KR102329187B1 - 인간 lmna를 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 유사체 - Google Patents

인간 lmna를 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 유사체 Download PDF

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KR102329187B1
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프란시스 에스. 콜린스
칸 카오
리자드 콜
리차드 키스 베스트위크
레슬리 비. 골든
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사렙타 쎄러퓨틱스, 인코퍼레이티드
더 유에스에이, 애즈 레프리젠티드 바이 더 세크러터리, 디파트먼트 오브 헬스 앤드 휴먼 서비스
유니버시티 오브 매릴랜드
더 프로게리아 리서치 파운데이션
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Abstract

프로저린을 암호화하는 1종 이상의 비정상적으로 스플라이싱된 LMNA mRNA 아이소폼의 발현을 감소시키기 위한 LMNA-표적화된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 제공된다.

Description

인간 LMNA를 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 유사체
서열 목록에 관한 언급
본 출원과 연관된 서열은 서류 사본 대신에 텍스트 포맷으로 제공되며, 본 명세서에 참고로 포함된다. 서열 목록을 함유하는 텍스트 파일의 명칭은 120178_503WO_SEQUENCE_LISTING.txt이다. 텍스트 파일은 약 6.5KB이고, 2017년 4월 26일자로 생성되었고, EFS 웹을 통해서 전자적으로 제출되어 있다.
기술분야
본 개시내용은 일반적으로 인간 라민 A 표적화된 안티센스 화합물에 관한 것이다.
허친슨 길포오드 조로증 증후군(Hutchinson-Gilford progeria syndrome: HGPS)은 조기 동맥 경화증 및 혈관 평활근 근육 세포(vascular smooth muscle cell: SMC)의 퇴행을 특징으로 하는 희귀한 유전적 장애이다. HGPS는 그 자체로 가장 현저하게는 영향을 받은 아동에서 가속 조기 노화로서 나타난다. HGPS를 갖는 아동은 진행성 증상, 예컨대, 발육 지연, 탈모, 피하 지방 손실, 및 뼈 기형을 갖는다. 평균 수명은 12세이고, 사망의 가장 일반적인 이유는 심근 경색 또는 뇌졸중이다.
대부분의 HGPS 케이스는 프로저린(progerin)을 생성시키는 라민 A(LMNA) 유전자 내의 한점 돌연변이, 즉 라민 A의 절두된 스플라이싱 돌연변이체에 의해서 유발된다. 한점 돌연변이는 라민 A(LMNA) 유전자의 엑손 11 내의 신생 침묵성 치환(1824C>T, Gly608Gly)이다. 이러한 치환은 은성 스플라이스(cryptic splice) 공여체 부위를 활성화시키는데, 이것은 50개 아미노산의 내부 결실을 갖는 우세한 음성 돌연변이체 라민 A의 생산으로 이어진다. 프로저린으로 명명되는 돌연변이체 단백질이 핵막 상에 축적되고, 이는 특징적인 핵 블레빙(nuclear blebbing)을 유발한다(Scaffidi and Misteli 2005; Cao, Blair et al. 2011).
비정상적인 스플라이싱은 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고뉴클레오타이드(PMO), 또는 보다 구체적으로는 스플라이스-스위칭 올리고뉴클레오타이드(SSO)를 사용하여 수정될 수 있다고 공지되어 있다. SSO는 그 부위에서 또는 그 근처에서 혼성화하여 세포 스플라이싱 머시너리에 의한 인식을 예방함으로써 비정상적인 스플라이싱 부위를 차단한다. 예시적인 SSO는 뉴클레아제에 대해서 저항성이고, 생성된 이중 가닥 구조는 RNase H에 의한 RNA 절단 가능성을 제거한다. SSO는 지중해 빈혈(thalassemia) 및 뒤센 근육 영양장애(Duchenne muscular dystrophy)에 대해서 시험관내 및 생체내 둘 모두에서 스플라이싱 패턴을 효과적으로 수선하는 것으로 밝혀져 있다(Kinali, Arechavala-Gomeza et al.2009; Svasti, Suwanmanee et al.2009). HGPS와 연관된 LMNA의 비정상적인 스플라이싱은 세포 배양물(Scaffidi and Misteli 2005) 및 관련된 동물 모델(Osorio, Navarro et al. 2011) 둘 모두에서 활성화된 은성 스플라이스 부위에 표적화된 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 비정상적인 스플라이싱 사건을 수정함으로써 감소되는 것으로 밝혀져 있다.
PCT 공개 제WO 2013/086441호 및 제WO 2013/086444호에는 인간 lmna를 표적화하는 안티센스 올리고머 및 인간 lmna를 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 유사체를 사용하여 조로증 라미노패씨(progeroid laminopathy)를 치료하는 방법이 개시되어 있지만, 본 개시내용의 안티센스 올리고머 화합물 및 본 개시내용의 것을 사용한 방법은 개시되어 있지 않다.
HGPS에서 LMNA의 역할을 고려할 때, 프로저린의 발현을 제거하도록 LMNA 프리-mRNA의 스플라이싱을 조절하는 올리고뉴클레오타이드가 필요하다.
본 개시내용의 실시형태는 일반적으로 LMNA 프리(pre)-mRNA의 비정상적인 스플라이싱을 조절하는 안티센스 올리고머 또는 이의 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 일 양상에서, 본 개시내용은 10 내지 40개의 핵염기의 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 특징으로 한다. 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 LMNA의 프리-mRNA 내의 표적 영역에 상보적 표적화 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure 112018119163363-pct00001
식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 의 정수이며;
T는
Figure 112018119163363-pct00002
로부터 선택되고;
G는 세포 투과성 펩타이드("CPP") 및
Figure 112018119163363-pct00003
Figure 112018119163363-pct00004
Figure 112018119163363-pct00005
및
Figure 112018119163363-pct00006
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 양상에서, 본 개시내용의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Figure 112018119163363-pct00007
식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이며;
G는 세포 투과성 펩타이드("CPP") 및
Figure 112018119163363-pct00008
Figure 112018119163363-pct00009
및
Figure 112018119163363-pct00010
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 5 내지 21로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25로부터 선택된다.
다양한 실시형태에서, G(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음)는
Figure 112018119163363-pct00011
및 화학식
Figure 112018119163363-pct00012
로부터 선택된다:
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중, CPP-Ra는
Figure 112018119163363-pct00013
Figure 112018119163363-pct00014
,
Figure 112018119163363-pct00015
로부터 선택되고, 식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, G(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음)는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112018119163363-pct00016
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, J는 4 내지 9의 정수이다. 특정 실시형태에서 J는 6이다.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음)는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112018119163363-pct00017
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, J는 4 내지 9의 정수이다. 특정 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 다양한 실시형태에서, J는 6이다. 일부 실시형태에서 Ra는 H 및 아세틸로부터 선택된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Ra는 H이다. 특정 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
특정 실시형태에서, G는 올리고머의 3' 단부에서 본 개시내용의 안티센스 올리고머에 공유 결합된 -C(O)CH2NH-R6-Ra이고, 식 중, Ra는 R6의 아미노 말단을 캡핑하기 위한 H, 아세틸, 벤조일 또는 스테아로일이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다. 이러한 비제한적인 예에서, CPP-Ra는 -R6-Ra이고, 링커는 -C(O)CH2NH-(즉, 글리신)이다. G = -C(O)CH2NH-R6-Ra의 이러한 특정 예가 또한 하기 구조식에 의해서 예시된다:
Figure 112018119163363-pct00018
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 -R6-Ra이다:
Figure 112018119163363-pct00019
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 -(RXR)4-Ra이다:
Figure 112018119163363-pct00020
.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 -R-(FFR)3-Ra이다:
Figure 112018119163363-pct00021
.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 안티센스 올리고머의 표적화 서열, 예를 들어, 화학식 (I) 및 (II)의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태는 하기로부터 선택된다:
a) 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)(식 중, Z는 23임; 및
b) 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)(식 중, Z는 23임).
본 개시내용의 또 다른 양상에서, 질환, 예컨대, 인간 LMNA와 연관된 질환 또는 병태의 치료 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 방법은 조로병 또는 관련 병태, 예컨대, 조로증 라미노패씨(예컨대, HGPS), 노화-관련 병태, 또는 심혈관 질환(예컨대, 죽상경화증)의 치료에 사용된다.
추가적인 양상에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 안티센스 올리고머 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
따라서, 추가 양상에서, 본 개시내용은 또한 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여함으로써 조로증 라미노패씨를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용의 이들 및 다른 양상은 하기 상세한 설명을 참고로 자명할 것이다. 이를 위해서, 다양한 참고 문헌이 본 명세서에 언급되며, 이것은 특정 배경 정보, 절차 및 화합물 및/또는 조성물을 보다 상세하게 기술하고, 각각은 이의 전문이 참고로 포함된다.
도 1은 12주 동안 PPMO1(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), PPMO2(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), 또는 식염수 대조군으로 처리된 마우스의 심장으로부터의 라민 A 및 프로저린의 ddPCR 분석에 대한 결과를 나타낸 도면.
도 2는 12주 동안 PPMO1(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), PPMO2(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), 또는 식염수 대조군으로 처리된 마우스의 하행 대동맥으로부터의 라민 A 및 프로저린의 ddPCR 분석에 대한 결과를 나타낸 도면.
도 3은 12주 동안 PPMO1(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), PPMO2(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), 또는 식염수 대조군으로 처리된 마우스의 사두근으로부터의 라민 A 및 프로저린의 ddPCR 분석에 대한 결과를 나타낸 도면.
도 4는 12주 동안 PPMO1(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), PPMO2(7㎎/㎏, 20㎎/㎏, 또는 60㎎/㎏), 또는 식염수 대조군으로 처리된 마우스의 간으로부터의 라민 A 및 프로저린의 ddPCR 분석에 대한 결과를 나타낸 도면.
본 개시내용은 본 명세서에 기술된 바와 같은 올리고뉴클레오타이드, 및 이를 함유하는 조성물, 뿐만 아니라 시험관내 방법에 관한 것이며, 여기서 올리고뉴클레오타이드는, 예를 들어, LMNA 프리-mRNA의 스플라이싱을 조절함으로써 돌연변이체 LMNA 단백질 mRNA의 발현을 저해한다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용이 속한 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 물질이 기술되어 있다. 본 개시내용의 목적을 위해서, 하기 용어가 하기에 정의된다.
단수 표현은 본 명세서에서 문법적 대상이 하나이거나 하나 초과(즉, 적어도 하나) 것을 지칭하기 위해서 사용된다. 예를 들어, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.
"약"은 기준 양, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 총량, 중량 또는 길이에 대해서 30%, 25%, 20%, 25%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%만큼까지 변화되는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 총량, 중량 또는 길이를 의미한다.
"암호 서열"은 유전자의 폴리펩타이드 생성물에 대한 암호에 기여하는 임의의 핵산 서열을 의미한다. 대조적으로, 용어 "비-암호 서열"은 유전자의 폴리펩타이드 생성물에 대한 암호에 기여하지 않는 임의의 핵산 서열을 지칭한다.
본 명세서 전체에 걸쳐서 문맥이 달리 요구하지 않는 한, 단어 "포함한다", "포함하다" 및 "포함하는"은 언급된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군을 포함하지만, 어떤 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군도 배제하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 수 있다.
"로 이루어진"은 구 "이루어진" 다음의 것이 무엇이든 포함하며, 이들로 제한되는 것을 의미한다. 따라서, 구 "로 이루어진"은 열거된 요소가 필요하거나 필수적이며, 다른 요소는 존재할 수 없음을 나타낸다. "로 본질적으로 이루어진"은 이 구 다음에 열거되고, 열거된 요소에 대한 설명에 명시된 활성 또는 작용을 간섭하지 않거나 기여하지 않는 다른 요소로 제한된 모든 요소를 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 구 "로 본질적으로 이루어진"은 열거된 요소가 필요하거나 필수적이지만, 다른 요소는 임의의 것이며, 열거된 요소의 활성 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는지 미치지 않는지에 따라 존재할 수 있거나 없을 수 있음을 나타낸다.
용어 "상보적" 및 "상보성"은 염기-짝짓기 규칙에 의해 관련된 폴리뉴클레오타이드(즉, 뉴클레오타이드의 서열)을 지칭한다. 예를 들어, 서열 "A-G-T"는 서열 "T-C-A"에 대해서 상보적이다. 상보성은 핵산 염기의 단지 일부만이 염기 짝짓기 규칙에 따라 매칭되는(matched) 것으로 "부분적"일 수 있다. 또는, 핵산들 사이에는 "완전"하거나 "전체"적인 상보성이 있을 수 있다. 핵산 가닥들 사이의 상보성 정도는 핵산 가닥들 사이의 혼성화의 효율 및 강도에 상당한 영향을 미친다. 완전한 상보성이 종종 바람직하지만, 일부의 실시형태는 표적 RNA에 관해서 1개 또는 그 초과, 바람직하게는 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 미스매치(mismatch)를 포함할 수 있다. 올리고머 내의 어떤 위치에서의 변이도 포함된다. 특정의 실시형태에서, 올리고머의 말단에 가까운 서열에서의 변이는 일반적으로 내부에서의 변이보다 바람직하며, 존재한다면, 전형적으로 5' 및/또는 3' 말단의 약 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 뉴클레오타이드 내에서 이루어진다.
용어 "세포 투과성 펩타이드" 또는"CPP"는 상호 교환 가능하게 사용되며, 수송 펩타이드, 담체 펩타이드 또는 펩타이드 형질도입 도메인으로도 지칭되는 양이온성 세포 투과성 펩타이드를 지칭한다. 본 발명에 나타낸 바와 같은 펩타이드는 주어진 세포 배양 집단의 세포의 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%(이들 사이의 모든 정수 포함) 내에서 세포 투과를 유도하는 능력을 가지며, 전신 투여 시 생체 내에서 다수의 조직 내에서 거대분자 전좌를 허용한다.
용어 "안티센스 올리고머" 또는 "안티센스 화합물" 또는 "안티센스 올리고뉴클레오타이드" 또는 "올리고뉴클레오타이드"는 상호 교환 가능하게 사용되고, 염기-짝짓기 모이어티 각각이 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해 핵산(전형적으로, RNA) 내의 표적 서열에 혼성화하여, 표적 서열 내에서 핵산:올리고머 헤테로듀플렉스를 형성하도록 하는 소단위간 연결에 의해서 연결된, 염기-짝짓기 모이어티를 각각 보유하는 환식 소단위의 서열을 지칭한다. 환식 소단위는 리보스 또는 또 다른 펜토스 당, 또는 특정 실시형태에서는, 모폴리노기를 기초로 한다(하기 모폴리노 올리고머의 설명 참조). 펩타이드 핵산(PNA), 잠금 핵산(locked nucleic acid: LNA), 및 2'-O-메틸 올리고뉴클레오타이드, 및 관련 기술 분야에 공지된 다른 안티센스 작용제가 또한 고려된다.
이러한 안티센스 올리고머는 mRNA의 번역을 차단 또는 저해하거나 또는 자연 프리-mRNA 스플라이스 가공을 저해하거나 또는 표적화된 mRNA의 분해를 유도하도록 설계될 수 있고, 그것이 혼성화하는 표적 서열"로 안내되거나" 또는 "그것에 대해서 표적화"될 수 있다고 언급될 수 있다. 특정 실시형태에서, 표적 서열은 mRNA의 AUG 개시 코돈, 프리-프로세싱된 mRNA의 3' 또는 5' 스플라이스 부위, 또는 분기점을 둘러싸거나 포함하는 영역이다 표적 서열은 엑손 내에, 또는 인트론 내 또는 그 조합 내에 존재할 수 있다. 스플라이스 부위에 대한 표적 서열은 프리프로세싱된 mRNA 내의 일반적인 스플라이스 수용체 접합부의 하류에서 1 내지 약 25개의 염기쌍에서 그의 그의 5' 말단을 갖는 mRNA 서열을 포함할 수 있다. 스플라이스 부위에 대한 예시적인 표적 서열은 스플라이스 부위를 포함하거나, 엑손 암호 서열 내에 완전히 함유되거나, 스플라이스 수용체 또는 공여체 부위에 걸쳐진 프리프로세싱된 mRNA의 임의의 영역이다. 올리고머는 보다 일반적으로 이것이 상기에 기술된 방식으로 표적의 핵산에 대해서 표적화되는 경우, 보다 일반적으로는 생물학적으로 관련된 표적, 예컨대, 본 개시내용에서, 라민 A 단백질을 암호화하는 인간 LMNA 유전지 프리-mRNA라 언급된다. 예시적인 표적화 서열은 서열번호 3 또는 4를 포함한다.
