KR102213609B1 - 키랄 제어 - Google Patents

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KR102213609B1
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나오키 이와모토
미나
네너드 스브르지카파
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이반 즐라테프
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Abstract

본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물, 및 그의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명은 구체적으로 완전히 키랄 제어되는 조성물, 특히 여러 올리고뉴클레오티드 타입을 포함하는 조성물의 제조를 방해하는 문제를 포함한, 키랄 올리고뉴클레오티드의 제조를 위한 선행기술의 방법론과 연관된 특정 문제점들의 근원을 알아내는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 및 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물의 제조 방법을 제공한다.

Description

키랄 제어 {CHIRAL CONTROL}
관련 출원의 참조 인용
본 출원은 2012 년 7 월 13 일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 61/671,655, 2012 년 7 월 13 일에 출원된 61/671,656, 2012 년 7 월 14 일에 출원된 61/671,722, 및 2012 년 7 월 14 일에 출원된 61/671,724 (이들 각각은 그 전체가 본원에서 참조 인용됨) 에 대한 우선권을 주장한다.
올리고뉴클레오티드는 치료적, 진단적, 연구 및 나노물질 적용물에 있어서 유용하다. 치료를 위한 자연적으로 발생한 핵산 (예를 들어, 비개질된 DNA 또는 RNA) 의 사용은 예를 들어 세포외 및 세포내 뉴클레아제에 대한 이의 불안정성 및/또는 이의 불량한 세포 침투 및 분포로 인해 제한될 수 있다. 또한, 시험관내 연구는 안티센스 올리고뉴클레오티드 예컨대 결합 친화성, 상보적 RNA 에 대한 서열 특이적 결합 (Cosstick 및 Eckstein, 1985; LaPlanche et al., 1986; Latimer et al., 1989; Hacia et al., 1994; Mesmaeker et al., 1995) 및 뉴클레아제에 대한 안정성이 인 원자의 절대 입체화학 배열에 의해 영향을 받을 수 있다는 것을 나타냈다 (Cook, et al. US005599797A). 따라서, 신규 및 개선된 올리고뉴클레오티드 조성물에 대한 요구가 존재한다.
본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물 및 상기를 합성하는 신규 방법에 대한 수요가 존재한다는 인식을 포함한다. 본 발명은 구체적으로 완전히 키랄적으로 제어된 조성물, 특히 다수의 올리고뉴클레오티드 유형을 포함하는 조성물의 제조를 못하게 하는 문제를 포함하는, 키랄 올리고뉴클레오티드의 제조를 위한 선행 방법론에 의한 특정 문제의 근원의 인지를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄적으로 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄적으로 제어된 올리고뉴클레오티드 및 키랄적으로 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물의 제조 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄적으로 제어된 올리고뉴클레오티드 및 키랄적으로 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물의 사용 방법을 제공한다.
본 출원에서 언급된 모든 문헌 및 툭허 문헌은 그 전체가 본원에서 참조 인용된다.
정의
지방족: 본원에서 사용된 용어 "지방족" 또는 "지방족 기" 는 완전 포화되거나 하나 이상의 불포화된 단위를 함유하는 직쇄 (즉, 비분지형) 또는 분지형, 치환 또는 비치환 탄화수소 사슬, 또는 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하는 모노시클릭 탄화수소 또는 바이시클릭 또는 폴리시클릭 탄화수소를 의미하나, 이는 분자의 나머지에 대한 단일 부착 지점을 갖는 방향족 (또한 본원에서 "카르보사이클" "시클로지방족" 또는 "시클로알킬" 로 나타냄) 이 아니다. 일부 구현예에서, 지방족 기는 1-50 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 달리 나타내지 않는 한, 지방족 기는 1-10 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 지방족 기는 1-6 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, 지방족 기는 1-5 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 다른 구현예에서, 지방족 기는 1-4 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 보다 다른 구현예에서, 지방족 기는 1-3 개의 지방족 탄소 원자를 함유하고, 보다 다른 구현예에서, 지방족 기는 1-2 개의 지방족 탄소 원자를 함유한다. 일부 구현예에서, "시클로지방족" (또는 "카르보사이클" 또는 "시클로알킬") 은 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하는 모노시클릭 또는 바이시클릭 C3-C10 탄화수소를 나타내지만 이는 분자의 나머지에 대한 단일 부착 지점을 갖는 방향족이 아니다. 일부 구현예에서, "시클로지방족" (또는 "카르보사이클" 또는 "시클로알킬") 은 완전히 포화되거나 하나 이상의 불포화 단위를 함유하는 모노시클릭 C3-C6 탄화수소를 나타내지만, 이는 분자의 나머지에 대한 단일 부착 지점을 갖는 방향족이 아니다. 적합한 지방족 기는 제한 없이 선형 또는 분지형, 치환 또는 비치환 알킬, 알케닐, 알키닐 기 및 이의 혼성체 예컨대 (시클로알킬)알킬, (시클로알케닐)알킬 또는 (시클로알킬)알케닐을 포함한다.
알킬렌: 용어 "알킬렌" 은 2가 알킬 기를 나타낸다. "알킬렌 사슬" 은 폴리메틸렌 기, 즉 -(CH2)n- (식 중, n 은 양의 정수, 바람직하게는 1 내지 6, 1 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 2, 또는 2 내지 3 임) 이다. 치환 알킬렌 사슬은 하나 이상의 메틸렌 수소 원자가 치환기로 대체되는 폴리메틸렌 기이다. 적합한 치환기는 치환된 지방족 기에 관해 아래 기재된 것을 포함한다.
알케닐렌: 용어 "알케닐렌" 은 2가 알케닐 기를 나타낸다. 치환된 알케닐렌 사슬은 하나 이상의 수소 원자가 치환기로 대체되는 하나 이상의 이중 결합을 함유하는 폴리메틸렌 기이다. 적합한 치환기는 치환된 지방족 기에 관해 아래 기재된 것을 포함한다.
동물: 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "동물" 은 동물 왕국의 임의의 구성원을 나타낸다. 일부 구현예에서, "동물" 은 임의의 발현 단계에서의 인간을 나타낸다. 일부 구현예에서, "동물" 은 임의의 발현 단계에서의 비인간 동물을 나타낸다. 특정 구현예에서, 비인간 동물은 포유류 (예를 들어, 설치류, 마우스, 랫트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류 및/또는 돼지) 이다. 일부 구현예에서, 동물은 제한 없이, 포유류, 조류, 파충류, 양서류, 어류 및/또는 벌레를 포함한다. 일부 구현예에서, 동물은 형질전환 동물, 유전-공학 동물 및/또는 클론일 수 있다.
약: 본원에서 사용된 바와 같은, 숫자에 대한 인용에서 용어 "약" 또는 "대략" 은 일반적으로 달리 나타내거나 내용에서 달리 명백하지 않는 한, 수의 어느 방향으로든 (초과 또는 미만) 5%, 10%, 15% 또는 20% 범위 내에 있는 수를 포함하도록 취해진다 (상기 숫자가 가능한 값의 0% 미만 또는 100% 초과일 경우는 제외). 일부 구현예에서, 투약량에 대한 인용에서 용어 "약" 의 사용은 ±5 mg/kg/일 을 의미한다.
아릴: "아르알킬", "아르알콕시" 또는 "아릴옥시알킬" 에서 큰 잔기의 일부로서 또는 단독 사용된 용어 "아릴" 은 총 5 내지 14 개의 고리 구성원을 갖는 모노시클릭 및 바이시클릭 고리계를 나타내고, 여기서 계의 고리 하나 이상은 방향족이고 계의 고리 각각은 3 내지 7 개의 고리 구성원을 함유한다. 용어 "아릴" 은 용어 "아릴 고리" 와 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, "아릴" 은 제한 없이 페닐, 바이페닐, 나프틸, 안트라실 등을 포함하는 방향족 고리계를 나타내고, 이는 하나 이상의 치환기를 포함할 수 있다. 또한 본원에서 사용된 자체인 용어 "아릴" 의 범주 내에 또한 포함되는 것은 방향족 고리가 하나 이상의 비방향족 고리, 예컨대 인다닐, 프탈리미딜, 나프티미딜, 페난트리디닐 또는 테트라히드로나프틸 등에 융합되는 기이다.
특징적 부분: 본원에서 사용된 바와 같은, 문구 단백질 또는 폴리펩티드의 "특징적 부분" 은 아미노산의 연속 스트레치 (continuous stretch), 또는 아미노산의 연속 스트레치의 집합을 함유하는 것 (이는 함께 단백질 또는 폴리펩티드의 특징임) 이다. 각각 상기 연속 스트레치는 일반적으로 둘 이상의 아미노산을 함유할 것이다. 또한, 당업자는 전형적으로 5, 10, 15, 20 개 또는 그 이상의 아미노 산이 단백질의 특징에 요구된다는 것을 이해할 것이다. 일반적으로, 특징적 부분은 상기 명시된 서열 아이덴티티 이외에 관련 비손상 단백질과 하나 이상의 기능적 특징을 공유하는 것이다.
특징적 서열: "특징적 서열" 은 폴리펩티드 또는 핵산 부류의 모든 구성원에서 발견되고, 이에 따라 부류의 구성원을 정의하기 위해 당업자에 의해 사용될 수 있는 서열이다.
특징적 구조 구성 요소: 용어 "특징적 구조 구성 요소" 는 폴리펩티드, 소분자 또는 핵산의 부류의 모든 구성원에서 발견되고 이에 따라 부류의 구성원을 정의하기 위해 당업자에 의해 사용될 수 있는 독특한 구조 구성 요소 (예를 들어, 코어 구조, 펜던트 잔기의 수집, 서열 구성 요소 등) 를 나타낸다.
필적하는: 용어 "필적하는" 은 수득된 결과 또는 관찰된 형상의 비교를 허용하기 위해 서로 충분히 유사한 조건 또는 환경의 둘 (또는 그 이상) 의 세트를 기재하기 위해 본원에서 사용된다. 일부 구현예에서, 조건 또는 환경의 필적하는 세트는 하나 또는 소수의 변화된 특징 및 실질적으로 동일한 특징 다수에 의해 특징지어진다. 당업자는 상이한 일련의 조건 또는 환경 하에 관찰된 현상 또는 수득된 결과의 차이가 변화되는 특징의 변화를 가르키거나 이에 의해 야기되는 타당한 결론을 보증하는데 충분한 수 및 실질적으로 동일한 특징의 유형에 의해 특징지어질때, 일련의 조건이 서로 필적함을 이해할 것이다.
투여 양생법: 본원에 사용된 바와 같은, "투여 양생법" 또는 "치료적 양생법" 은 전형적으로 기간에 의해 분리되는 대상에 대해 개별적으로 투여되는 일련의 단위 투약량 (전형적으로 하나 초과) 을 나타낸다. 일부 구현예에서, 주어진 치료제는 하나 이상의 투약량을 포함할 수 있는 추천된 투여 양생법을 갖는다. 일부 구현예에서, 투여 양생법은 각각이 동일한 길이의 기간으로 서로 분리되는 다수의 투약량을 포함하고; 일부 구현예에서, 투여 양생법은 다수의 투약량 및 개별적 투약량을 분리하는 둘 이상의 상이한 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 양생법 내의 모든 투약량은 동일한 단위 투약량 양이다. 일부 구현예에서, 투여 양생법 내의 상이한 투약량은 상이한 양이다. 일부 구현예에서, 투여 양생법은 제 1 투약량 양의 제 1 투약량, 이후 제 1 투약량 양과 상이한 제 2 투약량 양의 하나 이상의 추가 투약량을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 양생법은 제 1 투약량 양의 제 1 투약량, 이후 제 1 투약량 양과 동일한 제 2 투약량 양의 하나 이상의 추가 투약량을 포함한다.
등가 작용제: 당업자는 본 개시물의 파악시에, 본 발명의 맥락에서 유용한 작용제의 범주가 본원에 구체적으로 언급 또는 예시된 것에 제한되지 않음을 이해할 것이다. 특히, 당업자는 활성제가 전형적으로 코어 및 부착된 펜던트 잔기로 이루어지는 구조를 갖는다는 것을 인식할 것이고, 또한 상기 코어 및/또는 펜던트 잔기의 단순한 변형이 작용제의 활성을 유의하게 바꾸지 않을 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 필적하는 3차원 구조의 기 및/또는 화학 반응성 특징을 갖는 하나 이상의 펜던트 잔기의 치환은 모 (parent) 참조 화합물 또는 부분과 등가인 치환된 화합물 또는 부분을 생성시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 펜던트 잔기의 추가 또는 제거는 모 참조 화합물과 등가인 치환 화합물을 생성할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 소수의 결합 (전형적으로 5 이하, 4, 3, 2 또는 1 개의 결합, 및 흔히 오로지 단독 결합) 의 추가 또는 제거에 의한 코어 구조의 변화는 모 참조 화합물과 등가인 치환 화합물을 생성할 수 있다. 많은 구현예에서, 등가 화합물은 예를 들어 아래 기재된 바와 같은 일반적 반응 도식에 설명된 방법에 의해 또는 이의 변형에 의해, 쉽게 이용가능한 물질, 작용제 및 통상적 또는 제공된 합성 과정을 사용하여 제조될 수 있다. 이러한 반응에서, 공지된 그 자체인 변형물의 사용이 또한 가능할 수 있으나, 여기에서 언급되지는 않는다.
등가 투여량: 용어 "등가 투여량" 은 동일한 생물학적 결과에 영향을 주는 상이한 약학적 활성제의 투여량을 비교하기 위해 본원에서 사용된다. 두 상이한 작용제의 투여량은 이들이 필적하는 수준 또는 정도의 생물학적 결과를 달성하는 경우에 본 발명에 따라 서로 "등가" 인 것으로 여겨진다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 상이한 약학적 작용제의 등가 투여량은 본원에 기재된 시험관내 및/또는 생체내 검정을 사용하여 측정된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 하나 이상의 라이소좀 활성화제는 참조 라이소좀 활성화제의 투약량에 대해 투약량 등가로 이용되고; 일부 상기 구현예에서, 상기 목적을 위한 참조 라이소좀 활성화제는 소분자 알로스테릭 활성화제 (예를 들어, 피라졸피리미딘), 이미노당 (예를 들어, 이소파고민), 항산화제 (예를 들어, n-아세틸-시스테인), 및 세포 트래피킹 (trafficking) 의 조절제 (예를 들어 Rab1a 폴리펩티드) 로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
헤테로지방족: 용어 "헤테로지방족" 은 C, CH, CH2 또는 CH3 로부터 선택되는 하나 이상의 단위가 독립적으로 헤테로원자로 대체되는 지방족 기를 나타낸다. 일부 구현예에서, 헤테로지방족 기는 헤테로알킬이다. 일부 구현예에서, 헤테로지방족 기는 헤테로알케닐이다.
헤테로아릴: 단독으로 또는 더 큰 잔기의 일부로서 사용된 용어 "헤테로아릴" 및 "헤테로아르-", 예를 들어 "헤테로아르알킬" 또는 "헤테로아르알콕시" 는 5 내지 10 개의 고리 원자, 바람직하게는 5, 6 또는 9 개의 고리 원자를 갖고; 시클릭 집합체에 공유된 6, 10, 또는 14 개의 π 전자를 갖고; 탄소 원자 이외에 1 내지 5 개의 헤테로원자를 갖는 기를 나타낸다. 용어 "헤테로원자" 는 질소, 산소, 또는 황을 나타내고, 질소 또는 황의 임의의 산화 형태 및 염기성 질소의 임의의 4차화 형태를 포함한다. 헤테로아릴 기는 제한 없이, 티에닐, 푸라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌리지닐, 푸리닐, 나프티리디닐, 및 프테리디닐을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "헤테로아릴" 및 "헤테로아르-" 는 또한 헤테로방향족 고리가 하나 이상의 아릴, 시클로지방족 또는 헤테로시클릴 고리에 융합되는 기를 포함하고, 여기서 라디칼 또는 부착 지점은 헤테로방향족 고리 상에 있다. 비제한적인 예는 인돌릴, 이소인돌릴, 벤조티에닐, 벤조푸라닐, 디벤조푸라닐, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤즈티아졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 신놀릴닐, 프탈라지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 4H-퀴놀리지닐, 카르바졸릴, 아크리디닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐 및 피리도[2,3-b]-1,4-옥사진-3(4H)-온을 포함한다. 헤테로아릴 기는 모노- 또는 바이시클릭일 수 있다. 용어 "헤테로아릴" 은 용어 "헤테로아릴 고리", "헤테로아릴 기" 또는 "헤테로방향족" 과 상호 교환적으로 사용될 수 있고, 이 용어 중 임의의 것은 임의 치환되는 고리를 포함한다. 용어 "헤테로아르알킬" 은 헤테로아릴에 의해 치환된 알킬기를 나타내고, 여기서 알킬 및 헤테로아릴 부분은 독립적으로는 임의 치환된다.
헤테로원자: 용어 "헤테로원자" 는 산소, 황, 질소, 인 또는 규소 (예컨대, 질소, 황, 인, 또는 규소의 임의의 산화 형태; 임의의 염기성 질소의 4차화 형태; 헤테로시클릭 고리의 치환성 질소, 예를 들어 N (3,4-디히드로-2H-피롤릴의 경우), NH (피롤리디닐의 경우) 또는 NR+ (N-치환 피롤리디닐의 경우) 중 임의의 것) 를 의미한다.
헤테로사이클: 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "헤테로사이클", "헤테로시클릴", "헤테로시클릭 라디칼" 및 "헤테로시클릭 고리" 는 상호 교환적으로 사용되고, 포화 또는 일부 불포화되고 탄소 원자 이외에 상기 정의된 바와 같은 헤테로원자 하나 이상, 바람직하게는 1 내지 4 개를 갖는 안정한 3- 내지 7-원 모노시클릭 또는 7-10-원 바이시클릭 헤테로시클릭 잔기를 나타낸다. 헤테로사이클의 고리 원자에 대한 인용에서 사용된 경우, 용어 "질소" 는 치환된 질소를 포함한다. 예로서, 산소, 황 또는 질소로부터 선택되는 0-3 개의 헤테로원자를 갖는 포화 또는 일부 불포화 고리는 N (3,4-디히드로-2H-피롤릴의 경우), NH (피롤리디닐의 경우), 또는 NR+ (N-치환 피롤리디닐의 경우) 일 수 있다.
헤테로시클릭 고리는 안정한 구조를 산출하는 임의의 헤테로원자 또는 탄소 원자에서의 이의 펜던트 기에 부착될 수 있고, 고리 원자 중 임의의 것은 임의 치환될 수 있다. 상기 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 라디칼의 예는 제한 없이, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐 피롤리디닐, 피페리디닐, 피롤리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 데카히드로퀴놀리닐, 옥사졸리디닐, 피페라지닐, 디옥사닐, 디옥솔라닐, 디아제피닐, 옥사제피닐, 티아제피닐, 모르폴리닐 및 퀴누클리디닐을 포함한다. 용어 "헤테로사이클", "헤테로시클릴", "헤테로시클릴 고리", "헤테로시클릭 기", "헤테로시클릭 잔기" 및 "헤테로시클릭 라디칼" 은 본원에서 상호 교환적으로 사용되고, 또한 헤테로시클릴 고리가 하나 이상의 아릴, 헤테로아릴 또는 시클로지방족 고리 예컨대 인돌리닐, 3H-인돌릴, 크로마닐, 페난트리디닐, 또는 테트라히드로퀴놀리닐에 융합되는 기를 포함하고, 여기서 라디칼 또는 부착 지점은 헤테로시클릴 고리 상에 있다. 헤테로시클릴 기는 모노- 또는 바이시클릭일 수 있다. 용어 "헤테로시클릴알킬" 은 헤테로시클릴에 의해 치환된 알킬 기를 나타내고, 여기서 알킬 및 헤테로시클리 부분은 독립적으로 임의 치환된다.
복강내: 본원에서 사용된 구절 "복강내 투여" 및 "복강내로 투여된" 은 대상체의 복막에 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 나타내는 이의 업계-이해되는 의미를 갖는다.
시험관내: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "시험관내" 는 유기체 (예를 들어, 동물, 식물 및/또는 미생물) 내에서가 아니라 인공적 환경, 예를 들어 시험 튜브 또는 반응 용기, 세포 배양 등에서 발생하는 사건을 나타낸다.
생체내: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "생체내" 는 유기체 (예를 들어, 동물, 식물 및/또는 미생물) 내에서 발생하는 사건을 나타낸다.
낮은 알킬: 용어 "저급 알킬" 은 C1-4 직선 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 예시적 저급 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸 및 tert-부틸이다.
저급 할로알킬: 용어 "저급 할로알킬" 은 하나 이상의 할로겐 원자에 의해 치환된 C1-4 직선 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다.
임의 치환: 본원에서 기재된 바와 같은, 본 발명의 화합물은 "임의 치환" 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로, 용어 "치환" 은 용어 "임의로" 가 선행하든 선행하지 않는, 지시된 잔기의 하나 이상의 수소가 적합한 치환기로 대체된다는 것을 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, "임의 치환" 기는 기의 치환가능 위치 각각에 적합한 치환기를 가질 수 있고, 임의의 주어진 구조에서 하나 초과의 위치가 명시된 기로부터 선택되는 하나 초과의 치환기로 치환될 수 있는 경우, 치환기는 모든 위치에서 동일 또는 상이할 수 있다. 본 발명에 의해 구성되는 치환기의 조합은 바람직하게는 안정하거나 화학적으로 실현가능한 화합물의 형성을 산출하는 것이다. 본원에서 사용된 용어 "안정한" 은 이의 제조, 검출 및 특정 구현예에서 이의 회수, 정제 및 본원에 개시된 목적 중 하나 이상을 위한 사용에 대해 허용하기 위한 조건에 적용될 때 실질적으로 바뀌지 않는 화합물을 나타낸다.
"임의 치환" 기의 치환성 탄소 원자 상의 적합한 1가 치환기는 독립적으로 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 또는 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2 이고, 여기서, 각각의 R°은 아래 정의된 바와 같이 치환될 수 있고 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, 상기 정의에도 불구하고 R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 이는 아래 정의된 바와 같이 치환될 수 있다.
R°상의 적합한 1가 치환기 (또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리) 는 독립적으로 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 이고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (독립적으로 질소, 산소 또는 황으로부터 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택된다. R˚의 포화 탄소 원자 상의 적합한 2가 치환기는 =O 및 =S 를 포함한다.
"임의 치환" 기의 포화 탄소 원자 상의 적합한 2가 치환기는 하기를 포함한다: =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S- (여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족 (이는 하기 정의된 바와 같이 치환될 수 있음), 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택된다. "임의 치환" 기의 인접 치환성 탄소에 결합되는 적합한 2가 치환기는 하기를 포함한다: -O(CR* 2)2-3O- (여기서, R* 의 각각의 독립적인 경우는 수소, C1-6　지방족 (이는 아래 정의된 바와 같이 치환될 수 있음), 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택됨).
R* 의 지방족 기 상의 적합한 치환기는 할로겐 -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2 을 포함하고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐에 의해 치환되고, 독립적으로 C1-4　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이다.
"임의 치환된" 기의 치환성 질소 상의 적합한 치환기는 -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 또는 -N(R†)S(O)2R† 을 포함하고, 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족 (이는 아래 정의된 바와 같이 치환될 수 있음), 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, 상기 정의에 얽매지이 않고 그 개입 원자(들) 과 함께 취해진 R† 의 2 개의 독립적인 존재는 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 또는 황으로부터 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성한다.
R† 의 지방족 기 상의 적합한 치환기는 독립적으로 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2 이고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (독립적으로 질소, 산소 또는 황으로부터 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이다.
경구: 본원에서 사용된 구절 "경구 투여" 및 "경구로 투여된" 은 화합물 또는 조성물의 입에 의한 투여를 나타내는 당업계에서 이해되는 의미를 갖는다.
비경구: 본원에서 사용된 구절 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된" 은 일반적으로 주사에 의해 장관 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 나타내는 이의 당업계에서 이해되는 의미를 갖고, 제한 없이 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추 강내, 관절내, 안와내, 심장내, 피부내, 복강내, 경기관 (transtracheal), 피하, 표피하, 관절 내 (intraarticulare), 피막하, 지주막하, 척수내, 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
일부 불포화: 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "일부 불포화" 는 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 포함하는 고리 잔기를 나타낸다. 용어 "일부 불포화" 는 불포화의 다중 부위를 갖는 고리를 포함하는 것으로 이해되지만, 본원에 정의된 바와 같은 아릴 또는 헤테로아릴 잔기를 포함하는 것으로 의도되지는 않는다.
약학 조성물: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "약학 조성물" 은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화된 활성제를 나타낸다. 일부 구현예에서, 활성제는 관련 개체군에 투여될 때 미리 결정된 치료 효과를 달성하는 통계적으로 유의한 개연성을 나타내는 치료 양생법에서 투여에 적절한 단위 투약량 양으로 존재한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 하기에 적합화된 것을 포함하여, 고체 또는 액체 형태로 투여하기 위해 특별히 제형화될 수 있다: 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협, 설하 및 전신 흡수에 관해 표적이 되는 것, 볼러스 (boluse), 분말, 과립, 혀에 대한 적용을 위한 페이스트; 예를 들어 살균 용액 또는 현탁액 또는 서방출 제형으로서 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의한 비경구 투여; 예를 들어 크림, 연고, 또는 피부, 폐 또는 구강에 적용되는 서방출 패치 또는 스프레이로서 국소 적용; 예를 들어 질 좌약, 크림 또는 발포체로서 질내 또는 직장내; 설하; 안구; 경피; 또는 비강, 폐 및 기타 점막 표면.
약학적으로 허용가능한: 본원에 사용된 바와 같은, 구절 "약학적으로 허용가능한" 은 의료적 판단의 범주 내에서, 과다한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없고, 합리적인 헤택/위험성 비율과 적합하게, 인간 및 동물의 조직과 접촉되어 사용하기에 적합한, 이러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 나타낸다.
약학적으로 허용가능한 담체: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "약학적으로 허용가능한 담체" 는 한 장기, 또는 신체 부분으로부터 또다른 장기 또는 신체 부분으로, 대상 화합물을 운반 또는 수송하는 것에 포함되는 약학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 물질을 캡슐화하는 액체 또는 고체 필러, 희석제, 부형제 또는 용매를 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 상용가능하고 환자에게 해를 주지 않는다는 의미에서 "허용가능" 해야 한다. 약학적으로 허용가능한 담체로서 역할할 수 있는 물질의 일부 예는 하기를 포함한다: 당, 예컨대 락토오스, 글루코오스 및 수크로오스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스, 및 이의 유도체, 예컨대 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말화 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 탈크; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌약 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 마그네슘 히드록시드 및 알루미늄 히드록시드; 알긴산; 무발열원 (pyrogen-free) 물; 등장성 염수; 링거 용액; 에틸 알코올; pH 완충 용액; 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 약학 제형에서 사용되는 기타 비독성 상용성 성분.
약학적으로 허용가능한 염: 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 염" 은 약학적 맥락에서 사용하기에 적절한 상기 화합물의 염, 즉 의료적 판단의 범주 내에서 지나친 독성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 그리고 합리적인 혜택/위험성 비율과 잘 맞는 인간 및 하등 동물의 조직과의 접촉에서 사용하기 적합한 염을 나타낸다. 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에 익히 공지되어 있다. 예를 들어, S. M. Berge 등은 [J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977)] 에서 상세하게 약학적으로 허용가능한 염을 기재하고 있다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 염은 제한 없이, 비독성 산 부가 염을 포함하고, 이는 무기 산 예컨대 염산, 브롬화 수소산, 인산, 황산 및 과염소산 또는 유기 산 예컨대 아세트산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산에 의해 또는 당업계에서 사용된 다른 방법 예컨대 이온 교환을 사용하여 형성된 아미노 기의 염이다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 염은 제한 없이, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 시트레이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 글루코네이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로요오다이드, 2-히드록시-에탄술포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 염은 적절한 경우에 비독성 암모늄 4차 암모늄, 및 상대 이온 예컨대 할라이드를 사용하여 형성된 아민 양이온, 히드록시드, 카르복실레이트, 술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 탄소수 1 내지 6 의 알킬, 술포네이트 및 아릴 술포네이트를 포함한다.
전구약물: 일반적으로, 본원에서 사용되고 당업계에서 이해되는 용어 그 자체인 "전구약물" 은 유기체에 투여될 때 신체에서 대사되어 관심 대상인 활성제 (예를 들어, 치료적 또는 진단적) 를 전달하는 실체이다. 전형적으로, 상기 대사는 활성제가 형성되는 하나 이상의 "전구약물 잔기" 의 제거를 포함한다. "전구약물" 의 다양한 형태는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 상기 전구약물의 예에 대해 하기를 참조한다:
a) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) 및 Methods in Enzymology, 42:309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);
b) Prodrugs and Targeted Delivery, edited by by J. Rautio (Wiley, 2011);
c) Prodrugs and Targeted Delivery, edited by by J. Rautio (Wiley, 2011);
d) A Textbook of Drug Design 및 Development, edited by Krogsgaard-Larsen;
e) Bundgaard, Chapter 5 "Design 및 Application of Prodrugs", by H. Bundgaard, p. 113-191 (1991);
f) Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8:1-38 (1992);
g) Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77:285 (1988); 및
h) Kakeya, et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984).
본원에서 기재된 기타 화합물에 있어서, 전구약물은 다양한 형태, 예를 들어 결정 형태, 염 형태 등 중 임의의 형태로 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 전구약물은 이의 약학적으로 허용가능한 염으로서 제공된다.
보호기: 본원에서 사용된 용어 "보호기" 는 당업계에 익히 공지되어 있고, 그 전체가 본원에서 참조 인용되는 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene 및 P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, 1999] 에 상세하게 기재된 것을 포함한다. 또한 포함되는 것은 챕터 2 전체가 본원에서 참조 인용되는 [Current Protocols in Hexane Chemistry, edited by Serge L. Beaucage et al. 06/201] 에 기재된 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 화학에 특히 적합화된 보호기이다. 적합한 아미노-보호기는 메틸 카르바메이트, 에틸 카르바메이트, 9-플루오레닐메틸 카르바메이트 (Fmoc), 9-(2-술포)플루오레닐메틸 카르바메이트, 9-(2,7-디브로모)플루오로에닐메틸 카르바메이트, 2,7-디-T-부틸-[9-(10,10-디옥소-10,10,10,10-테트라히드로티옥산틸)]메틸 카르바메이트 (DBD-Tmoc), 4-메톡시페나실 카르바메이트 (Phenoc), 2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (Troc), 2-트리메틸실릴에틸 카르바메이트 (Teoc), 2-페닐에틸 카르바메이트 (hZ), 1-(1-아다만틸)-1-메틸에틸 카르바메이트 (Adpoc), 1,1-디메틸-2-할로에틸 카르바메이트, 1,1-디메틸-2,2-디브로모에틸 카르바메이트 (DB-T-bOC), 1,1-디메틸-2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (TCBOC), 1-메틸-1-(4-바이페닐)에틸 카르바메이트 (Bpoc), 1-(3,5-디-t-부틸페닐)-1-메틸에틸 카르바메이트 (t-Bumeoc), 2-(2'- 및 4'-피리딜)에틸 카르바메이트 (Pyoc), 2-(N,N-디시클로헥실카르복사미도)에틸 카르바메이트, t-부틸 카르바메이트 (BOC), 1-아다만틸 카르바메이트 (Adoc), 비닐 카르바메이트 (Voc), 알릴 카르바메이트 (Alloc), 1-이소프로필알릴 카르바메이트 (Ipaoc), 신나밀 카르바메이트 (Coc), 4-니트로신나밀 카르바메이트 (Noc), 8-퀴놀릴 카르바메이트, N-히드록시피페리디닐 카르바메이트, 알킬디티오 카르바메이트, 벤질 카르바메이트 (Cbz), p-메톡시벤질 카르바메이트 (Moz), p-니트로벤질 카르바메이트, p-브로모벤질 카르바메이트, p-클로로벤질 카르바메이트, 2,4-디클로로벤질 카르바메이트, 4-메틸술피닐벤질 카르바메이트 (Msz), 9-안트릴메틸 카르바메이트, 디페닐메틸 카르바메이트, 2-메틸티오에틸 카르바메이트, 2-메틸술포닐에틸 카르바메이트, 2-(p-톨루엔술포닐)에틸 카르바메이트, [2-(1,3-디티아닐)]메틸 카르바메이트 (Dmoc), 4-메틸티오페닐 카르바메이트 (Mtpc), 2,4-디메틸티오페닐 카르바메이트 (Bmpc), 2-포스포니오에틸 카르바메이트 (Peoc), 2-트리페닐포스포니오이소프로필 카르바메이트 (Ppoc), 1,1-디메틸-2-시아노에틸 카르바메이트, m-클로로-p-아실옥시벤질 카르바메이트, p-(디히드록시보릴)벤질 카르바메이트, 5-벤즈이속사졸릴메틸 카르바메이트, 2-(트리플루오로메틸)-6-클로로모닐메틸 카르바메이트 (Tcroc), m-니트로페닐 카르바메이트, 3,5-디메톡시벤질 카르바메이트, o-니트로벤질 카르바메이트, 3,4-디메톡시-6-니트로벤질 카르바메이트, 페닐(o-니트로페닐)메틸 카르바메이트, 페노티아지닐-(10)-카르보닐 유도체, N'-p-톨루엔술포닐아미노카르보닐 유도체, N'-페닐아미노티오카르보닐 유도체, t-아밀 카르바메이트, S-벤질 티오카르바메이트, p-시아노벤질 카르바메이트, 시클로부틸 카르바메이트, 시클로헥실 카르바메이트, 시클로펜틸 카르바메이트, 시클로프로필메틸 카르바메이트, p-데실옥시벤질 카르바메이트, 2,2-디메톡시카르보닐비닐 카르바메이트, o-(N,N-디메틸카르복사미도)벤질 카르바메이트, 1,1-디메틸-3-(N,N-디메틸카르복사미도)프로필 카르바메이트, 1,1-디메틸프로피닐 카르바메이트, 디(2-피리딜)메틸 카르바메이트, 2-푸라닐메틸 카르바메이트, 2-요오도에틸 카르바메이트, 이소보르닐 카르바메이트, 이소부틸 카르바메이트, 이소니코티닐 카르바메이트, p-(p'-메톡시페닐아조)벤질 카르바메이트, 1-메틸시클로부틸 카르바메이트, 1-메틸시클로헥실 카르바메이트, 1-메틸-1-시클로프로필메틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(3,5-디메톡시페닐)에틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(p-페닐아조페닐)에틸 카르바메이트, 1-메틸-1-페닐에틸 카르바메이트, 1-메틸-1-(4-피리딜)에틸 카르바메이트, 페닐 카르바메이트, p-(페닐아조)벤질 카르바메이트, 2,4,6-트리-t-부틸페닐 카르바메이트, 4-(트리메틸암모늄)벤질 카르바메이트, 2,4,6-트리메틸벤질 카르바메이트, 포름아미드, 아세트아미드, 클로로아세트아미드, 트리클로로아세트아미드, 트리플루오로아세트아미드, 페닐아세트아미드, 3-페닐프로판아미드, 피콜린아미드, 3-피리딜카르복사미드, N-벤조일페닐알라닐 유도체, 벤즈아미드, p-페닐벤즈아미드, o-니트로페닐아세트아미드, o-니트로페녹시아세트아미드, 아세토아세트아미드, (N'-디티오벤질옥시카르보닐아미노)아세트아미드, 3-(p-히드록시페닐)프로판아미드, 3-(o-니트로페닐)프로판아미드, 2-메틸-2-(o-니트로페녹시)프로판아미드, 2-메틸-2-(o-페닐아조페녹시)프로판아미드, 4-클로로부탄아미드, 3-메틸-3-니트로부탄아미드, o-니트로신나미드, N-아세틸메티오닌 유도체, o-니트로벤즈아미드, o-(벤조일옥시메틸)벤즈아미드, 4,5-디페닐-3-옥사졸린-2-온, N-프탈이미드, N-디티아숙신이미드 (Dts), N-2,3-디페닐말레이미드, N-2,5-디메틸피롤, N-1,1,4,4-테트라메틸디실릴아자시클로펜탄 부가물 (STABASE), 5-치환 1,3-디메틸-1,3,5-트리아자시클로헥산-2-온, 5-치환 1,3-디벤질-1,3,5-트리아자시클로헥산-2-온, 1-치환 3,5-디니트로-4-피리돈, N-메틸아민, N-알릴아민, N-[2-(트리메틸실릴)에톡시]메틸아민 (SEM), N-3-아세톡시프로필아민, N-(1-이소프로필-4-니트로-2-옥소-3-피롤린-3-일)아민, 4차 암모늄 염, N-벤질아민, N-디(4-메톡시페닐)메틸아민, N'-디벤조수베릴아민, N-트리페닐메틸아민 (Tr), N-[(4-메톡시페닐)디페닐메틸]아민 (MMTr), N'-페닐플루오레닐아민 (PhF), N-2,7-디클로로-9-플루오레닐메틸렌아민, N-페로세닐메틸아미노 (Fcm), N-2-피콜릴아미노 N'-옥시드, N-1,1-디메틸티오메틸렌아민, N-벤질리덴아민, N-p-메톡시벤질리덴아민, N-디페닐메틸렌아민, N-[(2-피리딜)메시틸]메틸렌아민, N-(N',N'-디메틸아미노메틸렌)아민, N,N'-이소프로필리덴디아민, N-p-니트로벤질리덴아민, N-살리실리덴아민, N'-클로로살리실리덴아민, N-(5-클로로-2-히드록시페닐)페닐메틸렌아민, N-시클로헥실리덴아민, N-(5,5-디메틸-3-옥소-1-시클로헥세닐)아민, N-보란 유도체, N-디페닐보린산 유도체, N-[페닐(펜타카르보닐크로뮴- 또는 텅스텐)카르보닐]아민, N-구리 킬레이트, N-아연 킬레이트, N-니트로아민, N-니트로소아민, 아민 N-옥시드, 디페닐포스핀아미드 (Dpp), 디메틸티오포스핀아미드 (Mpt), 디페닐티오포스핀아미드 (Ppt), 디알킬 포스포르아미데이트, 디벤질 포스포르아미데이트, 디페닐 포스포르아미데이트, 벤젠술펜아미드, o-니트로벤젠술펜아미드 (Nps), 2,4-디니트로벤젠술펜아미드, 펜타클로로벤젠술펜아미드, 2-니트로-4-메톡시벤젠술펜아미드, 트리페닐메틸술펜아미드, 3-니트로피리딘술펜아미드 (Npys), p-톨루엔술폰아미드 (Ts), 벤젠술폰아미드, 2,3,6,-트리메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mtr), 2,4,6-트리메톡시벤젠술폰아미드 (Mtb), 2,6-디메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Pme), 2,3,5,6-테트라메틸-4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mte), 4-메톡시벤젠술폰아미드 (Mbs), 2,4,6-트리메틸벤젠술폰아미드 (Mts), 2,6-디메톡시-4-메틸벤젠술폰아미드 (iMds), 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-술폰아미드 (Pmc), 메탄술폰아미드 (Ms), β-트리메틸실릴에탄술폰아미드 (SES), 9-안트라센술폰아미드, 4-(4',8'-디메톡시나프틸메틸)벤젠술폰아미드 (DNMBS), 벤질술폰아미드, 트리플루오로메틸술폰아미드 및 페나실술폰아미드를 포함한다.
적합하게 보호되는 카르복실산은 또한 제한 없이, 실릴-, 알킬-, 알케닐-, 아릴- 및 아릴알킬-보호된 카르복실산을 포함한다. 적합한 실릴 기의 예는 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, t-부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴, 트리이소프로필실릴 등이다. 적합한 알킬 기의 예는 메틸, 벤질, p-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, 트리틸, t-부틸, 테트라히드로피란-2-일을 포함한다. 적합한 알케닐 기의 예는 알릴을 포함한다. 적합한 아릴 기의 예는 임의 치환된 페닐, 바이페닐 또는 나프틸을 포함한다. 적합한 알케닐 기의 예는 알릴을 포함한다. 적합한 아릴 기의 예는 임의 치환된 페닐, 바이페닐 또는 나프틸을 포함한다. 적합한 아릴알킬 기의 예는 임의 치환된 벤질 (예를 들어, p-메톡시벤질 (MPM), 3,4-디메톡시벤질, O-니트로벤질, p-니트로벤질, p-할로벤질, 2,6-디클로로벤질, p-시아노벤질) 및 2- 및 4-피콜릴을 포함한다.
적합한 히드록실 보호기는 메틸, 메톡실메틸 (MOM), 메틸티오메틸 (MTM), t-부틸티오메틸, (페닐디메틸실릴)메톡시메틸 (SMOM), 벤질옥시메틸 (BOM), p-메톡시벤질옥시메틸 (PMBM), (4-메톡시페녹시)메틸 (p-AOM), 구아이아콜메틸 (GUM), t-부톡시메틸, 4-펜테닐옥시메틸 (POM), 실록시메틸, 2-메톡시에톡시메틸 (MEM), 2,2,2-트리클로로에톡시메틸, 비스(2-클로로에톡시)메틸, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 (SEMOR), 테트라히드로피라닐 (THP), 3-브로모테트라히드로피라닐, 테트라히드로티오피라닐, 1-메톡시시클로헥실, 4-메톡시테트라히드로피라닐 (MTHP), 4-메톡시테트라히드로티오피라닐, 4-메톡시테트라히드로티오피라닐 S,S-디옥시드, 1-[(2-클로로-4-메틸)페닐]-4-메톡시피페리딘-4-일 (CTMP), 1,4-디옥산-2-일, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오푸라닐, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-옥타히드로-7,8,8-트리메틸-4,7-메타노벤조푸란-2-일, 1-에톡시에틸, 1-(2-클로로에톡시)에틸, 1-메틸-1-메톡시에틸, 1-메틸-1-벤질옥시에틸, 1-메틸-1-벤질옥시-2-플루오로에틸, 2,2,2-트리클로로에틸, 2-트리메틸실릴에틸, 2-(페닐셀레닐)에틸, t-부틸, 알릴, p-클로로페닐, p-메톡시페닐, 2,4-디니트로페닐, 벤질, p-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, o-니트로벤질, p-니트로벤질, p-할로벤질, 2,6-디클로로벤질, p-시아노벤질, p-페닐벤질, 2-피콜릴, 4-피콜릴, 3-메틸-2-피콜릴 N-옥시도, 디페닐메틸, p,p'-디니트로벤즈히드릴, 5-디벤조수베릴, 트리페닐메틸, α-나프틸디페닐메틸, p-메톡시페닐디페닐메틸, 디(p-메톡시페닐)페닐메틸, 트리(p-메톡시페닐)메틸, 4-(4'-브로모펜아실옥시페닐)디페닐메틸, 4,4',4"-트리스(4,5-디클로로프탈이미도페닐)메틸, 4,4',4"-트리스(레불리노일옥시페닐)메틸, 4,4',4"-트리스(벤조일옥시페닐)메틸, 3-(이미다졸-1-일)비스(4',4"-디메톡시페닐)메틸, 1,1-비스(4-메톡시페닐)-1'-피레닐메틸, 9-안트릴, 9-(9-페닐)잔테닐, 9-(9-페닐-10-옥소)안트릴, 1,3-벤조디티올란-2-일, 벤즈이소티아졸릴 S,S-디옥시도, 트리메틸실릴 (TMS), 트리에틸실릴 (TES), 트리이소프로필실릴 (TIPS), 디메틸이소프로필실릴 (IPDMS), 디에틸이소프로필실릴 (DEIPS), 디메틸t헥실실릴, t-부틸디메틸실릴 (TBDMS), t-부틸디페닐실릴 (TBDPS), 트리벤질실릴, 트리-p-자일릴실릴, 트리페닐실릴, 디페닐메틸실릴 (DPMS), t-부틸메톡시페닐실릴 (TBMPS), 포르메이트, 벤조일포르메이트, 아세테이트, 클로로아세테이트, 디클로로아세테이트, 트리클로로아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 메톡시아세테이트, 트리페닐메톡시아세테이트, 페녹시아세테이트, p-클로로페녹시아세테이트, 3-페닐프로피오네이트, 4-옥소펜타노에이트 (레불리네이트), 4,4-(에틸렌디티오)펜타노에이트 (레불리노일디티오아세탈), 피발로에이트, 아다만토에이트, 크로토네이트, 4-메톡시크로토네이트, 벤조에이트, p-페닐벤조에이트, 2,4,6-트리메틸벤조에이트 (메시토에이트), 알킬 메틸 카르보네이트, 9-플루오레닐메틸 카르보네이트 (Fmoc), 알킬 에틸 카르보네이트, 알킬 2,2,2-트리클로로에틸 카르보네이트 (Troc), 2-(트리메틸실릴)에틸 카르보네이트 (TMSEC), 2-(페닐술포닐) 에틸 카르보네이트 (Psec), 2-(트리페닐포스포니오) 에틸 카르보네이트 (Peoc), 알킬 이소부틸 카르보네이트, 알킬 비닐 카르보네이트 알킬 알릴 카르보네이트, 알킬 p-니트로페닐 카르보네이트, 알킬 벤질 카르보네이트, 알킬 p-메톡시벤질 카르보네이트, 알킬 3,4-디메톡시벤질 카르보네이트, 알킬 o-니트로벤질 카르보네이트, 알킬 p-니트로벤질 카르보네이트, 알킬 S-벤질 티오카르보네이트, 4-에톡시-1-나프틸 카르보네이트, 메틸 디티오카르보네이트, 2-요오도벤조에이트, 4-아지도부티레이트, 4-니트로-4-메틸펜타노에이트, o-(디브로모메틸)벤조에이트, 2-포르밀벤젠술포네이트, 2-(메틸티오메톡시)에틸, 4-(메틸티오메톡시)부티레이트, 2-(메틸티오메톡시메틸)벤조에이트, 2,6-디클로로-4-메틸페녹시아세테이트, 2,6-디클로로-4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)페녹시아세테이트, 2,4-비스(1,1-디메틸프로필)페녹시아세테이트, 클로로디페닐아세테이트, 이소부티레이트, 모노숙시노에이트, (E)-2-메틸-2-부테노에이트, o-(메톡시카르보닐)벤조에이트, α-나프토에이트, 니트레이트, 알킬 N,N,N',N'-테트라메틸포스포로디아미데이트, 알킬 N-페닐카르바메이트, 보레이트, 디메틸포스피노티오일, 알킬 2,4-디니트로페닐술페네이트, 술페이트, 메탄술포네이트 (메실레이트), 벤질술포네이트 및 토실레이트 (Ts) 를 포함한다. 1,2- 또는 1,3-디올을 보호하는 경우, 보호기는 메틸렌 아세탈, 에틸리덴 아세탈, 1-T-부틸에틸리덴 케탈, 1-페닐에틸리덴 케탈, (4-메톡시페닐)에틸리덴 아세탈, 2,2,2-트리클로로에틸리덴 아세탈, 아세토나이드, 시클로펜틸리덴 케탈, 시클로헥실리덴 케탈, 시클로헵틸리덴 케탈, 벤질리덴 아세탈, p-메톡시벤질리덴 아세탈, 2,4-디메톡시벤질리덴 케탈, 3,4-디메톡시벤질리덴 아세탈, 2-니트로벤질리덴 아세탈, 메톡시메틸렌 아세탈, 에톡시메틸렌 아세탈, 디메톡시메틸렌 오르토 에스테르, 1-메톡시에틸리덴 오르토 에스테르, 1-에톡시에틸리딘 오르토 에스테르, 1,2-디메톡시에틸리덴 오르토 에스테르, α-메톡시벤질리덴 오르토 에스테르, 1-(N,N-디메틸아미노)에틸리덴 유도체, α-(N,N'-디메틸아미노)벤질리덴 유도체, 2-옥사시클로펜틸리덴 오르토 에스테르, 디-t-부틸실릴렌 기 (DTBS), 1,3-(1,1,3,3-테트라이소프로필디실록사닐리덴) 유도체 (TIPDS), 테트라-T-부톡시디실록산-1,3-디일리덴 유도체 (TBDS), 시클릭 카르보네이트, 시클릭 보로네이트, 에틸 보로네이트 및 페닐 보로네이트를 포함한다.
일부 구현예에서, 히드록실 보호기는 아세틸, t-부틸, t-부톡시메틸, 메톡시메틸, 테트라히드로피라닐, 1 -에톡시에틸, 1 -(2-클로로에톡시)에틸, 2- 트리메틸실릴에틸, p-클로로페닐, 2,4-디니트로페닐, 벤질, 벤조일, p-페닐벤조일, 2,6- 디클로로벤질, 디페닐메틸, p-니트로벤질, 트리페닐메틸 (트리틸), 4,4'-디메톡시트리틸, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, t-부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴, 트리페닐실릴, 트리이소프로필실릴, 벤조일포르메이트, 클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸, 피발로일, 9- 플루오레닐메틸 카르보네이트, 메실레이트, 토실레이트, 트리플레이트, 트리틸, 모노메톡시트리틸 (MMTr), 4,4'-디메톡시트리틸, (DMTr) 및 4,4',4"-트리메톡시트리틸 (TMTr), 2-시아노에틸 (CE 또는 Cne), 2-(트리메틸실릴)에틸 (TSE), 2-(2-니트로페닐)에틸, 2-(4-시아노페닐)에틸 2-(4-니트로페닐)에틸 (NPE), 2-(4-니트로페닐술포닐)에틸, 3,5-디클로로페닐, 2,4-디메틸페닐, 2-니트로페닐, 4-니트로페닐, 2,4,6-트리메틸페닐, 2-(2-니트로페닐)에틸, 부틸티오카르보닐, 4,4',4"-트리스(벤조일옥시)트리틸, 디페닐카르바모일, 레불리닐, 2-(디브로모메틸)벤조일 (Dbmb), 2-(이소프로필티오메톡시메틸)벤조일 (Ptmt), 9-페닐잔텐-9-일 (pixyl) 또는 9-(p-메톡시페닐)잔틴-9-일 (MOX) 이다. 일부 구현예에서, 각각의 히드록실 보호기는 독립적으로 아세틸, 벤질, t- 부틸디메틸실릴, t-부틸디페닐실릴 및 4,4'-디메톡시트리틸로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 히드록실 보호기는 트리틸, 모노메톡시트리틸 및 4,4'-디메톡시트리틸 기로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 인 보호기는 올리고뉴클레오티드 합성 전반에 걸쳐 뉴클레오티드간 인 결합에 부착된다. 일부 구현예에서, 보호기는 뉴클레오티드간 인 결합의 황 원자에 부착된다. 일부 구현예에서, 인 보호기는 뉴클레오티드간 포스포로티오에이트 결합의 산소 원자에 부착된다. 일부 구현예에서, 인 보호기는 뉴클레오티드간 포스페이트 결합의 산소 원자에 부착된다. 일부 구현예에서, 인 보호기는 2-시아노에틸 (CE 또는 Cne), 2-트리메틸실릴에틸, 2-니트로에틸, 2-술포닐에틸, 메틸, 벤질, o-니트로벤질, 2-(p-니트로페닐)에틸 (NPE 또는 Npe), 2-페닐에틸, 3-(N-tert-부틸카르복사미도)-1-프로필, 4-옥소펜틸, 4-메틸티오-l-부틸, 2-시아노-1,1-디메틸에틸, 4-N-메틸아미노부틸, 3-(2-피리딜)-1-프로필, 2-[N-메틸-N-(2-피리딜)]아미노에틸, 2-(N-포르밀,N-메틸)아미노에틸, 4-[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로아세틸)아미노]부틸이다.
단백질: 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "단백질" 은 폴리펩티드 (즉, 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 둘 이상의 아미노산의 스트링) 를 나타낸다. 일부 구현예에서, 단백질은 오로지 천연적으로 발생한 아미노 산을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질은 하나 이상의 비천연-발생 아미노산 (예를 들어, 인접한 아미노산과 하나 이상의 펩티드 결합을 형성하는 잔기) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 사슬의 하나 이상의 잔기는 비아미노산 잔기 (예를 들어 글리칸 등) 를 함유한다. 일부 구현예에서, 단백질은 예를 들어 하나 이상의 디술피드 결합에 의해 연결되거나 다른 방법에 의해 결부된 하나 초과의 폴리펩티드 사슬을 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질은 L-아미노산, D-아미노산 또는 둘 모두를 함유하고; 일부 구현예에서, 단백질은 하나 이상의 아미노산 변형물 또는 당업계에 공지된 유사체를 함유한다. 유용한 변형물은 예를 들어 말단 아세틸화, 아미드화, 메틸화 등을 포함한다. 용어 "펩티드" 는 일반적으로 약 100 개 미만의 아미노산, 약 50 개 미만의 아미노산, 20 개 미만의 아미노산 또는 10 개 미만의 아미노산의 길이를 갖는 폴리펩티드를 나타내는데 사용된다. 일부 구현예에서, 단백질은 항체, 항체 분절, 이의 생물학적 활성 부분 및/또는 이의 특징적 부분이다.
샘플: 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "샘플" 은 본원에 기재된 관심 공급원으로부터 수득 또는 유래된 생물학적 샘플을 나타낸다. 일부 구현예에서, 관심 공급원은 유기체, 예컨대 동물 또는 인간이다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 생물학적 조직 또는 유체를 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 골수; 혈액; 혈액 세포; 복수; 조직 또는 미세침 생검 샘플; 세포-함유 체액; 자유 유동 핵산 (free floating nucleic acid); 가래; 침; 소변; 뇌척수액, 복막액; 흉수; 대변; 림프; 부인과 유체; 피부 표본; 질 표본; 경구 표본; 코 표본; 세척물 또는 세정물 예컨대 도관 세정물 또는 세기관지 세정물; 흡인물; 찰과표본 (scraping); 골수 시편; 조직 생검 시편; 수술 시편; 배설물, 기타 체액, 분비물 및/또는 배출물; 및/또는 이로부터의 세포 등이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 개개인으로부터 수득된 세포이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 샘플은 임의의 적절한 방법에 의해 관심 공급원으로부터 직접 수득된 "1차 샘플" 이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 1차 생물학적 샘플은 생검 (예를 들어, 미세침 흡인물 또는 조직 생검), 수술, 체액 (예를 들어 혈액, 림프, 배설물 등) 의 수집 등으로 이루어지는 군으로부터 선택된 방법에 의해 수득된다. 일부 구현예에서, 내용으로부터 명백할 바와 같이, 용어 "샘플" 은 1차 샘플을 가공 (예를 들어 하나 이상의 성분의 제거 및/또는 이에 대한 하나 이상의 작용제 첨가) 에 의해 수득된 제조를 나타낸다. 예를 들어, 여과는 반투과성 막을 사용한다. 상기 "가공된 샘플" 은 예를 들어 기술 예컨대 mRNA 의 증폭 또는 역 전사, 특정 성분의 단리 및/또는 정제 등에 1차 샘플을 적용함으로써 수득되거나 샘플로부터 추출되는 핵산 또는 단백질을 포함할 수 있다.
입체화학적 이성질체 형태: 본원에서 사용된 구절 "입체화학적 이성질체 형태" 는 동일한 결합 순서로 결합되지만 상호 교환성이 아닌 상이한 3차원 구조를 갖는 것에 의한, 동일한 원자로 구성된 상이한 화합물을 나타낸다. 본 발명의 일부 구현예에서, 제공되는 화학적 조성물은 화합물의 개별적 입체 화학적 이성질체 형태의 순수한 제조일 수 있거나 이를 포함하고; 일부 구현예에서, 제공되는 화학적 조성물은 화합물의 입체 화학적 이성질체 형태 둘 이상의 혼합물일 수 있거나 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 혼합물은 상이한 입체 화학적 이성질체 형태를 동일한 양 함유하고; 특정 구현예에서, 상기 혼합물은 상이한 양의 둘 이상의 상이한 입체화학 이성질체 형태를 함유한다. 일부 구현예에서, 화학 조성물은 화합물의 모든 부분입체 이성질체 및/또는 거울상 이성질체를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 화학 조성물은 전부보다 적은 부분입체 이성질체 및/또는 거울상 이성질체를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물의 특정 거울상 이성질체가 바람직한 경우, 이는 예를 들어 비대칭 합성 또는 키랄 보조제에 의한 유도에 의해 제조될 수 있고, 여기서 생성된 부분입체 이성질체 혼합물이 분리되고 보조 기가 분해되어 순수한 원하는 거울상 이성질체를 제공한다. 대안적으로, 분자가 염기성 관능기를 함유하는 경우, 예컨대 아미노, 부분입체 이성질체 염은 적절한 광학-활성 산에 의해 형성되고 예를 들어 분별 결정화에 의해 분리된다.
대상체: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "대상체" 또는 "시험 대상체" 는 제공된 화합물 또는 조성물이 본 발명에 따라 예를 들어 실험, 진단, 예방 및/또는 치료 목적으로 투여되는 임의의 유기체를 나타낸다. 전형적인 대상체는 동물 (예를 들어, 포유류, 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 비인간 영장류 및 인간; 곤충; 벌레 등) 및 식물을 포함한다. 일부 구현에에서, 대상체는 질환, 장애 및/또는 병상을 겪고/거나 이에 걸리기 쉬울 수 있다.
실질적으로: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "실질적으로" 는 관심대상의 특징 또는 특성의 전체 또는 거의 전체의 규모 또는 정도를 나타내는 질적 상태를 나타낸다. 생물학 분야의 당업자는 생물학적 및 화학적 현상이 적어도 절대적 결과를 완성 또는 달성 또는 회피하는 것으로 거의 완료 및/또는 진행된다는 것을 이해할 것이다. 따라서 본원에서 용어 "실질적으로" 는 많은 생물학적 및/또는 화학적 현상에서 내재하는 완료의 잠재적 결함을 포착하기 위해 사용된다.
겪다: 질환, 장애 및/또는 병상을 "겪는" 개개인은 질환, 장애 및/또는 병상의 증상 하나 이상을 갖거나 나타내는 것으로 진단된다.
걸리기 쉽다: 질환, 장애 및/또는 병상에 "걸리기 쉬운" 개개인은 일반 대중의 구성원보다 질환, 장애 및/또는 병상을 발현하는 위험성이 더 높은 개개인이다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리기 쉬운 개개인은 질환, 장애 및/또는 장애를 갖는 것으로 진단되지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리기 쉬운 개개인은 질환, 장애 및/또는 병상의 증상을 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리기 쉬운 개개인은 질환, 장애 및/또는 병상의 증상을 나타내지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리기 쉬운 개개인은 질환, 장애 및/도는 병상을 발현할 것이다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리기 쉬운 개개인은 질환, 장애 및/또는 병상을 발현하지 않을 것이다.
전신: 본원에서 사용된 구절 "전신 투여", "전신으로 투여", "말초 투여" 및 "말초로 투여" 는 화합물 또는 조성물을 투여하여 이것이 수령자의 전신에 들어가는 것을 나타내는 당업계에서 이해되는 의미를 갖는다.
호변이성체 형태: 본원에서 사용된 구절 "호변이성체 형태" 는 쉽게 상호전환될 수 있는 유기 화합물의 상이한 이성질체 형태를 기재하는데 사용된다. 호변이성체는 단일 결합 및 인접한 이중 결합의 전환에 의해 동반되는 수소 원자 또는 양성자의 형식적 이동에 의해 특징지어질 수 있다. 일부 구현예에서, 호변이성체는 양성자성 호변이성 (즉 양성자의 재배치) 으로부터 산출될 수 있다. 일부 구현예에서, 호변이성체는 원자가 호변이성 (즉, 결합 전자의 급속 재구성) 으로부터 산출될 수 있다. 모든 상기 호변이성체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 일부 구현예에서, 화합물의 호변이성체 형태는 서로 이동성 평형으로 존재하여, 혼합물의 형성을 산출하는 별도의 성분을 제조하려고 시도한다. 일부 구현예에서, 화합물의 호변이성체 형태는 분리가능 및 단리가능 화합물이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 화학적 조성물은 화합물의 단일 호변이성 형태의 순수한 제조이거나 이를 포함하도록 규정될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 화학적 조성물은 화합물의 둘 이상의 호변이성체 형태의 혼합물로서 제공될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 혼합물은 동일한 양의 상이한 호변이성체 형태를 함유하고; 특정 구현예에서, 상기 혼합물은 화합물의 상이한 호변이성체 형태 둘 이상의 상이한 양을 함유한다. 본 발명의 일부 구현예에서, 화학적 조성물은 화합물의 모든 호변이성체 형태를 함유할 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 화학적 조성물은 화합물의 전부보다 적은 호변이성체 형태를 함유할 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 화학적 조성물은 상호전환의 결과로서 시간에 걸쳐 변화하는 양의 화합물의 호변이성체 형태 하나 이상을 함유할 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 호변이성은 케토-에놀 호변이성이다. 당업자는 케노-에놀 호변이성체가 당업자에 공지된 임의의 적합한 시약을 사용하여 "트랩핑" (즉 이것이 "에놀" 형태를 유지하도록 화학적 변형됨) 되어, 당업계에 공지된 적합한 기술 하나 이상을 사용하여 이후 단리될 수 있는 에놀 유도체를 제공할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 달리 나타내지 않는 한, 본 발명은 순수한 형태이든 서로의 혼합물이든 관련 화합물의 모든 호변이성체 형태를 포함한다.
치료제: 본원에서 사용된 구절 "치료제" 는 대상체에 투여될 때 치료적 효과를 갖고/거나 원하는 생물학적 및/또는 약물학적 효과를 유발하는 임의의 작용제를 나타낸다. 일부 구현예에서, 치료제는 질환, 장애 및/또는 병상의 증상 또는 특징 하나 이상을 완화, 개선, 경감, 저해, 예방, 개시 지연, 심각성 감소 및/또는 발생 감소시키는데 사용될 수 있는 임의의 성분이다.
치료적 유효량: 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "치료적 유효량" 은 치료적 양생법의 일부로서 투여될 때 원하는 생물학적 반응을 유도하는 성분 (예를 들어, 치료제, 조성물 및/또는 제형) 의 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 성분의 치료적 유효량은 질환, 장애 및/또는 병상에 걸리거나 이에 걸리기 쉬운 대상체에 투여될 때 질환, 장애 및/또는 병상을 치료, 진단, 예방 및/또는 개시 지연하는데 충분한 양이다. 당업자에 의해 이해될 바와 같이, 성분의 유효량은 원하는 생물학적 종점으로서 상기 인자, 전달되는 성분, 표적 세포 또는 조직 등에 따라 매우 가변적일 수 있다. 예를 들어 질환, 장애 및/또는 병상을 치료하기 위한 제형 중 화합물의 유효량은 질환, 장애 및/또는 병상의 증상 또는 특징 하나 이상을 완화, 개선, 경감, 저해, 예방, 개시 지연, 심각성 감소 및/또는 발생 감소하는 양이다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 단일 투약량으로 투여되고; 일부 구현예에서, 다중 단위 투약량이 치료적 유효량을 전달하는데 요구된다.
치료: 본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "치료하다", "치료" 또는 "치료하는" 은 질환, 장애 및/또는 병상의 증상 또는 특징 하나 이상을 일부 또는 완전히 완화, 개선, 경감, 저해, 예방, 개시 지연, 심각성 저하 및/또는 발생 저하시키는데 사용된 임의의 방법을 나타낸다. 치료는 질환, 장애 및/또는 병상의 징후를 나타내지 않는 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 예를 들어 질환, 장애 및/또는 병상과 관련된 병리학을 발현할 위험성을 감소시킬 목적으로, 질환, 장애 및/또는 병상의 초기 징후만을 나타내는 대상체에 투여될 수 있다.
불포화: 본원에서 사용된 용어 "불포화" 는 잔기가 불포화 단위 하나 이상을 갖는 것을 의미한다.
단위 투약량: 본원에서 사용된 표현 "단위 투약량" 은 약학 조성물의 물리학적 별개 단위 및/또는 단일 투약량으로서 투여되는 양을 나타낸다. 많은 구현예에서, 단위 투약량은 소정량의 활성제를 함유한다. 일부 구현예에서, 단위 투약량은 작용제의 전체 단일 투약량을 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 초과의 단위 투약량은 전체 단일 투약량을 달성하기 위해 투여된다. 일부 구현예에서, 의도된 효과를 달성하기 위해 다중 단위 투약량의 투여가 요구되거나 요구될 것이 예상된다. 단위 투약량은 예를 들어 소정량의 하나 이상의 치료제, 소정량의 하나 이상의 고체 형태의 치료제, 서방출 제형 또는 소정량의 하나 이상의 치료제를 함유하는 약물 전달 디바이스 등을 함유하는 액체 (예를 들어 허용가능한 담체) 의 부피일 수 있다. 단위 투약량은 치료제(들) 이외에 임의의 다양한 성분을 포함하는 제형으로 존재할 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 허용가능한 담체 (예를 들어, 약학적으로 허용가능한 담체), 희석제, 안정화제, 완충액, 보존제 등은 상기 기재된 바와 같이 포함될 수 있다. 많은 구현예에서, 특정 치료제의 총 적절 매일 투여량은 분획, 또는 다수의 단위 투약량을 포함할 수 있고 예를 들어 타당한 의료적 판단의 범주 내의 의사에 의해 결정될 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다. 일부 구현예에서, 임의의 특정 대상체 또는 유기체에 대한 특정 유효 투약량 수준은 치료하고자 하는 장애 및 장애의 심각성; 사용된 특정 활성 화합물의 활성; 사용된 특정 조성물; 대상체의 연령, 체중, 일반 건강, 성별 및 식습관; 투여 시간 및 사용된 특정 활성 화합물의 배출 속도; 치료 기간; 사용된 특정 화합물(들) 과 함께 또는 동시에 사용된 약물 및/또는 추가 치료제 및 의료 분야에 익히 공지된 기타 인자를 포함하는 다양한 인자에 가변적일 수 있다.
야생형: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "야생형" 은 "정상적" (돌연변이, 질환, 변질 등과 대조적임) 상태 또는 상황에서 자연에서 발견되는 구조 및/또는 활성을 갖는 실체를 나타내는 당업계에서 이해되는 의미를 갖는다. 당업자는 야생형 유전자 및 폴리펩티드가 흔히 다중 상이한 형태 (예를 들어, 대립 형질) 로 존재한다는 것을 이해할 것이다.
핵산: 용어 "핵산" 은 임의의 뉴클레오티드, 이의 유사체 및 이의 중합체를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드" 는 임의의 길이의 뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드 (RNA) 또는 데옥시리보뉴클레오티드 (DNA) 의 중합체성 형태를 나타낸다. 이러한 용어는 분자의 1차 구조를 나타내고, 이에 따라 이중- 및 단일-가닥 DNA 및 이중- 및 단일-가닥 RNA 를 포함한다. 이러한 용어는 등가물로서, 뉴클레오티드 유사체 및 개질된 폴리뉴클레오티드, 예컨대 제한 없이 메틸화, 보호 및/또는 캡핑된 뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드로부터 만들어진 RNA 또는 DNA 의 유사체를 포함한다. 용어는 폴리- 또는 올리고-리보뉴클레오티드 (RNA) 및 폴리- 또는 올리고-데옥시리보뉴클레오티드 (DNA); 핵염기 및/또는 개질된 핵염기의 N-글리코시드 또는 C-글리코시드로부터 유래된 RNA 또는 DNA; 당 및/또는 개질된 당으로부터 유래된 핵산; 및 포스페이트 가교 및/또는 개질된 인-원자 가교 (또한 본원에서 "뉴클레오티드 간 연결" 로 나타냄) 로부터 유래된 핵산을 포함한다. 용어는 핵염기, 개질된 핵염기, 당, 개질된 당, 포스페이트 가교 또는 개질된 인 원자 가교의 임의의 조합을 함유하는 핵산을 포함한다. 예는 리보스 잔기를 함유하는 핵산, 데옥시리보스 잔기를 함유하는 핵산, 리보스 및 데옥시 리보스 잔기를 함유하는 핵산, 리보스 및 개질된 리보스 잔기를 함유하는 핵산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 접두사 폴리- 는 2 내지 약 10,000 개의 뉴클레오티드 단량체 단위를 함유하는 핵산을 나타내고, 여기서 접두사 올리고- 는 2 내지 약 200 개의 뉴클레오티드 단량체 단위를 함유하는 핵산을 나타낸다.
뉴클레오티드: 본원에서 사용된 용어 "뉴클레오티드" 는 헤테로시클릭 염기, 당 및 하나 이상의 포스페이트 기 또는 인-함유 뉴클레오티드 간 연결로 이루어지는 폴리뉴클레오티드의 단량체성 단위를 나타낸다. 자연적 발생 염기 (구아닌 (G), 아데닌 (A), 시토신 (C), 티민 (T) 및 우라실 (U)) 는 자연적으로 및 비자연적으로 발생하는 염기 유사체가 또한 포함되는 것이 이해되어야 함에도 불구하고 푸린 또는 피리미딘의 유도체이다. 자연적 발생 당은 펜토오스 (5-탄소 당) 데옥시리보오스 (이는 DNA 를 형성함) 또는 리보오스 (이는 RNA 를 형성함) 이지만, 자연적으로 및 비자연적으로 발생하는 당 유사체가 또한 포함됨이 이해되어야 한다. 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 간 연결을 통해 연결되어 핵산을 형성하거나 폴리뉴클레오티드를 형성한다. 많은 뉴클레오티드 간 연결은 당업계에 공지되어 있다 (예컨대, 제한 없이 포스페이트, 포스포로티오에이트, 보라노포스페이트 등). 인공 핵산은 PNA (펩티드 핵산), 포스포트리에스테르, 포스포로티오네이트, H-포스포네이트, 포스포르아미데이트, 보라노포스페이트, 메틸포스포네이트, 포스포노아세테이트, 티오포스포노아세테이트 및 천연 핵산의 포스페이트 백본의 기타 변형물, 예컨대 본원에 기재된 것을 포함한다.
뉴클레오시드: 용어 "뉴클레오시드" 는 핵염기 또는 개질된 핵염기가 당 또는 개질된 당에 공유 결합되는 잔기를 나타낸다.
당: 용어 "당" 은 폐쇄 및/또는 개방 형태의 단당류를 나타낸다. 당은 제한 없이, 리보오스, 데옥시리보오스, 펜토푸라노오스, 펜토피라노오스 및 헥소피라노오스 잔기를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어는 또한 통상적인 당 분자 대신에 사용된 구조적 유사체, 예컨대 글리콜, 핵산 유사체, 글리콜 핵산 ("GNA") 의 백본을 형성하는 중합체를 포함한다.
개질된 당: 용어 "개질된 당" 은 당을 대체할 수 있는 잔기를 나타낸다. 개질된 당은 공간 배열, 전자 특성 또는 당의 일부 기타 물리화학적 특성을 모의한다.
핵염기: 용어 "핵염기" 는 하나의 핵산 가닥을 또다른 상보적 가닥에 서열 특이적 방식으로 결합하는 수소-결합에 포함되는 핵산의 일부를 나타낸다. 가장 통상적인 자연-발생 핵염기는 아데닌 (A), 구아닌 (G), 우라실 (U), 시토신 (C) 및 티민 (T) 이다. 일부 구현예에서, 자연-발생 핵염기는 개질된 아데닌, 구아닌, 우라실, 시토신 또는 티민이다. 일부 구현예에서, 자연-발생 핵염기는 메틸화 아데닌, 구아닌, 우라실, 시토신 또는 티민이다. 일부 구현예에서, 핵염기는 "개질된 핵염기", 예를 들어 아데닌 (A), 구아인 (G), 우라실 (U), 시토신 (C) 및 티민 (T) 이외의 핵염기이다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 메틸화 아데닌, 구아닌, 우라실, 시토신 또는 티민이다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 핵염기의 공간 배열, 전자 특성 또는 일부 기타 물리화학적 특성을 모방하고, 한 핵산 가닥을 또다른 것에 서열 특이적 방식으로 결합하는 수소-결합의 특성을 유지한다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 올리고뉴클레오티드 이중 (duplex) 의 활성 또는 세포내 효소에 의한 인식, 용융 거동에 실질적으로 영향을 주지 않으면서, 5 개의 자연 발생 염기 모두 (우라실, 티민, 아데닌, 시토신 또는 구아닌) 와 쌍을 이룰 수 있다.
키랄 리간드: 용어 "키랄 리간드" 또는 "키랄 보조제" 는 키랄이고 반응이 특정 입체 선택적으로 수행될 수 있도록 반응에 혼입될 수 있는 잔기를 나타낸다.
축합 작용제: 축합 반응에서, 용어 "축합 작용제" 는 덜 반응성인 부위를 활성화시키고 또다른 작용에 의한 공격에 더 취약하게 만드는 작용제를 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 또다른 작용제는 친핵체이다.
차단기: 용어 "차단기" 는 관능기의 반응성을 차폐시키는 기를 나타낸다. 관능기는 이후 차단기의 제거에 의해 비차폐될 수 있다. 일부 구현예에서, 차단기는 보호기이다.
잔기: 용어 "잔기" 는 분자의 특정 분절 또는 관능기를 나타낸다. 화학적 잔기는 흔히 분자에 포매 또는 부가된 화학적 실체로 인식된다.
고체 지지체: 용어 "고체 지지체" 는 핵산의 합성을 가능하게 하는 임의의 지지체를 나타낸다. 일부 구현예에서, 용어는 핵산을 합성하기 위해 수행된 반응 단계에서 사용된 매질에서 불용성이고 반응성 기를 포함하도록 유도체화되는 중합체 또는 유리를 나타낸다. 일부 구현예에서, 고체 지지체는 매우 가교된 폴리스티렌 (HCP) 또는 제어된 기공 유리 (CPG) 이다. 일부 구현예에서, 고체 지지체는 제어된 기공 유리 (CPG) 이다. 일부 구현예에서, 고체 지지체는 제어된 기공 유리 (CPG) 및 매우 가교된 폴리스티렌 (HCP) 의 혼성 지지체이다.
연결 잔기: 용어 "연결 잔기" 는 임의로 말단 뉴클레오시드 및 고체 지지체 사이 또는 말단 뉴클레오시드 및 또다른 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 핵산 사이에 위치된 임의의 잔기를 나타낸다.
DNA 분자: "DNA 분자" 는 그 단일 가닥 형태 또는 이중-가닥 나산으로의 데옥시리보뉴클레오티드 (아데닌 구아닌, 티민 또는 시토신) 의 중합체성 형태를 나타낸다. 이러한 용어는 오로지 분자의 1차 및 2차 구조를 나타내고, 이를 임의의 특정 3차 형태로 제한하지 않는다. 따라서, 이러한 용어는 특히 선형 DNA 분자 (예를 들어, 제한 절편), 바이러스, 플라스미드 및 염색체에서 발견된 이중-가닥 DNA 를 포함한다. 특정 이중-가닥 DNA 분자의 구조의 논의에서, 서열은 본원에서 DNA 의 비전사 가닥 (mRNA 에 대해 서열 동족성을 갖는 가닥) 을 따라 5' → 3' 의 서열로만 주어지는 일반적 통례에 따라 기재될 수 있다.
코딩 서열: DNA "코딩 서열" 또는 "코딩 영역" 은 적절한 발현 제어 서열의 제어 하에 놓여질 때 생체내에서 폴리펩티드로 전사 및 번역되는 이중-가닥 DNA 서열이다. 코딩 서열의 경계 ("개방 해독 프레임 (open reading frame)" 또는 "ORF") 는 5' (아미노) 말단의 출발 코돈 및 3' (카르복실) 말단의 번역 중단 코돈에 의해 결정된다. 코딩 서열은 제한 없이, 원핵 서열, 진핵 mRNA 로부터의 cDNA, 진핵 (예를 들어 포유류) DNA 로부터의 게놈 DNA 서열 및 합성 DNA 서열을 포함할 수 있다. 폴리아데닐화 신호 및 전사 종료 서열은 일반적으로 코딩 서열에 대해 3' 에 위치된다. 용어 "비코딩 서열" 또는 "비코딩 영역" 은 아미노산으로 번역되지 않는 폴리뉴클레오티드 서열의 영역 (예를 들어, 5' 및 3' 비번역 영역) 을 나타낸다.
해독 프레임: 용어 "해독 프레임" 은 이중 가닥 DNA 분자의 6 개의 가능한 해독 프레임 (각 방향으로 3 개) 중 하나를 나타낸다. 해독 프레임은 어느 코돈이 DNA 분자의 코딩 서열 내의 아미노산을 인코팅하는데 사용되는지 결정한다.
안티센스 (antisense): 본원에서 사용된 바와 같은, "안티센스" 핵산 분자는 단백질을 인코딩하는 "센스 (sense)" 핵산에 상보적이거나, 예를 들어 이중-가닥 cDNA 분자의 코딩 가닥에 상보적이거나, mRNA 서열에 상보적이거나, 또는 유전자의 코딩 가닥에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 따라서, 안티센스 핵산 분자는 센스 핵산 분자에 수소 결합을 통해 회합할 수 있다.
동요 위치 (Wobble position): 본원에서 사용된 바와 같은 "동요 위치" 는 코돈의 제 3 위치를 나타낸다. 일부 구현예에서, 코돈의 동요 위치 내의 DNA 분자의 돌연변이는 아미노산 수준에서의 숨은 돌연변이 (silent mutation) 또는 보수적 돌연변이 (conservative mutation) 를 산출한다. 예를 들어 글리신을 인코딩하는 4 개의 코돈, GGU, GGC, GGA 및 GGG 가 있고, A, U, C 및 G 로부터 선택된 임의의 기타 뉴클레오티드에 대한 임의의 동요 위치 뉴클레오티드의 돌연변이는 인코딩된 단백질의 아미노산 수준의 변화를 산출하지 않으므로 숨은 치환이다.
숨은 치환: "숨은 치환" 또는 "숨은 돌연변이" 는 코돈 내의 뉴클레오티드가 개질되지만 코돈에 의해 인코딩된 아미노산 잔기의 변화를 산출하지 않는 것이다. 예는 코돈의 제 3 위치, 및 특정 코돈 예컨대 코돈 "CGG" (이는 AGG 로 돌연변이되는 경우, 여전히 Arg 를 인코딩함) 의 제 1 위치에서의 돌연변이를 포함한다.
유전자: 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "유전자", "재조합 유전자" 및 "유전자 구조물" 은 단백질 또는 이의 부분을 인코딩하는 DNA 분자, 또는 DNA 분자의 부분을 나타낸다. DNA 분자는 단백질을 인코딩하는 개방 해독 프레임을 (엑손 서열로서) 함유할 수 있고 또한 인트론 서열을 포함할 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "인트론" 은 단백질로 번역되지 않고 일부에서 (모든 경우에서가 아님) 엑손 사이에서 발견되는 주어진 유전자에 존재하는 DNA 서열을 나타낸다. 유전자는 당업계에 익히 공지된 바와 같이, 하나 이상의 프로모터, 인핸서, 억제 및/또는 기타 조절 서열에 실시가능하게 연결되어 유전자의 활성 또는 발현을 조절하는 것이 바람직할 수 있다.
상보적 DNA: 본원에서 사용된 바와 같이, "상보적 DNA" 또는 "cDNA" 는 mRNA 의 역전사에 의해 합성된 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 이로부터 개입 서열 (인트론) 이 제거된다.
상동 (homology): "상동" 또는 "동일성 (identity)" 또는 "유사성" 은 두 핵산 분자 사이의 서열 유사성을 나타낸다. 상동 및 동일성은 각각 비교의 목적으로 배열될 수 있는 각각의 서열에서의 위치를 비교함으로써 측정될 수 있다. 비교된 서열에서 동등한 위치가 동일한 염기에 의해 차지되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하고; 동일한 또는 유사한 핵산 잔기 (예를 들어 입체적 및/또는 전자 성질이 유사함) 에 의해 점유된 동등한 부위의 경우, 분자는 그 위치에서 일치 (유사) 하는 것으로 나타날 수 있다. 상동성/유사성 또는 동일성의 백분율로서의 표현은 비교된 서열에 의해 공유된 위치에서 동일 또는 유사한 핵산의 수의 함수를 나타낸다. "비관련" 또는 "비상동성" 인 서열은 본원에 기재된 서열과 40% 미만의 동일성, 35 % 미만의 동일성, 30% 미만의 동일성 또는 25 % 미만의 동일성을 공유한다. 두 서열의 비교에 있어서, 잔기 (아미노산 또는 핵산) 의 부재 또는 추가 잔기의 존재는 또한 동일성 및 상동성/유사성을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 용어 "상동성" 은 유사한 기능 또는 모티프를 갖는 유전자를 식별하는데 사용되는 서열 유사성의 수학적 기반 비교를 기재한다. 본원에 기재된 핵산 서열은 공용 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위한, 예를 들어 기타 패밀리 구성원, 관련 서열 또는 동족체를 식별하기 위한 "문의 서열" 로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 검색은 Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10 의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램 (버전 2.0) 을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, BLAST 뉴클레오티드는 본 발명의 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오티드 서열을 수득하기 위해 NBLAST 프로그램, 점수=100, 단어길이=12 과 함께 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 비교 목적으로 얼라인먼트 갭을 수득하기 위해, Gapped BLAST 는 Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402 에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 경우, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 BLAST) 의 디폴트 매개변수가 사용될 수 있다 (www.ncbi.nlm.nih.gov 참조).
동일성: 본원에서 사용된 바와 같은, "동일성" 은 서열이 서열 매칭을 최대화하기 위해, 즉 갭 및 삽입을 고려하여 배열될 때, 둘 이상의 서열에 상응하는 위치에서의 동일한 뉴클레오티드 잔기의 백분율을 의미한다. 동일성은 제한 없이 (Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., 및 Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; 및 Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. 및 Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988) 에 기재된 것을 포함하는 공지된 방법에 의해 쉽게 계산될 수 있다. 동일성을 측정하는 방법은 시험된 서열 사이의 가장 큰 매칭을 산출하기 위해 고안된다. 또한, 동일성을 측정하는 방법은 공용으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램에 코드화되어 있다. 두 서열 사이의 동일성을 측정하는 컴퓨터 프로그램 방법은 제한 없이, GCG 프로그램 패키지 (Devereux, J., et al., 핵산s Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol. 215: 403-410 (1990) 및 Altschul et al. Nuc. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)) 를 포함한다. BLAST X 프로그램은 NCBI 및 기타 공급원으로부터 공용으로 이용가능하다 (BLAST Manual, Altschul, S., et al., NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul, S., et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990)). 익히 공지된 스미스 워터맨 알고리즘 (Smith Waterman algorithm) 은 또한 동일성을 측정하는데 사용될 수 있다.
이종성: DNA 서열의 "이종성" 영역은 자연에서 더 큰 서열과 관련하여 밝혀지지 않은 더 큰 DNA 서열 내의 식별가능한 DNA 분절이다. 따라서, 이종성 영역이 포유류 유전자를 인코딩하는 경우, 유전자는 일반적으로 공급원 유기체의 게놈에서 포유류 게놈 DNA 에 배치 (flank) 되지 않는 DNA 에 의해 배치될 수 있다. 이종성 코딩 서열의 또다른 예는 코딩 서열 그 자체가 자연에서 발견되지 않는 서열 (예를 들어, 게놈 코딩 서열이 비개질 유전자와 상이한 코돈 또는 모티프를 갖는 합성 서열 또는 인트론을 함유함) 이다. 대립 변형 또는 자연-발생 돌연변이 이벤트는 본원에 정의된 바와 같은 DNA 의 이종 영역을 산출하지 않는다.
전이 돌연변이 (transition mutation): 용어 "전이 돌연변이" 는 피리미딘 (시티딘 (C) 또는 티미딘 (T) 가 또다른 피리미딘으로 대체되고, 또는 푸린 (아데노신 (A) 또는 구아노신 (G)) 가 또다른 푸린으로 대체되는 DNA 서열의 염기 변화를 나타낸다.
전환 돌연변이 (Transversion mutation): 용어 "전환 돌연변이" 는 피리미딘 (시티딘 (C) 또는 티미딘 (T)) 이 푸린 (아데노신 (A) 또는 구아노신 (G)) 으로 대체되거나 푸린이 피리미딘으로 대체되는 DNA 서열의 염기 변화를 나타낸다.
올리고뉴클레오티드: 용어 "올리고뉴클레오티드" 는 핵염기, 개질 핵염기, 당, 개질 당, 포스페이트 가교, 또는 개질된 인 원자 가교 (또한 본원에서 본원에 추가 정의된 "뉴클레오티드 간 연결" 로 나타냄) 의 임의의 조합을 함유하는 중합체 또는 뉴클레오티드 단량체의 올리고머를 나타낸다.
올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "올리고뉴클레오티드 가닥" 은 단일-가닥 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥 영역을 가질 수 있고, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 영역을 가질 수 있다. 예시적 올리고뉴클레오티드는 제한 없이, 구조적 유전자, 제어 및 말단 영역을 포함하는 유전자, 자기-복제 시스템 예컨대 바이러스성 또는 플라스미드 DNA, 단일-가닥 및 이중-가닥 siRNA 및 기타 RNA 간섭 작용제 (RNAi 작용제 또는 iRNA 작용제), shRNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 마이크로RNAs, 마이크로RNA 모방물, 수페르미르 (supermir), 아프타메르 (aptamer), 안티미르 (antimir), 안타고미르 (antagomir), Ul 어답터, 3중-형성 올리고뉴클레오티드, G-4중 올리고뉴클레오티드, RNA 활성화제, 면역-자극 올리고뉴클레오티드, 및 유인 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
RNA 개입을 유도하는데 효과적인 이중-가닥 및 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 또한 본원에서 siRNA, RNAi 작용제, 또는 iRNA 작용제로서 나타내어진다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 도입하는 이러한 RNA 개입은 RNAi-유도된 숨은 착물 (RISC) 로 공지된 세포질 다중-단백질 착물과 결부된다. 많은 구현예에서, 단일-가닥 및 이중-가닥 RNAi 작용제는 내생성 분자, 예를 들어 Dicer 에 의해 분해되어, RISC 기계에 들어갈 수 있고 표적 서열, 예를 들어 표적 mRNA의 RISC 매개된 분해에 참여할 수 있는 더 작은 올리고뉴클레오티드를 산출할 수 있게 충분히 길다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 다양한 길이일 수 있다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 200 뉴클레오티드 길이의 범위일 수 있다. 다양한 관련 구현예에서, 올리고뉴클레오티드, 단일-가닥, 이중-가닥 및 삼중-가닥은 약 4 내지 약 10 뉴클레오티드, 약 10 내지 약 50 뉴클레오티드, 약 20 내지 약 50 뉴클레오티드, 약 15 내지 약 30 뉴클레오티드, 약 20 내지 약 30 뉴클레오티드의 길이 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 약 9 내지 약 39 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 4 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 6 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 7 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 8 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 9 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 10 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 11 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 12 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 15 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 20 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 25 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 30 이상의 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 18 이상의 뉴클레오티드 길이의 상보적 가닥의 이중 (duplex) 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 21 이상의 뉴클레오티드 길이의 상보적 가닥의 이중이다.
뉴클레오티드 간 연결 (internucleotidic linkage): 본원에서 사용된 바와 같은, 구절 "뉴클레오티드 간 연결" 은 일반적으로 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 단위 사이의 인-함유 연결을 나타내고, 상기 및 본원에서 사용된 "당 간 연결" 및 "인 원자 가교" 와 상호 교환될 수 있다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드간 연결은 자연 발생 DNA 및 RNA 분자에서 발견되는 포스포디에스테르 연결이다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 간 연결은 "개질된 뉴클레오티드 간 연결" 이고, 여기서, 포스포디에스테르 연결의 각각의 산소 원자는 임의로 및 독립적으로 유기 또는 무기 잔기로 대체된다. 일부 구현예에서, 상기 유기 또는 무기 잔기는 제한 없이 =S, =Se, =NR', -SR', -SeR', -N(R')2, B(R')3, -S- -Se- 및 -N(R')- 로부터 선택되고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 하기에 정의 및 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 간 연결은 포스포트리에스테르 연결, 포스포로티오에이트 디에스테르 연결
Figure 112015015568410-pct00001
, 또는 개질된 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결이다. 뉴클레오티드 간 연결은 연결에서 산 또는 염기 잔기의 존재로 인해 주어진 pH 에서 음이온 또는 양이온으로서 존재할 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해된다.
달리 나타내지 않는 한, 올리고뉴클레오티드 서열과 함께 사용될 때 각각의 s, s1, s2, s3, s4, s5, s6 및 s7 은 독립적으로 아래 표 1 에 설명된 바와 같이 하기 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 나타낸다.
표 1. 예시적 개질된 뉴클레오티드 간 연결.
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Figure 112015015568410-pct00003
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예를 들어, (Rp, Sp)-ATsCs1GA 는 1) T 와 C 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결
Figure 112015015568410-pct00005
; 및 2) C 와 G 사이의
Figure 112015015568410-pct00006
의 구조를 갖는 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 갖는다. 달리 나타내지 않는 한, 올리고뉴클레오티드 서열에 선행하는 Rp/Sp 지정은 올리고뉴클레오티드 서열의 5' 로부터 3' 로 순차적으로 뉴클레오티드 간 연결로의 키랄 연결 인 원자의 배열을 기재한다. 예를 들어, (Rp, Sp)-ATsCs1GA 에 있어서, T 와 C 사이의 "s" 연결에서의 인 및 C 와 G 사이의 "s1" 연결에서의 인은 Sp 배열을 갖는다. 일부 구현예에서, "전부-(Rp)" 또는 "전부-(Sp)" 은 올리고뉴클레오티드의 모든 키랄 연결 인 원자가 각각 동일한 Rp 또는 Sp 배열을 갖는 것을 나타내는데 사용된다. 예를 들어, 전부-(Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC 는 올리고뉴클레오티드의 모든 키랄 연결 인 원자가 Rp 배열을 갖는다는 것을 나타내고; 전부-(Sp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC 은 올리고뉴클레오티드의 모든 키랄 연결 인 원자가 Sp 배열을 갖는다는 것을 나타낸다.
올리고뉴클레오티드 유형: 본원에서 사용된 바와 같은, 구절 "올리고뉴클레오티드 유형" 은 특정 염기 서열, 백본 연결의 패턴 (즉, 뉴클레오티드 간 연결 유형의 패턴, 포스페이트, 포스포로티오에이트 등), 백본 키랄 중심의 패턴 (즉 연결 인 입체화학 (Rp/Sp) 의 패턴), 및 백본 인 개질물의 패턴 (예를 들어, 화학식 I 의 "-XLR1" 의 패턴) 을 갖는 올리고뉴클레오티드를 정의하는데 사용된다. 통상적 지시된 "유형" 의 올리고뉴클레오티드는 서로 구조적으로 동일하다.
당업자는 본 발명의 합성 방법은 올리고뉴클레오티드 가닥의 각각의 뉴클레오티드 단위가 고안될 수 있고/거나 사전에 특정 연결 인에서의 입체화학 및/또는 특정 연결 인에서의 개질 및/또는 특정 염기 및/또는 특정 당을 갖도록 선택될 수 있는 올리고뉴클레오티드 가닥의 합성 동안의 제어도를 제공한다는 것을 이해할 것이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 가닥은 연결 인에서 입체 중심의 특정 조합을 갖도록 고안 및/또는 사전 선택된다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 가닥은 연결 인에서 개질물의 특정 조합을 갖도록 고안 및/또는 결정된다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 가닥은 염기의 특정 조합을 갖도록 고안 및/또는 선택된다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 가닥은 상기 구조적 특징 중 하나 이상의 특정 조합을 갖도록 고안 및/또는 선택된다. 본 발명은 다수의 올리고뉴클레오티드 분자 (예를 들어 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물) 을 포함하거나 이로 이루어지는 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 모든 상기 분자는 동일한 유형 (즉, 구조적으로 서로 동일함) 이다. 그러나, 많은 구현예에서, 상이한 유형의 올리고뉴클레오티드 다수를 전형적으로 미리 결정된 상대적 양으로 포함한다.
키랄 제어: 본원에서 사용된 바와 같은 "키랄 제어" 는 올리고뉴클레오티드 가닥에서 모든 키랄 연결 인의 입체화학적 지정을 제어하는 능력을 나타낸다. 구절 "화학적으로 제어된 올리고뉴클레오티드" 는 키랄 연결 인에 대해 단일 부분입체 이성질체 형태로 존재하는 올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물: 본원에서 사용된 바와 같은, 구절 "키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물" 은 개별적 올리고뉴클레오티드 유형의 소정 수준을 함유하는 올리고뉴클레오티드 조성물을 나타낸다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물은 하나 초과의 올리고뉴클레오티드 유형을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물은 다중 올리고뉴클레오티드 유형의 혼합물을 포함한다. 예시적 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물은 본원에 추가 기재되어 있다.
키랄적 순수: 본원에서 사용된 바와 같은, 구절 "키랄적 순수" 는 올리고뉴클레오티드 모두가 연결 인에 대해 단일 부분입체 이성질체 형태로 존재하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 기재하는데 사용된다.
키랄적 균일: 본원에 사용된 바와 같은, 구절 "키랄적 균일" 은 모든 뉴클레오티드 단위가 연결 인에서 동일한 입체화학을 갖는 올리고뉴클레오티드 분자 또는 유형을 기재하는데 사용된다. 예를 들어, 뉴클레오티드 단위가 모두 연결 인에서 Rp 입체화학을 갖는 올리고뉴클레오티드는 키랄적으로 균일하다. 또한, 뉴클레오티드 단위 모두가 연결 인에서 Sp 입체화학을 갖는 올리고뉴클레오티드는 키랄적 균일이다.
소정 (predetermine): 소정은 예를 들어 무작위 발생 또는 달성되는 것과 반대로서 의도적으로 선택되는 것을 의미한다. 본 명세서를 읽는 당업자는 본 발명이 제조를 위한 특정 올리고뉴클레오티드 유형 및/또는 제공된 조성물 중 내포물의 선택을 허용하고, 또한 그에 따라 제공된 조성물이 제조되는, 임의로 특정 상대적 양으로 선택되는 정확하게 선택된 특정 유형의 제어된 제조를 허용하는 신규하고 놀라운 기술을 제공한다는 것을 이해할 것이다. 상기 제공된 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 "소정" 된다. 특정 개별적 올리고뉴클레오티드 유형을 함유할 수 있는 조성물은 이들이 특정 올리고뉴클레오티드 유형을 의도적으로 생성하도록 제어될 수 없는 공정을 통해 생성되기 때문에 "소정" 조성물이 아니다. 일부 구현예에서, 소정 조성물은 의도적으로 재현될 수 있는 것이다 (예를 들어 제어된 방법의 반복을 통함).
연결 인: 본원에 사용된 바와 같은, 구절 "연결 인" 은 나타나는 특정 인 원자가 뉴클레오티드 간 연결에 존재하는 인 원자이고 이 인 원자가 자연 발생 DNA 및 RNA 에서 발생하는 뉴클레오티드 간 연결의 포스포디에스테르의 인 원자에 해당함을 나타내는데 사용된다. 일부 구현예에서, 연결 인 원자는 개질된 뉴클레오티드 간 연결에 있고, 여기서 포스포디에스테르 연결의 산소 원자 각각은 임의로 및 독립적으로 유기 또는 무기 잔기로 대체된다. 일부 구현예에서, 연결 인 원자는 화학식 I 의 P* 이다. 일부 구현예에서, 연결 인 원자는 키랄이다. 일부 구현예에서, 키랄 연결 인 원자는 화학식 I 의 P* 이다.
P-개질: 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "P-개질" 은 입체 화학 개질 이외에 연결 인에서의 임의의 개질을 나타낸다. 일부 구현예에서, P-개질은 연결 인에 공유결합 부착된 펜던트 잔기의 부가, 치환 또는 제거를 포함한다. 일부 구현예에서, "P-개질" 은 -X-L-R1 (식 중, X, L 및 R1 은 독립적으로 본원 및 하기에 정의 및 기재된 바와 같음) 이다.
블록머 (Blockmer): 본원에서 사용된 용어 "블록머" 는 각각의 개별적 뉴클레오티드 단위를 특징짓는 구조적 특징의 패턴이 뉴클레오티드 간 인 연결에서 공통 구조적 특징을 공유하는 둘 이상의 연이은 뉴클레오티드 단위의 존재에 의해 특징지어지는 올리고뉴클레오티드 가닥을 나타낸다. 공통 구조적 특징은 연결 인에서 공통 개질 또는 연결 인에서 공통 입체화학을 의미한다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 간 인 연결에서의 공통 구조 특징을 공유하는 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위는 "블록" 으로 나타낸다.
일부 구현예에서, 블록머는 "입체블록머 (stereoblockmer)" 이고, 예를 들어 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 입체화학을 갖는다. 상기 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위는 "입체블록" 을 형성한다. 예를 들어 (Sp, Sp)-ATsCs1GA 는 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위, Ts 및 Cs1 이 연결 인에서 동일한 입체 화학을 갖기 때문에 (모두 Sp) 입체블록머이다. 동일한 올리고뉴클레오티드 (Sp, Sp)-ATsCs1GA 에서, TsCs1 는 블록을 형성하고, 이는 입체블록이다.
일부 구현예에서, 블록머는 "P-개질 블록머 (P-modification blockmer)" 이고, 예를 들어 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 변형을 갖는다. 상기 둘 이상의 연속 뉴클레오티드 단위는 "P-개질 블록" 이다. 예를 들어, (Rp, Sp)-ATsCsGA 는 둘 이상의 연속 뉴클레오티드 단위, Ts 및 Cs 가 동일한 P-개질 (즉, 모두 포스포로티오에이트 디에스테르임) 을 갖기 때문에 P-개질 블록머이다. (Rp, Sp)-ATsCsGA 의 동일한 올리고뉴클레오티드에서, TsCs 는 블록을 형성하고, 이는 P-개질 블록이다.
일부 구현예에서, 블록머는 "연결 블록머 (linkage blockmer)" 이고, 예를 들어 둘 이상의 연속 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 입체화학 및 및 동일한 개질을 갖는다. 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위는 "연결 블록" 을 형성한다. 예를 들어, (Rp, Rp)-ATsCsGA 는 둘 이상의 연속적 뉴클레오티드 단위, Ts 및 Cs 가 동일한 입체화학 (모두 Rp) 및 P-개질 (모두 포스포로티오에이트) 을 갖기 때문에 연결 블록머이다. (Rp, Rp)-ATsCsGA 의 동일한 올리고뉴클레오티드에서, TsCs 는 블록을 형성하고, 이는 연결 블록이다.
일부 구현예에서, 블록머는 스테레오블록, P-개질 블록 및 연결 블록으로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 블록을 포함한다. 일부 구현예에서, 블록머는 하나의 블록에 대한 입체블록머, 및/또는 또다른 블록에 대한 P-개질 블록머 및/또는 보다 또다른 블록에 대한 연결 블록머이다. 예를 들어, (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp)-AAsTsCsGsAs1Ts1Cs1Gs1ATCG 는 입체블록 AsTsCsGsAs1 (연결 인에서의 모든 Rp) 또는 Ts1Cs1Gs1 (연결 인에서의 모든 Sp) 에 대한 입체 블록머, P-개질 블록 AsTsCsGs (모든 s 연결) 또는 As1Ts1Cs1Gs1 (모든 s1 연결) 에 대한 P-개질 블록머, 또는 연결 블록 AsTsCsGs (연결 인에서의 모든 Rp 및 모든 s 연결) 또는 Ts1Cs1Gs1 (연결 인에서의 모든 Sp 및 모든 s1 연결) 에 대해 연결 블록머이다.
알트머 (altmer): 본원에서 사용된 용어 "알트머" 는 각각의 개별적 뉴클레오티드 단위를 특징짓는 구조적 특징의 패턴이 올리고뉴클레오티드 가닥의 두 연속적 뉴클레오티드 단위가 뉴클레오티드 간 인 연결에서 특정 구조적 특징을 공유하지 않는 것을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드 가닥을 나타낸다. 일부 구현예에서, 알트머는 이것이 반복 패턴을 포함하도록 고안된다. 일부 구현예에서, 알트머는 이것이 반복 패턴을 포함하지 않도록 고안된다.
일부 구현예에서, 알트머는 "입체알트머 (stereoaltmer)" 이고, 예를 들어 두 연속적 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 입체 화학을 갖지 않는다. 예를 들어 (Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC.
일부 구현예에서, 알트머는 "P-개질 알트머" 이고, 예를 들어, 두 연속적 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 개질을 갖지 않는다. 예를 들어, 전부-(Sp)-CAs1GsT (여기서, 각각의 연결 인은 다른것과 상이한 P-개질을 가짐).
일부 구현예에서, 알트머는 "연결 알트머" 이고, 예를 들어 두 연속적 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 입체화학 또는 동일한 개질을 갖지 않는다. 예를 들어, (Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)-GsCs1CsTs1CsAs1GsTs1CsTs1GsCs1TsTs2CsGs3CsAs4CsC.
유니머 (unimer): 본원에서 사용된 용어 "유니머" 는 각각의 뉴클레오티드 단위를 특징 짓는 구조적 특징의 패턴이 가닥 내의 모든 뉴클레오티드 단위가 뉴클레오티드 간 인 연결에서 하나 이상의 통상적 구조적 특징을 공유하는 것인 올리고뉴클레오티드 가닥을 나타낸다. 통상적 구조적 특징은 연결 인에서의 공통 입체화학 또는 연결 인에서의 공통 개질이다.
일부 구현예에서, 유니머는 "입체유니머" 이고, 예를 들어 모든 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 입체화학을 갖는다. 예를 들어, 전부-(Sp)-CsAs1GsT (여기서, 모든 연결은 Sp 인을 가짐).
일부 구현예에서, 유니머는 "P-개질 유니머" 이고, 예를 들어 모든 뉴클레오티드 단위는 연결 인에서 동일한 개질을 갖는다. 예를 들어, (Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC (여기서, 모든 뉴클레오티드 간 연결은 포스포로티오에이트 디에스테르임).
일부 구현예에서, 유니머는 "연결 유니머" 이고, 예를 들어 모든 뉴클레오티드 단위는 연결 인에 동일한 입체화학 및 동일한 개질을 갖는다. 예를 들어, 전부-(Sp)-GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC (여기서, 모든 뉴클레오티드 간 연결은 Sp 연결 인을 갖는 포스포로티오에이트 디에스테르임).
갭머 (gapmer): 본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "갭머" 는 올리고뉴클레오티드 가닥의 하나 이상의 뉴클레오티드 간 인 연결이 포스페이트 디에스테르 연결, 예를 들어 자연 발생 DNA 또는 RNA 에서 발견되는 것임을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드 가닥을 나타낸다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 가닥의 하나 초과의 뉴클레오티드 간 인 연결은 포스페이트 디에스테르 연결 예컨대 자연 발생 DNA 또는 RNA 에서 발견되는 것이다. 예를 들어, 전부-(Sp)-CAs1GsT (여기서, C 와 A 사이의 뉴클레오티드 간 연결은 포스페이트 디에스테르 연결임).
스킵머 (Skipmer): 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "스킵머" 는 올리고뉴클레오티드 가닥의 모든 기타 뉴클레오티드 간 인 연결이 포스페이트 디에스테르 연결, 예를 들어 자연 발생 DNA 또는 RNA 에서 발견되는 것이고, 올리고뉴클레오티드 가닥의 모든 기타 뉴클레오티드 간 인 연결이 개질된 뉴클레오티드 간 연결인, 갭머의 유형을 나타낸다. 예를 들어, 전부-(Sp)-AsTCs1GAs2TCs3G.
본 발명의 목적의 경우, 화학적 구성요소는 원소 주기율표, CAS 버전, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed., 1986-87, 표지 내부에 따라 식별된다.
본 발명의 화합물 및 조성물과 관련하여 본원에 기재된 방법 및 구조는 또한 이러한 화합물 및 조성물의 약학적으로 허용가능한 산 또는 염기 부가 염 및 모든 입체 이성질체 형태에 적용된다.
도면의 간단한 설명
도 1. 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 입체무작위 (stereorandom) 올리고뉴클레오티드에 비해 HPLC 에서 상당히 상이한 체류 시간은 갖는다. A: 미정제 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 (올리고뉴클레오티드 101); C: 상응하는 입체무작위 올리고뉴클레오티드 (올리고뉴클레오티드 118).
도 2. 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 입체무작위 올리고뉴클레오티드의 HPLC. A: 올리고뉴클레오티드 101 (전부-Rp); B: 올리고뉴클레오티드 102 (전부-Sp); 및 C: 올리고뉴클레오티드 118 (입체무작위).
도 3. 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 및 입체무작위 올리고뉴클레오티드의 Tm.
도 4. 대표적 데이터: 표적 및 내생성 제어 쌍의 용융 곡선 분석은 단일 앰플리콘 (amplicon) 을 산출한다.
도 5. 화합물에 관한 대표적 데이터 및 IC50.
도 6. 미정제물 (Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((RRS)6-R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 7. 정제된 (Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((RRS)6-R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 8. (Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((RRS)6-R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 LCMS.
도 9. 미정제물 (Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (S-(RRS)6, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 10. 정제된 (Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (S-(RRS)6, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 11. (Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (S-(RRS)6, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 LCMS.
도 12. 미정제 (Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp) d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (RS-(RRS)5-RR, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 13. 정제된 (Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp) d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (RS-(RRS)5-RR, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 HPLC.
도 14. (Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (RS-(RRS)5-RR, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s-유니머)) 의 LCMS
도 15. 미정제 (Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (3R-5S-3R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s1-유니머)) 의 HPLC.
도 16. 정제된 (Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (3R-5S-3R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s1-유니머)) 의 HPLC.
도 17. (Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (3R-5S-3R, 입체블록머 및 P-개질 유니머 (s1-유니머)) 의 LCMS.
도 18. 미정제 전부-(Rp)-d[Cs3As3Gs3T] (P-개질 유니머 (s3-유니머), 입체유니머 및 연결 유니머) 의 HPLC.
도 19. 전부-(Rp)-d[Cs3As3Gs3T] (P-개질 유니머 (s3-유니머), 입체유니머 및 연결 유니머) 의 LCMS.
도 20. 미정제 전부-(Rp)-d[Cs2As2Gs2T] (P-개질 유니머 (s2-유니머), 입체유니머 및 연결 유니머) 의 HPLC.
도 21. 전부-(Rp)-d[Cs2As2Gs2T] (P-개질 유니머 (s2-유니머), 입체유니머 및 연결 유니머) 의 LCMS.
도 22. 미정제 전부-(Sp)-d[Cs1AGs1T] (갭머, 입체알트머, P-개질 알트머 및 연결 알트머) 의 HPLC.
도 23. 전부-(Sp)-d[Cs1AGs1T] (갭머 입체알트머, P-개질 알트머 및 연결 알트머) 의 LCMS.
도 24. 미정제 전부-(Rp)-d[TsCs1AsT] (입체유니머, P-개질 알트머 및 연결 알트머).
도 25. 전부-(Rp)-d[TsCs1AsT] (입체유니머, P-개질 알트머 및 연결 알트머) 의 LCMS.
도 26. WO2012/030683 에 기재되고 본 발명의 방법을 사용한 합성에 고려되는 예시적 올리고뉴클레오티드.
도 27. WO2012/030683 에 기재되고 본 발명의 방법을 사용한 합성에 고려되는 예시적 올리고뉴클레오티드.
도 28. WO2012/030683 에 기재되고 본 발명의 방법을 사용한 합성에 고려되는 예시적 올리고뉴클레오티드.
도 29. WO2012/030683 에 기재되고 본 발명의 방법을 사용한 합성에 고려되는 예시적 올리고뉴클레오티드.
도 30. WO2012/030683 에 기재되고 본 발명의 방법을 사용한 합성에 고려되는 예시적 올리고뉴클레오티드.
도 31. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 WO2012/030683 에 기재된 예시적 링커.
도 32. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 WO2012/030683 에 기재된 예시적 링커.
도 33. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 WO2012/030683 에 기재된 예시적 링커.
도 34. 본 발명의 방법에서 사용하기 위한 WO2012/030683 에 기재된 예시적 링커.
도 35. 올리고뉴클레오티드 상의 미정제 DMT 의 RP-HPLC: ONT-75 (Panel A); ONT-80 (Panel B); ONT-77 (Panel C); ONT-81 (Panel D); ONT-87 (Panel E); ONT-88 (Panel F); ONT-89 (Panel G); ONT-82 (Panel H); ONT-84 (Panel I); ONT-85 (Panel J); ONT-86 (Panel K).
도 36. 정제된 DMT 오프 올리고뉴클레오티드의 RP-HPLC: ONT-75 (Panel A); ONT-80 (Panel B); ONT-77 (Panel C); ONT-81 (Panel D); ONT-87 (Panel E); ONT-88 (Panel F); ONT-89 (Panel G); ONT-82 (Panel H); ONT-84 (Panel I); ONT-85 (Panel J); ONT-86 (Panel K).
도 37. 정제된 DMT 오프 올리고뉴클레오티드의 RP-HPLC 추적의 오버레이 (overlay): ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89, 및 ONT-41 (Panel A); ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89, 및 ONT-41 (Panel B) 의 오버레이의 확장된 관점 (expanded view).
도 38. 정제된 DMT 오프 올리고뉴클레오티드의 RP-HPLC 추적의 오버레이: ONT-82, ONT-84, ONT-85, ONT-86, 및 ONT-83 (Panel A); ONT-82, ONT-84, ONT-85, ONT-86, 및 ONT-83 (Panel B) 의 오버레이의 확장된 관점.
도 39. 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 ONT-81, ONT-41, ONT-75, ONT-77, 및 ONT-80 의 Tm 오버레이.
도 40. ONT-41, ONT-75, ONT-80, ONT-77, 및 ONT-81 에 관한 huApoB 마우스에서 5 mg/kg 입체이성질체 또는 미포머슨 (mipomersen) IP 투약에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 41. 미포머슨, "완전 R" 미포머슨, "완전 S" 미포머슨, "RSR" 미포머슨, 및 "SRS" 미포머슨에 대한 huApoB 마우스에서의 5 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 (apolipoprotein) B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 42. 미포머슨, "완전 R" 미포머슨, "완전 S" 미포머슨, "RSR" 미포머슨 및 "sRS"미포머슨에 대한 huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 43. 미포머슨, ONT-87, ONT-88, 및 ONT-89 에 대한 huApoB 마우스에서 5 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 44. ONT-87, ONT-88, 및 ONT-89 에 대한 huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 45. siRNA 이중에 의한 Hep3B 처리 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 46. siRNA 이중 곡선 맞춤에 의한 Hep3B 처리 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 47. siRNA 이중에 의한 HeLa 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 48. siRNA 이중 곡선 맞춤에 의한 HeLa 처리 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 49. 3 개의 포스포로티에이트 입체 중심 3 개를 함유하는 siRNA 이중에 의한 HeLA 처리 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 50. 3 개의 포스포로티에이트 입체 중심 곡선 맞춤을 함유하는 siRNA 이중에 의한 HeLa 처리 이후 유지되는 % PCSK-9 mRNA 의 그래픽적 표현.
도 51. 정제된 DMT 오프 올리고뉴클레오티드: ONT-108, ONT-109, 및 ONT-114 의 RP-HPLC 추적의 오버레이.
도 52. 정제된 DMT 오프 올리고뉴클레오티드: ONT-106, ONT-107, 및 ONT-114 의 RP-HPLC 추적의 오버레이.
도 53. huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 54.huApoB 마우스 (n= 3-4) 에서 5 mg/kg 입체 이성질체 또는 미포머슨의 다중 IP 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간경과의 그래픽적 표현. 아래로 향한 화살표는 투약 일을 나타낸다.
도 55. huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 (ONT-87, ONT-88 또는 ONT-89) 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 제 17 일 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준.
도 56. huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 (ONT-87, ONT-88 또는 ONT-89) 또는 미포머슨 IP 투약 이후 PBS 에 대한 제 24 일 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준.
도 57. huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 (ONT-41, ONT-87, ONT-88 또는 ONT-89) 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준.
도 58. huApoB 마우스에서 10 mg/kg 입체 이성질체 (ONT-87, ONT-88 또는 ONT-89) 투약 이후 PBS 에 대한 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준.
도 59. 올리고뉴클레오티드 ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89 및 ONT-41 에 대한 svPDE 소화 연구의 IEX-HPLC 정량 분석의 플롯.
도 60. 올리고뉴클레오티드 ONT-75 (All (Rp))-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC 에 대한 nP1 을 사용한 효소적 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 61. 올리고뉴클레오티드 ONT-77 (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp)- Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC (5R-10S-4R) 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 62. 올리고뉴클레오티드 ONT-80 (All (Sp))-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 63. 올리고뉴클레오티드 ONT-81 (Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC (5S-10R-4S) 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 64. 올리고뉴클레오티드 ONT-87 (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC (5R-(SSR)3 -5R) 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 65. 올리고뉴클레오티드 ONT-88 (Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC (5S-(RRS)3-5S) 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 66. 올리고뉴클레오티드 ONT-89 (Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC ((SR)9S) 에 대한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 67. 올리고뉴클레오티드 ONT-41 (부분입체 혼합물)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs 5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC 에 관한 nP1 을 사용한 효소 소화 연구의 IEX-HPLC.
도 68. 사전 인큐베이션된 전간 (whole liver) 균질액에서 입체무작위 "모" 올리고뉴클레오티드 ONT-41 (미포머슨) 에 의한 키랄적 순수한 올리고뉴클레오티드 ONT-75 및 ONT-77 의 안정성 비교.
도 69. 13b 의 단량체를 사용한 올리고뉴클레오티드 유도체의 제조에서 UPLC 프로파일.
도 70. 27 의 단량체를 사용한 올리고뉴클레오티드 유도체의 제조에서 UPLC 프로파일.
도 71. 입체 이성질체 (ONT-82, ONT-83, ONT-84, ONT-85 또는 ONT-86) 에 의한 1차 마우스 간세포의 트랜스펙션 이후 Mock 및 비처리 대조군에 대한 마우스 아포리포단백질 B/GAPDH mRNA 수준.
도 72. 입체 이성질체 (ONT-83, ONT-84, ONT-85 또는 ONT-86) 에 의한 1차 마우스 간세포의 트랜스펙션 이후 Mock 및 비처리 대조군에 대한 마우스 아포리포단백질 B/GAPDH mRNA 수준.
특정 구현예의 상세한 설명
합성 올리고뉴클레오티드는 다양한 적용물에서 유용한 분자 툴을 제공한다. 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 치료, 진단, 연구 및 신규 나노물질 적용물에서 유용하다. 자연 발생 핵산 (예를 들어, 비개질 DNA 또는 RNA) 의 사용은 예를 들어 엔도- 및 엑소-뉴클레아제에 대한 이의 민감성에 의해 제한된다. 상기와 같이, 다양한 합성 상대부분은 이러한 결점을 면하기 위해 개발되었다. 이는 백본 개질물을 함유하는 합성적 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 이는 이러한 분자를 분해에 덜 민감하게 한다. 구조적 관점에서, 뉴클레오티드 간 포스페이트 연결에 대한 상기 변형은 키랄성을 도입한다. 올리고뉴클레오티드의 특정 특성이 올리고뉴클레오티드의 백본을 형성하는 인 원자의 배열에 의해 영향을 받을 수 있다는 것이 명백해졌다. 예를 들어, 시험관내 연구는 안티센스 뉴클레오티드의 특성 예컨대 결합 친화성, 상보적 RNA 에 대한 서열 특이적 결합, 뉴클레아제에 대한 안정성이 특히 백본의 키랄성 (예를 들어, 인 원자의 배열) 에 의해 영향을 받는다는 것을 나타냈다. 따라서, 본 발명은 인 원자-개질 핵산을 포함하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 관련 조성물 및 방법에 대한 요구가 있다는 인식을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 특정 원하는 특징, 예를 드어 증가된 안정성 및 개선된 시험관내 및/또는 생체내 적용물에 대한 개선된 효능을 나타내는데 구조적으로 최적화된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
뉴클레오티드 간 포스페이트의 두 비가교 산소 원자 중 하나 또는 두 개가 상이한 유형의 원자 또는 치환기로 대체되는 올리고뉴클레오티드는 효소적 반응 메커니즘을 설명하기 위한 탐침 및 치료제로서 유용한 것으로 공지되어 있다. 그러나, 상기 올리고뉴클레오티드는 흔히 다양한 적용물에서 이의 사용을 금지하는 원치 않는 특성 (예를 들어 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 민감성, 불량한 세포 막 투과성) 을 나타낸다. 따라서, 화학적 개질의 다양한 유형은 이의 특성을 개선하고/거나 신규 관능성을 부여하려는 시도에서 개발되었다.
개질된 올리고뉴클레오티드 구조
상기 나타낸 바와 같이, 다양한 적용물 및 지시에서 올리고뉴클레오티드 조성물의 유용성의 관점에서, 당업자는 바람직할 수 있는 올리고뉴클레오티드 구조의 변형 또는 원하는 특징을 발현하거나 예를 들어 특히 적용 및 지시에서 사용되는 자연-발생 올리고뉴클레오티드 분자에 비해 기여하기 위해 노력하였다. 상기 개질의 예는 아래 기재되어 있다.
WO2010/141471 (본원에서 "트라베르사 I") 은 감소된 순 다음이온 전하를 갖도록 개질된 핵산 구성물의 상이한 유형의 개질을 교시하고 있다. WO2010/039543 (본원에서 "트라베르사 II") 은 감소된 다음이온 전하를 갖는 중성 폴리뉴클레오티드 (NN) 을 제조하는 방법 및 조성물을 교시하고 있다. WO2008/008476 (본원에서 "트라베르사 III") 는 SATE (Imbach-형) 포스페이트 전구약물의 합성을 기재한다. 트라베르사 I, II 및 III 은 본 발명에 기재된 바와 같이, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이의 제조 및 사용하는 방법을 교시하지 않는다.
WO2010/072831 (본원에서 "Girindus 등") 은 또한 올리고뉴클레오티드의 개질을 교시하고 있다. 특히, Girindus 등은 전구약물로서 포스포로티오에이트 트리에스테르를 생성하기 위한 황화제의 사용을 교시하고 있다. Girindus 등은 본 발명에 기재된 바와 같이, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물, 이의 제조 및 이를 사용하는 방법을 교시하고 있지 않다.
유사하게는, WO2004/085454 (본원에서"Avecia I") 는 예를 들어 폴리-H-포스포네이트 디에스테르의 일시적 실릴화를 통한 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드의 제조를 교시한다. WO2001/027126 (본원에서 "Avecia II") 는 고체 지지된 5'-히드록실 올리고뉴클레오티드에 대한 H-포스포네이트 단량체의 커플링 및 생성된 H-포스포네이트 디에스테르의 포스포로티오에이트 트리에스테르로의 추가 황화에 의한 포스포트리에스테르 올리고뉴클레오티드의 고체 상 합성 방법을 교시하고 있다. WO2001/064702 (본원에서 "아베시아 III") 의 개시는 아베시아 II 와 유사하고 상이한 고체 지지체 상의 고체-상 합성을 추가 기재한다. 아베시아 I, II 및 III 은 본 발명에 의해 기재된 바와 같이, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 교시하고 있지 않다.
WO1997/006183 (본원에서 "키론") 은 비대칭 인, 예컨대 입체순수 아미데이트를 포함하는 양이온성 뉴클레오티드 간 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드를 교시한다. 키론은 부분입체 이성질체의 혼합물의 결정화 또는 예를 들어 컬럼 크로마토그래피를 사용한 분리를 통해 수득된 입체순수 올리고뉴클레오티드를 교시하고 있다. 키론은 본 발명에 의해 기재된 바와 같이, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 교시하고 있지 않다.
WO2009/146123 (본원에서 "스프링 뱅크 (Spring Bank) I") 은 치환된 포스페이트 올리고뉴클레오티드 및 포스포로티오에이트 트리에스테르를 사용하여 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 교시하고 있다. WO2007/070598 (본원에서 "스프링 뱅크 II") 는 항바이러스 핵산으로서 포스포트리에스테르 전구약물을 교시하고 포스포로티오에이트 전구약물의 합성을 교시하고 있다. 스프링 뱅크 I 및 II 는 본 발명에 의해 기재되는 바와 같이, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 교시하지 않는다.
EP0779893 (본원에서 "히브리돈") 은 안티센스 올리고뉴클레오티드의 증가된 세포 흡수를 위한 친유성 전구약물을 교시하고 있고 Rp 및 Sp 포스포로티오에이트 및 포스포로티오에이트 트리에스테르 2량체가 상이한 효소적 안정성 특성을 가질 수 있음을 관찰한다. 히브리돈은 본 발명에 의해 기재되는 바와 같은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 교시하고 있지 않다.
WO1997/047637 (본원에서 "임바흐 I") 는 일반적으로 임바흐 "SATE" (S-아실 티오에틸) 전구약물 올리고뉴클레오티드 조성물 및 방법을 교시하고 있다. 임바흐 I 은 예를 들어 생체가역성 포스포트리에스테르 전구약물 및 후속-합성 알킬화 또는 전구약물-기-함유 포스포르아미다이트를 사용한 특정 전구약물 올리고뉴클레오티드의 제조를 기재하고 있다. US 6,124,445 (본원에서 "임바흐 II") 는 개질된 안티센스 및 키메라 전구약물 올리고뉴클레오티드를 교시하고 있다. 임바흐 I 및 II 는 본 발명에 기재된 바와 같이, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물, 및 이를 제조 및 사용하는 방법을 교시하고 있지 않다.
WO2006/065751 (본원에서 "보케이지 (Beaucage)") 는 열불안정 치환기 (이 치환기는 포스로프아미다이트 단량체를 통해 도입됨) 를 포함하는 CpG 올리고뉴클레오티드 포스포로티오에이트 전구약물 및 이의 적용물을 교시하고 있다. 보케이지는 본 발명에 의해 기재되는 바와 같이 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 이의 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법은 교시하지 않는다.
Takeshi Wada 등은 아미다이트 키랄 보조제를 사용하여 P-키랄 핵산의 입체-제어 합성을 위한 신규 방법을 개발하였다 (JP4348077, WO2005/014609, WO2005/092909, 및 WO2010/064146, 본원에서 "와다 (Wada) II" 로 축적하여 나타냄). 특히, WO2010/064146 (본원에서 "와다 II" 로 나타냄) 은 인에서 입체화학 배열이 제어되는 인 원자-개질 핵산을 합성하는 방법을 개시하고 있다. 그러나, 와다 II 의 방법은 이들이 제어 및 고안된 방식으로 각각의 키랄 연결 인의 개별적 P-개질을 제공하지 않는다는 것에 있어서 제한된다. 즉, 와다 II 의 P-개질된 연결 방법은, 원하는 길이로 구축되면 예를 들어 원하는 포스포로티오에이트 디에스테르, 포스포르아미데이트 또는 보라노포스페이트 또는 기타 상기 인 원자-개질 핵산을 제공하기 위해 (상기 문헌, 페이지 36 도식 6 에서 경로 B 로 나타냄) 연결 인에서 개질된 질량인 축합 중간체 폴리 H-포스포네이트 올리고뉴클레오티드 가닥의 생성을 제공한다. 또한, 와다 II 의 H-포스포네이트 올리고뉴클레오티드 가닥은 짧은 길이 (예를 들어 2량체, 3량체 또는 4량체) 이다. "n-1" 유형 부산물의 축적의 결과로서 일반적으로 낮은 미정제물 순도를 나타내는 경로 B 에서 캡핑 단계가 없다는 사실과 함께, 와다 II 경로는 더 긴 올리고뉴클레오티드의 합성과 관련하여 제한을 함유한다. 와다 II 가 일반적으로 특정 올리고뉴클레오티드가 각각의 연결 인에서 상이한 개질을 함유하는 것으로 예상될 수 있음을 고려하는 한편, 와다 II 는 본원에 기재된 바와 같이 상기 개질물의 제어된 반복적 설정을 위한 방법을 기재 또는 제안하지 있지 않다. 와다 II 가 연결 인에서의 개질 전에 완전히 조립되는 H-포스포네이트 중간체 올리고뉴클레오티드를 필요로하지 않는 합성 사이클을 도시할 정도까지 (여기서, 경로 A, 페이지 35, 도식 5, "루트 A 를 통한 화학식 1 의 키랄 X-포스포네이트 잔기를 포함하는 핵산의 합성" 으로 나타냄), 이러한 일반적 개시는 본 발명에 의해 제공된 특정 P-개질을 설정하는데 필요한 특정 핵심 단계를 교시하지 않고, 특히 이러한 사이클이 키랄 제어된 P-개질 올리고뉴클레오티드 및 특히 더 긴 길이의 올리고뉴클레오티드의 합성에서 유용할 효능 및 다능성의 임의의 정도가 없다.
상기 와다 II 의 무효능 하나 이상은 WO2012/039448 에 Wada 등에 의해 나타나 있다 (본원에서 "와다 III"). 와다 IIII 은 구축되면 이후 개질되어 특히 포스포로티오에이트 등을 제공할 수 있는 H-포스포네이트 올리고뉴클레오티드를 제조하기 위한 와다 II 방법에서 사용하기 위한 신규 키랄 보조제를 교시하고 있다. 와다 등은 와다 II 에서 개시된 키랄 보조제의 네 가지 유형이 연결 인에서 인과 강한 결합을 형성하고 이에 따라 효과적인 제거를 허용하지 않는다는 것을 와다 III 에서 관찰한다. 와다 III 은 와다 II 키랄 보조제의 제거가 그 조건이 생성물 올리고뉴클레오티드의 완전성을 절충시키기 쉬운 가혹한 조건을 필요로 한다는 것을 나타낸다. 와다 III 은 적어도 이것이 특히 분해 반응(들) 이 진행되므로, 생성물 올리고뉴클레오티드와 추가 반응하고 이를 분해할 수 있는 추가 부산물이 생성된다는 이유로 긴 사슬 올리고뉴클레오티드를 합성할 때 특히 문제가된다는 것을 관찰한다. 따라서, 와다 III 은 H-포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결 (경로 B) 을 방출하는 SN1 메카니즘의 예로써 온건한 산성 조건 하에, 또는 β-제거 경로에 의한 비교적 온건한 염기성 조건 하에 올리고뉴클레오티드로부터 더 효과적으로 분해될 수 있는 키랄 보조제를 제공한다.
화학 및 합성 분야의 당업자는 생성된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 예컨대 본 발명에 의해 제공된 것과 결부된 착물을 즉시 알아볼 것이다. 예를 들어, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 합성 및 단리하기 위해, (1) 화학이 성장하는 올리고뉴클레오티드의 모든 부분과 상용성이고; (2) 각각의 단량체 부가 동안 생성된 부산물은 성장하는 올리고뉴클레오티드의 구조적 및 입체화학적 완전성을 절충시키지 않고; (3) 미정제 최종 생성물 조성물은 원하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 생성물의 단리를 허용하는 조성물인 각각의 단량체 부가를 위한 조건이 고안되어야 한다.
올리고뉴클레오티드 포스포로티오에이트는 치료적 잠재력을 나타냈다 (Stein et al., Science (1993), 261:1004-12; Agrawal et al., Antisence Res. and Dev. (1992), 2:261-66; Bayever et al., Antisense Res. and Dev. (1993), 3:383-390). 포스포로티오에이트의 입체화학과 관련 없이 제조된 올리고뉴클레오티드 포스포로티오에이트는 2n 부분입체 이성질체의 혼합물로서 존재하고, 여기서 n 은 뉴클레오티드 간 포스포로티오에이트 연결이다. 이러한 부분입체 이성질체 포스포로티오에이트의 화학적 및 생물학적 특성은 구별될 수 있다. 예를 들어, Wada 등 (Nucleic acids Symposium Series No. 51 p. 119-120; doi:10.1093/nass/nrm060) 은 입체정의된-(Rp)-(Ups)9U/(Ap)9A 이중이 자연적- (Up)9U/(Ap)9A 의 것보다 높은 Tm 값을 나타내고 입체 정의된-(Sp)-(Ups)9U 가 이중을 형성하지 않는다는 것을 밝혀냈다. 또다른 예에서, Tang 등에 의한 연구 (Nucleosides Nucleotides (1995), 14:985-990) 에 있어서, 입체순수 Rp-올리고데옥시리보뉴클레오시드 포스포로티오에이트는 비정의된 인 키랄성을 갖는 모 올리고데옥시리보뉴클레오시드 포스포로티오에이트인 인간 혈청에 대해 더 낮은 내생성 뉴클레아제에 대한 안정성을 갖는다는 것이 밝혀졌다.
키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물
본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 및 높은 미정제 순도 및 높은 부분입체 순도인 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드, 및 높은 미정제물 순도인 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 및 높은 부분입체 이성질체 순도인 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 유형의 올리고뉴클레오티드 다수를 포함하는 키랄 제어된 조성물을 제공하고, 여기서 각각의 유형은 하기에 의해 정의된다: 1) 염기 서열; 2) 백본 연결의 패턴; 3) 백본 키랄 중심의 패턴; 및 4) 백본 P-개질의 패턴.
일부 구현예에서, 본 발명은 동일한 유형의 올리고뉴클레오티드 다수를 포함하는 키랄 제어 조성물을 제공하고, 여기서 각각의 유형은 하기에 의해 정의된다: 1) 염기 서열; 2) 백본 연결의 패턴; 3) 백본 키랄 중심의 패턴; 4) 백본 P-개질의 패턴. 일부 구현예에서, 본 발명은 둘 이상의 유형의 올리고뉴클레오티드 다수를 포함하는 키랄 제어 조성물을 제공하고, 여기서 각각의 유형은 하기에 의해 정의된다: 1) 염기 서열; 2) 백본 연결의 패턴; 3) 백본 키랄 중심의 패턴; 및 4) 백본 P-개질의 패턴.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 연결 인에 대하여 하나 이상의 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 구조를 갖는 하나 이상의 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 연결 인에 대해 하나 이상의 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 구조를 갖는 하나 이상의 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결, 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I-c 의 구조를 갖는 하나 이상의 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결, 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 본 출원에서 기재된 바와 같이 입체 선택적 올리고뉴클레오티드 합성에 의해 제조되어, 키랄 연결 인에 대하여 사전-고안된 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 형성한다. 예를 들어, (Rp/Sp, Rp/Sp, Rp/Sp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGs1Cs1As1CsC] 의 한 예시적 올리고뉴클레오티드에서, 처음 3 개의 뉴클레오티드 간 연결은 전통적 올리고뉴클레오티드 합성 방법을 사용하여 구축되고, 부분입체 이성질체적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결은 본 출원에 기재된 입체화학적 제어에 의해 구축된다. 화학식 I 의 구조를 갖는 것을 포함하여 예시적 튜클레오티드 간 연결은 아래 추가 기재된다. 일부 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 제한 없이 표 2 및 4 및 부록 A, B 및 C 에 기재된 것을 포함하여, 출원에 추가 기재된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 연결 인에서 키랄성에 대하여 입체순수 및 입체 무작위 뉴클레오티드 간 연결의 조합을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 제공된 올리고뉴클레오티드는 연결 인에서의 키랄성에 대해 입체순수 및 입체 무작위 뉴클레오티드 간 연결의 조합을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 연결 인에서의 키랄성에 대하여 다르게는 입체 무작위인 올리고뉴클레오티드 내의 하나 이상의 입체 정의된 뉴클레오티드 간 연결의 블록을 갖는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 연결 인에서의 키랄성에 대해 다르게는 입체 정의된 올리고뉴클레오티드 내의 입체 무작위인 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결의 블록을 갖는 것이 바람직하다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 뉴클레오티드 단위는 본 출원에 기재된 바와 같이 입체 선택적 올리고뉴클레오티드 합성을 사용하여 설정되어, 키랄 연결 인에 대해 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 형성한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 둘 이상의 뉴클레오티드 단위는 본 출원에 기재된 바와 같이 입체 선택적 올리고뉴클레오티드 합성을 사용하여 설정되어, 키랄 연결 인에 대하여 둘 이상의 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 형성한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 3 개 이상의 뉴클레오티드 단위는 본 출원에 기재된 바와 같이 입체 선택적 올리고뉴클레오티드 합성을 사용하여 설정되어, 키랄 연결 인에 대해 3 개 이상의 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 형성한다. 일부 구현예에서, 적어도 1, 2 또는 3 개의 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결은 서로 인접한다. 일부 구현예에서, 적어도 1, 2 또는 3 개의 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결은 서로 인접하지 않는다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 의 뉴클레오티드 단위는 본 출원에 기재된 바와 같이 입체 선택적 올리고뉴클레오티드 합성을 사용하여 설정되어, 키랄 연결 인에 대해 사전-고안된 부분입체 화학적으로 순수한 뉴클레오티드 간 연결을 형성한다. 본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서 뉴클레오티드 단위의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 는 하나 이상의 블록에서 발생하여, 블록머를 제공한다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 단위의 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 는 교대 패턴에서 발생하여, 알트머를 제공한다. 관련 업계의 당업자는 임의의 원하는 패턴이 본 발명의 방법을 사용하여 달성될 수 있고 본원에서 고려된다는 것을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대해 상이한 입체화학 및/또는 상이한 P-개질을 갖는다. 특정 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 둘 이상의 개별적 뉴클레오티드 간 연결은 서로에 대해 상이한 P-개질을 갖는다. 특정 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대해 상이한 P-개질을 갖고, 여기서 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대해 상이한 P-개질을 갖고, 여기서 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대해 상이한 P-개질을 갖고, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대해 상이한 P-개질을 갖고, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 하나 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명은 독립적으로 하기 화학식 I 의 구조를 갖는 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00007
[식 중, 각각의 변수는 하기 정의 및 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 개질된 뉴클레오티드 간 연결 하나 이상을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 화학식 I 의 개별적 뉴클레오티드 간 연결은 서로에 대한 상이한 P-개질을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 개질된 뉴클레오티드 간 연결 하나 이상을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 화학식 I 의 개별적 뉴클레오티드 간 연결은 서로에 대해 상이한 -X-L-R1 을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 개질된 뉴클레오티드 간 연결 하나 이상을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 화학식 I 의 개별적 뉴클레오티드 간 연결은 서로에 대해 상이한 X 를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 I 의 개질된 뉴클레오티드 간 연결 하나 이상을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 화학식 I 의 개별적 뉴클레오티드 간 연결은 서로에 대해 상이한 -L-R1 를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상이 상이한 입체 화학 및/또는 서로에 대한 상이한 P-개질을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상은 서로에 대한 상이한 입체화학을 갖고, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드의 구조의 일부 이상은 교대 입체화학의 반복 패턴에 의해 특징지어진다.
일부 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결의 둘 이상이 서로에 대한 상이한 P-개질을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 이는 그 -XLR1 잔기에 상이한 X 원자를 갖고/거나 이는 그 -XLR1 잔기에 상이한 L 기를 갖고/거나 이는 그 -XLR1 잔기에 상이한 R1 원자를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 내의 개별적 뉴클레오티드 간 연결 둘 이상은 상이한 입체 화학 및/또는 서로에 대한 상이한 P-개질을 갖고 올리고뉴클레오티드는 하기 화학식으로 나타낸 구조를 갖는다:
[SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny]
[식 중:
각각의 RB 는 독립적으로 연결 인에 R 배열을 갖는 뉴클레오티드 단위의 블록을 나타내고;
각각의 SB 는 독립적으로 연결 인에 S 배열을 갖는 뉴클레오티드 단위의 블록을 나타내고;
각각의 n1-ny 는 0 또는 정수이고, 단 하나 이상의 홀수 n 및 하나 이상의 짝수 n 은 올리고뉴클레오티드가 서로에 대해 상이한 입체 화학을 갖는 둘 이상의 개별적 뉴클레오티드 간 연결을 포함하도록 0 이 아니어야 하고;
여기서 n1-ny 의 합은 2 내지 200 이고, 일부 구현예에서는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 또는 그 이상으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하한과 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 및 200 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 상한 사이에 있고, 상한은 하한보다 더 큼].
일부 상기 구현예에서, 각각의 n 은 동일한 값을 갖고; 일부 구현예에서, 각각의 짝수 n 은 각각의 다른 짝수 n 과 동일한 값을 갖고; 일부 구현예에서, 각각의 홀수 n 은 각각의 다른 홀수 n 과 동일한 값을 갖고; 일부 구현예에서, 둘 이상의 짝수 ns 는 서로 상이한 값을 갖고; 일부 구현예에서, 둘 이상의 홀수 ns 는 서로 상이한 값을 갖는다.
일부 구현예에서, 둘 이상의 인접한 ns 는 서로 동일하여, 제공된 올리고뉴클레오티드는 동일한 길이의 R 입체화학 연결 및 S 입체화학 연결의 인접한 블록을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 동일한 길이의 S 및 R 입체화학 연결의 반복 블록을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 S 및 R 입체화학 연결의 반복 블록을 포함하고, 여기서 둘 이상의 상기 블록은 서로 상이한 길이이고; 일부 상기 구현예에서 각각의 S 입체화학 블록은 동일한 길이이고, 각각의 R 입체화학 길이와 상이한 길이이고, 이는 임의로 서로 동일한 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 둘 이상의 스킵-인접 ns 는 서로 동일하여, 제공된 올리고뉴클레오티드는 서로에 대한 길이가 동일하고 다른 입체화학의 연결의 블록에 의해 분리되는 제 1 입체화학의 연결의 둘 이상의 블록을 포함하고, 이 분리 블록은 제 1 입체화학의 블록과 동일한 길이 또는 상이한 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 말단에서 연결 블록과 관련된 ns 는 동일한 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 동일한 연결 입체화학의 말단 블록을 갖는다. 일부 상기 구현예에서, 말단 블록은 다른 연결 입체화학의 중간 블록에 의해 서로 분리된다.
일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체블록머이다. 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체스킵머이다. 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체알트머이다. 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 갭머이다.
일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 상기 기재된 패턴 중 임의의 것이고 추가로 P-개질의 패턴을 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체스킵머 및 P-개질 스킵머이다. 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체블록머 및 P-개질 알트머이다. 일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체알트머이고 P-개질 블록머이다.
일부 구현예에서, 화학식 [SBn1RBn2SBn3RBn4...SBnxRBny] 의 제공된 올리고뉴클레오티드는 독립적으로 하기 화학식 I 의 구조를 갖는 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드이다:
Figure 112015015568410-pct00008
[식 중:
P* 는 비대칭 인 원자이고 Rp 또는 Sp 이고;
W 는 O, S 또는 Se 이고;
X, Y 및 Z 각각은 독립적으로 -O- -S- -N(-L-R1)- 또는 L 이고;
L 은 공유 결합 또는 임의 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2- -Cy- -O- -S- -S-S- -N(R')-, -C(O)- -C(S)- -C(NR')- -C(O)N(R')- -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O- -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 치환되고;
R1 은 할로겐, R 또는 임의 치환 C1-C50 지방족이고, 여기서, 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고;
각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나:
동일한 질소 상의 두 개의 R' 은 그 개입 원자와 함께 취해져서 임의 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나,
동일한 탄소 상의 두 개의 R' 은 그 개입 원자와 함께 취해져서, 임의 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭, 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
-Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의 치환 2가 고리이고;
각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환 기이고;
각각의
Figure 112015015568410-pct00009
은 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타냄].
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드 간 인 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 포스포로티오에이트 또는 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 둘 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 셋 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 넷 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 다섯 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 상기 개질된 뉴클레오티드 간 인 연결은 본원에 추가 기재된다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 상이한 뉴클레오티드 간 인 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 하나 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 둘 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 셋 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 넷 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 다섯 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함한다. 예시적 상기 개질된 뉴클레오티드 간 인 연결은 본원에 추가 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결은 키랄 보조제를 포함하고, 이는 예를 들어 반응의 입체 선택성을 제어하는데 사용된다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결은 키랄 보조제를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결은 대상체에 투여될 때까지 및/또는 그 동안에 의도적으로 유지된다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 고체 지지체에 연결된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 고체 지지체로부터 분해된다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 둘 이상의 연속 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 둘 이상의 연속 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 블록머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 입체블록머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 P-개질 블록머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 연결 블록머이다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 알트머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 입체알트머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 P-개질 알트머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 연결 알트머이다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 유니머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 입체유니머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 P-개질 유니머이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 연결 유니머이다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 갭머이다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 스킵머이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 독립적으로 하기 화학식 I 의 구조를 갖는 개질된 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00010
[식 중:
P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
W 는 O, S 또는 Se 이고;
각각의 X, Y 및 Z는 독립적으로 -O-, -S-, -N(-L-R1)- 또는 L 이고;
L 은 공유 결합 또는 임의 치환 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')- -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S- -OC(O)- 또는 -C(O)O 로 치환되고;
R1 은 할로겐, R 또는 임의 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고;
각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이고, 또는:
동일한 질소 상의 두 개의 R' 은 이의 개입 원자와 함께 취해져 임의 치환 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나,
동일한 탄소 상의 두 개의 R' 은 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭, 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
-Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의 치환 2가 고리이고;
각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환된 기이고;
각각의
Figure 112015015568410-pct00011
은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타냄].
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, P* 는 비대칭 인 원자이고 Rp 또는 Sp 이다. 일부 구현예에서 P* 는 Rp 이다. 다른 구현예에서, P* 는 Sp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 여기서 각각의 P* 는 독립적으로 Rp 또는 Sp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 여기서 각각의 P* 는 Rp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 여기서 각각의 P* 는 Sp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 여기서 P* 는 Rp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 여기서 P* 는 Sp 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, P* 는 Rp 임) 및 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, P* 는 Sp 임) 을 포함한다.
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, W 는 O, S 또는 Se 이다. 일부 구현예에서, W 는 O 이다. 일부 구현예에서, W 는 S 이다. 일부 구현예에서, W 는 Se 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, W 는 O 임) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, W 는 S 임) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, W 는 Se 임) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (식 중, W 는 Se 임) 을 포함한다.
상기 및 본원에서 일반적으로 정의된 바와 같이, 각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환 기이다.
일부 구현예에서, R 은 수소이다. 일부 구현예에서, R 은 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환 기이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 C1-C6 지방족이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 헥실이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 펜틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 부틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 프로필이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 에틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 메틸이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, R 은 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, R 은 페닐이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 C3-C10 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 모노시클릭 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 시클로헵틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 시클로헥실이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 시클로펜틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 시클로부틸이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 시클로프로필이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 바이시클릭 카르보시클릴이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 아릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 바이시클릭 아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 황 또는 산소로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 치환된 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 황 또는 산소로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 비치환 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 선택되는 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 피롤릴, 푸라닐 또는 티에닐로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R 은 1 개의 질소 원자, 및 황 또는 산소로부터 선택되는 추가 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 헤테로아릴 고리이다. 예시적 R 기는 임의 치환된 피라졸릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴 또는 이속사졸릴을 포함한다.
일부 구현예에서, R 은 1-3 개의 질소 원자를 갖는 6-원 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R 은 1-2 개의 질소 원자를 갖는 임의 치환 6-원 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 2 개의 질소 원자를 갖는 임의 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R 은 1 개의 질소를 갖는 임의 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다. 예시적 R 기는 임의 치환된 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐 또는 테트라지닐을 포함한다.
특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 8-10 원 바이시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합된 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 인돌릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 아자바이시클로[3.2.1]옥타닐이다. 특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 벤즈이미다졸릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 벤조티아졸릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 벤즈옥사졸릴이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 인다졸릴이다. 특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다.
특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 퀴놀리닐이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 이소퀴놀리닐이다. 한 양상에 따르면, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 퀴나졸린 또는 퀴녹살린이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 치환된 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 비치환된 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 2 개의 산소 원자를 갖는 임의 치환된 6 원 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 특정 구현예에서, R 은 옥시라닐, 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 옥세파네일, 아지리디네일, 아제티디네일, 피롤리디닐, 피페리디닐, 아제파닐, 티이라닐, 티에타닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로티오피라닐, 티에파닐 디옥솔라닐, 옥사티올라닐, 옥사졸리디닐, 이미다졸리디닐, 티아졸리디닐, 디티올라닐, 디옥사닐, 모르폴리닐, 옥사티아닐, 피페라지닐, 티오모르폴리닐, 디티아닐, 디옥세파닐, 옥사제파닐, 옥사티에파닐 디티에파닐 디아제파닐, 디히드로푸라노닐, 테트라히드로피라노닐, 옥세파노닐, 피롤리디노닐, 피페리디노닐, 아제파노닐, 디히드로티오페노닐, 테트라히드로티오피라노닐, 티에파노닐, 옥사졸리디노닐, 옥사지나노닐, 옥사제파노닐, 디옥솔라노닐, 디옥사노닐, 디옥세파노닐, 옥사티올리노닐, 옥사티아노닐, 옥사티에파노닐, 티아졸리디노닐, 티아지나노닐, 티아제파노닐, 이미다졸리디노닐, 테트라히드로피리미디노닐, 디아제파노닐, 이미다졸리딘디오닐, 옥사졸리딘디오닐, 티아졸리딘디오닐, 디옥솔란디오닐, 옥사티올란디오닐, 피페라진디오닐, 모르폴린디오닐, 티오모르폴린디오닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 테트라히드로티오페닐, 또는 테트라히드로티오피라닐이다. 일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
특정 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-6 원 일부 불포화 모노시클릭 고리이다. 특정 구현예에서, R 은 임의 치환된 테트라히드로피리디닐, 디히드로티아졸릴, 디히드로옥사졸릴, 또는 옥사졸리닐 기이다.
일부 구현예에서, R 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 8-10 원 바이시클릭 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 인돌리닐이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 이소인돌리닐이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 1, 2, 3, 4-테트라히드로퀴놀린이다. 일부 구현예에서, R 은 임의 치환된 1, 2, 3, 4-테트라히드로이소퀴놀린이다.
상기 및 본원에서 일반적으로 정의된 바와 같이, 각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나:
동일한 질소 상의 두 개의 R' 는 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나,
동일한 탄소 상의 두 개의 R' 는 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭, 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다.
일부 구현예에서, R' 는 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이고, 여기서 R 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, R' 는 -R 이고, 여기서 R 은 상기 및 본원에 정의 및 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R' 는 수소이다.
일부 구현예에서, R' 는 -C(O)R이고, 여기서 R 은 상기 정의 및 본원에서 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R' 는 -CO2R 이고, 여기서 R 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R' 는 -SO2R 이고, 여기서 R 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 동일한 질소 상의 두 개의 R' 은 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다. 일부 구현예에서, 동일한 탄소 상의 두 R' 는 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성한다.
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, -Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의 치환된 2가 고리이다.
일부 구현예에서, -Cy- 는 임의 치환된 페닐렌이다. 일부 구현예에서, -Cy- 는 임의 치환된 카르보시클릴렌이다. 일부 구현예에서, -Cy- 는 임의 치환된 아릴렌이다. 일부 구현예에서, -Cy- 는 임의 치환된 헤테로아릴렌이다. 일부 구현예에서, -Cy- 는 임의 치환된 헤테로시클릴렌이다.
상기 및 본원에 일반적으로 정의된 바와 같이, X, Y 및 Z 각각은 독립적으로 -O- -S- -N(-L-R1)- 또는 L 이고, 여기서 L 및 R1 각각은 독립적으로 상기 정의 및 하기 기재되는 바와 같다.
일부 구현예에서, X 는 -O- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -S- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -O- 또는 -S- 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서 X 는 -O- 임) 을 포함하고, 일부 구현예에서 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, X 는 -S- 임) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, X 는 -O- 임) 및 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, X 는 -S- 임) 을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, X 는 -O- 임) 및 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, X 는 -S- 임) 및 하나 이상의 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결 (여기서, L 은 임의 치환된 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 L 의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2- -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 으로 대체됨) 을 포함한다.
일부 구현예에서, X 는 -N(-L-R1)- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -N(R1)- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -N(R')- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -N(R)- 이다. 일부 구현예에서, X 는 -NH- 이다.
일부 구현예에서, X 는 L 이다. 일부 구현예에서, X 는 공유 결합이다. 일부 구현예에서, X 는 임의 치환된 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체된다. 일부 구현예에서, X 는 임의 치환된 C1-C10 알킬렌 또는 C1-C10 알케닐렌이다. 일부 구현예에서, X 는 메틸렌이다.
일부 구현예에서, Y 는 -O- 이다. 일부 구현예에서, Y 는 -S- 이다.
일부 구현예에서, Y 는 -N(-L-R1)- 이다. 일부 구현예에서, Y 는 -N(R1)- 이다. 일부 구현예에서, Y 는 -N(R')- 이다. 일부 구현예에서, Y 는 -N(R)- 이다. 일부 구현예에서, Y 는 -NH- 이다.
일부 구현예에서, Y 는 L 이다. 일부 구현예에서, Y 는 공유 결합이다. 일부 구현예에서, Y 는 임의 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 L 의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2- -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체된다. 일부 구현예에서, Y 는 임의 치환된 C1-C10 알킬렌 또는 C1-C10 알케닐렌이다. 일부 구현예에서, Y 는 메틸렌이다.
일부 구현예에서, Z 는 -O- 이다. 일부 구현예에서, Z 는 -S- 이다.
일부 구현예에서, Z 는 -N(-L-R1)- 이다. 일부 구현예에서, Z 는 -N(R1)- 이다. 일부 구현예에서, Z 는 -N(R')- 이다. 일부 구현예에서, Z 는 -N(R)- 이다. 일부 구현예에서, Z 는 -NH- 이다.
일부 구현예에서, Z 는 L 이다. 일부 구현예에서, Z 는 공유 결합이다. 일부 구현예에서, Z 는 임의 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 L 의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2- -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체된다. 일부 구현예에서, Z 는 임의 치환된 C1-C10 알킬렌 또는 C1-C10 알케닐렌이다. 일부 구현예에서, Z 는 메틸렌이다.
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, L 은 공유 결합 또는 임의 치환된 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 L 의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체된다.
일부 구현예에서, L 은 공유 결합이다. 일부 구현예에서, L 은 임의 치환된 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체된다.
일부 구현예에서, L 은 하기와 같은 -L1-V- 의 구조를 갖는다:
L1 은
Figure 112015015568410-pct00012
Figure 112015015568410-pct00013
, C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, C1-C6 헤테로알킬렌, 헤테로시클릴렌, 및 헤테로아릴렌으로부터 선택되는 임의 치환된 기이고;
V 는 -O-, -S-, -NR'-, C(R')2, -S-S-, -B-S-S-C-,
Figure 112015015568410-pct00014
, 또는 C1-C6 알킬렌, 아릴렌, C1-C6 헤테로알킬렌, 헤테로시클릴렌, 및 헤테로아릴렌으로부터 선택되는 임의 치환 기로부터 선택되고;
A 는 =O, =S, =NR', 또는 =C(R')2 이고;
각각의 B 및 C 는 독립적으로 -O-, -S-, -NR'-, -C(R')2- 또는 C1-C6 알킬렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로시클릴렌, 또는 헤테로아릴렌으로부터 선택되는 임의 치환된 기이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음.
일부 구현예에서, L1 은
Figure 112015015568410-pct00015
이다.
일부 구현예에서, L1 은
Figure 112015015568410-pct00016
이고, 여기서 고리 Cy' 는 임의 치환된 아릴렌, 카르보시클릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌이다. 일부 구현예에서, L1 은 임의 치환된
Figure 112015015568410-pct00017
이다. 일부 구현예에서, L1 은
Figure 112015015568410-pct00018
이다.
일부 구현예에서, L1 은 X 에 연결된다. 일부 구현예에서, L1 은
Figure 112015015568410-pct00019
로부터 선택되는 임의 치환된 기이고, 황 원자는 V 에 연결된다. 일부 구현예에서, L1 은
Figure 112015015568410-pct00020
로부터 선택되는 임의 치환된 기이고, 탄소 원자는 X 에 연결된다.
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00021
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고;
Figure 112015015568410-pct00022
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 탄소 원자 두 개와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고; 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00023
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
Figure 112015015568410-pct00024
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 탄소 원자 두 개와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성함].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00025
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'-, 또는 -C(R')2- 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00026
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 임].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00027
[식 중:
E 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00028
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 임].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00029
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고;
Figure 112015015568410-pct00030
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 두 탄소 원자와 함께 취해져, 임의로 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00031
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
Figure 112015015568410-pct00032
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 두 탄소 원자와 함께 취해져, 임의로 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00033
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00034
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00035
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00036
[식 중:
G 는 -O- -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00037
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R')2- 이고;
Figure 112015015568410-pct00038
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 두 탄소 원자와 함께 취해져서, 임의로 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고; 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00039
[식 중:
G 는 -O- -S- 또는 -NR' 이고;
Figure 112015015568410-pct00040
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 두 탄소 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고; 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00041
[식 중:
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R')2- 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00042
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
R' 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00043
E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00044
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
D 는 =N-, =C(F)-, =C(Cl)-, =C(Br)-, =C(I)-, =C(CN)-, =C(NO2)-, =C(CO2-(C1-C6 지방족))- 또는 =C(CF3)- 이고;
R' 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00045
[식 중, 페닐 고리는 임의 치환됨].
일부 구현예에서, 페닐 고리는 치환되지 않는다. 일부 구현예에서, 페닐 고리는 치환된다.
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00046
[식 중, 페닐 고리는 임의 치환됨].
일부 구현예에서, 페닐 고리는 치환되지 않는다. 일부 구현예에서, 페닐 고리는 치환된다.
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00047
[식 중:
Figure 112015015568410-pct00048
은 단일 또는 이중 결합이고;
두 RL1 은 이들이 결합되는 2 개의 탄소 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성함].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00049
[식 중:
G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고;
Figure 112015015568410-pct00050
은 단일 또는 이중 결합이고;
RL1 은 이들이 결합되는 두 탄소 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, C3-C10 카르보시클릭, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릭 고리를 형성함].
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, E 는 -O-, -S-, -NR'- 또는 -C(R)2- 이고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, E 는 -O-, -S- 또는 -NR'- 이다. 일부 구현예에서, E 는 -O-, -S- 또는 -NH- 이다. 일부 구현예에서, E 는 -O- 이다. 일부 구현예에서, E 는 -S- 이다. 일부 구현예에서, E 는 -NH- 이다.
일반적으로 상기 및 본원에서 정의된 바와 같이, G 는 -O-, -S- 또는 -NR' 이고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, G 는 -O-, -S- 또는 -NH- 이다. 일부 구현예에서, G 는 -O- 이다. 일부 구현예에서, G 는 -S- 이다. 일부 구현예에서, G 는 -NH- 이다.
일부 구현예에서, L 은 하기와 같은 -L3-G- 이다:
L3 은 임의 치환된 C1-C5 알킬렌 또는 알케닐렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -O-, -S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -S(O)-, -S(O)2- 또는
Figure 112015015568410-pct00051
로 대체되고;
각각의 G, R' 및 고리 Cy' 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음.
일부 구현예에서, L 은 -L3-S- 이고, 여기서 L3 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은 -L3-O- 이고, 여기서 L3 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은 -L3-N(R')- 이고, 여기서 각각의 L3 및 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은 -L3-NH- 이고, 여기서 각각의 L3 및 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, L3 은 임의 치환된 C5 알킬렌 또는 알케닐렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -O-, -S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -S(O)-, -S(O)2- 또는
Figure 112015015568410-pct00052
로 대체되고, 각각의 R' 및 고리 Cy' 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L3 은 임의 치환된 C5 알킬렌이다. 일부 구현예에서, -L3-G- 은
Figure 112015015568410-pct00053
이다.
일부 구현예에서, L3 은 임의 치환된 C4 알킬렌 또는 알케닐렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -O-, -S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -S(O)-, -S(O)2- 또는
Figure 112015015568410-pct00054
로 대체되고, 각각의 R' 및 Cy' 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L3-G- 은
Figure 112015015568410-pct00055
이다.
일부 구현예에서, L3 은 임의 치환된 C3 알킬렌 또는 알케닐렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -O- -S--N(R')- -C(O)- -C(S)- -C(NR')- -S(O)- -S(O)2- 또는
Figure 112015015568410-pct00056
로 대체되고, R' 및 Cy' 각각은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L3-G- 은
Figure 112015015568410-pct00057
이다.
일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00058
이다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00059
이다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00060
이다.
일부 구현예에서, L3 은 임의로 치환된 C2 알킬렌 또는 알케닐렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -O-, -S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -S(O)-, -S(O)2- 또는
Figure 112015015568410-pct00061
로 대체되고, 각각의 R' 및 Cy' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L3-G- 은
Figure 112015015568410-pct00062
이고, 여기서 각각의 G 및 Cy' 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00063
이다.
일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 임의 치환된 C1-C2 알킬렌이고; G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 임의 치환된 C1-C2 알킬렌이고; G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고; G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 임의 치환된 메틸렌이고; G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와같고; G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 메틸렌이고; G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고; G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 임의 치환된 -(CH2)2- 이고, G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고; G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은 -L4-G- 이고, 여기서 L4 는 -(CH2)2- 이고; G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고; G 는 R1 에 연결된다.
일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00064
이고, 여기서 G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고, G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00065
이고, 여기서 G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고, G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00066
이고, 여기서 G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같고, G 는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00067
이고, 여기서 황 원자는 R1 에 연결된다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00068
이고, 여기서 산소 원자는 R1 에 연결된다.
일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00069
이고, 여기서 G 는 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의로 치환된 선형 또는 분지형, C1-C9 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2- -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2- -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 여기서 각각의 R' 및 -Cy- 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의 치환된 C1-C6 알킬렌이다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의 치환된 C1-C6 알케닐렌이다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의 치환된 C1-C6 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알케닐렌, 아릴렌, 또는 헤테로아릴렌으로 대체된다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, RL3 은 임의 치환된 -S-(C1-C6 알케닐렌)-, -S-(C1-C6 알킬렌)-, -S-(C1-C6 알킬렌)-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)-, -S-CO-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)- 또는 -S-CO-(C1-C6 알킬렌)-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)- 이다.
일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00070
이다.
일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00071
이다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00072
이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00073
.
일부 구현예에서, 상기 및 본원에 기재된 L 구현예에서 황 원자는 X 에 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 및 본원에 기재된 L 구현예에서 황 원자는 R1 에 연결된다.
일반적으로 상기 및 본원에 정의된 바와 같이, R1 은 할로겐, R 또는 임의 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 할로겐, R 또는 임의 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, R1 은 수소이다. 일부 구현예에서, R1 은 할로겐이다. 일부 구현예에서, R1 은 -F 이다. 일부 구현예에서, R1 은 -Cl 이다. 일부 구현예에서, R1 은 -Br 이다. 일부 구현예에서, R1 은 -I 이다.
일부 구현예에서, R1 은 R 이고, 여기서 R 은 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, R1 은 수소이다. 일부 구현예에서, R1 은 C1-C50 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환 기이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C50 지방족이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C10 지방족이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C6 지방족이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 헥실이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 펜틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 부틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된, 선형 또는 분지형 프로필이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 에틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 메틸이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 페닐이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C3-C10 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 모노시클릭 카르보시클릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 시클로헵틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 시클로헥실이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 시클로펜틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 시클로부틸이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 시클로프로필이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 바이시클릭 카르보시클릴이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C50 폴리시클릭 탄화수소이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C50 폴리시클릭 탄화수소이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 여기서 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된
Figure 112015015568410-pct00074
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00075
이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된
Figure 112015015568410-pct00076
이다.
일부 구현예에서, R1 은 하나 이상의 임의 치환된 폴리시클릭 탄화수소 잔기를 포함하는 임의 치환된 C1-C50 지방족이다. 일부 구현예에서, R1 은 하나 이상의 임의 치환된 폴리시클릭 탄화수소 잔기를 포함하는 임의 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 으로 대체되고, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 하나 이상의 임의 치환된
Figure 112015015568410-pct00077
를 포함하는 임의 치환된 C1-C50 지방족이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00078
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00079
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00080
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00081
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00082
이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 아릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 바이시클릭 아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 황 또는 산소로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 치환된 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 황, 또는 산소로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 비치환 5-6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다.
