフレームワークとしては、限定するものではないが、例えば、抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化させるために導入された突然変異を含んでなる抗体由来のフレームワーク領域、ならびに例えば生体適合性ポリマーを含んでなる完全合成フレームワーク領域を含み得る。抗原結合タンパク質の例としては、限定するものではないが、ヒト抗体、ヒト化抗体；キメラ抗体；組換え抗体；単鎖抗体；二機能性抗体；三機能性抗体；四機能性抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ＩｇＤ抗体；ＩｇＥ抗体；ＩｇＭ抗体；ＩｇＧ１抗体；ＩｇＧ２抗体；ＩｇＧ３抗体；および／またはＩｇＧ４抗体およびそのフラグメントを含み得る。
本願において、用語「ＣＤＲ」は、「相補性決定領域」とも呼ばれ、一般に、抗体可変ドメイン中の、配列の変動が大きい、かつ／または構造的に定義されたループを形成し得る領域を指す。例えば、抗体は、ＶＨに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）とＶＬに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）の６つのＣＤＲを含んでなり得る。いくつかの実施形態では、重鎖のみからなる天然ラクダ抗体は、軽鎖が存在しなくとも正常かつ安定に機能し得る。抗体のＣＤＲは、様々なコードシステム、例えば、ＣＣＧ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの包括的考慮などによって決定することができる。このようなコードシステムは当技術分野で公知である。例えば、www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum参照。例えば、抗原結合タンパク質のアミノ酸配列のナンバリングは、ＩＭＧＴナンバリングスキーム（ＩＭＧＴ、ＩＭＧＴ、the international ImMunoGeneTics information system@imgt.cines.fr; imgt.cines.fr; Lefranc et al., 1999, Nucleic Acids Res. 27: 209-212; Ruiz et al.,2000 Nucleic Acids Res. 28: 219-221; Lefranc et al., 2001, Nucleic Acids Res. 29:207-209; Lefranc et al., 2003, Nucleic Acids Res. 31: 307-310; Lefranc et al., 2005, DevComp Immunol 29: 185-203）に従うものであり得る。例えば、抗原結合タンパク質のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Kabat EA &Wu TT (1971) Ann NY AcadSci 190:382-391 and Kabat EAet al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242参照）。
本願において、用語「ＦＲ」は一般に、フレームワーク領域と呼ばれる、抗体可変ドメインのより保存性の高い部分を指す。例えば、天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ４つのＦＲ領域、すなわち、ＶＨに４つ（Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、およびＨ－ＦＲ４）とＶＬに４つ（Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、およびＬ－ＦＲ４）を含んでなり得る。
本願において、用語「可変ドメイン」および「可変領域」は、互換的に使用され、一般に、抗体重鎖および／または軽鎖の一部を指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれおぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」（またはそれぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」）と呼ぶことができる。これらのドメインは一般に、抗体の最も多様な部分（同じタイプの他の抗体と比較して）であり得、抗原結合部位を含んでなり得る。本願において、用語「可変」とは、一般に、可変ドメインの特定のセグメントが抗体間の配列で実質的に異なり得ることを意味する。可変ドメインは抗原結合に介在し、特定の抗体の、その特定の抗原に対する特異性を決定する。しかしながら、可変性は、可変ドメインに均一に分布していなくてもよい。可変性は一般に、軽鎖および重鎖可変ドメイン中の超可変領域（ＣＤＲまたはＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより保存性の高い部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ぶことができる。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ４つのＦＲ領域を含んでなり、これらは主としてβシート構成をとり、３つのＣＤＲにより接続されてループ接合を形成し、場合によってはβシート構造の一部を形成する。各鎖のＣＤＲはＦＲ領域によって近接して保持され、もう一方の鎖のＣＤＲも一緒になって抗体の抗原結合部位の形成を促進することができる。
本願において、用語「抗体」は一般に、免疫グロブリンまたはそのフラグメントもしくは誘導体を指し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生産されたものであれｉｎ ｖｉｖｏで生産されたものであれ、抗原結合部位を含むいずれのポリペプチドも包含する。この用語には、限定するものではないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異的抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、およびグラフト抗体を含み得る。「無傷抗体」のように「無傷」という用語で修飾されない限り、本発明の目的では、「抗体」という用語にはまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ＶＨＨ、ｄＡｂ、および抗原結合機能を保有する（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃに特異的に結合する）その他の抗体フラグメントなどの抗体フラグメントも含み得る。一般に、このようなフラグメントは、抗原結合ドメインを含んでなり得る。基本的な４鎖抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖と２本の同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体糖タンパク質であり得る。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる別のポリペプチドと一緒になった５つの基本的ヘテロ四量体単位からなり得、１０個の抗原結合部位を含むが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と一緒になって重合されて多価の組合せを形成し得る２～５つの基本的４鎖単位を含んでなり得る。ＩｇＧについては、４鎖単位は一般に約１５０，０００ダルトンであり得る。各Ｌ鎖は、１つの共有結合性のジスルフィド結合を介してＨ鎖に連結されていてよく、２本のＨ鎖はＨ鎖アイソタイプに応じて１以上のジスルフィド結合により互いに連結されていてもよい。Ｈ鎖およびＬ鎖のそれぞれはまた、規則的な間隔をおいた鎖内ジスルフィド架橋も有し得る。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に重鎖可変領域（ＶＨ）、続いてアルファ（α）鎖およびガンマ（γ）鎖のそれぞれに関して３つの定常ドメイン（ＣＨ）、さらにミュー（μ）アイソタイプおよびイプシロン（ε）アイソタイプに関して４つのＣＨドメインを有し得る。各Ｌ鎖は、Ｎ末端の軽鎖可変領域（ＶＬ）、およびそのもう一方の末端に定常ドメインを有し得る。ＶＬはＶＨに相当する場合があり、軽鎖定常領域（ＣＬ）は、重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）に相当する場合がある。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの界面を形成すると考えることができる。ＶＨおよびＶＬは、相互に対となり単一の抗原結合部位を形成することができる。いずれの脊椎動物種由来のＬ鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてκおよびλと呼ばれる２つの異なるタイプの１つ分類することができる。免疫グロブリンは、重鎖定常領域（ＣＨ）の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて異なるクラスまたはアイソタイプに分類することができる。免疫グロブリンには現在５クラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４、ならびにＩｇＭ、それぞれアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）と呼ばれる重鎖を有する。
本願において、用語「抗原結合フラグメント」は一般に、抗原（例えばＳｉｇｌｅｃ）と特異的に結合する能力を有する１以上のフラグメントを指す。本願において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨおよび／またはｄＡｂを含み得る。
本願において、用語「Ｆａｂ」は一般に、抗体の抗原結合フラグメントを指す。上記のように、無傷抗体をパパインで消化することができる。パパインによる抗体の消化は、２つの同一の抗原結合フラグメント、すなわち、「Ｆａｂ」フラグメントと残りの「Ｆｃ」フラグメント（すなわち、Ｆｃ領域）を生じる。Ｆａｂフラグメントは、重鎖の可変領域を有する１本の完全なＬ鎖とＨ鎖（ＶＨ）の第１定常領域（ＣＨ１）からなり得る。
本願において、用語「Ｆ（ａｂ）２」は一般に、抗体の抗原結合フラグメントを指す。例えば、Ｆ（ａｂ）２は、２つのＦａｂフラグメントにより連結されていてよい。
本願において、用語「Ｆａｂ」は一般に、ヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合フラグメントを指し、Ｆａｂフラグメントよりもわずかの大きい。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、全軽鎖、全重鎖可変領域、および重鎖の第１および第２定常領域の全部または一部を含んでなり得る。例えば、Ｆａｂ’フラグメントはまた、重鎖の２２０～３３０のアミノ酸残基の一部または全部も含み得る。
本願において、用語「Ｆ（ａｂ’）２」は一般に、ペプシンによる無傷抗体の消化によって生成される抗体フラグメントを指す。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ジスルフィド結合により相互に保持された２つのＦａｂフラグメントおよびヒンジ領域の一部を含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは二価抗原結合活性を有し、抗原を架橋することができる。
本願において、用語「Ｆｖフラグメント」は一般に、重鎖可変領域および軽鎖可変領域の全部または一部を含み、重鎖定常領域および軽鎖定常領域を欠くヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合フラグメントを指す。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、例えばＣＤＲを含み得る。例えば、Ｆｖフラグメントは、重鎖および軽鎖の約１１０のアミノ酸のアミノ末端可変領域の全部または一部を含む。
本願において、用語「ｓｃＦｖ」一般に、軽鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントおよび重鎖の可変領域を含む少なくとも１つの抗体フラグメントを含んでなり、軽鎖および重鎖の可変領域は隣接し（例えば、ショートフレキシブルポリペプチドリンカーなどの合成リンカーを介する）、一本鎖ポリペプチドとして発現させることができ、ｓｃＦｖが、それが由来する無傷抗体の特異性を保持する融合タンパク質を指す。特に断りのない限り、本願で使用する場合、ｓｃＦｖは、任意の順序で（例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に対して）記載されるＶＬおよびＶＨ可変領域を有してよく、ｓｃＦｖはＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでなってもよいし、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでなってもよい。
本願において、用語「ｄｉ－ｓｃＦｖ」は一般に二価のｓｃＦｖを指し、これは例えば、２つのｓｃＦｖ分子が短いリンカーを介してコンジュゲートされている分子である。
本願において、用語「ｄＡｂ」は一般に、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン組成物からなる抗原結合フラグメントを指す。例えば、Ward et al. (Nature,1989Oct 12; 341(6242): 544-6), see Holt et al., Trends Biotechnol., 2003,21(11):484-490参照。
本願において、用語「ＶＨＨ」は一般に、重鎖抗体の可変抗原結合ドメインを含んでなる抗体を指す（Vanlandschoot P. et al., 2011, Antiviral Research 92, 389-407参照）。ＶＨＨはまた、ナノボディ（Ｎｂ）と呼ぶこともできる。
本願において、用語「モノクローナル抗体」は一般に、単一分子からなる抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は一般に、単一の抗原部位に特異性が高い。さらに、従来のポリクローナル抗体調製物（一般に異なる決定基に対して向けられた異なる抗体を有する）とは異なり、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して向けることができる。それらの特異性に加え、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンが混入せずにハイブリドーマ培養により合成可能であるという利点を有する。修飾語の「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団から得られるような抗体の特徴を示すことができ、いずれかの特定の方法による抗体の製造を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本願で使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細胞で作製することができるか、または組換えＤＮＡ法によって作製することができる。
本願において、用語「キメラ抗体」は一般に、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体を指す。一般に、可変領域は、齧歯類などの実験動物の抗体（「親抗体」）に由来し、定常領域はヒト抗体に由来し、その結果、生じたキメラ抗体によるヒト個体において有害な免疫応答を惹起する可能性が親（例えば、マウス由来の）抗体に比べて低減される。
本願において、用語「ヒト化抗体」は一般に、非ヒト抗体（例えば、マウス抗体）のＣＤＲ外のアミノ酸の一部または全部がヒト免疫グロブリンに由来する対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。ＣＤＲでは、特定の抗原に結合する抗体の能力をなお保持する限り、アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾も許容可能である。ヒト化抗体は場合により、ヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含んでなり得る。「ヒト化抗体」は、元の抗体と同じ抗原特異性を保有し得る。非ヒト抗体（例えば、マウス抗体）の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン配列由来のキメラ抗体を最低限含んでなり得る。場合によっては、ヒト免疫グロブリン（レセプター抗体）のＣＤＲの残基を、所望の特性、親和性、および／または能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（例えば、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類）由来のＣＤＲの残基で置換することができる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦＲ領域の残基を対応する非ヒト残基で置換することができる。さらに、ヒト化抗体は、レセプター抗体またはドナー抗体に存在しないアミノ酸修飾を含んでなってもよい。これらの修飾は、結合親和性などの抗体の特性をさらに改善するために行うことができる。
本願において、用語「完全ヒト抗体」は一般に、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含んでなる抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞に由来するハイブリドーマで生産される場合にはマウス糖鎖を含有し得る。同様に、「マウス抗体」、「マウス抗体」、または「ラット抗体」は、それぞれマウスまたはラット免疫グロブリン配列のみを含んでなる抗体を指す。完全ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン生殖細胞系配列を有するヒトトランスジェニック動物で、またはファージディスプレイもしくはその他の分子生物学的方法により作製することができる。抗体作製に使用可能な例示的技術は当技術分野で公知である。
本願において、用語「抗原結合タンパク質」は一般に、抗原に結合する部分、および場合により、抗原に結合する部分が抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進する立体配座をとることを可能にする足場または骨格部分を含んでなるタンパク質を指す。抗原結合タンパク質の例としては、限定するものではないが、抗体、所望の抗原結合活性を示す限り、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、および／またはｄＡｂ）、免疫複合体、抗体フラグメント、抗体誘導体、抗体類似体、または融合タンパク質などが含まれる。本願の「単離された抗原結合タンパク質」は、抗原に結合する部分、場合により、抗原に結合する部分が抗原結合部分の抗原への結合を促進する立体配座をとることを可能にする足場または骨格部分を含んでなり得る。
本願において、用語「ポリペプチド分子」および「ポリペプチド」、および「ペプチド」は互換的に使用され、一般にアミノ酸残基のポリマーを指す。用語「融合タンパク質」は一般に、相互に共有結合的に連結された少なくとも２つの部分を有するポリペプチドを指す。各部分は異なる特性を有するポリペプチドであり得る。この特性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性またはｉｎ ｖｉｖｏ活性などの生物学的特性であり得る。特性はまた、標的分子への結合、反応の触媒などの単純な化学的または物理的特性であってもよい。これらの２つの部分は単一のペプチド結合またはペプチドリンカーによって直接連結することができる。
本願において、用語「核酸分子」は一般に、任意の長さのヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、もしくはリボヌクレオチドの単離された形態、またはそれらの天然環境から単離されたもしくは合成された類似体を指す。
本願において、用語「ベクター」は一般に、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入し、発現させることができる核酸送達ビヒクルを指す。ベクターにより運ばれた遺伝物質要素での宿主細胞内発現は、宿主細胞へのベクターの形質転換、形質導入またはトランスフェクションにより達成することができる。ベクターは、発現を制御するための複数の要素を含み得る。あるいは、ベクターは、複製起点を含んでなり得る。ベクターはまた、ベクターの細胞への進入を促進する成分も含むことができる。
本願において、用語「細胞」は一般に、本願の核酸分子または本願のベクターを含む、対象由来のプラスミドまたはベクターのレシピエントであり得るまたはあった単細胞、細胞株、または細胞培養を指す。細胞は単細胞の後代を含み得る。後代は、天然、偶発的、または意図的な突然変異のために、（形態学においてまたは全ＤＮＡ相補物に対するゲノムにおいて）元の親細胞と必ずしも同一でなくてもよい。この細胞には、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて本願のベクターでトランスフェクトされた細胞を含み得る。
本願において、用語「免疫複合体」は一般に、他の試薬（例えば、化学療法薬、放射性元素、細胞増殖抑制剤、および細胞傷害性薬剤）と抗体またはその抗原結合フラグメントのコンジュゲーション（例えば、架橋分子の共有結合を介する）により形成されたコンジュゲートを指し、このコンジュゲートは、抗体またはその抗原結合フラグメントの、標的細胞上の抗原への特異的結合を介して標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に他の試薬を送達することができる。
本願において、用語「医薬組成物」は一般に、疾患または病態の予防／治療のための組成物を指す。医薬組成物は、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願の核酸分子、本願のベクター、および／または本願の細胞、および所望により、薬学上許容可能なアジュバントを含んでなり得る。さらに、医薬組成物はまた、１以上の（薬学上有効な）ビヒクルなどの好適な調製物も含んでなり得る。これらの組成物の許容可能な成分は、使用用量および濃度でレシピエントに無毒であり得る。本願の医薬組成物としては、限定するものではないが、液体組成物、冷凍組成物および凍結乾燥組成物が含まれる。
本願において、用語「薬学上許容可能なビヒクル」は一般に、使用用量および濃度で曝される細胞または哺乳動物に無毒である薬学上許容可能な担体、賦形剤、または安定剤を指す。生理学的に許容可能な担体は、好適な物質を含んでなり得る。薬学上許容可能な担体は一般に、遺伝子工学において核酸を挿入するために使用されるベクターと同じクラスのものではない。
本願において、用語「固形腫瘍」は一般に、臨床検査（例えば、Ｘ線照射、ＣＴスキャン、Ｂ超音波または触診など）によって検出可能な触知可能な腫瘍を指す。腫瘍は、異常な細胞増殖によって形成される新生物または固形病変を含み得る。
本願において、用語「結腸癌」は一般に、消化管の結腸部位に発生する、またはそこに起源する腫瘍を指す。例えば、結腸癌は、直腸とS状結腸の接合部に発生する、またはそこに起源し得る。例えば、結腸癌は、消化管の結腸部位に発生する、またはそこに起源する癌であり得る。
本願において、用語「直接連結」は、用語「間接連結」と対比させることができ、一般に直接的な結合を意味する。例えば、直接連結は、物質同士がスペーサーを用いずに直接連結されている状態であり得る。スペーサーはリンカーであり得る。例えば、リンカーは、ペプチドリンカーであり得る。用語「間接連結」は一般に、物質同士が調節連結されていない状態を指す。例えば、間接連結は、物質同士がスペーサーを介して連結されている状態であり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質では、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端とＬＣＤＲ１のＮ末端を直接または間接的に連結することができる。
本願において、用語「特異的結合」または「特異的」は一般に、標的と抗体との間の結合のような、生体分子を含む分子の不均一な集団の存在下で標的の存在を決定することができる、測定可能で再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、かつ／またはより長期間、その標的に結合する抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、異なる種のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、排他的結合である必要はない。