서열번호 3 또는 4 중 하나 이상을 포함하거나, 이것으로 본질적으로 이루어지거나, 이것으로 이루어진 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 포함된다. 또한, 서열번호 3 또는 4 중 어느 하나와 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99%(이들 사이의 모든 정수 포함) 서열 동일성 또는 서열 상동성을 갖는 변이체 올리고머, 및/또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 뉴클레오타이드가 이들 서열과 상이한 변이체, 바람직하게는 세포에서 프로저린 발현을 조절하는 변이체를 비롯한, 이들 안티센스 올리고머의 변이체가 포함된다. 또한, 본 발명에 기술된 바와 같은 적합한 수, 예를 들어, 매 2 내지 5개의 비하전된 링키지당 약 1개 이하, 예컨대, 매 10개의 비하전된 링키지당 약 4 내지 5개의 양이온성 또는 다른 변형된 링키지를 포함하고/하거나 본 명세서에 또한 기술된 바와 같이, 이들에 부착된 세포-투과성 수송 펩타이드를 포함하는 서열번호 3 또는 4 중 임의의 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드가 포함된다.
"PMO+"는 이미 기술된 임의의 수의 (1-피페라지노)포스핀일리덴옥시, (1-(4-(ω-구아니딘오-알칸오일))-피페라지노)포스핀일리덴옥시 링키지(A2 및 A3)(예를 들어, 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 PCT 공개 제WO2008/036127호 참고)를 포함하는 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머를 지칭한다.
"PMO-X"는 적어도 하나의 (B) 링키지 또는 개시된 말단 변형 중 적어도 하나를 포함하는 본 명세서에 개시된 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머를 지칭하며, 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 PCT 공개 제WO2011/150408호 및 미국 특허 공개 제US2012/0065169호에 개시된 바와 같다. 추가로 본 명세서에서 유용한 PMO-X 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머는 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 2011년 11월 18일자로 출원된 미국 가출원 제61/561,806호에서 찾아볼 수 있다.
"포스포르아미데이트"기는 3개의 산소 원자가 부착되고, 하나의 질소 원자가 부착된 인을 포함하는 반면, "포스포로다이아미데이트"기는 2개의 산소 원자가 부착되고, 2개의 질소 원자가 부착된 인을 포함한다. 본 명세서 및 공히 계류중인 미국 가출원 제61/349,783호 및 미국 특허 출원 제11/801,885호에 기술된 올리고머의 비하전되거나 또는 변형된 소단위간 링키지에서, 하나의 질소는 항상 골격쇄에 대해서 펜던트이다. 포스포로다이아미데이트 링키지에서, 제2 질소는 전형적으로 모폴리노 고리 구조 내의 고리 질소이다.
"티오포스포르아미데이트" 또는 "티오포스포로다이아미데이트" 링키지는 각각 포스포르아미데이트 또는 포스포로다이아미데이트 링키지이고, 여기서 하나의 산소 원자, 전형적으로 골격에 대해서 펜던트인 산소는 황으로 대체된다.
"소단위간 링키지"는 2개의 모폴리노 소단위를 연결하는 링키지, 예를 들어 구조식 (I)을 지칭한다.
"하전된", "비하전된", "양이온성" 및 "음이온성"은 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 중성 pH 근처, 예를 들어, 약 6 내지 8에서 화학 모이어티의 우세한 상태를 지칭한다. 예를 들어, 이 용어는 생리 pH, 즉, 약 7.4에서 화학 모이어티의 우세한 상테를 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "안티센스 올리고뉴클레오타이드", "안티센스 올리고머" 또는 "올리고뉴클레오타이드"는 핵염기가 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해서 RNA 내의 표적 서열에 혼성화하여 표적 서열 내에서 올리고머:RNA 헤테로듀플렉스를 형성하도록 하는 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체의 선형 서열을 지칭한다. 용어 "안티센스 올리고뉴클레오타이드", "변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드", "안티센스 올리고머", "올리고머" 및 "화합물"은 올리고머를 지칭하도록 상호 교환 가능하게 사용될 수 있다. 환식 소단위는 리보스 또는 또 다른 펜토스 당, 또는 특정 실시형태에서는, 모폴리노기를 기초로 한다(하기 모폴리노 올리고머의 설명 참조).
용어 "올리고뉴클레오타이드 유사체"는 (i) 변형된 골격 구조, 예를 들어, 자연 올리고- 및 폴리뉴클레오타이드에서 발견되는 표준 포스포다이에스터 링키지가 아닌 골격, 및 (ii) 임의로, 변형된 당 모이어티, 예를 들어, 리보스 또는 데옥시리보스 모이어티가 아닌 모폴리노 모이어티를 갖는 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다. 올리고뉴클레오타이드 유사체는 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해서 표준 폴리뉴클레오타이드 염기에 구소 결합할 수 있는 염기를 지지하고, 여기서 유사체 골격은 서열-특이적 방식으로 올리고뉴클레오타이드 유사체 분자와 표준 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 단일 가닥 RNA 또는 단일 가닥 DNA) 내의 염기 간의 이러한 수소 결합을 허용하도록 하는 방식으로 염기를 제공한다. 예시적인 유사체는 실질적으로 비하전된, 인 함유 골격을 갖는 것이다.
올리고뉴클레오타이드 유사체 내의 실질적으로 비하전된, 인 함유 골격은, 소단위 링키지의 대부분, 예를 들어, 이의 링키지의 50 내지 100%, 전형적으로는 적어도 60% 내지 100% 또는 75% 또는 80%가 비하전되고, 단일 인 원자를 함유하는 것이다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 올리고뉴클레오타이드 유사체는 약 8 내지 40개의 소단위, 전형적으로는 약 8 내지 25개의 소단위, 바람직하게는 약 12 내지 25개의 소단위(이들 사이의 모든 정수 및 범위 포함)를 함유할 수 있다. 특정 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 하기에 정의된 바와 같이, 표적 서열에 대해서 정확한 서열 상보성 또는 대략적인 상보성을 가질 수 있다.
올리고뉴클레오타이드의 "소단위"는 퓨린 또는 피리미딘 염기 짝짓기 모이어티를 포함하는 하나의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체) 단위를 지칭한다. 이 용어는 부착된 소단위간 링키지를 갖거나 갖지 않는 뉴클레오타이드 단위를 지칭할 수 있지만, "하전된 소단위"를 지칭하는 경우, 전하는 전형적으로는 소단위간 링키지(예를 들어, 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 링키지 또는 양이온성 링키지) 내에 존재한다.
본 명세서에서 단순히 "핵염기", "염기", 또는 "염기들"이라 지칭되는 퓨린 또는 피리미딘 염기 짝짓기 모이어티는 아데닌, 사이토신, 구아닌, 우라실, 티민 또는 이노신일 수 있다. 또한, 염기, 예컨대, 피리딘-4-온, 피리딘-2-온, 페닐, 슈도우라실, 2,4,6-트라이메톡시 벤젠, 3-메틸 우라실, 다이하이드로유리딘, 나프틸, 아미노페닐, 5-알킬사이티딘(예를 들어, 5-메틸사이티딘), 5-알킬유리딘(예를 들어, 리보티미딘), 5-할로유리딘(예를 들어, 5-브로모유리딘) 또는 6-아자피리미딘 또는 6-알킬피리미딘(예를 들어 6-메틸유리딘), 프로핀, 큐에소신(quesosine), 2-티오유리딘, 4-티오유리딘, 와이부토신(wybutosine), 와이부톡소신(wybutoxosine), 4-아세틸티딘, 5-(카복시하이드록시메틸)유리딘, 5'-카복시메틸아미노메틸-2-티오유리딘, 5-카복시메틸아미노메틸유리딘, β-D-갈락토실큐에오신, 1-메틸아데노신, 1-메틸이노신, 2,2-다이메틸구아노신, 3-메틸사이티딘, 2-메틸아데노신, 2-메틸구아노신, N6-메틸아데노신, 7-메틸구아노신, 5-메톡시아미노메틸-2-티오유리딘, 5-메틸아미노메틸유리딘, 5-메틸카보닐에틸유리딘, 5-메틸옥시유리딘, 5-메틸-2-티오유리딘, 2-메틸티오-N6-아이소펜텐일아데노신, β-D-만노실큐에오신, 유리딘-5-옥시아세트산, 2-티오사이티딘, 트레오닌 유도체 등이 포함된다(상기 문헌[Burgin et al., 1996, Biochemistry, 35:14090; Uhlman & Peyman]). 이러한 양상에서 "변형된 염기"는 상기에 예시된 바와 같은 아데닌(A), 구아닌(G), 사이토신(C), 티민(T) 및 우라실(U)이 아닌 뉴클레오타이드 염기를 의미하고; 이러한 염기는 안티센스 분자 내의 임의의 위치에서 사용될 수 있다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자는 올리고머의 용도에 따라서, T 및 U가 상호 교환 가능하다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 다른 안티센스 화학, 예컨대, 보다 RNA-유사한 2'-O-메틸 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하는 경우, T 염기가 U로서 나타날 수 있다.
용어 "표적화 서열"은 RNA 게놈에서 "표적 서열"에 상보적(또한 실질적으로 상보적임을 의미함)인 올리고머 또는 올리고머 유사체 내의 서열이다. 안티센스 올리고머의 전체 서열, 또는 단지 일부는 표적 서열에 상보적일 수 있다. 예를 들어, 20 내지 30개의 염기를 갖는 올리고머에서, 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29개가 표적 영역에 상보적인 표적화 서열일 수 있다. 전형적으로, 표적화 서열은 올리고머 내에서 인접한 염기로 형성되지만, 대안적으로 예를 들어, 올리고머의 반대 단부로부터 함께 놓이는 경우 표적 서열에 걸쳐진 서열을 구성하는 비-인접한 서열로 형성될 수 있다.
"표적화 서열"은 표적 서열에 대해서 "대략적인" 또는 "실질적인" 상보성을 가질 수 있고, 여전히 "상보적"인 본 개시 내용의 목적을 위해서 여전히 기능한다. 바람직하게는, 본 개시내용에 사용된 올리고머 유사체 화합물은 10개의 뉴클레오타이드 중에서 표적 서열과 최대 하나의 미스매치, 바람직하게는 20개 중에서 최대 하나의 미스매치를 갖는다. 대안적으로, 사용된 안티센스 올리고머는 본 명세서에 지정된 바와 같은 예시적인 표적화 서열과 적어도 90%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "TEG", "EG3", 또는 "트라이에틸렌 글리콜 테일"은 예를 들어, 이의 3'- 또는 5'-단부에서 올리고뉴클레오타이드에 접합된 트라이에틸렌 글리콜 모이어티를 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, "TEG"는 하기 화학식의 모이어티를 포함한다:
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"아미노산 소단위" 또는 "아미노산 잔기"는 α-아미노산 잔기(-CO-CHR-NH-) 또는 β- 또는 다른 아미노산 잔기(예를 들어, -CO-(CH2)nCHR-NH-)를 지칭할 수 있고, 식 중, R은 측쇄(이것은 수소를 포함할 수 있음)이고, n은 1 내지 7, 바람직하게는 1 내지 4이다.
용어 "자연 발생 아미노산"은 자연에서 발견되는 단백질 중에 존재하는 아미노산, 예컨대, 단백질 생합성에서 이용된 20개의 (L)-아미노산뿐만 아니라 4-하이드록시프롤린, 하이드록시라이신, 데스모신, 아이소데스모신, 호모시스테인, 시트룰린 및 오르니틴을 지칭한다. 용어 "비-자연 아미노산"은 자연에서 발견되는 단백질 내에 존재하지 않는 아미노산을 지칭하며, 예는 베타-알라닌(β-Ala), 6-아미노헥산산(Ahx) 및 6-아미노펜탄산을 포함한다. "비-자연 아미노산"의 추가 예는 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 (D)-아미노산, 노르류신, 노르발린, p-플루오로페닐알라닌, 에티오닌 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
유효량" 또는 "치료적 유효량"은 목적하는 치료 효과(예를 들어, 화학요법에 대한 암 세포의 감응화)를 생성하기에 효과적인, 포유동물 대상체에게 단일 용량으로, 또는 일련의 용량의 일부분으로 투여되는 치료 화합물, 예컨대, 안티센스 올리고머의 양을 지칭한다. 안티센스 올리고머의 경우, 이러한 효과는 전형적으로 선택된 표적 서열의 번역 또는 자연 스플라이스-가공을 저해함으로써 일어난다. LMNA mRNA에 대해서 표적화된 "유효량"은 또한 프로저린의 발현을 조절하기에 효과적인 양에 관한 것이다.
"증진시키다" 또는 "증진시키는", 또는 "증가시키다" 또는 "증가시키는", 또는 "자극하다" 또는 "자극하는"은 일반적으로, 안티센스 화합물이 없는 경우 또는 대조 화합물에 의해서 야기된 반응과 비교할 때 세포에서 더 큰 생리학적 반응(즉, 하류 효과)을 제공하거나 야기하는 하나 또는 그 이상의 안티센스 화합물 또는 조성물의 능력을 지칭한다. "증가된" 또는 "증진된" 양은 전형적으로는 "통계학적으로 유의한" 양이고, 안티센스 화합물이 없는 경우(작용제의 부재) 또는 대조 화합물에 의해서 제공된 양의 1.1, 1.2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50배 또는 그 초과의 배수(예를 들어, 500, 1000배)(이들 사이 및 1 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 등)인 증가를 포함할 수 있다.
용어 "감소시키다" 또는 "저해하다"는 일반적으로, 진단 분야에서의 일상적인 기술에 따라 측정되는 바와 같이, 관련된 생리학적 또는 세포 반응을 "감소"시키는 본 개시내용의 하나 이상의 안티센스 화합물의 능력과 연관될 수 있다. 관련된 생리학적 또는 세포성 반응(생체내 또는 시험관내)은 관련 기술 분야에서 통상의 기술자에게 명백할 것이며, 예를 들어, mRNA 및/또는 단백질 수준에 의해서 측정되는 바와 같은 프로저린의 발현의 감소를 포함할 수 있다. 반응에 있어서의 "감소"는 안티센스 화합물이 없는 경우 또는 대조 조성물에 의해서 생성된 반응에 비해서 통계학적으로 유의할 수 있으며, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 감소(이들 사이의 모든 정수 포함)를 포함할 수 있다.
용어 "표적 서열"은 올리고뉴클레오타이드 또는 안티센스 작용제가 안내되는, 즉, 올리고뉴클레오타이드가 상보적 서열의 왓슨-크릭 염기 짝짓기에 의해서 혼성화할 서열에 대한 표적 RNA의 일부를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 표적 서열은 인트론 및 엑손 표적 서열 둘 모두를 포함하는 프리-mRNA의 인접한 영역일 수 있다. 특정 다른 실시형태에서, 표적 서열은 인트론 또는 엑손 서열 중 어느 하나를 제외하게 이루어질 것이다.
용어 "표적화 서열" 또는 "안티센스 표적화 서열"은 RNA 개놈에서 표적 서열에 상보적(또한 실질적으로 상보적임을 의미함)인 올리고뉴클레오타이드 또는 안티센스 작용제 내의 서열을 지칭한다. 안티센스 화합물의 전체 서열, 또는 단지 일부는 표적 서열에 상보적일 수 있다. 예를 들어, 20 내지 30개의 염기를 갖는 올리고뉴클레오타이드에서, 약 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 또는 29개의 염기가 표적 영역에 상보적인 표적화 서열일 수 있다. 전형적으로, 표적화 서열은 인접한 염기로 형성되지만, 대안적으로 예를 들어, 올리고뉴클레오타이드의 반대 단부로부터 함께 놓이는 경우 표적 서열에 걸쳐진 서열을 구성하는 비-인접한 서열로 형성될 수 있다.