일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 선택되는 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 모노시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 피롤릴, 푸라닐, 또는 티에닐로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R1 은 1 개의 질소 원자 및 황 또는 산소로부터 선택되는 추가 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-원 헤테로아릴 고리이다. 예시적 R1 기는 임의 치환된 피라졸릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴 또는 이속사졸릴을 포함한다.
일부 구현예에서, R1 은 1 내지 3 개의 질소 원자를 갖는 6-원 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R1 은 1-2 개의 질소 원자를 갖는 임의 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 2 개의 질소 원자를 갖는 임의 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R1 은 1 개의 질소를 갖는 임의 치환된 6-원 헤테로아릴 고리이다. 예시적 R1 기는 임의 치환된 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 또는 테트라지닐을 포함한다.
특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 8-10 원 바이시클릭 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 인돌릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 아자바이시클로[3.2.1]옥타닐이다. 특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 아자인돌릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 벤즈이미다졸릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 벤조티아졸릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 벤즈옥사졸릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 인다졸릴이다. 특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 3 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5,6-융합 헤테로아릴 고리이다.
특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 다른 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 퀴놀리닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 이소퀴놀리닐이다. 한 양상에 따르면, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6,6-융합 헤테로아릴 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 퀴나졸린 또는 퀴녹살린이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 치환된 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 비치환 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 6 원 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 2 개의 산소 원자를 갖는 임의 치환된 6 원 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 3-7 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 특정 구현예에서, R1 은 옥시라닐, 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 옥세파네일, 아지리디네일, 아제티디네일, 피롤리디닐, 피페리디닐, 아제파닐, 티이라닐, 티에타닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로티오피라닐, 티에파닐 디옥솔라닐, 옥사티올라닐, 옥사졸리디닐, 이미다졸리디닐, 티아졸리디닐, 디티올라닐, 디옥사닐, 모르폴리닐, 옥사티아닐, 피페라지닐, 티오모르폴리닐, 디티아닐, 디옥세파닐, 옥사제파닐, 옥사티에파닐 디티에파닐 디아제파닐, 디히드로푸라노닐, 테트라히드로피라노닐, 옥세파노닐, 피롤리디노닐, 피페리디노닐, 아제파노닐, 디히드로티오페노닐, 테트라히드로티오피라노닐, 티에파노닐, 옥사졸리디노닐, 옥사지나노닐, 옥사제파노닐, 디옥솔라노닐, 디옥사노닐, 디옥세파노닐, 옥사티올리노닐, 옥사티아노닐, 옥사티에파노닐, 티아졸리디노닐, 티아지나노닐, 티아제파노닐, 이미다졸리디노닐, 테트라히드로피리미디노닐, 디아제파노닐, 이미다졸리딘디오닐, 옥사졸리딘디오닐, 티아졸리딘디오닐, 디옥솔란디오닐, 옥사티올란디오닐, 피페라진디오닐, 모르폴린디오닐, 티오모르폴린디오닐, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 테트라히드로티오페닐, 또는 테트라히드로티오피라닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5 원 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다.
특정 구현예에서, R1 은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-2 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 5-6 원 일부 불포화 모노시클릭 고리이다. 특정 구현예에서, R1 은 임의 치환된 테트라히드로피리디닐, 디히드로티아졸릴, 디히드로옥사졸릴 또는 옥사졸리닐 기이다.
일부 구현예에서, R1 은 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1-4 개의 헤테로원자를 갖는 임의 치환된 8-10 원 바이시클릭 포화 또는 일부 불포화 헤테로시클릭 고리이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 인돌리닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 이소인돌리닐이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 1, 2, 3, 4-테트라히드로퀴놀린이다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 1, 2, 3, 4-테트라히드로이소퀴놀린이다.
일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의로 -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 임의 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의로 -Cy- -O- -S- -S-S- -N(R')- -C(O)- -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00083
Figure 112015015568410-pct00084
이다.
일부 구현예에서, R1 은 CH3-,
Figure 112015015568410-pct00085
이다.
일부 구현예에서, R1 은 말단 임의 치환된 -(CH2)- 잔기를 포함하고, 이는 L 에 연결된다. 예시적 상기 R1 기는 아래 도시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00086
일부 구현예에서, R1 은 말단 임의 치환 -(CH2)- 잔기를 포함하고, 이는 L 에 연결된다. 예시적 상기 R1 기는 아래 도시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00087
일부 구현예에서, R1 은 -S-RL2 이고, 여기서 RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2- -Cy- -O- -S- -S-S- -N(R')- -C(O)- -C(S)- -C(NR')- -C(O)N(R')- -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)- -N(R')C(O)O- -OC(O)N(R')-, -S(O)- -S(O)2- -S(O)2N(R')- -N(R')S(O)2- -SC(O)- -C(O)S- -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 R' 및 -Cy- 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 -S-RL2 이고, 여기서 황 원자는 L 기의 황 원자와 연결된다.
일부 구현예에서, R1 은 -C(O)-RL2 이고, 여기서 RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 으로 대체되고, 각각의 R' 및 -Cy- 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R1 은 -C(O)-RL2 이고, 카르보닐 기는 L 기의 G 와 연결된다. 일부 구현예에서, R1 은 -C(O)-RL2 이고, 카르보닐 기는 L 기의 황 원자와 연결된다.
일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 지방족이다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 알킬이다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 알케닐이다. 일부 구현예에서, RL2 는 임의 치환된 C1-C9 알키닐이다. 일부 구현예에서, RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -Cy- 또는 -C(O)- 로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -Cy- 로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 헤테로시클렌으로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 아릴렌으로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 헤테로아릴렌으로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C3-C10 카르보시클릴렌으로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 두 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -Cy- 또는 -C(O)- 로 대체된다. 일부 구현예에서, RL2 은 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 여기서 두 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 -Cy- 또는 -C(O)- 로 대체된다. 예시적 RL2 기는 아래 도시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00088
일부 구현예에서, R1 은 수소, 또는
Figure 112015015568410-pct00089
Figure 112015015568410-pct00090
, -S-( C1-C10 지방족), C1-C10 지방족, 아릴, C1-C6 헤테로알킬, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환 기이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00091
, 또는 -S-( C1-C10 지방족) 이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00092
이다.
일부 구현예에서, R1 은 -S-(C1-C6 지방족), C1-C10 지방족, C1-C6 헤테로지방족, 아릴, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴로부터 선택되는 임의 치환된 기이다.
일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00093
이다.
일부 구현예에서, 상기 및 본원에서 기재된 R1 구현예에서 황 원자는 상기 및 본원에서 기재된 L 구현예의 황 원자, G, E, 또는 -C(O)- 잔기와 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 및 본원에 기재된 R1 구현예의 -C(O)- 잔기는 상기 및 본원에서 기재된 L 구현예의 황 원자, G, E, 또는 -C(O)- 잔기와 연결된다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 상기 및 본원에 기재된 L 구현예 및 R1 구현예의 임의의 조합이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 각각의 변수가 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같은 -L3-G-R1 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 각각의 변수가 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같은 -L4-G-R1 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 각각의 변수가 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같은 -L3-G-S-RL2 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 각각의 변수가 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같은 -L3-G-C(O)-RL2 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은
Figure 112015015568410-pct00094
이고, 여기서 RL2 는 임의 치환된 C1-C9 지방족이고, 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)- -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되고, 각각의 G 는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 -RL3-S-S-RL2 이고, 여기서 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, -L-R1 은 -RL3-C(O)-S-S-RL2 이고, 여기서 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00095
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00096
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00097
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00098
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00099
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00100
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00101
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00102
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00103
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00104
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00105
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00106
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00107
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00108
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00109
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00110
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00111
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00112
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00113
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00114
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00115
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, L 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00116
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -X-L-R1 은 하기의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00117
[식 중:
페닐 고리는 임의 치환되고,
R1 및 X 각각은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00118
Figure 112015015568410-pct00119
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00120
일부 구현예에서, -L-R1 은 CH3-,
Figure 112015015568410-pct00121
이다. 일부 구현예에서, -L-R1 은
Figure 112015015568410-pct00122
이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 말단 임의 치환된 -(CH2)2- 잔기를 포함하고, 이는 X 에 연결된다. 일부 구현예에서, -L-R1 은 말단 -(CH2)2- 잔기를 포함하고, 이는 X 에 연결된다. 예시적 상기 -L-R1 은 아래 도시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00123
일부 구현예에서, -L-R1 은 말단 임의 치환된 -(CH2)- 잔기를 포함하고, 이는 X 에 연결된다. 일부 구현예에서, -L-R1 은 말단 -(CH2)- 잔기를 포함하고, 이는 X 에 연결된다. 예시적 상기 -L-R1 잔기는 아래 도시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00124
일부 구현예에서, -L-R1 은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00125
일부 구현예에서, -L-R1 은 CH3-,
Figure 112015015568410-pct00126
이고; X 은 -S- 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 CH3-,
Figure 112015015568410-pct00127
이고, X 는 -S- 이고, W 는 O 이고, Y 는 -O- 이고, Z 는 -O- 이다.
일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00128
, 또는 -S-(C1-C10 지방족) 이다.
일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00129
이다.
일부 구현예에서, X 는 -O- 또는 -S- 이고, R1 은
Figure 112015015568410-pct00130
, 또는 -S-( C1-C10 지방족) 이다.
일부 구현예에서, X 는 -O- 또는 -S- 이고, R1 은
Figure 112015015568410-pct00131
, -S-( C1-C10 지방족) 또는 -S-( C1-C50 지방족) 이다.
일부 구현예에서, L 은 공유 결합이고, -L-R1 은 R1 이다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 수소가 아니다.
일부 구현예에서, -X-L-R1 은 R1 은
Figure 112015015568410-pct00132
Figure 112015015568410-pct00133
, -S-( C1-C10 지방족) 또는 -S-( C1-C50 지방족) 이다.
일부 구현예에서, -X-L-R1 은
Figure 112015015568410-pct00134
의 구조를 갖고, 여기서
Figure 112015015568410-pct00135
잔기는 임의 치환된다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00136
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00137
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00138
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 은
Figure 112015015568410-pct00139
의 구조를 갖고, 여기서 X' 는 O 또는 S 이고, Y' 는 -O-, -S- 또는 -NR'- 이고,
Figure 112015015568410-pct00140
잔기는 임의 치환된다. 일부 구현예에서, Y' 는 -O-, -S- 또는 -NH- 이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00141
는
Figure 112015015568410-pct00142
이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00143
는
Figure 112015015568410-pct00144
이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00145
는
Figure 112015015568410-pct00146
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00147
의 구조를 갖고, 여기서 X' 는 O 또는 S 이고,
Figure 112015015568410-pct00148
잔기는 임의 치환된다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00149
는
Figure 112015015568410-pct00150
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00151
이고, 여기서
Figure 112015015568410-pct00152
는 임의 치환된다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00153
이고, 여기서
Figure 112015015568410-pct00154
는 치환된다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는
Figure 112015015568410-pct00155
이고, 여기서
Figure 112015015568410-pct00156
는 비치환된다.
일부 구현예에서, -X-L-R1 는 R1-C(O)-S-Lx-S- 이고, 여기서 Lx 은
Figure 112015015568410-pct00157
및
Figure 112015015568410-pct00158
로부터 선택되는 임의 치환된 기이다. 일부 구현예에서, Lx 는
Figure 112015015568410-pct00159
및
Figure 112015015568410-pct00160
이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는 (CH3)3C-S-S-Lx-S- 이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 는 R1-C(=X')-Y'-C(R)2-S-Lx-S- 이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 은 R-C(=X')-Y'-CH2-S-Lx-S- 이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 은
Figure 112015015568410-pct00161
이다.
당업자는 본원에 기재된 대다수의 -X-L-R1 기가 분해가능하고 대상체에 대한 투여 후에 -X- 로 전환될 수 있음을 이해할 것이다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 은 분해가능하다. 일부 구현예에서, -X-L-R1 은 -S-L-R1 이고, 대상체에 대한 투여 후에 -S- 로 전환된다. 일부 구현예에서, 전환은 대상체의 효소에 의해 촉진된다. 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, -S-L-R1 기가 투여 후에 -S- 로 전환되었는지를 측정하는 방법은 약물 대사 및 약물동력학의 연구에 사용되는 것을 포함하여 널리 공지되어 있고, 업계에서 실시되고 있다.
일부 구현예에서, 화학식 I 의 구조를 갖는 뉴클레오티드 간 연결은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00162
일부 구현예에서, 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결은 하기 화학식 I-a 의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00163
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결은 하기 화학식 I-b 의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00164
[식 중, 각각의 변수는 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음].
일부 구현예에서, 화학식 I 의 뉴클레오티드 간 연결은 하기 화학식 I-c 의 구조를 갖는 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결이다:
Figure 112015015568410-pct00165
[식 중:
P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
L 은 공유 결합 또는 임의 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고, 여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌,-C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되거나;
R1 은 할로겐, R, 또는 임의 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 및 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌,-C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 대체되거나;
각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나:
동일한 질소 상의 두 R' 은 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나,
동일한 탄소 상의 두 R' 은 이의 개입 원자와 함께 취해져, 임의 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭, 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
-Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의 치환된 2가 고리이고;
각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의 치환된 기이고;
각각의
Figure 112015015568410-pct00166
은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
R1 은 L 이 공유 결합인 경우 -H 가 아님].
일부 구현예에서, 화학식 I 의 구조를 갖는 뉴클레오티드 간 연결은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00167
Figure 112015015568410-pct00168
일부 구현예에서, 화학식 I-c 의 구조를 갖는 뉴클레오티드 간 연결은 하기이다:
Figure 112015015568410-pct00169
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함하고, 하나 이상의 화학식 I-a, I-b, 또는 I-c 를 갖는 뉴클레오티드 간 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 화학식 I-c 의 구조를 갖는 하나 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 화학식 I-c 의 구조를 갖는 둘 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 화학식 I-c 의 구조를 갖는 셋 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 화학식 I-c 의 구조를 갖는 넷 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드 간 연결 및 화학식 I-c 의 구조를 갖는 다섯 이상의 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 본 출원의 부록 중 임의의 것에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 A 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 B 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 C 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본 출원의 부록 중 임의의 것에서 발견되는 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 A 에서 발견되는 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 B 에서 발견되는 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 부록 C 에서 발견되는 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 50% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 60% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 70% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 80% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 90% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 상기 서열은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에 의해 95% 초과의 식별을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 키랄 연결 인을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00170
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00171
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00172
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 에서 발견되는 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00173
이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 키랄 연결 인을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00174
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00175
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00176
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00177
이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 키랄 연결 인을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은 화학식 I-c 의 구조를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00178
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00179
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00180
이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 뉴클레오티드 간 연결은
Figure 112015015568410-pct00181
이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 하나 이상의 연결 인은 Rp 이다. 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 RNA 서열을 포함하는 특정 구현예에서, 각각의 T 는 독립적으로 및 임의로 U 로 대체된다는 것이 당업자에 의해 이해된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 연결 인은 Rp 이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 연결 인은 Sp 이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 연결 인은 Sp 이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 블록머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 입체블록머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 P-개질 블록머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 연결 블록머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 알트머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 올리고뉴클레오티드는 입체알트머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 P-개질 알트머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 연결 알트머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 유니머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 입체유니머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 여기서 올리고뉴클레오티드는 P-개질 유니머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 연결 유니머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 갭머이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 올리고뉴클레오티드는 스킵머이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 시토신은 임의로 및 독립적으로 5-메틸시토신으로 대체된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 시토신은 임의로 및 독립적으로 5-메틸시토신으로 대체된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고, 여기서 각각의 시토신은 임의로 및 독립적으로 5-메틸시토신으로 대체된다. GCCTCAGTCTGCTTCGCACC 의 서열을 갖는 예시적 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 아래 표 2 에 도시되어 있다:
표 2. 예시적 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
Figure 112015015568410-pct00182
Figure 112015015568410-pct00183
Figure 112015015568410-pct00184
Figure 112015015568410-pct00185
Figure 112015015568410-pct00186
Figure 112015015568410-pct00187
Figure 112015015568410-pct00188
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 뉴클레오티드가 특정 조건 하에 "자동방출" 하기 쉬운 인 개질을 포함하도록 고안된다. 즉, 특정 조건 하에 특정 인 개질은 이것이 올리고뉴클레오티드로부터 자체-분해되어 예를 들어 포스페이트 디에스테르 예컨대 자연 발생 DNA 및 RNA 에서 발견되는 것을 산출하도록 고안된다. 일부 구현예에서, 상기 인 개질은 -O-L-R1 의 구조를 갖고, 여기서 각각의 L 및 R1 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 자동방출된 기는 모르폴리노 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 자동방출 기는 뉴클레오티드 간 인 링커에 작용제를 전달하는 능력에 의해 특징지어지고, 이 작용제는 인 원자의 추가 개질, 예를 들어 탈황화를 용이하게 한다. 일부 구현예에서, 작용제는 물이고 추가 개질은 자연 발생 DNA 및 RNA 에서 발견되는 포스페이트 디에스테르를 형성하기 위한 가수분해이다.
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 산출된 약학적 특성이 인에서의 하나 이상의 특정 개질을 통해 개선되도록 고안된다. 특정 올리고뉴클레오티드가 뉴클레아제에 의해 빠르게 분해되고 세포질 세포 막을 통한 불량한 세포 흡수를 나타낸다는 것은 당업계에 잘 기록되어 있다 (Poijarvi-Virta et al., Curr. Med. Chem. (2006), 13(28);3441-65; Wagner et al., Med. Res. Rev. (2000), 20(6):417-51; Peyrottes et al., Mini Rev. Med. Chem. (2004), 4(4):395-408; Gosselin et al., (1996), 43(1):196-208; Bologna et al., (2002), 안티센스 & 핵산 Drug Development 12:33-41). 예를 들어, Vives et al., (Nucleic Acids Research (1999), 27(20):4071-76) 은 tert-부틸 SATE 프로-올리고뉴클레오티드가 모 올리고뉴클레오티드에 비해 크게 증가된 세포 침투를 나타냄을 밝혀냈다.
일부 구현예에서, 연결 인에서의 개질은 제한 없이 아래 표 3 에 열거된 것을 포함하는, 하나 이상의 에스테라아제, 뉴클레아제 및/또는 시토크롬 P450 효소에 의해 포스페이트 디에스테르, 예컨대 자연 발생 DNA 및 RNA 에 존재하는 것으로 변형되는 이의 능력에 의해 특징지어진다.
표 3. 예시적 효소.
Figure 112015015568410-pct00189
Figure 112015015568410-pct00190
일부 구현예에서, 인에서의 개질은 이것이 전구-약물로서 작용하는 것을 특징으로 하는 P-개질 잔기를 산출하는데, 예를 들어 상기 P-개질 잔기는 제거 이전에 원하는 위치로의 올리고뉴클레오티드의 전달을 용이하게 한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, P-개질 잔기는 연결 인에서의 PEG화로부터 산출된다. 관련 업계의 당업자는 다양한 PEG 사슬 길이가 유용하고 사슬 길이의 선택이 PEG 화에 의해 달성되도록 추구되는 결과에 의해 일부 결정될 것임을 이해할 것이다. 예를 들어, 일부 구현예에서 PEG화가 영향을 받아, 올리고뉴클레오티드의 생체내 순환 수명을 연장시키고 RES 흡수를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 PEG화 작용제는 약 300 g/mol 내지 약 100,000 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG 화 작용제는 약 300 g/mol 내지 약 10,000 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG화 작용제는 약 300 g/mol 내지 약 5,000 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG화 작용제는 약 500 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG화 작용제는 약 1000 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG화 작용제는 약 3000 g/mol 의 분자량이다. 일부 구현예에서, PEG화는 약 5000 g/mol 의 분자량이다.
특정 구현예에서, PEG화 작용제는 PEG500 이다. 특정 구현예에서, PEG화 작용제는 PEG1000 이다. 특정 구현예에서, PEG화 작용제는 PEG3000 이다. 특정 구현예에서, PEG화 작용제는 PEG5000 이다.
일부 구현예에서, P-개질 잔기는 PK 향상제, 예를 들어 지질, PEG화 지질 등으로서 작용되는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, P-개질 잔기는 세포 진입 및/또는 엔도조말 탈출을 촉진시키는 작용제, 예컨대 막-파열 지질 또는 펩티드로서 작용하는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, P- 개질 잔기는 표적 작용제로서 작용하는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, P-개질 잔기는 표적 작용제이고 이를 포함한다. 본원에서 사용되는 구절 "표적 작용제" 는 본원에서 사용된 바와 같고, 관심 대상의 탑재 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 조성물) 와 관련되고 또한 관심 대상의 표적 부위와 상호작용하여, 관심 대상의 탑재는 관심 대상의 탑재가 표적 작용제와 관련되지 않는 경우 다르게는 비교가능한 조건 하에 관찰되는 것보다 실질적으로 큰 정도로 표적 작용제와 관련될 때 관심 대상의 표적 부위에 표적으로 하는 실체이다. 표적 작용제는 예를 들어 다양한 화학적 잔기 중 임의의 것 예를 들어 소분자 잔기, 핵산, 폴리펩티드, 카르보히드레이트 등일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 표적 작용제는 Adarsh et al., "organelle Specific Targeted Drug Delivery - A Review,"International Journal of Research in Pharmaceutical 및 Biomedical Sciences, 2011, p. 895 에 의해 추가 기재된다.
예시적 상기 표적 작용제는 제한 없이 단백질 (예를 들어 트랜스페린), 올리고펩티드 (예를 들어, 시클릭 및 비시클릭 RGD-함유 올리고펩티드), 항체 (단일클론성 및 다클론성 항체, 예를 들어 IgG, IgA, IgM, IgD, IgE 항체), 당/탄화수소 (예를 들어, 단당류 및/또는 올리고당류 (만노스, 만노스-6-포스페이트, 갈락토스 등)), 비타민 (예를 들어, 폴레이트), 또는 기타 작은 생분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 잔기는 스테로이드 분자 (예를 들어, 담즙산 예컨대 콜산, 데옥시콜산, 데히드로콜산; 코르티손; 다이곡시제닌; 테스토스테론; 콜레스테롤; 양이온성 스테로이드 예컨대 코르티손 고리의 3-위치에 이중 결합을 통해 부착된 트리메틸아미노메틸 히다자이드 기를 갖는 코르티손) 이다. 일부 구현예에서, 표적 잔기는 친유성 분자 (예를 들어, 지환식 탄화수소, 포화 및 불포화 지방산, 왁스, 테르펜 및 폴리지환식 탄화수소 예컨대 아다만틴 및 벅민스테르풀러렌) 이다. 일부 구현예에서, 친유성 분자는 테르페노이드 예컨대 비타민 A, 레티노산, 레티날 또는 데히드로레티날이다. 일부 구현예에서, 표적 잔기는 펩티드이다.
일부 구현예에서, P-개질 잔기는 화학식 -X-L-R1 의 표적 작용제 (여기서 각각의 X, L 및 R1 은 상기 화학식 I 에 정의된 바와 같음) 이다.
일부 구현예에서, P-개질 잔기는 이것이 세포 특이적 전단을 용이하게 하는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, P-개질 잔기는 이것이 상기 기재된 카테고리 중 하나 이상에 들어간다는 것을 특징으로 한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 P-개질 잔기는 PK 향상제 및 표적 리간드로서 작용한다. 일부 구현예에서, P-개질 잔기는 전구-약물 및 엔도솜 탈출 작용제로서 작용한다. 관련 업계의 당업자는 많은 기타 상기 조합이 가능하고 본 발명에 의해 고려된다는 것을 인식할 것이다.
핵염기
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드에 존재하는 핵염기는 천연 핵염기로부터 유래된 개질된 핵염기 또는 천연 핵염기이다. 예는 제한 없이, 아실 보호기에 의해 보호된 이의 각각의 아미노 기를 갖는 우라실, 티민, 아데닌, 시토신 및 구아닌, 2-플루오로우라실, 2-플루오로시토신, 5-브로모우라실, 5-요오도우라실, 2,6-디아미노푸린, 아자시코신, 피리미딘 유사체 예컨대 유사이소시토신 및 유사우라실 및 기타 개질된 핵염기 예컨대 8-치환 푸린, 잔틴 또는 하이포잔틴 (마지막 두 개는 자연 분해 생성물임) 을 포함한다. 예시적 개질된 핵염기는 Chiu and Rana, RNA, 2003, 9, 1034-1048, Limbach et al. Nucleic acids Research, 1994, 22, 2183-2196, 및 Revankar and Rao, Comprehensive Natural Products Chemistry, vol. 7, 313 에 개시되어 있다.
하기 화학식으로 나타내어지는 화합물이 또한 개질된 핵염기로서 고려된다:
Figure 112015015568410-pct00191
Figure 112015015568410-pct00192
[식 중, R8 은 탄소수 1 내지 15 의 지방족, 아릴, 아르알킬, 아릴옥실알킬, 카르보시클릴, 헤테로시클릴 또는 헤테로아릴 기로부터 선택되는 임의 치환된 선형 또는 분지형 기이고, 오로지 예로써 메틸, 이소프로필, 페닐, 벤질, 또는 페녹시메틸 기를 포함하고; 각각의 R9 및 R10 은 독립적으로 선형 또는 분지형 지방족, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로시클릴 및 헤테로아릴로부터 선택되는 임의 치환된 기임].
개질된 핵염기는 하나 이상의 아릴 고리, 예컨대 페닐 고리가 첨가되는 팽창된-크기 핵염기를 포함한다. [Glen Research catalog (www.glenresearch.com); Krueger AT et al, Acc. Chem. Res., 2007, 40, 141-150; Kool, ET, Acc. Chem. Res., 2002, 35, 936-943; Benner S.A., et al., Nat. Rev. Genet., 2005, 6, 553-543; Romesberg, F.E., et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 2003, 7, 723-733; Hirao, I., Curr. Opin. Chem. Biol., 2006, 10, 622-627] 에 기재된 핵염기 대체물은 본원에 기재된 핵산의 합성에 유용한 것으로 고려된다. 이러한 팽창-크기 핵염기의 일부 예는 아래 나타나 있다:
Figure 112015015568410-pct00193
Figure 112015015568410-pct00194
.
본원에서, 개질된 핵염기는 또한 고려되는 핵염기는 아니지만 기타 잔기 예컨대 제한 없이 코린- 또는 포르피린-유래 고리인 구조를 포함한다. 포르피린-유래 염기 대체물은 Morales-Rojas, H 및 Kool, ET, Org. Lett., 2002, 4, 4377-4380 에 기재되어 있다. 아래 나타낸 것은 염기 대체물로서 사용될 수 있는 포르피린-유래 고리의 예이다:
Figure 112015015568410-pct00195
일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 임의 치환된 하기 구조 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00196
일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 형광이다. 예시적 상기 형광 개질된 핵염기는 아래 나타낸 바와 같은 페난트렌, 피렌, 스틸벤, 이속산틴, 이소잔토프테린, 테르페닐, 테르티오펜, 벤조테르티오펜, 쿠마린, 루마진, 테더 스틸벤 (tethered stillbene), 벤조-우라실 및 나프토-우라실을 포함한다:
Figure 112015015568410-pct00197
일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 비치환된다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 치환된다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 이것이 예를 들어 헤테로원자, 알킬 기 또는 형광 잔기, 비오틴 또는 아비딘 잔기에 연결된 연결 잔기, 또는 기타 단백질 또는 펩티드를 함유하도록 치환된다. 일부 구현예에서, 개질된 핵염기는 가장 전통적 의미에서 핵염기가 아니지만 핵염기와 유사한 기능을 하는 "보편적 염기 (universal base)" 이다. 상기 보편적 염기의 대표적 예는 3-니트로피롤이다.
일부 구현예에서, 기타 뉴클레오시드는 또한 본원에 개시된 방법에서 사용될 수 있고 개질된 핵염기 또는 개질된 당에 공유 결합된 핵염기를 혼입하는 뉴클레오시드를 포함한다. 개질된 핵염기를 혼입하는 뉴클레오시드의 일부 예는 4-아세틸시티딘; 5-(카르복시히드록실메틸)우리딘; 2'-O-메틸시티딘; 5-카르복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘; 5-카르복시메틸아미노메틸우리딘; 디히드로우리딘; 2'-O-메틸유사우리딘; 베타,D-갈락토실퀘오신; 2'-O-메틸구아노신; N6-이소펜테닐아데노신; 1-메틸아데노신; 1-메틸유사우리딘; 1-메틸구아노신; l-메틸이노신; 2,2-디메틸구아노신; 2-메틸아데노신; 2-메틸구아노신; N7-메틸구아노신; 3-메틸-시티딘; 5-메틸시티딘; 5-히드록시메틸시티딘; 5-포르밀시토신; 5-카르복실시토신; N6-메틸아데노신; 7-메틸구아노신; 5-메틸아미노에틸우리딘; 5-메톡시아미노메틸-2-티오우리딘; 베타,D-만노실퀘오신; 5-메톡시카르보닐메틸우리딘; 5-메톡시우리딘; 2-메틸티오-N6-이소펜테닐아데노신; N-((9-베타,D-리보푸라노실-2-메틸티오푸린-6-일)카르바모일)트레오닌; N-((9-베타,D-리보푸라노실푸린-6-일)-N-메틸카르바모일)트레오닌; 우리딘-5-옥시아세트산 메틸에스테르; 우리딘-5-옥시아세트산 (v); 유사우리딘; 퀘오신; 2-티오시티딘; 5-메틸-2-티오우리딘; 2-티오우리딘; 4-티오우리딘; 5-메틸우리딘; 2'-O-메틸-5-메틸우리딘; 및 2'-O-메틸우리딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 뉴클레오시드는 6'-위치에 (R) 또는 (S)-키랄성을 갖는 6'-개질된 바이시클릭 뉴클레오시드 유사체를 포함하고 미국 특허 번호 7,399,845 에 기재된 유사체를 포함한다. 다른 구현예에서, 뉴클레오시드는 5'-위치에 (R) 또는 (S)-키랄성을 갖는 5'-개질된 바이시클릭 뉴클레오시드 유사체를 포함하고 미국 특허 공개 번호 20070287831 에 기재된 유사체를 포함한다.
일부 구현예에서, 핵염기 또는 개질된 핵염기는 하나 이상의 생분자 결합 잔기 예를 들어 항체, 항체 분절, 비오틴, 아비딘, 스트렙타비딘, 수용체 리간드 또는 킬레이트 잔기를 포함한다. 다른 구현예에서, 핵염기 또는 개질된 핵염기는 5-브로모우라실, 5-요오도우라실 또는 2,6-디아미노푸린이다. 일부 구현예에서, 핵염기 또는 개질된 핵염기는 형광 또는 생분자 결합 잔기에 의한 치환에 의해 개질된다. 일부 구현예에서, 핵염기 또는 개질된 핵염기 상의 치환기는 형광 잔기이다. 일부 구현예에서, 핵염기 또는 개질된 핵염기 상의 치환기는 비오틴 또는 아비딘이다.
특정 상기 나타낸 개질된 핵염기 및 기타 개질된 핵염기의 제조를 교시하는 대표적 미국 특허는 제한 없이, 상기 나타낸 미국 특허 번호 3,687,808 및 미국 특허 번호 4,845,205; 5,130,30; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,457,191; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 6,015,886; 6,147,200; 6,166,197; 6,222,025; 6,235,887; 6,380,368; 6,528,640; 6,639,062; 6,617,438; 7,045,610; 7,427,672; 및 7,495,088 를 포함하는데, 이들 각각은 그 전체가 본원에서 참조 인용된다.
당
가장 통상적인 천연 발생 뉴클레오티드는 핵염기 아데노신 (A), 시토신 (C), 구아닌 (G), 및 티민 (T) 또는 우라실 (U) 에 연결된 리보스 당으로 구성된다. 또한 고려되는 것은 개질된 뉴클레오티드이고, 여기서 뉴클레오티드의 포스페이트 기 또는 연결 인은 당 또는 개질된 당의 다양한 위치에 연결될 수 있다. 비제한적 예로서, 포스페이트 기 또는 연결 인은 당 또는 개질된 당의 2', 3', 4' 또는 5' 히드록실 잔기에 연결될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 개질된 핵염기를 혼입하는 뉴클레오티드는 또한 이러한 맥락에서 고려된다. 일부 구현예에서, 비보호된 -OH 잔기를 포함하는 뉴클레오티드 또는 개질된 뉴클레오티드는 본 발명의 방법에 따라 사용된다.
기타 개질된 당은 또한 제공된 올리고뉴클레오티드 내에 혼입될 수 있다. 일부 구현예에서, 개질된 당은 하기 중 하나 이상을 포함하는 2' 위치에서의 치환기 하나 이상을 함유한다: -F; -CF3, -CN, -N3, -NO, -NO2, -OR', -SR', 또는 -N(R)2, (여기서, 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음); -O-(C1-C10 알킬), -S-(C1-C10 알킬), -NH-(C1-C10 알킬), 또는 -N(C1-C10 알킬)2; -O-(C2-C10 알케닐), -S-(C2-C10 알케닐), -NH-(C2-C10 알케닐), 또는 -N(C2-C10 알케닐)2; -O-(C2-C10 알키닐), -S-(C2-C10 알키닐), -NH-(C2-C10 알키닐), 또는 -N(C2-C10 알키닐)2; 또는 -O-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬), -O-(C1-C10 알킬렌)-NH-(C1-C10 알킬) 또는 -O-(C1-C10 알킬렌)-NH(C1-C10 알킬)2, -NH-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬), 또는 -N(C1-C10 알킬)-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬) (여기서, 알킬, 알킬렌, 알케닐 및 알키닐은 치환 또는 비치환될 수 있음). 치환기의 예는 제한 없이 -O(CH2)nOCH3, 및 -O(CH2)nNH2 (식 중, n 은 1 내지 10 임), MOE, DMAOE, DMAEOE 를 포함한다. 또한 본원에서 고려되는 것은 WO 2001/088198; 및 Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504 에 기재된 개질된 당이다. 일부 구현예에서, 개질된 당은 치환된 실릴 기, RNA 분해 기, 리포터 기, 형광 라벨, 삽입제 (intercalator), 핵산의 약물동력학적 특성을 향상시키는 기, 핵산의 약물동력학적 특성을 향상시키는 기, 핵산의 약동학적 특성을 향상시키는 기, 또는 유사한 특성을 갖는 기타 치환기로부터 선택된 하나 이상의 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 개질은 당 또는 개질된 당의 2', 3', 4', 5', 또는 6' 위치 중 하나 이상, 예컨대 3'-말단 뉴클레오티드 상의 당의 3' 위치 또는 5'-말단 뉴클레오티드의 5' 위치에서 이루어진다.
일부 구현예에서, 리보스의 2'-OH 는 하기 중 하나를 포함하는 치환기로 대체된다: -H, -F; -CF3, -CN, -N3, -NO, -NO2, -OR', -SR', 또는 -N(R)2 (여기서 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같음); -O-(C1-C10 알킬), -S-(C1-C10 알킬), -NH-(C1-C10 알킬), 또는 -N(C1-C10 알킬)2; -O-(C2-C10 알케닐), -S-(C2-C10 알케닐), -NH-(C2-C10 알케닐), 또는 -N(C2-C10 알케닐)2; -O-(C2-C10 알키닐), -S-(C2-C10 알키닐), -NH-(C2-C10 알키닐), 또는 -N(C2-C10 알키닐)2; 또는 -O-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬), -O-(C1-C10 알킬렌)-NH-(C1-C10 알킬) 또는 -O-(C1-C10 알킬렌)-NH(C1-C10 알킬)2, -NH-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬), 또는 -N(C1-C10 알킬)-(C1-C10 알킬렌)-O-(C1-C10 알킬) (여기서, 알킬, 알킬렌, 알케닐 및 알키닐은 치환 또는 비치환될 수 있음). 일부 구현예에서, 2'-OH 는 -H 로 대체된다 (데옥시리보스). 일부 구현예에서, 2'-OH 는 -F 로 대체된다. 일부 구현예에서, 2'-OH 는 -OR' 로 대체된다. 일부 구현예에서, 2'-OH 는 -OMe 로 대체된다. 일부 구현예에서, 2'-OH 는 -OCH2CH2OMe 로 대체된다.
개질된 당은 또한 잠김 핵산 (LNA: locked nucleic acid) 이다. 일부 구현예에서, 잠겨진 핵산은 아래 나타낸 구조를 갖는다. 아래 구조의 잠겨진 핵산이 나타나 있고, 여기서 Ba 는 본원에 기재된 핵염기 또는 개질된 핵염기를 나타내고, R2s 는 -OCH2C4'- 이다.
Figure 112015015568410-pct00198
일부 구현예에서, 개질된 당은 ENA 예컨대 예를 들어 Seth et al., J Am Chem Soc. 2010 October 27; 132(42): 14942-14950 에 기재된 것이다. 일부 구현예에서, 개질된 당은 XNA (제노핵산) 에서 발견되는 것 중 임의의 것, 예를 들어 아라비노스, 무수헥시톨, 트레오스, 2'플루오로아라비노스 또는 시클로헥센이다.
개질된 당은 펜토푸라노실 당 대신에 시클로부틸 또는 시클로펜틸 잔기와 같은 당 모방물을 포함한다. 상기 개질된 당 구조물의 제조를 교시하는 대표적 미국 특허는 제한 없이 미국 특허 번호 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080 ; 및 5,359,044 를 포함한다. 고려되는 일부 개질된 당은 리보스 고리 내의 산소 원자가 질소, 황, 셀레늄 또는 탄소로 대체되는 당을 포함한다. 일부 구현예에서, 개질된 당은 리보스 고리 내의 산소 원자가 질소로 대체되고 질소가 알킬 기 (예를 들어 메틸, 에틸, 이소프로필 등) 으로 치환되는 개질된 리보스이다.
개질된 당의 비제한적 예는 글리세롤을 포함하고, 이는 글리세롤 핵산 (GNA) 유사체를 형성한다. GNA 유사체의 한 예는 아래 나타나 있고 Zhang, R et al., J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 5846-5847; Zhang L, et al., J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 4174-4175 및 Tsai CH et al., PNAS, 2007, 14598-14603 (X = O-) 에 기재되어 있다.
Figure 112015015568410-pct00199
GNA 유래 유사체, 포르밀 글리세롤의 혼합 아세탈 아미날 기반의 가요성 핵산 (FNA) 의 또다른 예는 Joyce GF et al., PNAS, 1987, 84, 4398-4402 및 Heuberger BD and Switzer C, J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 412-413 에 기재되어 있고, 아래 나타나 있다:
Figure 112015015568410-pct00200
.
개질된 당의 추가 비제한적 예는 헥소피라논실 (6' -> 4'), 펜토피라노실 (4' -> 2'), 펜토피라노실 (4' -> 3'), 또는 테트로푸라노실 (3' -> 2') 당을 포함한다. 일부 구현예에서, 헥소피라노실 (6' -> 4') 당은 하기 화학식 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00201
[식 중, XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고 Ba 는 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, 펜토피라노실 (4' -> 2') 당은 하기 화학식 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00202
[식 중, XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고 Ba 는 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, 펜토피라노실 (4' -> 3') 당은 하기 화학식 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00203
[식 중, XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고 Ba 는 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, 테트로푸라노실 (3' -> 2') 당은 하기 화학식 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00204
[식 중, XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고 Ba 는 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, 개질된 당은 하기 화학식 중 어느 하나이다:
Figure 112015015568410-pct00205
[식 중, XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고 Ba 는 본원에 정의된 바와 같음].
일부 구현예에서, 당 잔기의 하나 이상의 히드록실 기는 임의로 및 독립적으로 할로겐, R' -N(R')2, -OR', 또는 -SR' 로 대체되고, 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 당 모방물은 아래 설명된 바와 같고, 여기서 XS 는 본원에 기재된 P-개질 기 "-XLR1" 에 해당하고, Ba 는 본원에 정의된 바와 같고, X1 은 -S- -Se- -CH2- -NMe- -NEt- 또는 -NiPr- 로부터 선택된다.
Figure 112015015568410-pct00206
일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물에서 당의 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50% 또는 그 이상 (예를 들어, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상) (포괄적) 이 개질된다. 일부 구현예에서, 오로지 푸린 잔기가 개질된다 (예를 들어, 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50% 또는 그 이상 [예를 들어, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상] 의 푸린 잔기가 개질됨). 일부 구현예에서, 오로지 피리미딘 잔기가 개질된다 (예를 들어, 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50% 또는 그 이상 [예를 들어, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상] 의 피리미딘 잔기가 개질됨). 일부 구현예에서, 푸린 및 피리미딘 잔기 모두가 개질된다.
개질된 당 및 당 모방물은 제한 없이 하기를 포함하는 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다: A. Eschenmoser, Science (1999), 284:2118; M. Bohringer et al, Helv. Chim. Acta (1992), 75:1416-1477; M. Egli et al, J. Am. Chem. Soc. (2006), 128(33):10847-56; A. Eschenmoser in Chemical Synthesis: Gnosis to Prognosis, C. Chatgilialoglu 및 V. Sniekus, Ed., (Kluwer Academic, Netherlands, 1996), p.293; K.-U. Schoning et al, Science (2000), 290:1347-1351; A. Eschenmoser et al, Helv. Chim. Acta (1992), 75:218; J. Hunziker et al, Helv. Chim. Acta (1993), 76:259; G. Otting et al, Helv. Chim. Acta (1993), 76:2701; K. Groebke et al, Helv. Chim. Acta (1998), 81:375; 및 A. Eschenmoser, Science (1999), 284:2118. 2' 개질물에 대한 개질은 Verma, S. et al. Annu. Rev. Biochem. 1998, 67, 99-134 및 그 안의 모든 문헌에서 찾을 수 있다. 리보스에 대한 특정 개질은 하기 분헌에서 찾을 수 있다: 2'-플루오로 (Kawasaki et. al., J. Med. Chem., 1993, 36, 831- 841), 2'-MOE (Martin, P. Helv. Chim. Acta 1996, 79, 1930-1938), "LNA" (Wengel, J. Acc. Chem. Res. 1999, 32, 301-310). 일부 구현예에서, 개질된 당은 본원에서 참조 인용되고 본 출원의 도 26-30 에 도시된 PCT 공개 번호 WO2012/030683 에 기재된 것 중 임의의 것이다.
올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어인 올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 소정 수준의 하나 이상의 개별적 올리고뉴클레오티드 유형을 함유하고, 여기서 올리고뉴클레오티드 유형은 하기에 의해 정의된다: 1) 염기 서열; 2) 백본 연결 패턴; 3) 백본 키랄 중심의 패턴; 및 4) 백본 P-개질의 패턴.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 유니머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 P-개질 유니머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체유니머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 배열 Rp 의 입체유니머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 배열 Sp 의 입체유니머이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 알트머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 P-개질 알트머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체알트머이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 블록머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 P-개질 블록머이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 입체블록머이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 갭머이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 스킵머이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 유니머, 알크머, 블록머, 갭머 및 스킵머 중 하나 이상의 조합이다. 예를 들어, 일부 구현예에서 제공된 올리고뉴클레오티드는 알트머 및 갭머 모두이다. 일부 구현예에서, 제공된 뉴클레오티드는 캡머 및 스킵머 모두이다. 화학 및 합성 업계의 당업자는 많은 기타 패턴 조합이 이용가능하고 본 발명의 방법에 따라 제공된 올리고뉴클레오티드를 합성하는데 필요한 구성 부분의 시판성 및/또는 합성 접근성만에 의해 제한된다는 것을 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 개질된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 LNAs 를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 핵염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 천연 핵염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 개질 핵염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 5-메틸시티딘; 5-히드록시메틸시티딘, 5-포르밀시토신, 또는 5-카르복실시토신을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 5-메틸시티딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 당을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 자연 발생 DNA 및 RNA 에서 발견되는 하나 이상의 임의 치환된 당을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 리보스 또는 데옥시리보스를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 리보스 또는 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 리보스 또는 데옥시리보스 잔기의 히드록실 기 하나 이상은 임의로 및 독립적으로 할로겐, R', -N(R')2, -OR', 또는 -SR' 으로 대체되고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 할로겐, R', -N(R)2, -OR', 또는 -SR' 으로 대체되고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 할로겐으로 치환된다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 부분은 임의로 및 독립적으로 하나 이상의 -F, 할로겐으로 치환된다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 -OR' 로 치환되고, 각각의 R' 은 독립적으로 상기 정의 및 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 -OR' 로 치환되고, 여기서 각각의 R' 은 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 지방족이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 -OR' 로 치환되고, 각각의 R' 은 독립적으로 임의 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 -OMe 로 치환된다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 임의 치환된 데옥시리보스를 포함하고, 여기서 데옥시리보스의 2' 위치는 임의로 및 독립적으로 -O-메톡시에틸로 치환된다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 혼성화 올리고뉴클레오티드 가닥이다. 특정 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 일부 수소화 올리고뉴클레오티드 가닥이다. 특정 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 완전 수소화 올리고뉴클레오티드 가닥이다. 특정 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드이다. 특정 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 삼중-가닥 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 3중) 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 키메라이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 DNA-RNA 키메라, DNA-LNA 키메라 등이다.
일부 구현예에서, WO2012/030683 에 도시된 올리고뉴클레오티드를 포함하는 구조 중 어느 하나는 본 발명의 방법에 따라 개질되어 이의 카랄 제어 변형물을 산출할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서 키랄 제어 변형은 연결 인 중 임의의 하나 이상에서의 입체 화학 개질 및/또는 연결 인 중 임의의 하나 이상에서의 P-개질을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서 WO2012/030683 의 올리고뉴클레오티드의 특정 뉴클레오티드 단위는 뉴클레오티드 단위의 연결 인에서 입체 화학적으로 개질 및/또는 뉴클레오티드 단위의 연결 인에서 P-개질되도록 사전 선택된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 도 26-30 에 도시된 구조 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드는 도 26-30 에 도시된 구조 중 어느 하나의 변형물 (예를 들어, 개질된 버전) 이다. WO2012/030683 의 개시는 본원에서 그 전체가 참조 인용된다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 치료제이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 항원 올리고뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 데코이 올리고뉴클레오티드 (decoy oligonucleotide) 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 DNA 백신의 일부이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 면역중재 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, 면역자극 올리고뉴클레오티드 및 면역저해 올리고뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 아쥬반트이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 앱타머 (aptamer) 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 리보자임이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 데옥시리보자임 (DNAzyme 또는 DNA 효소) 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 siRNA 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 microRNA 또는 miRNA 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 ncRNA (비코딩 RNA), 예컨대 긴 비코딩 (lncRNA) 및 작은 비코딩 RNA, 예를 들어 piwi-상호작용 RNA (piRNA) 이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 구조적 RNA, 예를 들어 tRNA 에 상보적이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 핵산 유사체, 예를 들어, GNA, LNA, PNA, TNA 및 모르폴리노이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 P-개질된 전구약물이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 프라이머이다. 일부 구현예에서, 프라이머는 핵산을 증폭시키기 위해 폴리머라아제-기반 사슬 반응 (즉, PCR) 에서 사용된다. 일부 구현예에서, 프라이머는 PCR 의 임의의 공지된 변형, 예컨대 역 전사 PCR (RT-PCR) 및 실시간 PCR 에서 사용된다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 RNase H 활성화를 조절하는 능력을 갖는 것으로 특징지어진다. 예를 들어, 일부 구현예에서 RNase H 활성화는 입체조절된 포스포로티오에이트 핵산 유사체의 존재에 의해 조절되고, 천연 DNA/RNA 는 Rp 입체 이성질체보다 더 또는 동등하게 민감하고, 이는 결국 상응하는 Sp 입체 이성질체보다 더 민감하다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 단백질의 활성을 간접 또는 직접 증가 또는 감소시키거나 단백질의 발현을 저해 또는 증진시키는 능력을 갖는 것으로 특징지어진다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 이것이 세포 증식, 바이러스 복제 및/또는 임의의 기타 세포 신호 과정의 제어에 유용하다는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 200 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 180 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 160 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 140 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 120 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 100 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 90 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 80 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 70 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 60 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 50 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 40 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 30 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 29 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 28 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 27 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 26 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 25 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 24 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 23 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 22 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 21 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 2 내지 약 20 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 200 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 180 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 160 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 140 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 120 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 100 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 90 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 80 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 70 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 60 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 50 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 40 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 30 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 29 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 28 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 27 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 26 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 25 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 24 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 23 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 22 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 21 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 4 내지 약 20 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 5 내지 약 10 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 10 내지 약 30 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 15 내지 약 25 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 개의 뉴클레오티드 단위 길이이다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 2 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 3 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 4 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 6 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 7 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 8 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 9 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 10 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 11 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 12 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 15 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 20 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 25 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 30 뉴클레오티드 단위체 길이 이상이다. 일부 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 18 뉴클레오티드 단위체 길이 이상의 상보적 가닥의 두가닥이다. 일부 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 21 뉴클레오티드 단위체 길이 이상의 상보적 가닥의 두가닥이다.
일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단 및/또는 3'-말단은 개질되어 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단 및/또는 3'-말단은 말단 캡 모이어티로 개질되어 있다. 말단 캡 모이어티를 포함하는, 예시적 그러한 개질은 본원에서 및 기술분야에서 광범위하게 기재되어 있고, 예를 들어 그에 제한되는 것은 아니나 US 특허 출원 공개 US 2009/0023675A1 에 기재되어 있다.
올리고뉴클레오티드의 종
특정 구현예에서, 화학식 I 의 올리고뉴클레오티드는 상기 표 2 에 제시된 구조 및 실시예에 기재된 구조 중 임의의 하나를 갖는다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 미포멀슨의 서열, 또는 서열의 일부를 포함한다. 미포멀슨은 하기 염기 서열 GCCT/UCAGT/UCT/UGCT/UT/UCGCACC 에 기초한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 임의의 뉴클레오티드 또는 연결은 본 발명에 따라 개질될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명은 3'→5' 포스포로티오에이트 연결을 갖는 G*-C*-C*-U*-C*-dA-dG-dT-dC-dT-dG-dmC-dT-dT-dmC-G*-C*-A*-C*-C* [d = 2'-데옥시, * = 2'-O-(2-메톡시에틸)] 의 서열을 갖는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 예시적 개질된 미포멀슨 서열은 그에 제한되는 것은 아니나 표 4 에 기재된 것을 포함하여, 출원 전체에 기재되어 있다.
특정 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드는 미포멀슨 단일체이다. 특정 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드는 입체배치 Rp 의 미포멀슨 단일체이다. 특정 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드는 입체배치 Sp 의 미포멀슨 단일체이다.
미포멀슨의 서열, 또는 서열의 일부를 포함하는 예시적 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가는 하기 표 4 에 제시되어 있다.
표 4. 예시적 미포멀슨 관련 서열.
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올리고뉴클레오티드 조성물
본 발명은 복수의 제공되는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 또는 그것으로 이루어지는 조성물 (예를 들어, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물) 을 제공한다. 일부 구현예에서, 모든 그러한 제공되는 올리고뉴클레오티드는 동일한 유형에 속하며, 즉, 모두 동일한 염기 서열, 백본 연결의 패턴 (즉, 뉴클레오티드간 연결 유형의 패턴, 예를 들어, 포스페이트, 포스포로티오에이트 등), 백본 키랄 중심의 패턴 (즉 인 연결 (linkage phosphorous) 입체화학 (Rp/Sp) 의 패턴), 및 백본 인 개질의 패턴 (예를 들어, 화학식 I 에서 "-XLR1" 기의 패턴) 을 갖는다. 많은 구현예에서, 그러나, 제공되는 조성물은 복수의 올리고뉴클레오티드 유형을, 전형적으로 미리 결정된 상대량으로 포함한다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 키랄적으로 순수한 미포멀슨 조성물이다. 다시 말해서, 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 미포멀슨을 인 연결의 입체배치에 관하여 단일 부분입체이성질체로서 제공한다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 키랄적으로 균일한 미포멀슨 조성물이다. 다시 말해서, 일부 구현예에서, 미포멀슨의 모든 인 연결은 Rp 입체배치를 갖거나 또는 미포멀슨의 모든 인 연결은 Sp 입체배치를 갖는다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 하나 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 화학 및 의학 분야의 통상의 기술자는 제공되는 조성물 중 제공되는 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 유형 각각의 선택 및 양이 그 조성물의 의도되는 용도에 좌우될 것이라는 것을 이해할 것이다. 다시 말해서, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 그안에 함유되는 제공되는 올리고뉴클레오티드의 양 및 유형이 전체로서 특정 바람직한 특징 (예를 들어, 생물학적으로 바람직한, 치료적으로 바람직한 특징 등) 을 갖는 조성물을 야기하도록 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물을 디자인할 것이다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 2 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 3 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 4 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 5 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 6 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 7 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 8 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 9 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 10 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 15 가지 이상의 제공되는 올리고뉴클레오티드 유형의 조합물을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 소정량의 Rp 입체배치의 키랄적으로 균일한 미포멀슨 및 소정량의 Sp 입체배치의 키랄적으로 균일한 미포멀슨의 조합물이다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 소정량의 Rp 입체배치의 키랄적으로 균일한 미포멀슨, 소정량의 Sp 입체배치의 키랄적으로 균일한 미포멀슨, 및 소정량의 요망되는 부분입체이성질체 형태의 하나 이상의 키랄적으로 순수한 미포멀슨의 조합물이다.
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 및 그의 조성물의 제조 방법
본 발명은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 및 하나 이상의 특정 뉴클레오티드 유형을 포함하는 키랄적으로 제어되는 조성물의 제조 방법을 제공한다. 위에서 언급한 바와 같이, 본원에서 사용되는 구절 "올리고뉴클레오티드 유형" 은 특별한 염기 서열, 백본 연결의 패턴, 백본 키랄 중심의 패턴, 및 백본 인 개질의 패턴 (예를 들어, "-XLR1" 기) 을 갖는 올리고뉴클레오티드를 정의한다. 보통 지정되는 "유형" 의 올리고뉴클레오티드는 염기 서열, 백본 연결의 패턴, 백본 키랄 중심의 패턴, 및 백본 인 개질의 패턴에 관하여 서로 구조적으로 동일하다.
일부 구현예에서, 본 발명에서 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 상응하는 스테레오랜덤 (stereorandom) 올리고뉴클레오티드 혼합물과 상이한 특성을 갖는다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 스테레오랜덤 올리고뉴클레오티드 혼합물과 상이한 친유성을 갖는다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 HPLC 에서 상이한 체류 시간을 갖는다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 상응하는 스테레오랜덤 올리고뉴클레오티드 혼합물과 상당히 상이한 피크 (peak) 체류 시간을 가질 수 있다. 당업계에서 일반적으로 실행되는 HPLC 를 사용하는 올리고뉴클레오티드 정제 동안, 특정 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 크게 그렇지 않다면 완전히 소실될 것이다. 당업계에서 일반적으로 실행되는 HPLC 를 사용하는 올리고뉴클레오티드 정제 동안, 특정 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 크게 그렇지 않다면 완전히 소실될 것이다. 결과 중 하나는 스테레오랜덤 올리고뉴클레오티드 혼합물 중 특정 부분입체이성질체 (특정 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드) 는 검정에서 시험되지 않는다는 것이다. 또다른 결과는 뱃치마다, 불가피한 기계 및 인적 오류로 인해, 추정상 "순수한" 스테레오랜덤 올리고뉴클레오티드는 조성물 중 그 부분입체이성질체의 조성에 일관성 없을 것이고, 그들의 상대량 및 절대량은 뱃치마다 상이하다는 것이다. 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 키랄적으로 제어되는 방식으로 단일 부분입체이성질체로서 합성되고, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 예정된 수준의 하나 이상의 개별 올리고뉴클레오티드 유형을 포함하므로, 본 발명에서 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 및 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 그러한 문제점들을 극복한다.
화학 및 합성 기술 분야의 통상의 기술자는 본 발명의 합성 방법이 제공되는 올리고뉴클레오티드의 합성의 각각의 단계 동안 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오티드 단위체가 인 연결에서의 특별한 입체화학 및/또는 인 연결에서의 특별한 개질, 및/또는 특별한 염기, 및/또는 특별한 당을 갖도록 사전에 디자인 및/또는 선택될 수 있게 하는 정도의 제어를 제공하는 것을 이해할 것이다. 일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드는 뉴클레오티드간 연결의 인 연결에서 입체중심의 특별한 조합을 갖도록 사전에 디자인 및/또는 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법을 사용하여 제조되는 제공되는 올리고뉴클레오티드는 인 연결 개질의 특별한 조합을 갖도록 디자인 및/또는 결정된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법을 사용하여 제조되는 제공되는 올리고뉴클레오티드는 염기의 특별한 조합을 갖도록 디자인 및/또는 결정된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법을 사용하여 제조되는 제공되는 올리고뉴클레오티드는 당의 특별한 조합을 갖도록 디자인 및/또는 결정된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법을 사용하여 제조되는 제공되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 상기 구조적 특징의 특별한 조합을 갖도록 디자인 및/또는 결정된다.
본 발명의 방법은 높은 정도의 키랄 제어를 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 방법은 제공되는 올리고뉴클레오티드 내에서의 모든 단일 인 연결의 입체화학적 입체배치의 제어를 촉진한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 독립적으로 화학식 I 의 구조를 갖는 하나 이상의 개질된 뉴클레오티드간 연결을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 미포멀슨 단일체인 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 입체배치 Rp 의 미포멀슨 단일체인 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 입체배치 Sp 의 미포멀슨 단일체인 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물, 즉, 예정된 수준의 개별 올리고뉴클레오티드 유형을 함유하는 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 1 가지 올리고뉴클레오티드 유형을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 1 가지 초과의 올리고뉴클레오티드 유형을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 복수의 올리고뉴클레오티드 유형을 포함한다. 본 발명에 따라 제조되는 예시적 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 본원에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 인 연결의 입체배치에 관하여 키랄적으로 순수한 미포멀슨 조성물을 제공한다. 다시 말해서, 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 미포멀슨이 조성물 중에서 인 연결의 입체배치에 관하여 단일 부분입체이성질체의 형태로 존재하는 미포멀슨의 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 인 연결의 입체배치에 관하여 키랄적으로 균일한 미포멀슨 조성물을 제공한다. 다시 말해서, 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 그안의 모든 뉴클레오티드 단위체가 인 연결의 입체배치에 관하여 동일한 입체화학을 갖는, 예를 들어, 모든 뉴클레오티드 단위체가 인 연결에서 Rp 입체배치를 갖거나 모든 뉴클레오티드 단위체가 인 연결에서 Sp 입체배치를 갖는 미포멀슨의 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 50% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 55% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 60% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 65% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 70% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 75% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 80% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 85% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 90% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 91% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 92% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 93% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 94% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 95% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 96% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 97% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 98% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99.5% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99.6% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99.7% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99.8% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 약 99.9% 초과로 순수하다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 적어도 약 99% 초과로 순수하다.
일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 단일 올리고뉴클레오티드 유형을 포함하도록 디자인된 조성물이다. 특정 구현예에서, 그러한 조성물은 약 50% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 50% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 50% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 55% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 60% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 65% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 70% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 75% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 80% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 85% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 90% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 91% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 92% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 93% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 94% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 95% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 96% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 97% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 98% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99.5% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99.6% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99.7% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99.8% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 약 99.9% 부분입체이성질체적으로 순수하다. 일부 구현예에서, 그러한 조성물은 적어도 약 99% 부분입체이성질체적으로 순수하다.
일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 복수의 올리고뉴클레오티드 유형을 포함하도록 디자인된 조성물이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 라이브러리의 생성을 허용하여, 사전 선택된 양의 임의의 하나 이상의 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 유형이 임의의 하나 이상의 기타 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 유형과 혼합되어 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물을 창출할 수 있도록 한다. 일부 구현예에서, 사전 선택된 양의 올리고뉴클레오티드 유형은 임의의 하나의 위에 기재된 부분입체이성질체적 순도를 갖는 조성물이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단 (deblocking); 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복.
제공되는 방법을 기술할 때, 단어 "사이클" 은 통상의 기술자에 의해 이해되는 그것의 통상의 의미를 갖는다. 일부 구현예에서, 한 차례의 단계 (1)-(4) 는 사이클로서 언급된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물의 제조 방법을 제공한다:
(a) 소정량의 제 1 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제공; 및
(b) 임의로 소정량의 하나 이상의 부가적 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제공.
일부 구현예에서, 제 1 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 본원에 기재된 바와 같은 올리고뉴클레오티드 유형이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 부가적 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 유형이다.
관련 화학 및 합성 기술 분야의 통상의 기술자는 본 발명의 방법을 사용하여 합성될 때 제공되는 올리고뉴클레오티드의 구조적 변화 및 입체화학적 입체배치에 대한 융통성 및 제어의 정도를 인지할 것이다. 예를 들어, 제 1 사이클의 완료 후에, 후속 사이클은 제 1 사이클 핵염기 및/또는 당과 상이한 핵염기 및/또는 당을 포함하는 그 후속 사이클에 대해 개별적으로 선택되는 뉴클레오티드 단위체를 사용하여 수행될 수 있다. 마찬가지로, 후속 사이클의 커플링 단계에서 사용되는 키랄 보조기는 제 1 사이클에서 사용되는 키랄 보조기와 상이하여, 제 2 사이클은 상이한 입체화학적 입체배치의 인 연결을 생성할 수 있다. 일부 구현예에서, 새로 형성되는 뉴클레오티드간 연결 내의 인 연결의 입체화학은 입체화학적으로 순수한 포스포라미디트를 사용함으로써 제어된다. 부가적으로, 후속 사이클의 개질 단계에서 사용되는 개질 시약은 제 1 또는 이전 사이클에서 사용되는 개질 시약과 상이할 수 있다. 이러한 반복적 조립 접근법의 누적 효과는 제공되는 올리고뉴클레오티드의 각각의 성분이 구조적으로 및 입체배치적으로 높은 정도로 맞춰질 수 있다는 것이다. 이러한 접근법의 부가적 이점은 캡핑 단계가 그렇지 않으면 제공되는 올리고뉴클레오티드의 단리를 극히 도전적으로 만들 수 있는 "n-1" 분순물, 특히 더 긴 길이의 올리고뉴클레오티드의 형성을 최소화하는 점이다.
일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법의 예시적 사이클이 반응식 I 에 나타나 있다. 반응식 I 에서,
Figure 112015015568410-pct00213
는 고체 지지체, 및 임의로 고체 지지체에 부착된 성장하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 일부를 나타낸다. 예시된 키랄 보조기는 하기 화학식 3-I 의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00214
이는 아래 추가로 기재되어 있다. "Cap" 은 캡핑 단계에 의해 질소 원자에 도입되는 임의의 화학적 모이어티이고, 일부 구현예에서, 아미노 보호기이다. 통상의 기술자는 제 1 사이클에서, 시작될 때 고체 지지체에 부착된 오직 1 개의 뉴클레오시드가 존재할 수 있고, 사이클 퇴장은 임의로 탈차단 전에 수행될 수 있음을 이해한다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, BPRO 는 올리고뉴클레오티드 합성에서 사용되는 보호된 염기이다. 위에 나타낸 반응식 I 의 사이클의 각각의 단계는 아래 추가로 기재되어 있다.
반응식 I. 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 합성.
Figure 112015015568410-pct00215
고체 지지체에서의 합성
일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 합성은 고체 상에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체에 존재하는 반응성 기는 보호된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체에 존재하는 반응성 기는 보호되지 않는다. 올리고뉴클레오티드 합성 동안 고체 지지체는 여러 합성 사이클에서 다양한 시약으로 처리되어 개별 뉴클레오티드 단위체에 의한 성장하는 올리고뉴클레오티드 사슬의 단계적 신장이 달성된다. 고체 지지체에 직접 연결되어 있는 사슬의 말단에서의 뉴클레오시드 단위체는 본원에서 사용되는 "제 1 뉴클레오시드" 로 명명된다. 제 1 뉴클레오시드는 고체 지지체에 링커 모이어티, 즉 CPG, 중합체 또는 기타 고체 지지체 및 뉴클레오시드 사이에 공유 결합을 갖는 2가 라디칼을 통해 결합되어 있다. 링커는 올리고뉴클레오티드 사슬을 조립하기 위해 수행되는 합성 사이클 동안 온전하게 유지되고, 사슬 조립 후에 절단되어 지지체로부터 올리고뉴클레오티드를 해방시킨다.
고체-상 핵산 합성을 위한 고체 지지체는, 예를 들어, 미국 특허 4,659,774, 5,141,813, 4,458,066; Caruthers 미국 특허 번호 4,415,732, 4,458,066, 4,500,707, 4,668,777, 4,973,679, 및 5,132,418; Andrus et al. 미국 특허 번호 5,047,524, 5,262,530; 및 Koster 미국 특허 번호 4,725,677 (Re34,069 로서 재발행됨) 에 기재된 지지체를 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 상은 유기 중합체 지지체이다. 일부 구현예에서, 고체 상은 무기 중합체 지지체이다. 일부 구현예에서, 유기 중합체 지지체는 폴리스티렌, 아미노메틸 폴리스티렌, 폴리에틸렌 글리콜-폴리스티렌 그래프트 공중합체, 폴리아크릴아미드, 폴리메타크릴레이트, 폴리비닐알코올, 고도로 가교된 중합체 (HCP), 또는 기타 합성 중합체, 탄수화물 예컨대 셀룰로오스 및 전분 또는 기타 중합체성 탄수화물, 또는 기타 유기 중합체 및 임의의 공중합체, 복합 재료 또는 상기 무기 또는 유기 재료의 조합이다. 일부 구현예에서, 무기 중합체 지지체는 실리카, 알루미나, 조절 폴리글라스 (controlled polyglass) (CPG) (이는 실리카-겔 지지체임), 또는 아미노프로필 CPG 이다. 기타 유용한 고체 지지체는 불소 고체 지지체 (예를 들어, WO/2005/070859 참고), 장쇄 알킬아민 (LCAA) 조절 공극 유리 (controlled pore glass) (CPG) 고체 지지체 (예를 들어, S. P. Adams, K. S. Kavka, E. J. Wykes, S. B. Holder 및 G. R. Galluppi, J. Am. Chem. Soc., 1983, 105, 661-663; G. R. Gough, M. J. Bruden 및 P. T. Gilham, Tetrahedron Lett., 1981, 22, 4177-4180 참고) 를 포함한다. 막 지지체 및 중합체성 막 (예를 들어 Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Peptides, Proteins and Nucleic Acids, ch 21 pp 157-162, 1994, Ed. Roger Epton 및 미국 특허 번호 4,923,901 참고) 이 또한 핵산의 합성에 유용하다. 일단 형성되면, 막은 핵산 합성에 사용하기 위해 화학적으로 관능화될 수 있다. 관능성 기의 막에의 부착에 더하여, 막에 부착된 링커 또는 스페이서 기의 사용이 또한 일부 구현예에서 사용되어 막과 합성된 사슬 사이의 입체 장애를 최소화한다.
기타 적합한 고체 지지체는 고체 상 방법에서 사용하기에 적합한 것으로 기술분야에서 일반적으로 알려진 것들을 포함하고, 예를 들어, PrimerTM 200 지지체로서 판매되는 유리, 조절 공극 유리 (CPG), 옥살릴-조절 공극 유리 (예를 들어, Alul, et al., Nucleic Acids Research, 1991, 19, 1527 참고), TentaGel Support-아미노폴리에틸렌글리콜 유도된 지지체 (예를 들어, Wright, et al., Tetrahedron Lett., 1993, 34, 3373 참고), 및 다공성 (Poros)- 폴리스티렌/디비닐벤젠의 공중합체를 포함한다.
표면 활성화된 중합체는 여러 고체 지지체 매질에서의 천연 및 개질된 핵산 및 단백질의 합성에서의 사용에 대해 입증되었다. 고체 지지체 재료는 온전성을 상실하지 않으면서 임의의 수반되는 조작을 받기에 충분한 유연성 및, 충분한 아민 함량을 갖는, 다공성이 적합하게 균일한 임의의 중합체일 수 있다. 적합한 선택되는 재료의 예는 나일론, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리테트라플루오로에틸렌, 폴리스티렌, 폴리카르보네이트, 및 니트로셀룰로오스를 포함한다. 기타 재료는 연구자의 디자인에 따라 고체 지지체로서의 역할을 할 수 있다. 일부 디자인을 고려하여, 예를 들어, 코팅된 금속, 특히 금 또는 백금이 선택될 수 있다 (예를 들어, 미국 공개 번호 20010055761 참고). 올리고뉴클레오티드 합성의 하나의 구현예에서, 예를 들어, 뉴클레오시드는 히드록실 또는 아미노 잔기로 관능화된 고체 지지체에 고정될 수 있다. 대안적으로, 고체 지지체는 유도체화되어 산 불안정 트리알콕시트리틸 기, 예컨대 트리메톡시트리틸 기 (TMT) 를 제공한다. 이론에 구속되지 않으면서, 트리알콕시트리틸 보호기의 존재는 DNA 합성기에서 통상적으로 사용되는 조건 하에 초기 탈트리틸화를 허용할 것으로 예상된다. 수성 암모니아 함유 용액 중 올리고뉴클레오티드 재료의 더 빠른 방출을 위해, 디글리코에이트 링커가 임의로 지지체에 도입된다.
일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드는 대안적으로 5' 에서 3' 방향으로 합성된다. 일부 구현예에서, 핵산은 고체 지지체에 성장하는 핵산의 5' 말단을 통해 부착되어, 그것의 3' 기를 반응, 즉 5'-뉴클레오시드 포스포라미디트를 사용하는 반응 또는 효소 반응 (예를 들어 뉴클레오시드 5'-트리포스페이트를 사용하는 결찰 및 중합) 에 제시한다. 5' 에서 3' 방향 합성을 고려할 때 본 발명의 반복적 단계는 계속 변하지 않는다 (즉 키랄 인에서의 캡핑 및 개질).
연결 모이어티
연결 모이어티 또는 링커는 임의로 자유 친핵성 모이어티를 포함하는 화합물에 고체 지지체를 연결시키는데 사용된다. 적합한 링커 예컨대 고체 상 합성 기술에서 초기 뉴클레오시드 분자의 관능성 기 (예를 들어, 히드록실 기) 에 고체 지지체를 연결하는 역할을 하는 짧은 분자가 알려져 있다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티는 숙시남산 링커, 또는 숙시네이트 링커 (-CO-CH2-CH2-CO-), 또는 옥살릴 링커 (-CO-CO-) 이다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티 및 뉴클레오시드는 에스테르 결합을 통해 함께 결합되어 있다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티 및 뉴클레오시드는 아미드 결합을 통해 함께 결합되어 있다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티는 뉴클레오시드를 또다른 뉴클레오티드 또는 핵산에 연결시킨다. 적합한 링커는, 예를 들어, Oligonucleotides And Analogues A Practical Approach, Ekstein, F. Ed., IRL Press, N.Y., 1991, Chapter 1 및 Solid-Phase Supports for Oligonucleotide Synthesis, Pon, R. T., Curr. Prot. Nucleic Acid Chem., 2000, 3.1.1-3.1.28 에 개시되어 있다.
링커 모이어티는 자유 친핵성 모이어티를 포함하는 화합물을 또다른 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 핵산에 연결시키는데 사용된다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티는 포스포디에스테르 연결이다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티는 H-포스포네이트 모이어티이다. 일부 구현예에서, 연결 모이어티는 본원에 기재된 바와 같은 개질된 인 연결이다. 일부 구현예에서, 범용 링커 (UnyLinker) 가 올리고뉴클레오티드를 고체 지지체에 부착시키는데 사용된다 (Ravikumar et al., Org. Process Res. Dev.,　2008,　12　(3), 399-410). 일부 구현예에서, 기타 범용 링커가 사용된다 (Pon, R. T., Curr. Prot. Nucleic Acid Chem., 2000, 3.1.1-3.1.28). 일부 구현예에서, 다양한 직교 링커 (예컨대 다이설파이드 링커) 가 사용된다 (Pon, R. T., Curr. Prot. Nucleic Acid Chem., 2000, 3.1.1-3.1.28).
일반적 조건 - 합성용 용매
제공되는 올리고뉴클레오티드의 합성은 일반적으로 반양성자성 유기 용매 중에서 수행된다. 일부 구현예에서, 용매는 니트릴 용매 예컨대, 예를 들어, 아세토니트릴이다. 일부 구현예에서, 용매는 염기성 아민 용매 예컨대, 예를 들어, 피리딘이다. 일부 구현예에서, 용매는 에테르성 용매 예컨대, 예를 들어, 테트라히드로푸란이다. 일부 구현예에서, 용매는 할로겐화 탄화수소 예컨대, 예를 들어, 디클로로메탄이다. 일부 구현예에서, 용매의 혼합물이 사용된다. 특정 구현예에서 용매는 임의의 하나 이상의 위에 기재된 부류의 용매의 혼합물이다.
일부 구현예에서, 반양성자성 유기 용매가 염기성이 아닐 때, 염기는 반응 단계에서 존재한다. 일부 구현예에서 염기가 존재할 때, 염기는 아민 염기 예컨대, 예를 들어, 피리딘, 퀴놀린, 또는 N,N-디메틸아닐린이다. 예시적 기타 아민 염기는 피롤리딘, 피페리딘, N-메틸 피롤리딘, 피리딘, 퀴놀린, N,N-디메틸아미노피리딘 (DMAP), 또는 N,N-디메틸아닐린을 포함한다.
일부 구현예에서, 염기는 아민 염기 이외의 것이다.
일부 구현예에서, 반양성자성 유기 용매는 무수이다. 일부 구현예에서, 무수 반양성자성 유기 용매는 갓 증류된다 (freshly distilled). 일부 구현예에서, 갓 증류된 무수 반양성자성 유기 용매는 염기성 아민 용매 예컨대, 예를 들어, 피리딘이다. 일부 구현예에서, 갓 증류된 무수 반양성자성 유기 용매는 에테르성 용매 예컨대, 예를 들어, 테트라히드로푸란이다. 일부 구현예에서, 갓 증류된 무수 반양성자성 유기 용매는 니트릴 용매 예컨대, 예를 들어, 아세토니트릴이다.
키랄 시약
제공되는 방법에서, 키랄 시약은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 생산에서 입체선택성을 제공하는데 사용된다. 통상의 기술자에 의해 및 본원에서 또한 키랄 보조제로서 언급되는, 많은 상이한 키랄 시약이 본 발명의 방법에 따라 사용될 수 있다. 예시적 그러한 키랄 시약은 본원 및 위에 참조된 Wada I, II 및 III 에 기재되어 있다. 특정 구현예에서, 키랄 시약은 Wada I 에 의해 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 키랄 시약은 하기 화학식 3-I 을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00216
식 중, W1 및 W2 는 -O-, -S-, 또는 -NG5- 중 임의의 것이고, U1 및 U3 는 존재하는 경우 U2 에, 또는 r 이 0 인 경우 서로에게 단일, 이중 또는 삼중 결합을 통해 결합되어 있는 탄소 원자이다. U2 는 -C-, -CG8-, -CG8G8-, -NG8-, -N-, -O-, 또는 -S- 이고, 여기서 r 은 0 내지 5 의 정수이고, 2 개 이하의 헤테로원자가 인접해 있다. U2 중 임의의 하나가 C 일 때, 두번째 경우의 U2 (이는 C 임) 사이에, 또는 U1 또는 U3 중 하나에 삼중 결합이 형성되어야 한다. 유사하게, U2 중 임의의 하나가 CG8 일 때, 두번째 경우의 U2 (이는 -CG8- 또는 -N- 임) 사이에, 또는 U1 또는 U3 중 하나에 이중 결합이 형성된다.
일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3G4-CG1G2- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3= CG1- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -C=C- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3=CG8-CG1G2- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3G4-O-CG1G2- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3G4-NG8-CG1G2- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3G4-N-CG2- 이다. 일부 구현예에서, -U1-(U2)r-U3- 은 -CG3G4-N=C G8-CG1G2- 이다.
본원에서 정의되는, G1, G2, G3, G4, G5, 및 G8 은 독립적으로 수소, 또는 알킬, 아르알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 및 아릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이거나; 또는 G1, G2, G3, G4, 및 G5 중 2 개는 함께 모노시클릭 또는 폴리시클릭, 융합형 또는 비융합형 약 20 개 이하의 고리 원자의 임의로 치환된, 포화, 부분 불포화 또는 불포화 카르보시클릭 또는 헤테로원자-함유 고리를 형성하는 G6 이다. 일부 구현예에서, 그렇게 형성되는 고리는 옥소, 티옥소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로아릴, 또는 아릴 모이어티로 치환되어 있다. 일부 구현예에서, 2 개의 G6 에 의해 형성되는 고리가 치환되어 있을 때, 그것은 반응 동안 입체선택성을 제공하기에 충분히 부피가 큰 모이어티에 의해 치환되어 있다.
일부 구현예에서, 2 개의 G6 에 의해 함께 형성되는 고리는 임의로 치환된 시클로펜틸, 피롤릴, 시클로프로필, 시클로헥세닐, 시클로펜테닐, 테트라히드로피라닐, 또는 피페라지닐이다. 일부 구현예에서, 2 개의 G6 에 의해 함께 형성되는 고리는 임의로 치환된 시클로펜틸, 피롤릴, 시클로프로필, 시클로헥세닐, 시클로펜테닐, 테트라히드로피라닐, 피롤리디닐, 또는 피페라지닐이다.
일부 구현예에서, G1 은 임의로 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, G1 은 페닐이다. 일부 구현예에서, G2 는 메틸 또는 수소이다. 일부 구현예에서, G1 은 임의로 치환된 페닐이고, G2 는 메틸이다. 일부 구현예에서, G1 은 페닐이고, G2 는 메틸이다.
일부 구현예에서, r 은 0 이다.
일부 구현예에서, W1 은 -NG5- 이다. 일부 구현예에서, G3 및 G4 중 하나는 G5 와 함께 임의로 치환된 피롤리디닐 고리를 형성한다. 일부 구현예에서, G3 및 G4 중 하나는 G5 와 함께 피롤리디닐 고리를 형성한다.
일부 구현예에서, W2 는 -O- 이다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 3-AA 의 화합물이다:
Figure 112015015568410-pct00217
식 중, 각각의 변수는 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다.
화학식 3AA 의 일부 구현예에서, W1 및 W2 는 독립적으로 -NG5-, -O-, 또는 -S- 이고; G1, G2, G3, G4, 및 G5 는 독립적으로 수소, 또는 알킬, 아르알킬, 시클로알킬, 시클로알킬알킬, 헤테로시클릴, 헤테로아릴, 또는 아릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이거나; 또는 G1, G2, G3, G4, 및 G5 중 2 개는 함께 모노시클릭 또는 폴리시클릭, 융합형 또는 비융합형 약 20 개 이하의 고리 원자의 임의로 치환된 포화, 부분 불포화 또는 불포화 카르보시클릭 또는 헤테로원자-함유 고리를 형성하는 G6 이고, G1, G2, G3, G4, 및 G5 중 4 개 이하는 G6 이다. 화학식 3-I 의 화합물과 유사하게, G1, G2, G3, G4, 또는 G5 중 임의의 것은 옥소, 티옥소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로아릴, 또는 아릴 모이어티에 의해 임의로 치환되어 있다. 일부 구현예에서, 그러한 치환은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 생산에서 입체선택성을 유도한다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 중 하나를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00218
.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 아미노알코올이다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아미노티올이다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아미노페놀이다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 (S)- 및 (R)-2-메틸아미노-1-페닐에탄올, (1R, 2S)-에페드린, 또는 (1R, 2S)-2-메틸아미노-1,2-디페닐에탄올이다.
본 발명의 일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 중 하나의 화합물이다:
Figure 112015015568410-pct00219
.
키랄 시약, 예를 들어, 화학식 Q 로 표시되는 이성질체 또는 그것의 입체이성질체, 화학식 R 의 선택은 인 연결에서 키랄성의 특이적 제어를 허용한다. 따라서, Rp 또는 Sp 입체배치가 각각의 합성 사이클에서 선택되어, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 전체적 3차원 구조의 제어를 허용할 수 있다. 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 전부 Rp 입체중심을 갖는다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 전부 Sp 입체중심을 갖는다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 내의 각각의 인 연결은 독립적으로 Rp 또는 Sp 이다. 본 발명의 일부 구현예에서, 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 내의 각각의 인 연결은 독립적으로 Rp 또는 Sp 이고, 적어도 하나는 Rp 이고 적어도 하나는 Sp 이다. 일부 구현예에서, Rp 및 Sp 중심의 선택은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드에게 특이적 3차원 상부구조를 제공하도록 이루어진다. 예시적 그러한 선택은 본원에서 추가로 상세히 기재된다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 키랄 시약은 위에 나타낸 사이클 내의 특별한 단계에서 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서 인 연결의 개질 단계 동안 키랄 시약을 제거하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 인 연결의 개질 단계 전에 키랄 시약을 제거하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 인 연결의 개질 단계 후에 키랄 시약을 제거하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 제 1 커플링 단계가 일어난 후에 그러나 제 2 커플링 단계가 일어나기 전에 키랄 시약을 제거하여, 제 2 커플링 동안 (및 마찬가지로 부가적 후속 커플링 단계 동안) 성장하는 올리고뉴클레오티드에 키랄 시약이 존재하지 않도록 하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 인 연결의 개질 후에 그러나 후속 사이클의 시작 전에 일어나는 "탈차단" 반응 동안 키랄 시약이 제거된다. 제거를 위한 예시적 방법 및 시약이 본원에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 키랄 보조기의 제거는 개질 및/또는 탈차단 단계를 수행할 때 달성되며, 이는 반응식 I 에 나타나 있다. 키랄 보조기 제거를 기타 변환, 예컨대 개질 및 탈차단과 함께 조합하는 것이 유익할 수 있다. 통상의 기술자는 절약된 단계/변환이, 특히 더 긴 올리고뉴클레오티드의 경우, 예를 들어, 수율 및 생성물 순도에 관하여, 합성의 전체적 효율을 개선할 수 있음을 이해할 것이다. 개질 및/또는 탈차단 동안 키랄 보조기가 제거되는 하나의 예가 반응식 I 에 나타나 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 키랄 시약은 그것이 특정 조건 하에 제거가능하다는 것을 특징으로 한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 키랄 시약은 산성 조건 하에 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 특정 구현예에서, 키랄 시약은 약산성 조건 하에 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 특정 구현예에서, 키랄 시약은 E1 제거 반응에 의해 제거되는 그것의 능력으로 선택된다 (예를 들어, 산성 조건 하에 키랄 시약 상의 양이온 중간체의 형성으로, 키랄 시약이 올리고뉴클레오티드로부터 절단됨으로써 제거가 일어남). 일부 구현예에서, 키랄 시약은 E1 제거 반응을 수용 또는 촉진할 수 있다고 인정되는 구조를 갖는 것을 특징으로 한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 그러한 제거 반응을 겪을 경향이 있다고 예상되는 구조를 인식할 것이다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 친핵체로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아민 친핵체로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아민 이외의 친핵체로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 염기로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아민으로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 아민 이외의 염기로 제거되는 그것의 능력으로 선택된다.
키랄 시약의 추가의 구현예
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드를 합성하는데 사용되는 키랄 시약에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 위에 및 본원에 기재된 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 위에 및 본원에 기재된 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 위에 및 본원에 기재된 황화 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 위에 및 본원에 기재된 산화 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 그러한 키랄 시약은 화학식 Z-I 의 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 염기 및/또는 친핵체로 처리하여 제거되는 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 염기 및/또는 친핵체로 처리하여 제거되고, 위에 및 본원에 기재된 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 아민을 포함하는 처리로 제거되는 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 아민을 포함하는 처리로 제거되고, 위에 및 본원에 기재된 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본 출원에 기재된 탈보호/절단 조건으로 제거되고, 위에 및 본원에 기재된 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약을 제공한다. 일부 구현예에서, 그러한 키랄 시약은 화학식 Z-I 의 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 위에 및 본원에 기재된 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성된다. 일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 위에 및 본원에 기재된 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 여기서 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 또는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 또는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 원하는 올리고뉴클레오티드 길이가 달성될 때까지 제거되지 않는다. 일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 또는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 사이클 퇴장 후까지 제거되지 않는다. 일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 또는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 고체 지지체로부터 절단되기 전까지 제거되지 않는다. 일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 사용되어 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 또는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 고체 지지체로부터 절단되기 전까지 제거되지 않고, 고체 지지체로부터 절단되는 단계와 동일한 단계에서 제거가 수행된다. 일부 구현예에서, 그러한 키랄 시약은 화학식 Z-I 의 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, 커플링, 캡핑, 개질 및 탈차단 단계에 안정적인 키랄 시약이 올리고뉴클레오티드 합성에서 사용될 때, 커플링에 대해 준비된 5'-OH 를 갖는 올리고뉴클레오티드는 반응식 I, I-b, I-c, I-d, Z-1 및 Z-2 에 기재된 것을 포함하는 임의의 합성 사이클에서 유래할 수 있다. 일부 구현예에서, 커플링에 대해 준비된 5'-OH 를 갖는 올리고뉴클레오티드는 위에 및 본원에 기재된 다양한 유형의 뉴클레오티드간 연결을 포함한다. 커플링 후에, 본 출원에 기재된 개질 단계는 인 연결에 원하는 개질을 가한다. 생성물은 탈차단 전에/후에 사이클에서 퇴장하거나, 5'-OH 탈차단 후에 다음 사이클에 입장한다. 다음 사이클은 그에 제한되는 것은 아니나 반응식 I, I-b, I-c, I-d, Z-1 및 Z-2 에 나타낸 것을 포함하는 본 출원에 기재된 임의의 합성 사이클일 수 있다고 통상의 기술자에 의해 이해된다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 키랄 시약 또는 그의 염은 하기 화학식 (Z-I) 을 갖는다.
Figure 112015015568410-pct00220
화학식 (Z-I) 에서, Gz1 및 Gz2 는 독립적으로 수소 원자, 니트로 기 (-NO2), 할로겐 원자, 시아노 기 (-CN), 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 G1 및 G2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성한다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-II) 의 기는 아래 나타낸 바와 같다:
Figure 112015015568410-pct00221
식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-III) 의 기는 아래 나타낸 바와 같다:
Figure 112015015568410-pct00222
식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6-14 아릴 기 C1-4 알콕시 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-IV) 의 기는 아래 나타낸 바와 같다:
Figure 112015015568410-pct00223
식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
Gz3 및 Gz4 은 독립적으로 수소 원자, C1-3 알킬 기, C6-14 아릴 기이거나, 또는 Gz3 및 Gz4 는 둘다 함께 화학식 (Z-I) 내의 NH 모이어티와 함께 탄소수 3 내지 16 의 헤테로원자-함유 고리를 형성한다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 (Z-I') 을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00224
식 중, Gz1 및 Gz2 는 상기와 동일하다. 즉, Gz1 및 Gz2 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기, 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 Gz1 및 Gz2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성한다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, 각각의 Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 여기서, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, 각각의 Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 각각의 G21 내지 G23 은 수소 원자이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 각각의 G21 및 G22 는 수소 원자이고, G23 은 니트로 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6-14 아릴 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (I') 을 갖고, G1 은 수소 원자이고, G2 는 화학식 (III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6 아릴 기, C7-10 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6 아릴 기, C1-4 알콕시 C6 아릴 기, 또는 C6 아릴 C1-4 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기 또는 C6 아릴 기이다. C1-4 알킬 기의 예는 메틸 기, 에틸 기, n-프로필 기, iso-프로필 기, n-부틸 기 및 tert-부틸 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 및 G33 은 C6 아릴 기이고, G32 는 C1-4 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-4 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, 각각의 G41 내지 G46 은 수소 원자이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 3a, 3b, 5a, Z-5b, 7a, 7b, 9a, 9b, 11a 및 11b 중 하나로부터 선택된다:
Figure 112015015568410-pct00225
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 하기 화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시된다:
Figure 112015015568410-pct00226
식 중, Gz1 내지 Gz4 는 상기와 동일하고, Gz5 는 히드록실 기의 보호기이고, Bs 는 하기 화학식 (Z-VI) 내지 (Z-XI) 로 표시되는 기, 또는 그의 유도체로부터 선택되는 기이다.
Figure 112015015568410-pct00227
Bs 의 예는 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 우라실, 5-메틸시토신 또는 그의 유도체이고;
Rz2 는 독립적으로 수소, -OH, -SH, -NRdRd, -N3, 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y1-, 알케닐-Y1-, 알키닐-Y1-, 아릴-Y1-, 헤테로아릴-Y1-, -ORb, 또는 -SRb 이고, Rb 는 차단 모이어티이고;
Y1 은 O, NRd, S, 또는 Se 이고;
Rd 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아실, 치환된 실릴, 카르바메이트, -P(O)(Re)2, 또는 -HP(O)(Re) 이고;
Re 는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y2-, 알케닐- Y2-, 알키닐-Y2-, 아릴-Y2-, 또는 헤테로아릴-Y2-, 또는 양이온 Na+, Li+, 또는 K+, 또는 -O- 이고;
Y2 는 O, NRd, 또는 S 이고;
Rz3 은 -CH2-, -(CH2)2-, -CH2NH-, 또는 -CH2N(CH3)- 로 표시되는 기이다.
G5 의 예는 트리틸, 4-모노메톡시트리틸, 4,4'-디메톡시트리틸, 4,4',4''-트리메톡시트리틸, 9-페닐크산틴-9-일 (Pixyl) 및 9-(p-메톡시페닐)크산틴-9-일 (MOX) 이다.
일부 구현예에서, 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 하기 화학식 (Z-Va') 또는 (Z-Vb') 로 표시된다:
Figure 112015015568410-pct00228
식 중, 각각의 Gz1, Gz2, Gz5, Bs, Rz2, 및 Rz3 은 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 합성 방법에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 제공되는 방법은 아키랄 H-포스포네이트 모이어티를 포함하는 분자, 제 1 활성화 시약 및 키랄 시약 또는 그의 염을 반응시켜 단량체를 형성하는 제 1 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I) 을 갖고, 단량체는 화학식 (Z-Va), (Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb') 로 표시될 수 있다. 단량체는 제 2 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응하여 축합된 중간체를 형성한다. 일부 구현예에서, 후속 단계는 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 출발 재료로서 안정적이고 상업적으로 입수가능한 재료를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 아키랄 출발 재료를 사용하여 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
작업예에서 제시되는 바와 같이, 일부 구현예에서 본 발명의 방법은 탈보호 단계 동안 붕괴를 야기하지 않는다. 나아가 본 발명의 방법은 특별한 캡핑제를 요구하지 않고 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체를 생성한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 단량체를 사용하여 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체를 합성하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제 1 단계는 화학식 (Z-Va), (Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb') 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제 2 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 것이다. 제 2 단계는 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 것이다.
본 명세서에서 개시된 모든 공개 및 특허 출원은 각각의 개별 공개 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 명시된 것과 동일한 정도로 전문이 참조로 본원에 포함된다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 축합 반응에서, 용어 "활성화 시약" 은 반응성이 더 적은 자리를 활성화시키고 그것을 친핵체에 의한 공격에 더욱 감수성으로 만드는 시약을 언급한다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알킬" 기는 지방족 탄화수소 기를 언급한다. 알킬 모이어티는 포화 알킬 기 (이는 그것이 불포화 단위체, 예를 들어 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-탄소 삼중 결합을 전혀 함유하지 않음을 의미함) 일 수 있거나 또는 알킬 모이어티는 불포화 알킬 기 (이는 그것이 하나 이상의 불포화 단위체를 함유함을 의미함) 일 수 있다. 알킬 모이어티는, 포화이든 또는 불포화이든, 분지형, 직선형 사슬이거나, 시클릭 부분을 포함할 수 있다. 알킬의 부착점은 고리의 일부가 아닌 탄소 원자이다. "알킬" 모이어티는 탄소수 1 내지 10 일 수 있다 (그것이 본원에서 출현할 때마다, 수치 범위 예컨대 "1 내지 10" 은 주어진 범위 내의 각각의 정수를 언급한다; 예를 들어, "탄소수 1 내지 10" 은 알킬 기가 1 개의 탄소 원자, 2 개의 탄소 원자, 3 개의 탄소 원자, 10 개 이하의 탄소 원자 등으로 이루어질 수 있음을 의미하지만, 본 정의는 또한 수치 범위가 지정되지 않는 용어 "알킬" 을 포괄함). 알킬은 분지형 및 직선형 사슬 알킬 기를 둘다 포함한다. 본원에 기재된 화합물의 알킬 기는 "C1-C6 알킬" 또는 유사한 명칭으로 지정될 수 있다. 오직 예로서, "C1-C6 알킬" 은 알킬 사슬 내에 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6 개의 탄소 원자가 존재하며, 즉, 알킬 사슬이 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, iso-프로필, n-부틸, iso-부틸, sec-부틸, 및 tert-부틸로부터 선택됨을 나타낸다. 전형적인 알킬 기는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3 차 부틸, 펜틸, 헥실, 알릴, 시클로프로필메틸, 시클로부틸메틸, 시클로펜틸메틸, 시클로헥실메틸 등을 포함하나, 그에 제한되지 않는다. 하나의 양상에서, 알킬은 C1-C6 알킬이다. C1-3 알킬 기는 탄소수 1 내지 3 의 직선형 또는 분지형 알킬 기를 의미한다. C1-3 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필 및 이소프로필이다. C1-4 알킬 기는 탄소수 1 내지 4 의 직선형 또는 분지형 알킬 기를 의미한다. C1-4 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 및 tert-부틸이다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "아릴" 은 고리를 형성하는 각각의 원자가 탄소 원자인 방향족 고리를 언급한다. 아릴 고리는 5, 6, 7, 8, 9 개, 또는 9 개 초과의 탄소 원자로 형성된다. 아릴 기는 치환되거나 치환되지 않는다. 하나의 양상에서, 아릴은 페닐 또는 나프탈레닐이다. 구조에 따라, 아릴 기는 모노라디칼 또는 2가 라디칼 (즉, 아릴렌 기) 일 수 있다. 하나의 양상에서, 아릴은 C6-C10 아릴이다. C6-14 아릴 기는 탄소수 6 내지 14 의 아릴 기를 의미한다. C6-14 아릴 기의 예는 페닐, 바이페닐, 나프틸, 안트라실, 인다닐, 프탈이미딜, 나프티미딜, 페난트리디닐, 및 테트라히드로나프틸이다.
용어 "아르알킬" 은 아릴 기로 치환된 알킬 기를 언급한다. 적합한 아르알킬 기는 벤질, 피콜일 등을 포함하며, 이들은 모두 임의로 치환될 수 있다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "아실 모이어티" 는 알킬(C=O), 아릴(C=O), 또는 아르알킬(C=O) 기를 언급한다. 아실 모이어티는 카르보닐 및 탄화수소 기 사이에 개재 모이어티 (Y) 옥시, 아미노, 티오, 또는 셀레노를 가질 수 있다. 예를 들어, 아실 기는 알킬-Y-(C=O), 아릴-Y-(C=O) 또는 아르알킬-Y-(C=O) 일 수 있다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알케닐" 기는 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 직선형 사슬, 분지형 사슬, 및 시클릭 탄화수소 기이다. 알케닐 기는 치환될 수 있다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알키닐" 기는 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 직선형 사슬, 분지형 사슬, 및 시클릭 탄화수소 기이다. 알키닐 기는 치환될 수 있다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알콕시" 기는 산소에 연결된 알킬 기, 즉 (알킬)-O- 기를 언급하며, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다. 예는 메톡시 (-OCH3) 또는 에톡시 (-OCH2CH3) 기를 포함한다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알케닐옥시" 기는 산소에 연결된 알케닐 기, 즉 (알케닐)-O- 기를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알키닐옥시" 기는 산소에 연결된 알키닐 기, 즉 (알키닐)-O- 기를 언급하며, 여기서 알키닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "아릴옥시" 기는 산소에 연결된 아릴 기, 즉 (아릴)-O-기를 언급하며, 여기서 아릴은 본원에 정의된 바와 같다. 예는 페녹시 (-OC6H5) 기를 포함한다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알킬셀레노" 는 치환된 셀레노 기가 부착되어 있는 알킬 기, 즉 (알킬)-Se- 기를 언급하며, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알케닐셀레노" 는 치환된 셀레노 기가 부착되어 있는 알케닐 기, 즉 (알케닐)-Se- 기를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알키닐셀레노" 는 치환된 셀레노 기가 부착되어 있는 알키닐 기, 즉 (알키닐)-Se- 기를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알킬티오" 는 가교 황 원자에 부착된 알킬 기, 즉 (알킬)-S-기를 언급하며, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다. 예를 들어, 알킬티오는 메틸티오 등이다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알케닐티오" 는 가교 황 원자에 부착된 알케닐 기, 즉 (알케닐)-S- 기를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알키닐티오" 는 가교 황 원자에 부착된 알키닐 기, 즉 (알키닐)-S- 기를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알킬아미노" 는 하나 이상의 알킬 기로 치환된 아미노 기, 즉 -NH(알킬) 또는 -N(알킬)2 를 언급하며, 여기서 알킬은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알케닐아미노" 는 하나 이상의 알케닐 기로 치환된 아미노 기, 즉 - NH(알케닐) 또는 -N(알케닐)2 를 언급하며, 여기서 알케닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "알키닐아미노" 는 하나 이상의 알키닐 기로 치환된 아미노 기, 즉 - NH(알키닐) 또는 -N(알키닐)2 를 언급하며, 여기서 알키닐은 본원에 정의된 바와 같다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "할로겐" 은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 포함하는 것으로 의도된다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "형광 기" 는, 선택된 파장을 갖는 빛으로 여기되었을 때, 상이한 파장의 빛을 방사하는 분자를 언급한다. 형광 기는 인돌 기, 플루오레세인, 테트라메틸로다민, 텍사스 레드 (Texas Red), BODIPY, 5-[(2-아미노에틸)아미노]나프탈렌-l-술폰산 (EDANS), 쿠마린 및 루시퍼 옐로우 (Lucifer yellow) 를 포함하나 그에 제한되지 않는다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "암모늄 이온" 은 양전하로 하전된 화학식 NH4 + 의 다원자 양이온이다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "알킬암모늄 이온" 은 하나 이상의 그것의 수소 원자가 알킬 기로 대체된 암모늄 이온을 언급하며, 여기서 알킬은 본원에서 정의된 바와 같다. 예는 트리에틸암모늄 이온, N,N-디이소프로필에틸암모늄 이온을 포함한다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, "이미늄 이온" 은 일반적 구조 (Rx)2C=N(Rx)2 + 를 갖는다. Rx 기는 본원에서 정의된 바와 같은 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 기를 언급한다. "헤테로방향족 이미늄 이온" 은 질소 및 그것의 부착된 Rx 기가 헤테로방향족 고리를 형성하는 이미늄 이온을 언급한다. "헤테로시클릭 이미늄 이온" 은 질소 및 그것의 부착된 Rx 기가 헤테로시클릭 고리를 형성하는 이미늄 이온을 언급한다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "아미노" 또는 "아민" 은 명세서에서 구체적으로 다르게 언급되지 않으면 -N(Rh)2 라디칼 기를 언급하며, 여기서 각각의 Rh 는 독립적으로 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬이다. -N(Rh)2 기가 수소 이외의 2 개의 Rh 를 가질 때, 그들은 질소 원자와 조합되어 4-, 5-, 6-, 또는 7-원 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, -N(Rh)2 는 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포하하나 그에 제한되지 않는다. 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬 중 임의의 하나 이상은 독립적으로 알킬, 헤테로알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 히드록시, 할로, 시아노, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 니트로, 트리메틸실릴, -ORi, -SRi, -OC(O)Ri, -N(Ri)2, -C(O)Ri, -C(O)ORi, -OC(O)N(Ri)2, -C(O)N(Ri)2, -N(Ri)C(O)OR, -N(Ri)C(O)Ri, -N(Ri)C(O)N(Ri)2, N(Ri)C(NRi)N(Ri)2, -N(Ri)S(O)tRi (식 중, t 는 1 또는 2 임), -S(O), 또는 -S(O)tN(Ri)2 (식 중, t 는 1 또는 2 임) (여기서, 각각의 Ri 는 독립적으로 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬임) 인 하나 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 본원에서 사용되는 "카르바메이트" 는 화학식 -C(O)OR (식 중, R 은 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬임) 을 갖는 아미노 기에 부착된 모이터티를 언급한다. 예는 Boc (tert-부틸-OC(O)-), CBz (벤질-OC(O)-), Teoc (Me3SiCH2CH2OC(O)-), 알록 (알릴-OC(O)-), 또는 Fmoc (9-플루오레닐메틸-OC(O)-) 기를 포함하나 그에 제한되지 않는다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 본원에서 사용되는 "치환된 실릴" 은 화학식 Rx 3Si- 를 갖는 모이어티를 언급한다. 예는 TBDMS (tert-부틸디메틸실릴), TBDPS (tert-부틸디페닐실릴) 또는 TMS (트리메틸실릴) 을 포함하나 그에 제한되지 않는다.
이 "키랄 시약의 추가의 구현예" 섹션에서 사용되는, 용어 "티올" 은 -SH 기를 언급하고, 치환된 티올 기, 즉 -SRJ 기 (식 중, RJ 는 각각 독립적으로 본원에서 정의된 바와 같은 치환 또는 미치환 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 아르알킬, 헤테로시클릴 또는 헤테로시클릴알킬 기임) 를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 시약 또는 그의 염을 제공한다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 (Z-I) 을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00229
식 중, Gz1 및 Gz2 는 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 (-CN), 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 Gz1 및 Gz2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성한다. 일부 구현예에서, 용어 "키랄 시약" 은 입체제어되는 인 원자-개질된 뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 유도체를 생성하는데 사용되는 화학적 조성물이다. 키랄 시약은 뉴클레오시드와 반응하여 키랄 중간체를 형성한다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-II) 의 기는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00230
식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, G21 내지 G23 의 예는 수소 원자이다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-III) 의 기는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00231
식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이다. C1-4 알킬 C6-14 아릴 기의 예는 메틸페닐 기, 및 에틸페닐 기이다. C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기의 예는 메톡시페닐 기 및 에톡시페닐 기이다. C6-14 아릴 C1-4 알킬 기의 예는 벤질 기 및 페닐에틸 기이다. 일부 구현예에서, G31 내지 G33 의 예는 독립적으로 메틸 기 및 페닐 기이다.
일부 구현예에서, 화학식 (Z-IV) 의 기는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00232
식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, G41 내지 G46 의 예는 수소 원자이다.
Gz3 및 Gz4 은 독립적으로 수소 원자, C1-3 알킬 기, C6-14 아릴 기이거나, 또는 Gz3 및 Gz4 는 둘다 함께 탄소수 3 내지 16 의 헤테로원자-함유 고리를 형성한다. 일부 구현예에서, G3 및 G4 의 예는 화학식 (I) 내의 NH 모이어티와 함께 탄소수 3 내지 16 의 헤테로원자-함유 고리를 형성하는 것이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 (Z-I') 을 갖는다.
Figure 112015015568410-pct00233
화학식 (Z-I') 에서, Gz1 및 Gz2 는 상기와 동일하고, Gz1 및 Gz2 는 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기, 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 Gz1 및 Gz2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성한다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, 각각의 Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 여기서 G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, 각각의 Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 각각의 G21 내지 G23 은 수소 원자이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 각각의 G21 및 G22 는 수소 원자이고, G23 은 니트로 기 (-NO2) 이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6-14 아릴 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이다.
일부 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기 또는 C6 아릴 기 (페닐 기) 이다. C1-4 알킬 기의 예는 메틸 기, 에틸 기, n-프로필 기, iso-프로필 기, n-부틸 기 및 tert-부틸 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-2 알킬 기 (메틸 기 또는 에틸 기) 또는 C6 아릴 기 (페닐 기) 이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, G31 및 G33 은 C6 아릴 기 (페닐 기) 이고, G32 는 C1-2 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I') 을 갖고, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, 각각의 G41 내지 G46 은 수소 원자이다.
특정 구현예에서, 키랄 시약은 하기 화학식 3a, 3b, 5a, Z-5b, 7a, 7b, 9a, 9b, 11a 및 11b 중 하나로부터 선택된다:
Figure 112015015568410-pct00234
.
즉, 일부 구현예에서, 키랄 시약은 하기로부터 선택된다:
(S)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((S)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (3a),
(R)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((R)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (3b),
(S)-2-(트리메틸실릴)-1-((S)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (5a),
(R)-2-(트리메틸실릴)-1-((R)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (Z-5b),
(R)-2,2-디페닐-1-((S)-피롤리딘-2-일)에탄올 (7a),
(S)-2,2-디페닐-1-((R)-피롤리딘-2-일)에탄올 (7b),
(R)-2-(4-니트로페닐)-1-((S)-피롤리딘-2-일)에탄올 (9a),
(S)-2-(4-니트로페닐)-1-((R)-피롤리딘-2-일)에탄올 (9b),
(R)-(9H-플루오로렌-9-일)((S)-피롤리딘-2-일)메탄올 (11a), 또는
(S)-(9H-플루오로렌-9-일)((R)-피롤리딘-2-일)메탄올 (11b).
키랄 시약은 비대칭 보조기인 핵산 또는 개질된 핵산과 반응한다. 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 제조의 중간체인, 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 핵산 또는 개질된 핵산과 반응하는 키랄 시약에 의해 수득된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제공한다. 화학식 (Z-Va) 및 (Z-Vb) 의 화합물은 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성에 사용되는 단량체로서 알려져 있다. 이들 화합물은 또한 옥사자포스폴리딘 단량체로서 알려져 있다. 화학식 (Z-Vb) 로 표시되는 화합물의 당 모이어티는 BNA 및 LNA (Rz3 이 메틸렌 기일 때) 로서 알려져 있다.
Figure 112015015568410-pct00235
화학식 (Z-Va) 및 (Z-Va) 에서, Gz1 내지 Gz4 는 상기와 동일하고, Gz5 는 히드록실 기의 보호기이고, Bs 는 하기 화학식 (Z-VI) 내지 (Z-XI) 또는 그의 유도체로 표시되는 기로부터 선택되는 기이다.
Figure 112015015568410-pct00236
Bs 의 예는 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 우라실, 5-메틸시토신 또는 그의 유도체이고;
Rz2 는 독립적으로 수소, -OH, -SH, -NRdRd, -N3, 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y1-, 알케닐-Y1-, 알키닐-Y1-, 아릴-Y1-, 헤테로아릴-Y1-, -ORb, 또는 -SRb 이고, 여기서 Rb 는 차단 모이어티이고;
Y1 은 O, NRd, S, 또는 Se 이고;
Rd 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아실, 치환된 실릴, 카르바메이트, -P(O)(Re)2, 또는 -HP(O)(Re) 이고;
Re 는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y2-, 알케닐- Y2-, 알키닐-Y2-, 아릴-Y2-, 또는 헤테로아릴-Y2-, 또는 양이온 Na+, Li+, 또는 K+, 또는 -O- 이고;
Y2 는 O, NRd, 또는 S 이고;
Rz3 은 -CH2-, -(CH2)2-, -CH2NH-, 또는 -CH2N(CH3)- 로 표시되는 기이다.
Gz5 의 예는 트리틸, 4-모노메톡시트리틸, 4,4'-디메톡시트리틸, 4,4',4''-트리메톡시트리틸, 9-페닐크산틴-9-일 (Pixyl) 및 9-(p-메톡시페닐)크산틴-9-일 (MOX) 이다.
일부 구현예에서, Bs 는 아데닌, 티민, 시토신, 구아닌, 또는 그의 유도체이다. 일부 구현예에서, Bs 는 핵염기 또는 개질된 핵염기이다. 예시적 유도체는, 예를 들어, JP 2005-89441 A 에 개시된 것들이고, 하기와 같이 표시된다:
Figure 112015015568410-pct00237
상기 화학식에서, 각각의 R8 내지 R10 은 독립적으로 C1-10 알킬, C6-C10 아릴, C6-C10 아르알킬, 또는 C6-C10 아릴옥시알킬이다. 일부 구현예에서, R8 은 메틸, 이소프로필, 페닐, 벤질, 및 페녹시메틸이다. 일부 구현예에서, R9 및 R10 은 C1-4 알킬 기이다.
일부 구현예에서, 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 하기 화학식 (Z-Va') 또는 (Z-Vb') 로 표시된다:
Figure 112015015568410-pct00238
화학식 (Z-Va') 및 (Z-Vb') 에서, 각각의 Gz1, Gz2, Gz5, Bs, Rz2 및 Rz3 는 상기와 동일하다. 특정 구현예에서, 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 입체제어되는 인 원자-개질된 뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드를 생성하는데 사용되는 키랄 단량체이다. 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체의 예는 하기 화학식으로 표시된다: 12a, 12b, 13a, 13b, 14a, 14b, 15a, 15b, 16a, 16b, 17a, 17b, 18a, 18b, 19a, 19b, 20a, 20b, 21a, 21b, 22a, 22b, 23a, 23b, 24a, 24b, 25a, 25b, 26a, 26b, 27a, 27b, 28a, 28b, 29a, 29b, 30a, 30b, 31a, 31b, 32a, 32b, 33a, 33b, 34a, 34b 및 35a.
Figure 112015015568410-pct00239
Figure 112015015568410-pct00240
Figure 112015015568410-pct00241
Figure 112015015568410-pct00242
Figure 112015015568410-pct00243
Figure 112015015568410-pct00244
Figure 112015015568410-pct00245
Figure 112015015568410-pct00246
DMTr 은 4,4'-디메톡시트리틸 기를 나타내고, TOM 은 트리이소프로필실록시메틸 기를 나타낸다.
뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 사용하는 예는, 예를 들어, JP 2005-89441 A 에 개시되어 있다. 축합 및 탈보호 단계를 반복함으로써, 본 발명의 방법은 본원에 개시된 바와 같이 올리고뉴클레오티드 사슬의 연장을 촉진한다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 화학식 (Z-X) 로 표시된다:
Figure 112015015568410-pct00247
화학식 (Z-X) 에서, Xz 는 설파이드 (=S), C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C1-3 알킬티오, C6-C10 아릴, C6-C10 아르알킬, 또는 C6-C10 아릴옥시알킬을 나타낸다. 일부 구현예에서, Xz 는 설파이드 (=S) 를 나타낸다. nz 는 1 내지 150, 1 내지 100, 1 내지 50, 또는 1 내지 30 을 나타내는 정수이다. 일부 구현예에서, nz 는 바람직하게는 2 내지 100, 바람직하게는 10 내지 100, 바람직하게는 10 내지 50, 더욱 바람직하게는 15 내지 30 이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제 1 단계는 아키랄 H-포스포네이트 모이어티를 포함하는 분자, 제 1 활성화 시약 및 키랄 시약 또는 그의 염을 반응시켜 단량체를 형성하는 단계이다. 일부 구현예에서, 키랄 시약은 화학식 (Z-I) 또는 (Z-I') 을 갖고, 단량체는 화학식 (Z-Va), (Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb') 로 표시될 수 있다. 단량체는 제 2 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응하여 축합된 중간체를 형성한다. 다음 단계는 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계이다. 일부 구현예에서, 방법은 WO 2010/064146 에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 단계는 WO 2010/064146 의 경로 A 및 경로 B 에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명은 아래 반응식 Z-1 에 나타낸 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 합성 방법을 제공한다.
Figure 112015015568410-pct00248
활성화
아키랄 H-포스포네이트 모이어티는 제 1 활성화 시약으로 처리되어 제 1 중간체를 형성한다. 하나의 구현예에서, 제 1 활성화 시약은 축합 단계 동안 반응 혼합물에 첨가된다. 제 1 활성화 시약의 사용은 반응 조건 예컨대 반응에 사용되는 용매에 의존적이다. 제 1 활성화 시약의 예는 포스겐, 트리클로로메틸 클로로포르메이트, 비스(트리클로로메틸)카르보네이트 (BTC), 옥살릴 클로리드, Ph3PCl2, (PhO)3PCl2, N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로리드 (BopCl), 1,3-디메틸-2-(3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일)-2-피롤리딘-1-일-1,3,2-디아자포스폴리디늄 헥사플루오로포스페이트 (MNTP), 또는 3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일-트리스(피롤리딘-1-일)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyNTP) 이다.
아키랄 H-포스포네이트 모이어티의 예는 상기 반응식에 제시된 화합물이다. DBU 는 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데크-7-엔이다. H+DBU 는, 예를 들어, 암모늄 이온, 알킬암모늄 이온, 헤테로방향족 이미늄 이온, 또는 헤테로시클릭 이미늄 이온이며, 이들 중 임의의 것은 일차, 2 차, 3 차 또는 4 차, 또는 1 가 금속 이온이다.
키랄 시약과의 반응
제 1 활성화 단계 후에, 활성화된 아키랄 H-포스포네이트 모이어티는 화학식 (Z-I) 또는 (Z-I') 로 표시되는 키랄 시약과 반응하여, 화학식 (Z-Va), (Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb') 의 키랄 중간체를 형성한다.
입체특이적 축합 단계
화학식 Z-Va ((Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb')) 의 키랄 중간체는 제 2 활성화 시약 및 뉴클레오시드로 처리되어 축합된 중간체를 형성한다. 뉴클레오시드는 고체 지지체 상에 있을 수 있다. 제 2 활성화 시약의 예는 4,5-디시아노이미다졸 (DCI), 4,5-디클로로이미다졸, 1-페닐이미다졸륨 트리플레이트 (PhIMT), 벤즈이미다졸륨 트리플레이트 (BIT), 벤즈트리아졸, 3-니트로-1,2,4-트리아졸 (NT), 테트라졸, 5-에틸티오테트라졸 (ETT), 5-벤질티오테트라졸 (BTT), 5-(4-니트로페닐)테트라졸, N-시아노메틸피롤리디늄 트리플레이트 (CMPT), N-시아노메틸피페리디늄 트리플레이트, N-시아노메틸디메틸암모늄 트리플레이트이다. 화학식 Z-Va ((Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb')) 의 키랄 중간체는 단량체로서 단리될 수 있다. 통상적으로, Z-Va ((Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb')) 의 키랄 중간체는 단리되지 않고, 뉴클레오시드 또는 개질된 뉴클레오시드를 함유하는 동일한 포트에서 반응에 적용되어 키랄 포스파이트 화합물, 축합된 중간체를 제공한다. 다른 구현예에서, 방법이 고체 상 합성을 통해 수행될 때, 화합물을 포함하는 고체 지지체는 부산물, 불순물, 및/또는 시약으로부터 여과된다.
캡핑 단계
최종 핵산이 이량체보다 더 큰 경우에, 미반응 -OH 모이어티는 차단 기로 캡핑되고, 화합물 내의 키랄 보조기는 또한 차단 기로 캡핑되어 캡핑된 축합된 중간체를 형성할 수 있다. 최종 핵산은 이량체이고, 그때 캡핑 단계는 필수적이지 않다.
개질 단계
화합물은 친전자체와의 반응으로 개질된다. 캡핑된 축합된 중간체에 개질 단계가 실행될 수 있다. 일부 구현예에서, 개질 단계는 황 친전자체, 셀레늄 친전자체 또는 보론화제를 사용하여 수행된다. 개질 단계의 예는 산화 및 황화 단계이다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, 황 친전자체는 하기 화학식 중 하나를 갖는 화합물이다:
S8 (화학식 Z-B), Zz1-S-S-Zz2, 또는 Zz1-S-Vz-Zz2;
식 중, Zz1 및 Zz2 는 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릭, 시클로알킬알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬옥시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 아실, 아미드, 이미드, 또는 티오카르보닐이거나, 또는 Zz1 및 Zz2 는 함께 3 내지 8 원 지환식 또는 헤테로시클릭 고리 (이는 치환되거나 치환되지 않을 수 있음) 를 형성하고; Vz 는 SO2, O, 또는 NRf 이고; Rf 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 아릴이다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, 황 친전자체는 하기 화학식 Z-A, Z-B, Z-C, Z-D, Z-E, 또는 Z-F 의 화합물이다:
Figure 112015015568410-pct00249
일부 구현예에서, 셀레늄 친전자체는 하기 화학식 중 하나를 갖는 화합물이다:
Se (화학식 Z-G), Zz3-Se-Se-Zz4, 또는 Zz3-Se-Vz-Zz4;
식 중, Zz3 및 Zz4 는 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릭, 시클로알킬알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬옥시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 아실, 아미드, 이미드, 또는 티오카르보닐이거나, 또는 Zz3 및 Zz4 는 함께 3 내지 8 원 지환식 또는 헤테로시클릭 고리 (이는 치환되거나 치환되지 않을 수 있음) 를 형성하고; Vz 는 SO2, S, O, 또는 NRf 이고; Rf 는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 또는 아릴이다.
일부 구현예에서, 셀레늄 친전자체는 하기 화학식 Z-G, Z-H, Z-I, Z-J, Z-K, 또는 Z-L 의 화합물이다.
Figure 112015015568410-pct00250
일부 구현예에서, 보론화제는 보란-N,N-디이소프로필에틸아민 (BH3 DIPEA), 보란-피리딘 (BH3 Py), 보란-2-클로로피리딘 (BH3 CPy), 보란-아닐린 (BH3 An), 보란-테트라히드로피이란 (BH3 THF), 또는 보란-디메틸설파이드 (BH3 Me2S) 이다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, 개질 단계는 산화 단계이다. 본 발명의 방법의 일부 구현예에서, 개질 단계는 본 출원에서 위에 기재된 바와 유사한 조건을 사용하는 산화 단계이다. 일부 구현예에서, 산화 단계는, 예를 들어, JP 2010-265304 A 및 WO2010/064146 에 개시된 바와 같다.
사슬 신장 사이클 및 탈보호 단계
캡핑된 축합된 중간체는 성장하는 핵산 사슬의 5'-말단에서 차단 기가 제거되어 탈차단되어 화합물을 제공한다. 화합물은 임의로 사슬 신장 사이클에 재입장하여 축합된 중간체, 캡핑된 축합된 중간체, 개질된 캡핑된 축합된 중간체, 및 5'-탈보호된 개질된 캡핑된 중간체를 형성한다. 하나 이상의 회의 사슬 신장 사이클 후에, 5'-탈보호된 개질된 캡핑된 중간체는 키랄 보조기 리간드 및 기타 보호기, 예를 들어, 핵염기, 개질된 핵염기, 당 및 개질된 당 보호기의 제거에 의해 추가로 탈차단되어, 핵산을 제공한다. 다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 본원에 기재된 바와 같은 이전 사슬 신장 사이클로부터의 중간체이다. 또다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 또다른 알려진 핵산 합성 방법으로부터 수득된 중간체이다. 고체 지지체가 사용되는 구현예에서, 인-원자 개질된 핵산은 그 후 고체 지지체로부터 절단된다. 특정 구현예에서, 핵산은 정제 목적을 위해 고체 지지체에 부착된 상태로 남겨지고, 그 후 정제 후에 고체 지지체로부터 절단된다.
또다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 또다른 알려진 핵산 합성 방법으로부터 수득된 중간체이다. 또다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 본 출원에 기재된 또다른 알려진 핵산 합성 방법으로부터 수득된 중간체이다. 또다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 반응식 I 에 나타낸 하나 이상의 사이클을 포함하는 또다른 알려진 핵산 합성 방법으로부터 수득된 중간체이다. 또다른 구현예에서, 5'-OH 모이어티를 포함하는 뉴클레오시드는 반응식 I-b, I-c 또는 I-d 에 나타낸 하나 이상의 사이클을 포함하는 또다른 알려진 핵산 합성 방법으로부터 수득된 중간체이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 출발 재료로서 안정적이고 상업적으로 입수가능한 재료를 사용하는 올리고뉴클레오티드 합성 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 아키랄 출발 재료를 사용하여 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체를 생성하는 올리고뉴클레오티드 합성 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 탈보호 단계 하에 붕괴를 야기하지 않는다. 나아가 본 발명의 방법은 특별한 캡핑제를 요구하지 않고 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체를 생성한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 단량체를 사용하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체 합성 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제 1 단계는 화학식 (Z-Va), (Z-Vb), (Z-Va'), 또는 (Z-Vb') 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제 2 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 것이다. 제 2 단계는 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 것이다. 예시적 방법이 아래 반응식 Z-2 에 나타나 있다.
Figure 112015015568410-pct00251
반응식 Z-2 의 세부 조건은 반응식 Z-1 과 유사하다. 화학식 Z-Va (Z-Vb), 특히 화학식 Z-Va' (또는 Z-Vb') 의 출발 재료는 화학적으로 안정적이다. 작업예에 제시된 바와 같이, 본 발명의 방법은 탈보호 단계 하에 붕괴를 야기하지 않는다. 나아가 본 발명의 방법은 특별한 캡핑제를 요구하지 않고 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체를 생성한다.
일부 구현예에서, 보조기 제거에 관한 메카니즘은 아래 반응식 Z-3 에 나타낸 바와 같다.
반응식 Z-3.
Figure 112015015568410-pct00252
반응식 Z-3 에서, Nu 는 친핵체를 나타낸다. 일부 구현예에서, 반응식 Z-3 에서의 메카니즘은 보조기의 제거에 관한 이전 메카니즘과 상이하다고 여겨진다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 (Z-I) 을 갖는 키랄 시약 또는 그의 염을 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00253
식 중, Gz1 및 Gz2 는 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기, 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 Gz1 및 Gz2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고,
Figure 112015015568410-pct00254
식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이고,
Figure 112015015568410-pct00255
식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C1-4 알콕시 기, C6-14 아릴 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이고,
Figure 112015015568410-pct00256
식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이고,
Gz3 및 Gz4 은 독립적으로 수소 원자, C1-3 알킬 기, C6-14 아릴 기이거나, Gz3 및 Gz4 는 둘다 함께 탄소수 3 내지 16 의 헤테로원자-함유 고리를 형성한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 (Z-I') 을 갖는 화학식 (Z-1) 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00257
식 중, 각각의 변수는 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 및 Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 식 중, 각각의 G21 내지 G23 은 수소 원자이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-II) 의 기이고, 식 중, 각각의 G21 및 G22 는 수소 원자이고, G23 은 니트로 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6-14 아릴 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C6 아릴 기, C7-10 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6 아릴 기, C1-4 알콕시 C6 아릴 기, 또는 C6 아릴 C1-4 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, 또는 C6 아릴 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 및 G33 은 C6 아릴 기이고, G32 는 C1-2 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-III) 의 기이고, 식 중, G31 및 G33 은 C6 아릴 기이고, G32 는 C1-4 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 은 수소 원자이고, Gz2 는 화학식 (Z-IV) 의 기이고, 식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, 식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 (Z-1') 의 키랄 시약, 또는 그의 염을 제공하며, 식 중, Gz1 및 Gz2 는 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고, 식 중, 각각의 G41 내지 G46 은 수소 원자이다.
일부 구현예에서, 키랄 시약 또는 그의 염은 화학식 3a, 3b, 5a, Z-5b, 7a, 7b, 9a, 9b, 11a 및 11b 로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 화학식 Z-Va 또는 Z-Vb 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00258
식 중, Gz1 및 Gz2 는 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기, 화학식 (Z-II) 또는 (Z-III) 의 기이거나, 또는 Gz1 및 Gz2 는 둘다 함께 화학식 (Z-IV) 의 기를 형성하고,
Figure 112015015568410-pct00259
식 중, G21 내지 G23 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이고,
Figure 112015015568410-pct00260
식 중, G31 내지 G33 은 독립적으로 C1-4 알킬 기, C1-4 알콕시 기, C6-14 아릴 기, C7-14 아르알킬 기, C1-4 알킬 C6-14 아릴 기, C1-4 알콕시 C6-14 아릴 기, 또는 C6-14 아릴 C1-4 알킬 기이고,
Figure 112015015568410-pct00261
식 중, G41 내지 G46 은 독립적으로 수소 원자, 니트로 기, 할로겐 원자, 시아노 기 또는 C1-3 알킬 기이고;
Gz3 및 Gz4 은 독립적으로 수소 원자, C1-3 알킬 기, C6-14 아릴 기이거나, Gz3 및 Gz4 는 둘다 함께 탄소수 3 내지 16 의 헤테로원자-함유 고리를 형성하고;
Gz5 는 히드록실 기의 보호기이고;
Rz2 는 독립적으로 수소, -OH, -SH, -NRdRd, -N3, 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y1-, 알케닐-Y1-, 알키닐-Y1-, 아릴-Y1-, 헤테로아릴-Y1-, -ORb, 또는 -SRb 이고, 여기서 Rb 는 차단 모이어티이고;
Y1 은 O, NRd, S, 또는 Se 이고;
Rd 는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 아실, 치환된 실릴, 카르바메이트, -P(O)(Re)2, 또는 -HP(O)(Re) 이고;
Re 는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 알케닐, 알키닐, 알킬-Y2-, 알케닐- Y2-, 알키닐-Y2-, 아릴-Y2-, 또는 헤테로아릴-Y2-, 또는 양이온 Na+, Li+, 또는 K+, 또는 -O- 이고;
Y2 는 O, NRd, 또는 S 이고;
Rz3 은 -CH2-, -(CH2)2-, -CH2NH-, 또는 -CH2N(CH3)- 로 표시되는 기이고;
Bs 는 하기 화학식 (Z-VI) 내지 (Z-XI) 로 표시되는 기 또는 그의 유도체로부터 선택되는 기이다.
Figure 112015015568410-pct00262
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 (Z-Va') 또는 (Z-Vb') 의 구조를 갖는 화학식 Z-Va 또는 Z-Vb 의 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제공한다:
Figure 112015015568410-pct00263
식 중, 각각의 변수는 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 12a, 12b, 13a, 13b, 14a, 14b, 15a, 15b, 16a, 16b, 17a, 17b, 18a, 18b, 19a, 19b, 20a, 20b, 21a, 21b, 22a, 22b, 23a, 23b, 24a, 24b, 25a, 25b, 26a, 26b, 27a, 27b, 28a, 28b, 29a, 29b, 30a, 30b, 31a, 31b, 32a, 32b, 33a, 33b, 34a, 34b 및 35a 로부터 선택되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 화학식 12a, 12b, 13a, 13b, 14a, 14b, 15a, 15b, 16a, 16b, 17a, 17b, 18a, 18b, 19a, 19b, 20a, 20b, 21a, 21b, 22a, 22b, 23a, 23b, 24a, 24b, 25a, 25b, 26a, 또는 26b 로부터 선택되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
아키랄 H-포스포네이트 모이어티를 포함하는 분자, 키랄 시약 또는 그의 염을 반응시켜 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체의 단량체를 형성하는 단계;
단량체 및 뉴클레오시드를 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계;
축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계;
여기서 키랄 시약은 하기 화학식 (Z-I) 을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
아키랄 H-포스포네이트 모이어티를 포함하는 분자, 키랄 시약 또는 그의 염을 반응시켜 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체의 단량체를 형성하는 단계;
단량체 및 뉴클레오시드를 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계;
축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계;
여기서 키랄 시약은 하기 화학식 (Z-I') 을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
아키랄 H-포스포네이트 모이어티를 포함하는 분자, 키랄 시약 또는 그의 염을 반응시켜 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체의 단량체를 형성하는 단계;
단량체 및 뉴클레오시드를 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계;
축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계;
여기서 키랄 시약은 화학식 3a, 3b, 5a, Z-5b, 7a, 7b, 9a, 9b, 11a 및 11b 로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계; 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계; 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계; 여기서 화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 화학식 12a, 12b, 13a, 13b, 14a, 14b, 15a, 15b, 16a, 16b, 17a, 17b, 18a, 18b, 19a, 19b, 20a, 20b, 21a, 21b, 22a, 22b, 23a, 23b, 24a, 24b, 25a, 25b, 26a, 26b, 27a, 27b, 28a, 28b, 29a, 29b, 30a, 30b, 31a, 31b, 32a, 32b, 33a, 33b, 34a, 34b 및 35a 로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 입체제어되는 인 원자-개질된 올리고뉴클레오티드 유도체의 합성 방법을 제공한다:
화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체를 활성화 시약 및 뉴클레오시드와 반응시켜 축합된 중간체를 형성하는 단계; 축합된 중간체를 키랄 X-포스포네이트 모이어티를 포함하는 핵산으로 전환시키는 단계;
여기서 화학식 (Z-Va) 또는 (Z-Vb) 로 표시되는 뉴클레오시드 3'-포스포라미디트 유도체는 화학식 12a, 12b, 13a, 13b, 14a, 14b, 15a, 15b, 16a, 16b, 17a, 17b, 18a, 18b, 19a, 19b, 20a, 20b, 21a, 21b, 22a, 22b, 23a, 23b, 24a, 24b, 25a, 25b, 26a, 및 26b 로부터 선택된다.
화학식 Z-I 의 특정 키랄 보조기의 제조 및 용도
약어
ac: 아세틸
bz: 벤조일
CSO: (1S)-(+)-(10-캄포르설포닐)옥사지리딘
DBU: 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데크-7-엔
DCA: 디클로로아세트산
DCM: 디클로로메탄, CH2Cl2
Tr: 트리틸, 트리페닐메틸
MeIm: N-메틸이미다졸
NIS: N-요오드숙신이미드
pac: 페녹시아세틸
Ph: 페닐
PhIMT: N-페닐이미다졸륨 트리플레이트
POS: 3-페닐-1,2,4-디티아졸린-5-온
TBS: tert-부틸디메틸실릴
TBDPS: tert-부틸디페닐실릴
TOM: 트리이소프로필실록시메틸
TFA: 트리플루오로아세트산
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 -1 의 합성에 관한 일반적 절차.
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 자동화된 고체-상 합성을 표 Z-1 에 제시된 사이클에 따라 수행했다.
표 Z-1. 합성 절차.
Figure 112015015568410-pct00264
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 -2 의 합성에 관한 일반적 절차.
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 자동화된 고체-상 합성을 표 Z-2 에 제시된 사이클에 따라 수행했다.
표 Z-2.
Figure 112015015568410-pct00265
* 표 Z- 2 의 단계 2 에서 예비활성화된 단량체의 제조 :
뉴클레오시드-3'-H-포스포네이트 모노에스테르를 건조 톨루엔으로 반복적으로 동시증발시켜 건조시키고, 그 후 건조 MeCN 에 용해시켰다. Ph3PCl2 를 용액에 첨가하고, 혼합물을 5 min 동안 교반했다. 혼합물에, 키랄 시약의 용액 (이는 건조 톨루엔으로 반복적으로 동시증발시켜 건조시키고 건조 MeCN 에 용해시킴) 을 주사기를 통해 드롭방식으로 첨가하고, 혼합물을 5 min 동안 아르곤 하에 교반했다.
합성 후에, 수지를 25% NH3 수성 용액 (1 mL) 으로 12 h 동안 55 ℃ 에서 처리했다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 수지를 막 여과에 의해 제거했다. 여과물을 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O (3 mL) 에 용해시키고, RP-UPLC-MS 에 의해 0.1 M 트리에틸암모늄 아세테이트 완충액 (pH 7.0) 중 아세토니트릴 (0-50%/30 min) 의 선형 기울기로 50 ℃ 에서 0.3 mL/min 의 속도로 분석했다.
실시예 Z-1.
(S)-1-트리틸피롤리딘-2-카르브알데히드 (1a).
Figure 112015015568410-pct00266
화합물 1a 를 L-프롤린으로부터 문헌 (Guga, P. Curr. Top. Med. Chem. 2007, 7, 695-713.) 에 기재된 절차에 따라 합성했다.
(R)-1-트리틸피롤리딘-2-카르브알데히드 (1b).
Figure 112015015568410-pct00267
화합물 1b 를 D-프롤린으로부터 화합물 1a 와 유사한 방식으로 합성했다.
(S)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (2a).
Figure 112015015568410-pct00268
THF (14 mL) 중 클로로메틸디페닐메틸실란 (4.02 g, 16.3 mmol) 및 마그네슘 (402 mg, 16.3 mmol) 으로부터 제조된 THF 중 메틸디페닐실릴메틸 마그네슘 클로리드의 용액에 얼음 냉각시키면서 THF (30 mL) 용액 중 1a (2.79 g, 8.14 mmol) 를 첨가했다. 얼음 냉각시키면서 1.5 h 동안 교반 후에, 혼합물을 실온으로 데우고, 30 min 동안 교반을 지속했다. 포화 수성 NH4Cl (100 mL) 을 반응 혼합물에 0℃ 에서 첨가하고, 추출을 디에틸에테르 (100 mL) 로 3 회 수행했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 2a 를 무색 거품 (3.91 g, 87%) 으로서 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.48-7.08 (25H, m), 4.33-4.23 (1H, m), 3.16-2.89 (3H, m), 2.84 (1H, brs), 1.70-1.54 (1H, m), 1.35 (1H, dd, J = 14.7, 6.3Hz), 1.10 (1H, dd, J = 14.7, 8.1Hz), 1.18-1.05 (1H, m), 1.04-0.90 (1H, m), 0.34 (3H, s), -0.17- -0.36 (1H, m).
(S)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((S)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (3a).
Figure 112015015568410-pct00269
2a (3.91 g, 7.06 mmol) 를 DCM (70 mL) 중 3% DCA 에 용해시키고, 10 min 동안 실온에서 교반했다. 혼합물에, 1M NaOH (200 mL) 를 첨가하고, 추출을 DCM (100 mL) 로 3 회 수행했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 3a 를 연한 노란색 오일 (1.99 g, 90%) 로서 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.57-7.52 (5H, m), 7.38-7.33 (5H, m), 3.77 (1H, ddd, J = 8.9, 5.4, 3.5Hz), 3.01 (1H, dt, J = 7.4, 3.6Hz), 2.97-2.79 (2H, m), 2.27 (2H, brs), 1.76-1.53 (4H, m), 1.38 (1H, dd, J = 15.0, 9.0Hz), 1.24 (1H, dd, J = 15.0, 5.4Hz), 0.65 (3H, s); 13C NMR (100.4 MHz, CDCl3) δ 137.4, 137.1, 134.6, 134.5, 129.1, 127.8, 69.5, 64.1, 47.0, 25.8, 24.0, 19.6, -3.4. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C19H26NOSi [M+H]+ 312.18, 관측치 312.06.
실시예 Z-2.
(R)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((R)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (2b).
Figure 112015015568410-pct00270
화합물 2b 를 화합물 2a 와 유사한 방식으로 1a 대신 1b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.48-7.12 (25H, m), 4.33-4.24 (1H, m), 3.16-2.89 (3H, m), 2.86 (1H, brs), 1.69-1.52 (1H, m), 1.35 (1H, dd, J = 14.4, 6.0Hz), 1.10 (1H, dd, J = 14.4, 8.4Hz), 1.18-1.05 (1H, m), 1.03-0.89 (1H, m), 0.33 (3H, s), -0.19- -0.39 (1H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 144.5, 137.5, 136.8, 134.6, 134.3, 129.8, 129.0, 127.8, 127.7, 127.4, 126.1, 77.9, 71.7, 65.1, 53.5, 25.0, 24.8, 19.6, -4.0. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C38H40NOSi [M+H]+ 554.29, 관측치 554.09.
(R)-2-(메틸디페닐실릴)-1-((R)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (3b).
Figure 112015015568410-pct00271
화합물 3b 를 화합물 3a 와 유사한 방식으로 2a 대신 2b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.52 (5H, m), 7.38-7.33 (5H, m), 3.78 (1H, ddd, J = 9.0, 5.1, 3.6Hz), 3.00 (1H, dt, J = 7.4, 3.3Hz), 2.97-2.78 (2H, m), 2.19 (2H, brs), 1.76-1.53 (4H, m), 1.38 (1H, dd, J = 14.6, 9.0Hz), 1.24 (1H, dd, J = 14.6, 5.1Hz), 0.66 (3H, s); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 137.5, 137.1, 134.5, 134.4, 129.0, 127.7, 69.2, 64.2, 46.9, 25.8, 24.0, 19.7, -3.4. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C19H26NOSi [M+H]+ 312.18, 관측치 312.09.
실시예 Z-3.
(S)-2-(트리메틸실릴)-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (4a).
Figure 112015015568410-pct00272
화합물 4a 를 화합물 2a 와 유사한 방식으로 "클로로메틸트리메틸실란" 을 "클로로메틸디페닐메틸실란" 대신 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.51 (5H, m), 7.31-7.14 (10H, m), 4.13 (1H, dt, J = 7.5, 3.0Hz), 3.39-3.31 (1H, m), 3.20-2.99 (2H, m), 2.84 (1H, s), 1.74-1.57 (1H, m), 1.29-1.10 (2H, m), 0.74 (1H, dd, J = 14.4, 7.2Hz), 0.46 (1H, dd, J = 14.4, 7.2Hz), -0.15 (9H, s). MALDI TOF-MS m/z 계산치 C28H36NOSi [M+H]+ 430.26, 관측치 430.09.
(S)-2-(트리메틸실릴)-1-((S)-1-피롤리딘-2-일)에탄올 (5a).