本願において、用語「対象」は一般に、ヒト、または限定するものではないが、ネコ、イヌ、ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウサギ、マウス、ラット、またはサルを含む非ヒト動物を指す。
本願において、用語「腫瘍」は一般に、いずれの新しい病的な組織過形成も指す。腫瘍細胞は局所的に、または血流およびリンパ系を介して、身体の他の部分に拡散する可能性がある。本願において、腫瘍は良性腫瘍および悪性腫瘍を含み得る。本願において、腫瘍は、固形腫瘍および／または血液腫瘍を含み得る。本願において、腫瘍は癌(caner)を含み得る。本願において、腫瘍の例としては、限定するものではないが、結腸癌が挙げられる。
本願において、タンパク質、ポリペプチドおよび／またはアミノ酸配列という場合には、少なくとも以下の範囲：前記タンパク質またはポリペプチドと同じまたは類似の機能を有する変異体またはホモログを包含するものと理解されるべきである。
本願において、変異体は、例えば、そのタンパク質および／またはポリペプチド（例えば、Ｓｉｇｌｅｃと特異的に結合する抗体またはそのフラグメント）のアミノ酸配列において１以上のアミノ酸は置換、欠失または付加されているタンパク質またはポリペプチドであり得る。例えば、機能的変異体は、少なくとも１つ、例えば、１～３０、１～２０または１～１０、さらには例えば、１、２、３、４または５つのアミノ酸置換、欠失および／または挿入により変更されているタンパク質またはポリペプチドを含んでなり得る。機能的変異体は、変更（例えば、置換、欠失、または付加）前のタンパク質またはポリペプチドの生物学的特性を実質的に保有することができる。例えば、機能的変異体は、変更前のタンパク質またはポリペプチドの生物活性（例えば、抗原結合能）の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％を保有することができる。例えば、置換は保存的置換であり得る。例えば、変異体はまた、細胞内で起こるプロセシングおよび／または修飾から生じるタンパク質の機能的に活性なフラグメントを含むポリペプチドに限定されない、その機能的に活性なフラグメントを含むポリペプチドであり得る。
本願において、ホモログは、タンパク質および／またはポリペプチド（例えば、Ｓｉｇｌｅｃと特異的に結合する抗体またはそのフラグメント）のアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上）の配列相同性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。
本願において、相同性は一般に、２つ以上の配列間の類似性、類似性または関連を指す。「配列相同性のパーセンテージ」は、アラインされる２つの配列を比較ウインドウ上で比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔ）が２つの配列に出現する位置の数を決定してマッチした位置の数を求め、マッチした位置の数を比較ウインドウ内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で割り、その結果に１００を乗じて配列相同性のパーセンテージを得る。配列相同性のパーセンテージを決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアなどの公開されているコンピューターソフトウエアを使用して、当技術分野で公知の種々の方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の全長にわたって、または標的配列の領域にわたって、最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アライン配列のための適切なパラメーターを決定することができる。相同性は、以下の方法：ＦＡＳＴＡおよびＢＬＡＳＴによって決定することもできる。ＦＡＳＴＡアルゴリズムは、W. R. Pearson and D. J. Lipman “Improved Tools for Biological Sequence Comparison”, Proc. Natl. Acad. Sci., 85: 2444-2448, 1988;およびD. J. Lipman and W. R. Pearson “Rapid and Sensitive Protein Similarity Searches”, Science, 227:1435-1441,1989に記載されている。ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、S. Altschul, W. Gish, W. Miller, E. W. Myers and D. Lipman, A Basic Local Alignment Search Tool, J. Mol. Biol. 215: 403-410, 1990に記載されている。
本願において、用語「含むもしくは含んでなる」またはこの用語の他の形態は、含んでなる、含む、含有する、または包含するの意味を指す。場合によっては、この用語は「である」および「からなる」の意味も表す。
本願において、用語「約」は一般に、特定の値の０．５％～１０％上または下の範囲、例えば、特定の値の０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％、３．５％、４％、４．５％、５％、５．５％、６％、６．５％、７％、７．５％、８％、８．５％、９％、９．５％、または１０％上または下の範囲を指す。
発明の詳細な説明
１つの側面において、本願は、単離された抗原結合タンパク質を提供する。
１つの側面において、本願は、単離された抗原結合タンパク質を提供する。
相補性決定領域としても知られる抗体のＣＤＲは、可変領域の一部である。この領域のアミノ酸残基は、抗原または抗原エピトープと接している可能性がある。抗体のＣＤＲは、当技術分野で公知の様々なコードシステムによって特定することができる。例えば、www.bioinf.org.uk/abs/index.html#kabatnum参照。当業者ならば、抗体の配列および構造に基づき、異なるコードシステムを用いてＣＤＲを決定することができる。ＣＤＲは、コードシステムが違えば異なる場合がある。本願において、ＣＤＲは、任意のＣＤＲ分割様式に従って分割することにより得られるＣＤＲ配列をカバーし；１以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加、例えば、１～３０、１～２０または１～１０、さらには例えば１、２、３、４、５、６、７、８または９個のアミノ酸置換、欠失および／または挿入を有するＣＤＲのアミノ酸配列を含んでなるその変異体も企図され；ＣＤＲのアミノ酸配列と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上）の配列相同性を有するアミノ酸配列であり得るそのホモログも企図される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームによって決定される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームによって決定される。
１つの側面において、本願は、ＡＩＧＳＳＷＹＳＤＡＦＤＬ（配列番号１）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３を含んでなる単離された抗原結合タンパク質を提供する。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ２をさらに含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ２は、Ｘ１ＧＧＧＸ２Ｘ３に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、ＨＣＤＲ２は、Ｘ１ＧＧＧＸ２Ｘ３（配列番号３３）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ１はＳ、Ｔ、ＷまたはＹであり得、Ｘ２はＥ、ＧまたはＶであり得、Ｘ３はＳまたはＹであり得る。場合によっては、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＨＣＤＲ２は、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置の少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ２は、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、ＨＣＤＲ２は、ＳＧＧＧＧＳ（配列番号２）、ＴＧＧＧＥＳ（配列番号３）、ＹＧＧＧＧＳ（配列番号４）、ＷＧＧＧＧＳ（配列番号５）、またはＳＧＧＧＶＹ（配列番号６）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＨＣＤＲ２を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ２を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ１をさらに含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ１は、ＧＦＴＸ４ＳＳＹに示されるような配列を含んでなり得、配列中、Ｘ４は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、ＨＣＤＲ１は、ＧＦＴＸ４ＳＳＹ（配列番号３４）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ４は、ＦまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＨＣＤＲ１は、少なくともＸ４におけるアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ１は、配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、ＨＣＤＲ１は、ＧＦＴＦＳＳＹ（配列番号７）またはＧＦＴＳＳＳＹ（配列番号８）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＨＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ３は配列番号１に示されるような配列を含んでなり得、ＨＣＤＲ２はＸ１ＧＧＧＸ２Ｘ３に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができ、ＨＣＤＲ１はＧＦＴＸ４ＳＳＹに示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ４は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０またはＡｂ９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０またはＡｂ９の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ２の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ３、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ３、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ６の．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ６の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ７の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＱＱＳＹＳＩＰＹＴ（配列番号９）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得るＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ２をさらに含んでなり得る。例えば、ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号３５）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ５はＦまたはＳであり得、Ｘ６はＥ、ＩまたはＬであり得、Ｘ７はＨまたはＱであり得、Ｘ８はＲまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＬＣＤＲ２は、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置の少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、ＬＣＤＲ２は、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＳＬＱＳ（配列番号１０）、ＶＡＳＦＥＨＲ（配列番号１１）、またはＶＡＳＹＩＨＳ（配列番号１２）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＬＣＤＲ２を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ２を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ１をさらに含んでなり得る。例えば、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＳＸ９ＷＬＡに示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ９は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＳＸ９ＷＬＡ（配列番号３６）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ９はＤまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＬＣＤＲ１は、少なくともＸ９におけるアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、ＬＣＤＲ１は、配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＳＳＷＬＡ（配列番号１３）またはＲＡＳＱＤＩＳＤＷＬＡ（配列番号１４）に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５のＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるような配列を含んでなり得、ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができ、ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＳＸ９ＷＬＡに示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ９は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、またはＡｂ７のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、またはＡｂ７の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ９のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ９の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１３の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１５のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１５の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＨＣＤＲ３ は、配列番号１に示されるような配列を含んでなり得；ＨＣＤＲ２は、Ｘ１ＧＧＧＸ２Ｘ３に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができ；ＨＣＤＲ１は、ＧＦＴＸ４ＳＳＹに示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ４は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができ；ＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるような配列を含んでなり得；ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８はそれぞれ独立に天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができ；ＬＣＤＲ１は、ＲＡＳＱＤＩＳＸ９ＷＬＡに示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ９は、天然アミノ酸などの任意のアミノ酸から選択することができる。例えば、ＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるような配列を含んでなり得；ＨＣＤＲ２は、Ｘ１ＧＧＧＸ２Ｘ３（配列番号３３）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ１はＳ、Ｔ、ＷまたはＹであり得、Ｘ２はＥ、ＧまたはＶであり得、Ｘ３はＳまたはＹであり得；ＨＣＤＲ１は、ＧＦＴＸ４ＳＳＹ（配列番号３４）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ４はＦまたはＳであり得；ＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるような配列を含んでなり得；ＬＣＤＲ２は、ＶＡＳＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８（配列番号３５）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ５はＦ、Ｓ、またはＹであり得、Ｘ６はＥ、Ｉ、またはＬであり得、Ｘ７はＨまたはＱであり得、Ｘ８はＲまたはＳであり得；ＬＣＤＲ３は、ＲＡＳＱＤＩＳＸ９ＷＬＡ（配列番号３６）に示されるような配列を含んでなり得、式中、Ｘ９はＤまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＨＣＤＲ２は、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置の少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得；配列番号７に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＨＣＤＲ１は、少なくともＸ４におけるアミノ酸置換を含んでなり得；配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＬＣＤＲ２は、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、およびＸ８におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置の少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得；配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＬＣＤＲ１は、少なくともＸ９におけるアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ２のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ２の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ３のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ３の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ５のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ６のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ６の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ７のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ７の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ９のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ９の重鎖可変領域ＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１３のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１３の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ３は、配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ２は、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＨＣＤＲ１は、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ３は、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ２は、配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得；単離された抗原結合タンパク質のＬＣＤＲ１は、配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１５のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１５の重鎖可変領域のＨＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ１、ならびに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ３、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ１を含んでなり得る。例えば、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａルールに従って決定される。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１を含んでなり得、ＨＣＤＲ１のＣ末端は、ＨＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結することができ、Ｈ－ＦＲ１は、配列番号１５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ２を含んでなり、Ｈ－ＦＲ２は、ＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に位置し、Ｈ－ＦＲ２は、配列番号１６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ３を含んでなり得、Ｈ－ＦＲ３は、ＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に位置し、Ｈ－ＦＲ３は、配列番号１７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ４を含んでなり得、Ｈ－ＦＲ４のＮ末端は、ＨＣＤＲ３のＣ末端に連結することができ、Ｈ－ＦＲ４は、配列番号１８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、抗原結合タンパク質は、Ｈ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、およびＨ－ＦＲ４を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質のＨ－ＦＲ１、Ｈ－ＦＲ２、Ｈ－ＦＲ３、およびＨ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、および配列番号１８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１を含んでなり得、Ｌ－ＦＲ１のＣ末端は、ＬＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結することができ、Ｌ－ＦＲ１は、配列番号１９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ２を含んでなり得、Ｌ－ＦＲ２は、ＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に位置し、Ｌ－ＦＲ２は、配列番号２０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ３を含んでなり、Ｌ－ＦＲ３は、ＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に位置し、Ｌ－ＦＲ３は、配列番号２１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ４を含んでなり得、Ｌ－ＦＲ４のＮ末端は、ＬＣＤＲ３のＣ末端に直接または間接的に連結することができ、Ｌ－ＦＲ４は、配列番号２２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｌ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、およびＬ－ＦＲ４を含んでなり得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質のＬ－ＦＲ１、Ｌ－ＦＲ２、Ｌ－ＦＲ３、およびＬ－ＦＲ４は、それぞれ配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、および配列番号２２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＶＨを含んでなり得、これは配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、