표적 및 표적화 서열은 혼성화가 역평행 구성으로 일어나는 경우 서로에 대해서 "상보적"인 것으로서 기술된다. 표적화 서열은 표적 서열에 대해서 "대략적인" 또는 "실질적인" 상보성을 가질 수 있고, 본 개시 내용의 목적을 위해서 여전히 기능하고, 즉, 그것은 여전히 기능적으로 "상보적"일 수 있다. 특정 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 10개의 뉴클레오타이드 중에서 표적 서열과 최대 하나의 미스매치, 바람직하게는 20개 중에서 최대 하나의 미스매치를 갖는다. 대안적으로, 올리고뉴클레오타이드는 본 명세서에 기술된 예시적인 안티센스 표적화 서열과 적어도 90%의 서열 동일성, 바람직하게는 적어도 95%의 서열 동일성을 가질 수 있다.
올리고뉴클레오타이드는 생리 조건 하에서 올리고머가 표적에 혼성화하면 표적 폴리뉴클레오타이드에 "특이적으로 혼성화"하고, Tm은 실질적으로 45℃ 초과, 바람직하게는 적어도 50℃, 전형적으로는 60℃ 내지 80섭℃ 또는 그 초과이다. 이러한 혼성화는 바람직하게는 엄격한 혼성화 조건에 상응한다. 주어진 이온 강도 및 pH에서, Tm은 표적 서열의 50%가 상보적 폴리뉴클레오타이드에 혼성화하는 온도이다. 다시, 이러한 혼성화는 표적 서열에 대한 안티센스 올리고머의 "대략적인" 또는 "실질적인" 상보성으로, 뿐만 아니라 정확한 상보성으로 일어날 수 있다.
"상동성"은 동일하거나 또는 보존적 치환을 구성하는 아미노산의 백분율 수치를 지칭한다. 상동성은 서열 비교 프로그램, 예컨대, GAP를 사용하여 결정될 수 있다(Deveraux et al., 1984, Nucleic Acids Research 12, 387-395). 이러한 방식에서 갭을 정렬 내에 삽입함으로써 본 명세서에 언급된 것과 유사하거나 실질적으로 상이한 길이의 서열을 비교할 수 있는데, 이러한 갭은 예를 들어, GAP에 의해서 사용되는 비교 알고리즘에 의해서 결정된다.
용어 "서열 동일성" 또는, 예를 들어, "와 50% 동일한 서열"을 포함하는 것은, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 서열이 비교 창에 걸쳐서 뉴클레오타이드-대-뉴클레오타이드 기준 또는 아미노산-대-아미노산 기준으로 동일한 정도를 나타낸다. 따라서, "서열 동일성의 백분율"은 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교 창에 걸쳐서 비교하고, 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기(예를 들어Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 두 서열 에서 모두 나타나는 위치의 수를 결정하여 매칭된 위치의 수를 얻고, 매칭된 위치의 수를 비교 창 내의 위치의 총 수(즉, 창 크기)로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 수득함으로써 계산될 수 있다.
2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 사이의 서열 관계를 기술하기 위해서 사용된 용어는 "기준 서열", "비교 창", "서열 동일성", "서열 동일성의 백분율" 및 "실질적인 동일성"을 포함한다. "기준 서열"은 길이가 적어도 8 또는 10개, 그러나 빈번하게는 15 내지 18개, 종종 적어도 25개의 뉴클레오타이드 및 아미노산 잔기를 포함하는 단량체 단위이다. 2개의 폴리뉴클레오타이드는 각각 (1) 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이에서 유사한 서열(즉, 단지 완전한 폴리뉴클레오타이드 서열의 일부분), 및 (2) 2개의 폴리뉴클레오타이드 사이에서 일치하지 않는 서열을 포함할 수 있기 때문에, 2개(또는 그 초과)의 폴리뉴클레오타이드 사이의 서열 비교는 전형적으로 "비교 창"에 걸친 2개의 폴리뉴클레오타이드의 서열을 비교하여 서열 유사성의 국소 영역을 확인하고 비교함으로써 수행된다. "비교 창"은 적어도 6개의 인접한 위치, 통상적으로는 약 50 내지 약 100개, 보다 통상적으로는 약 100 내지 약 150개의 위치의 개념적 분절을 나타내며, 여기에서 서열은 2개의 서열을 최적으로 정렬한 후에 동일한 수의 인접한 위치의 기준 서열과 비교된다. 비교 창은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해서 기준 서열(부가 또는 결실을 포함하지 않음)에 비해 약 20% 이하의 부가 또는 결실(즉, 갭)을 포함할 수 있다.
비교 창을 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은 알고리즘(위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지 릴리즈(Wisconsin Genetics Software Package Release) 7.0(제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 미국 위스콘신주 575 사이언스 드라이브 매디슨 소재) 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)의 컴퓨터 구현에 의해서, 또는 선택된 다양한 방법 중의 임의의 것에 의해서 생성된 검사 및 최적 정렬(즉, 비교 창에 걸쳐 최고의 상동성 백분율을 제공함)에 의해서 수행될 수 있다. 기준은 또한 예를 들어, 문헌[Altschul et al., 1997, Nucl . Acids Res. 25:3389]에 개시된 바와 같은 프로그램의 BLAST 패밀리에 의해서 만들어질 수 있다. 서열 분석의 상세한 검토는 문헌[Unit 19.3 of Ausubel et al.,"Current Protocols in Molecular Biology," John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15]에서 찾아볼 수 있다.
"뉴클레아제-저항성" 올리고머 분자(올리고머)는 골격이 비-혼성화 형태 또는 혼성화 형태에서 신체 내에서 일반적인 세포외 뉴클레아제 및 세포내 뉴클레아제에 의한 뉴클레아제 절단에 실질적으로 저항성인 것을 지칭하고; 즉, 그 올리고머는 올리고머가 노출되는 신체 내의 정상 뉴클레아제 조건 하에서 뉴클레아제 절단을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다.
작용제는 그 작용제가 세포막을 통한 수동 확산이 아닌 기전에 의해서 세포에 도입될 때 "포유동물 세포에 의해서 능동적으로 흡수"된다. 작용제는 예를 들어, ATP-의존적 수송 기전에 의한 포유동물 세포막을 통한 작용제의 수송을 지칭하는 예를 들어, "능동 수송"에 의해서 또는 단백질을 수송하기 위해서 작용제의 결합을 요구하고, 이어서 결합된 작용제가 막을 통해서 통과하는 것을 촉진하는 수송 기전에 의한 세포막을 통한 안티센스 작용제의 수송을 지칭하는 "촉진 수송"에 의해서 수송될 수 있다. 능동 수송 및 촉진 수송 둘 모두의 경우, 올리고뉴클레오타이드 유사체는 바람직하게는 하기에 정의된 바와 같이, 실질적으로 비하전된 골격을 갖는다.
"헤테로듀플렉스"는 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 표적 RNA의 상보적 부분 간의 듀플렉스를 지칭한다. "뉴클레아제-저항성 헤테로듀플렉스"는 이의 상보적 표적에 대한 안티센스 올리고머의 결합에 의해서 형성된 헤테로듀플렉스를 지칭하여, 헤테로듀플렉스는 세포내 뉴클레아제 및 세포외 뉴클레아제, 예컨대, 이중 가닥 RNA/RNA 또는 RNA/DNA 복합체를 절단할 수 있는 RNaseH에 의한 생체내 절단에 실질적으로 저항성이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "체액"은 소변, 타액, 혈장, 혈액, 척수액, 또는 생물 기원의 다른 샘플, 예컨대, 피부 세포 또는 피부 부스러기를 비롯한, 대상체로부터 수득된 다양한 샘플 유형을 포함하고, 세포 또는 그 중에 현탁된 세포 단편 또는 액체 매질 및 이의 용질을 지칭할 수 있다.
용어 "상대적인 양"은 비교가 시험 측정치와 대조군 측정치 사이에서 일어난 경우 사용된다. 반응에서 복합체를 형성하는 시약의 상대적인 양은, 대조군 시편과 반응하는 양과 비교된 시험 시편과 반응하는 양이다. 대조군 시편은 동일한 검정에서 별개로 실시될 수 있거나 또는 그것은 동일한 샘플(예를 들어, 조직 섹션 내에서 악성 면적을 둘러싼 정상 조직)의 부분일 수 있다.
개체 또는 세포의 "치료"는 개체 또는 세포에서 질환 또는 병리학의 자연적인 과정을 변경하기 위한 수단으로서 제공된 사용된 임의의 유형의 개입이다. 치료는 예를 들어, 약제학적 조성물의 투여를 포함하지만 이것으로 제한되지 않으며, 예방적으로 또는 병리학적 이벤트의 개시 또는 병인제(etiologic agent)와의 접촉 후에 수행될 수 있다. 치료는 특히 본 명세서에 기술된 염증과 연관된 질환 또는 병태의 증상 또는 병리학에 대한 임의의 바람직한 효과를 포함한다.
또한 치료될 질환 또는 병태의 진행 속도를 감소시키거나, 질환 또는 병태의 개시를 지연시키거나, 그의 개시의 중증도를 감소시키도록 지시될 수 있는 "예방적" 치료가 포함된다. "치료" 또는 "예방"은 반드시 질환 또는 병태, 또는 이와 연관된 증상의 완전한 근절, 치유 또는 예방을 나타내는 것은 아니다.
야생형 유전자 또는 유전자 생성물은 집단에서 가장 빈번하게 관찰되는 것이며, 따라서 임의로 유전자의 "정상" 또는 "야생형" 형태로 지정된다.
LMNA 표적화
예는 하기에 논의된 서열번호 1 및/또는 2를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
특정 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 야생형 서열(서열번호 1) 및/또는 서열번호 2에 나타낸 바와 같은, HGPS 환자에서 발견되는 서열을 비롯한, 인간 LMNA 유전자 내의 엑손 11의 하나 이상의 염기에 상보적인 표적화 서열을 포함할 수 있다. 이러한 표적 서열을 하기 표 1에 나타낸다.
Figure 112018119163363-pct00023
예는 표 1의 서열번호 1 및 서열번호 2에서 밑줄 친 LMNA 엑손 11의 은성 스플라이스 부위(예를 들어,
Figure 112018119163363-pct00024
에 또한 상보적인 것을 비롯한, LMNA 엑손 11에 완전히 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드(서열번호 1 또는 2)를 포함한다.
특정 실시형태에서, 표적과 안티센스 표적화 서열 간의 상보성 정도는 안정적인 듀플렉스를 형성하기에 충분하다. 표적 RNA 서열을 갖는 안티센스 올리고머의 상보성의 영역은 8 내지 11개의 염기만큼 짧을 수 있지만, 바람직하게는 12 내지 15개의 염기 또는 그 초과, 예를 들어, 12 내지 20개의 염기, 12 내지 25개, 또는 15 내지 25개(이들 범위 사이의 모든 정수 및 범위 포함)의 염기이다. 약 14 내지 15개 염기의 안티센스 올리고머는 일반적으로 표적 mRNA에서 독특한 상보적 서열을 갖기에 충분히 길다. 특정 실시형태에서, 상보적 염기의 최소 길이는 하기에 논의된 바와 같이, 요구되는 결합 Tm을 달성하기 위해서 필요할 수 있다.
특정 실시형태에서, 40개 염기만큼 긴 올리고머가 적합할 수 있고, 여기서 적어도 염기의 최소 수, 예를 들어, 10 내지 12개의 염기가 표적 서열에 상보적이다. 일반적으로, 그러나, 세포에서의 촉진 또는 능동 흡수는 약 30개 미만의 올리고머 길이에서 최적화된다. 하기에 추가로 기술된 PMO 올리고머의 경우, 결합 안정성 및 흡수의 최적 균형은 18 내지 30개 염기의 길이에서 일어난다. 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40개의 염기로 이루어지고, 여기서 적어도 약 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40개의 인접한 염기 및/또는 비-인접한 염기가 서열번호 1 및/또는 2 또는 이의 변이체의 표적 서열을 비롯한, 본 명세서에 기술된 표적 서열에 상보적인 안티센스 올리고머(예를 들어, PNA, LNA, 2'-OMe, MOE, PMO)가 포함된다.
특정 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 LMNA 프리-mRNA 핵산 표적 서열에 100% 상보적일 수 있거나, 또는 이것은 예를 들어, 올리고머와 표적 서열 간에 형성된 헤테로듀플렉스가 세포 뉴클레아제의 작용 및 생체내에서 일어날 수 있는 다른 모드의 분해 또는 변위를 견디기에 충분히 안정적인 한, 예를 들어, 변이체를 수용하기 위해서 미스매치를 포함할 수 있다. 뉴클레아제에 의한 절단에 덜 민감한 올리고머 골격이 하기에 논의되어 있다. 존재하는 경우, 미스매치는 중간에서보다 혼성 듀플렉스의 단부 영역에 대해서 덜 탈안정화된다. 허용되는 미스매치의 수는 듀플렉스 안정성의 널리 이해되는 원칙에 따라서 올리고머의 길이, 듀플렉스 내의 G:C 염기쌍의 백분율, 및 듀플렉스 내의 미스매치(들)의 위치에 좌우될 것이다. 이러한 안티센스 올리고머는 표적 서열에 반드시 100% 상보적인 것은 아니지만, 그것은 표적 서열에 안정적이고 특이적으로 결합하기에 효과적이어서, 핵산 표적의 생물학적 활성도, 예를 들어, 프로저린 단백질(들)의 발현이 조절된다.
특정 실시형태에서, 예컨대, PMO 올리고머, 올리고머의 안티센스 활성도는 비하전된 링키지와 양이온성 포스포로다이아미데이트 링키지의 혼합물을 사용함으로써 증진될 수 있다. 올리고머 내의 양이온성 링키지의 총 수는 1 내지 10(이들 사이의 모든 정수 포함)에서 달라질 수 있고, 올리고머 전체에 배치될 수 있다. 바람직하게는 하전된 링키지의 수는 적어도 2개이고, 총 골격 링키지의 절반 이하, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 양으로 하전된 링키지, 바람직하게는 각각 하전된 링키지는 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5개의 비하전된 링키지에 의해서 골격을 따라서 분리되어 있다.
인간 LMNA 프리-mRNA를 표적화하기 위한 예시적인 안티센스 서열을 하기 표 2에 나타낸다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 이들 표적화 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다.
Figure 112018119163363-pct00025
안티센스 올리고뉴클레오타이드 화합물
본 개시내용의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 전형적으로는 (a) 포유동물 세포에 의해서 능동적으로 흡수되는 능력을 갖고, (b) 흡수된 후, 약 45℃ 초과의 Tm으로, 표적 RNA와 듀플렉스를 형성한다. 특정 실시형태에서, 올리고머 골격은 실질적으로 비하전될 수 있고, 바람직하게는, 세포막을 통한 능동 또는 촉진 수송을 위한 기질로서 인식될 수 있다. 표적 RNA와 안정적인 듀플렉스를 형성하는 올리고머의 능력은 또한 표적에 대한 안티센스 올리고머의 길이 및 상보성 정도, G:C 대 A:T 염기 매치의 비, 및 임의의 미스매칭된 염기의 위치를 비롯한, 올리고머 골격의 다른 특징에 관련될 수 있다. 세포 뉴클레아제에 저항하는 안티센스 올리고머의 능력은 생존 및 세포 세포질로의 작용제의 궁극적인 전달을 촉진시킬 수 있다.