Figure 112015015568410-pct00273
화합물 5a 를 화합물 3a 와 유사한 방식으로 2a 대신 4a 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 3.76 (1H, ddd, J = 8.8, 5.7, 3.3Hz), 3.08 (1H, dt, J = 7.8, 3.3Hz), 3.02-2.87 (2H, m), 2.48 (2H, brs), 1.81-1.58 (4H, m), 0.83 (1H, dd, J = 14.7, 8.7Hz), 0.68 (1H, dd, J = 14.7, 6.0Hz), 0.05 (9H, s); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 69.6, 64.3, 46.9, 25.8, 23.9, 22.0, -0.8. MALDI TOF-MS m/z C9H22NOSi [M+H]+ 188.15, 관측치 188.00.
실시예 Z-5.
(R)-2,2-디페닐-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (6a).
Figure 112015015568410-pct00274
무수 THF (36 mL) 중 디페닐메탄 (6.7 mL, 40mmol) 의 용액에, n-BuLi (헥산의 1.67M 용액, 24mL, 40mmol) 을 실온에서 드롭방식으로 첨가하고, 1 h 동안 교반했다. 혼합물에, 무수 THF (40mL) 중 1a (3.41g, 10mmol) (이는 톨루엔으로 반복적으로 동시증발시켜 건조시킴) 를 0 ℃ 에서 서서히 첨가하고, 교반을 45 min 동안 지속했다. 포화 NH4Cl 수성 용액 (100mL) 및 Et2O (100mL) 를 그 후 첨가하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 Et2O (2×100mL) 로 추출했다. 유기 층을 조합하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피에 의해 실리카 겔에서 정제하여 6a (1.41g, 28%) 를 백색 거품으로서 수득했다.
(R)-2,2-디페닐-1-((S)-피롤리딘-2-일)에탄올 (7a).
Figure 112015015568410-pct00275
6a（650mg, 1.27mmol）를 DCM (13 mL) 중 3% DCA 에 용해시키고, 10 min 동안 실온에서 교반했다. 혼합물에, 1M NaOH (40 mL) 를 첨가하고, 추출을 DCM (30 mL) 으로 3 회 수행했다. 조합된 추출물을 Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔에서 크로마토그래피하여 7a 를 연노란색 오일 (316 mg, 93%) 로서 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.44-7.38 (2H, m), 7.33-7.14 (8H, m), 4.46 (1H, dd, J = 9.9, 3.3Hz), 3.91 (1H, d, J = 9.9Hz), 3.02-2.88 (2H, m), 2.81-2.69 (1H, m), 2.52 (2H, brs), 1.88-1.56 (4H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 142.3, 142.0, 128.6, 128.5, 128.4, 128.2, 126.5, 126.4, 73.5, 60.1, 55.8, 46.6, 25.8, 23.4. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C18H22NO [M+H]+ 268.17, 관측치 268.06.
실시예 Z-6.
(S)-2,2-디페닐-1-((R)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (6b).
Figure 112015015568410-pct00276
화합물 6b 를 화합물 6a 와 유사한 방식으로 1a 대신 1b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.44-7.37 (6H, m), 7.30-7.01 (17H, m), 6.66-6.61 (2H, m), 4.80 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.63 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.36-3.28 (1H, m), 3.22-3.09 (1H, m), 3.01-2.89 (1H, m), 2.66 (1H, s), 1.90-1.75 (1H, m), 1.29-1.04 (2H, m), 0.00--0.19 (1H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 144.2, 142.9, 141.6, 130.0, 128.5, 128.4, 127.9, 127.8, 127.4, 126.4, 126.2, 77.9, 75.9, 61.9, 55.4, 53.4, 24.7, 24.5. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C37H36NO [M+H]+ 510.28, 관측치 510.11.
(S)-2,2-디페닐-1-((R)-피롤리딘-2-일)에탄올 (7b).
Figure 112015015568410-pct00277
화합물 7b 를 화합물 7a 와 유사한 방식으로 6a 대신 6b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.45-7.14 (10H, m), 4.45 (1H, dd, J = 9.9, 3.3Hz), 3.91 (1H, d, J = 9.9Hz), 3.00-2.89 (2H, m), 2.82-2.71 (1H, m), 2.40 (2H, brs), 1.87-1.55 (4H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 142.3, 142.0, 128.5, 128.3, 128.1, 126.3, 126.2, 73.4, 60.1, 55.9, 46.5, 25.8, 23.5. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C18H22NO [M+H]+ 268.17, 관측치 268.03.
실시예 Z-7.
(R)-2-(4-니트로페닐)-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (8a).
Figure 112015015568410-pct00278
화합물 8a 를 화합물 6a 와 유사한 방식으로 "디페닐메탄" 대신 "4-니트로벤질클로리드" 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.09-8.03 (2H, m), 7.49-7.43 (6H, m), 7.28-7.09 (11H, m), 4.23 (1H, ddd, J = 8.3, 5.6, 3.0Hz), 3.43-3.33 (1H, m), 3.23-3.11 (1H, m), 3.07-2.96 (1H, m), 2.83 (1H, brs), 2.74 (1H, dd, J = 13.8, 8.4Hz), 2.49 (1H, dd, J = 13.8, 5.1Hz), 1.83-1.67 (1H, m), 1.41-1.17 (2H, m), 0.27-0.08 (1H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 147.3, 146.3, 144.3, 129.8, 129.6, 127.5, 126.3, 123.4, 77.9, 74.8, 63.5, 53.2, 39.5, 25.0, 24.9. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C31H31N2O3 [M+H]+ 479.23, 관측치 479.08.
(R)-2-(4-니트로페닐)-1-((S)-피롤리딘-2-일)에탄올 (9a).
Figure 112015015568410-pct00279
화합물 9a 를 화합물 7a 와 유사한 방식으로 6a 대신 8a 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.15 (2H, d, J = 8.7Hz), 7.42 (2H, d, J = 8.7Hz), 3.86-3.79 (1H, m), 3.16-3.07 (1H, m), 2.99-2.68 (6H, m), 1.84-1.68 (4H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 147.4, 146.2, 129.9, 123.2, 72.4, 62.0, 46.6, 40.4, 25.7, 24.4. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C12H17N2O3 [M+H]+ 237.12, 관측치 237.01.
실시예 Z-8.
(S)-2-(4-니트로페닐)-1-((R)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (8b).
Figure 112015015568410-pct00280
화합물 8b 를 화합물 8a 와 유사한 방식으로 1a 대신 1b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.09-8.04 (2H, m), 7.49-7.43 (6H, m), 7.28-7.09 (11H, m), 4.22 (1H, ddd, J = 8.4, 5.6, 3.0Hz), 3.43-3.33 (1H, m), 3.24-3.10 (1H, m), 3.08-2.94 (1H, m), 2.81 (1H, brs), 2.75 (1H, dd, J = 14.0, 8.1Hz), 2.49 (1H, dd, J = 14.0, 5.1Hz), 1.81-1.67 (1H, m), 1.40-1.16 (2H, m), 0.26-0.09 (1H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 147.3, 144.3, 129.8, 129.6, 129.4, 126.3, 123.5, 77.9, 74.8, 63.5, 53.2, 39.5, 25.0, 24.9. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C31H31N2O3 [M+H]+ 479.23, 관측치 479.08.
(S)-2-(4-니트로페닐)-1-((R)-피롤리딘-2-일)에탄올 (9b).
Figure 112015015568410-pct00281
화합물 9b 를 화합물 9a 와 유사한 방식으로 8a 대신 8b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.19-8.13 (2H, m), 7.45-7.39 (2H, m), 3.83 (1H, ddd, J = 7.7, 5.4, 3.9Hz), 3.14 (1H, dt, J = 7.7, 3.9Hz), 3.01-2.87 (2H, m), 2.83 (1H, d, J = 3.3Hz), 2.81 (1H, s), 2.62 (2H, brs), 1.79-1.72 (4H, m); 13C NMR (75.5 MHz, CDCl3) δ 147.3, 146.5, 130.0, 123.5, 72.7, 61.7, 46.7, 40.1, 25.8, 24.2. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C12H17N2O3 [M+H]+ 237.12, 관측치 237.02.
실시예 Z-9.
(R)-(9H-플루오렌-9-일)((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)메탄올 (10a).
Figure 112015015568410-pct00282
화합물 10a 를 화합물 6a 와 유사한 방식으로 "디페닐메탄" 대신 "플루오렌" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.70 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.66 (1H, d, J = 7.8Hz), 7.55 (2H, d, J = 7.5Hz), 7.44-7.09 (18H, m), 6.87-6.62 (1H, m), 4.55-4.48 (1H, m), 4.06 (1H, d, J = 7.5Hz), 3.43-3.34 (1H, m), 3.18-3.06 (1H, m), 2.98-2.88 (1H, m), 2.85 (1H, brs), 1.42-1.24 (1H, m), 1.18-1.04 (1H, m), 0.53-0.39 (1H, m), -0.02- -0.20 (1H, m); MALDI TOF-MS m/z 계산치 C37H34NO [M+H]+ 508.26, 관측치 508.12.
(R)-(9H-플루오로렌-9-일)((S)-피롤리딘-2-일)메탄올 (11a).
Figure 112015015568410-pct00283
화합물 11a 를 화합물 7a 와 유사한 방식으로 6a 대신 10a 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.76 (2H, d, J = 7.5Hz), 7.68 (2H, t, J = 8.0Hz), 7.43-7.35 (2H, m), 7.34-7.25 (2H, m), 4.28 (1H, d, J = 6.3Hz), 4.03 (1H, dd, J = 6.5, 4.2Hz), 3.19-3.11 (1H, m), 2.97-2.88 (1H, m), 2.86-2.76 (1H, m), 2.02 (2H, brs), 1.77-1.53 (3H, m), 1.38-1.23 (1H, m); MALDI TOF-MS m/z 계산치 C18H20NO [M+H]+ 266.15, 관측치 266.04.
(S)-2-토실-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (12a').
Figure 112015015568410-pct00284
화합물 12a' 를 화합물 2a 와 유사한 방식으로 "클로로메틸디페닐메틸실란" 대신 "클로로메틸 p-톨릴 술폰" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.66 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.48-7.44 (6H, m), 7.35 (2H, d, J = 7.2Hz), 7.21-7.13 (9H, m), 4.39-4.36 (1H, m), 3.33 (1H, s), 3.24-3.20 (1H, m), 3.19-3.10 (2H, m), 2.98-2.92 (2H, m), 2.49 (3H, s), 1.55-1.49 (1H, m), 1.33-1.26 (1H, m), 1.12-1.04 (1H, m), 0.22-0.14 (1H, m); 13C NMR (150.9 MHz, CDCl3) δ 144.6, 144.5, 136.3, 129.9, 129.5, 128.1, 127.5, 126.2, 78.0, 69.1, 63.9, 60.2, 52.6, 25.5, 24.7, 21.7.
(S)-2-토실-1-((S)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (13a').
Figure 112015015568410-pct00285
화합물 13a' 를 화합물 3a 와 유사한 방식으로 2a 대신 12a' 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.82 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.37 (2H, d, J = 8.4Hz), 4.01 (1H, ddd, J = 12.0, 5.1, 3.0Hz), 3.32 (1H, dd, J = 14.4, 3.0Hz), 3.25 (1H, dd, J = 14.4, 9.0Hz), 3.16 (1H, dt, J = 7.8, 5.1Hz), 2.90-2.82 (2H, m), 2.46 (3H, s), 2.04 (2H, brs), 1.78-1.63 (3H, m), 1.62-1.55 (1H, m); 13C NMR (150.9 MHz, CDCl3) δ 144.5, 136.7, 129.7, 127.7, 67.4, 61.8, 60.1, 46.7, 25.7, 21.4. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C13H20NO3S [M+H]+ 270.12, 관측치 270.04.
(R)-2-토실-1-((R)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (12b').
Figure 112015015568410-pct00286
화합물 12b' 를 화합물 12a' 와 유사한 방식으로 1a 대신 1b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.66 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.47-7.44 (6H, m), 7.35 (2H, d, J = 7.8Hz), 7.21-7.13 (9H, m), 4.37 (1H, dt, J = 8.6, 2.4Hz), 3.33 (1H, s), 3.23-3.20 (1H, m), 3.19-3.12 (2H, m), 2.98-2.92 (2H, m), 2.49 (3H, s), 1.56-1.49 (1H, m), 1.32-1.26 (1H, m), 1.11-1.03 (1H, m), 0.23-0.15 (1H, m); 13C NMR (150.9 MHz, CDCl3) δ 144.6, 144.5, 136.3, 129.9, 129.6, 128.1, 127.6, 126.2, 78.0, 69.1, 63.9, 60.2, 52.6, 25.5, 24.7, 21.7.
(R)-2-토실-1-((R)-1-트리틸피롤리딘-2-일)에탄올 (13b').
Figure 112015015568410-pct00287
화합물 13b' 를 화합물 13a' 와 유사한 방식으로 12a' 대신 12b' 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.82 (2H, d, J = 8.4Hz), 7.37 (2H, d, J = 8.4Hz), 4.01 (1H, ddd, J = 9.0, 5.1, 3.0Hz), 3.32 (1H, dd, J = 14.4, 3.0Hz), 3.25 (1H, dd, J = 14.4, 9.0Hz), 3.17 (1H, dt, J = 7.2, 5.1Hz), 2.89-2.83 (2H, m), 2.46 (3H, s), 2.04 (2H, brs), 1.79-1.64 (3H, m), 1.62-1.55 (1H, m); 13C NMR (150.9 MHz, CDCl3) δ 144.8, 136.6, 129.8, 127.9, 67.7, 61.8, 60.1, 46.8, 25.9, 25.8, 21.6. MALDI TOF-MS m/z 계산치 C13H20NO3S [M+H]+ 270.12, 관측치 270.05.
실시예 Z-10.
옥사자포스폴리딘 단량체 12a.
Figure 112015015568410-pct00288
3a (560 mg, 1.80 mmol) 를 톨루엔으로 반복적으로 동시증발시켜 건조시키고, 건조 디에틸에테르 (0.90 mL) 에 아르곤 하에 용해시켰다. N-메틸모르폴린 (400 ㎕, 3.60 mmol) 을 용액에 첨가하고, 결과적인 용액을 건조 디에틸에테르 (0.90 mL) 중 PCl3 (160 ㎕, 1.80 mmol) 의 용액에 0 ℃ 에서 아르곤 하에 교반하면서 드롭방식으로 첨가했다. 혼합물을 그 후 실온으로 데워지게 하고, 30 min 동안 교반했다. 결과적인 N-메틸모르폴린 히드로클로리드를 질소 하에 여과에 의해 제거하고, 여과물을 감압 하에 농축 건조시켜 미가공 2-클로로-1,3,2-옥사자포스폴리딘 유도체를 수득했다. 미가공 재료를 갓 증류된 THF (3.6 mL) 에 용해시켜 0.5 M 용액을 제조하고, 이것을 추가 정제 없이 사용하여 뉴클레오시드 3'-O-옥사자포스폴리딘을 합성했다.
5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신 (636 mg, 0.84 mmol) 을 건조 톨루엔으로 반복적으로 동시증발시켜 건조시키고, 갓 증류된 THF (2.5 mL) 에 아르곤 하에 용해시켰다. Et3N (0.58 mL, 4.2 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 -78 ℃ 로 냉각시켰다. 갓 증류된 THF (3.6 mL, 1.80 mmol) 중 상응하는 미가공 2-클로로-1,3,2-옥사자포스폴리딘 유도체의 0.5 M 용액을 주사기를 통해 드롭방식으로 첨가하고, 혼합물을 15 min 동안 실온에서 교반했다. 포화 NaHCO3 수성 용액 (70 mL) 및 CHCl3 (70 mL) 을 그 후 첨가하고, 유기 층을 분리하고, 포화 NaHCO3 수성 용액 (2×70 mL) 으로 세정했다. 조합된 수성 층을 CHCl3 (70 mL) 로 역추출했다. 유기 층을 조합하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피에 의해 실리카 겔에서 정제하여 12a (829 mg, 90%) 를 백색 거품으로서 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.77 (1H, brs), 7.99 (1H, s), 7.54-6.98 (24H, m), 6.81-6.73 (4H, m), 6.35 (1H, dd, J = 8.0, 6.3Hz), 4.89-4.73 (4H, m), 4.68 (2H, brs), 4.05-3.98 (1H, m), 3.75 (6H, s), 3.62-3.46 (1H, m), 3.41-3.20 (3H, m), 3.18-3.04 (1H, m), 3.08 (2H, t, J = 6.6Hz), 2.58-2.36 (2H, m), 1.94-1.59 (2H, m), 1.56 (1H, dd, J = 15.0, 8.7Hz), 1.43 (1H, dd, J = 15.0, 5.7Hz), 1.33-1.16 (2H, m), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 153.5 (1P, s).
실시예 Z-11.
옥사자포스폴리딘 단량체 12b.
Figure 112015015568410-pct00289
화합물 12b 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.80 (1H, brs), 7.96 (1H, s), 7.54-6.96 (24H, m), 6.79-6.71 (4H, m), 6.19 (1H, t, J = 6.6Hz), 4.90-4.73 (4H, m), 4.66 (2H, brs), 4.16-4.08 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.60-3.36 (2H, m), 3.29 (1H, d, J = 3.9Hz), 3.27-3.12 (2H, m), 3.09 (2H, t, J = 6.6Hz), 2.59-2.46 (1H, m), 2.07-1.97 (1H, m), 1.94-1.41 (5H, m), 1.36-1.18 (1H, m), 0.65 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.1 (1P, s).
실시예 Z-12.
옥사자포스폴리딘 단량체 13a.
Figure 112015015568410-pct00290
화합물 13a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)티미딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.58-7.23 (21H, m), 6.86-6.79 (4H, m), 6.35 (1H, dd, J = 8.1, 5.7Hz), 4.79-4.67 (2H, m), 3.83-3.78 (1H, m), 3.78 (6H, s), 3.59-3.43 (1H, m), 3.34 (1H, dd, J = 10.5, 2.4Hz), 3.35-3.24 (1H, m), 3.20 (1H, dd, J = 10.5, 2.4Hz), 3.16-3.02 (1H, m), 2.36-2.26 (1H, m), 2.15-2.02 (1H, m), 1.92-1.77 (1H, m), 1.74-1.59 (1H, m), 1.52 (1H, dd, J = 14.7, 9.0Hz), 1.40 (3H, s), 1.45-1.15 (3H, m), 0.60 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 153.7 (1P, s).
실시예 Z-13.
옥사자포스폴리딘 단량체 13b.
Figure 112015015568410-pct00291
화합물 13b 를 화합물 13a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.46 (1H, brs), 7.59-7.20 (20H, m), 6.86-6.79 (4H, m), 6.26 (1H, t, J = 6.8Hz), 4.78-4.65 (2H, m), 4.01-3.95 (1H, m), 3.78 (6H, s), 3.55-3.40 (1H, m), 3.42 (1H, dd, J = 10.5, 2.7Hz), 3.40-3.28 (1H, m), 3.22 (1H, dd, J = 10.5, 3.0Hz), 3.19-3.06 (1H, m), 2.16-1.95 (2H, m), 1.90-1.54 (3H, m), 1.49-1.35 (1H, m), 1.43 (3H, s), 1.34-1.17 (2H, m), 0.67 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.2 (1P, s). 올리고 (Oligo) 를 위에 개시된 일반적 방법에 의해 상기 화합물 13b 를 사용하여 합성했다.
실시예 Z-14.
옥사자포스폴리딘 단량체 14a.
Figure 112015015568410-pct00292
화합물 14a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-4-N-(이소부티릴)시티딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.33 (1H, brs), 8.17 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.52-7.22 (19H, m), 7.07 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.88-6.81 (4H, m), 6.20 (1H, t, J = 6.2Hz), 4.81-4.64 (2H, m), 3.93-3.87 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.59-3.43 (1H, m), 3.39-3.29 (3H, m), 3.16-3.02 (1H, m), 2.69-2.52 (2H, m), 2.12-2.00 (1H, m), 1.91-1.50 (3H, m), 1.47-1.32 (2H, m), 1.27-1.16 (7H, m), 0.60 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 154.8 (1P, s).
실시예 Z-16.
옥사자포스폴리딘 단량체 14b.
Figure 112015015568410-pct00293
화합물 14b 를 화합물 14a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.33 (1H, d, J = 7.5Hz), 8.23 (1H, brs), 7.57-7.22 (19H, m), 7.12 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.88-6.81 (4H, m), 6.15 (1H, dd, J = 6.6, 4.2Hz), 4.82-4.63 (2H, m), 4.03-3.97 (1H, m), 3.80 (6H, s), 3.55-3.26 (4H, m), 3.19-3.05 (1H, m), 2.59 (1H, quintet, J = 6.9Hz), 2.39-2.27 (1H, m), 2.21-2.10 (1H, m), 1.90-1.56 (3H, m), 1.50-1.32 (2H, m), 1.26-1.17 (7H, m), 0.66 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.2 (1P, s).
실시예 Z-17.
옥사자포스폴리딘 단량체 15a.
Figure 112015015568410-pct00294
화합물 15a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-6-N-(벤조일)아데노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 8.71 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.04 (2H, d, J = 7.8Hz), 7.62-7.15 (23H, m), 6.80-6.75 (4H, m), 6.37 (1H, dd, J = 7.8, 6.0Hz), 4.94-4.88 (1H, m), 4.80 (1H, ddd, J = 12.0, 6.0, 5.4Hz), 4.07-4.04 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.58-3.49 (1H, m), 3.41-3.34 (1H, m), 3.33 (1H, dd, J = 10.8, 4.8Hz), 3.25 (1H, dd, J = 10.8, 4.8Hz), 3.13-3.06 (1H, m), 2.66-2.58 (1H, m), 2.40-2.35 (1H, m), 1.91-1.84 (1H, m), 1.73-1.66 (1H, m), 1.56 (1H, dd, J = 15.0, 9.0Hz), 1.44 (1H, dd, J = 15.0, 5.4Hz), 1.47-1.41 (1H, m), 1.30-1.23 (1H, m), 0.63 (3H, s); 31P NMR (243.0 MHz, CDCl3) δ 151.8 (1P, s).
실시예 Z-18.
옥사자포스폴리딘 단량체 15b.
Figure 112015015568410-pct00295
화합물 15b 를 화합물 15a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.06 (1H, brs), 8.76 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.07-7.99 (2H, m), 7.64-7.14 (22H, m), 6.83-6.75 (4H, m), 6.25 (1H, t, J = 6.6Hz), 4.86-4.75 (2H, m), 4.20-4.15 (1H, m), 3.77 (6H, s), 3.61-3.38 (2H, m), 3.36 (1H, dd, J = 10.2, 4.2Hz), 3.27 (1H, dd, J = 10.2, 4.2Hz), 3.27-3.13 (1H, m), 2.71-2.59 (1H, m), 2.12-2.01 (1H, m), 1.94-1.42 (5H, m), 1.36-1.20 (1H, m), 0.67 (3H, s)); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.3 (1P, s)..
실시예 Z-19.
옥사자포스폴리딘 단량체 16a.
Figure 112015015568410-pct00296
화합물 16a 를 화합물 13a 와 유사한 방식으로 3a 대신 7a 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.57 (1H, d, J = 0.9Hz), 7.37-6.94 (20H, m), 6.87-6.78 (4H, m), 6.48 (1H, dd, J = 8.6, 5.7Hz), 5.42 (1H, dd, J = 11.0, 5.1Hz), 4.81-4.71 (1H, m), 4.02 (1H, d, J = 11.0Hz), 3.83 (1H, d, J = 2.1Hz), 3.79 (6H, s), 3.61-3.41 (2H, m), 3.24-3.09 (1H, m), 3.16 (1H, dd, J = 10.8, 2.4Hz), 3.02 (1H, dd, J = 10.8, 2.4Hz), 2.54-2.44 (1H, m), 2.34-2.22 (1H, m), 1.94-1.79 (1H, m), 1.74-1.56 (1H, m), 1.38 (3H, s), 1.38-1.28 (2H, m); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 160.9 (1P, s).
실시예 Z-20.
옥사자포스폴리딘 단량체 16b.
Figure 112015015568410-pct00297
화합물 16b 를 화합물 16a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.57 (1H, d, J = 1.5Hz), 7.43-7.11 (20H, m), 6.85-6.78 (4H, m), 6.48 (1H, dd, J = 7.5, 5.7Hz), 5.58 (1H, dd, J = 11.4, 5.1Hz), 4.82-4.73 (1H, m), 4.17-4.02 (2H, m), 3.78 (6H, s), 3.56-3.40 (3H, m), 3.32 (1H, dd, J = 10.7, 2.4Hz), 3.22-3.07 (1H, m), 2.26-2.04 (2H, m), 1.95-1.81 (1H, m), 1.74-1.56 (1H, m), 1.40 (3H, d, J = 1.5Hz), 1.44-1.34 (2H, m); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 162.2 (1P, s).
실시예 Z-21.
옥사자포스폴리딘 단량체 17a.
Figure 112015015568410-pct00298
화합물 17a 를 화합물 13a 와 유사한 방식으로 3a 대신 9a 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.22 (1H, brs), 8.05-7.99 (2H, m), 7.52 (1H, d, J = 1.2Hz), 7.41-7.19 (11H, m), 6.87-6.79 (4H, m), 6.37 (1H, dd, J = 8.4, 5.7Hz), 4.88-4.75 (2H, m), 3.86-3.80 (1H, m), 3.79 (6H, d, J = 1.2Hz), 3.64-3.49 (2H, m), 3.27-3.12 (3H, m), 2.97 (2H, d, J = 6.6Hz), 2.51-2.41 (1H, m), 2.33-2.20 (1H, m), 2.03-1.75 (2H, m), 1.72-1.59 (1H, m), 1.46-1.36 (1H, m), 1.40 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.5 (1P, s).
실시예 Z-22.
옥사자포스폴리딘 단량체 17b.
Figure 112015015568410-pct00299
화합물 17b 를 화합물 17a 와 유사한 방식으로 9a 대신 9b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.67 (1H, brs), 8.18-8.11 (2H, m), 7.57 (1H, d, J = 1.2Hz), 7.47-7.22 (11H, m), 6.86-6.79 (4H, m), 6.29 (1H, t, J = 6.6Hz), 4.87 (1H, dt, J = 7.5, 5.7Hz), 4.80-4.72 (1H, m), 4.11-4.05 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.67-3.47 (2H, m), 3.43 (1H, dd, J = 10.8, 2.7Hz), 3.27 (1H, dd, J = 10.8, 2.4Hz), 3.25-3.13 (1H, m), 3.07-2.99 (2H, m), 2.19-2.12 (2H, m), 2.03-1.62 (3H, m), 1.46-1.30 (1H, m), 1.41 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.1 (1P, s).
실시예 Z-23.
옥사자포스폴리딘 단량체 18a.
Figure 112015015568410-pct00300
화합물 18a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-TOM-6-N-(아세틸)아데노신" 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.82 (1H, brs), 8.49 (1H, s), 8.10 (1H, s), 7.58-7.17 (19H, m), 6.83-6.73 (4H, m), 6.11 (1H, d, J = 6.6Hz), 5.15 (1H, dd, J = 6.6, 5.4Hz), 4.98-4.77 (4H, m), 4.18-4.11 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.59-3.25 (4H, m), 3.16-3.02 (1H, m), 2.62 (3H, s), 1.91-1.53 (3H, m), 1.49-1.18 (3H, m), 0.96-0.80 (3H, m), 0.90 (18H, s), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.7 (1P, s).
실시예 Z-24.
옥사자포스폴리딘 단량체 18b.
Figure 112015015568410-pct00301
화합물 18b 를 화합물 18a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.56 (1H, brs), 8.55 (1H, s), 8.13 (1H, s), 7.57-7.17 (19H, m), 6.82-6.73 (4H, m), 6.16 (1H, d, J = 5.7Hz), 5.06 (1H, t, J = 5.6Hz), 4.93 (1H, d, J = 5.1Hz), 4.83 (1H, d, J = 5.1Hz), 4.81-4.69 (2H, m), 4.27-4.19 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.55-3.40 (2H, m), 3.33-3.16 (2H, m), 3.12-2.97 (1H, m), 2.63 (3H, s), 1.88-1.52 (3H, m), 1.45-1.16 (3H, m), 0.91-0.79 (3H, m), 0.86 (18H, s), 0.64 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 154.8 (1P, s).
실시예 Z-25.
옥사자포스폴리딘 단량체 19a.
Figure 112015015568410-pct00302
화합물 19a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-(메틸)우리딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.91 (1H, d, J = 7.8Hz), 7.58-7.20 (19H, m), 6.88-6.80 (4H, m), 5.96 (1H, d, J = 3.3Hz), 5.19 (1H, d, J = 7.8Hz), 4.88-4.78 (1H, m), 4.66-4.57 (1H, m), 4.03-3.95 (1H, m), 3.90-3.74 (1H, m), 3.78 (6H, s), 3.77-3.71 (1H, m), 3.58-3.29 (2H, m), 3.45 (3H, s), 3.13-2.82 (2H, m), 1.88-1.53 (3H, m), 1.49-1.16 (3H, m), 0.60 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.3 (1P, s).
실시예 Z-26.
옥사자포스폴리딘 단량체 19b.
Figure 112015015568410-pct00303
화합물 19b 를 화합물 19a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.10 (1H, d, J = 8.4Hz), 7.58-7.20 (19H, m), 6.87-6.79 (4H, m), 5.89 (1H, d, J = 1.5Hz), 5.21 (1H, d, J = 8.4Hz), 4.92-4.82 (1H, m), 4.73-4.63 (1H, m), 4.15-4.08 (1H, m), 3.89-3.73 (1H, m), 3.78 (6H, s), 3.66-3.62 (1H, m), 3.57-3.27 (2H, m), 3.30 (3H, s), 3.17-2.82 (2H, m), 1.89-1.55 (3H, m), 1.55-1.40 (1H, m), 1.35-1.15 (2H, m), 0.66 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.5 (1P, s).
실시예 Z-27.
옥사자포스폴리딘 단량체 20a.
Figure 112015015568410-pct00304
화합물 20a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-데옥시-2'-플루오로우리딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.85 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.58-7.20 (19H, m), 6.87-6.79 (4H, m), 5.98 (1H, d, J = 16.5Hz), 5.23 (1H, d, J = 8.1Hz), 4.86-4.61 (3H, m), 3.99 (1H, d, J = 6.9Hz), 3.76 (6H, d, J = 3.0Hz), 3.56-3.34 (4H, m), 3.10-2.96 (1H, m), 1.88-1.74 (1H, m), 1.72-1.52 (2H, m), 1.48-1.16 (3H, m), 0.61 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 154.3 (1P, d, J = 8.9Hz).
실시예 Z-28.
옥사자포스폴리딘 단량체 20b.
Figure 112015015568410-pct00305
화합물 20b 를 화합물 20a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.01 (1H, d, J = 8.4Hz), 7.58-7.20 (19H, m), 6.87-6.79 (4H, m), 6.03 (1H, d, J = 16.2Hz), 5.29 (1H, d, J = 8.4Hz), 4.96 (1H, dd, J = 13.1, 7.5Hz), 4.80-4.54 (2H, m), 4.15 (1H, d, J = 9.0Hz), 3.78 (6H, s), 3.61-3.39 (3H, m), 3.37-3.25 (1H, m), 3.23-3.09 (1H, m), 1.91-1.56 (3H, m), 1.51-1.13 (3H, m), 0.66 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.9 (1P, d, J = 4.4Hz).
실시예 Z-29.
옥사자포스폴리딘 단량체 21a.
Figure 112015015568410-pct00306
화합물 21a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-메톡시에틸-5-메틸우리딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.62-7.18 (21H, m), 6.84 (4H, d, J -= 8.7Hz), 6.07 (1H, d, J = 5.7Hz), 4.86-4.76 (1H, m), 4.63-4.54 (1H, m), 4.20 (1H, t, J = 5.4Hz), 3.95-3.89 (1H, m), 3.78 (6H, s), 3.78-3.71 (2H, m), 3.60-3.48 (2H, m), 3.44-3.02 (5H, m), 3.31 (3H, s), 1.88-1.15 (6H, m), 1.35 (3H, s), 0.58 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.3 (1P, s).
실시예 Z-30.
옥사자포스폴리딘 단량체 21b.
Figure 112015015568410-pct00307
화합물 21b 를 화합물 21a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.71 (1H, d, J = 1.2Hz), 7.55-7.22 (20H, m), 6.86-6.78 (4H, m), 5.99 (1H, d, J = 3.9Hz), 4.78-4.62 (2H, m), 4.13-4.08 (1H, m), 4.07-4.02 (1H, m), 3.77 (6H, s), 3.77-3.70 (1H, m), 3.65-3.56 (1H, m), 3.52-3.36 (4H, m), 3.33-3.14 (2H, m), 3.29 (3H, s), 3.08-2.94 (1H, m), 1.86-1.72 (1H, m), 1.71-1.55 (2H, m), 1.30 (3H, d, J = 1.2Hz), 1.47-1.16 (3H, m) 0.64 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.6 (1P, s).
실시예 Z-31.
옥사자포스폴리딘 단량체 22a.
Figure 112015015568410-pct00308
화합물 22a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-메틸-4-N-(이소부티릴)시티딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.49 (1H, d, J -= 7.2Hz), 7.58-7.20 (19H, m), 6.96 (1H, d, J =7.2Hz), 6.90-6.82 (4H, m), 5.98 (1H, s), 4.84 (1H, dd, J = 13.1, 7.5Hz), 4.59 (1H, dt, J = 8.3, 4.5Hz), 4.19-4.13 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.78-3.72 (1H, m), 3.63-3.40 (3H, m), 3.55 (3H, s), 3.36-3.24 (1H, m), 3.09-2.95 (1H, m), 2.59 (1H, septet, J = 6.9Hz), 1.85-1.53 (5H, m), 1.48-1.37 (1H, m), 1.24-1.17 (6H, m), 0.59 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.2 (1P, s).
실시예 Z-32.
옥사자포스폴리딘 단량체 22b.
Figure 112015015568410-pct00309
화합물 22b 를 화합물 22a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.62 (1H, d, J -= 7.5Hz), 7.57-7.23 (19H, m), 7.02 (1H, d, J =7.5Hz), 6.89-6.81 (4H, m), 5.92 (1H, s), 4.90 (1H, dt, J = 9.0, 5.7Hz), 4.61 (1H, dt, J = 8.7, 4.8Hz), 4.25-4.17 (1H, m), 3.81 (6H, s), 3.67 (1H, d, J = 4.5Hz), 3.62-3.25 (4H, m), 3.38 (3H, s), 3.16-3.02 (1H, m), 2.58 (1H, septet, J = 6.9Hz), 1.87-1.40 (6H, m), 1.26-1.14 (6H, m), 0.64 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.2 (1P, s).
실시예 Z-33.
옥사자포스폴리딘 단량체 23a.
Figure 112015015568410-pct00310
화합물 23a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-메틸-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.67 (1H, brs), 8.01 (1H, s), 7.56-7.16 (24H, m), 6.83-6.74 (4H, m), 6.08 (1H, d, J = 6.9Hz), 4.85-4.76 (1H, m), 4.84 (2H, t, J = 6.6Hz), 4.65-4.56 (1H, m), 4.59 (2H, brs), 4.48 (1H, dd, J = 6.6, 5.1Hz), 4.09-4.05 (1H, m), 3.75 (6H, s), 3.60-3.42 (2H, m), 3.40-3.26 (2H, m), 3.35 (3H, s), 3.18-3.05 (1H, m), 3.08 (2H, t, J = 6.6Hz), 1.89-1.49 (3H, m), 1.48-1.16 (3H, m), 0.59 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.9 (1P, s).
실시예 Z-34.
옥사자포스폴리딘 단량체 23b.
Figure 112015015568410-pct00311
화합물 23b 를 화합물 23a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.74 (1H, brs), 8.09 (1H, s), 7.56-6.94 (24H, m), 6.84-6.71 (4H, m), 6.09 (1H, d, J = 4.8Hz), 4.83-4.70 (2H, m), 4.83 (2H, t, J = 6.6Hz), 4.63 (2H, brs), 4.35 (1H, t, J = 5.0Hz), 4.23-4.16 (1H, m), 3.75 (6H, s), 3.58-3.19 (4H, m), 3.32 (3H, s), 3.16-3.04 (1H, m), 3.07 (2H, t, J = 6.6Hz), 1.90-1.55 (3H, m), 1.48-1.15 (3H, m), 0.64 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 154.6 (1P, s).
실시예 Z-35.
옥사자포스폴리딘 단량체 24a.
Figure 112015015568410-pct00312
화합물 24a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-데옥시-2'-플루오로-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.74 (1H, brs), 8.03 (1H, s), 7.55-6.94 (24H, m), 6.80-6.69 (4H, m), 6.21 (1H, dd, J = 14.9, 3.6Hz), 5.34 (1H, dt, J = 52.3, 3.6Hz), 5.01-4.75 (2H, m), 4.84 (1H, t, J = 6.6Hz), 4.62 (2H, brs), 4.15-4.07 (1H, m), 3.73 (6H, s), 3.59-3.29 (4H, m), 3.15-3.00 (1H, m), 3.07 (2H, t, J = 6.6Hz), 1.90-1.49 (3H, m), 1.47-1.12 (3H, m), 0.58 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.6 (1P, d, J = 10.9Hz).
실시예 Z-36.
옥사자포스폴리딘 단량체 24b.
Figure 112015015568410-pct00313
화합물 24b 를 화합물 24a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.81 (1H, brs), 8.06 (1H, s), 7.55-6.95 (24H, m), 6.77-6.69 (4H, m), 6.06 (1H, d, J = 17.1Hz), 5.24-5.08 (1H, m), 5.04-4.80 (2H, m), 4.87 (1H, t, J = 6.6Hz), 4.62 (2H, brs), 4.25-4.19 (1H, m), 3.73 (6H, s), 3.58-3.02 (5H, m), 3.10 (2H, t, J = 6.6Hz), 1.90-1.56 (3H, m), 1.50-1.15 (3H, m), 0.63 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.0 (1P, d, J = 4.4Hz).
실시예 Z-37.
옥사자포스폴리딘 단량체 25a.
Figure 112015015568410-pct00314
화합물 25a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-TOM-4-N-(아세틸)시티딘" 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.04 (1H, brs), 8.30 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.51-7.21 (19H, m), 6.99 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.89-6.81 (4H, m), 6.12 (1H, d, J = 3.3Hz), 5.07 (1H, d, J = 4.8Hz), 5.05 (1H, d, J = 4.8Hz), 4.84-4.75 (1H, m), 4.62-4.52 (1H, m), 4.31-4.25 (1H, m), 4.08-4.01 (1H, m), 3.78 (6H, d, J = 3.0Hz), 3.55-3.23 (4H, m), 3.10-2.96 (1H, m), 2.24 (3H, s), 1.84-1.49 (3H, m), 1.46-0.96 (24H, m), 0.58 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.5 (1P, s).
실시예 Z-38.
옥사자포스폴리딘 단량체 25b.
Figure 112015015568410-pct00315
화합물 25b 를 화합물 25a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.19 (1H, brs), 8.46 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.54-7.23 (19H, m), 7.01 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.88-6.79 (4H, m), 6.19 (1H, d, J = 1.8Hz), 5.11 (1H, d, J = 4.8Hz), 5.07 (1H, d, J = 4.8Hz), 4.81-4.71 (1H, m), 4.60-4.51 (1H, m), 4.26-4.18 (2H, m), 3.79 (6H, s), 3.63-3.55 (1H, m), 3.48-3.28 (2H, m), 3.21-2.94 (2H, m), 2.26 (3H, s), 1.81-1.49 (3H, m), 1.43-0.96 (24H, m), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.4 (1P, s).
실시예 Z-39.
옥사자포스폴리딘 단량체 26a.
Figure 112015015568410-pct00316
화합물 26a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-데옥시-2'-플루오로-4-N-(이소부티릴)시티딘" 을 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.66 (1H, brs), 8.41 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.55-7.20 (19H, m), 7.01 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.89-6.81 (4H, m), 6.06 (1H, d, J = 15.9Hz), 4.85 (1H, dd, J = 51.4, 3.9Hz), 4.84 (1H, dd, J = 12.9, 7.5Hz), 4.77-4.59 (1H, m), 4.15-4.08 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.63-3.29 (4H, m), 3.10-2.96 (1H, m), 2.65 (1H, septet, J = 6.9Hz), 1.85-1.53 (3H, m), 1.48-1.17 (3H, m), 1.21 (3H, d, J = 4.8Hz), 1.19 (3H, d, J = 4.8Hz), 0.59 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.5 (1P, d, J = 6.6Hz).
실시예 Z-40.
옥사자포스폴리딘 단량체 26b.
Figure 112015015568410-pct00317
화합물 26b 를 화합물 26a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.53 (1H, d, J = 7.5Hz), 7.57-7.23 (20H, m), 7.10 (1H, d, J = 7.5Hz), 6.89-6.81 (4H, m), 6.10 (1H, d, J = 15.9Hz), 5.00-4.92 (1H, m), 4.84 (1H, dd, J = 51.5, 3.3Hz), 4.75-4.58 (1H, m), 4.24 (1H, d, J = 9.3Hz), 3.81 (6H, s), 3.65-3.39 (3H, m), 3.32-3.06 (2H, m), 2.59 (1H, septet, J = 6.9Hz), 1.88-1.53 (4H, m), 1.49-1.34 (2H, m), 1.27-1.18 (6H, m), 0.65 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 159.0 (1P, d, J = 4.4).
옥사자포스폴리딘 단량체 27a.
Figure 112015015568410-pct00318
화합물 27a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-메틸-6-N-(벤조일)아데노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.66 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.03 (2H, d, J = 7.2Hz), 7.64-7.16 (23H, m), 6.79 (4H, d, J = 8.7Hz), 6.08 (1H, d, J = 6.3Hz), 4.91-4.81 (1H, m), 4.77-4.69 (1H, m), 4.64-4.57 (1H, m), 4.15-4.10 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.60-3.23 (4H, m), 3.35 (3H, s), 3.14-3.00 (1H, m), 1.90-1.19 (6H, m), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.8 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 27b.
Figure 112015015568410-pct00319
화합물 27b 를 화합물 27a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.12 (1H, brs), 8.73 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.07-8.01 (2H, m), 7.62-7.17 (22H, m), 6.83-6.77 (4H, m), 6.12 (1H, d, J = 4.8Hz), 4.84-4.73 (2H, m), 4.43 (1H, t, J = 4.8Hz), 4.25-4.19 (1H, m), 3.77 (6H, s), 3.55-3.20 (4H, m), 3.28 (3H, s), 3.16-3.03 (1H, m), 1.90-1.17 (6H, m), 0.65 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.0 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 28a.
Figure 112015015568410-pct00320
화합물 28a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-데옥시-2'-플루오로-6-N-(벤조일)아데노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.64 (1H, s), 8.14 (1H, s), 8.06-8.01 (2H, m), 7.63-7.07 (23H, m), 6.78-6.70 (4H, m), 6.12 (1H, dd, J = 18.0, 2.4Hz), 5.24-5.01 (2H, m), 4.94-4.84 (1H, m), 4.17-4.06 (1H, m), 3.73 (6H, s), 3.55-3.40 (3H, m), 3.30-3.22 (1H, m), 3.03-2.88 (1H, m), 1.92-1.19 (6H, m), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 150.5 (1P, d, J = 7.7Hz).
옥사자포스폴리딘 단량체 28b.
Figure 112015015568410-pct00321
화합물 28b 를 화합물 28a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.07 (1H, brs), 8.80 (1H, s), 8.24 (1H, s), 8.08-8.01 (2H, m), 7.66-7.15 (22H, m), 6.81-6.75 (4H, m), 6.14 (1H, dd, J = 18.0, 1.8Hz), 5.16-4.91 (3H, m), 4.28-4.21 (1H, m), 3.76 (6H, s), 3.57-3.11 (5H, m), 1.82-1.16 (6H, m), 0.65 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.8 (1P, d, J = 5.6Hz).
옥사자포스폴리딘 단량체 29a.
Figure 112015015568410-pct00322
화합물 29a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-TOM-2-N-(아세틸)구아노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.70 (1H, s), 7.63-7.13 (21H, m), 6.84-6.76 (4H, m), 5.77 (1H, d, J = 8.4Hz), 5.41-5.33 (1H, m), 4.90 (2H, s), 4.78-4.68 (2H, m), 3.86 (1H, brs), 3.75 (3H, s), 3.74 (3H, s), 3.56-3.41 (2H, m), 3.32-2.90 (3H, m), 1.92-1.10 (9H, m), 0.97-0.87 (21H, m), 0.52 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.1 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 29b.
Figure 112015015568410-pct00323
화합물 29b 를 화합물 29a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.77 (1H, s), 7.56-7.15 (21H, m), 6.82-6.75 (4H, m), 5.86 (1H, d, J = 7.5Hz), 5.26-5.17 (1H, m), 4.95 (1H, d, J =5.4Hz), 4.85 (1H, d, J =5.4Hz), 4.78-4.71 (1H, m), 4.59-4.49 (1H, m), 4.10-4.05 (1H, m), 3.74 (6H, s), 3.52-3.37 (2H, m), 3.30-3.18 (1H, m), 3.11-2.85 (2H, m), 1.85-1.15 (9H, m), 0.93-0.84 (21H, m), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 152.3 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 30a.
Figure 112015015568410-pct00324
화합물 30a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O-TOM-우리딘" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.76 (1H, d, J = 8.1Hz), 7.55-7.18 (20H, m), 6.88-6.80 (4H, m), 6.11 (1H, d, J = 6.0Hz), 5.32 (1H, d, J = 8.1Hz), 4.99 (1H, d, J = 5.1Hz), 4.93 (1H, d, J = 5.1Hz), 4.84-4.75 (1H, m), 4.54-4.46 (1H, m), 4.38 (1H, t, J = 5.7Hz), 3.87-3.83 (1H, m), 3.78 (3H, s), 3.77 (3H, s), 3.56-3.42 (1H, m), 3.39-3.28 (1H, m), 3.36 (1H, dd, J = 11.0, 2.7Hz), 3.25 (1H, dd, J = 11.0, 2.7Hz), 3.16-3.03 (1H, m), 1.88-1.12 (6H, m), 1.08-0.97 (21H, m), 0.59 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 156.6 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 30b.
Figure 112015015568410-pct00325
화합물 30b 를 화합물 30a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.87 (1H, d, J = 7.8Hz), 7.52-7.48 (4H, m), 7.38-7.21 (16H, m), 6.83-6.79 (4H, m), 6.14 (1H, d, J = 4.8Hz), 5.33 (1H, d, J = 7.8Hz), 4.99 (1H, d, J = 5.4Hz), 4.89 (1H, d, J = 5.4Hz), 4.67 (1H, dd, J = 13.8, 7.2Hz), 4.52 (1H, dt, J = 10.4, 4.8Hz), 4.31 (1H, t, J = 4.8Hz), 4.06-4.03 (1H, m), 3.78 (3H, s), 3.77 (3H, s), 3.47 (1H, dd, J = 10.4, 2.4Hz), 3.47-3.39 (1H, m), 3.22-3.17 (2H, m), 3.00 (1H, ddd, J = 19.5, 10.4, 4.8Hz), 1.82-1.74 (1H, m), 1.68-1.58 (1H, m), 1.56 (1H, dd, J = 14.4, 8.4Hz), 1.38 (1H, dd, J = 14.4, 7.2Hz), 1.31-1.25 (1H, m), 1.26-1.17 (1H, m), 1.08-0.98 (21H, m), 0.63 (3H, s); 31P NMR (243.0 MHz, CDCl3) δ 154.3 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 31a.
Figure 112015015568410-pct00326
화합물 31a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O,4'-C-메틸렌-6-N-(벤조일)아데노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.10 (1H, brs), 8.76 (1H, s), 8.32 (1H, s), 8.04 (2H, d, J = 7.2Hz), 7.64-7.18 (22H, m), 6.84 (4H, d, J = 8.7Hz), 6.10 (1H, s), 4.76 (1H, δ J = 6.9Hz), 4.58 (1H, s), 4.61-4.51 (1H, m), 3.91 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.77 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.75 (6H, s), 3.50 (1H, s), 3.47-3.33 (1H, m), 3.31-3.19 (1H, m), 3.03-2.88 (1H, m), 1.84-1.09 (6H, m), 0.51 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 152.9 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 31b.
Figure 112015015568410-pct00327
화합물 31b 를 화합물 31a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.81 (1H, s), 8.30 (1H, s), 8.07-8.00 (2H, m), 7.64-7.17 (22H, m), 6.86-6.79 (4H, m), 6.12 (1H, s), 4.81-4.72 (1H, m), 4.62 (1H, δ J = 7.2Hz), 4.57 (1H, s), 3.94 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.89 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.77 (6H, s), 3.48 (2H, s), 3.46-3.32 (1H, m), 3.24-3.13 (1H, m), 3.10-2.97 (1H, m), 1.84-1.49 (3H, m), 1.42-1.09 (3H, m), 0.58 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.3 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 32a.
Figure 112015015568410-pct00328
화합물 32a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O,4'-C-메틸렌-4-N-(이소부티릴)-5-메틸시티딘" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.88 (1H, brs), 7.58-7.18 (20H, m), 6.88-6.80 (4H, m), 5.65 (1H, s), 4.69-4.60 (1H, m), 4.52 (1H, d, J = 6.6Hz), 4.49 (1H, s), 3.81-3.74 (1H, m), 3.75 (3H, s), 3.73 (3H, s), 3.64 (1H, d, J = 8.1Hz), 3.56 (1H, d, J = 11.1Hz), 3.53 (1H, d, J = 8.1Hz), 3.46 (1H, d, J = 11.1Hz), 3.56-3.40 (1H, m), 3.32-3.20 (1H, m), 3.14-3.00 (1H, m), 1.85-1.12 (6H, m), 1.60 (3H, s), 1.19 (6H, d, J = 6.9Hz), 0.55 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.9 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 32b.
Figure 112015015568410-pct00329
화합물 32b 를 화합물 32a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.86 (1H, brs), 7.56-7.19 (20H, m), 6.88-6.79 (4H, m), 5.69 (1H, s), 4.86-4.76 (1H, m), 4.46 (1H, s), 4.45 (1H, d, J = 7.5Hz), 3.80-3.75 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.74 (1H, d, J = 8.1Hz), 3.69 (1H, d, J = 8.1Hz), 3.51 (1H, d, J = 11.1Hz), 3.44-3.30 (1H, m), 3.39 (1H, d, J = 11.1Hz), 3.29-3.17 (1H, m), 3.11-2.97 (1H, m), 1.86-1.52 (3H, m), 1.64 (3H, s), 1.45-1.10 (3H, m), 1.21 (6H, d, J = 6.6Hz), 0.62 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.2 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 33a.
Figure 112015015568410-pct00330
화합물 33a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O,4'-C-메틸렌-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.71 (1H, brs), 8.16 (1H, s), 7.50-7.17 (21H, m), 7.09-7.01 (3H, m), 6.86-6.79 (4H, m), 6.03 (1H, s), 4.84 (2H, t, J = 6.6Hz), 4.72 (2H, s), 4.68 (1H, d, J = 7.2Hz), 4.55-4.46 (1H, m), 4.50 (1H, s), 3.90 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.77 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.75 (6H, s), 3.51 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.47 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.45-3.21 (2H, m), 3.08 (2H, t, J =6.6Hz), 3.03-2.89 (1H, m), 1.80-1.08 (6H, m), 0.47 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 153.2 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 33b.
Figure 112015015568410-pct00331
화합물 33b 를 화합물 33a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.86 (1H, brs), 8.13 (1H, s), 7.55-7.17 (21H, m), 7.08-6.98 (3H, m), 6.95-6.78 (4H, m), 6.01 (1H, s), 4.86 (2H, t, J = 6.6Hz), 4.82-4.73 (1H, m), 4.70 (2H, s), 4.64 (1H, d, J = 7.5Hz), 4.49 (1H, s), 3.94 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.89 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.77 (6H, s), 3.46 (2H, s), 3.45-3.30 (1H, m), 3.24-3.12 (1H, m), 3.09 (2H, t, J =6.6Hz), 3.09-2.96 (1H, m), 1.81-1.50 (3H, m), 1.41-1.06 (3H, m), 0.58 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 157.4 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 34a.
Figure 112015015568410-pct00332
화합물 34a 를 화합물 12a 와 유사한 방식으로 "5'-O-(DMTr)-2-N-(페녹시아세틸)-6-O-(시아노에틸)구아노신" 대신 "5'-O-(DMTr)-2'-O,4'-C-메틸렌-5-메틸우리딘" 을 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.71 (1H, d, J = 0.9Hz), 7.50-7.17 (20H, m), 6.87-6.80 (4H, m), 5.61 (1H, s), 4.69-4.60 (1H, m), 4.55 (1H, d, J = 6.9Hz), 4.41 (1H, s), 3.74 (3H, s), 3.73 (3H, s), 3.64 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.55 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.53 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.46 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.56-3.42 (1H, m), 3.35-3.24 (1H, m), 3.13-3.00 (1H, m), 1.85-1.45 (3H, m), 1.55 (3H, d, J = 0.9Hz), 1.41-1.12 (3H, m), 0.56 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 155.1 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 34b.
Figure 112015015568410-pct00333
화합물 34b 를 화합물 34a 와 유사한 방식으로 3a 대신 3b 를 사용하여 수득했다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.69 (1H, s), 7.56-7.19 (20H, m), 6.88-6.79 (4H, m), 5.66 (1H, s), 4.87-4.77 (1H, m), 4.47 (1H, d, J = 7.8Hz), 4.40 (1H, s), 3.78 (6H, s), 3.74 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.68 (1H, d, J = 7.8Hz), 3.50 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.46-3.32 (1H, m), 3.39 (1H, d, J = 10.8Hz), 3.30-3.19 (1H, m), 3.12-2.98 (1H, m), 1.85-1.56 (3H, m), 1.59 (3H, s), 1.46-1.12 (3H, m), 0.63 (3H, s); 31P NMR (121.5 MHz, CDCl3) δ 158.1 (1P, s).
옥사자포스폴리딘 단량체 35a.
Figure 112015015568410-pct00334
화합물 35a 를 화합물 13a 와 유사한 방식으로 3a 대신 13a' 를 사용하여 수득했다. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 7.76 (2H, d, J = 9.0Hz), 7.62 (1H, d, J = 1.2Hz), 7.40 (2H, d, J = 7.2Hz), 7.32-7.23 (10H, m), 6.85 (4H, d, J = 8.4Hz), 6.41 (1H, dd, J = 8.4, 5.4Hz), 4.94 (1H, dd, J = 12.3, 5.4Hz), 4.84-4.79 (1H, m), 4.03-4.01 (1H, m), 3.79 (6H, s), 3.59-3.53 (1H, m), 3.52-3.44 (2H, m), 3.41 (1H, dd, J = 14.7, 7.2Hz), 3.37-3.30 (2H, m), 3.13 (1H, ddd, J = 19.3, 10.3, 4.1Hz), 2.50-2.44 (1H, m), 2.39 (3H, s), 2.35-2.29 (1H, m), 1.91-1.72 (2H, m), 1.64-1.59 (1H, m), 1.40 (3H, s), 1.12-1.05 (1H, m); 31P NMR (243.0 MHz, CDCl3) δ 154.2 (1P, s).
실시예 Z-41.
Figure 112015015568410-pct00335
상기 화합물 Z-27 (이는 관습적 단량체를 나타냄) 을 사용하여 올리고를 생성했다. 도 70 은 비교예 Z-1 을 통해 수득된 생성물의 그래프를 보여준다. 도 69 및 70 에 나타난 바와 같이, 본 발명의 단량체는 더욱 완전한 탈보호 및 더 적은 부산물을 제공했고, 이는 생성물 단리 및/또는 정제를 더 용이하게 만든다.
일부 구현예에서, 본 발명은 화학적으로 안정적인 단량체를 제공한다. 예시적 그러한 단량체는 상기 실시예에 나타나 있다. 일부 구현예에서, 본 발명은 단량체를 높은 단리 수율로 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 단량체를 종래의 방법보다 높은 단리 수율로 제공한다. 일부 구현예에서, 단리 수율은 80% 초과이다. 예시적 그러한 단량체는 상기 실시예에 나타나 있다.
축합 시약
본 발명의 방법에 따라 유용한 축합 시약 (C R ) 은 하기 일반식 중 임의의 하나를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00336
식 중, Z 1 , Z 2 , Z 3 , Z 4 , Z 5 , Z 6 , Z 7 , Z 8 , 및 Z 9 는 독립적으로 알킬, 아미노알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릭, 시클로알킬알킬, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬옥시, 아릴옥시, 또는 헤테로아릴옥시로부터 선택되는 임의로 치환된 기이거나, 또는 Z 2 및 Z 3 , Z 5 및 Z 6 , Z 7 및 Z 8 , Z 8 및 Z 9 , Z 9 및 Z 7 , 또는 Z 7 및 Z 8 및 Z 9 는 함께 3 내지 20 원 지환식 또는 헤테로시클릭 고리를 형성하고; Q - 는 반대 음이온이고; LG 는 이탈기이다.
일부 구현예에서, 축합 시약 C R 의 반대 이온은 Cl - , Br - , BF 4 - , PF 6 - , TfO - , Tf 2 N - , AsF 6 - , ClO 4 - , 또는 SbF 6 - 이고, 여기서 Tf 는 CF 3 SO 2 이다. 일부 구현예에서, 축합 시약 C R 의 이탈기는 F, Cl, Br, I, 3-니트로-1,2,4-트리아졸, 이미다졸, 알킬트리아졸, 테트라졸, 펜타플루오로벤젠, 또는 1-히드록시벤조트리아졸이다.
본 발명의 방법에 따라 사용되는 축합 시약의 예는 펜타플루오로벤조일 클로리드, 카르보닐디이미다졸 (CDI), 1-메시틸렌설포닐-3-니트로트리아졸 (MSNT), 1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로리드 (EDCI-HCl), 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBOP), N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로리드 (BopCl), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU), 및 O-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), DIPCDI; N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 브로미드 (BopBr), 1,3-디메틸-2-(3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일)-2-피롤리딘-1-일-1,3,2-디아자포스폴리디늄 헥사플루오로포스페이트 (MNTP), 3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일-트리스(피롤리딘-1-일)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyNTP), 브로모트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBrOP); O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU); 및 테트라메틸플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (TFFH) 를 포함하나 그에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 축합 시약 CR 의 반대 이온은 Cl-, Br-, BF4 -, PF6 -, TfO-, Tf2N-, AsF6 -, ClO4 -, 또는 SbF6 - 이고, 여기서 Tf 는 CF3SO2 이다.
일부 구현예에서, 축합 시약은 1-(2,4,6-트리이소프로필벤젠설포닐)-5-(피리딘-2-일) 테트라졸리드, 피발로일 클로리드, 브로모트리스피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트, N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐) 포스피닉 클로리드 (BopCl), 또는 2-클로로-5,5-디메틸-2-옥소-1,3,2-디옥사포스피난이다. 일부 구현예에서, 축합 시약은 N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로리드 (BopCl) 이다. 일부 구현예에서, 축합 시약은 WO/2006/066260 에 기재된 것으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 축합 시약은 1,3-디메틸-2-(3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일)-2-피롤리딘-1-일-1,3,2-디아자포스폴리디늄 헥사플루오로포스페이트 (MNTP), 또는 3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일-트리스(피롤리딘-1-일)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyNTP) 이다:
Figure 112015015568410-pct00337
.
뉴클레오시드 커플링 상대의 염기 및 당의 선택
본원에 기재된 바와 같은, 본 발명의 방법에 따라 사용되는 뉴클레오시드 커플링 상대는 서로 동일 또는 상이할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 합성에 사용되는 뉴클레오시드 커플링 상대는 서로 동일한 구조 및/또는 입체화학적 입체배치를 갖는다. 일부 구현예에서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 합성에 사용되는 각각의 뉴클레오시드 커플링 상대는 올리고뉴클레오티드의 특정 기타 뉴클레오시드 커플링 상대와 동일한 구조 및/또는 입체화학적 입체배치를 갖는다. 본 발명의 방법에 따라 사용되는 예시적 핵염기 및 당은 본원에 기재되어 있다. 관련 화학 및 합성 기술 분야의 통상의 기술자는 본원에 기재된 핵염기 및 당의 임의의 조합이 본 발명의 방법에 따라 사용될 것이 고려됨을 인식할 것이다.
커플링 단계:
본 발명에 따라 사용되는 예시적 커플링 절차 및 키랄 시약 및 축합 시약은, 특히, Wada I (JP4348077; WO2005/014609; WO2005/092909), Wada II (WO2010/064146), 및 Wada III (WO2012/039448) 에 개요서술되어 있다. 본 발명에 따라 사용되는 키랄 뉴클레오시드 커플링 상대는 또한 본원에서 "Wada 아미다이트" 로서 언급된다. 일부 구현예에서, 커플링 상대는
Figure 112015015568410-pct00338
의 구조를 갖고, 여기서 BPRO 는 보호된 핵염기이다. 일부 구현예에서, 커플링 상대는
Figure 112015015568410-pct00339
의 구조를 갖고, 여기서 BPRO 는 보호된 핵염기이다. 커플링 상대로서의 예시적 키랄 포스포라미디트가 아래 나타나 있다:
Figure 112015015568410-pct00340
커플링 상대의 합성에 사용되는 방법 중 하나는 아래 반응식 II 에 나타나 있다.
반응식 II. 커플링 상대의 예시적 합성.
Figure 112015015568410-pct00341
일부 구현예에서, 커플링 단계는 커플링을 실행하기에 적합한 조건 하에 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 단위체의 자유 히드록실 기를 뉴클레오시드 커플링 상대와 반응시는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 커플링 단계 앞에 탈차단 단계가 선행한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 성장하는 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록실 기는 차단되고 (즉, 보호되고), 후속적으로 뉴클레오시드 커플링 상대와 반응하기 위해 탈차단되어야 한다.
일단 성장하는 올리고뉴클레오티드의 적당한 히드록실 기가 탈차단되면, 지지체는 세정되고 키랄 시약을 포함하는 용액 및 활성화제를 포함하는 용액의 전달을 위한 제제 중에서 건조된다. 일부 구현예에서, 키랄 시약 및 활성화제는 동시에 전달된다. 일부 구현예에서, 동시전달은 소정량의 키랄 시약을 용액 (예를 들어, 포스포라미디트 용액) 으로, 그리고 소정량의 활성화제를 용액 (예를 들어, CMPT 용액) 으로 극성 반양성자성 용매 예컨대 니트릴 용매 (예를 들어, 아세토니트릴) 중에 전달하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 커플링 단계는 키랄 포스파이트 생성물이 부분입체이성질체 초과량 (diastereomeric excess) > 95% 으로 존재하는 미가공 생성물 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 키랄 포스파이트 생성물은 부분입체이성질체 초과량 > 96% 으로 존재한다. 일부 구현예에서, 키랄 포스파이트 생성물은 부분입체이성질체 초과량 > 97% 으로 존재한다. 일부 구현예에서, 키랄 포스파이트 생성물은 부분입체이성질체 초과량 > 98% 으로 존재한다. 일부 구현예에서, 키랄 포스파이트 생성물은 부분입체이성질체 초과량 > 99% 으로 존재한다.
캡핑 단계:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법은 캡핑 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 캡핑 단계는 단일 단계이다. 일부 구현예에서, 캡핑 단계는 2 개의 단계이다. 일부 구현예에서, 캡핑 단계는 2 개 초과의 단계이다.
일부 구현예에서, 캡핑 단계는 키랄 보조기의 자유 아민의 캡핑 및 임의의 잔류 미반응 5' 히드록실 기의 캡핑 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 보조기의 자유 아민 및 미반응 5' 히드록실 기는 동일한 캡핑 기로 캡핑된다. 일부 구현예에서, 키랄 보조기의 자유 아민 및 미반응 5' 히드록실 기는 상이한 캡핑 기로 캡핑된다. 특정 구현예에서, 상이한 캡핑 기에 의한 캡핑은 올리고뉴클레오티드의 합성 동안 하나의 캡핑 기의 다른 것에 우선하는 선택적 제거를 허용한다. 일부 구현예에서, 상기 2 가지 기 모두의 캡핑은 동시에 일어난다. 일부 구현예에서, 상기 2 가지 기 모두의 캡핑은 반복적으로 일어난다.
특정 구현예에서, 캡핑은 반복적으로 일어나고, 자유 아민의 제 1 캡핑 단계에 뒤이어 자유 5' 히드록실 기의 제 2 캡핑 단계를 포함하고, 자유 아민 및 5' 히드록실 기 둘다 동일한 캡핑 기로 캡핑된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 키랄 보조기의 자유 아민은 무수물 (예를 들어, 페녹시아세트산 무수물, 즉, Pac2O) 을 사용하여 캡핑되고, 그 후 5' 히드록실 기는 동일한 무수물로 캡핑된다. 특정 구현예에서, 동일한 무수물에 의한 5' 히드록실 기의 캡핑은 상이한 조건 하에 (예를 들어, 하나 이상의 부가적 시약의 존재 하에) 일어난다. 일부 구현예에서, 5' 히드록실 기의 캡핑은 에테르성 (etherial) 용매 중 아민 염기 (예를 들어, THF 중 NMI (N-메틸이미다졸)) 의 존재 하에 일어난다. 구절 "캡핑 기" 는 본원에서 구절 "보호기" 및 "차단기" 와 호환되게 사용된다.
일부 구현예에서, 아민 캡핑 기는 중간체 포스파이트 종의 재배열 및/또는 분해를 방지하도록 아민을 효과적으로 캡핑하는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 캡핑 기는 뉴클레오티드간 인 연결의 분자내 절단을 방지하기 위해 키랄 보조기의 아민을 보호하는 그것의 능력으로 선택된다.
일부 구현예에서, 5' 히드록실 기 캡핑 기는 "쇼트머 (shortmer)", 예를 들어, 제 1 사이클에서 반응하는데 실패하지만 그 후 하나 이상의 후속 사이클에서 반응하는 올리고뉴클레오티드 사슬의 반응으로부터 발생하는 "n-m" (m 및 n 은 정수이고, m<n 이고; n 은 표적화되는 올리고뉴클레오티드 내의 염기의 개수임) 불순물의 발생을 방지하도록 히드록실 기를 효과적으로 캡핑하는 것을 특징으로 한다. 그러한 쇼트머, 특히 "n-1" 의 존재는 미가공 올리고뉴클레오티드의 순도에 유해 효과를 갖고, 올리고뉴클레오티드의 최종 정제를 오래 지속되고 일반적으로 수율을 낮게 만든다.
일부 구현예에서, 특별한 캡은 특별한 조건 하에 특별한 유형의 반응을 촉진하는 그것의 경향에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 캡핑 기는 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 캡 및/또는 보조기를 제거하는 E1 제거 반응을 촉진하는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 캡핑 기는 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 캡 및/또는 보조기를 절단하는 E2 제거 반응을 촉진하는 그것의 능력으로 선택된다. 일부 구현예에서, 캡핑 기는 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 캡 및/또는 보조기를 절단하는 β-제거 반응을 촉진하는 그것의 능력으로 선택된다.
개질 단계:
본원에서 사용되는, 구절 "개질 단계", "개질 단계" 및 "P-개질 단계" 는 호환되게 사용되고, 일반적으로 개질된 뉴클레오티드간 연결을 설치하는데 사용되는 임의의 하나 이상의 단계를 언급한다. 일부 구현예에서, 개질된 뉴클레오티드간 연결은 화학식 I 의 구조를 갖는다. 본 발명의 P-개질 단계는 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립이 완료된 후 보다는 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립 동안 일어난다. 따라서, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 각각의 뉴클레오티드 단위체는 뉴클레오티드 단위체가 설치되는 사이클 동안 인 연결에서 개별적으로 개질될 수 있다.
일부 구현예에서, 적합한 P-개질 시약은 황 친전자체, 셀레늄 친전자체, 산소 친전자체, 보론화 시약, 또는 아지드 시약이다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 셀레늄 시약은 원소 셀레늄, 셀레늄 염, 또는 치환된 디셀레니드이다. 일부 구현예에서, 산소 친전자체는 원소 산소, 퍼옥시드, 또는 치환된 퍼옥시드이다. 일부 구현예에서, 보론화 시약은 보란-아민 (예를 들어, N,N-디이소프로필에틸아민 (BH3·DIPEA), 보란-피리딘 (BH3·Py), 보란-2-클로로피리딘 (BH3·CPy), 보란-아닐린 (BH3·An)), 보란-에테르 시약 (예를 들어, 보란-테트라히드로푸란 (BH3·THF)), 보란-디알킬설파이드 시약 (예를 들어, BH3·Me2S), 아닐린-시아노보란, 또는 트리페닐포스핀-카르보알콕시보란이다. 일부 구현예에서, 아지드 시약은 후속 환원을 겪어 아민 기를 제공할 수 있는 아지드 기를 포함한다.
일부 구현예에서, P-개질 시약은 본원에 기재된 바와 같은 황화 시약이다. 일부 구현예에서, 개질 단계는 포스포로티오에이트 연결 또는 포스포로티오에이트 트리에스테르 연결을 제공하는 인의 황화를 포함한다. 일부 구현예에서, 개질 단계는 화학식 I 의 뉴클레오티드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 황화 시약, 및 그의 제조 방법, 및 용도를 제공한다.
일부 구현예에서, 그러한 황화 시약은 티오설포네이트 시약이다. 일부 구현예에서, 티오설포네이트 시약은 하기 화학식 S-I 의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00342
식 중:
R s1 은 R 이고;
각각의 R, L 및 R 1 은 독립적으로 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 비스(티오설포네이트) 시약이다. 일부 구현예에서, 비스(티오설포네이트) 시약은 하기 화학식 S-II 의 구조를 갖는다:
Figure 112015015568410-pct00343
식 중, 각각의 R s1 및 L 은 독립적으로 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다.
위에서 일반적으로 정의된 바와 같이, R s1 은 R 이고, 여기서 R 은 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R s1 은 임의로 치환된 지방족, 아릴, 헤테로시클릴 또는 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, R s1 은 임의로 치환된 알킬이다. 일부 구현예에서, R s1 은 임의로 치환된 알킬이다. 일부 구현예에서, R s1 은 메틸이다. 일부 구현예에서, R s1 은 시아노메틸이다. 일부 구현예에서, R s1 은 니트로메틸이다. 일부 구현예에서, R s1 은 임의로 치환된 아릴이다. 일부 구현예에서, R s1 은 임의로 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, R s1 은 페닐이다. 일부 구현예에서, R s1 은 p-니트로페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 p-메틸페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 p-클로로페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 o-클로로페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 2,4,6-트리클로로페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 펜타플루오로페닐이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 임의로 치환된 헤테로시클릴이다. 일부 구현예에서, Rs1 은 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00344
(MTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00345
(TTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00346
(NO2PheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00347
(p-ClPheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00348
(o-ClPheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00349
(2,4,6-TriClPheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00350
(PheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00351
(PFPheTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00352
(a-CNMTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00353
(a-NO2MTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00354
(a-CF3MTS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00355
(a-CF3TS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00356
(a-CHF2TS) 이다. 일부 구현예에서, Rs1-S(O)2S- 은
Figure 112015015568410-pct00357
(a-CH2FTS) 이다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌이다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 임의로 치환된 C1-C6 알케닐렌이다. 일부 구현예에서, L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 여기서 RL3 은 하나 이상의 메틸렌 단위가 임의로 및 독립적으로 임의로 치환된 C1-C6 알케닐렌, 아릴렌, 또는 헤테로아릴렌으로 대체되어 있는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌이다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, RL3 은 임의로 치환된 -S-(C1-C6 알케닐렌)-, -S-(C1-C6 알킬렌)-, -S-(C1-C6 알킬렌)-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)-, -S-CO-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)-, 또는 -S-CO-(C1-C6 알킬렌)-아릴렌-(C1-C6 알킬렌)- 이다. 일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 L 은 -S-RL3- 또는 -S-C(O)-RL3- 이고, 황 원자는 R1 에 연결되어 있다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 L 은 알킬렌, 알케닐렌, 아릴렌 또는 헤테로아릴렌이다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 L 은
Figure 112015015568410-pct00358
Figure 112015015568410-pct00359
이다. 일부 구현예에서, L 은
Figure 112015015568410-pct00360
Figure 112015015568410-pct00361
이고, 식 중 황 원자는 R1 에 연결되어 있다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 R1 은
Figure 112015015568410-pct00362
Figure 112015015568410-pct00363
이다. 일부 구현예에서, R1 은
Figure 112015015568410-pct00364
Figure 112015015568410-pct00365
이고, 식 중 황 원자는 L 에 연결되어 있다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 L 은
Figure 112015015568410-pct00366
이고, 식 중 황 원자는 R1 에 연결되어 있고;
R1 은
Figure 112015015568410-pct00367
또는
Figure 112015015568410-pct00368
이고, 식 중 황 원자는 L 에 연결되어 있다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S-I 또는 S-II 의 구조를 갖고, 식 중 R1 은 -S-RL2 이고, 여기서 RL2 는 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, RL2 는 -S-(C1-C6 알킬렌)-헤테로시클릴, -S-(C1-C6 알케닐렌)-헤테로시클릴, -S-(C1-C6 알킬렌)-N(R')2, -S-(C1-C6 알킬렌)-N(R')3 로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고, 여기서 각각의 R' 는 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, -L-R1 은 -RL3-S-S-RL2 이고, 여기서 각각의 변수는 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, -L-R1 은 -RL3-C(O)-S-S-RL2 이고, 여기서 각각의 변수는 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같다.
화학식 S-II 의 예시적 비스(티오설포네이트) 시약이 아래 제시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00369
.
일부 구현예에서, 황화 시약은 하기 화학식 중 하나를 갖는 화합물이다:
S8, Rs2-S-S-Rs3, 또는 Rs2-S-Xs-Rs3,
식 중:
각각의 Rs2 및 Rs3 은 독립적으로 지방족, 아미노알킬, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬옥시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 아실, 아미드, 이미드, 또는 티오카르보닐로부터 선택되는 임의로 치환된 기이거나; 또는
Rs2 및 Rs3 은 그들이 결합되어 있는 원자들과 함께 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
Xs 는 -S(O)2-, -O-, 또는 -N(R')- 이고;
R' 는 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 S8,
Figure 112015015568410-pct00370
Figure 112015015568410-pct00371
이다. 일부 구현예에서, 황화 시약은 S8,
Figure 112015015568410-pct00372
이다. 일부 구현예에서, 황화 시약은
Figure 112015015568410-pct00373
이다.
예시적 황화 시약은 아래 표 5 에 제시되어 있다.
표 5. 예시적 황화 시약.
Figure 112015015568410-pct00374
Figure 112015015568410-pct00375
일부 구현예에서, 제공되는 황화 시약은 H-포스포네이트를 개질하는데 사용된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, H-포스포네이트 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어, Wada I 또는 Wada II 의 방법을 사용하여 합성되고, 화학식 S-I 또는 S-II 의 황화 시약을 사용하여 개질된다:
Figure 112015015568410-pct00376
식 중, 각각의 RS1, L, 및 R1 은 위에 및 본원에서 기재 및 정의된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 포스포로티오에이트 트리에스테르의 합성 방법을 제공한다:
i) 하기 구조의 H-포스포네이트를 실릴화 시약과 반응시켜 실릴옥시포스포네이트를 제공하는 단계:
Figure 112015015568410-pct00377
(식 중, 각각의 W, Y, 및 Z 은 위에 및 본원에서 기재 및 정의된 바와 같음);
ii) 실릴옥시포스포네이트를 하기 구조 S-I 또는 S-II 의 황화 시약과 반응시켜 포스포로티오트리에스테르를 제공하는 단계:
Figure 112015015568410-pct00378
.
일부 구현예에서, 뉴클레오티드간 연결에 개질을 도입하는데 황화 시약 대신 셀레늄 친전자체가 사용된다. 일부 구현예에서, 셀레늄 친전자체는 하기 화학식 중 하나를 갖는 화합물이다:
Se, Rs2-Se-Se- Rs3, 또는 Rs2-Se-Xs-Rs3,
식 중:
각각의 Rs2 및 Rs3 은 독립적으로 지방족, 아미노알킬, 카르보시클릴, 헤테로시클릴, 헤테로시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알킬옥시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 아실, 아미드, 이미드, 또는 티오카르보닐로부터 선택되는 임의로 치환된 기이거나; 또는
Rs2 및 Rs3 은 그들이 결합되어 있는 원자들과 함께 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
Xs 는 -S(O)2-, -O-, 또는 -N(R')- 이고;
R' 는 위에 및 본원에 정의되고 기재된 바와 같다.
다른 구현예에서, 셀레늄 친전자체는 Se, KSeCN,
Figure 112015015568410-pct00379
의 화합물이다. 일부 구현예에서, 셀레늄 친전자체는 Se 또는
Figure 112015015568410-pct00380
이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은 황화 동안 인에 전달되는 모이어티가 단일 황 원자 (예를 들어, -S- 또는 =S) 와는 대조적으로 치환된 황 (예를 들어, -SR) 인 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은 시약의 활성이 시약을 특정 전자 끌기 또는 주기 기로 개질하여 조정가능한 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은 결정질인 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은 높은 정도의 결정도를 갖는 것을 특징으로 한다. 특정 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은, 예를 들어, 재결정화를 통해 시약의 정제가 용이한 것을 특징으로 한다. 특정 구현예에서, 본 발명에 따라 사용되는 황화 시약은 황-함유 불순물이 실질적으로 없는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 황-함유 불순물이 실질적으로 없는 황화 시약은 증가된 효율을 보인다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함한다. 그러한 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드를 합성하기 위해, 하나 이상의 개질 단계가 임의로 산화 단계로 대체되어 상응하는 포스페이트 디에스테르 연결을 설치한다. 일부 구현예에서, 산화 단계는 일상적 올리고뉴클레오티드 합성과 유사한 방식으로 수행된다. 일부 구현예에서, 산화 단계는 I2 의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 산화 단계는 I2 및 피리딘의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 산화 단계는 THF/피리딘/물 (70:20:10 - v/v/v) 조-용매 시스템 중 0.02 M I2 의 사용을 포함한다. 예시적 사이클이 반응식 I-c 에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 전구체가 사용되어 포스포로티오에이트 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드가 합성된다. 일부 구현예에서, 그러한 포스포로티오에이트 전구체는
Figure 112015015568410-pct00381
이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00382
은 사이클 퇴장 후 표준 탈보호/방출 절차 동안 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다. 예가 아래 추가로 제시되어 있다.
일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결 및 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결 및 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하고, 여기서 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결은 3' 에서 5' 로 합성될 때 모든 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 뒤에 설치된다. 그러한 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드를 합성하기 위해, 일부 구현예에서, 하나 이상의 개질 단계가 임의로 산화 단계로 대체되어 상응하는 포스페이트 디에스테르 연결을 설치하고, 포스포로티오에이트 전구체가 각각의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결에 대해 설치된다. 일부 구현예에서, 원하는 올리고뉴클레오티드 길이가 달성된 후에 포스포로티오에이트 전구체는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다. 일부 구현예에서, 사이클 퇴장 동안 또는 후의 탈보호/방출 단계는 포스포로티오에이트 전구체를 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환시킨다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 전구체는 베타-제거 경로에 의해 제거되는 능력을 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 전구체는
Figure 112015015568410-pct00383
이다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 합성 동안 포스포로티오에이트 전구체, 예를 들어,
Figure 112015015568410-pct00384
를 사용하는 이점 중 하나는
Figure 112015015568410-pct00385
이 특정 조건에서 포스포로티오에이트보다 더욱 안정적이라는 점이다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 전구체는 본원에 기재된 바와 같은 인 보호기, 예를 들어, 2-시아노에틸 (CE 또는 Cne), 2-트리메틸실릴에틸, 2-니트로에틸, 2-설포닐에틸, 메틸, 벤질, o-니트로벤질, 2-(p-니트로페닐)에틸 (NPE 또는 Npe), 2-페닐에틸, 3-(N-tert-부틸카르복사미도)-1-프로필, 4-옥소펜틸, 4-메틸티오-l-부틸, 2-시아노-1,1-디메틸에틸, 4-N-메틸아미노부틸, 3-(2-피리딜)-1-프로필, 2-[N-메틸-N-(2-피리딜)]아미노에틸, 2-(N-포르밀,N-메틸)아미노에틸, 4-[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로아세틸)아미노]부틸이다. 예가 아래 추가로 제시되어 있다.
원하는 황화 시약의 합성 방법은 본원 및 실시예 섹션에 기재되어 있다.
위에서 언급한 바와 같이, 일부 구현예에서, 황화는 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 키랄 시약을 절단하는 조건 하에 일어난다. 일부 구현예에서, 황화는 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 키랄 시약을 절단하지 않는 조건 하에 일어난다.
일부 구현예에서, 황화 시약은 적합한 용매에 용해되고, 칼럼에 전달된다. 특정 구현예에서, 용매는 극성 반양성자성 용매 예컨대 니트릴 용매이다. 일부 구현예에서, 용매는 아세토니트릴이다. 일부 구현예에서, 황화 시약의 용액은 황화 시약 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 티오설포네이트 유도체) 을 니트릴 용매 (예를 들어, 아세토니트릴) 중 BSTFA (N,O-비스-트리메틸실릴-트리플루오로아세타미드) 와 혼합하여 제조된다. 일부 구현예에서, BSTFA 는 포함되지 않는다. 예를 들어, 본 발명의 발명자들은 상대적으로 더욱 반응성인 일반식 Rs2-S-S(O)2-Rs3 의 황화 시약이 종종 BSTFA 의 부재 하에 황화 반응에 성공적으로 참여할 수 있음을 발견했다. 하나의 예로, 본 발명의 발명자들은 Rs2 가 p-니트로페닐이고, Rs3 이 메틸인 경우에 BSTFA 가 요구되지 않음을 입증했다. 본 공개에 비추어, 통상의 기술자는 BSTFA 를 요구하지 않는 기타 상황 및/또는 황화 시약을 용이하게 확인할 수 있을 것이다.
일부 구현예에서, 황화 단계는 실온에서 수행된다. 일부 구현예에서, 황화 단계는 더 낮은 온도 예컨대 약 0 ℃, 약 5 ℃, 약 10 ℃, 또는 약 15 ℃ 에서 수행된다. 일부 구현예에서, 황화 단계는 약 20 ℃ 초과의 상승된 온도에서 수행된다.
일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 120 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 90 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 60 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 30 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 25 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 20 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 15 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 1 분 내지 약 10 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 5 분 내지 약 60 분 동안 진행된다.
일부 구현예에서, 황화 반응은 약 5 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 10 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 15 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 20 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 25 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 30 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 35 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 40 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 45 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 50 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 55 분 동안 진행된다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 약 60 분 동안 진행된다.
예상외로 본 발명의 방법에 따라 제조되는 특정 황화 개질 생성물이 예상외로 안정적임이 발견되었다. 일부 구현예에서, 예상외로 안정적인 생성물은 포스포로티오에이트 트리에스테르이다. 일부 구현예에서, 예상외로 안정적인 생성물은 화학식 I-c 의 구조를 갖는 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결을 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 기재된 황화 방법 및 본원에 기재된 황화 시약이 또한 Wada II (WO2010/064146) 에 기재된 것과 같은 개질 H-포스포네이트 올리고뉴클레오티드의 개질의 맥락에서 유용함을 이해할 것이다.
일부 구현예에서, 황화 반응은 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 또는 98% 인 단계적 황화 효율을 갖는다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 98% 이상 순수한 미가공 디뉴클레오티드 생성물 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 90% 이상 순수한 미가공 테트라뉴클레오티드 생성물 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 70% 이상 순수한 미가공 도데카뉴클레오티드 생성물 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 황화 반응은 50% 이상 순수한 미가공 아이코사뉴클레오티드 생성물 조성물을 제공한다.
일단 인 연결의 개질 단계가 완료되면, 올리고뉴클레오티드는 사이클 재입장을 위한 준비에서 또다른 탈차단 단계에 적용된다. 일부 구현예에서, 키랄 보조기는 황화 후에 온전하게 유지되고, 사이클 재입장 전에 필수적으로 일어나는 후속 탈차단 단계 동안 탈차단된다. 탈차단, 커플링, 캡핑, 및 개질 과정은 성장하는 올리고뉴클레오티드가 원하는 길이에 도달할 때까지 반복되고, 원하는 길이에 도달했을 때 올리고뉴클레오티드는 고체 지지체로부터 즉시 절단되거나 정제 목적을 위해 지지체에 부착된 상태로 남고 나중에 절단될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 보호기가 하나 이상의 뉴클레오티드 염기에 존재하고, 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단 및 염기의 탈보호가 단일 단계로 일어난다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 보호기가 하나 이상의 뉴클레오티드 염기에 존재하고, 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단 및 염기의 탈보호가 1 개 초과의 단계로 일어난다. 일부 구현예에서, 탈보호 및 지지체로부터의 절단은 염기성 조건 하에, 예를 들어, 하나 이상의 아민 염기를 사용하여 일어난다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 아민 염기는 프로필 아민을 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 아민 염기는 피리딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 지지체로부터의 절단 및/또는 탈보호는 약 30 ℃ 내지 약 90 ℃ 의 상승된 온도에서 일어난다. 일부 구현예에서, 지지체로부터의 절단 및/또는 탈보호는 약 40 ℃ 내지 약 80 ℃ 의 상승된 온도에서 일어난다. 일부 구현예에서, 지지체로부터의 절단 및/또는 탈보호는 약 50 ℃ 내지 약 70 ℃ 의 상승된 온도에서 일어난다. 일부 구현예에서, 지지체로부터의 절단 및/또는 탈보호는 약 60 ℃ 의 상승된 온도에서 일어난다. 일부 구현예에서, 지지체로부터의 절단 및/또는 탈보호는 주위 온도에서 일어난다.
예시적 정제 절차는 본원에 기재되어 있고/거나 관련 기술분야에서 일반적으로 알려져 있다.
각각의 사이클 동안 성장하는 올리고뉴클레오티드로부터 키랄 보조기의 제거는 적어도 (1) 잠재적으로 민감성인 관능성 기가 인에 설치되었을 때 올리고뉴클레오티드 합성의 마지막에 별도의 단계에서 보조기가 제거될 필요가 없고; (2) 부반응을 겪고/거나 후속 화학을 간섭하는 경향이 있는 불안정적인 인-보조기 중간체가 회피된다는 이유로 유익하다는 점이 주목할 만하다. 따라서, 각각의 사이클 동안 키랄 보조기의 제거는 전체적 합성을 더욱 효율적으로 만든다.
사이클의 맥락에서 탈차단 단계가 위에 기재되어 있지만, 부가적 일반적 방법이 아래 포함되어 있다.
탈차단 단계
일부 구현예에서, 커플링 단계 전에 탈차단 단계가 선행한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 성장하는 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록실 기는 차단되고 (즉, 보호되고), 후속적으로 뉴클레오시드 커플링 상대와 반응하기 위해 탈차단되어야 한다.
일부 구현예에서, 산성화가 사용되어 차단 기가 제거된다. 일부 구현예에서, 산은 브뢴스테드 산 또는 루이스 산이다. 유용한 브뢴스테드 산은 pKa (물 중 25 ℃) 값이 유기 용매 또는 물 (80% 아세트산의 경우에) 중 -0.6 (트리플루오로아세트산) 내지 4.76 (아세트산) 인 카르복시산, 알킬술폰산, 아릴술폰산, 인산 및 그것의 유도체, 포스폰산 및 그것의 유도체, 알킬포스폰산 및 그들의 유도체, 아릴포스폰산 및 그들의 유도체, 포스피닉 산, 디알킬포스피닉 산, 및 디아릴포스피닉 산이다. 산성화 단계에서 사용되는 산 (1 내지 80%) 의 농도는 산의 산도에 의존한다. 강산 조건은 퓨리닐 또는 피리미디닐 염기가 리보스 고리 및 또는 기타 당 고리로부터 절단되는 탈퓨린화/탈피리미딘화를 초래할 것이므로 산 강도가 고려되어야 한다. 일부 구현예에서, 산은 Ra1COOH, Ra1SO3H, Ra3SO3H,
Figure 112015015568410-pct00386
,
Figure 112015015568410-pct00387
로부터 선택되고, 식 중, 각각의 Ra1 및 Ra2 는 독립적으로 수소 또는 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이고, Ra3 은 임의로 치환된 알킬 또는 아릴이다.
일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 루이스 산에 의해 달성된다. 예시적 그러한 유용한 루이스 산은 Zn(Xa)2 이고, 여기서 Xa 는 Cl, Br, I, 또는 CF3SO3 이다.
일부 구현예에서, 산성화 단계는 축합된 중간체로부터 퓨린 모이어티를 제거하지 않으면서 차단 기를 제거하는데 효과적인 소정량의 브뢴스테드 또는 루이스 산을 첨가하는 것을 포함한다.
산성화 단계에서 유용한 산은 또한 유기 용매 중 10% 인산, 유기 용매 중 10% 염산, 유기 용매 중 1% 트리플루오로아세트산, 유기 용매 중 3% 디클로로아세트산 또는 트리클로로아세트산 또는 물 중 80% 아세트산을 포함하나 그에 제한되지 않는다. 이러한 단계에서 사용되는 임의의 브뢴스테드 또는 루이스 산의 농도는 산의 농도가 당 모이어티로부터 핵염기의 절단을 야기하는 농도를 초과하지 않도록 선택된다.
일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 1% 트리플루오로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 약 0.1% 내지 약 8% 트리플루오로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 3% 디클로로아세트산 또는 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 약 0.1% 내지 약 10% 디클로로아세트산 또는 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 3% 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 유기 용매 중 약 0.1% 내지 약 10% 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 물 중 80% 아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 물 중 약 50% 내지 약 90%, 또는 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 70% 내지 약 90% 아세트산을 첨가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 산성화는 산성 용매에 양이온 제거제를 추가로 첨가하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 양이온 제거제는 트리에틸실란 또는 트리이소프로필실란일 수 있다. 일부 구현예에서, 차단 기는 유기 용매 중 1% 트리플루오로아세트산을 첨가하는 것을 포함하는 산성화에 의해 탈차단된다. 일부 구현예에서, 차단 기는 유기 용매 중 3% 디클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함하는 산성화에 의해 탈차단된다. 일부 구현예에서, 차단 기는 유기 용매 중 3% 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함하는 산성화에 의해 탈차단된다. 일부 구현예에서, 차단 기는 디클로로메탄 중 3% 트리클로로아세트산을 첨가하는 것을 포함하는 산성화에 의해 탈차단된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 방법은 합성기에서 완료되고, 성장하는 올리고뉴클레오티드의 히드록실 기의 탈차단 단계는 소정량의 용매를 합성기 칼럼에 전달하는 것을 포함하며, 상기 칼럼은 올리고뉴클레오티드가 부착되어 있는 고체 지지체를 함유한다. 일부 구현예에서, 용매는 할로겐화 용매 (예를 들어, 디클로로메탄) 이다. 특정 구현예에서, 용매는 소정량의 산을 포함한다. 일부 구현예에서, 용매는 소정량의 유기 산 예컨대, 예를 들어, 트리클로로아세트산을 포함한다. 특정 구현예에서, 산은 약 1% 내지 약 20% w/v 의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 산은 약 1% 내지 약 10% w/v 의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 산은 약 1% 내지 약 5% w/v 의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 산은 약 1 내지 약 3% w/v 의 양으로 존재한다. 특정 구현예에서, 산은 약 3% w/v 의 양으로 존재한다. 히드록실 기의 탈차단 방법은 본원에 추가로 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 산은 디클로로메탄 중 3% w/v 으로 존재한다.
일부 구현예에서, 키랄 보조기는 탈차단 단계 전에 제거된다. 일부 구현예에서, 키랄 보조기는 탈차단 단계 동안 제거된다.
일부 구현예에서, 사이클 퇴장은 탈차단 단계 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 사이클 퇴장은 탈차단 단계 후에 수행된다.
차단 기/보호기 제거에 관한 일반적 조건
핵염기 또는 당 모이어티에 위치하는 관능성 기 예컨대 히드록실 또는 아미노 모이어티는 일상적으로 합성 동안 차단 (보호) 기 (모이어티) 로 차단되고, 후속적으로 탈차단된다. 일반적으로, 차단 기는 분자의 화학적 관능기를 특정 반응 조건에 불활성으로 만들고, 나중에 분자 내의 그러한 관능기로부터 분자의 나머지를 실질적으로 손상시키지 않으면서 제거될 수 있다 (예를 들어, Green and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd Ed., John Wiley & Sons, New York, 1991 참고). 예를 들어, 아미노 기는 질소 차단 기 예컨대 프탈이미도, 9-플루드레닐메톡시카르보닐 (FMOC), 트리페닐메틸술페닐, t-BOC, 4,4'-디메톡시트리틸 (DMTr), 4-메톡시트리틸 (MMTr), 9-페닐크산틴-9-일 (Pixyl), 트리틸 (Tr), 또는 9-(p-메톡시페닐)크산틴-9-일 (MOX) 로 차단될 수 있다. 카르복실 기는 아세틸 기로 보호될 수 있다. 히드록시 기는 예컨대 테트라히드로피라닐 (THP), t-부틸디메틸실릴 (TBDMS), 1-[(2-클로로-4-메틸)페닐]-4-메톡시피페리딘-4-일 (Ctmp), 1-(2-플루오로페닐)-4-메톡시피페리딘-4-일 (Fpmp), 1-(2-클로로에톡시)에틸, 3-메톡시-1,5-디카르보메톡시펜탄-3-일 (MDP), 비스(2-아세톡시에톡시)메틸 (ACE), 트리이소프로필실릴옥시메틸 (TOM), 1-(2-시아노에톡시)에틸 (CEE), 2-시아노에톡시메틸 (CEM), [4-(N-디클로로아세틸-N-메틸아미노)벤질옥시]메틸, 2-시아노에틸 (CN), 피발로일옥시메틸 (PivOM), 레부닐옥시메틸 (ALE) 로 보호될 수 있다. 기타 대표적 히드록실 차단 기가 기재된 바 있다 (예를 들어, Beaucage et al., Tetra hedron, 1992, 46, 2223 참고). 일부 구현예에서, 히드록실 차단 기는 산-불안정성 기, 예컨대 트리틸, 모노메톡시트리틸, 디메톡시트리틸, 트리메톡시트리틸, 9-페닐크산틴-9-일 (Pixyl) 및 9-(p-메톡시페닐)크산틴-9-일 (MOX) 이다. 화학적 관능성 기는 또한 그들을 전구체 형태로 포함시킴으로써 차단될 수 있다. 따라서 아지도 기는 아민으로 쉽게 전환되므로 아지도 기는 아민의 차단된 형태로 여겨질 수 있다. 핵산 합성에서 이용되는 추가의 대표적 보호기는 알려져 있다 (예를 들어 Agrawal et al., Protocols for Oligonucleotide Conjugates, Eds., Humana Press, New Jersey, 1994, Vol. 26, pp. 1-72 참고).
핵산으로부터 차단 기를 제거하는 다양한 방법이 알려져 있고 사용된다. 일부 구현예에서, 모든 차단 기가 제거된다. 일부 구현예에서, 일부 차단 기가 제거된다. 일부 구현예에서, 반응 조건이 조정되어 특정 차단 기를 선택적으로 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 핵염기 차단 기는, 존재하는 경우, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립 후에 산성 시약으로 절단가능하다. 일부 구현예에서, 핵염기 차단 기는, 존재하는 경우, 산성 또는 염기성 조건 하에 절단가능하지 않고, 예를 들어 불화물 염 또는 불화수소산 착물로 절단가능하다. 일부 구현예에서, 핵염기 차단 기는, 존재하는 경우, 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립 후에 염기 또는 염기성 용매의 존재 하에 절단가능하다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 핵염기 차단 기는 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립 후에 염기 또는 염기성 용매의 존재 하에 절단가능하지만 제공되는 올리고뉴클레오티드의 조립 동안 일어나는 하나 이상의 더 이른 탈보호 단계의 특별한 조건에 안정적인 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 핵염기를 위한 차단 기는 요구되지 않는다. 일부 구현예에서, 핵염기를 위한 차단 기가 요구된다. 일부 구현예에서, 특정 핵염기는 하나 이상의 차단 기를 요구하지만, 다른 핵염기는 하나 이상의 차단 기를 요구하지 않는다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 합성 후에 고체 지지체로부터 절단된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 피리딘 중 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 피리딘 중 20% 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 무수 피리딘 중 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 무수 피리딘 중 20% 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 극성 반양성자성 용매 예컨대 아세토니트릴, NMP, DMSO, 술폰, 및/또는 루티딘의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 절단은 용매, 예를 들어, 극성 반양성자성 용매, 및 하나 이상의 일차 아민 (예를 들어, C1-10 아민), 및/또는 하나 이상의 메톡실아민, 히드라진, 및 순수한 무수 암모니아의 사용을 포함한다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 피리딘 중 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 피리딘 중 20% 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 무수 피리딘 중 프로필아민의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 무수 피리딘 중 20% 프로필아민의 사용을 포함한다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 절단 동안 탈보호된다.
일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 실온 근처에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 상승된 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 30 ℃, 40 ℃, 50 ℃, 60 ℃, 70℃, 80 ℃, 90 ℃ 또는 100 ℃ 초과에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 30 ℃, 40 ℃, 50 ℃, 60 ℃, 70℃, 80 ℃, 90 ℃ 또는 100 ℃ 에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 40-80 ℃ 에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 50-70 ℃ 에서 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 60 ℃ 에서 수행된다.
일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 0.1 hr, 1 hr, 2 hrs, 5 hrs, 10 hrs, 15 hrs, 20 hrs, 24 hrs, 30 hrs, 또는 40 hrs 초과 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 0.1-5 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 3-10 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 5-15 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 10-20 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 15-25 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 20-40 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 2 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 5 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 10 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 15 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 18 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 24 hrs 동안 수행된다.
일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 실온에서 0.1 hr, 1 hr, 2 hrs, 5 hrs, 10 hrs, 15 hrs, 20 hrs, 24 hrs, 30 hrs, 또는 40 hrs 초과 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 실온에서 약 5-48 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 실온에서 약 10-24 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 실온에서 약 18 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 상승된 온도에서 0.1 hr, 1 hr, 2 hrs, 5 hrs, 10 hrs, 15 hrs, 20 hrs, 24 hrs, 30 hrs, 또는 40 hrs 초과 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 상승된 온도에서 약 0.5-5 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 60 ℃ 에서 약 0.5-5 hrs 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 약 60 ℃ 에서 약 2 hrs 동안 수행된다.
일부 구현예에서, 고체 지지체로부터의 올리고뉴클레오티드의 절단, 또는 올리고뉴클레오티드의 탈보호는 프로필아민의 사용을 포함하고, 실온 또는 상승된 온도에서 0.1 hr, 1 hr, 2 hrs, 5 hrs, 10 hrs, 15 hrs, 20 hrs, 24 hrs, 30 hrs, 또는 40 hrs 초과 동안 수행된다. 예시적 조건은 피리딘 중 20% 프로필아민 실온에서 약 18 hrs 동안, 및 피리딘 중 20% 프로필아민 60 ℃ 에서 약 18 hrs 동안이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 또는 화학식 I-c 의 구조를 갖는 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
(1) 내지 (4) 의 사이클 하나 이상은 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 형성한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
(1) 내지 (4) 의 사이클 하나 이상은 화학식 I-c 의 구조를 갖는 뉴클레오티드간 연결을 형성한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
커플링 단계는 활성화 기 및
Figure 112015015568410-pct00388
또는
Figure 112015015568410-pct00389
의 사용을 포함하고, 식 중 BPRO 은 보호된 핵염기이고;
캡핑 단계는 키랄 보조기 내의 아미노 기의 캡핑 및 미반응 5'-OH 의 캡핑을 포함하고;
개질 단계는 인 연결에 대한 -S-L-R1 기의 설치를 포함하고, 여기서 각각의 L 및 R1 은 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같고;
탈차단 단계는 산의 사용을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
커플링 단계는 CMPT 및
Figure 112015015568410-pct00390
의 사용을 포함하고, 식 중 BPRO 는 보호된 핵염기이고;
캡핑 단계는 키랄 보조기 내의 아미노 기의 캡핑 및 미반응 5'-OH 의 캡핑을 포함하고;
개질 단계는 인 연결에 대한 -S-L-R1 기의 설치를 포함하고, 여기서 각각의 L 및 R1 은 독립적으로 위에 정의되고 본원에 기재된 바와 같고;
탈차단 단계는 산의 사용을 포함한다.
일부 구현예에서, 활성화제는 "Wada" 활성화제이고, 즉, 활성화제는 위에 언급된 Wada I, II, 또는 III 문헌 중 임의의 하나로부터이다.
예시적 활성화 기가 아래 제시되어 있다:
Figure 112015015568410-pct00391
Figure 112015015568410-pct00392
예시적 사이클이 반응식 I-b 에 제시되어 있다.
반응식 I-b. 포스포로티오에이트 연결의 설치.
Figure 112015015568410-pct00393
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 또는 화학식 I-c 의 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결, 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드간 연결을 포함하고;
하나 이상의 개질 단계는 산화 단계로 대체된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 또는 화학식 I-c 의 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결, 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드간 연결을 포함하고;
하나 이상의 개질 단계는 I2 의 사용을 포함하는 산화 단계로 대체된다.
예시적 사이클이 반응식 I-c 에 제시되어 있다.
반응식 I-c. 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 내에 포스페이트 디에스테르 및 개질된 뉴클레오티드간 연결 둘다의 설치.
Figure 112015015568410-pct00394
반응식 I-c 에서, 고체 지지체 (C-1) 상의 올리고뉴클레오티드 (또는 뉴클레오티드, 또는 개질된 뉴클레오티드간 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드) 는 포스포라미디트 C-2 와 커플링된다. 커플링 및 캡핑 후에, 산화 단계가 수행된다. 탈차단 후에, 포스페이트 디에스테르 연결이 형성된다. 사이클 생성물 C-3 은 사이클 C 에 재입장하여 더 많은 포스페이트 디에스테르 연결을 설치하거나, 또는 기타 사이클에 입장하여 기타 유형의 뉴클레오티드간 연결을 설치하거나, 또는 사이클을 퇴장한다.
일부 구현예에서, 비-키랄적으로 순수한 포스포라미디트가 반응식 I-c 에서 C-2 대신 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, DMTr 로 보호된 β-시아노에틸포스포라미디트가 사용된다. 일부 구현예에서, 사용되는 포스포라미디트는 하기 구조를 갖는다
Figure 112015015568410-pct00395
.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하고;
하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체가 각각의 상응하는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결에 대해 형성된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 포함하고;
하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체가 각각의 상응하는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결에 대해 형성되고;
원하는 길이가 달성된 후에 각각의 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법을 제공한다:
(1) 커플링;
(2) 캡핑;
(3) 개질;
(4) 탈차단; 및
(5) 원하는 길이가 달성될 때까지 단계 (1) - (4) 의 반복;
여기서:
키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 및 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드간 연결을 포함하고;
하나 이상의 개질 단계는 산화 단계로 대체되고;
하나 이상의 개질 단계가 수행되어 각각의 포스포로티오에이트 디에스테르 연결에 대해 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체를 설치하고;
원하는 길이가 달성된 후에 각각의 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체의 사용은 합성 동안 올리고뉴클레오티드의 안정성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체의 사용은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 합성의 효율을 개선한다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체의 사용은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 합성의 수율을 개선한다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체의 사용은 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 합성의 생성물 순도를 개선한다.
일부 구현예에서, 위에 언급된 방법에서 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체는
Figure 112015015568410-pct00396
이다. 일부 구현예에서,
Figure 112015015568410-pct00397
은 탈보호/방출 동안 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다. 예시적 사이클이 반응식 I-d 에 제시되어 있다. 더 많은 예가 아래 제시되어 있다.
반응식 I-d. 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 합성에서 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체.
Figure 112015015568410-pct00398
반응식 I-d 에 나타난 바와 같이, 포스포로티오에이트 및 포스페이트 디에스테르 연결 둘다가 동일한 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 내로 통합될 수 있다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 제공되는 방법은 포스포로티오에이트 디에스테르 및 포스페이트 디에스테르가 연속적일 것을 요구하지 않고, 위에 기재된 사이클을 사용하여 그들 사이에 기타 뉴클레오티드간 연결이 형성될 수 있다. 반응식 I-d 에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 연결 대신 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체,
Figure 112015015568410-pct00399
가 설치된다. 일부 구현예에서, 그러한 대체는 특정 단계, 예를 들어, 산화 단계 동안 증가된 합성 효율을 제공했다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체의 사용은 일반적으로 합성 및/또는 저장 동안 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드의 안정성을 개선한다. 사이클 퇴장 후에, 탈보호/방출 동안, 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체는 포스포로티오에이트 디에스테르 연결로 전환된다. 일부 구현예에서, 심지어는 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 내에 포스페이트 디에스테르 연결이 존재하지 않거나, 합성 동안 산화 단계가 요구되지 않을 때에도 포스포로티오에이트 디에스테르 전구체를 사용하는 것이 유익하다.
반응식 I-c 에서와 같이, 일부 구현예에서, 비-키랄적으로 순수한 포스포라미디트가 산화 단계를 포함하는 사이클 동안 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, DMTr 로 보호된 β-시아노에틸포스포라미디트가 사용된다. 일부 구현예에서, 사용되는 포스포라미디트는 하기 구조를 갖는다
Figure 112015015568410-pct00400
.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 특별한 올리고뉴클레오티드 유형이 풍부한 키랄적으로 제어되는 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 10% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 20% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 30% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 40% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 50% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 60% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 70% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 80% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 90% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다. 일부 구현예에서, 제공되는 미가공 조성물의 약 95% 이상이 특별한 올리고뉴클레오티드 유형에 속한다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 1% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 2% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 3% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 4% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 5% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 10% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 20% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 30% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 40% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 50% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 60% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 70% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 80% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 90% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물의 적어도 약 95% 는 특정 올리고뉴클레오티드 유형의 것이다.
생물학적 적용
본원에 상세히 논의된 바와 같이, 본 발명은 그 중에서도, 조성물이 1 가지 이상의 유형의 다수의 올리고뉴클레오티드를 함유하는 것을 의미하는, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공한다. 특정 "유형" 의 각각의 올리고뉴클레오티드 분자는 (1) 염기 서열; (2) 백본 연결의 패턴; (3) 백본 키랄 중심의 패턴; 및 (4) 백본 P-개질 부분의 패턴과 관련하여, 미리 선택된 (예를 들어, 미리 결정된) 구조 요소로 구성된다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 단일 합성 공정에서 제조된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 단일 올리고뉴클레오티드 분자 내에 1 개 초과의 키랄 구성 (chiral configuration) 을 갖는 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드를 따라 상이한 잔기가 상이한 입체화학을 가짐) 올리고뉴클레오티드를 함유하고; 일부 이러한 구현예에서, 이러한 올리고뉴클레오티드는 1 개 초과의 키랄 구성을 갖는 개별적인 올리고뉴클레오티드 분자를 생성하기 위한 이차 컨주게이션 단계에 대한 필요 없이, 단일 합성 공정에서 수득될 수 있다.
본원에 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 전사, 번역, 면역 반응, 후생 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 다수의 세포 과정 및 조직을 조정하는 작용제로서 사용될 수 있다. 또한, 본원에 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 연구 및/또는 진단 목적용의 시약으로서 사용될 수 있다. 당업자는 본 발명의 설명이 특정 용도에 제한되지 않고 합성 올리고뉴클레오티드가 요망되는 임의의 상황에 적용될 수 있다는 것을 쉽게 인지할 것이다. 그 중에서도, 제공된 조성물은 다양한 치료, 진단, 농업, 및/또는 연구 적용에 유용하다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 본원에 상세히 기재되는 바와 같은 하나 이상의 구조적 개질을 포함하는 올리고뉴클레오티드 및/또는 이의 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 하나 이상의 핵산 유사체를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은, 펩티드 핵산 (PNA), 모르폴리노 (Morpholino) 및 잠금 (locked) 핵산 (LNA), 글리콘 핵산 (GNA), 트레오스 핵산 (TNA), 제노 (Xeno) 핵산 (ZNA), 및 이의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 인공 핵산 또는 잔기를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
임의의 구현예에서, 본 발명은 유전자 발현, 면역 반응, 등의 올리고뉴클레오티드-기반 조절에 유용하다. 따라서, 미리 결정된 유형 (즉, 키랄 제어되고, 및 임의로 키랄적으로 순수한) 의 올리고뉴클레오티드를 함유하는 입체-규정된, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 조성물이, 통상의 입체-랜덤 또는 키랄적으로 불순한 대응부 대신에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 향상된 의도되는 효과 및/또는 감소된 원치않는 부작용을 나타낸다. 본 발명의 생물학적 및 임상적/치료적 적용의 특정 구현예는 하기에 명백하게 논의된다.
다양한 투여 섭생은 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 투여하기 위해 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 다중 단위 투여량이 시간을 분리하여, 투여된다. 일부 구현예에서, 제시된 조성물은 1 가지 이상의 투여량을 수반할 수 있는 권고되는 투여 섭생을 가진다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 동일한 길이의 시간 기간에 의해 각각 서로 분리되는 다수의 투여를 포함하고; 일부 구현예에서, 투여 섭생은 다수의 투여량 및 개별 투여를 분리하는 2 개 이상의 상이한 시간 기간을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생 내의 모든 투여는 동일한 단위 투여량의 것이다. 일부 구현예에서, 투여 섭생 내의 상이한 투여는 상이한 양의 것이다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 첫번째 투여량으로의 첫번째 투여에 이어, 첫번째 투여량과 상이한 두번째 투여량으로의 하나 이상의 부가적인 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 첫번째 투여량으로의 첫번째 투여에 이어, 첫번째 투여량 (또는 또다른 이전 투여량) 과 동일 또는 상이한 두번째 (또는 후속) 투여량으로의 하나 이상의 부가적인 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 일 이상 동안 1 개 이상의 단위 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 일 이상, 종종 1 일 초과의 시간 기간 동안 1 회 초과의 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 주 이상의 시간 기간에 걸쳐 다중 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 시간 기간은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 이상 (예를 들어, 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 이상 주이다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 주 초과 동안 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 이상 (예를 들어, 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 이상) 주 동안 1 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 2 주 초과 기간 동안 매 2 주 마다 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 이상 (예를 들어, 약 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 이상) 주의 시간 기간에 걸쳐 매 2 주 마다 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 개월 동안 1 개월 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 1 개월 초과 동안 1 개월 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 이상 개월 동안 1 개월 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 약 10 주 동안 1 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 약 20 주 동안 1 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 약 30 주 동안 1 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 섭생은 26 주 동안 1 주 당 1 회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은 동일한 서열의 키랄 비제어된 (예를 들어, 입체랜덤) 올리고뉴클레오티드 조성물, 및/또는 동일한 서열의 상이한 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물에 대해 이용되는 것과 상이한 투여 섭생에 따라 투여된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은 제시된 시간 단위에 걸쳐 보다 낮은 레벨의 총 노출을 달성하고, 하나 이상의 적은 단위 투여량을 수반하고, 및/또는 제시된 시간 단위에 걸쳐 보다 적은 투여 횟수를 포함하는, 동일한 서열의 키랄 비제어된 (예를 들어, 입체랜덤) 올리고뉴클레오티드 조성물의 것과 비교하여 감소된 투여 섭생에 따라 투여된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은 동일한 서열의 키랄 비제어된 (예를 들어, 입체랜덤) 올리고뉴클레오티드 조성물의 투여보다 긴 시간 기간 동안 확장된 투여 섭생에 따라 투여된다. 이론에 제한되지 않고, 본 출원인은 일부 구현예에서, 투여 사이의 보다 짧은 투여 섭생, 및/또는 보다 긴 시간 기간은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물의 개선된 안정성, 생물학적이용능 및/또는 효능 때문일 수 있다고 명시한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은 상응하는 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드 조성물과 비교해 더 긴 투여 섭생을 갖는다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은 상응하는 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드 조성물고 비교해 2 회 이상의 투여 사이에 보다 짧은 시간 기간을 갖는다. 이론에 제한되지 않고, 본 출원인은 일부 구현예에서, 투여 사이의 보다 긴 투여 섭생, 및/또는 보다 짧은 시간 기간이 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물의 개선된 안정성 때문일 수 있다고 명시한다.
단일 투여는 본 출원에 적합한 것으로 요망되는, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드의 유형의 다양한 양을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300 이상 (예를 들어, 약 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000 이상) mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 1 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 5 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 10 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 15 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 20 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 50 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 100 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 150 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 200 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 250 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 투여는 약 300 mg 의 하나의 유형의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드보다, 단일 투여량, 및/또는 총 투여량에서 적은 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 개선된 효능으로 인해 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드보다, 단일 투여량, 및/또는 총 투여량에서 적은 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드보다, 단일 투여량, 및/또는 총 투여량에서 많은 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 개선된 안정성으로 인해 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드보다, 단일 투여량, 및/또는 총 투여량에서 많은 양으로 투여된다.
생물학적으로 활성인 올리고뉴클레오티드
본원에 사용되는 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 단일-가닥 및/또는 다중 가닥 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 관련 조건 하에서 하이브리드화될 수 있는 자가-상보적 부분을 함유하여, 사용되는 바와 같이, 심지어 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 적어도 부분적으로 이중-가닥 특성을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물에 포함되는 올리고뉴클레오티드는 단일-가닥, 이중-가닥, 또는 삼중-가닥이다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물에 포함되는 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 내에 단일-가닥 부분 및 다중-가닥 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 명시된 바와 같이, 개별적인 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥 영역 및 단일-가닥 영역을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물에는, 구조적 유전자, 유전자 제어 및/또는 종결 영역, 및/또는 자가-복제 시스템, 예컨대 바이러스 또는 플라스미드 DNA 의 가닥에 완전히 또는 부분적으로 성보적인 하나 이상의 올리고뉴클레오티드가 포함된다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물에는 siRNA 또는 기타 RNA 간섭 시약 (RNAi 작용제 또는 iRNA 작용제), shRNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 자가-분할 RNA, 리보자임, 이의 단편 및/또는 이의 변이체 (예컨대, 펩티딜 트랜스페라아제 23S rRNA, RNase P, Group I 및 Group II 인트론, GIR1 분지화 (branching) 리보자임, 리드자임 (Leadzyme), 헤어핀 (Hairpin) 리보자임, 해머해드 (Hammerhead) 리보자임, HDV 리보자임, 포유류 CPEB3 리보자임, VS 리보자임, glmS 리보자임, CoTC 리보자임, 등), microRNA, microRNA 모방체, 수퍼미르 (supermir), 압타머 (aptamer), 안티미르 (antimir), 안타고미르 (antagomir), Ul 어댑터, 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드, RNA 활성화제, 긴 비-코딩 RNA, 짧은 비-코딩 RNA (예를 들어, piRNA), 면역조절성 올리고뉴클레오티드 (예컨대, 면역촉진 올리고뉴클레오티드, 면역억제 올리고뉴클레오티드), GNA, LNA, ENA, PNA, TNA, 모르폴리노, G-사중세 (RNA 및 DNA), 항바이러스 올리고뉴클레오티드, 및 데코이 (decoy) 올리고뉴클레오티드인 또는 이들로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 하나 이상의 하이브리드 (예를 들어, 키메라성) 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 명세서의 문맥에서, 용어 "하이브리드" 는 광범위하게 올리고뉴클레오티드의 혼합된 구조적 성분을 말한다. 하이브리드 올리고뉴클레오티드는 예를 들어, (1) 단일 분자 내에 혼합된 클래스의 뉴클레오티드, 예를 들어, 부분 DNA 및 부분 RNA 를 갖는 올리고뉴클레오티드 분자 (예를 들어, DNA-RNA); (2) 상이한 클래스의 핵산의 상보적 쌍, DNA:RNA 염기 쌍은 분자사이에서 또는 분자내에서; 또는 둘 다에서 일어날 수 있음; (3) 2 가지 이상의 종류의 백본 또는 인터뉴클레오티드 연결을 갖는 올리고뉴클레오티드를 말할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 단일 분자 내에 하나 초과의 계열의 핵산 잔기를 포함하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 DNA 부분 및 RNA 부분을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 비개질된 부분 및 개질된 부분을 포함할 수 있다.
제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 예를 들어 본원에 기재된 다양한 개질 중 임의의 것을 함유하는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 개질은 예를 들어, 의도되는 용도의 견지에서 선택된다. 일부 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드 (또는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드의 이중-가닥 부분) 의 하나 또는 양쪽 가닥을 개질하는 것이 바람직하다. 일부 구현예에서, 2 개의 가닥 (또는 부분) 은 상이한 개질을 포함한다. 일부 구현예에서, 2 개의 가닥은 동일한 개질을 포함한다. 당업자는 본 발명의 방법에 의해 가능해지는 개질의 정도 및 유형이 수많은 순열의 개질을 만들 수 있게 한다는 것을 인식할 것이다. 예시적인 이러한 개질은 본원에 기재되어 있고 제한을 의미하지 않는다.
RNA 간섭
제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은, 그 중에서도, RNA 간섭에서의 적용에 유용하다.
RNA 간섭 (RNAi) 은 RNA 분자에 의한 유전자 발현의 억제를 말한다. 전형적으로는, 이들은 소형의, 이중-가닥 RNA 분자이다. 유전자 발현이 대부분의 세포 과정을 제어하므로, 유전자 발현을 억제하는 능력은 인간 및/또는 동물 (예를 들어, 가축 또는 애완동물) 질환의 치료를 비롯해, 생물학적 상태의 조절을 위한 잠재적으로 강력한 도구를 제공한다. 질환-연관 유전자 발현을 조절 또는 제어하는데 RNAi 의 용도를 입증하기 위해 수많은 연구가 수행되었다. 예를 들어, 하기 문헌을 참조한다: Cullen, K.A., Hall, M.J. & Golosinskiy, A. Ambulatory surgery in the United States, 2006. Natl Health Stat Report 2009; 1-25; Elbashir S, Harborth J, Lendeckel W, Yalcin A, Weber K, Tuschl T. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature 2001; 411: 494-498; Fire A, Xu S, Montgomery MK, Kostas SA, Driveri SE & Mello C. Potent and specific RNA interference by double-stranded RNA in Caenorhadbditis elegans. Nature 1998; 391 (6669):806-811; Gauglitz, G.G., Kortin, H.C., Pavicic, T., Ruzicka, T., & Jeschke, M.G. Hypertrophic scarring and keloids: pathomechanisms and current emerging treatment strategies. Mol Med 2011; 17(1-2): 113-125; Li-Tsang, C.W., Lau, J.C. & Chan, C.C. Prevalence of hypertrophic scar formation and its characteristics among the Chinese population. Burns 2005; 31, 610-616; Wang H, Ghosh A, Baigude H, Yang C, Qui L, Xia L, et al. Therapeutic gene silencing delivered by a chemically modified siRNA against mutant SOD1 slows ALS progression. JBC 2008; 283 (23):15845-15852; Weiser, T.G., Regenbogen, S.E., Thompson, K.D., Haynes, A.B., Lipsitz, S.R., Berry, W.R. & Gawande, A.A. An estimation of the global volume of surgery: a modeling strategy based on available data. Lancet 2008; 372(9633):139-44.
RNA 간섭 현상은 처음 C. 엘레간스 (C. elegans) 에서 입증되었는데, dsRNA 분자의 주입이 상보적인 유전자 발현을 억제하였다. siRNA 의 사용이 유전자 발현의 하향-조절을 위해 널리 사용되는 도구가 되었지만, 진핵생물 내의 자연발생적 경로의 존재는 잘 기재되어 있다. 내생 siRNA (또는 miRNA) 의 기원은 트랜스포존, 바이러스, 반복 서열 및 유전자일 수 있다. 효과적인 내생 siRNA 를 제조하는 방법은 3 가지 효소에 의해 조절된다. RNA-의존적 RNA 폴리머라아제는 단일-가닥 RNA 를 이중-가닥 RNA 로 전환시킨다. 대안적으로, DNA-의존적 RNA 폴리머라아제는 역상 DNA 반복을 전사시킴으로써 dsRNA 를 생성한다. 산출된 대형 RNA 분자를 리보뉴클레아제 III (Dicer) 에 의한 소화에 적용하여 짧은 이중-가닥 siRNA 분자를 생성한다. 아르고나우트 (Argonaute) 단백질은 이후 RISC (RNA-유도된 침묵 복합체) 라고 알려진 복합체를 형성하기 위해 siRNA 분자에 결합될 필요가 있다. RISC 이중-가닥 RNA 단편을 인지하고 이중-가닥을 분리시키고, RISC 복합체 내에 하나의 가닥을 유지한다. RISC 는 이후 RNA-지정 DNA 메틸화를 통한 또는 표적 RNA 분할에 의한 후생적 (epigentic) 침묵화를 촉진시킬 수 있다. 단백질 번역이 상당히 녹다운될 수 있지만, siRNA 는 보통은 유전자 표적의 발현을 완전히 제거할 수는 없다. RISC 는 그러므로 RNA 의 가이드 가닥이 이의 상응하는 세포성 메신저 RNA 표적에 결합하고 이를 파괴시키는 것을 도울 수 있다. 따라서, RNAi 는 질환을 야기하는 단백질의 창출을 잠재적으로 차단하는 방법을 제공한다.
siRNA 기술은 유용한 분자 도구를 나타낸다. 인공적으로 조작된 유전자 발현을 위한 RNA 간섭의 사용은 세포성 항바이러스 메카니즘의 활성화에 의해 처음 제한되었다. 30 개 뉴클레오티드의 초과의 서열에 대한 세포의 노출은 인터페론 유전자 발현을 유도하여 비-특이적 RNA 분해 및 감소된 단백질 합성을 야기한다는 것이 보여졌다. 그러나, 상기 문제는 짧은 (예를 들어, 19 내지 22 개의 뉴클레오티드) siRNA 서열을 디자인함으로써 회피될 수 있다. 세포 내로의 siRNA 전달 방법에는 제한 없이, 정제된 리보뉴클레오티드의 매질로의 리포좀-기반 첨가 또는 siRNA 분자를 발현하도록 디자인된 플라스미드 벡터의 트랜스펙션이 포함된다. 플라스미드 벡터는 siRNA 분자의 전사를 유도하는 2 개의 RNA 폴리머라아제 III 프로모터 (U6 및 H1) 의 사용에 의존한다. 표적 서열 (19 내지 29 개의 뉴클레오티드) 은 사이에 소형 스페이서 기를 갖는 (짧은 헤어핀 RNA 또는 shRNA) 센스 및 안티센스 방향으로 위치한다. 일단 전사되면, 헤어핀 구조는 Dicer 에 의해 인지되고 분할될 수 있도록 형성된다. 대안적으로, RNA 이중체는 헤어핀 구조 없이 전사될 수 있고 RISC 에 의해 직접적으로 프로세싱된다. 현재, siRNA, shRNA, 또는 단일 가닥 siRNA (ss-siRNA) 분자를 생성하기 위해 유사한 컨셉을 이용하는 다수의 플라스미드 및 바이러스 벡터가 있다 (예를 들어, 2012 Cell-150-883 Walt Lima et al. ssRNAi activate RNAi in animals, 참조).
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 조성물은 ss-siRNA 또는 GalNAc 컨쥬게이션된 siRNA 로서 유용하다.
상기 기술은 siRNA 에 도구로서 영향을 주는 특정한 구조적 특징과 유사하다. siRNA 의 발견에 이어, siRNA 디자인에 필요한 최적 특징을 확인하기 위해 여러 연구가 시도되었다. 필요조건 중 일부에는 3' 말단과 관련해 안티센스 가닥의 5' 말단에서의 PKR 활성화, 서열 안정성을 피하기 위해 30 개의 뉴클레오티드보다 짧은 서열을 사용하는 것 및 TT 돌출을 삽입하는 것이 포함된다. 이와 같은 연구에 근거하여, 제시된 유전자에 대한 가장 효과적인 표적 서열을 예상하기 위해 다수의 알고리즘이 학계 및 산업계 실험실에 의해 개발되었다. 상기 프로그램의 대부분이 완벽하지는 않지만, 예상되는 서열을 수득하는 가망성은 권고되는 특징의 고려 없이 서열을 디자인하는 것보다 우수하다. 다중 서열의 합성 및 시험이 필요할 수 있다. siRNA 실험 디자인은 몇몇 잠재적인 위험을 가질 수 있으므로, 디자인은 적합한 대조군 및 측정가능한 종결점을 포함하도록 수행되어야만 한다. 음성 대조군에는 효과적인 siRNA 서열로서 열역학적으로 유사한 특성을 갖는 비-상보적 서열이 포함될 수 있다. siRNA 또는 shRNA 를 도입하기 위해 플라스미드 벡터를 트랜스펙션하는 경우, 지질 대 핵산의 비는 동일할 수 있고 대조군 벡터는 세포내에서 전사 및 프로세싱되는 서열을 함유할 수 있다. siRNA 효과의 입증은 또한 RNA 및 단백질 발현 모두를 측정함으로써 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 사용되는 제공된 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥이다. 전형적으로, 20 내지 23, 그러나 특히 21, 염기 쌍의 이중체 구조를 포함하는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드가 RNA 간섭을 유도하는데 특히 효과적인 것으로 묘사되었다 (Elbashir ct al., EMBO 2001, 20:6877-6888). 그러나, 보다 짧은 또는 보다 긴 이중-가닥 올리고뉴클레오티드가 마찬가지로 효과적일 수 있다는 것을 발견하였다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 이중체 구조를 형성하기 위해 하이브리드화되기에 충분히 상보적인 2 개의 올리고뉴클레오티드 가닥을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 12 내지 약 45 염기 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 18 내지 약 25 염기 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 19 내지 약 24 염기 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 19 내지 약 21 염기 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 25 내지 약 30 염기 쌍의 길이의 이중-가닥 올리고뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 이중체 구조는 약 10 내지 약 15 염기 쌍의 길이의 이중-가닥 올리고뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 약 21 이상의 뉴클레오티드 길이이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 안티센스 RNA 가닥은 표적 서열의 적어도 일부에 상보적인 상보성 영역을 갖고, 이중체 영역은 약 14 내지 약 30 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 약 14 내지 약 30 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 약 18 내지 약 25 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 약 19 내지 약 24 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 약 19 내지 약 21 뉴클레오티드의 길이이다.
본원에 사용되는 구절 "안티센스 가닥" 은 관심의 표적 서열에 실실적으로 또는 100% 상보적인인 올리고뉴클레오티드를 말한다. 구절 "안티센스 가닥" 은 2 개의 개별 가닥으로부터 형성되는 양쪽 올리고뉴클레오티드 뿐 아니라 헤어핀 또는 덤벨 유형 구조를 형성할 수 있는 단분자 올리고뉴클레오티드의 안티센스 영역을 포함한다. 용어 "안티센스 가닥" 및 "가이드 가닥" 은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
구절 "센스 가닥" 은 메신저 RNA 또는 DNA 의 서열과 같은, 표적 서열로서 전체적으로 또는 부분적으로 동일한 뉴클레오시드 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 말한다. 용어 "센스 가닥" 및 "패신저 가닥" 은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
"표적 서열" 이란 그의 발현 또는 활성이 조절되어지는 임의의 핵산 서열을 의미한다. 표적 핵산은 DNA 또는 RNA, 예컨대 내생 DNA 또는 RNA, 바이러스 DNA 또는 바이러스 RNA, 또는 유전자, 바이러스, 박테리아, 진균, 포유류 또는 식물에 의해 인코딩되는 기타 RNA 일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 서열은 질환 또는 장애와 연관된다.
"특이적으로 하이브리드화하는" 및 "상보적인" 은 핵산이 종래의 Watson-Crick 또는 비-종래의 유형에 의해 또다른 핵산 서열과 수소 결합(들) 을 형성할 수 있다는 것을 의미한다. 본 발명의 핵 분자를 참조하여, 그의 상보적 서열과의 핵산 분자에 대한 결합 자유 에너지는 프로세싱되는 핵산의 관련있는 작용, 예를 들어, RNAi 활성을 허용하기에 충분하다. 핵산 분자에 대한 결합 자유 에너지의 측정은 당업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, Turner et al, 1987, CSH Symp. Quant. Biol. LIT pp.123-133; Frier et al., 1986, Proc. Nat. Acad. Sci. USA83:9373-9377; Turner et al., 1987, /. Ain. Chem. Soc. 109:3783-3785 참조).
백분율 상보성은 두번째 핵산 서열과 수소 결합 (예를 들어, Watson-Crick 염기 쌍 형성) 을 형성할 수 있는 핵산 분자 내의 연속 잔기의 백분율을 나타낸다 (예를 들어, 10 개 중 5, 6, 7, 8, 9, 10 개는 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 및 100% 상보적임). "완벽하게 상보적인" 또는 100% 상보성은 핵산 서열의 모든 연속 잔기가 두번째 핵산 서열 내의 연속 잔기의 동일한 수와 수소 결합을 할 것임을 의미한다. 덜 완벽한 상보성은 2 개의 가닥의 일부 (그러나 모두는 아님) 뉴클레오시드 단위가 서로 수소 결합할 수 있는 상황을 말한다. "실질적인 상보성" 은 비-상보성이도록 선택되는 돌출부와 같은 폴리뉴클레오티드 가닥의 영역을 제외하고, 90% 이상의 상보성을 나타내는 폴리뉴클레오티드 가닥을 말한다. 특이적 결합은 특이적 결합이 요망되는 조건 하에, 예를 들어, 생체 내 검정법 또는 치료적 치료의 경우에는 생리학적 조건 하에서, 또는 시험관 내 검정법의 경우에는 상기 검정법이 수행되는 조건 하에 비-표적 서열에 대한 올리고머성 화합물의 비-특이적 결합을 피하도록 하는 충분한 정도의 상보성을 필요로 한다. 일부 구현예에서, 비-표적 서열은 적어도 5 개 뉴클레오티드가 상응하는 표적 서열과 상이하다.
이중 가닥 올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 보다 작은 이중-가닥 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, RNAi 작용제를 생성하기 위해, 내생 분자에 의해, 예를 들어, Dicer 에 의해 분할될 수 있는 정도로 충분히 크다. 일부 구현예에서, 제공된 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 표적 서열의 RISC 매개된 분할을 통해 표적 유전자의 발현을 조절한다.
일부 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드의 이중-가닥 영역은 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 개 이상의 뉴클레오티드 쌍의 길이이다.
일부 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드의 안티센스 가닥은 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 개 이상의 뉴클레오티드의 길이이다.
일부 구현예에서, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드의 센스 가닥은 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30 개 이상의 뉴클레오티드의 길이이다.
일부 구현예에서, 하나의 가닥은 이중-가닥 영역 내에 1-5 단일-가닥 뉴클레오티드의 하나 이상의 스트레치를 갖는다. "이중-가닥 영역 내에 단일-가닥 뉴클레오티드의 스트레치" 는 단일-가닥 스트레치의 양 말단에 하나 이상의 뉴클레오티드 염기 쌍이 존재하는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 양쪽 가닥은 이중 가닥 영역 내에 1-5 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5) 단일-가닥 뉴클레오티드의 하나 이상의 스트레치를 갖는다. 양쪽 가닥이 이중 가닥 영역 내에 1-5 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5) 단일-가닥 뉴클레오티드의 스트레치를 갖는 경우, 이러한 단일-가닥 뉴클레오티드는 서로 반대일 수 있거나 (예를 들어, 미스매치의 스트레치) 또는 이들은 두번째 가닥이 첫번째 가닥의 단일-가닥 올리고뉴클레오티드에 반대하는 단일-가닥 뉴클레오티드를 갖지 않는 또는 그 역과 같은 (예를 들어, 단일-가닥 루프) 그러한 식으로 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 뉴클레오티드는 각 말단으로부터의 8 개의 뉴클레오티드 내에, 예를 들어 2 개의 가닥 사이의 상보성 영역의 5' 또는 3' 말단으로부터의 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2 개의 뉴클레오티드 내에 존재한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드의 각각의 가닥은 ZXY 구조를 갖고, 예컨대 2004 년 3 월 8 일에 출원된 국제 출원 번호 PCT/US2004/07070 에 기재되어 있다 (이의 내용은 그 전체가 인용됨).
헤어핀 및 덤벨
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 자가-상보적 영역을 포함하는 단일 분자이고; 따라서 이중-가닥 영역의 2 개의 "가닥" 은 사실상 서로 공유결합 연결된다. 이러한 2 개의 가닥은 양 말단에서, 또는 하나의 말단에서만 서로 연결될 수 있다. 하나의 말단에서의 연결은 첫번째 가닥의 5'-말단이 두번째 가닥의 3'-말단에 연결되어 있는 것 또는 첫번째 가닥의 3'-말단이 두번째 가닥의 5'-말단에 연결되어 있는 것을 의미한다. 2 개의 가닥이 양 말단에서 서로 연결된 경우, 첫번째 가닥의 5'-말단이 두번째 가닥의 3'-말단에 연결되고 첫번째 가닥의 3'-말단이 두번째 가닥의 5'-말단에 연결된다. 일부 구현예에서, 2 개의 가닥은 (N)n (식 중, N 은 독립적으로 개질된 또는 비개질된 뉴클레오티드이고 n 은 3-23 임) 을 포함하는 그렇나 이에 제한되지 않는 올리고뉴클레오티드 링커에 의해 함께 연결된다. 일부 구현예에서, n 은 3-10, 예를 들어, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 링커는 GNRA, (G)4, (U)4, 및 (dT)4 (식 중, N 은 개질된 또는 비개질된 뉴클레오티드이고, R 은 개질된 또는 비개질된 퓨린 뉴클레오티드임) 로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 링커 내 뉴클레오티드의 일부는 링커 내 기타 뉴클레오티드와의 염기-쌍 상호작용에 관여한다. 일부 구현예에서, 2 개의 가닥은 예를 들어 비-뉴클레오시드 링커에 의해 서로 연결된다.
일부 구현예에서, 헤어핀 및 덤벨 유형 RNAi 작용제는 14, 15, 15, 16, 17, 18, 19, 29, 21, 22, 23, 24, 또는 25 개 이상의 뉴클레오티드 쌍의 이중체 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 이중체 영역은 200, 100, 또는 50 개 이하의 뉴클레오티드 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 이중체 영역에 대한 범위는 약 15 내지 약 30, 약 17 내지 약 23, 약 19 내지 약 23, 및 약 19 내지 약 21 개 뉴클레오티드 쌍의 길이이다. 일부 구현예에서, 헤어핀 올리고뉴클레오티드는 microRNA 의 자연적 전구체를 모방한다.
일부 구현예에서, 헤어핀 RNAi 작용제는 예를 들어, 헤어핀 등의 안티센스 측면 상의 3' 말단에 단일 가닥 돌출부 또는 말단 쌍이 없는 영역을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 돌출부는 약 1 내지 약 4 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 돌출부는 약 2 내지 약 3 뉴클레오티드의 길이이다.
일부 구현예에서, 헤어핀 RNAi 작용제는 안티센스 가닥의 3'-말단이 센스 가닥의 5'-말단에 연결되는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 헤어핀 RNAi 작용제는 안티센스 가닥의 5'-말단이 센스 가닥의 3'-말단에 연결되는 것을 특징으로 한다. 제공된 헤어핀 올리고뉴클레오티드는 또한 "shRNA" 로서 본원에 언급된다.
단일-가닥 올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 유전자 발현 생성물을 인코딩하는 "센스" 핵산에 실질적으로 상보적인, 예를 들어, 이중-가닥 cDNA 분자의 코딩 가닥에 상보적인 또는 RNA 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열, 예를 들어, 프리 (pre)-mRNA, mRNA, miRNA, 또는 프리-miRNA 를 포함한다. 제공된 단일-가닥 올리고뉴클레오티드에는, 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 단일-가닥 RNAi 작용제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 상보성 영역은 약 30 개 미만 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 상보성 영역은 약 15 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 단일 가닥 올리고뉴클레오티드는 약 10 내지 약 25 개 뉴클레오티드의 길이 (예를 들어, 약 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 개 뉴클레오티드의 길이) 이다. 일부 구현예에서, 제공된 단일 가닥 올리고뉴클레오티드는 약 25 내지 약 30 개 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 단일 가닥 올리고뉴클레오티드는 약 15 내지 약 29 개 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 제공된 단일 사슬 올리고뉴클레오티드는 mRNA, RNA 또는 DNA arc 와 100% 상보성 미만을 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 제공된 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 예컨대 2004 년 3 월 8 일 출원된 국제 출원 번호 PCT/US2004/07070 에 기재된 ZXY 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, 이용된 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 상보적 RNA, 예를 들어, mRNA, 프리-mRNA 에 하이브리드화될 수 있고, 표적 RNA 전사물에 대한 번역 조직체의 접근을 방지하여, 단백질 합성을 방지한다. 일부 구현예에서, 제공된 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 상보적 RNA 에 하이브리드화될 수 있고, RNA 표적은 RNasc H 와 같은 효소에 의해 이어서 분할될 수 있으므로, 표적 RNA 의 번역을 방지한다. 일부 구현예에서, 제공된 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 표적 서열의 RISC 매개된 분할을 통해 표적 유전자의 발현을 조정한다.
본원에 사용되는 바와 같은 "단일-가닥 RNAi 작용제" 는 단일 분자로 구성된 RNAi 작용제이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제에는 사슬-내 쌍형성에 의해 형성된 이중체 영역이 포함된다, 예를 들어, 이것은 헤어핀 또는 팬-손잡이 구조이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 표적 분자와 관련해 안티센스이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 RISC 로 들어갈 수 있을만큼 충분히 길고, 표적 mRNA 의 RISC 매개 분할에 참여한다. 예시적인 단일-가닥 siRNA (ss siRNA) 는 공지되고, 예를 들어, 전체가 본원에 인용된 U.S. Pat. Pub. No. 2006/0166901 에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 12 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 15 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 20 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 25 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 29 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 30 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 35 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 40 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 50 개 이상 뉴클레오티드의 길이이다.
일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 200 개 미만 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 100 개 미만 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 60 개 미만 뉴클레오티드의 길이이다.
일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 5' 인산화된다. 일부 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 5' 주요 말단에 포스포릴 유사체를 포함한다. 특정 구현예에서, 단일-가닥 RNAi 작용제는 약 15 내지 약 29 개 뉴클레오티드의 길이를 갖는다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드의 디자인을 위한 표적으로 사용될 수 있거나 주형으로서 담당할 수 있는 단일 가닥 siRNA, microRNA 또는 mir 로서 기재된 및/또는 확인된 것을 포함하는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드가 예를 들어, 전체 내용이 본원에 참조로서 인용된, Esau, et al. US Publication #20050261218 (USSN: 10/909125), 표제 "Oligonucleotides and compositions for use in modulation small non-coding RNAs" 에 교시되어 있다.
본 발명은 단일-가닥 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조사 및/또는 진단 시약을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 프라이머이고/거나 프라이머로서 작용한다. 일부 구현예에서, 프라이머는 핵산을 증폭하기 위해 폴리머라아제-기반 연쇄 반응 (즉, PCR) 에 사용된다. 상기 적용에는 PCR 의 임의의 공지된 변형, 예컨대 역 전사 PCR (RT-PCR) 및 실시간 PCR 이 포함된다.
MicroRNA
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 MicroRNA 인 또는 이것으로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
MicroRNA (miRNA 또는 mir) 는 식물 및 동물의 게놈 내에서 DNA 로부터 전사되나, 단백질로는 번역되지 않는 소형 RNA 분자의 고도로 보존된 클래스이다. 프리-microRNA 는 miRNA 로 프로세싱된다. 프로세싱된 microRNA 는 RNA-유도된 침묵 복합체 (RISC) 로 도입되게 되고, 발달, 세포 증식, 세포자멸사 및 분화의 핵심 조절자로서 확인된 단일 가닥 17-25 뉴클레오티드 (nt) RNA 분자이다. 이들은 특이적 mRNA 의 3'-미번역된 영역에 대한 결합에 의한 유전자 발현의 조절에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨진다. RISC 는 번역 억제, 전사물 분할, 또는 둘 다를 통해 유전자 발현의 하향-조절을 매개한다. RISC 는 또한 광범위한 진핵세포의 핵 내의 전사 침묵에 연루된다.
MicroRNA 는 또한 숙주 내 병원체의 조절에 연루되어 있다. 예를 들어, Jopling, C.L., et al., Science (2005) vol. 309, pp 1577-1581 을 참조한다. 이론에 구속되지 않고, microRNA, microRNA 모방체, 및/또는 항 microRNA 올리고뉴클레오티드의 투여는 병원체 생존력, 성장, 발달, 및/또는 복제의 조절을 야기한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 microRNA, microRNA 모방체, 및/또는 항 microRNA 이고, microRNA 는 숙주 microRNA 이다. 지금까지 확인된 miRNA 서열의 수는 크고 증가하며, 이의 설명적 예는 예를 들어: "miRBase: microRIVA sequences, targets and gene nomenclature" Griffiths-Jones S, Grocock RJ, van Dongen S, Bateman A, Enright AJ. NAR, 2006, 34, Database Issue, D140-D144; "The microRNA Registry" Griffiths-Jones S. NAR, 2004, 32, Database Issue, D109-D111 에서 발견될 수 있다. 유용한 miRNA 서열의 비-제한적인 예는 또한 첨부되는 부록 (C) 에 제공된다.
리보자임
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 리보자임인 또는 리보자임으로 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
리보자임은 엔도뉴클레아제 활성을 보유하는 특이적 촉매적 도메일을 갖는 올리고뉴클레오티드이다 (Kim and Cech, Proc Natl Acad Sci U S A. 1987 Dec;84(24):8788-92; Forster and Symons, Cell. 1987 Apr 24;49(2):211-20). 현재 자연 발생적인 효소적 RNA 의 적어도 6 개의 기본적 변형이 공지된다. 일반적으로, 효소적 핵산은 표적 RNA 에 대한 첫번째 결합에 의해 작용한다. 이러한 결합은 표적 RNA 를 분할하는 작용을 하는 분자의 효소적 부분에 가까운 근접성을 유지하는 효소적 핵산의 표적 결합 부분을 통해 일어난다. 따라서, 효소적 핵산은 상보적 염기-쌍형성을 통해 표적 RNA 를 먼저 인지한 다음 결합하고, 일단 올바른 부위에 결합하면, 표적 RNA 를 효소적으로 절단하는 작용을 한다. 이러한 표적 RNA 의 전략적 분할은 인코딩된 단백질의 합성을 유도하는 이의 능력을 파괴할 것이다. 효소적 핵산이 이의 RNA 표적에 결합하고 분할한 후, 이것은 또다른 표적을 조사하기 위해 상기 RNA 로부터 방출되고, 새로운 표적에 반복적으로 결합하고 분할할 수 있다.
임의의 표적 서열에 표적화된 리보자임의 제조 방법은 당업계에 공지된다. 리보자임은 특히, Int. Pat. Appl. Publ. No. WO 93/23569 및 Int. Pat. Appl. Publ. No. WO 94/02595 (이는 참조로서 본원에 구체적으로 도입됨) 에 기재된 바와 같이 디자인될 수 있고, 그곳에 기재된 바와 같이 시험관내에서 및 생체내에서 시험되도록 합성될 수 있다.
앱타머
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 앱타머인 또는 앱타머로 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
앱타머는 높은 친화성 및 특이성으로 관심의 특정 분자에 결합하는 핵산 또는 펩티드 분자이다 (Tuerk and Gold, Science 249:505 (1990); Ellington and Szostak, Nature 346:818 (1990)). DNA 또는 RNA 앱타머는 대형 단백질에서 소형 유기 분자까지 많은 상이한 부분에 결합하는 것이 성공적으로 생성되었다. Eaton, Curr. Opin. Chem. Biol. 1:10-16 (1997), Famulok, Curr. Opin. Struct. Biol. 9:324-9(1999), 및 Hermann and Patel, Science 287:820-5 (2000) 를 참조한다. 앱타머는 RNA 또는 DNA 기반일 수 있다.
일반적으로, 앱타머는 다양한 분자 표적, 예컨대 소형 분자, 단백질, 핵산, 및 심지어 세포, 조직 및 유기체에 결합하기 위해, 시험관 내 선별 또는 동등하게, SELEX (systematic evolution of ligands by exponential enrichment: 지수 농축에 의한 리간드의 체계적 진화) 의 반복되는 회차를 통해 조작된다. SELEX 절차는, 단일 가닥 올리고뉴클레오티드가 표적 단백질 또는 기타 분자에의 결합 친화성에 근거하여, 서열의 다양한 라이브러리로부터 선택되는 프로토콜이다 (C. Tuerk, L. Gold, Science, 249 (1990), pp. 505-510; R. Green, A.D. Ellington, D.P. Bartel, J.W. Szostak, Methods Enzymol., 2 (1991), pp. 75-86; L. Gold, B. Polisky, O. Uhlenbeck, M. Yarus, Annu. Rev. Biochem., 64 (1995), pp. 763-797). SELEX 절차는 통상, 몇몇 1014 - 1015 랜덤 올리고뉴클레오티드 서열로 이루어지는 RNA 또는 DNA 라이브러리로 개시된다. 완전히 랜덤화된 올리고뉴클레오티드 라이브러리에서, 각각의 분자는 분자의 뉴클레오티드 서열에 의존적일 독특한 삼차 구조를 나타낼 것이다. 표적 단백질에 대한 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성은 표적 단백질 상의 올리고뉴클레오티드 및 에피토프의 표면 상의 부분 사이에 핏에 의해 결정될 것이다. 광대한 다양성의 라리브러리로부터 출발하는 결과로서, 표적 단백질에 대한 nM 또는 sub-nM 친화성의 및 고도의 구조적 상동성을 갖는 다른 단백질에 대한 표적 단백질에 대한 선택성을 갖는 앱타머를 확인하는 것이 종종 가능하다 (K.W. Uphoff, S.D. Bell, A.D. Ellington, Curr. Opin. Struct. Biol., 6 (1996), pp. 281-288). SELEX 방법론을 사용하여 RNA 또는 DNA 앱타머는 도파민 (C. Mannironi, A. Di Nardo, P. Fruscoloni, G.P. Tocchini-Valentini, Biochemistry, 36 (1997), pp. 9726-9734), 물질 P (D. Nieuwlandt, M. Wecker, Biochemistry, 34 (1995), pp. 5651-5659), 서브틸리신 (H. Takeno, S. Yamamoto, T. Tanaka, Y. Sakano, Y. Kikuchi, J. Biochem., 125 (1999), pp. 1115-1119), 혈소판 유래 성장 인자 (L.S. Green, D. Jellinek, R. Jenison, A. Ostman, C-H. Heldin, N. Janjic Biochemistry, 35 (1996), pp. 14413-14424), 혈관 내피 성장 인자 (L.S. Green, D. Jellinek, C. Bell, L.A. Bebe, B.D. Feistner, S.C. Gill, F.M. Jucker, N. Janjic Chem. Biol., 2 (1995), pp. 683-695), 트롬빈 (L.C. Bock, L.C. Griffen, J.A. Latham, E.H. Vermaas, J.J. Toole, Nature, 355 (1992), pp. 564-566), 및 L-셀렉틴 (D. O'Connell, A. Koenig, S. Jennings, B. Hicke, H.L. Han, T. Fitzwater, Y.F. Chang, N. Varki, D. Parma Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93 (1996), pp. 5883-5887) 을 비롯한, 많은 단백질, 펩티드 및 소형 분자를 생성해낸다.
Dua et al. (2008) Recent Patents on DNA & Gene Sequences, 2: 172-186 (본원에 참조로서 인용됨) 에서 더욱 상세히 검토되는 바와 같이, 수년 간, 다수의 개질된 SELEX 프로토콜이 개발되었다. 개질된 SELEX 방법의 비-제한적인 예는 하기 공개문헌에 기재되어 있다 (이들 각각은 본원에 전체가 참조로서 인용됨): Counter SELEX (US5580737), Flow cell SELEX (WO9833941), Truncation SELEX (WO0056930), Blended SELEX (US5683867), Transctiption free SELEX (US20026387620), Solution SELEX (US5567588), Chimeric SELEX (WO9604403), Tissue SELEX (US20026376474), Photo SELEX (US6001577), Toggle SELEX (US20077312325), Covalent SELEX/Chemi SELEX (US5763595), Genomic SELEX (US20016261774), 정제된 단백질 없는 SELEX (WO0224954), CE-SELEX (WO03102212), Mirror-image SELEX - Spiegelmers (EP1386972) 및 Laser SELEX, DeSELEX (WO07035532). 본 발명에 의해 포함되는 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 SELEX 방법의 임의의 하나 이상의 변형에서 사용될 수 있다 .