に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり得、Ｘ２はＥ、Ｇ、またはＶであり得、Ｘ３はＳまたはＹであり得、Ｘ４はＦまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＶＨは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、式中、Ｘ１は、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹであり得、Ｘ２はＥ、Ｇ、またはＶであり得、Ｘ３はＳまたはＹであり得、Ｘ４はＦまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＶＨは、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、抗原結合タンパク質は、ＶＨを含んでなり得、これは配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の重鎖可変領域を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＶＬを含んでなり得、これは配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＬは、
に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、式中、Ｘ５はＦ、Ｓ、またはＹであり得、Ｘ６はＥ、Ｉ、またはＬであり得、Ｘ７はＨまたはＱであり得、Ｘ８はＲまたはＳであり得、Ｘ９はＤまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＶＨは、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、およびＸ９におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、式中、Ｘ５はＦ、Ｓ、またはＹであり得、Ｘ６はＥ、Ｉ、またはＬであり得、Ｘ７はＨまたはＱであり得、Ｘ８はＲまたはＳであり得、Ｘ９はＤまたはＳであり得る。場合によっては、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列と比較して、ＶＨは、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８、およびＸ９におけるアミノ酸置換からなる群から選択される位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、抗原結合タンパク質は、ＶＬを含んでなり得、これは配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０、Ａｂ２、Ａｂ３、Ａｂ５、Ａｂ６、Ａｂ７、Ａｂ９、Ａｂ１３、またはＡｂ１５の軽鎖可変領域を含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、ＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ０のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ２のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ３のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ５のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ６のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ７のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ９のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１３のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＡｂ１５のＶＨおよびＶＬを含んでなり得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＶＨのいずれかの少なくとも１つのＣＤＲを含んでなり得る。本願において、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＶＬのいずれかの少なくとも１つのＣＤＲを含んでなり得る。ＣＤＲは、ＣＣＧ、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａの包括的考慮などの任意の区分スキームに従って決定することができる。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得、ＶＨは、配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、抗原結合タンパク質は、本願のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含んでなり得、ＶＨは、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、本願のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、抗原結合タンパク質は、本願のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合能を有し得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み得る。抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよび／またはＩｇＭ重鎖定常領域に由来し得る。抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域に由来し得る。いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み得、抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／またはＩｇＧ４重鎖定常領域に由来し得る。いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、抗体重鎖定常領域を含み得、抗体重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域に由来し得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、抗体軽鎖定常領域を含み得る。抗体軽鎖定常領域は、ヒトＩｇκ定常領域に由来し得る。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントを含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、および／またはｄＡｂを含み得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および／または完全ヒト抗体を含み得る。
例えば、キメラ抗体のＶＨは、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、キメラ抗体のＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のＶＨは、配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ヒト化抗体のＶＬは、配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。例えば、ＶＨは、配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得、ＶＬは、配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、軽鎖定常領域を含んでなる。例えば、軽鎖定常領域は、ヒト抗体に由来する軽鎖定常領域であり得；例えば、軽鎖定常領域は、配列番号４０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖定常領域を含んでなる。例えば、重鎖定常領域は、ヒト抗体に由来する重鎖定常領域であり得；例えば、重鎖定常領域は、配列番号３９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなり得る。
さらに、本願の単離された抗原結合タンパク質が１以上の保存的配列修飾を有する重鎖および／または軽鎖配列を含んでなり得ることに留意されたい。「保存的配列修飾」は、抗体の結合特性に有意に影響を及ぼさない、または変更しないアミノ酸修飾を意味する。このような保存的修飾には、アミノ酸の置換、付加、および欠失が含まれる。修飾は、点突然変異およびＰＣＲ媒介突然変異などの当技術分野で公知の標準技術によって本願の単離された抗原結合タンパク質に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されているものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基の群は当技術分野で公知である。これらのアミノ酸残基の群としては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質のＣＤＲにおける１以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖群の他のアミノ酸残基で置換することができる。当業者は、いくつかの保存的配列修飾は抗原結合を損なわないことを認識するであろう。例えば、for example, Brummell et al., (1993) Biochem 32:1180-8; de Wildt et al., (1997) Prot. Eng. 10:835-41; Komissarov et al., (1997) J. Biol. Chem. 272:26864-26870; Hall et al., (1992) J. Immunol. 149:1605-12; Kelley and O'Connell (1993) Biochem.32:6862-35; Adib-Conquy et al., (1998) Int. Immunol.10:341-6およびBeers et al., (2000) Clin. Can. Res. 6:2835-43参照。
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５抗原結合タンパク質は、当技術分野で公知の様々なアッセイによって同定、スクリーニング、または特性決定を行うことができる。
例えば、本願の抗原結合タンパク質または融合タンパク質は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、イムノブロット（例えば、ウエスタンブロット）、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）、免疫組織化学、および免疫蛍光などの既知の方法により、抗原結合活性に関して試験することができる。
本願において、単離された抗原結合タンパク質は、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメント、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントに特異的に結合することができる。
いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントは、全長Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメント、またはＳｉｇｌｅｃ－１５機能活性を発揮するフラグメントであり得、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５機能活性は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５の下流経路を活性化する能力であり得る。いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントは、単離されたＳｉｇｌｅｃ－１５もしくはその機能的に活性なフラグメント、または種々の形態のＳｉｇｌｅｃ－１５もしくはその機能的に活性なフラグメントの混合物であり得る。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５もしくはその機能的に活性なフラグメント、マウスＳｉｇｌｅｃ－１５もしくはその機能的に活性なフラグメントまたはサルＳｉｇｌｅｃ－１５もしくはその機能的に活性なフラグメントであり得；例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントは、細胞の表面に発現されるＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントであり得；例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントは、固相培地に結合されたＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントであり得る。
いくつかの実施形態では、単離された抗原結合タンパク質は、分子相互作用アナライザーによって親和性を測定することができる。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、１．５６Ｅ－１０Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質に結合することができる。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、１．５６Ｅ－１０Ｍ以下、１．５Ｅ－１０Ｍ以下、１．３Ｅ－１０Ｍ以下、１．１Ｅ－１０Ｍ以下、１．０Ｅ－１０Ｍ以下、９．０Ｅ－１１Ｍ以下、８．０Ｅ－１１Ｍ以下、７．０Ｅ－１１Ｍ以下、６．０Ｅ－１１Ｍ以下、５．０Ｅ－１１Ｍ以下、４．０Ｅ－１１Ｍ以下、３．０Ｅ－１１Ｍ以下、２．０Ｅ－１１Ｍ以下、１．０Ｅ－１１Ｍ以下、９．０Ｅ－１２Ｍ以下、８．０Ｅ－１２Ｍ以下、７．０Ｅ－１２Ｍ以下、６．０Ｅ－１２Ｍ以下、または５．０Ｅ－１２Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質に結合することができる。
いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質は、より高い量で発現させることができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、５０ｍｇ／Ｌ以上の量で発現させることができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、５０ｍｇ／Ｌ以上、５３ｍｇ／Ｌ以上、５５ｍｇ／Ｌ以上、６０ｍｇ／Ｌ以上、７０ｍｇ／Ｌ以上、８０ｍｇ／Ｌ以上、９０ｍｇ／Ｌ以上、１００ｍｇ／Ｌ以上、１３０ｍｇ／Ｌ以上、１４０ｍｇ／Ｌ以上、１５０ｍｇ／Ｌ以上、１６０ｍｇ／Ｌ以上、２００ｍｇ／Ｌ以上、２１０ｍｇ／Ｌ以上、２２０ｍｇ／Ｌ以上、または２３０ｍｇ／Ｌ以上の量で発現させることができる。
いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＦＡＣＳ法により、細胞表面Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質に対する結合活性を測定することができる。例えば、それは細胞表面ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質、細胞表面サルＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質および／または細胞表面マウスＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質であり得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、約３．２５ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合することができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、約３．２５ｎＭ以下、約３．０ｎＭ以下、約２．０ｎＭ以下、約１．９ｎＭ以下、約１．８ｎＭ以下、約１．７ｎＭ以下、約１．６ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１．０ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合することができる。
いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫細胞の増殖能に影響を与え得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫系の機能に影響を与えることができ；例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫細胞亜集団の割合および／または免疫細胞の数に影響を与え得る。例えば、免疫細胞は、リンパ球、末梢血リンパ球、末梢血単核細胞、ＰＢＭＣ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および／またはＮＫ細胞を含み得る。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫細胞亜集団の割合を高めることができ；例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を高めることができ；例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を高めることができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、末梢血リンパ球におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を高めることができ；例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、末梢血リンパ球におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を高めることができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の数をブランク対照のみを投与した群と比較して約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。例えば、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の数をブランク対照のみを投与した群と比較して約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。
いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫系機能に対するＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質の抑制効果を逆転させることができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質をｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏで投与する、および／またはＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質をｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏで過剰発現させると、Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質は免疫系の機能を抑制することができ、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質は、免疫細胞の亜集団の割合に影響を与えることができ、免疫細胞の増殖を抑制することができ、および／または免疫細胞の数を低減することができる。例えば、免疫系の機能がＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質によって抑制される場合、本願の単離された抗原結合タンパク質は、免疫系の機能を向上させる、逆転させる、回復させる、および／または活性化することができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質が免疫系の機能および／または免疫細胞の数を抑制した後、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、ブランク対照のみを投与した群と比較して約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－１５タンパク質が免疫系の機能および／または免疫細胞の数を抑制した後、本願の単離された抗原結合タンパク質は、ＣＤ４＋Ｔ細胞の数を、ブランク対照のみを投与した群と比較して約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。
いくつかの実施形態では、本開示の単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍成長を抑制することができる。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍、例えば結腸癌の成長を約２３％以上の腫瘍体積抑制率で抑制する能力を有する。例えば、単離された抗原結合タンパク質は、腫瘍成長を、ブランク対照のみを投与した群と比較して約２０％以上、約２１％以上、約２２％以上、約２３％以上、約２４％以上、約２５％以上、約２６％以上、約２７％以上、約２８％以上、約２９％以上、約３０％以上、約４０％以上、または約５０％以上の腫瘍体積抑制率で抑制する能力を有する。
いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質は、サイトカイン分泌の能力に影響を与えることができる。例えば、本願のサイトカインの分泌は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ分泌を含み得る。例えば、本願のサイトカインの分泌は、リポ多糖により誘導されるサイトカイン分泌を含み得る。例えば、リポ多糖により誘導されるサイトカイン分泌は、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏで分泌されるサイトカインの量の増加、培養液のサイトカイン濃度の上昇、および／またはｉｎ ｖｉｖｏおよび／もしくはｉｎ ｖｉｔｒｏでリポ多糖を投与した後の末梢血のサイトカイン濃度の上昇を指し得る。例えば、対象に本願の抗原結合タンパク質、次いでリポ多糖を投与すると、リポ多糖単独またはブランクに次ぐリポ多糖の投与と比較して、対象のサイトカイン量の増加が起こる。例えば、リポ多糖単独またはブランに次ぐリポ多糖の投与と比較して、本願の抗原結合タンパク質は、サイトカインの分泌を、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約９０％を超えて、約１００％を超えて、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、約４００％以上増加させることができる。例えば、本願のサイトカインは、炎症性応答に関連する因子または炎症誘発性因子ＴＮＦ－αおよび／もしくはＩＬ－６などの炎症性因子を含み得る。例えば、リポ多糖単独またはブランに次ぐリポ多糖の投与と比較して、本願の抗原結合タンパク質は、ＴＮＦ－αの分泌を、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約９０％を超えて、約１００％を超えて、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、約４００％以上増加させることができる。例えば、リポ多糖単独またはブランに次ぐリポ多糖の投与と比較して、本願の抗原結合タンパク質は、ＩＬ－６の分泌を、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約９０％を超えて、約１００％を超えて、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、約４００％以上増加させることができる。
１つの側面において、本願は、ポリペプチド分子、核酸分子、ベクター、免疫複合体、細胞、および医薬組成物を提供する。
別の側面において、本願は、本願の単離された抗原結合タンパク質を含んでなり得るポリペプチド分子を提供する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド分子は、融合タンパク質を含んでなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド分子は、融合タンパク質であり得る。いくつかの実施形態では、本願のポリペプチド分子は、アミノ酸以外の構造を含んでなり得、例えば、本願のポリペプチド分子は、核酸、多糖、脂質、小分子、および以上の任意の組合せを含んでなり得る。
別の側面において、本願は、本願の単離された抗原結合タンパク質および／または本願のポリペプチドをコードし得る単離された核酸分子を提供する。例えば、この核酸分子は、次の方法：（ｉ）ｉｎ ｖｉｔｒｏ増幅、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、（ｉｉ）クローン組換え、（ｉｉｉ）精製、例えば、消化およびゲル電気泳動分画、または（ｉｖ）合成、例えば、化学合成によって生産または合成され得る。
別の側面において、本願は、本願の核酸分子を含んでなり得るベクターを提供する。さらに、ベクターはまた、適当な宿主細胞中、適当な条件下でベクターの選択を可能とするマーカー遺伝子などの他の遺伝子も含んでなり得る。さらに、ベクターはまた、適当な宿主中でコード領域の適切な発言を可能とする発現制御要素も含んでなり得る。このような制御要素は当業者に周知であり、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、エンハンサー、および遺伝子転写またはｍＲＮＡ翻訳を調節する他の制御要素などを含み得る。宿主細胞での、ベクターにより運ばれた遺伝物質要素の発現は、宿主細胞へのベクターの形質転換、形質導入またはトランスフェクションによって達成することができる。このようなベクターには、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ファージまたは例えば遺伝子工学に慣用される他のベクターを含み得る。例えば、ベクターは、発現ベクターであり得る。さらには、ベクターはまた、限定するものではないが、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパク質殻を含む、ベクターが細胞に侵入するのを補助する成分も含み得る。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質および／または本願のポリペプチドを含んでなり得る免疫複合体も提供する。いくつかの実施形態では、本願の単離された抗原結合タンパク質またはそのフラグメントは、化学療法薬、毒素、免疫治療薬、イメージングプローブ、分光分析プローブなどの別の試薬に連結することができる。この連結は、１以上の共有結合、または非共有結合的相互作用を介して形成することができ、キレート化を含み得る。当技術分野で公知であり得る様々なリンカーを使用して免疫複合体を形成することができる。さらに、免疫複合体は、免疫複合体をコードするポリヌクレオチドから発現させることができる融合タンパク質の形態で提供することができる。免疫複合体はまた、例えば、抗体－薬物ＡＤＣも含んでなり得る。ＡＤＣでは、抗体と治療薬をリンカーにより架橋することができ、このリンカーは、切断可能なリンカー、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏで酵素切断可能なリンカー、例えば、ペプチドリンカー、ジスルフィドリンカー、またはヒドラゾンリンカーであり得る。
別の側面において、本願は、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド分子、本願の免疫複合体、本願の核酸分子、または本願のベクターを含んでなり得る細胞を提供する。いくつかの実施形態では、いずれの宿主細胞も、本願の核酸分子またはベクターの１つまたは１タイプを含んでなり得る。いくつかの実施形態では、いずれの宿主細胞も、本願の複数（例えば２以上）のまたは複数（例えば２以上）の核酸分子またはベクターを含んでなり得る。例えば、本願のベクターは、宿主細胞、例えば、植物、真菌または酵母などに由来する細胞などの真核細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、細菌細胞（例えば大腸菌）、酵母細胞、または他の真核細胞、例えば、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＬＮＣＡＰ細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３Ｔ細胞、ＣＯＳ－１細胞、ＳＰ２／０細胞、ＮＳ０細胞、または骨髄腫細胞であり得る。本願のベクターは、エレクトロポレーション、リポフェクチントランスフェクション、リポフェクタミントランスフェクションなどの当技術分野で公知の方法によって宿主に導入することができる。
別の側面において、本願はまた、本願の単離された抗原結合タンパク質、本願のポリペプチド分子、本願の免疫複合体、本願の核酸分子、本願のベクターおよび／または本願の細胞、および場合により薬学上許容可能なビヒクルを含んでなり得る医薬組成物も提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１以上の（薬学上有効な）アジュバント、安定剤、賦形剤、希釈剤、可溶化剤、界面活性剤、乳化剤、および／または保存剤の好適な処方物をさらに含んでなり得る。組成物の許容可能な成分は、使用する用量および濃度でレシピエントに無毒であり得る。本発明の医薬組成物には、限定するものではないが、液体、冷凍組成物、および凍結乾燥組成物を含み得る。
いくつかの実施形態では、医薬組成物はまた、２種類以上の有効化合物、一般に、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有するものを含有し得る。このような薬物のタイプおよび有効量は、例えば、処方物中に存在するアンタゴニストの量およびタイプ、ならびに対象の臨床パラメーターによって異なり得る。
いくつかの実施形態では、薬学上許容可能なビヒクルは、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、等張化剤および吸収遅延剤を含み得、一般に安全で、非毒性であり
、薬物投与に適合する。
、薬物投与に適合する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非経口投与、経皮投与、腔内投与、動脈内投与、くも膜下腔内投与および／もしくは鼻腔内投与され得るか、または組織に直接注入され得る。例えば、医薬組成物は、注入または注射によって患者または対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与は、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、または皮内投与などの様々な手段によって行うことができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、中断なく投与され得る。このような中断のない（または連続的な）投与は、患者への治療薬の流量を測定するために患者が装着する小型ポンプシステムによって達成することができる。
いくつかの実施形態では、本願は、医薬組合せを提供する。いくつかの実施形態では、本願の医薬組合せは、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の免疫複合体、本願の核酸分子、本願のベクター、本願の細胞、および／または本願の医薬組成物を含んでなり得、予防および／または治療効果を有する好適な有効物質を含んでなり得る。
いくつかの実施形態では、医薬組合せは、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質および／またはＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を含んでなるポリペプチドおよび薬学上許容可能な第１の担体を含む第１の処方物、ならびに好適な治療上有効な物質および薬学上許容可能な第２の担体を含む第２の処方物を含んでなり得る。
１つの側面において、本願は、キットを提供する。例えば、キットは、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクター、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体、上記の物質を含んでなる細胞、本願の組成物、および／または本願の医薬組合せを含んでなり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。いくつかの実施形態では、キットは、サンプル中のＳｉｇｌｅｃ－１５の存在および／または量を検出するために使用される。
１つの側面において、本願は、調製方法を提供する。
別の側面において、本願は、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質および／またはＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを調製する方法を提供する。これらの方法は、本願の宿主細胞を、単離されたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質および／または本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを発現し得る条件下で培養することを含んでなり得る。例えば、これらの方法は、適当な培地、適当な温度、適当な培養時間を使用することにより行うことができ、これらは当業者に公知である。
モノクローナル抗体を調製するために好適ないずれの方法も、本願の抗原結合タンパク質を生産するために使用することができる。例えば、動物を、連結されたまたは天然のＳｉｇｌｅｃ－１５またはそのフラグメントで免疫することができる。アジュバント、免疫賦活剤、反復ブースター免疫を含む好適な免疫法を使用することができ、１以上の経路を使用することができる。例えば、ハイブリドーマ調製法を使用することができ、この方法では、免疫マウスから脾細胞を得、ＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞株をＨＡＴによりスクリーニングする。
いずれの好適な形態のＳｉｇｌｅｃ－１５も、Ｓｉｇｌｅｃ－１５に特異的な非ヒト抗体を作出するために免疫原（抗原）として使用することができ、これらの抗体は生物活性に関して選択された。例えば、プライム免疫原は、全長成熟ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５であり得、天然ホモ二量体、または単一／複数のエピトープを含有するペプチドを含んでなり得る。免疫原は、単独でまたは当技術分野で公知の１以上の免疫原性増強剤と組み合わせて使用することができる。
キメラヒト抗体は、任意のクラスの免疫グロブリンから選択することができ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含み得る。本願において、抗体はＩｇＧ抗体であり得、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプが使用可能である。所望の生物活性を生成するために必要な定常ドメイン配列の最適化は、当技術分野における生物学的アッセイを用いて抗体をスクリーニングすることにより達成することができる。同様に、いずれのタイプの軽鎖も本願の化合物および方法で使用することができる。例えば、κ鎖またはその変異体が、本願の化合物および方法で使用可能である。
１つの側面において、本願は、方法および使用を提供する。
例えば、本願は、サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法を提供し、その方法は、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を投与すること、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクターを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体を投与すること、上記の物質を含んでなる細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを投与することを含んでなり得る。場合によっては、サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法であり得る。場合によっては、サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法は、非治療的方法であり得る。場合によっては、サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法は、非診断的方法であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
例えば、本願は、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントの、そのリガンドへの結合に影響を与える方法を提供し、その方法は、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を投与すること、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクターを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体を投与すること、上記の物質を含んでなる細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを投与することを含んでなり得る。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントの、そのリガンドへの結合に影響を与える方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法であり得る。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントの、そのリガンドへの結合に影響を与える方法は、非治療的方法であり得る。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントの、そのリガンドへの結合に影響を与える方法は、非診断的方法であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃのリガンドは、ロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃおよびシアリル化Ｔｎ（シアリル－Ｔｎ）を含んでなり得る。例えば、Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントの、そのリガンドへの結合に影響を与えることは、Ｓｉｇｌｅｃによる免疫系機能の抑制における、ブランク対照と比較して約１％を超える、約２％超える、約３％超える、約４％超える、約５％超える、約７％超える、約１０％超える、約１５％超える、約２０％超える、約２５％超える、約３０％超える、約３５％超える、約４０％超える、約４５％超える、約５０％超える、約６０％超える、約７０％超える、約８０％超える、約９０％超える、約１００％以上、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、または約４００％以上の低下として現れ得る。
例えば、本願は、免疫細胞増殖に影響を与える方法を提供し、この方法は、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を投与すること、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクターを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体を投与すること、上記の物質を含んでなる細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを投与することを含んでなり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。場合によっては、免疫細胞増殖に影響を与える方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法であり得る。場合によっては、免疫細胞の増殖に影響を与える方法は、非治療的方法であり得る。場合によっては、免疫細胞の増殖に影響を与える方法は、非診断的方法であり得る。例えば、本願による免疫細胞増殖に影響を与えることは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５による免疫細胞の増殖抑制の低減として現れ得る。例えば、免疫細胞の亜集団の割合および／または免疫細胞の数が影響を受け得る。例えば、免疫細胞には、リンパ球、末梢血リンパ球、末梢血単核細胞および／または末梢血単核細胞が含まれ得る。例えば、免疫細胞亜集団の割合を増大させることができ、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を増大させることができ、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を増大させることができる。例えば、末梢血リンパ球におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を増大させることができ、例えば、末梢血リンパ球におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の割合を増大させることができる。例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の数は、ブランク対照と比較して、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ブランク対照と比較して、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、または約９０％を超えて増大させることができる。
例えば、本願は、サイトカイン分泌に影響を与える方法を提供し、この方法は、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を投与すること、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチドを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクターを投与すること、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体を投与すること、上記の物質を含んでなる細胞を投与すること、本願の医薬組成物を投与すること、本願の医薬組合せを投与すること、および／または本願のキットを投与することを含んでなり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。場合によっては、サイトカイン分泌に影響を与える方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法であり得る。場合によっては、サイトカイン分泌に影響を与える方法は、非治療的方法であり得る。場合によっては、サイトカイン分泌に影響を与える方法は、非診断的方法であり得る。例えば、サイトカイン分泌に影響を与えることは、リポ多糖により誘導されるサイトカイン、例えば、ＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－６の分泌への影響として現れ得る。例えば、ＴＮＦ－αの分泌は、ブランク対照と比較して、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約９０％を超えて、約１００％を超えて、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、約４００％以上増大させることができる。例えば、ＩＬ－６の分泌は、ブランク対照と比較して、約１％を超えて、約２％を超えて、約３％を超えて、約４％を超えて、約５％を超えて、約７％を超えて、約１０％を超えて、約１５％を超えて、約２０％を超えて、約２５％を超えて、約３０％を超えて、約３５％を超えて、約４０％を超えて、約４５％を超えて、約５０％を超えて、約６０％を超えて、約７０％を超えて、約８０％を超えて、約９０％を超えて、約１００％を超えて、約１５０％以上、約２００％以上、約２５０％以上、約３００％以上、約３５０％以上、約４００％以上増大させることができる。
別の側面において、本発明は、キットの製造における本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクター、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体、上記の物質を含んでなる細胞、本願の組成物および／または本願の医薬組合せの使用を提供する。例えば、キットは、サンプル中のＳｉｇｌｅｃの存在および／または量を検出するために使用することができる。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
１つの側面において、本願は、予防的および／または治療的使用を提供する。Ｓｉｇｌｅｃ－１５は、新規な標的として役立つ可能性があり、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を標的とする抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－１５による免疫系機能の抑制を逆転させることができる。利用可能なデータは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５を標的とする抗体が免疫応答を活性化することができ、従って、Ｓｉｇｌｅｃ－１５に対する抗体は疾患および／もしくは病態を予防および／もしくは治療するための薬剤として開発することができるか、またはＳｉｇｌｅｃ－１５に対する抗体は疾患および／もしくは病態を予防および／もしくは治療するための方法において使用することができることを示し得る。
別の側面において、本願は、疾患および／または病態の予防および／または治療のための薬剤の製造における、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクター、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体、上記の物質を含んでなる細胞、本願の組成物、本願の医薬組合せおよび／または本願のキットの使用を提供する。例えば、疾本願の患および／または病態は、免疫関連障害および／または増殖関連障害であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの異常な発現または機能不全に関連する疾患であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得る。例えば本願の、疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ関連疾患および／または病態であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