안티센스 올리고머는 다양한 안티센스 화학물질을 이용할 수 있다. 올리고머 화학물질의 예는 상기 중 임의의 것의 조합물을 비롯한, 포스포르아미데이트 모폴리노 올리고머 및 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머(PMO), 포스포로티오에이트 변형된 올리고머, 2' O-메틸 변형된 올리고머, 펩타이드 핵산(PNA), 잠금 핵산(LNA), 포스포로티오에이트 올리고머, 2' O-MOE 변형된 올리고머, 2'-플루오로-변형된 올리고머, 2'O,4'C-에틸렌-브릿징된 핵산(ENA), 트라이사이클로-DNA, 트라이사이클로-DNA 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드, 2'-O-[2-(N-메틸카바모일)에틸] 변형된 올리고머, 모폴리노 올리고머, 펩타이드-접합된 포스포르아미데이트 모폴리노 올리고머(PPMO), (i) 모폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합, 및 (ii) (1,4-피페라진)-1-일 치환기 또는 치환된 (1,4-피페라진)-1-일(PMOplus)에 대한 제2 공유 결합을 갖는 인 원자를 갖는 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머, 및 (i) 모폴리노 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합 및 (ii) 4-아미노피페리딘-1-일(즉, APN) 또는 4-아미노피페리딘-1-일의 유도체(PMO-X) 화학물질의 고리 질소에 대한 제2 공유 결합을 갖는 인 원자를 갖는 포스포로다이아미데이트 모폴리노 올리고머를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, PNA 및 LNA 화학물질은 PMO 및 2'O-Me 변형된 올리고머에 비해서 비교적 높은 표적 결합 강도로 인해서 더 짧은 표적화 서열을 이용할 수 있다. 포스포로티오에이트 및 2'O-Me-변형된 화학물질은 조합되어 2'O-Me-포스포로티오에이트 골격을 생성할 수 있다(예를 들어, 전문이 참고로 포함된 PCT 공개 제WO2013/112053호 및 제WO2009/008725호 참고).
일부 예에서, 안티센스 올리고머, 예컨대, PMO는 세포내 전달을 촉진시키기 위해서 세포 투과성 펩타이드(CPP)에 접합될 수 있다. 펩타이드-접합된 PMO는 PPMO라 불리며, 특정 실시형태는 전문이 참고로 본 명세서에 포함된 PCT 공개 제WO2012/150960호에 기술된 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같은 안티센스 올리고머의 3' 말단 단부에 접합 또는 연결된 아르기닌-풍부 펩타이드 서열이 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 바와 같은 안티센스 올리고머의 5' 말단 단부에 접합 또는 연결된 아르기닌-풍부 펩타이드 서열이 사용될 수 있다.
1. 펩타이드 핵산(PNA)
펩타이드 핵산(PNA)은, 골격이 피리미딘 또는 퓨린 염기가 부착된 N-(2-아미노에틸) 글리신 단위로 이루어진, 데옥시리보스 골격과 구조적으로 이체동형(homomorphous)인 DNA의 유사체이다. 자연 피리미딘 및 퓨린 염기를 함유한 PNA는 왓슨-크릭 염기-짝짓기 규칙을 따라서 상보적 올리고머에 혼성화하고, 염기쌍 인식과 관련하여 DNA를 모방한다(Egholm, Buchardt et al. 1993). PNA의 골격은 포스포다이에스터 결합이 아닌 펩타이드 결합에 의해서 형성되어, 이것이 안티센스 응용에 양호하게 적합하게 한다(하기 구조 참고). 이 골격은 비하전되어, 일반적인 열 안정성보다 큰 열 안정성을 나타내는 PNA/DNA 또는 PNA/RNA 듀플렉스를 생성한다. PNA는 뉴클레아제 또는 프로테아제에 의해서 인식되지 않는다. PNA의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00026
.
자연 구조로의 라디칼 구조 변화에도 불구하고, PNA는 DNA 또는 RNA에 헬릭스 형태로 서열-특이적으로 결합할 수 있다. PNA의 특징은 상보적 DNA 또는 RNA에 대한 높은 결합 친화성, 단일-염기 미스매치에 인해서 유발되는 탈안정화 효과, 뉴클레아제 및 프로테아제에 대한 저항성, 염 농도와 무관한 DNA 또는 RNA와의 혼성화 및 호모퓨린 DNA와의 트리플렉스 형성을 포함한다. PANAGENE(상표명)은 이의 소유권이 있는 Bts PNA 단량체(Bts; 벤조티아졸-2-설포닐기) 및 소유권이 있는 올리고머화 공정을 개발하였다. Bts PNA 단량체를 사용한 PNA 올리고머화는 탈보호, 커플링 및 캡핑의 반복적인 사이클로 구성된다. PNA는 관련 기술 분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여 합성 방식으로 생산될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,969,766호, 제7,211,668호, 제7,022,851호, 제7,125,994호, 제7,145,006호 및 제7,179,896호 참고). PNA의 제조에 대해서는 또한 미국 특허 제5,539,082호; 제5,714,331호; 및 제5,719,262호를 참고하기 바란다. PNA 화합물의 추가 교시는 문헌[Nielsen et al., Science, 254:1497-1500, 1991]에서 찾아볼 수 있다. 상기 각각은 이의 전문이 참고로 포함된다.
2. 잠금 핵산(LNA)
안티센스 올리고머 화합물은 "잠금 핵산" 소단위(LNA)를 또한 함유할 수 있다. "LNA"는 브œ징된 핵산(BNA)이라 불리는 변형의 부류의 구성원이다. BNA는 C30-엔도(노던(northern)) 당 퍼커(sugar pucker)에서 리보스 고리의 입체 배치를 고정하는 공유 링키지를 특징으로 한다. LNA의 경우, 브릿지는 2'-O와 4'-C 위치 사이의 메틸렌으로 구성된다. LNA는 골격 사전조직화(preorganization) 및 염기 적층을 증진시켜 혼성화 및 열 안정성을 증가시킨다.
LNA의 구조는 예를 들어 전문이 참고로 포함된 문헌[Wengel, et al., Chemical Communications (1998) 455; Tetrahedron (1998) 54:3607, and Accounts of Chem. Research (1999) 32:301); Obika, et al., Tetrahedron Letters (1997) 38:8735; (1998) 39:5401, and Bioorganic Medicinal Chemistry (2008) 16:9230]에서 찾아볼 수 있다. LNA의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00027
.
본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 LNA를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 LNA로 전체적으로 구성될 수 있다. 개별 LNA 뉴클레오사이드 소단위의 합성 및 올리고머 내의 이의 혼입을 위한 방법은 예를 들어, 각각 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제7,572,582호, 제7,569,575호, 제7,084,125호, 제7,060,809호, 제7,053,207호, 제7,034,133호, 제6,794,499호 및 제6,670,461호에 기술되어 있다. 전형적인 소단위간 링커는 포스포다이에스터 및 포스포로티오에이트 모이어티를 포함하고; 대안적으로, 비-인 함유 링커가 사용될 수 있다. 추가 실시형태는 LNA 함유 화합물을 포함하는데, 여기서 각각의 LNA 소단위는 DNA 소단위에 의해서 분리되어 있다. 특정 화합물은 교호하는 LNA 및 DNA 소단위로 구성되는데, 여기서 소단위간 링커는 포스포로티오에이트이다.
2'O,4'C-에틸렌-브릿징된 핵산(ENA)이 BNA의 부류의 또 다른 구성원이다. 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00028
.
ENA 올리고머 및 이의 제조는 전문이 참고로 포함된 문헌[Obika et al., Tetrahedron Lett 38 (50): 8735]에 기술되어 있다. 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 ENA 소단위를 혼입할 수 있다.
3. 포스포로티오에이트
"포스포로티오에이트"(도는 S-올리고)는 비브릿징된 산소가 황에 의해서 대체된 정상 DNA의 변이체이다. 포스포로티오에이트의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00029
.
뉴클레오타이드간 결합의 황화는 5'에서 3' 및 3'에서 5' DNA POL 1 엑소뉴클레아제, 뉴클레아제 S1 및 P1, RNases, 혈청 뉴클레아제 및 뱀독 포스포다이에스터라제를 비롯한, 엔도- 및 엑소뉴클레아제의 작용을 감소시킨다. 포스포로티오에이트는 2가지 경로: 수소 포스포네이트 상에서의 이황화탄소 내의 원소 황의 용액의 작용에 의해서, 또는 테트라에틸티우람 다이설파이드(TETD) 또는 3H-1, 2-벤소티올-3-온 1, 1-다이옥사이드(BDTD) 중 어느 하나로의 포스파이트 트라이에스터의 황화 방법에 의해서 일어난다(예를 들어, 전문이 참고로 포함된 문헌[Iyer et al., J. Org. Chem.55, 4693-4699, 1990] 참고). 후자 방법은 대부분의 유기 용매 중에서의 원소 황의 불해성 및 이황화탄소의 독성 문제를 회피한다. TETD 및 BDTD 방법은 또한 더 높은 순도의 포스포로티오에이트를 수득한다.
4. 트라이사이클로-DNA 및 트라이사이클로-포스포로티오에이트 뉴클레오타이드
트라이사이클로-DNA(tc-DNA)는 속박된 DNA 유사체의 부류인데, 여기서 각각의 뉴클레오타이드는 골격의 입체 배치 유연성을 제한하고, 비틀림각 γ의 골격 기하학적 형상을 최적화하기 위해서 사이클로프로판 고리의 도입에 의해서 변형되어 있다. 동종염기성(homobasic) 아데닌- 및 티민-함유 tc-DNA가 상보적 RNA와 함께 상당히 안정적인 A-T 염기쌍을 형성한다. 트라이사이클로-DNA 및 이의 합성은 전문이 참고로 포함된 PCT 특허 출원 공개 제WO 2010/115993호에 기술되어 있다. 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 트라이사이클-DNA를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 트라이사이클-DNA로 전체적으로 구성될 수 있다.
트라이사이클로-포스포로티오에이트 뉴클레오타이드는 포스포로티오에이트 소단위간 링키지를 갖는 트라이사이클로-DNA 뉴클레오타이드이다. 트라이사이클로-포스포로티오에이트 뉴클레오타이드 및 이의 합성은 전문이 참고로 포함된 PCT 특허 출원 공개 제WO 2013/053928호에 기술되어 있다. 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 트라이사이클-DNA를 혼입할 수 있고; 일부 경우에, 화합물은 트라이사이클-DNA로 전체적으로 구성될 수 있다. 트라이사이클로-DNA/트라이사이클로-포스포로티오에이트 뉴클레오타이드의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00030
.
5. 2' O-메틸, 2' O-MOE, 및 2'-F 올리고머
"2'O-Me 올리고머" 분자는 리보스 분자의 2'-OH 잔기에서 메틸기를 보유한다. 2'-O-Me-RNA는 DNA와 동일한(또는 유사한) 거동을 나타내지만, 뉴클레아제 분해에 대해서 보호된다. 2'-O-Me-RNA는 또한 추가 안정화를 위해서 포스포티오에이트 올리고머(PTO)와 조합될 수 있다. 2'O-Me 올리고머(포스포다이에스터 또는 포스포티오에이트)는 관련 기술 분야의 일상적인 기술에 따라서 합성될 수 있다(예를 들어, 전문이 참고로 포함된 문헌[Yoo et al., Nucleic Acids Res.32:2008-16, 2004] 참고). 2' O-Me 올리고머의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00031
.
2' O-Me 올리고머는 또한 포스포로티오에이트 링키지(2' O-Me 포스포로티오에이트 올리고머)를 포함할 수 있다. 2' O-메톡시에틸 올리고머(2'-O MOE), 예컨대, 2' O-Me 올리고머는 리보스 분자의 2'-OH 잔기에서 메톡시에틸을 보유하고, 전문이 참고로 포함된 문헌[Martin et al., Helv . Chim . Acta, 78, 486-504, 1995]에 논의되어 있다. 2' O-MOE 뉴클레오타이드의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00032
.
상기 알킬화된 2'OH 리보스 유도체에 반해서, 2'-플루오로 올리고머는 2'OH 대신에 2' 위치에서 플루오로 라디칼을 갖는다. 2'-F 올리고머의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00033
.
2'-플루오로 올리고머는 전문이 참고로 포함된 PCT 출원 공개 제WO 2004/043977호에 추가로 기술되어 있다. 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 2'O-메틸, 2' O-MOE, 및 2'-F 소단위를 혼입할 수 있고, 본 명세서에 기술된 소단위간 링키지 중 임의의 것을 활용할 수 있다. 일부 예에서, 본 개시내용의 화합물은 2'O-메틸, 2' O-MOE, 또는 2'-F 소단위로 완전히 구성될 수 있다. 본 개시내용의 화합물의 일 실시형태는 2'O-메틸 소단위로 완전히 구성된다.
6. 2'-O-[2-(N-메틸카바모일)에틸] 올리고뉴클레오타이드(MCE)
MCE는 본 개시내용의 화합물에 유용한 2'O 변형된 리보뉴클레오사이드의 또 다른 예이다. 여기서, 2'OH는 뉴클레아제 저항성을 증가시키기 위해서 2-(N-메틸카바모일)에틸 모이어티로 유도체화된다. MCE 올리고머의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00034
.
MCE 및 이의 합성은 전문이 참고로 포함된 문헌[Yamada et al., J. Org . Chem., 76(9):3042-53]에 기술되어 있다. 본 개시내용의 화합물은 하나 이상의 MCE 소단위를 혼입할 수 있다.
7. 입체 특이적 올리고머
입체 특이적 올리고머는 각각의 인-함유 링키지의 입체 화학이 실질적으로 순수한 단일 올리고머가 생산되도록 하는 합성 방법에 의해서 고정된 것이다. 입체 특이적 올리고머의 비제한적인 예를 하기에 도시한다:
Figure 112018119163363-pct00035
.
상기 예에서, 올리고머의 각각의 인은 동일한 입체 화학을 갖는다. 추가적인 예는 상기에 기술된 올리고머를 포함한다. 예를 들어, LNA, ENA, 트라이사이클로-DNA, MCE, 2' O-메틸, 2' O-MOE, 2'-F, 및 모폴리노-기반 올리고머는 입체-특이적 인-함유 뉴클레오사이드간 링키지, 예컨대, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포다이에스터, 포스포르아미데이트, 포스포로다이아미데이트, 또는 다른 인-함유 뉴클레오사이드간 링키지를 사용하여 제조될 수 있다. 입체 특이적 올리고머, 제조 방법, 카이랄 제어된 합성, 카이랄 설계 및 이러한 올리고머의 제조에 사용하기 위한 카이랄 보조제는 예를 들어, 각각 전문이 참고로 포함된 PCT 출원 공개 제WO2015/107425호, 제WO2015/108048호, 제WO2015/108046호, 제WO2015/108047호, 제WO2012/039448호, 제WO2010/064146호, 제WO2011/034072호, 제WO2014/010250호, 제WO2014/012081호, 제WO2013/0127858호, 및 제WO2011/005761에 상술되어 있다.
8. 모폴리노-기반 올리고머
모폴리노-기반 올리고머는 핵염기를 지지하는 모폴리노 소단위를 포함하는 올리고머를 지칭하고, 이것은 리보스 대신에 모폴린 고리를 함유한다. 예시적인 뉴클레오사이드간 링키지는 예를 들어, 하나의 모폴리노 소단위의 모폴린 고리 질소를 인접한 모폴리노 소단위의 4' 엑소사이클릭 탄소에 연결시키는 포스포르아미데이트 또는 포스포로다이아미데이트 뉴클레오사이드간 링키지를 포함한다. 각각의 모폴리노 소단위는 염기-특이적 수소 결합에 의해서 올리고뉴클레오타이드 내의 염기에 결합하기에 효과적인 퓨린 또는 피리미딘 핵염기를 포함한다.
모폴리노-기반 올리고머(안티센스 올리고머 포함) 및 이의 합성은 예를 들어, 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제5,698,685호; 제5,217,866호; 제5,142,047호; 제5,034,506호; 제5,166,315호; 제5,185,444호; 제5,521,063호; 제5,506,337 및 미국 출원 제12/271,036호; 제12/271,040호; PCT 공개 제WO2009/064471호 및 제WO2012/043730호 문헌[Summerton et al. 1997, Antisense and Nucleic Acid Drug Development, 7:187-195]에 상술되어 있다. 올리고머 구조 내에서, 포스페이트기는 올리고머의 "뉴클레오사이드간 링키지"를 형성하는 것으로 일반적으로 지칭된다. RNA 및 DNA의 자연 발생 뉴클레오사이드간 링키지는 3'에서 5' 포스포다이에스터 링키지이다. "포스포르아미데이트"기는 3개의 산소 원자가 부착되고, 하나의 질소 원자가 부착된 인을 포함하는 반면, "포스포로다이아미데이트"기는 2개의 산소 원자가 부착되고, 2개의 질소 원자가 부착된 인을 포함한다. 본 명세서에 기술된 모폴리노-기반 올리고머의 비하전된 또는 양이온성 소단위간 링키지에서, 하나의 질소는 항상 골격쇄에 대해서 펜던트이다. 포스포로다이아미데이트 링키지에서, 제2 질소는 전형적으로 모폴린 고리 구조 내의 고리 질소이다.