앱타머는 합성, 재조합, 및 정제 방법을 비롯한 임의의 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 단독으로 또는 동일한 표적에 특이적인 다른 앱타머와 조합으로 사용될 수 있다. 추가로, 본원에 더욱 충분히 기재되는 바와 같이, 용어 "앱타머" 는 구체적으로 2 개 이상의 공지된 앱타머를 제시된 표적에 비교함으로써 유도된 컨센서스 서열을 함유하는 "이차 앱타머" 가 포함된다. 앱타머는 이들을 매력적인 치료제로 만드는 여러 특징을 갖고 있다. 양쪽 DNA 및 RNA 앱타머는 적은 피코몰에서 적은 나노몰 범위의 해리 상수 (Kd) 로 이들의 표적에 결합하는 것으로 보인다. 앱타머의 결합은 공통의 구조적 도메인을 공유하는 관련 단백질 사이를 심지어 구별할 수 있는 고도로 특이적인 상호작용이다. 양쪽 앱타머 및 항체의 결합 친화성이 동일한 범위에 있더라도, 앱타머는 많은 경우 그들의 라이벌을 압도할 많은 부가적인 특징을 갖는다. 항체와는 다르게, 앱타머는 심지어 비 면역원성 표적에 대항하여 표적될 수 있다. 합성 동안, 이들은 이들의 안정성 및 약동학을 개선하는 화학적 개질에 쉽게 적용될 수 있다. 이들은 이들의 내생 분자와의 닮음으로 인해, 치료 투여량에서 0 내지 무시할만한 수준의 면역원성을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 항-병원성제, 예를 들어, 항바이러스제, 항박테리아제, 항진균제, 등으로서 유용하다. 다양한 감염성제 예컨대 바이러스 및 박테리아에 대한 적합한 표적이 보고되어 있다. 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된, US Patent 5726017, US Patent 5654151, US Patent 5496938, US Patent 5503978, US Patent 5587468, US Patent 5527894, US2005233317, US Patent 5496938, WO08 066231, JP2002165594, WO02081494, US Patent 5861501, WO9720072, US Patent 5475096, US Patent 6569630, CN101109013, 및 WO03106476 을 참조한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 항암제이거나 항암제로서 작용한다. 임의의 공지된 암- 또는 종양-연관 인자, 예컨대 구조적 단백질 및 신호 전달 분자를 비롯한, 세포 분열 또는 증식, 세포 사이클 진행, 세포자멸사, 세포 이동, DNA 복구 등의 조절에 관여하는 단백질이 앱타머에 의해 표적화될 수 있다. 예에는 제한 없이, 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 AU Patent 775412, US Patent 6232071, WO 08/028534, US Patent 6933114, WO 04/081574, AU Patent 242462, US Patent 6995249, US Patent 5668264, US Patent 6699843, WO 04/094614, 및 US Patent 5846713 이 있고 이를 참조한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 항혈관신생제이거나 항혈관신생제로서 작용한다. 항혈관신생 표적의 비-제한적인 예에는 VEGF 및 관련 수용체 뿐 아니라 세포외 매트릭스 또는 부착 분자가 포함된다. 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 US Patent 6051698, US 2003175703, WO 95/21853 및 US Patent 7094535 를 참조한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 항혈액응고제이거나 항혈액응고제로서 작용한다. 혈액 응고 인자 및 이들의 기능 뿐 아니라 단백질 조절 그러한 과정에 대해서는 많은 것이 공지되어 있다. 앱타머는 심혈관 질환 및 혈액 응고 장애와 같은 상태의 치료시 이러한 인자 중 하나 이상을 표적하는데 유용하다. 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 06/033854, US Patent 5543293, WO 07/025049, US Patent 6774118, WO 07/140000 를 참조한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 면역조절제이거나 면역조절제로서 작용한다. 앱타머는 자가면역 질병에 관여된 면역조절 분자를 표적하기 위해 생성되었다. 본 발명은 면역 세포, 예컨대 T 세포 및 항원 제시 세포 (APC) 상에서 발현된 분자를 표적하는데 유용할 수 있다. 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 US Patent 5869641, WO 01/09160 을 참조한다. 일부 구현예에서, C1, C4, C2, C3 및 C5 와 같은 보체계에 관여된 분자는 앱타머에 의해 표적될 수 있다. 보체계는 수 많은 신장의, 류머티스성, 신경학적, 피부과적, 혈액학적, 알러지성, 감염성, 및 기타 질환에 연루된다. 예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 97/28178 및 WO 07/103549 를 참조한다. 기타 면역-관련 표적에는 제한 없이, IL-12, IL-23 및 IL-28 (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 07/035922 참조), IgE (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 05/113813 참조), Sp-1 및 Sp1-, CD28, IL-2, GMCSF (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 US Patent 6994959 참조), SDF-1, CXCR4 (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 08/009437 참조), IL-6, IL-12, IFN 감마 (예를 들어, 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 US Patent 6589940 및 US2003125279 참조), 및 TLR 이 포함된다. 입체-정의된 앱타머는 이러한 질환에 대항하여 개선된 효능을 도출할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 항-염증제이거나 항-염증제로서 작용한다. 염증성 질환, 예컨대 급성 호흡기 질환 증후군 (ARDS), 패혈증 쇼크, 폐기종, 낭포성 섬유증, 류머티스성 관절염 및 만성 기관지염은 이들의 발병에 관여하는 호중구 엘러스타아제를 갖는다. 인간 엘라스타아제는 따라서 염증을 조절하는 앱타머를 사용하는 이러한 질병을 치료하기 위한 표적이다. 기타 적합한 표적에는, 제한 없이, 포스포리파아제 A2, 예컨대 비-취장 분비성 PLA2 (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 96/27604 참조), 셀렉틴, E-, P- 및 L- (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 US Patent 5780228 참조), 3 개의 상동 C-유형 렉틴, 백혈구, 내피 세포 및 혈소판과 같은 세포 내에서 발현되는 기타 세포 부착 분자; MCP-1 (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 07/093409 참조), NF-카파 B 및 NF-IL6 (예를 들어, 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 00/24404 참조) 이 포함된다. 입체-정의된 앱타머는 이러한 질환에 대항하여 개선된 효능을 도출할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 전염성 해면체성 뇌병증 (Transmissible spongiform encephalopathies: TSEs) 및 알츠하이머 질환을 포함하나 이에 제한되지 않는 특정 뇌 질환의 치료에 유용하다. 공지된 표적은 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 WO 2006/138676 및 DE19916417, 및 WO 08/008884 를 비롯한 공개문헌에 기재되어 있다. 입체-정의된 앱타머는 이러한 질환에 대항하여 개선된 효능을 도출할 수 있다.
데코이 올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 데코이 올리고뉴클레오티드인 또는 데코이 올리고뉴클레오티드로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
전사 인자가 심지어 주위의 게놈 DNA 의 부재 하에도, 이들의 비교적 짧은 결합 서열을 인지하기 때문에, 특이적 전사 인자의 컨센서스 결합 서열을 갖는 짧은 올리고뉴클레오티드는 살아있는 세포에서 유전자 발현의 조작을 위한 도구로서 사용될 수 있다. 상기 전략은 이러한 "데코이 올리고뉴클레오티드" 의 세포내 전달을 수반하고, 이것은 이후 표적 인자에 의해 인지되고 결합된다. 데코이에 의한 전사 인자의 DNA-결합 부위의 점유는 전사 인자가 표적 유전자의 프로모터 영역에 이어서 결합할 수 없게 한다. 데코이는 전사 인자에 의해 활성화된 유전자의 발현을 억제하기 위해, 또는 전사 인자의 결합에 의해 억제되는 유전자를 상향-조절하기 위해 치료제로서 사용될 수 있다. 데코이 올리고뉴클레오티드의 이용 예는 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된 문헌 Mann et al., J. Clin. Invest., 2000, 106: 1071-1075 에서 찾을 수 있다.
miRNA 모방체
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 miRNA 모방체인 또는 miRNA 모방체로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
miRNA 모방체는 하나 이상의 miRNA 의 활성을 조절하는 유전자를 모방하기 위해 사용될 수 있는 분자의 클래스를 나타낸다. 따라서, 용어 "microRNA 모방체" 는 RNAi 경로에 들어가서 유전자 발현을 조절할 수 있는 합성 비-코딩 RNA (즉, miRNA 는 내생 miRNA 의 공급원으로부터 정제에 의해 수득되지 않음) 를 말한다. miRNA 모방체는 성숙 분자 (예를 들어, 단일 가닥) 또는 모방 전구체 (예를 들어, pri- 또는 프리-miRNA) 로서 디자인될 수 있다.
일부 구현예에서, miRNA 모방체는 이중 가닥 분자 (예를 들어, 약 16 내지 약 31 개 뉴클레오티드의 길이의 이중체 영역을 가진) 이고, 제시된 miRNA 의 성숙 가닥과 일치성을 갖는 하나 이상의 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, miRNA 모방체는 약 16 내지 약 31 개 뉴클레오티드의 이중체 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 miRNA 모방체는 하기 화학적 개질 패턴 중 하나 이상을 함유할 수 있다: 센스 가닥은 뉴클레오티드 1 및 2 (센스 올리고뉴클레오티드의 5' 말단으로부터 계수함), 및 C 및 U 의 모두의 2'-O-메틸 개질을 함유할 수 있고; 안티센스 가닥 개질은 C 및 U 모두의 2' F 개질, 올리고뉴클레오티드의 5' 말단의 인산화 , 및 2 뉴클레오티드 3' 돌출부와 연관된 안정화된 뉴클레오티드사이 (internucleotide) 연결을 포함할 수 있다.
슈퍼미르 (Supermir)
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 슈퍼미르인 또는 슈퍼미르로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
슈퍼미르는 miRNA 와 실질적으로 동일하고 이의 표적과 관련하여 안티센스인 뉴클레오티드 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 딘일 가닥, 이중 가닥 또는 부분적으로 이중 가닥) 을 말한다. 이 용어는 유사하게 작용하는 하나 이상의 비-자연 발생적 부분을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 슈퍼미르는 센스 가닥을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 슈퍼미르는 상당한 정도까지 자가-하이브리드화하지 않는다. 일부 구현예에서, 슈퍼미르는 2 차 구조를 갖지만, 생리학적 조건 하에서 실질적으로 단일-가닥이다. 실질적으로 단일-가닥인 슈퍼미르는 슈퍼미르의 약 50% 미만 (예를 들어, 약 40%, 30%, 20%, 10%, 또는 5% 미만) 이 자체적으로 이중체화되는 범위로 단일-가닥이다. 슈퍼미르는 헤어핀 절편을 포함할 수 있는데, 예를 들어, 바람직하게는 3' 말단에서의 서열은 자가 하이브리드화 될 수 있고 이중체 영역, 예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 또는 4 개, 바람직하게는 8, 7, 6, 또는 5 개 미만 뉴클레오티드, 예를 들어, 5 개 뉴클레오티드의 이중체 영역을 형성한다. 이중체화된 영역은 링커, 예를 들어, 뉴클레오티드 링커, 예를 들어, 3, 4, 5, 또는 6 dT, 예를 들어, 개질된 dT 에 의해 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 슈퍼미르는 예를 들어, 3' 및 5' 말단 중 하나 또는 양쪽에서 또는 슈퍼미르의 비-말단 또는 중간의 하나의 말단에서 그리고 내에서 예를 들어, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 뉴클레오티드 길이의 짧은 올리고뉴클레오티드와 이중체화된다.
안티머 (Antimer) 또는 miRNA 억제제
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 안티머 또는 miRNA 억제제인 또는 안티머 또는 miRNA 억제제로 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
용어 "안티머" "microRNA 억제제" 또는 "miR 억제제" 는 동의어이고, 특이적 miRNA 의 활성을 간섭하는 올리고뉴클레오티드 또는 개질된 올리고뉴클레오티드를 말한다. 억제제는 단일 가닥, 이중 가닥 (RNA/RNA 또는 RNA/DNA 이중체), 및 헤어핀 디자인을 포함하는 다양한 배열을 채택할 수 있다. 일부 구현예에서, microRNA 억제제는 표적되는 miRNA 성숙 가닥 (또는 가닥들) 과 상보적인 또는 부분적으로 상보적인 하나 이상의 서열 또는 서열의 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, miRNA 억제제는 성숙 miRNA 의 역 보체인 서열에 5' 및 3' 에 위치하는 부가적인 서열을 포함한다. 부가적인 서열은 성숙 miRNA 가 유도되는 pri-miRNA 내의 성숙 miRNA 에 근접한 서열의 역 보체일 수 있고, 또는 부가적인 서열은 임의의 서열 (A, G, C, U, 또는 dT 의 혼합물을 가짐) 일 수 있다. 일부 구현예에서, 부가적인 서열의 하나 또는 모두는 헤어핀을 형성할 수 있는 임의의 서열이다. 따라서, 일부 구현예에서, 서열은 miRNA 의 역 보체가 헤어핀 구조에 의해 5' 면 및 3' 면 상에서 측면에 있는 것이다. 일부 구현예에서, microRNA 억제제는 이중 가닥이다. 일부 구현예에서, microRNA 억제제는 이중 가닥이고 반대 가닥 상의 뉴클레오티드 사이에 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, microRNA 억제제는 억제제의 세포 내로의 섭취를 용이하게 하기 위해 콘쥬게이트 부분에 연결된다.
헤어핀 miRNA 억제제를 포함하는 MicroRNA 억제제는 각각 전체가 본원에 참조로서 인용된, 문헌 Vermeulen et al., "Double-Stranded Regions Are Essential Design Components Of Potent Inhibitors of RISC Function," RNA 13: 723-730 (2007) 및 W02007/095387 및 WO 2008/036825 에서 상세히 기재된다.
miRNA-기반 요법의 예시적인 적용은 그 내용이 참조로서 인용된 문헌 Pan et al. (2007) World J Gastroenterol 13(33): 4431-36, "New therapeutic opportunities for Hepatitis C based on small RNA" 에 기재된다. 간략하게, 상기 저자는 간-특이적 발달 조절자인, hcr 유전자의 비코딩 폴리아데닐화 RNA 전사체로부터 유래된 22 개의 뉴클레오티드 성숙 miR-122 를 기술한다. miR-122 가 HCV 바이러스 복제에 관여하는 간 특이적 miRNA 이기 때문에, miR-122 의 침묵은 HCV 의 치료에 유용할 수 있다.
안타고미르 (Antagomir)
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 안타고미르인 또는 안타고미르로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
안타고미르는 RNAse 보호 및 약리학적 특성에 대한 다양한 개질 (예컨대 향상된 조직 및 세포 섭취) 를 보유하는 RNA-유사 올리고뉴클레오티드이다. 이들은 정상 RNA 와, 예를 들어, 당의 완전한 2'-0-메틸화, 포스포로티오에이트 삽입당 (intersugar) 연결 및, 예를 들어, 3'-말단에 콜레스테롤-부분이 상이하다. 일부 구현예에서, 안타고미르는 모든 뉴클레오티드에 2'-O-메틸개질, 3'-말단에 콜레스테롤 부분, 5'-말단에서 첫번째 2 개의 위치에 2 개의 포스포로티오에이트 삽입당 연결 및 분자의 3'-말단에 4 개의 포스포로티오에이트 연결를 포함한다. 안타고미르는 안타고미르 및 내생 miRNA 를 포함하는 이중체를 형성하여, miRNA-유도 유전자 침묵을 방지함으로써 내생 miRNA 를 효과적으로 침묵시키는데 사용될 수 있다. 안타고미르-매개 miRNA 침묵의 예는 전체가 본원에 참조로서 인용된 Krutzfeldt et al, Nature, 2005, 438: 685-689 에 기재된 miR-122 의 침묵이다.
개질된 단일 올리고뉴클레오티드 변형
전형적으로, 2 개의 성분이 RNAi-연관 단백질에 의한 인지에 필요한 RNAi 조직체 - 이중-가닥 핵산 모티프 및 RISC 의 아르고나우트 (Argonaute) 촉매 단백질 내의 mRNA 결합 조-인자로서 담당하는 가이드 가닥을 활성화시키는데 필요하다는 것으로 여겨진다. 더욱 최근에, 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 단일의, 짧은 (25-28 nt) 올리고로 구성된 신규한 유형의 RNAi 분자가 개발되었다. 상기 분자는 RISC 를 효과적으로 활성화하고 강력한 통상의 RNAi 분자로 수득된 것에 필적할만한 표적 mRNA 침묵을 생성하는 것으로 입증되었다. 그 내용이 본원에 참조로서 인용된: Lapierre et al., "Potent and systematic RNAi mediated silencing with single oligonucleotide compounds." RNA 2011; 17:00 을 참조한다. 또한 그 내용이 본원에 참조로서 인용된: WO 2010/090762 "RNA DUPLEXES WITH SINGLE STRANDED PHOSPHOROTHIOATE NUCLEOTIDE REGIONS FOR ADDITIONAL FUNCTIONALITY" (PCT/US2010/00348) 를 참조한다.
따라서, 본 발명은 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역을 함유하는 RNAi 구축물, 및 유전자 침묵에서의 그러한 구축물의 용도를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 포함하는 단리된 이중 가닥 핵산 분자를 이용하며, 패신저 가닥은 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역에 분할가능 링커를 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 갖는 단리된 이중 가닥 핵산 분자이며, 가이드 가닥 및 패신저 가닥 중 하나 이상은 6 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역에 분할가능 링커를 통해 연결된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 갖는 단리된 이중 가닥 핵산 분자를 이용하며, 가이드 가닥 및 패신저 가닥 중 하나 이상은 3 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역에 분할가능 링커를 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 핵산 분자는 하기 특성 중 하나 이상을 포함한다. 패신저 가닥은 8-18 개 뉴클레오티드의 길이일 수 있다. 핵산은 2' O 메틸 또는 2' 플루오로 개질 중 하나 이상을 가질 수 있다. 분할가능 연결은 뉴클레오티드 연결 이외의 것일 수 있다. 핵산은 친유성 기를 포함할 수 있다. 가이드 가닥은 16-18 개 뉴클레오티드 또는 26-28 개 뉴클레오티드의 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 가이드 가닥에 연결된다.
일부 구현예에서, 분할가능 링커는 하나 초과의 비개질된 뉴클레오티드를 포함한다. 기타 구현예에서, 분할가능 링커는 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 분할가능 링커는 S-S 이다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 DNA 또는 RNA 이다. 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 패신저 가닥의 3' 또는 5' 말단 중 하나에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 6 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 DNA 인 반면, 기타 구현예에서, 이것은 RNA 이다.
일부 구현예에서, 핵산 분자의 이중 가닥 영역은 완벽한 이중체이다. 기타 구현예에서, 이중 가닥 영역은 하나 이상의 불거진 (bulge) 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 패신저 가닥은 분자의 이중 가닥 영역 내에 닉 (nick) 을 포함한다. 이중 가닥 영역은 포스포로티오에이트 개질된 하나 이상의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다.
본 발명에 따라 이용되는 핵산 분자는 화학적으로 개질될 수 있다. 특정 구현예에서, 화학적 개질은 2'O 메틸 및/또는 2' 플루오로이다. 일부 구현예에서, 하나 초과의 화학적 개질이 동일한 분자 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 화학적 개질은 안정성을 증가시키고, 면역 조절의 회피를 증가시키고, 및/또는 오프-표적 유전자 침묵을 방지한다. 화학적 개질은 패신저 가닥 및/또는 가이드 가닥 상에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 세포 내 핵산 분자의 이중 가닥 영역으로부터 분할된다. 일부 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 포유류 유전자에 대한 상보성을 갖는다. 특정 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 안티센스 분자로서 기능한다. 이중 가닥 영역은 19 개 이상의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 12 개 이상의 뉴클레오티드 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 RNA 간섭에서 기능하는 이중 가닥 영역 및 안티센스에서 기능하는 단일 가닥 영역을 포함하는 이작용성 핵산 분자를 이용하며, 이중 가닥 영역은 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 포함하고, 이중 가닥 영역 및 단일 가닥 영역은 분할가능 링커를 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 하나 이상의 비개질된 뉴클레오티드를 포함한다. 기타 구현예에서, 분할가능 링커는 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 분할가능 링커는 S-S 이다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 DNA 또는 RNA 이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 포유류 세포를 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 포함하는 단리된 이중 가닥 핵산 분자와 접촉시키는 것을 포함하는, 포유류 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제하기 위한 방법에 관한 것이며, 상기 패신저 가닥은 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역에 분할가능 링커를 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 하나 이상의 비개질된 뉴클레오티드를 포함한다. 기타 구현예에서, 분할가능 링커는 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 분할가능 링커는 S-S 이다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 DNA 또는 RNA 이다.
일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드를 포함하고, 패신저 가닥의 3' 또는 5' 말단에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역이 DNA 인 반면, 기타 구현예에서, 이것은 RNA 이다. 일부 구현예에서, 핵산 분자의 이중 가닥 영역은 완벽한 이중체이다. 기타 구현예에서, 이중 가닥 영역은 하나 이상의 불거진 (bulge) 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 패신저 가닥은 분자의 이중 가닥 영역 내에 닉 (nick) 을 포함한다. 이중 가닥 영역은 포스포로티오에이트 개질된 하나 이상의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다.
본 발명에 따라 이용되는 핵산 분자는 화학적으로 개질될 수 있다. 특정 구현예에서, 화학적 개질은 2'O 메틸 및/또는 2' 플루오로이다. 일부 구현예에서, 하나 초과의 화학적 개질이 동일한 분자 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 화학적 개질은 안정성을 증가시키고, 면역 조절의 회피를 증가시키고, 및/또는 오프-표적 유전자 침묵을 방지한다. 화학적 개질은 패신저 가닥 및/또는 가이드 가닥 상에 존재할 수 있다.
일부 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 세포 내 핵산 분자의 이중 가닥 영역으로부터 분할된다. 일부 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 포유류 유전자에 대한 상보성을 갖는다. 특정 구현예에서, 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역은 안티센스 분자로서 기능한다. 이중 가닥 영역은 19 개 이상의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 가닥 영역은 12 개 이상의 뉴클레오티드 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 포유류 세포를 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 포함하는 단리된 이중 가닥 핵산 분자와 접촉시키는 것을 포함하는, 포유류 세포에서 표적 유전자의 발현을 억제하기 위한 방법에 관한 것이며, 상기 가이드 가닥은 8 개 이상의 포스포로티오에이트 개질된 뉴클레오티드의 단일 가닥 영역에 분할가능 링커를 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 하나 이상의 비개질된 뉴클레오티드를 포함한다. 기타 구현예에서, 분할가능 링커는 포스포디에스테르 결합이다. 특정 구현예에서, 분할가능 링커는 S-S 이다. 일부 구현예에서, 분할가능 링커는 DNA 또는 RNA 이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 포유류 세포를 RNA 간섭에서 기능하는 이중 가닥 영역 및 안티센스에서 기능하는 단일 가닥 영역을 포함하는 이작용성 핵산 분자와 접촉시키는 것을 포함하는, 포유류 세포에서의 표적 유전자의 발현을 억제하는 방법에 관한 것이며, 이중 가닥 영역은 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 포함하고, 이중 가닥 영역 및 단일 가닥 영역은 분할가능 링커를 통해 연결된다. 기타 양상에서, 포유류 세포에서의 표적 유전자의 발현을 억제하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 포유류 세포를 본원에 기재된 단리된 이중 가닥 핵산 분자 중 임의의 것과 접촉시키는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 단리된 이중 가닥 핵산 분자는 안정성을 증가시키는 화학적 개질을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 이중 가닥 핵산 분자는 면역 조절의 회피를 증가시키는 화학적 개질을 포함한다. 일부 구현예에서, 단리된 이중 가닥 핵산 분자는 오프-표적 유전자 침묵을 방지하는 화학적 개질을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 논의된 바와 같이, 이용된 올리고뉴클레오티드는 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 단일 올리고뉴클레오티드 분자이다. 일부 구현예에서, 이러한 단일 올리고뉴클레오티드는 약 23-30 개 뉴클레오티드의 길이, 예를 들어, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 및 30 개이다. 일부 구현예에서, 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 단일 올리고뉴클레오티드는 약 14-18 개의 뉴클레오티드 mRNA 표적화 영역 (예를 들어, 14, 15, 16, 17, 및 18 개) 을 함유한다. 일부 구현예에서, 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 단일 올리고뉴클레오티드는 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 부가적인 7-11 개, 예를 들어, 7, 8, 9, 10, 및 11 개의 뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 부분적으로 상보적인 이중체로 자가-이량체화할 수 있는 단일 올리고뉴클레오티드는 RNA-유도 침묵 복합체 (RISC) 로 효과적으로 진입하여 활성화시킬 수 있다.
Ul 어댑터
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 U1 어댑터인 또는 U1 어댑터로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
Ul 어댑터는 polyA 부위를 억제하고, 표적 유전자의 말단 엑손 내의 부위에 상보적인 표적 도메인 및 Ul snRNP 의 Ul 소형 핵 RNA 성분에 결합하는 'Ul 도메인' 을 갖는 이작용성 올리고뉴클레오티드이다. 예를 들어, 각각 본원에 전체가 참조로서 인용된 Int. Pat. App. Pub. No. W02008/121963 및 Goraczniak, et al., 2008, Nature Biotechnology, 27(3), 257-263 을 참조한다. Ul snRNP 는 프리-mRNA 엑손-인트론 경계에 결합함으로써 스플라이시오좀 형성 시 초기 단계를 지시하는 것을 일차적으로 기능하는 리보핵단백질 복합체이다, Brown and Simpson, 1998, Annu Rev Plant Physiol Plant MoI Biol 49:77-95.
일부 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 Ul 어댑터이고, 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 효과기 도메인 (U1 도메인) 에 연결된 하나 이상의 어닐링 도메인 (표적화 도메인) 을 포함하고, 어닐링 도메인은 표적 유전자 서열에 하이브리드화하고, 효과기 도메인은 Ul snRNP 의 Ul snRNA 에 하이브리드화한다. 일부 구현예에서, Ul 어댑터는 하나의 어닐링 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Ul 어댑터는 하나의 효과기 도메인을 포함한다.
이론에 구애되지 않고, 어닐링 도메인은 전형적으로 약 10 내지 약 50 개 뉴클레오티드의 길이, 더욱 전형적으로는 약 10 내지 약 30 개 뉴클레오티드 또는 약 10 내지 약 20 개 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 어닐링 도메인은 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 21 개 뉴클레오티드의 길이이다. 어닐링 도메인은 표적 유전자에 대해 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 또는 약 100% 이상 상보적일 수 있다. 일부 구현예에서, 어닐링 도메인은, 말단 코딩 영역 및 3'UTR 및 폴리아데닐화 신호 서열 (예를 들어, 폴리아데닐화 부위를 통해) 을 포함하는, 프리-MRNA 의 Y 말단 엑손 내의 표적 부위와 하이브리드화한다. 일부 구현예에서, 표적 서열은 프리-mRNA 의 폴리 (A) 신호 서열의 약 500 염기쌍, 약 250 염기쌍, 약 100 염기쌍, 또는 약 50 염기쌍 내에 있다. 일부 구현예에서, 어닐링 도메인은 표적 유전자 서열과 1, 2, 3, 또는 4 개 미스매치를 포함한다.
일부 구현예에서, 효과기 도메인은 약 8 뉴클레오티드 내지 약 30 개 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 효과기 도메인은 약 10 뉴클레오티드 내지 약 20 개 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 효과기 도메인은 약 10 뉴클레오티드 내지 약 15 개 뉴클레오티드의 길이이다. U1 도메인은 UI snRNA, 특히 5' 말단, 더욱 구체적으로는 뉴클레오티드 2-11 와 하이브리드화할 수 있다. 일부 구현예에서, Ul 도메인은 내생 U1 snRNA 의 뉴클레오티드 2-11 에 완벽하게 상보적이다. 일부 구현예에서, U1 도메인은 SEQ ID NO: 1 (5'- GCCAGGIL1AAGUAU-3'), SEQ ID NO: 2 (5"-CCAGGLIAA.GUAII-3"). SEQ ID NO: 4 (5"- CAGGUAAGUAU-3'), SEQ ID NO: 5 (5 2-CAGGLIAAGU-3'), SEQ ID NO: 6 (5'-- CM.16ITAAC1-3'), 및 SEQ ID NO: 7 (5'-CAGG1IA2=',,3') 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서; III 도메인은 뉴클레오티드 서열, SEQ ID NO: 8 (5"-CAGGUAAGUA-3") 을 포함한다. 이론에 구애되지 않고, 줄기 1 내로의 염기쌍형성 및/또는 U1 snRNA 의 위치 1 에 대한 염기쌍형성을 포함하도록 하는 U1 도메인의 길이의 증가는 Ul snRNA 에 대한 U1 어댑터의 친화성을 개선한다.
Ul 어댑터의 어닐링 및 효과기 도메인은, 효과기 도메인이 어닐링 도메인의 5' 말단 및/또는 3' 말단에 있는 식으로 연결될 수 있다. 2 개의 도메인은 하나의 도메인의 3' 말단이 다른 도메인의 5' 말단에 연결되거나, 하나의 도메인의 3' 말단이 다른 도메인의 3' 말단에 연결되거나, 하나의 도메인의 5' 말단이 다른 도메인의 5' 말단에 연결되는 식으로 연결될 수 있다. 어닐링 및 효과기 도메인은 서로에 대해 직접 또는 뉴클레오티드 기재 또는 비-뉴클레오티드 기재 링커에 의해 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 뉴클레오티드 염기이고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 개 이하, 20 개 이하, 또는 25 개 이하 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 어닐링 도메인과 효과기 도메인 사이의 링커는 다-원자가, 예를 들어, 3-원자가, 4-원자가, 5-원자가이다. 이론에 구애되지 않고, 다-원자가 링커는 단일 어닐링 도메인을 다수의 어댑터 도메인과 함께 연결하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, Ul 어댑터는 본원에 기재된 임의의 올리고뉴클레오티드 개질을 포함한다. 예시적인 이러한 개질은 세포 및 유기제 내의 어닐링 친화성, 특이성, 생물이용능, 세포 및/또는 핵 수송, 안정성, 및/또는 분해에 대한 저항성을 증가시키는 것이 포함된다. 일부 구현예에서, U1 어댑터는 하나 이상의 기타 RNAi 작용제와 조합으로 투여될 수 있다.
RNA 활성화제
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 RNA 활성화제인 또는 RNA 활성화제로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
최근의 연구는 dsRNA 는 또한 "소형 RNA-유도된 유전자 활성화" 또는 RNAa 라고 불리는 메카니즘인 유전자 발현을 활성화할 수 있다는 것을 발견하였다. 예를 들어, Li, L.C. et al. Proc Nati Auld Sci U S A. (2006), 103(46):17337-42 및 Li L.C. (2008). "Small RNA-Mediated Gene Activation". RNA and the Regulation of Gene Expression: A Hidden Layer of Complexity. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-25-7 을 참조한다. dsRNA 표적화 유전자 프로모터가 연관 유전자의 강력한 전사 활성화를 유도한다는 것이 제시되었다. RNAa 를 야기하는 내생 miRNA 가 또한 인간에서 발견되었다. Check E. Nature (2007). 448 (7156): 855-858.
또다른 관찰은 RNAa 에 의한 유전자 활성화가 장기-지속성이라는 점이다. 유전자 발현의 유도는 10 일 이상 지속되는 것으로 보인다. RNAa 의 연장된 효과는 dsRNA 표적 부위에서 후생적 변화에 기여할 수 있었다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 RNA 활성화제이고, 제공된 올리고뉴클레오티드는 유전자의 발현을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 증가된 유전자 발현은 생존력, 성장 발달, 및/또는 번식을 억제한다.
비-코딩 RNA (ncRNA)
본 발명은 비-코딩 RNA, 예컨대 긴 비-코딩 RNA (lncRNA) 및 짧은 비-코딩 RNAs (sncRNA) 를 포함한다.
따라서, 본 발명의 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 질환-연관된 긴 비-코딩 RNA 의 조절에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법에 따라 합성된 올리고뉴클레오티드는 표적 lncRNA 영역에 대한 전사 억제체 복합체의 결합을 특이적으로 차단하여, 관련 표적 유전자의 발현을 유도하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 전사 억제체 복합체는 침묵 인자이다. 일부 구현예에서, 전사 억제체 복합체는 히스톤 (Histone) 메틸트랜스페라아제 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 전사 억제체 복합체는 히스톤 H3 을 메틸화한다. 일부 구현예에서, 전사 억제체 복합체는 PRC2 (Polycomb Repressive Complex 2) 이다.
특정 PRC2-연관 lncRNA 는 잠재적인 치료 표적 및/또는 바이오마커인 것으로 보고되었다 (Zhao et al., 2010. "Genome-wide Identification of Polycomb-Associated RNAs by RIP-seq" Molelcular Cell 40: 939-53). PCR2 단백질의 과발현은 전이성 전립선암 및 유방암, 및 대장암, 유방암, 및 간암을 비롯한 다양한 유형의 암에 연결된다. PRC2-매개 유전자 억압의 약리학적 억제가 시험관 내에서 여러 개의 암 세포주에서 세포자멸사를 유도한다는 것을 발견하였다 (그러나 다양한 유형의 정상 세포에서는 아님). 상기 시스템에서의 세포자멸사의 유도는 PRC2 에 의해 억압되었던 유전자의 재활성화에 의존한다. 또한 PRC2-매개 유전자 억압이 암 줄기 세포의 줄기-세포 특성의 유지와 연결될 수 있다는 증거가 있다. 상기 결과는 적어도 일부 경우에서, PRC2-매개 유전자 억압의 억제 -중요한 유전자로 PRC2 를 모집하는 표적화 lncRNA 를 통한 포함- 가 다양한 유형의 암을 치료하기 위한 잠재적인 전략이라는 것을 암시한다. 본원에 제공된 방법에 따라 제조될 수 있는 핵산의 비-제한적인 서열은 예를 들어, 그 내용이 본원에 참조로서 인용된 국제 특허 공개 WO 2012/065143, 표제 "Polycomb-associated non-coding RNAs" (PCT/US2011/60493) 에서 찾을 수 있다.
본 발명의 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 소형 비-코딩 RNA, 예컨대 piwi-상호작용 RNA (piRNA) 이거나 이것으로서 작용할 수 있다. piRNA 는 동물 세포에서 발현되고, 게놈을 통틀어 클러스터로 발견되는 소형 비-코딩 RNA 분자의 가장 큰 클래스를 나타낸다. piRNA 는 piwi 단백질과의 상호작용을 통해 RNA-단백질 복합체를 형성하는 것으로 공지된다. piRNA 복합체는 정자생성을 포함하는 생식 세포에서의 기타 유전 요소 및 레트로트랜스포존의 후생 및 전사-후 유전자 침묵 모두에 연루되어 있다. 전형적으로 piRNA 는 26-31 개 뉴클레오티드의 길이이고, 전형적인 miRNA 와 비교해서, 이들은 서열 보존이 결핍되고 높은 복합성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 5' 우리딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드 조성물은 2' 또는 3' 산소를 차단하도록 작용하는 5' 모노포스포에이트 및 3' 개질을 포함한다. 일부 구현예에서, 3' 개질은 2'-O-메틸화이다.
삼중체-형성 올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드이거나 이것으로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
최근의 연구는 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드 (TFO) 이 서열-특이적 방식으로 이중-가닥 나선형 DNA 내의 폴리퓨린/폴리피리미딘 영역을 인지하고 이에 결합할 수 있게 디자인될 수 있다는 것을 보여주었다. 상기 인지 법칙은 문헌 Maher III, L.J., et al., Science (1989) vol. 245, pp 725-730; Moser, H. E., et al., Science (1987) vol. 238, pp 645-630; Beal, P.A., et al., Science (1992) vol. 251, pp 1360-1363; Conney, M., et al., Science (1988) vol. 241, pp 456-459 and Hogan, M.E., et al., EP Publication 375408 에 요약된다. 올리고뉴클레오티드의 개질, 예컨대 삽입제 (intercalator) 및 삽입당 (intersugar) 연결 치환의 도입, 및 결합 조건 (pH 및 양이온 농도) 의 최적화는 TFO 활성에 대한 고유의 장애의 극복 (예컨대 전하 반발 및 불안정성) 에 도움을 주고, 최근에 올리고뉴클레오티드가 특이적인 서열에 표적될 수 있다는 것이 (최근의 리뷰를 위해서는, Seidman and Glazer, Clin Invest 2003 2.:487-94 를 참조함) 제시되었다. 일반적으로 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드는 하기 서열 상응성을 갖는다:
올리고 3'-A G G T
이중체 5'-A G C T
이중체 3'-T C G A
그러나, A-AT 및 G-GC 삼중체가 최대의 삼중 나선형 안정성을 갖는다는 것이 제시되었다 (Reither and Jeltsch, BMC Biochem, 2002, Sept12, Epub). 동일한 저자는 A-AT 및 G-GC 법칙에 따라 디자인된 TFO 가 비-특이적 삼중체를 형성하지 않아, 삼중체 형성이 실제로 서열 특이적이라는 것을 나타냄을 입증하였다. 따라서, 임의의 제공된 서열에 대해, 삼중체 형성 서열이 고안될 수 있다. 일부 구현예에서, 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드는 적어도 약 15, 약 25, 또는 약 30 개 이상의 뉴클레오티드의 길이이다. 일부 구현예에서, 삼중체-형성 올리고뉴클레오티드는 약 50 까지 또는 약 100 개의 뉴클레오티드의 길이이다.
표적 DNA 와의 삼중 나선형 구조의 형성은 공간적 및 기능적 변화를 유도해서, 전사 개시 및 신장을 차단하여, 내생 DNA 중에 원하는 서열 변화의 도입을 허용하고 유전자 발현의 특이적 하향-조절을 산출한다. TFO 로 처리된 세포에서 유전자 발현의 이러한 억제의 예에는 포유류 세포 내 에피좀 supFGI 및 내생 HPRT 유전자의 녹아웃 (Vasquez et al., Nucl Acids Res. 1999;27: 1176-81, 및 Puri, et al, J Biol Chem, 2001;276:28991-98), 및 전립선 암 병인론에 중요한, Ets2 전사 인자의 발현의 서열- 및 표적 특이적 하향조절 (Carbone, et al, Nucl Acid Res. 2003;31:833-43), 및 pro-염증성 ICAM-I 유전자 (Besch et al, J Biol Chem, 2002;277:32473-79) 가 포함된다. 또한, Vuyisich and Beal 은 최근에 서열 특이적 TFO 가 dsRNA 에 결합할 수 있어, dsRNA-의존적 효소, 예컨대 RNA-의존적 키나아제 활성을 억제한다는 것을 보여주었다 (Vuyisich and Beal, Nuc, Acids Res 2000;28:2369-74).
부가적으로, 상기 언급된 원리에 따라 디자인된 TF0 는 DNA 복구에 영향을 줄 수 있는 지정 돌연변이유발을 유도할 수 있으므로, 내생 유전자의 발현의 하향-조절 및 상향-조절 모두를 제공한다 (Seidman and Glazer, JInvest 2003; 112:487-94). 효과적인 TFO 의 디자인, 합성 및 투여의 상세한 설명은, 그 내용이 본원에 전체가 인용된 S. Pat. App. Nos. 2003 017068 및 2003 0096980 (Froehier et at) 및 2002 012821/8 및 2002 0123476 (Emanude et aE), 및 U.S. Pat. No. 5,721,138 (Lawn) 에서 찾을 수 있다.
콘쥬게이트/링커
본 발명은 또한 이용된 올리고뉴클레오티드가, 일부 구현예에서, 세포 섭취에 대해 최적이라는 것을 포함한다. 본 발명에 의해 포함되는 임의의 이용된 올리고뉴클레오티드에서, 가이드 및/또는 패신저 가닥은 콘쥬게이트에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 콘쥬게이트는 소수성이다. 소수성 콘쥬게이트는 10 초과인 분배 계수를 갖는 소형 분자일 수 있다. 콘쥬게이트는 스테롤-유형 분자, 예컨대 콜레스테롤, 또는 C17 에 부착된 증가된 길이 폴리카본 사슬을 가진 분자일 수 있고, 콘쥬게이트의 존재는 지질 트랜스펙션 시약과 함께 또는 없이 세포 내로 받아들여지는 RNA 분자의 능력에 영향을 줄 수 있다. 콘쥬게이트는 소수성 링커를 통해 패신저 또는 가이드 가닥에 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 소수성 링커는 5-12C 의 길이이고, 및/또는 히드록시피롤리딘-기재이다. 일부 구현예에서, 소수성 콘쥬게이트는 패신저 가닥에 부착되고, 패신저 및/또는 가이드 가닥의 CU 잔기는 개질된다. 일부 구현예에서, 패신저 가닥 및/또는 가이드 가닥 상의 CU 잔기의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 가 개질된다. 일부 양상에서, 본 발명과 연관된 분자는 자가-전달 (sd) 이다. 본원에 사용되는 바와 같은, "자가-전달" 은 부가적인 전달 비히클, 예컨대 트랜스펙션 시약의 필요 없이 세포 내로 전달되어지는 분자의 능력을 말한다. 본 발명의 양상은 RNAi 에서 사용하기 위한 선별 분자에 관한 것이다.
본원에 포함된 임의의 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 세포에 대한 분자의 표적화 및/또는 전달을 위해 소수성 부분과 연합될 수 있다. 일부 구현예에서, 소수성 부분은 링커를 통해 핵산 분자와 연합된다. 일부 구현예에서, 연합은 비-공유 상호작용을 통한다. 기타 일부에서, 연합은 공유 결합을 통한다. 당업계에 공지된 임의의 링커는 핵산을 소수성 부분과 연합시키는데 사용될 수 있다. 당업계에 공지된 링커는 참조로서 본원에 인용된, 공개된 국제 PCT 출원, WO 92/03464, WO 95/23162, WO 2008/021157, WO 2009/021157, WO 2009/134487, WO 2009/126933, 미국 특허 출원 Publication 2005/0107325, U.S. Patent 5,414,077, U.S. Patent 5,419,966, U.S. Patent 5,512,667, U.S. Patent 5,646, 126, 및 U.S. Patent 5,652,359 에 기재되어 있다. 링커는 다-원자 링커에 대한 공유 결합 같이 단순할 수 있다. 링커는 시클릭 또는 아시클릭일 수 있다. 링커는 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 핵산으로부터 분할될 수 있다. 특정 구현예에서, 링커는 생리학적 조건 하에서 가수분해될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 효소 (예를 들어, 에스테라아제 또는 포스포디에스테라아제) 에 의해 분할될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 핵산을 소수성 부분으로부터 분리시키는 스페이서 요소를 포함한다. 스페이서 요소는 1 내지 30 개의 탄소 또는 헤테로원자를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 링커는 및/또는 스페이서 요소는 양성자화가능 작용기를 포함한다. 이러한 양성자화가능 작용기는 핵산 분자의 엔도좀 탈출을 촉진할 수 있다. 양성자화가능 작용기는 또한 세포에 대한 핵산의 전달에 도움을 줄 수 있다 (예를 들어, 분자의 전체적인 전하를 중화시킴). 일부 구현예에서, 링커는 및/또는 스페이서 요소는 생물학적으로 비활성이다 (즉, 이것은 산출되는 핵산 분자에 대해 생물학적 활성 또는 기능을 부여하지 않음).
소수성 분자는 링커 부분에 의해 폴리뉴클레오티드에 연결될 수 있다. 임의로, 링커 부분은 비-뉴클레오티드성 링커 부분이다. 비-뉴클레오티드성 링커는, 예를 들어, 비염기성 (abasic) 잔기 (dSpacer), 올리고에틸렌글리콜, 예컨대 트리에틸렌글리콜 (스페이서 9) 또는 헥사에틸렌글리콜 (스페이서 18), 또는 알칸-디올, 예컨대 부탄디올이다. 스페이서 단위는 바람직하게는 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트 결합에 의해 연결된다. 링커 단위는 분자 내에 오직 1 회만 나타날 수 있거나, 예를 들어, 포스포디에스테르, 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트, 또는 아미드 연결을 통해 수 회 도입될 수 있다.
전형적인 컨주게이션 프로토콜은 서열의 하나 이상의 위치에서 아미노링커를 가지고 있는 폴리뉴클레오티드의 합성을 수반하나, 링커는 필요하지 않다. 이후 아미노기는 적합한 커플링 또는 활성화 시약을 사용하여 콘쥬게이트가 되는 분자와 반응한다. 컨주게이션 반응은 고체 지지체에 여전히 결합된 폴리뉴클레오티드로 또는 용액 상 내 폴리뉴클레오티드의 후속 분할로 수행될 수 있다. HPLC 에 의한 개질된 폴리뉴클레오티드의 정제는 전형적으로 순수한 재료를 산출한다.
일부 구현예에서, 연결 기는 핵단량체 (nucleomonomer) 에 부착될 수 있고, 수송 펩티드는 링커에 공유 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 수송 펩티드에 대한 부착 부위 모두로서 기능할 수 있고, 뉴클레아제에 대항하는 안정성을 제공할 수 있다. 적합한 링커의 예에는 치환 또는 미치환된 C1-C20 알킬 사슬, C2-C20 알케닐 사슬, C2-C20 알키닐 사슬, 펩티드, 및 헤테로원자 (예를 들어, S, O, NH, 등) 가 포함된다. 기타 예시적인 링커에는 2-작용성 가교제, 예컨대 술포숙신이미딜-4-(말레이미도페닐)-부티레이트 (SMPB) (예를 들어, Smith et al. Biochem J 1991.276: 417-2 참조) 가 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 제공된 올리고뉴클레오티드는 유전자를 세포 내로 전달하기 위한 수용체-매개 세포내섭취 메카니즘을 이용하는 분자 콘쥬게이트로서 합성된다 (예를 들어, Bunnell et al. 1992. Somatic Cell and Molecular Genetics. 18:559, 및 그곳에 언급된 참조문헌 참조).
표적화제
일부 구현예에서, 제공된 조성물은, 조성물 및/또는 내부의 개별적인 올리고뉴클레오티드와 연합된 하나 이상의 표적화제를 포함한다. 예시적인 이러한 표적화제는 상기 그리고 추가로 본원에 기재되어 있다. 구절 "표적화제" 및 "표적화 부분" 은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
올리고뉴클레오티드 및/또는 이의 조성물의 전달은 종종 올리고뉴클레오티드를 세포 수용체로 표적화함으로써 개선될 수 있다. 표적화 부분은 올리고뉴클레오티드에 콘쥬게이트화될 수 있거나 또는 올리고뉴클레오티드에 연결된 운반체 기 (즉, 폴리(L-라이신) 또는 리포좀) 에 부착될 수 있다. 상기 방법은 특이적 수용체-매개 세포내섭취를 나타내는 세포에 대해 적합하다.
예를 들어, 6-포스포만노실화 단백질에 대한 올리고뉴클레오티드 콘쥬게이트는 자유 올리고뉴클레오티드보다 만노오스 6-포스페이트 특이적 수용체를 발현하는 세포에 의해 20 배 더욱 효과적으로 내재화된다. 올리고뉴클레오티드는 또한 생분해가능 링커를 사용하는 세포 수용체에 대한 리간드와 커플링될 수 있다. 또다른 예에서, 전달 구축물은 비오티닐화 올리고뉴클레오티드와 단단한 복합체를 형성하는 만노실화 스트렙타비딘이다. 만노실화 스트렙타비딘은 비오티닐화 올리고뉴클레오티드의 내재화를 20-배 증가시키는 것으로 밝혀졌다 (Vlassov et al. 1994. Biochimica et Biophysica Acta 1197:95-108).
RNA 간섭 분야는 생물학적 과정 연구에 변혁을 일으켰다. 상기 도구는 소형 억제성 RNA (siRNA), 소형 헤어핀 RNA (shRNA) 및 리보자임을 포함한다. RNA 간섭 기술이 성장함에 따라, 입증된 RNA 표적 서열 및 사용하기 위한 시약의 목록도 성장하고 있다. 본 출원에 의해 포함되는 제공된 조성물 및 방법은 이러한 표적 서열 각각에 쉽게 적용될 수 있다. 입증된 siRNA 표적 서열의 데이터베이스 및 RNA 간섭 실험에 사용될 수 있는 키트 및 시약에 대한 링크에 대해서는, 예를 들어, http://www.rnainterference.org/index.html 을 참조한다. 본 발명을 위해 유용한 예시적 siRNA 표적 서열은 첨부된 부록 (A) 에 제공된다.
면역조절성 올리고뉴클레오티드
일부 구현예에서, 제공된 조성물은 면역조절성 올리고뉴클레오티드이거나 면역조절성 올리고뉴클레오티드로서 작용하는 하나 이상의 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 면역조절제, 즉, 대상에게 투여될 때 면역 반응을 조절 또는 규제할 수 있는 작용제일 수 있다. 이러한 작용제에 의해 도출되는 면역 반응은 선천적 및/또는 적응성 면역 반응일 수 있다. 면역계는 척추동물의 좀더 선천적 면역계, 및 후천적 적응성 면역계로 나뉘며, 후천적 적응성 면역계는 체액성 세포 성분으로 추가로 나뉘어진다. 일부 구현예에서, 면역 반응은 점막성일 수 있다. 본원에 기재된 면역조절성 모티프는 ODN 클래스, 예컨대 A 클래스, B 클래스, C 클래스, E 클래스, T 클래스 및 P 클래스를 포함하는 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 이전에 기재된 클래스의 문맥에서 사용될 수 있다.
본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 면역촉진 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 "CpG 디뉴클레오티드" 를 포함한다. CpG 디뉴클레오티드는 메틸화 또는 비메틸화될 수 있다. 하나 이상의 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 함유하는 면역촉진 올리고뉴클레오티드는, 비메틸화 사이토신-구아닌 디뉴클레오티드 서열 (즉, 3' 구아노신에 이은 및 포스페이트 결합에 의해 연결된 비메틸화 5' 시티딘) 을 함유하고 면역계를 활성화시키는 올리고뉴클레오티드 분자이고; 예컨대, 면역촉진 올리고뉴클레오티드는 CpG 올리고뉴클레오티드이다. CpG 올리고뉴클레오티드는 그 내용이 본원에 참조로서 인용된, U.S. Patent Nos. 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371 ; 6,239,116; 및 6,339,068 을 포함하는 다수의 발행된 특허, 공개된 특허 출원, 및 기타 공개문헌에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체 (Toll-like receptor) 에 대한 작동제이거나 이것으로서 작용한다. 일부 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 에 대한 작동제이거나 이것으로서 작용한다. 일부 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체에 대한 길항제이거나 이것으로서 작용한다. 일부 구현예에서, 이용된 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 에 대한 길항제이거나 이것으로서 작용한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 의해 포함되는 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 입체-랜덤 대응부와 비교하여, 각각의 수용체/표적에 대한 보다 큰 친화성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명에 의해 포함되는 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 입체-랜덤 대응부와 비교하여, 집단 사이의 가변도를 줄인, 특정 임상 범주를 충족시키는 대상에게 투여될 때 하나 이상의 면역 반응을 도출한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 의해 포함되는 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 입체-랜덤 대응부와 비교하여, 특정 임상 범주를 충족시키는 대상에게 투여될 때 적은 정도의 독성 부작용 또는 거의 없는 부작용을 야기한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드에는 CpG 디뉴클레오티드 모티프가 없다. CpG 디뉴클레오티드가 없는 상기 올리고뉴클레오티드는 비-CpG 올리고뉴클레오티드로서 언급되고, 이들은 비-CpG 면역촉진 모티프를 갖는다. 일부 구현예에서, 이들은 T-풍부 면역촉진 올리고뉴클레오티드, 예컨대 적어도 80% T 를 갖는 올리고뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 B 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다.
"B 클래스" ODN 은 B 세포를 활성화시키는데 강력하나, IFN-α 의 유도 및 NK 세포 활성화에서는 비교적 약하다. B 클래스 CpG 올리고뉴클레오티드는 전형적으로는 완전히 안정화되고, 특정한 바람직한 염기 문맥 내에서 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, U.S. Patent Nos. 6,194,388; 6,207,646; 6,214,806; 6,218,371; 6,239,116; 및 6,339,068 을 참조한다.
또다른 클래스는 IFN-α 유도 및 NK 세포 활성화에 강력하나 B 세포의 자극에는 비교적 약하고; 상기 클래스는 "A 클래스" 로 불린다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 A 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. A 클래스 CpG 올리고뉴클레오티드는 전형적으로 5' 및 3' 말단에 안정화된 폴리-G 서열 및 6 개 이상의 뉴클레오티드의 회귀성 포스포디에스테르 CpG 디뉴클레오티드-함유 서열을 갖는다. 예를 들어, 공개된 특허 출원 PCT/US00/26527 (WO 01/22990) 을 참조한다.
그러나 CpG 올리고뉴클레오티드의 또다른 클래스는 B 세포 및 NK 세포를 활성화시키고, IFN-α 를 유도하고; 상기 클래스는 C-클래스로 불린다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 C 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. 2 개 이상의 구별되는 모티프를 함유하는 "C 클래스" 면역촉진 올리고뉴클레오티드는 면역계의 세포에 대해 독특하고 바람직한 자극성 효과를 갖는다. 상기 ODN 중 일부는 종래의 "자극성" CpG 서열 및 "GC-풍부" 또는 "B-세포 중화" 모티프를 모두 갖는다. 상기 조합 모티프 올리고뉴클레오티드는, B 세포 활성화 및 수지상 세포 (DC) 활성화의 강한 유도제인, 전통적인 "클래스 B" CpG ODN 과 연합된 상기 효과와, IFN-α 및 자연 살해 (NK) 세포 활성화의 강한 유도제이나, B-세포 및 DC 활성화의 비교적 저조한 유도제인 면역 자극성 올리고뉴클레오티드 ("클래스 A" CpG ODN) 의 더욱 최근에 기재된 클래스와 연합된 상기 효과 사이 어딘가에 놓인 면역 자극 효과를 갖는다. Krieg AM et al. (1995) Nature 374:546-9; Ballas ZK et al. (1996) J Immunol 157:1840-5; Yamamoto S et al. (1992) J Immunol 48:4072-6. 바람직한 클래스 B CpG ODN 이 종종 포스포로티오에이트 백본을 갖고 바람직한 클래스 A CpG ODN 이 혼합된 또는 키메라성 백본을 갖지만, 조합 모티프 면역 자극성 올리고뉴클레오티드의 C 클래스는 안정화된, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 키메라성, 또는 포스포디에스테르 백본을 가질 수 있고, 일부 바람직한 구현예에서, 이들은 반-연성 백본을 갖는다. 상기 클래스는 전체 내용이 본원에 참조로서 인용된, 2002 년 8 월 19 일에 출원된 미국 특허 출원 USI 0/224,523 에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 E 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. "E 클래스" 올리고뉴클레오티드는 IFN-알파의 분비를 유도하는 향상된 능력을 갖는다. 상기 ODN 은 YGZ 모티프의 친유성 치환된 뉴클레오티드 유사체 5' 및/또는 3' 를 갖는다. E 클래스 식의 화합물은, 예를 들어, 하기 친유성 치환된 뉴클레오티드 유사체 중 임의의 것일 수 있다: 치환된 피리미딘, 치환된 우라실, 소수성 T 유사체, 치환된 톨루엔, 치환된 이미다졸 또는 피라졸, 치환된 트리아졸, 5-클로로-우라실, 5-브로모-우라실, 5-요오도-우라실, 5-에틸-우라실, 5-프로필-우라실, 5-프로피닐-우라실, (E)-5-(2-브로모비닐)-우라실, 또는 2.4-디플루오로-톨루엔. E 클래스 올리고뉴클레오티드는 가특허 출원 US 60/847,811 에 적어도 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 T 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. "T 클래스" 올리고뉴클레오티드는 B 클래스 올리고뉴클레오티드와 유사한 IL-10 의 수준을 유도하는 능력을 보유하면서, 본 발명의 ODN 에서와 같이 개질되지 않았을 때 B 클래스 또는 C 클래스 올리고뉴클레오티드보다 낮은 수준의 IFN-알파의 분비 및 IFN-관련 사이토카인 및 케모카인의 분비를 유도한다. T 클래스 올리고뉴클레오티드는 전체 내용이 본원에 참조로서 인용된 US 특허 출원 No. 11/099,683 에 적어도 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 P 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. "P 클래스" 면역촉진 올리고뉴클레오티드는 5TLR 활성화 도메인, 2 개의 이중체 형성 영역 및 임의의 스페이서 및 3' 꼬리를 포함하여 여러 개의 도메인을 갖는다. 상기 클래스의 올리고뉴클레오티드는 일부 예에서 C-클래스보다 훨씬 높은 수준의 IFN-α 분비를 유도하는 능력을 갖는다. P-클래스 올리고뉴클레오티드는 시험관 내 및/또는 생체 내에서 연쇄체 (concatamer) 로 자발적으로 자가-어셈블리하는 능력을 갖는다. 상기 분자의 작용 방법에 대해 임의의 특정 이론에 의해 구애됨 없이, 하나의 잠재적인 가설은 상기 특성이 P-클래스 올리고뉴클레오티드에게 특정 면역 세포 내부에서 TLR9 를 더욱 크게 가교결합하는 능력을 부여하여, CpG 올리고뉴클레오티드의 이전에 기재된 클래스에 비해, 구별되는 패턴의 면역 활성화를 유도한다는 것이다. TLR9 수용체의 가교 결합은 플라스마사이토이드 (plasmacytoid) 수지상 세포 내의 유형 I IFNR 피드백 루프를 통한 더욱 강한 IFN-α 분비의 활성화를 유도할 수 있다. P 클래스 올리고뉴클레오티드는 적어도 US 출원 일련 번호 11/706,561 에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 면역자극성 올리고뉴클레오티드는 S 클래스 면역조절성 올리고뉴클레오티드이다. 본 발명의 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 면역억제 올리고뉴클레오티드일 수 있다. 상기 기재된 면역조절성 모티프는 ODN 클래스를 포함하는 면역억제 올리고뉴클레오티드의 이전에 기재된 클래스, 예컨대 "S 클래스" 의 문맥에서 사용될 수 있다. 억제성, 또는 S 클래스, ODN 은 면역자극을 억제하는 것이 요망될 때에는 언제든 유용하다. 억제성 ODN 은 패혈성 쇼크, 염증, 알러지, 천식, 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환 (GvHD), 자가면역 질환, Th1- 또는 Th2-매개 질환, 박테리아 감염, 기생충 감염, 자연 유산, 및 종양의 예방 및 치료에 유용할 수 있다. 억제성 ODN 은 관련 TLR 을 발현하는 모든 세포의 활성화를 억제하기 위해, 더욱 구체적으로는 항원-제시 세포, B 세포, 플라스마사이토이드 수지상 세포 (pDC), 단핵구, 단핵구-유래 세포, 호산구, 및 호중구의 활성화를 억제하기 위해 사용될 수 있다. S 클래스 ODN 은 추가로 적어도 US 출원 일련 번호 10/977,560 에 기재되어 있다.
본 발명에 따르면, 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 안정화 FANA 퓨린 뉴클레오티드(들) 외에 안정화된 뉴클레오티드사이 연결의 백본을 가질 수 있거나, 안정화된 및 포스포디에스테르 뉴클레오티드 연결의 키메라성 백본을 가질 수 있다. "안정화된 뉴클레오티드사이 연결" 은 포스포디에스테르 뉴클레오티드사이 연결에 비해, 생체 내 분해 (예를 들어, 엑소- 또는 엔도-뉴클레아제를 통해) 에 비교적 저항성인 뉴클레오티드사이 연결을 의미할 것이다. 일부 구현예에서, 안정화된 뉴클레오티드사이 연결에는, 제한 없이 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 메틸포스포네이트, 메틸포스포로티오에이트, 포스포노아세테이트, Rp-포스포로티오에이트, Sp-포스포로티오에이트, 보라노포스페이트, 또는 3'-티오포름아세탈, 또는 이의 조합이 포함된다. 기타 안정화된 올리고뉴클레오티드에는 비이온성 DNA 유사체, 예컨대 알킬- 및 아릴-포스페이트 (하전된 포스포네이트 산소가 알킬 또는 아릴 기로 대체됨), 포스포디에스테르 및 알킬포스포트리에스테르 (하전된 산소 부분이 알킬화됨) 이 포함된다. 디올을 함유하는 올리고뉴클레오티드, 예컨대 테트라에틸렌글리콜 또는 헥사에틸렌글리콜은 한쪽 말단 또는 양쪽 말단에서, 뉴클레아제 분해에 대해 실질적으로 저항성인 것으로 보여졌다.
본 발명에 따라 본원에 더욱 상세히 기재되는 바와 같이, 상기 및 기타 개질은 입체특이적 올리고뉴클레오티드 분자를 수득하도록 올리고뉴클레오티드 내에 미리 결정된 위치(들)/패턴(들) 에서 선별적으로 도입될 수 있다. 게다가, 본 발명에 따르면, 매우 높은 순도 (예를 들어, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 본질적으로 100%) 로 다수의 이러한 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 수득할 수 있다. 따라서, 하나 이상의 미리 결정된 유형의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 생체 내 투여에 적합하다. 이것은 조성물 내 높은 정도의 구조적 순도의 올리고뉴클레오티드 (조성물이 단일의 구체화된 유형의 올리고뉴클레오티드를 포함함) 로 인해, 제공된 조성물은 대상에 투여되는 경우, 개선된생물학적 활성, 증가된 효능, 반응에서 감소된 가변성, 및/또는 감소된 원치 않는 부작용을 도출할 수 있다는 것으로 생각된다.
따라서, 본 발명의 이용된 올리고뉴클레오티드는 약학 조성물로 제형화되는 경우 치료제로서 특히 유용하다. 일부 구현예에서, 이러한 치료제는 면역조절제이다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절제는 면역촉진제이다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절제는 면역저해 (또는 면역억제) 제이다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절제는 아쥬반트로서 작용한다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절제는 염증성 Th2 반응을 억제할 수 있는 Th1 유형 사이토카인을 유도함으로써 Th2 유형 면역 반응을 Th1 유형 면역 반응으로 이동시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 유전자 발현을 조절하는 작용제로서 유용하다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 관심의 유전자, 예를 들어, 질환 또는 질병과 연관된 유전자를 스플라이싱 할 수 있는 작용제로서 유용하다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 RNA 스플라이싱을 조절하는 작용제로서 유용하다.
예를 들어, 이러한 올리고뉴클레오티드의 일부 구현예는 하나 이상의 CpG 디뉴클레오티드 모티프를 포함하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 비메틸화 CpG 디뉴클레오티드 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 클래스 A (유형 D) 올리고뉴클레오티드로서 분류된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 클래스 B (유형 K) 올리고뉴클레오티드로서 분류된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 클래스 C 올리고뉴클레오티드로서 분류된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 클래스 P 올리고뉴클레오티드로서 분류된다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 회귀성 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 "덤벨-유사" 구조를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 "Y" 형태 구조, 또는 이의 다중체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG-함유 올리고뉴클레오티드는 사면체 구조를 형성할 수 있다. 리뷰를 위해, 예를 들어: Bode et al. (2011) Expert Rev. Vaccines 10(4): 499-511; Hanagata (2012) Int. J. Nanomedicine 7:2181-95 를 참조한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체(들) 을 발현하는 세포 상에 면역조절 효과를 도출한다. 일부 구현예에서, 이러한 올리고뉴클레오티드에 반응하는 표적 세포에는 항원-제시 세포 (APC), 항원-특이적 T 및 B 세포, 세포독성 T 림프구 (CTL), 자연 살해 (NK) 세포, 및 수지상 세포 (DC) 가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 면역조절 효과는 이러한 올리고뉴클레오티드를 인지하는 수용체 또는 수용체들을 발현하는 세포에 의해 도출되는 직접적인 효과이다. 일부 구현예에서, 이러한 올리고뉴클레오티드는 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 를 리간드로서 발현하는 세포 상에 면역조절 효과를 도출한다. 예를 들어, 본 발명의 일부 구현예는 하나 이상의 톨-유사 수용체의 작동제로서 작용하는 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명의 일부 구현예는 하나 이상의 톨-유사 수용체의 길항제로서 작용하는 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역조절 효과는 이러한 올리고뉴클레오티드에 직접적으로 반응할 필요가 없는 또는 이러한 수용체를 발현하는 세포를 수반하여, 다운스트림에서 일어나는 간접 효과이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고뉴클레오티드는 이들이 인간 B 세포 및 플라스마사이토이드 수지상 세포를 TLR-9 를 통해 직접적으로 활성화시키는 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드는 자연 살해 세포, T 세포 및 단핵구/대식세포의 성숙 및 증식을 간접적으로 지탱하는 것을 특징으로 한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고뉴클레오티드는 Th1-유형 및 전염증성 사이토카인, 케모카인 및 다중반응성 IgM 의 생성을 특징으로 하는 면역 반응을 촉발시킨다.
일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고뉴클레오티드는 통상의 단백질 항원 및 펩티드-기반 백신의 면역원성이 이러한 올리고뉴클레오티드에 의해 향상되는 것을 특징으로 한다. 특정 이론에 구애됨 없이, 이러한 아쥬반트 효과는 전문적인 항원-제시 세포의 개선된 기능 및 체액성 및 세포성 백신-특이적 면역 반응의 산출되는 생성을 통해 매개되는 것으로 여겨진다.
일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고뉴클레오티드는 CpG 올리고뉴클레오티드가 규모를 증가시키고 백신유도된 반응의 발달을 가속화시키는 것을 특징으로 한다. 이들은 또한 기억의 유도를 개선하여, 체액성 및 세포성 면역력의 지속 동안 확장된다.
일부 구현예에서, 본 발명에 대해 유용한 CpG 올리고뉴클레오티드는 이들이 감소된 면역 기능을 가진 대상의 그룹 (예를 들어, 환자 집단), 예컨대 노인 및 억제된 면역계를 가진 그룹에서 면역력을 증강시키는 것을 특징으로 한다. 이들은 전신적으로 또는 점막적으로 투여되는 경우 효과적이다. 혼합된 키랄성 (예를 들어, 키랄적으로 순수하지는 않음) 의 CpG 올리고뉴클레오티드를 사용하는 전임상 및 임상 실험은 CpG 올리고뉴클레오티드가 감염성 질환 및 암을 표적하는 백신의 면역원성을 증강시킬 수 있음을 입증한다. 게다가, 임상 실험은 CpG 올리고뉴클레오티드가 백신 아쥬반트로서 투여되는 경우 합리적으로 안전하다는 것을 나타낸다.
본 발명에 따라 제조되는 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 다수의 치료적 적용에 유용하다. 그러므로, 이용된 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 적합한 약학 조성물로 제형화될 수 있다. 이러한 약학 조성물은 적합한 투여 경로에 의해 본원에 추가로 상세히 기재되는 바와 같이, 질환, 장애 또는 상태를 치료하기에 유효한 양으로 대상에게 투여될 수 있다. 본 발명에 따르면, 면역촉진 올리고뉴클레오티드의 유효량은 면역계 (예를 들어, 향상된 면역 반응) 를 증강시킴으로써 이익을 얻을 것 같은 대상에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 임상적 이익은 예를 들어, 리간드의 이의 톨-유사 수용체 단백질에 대한 결합을 통해, 그의 표적 면역 세포에 작용하는 면역조절성 올리고뉴클레오티드에 의해 직접 부여된다. 일부 구현예에서, 임상적 이익은 대상의 면역계의 전반적인 증강에 의해 적어도 일부 간접적으로 달성된다.
본원에 사용되는, 용어 "유효량" 및 "유효 투여량" 은 그의 의도되는 목적(들), 즉, 허용가능한 이익/위험 비로 조직 또는 대상에서의 원하는 생물학적 또는 약학적 반응을 충족시키기에 충분한 화합물 또는 조성물의 임의의 양 또는 투여량을 말한다. 관련된 의도되는 목적은 객관적 (즉, 일부 시험 또는 마커에 의해 측정가능함) 또는 주관적 (즉, 대상이 효과의 징후 또는 느낌을 받음) 일 수 있다. 일부 구현예에서, 치료학적 유효량은 (예를 들어, 명백한 증상, 질병 진행/병기, 유전적 프로파일 등에 의해 측정되는 바와 같은) 질환 또는 장애에 대해 특정의 임상적 범주를 충족하는 대상의 집단에게 투여되는 경우, 통계적으로 유의한 치료적 반응이 상기 집단 중에서 수득되는 양이다. 치료학적 유효량은 통상 다중 단위 투여량을 포함할 수 있는 투여 섭생으로 투여된다. 임의의 특정 약학제의 경우, 치료학적 유효량 (및/또는 효과적인 투여 섭생 내의 적합한 단위 투여량) 은 예를 들어, 투여 경로, 기타 약학제와의 조합에 따라 다를 수 있다. 일부 구현예에서, 임의의 특정 환자에 대한 특이적 치료학적 유효량 (및/또는 단위 투여량) 은 치료하고자 하는 질환 및 질환의 경중도; 사용되는 특이적 약학제의 활성; 사용되는 특이적 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강상태, 성별 및 식이요법; 사용되는 특이적 약학제의 투여 시간, 투여 경로, 및/또는 배출 또는 대사 속도; 치료 기간; 및 의학계에 잘 공지된 기타 인자를 비롯한 다양한 인자에 따라 다를 수 있다. 당업자는 본 발명의 일부 구현예에서, 단위 투여량이 긍정적인 결과와 상관된 투여량 섭생의 문맥에서 투여에 적합한 양을 함유하는 경우, 단위 투여량이 유효량을 함유하는 것으로 고려될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 제조된 CpG 올리고데옥시뉴클레오티드는 따라서 이들의 키랄 순도로 인해 개선된 효능 및 면역조절 효과를 발휘할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 유효량은 덜-순수한 대응부의 유효량보다 적다.
일부 구현예에서, 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 건강한 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 면역촉진 올리고뉴클레오티드 조성물은 면역촉진 올리고뉴클레오티드가 아쥬반트로서 작용하는, 백신의 일부로서 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 면역촉진 올리고뉴클레오티드 조성물은 억제된 (예를 들어, 저항력이 저하된 (compromised)) 면역계를 가진 대상에게 투여된다. 일부 구현예에서, 면역계가 억제되고 통상의 백신에 대해 충분히 반응하지 않는 대상은, 본 발명에 의해 포함되는 면역촉진 올리고뉴클레오티드를 포함하는 백신에 반응한다. 일부 구현예에서, 이러한 백신으로부터 이익을 볼 수 있는 대상은 감염, 예컨대 바이러스 감염, 예를 들어, HIV, HBV, HCV, 등과 연관된 억제된 면역계를 갖는다.
본 발명은 면역 반응의 자극 또는 억제에 의해 치료될 수 있는 상태를 가진 대상의 치료를 위한 본원에 포함되는 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 용도를 포함한다. 따라서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 제한 없이, 감염, 암, 알러지, 천식, 염증성 상태, 자가면역 질환, 및 이의 임의의 조합을 포함하는 질환 또는 상태의 치료에 유용하다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 본 발명의 일부 양상에서, 임상 상태를 발달시킬 위험이 있는 대상의 치료에 유용하다. 비-제한적인 임상 상태에는 알러지, 천식, 감염성 유기체로의 감염, 암, 염증, 및 자가면역 질환이 포함된다. 본원에 사용되는 바와 같은 위험이 있는 대상은 감염 야기 병원체 또는 암 또는 알러지원에 노출될 임의의 위험 또는 암을 발달시킬 위험을 가진 대상이다. 예를 들어, 위험이 있는 대상은 특정 유형의 감염성제가 발견된 지역을 여행할 계획을 가진 대상일 수 있고, 또는 그의 라이프스타일을 통해 또는 의료적 처치가 감염성 유기체를 함유할 수 있는 체액에 노출되거나 유기체에 직접 노출되는 대상일 수 있고, 또는 심지어 감염성 유기체 또는 알러지원이 확인된 지역에서 살고있는 임의의 대상일 수 있다. 감염을 발달시킬 위험이 있는 대상은 또한 의료 기관이 특정 감염성 유기체 항원으로의 백신접종을 권고하는 일반적인 집단을 포함한다. 항원이 알러지원이고 대상이 상기 특정 항원에 대한 알러지 반응을 발달시키며 대상이 항원에 노출될 수 있는 경우 (즉, 꽃가루 날리는 계절 동안), 상기 대상은 항원에 대한 노출 위험이 있다. 알러지 또는 천식을 발달시킬 위험이 있는 대상은 알러지 또는 천식을 갖는 것으로 확인되었으나 면역조절성 올리고뉴클레오티드 치료 동안 활성 질환을 갖지 않는 대상 뿐 아니라, 유전자 또는 환경적 요인 때문에 상기 질환의 발달 위험이 있는 것으로 고려되는 대상을 포함한다. 암을 발달시킬 위험이 있는 대상은 암을 발달시킬 높은 개연성을 가진 대상이다. 상기 대상은 예를 들어 유전적 비정상을 가진 대상, 암을 발달시킬 높은 가망성과 상관 관계가 있는 것으로 입증된 것의 존재 및 발암제, 예컨대 담배, 석면, 또는 기타 화학적 독소에 노출된 대상, 또는 이전에 암에 대해 치료 받고 명백한 재발이 있는 대상을 포함한다. 암을 발달시킬 위험이 있는 대상을 대상이 발달시킬 위험이 있는 암의 유형에 대해 특이적인 항원 및 CpG 면역촉진 올리고뉴클레오티드로 처리하는 경우, 대상은 이들이 발달하면서 암 세포를 살해할 수 있다. 대상에서 종양이 형성되기 시작하는 경우, 대상은 종양 항원에 대항하는 특이적 면역 반응을 발달시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 천식, 알러지, 및 관련 상태를 포함하는 면역 질환 또는 장애를 갖는 대상을 치료하는데 유용하다.
알러지를 갖는 대상은 알러지원에 반응하여 알러지 반응을 보이거나 또는 발달시킬 위험을 가진 대상이다. 알러지는 물질 (알러지원) 에 대한 획득된 과민감성을 말한다. 알러지 상태에는 습진, 알러지성 비염 또는 코감기, 건초열, 결막염, 기관지 천식, 심마진 (두드러기) 및 식품 알러지, 및 기타 아토피성 상태를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일러지는 일반적으로 무해한 알러지원에 대항하는 IgE 항체 발생에 의해 야기된다. 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 전신 또는 점막 투여에 의해 유도되는 사이토카인은 대부분 Th1 (예는 IL-12, IP-10, IFN-α 및 IFN-γ 임) 라고 불리는 클래스이고, 이들은 체액성 및 세포성 면역 반응 모두를 유도한다. IL-4 및 IL-5 사이토카인의 생성과 연관된 다른 대부분의 유형의 면역 반응은 Th2 면역 반응이라고 불린다. 일반적으로, 알러지성 질환은 Th2 유형 면역 반응에 의해 매개되는 것으로 보인다. 우세한 Th2 (이것은 IgE 항체의 생성 및 알러지와 연관됨) 로부터 균형잡힌 Th2/Th1 반응 (이것은 알러지 반응에 대항하여 보호성임) 으로 대상에서의 면역 반응을 이동시키는 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 능력에 근거하여, 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 면역 반응을 유도하기 위한 유효 투여량은 천식 및 알러지를 처리하거나 예방하기 위해 대상에게 투여될 수 있다.
따라서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 알러지성 및 비-알러지성 상태, 예컨대 천식의 치료에 상당한 치료적 유용성을 갖는다. Th2 사이토카인, 특히 IL-4 및 IL-5 는 천식이 있는 대상의 기도에서 상승된다. 상기 사이토카인은 IgE 동종형 스위칭, 호산구 주화성 및 활성화 및 비만 세포 성장을 포함하는 천식의 염증성 반응의 중요한 양상을 촉진한다. Th1 사이토카인, 특히 IFN-γ 및 IL-12 는 Th2 클론의 형성 및 Th2 사이토카인의 생성을 억제할 수 있다. 천식은 염증, 기도의 좁혀짐 및 흡입제에 대한 기도의 증가된 반응성을 특징으로 하는 호흡계 질환을 말한다. 천식은 아토피성 또는 알러지성 증상에만 연관되지는 않지만, 흔하다.
제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 또한 항-알러지 요법과 함께 투여될 수 있다. 알러지의 치료 또는 예방을 위한 통상의 방법은 알러지 의약 또는 탈감작 요법의 사용을 수반하였다. 알러지의 치료 또는 예방을 위한 일부 발달된 요법에는 중화 항-IgE 항체의 사용을 포함한다. 알러지 반응의 화학적 매개체의 효과를 차단하는 항-히스타민 및 기타 약물은 알러지 증상의 중증도를 조절하는 것을 돕지만, 알러지 반응을 예방하지는 못하고 후속 알러지 대응에 영향을 주지는 못한다. 탈감작 요법은 알러지원에 대항하는 IgG-유형 대응을 유도하기 위해, 피부 아래에 통상 주사에 의해 소용량의 알러지원을 제공함으로써 수행한다. IgG 항체의 존재는 IgE 항체의 유도로부터 야기되는 매개체의 생성을 중화하는 것을 돕는다고 여겨진다. 처음에, 대상을 심각한 반응의 유도를 피하기 위해 매우 적은 용량의 알러지원으로 치료하고, 용량을 천천히 증가시킨다. 상기 유형의 요법은 위험한데, 대상에게 실제로, 알러지 대응을 야기하고 심각한 알러지 반응을 유발할 수 있는 화합물을 투여하기 때문이다.
항-알러지 의약에는 항-히스타민, 코르티코스테로이드, 및 프로스타글란딘 유도제가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 항-히스타민은 비만 세포 또는 호염기구에 의해 방출되는 히스타민에 반대 작용을 하는 화합물이다. 상기 화합물은 당업계에 잘 공지되어 있고 알러지의 치료에 통상 사용된다. 항-히스타민에는 아크리바스틴, 아스테미졸, 아자타딘, 아젤라스틴, 베타타스틴, 브롬페니라민, 부클리리진, 세티리진, 세티리진 유사체, 클로르페니라민, 클레마스틴, CS 560, 사이프로헵타딘, 데슬로라타딘, 덱스클로르페니라민, 에바스틴, 에피나스틴, 펙소페나딘, HSR 609, 히드록시진, 레보카바스틴, 로라티딘, 메트스코폴라민, 미졸라스틴, 노르아스테미졸, 페닌다민, 프로메타진, 피릴라민, 테르페나딘, 및 트라닐라스트가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 코르티코스테로이드에는 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 베클로메타손, 부데소나이드, 덱사메타손, 플루니솔라이드, 플루티카손 프로피오네이트, 및 트리암시놀론이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 덱사메타손이 항-염증 작용을 갖는 코르티코스테로이드이지만, 이것은 흡입된 형태로 알러지 또는 천식의 치료를 위해서는 보통 사용되지는 않는데, 이것이 고도로 흡수성이고, 유효 투여량에서 장기간 억제 부작용을 갖기 때문이다. 덱사메타손은 그러나, 본 발명의 조성물과 조합으로 투여되는 경우 부작용을 감소시키기 위해 적은 용량으로 투여될 수 있기 때문에, 알러지 또는 천식을 치료하기 위해 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드 사용과 연관된 일부 부작용에는 기침, 발성장애, 구강 아구창 (칸디다증), 및 높은 용량에서는, 전신적 영향, 예컨대 부신 기능 억제, 포도당 불내성, 골다공증, 뼈의 무균성 괴사, 백내장 형성, 성장 억제, 고혈압, 근력 저하, 피부 박화, 및 타박상이 생기기 쉬움이 포함된다. Barnes & Peterson (1993) Am Rev Respir Dis 148:S1-S26; 및 Kamada AK et al. (1996) Am J Respir Crit Care Med 153:1739-48.
본 발명에 따른 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물 및 방법은 단독으로 또는 천식의 치료에 유용한 다른 작용제 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 하나의 양상에서, 본 발명은 천식이 있는 대상의 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 양상에 따른 방법은 대상을 치료하기 위해 본 발명의 조성물의 유효량을 천식이 있는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 천식이 있는 대상의 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 상기 양상에 따른 방법에는 대상을 치료하기 위한 항-천식 요법 및 본 발명의 조성물의 유효량을 천식이 있는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "천식" 은 염증, 기도의 좁혀짐 및 흡입제에 대한 기도의 증가된 반응성을 특징으로 하는 호흡계 질환을 말한다. 천식은 아토피성 또는 알러지성 증상에만 연관되지는 않지만, 흔하다. 천식의 증상에는 기류 폐색으로부터 기인하는 재발성 천명 발생, 숨이 참, 흉부 긴장, 및 기침이 포함된다. 천식과 연관된 기도 염증은 다수의 생리학적 변화의 관찰을 통해 검출될 수 있다 (예컨대, 기도 상피의 황폐화, 기저막 아래의 콜라겐 침적, 부종, 비만 세포 활성화, 호중구, 호산구 및 림프구를 비롯한염증 세포 침윤). 기도 염증의 결과로서, 천식 환자는 종종 기도 과-반응성, 기류 제한, 호흡기 증상, 및 질환 만성화를 경험한다. 기류 제한은 급성 기관지수축, 기도 부종, 점액전 형성, 및 기도 리모델링, 종종 기관지 폐색을 일으키는 특징을 포함한다. 천식의 일부 경우에는, 폐 기능의 지속적인 비정상을 야기하는, 기저하 (sub-basement) 막 섬유증이 일어날 수 있다.
지난 수 년간의 연구는 천식이 기도 내에 상주하는 염증성 세포, 매개체, 및 기타 세포 및 조직 간의 복잡한 상호작용으로부터 야기되는 것 같음을 밝혀냈다. 비만 세포, 호산구, 상피 세포, 대식세포, 및 활성화된 T 세포 모두는 천식과 연관된 염증성 과정에 중요한 역할을 한다. Djukanovic R et al. (1990) Am Rev Respir Dis 142:434-457. 상기 세포가 국부 조직에 직접적으로 또는 간접적으로 작용할 수 있는 미리 형성된 및 새롭게 합성된 매개체의 분비를 통해 기도 기능에 영향을 줄 수 있는 것으로 여겨진다. 또한 T 림프구의 서브집단 (Th2) 이 선택적 사이토카인을 분비하고 질환 만성화를 성립시킴으로써 기도 내 알러지 염증 조절에 중요한 역할을 하는 것으로 인지된다. Robinson DS et al. (1992) N Engl J Med 326:298-304.
천식은 발달시 상이한 병기로 발생하고, 급성, 아급성, 또는 만성과 같이 증상의 정도에 따라 분류될 수 있는 복잡한 질환이다. 급성 염증성 반응은 기도 내로의 세포의 초기 모집과 연관된다. 아급성 염증성 반응은 세포의 모집 뿐 아니라, 좀더 지속적인 패턴의 염증을 야기하는 상주 세포의 활성화를 수반한다. 만성 염증성 반응은 기도 내 지속적인 비정상을 야기할 수 있는, 지속적인 수준의 세포 손상 및 계속되는 복구 과정을 특징으로 한다.
"천식이 있는 대상" 은 염증, 기도의 좁혀짐 및 흡입제에 대한 기도의 증가된 반응성을 특징으로 하는 호흡계 질환이 있는 대상이다. 천식의 개시와 연관된 인자에는 알러지원, 저온, 운동, 바이러스 감염, 및 SO2 가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
상기 언급된 바와 같이, 천식은 적어도 부분적으로 Th2 사이토카인 IL-4 및 IL-5 뿐 아니라, IgE 에 대한 항체 동종형 스위칭을 특징으로 하는 Th2-유형의 면역 반응과 연관될 수 있다. Th1 및 Th2 면역 반응은 상호-조절성이어서, Th1-유형의 면역 반응으로의 면역 반응의 왜곡이 알러지를 포함하는 Th2-유형의 면역 반응을 예방 또는 경감시킬 수 있. 본 발명의 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 따라서 천식이 있는 대상을 치료하기 위해 그 자체가 유용할 수 있는데, 유사체가 Th1-유형의 면역 반응으로의 면역 반응을 왜곡할 수 있기 때문이다.
본 발명의 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 또한 천식 요법과 함께 투여될 수 있다. 천식의 치료 또는 예방을 위한 통상의 방법은 항-알러지 요법 (상기 기재됨) 및 흡입제를 포함하는 다수의 기타 작용제의 사용을 수반한다.
천식의 치료용 의약은 일반적으로 2 가지 카테고리, 빠른-경감 의약 및 장기간 조절 의약으로 나뉜다. 천식 환자는 지속적인 천식의 조절을 달성하고 유지하기 위해 일일 기반으로 장기간 조절 의약을 섭취한다. 장기간 조절 의약에는 항-염증제, 예컨대 코르티코스테로이드, 크로몰린 나트륨 및 네도크로밀; 장기-작용 기관지확장제, 예컨대 장기-작용 β2-작동제 및 메틸크잔틴; 및 류코트리엔 개질제가 포함된다. 빠른-경감 의약에는 단기-작용 β2 작동제, 항콜린제, 및 전신성 코르티코스테로이드가 포함된다. 각각의 상기 약물과 연관된 많은 부작용이 있고 상기 약물 중 어느 것도 단독으로 또는 조합으로 천식을 예방하거나 완전히 치료할 수는 없다.
항-천식 의약에는 PDE-4 억제제, 기관지확장제/베타-2 작동제, K+ 채널 개방제, VLA-4 길항제, 뉴로킨 길항제, 트롬복산 A2 (TXA2) 합성 억제제, 크산틴, 아라키돈산 길항제, 5 리폭시게나아제 억제제, TXA2 수용체 길항제, TXA2 길항제, 5-리폭스 활성화 단백질의 억제제, 및 프로테아제 억제제가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
기관지확장제/β2 작동제는 기관지확장 또는 평활근 이완을 야기하는 화합물의 클래스이다. 기관지확장제/β 2 작동제에는 살메테롤, 살부타몰, 알부테롤, 테르부탈린, D2522/포르모테롤, 페노테롤, 비톨테롤, 피르부에롤 메틸크잔틴 및 오르시프레날린이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 장기-작용 β2 작동제 및 기관지확장제는 항-염증성 요법에 더해 증상의 장기-작용 예방에 사용되는 화합물이다. 장기-작용 β2 작동제에는 살메테롤 및 알부테롤이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 화합물은 통상 코르티코스테로이드와 조합으로 사용되고, 일반적으로 임의의 염증성 요법 없이는 사용되지 않는다. 이들은 과용량에서 심계항진, 백본근 미진, 저칼륨증, 및 QTc 간격의 연장과 같은 부작용과 연관된다.
예를 들어 테오필린을 포함하는 메틸크잔틴은 증상의 장기간 제어 및 예방을 위해 사용된다. 상기 화합물은 포스포디에스테라아제 억제 및 아마도 아데노신 길항작용을 산출하는 기관지확장을 야기한다. 용량-관련 급성 독성은 상기 유형의 화합물과의 특정 문제이다. 그 결과, 대사 소거율의 개인적인 차이로부터 발생하는 독성 및 좁은 치료 범위를 설명하기 위해 정기적인 혈청 농도가 모니터링되어야만 한다. 부작용에는 심계항진, 빈박성부정맥, 메스꺼움 및 구토, 중추신경계 자극, 두통, 발작, 토혈, 과혈당증 및 저칼륨증이 포함된다. 단기-작용 β2 작동제에는 알부테롤, 비톨테롤, 피르부테롤, 및 테르부탈린이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 단기-작용 β2 작동제의 투여와 연관된 부작용 중 일부에는 심계항진, 백본근 미진, 저칼륨증, 증가된 락트산, 두통 및 과혈당증이 포함된다.
크로몰린 나트륨 및 네도크로밀은 일차적으로 운동으로부터 야기되는 천식 증상 또는 알러지원으로부터 야기되는 알러지 증상을 예방하기 위한 장기간 제어 의약으로서 사용된다. 상기 화합물은 클로라이드 채널 기능과 간섭함으로써 알러지원에 대한 초기 및 후기 반응을 차단하는 것으로 여겨진다. 이들은 또한 비만 세포 막을 안정시키고, 호산구 및 상피 세포로부터의 매개체의 활성화 및 방출을 억제한다. 4 내지 6 주 기간의 투여가 일반적으로 최대 이익을 달성하기 위해 필요하다.
항콜린제는 일반적으로 급성 기관지경련의 완화를 위해 사용된다. 상기 화합물은 무스카린 콜린성 수용체의 경쟁적 억제에 의해 작용하는 것으로 여겨진다. 항콜린제에는 일반적으로 이프라트로퓸 브로마이드가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 화합물은 콜린성-매개된 기관지경련 만을 역행시키고, 항원에 대한 임의의 반응을 개질시키지 않는다. 부작용에는 구강 및 호흡기 분비의 마름, 일부 개인에서는 천명의 증가, 및 눈에 분사하는 경우의 흐릿한 시야가 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 또한 기도 리모델링을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 기도 리모델링은 평활근 세포 증식 및/또는 기도 내 점막하 비후로부터 산출되고, 궁극적으로 제한된 기류를 야기하는 기도의 좁혀짐을 야기한다. 본 발명의 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 추가의 리모델링을 예방할 수 있고, 가능하게는, 심지어 리모델링 공정으로부터 기인하는 조직 증축을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 염증성 질환을 가진 대상의 치료에 유용하다. 본원에서 사용되는, 용어 "염증성 질환" 은 감염, 독소 노출, 또는 세포 손상 부위에서 백혈구 및 혈장 단백질의 축적 및 활성화를 수반하는 선천적 면역계의 항원-비특이적 반응과 연관된 상태를 말한다. 염증의 특징인 사이토카인은 종양 괴사 인자 (TNF-α), 인터류킨 1 (IL-1), IL-6, IL-12, 인터페론 알파 (IFN-α), 인터페론 베타 (IFN-β), 및 케모카인을 포함한다. 따라서, 특정 유형의 천식, 알러지, 및 자가면역 질환은 염증성 질환의 특징을 가질 수 있다. 염증성 질환에는 또한 예를 들어 심혈관 질환, 만성 폐색성 폐 질환 (COPD), 기관지확장, 만성 담낭염, 폐결핵, 하시모토 갑상선염, 패혈증, 사르코이드증, 규페증 및 기타 진폐증, 및 상처 내 이식된 외래 신체가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는, 용어 "패혈증" 은 미생물적 침입에 대한 숙주의 전신적 염증성 반응과 연관되는 잘-인지된 임상적 증후군을 말한다. 본원에서 사용되는 용어 "패혈증" 은 전형적으로 열 또는 저체온증, 심계항진, 및 빈호흡에 의해 신호를 보내는 상태를 말하고, 심각한 경우에는, 저혈압, 장기 부전, 및 심지어 사망에 이르게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 감염을 가진 대상을 치료하는데 유용하다. 일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 병원체 또는 병원체들에 노출될 수 있는 대상을 비롯해, 감염되기 쉬운 대상을 치료하는데 유용하다. 본 발명에 따라 이용되는 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 일부 양상에서 또한 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생충에 의한 감염을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 감염을 가진 대상은 감염성 병원체에 노출되고, 체내에서 급성 또는 만성의 검출가능한 수준의 병원체를 가지는 대상이다. 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 감염성 병원체의 수준을 감소시키거나 이를 근절시킬 수 있는 항원 특이적 전신성 또는 점막성 면역 반응을 고정하기 위한 항원과 함께 또는 항원 없이 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 감염성 질환은 체내의 외래 미생물의 존재로부터 야기되는 질환이다. 병원체 침입의 일차 부위인 신체의 점막을 보호하기 위한 효과적인 백신 전략 및 치료를 개발하는 것이 특히 중요하다.
바이러스는 일반적으로 핵산 코어 및 단백질 코트를 함유하지만, 독립적으로는 살아있는 유기체가 아닌 소형 감염성제이다. 바이러스는 또한 단백질이 결핍된 감염성 핵산의 형태를 취할 수 있다. 바이러스는 내부에서 바이러스가 복제될 수 있는 살아있는 세포의 부재하에서는 생존할 수 없다. 바이러스는 DNA (파지) 의 세포내섭취 또는 직접 주입에 의해 특정한 살아있는 세포 내로 침입하고 증식하여, 질환을 야기한다. 증식된 바이러스는 이후 방출되고 부가적인 세포를 감염시킨다. 일부 바이러스는 DNA-함유 바이러스이고, 다른 것은 RNA-함유 바이러스이다. DNA 바이러스에는 폭스 (Pox), 헤르페스 (Herpes), 아데노 (Adeno), 파포바 (Papova), 파르보 (Parvo), 및 헤파드나 (Hepadna) 가 포함된다. RNA 바이러스에는 피코르나 (Picorna), 칼리시 (Calici), 아스트로.통가 (Astro.Toga), 플라비 (Flavi), 코로나 (Corona), 파라믹소 (Paramyxo), 오르토믹소 (Orthomyxo), 부냐 (Bunya), 아레나 (Arena), 라브도 (Rhabdo), 필로 (FiIo), 보르나 (Borna), 레오 (Reo), 및 레트로 (Retro) 가 포함된다. 일부 양상에서, 본 발명은 또한 질환 발달에 프리온이 연루되는 질환, 예컨대 예를 들어 동물에서의 소 해면형 뇌증 (즉, 광우병, BSE) 또는 스크래피 감염, 또는 인간에서의 크로이츠펠트-야콥 (Creutzfeldt-Jakob) 질환 을 치료하는 것을 의도한다.
바이러스에는 엔테로바이러스 (계열 피코르나비리다에, 예컨대 소아마비 바이러스, 콕스사키 (Coxsackie) 바이러스, 에코 바이러스인 바이러스를 포함하나 이에 제한되지 않음), 로타바이러스, 아데노바이러스 및 간염 바이러스, 예컨대 A, B, C, D 및 E 형 간염 바이러스가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 인간에서 발견된 바이러스의 구체적인 예에는: 레트로비리다에 (Retroviridae) (예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스, 예컨대 HIV-1 (또한 HTLV-III, LAV 또는 HTLV-III/LAV, 또는 HIV-III 로서 언급됨; 및 기타 단리물, 예컨대 HIV-LP; 피코르나비리다에 (Picornaviridae) (예를 들어, 소아마비 바이러스, A 형 간염 바이러스; 엔테로바이러스, 인간 콕스사키 (Coxsackie) 바이러스, 코감기바이러스, 에코바이러스); 칼시비리다에 (Calciviridae) (예를 들어, 위장염을 야기하는 균주); 토가비리다에 (Togaviridae) (예를 들어, 마뇌염 바이러스, 풍진 바이러스); 플라비비리다에 (Flaviviridae) (예를 들어, 뎅기열 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열병 바이러스); 코로나비리다에 (Coronaviridae) (예를 들어, 코로나 바이러스); 라브도비리다에 (Rhabdoviridae) (예를 들어, 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로비리다에 (Filoviridae) (예를 들어, 에볼라 바이러스); 파라믹소비리아데 (Paramyxoviridae) (예를 들어, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스); 오르토믹소비리다에 (Orthomyxoviridae) (예를 들어, 인플루엔자 바이러스); 부냐비리다에 (Bunyaviridae) (예를 들어, 한탄 (Hantaan) 바이러스, 반야 바이러스, 플레보바이러스 및 나이로 (Nairo) 바이러스); 아레나비리다에 (Arenaviridae) (출혈열 바이러스); 레오비리다에 (Reoviridae) (예를 들어, 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나비리다에 (Birnaviridae); 헤파드나비리다에 (Hepadnaviridae) (B 형 간염 바이러스); 파르보비리다에 (Parvoviridae) (파르보바이러스); 파보바지리다에 (Papovavihdae) (파필로마바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노비리다에 (Adenoviridae) (대부분의 아데노바이러스); 헤르페스비리다에 (Herpesviridae) (단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 1 및 2, 수두 대상포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스 (CMV)); 폭시비리다에 (Poxviridae) (천연두 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스); 이리도비리다에 (Iridoviridae) (예를 들어, 아프리카 돼지 열병 바이러스); 및 기타 바이러스 급성 후두기관기관지염 바이러스, 알파바이러스 (Alphavirus), 카포시 (Kaposi) 육종-연관 헤르헤스바이러스, 뉴캐슬 (Newcastle) 질환 바이러스, 니파 (Nipah) 바이러스, 노르워크 (Norwalk) 바이러스, 파필로마바이러스 (Papillomavirus), 파라인플루엔자 바이러스, 조류 인플루엔자, SARs 바이러스, 웨스트 나일 (West Nile) 바이러스가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 식물을 감염시키는 바이러스에는 예를 들어, 알파모바이러스 (Alfamoviruses): 브로모비리다에 (Bromoviridae), 알파크립토바이러스 (Alphacryptoviruses): 파르티티비리다에 (Partitiviridae), 바드나바이러스 (Badnaviruses), 베타크립토바이러스 (Betacryptoviruses): 파르티티비리아데 (Partitiviridae), 비게미니바이러스 (Bigeminiviruses): 게미니비리다에 (Geminiviridae), 브로모바이러스 (Bromoviruses): 브로모비리다에 (Bromoviridae), 바이모바이러스 (Bymoviruses): 포타이비리다에 (Potyviridae), 카필로바이러스 (Capilloviruses), 칼라바이러스 (Carlaviruses), 카르모바이러스 (Carmoviruses): 톰부스비리다에 (Tombusviridae), 카울리모바이러스 (Caulimoviruses), 클로스테로바이러스 (Closteroviruses), 코모바이러스 (Comoviruses): 코모비리다에 (Comoviridae), 큐큐모바이러스 (Cucumoviruses): 브로모비리다에 (Bromoviridae), 사이토랍도바이러스 (Cytorhabdoviruses): 랍도비리다에 (Rhabdoviridae), 디안토바이러스 (Dianthoviruses), 에나모바이러스 (Enamoviruses), 파바바이러스 (Fabaviruses): 코모비리다에 (Comoviridae), 피지바이러스 (Fijiviruses): 레오비리다에 (Reoviridae), 푸로바이러스 (Furoviruses), 호르데이바이러스 (Hordeiviruses), 하이브리게미니바이러스 (Hybrigeminiviruses): 게미니비리다에 (Geminiviridae), 이다에오바이러스 (Idaeoviruses), 일라르바이러스 (Ilarviruses): 브로모비리다에 (Bromoviridae), 이포모바이러스 (Ipomoviruses): 포타이비리다에 (Potyviridae), 루테오바이러스 (Luteoviruses), 마클로모바이러스 (Machlomoviruses), 마클루라바이러스 (Macluraviruses), 마라피바이러스 (Marafiviruses), 모노게미니바이러스 (Monogeminiviruses): 게미니비리다에 (Geminiviridae), 나나바이러스 (Nanaviruses), 네크로바이러스 (Necroviruses), 네포바이러스 (Nepoviruses): 코모비리다에 (Comoviridae), 뉴클레오랍도바이러스 (Nucleorhabdoviruses): 랍도비리다에 (Rhabdoviridae), 오리자바이러스 (Oryzaviruses): 레오비리다에 (Reoviridae) 오우르미아바이러스 (Ourmiaviruses), 파이토레오바이러스 (Phytoreoviruses): 레오비리다에 (Reoviridae), 포텍스바이러스 (Potexviruses), 포타이바이러스 (Potyviruses): 포타이비리다에 (Potyviridae), 라이모바이러스 (Rymoviruses): 포타이비리다에 (Potyviridae), 사텔라이트 (Satellite) RNA, 사텔리바이러스 (Satelliviruses), 세퀴바이러스 (Sequiviruses): 세퀴비리다에 (Sequiviridae), 소베모바이러스 (Sobemoviruses), 테누이바이러스 (Tenuiviruses), 토바모바이러스 (Tobamoviruses), 토브라바이러스 (Tobraviruses), 톰부스바이러스 (Tombusviruses): 톰부스비리다에 (Tombusviridae), 토스포바이러스 (Tospoviruses): 부냐비리다에 (Bunyaviridae), 트리코바이러스 (Trichoviruses), 타이모바이러스 (Tymoviruses), 움브라바이러스 (Umbraviruses), 미지정 포타이바이러스: 포타이비리다에 (Potyviridae), 미지정 랍도바이러스: 랍도비리다에 (Rhabdoviridae), 바리코사바이러스 (Varicosaviruses), 와이카바이러스 (Waikaviruses): 세퀴비리다에 (Sequiviridae), 미그룹화 바이러스, 브로모비리다에 포타이비리다에 (Bromoviridae Potyviridae) 및 타이모비리다에 (Tymoviridae) 의 속 및/또는 과의 바이러스가 포함되고; 특정 관련 식물 바이러스에는 예를 들어, 담배 모자이크 바이러스 (TMV), 토마토 반점 시들음 바이러스, 토마토 황화 잎말림 바이러스, 오이 모자이크 바이러스, 감자 바이러스 Y, 콜리플라워 모자이크 바이러스, 아프리카 카사바 모자이크 바이러스, 자두 폭스 바이러스, 브로메 (Brome) 모자이크 바이러스, 감자 바이러스 X, 감귤류 트리스테자 (Citrus tristeza) 바이러스, 보리 황화 위축 바이러스, 감자 잎말림병 바이러스 및 토마토 덤불 성장위축 바이러스가 포함된다.
바이러스 간염은 팽창, 압통, 및 종종 간에 영구적인 손상을 줄 수 있는 간의 염증이다. 간의 염증이 6 개월 이상 지속되는 경우, 이것을 만성 간염으로서 언급한다. 바이러스 간염을 야기하는 것으로 알려진 5 가지 이상의 상이한 바이러스가 있고, A 1 B, C D 및 E 형 간염이 포함된다. A 형 간염은 일반적으로 인간 배변으로 오염된 식품 또는 식수를 통해 전염된다. B 형 간염은 일반적으로 혈액과 같은 체액을 통해 전염된다. 예를 들어, 이것은 출산 시 모체에서 아이로, 성적 접촉을 통해, 오염된 수혈 및 바늘로 전염될 수 있다. C 형 간염은 꽤 흔하고, B 형 간염과 같이 종종 수혈 및 오염된 주사기를 통해 전염된다. D 형 간염은 함께 연관된 B 형 간염 바이러스 보균자인 IV 약물 사용자에서 가장 자주 발견된다. E 형 간염은 A 형 간염 바이러스와 유사하며, 일반적으로 나쁜 위생상태와 연관된다.
그람 음성 및 그람 양성 박테리아 모두는 척추동물에서 항원으로서 담당한다. 이러한 그람 양성 박테리아에는 파스?p라 (Pasteυrella) 종, 스타필로코코시 (Staphylococci) 종, 및 스트렙토코쿠스 (Streptococcus) 종이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 그람 음성 박테리아에는 에스케리챠 콜라이 (Escherichia coli), 슈도모나스 (Pseudomonas) 종, 및 살모넬라 (Salmonella) 종이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 감염성 박테리아의 구체적인 예에는 헬리코박테르 파일로리스 (Helicobacter pyloris), 보렐리아 부르그도르페리 (Borelia burgdorferi), 레지오넬라 뉴모필라 (Legionella pneumophilia), 마이코박테리아 (Mycobacteria sps) (예를 들어, M. tuberculosis, M. avium, M. intracellular, M. kansaii, M. gordonae), 스타필로코쿠스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 네이세리아 고노로에아에 (Neisseria gonorrhoeae), 네이세리아 메닝기티디스 (Neisseria meningitidis), 리스테리아 모노사이토게네스 (Listeria monocytogenes), 스트렙토코쿠스 피오게네스 (Streptococcus pyogenes) (그룹 A 스트렙토코쿠스), 스트렙토코쿠스 아가락티아에 (Streptococcus agalactiae) (그룹 B 스트렙토코쿠스), 스트렙토코쿠스 (Streptococcus) (비리단스 (viridans) 그룹), 스트렙토코쿠스 파에칼리스 (Streptococcus faecalis), 스트렙토코쿠스 보비스 (Streptococcus bovis), 스트렙토코쿠스 (Streptococcus) (혐기성 sps.), 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 (Streptococcus pneumoniae), 병원성 캄필로박테르 (Campylobacter sp.), 엔테로코쿠스 (Enterococcus sp.), 하에모필러스 (Haemophilus) 인플루엔자, 바실러스 안트라시스 (Bacillus antracis), 코리네박테리움 디프테리아에, 코리네박테리움 (corynebacterium sp.), 에리시펠로트릭스 루시오파티아에 (Erysipelothrix rhusiopathiae), 클로스트리듐 펜링거스 (Clostridium penringers), 클로스트리듐 테타니 (Clostridium tetani), 엔테로박테르 아에로게네스 (Enterobacter aerogenes), 클렙시엘라 뉴모니아에 (Klebsiella pneumoniae), 파스??라 물토시다 (Pasturella multocida), 박테로이데스 (Bacteroides sp.), 푸소박테리움 뉴클라툼 (Fusobacterium nucleatum), 스트렙토바실러스 모닐리포르미스 (Streptobacillus moniliformis), 트레포네마 팔리듐 (Treponema pallidium), 트레포네마 페르테뉴 (Treponema pertenue), 렙토스피라 (Leptospira), 리켓시아 (Rickettsia), 및 악티노마이세스 이스라엘리이 (Actinomyces israelii) 가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
진균의 예에는 크립토코쿠스 네오포르만스 (Cryptococcus neoformans), 히스토플라즈마 캅슐라툼 (Histoplasma capsulatum), 코시디오이데스 이미티스 (Coccidioides immitis), 블라스토마이세스 데마티티디스 (Blastomyces dermatitidis), 클라마이디아 트라코마티스 (Chlamydia trachomatis), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans) 가 포함된다.
기타 감염성 유기체 (즉, 원생생물) 에는 플라스모디움 (Plasmodium spp.), 예컨대 플라스모디움 팔시파룸 (Plasmodium falciparum), 플라스모디움 말라리아에 (Plasmodium malariae), 플라스모디움 오발레 (Plasmodium ovale), 및 플라스모디움 비박스 (Plasmodium vivax) 및 톡소플라스마 곤디이 (Toxoplasma gondii) 가 포함된다. 혈액-유래 및/또는 조직 기생충에는 플라스모디움 (Plasmodium spp.), 바베시아 미크로티 (Babesia microti), 바베시아 디버젠스 (Babesia divergens), 레이쉬만니아 트로피카 (Leishmania tropica), 레이쉬만니아 (Leishmania spp.), 레이쉬만니아 브라질리엔시스 (Leishmania braziliensis), 레이쉬만니아 도노반니 (Leishmania donovani), 트리파노소마 감비엔스 (Trypanosoma gambiense) 및 트리파노소마 로데시엔스 (Trypanosoma rhodesiense) (아프리카 수면병), 트리파노소마 크루찌 (Trypanosoma cruzi) (샤가스병), 및 톡소플라스마 곤디이 (Toxoplasma gondii) 가 포함된다.
기타 의학적으로 관련있는 미생물은 문헌, 예를 들어, 전체 내용이 본원에 참조로서 인용된 C.G.A Thomas, Medical Microbiology, Bailliere Tindall, Great Britain 1983 에 집중적으로 기재되어 있다. 농업적으로 관련있는 미생물 (예를 들어, 작물 및/또는 가축을 감염시키는 것) 이 또한 공지되어 있고, 예를 들어, 하기문헌에 기재되어 있으나 이에 제한되지 않는다: George N. Agrios, Plant Pathology, Elsevier Academic Press, 5th Edition, 2005; John Lucas, Plant Pathology and Plant Pathogens, Wiley-Blackwell; 3rd edition, 1998; Dwight C. Hirsh, N. James MacLachlan, Richard L. Walker, Veterinary Microbiology, Wiley-Blackwell; 2 edition, 2004; 및 P. J. Quinn, et al, Veterinary Microbiology and Microbial Disease, Wiley-Blackwell; 2 edition, 2011.
본 발명의 제공된 올리고뉴클레오티드 조성물은 대상 (예를 들어, 인간 대상, 또는 일부 구현예에서 동물 [예를 들어, 가축 또는 애완동물] 또는 식물 [예를 들어, 작물] 대상을 포함) 에게 항-미생물제와 함께 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 항-미생물제는 감염성 미생물을 살해 또는 억제할 수 있는 자연-발생적 또는 합성 화합물을 말한다. 본 발명에 따라 유용한 항-미생물제의 유형은 대상이 그것으로 감염된 또는 감염될 위험이 있는 미생물의 유형에 따라 다를 것이다. 항-미생물제에는 항-박테리아제, 항-바이러스제, 항-진균제 및 항-기생충제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. "항-감염성제", "항-박테리아제", "항-바이러스제", "항-진균제", "항-기생충제" 및 "구충제" 와 같은 구절은 당업자에게 있어 잘 성립된 의미를 가지고, 표준 의료 지침에서 정의된다. 간략하게, 항-박테리아제는 박테리아를 죽이거나 억제하고, 항생제 뿐 아니라 유사한 기능을 갖는 기타 합성 또는 천연 화합물을 포함한다. 항생제는 미생물과 같은 세포에 의한 이차 대사물로서 제조되는 저 분자량 분자이다. 일반적으로, 항생제는 미생물에 특이적이고 숙주 세포에 존재하지 않는 하나 이상의 박테리아 기능 또는 구조를 간섭한다. 항-바이러스제는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나 합성될 수 있고, 바이러스를 죽이거나 억제하는데 유용하다. 항-진균제는 피상적인 진균 감염 뿐 아니라 기회감염성 및 예비적인 전신적 진균 감염을 치료하는데 사용된다. 항-기생충제는 기생충을 죽이거나 억제한다.
인간 투여를 위해 유용한 또한 구충제로서 언급되는 항-기생충제의 예에는 알벤다졸, 암포테리신 B, 벤즈니다졸, 비티오놀, 클로로퀸 HCI, 클로로퀸 포스페이트, 클린다마이신, 데히드로에메틴, 디에틸카바마진, 디록사나이드 푸로에이트, 에플로르니틴, 푸라졸리다논, 글루코코르티코이드, 할로판트린, 요오도퀴놀, 이베르멕틴, 메벤다졸, 메플로퀸, 메글루민 안티모니에이트, 멜라르소프롤, 메트리포네이트, 메트로니다졸, 니클로사미드, 니푸르티목스, 옥삼니퀸, 파로모마이신, 펜타미딘 이세티오네이트, 피페라진, 프라지콴텔, 프리마퀸 포스페이트, 프로구아닐, 피란텔 파모에이트, 피리메탄민-술폰아미드, 피리메탄민-술파독신, 퀴나크린 HCl, 퀴닌 술페이트, 퀴니딘 글루코네이트, 스피라마이신, 스티보글루코네이트 나트륨 (나트륨 안티몬 글루코네이트), 수라민, 테트라사이클린, 독시사이클린, 티아벤다졸, 티니다졸, 트리메트로프림-술파메톡사졸, 및 트리파르사미드 (이중 일부는 단독으로 또는 다른것과 조합으로 사용됨) 이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
항박테리아제는 박테리아의 성장 또는 기능을 죽이거나 억제한다. 항박테리아제의 큰 클래스는 항생제이다. 광범위한 박테리아를 죽이거나 저해하는데 효과적인 항생제는 광범위 스펙트럼 항생제로서 언급된다. 다른 유형의 항생제는 클래스 그램-양성 또는 그램-음성의 박테리아에 대항하여 대부분 효과적이다. 상기 유형의 항생제는 좁은 스펙트럼 항생제로서 언급된다. 단일 유기체 또는 질환에 대항하여 효과적이고 다른 유형의 박테리아에 대항해서는 효과적이지 않은 기타 항생제는 제한된 스펙트럼 항생제로서 언급된다. 항박테리아제는 종종 이들의 일차적인 작용 방식에 근거하여 분류된다. 일반적으로, 항박테리아제는 세포벽 합성 억제제, 세포막 억제제, 단백질 합성 억제제, 핵산 합성 또는 기능 억제제, 및 경쟁적 억제제이다.
항바이러스제는 바이러스에 의한 세포의 감염 또는 세포 내의 바이러스의 복제를 예방하는 화합물이다. 항박테리아 약물보다는 적은 항바이러스 약물이 있는데, 이것은 바이러스 복제 과정은 숙주 세포 내의 DNA 복제와 아주 밀접하게 연결되어 있어, 비-특이적 항바이러스제는 숙주에게도 종종 독성이 있을 것이기 때문이다. 항바이러스제에 의해 차단되거나 억제될 수 있는 바이러스 감염 과정 내에는 여러 단계가 있다. 상기 단계에는 숙주 세포에 대한 바이러스의 부착 (면역글로불린 또는 결합 펩티드), 바이러스의 비-코팅 (예를 들어, 아만타딘), 바이러스 mRNA 의 합성 또는 번역 (예를 들어, 인터페론), 바이러스 RNA 또는 DNA 의 복제 (예를 들어, 뉴클레오티드 유사체), 신규 바이러스 단백질의 성숙 (예를 들어, 프로테아제 억제제), 및 바이러스의 출아 및 방출이 포함된다.
뉴클레오티드 유사체는 뉴클레오티드와 유사하나, 불완전한 또는 비정상 데옥시리보오스 또는 리보오스 기를 갖는 합성 화합물이다. 일단 뉴클레오티드 유사체가 세포 내에 있으면, 이들은 인산화되어, 트리포스페이트를 형성하고, 이것은 바이러스 DNA 또는 RNA 내로의 혼입을 위해 정상 뉴클레오티드와 경쟁한다. 일단 뉴클레오티드 유사체의 트리포스페이트 형태가 성장하는 핵산 사슬 내로 도입되면, 이것은 바이러스 폴리머라아제와의 비가역적인 회합 및 따라서 사슬 종결을 야기한다. 뉴클레오티드 유사체에는 아시클로비르 (단순 헤르페스 바이러스 및 수두-대상포진 바이러스의 치료에 사용됨), 간시클로비르 (사이토메갈로바이러스의 치료에 유용함), 이독수리딘, 리바비린 (호흡기 합포체 바이러스의 치료에 유용함), 디데옥시이노신, 디데옥시시티딘, 지도부딘 (아지도티미딘), 이미퀴모드, 및 레시미퀴모드가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
인터페론은 바이러스-감염된 세포 뿐 아니라 면역 세포에 의해 분비되는 사이토카인이다. 인터페론은 감염된 세포에 인접한 세포 상의 특정 수용체에 결합함으로써, 바이러스에 의한 감염으로부터 세포를 보호하는 세포 내의 변화를 야기하여 작용하고, α 및 β-인터페론은 또한 감염된 세포의 표면 상에 클래스 I 및 클래스 II MHC 분자의 발현을 유도하여, 숙주 면역 세포 인지에 대한 증가된 항원 제시를 산출하고, α 및 β-인터페론은 재조합 형태로서 이용가능하고, 만성 B 및 C 형 간염 감염의 치료에 사용되어 왔다. 항-바이러스 요법을 위해 유효한 용량으로, 인터페론은 열, 불안 및 체중 감소와 같은 심각한 부작용이 있다.
본 발명에서 유용한 항-바이러스제에는 면역글로불린, 아만타딘, 인터페론, 뉴클레오티드 유사체, 및 프로테아제 억제제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 항-바이러스제의 구체적인 예에는 아세만난 (Acemannan); 아시클로비르 (Acyclovir); 아시클로비르 나트륨; 아데포비르 (Adefovir); 알로부딘 (Alovudine); 알비셉트 수도톡스 (Alvircept Sudotox); 아만타딘 히드로클로라이드; 아라노틴 (Aranotin); 아릴돈 (Arildone); 아테비르딘 (Atevirdine) 메실레이트; 아브리딘 (Avridine); 시도포비르 (Cidofovir); 시팜필린 (Cipamfylline); 시타라빈 (Cytarabine) 히드로클로라이드; 델라비르딘 (Delavirdine) 메실레이트; 데시클로비르 (Desciclovir); 디다노신 (Didanosine); 디속사릴 (Disoxaril); 에독수딘 (Edoxudine); 엔비라덴 (Enviradene); 엔비록심 (Enviroxime); 팜시클로비르 (Famciclovir); 파모틴 (Famotine) 히드로클로라이드; 피아시타빈 (Fiacitabine); 피아루리딘 (Fialuridine); 포사릴레이트 (Fosarilate); 포스카르네트 (Foscarnet) 나트륨; 포스포네트 (Fosfonet) 나트륨; 간시클로비르 (Ganciclovir); 간시클로비르 나트륨; 이독수리딘 (Idoxuridine); 케톡살 (Kethoxal); 라미부딘 (Lamivudine); 로부카비르 (Lobucavir); 메모틴 (Memotine) 히드로클로라이드; 메티사존 (Methisazone); 네비라핀 (Nevirapine); 펜시클로비르 (Penciclovir); 피로다비르 (Pirodavir); 리바비린 (Ribavirin); 리만타딘 (Rimantadine) 히드로클로라이드; 사퀴나비르 (Saquinavir) 메실레이트; 소만타딘 (Somantadine) 히드로클로라이드; 소리부딘 (Sorivudine); 스타톨론 (Statolon); 스타부딘 (Stavudine); 틸로론 (Tilorone) 히드로클로라이드; 트리플루리딘 (Trifluridine); 발라시클로비르 (Valacyclovir) 히드로클로라이드; 비다라빈 (Vidarabine); 비다라빈 포스페이트; 비다라빈 나트륨 포스페이트; 비록심 (Viroxime); 잘시타빈 (Zalcitabine); 지도부딘 (Zidovudine); 및 진비록심 (Zinviroxime) 이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
항-진균제는 감염성 진균의 치료 및 예방에 유용하다. 항-진균제는 종종 이들의 작용 메카니즘에 의해 분류된다. 일부 항진균제는 글루코오스 신타아제를 억제함으로써 세포 벽 억제제로서 기능한다. 여기에는 바시운긴 (basiungin)/ECB 가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 기타 항-진균제는 막 통합성을 불안정화시킴으로써 작용한다. 여기에는 아미다졸, 예컨대 클로트리마졸, 세르타콘졸, 플루코나졸, 이트라코나졸, 케토코나졸, 미코나졸, 및 보리코나콜 뿐 아니라 FK 463, 암포테리신 B, BAY 38-9502, MK 991, 프라디미신, UK 292, 부테나핀, 및 테르비나핀이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 항-진균제는 키틴의 붕괴 (예를 들어, 키티나아제) 또는 면역억제 (501 크림) 에 의해 작용한다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 세포 증식성 질환, 예컨대 암을 가진 대상의 치료에 유용하다. 암을 가진 대상은 검출가능한 암성 세포를 가진 대상이다. 암은 악성 또는 비-악성 암일 수 있다. 암 또는 종양에는 담관암; 뇌암; 유방암; 자궁경부암; 융모암종; 결장암; 자궁내막암; 식도암; 위암; 상피내 신생물; 림프종; 간암; 폐암 (예를 들어, 소세포 및 비-소세포); 흑색종; 신경아 세포종; 구강암; 난소암; 췌장암; 전립선 암; 직장암; 육종; 피부암; 고환암; 갑상선 암; 및 신장 암 뿐 아니라, 기타 암종 및 육종이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 하나의 구현예에서, 암은 모발 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 피부 T-세포 백혈병, 다발성 골수종, 난포성 림프종, 악성 흑색종, 평편 세포 암종, 신장 세포 암종, 전립선 암종, 방광 세포 암종, 및 결장 암종이다.
제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 단독으로 또는 항-암 요법과 함께 투여될 수 있다. 항-암 요법에는 방사선 요법, 화학요법, 면역요법, 암 백신, 호르몬 요법, 생물학적 반응 개질제, 및 수술 처치가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 암 의약은 암을 치료하려는 목적을 위해 대상에게 투여되는 작용제를 말한다. 본원에 사용되는, "암을 치료하기" 는 암의 발달을 예방하는 것, 암의 증상을 감소시키는 것, 및/또는 성립된 암의 성장을 저해하는 것을 포함한다. 다른 양상에서, 암 의약은 암의 발달 위험을 감소시키는 목적을 위해 암의 발달 위험이 있는 대상에게 투여된다. 암의 치료를 위한 다양한 유형의 의약이 본원에 기재된다. 본 명세서의 목적을 위해, 암 의약은 화학치료제, 면역치료제, 암 백신, 호르몬 요법, 및 생물학적 반응 개질제로서 분류된다.
부가적으로, 본 발명의 방법은 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물과 함께 1 개 초과의 암 의약의 사용을 포함하는 것으로 의도된다. 예로서, 적합한 경우, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 화학치료제 및 면역치료제 모두와 함께 투여될 수 있다. 대안적으로, 암 의약은 면역치료제 및 암 백신, 또는 화학치료제 및 암 백신, 또는 화학치료제, 면역치료제 및 암 백신 (모두는 암을 가진 또는 암을 발달시킬 위험이 있는 대상을 치료하기 위한 목적으로 하나의 대상에게 투여됨) 을 포함할 수 있다.
화학치료제는 하기: 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 아드리아마이신, 시스플라틴, 비-당 함유 클로로에틸니트로소우레아, 5-플루오로우라실, 마이토마이신 C, 블레오마이신, 독소루비신, 다카르바진, 탁솔, 프라글린, 메글라민 GLA, 발루비신, 카르무스타인 및 폴리페르포산, MMI270, BAY 12-9566, RAS 파메실 트랜스페라아제 억제제, 파메실 트랜스페라아제 억제제, MMP, MTA/LY231514, LY264618/로메텍솔, 글라몰렉 (Glamolec), CI-994, TNP-470, 하이캄틴/토포테칸, PKC412, 발스포다르 (Valspodar)/PSC833, 노반트론/미트록산트론, 메타레트 (Metaret)/수라민, 바티마스타트 (Batimastat), E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, 인셀 (lncel)/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/마르미스타트 (Marmistat), BB2516/마르미스타트, CDP 845, D2163, PD183805, DX8951f, 레모날 (Lemonal) DP 2202, FK 317, 피시바닐 (Picibanil)/OK-432, AD 32/발루비신, 메타스트론/스트론튬 유도체, 테모달 (Temodal)/테모졸로미드 (Temozolomide), 에바세트 (Evacet)/리포좀성 독소루비신, 예브탁산 (Yewtaxan)/파클리탁셀, 탁솔/파클리탁셀, 제로드 (Xeload)/카펙시타빈 (Capecitabine), 푸르툴론 (Furtulon)/독시플루리딘 (Doxifluridine), 시클로팍스 (Cyclopax)/경구 파클리탁셀, 경구 택소이드, SPU-077/시스플라틴, HMR 1275/플라보피리돌 (Flavopiridol), CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/RAS 발암유전자 억제제, BMS-182751/경구 백금, UFT(Tegafur/Uracil), 에르가미솔 (Ergamisol)/레바미솔 (Levamisole), 에닐우라실/776C85/5FU 향상제, 캄프토 (Campto)/레바미솔, 캄프토사르 (Camptosar)/이리노테칸, 투모덱스 (Tumodex)/랄리트렉세드 (Ralitrexed), 류스타틴 (Leustatin)/클라드리빈 (Cladribine), 파섹스 (Paxex)/파클리탁셀, 독실 (Doxil)/리포좀성 독소루비신, 카엘릭스 (Caelyx)/리포좀성 독소루비신, 플루다라 (Fludara)/플루다라빈 (Fludarabine), 파르마루비신 (Pharmarubicin)/에피루비신 (Epirubicin), DepoCyt, ZD1839, LU 79553/비스-나프탈이미드 (Bis-Naphtalimide), LU 103793/돌라스타인 (Dolastain), 카에틱스 (Caetyx)/리포좀성 독소루비신, 겜자르 (Gemzar)/겜시타빈, ZD 0473/아노르메드 (Anormed), YM 116, 요오딘 시드 (Iodine seed), CDK4 및 CDK2 억제제, PARP 억제제, D4809/덱시포사미드 (Dexifosamide), 이페스 (Ifes)/메스넥스 (Mesnex)/이포사미드 (Ifosfamide), 부몬 (Vumon)/테니포시드 (Teniposide), 파라플라틴 (Paraplatin)/카르보플라틴 (Carboplatin), 플란티놀 (Plantinol)/시스플라틴, 베페시드 (Vepeside)/에토포시드, ZD 9331, 탁소테레 (Taxotere)/도세탁셀 (Docetaxel), 구아닌 아라비노시드의 프로드러그, 탁산 유사체, 니트로소우레아, 알킬화제 예컨대 멜팔란 및 시클로포스파미드, 아미노글루테티미드, 아스파라기나아제 (Asparaginase), 부술판 (Busulfan), 카르보플라틴 (Carboplatin), 클로르암부실 (Chlorambucil), 시타라빈 (Cytarabine) HCl, 닥티노마이신 (Dactinomycin), 다우노루비신 (Daunorubicin) HCl, 에스트라무스틴 (Estramustine) 포스페이트 나트륨, 에토포시드 (Etoposide) (VP16-213), 플록수리딘 (Floxuridine), 플루오로우라실 (5-FU), 플루타미드 (Flutamide), 히드록시우레아 (히드록시카바미드), 이포사미드, 인터페론 Alfa-2a, Alfa-2b, 류프롤리드 (Leuprolide) 아세테이트 (LHRH-방출 인자 유사체), 로무스틴 (Lomustine) (CCNU), 메클로르에타민 (Mechlorethamine) HCl (질소 머스타드), 메르캅토퓨린 (Mercaptopurine), 메스나 (Mesna), 미토탄 (Mitotane) (o.p'-DDD), 미톡산트론 (Mitoxantrone) HCl, 옥트레오티드 (Octreotide), 플리카마이신 (Plicamycin), 프로카바진 (Procarbazine) HCl, 스트렙토조신 (Streptozocin), 타목시펜 (Tamoxifen) 시트레이트, 티오구아닌, 티오테파 (Thiotepa), 빈블라스틴 (Vinblastine) 술페이트, 암사크린 (Amsacrine) (m-AMSA), 아자시티딘 (Azacitidine), 에르트로포이에틴 (Erthropoietin), 헥사메틸멜라민 (HMM), 인터류킨 2, 미토구아존 (Mitoguazone) (메틸-GAG; 메틸 글리옥살 비스-구아닐히드라존; MGBG), 펜토스타틴 (Pentostatin) (2'데옥시코포르마이신), 세무스틴 (Semustine) (메틸-CCNU), 테니포시드 (Teniposide) (VM-26) 및 빈데신 술페이트로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
면역치료제는 리부탁신 (Ributaxin), 허셉틴 (Herceptin), 쿼드라메트 (Quadramet), 파노렉스 (Panorex), IDEC-Y2B8, BEC2, C225, 온콜라임 (Oncolym), SMART M195, ATRAGEN, Ovarex, Bexxar, LDP-03, ior tβ, MDX-210, MDX-11, MDX-22, OV103, 3622W94, 항-VEGF, 제나팍스 (Zenapax), MDX-220, MDX-447, MELIMMUNE-2, MELIMMUNE-1, CEACIDE, 프리타겟 (Pretarget), NovoMAb-G2, TNT, 신경교종b-H, GNI-250, EMD-72000, LymphoCide, CMA 676, Monopharm-C, 4B5, ior egf.r3, ior c5, BABS, 항-FLK-2, MDX-260, ANA Ab, SMART 1 D10 Ab, SMART ABL 364 Ab 및 ImmuRAIT-CEA 로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
암 백신은 EGF, 항-개별특이형 암 백신, Gp75 항원, GMK 흑색종 백신, MGV 강글리오시드 콘쥬게이트 백신, Her2/neu, Ovarex, M-Vax, O-Vax, L-Vax, STn-KHL 테라토프 (theratope), BLP25 (MUC-1), 리포좀성 개별특이형 백신, 멜라신 (Melacine), 펩티드 항원 백신, 독소/항원 백신, MVA-기반 백신, PACIS, BCG 백신, TA-HPV, TA-CIN, DISC-바이러스 및 ImmuCyst/TheraCys 로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용되는, 용어 "암 항원" 및 "종양 항원" 은 암 세포에 의해 구별적으로 발현되는 항원을 언급하기 위해 상호교환적으로 사용되고, 따라서 암 세포를 표적하기 위해 이용될 수 있다. 암 항원은 종양-특이적 면역 반응을 명백히 가능성있게 촉진할 수 있는 항원이다. 상기 항원 중 일부는 정상 세포에 의해 인코딩된다 (비록 반드시 발현되지는 않음). 상기 항원은 정상 세포에서 정상적으로 묵인되는 (즉, 발현되지 않음) 것들, 오직 분화의 특정 단계에서만 발현되는 것들 및 배아 및 태아 항원과 같이 일시적으로 발현되는 것들을 특징으로 할 수 있다. 기타 암 항원은 돌연변이체 세포 유전자, 예컨대 발암유전자 (예를 들어, 활성화된 ras 발암유전자), 억제제 유전자 (예를 들어, 돌연변이체 p53), 내부 결실 또는 염색체 전위로부터 산출되는 융합 단백질에 의해 인코딩된다. 여전히 기타 암 항원은 RNA 및 DNA 종양 바이러스 상에 보유된 것과 같은 바이러스 유전자에 의해 인코딩될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 면역조절성 올리고뉴클레오티드 조성물은 또한 자가면역 질환의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 자가면역 질환은 대상 자체의 항체가 숙주 조직과 반응하거나 또는 면역 효과기 T 세포가 내생 자가 펩티드에 대해 자가반응성이고 조직의 파괴를 야기하는 질환의 클래스이다. 따라서, 면역 반응은 자가 항원으로 불리는 대상 자체의 항원에 대항하여 고정된다. 자가면역 질환에는 원형 탈모, 후천성 혈우병, 강직성 척추염, 항인지질 증후군, 자가면역-연관 불임, 자가면역 뇌척수염, 자가면역 간염, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 진성 당뇨병, 자가면역 혈소판감소성 자반증, 베체트 증후군, 수포성 유천포창, 심근증, 만성 피로 면역 기능장애 증후군 (CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 처크-스트라우스 (Churg-Strauss) 증후군, 반흔성 유천포창, CREST 증후군, 한랭 응집소병, 피부근육염, 원판상 루푸스, 본질적 혼합 한랭글로불린혈증, 섬유근육통, 섬유근염, 길랭-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 사구체신염 (예를 들어, 초승달 사구체신염, 증식성 사구체신염), 그레이브스병, 이식편 대 숙주 질환, 굿파스처증후군, 천포창 (예를 들어, 보통 천포창), 특발성 폐섬유증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 인슐린 저항성, 특발성 에디슨병, IgA 신증, 염증성 장 질환 (크론병 및 궤양성 대장염 포함), 소아 관절염, 편평 태선, 중증 근무력증, 다발성 경화증, 혼합된 결합 조직 질환, 다발근육염, 악성 빈혈, 결절다발 동맥염, 다발연골염, 다선성 증후군, 류마티스성 다발성 근육통, 일차 무(無) 감마글로불린혈증, 원발성 담즙성 간경변, 건선, 레이노 현상, 라이터 증후군, 소아 및 성인 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군, 항-콜라겐 항체로의 경피증, 사르코이드증, 강직-인간 증후군, 전신성 홍반 루프스 (SLE), 타카야스 관절염, 이식된 기관 거부, 측두 동맥염/거대 세포 동맥염, 포도막염, 궤양성 대장염, 맥관염, 및 백반증이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 "자가-항원" 은 정상 숙주 조직의 항원을 말한다. 정상 숙주 조직은 암 세포를 포함하지는 않는다. 따라서, 자가면역 질환의 문맥에서, 자가-항원에 대항하여 고정되는 면역 반응은, 바람직하지 않은 면역 반응이고 정상 조직의 파괴 및 손상에 기여하는 반면, 암 항원에 대항하여 고정되는 면역 반응은 바람직한 면역 반응이고 종양 또는 암의 파괴에 기여한다. 따라서, 자가면역 질환의 치료를 목표로 하는 본 발명의 일부 양상에서, 면역조절성 올리고뉴클레오티드가 자가 항원, 특히 자가면역 질환의 표적인 자가 항원과 함께 투여되는 것은 권고되지 않는다.
다른 예에서, 본 발명에 따라 사용되는 면역조절성 올리고뉴클레오티드는 저 용량의 자가-항원과 함께 전달될 수 있다. 다수의 동물 연구는 저 용량의 항원의 점막 투여가 면역 반응성저하 또는 "용인성" 상태를 야기할 수 있다는 것을 입증하였다. 활성 메카니즘은 대부분 Th2 및 Th3 (즉, TGF-β 우세한) 반응을 향해 Th1 로부터 사이토카인-매개 면역 이탈하는 것으로 보인다. 저 용량 항원 전달로의 활성 억제는 또한 자가면역 질환, 예를 들어, 류마티스 관절염 및 SLE 의 요법에 상당한 관심이 있는, 미관련된 면역 반응을 억제 (방관자 억제) 할 수 있다. 방관자 억제는 전염증성 및 Th1 사이토카인이 항원-특이적 또는 항원-비특이적 방식으로 방출되는 국부 환경에서의 Th1 - 상호-조절성, 억제제 사이토카인의 분비와 연관된다. 본원에서 사용되는 "용인성" 은 상기 현상을 말하기 위해 사용된다. 게다가, 경구 용인성은 실험 자가면역 뇌척수염 (EAE), 실험 자가면역 중증 근무력증, 콜라겐-유도 관절염 (CIA), 및 인슐린-의존성 진성 당뇨병을 포함하여 동물에서 다수의 자가면역 질환의 치료에 효과적이다. 상기 모델에서, 자가면역 질환의 예방 및 억제는 Th1 에서 Th2/Th3 반응으로의 항원-특이적 체액성 및 세포성 반응의 이동과 연관된다.
본 발명에 따라 이용될 수 있는 유용한 면역조절성 올리고뉴클레오티드의 비-제한적인 예는 첨부되는 부록 (B) 에 제공된다.
RIPtides
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 이용되는 올리고뉴클레오티드는 RNA-상호작용 폴리뉴클레오티드 ("RIPtides") 이거나 이것으로서 작용한다. RIPtides 는 질환에 연루된 구조적 RNA 를 비활성화함으로써 "비약물가능성 (undruggable)" 표적의 공간을 터주는 것으로 의도되는 치료제의 클래스이다. RIPtides 는 전형적으로, 구조화된 RNA 에 결합하여 이의 작용에 지장을 주는 소형 뉴클레오티드 스트레치 (대략 8 개의 뉴클레오티드) 이다. 이들의 크기로 인해, 상기 분자는 세포막을 쉽게 통과할 수 있다. 예를 들어, U.S. Patent 6,080,585 를 참조한다.
RIPtides 는 다수의 임상 적용에 유용할 수 있다. 암 요법의 문맥에서, 하나 이상의 표적은 텔로머라아제인데, 이것은 암 세포의 약 90% 에서 존재한다. 그러므로, 일부 구현예에서, 본 발명의 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 다양한 암의 치료를 위해 텔로머라아제를 표적하는데 사용될 수 있다. 게다가, RIPtides 는 감염성 질환의 치료에 유용할 수 있다. 바이러스, 예컨대 HIV 및 C 형 간염 바이러스는 복제하기 위해 숙주 세포를 인계할 수 있어야만 하고; 그러므로, 구조적 RNA 는 많은 바이러스의 성숙 및 복제에서 중요한 역할을 할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 입체-정의된 올리고뉴클레오티드는 바이러스 성숙 및/또는 복제에 관여하는 DNA 또는 RNA의 일부를 표적하는데 사용될 수 있다.
그러므로, 본 발명은 다양한 바이러스 감염을 표적하는데 유용하다. 바이러스에는 엔테로바이러스 (계열 피코르나비리다에, 예컨대 소아마비 바이러스, 콕스사키 (Coxsackie) 바이러스, 에코 바이러스인 바이러스를 포함하나 이에 제한되지 않음), 로타바이러스, 아데노바이러스 및 간염 바이러스, 예컨대 A, B, C, D 및 E 형 간염 바이러스가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 인간에서 발견된 바이러스의 구체적인 예에는: 레트로비리다에 (Retroviridae) (예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스, 예컨대 HIV-1 (또한 HTLV-III, LAV 또는 HTLV-III/LAV, 또는 HIV-III 로서 언급됨; 및 기타 단리물, 예컨대 HIV-LP; 피코르나비리다에 (Picornaviridae) (예를 들어, 소아마비 바이러스, A 형 간염 바이러스; 엔테로바이러스, 인간 콕스사키 (Coxsackie) 바이러스, 코감기바이러스, 에코바이러스); 칼시비리다에 (Calciviridae) (예를 들어, 위장염을 야기하는 균주); 토가비리다에 (Togaviridae) (예를 들어, 마뇌염 바이러스, 풍진 바이러스); 플라비비리다에 (Flaviviridae) (예를 들어, 뎅기열 바이러스, 뇌염 바이러스, 황열병 바이러스); 코로나비리다에 (Coronaviridae) (예를 들어, 코로나 바이러스); 라브도비리다에 (Rhabdoviridae) (예를 들어, 수포성 구내염 바이러스, 광견병 바이러스); 필로비리다에 (Filoviridae) (예를 들어, 에볼라 바이러스); 파라믹소비리아데 (Paramyxoviridae) (예를 들어, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리 바이러스, 홍역 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스); 오르토믹소비리다에 (Orthomyxoviridae) (예를 들어, 인플루엔자 바이러스); 부냐비리다에 (Bunyaviridae) (예를 들어, 한탄 (Hantaan) 바이러스, 반야 바이러스, 플레보바이러스 및 나이로 (Nairo) 바이러스); 아레나비리다에 (Arenaviridae) (출혈열 바이러스); 레오비리다에 (Reoviridae) (예를 들어, 레오바이러스, 오르비바이러스 및 로타바이러스); 비르나비리다에 (Birnaviridae); 헤파드나비리다에 (Hepadnaviridae) (B 형 간염 바이러스); 파르보비리다에 (Parvoviridae) (파르보바이러스); 파보바지리다에 (Papovavihdae) (파필로마바이러스, 폴리오마 바이러스); 아데노비리다에 (Adenoviridae) (대부분의 아데노바이러스); 헤르페스비리다에 (Herpesviridae) (단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 1 및 2, 수두 대상포진 바이러스, 사이토메갈로바이러스 (CMV)); 폭시비리다에 (Poxviridae) (천연두 바이러스, 백시니아 바이러스, 폭스 바이러스); 이리도비리다에 (Iridoviridae) (예를 들어, 아프리카 돼지 열병 바이러스); 및 기타 바이러스 급성 후두기관기관지염 바이러스, 알파바이러스 (Alphavirus), 카포시 (Kaposi) 육종-연관 헤르헤스바이러스, 뉴캐슬 (Newcastle) 질환 바이러스, 니파 (Nipah) 바이러스, 노르워크 (Norwalk) 바이러스, 파필로마바이러스 (Papillomavirus), 파라인플루엔자 바이러스, 조류 인플루엔자, SARs 바이러스, 웨스트 나일 (West Nile) 바이러스가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
안티센스 약물
본 발명은 또한 다양한 안티센스-기반 치료법을 포함한다. 전형적으로는, 안티센스 약물은 호의적인 약물 특성을 조작하기 위해 화학적으로 개질된 소형 (12-21 개 뉴클레오티드) DNA- 또는 RNA-유사 화합물이다. 당업계에서 이용가능한 일부 안티센스 작용제에는 포스포로티오에이트 또는 데옥시올리고뉴클레오티드가 포함되고, 상기 상황에서 황 기는 포스페이트 백본 상의 비-가교 산소로 교환된다. 이것은 RNase 분해에 대한 저항성을 증가시키고 약리학적 안정성을 개선한다. 그러나 다른 작용제에서, 표적 RNA 에 대한 상기 올리고뉴클레오티드의 친화성을 증가시킬 수 있는 백본에 대한 2'-O-메톡시에틸 개질 올리고뉴클레오티드는 소위 "차세대 안티센스 분자" 라고 불린다. 그러나, 일부 경우에서, 상기 작용제 중 다수는 부작용, 예컨대 원치않는 면역 반응과 연관된다. 적어도 일부 경우에서, 상기 작용제의 이러한 바람직하지 않은 특성은 적어도 부분적으로 이들의 입체랜덤 특성에 기여한다. 본 발명은 바람직한 특성, 예컨대 개선된 친유성 및 증가된 RNA 결합을 갖는 입체정의된 대응부를 제공한다.
다수의 안티센스-기반 치료법이 개발되었거나 개발중이다. 안티센스 요법의 비-제한적인 예는 하기에 제공된다. 본원에 기재된 입체-정의된 (예를 들어, 키랄적으로 순수한) 올리고뉴클레오티드는 당업계에서 현재 이용되는 안티센스 약물에 비해 개선된 효능, 표적에 대한 증가된 친화성, 감소된 부작용, 개선된 약동학, 향상된 안정성 및/또는 증가된 생물학적이용능을 달성하기 위해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 안티센스 치료법은 모르폴리노 (Morpholino) 약물을 포함한다. 예를 들어: Morcos, PA (2007). "Achieving targeted and quantifiable alteration of mRNA splicing with Morpholino oligos". Biochem Biophys Res Commun 358 (2): 521-7 을 참조한다.
사이토메갈로바이러스 망막염: 포미비르센 (Fomivirsen) (Vitravene 로서 시판됨) 이 사이토메갈로바이러스 망막염에 대한 치료로서 1998 년 8 월에 U.S. FDA 에 의해 승인되었다.
출혈열 바이러스: 2006 년 초에, USAMRIID 에서 에볼라 출혈열 바이러스를 연구하는 과학저들은 4 마리의 붉은털 원숭이 (rhesus monkey) 를 감염시킨 다음, U.S. 생명공학 회사인 AVI BioPharma 에 의해 개발된 안티센스 Morpholino 약물로 치료한 후 75% 회복률을 발표하였다 [U.S. Army Medical Research Institute of Infectious Diseases, Fort Detrick, Maryland. News Release: Gene-Specific Ebola Therapies Protect Nonhuman Primates from Lethal Disease. January 13, 2006]. 에볼라 바이러스로 감염된 원숭이의 통상의 사망률은 100% 이다. 2008 년 후반에는, AVI BioPharma 는 마르부르크 (Marburg) 및 에볼라 바이러스에 대해 2 가지 선도 제품에 대해 FDA 에 시험용 신약 (Investigational New Drug (IND)) 출원을 성공적으로 제출하였다. 상기 약물, AVI-6002 (Lu, X; Yu, Q; Binder, GK; Chen, Z; Slepushkina, T; Rossi, J; Dropulic, B (2004). "Antisense-Mediated Inhibition of Human Immunodeficiency Virus (HIV) Replication by Use of an HIV Type 1-Based Vector Results in Severely Attenuated Mutants Incapable of Developing Resistance". Journal of Virology 78 (13): 7079-88) 및 AVI-6003 은 항-바이러스 효능이 모르폴리노 올리고머 사슬에 대한 양전하 성분의 첨가에 의해 향상되는 AVI's PMO 안티센스 화학에 근거하는 신규한 유사체이다. AVI-6002 및 AVI-6003 의 전임상 결과는 에볼라 및 마르부르크 바이러스 각각의 치명적 감염으로 접종된 비-인간 영장류에서 재현성있고 높은 생존률을 입증하였다 (Medical News Today. AVI BioPharma Announces FDA Clears IND Applications For Clinical Trials Of RNA Therapeutic Agents For Treatment Of Ebola And Marburg Viruses. 30 Dec 2008).
암: 또한 2006 년에, 독일인 의사가 높은 등급의 신경교종 환자에서 화합물 AP 12009 (인간 형질전환 성장 인자 TGF-beta2 의 mRNA 에 특이적인 포스포로티오에이트 안티센스 올리고데옥시뉴클레오티드) 에 대한 용량-단계적 확대 연구를 보고하였다. 보고시에는, 중간 전체 생존기간은 수득되지 않았고, 저자는 잠재적인 치유에서 힌트를 얻었다 (G004 의 결과, IIb 기는 재발성 미분화 성상세포종에 대해 TGF-b2 표적화 화합물 AP 12009 로의 임상 실험을 적극적으로 제어하였다 - Hau et al. 24 (18 Supplement): 1566 - ASCO Meeting Abstracts).
예를 들어, 트라베데르센 (trabedersen) (AP 12009-P001) 은 진행된 췌장암, 악성 흑색종, 뇌 종양, 미분화 성상세포종, 및 결장직장 암종 환자의 치료에 대한 단일요법으로서 개발된다. AP 12009-P001 을, 성립된 형태의 요법을 받아들이지 않거나 더이상 받아들일 수 없었던, TGF-b2 를 과생성하는 것으로 알려진 진행성 고형 종양을 가진 61 명의 환자에서, 트라베데르센의 i.v. 투여의 안정성 및 용인가능성을 평가하기 위한 오픈-라벨, 멀티센터, I/II 기 용량-단계적 확대 실험에서 평가하였다.
암에서 과발현된 단백질을 표적하는 안티센스 약물의 기타 예에는 전립선 암 세포에서 성장 인자 TGF 베타 및 전사 인자 TWIST1 에 의해 유도되는 상피-간엽 전이를 조절하는 클루스테린 (Clusterin) (OGX-011/TV01011); 전립선 암 치료에서의 ATL1101 (인슐린-유사 성장 인자-I 수용체 (IGF-IR) 의 2 세대 안티센스 억제제); 만성 림프구성 백혈병의 치료를 위한 오블리메르센 (oblimersen) (상표명: Genasense); CML, 흑색종, 신경아 세포종, 및 유방암, 췌장암 및 결장암의 치료를 위한 G4460 및 LR3001 (c-myb 의 억제제); 신장 세포 암종의 치료를 위한 MG98 (DNA 메틸트랜스페라아제 I 의 억제제); ISIS 5132 (c-Raf 안티센스); LY900003 (단백질 키나아제 C-알파 안티센스); G3139 (Bcl-2 안티센스), 등이 포함된다.
HIV/AIDS: 2004 년부터 시작하여, US 에서 연구자들은 HIV 를 정복하기 위한 안티센스 기술의 사용에 대한 연구를 수행해왔다. HIV 유형 1-기반 벡터의 사용에 의한 인간 면역결핍성 바이러스 (HIV) 복제의 안티센스-매개 억제가 내성을 발달시킬 수 없는 심각하게 약화된 돌연변이체를 산출한다는 것이 공지된다. 2010 년 2 월에 연구자들은 수확되고, HIV 바이러스 외피 단백질에 대해 RNA 안티센스 가닥으로 개질되고, 레트로바이러스 약물 요법로의 계획된 경과기간 동안 환자내에 재-주입하게되는 환자 T-세포를 사용하여 HIV 바이러스 부하량을 감소시키는데 성공을 보고하였다.
고 콜레스테롤: 2010 년에 미포메르센 (mipomersen) (이전 ISIS 301012, 상표명 Kynamro) 은 일부 유형의 고 콜레스테롤에 대한 3 기 임상시험을 성공적으로 완료하였다. 미포메르센은 콜레스테롤-감소 약물 후보자이다. 이것은 아포지단백질 B 에 대한 메신저 RNA 를 표적하는 안티센스 치료법이다. 참조문헌: Merki E, Graham MJ, Mullick AE, et al. (August 2008). "Antisense oligonucleotide directed to human apolipoprotein B-100 reduces lipoprotein(a) levels and oxidized phospholipids on human apolipoprotein B-100 particles in lipoprotein(a) transgenic mice". Circulation 118 (7): 743-53; El Harchaoui K, Akdim F, Stroes ES, Trip MD, Kastelein JJ (2008). "Current and future pharmacologic options for the management of patients unable to achieve low-density lipoprotein-cholesterol goals with statins". Am J Cardiovasc Drugs 8 (4): 233-42; Athyros VG, Kakafika AI, Tziomalos K, Karagiannis A, Mikhailidis DP (July 2008). "Antisense technology for the prevention or the treatment of cardiovascular disease: the next blockbuster?". Expert Opin Investig Drugs 17 (7): 969-72. 이것은 주당 주입으로서 투여된다. 상기 화합물은 '2-세대' 안티센스 올리고뉴클레오티드이고; 뉴클레오티드는 RNA 및 DNA 의 포스포디에스테르 연결보다는 포스포로티오에이트 연결로 연결되고, 당 부분은 분자의 중간 부분 내 데옥시리보오스 및 두 말단에서 2'-O-메톡시에틸-개질된 리보오스이다. 상기 개질은 뉴클레아제에 의한 분해에 대해 약물을 저항성 있게 만들어, 주당 투여되도록 한다. 약물은 간에 축적되고, 이것은 아포지단백질 B 가 그곳에서 주로 작용하기 때문에 통상적이다. 완전한 서열은 다음과 같다:
G*-C*-C*-U*-C*-dA-dG-dT-dC-dT-dG-dmC-dT-dT-dmC-G*-C*-A*-C*-C* [d = 2'-데옥시, * = 2'-O-(2-메톡시에틸)], 3'→5' 포스포로티오에이트 연결임. 3 기 임상시험을 가족력 고콜레스테롤혈증 (FH) (동형접합성 (ho) 및 이형접합성 (he) 모두) 이 있는 환자에서 수행하였다. FH 는 예외적으로 높은 수준의 저-밀도 지단백질 콜레스테롤을 야기하는 유전 질환이다. 두 실험은 2 개 환자 집단에서 지금까지 보여진 최고 효능으로, 그리고 기타 주사가능한 약물과 비교하였을 때, 비교적 낮은 탈락율로, 예외적인 성능을 보였다.
뒤시엔느 근위축증: 뒤시엔느 근위축증 (DMD) 에서, 환자의 근육 세포는 파괴되고 상실되어, 진행성 근무력 및 사망에 이른다. AVI-4658 은 뒤시엔느 근위축증 환자에게 결핍된 핵심 단백질인 디스트로핀의 발현을 복구하기 위한 안티센스 요법을 표적으로 한다. 19 명의 환자로의 오픈-라벨, 2 기, 용량-단계적 확대 연구로부터의 결과는 치료가 완료되었을 때, 각각의 환자로부터 근육 생검을 채취한 것을 보여주었다. 상기 팀은 "엑손 스킵핑 (exon skipping)" 을 통한 기능적 mRNA 를 제조하는 환자의 능력이 AVI-4658 의 사용으로 복구되어, 결국 이들이 기능적 디스트로핀 단백질을 제조하게 한다는 것을 밝혔다.
근긴장성 근이영양증: 근긴장성 근이영양증은 백본근, 심장 및 중추 신경계에 영향을 미치는, 성인에서 가장 흔한 근육 질환이다. 이것은 DMPK 라고 불리는 유전자 내의 유전자 3 글자 코드 (CTG) 의 수많은 반복을 야기하는 돌연변이 때문에 일어난다. 돌연변이된 유전자로부터 생성되는 메신저 RNA 는 또한 RNA 가 세포의 핵 내에 축적되도록 하는 비정상 긴 반복을 함유한다. 이것은 머슬블라인드 (Muscleblind)-유사 1 이라고 불리는 단백질의 기능을 격리 및 차단하고 CELF1 이라고 불리는 또다른 단백질을 활성화시킨다. 상기 단백질은 서로 길항작용을 하고, 성체 조직에서 많은 다른 유전자로부터 단백질의 비정상 발현이라는 결과를 가져와, 질환을 야기한다. 이에 대응하기 위해, Cooper 및 그의 동료들은 비정상 RNA 반복 및 표적 RNase H 의 일부를 독성 RNA 에 대해 찾아내, 그의 분해를 야기하는 단순히 유전 물질의 가닥인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 제작하였다. 또한 격리된 머슬블라인드 (Muscleblind)-유사 1 을 방출시키는 것을 돕는 안티센스 올리고뉴클레오티드와 기타 안티센스 올리고뉴클레오티드의 조합은 상기 효과를 향상시킬 수 있는 것으로 보고되었다.
당뇨병: SGLT2 (ISIS 388626) 는 당뇨병 환자에서 혈중 글루코오스 수준의 유의한 감소를 산출하는 나트륨 의존성 글루코오스 공-수송체 유형 2 (SGLT2) 수준의 감소를 달성하기 위한 안티센스 약물이다.
간염: 지속성 C 형 간염 바이러스 (HCV) 감염은 간 질환의 유발 요인이다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 항바이러스제의 유망한 클래스를 나타낸다. 개발 중인 이러한 약물에는 ISIS 14803 이 포함되는데, 이것은 HCV 복제 및 단백질 발현을 억제하는 20-단위 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드이다.
치료 방법
본원에 기재된, 제공된 올리고뉴클레오티드 및 이의 조성물은 항바이러스제로서의 용도를 포함하여 다양한 질환 상태에 대항하는 치료제로서 유용하다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 DNA 및/또는 RNA 활성의 조절을 통해 질환의 치료를 위한 작용제로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 특이적 유전자 발현을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 제공된 올리고뉴클레오티드는 특이적 표적 메신저 RNA (mRNA) 서열에 상보적일 수 있다. 이것은 무수한 바이러스의 바이러스 복제를 억제하는데 사용될 수 있다. 예시적 바이러스 과에는 오르토믹소바이러스, 폭스 바이러스, 헤르페스 바이러스, 파필로마 바이러스, 피코르나바이러스, 플라비바이러스, 레트로바이러스, 간염 바이러스, 파라믹소바이러스, 레오바이러스, 파르보바이러스, 필로바이러스, 코로나바이러스, 아레나바이러스, 랍도바이러스 및 아데노바이러스가 포함된다. 부가적인 바이러스 과가 알려져 있고 또한 본원에 포함된다. 다른 예에는 HIV RNA 또는 기타 레트로바이러스 RNA 에 대항하는 또는 단백질을 인코딩하는 HIV mRNA 에, 또는 HIV mRNA 의 TAR 영역에 하이브리드화하기 위한 안티센스 화합물로서의 용도가 포함된다. 일부 구현예에서, 핵산은 HIV mRNA 의 TAR 영역의 이차 구조를 모방하고, 그렇게 함으로써 tat 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 세포를 제공된 올리고뉴클레오티드와 접촉시킴으로써 표적 단백질의 발현을 억제하기 위해 사용되는데, 이때 세포 내의 다른 단백질의 발현은 억제되지 않거나 최소한으로 억제된다. 일부 구현예에서, 표적 단백질 억제는 포유류에서 생체 내에서 일어난다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드의 치료학적 유효량을 표적 단백질의 발현을 억제하기 위해 투여한다.
발현이 조절될 수 있는 단백질의 다른 예에는 Jun N-말단 키나아제 (JNK) 단백질, 디아실글리세롤 아실트랜스페라아제 I, 아포지단백질 B, 글루카곤 수용체, Aurora B, 아실 CoA 콜레스테롤 아실트랜스페라아제-2, c-반응성 단백질, 단백질의 STAT (전사의 신호 전달제 (transducer) 및 활성화제) 패밀리, 및 MDR P-당단백질이 포함된다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 단백질 포스포타아제 1B (PTP1B) 발현, RNA-의존성 RNA 바이러스 폴리머라아제를 억제하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 암 세포에서 세포자멸사와 같은 사건을 유도하기 위해 또는 세포를 세포자멸사에 대해 좀더 쉽게 만들도록 하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 단백질의 활성을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 RNase H 활성 표적화 다중약물 내성 (MDR) RNA 분자를 조절하는 것을 도울 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상 (예를 들어, 포유류, 예컨대 인간) 에서 원치않는 유전자 발현에 의해 매개되는 질환의 치료 방법을 제공한다. "질환" 은 질환, 또는 질환 증상을 의미한다. 방법은, 예를 들어, 제공된 올리고뉴클레오티드의 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함한다.
원치않는 유전자 발현에 의해 매개되는 질환의 예에는 암 (예를 들어, 백혈병, 종양, 및 전이), 알러지, 천식, 비만, 염증 (예를 들어, 염증성 질환, 예컨대 염증성 기도 질환), 고콜레스테롤혈증, 혈액학 장애, 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS), 폐색성 기도 질환, 천식, 자가면역 질환, 레트로바이러스 질환, 예컨대 AIDS 또는 HIV, 기타 바이러스 감염, 자궁내 감염, 대사성 질환, 감염 (예를 들어, 박테리아, 바이러스, 효모, 진균), CNS 질환, 뇌 종양, 퇴행성 신경 질환, 심혈관 질환, 및 혈관신생, 신혈관형성, 및 맥관형성과 연관된 질환이 포함된다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 췌장암을 비롯한 암, 및 비정상 세포 증식을 비롯한 기타 질환 또는 장애의 치료에 유용하다.
상 복부 (복막후강 내) 에 위치한, 췌장은 소화 및 내분기계의 이중-기능 샘이다. 특정 예에서, 췌장은 내분비샘 (예를 들어, 여러 가지 중요한 호르몬을 생성함) 으로서 기능한다. 특정 예에서, 췌장은 외분비샘 (예를 들어, 소장을 지나는 소화 효소를 함유하는 액체를 분비함) 으로서 기능한다.
췌장암은 모든 암-관련 사망의 6% 에 달하는, US 에서 암 사망의 4번째로 (폐, 결장 및 유방 다음으로) 가장 흔한 원인이다. 2008 년에, 추정되는 37,680 건의 신규 췌장암 경우가 US 에서 진단되었고, 34,290 명이 사망했다. 질환의 발병률은 50 세 이후에 연속 상승하고, 유일한 규명된 위험 이자는 담배 흡연이다 (흡연자는 비-흡연자보다 질환이 발달될 확률이 4 배 높음). 침습성 췌장암이 항상 언제나 치명적이다. 모든 환자의 집합적 중앙 생존 시간은 4-6 개월이다. 상대적 1-년 생존률은 24% 이고; 전체적인 5-년 생존률 < 5% 이다.
췌장암은 그의 초기 단계에는 자각증상이 없어, 종종 수 개월 간 (환자의 1/3 미만이 증상 개시 2 개월 내에 진단받음) 미진단된 상태로 남아있다. 특정 경우에서, 지연된 진단은 간 또는 림프절에 대한 암성 세포의 전이 (부분적으로 또는 전체적으로) 를 가져온다.
현재, 수술 (췌장의 절제) 이 췌장암에 대한 일차적이고 유일한 치유적 요법이다. 그러나, 종양의 오직 15-25% 만이 진단시점에 절단가능하고, 수술을 겪은 환자의 오직 10-20% 만이 2 년 넘게 생존한다. 일단 종양 침윤이 발생하고 다른 조직에 영향을 주면, 수술을 더이상 가능하지 않다.
특정 예에서, 진성 당뇨병 또는 췌장염은 개체에게 다수의 췌장 세포의 증식성 질환을 발달시키는 성향으로 만든다. 특정 예에서, 개체는 유전성 비용종증 결장직장 암 (HNPCC) 및 가족성 대장 폴립증 (FAP) 으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 유전적 증후군으로 인해 다수의 췌장 세포의 증식성 질환을 발달시킬 증가된 위험을 갖는다. 특정 예에서, 개체는 MSH2, MSH6, MLH1, 및 APC 로 이루어지는 군으로부터 선택되는 유전자 내의 돌연변이로 인해 다수의 췌장 세포의 증식성 질환을 발달시킬 증가된 위험을 갖는다.
이상적으로는, 췌장암의 효과적인 치료는 (i) 일차 종양 질량을, 처음으로 및 후속적으로 모두 조절하고, (ii) 전이성 종양 세포를 치료해야만 한다. 화학예방요법 (약물, 생물제제, 영양제 등과 같은 작용제의 투여) 은 발암 진행을 느리게 하거나, 역행시키거나, 억제하여, 침습성의 또는 임상적으로 유의한 질환의 발달 위험을 저하시킨다.
본원에 기재되는 것은, 특정 구현예에서, 췌장암의 치료 방법이다. 본원에 사용되는, "췌장암" 은 췌장의 암의 형태를 포함한다. 일부 구현예에서, 췌장암은 전이성 췌장암이다. 일부 구현예에서, 췌장암은 암종, 육종, 암, 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 치료하고자 하는 췌장암에는 산발성 및 유전성 췌장암이 포함된다. 일부 구현예에서, 췌장암은 관 세포 암종, 선포 세포 암종, 유듀상 점액성 암종, 인환세포 암종, 선편평상피 암종, 미분화된 암종, 점액성 암종, 거대 세포 암종, 소세포 암종, 낭종암, 장액 낭종암, 점액성 낭종암, 미분류된 췌장암, 췌장아세포종, 또는 이들의 조합이다.
일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체는 췌장의 국부화된 종양으로 나타난다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체는 음성 국지적 림프절 생검으로 나타난다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체는 양성 국지적 림프절 생검으로 나타난다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체는 결절 음성 췌장 종양 (예를 들어, 결절-음성) 으로 나타난다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체는 결절 양상 종양 (예를 들어, 결절-양성) 으로 나타난다.
일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체에서의 췌장암은 체 내 다른 위치로 전이되었다. 일부 구현예에서, 췌장암은 림프절, 위, 담관, 간, 뼈, 난소, 복막 및 뇌로 이루어지는 군으로부터 선택되는 위치로 전이되었다.
일부 구현예에서, 암세포 또는 전암성 세포는 조직 샘플 (예를 들어, 생검 샘플) 의 조직학적 유형 또는 등급화에 의해 확인된다. 일부 구현예에서, 암세포 또는 전암성 세포는 적합한 분자 마커의 사용을 통해 확인된다.
일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체에서의 췌장암은 American Joint Committee on Cancer (AJCC) TNM 분류 시스템에 따라 병기가 나뉘는데, 종양 (T) 은 Tx, T1, T2, T3, T4 의 병기로 지정되고; 국지적 림프절 (N) 은 NX, N0, N1 의 병기로 지정되고; 원거리 전이 (M) 는 MX, M0, 또는 M1 의 병기로 지정된다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체에서의 췌장암은 Stage 0, I, IA, IB, II, IIA, IIB, III, 및 IV 췌장암으로서 병기화된다. 일부 구현예에서, 췌장암에 대한 치료가 필요한 개체에서의 췌장암은 Grade GX (예를 들어, 등급을 평가할 수 없음), Grade 1, Grade 2, Grade 3 또는 Grade 4 로서 병기화된다.
제공된 올리고뉴클레오티드로 치료되는 암의 더욱 구체적인 예에는 유방암, 폐암, 흑색종, 결장직장암, 방광암, 난소암, 전립선암, 신장암, 평편 세포암, 아교종, 카포시 육종, 다발성 골수종, 및 백혈병이 포함된다.
암의 평가 및 치료
용어 "종양 세포 항원" 은 비관련된 종양 세포, 정상 세포, 또는 정상 체액에서보다 종양 세포 상에서 또는 체액에서 높은 양을 나타내는 항원으로서 본원에 정의된다. 항원 존재는 당업자에게 공지된 임의의 수의 검정법에 의해 시험될 수 있고, 제한 없이, 항체로의 음성 및/또는 양성 성별, 예컨대 ELISA 검정법, 방사능면역검정법, 또는 웨스턴 블롯 (Western Blot) 에 의한 것이 포함된다.
"세포자멸사 유도제" 는 세포자멸사/프로그램된 세포 사멸을 유도하는 것으로 본원에 정의되며, 예를 들어, 세포 (예를 들어, 종양 세포) 가 프로그램된 세포 사멸을 겪도록 유도되는 치료 및 항암제가 포함된다. 예시적인 세포자멸사 유도제는 하기에 더욱 상세히 기재된다.
용어 "세포자멸사" 또는 "프로그램된 세포 사멸" 은 원치않는 또는 쓸모없는 세포를 발달 및 기타 정상 생물학적 과정 동안 제거하는 생리학적 과정을 말한다. 세포자멸사는 정상 생리학적 상태 하에서 일어나는 세포 사멸의 방식이고, 세포는 그 자체의 죽음에 능동적인 참여자이다 ("세포 자살"). 이것은 정상 세포 턴오버 (turnover) 및 조직 항상성, 배발생, 면역 용인성의 유도 및 유지, 신경계 발달 및 내분비-의존적 조직 위축 동안 가장 종종 발견된다. 세포자멸사를 겪는 세포는 특징적인 형태학적 및 생화학적인 특징을 나타낸다. 상기 특징에는 염색질 응집, 핵 및 세포질 응축, 막 결합된 소포 내로의 세포질 및 핵의 분배 (세포자멸체) 이 포함되고, 이것은 리보솜, 형태학적으로 온전한 미토콘드리아 및 액 물질을 함유한다. 생체 내에서, 상기 세포자멸체는 대식세포, 수지상 세포 또는 인접 상피 세포에 의해 빠르게 인지되고 식균작용된다. 세포자멸 세포의 제거를 위한 상기 효과적인 매커니즘 덕분에 생체 내에서 염증성 반응이 도출되지 않는다. 시험관 내에서, 세포자멸체 뿐 아니라 남아있는 세포 단편은 궁극적으로 팽창하고 최종적으로 용해된다. 시험관 내 세포 사멸의 상기 최종 기는 "이차 괴사" 라고 불린다. 세포자멸사는 DNA 단편화, Annexin V 의 노출, 캐스파아제의 활성화, 사이토크롬 c 의 방출 등과 같은 당업자에게 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 죽음으로 유도된 세포는 본원에서 "세포자멸 세포" 라고 불린다.
세포자멸사는 또한 표준 Annexin V 세포자멸사 검정법을 사용하여 시험될 수 있다: NIH:OVCAR-3 세포를 6-웰 플레이트 (NUNC) 에서 성장시키고, 길항제 (또는 또다른 항-암 약물과 조합으로) 로 4-48 시간 동안 조사 또는 처리하고, 세척하고, Annexin V-FITC (BD-Pharmingen) 로 1 시간 동안 염색하였다. 세포를 유세포계수기 (Becton-Dickinson, CellQuest) 에 의해 분석하고, 프로피듐 요오드화물로 반대염색하고, 유세포계수기에서 다시 분석하였다.
환자는 치료 섭생 전, 동안, 및 후를 포함하는 하나 이상의 복합 시점에 증상과 관련하여 평가될 수 있다. 치료는 대상의 상태 개선을 야기할 수 있고, 하기 인자 중 하나 이상이 일어나는 경우를 측정함으로써 평가될 수 있다: 감소된 종양 크기, 감소된 세포 증식, 감소된 세포 수, 감소된 신혈관형성, 증가된 세포자멸사, 또는 종양 세포의 적어도 일부의 감소된 생존률. 상기 발생 중 하나 이상은 일부 경우에서, 암의 부분적인 또는 전체적인 제거 및 환자의 생존 연장을 야기할 수 있다. 대안적으로, 말기암의 경우, 치료는 질환의 정체, 더 나은 삶의 질 및/또는 생존 연장을 야기할 수 있다.
세포 이동 검정법
세포 이동 검정법은 문헌, 예를 들어, Brooks, et al., J. Clin. Invest 1997, 99:1390-1398 에 기재되어 있고, 세포 이동 측정법은 당업자에게 공지되어 있다. 본원에 기재된 하나의 세포 이동 측정법에서, 트랜스웰 이동 챔버의 멤브레인을 기질로 코팅하고, 트랜스웰을 세척하고, 비-특이적 결합 부위를 BSA 로 차단시킨다. 서브-컨플루언트 (sub-confluent) 배양물로부터의 종양 세포를 수확하고, 세척하고, 검정 항체의 존재 또는 부재 하에 이동 완충액에 재현탁시켰다. 종양 세포를 코팅된 트랜스웰 멤브레인의 아랫면으로 이동하게 둔 후, 멤브레인의 상부면 상에 남아있는 세포를 제거하고, 아랫면으로 이동한 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색한다. 이후 세포 이동을 현미경 시야 당 직접적인 세포 계수에 의해 정량화한다.
종양 성장 검정법
종양 성장을 당업자에게 공지된 방법 (예를 들어, SCID 마우스 모델, 누드 마우스 모델, 및 공통 유전자 종양을 가진 BALB/c 마우스) 에 의해 검정하였다. 종양 성장을 위한 SCID 마우스 모델을 하기와 같이 실시한다: 서브-컨플루언트 인간 M21 흑색종 세포 (또는 임의의 바람직한 종양 세포 유형) 를 수확하고, 세척하고, 멸균 PBS (20 x 106/mL) 내에 재현탁시켰다. SCID 마우스에 100 μL 의 M21 인간 흑색종 세포 (2 x 106) 현탁액을 피하 주사한다. 종양 세포 주입 3 일 후, 마우스를 원하는 용량 범위의 길항제로 복강 내에 미처리 또는 처리한다. 마우스를 24 일 동안 매일 처리한다. 종양 크기를 캘리퍼스로 측정하고, 부피를 식 V = (L x W2)/2 (식 중, V 는 부피이고, L 은 길이이고, W 는 폭임) 를 사용하여 추정하였다.
대안적으로, 누드 마우스 모델, SCID 마우스 모델 및/또는 BALB/c 공통 유전자 마우스 모델은 또한 본원에 기재된 인간화된 항-엔도글린 항체 또는 항원-결합 단편에 의해 종양 성장 및 이의 억제를 평가하기 위해 이용될 수 있다.
세포 증식 검정법
세포 증식은 당업자에게 공지된 방법에 의해 검정될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은, 서브-컨플루언트 인간 내피 세포 (HUVEC) 를 ECV 또는 ECVL 세포로부터 CM (25 μL) 의 존재 또는 부재 중에 저 (5.0%) 혈청을 함유하는 증식 완충액 내에 재현탁할 수 있고, 내피 세포를 24 시간 동안 증식키킨다. 증식은 시판되는 WST-1 검정 키트 (Chemicon) 를 사용하여 미토콘드리아 탈수소효소 활성을 측정함으로써 정량화될 수 있다. 또한, 본원에 기재된 바와 같이, 증식은 표준 방법을 사용하여 3H 도입을 측정함으로써 정량화될 수 있다 (She et al., Int. J. 암, 108: 251-257 (2004)).
세포 증식을 평가하는 다른 방법은 당업계에 공지되어 있고 본원에 포함된다. 추가의 비-제한적인 예가 실시예에 더욱 상세히 기재되어 있다.
본원에 기재된 분류 및 병기화 시스템이 본원에 기재된 암의 치료를 평가하는 하나의 수단을 나타내고; 부가적으로, 기타 병기화 계획이 당업계에 공지되고 본원에 기재된 방법과 함께 사용될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 오직 예로서, 악성 종양의 TNM 분류가 환자의 신체 내 암의 범위를 기술하는 암 병기화 시스템으로서 사용될 수 있다. T 는 종양의 크기 및 이것이 근처 조직에 침습하였는지의 여부를 기재하고, N 은 관여된 국지적 림프절을 기재하고, M 은 원거리 전이를 기재한다. TNM 은 International Union Against Cancer (UICC) 에 의해 유지되고, American Joint Committee on Cancer (AJCC) 및 International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) 에 의해 사용된다. 모든 종양이 TNM 분류를 갖지는 않는 것으로 이해될 것이다 (예를 들어, 뇌 종양). 일반적으로, T (a,는,(0), 1-4) 는 일차 종양의 크기 또는 직접적인 범위로서 측정된다. N (0-3) 은 국지적 림프절로 번진 정도를 말하고: N0 는 종양 세포가 국지적 림프절로부터 부재하는 것을 의미하고, N1 은 종양 세포가 가장 가까운 또는 소수의 국지적 림프절로 번진 것을 의미하고, N2 는 종양 세포가 N1 과 N3 사이의 범위로 번진 것을 의미하고; N3 은 종양 세포가 최대 원거리 또는 다수의 국지적 림프절로 번진 것을 의미한다. M (0/1) 은 전이의 존재를 나타내고: M0 은 원거리 전이가 존재하지 않는 것을 의미하고; M1 은 전이가 원거리 기관 (국지적 림프절 너머) 으로 번진 것을 의미한다. 다른 파라미터가 또한 측정될 수 있다. G (1-4) 는 암 세포의 등급을 말한다 (즉, 이들은 정상 세포와 유사한 것으로 보이는 경우 낮은 등급이고, 나쁘게 분화된 것으로 보이는 경우 높은 등급이다). R (0/1/2) 는 수술의 완료를 말한다 (즉, 암 세포가 없는 절제-경계 또는 그렇지 않은 경우). L (0/1) 은 림프관 내로의 침습을 말한다. V (0/1) 은 정맥 내로의 침습을 말한다. C (1-4) 는 V 의 확실성 (품질) 의 개질제를 말한다.
본원에 제공된 것은 세포를, 암 세포를 퇴화시키거나, 이의 성장을 저해하거나, 살해하는데 유효한 본원에 기재된 화합물의 양과 접촉시키는 것을 포함하는, 암 세포를 퇴화시키거나, 이의 성장을 저해하거나, 살해하기 위한 방법이다.
본원에 제공된 것은 종양 크기 증가를 억제하기 위해, 종양의 크기를 감소시키기 위해, 종양 증식을 감소시키거나 종양 증식을 억제시키기 위해, 본원에 기재된 화합물의 유효량을 개인에게 투여하는 것을 포함하는, 개인에서의 종양 크기 증가의 억제, 종양의 크기 감소, 종양 증식의 감소 또는 종양 증식의 예방 방법이다. 일부 경우에서 종양의 치료에는 증상의 정체가 포함되는데, 즉, 환자를 치료함으로써, 암이 악화되지 않고 환자의 생존률이 연장된다.
환자는 치료 섭생 전, 동안, 및 후를 포함하는 하나 이상의 복합 시점에 증상과 관련하여 평가될 수 있다. 치료는 대상의 상태 개선을 야기할 수 있고, 하기 인자 중 하나 이상이 일어나는 경우를 측정함으로써 평가될 수 있다: 감소된 종양 크기, 감소된 종양 세포 증식, 감소된 세포 수, 감소된 신혈관형성 및/또는 증가된 세포자멸사. 상기 발생 중 하나 이상은 일부 경우에서, 암의 부분적인 또는 전체적인 제거 및 환자의 생존 연장을 야기할 수 있다. 대안적으로, 말기암의 경우, 치료는 질환의 정체, 더 나은 삶의 질 및/또는 생존 연장을 야기할 수 있다.
다른 치료 측정 방법은 당업계에 공지되어 있고 본원에 포함된다. 예시적인 구현예에서, 본 발명의 프로-올리고뉴클레오티드 화합물을 의료적 질환, 예를 들어, 암, 또는 원치않는 세포의 클래스의 존재를 특징으로 하는 비-악성 상태를 겪고 있는 대상, 예컨대 포유류 (예를 들어, 인간) 에 투여한다.
일차 결과 측정은 본원에 기재된 방법을 사용하여 치료된 환자에 대해 평가될 수 있고, 예를 들어, 진행-없는 생존이 포함된다. 하나의 구현예에서, 진행-없는 생존의 증가는 치료의 결핍시와 비교하여, 약 2-배, 5-배, 10-배, 20 배, 50 배 이상의 양으로 관찰된다. 또다른 구현예에서, 진행-없는 생존의 증가는 치료의 결핍시와 비교하여, 약 3 개월, 약 6 개월, 약 9 개월, 약 12 개월, 약 18 개월, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년, 약 5 년 이상으로 생존을 증가시킨다.
이차 결과 측정은 또한 평가될 수 있고, 반응의 지속, 종양 진행까지의 시간, 전반적인 생존률, 심각한 및 비-심각한 부작용이 포함된다. 예를 들어, 치료는 질환이 전개를 방지할 수 있거나 (즉, 정체) 또는 개선을 야기할 수 있다. 대안적으로는, 또는 부가적으로는, 기타 목표는 하기 중 하나 이상에 대해 측정될 수 있다: 감소된 종양 적재, 감소된 신혈관형성, 감소된 부작용, 감소된 부작용, 및/또는 증가된 환자 순응.
본 발명의 화합물 또는 조성물에 의한 치료가 치료 또는 예방에 유용한 질환 또는 질병의 기타 구체적인 예에는 이식 거부 (예를 들어, 신장, 간, 심장, 폐, 섬 세포, 췌장, 골수, 각막, 소장, 피부 동종이식 또는 이종이식 및 기타 이식물), 이식편 대 숙주 질환, 골관절염, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 당뇨병성 망막증, 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병, 궤양성 대장염, 및 기타 장 질환), 신장병, 악액질, 패혈증 쇼크, 루푸스, 중증 근무력증, 건선, 피부염, 습진, 지루, 알츠하이머 질환, 파킨슨씨 질환, 화학요법 동안의 줄기 세포 보호, 자가 또는 동종이계 골수 이식을 위한 생체 외 선별 또는 생체 외 퍼징 (purging), 안 질환, 망막증 (예를 들어, 시력 감퇴, 당뇨병성 망막증, 및 기타 망막증), 각막 질환, 녹내장, 감염 (예를 들어, 박테리아, 바이러스 또는 진균), 재발협착증을 포함하나 이에 제한되지 않는 심장병이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
RNAse L 의 활성화
2'-5' 올리고아데닐레이트 (2-5A)/RNase L 경로는 인터페론에 의해 유도되는 효소적 경로 중 하나이다. Rnase L 은 2'-5' 아데닐산의 5'-인산화된 단편에 결합한 후 활성화된다. 2'-5' 아데닐산 (2-5A) 의 상기 단편은 2'-5' 올리고(A) 합성효소의 조절 하에 생성된다. 상기 경로는 선천적 면역계의 일부이고, 바이러스 감염을 예방하는데 중요한 역할을 한다. 단일-가닥 RNA 의 2-5A-유도된 분할은 세포자멸사를 야기한다. 2-5A 의 생체안정성 포스포로티오에이트 유사체는 Rnase L 의 강력한 활성화제인 것으로 나타났다 (Xianh et al., Cancer Research (2003), 63:6795-6801). 본 연구에서, 2-5A 유사체는 Rnase L 활성을 유도하고, 최종 병기의, 전이성 인간 전립선 암 세포주 DU145, PC3 및 LNCaP 의 배양물에서 세포자멸사를 야기하였다.
RNase L 의 지속적인 활성화는 바이러스-감염된 세포 뿐 아니라 암성/종양 세포를 제거하기 위한 세포자멸사의 미토콘드리아 경로를 촉발시킨다. RNase L 은 섬유육종 성장, 전립선 암 성장, 결장직장 암 성장 및 췌장암 성장을 억제할 수 있다. 상이한 암에서 RNase L 의 통상의 역할을 제시하면, 본원에 기재된 본 발명은 임의의 유형의 암의 치료를 위해 사용될 수 있는 것으로 고려된다. Silverman, RH, Cytokine Growth Factor Rev, 18(5-6): 381-388 (2007); Bisbal, C. and Silverman, RH, Biochimie. 89(6-7): 789-798 (2007). 예를 들어, RNase L 의 하향조절은 예시적인 건강한 집단 내의 RNase L 의 미리 결정된 수준과 비교하는 대로, RNase L 을 인코딩하는 유전자 또는 유전자들의 발현 수준의 임의의 감소, RNase L 을 인코딩하는 유전자 또는 유전자들의 침묵, RNase L 을 포함하는 단백질의 발현/번역의 수준 감소, 세포 내 존재하는 RNase L 의 양의 감소, 및/또는 RNase L 의 활성의 임의의 감소를 말한다. 대안적으로 본원에 기재되는 바와 같은 RNase L 수준의 임의의 감소는 RNase L 의 하향조절의 지표일 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 올리고뉴클레오티드는 하향조절된 RNase L 을 가진 질환의 치료에 유용하다. 일부 구현예에서, 하향조절된 RNase L 과 연관된 질환은 암이다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암, 전립선 암, 또는 결장직장암이다. 대안적으로, 본원에 기재된 제공된 올리고뉴클레오티드는 상향조절된 RNase L 을 가진 질환의 치료에 유용하다. 일부 구현예에서, 상향조절된 RNase L 을 가진 질환은 만성 피로 증후군이다. 상향조절된 RNase L 을 가진 부가적인 질환은 당업계에 공지되고 본원에 포함된다.
치료법으로 사용되는 경우, 제공된 올리고뉴클레오티드는 약학 조성물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 제공된 올리고뉴클레오티드의 치료학적 유효량, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 희석제, 약학적으로 허용가능한 부형제, 및 약학적으로 허용가능한 담체로부터 선택되는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 비활성 성분을 포함한다. 또다른 구현예에서, 약학 조성물은 정맥 주사, 경구 투여, 구강 투여, 흡입, 경비 투여, 국소 투여, 안과 투여 또는 귀 투여를 위해 제형화된다. 추가의 구현예에서, 약학 조성물은 정제, 알약, 캡슐, 액체, 흡입제, 비강 분사액, 좌제, 현탁액, 젤, 콜로이드, 분산액, 현탁액, 용액, 에멀젼, 연고, 로션, 점안약 또는 귀약이다.
약학 조성물
치료법으로 사용되는 경우, 본원에 기재된 제공된 올리고뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드 조성물은 약학 조성물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 제공된 올리고뉴클레오티드의 치료학적 유효량, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 희석제, 약학적으로 허용가능한 부형제, 및 약학적으로 허용가능한 담체로부터 선택되는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 비활성 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 정맥 주사, 경구 투여, 구강 투여, 흡입, 경비 투여, 국소 투여, 안과 투여 또는 귀 투여를 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 정제, 알약, 캡슐, 액체, 흡입제, 비강 분사액, 좌제, 현탁액, 젤, 콜로이드, 분산액, 현탁액, 용액, 에멀젼, 연고, 로션, 점안약 또는 귀약이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 또는 이의 조성물을, 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼련물로, 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 당업자는 약학 조성물이 상기 기재된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 또는 이의 조성물의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다는 것을 인지할 것이다.
전달 향상 및 표적화를 위한 화합물
본원에 기재된 제공된 올리고뉴클레오티드는 핵산의 다양한 리간드와의 콘쥬게이트 뿐 아니라, 나노담체 접근법의 사용을 포함하는 다양한 전달 전략을 사용하여 전달될 수 있다. 임의의 핵산 전달 전략이본원에 기재된 제공된 올리고뉴클레오티드와의 사용을 위해 고려된다. 화학적 콘쥬게이트, 양이온성 지질/리포좀성 전달 소포 및 초분자성 나노담체를 포함하나 이에 제한되지 않는 예시적인 전달 전략 사이의 선택은 치료적 문맥에 따라 다를 것이고, 최적 전달 양식을 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있고 본원에 추가로 포함된다.
세포 투과 화합물 ("CPC")
수 많은 화합물이 핵산과 같은 카고를 위한 담체로서 작용하고 세포 내 및 생체 내 설정에서 핵산의 유입을 용이하게 하는 것으로 공지된다. 예시적인 담체는 본원에 참조로서 인용되는 문헌 Dietz et al., Molecular & Cellular Neuroscience, 27(2): 85-131 (2004) 에 기재되어 있다. Tat 와 안텐네페디아 (antennepedia) 전사 조절제로부터 유래되는 원형 (prototypical) CPC 는 다수의 신규한 부분에 의해 연결되었다. 예로서, 펩티드인 CPC 는 아르기닌 및 라이신, 또는 막-상호작용성 소수성 서열이 풍부한 비교적 짧은 (9-30 개 아미노산) 폴리양이온성 펩티드일 수 있다. CPC 는 재조합 DNA 기법에 의해 연결되거나 또는 펩티드, 올리고뉴클레오티드 또는 나노담체에 화학적으로 커플링된다 (이것은 이후 CPC 에 대한 '카고' 를 포함한다).
세포 표적화 리간드 ("CTL")
또다른 표적은 효과적인 내재화를 겪을 수 있는 세포 표면 수용체에 대해 높은 친화성으로 결합하는 CTL 의 사용에 의해 올리고뉴클레오티드를 전달하는 것이다. 잠재적인 리간드에는 항체, 파지 디스플레이 라이브러리로부터 유래되는 폴리펩티드, 및 소형 유기 분자가 포함된다. 부가적인 세포-표적화 리간드가 당업계에 공지되어 있거나 개발될 것이고, 본원에 기재된 본 발명과의 사용을 위해 고려된다 (ASGPR 의 경우 - GalNAc 콘쥬게이트된 siRNA 및 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, WO2012037254A1). 다양한 수용체가 종종 특정 세포 유형 상에서 우선적으로 발현되기 때문에, 상기 접근법은 올리고뉴클레오티드 시약에 대한 개선된 선택성의 가능성을 제공한다. 예시적인 수용체 표적에는 지단백질 수용체 (예컨대 간 내의 것들), 인테그린, 수용체 티로신 키나아제, 및 G-단백질 커플링 수용체 (GPCR) 수퍼패밀리가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
나노담체
다양한 초분자성 나노담체는 핵산을 전달하는데 사용될 수 있다. 예시적인 나노담체에는 리포좀, 양이온성 중합체 복합체 및 다양한 양이온성이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 핵산과 다양한 폴리양이온과의 복합체 형성은 세포내 전달을 위한 또다른 접근법이고; 이것은 PEG-화 폴리양이온, 폴리에틸렌아민 (PEI) 복합체, 양이온성 블록 공중합체, 및 덴드리머의 사용을 포함한다. PEI 및 폴리아미도아민 덴드리머를 포함하는 여러 양이온성 나노담체는 엔도좀으로부터 내용물을 방출시키는 것을 돕는다. 다른 접근법은 중합체성 나노입자, 중합체 마이셀, 양자 점 및 리포플렉스 (lipoplexes) 의 사용을 포함한다.
본원에 기재된 예시적 전달 전략 외에도 부가적인 핵산 전달 전략이 공지된다.
치료 및/또는 진단 적용에서, 본 발명의 화합물은 전신 및 국소 또는 국부화 투여를 비롯한 다양한 투여 방식에 대해 제형화될 수 있다. 기법 및 제형은 일반적으로 문헌 Remington, The Science and Practice of Pharmacy, (20th ed. 2000) 에서 발견될 수 있다.
제공된 올리고뉴클레오티드, 및 이의 조성물은 넓은 투여량 범위에 걸쳐 효과적이다. 예를 들어, 성인의 치료에서, 약 0.01 내지 약 1000 mg, 약 0.5 내지 약 100 mg, 약 1 내지 약 50 mg/일, 및 약 5 내지 약 100 mg/일의 투여량이 사용될 수 있는 투여량의 예이다. 정확한 투여량은 투여 경로, 화합물이 투여되는 형태, 치료하고자 하는 대상, 치료하고자 하는 대상의 체중, 및 담당의의 선호도 및 경험에 따라 다를 것이다.
약학적으로 허용가능한 염은 일반적으로 당업자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어 제한 없이, 아세테이트, 벤젠술포네이트, 베실레이트, 벤조에이트, 비카보네이트, 비타르트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트, 카른실레이트, 카보네이트, 시트레이트, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트, 헥실레소르시네이트, 히드라다민, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 히드록시나프토에이트, 요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 말레레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 무케이트, 납실레이트, 니트레이트, 파모에이트 (엠보네이트), 판토테네이트, 포스페이트/디포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 숙시네이트, 술페이트, 탄네이트, 타르트레이트, 또는 테오클레이트를 포함할 수 있다. 기타 약학적으로 허용가능한 염은 예를 들어, Remington, The Science and Practice of Pharmacy (20th ed. 2000) 에서 찾을 수 있다. 바람직한 약학적으로 허용가능한 염에는 예를 들어, 아세테이트, 벤조에이트, 브로마이드, 카보네이트, 시트레이트, 글루코네이트, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 말레에이트, 메실레이트, 납실레이트, 파모에이트 (엠보네이트), 포스페이트, 살리실레이트, 숙시네이트, 술페이트, 또는 타르트레이트가 포함된다.
치료되는 특정 상태에 따라, 이러한 작용제는 액체 또는 고체 투여량 형태로 제형화될 수 있고 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 작용제는 예를 들어, 당업자에게 공지된 것과 같은 정기적- 또는 지속적- 저 방출 형태로 전달될 수 있다. 제형화 및 투여를 위한 기법은 문헌 Remington, The Science and Practice of Pharmacy (20th ed. 2000) 에서 찾을 수 있다. 적합한 경로에는 경구, 구강, 흡입 분무에 의해, 설하, 직장, 경피, 질내, 경점막, 비강 또는 장내 투여; 근육내, 피하, 척수내 주사 뿐 아니라 경막내, 직접적 심실내, 정맥내, 관절내, 흉골내, 활액내, 간내, 병반내, 두개내, 복강내, 비강내, 또는 안내 주사를 비롯한 비경구 전달 또는 다른 전달 방식이 포함될 수 있다.
주사를 위해, 본 발명의 작용제는 수용액, 예컨대 생리학적으로 적합한 완충제, 예컨대 행크 (Hank) 용액, 링거액 또는 생리학적 식염수 완충액 내에서 제형화되고 희석될 수 있다. 이러한 경점막 투여의 경우, 장벽을 침투하기에 적합한 침투제가 제형에서 사용될 수 있다. 이러한 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.
전신적 투여에 적합한 용량으로 본 발명의 실시를 위해 본원에 기재된 화합물을 제형화하기 위한 약학적으로 허용가능한 비활성 담체의 사용이 본 발명의 범주 내에 있다. 담체의 적합한 선택 및 적합한 제조 실시와 함께, 본 발명의 조성물, 특히, 용액으로서 제형화된 것은 비경구로, 예컨대 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다.
화합물은 경구 투여에 적합한 투여량으로 당업계에 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 담체를 사용하여 쉽게 제형화될 수 있다. 이러한 담체는 본 발명의 화합물이 치료하고자 하는 대상 (예를 들어, 환자) 에 의한 경구 섭취를 위해 정제, 알약, 캡슐, 액체, 젤, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로서 제형화되는 것을 가능하게 한다.
비강 또는 흡입 전달을 위해, 본 발명의 작용제는 또한 당업자에게 공지된 방법에 의해 제형화될 수 있고, 예를 들어, 가용화, 희석 또는 분산 물질, 예컨대, 식염수, 방부제, 예컨대 벤질 알코올, 흡수 프로모터, 및 플루오로카본의 예가 포함될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 약학 조성물은 유효 성분이 그의 의도되는 목적을 달성하기 위해 유효량으로 함유되는 조성물을 포함한다. 유효량의 결정은 당업자의 능력 내에 있고, 특히 본원에 제공된 상세한 설명의 견지 내에 있다.
유효 성분 외에, 상기 약학 조성물은 약학적으로 사용될 수 있는 제제 내에 활성 화합물의 가공을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 적합한 약학적으로 허용가능한 담체를 함유할 수 있다. 경구 투여를 위해 제형화된 제제는 정제, 당의정, 캡슐, 또는 용액의 형태일 수 있다.
경구용 약학 제제는 활성 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 임의로 산출된 혼합물을 분쇄하고, 바람직한 경우, 정제 또는 당의정 코어를 수득하기 위해 적합한 보조제를 첨가한 후, 과립의 혼합물을 처리하는 것에 의해 수득될 수 있다. 적합한 부형제는 특히, 충전제, 예컨대 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로오스 제제, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 트라가칸스 검, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸-셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸-셀룰로오스 (CMC), 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP: 포비돈) 이다. 바람직한 경우, 붕해제, 예컨대 가교결합된 폴리비닐피롤리돈, 아가, 또는 알킨산 또는 이의 염, 예컨대 나트륨 알기네이트가 첨가될 수 있다.
당의정 코어는 적합한 코팅과 함께 제공된다. 본 목적을 위해, 농축된 당 용액이 사용될 수 있고, 이것은 임의로 아라비아 검, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 카르보폴 젤, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및/또는 이산화티타늄, 락커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있다. 염료 또는 안료가 확인을 위한 정제 또는 당의정 코팅 또는 상이한 조합의 활성 화합물 투여량을 특징화하기 위해 첨가될 수 있다.
경구로 사용될 수 있는 약학 제제에는 젤라틴으로 제조된 밀어서-맞추는 (push-fit) 캡슐 뿐 아니라, 젤라틴, 및 가소제, 예컨대 글리세롤 또는 소르비톨로 제조된 연질의, 밀봉 캡슐이 포함된다. 밀어서-맞추는 캡슐은 유효 성분을 충전제, 예컨대 락토오스, 결합제, 예컨대 전분, 및/또는 윤활제, 예컨대 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트 및, 임의로 안정화제와 혼련물로 함유할 수 있다. 연질 캡슐 내에, 활성 화합물은 적합한 액체, 예컨대 지방 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제가 첨가될 수 있다.
치료 또는 예방하고자 하는 특정 상태, 또는 질환 상태에 따라, 상기 상태를 치료 또는 예방하기 위해 정상적으로 투여되는 부가적인 치료제는 본 발명의 억제제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학치료제 또는 기타 항-증식제는 증식성 질환 및 암을 치료하기 위해 본 발명의 억제제와 조합될 수 있다. 공지된 화학치료제의 예에는, 아드리아마이신, 덱사메타손, 빈크리스틴, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 토포테칸, 탁솔, 인터페론, 및 백금 유도체가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 비-라세믹 프로-올리고뉴클레오티드와 또한 조합될 수 있는 작용제의 기타 예는 제한 없이, 항-염증제, 예컨대 코르티코스테로이드, TNF 차단제, IL 1 RA, 아자티오프린, 시클로포스파미드, 및 술파살라진; 면역조절제 및 면역억제제, 예컨대 시클로스포린, 타크롤리무스, 라파마이신, 마이코페놀레이트 모페틸, 인터페론, 코르티코스테로이드, 시클로포파미드, 아자티오프린, 및 술파살라진; 신경영양성 인자, 예컨대 아세틸콜린스테라제 억제제, MAO 억제제, 인터페론, 항-경련제, 이온 채널 차단제, 릴루졸, 및 항-파킨슨제; 심혈관 질환 치료제, 예컨대 베타-차단제, ACE 억제제, 이뇨제, 니트레이트, 칼슘 채널 차단제, 및 스타틴; 간 질환 치료제, 예컨대 코르티코스테로이드, 콜레스티라민, 인터페론, 및 항-바이러스제; 혈액 질환 치료제, 예컨대 코르티코스테로이드, 항-백혈병제, 및 성장 인자; 당뇨병 치료제, 예컨대 인슐린, 인슐린 유사체, 알파 글루코시다아제 억제제, 비구아나이드, 및 인슐린 증감제; 및 면역결핍 장애 치료제, 예컨대 감마 글로불린이 포함된다.
상기 부가적인 작용제는 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 및 이의 조합으로부터, 개별적으로, 다중 투여량 섭생의 일부로서 투여될 수 있다. 대안적으로, 상기 작용제는 단일 조성물로, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드, 및 이의 조성물과 함께 혼합된, 단일 투여량 형태의 일부일 수 있다.
하기에 제공된 예 및 제제는 제공된 올리고뉴클레오티드 및 이의 조성물, 및 이의 제조 방법을 추가로 예증하고 예시한다. 본 발명의 범주가 어떠한 방식으로도 하기 실시예 및 제제의 범주를 제한하지는 않는 것으로 이해된다.
본 발명의 상기 및 기타 구현예의 기능 및 장점은 하기 기술되는 실시예로부터 더욱 충분히 이해될 것이다. 하기 실시예는 본 발명의 이점을 설명하기 위한 것으로 의도되나, 본 발명의 완전한 범주는 예시하지 않는다.
올리고뉴클레오티드 조성물의 분석 방법
일부 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드 조성물의 분석 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 하나 이상의 올리고뉴클레오티드의 확인, 순도, 정량 및/또는 품질을 검출, 측정 및/또는 정량화한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a) 첫번째 조성물의 첫번째 분석을 수행하는 단계로서, 상기 첫번째 조성물이 다수의 상이한 유형의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 단계; 및
b) 두번째 조성물의 첫번째 분석과 필적가능한 조건 하에서, 상기 수행된 첫번째 분석을 두번째 분석과 비교하는 단계로서, 두번째 조성물이 올리고뉴클레오티드의 키랄 제어된 조성물이고, 첫번째와 두번째 분석 사이의 차이가 두번째 조성물과 비교하여 첫번째에서 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 유형의 존재 또는 수준의 차이를 반영하는 단계.
일부 구현예에서, 두번째 조성물은 오직 단일 유형의 올리고뉴클레오티드 만을 함유한다. 일부 구현예에서, 두번째 조성물은 한가지 초과의 유형의 올리고뉴클레오티드를 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 예를 들어, 실시예 17 및 48 에 예증되듯이 올리고뉴클레오티드 조성물의 품질 제어를 위해 사용된다. 당업자에게 인지될 듯이, 실시예 48 에 제시된 데이터는 조성물을 비교하는 묘사된 분석이 비-키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 합성에 의해 제조된 랜덤 올리고뉴클레오티드 조성물 (첫번째 조성물) 이, 극히 적은 수준의 특정 올리고뉴클레오티드 유형, 예컨대 키랄 제어된 조성물의 가득찬 Rp 또는 Sp 유형 (두번째 조성물) 을 포함하는 것을 보여줌을 확인하였다.
실시예
이하 본 발명의 특정한 비-제한적인 구현예를 설명하고자 한다. 따라서, 본원에 기재된 본 발명의 구현예가 본 발명의 원리의 적용의 단지 예증인 것으로 이해된다. 예증된 구현예를 상세화하기 위한 본원의 참조는 특허청구범위를 제한하고자 의도되지 않는다.
올리고뉴클레오티드 합성의 일반적 설명
상기 및 본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드 및 이의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 합성은 고체 지지체를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 합성은 용액에서 수행된다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 합성은 고체 지지체를 사용하는 단계 및 용액 상에서의 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 고체 지지체를 사용하는 단계는 올리고뉴클레오티드 합성기 상에서 수행된다.
고체 지지체의 제조: 지지체 (Highly Cross-linked Polystyrene (HCP) 또는 Controlled Pore Glass (CPG)) 를 올리고뉴클레오티드 서열 내에 함유된 첫번째 5'-O-DMTr 보호된 뉴클레오시드를 적재하기 위해 사용하였다. 일부 구현예에서, 문헌 Alul et al., Oxalyl-CPG: a labile support for synthesis of sensitive oligonucleotide derivatives, Nucleic Acids Research 1991, 19(7), 1527 에 기재된 바와 같이, 옥살릴 기가 고체 지지체 상의 아민 기에 대해 첫번째 뉴클레오시드의 3'-OH 기를 연결하기 위해 사용되었다. 일부 구현예에서, 표준 숙시닐 기가 링커로서 사용되었다.
고체 지지체 상의 뉴클레오티드의 탈-트리틸화 (Detritylation): 디클로로메탄 (DCM, CH2Cl2) 중의 3% TCA (트리클로로아세트산) 의 용액을 5'-O-DMTr 을 탈-차단하기 위해 합성기 상에 장치되었던 지지체를 함유하는 컬럼으로 전달하였다.
CMPT-매개된 키랄 포스포라미다이트 커플링: 고체 지지체의 무수 아세토니트릴 (ACN) 로의 세척 및 건조 아르곤으로의 역 플러시에 의한 건조 후, 자유 5'-OH 를 올리고뉴클레오티드 서열 내의 다음 뉴클레오티드와 커플링시켜, 3' 에서 5' 말단으로 성장시켰다. 우수한 입체이성질 부분입체이성질체 과량 (전형적으로 >99%) 으로의 고도로 효과적인 커플링에서 산출되는, CMPT (하기) 과 함께 키랄 포스포라미다이트의 용액의 고체 지지체에 대한 상기 수반된 공동-전달은, 문헌 Wada et al. J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 16031-1603; Angew. Chem. Intern. Ed. 2009, 48, 496-499 에 기재되는 바와 같이, 키랄 포스파이트 디에스테르 생성물을 산출하였다. 용매는 통상 아세토니트릴 (ACN) 이었으나, 다른 용매도 또한 사용될 수 있다.
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상기 연구에 이용된 키랄 포스포라미다이트:
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Figure 112015015568410-pct00403
Figure 112015015568410-pct00404
Figure 112015015568410-pct00405
부가적인 포스포라미다이트:
Figure 112015015568410-pct00406
Figure 112015015568410-pct00407

