CN114302878A - 酪氨酸激酶非受体1(tnk1)抑制剂及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure DDA0003522759190000011
其中变量(例如，X1、X2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、n)的值如本文中所述。式I的化合物、其药学上可接受的盐、前述任一种的药物组合物和前述任一种的组合可以用于治疗酪氨酸激酶非受体1(TNK1)介导的疾病、障碍和病症。

Description

酪氨酸激酶非受体1(TNK1)抑制剂及其用途
相关申请
本申请要求2019年7月3日提交的美国临时申请号62/870,415、2019年8月16日提交的美国临时申请号62/888,149和2019年11月12日提交的美国临时申请号62/934,167的权益。前述申请的全部教导通过引用并入本文。
发明领域
本公开内容涉及化合物、这样的化合物的药学上可接受的盐、以及包含这样的化合物或盐的组合物、及其用于治疗酪氨酸激酶非受体1(TNK1)介导的疾病、障碍和病症的用途。
背景
酪氨酸激酶非受体1(TNK1)是非受体酪氨酸激酶的ACK家族的成员，且其失调已经与诸如癌症的障碍相关联。
因此，需要用于TNK1介导的疾病、障碍和病症的新治疗和疗法。
发明内容
本文提供了抑制TNK1的化合物、其药学上可接受的盐、前述任一种的药物组合物和前述任一种的组合。本文所述化合物可以用在治疗TNK1介导的疾病、障碍和/或病症(例如，障碍或疾病)的方法中，例如，通过给有此需要的受试者施用治疗有效量的化合物或其药学上可接受的盐。
一个方面是式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000021
其中变量(例如，X1、X2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、n)的值如本文中所述。
另一个方面是药物组合物，其包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)(例如，治疗有效量的本公开内容的化合物)和一种或多种药学上可接受的载体。
另一个方面是药物组合，其包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)(例如，治疗有效量的本公开内容的化合物)和一种或多种其它治疗剂(例如，治疗有效量的一种或多种其它治疗剂)。
另一个方面是治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是治疗癌症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是在携带TNK1突变的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括确定所述受试者是否携带TNK1突变；和如果确定所述受试者携带TNK1突变，则给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是在有此需要的受试者中改善肠屏障功能的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是在将受益于改善的肠屏障功能的受试者中治疗疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是抑制细胞中的TNK1活性的方法，所述方法包括使所述细胞与本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)例如治疗有效量的本公开内容的化合物接触。
另一个方面是在有此需要的受试者中抑制TNK1活性的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。
另一个方面是用于治疗受试者中的本文描述的障碍、疾病或病症(例如，TNK1介导的疾病、障碍或病症，癌症，TNK1突变，将受益于改善的肠屏障功能的疾病、障碍或病症)的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)或本文描述的组合物。另一个方面是本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)用于制备药物的用途，所述药物用于治疗本文描述的障碍、疾病或病症(例如，TNK1介导的疾病、障碍或病症，癌症，TNK1突变，将受益于改善的肠屏障功能的疾病、障碍或病症)。
附图说明
从以下对实施例实施方案的更具体描述中将明白前述内容。
图1是平均肿瘤体积(mm3)相对于研究天数的图，并显示了用指定量的实施例编号13治疗后对L540异种移植物的肿瘤生长抑制。
图2A描绘了蛋白质印迹的图像，并显示了来自皮下L540霍奇金淋巴瘤异种移植物癌症模型的肿瘤样品中TNK1和STAT5磷酸化的剂量依赖性抑制。
图2B描绘了蛋白质印迹的图像，并显示了L540和K562肿瘤组织样品中TNK1表达和磷酸化的对比。
图2C描绘了蛋白质印迹的图像和对应的条形图，并显示了L540和K562肿瘤组织样品中的STAT5表达和磷酸化分析。
图2D描绘了蛋白质印迹的图像，并显示了在给药后4小时和24小时在L540和K562样品中的TNK1磷酸化动力学的分析。
图3A是汇合(％)相对于逝去时间(小时)的图，并显示了实施例编号13、硼替佐米和实施例编号13+硼替佐米的组合对在第一个实验中用实施例编号13、硼替佐米或实施例编号13+硼替佐米的组合处理过的A549细胞的汇合的影响。
图3B是汇合(％)相对于逝去时间(小时)的图，并显示了实施例编号13、硼替佐米和实施例编号13+硼替佐米的组合对在第二个实验中用实施例编号13、硼替佐米或实施例编号13+硼替佐米的组合处理过的A549细胞的汇合的影响。
图4是标准化的pSTAT5相对于治疗组的图，并显示了用指示的化合物治疗对来自用指示的化合物治疗的NOD SCID小鼠的肿瘤裂解物中的pSTAT5水平的影响。
发明详述
实施例实施方案的描述如下。
化合物
第一个实施方案是结构式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000041
其中：
X1是-N-且X2是-C(R9)-，或X1是-C(R9)-且X2是-N-；
R9是-H、卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、-C(O)NR20R21或-NR20R21；
R20和R21各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R1是卤素、-CN、-C(O)NR10R11、-C(O)(C1-C6)烷基、-OR12或-NR10R11；
R10和R11各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R12是-H或(C1-C6)烷基；
R2是-NR13R14；
R13和R14各自独立地是-H或(C1-C6)烷基，或与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，更具体地，1个R30)取代的(C3-C7)杂环基；
R30在每次出现时任选地且独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R3是-H、卤素、氰基或(C1-C6)烷基；
R4是-H、(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基或-C(O)(C1-C6)烷基；
R5是-H；且
R6是-H、卤素、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基或(C3-C7)环烷氧基；或者
R5和R6与它们的插入原子一起形成任选地被一个或多个R40(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，或更具体地，1或2个R40)取代的(C6)芳基或(C5-C6)杂芳基，或任选地被一个或多个R50(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，或更具体地，1或2个R50)取代的(C5-C8)碳环基或(C5-C8)杂环基；
R40在每次出现时任选地且独立地是卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R50在每次出现时任选地且独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R7是卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、-C(O)NR17R18或-NR17R18；
R17和R18各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R8在每次出现时独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
m是0或1，前提条件是，如果R9是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基，则m是0；且
n是0、1或2。
在第一个实施方案的第一方面，X1是-N-且X2是-C(R9)-(例如，-C(H)-)。其余变量的值如在第一个实施方案中所述。
在第一个实施方案的第二方面，X1是-C(R9)-(例如，-C(H)-)和X2是-N-。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一方面中所述。
在第一个实施方案的第三方面，R9是-H。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一或第二方面中所述。
在第一个实施方案的第四方面，R20和R21各自是-H。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三方面中所述。
在第一个实施方案的第五方面，R1是卤素(例如，氯、溴或碘)或-CN。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第四方面中所述。
在第一个实施方案的第六方面，R1是氯、溴或-CN。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第五方面中所述。
在第一个实施方案的第七方面，R1是氯。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第六方面中所述。
在第一个实施方案的第八方面，R13和R14各自独立地是-H或(C1-C6)烷基(例如，R13和R14各自独立地是(C1-C6)烷基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第七方面中所述。
在第一个实施方案的第九方面，R13和R14与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，还更具体地，1个R30)取代的(C3-C7)杂环基(例如，(C5-C6)杂环基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第八方面中所述。
在第一个实施方案的第十方面，R13和R14与它们所连接的N一起形成被一个氧代取代且任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，还更具体地，1个R30)取代的(C3-C7)杂环基(例如，(C5-C6)杂环基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第九方面中所述。
在第一个实施方案的第十一方面，R13和R14与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，还更具体地，1个R30)取代的哌啶酮、吡咯烷酮或咪唑啉酮(例如，1-哌啶基-2-酮、1-吡咯烷基-2-酮或1-咪唑烷基-2-酮)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十方面中所述。
在第一个实施方案的第十二方面，R30在每次出现时任选地且独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十一方面中所述。
在第一个实施方案的第十三方面，R2是-N(CH3)2、1-哌啶基-2-酮、1-吡咯烷基-2-酮、1-咪唑烷基-2-酮、1-吡咯烷基或1-哌啶基(例如，-N(CH3)2、1-吡咯烷基-2-酮或1-咪唑烷基-2-酮)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十二方面中所述。
在第一个实施方案的第十四方面，R3是卤素(例如，氯)、氰基或(C1-C6)烷基(例如，甲基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十三方面中所述。
在第一个实施方案的第十五方面，R3是氯或甲基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十四方面中所述。
在第一个实施方案的第十六方面，R3是-H、卤素(例如，氯)或(C1-C6)烷基(例如，甲基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十五方面中所述。
在第一个实施方案的第十七方面，R3是-H、氯或甲基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十六方面中所述。
在第一个实施方案的第十八方面，R4是-H、-CH3、2-羟基乙基或-C(O)CH3(例如，-CH3)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十七方面中所述。
在第一个实施方案的第十九方面，R5是-H且R6是卤素、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基或(C3-C7)环烷氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十八方面中所述。
在第一个实施方案的第二十方面，R6是(C1-C6)烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、异丙氧基)或(C3-C7)环烷氧基(例如，环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第十九方面中所述。
在第一个实施方案的第二十一方面，R6是(C1-C6)烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基或异丙氧基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十方面中所述。
在第一个实施方案的第二十二方面，R6是甲氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十一方面中所述。
在第一个实施方案的第二十二方面，R5和R6与它们的插入原子一起形成任选地被一个或多个R40(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，或更具体地，1或2个R40)取代的(C6)芳基或(C5-C6)杂芳基，或任选地被一个或多个R50(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，或更具体地，1或2个R50)取代的(C5-C8)碳环基或(C5-C8)杂环基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十一方面中所述。
在第一个实施方案的第二十三方面，R5和R6与它们的插入原子一起形成(C6)芳基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十二方面中所述。
在第一个实施方案的第二十四方面，R7是卤素、氰基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十三方面中所述。
在第一个实施方案的第二十五方面，R17和R18各自是-H。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十四方面中所述。
在第一个实施方案的第二十六方面，R9是-H，且m是1。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十五方面中所述。
在第一个实施方案的第二十七方面，m是0。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十六方面中所述。
在第一个实施方案的第二十八方面，R8在每次出现时独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十七方面中所述。
在第一个实施方案的第二十九方面，n是0。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十八方面中所述。
在第一个实施方案的第三十方面，R4是-CH3。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第二十九方面中所述。
在第一个实施方案第三十一方面，R1是卤素(例如，氯、溴、碘)、-CN或-C(O)(C1-C6)烷基(例如，-C(O)CH3)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十方面中所述。
在第一个实施方案的第三十二方面，R10和R11各自是-H。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十一方面中所述。
在第一个实施方案的第三十三方面，R12是-H或-CH3。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十二方面中所述。
在第一个实施方案的第三十四方面，R5是-H，且R6是-H、(C1-C6)烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基、异丙氧基)或(C3-C7)环烷氧基(例如，环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十三方面中所述。
在第一个实施方案的第三十五方面，R6是-H或(C1-C6)烷氧基(例如，甲氧基、乙氧基或异丙氧基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十四方面中所述。
在第一个实施方案的第三十六方面，R6是-H或甲氧基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十五方面中所述。
在第一个实施方案的第三十七方面，R13和R14与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，还更具体地，1个R30)取代的(C5)杂环基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十六方面中所述。
在第一个实施方案的第三十八方面，R13和R14与它们所连接的N一起形成被一个氧代取代且任选地被一个或多个R30(例如，1、2、3、4或5个，具体地，1、2或3个，更具体地，1或2个，还更具体地，1个R30)取代的(C5)杂环基。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十七方面中所述。
在第一个实施方案的第三十九方面，R2是-N(CH3)2、1-哌啶基-2-酮、1-吡咯烷基-2-酮、1-咪唑烷基-2-酮、1-吡咯烷基或1-哌啶基(例如，-N(CH3)2、1-吡咯烷基-2-酮或1-咪唑烷基-2-酮)；且R3是-H、卤素、氰基或(C1-C6)烷基(例如，卤素、氰基或(C1-C6)烷基；氯或甲基；-H、卤素或(C1-C6)烷基；-H、氯或甲基)。其余变量的值如在第一个实施方案或其第一至第三十八方面中所述。
第二个实施方案是由以下结构式表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000101
其中变量(例如，X1、X2、R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、m和n)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
第三个实施方案是由以下结构式表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000102
其中变量(例如，X1、X2、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R8和n)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
在第三个实施方案的第一方面，所述化合物由以下结构式表示：
Figure BDA0003522759170000111
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，X1、X2、R1、R2、R3、R4、R5和R6)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
第四个实施方案是由以下结构式表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000112
其中变量(例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m和n)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
在第四个实施方案的第一方面，所述化合物由以下结构式表示：
Figure BDA0003522759170000113
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，R1、R2、R3、R4、R5和R6)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
第五个实施方案是由以下结构式表示的化合物：
Figure BDA0003522759170000114
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m和n)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
在第五个实施方案的第一方面，所述化合物由以下结构式表示：
Figure BDA0003522759170000121
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，R1、R2、R3、R4、R5和R6)的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
第六个实施方案是由以下结构式表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003522759170000122
其中：
Z是-N(R60)-或-C(R60)2-；
R30在每次出现时任选地且独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基(例如，甲基)；
R60在每次出现时独立地是氢、卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基(例如，氢或甲基，具体地，氢)；和
p是0、1、2、3、4或5(例如，0、1、2或3；0、1或2；0或1；或0)。变量X1、X2、R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m和n的值如在第一个实施方案或其任何方面中所述。
在第六个实施方案的第一方面，所述化合物由以下结构式表示：
Figure BDA0003522759170000131
或其药学上可接受的盐，其中变量(例如，Z、R1、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R30、m、n和p)的值如在第一个实施方案或其任何方面或第六个实施方案中所述。
定义
为了解释本说明书的目的，将应用以下定义，并且只要合适，以单数形式使用的术语也将包括复数。除非上下文另外清楚地指出，否则在本说明书中使用的术语具有以下含义。
可以以任意合适的次序执行本文描述的所有方法，除非在本文中另外指出或以其它方式与上下文明显矛盾。在本文中提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如“诸如”)的使用仅意图更好地阐明本公开内容，并且不对本公开内容另外要求保护的范围构成限制。
在本公开内容的上下文中(尤其是在权利要求的上下文中)使用的术语“一个”、“一种”、“所述”和类似术语应被解释为涵盖单数和复数，除非本文另外指出或上下文明显矛盾。
本文中使用的术语“杂原子”表示氮(N)、氧(O)或硫(S)原子，尤其是氮或氧。当一个杂原子是S时，它可以任选地单-或二-氧化(即，-S(O)-或-S(O)2)。除非另有说明，假定任何具有不满足化合价的任何杂原子具有足以满足化合价的氢原子。
本文中使用的术语“烷基”表示具有指定数目的碳原子和通式CnH2n+1的支链或直链单价烃基。因而，术语“(C1-C6)烷基”表示通式CnH2n+1的支链或直链单价烃基，其中n是1、2、3、4、5或6。烷基的例子包括、但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、3,3-二甲基丙基、己基、2-甲基戊基等。
本文中使用的术语“烷氧基”表示通过氧连接原子连接的烷基残基，其中烷基如本文中所述。“(C1-C6)烷氧基”表示烷氧基，其中(C1-C6)烷基通过氧连接原子连接。烷氧基的例子包括、但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和异丙氧基)和丁氧基(例如，叔丁氧基)。
本文中使用的“卤素”和“卤”表示氟、氯、溴或碘。在某些实施方案中，卤素是氟、氯或溴。在某些实施方案中，卤素是氟或氯。在某些实施方案中，卤素是氯、溴或碘。在某些实施方案中，卤素是氯或溴。
本文中使用的“卤代烷基”表示烷基残基，其中一个或多个氢原子各自独立地被卤素替代，其中烷基如本文中所述。“卤代烷基”包括单-、多-和全卤代烷基。“(C1-C6)卤代烷基”表示(C1-C6)烷基，其中一个或多个氢原子各自独立地被卤素替代。卤代烷基的例子包括、但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。
本文中使用的“卤代烷氧基”表示通过氧连接原子连接的卤代烷基残基，其中卤代烷基如本文中所述。“(C1-C6)卤代烷氧基”表示卤代烷氧基，其中(C1-C6)卤代烷基通过氧连接原子连接。卤代烷氧基的例子包括、但不限于三氟甲氧基、二氟甲氧基、2,2,2三氟乙氧基和五氟乙氧基。
本文中使用的“羟基”是指-OH。
本文中使用的“羟基烷基”表示烷基残基，其中一个或多个(例如，一个)氢原子各自被羟基替换，其中烷基和羟基如本文中所述。“羟基(C1-C6)烷基”表示(C1-C6)烷基，其中一个或多个氢原子各自被羟基替换。羟基烷基的例子包括、但不限于2-羟基乙基。
本文中使用的“氰基”是指-C≡N。
本文中使用的“氧代”是指＝O。
本文中使用的术语“碳环基”表示具有指定数目的环碳原子的饱和的或不饱和的、非芳族的、单环的或多环的(例如，二环的、三环的)烃环系。因而，“(C5-C8)碳环基”是指具有5-8个环碳的碳环基环系。碳环基可以是饱和的(即，环烷基)。可替换地，碳环基可以是不饱和的(即，含有至少一个不饱和度，如在至少一个双键或三键中)。碳环基的例子包括、但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基和降冰片基(norbornyl)。
本文中使用的术语“环烷基”表示具有指定数目的碳原子的饱和的、单环的或多环的(例如，二环的、三环的)、脂族的烃环系。因而，“(C5-C8)环烷基”是指具有5-8个环碳的环烷基环系。环烷基的例子包括、但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和降冰片基。
本文中使用的“环烷氧基”表示通过氧连接原子连接的环烷基环系。“(C3-C7)环烷氧基”表示环烷氧基，其中(C3-C7)环烷基通过氧连接原子连接。环烷氧基的例子包括、但不限于环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。
本文中使用的术语“芳基”表示具有指定数目的环原子的单环的或多环的、芳族的、碳环的环系。因而，“(C6)芳基”表示具有6个环碳原子的芳基环系。通常，芳基具有6-15个、6-10个、6-9个或6个环碳原子。芳基环系可以由单个或稠合环系组成。芳基的例子包括、但不限于苯基。
本文中使用的术语“杂芳基”表示具有指定数目的环原子的单环的或多环的、芳族的烃环系，其中环中的至少一个碳原子已经被杂原子替换。因而，“(C5-C6)杂芳基”表示具有5或6个环原子的杂芳基环系。通常，杂芳基具有5-15个、5-10个、5-9个或5-6个环原子。杂芳基环系可以由单个或稠合环系组成。典型的单个杂芳基环系是含有1-3个(例如，1、2或3个)独立地选自氧、硫和氮的杂原子的5至6元环，且典型的稠合的杂芳基环系是含有1-4个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的9至10元环系。稠合的杂芳基环系可以由2个稠合在一起的杂芳基环或稠合至芳基环(例如，苯基)的杂芳基环组成。杂芳基的例子包括、但不限于，吡咯基、吡啶基、吡唑基、吲哚基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并吡喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基等。
本文中使用的术语“杂环基”表示具有指定数目的环原子的饱和的或部分饱和的、非芳族的、单环的或多环的(例如，二环的、三环的)环系，其中环系中的至少一个碳原子已经被独立地选自氧、硫和氮的杂原子替换。因而，“(C3-C7)杂环基”是指具有3-7个环原子的杂环基。“杂环基”包括单环、稠合环、桥环和螺环。在某些实施方案中，杂环基是(C3-C7)杂环基、(C5-C6)杂环基、(C5)杂环基或(C6)杂环基。在某些实施方案中，杂环基(例如，(C3-C7)杂环基)是饱和的杂环基。
杂环基可以含有1-7个、1-5个、1-3个、1-2个、1个或2个杂原子。杂环基可以连接在杂原子或碳原子，只要价允许。杂环基的例子包括、但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、哌啶基、哌嗪基、吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢吡喃基、1,4-二氧杂环己烷基、1,4-氧杂硫杂环己烷基、六氢嘧啶基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、氮杂环庚烷基、3-氮杂双环[3.2.2]壬烷基、十氢异喹啉基、2-氮杂螺[3.3]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷基、3-氧杂-8-氮杂-二环[3.2.1]辛烷基、8-氧杂-3-氮杂-二环[3.2.1]辛烷基、2-氧杂-5-氮杂-二环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂-二环[2.2.1]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷基、3-氧杂-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷基、八氢吡咯并[3,2-b]吡咯基等。
本文中使用的术语“取代”是指，至少一个(例如，1、2、3、4、5、6个等，1-5个，1-3个，1或2个)氢原子被非氢取代基替换，前提条件是，维持正常价且取代产生稳定的化合物。除非另有说明，否则“任选地取代的”基团可以在该基团的每个可取代位置处具有取代基，且当任何给定结构中的超过一个位置可以被选自特定组的超过一个取代基取代时，在每个位置的取代基可以是相同的或不同的。可替换地，“任选地取代的基团”可以是未被取代的。
当取代基是氧代时，则单个原子上的两个氢被取代基替换。在芳族部分上不存在氧代取代基。
在其中本公开内容的化合物上存在氮原子的情况下，这些氮原子可以通过用氧化剂(例如，mCPBA和/或过氧化氢)处理而转化成N-氧化物以提供本公开内容的其它化合物。因此，所示和要求保护的氮原子被认为涵盖所示的氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。
当任何变量在化合物的任何组分或式中出现超过一次时，其在每次出现时的定义与其在其它每次出现时的定义无关。因此，例如，如果基团显示为被0-3个取代基取代，则所述基团可以是未被取代的或被最多三个取代基取代，并且每个取代基独立于其它取代基进行选择。
当与取代基的键显示为与连接环中两个原子的键交叉(cross)时，则这样的取代基可以与环上的任何原子键合。当列出取代基而未指明这样的取代基与给定式的化合物的其余部分所键合的原子时，则这样的取代基可以经由这样的取代基中的任何原子键合。
取代基和/或变量的组合只有在该组合产生稳定化合物时才是允许的。
本领域普通技术人员会理解，例如，分子中的酮(-C(H)C(O))基团可以互变异构化为其烯醇形式(-C＝C(OH))。本公开内容意图涵盖所有可能的互变异构体，即使当结构仅描绘其中之一时。
短语“药学上可接受的”是指，该短语所修饰的物质或组合物必须在合理的医学判断范围内，适用于与人类和低等动物的组织接触，没有不适当的毒性、刺激、变应性应答等，且与合理的收益/风险比相称。如果物质是组合物或制剂的一部分，则该物质还必须在化学上和/或毒理学上与组合物或制剂中的其它成分相容。
除非另有说明，否则术语“本公开内容的化合物”表示本文描述的任何结构式的化合物(例如，式I的化合物，式I的子式的化合物，诸如式II、III、III'、IV、IV'、V、V'、VI或VI'的化合物)，以及异构体，诸如立体异构体(包括非对映异构体、对映异构体和外消旋体)、几何异构体、构象异构体(包括旋转异构体和阻转异构体)、互变异构体、同位素标记的化合物(包括氘取代)及其固有形成的部分(例如，多晶型物和/或溶剂化物，诸如水合物)。当存在能够形成盐的部分时，则同样包括盐，特别是药学上可接受的盐。
本公开内容的化合物可以具有不对称中心、手性轴和手性平面(例如，如在以下文献中所述：E.L.Eliel和S.H.Wilen,Stereo-chemistry of Carbon Compounds,JohnWiley&Sons,New York,1994,第1119-1190页)，并作为外消旋混合物、单独的异构体(例如，非对映异构体、对映异构体、几何异构体、构象异构体(包括旋转异构体和阻转异构体)、互变异构体)和中间体混合物出现，所有可能的异构体及其混合物都被包括在本发明中。
本文中使用的术语“异构体”表示具有相同分子式但在原子的排列和构型方面存在差异的不同化合物。
“对映异构体”是一对立体异构体，它们是彼此的不可重叠的镜像。一对对映异构体的1:1混合物是“外消旋的”混合物。在适当的情况下，“外消旋体”或“外消旋的”用于指定外消旋混合物。当指定本公开内容的化合物的立体化学时，使用常规RS系统指定具有两个手性中心的已知相对和绝对构型的单一立体异构体(例如，(1S,2S))；具有已知相对构型但未知绝对构型的单一立体异构体用星号表示(例如，(1R*,2R*))；和具有两个字母的外消旋体(例如，(1RS,2RS)作为(1R,2R)和(1S,2S)的外消旋混合物；(1RS,2SR)作为(1R,2S)和(1S,2R)的外消旋混合物)。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子的立体异构体，但它们不是彼此的镜像。根据Cahn-Ingold-Prelog R-S系统指定了绝对立体化学。当化合物是纯对映异构体时，在每个手性碳处的立体化学可以由R或S指定。未知其绝对构型的经拆分的化合物可以被指定(+)或(-)，取决于它们在钠D线的波长处旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)。可替换地，经由手性HPLC通过相应对映异构体/非对映异构体的各自保留时间，可以定义拆分的化合物。
当化合物含有双键或某些其它使分子具有特定量的结构刚性的特征时，可能出现几何异构体。如果化合物含有双键，则双键可以是E-或Z-构型。如果化合物含有双取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。
构象的异构体(或构象异构体)是通过围绕一个或多个键旋转而不同的异构体。旋转异构体是仅围绕单键旋转而不同的构象异构体。
本文中使用的术语“阻转异构体”表示基于由分子中的受阻旋转产生的轴向或平面手性的结构异构体。
光学活性的(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或使用常规技术拆分(例如，在手性SFC或HPLC色谱柱上分离，诸如可从DAICEL Corp.获得的
Figure BDA0003522759170000191
和
Figure BDA0003522759170000192
柱，或其它等效柱，使用适当的溶剂或溶剂混合物以实现适当的分离)。
本公开内容的化合物可以以光学活性形式或外消旋形式分离。光学活性形式可以通过拆分外消旋形式或通过从光学活性的起始原料合成来制备。用于制备本公开内容的化合物和在其中制备的中间体的所有方法都被认为是本公开内容的一部分。当制备对映异构的或非对映异构的产物时，它们可以通过常规方法分离，例如通过色谱法或分步结晶。
取决于工艺条件，本公开内容的终产物以游离(中性)或盐形式得到。这些终产物的游离形式和盐均在本公开内容的范围内。如果需要，可以将化合物的一种形式转化为另一种形式。游离碱或酸可以转化成盐；盐可以转化成游离化合物或另一种盐；本公开内容的异构体化合物的混合物可以分离成单一异构体。
药学上可接受的盐是优选的。但是，其它盐可能是有用的，例如，在制备期间可以采用的分离或纯化步骤中，并因此被涵盖在本公开内容的范围内。
本文中使用的“药学上可接受的盐”表示衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐，其在合理的医学判断范围内，适用于与人类和低等动物的组织接触，没有不适当的毒性、刺激、变应性应答等，且与合理的收益/风险比相称。
可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以从其衍生出盐的无机酸包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以从其衍生出盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、羟乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学上可接受的酸加成盐包括、但不限于乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙烷二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐/羟基丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐(mucate)、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、苯基乙酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、氨基磺酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐。
可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以从其衍生出盐的无机碱包括，例如，铵盐和来自周期表第I至XII列的金属。在某些实施方案中，所述盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌或铜；特别合适的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。可以从其衍生出盐的有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环胺、碱性离子交换树脂等。有机胺的例子包括、但不限于异丙胺、二苄基乙二胺、胆碱盐、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪和氨丁三醇。
通过常规化学方法可以从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成本公开内容的药学上可接受的盐。通常，通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的量的适当的碱或酸在水或有机溶剂或这两者的混合物中反应，可以制备这样的盐；通常，非水性介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列表可在以下文献中找到：Allen,L.V.,Jr.,编,Remington：Science and Practice of Pharmacy,第22版,PharmaceuticalPress,London,UK(2012)，其有关的公开内容特此通过引用整体并入。
含有能够充当氢键的供体和/或受体的基团的本公开内容的化合物可以能够与合适的共晶形成剂(co-crystal former)形成共晶。这些共晶可以通过已知的共晶形成程序从本公开内容的化合物制备。这样的程序包括在溶液中使本公开内容的化合物与共晶形成剂一起在结晶条件下研磨、加热、共升华、共熔化或接触并分离由此形成的共晶。合适的共晶形成剂包括在WO 2004/078163中描述的那些。因此，本公开内容进一步提供了包含本公开内容的化合物和共晶形成剂的共晶。
本文给出的任意式还旨在表示所述化合物的未标记形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式描绘的结构，但是一个或多个原子被具有所选择的原子质量或质量数的原子替换。可以掺入本公开内容的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、123I、124I和125I。本公开内容包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中存在放射性同位素(诸如3H和14C)的那些化合物，或其中存在非放射性同位素(诸如2H和13C)的那些化合物。这样的同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)、检测或成像技术诸如正电子发射断层摄影术(PET)或单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)(包括药物或底物组织分布测定)，或用于患者的放射性治疗。具体地，18F或标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是特别合乎需要的。
此外，用较重的同位素、特别是氘(即，2H或D)取代可能提供某些由更大代谢稳定性引起的治疗优点，例如，增加的体内半衰期或减小的剂量需求或治疗指数的改进。应当理解，氘在该背景下被认为是本公开内容的化合物的取代基。这样的更重的同位素、特别是氘的浓度可以用同位素富集因子来定义。本文中使用的术语“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。如果本公开内容的化合物中的取代基表示为氘，则这样的化合物对于每个指定的氘原子具有至少3500(在每个指定的氘原子处52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)或至少6633.3(99.5％氘掺入)的同位素富集因子。
通过本领域技术人员已知的常规技术或通过以下描述的方案或实施例和制备中所公开的方法(或与下文描述的那些类似的方法)，通过用适当的或容易得到的同位素标记的试剂替换在其它情况下使用的非同位素标记的试剂，通常可以制备本公开内容的被同位素标记的化合物。这样的化合物具有多种潜在用途，例如，在确定潜在药物化合物的结合靶蛋白或受体的能力时作为标准品和试剂，或用于在体内或在体外对结合至生物受体的本公开内容的化合物的成像。
术语“溶剂化物”是指本公开内容的化合物与一个或多个溶剂分子(不论有机或无机)的物理缔合。该物理缔合包括氢键合。在某些情况下，溶剂化物能够分离，例如，当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。在溶剂化物中的溶剂分子可以以规则排列和/或无序排列存在。溶剂化物可包含化学计量的或非化学计量的量的溶剂分子。“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。溶剂化物的例子包括、但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物和异丙醇化物。溶剂化的方法通常是本领域已知的。
本文中使用的“多晶型物”表示具有相同化学结构/组成但形成晶体的分子和/或离子的空间排列不同的结晶形式。本公开内容的化合物可以作为无定形固体或结晶固体提供。可以采用低压冻干法以提供作为固体的本公开内容的化合物。
本文中使用的术语“酪氨酸激酶非受体抑制剂1介导的疾病、障碍或病症”和“TNK1介导的疾病、障碍或病症”表示由TNK1直接地或间接地调节的任何疾病、障碍或病症。TNK1介导的疾病、障碍或病症的非限制性例子包括癌症，胃肠道障碍，SIRS，MODS，脓毒症，自身免疫障碍，微生物组(microbiome)的疾病、障碍或病症，或由创伤和/或肠损伤引起的疾病、障碍或病症。
术语“恶性肿瘤”和“癌症”在本文中可互换地使用，并表示其中异常细胞不受控制地分裂并且可以侵袭附近组织的疾病。恶性细胞还可以通过血液和淋巴系统扩散到身体的其它部位。有几种主要类型的恶性肿瘤。癌(Carcinoma)是一种起源于皮肤或组织(其衬或覆盖内部器官)的恶性肿瘤。肉瘤是一种源于骨、软骨、脂肪、肌肉、血管或其它结缔组织或支持组织的恶性肿瘤。白血病是一种起源于造血组织(诸如骨髓)并导致大量异常血细胞产生并进入血液的恶性肿瘤。淋巴瘤和多发性骨髓瘤是起源于免疫系统细胞的恶性肿瘤。中枢神经系统癌症是起源于脑和脊髓的组织的恶性肿瘤。
本文中使用的术语“实体瘤”表示由经常不含有囊肿或液体区域的异常组织块形成的恶性肿瘤/癌症。根据起源的组织/细胞来命名/分类实体瘤。例子包括、但不限于肉瘤和癌。
本文中使用的术语“白血病”表示开始于血液形成组织(诸如骨髓)的血液学或血细胞恶性肿瘤/癌症。例子包括、但不限于慢性白血病、急性白血病、急性髓性白血病(AML)、慢性髓性白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性淋巴母细胞白血病(例如，B-细胞、T-细胞)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
本文中使用的术语“淋巴瘤”表示开始于免疫系统细胞的淋巴细胞恶性肿瘤/癌症。例子包括、但不限于霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
本文中使用的术语”受试者”表示动物。通常，动物是哺乳动物。受试者也表示，例如，灵长类动物(例如，人类)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、禽类等。在某些实施方案中，受试者是灵长类动物。在其它实施方案中，受试者是人。
如本文中使用的，如果受试者(例如，人)将在生物学上、在医学上或在生活质量上受益于治疗，则这样的受试者“需要”这样的治疗。
本文中使用的“治疗”表示对患有感兴趣的疾病或病症(例如癌症)的受试者(诸如人)施用药物或医疗护理，并且包括:(i)预防在受试者中发生疾病或病症，特别是当这样的受试者易患该病症但尚未被诊断为患有该病症时；(ii)抑制疾病或病症，例如阻止其发展；(iii)缓解疾病或病症，例如，造成疾病或病症的消退；或(iv)缓解由疾病或病症引起的症状(例如，疼痛、重量减轻、咳嗽、疲劳、虚弱等)。
本文中使用的术语“治疗有效量”表示当给受试者(诸如人)施用时足以实现治疗的治疗剂(诸如本公开内容的化合物)的量。构成“有效量”的治疗剂的量将随治疗剂、所治疗的病症及其严重程度、施用方式、治疗的持续时间或要治疗的受试者(例如，受试者的年龄、重量、适合性)而变化，但可以由本领域普通技术人员基于他自己的知识和本公开内容常规地确定。在实施方案中，“有效量”实现治疗，如通过一种或多种适应症、症状、征象、诊断试验、生命征象等的统计学显著变化所测量的。在其它实施方案中，“有效量”控制或预防通过一种或多种适应症、症状、征象、诊断试验、生命征象等没有统计学显著变化来测量的病症。
施用方案可以影响治疗有效量的构成。本公开内容的化合物可以在TNK1介导的病症的发作之前或之后施用给受试者。此外，可以每天或依次施用几个分开的剂量、以及交错的剂量，或者可以连续输注剂量，或者可以是快速推注(bolus injection)。此外，可以如治疗或预防情况的急迫性所指示按比例增加或减少本公开内容的化合物的剂量。
药物组合物和组合