本願において、疾患および／または病態は、腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、細胞の過剰成長または増殖を伴う病態を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、増殖性疾患、新生物性疾患、および／または免疫疾患を含み得る。例えば、本願の腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の異常な発現または機能不全に関連する腫瘍および／または感染症であり得る。例えば、本願の腫瘍はＳｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得、かつ／またはＳｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、腫瘍は、固形腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、消化管の腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、腸管腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、結腸癌を含み得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
別の側面において、本願は、疾患および／または病態の予防および／または治療のための本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクター、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体、上記の物質を含んでなる細胞、本願の組成物、本願の医薬組合せおよび／または本願のキットを提供する。例えば、本願の疾患および／または病態は、免疫関連障害および／または増殖関連障害であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの異常な発現または機能不全に関連する疾患であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ関連疾患および／または病態であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
本願において、疾患および／または病態は、腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、細胞の過剰成長または増殖を伴う病態を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、増殖性疾患、新生物性疾患、および／または免疫疾患を含み得る。例えば、本願の腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の異常な発現または機能不全に関連する腫瘍および／または感染症であり得る。例えば、本願の腫瘍はＳｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得、かつ／またはＳｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、腫瘍は、固形腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、消化管の腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、腸管腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、結腸癌を含み得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
別の側面において、本願は、疾患および／または病態を予防および／または治療する方法を提供し、その方法は、それを必要とする対象に本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなるポリペプチド、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質をコードする核酸分子を含んでなるベクター、本願の単離されたＳｉｇｌｅｃ結合タンパク質を含んでなる免疫複合体、上記の物質を含んでなる細胞、本願の組成物、本願の医薬組合せ、および／または本願のキットを投与することを含んでなり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、免疫関連障害および／または増殖関連障害であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの異常な発現または機能不全に関連する疾患であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得る。例えば、本願の疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、疾患および／または病態は、Ｓｉｇｌｅｃ関連疾患および／または病態であり得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
本願において、疾患および／または病態は、腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、細胞の過剰成長または増殖を伴う病態を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、増殖性疾患、新生物性疾患、および／または免疫疾患を含み得る。例えば、本願の腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質の異常な発現または機能不全に関連する腫瘍および／または感染症であり得る。例えば、本願の腫瘍はＳｉｇｌｅｃ陽性腫瘍であり得、かつ／またはＳｉｇｌｅｃの発現が高い腫瘍であり得る。本願において、腫瘍は、固形腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、消化管の腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、腸管腫瘍を含み得る。本願において、疾患および／または病態は、結腸癌を含み得る。例えば、本願のＳｉｇｌｅｃは、Ｓｉｇｌｅｃ－１５であり得る。
本願において、投与は、静脈内投与、腫瘍内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、局所投与、または皮内投与などの様々な方法で行うことができる。
いずれの理論にも縛られるものではないが、以下の実施例は本願の結合タンパク質、調製方法、使用などの説明を意図するにすぎず、本願の範囲を限定するものではない。
実施例１ 組換え細胞株の調製
発現プラスミドは、コドンを最適化した後のヒトＳｉｇｌｅｃ－１５の細胞外ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ、Ｑ６ＺＭＣ９、２０－２６３に記載のアミノ酸配列を有する）および血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の膜貫通ドメイン（Ｐ０９６１９、５１３－５６１に記載のアミノ酸配列を有する）を有するものを構築し；レンチウイルスは、２９３Ｔ細胞に感染させるための発現プラスミドを用いてパッケージングし；Ｓｉｇｌｅｃ－１５の発現は、抗生物質加圧スクリーニングにより検出し；陽性クローンを選択および拡大培養して、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５の細胞外ドメインのアミノ酸配列を過剰発現する組換え細胞株ヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔを得た。サルＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔは、上記と類似の手順を参照して作製することができる。
発現プラスミドは、コドンを最適化した後のヒトＳｉｇｌｅｃ－１５の細胞外ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ、Ｑ６ＺＭＣ９、２０－２６３に記載のアミノ酸配列を有する）および血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の膜貫通ドメイン（Ｐ０９６１９、５１３－５６１に記載のアミノ酸配列を有する）を有するものを構築し；レンチウイルスは、２９３Ｔ細胞に感染させるための発現プラスミドを用いてパッケージングし；Ｓｉｇｌｅｃ－１５の発現は、抗生物質加圧スクリーニングにより検出し；陽性クローンを選択および拡大培養して、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５の細胞外ドメインのアミノ酸配列を過剰発現する組換え細胞株ヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔを得た。サルＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔは、上記と類似の手順を参照して作製することができる。
全長マウスＳｉｇｌｅｃ－１５（Ｕｎｉｐｒｏｔ、Ａ７Ｅ１Ｗ８に記載のアミノ酸配列を有する）をＴ２Ａにより、全長ＤＡＰ１２アミノ酸配列（Ｏ５４８８５）（配列番号４１のＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰに記載のアミノ酸配列を有する）と連結し、コドンの最適化を行って、従来の方法に従い、発現プラスミドを構築し；レンチウイルスはＣＴ２６細胞に感染させるための発現プラスミドを用いてパッケージングして、全長マウスＳｉｇｌｅｃ－１５を過剰発現する組換え細胞株マウスＳ１５－ＣＴ２６を作出した。
実施例２ Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質のスクリーニングおよび成熟
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質のファージスクリーニング
抗体ライブラリーを用い、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５抗原に、２回の液相ファージスクリーニングを行った。１×１０１３ｃｆｕのライブラリーファージを取り出し、３０分間、５０ｍｌのストレプトアビジン磁性ビーズを予め結合させ、磁気ラックを用いた特異的吸着により、非特異的結合ファージを除去した。この手順を３回繰り返し、バックグラウンドにより除去されたファージ、１０μｇのビオチン化ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質（略称：ＨＳ－１５ビオチンまたはヒトＳ－１５ビオチン、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｈ８２Ｅ９）、および１５０μｇのストレプトアビジン磁性ビーズの混合物を３７℃で１５分間インキュベートした。この混合物をＰＢＳＴで１４回繰り返し洗浄して結合していないファージを除去した。Ｓｉｇｌｅｃ－１５と特異的に結合したファージを１００ｍＭ濃度の塩酸で溶出させ、ｐＨ１１のＴｒｉｓ－ＨＣｌで中和し、指数関数的に増殖している大腸菌ＳＳ３２０に感染させ、次いで、感染１時間後にヘルパーファージＭ１３ＫＯ７を終濃度１．５×１０９ｃｆｕで加え、この混合物を３２℃で一晩インキュベートした。翌日、この混合物を１５０００ｇで１０分間遠心分離して上清を回収し、上清の１／５の体積の２０％ＰＥＧ／ＮａＣｌ溶液を加えて４℃で１時間沈殿させ；この沈殿を１５０００ｇで２０分の遠心分離により取得し、２回目のパンニングのために１ｍｌの１×ＰＢＳに再懸濁させ、この用量は、抗原の用量を回ごとに半分に減らすこと以外は、初回と同じであった。２回のパンニングの濃縮率はファージ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により決定した。２ｎｇ／μＬ濃度のヒトＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質を１００μＬ／ウェルで加え、一晩４℃でコーティングした。２回目のパンニングから濃縮されたファージを１×１０１１ｃｆｕ／ウェルで加え、この混合物を３７℃で４０分間インキュベートした。結合していないファージをＰＢＳＴで溶出させ、１：５０００希釈のＨＲＰコンジュゲートマウス抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ、８５９２）を１００μＬ／ウェルで加え、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、結合してないファージをＰＢＳＴで溶出させ、アルカリ性ホスファターゼ発色溶液を加え、吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーにて４５０ｎｍで読み取った。結果を表１に示す。
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質のファージスクリーニング
抗体ライブラリーを用い、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５抗原に、２回の液相ファージスクリーニングを行った。１×１０１３ｃｆｕのライブラリーファージを取り出し、３０分間、５０ｍｌのストレプトアビジン磁性ビーズを予め結合させ、磁気ラックを用いた特異的吸着により、非特異的結合ファージを除去した。この手順を３回繰り返し、バックグラウンドにより除去されたファージ、１０μｇのビオチン化ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質（略称：ＨＳ－１５ビオチンまたはヒトＳ－１５ビオチン、Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｈ８２Ｅ９）、および１５０μｇのストレプトアビジン磁性ビーズの混合物を３７℃で１５分間インキュベートした。この混合物をＰＢＳＴで１４回繰り返し洗浄して結合していないファージを除去した。Ｓｉｇｌｅｃ－１５と特異的に結合したファージを１００ｍＭ濃度の塩酸で溶出させ、ｐＨ１１のＴｒｉｓ－ＨＣｌで中和し、指数関数的に増殖している大腸菌ＳＳ３２０に感染させ、次いで、感染１時間後にヘルパーファージＭ１３ＫＯ７を終濃度１．５×１０９ｃｆｕで加え、この混合物を３２℃で一晩インキュベートした。翌日、この混合物を１５０００ｇで１０分間遠心分離して上清を回収し、上清の１／５の体積の２０％ＰＥＧ／ＮａＣｌ溶液を加えて４℃で１時間沈殿させ；この沈殿を１５０００ｇで２０分の遠心分離により取得し、２回目のパンニングのために１ｍｌの１×ＰＢＳに再懸濁させ、この用量は、抗原の用量を回ごとに半分に減らすこと以外は、初回と同じであった。２回のパンニングの濃縮率はファージ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により決定した。２ｎｇ／μＬ濃度のヒトＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質を１００μＬ／ウェルで加え、一晩４℃でコーティングした。２回目のパンニングから濃縮されたファージを１×１０１１ｃｆｕ／ウェルで加え、この混合物を３７℃で４０分間インキュベートした。結合していないファージをＰＢＳＴで溶出させ、１：５０００希釈のＨＲＰコンジュゲートマウス抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ、８５９２）を１００μＬ／ウェルで加え、この混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、結合してないファージをＰＢＳＴで溶出させ、アルカリ性ホスファターゼ発色溶液を加え、吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダーにて４５０ｎｍで読み取った。結果を表１に示す。
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の酵母ディスプレイスクリーニング
図１に示されるように、ファージ抗体ライブラリーのパンニングの後のプラスミドを鋳型として用いる本願の酵母ディスプレイの構築方法に従い、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）遺伝子を増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施するようにプライマーを設計し、ＰＣＲにより増幅されたｓｃＦｖ遺伝子フラグメントを回収し、酵母ディスプレイプラスミドとともにサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)株ＥＢＹ１００（ＡＴＣＣから入手可能）に共形質転換し、ｓｃＦｖ遺伝子を、サッカロミセス・セレビシエにおける相同組換えにより酵母ディスプレイプラスミドに挿入し、それにより、酵母細胞壁の表面に単鎖抗体をディスプレイした。酵母ディスプレイ単鎖抗体ライブラリーをＪＹＹＤＬ０２０と呼称した。ライブラリーＪＹＹＤＬ０２０を選択し、１００ｍＬのＳＤ－Ｔｒｐ培地（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３０３０８）中、３０℃、２２５ｒｐｍで一晩培養し；１．０×１０８の細菌を取り出し、２０ｍＬのＹＰＧＰ液体培地（２％ガラクトース、２％ペプトン、１％酵母抽出液、０．５４％Ｎａ２ＨＰＯ４、０．８６％ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ）に再懸濁させ、２０℃、２２５ｒｐｍで２４時間培養し、４℃の冷蔵庫で次に使用するために保存した。
図１に示されるように、ファージ抗体ライブラリーのパンニングの後のプラスミドを鋳型として用いる本願の酵母ディスプレイの構築方法に従い、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）遺伝子を増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施するようにプライマーを設計し、ＰＣＲにより増幅されたｓｃＦｖ遺伝子フラグメントを回収し、酵母ディスプレイプラスミドとともにサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)株ＥＢＹ１００（ＡＴＣＣから入手可能）に共形質転換し、ｓｃＦｖ遺伝子を、サッカロミセス・セレビシエにおける相同組換えにより酵母ディスプレイプラスミドに挿入し、それにより、酵母細胞壁の表面に単鎖抗体をディスプレイした。酵母ディスプレイ単鎖抗体ライブラリーをＪＹＹＤＬ０２０と呼称した。ライブラリーＪＹＹＤＬ０２０を選択し、１００ｍＬのＳＤ－Ｔｒｐ培地（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３０３０８）中、３０℃、２２５ｒｐｍで一晩培養し；１．０×１０８の細菌を取り出し、２０ｍＬのＹＰＧＰ液体培地（２％ガラクトース、２％ペプトン、１％酵母抽出液、０．５４％Ｎａ２ＨＰＯ４、０．８６％ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ）に再懸濁させ、２０℃、２２５ｒｐｍで２４時間培養し、４℃の冷蔵庫で次に使用するために保存した。
ライブラリーを誘導した後、細菌溶液のＯＤ６００を測定し、１ＯＤを１．０×１０７細胞として換算し、４．０×１０８細胞を取り出し、１回目のフローサイトメトリー選別を行い、ＨＳ－１５ビオチンと結びついた陽性細胞集団を濃縮した。２．０×１０７細胞を取り出し、無関係の抗原に対する２回目の負の選択を行って非特異的に結合した細胞集団を除去した。選別後、適当な量の細胞をＳＤ－Ｔｒｐ固形培地に播種し、３０℃で３日間培養した。
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質酵母モノクローンの同定
シークエンシングのためにＪＹＹＤＬ０２０抗体ライブラリーの１回目のスクリーニング産物から１枚の４８ウェルプレートを選択してＹ１１と呼称し；シークエンシングのためにＪＹＹＤＬ０２０の２回目のスクリーニング産物から２枚の４８ウェルプレートを選択してＹ１４－Ｙ１５と呼称した。配列分析の後、単一の配列を有する単鎖抗体を得、対応する酵母モノクローンを、表２に従い、フローサイトメトリー染色により分析した。
シークエンシングのためにＪＹＹＤＬ０２０抗体ライブラリーの１回目のスクリーニング産物から１枚の４８ウェルプレートを選択してＹ１１と呼称し；シークエンシングのためにＪＹＹＤＬ０２０の２回目のスクリーニング産物から２枚の４８ウェルプレートを選択してＹ１４－Ｙ１５と呼称した。配列分析の後、単一の配列を有する単鎖抗体を得、対応する酵母モノクローンを、表２に従い、フローサイトメトリー染色により分析した。
スキーム１で、細胞集団に結合したＨＳ－１５ビオチンの強度は、ＰＥ平均蛍光シグナル強度（ＭＦＩ）に反映させることができる。同様に、スキーム２、スキーム３およびスキーム４で、マウスＳ－１５ビオチン（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｔｅｍｓ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｍ５２Ｈ７、ビオチン化）およびサルＳ－１５－Ｆｃ（Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｔｅｍｓ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｃ５２５３）の非特異的結合レベルも評価することができ、結果を表３に示す。
染色結果に従い、ヒト、サル、およびマウスに結合しなかったクローンを除外し、Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の発現のために、単一クローンの最終的に得られた配列をプラスミドに構築した。
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の発現
結合タンパク質の得られた全長軽鎖および重鎖タンパク質配列にそれぞれコドンの最適化を行い、コドンが最適化されたＤＮＡフラグメント（ＧＥＮＥＷＩＺ）に遺伝子合成を行い、合成された遺伝子フラグメントを発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にＩｇＧ１の形でクローニングした。発現プラスミドの増幅およびプラスミド抽出の後、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ２９１３３）を２つのプラスミドに共トランスフェクトし、供給者のＥｘｐｉＣＨＯ発現系アプローチに従って一過性の抗体発現を行い、手順は以下の通りであった：ＥｘｐｉＣＨＯ細胞を３６．５℃および８％二酸化炭素濃度にて、総培養体積２５ｍｌの培養培地中で６×１０６／ｍＬの密度まで培養し、ＥｘｐｉＦｅｃｔａトランスフェクション試薬を用い、１０μｇの抗体軽鎖および重鎖発現プラスミドをそれぞれ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクション１日後に１５０μＬの各４ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ エンハンサーおよびＥｘｐｉＣＨＯアジュバントを培養細胞に加え、９日間培養を続けた。３５００ｒｐｍ、４℃での遠心分離により上清を得た。磁性ビーズ（ＡｍＭａｇＴＭプロテインＡ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｌ００６９５）を本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質発現上清と混合し、この混合物を室温で２時間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、上清を廃棄し、適当な量の溶出バッファー（プロテインＧまたはＡ Ｓｅｆｉｎｏｓｅ ＴＭ溶出バッファー、Ｓａｎｇｏｎ、Ｃ６００４８１）を加え、混合物を十分に混合した後、５分間静置インキュベーションを行うために試験管ラックに置き、インキュベーション期間中、磁性ビーズを２～３回再懸濁させ、溶出を２回繰り返し、溶出後に適当な量の中和溶液１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５（Ｓａｎｇｏｎ、Ｂ５４８１２４）を迅速に加えてその後の使用のために中和して精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を得、情報を表４に示す。