캡핑: 일부 구현예에서, 캡핑 단계는 2 단계로 실시되었다. 일부 구현예에서, 상기-언급된 2 캡핑 단계는 하나로 조합되고 1-용기 내에서 수행되었다. 다르게 구체화되지 않는다면, 2 단계 캡핑이 본원에 기재된 실시예의 합성에서 사용되었다.
2 단계 캡핑의 경우, 고체 지지체의 무수 ACN 로의 세척 및 건조 아르곤으로의 역 플러시에 의한 건조 후, 전형적으로 2,6-루티딘/THF - 1:4 (v/v) 중의 5% Pac2O 용액을 포함하는 'Cap A' 시약을 먼저 고체 지지체에 도입하였다. 이론에 제한되는 의도 없이, Cap A 는 키랄 보조제의 자유 아민을 효과적으로 캡핑 (아실레이트) 하기에 충분히 반응성이었다. 일부 구현예에서, 이러한 보호는 중간체 포스파이트의 재배열/분해를 방지한다. 상기 처리에 즉시 이어서, 'Cap A' 및 'Cap B' 시약의 1:1 혼합물을 고체 지지체를 함유하는 컬럼으로 송부하였다. 'Cap B' 는 'Cap A' 와 혼합된 경우, 고체 지지체에 결합된 예를 들어, 미반응된 5'-OH 올리고뉴클레오티드의 캡핑에 영향을 주는 THF 중의 16% N-메틸이미다졸 (NMI) 의 용액이었다. 이론에 제한됨 없이, 캡핑 단계는 키랄 보조제의 아미노기의 캡핑 없이, 사이클 내의 이후 황화 단계가 예를 들어, 인 원자 상의 보조제의 자유 아민의 원치않는 분자내 친핵서 공격으로 인해, 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오티드 간 연결의 분할 및 분해를 유도하였다는 점에서 매우 중요했다. 게다가, 유출 (run-off) 미커플링된 고체-지지된 올리고뉴클레오티드 쇼트머 (shortmer) 의 5'-OH 기의 캡핑은 연장된 실패한 서열의 축적 및 최종 정제가 불가능하지는 않더라고 부진하고 어렵기 때문에 기인하는 낮은 수율을 피하면서, 높은 순도의 미정제 전장 올리고뉴클레오티드를 수득하는 것과 관련하여 중요하다.
황화: 고체 지지체의 무수 ACN 로의 세척 및 건조 아르곤으로의 역 플러시에 의한 건조 후, 산출된 캡핑된 포스파이트 트리에스테르 중간체를 산화적 황화에 적용하였다. 황화제의 용액을 황화제, 예를 들어, 알킬 티오술포네이트 유도체 (300 mM) 를, ACN 중의 N,O-비스(트리메틸실릴)트리플루오로아세타미드 (BSTFA) (100 mM) 와 혼합함으로써 제조하였다. 이것은 이후 고체 지지체를 함유하는 컬럼으로 전달되고, 특정 시간 (통상 5 - 60 분) 동안 반응하도록 두었다. 일부 구현예에서, 황화 티오술포네이트 시약이 BSTFA 의 첨가 없이, 무수 ACN 중의 300 mM 용액으로서 사용되었다. 일부 구현예에서, BSTFA 가 있는 및 없는 시약 용액은 유사한 결과를 산출하였다.
산화: 일부 구현예에서, 포스포디에스테르로의 산화가 황화 단계 대신에 수행되었다. 산화를 THF/피리딘/물 (70:20:10 - v/v/v) 공-용매 시스템 중의 0.02 M I2 의 용액을 전달하여, 비-키랄 포스포디에스테르 연결을 형성함으로써 달성하였다.
DMTr 기의 5'-탈차단화: DMTr 제거는 DCM 중의 3% TCA 를 사용하여 발휘되었다. 탈-차단화 후, 사이클은 이후 커플링, 캡핑, 황화/산화 (각각의 다음 사이클에 대해, 동일한 황화제로의 황화, 또는 상이한 황화제로의 황화, 또는 황화 대신 산화) 및 탈-차단화의 추가의 반복되는 회차에 대해 실시될 수 있다. 대안적으로, 미리-디자인된 길이에 도달하는 경우, 올리고뉴클레오티드를 사이클 배출, 및 임의로 합성-후 처리에 적용하였다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 말단 5'-O-DMTr 기의 탈-차단화 전에 제거되었다.
키랄 보조제의 자발적인 제거: 키랄 보조제의 자발적인 제거가 DMTr 기의 황화, 산화, 탈-차단화, 또는 이의 조합 동안 달성되었다. 키랄 보조제를 제거하기 위해 특정한 단계가 필요하지 않았다.
분할 및 탈보호: 원하는 길이 올리고뉴클레오티드는 상응하는 링커 (옥살릴 또는 숙시닐 연결된 HCP 또는 CPG) 를 분할함으로써 그의 고체 지지체로부터 제거되었고, 동시에 올리고뉴클레오티드 상의 보호기는 탈보호되었다. 일부 구현예에서, 고체-지지된 올리고뉴클레오티드를, 문헌 Reese and Yan, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2002, 2619 에 기재된 바와 같이 먼저 건조 ACN-트리메틸실릴 클로라이드 중의 1,5-디아자비시클로(4.3.0)논-5-엔 (DBN) 또는 1,8-디아자비시클로운데크-7-엔 (DBU) 의 수성 1 M 용액 - 16:1 (v/v) 으로 10 분 동안 r.t. 에서 처리한 다음, 건조 ACN 으로 세척하였다. 일부 구현예에서, 물질을 18 h 의 기간 동안 r.t. 에서 또는 60 ℃ 에서 2 h 동안 건조 피리딘 중의 건조 프로필아민의 용액 (전형적으로 1:4 비율로) 으로 처리하였다. 일부 구현예에서, 양 조건으로 미정제 화합물을 유사한 양으로 산출하였다. 일부 구현예에서, 미정제 올리고뉴클레오티드를 지지체로부터 분할하고, 18 h 의 기간 동안 r.t. 에서 또는 60 ℃ 에서 5 h 동안 28% 수성 암모니아로의 처리에 의해 탈보호하였다. 일부 구현예에서, 양 조건으로 미정제 화합물을 유사한 양으로 산출하였다. 용매를 이후 증발시키고, 잔류물을 0-50% DMSO 으로 ~pH 1.5 수용액 (pH 는 원하는 경우 변경될 수 있음) 으로 처리하고, 미정제 생성물을 HPLC 및 UPLC/MS 의 조합에 의해 분석에 적용하였다. 생성물을 역상 HPLC (RP-HPLC), 정상상 HPLC, 이온 교환 HPLC (IE-HPLC) 또는 크기 배제 크로마토그래피 중 하나 또는 이의 조합에 의해 정제하였다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 고체 지지체로부터 제거하고, DMTr 기의 탈-차단화 전에 탈보호 하고 정제하였다.
실시예 1: 황화제의 합성 및 포스포라미다이트의 합성
일부 구현예에서, 본 발명은 황화제, 및 이의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제공된 황화제를 본 출원에 기재된 올리고뉴클레오티드의 합성에서 사용하였다. 예시적인 황화제 및 이들의 합성은 도식 E-1 에 예시된다.
도식 E-1. 황화제의 합성.
Figure 112015015568410-pct00408
Figure 112015015568410-pct00409
Figure 112015015568410-pct00410
Figure 112015015568410-pct00411
Figure 112015015568410-pct00412
Figure 112015015568410-pct00413
Figure 112015015568410-pct00414
Figure 112015015568410-pct00415
(i) MsCl, NEt3; (ii) NaMTS; (iii) PivCl, NEt3; (iv) NaMTS, NaI; (v) 화합물 4; (vi) TMSCl, NEt3; (vii) 화합물 35, DEAD, PPh3; (viii) TBAF; (ix) TsCl, 피리딘; (x) Ac2O, 피리딘; (xi) KTTS; (xii) (COCl)2; (xiii) Fmoc-OSu, Py; (xiv) NaOH (aq); (xv) Na-p-ClPheTS; 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트, Br2; (xvii) H2O2, NaI
화합물 5 의 합성
Figure 112015015568410-pct00416
화합물 2: 디클로로메탄 (DCM, 50 mL) 중의 (Z)-부트-2-엔-1,4-디올 (0.93 ml, 11.3 mmol) 및 트리에틸아민 (3.3 ml, 24 mmol) 의 용액을, DCM (50 mL) 중의 메탄술포닐 클로라이드 (1.9 ml, 24 mmol) 의 교반하는 빙냉 용액에 적가 방식으로 첨가하였다. 0.5h 동안 r.t. 에서 교반 후, 혼합물을 얼음 위에 붓고 추출하였다. 유기 층을 수집하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 용매의 제거 후, 2.66 g 화합물 2 를 수득하고 (96%), 이것을 NMR 에 의해 반응 다음 단계에서 직접 사용하기 위해 충분히 순수한 것으로 판단하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.94 (ddd, J = 5.4, 4.1, 1.3 Hz, 2H), 4.83 (dd, J = 4.1, 1.3 Hz, 4H), 3.04 (s, 6H); 13C NMR 128.34, 64.38, 38.27; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 262.04, 측정치: 262.05; Rf = 0.3 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 3: MeOH (20 ml) 중의 나트륨 메탄술포노티오에이트 (1.51 g, 11.3 mmol) 의 용액을 순 (Z)-부트-2-엔-1,4-디일 디메탄술포네이트 (1.25 g, 5.12 mmol) 로 실온에서 처리하였다. 5 분 후, 침전이 발생하는 것을 관찰하였다. 36 h 후, 혼합물을 물과 DCM 사이로 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 용매의 제거로 무색 오일을 산출하였다. 컬럼 크로마토그래피 (ISCO) 를 순수한 화합물 3 (0.89 g, 63%) 을 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.84 (ddd, J = 6.6, 5.1, 1.5 Hz, 2H), 3.92 (dd, J = 5.1, 1.5 HZ, 4H), 3.33 (s, 6H); 13C NMR 128.1, 51.47, 33.13; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 294.00, 측정치: 294.04; Rf = 0.4 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 4: 아르곤 분위기 하에서, 모르폴린 (10 g, 115 mmol) 을 둥근 바닥 플라스크 내의 에틸렌 술파이드 (15 g, 250 mmol) 에 첨가하였다. 반응을 7 시간 동안 교반하고, 실리카 겔 컬럼 상에 직접 로딩하였다. 컬럼을 DCM 로 먼저 세정하고, 그 다음 2% MeOH/DCM 을 사용하여 화합물 4 (15.3 g, 91%) 를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (399MHz, CDCl3) δ 3.67-3.59 (m, 4H), 2.63-2.52 (m, 2H), 2.51-2.45 (m, 2H), 2.44-2.34 (m, 4H); MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+ = 148.07, 측정치: 148.1.
화합물 5: 2-모르폴리노에탄티올 (0.21 g, 1.44 mmol) 의 DCM 용액 (1 mL) 을 주사기를 통해 DCM (10 mL) 중의 화합물 3 (0.40 g, 1.44 mmol) 의 교반 용액에 실온에서 적가하였다. 첨가 직후, 반응을 TLC 에 의해 확인하였고, 생성물 및 일부 이량체의 빠른 형성을 보였다. 0.5 h 후, 혼합물을 물의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 진공에서 용매의 제거 후, 컬럼 크로마토그래피로 화합물 5 (0.29 g, 58%) 를 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.78 (m, 2H), 3.92 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.46 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 3.31 (s, 3H), 2.84 (dd, J = 7.8, 6.7 Hz, 2H), 2.66 (dd, J = 7.8, 6.7, 2H), 2.48 (t, J = 4.6 Hz, 4H); 13C NMR 130.35, 126.27, 66.97, 58.20, 53.67, 51.52, 36.22, 35.16, 33.67; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 344.05, 측정치: 344.06; Rf = 0.3 (EtOAc).
Figure 112015015568410-pct00417
화합물 5b: 화합물 4b (395 mg, 1.085 mmol) 의 DCM 용액 (1 mL) 을 주사기를 통해 화합물 3 (300 mg, 1.085 mmol) 의 교반 DCM (15 mL) 용액에 r.t. 에서 적가하였다. 1h 후, 산출된 용액을 물의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하였다. 진공에서 용매의 제거 후, 컬럼 크로마토그래피로 화합물 5b 를 무색 오일 (0.35 g, 58%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.83 - 5.70 (m, 2H), 5.35 - 5.21 (dt, J = 26.0, 9.3 Hz, 2H), 5.16 - 5.07 (m, 1H), 4.59 - 4.54 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.23 - 4.18 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (dd, J = 6.7, 1.2 Hz, 2H), 3.80 - 3.72 (ddd, J = 10.1, 4.6, 2.6 Hz, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.03 (s, 6H), 2.00 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 170.68, 170.30, 169.51, 169.30, 129.43, 127.14, 87.73, 76.49, 73.89, 69.16, 67.99, 61.99, 51.64, 35.89, 33.58, 20.95, 20.80, 20.74, 20.71; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 578.07, 측정치: 577.96; Rf = 0.5 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 7 의 합성
Figure 112015015568410-pct00418
화합물 6: DCM (50 ml) 중의 (Z)-부트-2-엔-1,4-디올 (0.93 ml, 11.3 mmol) 및 트리에틸아민 (1.6 mL, 11.5 mmol) 의 빙냉 용액을 주사기를 통해 피발로일 클로라이드 (1.4 ml, 11.4 mmol) 와 함께 2 분에 걸쳐 적가 처리하였다. 1 h 후, TLC 로 양호한 반응 결과를 나타냈다. 산출된 용액을 물의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 진공에서 농축하였다. 상기 미정제 화합물은 TLC (Rf = 0.6, 1:1 EtOAc/헥산) 에 의해 출발 디올을 함유하지 않는 것으로 밝혀졌고, 메실레이트를 제조하기 위한 미정제 물질로 사용되었다. 미정제 물질을 트리에틸아민 (1.7 mL, 12 mmol) 을 함유하는 DCM (50 ml) 내로 취하고, 얼음 배스 상에서 냉각시켰다. 메탄술포닐 클로라이드 (0.98 ml, 12.66 mmol) 를 주사기를 통해 2 분에 걸쳐 적가하였다. 첨가 직후 TLC 는 출발 재료의 완전한 소모를 나타내었다. 산출된 용액을 물의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 6, 1.48 g, 52% 를 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.89 - 5.75 (m, 2H), 4.89 - 4.84 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.68 - 4.63 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H), 1.19 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 178.28, 130.61, 126.11, 65.08, 59.65, 38.84, 38.21, 27.25; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 268.12, 측정치: 268.20; Rf = 0.3 (20% EtOAc/헥산).
화합물 7: 나트륨 메탄술포노티오에이트 (0.63 g, 4.70 mmol) 및 (Z)-4-(메틸술포닐옥시)부트-2-에닐 피발레이트 (1.00 g, 4.00 mmol) 의 MeOH (10 ml) 용액을 r.t. 에서 18 h 동안 백색 침전물의 형성과 함께 (10 분 후) 교반하였다. 산출된 용액을 물 및 DCM 의 첨가에 의해 분배하였다. DCM 내로 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 화합물 7, 0.83 g, 78% 를 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.82 - 5.73 (m, 2H), 4.73 - 4.66 (m, 2H), 3.95 - 3.87 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 1.19 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 178.35, 129.37, 127.32, 59.50, 51.44, 38.84, 33.61, 27.28; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 284.10, 측정치: 284.19; Rf = 0.4 (20% EtOAc/헥산).
화합물 9 의 합성
Figure 112015015568410-pct00419
화합물 9: 피발로일 클로라이드 (0.60 g, 5.0 mmol) 를 DCM (20 ml) 중의 S-2-히드록시에틸 메탄술포노티오에이트 (0.65 g, 4.16 mmol) 의 교반 용액에 적가 방식으로 첨가하였다. r.t 에서 2 h 후, 산출된 혼합물을 백색 침전과 함께 물로 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고 오일로 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 화합물 9 를 무색 오일 (0.45 g, 45%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.39 - 4.34 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.44 - 3.39 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.36 (s, 3H), 1.20 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 62.10, 51.11, 38.96, 35.19, 27.24; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 158.08, 측정치: 158.04; Rf = 0.3 (20% EtOAc/헥산).
화합물 12 의 합성
Figure 112015015568410-pct00420
화합물 11: 피발로일 클로라이드 (4.96 ml, 40.3 mmol) 를 주사기를 통해 2-(히드록시메틸)페놀 (5 g, 40.3 mmol) 및 트리에틸아민 (5.61 ml, 40.3 mmol) 의 빙냉 DCM 용액 (50 mL) 에 적가하였다. 미정제 피발레이트 에스테르의 빙냉 용액을 트리에틸아민 (6.74 ml, 48.4 mmol) 및 50 mL DCM 으로 처리하였다. 메탄술포닐 클로라이드 (3.43 ml, 44.3 mmol) 를 이후 천천히 (5 분) 주사기를 통해 천천히 첨가하고, 산출된 혼합물을 r.t. 로 가온시켰다. 혼합물을 얼음에 붓고, 유기층을 분리한 다음, 포화 NaHCO3 (aq) 로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하여, 10.5 g 미정제 담황색 오일을 산출하였다. 컬럼 크로마토그래피 (ISCO) 로 순수한 11 5.45 g, 47% 를 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.53 - 7.46 (dd, 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.46 - 7.40 (dt, 7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.24 (t, 7.7 Hz, 1H), 7.13 - 7.06 (d, 7.7 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 2.79 (s, 3H), 1.40 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.05, 150.06, 131.18, 131.07, 126.35, 125.94, 123.21, 66.88, 39.48, 38.82, 27.30, 27.26. MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 304.12, 측정치: 303.99; Rf = 0.4 (20% EtOAc/헥산).
화합물 12: 나트륨 메탄술포노티오에이트 (0.825 g, 6.15 mmol) 의 MeOH (20 mL) 용액을 2-((메틸술포닐옥시)메틸)페닐 피발레이트 (1.76 g, 6.15 mmol) 로 r.t. 에서 처리하고, 18 h 동안 교반하며 방치시켰다. 혼합물을 물과 DCM 사이로 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하여, 무색 오일을 산출하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 12 를 옅은 무색 오일, 0.754 g, 41% 를 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.48 - 7.44 (dd, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.39 - 7.34 (td, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.25 - 7.20 (td, J = 7.6, 1.2 Hz, 1H), 7.10 - 7.06 (dd, J = 8.2, 1.2 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 2.90 (s, 3H), 1.39 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 176.69, 149.59, 131.17, 129.85, 127.41, 126.18, 123.40, 51.43, 39.47, 36.01, 27.30; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 320.10, 측정치: 320.09; Rf = 0.4 (20% EtOAc/헥산).
화합물 14 의 합성
Figure 112015015568410-pct00421
화합물 14: 클로로메틸 피발레이트 (0.478 ml, 3.32 mmol) 를 아세톤 (7 ml) 중의 나트륨 요오다이드 (0.050 g, 0.33 mmol) 및 나트륨 메탄술포노티오에이트 (0.445 g, 3.32 mmol) 의 교반 혼합물에 r.t. 에서 첨가하였다. 24 h 후, TLC 는 생성물로의 양호한 전환을 보였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 물과 DCM 사이로 분배하였다. 유기층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하여, 무색 오일을 산출하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 14 를 약간의 분홍색 고체로서 산출하였다, 0.41 g, 55%. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 5.67 (s, 2H), 3.39 (s, 3H), 1.24 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.35, 67.84, 52.20, 38.93, 27.05; Rf = 0.5 (20% EtOAc/헥산).
화합물 16 의 합성
Figure 112015015568410-pct00422
화합물 16: US 3,484,473 에서 이전에 기재된 바와 같이 15 및 NaMTS 로부터 제조되었다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.86 (s, 2H), 3.45 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 52.15, 41.50.
화합물 18 및 19 의 합성
Figure 112015015568410-pct00423
화합물 18: 이전에 기재된 바와 같이 17 및 NaMTS 로부터 제조되었다: Chem. Pharm. Bull. Vol. 12(11) p. 1271, 1964. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 3.55 (s, 4H), 3.40 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 50.67, 35.96.
화합물 19: 2-모르폴리노에탄티올 (0.17 g, 1.2 mmol) 의 DCM 용액 (1 mL) 을 주사기를 통해 DCM (10 mL) 중의 화합물 18 (300 mg, 1.2 mmol) 의 교반 용액에 r.t. 에서 적가하였다. 첨가 직후, TLC 는 생성물 및 일부 이량체의 빠른 형성을 보였다. 0.5 h 후, 혼합물을 NaHCO3 용액의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 19 (0.20 g, 53%) 를 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 3.73 - 3.67 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.51 - 3.46 (m, 2H), 3.35(s, 3H), 3.07 - 3.01 (m, 2H), 2.88 - 2.83 (m, 2H), 2.69 - 2.63 (m, 2H), 2.52 - 2.43 (t, J = 4.6 Hz, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 66.96, 57.91, 53.58, 50.79, 37.66, 36.10, 35.52; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 318.03, 측정치: 318.04; Rf = 0.3 (EtOAc).
화합물 22 의 합성
Figure 112015015568410-pct00424
화합물 21: 화합물 20 을 화합물 11 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 21 로 전환시켰다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.45 - 7.36 (m, 4H), 5.37 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 2.93 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 178.20, 135.65, 131.92, 130.48, 129.98, 129.78, 128.88, 69.05, 63.39, 38.94, 38.36, 27.27; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 318.24, 측정치: 318.14; Rf = 0.4 (20% EtOAc/헥산).
화합물 22: 화합물 21 을 화합물 12 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 22 로 전환시켰다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.46 - 7.32, (m, 4H), 5.21 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 3.03 (s, 3H), 1.21 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 178.24, 135.10, 133.15, 130.93, 130.32, 129.05, 129.00, 63.61, 51.07, 38.97, 38.03, 27.30; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 334.11, 측정치: 334.13; Rf = 0.4 (20% EtOAc/헥산).
화합물 25 의 합성
Figure 112015015568410-pct00425
화합물 23: 화합물 23 을 문헌 방법에 따라 제조한다 (Journal of Medicinal Chemistry, 50(23), 5568-5570, 2007).
화합물 24: 화합물 23 (1 mmol) 의 빙냉 피리딘 용액 (10 mL) 을 이어서, 아세틸 클로라이드 (1 mmol) 와 함께, 그 다음, 5 분 후 MsCl (1.1 mmol) 적가 방식으로, 처리한다. 용액을 실온으로 가온시킨 다음, 용매를 제거하였다. 잔류물을 EtOAc 에 용해하고, 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 24 를 산출하였다.
화합물 25: 화합물 24 를 화합물 12 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 25 로 전환시켰다.
화합물 27 의 합성
Figure 112015015568410-pct00426
화합물 27: 화합물 26 을 화합물 14 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 27 로 전환시켰다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 3.97 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.48 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 168.84, 53.35, 51.53, 37.83; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 202.02, 측정치: 201.96; Rf = 0.2 (20% EtOAc/헥산).
화합물 29 의 합성
Figure 112015015568410-pct00427
화합물 29: 화합물 28 을 화합물 14 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 29 로 전환시켰다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 3.39 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.85 (t, J = 6.8 Hz, 2H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 171.53, 52.29, 50.66, 34.51, 31.20; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 216.10, 측정치: 216.04; Rf = 0.2 (20% EtOAc/헥산).
화합물 31 의 합성
Figure 112015015568410-pct00428
화합물 30: 화합물 30 을 문헌 방법에 따라 제조한다 (Tetrahedron, 42(2), 601-607; 1986).
화합물 31: 화합물 31 을 특허 절차에 따라 화합물 30 으로부터 제조한다 (US 20090181444).
화합물 33 의 합성
Figure 112015015568410-pct00429
화합물 33: 화합물 33 을 특허 절차에 따라 화합물 32 로부터 제조한다 (US 20090181444).
화합물 38 의 합성
Figure 112015015568410-pct00430
화합물 36: 화합물 34 (1 mmol) 의 빙냉 DCM (20 mL) 용액을 NEt3 (1 mmol), 이후 TMS-Cl (1.1 mmol) 의 적가로 처리하였다. 1 h 후, 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 미정제 TMS 보호된 물질을 THF (10 mL) 에 재-용해시키고, 여기에 PPh3 (1.2 mmol), 화합물 35 (1.2 mmol), 이후 DEAD (1.2 mmol, 적가) 를 연속으로 첨가한다. 실온에서 18 h 동안 교반 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 36 을 산출하였다.
화합물 37: 화합물 36 (0.5 mmol) 의 THF (10 mL) 용액을 TLC 에 의한 모니터링 없이, TBAF (THF 중의 1M 용액의 1 mmol) 로 처리하였다. TMS 분할 완료시, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 환원시켰다. 미정제 알코올을 피리딘 (5 mL) 에 재-용해시키고, TsCl (0.55 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 18 h 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 37 을 산출하였다.
화합물 38: 화합물 37 을 화합물 12 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 38 로 전환시켰다.
화합물 41 의 합성
Figure 112015015568410-pct00431
화합물 40: 화합물 39 (1 mmol) 의 빙냉 DCM (20 mL) 용액을 NEt3 (1 mmol), 이후 TMS-Cl (1.1 mmol) 의 적가로 처리하였다. 1 h 후, 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 미정제 TMS 보호된 물질을 THF (10 mL) 에 재-용해시키고, 여기에 PPh3 (1.2 mmol), 칼륨 p-톨루엔티오술포네이트 (KTTS, 1.2 mmol), 무수 ZnCl2 (1 mmol), 이후 DEAD (1.2 mmol, 적가) 를 연속으로 첨가한다. r.t. 에서 18 h 동안 교반 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 40 을 산출하였다.
화합물 41: 화합물 40 (0.5 mmol) 의 THF (10 mL) 용액을 TLC 에 의한 모니터링 없이, TBAF (THF 중의 1M 용액의 1 mmol) 로 처리하였다. TMS 분할 완료시, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 환원시켰다. 미정제 알코올을 THF (10 mL) 에 재-용해시키고, 여기에 PPh3 (1.2 mmol), 화합물 35 (1.2 mmol), 이후 DEAD (1.2 mmol, 적가) 를 연속으로 첨가한다. r.t. 에서 18 h 동안 교반 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 DCM 에 재-용해시키고, 이의 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 41 을 산출하였다.
화합물 43 의 합성
Figure 112015015568410-pct00432
화합물 43: 화합물 42 를 화합물 14 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 43 으로 전환시켰다.
화합물 45a, 45b, 47a 및 47b 의 합성
Figure 112015015568410-pct00433
화합물 45a: 4-(2-클로로에틸)모르폴린 히드로클로라이드 (화합물 44) (50 g, 269 mmol), 나트륨 요오다이드 (4.03 g, 26.9 mmol) 및 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트 (73.0 g, 322 mmol) 의 혼합물을 MeOH (200 ml) 에서 교반하고, 60℃ 에서 72 h 에 걸쳐 가열하였다. 담황색 혼합물을 냉각시키고, 200 mL 물로 희석하고, 0.5 h 동안 교반한 다음, 백색 고체를 여과에 의해 수집하고, 물 (100 mL), IPA (200 mL), EtOAc (200 mL) 및 에테르 (200 mL) 로 세척하였다. 건조된 질량 = 68 g. 상기 미정질 분말을 90℃ 물 (200 mL) 로부터 재결정화하고, 결정질 질량을 r.t. 에서 밤새 (64 g, 71%) 정치 후 여과에 의해 수집하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.16 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.64 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.41 (t, J = 4.4 Hz, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 144.82, 141.99, 129.95, 127.14, 66.85, 56.54, 53.18, 33.44, 21.78; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 302.08, 측정치: 302.22.
화합물 45b: 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트의 칼륨 4-클로로벤젠술포노티오에이트 화합물 45b 로의 대체를 화합물 45a 에 대해 기재된 것과 유사한 방법에 의해 합성하였다. (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 324.03, 322.04, 측정치: 324.22, 322.20 (37Cl, 35Cl 동위원소 패턴).
화합물 47a: 4-(2-클로로에틸)모르폴린 히드로클로라이드의 4-(2-브로모에틸)-N-메틸피페라진 히드로브로마이드 (화합물 46), 화합물 47a 로의 대체를 화합물 45a 에 대해 기재된 것과 유사한 방법에 의해 합성하였다. MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 315.12, 측정치: 315.07.
화합물 47b: 4-(2-클로로에틸)모르폴린 히드로클로라이드의 4-(2-브로모에틸)-N-메틸피페라진 히드로브로마이드로의 대체 및 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트의 칼륨 4-클로로벤젠술포노티오에이트 화합물 47b 로의 대체를 화합물 45a 에 대해 기재된 것과 유사한 방법에 의해 합성하였다.
화합물 50 의 합성
Figure 112015015568410-pct00434
화합물 49: 화합물 48, (500 mg, 1.894 mmol) 및 나트륨 메탄술포노티오에이트 (534 mg, 3.98 mmol) 의 혼합물을 아세톤 (10 ml) 에 용해하고, r.t. 에서 4 h 동안 교반하였다. TLC 는 완전한 반응을 나타냈다. 용매를 제거한 다음, 혼합물을 물 및 DCM 의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기층을 분리한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 생성물을 무색 고체 (0.60 g, 97%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.47 (dd, J = 5.5, 3.5 Hz, 2H), 7.38 (dd, J = 5.5, 3.5 Hz, 2H), 4.55 (s, 4H), 3.13 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 133.41, 131.75, 129.51, 51.02, 37.09; MS (ESI +ve): 계산치 (M+NH4)+: 344.01, 측정치: 344.01; Rf = 0.5 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 50: A DCM 용액 (2 mL) 화합물 4, (180 mg, 1.225 mmol) 를 주사기를 통해 DCM (20 mL) 중의 화합물 49 (400 mg, 1.225 mmol) 의 교반 용액에 r.t. 에서 적가하였다. 0.5 h 후, 혼합물을 NaHCO3 의 첨가에 의해 분배하였다. 추출 시, 유기층을 분리한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 생성물 (170 mg, 35%) 을 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.39 (m, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 3H), 4.54 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.67 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.05 (s, 3H), 2.58 - 2.50 (m, 4H), 2.38 (t, J = 4.6 Hz, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 136.09, 133.20, 131.87, 131.21, 128.86, 128.54, 66.95, 57.95, 53.52, 51.04, 40.81, 38.18, 35.82; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H): 394.06, 측정치: 394.23; Rf = 0.5 (EtOAc).
화합물 55 의 합성
Figure 112015015568410-pct00435
화합물 54: DCM (50 mL) 중의 브롬 (0.246 ml, 4.78 mmol) 을 0.5 h 에 걸쳐 DCM (50 mL) 중의 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트 (2 g, 9.56 mmol) 및 2-히드록시에틸 디술파이드 (0.585 ml, 4.78 mmol) 의 교반 용액에 r.t. 에서 적가 방식으로 첨가하였다. r.t. 에서 2 h 후, 혼합물을 여과하여 염을 제거하였다. 용매를 제거한 다음, 컬럼 크로마토그래피에 의한 컬럼 정제로 생성물 (2.1 g, 83%) 을 무색 오일로서 산출하였다. Rf = 0.4 (1:1 EA/헥산.1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.13 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.89 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.02 - 1.94 (s, br, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 149.73, 128.40, 124.82, 60.94, 39.28.
화합물 55: DCM (50 mL) 중의 화합물 51 (1 g, 3.07 mmol) 을 옥살릴 디클로라이드 (0.527 ml, 6.15 mmol) 와 함께 적가 처리하고, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 무색 균질 용액을 형성하였다. r.t. 에서 1h 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 백색 잔류물 (미정제 산 클로라이드, 화합물 52) 을 DCM (20 mL) 에 재-용해하고, 피리딘 (20 mL) 중의 화합물 54 (0.48 g, 3.1 mmol) 의 교반 용액에 첨가하였다. 18 h 후, 반응이 완료된 것으로 판단하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 톨루엔에 재-용해시키고, 물로 분배하였다. 톨루엔 추출물을 수집하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 55 (0.86 g, 60%) 를 무색 고체로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.31 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 8.03 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.7 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.42 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.32 (dt, J = 7.5, 1.2 Hz, 2H), 5.22 (s, br, 1H), 4.34 (s, br, 4H), 4.19 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.23 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 4.17 (s, br, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 173.91, 155.10, 150.60, 149.53, 143.85, 141.42, 128.27, 128.20, 127.91, 127.22, 127.18, 125.12, 124.84, 120.17, 66.81, 62.60, 56.40, 47.25, 34.76, 25.37; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 571.11, 측정치: 571.00; Rf = 0.5 (EtOAc).
화합물 59 의 합성
Figure 112015015568410-pct00436
화합물 57: 화합물 57 을 r.t. 에서 18 h 동안 피리딘 중의 1.5 eq Fmoc-OSu 와의 반응에 의해 화합물 56 (1 mmol) 로부터 제조하였다. 수성 워크업, 이후 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 57 을 산출하였다.
화합물 59: 화합물 59 를 화합물 55 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 57 로 전환시켰다.
화합물 63 의 합성
Figure 112015015568410-pct00437
화합물 61: 화합물 61 을 화합물 57 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 60 으로 전환시켰다.
화합물 63: 화합물 63 을 화합물 55 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 61 로 전환시켰다.
화합물 69 의 합성
Figure 112015015568410-pct00438
화합물 65: 에틸 이소부티레이트 (11.6 g, 100 mmol) 를 0.5 h 에 걸쳐 THF 중의 LDA 의 냉각된 (-78℃) 용액 (53 mL, 2M) 에 첨가하였다. 오렌지색 혼합물을 이후 0℃ 로 잠깐 가온시킨 다음, -78℃ 로 재-냉각시켰다. 1,2-디브로모에탄 (20 g, 106 mmol) 을 이후 0.5 h 에 걸쳐 용액에 첨가하고, 이것을 점차적으로 r.t. 로 가온시키고 밤새 교반하였다. 산출된 용액을 물 및 EA 의 첨가에 의해 분배하였다. EA 내로의 추출 및 염수로의 세척 시, 유기층을 분리한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 생성물을 무색 오일 (6.0 g, 25%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.15 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.35 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 2.16 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 1.27 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.22 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 176.78, 60.83, 43.83, 42.89, 28.45, 25.20, 14.32; Rf = 0.5 (5% EtOAc/헥산).
화합물 66: THF (20 ml) 중의 화합물 65 (3.4 g, 15.24 mmol) 및 모르폴린 (13.28 g, 152 mmol) 의 혼합물을 50℃ 에서 유리 압력병 내에서 72 h 에 걸쳐 가열하였다. 백색 침전물이 형성되는 것이 관찰되었다. 혼합물을 물과 EA 사이로 분리하였다. EA 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 생성물을 무색 액체 (3.5 g, 100%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.11 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.41 (t, br, J = 4.0 Hz, 4H), 2.30 - 2.26 (m, 2H), 1.74 - 1.70 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.17 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.69, 67.11, 55.15, 54.02, 41.10, 37.04, 25.49, 14.35; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 230.18, 측정치: 230.33; Rf = 0.5 (5% EtOAc/헥산).
화합물 67: 화합물 66 (120 mg, 0.523 mmol) 및 수산화나트륨 (120 mg, 3.00 mmol) 을 함께 1:1 EtOH/H2O (10 mL) 로 교반하였다. 36 h 후, 용액의 pH 를 c. HCl 의 첨가에 의해 대략 2 로 조절한 다음, pH 가 대략 10 에 도달할 때까지 NEt3 을 첨가하였다. SiO2 (2 g) 를 첨가하고, 용매/물을 증발시켰다. 건조 로딩 (MeOH/DCM, DCM 중 2% NEt3 과 함께) 이 있는 컬럼 크로마토그래피로, 생성물을 부분적인 (대략 1/3 mol eq) HNEt3 염으로서 산출하였다. 조절된 수율은 103 mg, 84% 였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3 + 3 방울의 DMSO-d6) δ 3.62 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.51 - 2.46 (br, 4H), 2.40 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.62 (J = 7.1 Hz, 2H), 1.08 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 179.91, 65.91, 54.29, 52.87, 45.44, 41.37, 35.09, 25.93, 8.56; MS (ESI -ve): 계산치 (M-H)-: 200.13, 측정치: 200.16; Rf = 0.5 (2% NEt3/10% MeOH/DCM).
화합물 69a: DCM (200 mL) 중의 화합물 67 (11 g, 54.9 mmol) 의 현탁액을 옥살릴 클로라이드 (9.42 ml, 110 mmol) 로 처리하고, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 무색 균질 용액이 형성되었다. r.t. 에서 1h 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 황색 잔류물을 DCM (200 mL) 및 Py (100 mL) 의 혼합물에 현탁시킨 다음, S-2-히드록시에틸 화합물 54 (15.91 g, 60.4 mmol) (DB-7-5) 를 모두 1 회에 첨가하고, 반응을 HPLC/MS 에 의해 모니터링하였다. 18 h 후, MS 및 TLC 에 의해 반응이 사실상 완료된 것으로 판단하였다. 용매를 제거한 다음, 잔류물을 DCM/비카보네이트에 재용해하였다. 수합된 유기물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 12.5 g, 51% 의 화합물 69a 를, 정치 시 결정화되는 황색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.41 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.27 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.65 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.28 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.40 (s, br, 4H), 2.27 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.71 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.14 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.11, 150.71, 149.69, 128.34, 124.92, 66.96, 61.66, 54.95, 53.92, 41.25, 46.81, 35.11, 25.36; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 447.12, 측정치: 446.98.
화합물 69b: DCM (12 mL) 중의 화합물 67 (128 mg, 0.636 mmol) 의 현탁액을 옥살릴 클로라이드 (545 μl, 6.36 mmol) 와 함께 적가 처리하고, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 무색 균질 용액이 형성되었고, 이것은 곧 무색 침전물로 발달되었다. HPLC/MS 는 N-프로필 아미드로의 전환에 의해 제시된 바와 같이 산 클로라이드 (화합물 68) 로의 양호한 전환을 나타냈다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 백색 잔류물을 얼음 배스 상에서 냉각시키고, S-2-히드록시에틸 메탄술포노티오에이트 (화합물 54) (99 mg, 0.636 mmol) 의 DCM (12 mL) 용액으로 처리한 후, 교반하면서 휴니그 (Hunig's) 염기 (0.34 g, 2.6 mmol, 4 eq) 의 적가에 의해 처리하였다. 1.5 h 후, 용액을 희석된 NaHCO3 (aq) 으로 세척하였다. 수합된 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피로 생성물을 무색 오일 (84 mg, 39%) 로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.40 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 3.44 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.47 - 2.43 (br, 4H), 2.32 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.77 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.64 - 1.58 (br, 4H), 1.22 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.30, 67.08, 62.27, 55.03, 54.01, 51.07, 41.32, 36.99, 35.14, 25.44; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 340.13, 측정치: 340.27; Rf = 0.2 (EtOAc).
화합물 73 의 합성
Figure 112015015568410-pct00439
화합물 70: 화합물 70 을 화합물 66 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 N-메틸 피페라진과 화합물 65 와의 반응에 의해 제조하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 4.10 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.3 - 2.6 (br, 8H), 2.28 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.72 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.15 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.71, 60.44, 55.27, 54.64, 53.50, 46.18, 41.15, 37.36, 25.47, 14.34; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 243.20, 측정치: 243.31.
화합물 71: 화합물 71 을 화합물 67 에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하여 화합물 70 의 가수분해에 의해 제조하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 12 - 10 (vbr, 1H), 3.2 - 2.2 (vbr, 8H), 2.44 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.71 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 1.17 (s, 6H), 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 181.36, 55.18, 53.51, 52.18, 44.31, 41.57, 37.19, 26.28; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 215.17, 측정치: 215.19.
화합물 83: DCM (50 mL) 중의 브롬 (2.58 ml, 50.0 mmol) 을 0.5 h 에 걸쳐 DCM (50 mL) 중의 나트륨 벤젠술피네이트 (16.4 g, 100 mmol) 및 2-히드록시에틸 디술파이드 (6.11 ml, 49.9 mmol) 의 교반 혼합물에 0.5 h 에 걸쳐 적가 방식으로 첨가하였다. r.t. 에서 2 h 후, TLC 는 양호한 반응 (Rf = 0.4 (1:1 EA/헥산) 을 나타냈고, 혼합물을 여과하여 염을 제거하였다. 용매를 제거한 다음, 컬럼 크로마토그래피로 생성물 (17.4 g, 80%) 을 무색 오일로서 산출하였다.
화합물 73: DCM (20 mL) 중의 화합물 71 (1.342 g, 6.29 mmol) 을 옥살릴 클로라이드 (1.079 ml, 12.58 mmol) 로 처리하고, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 담황색 침전물이 형성되는 것이 관찰되었다. r.t 에서 0.5h 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 담황색 잔류물을 DCM (20 mL) 및 Py (20 mL) 의 혼합물에 현탁시킨 다음, 화합물 83 (2.060 g, 9.44 mmol) 을 모두 1 회에 첨가하였다. 18 h 후, TLC 에 의해 반응이 완료된 것으로 판단하였다. 용매를 제거한 다음, 잔류물을 물에 재용해시키고, 에테르로 세척하였다. 수성층을 갈색 고체로 환원시켰다. 끓는 EtOH (10 mL) 로부터의 재결정화로, 자유 염기 (DCM 중의 NEt3) 인 약간 불순한 HCl 염을 산출하였고 이후, 직접 실리카 겔 상에 로딩하였다. 컬럼 크로마토그래피로 0.95 g, 36% 의 순수한 화합물 73 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.68 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 4.25 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.25 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.8 - 2.3 (vbr, 8H), 2.36 (s, 3H), 2.33 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.74 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.16 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 177.13, 144.68, 134.09, 129.59, 127.09, 61.99, 54.86, 54.35, 52.84, 45.95, 45.71, 41.26, 37.05, 34.66, 25.39; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 415.17, 측정치: 415.09.
화합물 76 의 합성
Figure 112015015568410-pct00440
화합물 75: 화합물 74 를 화합물 2 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 75 로 전환시켰다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.49 - 6.41 (br, d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.91 (dt, J = 6.3, 2.7 Hz, 1H), 4.59 (ddd, J = 31.4, 10.6, 3.0 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.04 (s, 3H), 2.09 (s, 3H); 170.27, 169.05, 68.90, 53.33, 52.03, 37.63, 23.16; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 240.06, 측정치: 240.24.
화합물 76: 화합물 75 를 화합물 3 에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 의해 화합물 76 으로 전환시켰다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.56 - 6.40 (br, d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.93 (q, J = 5.9 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 4 3.74 (dd, J = 14.6, 4.8 Hz, 1H), 3.57 (dd, J = 14.6, 5.6 Hz, 1H), 3.38 (s, 3H), 2.07 (s, 3H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.44, 170.19, 53.23, 52.02, 50.73, 37.77, 23.12; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 256.03, 측정치: 256.21.
화합물 78 의 합성
Figure 112015015568410-pct00441
화합물 77, (2.49 ml, 32.8 mmol), 및 나트륨 메탄술포노티오에이트 (4.4 g, 32.8 mmol) 의 혼합물을 아세톤 (80 ml) 에서 6h 에 걸쳐 교반하였다. 회전 증발에 의해 아세톤을 제거하고, 혼합물을 DCM 으로 분말화하였다. 여과 후, DCM 을 증발에 의해 제거하고 (5 g 미정제 수율), 혼합물을 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제에 적용하였다. 순수한 화합물 78 의 수율은 2.8 g, 55%, 무색 오일, Rf = 0.3 (20% EA/헥산) 이었다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 5.30 (s, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.38 (s, 3H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 80.07, 57.40, 22.71.
화합물 80 의 합성
Figure 112015015568410-pct00442
DCM (150 mL) 중의 화합물 79 (5 g, 65.7 mmol) 및 트리에틸아민 (11 ml, 79 mmol) 의 빙냉 용액을 메탄술포닐 클로라이드 (5.59 ml, 72.3 mmol) 로 2 분에 걸쳐 처리하였다. 1 h 후 반응은 TLC 에 의해 완료된 것으로 판단되었다. 물을 첨가하고, 유기 추출물을 HCl, 포화 나트륨 비카보네이트, 염수로 세척하고 이어서 희석한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 환원시켰다. 생성물 메실레이트 (9.4 g, 61 mmol, 96%) 를 아세톤 (200 ml) 에 취한 다음, 톨루엔 티오술핀산 (61 mmol) 의 칼륨 염을 첨가하고, 용액을 50℃ 에서 18 h 에 걸쳐 교반하였다. 두꺼운 백색 침전물이 형성되는 것이 관찰되었다. 혼합물을 여과하고, 오일로 환원시킨 다음, DCM/물로 추출하였다. 유기 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 80 을 정치시 결정화되는 무색 오일 Rf = 0.3 (20% EA/헥산) 로서 산출하였다.
화합물 82 의 합성
Figure 112015015568410-pct00443
2-클로로-N,N-디메틸에탄아민 히드로클로라이드 (10 g, 69.4 mmol), 나트륨 요오다이드 (1.041 g, 6.94 mmol) 및 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트 (18.86 g, 83 mmol) 의 혼합물을 MeOH (50 ml) 에서 교반하고, 60℃ 에서 72 h 에 걸쳐 가열하였다. 수성 워크업 이후 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 82 (8.5 g, 47%) 를 무색 오일로서 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (dd, J = 8.4, 0.6 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.53 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.17 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 144.76, 142.03, 129.92, 127.18, 57.51, 45.14, 34.29, 21.77; MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 260.07, 측정치: 260.16.
화합물 85 의 합성
Figure 112015015568410-pct00444
나트륨 메탄술포네이트 (11.5 g, 86 mmol) 를 건조 50 mL 1 목 플라스크에 넣었다. 30 mL 의 무수 DMF (Aldrich) 를 건조 유리 주사기를 사용하여 첨가하였다. 5 mL 의 3-브로모프로피오니트릴 (화합물 84) (8.2 g, 61.2 mmol) 를 건조 유리 주사기를 사용하여 첨가하였다. 반응 플라스크를 아르곤 하에 폐쇄하고, 밀봉하고, 24 h 동안 50℃ 에서 교반하였다. 반응을 TLC (시스템: 헥산/에틸 아세테이트 - 5:5 - v/v) 를 사용하여 모니터링하였다. 반응 혼합물을 100 mL 의 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 5 회 (5 × 100 mL) 세척하였다. 유기층을 나트륨 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 건조상태로 증발시켰다. 잔류물을 5 mL 의 디클로로메탄에 용해하고, 헥산 중의 에틸 아세테이트의 선형 구배를 사용하는 실리카 겔 크로마토그래피 (CombiFlash) 에 의해 정제하였다. 순수한 화합물 85 (7.2 g, 52%) 를 무색 오일로서 수득하였다. 1H-NMR (CDCl3, 399 MHz). δ 3.43 (s, 3H), 3.41 (t, 2H, J = 2.5 Hz), 2.93 (t, 2H, J = 2.5 Hz); 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 117.7, 51.2, 31.7, 19.6.
화합물 87 의 합성
Figure 112015015568410-pct00445
화합물 87: 화합물 86 (1.11 mL, 12.5 mmol) 및 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트 (5.23 g, 25.0 mmol) 를 DCM (12.5 mL) 에 첨가하여 백색 현탁액을 산출하였다. 디브롬 (0.64 ml, 12.5 mmol) 을 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 30 분 동안 r.t. 에서 교반하고, 여과하여 염을 제거한 다음, 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼에 첨가하고, 헥산- EtOAc 로 용리하여 순수한 화합물 87 (4.80 g, 20.6 mmol, 82% 수율) 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.44 - 8.40 (m, 2H), 8.15 - 8.10 (m, 2H), 2.58 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 149.00, 128.54, 124.87, 94.61, 18.55; Rf = 0.60 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 90 의 합성
Figure 112015015568410-pct00446
화합물 89: 1 L 둥근-바닥 플라스크 내에서 N-(2-메르캅토에틸)아세타미드, 88 (11.92 g, 100 mmol) 를 EtOAc (300 mL) 에 용해하여 무색 용액을 산출하였다. H2O (11.3 mL) 중의 나트륨 요오다이드 (0.150 g, 1.000 mmol) 및 30% 과산화수소 (3.40 g, 100 mmol) 를 용액에 첨가하고, 이것을 45 분 동안 r.t. 에서 교반하였다. 포화 Na2S2O3 을 용액에 첨가하엿다. 수성층을 EtOAc (3 × 300 mL) 로 추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 회전 증발에 의해 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, MeOH/DCM 구배로 용리하여, 순수한 화합물 89 (4.94 g, 20.90 mmol, 41.8 % 수율) 를 산출하였고, 이것은 TLC 에 의해 반응 다음 단계에 직접 사용하기 위해 충분히 순수한 것으로 판단되었다. Rf = 0.35 (9:1 DCM/메탄올)
화합물 90: 100 mL 둥근-바닥 플라스크 내에서, 화합물 89 (2.364 g, 10.00 mmol) 및 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트 (4.18 g, 20 mmol) 를 CH2Cl2 (20 mL) 에 용해하여 백색 현탁액을 산출하였다. 디브롬 (0.516 ml, 10.00 mmol) 을 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 30 분 동안 r.t. 에서 교반하고, 여과하여 염을 제거한 다음, 여과액을 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼에 첨가하고, 헥산- EtOAc 로 용리하여, 순수한 화합물 90 (2.37 g, 7.79 mmol, 39 % 수율) 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.45 - 8.40 (m, 2H), 8.17 - 8.12 (m, 2H), 3.60 - 3.54 (dt, 2H), 3.21 - 3.16 (t, 2H), 2.00 (s, 3H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 130.35, 126.27, 66.97, 58.20, 53.67, 51.52, 36.22, 35.16, 33.67; Rf = 0.40 (EtOAc).
화합물 93 및 94 의 합성
Figure 112015015568410-pct00447
화합물 92: 250 mL 둥근-바닥 플라스크 내에서, 나트륨 4-클로로벤젠술포노티오에이트 (14.5 g, 63.0 mmol) 를 MeOH 에 용해하였다. 시스-1,4-디클로로-2-부텐, 91 (3.16 g, 30.0 mmol) 및 나트륨 요오다이드 (450 mg, 3.0 mmol) 을 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 3 h 동안 r.t. 에서 교반한 다음, 50 ℃ 로 가열하였다. 18 h 동안 50 ℃ 에서 교반 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 산출된 미정제 물질을 DCM (300 mL) 으로 희석하고, 물 (1 × 100 mL) 로 세척하였다. 수성층을 DCM (1 × 100 mL) 으로 추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 미정제 생성물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, EtOAc/헥산 구배로 용리하여, 화합물 92 (5.99 g, 12.8 mmol, 43 % 수율) 를 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.87-7.84 (m, 4H), 7.56-7.51 (m, 4H), 5.56-5.50 (m, 2H), 3.72-3.68 (m, 4H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)130.35, 126.27, 66.97, 58.20, 53.67, 51.52, 36.22, 35.16, 33.67; Rf = 0.35 (1:3 EtOAc/헥산).
화합물 93: 100 mL 둥근-바닥 플라스크 내에서, 화합물 92 (3.09 g, 6.58 mmol) 를 THF 에 0 ℃ 에서 용해하였다. 트리에틸아민 (459 μL, 3.29 mmol) 및 2-메틸-2-프로판티올 (742 μL, 6.58 mmol) 을 교반된 용액에 0 ℃ 에서 첨가하였다. 용액을 20 분 동안 0 ℃ 에서 교반한 다음, 트리에틸아민 (230 μL, 1.65 mmol) 을 교반된 용액에 0 ℃ 에서 첨가하였다. 40 분 동안 0 ℃ 에서 교반 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 산출물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, EtOAc/헥산 구배로 용리하여, 화합물 93 (1.77 g, 4.62 mmol, 70 % 수율) 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.90 - 7.85 (m, 2H), 7.56 - 7.52 (m, 2H), 5.73 - 5.65 (m, 1H), 5.55 - 5.48 (m, 1H), 3.78 - 3.75 (d, 2H), 3.36 - 3.32 (d, 2H), 1.32 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 143.54, 140.60, 130.90, 129.83, 128.66, 124.56, 48.29, 37.05, 33.35, 30.16; Rf = 0.60 (1:3 EtOAc/헥산).
화합물 94: 화합물 93 에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고, 2-프로판티올을 2-메틸-2-프로판티올에 대해 치환하여, 순수한 화합물 94 를 수득하였다 (1.13 g, 3.06 mmol, 72 % 수율). 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.90 - 7.82 (m, 2H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 5.72 - 5.64 (m, 1H), 5.57 - 5.47 (m, 1H), 3.79 - 3.72 (d, 2H), 3.33 - 3.26 (d, 2H), 3.61 - 2.92 (m, 1H), 1.27 (d, 6H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 143.28, 140.36, 131.37, 125.63, 124.55, 124.56, 41.32, 38.02, 35.81, 33.08, 22.54; Rf = 0.55 (1:3 EtOAc/헥산).
화합물 96 의 합성
Figure 112015015568410-pct00448
화합물 96: 화합물 9 (1.81 g, 5.50 mmol) 및 54 (2.17 g, 8.25 mmol) 를 수합하고, 무수 톨루엔 (3 × 2 mL) 으로의 공-증발에 의해 건조시켰다. 혼합물을 건조 1,2-디클로로에탄 (16.5 mL) 에 용해하였다. 4 Å 분자체를 용액에 첨가하고, 혼합물을 30 분 동안 r.t. 에서 교반하였다. 트리메틸실릴트리플레이트 (497 μL, 2.75 mmol) 을 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 9 h 동안 r.t. 에서 교반한 다음, 부가적인 54 (0.723 g, 2.75 mmol) 를 교반된 용액에 첨가하였다. 16 h 동안 r.t. 에서 교반 후, 용액을 DCM (100 mL) 으로 희석하고, 포화 NaHCO3 (1 × 100 mL) 으로 세척하였다. 수성층을 DCM (1 × 50 mL) 으로 추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 회전 증발에 의해 농축하였다. 산출된 미정제 물질을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, EtOAc/헥산 구배로 용리하여 화합물 96 (2.21 g, 3.73 mmol, 68 % 수율) 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.42 - 8.36 (d, 2H), 8.12 8.06 (d, 2H), 6.07 - 6.00 (d, 1H), 5.33 - 5.30 (d, 1H), 5.23 - 5.15 (dd, 1H), 4.69 - 4.63 (d, 1H), 4.15 - 4.04 (m, 3H), 4.04-3.87 (m, 2H), 3.84-3.73 (m, 1H), 3.22-3.12 (t, 2H), 2.12-1.92 (m, 12H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)179.95, 170.74, 170.48, 150.77, 149.59, 128.47, 125.03, 101.40, 71.08, 70.02, 67.39, 66.92, 61.76, 51.12, 36.51, 23.72, 20.92; Rf = 0.25 (1:9 MeOH/DCM).
화합물 100 의 합성
Figure 112015015568410-pct00449
화합물 98: 건조 피리딘 (70 mL) 중의 화합물 97 (4.87 g, 22.0 mmol) 의 빙냉 용액을 페녹시아세트 무수물 (37.8 g, 132.0 mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (26.9 mg, 220 μmol) 으로 처리하였다. r.t. 에서 12 h 동안 교반 후, 혼합물을 농축하고, 톨루엔으로 진공 하에서 공-증발시켰다. 산출물을 DCM (400 mL) 에 의해 희석하고 포화 NaHCO3 (1 × 400 mL) 으로 세척하였다. 추출 시, 유기 층을 분리하고, Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 산출물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, EtOAc/헥산 구배로 용리하여, 순수한 화합물 98 (16.7 g, 22.0 mmol, 100 % 수율) 을 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.36 - 6.75 (m, 20H), 6.27 - 6.20 (d, 1H), 5.43 - 5.36 (m, 1H), 5.22 - 5.06 (m, 2H), 4.81 - 4.65 (m, 3H), 4.60 - 4.52 (m, 2H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 4.17 - 4.02 (m, 2H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 1.85 and 1.74 (d, 3H, 회전이성질체); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 170.20, 168.78, 168.70, 168.36, 167.52, 157.56, 157.48, 157.40, 130.09, 129.70, 129.66, 129.60, 122.32, 122.01, 121.94, 114.61, 114.58, 114.58, 114.39, 91.93, 68.37, 68.25, 67.30, 64.54, 61.25, 46.43, 22.95; Rf = 0.35 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 99: 화합물 98 (15.15 g, 20.0 mmol) 을 ClCH2CH2Cl (40 mL) 에 용해하고, 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (5.43 mL, 30.0 mmol) 를 r.t 에서 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 24 h 동안 50 ℃ 에서 교반하고, 트리에틸아민 (12.6 mL, 90.0 mmol) 을 첨가하고, 혼합물을 진공 하에서 농축하였다. 산출물을 실리카 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc (2.5% Et3N)-헥산) 에 의해 정제하여 미량의 페녹시아세트산을 함유하는 약간 불순한 화합물 99 를 산출하였다. 상기 물질을 추가 정제 없이 반응식 다음 단계에서 사용하였다.
화합물 100: 화합물 99 (3.63 g, 6 mmol) 및 S-2-히드록시에틸-4-니트로벤젠술포노티오에이트, 54 (2.76 g, 10.5 mmol) 를 ClCH2CH2Cl (18 mL) 에 용해하여, 무색 용액을 산출하였다. 4 Å 분자체를 r.t. 에서 교반된 용액에 첨가하였다. 용액을 30 분 동안 r.t. 에서 교반한 다음, 트리메틸실릴 트리플루오로메탄술포네이트 (0.543 ml, 3.00 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 r.t. 에서 24 h 동안 교반하고, TLC 는 약 90% 반응이 완료된 것을 보여주었다. 부가적인 54 (237.0 mg, 0.90 mmol) 를 혼합물에 첨가하고, 이것을 추가 36 h 동안 교반하여 반응을 완료하였다. 혼합물을 DCM (100 mL) 로 희석하고, 포화 NaHCO3 (1 × 100 mL) 으로 세척하였다. 수성층을 CH2Cl2 (1 × 50 mL) 로 다시-추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고, 농축하고 120 mL 의 Ac2O-피리딘 (1:9, v/v) 에 용해하였다. 혼합물을 12 h 동안 교반한 다음, 감압 하에서 농축하였다. 산출물을 CH2Cl2 (100 mL) 로 희석하고, 포화 NaHCO3 (1 × 100 mL) 으로 세척하였다. 수성층을 CH2Cl2 (1 × 50 mL) 로 다시-추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 산출물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc-헥산 구배) 에 의해 정제하여, 순수한 화합물 100 (2.56 g, 2.94 mmol, 49.0 % 수율) 로 산출하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.70 - 8.62 (d, 2H), 8.41 - 8.33 (d, 2H), 7.65 - 7.03 (m, 15H), 6.35 - 6.27 (d, 1H), 5.81 - 5.72 (m, 2H), 5.06 - 4.97 (m, 3H), 4.92 - 4.85 (m, 2H), 4.83 - 4.62 (m, 2H), 4.58 - 4.44 (m, 2H), 4.34 - 4.26 (m, 2H), 4.26 - 4.15 (m, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 1H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 2.22 및 2.18 (d, 3H, 회전이성질체); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 171.17, 169.13, 169.05, 168.92, 157.86, 157.80, 157.76, 150.82, 149.63, 130.01, 129.96, 128.47, 125.06, 122.27, 122.23, 114.93, 114.74, 100.86, 70.64, 70.54, 65.36, 64.90, 62.21, 51.30, 36.54, 23.74; Rf = 0.60 (1:1 EtOAc/헥산).
화합물 104 의 합성
Figure 112015015568410-pct00450
화합물 102: 화합물 98 에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고, 화합물 101 을 화합물 97 에 대해 치환하여, 순수한 화합물 102 를 수득하였다.
화합물 103 화합물 99 에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고, 화합물 102 를 화합물 98 에 대해 치환하여, 순수한 화합물 103 을 수득하였다.
화합물 104 화합물 100 에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고, 화합물 103 을 화합물 99 에 대해 치환하여, 순수한 화합물 103 을 수득하였다.
화합물 109 및 111 의 합성
Figure 112015015568410-pct00451
화합물 106: 건조 1,2-디클로로에탄 (300 mL) 중의 화합물 105 (100 mmol) 의 용액을 주사기를 통해 TiCl4 (110 mmol) 와 함께 2 분에 걸쳐 적가 처리하였다. 16 h 동안 환류 후, TLC 는 반응 완료를 보여준다. 미정제 물질을 DCM 로 희석하고, 포화 NaHCO3 으로 세척하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고, 농축하고, 추가 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
화합물 107: 티오우레아 (150 mmol) 및 화합물 106 (100 mmol) 을 아세톤 (200 mL) 에 Ar 하에 용해하였다. 반응 혼합물을 60 ℃ 로 가열하고 교반하였다. 2 h 후, 백색 고체 침전을 여과에 의해 제거하였다. 침전물을 재결정화하였다. 여과된 결정 및 Na2S2O5 (140 mmol) 를 DCM (500 mL) 및 H2O (250 mL) 의 교반된 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류로 Ar 하에 가열하였다. 3 h 후, 반응 혼합물을 r.t 로 냉각시키고, 상을 분리하였다. 수성층을 DCM 으로 다시 추출하였다. 수합된 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하여 화합물 107 을 산출하였다.
화합물 108: 1-브로모-2-클로로에탄 (100 mmol), 트리에틸아민 (200 mmol) 및 화합물 107 (100 mmol) 을 아세토니트릴 (200 mL) 에 Ar 하에 용해하였다. 반응 혼합물을 60 ℃ 로 가열하고 교반하였다. TLC 는 완료된 반응을 나타낸다. 혼합물을 DCM (500 mL) 으로 희석하고, NaHCO3 (250 mL) 으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하고, 정제하여 화합물 108 을 산출하였다.
화합물 109: 화합물 112 (120 mmol), 나트륨 요오다이드 (10.0 mmol) 및 화합물 108 (100 mmol) 을 MeOH (200 mL) 에 Ar 하에 용해하였다. 반응 혼합물을 60 ℃ 로 가열하고 교반하였다. TLC 는 완료된 반응을 나타낸다. 혼합물을 DCM (500 mL) 으로 희석하고, NaHCO3 (250 mL) 으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하고, 정제하여 화합물 109 를 산출하였다.
화합물 110: 1-브로모-4-클로로-2,3-시스-부텐 (100 mmol), 트리에틸아민 (200 mmol) 및 화합물 107 (100 mmol) 을 아세토니트릴 (200 mL) 에 Ar 하에 용해하였다. 반응 혼합물을 60 ℃ 로 가열하였다. TLC 는 반응이 완료된 것을 보여준다. 혼합물을 DCM (500 mL) 으로 희석하고, NaHCO3 (250 mL) 으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하고, 정제하여 화합물 110 을 산출하였다.
화합물 111: 화합물 112 (120 mmol), 나트륨 요오다이드 (10.0 mmol) 및 화합물 110 (100 mmol) 을 MeOH (200 mL) 에 Ar 하에 용해하였다. 반응 혼합물을 60 ℃ 로 가열하였다. TLC 는 완료된 반응을 나타낸다. 혼합물을 DCM (500 mL) 으로 희석하고, NaHCO3 (250 mL) 으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 로 건조시키고, 여과하고 농축하고, 정제하여 화합물 111 을 산출하였다.
화합물 115 의 합성
Figure 112015015568410-pct00452
화합물 113: 2-클로로술포닐아세토니트릴 (113) 을 Sammes 의 절차 (특허 GB1252903 에 기재된 바와 같이) 에 따라 제조한다.
화합물 114: 나트륨 술파이드 노나히드레이트 (65 mmol) 를 100 mL 물에 취한다. 플라스크를 수조에 유지한다. 수조를 완만하게 가온시키고 교반하면서 화합물 113 (50 mmol) 을 상기 용액에 적가한다. 황이 나타난 다음, 플라스크에서 사라지는 것을 관찰하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 에탄올로부터 재결정화한다. 나트륨 시아노메탄술포노티오에이트 (화합물 114) 를 무색 결정성 고체로서 수득한다.
화합물 115: 화합물 114 (13.69 g, 86 mmol) 를 교반하면서, 100 mL 둥근 바닥 플라스크 내의 무수 DMF (30 mL) 에 취한다. 이후, 3-브로모프로피오니트릴 (5 mL, 8.2 g, 61.2 mmol) 을 첨가하고, 산출된 혼합물을 18 h 동안 50 ℃ 에서 TLC 에 의해 모니터링 하면서 교반하였다. 반응 완료시 (3-브로모프로피오니트릴의 완전한 소모), 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL) 로 희석하고, 유기층을 5 × 20 mL H2O 로 세척하였다. 유기 분리된 유기층을 이후 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 회전 증발에 의해 오일로 환원시켰다. 미정제 오일을 EtOAc/헥산 구배를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, 순수한 물질을 함유하는 분획을 수집하고, 용매를 회전 증발에 의해 제거한 다음, 진공 하에서 추가 건조로 순수한 화합물 115 를 무색 오일로서 산출하였다.
화합물 118 의 합성
Figure 112015015568410-pct00453
화합물 116: DCM (50 mL) 중의 화합물 51 (2.9 g, 8.91 mmol) 을 옥살릴 디클로라이드 (0.53 ml, 6.15 mmol) 이후 DMF (10 μL) 로 적가 처리하고, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 무색 균질 용액이 형성되었다. r.t. 에서 2 h 후, 용매를 감압 하에 제거하였다. 백색 잔류물을 DCM (20 mL) 에 재용해시킨 다음, 에탄-1,2-디티올 (8.40 g, 89 mmol) 의 교반 피리딘 (10 mL) 용액에, UPLC/MS 에 의해 모니터링하면서 적가하였다. 18 h 후, 반응이 완료된 것으로 판단하였다. 용매를 제거하고, 남은 에탄티올을 트랩-투-트랩 (trap-to-trap) 증류에 의해 제거한 다음, 잔류물을 DCM 로의 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제에 적용하여, 순수한 화합물 116 을 무색 고체로서 제공하였다. 수율은 1.82 g, 51 % 였다. MS (ESI +): 계산치 (M+Na)+: 424.10, 측정치: 424.06. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.79 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.34 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 5.40 - 5.15 (br, 1H), 4.60 - 4.35 (br, 2H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 3.15 - 3.04 (br, 2H), 2.95 - 2.80 (m, 1H), 2.75 - 2.60 (br, 2H), 1.72 - 1.43 (m, 6H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.14, 154.75, 143.92, 141.49, 127.84, 127.19, 125.17, 120.13, 66.81, 62.69, 47.41, 33.01, 25.78, 24.60.
화합물 117: EtOAc (12 mL) 중의 화합물 116 (1.7 g, 4.23 mmol) 의 교반된 용액에 나트륨 요오다이드 (6.35 mg, 0.042 mmol) 및 과산화수소 (0.144 g, 4.23 mmol) (30% 수용액의 0.45 mL) 를 첨가하고, 혼합물을 r.t. 에서 15 분 동안 교반하였다. TLC 는 출발 물질의 완전한 소모를 보여주었다. 용액이 무색이 될 때까지 수성 나트륨 티오술페이트를 첨가하였다. 용액을 물로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 이후 컬럼 크로마토그래피 (EtOAc/헥산) 로 순수한 화합물 117 을 무색 고체 포말 (1.45 g, 86%) 로서 산출하였다. MS (ESI +): 계산치 (M+H)+: 802.07, 측정치: 802.08. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.78 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 7.63 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 7.42 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 5.42 - 5.25 (br, 2H), 4.55 - 4.35 (br, 4H), 4.30 - 4.18 (br, 2H), 3.25 - 3.10 (br, 4H), 2.95 - 2.70 (br, 4H), 1.65 - 1.45 (br, 12H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 203.19, 154.71, 143.90, 141.45, 127.80, 127.17, 125.16, 120.10, 66.76, 62.65, 47.37, 37.90, 28.56, 25.73.
화합물 118: 디브롬 (0.091 ml, 1.77 mmol) 을 2 분에 걸쳐 DCM (10 mL) 중의 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트 (0.742 g, 3.55 mmol) 및 화합물 117 (1.42 g, 1.773 mmol) 의 교반 혼합물에 r.t. 에서 적가 방식으로 첨가하였다. r.t. 에서 30 분 교반 후, 혼합물을 여과하고, 여과액을 진공 하에서 오랜지색 고체 포말로 환원하였다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM/헥산) 로 순수한 화합물 118 (1.26 g, 60 %) 을 담황색 고체 포말로서 산출하였다. MS (ESI +): 계산치 (M+H)+: 587.71, 측정치: 802.08. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.36 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 8.14 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.79 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.63 (s, 2H), 7.43 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 5.35 - 5.15 (br, 1H), 4.55 - 4.35 (br, 2H), 4.30 - 4.20 (br, 1H), 3.30 - 3.00 (br, 4H), 1.70 - 1.25 (br, 6H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 202.71, 154.66, 150.60, 149.63, 143.78, 141.46, 128.40, 127.91, 127.21, 125.12, 124.81, 120.18, 66.86, 62.59, 47.35, 35.84, 28.42, 25.61.
화합물 120 의 합성
Figure 112015015568410-pct00454
화합물 120: 시판되는 화합물 119 (1 g, 7.04 mmol) 및 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트 (1.753 g, 7.75 mmol) 를 MeOH (10 mL) 에서 5 일에 걸쳐 r.t. 에서, 이후 40 ℃ 에서 24 h 에 걸쳐 교반하였다. TLC 는 생성물로의 양호한 전환을 보였다. MeOH 를 증발시키고, 잔류물을 DCM (30 mL) 에 취하고, Boc2O (1.54 g, 7.04 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 트리에틸아민 (1.030 ml, 7.39 mmol) 으로 10 분에 걸쳐 r.t. 에서 용액이 사실상 균질한 상태가 될 때까지 적가 방식으로 처리하였다. 물 (50 mL) 로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과 및 정제로 미정제 생성물을 산출하고, 이것을 컬럼 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하여, 순수한 화합물 120 (1.64 g, 65 %) 을 무색 고체로서 산출하였다. MS (ESI +): 계산치 (M+Na)+: 380.10, 측정치: 380.11. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.34 (dd, J = 8.5, 0.8 Hz, 2H), 5.54 (ddt, J = 24.7, 16.6, 7.9 Hz, 2H), 4.65 (s, 1H), 3.77 - 3.66 (m, 4H), 2.45 (s, 3H), 1.43 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 155.83, 145.05, 142.06, 131.80, 130.01, 127.15, 124.55, 79.72, 37.29, 32.75, 28.51, 21.79.
화합물 122 의 합성
Figure 112015015568410-pct00455
화합물 122: 물 (1 mL) 중의 시판되는 화합물 121 (1 g, 3.59 mmol) 의 용액을 물 (10 mL) 중의 칼륨 헥사플로로포스페이트 (0.662 g, 3.59 mmol) 의 용액으로 모두 1 회로 처리하고, r.t. 에서 5 분 동안 교반에 의해 진탕하였다. 산출된 고체를 여과에 의해 수집하고, 2 × 3mL 물로 세척하고, KOH 로 진공 하에서 건조시켜, 순수한 화합물 122 를 무색 고체 (1.01 g, 82 %) 로서 산출하였다. 1H NMR (300 MHz, CD3CN) δ 3.67 - 3.60 (m, 2H), 3.49 (s, 3H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 3.10 (s, 9H); 13C NMR (126 MHz, CD3CN) δ 65.98, 54.05 (q, J = 4.1 Hz), 51.11, 28.99; 19F NMR (376 MHz, CD3CN) δ -73.15 (d, J = 706.5 Hz); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ -143.50 (hept, J = 706.6 Hz).
화합물 125 의 합성
Figure 112015015568410-pct00456
화합물 124: 시판되는 화합물 123 (10 mmol) 의 DMF (50 mL) 용액을 tert-부틸-2-아미노아세테이트 (22 mmol), 디-이소프로필에틸아민 (50 mmol) 및 HBTU (24 mmol) 으로 이어서 처리하였다. r.t. 에서 1 h 교반 후, 물 (100 mL) 을 첨가하고, 산출된 용액을 EtOAc (2 × 50 mL) 로 추출하고, 5 % NaHCO3 (2 × 25 mL) 로 세척한 다음, 염수 (2 × 25 mL) 로 희석하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 회전 증발에 의해 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제로 순수한 화합물 124 를 산출하였다.
화합물 125: 디브롬 (0.091 ml, 1.77 mmol) 을 2 분에 걸쳐 DCM (10 mL) 중의 나트륨 4-니트로벤젠술피네이트 (0.742 g, 3.55 mmol) 및 디-tert-부틸-2,2'-((4,4'-디술판디일-비스(부타노일))비스(아잔디일))디아세테이트 (824 mg, 1.77 mmol) 의 교반 혼합물에 r.t. 에서 적가 방식으로 첨가하였다. r.t. 에서 30 분 교반 후, 혼합물을 여과하고, 여과액을 고체 포말로 진공 하에서 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 생성물을 고체 포말로서 산출하였다.
화합물 129 의 합성
Figure 112015015568410-pct00457
화합물 127: TFA (10 mL) 중의 에탄-1,2-디티올 (1.130 g, 12 mmol) 의 용액을 시판되는 화합물 126 (0.89 g, 9.99 mmol) 로 모두 1 회 처리하였다. 용액은 따뜻해졌다. r.t. 에서 1 h 교반 후, 휘발물질을 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하여, 순수한 화합물 127 을 무색 오일 (0.95 g, 48 %) 로서 산출하였다. Rf = 0.6 (5%MeOH/DCM); 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.09 - 5.93 (br, 1H), 4.41 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.87 - 2.83 (m, 2H), 2.79 (ddd, J = 9.7, 7.3, 3.5 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.71 (t, J = 8.0 Hz, 1H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.25, 40.89, 35.22, 24.91, 23.44.
화합물 129: 시판되는 화합물 128 (939 mg, 3.0 mmol) 의 따뜻한 (35 ℃) DMF (10 mL) 용액을 5 분에 걸쳐 화합물 127 (250 mg, 1.513 mmol) 의 DCM (5 mL) 용액으로 적가 방식으로 처리하였다. TLC 확인 후, 고압 하의 회전 증발에 의해 용매를 제거한 다음, 잔류물을 DCM (50 mL) 으로 처리하고, 여과하고, 여과액을 5 × 5% NaHCO3 으로 세척한 다음, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 담황색 고체로 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 129 를 담황색 고체로서 산출하였다. MS (ESI +): 계산치 (M+H)+: 320.02, 측정치: 320.34; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.28 (dd, J = 2.7, 0.7 Hz, 1H), 8.43 (dd, J = 8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 8.9, 0.7 Hz, 1H), 6.10 - 5.90 (br, 1H), 4.41 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.13 (dd, J = 8.6, 6.3 Hz, 2H), 2.93 (dd, J = 8.6, 6.4 Hz, 2H), 2.00 (s, 3H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 170.18, 168.57, 145.22, 142.22, 131.81, 119.59, 40.65, 38.59, 30.07, 23.39.
화합물 134 의 합성
Figure 112015015568410-pct00458
화합물 130: 화합물 130 을 이전에 기재된 방법에 의해 제조하였다 (Heterocycles, Vol 54, p 139, 2001).
화합물 132: 화합물 126 의 합성에 대해 이전에 기재된 유사한 절차를 사용하여 (Organic Syntheses, Coll. Vol. 6, p.5 (1988)), 화합물 131 (Tetrahedron Letters, 48(39), 7038-7041; 2007) 을 K2CO3 을 함유하는 수성 포름알데히드 용액의 존재 하에 완만히 가열함으로써 화합물 132 로 전환시켰다.
화합물 133: 화합물 127 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 132 의 화합물 126 에 대한, 화합물 130 의 에탄-1,2-디티올에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 133 을 수득하였다.
화합물 134: 화합물 129 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 133 의 화합물 127 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 134 를 수득하였다.
화합물 140 의 합성
Figure 112015015568410-pct00459
화합물 136: 시판되는 화합물 135 (50 g, 342 mmol) 의 빙냉 용액, 및 메탄올 (277 mL) 을 황산 (3.36 g, 34.2 mmol) 으로 10 분에 걸쳐 적가 처리한 다음, r.t. 로 점진적으로 밤새 가온시켰다. 회전 증발에 의해 대부분의 용매를 제거한 다음, 포화 수성 NaHCO3 을 조심스럽게 첨가하였다. 용액의 pH 를 1 M HCl 의 첨가에 의해 1.9 로 조정한 다음, EtOAc (200 mL) 내로 추출하고, 염수 (50 mL) 로 세척 및 희석하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 29 g 의 무색 오일로 환원시켰다. 컬럼 크로마토그래피로 순수한 화합물 136 을 무색 고체 (12.5 g, 23 %) 로서 산출하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 12.5 - 10.5 (vbr, 1H), 3.69 (s, 3H), 2.63 (s, 2H), 1.32 (s, 6H); 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ 183.32, 171.76, 51.72, 43.88, 40.60, 25.34.
화합물 138 의 합성: DCM (50 mL) 중의 화합물 136 (10 mmol) 을 옥살릴 디클로라이드 (10 mmol), 그 다음 DMF (10 μL) 로 적가 처리한 다음, r.t. 에서 교반하였다. 반응 동안, 무색 균질 용액이 형성되었다. r.t. 에서 2 h 후, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 백색 잔류물을 DCM (20 mL) 에 재용해시킨 다음, TLC 에 의해 모니터링하면서 화합물 137 (10 mmol) 의 교반 피리딘 (10 mL) 용액에 적가하였다. 18 h 후, 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM 로의 컬럼 크로마토그래피에 의한 정제에 적용하여, 순수한 화합물 137 을 제공하였다.
화합물 139: THF (20 mL) 중의 용액으로서 화합물 138 (5 mmol) 을 THF (20 mL) 중의 LiBH4 (5 mmol) 의 빙냉 용액에 첨가하였다. r.t. 에서의 반응 진행은 TLC 에 의해 판단하였다. 반응 완료 후 (출발 물질의 완전한 소모), 물 (100 mL) 을 조심스럽게 빙냉 용액에 첨가하고, 이것을 EtOAc (2 × 100 mL) 로 이어서 추출하였다. 수합된 유기 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 회전 증발에 의해 용매를 증발시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하고, 순수한 화합물 139 를 수득하였다.
화합물 140: 화합물 80 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 139 의 화합물 79 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 140 을 수득하였다.
화합물 143 의 합성
Figure 112015015568410-pct00460
화합물 139: 화합물 139 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 136 의 화합물 138 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 141 을 수득하였다.
화합물 142: DCM/MeOH (12/3 mL) 중의 화합물 141 (8.39 mmol) 의 용액을 0 ℃ 에서 에테르 중의 (디아조메틸)트리메틸실란 (1.05 g, 9.23 mmol) 의 2 M 용액으로 30 분에 걸쳐 적가 처리하였다. AcOH 로 과량의 시약을 켄칭한 후, 물 (2 × 5 mL) 로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과, 회전 증발에 의한 용매의 제거, 이후 컬럼 크로마토그래피로, 순수한 화합물 142 를 수득하였다.
화합물 143: 화합물 80 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 142 의 화합물 79 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 143 을 수득하였다.
화합물 147 의 합성
Figure 112015015568410-pct00461
화합물 144: 화합물 69a 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 136 의 화합물 67 에 대한, 화합물 54 의 NH4Cl + iPr2NEt 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 144 를 수득하였다.
화합물 145: LiAlH4 (THF 중의 2 M 용액, 100 mL) 를 화합물 144 (86 mmol) 의 빙냉 THF (500 mL) 용액에 적가 방식으로 첨가하였다. 혼합물을 r.t. 로 가온시킨 다음, 0.5 h 동안 환류시켰다. 잔류 LiAlH4 를, 과립 침전물이 형성될 때까지 빙냉 용액에 포화 Na2SO4 의 조심스런 첨가에 의해 파괴시켰다. 혼합물을 여과하고 환원시킨 다음 EtOAc 에 재용해하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공 하에서 환원시켜, 반응 다음 단계에서 직접 사용하기에 충분히 순수한 화합물 145 를 산출하였다.
화합물 146: 화합물 124 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 145 의 화합물 123 에 대한, Leu-Fmoc-OH 의 tert-부틸 2-아미노아세테이트에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 146 을 수득하였다.
화합물 147: 화합물 80 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 146 의 화합물 79 에 대한, 화합물 114 의 칼륨 4-메틸벤젠술포노티오에이트에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 147 를 수득하였다.
화합물 150 의 합성
Figure 112015015568410-pct00462
화합물 148: 시판되는 클로로메틸 피발레이트 (10 mmol) 를 1,2-디클로로에탄 (100 mL) 중의 화합물 130 (20 mmol) 의 교반 용액에 Ar 하에 적가 방식으로 첨가하였다. 산출된 용액을 완료를 강요하기 위해 (TLC 에 의해 클로로메틸피발레이트 물질의 사라짐이 명시됨) 가열하였다. 회전 증발에 의해 용매를 제거한 다음, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 적용하여 순수한 화합물 148 을 제공하였다.
화합물 149: 화합물 89 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 148 의 화합물 88 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 149 를 수득하였다.
화합물 150: 화합물 87 의 합성에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 사용하고 화합물 149 의 화합물 86 에 대한 치환을 사용하여, 순수한 화합물 150 을 수득하였다.
부가적인 황화제:
Figure 112015015568410-pct00463
식 중, Sa 는 하기 구조 중 임의의 것을 나타냄:
Figure 112015015568410-pct00464
포스포라미다이트의 합성
일부 구현예에서, 본 발명은 포스포라미다이트, 및 이의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 제공된 포스포라미다이트가 본 출원에 기재된 올리고뉴클레오티드의 합성에 사용되었다. 예시적인 포스포라미다이트 및 이들의 합성은 하기 기재된다.
화합물 203 의 합성
Figure 112015015568410-pct00465
화합물 202: N4-Bz-5'-O-DMTr-2'-O-MOE-5-메틸사이티딘 (201) (2.00 g, 2.77 mmol) 을 피리딘 (22.5 mL) 및 2-프로판올 (Aldrich, 무수물, 45 mL) 중 2 M 암모니아로 60 ℃ 에서 5 h 동안 이어서 실온에서 처리하였다. 밤새, TLC 및 UPLC/MS 로 모니터링하였다. 용매를 제거하고 (톨루엔과의 3×공비혼합물) 이어서 컬럼 크로마토그래피 (0-10% MeOH/DCM) 로 순수 화합물 202 (1.62 g, 95 %) 을 무색 고체 (TLC 및 HPLC 에 의해 균질) 로서 수득하였다. (ESI +): 계산치 (M+H)+: 618.28, 측정치: 618.53. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 7.82 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.37-7.18 (m, 8H), 6.83 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 4H), 5.93 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.43 (td, J = 8.3, 4.9 Hz, 1H), 4.24 (ddd, J = 11.7, 5.1, 3.0 Hz, 1H), 4.07 (dt, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 4.03-3.98 (m, 1H), 3.90 (ddd, J = 11.7, 6.3, 3.3 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 1.0 Hz, 6H), 3.63-3.52 (m, 3H), 3.44 (dd, J = 11.0, 3.0 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.32 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 1.80-1.64 (s, br, 1H), 1.13 (s, 3H).
화합물 203: 이소부티르 무수물 (0.48 ml, 2.9 mmol) 을 DMF (13 ml) 중 화합물 202 (1.61 g, 2.61 mmol) 용액에 실온에서 적가하였다. 용액을 실온에서 교반하였다. 이어서, 24 h 에 걸쳐 용매를 진공 하 35 ℃ 에서 제거하였다. 에테르/바이카르보네이트로 추출하고 이어서 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 용매를 제거하여 미정제 생성물을 무색 고체 거품로서 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (0-4% MeOH/DCM) 로 순수 생성물을 수득하였고 (1.75 g, 98 %) TLC 및 HPLC 에 의해 균질한 무색 고체 거품으로서 수득하였다. (ESI +): 계산치 (M+H)+: 688.32, 측정치: 688.56. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 8.00-7.75 (br, 1H), 7.45-7.39 (m, 2H), 7.34-7.20 (m, 8H), 6.84 (dd, J = 9.0, 1.2 Hz, 4H), 5.97 (s, 1H), 4.43 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.20-4.04 (m, 3H), 3.79 (d, J = 0.9 Hz, 6H), 3.64-3.58 (m, 1H), 3.64-3.52 (m, 2H), 3.47-3.40 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 1.70-1.55 (br, 1H), 1.39 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 1.18 (d, J = 6.9 Hz, 6H).
화합물 205 의 합성
Figure 112015015568410-pct00466
화합물 205: (R)-1-페닐-1-((S)-피롤리딘-2-일)에탄올 (4) 을 톨루엔 (3×3 mL) 을 이용한 공비 증류에 의해 건조시켰다. 톨루엔 (5 mL) 중 건조된 화합물 4 (0.725 g, 3.79 mmol) 및 4-메틸모폴린 (0.833 ml, 7.58 mmol) 용액을 톨루엔 (5 mL) 중 트리클로로포스핀 (0.331 ml, 3.79 mmol) 의 빙냉 용액에 첨가하였고 이어서 이를 1 h 동안 실온으로 가온시키고 이어서 Ar 하 여과시키고 추가의 정제 없이 반응의 다음 단계에 사용되는 오일로 환원시켰다.
화합물 207 의 합성
Figure 112015015568410-pct00467
화합물 207: 화합물 205 의 합성에 대해 기술된 바와 유사한 과정을 사용하고 화합물 206 을 화합물 204 로 대체하여, 화합물 207 을 미정제 갈색 오일로서 수득하고 이를 추가의 정제 없이 반응의 다음 단계에 사용하였다.
화합물 208 의 합성
Figure 112015015568410-pct00468
화합물 208: 화합물 203 (1.74 g, 2.53 mmol) 을 피리딘 (3×5 mL) 이어서 톨루엔 (5×5 mL) 을 이용하여 공동-증발시켜 건조시켰다. 생성되는 건조된 203 을 THF (15 mL) 에 용해시키고, 이어서 트리에틸아민 (2.47 ml, 17.7 mmol) 을 첨가하고 CO2(들)/아세톤 냉각 욕에 의해 용액을 -78 ℃ 로 냉각시켰다. 미정제 화합물 205 (3.79 mmol) 의 THF 용액 (15 mL) 을 0.5 h 에 걸쳐서 적가하고 이어서 점차적으로 실온으로 가온시켰다. 실온에서 1 시간 후, TLC 로 화합물 203 의 생성물로의 완전 전환을 나타냈다. 혼합물을 클로로포름 (100 mL) 을 이용하여 분별 깔때기로 세척하고 이어서 NaHCO3 (포화된, 수성, 50 mL 이어서 2×25 mL) 로 추출하였다. 각각의 추출시, 수성 추출물을 추가의 1×10 mL 의 클로로포름을 이용하여 세척하였다. 결합된 클로로포름 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고, 32 ℃ 에서 회전 증발에 의해 농축시켰다. 이에 따라 수득된 미정제 고체를 트리에틸아민의 일부 액적을 함유하는 DCM 에 재용해시키고 이어서 2% 농도의 트리에틸아민을 꾸준하게 함유하는 헥산/EtOAc 구배로 컬럼 크로마토그래피하여 백색 고체 거품으로서 순수 화합물 208 을 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CD3CN) δ 7.92-7.80 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 2H), 7.40-7.24 (m, 12H), 6.88 (dd, J = 9.0, 1.1 Hz, 4H), 5.94 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.79 (dt, J = 9.6, 5.6 Hz, 1H), 4.31-4.27 (m, 1H), 4.27-4.22 (m, 1H), 3.87 (t, J = 4.7 Hz, 2H), 3.75 (d, J = 2.0 Hz, 6H), 3.66 (td, J = 5.9, 5.5, 2.2 Hz, 1H), 3.58-3.53 (m, 2H), 3.50 (dd, J = 11.1, 2.4 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 11.0, 3.3 Hz, 1H), 3.31 (s, 3H), 2.85 (dq, J = 10.5, 7.4, 6.9 Hz, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.52 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 1.47-1.32 (m, 2H), 1.17 (dd, J = 6.9, 0.7 Hz, 6H), 1.05-0.90 (m, 2H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ 155.35.
화합물 210 의 합성
Figure 112015015568410-pct00469
화합물 210: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 209 를 화합물 203 로, 화합물 207 을 화합물 205 로 대체하여, 순수 화합물 210 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CD3CN) δ 8.31-8.27 (m, 2H), 7.86 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.55-7.45 (m, 5H), 7.44-7.24 (m, 12H), 6.94-6.90 (m, 4H), 5.96 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 4.86-4.76 (m, 1H), 4.29 (dd, J = 5.0, 3.8 Hz, 1H), 4.23 (dt, J = 5.8, 2.8 Hz, 1H), 3.92-3.80 (m, 2H), 3.78 (s, 6H), 3.74 (ddd, J = 7.1, 5.3, 2.1 Hz, 1H), 3.55 (t, J = 4.7 Hz, 2H), 3.51 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 11.1, 3.4 Hz, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.26 (ddd, J = 10.3, 6.1, 2.2 Hz, 1H), 2.86 (ddt, J = 10.1, 8.2, 7.2 Hz, 1H), 1.72 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.62 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 1.56-1.41 (m, 2H), 1.09-0.87 (m, 2H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ 155.22.
화합물 212 의 합성
Figure 112015015568410-pct00470
화합물 212: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 211 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 212 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 9.25-8.70 (br, 1H), 7.69 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.40-7.17 (m, 12H), 6.81 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 4H), 6.09 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.78 (dt, J = 9.6, 5.2 Hz, 1H), 4.36-4.26 (m, 2H), 3.94-3.88 (m, 2H), 3.74 (dd, J = 4.0, 0.9 Hz, 6H), 3.69 (td, J = 6.4, 2.9 Hz, 1H), 3.64-3.56 (m, 3H), 3.44-3.37 (m, 2H), 3.36 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 3.00 (dtd, J = 10.3, 7.9, 6.4 Hz, 1H), 1.72 (s, 3H), 1.54-1.44 (m, 1H), 1.38 (dd, J = 6.8, 5.4 Hz, 1H), 1.34 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.97-0.87 (m, 1H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 158.18.
화합물 213 의 합성
Figure 112015015568410-pct00471
화합물 213: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 211 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 213 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 9.55-9.10 (br, 1H), 8.09 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.80-7.71 (m, 2H), 7.69-7.47 (m, 12H), 7.20-7.08 (m, 4H), 6.32 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 5.20-5.11 (m, 1H), 4.66-4.59 (m, 1H), 4.49-4.39 (m, 1H), 4.33-4.24 (m, 1H), 4.16-4.02 (m, 8H), 4.00-3.93 (m, 1H), 3.91-3.84 (m, 2H), 3.73 (dd, J = 11.0, 2.5 Hz, 1H), 3.65-3.52 (m, 4H), 3.27-3.16 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 1.88-1.76 (m, 1H), 1.76-1.65 (m, 1H), 1.63-1.49 (m, 4H), 1.29-1.18 (m, 1H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 160.08.
화합물 215 의 합성
Figure 112015015568410-pct00472
(i) TMSCl, NEt3, 0℃; (ii) 2,4,6-트리메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드, DMAP; (iii) 1-메틸피롤리딘, 3-히드록시프로판니트릴, DBU, 0℃; (iv) MeOH/H2O, 4 d, 실온.
화합물 215: (i) 일시적인 TMS 보호: N2-이소부티릴-5'-O-DMTr-2'-O-MOE-구아노신 (화합물 214) (15.04 g, 21.1 mmol) 및 트리에틸아민 (11.8 ml, 85 mmol) 의 용액을 ACN (200 mL) 중에서 취하고 이어서 클로로트리메틸실란 (10.4 ml, 82 mmol) 을 실온에서 교반된 빙냉 용액에 적가하였다. TLC 에 의해 1 h 동안 모니터링하였다. 용매의 여과 및 제거, 이어서 추출 (DCM/NaHCO3 500 mL/200 mL) 을 수행하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 용매를 제거하여 미정제 화합물을 추가 정제 없이 다음 반응 단계에 사용하였다. 화합물은 균질하였다 (TLC 에 의해, Rf= 0.6, (5% MeOH/DCM)). (ii) 시아노에틸 보호를 위한 O 6 위치의 활성화: 잔사를 DCM 에 재용해시키고 이어서 트리에틸아민 (13.1 ml, 94 mmol) 를 첨가하고, 이어서 2,4,6-트리메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (6.15 g, 28.1 mmol) 및 DMAP (0.14 g, 1.146 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 출발 물질의 완전히 사라지고 TLC 에 의해 새로운 스팟이 나타날 때까지 TLC (Rf= 0.9, (5% MeOH/DCM)) 로 모니터링하면서 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. (iii) 시아노에틸 보호: 1-메틸피롤리딘 (22.43 ml, 211 mmol) 을 TLC (새로운 스팟, Rf = 0.2, 스트리크, (5% MeOH/DCM)) 로 모니터링하여, 0 ℃ 에서 1 시간에 걸쳐 추가 반응으로 빙냉 용액에 적하 방식으로 천천히 첨가하였다. 3-히드록시프로판니트릴 (14.40 ml, 211.0 mmol) 이어서 DBU (6.32 mL, 42.1 mmol) 를 적하 방식으로 여전한 빙냉 용액에 연속적으로 첨가하고 추가 90 분 동안 지속시키고, TLC (새로운 스팟, Rf = 0.6, (5% MeOH/DCM)) 로 모니터링하였다. 반을 거의 완료시키기 위해, TLC 로 조심스레 모니터링하면서 추가 1.6 mL 의 DBU 를 적가하였다. 혼합물을 NaH2PO4 (400 mL 물 중 50 g) 상에 붓고, 유기 물질을 분리시키고, 희석 NaH2PO4 (200 mL 물 중 10 g) 로 세척시키고, 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고 회전 증발에 의해 환원시켰다. (iv) TMS 탈보호: 따라서 이전 단계에서 수득된 잔사를 MeOH (250 mL) 에 재용해시키고 이어서 물을 적하 방식으로 침전을 유도하지 않도록 조심스럽게 첨가하였다. 적하 첨가를 4일에 걸쳐 계속하면서 TLC 로 모니터링하였다. 대부분의 용매를 제거하고 잔사를 추출하고 (DCM/NaHCO3 (500/200 mL), 여과시키고 환원시켰다. 잔사를 컬럼 정제로 처리하여 (0-5% MeOH/DCM) 순수 화합물 215 를 백색 거품 (TLC 및 HPLC 에 의해 균질) 으로서 수득하였다. (ESI +): 계산치 (M+H)+: 767.34, 측정치: 767.03. 1H NMR (300 MHz, CD3CN) δ 8.63 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.44-7.36 (m, 2H), 7.33-7.18 (m, 7H), 6.84-6.72 (m, 4H), 6.02 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.74 (td, J = 6.2, 0.9 Hz, 2H), 4.71-4.64 (m, 2H), 4.14-4.06 (m, 1H), 3.88-3.73 (m, 8H), 3.57-3.41 (m, 4H), 3.32-3.23 (m, 3H), 3.08 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.77 (dt, J = 13.7, 6.9 Hz, 1H), 1.14 (dd, J = 6.9, 1.2 Hz, 6H).
화합물 216 의 합성
Figure 112015015568410-pct00473
화합물 216: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 215 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 216 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CD3CN) δ 8.41 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.50-7.44 (m, 2H), 7.40-7.19 (m, 12H), 6.80 (dd, J = 8.9, 5.2 Hz, 4H), 6.04 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.99 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.94 (ddd, J = 9.9, 5.2, 3.7 Hz, 1H), 4.75 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.29 (q, J = 3.8 Hz, 1H), 3.89-3.82 (m, 1H), 3.76-3.68 (m, 7H), 3.64 (ddd, J = 6.8, 5.5, 2.3 Hz, 1H), 3.50-3.46 (m, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.38-3.28 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.09 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.84 (dq, J = 10.2, 7.3 Hz, 1H), 2.70-2.58 (m, 1H), 1.76 (s, 3H), 1.46-1.27 (m, 2H), 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.04-0.89 (m, 2H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ 154.40.
화합물 217 의 합성
Figure 112015015568410-pct00474
화합물 217: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 215 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 217 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CD3CN) δ 8.56 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 8.2, 1.5 Hz, 2H), 7.39-7.19 (m, 12H), 6.81 (dd, J = 10.4, 8.9 Hz, 4H), 6.06 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.96-4.86 (m, 2H), 4.75 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.30 (td, J = 5.1, 4.7, 2.4 Hz, 1H), 3.83 (dt, J = 11.2, 4.3 Hz, 1H), 3.79- 3.70 (m, 7H), 3.67 (ddd, J = 7.1, 5.2, 2.0 Hz, 1H), 3.52-3.45 (m, 3H), 3.41 (dd, J = 10.8, 2.7 Hz, 1H), 3.34-3.24 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.08 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.89-2.72 (m, 2H), 1.68 (s, 3H), 1.54-1.38 (m, 2H), 1.14 (dd, J = 6.8, 5.4 Hz, 6H), 1.09-1.00 (m, 1H), 0.95-0.83 (m, 1H); 31P NMR (162 MHz, CD3CN) δ 154.93.
화합물 219 의 합성
Figure 112015015568410-pct00475
화합물 219: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 218 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 219 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 9.31 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.07-7.98 (m, 2H), 7.60-7.53 (m, 1H), 7.52-7.43 (m, 4H), 7.38-7.15 (m, 12H), 6.83-6.74 (m, 4H), 6.24 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.03-4.92 (m, 2H), 4.45 (q, J = 3.8 Hz, 1H), 3.93 (dt, J = 11.4, 4.2 Hz, 1H), 3.77 (ddd, J = 7.5, 5.8, 3.2 Hz, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.60-3.49 (m, 3H), 3.47-3.37 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.81 (s, 3H), 1.56-1.43 (m, 1H), 1.37 (dq, J = 13.2, 6.5 Hz, 1H), 1.22-1.09 (m, 1H), 0.96 (ddt, J = 13.1, 7.9, 6.8 Hz, 1H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 157.73.
화합물 220 의 합성
Figure 112015015568410-pct00476
화합물 220: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 218 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 220 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (399 MHz, CDCl3) δ 9.26 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.60-7.53 (m, 1H), 7.52-7.40 (m, 4H), 7.39-7.13 (m, 12H), 6.84-6.76 (m, 4H), 6.24 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.99 (dt, J = 10.0, 5.0 Hz, 1H), 4.84 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 4.46 (q, J = 4.0 Hz, 1H), 3.91 (dt, J = 11.1, 4.2 Hz, 1H), 3.85-3.69 (m, 8H), 3.63-3.50 (m, 3H), 3.42 (dd, J = 10.7, 4.0 Hz, 1H), 3.40-3.31 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.00-2.89 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.58-1.38 (m, 2H), 1.20-1.09 (m, 1H), 1.00 (ddt, J = 12.3, 8.8, 5.9 Hz, 1H); 31P NMR (162 MHz, CDCl3) δ 158.98.
화합물 222 의 합성
Figure 112015015568410-pct00477
화합물 222: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 221 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 222 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 10.46 (s, br, 1H), 8.62 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.36-7.21 (m, 12H), 7.00 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 9.0, 7.1 Hz, 4H), 6.03 (s, 1H), 4.77 (td, J = 8.7, 4.8 Hz, 1H), 4.34 (dt, J = 9.4, 2.3 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 6.7, 3.4 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.71 (s, 6H), 3.68-3.58 (m, 2H), 3.48-3.38 (m, 1H), 3.01 (p, J = 7.8 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.49 (tt, J = 12.3, 7.0 Hz, 1H), 1.40 (dq, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.18 (dq, J = 13.9, 7.0 Hz, 1H), 1.02-0.90 (m, 1H); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.71.
화합물 223 의 합성
Figure 112015015568410-pct00478
화합물 223: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 221 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 223 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.76 (s, 1H), 8.70 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.48-7.41 (m, 2H), 7.41-7.18 (m, 12H), 7.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.9, 1.9 Hz, 4H), 6.00 (s, 1H), 4.80 (td, J = 9.2, 4.7 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.72 (td, J = 6.6, 3.4 Hz, 1H), 3.70-3.62 (m, 4H), 3.53 (dd, J = 11.3, 2.2 Hz, 1H), 3.34 (tdd, J = 10.7, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 2.96 (dq, J = 10.3, 7.6 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.56-1.48 (m, 1H), 1.43 (dq, J = 13.1, 6.4 Hz, 1H), 1.24-1.16 (m, 1H), 1.00-0.91 (m, 1H). 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 157.17.
화합물 225 의 합성
Figure 112015015568410-pct00479
화합물 225: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 224 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 225 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 9.76 (s, br, 1H), 8.70 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.48-7.41 (m, 2H), 7.41-7.18 (m, 12H), 7.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 8.9, 1.9 Hz, 4H), 6.00 (s, 1H), 4.80 (td, J = 9.2, 4.7 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.72 (td, J = 6.6, 3.4 Hz, 1H), 3.69-3.62 (m, 4H), 3.53 (dd, J = 11.3, 2.2 Hz, 1H), 3.34 (tdd, J = 10.7, 7.8, 4.9 Hz, 1H), 2.96 (dq, J = 10.3, 7.6 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.56-1.48 (m, 1H), 1.43 (dq, J = 13.1, 6.4 Hz, 1H), 1.24-1.16 (m, 1H), 1.00-0.91 (m, 1H); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.97.
화합물 226 의 합성
Figure 112015015568410-pct00480
화합물 226: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 224 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 226 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 9.8-9.0 (br, 1H), 8.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.36-7.19 (m, 12H), 6.80 (dd, J = 11.4, 8.8 Hz, 4H), 6.02 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.82 (td, J = 8.1, 4.9 Hz, 1H), 4.27 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.96 (dd, J = 5.0, 2.2 Hz, 1H), 3.81-3.76 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.61-3.54 (m, 2H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.04 (dtd, J = 10.2, 8.0, 6.3 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.56-1.47 (m, 1H), 1.44-1.35 (m, 1H), 1.26-1.18 (m, 1H), 0.95 (dq, J = 12.3, 7.5 Hz, 1H); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.96.
화합물 228 의 합성
Figure 112015015568410-pct00481
화합물 228: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 227 을 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 228 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.16.
화합물 229 의 합성
Figure 112015015568410-pct00482
화합물 229: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 227 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 229 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.84.
화합물 231 의 합성
Figure 112015015568410-pct00483
화합물 231: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 230 을 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 231 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 9.6-9.3 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.50-7.41 (m, 2H), 7.39-7.16 (m, 14H), 7.10-7.01 (m, 3H), 6.82 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 6.21 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 4.96 (dt, J = 10.1, 5.1 Hz, 1H), 4.86 (s, 2H), 4.54 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 4.43 (q, J = 3.9 Hz, 1H), 3.81-3.75 (m, 7H), 3.62 (dd, J = 10.8, 3.3 Hz, 1H), 3.54 (s, 3H), 3.46-3.42 (m, 1H), 3.41-3.33 (m, 1H), 3.01-2.93 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.56-1.47 (m, 1H), 1.44 (dq, J = 13.2, 6.5 Hz, 1H), 1.22-1.11 (m, 1H), 1.03-0.94 (m, 1H); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.11.
화합물 232 의 합성
Figure 112015015568410-pct00484
화합물 232: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 230 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 232 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 1H NMR (499 MHz, CDCl3) δ 9.8-9.2 (br, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.40-7.15 (m, 14H), 7.09-7.02 (m, 3H), 6.79 (d, J = 8.9 Hz, 4H), 6.20 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.93 (ddd, J = 9.3, 5.0, 3.8 Hz, 1H), 4.86 (s, 2H), 4.73 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.43 (q, J = 3.9 Hz, 1H), 3.79-3.75 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.57 (dt, J = 6.8, 3.8 Hz, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.46-3.36 (m, 2H), 2.99 (dtd, J = 10.1, 7.9, 6.5 Hz, 1H), 1.80 (s, 3H), 1.54-1.45 (m, 1H), 1.39-1.31 (m, 1H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.99-0.90 (m, 1H); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.13.
화합물 234 의 합성
Figure 112015015568410-pct00485
화합물 234: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 233 을 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 234 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 235 의 합성
Figure 112015015568410-pct00486
화합물 235: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 233 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 235 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 158.75.
화합물 237 의 합성
Figure 112015015568410-pct00487
화합물 237: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 236 을 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 237 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, 클로로포름-d) δ 159.51 (d, JP-F = 9.5 Hz).
화합물 238 의 합성
Figure 112015015568410-pct00488
화합물 238: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 236 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 238 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, 클로로포름-d) δ 159.48.
화합물 240 의 합성
Figure 112015015568410-pct00489
화합물 240: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 239 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 240 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 160.20 (d, JP-F = 11.0 Hz).
화합물 241 의 합성
Figure 112015015568410-pct00490
화합물 241: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 239 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 241 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 159.66 (d, JP-F = 8.4 Hz).
화합물 243 의 합성
Figure 112015015568410-pct00491
화합물 243: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 242 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 243 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 160.20 (d, J = 11.0 Hz).
화합물 244 의 합성
Figure 112015015568410-pct00492
화합물 244: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 242 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 244 을 무색 고체 거품으로서 수득하였다. 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ 156.52 (d, JP-F = 8.5 Hz).
화합물 246 의 합성
Figure 112015015568410-pct00493
화합물 246: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 245 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 246 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 247 의 합성
Figure 112015015568410-pct00494
화합물 247: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 245 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 247 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 249 의 합성
Figure 112015015568410-pct00495
화합물 249: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 248 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 249 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 250 의 합성
Figure 112015015568410-pct00496
화합물 250: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 248 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 250 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 252 의 합성
Figure 112015015568410-pct00497
화합물 252: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 251 을 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 252 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 253 의 합성
Figure 112015015568410-pct00498
화합물 253: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 251 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 253 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 255 의 합성
Figure 112015015568410-pct00499
화합물 255: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 254 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 255 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 256 의 합성
Figure 112015015568410-pct00500
화합물 256: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 254 를 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 256 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 258 의 합성
Figure 112015015568410-pct00501
화합물 258: 화합물 208 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고, 화합물 257 를 화합물 203 로 대체하여, 순수 화합물 258 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
화합물 259 의 합성
Figure 112015015568410-pct00502
화합물 259: 화합물 210 에 대해 기술된 바와 유사한 절차를 사용하고 화합물 257 을 화합물 209 로 대체하여, 순수 화합물 259 를 무색 고체 거품으로서 수득하였다.
실시예 2-16.
하기 표 E-1 에서, DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 실시예 2-16 에 대한 합성 과정을 요약하였다.
표 E-1. 실시예 2-16 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서의 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00503
실시예 2-9: 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다 (10 mmol 합성 컬럼 및 6.5 mmol 의 숙시닐 연결된 dC (CPG 상의) 를 사용하는 표 E-1 에서 요약된 사이클에 따라). 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 이어서 건식 고체 지지체를 건식 ACN-트리메틸실릴 클로라이드-16:1 (v/v) 중에서 1,8-디아자바이시클로운데크-7-엔 (DBU) 의 5 mL 의 무수물 1 M 용액으로 10 분 동안 실온에서 처리하였다 (용액이 컬럼의 배출구에 고정된 플라스틱 루어 시린지에 의해 컬럼을 통해 천천히 밀리는 시간 동안). 이어서 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 CPG 를 플라스틱 바이알에 두고 이어서 3 mL 의 28% 수성 암모니아로 18 시간 동안 실온에서 처리하였다. 용매를 건조 증발시키고, 잔사를 10% 수성 DMSO 로 재현탁하고, 고체 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 음이온 교환 제조용 HPLC (구배: 20 mM NaOH 중 0.25 내지 1.75 M NaCl) 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
실시예 10-16: 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다 (1 μmol 합성 컬럼 및 3 mmol 의 숙시닐 연결된 dC (CPG 상의) 를 사용하여 표 E-1 에 요약된 사이클에 따라). 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 이어서 건식 고체 지지체를 건식 ACN-트리메틸실릴 클로라이드-16:1 (v/v) 중에서 1,5-디아자바이시클로(4.3.0)논-5-엔 (DBN) 의 5 mL 의 무수물 1 M 용액으로 10 분 동안 실온에서 처리하였다. 컬럼의 배출구에 고정된 플라스틱 루어 시린지에 의해 컬럼을 통해 DBN 용액을 천천히 밀었다. 이어서 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 CPG 를 플라스틱 바이알에 두고 2 mL 의 28% 수성 암모니아 18 시간 동안 실온에서 처리하였다. 용매를 건조 증발시키고, 잔사를 10% 수성 DMSO 에서 재현탁시키고, 고체 지지체를 여과시켰다.
실시예 2-16 의 정제 및 탈염:
미정제 생성물을 Waters 2525 BGM HPLC 시스템으로 정제시켰다 (2487 이중 파장 검출기 및 FCO 및 Flex 인젝트 장착). AP-1 유리 컬럼 (Waters) 10×200 mm 을 Source 15Q 지지체 (GE Healthcare, Part no. 17-0947-01) 로 충전시키고 4 mL/min 의 유속으로 사용하였다. 컬럼을 TL600 이동 상 히터 및 TL150 온도 콘트롤러 (Timberline Instruments) 세트를 사용하여 75 ℃ 에서 전체 정제 동안 가열시켰다. 버퍼 A: 20 mM NaOH 및 버퍼 B: 20 mM NaOH, 2.5 M NaCl 를 30% B 내지 70% B 로 출발하는 단계 구배를 사용하였다. 95 % 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 4 mL/min 유속 및 80% ACN 에 대한 물의 구배를 갖는 역-상 컬럼 (XBridge Semi Prep, 250×10mm, C18, 5㎛) 에 의한 동일한 HPLC 시스템 상에서 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 스피드 백에서 농축시키고 이어서 물로 동결건조하였다.
정제된 올리고뉴클레오티드의 HPLC 분석: 올리고뉴클레오티드의 품질을 DNA Pac 100 (10×50 mm) 를 사용하여 결정하였고,
하기 조건을 사용하였다:
버퍼 A: 10 mM Tris HCl, 50% HCl, pH=8.0
버퍼 B: A + 0.8 M NaClO4, pH=8.0
컬럼 온도: 60 ℃
구배 방법:
Figure 112015015568410-pct00504
LCMS 분석 방법:
용리제 A: 15 mM TEA, 400 mM HFIP, 물
용리제 B: 50:50 버퍼 A/메탄올
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 50 ℃
구배 방법:
Figure 112015015568410-pct00505
실시예 2. 올리고뉴클레오티드 101 (모든-(Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 101 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.70 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치: 6310.2; 측정치: 6310.4.
실시예 3. 올리고뉴클레오티드 102 (모든-(Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 102 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.49 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치: 6310.2; 측정치: 6310.2.
실시예 4. 올리고뉴클레오티드 103 ((Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (5R-9S-5R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 103 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.10 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6310.3.
실시예 5. 올리고뉴클레오티드 104 ((Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (5S-9R-5S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 104 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.04 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6307.2.
실시예 6. 올리고뉴클레오티드 105 ((Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (1S-17R-1S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 105 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.75 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치: 6310.2; 측정치: 6310.2.
실시예 7. 올리고뉴클레오티드 106 ((Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (1R-17S-1R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 106 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.43 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6309.6.
실시예 8. 올리고뉴클레오티드 107 ((Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((R/S) 9 R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 107 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.02 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6310.7.
실시예 9. 올리고뉴클레오티드 108 ((Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((S/R) 9 S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 108 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.10 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6307.9.
실시예 10. 올리고뉴클레오티드 109 ((Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp)d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (3S-13R-3S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 109 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.91 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6309.5.
실시예 11. 올리고뉴클레오티드 110 ((Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (3R-13S-3R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 110 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.24 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6309.3.
실시예 12. 올리고뉴클레오티드 111 ((Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((18S/R 19 )) 의 합성
올리고뉴클레오티드 111 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.69 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6309.4.
실시예 13. 올리고뉴클레오티드 113 ((Sp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (18S/R 2 )) 의 합성
올리고뉴클레오티드 113 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 15.72 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6311.0.
실시예 14. 올리고뉴클레오티드 114 ((Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] ((RRS) 6 -R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 114 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.14 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6313.7.
실시예 15. 올리고뉴클레오티드 115 ((Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp)-d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (S-(RRS) 6 )) 의 합성
올리고뉴클레오티드 115 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.30 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6313.7.
실시예 16. 올리고뉴클레오티드 116 ((Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp)d[GsCsCsTsCsAsGsTsCsTsGsCsTsTsCsGsCsAsCsC] (RS-(RRS) 5 -RR)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 116 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (IEX-HPLC 에서): 14.17 min. UPLC/ESI-MS: C191H246N67O102P19S19 에 대한 계산치 : 6310.2; 측정치: 6312.4.
실시예 2-16 의 결과를 하기 표 E-2 에 요약하였다.
표 E-2. 실시예 2-16 의 요약
Figure 112015015568410-pct00506
실시예 17. 대조군 올리고뉴클레오티드의 합성
대조군 올리고뉴클레오티드 (참조, 표 E-3) 를 자동화 고체상 올리고뉴클레오티드 합성에 대한 표준 화학 방법을 사용하여 합성하였다 (Beaucage, S.L. 및 Iyer, R.P., Tetrahedron, 1992, 48, 2223-2311). 더욱 구체적으로는, 입체무작위 DNA 를 표준 DNA 포스포라미디트 (ChemGenes Co.), 에틸티오테트라졸(ETT, Muang et al., Tetrahedron Lett., 2004, 45, 6497-6499) 를 활성화제로서 (Glen Research) 및 N,N-디메틸-N'-(3-티옥소-3H-1,2,4-디티아졸-5-일)메탄이미다미드 (DDTT, AM Chemicals) 를 황화 시약으로서 (Guzaev, A.; Tetrahedron Lett., 2011, 52, 434-437) 사용함으로써 합성하였다. 포스포라미디트 커플링 시간은 2분 이였고 황화 시간은 10 분이였다. 올리고뉴클레오티드를 탈보호시키고 표준 방법을 사용하여 정제하였다. DNA 포스포디에스테르를, 표준 DNA 포스포라미디트, ETT (활성화제로서) 및 요오드/피리딘/물 (산화 시약으로서) 을 사용하여 합성하였다. 2'-O-메톡시에틸 (MOE) DNA 를 인-하우스 제조된 2'-O-메톡시에틸 (MOE) 포스포라미디트 (Martin, P.; Helv. Chim. Acta. 1995, 78, 486-504; Ross, B.; Song, Q.; 2004, US 특허 공보 No. 20040082775), ETT (활성화제로서) 및 DDTT (황화 시약으로서) 를 사용하여 합성하였다. 커플링 시간은 10 분이였고 황화 시간은 10 분이였다. RNA 를 표준 RNA 포스포라미디트 (ChemGenes Co.), ETT (활성화제로서) 및 요오드/피리딘/물 (산화 시약으로서) 를 사용하여 합성하였다. 커플링 시간은 10 분이였다.
모든 올리고뉴클레오티드를 탈보호시키고 표준 방법으로 정제하였다.
RNA (올리고뉴클레오티드 117) 의 정제:
Waters 2525 BGM, 2487 이중 파장 검출기, FCO 및 Flex 인젝터를 장착함,
버퍼 A: 20 mM 나트륨 포스페이트 pH=8.5
버퍼 B: 20 mM 나트륨 포스페이트, 1 M NaBr pH=8.5
컬럼: AP-1 유리 컬럼 (Waters) 10×200mm, Super Q-5PW (20), TSK Gel (Anion Exchange) (TOSOH) 로 충전됨,
컬럼 온도: 70 ℃ (Timberline Instruments, TL600 이동 상 히터 및 TL150 온도 콘트롤러)
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00507
도 1 에 나타낸 바와 같이, 키랄 제어된 포스포로티오에이트 디에스테르 20-mer 올리고뉴클레오티드 (모든-(Rp), 올리고뉴클레오티드 101, 도 1, A) 은 포스포로티오에이트 디에스테르 20-mer 표준 입체무작위 올리고뉴클레오티드 (올리고뉴클레오티드 118, 도 1, C) 의 보유 시간과는 상이한 보유 시간을 가지며, 더욱 가파른 피크를 갖는다. 당업자는, 입체무작위 올리고뉴클레오티드 108 의 정제 동안, 대부분의 모든-(Rp) 올리고뉴클레오티드 (101, 혼합물 입체무작위 올리고뉴클레오티드 108 의 대략 1/219 분획으로 존재함) 이 손실될 수 있음을 이해한다.
실시예 17 의 결과를 하기 표 E-3 에 요약하였다.
표 E-3. 실시예 17 의 요약
Figure 112015015568410-pct00508
실시예 18-21 에 대한 과정: 입체규정된 모폴리노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 HCP 상의 0.8 μmol 의 옥살릴 연결된 dC 및 1 μmol 합성 컬럼을 사용하여 표 E-4 에 요약된 사이클레 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거를 이용하여 합성 사이클을 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤의 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 이를 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비) 으로 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고 HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 에 의해 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물은 물로부터 동결건조되었다.
표 E-4. 실시예 18-21 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서의 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00509
실시예 18-21 의 일반적인 정제 방법:
버퍼 A: 20 mM 포스페이트 pH=6.0 (인산으로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = 50 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00510
올리고뉴클레오티드에 대한 분석적 HPLC 방법
HPLC 방법 1:
버퍼 A: 20 mM 포스페이트 pH=6.0 (인산으로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C18, 3.5 ㎛, C18, 4.6x50mm, Part #186003034
버퍼 히터 세트 온도 = 35 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00511
HPLC 방법 2:
버퍼 A: 50 mM TEAA, pH 7.8
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C18, 3.5 ㎛, C18, 4.6x50mm, Part #186003034
버퍼 히터 세트 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00512
HPLC 방법 3:
Figure 112015015568410-pct00513
HPLC 방법 4:
Figure 112015015568410-pct00514
실시예 18. 올리고뉴클레오티드 122 의 합성(모든-(Rp)-d[Gs1Cs1Cs1Ts1Cs1As1Gs1Ts1Cs1Ts1Gs1Cs1Ts1Ts1Cs1Gs1Cs1As1Cs1C] (s1 =
Figure 112015015568410-pct00515
올리고뉴클레오티드 122 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서): (HPLC 방법 1): 15.2 min. UPLC/ESI-MS: C305H455N86O121P19S19 에 대한 계산치: 8460.25; 측정치: 8462.0.
실시예 19. 올리고뉴클레오티드 123 ((Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp)-d[Gs1Cs1Cs1Ts1Cs1As1Gs1Ts1Cs1Ts1Gs1Cs1Ts1Ts1Cs1Gs1Cs1As1Cs1C] ((1S-17R-1S) 의 합성
올리고뉴클레오티드 123 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 16.2 min. UPLC/ESI-MS: C305H455N86O121P19S19 에 대한 계산치 : 8460.3; 측정치: 8461.5.
실시예 20. 올리고뉴클레오티드 124 (모든-(Sp)-d[Gs1Cs1Cs1Ts1Cs1As1Gs1Ts1Cs1Ts1Gs1Cs1Ts1Ts1Cs1Gs1Cs1As1Cs1C]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 124 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.3 min. UPLC/ESI-MS: C305H455N86O121P19S19 에 대한 계산치 : 8460.3; 측정치: 8461.8.
실시예 21. 올리고뉴클레오티드 125 (모든-(Rp)-d[5mCs1As1Ts1G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 125 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 16.32 min. UPLC/ESI-MS: C58H85N18O22P3S3 에 대한 계산치 : 1575.5; 측정치: 1575.2.
실시예 22 및 42 에서, 입체규정된 메톡시에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드는 HCP 상에 0.8 μmol 의 옥살릴 연결된 dC 및 1 μmol 합성 컬럼을 사용하는 표 E-5 에 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 건식 피리딘 (1:4 비로) 중에서 1 mL 의 건식 프로필아민으로 18 시간 동안 실온에서 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고, HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (구배 20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-5. 실시예 22 및 42 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 에 대한 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00516
실시예 22. 올리고뉴클레오티드 126 (모든-(Rp)-d[Cs2As2Gs2T] 의 합성 (s2 =
Figure 112015015568410-pct00517
))
올리고뉴클레오티드 126 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 16.23 분. UPLC/ESI-MS: C48H68N15O22P3S3 에 대한 계산치: 1396.2; 측정치: 1395.2.
실시예 23: 입체규정된 N-메틸피페라지노 벌키 에스테르 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 HCP 에 대해 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT 를 사용하여 표 E-6 에서 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거를 이용하여 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 건식 피리딘 (1:4 비로) 중에서 18 시간 동안 실온에서 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0) 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-6. 실시예 23 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 에 대한 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00518
실시예 23. 올리고뉴클레오티드 127 (모든-(Rp)-d[Cs3As3Gs3T] 의 합성 (s3 =
Figure 112015015568410-pct00519
))
올리고뉴클레오티드 127 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 20.24 분. UPLC/ESI-MS: C78H122N21O25P3S3 에 대한 계산치: 1943.1; 측정치: 1941.0.
실시예 24 및 43. 입체규정된 모폴리노 벌키 에스테르 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 를 이용하여 표 E-7 에 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-7. 실시예 24 및 43 에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 에 대한 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00520
실시예 24. 올리고뉴클레오티드 128 (모든-(Sp)-d[Cs4As4Gs4T] 의 합성 (s4 =
Figure 112015015568410-pct00521
))
올리고뉴클레오티드 128 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 3): 19.75 min. UPLC/ESI-MS: C75H113N18O28P3S3 에 대한 계산치: 1902.9; 측정치: 1904.0.
실시예 25: 입체규정된 디메틸아미노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 을 사용하는 표 E-8 에서 요약되는 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기에 대해 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0) 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-8. 실시예 25 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 에 대한 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00522
실시예 25. 올리고뉴클레오티드 129 (모든-(Sp)-d[Cs5As5Gs5T] 의 합성 (s5 =
Figure 112015015568410-pct00523
))
올리고뉴클레오티드 129 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 17.25 min. UPLC/ESI-MS: C51H77N18O19P3S3 에 대한 계산치:1435.4; 측정치: 1435.0.
실시예 26: 입체규정된 디메틸알라닌 에스테르 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 를 사용하여 표 E-9 에 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-9. 실시예 26 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00524
실시예 26. 올리고뉴클레오티드 130 (모든-(Sp)-d[Cs6As6Gs6T] 의 합성 (s6 =
Figure 112015015568410-pct00525
))
올리고뉴클레오티드 130 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 16.45 min. UPLC/ESI-MS: C57H83N18O25P3S3 에 대한 계산치: 1609.5; 측정치: 1609.6.
실시예 27 및 28: 입체규정된 S-메틸 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 0.8 μmol 의 옥살릴 연결된 dC (HCP 상의) 를 사용하여 표 E-10 에 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기에 대해 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 was 처리됨 with 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 with 50% DMSO 으로 18 시간 동안 실온에서. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-10. 실시예 27 및 28 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00526
실시예 27. 올리고뉴클레오티드 131 (모든-(Rp)-d[Gs7Cs7Cs7Ts7Cs7As7Gs7Ts7Cs7Ts7Gs7Cs7Ts7Ts7Cs7Gs7Cs7As7Cs7C] 의 합성 (s7 =
Figure 112015015568410-pct00527
))
올리고뉴클레오티드 131 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서): 27.65 min. UPLC/ESI-MS: C210H284N67O102P19S19 에 대한 계산치: 6576.71; 측정치: 6575.6.
실시예 28. 올리고뉴클레오티드 132 (모든-(Sp)-d[Gs7Cs7Cs7Ts7Cs7As7Gs7Ts7Cs7Ts7Gs7Cs7Ts7Ts7Cs7Gs7Cs7As7Cs7C] 의 합성 (s7 =
Figure 112015015568410-pct00528
))
올리고뉴클레오티드 132 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서): 32.65 min. UPLC/ESI-MS: C210H284N67O102P19S19 에 대한 계산치: 6576.71; 측정치: 6574.8.
변형된 뉴클레오베이스를 포함하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드의 합성
상기에서 그리고 본원에서 일반적으로 기술된 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 발명은 A, T, C 및 G 이외의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 이러한 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 5-메틸사이토신 (5mC) 을 포함한다. 비제한적 예는 실시예 21 및 하기에서 제시된다.
실시예 29-41 은 1 μmol 합성 컬럼 및 1.75 μmol 의 옥살릴 연결된 dG (HCP 상의) 를 사용하여, 표 E-11 에 요약된 합성 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 자동화 합성을 이용하여 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 완료 후 HCP 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고, HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (하기 기술되는 과정에 따름). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 30% ACN) 에 의해 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-11. 실시예 29-41 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00529
실시예 29-41 에 대한 일반적인 정제 방법:
버퍼 A: 20 mM 포스페이트 pH=6.0 (인산으로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = 50 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00530
실시예 29. 올리고뉴클레오티드 135 (모든-(Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 135 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 17.50 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11 에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5091.9.
실시예 30. 올리고뉴클레오티드 136 (모든-(Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 136 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 19.25 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11 에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5090.8.
실시예 31. 올리고뉴클레오티드 137 ((Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (1S-9R-1S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 137 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 17.85 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5091.9.
실시예 32. 올리고뉴클레오티드 138 ((Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (2S-7R-2S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 138 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.10 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5091.9.
실시예 33. 올리고뉴클레오티드 139 ((Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (1R-9S-1R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 139 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.75 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11 에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5088.9.
실시예 34. 올리고뉴클레오티드 140 ((Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (2R-7S-2R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 140 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.72 min. UPLC/ESI-MS: C186H278N51O73P11S11에 대한 계산치: 5090.0; 측정치: 5091.3.
실시예 35. 올리고뉴클레오티드 141 ((Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (3S-5R-3S)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 141 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.09 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C186H278N51O73P11S11: 5090.0; 측정치: 5090.9.
실시예 36. 올리고뉴클레오티드 142 ((Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] (3R-5S-3R)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 142 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서): 18.35 min. UPLC/ESI-MS (HPLC 방법 1): 에 대한 계산치 C186H278N51O73P11S11: 5090.0; 측정치: 5088.9.
실시예 37. 올리고뉴클레오티드 143 ((Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] ((SSR) 3 -SS)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 143 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.48 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C186H278N51O73P11S11: 5090.0; 측정치: 5092.0.
실시예 38. 올리고뉴클레오티드 144 ((Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp)-d[5mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1G] ((RRS) 3 -RR)) 의 합성
올리고뉴클레오티드 144 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 18.02 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C186H278N51O73P11S11: 5090.0; 측정치: 5091.4.
실시예 39. 올리고뉴클레오티드 145 (모든-(Rp)-d[5mCs1Ts15mCs1As1Gs1Ts15mCs1Ts1Gs15mCs1Ts1Ts15mCs1Gs15mC]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 145 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 1): 17.30 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C234H352N62O92P14S14: 6388.3; 측정치: 6390.6.
실시예 40. 올리고뉴클레오티드 146 (모든-(Rp)-d[Gs15mCs1Ts1G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 146 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 15.89 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C58H85N18O23P3S3: 1591.5; 측정치: 1590.8.
실시예 41. 올리고뉴클레오티드 147 (모든-(Rp)-d[5mCs1As1Gs1T]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 147 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 16.30 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C58H85N18O22P3S3: 1575.5; 측정치: 1575.2.
실시예 42. 올리고뉴클레오티드 148 (모든-(Rp)-d[5mCs2As2Gs2Ts25mCs2Ts2Gs25mCs2Ts2Ts25mCs2G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 148 을 실시예 22 에서의 황화 시약을 이용하여, 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 3): 16.51 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C153H223N40O73P11S11: 4484.1; 측정치: 4483.0.
실시예 43. 올리고뉴클레오티드 149 (모든-(Rp)-d[5mCs4As4Gs4Ts45mCs4Ts4Gs45mCs4Ts4Ts45mCs4G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 149 를 실시예 24 에서 황화 시약을 이용하여, 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 4): 17.87 min. UPLC/ESI-MS: 에 대한 계산치 C252H388N51O95P11S11: 6345.6; 측정치: 6346.5.
상이한 뉴클레오티드간 링크를 포함하는 키랄 제어된 키메라성 올리고뉴클레오티드의 합성
상기에서 그리고 본원에서 일반적으로 기술되는 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 발명은 상이한 뉴클레오티드간 링크를 포함하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 비제한적 예로 이러한 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 이의 합성 방법을 기재한다.
실시예 44-45 는 상이한 뉴클레오티드간 링크를 포함하는 키랄 제어된 키메라성 올리고뉴클레오티드의 합성을 기술하고 있다. 혼합된 부분입체이성질체적으로 순수 모폴리노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르/포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 를 이용하여 표 E-12 에서 요약되는 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 각각의 반복성 사이클은 상이한 황화 시약이 반응되게 하며, 2개의 상이한 티오술포네이트를 사용하였다. 말단 5'-O-DMTr 그룹의 제거로 합성을 수행하였다 (DMT 오프). 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 이어서 건식 고체 지지체를 건식 ACN-트리메틸실릴 클로라이드-16:1 (v/v) 중 1,5-디아자바이시클로(4.3.0)논-5-엔 (DBN) 1M 무수물 용액 5 mL 로 10 분 동안 실온에서 처리하였다. DBN 용액을 컬럼의 배출구에 고정된 플라스틱 루어 시린지에 의해 컬럼을 통해 천천히 밀었다. 이어서 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-12. 실시예 44-45 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00531
실시예 44. 올리고뉴클레오티드 150 (모든-(Rp)-d[TsCs1AsT]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 150 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 12.72 min. UPLC/ESI-MS: C45H62N13O21P3S3에 대한 계산치: 1310.2; 측정치: 1309.2
실시예 45. 올리고뉴클레오티드 151 (모든-(Sp)-d[Cs1AsGs1T]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 151 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 14.71 min. UPLC/ESI-MS: C51H72N17O21P3S3에 대한 계산치: 1448.4; 측정치: 1446.9.
실시예 46 은 둘 모두의 포스페이트 디에스테르 뉴클레오티드간 연결 및 변형된 뉴클레오티드간 링크를 포함하는 키랄 제어된 키메라성 올리고뉴클레오티드으의 합성을 기재한다.
혼합된 모폴리노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르/포스포디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 예시적인 올리고뉴클레오티드를 1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 를 사용하는 표 E-13 에 요약된 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 각 반복성 사이클이 상이한 황화 또는 산화 시약이 반응되게 하기 때문에, 하나의 티오술포네이트 시약을 하나의 사이클에서 황화에 사용하고 요오드-촉진된 산화를 다른 사이클에 사용하였다. 말단 5'-O-DMTr 그룹의 제거로 합성을 수행하였다 (DMT 오프). 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고,HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-13. 실시예 46 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00532
실시예 46. 올리고뉴클레오티드 152 (모든-(Sp)-d[Cs1AGs1T]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 152 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 13.42 min. UPLC/ESI-MS: C51H72N17O22P3S2에 대한 계산치: 1432.3; 측정치: 1431.7.
실시예 47 은, 포스포디에스테르 뉴클레오티드간 링크 및 둘 모두의 변형된 키랄 순수 포스포트리에스테르 및 포스포디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 포함하는 키랄 제어된 키메라성 올리고뉴클레오티드의 합성을 기재하고 있다. 혼합된 모폴리노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르/포스포디에스테르/포스포로티오에이트 디에스테르 링크를 함유하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드를 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다 (1 μmol 합성 컬럼 및 1.5 μmol 의 옥살릴 연결된 dT (HCP 상의) 를 사용하여 표 E-14 에 요약된 사이클에 따라). 각 반복성 사이클이 상이한 황화 또는 산화 시약이 반응되게 하기 때문에, 2개의 상이한 티오술포네이트 시약을 상이한 황화 사이클에 사용하고 요오드-촉진된 산화를 또라른 사이클에 사용하였다. 말단 5'-O-DMTr 그룹의 제거로 합성을 수행하였다 (DMT 오프). 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 이어서 건식 고체 지지체를 건식 ACN-트리메틸실릴 클로라이드-16:1 (v/v) 중 1,5-디아자바이시클로(4.3.0)논-5-엔 (DBN) 1M 무수물 용액 5 mL 로 10 분 동안 실온에서 처리하였다. 컬럼의 배출구에 고정된 플라스틱 루어 시린지에 의해 컬럼을 통해 DBN 용액을 천천히 밀었다. 이어서 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 수용액으로 재현탁하고, HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (20 mM 나트륨 포스페이트 버퍼 중 5 내지 65% ACN 구배, pH = 6.0). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-14. 실시예 47 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00533
실시예 47. 올리고뉴클레오티드 153 (모든-(Sp)-d[CAs1GsT]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 153 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 2): 11.48 min. UPLC/ESI-MS: C45H61N16O21P3S2에 대한 계산치: 1318.1; 측정치: 1318.1.
당업자에게 주지되는 바와 같이 하기 실시예 46 및 47, 및 기타 실시예 및 본원에 기술된 방법으로, 길이가 더욱 긴 키메라성 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드가 제조될 수 있다.
키랄 순수 올리고뉴클레오티드는 비-입체특이적 합성으로부터 부분입체이성질체 혼합물 보다 상이한 특성을 가짐
상기에서 그리고 본원에서 기술되는 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 발명은 비-입체특이적 올리고뉴클레오티드 합성을 통해 합성되나 동일한 염기 서열을 갖는 입체이성질체의 혼합물과는 상이한 화학적 그리고 생물학적 특성을 갖는 키랄 순수 올리고뉴클레오티드를 제공한다.
실시예 48. 키랄 순수 올리고뉴클레오티드의 HPLC 특성 및 비-입체특이적 합성로부터의 부분입체이성질체 혼합물
키랄 순수 포스포로티오에이트 디에스테르 올리고뉴클레오티드 A (Full RP, 올리고뉴클레오티드 101) 및 B (Full SP, 올리고뉴클레오티드 102) 및 비-입체특이적 C (입체무작위 포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드간 링크) (이는 표준 비-입체특이적 올리고뉴클레오티드 합성에 의해 제조됨) 를 동일한 RP-HPLC 조건으로 분석하고 상응하는 HPLC 추척을 도 2 에 제시한다.