本公开内容的化合物通常用于药物组合物(例如，包含本公开内容的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物)中。“药学上可接受的载体”表示本领域普遍接受的用于将生物活性剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，包括公认为安全的(GRAS)溶剂、分散介质、包衣剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、缓冲剂(例如，马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠等)、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等和它们的组合，如本领域技术人员已知的(参见，例如，Allen,L.V.,Jr.等人,Remington：Science and Practice of Pharmacy(第2卷),第22版,Pharmaceutical Press(2012)。
在一个方面，本文提供了药物组合物，其包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或前述的药学上可接受的盐)(例如，治疗有效量的本公开内容的化合物)和药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，所述组合物包含至少两种药学上可接受的载体，诸如本文描述的那些。为了本公开内容的目的，除非另有说明，否则溶剂化物通常被认为是组合物。优选地，药学上可接受的载体是无菌的。药物组合物可以被配制用于特定施用途径，诸如口服施用、胃肠外施用(例如，静脉内施用)和直肠施用等。此外，本公开内容的药物组合物可以制成固体形式(包括、但不限于，胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)或液体形式(包括、但不限于，溶液、悬浮液或乳剂)。药物组合物可以进行常规药物操作，诸如灭菌，和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂，以及辅助剂(adjuvant)，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。通常，药物组合物是包含活性成分以及以下一种或多种的片剂或明胶胶囊剂：
a)稀释剂，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；
c)粘合剂，例如，硅酸镁铝、淀粉浆、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；
d)崩解剂，例如，淀粉、琼脂、海藻酸或它的钠盐或泡腾混合物；和
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
根据本领域已知的方法，片剂可以是薄膜包衣的或包有肠溶衣的。
适合口服施用的组合物包括呈片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂的形式的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法制备意图用于口服使用的组合物，并且这样的组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以便提供药学上美观且可口的制备物。片剂可以含有与适合于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是，例如，惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如，淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如，硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未包衣的或通过已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并从而提供在较长时间中的持续作用。例如，可以采用时间延迟材料，诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以呈现为硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如，碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或呈现为软明胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质(例如，花生油、液状石蜡或橄榄油)混合。
某些可注射的组合物包含呈水性等渗溶液或悬浮液形式的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)，并且包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)的某些栓剂有利地从脂肪乳剂或悬浮液制备。所述组合物可以被灭菌和/或含有辅助剂，诸如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可能含有其它治疗上有价值的物质。所述组合物分别根据常规混合、制粒或包衣方法制备，并含有约0.1-75％或约1-50％的活性成分。
用于透皮应用的合适组合物包括与合适的载体在一起的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。适用于透皮递送的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂以帮助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置是绷带的形式，其包括背衬构件、含有任选地与载体一起的化合物的蓄池、任选地速率控制屏障(以在延长的时间段将化合物以受控和预定的速率递送至宿主的皮肤)和将装置固定到皮肤上的工具。
用于局部应用例如至皮肤和眼睛的包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)的合适组合物包括水溶液、悬浮液、软膏剂、乳膏剂、凝胶或可喷射制剂，例如用于通过气雾剂等递送。这样的局部递送系统将特别适用于真皮应用，例如用于治疗皮肤癌，例如用于在防晒霜、洗剂、喷雾剂等中的预防性使用。因此，它们特别适用于在本领域众所周知的局部制剂(包括化妆品制剂)中的应用。这些可能含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
本文中使用的局部应用还可以涉及吸入或鼻内应用。适用于吸入或鼻内施用的组合物可以以来自干粉吸入器的干粉形式(单独地，作为混合物，例如与乳糖的干混物，或混合的组分颗粒，例如，与磷脂)方便地递送，或来自加压容器、泵、喷雾器(spray)、雾化器(atomizer)或雾化吸入器(nebuliser)的气溶胶喷雾呈现，使用或不使用合适的抛射剂。
本公开内容进一步提供了无水药物组合物和剂型，其包含本文提供的化合物(例如，式I或其子式的化合物)或其药学上可接受的盐，因为水可促进某些化合物的降解。可以使用无水或低含水成分和低水分或低湿度条件制备本公开内容的无水药物组合物和剂型。可以制备和储存无水药物组合物以保持其无水性质。因此，使用已知防止暴露于水的材料包装无水组合物，使得它们可以被包括在合适的处方试剂盒中。合适包装的例子包括、但不限于气密密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如，管形瓶)、泡罩包和条状包。
本公开内容进一步提供了药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)作为活性成分的分解速率的试剂。在本文中被称作“稳定剂”的此类试剂包括、但不限于抗氧化剂诸如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)通常被配制成药物剂型以提供易于控制的药物剂量并给患者提供优雅且易于操作的产品。本公开内容的化合物的剂量方案当然将随已知因素而变化，诸如特定药剂的药效动力学特征及其施用模式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康、医学病症和重量；症状的性质和程度；并行治疗的种类；治疗频率；施用途径；患者的肾和肝功能；以及期望的效果。本文描述的化合物(例如，式I或其子式的化合物)或其药学上可接受的盐可以以单个每日剂量施用，或总日剂量可以以分份剂量施用，例如每天两次、三次或四次。
在某些情况下，可能有利的是，与一种或多种治疗活性剂联合施用本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。例如，可能有利的是，与一种或多种治疗活性剂联合施用本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)以治疗癌症，例如，所述治疗活性剂独立地选自抗癌剂(例如，化学治疗剂)、抗过敏剂、止吐剂、疼痛缓解剂、免疫调节剂和细胞保护剂。在某些实施方案中，与一种或多种治疗活性剂联合施用本公开内容的化合物以治疗TNK1-介导的疾病、障碍或病症，例如，癌症，胃肠道障碍，SIRS，MODS，脓毒症，自身免疫障碍，微生物组的疾病、障碍或病症，或由创伤和/或肠损伤引起的疾病、障碍或病症。
术语“联合疗法”表示施用两种或更多种治疗剂来治疗本文所述的疾病、障碍或病症。这样的施用涵盖以基本上同时的方式共同施用治疗剂，诸如在具有固定比例的活性成分的单个胶囊中。可替换地，这样的施用涵盖每种活性成分在多个或分开的容器(例如，胶囊、粉末和液体)中的共同施用。这样的施用也涵盖以顺序方式使用每种类型的治疗剂，无论在大致同时还是在不同时间。本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)和额外的治疗剂可以经由相同的施用途径或经由不同的施用途径施用。粉末和/或液体可以在施用前重构或稀释至所需剂量。通常，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述的疾病、病症或障碍中的有益效果。
在某些实施方案中，用于本文所述的联合疗法的方法提供了一种药剂，已知当与本文所述的化合物联合使用时，其调节其它途径或相同途径的其它组分，或甚至重叠的靶酶组。在一个方面，这样的疗法包括、但不限于本文所述的化合物与化学治疗剂、治疗性抗体和辐射治疗的组合以提供协同的或累加的治疗效果。
用于联合疗法中的组合物将一起配制为药物组合，或提供用于分开施用(例如，结合在试剂盒中)。因此，另一个实施方案是一种药物组合，其包含本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)(例如，治疗有效量的本公开内容的化合物)和一种或多种其它治疗剂(例如，治疗有效量的一种或多种其它治疗剂)。药物组合可以进一步包含一种或多种药学上可接受的载体，诸如一种或多种本文所述的药学上可接受的载体。
用于与本公开内容的化合物联合使用(例如，在联合疗法中、在药物组合中)的疗法的例子包括护理标准疗法(例如，标准护理药剂(standard of care agents))。护理标准疗法是临床医师应为特定类型的患者、疾病和/或临床情况使用的疗法。例如，胰腺癌的标准护理药剂的一个非限制性例子是吉西他滨。结肠直肠癌的标准护理药剂的非限制性例子是FOLFIRINOX(由亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂组成的化学疗法方案)，或前述两种或更多种的任何组合。诸如国家综合癌症网络(National Comprehensive CancerNetwork，NCCN)的组织经常发布指南和/或治疗算法，其为某些患者、疾病和/或临床情况的治疗制定最佳实践。参见nccn.org。这些指南经常建立、阐述和/或总结护理标准疗法。
在某些实施方案中，辐射疗法可以与本文所述的化合物联合施用。示例性的辐射疗法包括外部射束(external-beam)疗法、内部辐射疗法、植入辐射、立体定向放射手术、全身性辐射疗法、放射疗法以及持久性或暂时性组织间近距离放射疗法(interstitialbrachytherapy)。本文中使用的术语“近距离放射疗法”表示通过在肿瘤或其它增殖性组织疾病位点处或附近插入体内的空间受限的放射性物质递送的辐射疗法。该术语意图但不限于包括暴露于放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)。用作本发明的细胞调节剂的合适辐射源包括固体和液体。作为非限制性例子，所述辐射源可以是放射性核素，诸如作为固体源的I125、I131、Yb169、Ir192，作为固体源的I125，或发射光子、β粒子、γ辐射或其它治疗性射线的其它放射性核素。放射性物质也可以是由放射性核素的任何溶液(例如，I125或I131的溶液)制成的流体，或者可以使用含有固体放射性核素(诸如Au198、Y90)的小颗粒的合适流体的浆料来生产放射性流体。此外，放射性核素可以被包含在凝胶或放射性微球中。
不受任何理论限制，本文所述的化合物可以使异常细胞对辐射治疗更敏感，用于杀死和/或抑制这样的细胞的生长的目的。因此，一些实施方案包括使哺乳动物中的异常细胞对辐射治疗敏感的方法，该方法包括向哺乳动物施用一定量的本文所述的化合物，该量有效地使异常细胞对辐射治疗敏感。根据用于确定本文描述的这样的化合物和盐的有效量的方式，可以确定该方法中本文所述的化合物的量。在某些实施方案中，护理标准疗法包括辐射疗法。
用于与本公开内容的化合物联合使用(例如，在联合疗法中、在药物组合中)的化学治疗剂的非限制性例子包括卡培他滨
Figure BDA0003522759170000301
N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂
Figure BDA0003522759170000302
顺铂
Figure BDA0003522759170000303
克拉屈滨
Figure BDA0003522759170000304
环磷酰胺(
Figure BDA0003522759170000305
或
Figure BDA0003522759170000306
)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)
Figure BDA0003522759170000307
阿糖胞苷脂质体注射剂
Figure BDA0003522759170000308
达卡巴嗪
Figure BDA0003522759170000309
盐酸多柔比星
Figure BDA00035227591700003010
磷酸氟达拉滨
Figure BDA00035227591700003011
5-氟尿嘧啶
Figure BDA00035227591700003012
吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、伊立替康
Figure BDA00035227591700003013
L-天门冬酰胺酶
Figure BDA00035227591700003014
6-巯基嘌呤
Figure BDA00035227591700003015
甲氨蝶呤
Figure BDA00035227591700003016
喷司他丁、6-硫鸟嘌呤、塞替派和注射用盐酸托泊替康
Figure BDA0003522759170000311
另一个例子是硼替佐米。再其它例子包括吉西他滨、白蛋白结合型紫杉醇(nabpaclitaxel)、厄洛替尼、氟尿嘧啶和FOLFIRINOX(由亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂组成的化学疗法方案)或前述两种或更多种的任意组合，例如，以治疗胰腺癌(例如，晚期胰腺癌、胰腺导管腺癌)。
用于与本公开内容的化合物联合使用的特别感兴趣的抗癌剂包括：
嘌呤抗代谢药和/或从头嘌呤合成的抑制剂：培美曲塞
Figure BDA0003522759170000312
吉西他滨
Figure BDA0003522759170000313
5-氟尿嘧啶(
Figure BDA0003522759170000314
和
Figure BDA0003522759170000315
)、甲氨蝶呤
Figure BDA0003522759170000316
卡培他滨
Figure BDA0003522759170000317
氟尿苷
Figure BDA0003522759170000318
地西他滨
Figure BDA0003522759170000319
阿扎胞苷(
Figure BDA00035227591700003110
和
Figure BDA00035227591700003111
)、6-巯基嘌呤
Figure BDA00035227591700003112
克拉屈滨(
Figure BDA00035227591700003113
和
Figure BDA00035227591700003114
)、氟达拉滨
Figure BDA00035227591700003115
喷司他丁
Figure BDA00035227591700003116
奈拉滨
Figure BDA00035227591700003117
氯法拉滨(
Figure BDA00035227591700003118
和
Figure BDA00035227591700003119
)和阿糖胞苷
Figure BDA00035227591700003120
抗血管生成剂包括，例如，MMP-2(基质金属蛋白酶2)抑制剂、雷帕霉素、坦罗莫司(CCI-779)、依维莫司(RAD001)、索拉非尼、舒尼替尼和贝伐珠单抗。有用的COX-II抑制剂的例子包括CELEBREXTM(alecoxib)、伐地考昔和罗非考昔。有用的基质金属蛋白酶抑制剂的例子描述在：WO 96/33172(公开日为1996年10月24日),WO 96/27583(公开日为1996年3月7日),欧洲专利申请号97304971.1(申请日为1997年7月8日),欧洲专利申请号99308617.2(申请日为1999年10月29日),WO 98/07697(公开日为1998年2月26日),WO 98/03516(公开日为1998年1月29日),WO 98/34918(公开日为1998年8月13日),WO 98/34915(公开日为1998年8月13日),WO 98/33768(公开日为1998年8月6日),WO 98/30566(公开日为1998年7月16日),欧洲专利公开606,046(公开日为1994年7月13日),欧洲专利公开931,788(公开日为1999年7月28日),WO 90/05719(公开日为1990年5月31日),WO 99/52910(公开日为1999年10月21日),WO 99/52889(公开日为1999年10月21日),WO 99/29667(公开日为1999年6月17日),PCT国际申请号PCT/IB98/01113(申请日为1998年7月21日),欧洲专利申请号99302232.1(申请日为1999年3月25日),英国专利申请号9912961.1(申请日为1999年6月3日),美国临时申请号60/148,464(申请日为1999年8月12日),美国专利5,863,949(授权日为1999年1月26日),美国专利5,861,510(授权日为1999年1月19日),和欧洲专利公开780,386(公开日为1997年6月25日)，它们都通过引用将其整体并入本文。MMP-2和MMP-9抑制剂的实施方案包括几乎不具有或根本不具有抑制MMP-1的活性的那些。其它实施方案包括相对于其它基质金属蛋白酶(即，MAP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP-8、MMP-10、MMP-ll、MMP-12和MMP-13)选择性地抑制MMP-2和/或AMP-9的那些。在某些实施方案中有用的MMP抑制剂的一些具体例子是AG-3340、RO323555和RS 13-0830。
自噬抑制剂包括、但不限于氯喹、3-甲基腺嘌呤、羟氯喹(PlaquenilTM)、巴佛洛霉素(bafilomycin)A1、5-氨基-4-咪唑甲酰胺核苷(AICAR)、冈田酸、抑制2A型或1型的蛋白磷酸酶的自噬抑制性海藻毒素、cAMP的类似物和升高cAMP水平的药物诸如腺苷、LY204002、N6-巯基嘌呤核苷和长春碱。另外，也可以使用抑制蛋白表达的反义或siRNA，包括、但不限于ATG5(其参与自噬)。
在其它实施方案中，可用在与本文所述的化合物的联合疗法的方法中的药剂包括、但不限于：厄洛替尼、阿法替尼、易瑞沙、GDC0941、MLN1117、BYL719(阿培利司)、BKM120(Buparlisib)、CYT387、GLPG0634、巴瑞替尼、来他替尼、momelotinib、帕瑞替尼、鲁索替尼、TG101348、克唑替尼、tivantinib、AMG337、卡博替尼、弗雷替尼、奥那妥组单抗、NVP-AEW541、达沙替尼、普纳替尼、沙拉替尼、波舒替尼、曲美替尼、司美替尼、考比替尼、PD0325901、RO5126766、阿昔替尼、贝伐珠单抗、Bostutinib、西妥昔单抗、克唑替尼、福他替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、乐伐替尼、依鲁替尼、尼洛替尼、帕尼单抗、帕唑帕尼、哌加他尼、雷珠单抗、鲁索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、SU6656、曲妥珠单抗、托法替尼、凡他尼布、威罗菲尼、伊立替康、泰素、多西他赛、雷帕霉素或MLN0128。
B-细胞受体信号传递拮抗剂(例如，布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂)：依鲁替尼、维奈托克。
布罗莫结构域抑制剂。布罗莫结构域抑制剂抑制至少一种布罗莫结构域蛋白，诸如Brd2、Brd3、Brd4和/或BrdT，例如Brd4。在这些实施方案中的一些中，布罗莫结构域抑制剂是JQ-1(Nature 2010年12月23日；468(7327):1067-73),BI2536(ACS Chem.Biol.2014年5月16日；9(5):1160-71；Boehringer Ingelheim),TG101209(ACS Chem.Biol.2014年5月16日；9(5):1160-71),OTX015(Mol.Cancer Ther.2013年11月12日；C244；Oncoethix),IBET762(J Med Chem.2013年10月10日；56(19):7498-500；GlaxoSmithKline),IBET151(Bioorg.Med.Chem.Lett.2012年4月15日；22(8):2968-72；GlaxoSmithKline),PFI-1(J.Med.Chem.2012年11月26日；55(22):9831-7；Cancer Res.2013年6月1日；73(11):3336-46；Structural Genomics Consortium)或CPI-0610(Constellation Pharmaceuticals)。在某些实施方案中，所述布罗莫结构域抑制剂是TG101209、BI2536、OTX015、C244、IBET762、IBET151或PFI-1。
组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。HDAC抑制剂抑制至少一种HDAC蛋白。HDAC蛋白可以根据与酵母HDAC蛋白的同源性分为几类，其中I类由HDAC1、HDAC2、HDAC3和HDAC 8组成；IIa类由HDAC4、HDAC5、HDAC7和HDAC 9组成；IIb类由HDAC6和HDAC10组成；且IV类由HDAC11组成。在这些实施方案中的一些中，HDAC抑制剂是曲古抑菌素A,伏立诺他(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1998年3月17日；95(6):3003-7),吉维司他,艾贝司他(Mol.Cancer Ther.2006年5月；5(5):1309-17),贝利司他(Mol.Cancer Ther.2003年8月；2(8):721-8),帕比司他(Clin.Cancer Res.2006年8月1日；12(15):4628-35),resminostat(Clin.Cancer Res.2013年10月1日；19(19):5494-504),quisinostat(Clin.CancerRes.2013年8月1日；19(15):4262-72),缩肽(Blood.2001年11月1日；98(9):2865-8),恩替诺特(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1999年4月13日；96(8):4592-7),莫西司他(Bioorg.Med.Chem.Lett.2008年2月1日；18(3):106771)或丙戊酸(EMBO J.2001年12月17日；20(24):6969-78)。例如，在某些实施方案中，所述HDAC抑制剂是帕比司他、伏立诺他、MS275、贝利司他或LBH589。在某些实施方案中，所述HDAC抑制剂是帕比司他或SAHA。
在实施方案中，本文所述的化合物与表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR)抑制剂联合施用。EGFR抑制剂的例子包括厄洛替尼、奥希替尼、西妥昔单抗、吉非替尼、奈昔木单抗、拉帕替尼、奈拉替尼、帕尼单抗、凡他尼布和奈昔木单抗。本文所述的化合物和EGFR抑制剂的组合可能用于例如治疗与EGFR调节异常有关的癌症，诸如非小细胞肺癌(NSCLC)、胰腺癌、乳腺癌和结肠癌。EGFR可能调节异常，例如，由于外显子18、19、20或21中的激活突变。在特定实施方案中，所述EGFR抑制剂是厄洛替尼或奥希替尼。在特定实施方案中，本文所述的化合物和EGFR抑制剂的组合用于治疗EGFR-突变的NSCLC。在特定实施方案中，本文所述的化合物和EGFR抑制剂的组合用于治疗EGFR抑制剂抗性的癌症，并且本文所述的化合物使癌症对EGFR抑制剂敏感。
EGFR抗体:西妥昔单抗
Figure BDA0003522759170000341
MTAP抑制剂:(3R,4S)-1-((4-氨基-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-7-基)甲基)-4-((甲硫基)甲基)吡咯烷-3-醇(MT-DADMe-免疫霉素(immucillin)-A,CAS 653592-04-2)。
甲硫基腺苷:((2R,3R,4S,5S)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-5-((甲硫基)甲基)四氢呋喃-3,4-二醇,CAS 2457-80-9)。
表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂：盐酸厄洛替尼
Figure BDA0003522759170000342
和吉非替尼
Figure BDA0003522759170000343
EGFR抗体:西妥昔单抗
Figure BDA0003522759170000344
MET抑制剂:卡马替尼(INC280,CAS 1029712-80-8)。
血小板-衍生的生长因子(PDGF)受体抑制剂：伊马替尼
Figure BDA0003522759170000351
利尼伐尼(N-[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯基]-N'-(2-氟-5-甲基苯基)脲，也被称作ABT 869，可得自Genentech)；苹果酸舒尼替尼
Figure BDA0003522759170000352
奎扎替尼(AC220,CAS 950769-58-1)；帕唑帕尼
Figure BDA0003522759170000353
阿昔替尼
Figure BDA0003522759170000354
索拉非尼
Figure BDA0003522759170000355
vargatef(BIBF1120,CAS 928326-83-4)；替拉替尼(BAY57-9352,CAS 332012-40-5)；二盐酸伐拉尼布(PTK787,CAS 212141-51-0)；和二磷酸莫替沙尼(AMG706,CAS 857876-30-3,N-(2,3-二氢-3,3-二甲基-1H-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，描述于PCT公开号WO 02/066470)。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂：4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也被称作GDC 0941并描述于PCT公开号WO09/036082和WO 09/055730)；4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(也被称作BKM120或NVP-BKM120，并描述于PCT公开号WO 2007/084786)；阿培利司(BYL719):(5Z)-5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮(GSK1059615,CAS 958852-01-2)；5-[8-甲基-9-(1-甲基乙基)-2-(4-吗啉基)-9H-嘌呤-6-基]-2-嘧啶胺(VS-5584,CAS 1246560-33-7)和依维莫司
Figure BDA0003522759170000356
周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂：瑞博西尼(LEE011,CAS 1211441-98-3)；aloisine A；阿伏西地(也被称作黄酮吡多或HMR-1275,2-(2-氯苯基)-5,7-二羟基-8-[(3S,4R)-3-羟基-1-甲基-4-哌啶基]-4-苯并吡喃酮(chromenone)，并描述于美国专利号5,621,002)；克唑替尼(PF-02341066,CAS 877399-52-5)；2-(2-氯苯基)-5,7-二羟基-8-[(2R,3S)-2-(羟基甲基)-1-甲基-3-吡咯烷基]-4H-1-苯并吡喃-4-酮盐酸盐(P276-00,CAS920113-03-7)；1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]-4-吡啶基]氧基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-苯并咪唑-2-胺(RAF265,CAS 927880-90-8)；吲地磺胺(indisulam)(E7070)；roscovitine(CYC202)；6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮盐酸盐(PD0332991)；dinaciclib(SCH727965)；N-[5-[[(5-叔丁基噁唑-2-基)甲基]硫基]噻唑-2-基]哌啶-4-甲酰胺(BMS 387032,CAS 345627-80-7)；4-[[9-氯-7-(2,6-二氟苯基)-5H-嘧啶并[5,4-d][2]苯并氮杂环庚三烯-2-基]氨基]-苯甲酸(MLN8054,CAS 869363-13-3)；5-[3-(4,6-二氟-1H-苯并咪唑-2-基)-1H-吲唑-5-基]-N-乙基-4-甲基-3-吡啶甲胺(AG-024322,CAS 837364-57-5)；4-(2,6-二氯苯甲酰基氨基)-1H-吡唑-3-甲酸N-(哌啶-4-基)酰胺(AT7519,CAS 844442-38-2)；4-[2-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-咪唑-5-基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-嘧啶胺(AZD5438,CAS 602306-29-6)；帕博西尼(PD-0332991)；和(2R,3R)-3-[[2-[[3-[[S(R)]-S-环丙基亚氨磺酰基]-苯基]氨基]-5-(三氟甲基)-4-嘧啶基]氧基]-2-丁醇(BAY 10000394)。
p53-MDM2抑制剂:(S)-1-(4-氯-苯基)-7-异丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-环己基甲基]-氨基}-苯基)-1,4-二氢-2H-异喹啉-3-酮,(S)-5-(5-氯-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基)-6-(4-氯-苯基)-2-(2,4-二甲氧基-嘧啶-5-基)-1-异丙基-5,6-二氢-1H-吡咯并[3,4-d]咪唑-4-酮,[(4S,5R)-2-(4-叔丁基-2-乙氧基苯基)-4,5-双(4-氯苯基)-4,5-二甲基咪唑-1-基]-[4-(3-甲基磺酰基丙基)哌嗪-1-基]甲酮(RG7112),4-[[(2R,3S,4R,5S)-3-(3-氯-2-氟苯基)-4-(4-氯-2-氟苯基)-4-氰基-5-(2,2-二甲基丙基)吡咯烷-2-羰基]氨基]-3-甲氧基苯甲酸(RG7388),SAR299155,2-((3R,5R,6S)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-((S)-1-(异丙基磺酰基)-3-甲基丁-2-基)-3-甲基-2-氧代哌啶-3-基)乙酸(AMG232),{(3R,5R,6S)-5-(3-氯苯基)-6-(4-氯苯基)-1-[(2S,3S)-2-羟基-3-戊烷基]-3-甲基-2-氧代-3-哌啶基}乙酸(AM-8553)，(±)-4-[4,5-双(4-氯苯基)-2-(2-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-4,5-二氢-咪唑-1-羰基]-哌嗪-2-酮(Nutlin-3),2-甲基-7-[苯基(苯基氨基)甲基]-8-喹啉醇(NSC 66811),1-N-[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-4-N-吡啶-4-基苯-1,4-二胺(JNJ-26854165),4-[4,5-双(3,4-氯苯基)-2-(2-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-4,5-二氢-咪唑-1-羧基]-哌嗪-2-酮(Caylin-1),4-[4,5-双(4-三氟甲基-苯基)-2-(2-异丙氧基-4-甲氧基-苯基)-4,5-二氢-咪唑-1-羧基]-哌嗪-2-酮(Caylin-2),5-[[3-二甲基氨基)丙基]氨基]-3,10-二甲基嘧啶并[4,5-b]喹啉-2,4(3H,10H)-二酮二盐酸盐(HLI373)和反式-4-碘-4′-硼烷基-查耳酮(SC204072)。
促分裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂：XL-518(也被称作GDC-0973,CASNo.1029872-29-4，可得自ACC Corp.)；司美替尼(5-[(4-溴-2-氯苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺，也被称作AZD6244或ARRY 142886，描述于PCT公开号WO 2003/077914)；2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也被称作CI-1040或PD184352并描述于PCT公开号WO 2000/035436)；N-[(2R)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也被称作PD0325901并描述于PCT公开号WO 2002/006213)；2,3-二[氨基[(2-氨基苯基)硫基]亚甲基]-丁烷二腈(也被称作U0126并描述于美国专利号2,779,780)；N-[3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6-甲氧基苯基]-1-[(2R)-2,3-二羟丙基]-环丙烷磺酰胺(也被称作RDEA119或BAY869766并描述于PCT公开号WO 2007/014011)；(3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(乙基氨基)-8,9,16-三羟基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氢-1H-2-苯并氧杂环十四烯(cyclotetradecine)-1,7(8H)-二酮](也被称作E6201并描述于PCT公开号WO 2003/076424)；2'-氨基-3'-甲氧基黄酮(也被称作PD98059，可得自Biaffin GmbH&Co.,KG,德国)；(R)-3-(2,3-二羟丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733,CAS 1035555-63-5)；pimasertib(AS-703026,CAS 1204531-26-9)；曲美替尼二甲亚砜(GSK-1120212,CAS1204531-25-80)；2-(2-氟-4-碘苯基氨基)-N-(2-羟基乙氧基)-1,5-二甲基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-甲酰胺(AZD 8330)；3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-N-(2-羟基乙氧基)-5-[(3-氧代-[1,2]噁嗪烷-2-基)甲基]苯甲酰胺(CH 4987655或Ro 4987655)；和5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺(MEK162)。
B-RAF抑制剂：瑞戈非尼(BAY73-4506,CAS 755037-03-7)；tuvizanib(AV951,CAS475108-18-0)；威罗菲尼(
Figure BDA0003522759170000385
PLX-4032,CAS 918504-65-1)；康奈非尼(也被称作LGX818)；1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]-4-吡啶基]氧基]-N-[4-(三氟甲基)苯基-1H-苯并咪唑-2-胺(RAF265,CAS 927880-90-8)；5-[1-(2-羟基乙基)-3-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-2,3-二氢茚-1-酮肟(GDC-0879,CAS 905281-76-7)；5-[2-[4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基]-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑-4-基]-2,3-二氢-1H-茚-1-酮肟(GSK2118436或SB590885)；(±)-(5-(2-(5-氯-2-甲基苯基)-1-羟基-3-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-1-基)-1H-苯并咪唑-2-基)氨基甲酸甲酯(也被称作XL-281和BMS908662),达拉菲尼
Figure BDA0003522759170000386
和N-(3-(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-羰基)-2,4-二氟苯基)丙烷-1-磺酰胺(也被称作PLX4720)。
ALK抑制剂:克唑替尼
Figure BDA0003522759170000381
PIM激酶抑制剂:
Figure BDA0003522759170000382
或其药学上可接受的盐。
蛋白酶体抑制剂:硼替佐米
Figure BDA0003522759170000383
N-5-苄氧基羰基-Ile-Glu(O-叔丁基)-Ala-亮氨醛(leucinal)(PSI),卡非佐米(carfilzomib)和伊沙佐米(ixazomib),马里佐米(marizomib)(NPI-0052)，德兰佐米(delanzomib)(CEP-18770),和O-甲基-N-[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-L-丝氨酰基-O-甲基-N-[(1S)-2-[(2R)-2-甲基-2-氧杂环丙基]-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基]-L-丝氨酰胺(奥普佐米,ONX-0912,PR-047)(例如，硼替佐米)。RNAi筛选将TNK1鉴定为骨髓瘤中蛋白酶体抑制剂敏感性的潜在调节剂。Zhu等人,Blood(2011)117(14):3847-3857。在某些实施方案中，本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)与本文描述的蛋白酶体抑制剂(诸如硼替佐米)联合施用，例如，用于治疗多发性骨髓瘤。
可以与本文所述的化合物联合使用的治疗剂的其它非限制性例子是化学治疗剂、细胞毒性剂和非肽小分子诸如
Figure BDA0003522759170000384
(甲磺酸伊马替尼)、
Figure BDA0003522759170000391
(硼替佐米)、Casodex(比卡鲁胺)、
Figure BDA0003522759170000392
(吉非替尼)和阿霉素以及许多化学治疗剂。化学治疗剂的非限制性例子包括：烷化剂诸如塞替派和环磷酰胺
Figure BDA0003522759170000393
磺酸烷基酯类诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；吖丙啶类诸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替派和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基三聚氰胺类，包括六甲蜜胺、三乙蜜胺、三亚乙基磷酰胺,三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基密胺(trimethylolomelamine)；氮芥类诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺、二氯甲基二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲类诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素诸如阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡利奇霉素、carabicin、洋红霉素、嗜癌霉素、
Figure BDA0003522759170000394
色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、麦考酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢药诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物诸如氟达拉滨、6巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、雄激素类诸如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸盐、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺类诸如氨鲁米特，米托坦，曲洛司坦；叶酸补充剂诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基酮戊酸；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfomithine；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.；雷佐生；西佐喃；锗螺胺；替奴佐酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；尿烷(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；紫杉烷，例如，紫杉醇(TAXOLTM,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西他赛(TAXOTERETM,Rhone-Poulenc Rorer,Antony,法国)；视黄酸；埃斯波霉素；卡培他滨；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在某些实施方案中，所述化学治疗剂选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢药、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂、抗-激素剂、血管生成抑制剂和抗雄激素剂。
用于与本公开内容的化合物联合使用(例如，在联合疗法中、在药物组合中)的化学治疗剂的更多非限制性例子包括卡培他滨
Figure BDA0003522759170000401
N4-戊氧基羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂
Figure BDA0003522759170000402
顺铂
Figure BDA0003522759170000403
克拉屈滨
Figure BDA0003522759170000404
环磷酰胺(
Figure BDA0003522759170000405
或
Figure BDA0003522759170000406
)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷
Figure BDA0003522759170000407
阿糖胞苷脂质体注射剂
Figure BDA0003522759170000408
达卡巴嗪
Figure BDA0003522759170000409
盐酸多柔比星
Figure BDA00035227591700004010
磷酸氟达拉滨
Figure BDA00035227591700004011
5-氟尿嘧啶
Figure BDA00035227591700004012
吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、伊立替康
Figure BDA00035227591700004013
L-天门冬酰胺酶
Figure BDA00035227591700004014
6-巯基嘌呤
Figure BDA00035227591700004015
甲氨蝶呤
Figure BDA00035227591700004016
喷司他丁、6-硫鸟嘌呤、塞替派和注射用盐酸托泊替康
Figure BDA00035227591700004017
通常开处方的抗癌药物的其它非限制性例子包括
Figure BDA00035227591700004018
Figure BDA00035227591700004019
ABVD、AVICINE、阿巴伏单抗、吖啶甲酰胺、阿德木单抗、17-N-烯丙基氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素、Alpharadin、阿伏西地、3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲(carboxaldehydethiosemicarbazone)、氨萘非特、蒽二酮、抗-CD22免疫毒素、抗瘤剂、抗肿瘤生成草药、阿帕齐醌、阿替莫德、硫唑嘌呤、贝洛替康、苯达莫司汀、BIBW 2992、比立考达、溴他利星、苔藓抑素、丁硫氨酸亚砜亚胺、CBV(化学疗法)、花萼海绵诱癌素、细胞周期非特异性的抗肿瘤剂、二氯乙酸、圆皮海绵内酯、依沙芦星、依诺他滨、埃博霉素、艾立布林、依维莫司、依沙替康、依昔舒林、弥罗松酚、呋咯地辛、磷雌酚、ICE化学疗法方案、IT-101、伊美克、咪喹莫特、吲哚并咔唑、伊罗夫文、拉尼喹达、拉罗他赛、来那度胺、硫蒽酮、勒托替康、马磷酰胺、米托唑胺、萘福昔定、奈达铂、奥拉帕尼、奥他赛、PAC-1、万寿果(Pawpaw)、匹克生琼、蛋白酶体抑制剂、蝴蝶霉素、瑞喹莫德、卢比替康、SN-38、Salinosporamide A、沙帕他滨、Stanford V、苦马豆碱、他拉泊芬、他立喹达、替加氟-尿嘧啶、Temodar、替司他赛、四硝酸三铂、三(2-氯乙基)胺、曲沙他滨、尿嘧啶氮芥、Vadimezan、长春氟宁、ZD6126或佐舒喹达。
还包括作为合适的化疗细胞调节剂的抗激素剂，其作用是调节或抑制对肿瘤的激素作用，诸如抗雌激素剂，包括例如他莫昔芬、(诺瓦得士TM)、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、LY 117018、奥那司酮和托瑞米芬(法乐通)；和抗雄激素剂诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺肖林；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；Xeloda；伊班膦酸盐；喜树碱-11(CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)。
可以与本文所述的化合物联合使用的治疗剂的非限制性例子是mTOR抑制剂。示例性的mTOR抑制剂包括，例如，坦罗莫司；地磷莫司(ridaforolimus)(以前称作deferolimus,(1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-二羟基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五氧代-11,36-二氧杂-4-氮杂三环[30.3.1.04,9]三十六碳(hexatriaconta)-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基环己基二甲基次膦酸酯，也被称作AP23573和MK8669，并描述于PCT公开号WO 03/064383)；依维莫司(
Figure BDA0003522759170000421
或RAD001)；雷帕霉素(AY22989,