結合タンパク質の得られた全長軽鎖および重鎖タンパク質配列にそれぞれコドンの最適化を行い、コドンが最適化されたＤＮＡフラグメント（ＧＥＮＥＷＩＺ）に遺伝子合成を行い、合成された遺伝子フラグメントを発現ベクターｐｃＤＮＡ３．４（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にＩｇＧ１の形でクローニングした。発現プラスミドの増幅およびプラスミド抽出の後、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ａ２９１３３）を２つのプラスミドに共トランスフェクトし、供給者のＥｘｐｉＣＨＯ発現系アプローチに従って一過性の抗体発現を行い、手順は以下の通りであった：ＥｘｐｉＣＨＯ細胞を３６．５℃および８％二酸化炭素濃度にて、総培養体積２５ｍｌの培養培地中で６×１０６／ｍＬの密度まで培養し、ＥｘｐｉＦｅｃｔａトランスフェクション試薬を用い、１０μｇの抗体軽鎖および重鎖発現プラスミドをそれぞれ細胞にトランスフェクトし、トランスフェクション１日後に１５０μＬの各４ｍＬのＥｘｐｉＣＨＯ エンハンサーおよびＥｘｐｉＣＨＯアジュバントを培養細胞に加え、９日間培養を続けた。３５００ｒｐｍ、４℃での遠心分離により上清を得た。磁性ビーズ（ＡｍＭａｇＴＭプロテインＡ、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｌ００６９５）を本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質発現上清と混合し、この混合物を室温で２時間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、上清を廃棄し、適当な量の溶出バッファー（プロテインＧまたはＡ Ｓｅｆｉｎｏｓｅ ＴＭ溶出バッファー、Ｓａｎｇｏｎ、Ｃ６００４８１）を加え、混合物を十分に混合した後、５分間静置インキュベーションを行うために試験管ラックに置き、インキュベーション期間中、磁性ビーズを２～３回再懸濁させ、溶出を２回繰り返し、溶出後に適当な量の中和溶液１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５（Ｓａｎｇｏｎ、Ｂ５４８１２４）を迅速に加えてその後の使用のために中和して精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を得、情報を表４に示す。
精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質に、親和性アッセイ、物理化学的特性分析および細胞結合、ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏ機能活性アッセイ、次いで、親和性成熟を行った。
親和性成熟突然変異体ライブラリーの構築
得られたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５に対するその親和性を高めるために親和性成熟を行った。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の抗原結合決定基（ＣＤＲ）部位のアミノ酸を無作為に変異させることによって各ＣＤＲの突然変異ライブラリーを構築し、強い抗原特異的結合力を有する配列のハイスループットスクリーニングを、酵母ディスプレイ技術を用いて行った。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列はＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従ってコードすることができ、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａに従って定義することができる。抗体分子の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ１、ＣＤＲ３および重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３について、ＮＮＫ（Ｎは任意のヌクレオチドを表し、ＫはＧまたはＴを表す）突然変異プライマーは、各ＣＤＲ突然変異ライブラリー遺伝子フラグメントを増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施するように設計され、各ＣＤＲ突然変異ライブラリーがＦａｂの形で酵母表面にディスプレイされるように、各ＣＤＲ突然変異ライブラリー遺伝子フラグメントおよび酵母ディスプレイプラスミドをそれぞれサッカロミセス・セレビシエ株ＥＢＹ１００に形質転換した。一方で、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の親配列もＦａｂの形で酵母の表面にディスプレイされ、これを対照として使用した。
得られたＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５に対するその親和性を高めるために親和性成熟を行った。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の抗原結合決定基（ＣＤＲ）部位のアミノ酸を無作為に変異させることによって各ＣＤＲの突然変異ライブラリーを構築し、強い抗原特異的結合力を有する配列のハイスループットスクリーニングを、酵母ディスプレイ技術を用いて行った。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の軽鎖および重鎖可変領域のアミノ酸配列はＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従ってコードすることができ、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａに従って定義することができる。抗体分子の軽鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ１、ＣＤＲ３および重鎖可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３について、ＮＮＫ（Ｎは任意のヌクレオチドを表し、ＫはＧまたはＴを表す）突然変異プライマーは、各ＣＤＲ突然変異ライブラリー遺伝子フラグメントを増幅するためのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施するように設計され、各ＣＤＲ突然変異ライブラリーがＦａｂの形で酵母表面にディスプレイされるように、各ＣＤＲ突然変異ライブラリー遺伝子フラグメントおよび酵母ディスプレイプラスミドをそれぞれサッカロミセス・セレビシエ株ＥＢＹ１００に形質転換した。一方で、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の親配列もＦａｂの形で酵母の表面にディスプレイされ、これを対照として使用した。
親和性成熟突然変異体ライブラリーのスクリーニング
ライブラリーを培養し、誘導した後、１×１０９細胞をそれぞれ取り出し、磁性ビーズ選別系を用いて１回目の濃縮を行った。各ライブラリーからの細胞を１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンを含有する１×ＰＢＳＡに再懸濁させ、３０分間インキュベートした。洗浄後、細胞を抗ビオチンビーズと混合し、１０分間インキュベートした。陽性細胞は磁気カラムにより回収した。陽性細胞を再び培養し、誘導した後、３．０×１０７の細胞をそれぞれ取り出し、１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンを用いて２回目のフローサイトメトリー選別を行って高いディスプレイレベルと抗原に対する強い結合力を備えた細胞集団を回収し；２回目の選別に従い、０．１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチン抗原とともにインキュベートした後に、混合物を１０ｍＬの１×ＰＢＳＡで、室温で２時間洗浄し、次いで、３回目の選別を行い；選別後に細胞をＳＤ－Ｔｒｐ、Ｌｅｕ固体培地に播種し、３０℃で３日間培養した。単一のクローンを採取し、シークエンシング分析を行って、軽鎖および重鎖の各ＣＤＲに突然変異を有する単一の配列を得た。
ライブラリーを培養し、誘導した後、１×１０９細胞をそれぞれ取り出し、磁性ビーズ選別系を用いて１回目の濃縮を行った。各ライブラリーからの細胞を１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンを含有する１×ＰＢＳＡに再懸濁させ、３０分間インキュベートした。洗浄後、細胞を抗ビオチンビーズと混合し、１０分間インキュベートした。陽性細胞は磁気カラムにより回収した。陽性細胞を再び培養し、誘導した後、３．０×１０７の細胞をそれぞれ取り出し、１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンを用いて２回目のフローサイトメトリー選別を行って高いディスプレイレベルと抗原に対する強い結合力を備えた細胞集団を回収し；２回目の選別に従い、０．１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチン抗原とともにインキュベートした後に、混合物を１０ｍＬの１×ＰＢＳＡで、室温で２時間洗浄し、次いで、３回目の選別を行い；選別後に細胞をＳＤ－Ｔｒｐ、Ｌｅｕ固体培地に播種し、３０℃で３日間培養した。単一のクローンを採取し、シークエンシング分析を行って、軽鎖および重鎖の各ＣＤＲに突然変異を有する単一の配列を得た。
軽鎖および重鎖の各ＣＤＲの、結果として得たれた変異型プラスミドを親プラスミドと混合し、この混合物を酵母株に共形質転換し、ＪＹＹＤＬ０６２と符番される軽鎖および重鎖突然変異のコンビナトリアルライブラリーを構築した。ライブラリーを培養し、誘導した後、２．０×１０７の細胞を取り出し、０．１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンを用いるフローサイトメトリー選別を行い、高いディスプレイレベルと抗原に対する強い結合力を備えた細胞集団を回収し；選別後、細胞を播種して増殖させ、シークエンシング分析のために単一のクローンを採取した。
単一クローンの同定
シークエンシング分析の後、単一の配列を有する単一のクローンをフローサイトメトリー染色により特定し、それぞれ１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンとともに３０分間インキュベートし、１ｍＬの１×ＰＢＳＡで室温にて２時間洗浄し；フローサイトメトリー分析の後、抗原に結合する種々のクローンの蛍光強度を比較した。染色結果に基づき、ＨＳ－１５ビオチンへの結合強度が有意に向上したクローンをさらなる評価のために選択し、評価結果および配列を表５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、および５Ｄに示す。
シークエンシング分析の後、単一の配列を有する単一のクローンをフローサイトメトリー染色により特定し、それぞれ１ｎＭ ＨＳ－１５ビオチンとともに３０分間インキュベートし、１ｍＬの１×ＰＢＳＡで室温にて２時間洗浄し；フローサイトメトリー分析の後、抗原に結合する種々のクローンの蛍光強度を比較した。染色結果に基づき、ＨＳ－１５ビオチンへの結合強度が有意に向上したクローンをさらなる評価のために選択し、評価結果および配列を表５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、および５Ｄに示す。
Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質親和性成熟抗体の発現および親和性アッセイ
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を本願の上述のＥｘｐｉＣＨＯ発現系により発現させ、精製して精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を得、その情報を表６に示す。
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を本願の上述のＥｘｐｉＣＨＯ発現系により発現させ、精製して精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を得、その情報を表６に示す。
実施例３：Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の親和性アッセイ
ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５（Ａｃｒｏ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｈ５２Ｈ３）に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の親和性を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を用いて決定し、抗原および本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は双方とも１×ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ：Ｓａｎｇｏｎ、Ｂ５４８１１７－０５００；０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０：Ｓｉｇｍａ－ａｌｄｒｉｃｈ、Ｐ１３７９）で希釈した。抗原を３０ｎＭ濃度で使用し、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を３３．３ｎＭ濃度で使用する。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５（Ａｃｒｏ、カタログ番号：ＳＧ５－Ｈ５２Ｈ３）に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の親和性を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を用いて決定し、抗原および本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は双方とも１×ＰＢＳＴ（１×ＰＢＳ：Ｓａｎｇｏｎ、Ｂ５４８１１７－０５００；０．０２％Ｔｗｅｅｎ ２０：Ｓｉｇｍａ－ａｌｄｒｉｃｈ、Ｐ１３７９）で希釈した。抗原を３０ｎＭ濃度で使用し、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を３３．３ｎＭ濃度で使用する。
試験用サンプルのロード（Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｃｑｕｉｓｏｔｉｏｎ １１．１．０．１１）
まず、２００μＬ／ウェルのシステムで、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ、６５５２０９）にサンプルを加えた。次に、ソフトウエアパラメーターを設定し、プレート温度を３０℃に設定し、標準的な速度論シグナルを採集する頻度は５．０Ｈｚであった。次に、ＡＨＣセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、カタログ番号：１８－００１５）を１×ＰＢＳＴで１０分間予め湿らせ、次いで、検出のためにサンプルを機器にロードし、各サイクルは以下の工程を含んだ：１）サンプルをバッファーに６０秒浸す；２）抗原がセンサーに対して非特異的結合を示すかどうか検出する；３）１０ｍＭグリシン溶液 ｐＨ１．７中で再生する；４）バッファーに６０秒浸す；５）本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質をセンサーに２０秒固定する；６）センサーをバッファーに１８０秒浸す；７）抗原を本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を１８０秒結合させる；８）抗原と本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を１０分間解離させる；９）センサーを再生する。
まず、２００μＬ／ウェルのシステムで、９６ウェルプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ、６５５２０９）にサンプルを加えた。次に、ソフトウエアパラメーターを設定し、プレート温度を３０℃に設定し、標準的な速度論シグナルを採集する頻度は５．０Ｈｚであった。次に、ＡＨＣセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、カタログ番号：１８－００１５）を１×ＰＢＳＴで１０分間予め湿らせ、次いで、検出のためにサンプルを機器にロードし、各サイクルは以下の工程を含んだ：１）サンプルをバッファーに６０秒浸す；２）抗原がセンサーに対して非特異的結合を示すかどうか検出する；３）１０ｍＭグリシン溶液 ｐＨ１．７中で再生する；４）バッファーに６０秒浸す；５）本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質をセンサーに２０秒固定する；６）センサーをバッファーに１８０秒浸す；７）抗原を本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を１８０秒結合させる；８）抗原と本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を１０分間解離させる；９）センサーを再生する。
データ解析
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の平衡解離定数（ＫＤ）を、本願の抗原－Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の結合速度定数（ｋｏｎ）および解離速度定数（ｋｄｉｓ）を、データ解析１２．０ソフトウエアｆｒｏｍｘ Ｆｏｒｔｅｂｉｏを用いて１：１結合様式で決定することにより決定した。結果を以下の表７Ａ、７Ｂ、および７Ｃに示す。
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の平衡解離定数（ＫＤ）を、本願の抗原－Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の結合速度定数（ｋｏｎ）および解離速度定数（ｋｄｉｓ）を、データ解析１２．０ソフトウエアｆｒｏｍｘ Ｆｏｒｔｅｂｉｏを用いて１：１結合様式で決定することにより決定した。結果を以下の表７Ａ、７Ｂ、および７Ｃに示す。
実施例４ Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の細胞結合活性のアッセイ
本願の精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、本願のヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞に結合するその機能に関してフローサイトメトリーにより特定した。本願の方法により調製したヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞は、１５ｃｍ細胞培養ディッシュで集密度９０％まで拡大培養することができ、培地をピペットで完全に吸い取り、細胞をＰＢＳバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００１００４９）で１回洗浄し，次いで、酵素を含まない細胞解離バッファー（Ｖｅｒｓｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５０４００６６）で処理し、採取した。細胞をＰＢＳバッファーで２回洗浄し、計数し、所望の量の細胞を取り出して遠心分離し、細胞を２×１０６細胞／ｍｌとなるようにＦＡＣＳバッファー（２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）に再懸濁させた。室温で１５分間インキュベートした後、細胞懸濁液をＵ型９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７９８）に５０μＬ／ウェルで加えた。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質をＦＡＣＳバッファーで連続希釈し、希釈溶液を上記の９６ウェルプレートに５０μＬ／ウェルで加え、４℃で１時間インキュベートした。インキュベートした混合物を遠心分離して上清を廃棄し、細胞をＦＡＣＳバッファーで１回洗浄し、１００μＬの蛍光（Ａｌｅｘａ ４８８）標識二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ａ－１１０１３）を各ウェルに加え、４℃で１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳバッファーで１回洗浄し、１００μＬの固定剤（４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド）を各ウェルに加えて細胞を再懸濁させ、１０分後に細胞をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。細胞を３０μＬ／ウェルのＦＡＣＳバッファーで再懸濁させ、フローサイトメトリーインテリサイトプラス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）により検出および分析した。マウスＳ１５－ＣＴ２６細胞およびサルＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞に対する結合における精製抗ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の機能を同様の方法で特定した。
本願の精製Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、本願のヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞に結合するその機能に関してフローサイトメトリーにより特定した。本願の方法により調製したヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞は、１５ｃｍ細胞培養ディッシュで集密度９０％まで拡大培養することができ、培地をピペットで完全に吸い取り、細胞をＰＢＳバッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１００１００４９）で１回洗浄し，次いで、酵素を含まない細胞解離バッファー（Ｖｅｒｓｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、１５０４００６６）で処理し、採取した。細胞をＰＢＳバッファーで２回洗浄し、計数し、所望の量の細胞を取り出して遠心分離し、細胞を２×１０６細胞／ｍｌとなるようにＦＡＣＳバッファー（２％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）に再懸濁させた。室温で１５分間インキュベートした後、細胞懸濁液をＵ型９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７９８）に５０μＬ／ウェルで加えた。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質をＦＡＣＳバッファーで連続希釈し、希釈溶液を上記の９６ウェルプレートに５０μＬ／ウェルで加え、４℃で１時間インキュベートした。インキュベートした混合物を遠心分離して上清を廃棄し、細胞をＦＡＣＳバッファーで１回洗浄し、１００μＬの蛍光（Ａｌｅｘａ ４８８）標識二次抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ａ－１１０１３）を各ウェルに加え、４℃で１時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳバッファーで１回洗浄し、１００μＬの固定剤（４％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド）を各ウェルに加えて細胞を再懸濁させ、１０分後に細胞をＦＡＣＳバッファーで２回洗浄した。細胞を３０μＬ／ウェルのＦＡＣＳバッファーで再懸濁させ、フローサイトメトリーインテリサイトプラス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）により検出および分析した。マウスＳ１５－ＣＴ２６細胞およびサルＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞に対する結合における精製抗ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の機能を同様の方法で特定した。