"PMO-X"는 (i) 모폴린 고리의 질소 원자에 대한 공유 결합 및 (ii) 4-아미노피페리딘-1-일(즉, APN) 또는 4-아미노피페리딘-1-일의 유도체의 고리 질소에 대한 제2 공유 결합을 갖는 인 원자를 갖는 포스포로다이아미데이트 모폴리노-기반 올리고머를 지칭한다. 예시적인 PMO-X 올리고머는 전문이 참고로 포함된 PCT 출원 제PCT/US2011/38459호 및 PCT 공개 제WO 2013/074834호에 개시되어 있다. PMO-X는 "PMO-apn" 또는 "APN"을 포함하는데, 이것은 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 링키지를 포함하고, 여기서 인 원자는 모폴리노기 및 4-아미노피페리딘-1-일(즉, APN)의 고리 질소에 연결된 PMO-X 올리고머를 지칭한다. 구체적인 실시형태에서, 표 2에 제시된 바와 같은 표적화 서열을 포함하는 안티센스 올리고머는 적어도 하나의 APN-함유 링키지 또는 APN 유도체-함유 링키지를 포함한다. 다양한 실시형태는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 APN/APN 유도체-함유 링키지를 갖고, 여기서 나머지 링키지(100% 미만인 경우)는 비하전된 링키지, 예를 들어, 총 뉴클레오사이드간 링키지의 약 또는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40은 APN/APN 유도체-함유 링키지인, 모폴리노-기반 올리고머를 포함한다.
특정 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure 112018119163363-pct00036
식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 의 정수이며;
T는
Figure 112018119163363-pct00037
로부터 선택되고;
G는 세포 투과성 펩타이드("CPP") 및 링커 모이어티이다.
일부 실시형태에서, G는
Figure 112018119163363-pct00038
Figure 112018119163363-pct00039
Figure 112018119163363-pct00040
Figure 112018119163363-pct00041
및
Figure 112018119163363-pct00042
로부터 선택되고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단 Ra에 부착된 모이어티이고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 5 내지 21로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
특정 실시형태에서, G는
Figure 112018119163363-pct00043
및
Figure 112018119163363-pct00044
로부터 선택되고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, CPP는 서열번호 5 내지 21로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, T는
Figure 112018119163363-pct00045
이다.
다양한 양상에서, 본 개시내용의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다:
Figure 112018119163363-pct00046
식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열을 형성하는 핵염기이고;
Z는 8 내지 38의 정수이며;
G는 세포 투과성 펩타이드("CPP") 및 링커 모이어티이다.
일부 실시형태에서, G는
Figure 112018119163363-pct00047
Figure 112018119163363-pct00048
Figure 112018119163363-pct00049
Figure 112018119163363-pct00050
및
Figure 112018119163363-pct00051
로부터 선택되고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단 Ra에 부착된 모이어티이고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 5 내지 21로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
특정 실시형태에서, G는
Figure 112018119163363-pct00052
및
Figure 112018119163363-pct00053
로부터 선택되고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, CPP는 서열번호 5 내지 21로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 24 또는 25로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 안티센스 올리고머의 표적화 서열, 예를 들어, 화학식 (I) 및 (II)의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태는 하기로부터 선택된다:
a) 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)(식 중, Z는 23임); 및
b) 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)(식 중, Z는 23임).
펩타이드 수송체
PMO의 CPP 및 아르기닌-풍부 펩타이드 접합체(PPMO)
특정 실시형태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 세포-투과성 펩타이드(본 명세서에서 "CPP"라 칭함)에 접합된다. 일부 실시형태에서, CPP는 아르기닌-풍부 펩타이드이다. 용어"아르기닌-풍부"는 적어도 2개, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아르기닌 잔기를 갖고, 각각이 임의로 하나 이상의 비하전된, 소수성 잔기에 의해서 분리되고, 약 6 내지 14개의 아미노산 잔기를 임의로 함유하는 CPP를 지칭한다. 하기에 설명된 바와 같이, CPP는 바람직하게는 이의 카복시 말단에서, 또한 하나 이상의 아미노산일 수 있는 링커를 통해서 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 3' 및/또는 5' 단부에 연결되고, 바람직하게는 또한 H, 아세틸, 벤조일 또는 스테아로일로부터 선택된 Ra를 갖는 치환기 Ra에 의해서 이의 아미노 말단에서 캡핑된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
Figure 112018119163363-pct00054
CPP, 이의 합성 및 올리고머에 대한 접합 방법은 본 개시내용이 참고로 본 명세서에 포함된 미국 출원 공개 제2012/0289457호 및 PCT 특허 출원 공개 제WO 2004/097017호, 제WO 2009/005793호, 및 제WO 2012/150960호에 추가로 기술되어 있다.
다양한 실시형태에서, G(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음) G는 세포 투과성 펩타이드("CPP"),
Figure 112018119163363-pct00055
Figure 112018119163363-pct00056
Figure 112018119163363-pct00057
Figure 112018119163363-pct00058
및
Figure 112018119163363-pct00059
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단 Ra에 부착된 모이어티이고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다. 일부 실시형태에서, CPP는 서열번호 5 내지 21을 포함하거나 또는 이로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25를 포함하거나 또는 이로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 일부 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
일부 실시형태에서, G(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음)는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112018119163363-pct00060
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, J는 4 내지 9의 정수이다. 특정 실시형태에서 J는 6이다.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra(화학식 (I) 및 (II)에 언급된 바와 같음)는 하기 화학식을 갖는다:
Figure 112018119163363-pct00061
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, J는 4 내지 9의 정수이다. 특정 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 다양한 실시형태에서, J는 6이다. 일부 실시형태에서 Ra는 H 및 아세틸로부터 선택된다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, Ra는 H이다. 특정 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, G는 서열번호 22 내지 25를 포함하거나 또는 이로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, G는 서열번호 25이다.
예를 들어, 화학식 (I) 및 (II)의 안티센스 올리고머를 포함하는 특정 실시형태에서, G는 올리고머의 3' 단부에서 본 개시내용의 실시형태의 안티센스 올리고머에 공유 결합된 -C(O)CH2NH-R6-Ra이고, 식 중, Ra는 R6의 아미노 말단을 캡핑하기 위한 H, 아세틸, 벤조일 또는 스테아로일이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다. 이러한 비제한적인 예에서, CPP는 -R6-Ra이고, 링커는 -C(O)CH2NH-(즉, 글리신)이다. G = -C(O)CH2NH-R6-Ra의 이러한 특정 예가 또한 하기 구조식에 의해서 예시된다:
Figure 112018119163363-pct00062
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 -R6-Ra이고, 식 중, CPP는 서열번호 11이다:
Figure 112018119163363-pct00063
식 중, Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, CPP는 서열번호 11이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 화학식-(RXR)4-Ra를 갖고, 식 중, CPP는 서열번호 16이다:
Figure 112018119163363-pct00064
.
다양한 실시형태에서, CPP-Ra는 하기 화학식으로도 예시된 -R-(FFR)3-Ra이고, 식 중, CPP는 서열번호 21이다:
Figure 112018119163363-pct00065
.
다양한 실시형태에서, G는 세포 투과성 펩타이드("CPP") 및
Figure 112018119163363-pct00066
Figure 112018119163363-pct00067
Figure 112018119163363-pct00068
및
Figure 112018119163363-pct00069
로부터 선택된 링커 모이어티이고,
식 중, CPP는 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 링커 모이어티에 부착되고, Ra는 아마이드 결합에 의해서 CPP 아미노 말단에 부착되고, 식 중 Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택되고, 식 중, CPP-Ra는 하기로부터 선택된다:
Figure 112021038968911-pct00071
Figure 112018119163363-pct00072
또는
Figure 112018119163363-pct00073
. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다
추가로, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 안티센스 올리고머는 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure 112021038968911-pct00106
식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 하기로부터 선택된 표적화 서열(5'에서 3')을 형성하는 핵염기이고:
a) 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)(식 중, Z는 23임); 및
b) 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)(식 중, Z는 23임);
Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 표적화 서열은 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)이고, Z는 23이다. 특정 실시형태에서, 표적화 서열은 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)이고, Z는 23이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
예를 들어, 화학식 (III)의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태를 비롯한, 본 개시내용의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 하기 화학식 (IV) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
Figure 112018119163363-pct00075
각각의 Nu는 함께 취해져서 하기로부터 선택된 표적화 서열(5'에서 3')을 형성하는 핵염기이고:
a) 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)(식 중, Z는 23임; 및 b) 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)(식 중, Z는 23임);
Ra는 H, 아세틸, 벤조일 및 스테아로일로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 표적화 서열은 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)이고, Z는 23이다. 특정 실시형태에서, 표적화 서열은 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)이고, Z는 23이다. 일부 실시형태에서, Ra는 아세틸이다.
일부 실시형태에서, 화학식 (III)의 안티센스 올리고머 화합물은 화학식 (IV)를 갖고, 여기서 표적화 서열은 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)이고, Z는 23이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (III)의 안티센스 올리고머 화합물은 화학식 (IV)를 갖고, 여기서 표적화 서열은 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG) 이고, Z는 23이다.
일부 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 하기로부터 선택된 화학식 (V)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure 112018119163363-pct00076
및
Figure 112018119163363-pct00077
일부 실시형태에서, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머는 화학식 (Va)를 갖는다. 특정 실시형태에서, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머는 화학식 (Vb)를 갖는다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 화학식 (III), 화학식 (IV), 화학식 (V), 화학식 (Va), 및 화학식 (Vb)의 화합물을 비롯한 본 개시내용의 안티센스 올리고머는 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 HCl(염산) 염이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 화학식 (III)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (III)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (IV)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (V)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (V)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (Va)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (Va)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (Vb)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (Vb)의 화합물은 0.6 HCl 염이다.
예를 들어, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태를 비롯한, 본 개시내용의 안티센스 올리고머의 일부 실시형태에서, 안티센스 올리고머는 하기로부터 선택된 하기 화학식 (VI)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염일 수 있다:
Figure 112018119163363-pct00078
및
Figure 112018119163363-pct00079
일부 실시형태에서, 화학식 (VI)의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIa)를 갖는다. 특정 실시형태에서, 화학식 (VI)의 안티센스 올리고머는 화학식 (VIb)를 갖는다. 특정 실시형태에서, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머 화합물은 화학식 (VIa)를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 (V)의 안티센스 올리고머 화합물은 화학식 (VIb)를 갖는다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 화학식 (VI), 화학식 (VIa), 화학식 (VIb)의 화합물을 비롯한 본 개시내용의 안티센스 올리고머는 약제학적으로 허용 가능한 염이다. 특정 실시형태에서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 HCl(염산) 염이다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 화학식 (VI)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (VI)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (VIa)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (VIa)의 화합물은 0.6 HCl 염이다. 일부 실시형태에서, 화학식 (VIb)의 화합물은 HCl 염이다. 특정 실시형태에서, 화학식 (VIb)의 화합물은 0.6 HCl 염이다.
명확성을 위해서, 화학식 (V) 및 (VI)의 안티센스 올리고머의 구조 화학식은 5'에서 3'으로의 연속적인 구조 화학식이고, 도시의 용이성을 위해서, 컴팩트 형태의 전체 구조 화학식을 "브레이크 A", "브레이크 B", 및 "브레이크 C"로 표지된 다양한 삽화 브레이크로 본 명세서에 제공한다. 통상의 기술자는, 예를 들어, "브레이크 A"의 각각의 표시가 이러한 지점에서 구조 화학식의 삽화의 연속을 나타낸다는 것을 이해한다. 이것은 화학식 (V) 및 (VI)의 안티센스 올리고머의 구조 화학식에서 "브레이크 B" 및 "브레이크 C"의 각각의 예에서도 마찬가지이다. 상기에 기술되거나 본 명세서에서 사용된 삽화 브레이크 중 어느 것도 화학식 (V) 및 (VI)의 안티센스 올리고머의 구조 화학식의 실제 중단을 나타내도록 의도되지 않고, 통상의 기술자는 이를 의미하는 것으로 이해하지 않을 것이다.
사용 방법 및 약제학적 제형
본 발명은 대상체에게 본 명세서에 기술된 바와 같은 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 이를 함유하는 약제학적 조성물을 투여함으로써 조로병, 예컨대, 라미노패씨 및 관련된 질환 또는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에서 조로병, 예컨대, 라미노패씨 및 관련된 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 관한 것이며, 여기서 올리고뉴클레오타이는 LMNA 프리-mRNA의 스플라이싱을 조절함으로써 돌연변이체 LMNA 단백질 mRNA의 발현을 저해한다. 특정 양상에서, 예를 들어, 이들 및 관련된 방법은 프로저린 발현이 질환, 예컨대, HGPS와 연관된 임상 환경에서 조로증 라미노패씨를 치료하는 데 적용될 수 있다. 이들 및 관련 실시형태는 또한 다른 치료와 함께 본 발명의 방법을 동시에 또는 순차적으로 수행함으로써 조로증 라미노패씨를 치료 또는 감소시키는 방법과 조합될 수 있다.
본 명세서에 기술된 결과는, 조로증 라미노패씨를 넘어선 노화 과정 및 관련된 병태 및 질환에 대해서 일반화될 수 있다. 이는, HGPS가 다수의 측면에서 정상 노화 과정에 밀접하게 연관되기 때문이다. HGPS는 유용한 노화 모델로서 계속 인식되어 왔다(Fossel, J. Pediatr Endocrinol Metab 13 Suppl 6:1477-1481, 2000). 예를 들어, 특히 관상 동맥의 죽상경화증은 매우 강력하다. 또한, HGPS에서의 탈모는 노년의 대상체에서 인지되는 것과 유사하다. 추가로, 헤이플릭(Hayflick) 등(Hayflick, N Engl J Med 295:1302-1308, 1976)에 의해서 수 년 전에 기술된 바와 같이 HGPS의 주된 세포 특징은 조기 세포 노쇄이다. HGPS 섬유아세포에서의 제한된 세포 분열의 수는 노인 개체로부터 유래된 섬유아세포에서 인지되는 것과 유사하다. 즉, HGPS 섬유아세포와 노인으로부터 유래된 것의 유전자 발현 패턴에서 유사성을 나타내고, 더 젊은 사람으로부터 유래된 섬유아세포와 구별되는 것이 연구자들에 의해서 추가로 확인되었다(Ly et al., Science 287: 2486-2492, 2000).
따라서, 본 명세서에 기술된 바와 같은 조로병 또는 관련된 병태를 치료하는 방법은 조로증 라미노패씨, 예컨대, HGPS, 또는 또 다른 조로병 또는 병태, 노화-관련 병태, 심혈관 질환 또는 병태(예컨대, 죽상경화증) 등의 치료를 포함할 수 있다고 이해될 것이다.
본 발명의 방법을 사용한 효과적인 생체내 치료 요법은 올리고뉴클레오타이드의 투여 기간, 용량, 빈도, 경로, 뿐만 아니라 치료(즉, 예방적 투여 대 기존의 병태에 반응하는 투여) 하의 대상체의 병태에 따라서 달라질 수 있다고 이해될 것이다. 따라서, 이러한 생체내 요법은 종종 최적의 치료 결과를 달성하기 위해서, 치료 하의 특정 유형의 질환에 적절한 시험에 의해서 모니터링되고, 용량 또는 치료 요법에서 대응해서 조정되는 것이 필요할 것이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 방법은 본 명세서에 기술된 바와 같은 안티센스 올리고머의 치료적 전달에 적합한 제형 또는 조성물을 이용한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 본 발명의 방법은 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체(첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제형화된, 본 발명에 기술된 1종 이상의 올리고머 또는 작용제의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적으로 허용 가능한 조성물을 이용한다. 본 발명의 올리고머는 단독으로 투여될 수 있지만, 화합물은 약제학적 제형(조성물)로 투여하는 것이 바람직하다.