Figure BDA0003522759170000422
Figure BDA0003522759170000423
)；simapimod(CAS 164301-51-3)；emsirolimus,(5-{2,4-二[(3S)-3-甲基吗啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(AZD8055)；2-氨基-8-[反式-4-(2-羟基乙氧基)环己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF04691502,CAS 1013101-36-4)；和N2-[1,4-二氧代-4-[[4-(4-氧代-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-2-基)吗啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-L-精氨酰基甘氨酰基-L-α-天冬氨酰基L-丝氨酸-内盐(SEQ ID NO:1482)(SF1126,CAS 936487-67-1),和XL765。
在某些其它实施方案中，提供了一种用于治疗癌症的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用有效量的本文所述的化合物和CDK抑制剂。
在实施方案中，所述CDK抑制剂是CDK2、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、CDK10和/或CDK11抑制剂。在某些实施方案中，所述CDK抑制剂是CDK7、CDK9抑制剂或二者。在某些实施方案中，所述CDK抑制剂是dinaciclib(ACS Med.Chem.Lett.2010年5月17日；1(5):204-8；Mol.Cancer Ther.2010年8月；9(8):2344-53；Merck,Sharp和Dohme),AT7519(J.Med.Chem.2008年8月28日；51(16):4986-99；Astex Pharmaceutical)或帕博西尼(J.Med.Chem.2005年4月7日；48(7):2388-406；Pfizer)。在某些实施方案中，所述CDK抑制剂是CDK9抑制剂，诸如阿伏西地。阿伏西地可以作为游离碱、作为药学上可接受的盐或作为前药施用。在某些实施方案中，所述CDK9抑制剂是阿伏西地。在其它实施方案中，所述CDK9抑制剂是阿伏西地的药学上可接受的盐。在其它实施方案中，所述CDK9抑制剂是阿伏西地的前药。阿伏西地的前药包括在WO 2016/187316中公开的那些，其整个公开内容特此通过引用整体并入。
在一个实施方案中，将本文所述的化合物与ATR抑制剂(诸如AZD6738或VX-970)联合施用给有此需要的受试者。所述施用可以是在施用ATR抑制剂之前、同时或之后。在一个具体实施方案中，将本文所述的化合物与ATR抑制剂(诸如AZD6738或VX-970)联合施用给有此需要的受试者以治疗非小细胞肺癌。在一个有关的具体实施方案中，将本文所述的化合物的药学上可接受的盐与ATR抑制剂(诸如AZD6738或VX-970)联合施用给有此需要的受试者用于治疗非小细胞肺癌。在前述实施方案中的一些中，所述盐是酒石酸盐。在前述实施方案中的一些中，所述ATR抑制剂是AZD6738。在前述实施方案中的一些中，所述ATR抑制剂是VX-970。在某些实施方案中，所述盐是酒石酸盐且所述ATR抑制剂是AZD6738。在某些实施方案中，所述盐是酒石酸盐且所述ATR抑制剂是VX-970。在前述实施方案中的一些中，所述ATR抑制剂是AZD6738和VX-970的组合。
一些患者可能在施用期间或施用后经历对本公开内容的化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)的变态反应。因此，抗过敏剂可以与本公开内容的化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)联合施用以使变态反应的风险最小化。合适的抗过敏剂包括皮质类固醇(Knutson,S.,等人,PLoS One,DOI:10.1371/journal.pone.0111840(2014))，诸如地塞米松(例如，
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)、倍氯米松(例如，
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)、氢化可的松(也被称作可的松、氢化可的松琥珀酸钠、氢化可的松磷酸酯钠(在商业名称
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下销售)、磷酸氢化可的松、
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HYDROCORT
Figure BDA0003522759170000435
和
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),泼尼松龙(在商业名称
Figure BDA0003522759170000437
和
Figure BDA0003522759170000438
下销售)、泼尼松(在商业名称
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LIQUID
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Figure BDA00035227591700004311
和
Figure BDA00035227591700004312
下销售)、甲泼尼龙(也被称作6-甲泼尼龙、醋酸甲泼尼龙、甲泼尼龙琥珀酸钠，在商业名称
Figure BDA00035227591700004313
Figure BDA00035227591700004314
和
Figure BDA00035227591700004315
下销售)；抗组胺药，诸如苯海拉明(例如，
Figure BDA00035227591700004316
)、羟嗪和赛庚啶；和支气管扩张剂，诸如β-肾上腺素能受体激动剂、沙丁胺醇(例如，
Figure BDA00035227591700004317
)和特布他林
Figure BDA0003522759170000441
一些患者可能在施用本文所述化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)期间和之后会经历恶心。因此，止吐药可以与本公开内容的化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)联合使用以预防恶心(上胃)和呕吐。合适的止吐药包括阿瑞匹坦
Figure BDA0003522759170000442
昂丹司琼
Figure BDA0003522759170000443
盐酸格拉司琼
Figure BDA0003522759170000444
劳拉西泮(
Figure BDA0003522759170000445
地塞米松
Figure BDA0003522759170000446
丙氯拉嗪
Figure BDA0003522759170000447
卡索匹坦(
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和
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)和它们的组合。
经常开出减轻治疗阶段中经历的疼痛的药物以使患者更舒适。常见的柜台有售的镇痛药(诸如
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)也可以与本公开内容的化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)联合使用。阿片类镇痛药物诸如氢可酮/扑热息痛或氢可酮/醋氨酚(例如，
Figure BDA00035227591700004411
)、吗啡(例如，
Figure BDA00035227591700004412
或
Figure BDA00035227591700004413
)、羟考酮(例如，
Figure BDA00035227591700004414
或
Figure BDA00035227591700004415
)、盐酸羟吗啡酮
Figure BDA00035227591700004416
和芬太尼(例如，
Figure BDA00035227591700004417
)可用于中度或重度疼痛，并可与本公开内容的化合物和/或其它治疗剂(例如，抗癌剂)联合使用。
与本公开内容的化合物联合使用的特别感兴趣的免疫调节剂(例如，免疫肿瘤剂)包括：阿托珠单抗(可得自
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)；培非司亭
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来那度胺(CC-5013,
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)；沙利度胺
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actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白介素1、白介素2和干扰素γ、CAS 951209-71-5，可得自IRXTherapeutics)。
与本公开内容的化合物联合使用的特别感兴趣的嵌合抗原受体T-细胞(CAR-T)疗法包括：tisagenlecleucel(Novartis)、axicabtagene ciloleucel(Kite)和托珠单抗(tocilizumab)(atlizumab；Roche)。
与本公开内容的化合物联合使用的感兴趣的免疫检查点抑制剂包括：PD-1抑制剂，诸如帕博利珠单抗(pembrolizumab)(也被称作派姆单抗(Lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或
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)和其它抗-PD-1抗体(如公开在Hamid,O.等人(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134-44,US 8,354,509,和WO 2009/114335，通过引用整体并入),纳武单抗(也被称作MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538、BMS-936558或
Figure BDA0003522759170000452
)和其它抗-PD-1抗体(如公开在US 8,008,449和WO 2006/121168，通过引用整体并入),西米普利单抗
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spartalizumab(PDR001),皮地利珠单抗(CureTech),MEDI0680(Medimmune),西米普利单抗(REGN2810),dostarlimab(TSR-042),PF-06801591(Pfizer),信迪利单抗,特瑞普利单抗,替雷利珠单抗(BGB-A317),卡瑞利珠单抗(INCSHR1210,SHR-1210),AMP-224(Amplimmune),CBT-501(CBTPharmaceuticals),CBT-502(CBT Pharmaceuticals),JS001(Junshi Biosciences),IBI308(Innovent Biologics),INCSHR1210(Incyte)，也被称作SHR-1210(HengruiMedicine),BGBA317(Beigene),BGB-108(Beigene),BAT-I306(Bio-Thera Solutions),GLS-010(Gloria Pharmaceuticals；WuXi Biologics),AK103,AK104,AK105(AkesioBiopharma；Hangzhou Hansi Biologics；Hanzhong Biologics),LZM009(Livzon),HLX-10(Henlius Biotech),MEDI0680(Medimmune),PDF001(Novartis),PF-06801591(Pfizer),皮地利珠单抗(CureTech)也被称作CT-011和其它抗-PD-1抗体(如公开在Rosenblatt,J.等人(2011)J Immunotherapy 34(5):409-18,US 7,695,715,US 7,332,582,和US 8,686,119，通过引用整体并入),REGN2810(Regeneron),TSR-042(Tesaro)也被称作ANB011,或CS1003(CStone Pharmaceuticals)。MEDI0680(Medimmune)，也被称作AMP-514。MEDI0680和其它抗-PD-1抗体公开在US 9,205,148和WO 2012/145493，通过引用整体并入。其它已知的抗-PD-1抗体分子包括在例如WO 2015/112800、WO 2016/092419、WO 2015/085847、WO 2014/179664、WO 2014/194302、WO 2014/209804、WO 2015/200119、US 8,735,553、US 7,488,802、US 8,927,697、US 8,993,731和US 9,102,727(通过引用整体并入)中描述的那些。在一个实施方案中，所述PD-1抑制剂是在US 2015/0210769(公开于2015年7月30日，标题为“Antibody Molecules to PD-1and Uses Thereof”，通过引用整体并入)中描述的抗-PD-1抗体分子。在一个实施方案中，所述抗-PD-1抗体分子包含在US 2015/0210769中公开的BAP049-克隆-E或BAP049-克隆-B的CDR、可变区、重链和/或轻链。本文描述的抗体分子可以由在US 2015/0210769(通过引用整体并入)中描述的载体、宿主细胞和方法产生。在一个实施方案中，所述PD-1抑制剂是抑制PD-1信号传递途径的肽，例如，如在US 8,907,053(通过引用整体并入)中所述。在一个实施方案中，所述PD-1抑制剂是免疫黏附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外或PD-1结合部分的免疫黏附素)。在一个实施方案中，所述PD-1抑制剂是AMP-224(B7-DCIg(Amplimmune)，例如，在WO 2010/027827和WO 2011/066342(通过引用整体并入)中公开)。
与本公开内容的化合物联合使用的感兴趣的免疫检查点抑制剂也包括：PD-L1抑制剂，诸如阿特珠单抗(也被称作MPDL3280A、RG7446、RO5541267、YW243.55.S70或
Figure BDA0003522759170000461
)和在US 8,217,149(通过引用整体并入)中公开的其它抗-PD-L1抗体，阿维鲁单抗(
Figure BDA0003522759170000462
也被称作MSB0010718C)和在WO 2013/079174(通过引用整体并入)中公开的其它抗-PD-L1抗体，度伐单抗(
Figure BDA0003522759170000463
或MEDI4736)和在US8,779,108(通过引用整体并入)中公开的其它抗-PD-L1抗体，FAZ053(Novartis),和BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)。在某些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是KN035(Alphamab；3DMed；Ascletis Pharma),恩沃利单抗(TRACON Pharmaceuticals),BMS936559(Bristol-Myers Squibb),CS1001(CStone Pharmaceuticals,LigandPharmaceuticals),CX-072(CytomX Therapeutics),FAZ053(Novartis),SHR-1316(Hengrui Medicine),TQB2450(Chiatai Tianqing),STI-A1014(Zhaoke Pharm；Lee'sPharm,Lonza,Sorrento Therapeutics,NantWorks),LYN00102(Lynkcell),A167(HarbourBioMed,Kelun Group),BGB-A333(Beigene),MSB2311(Mabspace Biosciences),或HLX-20(Henlius Biotech)。在一个实施方案中，所述抗-PD-L1抗体分子是BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)，也被称作MDX-1105或12A4。BMS-936559和其它抗-PD-L1抗体公开在US 7,943,743和WO 2015/081158，通过引用整体并入。在某些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是柯希利单抗(Fortress Biotech),LY3300054或Iodapolimab(Eli Lilly),GS-4224(GileadSciences),STI-A1015(Yuhan,Sorrento Therapeutics),BCD-135(BIOCAD),柯希利单抗(Dana-Farber Cancer Institute,TG Therapeutics),APL-502(Apollomics),AK106(Akeso Biopharma),MSB2311(Transcenta Holding),TG-1501(TG Therapeutics),FAZ053(Novartis)。在某些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是MT-6035(Molecular Templates),Icaritin和ZKAB001(Lonza,Lee’s Pharmaceutical Holdings,Sorrento Therapeutics,Shenogen Pharma Group),TRIDENT抗体(MacroGenics,Zai Lab),YBL-007(Anh-GookPharmaceutical,Y-Biologics),HTI-1316(Hengrui Therapeutics),PD-L1肿瘤课题(Oncology Project)(Weizmann Institute of Sciences),JS003(Shanghai JunshiBiosciences),ND021(Numab Therapeutics,CStone Pharmaceuticals),Toca 521(Tocagen),STT01(STCube)。在某些实施方案中，所述PD-L1抑制剂是DB004(DotBio),MT-5050(Molecular Templates),KD036(Kadmon)。在一个实施方案中，所述PD-L1抑制剂是抗-PD-L1抗体分子。在一个实施方案中，所述PD-L1抑制剂是在US 2016/0108123(公开于2016年4月21日，标题为“Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof”，通过引用整体并入)中公开的抗-PD-L1抗体分子。在一个实施方案中，所述抗-PD-L1抗体分子包含在US2016/0108123中公开的BAP058-克隆O或BAP058-克隆N的CDR、可变区、重链和/或轻链。
其它已知的抗-PD-L1抗体包括在例如WO 2015/181342、WO 2014/100079、WO2016/000619、WO 2014/022758、WO 2014/055897、WO 2015/061668、WO 2013/079174、WO2012/145493、WO 2015/112805、WO 2015/109124、WO 2015/195163、US 8,168,179、US 8,552,154、US 8,460,927和US 9,175,082(通过引用整体并入)中描述的那些。
在某些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是细胞毒性的T-淋巴细胞-相关的调节剂。在某些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是靶向CTLA-4的药物，诸如伊匹木单抗
Figure BDA0003522759170000481
曲美木单抗,ALPN-202(Alpine Immune Sciences),RP2(Replimune),BMS-986249(Bristol-Myers Squibb),BMS-986218(Bristol-Myers Squibb),zalifrelimab(Agenus,Ludwig Institute for Cancer Research,UroGen Pharma,Recepta Biopharma),BCD-217(BIOCAD),Onc-392(Pfizer,Oncoimmune),IBI310(InnoventBiologics),KN046(Alphamab),MK-1308(Merck&Co),REGN4659(RegeneronPharmaceuticals),XmAb20717(Xencor),XmAb22841(Xencor),抗-CTLA-4NF(Bristol-Myers Squibb),MEDI5752(AstraZeneca),AGEN1181(Agenus),MGD019(MacroGenics),ATOR-1015(Alligator Bioscience),BCD-145(BIOCAD),PSB205(Sound Biologics),CS1002(CStone Pharmaceuticals),ADU-1604(Aduro Biotech),PF-06753512(Pfizer),BioInvent-Transgene研究项目(Research Program)(Transgene),AGEN2041(Agenus,Recepta Biopharam),ATOR-1144(Alligator Bioscience),CTLA-4研究课题(SorrentoTherapeutics),PD-L1/CTLA-4研究课题(Sorrento Therapeutics),HLX13(ShanghaiHenlius Biotech),ISA203(ISA Pharmaceuticals),PRS-300系列A(PierisPharmaceuticals),BA3071(BioAtla),CTLA4癌症研究项目(BiosortiaPharmaceuticals),RP3(Replimune),CG0161(Cold Genesys),APL-509(Apollomics,JSR),AGEN2041(Ludwig Institute for Cancer Research),APC 101(Advanced Proteome),CTLA-4抑制剂(Advanced Proteome),BA3071(Beigene),BPI-002(BeyondSpringPharmaceuticals),CTLA-4抗体(Tikcro Technologies),免疫-肿瘤研究项目II(OliPass),PBP1701(Prestige BioPharma),DB002(DotBio),DB003(DotBio),OR-2299(OncoResponse),NK044(Alphamab)。在某些实施方案中，所述CTLA-4抑制剂是伊匹木单抗。在其它实施方案中，所述CTLA4抑制剂是曲美木单抗。
与本公开内容的化合物联合使用的感兴趣的免疫检查点抑制剂还包括：LAG-3抑制剂。在某些实施方案中，所述LAG-3抑制剂选自LAG525(Novartis)、BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)或TSR-033(Tesaro)。在一个实施方案中，所述LAG-3抑制剂是抗-LAG-3抗体分子。在一个实施方案中，所述LAG-3抑制剂是在US 2015/0259420(公开于2015年9月17日，标题为“Antibody Molecules to LAG-3and Uses Thereof”，通过引用整体并入)中公开的抗-LAG-3抗体分子。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抗体分子包含在US 2015/0259420中公开的BAP050-克隆I或BAP050-克隆J的CDR、可变区、重链和/或轻链。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抗体分子是BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)，也被称作BMS986016。BMS-986016和其它抗-LAG-3抗体公开在WO 2015/116539和US 9,505,839，通过引用整体并入。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抗体分子是TSR-033(Tesaro)。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抗体分子是IMP731或GSK2831781(GSK和Prima BioMed)。IMP731和其它抗-LAG-3抗体公开在WO 2008/132601和US 9,244,059，通过引用整体并入。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抗体分子是IMP761(Prima BioMed)。其它已知的抗-LAG-3抗体包括在例如WO2008/132601、WO 2010/019570、WO 2014/140180、WO 2015/116539、WO 2015/200119、WO2016/028672、US 9,244,059、US 9,505,839(通过引用整体并入)中描述的那些。在一个实施方案中，所述抗-LAG-3抑制剂是可溶性的LAG-3蛋白，例如，IMP321(Prima BioMed)，例如，在WO 2009/044273(通过引用整体并入)中公开。
与本公开内容的化合物联合使用的感兴趣的免疫检查点抑制剂还包括：Tim-3抑制剂。在某些实施方案中，所述TIM-3抑制剂是MGB453(Novartis)或TSR-022(Tesaro)。在一个实施方案中，所述TIM-3抑制剂是抗-TIM-3抗体分子。在一个实施方案中，所述TIM-3抑制剂是在US 2015/0218274(公开于2015年8月6日，标题为“Antibody Molecules to TIM-3and Uses Thereof”，通过引用整体并入)中公开的抗-TIM-3抗体分子。在一个实施方案中，所述抗-TIM-3抗体分子包含在US 2015/0218274中公开的ABTIM3-hum11或ABTIM3-hum03的CDR、可变区、重链和/或轻链。在一个实施方案中，所述抗-TIM-3抗体分子是TSR-022(AnaptysBio/Tesaro)。在一个实施方案中，所述抗-TIM-3抗体分子包含APE5137或APE5121的一个或多个CDR序列(或共同地所有CDR序列)、重链或轻链可变区序列、或重链或轻链序列。APE5137、APE5121和其它抗-TIM-3抗体公开在WO 2016/161270，通过引用整体并入。在一个实施方案中，所述抗-TIM-3抗体分子是抗体克隆F38-2E2。其它已知的抗-TIM-3抗体包括在例如WO 2016/111947、WO 2016/071448、WO 2016/144803、US 8,552,156、US 8,841,418和US 9,163,087(通过引用整体并入)中描述的那些。
在某些实施方案中，本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)与本文描述的检验点抑制剂联合施用，例如，以治疗胰腺癌(例如，胰腺导管腺癌)。在某些实施方案中，本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)与本文描述的检验点抑制剂和/或(例如，或)选自下述的药剂联合施用：吉西他滨、白蛋白结合型紫杉醇、厄洛替尼、氟尿嘧啶或FOLFIRINOX(由亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康和奥沙利铂组成的化学疗法方案)，或前述两种或更多种的任意组合，例如，以治疗胰腺癌(例如，晚期胰腺癌、胰腺导管腺癌)。
为了保护正常细胞免于治疗毒性和限制器官毒性，细胞保护剂(诸如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂、营养物等)可以与本公开内容的化合物组合用作辅助疗法。合适的细胞保护剂包括氨磷汀
Figure BDA0003522759170000501
谷氨酰胺、地美司钠
Figure BDA0003522759170000502
美司钠
Figure BDA0003522759170000503
右丙亚胺(
Figure BDA0003522759170000504
或
Figure BDA0003522759170000505
)、扎利罗登
Figure BDA0003522759170000511
和甲酰四氢叶酸(也被称作甲酰四氢叶酸钙、柠胶因子和亚叶酸)。
由代码号、通用名或商品名标识的活性化合物的结构可取自标准纲要“The MerckIndex”的实际版本或数据库，例如国际专利(Patents International)(例如，IMS WorldPublications)。
在本公开内容的另一个方面，提供了试剂盒，其包含两种或更多种分开的药物组合物，其中至少一种含有本公开内容的化合物。在一个实施方案中，所述试剂盒包含用于分别保留所述组合物的装置(诸如容器、分开的瓶子、或分开的箔包)。这样的试剂盒的一个例子是泡罩包，其通常用于片剂、胶囊剂等的包装。
本公开内容的试剂盒可以用于施用不同的剂型(例如，口服及胃肠外)，适用于以不同的剂量间隔施用单独的组合物，或适用于将单独的组合物相互滴定。为了有助于顺应性，本公开内容的试剂盒通常包含施用指导。
本公开内容的化合物还可以有利地与已知的治疗方法(例如激素或尤其是辐射的施用)联合使用。本公开内容的化合物可以特别地用作放射敏化剂，尤其用于治疗对放射疗法表现出差敏感性的肿瘤。
在本公开内容的联合疗法中，本公开内容的化合物和其它治疗剂可以由相同的或不同的生产商生产和/或配制。此外，可以将本公开内容的化合物和其它治疗剂一起用在联合疗法中：(i)在向医师发放组合产品(例如，在包含本公开内容的化合物和其它治疗剂的试剂盒的情况下)之前；(ii)在施用之前不久，由医师(或在医师的指导下)；(iii)在患者自身中，例如，在依次施用本公开内容的化合物和其它治疗剂期间。
可以根据用于施用药物的方法而以多种方式包装用于应用的药物组合物(或制剂)。通常，用于分配的物品包括药物制剂以适当形式在其内贮存的容器。合适的容器是本领域技术人员众所周知的并且包括材料诸如瓶子(塑料和玻璃)、药囊、安瓿、塑料袋、金属圆筒等。容器还可以包括防干扰组件，以防止不小心接触到包装的内容物。另外，容器在其上面贴有描述容器的内容物的标签。标签还可以包括适当的警告。
对于约50至约70kg的受试者，本公开内容的药物组合物或组合可以是含有约1至约1000mg活性成分的单位剂量；或者对于约50至约70kg的受试者，含有约1至约500mg、约1至约250mg、约1至约150mg、约0.5至约100mg、或约1至约50mg活性成分。化合物、药物组合物或药物组合的治疗有效剂量取决于受试者的物种，受试者的体重、年龄和个体状况，以及所治疗的疾病、障碍或病症或其严重程度。具有普通技能的医师、临床医师或兽医可以容易地确定预防或治疗疾病、障碍或病症的进展所必需的每种活性成分的治疗有效量。
上述的剂量特性可以在体外和体内试验中有利地使用哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、狗、猴或其分离的器官、组织和制品)证明。本公开内容的化合物可以以溶液(例如水溶液)的形式在体外应用，并且可以肠内地、胃肠外地、有利地静脉内地(例如，作为悬浮液或在水溶液中)在体内应用。体外剂量可以在约10-3摩尔至10-9摩尔浓度的范围内。体内治疗有效量的范围取决于施用途径，尤其是在约0.1mg/kg至约500mg/kg之间，或约1mg/kg至约100mg/kg之间。
在某些实施方案中，在药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度小于100％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在某些实施方案中，在药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度大于90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、19.75％、19.50％、19.25％19％、18.75％、18.50％、18.25％18％、17.75％、17.50％、17.25％17％、16.75％、16.50％、16.25％16％、15.75％、15.50％、15.25％15％、14.75％、14.50％、14.25％14％、13.75％、13.50％、13.25％13％、12.75％、12.50％、12.25％12％、11.75％、11.50％、11.25％11％、10.75％、10.50％、10.25％10％、9.75％、9.50％、9.25％9％、8.75％、8.50％、8.25％8％、7.75％、7.50％、7.25％7％、6.75％、6.50％、6.25％6％、5.75％、5.50％、5.25％5％、4.75％、4.50％、4.25％、4％、3.75％、3.50％、3.25％、3％、2.75％、2.50％、2.25％、2％、1.75％、1.50％、125％、1％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.09％、0.08％、0.07％、0.06％、0.05％、0.04％、0.03％、0.02％、0.01％、0.009％、0.008％、0.007％、0.006％、0.005％、0.004％、0.003％、0.002％、0.001％、0.0009％、0.0008％、0.0007％、0.0006％、0.0005％、0.0004％、0.0003％、0.0002％或0.0001％w/w、w/v或v/v。
在某些实施方案中，在药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度是在以下范围内：约0.0001％至约50％、约0.001％至约40％、约0.01％至约30％、约0.02％至约29％、约0.03％至约28％、约0.04％至约27％、约0.05％至约26％、约0.06％至约25％、约0.07％至约24％、约0.08％至约23％、约0.09％至约22％、约0.1％至约21％、约0.2％至约20％、约0.3％至约19％、约0.4％至约18％、约0.5％至约17％、约0.6％至约16％、约0.7％至约15％、约0.8％至约14％、约0.9％至约12％、约1％至约10％w/w、w/v或v/v。
在某些实施方案中，在药物组合物中提供的一种或多种治疗剂的浓度是在以下范围内：约0.001％至约10％、约0.01％至约5％、约0.02％至约4.5％、约0.03％至约4％、约0.04％至约3.5％、约0.05％至约3％、约0.06％至约2.5％、约0.07％至约2％、约0.08％至约1.5％、约0.09％至约1％、约0.1％至约0.9％w/w、w/v或v/v。
治疗方法
现在已经发现，本公开内容的化合物抑制TNK1活性。因此，本文提供了在细胞(例如，表达TNK1的细胞)中调节(例如，抑制)TNK1活性的方法，其包括使所述细胞与本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐，诸如治疗有效量的式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)接触。在某些实施方案中，所述细胞是在受试者(诸如人)中。在某些实施方案中，所述TNK1携带由截短突变(truncating mutation)或染色体重排导致的遗传改变(例如，C-端截短)(例如，如Gu等人所述)。
本文还提供了在有此需要的受试者中抑制TNK1活性的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，所述TNK1携带突变(例如，C-端突变)，诸如截短突变(例如，如Gu等人所述)。
本文还提供了抑制细胞(例如，表达STAT的细胞)中的TNK1依赖性的STAT(例如，STAT3、STAT5)磷酸化的方法，其包括使所述细胞与本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐，诸如治疗有效量的式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)接触。在某些实施方案中，所述细胞是在受试者(诸如人)中。在某些实施方案中，所述TNK1携带突变(例如，C-端突变)，诸如截短突变(例如，如Gu等人所述)。
本文还提供了在有此需要的受试者中抑制TNK1依赖性的STAT(例如，STAT3、STAT5)磷酸化的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，所述TNK1携带突变(例如，C-端突变)，诸如截短突变(例如，如Gu等人所述)。
本文还提供了在有此需要的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症(例如，癌症，胃肠道障碍，SIRS，MODS，脓毒症，自身免疫障碍，微生物组的疾病、障碍或病症，或由创伤和/或肠损伤引起的疾病、障碍或病症)的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。
本文还提供了在有此需要的受试者中治疗TNK1依赖性的疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。
本文还提供了在有此需要的受试者中治疗脓毒性休克和/或器官功能衰竭(例如，多器官功能衰竭)的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。
本文还提供了在有此需要的受试者中改善肠屏障功能和/或降低肠渗透性和/或调节肠稳态的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，本文所述的方法改善肠屏障功能和/或降低肠渗透性和/或调节肠稳态，其是癌症(例如，结肠癌)、胃肠道障碍、全身性炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、脓毒症(例如，肠源性脓毒症)、自身免疫障碍、微生物组健康和对免疫肿瘤药剂的敏感性中以及创伤(例如，严重创伤、出血性创伤)和/或肠损伤以后的挑战，其中肠屏障可以表现出受损或失调的征象。因此，本文还提供了在将受益于改善的肠屏障功能和/或降低的肠渗透性和/或受调节的肠稳态的受试者(例如，具有癌症(例如，具有可用免疫肿瘤药剂治疗的癌症的受试者，具有癌症且被施用免疫肿瘤药剂的受试者)、胃肠道障碍、SIRS、MODS、脓毒症(例如，肠源性脓毒症)、自身免疫障碍、微生物组的疾病、障碍或病症(例如，失调的或不健康的微生物组)或由创伤(例如，严重创伤、出血性创伤)引起的疾病、障碍或病症和/或肠损伤的受试者)中治疗疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。本文还提供了在创伤(例如，严重创伤、出血性创伤)和/或肠损伤以后治疗受试者的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。
适用于本文公开的方法的胃肠道障碍的例子包括多发性肠瘤形成(neoplasia)、缺血/再灌注性损伤、结肠炎(例如，溃疡性结肠炎)、感染性腹泻、乳糜泻、家族性腺瘤性息肉病和炎性肠病(IBD)(例如，慢性IBD、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎)。
适用于本文公开的方法的自身免疫障碍的例子包括纤维化、类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、I型糖尿病、吉兰-巴雷综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、重症肌无力、IBD(例如，慢性IBD、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎)、多肌炎、皮肌炎、炎症性肌炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、银屑病、血管炎、舍格伦病(Sjogren’s disease)和移植排斥。
本文还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。
包括实体瘤、白血病、淋巴瘤和骨髓瘤在内的多种癌症适用于本文公开的方法。在某些实施方案中，所述癌症是实体瘤癌症。在某些实施方案中，所述癌症包含实体瘤(例如，结肠直肠、乳房、前列腺、肺、胰腺、肾脏或卵巢肿瘤)。因此，在某些实施方案中，所述癌症是实体瘤癌症。在某些实施方案中，所述癌症选自肺系统癌、脑癌、胃肠道癌、皮肤癌、生殖泌尿道癌、头颈癌、肉瘤、癌和神经内分泌癌中的一种或多种。在不同的实施方案中，所述实体瘤癌症是乳腺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、食管癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、子宫癌、病毒诱导的癌症、黑素瘤或肉瘤。在某些实施方案中，所述癌症是膀胱癌。在某些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，非小细胞肺癌)。在其它实施方案中，所述癌症是肝癌。在某些实施方案中，所述癌症是肉瘤、膀胱癌或肾癌。在某些实施方案中，所述癌症是前列腺癌(例如，去势抵抗性的前列腺癌、去势敏感的前列腺癌)。在其它实施方案中，所述癌症是膀胱癌、胰腺癌、结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、肾癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、肉瘤、皮肤癌、甲状腺癌、睾丸癌或外阴癌。在某些实施方案中，所述癌症是子宫内膜癌、胰腺癌、睾丸癌、肾癌、黑素瘤、结肠直肠癌、甲状腺癌、膀胱癌、胰腺癌、外阴癌、肉瘤、前列腺癌、肺癌或肛门癌。在某些实施方案中，所述癌症是肉瘤。在某些实施方案中，所述癌症是肾细胞癌。
在某些实施方案中，所述癌症是非实体瘤癌症。在某些实施方案中，所述癌症是血液学癌症。根据本文所述的方法可以治疗的血液学癌症包括白血病(例如，急性白血病、慢性白血病)、淋巴瘤(例如，B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤)和多发性骨髓瘤。在某些实施方案中，所述血液学癌症选自多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓性白血病(AML)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性淋巴细胞白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、慢性淋巴原性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或骨髓纤维化。
在本文提供的某些实施方案中，血液学癌症是白血病，诸如突变体白血病(例如，突变体AML、突变体JMML)。突变体白血病诸如PTPN11/SHP2突变体(E76K、D61V和D61Y)白血病已经至少涉入AML和青少年髓细胞单核细胞性白血病(JMML)。Jenkins,C.,等人,Sci.Signal.11(539)；doi:10.1126/scisignal.aao5617。Jenkins等人报道，TNK2与PTPN11直接相互作用，并且PTPN11-突变体JMML和AML细胞对TNK2抑制是敏感的。
在实体瘤中也已经观察到PTPN11/SHP2突变。参见Jenkins等人。在某些实施方案中，所述癌症包含PTPN11/SHP2突变体(E76K、D61V和D61Y)实体瘤(例如，乳房、肺、前列腺、胃肠道、肾的)。
本文还提供了在有此需要的受试者(例如，具有突变体白血病诸如AML或JMML或突变体实体瘤诸如乳房或肺的突变体实体瘤的受试者)中抑制TNK2活性的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，所述受试者患有具有PTPN11/SHP2突变的癌症(例如，突变体白血病，诸如AML或JMML，或突变体实体瘤，诸如乳房或肺的突变体实体瘤)。本文还提供了在细胞(例如，来自患有突变体白血病诸如AML或JMML或突变体实体瘤诸如乳房或肺的突变体实体瘤的受试者的细胞)中抑制TNK2活性的方法，其包括使所述细胞与本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物或其药学上可接受的盐)接触。在某些实施方案中，所述TNK2在PTPN11/SHP2突变细胞中表达和/或由PTPN11/SHP2突变细胞表达。
在某些实施方案中，所述癌症是转移前癌症。在某些实施方案中，所述癌症是转移性癌症。
根据本文所述的方法可治疗的癌症的例子包括、但不限于乳房、前列腺和结肠的腺癌；肺的支气管原癌的所有形式；骨髓的；黑素瘤；肝细胞瘤；神经母细胞瘤；乳头状瘤；apud瘤；迷芽瘤；鳃原瘤；恶性类癌综合症；类癌心脏病；和癌(例如，Walker、基底细胞癌、基底鳞状癌、布-皮癌、导管癌、Ehrlich肿瘤癌、Krebs 2癌、梅克尔细胞癌、黏液癌、肺癌(例如，大细胞肺癌，诸如鳞状细胞癌、非小细胞肺癌)、燕麦细胞癌、乳头状癌、硬癌、细支气管(bronchiolar)癌、支气管原癌、鳞状细胞癌和移行细胞癌)。根据本文所述的方法可治疗的癌症的另外例子包括、但不限于组织细胞障碍；白血病；恶性组织细胞增多症；霍奇金病；嗜伊红细胞增多症,免疫增生性小的；非霍奇金淋巴瘤；浆细胞瘤；网状内皮组织增殖病；黑素瘤；软骨母细胞瘤；软骨瘤；软骨肉瘤；隆凸性皮肤纤维肉瘤、纤维化癌症(骨髓纤维化、胰腺癌(例如，胰腺导管腺癌)、肾癌、肝癌、肺癌(例如，大细胞肺癌，诸如鳞状细胞癌)、乳腺癌(例如，炎症性乳腺癌)、卵巢癌(例如，高等级严重卵巢癌)、子宫内膜癌、子宫癌、子宫肉瘤(例如，子宫平滑肌肉瘤)、肾细胞癌、肉瘤(例如，软组织肉瘤)、恶性纤维组织细胞瘤、纤维肉瘤(例如，隆凸性皮肤纤维肉瘤)和肝细胞癌)；纤维瘤；纤维肉瘤；巨细胞瘤；组织细胞瘤；脂肪瘤；脂肪肉瘤；间皮瘤；黏液瘤；黏液肉瘤；骨瘤；骨肉瘤；儿科恶性肿瘤，脊索瘤；颅咽管瘤；无性细胞瘤；错构瘤；间叶瘤；中肾瘤；肌肉瘤；成釉细胞瘤；牙骨质瘤；牙瘤；畸胎瘤；胸腺瘤；滋养细胞肿瘤。进一步，以下类型的癌症也被考虑为适合治疗：腺瘤；胆管瘤；胆脂瘤；圆柱瘤；囊腺癌；囊腺瘤；粒层细胞肿瘤；两性胚细胞瘤；肝细胞癌,肝细胞瘤；汗腺腺瘤；胰岛细胞肿瘤；莱迪希细胞肿瘤；乳头状瘤；睾丸支持细胞瘤；泡膜细胞瘤；平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；成肌细胞瘤；myomma；肌肉瘤；横纹肌瘤；横纹肌肉瘤；室管膜瘤；神经节瘤；神经胶质瘤；髓母细胞瘤；脑膜瘤；神经鞘瘤；神经母细胞瘤；神经上皮瘤；神经纤维瘤；神经瘤；副神经节瘤；非嗜铬性副神经节瘤。根据本文所述的方法可治疗的癌症的更多例子包括、但不限于血管角化瘤；血管淋巴样增生伴嗜酸性粒细胞增多症；硬化性血管瘤；血管瘤病；血管球瘤；血管内皮瘤；血管瘤；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤；淋巴管瘤；淋巴管肌瘤；淋巴管肉瘤；松果体瘤；癌肉瘤；软骨肉瘤；叶状囊性肉瘤；纤维肉瘤；血管肉瘤；平滑肌肉瘤；白血病性肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；肌肉瘤；黏液肉瘤；卵巢癌；横纹肌肉瘤；肉瘤；赘生物；神经纤维瘤病；和宫颈发育不良。