図２、３および４に示されるように、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、細胞表面のＳｉｇｌｅｃ－１５に結合することができる。図２は、細胞表面のヒトＳｉｇｌｅｃ－１５に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の結合に関する結果を示す。図３は、細胞表面のサルＳｉｇｌｅｃ－１５に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の結合の検出結果を示す。図４は、細胞表面のマウスＳｉｇｌｅｃ－１５に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の結合の検出結果を示す。ヒトＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞への結合に関する本願のＡｂ９、Ａｂ１５およびアイソタイプ対照のＥＣ５０値（ｎＭ）は、それぞれ１．５１６、０．４７５０およびＮＡ（データは得られず）であり；本願におけるサルＳ１５ＥＣＤ－２９３Ｔ細胞への結合に関する本願のＡｂ９、Ａｂ１５およびアイソタイプ対照のＥＣ５０値（ｎＭ）は、それぞれ０．９２２４、０．４７４６およびＮＡ（データは得られず）であり；本願におけるマウスＳ１５－ＣＴ２６細胞への結合に関する本願のＡｂ９、Ａｂ１５、およびアイソタイプ対照のＥＣ５０値（ｎＭ）は、３．２４７、１．８２７、およびＮＡ（データは得られず）であった。
実施例５ Ｓｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の物理化学的特性の評価
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の物理化学的特性は、以下の方法を参照して決定することができる。
本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の物理化学的特性は、以下の方法を参照して決定することができる。
ＥＣ－ＨＰＬＣ純度分析
（１）サンプルを１ｍｇ／ｍＬに希釈し、十分に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清をサンプル瓶に移し、ＨＰＬＣサンプルトレイに置いた。クロマトグラフィー条件は次のように設定した：カラムはＴＳＫ Ｇ３０００ＳＷｘｌ；検出波長は２８０ｎｍ；カラム温度は２５℃；サンプルチャンバー温度は５℃；流速は０．５ｍＬ／分であり得る。
（２）クロマトグラフィーカラムを移動相（２００ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ６．８）で平衡化し、サンプルを注入して分析した。データ解析にはクロマトグラフィーソフトウエアを使用した。各ピークのピーク面積パーセンテージをピーク面積正規化法により計算した。
（１）サンプルを１ｍｇ／ｍＬに希釈し、十分に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清をサンプル瓶に移し、ＨＰＬＣサンプルトレイに置いた。クロマトグラフィー条件は次のように設定した：カラムはＴＳＫ Ｇ３０００ＳＷｘｌ；検出波長は２８０ｎｍ；カラム温度は２５℃；サンプルチャンバー温度は５℃；流速は０．５ｍＬ／分であり得る。
（２）クロマトグラフィーカラムを移動相（２００ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ６．８）で平衡化し、サンプルを注入して分析した。データ解析にはクロマトグラフィーソフトウエアを使用した。各ピークのピーク面積パーセンテージをピーク面積正規化法により計算した。
ＨＩＣ－ＨＰＬＣ分析
（１）サンプルを１ｍｇ／ｍｌに希釈し、遠心分離し、上清を取り出してアッセイした。クロマトグラフィー条件は次のように設定した：カラムはＭＡｂＰａｃ ＴＭ ＨＩＣ－１０；検出波長は２１４ｎｍ；カラム温度は３０℃；サンプルチャンバー温度は５℃；流速は０．８ｍＬ／分であり得る。
（３）勾配溶出は移動相Ａ（５０ｍＭリン酸バッファー／１Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０）および移動相Ｂ（５０ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ７．０）で実施し、主要ピークの保持時間を記録した。
（１）サンプルを１ｍｇ／ｍｌに希釈し、遠心分離し、上清を取り出してアッセイした。クロマトグラフィー条件は次のように設定した：カラムはＭＡｂＰａｃ ＴＭ ＨＩＣ－１０；検出波長は２１４ｎｍ；カラム温度は３０℃；サンプルチャンバー温度は５℃；流速は０．８ｍＬ／分であり得る。
（３）勾配溶出は移動相Ａ（５０ｍＭリン酸バッファー／１Ｍ硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０）および移動相Ｂ（５０ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ７．０）で実施し、主要ピークの保持時間を記録した。
融解温度（Ｔｍ）値の分析
試験サンプルをサンプルバッファーで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、次いで、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｓｔａｒｔｅｒ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の説明に従い、ＰＣＲチューブに１３μＬの試験サンプル溶液、次いで５μＬのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ ｓｈｉｆｔバッファーおよび２μＬの１０×染色溶液を加えたところ反応体積は２０μＬとなり、この混合物を十分に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離して気泡を除去した。試験サンプルをサンプル分析のためにＰＣＲ機に入れ、サンプルのＴｍ値を記録した。
試験サンプルをサンプルバッファーで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、次いで、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｓｈｉｆｔ Ｓｔａｒｔｅｒ Ｋｉｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）の説明に従い、ＰＣＲチューブに１３μＬの試験サンプル溶液、次いで５μＬのＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｈｅｒｍａｌ ｓｈｉｆｔバッファーおよび２μＬの１０×染色溶液を加えたところ反応体積は２０μＬとなり、この混合物を十分に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離して気泡を除去した。試験サンプルをサンプル分析のためにＰＣＲ機に入れ、サンプルのＴｍ値を記録した。
ｉＣＩＥＦ分析
サンプル溶液を以下の十分に混合したシステムに加えた：１％メチルセルロース（ＭＣ）７０μＬ、５Ｍ尿素８０μＬ、両性電解質Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ ｐＨ３～１０ ８μＬ、ｐＩマーカー５．５ ２μＬ、ｐＩマーカー９．５ ２μＬ。この系に適当な容量の超純水を加えて２００μＬとし、この混合物を十分に混合し、次いで、遠心分離して分析用の上清を取り出した。分析後、結果のファイルをＣｈｒｏｍＰｅｒｆｅｃｔソフトウエアにインポートしてスペクトルの積分処理および各ピークの等電点と各ピークのパーセンテージを計算した。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は９８％以上の純度と８６℃～９２℃の範囲の融解温度Ｔｍを有し、以下の開発のために良好な温度安定性を有するといえる。
サンプル溶液を以下の十分に混合したシステムに加えた：１％メチルセルロース（ＭＣ）７０μＬ、５Ｍ尿素８０μＬ、両性電解質Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ ｐＨ３～１０ ８μＬ、ｐＩマーカー５．５ ２μＬ、ｐＩマーカー９．５ ２μＬ。この系に適当な容量の超純水を加えて２００μＬとし、この混合物を十分に混合し、次いで、遠心分離して分析用の上清を取り出した。分析後、結果のファイルをＣｈｒｏｍＰｅｒｆｅｃｔソフトウエアにインポートしてスペクトルの積分処理および各ピークの等電点と各ピークのパーセンテージを計算した。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は９８％以上の純度と８６℃～９２℃の範囲の融解温度Ｔｍを有し、以下の開発のために良好な温度安定性を有するといえる。
実施例６ ヒトＰＢＭＣ中のＴ細胞の増殖に対する本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の抑制効果
ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号： １６－００３７－８５）をＰＢＳで０．０３μｇ／ｍｌに希釈し、細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、コード３５９９）（１００μＬ／ウェル）に４℃で一晩コーティングした。翌日、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）で希釈し、最高終濃度は１２μｇ／ｍＬ（調製濃度４８μｇ／ｍＬ）、４倍連続希釈（３勾配濃度＋０の１濃度）；ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５ Ｆｃタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ． カタログ番号：１３９７６－Ｈ０２Ｈ）を培養培地で希釈し、終濃度を５μｇ／ｍＬ（調製濃度２０μｇ／ｍＬ）とした。コーティングプレート内のコーティング溶液をピペットで吸い取って廃棄し、プレートをＰＢＳで２回洗浄し、そのプレートに５０μＬの調製した本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質、次いで、５０μＬの調製したヒトＳｉｇｌｅｃ－１５ Ｆｃタンパク質を加えた。次に、新鮮なヒト末梢血リンパ球（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、カタログ番号：ＰＢ００４－Ｃ）を標識し、４００×ｇで１０分間遠心分離し、細胞ペレットをＰＢＳに再懸濁させて、細胞密度を１×１０７細胞／ｍＬに調整した後、等量の２μＭ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号：Ｃ３４５５４）を加え、添加直後に混合し、混合物を３７℃の水浴に５分間入れ、１０倍量のＰＢＳ＋１０％ＦＢＳで終了させた。次に、細胞を４００×ｇで１０分間遠心分離し、ＰＢＳ＋１０％ＦＢＳで２回洗浄し、培地に２×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させた。その後、ＣＦＳＥで標識された細胞を１００μＬ／ウェルで培養プレートに加え、すなわち、ウェル当たりの細胞数は２×１０５細胞／ウェルであり；細胞培養プレートを３７℃、５％二酸化炭素細胞インキュベーターで３日間インキュベートし、細胞を３００×ｇで５分間遠心分離し、予冷ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで１回洗浄し、細胞ペレットを１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させ、２μＬのＦｃブロッキング試薬を各ウェルに加えた後、プレートを４℃の冷蔵庫に入れて３０分間ブロッキングし、その後混合し、各ウェルの細胞を２つのアリコートに分け、一方のアリコートに５μＬのＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ４抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５５３４９）を加え、、および他方のアリコートに５μＬのＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ８抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５５３６９）を加え；４℃の冷蔵庫で１時間インキュベートした後に、細胞を予冷ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、続いて３０μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させ、ｉＱｕｅフローサイトメーター（ｉｎｔｅｌｌｙｃｉｔｅ ｐｌｕｓ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）にロードして検出を行った。フロー結果はＦｌｏｗ ｊｏ Ｖ１０で分析し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアで処理した。
ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号： １６－００３７－８５）をＰＢＳで０．０３μｇ／ｍｌに希釈し、細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、コード３５９９）（１００μＬ／ウェル）に４℃で一晩コーティングした。翌日、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質を培養培地（ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ）で希釈し、最高終濃度は１２μｇ／ｍＬ（調製濃度４８μｇ／ｍＬ）、４倍連続希釈（３勾配濃度＋０の１濃度）；ヒトＳｉｇｌｅｃ－１５ Ｆｃタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ． カタログ番号：１３９７６－Ｈ０２Ｈ）を培養培地で希釈し、終濃度を５μｇ／ｍＬ（調製濃度２０μｇ／ｍＬ）とした。コーティングプレート内のコーティング溶液をピペットで吸い取って廃棄し、プレートをＰＢＳで２回洗浄し、そのプレートに５０μＬの調製した本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質、次いで、５０μＬの調製したヒトＳｉｇｌｅｃ－１５ Ｆｃタンパク質を加えた。次に、新鮮なヒト末梢血リンパ球（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、カタログ番号：ＰＢ００４－Ｃ）を標識し、４００×ｇで１０分間遠心分離し、細胞ペレットをＰＢＳに再懸濁させて、細胞密度を１×１０７細胞／ｍＬに調整した後、等量の２μＭ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号：Ｃ３４５５４）を加え、添加直後に混合し、混合物を３７℃の水浴に５分間入れ、１０倍量のＰＢＳ＋１０％ＦＢＳで終了させた。次に、細胞を４００×ｇで１０分間遠心分離し、ＰＢＳ＋１０％ＦＢＳで２回洗浄し、培地に２×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させた。その後、ＣＦＳＥで標識された細胞を１００μＬ／ウェルで培養プレートに加え、すなわち、ウェル当たりの細胞数は２×１０５細胞／ウェルであり；細胞培養プレートを３７℃、５％二酸化炭素細胞インキュベーターで３日間インキュベートし、細胞を３００×ｇで５分間遠心分離し、予冷ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで１回洗浄し、細胞ペレットを１００μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させ、２μＬのＦｃブロッキング試薬を各ウェルに加えた後、プレートを４℃の冷蔵庫に入れて３０分間ブロッキングし、その後混合し、各ウェルの細胞を２つのアリコートに分け、一方のアリコートに５μＬのＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ４抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５５３４９）を加え、、および他方のアリコートに５μＬのＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ８抗体（ＢＤ、カタログ番号：５５５３６９）を加え；４℃の冷蔵庫で１時間インキュベートした後に、細胞を予冷ＰＢＳ＋２％ＦＢＳで２回洗浄し、続いて３０μＬのＰＢＳ＋２％ＦＢＳに再懸濁させ、ｉＱｕｅフローサイトメーター（ｉｎｔｅｌｌｙｃｉｔｅ ｐｌｕｓ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）にロードして検出を行った。フロー結果はＦｌｏｗ ｊｏ Ｖ１０で分析し、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウエアで処理した。
図５は、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によるＣＤ４＋Ｔ細胞に対するＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質の増殖抑制効果の逆転に関する検出結果を示す。図６は、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によるＣＤ８＋Ｔ細胞に対するＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質の増殖抑制効果に関する検出結果を示す。図５および６に示されるように、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、ＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞に対するＳｉｇｌｅｃ－１５タンパク質の増殖抑制効果を逆転させることができる。
実施例７ マウス腫瘍モデルにおける本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質の抗腫瘍活性の評価
ＣＴ－２６．ＷＴ（ＡＴＣＣから入手可能）マウス結腸癌細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大培養し、その間にＢＭＤＭ（骨髄由来マクロファージ）を培養した。ＢＭＤＭは、ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、７～８週齢、雌）の大腿骨および脛骨の骨髄から取り出し、１０％ウシ胎仔血清および２０ｎｇ／ｍｌマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）を添加したＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した後、７日後に回収し、各マウス１×１０５量のＣＴ－２６．ＷＴ細胞と組み合わせてＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下接種した。接種１２後、マウスの平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達した際に、マウスを腫瘍体積と体重に従って各８匹の群に無作為に分け、同じ日に投与した。Ｇ１にはアイソタイプ対照ヒトＩｇＧを投与し、Ｇ２には本願のＡｂ９を投与し、Ｇ３にはＡｂ１５を投与した。各マウス群に１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇを腹膜内に投与した。
ＣＴ－２６．ＷＴ（ＡＴＣＣから入手可能）マウス結腸癌細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大培養し、その間にＢＭＤＭ（骨髄由来マクロファージ）を培養した。ＢＭＤＭは、ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．、７～８週齢、雌）の大腿骨および脛骨の骨髄から取り出し、１０％ウシ胎仔血清および２０ｎｇ／ｍｌマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）を添加したＲＰＭＩ－１６４０培地で培養した後、７日後に回収し、各マウス１×１０５量のＣＴ－２６．ＷＴ細胞と組み合わせてＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下接種した。接種１２後、マウスの平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達した際に、マウスを腫瘍体積と体重に従って各８匹の群に無作為に分け、同じ日に投与した。Ｇ１にはアイソタイプ対照ヒトＩｇＧを投与し、Ｇ２には本願のＡｂ９を投与し、Ｇ３にはＡｂ１５を投与した。各マウス群に１週間に２回、１０ｍｇ／ｋｇを腹膜内に投与した。
図７に示されるように、群分けの１１日後、群Ｇ１では、平均腫瘍体積は２１７０±２６９ｍｍ３であり；群Ｇ２では、平均腫瘍体積は１６７７±１９１ｍｍ３であり、腫瘍抑制率は２３％であり；群Ｇ３では、平均腫瘍体積は１５４０±４３７ｍｍ３であり、腫瘍抑制率は２９％であった。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は腫瘍成長に抑制効果を有したことが示された。
実施例８ 本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質による、ＬＰＳにより誘導されるサイトカイン分泌の増強
ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．, Ｌｔｄ．、７～８週齢、雄から市販）を体重に従い、各６匹の群に無作為に分けた。群Ｇ１にはアイソタイプ対照ヒトＩｇＧを投与し、群Ｇ２には本願のＡｂ９を投与し、群Ｇ３にはＡｂ１５を投与した。各マウス群に１０ｍｇ／ｋｇを腹膜内に投与し、０時間として記録し；投与２時間後、マウスに生理食塩水に溶解させたリポ多糖ＬＰＳを２００μｇ／ｋｇの用量で腹膜内注射した。ＬＰＳモデリングの２時間後にｉｎｇ、総ての群の動物を２～５％濃度のイソフルラン吸入により麻酔し、眼窩から２００μＬの全血を採取し、；ＬＰＳモデリングの６時間後に、全群の動物を２～５％濃度のイソフルラン吸入により麻酔し、眼窩から最大量の末梢血を採取し、次いで、室温で３０～６０分間静置し、２０００ｇにて１０分間４℃で遠心分離して、サイトカインＴＮＦ－αおよびＩＬ－６を検出するための血清を分離した。総ての実験動物を過量の二酸化炭素で安楽死させた。
ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．, Ｌｔｄ．、７～８週齢、雄から市販）を体重に従い、各６匹の群に無作為に分けた。群Ｇ１にはアイソタイプ対照ヒトＩｇＧを投与し、群Ｇ２には本願のＡｂ９を投与し、群Ｇ３にはＡｂ１５を投与した。各マウス群に１０ｍｇ／ｋｇを腹膜内に投与し、０時間として記録し；投与２時間後、マウスに生理食塩水に溶解させたリポ多糖ＬＰＳを２００μｇ／ｋｇの用量で腹膜内注射した。ＬＰＳモデリングの２時間後にｉｎｇ、総ての群の動物を２～５％濃度のイソフルラン吸入により麻酔し、眼窩から２００μＬの全血を採取し、；ＬＰＳモデリングの６時間後に、全群の動物を２～５％濃度のイソフルラン吸入により麻酔し、眼窩から最大量の末梢血を採取し、次いで、室温で３０～６０分間静置し、２０００ｇにて１０分間４℃で遠心分離して、サイトカインＴＮＦ－αおよびＩＬ－６を検出するための血清を分離した。総ての実験動物を過量の二酸化炭素で安楽死させた。
図８は、ＬＰＳ注射２時間後に、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によりＴＮＦ－α（ＴＮＦ－アルファ）の分泌レベルに影響を与えるかどうかの検出結果を示す。図９は、ＬＰＳ注射６時間後に、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によりＴＮＦ－α（ＴＮＦ－アルファ）の分泌レベルに影響を与えるかどうかの検出結果を示す。図１０は、ＬＰＳ注射２時間後に、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によりＩＬ－６の分泌レベルに影響を与えるかどうかの検出結果を示す。図１１は、ＬＰＳ注射６時間後に、本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質によりＩＬ－６の分泌レベルに影響を与えるかどうかの検出結果を示す。図８、９、１０、および１１に示されるように、ＬＰＳ注射の２時間後に、ＴＮＦ－α（ＴＮＦ－アルファ）は、アイソタイプ対照群と比較して群Ｇ２で有意に増加し、基本的に６時間後に同じレベルに戻り；ＬＰＳ注射２時間後に、ＩＬ－６はアイソタイプ対照群と比較して全投与群で有意に増加し、６時間後に基礎レベルに戻った。本願のＳｉｇｌｅｃ－１５結合タンパク質は、ＬＰＳにより誘導される急性炎症モデルで炎症性因子の放出を促進することが示された。