핵산 분자의 전달을 위한 방법은 예를 들어, 문헌[Akhtar et al., 1992, Trends Cell Bio., 2:139; 및 Delivery Strategies for Antisense Oligonucleotide Therapeutics, ed. Akhtar]; 설리반(Sullivan) 등의 PCT 출원 공개 제WO94/02595호에 기술되어 있다. 이들 및 다른 프로토콜은 본 발명의 단리된 올리고머를 비롯한, 실질적으로 임의의 핵산 분자의 전달을 위해서 이용될 수 있다.
하기에 상술된 바와 같이, 본 발명의 방법에서 사용되는 약제학적 조성물은 하기를 위해서 개작된 것을 비롯한 고체 또는 액체 형태로 투여하기 위해서 특별하게 제형화될 수 있다: (1) 경구 투여, 예를 들어, 드렌치(drench)(수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어, 협측, 설하, 및 전신 흡수를 위해서 표적화된 것, 볼루스(boluse), 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 예를 들어, 멸균 용액 또는 현탁액 또는 서방형 제형으로서, 예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의한 비경구 투여; (3) 예를 들어, 크림, 연고 또는 제어된-방출 패치 또는 피부에 적용된 스프레이와 같은 국소 적용; (4) 예를 들어, 페서리(pessary), 크림 또는 폼(foam)으로서의 질내 또는 직장내 투여; (5) 설하 투여; (6) 안내; (7) 경피; 또는 (8) 비내.
구 "약제학적으로 허용 가능한"은 본 명세서에서 건전한 의학적 판단의 범주 내에서 타당한 유익/유해비와 비례하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증이 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하는데 적합한 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여형을 지칭하기 위해서 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 구 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 약제학적으로 허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대, 대상 화합물을 신체의 한 기관 또는 부분으로부터 신체의 또 다른 기관 또는 부분으로 운반하거나 수송하는데 관여되는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제조 보조제(예를 들어, 윤활제, 탈크 마그네슘, 칼슘 또는 아연 스테아레이트 또는 스테아르산), 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 상요성이고, 환자에게 무해하여야 한다는 의미에서 "허용 가능"해야 한다.
약제학적으로 허용 가능한 담체로 기능할 수 있는 물질의 일부의 예는 하기가 포함되지만, 이들로 제한되지 않는다: (1) 당, 예컨대, 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대, 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스, 및 이의 유도체, 예컨대, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탈크; (8) 부형제, 예컨대, 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 낙화생유, 면실유, 잇꽃유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대, 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대, 글리세린, 솔비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스터, 예컨대, 에틸 올리에이트 및 에틸라우레이트; (13) 아가; (14) 완충제, 예컨대, 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원-무함유 물; (17) 등장성 식염수; (18) 링거(Ringer) 용액; (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스터, 폴리카보네이트 및/또는 폴리언하이드라이드; 및 (22) 약제학적 제형에 사용되는 다른 비독성 사용성 물질.
본 발명의 안티센스 올리고머와 함께 제형화하는데 적합한 작용제의 추가의 비제한적 예는 하기를 포함한다: PEG 접합된 핵산, 인지질 접합된 핵산, 친유성 모이어티를 함유하는 핵산, 포스포로티오에이트, 다양한 조직 내로 약물의 유입을 증진시킬 수 있는 P-당단백질 저해제(예컨대, 플루로닉(Pluronic) P85); 생분해성 중합체, 예컨대, 이식 후 서방형 전달을 위한 폴리(DL-락티드-코글리콜리드) 미소구체(microsphere)(Emerich, DF et al., 1999, Cell Transplant, 8, 47-58) Alkermes, Inc. Cambridge, Mass.); 및 적재된 나노입자, 예컨대, 약물을 혈뇌 장벽을 가로질러서 전달할 수 있고, 뉴론성 흡수 기전을 변경할 수 있는 폴리부틸사이아노아크릴레이트로 만들어진 것(Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry, 23, 941-949, 1999).
본 발명의 방법은 또한, 폴리(에틸렌 글리콜) 지질을 함유하는 표면-변형된 리포솜(PEG-변형된, 분지형 및 비분지형 또는 이들의 조합물, 또는 장기간-순환성 리포솜 또는 스텔스(stealth) 리포솜)을 포함하는 조성물의 사용을 특징으로 한다. 본 발명의 올리고머는 또한, 다양한 분자량의 공유 결합된 PEG 분자를 포함할 수 있다. 이들 제형은 표적 조직에서 약물의 축적을 증가시키는 방법을 제공한다. 이러한 부류의 약물 담체는 단핵성 식세포 시스템(MPS 또는 RES)에 의한 옵소닌화 (opsonization) 및 제거에 저항함으로써 더 긴 혈액 순환 시간 및 캡슐화된 약물에 대한 증진된 조직 노출을 가능하게 한다(Lasic et al. Chem . Rev. 1995, 95, 2601-2627; Ishiwata et al., Chem . Pharm . Bull. 1995, 43, 1005-1011). 이러한 리포솜은 아마도 혈관신생된 표적 조직에서의 혈관외유출(extravasation) 및 포획에 의해 종양 내에서 선택적으로 축적되는 것으로 나타났다(Lasic et al., Science 1995, 267, 1275-1276; Oku et al., 1995, Biochim. Biophys. Acta, 1238, 86-90). 장기간-순환성 리포솜은 특히 MPS의 조직 내에서 축적하는 것으로 공지된 통상적인 양이온성 리포솜에 비해서, DNA 및 RNA의 약력학 및 약동학을 증진시킨다(Liu et al., J. Biol. Chem.1995, 42, 24864-24870; 최(Choi) 등의 PCT 공개 제WO 96/10391호; 안셀(Ansell) 등의 PCT 공개 제WO 96/10390호; 홀란드(Holland) 등의 PCT 공개 제WO 96/10392호). 장기간-순환성 리포솜은 또한 대사적으로 공격성인 MPS 조직, 예컨대, 간 및 비장 내에서의 축적을 회피하는 그의 능력을 기초로 하여, 양이온성 리포솜에 비해 더 큰 정도로 뉴클레아제 분해로부터 약물을 보호하는 것 같다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 방법은 미국 특허 제6,692,911호, 제7,163,695호 및 제7,070,807호에 기술된 바와 같이 전달을 위해서 제조된 올리고머 조성물을 포함한다. 이와 관련하여, 일 실시형태에서, 본 발명은 단독으로 또는 PEG(예를 들어, 분지형 또는 비분지형 PEG 또는 이들 둘 모두의 혼합물)와 조합하여, PEG 및 표적화 모이어티 또는 전술한 것 중의 임의의 것과 조합하여, 교차결합제와 조합하여, 미국 특허 제7,163,695, 제7,070,807호 및 제6,692,911호에 기술된 바와 같이 라이신 및 히스티딘의 공중합체(HK)를 포함하는 조성물 중의 본 발명의 올리고머를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 발명은 글루콘산-변형된 폴리히스티딘 또는 글루코닐화된-폴리히스티딘/트랜스페린-폴리라이신을 포함하는 조성물 중의 안티센스 올리고머를 제공한다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자는 또한 His 및 Lys와 유사한 특성을 갖는 아미노산이 조성물 중에서 치환될 수 있음을 인지할 것이다.
특정 방법에서, 본 명세서에 기술된 올리고머는 염기성 작용기, 예컨대, 아미노 또는 알킬아미노를 함유할 수 있으며, 따라서 약제학적으로 허용 가능한 산을 사용하여 약제학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 본 발명의 화합물의 비교적 비-독성인 무기산 및 유기산 부가염을 지칭한다. 이들 염은 투여 비히클 또는 투여형 제조 공정에서 동일계에서, 또는 그의 유리 염기 형태인 본 발명의 정제된 화합물을 적합한 유기산 또는 무기산과 별개로 반응시키고, 후속 정제 중에 이렇게 형성된 염을 단리시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 염은 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발러레이트, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 퓨마레이트, 석시네이트, 타트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트, 및 라우릴설포네이트 염 등이 포함된다(예를 들어, 문헌[Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참고).
대상 올리고머의 약제학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어, 비독성 유기산 또는 무기산으로부터의, 화합물의 통상적인 비독성 염 또는 4차 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비독성 염은 무기산, 하이드로클로라이드, 브롬화수소산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등으로부터 유래된 것; 및 유기산, 예컨대, 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르산, 시트르산, 아스코르빈산, 팔미트산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 퓨마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄다이설폰산, 옥살산, 아이소티온산으부터 제조된 염을 포함한다.
특정 방법에서, 본 발명의 올리고머는 1종 이상의 산성 작용기를 함유할 수 있으며, 따라서 약제학적으로 허용 가능한 염기를 사용하여 약제학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수 있다. 이러한 예에서 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 본 발명의 화합물의 비교적 비독성인 무기 염기 부가염 및 유기 염기 부가염을 지칭한다. 이들 염은 마찬가지로 투여 비히클 또는 투여형 제조 공정에서 동일계에서, 또는 이의 유리산 형태의 정제된 화합물을 적합한 염기, 예컨대 약제학적으로 허용 가능한 금속 양이온의 하이드록사이드, 카보네이트 또는 바이카보네이트와, 암모니아와, 또는 약제학적으로 허용 가능한 유기 1차, 2차 또는 3차 아민과 별개로 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토류 염은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염 등을 포함한다. 염기 부가염의 형성에 유용한 대표적인 유기 아민은 에틸아민, 다이에틸아민, 에틸렌다이아민, 에탄올아민, 다이에탄올아민, 피페라진 등을 포함한다(예를 들어, 상기 문헌[Berge et al.] 참고).
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대, 나트륨 라우릴 설페이트 및 마그네슘 스테아레이트뿐만 아니라 착색제, 이형제(release agent), 코팅제, 감미제, 방향제, 보존제 및 항산화제가 조성물 중에 또한 존재할 수 있다.
약제학적으로 허용 가능한 항산화제의 예는 하기를 포함한다: (1) 수용성 항산화제, 예컨대, 아스코르브산, 시스테인 하이드로클로라이드, 나트륨 바이설페이트, 나트륨 메타바이설페이트, 나트륨 설파이트 등; (2) 유용해성 항산화제, 예컨대, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화된 하이드록시아니솔(BHA), 부틸화된 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대, 시트르산, 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA), 솔비톨, 타타르산, 인산 등.
본 발명의 제형은 경구, 비내, 국소(협측 및 설하 포함), 직장, 질내 및/또는 비경구 투여에 적합한 것을 포함한다. 제형은 편리하게는 단위 투여형으로 존재할 수 있으며, 약제학의 분야에서 널리 공지된 임의의 방법에 의해서 제조될 수 있다. 단일 투여형을 생산하기 위해서 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 숙주, 특정한 투여 모드에 따라 달라질 수 있다. 단일 투여형을 생산하기 위해서 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 제공하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100% 중에서, 이 양은 약 0.1% 내지 약 99%의 활성 성분, 바람직하게는 약 5% 내지 약 70%, 가장 바람직하게는 약 10% 내지 약 30%의 범위일 것이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 방법에서 사용되는 제형은 사이클로덱스트린, 셀룰로스, 리포솜, 마이셀 형성제, 예를 들어, 담즙산, 및 중합체 담체, 예를 들어, 폴리에스터 및 폴리언하이드라이드로부터 선택된 부형제; 및 본 발명의 올리고머를 포함한다. 특정 실시형태에서, 전술한 제형은 본 발명의 올리고머를 경구로 생체이용할 수 있도록 한다.
이들 제형 또는 조성물을 제조하는 방법은 본 발명의 올리고머를 담체, 및 임의로, 1종 이상의 보조 성분과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 본 발명의 화합물을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체, 또는 둘 모두와 균일하고 긴밀하게 회합시키고, 이어서, 필요한 경우, 생성물을 성형시킴으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 발명에서 사용되는 제형은 각각 활성 성분으로서 미리 결정된 양의 본 발명의 화합물을 함유하는, 캡슐, 카세(cachet), 환제, 정제, 로젠지(lozenge)(방향성 기재, 통상적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 사용), 분말, 과립의 형태, 또는 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액, 또는 수중유 또는 유중수 에멀션, 또는 엘릭시르(elixir) 또는 시럽, 또는 패스틸(pastille)(불활성 기재, 예컨대, 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아를 사용) 및/또는 구강 세척제(mouth wash) 등일 수 있다. 본 발명의 올리고머는 또한 볼루스, 지제(electuary) 또는 페이스트로 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 본 발명의 고체 투여형(캡슐, 정제, 환제, 당제(dragee), 분말, 과립, 트로치(trouch) 등)에서, 활성 성분은 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대 나트륨 시트레이트 또는 다이칼슘 포스페이트 및/또는 하기 중의 임의의 것과 혼합될 수 있다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대, 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 예를 들어, 카복시메틸셀룰로스, 알지네이트, 젤라틴, 폴리바이닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 보습제, 예컨대, 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대, 아가-아가, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 및 탄산나트륨; (5) 용해 지연제, 예컨대, 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대, 4차 암모늄 화합물 및 계면활성제, 예컨대, 폴록사머 및 나트륨 라우릴 설페이트; (7) 습윤제, 예컨대, 예를 들어, 세틸 알코올, 글리세롤 모노스테아레이트 및 비-이온성 계면활성제; (8) 흡수제, 예컨대, 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대, 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트, 아연 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 스테아르산, 및 이들의 혼합물; (10) 착색제; 및 (11) 제어 방출제, 예컨대, 크로스포비돈 또는 에틸 셀룰로스. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 약제학적 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 락토스 또는 유당과 같은 부형제뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용한 연질 및 경질-외피 젤라틴 캡슐 내의 충전제로서 사용될 수 있다.
정제는 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압착 또는 성형함으로써 제조될 수 있다. 압착된 정제는 결합제(예를 들어, 젤라틴 또는 하이드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제(예를 들어, 나트륨 전분 글리콜레이트 또는 교차결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스), 계면활성 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말 화합물의 혼합물을 적합한 기계 내에서 성형함으로써 제조될 수 있다.
본 발명에 따라서 사용되는 약제학적 조성물의 정제 및 다른 고체 투여형, 예컨대, 당제, 캡슐, 환제 및 과립은 임의로 스코어(score)되거나, 또는 코팅 및 외피, 예컨대, 장용 코팅 및 약제학적 제형화 기술분야에서 널리 공지된 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어, 목적하는 방출 프로필을 제공하는 다양한 비율의 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 미소구체를 사용하여 그 내의 활성 성분의 느린 방출 또는 제어된 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 이들은 신속 방출을 위해서 제형화될 수 있는데, 예를 들어, 동결-건조될 수 있다. 이들은 예를 들어, 박테리아-보유 필터를 통해서 여과하거나, 사용하기 직전에 멸균수 또는 일부의 다른 멸균 주사용 매질 중에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한, 임의로 불투명화제를 함유할 수 있으며, 활성 성분(들)을, 임의로 지연된 방식으로, 위장관의 특정 부분에서만, 또는 특정 부분에서 선택적으로 방출하는 조성물의 형태일 수 있다. 사용될 수 있는 매립 조성물의 예는 중합체 성분 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한, 적절한 경우, 상술한 부형제 중의 1종 이상과 함께 마이크로-캡슐화될 수 있다.
본 발명의 화합물의 경구 투여를 위한 액체 투여형은 약제학적으로 허용 가능한 에멀션, 마이크로에멀션, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분 이외에도, 액체 투여형은 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어, 에틸 알코올, 아이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배야유, 올리브유, 피마자유 및 참기름, 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스터, 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 또한 보조제, 예컨대, 습윤제, 유화 및 현탁화제, 감미제, 방향제, 착색제, 향료 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은 활성 성분 이외에, 예를 들어, 에톡실화 아이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 및 소비탄 에스터, 미세결정성 셀룰로스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트, 및 이들의 혼합물과 같은 현탁화제를 함유할 수 있다.
직장 또는 질내 투여를 위한 제형은 좌제로서 제공될 수 있는데, 이것은 본 발명의 1종 이상의 화합물을 예를 들어, 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 1종 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 혼합시킴으로써 제조될 수 있으며, 실온에서 고체이지만 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융하여 활성 화합물을 방출할 수 있다.