根据本文所述的方法可治疗的癌症的其它例子包括、但不限于急性淋巴母细胞白血病(ALL)；急性髓性白血病(AML)；肾上腺皮质癌；儿童期肾上腺皮质癌；AIDS相关的癌症(例如，卡波西肉瘤、AIDS相关的淋巴瘤、原发性CNS淋巴瘤)；肛门区域的癌症；肛门癌；阑尾癌；儿童期星形细胞瘤；儿童期中枢神经系统(CNS)非典型畸胎样/杆状瘤；CNS的赘生物(例如，原发性CNS淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、髓母细胞瘤、脑干神经胶质瘤或垂体腺瘤)、巴雷特食管(例如，恶化前综合征)和蕈样肉芽肿病、皮肤的基底细胞癌；胆管癌；膀胱癌；儿童期膀胱癌；骨癌(包括尤因肉瘤、骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)；脑肿瘤/癌症；乳腺癌；伯基特淋巴瘤；类癌瘤(胃肠的)；儿童期类癌瘤；儿童期心脏(心)肿瘤；儿童期胚胎瘤；儿童期生殖细胞肿瘤；原发性CNS淋巴瘤；宫颈癌；儿童期宫颈癌；胆管上皮癌；儿童期脊索瘤；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；慢性髓细胞性白血病(CML)；慢性骨髓增生性赘生物；结肠直肠癌；儿童期结肠直肠癌；儿童期颅咽管瘤；皮肤T-细胞淋巴瘤(例如，蕈样肉芽肿病和塞扎里综合征)；导管原位癌(DCIS)；儿童期中枢神经系统胚胎瘤；内分泌系统的癌症(例如，甲状腺、胰腺、副甲状腺或肾上腺的癌症)，子宫内膜癌(子宫癌)；儿童期室管膜瘤；食管癌；儿童期食管癌；成感觉神经细胞瘤；尤因肉瘤；儿童期颅外生殖细胞肿瘤；性腺外胚细胞瘤；眼癌；儿童期眼内黑素瘤；眼内黑素瘤；视网膜母细胞瘤；输卵管癌；恶性骨纤维组织细胞瘤和骨肉瘤；胆囊癌；胃癌；儿童期胃癌；胃肠道类癌瘤；胃肠道间质瘤(GIST)；儿童期胃肠道间质瘤；生殖细胞肿瘤；儿童期中枢神经系统生殖细胞肿瘤(例如，儿童期颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、睾丸癌)；妊娠性滋养层细胞病；妇科肿瘤((例如，子宫肉瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌或外阴癌)、毛细胞白血病；头颈癌；儿童期心脏肿瘤；肝细胞(肝)癌；朗格汉斯细胞组织细胞增多症；霍奇金淋巴瘤；下咽癌；皮肤或眼内黑素瘤；儿童期眼内黑素瘤；胰岛细胞肿瘤，胰腺神经内分泌肿瘤；卡波西肉瘤；肾(肾细胞)癌；朗格汉斯细胞组织细胞增多症；喉癌；白血病；唇与口腔癌；肝癌；肺癌(非小细胞和小细胞)；儿童期肺癌；淋巴瘤；男性乳腺癌；骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤；黑素瘤；儿童期黑素瘤；眼内(眼)黑素瘤；儿童期眼内黑素瘤；梅克尔细胞癌；恶性间皮瘤；儿童期间皮瘤；转移性癌症；隐性原发性转移性鳞状颈癌；具有NUT基因变化的中线道癌；口腔癌；多发性内分泌肿瘤综合征；多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物；蕈样肉芽肿病；骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性赘生物；慢性髓性白血病(CML)；急性髓性白血病(AML)；慢性骨髓增生性赘生物；鼻腔与鼻旁窦癌；鼻咽癌；神经母细胞瘤；非霍奇金淋巴瘤；非小细胞性肺癌；口癌、唇和口腔癌以及口咽癌；骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌；儿童期卵巢癌；胰腺癌；儿童期胰腺癌；胰腺神经内分泌肿瘤；乳头状瘤病(儿童期喉头)；副神经节瘤；儿童期副神经节瘤；鼻旁窦与鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；儿童期嗜铬细胞瘤；垂体瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；原发性中枢神经系统(CNS)淋巴瘤；原发性腹膜癌；前列腺癌；直肠癌；复发性癌症；肾细胞(肾)癌；视网膜母细胞瘤；儿童期横纹肌肉瘤；唾液腺癌；肉瘤(例如，儿童期横纹肌肉瘤、儿童期血管肿瘤、尤因肉瘤、卡波西肉瘤、骨肉瘤(骨癌)、软组织肉瘤、子宫肉瘤)；塞扎里综合征；皮肤癌；儿童期皮肤癌；小细胞性肺癌；小肠癌；软组织肉瘤；皮肤的鳞状细胞癌；隐性原发性转移性鳞状颈癌；胃癌；儿童期胃癌；皮肤T-细胞淋巴瘤(例如，蕈样肉芽肿病和塞扎里综合征)；睾丸癌；儿童期睾丸癌；喉癌(例如，鼻咽癌、口咽癌、下咽癌)；胸腺瘤与胸腺癌；甲状腺癌；肾盂与输尿管过渡型细胞癌；输尿管和肾盂(例如，肾细胞癌、肾盂癌)、良性前列腺肥大、甲状旁腺癌、移行细胞癌；尿道癌；子宫内膜癌；子宫肉瘤；阴道癌；儿童期阴道癌；血管肿瘤；外阴癌；和肾母细胞瘤和其它儿童期肾肿瘤。
根据本文所述的方法还可以治疗上述癌症的转移。
在某些实施方案中，所述癌症是霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、B-细胞急性淋巴母细胞白血病、多发性骨髓瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、骨癌、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌或星形细胞瘤。
在某些实施方案中，所述癌症是前列腺癌(例如，去势抵抗性的前列腺癌)。在某些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(例如，胰腺导管腺癌、晚期胰腺癌)。在某些实施方案中，所述癌症是霍奇金淋巴瘤。在某些实施方案中，所述癌症是结肠癌。在某些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌。在某些实施方案中，所述癌症是肺癌(例如，非小细胞肺癌)。
人全长TNK1(诸如在K562 CML细胞中所发现的)与UniProtKB登记号Q13470相关。在人类中也已经观察到TNK1的突变(例如，截短突变，重排，诸如倒位)(例如，C-端突变，诸如C-端截短突变)，例如，在霍奇金淋巴瘤细胞系L540中。例如，Gu,T.-L.,等人,Leukemia(2010),24,861-865(其整个内容通过引用并入本文)公开了TNK1的变体，其中TNK1的5'部分(包括激酶结构域)与由17号染色体开放可读框61(C17ORF61)基因的外显子3的5'非翻译区的31个碱基对、完整的外显子2和前52个碱基对组成的序列融合，其由臂内倒位(17)(p13.1)产生。具体地，参见，Gu等人的图1(c)。Gu等人公开的TNK1变体缺乏全长TNK1的C-端抑制序列。Gu等人也公开了STAT5的磷酸化是酪氨酸激酶活性的可靠替代标志物。
因而，在某些实施方案中，所述癌症与TNK1突变(例如，C-端突变)诸如截短突变相关(例如，如Gu等人所述)。在某些实施方案中，所述癌症与失调的(例如，增强的、增加的)TNK1磷酸化相关。与TNK1突变相关的癌症的例子包括霍奇金淋巴瘤、结肠直肠癌和肺癌(例如，非小细胞肺癌)。结肠直肠癌中TNK1突变的例子包括、但不限于R458W、R562I和E522fs。与失调的(例如，增强的、增加的)TNK1磷酸化相关的癌症的一个例子是霍奇金淋巴瘤。
在某些实施方案中，所述癌症与TNK1依赖性的STAT5磷酸化相关。在某些实施方案中，所述癌症与失调的(例如，增强的、增加的)STAT5磷酸化相关。与TNK1依赖性的和/或失调的(例如，增强的、增加的)STAT5磷酸化相关的癌症的一个例子是霍奇金淋巴瘤。
本文还提供了在携带TNK1突变(例如，本文描述的TNK1突变，例如，C-端突变，诸如截短突变，例如，如Gu等人所述)的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症(例如，本文描述的TNK1介导的疾病、障碍或病症)的方法，其包括提供被确定携带TNK1突变的受试者；和给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，所述受试者携带在TNK1基因中的突变。在某些实施方案中，所述受试者携带在TNK1蛋白中的突变，例如，其源自在TNK1基因中的突变。
本文还提供了在携带TNK1突变(例如，本文描述的TNK1突变，例如，C-端突变，诸如截短突变，例如，如Gu等人所述)的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症(例如，本文描述的TNK1介导的疾病、障碍或病症)的方法，其包括确定所述受试者是否携带TNK1突变；和如果确定所述受试者携带TNK1突变，则给所述受试者施用治疗有效量的本公开内容的化合物(例如，式I或其子式的化合物、或前述的药学上可接受的盐)。在某些实施方案中，所述受试者携带在TNK1基因中的突变。在某些实施方案中，所述受试者携带在TNK1蛋白中的突变，例如，其源自在TNK1基因中的突变。
根据本文所述的方法要施用给受试者的治疗剂(例如，本公开内容的化合物)的治疗有效量可以由普通技术的临床医师使用本文提供的指导和本领域已知的其它方法确定。例如，取决于施用途径，合适的剂量范围可以尤其是约0.1mg/kg至约500mg/kg，或约1mg/kg至约100mg/kg。
本公开内容的化合物可以经由多种施用途径施用，所述施用途径包括例如口服、饮食、局部、透皮、直肠、胃肠外(例如，动脉内、静脉内、肌肉内、皮下注射、真皮内注射)、静脉内输注和吸入(例如，支气管内、鼻内或口腔吸入、鼻内滴入)施用途径，取决于化合物和要治疗的具体疾病。如所指示的，施用可以是局部的或全身的。优选的施用模式可以根据所选的特定化合物而变化。在某些实施方案中，口服地施用本公开内容的化合物。在某些实施方案中，静脉内地施用本公开内容的化合物。
本公开内容的化合物还可以与一种或多种其它疗法(例如，化学疗法，诸如化学治疗剂；免疫疗法，诸如免疫治疗剂、免疫肿瘤药剂)联合施用。因此，在某些实施方案中，所述方法进一步包括给所述受试者施用治疗有效量的一种或多种其它治疗剂。用于本文公开的方法中的合适的其它治疗剂包括本文结合联合疗法和药物组合讨论的那些。
当与另一种疗法联合施用时，可以在其它疗法(例如，额外的治疗剂)之前、之后或同时施用本公开内容的化合物。当同时(例如，并行地)共同施用两种或更多种治疗剂时，本公开内容的化合物和其它治疗剂可以在分开的制剂或相同的制剂中。可替换地，本公开内容的化合物和其它疗法可以在由熟练的临床医师确定的适当时间范围内(例如，足以允许本公开内容的化合物和其它疗法的药学作用重叠的时间)依次施用(例如，作为分开的组合物)。
呈游离形式或呈药学上可接受的盐形式的本公开内容的化合物表现出有价值的药理学性能，这至少可以通过使用本文所述的任何一种试验程序来证明。
例证
考虑到本文提供的方法、反应方案和实施例，可以以有机合成领域的技术人员已知的多种方式制备本公开内容的化合物。如本领域技术人员所理解的，可以使用下面描述的方法以及合成有机化学领域已知的合成方法或者通过其变体来合成本公开内容的化合物。优选的方法包括、但不限于下述的那些。在适合于所用试剂和材料并适合于进行的转化的溶剂或溶剂混合物中进行反应。有机合成领域的技术人员将理解，在分子上存在的官能度应与所提出的转化一致。这有时需要判断以修改合成步骤的顺序或选择一种特定工艺方案而不是另一种工艺方案以获得本公开内容的所需化合物。
起始原料通常可从商业来源获得，诸如Sigma Aldrich或其它商业供应商，或如本公开内容中所述进行制备,或者使用本领域技术人员众所周知的方法容易地制备(例如，通过在以下文献中一般地描述的方法制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents forOrganic Synthesis,v.1-19,Wiley,New York(1967-1999版),Larock,R.C.,Comprehensive Organic Transformations,第2版,Wiley-VCH Weinheim,德国(1999),或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(也可经由Beilstein在线数据库得到)。
为了例证目的，下面描述的反应方案提供了合成本公开内容的化合物以及关键中间体的潜在途径。本领域技术人员会明白，可以使用其它合成途径来合成本公开内容的化合物。虽然在方案中描述了并在下面讨论了具体的起始原料和试剂，但其它起始原料和试剂可以易于取代以提供多种衍生物和/或反应条件。此外，使用本领域技术人员众所周知的常规化学，可以根据本公开内容进一步修饰通过下述方法制备的许多化合物。
在本公开内容的化合物的制备中，可能需要保护中间体的远程官能团。对这样的保护的需要将随远程官能度的性质和制备方法的条件而异。本领域技术人员容易确定对这样的保护的需要。关于保护基及其用途的一般描述，参见Greene,T.W.等人,ProtectingGroups in Organic Synthesis,第4版,Wiley(2007)。在制备本公开内容的化合物时引入的保护基，诸如三苯甲基保护基，可以显示为一种位置异构体，但也可以作为位置异构体的混合物存在。
在下文中使用的以下缩写具有相应的含义：
ACN 乙腈； Ac2O 乙酸酐；
Aq 水性的； BSA 牛血清白蛋白；
BINAP 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-二萘基；
Boc 叔丁基氧基羰基； C 摄氏；
CH2Cl2 二氯甲烷； Cs2CO3碳酸铯；
d 双峰； dd 双重双峰；
DCE 1,2-二氯乙烷； DCM 二氯甲烷；
DIPEA/DIEA N,N-二异丙基乙胺； DMF N,N-二甲基甲酰胺；
DMSO 二甲基亚砜；
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；
EtOAc 乙酸乙酯； EtOH 乙醇；
g 克； h 小时；
HATU 2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑；
HPLC 高压液相色谱法；
IBX 2-碘酰基苯甲酸； kg 千克；
L 升； LC 液相色谱法；
LCMS 液相色谱法和质谱法；
LiOH 氢氧化锂； MeOH 甲醇；
MS 质谱法； M 摩尔；
m 多重峰； min 分钟；
mL 毫升； μM 微摩尔；
m/z 质荷比； nm 纳米；
nM 纳摩尔； N 当量的；
NMP N-甲基吡咯烷酮； NMR 核磁共振；
Pd(OAc)2 乙酸钯(II)； PS 聚合物支持的；
PG 保护基； pTsOH 对甲苯磺酸；
rac 外消旋的； s 单峰；
sat. 饱和的； t 三重峰；
TEA 三甲胺； TFA 三氟乙酸；
TFE 三氟乙醇； THF 四氢呋喃；
TLC 薄层色谱法。
在实施例的表征中采用的LC/MS方法.使用具有6125MS系统的Agilent 1290LC记录LC/MS数据。下面描述了用于获取所有LCMS数据的方法。
方法1:
柱：Xbridge C8,3.5μm,4.6x 50mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在950mL水和50mL ACN的混合物中的0.1％TFA；B:在ACN中的0.1％TFA
流速:1.5mL/min
梯度:
流动相B％ 5 95 95 5 5
时间 0 2.5 4.0 4.5 5.5
方法2:
柱：Atlantis dC18,5μm,4.6x 50mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在950mL水和50mL ACN的混合物中的0.1％甲酸；B:ACN
流速:1.5mL/min
梯度:
流动相B％ 5 95 95 5 5
时间 0 2.5 4.0 4.5 5.5
方法3:
柱：Atlantis dC18,5μm,4.6x 250mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在950mL水和50mL ACN的混合物中的0.1％甲酸；B:ACN
流速:1.0mL/min
梯度:
流动相B％ 10 100 100 10 10
时间 0 15 20 26 30
方法4:
柱：Zorbax XDB C18,3.5μm,4.6x 50mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在950mL水和50mL ACN的混合物中的0.1％甲酸；B:ACN
流速:1.5mL/min
梯度:
流动相B％ 5 95 95 5 5
时间 0 2.5 4.0 4.5 5.5
方法5:
柱：Zorbax extend C18,5μm,4.6x 50mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在水中的10mM乙酸铵；B:ACN
流速:1.2mL/min
梯度:
流动相B％ 10 95 95 10 10
时间 0 3.5 4.5 5.0 5.5
方法6:
柱：Xbridge C8,5μm,4.6x 50mm
柱温度：环境温度
洗脱液:A:在水中的10mM碳酸氢铵:B:ACN
流速:0.8mL/min
梯度:
流动相B％ 5 95 95 5 5
时间 0 2.5 5.0 5.5 6.0
在实施例的表征中采用的NMR。用运行在如下频率的Bruker傅里叶变换波谱仪获得1H NMR谱：1H NMR:400MHz(Bruker)；13C NMR:100MHz(Bruker)。以以下格式报告波谱数据：化学位移(多重性，氢数)。以距离四甲基硅烷内部标准品(δ单位，四甲基硅烷＝0ppm)的ppm低磁场和/或参考溶剂峰指定化学位移，所述溶剂峰在1H NMR谱中出现在2.50ppm(对于CD3SOCD3)、3.31ppm(对于CD3OD)、1.94(对于CD3CN)、4.79(对于D2O)、5.32(对于CD2Cl2)和7.26ppm(对于CDCl3)，且在13C NMR谱中出现在39.7ppm(对于CD3SOCD3)、49.0ppm(对于CD3OD)、1.32和/或118.26(对于CD3CN)、53.84(对于CD2Cl2)和77.0ppm(对于CDCl3)。将所有13C NMR谱进行质子解耦。
在实施例的纯化中采用的方法。经由正相或反相色谱法进行中间体和终产物的纯化。使用预装的SiO2筒(例如，来自Teledyne Isco,Inc.的
Figure BDA0003522759170000691
Rf柱)进行正相色谱法，用适当的溶剂系统(例如，己烷类和乙酸乙酯；DCM和MeOH；除非另外指出)的梯度洗脱。
使用下述方法进行反相制备型HPLC。
Figure BDA0003522759170000692
根据化合物的性质，使用DAD、ELSE和MSD检测样品。
SFC方法：
1.GreenSep Ethyl Pyridine,5μm柱,CO2和甲醇。
2.GreenSep Ethyl Pyridine-4,5μm柱,CO2和甲醇。
3.GreenSep Ethyl Pyridine-4,5μm柱,CO2和IPA。
4.GreenSep Ethyl Pyridine,5μm柱,CO2和IPA。
所有上述HPLC方法运行从起始甲醇百分比到最终甲醇百分比的聚焦梯度。每个梯度的初始和最终条件如下：
方法1:2-20％甲醇；
方法2:10-50％甲醇；
方法3：等度细节如下，
等度:30％、40％和50％的甲醇
流速:3.0ml/min
ABPR:100巴
一般合成方案。使用本文中公开的方法制备、分离和表征以下实施例。以下实施例展示了本公开内容的部分范围，且不意味着限制本公开内容的范围。
除非另有说明，否则起始原料通常可得自非限制性的商业来源诸如TCI FineChemicals(日本),Shanghai Chemhere Co.,Ltd.(上海，中国),Aurora Fine ChemicalsLLC(圣迭戈,CA),FCH Group(乌克兰),Aldrich Chemicals Co.(Milwaukee,Wis.),Lancaster Synthesis,Inc.(Windham,N.H.),Acros Organics(Fairlawn,N.J.),Maybridge Chemical Company,Ltd.(Cornwall,英格兰),Tyger Scientific(Princeton,N.J.),AstraZeneca Pharmaceuticals(伦敦,英格兰),Chembridge Corporation(美国),Matrix Scientific(美国),Conier Chem&Pharm Co.,Ltd(中国),Enamine Ltd(乌克兰),Combi-Blocks,Inc.(圣迭戈,美国),Oakwood Products,Inc.(美国),Apollo ScientificLtd.(UK),Allichem LLC.(美国)和Ukrorgsyntez Ltd(拉脱维亚)。
方案1-9(如下所示)描述了制备本公开内容的化合物的潜在途径，所述化合物包括式I及其子式(例如式II)的化合物。用于以下反应方案的起始原料是商购可得的或可以根据本领域技术人员已知的方法或通过本文公开的方法制备。通过使用基本上光学纯的起始原料或通过分离色谱法、重结晶或本领域众所周知的其它分离技术，可以使式I的化合物是基本上光学纯的。
Figure BDA0003522759170000701
式I的化合物的合成：
程序A:向嘧啶衍生物(中间体I,1.0当量)和苯胺衍生物(中间体II,0.9当量)的2-甲氧基乙醇溶液(4.0ml/mmol)中加入1.5(N)HCl(0.4ml/mmol)，并将得到的反应混合物加热至90℃保持16h。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到式I的化合物。
程序B:向在密闭试管中的嘧啶衍生物(中间体I,1.0当量)和苯胺衍生物(中间体II,0.9当量)的叔丁醇溶液(4.0ml/mmol)中加入TFA(0.3ml/mmol)。将得到的反应混合物加热至90℃保持16h。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到式I的化合物。
程序C:将含有嘧啶衍生物(中间体I,1.0当量)、苯胺衍生物(中间体II,1.1当量)、Cs2CO3(3.2当量)、Pd(OAc)2(0.1当量)和xanthophos(0.1当量)的二氧杂环己烷溶液(4.0ml/mmol)用氩气脱气15分钟，并在微波中加热至100℃保持1小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到式I的化合物。
表1.所选化合物的NMR和LCMS数据
Figure BDA0003522759170000711
Figure BDA0003522759170000721
Figure BDA0003522759170000731
Figure BDA0003522759170000741
Figure BDA0003522759170000751
Figure BDA0003522759170000761
Figure BDA0003522759170000771
Figure BDA0003522759170000781
Figure BDA0003522759170000791
Figure BDA0003522759170000801
Figure BDA0003522759170000811
Figure BDA0003522759170000821
Figure BDA0003522759170000831
Figure BDA0003522759170000841
Figure BDA0003522759170000851
Figure BDA0003522759170000861
Figure BDA0003522759170000871
Figure BDA0003522759170000881
嘧啶中间体I的合成：
按照方案2和3可以制备嘧啶中间体I。例如，加热(常规或微波)或钯催化的胺化可以用于将NR13R14安装到吡啶上，随后与嘧啶偶联。钯催化的胺化可以利用试剂诸如Pd2(dba)3、Pd(PPh3)4、Pd(dppf)Cl2等。NR1R2和NR3R4取代基可以需要保护基，所述保护基可以如在标准参考文献中所述安装和除去，诸如Greene“Protective Groups in OrganicSynthesis”(由Wiley-Interscience出版)。
嘧啶中间体I-ax的合成：
方案2.
Figure BDA0003522759170000882
步骤1：中间体I-a-int-1的制备：
条件A:在密闭试管中将2-卤代-3-硝基吡啶(1.0当量)以及NR13R14(1.2当量)和K2CO3(1.5当量)的DMF溶液(1.0ml/mmol)加热至100℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的中间体化合物(产率88-94％)。
条件B:将2-卤代-3-硝基吡啶(1.0当量)、NR13R14(1.2当量)和Cs2CO3(1.5当量)的二氧杂环己烷溶液(1.0ml/mmol)用氩气脱气15min。在氩气下将Pd(OAc)2(0.1当量)和xanthophos(0.15当量)加入溶液中，并将得到的反应混合物在密闭试管中加热至100℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的中间体化合物(产率78-91％)。
步骤2：中间体I-a-int-2的制备：
向3-硝基吡啶衍生物的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(10mol％)。将反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的胺中间体(产率86-98％)。
步骤3：中间体I-ax的制备：
在密闭试管中向3-氨基吡啶(1.0当量)和嘧啶衍生物(1.2当量)的二甲基甲酰胺(1.0ml/mmol)溶液中加入DIPEA(3.0当量)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的嘧啶中间体(产率63-81％)。
Figure BDA0003522759170000901
Figure BDA0003522759170000911
中间体I-bx的合成：
方案3
Figure BDA0003522759170000912
步骤1：中间体I-b-int-1的制备：
在室温向2-氟-3-硝基吡啶/苯(1.0当量)在DMF(2.0ml/mmol)中的搅拌溶液中加入乙二胺(1.5当量)和碳酸钾(1.2当量)。将得到的反应混合物在80℃搅拌16h。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥，并在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的胺中间体I-b-int-1(产率78-81％)。
步骤2：中间体I-b-int-2的制备：
在室温向胺中间体(1.0当量)在THF(2.0ml/mmol)中的搅拌溶液中加入CDI(1.2当量)。将得到的反应混合物加热至50℃保持16h。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥，并在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的环状脲中间体I-b-int-2(产率71-76％)。
步骤3：中间体I-b-int-3的制备：
在氮气氛下向中间体I-b-int-2(1.0当量)在甲醇(3.0ml/mmol)中的溶液中加入干燥的Pd/C(10mol％)。在氢气氛下在室温继续搅拌16h。反应的LCMS指示起始原料的消耗。将Pd/C滤出，并用过量的甲醇洗涤。将滤液浓缩得到粗产物，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的胺中间体I-b-int-3(产率86-88％)。
步骤4：中间体I-ba的制备：
在氮气氛下向胺中间体I-b-int-3(1.0当量)和2,4,5-三氯嘧啶(2.5当量)在DMF(2.5ml/mmol)中的溶液中加入DIPEA(3.0当量)。将反应混合物加热至80℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的嘧啶衍生物(产率56-62％)。
Figure BDA0003522759170000921
苯胺中间体(II-xx)的合成：
按照下面的方案4-9可以制备苯胺中间体(II-xx)。例如，加热(常规或微波)或钯催化的胺化可以用于在苯胺衍生物上形成C-N、C-C或C-O键。C-N或C-O键形成可以在常规加热条件下利用碱诸如K2CO3、Cs2CO3等。钯催化的C-N或C-C键形成可以利用试剂诸如Pd2(dba)3、Pd(PPh3)4、Pd(dppf)Cl2等。N(R4)可以需要保护基，所述保护基可以如在标准参考文献中所述安装和除去，诸如Greene“Protective Groups in Organic Synthesis”(由Wiley-Interscience出版)。
苯胺中间体II-ax的合成：
Figure BDA0003522759170000931
步骤1：中间体II-a-int-1的制备：
条件A:在圆底烧瓶中向芳基卤化物(1.0当量)的二甲基甲酰胺溶液(2.0ml/mmol)中加入哌嗪(1.1当量)和K2CO3(1.5当量)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到对应的中间体II-a-int-1(产率80-90％)。
条件B：将芳基卤化物(1.0当量)、哌嗪(1.1当量)和Cs2CO3(1.5当量)的二氧杂环己烷溶液(1.0ml/mmol)用氩气脱气15分钟。在氮气氛下向脱气的溶液中加入Pd2(dba)3(0.1当量)和xanthophos(0.15当量)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的中间体(产率60-70％)。
步骤2：中间体II-ax的制备：
条件C:向中间体II-a-int-1的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的胺中间体(产率78-86％)。
条件D:向中间体II-a-int-1(1.0当量)在EtOH(2.0ml/mmol)中的搅拌溶液中加入铁粉(3.0当量)和氯化铵(3.0当量)。在70℃继续搅拌4小时。反应结束后，将铁粉滤出，并用过量的乙醇洗涤，并将有机层在减压下蒸发。将粗制的反应混合物使用isolara柱色谱法纯化以得到苯胺中间体II-ax(产率78-86％)。
Figure BDA0003522759170000941
苯胺中间体II-bx的合成：
方案5
Figure BDA0003522759170000951
步骤1：中间体II-b-int-1的制备：
在圆底烧瓶中向芳基氟化物(1.0当量)的二甲基甲酰胺溶液(2.0ml/mmol)中加入ROH(1.1当量)和K2CO3(1.5当量)。将得到的反应混合物加热至100℃保持16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并用乙酸乙酯萃取，并将有机层经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到对应的芳基烷氧基中间体II-b-int-1(产率53-88％)。
步骤2：中间体II-b-int-2的制备：
按照在方案4步骤1中关于中间体II-a-int-1的合成所述的条件B。
步骤3：中间体II-bx的制备：
按照在方案4步骤2中关于中间体II-ax的合成所述的条件C。
Figure BDA0003522759170000952
Figure BDA0003522759170000961
苯胺中间体II-cx的合成：
Figure BDA0003522759170000962
步骤1：中间体II-c-int-1的制备：
按照在方案4步骤1中关于中间体II-a-int-1的合成所述的条件A或B(产率63-88％)。
步骤3：中间体II-c-int-2的制备：
在0℃向中间体II-c-int-1(1.0当量)的DMF(2.0ml/mmol)溶液中加入NCS(1.2当量)。将得到的反应混合物在室温搅拌16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并用乙酸乙酯萃取，并将有机层经硫酸钠干燥并在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到对应的氯中间体II-c-int-2(产率86-91％)。
步骤2和4：中间体II-cx和II-cx'的制备：
按照方案4中关于中间体II-ax的合成描述的条件C或D，将硝基还原为胺(产率76-94％)。
Figure BDA0003522759170000971
苯胺中间体II-da的合成：
方案7
Figure BDA0003522759170000972
步骤1：中间体II-d-int-1的制备：
按照在方案4、步骤1中关于中间体II-a-int-1的合成描述的条件A(产率93％)。
步骤2：中间体II-d-int-2的制备：
在0℃向中间体II-d-int-1(1.3g,3.7mmol)在DCM(25.0ml)中的搅拌溶液中加入TFA(4.58g,4.0mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌3h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用DCM(25.0ml)稀释，用10％NaHCO3(25.0ml)洗涤，并用DCM萃取。将有机层经Na2SO4干燥和在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到对应的II-d-int-2(产率78％)。
步骤3：中间体II-d-int-3的制备：
在0℃向中间体II-d-int-2(1.0当量)的DCM溶液(2.0ml/mmol)中加入吡啶(1.2当量)和酰氯(1.2当量)。将得到的反应混合物在室温搅拌6h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥和在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到对应的酰基中间体II-d-int-3(产率79％)。
步骤4：中间体II-da的制备：
按照在方案4中关于中间体II-ax的合成描述的条件C，还原硝基(产率81％)。
Figure BDA0003522759170000981
苯胺中间体II-ea的合成：
方案8
Figure BDA0003522759170000991
步骤1：中间体II-e-int-1的制备：
在0℃向色满-8-胺(1.0g,6.7mmol)的DCM(2.0ml/mmol)溶液中加入NBS(1.4g,8.0mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌16h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥和在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到对应的溴代中间体II-e-int-1(产率1.27g,83.0％)。
步骤2：中间体II-e-int-2的制备：
在0℃向中间体I-e-int-1(1.2g,5.3mmol 1.0当量)在DCM(3.0ml/mmol)中的搅拌溶液中逐份加入m-CPBA(2.7g,15.8mmol，3.0当量)。将得到的反应混合物在室温搅拌16h。将反应混合物用NaHCO3溶液淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到硝基中间体I-e-int-2(1.0g，产率73％)。
步骤3：中间体II-e-int-3的制备：
按照在方案4中关于中间体II-a-int-1、条件B的合成描述的相同条件(产率65％)。
步骤4：中间体II-ea的制备：
按照在方案4中关于中间体II-ax、步骤2、条件C的合成描述的相同条件(产率83％)。
Figure BDA0003522759170001001
苯胺中间体II-fa的合成：
Figure BDA0003522759170001002
苯胺中间体II-fa的合成：
将芳基卤化物(0.5g,1.95mmol)、N-甲基哌嗪(0.24g,2.34mmol)和LHMDS(1.5当量)的二氧杂环己烷溶液(2.0ml/mmol)用氩气脱气15分钟。在氮气氛下向溶液中加入Pd2(dba)3(0.178g,0.195mmol)和DavePhos(0.115g,0.292mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至70℃保持3h。反应的TLC和LCMS用于跟踪起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到对应的中间体II-fa(0.35g，产率65％)。
Figure BDA0003522759170001003
Figure BDA0003522759170001011
实施例编号1的合成
Figure BDA0003522759170001012
步骤1:1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001013
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。然后，在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)。将得到的反应混合物在密闭试管中在100℃加热12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,36.2mmol,57.4％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2:1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001021
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol,78.0％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3:1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001022
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)，将其加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,33.6mmol,82.0％收率),LCMS(ES+,m/z):324.0(M+1)。
步骤4:1-(3-((5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001031
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.0g,3.08mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.589g,3.08mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA，将其加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.5g,1.04mmol,34％收率),1H-NMR 400MHz,DMSO-d6:δ9.57(s,1H),9.23(s,1H),8.82(s,1H),8.28-8.35(m,2H),8.16(s,1H),7.40-7.49(m,3H),6.86(d,J＝12.6Hz,2H),4.02-4.20(m,2H),3.85(d,J＝14.1Hz,2H),3.72(d,J＝13.4Hz,2H),3.11-3.21(m,4H),2.84-2.89(m,5H)和2.08-2.15(m,2H)；LCMS(ES+,m/z):479.1(M+1)。
实施例编号2的合成
Figure BDA0003522759170001041
步骤1:1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(2-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001042
向2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)中加入吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)。将得到的反应混合物用氩气脱气15分钟。然后，在氩气下向脱气的反应混合物中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并将反应混合物在密闭试管中在100℃加热12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,36.2mmol,57.4％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2:1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(2-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001051
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol,78.0％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3:1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(2-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001052
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)，将其加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取，并将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,33.6mmol,82.0％收率),LCMS(ES+,m/z):324.0(M+1)。
步骤4：1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(2-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001061
在圆底烧瓶中向4-氟-2-甲氧基-1-硝基苯(5.0g,29.2mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(3.5g,35.0mmol)和K2CO3(6.0g,43.8mmol)，将其加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(5.0g,19.9mmol,68.1％收率),LCMS(ES+,m/z):252.2(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(2-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001062
向1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,26.3mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(4.3g,78.1mmol)、NH4Cl(4.3g,78.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(4.5g,20.33mmol,77.5％收率),LCMS(ES+,m/z):222.2(M+1)。
步骤6：1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001071
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.0g,3.08mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.68g,3.08mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA，将其加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为绿色固体的1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.5g,0.98mmol,32.0％收率):1H-NMR 400MHz,CD3OD-d4:δ8.42(d,J＝4.4Hz,1H),8.17(d,J＝7.9Hz,2H),7.39-7.42(m,1H),7.31(d,J＝8.6Hz,1H),6.75(s,1H),6.56(d,J＝9.0Hz,1H),4.13(t,J＝12.6Hz,2H),3.87-3.93(m,5H),3.66(d,J＝11.0Hz,2H),3.27-3.33(m,2H),3.11(t,J＝12.3Hz,2H),3.01(s,3H),2.68(t,J＝7.9Hz,2H),和2.09-2.28(m,2H).；LCMS(ES+,m/z):509.1(M+1)。
实施例编号3的合成：
Figure BDA0003522759170001072
中间体3-11的合成
Figure BDA0003522759170001081
实施例编号3的合成
Figure BDA0003522759170001082
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(3-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001083
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M的二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。将得到的反应混合物在二颈圆底烧瓶中加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2:N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(3-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001084
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(3-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001091
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4：4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯(3-8)的合成：
Figure BDA0003522759170001092
向4-溴-2-氟-1-硝基苯(2.0g,9.09mmol)的乙醇溶液(30ml)中加入乙醇钠(0.61g,9.09mmol)。将得到的反应混合物在60℃加热16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后蒸发乙醇并将反应残余物用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯(1.7g,6.9mmol,76.2％收率)。
步骤5：1-(3-乙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(3-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001101
在圆底烧瓶中向4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯(1.6g,6.5mmol)中加入1-甲基哌嗪(0.78g,7.8mmol)。将得到的反应混合物加热至110℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(3-乙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.4g,81.3％收率)。
步骤6：2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(3-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001102
向1-(3-乙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.4g,5.2mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(200mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(1.1g,4.6mmol,88.7％收率)。
步骤7:5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001111
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.8mmol)和2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.2g,0.8mmol)的2-甲氧基乙醇溶液(5.0ml)中加入0.5ml的1.5N HCl在二氧杂环己烷中的溶液。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-乙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.05g,11.7mmol,11％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.19(s,1H),8.13-8.11(m,1H),8.04(d,J＝8.00Hz,2H),7.28-7.23(m,1H),7.13(t,J＝6.80Hz,1H),6.70(s,1H),6.48(d,J＝7.60Hz,1H),4.12-4.08(m,2H),3.87(d,J＝12.80Hz,2H),3.64(d,J＝12.00Hz,2H),3.37(s,6H),3.33-3.32(m,4H),3.00(s,3H),1.39-1.36(m,3H),LCMS(ES+,m/z):483.2(M+1)。
实施例编号4的合成：
Figure BDA0003522759170001112
中间体4-11的合成
Figure BDA0003522759170001121
实施例编号4的合成
Figure BDA0003522759170001122
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(4-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001123
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2:N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001131