前述の詳細な説明は、説明および例として提供されるものであり、添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。本発明に記載されている現在列挙されている実施形態の様々な変更は、当業者には自明であり、添付の特許請求の範囲およびその等価な解決策の範囲内に留保される。
Claims (122)
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３を含んでなる、単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２を含んでなる、請求項１に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２を含んでなる、請求項１～２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３を含んでなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２を含んでなる、 請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２を含んでなる、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１３または配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｈ－ＦＲ１を含んでなり、前記Ｈ－ＦＲ１のＣ末端はＨＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結され、前記Ｈ－ＦＲ１は配列番号１５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｈ－ＦＲ２を含んでなり、前記Ｈ－ＦＲ２はＨＣＤＲ１とＨＣＤＲ２の間に位置し、前記Ｈ－ＦＲ２は配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｈ－ＦＲ３を含んでなり、前記Ｈ－ＦＲ３はＨＣＤＲ２とＨＣＤＲ３の間に位置し、前記Ｈ－ＦＲ３は配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｈ－ＦＲ４を含んでなり、前記Ｈ－ＦＲ４のＮ末端はＨＣＤＲ３のＣ末端に直接または間接的に連結され、前記Ｈ－ＦＲ４は配列番号１８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｌ－ＦＲ１を含んでなり、前記Ｌ－ＦＲ１のＣ末端はＬＣＤＲ１のＮ末端に直接または間接的に連結され、前記Ｌ－ＦＲ１は配列番号１９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｌ－ＦＲ２を含んでなり、前記Ｌ－ＦＲ２はＬＣＤＲ１とＬＣＤＲ２の間に位置し、前記Ｌ－ＦＲ２は配列番号２０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｌ－ＦＲ３を含んでなり、前記Ｌ－ＦＲ３はＬＣＤＲ２とＬＣＤＲ３の間に位置し、前記Ｌ－ＦＲ３は配列番号２１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- Ｌ－ＦＲ４を含んでなり、前記Ｌ－ＦＲ４のＮ末端はＬＣＤＲ３のＣ末端に直接または間接的に連結され、前記Ｌ－ＦＲ４は配列番号２２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、および配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～１８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、および配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～１９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０、配列番号１１または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３または配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号３３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号３４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号３５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号３６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７または配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３または配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ３、配列番号３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ２、配列番号７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＨＣＤＲ１、配列番号９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ３、配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ２、および配列番号１３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＬＣＤＲ１を含んでなる、請求項１～２４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる重鎖可変領域（ＶＨ）を含んでなる、請求項１～３３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨを含んでなる、請求項１～３４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなる軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる、請求項１～３５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号３７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号３８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、または配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、または配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２４に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２６に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２７に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２８に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号２９に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２３に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号３０に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号３１に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 配列番号２５に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＨ、および配列番号３２に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＶＬを含んでなる、請求項１～３９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 抗体重鎖定常領域を含んでなる、請求項１～４８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体重鎖定常領域がヒト抗体に由来する重鎖定常領域を含んでなる、請求項４９に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体重鎖定常領域がＩｇＧに由来する重鎖定常領域を含んでなる、請求項４９～５０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体重鎖定常領域がＩｇＧ１に由来する重鎖定常領域を含んでなる、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 抗体軽鎖定常領域を含んでなる、請求項１～５２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体軽鎖定常領域がヒト抗体に由来する軽鎖定常領域を含んでなる、請求項５３に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体軽鎖定常領域がＩｇκに由来する定常領域を含んでなる、請求項５３～５４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体がモノクローナル抗体を含む、請求項５６に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗体がマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および完全ヒト抗体からなる群の１以上から選択される、請求項５６～５７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記抗原結合フラグメントがＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ＶＨＨ、およびｄＡｂからなる群の１以上から選択される、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）またはその機能的に活性なフラグメントに特異的に結合することができる、請求項１～５９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記ＳｉｇｌｅｃがＳｉｇｌｅｃ－１５を含む、請求項６０に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記ＳｉｇｌｅｃがヒトＳｉｇｌｅｃ、サルＳｉｇｌｅｃ、および／またはマウスＳｉｇｌｅｃを含む、請求項６０～６１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 約１．５６Ｅ－１０Ｍ以下のＫＤ値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有する、請求項１～６２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 約３．２５ｎＭ以下のＥＣ５０値でＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントに結合する能力を有する、請求項１～６３のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記Ｓｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントが、細胞上に発現するＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的フラグメントを含む、請求項６４に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 免疫細胞の増殖に影響を与える能力を有する、請求項１～６５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 免疫細胞の増殖に影響を与えることがＳｉｇｌｅｃ－１５関連免疫細胞の増殖抑制を低減することを含む、請求項６６に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記免疫細胞がヒト由来免疫細胞を含む、請求項６６～６７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記免疫細胞がリンパ球を含む、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記免疫細胞が末梢血リンパ球を含む、請求項６６～６９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記免疫細胞がＴ細胞を含む、請求項６６～７０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記免疫細胞がＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ８＋細胞を含む、請求項６６～７１のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 腫瘍抑制能を有する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記腫瘍抑制能が腫瘍体積に影響を与えることを含む、請求項７３に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 約２３％以上の腫瘍体積抑制率で腫瘍を抑制する能力を有する、請求項７３～７４のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- サイトカイン分泌に影響を与える能力を有する、請求項１～７５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記分泌がｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ分泌を含む、請求項７６に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記サイトカイン分泌がリポ多糖により誘導されるサイトカイン分泌を含む、請求項７６～７７のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記サイトカインが炎症性因子を含む、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 前記サイトカインがＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－６を含む、請求項７６～７９のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含んでなるポリペプチド。
- 融合タンパク質を含んでなる、請求項８１に記載のポリペプチド。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質および／または請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
- 請求項８３に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質および／または請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを含んでなる免疫複合体。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を含んでなる、かつ／もしくは発現する細胞、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを含んでなる、かつ／もしくは発現する細胞、請求項８３に記載の核酸分子を含んでなる細胞、請求項８４に記載のベクターを含んでなる細胞、および／または請求項８５に記載の免疫複合体を含んでなる細胞。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載のベクター、請求項８５に記載の免疫複合体、および／または請求項８６に記載の細胞、ならびに任意選択の薬学上許容可能なビヒクルを含んでなる医薬組成物。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載のベクター、請求項８５に記載の免疫複合体、請求項８６に記載の細胞、および／または請求項８７に記載の医薬組成物を含んでなる医薬組合せ。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載のベクター、請求項８５に記載の免疫複合体、請求項８６に記載の細胞、請求項８７に記載の医薬組成物、および／または請求項８８に記載の医薬組合せを含んでなるキット。
- サンプル中のＳｉｇｌｅｃの存在および／または量を検出するための、請求項８９に記載のキット。
- 前記ＳｉｇｌｅｃがＳｉｇｌｅｃ－１５を含む、請求項９０に記載のキット。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質および／または請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを調製する方法であって、請求項８６に記載の細胞を前記抗原結合タンパク質および／または前記ポリペプチドを発現することができる条件下で培養することを含んでなる、方法。
- 前記細胞を、前記抗原結合タンパク質を発現することができる条件下で培養することを含んでなる、請求項９２に記載の方法。
- 前記細胞を、前記ポリペプチドを発現することができる条件下で培養することを含んでなる、請求項９２に記載の方法。
- サンプル中のＳｉｇｌｅｃを検出する方法であって、請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを投与すること、請求項８３に記載の核酸分子を投与すること、請求項８４に記載のベクターを投与すること、請求項８５に記載の免疫複合体を投与すること、請求項８６に記載の細胞を投与すること、請求項８７に記載の医薬組成物を投与すること、請求項８８に記載の医薬組合せを投与すること、および／または請求項８９～９１のいずれか一項に記載のキットを使用することを含んでなる、方法。
- 前記ＳｉｇｌｅｃがＳｉｇｌｅｃ－１５を含む、請求項９５に記載の方法。
- Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントのそのリガンドへの結合に影響を与える方法であって、請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを投与すること、請求項８３に記載の核酸分子を投与すること、請求項８４に記載のベクターを投与すること、請求項８５に記載の免疫複合体を投与すること、請求項８６に記載の細胞を投与すること、請求項８７に記載の医薬組成物を投与すること、請求項８８に記載の医薬組合せを投与すること、および／または請求項８９～９１のいずれか一項に記載のキットを使用することを含んでなる、方法。
- ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ法を含む、請求項９７に記載の方法。
- 前記Ｓｉｇｌｅｃまたはその機能的に活性なフラグメントがＳｉｇｌｅｃ－１５またはその機能的に活性なフラグメントを含む、請求項９７～９８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記Ｓｉｇｌｅｃのリガンドがロイシンリッチリピート含有タンパク質４Ｃおよび／またはシアリル－Ｔｎを含む、請求項９７～９９のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを投与すること、請求項８３に記載の核酸分子を投与すること、請求項８４に記載のベクターを投与すること、請求項８５に記載の免疫複合体を投与すること、請求項８６に記載の細胞を投与すること、請求項８７に記載の医薬組成物を投与すること、請求項８８に記載の医薬組合せを投与すること、および／または請求項８９～９１のいずれか一項に記載のキットを使用することを含んでなる、免疫細胞の増殖に影響を与える方法。
- ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ法を含む、請求項１０１に記載の方法。
- 免疫細胞の増殖に影響を与えることがＳｉｇｌｅｃ－１５関連免疫細胞の増殖抑制を低減することを含む、請求項１０１～１０２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞がヒト由来免疫細胞を含む、請求項１０１～１０３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞がリンパ球を含む、請求項１０１～１０４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞が末梢血リンパ球を含む、請求項１０１～１０５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞がＴ細胞を含む、請求項１０１～１０６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記免疫細胞がＣＤ４＋細胞および／またはＣＤ８＋細胞を含む、請求項１０１～１０７のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質を投与すること、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチドを投与すること、請求項８３に記載の核酸分子を投与すること、請求項８４に記載のベクターを投与すること、請求項８５に記載の免疫複合体を投与すること、請求項８６に記載の細胞投与をすること、請求項８７に記載の医薬組成物を投与すること、請求項８８に記載の医薬組合せを投与することおよび／または請求項８９～９１のいずれか一項に記載のキットを使用することを含んでなる、サイトカイン分泌に影響を与える方法。
- 前記分泌がｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ分泌を含む、請求項１０９に記載の方法。
- 前記サイトカイン分泌がリポ多糖関連サイトカイン分泌を含む、請求項１０９～１１０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サイトカインが炎症性因子を含む、請求項１０９～１１１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サイトカインがＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－６を含む、請求項１０９～１１２のいずれか一項に記載の方法。
- キットの製造における請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載のベクター、請求項８５に記載の免疫複合体、請求項８６に記載の細胞、請求項８７に記載の医薬組成物、および／または請求項８８に記載の医薬組合せの使用。
- 前記キットがサンプル中のＳｉｇｌｅｃの存在および／または量を検出するために使用される、請求項１１４に記載の使用。
- 前記ＳｉｇｌｅｃがＳｉｇｌｅｃ－１５を含む、請求項１１５に記載の使用。
- 疾患および／または病態の予防および／または治療のための薬剤の製造における請求項１～８０のいずれか一項に記載の単離された抗原結合タンパク質、請求項８１～８２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項８３に記載の核酸分子、請求項８４に記載のベクター、請求項８５に記載の免疫複合体、請求項８６に記載の細胞、請求項８７に記載の医薬組成物、請求項８８に記載の医薬組合せ、および／または請求項８９～９１のいずれか一項に記載のキットの使用。
- 前記疾患および／または病態が腫瘍を含む、請求項１１７に記載の使用。
- 前記腫瘍がＳｉｇｌｅｃ関連腫瘍を含む、請求項１１７～１１８のいずれか一項に記載の使用。
- ＳｉｇｌｅｃがＳｉｇｌｅｃ－１５を含む、請求項１１９に記載の使用。
- 前記疾患および／または病態が固形腫瘍を含む、請求項１１７～１２０のいずれか一項に記載の使用。
- 前記疾患および／または病態が結腸癌を含む、請求項１１７～１２１のいずれか一項に記載の使用。
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