본 발명에서 제공된 바와 같은 올리고머의 국소 또는 경피 투여를 위한 제형 또는 투여형은 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 올리고머는 멸균 조건 하에서 약제학적으로 허용 가능한 담체, 및 필요에 따라 임의의 보존제, 완충제, 또는 추진제와 혼합될 수 있다. 연고, 페이스트, 크림 및 겔은 본 발명의 활성 화합물에 더하여 부형제, 예컨대, 동물 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크 및 산화아연, 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는 본 발명의 올리고머에 더하여, 부형제, 예컨대, 락토스, 탈크, 규산, 수산화알루미늄, 칼슘 실리케이트, 및 폴리아마이드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 추가로 통상적인 추진제, 예컨대, 클로로플루오로하이드로카본, 및 휘발성 비치환 하이드로카본, 예컨대, 부탄 및 프로판을 함유할 수 있다.
경피 패치는 신체에 대한 본 발명의 올리고머의 제어된 전달을 제공하는 추가의 이점을 갖는다. 이러한 투여형은 올리고머를 적절한 매질에 용해 또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 또한, 흡수 증진제를 사용하여 피부를 가로지르는 작용제의 유동을 증가시킬 수도 있다. 이러한 유동의 속도는 관련 기술 분야에서 공지된 다른 방법들 중에서 특히, 속도 제어막을 제공하거나 작용제를 중합체 매트릭스 또는 겔에 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 약제학적 조성물은 당, 알코올, 항산화제, 완충제, 정균제, 제형이 목적으로 하는 수여체의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있는, 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀션, 또는 사용하기 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 본 발명의 1종 이상의 올리고머를 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 이들의 적합한 혼합물, 식물유, 예컨대, 올리브유, 및 주사용 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트를 포함ㅎ한. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅 물질의 사용에 의해서, 분산액의 경우에는 필요한 입자 크기의 유지에 의해서, 그리고 계면활성제의 사용에 의해서 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 보조제, 예컨대, 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 대상 올리고머에 대한 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 솔브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 또한, 등장화제, 예컨대, 당, 나트륨 클로라이드 등을 조성물에 포함시키는 것이 바람직할 수 있다. 또한, 주사용 약제학적 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 성분, 예컨대, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시킴으로써 일어날 수 있다.
일부의 경우에, 약물의 효과를 연장시키기 위해서, 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직하다. 이것은 관련 기술 분야에 공지된 방법 중에서 불량한 수 용해도를 갖는 결정성 또는 비정질 물질의 액체 현탁액을 사용함으로써 성취될 수 있다. 이제, 약물의 흡수율은 이의 용해 속도에 좌우되며, 결국 결정 크기 및 결정성 형태에 따라 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 성취된다.
주사용 데포(depot) 형태는 생분해성 중합체, 예컨대, 폴리락티드-폴리글리콜리드 중에 대상 올리고머의 마이크로엔캡슐 매트릭스(microencapsule matrix)를 형성시킴으로써 제조될 수 있다. 올리고머 대 중합체의 비, 및 사용된 특정한 중합체의 본성에 따라서, 올리고머 방출의 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오쏘에스터) 및 폴리(언하이드라이드)를 포함한다. 데포 주사용 제형은 또한 약물을 신체 조직과 사용성인 리포솜 또는 마이크로에멀션 내에 엔트랩핑(entrapping)함으로써 제조될 수 있다.
본 발명의 올리고머를 약제로서 인간 및 동물에게 투여하는 경우에, 이들은 그 자체로서, 또는 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 0.1 내지 99%(보다 바람직하게는, 10 내지 30%)의 활성 성분을 함유하는 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 제형 또는 제제는 경구로, 비경구로, 국소로 또는 직장으로 제공될 수 있다. 이들은 전형적으로 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 예를 들어, 이들은 정제 또는 캡슐 형태로, 주사, 주입 또는 흡입에 의한 주사, 흡입, 안 로션, 연고, 좌제 등의 투여로, 로션 또는 연고에 의해 국소적으로; 및 좌제에 의해서 직장으로 투여된다.
구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 통상적으로 주사에 의한, 장내 및 국소 투여가 아닌 투여의 모드를 의미하며, 정맥내, 근육내, 동맥내, 초내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내 경기관 (transtracheal), 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
구 "전신 투여", "전신에 투여된", "말초 투여" 및 "말초로 투여된"은 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 화합물, 약물 또는 다른 물질이 환자의 전신에 들어가고, 따라서 대사 및 다른 유사 과정을 겪도록, 이들을 중추 신경계 내로 직접 투여하는 것이 아닌 투여, 예를 들어, 피하 투여하는 것을 의미한다.
선택된 투여의 경로와 관계없이, 적합한 수화된 형태로 사용될 수 있는 본 발명에서 사용되는 올리고머 및/또는 본 발명의 약제학적 조성물은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 방법에 의해서 약제학적으로 허용 가능한 투여형으로 제형화될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물 중의 활성 성분의 실제 투여 수준은 환자에 대한 허용할 수 없는 독성이 없이, 특정 환자, 조성물 및 투여의 모드에 대해서 목적하는 치료 반응을 달성하는데 효과적인 활성 성분의 양을 수득하도록 달라질 수 있다.
선택된 투여 수준은 사용된 본 발명의 특정 올리고머, 또는 이의 에스터, 염 또는 아마이드의 활성도, 투여의 경로, 투여의 시간, 사용된 특정 올리고머의 배설 또는 대사의 속도, 흡수의 속도 및 정도, 치료의 지속기간, 사용된 특정 올리고머와 조합하여 사용된 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 이전의 병력, 및 의료 기술분야에서 널리 공지된 유사 요인을 비롯한 다양한 인자에 좌우될 것이다.
관련 기술 분야에서 통상의 기술을 갖는 의사 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 유효량을 쉽게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 약제학적 조성물 중에 사용된 본 발명의 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하기 위해서 필요한 것보다 더 낮은 수준에서 시작하여, 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물의 적합한 1일 용량은 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양일 것이자. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상술한 인자에 좌우될 것이다. 일반적으로, 제시된 효과를 위해서 사용되는 경우, 환자에 대한 본 발명의 화합물의 경구, 정맥내, 뇌실내 및 피하 용량은 약 0.0001 내지 약 100㎎/체중 킬로그램/1일의 범위일 것이다.
바람직한 경우, 활성 화합물의 유효 1일 용량은 하루 전체에 걸쳐서 적절간 간격을 두고 별도로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6 또는 그 초과의 하위-용량으로, 임의로는 단위 투여형으로 투여될 수 있다. 특정 상황에서, 투여는 1일 1회 투여이다. 특정 실시형태에서, 투여는 필요에 따라, 매 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일마다, 또는 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주마다, 또는 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개월마다 1회 이상 투여하여 목적하는 병태를 치료한다.
안티센스 분자는 본 명세서에 기술되고, 관련 기술 분야에서 공지된 바와 같이, 리포솜 내에 캡슐화하거나, 이온영동법(iontophoresis)에 의해서, 또는 다른 비히클, 예컨대, 하이드로겔, 사이클로덱스트린, 생분해성 나노캡슐 및 생물접착성 미소구체 내로 혼입시키는 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 관련 기술 분야에 익숙한 기술자에게 공지된 다양한 방법에 의해서 세포에 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 마이크로에멀션화 기술을 이용하여 친유성(불수용성) 약제학적 작요제의 생체이용률을 개선시킬 수 있다. 예는 트라이메트린(Trimetrine)[Dordunoo, S. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991] 및 REV5901[Sheen, P. C., et al., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991]을 포함한다. 다른 이점 중에서, 마이크로 에멀션화는 순환계 대신에 림프계에 대한 흡수를 선택적으로 지시하고, 이에 의해서 간을 우회하고, 간담즙성 순환에서 화합물의 파괴를 방지함으로써 증진된 생체이용률을 제공한다.
본 발명의 일 양상에서, 제형은 본 명세서에 제공된 바와 같은 올리고머 및 적어도 1종의 양친매성 담체로부터 형성된 마이셀을 함유하며, 여기서 마이셀은 약 100㎚ 미만의 평균 직경을 갖는다. 보다 바람직한 실시형태는 약 50㎚ 미만의 평균 직경을 갖는 마이셀을 제공하며, 보다 더 바람직한 실시형태는 약 30㎚ 미만, 또는 심지어는 약 20㎚ 미만의 평균 직경을 갖는 마이셀을 제공한다.
모든 적합한 양친매성 담체가 고려되지만, 현재 바람직한 담체는 일반적으로 일반적으로 안전한 것으로 인정되는(Generally-Recognized-as-Safe: GRAS) 상황을 갖고, 용액이 복합체 수상(예컨대, 인간 위장관에서 발견되는 것)과 접촉하는 경우, 본 발명의 화합물을 가용화시키고, 이것을 더 나중의 단계에서 마이크로에멀션화시키는 둘 다를 할 수 있는 것이다. 통상적으로, 이들 필요조건을 충족시키는 양친매성 성분은 2 내지 20의 HLB(친수 대 친유 평형) 값을 가지며, 이들의 구조는 C-6 내지 C-20의 범위의 직쇄형 지방족 라디칼을 함유한다. 예는 폴리에틸렌-글리콜화된 지방 글리세리드 및 폴리에틸렌 글리콜이다.
양친매성 담체의 예는 포화 및 모노불포화 폴리에틸렌글리콜화된 지방산 글리세리드, 예컨대, 완전히 또는 부분적으로 수소화된 다양한 식물성 오일로부터 수득된 것을 포함된다. 이러한 오일은 이롭게는 트라이-, 다이- 및 모노-지방산 글리세리드 및 상응하는 지방산의 다이- 및 모노-폴리에틸렌글리콜 에스터로 구성될 수 있으며, 특히 바람직한 지방산 조성물은 카프르산 4 내지 10%, 카프르산 3 내지 9%, 라우르산 40 내지 50%, 미리스트산 14 내지 24%, 팔미트산 4 내지 14% 및 스테아르산 5 내지 15%를 포함한다. 양친매성 담체의 또 다른 유용한 부류는 포화 또는 모노-불포화된 지방산(SPAN-시리즈) 또는 상응하는 에톡실화된 유사체(TWEEN-시리즈)로 부분적으로 에스터화된 솔비탄 및/또는 솔비톨을 포함한다.
겔루시르(Gelucire)-시리즈, 라브라필(Labrafil), 라브라솔(Labrasol), 또는 라우로글리콜(Lauroglycol)(이들 모두는 가터포스 코퍼레이션(Gattefosse Corporation)(프랑스 세인트 프리스트 소재)에 의해서 제조 및 배포됨), PEG-모노-올레에이트, PEG-다이-올레에이트, PEG-모노-라우레이트 및 다이-라우레이트, 레시틴, 폴리솔베이트 80 등(미국 및 세계의 여러 회사에 의해서 생산 및 배포됨)을 포함하는 상업적으로 이용할 수 있는 양친매성 담체가 특히 유용할 수 있다.
특정 실시형태에서, 전달은 적합한 숙주 세포 내로 본 발명의 조성물을 도입시키기 위한 리포솜, 나노캡슐, 마이크로입자, 미소구체, 지질 입자, 소포체 등의 사용에 의해서 일어날 수 있다. 특히, 본 발명의 조성물은 지질 입자, 리포솜, 소포체, 나노구체(nanosphere), 나노입자 등 내에 캡슐화되어 전달을 위해서 제형화될 수 있다. 이러한 전달 비히클의 제형화 및 사용은 공지되고 통상적인 기술을 사용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 사용하기에 적합한 친수성 중합체는 용이하게 수용성이며, 소포-형성 지질에 공유 결합할 수 있고, 독성 효과 없이 용인되는(즉, 생체적합성) 것이다. 적합한 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리락트산(또한 폴리락티드라 지칭됨), 폴리글리콜산(또한 폴리글리콜리드라 지칭됨), 폴리락트산-폴리글리콜산 공중합체, 및 폴리바이닐 알코올을 포함한다. 특정 실시형태에서, 중합체는 약 100 또는 120달톤 내지 약 5,000 또는 10,000달톤 이하, 또는 약 300달톤 내지 약 5,000달톤 이하의 분자량을 갖는다. 다른 실시형태에서, 중합체는 약 100 내지 약 5,000달톤의 분자량을 갖거나, 약 300 내지 약 5,000달톤의 분자량을 갖는폴리에틸렌글리콜이다. 특정의 실시형태에서, 중합체는 750달톤의 폴리에틸렌글리콜 (PEG(750))이다. 중합체는 또한, 그 내의 단량체의 수에 의해서 정의될 수 있으며; 본 발명의 바람직한 실시형태는 3개의 단량체로 이루어진 PEG 중합체(약 150달톤)와 같은 적어도 약 3개의 모노머의 중합체를 이용한다.
본 발명에서 사용하기에 적합할 수 있는 다른 친수성 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 폴리메톡사졸린, 폴리에틸옥사졸린, 폴리하이드록시프로필 메타크릴아마이드, 폴리메타크릴아마이드, 폴리다이메틸아크릴아마이드, 및 유도체화된 셀룰로스, 예컨대, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 하이드록시에틸셀룰로스를 포함된다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 제형은 폴리아마이드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌, 아크릴 및 메타크릴 에스터의 중합체, 폴리바이닐 중합체, 폴리글리콜리드, 폴리실옥산, 폴리우레탄 및 이들의 공중합체, 셀룰로스, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리스티렌, 락트산 및 글리콜산의 중합체, 폴리언하이드라이드, 폴리(오쏘)에스터, 폴리(부트산), 폴리(발레르산), 폴리(락티드-코-카프로락톤), 다당류, 단백질, 폴리히알루론산, 폴리사이아노아크릴레이트 및 이들의 블렌드, 혼합물 또는 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 생체적합성 중합체를 포함한다.
사이클로덱스트린은 각각 그리스 문자 α, β 또는 γ로 지정된 6, 7 또는 8개의 글루코스 단위로 구성된 환식 올리고당이다. 글루코스 단위는 α-1,4-글루코시드 결합에 의해서 연결된다. 당 단위의 의자 입체 배치의 결과로, 모든 2차 하이드록실기(C-2, C-3에서)는 고리의 한쪽 면에 위치하는 반면에, C-6에서 의 모든 1차 하이드록실기는 다른 면에 배치된다. 결과적으로, 외부 표면은 친수성이기 때문에, 사이클로덱스트린을 수용성으로 만든다. 대조적으로, 사이클로덱스트린의 공동은 원자 C-3 및 C-5의 수소에 의해서, 및 에터-유사 산소에 의해서 라이닝되기 때문에 소수성이다. 이들 매트릭스는 예를 들어, 17α-에스트라다이올과 같은 스테로이드 화합물을 포함하는 다양한 비교적 소수성인 화합물과의 복합체화(complexation)를 가능하게 한다(예를 들어, 문헌[van Uden et al. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 38:1-3-113 (1994))] 참고). 복합체화는 반데르 발스(Van der Waals) 상호작용에 의해서, 그리고 수소 결합 형성에 의해서 일어난다. 사이클로덱스트린의 화학의 일반적 검토에 대해서는 문헌[Wenz, Agnew. Chem. Int. Ed. Engl., 33:803-822 (1994)]을 참고로 한다.
사이클로덱스트린 유도체의 물리-화학적 특성은 치환의 종류 및 정도에 따라 강하게 좌우된다. 예를 들어, 물 중에서의 이들의 용해도는 불용성(예를 들어, 트라이아세틸-베타-사이클로덱스트린) 내지 147% 가용성(w/v)(G-2-베타-사이클로덱스트린)의 범위이다. 또한, 이들은 다수의 유기 용매 중에서 가용성이다. 사이클로덱스트린의 특성은 이들의 용해도를 증가시키거나 감소시킴으로써 다양한 제형화 성분의 용해도에 대한 제어를 가능하게 한다.