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001132
在密闭试管中向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12h。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4:4-溴-2-异丙氧基-1-硝基苯(4-8)的合成：
Figure BDA0003522759170001133
向4-溴-2-氟-1-硝基苯(5.0g,22.7mmol)的异丙醇溶液(50ml)中加入乙醇钠(22.7mmol)并加热至60℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。从反应混合物蒸发异丙醇，并将得到的残余物用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到4-溴-2-异丙氧基-1-硝基苯(3g,11.5mmol,50.8％收率)。
步骤5：1-(3-异丙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(4-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001141
在圆底烧瓶中向4-溴-2-乙氧基-1-硝基苯(2.4g,9.2mmol)中加入1-甲基哌嗪(1.1g,11mmol)。将得到的反应混合物加热至110℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(3-异丙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.7g,6.0mmol,66.1％收率)。
步骤6：2-异丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(4-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001142
向1-(3-异丙氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.5mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入干燥的Pd/C(300mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的2-异丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.75g,3.0mmol,84.2％收率)。
步骤7：5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-异丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001151
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.8mmol)和2-异丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.22g,0.8mmol)的2-甲氧基乙醇溶液(5.0ml)中加入0.5ml的1.5N HCl在二氧杂环己烷中的溶液。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-异丙氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(45mg,10％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.19(s,1H),8.14-8.12(m,1H),8.03(d,J＝6.40Hz,2H),7.28(d,J＝8.80Hz,1H),7.15-7.11(m,1H),6.72(d,J＝2.40Hz,1H),6.47(d,J＝8.00Hz,1H),4.71-4.65(m,1H),3.85(d,J＝12.00Hz,2H),3.64(d,J＝10.80Hz,2H),3.33-3.32(m,2H),3.20(s,8H),3.00(s,3H),1.31(d,J＝6.00Hz,6H),LCMS(ES+,m/z):497.2(M+1)。
实施例编号5的合成：
Figure BDA0003522759170001161
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(5-2)的合成:
Figure BDA0003522759170001162
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(5-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001163
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol，82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(5-5)的合成：
Figure BDA0003522759170001171
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4:5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001172
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.8mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.16g,0.8mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.08g，20％收率)。1H-NMR 400MHz,DMSO-d6:δ9.10(d,J＝8.40Hz,1H),8.38-8.39(m,1H),8.16(d,J＝1.60Hz,1H),7.54-7.57(m,1H),7.45-7.47(m,1H),7.03-7.05(m,2H),7.45-7.47(m,1H),7.03-7.05(m,2H),3.70(d,J＝12.92Hz,2H),3.52(d,J＝11.40Hz,2H),3.12-3.20(m,2H),2.86(d,J＝15.44Hz,12H)；LCMS(ES+,m/z):439.1(M+1)。
实施例编号6的合成：
Figure BDA0003522759170001181
中间体6-10的合成
Figure BDA0003522759170001182
实施例编号6的合成
Figure BDA0003522759170001183
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(6-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001191
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(6-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001192
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(6-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001193
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6-9)的合成:
Figure BDA0003522759170001201
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(6-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001202
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001211
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.8mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.20g,0.8mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为灰白色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.09g,21.1％收率)。1H-NMR 400MHz,DMSO-d6:δ9.87(s,1H),9.31(s,1H),8.53(s,1H),8.24(s,1H),8.10-8.11(m,1H),7.86(d,J＝7.68Hz,1H),7.37(s,1H),6.92-6.95(m,1H),6.67(s,1H),3.79(s,3H),3.51(d,J＝11.76Hz,2H),3.16-3.21(m,4H),2.85-2.96(m,10H),2.02(s,3H),LCMS(ES+,m/z):483.02(M+1)。
实施例编号7的合成：
Figure BDA0003522759170001212
中间体7-11的合成
Figure BDA0003522759170001221
实施例编号7的合成
Figure BDA0003522759170001222
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001223
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(7-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001224
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g,34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(7-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001231
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4：1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(7-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001232
向1-氟-4-硝基萘(0.38g,1.9mmol)和1-甲基哌嗪(0.298mg,2.98mmol)的DMF溶液(10ml)中，加入K2CO3(0.790g,5.7mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(0.52g,1.97mmol,96.47％收率)。
步骤5：1-(2-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(7-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001241
向1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(0.52g,1.91mmol)中加入NCS和NaCl溶液。将得到的反应混合物在室温在氮气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(2-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(0.4g,68.2％收率)。
步骤6：3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(7-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001242
向1-(2-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(0.4g,1.31mmol)的乙醇溶液(10ml)中加入Fe粉末(0.18g,3.4mmol)、NH4Cl(0.18g,3.4mmol)和水(3.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持5小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(0.35g,97.4％收率)。
步骤7：5-氯-N2-(3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺的合成：
Figure BDA0003522759170001251
向3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(0.35g,1.27mmol)和N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.360g,1.27mmol)的2-甲氧基乙醇溶液(5.0ml)中加入5.0ml HCl在二氧杂环己烷中的溶液。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持12小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为浅棕色固体的5-氯-N2-(3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.09g,0.1719mmol,12.27％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.79(s,1H),9.60(s,1H),8.60(s,1H),8.50(d,J＝8.40Hz,1H),8.22(s,1H),8.08(d,J＝8.00Hz,1H),7.98(d,J＝5.20Hz,2H),7.65-7.56(m,3H),6.86-6.82(m,1H),3.83(t,J＝11.20Hz,2H),3.54-3.46(m,4H),3.08(d,J＝13.20Hz,2H),2.95(d,J＝3.60Hz,3H),2.78(s,6H),LCMS(ES+,m/z):523.2(M+1)。
实施例编号8的合成：
中间体8-6的合成
Figure BDA0003522759170001252
中间体8-10的合成
Figure BDA0003522759170001261
实施例编号8的合成
Figure BDA0003522759170001262
步骤1：3-硝基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(8-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001263
向2-氯-3-硝基吡啶(1.0g,7.042mmol)和吡咯烷(0.749g,10.563mmol)的二氧杂环己烷溶液(40ml)中加入K2CO3(3.07g,9.45mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到3-硝基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(1.2g,6.21mmol,88.2％收率)。
步骤2：2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(8-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001264
向3-硝基-2-(吡咯烷-1-基)吡啶(1.2g,2.48mmol)的乙醇溶液(200ml)中加入干燥的Pd/C(300mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(0.890g,5.452mmol,87.85％收率)。
步骤3：2,5-二氯-N-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(8-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001271
向2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-胺(0.89g,5.452mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(1.1g,6.55mmol)的二甲基甲酰胺(8ml)溶液中加入DIPEA(3ml,16.36mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到2,5-二氯-N-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(780mg,0.739mmol,46.15％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(8-9)的合成:
Figure BDA0003522759170001272
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(8-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001281
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：5-氯-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺的合成：
Figure BDA0003522759170001282
向2,5-二氯-N-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(0.1g,0.0322mmol)和5-甲基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(81.6mg,0.0322mmol)的2-甲氧基乙醇溶液(5.0ml)中加入3.0ml HCl在二氧杂环己烷中的溶液。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持12小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-氯-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(2-(吡咯烷-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.054g,0.4911mmol,32.9％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),9.47(s,1H),8.32(s,2H),8.21(s,1H),8.06(d,J＝4.40Hz,1H),7.76(d,J＝6.80Hz,1H),7.36(s,1H),6.88(t,J＝6.40Hz,1H),6.64(s,1H),3.77(s,3H),3.49(d,J＝19.20Hz,5H),3.15(d,J＝13.20Hz,3H),2.93(t,J＝18.00Hz,6H),2.01(s,3H),1.84(s,4H),LCMS(ES+,m/z):509.2(M+1)。
实施例编号9的合成
Figure BDA0003522759170001291
步骤1：N1-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(9-2)的合成:
Figure BDA0003522759170001292
在0℃向2-氟-3-硝基吡啶/苯(10.0g,70.4mmol)在DMF(200ml)中的搅拌溶液中加入乙二胺(6.3g,105mmol)。在相同温度继续搅拌30分钟。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将粗产物使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的N1-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(8.0g,43.9mmol,62.0％收率),LCMS(ES+,m/z):183.2(M+1)。
步骤2：1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(9-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001301
在室温向N1-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(8.0g,43.9mmol)在THF(80ml)中的搅拌溶液中加入CDI(10.6g,65.4mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌1小时。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将粗产物使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(7.0g,33.6mmol,77.0％收率),LCMS(ES+,m/z):209.2(M+1)。
步骤3：1-(3-氨基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(9-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001302
向1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(7.0g,33.6mmol)的乙醇溶液(70ml)中加入干燥的Pd/C(1.4g)。将反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(5.0g,28.1mmol,84.0％收率),LCMS(ES+,m/z):179.2(M+1)。
步骤4：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(9-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001311
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(5.0g,28.1mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(5.14g,28.1mmol)的二甲基甲酰胺(50ml)溶液中加入DIPEA(10.0ml,70.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取，并将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(6.0g,18.5mmol,66.0％收率),LCMS(ES+,m/z):325.15(M+1)。
步骤5：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(9-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001312
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(0.5ml,6.5mmol)和K2CO3(1.1g,8.1mmol)，将其加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol,84.0％收率),LCMS(ES+,m/z):266.1(M+1)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(9-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001321
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.25g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.76g,3.2mmol,72.0％收率),LCMS(ES+,m/z):236.1(M+1)。
步骤7:1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001322
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(1.0g,3.08mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.72g,3.08mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为淡粉红色固体的1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(0.8g,1.5mmol,50.0％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.73(s,1H),8.21(d,J＝4.80Hz,1H),8.16(d,J＝8.00Hz,1H),8.11(s,1H),7.77(s,1H),7.65(s,1H),7.44(s,1H),7.23(q,J＝4.40Hz,1H),6.67(s,1H),5.76(s,1H),4.07(t,J＝8.00Hz,2H),3.77(s,3H),3.49(t,J＝8.00Hz,2H),3.16-3.25(m,4H),2.89-2.97(m,7H),2.08(s,3H)；LCMS(ES+,m/z):524.2(M+1)。
实施例编号10的合成
Figure BDA0003522759170001331
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(10-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001332
在密闭试管中将2-氟-3-硝基吡啶(1.0g,7.0mmol)的DMF溶液(1.0ml/mmol)、在THF中的二甲基胺(2.0M溶液,4.2ml,8.4mmol)和K2CO3(1.4g,10.5mmol)加热至100℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，并将有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(1.05g,6.3mmol,90.0％收率),LCMS(ES+,m/z):168.2(M+1)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(10-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001341
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(1.0g,6.0mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.2g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为淡紫色固体的N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.7g,5.1mmol,85.0％收率),LCMS(ES+,m/z):138.1(M+1)。
步骤3：N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(10-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001342
在密闭试管中向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.7g,5.1mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(0.8ml,6.1mmol)的二甲基甲酰胺(1.0ml/mmol)溶液中加入DIPEA(2.6ml,15.3mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为淡棕色固体的N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(1.6g,4.9mmol,95.0％收率),LCMS(ES+,m/z):328.9(M+1)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(10-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001351
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(0.5ml,6.5mmol)和K2CO3(1.1g,8.1mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol,84.0％收率),LCMS(ES+,m/z):266.1(M+1)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(10-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001352
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.25g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.76g，3.2mmol,72.0％收率),LCMS(ES+,m/z):236.1(M+1)。
步骤6:5-溴-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001361
在密闭试管中向N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(1.0g,3.0mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.86g,3.6mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-溴-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.7g,1.33mmol,44.0％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):10.13(s,1H),9.12(s,1H),8.67(s,1H),8.32(s,1H),8.10(d,J＝3.60Hz,1H),7.91(s,1H),7.33(s,1H),6.95(s,1H),6.68(s,1H),3.79(s,3H),3.52(d,J＝11.20Hz,4H),3.17-3.24(m,4H),2.85-2.99(m,9H),2.04(s,3H)；LCMS(ES+,m/z):527.1(M+1)。
实施例编号11的合成：
Figure BDA0003522759170001371
中间体11-10的合成
Figure BDA0003522759170001372
实施例编号11的合成
Figure BDA0003522759170001373
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(11-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001374
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(11-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001381
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2-氯-5-碘嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(11-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001382
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4-二氯-5-碘嘧啶(1.0g,3.6mmol)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入DIPEA(0.9ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2-氯-5-碘嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.59g,1.5mmol,45.3％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(11-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001391
向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(11-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001392
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-5-碘-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001401
向N3-(2-氯-5-碘嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.2g,0.5mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.12g,0.5mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0mlTFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.09g,0.15mmol,29.5％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.93(s,1H),8.51(d,J＝28.12Hz,2H),8.34(s,1H),8.05-8.07(m,2H),7.39(s,1H),6.90-6.93(m,1H),6.69(s,1H),3.80(s,3H),3.51(d,J＝11.32Hz,2H),3.20(d,J＝11.68Hz,4H),2.99(d,J＝11.60Hz,2H),2.89(d,J＝3.76Hz,3H),2.80(s,6H),2.07(s,3H)。LCMS(ES+,m/z):575.1(M+1)。
实施例编号12的合成：
中间体12-6的合成
Figure BDA0003522759170001411
中间体12-10的合成
Figure BDA0003522759170001412
实施例编号12的合成
Figure BDA0003522759170001413
步骤1：N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(12-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001414
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.5g,3.6mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(0.91g，4.0mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入DIPEA(0.9ml，5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.5g,1.5mmol,42.0％收率)。
步骤2：N3-(2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(12-5)的合成：
Figure BDA0003522759170001421
向N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.5g,1.5mmol)和三丁基(3-甲氧基丙-1-烯-2-基)锡烷(0.6g,1.67mmol)的脱气甲苯溶液(10ml)中加入四三苯基膦钯(0.17g,0.15mol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持3小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的N3-(2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.7mmol,51％收率)。
步骤3：1-(2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮(12-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001422
向1-(2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮(0.2g,0.6mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)中加入0.5ml浓HCl。将得到的反应混合物在室温搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发并用碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮(0.1g,54.9％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(12-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001431
向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(12-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001432
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：1-(4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮：
Figure BDA0003522759170001441
向1-(2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮(0.1g,0.3mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.08g,0.37mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗制的异构体使用SFC纯化分离以得到作为淡黄色固体的1-(4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-基)乙烷-1-酮(30mg，17.8％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.42(s,1H),9.88(s,1H),9.17(s,1H),8.88(s,1H),8.28(s,1H),7.98(d,J＝3.84Hz,1H),7.68(s,1H),6.79(d,J＝32.92Hz,2H),3.79(s,3H),3.54(d,J＝10.92Hz,2H),3.28-3.21(m,4H),3.03-2.97(m,2H),2.91(d,J＝3.92Hz,3H),2.75(s,6H),2.53(s,3H),2.16(s,3H),LCMS(ES+,m/z):491.2(M+1)。
实施例编号13的合成
Figure BDA0003522759170001451
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(13-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001452
向2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)中，加入吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)。将得到的反应混合物用氩气脱气15分钟。然后，在氩气下向脱气的反应混合物中加入Pd(OAc)2(0.715g，3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,36.2mmol,57.4％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(13-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001461
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol,78.0％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(13-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001462
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,33.6mmol,82.0％收率),LCMS(ES+,m/z):324.0(M+1)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(13-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001471
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,24.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(2.7g,26.9mmol)和K2CO3(4.3g,31.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.1mmol,95.0％收率)，LCMS(ES+,m/z):286.1(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(13-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001472
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.1mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(6.3g,112.8mmol)、NH4Cl(6.1g,114.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(5.2g,20.3mmol,88.0％收率),LCMS(ES+,m/z):256.1(M+1)。
步骤6:1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001481
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.0g,3.08mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.787g,3.08mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1ml TFA，将其加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为浅棕色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.7g,1.29mmol,42.0％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.86(s,1H),8.31-8.29(m,1H),8.24(d,J＝8.00Hz,1H),8.17(s,1H),7.91(s,1H),7.75(s,1H),7.40-7.37(m,1H),6.76(s,1H),4.02(t,J＝6.80Hz,2H),3.82(s,3H),2.96(brs,4H),2.60(t,J＝6.80Hz 2H),2.24(s,3H),2.13-2.1(m,3H).；LCMS(ES+,m/z):544.2(M+1)。
实施例编号14的合成：
Figure BDA0003522759170001491
中间体14-10的合成
Figure BDA0003522759170001492
实施例编号14的合成
Figure BDA0003522759170001493
步骤1：3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶(14-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001494
向2-氯-3-硝基吡啶(1.0g,7.04mmol)和哌啶(0.599g,7.04mmol)的二氧杂环己烷溶液(40ml)中加入K2CO3(3.07g,9.45mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶(1.28g,6.176mmol,85.9％收率)。
步骤2：2-(哌啶-1-基)吡啶-3-胺(14-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001501
向3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶(1.28g,6.176mmol)的乙醇溶液(200ml)中加入干燥的Pd/C(300mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到2-(哌啶-1-基)吡啶-3-胺(0.990g,2.09mmol,90.8％收率)。
步骤3：2,5-二氯-N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(14-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001502
向2-(哌啶-1-基)吡啶-3-胺(0.5g,2.82mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.548g,3.03mmol)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入DIPEA(1.5ml,6.06mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到2,5-二氯-N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(0.35g,.1.0795mmol,38.29％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(14-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001511
向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(14-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001512
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：5-氯-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺的合成：
Figure BDA0003522759170001521
向2,5-二氯-N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-4-胺(0.25g,0.771mmol)和5-甲基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.195g,0.771mmol)的叔丁醇溶液(5.0ml)中加入0.5ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为深绿色固体的5-氯-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.17g,0.5396mmol,43.1％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.78(s,1H),8.91(s,1H),8.67(m,1H),8.24(s,2H),8.09-8.08(m,1H),7.36(s,1H),7.02-6.99(m,1H),6.70(s,1H),3.78(s,3H),3.51(d,J＝10.80Hz,2H),3.21(d,J＝11.20Hz,4H),2.99-2.89(m,9H),2.10(s,3H),1.56(s,6H),LCMS(ES+,m/z):523.2(M+1)。