도 2 에 명백히 나타낸 바와 같이, 포스포로티오에이트 디에스테르 20-mer 올리고뉴클레오티드의 입체화학은 RP-HPLC 및 IEX-HPLC 에 의해 측정된 바와 같은 이의 거동에 영향을 미친다. 이론에 한정되지 않으면서, RP-HPLC 에 의해 수득되는 보유 시간 (RT) 과 IEX-HPLC 사이에서 상관관계가 관찰된다 (RT 는 보존되는 경향이 있기 때문). 전체 RP 입체이성질체 (A) 는 전체 SP 입체이성질체 (B) 보다 더 짧은 보유를 갖는 반면, 입체무작위 포스포로티오에이트 디에스테르 올리고뉴클레오티드 (C) (모든 219 입체이성질체의 혼합물임) 를 폭넓은 HPLC 피크를 가지며, 이는 극도의 전체 RP 및 전체 SP 부분입체이성질체 사이에서 용리된다.
당업자에게 주지되는 바와 같이, 이와 함께 제시되는 데이터는, 상이한 키랄 제어된 또는 제어되지 않은 (예를 들어, 입체 무작위) 동일 서열의 올리고뉴클레오티드 조성물을 비교한 분석을 나타내며, 설명되는 키랄 제어되지 않은 올리고뉴클레오티드 조성물 (즉, 비-키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 합성에 의해 제조됨) 이 특정 올리고뉴클레오티드 유형 (예컨대 전체 Rp 또는 Sp 유형) 의 매우 낮은 수준으로만 포함함을 보여준다.
실시예 49. 열 변성 실험 (Tm).
각각의 DNA 가닥을 1×PBS 중에서 0.5 μM 의 등몰 농도에서 상보적 RNA 와 혼합하였다. 총 2.5 mL 용액을 각각 이중으로 제조하고 혼합물을 90 ℃ 에서 2 분 동안 및 가열시키고, 수 시간에 걸쳐 냉각시켰다. 이어서 혼합물을 4 ℃ 에서 2 시간 동안 저장시켰다. 254 nm 에서의 흡광도를 Peltier 단위를 장착한 Perkin Elmer UV-분광광도계를 사용하여, 출발 온도 구배 15 ℃ 내지 90 ℃ 로 0.5 ℃/분의 세정으로 0.5 분 간격으로 기록하였다. 254 nm 흡광도를 온도에 대해 플롯팅하고 Tm 값을 각 곡선의 제 1 유도로부터 계산하였다.
도 3 은, 2개의 입체순수 부분입체이성질체 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 (full RP 20-mer A 및 전체 SP 20-mer B) 및 the 입체무작위 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 (C) 사이에서 Tm 에서의 차이를 나타낸다. 전체 RP 포스포로티오에이트 DNA 는, 둘 모두의 반대 전체 SP 부분입체이성질체 및 입체무작위 20-mer 에 비교할 때 상보적 RNA 에 대한 더욱 높은 친화도를 나타낸다.
표 E-15 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 입체무작위 올리고뉴클레오티드 사이에서의 차이를 하기에 요약한다.
표 E-15. 키랄 제어된 및 입체무작위 올리고뉴클레오티드 사이의 차이
Figure 112015015568410-pct00534
Figure 112015015568410-pct00535
Figure 112015015568410-pct00536
Figure 112015015568410-pct00537
데이터는 3개의 생물학적 복제물의 결과이다. 모든 샘플을 트랜스펙션되지 않은 순전한 대조군과 비교하였다. SYBR 그린을 사용하는 실시간 PCR 로 유전자 발현을 평가할 때 하기 결과를 관찰하였다 (표 E-19, 도 5).
표 E-19. SYBR 그린에 의해 평가된 IC 50 데이타 완료.
Figure 112015015568410-pct00538
일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 8 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 7 nM. 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 6 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 5 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 4 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 3 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 2 nM 미만을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 0.5-8 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 1-4 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 1.5-3 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 1.5-2 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 0.5-2 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 1-2.5 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 1.5-3 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 2.5-5 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 3-6 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 IC50 5-8 nM 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 상부 경계 및 하부 경계 사이에서 범주를 갖는 IC50 을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상부 경계는 8, 5, 4, 또는 3 nM 이다. 일부 구현예에서, 하부 경계는 1, 1.5, 2, 또는 2.5 nM 이다. 실시예를 참조로 하여 보여지는 바와 같이, 본 개시는 구체적으로는 이러한 예시적 IC50 값을 나타내는 다양한 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 또는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 예로 들고 있다.
표 E-19 는 키랄 제어 형태로 시험될 때, 특정 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드/올리고뉴클레오티드 조성물이 상응하는 입체무작위 올리고뉴클레오티드 혼합물 (올리고뉴클레오티드 105, 109, 115 및 116 - 올리고뉴클레오티드 118 에 비교) 보다 더욱 잠재성이 있으며; 이들은 Mipomersen 보다 더욱 활성이 있으며, 이는 입체무작위 올리고뉴클레오티드 혼합물 (올리고뉴클레오티드 104, 105, 106, 107, 109, 115 및 116 - 올리고뉴클레오티드 120 에 비교) 임을 나타낸다.
추가 키랄 제어된 제조
실시예 51. 올리고뉴클레오티드의 키랄 제제의 제조
Figure 112015015568410-pct00539
본 실시예는 본원에 기술된 바와 같은 특정 올리고뉴클레오티드의 다양한 특정 키랄 제어 조성물의 제조를 기재하고 있다. 특히, 본 실시예는 적재된 lcaa-CPG-500 을 이용하는 것에 대한 올리고뉴클레오티드 제조를 기재하고 있다.
N4-Bz-5'-O-DMTr-2'-O-MOE-5mC (1) (4.0 g, 5.5 mmol) 을 무수물 DCM (20 mL) 에 용해시키고 2 당량의 숙신 무수물 (1.1 g, 11.1 mmol) 및 3 당량의 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (2.0 g, 16.6 mmol) 과 혼합하였다. 반응물을 실온에서 아르곤 하에 교반하였다. TLC (1 시간) 으로 측정시 출발 물질의 완전한 소비 후, 용매를 건조 증발시키고, 미정제 잔사를 1% 트리에틸아민을 함유하는 DCM 에 용해시키고 이어서 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 (2% 트리에틸아민을 함유하는 DCM 중 0-2% MeOH 구배를 사용) 로 정제하였다. 증발 후 순수 화합물 (2) 의 수율은 4.5 g, 88% 였다. 생성되는 3'-O-숙시네이트 (2) (0.92 g, 1.0 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.82 ml, 5.0 mmol) 및 CPG-500 (10g) 을 DMF (50mL) 중에서 채취하고 이어서 HBTU (0.42 g, 1.1 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 진탕하고 이어서 여과시켰다. 지지체를 DMF, MeOH 및 최종적으로, DCM 으로 세척하고 이어서 진공 하 건조시켰다. 트리틸 양이온 분석 (504 nm 에서 모니터링) 을 지지체 (3) 상에서 뉴클레오시드의 적재가 63 ㎛ol/g 인 것으로 나타났다.
입체규정된 키메라성 데옥시 및 2'-O-MOE 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드의 키랄 제어된 조성물을, 캡핑되지 않은 숙시닐 연결된 N4-Bz-5'-O-DMTr-2'-O-MOE-5mC (63 ㎛ol/g, lcaa CPG-500 (Glen Research) 의 2.0 g (126 ㎛ol) 로 적재된 MM-6-200 합성 컬럼 (BioAutomation) 을 사용하여 표 E-20 에서 요약된 사이클에 따라 MerMade-12 DNA/RNA 합성기 (BioAutomation) 상에서 합성하였다. 올리고뉴클레오티드 합성 사이클을 예비 캡핑 단계 (캡핑 2) 로 수행하고 최종 말단 5'-O-DMTr 올리고뉴클레오티드 그룹 (DMT On) 의 제거 없이 수행하였다. 입체특이적 황화 단계를 상응하는 키랄 포스포라미드 및 2단계 캡핑 공정 (표 E-20) 의 커플링에 따른 0.3 M S-(2-시아노에틸)메틸티오술포네이트 시약을 사용하여 수행하였다.
일단 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 사이클을 최종 5'-O-DMTr 그룹 kept On 으로 완료하고, 합성 컬럼을 DNA/RNA 합성기에서 떼어내서 진공 하에 건조시켰다. 건조된 지지체를 빈 유리 수동 펜티드 합성기상에 이동시키고 0.5 M 1,5-디아자바이시클로[4.3.0]논-5-엔 (DBN) 40 mL 용액, ACN 중 0.25 M N,O-비스(트리메틸실릴)트리플루오로아세트아미드 (BSTFA) 를 수동 펩티드 합성기에서 플로우를 중지시키지 않고 5 분 동안 지지체를 통해 연속 통과시켰다. 지지체를 50%Py/ACN 으로 세척하고 1 초 동안 아르곤 플로우로 건조시켰다. 이어서, 지지체를 빈 스크류-캡 플라스틱 바이알로 이동시키고 5% EtOH/conc NH3 (20 mL) 로 60 ℃ 에서 6 시간 동안 처리하고, 실온에서 12 시간 동안 방치시켰다. 지지체를 여과로 제거하고 농축 NH3 으로 세척하였다. 이어서 여과물을 진공 하에 건조시키고 생성물을 50 mM TEAA (120 mL) 에 용해시켰다. 용액 중 현탁액이 존재하는 경우 추가 여과를 수행하였다. 용액을 Sep-Pak 카트리지 (Waters, Sep-Pak Vac 35cc (10g) C18 카트리지) 상에 적재하였다. 카트리지를 20% ACN/50 mM TEAA (70 mL) 로 세척하여 말단이 잘린 서열 모두를 제거하고 0.5% 의 진한 NH3 (50 mL) 을 함유하는 50% ACN/물을 전체 길이 DMT On 올리고뉴클레오티드를 용리하였다. DMT On 올리고뉴클레오티드를 함유하는 용액을 진공 하에 건조시키고 이어서 50 mM TEAA (120 mL) 로 희석시키고 또다른 Sep-Pak 카트리지 (Waters, Sep-Pak Vac 35cc (10g) C18 카트리지) 상에서 적재하였다. 카트리지를 밀리 Q 물 (50 mL), 2%TFA/물 (50 mL), 이어서 물 (50 mL) 로 세척하였다. DMT Off 올리고뉴클레오티드를 0.5% 의 진한 NH3 (50 mL) 을 함유하는 50%ACN/물로 용리하였다.
표 E-20. 키랄 제어된 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 MerMade 12 상에서의 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00540
올리고뉴클레오티드 ONT-75 (모든 (Rp))-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-80 (모든 (Sp))-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-77 (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC (5R-10S-4R) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-81 (Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC (5S-10R-4S) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-87 (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC (5R-(SSR)3-5R) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-88 (Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC (5S-(RRS)3-5S) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-89 (Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAs GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC ((SR)9S) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-82 (모든 (Rp))- GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAsAsTsGs5mC 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-84 (모든 (Sp))- GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAsAsTsGs5mC 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-85 (Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp)- GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAsAsTsGs5mC (5R-10S-4R) 의 합성
올리고뉴클레오티드 ONT-86 (Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp)-GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAsAsTsGs5mC (5S-10R-4S) 의 합성
실시예 52: 미정제 DMT On 의 분석에 대한 일반적인 RP-HPLC 방법 및 정제된 DMT Off 올리고뉴클레오티드
본 실시예는 상기 기술된 바와 같은 키랄 제어된 합성에 의해 제조된 미정제된 및 정제된올리고뉴클레오티드 조성의 RP-HPLC 분석을 기재한다.
버퍼 A: 50 mM TEAA, pH 7.0
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C18, 3.5 ㎛, C18, 4.6x50mm, Part #186003034
컬럼 온도 = 50 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00541
Figure 112015015568410-pct00542
실시예 53: 미정제 DMT On 의 분석에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법 및 정제된DMT Off 올리고뉴클레오티드
본 실시예는 본원에 기술된 바와 같은 키랄 제어된 합성에 의해 제조된 미정제 및 정제된 올리고뉴클레오티드 조성물의 IEX-HPLC 분석을 기재하고 있다.
버퍼 A: 10 mM TrisHCl, 50%ACN, pH 8.0
버퍼 B: 10 mM TrisHCl, 800 mM NaClO4, 50%ACN, pH 8.0
컬럼: DIONEX, DNAPac, PA-100, Analytical, 4.0x250mm, Part #063000
컬럼 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00543
실시예 54: 정제된 DMT Off 올리고뉴클레오티드의 분석에 대한 일반적인 UPLC-LCMS 방법
본 실시예는 본원에 기술된 바와 같은 키랄 제어된 합성에 의해 제조된 정제된 올리고뉴클레오티드 조성물의 UPLC-LCMS 분석을 기재하고 있다.
버퍼 A: 15 mM TEA, 400 mM HFIP, 물
버퍼 B: 50:50 버퍼 A/메탄올
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 50 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00544
실시예 55: 미정제 DMT Off 올리고뉴클레오티드의 정제에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법
본 실시예는 상기 기술된 바와 같은 키랄 제어된 합성에 의해 제조된 미정제 올리고뉴클레오티드 조성물의 IEX-HPLC 정제를 기재하고 있다.
버퍼 A: 20 mM NaOH, pH 11.0
버퍼 B: 20 mM NaOH, 2.5 M NaCl, pH 11.0
컬럼: 빈 컬럼 Waters AP-2 (Waters), Source 15Q 지지체 (GE Healthcare) 로 포장된 커스텀 인-하우스. 개별 정제 컬럼을 포장하고 상이한 입체순수 올리고뉴클레오티드에 대해 사용하였다.
장치: AKTA Purifier, P-900 pump 장착, UPC-900 검출기 및 the 50 mL 주입SuperLoop (GE Healthcare)
버퍼 히터 온도 세트 = 70 ℃
254 nm 에서 신호 모니터링
분획 부피: 5 mL
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00545
수집된 분획을 분석 조건을 사용하여 상기 기술된 구배 및 분석 IEX-HPLC 분석 조건을 사용하여 개별 분석하였다. 순수 분획을 풀링하여 95% 의 정제된 재료 및 254 nm UV 흡광도 특성에 의해 측정시 상기 순도를 제공하였다.
Figure 112015015568410-pct00546
Figure 112015015568410-pct00547
표 E-21. 실시예 XX 에서 기술된 바와 같이 합성된 입체순수 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드에 대한 물리화학적 특성의 편성
서열 A: 인간 ApoB 서열 5'-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC-3'.
서열 B: 마우스 ApoB 서열 5'-GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAs AsTsGs5mC-3'.
밑줄친 뉴클레오티드는 2'-O-MOE 을 설계한다. s = 포스포로티오에이트 링크. 5mC = 5-메틸-2'-데옥시사이티딘. 5mC = 5-메틸-2'-O-MOE-사이티딘. 입체 구축물은 올리고뉴클레오티드의 주어진 포스포로티오에이트 링크에서 각각의 인 원자의 입체이성질체 성질 (Rp/Sp) 을 기재한다. 보유 시간 (tR) (IEX-HPLC 에서) 및 측정된 분자량 (MW) 값을 상기 기술된 정제된 화합물에 대한 상응하는 분석 방법을 사용하여 수득하였다
Figure 112015015568410-pct00548
실시예 56: 정제된 DMT Off 올리고뉴클레오티드의 오버레이 분석에 대한 일반적인 RP-HPLC 방법
본 실시예는 본원에 기술된 바와 같이 키랄 제어된 합성에 의해 제조된 정제된 올리고뉴클레오티드 조성물의 RP-HPLC 분석을 기재한다.
버퍼 A: 50 mM TEAA, pH 7.0
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C18, 3.5 ㎛, C18, 4.6×50mm
컬럼 온도 = 50 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00549
도 37 의 패널 A 는 미량의 정제된 DMT Off 올리고뉴클레오티드 ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89 및 ONT-41 (부분입체혼합물)-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs 5mCs5mC RP-HPLC 의 오버레이.
도 37 의 패널 B 는 하기와 같이 라벨링된 각 곡선을 갖는 패널 A 의 확대 뷰을 나타낸다:
Figure 112015015568410-pct00550
도 38 의 패널 A 는 정제된 DMT Off 올리고뉴클레오티드 ONT-82, ONT-84, ONT-85, ONT-86, 및 ONT-83 (부분입체혼합물)-GsTs5mCs5mCs5mCsTsGsAsAsGsAsTsGsTs5mCsAsAsTsGs5mC 의 RP-HPLC 의 오버레이이다.
도 38 의 패널 B 는 하기와 같이 패널 A 의 확대 뷰 (각 곡선은 하기와 같이 라벨링됨) 를 나타낸다:
Figure 112015015568410-pct00551
실시예 57: 열 변성 실험 (Tm)
본 실시예는 열 변성을 사용하는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물의 특징화를 기재하고 있다.
각각의 DNA 가닥을 1×PBS 중 등몰 농도 1 μM 으로 이의 상보적 RNA 가닥과 혼합하였다. 각 복제물에 대해 총 3 ml 용액을 제조하고 혼합물을 90 ℃ 에서 2 분 동안 가열시키고 이를 수 시간에 걸쳐 냉각시켰다. 이어서 혼합물을 4 ℃ 에서 2 시간 동안 저장하였다. 254 nm 에서의 흡광도를 Cary100 Series (Agilent Technologies) 사용하는 0.5 ℃/분의 세정으로 온도 구배 15.0 ℃ 내지 95.0 ℃ 로 출발하여 0.5 분 간격으로 기록하였다. 254 nm 흡광도를 온도에 대해 플롯팅하고 Tm 값을 각 곡선의 각 제 1 유도로부터 계산하였다.
도 39 는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 입체무작위 올리고뉴클레오티드의 Tm 오버레이를 나타낸다.
도 39 는 4개의 입체순수 부분입체이성질체 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 (모든-Rp 20-mer, 모든-Sp 20-mer, 5R-10S-4R 및 5S-10R-4S 갭머) 및 입체무작위 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 사이에서의 Tm 차이를 기술한다. 전체 Rp 포스포로티오에이트 DNA 는 가장 낮은 치화도를 갖는 전체 Sp 20-mer (Tm = 75.1 ℃) 에 비해 상보적 RNA (Tm = 85.1 ℃) 에 대한 가장 높은 친화도를 나타낸다. 5R-10S-4R 및 5S-10R-4S 갭머 및 입체무작위 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 모두는 중간 값을 나타낸다 (Tm 범위 = 80.1-81.2 ℃).
표 E-22, 포스포로티오에이트 백본 상의 다양한 입체화학 구축물과 인간 ApoB 서열 5'-Gs5mCs5mCsTs5mCsAsGsTs5mCsTsGs5mCsTsTs5mCsGs5mCsAs5mCs5mC-3' 를 갖는 입체순수 및 입체무작위 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 연구에서의 Tm 값을 제공한다.
표 E-22
Figure 112015015568410-pct00552
실시예 58: 예시적 키랄 제어된 siRNA 올리고뉴클레오티드 표적화 PCSK의 제조
프로단백질 컨버타아제 서브틸리신/켁신 유형 9 (PCSK9) 은 콜레스테롤 대사에 연계된 효소이다. PCSK9 는 저밀도 리포단백질 (LDL) 에 대한 수용체에 결합하고, 이의 붕괴를 촉발한다. 수용체와 연계된 LDL 이 또한 수용체가 파괴되었을 때 제거될지라도, 실제로 PCSK9 결합의 네트 결과는 LDL 수준을 증가시키며, 다르게는 사이클은 세포 표면으로 돌아가고 더 많은 콜레스테롤을 제거한다. 여러 회사들이 PCSK9 를 표적으로 하는 치료제를 개발 중에 있다. 특히, 본 개시와 관련하여, Isis Pharmaceuticals, Santaris Pharma, 및 Alnylam Pharmaceuticals 사가 PCSK9 를 저해하는 핵산을 개발 중에 있다. Isis Pharmaceuticals 제품인 안티센스 올리고뉴클레오티드는 LDLR 의 발현을 증가시키는 것으로 나탄T고 마우스에서 총 콜레스테롤 수준을 계산하는 것을 감소시킨다 (Graham et al "Antisense inhibition of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 reduces serum LDL in hyperlipidemic mice". J. Lipid Res. 48 (4): 763-7, April 2007). Alnylam Pharmaceuticals 제품인 ALN-PCS 를 이용한 초기 임상 연구는, RNA 간섭이 PCSK9 를 저해하는 요과적인 기전을 제공함을 밝혀냈다 (Frank-Kamenetsky et al "Therapeutic RNAi targeting PCSK9 acutely lowers plasma cholesterol in rodents and LDL cholesterol in nonhuman primates". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (33): 11915-, August 2008).
본 실시예는 PCSK9 로의 다양한 키랄 제어된 또는 입체무작위 siRNA 작용제의 제조를 기재한다. 구체적으로는, 이러한 실시예는 하기 표 E-23 에 나타낸 바와 같이 각 올리고뉴클레오티드 조성물의 제조를 나타낸다:
표 E-23:
Figure 112015015568410-pct00553
주석: 소문자는 2'OMe RNA 잔기를 나타내며; 대문자는 2'OH RNA 잔기를 나타내고; 볼드체 및 이탤릭체 "s" 는 포스포로티오에이트 부분을 나타낸다.
이들 올리고뉴클레오티드의 제조에 사용되는 Lcaa-CPG-500 를 하기 반응에 따라 제조하였다:
Figure 112015015568410-pct00554
특히, 5'-O-DMTr-2'-데옥시티미딘 (1) (4.28 g, 7.86 mmol) 을 무수물 DCM (50 mL) 에 용해시키고 2 당량의 숙신 무수물 (1.57 g, 15.7 mmol) 및 3 당량의 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (2.88 g, 23.6 mmol) 과 혼합하였다. 반응물을 아로근 하에서 실온에서 교반하였다. TLC (1 시간) 으로 측정시 출발 물질의 완전한 소비 후, 용매를 건조 증발시키고, 미정제 잔사를 1% 트리에틸아민을 함유하는 DCM 에 용해시키고 이어서 정제된by 플래시 실리카 겔 크로마토그래피 2% 트리에틸아민을 함유하는 DCM 중 0-2% MeOH 구배를 사용하는 플래시 실리카 겔 크로마토그래피. 증발 후 순수 화합물 (2) 의 수율은 5.5 g, 94% 였다. 생성되는 5'-O-DMTr-2'-데옥시티미딘-3'-O-숙시네이트 (2) (0.60 g, 0.81 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.71 mL, 4.02 mmol) 및 CPG-500 (10 g) DMF (50 mL) 중에서 채취하고 이어서 HBTU (0.37 g, 0.97 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 진탕하고 이어서 여과하였다. 지지체를 DMF, MeOH 및 최종적으로, DCM 으로 세척하고 이어서 진공 하 건조시켰다. 트리틸 양이온 분석 (504 nm 에서 모니터링) 을 지지체 (3) 상에서 뉴클레오시드의 적재가 38 ㎛ol/g 임을 나타냈다.
상기 표 E-23 에 나타낸 바와 같은 2'-OH 및 2'-OMe 포스포디에스테르 및 입체규정된 2'-데옥시 및 2'-OMe 포스포로티오에이트 디에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 각각의 올리고뉴클레오티드를 숙시닐 연결된 5'-O-DMTr-2'-데옥시티미딘 (38 ㎛ol/g) 의 130 mg (4.9 ㎛ol) 로 적재된 10 ㎛ol 용량 합성 컬럼을 사용하여, 각각 표 E-24 및 표 E-25 에서 요약된 사이클에 따라 ABI 394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 전에, 예비 캡핑 단계 (캡핑 2) 를 수행하고 말단 5'-O-DMTr 그룹을 제거하여 합성을 종결하였다. 데칸 중 tert-부틸히드로페록시드 (TBHP) 의 시판 5-6 M 용액을 사용하여 산화 단계를 수행하였으며 이어서 4부의 디클로로메탄으로 희석시켰다. 입체특이적 황화 단계를 상응하는 키랄 포스포라미드의 커플링 및 2단계 캡핑 공정 (표 E-25) 에 따라 0.3 M S-시아노에틸메틸티오술포네이트 시약을 사용하여 수행하였다.
일단 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 사이클을 완료하고 최종 5'-O-DMTr 그룹이 제거되면, 합성 컬럼을 떼어내고 DNA/RNA 합성기 및 진공 하에 건조시켰다. 10 mL 용액의, 0.5 M 1,5-디아자바이시클로[4.3.0]논-5-엔 (DBN), 0.25 M N,O-비스(트리메틸실릴)트리플루오로아세트아미드 (BSTFA) (ACN 중) 를 합성 컬럼의 한쪽 말단에 부착된 시린지를 사용하여 플로우를 중지시키지 않고 1 분 동안 합성 컬럼을 통해 지지체에 연속 첨가하였다. 이어서 지지체를 무수물 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 이후, 건조된 지지체를 빈 스크류-캡 플라스틱 바이알로 이동시키고 40% MeNH2 수용액 (0.5 mL) 으로 60 ℃ 에서 10 분 동안 처리하였다. 이후, 바이알을 즉시 냉각시키고 DMSO (0.5 mL) 로 희석 후, 지지체를 여과 제거하고, DMSO (1 mL) 로 다시 세척하고 여과시켰다. 여과액을 냉각시키고 이어서 3HF·Et3N (0.75 mL) 로 60 ℃ 에서 10 분 동안 처리하고, 이어서 즉시 동결시키고 정제 전 4 ℃ 에서 저장하였다.
표 E-24. DNA/RNA 합성기 ABI 394 (2'-O-TBDMS 및 2'-OMe 치환된 RNA 사이클) 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00555
표 E-25. DNA/RNA 합성기 ABI 394 (입체규정된 포스포로티오에이트 2'-데옥시 및 2'-OMe RNA 사이클) 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00556
실시예 59. 미정제 및 정제된DMT Off RNA 올리고뉴클레오티드의 분석에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법.
버퍼 A: 20 mM 나트륨 포스페이트, pH 11.0
버퍼 B: 20 mM 나트륨 포스페이트, 1 M NaBr, pH 11.0
컬럼: DIONEX, DNAPac, PA-100, Analytical, 4.0×250mm
컬럼 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00557
실시예 60. 정제된DMT Off RNA 올리고뉴클레오티드의 분석에 대한 일반적인 UPLC-LCMS 방법
버퍼 A: 15 mM TEA, 400 mM HFIP, 물
버퍼 B: 50:50 버퍼 A/메탄올
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 50 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00558
실시예 61. 미정제 DMTr Off RNA 올리고뉴클레오티드의 정제에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법.
버퍼 A: 20 mM 나트륨 포스페이트, pH 8.5
버퍼 B: 20 mM 나트륨 포스페이트, 1 M NaBr, pH 8.5
컬럼: 빈 컬럼 Waters AP-2 (Waters), Source 15Q 지지체 (GE Healthcare) 로 포장된 커스텀 인-하우스. 동일한 정제 컬럼을 상이한 입체순수 올리고뉴클레오티드에 사용하였다.
장치: Waters HPLC unit equipped with the 2525 2원 구배 모듈, the 2487 듀얼 흡광도 검출기 및 the 20 mL Flex 인젝터 (Waters).
버퍼 히터 온도 세트 = 70 ℃
254 nm 에서 신호 모니터링 및 280 nm
분획 부피: 4.5 mL
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00559
수집된 분획을 상기 기술된 구배 및 분석 IEX-HPLC 분석 조건을 사용하여 개별 분석하였다. 순수 분획을 풀링하여 95% 정제 물질을 제공하고 상기 순도는 254 nm UV 흡광도 프로파일로 측정한 것이다.
실시예 62. 정제된RNA 올리고뉴클레오티드의 탈염을 위한 일반적인 RP-Sep-Pak 방법.
풀링된 순수 분획의 용액을 물로 전조건화된 Sep-Pak 카트리지 (Waters, Sep-Pak Vac 35cc (10g) C18 카트리지) 상에서 적재하였다. 샘플 (100 mL) 의 적재 후, 카트리지를 밀리 Q 물 (50 mL) 로 세척하여 모든 염을 제거하고 이어서 50% ACN/물로 세척하여 전체 길이 탈염된 RNA 올리고뉴클레오티드를 용리하였다. 수집된 용액을 진공 하에 농축시켜 5 mL 의 부피로 만들고 물로부터 동결건조하였다.
실시예 63: 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 가닥을 사용하는 이중 가닥 siRNA 작용제의 제조
본 실시예는 상기 기술된 바와 같은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 가닥의 열적 어닐링에 의해 이중 가닥 siRNA 작용제의 제조를 기재한다.
각각의 RNA 가닥을 1×PBS 중 등몰 농도 10 μM 에서 이의 상보적 RNA 가닥과 혼합하였다. 총 0.5 mL 용액을 각각 이중으로 제조하고 혼합물을 90 ℃ 에서 2 분 동안 가열시키고 이를 수 시간에 걸쳐 냉각시켰다. 이어서 혼합물을 4 ℃ 에서 저장하였다. 이용된 RNA 가닥의 생화학적 특성을 표 E-26 에 제시하였다.
표 E-26.
Figure 112015015568410-pct00560
사용되는 올리고뉴클레오티드 서열, 인간 PCSK9 siRNA: 센스 가닥 (S) 5'-uucuAGAccuGuuuuGcuudTsdT-3'; 안티센스 가닥 1 (AS1) 5'-AAGcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT-3'; 안티센스 가닥 2 (AS2) 5'-asAGcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT-3'. 대문자 뉴클레오티드: RNA, 소문자 뉴클레오티드 2'-OMe, d = 2'-데옥시, s = 포스포로티오에이트. 입체구축물은 올리고뉴클레오티드의 주어진 포스포로티오에이트 링크에서 각각의 인 원자의 입체이성질체 성질 (Rp/Sp 절대 배열) 을 기재하고 있다. 측정된 분자량 (MW) 값은 상기 기술된 정제 화합물에 대한 상응하는 분석 방법을 사용하여 수득하였다.
도 51 은 입체순수 RNA 올리고뉴클레오티드 사이의 보유 시간에서의 차이를 나타내는 IEX-HPLC 프로파일의 오버레이를 나타낸다.
Figure 112015015568410-pct00561
도 52 는 입체순수 RNA 올리고뉴클레오티드 사이의 보유 시간에서의 차이를 나타내는 IEX-HPLC 프로파일의 오버레이를 나타낸다.
Figure 112015015568410-pct00562
상기 구체적으로 예시된 제조된 키랄 제어된 siRNA 올리고뉴클레오티드에 더하여, 본 발명은 수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크를 갖는 siRNA 듀플렉스 제조에 제공하였다.
예를 들어, 본 발명에 따르면, 다중 키랄 포스포로티오에이트 링크를, 적합한 2'-OH 보호기, 예컨대 2'-O-PivOM (Debart et al., Chem. Eur. J., 2008, 14, 9135), 2'-O-CEM (Ohgi et al., Org. Lett., 2005, 7, 7913; Wada et al., J. Org. Chem., 2012, 77, 7913), 2'-O-TOM (Pitsch et al., Helv. Chim. Acta, 2001, 84, 3773) 또는 2'-O-TC (Dellinger et al., J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 11540) 를 갖는 적절한 RNA 3'-포스포라미디트를 사용하여 RNA 올리고뉴클레오티드 내에 도입하였다. 수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크를 갖는 인간 PCSK9 siRNA 센스 가닥에 따르는 각각의 것을 본 발명에 따라 제조할 수 있다:
Figure 112015015568410-pct00563
주석: 소문자는 2'-OMe RNA 잔기를 나타내고; 대문자는 RNA 잔기를 나타내고; d = 2'-데옥시 잔기; 및 "s" 는 포스포로티오에이트 부분을 나타낸다.
수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크를 갖는 인간 PCSK9 siRNA 안티센스 가닥에 대한 합성 실시예
Figure 112015015568410-pct00564
주석: 소문자는 2'-OMe RNA 잔기를 나타내고; 대문자는 RNA 잔기를 나타내고; d = 2'-데옥시 잔기; 및 "s" 포스포로티오에이트 부분을 나타낸다.
대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명은 수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 완전한 변형된 리보오스 부분을 갖는 siRNA 듀플렉스의 제조를 제공한다.
예를 들어, 특정 구현예에서, 다중 키랄 포스포로티오에이트 링크를,상응하는 원하는 리보오스 2'-화학 변형, 예컨대 2'-데옥시-2'-플루오로 (2'-F) 또는 2'-O-메틸 (2'-OMe) 을 갖는, 적절한 키랄 RNA 3'-포스포라미디트를 사용함으로써 완전한 리보오스-변형된RNA 올리고뉴클레오티드 내에 도입하였다. 일부 실시예를 제공하기 위해, 수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크를 갖는 인간 PCSK9 siRNA 완전한 변형된2'-F/2'-OMe 센스 가닥에 따른 것이 제조될 수 있다.
Figure 112015015568410-pct00565
주석: 소문자는 2'-OMe RNA 잔기를 나타내고; 대문자는 2'-F RNA 잔기를 나타내고; d = 2'-데옥시 잔기; 및 "s" 포스포로티오에이트 부분을 나타낸다.
수개의 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크 및 전체 키랄 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 링크를 갖는 인간 PCSK9 siRNA 완전한 변형된 2'-F/2'-OMe 안티센스 가닥에 대한 합성 실시예
Figure 112015015568410-pct00566
주석: 소문자는 2'-OMe RNA 잔기를 나타내고; 대문자는 2'-F RNA 잔기를 나타내고; d = 2'-데옥시 잔기; 및 "s" 포스포로티오에이트 부분을 나타낸다.
듀플렉스를 조립하기 위해, RNA 가닥 열적 어닐링 및 siRNA 듀플렉스의 제조를 수행하였다. 구체적으로, 각각의 RNA 가닥을 1×PBS 중 10 μM 의 등몰 농도 로 이의 상보적 RNA 가닥과 혼합하였다. 총 0.5 mL 용액을 각각의 듀플렉스에 대해 제조하고 혼합물을 90 ℃ 에서 2 분 동안 가열시키고 수 시간에 걸쳐 냉각시켰다. 이어서 혼합물을 4 ℃ 에서 저장하였다.
열적 RNA 가닥 어닐링 단계에 따르면, 모든 가능한 siRNA 듀플렉스 조합은 안티센스 가닥의 임의의 가능한 상보적 가닥과 임의의 센스 가닥을 어닐링함으로써 제조될 수 있다.
모든 제조된 siRNA 듀플렉스는 HeLa 세포 또는 Hep3B 세포 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음) 에서 트랜스펙션에 따르는 이의 PCSK9 유전자-침묵 특성에 대해 시험관 내에서 평가할 수 있다. 본 발명에 따르면, 상이한 분할선은 상이한 듀플렉스에 대해 관찰될 수 있으며, 예를 들어 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 수, 위치 및/또는 입체구축물에서 다양하고, 임의적으로는 하나 이상의 다른 화학 변형의 존재, 수준 및/또는 유형에 있어서 다양하다.
임의의 또는 모든 siRNA 특성 예컨대: 뉴클레아제 저항성, 세포 투과, 엔도조말 이스케이프, 듀플렉스 열역학적 안정도, 듀플렉스의 트리덴셔널 구조, 효소 상호작용의 다양한 기전 단계에 대한 친화도, 표적 mRNA 에 대한 친화도, 특정 오프-표적 효과, 면역자극, 작용 기간, 약동학, 등을 본원에 기술된 바와 같은 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 입체화학에 의해 조절되고 영향 받을 수 있다.
실시예 64. 올리고뉴클레오티드의 키랄 제조된 제제의 제조
Figure 112015015568410-pct00567
본 실시예는 본원에 기술된 특정 올리고뉴클레오티드의 다양한 특정 키랄 제어된 조성물의 제조를 기재한다.
N4-아세틸-5'-O-DMTr-2'-O-메틸사이티딘 (1) (1.15 g, 1.91 mmol) 을 무수물 DCM (20 mL) 에 용해시키고 2 당량의 숙신 무수물 (0.383 g, 3.82 mmol) 및 3 당량의 4-N,N-디메틸아미노피리딘 (0.701 g, 5.73 mmol) 과 혼합하였다. 반응물을 아로근 하에서 실온에서 교반하였다. TLC (1 hour) 로 측정시 출발 물질의 완전한 소비 후, 용매를 건조 증발시키고, 미정제 잔사를 1% 트리에틸아민을 함유하는 DCM 에 용해시키고 이어서 트리에틸아민 2% 를 함유하는 DCM 중 0-2% MeOH 구배를 사용하여 플래시 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다. 증발 후 순수 숙시닐 화합물 (2) 의 수율은 1.50 g, 98 % 였다. MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 702.27, 측정치: 702.34. 생성되는 N4-아세틸-5'-O-DMTr-3'-O-숙시닐-2'-O-메틸사이티딘 (2) (0.18 g, 0.22 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.18 mL, 0.79 mmol) 및 GE Custom SupportTM 아미노 (1 g) 를 DMF (5 mL) 중에서 채취하고 이어서 HBTU (0.10 g, 0.26 mmol) 를 첨가하였다. 혼합물을 2 시간 동안 진탕하고 이어서 여과하였다. 지지체를 DMF, MeOH 및 최종적으로 DCM 로 세척하고 이어서 진공 하 건조시켰다. 트리틸 양이온 분석 (504 nm 에서 모니터링) 은 지지체 (3) 상의 뉴클레오시드의 적재가 180 ㎛ol/g 였음을 보여준다.
실시예 65. 올리고뉴클레오티드의 키랄 제어된 제제의 제조
Figure 112015015568410-pct00568
실시예 64 에 기술된 바와 유사한 절차를 사용하여, N2-페녹시아세틸-5'-O-DMTr-3'-O-숙시닐-2'-O-메틸구아노신 (4, MS (ESI +ve): 계산치 (M+H)+: 834.30, 측정치: 834.32) 를 GE Custom SupportTM 아미노 상에 적재하였다. 트리틸 양이온 분석 (504 nm 에서 모니터링) 으로, 지지체 (6) 상의 뉴클레오시드의 적재가 140 ㎛ol/g 였음을 보여준다.
일부 구현예에서, 입체규정된 2'-OMe 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를, 캡핑되지 않은 숙시닐 연결된 5'-O-DMTr-2'-O-메틸-GPac (6, 140 ㎛ol/g) 또는 5'-O-DMTr-2'-O-메틸-CAc (3, 180 ㎛ol/g) 중 하나가 60 mg (10.8 및 8.4 ㎛ol 각각) 로 적재된 10 ㎛ol 용량 합성 컬럼을 사용하여 표 E-27 에 요약된 사이클에 따라 ABI 394DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 합성 사이클을 예비 캡핑 단계 (캡핑 2) 로 수행하고 말단 5'-O-DMTr 그룹의 제거로 수행하였다. 상응하는 키랄 포스포라미드의 커플링 및 2단계 캡핑 공정에 따라 (표 E-27) 입체특이적 황화 단계를 BSTFA 를 함유하는 ACN 중 0.3 M S-(2-시아노에틸)메틸티오술포네이트 시약을 사용하여 수행하였다.
자동화 올리고뉴클레오티드 합성 사이클을 완료하고 최종 5'-O-DMTr 그룹을 제거하면, 합성 컬럼 을 떼어내고 DNA/RNA 합성기 및 진공 하에 건조시켰다. 건조된 지지체를 빈 유리 수동 펜티드 합성기상에 이동시키고 ACN 중 0.5 M 1,5-디아자바이시클로[4.3.0]논-5-엔 (DBN), 0.25 M N,O-비스(트리메틸실릴)트리플루오로아세트아미드 (BSTFA) 의 10 mL 용액을 수동 펩티드 합성기에서 흐름을 중지시키지 않으면서 5 분 동안 지지체에 연속 첨가하였다. 지지체를 ACN 로 세척하고 진공 하 건조시켰다. 이어서, 지지체를 5%EtOH/conc NH3 (5 mL) 로 60 ℃ 에서 6 시간 동안 처리하고, 실온에서 12 시간 동안 방치시켰다. 지지체를 여과 제거하고 농축 NH3 로 세척하였다. 여과액을 진공 하에 농축시키고 이어서 IEX 로 정제하였다.
표 E-27. 올리고뉴클레오티드 합성 요약.
Figure 112015015568410-pct00569
올리고뉴클레오티드 ONT-94 의 합성: (모든 (Sp))-gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 18.26 분. 계산치 MW: 3563.9; 측정치 MW: 3562.6.
올리고뉴클레오티드 ONT-96 의 합성: (모든 (Rp))-gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 18.16 분. 계산치 MW: 3563.9; 측정치 MW: 3561.7.
올리고뉴클레오티드 ONT-98 의 합성: (Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)-gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 18.05 분. 계산치 MW: 3563.9; 측정치 MW: 3562.5.
올리고뉴클레오티드 ONT-100 의 합성: (Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp)-gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 17.86 분. 계산치 MW: 3563.9; 측정치 MW: 3561.1.
올리고뉴클레오티드 ONT-102 의 합성: (Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp) ?gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 18.30 분. 계산치 MW: 3563.9; 측정치 MW: 3561.3.
올리고뉴클레오티드 ONT-104 의 합성: (Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp) ?gsgsusgsgsasasgsgsc. tR (IEX-HPLC): 17.95 분. 계산치 MW3563.9; 측정치 MW: 3562.7.
올리고뉴클레오티드 ONT-95 의 합성: (모든 (Sp))- gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 14.78 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2707.4.
올리고뉴클레오티드 ONT-97 의 합성: (모든 (Rp))- gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 15.60 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2708.3.
올리고뉴클레오티드 ONT-99 의 합성: (Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp)- gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 16.10 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2708.0.
올리고뉴클레오티드 ONT-101 의 합성: (Sp, Rp, Sp, Rp, Sp, Rp, Sp)-gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 16.23 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2708.2.
올리고뉴클레오티드 ONT-103 의 합성: (Rp, Rp, Sp, Sp, Sp, Rp, Rp) gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 16.26 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2707.8.
올리고뉴클레오티드 ONT-105 의 합성: (Sp, Sp, Rp, Rp, Rp, Sp, Sp) gscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 16.22 분. 계산치 MW: 2709.2; 측정치 MW: 2710.0.
입체규정된 키메라성 2'-OMe 포스포로티오에이트 트리에스테르 및 2'-O-MOE 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 올리고뉴클레오티드를 본원의 실시예와 유사한 방식으로 ABI 394DNA/RNA 상에서 합성하였다.
올리고뉴클레오티드 ONT-90 의 합성: (모든 (Rp))-GMOEsGMOEsusGMOEsGMOEsasasGMOEsGMOEsc. tR (IEX-HPLC): 15.35 분. 계산치 MW: 3828.2; 측정치 MW: 3826.5.
올리고뉴클레오티드 ONT-119 의 합성: (모든 (Sp))-GMOEsGMOEsusGMOEsGMOEsasasGMOEsGMOEsc. tR (IEX-HPLC): 16.42 분. 계산치 MW: 3828.2; 측정치 MW: 3827.2.
올리고뉴클레오티드 ONT-91 의 합성: (모든 (Rp)) -GMOEscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 15.69 분. 계산치 MW: 2753.3; 측정치 MW: 2751.5.
올리고뉴클레오티드 ONT-120 의 합성: (모든 (Sp)) -GMOEscscsuscscsasg. tR (IEX-HPLC): 14.71 분. 계산치 MW: 2753.3; 측정치 MW: 2751.4.
실시예 66. 미정제 및 정제된DMT Off RIPtide 올리고뉴클레오티드의 분석에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법:
버퍼 A: 10 mM TrisHCl, 50%ACN, pH 8.0
버퍼 B: 10 mM TrisHCl, 800 mM NaClO4, 50%ACN, pH 8.0
컬럼: DIONEX, DNAPac, PA-200, Analytical, 4.0×250mm
컬럼 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00570
실시예 67. 정제된DMT Off RIPtide 올리고뉴클레오티드의 분석에 대한 일반적인 UPLC-LCMS 방법:
버퍼 A: 15 mM TEA, 400 mM HFIP, 물
버퍼 B: 50:50 버퍼 A/메탄올
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 50 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00571
실시예 68. 미정제 DMT Off RIPtide 올리고뉴클레오티드의 정제에 대한 일반적인 IEX-HPLC 방법:
버퍼 A: 20 mM NaOH, pH 11.0
버퍼 B: 20 mM NaOH, 2.5 M NaCl, pH 11.0
컬럼: 빈 컬럼 Waters AP-1 (Waters), Source 15Q 지지체 (GE Healthcare) 로 포장된 커스텀 인-하우스. 동일한 정제 컬럼을 상이한 입체순수 RIPtide 올리고뉴클레오티드에 대해 사용하였다.
장치: AKTA Purifier, P-900 펌프 장착, UPC-900 검출기 및 50 mL 주입SuperLoop (GE Healthcare)
버퍼 히터 온도 세트 = 70 ℃
컬럼 히터 tape 세트 = 70 ℃
254 nm 에서 신호 모니터링
분획 부피: 5 mL
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00572
수집된 분획을 상기 기술된 구배 및 분석 IEX-HPLC 분석 조건을 사용하여 개별 분석하였다. 순수 분획을 풀링하여 95% 정제 물질을 제공하고 상기 순도는 254 nm UV 흡광도 프로파일로 측정한 것이다.
정제된 RIPtides 올리고뉴클레오티드의 탈염을 위한 일반적인 RP-Sep-Pak 방법. 풀링된 순수 분획의 용액을 Sep-Pak 카트리지 (Waters, Sep-Pak Vac 35cc (10 g) C18 카트리지) (물로 예비조건화됨) 상에서 적재하였다. 샘플 (100 mL) 적재 후, 카트리지를 밀리 Q 물 (50 mL) 로 처리하여 모든 염을 제거하고 이어서 50% ACN/물로 세척하여 전체 길이 탈염된 RNA 올리고뉴클레오티드를 용리하였다. 수집된 용액 진공 하에 농축시켜 5 mL 의 부피로 만들고 물로부터 동결건조하였다.
네이키드 hTR 에 결합하는 입체제어된 완전한 포스포로티오에이트 변형된 RIPtides (8-mer 또는 10-mer) 의 패널을 텔로머라아제 RNP 착물의 활성의 시험관내 저해에 대해 조사하였다. Cy5-TRAP 검정 (Shay et al., Nat. Protoc., 2006, 1, 1583), TRAP 의 변화 (Shay et al., Science, 1994, 266, 2011) 을 사용하여 이전 보고된 프로토콜에 따라 HeLa 세포 추출물을 사용하여 입체제어된 포스포로티오에이트 RIPtides 에 대한 IC50 값을 측정하는데 사용하였다 (Verdine et al., J. Biol. Chem., 2012, 287, 18843).
TRAP 검정을 일부 변형을 갖는 양자 시스템과 같은 플루오레센을 사용하는 이전에 보고된 프로토콜을 따라 수행하였다. 간단하게, 텔로머라아제에 의한 인공 형광 기판의 확장을 30 분 동안 30 ℃ 에서, 이어서 30 PCR 사이클s (34 ℃ 30 s, 59 ℃ 30 s, 72 ℃ 1 min) 을 갖는 증폭으로 수행하였다. RIPtides 의 저해성 포텐셜은 HeLa 세포 추출물에서 초기에 평가되며, 이중 실험으로, 600 pM-60μM 농도 범위를 사용하였다. 선별된 RIPtides 를 이용한 실험을 HeLa, DU145 (전립선암) 및 HEK293 세포 추출물에서 0.06 pM-60μM 의 농도 범위에 대해 보고하였다. 수개의 대조군을 이들 검정에 이용하였다: 양성 대조군 (처리되지 않은 세포 용균물), 음성 대조군 (버퍼 온리, 불활성화된 열 및 RNase 처리된 세포 추출물), 및 PCR 증폭 대조군 (PCR 전 및 텔로머라아제 신장 후 첨가되는 RIPtide 60 mM). 특정 구현예에서, 키랄 제어된 RIPtide 제조는, 음성 대조군과 비교하여 hTRas 의 증강 저해 및/또는 양성 대조군과 비교시 hTR 의 증강 저해를 나타내고; 일부 구현예에서, 일부 그러나 임의적으로는 전체가 아닌 모든 RIPtides 의 주어진 서열은 이러한 특성을 나타낸다. 일부 구현예에서, "증강된" 이란 대략 5배 내지 대략 10배의 증강을 의미한다. 일부 구현예에서, "증강된" 이란 대략 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 또는 10.0-배를 의미한다.
세포 배양 조건. 형질전환된 배아 신장 세포주 HEK293 및 전립선암 세포주 DU145 를 37 ℃ 에서 5% CO2 중 10% 혈청 소태아 혈청으로 보충된 DMEM 중에 유지하였다. TRAP 검정을 위한 가용성 세포 추출물을 제조자의 지시사항에 기술된 바와 같이 200 ㎕ 1X CHAPS 용균 버퍼 (Chemicon) 로 106 세포의 세제 용균에 의해 제조하였다.
본 발명에 따르면, 상이한 분할선 및/또는 상이한 다른 특성을 완전한 입체제어된 포스포로티오에이트 RIPtides 의 다양한 입체구축물에 대해 관찰하였다. 예를 들어, RIPtide 특성 (예컨대: 뉴클레아제 저항ㅅ어, 조직 축적, 세포 투과, 엔도조말 이스케이프, RIPtide 의 트리덴셔날 구조, 표적 배가 hTR RNA 에 대한 친화도, 면역자극, 작용 기간, 약동학 등) 은 하나 이상의 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 상이한 위치 및/또는 입체화학에 대해 서로 상이한 동일한 서열을 공유하는 키랄 제어된 RIPtide 제조가 다양할 수 있다.
실시예 69: 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물은, 동일한 서열을 갖는 키랄 제어되지 않은 조성물과 비교시 생체 내 상이한 활성을 나타냄
본 실시예는 "부모" 입체무작위 혼합물 (즉, 키랄 순수 올리고뉴클레오티드로서 동일한 서열의 올리고뉴클레오티드를 함유하는 조성물, 입체무작위 공정을 통해 제조된 결과로서의 실시예) 에 대해 관찰된 키랄 순수 올리고뉴클레오티드의 약동학적 생체 내 활성을 비교한다. 4개의 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 (이의 각각은 특정 표적 전자 또는 관심 단백질을 인코딩하는 유전자의 그것과 상보적인 서열을 가짐) 를 합성하고, 제형화하고, 표적 유전자를 발현하는 동물에게 각각 2개의 투여량 수준으로 5주 동안 주당 2회 투여된다. 인코딩된 단백질 수준의 수준 정도를 정량화 하였다. 이러한 실시예에서, 인간 아포리포단백질-B (ApoB) 에 대한 (및 이에 따른 표적화) 서열 안티센스를 갖는 올리고뉴클레오티드를 트랜스제닉 마우스 발현 인간 ApoB 에서 프루프-오프-컨셉에 대해 사용하였다.
시험 제품
시험 제품을 PBS 단독 (즉, 올리고뉴클레오티드 없는 대조군) 이거나, 또는 관련 올리고뉴클레오티드 조성물 (즉, Mipomersen (ONT-41), ONT-75, ONT-77, ONT-80, 또는 ONT-81 올리고뉴클레오티드 (구조에 대해 실시예 52 참조) 을 각각 5 및 10 mg/kg 에서 투여량에 대해 0.5 및 1 mg/mL 에서 1X PBS (10X PBS (Life Technologies, AM9624) 로부터 희석, 뉴클레아제-미함유 물 (Qiagen, 129115) 사용) 중에서 제형화하였다. 제형은 활성 물질에 대한 조정 없이 절대량을 기초로 하였다. 올리고뉴클레오티드 농도를 Carry-100 UV-Vis (Agilent Technologies) 로 측정함으로써 확인하였다. 모든 시험 제품의 샘플을 동적 피로크롬 크로모제닉 내독소 검정 (Associates of Cape Cod, 1500-5, E005-5) 을 이용하여 엔도톡신 수준을 확인하였다. 모든 시험된 샘플은 0.5 EU/ml 수용성 한계 보다 적은 내독소의 양을 갖는 것으로 밝혀졌다.
동물 및 생체 내 과정
인간 아포리포단백질 B100 및 리포단백질(a) (J. Clin. Invest. 92: 3029-3037) 의 고 혈장 농도를 발현하는 암컷 트랜스제닉 마우스 (huApoB 마우스) 를 Taconic (균주 B6.SJL-Tg(APOB)l 102Sgy N20+?, 모델 #1004-F) 로부터 수득하였다.
마우스를 전달하고 연구 전 적어도 7일 동안 순응시켰다. 모든 마우스를 정규 식사시간을 제공하고 임의로 물을 제공하고, 화합물 투여 전 금식시켰다. 마우스를 연구 그룹으로 랜덤화하고, 각 투여 일에 대해 투여 전에 측정된 마우스 개별 체중 에 기초하여 Days 1, 4, 8, 11, 15, 18, 22, 25, 29 및 32 일에 복강내 (IP) 투여하였다. Days 0 (첫번째 투여 전 날짜), 17, 24, 31, 38, 45, 52 및 60 에 대해 연과 과정 동안 악하선 (볼) 출혈로 혈액을 수집하고 심장 천자로 Day 66 에 살생시키고, 혈청으로 가공하였다.
아포리포단백질 B 단백질 검정
혈청 중 ApoB 단백질 수준을 ApoB 인간 ELISA Kit (Abcam, ab108807) 를 사용하여 측정하였다. 혈청 샘플을 1:20,000 로 희석시키고 변형 없이 권장 프로토콜에 따라 키트 당 검정하였다. Aquamax 4000 (Molecular Devices) 을 사용하여 30초 흡수 기간 동안 자동화 세척을 수행하였다. Chromogen 기질을 이용하여 12 분 인큐베이션 후 반응을 중지시키고 Spectramax M5 (Molecular Devices) 로 채취하였다.
표준 곡선을 x-축에 대한 표준 농도를 플롯팅하고 y-축에 대한 상응하는 평균 450 nm 흡광도에 대한 표준 농도를 플롯팅함으로써 곡선을 생성하였다. 베스트-핏 라인을 로그-로그 곡선-피트를 사용하여 회귀 본석으로 측정하였다. 각각의 검정 플레이트는 음성 (PBS 처리됨) 및 양성 (Mipomersen-처리됨) 대조군을 포함했고 각각의 마우스 혈청 샘플을 4 개의 기술적 복제물에서 검정하였다.
각각의 샘플에 대해, ApoB 의 평균 절대 수준을 PBS 처리된 그룹에 대한 평균 값으로 정상화시켜 ApoB 단백질 발현의 상대적 발현을 수득하였다. 하나의 예에서, 2 개의 표준편차로 코호트 평균으로부터 유도한 측정치로서 분석으로부터 동물을 배제하였다. ApoB 단백질 발현의 상대적 수준을 2-식 ANOVA 이어서 Newman-Keuls post-hoc 시험에 의해 통계분석 (Graphpad Prism) 에 사용하였다.
결과
결과를 표 E-28a 및 도 40 에 나타냈다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-75 을 연구 day 24 일에 혈청 ApoB 단백질 수준의 87% (p < 0.05) 로의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-77 은 각각 대조군 수준의 72% (p < 0.0001), 81% (p < 0.05) 에 대해 연구 24 일 및 31 일에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-80 은 각각 대조군 수준의 83% (p < 0.05), 80% (p < 0.05) 로 연구의 제 24 일 및 제 31 일에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-81 은 각각 대조군 수준의 85% (p < 0.05), 70% (p < 0.0001) 로 연구의 제 17 일 및 제 24 일에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다.
표 E-28a: huApoB 마우스 (N = 4-5] 에서 Mipomersen 또는 5 mg/kg 입체이성질체의 다중 IP 투여 후 PBS 에 비한 혈청 인간 아포리포단백질 B 수준
Figure 112015015568410-pct00573
a: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
b: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
c: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
d: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
w: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.5 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
x: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
y: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
z: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-75 은 연구의 days 17,24,31 및 38 (p < 0.0001), 및 45 (p < 0.05) 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 덜한 감소를 생성했다. 5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 동일한 투여 패러다임을 이용하여 투여되는 ONT-77 은 연구의 days 17,31 및 38 (p < 0.0001), 24 (p < 0.001) 및 45 (p < 0.05) 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 덜한 감소를 생성했다. 5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 ONT-80 은 연구의 day 45 (p > 0.05) 에 대해 상이하지는 않으나, days 17,24,31 및 38 (p < 0.0001) 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 덜한 감소를 생성했다. 5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 동일한 패러다임으로 투여된 ONT-81 은 연구의 days 17,31 및 38 (p < 0.0001), 24 (p < 0.001) 및 45 (p < 0.01) 에 대해 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 덜한 감소를 생성했다. 도 40 은 5 mg/kg 입체이성질체 후 PBS 에 비해 혈청 인간 아포리포단백질 B 단백질 수준의 시간 과정 또는 huApoB 마우스에서의 mipomersen IP 투여량을 나타낸다. 하부방향 화살표는 투여일자이다. PBS 대조군 그룹으로 정상화된 그룹 평균을 나타내고, 이때 각각의 그룹은 4-5 마리의 동물을 포함했다. 에러 바는 표준편차를 나타낸다.
10mg/kg 투여 패러다임의 결과를 표 E-28b 및 도 53 에 나타낸다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-75 는 각각 78% (p<0.0001), 76% (p < 0.0001) 및 82% (p<0.001) 로, 연구의 days 17, 24 및 38 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성하였다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-77 은 각각 대조군 수준의 62% (p < 0.0001), 61% (p < 0.0001), 54% (p < 0.0001), 59% (p < 0.0001), 72% (p < 0.0001),　 및 73% (p < 0.0001) 로, 연구의 days 17, 24, 31, 38, 45 및 52 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성하였다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-80 을 각각 대조군 수준의 55% (p < 0.0001), 59% (p < 0.0001), 73% (p < 0.0001), 67% (p < 0.0001), 76% (p < 0.0001), 76% (p < 0.0001), 및 80% (p<0.01) 로, 연구의 days 17, 24, 31, 38, 45, 52 및 66 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-81 은 각각 대조군 수준의 49% (p < 0.0001), 62% (p < 0.0001), 71% (p < 0.0001), 74% (p < 0.0001) 및 79% (p < 0.001) 로, 연구의 days 17, 24, 31, 38 및 45 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다.
표 E-28b: 10 mg/kg 입체이성질체 (ONT-75,-77,-80 또는 -81) 다중 IP 투여 후 또는 Mipomersen (huApoB 마우스 (N = 4-5) 에서) PBS 에 비해 혈청 인간 아포리포단백질 B 수준.
Figure 112015015568410-pct00574
a: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
b: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
c: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
d: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
w: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
x: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
y: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
z: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-75 은, 연구의 17, 24, 31,38, 45, 52, 60 (p < 0.0001), 및 66 (p < 0.001) 일에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 를 생성했다. 10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-77 은, 연구의 days 17, 24, 31,38, 및 45 (p < 0.0001), 60 (p < 0.05) 및 66 (p < 0.01) 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 를 생성했다. 10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-80은, days 24,31,38 및 45 (p < 0.0001),17 (p <0.001) 및 66 (p <0.01) 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 을 생성했다. 10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-81 은, 연구의 days 24, 31, 38 및 45 (p < 0.0001), 17 (p < 0.01), 52 및 66 (p < 0.001) 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 을 생성했다.
day 38 (즉 마지막 투여 6 일 후) 에, 혈청 ApoB 단백질 수준이 ONT-75 후 기저선으로 되돌아갔다. 초기 혈청 ApoB 단백질 수준 감소를 고려하면, 혈청 ApoB 단백질의 기준선으로 돌아가는 비율은 ONT-77 및 ONT-80 후 더욱 느렸으며 이는 day 52 에 Mipomersen 수준과 유사하게 되었다.
추가의 입체순수 구축물의 5mg/kg 투여 패러다임의 결과를 표 E-28c 및 도 54 에 나타낸다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-87 은, 각각 연구의 days 17, 24, 31 및 38 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의, 각각 대조군의 27%(p<0.0001), 40% (p < 0.0001), 55% (p<0.0001) 및 71% (p<0.0001) 로의 현저한 감소를 생성했다.
PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-88 은 각각 대조군 수준의 47% (p<0.0001), 34% (p < 0.0001), 69% (p<0.0001) 및 85% (p<0.0001) 로, 연구의 days 17 , 24, 31 및 38 에 대한 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 5 mg/kg IP ONT-89 은 각각 대조군의 43% (p<0.0001), 48% (p < 0.0001) 및 85% (p<0.05) 로, 연구의 days 17, 24 및 31 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생생했다.
표 E-28c:　입체이성질체 (ONT-87,-88 또는 -89) 또는 Mipomersen (huApoB 마우스 (N = 3-4) 에서) 5 mg/kg 의 다중 IP 투여 후 수준 PBS 에 비한 혈청 인간 아포리포단백질 B 수준
Figure 112015015568410-pct00575
a: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
b: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
c: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
d: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
w: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
x: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
y: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
z: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 ONT-87 은 연구의 day 31 (p < 0.01) 에 대해 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 높은 감소 (넉다운) 을 생성했다. 5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-88 은, day 17 (연구의 p < 0.05) 에 대해 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 를 생성했다. 5 mg/kg IP Mipomersen 에 비해 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-89 은, 연구의 day　 38 (p < 0.05) 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 더 적은 감소 (넉다운) 을 생성했다.
추가의 입체순수 구축물의 10mg/kg 투여 패러다임의 결과를 표 E-28d 및 도 55 및 56 에 나타냈다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-87 은, 각각, 연구의 days 17, 및 24 의, 대조군 수준의 27% (p<0.0001), 14% (p < 0.0001) 로의, 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저한 감소를 생성했다.
PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-88 은, 연구의 days 17, 및 　24 에, 대조군 수준의 23% (p<0.0001), 및 17% (p < 0.0001) 로의 현저한 감소를 생성했다. PBS 에 비해, 10 mg/kg IP ONT-89 은, 연구의 days 17 , 및 24 에 대해 혈청 ApoB 단백질 수준의, 각각 대조군 수준의 29%(p<0.0001), 및 23% (p < 0.0001) 로의 현저한 감소를 생성했다.
표 E-28d: 10 mg/kg 입체이성질체 (ONT-87,-88 or-89) 의 다중 IP 투여 후 또는 Mipomersen (huApoB 마우스e (N = 3-4) 에서) PBS 에 비한 혈청 인간 아포리포단백질 B 수준
Figure 112015015568410-pct00576
a: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
b: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
c: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
d: Mipomersen 대조군 그룹 (ONT-41) 과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
w: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.05 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
x: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.01 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
y: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
z: PBS 대조군 그룹과는 상이한 통계, p< 0.0001 (2-식 ANOVA, Newman-Keuls post-hoc 시험)
10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-87 은, 연구의 day 17 (p < 0.05) 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 더욱 현저한 환원 (넉다운) 을 생성했다. 10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, 동일한 투여 패러다임으로 투여된 ONT-88 은, 연구의 day 17 (p < 0.05) 에 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 높은 감소 (넉다운) 을 생성했다. 10 mg/kg IP Mipomersen 과 비교하여, ONT-89 은 연구의 day 17 (p < 0.05) 에 동일한 투여 패러다임으로 투여된 혈청 ApoB 단백질 수준의 현저히 높은 감소 (넉다운) 을 생성했다.
따라서, 적어도 일부 구현예에서, 본 발명은 생물학적 활성을 나타내는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물을 제공하며 이는 적절한 참조와 비교하여 (예를 들어, 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성을 갖는 올리고뉴클레오티드의 제조, 특히 입체무작위 제제 포함) 시간에 따른 활성도의 더욱 느린 부식율 및/또는 확정된 지속을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 이때 이러한 확장된 지속 및/또는 더욱 느린 부식율이 관찰되며, 제공된 키랄 제어된 조성물은 더욱 느린 총 투여량과 투여 계획에 따라 투여될 수 있고/있거나 "부모" 입체무작위 조성물을 이용하여 이용되는 둘 이상의 투여량 사이에 길이가 더욱 길며 필적할만한 생물학적 및/또는 치료학적 효과를 달성한다. 예를 들어, 본 실시예에서 나타낸 바와 같이 Mipomersen 과 비교한 키랄 순수 올리고뉴클레오티드와의 처리에 따른 혈청 ApoB 단백질의 더욱 느린 기준선으로 되돌아가는 것은, 키랄 순수 ApoB 올리고뉴클레오티드가 부모 입체무작위 혼합물 보다 (예를 들어 Mipomersen 보다) 덜 자주 투여될 수 있음을 제시한다.
이러한 실시예에서 제시되는 결과는, 예를 들어 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 조성물이 적절한 참조와 비교시 생체 내 현저하게 상이한 약동학적 활성을 가질 수 있음 (예를 들어, 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성을 갖는 올리고뉴클레오티드의 제조, 특히 입체무작위 제제 포함) 을 제시한다. 당업자는, 이러한 측면에서 본 개시에 의해 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물이 기대하지 못한 활성 및 특성을 갖는 것을 숙지하고 있다. 당업자는, 본 개시 측면에서, 다양한 방법론이 제공됨을 (비-키랄 제어된 조성물에 대해 이용되는 것과는 상이한 투여 계획을 이용하는 치료학적 방법 포함) (예를 들어, 뉴클레오티드 서열의 그것) 숙지한다. 일부 구현예에서, 상대적으로 더 큰 개별적 투여량의 키랄 제어된 (예를 들어 키랄 순수) 올리고뉴클레오티드는 대조군 (예를 들어, 입체무작위 대조군) 과 비교되어 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상대적으로 더 적은 개별 용량의 키랄 제어된 (예를 들어, 키랄 순수) 올리고뉴클레오티드는 대조군 (예를 들어, 입체무작위 대조군) 과 비교시 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상대적으로 더 적은 투여량의키랄 제어된 (예를 들어, 키랄 순수) 올리고뉴클레오티드는 주어진 시간 내에 대조군 (예를 들어, 입체무작위 대조군) 과 비교하여 이용될 수 있다.
실시예 70: 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 저해 PCSK-9 를 포함하는 siRNA 작용제
본 실시예는 본원에 기술된 바와 같은 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드로 구성된 siRNA 작용제를 사용하는 표적 유전자의 성공적 저해를 나타낸다. 구체적으로는, 이러한 실시예는 본원에 기술된 바와 같이 키랄 제어된 합성을 통해 제조된 개별적 올리고뉴클레오티드 가닥의 하이브리드화를 기술하고 있으며, 이중가닥의 키랄 제어된 siRNA 올리고뉴클레오티드 조성물이 제공된다. 이러한 실시예는 이러한 작용제를 갖는 세포의 성공적인 트랜스펙션을 나타내며, 게다가, 표적 유전자 발현의 성공적 저해를 나타낸다.
키랄 siRNA 분자의 siRNA 트랜스펙션
Hep3B, 또는 HeLa 세포를 96-웰 플레이트에서 2.0×104 　세포/웰의 밀도로 역 이동시켰다. siRNA 의 트랜스펙션을 제조자의 프로토콜을 사용하여 리포펙타민 RNAiMax (Life Technologies, cat. No. 13778-150) 을 이용하여 수행하고, 리포펙타민 RNAiMax의 감소된 양이 리포펙타민 RNAiMax 0.2ul/웰인 점은 제외한다. 12 개의 1:3 siRNA 복제 희석물을 1uM 에서 출발하여 1:3 siRNA복제물 희석을 창출하였다. 이어서 10ul 의 10x siRNA 듀플렉스를 9.8ul 의 혈청-미함유 배지 및 0.2ul 의 리포펙타민 RNAiMax /웰의 제조된 혼합물과 리포플렉스하였다. 10-15 분 인큐베이션 후, 2.0×104 　세포 (80ul 의 EMEM 세포 성장 배지 (ATCC, 30-2003) 에서) 를 100ul /웰의 최종 부피에 첨가하였다. 2개의 별도 트랜스펙션 경우를 각 투여량에 대해 수행하였다.
24 시간 후, 트랜스펙션 Hep3B 또는 HeLa 세포를 용균시키고, PCSK9 mRNA를 MagMAX™96 총 RNA 단리 키트 (Life Technologies, AM1830) 를 사용하여 정제하고; 5ul 의 cDNA 를 RNase 저해제를 갖는 고 용량 cDNA 역전사 키트(Life Technologies, 4374967) 를 이용하여 합성하였다. 유전자 발현을, 제조자의 프로토콜에 따라 탐침s Master Mix(Roche, 04 707 494 001) 을 사용하여 Lightcycler480(Roche) 상에서 PCSK9 (Life Technologies, Hs03037355_m1) 에 대한 FAM-라벨링된 Taqman 탐침-세트 및 VIC-라벨링된 GAPDH 프라이머-한정적 내인성 대조군 (Life Technologies, NM_002046.3) 에 대해 실시간 PCR 로 평가하였다.
IC50s 및 데이터 분석
델타 델타 Ct 방법을 사용하여 값을 계산하였다. 샘플을 hGAPDH 로 정상화하고 mock 트랜스펙션되고 비처리된 샘플에 대해 교정하였다. 입체무작위 분자를 양성 대조군으로서 사용하였다. 데이터를 Graphpad Prism 을 사용하여 2개의 생물학적 복제물의 평균으로서 제시하였다. 4개의 파라미터의 선형 회귀 곡선을 데이터에 핏팅시키고 하부 및 상부를 0 및 100 의 상수로 하고 상대적인 IC50 을 계산하였다.
표 E-29. 상대적인 IC50 값 [Hep3B 트랜스펙션]
Figure 112015015568410-pct00577
표 E-30. 상대적인 IC50 값 [HeLa 트랜스펙션]
Figure 112015015568410-pct00578
표 E-31. 3 개의 포스포로티오에이트 입체중심을 갖는 siRNA 의 상대적인 IC50 값 [HeLa 트랜스펙션]
Figure 112015015568410-pct00579
도 45-50 은 이들 연구 결과를 나타낸다. 도 45 는 siRNA 듀플렉스로 Hep3B 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA 를 나타낸다. 도 46 은 siRNA 듀플렉스 곡선 핏트로 Hep3B 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA 를 나타낸다. 도 47 은 siRNA 듀플렉스로 HeLa 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA를 나타낸다. 도 48 은 siRNA 듀플렉스 곡선 피트로 HeLa 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA 를 나타낸다. 도 49 는 3 개의 포스포로티에이트 입체중심을 함유하는 siRNA 듀플렉스로 HeLa 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA 를 나타낸다. 도 50 은 3개의 포스포로티에이트 입체중심 곡선 피트를 함유하는 siRNA 듀플렉스로 HeLa 처리 후 남아 있는 % PCSK-9 mRNA를 나타낸다.
보여지는 바와 같이, 각각의 가닥에서 단일 입체화학적으로 규정된 포스포로티오에이트를 갖는 분자에서 약간 증가된 역가는 둘 모두의 센스 및 안티센스 가닥에서 포스포로티오에이트에서 Sp 입체ㅗ하학을 갖는 분자와 함께 관찰되었다. 구체적으로 예로 든 siRNA 작용제가 가닥 당 오직 하나의 키랄 중심을 함유하며, 당업자는 본 개시에 관해 키랄성의 존재가 활성에 영향을 미칠 수 있는 원칙의 증거로서 상이한 결과를 현저히 입증함을 인지할 것이다.
키랄도의 영향은 2개의 입체중심보다 많은 입체중심을 갖는 siRNA 에서 더욱 분명하다. 3개의 키랄 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 에서 (센스 가닥에서 하나 그리고 안티센스 가닥에서 2개) 안티센스 가닥의 3'말단 (뉴클레오티드 n20 과 n21 사이) 에서 Rp 입체화학과 조합된 5'말단 (뉴클레오티드 n1 과 n2 사이) 에서 Sp 입체화학은 효능 면에서 해로운 영향을 미친다. 그러나, 안티센스 가닥의 3'말단 (뉴클레오티드 n20 과 n21 사이) 에서 Sp 입체화학과 조합된 5'말단 (뉴클레오티드 n1 과 n2 사이) 에서 Rp 입체화학은 입체무작위 대조군 siRNA 상에서 현저한 PCSK-9 mRNA 넉다운 개선을 나타낸다. 결과는 둘 모두의 가닥이 포스포로티오에이트의 입체화학에 의해 영향을 받음을 제시한다. 관찰된 효능 격차가 더 큰 수의 키랄 중심을 갖는 작용제에 대해 증가할 것이고, 더욱이 키랄 중심의 둘 모두의 위치 및 유형이 활성에 영향을 미칠 수 있고, 예를 들어 안정도, 효능 및/또는 둘 다에 영향을 미칠 수 있다. 당업자는 본 개시를 판독하여 둘 모두의 단일 및 이중 가닥의 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물 및 이의 용도의 교시를 제공하며, 적어도 일부 구현예에서 이러한 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 동일 서열의 입체무작위 작용제로부터의 작용제를 구분할 것이다.
실시예 71. 추가적이고 예시적인 올리고뉴클레오티드 및 이의 합성.
Figure 112015015568410-pct00580
올리고뉴클레오티드 N101-N104 를 1 ㎛ol 합성 컬럼 및 1.7 ㎛ol 의 옥살릴 연결된 dGCE,Pac (HCP 상의) 를 사용하여, 표 E-32 에 요약된 합성 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 자동화 합성을 사용하여 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 완료 후 HCP 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 1 mL 의 포화 NH3/Py 로 1 h 동안 55 ℃ 에서 이어서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 18 시간 동안 RT 에서 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 10% DMSO 를 함유하는 ~pH 1.5 HCl 수용액으로 재현탁하고 HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다 (하기 기술되는 과정에 따름). 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 하기 기술되는 과정에 따라 역상 HPLC 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-32. 올리고뉴클레오티드 N101-N102의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약.
Figure 112015015568410-pct00581
실시예 72. N101 및 N102 에 대한 HPLC 방법:
버퍼 A: 50 mM TEAA, pH 9.6 (TEA 로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C8, 3.5 ㎛, 4.6x50mm, Part #186003034
버퍼 히터 세트 온도 = 35 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00582
실시예 73. N101 및 N102 에 대한 일반적인 UPLC-LCMS 방법
버퍼 A: 10 mM 암모늄 포르메이트, pH 9.5 (수성 NH3 로 조정)
버퍼 B: ACN
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 35 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00583
실시예 74. N101 및 N102 에 대한 일반적인 정제 방법:
버퍼 A: 50 mM TEAA pH=9.6 (TEA 로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = RT
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00584
100 ㎕ 의 49-51% 인산을 각 분획 (pH 3) 에 첨가하고 HPLC 로 확인하고, 이어서 동결시까지 -80℃ 에서 저장하였다. 분획을 2시간 동안 동결건조기 상에서 부피가 ½ 될 때까지 유지시키고 이어서 -80℃ 에서 저장하였다.
실시예 75. N101 및 N102 에 대한 일반적인 탈염 방법:
버퍼 A: 10 mM 포름산
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = RT
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00585
수집된 분획을 동결시까지 -80℃ 에서 저장하고 건조시까지 동결건조시 상에서 유지시키고 HPLC 로 확인하였다.
실시예 76. 올리고뉴클레오티드 N101 (모든-(Rp)-d[5mCs16As16Gs16T] 의 합성 (s16 =
Figure 112015015568410-pct00586
))
올리고뉴클레오티드 N101 을 상기 기술된 바와 같이 합성하고 정제하였다. RT (RP-HPLC 에서): (HPLC 방법 N1): 15.9 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 1614.64; 측정치[+H]: 1615.06.
실시예 77. 올리고뉴클레오티드 N102 의 합성 (모든-(Sp)-d[5mCs16As16Gs16T])
올리고뉴클레오티드 N102 을 상기 기술된 바와 같이 합성하고 정제하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 N1): 16.4 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 1614.64; 측정치[+H]: 1614.97.
실시예 78. 올리고뉴클레오티드 N103 (모든-(Rp)-d[5mCs16As16Gs16Ts165mCs16Ts16Gs165mCs16Ts16Ts165mCs16G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 N103 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 N1): 18.4 min. UPLC/ESI-MS: C197H311N62O62P11S11에 대한 계산치: 5233.38; 측정치: 5234.7.
실시예 79. 올리고뉴클레오티드 N104 (모든-(Sp)-d[5mCs16As16Gs16Ts165mCs16Ts16Gs165mCs16Ts16Ts165mCs16G]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 N104 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 N1): 18.7 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 5233.38; 측정치: 5232.9.
올리고뉴클레오티드 N105-N106 을 1 ㎛ol 합성 컬럼 및 1.7 ㎛ol 의 옥살릴 연결된 dGCE,Pac (HCP 상의) 를 사용하여 표 E-33 에 요약된 합성 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 자동화 합성을 이용하여 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 완료 후 HCP 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 1 mL 의 포화 NH3/i-PrOH 16 시간 동안 55 ℃ 에서 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 pH 7.0 수용액으로 재현탁하고 HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역상 HPLC 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-33. 올리고뉴클레오티드 N105-N106 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00587
실시예 80. N101 및 N102 에 대한 HPLC 방법:
버퍼 A: 50 mM TEAA, pH 7.0
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C8, 3.5 ㎛, 4.6x150mm, Part #186003034
버퍼 히터 세트 온도 = 35 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00588
실시예 81. N101 및 N102 에 대한 일반적인 UPLC-LCMS 방법
버퍼 A: 10 mM 암모늄 포르메이트, pH 7.0
버퍼 B: ACN
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 35 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00589
실시예 82. 올리고뉴클레오티드 N105 (모든-(Rp)-d[5mCs9As9Gs9T] 의 합성 (s9 =
Figure 112015015568410-pct00590
))
올리고뉴클레오티드 N105 을 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서): (HPLC 방법 N2): 14.1 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 1977.78; 측정치[-H]: 1978.8.
실시예 83. 올리고뉴클레오티드 N106 (모든-(Sp)-d[5mCs9As9Gs9T]) 의 합성
올리고뉴클레오티드 N106 을 합성하고 상기와 같이 정제하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 N2): 14.7 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 1977.78; 측정치[-H]: 1977.37.
올리고뉴클레오티드 xxx 를 1 ㎛ol 합성 컬럼 및 1.7 ㎛ol 의 옥살릴 연결된 dGCE,Pac (HCP 상의) 를 이용하여, 표 E-33 에 요약된 합성 사이클에 따라 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 자동화 합성을 이용하여 합성하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 자동화 올리고뉴클레오티드 합성 완료 후 HCP 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 1 mL 의 포화 NH3/i-PrOH 로 16 시간 동안 55 ℃ 에서 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 10% DMSO 를 함유하는 pH 7.0 수용액으로 재현탁하고 HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역상 HPLC 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-34. DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약.
Figure 112015015568410-pct00591
실시예 84. 일반적인 정제 방법
버퍼 A: 50 mM TEAA
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = rt
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00592
HPLC 방법 5:
Figure 112015015568410-pct00593
ONT-60: 올리고뉴클레오티드 149 모든-(Rp)-d[5mCs8As8Gs8Ts85mCs8Ts8Gs85mCs8Ts8Ts85mCs8G] (s8 =
Figure 112015015568410-pct00594
))
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 5): 15.80 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 6345.6; 측정치: 6340.7.
ONT-69: 모든-(Sp)- d[5mCs16As8Gs8Ts85mCs8Ts8Gs85mCs8Ts8Ts85mCs8G]
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 5): 18.61 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 6345.6; 측정치: 6340.6.
실시예 85.
둘 모두의 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 및 입체규정된 모폴리노에틸 포스포로티오에이트 트리에스테르 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 P-변형된 블록머 및 알트머 올리고뉴클레오티드를 ABI-394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다 (1 ㎛ol 합성 컬럼 및 1.7 ㎛ol 의 옥살릴 연결된 dGCE,Pac (HCP 상의) 를 이용하여 표 E-4 에 요약된 사이클에 따름). P-변형된 블록머 및 알트머 올리고뉴클레오티드 중 하나를 황화 단계 (1) 또는 (2) 를 수행함으로써 서열 내 소정의 위치에서 도입하였다. 합성 사이클을 말단 5'-O-DMTr 그룹 (DMT 오프) 의 제거로 수행하였다. 고체 지지체를 건식 ACN 으로 세척하고 아르곤 환류 하에 건조시켰다. 건식 HCP 를 플라스틱 바이알에 두고 18 시간 동안 실온에서 건식 피리딘 (1:4 비로) 중 1 mL 의 건식 프로필아민으로 처리하였다. 이어서 용매를 증발시키고 잔사를 DMSO 에 재현탁시키고 HCP 지지체를 여과시켰다. 미정제 생성물을 역상 제조용 HPLC 로 정제하였다. 95% 초과의 순도를 갖는 분획을 풀링하고, 농축시키고 역-상 HPLC (구배: 0 내지 80% ACN) 로 탈염시켰다. 최종 탈염된 생성물을 물로부터 동결건조하였다.
표 E-4. 실시예 85 의 합성에 사용되는 DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00595
실시예 86. 실시예 85 에 대한 일반적인 정제 방법:
버퍼 A: 20 mM 포스페이트 pH=6.0 (인산으로 조정됨)
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge Prep C18, 5 ㎛, C18, 250×10mm, Part #186003256
버퍼 히터 세트 온도 = 50 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00596
HPLC 방법 6
버퍼 A: 20 mM 암모늄 아세테이트, pH 6.0
버퍼 B: ACN
컬럼: XBridge C8, 3.5 ㎛, 4.6x150mm, Part #186003034
버퍼 히터 세트 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00597
ONT-71: 모든-(Rp)- d[5mCs1As1GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs15mCs1G]
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 6): 9.39 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 4297.9; 측정치: 4295.3
ONT-72: 모든-(Sp)- d[5mCs1As1GsTs5mCsTsGs5mCsTsTs15mCs1G]
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 6): 10.84 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 4297.9; 측정치: 4295.7
ONT-73: 모든-(Rp)- d[5mCs1AsGs1Ts5mCs1TsGs15mCsTs1Ts5mCs1G]
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 6): 13.54 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 4524.2; 측정치: 4522.6
ONT-74: 모든-(Sp)- d[5mCs1AsGs1Ts5mCs1TsGs15mCsTs1Ts5mCs1G]
올리고뉴클레오티드를 상기 기술된 바와 같이 합성하였다. RT (RP-HPLC 에서) (HPLC 방법 6): 15.52 min. UPLC/ESI-MS: 계산치: 4524.2; 측정치: 4521.0
전구약물 올리고뉴클레오티드 특성 (예컨대: 뉴클레아제 저항성, 조직 축적, 세포 투과, 엔도조말 이스케이프, 면역자극, 작용 기간, 약동학, 등) 을 전부 조작하고 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 입체화학에 영향을 받았다.
2'-OH, 2'-OMe, 2'-F, 2'-데옥시, 뉴클레오티드간 포스포디에스테르 또는 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 또는 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 트리에스테르 (전구약물) (뉴클레오티드간 포스포디에스테르 (PO) 또는 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 (PS) 중 하나 방출) 링크를 함유하는 RNA 올리고뉴클레오티드를 130 mg (4.9 ㎛ol) 의 옥살릴 연결된 5'-O-DMTr-2'-데옥시티미딘 (상기 기술된 바와 같이 제조됨) 로 적재된 10 ㎛ol 용량 합성 컬럼을 사용하는, 표 E-35, 표 E-36, 표 E-37 및 표 E-38 에 요약된 사이클에 따라 ABI 394 DNA/RNA 합성기 상에서 합성하였다. 예비 캡핑 단계 (캡핑 2) 를 수행하고 합성을 말단 5'-O-DMTr 그룹의 제거로 종결시켰다. 산화 단계를 데칸 중 tert-부틸히드로페록시드 (TBHP) 5-6 M 시판 용액으로 수행하고 4부의 디클로로메탄으로 이어서 희석시켰다. 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 디에스테르 링크에 대한 입체특이적 황화 단계를 0.3 M S-시아노에틸메틸티오술포네이트 시약을 사용하여 수행하고 이어서 상응하는 키랄 포스포라미드의 커플링 및 2단계 캡핑 공정 (표 E-36) 을 수행하였다. 입체규정된 뉴클레오티드간 포스포디에스테르 (PS) 링크를 방출하는 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 트리에스테르에 대한 입체특이적 황화 단계를 0.3 M S-(N-모폴리노에틸티오에스테르-에틸)-파라-니트로-톨루일티오술포네이트를 사용하여 수행하였다. 상응하는 키랄 포스포라미드 커플링 및 2단계 캡핑 공정 (표 E-37) 에 따르는 시약. 뉴클레오티드간 포스포디에스테르 (PO) 링크를 방출하는 뉴클레오티드간 입체규정된 포스포로티오에이트 트리에스테르에 대한 입체특이적 황화 단계를, 상응하는 키랄 포스포라미드의 커플링 및 2단계 캡핑 공정 (표 E-38) 에 따르는 0.3 M S-(N-모폴리노에틸)-톨루일티오술포네이트 시약을 사용하여 수행하였다. 2'-OH RNA 뉴클레오티드에 대해서, 2'-O-염기 보호기 그룹을 사용하였다 (예컨대 2'-O-PivOM (Debart et al., Chem. Eur. J., 2008, 14, 9135) 또는 2'-O-TC (Dellinger et al., J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 11540)). 울트라마일드 (C-Ac, G-Pac, A-Pac) 보호기를 뉴클레오베이스의 전부에 대해 사용하였다.
자동화 올리고뉴클레오티드 합성 사이클이 완료되고 최종 5'-O-DMTr 그룹이 제거되면, 합성 컬럼을 채취하고 DNA/RNA 합성기 및 진공 하에 건조시켰다. ACN 중 0.5 M 1,5-디아자바이시클로[4.3.0]논-5-엔 (DBN), 0.25 M N,O-비스(트리메틸실릴)트리플루오로아세트아미드 (BSTFA) 용액 10 mL 를 합성 컬럼의 하나의 마지막에 부착된 시린지를 이용하여 흐름을 중지시키지 않으면서 1 분 동안 합성 컬럼을 통해 지지체에 연속 첨가하였다. 이어서 지지체를 무수물 ACN 으로 세척하고 진공 하에 건조시켰다. 이어서, 건조된 지지체를 빈 스크류-캡 플라스틱 바이알로 이동시키고 10% n-PrNH2 용액으로 무수물 피리딘 (1.5 mL) 중에서 실온에서 12 시간 동안 처리하였다. 그 후, 용매를 건조 증발시키고 고체 지지체를 포함하는 잔사를 pH 5 에서 2 mL 의 물/DMSO (50/50) 에 용해시키고, 지지체를 여과시키고 여과액을 수집하고, 즉시 동결시키고 정제 전에 -80 ℃ 에서 저장하였다.
표 E-35. DNA/RNA 합성기 ABI 394 상에서의 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00598
표 E-36. DNA/RNA 합성기 ABI 394 상에서의 올리고뉴클레오티드 합성 요약
Figure 112015015568410-pct00599
표 E-37. DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약.
Figure 112015015568410-pct00600
표 E-38. DNA/RNA 합성기 ABI-394 상에서 올리고뉴클레오티드 합성 요약.
Figure 112015015568410-pct00601
올리고뉴클레오티드의 합성: (Rp)- uucuAGAccuGuuuuGcuudTs10dT
올리고뉴클레오티드 ONT-107 의 합성: (Sp)- uucuAGAccuGuuuuGcuudTs10dT
올리고뉴클레오티드 ONT-108 의 합성: (Rp)- AAGcAAAAcAGGUCuAGAAdTs10dT
올리고뉴클레오티드 ONT-109 의 합성: (Sp)- AAGcAAAAcAGGUCuAGAAdTs10dT
Figure 112015015568410-pct00602
올리고뉴클레오티드의 합성: (Rp, Rp)- as1AGcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT
올리고뉴클레오티드의 합성: (Sp, Rp)- as1GcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT
올리고뉴클레오티드의 합성: (Sp, Sp)- as1GcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT
올리고뉴클레오티드의 합성: (Rp, Sp)- as1GcAAAAcAGGUCuAGAAdTsdT
올리고뉴클레오티드의 합성: (모든 (Sp))- us1ucus1AGAccs1uGus1uus1uGcuudTs10dT
올리고뉴클레오티드의 합성: (모든 (Rp))- As10AGcAAAAcAGGs1UCuAs1GAs1AdTs10dT
RNA 가닥 열적 어닐링 및 siRNA 듀플렉스의 제조. 각각의 RNA 가닥을 1×PBS 중 10 μM 의 등몰 농도 에서 이의 상보적 RNA 가닥과 혼합하였다. 총 0.5 mL 용액을 각 듀플렉스에 대해 제조하고 혼합물을 90 ℃ 에서 2 분 동안 가열시키고 이어서 수시간에 걸쳐 냉각시켰다. 이어서 혼합물을 4 ℃ 에서 저장하였다.
열적 RNA 가닥 어닐링 단계에 따르면, 모든 가능한 siRNA 듀플렉스 조합은 안티센스 가닥의 임의의 가능한 상보적 가닥과 임의의 센스 가닥을 어닐링함으로써 제조된다.
모든 제조된 siRNA 듀플렉스를 트랜스펙션 (HeLa 세포 또는 Hep3B 세포에서) 에 따라, 이의 PCSK9 유전자-침묵 특성에 대해 시험관내에서 평가하였다.
전구약물 그룹을 갖는 모든 제조된 siRNA 듀플렉스를 Hep3B 세포, Huh-7 세포 또는 인간 주된 헤파토사이트에서 자유 흡수에 따라, 이의 유전자-침묵 특성에 대해 시험관내에서 평가하였다.
상이한 분할선이 관찰되며, 추가적 화학 변형 및 전구약물 그룹이 탐구되는 층과 조합되어, 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 수, 위치 및 이의 입체구축물에 의해 조절된다.
siRNA 특성 예컨대: 뉴클레아제 저항성, 세포 투과, 엔도조말 이스케이프, 듀플렉스 열역학적 안정도, 듀플렉스의 트리덴셔널 구조, 효소 상호작용의 다양한 기전의 단계에 대한 친화도, 표적 mRNA 에 대한 친화도, 특이적 오프-표적 영향, 면역자극, 작용 기간, 약동학, 등을 전부 조작하였으며, 전구약물 그룹의 존재 또는 부재 하에서뿐만 아니라 키랄 포스포로티오에이트 백본 링크의 입체화학에 의해 영향 받는다.
siRNA 듀플렉스로 전구약물 그룹을 방출시키는 PO 및 PS 의 부착은 이의 세포내 전달을 증강시키고 트랜스펙션 시약 또는 표적화 리간드의 부재 하에서 자유 흡수를 증강시킨다.
실시예 87: 부분입체이성질체적으로 순수 올리고뉴클레오티드의 안정도 연구
본 실시예는 "부모" 입체무작위 혼합물에 대해 관찰된 그것과 키랄 순수 올리고뉴클레오티드의 시험관내 안정도를 비교한다 (즉, 키랄 순수 올리고뉴클레오티드로서 동일 서열 그러나 키랄 순도를 나타내지 않는 올리고뉴클레오티드를 함유하는 조성물에 대해, 예를 들어 입체무작위 공정을 통해 제조된 결과로서). 7개의 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 (이의 각각은 관심 단백질을 인코딩하는 유전자 또는 특정 표적 전사의 그것과 상보적인 서열을 가짐) 를 합성하고, 제형화하고, 3개의 상이한 생물학적 매트릭스를 사용하여 대사 안정도에 대해 평가하였다: 뱀독 포스포디에스테라아제 (svPDE), 뉴클레아제 P1 (nP1) 및 래트 전체 간 호모게네이트. 전체-길이 올리고뉴클레오티드의 수준을 상이한 인큐베이션 기간 후 IEX-HPLC 에 의해 정량화하였다. 이 실시예에 제시된 결과는 예를 들어 다음을 입증한다: 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 조성물은 적당한 참조와 비교시 구체적으로는, "부모" 입체무작위 제제와 비교시 현저히 상이한 대사 안정도 (예를 들어, 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성의 올리고뉴클레오티드의 제제, 특히 입체무작위 제제 포함) 를 가질 수 있다. 이 실시예에서, 인간 아포리포단백질-B (ApoB) 에 대한 (따라서 이를 표적화하는) 서열 안티센스를 갖는 올리고뉴클레오티드 를 대사 안정도 연구에서 프루프-오브-컨셉에 사용하였다.
올리고뉴클레오티드 ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89 및 ONT-41 에 대한 뱀독 포스포디에스테라아제 (svPDE) 소화 연구
본 발명자들은 적은 변형을 가하여 Oka et al. (J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 16031-16037) 에 의해 보고된 프로토콜을 사용하였다. 물 (50 ㎕) 중 정제된올리고뉴클레오티드 (10 nmoles) 를 svPDE (4 ×10-3 유닛), 100 mM Tris-HCl 및 15 mM MgCl2 을 함유하는 수용액 (450 ㎕, pH 8.6) 에 첨가하였다. 혼합물을 400 rpm 에서 진탕하면서 37 ℃ 에서 인큐베이션하였다. 각 시점에서 (0 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 4 d, 5 d, 6 d 및 7 d) 50 mL 의 분취액을 채취하고 25 ㎕ 의 150 mM EDTA, 2 ㎕ 의 프로테아제 K 용액 (20 mg/mL) 및 30 ㎕ 의 Lysis 버퍼 (Qiagen, #129115) 를 이용하여 켄칭하고 혼합물을 60 ℃ 에서 20 분 동안 가열시켰다. 5㎕ 의 내부 표준 (5'-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT-3', 27-mer 올리고뉴클레오티드 (밑줄친 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형된 것임), (200 ㎛) 을 분취액에 첨가하였다. 정량화 분석을 IEX-HPLC 로 수행하고 대사산물 확인을 UPLC/MS 로 수행하였다. 결과를 도 59 에 나타낸다.
IEX-HPLC 분석은, 입체이성질체 사이의 현저한 차이가 없는 svPDE 와의 인큐베이션 동안 포스포로티오에이트 20-mer 의 분해를 나타낸다. 대사산물의 LCMS 분석으로, 대다수의 분해 생성물이 탈황 결과로서 형성되었음을 나타낸다. Prakash et al. (Biochemistry 2002, 41, 11642-11648), Prhavc et al. (Org.Lett., 2003, 5, 2017-2020) 등에 의해 이전에 보고된 바와 같이, 본 발명자들은 5' 및 3'-말단에서 2'-MOE 변형이, 3'→5' 엑소뉴클레아제인 svPDE 소화로부터 이들 올리고머를 보호함을 관찰하였다.
올리고뉴클레오티드 ONT-75, ONT-77, ONT-80, ONT-81, ONT-87, ONT-88, ONT-89 및 ONT-41 에 대한 뉴클레아제 P1 (nP1) 소화 연구
본 발명자들은, Oka et al. (J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 16031-16037) 에 보고된 프로토콜에 적은 변형을 가하여 사용하였다. 물 (50 ㎕) 중 정제된올리고뉴클레오티드 (10 nmoles) 를 nP1 (20 units), 100 mM Tris-HCl 및 1 mM ZnCl2 를 함유하는 수용액 (500 ㎕, pH 7.2) 에 첨가하였다. 혼합물을 400 rpm 에서 진탕하면서 37 ℃ 에서 인큐베이션하였다. 각 시점에서 (0 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h, 1 d, 2 d, ) 50 ㎕ 분취액을 채취하고 25 ㎕ 의 중지 버퍼 (150 mM EDTA, 2 ㎕ 의 프로테아제 K 용액 (20 mg/mL) 및 30 ㎕ 의 Lysis 버퍼 (Qiagen, #129115) 로 켄칭하고 혼합물을 60 ℃ 에서 20 분 동안 가열시켰다. 5 ㎕ 의 내부 표준 (5'-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT-3'), 27-mer 올리고뉴클레오티드 (밑줄친 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형됨) (200 ㎛) 을 분취액에 첨가하였다. 정량화 분석을 IEX-HPLC 로 수행하고 대사산물 확인을 UPLC/MS 로 수행하였다. 결과를 도 60-67 에 나타낸다.
뉴클레아제 nP1 은, 인 원자에서 (Sp) 절대 배열을 갖는 DNA 포스포로티오에이트 링크를 특이적으로 분해하는 것에 대해 이미 보고되어 있다 (Porter et al., Biochemistry, 1983, 22, 1369-1377; Oka et al., J. Am. Chem. Soc., 2008, 130, 16031-16037). 본 발명자들은 연구 5-10-5 2'-MOE 개프머 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드에 대한 유사한 패턴의 분해를 관찰하였으며, 여기서 nP1 은 입체화학에 독립적으로 안정한, 2'-MOE 윙에 영향을 미치지 않으면서 (Sp) 포스포로티오에이트 중심에서 개프머 올리고뉴클레오티드의 DNA 코어를 효율적으로 소화하는 것으로 밝혀졌다. DNA 코어의 완전한 소화는 DNA 코어 (ONT-77, ONT-80, ONT-87, ONT-88 및 ONT-89) 에서 (Sp)-포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 링크를 함유하는 입체순수 올리고뉴클레오티드에 대해서 뿐만 아니라 입체무작위 부분입체혼합물 올리고뉴클레오티드 ONT-41 에 대해 1시간 동안 DNA 코어의 완전한 소화를 관찰하였다. 모든 분해 생성물을 UPLC/MS 로 명백하게 확인하였다. 문헌에 보고된 바와 같이, 본 발명자들은 (Rp) 포스포로티오에이트 DNA 가 nP1 에 대해 기질이 명백하게 아닌 것으로 밝혀졌다. (Rp) 포스포로티오에이트 DNA 코어 (ONT-75 및 ONT-81) 를 갖는 2개의 키랄 순수 올리고뉴클레오티드는 37 ℃ 에서 1 시간의 인큐베이션 동안 nP1 에 대해 완전하게 안정하였다. ONT-75 및 ONT-81 는 수 일에 걸쳐 인큐베이션 과정 동안 약 10-15% 손실의 전체 길이 생성물을 나타냈다. 이 실시예에 제시된 결과는 예를 들어 다음을 입증한다: 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 조성물은 적당한 참조 (예를 들어, 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성의 올리고뉴클레오티드의 제제, 특히 입체무작위 제제 포함), 구체적으로는, "부모" 입체무작위 제제와 비교시 nP1 검정에서 현저히 상이한 대사 안정도를 가질 수 있다.
효소 소화 생성물의 분석을 위한 일반적인 IEX-HPLC 방법
버퍼 A: 10 mM TrisHCl, 50%ACN, pH 8.0
버퍼 B: 10 mM TrisHCl, 800 mM NaClO4, 50%ACN, pH 8.0
컬럼: DIONEX, DNAPac, PA-100, 4.0×250mm, Part #063000
컬럼 온도 = 60 ℃
254 및 280 nm 에서 신호 모니터링
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00603
효소 소화 생성물의 분석을 위한 일반적인 UPLC-LCMS 방법.
버퍼 A: 15 mM TEA, 400 mM HFIP, 물
버퍼 B: 50:50 버퍼 A/메탄올
컬럼: UPLC@OST C18 1.7 ㎛, 2.1×500mm
컬럼 온도 = 60 ℃
사용되는 구배:
Figure 112015015568410-pct00604
예비인큐베이션된 래트 전체 간 호모게네이트에서 인간 입체이성질체적으로 순수한 올리고뉴클레오티드의 대사 시험관내 대사 안정도
래트 전체 간 호모게네이트에서 키랄 순수 올리고뉴클레오티드의 대사 안정도를 측정하였다. 여기서 사용되는 프로토콜은 이전에 보고된 것이고 올리고뉴클레오티드 약물의 안정도를 평가하기 위해 사용하였다.
프로토콜: Geary et al 에 의해 보고된 프로토콜을 일부 변형을 가하여 본 연구에 사용하였다 (Oligonucleotides, 2010, 20, 309).
시험 시스템: 2마리의 수컷 Sprague-Dawley 래트 (Rattus norvegicus) 를 Charles River Laboratories, Inc. (Holister,CA) 로부터 공급 받았다.
조직 수집: 조직 수집 2일 전에 연구실에서 동물을 순응시켰다. 조직 수집 시에, 나트륨 펜토바르비탈 용액의 복강내 (IP) 주입으로 마취시켰다. 500ml의 저온 염수/동물을 사용하여 간 포탈 정맥을 통해 투여하여 간 관류를 수행하였다. 관류 후, 간을 절개하고, 얼음 상에 유지하였다. 간을 작은 조각으로 갈고 이를 칭량하였다.
간 호모게네이트 제조: 갈린 간 조직을 테어드 50 ml 원심분리 튜브에 이동시키고 칭량하였다. 저온 균질화 버퍼 (100 mM Tris pH 8.0, 1 mM 마그네슘 아세테이트, 항생-안티마이코틱제) 를 각 튜브에 첨가했고, 상기 튜브는 5 ml 의 버퍼/조직g 을 함유했다. TissueRuptor 조직 균질화기, 간/버퍼 혼합물을 균질화하면서 얼음 상의 튜브를 유지하였다. 간 호모게네이트의 단백질 농도를 Pierce BCA 단백질 검정을 사용하여 측정하였다. 간 호모게네이트 를 1 ml 분취액으로 나누고, 크리오바이알로 이동시키고 -60 ℃에서 저장하였다.
인큐베이션 조건: 1 mL 분취액의 동결 간 호모게네이트 (단백질 농도= 31.9 mg/mL) 를 해동시키고 37 ℃ 에서 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 6개의 에펜도르프 튜브 (2 mL) 를 취하고 450 ㎕ 의 호모게네이트를 각 튜브에 첨가하였다. 50 ㎕ 의 시험 올리고뉴클레오티드 (200 μM) 를 각 튜브에 첨가하였다. 혼합 직후, 125 ㎕ 의 (5×) 중지 버퍼 (2.5% IGEPAL, 0.5 M NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris, pH = 8.0) 및 12.5 ㎕ 의 20 mg/mL 프로테아제 K (Ambion, # AM2546) 를 0 hour 시점 동안 하나의 튜브에 첨가하였다. 이어서 혼합물을 1시간 동안 60 ℃ 에서 가열시켰다. 남아 있는 반응 혼합물을 VWR Incubating Microplate 진탕기 상에서 400 rpm 에서 진탕하면서 37 ℃ 에서 인큐베이션하였다. 지정된 기간 (1, 2, 3, 4, 및 5 days) 동안 인큐베이션 후, 각각의 혼합물을 125 ㎕ 의 (5×) 중지 버퍼 (2.5% IGEPAL, 0.5 M NaCl, 5 mM EDTA, 50 mM Tris, pH = 8.0) 및 12.5 ㎕ 의 20 mg/mL 프로테아제 K (Ambion, # AM2546) 로 처리하였다.
후처리 및 바이오분석: (5'-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT-3'), 27-mer 올리고뉴클레오티드 (밑줄친 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형됨) 를 부분입체이성질체적으로 순수 올리고뉴클레오티드의 정량화를 위한 내부 표준으로서 사용하였다. 50 ㎕ 의 내부 표준 (200 ㎛) 을 각 튜브에 첨가하고 이어서 250 ㎕ 의 30% 암모늄 히드록시드, 800 ㎕ 의 페놀: 클로로포름: 이소아밀 알코올 (25:24:1) 의 첨가에 의해 각 투브에 첨가하였다. 600 rpm 에서 혼합 및 원심분리 후, 수성 층을 스피드 백 상에서 증발시켜 100 ㎕ 이 되게 하고 Sep Pak 컬럼 (C18, 1g, WAT 036905) 상에 적재하였다. Sep pak 컬럼의 모든 수성 세척을 빠른 IEX-HPLC 방법으로 시험하여 여기서 발견되는 생성물이 없음을 보장하였다. 아세토니트릴 용리액을 건조 농축시키고 100 ㎕ 물에서 용해시키고 RP-HPLC 을 사용하여 분석하였다.
용리액 A = 10mM 트리부틸암모늄 아세테이트, pH=7.0
용리액 B = ACN
컬럼: XTerra MS C18, 3.5 ㎛, 4.6×150 mm, Part number: 186000432
컬럼 온도 = 60 ℃
HPLC 구배:
Figure 112015015568410-pct00605
도 68 은 상이한 키랄 순수 올리고뉴클레오티드가 래트 전체 간 호모게네이트에서 상이한 대사 안정도 프로파일을 갖는 것을 보여준다. 실험은 또한 다음을 입증한다: 부분입체이성질체적인 혼합물 ONT-41 은 동일한 서열 및 화학 조성을 갖는 부분입체이성질체적으로 순수 입체규정된 올리고뉴클레오티드와 비교시 상이한 대사 안정도 특성을 갖는다 (ONT-75 및 ONT-77 은 예로서 사용되었으며, 이러한 관찰에서, 당업자에 의해 주지되는 바와 같이, 이 분자의 다른 가능한 부분입체이성질체적으로 순수 입체규정된 포스포로티오에이트 부분입체이성질체에 대해 추론될 수 있는 것으로 나타남).
모든 인 원자에서 전체 Rp 절대 배열을 갖는 입체제어된 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고뉴클레오티드 ONT-75 는 37 ℃ 에서 예비인큐베이션된 래트 전체 간 호모게네이트에서 하루 안에 완전하게 분해되었으며, 이는 연구에 사용된 3개 중 대사 안정도가 가장 낮음을 입증한다.
다른 부분입체이성질체적으로 순수한 입체규정된 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 ONT-77 (절대 배열: 5R-10S-4R) 은, 입체무작위 ONT-41 (Mipomersen) 보다 2배 더욱 안정적이였다. 인큐베이션 5 일 후, 부분입체이성질체적으로 순수한 ONT-77 에 대해 40%의 전장 올리고뉴클레오티드가 남아 있는 반면, 입체무작위 ONT-41 (Mipomersen) 에 대해 대략 15%의 전장 올리고뉴클레오티드가 남아 있다. ONT-77 과 ONT-41 과의 직접적인 비교는, 분석 시점 내내 입체제어된 이성질체 5R-10S-4R (ONT-77) 에 대해 현저히 높은 대사 안정도를 나타냄을 입증한다.
부분입체이성질체적으로 순수한 이성질체 ONT-77 의 입체규정된 구축물은, 이러한 올리고뉴클레오티드의 전체적인 대사 안정도 및 분해율에 명백히 영향을 미친다. 이러한 관찰로 이론에 얽매임 없이 다음의 결론을 이끌어낸다: 5-10-5 갭머 올리고뉴클레오티드의 DNA 코어에 적용된 Sp 입체화학은 증강된 엔도뉴클레오티드 저항성을 제공하며 따라서 입체무작위 부분입체혼합물과 비교하여 증강된 대사 안정도를 나타낸다. 이러한 시퀀스의 다른 부분입체이성질체적으로 순수한 입체제어된 포스포로티오에이트 이성질체에 사용되는 일부 다른 입체 구축물은 이러한 실험에서 심지어 더욱 큰 대사 안정도를 나타내는 것으로 예상된다.
이론에 얽매이지 않으면서, 이러한 실시예에 제시된 결과는 예를 들어 다음을 입증한다: 포스포로티오에이트 링크 (ONT-77) 에서 Rp 입체화학은 Sp DNA 코어를 함유하는 ONT-77 보다 래트 간 호모게네이트에서 더 적은 대사 안정도를 갖는다. 이러한 실시예에서 제시되는 결과는 또한 예컨대 다음을 입증한다: 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 조성물은, 적절한 참조 (예를 들어 특히 입체무작위 제제를 포함하는 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성의 올리고뉴클레오티드 제제) 에 비해 래트 간 호모게네이트에서 현저히 상이한 대사 안정도를 갖고, "부모" 입체무작위 제조에 비해 현저히 상이한 특이성을 가질 수 있다. 이러한 실시예에서, 인간 아폴리포프로틴-B (ApoB) 에 대한 (따라서 이를 표적으로 하는) 서열 안티센스를 갖는 올리고뉴클레오티드를 대사 안정도 연구에서 프루프-오브-컨셉에 사용하였다. 제공된 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드는 내인성 효소에 대해 증가되거나 감소될 수 있다. 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 및 조성물 및 이의 방법을 제공함으로써, 본 발명은 공지된 키랄 비제어된 올리고뉴클레오티드 및 이의 조성물보다 증강된 약물동태학적 특성을 갖는 올리고뉴클레오티드 및 조성물을 제공한다.
인간 혈청에서 입체제어된 포스포로티오에이트 디에스테르 연결을 갖는 인간 PCSK9 siRNA 듀플렉스의 시험관내 대사 안정도
이전체 보고된 절차와 유사한 프로토콜 (Oka et al., J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 16031-16037) 을 사용하였다. 물 (50 ㎕) 중 siRNA 듀플렉스 (2.5 μmoles) 를 인간 혈청 (450 ㎕) 에 첨가하였다. 혼합물을 400 rpm 에서 진탕하면서 37 ℃ 에서 인큐베이션하였다. 50 mL 의 분취액을 각 시점에서 (0 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h 및 24 h) 에서 채취하고 25 ㎕ 의 150 mM EDTA, 2 ㎕ 의 프로테아제 K 용액 (20 mg/mL) 및 30 ㎕ 의 Lysis 버퍼 (Qiagen, #129115) 로 켄칭하고 혼합물을 60 ℃ 에서 20 분 동안 가열시켰다. 5㎕ 의 내부 표준 (5'-GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT-3', 27-mer 올리고뉴클레오티드 (밑줄친 뉴클레오티드는 2'-MOE 변형됨) (200 ㎛) 를 분취액에 첨가하였다. 정량화 분석을 IEX-HPLC 에 의해 수행하고 대사산물 확인을 UPLC/MS 로 수행하였다.
일부 구현예에서, Sp 배열을 갖는 3' 말단 부분입체이성질체적으로 순수한 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 듀플렉스는, 동일 위치에서 입체무작위 부분입체혼합물 또는 Rp 배열을 갖는 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 에 비해 인간 혈청에서 더욱 높은 대사 안정도를 나타낸다. 다른 구현예에서, Sp 배열을 갖는 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 에 비해 인간 혈청에서 더욱 높은 대사 안정도를 갖거나, 동일 위치에서 입체무작위 부분입체혼합물에 비해 더욱 높은 대사 안정도를 갖는다. 다른 구현예에서, 3' 및 5' 말단 둘 모두에서 Sp 배열을 갖는 부분입체이성질체적으로 순수한 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 듀플렉스는, 동일한 위치에서 입체무작위 부분입체혼합물 또는 Rp 배열을 갖는 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 에 비해 인간 혈청에서 더욱 높은 대사 안정도를 나타낸다. 다른 구현예에서, Sp 배열을 갖는 다중 부분입체이성질체적으로 순수하 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 듀플렉스는, 입체무작위 부분입체혼합물 도는 Rp 배열을 갖는 다중 포스포로티오에이트를 갖는 siRNA 와 비교하여 인간 혈청에서 더욱 높은 대사 안정도를 나타낸다. 다른 구현예에서, Sp 배열을 갖는 부분입체이성질체적으로 순수한 포스포로티오에이트의 전체 백본을 갖는 siRNA 듀플렉스는, 입체무작위 부분입체혼합물 또는 Rp 배열을 갖는 포스포로티오에이트의 전체 백본을 갖는 siRNA 에 비해 인간 혈청에서 더욱 높은 대사 안정도를 갖는다.
실시예 88.　동일 서열을 갖는 키랄 비제어된 조성물과 비교시 시험관내 상이한 역가를 갖는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물
본 실시예는 "부모" 입체무작위 혼합물에 대해 관찰된 것과 키랄 순수 올리고뉴클레오티드의 시험관내 약물동태학적 활성을 비교한다 (즉, 키랄 순수 올리고뉴클레오티드와 동일한 서열이나 키랄 순도를 나타내지 않는 올리고뉴클레오티드를 함유하는 조성물, 예를 들어 입체무작위 공정을 통해 제조된 결과로서) 4개의 키랄 순수 올리고뉴클레오티드, (이의 각각은 관심 단백질을 인코딩하는 유전자 또는 특정 표적 전사의 그것과 상보적인 서열을 가짐) 을 합성하고, 제형화하고, 주된 마우스 헤파토사이트로 이동시킨다. mRNA 수준을 억제 수준을 평가하기 위해 정량화하였다. 이 실시예에서, 인간 아포리포단백질-B (ApoB) 에 대한 (따라서 이를 표적화하는) 서열 안티센스를 갖는 올리고뉴클레오티드를 인간 ApoB 를 발현하는 트랜스제닉 마우스에서 프루프-오브-컨셉에 사용하였다.
올리고뉴클레오티드를 이용한 마우스 주요 헤파토사이트의 트랜스펙션
7 주된 C57BL6 수컷 마우스를 사용하여 96-웰 플레이트 (오버레이 없음) (Celsis/Bioreclamation IVT) 에서 추출에 사용하고 마우스 주된 헤파토사이트를 플레이팅하였다. 주요 헤파토사이트의 트랜스펙션을, 0.5ul 의 리포펙틴 /96-플레이트 웰을 사용하여 제조자의 프로토콜을 사용하여 리포펙틴 (Life Technologies, cat. No. 18292-037) 으로 수행하였다. 12 개의, 1:3　 siRNA 듀플렉스 희석액을 6uM 에서 출발하여 창출하였다.　 이어서 10ul 의 10x 올리고를 9.5ul 의 시험관내 Gro HI 배지 (Celsis cat. Z99009) 혈청-미함유 배지 및 0.5ul 의 리포펙틴/웰의 제조된 혼합물과 리포플렉싱하였다. 10-15 분 인큐베이션 후, 20 ul 의 리포플렉싱된 올리고를 80ul 의 시험관내 Gro HI 배지에서 주요 헤파토사이트에 첨가하여 최종 부피를 100ul/웰이 되게 하였다. 트랜스펙션 24 시간 후, 세포를 용균시켰다.
아포리포단백질 B mRNA 검정
총 mRNA 를 MagMAX™96 총 RNA 단리 키트 (Life Technologies, AM1830) 를 사용하여 세포 용균물로부터 정제하고; 15ul 의 cDNA 를 RNase 저해제를 갖는 고 용량 cDNA 역전사 키트(Life Technologies, 4374967) 로 합성하였다. 유전자 발현을 하기 프라이머를 이용하여 제조자의 프로토콜에 따라 Probes Master Mix (Roche, 04 707 494 001) 를 사용하여 Lightcycler480(Roche) 상에서 실시간 PCR 로 평가하였다:
마우스 아포리포단백질 B 프라이머:
[주형: (GenBank accession number M35186)]
진행방향 프라이머: CGTGGGCTCCAGCATTCTA
역방향 프라이머: AGTCATTTCTGCCTTTGCGTC
PCR 탐침: FAM-CCAATGGTCGGGCACTGCTCAA-TAMRA
마우스 GAPDH 프라이머:
진행방향 프라이머: GGCAAATTCAACGGCACAGT
역방향 프라이머: GGGTCTCGCTCCTGGAAGAT
PCR 탐침: 5' JOE-AAGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTCATC-TAMRA 3'
데이터 분석
델타 델타 Ct 방법을 사용하여 값을 계산하였다. 각 샘플에 대해서, 평균 ApoB 신호를 평균 GAPDH 신호로 정상화하고, 이어서 이를 정상화하여 mock 트랜스펙션되고 비처리된 샘플에 대해 평균적인 상응 비로 정상화하여, ApoB 단백질 발현의 상대적이 수준을 수득하였다. "부모" 입체무작위 혼합물을 참조에 대해 사용하였다. 4개의 매개변수 선형 회귀 곡선을 데이터에 핏팅시키고, 바닥 및 상부를 0% 및 100% 상수가 되게 하여 Graphpad Prism 을 사용하여 상대적인 IC50 을 계산하였다.
시험관내 투여량-반응 (도 71 및 72) 은, 키랄 순수 올리고뉴클레오티드가 현저하게 상이한 효능을 갖고, ONT-83 이 가장 효능이 있으며, ONT-84 및 ONT-85 가 가장 덜 효능이 있으며, IC50 에서 8.6-배 차이가 있음을 보여준다 (표 E-39).
표 E-39.　마우스 아포리포단백질 B/GAPDH mRNA 수준 (주요 마우스 헤파토사이트에서) 의 억제를 위한 입체이성질체 (ONT-83,-84,-85 또는 -86) 의 IC50 값
Figure 112015015568410-pct00606
이 실시예에 제시된 결과는 예를 들어 다음을 입증한다: 키랄 순수 올리고뉴클레오티드 조성물은 적당한 참조 (예를 들어, 동일한 서열이나 상이한 키랄 특이성의 올리고뉴클레오티드의 제제, 특히 입체무작위 제제 포함), 및 구체적으로는, "부모" 입체무작위 제제와 비교시, 시험관 내에서 현저하게 상이한 약물동태학적 활성을 가질 수 있다. 당업자는, 이러한 입증 측면에서 볼 때, 본 개시에 의해 제공되는 키랄 제어된 올리고뉴클레오티드 조성물이 예기치 않는 활성 및 특성을 가짐을 이해할 것이다.
등가물
본 발명의 일부 예시적 구현예에 기술된 것은, 단지 설명의 목적으로 예로서 제시된 것임이 당업자에게 명백하다. 당업자의 재량 내에서 가해진 수많은 변형 및 다른 예시적 구현예는 본 발명의 범주 내에 속하는 것으로 고려된다. 특히 본원에 제시된 많은 실시예가 방법 작용 또는 시스템 요소의 특정 조합을 포함하지만, 이들 작용 및 이들 요소는 동일한 목적을 수행하기 위한 다른 방식과 조합될 수 있다. 논의되는 작용, 요소 및 특징은 다른 구현예에서 유사한 역할로부터 배체되는 것으로 의도된 것이 아닌 구현예와 관련되어 있다. 또한, 하기 청구범위에서 하나 이상의 수단과 기능의 한정은 인용되는 기능을 수행하는데 개시된 수단을 한정하는 의도가 아니며, 인용되는 기능을 수행하기 위한 임의의 수단, 공지된 수단 및 이후 개발되는 수단을 포함하는 것으로 의도된다.
청구범위에서 용어 "제 1", "제 2", "제 3" 등의 사용은, 청구범위 요소가 이의 우선권, 우선함 또는 또다른 요소상의 하나의 요소의 순서 또는 수행되는 방법 작용의 일시적인 순서 그 자체가 아닌, 동일 명칭의 또다른 요소와는 특정 명칭을 갖는 청구범위 요소를 구분하기 위한 라벨로서 단지 제시된 것이다. 마찬가지로, a), b), 등, 또는 i), ii), 등의 사용은, 청구범위에서 임의의 우선권, 우선함 또는 단계의 순서 그 자체를 나타내는 것이 아니다. 마찬가지로, 이들 용어의 사용은 구체적으로 임의의 요구되는 우선권, 우선함 또는 순서 그 자체를 나타내는 것이 아니다.
상기 나타낸 구체적인 사항은 당업자가 본 발명을 실시하는데 충분한 것으로 간주된다. 본 발명은 제공되는 실시예에 의해 그 범주가 한정되는 것이 아니며, 실시예는 본 발명의 하나의 양태를 단지 설명하고자 함이고 다른 기능적으로 등가물인 구현예는 본 발명의 범주 내에 속한다. 상기 명세서로부터 본 발명의 다양한 변형이 이에 가해질 수 있으며 이 또한 첨부된 청구범위의 범주 내에 속함이 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명의 이점 및 목적이 본 발명의 각 구현예에 반드시 포함되는 것은 아니다.
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부록 (B)
US 6,207,646 B1
표 1
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US 6,214,806
표 1
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US6,218,371
표 1
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US 6,239,116 B1
표 1
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표 7
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표 12 - 계속
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표 15
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US 6,339,068 B1
표 3
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표 13
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부록 (C)
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SEQUENCE LISTING <110> ONTORII, INC. <120> CHIRAL CONTROL <130> 2010581-0055 <140> PCT/US13/50407 <141> 2013-07-12 <150> 61/671,724 <151> 2012-07-14 <150> 61/671,722 <151> 2012-07-14 <150> 61/671,656 <151> 2012-07-13 <150> 61/671,655 <151> 2012-07-13 <160> 2308 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 gctagacgtt agcgt 15 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 gctagatgtt agcgt 15 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 gctagacgtt agcgt 15 <210> 4 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 gctagacgtt agcgt 15 <210> 5 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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11 atcgactctc gaacgttctc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 12 gagaacgctg gaccttccat 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 13 gagaacgctc gaccttccat 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 14 gagaacgctc gaccttcgat 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 15 gagcaagctg gaccttccat 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 16 gagcacgctg gaccttccat 20 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 17 gagaacgctg gaccttccat 20 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oligonucleotide <400> 30 tcttcgaa 8 <210> 31 <211> 7 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 31 caacgtt 7 <210> 32 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 32 ccaacgtt 8 <210> 33 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 33 caacgttct 9 <210> 34 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 34 tcaacgtc 8 <210> 35 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 35 atggactctc cagcgttctc 20 <210> 36 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 36 ataggaggtc caacgttctc 20 <210> 37 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 37 atcgactctc gagcgttctc 20 <210> 38 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 38 atggaggctc catcgttctc 20 <210> 39 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 39 atcggactct cgagcgttct c 21 <210> 40 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 40 atcgactctc gagcgttctc 20 <210> 41 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 41 gcatgacgtt gagct 15 <210> 42 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 42 tccatgtcgg tcctgatgct 20 <210> 43 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 43 tccatgccgg tcctgatgct 20 <210> 44 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 44 tccatggcgg tcctgatgct 20 <210> 45 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 45 tccatgacgg tcctgatgct 20 <210> 46 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 46 tccatgtcga tcctgatgct 20 <210> 47 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 47 tccatgtcgc tcctgatgct 20 <210> 48 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 48 tccatgtcgt tcctgatgct 20 <210> 49 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 49 tccataacgt tcctgatgct 20 <210> 50 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 50 tccatgacgt ccctgatgct 20 <210> 51 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 51 tccatcacgt gcctgatgct 20 <210> 52 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 52 ggggtcaacg ttgacgggg 19 <210> 53 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 53 ggggtcagtc gtgacgggg 19 <210> 54 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 54 gctagacgtt agtgt 15 <210> 55 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 55 gctagacgtt agtgt 15 <210> 56 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 56 tccatgtcgt tcctgatgct 20 <210> 57 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 57 tccatgtcgt tcctgatgct 20 <210> 58 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 58 accatggacg atctgtttcc cctc 24 <210> 59 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 59 tctcccagcg tgcgccat 18 <210> 60 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 60 taccgcgtgc gaccctct 18 <210> 61 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 61 accatggacg aactgtttcc 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 74 tccatagcgt tcctagcgtt 20 <210> 75 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 75 tcgtcgctgt ctccgcttct t 21 <210> 76 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 76 tcctgacgtt cctgacgtt 19 <210> 77 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 77 tcctgtcgtt cctgtcgtt 19 <210> 78 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 78 tccatgtcgt ttttgtcgtt 20 <210> 79 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 79 tcctgtcgtt ccttgtcgtt 20 <210> 80 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 80 tccttgtcgt tcctgtcgtt 20 <210> 81 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 81 tcctgtcgtt ttttgtcgtt 20 <210> 82 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 82 tcgtcgctgt ctgcccttct t 21 <210> 83 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 83 tcgtcgctgt tgtcgtttct t 21 <210> 84 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 84 tccatgtcgt tcctgtcgtt 20 <210> 85 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 85 tccaggactt ctctcaggtt 20 <210> 86 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 86 tccatgcgtg cgtgcgtttt 20 <210> 87 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 87 tccatgcgtt gcgttgcgtt 20 <210> 88 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 88 tccacgacgt tttcgacgtt 20 <210> 89 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 89 tcgtcgttgt cgttgtcgtt 20 <210> 90 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 90 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 91 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 91 tcgtcgttgt cgttttgtcg tt 22 <210> 92 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 92 gcgtgcgttg tcgttgtcgt t 21 <210> 93 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 93 gcggcgggcg gcgcgcgccc 20 <210> 94 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 94 tgtcgtttgt cgtttgtcgt t 21 <210> 95 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 95 tgtcgttgtc gttgtcgttg tcgtt 25 <210> 96 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 96 tgtcgttgtc gttgtcgtt 19 <210> 97 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 97 tcgtcgtcgt cgtt 14 <210> 98 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 98 tgtcgttgtc gtt 13 <210> 99 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 99 tccatagcgt tcctagcgtt 20 <210> 100 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 100 tccatgacgt tcctgacgtt 20 <210> 101 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 101 gtcgyt 6 <210> 102 <211> 7 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 102 tgtcgyt 7 <210> 103 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 103 tccatgagct tcctgagtct 20 <210> 104 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 104 tctcccagcg tgcgccat 18 <210> 105 <211> 20 <212> 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Synthetic oligonucleotide <400> 114 ggugcgaagc agacugaggc 20 <210> 115 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 115 gatgcctctc ctacgcgcct 20 <210> 116 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 116 agccttggtg gataccctga agtt 24 <210> 117 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 117 tggacaaggt catactctgc cgat 24 <210> 118 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 118 ctctgctcct cctgttcgac 20 <210> 119 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 119 acgaccaaat ccgttgactc 20 <210> 120 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 120 gtccctgaag atgtcaatgc 20 <210> 121 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 121 uucuagaccu guuuugcuut t 21 <210> 122 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 122 aagcaaaaca ggucuagaat t 21 <210> 123 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 123 agcaaaacag gucuagaatt 20 <210> 124 <211> 10 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 124 gguggaaggc 10 <210> 125 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 125 cagtctgctt cg 12 <210> 126 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 126 gcgtttgctc ttcttcttgc gtttttt 27 <210> 127 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 127 cgtgggctcc agcattcta 19 <210> 128 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 128 agtcatttct gcctttgcgt c 21 <210> 129 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 129 ccaatggtcg ggcactgctc aa 22 <210> 130 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 130 ggcaaattca acggcacagt 20 <210> 131 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 131 gggtctcgct cctggaagat 20 <210> 132 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 132 aaggccgaga atgggaagct tgtcatc 27 <210> 133 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 133 acaacagacu uuaauguaat t 21 <210> 134 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 134 acaacugacu uuaauguaa 19 <210> 135 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 135 Gly Leu Phe Glu Ala Ile Glu Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly 1 5 10 15 Met Ile Asp Gly Trp Tyr Gly Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg 20 25 30 Arg <210> 136 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 136 uuacauuaaa gucuguuguu u 21 <210> 137 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 137 auuucaggaa uuguuaaagu u 21 <210> 138 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 138 ugacauuaaa gucuguuguu u 21 <210> 139 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 139 uaaaaucuuc cugcccacct t 21 <210> 140 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 140 ggaagcuguu ggcugaaaat t 21 <210> 141 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 141 cacauccagc ccaucuguct t 21 <210> 142 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 142 ccgugcuccu ggggcugggt t 21 <210> 143 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 143 ggaguuggau cucucagaat t 21 <210> 144 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 144 aagtcccgct cattacaaat t 21 <210> 145 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 145 aagaccagcc ucuuugccca g 21 <210> 146 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 146 ggaccaggca gaaaacgag 19 <210> 147 <211> 17 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 147 cuaucaggau gacgcgg 17 <210> 148 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 148 aaccaccugg gccaguauua utt 23 <210> 149 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 149 ugacacaggc aggcuugacu u 21 <210> 150 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 150 aagcucaauu cggacaacaa g 21 <210> 151 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 151 aaguccugua ugagugggaa c 21 <210> 152 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 152 tcgacgaaca tctacaacgc ctgcttcaag agagcaggcg ttgtagatgt tcttttttt 59 <210> 153 <211> 59 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 153 tcgaccaatg acaagagccg tgacttcaag agagtcacgg ctcttgtcat tgttttttt 59 <210> 154 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 154 ggtgaagaag ggcgtccaa 19 <210> 155 <211> 62 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 155 gatccgttgg agctgttggc gtagttcaag agactacgcc aacagctcca actttttgga 60 aa 62 <210> 156 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 156 aggtggtgtt aacagcagag 20 <210> 157 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 157 aatgttccaa tgccccactc 20 <210> 158 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 158 aacugccagu ggccagggcc u 21 <210> 159 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 159 aaccugcggu cuggagucaa c 21 <210> 160 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 160 uaauccaauu cgaagaccaa u 21 <210> 161 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 161 aggggcagca actgatgaaa a 21 <210> 162 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 162 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aagccgugca aagaacucuu u 21 <210> 169 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 169 aacaguaggu uuguagugag c 21 <210> 170 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 170 aaaggggcau ccacagacau c 21 <210> 171 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 171 ttattcttct ctttggagga 20 <210> 172 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 172 actggacttc cagaagaac 19 <210> 173 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 173 aattgcacgt aatcacccaa a 21 <210> 174 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 174 aagaaataca aggaagatga g 21 <210> 175 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 175 gacaugcuug cucauaguct t 21 <210> 176 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 176 gaccugccuc cucaucguct t 21 <210> 177 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 177 aaggtggagc aagcggtgga g 21 <210> 178 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 178 aaggagttga aggcctacaa a 21 <210> 179 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 179 ugccuacgaa cucuucacct t 21 <210> 180 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 180 uauggagcug cagaggaugt t 21 <210> 181 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 181 ttggccaagc cacacacag 19 <210> 182 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 182 gttctcagcc attgctagc 19 <210> 183 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 183 ggcagcatgt attgctgag 19 <210> 184 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 184 aauccaggac ucauuccaga u 21 <210> 185 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 185 aagugaagaa uacgaucaag u 21 <210> 186 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 186 aacaacgagu accucaaccc u 21 <210> 187 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 187 aacgcuugag cuggaaguaa g 21 <210> 188 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 188 ccuucaagcu ucugaucuc 19 <210> 189 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 189 aacuucgacu uugucaccga g 21 <210> 190 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 190 aagcacugca gagacaugga ag 22 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<211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 197 aggaaggccg ggtgattgtg 20 <210> 198 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 198 gtctggtacg actggagta 19 <210> 199 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 199 gacagcttta ggcacctcta 20 <210> 200 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 200 ggauucgaac ugcacuucu 19 <210> 201 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 201 acuguggcac ccagcuugu 19 <210> 202 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 202 gcccaaagug aaucccuuc 19 <210> 203 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 203 tttgaatatc tgtgctgaga acacagttct cagcacagat attcttttt 49 <210> 204 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 204 tttgtcaatt agctggaaca tcacagatgt tccagctaat tgacttttt 49 <210> 205 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 205 aatgagaaaa gcaaaaggtg ccctgtctc 29 <210> 206 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 206 caucgaugug ugugagaacu gc 22 <210> 207 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 207 cuguucucag cuggagaagc uu 22 <210> 208 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide 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Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 213 cuggacuucc agaagaacau ctt 23 <210> 214 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 214 aagauccgcc agagccccuc g 21 <210> 215 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 215 aacagggact cacgtgaagc t 21 <210> 216 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 216 aagacctgtt tgatctgatc c 21 <210> 217 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 217 uagacugacc cagcuggaat t 21 <210> 218 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 218 gaugcaauua cacaacagat t 21 <210> 219 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 219 cucaggagag gagccauuu 19 <210> 220 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 220 gauugaagac acaggaggc 19 <210> 221 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 221 gcaacucugg augggauug 19 <210> 222 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 222 ggaguucaug agugcuaua 19 <210> 223 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 223 cagaggaacc ugcuggcga 19 <210> 224 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 224 aactggcaac ctccagagaa t 21 <210> 225 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 225 aagagacctc gtggagaaac t 21 <210> 226 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 226 aacagtagag gagccgtcaa a 21 <210> 227 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 227 gggugagacc aucuucauct t 21 <210> 228 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 228 ggccaaaguc uaugaagaut t 21 <210> 229 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 229 aaucaucauc aagaaagggc a 21 <210> 230 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 230 aauugcugga gcuggccuut t 21 <210> 231 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 231 gaatgaagat cgatagtaa 19 <210> 232 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 232 gcacaggtgt agcaagtaa 19 <210> 233 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 233 ggagaattat gctttgaaa 19 <210> 234 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 234 gcagtgcttt gcagtatga 19 <210> 235 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 235 cagaaagcct tgcgagttt 19 <210> 236 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 236 gaatttggat tgccacaga 19 <210> 237 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 237 gaaggtgttc ccactgata 19 <210> 238 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 238 gagagggtcc tgcaaagaa 19 <210> 239 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 239 ugaugaaaau gagcaccag 19 <210> 240 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 240 aaaatccctg ccagaaccac c 21 <210> 241 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 241 aacaagacct tcgactcttc c 21 <210> 242 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 242 aaacgaaagc gagtacact 19 <210> 243 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 243 agatggactt ctctgtacag g 21 <210> 244 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 244 gacattgtct gtctctgagg a 21 <210> 245 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 245 ggacuuaucc uggcuagagt t 21 <210> 246 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 246 ccggaucuac ucgacuccct t 21 <210> 247 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 247 ccuaaucaca cacucuguat t 21 <210> 248 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 248 acugcagaca aaacaccuut t 21 <210> 249 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 249 uccaaccucu ggguccguut t 21 <210> 250 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 250 acugugaccg uuucugugut t 21 <210> 251 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 251 cucagacucu acagauugct t 21 <210> 252 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 252 gggcaaggcc uugcagcuc 19 <210> 253 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 253 augacuguca ggauguugct t 21 <210> 254 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 254 gcaacauccu gacagucauc 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Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 265 ugaccaucac cgaguuuaut t 21 <210> 266 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 266 gattatagga aatgttg 17 <210> 267 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 267 aagaaggcag atgaggggtt a 21 <210> 268 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 268 aacaaagatg gaccaacaca g 21 <210> 269 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 269 ggacgagguc ugcgugaaut t 21 <210> 270 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 270 aagaaacgcg guaaucggac u 21 <210> 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Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 276 gggcaaggcc ttgcagctc 19 <210> 277 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 277 gtacaatgat gacatccgta a 21 <210> 278 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 278 gtacgtccgc gggttgctgc a 21 <210> 279 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 279 aagcaugugg ccugcuaugg a 21 <210> 280 <211> 65 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 280 gatcccgcct caacaacaac aacaacttca agagagttgt tgttgttgtt gaggtttttt 60 ggaaa 65 <210> 281 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 281 aagaagagcu ucgagacuuu c 21 <210> 282 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 282 aactgggaga gtacggtttc c 21 <210> 283 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 283 aagtcggacg caacagagaa a 21 <210> 284 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 284 ggccaaccag augcggcugu u 21 <210> 285 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 285 gauguuugac auccucuucu u 21 <210> 286 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 286 ggcugcaagc aguauuuacu u 21 <210> 287 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 287 ggacagaguc agauuacagu u 21 <210> 288 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 288 agccactgtg gaagaagtat att 23 <210> 289 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 289 cccucugguu ggugauucat t 21 <210> 290 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 290 ggaugauggc accuuccuat t 21 <210> 291 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 291 aattggagat gaagatgtag g 21 <210> 292 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 292 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 297 aactgggcga gtattacatg a 21 <210> 298 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 298 tgaacaaagt gagagacat 19 <210> 299 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 299 aatgtgtgaa tgacaactac t 21 <210> 300 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 300 aatacggact caccttgctt g 21 <210> 301 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 301 ccgccgcuuc cauuuuuccu tt 22 <210> 302 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 302 aggaaaaaug gaagcggcgg gtt 23 <210> 303 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 303 ccuggaacuc accuaccugt t 21 <210> 304 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 304 cuaccuuucu acggacgugt t 21 <210> 305 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 305 gauccggaag uacacgaugt t 21 <210> 306 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 306 gaaggaaucc uccaaguca 19 <210> 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<211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 313 gtgggcataa gtgctgatct a 21 <210> 314 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 314 ctcggtcctg cgattattaa t 21 <210> 315 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 315 aaggccgaga tcagcaaagt tcaagagact ttgctgatct cggccttttt ttt 53 <210> 316 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 316 ggccagccau cacaaucaat t 21 <210> 317 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 317 ggaacuucua aaugaaccat t 21 <210> 318 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 318 gguccaguua agguuuugut t 21 <210> 319 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 319 gguuaccuuc caccuacaat t 21 <210> 320 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 320 aaguggaugc cuuucggguc a 21 <210> 321 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 321 aaggagaaca guucuugcgg c 21 <210> 322 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 322 aagguccagu cauuccaaau g 21 <210> 323 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 323 aggaaggacc uguugaccuu tt 22 <210> 324 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 324 uggugagcuu aaugaaugat t 21 <210> 325 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 325 agaggacauu gagguguaut t 21 <210> 326 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 326 aactgctcaa caccggaatt ttt 23 <210> 327 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 327 ccauccugua caacuucaug ug 22 <210> 328 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 328 caauaaggaa gaagcccuut t 21 <210> 329 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 329 ttauuccuuc uucgggaagu c 21 <210> 330 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 330 ggcuggcuuc auccacugct t 21 <210> 331 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 331 cgaagatgtt gacctggtc 19 <210> 332 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 332 agagttgtcc tgtagttcg 19 <210> 333 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 333 ggaaauaugg gaaagaucct t 21 <210> 334 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 334 ggagacuuuc aaauacauct ttt 23 <210> 335 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 335 aaccttctgg aacccgccca c 21 <210> 336 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 336 aatgttgcag aggggaagga g 21 <210> 337 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 337 aagagaatgg agcacatgaa a 21 <210> 338 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 338 aagatgagca taaccagtga c 21 <210> 339 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 339 aaggccctat atttgcatta a 21 <210> 340 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 340 gttggctgag tgctatgggc tga 23 <210> 341 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 341 gggcttatgg aggaccctat ga 22 <210> 342 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 342 ggaacagcag agaagctcat tcaagagatg agcttctctg ctgttccttt tt 52 <210> 343 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 343 caccgaagca gcacgacttc ttcttcaaga gagaagaagt cgtgctgctt c 51 <210> 344 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 344 agguucagca gcuccacgga tt 22 <210> 345 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 345 gatcccccct cggggatact gtctgattca agagatcaga cagtatcccc gaggtttttg 60 gaaa 64 <210> 346 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 346 gagcatcttc gagcaagaa 19 <210> 347 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 347 catgtggcac cgtttgcct 19 <210> 348 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 348 uggcuuaucu uacacugga 19 <210> 349 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 349 ggcucaaguu caggagugag aacaa 25 <210> 350 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 350 ggaacgacuu caaagagaac uugag 25 <210> 351 <211> 25 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 351 gcauuacaac cagacaguug auauu 25 <210> 352 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 352 guggagcagc ggcaaaauct t 21 <210> 353 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 353 uccucauuug aggaauaaat t 21 <210> 354 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 354 ggaauaaacc uugugcagut t 21 <210> 355 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 355 uaaaccuugu gcaguuguat t 21 <210> 356 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 356 ccuugugcag uuguacagut t 21 <210> 357 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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 373 gactatgatc gactgcggc 19 <210> 374 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 374 gtgagaacga tgagaaata 19 <210> 375 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 375 gttggtgcct aatcactta 19 <210> 376 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 376 gacgtgtcag gaccttcgt 19 <210> 377 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 377 cttaactggt gtacattaa 19 <210> 378 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 378 caauaugauc auccagucca uua 23 <210> 379 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 379 caagcaugca gcuucuaccg uuc 23 <210> 380 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 380 cagucgaguu cucccaccgc ucu 23 <210> 381 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 381 gagaccaucu acgaccuggg cac 23 <210> 382 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 382 gagagugaca uggcgccugu ccu 23 <210> 383 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 383 aaggaaccaa acaguugaaa cug 23 <210> 384 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 384 gagucuucua ucgcucccau cgu 23 <210> 385 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 385 aaauugaggu ggauucacga guu 23 <210> 386 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 386 uaguaucagc gaggaacaaa uua 23 <210> 387 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 387 aagaguauau agcacaggau uua 23 <210> 388 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 388 aagauugccc uugcucgcaa uaa 23 <210> 389 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 389 uaucaccgua ugaaauggaa acu 23 <210> 390 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 390 aaguggaaug gguaacucuu cuu 23 <210> 391 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 391 aacggccguc ccaaagcugg cug 23 <210> 392 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 392 aagaaacaga uucugcgcuu gau 23 <210> 393 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 393 gaauuagguc cacuucaaug ucc 23 <210> 394 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 394 aagauucuuc cauuaaauug ccu 23 <210> 395 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 395 aactaccaga aaggtatacc t 21 <210> 396 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 396 aagacccttg tgctcgttgt c 21 <210> 397 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 407 aaaccggcag gaguuuaccc ag 22 <210> 408 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 408 aagguggcca uuaaggugau u 21 <210> 409 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 409 ucagaagacc acaaucuac 19 <210> 410 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 410 gugaagucaa caugccugct t 21 <210> 411 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 411 cacccuacac gaagccagat t 21 <210> 412 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 412 ggacagauga agcugcuuut t 21 <210> 413 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 413 ggtggacaag aatgctagac 20 <210> 414 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 414 gaaggattga ccagttaacc 20 <210> 415 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 415 gcttgaacat gagcaagagc 20 <210> 416 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 416 aacttccggc agaaacttct g 21 <210> 417 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 417 gccacagcau acauccugut t 21 <210> 418 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 418 cgcacgcuaa ugcuggcaut t 21 <210> 419 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 419 aagcgguguu ucucagaatt gtt 23 <210> 420 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 420 gucggaggga agacagugct t 21 <210> 421 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 421 gcaugugauu gcugacgcct t 21 <210> 422 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 422 aaggcttccc aactgatgca a 21 <210> 423 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 423 aagccaagga agcattgggt a 21 <210> 424 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 424 aagtactaga aggagaggtg g 21 <210> 425 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 425 gttcaaaagc tggatgatct t 21 <210> 426 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 426 aagatacggt ccagaagctt a 21 <210> 427 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 427 ccagcggctc aaggaggttt t 21 <210> 428 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 428 gagtcgggac cacagtttat t 21 <210> 429 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 429 taggctaatt gtactgctct t 21 <210> 430 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 430 ggagatcctc tacaaagggt t 21 <210> 431 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 431 aagagatgct aatagcagtt t 21 <210> 432 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 432 actcttactg ctctccagtt t 21 <210> 433 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 433 cgagacctat cgccgcatcg t 21 <210> 434 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 434 gggcggcttt gccaagtgct t 21 <210> 435 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 435 cccugagauc ccagcgcugt t 21 <210> 436 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 436 gatcaatggc tacacagga 19 <210> 437 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 437 accugucgag gacuucauct t 21 <210> 438 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 438 guacaaggug gagcgcaact t 21 <210> 439 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 439 cccggaaatt tcccgtccc 19 <210> 440 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 440 gagatgacct gcattgccc 19 <210> 441 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 441 acucuugguu cagaaaggat t 21 <210> 442 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 442 ggttcactac tagtaaact 19 <210> 443 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 443 ggaatctact cgtttgtat 19 <210> 444 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 444 ccaagaacca gagaaaagat t 21 <210> 445 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 445 cucuuuagaa acugggcaat t 21 <210> 446 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 446 aagactccag tggtaatcta c 21 <210> 447 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 447 tagagctaca gaacgaaag 19 <210> 448 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 448 gaatgtgaac accaccaaa 19 <210> 449 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> 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Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 455 aaacctcaga atctgctta 19 <210> 456 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 456 gttacttcta tgcctgatt 19 <210> 457 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 457 gaccgagaag guagacaauu gtt 23 <210> 458 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 458 aagaggcaca aggtccacat ctt 23 <210> 459 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 459 augcagcugg agauggcact t 21 <210> 460 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 460 aggaaguugg aaggauccat t 21 <210> 461 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 461 gaacacuuau caagccuaau u 21 <210> 462 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 462 ggagagaaca agcauauuuu u 21 <210> 463 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 463 ugauguaccu auucucuuau u 21 <210> 464 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 464 gauaagagau uucagaagau u 21 <210> 465 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 465 gucaccacag cgcaatggat t 21 <210> 466 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 466 acucuagaug cucagacuut t 21 <210> 467 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 467 aggatccatc ttcctggtta c 21 <210> 468 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 468 uaacaccagt acggacgggt t 21 <210> 469 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 469 ugcuccucuc augugggau 19 <210> 470 <211> 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513 aguggcccgu uuccagcggt t 21 <210> 514 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 514 aaggtgattg gtagaggtgc a 21 <210> 515 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 515 aagcacaaaa gcttgtctcc a 21 <210> 516 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 516 ggaauucaug gccuuuguu 19 <210> 517 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 517 gaucucaagu uucaacacct t 21 <210> 518 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 518 gucuguaaag accaagggat t 21 <210> 519 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 519 ggagcaagua guggggcugt t 21 <210> 520 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 520 guacauccau uauaagcugt t 21 <210> 521 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 521 aacttccagc tggcatatag gtt 23 <210> 522 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 522 aagggucaug cucuaucaga utt 23 <210> 523 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 523 aagaagacau cauccggaau att 23 <210> 524 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 524 aaggagauac cgugcggugc utt 23 <210> 525 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 525 ccggacagtt ccatgtata 19 <210> 526 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 526 ggagaaaagc cuuacagaut t 21 <210> 527 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 527 guauuuggcc gccgacgcat t 21 <210> 528 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 528 aagactggag aaagtggcat g 21 <210> 529 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 529 aaucacugug gagacauuug ctt 23 <210> 530 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 530 aaugaagagg gacacuuccc utt 23 <210> 531 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 531 aaccucgcug caaagaaugu gtt 23 <210> 532 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 532 aacuccaucu guucuccuga ctt 23 <210> 533 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 533 aaaguuugcu uggcacaccu utt 23 <210> 534 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 534 aaggcctaat gccgaacaca 20 <210> 535 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 535 aactttggct gccatcatcc a 21 <210> 536 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 536 uaagcuccaa gagaaaggct t 21 <210> 537 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 537 gcccuauccc uuuacguca 19 <210> 538 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 538 gtggaccatg cactgcatgc ctatagtgag tcgtattac 39 <210> 539 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 539 agatcctggc taactgttc 19 <210> 540 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 540 tacggactca ccttgcttg 19 <210> 541 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 541 cuggacacag uguguuugat t 21 <210> 542 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 542 cugaugacca gcaacuugat t 21 <210> 543 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 543 gcucuucgcc auggacacat t 21 <210> 544 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 544 gcgacagcug gaguaugaat t 21 <210> 545 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 545 ccaugagcac cguucucctt 20 <210> 546 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 546 cuugaccaag gagcucaact t 21 <210> 547 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 547 ggagcucaac uucaccacct t 21 <210> 548 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 548 cggccacucg cuuccgggct t 21 <210> 549 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 549 gcuccgucga cugcgcgcc 19 <210> 550 <211> 21 <212> DNA <213> 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oligonucleotide <400> 555 ggttccatcg aatcctgca 19 <210> 556 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 556 aacaagatca ccttctccga g 21 <210> 557 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 557 aactttgaga acatgagcaa c 21 <210> 558 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 558 cgtggattta tggtctgtg 19 <210> 559 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 559 uggaugucua ucagcgcagt t 21 <210> 560 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide 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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 565 gcuggcaguu cauaggaaut t 21 <210> 566 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 566 cgugcuccaa agucuguuat t 21 <210> 567 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 567 ucaguauguu gugcaagagt t 21 <210> 568 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 568 gaagauacuc uggaauucct t 21 <210> 569 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 569 cuggauuuca cagagacugt t 21 <210> 570 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 570 gcagagauca uagagacugt t 21 <210> 571 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 571 gacuuuccuc agaaugacgt t 21 <210> 572 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 572 cauuacucca ccuguaucat t 21 <210> 573 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 573 ggauuucagg augaacacgt t 21 <210> 574 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 574 gcugcaggac uuccaccagt t 21 <210> 575 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 575 aauuggaaca gcugcagcag a 21 <210> 576 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 576 aagcucugau uuaucaaaag a 21 <210> 577 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 577 cccacaccau uccauucua 19 <210> 578 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial 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<213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 590 gagcagggct tcaccattgt t 21 <210> 591 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 591 ggaaggagaa gaattcgtat t 21 <210> 592 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 592 gatatcatct ttctctgaat t 21 <210> 593 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 593 caactacggc tttgccaat 19 <210> 594 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 594 gcaactcacg ctccggaaa 19 <210> 595 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 595 gccctgagct ggactactt 19 <210> 596 <211> 19 <212> DNA <213> 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aaugccggug acacaacaug a 21 <210> 607 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 607 tacgggagca gatgatgaaa 20 <210> 608 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 608 aacccaaatc catggaaaat a 21 <210> 609 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 609 gagcagtgga aggacagcat tcaagagatg ctgtccttcc actgctcttt ttt 53 <210> 610 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 610 gatcccgagc agtggaagga cagcattcaa gagatgctgt ccttccactg ctcttttttg 60 gaaa 64 <210> 611 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 611 ggaccaggca gagaatgag 19 <210> 612 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 612 aagacacagg ccaacgacua c 21 <210> 613 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 613 aagauuguga agcagaaggc c 21 <210> 614 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 614 aatctccttg cgccacagaa t 21 <210> 615 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 615 aagtcagctg gatgaaccaa g 21 <210> 616 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 616 aagauccgac agagcgccuc a 21 <210> 617 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 617 aatgcaactg cagaagcaga a 21 <210> 618 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 618 aagcaagtcg aggtagattg c 21 <210> 619 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 619 cagcuaacug cacuccgag 19 <210> 620 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 620 ugauauuaug gaagcaaau 19 <210> 621 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 621 aaggcttttc ccagtccttc a 21 <210> 622 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 622 aagatgatgg tgtgccaagt g 21 <210> 623 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 623 aatgttatag gcatccgaga c 21 <210> 624 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 624 aacccaaaca agcgcatcac a 21 <210> 625 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 625 aaagttcgag ttgctatcaa g 21 <210> 626 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 626 gcgcatgagg aaccgcatt 19 <210> 627 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 627 gaccaggagc gcatcaaag 19 <210> 628 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 628 aagccagaac accgagctg 19 <210> 629 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 629 gcggagacag atcaacttg 19 <210> 630 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 630 attggaggat gagaaatcg 19 <210> 631 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 631 tcaacgccat caccaccag 19 <210> 632 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 632 aacgaugaag cccuggagug c 21 <210> 633 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 633 acttcatcag aatggcaggg ttt 23 <210> 634 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 634 aaccggaggt caggtcgaaa t 21 <210> 635 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 635 aagcagagtg acctggtaga t 21 <210> 636 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 636 caccaccauu gaggacgaat t 21 <210> 637 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 637 gugaccaccu uacuacucat t 21 <210> 638 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 638 guuugccagg agugacgaat t 21 <210> 639 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 639 ggcuuuucau guaucagcut t 21 <210> 640 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 640 ggcaauggcu ugguuuuuut t 21 <210> 641 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 641 ggaguacaug gagacagact t 21 <210> 642 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 642 gtcgagacat cttgactga 19 <210> 643 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 643 gacacggatc tgagaatct 19 <210> 644 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 644 ggacgugguu gaggaauuc 19 <210> 645 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 657 aactacggtt gctggagaca g 21 <210> 658 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 658 caacaaccac aaccataac 19 <210> 659 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 659 cataaccaca accaccactt t 21 <210> 660 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 660 tgtgagctca catcttgat 19 <210> 661 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 661 ccaggagttt gacacaatg 19 <210> 662 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 662 gatcaatggc tacacagga 19 <210> 663 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 663 gagccaagaa caaaattgc 19 <210> 664 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 664 gaaagtgcgc cgtgccatc 19 <210> 665 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 665 ccacuguggc auugaaucat t 21 <210> 666 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 666 aacgccacct cgtttgtttt c 21 <210> 667 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 667 gauguggaca gugucugutt 20 <210> 668 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 668 augcagcugg agauggcact t 21 <210> 669 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 669 cgtggatgag gttgagaca 19 <210> 670 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 670 ggtggacaac aacttcaca 19 <210> 671 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 671 gaaggtggag aaccatatc 19 <210> 672 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 672 gcacttgaac tactggtat 19 <210> 673 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 673 aagctgagca agattcagac c 21 <210> 674 <211> 21 <212> DNA <213> 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DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 679 gaagcacaga gugaagacca tt 22 <210> 680 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 680 cgagcaggag aacagcgagt t 21 <210> 681 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 681 gatggttatc caggtggca 19 <210> 682 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 682 cuguuguggu uaaacuccut t 21 <210> 683 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 683 gccttgacaa cgttaggaat c 21 <210> 684 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 684 gcaggaagtt cccaccttga c 21 <210> 685 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 685 gcctgatgaa gaagttcc 18 <210> 686 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 686 gctagaaaaa gctgagatc 19 <210> 687 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 687 cauccuaagg cccgauuuct t 21 <210> 688 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 688 guucccggaa cacaacccut t 21 <210> 689 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 699 ugguggucac agauaccagt t 21 <210> 700 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 700 gucugguaag acuggaguac c 21 <210> 701 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 701 uuggagauga acuggacaau u 21 <210> 702 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 702 cuggacaaua auauggagcu u 21 <210> 703 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 703 agaacuuugu gcuuuaaugu u 21 <210> 704 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 704 uauaggcaua uacuggaugu u 21 <210> 705 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 705 agugaaaacc uugaaagcgu u 21 <210> 706 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 706 agucaugaac cacguuaacu u 21 <210> 707 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 707 aatgagaaca gcaacaactc c 21 <210> 708 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 708 aagttctcag acaatgactg c 21 <210> 709 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 709 tcgagacagt agtggttcta cgtgccgagt actgggcacg tagaaccact actgtttttt 60 <210> 710 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 710 agaugacagg ugcccagagu u 21 <210> 711 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 711 gguagaucaa agcaggaggt t 21 <210> 712 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 712 aacggagucc cugcugcauu utt 23 <210> 713 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 713 aaccauguca ccaguccagu utt 23 <210> 714 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 714 aagccugugu uuggcuuugg att 23 <210> 715 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 715 aaccattatg gaagaagtac att 23 <210> 716 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 716 ggguuauucu gaacauguut t 21 <210> 717 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 717 gcaactggat ttctgtgaag g 21 <210> 718 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 718 gaagcggatt tcttccttct g 21 <210> 719 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 719 aaggagatcg acctggtcaa c 21 <210> 720 <211> 21 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Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 730 aauacaccga caagcaauga ctt 23 <210> 731 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 731 aaagucgguu aacagcgauc utt 23 <210> 732 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 732 cctttcattt ctcctcctt 19 <210> 733 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 733 agctgctcct gtggctctg 19 <210> 734 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 734 gcctcctgcc cagaaggca 19 <210> 735 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 735 ugagagaaag 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ugacauaaac acuccgcucu 110 <210> 792 <211> 110 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 792 ccagagguug uaacguuguc uauauauacc cuguagaacc gaauuugugu gguauccgua 60 uagucacaga uucgauucua ggggaauaua uggucgaugc aaaaacuuca 110 <210> 793 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 793 ccuuggagua aaguagcagc acauaauggu uuguggauuu ugaaaaggug caggccauau 60 ugugcugccu caaaaauaca agg 83 <210> 794 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 794 uugaggccuu aaaguacugu agcagcacau caugguuuac augcuacagu caagaugcga 60 aucauuauuu gcugcucuag aaauuuaagg aaauucau 98 <210> 795 <211> 89 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 795 gucagcagug ccuuagcagc acguaaauau uggcguuaag auucuaaaau uaucuccagu 60 auuaacugug cugcugaagu aagguugac 89 <210> 796 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 796 guuccacucu agcagcacgu aaauauuggc guagugaaau auauauuaaa caccaauauu 60 acugugcugc uuuaguguga c 81 <210> 797 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 797 gucagaauaa ugucaaagug cuuacagugc agguagugau augugcaucu acugcaguga 60 aggcacuugu 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uauauacaua uauauguauu auguacucau 60 auauca 66 <210> 964 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 964 ucaggucuuc agcagaagca gggagguucu cccagugguu uuccuugacu gugaggaacu 60 agccugcugc uuugcucagg agugagcu 88 <210> 965 <211> 63 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 965 aagaaauggu uuaccguccc acauacauuu ugaauaugua ugugggaugg uaaaccgcuu 60 cuu 63 <210> 966 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 966 ugcuacuuga agagagguaa uccuucacgc auuugcuuua cuugcaauga uuauacaagg 60 gcagacucuc ucuggggagc aaa 83 <210> 967 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 967 acugcuaacg aaugcucuga cuuuauugca cuacuguacu uuacagcuag cagugcaaua 60 guauugucaa agcaucugaa agcagg 86 <210> 968 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 968 gccgcaggug cucugacgag guugcacuac ugugcucuga gaagcagugc aaugauauug 60 ucaaagcauc ugggacca 78 <210> 969 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 969 ccaccacuua aacguggaug uacuugcuuu gaaacuaaag aaguaagugc uuccauguuu 60 uggugaugg 69 <210> 970 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 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Homo sapiens <400> 1043 gagagaagca cuggacuuag ggucagaagg ccugagucuc ucugcugcag augggcucuc 60 ugucccugag ccaagcuuug uccucccugg 90 <210> 1044 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1044 auaaaggaag uuaggcugag gggcagagag cgagacuuuu cuauuuucca aaagcucggu 60 cugaggcccc ucagucuugc uuccuaaccc gcgc 94 <210> 1045 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1045 cgaggggaua cagcagcaau ucauguuuug aaguguucua aaugguucaa aacgugaggc 60 gcugcuauac ccccucgugg ggaagguaga aggugggg 98 <210> 1046 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1046 gaaagcgcuu uggaaugaca cgaucacucc cguugagugg gcacccgaga agccaucggg 60 aaugucgugu ccgcccagug cucuuuc 87 <210> 1047 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1047 cgccggccga ugggcgucuu accagacaug guuagaccug gcccucuguc uaauacuguc 60 ugguaaaacc guccauccgc ugc 83 <210> 1048 <211> 114 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1048 uccugcuugu ccugcgaggu gucuugcagg ccgucaugca ggccacacug acgguaacgu 60 ugcaggucgu cuugcagggc uucucgcaag acgacauccu caucaccaac gacg 114 <210> 1049 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RNA <213> Homo sapiens <400> 1061 ucuguuuauc accagauccu agaacccuau caauauuguc ucugcugugu aaauaguucu 60 gaguagugca auauugcuua uaggguuuug guguuuggaa agaacaaugg gcagg 115 <210> 1062 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1062 ucccuggcgu gaggguaugu gccuuuggac uacaucgugg aagccagcac caugcagucc 60 augggcauau acacuugccu caaggccuau gucauc 96 <210> 1063 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1063 guguguguau auguguguug caugugugua uaugugugua uauauguaca cauacacaua 60 cacgcaacac acauauauac augc 84 <210> 1064 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1064 gagggggaag acgggaggaa agaagggagu gguuccauca cgccuccuca cuccucuccu 60 cccgucuucu ccucuc 76 <210> 1065 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1065 agccucguca ggcucagucc ccucccgaua aaccccuaaa uagggacuuu cccggggggu 60 gacccuggcu uuuuuggcg 79 <210> 1066 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1066 acuuggagag aggcuggccg ugaugaauuc gauucaucaa agcgagucau acacggcucu 60 ccucucuuuu agu 73 <210> 1067 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1067 gcauccugua cugagcugcc ccgaggcccu ucaugcugcc cagcucgggg cagcucagua 60 caggauac 68 <210> 1068 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1068 gguacuugaa gagugguuau cccugcugug uucgcuuaau uuaugacgaa ucauacaggg 60 acauccaguu uuucaguauc 80 <210> 1069 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1069 uugguacuug gagagugguu aucccugucc uguucguuuu gcucaugucg aaucguacag 60 ggucauccac uuuuucagua ucaa 84 <210> 1070 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1070 gagaaucauc ucucccagau aauggcacuc ucaaacaagu uuccaaauug uuugaaaggc 60 uauuucuugg ucagaugacu cuc 83 <210> 1071 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1071 guggcagcuu gguggucgua ugugugacgc cauuuacuug aaccuuuagg agugacauca 60 cauauacggc agcuaaacug cuac 84 <210> 1072 <211> 128 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1072 uggaggccuu gcugguuugg aaaguucauu guucgacacc auggaucucc agguggguca 60 aguuuagaga ugcaccaacc uggaggacuc caugcuguug agcuguucac aagcagcgga 120 cacuucca 128 <210> 1073 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1073 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acauuugugg 120 uggc 124 <210> 1091 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1091 gugcugugug uagugcuuca cuucaagaag ugccaugcau gugucuagaa auauguuuug 60 caccuuuugg agugaaauaa ugcacaacag auac 94 <210> 1092 <211> 115 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1092 ccaccuucag cugaguguag ugcccuacuc cagagggcgu cacucaugua aacuaaaaca 60 ugauuguagc cuuuuggagu agaguaauac acaucacgua acgcauauuu ggugg 115 <210> 1093 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1093 caugcugugu gugguacccu acugcagaca guggcaauca uguauaauua aaaaugauug 60 guacgucugu ggguagagua cugcaugaca caug 94 <210> 1094 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1094 caugcugugu gugguacccu acugcagaca guggcaauca uguauaauua aaaaugauug 60 guacgucugu ggguagagua cugcaugaca c 91 <210> 1095 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1095 gugguacccu acugcagacg uggcaaucau guauaauuaa aaaugauugg uacgucugug 60 gguagaguac ugcau 75 <210> 1096 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1096 gugguguccu acucaggaga guggcaauca cauguaauua ggugugauug aaaccucuaa 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uuuugugaaa gaaagugcuu 60 ccuuucagag gguuacucuu ugaga 85 <210> 1115 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1115 ucucaggcag ugacccucua gauggaagca cugucuguug uauaaaagaa aagaucgugc 60 aucccuuuag aguguuacug uuugaga 87 <210> 1116 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1116 gugacccucu agauggaagc acugucuguu gucuaagaaa agaucgugca ucccuuuaga 60 guguuac 67 <210> 1117 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1117 gaagaucuca ggcagugacc cucuagaugg aagcacuguc uguugucuaa gaaaagaucg 60 ugcauccuuu uagaguguua cuguuugaga aaauc 95 <210> 1118 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1118 ucucaagcug ugacugcaaa gggaagcccu uucuguuguc ugaaagaaga gaaagcgcuu 60 cccuuugcug gauuacgguu ugaga 85 <210> 1119 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1119 ucucaagcug ugggucugca aagggaagcc cuuucuguug ucuaaaagaa gagaaagcgc 60 uucccuuugc uggauuacgg uuugaga 87 <210> 1120 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1120 ucaugcugug gcccuccaga gggaagcgcu uucuguuguc ugaaagaaaa caaagcgcuc 60 cccuuuagag guuuacgguu uga 83 <210> 1121 <211> 101 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1121 gcgagaagau cucaugcugu gacucucugg agggaagcac uuucuguugu cugaaagaaa 60 acaaagcgcu ucucuuuaga guguuacggu uugagaaaag c 101 <210> 1122 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1122 ucccaugcug ugacccucua gagggaagca cuuucuguug ucugaaagaa accaaagcgc 60 uucccuuugg agcguuacgg uuugaga 87 <210> 1123 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1123 ucucaggcug ugacccucua gagggaagcg cuuucuguug gcuaaaagaa aagaaagcgc 60 uucccuucag aguguuaacg cuuugaga 88 <210> 1124 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1124 ucucaugcug ugacccucua gagggaagca cuuucucuug ucuaaaagaa aagaaagcgc 60 uucucuuuag aggauuacuc uuugaga 87 <210> 1125 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1125 cucaggcugu gacacucuag agggaagcgc uuucuguugu cugaaagaaa ggaaagugca 60 uccuuuuaga guguuacugu uugag 85 <210> 1126 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1126 ucucaggcug ugucccucua cagggaagcg cuuucuguug ucugaaagaa aggaaagugc 60 auccuuuuag aguguuacug uuugaga 87 <210> 1127 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1127 caugcuguga cccucuagag ggaagcgcuu ucuguugucu gaaagaaaag aaagugcauc 60 cuuuuagagg uuuacuguuu g 81 <210> 1128 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1128 ucucagccug ugacccucua gagggaagcg cuuucuguug ucugaaagaa aagaaagugc 60 aucuuuuuag aggauuacag uuugaga 87 <210> 1129 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1129 ucccaugcug ugacccucca aagggaagcg cuuucuguuu guuuucucuu aaacaaagug 60 ccucccuuua gaguguuacc guuuggga 88 <210> 1130 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1130 ucucaugcag ucauucucca aaagggagca cuuucuguuu gaaagaaaac aaagugccuc 60 cuuuuagagu guuacuguuu gaga 84 <210> 1131 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1131 cucaggcugu gacccuccag agggaaguac uuucuguugu cugagagaaa agaaagugcu 60 ucccuuugga cuguuucggu uugag 85 <210> 1132 <211> 61 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1132 cccucuacag ggaagcgcuu ucuguugucu gaaagaaaag aaagugcuuc cuuuuagagg 60 g 61 <210> 1133 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1133 ucucaggcug ucguccucua gagggaagca cuuucuguug ucugaaagaa aagaaagugc 60 uuccuuuuag aggguuaccg uuugaga 87 <210> 1134 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1134 ucucaagcug ugagucuaca aagggaagcc cuuucuguug ucuaaaagaa aagaaagugc 60 uucucuuugg uggguuacgg uuugaga 87 <210> 1135 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1135 ucuccugcug ugacccucaa gauggaagca guuucuguug ucugaaagga aagaaagugc 60 uuccuuuuug aggguuacug uuugaga 87 <210> 1136 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1136 ucucaggcug ugacccucua aagggaagcg cuuucugugg ucagaaagaa aagcaagugc 60 uuccuuuuag aggguuaccg uuuggga 87 <210> 1137 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1137 ucccaugcug ugacccucua gaggaagcac uuucuguuug uugucugaga aaaaacaaag 60 ugcuucccuu uagaguguua ccguuuggga 90 <210> 1138 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1138 ucccaugcug ugacccucua gaggaagcac uuucuguuug uugucugaga aaaaacaaag 60 ugcuucccuu uagaguuacu guuuggga 88 <210> 1139 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1139 ucucaggcug 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uaaaauaugg aaaaaaaaau 60 cacaauuacu uuugcaucaa ccuaauaa 88 <210> 1171 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1171 auugguguaa aaguaauugc agguuaugcc auuaaaagua augguaaaaa cugcaauuac 60 uuuuacacua ac 72 <210> 1172 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1172 aagguauuag guuggugcaa aaguaauugc aguuuuugcu auuacuuuua augguaaaaa 60 cugcaauuac uuuuacacca accuaauauu ua 92 <210> 1173 <211> 57 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1173 gugcaaaagu aacugcgguu uuugagaagu aauugaaaac cgcaauuacu uuugcag 57 <210> 1174 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1174 ggucggugca aaaguaauug cuguuuuugc cauuaaaaau aauggcauua aaaguaaugg 60 caaaaacggc aaugacuuuu guaccaaucu aauaucu 97 <210> 1175 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1175 aguuggugca aaaguaauug cgguuuuugc cgucgaaaau aauggcaaaa acugcaguua 60 cuuuuguacc aaug 74 <210> 1176 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1176 cauuagguug gugcaaaagg cauugugguu uuugccuaua aaaguaaugg caaaaaccgc 60 aauuccuuuu gcaccaaccu aau 83 <210> 1177 <211> 96 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cugcaaaagu aaucauguuu uuuuccauug uaaguaaugg gaaaaacugu 60 aauuacuuuu guaccaaccu aauagc 86 <210> 1197 <211> 89 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1197 aguuauuaga uuagugcaaa aguaauugca guuuuugcau uacguucuau ggcaaaacug 60 uaauuacuuu uguaccaaca uaauacuuc 89 <210> 1198 <211> 102 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1198 ucuguccauu aggugggugc aaaaguaauc gcgguuuuug ucauuacuuu uaaugguaaa 60 aacuggaauu acuuuugcac ugaccuaaua uuaagccaga ua 102 <210> 1199 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1199 guauuagguu ggugcaaaag uaaucgcggu uuuugucauu acuuucaaug gcaaacacca 60 caauuacuuu ugcaccaacc uaauauaa 88 <210> 1200 <211> 118 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1200 ucugauucug cauguauuag guuggugcaa aaguaaucgc gguuuuuguc auugaaagua 60 auagcaaaaa cugcaauuac uuuugcacca accuaaaagu agucacuguc uucagaua 118 <210> 1201 <211> 111 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1201 gcuauuaggu uggugcaaaa guaaucgcgg uuuuugucau uacuuuaauu acuuuacguu 60 ucauuaauga caaaaaccgc aauuacuuuu gcaccaaccu aauacuugcu a 111 <210> 1202 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aacugcaguu acuuuugcac caac 114 <210> 1213 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1213 uggugcaaaa guaauugcgg uuuuugccau uaaaaguaau gcggccaaaa cugcaguuac 60 uuuugcaccc 70 <210> 1214 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1214 auuagguugg uauaaaauua auugcaguuu uugucauuac uuucaauagc aaaaacugca 60 guuacuuuug caccaaugua auac 84 <210> 1215 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1215 auauuaggcu ggugcaaaag uaauggcggu uuuugccauu acuuuucauu uuuaccauua 60 aaaguaaugg caaaaagcau gauuacuuuu ucaccaaccu 100 <210> 1216 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1216 uugcugcaaa aauaauugca guuuuugcca uuauuuuuaa uaauuauaau aauggccaaa 60 acugcaguua uuuuugcacc aa 82 <210> 1217 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1217 aggguggugc aaaagugauc gugguuuuug caauuuuuua augacaaaaa ccacaauuac 60 uuuugcacca accu 74 <210> 1218 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1218 auuaggaugg ugcaaaagua augugguuuu uuucuuuacu uuuaauggca aagacugcaa 60 uuacuuuugc gccaaccuaa u 81 <210> 1219 <211> 80 <212> 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uaccauuugc acucccugug gcaau 95 <210> 1243 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1243 agcaaagaag uguguugccc ucuaggaaau guguguugcu cugauguaau uagguugaca 60 uacguuuccc ugguagcca 79 <210> 1244 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1244 cgggcagcgg gugccaggca cggugucagc aggcaacaug gccgagaggc cggggccucc 60 gggcggcgcc guguccgcga ccgcguaccc ugac 94 <210> 1245 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1245 gcuaggcgug guggcgggcg ccugugaucc caacuacuca ggaggcuggg gcagcagaau 60 cgcuugaacc cgggaggcga agguugcagu gagc 94 <210> 1246 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1246 ggauucuuau aggacaguau guucuuccag gacagaacau ucuuugcuau uuuguacugg 60 aagaacaugc aaaacuaaaa aaaaaaaaag uuauugcu 98 <210> 1247 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1247 gauauacacu auauuaugua uaaauguaua cacacuuccu auauguaucc acauauauau 60 aguguauaua uuauacaugu auaggugugu auaug 95 <210> 1248 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1248 gguauuguua gauuaauuuu gugggacauu aacaacagca ucagaagcaa caucagcuuu 60 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sapiens <400> 1266 cuccuaugca cccucuuucc auaggugaug agucacaggg cucagggaau gugucugcac 60 cugugacuca ucaccagugg aaagcccauc ccauau 96 <210> 1267 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1267 agcuuaggua ccaauuuggc cacaaugggu uagaacacua uuccauugug uucuuaccca 60 ccauggccaa aauugggccu aag 83 <210> 1268 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1268 uccagccugu gcccagcagc cccugagaac cacgucugcu cugagcuggg uacugccugu 60 ucagaacaaa ugccgguucc cagacgcugc cagcuggcc 99 <210> 1269 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1269 uagccaguca gaaaugagcu uauucauaaa agugcaguau ggugaaguca aucuguaauu 60 uuauguauaa gcuagucucu gauugaaaca ugcagca 97 <210> 1270 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1270 ucuuaucaau gagguagacc auggguucuc auuguaauag uguagaaugu ugguuaacug 60 uggacucccu ggcucugucu caaaucuacu gauuc 95 <210> 1271 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1271 uauuaugcca ugacauugug ucaauaugcg augauguguu gugauggcac agcgucauca 60 cguggugacg caacaucaug acguaagacg ucacaac 97 <210> 1272 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1272 cccccagaau cugucaggca ccagccaggc auugcucagc ccguuucccu cugggggagc 60 aaggaguggu gcuggguuug ucucugcugg gguuucuccu 100 <210> 1273 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1273 acggaagccu gcacgcauuu aacaccagca cgcucaaugu agucuuguaa ggaacagguu 60 gaagugugcc gugguguguc uggaggaagc gccugu 96 <210> 1274 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1274 agcacggccu cuccgaagcc ugcccggcuc cucgggaacc ugccucccgc auggcagcug 60 cugcccuucg gaggccg 77 <210> 1275 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1275 uacuuacucu acgugugugu cacucgauga ccacugugaa gacaguaaaa uguacagugg 60 uucucuugug gcucaagcgu aauguagagu acugguc 97 <210> 1276 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1276 gcuugaugau gcugcugaug cuggcgguga ucccgauggu gugagcugga aauggggugc 60 uacgucaucg uugucaucgu caucaucauc auccgag 97 <210> 1277 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1277 aaagacaugc uguccacagu guguuugaua agcugacaug ggacagggau ucuuuucacu 60 guugugucag uuuaucaaac ccauacuugg augac 95 <210> 1278 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1278 aagucacgug cuguggcucc agcuucauag gaaggcucuu gucugucagg caguggaguu 60 acuuacagac aagagccuug cucaggccag cccugccc 98 <210> 1279 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1279 ugcaugaguu cgucuugguc uaggauuguu ggaggaguca gaaaaacuac cccagggauc 60 cugaaguccu uugggugga 79 <210> 1280 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1280 uucucacccc cgccugacac gggcgacagc ugcggcccgc uguguucacu cgggccgagu 60 gcgucuccug ucaggcaagg gagagcagag ccccccug 98 <210> 1281 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1281 gauugaugcu guugguuugg ugcaaaagua auugcagugc uucccauuua aaaguaaugg 60 cacacacugc aauuacuuuu gcuccaacuu aauacuu 97 <210> 1282 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1282 agagcaucgu gcuugaccuu ccacgcucuc guguccacua gcaggcaggu uuucugacac 60 aggcugcgga auucaggaca gugcaucaug gaga 94 <210> 1283 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1283 gcccuagcuu gguucuaaau cccauggugc cuucuccuug ggaaaaacag agaaggcacu 60 augagauuua gaaucaaguu agg 83 <210> 1284 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1284 uguauccuug guuuuuagua guuuuacuau gaugaggugu gccauccacc ccaucauagu 60 aaacuacuga aaaucaaaga uacaagugcc ugacca 96 <210> 1285 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1285 uugccuaaag ucacacaggu uauagaucug gauuggaacc cagggagcca gacugccugg 60 guucaaaucc agaucuauaa cuugugugac uuuggg 96 <210> 1286 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1286 gggccaaggu gggccagggg ugguguuggg acagcuccgu uuaaaaaggc aucuccaaga 60 gcuuccauca aaggcugccu cuuggugcag cacagguaga 100 <210> 1287 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1287 ugcucggcug uuccuagggu guuucucuca ucucuggucu auaauggguu aaauaguaga 60 gaugagggca acacccuagg aacagcagag gaacc 95 <210> 1288 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1288 ucuauuuguc uuaggugagc uaaaugugug cugggacaca uuugagccaa augucccagc 60 acacauuuag cucacauaag aaaaauggac ucuagu 96 <210> 1289 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1289 aaaaugguga gagcguugag gggaguucca gacggagaug cgaggacccc ucggggucug 60 acccaca 67 <210> 1290 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1290 ucccaucugg acccugcugg gcagggcuuc ugagcuccuu agcacuagca ggaggggcuc 60 caggggcccu cccuccaugg cagccaggac aggacucuca 100 <210> 1291 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1291 ggugagugcg uuuccaagug ugaagggacc cuuccuguag ugucuuauau acaauacagu 60 aggaauguuc cuucuuugcc acucauacac cuuua 95 <210> 1292 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1292 ucuaagaaac gcaguggucu cugaagccug caggggcagg ccagcccugc acugaacgcc 60 uguucuugcc agguggcaga agguugcugc 90 <210> 1293 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1293 cucgggaggg gcgggagggg gguccccggu gcucggaucu cgagggugcu uauuguucgg 60 uccgagccug ggucucccuc uuccccccaa cccccc 96 <210> 1294 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1294 uuagguaauu ccuccacuca aaacccuuca gugacuucca ugacaugaaa uaggaaguca 60 uuggaggguu ugagcagagg aaugaccugu uuuaaaa 97 <210> 1295 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1295 caucauaagg agccuagacu ucccauuuga agguggccau uuccuaccac cuucaaaugg 60 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uguuggguug cauccuaagc ugugcuggag 60 cuucccgaug uacucuguag augucuuugc accuucug 98 <210> 1302 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1302 aaugcuguuu caagguagua ccaguaccuu guguucagug gaaccaaggu aaacacaagg 60 uauugguauu accuugagau agcauuacac cuaagug 97 <210> 1303 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1303 aggguagagg gaugaggggg aaaguucuau aguccuguaa uuagaucuca ggacuauaga 60 acuuuccccc ucaucccucu gcccu 85 <210> 1304 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1304 acugauauau uugucuuauu ugagagcuga ggaguauuuu uaugcaaucu gaaugaucuc 60 agcugucuga aaaugucuuc aauuuuaaag gcuu 94 <210> 1305 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1305 uacuuauuac ugguagugag ucucuaagaa aagaggaggu gguuguuuuc cuccucuuuu 60 cuuugagacu cacuaccaau aauaagaaau acuacua 97 <210> 1306 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1306 auagcuguug ugucacuucc ucaugcugac auauuuacua gaggguaaaa uuaauaaccu 60 ucuaguaaga guggcagucg aagggaaggg cucau 95 <210> 1307 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1307 ucccuuuccc aggggagggg cuggguuuac guugggagaa cuuuuacggu gaaccaggag 60 guucucccaa cguaagccca gccccucccc ucugccu 97 <210> 1308 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1308 aacuuaacau caugcuaccu cuuuguauca uauuuuguua uucuggucac agaaugaccu 60 aguauucugu accagggaag guaguucuua acuauau 97 <210> 1309 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1309 guggggagcc ugguuagacc uggcccagac cucagcuaca caagcugaug gacugaguca 60 ggggccacac ucucc 75 <210> 1310 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1310 cgccuccuac cgcagugcuu gacgggaggc ggagcgggga acgaggccgu cggccauuuu 60 gugucugcuu ccugugggac guggugguag ccgu 94 <210> 1311 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1311 aaccucucuu agccucuguu ucuuuauugc gguagauacu auuaaccuaa aaugagaagg 60 cuaauaguau cuaccacaau aaaauuguug ugaggaua 98 <210> 1312 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1312 aaacccacac cacugcauuu uggccaucga ggguuggggc uuggugucau gccccaagau 60 aaccagcacc ccaacuuugg acagcaugga uuagucu 97 <210> 1313 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1313 cagagaggag cugccacuug ggcacugaaa caauguccau uaggcuuugu uauggaaacu 60 ucuccugauc auuguuuugu guccauugag cuuccaau 98 <210> 1314 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1314 uggcggccug ggcgggagcg cgcgggcggg gccggccccg cugccuggaa uuaaccccgc 60 ugugcuugcu cgucccgccc gcagcccuag gcggcgucg 99 <210> 1315 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1315 uggcuaaggu guuggcucgg gcuccccacu gcaguuaccc uccccucggc guuacugagc 60 acugggggcu uucgggcucu gcgucugcac agauacuuc 99 <210> 1316 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1316 gugagcgggc gcggcaggga ucgcgggcgg guggcggccu agggcgcgga gggcggaccg 60 ggaauggcgc gccgugcgcc gccggcguaa cugcggcgcu 100 <210> 1317 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1317 uggccgacgg ggcgcgcgcg gccuggaggg gcggggcgga cgcagagccg cguuuagucu 60 aucgcugcgg uugcgagcgc uguagggagc cugugcug 98 <210> 1318 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1318 gugacccugg gcaaguuccu gaagaucaga cacaucagau cccuuaucug uaaaaugggc 60 augauccagg aaccugccuc uacgguugcc uugggg 96 <210> 1319 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1319 ugggugaaag gaaggaaaga cauaggauag agucaccucu guccucuguc cucuaccuau 60 agaggugacu guccuauguc uuuccuuccu cuuaccccu 99 <210> 1320 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1320 aucugaguug ggaggguccc ucuccaaaug ugucuugggg ugggggauca agacacauuu 60 ggagagggaa ccucccaacu cggccucugc caucauu 97 <210> 1321 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1321 gaguugggag guucccucuc caaauguguc uugauccccc accccaagac acauuuggag 60 agggacccuc ccaacuc 77 <210> 1322 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1322 accaagugau auucauuguc uaccugagcu agaauacaag uaguuggcgu cuucagagac 60 acuuguaugc uagcucaggu agauauugaa ugaaaaa 97 <210> 1323 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1323 uuuuuuuuua guauuuuucc aucaguguuc auaaggaaug uugcucugua guuuucuuau 60 aguguggcuu ucuuagagca aagaugguuc ccua 94 <210> 1324 <211> 61 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1324 ugggcuaagg gagaugauug gguagaaagu auuauucuau ucauuugccu cccagccuac 60 a 61 <210> 1325 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1325 caguuccuaa caggccucag accaguaccg gucuguggcc uggggguuga ggaccccugc 60 ucuaggcugg uacugcugau gcuuaaaaag agag 94 <210> 1326 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1326 gaucaggagu cugccagugg agucagcaca ccugcuuuuc accugugauc ccaggagagg 60 aagcagcugc cucugaggcc ucaggcucag uggc 94 <210> 1327 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1327 aggaaguguu ggccuguggc ugcacucacu uccuucagcc ccaggaagcc uuggucgggg 60 gcaggaggga gggucaggca gggcuggggg ccugac 96 <210> 1328 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1328 aucacagaca ccuccaagug ugcagggcac uggugggggc cggggcaggc ccagcgaaag 60 ugcaggaccu ggcacuuagu cggaagugag ggug 94 <210> 1329 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1329 ggccuagcca aauacuguau uuuugaucga cauuugguug aaaaauaucu auguauuagu 60 aaaccugugu uguucaagag uccacugugu uuugcug 97 <210> 1330 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1330 cagugcuggg gucucaggag gcagcgcucu caggacguca ccaccauggc cugggcucug 60 cuccuccuca cccuccucac ucagggcaca ggugau 96 <210> 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uggcccagca gcgcagucac guugc 95 <210> 1343 <211> 93 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1343 ccuuccggcg ucccaggcgg ggcgccgcgg gaccgcccuc gugucugugg cggugggauc 60 ccgcggccgu guuuuccugg uggcccggcc aug 93 <210> 1344 <211> 115 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1344 ggugccgagg gccguccggc auccuaggcg ggucgcugcg guaccucccu ccugucugug 60 gcggugggau cccguggccg uguuuuccug guggcccggc cgugccugag guuuc 115 <210> 1345 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1345 gaacauugaa acuggcuagg gaaaaugauu ggauagaaac uauuauucua uucauuuauc 60 cccagccuac aaaaugaaaa aa 82 <210> 1346 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1346 ucuccucgag gggucucugc cucuacccag gacucuuuca ugaccaggag gcugaggccc 60 cucacaggcg gc 72 <210> 1347 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1347 gguaagugcg ccucggguga gcaugcacuu aaugugggug uaugucacuc ggcucggccc 60 acuacc 66 <210> 1348 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1348 guuuaggggu ggaccugaug ucccugagug uaugugguga accugaauuu gccuuggguu 60 uccucauauu cauucaggag ugucaguugc cccuucac 98 <210> 1349 <211> 118 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1349 gcaggugaac uggcaggcca ggaagaggag gaagcccugg aggggcugga ggugauggau 60 guuuuccucc gguucucagg gcuccaccuc uuucgggccg uagagccagg gcuggugc 118 <210> 1350 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1350 cccagggucu ggugcggaga gggcccacag uggacuuggu gacgcuguau gcccucaccg 60 cucagccccu ggg 73 <210> 1351 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1351 gcaugacucu ucaaccucag gacuugcaga auuaauggaa ugcuguccua agguuguuga 60 guugugc 67 <210> 1352 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1352 aacugcccuc aaggagcuua caaucuagcu ggggguaaau gacuugcaca ugaacacaac 60 uagacuguga gcuucuagag ggcaggga 88 <210> 1353 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1353 acugacuuug agucucuccu cagggugcug caggcaaagc uggggaccca gggagagacg 60 uaagugaggg gagaug 76 <210> 1354 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1354 ggccgcggcg cgcaagaugg cggcgggccc gggcaccgcc ccuuccgccc cgccgggcgu 60 cgcacgaggc 70 <210> 1355 <211> 110 <212> RNA <213> Homo 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ggcccggcuc cgggucucgg cccguacagu ccggccggcc augcuggcgg ggcuggggcc 60 ggggccgagc ccgcggcggg gcc 83 <210> 1362 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1362 aaucuaggag gcaggugcuc acuuguccuc cuccaugcuu ggaaaaugca gggaggaggc 60 cauaguggca acuguuacca ugauu 85 <210> 1363 <211> 114 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1363 uuuaggcgcu gaugaaagug gaguucagua gacagcccuu uucaagcccu acgagaaacu 60 gggguuucug gaggagaagg aaggugauga aggaucuguu cucgugagcc ugaa 114 <210> 1364 <211> 111 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1364 gcauccucag gaccugggcu ugggugguag gaggaauugg ugcuggucuu ucauuuugga 60 uuugacucca gccccacagc cucagccacc ccagccaauu gucauaggag c 111 <210> 1365 <211> 109 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1365 gcuuuuauau uguagguuuu ugcucaugca ccaugguugu cugagcaugc agcaugcuug 60 ucugcucaua ccccaugguu ucugagcagg aaccuucauu gucuacugc 109 <210> 1366 <211> 118 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1366 gccuuggugc ugauuccugg gcucugaccu gagaccucug gguucugagc ugugauguug 60 cucucgagcu gggaucuccg gggucuuggu ucagggccgg ggccucuggg uuccaagc 118 <210> 1367 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1367 aggagccacc uuccgagccu ccaguaccac gugucagggc cacaugagcu gggccucgug 60 ggccugaugu ggugcugggg ccucaggggu cugcucuu 98 <210> 1368 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1368 guucuguuau uugcagucag uaacaaagau ucauccuugu guccaucaug caacaaggag 60 aaucuuuguc acuuagugua auuaauagcu ggac 94 <210> 1369 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1369 gugugcauuu gcaggaacuu gugagucucc uauugaaaau gaacaggaga cugaugaguu 60 cccgggaaca cccacaa 77 <210> 1370 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1370 uuagcccugc ggccccacgc accaggguaa gagagacucu cgcuuccugc ccuggcccga 60 gggaccgacu ggcugggc 78 <210> 1371 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1371 uuagugguac uauaccucag uuuuaucagg uguucuuaaa aucaccugga aacacugagg 60 uugugucuca cugaac 76 <210> 1372 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1372 ugaagugcug uggauuucuu ugugaaucac cauaucuaag cuaauguggu ggugguuuac 60 aaaguaauuc auagugcuuc a 81 <210> 1373 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Homo sapiens <400> 1398 cauggaagag gacgcacccg gcugugugca caugugccca gggcccggga cagcgccacg 60 gaagaggacg cacccggcug ugugcacaug ugcccagggc ccgggacagc gccacgg 117 <210> 1399 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1399 auuaggagag uaucuucucu guuuuggcca uguguguacu cacagccccu cacacauggc 60 cgaaacagag aaguuacuuu ccuaau 86 <210> 1400 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1400 gggacguucu gagcucgggg ugggggacgu uugccgguca cugcugcugg cgcccugacu 60 guugccgucc uccagcccca cucaaaggca uccc 94 <210> 1401 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1401 guuccagaca caucucaucu gauauacaau auuuucuuaa auuguauaaa gagaaauuau 60 uguacaucgg augagcugug ucugggau 88 <210> 1402 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1402 gcguuggcug gcagaggaag ggaagggucc agggucagcu gagcaugccc ucagguugcu 60 cacuguucuu cccuagaaug ucaggugaug u 91 <210> 1403 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1403 ggcuggaaag gaagaagcau ucuuucauug guuggugugu auugccuugu caaccaauaa 60 gaggaugcca uuuauccuuu ucugacuagc u 91 <210> 1404 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RNA <213> Homo sapiens <400> 1410 cuugcagaac gaggugaagg aggugguucu gcucagcagu caacaguggc cacaucucca 60 ccugcagcga cuugauggcu uccguguccu uuucguggg 99 <210> 1411 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1411 uuugguacuu gaagagagga uacccuuugu auguucacuu gauuaauggc gaauauacag 60 ggggagacuc uuauuugcgu aucaaa 86 <210> 1412 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1412 uuugguacuu aaagagagga uacccuuugu auguucacuu gauuaauggc gaauauacag 60 ggggagacuc ucauuugcgu aucaaa 86 <210> 1413 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1413 guagcugagg ggaugguaga ccggugacgu gcacuucauu uacgauguag gucacccguu 60 ugacuaucca ccagcgcc 78 <210> 1414 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1414 acuuccuggu auuugaagau gcgguugacc auggugugua cgcuuuauuu gugacguagg 60 acacaugguc uacuucuucu caauauca 88 <210> 1415 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1415 ugcuacuucu ccugagccau ucugagccuc aaucacuugc cagagagauu gguucaggaa 60 uuugucaggg auagcc 76 <210> 1416 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1416 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<213> Homo sapiens <400> 1423 gugaggacuc gggaggugga ggguggugcc gccggggccg ggcgcuguuu cagcucgcuu 60 cuccccccac cuccucucuc cucag 85 <210> 1424 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1424 guggguacgg cccagugggg gggagaggga cacgcccugg gcucugccca gggugcagcc 60 ggacugacug agccccugug ccgcccccag 90 <210> 1425 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1425 gugagggcau gcaggccugg auggggcagc ugggaugguc caaaagggug gccucaccag 60 cccuguguuc ccuag 75 <210> 1426 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1426 guggggccag gcgguggugg gcacugcugg ggugggcaca gcagccaugc agagcgggca 60 uuugaccccg ugccacccuu uuccccag 88 <210> 1427 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1427 gugggcgggg gcaggugugu gguggguggu ggccugcggu gagcagggcc cucacaccug 60 ccucgccccc cag 73 <210> 1428 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1428 guggguaggg uuugggggag agcgugggcu gggguucagg gacacccucu caccacugcc 60 cucccacag 69 <210> 1429 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1429 gucagugucu gggcggacag cugcaggaaa gggaagacca aggcuugcug ucuguccagu 60 cugccacccu acccugucug uucuugccac ag 92 <210> 1430 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1430 gugaguggga ggccagggca cggcaggggg agcugcaggg cuaugggagg ggccccagcg 60 ucugagcccu guccucccgc ag 82 <210> 1431 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1431 gugaguggga ggccagggca cggcaggggg agcugcaggg cuaugggagg ggccccagcg 60 ucugagcccu guccucccgc ag 82 <210> 1432 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1432 gugagugugg gguggcuggg gggggggggg gggggccggg gacggcuugg gccugccuag 60 ucggccugac cacccacccc acag 84 <210> 1433 <211> 102 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1433 gugagugaca ggggaaaugg ggauggacug gaagugggca gcauggagcu gaccuucauc 60 auggcuuggc caacauaaug ccucuucccc uugucucucc ag 102 <210> 1434 <211> 102 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1434 gugggagggc ccaggcgcgg gcaggggugg ggguggcaga gcgcuguccc gggggcgggg 60 ccgaagcgcg gcgaccguaa cuccuucugc uccguccccc ag 102 <210> 1435 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1435 gugaguggga gccccagugu gugguugggg ccauggcggg ugggcagccc agccucugag 60 ccuuccucgu cugucugccc cag 83 <210> 1436 <211> 93 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1436 cuaaaacugg aucaauuaua ggagugaaau aaagguccau cuccugccua uuuauuacuu 60 ugcuuuggua auaaaucuau uuuuaaaaga acc 93 <210> 1437 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1437 aucuuauucc gagcauucca guaacuuuuu uguguaugua cuuagcugua cuauaaguag 60 uugguuugua ugagaugguu aaaaa 85 <210> 1438 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1438 aucuuauucc gagcauucca guaacuuuuu uguguaugua cuuagcugua cuauaaguag 60 uugguuugua ugagaugguu aaaaa 85 <210> 1439 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1439 aucuuauucc gagcauucca guaacuuuuu uguguaugua cuuagcugua cuauaaguag 60 uugguuugua ugagaugguu aaaaa 85 <210> 1440 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1440 auuuauguau aggccuuuag aucaucugau guugaauacu cuuuaaguga ucuaaaggcc 60 uacauauaaa 70 <210> 1441 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1441 uuuauaugua ggccuuuaga ucacuuaaag aguauucaac aucagaugau cuaaaggccu 60 auacauaaa 69 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RNA <213> Homo sapiens <400> 1509 ccucauggca guguucugga auccuacgug agggacaauc auucagaccc acguagcagu 60 guucuggaau ucugugugag gga 83 <210> 1510 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1510 ggauuguggg gggucgcucu aggcaccgca gcacugugcu ggggauguug cagcugccug 60 ggagugacuu cacacagucc uc 82 <210> 1511 <211> 143 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1511 cagaaagccc aguuaaauuu gaauuucaag uaaacaauga auaauugugu auguaagaau 60 aucccauaca auauuuggga cauacuuaug cuaaaaauua uuccuugcuu aucugaaauu 120 caaauguaac uaggauuccu gua 143 <210> 1512 <211> 138 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1512 ggaugcccag cuaguuugaa uuuuagauaa acaacgaaua auuucguagc auaaauaugu 60 cccaagcuua guuugggaca uacuuaugcu aaaaaacauu auugguuguu uaucugagau 120 ucagaauuaa gcauuuua 138 <210> 1513 <211> 138 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1513 ggaugcccag cuaguuugaa uuuuagauaa acaacgaaua auuucguagc auaaauaugu 60 cccaagcuua guuugggaca uacuuaugcu aaaaaacauu auugguuguu uaucugagau 120 ucagaauuaa gcauuuua 138 <210> 1514 <211> 138 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1514 ggaugcccag cuaguuugaa uuuuagauaa acaacgaaua auuucguagc auaaauaugu 60 cccaagcuua guuugggaca uacuuaugcu aaaaaacauu auugguuguu uaucugagau 120 ucagaauuaa gcauuuua 138 <210> 1515 <211> 138 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1515 ggaugcccag cuaguuugaa uuuuagauaa acaacgaaua auuucguagc auaaauauuu 60 cccaagcuua guuugggaca uacuuaugcu aaaaaacauu auugguuguu uaucugagau 120 ucaaaauuaa gcauuuua 138 <210> 1516 <211> 150 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1516 aaugcagaag cacagcuaaa auuugaauuu cagauaaaca aauuuuucuu agaauaagua 60 ugucuccaug caacauuugg gacauacuua ugcuaaaaua uuauuugugu uucaucugaa 120 auucaaauuc aacuggacau ccuguauuuu 150 <210> 1517 <211> 150 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1517 ugcccggccu cccauuaaau ugguuuuuca gacaaaucac aaauuuguuu agguauaagu 60 auaucccaug uaaucuuugg gacauacuua ugcuaaaaua auuguuccuu guugauugga 120 aauuuuaauu uuaauuaggu guccuguauu 150 <210> 1518 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1518 aacaaauaau uugguaauau auguauggcc cacacaauau uuaggacaac aauauuuggg 60 acauacuuau gcuaaaaaag uauuuguuga 90 <210> 1519 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1519 acaacauguu uuuaggacau guaugucugg ugcaauaauu gggacauacu uaugcuaaaa 60 aaauuagugu uc 72 <210> 1520 <211> 128 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1520 cccauuuaaa cuugaauuuc auauaaacac cguaauuuuc agcauuagug uaucacaugc 60 aguauuuggg acauacuuau gcuaaaaaau uagguggugu ugaucugaaa uuccagugua 120 gaugggca 128 <210> 1521 <211> 138 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1521 ggaugcccag cuaguuugaa uuuuagauaa acaacgaaua auuucguagc auaaauaugu 60 cccaagcuua guuugggaca uacuuaugcu aaaaaacauu auugguuguu uaucugagau 120 ucagaauuaa gcauuuua 138 <210> 1522 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1522 ggcugggcaa cauagcgaga ccucaacucu acaauuuuuu uuuuuuuaaa uuuuagagac 60 ggggucuugc ucuguugcca ggcuuu 86 <210> 1523 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1523 aaacacuuga gcccagcggu uugaggcuac agugagaugu gauccugcca caucucacug 60 uagccucgaa ccccugggcu caagugauuc a 91 <210> 1524 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1524 aagauccugc uguuucuacc auuaguuuug aauguuuauu guaaagauac uuuucaacuc 60 uaaugggaga gacagcagga uucucc 86 <210> 1525 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1525 gugagcaguc uccaccaccu ccccugcaaa cguccagugg ugcagaggua auggacguug 60 gcucuggugg ugauggacag uccga 85 <210> 1526 <211> 149 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1526 caucaagacc cagcugaguc acugucacug ccuaccaauc ucgaccggac cucgaccggc 60 ucgucugugu ugccaaucga cucggcgugg cgucggucgu gguagauagg cggucaugca 120 uacgaauuuu cagcucuugu ucuggugac 149 <210> 1527 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1527 acauuaugaa gcaaguauua uuaucccugu uuuacaaaua aggaaauaaa cucagggagg 60 ugaaugugau caaagauag 79 <210> 1528 <211> 71 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1528 aguaucauga auuagaaacc uacuuauuac auaguuuaca uaagaagcgu gaugaugcug 60 cugaugcugu a 71 <210> 1529 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1529 acugaggucc ucaaaacuga ggggcauuuu cugugguuug aaaggaaagu gcacccaguu 60 uuggggaugu caa 73 <210> 1530 <211> 96 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gccaguccug ugccugccgc cuuugugcug uccuuggagg gaggcagaag 60 caggaugaca augagggcaa 80 <210> 1545 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1545 ucggcaucug cugaguaccg ccaugucugu ugggcaucca cagucuccca ccaggcauug 60 uggucuccgc ugacgcuuug 80 <210> 1546 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1546 cucuaggaug ugcucauugc augggcugug uauaguauua uucaauaccc agagcaugca 60 gugugaacau aauagagauu 80 <210> 1547 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1547 accucuaccu cccggcagag gaggcugcag aggcuggcuu uccaaaacuc ugcccccucc 60 gcugcugcca aguggcuggu 80 <210> 1548 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1548 cgugugagcc cgcccugugc ccggcccacu ucugcuuccu cuuagcgcag gagggguccc 60 gcacugggag gggcccucac 80 <210> 1549 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1549 ugagaggccg caccuugccu ugcugcccgg gccgugcacc cgugggcccc agggcgacgc 60 ggcgggggcg gcccuagcga 80 <210> 1550 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1550 uauaggcaug ugccaccaca ccuggcuuaa augugucauu uaaaaauuca ggccaggcac 60 aguggcucau gccugua 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gcgggcugag cgcugccagu cagcgcucac auuaaggcug 60 acagcgcccu gccuggcucg gccggcgaag cuc 93 <210> 1565 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1565 gugcugcagg uguuggagag cagugugugu ugccugggga cuguguggac ugguaucacc 60 cagacagcuu gcacugacuc cagacccugc cgucau 96 <210> 1566 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1566 cagacguguc auccccagau acaauggaca auaugcuauu auaaucguau ggcauugucc 60 uugcuguuug gagauaauac ugcugac 87 <210> 1567 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1567 auggucccuc ccaauccagc cauuccucag accagguggc ucccgagcca ccccaggcug 60 uaggaugggg gugagaggug cuag 84 <210> 1568 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1568 ggacaggcac cugaggcucu guuagccuug gcucuggguc cugcuccuua gagcagaggc 60 agagaggcuc agggucuguc u 81 <210> 1569 <211> 105 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1569 gcccccuuuu cacgcauuug uguuuuacca ccuccaggag acugcccaaa gacucuucag 60 uaucauggag uugguaaagc acagaugcau gaauaauuca acgug 105 <210> 1570 <211> 110 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1570 accuuccuga aagagguugg ggcaggcagu gacuguucag acguccaauc ucuuugggac 60 gccucuucag cgcugucuuc ccugccucug ccuuuaggac gagucucaaa 110 <210> 1571 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1571 ggcgccucug cagcuccggc ucccccuggc cucucgggaa cuacaagucc cagggggccu 60 ggcggugggc ggcgggcgga agaggcgggg 90 <210> 1572 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1572 gguguuaggg ccaacaucuc uuggucuuuc cccugugguc ccaagauggc uguugcaacu 60 uaacgccau 69 <210> 1573 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1573 ggagcucagc cacagauguc cagccacaau ucucgguugg ccgcagacuc guacaagaau 60 ugcguuugga caaucagugg cgaagccc 88 <210> 1574 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1574 ggucuggcug uuguggugug caaaacuccg uacauugcua uuuugccaca cugcaacacc 60 uuacag 66 <210> 1575 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1575 cugcccucuu caacaaaauc acugaugcug gagucgccug agucaucacu cagcaccagg 60 auauuguugg agaggacag 79 <210> 1576 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1576 gcucgacucc uguuccugcu gaacugagcc aguguguaaa augagaacug 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1590 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1590 aaaugguuau guccuuugcc uauucuauuu aagacacccu guaccuuaaa uagaguaggc 60 aaaggacaga aacauuu 77 <210> 1591 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1591 accagcucug uugggacaag aggacggucu ucuuuuggaa ggaagaccau caucuugucc 60 gaagagagcu ggu 73 <210> 1592 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1592 auggauuuga uugaaugauu cucccauuuc cacauggaga guggagccca gagaauuguu 60 uaaucaugua uccau 75 <210> 1593 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1593 gcgggcuucg cgggcgaagg caaagucgau uuccaaaagu gacuuuccuc acucccguga 60 agucggc 67 <210> 1594 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1594 gagaaugggu agaggaagcu guggagagaa cucacggugc cugugguucg agauccccgc 60 cuuccuccuc cuuuccuc 78 <210> 1595 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1595 augauuauau gagggacaga ugccagaagc acugguuaug auuugcaucu ggcauccguc 60 acacagauaa uuau 74 <210> 1596 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1596 ggccaggccc aucagggcuu guggaauggg aaggagaagg gacgcuuccc cuucugcagg 60 ccugcugggu guggcu 76 <210> 1597 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1597 uuccucuggc aaguaaaaaa cucucauuuu ccuuaaaaaa ugagaguuuu uuacuugcaa 60 uaggaa 66 <210> 1598 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1598 guacuugggc aguaguguag agauugguuu gccuguuaau gaauucaaac uaaucucuac 60 acugcugccc aagagc 76 <210> 1599 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1599 cuugucaugu cuuacccagu cuccggugca gccuguuguc aaggcugcac cggagacugg 60 guaagacaug acaag 75 <210> 1600 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1600 cuugucaugu cuuacccagu cuccggugca gccuugacaa caggcugcac cggagacugg 60 guaagacaug acaag 75 <210> 1601 <211> 63 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1601 gagucgagga cugguggaag ggccuuuccc cucagaccaa ggcccuggcc ccagcuucuu 60 cuc 63 <210> 1602 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1602 ggugggaugg guagagaagg agcucagagg acggugcgcc uuguuucccu ugagcccucc 60 cucucucauc ccacc 75 <210> 1603 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1603 cagaaauugu aaagaacucu uaaaacccaa uaguaaaaag acaaccuguu gaguuuuaag 60 aguucuuuau auauucug 78 <210> 1604 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1604 uguauccaau guguagucuu uuaucccuca cauggaguaa aauaugaugg auaaaagacu 60 acauauuggg uaca 74 <210> 1605 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1605 ucacuuuggu gccuaggcug agacugcagu ggugcaaucu caguucacug cagccuugac 60 cuccugggcu cagguga 77 <210> 1606 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1606 ugcccaggcu ggagcgagug caguggugca gucaguccua gcucacugca gccucgaacu 60 ccugggcu 68 <210> 1607 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1607 aauaugaaac ugacugaaua gguaggguca uuuuucugug acugcacaug gcccaaccua 60 uucaguuagu uccauauu 78 <210> 1608 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1608 uacaggucug uagccuggga gcaauggggu guaugguaua gggguagccu cgugcuccug 60 ggcuacaaac cugua 75 <210> 1609 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1609 cccuccucgg cacuuccccc accucacugc ccgggugccc acaagacugu ggacagugag 60 guagagggag ugccgaggag gg 82 <210> 1610 <211> 76 <212> RNA <213> Homo 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uagaaggggu 60 gaaauuuaaa cgucugugau ccug 84 <210> 1656 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1656 caggaucaca gacguuuaaa uuacacuccu ucugcugugc cuuacagcag uagaaggggu 60 gaaauuuaaa cgucugugau ccug 84 <210> 1657 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1657 caggaucaca gacguuuaaa uuacacuccu ucugcugugc cuuacagcag uagaaggggu 60 gaaauuuaaa cgucugugau ccug 84 <210> 1658 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1658 cagugcgacg ggcggagcuu ccagacgcuc cgccccacgu cgcaugcgcc ccgggaaagc 60 guggggcgga gcuuccggag gccccgcccu gcug 94 <210> 1659 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1659 gcgacgggcg gagcuuccag acgcuccgcc ccacgucgca ugcgccccgg gaaagcgugg 60 ggcggagcuu ccggaggccc cgcccugc 88 <210> 1660 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1660 cagugcgacg ggcggagcuu ccagacgcuc cgccccacgu cgcaugcgcc ccgggaaagc 60 guggggcgga gcuuccggag gccccgcccu gcug 94 <210> 1661 <211> 153 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1661 gcuccgcccc acgucgcaug cgccccggga acgcgugggg cggagcuucc ggaggccccg 60 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1667 gaauggaaga agaaggcggu cggucugcgg gagccaggcc gcagagccau ccgccuucug 60 uccauguc 68 <210> 1668 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1668 agccugcggu uccaacaggc gucugucuac guggcuucaa ccaaguucaa agucacgcgg 60 agagauggcu uuggaaccag gggcu 85 <210> 1669 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1669 gcuggcccug ggcagcgugu ggcugaaggu caccauguuc uccuuggcca uggggcugcg 60 cggggccagc 70 <210> 1670 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1670 ggcgccuccu gcucugcugu gccgccaggg ccuccccuag cgcgccuucu ggagaggcuu 60 ugugcggaua cggggcugga ggccu 85 <210> 1671 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1671 gccucaguug ccccaucugu gcccugggua ggaauauccu ggauccccuu gggucugaug 60 ggguagccga ugc 73 <210> 1672 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1672 cuggggucac cugucuggcc agcuacgucc ccacggcccu ugucagugug gaagguagac 60 ggccagagag gugaccccgg 80 <210> 1673 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1673 ggggucaccu cucuggccgu cuaccuucca cacugacaag ggccgugggg acguagcugg 60 ccagacaggu gacccc 76 <210> 1674 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1674 ggaagggauu cugggagguu guagcagugg aaaaaguucu uuucuuccuc ugaucgcccu 60 cucagcucuu uccuucu 77 <210> 1675 <211> 55 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1675 uccugcguag gaucugagga guggacgagu cucauuaccc agcuccugag cagga 55 <210> 1676 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1676 agguggcagg gccagccacc aggagggcug cgugccaccc gggcagcucu gcugcucacu 60 ggcaguguca ccu 73 <210> 1677 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1677 ccgcagccgc cgcgccgggc ccggguuggc cgcugacccc cgcggggccc ccggcggccg 60 gggcgggggc gggggcugcc ccgg 84 <210> 1678 <211> 64 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1678 gggugggggc ggggcggcag gggccucccc cagugccagg ccccauucug cuucucuccc 60 agcu 64 <210> 1679 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1679 ggcgagggga ggcgcaggcu cggaaaggcg cgcgaggcuc caggcuccuu cccgauccac 60 cgcucuccuc gcu 73 <210> 1680 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1680 gacugugcuc ucacuguuca cccagcacua gcaguaccag acgguucugu ggaguccugg 60 ggaauggaga gagcacaguc 80 <210> 1681 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1681 gacucugcuc ucacuguuca cccagcacua gcaguaccag augguucugu ggaguccugg 60 ggaauggaga gagcacaguc 80 <210> 1682 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1682 ggugacucca gggacugccu uaggagaaag uuucuggaag uucugacauu ccagaaacuu 60 ucuccuaagg cagucccugg gagucacu 88 <210> 1683 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1683 gugacuccca gggacugccu uaggagaaag uuucuggaau gucagaacuu ccagaaacuu 60 ucuccuaagg cagucccugg agucac 86 <210> 1684 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1684 gguggucgag ggaaucugag aaggcgcaca agguuugugu ccaauacagu ccacaccuug 60 cgcuacucag gucugcucgu gcccu 85 <210> 1685 <211> 52 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1685 gggauaugaa gaaaaauaag aggcuaggau ugccucuuau uuuuacaugc cc 52 <210> 1686 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1686 uauuaauaug gaagggagaa gagcuuuaau gauuggaguc auuuucagag cauuaaagcu 60 cuucucccuu ccauauuaau g 81 <210> 1687 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1687 auuaauaugg aagggagaag agcuuuaaug cucugaaaau gacuccaauc auuaaagcuc 60 uucucccuuc cauauuaau 79 <210> 1688 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1688 ggcaccauua gguagacugg gauuuguugu ugagcgcagu aagacaacaa caaaaucacu 60 agucuuccag auggggcc 78 <210> 1689 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1689 gcgcccgccg ggucuagugg uccuaaacau uucacaauug cgcuacagaa cuguugaacu 60 guuaagaacc acuggaccca gcgcgc 86 <210> 1690 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1690 caguagcuau uuagugugau aauggcguuu gauaguuuag acacaaacac cauugucaca 60 cuccacagcu cug 73 <210> 1691 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1691 acuuuauacg uguaauugug augaggaugg auagcaagga agccgcuccc accugacccu 60 cacggccucc guguuaccug uccucuaggu gggacgcucg 100 <210> 1692 <211> 63 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1692 uuguugcuau cuagguuagu gaaggcuauu uuaauuuuuu uaaaauuucu uucacuacuu 60 agg 63 <210> 1693 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1693 aagguugcgg ugcaugugau gaagcaaauc aguaugaaug aauucaugau acuguaaacg 60 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<213> Homo sapiens <400> 1700 gacucuggga cgcucagacg ccgcgcgggg cggggauugg ucuguggucc ucucucggcu 60 ccucgcggcu cgcggcggcc gacgguu 87 <210> 1701 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1701 ugucacuccg ccagcaucau gaagugcacu caugauaugu uugccccauc agcgugucac 60 gagggcauuu caugaugcag gcgggguugg ca 92 <210> 1702 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1702 aggucauaga aagacauagu ugcaagaugg gauuagaaac cauaugucuc aucagcaccc 60 uauguccuuu cucugcccu 79 <210> 1703 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1703 uaagcugagu gcauugugau uuccaauaau ugaggcagug guucuaaaag cugucuacau 60 uaaugaaaag agcaaugugg ccagcuug 88 <210> 1704 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1704 acggcaucuu ugcacucagc aggcaggcug gugcagcccg ugguggggga ccauccugcc 60 ugcugugggg uaaggacggc ugu 83 <210> 1705 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1705 gugagguggg ggccagcagg gagugggcug ggcugggcug ggccaaggua caaggccuca 60 cccugcaucc cgcacccag 79 <210> 1706 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1706 gugagcugcu ggggacgcgg gucggggucu gcagggcggu gcggcagccg ccaccugacg 60 ccgcgccuuu gucugugucc cacag 85 <210> 1707 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1707 aauagagggu gcacaggcac gggagcucag gugaggcagg gagcugagcu caccugaccu 60 cccaugccug ugcacccucu auu 83 <210> 1708 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1708 agugauauaa uagagggugc acaggcaugg gaggucaggu gagcucagcu cccugccuca 60 ccugagcucc cgugccugug cacccucuau uggcu 95 <210> 1709 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1709 uucaguaggu uggguucauu ucauuuucau gacaacccua uaugggaaaa uguugugaaa 60 augaaaugag cccagcccau ugaa 84 <210> 1710 <211> 180 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1710 cgcgacugcg gcggcggugg uggggggagc cgcggggauc gccgagggcc ggucggccgc 60 cccgggugcc gcgcggugcc gccggcggcg gugaggcccc gcgcgugugu cccggcugcg 120 gucggccgcg cucgaggggu ccccguggcg uccccuuccc cgccggccgc cuuucucgcg 180 <210> 1711 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1711 gcuuggaaca ggcaccugug ugugcccaag uguuucuagc aaacacaggg accugagugu 60 cuaagc 66 <210> 1712 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RNA <213> Homo sapiens <400> 1718 cuuucggcca gcgggacggc auccgaggug ggcuaggcuc gggcccgugg cgggugcggg 60 ggugggagg 69 <210> 1719 <211> 117 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1719 ugugucccau aauuaaauaa ugaaaucuga aaucaccaau aaugggacac uaaugugauu 60 aauguuguug ugucccauua uuggugauuu cagauuucau auaugauuaa ggacaua 117 <210> 1720 <211> 56 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1720 uauuuaagaa aacaccaugg agaugaaaug ccuuugauuu uuuuuuucuu uuugua 56 <210> 1721 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1721 ucuacaagca gauacaagga ugcccuugua cacaacacac gugcugcuug uauagacaug 60 aguguugucu acgagggcau ccuugugucu gugugugug 99 <210> 1722 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1722 gaaagaagaa cuggacaaaa uuaaaaugcu cuucugucau uguaauaguu cauaugggca 60 cugacaggag agcauuuuga cuuugucaag ugugucugcu 100 <210> 1723 <211> 96 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1723 caccuucucg cagaggcucu ugaccuggga cucggacagc ugcuugcacu cguucagcug 60 cucgauccac ugguccagcu ccuuggugaa caccuu 96 <210> 1724 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1724 uguguuuucc ucaacgcuca caguuacacu ucuuacucuc aauccauuca uauugaaaau 60 gaugaguagu gacugaugaa gcacaaauca gccaa 95 <210> 1725 <211> 97 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1725 cccgggaccu ugguccaggc gcuggucugc guggugcucg gguggauaag ucugaucuga 60 gcaccacaca ggccgggcgc cgggaccaag ggggcuc 97 <210> 1726 <211> 99 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1726 cuguaaacuu gaagguaggg aacucugucu ucacucauga guaccuucca acacgagcuc 60 ucaggaguaa agacagaguu cccuaccuuc aauguggau 99 <210> 1727 <211> 105 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1727 gcgggcggcg gcggcggcag cagcagcagg ugcggggcgg cggccgcgcu ggccgcucga 60 cuccgcagcu gcucguucug cuucuccagc uugcgcacca gcucc 105 <210> 1728 <211> 111 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1728 aguaaggucc gucaguugua augagaccca gugcaagugu agaugccgac uccguggcag 60 aguucagcgu uucacacugc cuggucucug ucacucuauu gaauuagauu g 111 <210> 1729 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1729 ugaggaugaa agacccauug aggagaaggu ucugcuggcu gagaaccuuc cucuccaugg 60 gucuuucauc cuca 74 <210> 1730 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1730 auauaugaaa uguagagauu gaucaaaaua guuucuauca aaauaguuuu gaucaaucuc 60 ugcaauuuua uauau 75 <210> 1731 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1731 auauauauau acggaauaua uauacggaau auauauauac ggaauauaua uauacggaau 60 auguauacgg aauauauaua u 81 <210> 1732 <211> 65 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1732 ucuagacugg uauagcugcu uuuggagccu caccugcuga gagcucacag cuguccuucu 60 cuaga 65 <210> 1733 <211> 65 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1733 ucuagacugg uauagcugcu uuuggagccu caccugcuga gagcucacag cuguccuucu 60 cuaga 65 <210> 1734 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1734 auguuauugc ugcugcuguc acauuuacau gaaaauaaaa uguaaauuau uuuauuucua 60 ucaaauaagg acuagucugc agugauau 88 <210> 1735 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1735 ucuuugugau uaccaugaga cucauguaaa acaucuuaga cuauuacaag auguuuuaug 60 agucucauga uaaucacaaa ga 82 <210> 1736 <211> 102 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1736 auauauauau auggaaugua uauacggaau auauauauau auggaaugua uauacggaau 60 auauauauau auggaaugua uauacggaau auauauauau au 102 <210> 1737 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1737 acaucacuau uguagaaccu aagauuggcc guuugagaug uccuuucaag uuuuugcauu 60 ucugaugu 68 <210> 1738 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1738 ggaugauaag uuauggggcu ucuguagaga uuucuaugag aacaucucua aggaacuccc 60 ccaaacugaa uuc 73 <210> 1739 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1739 uugguuaaag cgccugucua guaaacagga gauccugggu ucgaauccca gcggugccuc 60 cguguuuccc ccacgcuuuu gccaa 85 <210> 1740 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1740 ggcaguggcc agagcccugc agugcugggc augggcuucu cgugggcucu ggccacggcc 60 <210> 1741 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1741 gaauccgguc cguacaaacu cugcuguguu gaaugauugg ugaguuuguu ugcucauuga 60 uugaaucacu gcagaguuug uacggaccgg auuc 94 <210> 1742 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1742 cguggugagg auauggcagg gaaggggagu uucccucuau ucccuucccc ccaguaaucu 60 ucaucaug 68 <210> 1743 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uacccuaccu gaagacuuga gauuauaguc uuugggggga ugggcaaagu 60 ac 62 <210> 1750 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1750 cucaccucau ucauuuaccu ucucuuacag aucacuuuuc ugcacuggac agugaucugu 60 aagagaaagu aaaugaaaga ggugag 86 <210> 1751 <211> 61 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1751 cgcgcgugcg cccgagcgcg gcccgguggu cccucccgga caggcguucg ugcgacgugu 60 g 61 <210> 1752 <211> 93 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1752 ucuucacuuu caagaguggc aaagucuuuc cauauguaug uauguauguc uguuacacau 60 auggaaagac uuugccacuc uuuaaaguga aga 93 <210> 1753 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1753 ucacuuuaaa gaguggcaaa gucuuuccau auguguaaca gacauacaua cauacauaug 60 gaaagacuuu gccacucuug aaaguga 87 <210> 1754 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1754 ccugggaggu gugauaucau gguuccuggg aggugugauc cugugcuucc ugggaggugu 60 gauaucgugg uuccuggg 78 <210> 1755 <211> 148 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1755 gauccugugc ucccuggggg gucugauccu gugcuuccug ggagguguga uaucaugguu 60 ccugggaggu gugaucccgu gcuuccuggg aggugugaua uugugguucc ugggaggugu 120 gaucccgugc ucccugggag gugugauc 148 <210> 1756 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1756 gggaggugug auaucguggu uccugggagg ugugauaucg ugguuccugg gaggugugau 60 auugugguuc cu 72 <210> 1757 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1757 ugggaggugu gaucucacac ucgcugggag gugugcuauc gucuuccccg ggagguguga 60 uccuguucuu ccug 74 <210> 1758 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1758 acugggaggu gugaucucac acucgcuggg aggugugcua ucgucuuccc ugggaggugu 60 gauccuguuc uuccugagcg 80 <210> 1759 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1759 gggaggugug auaucauggu uccugggagg uaugauaucg ugguuccugg gaggugugau 60 cccgugcucc cu 72 <210> 1760 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1760 aggugugaua ucgugcuucc ugggacgugu gaugcugugc uuccugggag gugugauccc 60 acacuc 66 <210> 1761 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1761 cccaucucca ccuggaccca gcguagacaa agagguguuu cuacuccaua ucuaccugga 60 cccaguguag auggg 75 <210> 1762 <211> 90 <212> RNA <213> 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RNA <213> Homo sapiens <400> 1768 gguaugcugu ugcgcugucc uuccucuggg gagcaggcuc cgggggacag ggaaaagcac 60 acaaggaacu uguccucuag ggccugcagu cucaugggag agugacaugc accaggacc 119 <210> 1769 <211> 111 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1769 cuuuugcugu caguuuuucu guugcuuguc uugguuuuau gccuuuuaua ucaaggcaca 60 uaaaaggcau aaaaccaaga caagcaacaa aaaaaggauu gaucacagaa g 111 <210> 1770 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1770 uuuuuuuguu gcuugucuug guuuuaugcc uuuuaugugc cuugauauaa aaggcauaaa 60 accaagacaa gcaacagaaa aa 82 <210> 1771 <211> 109 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1771 gggugaggau guguguggau ccuggaggag gcagagaaga cagugagcuu gccaguucug 60 guuuccaaca cuuccuuucc ugcgcuucuc gauucccaga ucugcaccc 109 <210> 1772 <211> 105 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1772 agagaggaau gaacaguuaa auuauaacau guccauauua uggguuaguu guggacacau 60 acuaacgcau aauauggaca uguuauaauu uaacuguucc uuucu 105 <210> 1773 <211> 102 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1773 uuguuuauaa uaaacugaaa uauuugggac ugaucuugau 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ugcuucuuca 60 caauggucac augcauaggg cuuu 84 <210> 1836 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1836 ggggcauuua ggguaacuga gcugcugccg gggccuggcg cuccucuacc uugucaggug 60 acccagcagu cccucccccu gcauggugcc c 91 <210> 1837 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1837 acauuuuugu ccaauuacca cuucuuuuug ccaccugagc acagucagca gucagcauaa 60 aaaagugaua augggaaguu aaugucu 87 <210> 1838 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1838 cacagucuga cucagugacu caugugcugg caguggccac guaaauagag cuacuguguc 60 ugaaagcaau 70 <210> 1839 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1839 cugggucgag gcaguucuga gcacaguaca cugggcugcc cccacugccc agugcccugc 60 ucagcucaag uccuugugcc ccuc 84 <210> 1840 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1840 aucuaacacc aggagaaucc cauagaacau ugacaucaac acuagggggu uugcccuugu 60 ggggaagaa 69 <210> 1841 <211> 58 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1841 ugcucugugg agcugaggag cagauucucu cucucuccuc ccggcuucac cuccugag 58 <210> 1842 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 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ucuuauugcu uu 102 <210> 1869 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1869 aagcugcuua guguccuuag agucuccaga ggcaucccua acccagaauc uuuugacugu 60 ccucuggaga gaaaggcagu aggucuguac c 91 <210> 1870 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1870 ucagaagaaa aaacaggaga uaaaguuugu gauaauguuu gucuauauag uuaugaaugu 60 uuuuuccugu uuccuucagg gcca 84 <210> 1871 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1871 uauggguuca gagggaacuc cauuggacag aaauuuccuu uugaggaaau cuuucccugg 60 aguuucuucu uaccuuuuuc c 81 <210> 1872 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1872 ucuggggguu cuggagucua ggauuccagg aucuggguuu ugaggucuug gguuguaggg 60 ucugcgguuu gaagccccuc uug 83 <210> 1873 <211> 57 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1873 uggcgucugg ggccugaggc ugcagaacau ugcagcauuc augucccacc cccacca 57 <210> 1874 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1874 ucagagaggg gaaagagagc ugagugugac cuggagcagc ucaggagggc uuccugggug 60 agguggcagg uuacagguuc gaucuuuggc ccucagauuc 100 <210> 1875 <211> 76 <212> RNA <213> 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gcugggcuga gaggcgacug gugucuaauu uguuugucuc uccaacucag 60 acugccuggc cca 73 <210> 1909 <211> 49 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1909 gugaggcugg agugagcgga gaucguacca cugcacucca accugguga 49 <210> 1910 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1910 ugguuugcga cucugaaaac uagaagguuu augacugggc auuucucacc caaugcccaa 60 uauugaacuu ucuaguuguc agagucauua accc 94 <210> 1911 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1911 gcaucuugca gagccguucc aaugcgacac cucuagagug ucauccccua gaaugucacc 60 uuggaaagac ucugcaagau gccu 84 <210> 1912 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1912 cauccuccuu acgucccacc ccccacuccu guuucuggug aaauauucaa acaggagugg 60 gggugggaca uaaggaggau a 81 <210> 1913 <211> 53 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1913 ucacuuuagg agaaguaaag uagaacuuug guuuucaacu uuuccuacag ugu 53 <210> 1914 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1914 aggcagcaaa uggccagagc ucacacagag ggaugagugc acuucaccug cagugugacu 60 cagcaggcca acagaugcua 80 <210> 1915 <211> 74 <212> RNA <213> Homo 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cuaagauaca cacaaagcaa augccucuaa 60 gguaucaguu uaccaggcca 80 <210> 1922 <211> 98 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1922 cucucaccaa gcaagugcag uggggcuugc uggcuugcac cgugacuccc ucucaccaag 60 caagugucgu ggggcuugcu ggcuugcacu gugaagau 98 <210> 1923 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1923 cagagucucc uucguguaca gggaggagac uguacgugag agauagucag auccgcaugu 60 uagagcagag ucuccuucgu guacagggag gagauuguac 100 <210> 1924 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1924 gcgcccuccc ucucuccccg gugugcaaau gugugugugc gguguuaugc cggacaagag 60 ggaggug 67 <210> 1925 <211> 53 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1925 gguggggguu ggaggcgugg guuuuagaac cuaucccuuu cuagcccuga gca 53 <210> 1926 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1926 gugacgacug gccccgccuc uuccucucgg ucccauauug aacucgaguu ggaagaggcg 60 aguccggucu caaa 74 <210> 1927 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1927 gugacgacug gccccgccuc uuccucucgg ucccauauug aacucgaguu ggaagaggcg 60 aguccggucu caaa 74 <210> 1928 <211> 70 <212> RNA 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caaugcucaa aucucuggcc aaagaccaga acuuaauggu cucugguaag 60 agauuugggc auauuagaaa cuaa 84 <210> 1977 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1977 acauuugguc acaccagucc acauuaacgu ggaccagaca auauuaaugu ggacuggugu 60 gaccaaaa 68 <210> 1978 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1978 cugcagcgug cuucuccagg ccccgcgcgc ggacagacac acggacaagu cccgccaggg 60 gcugggcgcg cgccagccgg 80 <210> 1979 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1979 ccagagaugg gaaggccuuc cggugauuau cacagccaug ccuuuaccuc cagaaggccu 60 uuccaucucu guc 73 <210> 1980 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1980 aguuuuaguu acccugguca ucugcagucu gaaaauacaa aauggaaaau uccagacugu 60 ggcugaccag agguaacuga aacc 84 <210> 1981 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1981 aagaaaugua aacaggcuuu uugcucagug gaguuauuuu gagcaaaaag cuuauuuaca 60 uuucug 66 <210> 1982 <211> 61 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1982 acaucagcuc auauaauccu cgaagcugcc uuuagaaaug aggaaacuga agcugagagg 60 g 61 <210> 1983 <211> 89 <212> RNA <213> 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auaucuacau ugc 83 <210> 1990 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1990 cuaagauaau guccuccagg uucaucucug uugucauuug uggcauggac cauuugugac 60 aauagagaug aacauggagg auauuaucuu aa 92 <210> 1991 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1991 ggaggcuggg cugggacgga cacccggccu ccacuuucug uggcagguac cuccuccaug 60 ucggcccgcc uug 73 <210> 1992 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1992 uggccucugc caucagacca ucuggguuca aguuuggcuc caucuuuaug aaaugggugg 60 ucugaggcaa guggucu 77 <210> 1993 <211> 52 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1993 ucugggcuga gccgagcugg guuaagccga gcuggguugg gcugggcugg gu 52 <210> 1994 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1994 aggacccagc ggggcugggc gcgcggagca gcgcugggug cagcgccugc gccggcagcu 60 gcaagggccg 70 <210> 1995 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1995 cuuuaauacu aucucaaacu aaaggauaua gaagguuuuc ccuuucucuu gcccugaaac 60 cuucuguauc cuuuauuuug agauaguauu agaa 94 <210> 1996 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1996 cuuuaauacu aucucaaacu aaaggauaua gaagguuuuc ccuuucucuu gcccugaaac 60 cuucuguauc cuuuauuuug agauaguauu agaa 94 <210> 1997 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1997 cuuuaauacu aucucaaacu aaaggauaua gaagguuuuc ccuuucucuu gcccugaaac 60 cuucuguauc cuuuauuuug agauaguauu agaa 94 <210> 1998 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1998 guguauguga gggaguagga uguaugguug uuagauagac aacuacaauc uuuucucaca 60 acagacag 68 <210> 1999 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 1999 aaaaaaaagg gaaagaagaa cuguugcauu ugcccugcac ucaguuugca caggguaaau 60 gcaauaguuc uucuuucccu uuuuuua 87 <210> 2000 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2000 cucagcccgg gcaauauagu gagaccucgu cucuacaaaa aauugagaca gggccucacu 60 guaucgccca ggcugga 77 <210> 2001 <211> 86 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2001 auucuaggug gggagacuga cggcuggagg cccauaagcu gucuaaaacu ucggccccca 60 gauuucuggu cuccccacuu cagaac 86 <210> 2002 <211> 57 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2002 guugagacag gcaggauugg ggaaacaucu uuuaccucgu cucuugccug uuuuaga 57 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gauuuggaca gaaaacacgc aggu 54 <210> 2010 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2010 ucggcuaagg aaguccugug cucaguuuug uagcaucaaa acuaggauuu cucuuguuac 60 <210> 2011 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2011 gcgggcguug ccugggggcc ucgcaggggg agauccagcc caggcugguu ccgcugacuc 60 ugccuguagg ccgguggcgu cuucugg 87 <210> 2012 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2012 gcgggggacc gagagggccu cggcugugug aggacuagag gcggccgagg cccgggccgg 60 uucccccga 69 <210> 2013 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2013 gaacgauagc agcaugaacc ugucucacug cagaauuauu uugagacagg cuuaugcugc 60 uauccuuca 69 <210> 2014 <211> 115 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2014 uagcugggug gauguguucu uuugaaggau agcagcauaa gccugucuca aaauaauucu 60 gcagugagac agguucaugc ugcuaucguu ccaaagagga aggguaauca cuguc 115 <210> 2015 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2015 gucagagggg ggaugugcau gcugguuggg gugggcugcc uguggaccaa ucagcgugca 60 cuuccccacc cugaa 75 <210> 2016 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens 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cccuuacuug gaucugcaau uaguauuuua aucauagauu guauuuaguu aguuuuuaau 60 acuaacugca gauucaagug aggg 84 <210> 2038 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2038 gacucggcug cgguggacaa guccggcucc agaaccugga caccgcucag ccggccgcgg 60 cagggguc 68 <210> 2039 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2039 uugcuaagua ggcugagauu gaugucaggu uauccccaag cauaaccuca cucucaccuu 60 gcuuugcag 69 <210> 2040 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2040 cugugggcug ggccagggag cagcuggugg gugggaagua agaucugacc uggacuccau 60 cccacccacc cccuguuucc uggcccacag 90 <210> 2041 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2041 ggggggcagg gggcagaggg caucagagga cagccgccug gugcccaugc cauacuuuug 60 ccucag 66 <210> 2042 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2042 cacaacugca uggcaucguc cccugguggc uguggccuag ggcaagccac aaagccacuc 60 agugaugaug ccagcaguug ug 82 <210> 2043 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2043 gugugcccua gcauuuauaa ucauguguuc auucacauga ucauaagugg acacaugacc 60 auaaaugcua aagcacac 78 <210> 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gauucuuugc uuuuuguuuc uaacaaagca aagaaucucu 60 aucacagaaa aaagacg 77 <210> 2085 <211> 66 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2085 uauaagaacu cuugcagucu uagauguuau aaaaauauau aucugaauug uaagaguugu 60 uagcac 66 <210> 2086 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2086 ggcaacggga augcaggcug uaucugcagg gcauugugcu aacaggugca ggcugcagac 60 cugucacagg cc 72 <210> 2087 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2087 ugccccuggu cugaguuccu ggagccuggu cugucacugg ggaaguccag agcuccaagg 60 cucagugccc aggggacgca 80 <210> 2088 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2088 gacacgcaag acgaggcggg ccuggaggug caccaguucu ggccgcuggu ggagauccag 60 ugcucgcccg aucucaaguu c 81 <210> 2089 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2089 gcaccagggg uaccucucua cugacuugca acauacauuu gucuuggugu guugcaaguc 60 gguggagacg uacccuuggu gc 82 <210> 2090 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2090 uagcccaggg cuuggagugg ggcaagguug uuggugauau ggcuuccucu cccuuccugc 60 ccuggcuag 69 <210> 2091 <211> 76 <212> RNA <213> 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aauggaauuu acucugcaau 60 cuucuccaau ugcu 74 <210> 2105 <211> 74 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2105 ucagugaggu cuggggauga ggacagugug uccugaaauu cacaggacug acuccucacc 60 ccagugcacg agga 74 <210> 2106 <211> 63 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2106 ccuuggccac cacaccuacc ccuugugaau gucgggcaau gggugauggg uguggugucc 60 aca 63 <210> 2107 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2107 uuaugcauau uagcaauaca guacaaauau aguguguuug auuugcacug uaguuguauu 60 guauugccac ucuguauaa 79 <210> 2108 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2108 cuuauccuag acacuaggca ugugagugau ugucuuccuc acucaaucag ucacauaucu 60 agugucuaga augag 75 <210> 2109 <211> 71 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2109 cucacaagau caaucacuug guaauugcug ugauaacaac ucagcaauua ccaagugauu 60 gguuuuguga g 71 <210> 2110 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2110 gcuacgggga gcggggagga agugggcgcu gcuucugcgu uaucuggaag gagcagccca 60 cuccuguccu gggcucugug gu 82 <210> 2111 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2111 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cccauagugg gaagcuggca gauuc 55 <210> 2132 <211> 67 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2132 gugggagggg agaggcagca agcacacagg gccugggacu agcaugcuga ccucccuccu 60 gccccag 67 <210> 2133 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2133 ucuguuuccu cauuuaucug uugggaagcu aacugugacc uuagcguccc agcagauaaa 60 ugaggaaaca ga 72 <210> 2134 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2134 cgcaggccuc uggcggagcc cauuccaugc cagaugcuga gcgauggcug gugugugcug 60 cuccacaggc cuggug 76 <210> 2135 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2135 cccugccagu gcugggggcc acaugagugu gcagucaucc acacacaagu ggcccccaac 60 acuggcaggg 70 <210> 2136 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2136 gagggagcug uagagcaggg agcaggaagc uguguguguc cagcccugac cuguccuguu 60 cugcccccag ccccuc 76 <210> 2137 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2137 ggucgcuuaa aucccaaugc uagacccggu ggcaaucaag gucuagccac caggucuagc 60 auugggauuu aagccc 76 <210> 2138 <211> 70 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2138 cucgggcccg accgcgccgg 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2159 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2159 agauucagcu uucccuucag agccuggcuu uggcaucuau gaaagccagg cucugaaggg 60 aaaguugaau cu 72 <210> 2160 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2160 gggauaaaau gcagggaggc gcucacucuc ugcugccgau ucugcaccag agaugguugc 60 cuuccuauau uuuguguc 78 <210> 2161 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2161 uuccagcccg aggccucugu gacgucacgg ugucugcggg aggagaccau gacgucacag 60 aggcuucgcg cucugag 77 <210> 2162 <211> 71 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2162 ggugaguggg agccgguggg gcuggaguaa gggcacgccc ggggcugccc caccugcuga 60 ccacccuccc c 71 <210> 2163 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2163 cauuuaggac uagauguugg aauuagacag aaaaaaguua gacacaaaaa auugugucua 60 auuccaacau cuaguccuaa aug 83 <210> 2164 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2164 gccauggugu uuagauugaa caugaaguua gaauucuuaa guaucaaaac uaaauucaug 60 uucaaucuaa accccauggc 80 <210> 2165 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2165 ggacaaggug ugcaugccug acccguuguc agaccuggaa aaagggccgg cugugggcag 60 ggagggcaug cgcacuuugu cc 82 <210> 2166 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2166 cugauacccc aaaucuugau cagaagccuu gaucagaagc uaggaaggcu ucugaucaag 60 auuuguggug ucaag 75 <210> 2167 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2167 ccugucccuc cugcccugcg ccugcccagc ccuccugcuc uggugacuga ggaccgccag 60 gcaggggcug gugcugggcg gggggcggcg gg 92 <210> 2168 <211> 88 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2168 ucuuccccau ggauguggaa ggaguuaucu gucaccaguc agauaacugu caccagucag 60 uuaacuccuu ucacacccau ggggaaga 88 <210> 2169 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2169 uggugauuuu gaacguagcu auccaccacu cagccuggaa aaagcugagu gauugauagc 60 uauguucaaa aucacca 77 <210> 2170 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2170 cugaagcucc uucugaaaga gcaguuggug uuuauuuuuu acuaaauagc aauugcucuu 60 uuggaaggaa cuugag 76 <210> 2171 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2171 acaugggccc gcgggcgcuc cuggccgccg cccgacuucg gggccagccg ggggcagagc 60 gcgcgggagc ccgagcgu 78 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RNA <213> Homo sapiens <400> 2217 ggcacuugcu uggggguuag ugaggacagg gcaaauucac gagauugggu ugugcagagg 60 cugacacuug gauuuuccug ggccucagga cuuccuuuca gacaugg 107 <210> 2218 <211> 110 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2218 aaccauuagg gggcuguggu uugccagggc aggaggugga agggagcccc auuuacagug 60 guaacuuccu uucccuuucc auccuggcag gcuucagaga acuuuaccag 110 <210> 2219 <211> 95 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2219 gguaaaccuu ggugacuaau uagagucugg cugauauggu uugacacaga gcuaaaucau 60 augaaccaaa cucuaauuag ucaauaauuu cuguu 95 <210> 2220 <211> 94 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2220 gggcugaccc cuagggucag gugaggcccu uggggcacag uggugccauc uccccugugc 60 ucccagggcc ucgccugucc cuugaggucg gccc 94 <210> 2221 <211> 100 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2221 gaccagaagu guuuuggauu uuggacuuuu ucagauuugg ggauauuugc auuauacuua 60 uccuaaaucu gaaaguccaa aaccugaaau gaccaauaag 100 <210> 2222 <211> 120 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2222 gauccaggga acccuagagc agggggaugg cagagcaaaa uucauggccu acagcugccu 60 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ggcuggucuc aaacuccuga ccucagguga 60 uccauccacc 70 <210> 2235 <211> 119 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2235 ccaugaggag cuggcagugg gauggccugg ggguaggagc guggcuucug gagcuagacc 60 acauggguuc agaucccagc ggugccucua acuggccaca ggaccuuggg cagucagcu 119 <210> 2236 <211> 120 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2236 ucagccagcu uaugacuuga cccucucacc ugauuucuac caaccuuucc ucagcugauu 60 ucuuucuggg gagagauugg uagaaaucag gugagagggu caugccauaa gcuggcuaac 120 <210> 2237 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2237 gacuaagggu gggaugaggg auugaagugg agcaggaaug cgcuuuucuc cacugaaucc 60 ucuuuuccuc aggugg 76 <210> 2238 <211> 113 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2238 gggaggcaug gaaauuucuc ugguuucaau ggguacgauu auuguaagca ggauccauuc 60 aauaaucgga cccauuuaaa ccggagauuu uaaaagacag gaauagaauc cca 113 <210> 2239 <211> 114 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2239 ggcccgccuu uuaggggccu cgcugucugg gcacaggcgg auggacaggc uggccucugg 60 augaccugcc aaccgucaga gcccagaccc acguggccuc aguuggggac cagg 114 <210> 2240 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2240 ggucauaccc uggcuccagc ccugucacau gguuaauguu ccacagccag ugacugagcu 60 ggagccaggg ccacugcccc 80 <210> 2241 <211> 120 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2241 aguuggccag gaccccaagc ccccagcacu ucauucuugc uguccucucc uggucuggga 60 ggauagaaga gaggauagga agaaugaagu gcugggcgcu uagggggauc cuggccaacu 120 <210> 2242 <211> 92 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2242 uuaguuccag ccuccuggcu caccuggaac cauuucuccu gggaagcaug guagccagga 60 gaguggauuc caggugguga gggcuuggua cu 92 <210> 2243 <211> 109 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2243 ccuaggaaag gcugcuggua acugggaugg ggguuggggg gagguaagaa gucucugacu 60 ccuccucuac cucaucccag uuccaucacc ugaaguggac cucuuggga 109 <210> 2244 <211> 120 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2244 auuucuuugg guuaacuuaa acucagcccu ucuaggccca uucuuuucac ucaggaauug 60 gauaagcuuu ucugaggggu uuggaauggg auggcaggga gagucaccag acaccaugaa 120 <210> 2245 <211> 115 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2245 gagcaaaaac cagagaacaa caugggagcg uuccuaaccc cuaaggcaac uggaugggag 60 accugaccca uccaguucuc ugagggggcu cuuguguguu cuacaagguu guuca 115 <210> 2246 <211> 115 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2246 ucugaggaga ccugggcugu cagaggccag ggaaggggac gaggguuggg gaacaggugg 60 uuagcacuuc auccucgucu cccucccagg uuagaagggc cccccucucu gaagg 115 <210> 2247 <211> 112 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2247 uaugggauuc cacagacaau gaguaucaau ggcacaaacu cauucuugaa uuuuugccag 60 uucaagaaga gacugaguca ucgaaugcuc uaaaugucac uucaccucau gu 112 <210> 2248 <211> 113 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2248 aucugacaca aaaugugaac caagcaauuc ucaaaggagc cucccaggaa auucacuuua 60 ggaaguccua ggaggcuccu cugagaguug cuaaaacaaa acauugagag ucc 113 <210> 2249 <211> 137 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2249 agccagacaa gagggucaug gggagucacu gucaacccag agcaggcacu gccccugcga 60 ccagccuggg gcaucgguug gggugcaggg gucugcuggu gaugcuuucc aucucuuugc 120 uuuguccuga uuguagc 137 <210> 2250 <211> 58 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2250 uaugguacuc cuuaagcuaa caggccccug ucaccauuag cuuaaggagu accagauc 58 <210> 2251 <211> 58 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2251 ugcuggcuca uuucauaugu gugcugagaa aauucacaca uaugaaguga gccagcac 58 <210> 2252 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2252 agccuuccag gagaaaugga gacccuauac auaccuguuu ccaugccucc uagaaguucc 60 <210> 2253 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2253 uaggcacacu uaaaguuaua gcuacaucag uuauaacuau aucaguuaaa acuuuaagug 60 ugccuagg 68 <210> 2254 <211> 59 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2254 aaacuaauau acccauauuc uggcuaggug aucaucagaa uauggguaua uuaguuugg 59 <210> 2255 <211> 59 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2255 aaacuaauau acccauauuc ugaugaucac cuagccagaa uauggguaua uuaguuugg 59 <210> 2256 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2256 cagggaaaug ggaagaacua gauuugaauc cagaccuuua guucuucccu uugcccaauu 60 <210> 2257 <211> 59 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2257 ugaaguacca gcuacucgag aggucagagg auugcuccug aauagcuggg acuacaggu 59 <210> 2258 <211> 59 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2258 uauccagcuu guuacuauau gcuuuuuaaa uggggcacag agugacaagc ugguuaaag 59 <210> 2259 <211> 53 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2259 auggucaccu ccgggacuca gcccugugcu gagccccggg cagugugauc auc 53 <210> 2260 <211> 63 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2260 acuggcauua gugggacuuu uuuuuuuuuu uuuuuuaaug uuaaaagucc cacuaaugcc 60 agc 63 <210> 2261 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2261 ggcugggugc ucuugugcag ugagcaaccu acacaacugc acauggcaac cuagcuccca 60 <210> 2262 <211> 54 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2262 uugccauaca uagacuuuau uguguugauc aacaauaaag uucauguaug gcaa 54 <210> 2263 <211> 65 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2263 ugggagcuaa gcuaugggua uacugagcuu auguaugcau cugcauaccc auagcuuagc 60 uccca 65 <210> 2264 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2264 gcauuggguu agcagguuag cccagcauuu cccuuccugg acacacagga ggagaaaugc 60 uggacuaauc ugcuaaucca augc 84 <210> 2265 <211> 75 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2265 aguuuuugaa gaguauugcc acccuuucua gucccuauua gacuagaaag gguggcaaua 60 ccucuuccaa aaacu 75 <210> 2266 <211> 60 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2266 gaagagguau ugccacccuu ucuagucuaa uagggacuag aaaggguggc aauacucuuc 60 <210> 2267 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2267 ggcccauggg ucuuauccug caaggugcug cagagacgag gccuguagca ccuugcagga 60 uaaggucuac ugggcc 76 <210> 2268 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2268 ggagcuuguu acagaugcag auucucugac uucuuacugc accagugaag ucaggaucug 60 cauuugaaua agaccc 76 <210> 2269 <211> 65 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2269 gcugaacucu agccugagca acagagugag auggucuugu uuuguugccc aggcuggagu 60 ccagu 65 <210> 2270 <211> 79 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2270 cucuacauca cagcccagca guuaucacgg gccccucccc ucaaugggcc cgugauaacu 60 gcagggcugu gauguagag 79 <210> 2271 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2271 uaucguaucg uaucguaucg uauuguauug uacuguauug uauuguacug uauuguaucg 60 uaucguaucg uaucguaucg ua 82 <210> 2272 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2272 ccucacuuau cugacucuga aaucuucuaa augguaccca cuuuauuuag aacguuuuag 60 ggucaaauaa guacagg 77 <210> 2273 <211> 83 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2273 gaaacacuuu gccuuuuuac aggaguuuau uauguuuugg acauagaaac auaacaaaca 60 ccuguaaaac agcaaagugu uuc 83 <210> 2274 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2274 agcgugguag cauacaccug uaguccuaga uacucaggag ggugaguauc uaggacuaca 60 ggugugugcu accacgcu 78 <210> 2275 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2275 cuuuuaauuu cagcuacuac cucuauuagg auuugggagu uauacuaaua gagguaauag 60 uugaaauuaa gag 73 <210> 2276 <211> 68 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2276 ggacaagcuu gcucugagcu ccgagaaagc ugacagacag cugcuuggug uucagagcuu 60 gucugucc 68 <210> 2277 <211> 69 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2277 gacaguacaa auaauaccac agugggugua ccucaugugu guacacccug ugauauuauu 60 uguaauauc 69 <210> 2278 <211> 59 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2278 uacaaauaau accacagugg guguaccuca uguguguaca cccugugaua uuauuugua 59 <210> 2279 <211> 87 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2279 gauauuauga auaauaucac aguagguguu cacacauaau guguacacca uguguguaca 60 cccaugugau auuugaagua guauguc 87 <210> 2280 <211> 91 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2280 uauaacauug uauauaccca cugugauauu aagaguaaua gcucucuagg uuauuaugaa 60 uaauaucaca guagguguac acaauguugu a 91 <210> 2281 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2281 uguguacacc aacugugaua uuaggagucc uauuuauuuu uaggauauua ggaauaauau 60 cacaguaggu guacaca 77 <210> 2282 <211> 73 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2282 cugggaaguu aguucauuuc agucugugcu gugagcuagc cagcaguggc ucugaaauga 60 acucaaacuc uag 73 <210> 2283 <211> 76 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2283 gccaacugca gaucauggga cugucucagc cccauaugua ucugaaggcu gagaaguccc 60 augauccgca cuuggc 76 <210> 2284 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2284 caaggccuau cuaucuagau ucuucuuggc cucucugagc augcauuccu gagacuccaa 60 gaagaaucua gacagauagg ccuug 85 <210> 2285 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2285 gugcucauuu aaguagucug augccuacua cugaugacau acaauguaag ugcucauuua 60 ggcgucagac uaccuaaaug agcac 85 <210> 2286 <211> 78 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2286 agcauauucu caaguaguuu caugauaaag gguguaugag agaucaaccc uuuaucauga 60 aacgcuugag gauacgcu 78 <210> 2287 <211> 72 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2287 cugugcaccu gggggagugc agugauugug gaaugcaaag ucccacaauc acuguacucc 60 ccaggugcac ag 72 <210> 2288 <211> 90 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2288 cuguaccccu gccccaacaa ggaaggacaa gaggugugag ccacacacac gccuggccuc 60 cugucuuucc uuguuggagc agggauguag 90 <210> 2289 <211> 71 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2289 uuaauuaaug cauuaaauua uugaaggccc uugggcaccc caggccuuca auaauuuaau 60 gcauuuauug a 71 <210> 2290 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2290 gauuggacuu uauugucacg uucugauugg uuagccuaag acuuguucug auccaaucag 60 aacaugaaaa uaacguccaa uc 82 <210> 2291 <211> 82 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2291 gauuggacuu uauugucacg uucugauugg uuagccuaag acuuguucug auccaaucag 60 aacaugaaaa uaacguccaa uc 82 <210> 2292 <211> 84 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2292 gccucaacuc cugggauaug uugcugaucc aaccugaaau ccuucuguag guugagucag 60 caacauaucc caugacuuuu gggu 84 <210> 2293 <211> 56 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2293 uugccguccc cuuccucguc uuuuccccuc aggagaaguc gggaaggugg cggcgg 56 <210> 2294 <211> 77 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2294 ugaucuuguu uaggccauca ucccauuaug cuaaguccau gggcaaacau aacaggauga 60 uggccuaaac aagacca 77 <210> 2295 <211> 89 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2295 uccccauuua cacaggccau gagccccgaa acacccaucc caggauugcu gauggguguu 60 ucggggcuca uggccugugu aaaugggga 89 <210> 2296 <211> 80 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2296 agcuaggucu ucuggauaac augcugaagc uucuacguca uucagcacuu gcuucagcau 60 guuuuccaga ggaucuagcu 80 <210> 2297 <211> 81 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2297 uguaagaaca cguuugaaug cuguacaagg cacauaugug aacauuguac cacauguaca 60 gcuuucaaac augcucuuau a 81 <210> 2298 <211> 85 <212> RNA <213> Homo sapiens <400> 2298 auuacagaca ugagcgacug ugccugacca aaagucaaca uuaaacaaca aaucuuggcc 60 aggcacagug gcucaugccu guaau 85 <210> 2299 <211> 13 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2299 gccagguaag uau 13 <210> 2300 <211> 12 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2300 ccagguaagu au 12 <210> 2301 <211> 11 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2301 cagguaagua u 11 <210> 2302 <211> 9 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2302 cagguaagu 9 <210> 2303 <211> 8 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2303 cagguaag 8 <210> 2304 <211> 7 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2304 cagguaa 7 <210> 2305 <211> 10 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2305 cagguaagua 10 <210> 2306 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2306 tcatcgat 8 <210> 2307 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2307 aacgttct 8 <210> 2308 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2308 atcgactctc gagccttctc 20