实施例编号15的合成：
Figure BDA0003522759170001531
中间体15-6的合成
Figure BDA0003522759170001532
实施例编号15的合成
Figure BDA0003522759170001533
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(15-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001534
向2-氯-3-硝基吡啶(1.0g,6.31mmol)和吡咯烷-2-酮(0.7496g,7.57mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)中加入Cs2CO3(3.07g,9.45mmol)。将得到的反应混合物用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的反应混合物中加入Pd2(dba)3(0.288g,0.3155mmol)和Xanthophos(0.910g,0.00315mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.55g,3.62mmol,39.5％收率)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(15-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001541
向1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.55g,2.48mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(70mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-氨基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.4g,2.09mmol,84.15％收率)
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(15-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001542
向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.4g,2.02mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.597g,3.3mmol)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入DIPEA(1.2ml,6.06mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.250g,0.0739mmol,35.3％收率)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(15-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001551
向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(15-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001552
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g,2.9mmol,78.9％收率)。
步骤6：1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮的合成：
Figure BDA0003522759170001561
向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(250mg,0.733mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(173mg,0.73mmol)的叔丁醇溶液(5.0ml)中加入0.5ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为灰色固体的1-(3-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.174g,0.324mmol,51.45％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.66(s,1H),8.33-8.31(m,1H),8.20-7.93(m,4H),7.42(s,1H),7.38-7.35(m,1H),6.67(s,1H),3.86(s,1H),3.78(s,2H),3.52-3.49(m,3H),3.22-3.17(m,4H),2.96-2.89(m,5H),2.32(s,2H),2.06(s,3H),1.77(s,4H),LCMS(ES+,m/z):537.2(M+1)。
实施例编号16的合成：
Figure BDA0003522759170001571
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(16-2)的合成:
Figure BDA0003522759170001572
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(16-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001573
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g，34.2mmol，82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(16-5)的合成：
Figure BDA0003522759170001581
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4：5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001582
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.25g,0.8mmol)和2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.19g,0.8mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0mlTFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为深绿色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.1g,0.2mmol,24.1％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.08(s,1H),9.60(s,1H),8.82(s,3H),8.25-8.13(m,1H),7.84(d,J＝6.80Hz,1H),7.27(d,J＝8.80Hz,1H),6.95(t,J＝5.60Hz,1H),6.66(s,1H),6.34(d,J＝6.80Hz,1H),3.85(s,3H),3.54(d,J＝10.80Hz,2H),3.15(s,3H),2.96-2.90(m,11H),LCMS(ES+,m/z):469.1(M+1)。
实施例编号17的合成：
Figure BDA0003522759170001591
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(17-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001601
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(17-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001602
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g,34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(17-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001603
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(500mg,3.6mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.45ml,4.0mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(0.95ml,5.47mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.55g,1.9mmol,53.3％收率)。
步骤4：1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(17-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001611
向1-氟-4-硝基萘(380mg,1.9mmol)和1-甲基哌嗪(298mg,2.98mmol)的DMF溶液(10ml)中加入K2CO3(790mg,5.7mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(0.52g,1.97mmol,96.4％收率)。
步骤5：4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(17-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001612
向1-(2-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(400mg,1.31mmol)的乙醇溶液(10ml)中加入Fe粉末(85mg,3.4mmol)、NH4Cl(180mg,3.4mmol)和水(3.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(0.35g,79.5％收率)。
步骤5：5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)嘧啶-2,4-二胺的合成：
Figure BDA0003522759170001621
向N3-(2,5-二氯嘧啶-4-基)-N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.35g,1.27mmol)和4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(0.29g,1.27mmol)的2-甲氧基乙醇溶液(5.0ml)中加入5mlHCl在二氧杂环己烷中的溶液。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREPHPLC纯化以得到作为浅棕色固体的5-氯-N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)嘧啶-2,4-二胺(0.09g,0.18mmol,14.9％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.82(s,1H),9.56(s,1H),8.77(s,1H),8.17(d,J＝9.60Hz,2H),7.95(t,J＝6.40Hz,2H),7.82(d,J＝4.00Hz,1H),7.53(s,1H),7.43(d,J＝8.00Hz,1H),7.14(d,J＝7.60Hz,1H),6.73(s,1H),3.62(d,J＝11.60Hz,2H),3.50-3.41(m,4H),3.08(t,J＝12.00Hz,2H),2.96(s,3H),2.80(s,6H),LCMS(ES+,m/z):489.2(M+1)。
实施例编号18的合成
Figure BDA0003522759170001631
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(18-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001632
向2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)中加入吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)。将得到的反应混合物用氩气脱气15分钟。然后，在氩气下向脱气的反应混合物中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,36.2mmol,57.4％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(18-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001641
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol,78.0％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(18-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001642
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,33.6mmol,82.0％收率),LCMS(ES+,m/z):324.2(M+1)。
步骤4：1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(18-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001651
在圆底烧瓶中向1-氟-4-硝基萘(5.0g,26.17mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(3.14g,31.4mmol)和K2CO3(9g,65.2mmol)，将其加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(5.0g,18.4mmol,71.0％收率),LCMS(ES+,m/z):272.2(M+1)。
步骤5：1-(3-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(18-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001652
在0℃向1-甲基-4-(4-硝基萘-1-基)哌嗪(2.0g,7.4mmol)的DMF(20ml)溶液中加入NCS(1.07g,8.04mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥并在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(3-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.3mmol,44.0％收率),LCMS(ES+,m/z):306.2(M+1)。
步骤6：2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(18-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001661
向1-(3-氯-4-硝基萘-1-基)-4-甲基哌嗪(6.6g,21.6mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(3.57g,64.90mmol)、NH4Cl(3.52,64.90mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(5.0g,18.1mmol,83.0％收率),LCMS(ES+,m/z):276.2(M+1)。
步骤7：1-(3-((5-氯-2-((3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001662
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.0g,3.08mmol)和2-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-胺(0.85g,3.08mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为淡黄色固体的1-(3-((5-氯-2-((3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.8g,1.42mmol,46.0％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.6(s,1H),9.49(s,1H),8.82(s,1H),8.49(d,J＝8.40Hz,1H),8.19(t,J＝3.60Hz,2H),8.05(d,J＝8.00Hz,2H),7.62(t,J＝6.40Hz,2H),7.56(t,J＝6.80Hz,1H),7.09-7.14(m,1H),3.96(t,J＝6.80Hz,2H),3.62(t,J＝10.40Hz,2H),2.77-2.84(m,4H),2.56-2.61(m,2H),2.32-2.37(m,5H),2.08-2.19(m,2H)LCMS(ES+,m/z):563.1(M+1)。
实施例编号19的合成：
Figure BDA0003522759170001671
中间体19-10的合成
Figure BDA0003522759170001672
实施例编号19的合成
Figure BDA0003522759170001673
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(19-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001674
向2-氯-3-硝基吡啶(1.0g,6.31mmol)和吡咯烷-2-酮(0.7496g,7.57mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)中加入Cs2CO3(3.07g,9.45mmol)。将得到的混合物用氩气脱气15分钟。向脱气的混合物中加入Pd2(dba)3(0.288g,0.3155mmol)和Xanthophos(0.910g,0.00315mmol)。将得到的反应混合物维持在氩气下并在密闭试管中加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.55g,3.62mmol,39.5％收率)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(19-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001681
向1-(3-硝基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.55g,2.48mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(70mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-氨基吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.4g,2.09mmol,84.15％收率)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(19-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001682
向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.4g,2.02mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(0.597g,3.3mmol)的二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入DIPEA(1.2ml,6.06mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.250g,0.0739mmol,35.3％收率)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(19-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001691
向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,24.32mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(2.7g,26.9mmol)和K2CO3(4.3g,31.2mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至60℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g，23.09，产率94.9％)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(19-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001692
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.09mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(6.3g,112.8mmol)、NH4Cl(6.1g,114.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(5.2g，产率88.03％)。
步骤6：1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮：
Figure BDA0003522759170001701
向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.25g,0.733mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.18g,0.73mmol)的叔丁醇溶液(5.0ml)中加入0.5ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至90℃保持12小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为灰色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-2-酮(0.17g,0.324mmol,42.23％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.84(s,1H),8.34(d,J＝4.40Hz,1H),8.21(d,J＝10.40Hz,3H),8.11(s,1H),7.80(s,1H),7.42-7.39(m,1H),6.79(s,1H),3.93(s,3H),3.55(d,J＝11.20Hz,2H),3.41(d,J＝12.00Hz,2H),3.22(d,J＝8.80Hz,2H),3.04-2.90(m,6H),2.43(s,6H),1.79(s,4H)；LCMS(ES+,m/z):557.2(M+1)。
实施例编号20的合成：
Figure BDA0003522759170001702
中间体20-10的合成
Figure BDA0003522759170001711
实施例化合物20的合成
Figure BDA0003522759170001712
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(20-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001713
向2-氟-3-硝基吡啶(8.0g,56.3mmol)的DMF溶液(60ml)中，加入2.0M二甲基胺的THF溶液(33ml,67.56mmol)和K2CO3(11.66g,84.45mmol)。在二颈圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至100℃保持8小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X100ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol,74.4％收率)。
步骤2：N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(20-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001714
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(7.0g,41.8mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(700mg)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(4.7g,34.2mmol,82.4％收率)。
步骤3：2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈(20-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001721
向N2,N2-二甲基吡啶-2,3-二胺(1.0g,7.2mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入2,4-二氯嘧啶-5-甲腈(1.2g,7.2mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物在室温搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的两种位置异构体2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈和4-氯-2-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.54g,1.9mmol,27％收率)的混合物。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(20-9)的合成:
Figure BDA0003522759170001722
向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1.0g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.63g,6.4mmol)和K2CO3(1.12g,8.1mmol)。在圆底烧瓶中将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.7mmol,71.4％收率)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(20-10)的合成:
Figure BDA0003522759170001731
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1g,3.7mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.63g,11.3mmol)、NH4Cl(0.59g,11.3mmol)和水(4.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其使用isolera柱色谱法纯化以得到作为紫色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.7g，2.9mmol，78.9％收率)。
步骤6：N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-5-异氰基-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001732
向两种异构体2-氯-4-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈和4-氯-2-((2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲腈(0.54g,1.9mmol)的混合物和4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.46g,1.2mmol)的叔丁醇溶液(10.0ml)中加入1.0ml TFA。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至75℃保持1小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。将粗制的异构体通过SFC纯化分离以得到作为棕色固体的N4-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)-5-异氰基-N2-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.03g,0.06mmol,3.4％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.74(s,1H),9.24(s,1H),8.61(s,1H),8.47(s,1H),8.07(s,1H),7.83(s,1H),7.29(s,1H),6.92(t,J＝Hz,1H),6.66(s,1H),3.76(s,3H),3.51(d,J＝11.60Hz,2H),3.21(t,J＝12.08Hz,4H),2.96-2.86(m,11H),2.05(s,3H),LCMS(ES+,m/z):474.2(M+1)。
实施例编号21的合成
Figure BDA0003522759170001741
步骤1：N1-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(21-2)的合成:
Figure BDA0003522759170001742
在0℃向2-氟-3-硝基吡啶/苯(10g,70.42mmol)在DMF(200ml)中的搅拌溶液中加入乙二胺(6.3g,105mmol)。在相同温度继续搅拌30分钟。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥和在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到作为浅棕色液体的N1-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(8g，产率62％)。LCMS(ES+,m/z):182.1(M+1)。
步骤2：1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(21-3)的合成：
Figure BDA0003522759170001751
在室温向N-(3-硝基吡啶-2-基)乙烷-1,2-二胺(8g,43.95mmol)在THF(80ml)中的搅拌溶液中加入CDI(10.6g,65.4mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌1h。证实反应结束以后，将反应用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经Na2SO4干燥和在减压下蒸发。将粗产物通过isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(7g，产率77％)。LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤3：1-(3-氨基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(21-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001752
向1-(3-硝基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(7g,33.5mmol)的乙醇溶液(70ml)中加入干燥的Pd/C(1.4g)。将反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到1-(3-氨基吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(5g，产率85％)。LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(21-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001753
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,24.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(2.7g,26.9mmol)和K2CO3(4.3g,31.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,96％收率),LCMS(ES+,m/z):286.1(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(21-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001761
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.1mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(6.3g,112.8mmol)、NH4Cl(6.1g,114.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(5.2g,88％收率),LCMS(ES+,m/z):256.1(M+1)。
步骤6：1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮的合成：
Figure BDA0003522759170001762
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)、咪唑烷-2-酮(0.3g,0.922mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.26g,1.01mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREPHPLC纯化以得到作为紫色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(0.11g，产率22％),1H-NMR 400MHz,DMSO-d6:δ10.03(s,1H),9.87(s,1H),8.21-8.24(m,3H),8.15(d,J＝8.00Hz,1H),7.79(s,1H),7.69(s,1H),7.27(q,J＝4.60Hz,1H),6.80(s,1H),4.07(t,J＝7.84Hz,2H),3.85(s,3H),3.56-3.39(m,5H),3.23-3.17(m,2H),3.03-2.97(m,2H),2.91(s,3H).；LCMS(ES+,m/z):544.1(M+1)。
实施例编号22的合成
Figure BDA0003522759170001771
步骤1：N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(22-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001772
将2-氟-3-硝基吡啶(1g,5.98mmol)的DMF溶液(1.0ml/mmol)、在THF中的2(M)二甲基胺(4.2ml,8.97mmol)和K2CO3(1.4g,8.97mmol)在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(1.05g，产率90％),LCMS(ES+,m/z):168.1(M+1)。
步骤2：N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(22-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001773
向N,N-二甲基-3-硝基吡啶-2-胺(1g,5.9mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.2g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.7g，产率85％),LCMS(ES+,m/z):138.1(M+1)。
步骤3：N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(22-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001781
在密闭试管中向N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.7g,5.1mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(0.8ml,6.1mmol)的二甲基甲酰胺(1.0ml/mmol)溶液中加入DIPEA(2.6ml,15.3mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(1.5g，产率90％),LCMS(ES+,m/z):328.1(M+1)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(22-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001782
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,24.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(2.7g,26.9mmol)和K2CO3(4.3g,31.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g，产率88％),LCMS(ES+,m/z):286.1(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(22-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001791
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.3mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(6.3g,112.8mmol)、NH4Cl(6.1g,114.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(5.2g，产率88％),LCMS(ES+,m/z):256.1(M+1)。
步骤6:5-溴-N-(5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001792
在密闭试管中向N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-2,3-二胺(0.3g,1.5mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.26g,1.8mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入1ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物使用PREP HPLC纯化以得到作为淡砖红色固体的5-溴-N-(5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N-(2-(二甲基氨基)吡啶-3-基)嘧啶-2,4-二胺(0.2g，产率30％),1H-NMR 400MHz,DMSO-d69.98(s,1H),8.95(s,1H),8.40(s,1H),8.30(d,J＝8.32Hz,1H),8.09(q,J＝1.56Hz,1H),8.00(d,J＝7.16Hz,1H),7.67(s,1H),6.99(q,J＝5.28Hz,1H),6.79(s,1H),3.84(s,3H),3.54(d,J＝11.64Hz,2H),3.40(d,J＝12.52Hz,2H),3.19(t,J＝8.84Hz,2H),3.00(t,J＝12.12Hz,2H),2.88(s,3H),2.85(s,3H),2.50(s,3H).；LCMS(ES+,m/z):547.1(M+1)。
实施例编号23的合成
Figure BDA0003522759170001801
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(23-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001802
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthphos(3.6g,6.2mmol)。在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,57％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(23-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001803
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,78％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(23-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001811
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.0g,5.64mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(1.54g,6.67mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)溶液中加入DIPEA(1.1g,8.46mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(1.7g,82％收率),LCMS(ES+,m/z):369.1(M+1)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(23-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001812
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,24.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(2.7g,26.9mmol)和K2CO3(4.3g,31.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,96％收率),LCMS(ES+,m/z):286.1(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(23-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001821
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(6.6g,23.1mmol)的乙醇溶液(60ml)中加入Fe粉末(6.3g,112.8mmol)、NH4Cl(6.1g,114.1mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(5.2g,88％收率),LCMS(ES+,m/z):256.1(M+1)。
步骤6：1-(3-((5-溴-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮的合成：
Figure BDA0003522759170001822
在密闭试管中向1-(3-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.3g,0.813mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.229g,0.895mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREPHPLC纯化以得到作为灰色固体的1-(3-((5-溴-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.1g,19％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):9.79(s,1H),8.73(s,1H),8.30(t,J＝3.08Hz,1H),8.25(s,1H),8.22(d,J＝7.96Hz,1H),8.02(s,1H),7.78(s,1H),7.38(q,J＝4.72Hz,1H),6.79(s,1H),4.01(t,J＝6.88Hz,1H),3.84(s,3H),3.54(d,J＝8.30Hz,2H),3.40(d,J＝11.84Hz,2H),3.22(d,J＝10.00Hz,2H),3.00(t,J＝11.72Hz,2H),2.60(t,J＝7.96Hz,2H),2.50(s,3H),2.12(t,J＝7.12Hz,2H).；LCMS(ES+,m/z):587.1(M+H)。
实施例编号24的合成
Figure BDA0003522759170001831
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(24-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001832
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,57％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(24-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001841
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,78％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(24-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001842
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,82％收率),LCMS(ES+,m/z):324.0(M+1)。
步骤4：8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(24-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001851
在圆底烧瓶中向8-氟-5-硝基喹啉(1.0g,5.2mmol)的二甲基甲酰胺溶液(1.0ml)中加入1-甲基哌嗪(0.625g,6.24mmol)和K2CO3(1.1g,7.8mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(1.3g,92％收率),LCMS(ES+,m/z):273.2(M+1)。
步骤5：7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(24-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001852
在0℃向8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(1.0g,3.67mmol)的DMF(10ml)溶液中加入NCS(0.98g,7.34mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥并在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(0.9g,80％收率),LCMS(ES+,m/z):307.2(M+1)。
步骤6：7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-5-胺(24-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001853
向7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基喹啉(0.9g,2.93mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(0.983g,17.6mmol)、NH4Cl(0.94,17.6mmol)和水(2.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-5-胺(0.43g,53％收率),LCMS(ES+,m/z):276.2(M+1)。
步骤7：1-(3-((5-氯-2-((7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-5-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001861
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.3g,0.925mmol)和7-氯-8-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-5-胺(0.28g,1.01mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为淡黄色固体的1-(3-((5-氯-2-((3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.12g,23％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):9.73(s,1H),9.65(s,1H),8.94(s,1H),8.89(s,1H),8.49(s,1H),8.22-8.21(m,2H),8.04(d,J＝7.20Hz,1H),7.82(s,1H),7.56(s,1H),7.13(dd,J＝8.0,4.80Hz,1H),4.07-3.96(m,4H),3.54(d,J＝10.80Hz,2H),3.21(s,4H),2.94(d,J＝4.40Hz,3H),2.61(t,J＝Hz,2H),2.07-2.14(m,2H).；LCMS(ES+,m/z):564.2(M+1).0.12/0.52。
实施例编号25的合成
Figure BDA0003522759170001871
步骤1：N,N-二甲基-4-硝基吡啶-3-胺(25-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001872
将3-氟-4-硝基吡啶(1g,7.0mmol)的DMF溶液(1.0ml/mmol)、在THF中的2(M)二甲基胺(4.2ml,8.4mmol)和K2CO3(1.4g,10.5mmol)在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的N,N-二甲基-4-硝基吡啶-3-胺(1.05g，产率90％),LCMS(ES+,m/z):168.2(M+1)。
步骤2：N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(25-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001873
向N,N-二甲基-4-硝基吡啶-3-胺(1g,5.9mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.2g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(0.49g，产率60％),LCMS(ES+,m/z):138.2(M+1)。
步骤3：N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(25-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001881
在密闭试管中向N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(0.45g,3.27mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(0.896,3.93mmol)的二甲基甲酰胺(1.0ml/mmol)溶液中加入DIPEA(0.63g,4.92mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(0.75g，产率70％),LCMS(ES+,m/z):329.2(M+1)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(25-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001882
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(0.5ml,6.5mmol)和K2CO3(1.1g,8.1mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g，产率86％),LCMS(ES+,m/z):266.2(M+1)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(25-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001883
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.25g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释，并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.76g，产率72％),LCMS(ES+,m/z):236.2(M+1)。
步骤6：5-溴-N-(3-(二甲基胺)吡啶-4-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001891
在密闭试管中向N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-二甲基吡啶-3,4-二胺(0.1g,0.34mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.071g,0.34mmol)的叔丁醇溶液(2.0ml)中加入0.2ml TFA。将得到的反应混合物加热至80℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的5-溴-N-(3-(二甲基胺)吡啶-4-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.01g，产率7％),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.50(s,1H),8.42(s,1H),8.30-8.24(m,2H),8.06(d,J＝5.20Hz,1H),7.33(s,1H),6.76(s,1H),3.76(s,3H),2.91-2.89(m,4H),2.72(s,6H),2.55-2.49(m,4H),2.26(s,3H),2.18(s,3H).；LCMS(ES+,m/z):529.2(M+H)。
实施例编号26的合成
Figure BDA0003522759170001901
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(26-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001902
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向其中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g，产率57％),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(26-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001903
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g，产率78％),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(26-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001911
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g，产率82％),LCMS(ES+,m/z):324.1(M+1)。
步骤4：1-甲基-4-(8-硝基色满-5-基)哌嗪(26-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001912
在圆底烧瓶中向5-氟-8-硝基色满(5.0g,26.17mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-甲基哌嗪(3.14g,31.4mmol)和K2CO3(9g,65.2mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的1-甲基-4-(8-硝基色满-5-基)哌嗪(5.0g,71％收率),LCMS(ES+,m/z):278.2(M+1)。
步骤5：1-(6-氯-8-硝基色满-5-基)-4-甲基哌嗪(26-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001921
在0℃向1-甲基-4-(8-硝基色满-5-基)哌嗪(2.0g,7.4mmol)的DMF(20ml)溶液中加入NCS(1.07g,8.04mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层经硫酸钠干燥并在减压下蒸发。将得到的粗制化合物通过柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(6-氯-8-硝基色满-5-基)-4-甲基哌嗪(1.0g,45％收率),LCMS(ES+,m/z):312.2(M+1)。
步骤6：6-氯-5-(4-甲基哌嗪-1-基)色满-8-胺(26-11)的合成：
Figure BDA0003522759170001922
向1-(6-氯-8-硝基色满-5-基)-4-甲基哌嗪(1.0g,3.2mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(1.07g,19.2mmol)、NH4Cl(1.02,19.2mmol)和水(12.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的6-氯-5-(4-甲基哌嗪-1-基)色满-8-胺(0.75g,83％收率),LCMS(ES+,m/z):282.2(M+1)。
步骤7：1-(3-((5-氯-2-((6-氯-5-(4-甲基哌嗪-1-基)色满-8-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001931
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.3g,0.925mmol)和6-氯-5-(4-甲基哌嗪-1-基)色满-8-胺(0.286g,1.01mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREPHPLC纯化以得到作为淡棕色固体的1-(3-((5-氯-2-((3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)萘-1-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.08g,15％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):9.61(s,1H),8.96(s,1H),8.34(q,J＝1.60Hz,1H),8.23-8.26(m,2H),7.80(s,1H),7.73(s,1H),7.42(dd,J＝8.0,4.40Hz,1H),4.03(t,J＝5.20Hz,2H),3.62(t,J＝6.8Hz,2H),3.42(d,J＝10.80Hz,2H),3.15(d,J＝11.60Hz,2H),2.97(d,J＝13.20Hz,2H),2.91(d,J＝4.80Hz,2H),2.87(d,J＝4.00Hz,2H),2.79(t,J＝6.40Hz,1H),2.60(t,J＝8.00Hz,2H),2.50(s,3H),2.12(t,J＝7.60Hz,2H),1.90(t,J＝5.20Hz,2H).；LCMS(ES+,m/z):569.2(M+1)。
实施例编号27的合成
Figure BDA0003522759170001932
步骤1：N,N-双(甲基-d3)-3-硝基吡啶-2-胺(27-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001941
将2-氟-3-硝基吡啶(1g,7.0mmol)的DMF溶液(1.0ml/mmol)、在THF中的2(M)双(甲基-d3)胺(4.2ml,8.4mmol)和K2CO3(1.4g,10.5mmol)在室温搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色液体的N,N-双(甲基-d3)-3-硝基吡啶-2-胺(1.05g，产率87％),LCMS(ES+,m/z):174.1(M+1)。
步骤2：N,N-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(27-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001942
向N,N-双(甲基-d3)-3-硝基吡啶-2-胺(1g,5.9mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.2g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的N,N-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(0.7g，产率85％),LCMS(ES+,m/z):144.2(M+1)。
步骤3：N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(27-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001943
在密闭试管中向N,N-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(0.7g,5.1mmol)和5-溴-2,4-二氯嘧啶(0.8ml,6.1mmol)的二甲基甲酰胺(1.0ml/mmol)溶液中加入DIPEA(2.6ml,15.3mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的N3-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N2N2-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(1.3g，产率80％),LCMS(ES+,m/z):335.1(M+1)。
步骤4：1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(27-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001951
在圆底烧瓶中向1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯(1g,5.4mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-甲基哌嗪(0.5ml,6.5mmol)和K2CO3(1.1g,8.1mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的纯的1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g，产率86％),LCMS(ES+,m/z):266.2(M+1)。
步骤5：2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(27-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001952
向1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(1.2g,4.5mmol)的乙醇溶液(1.0ml/mmol)中加入干燥的Pd/C(0.25g,10mol％)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释，并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.76g，产率72％),LCMS(ES+,m/z):236.2(M+1)。
步骤6：N-(2-(双(甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-5-溴-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺：
Figure BDA0003522759170001961
在密闭试管中向N-(5-溴-2-氯嘧啶-4-基)-N,N-双(甲基-d3)吡啶-2,3-二胺(0.3g,0.896mmol)和2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(0.232g,0.985mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为棕色固体的N4-(2-(双(甲基-d3)氨基)吡啶-3-基)-5-溴-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(0.1g，产率21％),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):9.91(s,1H),9.04(s,1H),8.55(s,1H),8.30(s,1H),8.09(d,J＝3.60Hz,1H),7.91(d,J＝6.80Hz,1H),7.35(s,1H),6.93(q,J＝5.20Hz,1H),6.67(s,1H),3.79(s,3H),3.51(d,J＝10.80Hz,2H),3.18(d,J＝11.60Hz,4H),2.96(d,J＝12.00Hz,2H),2.90(s,3H),2.03(s,3H).；LCMS(ES+,m/z):534.1(M+1)。
实施例编号28的合成
Figure BDA0003522759170001971
1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(28-3)的合成:
Figure BDA0003522759170001972
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,57％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2:1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(28-4)的合成：
Figure BDA0003522759170001973
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,78％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(28-6)的合成：
Figure BDA0003522759170001981
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,82％收率),LCMS(ES+,m/z):324.2(M+1)。
步骤4：4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(28-9)的合成：
Figure BDA0003522759170001982
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(0.8g,3.89mmol)的二甲基甲酰胺溶液(50ml)中加入1-Boc哌嗪(0.467g,4.67mmol)和K2CO3(0.806g,5.83mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用水淬灭，用乙酸乙酯萃取，经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.7g,48％收率),LCMS(ES+,m/z):372.1.1(M+1)。
步骤5：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(28-10)的合成：
Figure BDA0003522759170001991
将4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.7g,1.88mmol)的DCM溶液(20ml)冷却至10℃。加入三氟乙酸(1.07g,9.41mmol)，并将得到的反应混合物温热至室温，且在室温搅拌16小时。反应的TLC指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用DCM稀释，用10％NaHCO3溶液洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(0.5g,98％收率),LCMS(ES+,m/z):272.2(M+1)。
步骤7：1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170001992
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.3g,0.925mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯胺(0.246g,1.01mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为淡黄色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.11g,22％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.87(s,1H),8.30(s,1H),8.24(d,J＝8.40Hz,1H),7.94(s,1H),7.79(s,1H),7.39(t,J＝7.60Hz,1H),6.76(s,1H),4.02(s,2H),3.84(s,3H),3.08-3.04(m,8H),2.59(d,J＝7.60Hz,2H),2.13(d,J＝7.60Hz,2H),1.91(s,1H).；LCMS(ES+,m/z):529.1(M+1)。
实施例编号29的合成
Figure BDA0003522759170002001
中间体29-10的合成
Figure BDA0003522759170002002
实施例编号29的合成
Figure BDA0003522759170002003
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(29-3)的合成:
Figure BDA0003522759170002004
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)和Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,57％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(29-4)的合成：
Figure BDA0003522759170002011
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,78％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(29-6)的合成：
Figure BDA0003522759170002012
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,82％收率),LCMS(ES+,m/z):324.2(M+1)。
步骤4：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(甲基-d3)哌嗪(29-9)的合成：
Figure BDA0003522759170002021
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1.0g,4.86mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-(甲基-d3)哌嗪(0.752g,7.3mmol)和K2CO3(1.0g,7.3mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭然后用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的纯的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(甲基-d3)哌嗪(1.1g,84％收率),LCMS(ES+,m/z):289.1(M+1)。
步骤5：5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基-d3)哌嗪-1-基)苯胺(29-10)的合成：
Figure BDA0003522759170002022
向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)-4-(甲基-d3)哌嗪(1.0g,3.5mmol)的乙醇溶液(20ml)中加入Fe粉末(1.17g,21mmol)、NH4Cl(1.15g,21mmol)和水(2.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基-d3)哌嗪-1-基)苯胺(0.750g,83％收率),LCMS(ES+,m/z):259.1(M+1)。
步骤6:1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基-d3)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170002031
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.2g,0.616mmol)和5-氯-2-甲氧基-4-(4-(甲基-d3)哌嗪-1-基)苯胺(0.175g,0.678mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.2ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为灰白色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(0.09g,18％收率),1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ9.73(s,1H),8.99(s,1H),8.32(q,J＝1.60Hz,1H),8.24(d,J＝1.20Hz,1H),8.22(t,J＝3.20Hz,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H),7.39(q,J＝4.80Hz,1H),6.80(s,1H),4.02(t,J＝7.20Hz,2H),3.85(s,3H),3.54(d,J＝12.00Hz,2H),3.41(d,J＝12.80Hz,2H),3.20(t,J＝12.00Hz,2H),3.17(s,1H),3.03(s,1H),2.98(d,J＝11.60Hz,1H),2.61(d,J＝8.00Hz,2H),2.12(t,J＝7.60Hz,2H).；LCMS(ES+,m/z):547.1(M+1)。
实施例编号30的合成中间体30-6的合成
Figure BDA0003522759170002032
中间体30-12的合成
Figure BDA0003522759170002041
实施例编号30的合成
Figure BDA0003522759170002042
步骤1：1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(30-3)的合成:
Figure BDA0003522759170002043
将2-氯-3-硝基吡啶(10.0g,63.1mmol)、吡咯烷-2-酮(6.4g,75.2mmol)、Cs2CO3(30.8g,94.5mmol)的二氧杂环己烷溶液(80ml)用氩气脱气15分钟。在氩气下向脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(0.715g,3.2mmol)和Xanthophos(3.6g,6.2mmol)，并在密闭试管中将得到的反应混合物加热至100℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为白色固体的1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.5g,57％收率),LCMS(ES+,m/z):208.1(M+1)。
步骤2：1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(30-4)的合成：
Figure BDA0003522759170002044
向1-(3-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,52.6mmol)的乙醇溶液(100ml)中加入干燥的Pd/C(1.1g)。将得到的反应混合物在室温在氢气氛下搅拌12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用乙醇稀释并穿过硅藻土床过滤。将过滤的反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黑色固体的1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,78％收率),LCMS(ES+,m/z):178.1(M+1)。
步骤3：1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(30-6)的合成：
Figure BDA0003522759170002051
在密闭试管中向1-(3-氨基吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(7.3g,41.2mmol)和2,4,5-三氯嘧啶(8.9g,48.5mmol)的二甲基甲酰胺(70ml)溶液中加入DIPEA(21.0ml,120.6mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持12小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，然后用乙酸乙酯(2X50ml)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为棕色固体的1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮(10.9g,82％收率),LCMS(ES+,m/z):324.0(M+1)。
步骤4：4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30-9)的合成：
Figure BDA0003522759170002052
在圆底烧瓶中向1-氯-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(0.8g,3.89mmol)的二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入1-Boc哌嗪(0.467g,4.67mmol)和K2CO3(0.806g,5.83mmol)。将得到的反应混合物加热至80℃保持16小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并将固体穿过布氏漏斗过滤以得到作为黄色固体的纯的4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.7g,48％收率),LCMS(ES+,m/z):372.1.1(M+1)。
步骤5：1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(30-10)的合成：
Figure BDA0003522759170002061
将4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.7g,1.88mmol)的DCM溶液(20ml)冷却至10℃。加入三氟乙酸(1.07g,9.41mmol)，并将得到的反应混合物温热至室温，并在室温搅拌16小时。反应物的TLC指示起始原料的完全消耗。将反应混合物用DCM稀释，并用10％NaHCO3溶液洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，并蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为黄色固体的1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(0.5g,98％收率),LCMS(ES+,m/z):272.2(M+1)。
步骤6：2-(4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(30-11)的合成：
Figure BDA0003522759170002062
在室温向1-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪(0.5g,1.84mmol)的DMF溶液(5.0ml)中加入K2CO3(0.38g,2.76mmol)和2-溴乙醇(0.274g,2.2mmol)。将得到的反应混合物在室温搅拌6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。向反应混合物中加入水，并将反应混合物用乙酸乙酯萃取。分离各层，并将有机层经Na2SO4干燥。将干燥的有机层蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为淡黄色胶状固体的2-(4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(0.4g,69％收率),LCMS(ES+,m/z):316.1(M+1)。
步骤7：2-(4-(4-氨基-2-氯-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(30-12)的合成：
Figure BDA0003522759170002071
向2-(4-(2-氯-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(0.4g,1.27mmol)的乙醇溶液(10ml)中加入Fe粉末(0.424g,7.62mmol)、NH4Cl(0.42g,7.62mmol)和水(2.0ml)。将得到的反应混合物加热至80℃保持6小时。反应的TLC和LCMS指示起始原料的完全消耗。将反应混合物蒸发以得到粗制物质，将其通过isolera柱色谱法纯化以得到作为淡棕色固体的2-(4-(4-氨基-2-氯-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(0.25g,69％收率),LCMS(ES+,m/z):286.2(M+1)。
步骤8：1-(3-((5-氯-2-((5-氯-4-(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)吡咯烷-2-酮：
Figure BDA0003522759170002072
在密闭试管中向1-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(0.3g,0.925mmol)和2-(4-(4-氨基-2-氯-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-醇(0.29g,1.01mmol)的叔丁醇溶液(3.0ml)中加入0.3ml TFA。将得到的反应混合物加热至90℃保持14小时。通过TLC和LCMS证实反应结束以后，将反应混合物蒸发以得到粗制物质。然后，将粗产物通过PREP HPLC纯化以得到作为淡棕色固体的1-(3-((5-氯-2-((5-氯-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡啶-2-基)咪唑烷-2-酮(0.12g,23％收率)。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):9.67(s,1H),9.00(s,1H),8.31(q,J＝1.48Hz,1H),8.23(s,1H),8.21(s,1H),8.15(s,1H),7.79(s,1H),7.39(q,J＝4.68Hz,1H),6.78(s,1H),4.02(t,J＝6.92Hz,2H),3.88(s,3H),3.79(t,J＝5.16Hz,2H),3.60(d,J＝11.04Hz,2H),3.40(d,J＝12.08Hz,2H),3.30-3.25(m,2H),3.10(t,J＝10.92Hz,2H),2.61-2.59(m,4H),2.09(d,J＝8.16Hz,2H).；LCMS(ES+,m/z):572.1(M-1)。
药理学和实用性
TNK1是一种非受体酪氨酸激酶，且是激酶的ACK蛋白家族的成员。TNK1活性的正常调节主要发生在转录水平，且经常是对细胞应激的应答。实际上，TNK1已被鉴定为抗病毒应答的介质，经由STAT调节来介导IFN信号传递。在某些实施方案中，本文所述的方法(使用本文所述的化合物)介导抗病毒应答，例如介导IFN信号传递，例如，经由STAT调节。
尽管早期研究表明TNK1在胚胎干细胞中具有肿瘤抑制功能，但随后的研究已经证实，TNK1可以驱动致癌潜力，包括霍奇金淋巴瘤的生长和增殖，尤其是在发生突变时。一项这样的研究描述了L540霍奇金淋巴瘤系中的C-端TNK1截短突变，其驱动STAT5介导的细胞生长和存活。参见Gu,T.-L.,等人,Leukemia(2010),24,861-865。在Gu等人公开的TNK1变体中，TNK1的5'部分(包括激酶结构域)与由17号染色体开放可读框61(C17ORF61)基因的5'非翻译区的31个碱基对、完整的外显子2和外显子3的前52个碱基对组成的序列融合，其由臂内倒位(17)(p13.1)产生。具体地，参见，Gu等人的图1(c)。因而，Gu等人公开的TNK1变体缺乏全长TNK1的C-端抑制序列。Gu等人也公开了STAT5的磷酸化是酪氨酸激酶活性的可靠替代标志物。在某些实施方案中，本文所述的方法(使用本文所述的化合物)可以用于抑制缺乏全长TNK1的C-端抑制序列的TNK1的活性。
虽然TNK1的截短突变的频率尚不完全清楚，但TNK1中的C-端点突变存在于多种癌症中，其中许多会增加TNK1活性并可能导致肿瘤生长的TNK1依赖性。TNK1依赖性癌症的例子包括、但不限于霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、B-细胞急性淋巴母细胞白血病、多发性骨髓瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肺癌、骨癌、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌和星形细胞瘤。
随后的研究还将TNK1鉴定为胰腺癌细胞存活的关键。例如，TNK1的siRNA沉默已被证明会抑制胰腺癌细胞的生长并诱导细胞凋亡。Henderson,M.C.,等人,Mol.CancerRes.2011；9:724-732。在某些实施方案中，本文所述的方法(使用本文所述的化合物)用于治疗患有胰腺癌的受试者。
RNAi筛选将TNK1鉴定为骨髓瘤中蛋白酶体抑制剂敏感性的潜在调节剂。Zhu等人，Blood(2011)117(14):3847-3857。在某些实施方案中，将本文所述的化合物与蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米)联合施用，例如，以治疗骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)。
还已经报道，与乱序siRNA(scrambled siRNA)相比，基于siRNA的TNK1、TNK2和ALK激酶各自从前列腺癌干细胞中消除与CD44+细胞的数目的减少有关。Mahajan,N.P.,等人,Scientific Reports(2018)8:1954。已经发现TNK1、TNK2和ALK激酶是本文所述化合物的靶标。在某些实施方案中，本文所述的方法(使用本文所述的化合物)用于治疗患有前列腺癌的受试者。
TNK1对肠道完整性的影响及其在MODS中的作用也一直是研究的主题。例如，已经发现，TNK1表达诱导隐窝特异性细胞凋亡，从而导致细菌易位、随后的脓毒性休克和过早死亡。从机制上讲，体内TNK1表达导致STAT3磷酸化、p65的核易位以及IL-6和TNF-a的释放。TNK1的肠道特异性缺失会保护肠粘膜免于实验性结肠炎，并阻止肠道中的细胞因子释放。最后，在鼠和猪创伤模型和人炎性肠病的肠道中发现TNK1失调。Armacki,M.,等人,J ClinInvest.2018；128(11):5056-5072。改善肠屏障功能和/或降低肠渗透性和/或调节肠稳态是癌症、胃肠道障碍、SIRS、MODS、脓毒症、自身免疫障碍、微生物组健康和对免疫肿瘤药剂的敏感性中的挑战，其中肠屏障可以显示出被损坏或失调的征象。参见Armacki,M.,等人,JClin Invest.2018；128(11):5056-5072。在某些实施方案中，本文所述的方法(使用本文所述的化合物)用于改善或促进肠屏障功能。
因此，TNK1代表了开发新疗法(例如，用于治疗癌症)的有吸引力的靶标。具体地，需要调节(例如，抑制)TNK1活性的小分子。
RBC HotSpot激酶测定方案
RBC HotSpot激酶测定(Reaction Biology Corp.,Malvern,Pennsylvania)用于评价试验化合物在以下反应中调节(例如，抑制)人TNK1(UniProt登记号Q13470)的酶活性的能力：
Figure BDA0003522759170002101
试剂：基本反应缓冲液；20mM Hepes(pH 7.5),10mM MgCl2,1mM EGTA,0.02％Brij35,0.02mg/ml BSA,0.1mM Na3VO4,2mM DTT,1％DMSO。将所需的辅因子单独添加到每个激酶反应中。
化合物处理:将试验化合物溶解在100％DMSO中至特定浓度。由Integra ViafloAssist在DMSO中进行系列稀释。
反应程序：
1.在新鲜制备的反应缓冲液中制备底物(肽底物,聚[Glu:Tyr](4:1),0.2mg/ml；ATP 10μM)；
2.向底物溶液递送任何所需的辅因子；
3.将激酶(TNK1)递送到底物溶液中并轻轻混合；
4.通过声学技术(Echo550；纳升范围)将在100％DMSO中的化合物递送到激酶反应混合物中，在室温温育20分钟；
5.将33P-ATP(比活性为10μCi/μl)递送到反应混合物中以引发反应；
6.在室温温育2小时；
7.通过过滤器结合方法检测放射性；
8.将激酶活性数据表示为与媒介物(二甲亚砜)反应相比，试验样品中剩余激酶活性的百分比。使用Prism(GraphPad Software)得到IC50值和曲线拟合。
结果：RBC HotSpot激酶测定的结果报告在表2中。“A”化合物在RBC HotSpot激酶测定中具有<5nM的IC50；“B”化合物在RBC HotSpot激酶测定中具有5nM至15nM的IC50；且“C”化合物在RBC HotSpot激酶测定中具有>15nM且<50nM的IC50。
TNK1 NanoBRET靶标衔接测定方案
NanoBRET靶标衔接(TE)测定(Promega,Madison,WI)能够通过细胞内环境中的试验化合物研究重组激酶的活性位点中的示踪化合物的置换。该测定能够同时测试渗透性、溶解性和激酶抑制，并测试试验试剂与感兴趣的激酶(此处为TNK1)的特异性相互作用。该测定是基于生物发光共振能量转移(BRET)的原理。在该测定中，将质粒编码的萤光素酶标记形式的TNK1转染到细胞中。将示踪化合物用荧光团标记，所述荧光团当与TNK1蛋白结合时发出荧光。读出是发光和荧光。试验化合物通过置换示踪剂从而破坏BRET而显示活性。
方法：根据生产商的方案进行TNK1 NanoBRET TE测定。简而言之，将Nanoluc-TNK1融合载体(Promega,Madison,WI,目录号NV2181)批量转染进HEK293细胞(在T175烧瓶中的8x106个细胞)。直到转染后30小时，将细胞通过胰蛋白酶消化进行收获，以2x105个细胞/mL的浓度重新悬浮，并以85μL/孔接种在96-孔平板中。将试验化合物和K5示踪剂加入每个孔，并将细胞温育2小时。测量发光(460nM)和荧光(647nM)以确定BRET比率。使用GraphpadPrism软件(GraphPad Software,圣迭戈,CA)从BRET比率确定IC50值。
结果：NanoBRET测定的结果报告在表2中。“A”化合物在NanoBRET测定中具有<150nM的IC50；“B”化合物在NanoBRET测定中具有150nM至1μM的IC50；且“C”化合物在NanoBRET测定中具有>1μM的IC50。
体外pSTAT5测定方案
L540细胞系在蛋白的C-端调节区中含有截短突变。因此，L540细胞中的TNK1在磷酸化关键蛋白(包括STAT5)方面具有组成型活性(constitutively active)。在TNK1野生型条件下(例如，K562 CML细胞)，STAT5磷酸化以与TNK1无关的方式实现。因此，对L540细胞特异性的磷酸-STAT5信号的减少是TNK1抑制剂功能的良好读出。
方法：根据生产商的方案使用STAT5 A/B(pY964/699)SimpleStep ELISA试剂盒(Abcam No.ab176656)进行体外pSTAT5测定。简而言之，使L540细胞在标准培养条件(含有青霉素/链霉素的10％FBS)下在RPMI1640培养基中生长。为了评估试验化合物的作用，将细胞铺板在96孔板(250,000个细胞/mL)中并使其生长过夜。随后用不同浓度的试验化合物处理细胞24小时，然后收获并根据生产商的方案使用STAT5 A/B(pY964/699)SimpleStepELISA试剂盒进行检测。如通过在处理的细胞上的CellTiter-Glo测定(Promega,目录号G7570)所评估的，将磷酸-STAT5信号标准化至细胞生存力。使用Graphpad Prism软件在标准化的磷酸-STAT5测量值上确定TNK1抑制剂IC50。
结果：pSTAT5测定的结果报告在表2中。“A”化合物在P-STAT5L540测定中具有<5nM的IC50；“B”化合物在P-STAT5 L540测定中具有5nM至50nM的IC50；“C”化合物在P-STAT5L540测定中具有>50nM的IC50；且“D”化合物未测定。
总体而言，对于10mg/kg和25mg/kg治疗组，我们看到通过在450nm处的吸光度测量的p-STAT5水平的剂量依赖性下降。化合物诸如实施例编号9、10或13实现了大于50％的p-STAT5抑制。虽然实施例编号9和10显示出一些剂量依赖性，但这种剂量依赖性趋势在实施例编号13中并没有类似地观察到。
表2.