Claims (100)

  1. 각각의 타입이 이하에 의해 정해지는, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 여러 개를 함유하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물로서:
    1) 염기 서열;
    2) 백본 연결의 패턴;
    3) 백본 키랄 중심의 패턴; 및
    4) 백본 X-모이어티의 패턴 (-X-L-R1);
    하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 5 개 이상의 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하고, 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결 중 하나 이상이 포스포로티오에이트 디에스테르 연결이 아니며;
    하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결을 포함하고;
    하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 독립적으로 하기 화학식 I 의 구조를 지니고 있는 하나 이상의 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물:
    Figure 112018068921177-pct00764

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    W 는 O, S 또는 Se 이고;
    각각의 X, Y 및 Z 는 독립적으로 -0-, -S-, -N(-L-R1)- 또는 L 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C50 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각 R' 은 독립적으로 -R, -C(0)R, -C02R 또는 -S02R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시크릴릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌 및 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2 가 고리이고;
    각 R 은 독립적으로 수소 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각
    Figure 112018068921177-pct00854
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임;
    치환성 질소 원자 상의, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  2. 제 1 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 5 개 이상의 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하고, 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결 중 하나 이상이 하기 화학식 I-c 의 구조를 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물:
    Figure 112018068921177-pct00855

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2가 고리이고;
    각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각각의
    Figure 112018068921177-pct00856
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    R1 은 L 이 공유 결합인 경우 -H 가 아니고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6 지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임;
    치환성 질소 원자 상의, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 15 개 이상의 뉴클레오티드 길이인 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 개질된 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 2'-개질된 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  6. 제 5 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 2'-F 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  7. 제 5 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 2'-OR' 개질을 포함하고, R' 는 독립적으로 임의로 치환된 C1-C6 지방족이고, 각각의 임의의 치환기는 독립적으로 (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 인 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  8. 제 5 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 2'-OMe 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  9. 제 5 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 2'-OCH2CH2OMe 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  10. 제 4 항에 있어서, 하나 이상의 올리고뉴클레오티드 타입 각각이 하나 이상의 잠김 핵산 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  11. 5 개 이상의 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드로서, 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결 중 하나 이상이 포스포로티오에이트 디에스테르 연결이 아니며;
    키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 포스페이트 디에스테르 연결 및, 독립적으로 하기 화학식 I 의 구조를 지닌 하나 이상의 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드:
    Figure 112018068921177-pct00766

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    W 는 O, S 또는 Se 이고;
    각각의 X, Y 및 Z 는 독립적으로 -0-, -S-, -N(-L-R1)- 또는 L 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C50 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각 R' 은 독립적으로 -R, -C(0)R, -C02R 또는 -S02R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시크릴릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌 및 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2 가 고리이고;
    각 R 은 독립적으로 수소 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각
    Figure 112018068921177-pct00857
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이고;
    치환성 질소 원자 상에, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  12. 제 11 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 5 개 이상의 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결을 포함하고, 연속 개질된 인터뉴클레오티드 연결 중 하나 이상이 하기 화학식 I-c 의 구조를 갖는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드:
    Figure 112018068921177-pct00858

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2가 고리이고;
    각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각각의
    Figure 112018068921177-pct00859
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    R1 은 L 이 공유 결합인 경우 -H 가 아니고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임;
    치환성 질소 원자 상의, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  13. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 15 개 이상의 뉴클레오티드 길이인 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  14. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 개질된 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  15. 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 2'-개질된 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  16. 제 15 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 2'-F 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  17. 제 15 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 2'-OR' 개질을 포함하고, R' 는 독립적으로 임의로 치환된 C1-C6 지방족이고, 각각의 임의의 치환기는 독립적으로 하기로부터 선택되는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드: (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임.
  18. 제 15 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 2'-OMe 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  19. 제 15 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드가 하나 이상의 2'-OCH2CH2OMe 개질을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  20. 제 14 항에 있어서, 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 각각이 하나 이상의 잠김 핵산 당을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드.
  21. 제 11 항 또는 제 12 항에 기재된 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 >90% 의 순도로 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드 조성물.
  22. 하기 단계를 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드의 제조 방법으로서:
    (1) 커플링;
    (2) 캡핑;
    (3) 개질 (modifying);
    (4) 디블로킹 (deblocking); 및
    (5) 원하는 길이의 달성까지 단계 (1) 내지 (4) 의 반복;
    상기 방법이 키랄 연결 인에 대해 단일 부분입체 이성질체 형태로 존재하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드를 제공하고,
    (1) 내지 (4) 의 사이클 내에서 하나 이상의 (3) 개질 단계는 황화를 포함하는 개질 단계이고, (1) 내지 (4) 의 사이클 중 하나 이상이 하기 화학식 I-a 의 구조를 갖는 인터뉴클레오티드 연결을 형성하는 제조 방법:
    Figure 112020032493557-pct00860

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    각각의 X, Y 및 Z 는 독립적으로 -0-, -S-, -N(-L-R1)- 또는 L 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C50 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C10 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -0-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(0)N(R')-, -N(R')C(0)N(R')-, -N(R')C(0)-, -N(R')C(0)0-, -OC(0)N(R')-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(0)2N(R')-, -N(R')S(0)2-, -SC(O)-, -C(0)S-, -OC(O)-, 또는 -C(0)0- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각 R' 은 독립적으로 -R, -C(0)R, -C02R 또는 -S02R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시크릴릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2 가 고리이고;
    각 R 은 독립적으로 수소 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각
    Figure 112020032493557-pct00861
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임;
    치환성 질소 원자 상의, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  23. 제 22 항에 있어서, (1) 내지 (4) 의 사이클 중 하나 이상이 하기 화학식 I-c 의 구조를 갖는 인터뉴클레오티드 연결을 형성하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드의 제조 방법:
    Figure 112018068921177-pct00862

    [식 중:
    P* 는 비대칭 인 원자이고, Rp 또는 Sp 이고;
    L 은 공유 결합 또는 임의로 치환된, 선형 또는 분지형 C1-C10 알킬렌이고,
    여기서 L 의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    R1 은 할로겐, R, 또는 임의로 치환된 C1-C50 지방족이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 C1-C6 알킬렌, C1-C6 알케닐렌, -C≡C-, -C(R')2-, -Cy-, -O-, -S-, -S-S-, -N(R')-, -C(O)-, -C(S)-, -C(NR')-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -N(R')C(O)O-, -OC(O)N(R')-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2N(R')-, -N(R')S(O)2-, -SC(O)-, -C(O)S-, -OC(O)- 또는 -C(O)O- 로 임의로 그리고 독립적으로 대체되고;
    각각의 R' 은 독립적으로 -R, -C(O)R, -CO2R, 또는 -SO2R 이거나, 또는:
    동일한 질소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하거나, 또는
    동일한 탄소 상의 2 개의 R' 은 그들의 개입 원자와 함께 취해져 임의로 치환된 아릴, 카르보시클릭, 헤테로시클릭 또는 헤테로아릴 고리를 형성하고;
    -Cy- 는 페닐렌, 카르보시클릴렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌, 또는 헤테로시클릴렌으로부터 선택되는 임의로 치환된 2가 고리이고;
    각각의 R 은 독립적으로 수소, 또는 C1-C6 지방족, 페닐, 카르보시클릴, 아릴, 헤테로아릴, 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기이고;
    각각의
    Figure 112018068921177-pct00863
    은 독립적으로 뉴클레오시드에 대한 연결을 나타내고;
    R1 은 L 이 공유 결합인 경우 -H 가 아니고;
    각각의 L, R1, R', -Cy-, 및 R 에 대해서는, 각 임의의 치환기는 하기로부터 독립적으로 선택됨:
    치환성 탄소 원자 상의, (i) 할로겐; -(CH2)0-4R°; -(CH2)0-4OR°; -O(CH2)0-4Ro, -O-(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4CH(OR°)2; -(CH2)0-4SR°; -(CH2)0-4Ph (이는 R°로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph (이는 R° 로 치환될 수 있음); -CH=CHPh, (이는 R° 로 치환될 수 있음); -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜 (이는 R° 로 치환될 수 있음); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(R°)2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)R°; -N(R°)C(S)R°; -(CH2)0-4N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)C(S)NR°2; -(CH2)0-4N(R°)C(O)OR°; -N(R°)N(R°)C(O)R°; -N(R°)N(R°)C(O)NR°2; -N(R°)N(R°)C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)R°; -C(S)R°; -(CH2)0-4C(O)OR°; -(CH2)0-4C(O)SR°; -(CH2)0-4C(O)OSiR°3; -(CH2)0-4OC(O)R°; -OC(O)(CH2)0-4SR-, SC(S)SR°; -(CH2)0-4SC(O)R°; -(CH2)0-4C(O)NR°2; -C(S)NR°2; -C(S)SR°; -SC(S)SR°, -(CH2)0-4OC(O)NR°2; -C(O)N(OR°)R°; -C(O)C(O)R°; -C(O)CH2C(O)R°; -C(NOR°)R°; -(CH2)0-4SSR°; -(CH2)0-4S(O)2R°; -(CH2)0-4S(O)2OR°; -(CH2)0-4OS(O)2R°; -S(O)2NR°2; -(CH2)0-4S(O)R°; -N(R°)S(O)2NR°2; -N(R°)S(O)2R°; -N(OR°)R°; -C(NH)NR°2; -P(O)2R°; -P(O)R°2; -OP(O)R°2; -OP(O)(OR°)2; -SiR°3; -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)O-N(R°)2; 및 -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(R°)2, 여기서, 각각의 R°은 독립적으로 수소, C1-6　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리이거나, R°의 2 개의 독립적인 존재는 그들의 개입 원자(들) 과 함께 취해져 질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리를 형성하고, 여기서 각각의 R°, 또는 R°의 2 개의 독립적인 존재를 그의 개입 원자와 함께 취함으로써 형성된 고리는 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR● 중 하나 이상으로 임의로 그리고 독립적으로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 및 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐), =O 및 =S 로부터 독립적으로 선택됨; (ii) =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O- 또는 -S(C(R* 2))2-3S-, 및 인접 치환성 탄소의 경우 -O(CR* 2)2-3O-, 여기서, R* 의 각각의 독립적인 존재는 수소, C1-6　지방족, 및 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 로부터 선택되고, R* 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나 "할로" 가 선행하는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임;
    치환성 질소 원자 상의, -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 및 -N(R†)S(O)2R†; 여기서 각각의 R† 은 독립적으로 수소, C1-6 지방족, 비치환 -OPh, 또는 비치환 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 이거나, R† 의 2 개의 독립적인 존재는 그의 개입 원자(들) 과 함께 비치환 3-12-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 모노- 또는 바이시클릭 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 를 형성하고, R† 의 지방족 기는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 및 -NO2 중 하나 이상으로 임의로 치환되고, 여기서 각각의 R● 은 비치환되거나, "할로" 가 선행되는 경우 오로지 하나 이상의 할로겐으로 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 5-6-원 포화, 일부 불포화, 또는 아릴 고리 (질소, 산소 및 황으로부터 독립적으로 선택되는 0-4 개의 헤테로원자를 가짐) 임].
  24. 제 22 항 또는 제 23 항에 있어서, 커플링 단계가 N시아노메틸피롤리디늄 트리플레이트 및
    Figure 112018068921177-pct00769
    또는
    Figure 112018068921177-pct00770

    [식 중, BPRO 은 보호된 뉴클레오베이스임] 의 이용을 포함하는 키랄 제어 올리고뉴클레오티드의 제조 방법.
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Families Citing this family (112)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101881596B1 (ko) 2008-12-02 2018-07-24 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법
SG177564A1 (en) 2009-07-06 2012-02-28 Ontorii Inc Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
WO2012039448A1 (ja) 2010-09-24 2012-03-29 株式会社キラルジェン 不斉補助基
WO2012068405A2 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of alpha synuclein expression
EP2734208B1 (en) 2011-07-19 2017-03-01 Wave Life Sciences Ltd. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
WO2013148260A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Washington University Methods for modulating tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
KR102213609B1 (ko) 2012-07-13 2021-02-08 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 제어
EP2872485B1 (en) 2012-07-13 2020-12-16 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
WO2014010718A1 (ja) 2012-07-13 2014-01-16 株式会社新日本科学 キラル核酸アジュバント
BR112015022156A2 (pt) 2013-03-14 2017-11-14 Isis Pharmaceuticals Inc composições e métodos para modular a expressão de tau
TWI657819B (zh) 2013-07-19 2019-05-01 美商Ionis製藥公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
JPWO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
AU2015207773B2 (en) * 2014-01-16 2021-06-17 Wave Life Sciences Ltd. Chiral design
WO2015125845A1 (ja) * 2014-02-20 2015-08-27 塩野義製薬株式会社 含窒素非芳香族複素環を含む核酸のリン酸部位修飾
WO2015133522A1 (ja) * 2014-03-04 2015-09-11 国立大学法人大阪大学 大腸癌の治療剤、及び大腸癌患者の予後の予測方法
US10619156B2 (en) 2014-05-28 2020-04-14 The Regents Of The University Of California Hybrid tRNA/pre-miRNA molecules and methods of use
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
RU2708237C2 (ru) 2014-08-22 2019-12-05 Общество с ограниченной ответственностью "НооГен" Модифицированные олигонуклеотиды и способ их получения
US9976143B2 (en) 2014-10-03 2018-05-22 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
US20180016575A1 (en) * 2014-11-19 2018-01-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S LNA Gapmer Oligonucleotides Comprising Chiral Phosphorothioate Linkages
CN107208092B (zh) * 2014-12-16 2021-09-10 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 手性毒性筛选方法
AU2015367378A1 (en) 2014-12-17 2017-06-15 Proqr Therapeutics Ii B.V. Targeted RNA editing
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
WO2017053781A1 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression
EP3359685A1 (en) 2015-10-09 2018-08-15 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
CR20180233A (es) 2015-10-09 2018-05-25 Wave Life Sciences Ltd Composiciones oligonucleotídicas y sus métodos
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
WO2017106377A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant mental retardation-5 and dravet syndrome
US11266672B2 (en) * 2016-01-28 2022-03-08 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for treating and/or preventing cancer
WO2017160741A1 (en) 2016-03-13 2017-09-21 Wave Life Sciences Ltd. Compositions and methods for phosphoramidite and oligonucleotide synthesis
EP3430021A1 (en) * 2016-03-18 2019-01-23 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Acyl-protected l-lna-guanosine monomers
MA45349A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques egfr et leurs utilisations
MA45469A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations
MA45328A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
MA45470A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques kras et leurs utilisations
MA45471A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques de phosphatidylinositol-3-kinase et leurs utilisations
KR102522059B1 (ko) 2016-04-18 2023-04-14 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 안티센스 올리고머, 및 산성 알파-글루코시다제 유전자와 연관된 질환을 치료하기 위한 이의 사용 방법
KR102329187B1 (ko) 2016-04-29 2021-11-22 사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드 인간 lmna를 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 유사체
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
JP7097820B2 (ja) * 2016-05-12 2022-07-08 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドへの、立体的に規定されたオキサザホスホリジンホスホルアミダイト単量体のカップリングの増大法
WO2017198775A1 (en) * 2016-05-18 2017-11-23 Eth Zurich Stereoselective synthesis of phosphorothioate oligoribonucleotides
US11013757B2 (en) * 2016-06-03 2021-05-25 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotides, compositions and methods thereof
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
KR102418185B1 (ko) 2016-06-22 2022-07-06 프로큐알 테라퓨틱스 Ⅱ 비.브이. 단일 가닥 rna-편집 올리고뉴클레오타이드
JP2019525742A (ja) 2016-06-30 2019-09-12 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーに対するエクソンスキッピングオリゴマー
WO2018041973A1 (en) 2016-09-01 2018-03-08 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified single-stranded rna-editing oligonucleotides
JOP20190065A1 (ar) * 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
JOP20190104A1 (ar) * 2016-11-10 2019-05-07 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3
JP7296882B2 (ja) * 2016-11-23 2023-06-23 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド ホスホラミダイト及びオリゴヌクレオチド合成のための組成物及び方法
CA3043768A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
WO2018118627A1 (en) 2016-12-19 2018-06-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
AU2017382773A1 (en) 2016-12-19 2019-08-01 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
BR112019012647A2 (pt) 2016-12-19 2019-11-19 Sarepta Therapeutics Inc conjugados de oligômero de salto de éxon para distrofia muscular
MX2019008199A (es) 2017-01-06 2019-11-25 Avidity Biosciences Llc Composiciones de acido nucleico polipeptido y metodos de induccion de la omision de exon.
US11274300B2 (en) 2017-01-19 2022-03-15 Proqr Therapeutics Ii B.V. Oligonucleotide complexes for use in RNA editing
JP7164540B2 (ja) * 2017-03-29 2022-11-01 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス 立体的に規定されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの調製のための直交保護基
JP7190794B2 (ja) 2017-03-29 2022-12-16 塩野義製薬株式会社 核酸医薬及び多分岐脂質の複合体
CN111050806A (zh) * 2017-06-02 2020-04-21 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其使用方法
WO2018223081A1 (en) * 2017-06-02 2018-12-06 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
WO2018237194A1 (en) * 2017-06-21 2018-12-27 Wave Life Sciences Ltd. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS OF SYNTHESIS
JP2020525503A (ja) * 2017-06-28 2020-08-27 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス 多重カップリングおよび酸化の方法
WO2019006455A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Solstice Biologics, Ltd. AUXILIARIES OF CHIRAL PHOSPHORAMIDITIS AND METHODS OF USE THEREOF
GB201711809D0 (en) 2017-07-21 2017-09-06 Governors Of The Univ Of Alberta Antisense oligonucleotide
EP3664816A4 (en) * 2017-08-08 2021-05-19 Wave Life Sciences Ltd. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHOD FOR THEREFORE
CN111278991B (zh) 2017-08-25 2022-04-01 斯托克制药公司 用于治疗病况和疾病的反义寡聚体
CN111108096A (zh) * 2017-09-18 2020-05-05 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸制备技术
EA201991450A1 (ru) 2017-09-22 2019-12-30 Сарепта Терапьютикс, Инк. Конъюгаты олигомеров для пропуска экзона при мышечной дистрофии
JP2020536060A (ja) 2017-09-28 2020-12-10 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド 筋ジストロフィーを処置するための併用療法
WO2019067981A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Sarepta Therapeutics, Inc. POLYTHERAPIES FOR TREATING MUSCLE DYSTROPHY
EP3687519A1 (en) 2017-09-28 2020-08-05 Sarepta Therapeutics, Inc. Combination therapies for treating muscular dystrophy
WO2019071028A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Avidity Biosciences Llc NUCLEIC ACID-POLYPEPTIDE COMPOSITIONS AND USES THEREOF
SG11202001783YA (en) 2017-10-12 2020-03-30 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide compositions and methods thereof
BR122020018622A2 (pt) 2017-10-16 2021-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Molécula de ácido nucleico para redução de papd5 e papd7 de mrna para o tratamento de infecção hepatite b
WO2019079637A2 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Sarepta Therapeutics, Inc. ANTISENSE OLIGOMERIC COMPOUNDS
TWI809004B (zh) * 2017-11-09 2023-07-21 美商Ionis製藥公司 用於降低snca表現之化合物及方法
KR20200098521A (ko) * 2017-11-13 2020-08-20 사일런스 테라퓨틱스 게엠베하 포스포로다이티오에이트 링키지를 포함하는 표적 유전자의 발현을 저해하기 위한 핵산
EP3717646A4 (en) 2017-12-01 2021-12-01 The Texas A&M University System ANTISENSE TREATMENT OF ANGELMAN'S SYNDROME
MX2020005860A (es) 2017-12-06 2020-09-09 Avidity Biosciences Inc Composiciones y metodos de tratamiento de atrofia muscular y distrofia miotonica.
CN108186564B (zh) * 2018-01-03 2020-06-02 上海市肿瘤研究所 一种肿瘤微环境响应型基因纳米胶束及其制备方法和应用
US20210222250A1 (en) * 2018-02-04 2021-07-22 The Texas A&M University System Heterochiral nucleic acid strand-displacement systems and methods
WO2019175126A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Lna-dicarboxylic acid derivatives and process for their preparation
BR112020020670A2 (pt) * 2018-04-12 2021-03-02 Wave Life Sciences Ltd. composição de oligonucleotídeo, composição farmacêutica, método para alterar o splicing de uma transcrição alvo, método para tratar distrofia muscular, método para preparar um oligonucleotídeo ou uma composição de oligonucleotídeo do mesmo e oligonucleotídeo
KR20210008497A (ko) 2018-05-09 2021-01-22 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Atxn3 발현 감소용 화합물 및 방법
US10765760B2 (en) 2018-05-29 2020-09-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
EP3806868A4 (en) 2018-06-13 2022-06-22 Sarepta Therapeutics, Inc. EXON-SKIPPING OLIGOMERS FOR MUSCULAR DYSTROPHY
EP3818159A1 (en) 2018-07-03 2021-05-12 F. Hoffmann-La Roche AG Oligonucleotides for modulating tau expression
TW202020153A (zh) 2018-07-27 2020-06-01 美商薩羅塔治療公司 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
CN113383078A (zh) * 2018-12-06 2021-09-10 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其方法
KR20210104759A (ko) 2018-12-13 2021-08-25 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 근 이영양증을 위한 엑손 스키핑 올리고머 접합체
IL297818A (en) 2018-12-21 2023-01-01 Avidity Biosciences Inc Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
CN109837326B (zh) * 2019-01-17 2022-07-05 嘉兴学院 基于多价捕获并放大输出信号的生物靶标分子检测方法
US20230089442A1 (en) * 2019-03-20 2023-03-23 Pachamuthu Kandasamy Technologies useful for oligonucleotide preparation
SG11202110180TA (en) * 2019-03-26 2021-10-28 Rutgers The State University Of New Jersey Compositions and methods for treating neurodegenerative disorders
WO2020214763A1 (en) 2019-04-18 2020-10-22 Sarepta Therapeutics, Inc. Compositions for treating muscular dystrophy
WO2020236618A1 (en) * 2019-05-17 2020-11-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligomeric compounds comprising phosphorothioate diester and phosphate diester linkages
CN110346493B (zh) * 2019-05-23 2021-01-05 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法
US11578090B2 (en) 2019-06-06 2023-02-14 Avidity Biosciences, Inc. Nucleic acid-polypeptide compositions and uses thereof
JP2023537798A (ja) 2020-03-19 2023-09-06 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーを処置するための組成物および方法
WO2021195469A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle dystrophy
CA3173647A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Isabel AZNAREZ Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
AU2021274944A1 (en) 2020-05-22 2022-12-15 Wave Life Sciences Ltd. Double stranded oligonucleotide compositions and methods relating thereto
CN112063608B (zh) * 2020-08-27 2022-06-17 浙江工业大学 一种脂肪酸光脱羧酶突变体及其在l-草铵膦合成中的应用
AU2022345098A1 (en) 2021-09-16 2024-04-04 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
CA3233242A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Antisense oligonucleotides having one or more abasic units
CN114230498B (zh) * 2021-12-30 2023-11-17 湖北华世通生物医药科技有限公司 β-(二甲氨基)乙基对甲苯磺酸巯酯盐酸盐的制备方法
CN115181736B (zh) * 2022-01-07 2023-05-30 中国科学院海洋研究所 一种可以结合脂多糖的蛋白酶pck及其制备和应用
WO2023152371A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Proqr Therapeutics Ii B.V. Guide oligonucleotides for nucleic acid editing in the treatment of hypercholesterolemia
WO2024013360A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing
WO2024013361A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof
WO2024064237A2 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Sarepta Therapeutics, Inc. Dmd antisense oligonucleotide-mediated exon skipping efficiency

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997047637A1 (en) 1996-06-10 1997-12-18 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation

Family Cites Families (649)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2878264A (en) 1959-03-17 Substituted amino alcohols
US513030A (en) 1894-01-16 Machine for waxing or coating paper
DE133885C (ko)
DE1144279B (de) 1957-09-26 1963-02-28 Robins Co Inc A H Verfahren zur Herstellung von 3-Aryl-3-hydroxypyrrolidinen und deren Salzen
US3135766A (en) 1961-10-03 1964-06-02 Mead Johnson & Co 3-substituted-3-pyrrolidinols
US3484473A (en) 1967-05-12 1969-12-16 Buckman Labor Inc Methylene bisesters of thiolsulfonic acids
DE1934150A1 (de) 1968-07-10 1970-01-15 Pennwalt Corp Neue 1-Alkanoyloxy-1,2,4,5-tetrahydro-3H,3-benzazepine
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US3745162A (en) 1970-08-31 1973-07-10 Robins Co Inc A H 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-2-(thio)-carboxamides
GB1448437A (en) 1973-02-24 1976-09-08 Beecham Group Ltd Diphenylpropylamines
US4022791A (en) 1975-06-03 1977-05-10 Pfizer Inc. 2-Aminomethyl-3,4-dihydronaphthalenes
GB1504424A (en) 1975-08-09 1978-03-22 Beecham Group Ltd Isoquinoline-derived aminoethers
BR7807288A (pt) 1977-11-08 1979-06-12 Genentech Inc Processo para sintese de polinucleotidos
DD133885B1 (de) 1978-01-04 1981-02-25 Hans Lehmann Mittel zur bekaempfung von phytopathogenen bakterien und pilzen
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4542142A (en) 1982-11-22 1985-09-17 Roussel Uclaf Insecticidal cyclopropane carboxylic acid derivatives with 3-unsaturated-side chain
USRE34069E (en) 1983-08-18 1992-09-15 Biosyntech Gmbh Process for the preparation of oligonucleotides
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5643889A (en) 1984-07-11 1997-07-01 Temple University-Of The Commonwealth System Of Pennsylvania Cholesterol conjugates of 2'5'-oligoadenylate derivatives and antiviral uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
FR2576898B1 (fr) 1985-02-01 1988-01-08 Lafon Labor Derives de 3-phenyl-tetrahydropyridine, procede de preparation et utilisation en therapeutique
US4659774A (en) 1985-11-01 1987-04-21 American Hoechst Corporation Support for solid-phase oligonucleotide synthesis
US4840956A (en) 1986-02-18 1989-06-20 Warner-Lambert Company Novel disubstituted-7-pyrrolidinoquinoline antibacterial agents
US4735949A (en) 1986-02-18 1988-04-05 Warner-Lambert Company Disubstituted-7-pyrrolidinonaphthyridine antibacterial agents
IL83663A0 (en) 1986-10-27 1988-01-31 Robins Co Inc A H Preparation of 3-pyrrolidinols
JP2828642B2 (ja) 1987-06-24 1998-11-25 ハワード フローレイ インスティテュト オブ イクスペリメンタル フィジオロジー アンド メディシン ヌクレオシド誘導体
EP0302349B1 (en) 1987-07-30 1993-09-29 Bar Ilan University Biologically active carboxylic acid esters
US4923901A (en) 1987-09-04 1990-05-08 Millipore Corporation Membranes with bound oligonucleotides and peptides
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
JP2794461B2 (ja) 1989-08-17 1998-09-03 有機合成薬品工業株式会社 ホスホアミダイト化合物及びそれを用いたオリゴリボヌクレオチドの固相合成法
US5141813A (en) 1989-08-28 1992-08-25 Clontech Laboratories, Inc. Multifunctional controlled pore glass reagent for solid phase oligonucleotide synthesis
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
EP0507863A4 (en) 1989-12-28 1993-07-07 Virginia Commonwealth University Sigma receptor ligands and the use thereof
US5212295A (en) 1990-01-11 1993-05-18 Isis Pharmaceuticals Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
JP2580091B2 (ja) 1990-01-11 1997-02-12 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド Ｒｎａ活性および遺伝子発現を検出および変調するための組成物および方法
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US6339066B1 (en) 1990-01-11 2002-01-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides which have phosphorothioate linkages of high chiral purity and which modulate βI, βII, γ, δ, Ε, ζ and η isoforms of human protein kinase C
US5914396A (en) 1990-01-11 1999-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-modified nucleosides and phosphoramidites
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5506212A (en) 1990-01-11 1996-04-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides with substantially chirally pure phosphorothioate linkages
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5620963A (en) 1991-10-15 1997-04-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating protein kinase C having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5635488A (en) 1991-10-15 1997-06-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds having phosphorodithioate linkages of high chiral purity
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5151510A (en) 1990-04-20 1992-09-29 Applied Biosystems, Inc. Method of synethesizing sulfurized oligonucleotide analogs
US5292875A (en) 1990-04-20 1994-03-08 Lynx Therapeutics, Inc. Method of synthesizing sulfurized oligonucleotide analogs
DK0531447T3 (da) 1990-05-23 2000-03-27 Isis Pharmaceuticals Inc Præparater og fremgangsmåder til modulering af RNA-aktivitet ved modifikation af 5'-cap-strukturen af RNA
US5726017A (en) 1990-06-11 1998-03-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity HIV-1 gag nucleic acid ligands
US5587468A (en) 1990-06-11 1996-12-24 University Research Corporation High affinity nucleic acid ligands to HIV integrase
US5861254A (en) 1997-01-31 1999-01-19 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Flow cell SELEX
US5527894A (en) 1990-06-11 1996-06-18 Nexstar Pharmacueticals, Inc. Ligands of HIV-1 tat protein
US5503978A (en) 1990-06-11 1996-04-02 University Research Corporation Method for identification of high affinity DNA ligands of HIV-1 reverse transcriptase
US6001577A (en) 1998-06-08 1999-12-14 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: photoselection of nucleic acid ligands and solution selex
US6331394B1 (en) 1991-06-10 2001-12-18 Gilead Sciences, Inc. Nucleic acid ligands to integrins
US5543293A (en) 1990-06-11 1996-08-06 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. DNA ligands of thrombin
US5869641A (en) 1990-06-11 1999-02-09 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity nucleic acid ligands of CD4
US5780228A (en) 1990-06-11 1998-07-14 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity nucleic acid ligands to lectins
US5668264A (en) 1990-06-11 1997-09-16 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity PDGF nucleic acid ligands
US6232071B1 (en) 1990-06-11 2001-05-15 Gilead Sciences, Inc. Tenascin-C nucleic acid ligands
US5846713A (en) 1990-06-11 1998-12-08 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity HKGF nucleic acid ligands and inhibitors
US5705337A (en) 1990-06-11 1998-01-06 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: chemi-SELEX
US6261774B1 (en) 1990-06-11 2001-07-17 Gilead Sciences, Inc. Truncation selex method
US5683867A (en) 1990-06-11 1997-11-04 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: blended SELEX
US5580737A (en) 1990-06-11 1996-12-03 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High-affinity nucleic acid ligands that discriminate between theophylline and caffeine
CA2084987C (en) 1990-06-11 2007-02-13 Larry Gold Nucleic acid ligands
US5637459A (en) 1990-06-11 1997-06-10 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: chimeric selex
US5496938A (en) 1990-06-11 1996-03-05 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligands to HIV-RT and HIV-1 rev
US5654151A (en) 1990-06-11 1997-08-05 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity HIV Nucleocapsid nucleic acid ligands
US5567588A (en) 1990-06-11 1996-10-22 University Research Corporation Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: Solution SELEX
US5610289A (en) * 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
BR9106702A (pt) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Inc Analogo de oligonucleotideos e processos para modular a producao de uma proteina por um organismo e para tratar um organismo
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US5512668A (en) 1991-03-06 1996-04-30 Polish Academy Of Sciences Solid phase oligonucleotide synthesis using phospholane intermediates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US6414112B1 (en) 1991-05-24 2002-07-02 Ole Buchardt Peptide nucleic acids having 2,6-diaminopurine nucleobases
JPH04348077A (ja) 1991-05-24 1992-12-03 Nec Corp 薄膜トランジスタ
WO1992022655A1 (en) 1991-06-10 1992-12-23 Lucky Limited Hepatitis c diagnostics and vaccines
US5359052A (en) 1991-08-05 1994-10-25 Polish Academy Of Sciences Chalcophospholanes useful in the synthesis of oligonucleoside phosphorothioates, phosphorodithioates and related selenates
US5646267A (en) 1991-08-05 1997-07-08 Polish Academy Of Sciences Method of making oligonucleotides and oligonucleotide analogs using phospholanes and enantiomerically resolved phospholane analogues
US6369209B1 (en) 1999-05-03 2002-04-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
US7119184B2 (en) 1991-08-12 2006-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
WO1993008296A1 (en) 1991-10-15 1993-04-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5599797A (en) 1991-10-15 1997-02-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5576302A (en) 1991-10-15 1996-11-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating hepatitis C virus having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5654284A (en) 1991-10-15 1997-08-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating RAF kinase having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5607923A (en) 1991-10-15 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating cytomegalovirus having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5661134A (en) 1991-10-15 1997-08-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides for modulating Ha-ras or Ki-ras having phosphorothioate linkages of high chiral purity
DE59208572D1 (de) 1991-10-17 1997-07-10 Ciba Geigy Ag Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
ATE515510T1 (de) 1991-12-24 2011-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc Durch dna-abschnitte unterbrochene modifizierte oligonukleotide
WO1993023569A1 (en) 1992-05-11 1993-11-25 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for inhibiting viral replication
GB9213601D0 (en) 1992-06-26 1992-08-12 Mastico Robert A Protein based delivery system
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
US7067497B2 (en) 1992-09-29 2006-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of telomere length by oligonucleotides having a G-core sequence
DE69400208T2 (de) 1993-01-25 1996-11-28 Hybridon Inc Olionukleotidalkylphosphonate und -phosphonothioate
EP0691979A1 (en) 1993-03-31 1996-01-17 Sanofi Novel 5'-substituted nucleosides and oligomers produced therefrom
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
DE69412704T2 (de) 1993-06-10 1999-02-04 Idemitsu Petrochemical Co Spritzgiessform
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5643989A (en) 1993-10-29 1997-07-01 Azdel, Inc. Fiber reinforced functionalized polyolefin composites
EP0732929B1 (en) 1993-10-29 2008-05-14 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic use of cis-element decoys in vivo
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
DE4435728A1 (de) 1994-01-19 1995-07-20 Boehringer Mannheim Gmbh Biotinsilan-Verbindungen und diese Verbindungen enthaltende Bindematrix
AU1838295A (en) 1994-02-10 1995-08-29 Nexagen, Inc. High-affinity ligands of basic fibroblast growth factor and thrombin
US6117679A (en) 1994-02-17 2000-09-12 Maxygen, Inc. Methods for generating polynucleotides having desired characteristics by iterative selection and recombination
WO1995022615A1 (en) 1994-02-22 1995-08-24 Novo Nordisk A/S A method of preparing a variant of a lipolytic enzyme
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
EP0759073A1 (en) 1994-05-11 1997-02-26 Novo Nordisk A/S AN ENZYME WITH ENDO-1,3(4)-$g(b)-GLUCANASE ACTIVITY
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
CA2194761C (en) 1994-07-15 2006-12-19 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
DE69521517T2 (de) 1994-09-07 2002-04-18 Hybridon Inc Prodrug-oligonukleotide
US5681940A (en) 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
EP0807171A1 (en) 1994-12-22 1997-11-19 HYBRIDON, Inc. Synthesis of stereospecific oligonucleotide phosphorothioates
GB9501465D0 (en) 1995-01-25 1995-03-15 King S College London Nucleoside phosphorothioate derivatives,synthesis and use thereof
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
AU5301996A (en) 1995-03-06 1996-09-23 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High-affinity oligonucleotide ligands to secretory phospholipase a2(spla2)
JPH10512894A (ja) 1995-03-06 1998-12-08 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ２’−ｏ−置換ピリミジンおよびそのオリゴマー化合物の合成の改良法
DE69638104D1 (de) 1995-04-27 2010-02-11 Takara Bio Inc Für Lacto-N-biosidase kodierendes Gen
EP0824588B1 (en) 1995-05-11 2004-07-14 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Il-6 activity inhibitor
ES2151173T3 (es) 1995-05-23 2000-12-16 Hybridon Inc Nuevos sintones para la sintesis estereoselectiva de oligonucleotidos.
AU5871196A (en) 1995-05-23 1996-12-24 Hybridon, Inc. Methods and compounds for the synthesis of oligonucleotides and the oligonucleotides thereby produced
EP0831854A4 (en) 1995-06-06 2001-01-24 Isis Pharmaceuticals Inc OLIGONUCLEOTIDS WITH PHOSPHOROTHIOATE BINDINGS OF HIGH CHIRAL PURITY
US6111095A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Merck & Co., Inc. Capped synthetic RNA, analogs, and aptamers
US5932450A (en) 1995-06-07 1999-08-03 Gen-Probe Incorporated Enzymatic synthesis of oligonucleotides using digestible templates
US6699843B2 (en) 1995-06-07 2004-03-02 Gilead Sciences, Inc. Method for treatment of tumors using nucleic acid ligands to PDGF
DE69635849T2 (de) 1995-06-29 2006-10-19 Takara Bio Inc., Otsu Für Endoglycoceramidase kodierendes Gen
US5824503A (en) 1995-06-29 1998-10-20 Takara Shuzo Co, Ltd. Gene encoding endoglycoceramidase activator
US6017700A (en) * 1995-08-04 2000-01-25 Bayer Corporation Cationic oligonucleotides, and related methods of synthesis and use
US5936080A (en) 1996-05-24 1999-08-10 Genta Incorporated Compositions and methods for the synthesis of organophosphorus derivatives
WO1997009443A1 (en) 1995-09-05 1997-03-13 Michigan State University PROCESS FOR THE ISOLATION AND PURIFICATION OF TAXOL AND TAXANES FROM TAXUS spp
US6476216B1 (en) 1995-10-20 2002-11-05 Mcgill University Preparation of phosphorothioate oligomers
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US5734041A (en) 1995-10-20 1998-03-31 Mcgill University Preparation of chiral phosphorothioate oligomers
US5856085A (en) 1995-12-01 1999-01-05 The Penn State Research Foundation Compositions and methods of developing oligonucleotides and oligonucleotide analogs having antiviral activity
US7018793B1 (en) 1995-12-07 2006-03-28 Diversa Corporation Combinatorial screening of mixed populations of organisms
JP2000505646A (ja) 1996-02-01 2000-05-16 ネクスター・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 補体系蛋白の高親和性核酸リガンド
US6214805B1 (en) 1996-02-15 2001-04-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services RNase L activators and antisense oligonucleotides effective to treat RSV infections
US5998602A (en) 1996-02-15 1999-12-07 The Cleveland Clinic Fouindation And Government RNase L activators and antisense oligonucleotides effective to treat RSV infections
GB9604669D0 (en) 1996-03-05 1996-05-01 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
US5824669A (en) 1996-03-22 1998-10-20 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated compounds and compositions and their use for treating respiratory disorders
AU3025597A (en) 1996-05-10 1997-12-05 Novo Nordisk A/S Method of providing novel dna sequences
US5856465A (en) 1996-05-24 1999-01-05 Polska Akademia Nauk Centrum Badan Molekularnych I Makromolekularnych Compositions and methods for the synthesis of chirally pure organophosphorus nucleoside derivatives
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
DE19622783A1 (de) 1996-06-07 1997-12-11 Hoechst Ag Isolierung der Biosynthesegene für Pseudo-Oligosaccharide aus Streptomyces glaucescens GLA.O und ihre Verwendung
DE69736667T2 (de) 1996-07-16 2007-09-06 Gen-Probe Inc., San Diego Verfahren zum nachweis und amplifikation von nukleinsäuresequenzen unter verbrauch von modifizierten oligonukleotiden mit erhöhter zielschmelztemperatur (tm)
ATE311402T1 (de) 1996-07-24 2005-12-15 Buchardt Dorte Peptidnukleinsäuren mit erhöhter bindungsaffinität, sequenzspezifität und löslichkeit
AU4156197A (en) 1996-08-21 1998-03-06 Hybridon, Inc. Oligonucleotide prodrugs
WO1998008809A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 Hybridon, Inc. Novel sulfur transfer reagents for oligonucleotide synthesis
US6056973A (en) 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
US6051698A (en) 1997-06-06 2000-04-18 Janjic; Nebojsa Vascular endothelial growth factor (VEGF) nucleic acid ligand complexes
IL130192A0 (en) 1996-12-27 2000-06-01 Icn Pharmaceuticals G-rich oligo aptamers and method of modulating an immune response
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US6369237B1 (en) 1997-03-07 2002-04-09 President And Fellows Of Harvard College DNA glycosylase inhibitors, and uses related thereto
US6015887A (en) 1997-04-11 2000-01-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chiral peptide nucleic acids and methods for preparing same
US6468983B2 (en) 1997-04-21 2002-10-22 The Cleveland Clinic Foundation RNase L activators and antisense oligonucleotides effective to treat telomerase-expressing malignancies
PL184612B1 (pl) 1997-04-25 2002-11-29 Pan Sposób wytwarzania modyfikowanych P chiralnych analogów nukleotydów
JP2001501975A (ja) 1997-05-28 2001-02-13 ペーター・エー・ニールセン 亢進した細胞取り込みを有する結合ペプチド核酸
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
WO1999005160A2 (en) 1997-07-25 1999-02-04 Hybridon, Inc. Oligonuclotides having 3' terminal stereospecific phosphorothioates
US6767739B2 (en) 2001-07-30 2004-07-27 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of microsomal triglyceride transfer protein expression
GB9717158D0 (en) 1997-08-13 1997-10-22 King S College London Solution synthesis of oligonucleotides and their phosphorothioate analogues
US6383808B1 (en) 2000-09-11 2002-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of clusterin expression
US6750344B1 (en) 1997-09-05 2004-06-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine compounds and combinatorial libraries comprising same
DE19741715A1 (de) 1997-09-22 1999-03-25 Hoechst Ag Pentopyranosyl-Nucleosid, seine Herstellung und Verwendung
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
US6080543A (en) 1997-12-08 2000-06-27 E. & J. Gallo Winery Detection of fungal pathogens
US6582936B1 (en) 1997-12-12 2003-06-24 The Regents Of The University Of California Methods for making nucleic acids
US6248519B1 (en) 1998-03-11 2001-06-19 E & J Gallo Winery Detection of fermentation-related microorganisms
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
AU3884199A (en) 1998-05-06 1999-11-23 Ottawa Health Research Institute Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
IL139646A0 (en) 1998-05-14 2002-02-10 Coley Pharm Group Inc Methods for regulating hematopoiesis using cpg-oligonucleotides
US6242589B1 (en) 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
WO2000006588A1 (en) 1998-07-27 2000-02-10 University Of Iowa Research Foundation STEREOISOMERS OF CpG OLIGONUCLEOTIDES AND RELATED METHODS
JP4620251B2 (ja) 1998-08-10 2011-01-26 アンチジェニックス・インコーポレイテッド Ｃｐｇおよびサポニンアジュバントの組成物並びにその方法
JP3655550B2 (ja) 1998-08-14 2005-06-02 独立行政法人科学技術振興機構 Ｒａｓの標的蛋白質に特異的に結合し得る核酸
WO2000023444A1 (en) 1998-10-21 2000-04-27 Abbott Laboratories 5,7-disubstituted-4-aminopyrido[2,3-d]pyrimidine compounds
US6995259B1 (en) 1998-10-23 2006-02-07 Sirna Therapeutics, Inc. Method for the chemical synthesis of oligonucleotides
US6423493B1 (en) 1998-10-26 2002-07-23 Board Of Regents The University Of Texas System Combinatorial selection of oligonucleotide aptamers
US6451524B1 (en) 1998-11-25 2002-09-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Identification of disease predictive nucleic acids
WO2000031110A1 (en) 1998-11-25 2000-06-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Identification of disease predictive nucleic acids
ATE438724T1 (de) 1998-12-21 2009-08-15 Genencor Int Chemisch modifizierte enzymen mit mehrfachgeladenen varianten
WO2000040749A2 (en) 1999-01-06 2000-07-13 Genenews Inc. Method for the detection of gene transcripts in blood and uses thereof
US6265172B1 (en) 1999-02-08 2001-07-24 University Of Kentucky Diagnostic test and therapy for manganese superoxide dismutate (mNsod) associated diseases
US6121437A (en) 1999-03-16 2000-09-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphate and thiophosphate protecting groups
US6506594B1 (en) 1999-03-19 2003-01-14 Cornell Res Foundation Inc Detection of nucleic acid sequence differences using the ligase detection reaction with addressable arrays
GB9907245D0 (en) 1999-03-29 1999-05-26 Goldsborough Andrew Cleavage of nucleic acids from solid supports
JP3072345B1 (ja) 1999-03-31 2000-07-31 農林水産省家畜衛生試験場長 豚丹毒菌の組換えサブユニットワクチン
DE19916417A1 (de) 1999-04-01 2000-10-19 Schering Ag Amyloidspezifisches Aptamer
EP1181304B1 (en) 1999-04-08 2007-10-10 Antisoma Research Limited Antiproliferative activity of g-righ oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
US6977245B2 (en) 1999-04-12 2005-12-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Oligodeoxynucleotide and its use to induce an immune response
US6300069B1 (en) 1999-05-03 2001-10-09 Qiagen Gmbh Generation and amplification of nucleic acids from ribonucleic acids
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
US6271004B1 (en) 1999-06-25 2001-08-07 Display Systems Biotech A/S Method for improved reverse transcription at high temperatures
US6066500A (en) 1999-06-25 2000-05-23 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of Beta catenin expression
US6569630B1 (en) 1999-07-02 2003-05-27 Conceptual Mindworks, Inc. Methods and compositions for aptamers against anthrax
US6414135B1 (en) 1999-07-07 2002-07-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. C3′-methylene hydrogen phosphonate monomers and related compounds
US20030092647A1 (en) 2001-08-08 2003-05-15 Crooke Rosanne M. Antisense modulation of cholesteryl ester transfer protein expression
DE19935756A1 (de) 1999-07-27 2001-02-08 Mologen Forschungs Entwicklung Kovalent geschlossenes Nukleinsäuremolekül zur Immunstimulation
US6171795B1 (en) 1999-07-29 2001-01-09 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligands to CD40ligand
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
US7264932B2 (en) 1999-09-24 2007-09-04 Applera Corporation Nuclease inhibitor cocktail
AP1775A (en) 1999-09-25 2007-08-28 Univ Iowa Res Found Immunostimulatory nucleic acids.
US6949520B1 (en) 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
MXPA02003059A (es) 1999-09-27 2002-09-30 Univ Iowa Res Found Metodos relacionados con interferon inducido por acido nucleico inmunoestabilizador.
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
WO2001025488A2 (en) 1999-10-06 2001-04-12 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger rna
JP3463098B2 (ja) 1999-10-08 2003-11-05 独立行政法人産業技術総合研究所 モジュレートアプタマー及びこれを用いた標的タンパク質の検出方法
GB9924285D0 (en) 1999-10-14 1999-12-15 Avecia Ltd Process
US20010055761A1 (en) 1999-10-29 2001-12-27 Agilent Technologies Small scale dna synthesis using polymeric solid support with functionalized regions
FR2800750B1 (fr) 1999-11-05 2003-01-31 Centre Nat Rech Scient Proteines membranaires ctl (choline transporter like) impliquees dans le transport de la choline
WO2001040515A1 (en) 1999-11-12 2001-06-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
US6322985B1 (en) 1999-12-27 2001-11-27 Technion Research And Development Foundation Ltd. Abundant, well distributed and hyperpolymorphic simple sequence repeats in prokaryote genomes and use of same for prokaryote classification and typing
JP2004510953A (ja) 1999-12-30 2004-04-08 キャボット　コーポレイション 改良された性質を有するセンサー
US7055094B2 (en) 1999-12-30 2006-05-30 Rutgers, The State University Of New Jersey Virtual tags and the process of virtual tagging utilizing user feedback in transformation rules
US6649750B1 (en) 2000-01-05 2003-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of oligonucleotide compounds
US6159697A (en) 2000-01-19 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of Smad7 expression
US7585847B2 (en) 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
US6936432B2 (en) 2000-03-01 2005-08-30 Message Pharmaceuticals Bacterial RNase P proteins and their use in identifying antibacterial compounds
GB0004889D0 (en) 2000-03-01 2000-04-19 Avecia Ltd Synthesis of oligonucleotides
WO2001070663A2 (en) 2000-03-17 2001-09-27 Corixa Corporation Novel amphipathic aldehydes and their use as adjuvants and immunoeffectors
CN1178911C (zh) 2000-04-20 2004-12-08 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 吡咯烷与哌啶衍生物和它们用于治疗神经变性疾病的用途
DE10019756A1 (de) 2000-04-20 2001-10-25 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von superabsorbierenden Polymeren aus Polyacrylnitrilen
AU2001259706A1 (en) 2000-05-09 2001-11-20 Reliable Biopharmaceutical, Inc. Polymeric compounds useful as prodrugs
US6492171B2 (en) 2000-05-16 2002-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of TERT expression
US6725412B1 (en) 2000-08-15 2004-04-20 Dolby Laboratories Licensing Corporation Low latency data encoder
US6809195B1 (en) 2000-08-16 2004-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of oligonucleotides
US6559279B1 (en) 2000-09-08 2003-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing peptide derivatized oligomeric compounds
EP1191097A1 (en) 2000-09-21 2002-03-27 Leids Universitair Medisch Centrum Induction of exon skipping in eukaryotic cells
US6376190B1 (en) 2000-09-22 2002-04-23 Somalogic, Inc. Modified SELEX processes without purified protein
AU2001296305B2 (en) 2000-09-26 2007-12-06 Duke University RNA aptamers and methods for identifying the same
GB0024752D0 (en) 2000-10-10 2000-11-22 Univ Belfast Oxidative halogenation of aromatic compounds
AU2002224401B2 (en) 2000-10-16 2007-12-06 Gilead Sciences, Inc. Nucleic acid ligands to the prostate specific membrane antigen
AU4433702A (en) 2000-10-18 2002-04-29 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6682889B1 (en) 2000-11-08 2004-01-27 Becton, Dickinson And Company Amplification and detection of organisms of the Chlamydiaceae family
JP2002165594A (ja) 2000-11-29 2002-06-11 National Institute Of Advanced Industrial & Technology Ｃ型肝炎ウイルスのｉｒｅｓ及びｎｓ３プロテアーゼを標的とするｒｎａ分子
NL1016978C2 (nl) 2000-12-22 2002-06-25 Robert Jan Colenbrander Inrichting en werkwijze voor het verpakken en bereiden van voedsel en werkwijze voor het vervaardigen van een dergelijke inrichting.
RS50236B (sr) 2001-01-22 2009-07-15 Merck & Co.Inc., Nukleozidni derivati kao inhibitori rnk-zavisne rnk virusne polimeraze
DE60239386D1 (de) 2001-01-25 2011-04-21 Evolva Ltd Zellbibliothek
US8008459B2 (en) 2001-01-25 2011-08-30 Evolva Sa Concatemers of differentially expressed multiple genes
NZ526507A (en) 2001-01-26 2005-07-29 Commw Scient Ind Res Org Methods and means for producing efficient silencing construct using recombinational cloning
JP2004532022A (ja) 2001-03-26 2004-10-21 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｂ型肝炎ウイルスおよびｃ型肝炎ウイルスの複製のオリゴヌクレオチド媒介性阻害
US20050277133A1 (en) 2001-05-18 2005-12-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030207804A1 (en) 2001-05-25 2003-11-06 Muthiah Manoharan Modified peptide nucleic acids
GB0113523D0 (en) 2001-06-04 2001-07-25 Torotrak Dev Ltd An Hydraulic control circuit for a continuosly variable transmission
US20030069410A1 (en) 2001-06-14 2003-04-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for preparing oligonucleotides having chiral phosphorothioate linkages
JP4370161B2 (ja) 2001-06-29 2009-11-25 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド Ｈｃｖｅ１ｅ２ワクチン組成物
WO2003004602A2 (en) 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US7205399B1 (en) 2001-07-06 2007-04-17 Sirna Therapeutics, Inc. Methods and reagents for oligonucleotide synthesis
US6440739B1 (en) 2001-07-17 2002-08-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of glioma-associated oncogene-2 expression
US7425545B2 (en) 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US6455308B1 (en) 2001-08-01 2002-09-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of serum amyloid A4 expression
US7888324B2 (en) 2001-08-01 2011-02-15 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression
US7407943B2 (en) 2001-08-01 2008-08-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein B expression
US7227014B2 (en) 2001-08-07 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression
US7259150B2 (en) 2001-08-07 2007-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
AU2002361468A1 (en) 2001-08-14 2003-03-18 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human S Method for rapid generation of mature dendritic cells
CA2458393A1 (en) 2001-08-24 2003-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Reagents that facilitate the purification of compounds synthesized on a solid support
US7049122B2 (en) 2001-09-21 2006-05-23 Academia Sinica Mutant-type lipases and applications thereof
US6933288B2 (en) 2002-02-04 2005-08-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyranosyl cytosines: pharmaceutical formulations and methods
JP4348044B2 (ja) 2002-02-12 2009-10-21 株式会社キラルジェン 立体規則性の高いジヌクレオシドホスホロチオエートの製造法
US8232383B2 (en) 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003106476A1 (en) 2002-02-20 2003-12-24 Sirna Therapeutics, Inc Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity
US20050096284A1 (en) 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US7288376B2 (en) 2002-03-22 2007-10-30 Council Of Scientific And Industrial Research Method of detection of SP-A2 gene variants useful for prediction of predisposition to aspergillosis
US20040102394A1 (en) 2002-11-23 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of huntingtin interacting protein 2 expression
WO2003097662A1 (en) 2002-05-15 2003-11-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein b expression
AU2003241621A1 (en) 2002-05-24 2003-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having modified nucleoside units
US20040014957A1 (en) 2002-05-24 2004-01-22 Anne Eldrup Oligonucleotides having modified nucleoside units
WO2003102212A2 (en) 2002-05-31 2003-12-11 Regents Of The University Of Minnesota In vitro evaluation of nucleic acid ligands
US7507808B2 (en) 2002-12-12 2009-03-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of endothelial lipase expression
AU2003248708A1 (en) 2002-06-17 2003-12-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds that include carbocyclic nucleosides and their use in gene modulation
BR0311995A (pt) 2002-06-20 2005-04-05 Cytos Biotechnology Ag Partìculas semelhantes a vìrus empacotadas para o uso como adjuvantes: método de preparação e uso
WO2004003228A1 (en) 2002-07-01 2004-01-08 Unisearch Limited Genotyping method
AU2003254334A1 (en) 2002-07-10 2004-02-02 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Rna-interference by single-stranded rna molecules
US20040023905A1 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of LAR expression
EP1386972A1 (en) 2002-08-01 2004-02-04 Noxxon Pharma AG Method and apparatus for designing a nucleic acid having a desired property
US20050255086A1 (en) 2002-08-05 2005-11-17 Davidson Beverly L Nucleic acid silencing of Huntington's Disease gene
US20080274989A1 (en) 2002-08-05 2008-11-06 University Of Iowa Research Foundation Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof
US20050042646A1 (en) 2002-08-05 2005-02-24 Davidson Beverly L. RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
AU2003261449A1 (en) 2002-08-07 2004-02-25 Compositions for rna interference and methods of use thereof
AR040996A1 (es) 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
US7414116B2 (en) 2002-08-23 2008-08-19 Illumina Cambridge Limited Labelled nucleotides
EP1537208A1 (en) 2002-09-13 2005-06-08 Replicor, Inc. Non-sequence complementary antiviral oligonucleotides
US7030230B2 (en) 2002-10-25 2006-04-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process of purifying phosphoramidites
ZA200503511B (en) 2002-10-29 2006-10-25 Coley Pharmaceutical Group Ltd Use of CPG oligonucleotides in the treatment of hepatitis C virus infection
WO2004044141A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated oligomeric compounds and their use in gene modulation
WO2004044134A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorous-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
WO2004044139A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
US7381527B2 (en) 2002-11-06 2008-06-03 Council Of Scientific And Industrial Research Method of detection of SP-A2 gene variants
CA2505801A1 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Rosanne Crooke Antisense modulation of apolipoprotein b expression
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
EP1605978B1 (en) 2003-03-07 2010-09-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Therapeutic compositions
GB0305422D0 (en) 2003-03-10 2003-04-16 Univ Open Detection, monitoring and treatment of cancer
CA2524255C (en) 2003-03-21 2014-02-11 Academisch Ziekenhuis Leiden Modulation of exon recognition in pre-mrna by interfering with the secondary rna structure
GB0306657D0 (en) 2003-03-24 2003-04-30 Avecia Ltd Process and compounds
US7537767B2 (en) 2003-03-26 2009-05-26 Cytis Biotechnology Ag Melan-A- carrier conjugates
ZA200507562B (en) 2003-03-26 2006-11-29 Cytos Biotechnology Ag HIV-peptide-carrier-conjugates
ITRM20030149A1 (it) 2003-04-02 2004-10-03 Giuliani Spa Oligonucleotidi (odn) antisenso per smad7 e loro usi in campo medico
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
WO2004094614A2 (en) 2003-04-21 2004-11-04 Archemix Corp. Stabilized aptamers to platelet derived growth factor and their use as oncology therapeutics
US7045306B2 (en) 2003-04-28 2006-05-16 The General Hospital Corporation Method for identifying compounds in vitro that modulate the dysregulation of transcription of transcription mediated by mutant huntingtin protein
US7214491B2 (en) 2003-05-07 2007-05-08 E. I. Du Pont De Nemours And Company Δ-12 desaturase gene suitable for altering levels of polyunsaturated fatty acids in oleaginous yeasts
US7589189B2 (en) 2003-05-14 2009-09-15 Japan Science And Technology Agency Inhibition of the expression of huntingtin gene
CN1984921B (zh) 2003-06-03 2010-06-16 Isis药物公司 存活蛋白表达的调节
BRPI0411514A (pt) 2003-06-20 2006-08-01 Coley Pharm Gmbh antagonistas de receptor toll-like de molécula pequena
CA2533701A1 (en) 2003-07-31 2005-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding rnas
JP2011088935A (ja) 2003-08-08 2011-05-06 Chiralgen Ltd リン原子修飾ヌクレオチド類縁体の製造のための光学活性ヌクレオシド３’−ホスホロアミダイト
JP2005089441A (ja) 2003-08-08 2005-04-07 Toudai Tlo Ltd 立体規則性の高いリン原子修飾ヌクレオチド類縁体の製造法
US7825235B2 (en) 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
WO2005028494A1 (ja) 2003-09-02 2005-03-31 Takeshi Wada ５'-ホスフィチル化モノマーおよびh-ホスホネートオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2005023828A1 (ja) 2003-09-02 2005-03-17 Takeshi Wada リボヌクレオチド又はリボヌクレオチド誘導体の製造方法
ES2662196T3 (es) 2003-09-09 2018-04-05 Geron Corporation Oligonucleótidos modificados para la inhibición de la telomerasa
US20050074801A1 (en) 2003-09-09 2005-04-07 Monia Brett P. Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry
US20050053981A1 (en) 2003-09-09 2005-03-10 Swayze Eric E. Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini
WO2005027980A1 (en) 2003-09-12 2005-03-31 University Of Massachusetts Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders
WO2008005562A2 (en) 2006-07-07 2008-01-10 University Of Massachusetts Rna silencing compositions and methods for the treatment of huntington's disease
US8680063B2 (en) 2003-09-12 2014-03-25 University Of Massachusetts RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders
GB0323968D0 (en) 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
CN101454451A (zh) 2003-10-30 2009-06-10 科勒制药有限公司 具有增强免疫刺激能力的c类寡核苷酸类似物
WO2005042716A2 (en) 2003-10-31 2005-05-12 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid binding oligonucleotides
US7846436B2 (en) 2003-11-28 2010-12-07 Chemgenes Corporation Oligonucleotides and related compounds
WO2005070859A1 (ja) 2004-01-27 2005-08-04 Takeshi Wada フルオラス担体およびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
US20050176045A1 (en) 2004-02-06 2005-08-11 Dharmacon, Inc. SNP discriminatory siRNA
EP1725250A2 (en) 2004-02-18 2006-11-29 Frutarom Ltd. Method for the preparation of peptide-oligonucleotide conjugates
JP3976742B2 (ja) 2004-02-27 2007-09-19 江守商事株式会社 インターフェロンアルファを誘導する免疫刺激オリゴヌクレオチド
US20060193821A1 (en) 2004-03-05 2006-08-31 Diener John L Aptamers to the human IL-12 cytokine family and their use as autoimmune disease therapeutics
WO2005085272A1 (ja) 2004-03-05 2005-09-15 Takeshi Wada ボラノホスフェートモノマーおよびそれを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法
WO2005092909A1 (ja) 2004-03-25 2005-10-06 Toudai Tlo, Ltd. 立体規則性の高いリボヌクレオチド類縁体及びデオキシリボヌクレオチド類縁体の製造法
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
EP1737878A2 (en) 2004-04-05 2007-01-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification
AU2005245793A1 (en) 2004-04-26 2005-12-01 Archemix Corporation Nucleic acid ligands specific to immunoglobulin e and their use as atopic disease therapeutics
TWI350168B (en) 2004-05-07 2011-10-11 Incyte Corp Amido compounds and their use as pharmaceuticals
WO2005116268A2 (en) 2004-05-27 2005-12-08 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health Differential expression of molecules associated with acute stroke
US7759318B1 (en) 2004-05-28 2010-07-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Identification of novel pathways, genes and promoter motifs regulating adipogenesis
AU2005252662B2 (en) 2004-06-03 2011-08-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
EP4272748A3 (en) 2004-06-28 2024-03-27 The University Of Western Australia Antisense oligonucleotides for inducing exon skipping and methods of use thereof
EP2409713B1 (en) 2004-08-10 2015-07-22 Genzyme Corporation Oligonucleotides for use in modulating lipoprotein and cholesterol levels in humans
ATE556085T1 (de) 2004-08-26 2012-05-15 Nippon Shinyaku Co Ltd Phosphoramiditverbindung und verfahren zur herstellung von oligo-rna
AU2005282380A1 (en) 2004-09-07 2006-03-16 Archemix Corp. Aptamer medicinal chemistry
KR20070101227A (ko) 2004-09-07 2007-10-16 아케믹스 코포레이션 폰 빌레브란트 인자에 대한 앱타머 및 이의 혈전증치료제로서의 용도
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
WO2006031461A2 (en) 2004-09-09 2006-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
US7919472B2 (en) 2004-09-17 2011-04-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
JP4944034B2 (ja) 2004-10-13 2012-05-30 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｐｔｐ１ｂ発現のアンチセンス調節
KR100721928B1 (ko) 2004-11-05 2007-05-28 주식회사 바이오씨에스 ＣｐＧ 올리고데옥시뉴클레오티드를 함유하는 피부질환의치료 또는 예방용 약학적 조성물
EP1657307A1 (en) 2004-11-16 2006-05-17 Immunotech S.A. Oligonucleotides that induce the secretion of GM-CSF
AU2005313883B2 (en) 2004-12-09 2011-03-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inducing an immune response in a mammal and methods of avoiding an immune response to oligonucleotide agents such as short interfering RNAs
WO2006065751A2 (en) 2004-12-13 2006-06-22 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Cpg oligonucleotide prodrugs, compositions thereof and associated therapeutic methods
WO2006066260A2 (en) 2004-12-17 2006-06-22 Thiosense, Inc. Compositions of and methods for producing phosphorus-chiral monomers and oligomers
US20060183763A1 (en) 2004-12-31 2006-08-17 Pfizer Inc Novel pyrrolidyl derivatives of heteroaromatic compounds
US20060166901A1 (en) 2005-01-03 2006-07-27 Yu Ruey J Compositions comprising O-acetylsalicyl derivatives of aminocarbohydrates and amino acids
EP1841777B1 (en) 2005-01-28 2015-09-30 Kwon, Hyung-Joo Oligonucleotides derived from mycobacterium for stimulating immune function, treating immune-related diseases, atopic dermatitis and/or protecting normal immune cell
JP2008531018A (ja) 2005-02-24 2008-08-14 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 免疫刺激性オリゴヌクレオチド
JP2006248949A (ja) * 2005-03-09 2006-09-21 Univ Nagoya ヌクレオシド誘導体、ヌクレオチド誘導体及びそれらの製造方法
US8222257B2 (en) 2005-04-01 2012-07-17 The Regents Of The University Of California Phosphono-pent-2-en-1-yl nucleosides and analogs
US8097597B2 (en) 2005-05-05 2012-01-17 Antisense Pharma Gmbh Use of low doses of oligonucleotides antisense to TGF-β genes in the treatment of brain tumors
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
EP1885854B1 (en) 2005-05-06 2012-10-17 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
BRPI0611870A2 (pt) 2005-06-15 2010-10-05 Univ Ohio State Res Found aptámeros que se ligam à proteìna de prìon
US10242753B2 (en) 2005-06-17 2019-03-26 University Of Washington Method for measuring strength of associations of multidimensional traits
PL2548560T3 (pl) 2005-06-23 2015-11-30 Biogen Ma Inc Kompozycje i sposoby modulowania splicingu SMN2
EP2062980B1 (en) 2005-06-28 2011-08-31 Medtronic, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin gene.
US9133517B2 (en) 2005-06-28 2015-09-15 Medtronics, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
US20090162316A1 (en) 2005-07-05 2009-06-25 Harvard University Liver targeted conjugates
JP4984634B2 (ja) 2005-07-21 2012-07-25 ソニー株式会社 物理情報取得方法および物理情報取得装置
BRPI0615958B8 (pt) 2005-07-28 2021-05-25 Id Fish Tech Inc composição para aumentar a permeabilidade de paredes celulares e membranas celulares de mycobacterium sp. e método para detectar um alvo em uma célula
WO2007025049A2 (en) 2005-08-26 2007-03-01 Archemix Corp. Aptamers that bind thrombin with high affinity
JP5523705B2 (ja) 2005-08-29 2014-06-18 レグルス・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｍｉｒ−１２２ａをモジュレートする使用方法
US8501703B2 (en) * 2005-08-30 2013-08-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
EP1931803A2 (en) 2005-09-15 2008-06-18 Duke University Focused libraries, functional profiling, laser selex and deselex
US7700567B2 (en) 2005-09-29 2010-04-20 Supergen, Inc. Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein
US20070077993A1 (en) 2005-09-30 2007-04-05 Midgley Timothy M Method and apparatus for collecting user game play data and crediting users in a gaming environment
KR101455081B1 (ko) 2005-10-12 2014-10-27 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 톨―유사 수용체 기초 면역 반응을 조절하기 위한 면역조절 올리고누클레오티드 (ｉｒｏ)
US9308252B2 (en) 2005-10-27 2016-04-12 Cook Biotech, Inc. Extracellular matrix materials as vaccine adjuvants for diseases associated with infectious pathogens or toxins
CN101365801B (zh) 2005-10-28 2013-03-27 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制亨廷顿基因表达的组合物和方法
CA2627134A1 (en) 2005-10-28 2007-05-03 Tosoh Corporation Method of preparing carotenoid synthesizing microorganism and method of producing carotenoids
CA2628659A1 (en) 2005-11-11 2007-05-24 Pfizer, Inc. Combinations and methods of using an immunomodulatory oligodeoxynucleotide
WO2007064291A1 (en) 2005-11-30 2007-06-07 Jyoti Chattopadhyaya Method and compounds for rna synthesis
AU2006320374B2 (en) 2005-12-02 2012-08-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antibacterial 4,5-substituted aminoglycoside analogs having multiple substituents
US8076303B2 (en) * 2005-12-13 2011-12-13 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide and oligonucleotide prodrugs
CA2634381C (en) 2005-12-21 2011-03-08 Pfizer Products Inc. Carbonylamino pyrrolopyrazoles, potent kinase inhibitors
EP3210633B1 (en) 2006-01-26 2019-06-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to huntingtin
KR20130042043A (ko) 2006-01-27 2013-04-25 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 6-변형된 바이시클릭 핵산 유사체
CA2638847C (en) 2006-02-14 2016-08-09 Noxxon Pharma Ag Mcp-1 binding nucleic acids
EP1991678B2 (en) 2006-02-15 2020-07-15 Rechtsanwalt Thomas Beck Compositions and methods for oligonucleotide formulations
PL2596807T3 (pl) 2006-03-08 2016-06-30 Archemix Llc Aptamery wiążące dopełniacza i środki anty-C5 użyteczne w leczeniu zaburzeń ocznych
US8383660B2 (en) 2006-03-10 2013-02-26 Pfizer Inc. Dibenzyl amine compounds and derivatives
JP2009533022A (ja) 2006-03-31 2009-09-17 アプライド バイオシステムズ， エルエルシー ローダミン標識されたオリゴヌクレオチドを合成するために有用な試薬
EP2010679A2 (en) 2006-04-06 2009-01-07 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for the use in identification of fungi
AU2007242883B2 (en) 2006-04-20 2012-09-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Diazepan derivatives modulators of chemokine receptors
WO2007123386A1 (es) 2006-04-24 2007-11-01 Sigma Alimentos, S.A. De C.V. Método para la detección y cuantificación múltiple y simultánea de patógenos mediante la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real
AU2007243412A1 (en) 2006-04-25 2007-11-08 Immune Disease Institute Inc. Targeted delivery to leukocytes using non-protein carriers
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
WO2007131232A2 (en) 2006-05-05 2007-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to ptpr alpha
US20090326042A1 (en) 2006-05-05 2009-12-31 Isis Pharmaceuticals, Inc Compounds and methods for modulating expression of crp
US20090012120A1 (en) 2006-05-10 2009-01-08 Board Of Trustees Of Michigan State University Synthesis of N-heterocycles, beta-amino acids, and allyl amines via aza-payne mediated reaction of ylides and hydroxy aziridines
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
DK2066684T3 (da) 2006-05-11 2012-10-22 Isis Pharmaceuticals Inc 5´-Modificerede bicycliske nukleinsyreanaloge
WO2007140000A2 (en) 2006-05-26 2007-12-06 Regado Biosciences, Inc. Administration of the reg1 anticoagulation system
JP5161770B2 (ja) 2006-05-31 2013-03-13 東レ株式会社 免疫刺激オリゴヌクレオチド及びその医薬用途
US8097596B2 (en) 2006-06-30 2012-01-17 Lakewood-Amedex, Inc. Compositions and methods for the treatment of muscle wasting
CA2659103C (en) 2006-07-12 2019-05-21 The Regents Of The University Of California Transducible delivery of nucleic acids by reversible phosphotriester charge neutralization protecting groups
US9233106B2 (en) 2006-07-12 2016-01-12 Cornell Research Foundation, Inc. Inhibition of beta-amyloid peptide aggregation
CA2658267C (en) 2006-07-18 2021-03-30 Noxxon Pharma Ag Sdf-1 binding nucleic acids
CN100503824C (zh) 2006-07-20 2009-06-24 武汉大学 抗结核杆菌感染的小分子核苷酸dna适配子及其制备方法
CA2659155A1 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Amgen Inc. Substituted azole aromatic heterocycles as inhibitors of 11.beta.-hsd-1
US8101585B2 (en) 2006-08-04 2012-01-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the modulation of JNK proteins
AT504194B1 (de) 2006-09-07 2008-07-15 Oesterr Rotes Kreuz Bakteriennachweis
EP1897562A1 (en) 2006-09-08 2008-03-12 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Aptamers labelled with Gallium-68
US8138330B2 (en) 2006-09-11 2012-03-20 Sigma-Aldrich Co. Llc Process for the synthesis of oligonucleotides
MX2009003398A (es) 2006-09-27 2009-08-12 Coley Pharm Gmbh Analogos de oligonucleotidos cpg que contienen analogos t hidrofobos con actividad inmunoestimuladora mejorada.
EP2410053B2 (en) 2006-10-18 2020-07-15 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
AU2007309195A1 (en) 2006-10-23 2008-05-02 Irm Llc Cathepsin proteases inhibitors
BRPI0718182A2 (pt) 2006-10-26 2014-02-25 Coley Pharm Gmbh Oligorribonucleotídeos e seus usos.
FR2908414B1 (fr) 2006-11-13 2012-01-20 Centre Nat Rech Scient Immobilisation de proteines membranaires sur un support par l'intermediaire d'une molecule amphiphile
CA2669917A1 (en) 2006-11-17 2008-05-22 Dawn M. George Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
EA200900741A1 (ru) 2006-11-27 2010-04-30 Айзис Фармасьютикалз, Инк. Способы лечения гиперхолестеринемии
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
KR100861108B1 (ko) 2006-11-28 2008-09-30 (주) 벡스코아 씨형 간염 바이러스 레플리콘 증식을 억제하는 알엔에이분해효소 저항성 알엔에이 압타머
CN101610671A (zh) 2006-12-12 2009-12-23 艾德拉药物股份有限公司 合成的tlr9激动剂
UY30892A1 (es) 2007-02-07 2008-09-02 Smithkline Beckman Corp Inhibidores de la actividad akt
WO2008101157A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
RU2015127794A (ru) 2007-03-24 2018-12-21 Касл Терапьютикс, ЭлЭлСи Введение антисмысловых олигонуклеотидов, комплементарных человеческому аполипопротеину в
WO2008137867A2 (en) * 2007-05-03 2008-11-13 Rosetta Inpharmatics Llc Compositions comprising mir34 therapeutic agents for treating cancer
EP2818550B1 (en) 2007-05-11 2016-12-28 Adynxx, Inc. Gene expression and pain
EP2149571A4 (en) 2007-05-24 2010-09-01 Kyorin Seiyaku Kk MUTILINE DERIVATIVE WITH A RINGED, HETEROCYCLIC AND AROMATIC CARBOXYLIC ACID STRUCTURE IN A SUBSTITUTE AT POSITION 14
GB0710186D0 (en) 2007-05-29 2007-07-04 Texas Instr Denmark PWM loop with minimum allasing error property
WO2008150729A2 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
AU2008258599B2 (en) 2007-06-05 2013-06-13 Nsab, Filial Af Neurosearch Sweden Ab, Sverige Disubstituted phenylpyrrolidines as modulators of cortical catecholaminergic neurotransmission
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
WO2008151833A2 (en) 2007-06-13 2008-12-18 Hochschule Mannheim Compounds for the modulation of huntingtin aggregation, methods and means for identifying such compounds
EP2014769B1 (en) 2007-06-18 2010-03-31 Commissariat à l'Energie Atomique Reversible siRNAa-based silencing of mutated and endogenous wild-type huntingtin gene and its application for the treatment of Huntington's disease
WO2009006478A2 (en) 2007-07-05 2009-01-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
CN102921003B (zh) 2007-07-09 2014-11-26 艾德拉药物股份有限公司 稳定化免疫调控性rna(simra)化合物
CA2694718A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 University Of Saskatchewan Genetic variation in pro-melanin-concentrating hormone gene affects carcass traits in cattle
US7812003B2 (en) 2007-08-02 2010-10-12 Safe Stephen H Antisense microRNA and uses therefor
AU2008286735A1 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Idera Pharmaceuticals, Inc. Toll like receptor modulators
EP2215102B1 (en) 2007-10-01 2016-02-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
KR100886139B1 (ko) * 2007-11-13 2009-02-27 주식회사 삼천리제약 올리고뉴클레오타이드의 제조방법
PE20091669A1 (es) 2007-12-21 2009-12-06 Exelixis Inc Benzofuropirimidinonas
TWI340765B (en) 2007-12-26 2011-04-21 Ind Tech Res Inst Oligonucleotide sequences and dna chip for identifying filamentous microorganisms and the identification method thereof
WO2009089689A1 (en) 2008-01-15 2009-07-23 Mediatek Inc. Multimedia presenting system, multimedia processing apparatus thereof, and method for presenting video and audio signals
WO2009089659A1 (en) 2008-01-18 2009-07-23 Shanghai Targetdrug Co., Ltd. Pyrollidine-based compounds
WO2009098197A1 (en) 2008-02-04 2009-08-13 Biofocus Dpi B.V. Target sequences and methods to identify the same, useful in treatment of neurodegenerative diseases
JP2009190983A (ja) 2008-02-12 2009-08-27 Tokyo Institute Of Technology オリゴヌクレオチド誘導体
EP2282744B1 (en) 2008-03-21 2018-01-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising tricyclic nucleosides and methods for their use
WO2009120878A2 (en) 2008-03-26 2009-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
CN107753499A (zh) 2008-04-03 2018-03-06 春堤制药公司 用于治疗病毒感染的化合物和方法
EP2285819B1 (en) 2008-04-04 2013-10-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising neutrally linked terminal bicyclic nucleosides
CA2726866A1 (en) 2008-05-09 2009-11-12 The University Of British Columbia Methods and compositions for the treatment of huntington's disease
US8679750B2 (en) 2008-05-09 2014-03-25 The University Of British Columbia Methods and compositions for the treatment of Huntington'S disease
US8541388B2 (en) 2008-05-22 2013-09-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating expression of RBP4
WO2009143391A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for modulation expression of creb
EP2294181A4 (en) 2008-05-22 2013-04-24 Isis Pharmaceuticals Inc MODULATION OF SMRT EXPRESSION
WO2009148605A2 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
CA2728559A1 (en) 2008-07-03 2010-01-07 Exelixis Inc. Cdk modulators
EP2346883B1 (en) 2008-09-23 2016-03-23 Scott G. Petersen Self delivering bio-labile phosphate protected pro-oligos for oligonucleotide based therapeutics and mediating rna interference
US8604192B2 (en) 2008-09-24 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acids analogs
WO2010036698A1 (en) 2008-09-24 2010-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
CA2739788A1 (en) 2008-10-07 2010-04-15 President And Fellows Of Harvard College Telomerase inhibitors that bind to the cr4-cr5 domain of the rna component of human telomerase and methods of use thereof
CA2962219C (en) 2008-10-22 2020-08-25 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating eye disorders
CN102264374B (zh) 2008-10-24 2015-01-07 Isis制药公司 5′和2′双取代的核苷和由其制备的低聚化合物
KR101881596B1 (ko) * 2008-12-02 2018-07-24 웨이브 라이프 사이언시스 재팬 인코포레이티드 인 원자 변형된 핵산의 합성 방법
CN102307889A (zh) 2008-12-23 2012-01-04 集润德斯股份公司 硫化剂及其用于寡核苷酸合成的用途
WO2010080953A1 (en) 2009-01-08 2010-07-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Transgenic murine model of human lipoprotein metabolism, hypercholesterolemia and cardiovascular disease
US20120264806A1 (en) 2009-02-06 2012-10-18 Bennett C Frank Oligomeric compounds and excipients
EP2396409A2 (en) 2009-02-10 2011-12-21 Idera Pharmaceuticals, Inc. Synthetic rna-based agonists of tlr7
AU2010221419B2 (en) 2009-03-02 2015-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
EP2408796B1 (en) 2009-03-16 2020-04-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Targeting Apolipoprotein B for the reduction of Apolipoprotein C-III
US8987222B2 (en) 2009-04-08 2015-03-24 University Of Massachusetts Single nucleotide polymorphism (SNP) targeting therapies for the treatment of huntington'S disease
US20120156138A1 (en) 2009-04-14 2012-06-21 Smith Larry J Methods and Compositions for the Treatment of Medical Conditions Involving Cellular Reprogramming
US9260493B2 (en) 2009-05-07 2016-02-16 The Regents Of The University Of California Transducible delivery of nucleic acids using modified dsRNA binding domains
US20120142763A1 (en) 2009-06-01 2012-06-07 The Regents Of The University Of California Nucleic acid delivery compositions and methods of use thereof
WO2010141861A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 Infectious Disease Research Institute Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants
NZ597071A (en) 2009-06-17 2014-05-30 Isis Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for modulation of smn2 splicing in a subject
SG177564A1 (en) * 2009-07-06 2012-02-28 Ontorii Inc Novel nucleic acid prodrugs and methods of use thereof
US8329024B2 (en) 2009-07-06 2012-12-11 Ada Technologies, Inc. Electrochemical device and method for long-term measurement of hypohalites
WO2011005860A2 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5' phosphate mimics
WO2011005942A2 (en) 2009-07-08 2011-01-13 Idera Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide-based compounds as inhibitors of toll-like receptors
WO2011015572A1 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases
WO2011015573A1 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Galapagos Nv Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases
US9012421B2 (en) 2009-08-06 2015-04-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
US8927553B2 (en) 2009-08-10 2015-01-06 Daljit Singh Dhanoa Deuterium-enriched alkyl sulfonamides and uses thereof
KR102173836B1 (ko) 2009-09-11 2020-11-05 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 헌팅틴 발현의 조절
US8470987B2 (en) 2009-09-16 2013-06-25 Chiralgen, Ltd. Protective group for synthesis of RNA and derivative
US20120270929A1 (en) 2009-09-25 2012-10-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of ttc39 expression to increase hdl
IN2012DN02577A (ko) 2009-10-15 2015-08-28 Pfizer
EP2512246B1 (en) 2009-12-17 2015-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Aminopyrimidines as syk inhibitors
KR101433114B1 (ko) 2009-12-28 2014-08-22 아키라 랩스 프라이빗 리미티드 진단용 겔 조성물, 진단용 겔 조성물의 제조 방법
AU2011203986C1 (en) 2010-01-08 2015-03-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression
US8750507B2 (en) 2010-01-25 2014-06-10 Cisco Technology, Inc. Dynamic group creation for managed key servers
JP6018506B2 (ja) 2010-02-08 2016-11-02 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 対立遺伝子多様体の選択的低減
US8957040B2 (en) 2010-02-08 2015-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective reduction of allelic variants
PT2534149E (pt) 2010-02-10 2014-12-23 Glaxosmithkline Llc Maleato de 6-amino-2-{[(1s)-1-metilbutil]oxi}-9-[5-(1- piperidinil)pentil]-7,9-di-hidro-8h-purin-8-ona
US8859755B2 (en) 2010-03-05 2014-10-14 Chiralgen, Ltd. Method for preparing ribonucleoside phosphorothioate
WO2011127175A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of cd130 (gp130) expression
EP2556159A1 (en) 2010-04-07 2013-02-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of cetp expression
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
EP3091027B1 (en) 2010-04-28 2018-01-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
EP2601204B1 (en) 2010-04-28 2016-09-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
US20130156845A1 (en) 2010-04-29 2013-06-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated single stranded rna
GB201008902D0 (en) 2010-05-27 2010-07-14 Imp Innovations Ltd Membrane enhanced polymer sythesis
KR20130100278A (ko) 2010-08-31 2013-09-10 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 올리고뉴클레오티드의 전달을 위한 신규 단일 화학 존재물 및 방법
WO2012039448A1 (ja) * 2010-09-24 2012-03-29 株式会社キラルジェン 不斉補助基
US9238812B2 (en) 2010-09-30 2016-01-19 Lsip, Llc Agent for suppressing expression of dominant mutant gene
KR101381048B1 (ko) 2010-10-20 2014-04-14 씨제이제일제당 (주) Ｏ-포스포세린 생산 균주 및 이로부터 생산된 ｏ-포스포세린으로부터 ｌ-시스테인 또는 이의 유도체의 생산방법
WO2012058693A2 (en) * 2010-10-29 2012-05-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of pcsk9 genes
WO2012058210A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA)
AU2011325956B2 (en) 2010-11-12 2016-07-14 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAs
JP6093924B2 (ja) 2010-11-30 2017-03-15 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ ２’−ｏ−修飾ｒｎａ
US10017764B2 (en) 2011-02-08 2018-07-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
US9181544B2 (en) 2011-02-12 2015-11-10 University Of Iowa Research Foundation Therapeutic compounds
US9353371B2 (en) 2011-05-02 2016-05-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds targeting genes associated with usher syndrome
FR2975600B1 (fr) 2011-05-24 2013-07-05 Assist Publ Hopitaux De Paris Agents pour le traitement de tumeurs
EP2734208B1 (en) 2011-07-19 2017-03-01 Wave Life Sciences Ltd. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
US10202599B2 (en) 2011-08-11 2019-02-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
US20140080896A1 (en) 2011-08-30 2014-03-20 The Regents Of The University Of California Identification of small molecules that facilitate therapeutic exon skipping
EP2790736B1 (en) 2011-12-12 2018-01-31 Oncoimmunin, Inc. In vivo delivery of oligonucleotides
CN102675386B (zh) 2011-12-24 2014-07-02 河南科技大学 一种龙胆苦苷分离提纯方法
WO2013134558A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 The Texas A & M University System Cancer treatment targeting non-coding rna overexpression
KR20130114435A (ko) 2012-04-09 2013-10-17 삼성전자주식회사 다수의 전극을 갖는 생분자 검출 장치
DK2857412T3 (en) 2012-05-30 2017-04-03 Hokkaido System Science Co Ltd Method for Oligonucleotide Synthesis Using High-Resolution Liquid Phase Carrier
KR102213609B1 (ko) * 2012-07-13 2021-02-08 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 제어
WO2014010718A1 (ja) 2012-07-13 2014-01-16 株式会社新日本科学 キラル核酸アジュバント
EP2872485B1 (en) 2012-07-13 2020-12-16 Wave Life Sciences Ltd. Asymmetric auxiliary group
ES2947520T3 (es) 2012-08-06 2023-08-10 Alnylam Pharmaceuticals Inc Proceso para la preparación de agentes de ARN conjugados con carbohidratos
KR102237882B1 (ko) 2012-08-15 2021-04-07 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 변형된 캡핑 프로토콜을 이용하는 올리고머 화합물 제조 방법
US20150275208A1 (en) 2012-10-12 2015-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
US20150291958A1 (en) 2012-11-15 2015-10-15 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Anti apob antisense conjugate compounds
KR20150088305A (ko) 2012-11-26 2015-07-31 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 Fgfr3 발현의 조절을 위한 조성물 및 방법
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
RU2018108405A (ru) 2013-01-30 2019-02-26 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Конъюгаты углевода и lna-олигонуклеотида
WO2014121287A2 (en) 2013-02-04 2014-08-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Selective antisense compounds and uses thereof
AU2014259759B2 (en) 2013-05-01 2020-06-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
JP6477464B2 (ja) 2013-05-24 2019-03-06 味の素株式会社 モルフォリノオリゴヌクレオチドの製造方法
WO2014188001A1 (en) 2013-05-24 2014-11-27 Santaris Pharma A/S Oligonucleotide modulators of b-cell cll/lymphoma 11a (bcl11a) and uses thereof
EP3591054A1 (en) 2013-06-27 2020-01-08 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9
TWI657819B (zh) 2013-07-19 2019-05-01 美商Ionis製藥公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
US10894963B2 (en) 2013-07-25 2021-01-19 Exicure, Inc. Spherical nucleic acid-based constructs as immunostimulatory agents for prophylactic and therapeutic use
JP2016538829A (ja) 2013-10-03 2016-12-15 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 低密度リポタンパク質受容体をコードするポリヌクレオチド
EP3052627B1 (en) 2013-10-04 2018-08-22 Novartis AG Novel formats for organic compounds for use in rna interference
BR112016010175A2 (pt) 2013-11-11 2017-10-03 Sangamo Biosciences Inc Repressor genético, seus usos, e composição farmacêutica
JP2017501684A (ja) 2013-11-14 2017-01-19 ロシュ・イノベーション・センター・コペンハーゲン・アクティーゼルスカブＲｏｃｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ Ａ／Ｓ Ａｐｏｂアンチセンスコンジュゲート化合物
EP2918275B1 (en) 2013-12-13 2016-05-18 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
JPWO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
AU2015207773B2 (en) 2014-01-16 2021-06-17 Wave Life Sciences Ltd. Chiral design
WO2015168172A1 (en) 2014-04-28 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified oligomeric compounds
EP3845547A1 (en) 2014-05-01 2021-07-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Galnac3 conjugated modified oligonucleotide for modulating angiopoietin-like 3 expression
BR112016025849A2 (pt) 2014-05-08 2017-10-17 Chdi Foundation Inc métodos e composições para o tratamento da doença de huntington
CA2949437C (en) 2014-05-20 2023-08-15 University Of Iowa Research Foundation Huntington's disease therapeutic compounds
US20160017327A1 (en) 2014-07-11 2016-01-21 The Johns Hopkins University Phosphorodiamidate morpholino oligomers (pmos) and their use in suppression of mutant huntingtin expression and attenuation of neurotoxicity
EP3169693B1 (en) 2014-07-16 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Chimeric polynucleotides
EP2982758A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) Genome editing for the treatment of huntington's disease
CN107075516A (zh) 2014-08-20 2017-08-18 阿尔尼拉姆医药品有限公司 经修饰的双链rna试剂
WO2016037191A1 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Health Research, Inc. Use of huntingtin-derived plasmids and peptides for active immunization as a huntington's disease (hd) therapeutic
US20180016575A1 (en) 2014-11-19 2018-01-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S LNA Gapmer Oligonucleotides Comprising Chiral Phosphorothioate Linkages
CN107208092B (zh) 2014-12-16 2021-09-10 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 手性毒性筛选方法
PT3237618T (pt) 2014-12-24 2019-07-04 Uniqure Ip Bv Supressão do gene huntingtina induzida por arni
US9688707B2 (en) 2014-12-30 2017-06-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic morpholino compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US20180023081A1 (en) 2015-02-04 2018-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
ES2893114T3 (es) 2015-02-04 2022-02-08 Bristol Myers Squibb Co Métodos para seleccionar moléculas terapéuticas
JP2018506304A (ja) 2015-02-10 2018-03-08 ジェンザイム・コーポレーション バリアントＲＮＡｉ
JP2018510621A (ja) 2015-02-13 2018-04-19 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
EP3262174A4 (en) 2015-02-23 2018-10-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for increasing antisense activity
EP3265098A4 (en) 2015-03-03 2019-02-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOSITIONS FOR MODULATING MECP2 EXPRESSION
WO2016154096A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of smggds expression
CA2980337A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 University Of Massachusetts Oligonucleotide compounds for targeting huntingtin mrna
US10851371B2 (en) 2015-04-10 2020-12-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of SMN expression
WO2016167780A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript
WO2016209862A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof
JP2018519811A (ja) 2015-06-29 2018-07-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 修飾ｃｒｉｓｐｒ ｒｎａ及び修飾単一ｃｒｉｓｐｒ ｒｎａならびにその使用
US10494632B2 (en) 2015-07-10 2019-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof
WO2017011276A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2)
US11053495B2 (en) 2015-07-17 2021-07-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multi-targeted single entity conjugates
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
TW201718620A (zh) 2015-07-27 2017-06-01 阿尼拉製藥公司 黃嘌呤脫氫酶（ＸＤＨ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
LT3329002T (lt) 2015-07-31 2021-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transtiretino (ttr) irnr kompozicijos ir jų naudojimo būdai, skirti naudoti su ttr susijusių ligų gydymui arba prevencijai
JP6835826B2 (ja) 2015-08-24 2021-02-24 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス Ｌｎａ−ｇプロセス
CN114939124A (zh) 2015-08-25 2022-08-26 阿尔尼拉姆医药品有限公司 治疗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin(pcsk9)基因相关障碍的方法和组合物
WO2017040078A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. PROGRAMMED CELL DEATH 1 LIGAND 1 (PD-L1) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
JP6893505B2 (ja) 2015-10-02 2021-06-23 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス オリゴヌクレオチドコンジュゲーション方法
CR20180233A (es) 2015-10-09 2018-05-25 Wave Life Sciences Ltd Composiciones oligonucleotídicas y sus métodos
EP3183347A4 (en) 2015-10-17 2018-04-18 Lifesplice Pharma LLC Splice modulating oligonucleotides and methods of use thereof
WO2017068087A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide detection method
EP3394258B1 (en) 2015-10-22 2021-09-22 Roche Innovation Center Copenhagen A/S In vitro toxicity screening assay
ES2852998T3 (es) 2015-11-12 2021-09-14 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos para inducir la expresión de UBE3A paterno
WO2017160741A1 (en) 2016-03-13 2017-09-21 Wave Life Sciences Ltd. Compositions and methods for phosphoramidite and oligonucleotide synthesis
ES2857702T3 (es) 2016-03-14 2021-09-29 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos para la reducción de la expresión de PD-L1
EP3430021A1 (en) 2016-03-18 2019-01-23 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Acyl-protected l-lna-guanosine monomers
CN109153697A (zh) 2016-04-14 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 三苯甲基-单-GalNAc化合物及其用途
MA45290A (fr) 2016-05-04 2019-03-13 Wave Life Sciences Ltd Procédés et compositions d'agents biologiquement actifs
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
JP7097820B2 (ja) 2016-05-12 2022-07-08 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドへの、立体的に規定されたオキサザホスホリジンホスホルアミダイト単量体のカップリングの増大法
WO2017194664A1 (en) 2016-05-13 2017-11-16 Roche Diagnostics Gmbh Protein-based sample collection matrices and devices
US11013757B2 (en) 2016-06-03 2021-05-25 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotides, compositions and methods thereof
US20190264267A1 (en) 2016-07-25 2019-08-29 Wave Life Sciences Ltd. Phasing
JP7296882B2 (ja) 2016-11-23 2023-06-23 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド ホスホラミダイト及びオリゴヌクレオチド合成のための組成物及び方法
US20210198305A1 (en) 2017-06-02 2021-07-01 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
CN111050806A (zh) 2017-06-02 2020-04-21 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其使用方法
WO2018223081A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
WO2018237194A1 (en) 2017-06-21 2018-12-27 Wave Life Sciences Ltd. COMPOUNDS, COMPOSITIONS AND METHODS OF SYNTHESIS
JP2020525503A (ja) 2017-06-28 2020-08-27 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス 多重カップリングおよび酸化の方法
EP3664816A4 (en) 2017-08-08 2021-05-19 Wave Life Sciences Ltd. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHOD FOR THEREFORE
CN111108096A (zh) 2017-09-18 2020-05-05 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸制备技术
SG11202001783YA (en) 2017-10-12 2020-03-30 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotide compositions and methods thereof
EP3728281A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chirally-enriched double-stranded rna agents
BR112020020670A2 (pt) 2018-04-12 2021-03-02 Wave Life Sciences Ltd. composição de oligonucleotídeo, composição farmacêutica, método para alterar o splicing de uma transcrição alvo, método para tratar distrofia muscular, método para preparar um oligonucleotídeo ou uma composição de oligonucleotídeo do mesmo e oligonucleotídeo
JP7427608B2 (ja) 2018-05-11 2024-02-05 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド オリゴヌクレオチド組成物及びその使用方法
CN113383078A (zh) 2018-12-06 2021-09-10 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其方法
CN113423385A (zh) 2019-02-01 2021-09-21 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其方法
FR3093595B1 (fr) 2019-03-07 2022-03-11 Thales Sa Systeme de calibration depuis le sol d'une charge utile d'un satellite
US20230089442A1 (en) 2019-03-20 2023-03-23 Pachamuthu Kandasamy Technologies useful for oligonucleotide preparation
WO2020196662A1 (ja) 2019-03-25 2020-10-01 国立大学法人東京医科歯科大学 二本鎖核酸複合体及びその使用
BR112021021214A2 (pt) 2019-04-25 2022-01-04 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotídeo; composição de oligonucleotídeo quiralmente controlada; composição farmacêutica; método para prevenir, tratar ou melhorar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a rho em um indivíduo suscetível à mesma ou que sofre da mesma; método para diminuir a atividade, expressão e/ou nível de um gene-alvo rho ou seu produto de gene em uma célula; método para supressão de uma transcrição de uma sequência-alvo rho; e composto, oligonucleotídeo, composição ou método
BR112021021203A2 (pt) 2019-04-25 2022-01-04 Wave Life Sciences Ltd Oligonucleotídeo; composição de oligonucleotídeo quiralmente controlada; composição farmacêutica; método para prevenir, tratar ou melhorar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a e/ou prevenir, atrasar o início, desenvolvimento e/ou progresso, e/ou tratar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a em um indivíduo suscetível à mesma ou que sofre da mesma; método para aumentar o nível de salto de um éxon prejudicial em uma transcrição de gene ush2a ou seu produto de gene em uma célula; método para prevenir, atrasar o início ou progressão de, tratar ou melhorar uma afecção, distúrbio ou doença relacionada a ush2a em um indivíduo suscetível à mesma ou que sofre da mesma; método para saltar um éxon prejudicial 13 em um alelo de ush2a em um indivíduo; método para produzir ou aumentar o nível de um éxon de proteína ush2a com salto 13 em um sistema; e composto, oligonucleotídeo, composição ou método
CN114502177A (zh) 2019-05-09 2022-05-13 波涛生命科学有限公司 寡核苷酸组合物及其使用方法
EP4037695A4 (en) 2019-10-06 2024-03-27 Wave Life Sciences Ltd OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
MX2022004101A (es) 2019-10-06 2022-04-26 Wave Life Sciences Ltd Composiciones de oligonucleotidos y metodos de uso de las mismas.
WO2021178237A2 (en) 2020-03-01 2021-09-10 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof
JP2023526975A (ja) 2020-05-22 2023-06-26 ウェイブ ライフ サイエンシズ リミテッド オリゴヌクレオチド組成物及びその方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997047637A1 (en) 1996-06-10 1997-12-18 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation

Also Published As

Publication number Publication date
KR20150036642A (ko) 2015-04-07
IL236621B (en) 2019-12-31
US10590413B2 (en) 2020-03-17
KR20210016078A (ko) 2021-02-10
AU2020244546B2 (en) 2022-09-22
HK1210595A1 (en) 2016-04-29
SG10201700283WA (en) 2017-03-30
CA2878945A1 (en) 2014-01-16
EP4219516A2 (en) 2023-08-02
US11643657B2 (en) 2023-05-09
RU2015104762A3 (ko) 2018-08-31
CL2015000092A1 (es) 2015-08-07
DK2872147T3 (da) 2023-02-20
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