Figure BDA0003522759170002131
Figure BDA0003522759170002141
体外K562和L540细胞生存力测定方案
已知Tnk1驱动霍奇金淋巴瘤(HL)细胞(诸如K652和L540细胞系)的增殖和存活(Gu等人,Identification of activated Tnk1 kinase in Hodgkin’s lymphoma,Leukemia24:861-65((2010))。Tnk1的下调抑制细胞生长和增殖，并增加细胞凋亡。为了在HL细胞的背景下研究单个试验化合物，根据生产商的说明书进行了
Figure BDA0003522759170002142
测定(Promega,Madison,WI)。
Figure BDA0003522759170002143
测定系统使用热稳定的萤光素酶产生稳定的“发光型”发光信号，同时抑制在细胞裂解过程中释放的内源性酶(例如，ATP酶)。因此，该测定提供灵敏且稳定的发光输出。
方法：
试剂制备
1.将
Figure BDA0003522759170002144
缓冲液在使用前解冻并平衡至室温。
2.将低压冻干的
Figure BDA0003522759170002145
底物在使用前平衡至室温。
3.根据生产商的建议，将适当体积的
Figure BDA0003522759170002146
缓冲液转移到装有
Figure BDA0003522759170002147
底物的琥珀色瓶中。重构的低压冻干的酶/底物混合物形成
Figure BDA0003522759170002148
试剂。
4.将
Figure BDA0003522759170002149
试剂通过轻轻涡旋、旋转或倒转内容物进行混合，以获得均匀的溶液。
细胞生存力测定方案
1.进行K652或L540细胞的滴定以确定最佳数量并确保
Figure BDA00035227591700021410
测定在线性范围内进行。
2.用在培养基中的K652或L540细胞制备不透明壁多孔板(与光度计兼容)，对于96-孔平板为100μl/孔，或对于384-孔平板为25μl/孔。
3.制备含有无细胞培养基的对照孔以获得背景发光值。
4.将试验化合物加入实验孔，并根据培养方案进行温育。
5.将平板及其内容物在室温下平衡大约30分钟。
生成ATP标准曲线的方案
1.在培养基中制备1μM ATP(100μl的1μM ATP溶液含有10-10摩尔ATP)。
2.进行在培养基中连续十倍稀释ATP(1μM至10nM；100μl含有10-10至10-12摩尔的ATP)。
3.制备在100μl培养基(对于384-孔板为25μl)中具有不同浓度ATP标准品的多孔板。
4.加入与每个孔中存在的ATP标准品的体积相等的体积的
Figure BDA0003522759170002152
试剂。
5.将内容物在定轨摇床上混合2分钟。
6.使平板在室温下温育10分钟以稳定发光信号。
7.记录发光。
结果：体外细胞生存力测定的结果报告在表3中。“A”化合物在体外细胞生存力测定中具有<500nM的IC50；“B”化合物在体外细胞生存力测定中具有500nM至<1.5μM的IC50；“C”化合物在体外细胞生存力测定中具有1.5μM至>6μM的IC50；“D”化合物在体外细胞生存力测定中具有6μM或更大的IC50；且“E”化合物未测定。
表3.
Figure BDA0003522759170002151
Figure BDA0003522759170002161
在皮下L540霍奇金淋巴瘤CDX模型中的体内效力研究
使用实施例编号13在L540 CDX小鼠模型中进行效力研究。动物是来自CharlesRiver Laboratories(CRL)的6-8周龄NOD-SCID(#394)雌性小鼠。使用吐温80:乙醇:PEG400:水(2:10:30:58v/v)作为媒介物每周配制实施例编号13。有四个治疗组(n＝10，总共40只动物)：媒介物/对照组，用10mg/kg实施例编号13治疗的组，用25mg/kg实施例编号13治疗的组，和用50mg/kg实施例编号13治疗的组。当平均肿瘤体积达到80-120mm3时，将动物随机化并经由经口管饲法，10ml/kg剂量体积每天给药持续21天。对未达到肿瘤负荷的动物进行监测，直到研究第66天。没有收集组织。在细胞培养前进行IDEXX病原体试验；测试了牛棒杆菌(Corynebacterium bovis)、棒杆菌属物种(Corynebacterium sp.)(HAC2)、EBV、HCMV、乙型肝炎、丙型肝炎、HIV1、HIV2、HPV16、HPV18、HTLV1、HTLV2、LDEV和支原体属物种(Mycoplasma sp.)，且所有结果为阴性。将肿瘤体积测量提供为平均绝对肿瘤体积+/-SEM。
50mg/kg的实施例编号13在整个研究中显示出最好的肿瘤生长抑制：第31天的86.5％为最高，但是25和10mg/kg也显示出显著的肿瘤生长抑制；在第31天和第21天分别为74.20％和35.17％。在第21天停止给药，直到给药后10天，对于25和50mg/kg平均注意到持续的肿瘤生长抑制。此外，在研究结束时，四只动物(用25mg/kg的实施例编号13治疗的组中的两只)和用50mg/kg的实施例编号13治疗的组中的两只存活。用50mg/kg的实施例编号13治疗的组有中等体重减轻，但体重减轻不严重。发现用50mg/kg的实施例编号13治疗的组中的两只动物在第7天死亡，可能是由于药物毒性。
图1是平均肿瘤体积(mm3)相对于研究天数的图，并且显示了在用指定量的实施例编号13治疗后对L540异种移植物的肿瘤生长抑制。
在雌性NOD SCID小鼠中在皮下L540霍奇金淋巴瘤异种移植物癌症模型中的体内单剂量药效动力学(PD)研究
本研究的目的是在6-8周龄的雌性NOD SCID小鼠的霍奇金淋巴瘤皮下异种移植物模型中评估实施例编号13的体内药效动力学活性。有4个组(且共84只小鼠)：50mg/kg、25mg/kg或10mg/kg的实施例编号13(每个剂量n＝27只小鼠)和媒介物(n＝3只小鼠)。当平均肿瘤体积达到300mm3时，将动物随机化并口服给药10mL/kg剂量体积一次。在九个不同的时间点收集血液和肿瘤。
使用K562多发性骨髓瘤人异种移植物模型将针对L540报告的实施例编号13的作用与具有不表达TNK1的截短形式的癌细胞系的异种移植物小鼠模型进行对比。在研究起始将1x107 K562细胞注射进9-11周龄的NOD/SCID雌性小鼠。当肿瘤达到大约328.36mm3的平均体积时开始治疗。将动物随机化并给药一次50mg/kg实施例编号13或媒介物，以10mL/kg剂量体积口服施用。将27只小鼠随机分配到对应于九个不同的时间点的9个不同的研究组，每组3只动物。在九个不同的时间点收集血液和肿瘤。
在吐温80(0.2mL)、乙醇(1mL)、PEG400(3mL)和水(5.8mL)中配制实施例编号13。
在该研究中，通过蛋白质印迹法分析蛋白表达。组织样品作为单剂量PK/PD研究的一部分而获得。将等量的肿瘤放入珠子试管中，加入裂解缓冲液(RIPA缓冲液(SigmaNo.0278)、Halt CocktaiL(ThermoFisher No.78440)、EDTA(ThermoFisher No.1861274)、PhosSTOP(Sigma No.04906845001)、cOmplete(Sigma No.11697498001)和抑制剂Cocktail3(Sigma No.P0044-1ML))，并将样品使用珠子匀浆器(2x 20s在4.5m/s(Fisherbrand BeadMill 24Homogenizer,Fisher Scientific))匀浆化。通过在4℃以5,000rpm离心5分钟，将裂解物澄清。
使用BCA试剂盒(Invitrogen No.23225)测定蛋白浓度。从每个治疗组汇集等量的蛋白，并在汇集的样品中再次测量浓度。将来自每个汇集的治疗组的等量蛋白在900℃煮沸5分钟，加载到4-12％Tris-Bis NUPAGE凝胶上，并在冰上在30V低安培运行1小时，并在50-75V运行大约4小时。然后将蛋白转移到PVDF膜。
本研究中使用以下抗体：磷酸-STAT5(CST No.9359,1:1,000/BSA),STAT5(CSTNo.9363S,1:1,000/BSA),TNK1(CST No.4570,1:1,000/BSA),磷酸-TNK1(CST No.5638,1:1,000/BSA),肌动蛋白-HRP抗体(ProteinTech No.HRP-60008,1:10,000/Milk),过氧化物酶AffiniPure驴抗-兔IgG(H+L)(JIR No.711-035-152,1:5,000/Milk)。
实施例编号13治疗抑制了来自L540霍奇金淋巴瘤异种移植物模型的肿瘤组织中的TNK1和STAT5磷酸化(图2A)。这种磷酸化抑制是剂量依赖性的，并且与TNK1中的磷酸化水平相比，在STAT5磷酸化水平的应答是更显著的(图2A)。
在50mg/kg治疗组中给药后早在15-30分钟收集的L540肿瘤样品中观察到STAT5磷酸化的抑制(图2A)。抑制应答稍有延迟，但在较低剂量水平仍具有渗透性(图2A)。在实施例编号13给药后24小时时间点收集的肿瘤样品在用针对磷酸化的TNK1和磷酸化的STAT5的抗体探测时表现出适当大小的条带。这表明，实施例编号13对TNK1和STAT5磷酸化的抑制作用在给药后24小时未持续。TNK1和STAT5的磷酸化在给药后24小时恢复。
接下来，对比了L540和K562模型之间TNK1和STAT5表达和磷酸化水平的变化。使用针对总TNK1的抗体，来自L540和K562模型的样品显示出条带(图2B)。当用针对总TNK1的抗体探测时，K562样品显示出略高于70kDa标记的浅色但良好饱和且一致的条带，这与L540肿瘤样品相反，L540肿瘤样品显示出在60kDa附近更低且更突出的条带(图2B)。来自人异种移植物模型的K562多发性骨髓瘤肿瘤样品不表达截短的或磷酸化的TNK1蛋白(图2B)，且因此，实施例编号13未显示在K562肿瘤样品中的TNK1或STAT5磷酸化的抑制(分别图2B和2C)。实施例编号13抑制L540异种移植物模型中的TNK1磷酸化(图2B)和L540异种移植物模型中的STAT5磷酸化(图2C)。
选择来自代表TNK1磷酸化的最显著变化的时间点(4小时和24小时)的样品用于在同一膜上进行对比(图2D)。通过蛋白质印迹法在K562样品中未检测到磷酸化的TNK1。
与硼替佐米组合的实施例编号13的研究
将A549细胞在对数期(例如，40-60％汇合)接种在孔板中。药物治疗是：无药物治疗，DMSO，50nM、10nM、5nM、2nM或1nM的硼替佐米，10nM的实施例编号13，和与10nM的实施例编号13组合的50nM、10nM、5nM、2nM或1nM的硼替佐米。DMSO浓度保持恒定(包括DMSO对照)以控制任何混杂的DMSO毒性。
药物添加方案：在第1天，以60,000个细胞/孔接种细胞，并温育24小时以允许粘附。在第2天，在相关孔中抽吸培养基并将其替换为500μl下述的药物培养基制品。将平板置于Incucyte中7-14天，并每2小时测量细胞汇合。
Figure BDA0003522759170002201
药物培养基制品：
无药物:4ml DMEM
实施例编号13 10nM:4ml DMEM+8μl 10μM化合物13
DMSO 0.1％:4μl DMSO+2ml DMEM
DMSO 0.2％:8μl DMSO+2ml DMEM
实施例编号13 10nM+硼替佐米50nM:4μl硼替佐米50μM+4μl 10μM实施例编号13+2ml DMEM
实施例编号13 10nM+硼替佐米10nM:4μl硼替佐米10μM+4μl 10μM实施例编号13+2ml DMEM
实施例编号13 10nM+硼替佐米5nM:4μl硼替佐米5uM+4μl 10μM实施例编号13+2mlDMEM
实施例编号13 10nM+硼替佐米2nM:4μl硼替佐米2μM+4μl 10μM实施例编号13+2mlDMEM
实施例编号13 10nM+硼替佐米1nM:4ul硼替佐米1μM+4μl 10uM实施例编号13+2mlDMEM
硼替佐米50nM:4μl硼替佐米50μM+2ml DMEM
硼替佐米10nM:4μl硼替佐米10μM+2ml DMEM
硼替佐米5nM:4μl硼替佐米5μM+2ml DMEM
硼替佐米2nM:4μl硼替佐米2μM+2ml DMEM
硼替佐米1nM:4μl硼替佐米1μM+2ml DMEM
图3A和3B显示了与硼替佐米组合的实施例编号13在两个独立实验中的研究结果。
10nM的实施例编号13和1nM硼替佐米各自单独在两个独立实验中均未表现出细胞生长的抑制，但是相同浓度的两种药剂的组合在200小时的时间段内导致大约50％的细胞生长抑制。组合中的生长抑制水平与协同生长抑制特性一致。
pSTAT5测定方案
在L540异种移植物肿瘤中测定了试验化合物对信号转导及转录激活蛋白5(STAT5)的磷酸化的影响。
方法：每个治疗组包括10只NOD SCID小鼠。给每只小鼠注射1x107个L540细胞(注射时存活率为86％)，并在L540细胞注射后10天用单剂量的试验化合物(10mg/kg或25mg/kg)治疗。在治疗后24小时收集肿瘤，快速冷冻，并在收获后在-80℃保持24小时。使用STAT5A/B pY694/699ELISA试剂盒(Abcam,Cambridge,UK,ab176656)在裂解物中测量磷酸化的STAT5(pSTAT5)水平。除了使用比Abcam推荐量的多10倍的蛋白以外，遵循标准的AbcamELISA方案。
结果：pSTAT5测定的结果显示在图4中。对于10mg/kg和25mg/kg治疗组，观察到p-STAT5水平的剂量依赖性降低，如通过在450nm处的吸光度所测量的。
APC多发性肠瘤形成(MIN)模型
本研究的目的是使用雌性C57BL/6J-ApcMin杂合子(Stock No:002020,JacksonLaboratory)小鼠来确定实施例编号13在多发性肠瘤形成的APC MIN模型中的耐受性和效力。在研究的第1天，动物将在不同年龄(5-8周)到达设施，并将适应至少3-4天。在第5-6天左右，将启动耐受性和效力研究。对于耐受性研究，将用10或25mg/kg实施例编号13治疗动物(n＝3)5天，然后观察接下来的5天。对于效力研究，当动物(n＝20)达到10周龄时，以指定的剂量水平开始给药并持续8周，直到动物达到18周龄。在20只动物中，15只被用于效力，且将5只在治疗10周后处死用于PD分析。
当动物年龄为18周时，启动PD研究和生存研究。每组中的几只动物(n＝5)转换为PD研究。PD分析仅根据效力结果进行。监测来自每组的剩余动物(n＝15)的存活和临床征象。
制剂/媒介物:吐温80:乙醇:PEG400:水(2:10:30:58v/v)
给药:
组 n 治疗 剂量mg/kg 计划 途径
1 20 媒介物 0 每天1次x 10周 口服
2 20 实施例编号13 10 每天1次x 10周 口服
3 20 实施例编号13 25 每天1次x 10周 口服
4 20 塞来考昔 120 每天1次x 10周 口服
该研究持续10周(即70天)。如果动物在给药8周后似乎出现临床问题，则研究在给药8周时结束。进行研究以尽量减少动物应激。根据文献检索确定动物数量。
对来自研究动物的粪便样品进行微生物组分析，因此参与这方面研究的小鼠被隔离在最干净的架子上。在研究开始前、研究中间和研究结束时收集粪便样品。在DNA/RNAshield中收集汇集的样品。
在处死动物(包括所有PD动物)时进行息肉计数。
评价以下端点：
鼻子/爪子:颜色变化作为贫血的征象
粪便评分
正常：＝0
柔软，但仍成型：＝1
非常柔软：＝2
腹泻：＝4
运动(与对照/媒介物组相比进行评分)
体重/食物摄入
无＝0
1-5％＝1
>5-10％＝2
>10-20％＝3
>20％＝4
便血发生：
阴性潜血：＝0
阳性潜血-条带上有轻微颜色：＝1
阳性潜血-条带上颜色较深：＝2
可见血迹：＝3
严重直肠出血：＝4
疾病活动指数(DAI；DAI评分＝体重减轻评分+粪便稠度评分+便血评分)
其它临床征象
Figure BDA0003522759170002241
生物标志物
CD45
CD34:血管形成
凋亡细胞染色:cC3/胱天蛋白酶3
嗜中性粒细胞活化(例如，通过IHC的Ly6G)
细胞因子mRNA:IL-6,TNFα
E钙黏着蛋白、密封蛋白：探究紧密连接
BrdU/Ki67染色：在结肠隐窝和息肉表型中的增殖细胞
小肠中的TNK1表达
在本文中引用的所有专利、公开的申请和参考文献的教导通过引用整体并入。
尽管已经具体地示出和描述了实施例实施方案，但是本领域技术人员将理解，在不脱离所附权利要求所涵盖的实施方案的范围的情况下，可以在其中做出形式和细节的各种变化。

Claims (95)

1.由以下结构式表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003522759160000011
其中：
X1是-N-且X2是-C(R9)-，或X1是-C(R9)-且X2是-N-；
R9是-H、卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、-C(O)NR20R21或-NR20R21；
R20和R21各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R1是卤素、-CN、-C(O)NR10R11、-C(O)(C1-C6)烷基、-OR12或-NR10R11；
R10和R11各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R12是-H或(C1-C6)烷基；
R2是-NR13R14；
R13和R14各自独立地是-H或(C1-C6)烷基，或与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30取代的(C3-C7)杂环基；
R30在每次出现时任选地且独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R3是-H、卤素、氰基或(C1-C6)烷基；
R4是-H、(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基或-C(O)(C1-C6)烷基；
R5是-H；且
R6是-H、卤素、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基或(C3-C7)环烷氧基；或者
R5和R6与它们的插入原子一起形成任选地被一个或多个R40取代的(C6)芳基或(C5-C6)杂芳基，或任选地被一个或多个R50取代的(C5-C8)碳环基或(C5-C8)杂环基；
R40在每次出现时任选地且独立地是卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R50在每次出现时任选地且独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R7是卤素、羟基、氰基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基、-C(O)NR17R18或-NR17R18；
R17和R18各自独立地是-H或(C1-C6)烷基；
R8在每次出现时独立地是卤素、氧代、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
m是0或1，前提条件是，如果R9是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基，则m是0；且
n是0、1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X1是-N-且X2是-C(R9)-。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中X1是-C(R9)-且X2是-N-。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的化合物，其中R9是-H。
5.根据权利要求1-3中的任一项所述的化合物，其中R20和R21各自是-H。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物，其中R1是卤素或-CN。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R1是氯、溴或-CN。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R1是氯。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的化合物，其中R13和R14各自独立地选自(C1-C6)烷基。
10.根据权利要求1-8中的任一项所述的化合物，其中R13和R14与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30取代的(C3-C7)杂环基。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中R13和R14与它们所连接的N一起形成被一个氧代取代且任选地被一个或多个R30取代的(C3-C7)杂环基。
12.根据权利要求10或11所述的化合物，其中R13和R14与它们所连接的N一起形成任选地被一个或多个R30取代的哌啶酮、吡咯烷酮或咪唑啉酮。
13.根据权利要求1-12中的任一项所述的化合物，其中R30在每次出现时任选地且独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。
14.根据权利要求1-8中的任一项所述的化合物，其中R2是-N(CH3)2、1-哌啶基-2-酮、1-吡咯烷基-2-酮、1-咪唑烷基-2-酮、1-吡咯烷基或1-哌啶基。
15.根据权利要求1-14中的任一项所述的化合物，其中R3是卤素、氰基或(C1-C6)烷基。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中R3是氯或甲基。
17.根据权利要求1-14中的任一项所述的化合物，其中R3是-H、卤素或(C1-C6)烷基。
18.根据权利要求17所述的化合物，其中R3是-H、氯或甲基。
19.根据权利要求1-18中的任一项所述的化合物，其中R4是-H、-CH3、2-羟基乙基或-C(O)CH3。
20.根据权利要求19所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000041
或其药学上可接受的盐。
21.根据权利要求1-20中的任一项所述的化合物，其中R5是-H，且R6是卤素、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)卤代烷氧基或(C3-C7)环烷氧基。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中R6是(C1-C6)烷氧基或(C3-C7)环烷氧基。
23.根据权利要求22所述的化合物，其中R6是甲氧基、乙氧基或异丙氧基。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中R6是甲氧基。
25.根据权利要求1-20中的任一项所述的化合物，其中R5和R6与它们的插入原子一起形成任选地被一个或多个R40取代的(C6)芳基或(C5-C6)杂芳基，或任选地被一个或多个R50取代的(C5-C8)碳环基或(C5-C8)杂环基。
26.根据权利要求25所述的化合物，其中R5和R6与它们的插入原子一起形成(C6)芳基。
27.根据权利要求1-26中的任一项所述的化合物，其中R7是卤素、氰基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。
28.根据权利要求1-26中的任一项所述的化合物，其中R17和R18各自是-H。
29.根据权利要求1-28中的任一项所述的化合物，其中R9是-H，且m是1。
30.根据权利要求1-28中的任一项所述的化合物，其中m是0。
31.根据权利要求1-30中的任一项所述的化合物，其中R8在每次出现时独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基。
32.根据权利要求1-31中的任一项所述的化合物，其中n是0。
33.根据权利要求1-19、21-26和30-32中的任一项所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000061
或其药学上可接受的盐。
34.根据权利要求33所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000062
或其药学上可接受的盐。
35.根据权利要求1、6-19和21-32中的任一项所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000063
或其药学上可接受的盐。
36.根据权利要求35所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000064
或其药学上可接受的盐。
37.根据权利要求1、6-19和21-32中的任一项所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000071
或其药学上可接受的盐。
38.根据权利要求37所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000072
或其药学上可接受的盐。
39.根据权利要求1、3-8、15-19和21-32中的任一项所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000073
或其药学上可接受的盐，其中：
Z是-N(R60)-或-C(R60)2-；
R30在每次出现时独立地是卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；
R60在每次出现时独立地是氢、卤素、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)卤代烷基、(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)卤代烷氧基；且
p是0、1、2、3、4或5。
40.根据权利要求39所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000081
或其药学上可接受的盐。
41.根据权利要求33-40中的任一项所述的化合物，其中R4是-CH3。
42.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000082
或其药学上可接受的盐。
43.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000091
或其药学上可接受的盐。
44.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000092
或其药学上可接受的盐。
45.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000093
或其药学上可接受的盐。
46.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000101
或其药学上可接受的盐。
47.根据权利要求1所述的化合物，其由以下结构式表示：
Figure FDA0003522759160000102
或其药学上可接受的盐。
48.表1的任一种结构式的化合物或其药学上可接受的盐。
49.药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体。
50.药物组合，其包含治疗有效量的权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的一种或多种其它治疗剂。
51.根据权利要求50所述的药物组合，其中所述一种或多种其它治疗剂独立地选自抗癌剂、抗过敏剂、止吐剂、疼痛缓解剂、免疫调节剂或细胞保护剂。
52.根据权利要求50或51所述的药物组合，其中所述一种或多种其它治疗剂是蛋白酶体抑制剂。
53.根据权利要求52所述的药物组合，其中所述蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
54.在有此需要的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述TNK1介导的疾病、障碍或病症是癌症，胃肠道障碍，SIRS，MODS，脓毒症，自身免疫障碍，微生物组的疾病、障碍或病症，或由创伤或肠损伤引起的疾病、障碍或病症。
56.在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
57.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述癌症包含实体瘤。
58.根据权利要求55-57中的任一项所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
59.根据权利要求55-57中的任一项所述的方法，其中所述癌症是前列腺癌。
60.根据权利要求55或56所述的方法，其中所述癌症是非实体瘤。
61.根据权利要求55、56或60所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
62.根据权利要求55、56、60或61所述的方法，其中所述癌症是急性白血病。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述急性白血病是急性髓性白血病或急性淋巴细胞白血病。
64.根据权利要求55、56、60或61所述的方法，其中所述癌症是慢性白血病。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述慢性白血病是慢性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病。
66.根据权利要求55、56、60或61所述的方法，其中所述癌症包含淋巴瘤。
67.根据权利要求55、56、60、61或66所述的方法，其中所述癌症是霍奇金淋巴瘤。
68.根据权利要求55、56、60、61或66所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤。
69.根据权利要求55、56、60或61所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
70.根据权利要求55-69中的任一项所述的方法，其中所述癌症与TNK1突变相关。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述癌症是霍奇金淋巴瘤。
72.根据权利要求70所述的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。
73.根据权利要求70所述的方法，其中所述癌症是肺癌。
74.根据权利要求73所述的方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
75.在携带TNK1突变的受试者中治疗TNK1介导的疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括
确定所述受试者是否携带TNK1突变；和
如果确定所述受试者携带TNK1突变，则给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
76.根据权利要求70-75中的任一项所述的方法，其中所述TNK1突变是C-端截短突变。
77.根据权利要求75或76所述的方法，其中所述TNK1介导的疾病、障碍或病症是选自结肠直肠癌、霍奇金淋巴瘤或肺癌的癌症。
78.在有此需要的受试者中改善肠屏障功能的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
79.在将受益于改善的肠屏障功能的受试者中治疗疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述疾病、障碍或病症是癌症，胃肠道障碍，全身性炎症反应综合征(SIRS)，多器官功能障碍综合征(MODS)，脓毒症，自身免疫障碍，微生物组的疾病、障碍或病症，或由创伤或肠损伤引起的疾病、障碍或病症。
81.根据权利要求80所述的方法，其中所述胃肠道障碍是多发性肠瘤形成、缺血/再灌注性损伤、结肠炎、感染性腹泻、乳糜泻或炎性肠病(IBD)。
82.根据权利要求80所述的方法，其中所述自身免疫障碍是纤维化、类风湿性关节炎、多发性硬化、系统性红斑狼疮、I型糖尿病、吉兰-巴雷综合征、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、重症肌无力、IBD、多肌炎、皮肌炎、炎症性肌炎、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎、银屑病、血管炎、舍格伦病或移植排斥。
83.根据权利要求54-82中的任一项所述的方法，所述方法进一步包括给所述受试者施用一种或多种另外的治疗剂。
84.根据权利要求83所述的方法，所述方法包括给所述受试者施用一种或多种标准护理药剂。
85.根据权利要求83或84所述的方法，所述方法包括给所述受试者施用蛋白酶体抑制剂。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、N-5-苄氧基羰基-Ile-Glu(O-叔丁基)-Ala-亮氨醛、卡非佐米、伊沙佐米、马里佐米(NPI-0052)、德兰佐米(CEP-18770)或O-甲基-N-[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-L-丝氨酰基-O-甲基-N-[(1S)-2-[(2R)-2-甲基-2-氧杂环丙基]-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基]-L-丝氨酰胺(ONX-0912)。
87.根据权利要求86所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂是硼替佐米。
88.根据权利要求83-87中的任一项所述的方法，其中所述疾病、障碍或病症是多发性骨髓瘤。
89.根据权利要求83-88中的任一项所述的方法，所述方法包括给所述受试者施用免疫检查点抑制剂。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂选自PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂或CTLA-4抑制剂。
91.抑制细胞中的TNK1活性的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合接触。
92.根据权利要求91所述的方法，其中所述细胞是在人中。
93.在有此需要的受试者中抑制TNK1活性的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-48中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、根据权利要求49所述的药物组合物或根据权利要求50-53中的任一项所述的药物组合。
94.根据权利要求91-93中的任一项所述的方法，其中所述TNK1携带突变。
95.根据权利要求94所述的方法，其中所述突变是截短突变。
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