다수의 사이클로덱스트린 및 이들의 제조를 위한 방법이 기술되어 있다. 예를 들어, 파미터(Parmeter)(I) 등(미국 특허 제3,453,259호) 및 그라메라(Gramera) 등(미국 특허 제3,459,731)은 전기중성 사이클로덱스트린을 기술하였다. 다른 유도체는 양이온성 특성을 갖는 사이클로덱스트린[파미터(II), 미국 특허 제3,453,257호], 불용성 가교결합된 사이클로덱스트린)솔름스(Solms), 미국 특허 제3,420,788호), 및 음이온성 특성을 갖는 사이클로덱스트린[파미터(III), 미국 특허 제3,426,011호)을 포함한다. 음이온성 특성을 갖는 사이클로덱스트린 유도체 중에서, 카복실산, 아인산, 포스피노우스산, 포스폰산, 인산, 티오포스폰산, 티오설핀산, 및 설폰산은 모 사이클로덱스트린에 부착되어 있다(상기 파미터 (III) 문헌 참고). 더욱이, 설포알킬 에터 사이클로덱스트린 유도체는 스텔라(Stella) 등(미국 특허 제5,134,127호에 의해서 기술되어 있다.
리포솜은 수성 내부 구획을 둘러싸는 적어도 하나의 지질 이중층 막으로 이루어진다. 리포솜은 막의 유형에 의해서 및 크기에 의해서 특징규명될 수 있다. 소형 단일라멜라 소포체(small unilamellar vesicle; SUV)는 단일막을 가지며, 전형적으로는 직경이 0.02 내지 0.05㎛의 범위이고; 대형 단일라멜라 소포체(LUVS)는 전형적으로는 0.05㎛보다 더 크다. 올리고라멜라(oligolamellar) 대형 소포체 및 다중라멜라 소포체는 다수의 통상적으로 동심원성인 막 층을 가지며, 전형적으로 0.1㎛보다 더 크다. 몇 개의 비동심원성 막, 즉 더 큰 소포체 내에 함유된 몇 개의 더 작은 소포체를 갖는 리포솜은 다중소포성 소포체(multivesicular vesicles)라 칭한다.
본 방법의 일 양상은 본 발명의 올리고머를 함유하는 리포솜을 포함하는 제형을 사용하며, 여기서 리포솜 막은 증가된 수용능력을 갖는 리포솜을 제공하도록 제형화된다. 대안적으로 또는 추가로, 본 발명의 화합물은 리포솜의 리포솜 이중층 내에 함유되거나, 그 상에 흡착될 수 있다. 본 발명의 올리고머는 지질 계면활성제와 함께 응집되고, 리포솜의 내부 공간 내에 수용될 수 있으며; 이들 경우에 리포솜 막은 활성 작용제-계면활성제 응집체의 붕괴 효과에 저항하도록 제형화된다.
본 방법의 일 실시형태에 따라서, 리포솜의 지질 이중층은 PEG 쇄가 지질 이중층의 내부 표면으로부터 리포좀에 의해서 캡슐화된 내부 공간 내로 연장되고, 지질 이중층으로부터 주변 환경 내로 연장되도록 폴리에틸렌글리콜(PEG)에 의해서 유도체화된 지질을 함유한다.
본 방법의 리포솜 중에 함유된 활성 작용제는 가용화된 형태이다. 계면활성제와 활성 작용제의 응집물(예를 들어, 관심 활성 작용제를 함유하는 에멀션 또는 마이셀)는 본 발명에 따른 리포솜의 내부 공간 내에 엔트래핑될 수 있다. 계면활성제는 활성 작용제를 분산 및 가용화시키는 작용을 하며, 다양한 쇄 길이(예를 들어, 약 C14 내지 약 C20)의 생체적합성 라이소포스파티딜콜린(LPC)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 임의의 적합한 지방족, 지환족 또는 방향족 계면활성제로부터 선택될 수 있다. 중합체-유도체화된 지질, 예컨대, PEG-지질이 또한 마이셀 형성을 위해서 이용될 수 있는데, 그 이유는 이들이 마이셀/막 융합을 저해하는 작용을 할 것이고, 계면활성제 분자에 대한 중합체의 첨가는 계면활성제의 CMC를 감소시키고 마이셀 형성에 도움을 주기 때문이다. 바람직한 것은 마이크로몰 범위의 CMC를 갖는 계면활성제이며; 더 높은 CMC 계면활성제가 본 발명의 리포솜 내에 엔트래핑된 마이셀을 제조하기 위해서 이용될 수 있다.
본 방법에 따라서 사용되는 리포솜은 관련 기술 분야에서 공지된 다양한 기술 중 임의의 것에 의해서 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,235,871호; 공개된 PCT 출원 제WO 96/14057호; 문헌[New RRC, Liposomes: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), pages 33-104; Lasic DD, Liposomes from physics to applications, Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam, 1993] 참고). 예를 들어, 본 발명의 리포솜은 예컨대, 리포솜 내에서 바람직한 유도체화된 지질의 최종 몰 퍼센트에 상응하는 지질 농도에서 미리형성된 리포솜을 지질-그래프팅된 중합체로 구성된 마이셀에 노출시킴으로써, 미리형성된 리포솜 내로 친수성 중합체로 유도체화된 지질을 확산시킴으로써 제조될 수 있다. 친수성 중합체를 함유하는 리포솜은 또한, 관련 기술 분야에서 공지된 바와 같이 균질화, 지질-영역 수화, 또는 압출 기술에 의해서 형성될 수 있다.
또 다른 예시적 제형화 절차에서, 활성 작용제를 먼저 소수성 분자를 쉽게 가용화하는 라이소포스파티딜콜린 또는 다른 낮은 CMC 계면활성제(중합체 그래프팅된 지질을 포함) 중에서 초음파 처리함으로써 분산시킨다. 그 후, 생성된 활성 작용제의 마이셀 현탁액을 사용하여 적합한 몰 퍼센트의 중합체-그래프팅된 지질, 또는 콜레스테롤을 함유하는 건조된 지질 샘플을 재수화시킨다. 그 후, 지질 및 활성 작용제제 현탁액을 관련 기술 분야에서 공지된 바와 같은 압출 기술을 사용하여 리포솜으로 형성시키고, 생성된 리포솜을 표준 칼럼 분리에 의해서 비캡슐화된 용액으로부터 분리한다.
본 방법의 일 양상에서, 리포솜은 선택된 크기 범위 내의 실질적으로 균일한 크기를 갖도록 제조된다. 하나의 효과적인 크기 결정 방법은 리포솜의 수성 현탁액을 선택된 균일한 공극 크기를 갖는 일련의 폴리카보네이트 막을 통해서 압출시키는 것을 포함하며; 막의 공극 크기는 그 막을 통한 압출에 의해서 생성된 리포솜의 최대 크기와 대략적으로 상응할 것이다(예를 들어, 미국 특허 제4,737,323호 (1988년 4월 12일) 참고). 특정 실시형태에서, 시약, 예컨대, 다르마펙트(DharmaFECT(등록상표)) 및 리포펙타민(Lipofectamine(등록상표))를 이용하여 폴리뉴클레오타이드 또는 단백질을 세포 내로 도입시킬 수 있다.
본 방법에서 사용되는 제형의 방출 특징은 캡슐화 물질, 캡슐화된 약물의 농도, 및 방출 변형제의 존재에 좌우된다. 예를 들어, 방출은 예를 들어, 위 내와 같은 낮은 pH, 또는 장 내와 같은 더 높은 pH에서만 방출하는 pH 민감성 코팅을 사용하여 pH 의존적이 되도록 조작될 수 있다. 장용 코팅을 사용하여 위를 통해서 통과한 후까지 방출이 일어나는 것을 방지할 수 있다. 다수의 코팅 또는 상이한 물질 내에 캡슐화된 사이안아마이드의 혼합물을 사용하여 위 내에서 초기 방출을 수득하고, 이어서 장 내에서의 후방출을 수득할 수 있다. 방출은 또한, 캡슐로부터의 확산에 의해 약물의 방출 또는 수분 흡수를 증가시킬 수 있는 염 또는 공극 형성제를 포함시킴으로써 조작될 수 있다. 약물의 용해도를 변형시키는 부형제를 또한 사용하여 방출률을 조절할 수 있다. 매트릭스의 분해 또는 매트릭스로부터의 방출을 증진시키는 작용제가 또한 혼입될 수 있다. 이들은 화합물에 따라서 약물에 첨가되거나, 별도의 상으로서(즉, 미립자로서) 첨가되거나, 중합체 상에 공동-용해될 수 있다. 대부분의 경우에, 양은 0.1 내지 30%(w/w 중합체)여야 한다. 분해 증진제의 유형은 무기 염, 예컨대, 황산암모늄 및 염화암모늄, 유기산, 예컨대, 시트르산, 벤조산 및 아스코르빈산, 무기 염기, 예컨대, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼슘, 탄산아연 및 수산화아연, 및 유기 염기, 프로타민 설페이트, 스페르민, 콜린, 에탄올아민, 다이에탄올아민 및 트라이에탄올아민, 및 계면활성제, 예컨대, 트윈(Tween(등록상표)) 및 플루로닉(등록상표))을 포함한다. 매트릭스에 미세구조를 부가하는 공극 형성제(즉, 수용성 화합물, 예컨대, 무기 염 및 당)는 미립자로서 첨가된다. 범위는 전형적으로 1 내지 30%(w/w 중합체)이다.
흡수는 또한 장 내에서의 입자의 체류 시간을 변경함으로써 조작될 수 있다. 이것은 예를 들어, 입자를 점막 접착성 중합체로 코팅하거나, 캡슐화 물질로서 점막 접착성 중합체를 선택함으로써 달성될 수 있다. 예는 유리 카복실기을 갖는 대부분의 중합체, 예컨대, 키토산, 셀룰로스, 및 특히 폴리아크릴레이트(본 발명에서 사용되는 바와 같이, 폴리아크릴레이트는 아크릴레이트기 및 변형된 아크릴레이트기, 예컨대, 사이아노아크릴레이트 및 메타크릴레이트 포함하는 중합체를 나타냄)를 포함한다.
올리고머는 수술용 또는 의료용 장치 또는 이식물 내에 함유되거나, 이들에 의해서 방출되도록 개작될 수 있다. 특정 양상에서, 이식물은 올리고머로 코팅되거나 달리 처리될 수 있다. 예를 들어, 하이드로겔 또는 다른 중합체, 예컨대, 생체적합성 및/또는 생분해성 중합체를 사용하여 이식물을 본 발명의 조성물로 코팅할 수 있다(즉, 조성물은 하이드로겔 또는 다른 중합체를 사용함으로써 의료용 장치에 의해서 사용되도록 개작될 수 있다). 의료용 장치를 작용제로 코팅하기 위한 중합체 및 공중합체는 관련 기술 분야에서 널리 공지되어 있다. 이식물의 예는 스텐트(stent), 약물-용출 스텐트, 봉합재, 보철, 혈관 카테터, 투석 카테터, 혈관 그래프트, 인공 심장판막, 심박 조율기, 이식형 심장제세동기, IV 니들, 뼈 고정 및 형성을 위한 장치, 예컨대, 핀, 스크류, 플레이트 및 다른 장치 및 창상 치유를 위한 인공 조직 매트릭스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에 제공된 방법에 더하여, 본 발명에 따라서 사용하기 위한 올리고머는 다른 약제와 유사하게, 인간 또는 수의과용 의약에서 사용하기 위해서 임의의 편리한 방식으로 투여하기 위해 제형화될 수 있다. 안티센스 올리고머 및 이들의 상응하는 제형은 단독으로, 또는 염증 치료에서의 다른 치료 전략과 조합하여 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에 따라서, 안티센스 올리고머 전달의 경로는 경구 투여 및 비경구 투여를 비롯한 다양한 전신 경로, 예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내 및 근육내, 뿐만 아니라 흡입, 경피, 폐 및 국소 전달을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 적절한 경로는 치료 하의 대상체의 병태에 적절한 바와 같이 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 결정될 수 있다. 예를 들어, 피부의 병태의 치료에서의 안티센스 올리고머의 전달에 적절한 경로는 국소 전달을 포함할 수 있는 반면, 호흡기 조건(예를 들어, COPD)의 치료를 위한 안티센스 올리고머의 전달은 흡입, 비내 또는 폐 전달을 포함할 수 있다. 올리고머는 또한 염증 감염의 부위 또는 혈류에 직접 전달될 수 있다.
안티센스 올리고머는 생리학적으로 허용 가능한 임의의 편리한 비히클 중에서 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 사용되는 다양한 표준 약제학적으로 허용 가능한 담체 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 예는 식염수, 인산염 완충 식염수(PBS), 물, 수성 에탄올, 에멀션, 예컨대, 오일/물 에멀션 또는 트라이글리세리드 에멀션, 정제 및 캡슐을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 적합한 생리학적으로 허용 가능한 담체의 선택은 선택된 투여 모드에 따라서 달라질 것이다.
일부 예에서, 상기에 주목된 바와 같이, 리포솜을 사용하여 세포 내로의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 흡수를 촉진시킬 수 있다(예를 들어, 문헌[Williams, S.A., Leukemia 10(12):1980-1989, 1996; Lappalainen et al., Antiviral Res.23:119, 1994; Uhlmann et al., antisense oligonucleotides: a new therapeutic principle, Chemical Reviews, Volume 90, No.4, pages 544-584, 1990; Gregoriadis, G., Chapter 14, Liposomes, Drug Carriers in Biology and Medicine, pp.287-341, Academic Press, 1979] 참고). 하이드로겔은 또한 예를 들어, PCT 출원 공개 제WO 93/01286호 또는 PCT 출원 제US1992/005305호에 기술된 바와 같이, 안티센스 올리고머 투여를 위한 비히클로서 사용될 수 있다. 대안적으로, 올리고뉴클레오타이드는 미소구체 또는 마이크로입자로 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌[Wu, G.Y. and Wu, C.H., J. Biol. Chem. 262:4429-4432, 1987] 참고). 대안적으로, 안티센스 올리고머와 복합체화된 기체-충전된 마이크로버블의 사용은 미국 특허 제6,245,747호에 기술된 바와 같이 표적 조직으로의 전달을 증진시킬 수 있다.
서방형 조성물이 또한 사용될 수 있다. 이들은 정형화된 물품, 예컨대, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 안티센스 화합물은 적어도 200 내지 400nM의 안티센스 올리고머의 피크 혈액 농도를 초래하기에 효과적인 양 및 방식으로 투여될 수 있다. 전형적으로는, 안티센스 올리고머의 1종 이상의 용량이 일반적으로 규칙적인 간격으로, 약 1 내지 2주의 기간 동안 투여된다. 경구 투여에 바람직한 용량은 약 1 내지 100㎎ 올리고머/70㎏이다. 일부 경우에, 100㎎ 올리고머/환자초과의 용량이 필요할 수 있다. i.v. 투여의 경우, 바람직한 용량은 약 1㎎ 내지 500㎎ 올리고머/70㎏이다. 안티센스 올리고머는 짧은 시간 기간 동안, 예를 들어 2주 이하 동안 매일 규칙적인 간격으로 투여될 수 있다. 그러나, 일부 경우에, 올리고머는 더 긴 시간 기간에 걸쳐서 간헐적으로 투여된다. 투여는 항생제 또는 다른 치료제의 투여 이후에 또는 투여와 동시에 일어날 수 있다. 치료 요법은 제시된 바와 같이 면역검정, 다른 생화학적 시험 및 치료 하의 대상체의 생리학적 조사를 기반으로 조정될 수 있다(용량, 빈도, 경로 등).
본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고로 포함된 것처럼 본 명세서에 참고로 포함된다.
상기에 기술된 다양한 실시형태가 조합되어 추가 실시형태를 제공할 수 있다. 2016년 4월 29일자로 출원된 미국 가출원 제62/330,027호가 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다. 상기에 상술된 설명을 비추어 이들 및 다른 변화가 실시형태에서 행해질 수 있다. 일반적으로, 하기 청구범위에서, 사용된 용어는 청구범위를 본 명세서에 개시된 구체적인 실시형태 및 청구범위로 제한하는 것으로 이해되어서는 안되지만, 이러한 청구범위가 자격을 주는 등가물의 완전한 범주와 함께 모든 가능한 실시형태를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 청구범위는 본 개시내용에 의해서 제한되지 않는다.
전술한 개시내용은 이해를 명확하게 할 목적으로 설명 및 예의 방식으로 어느 정도 상세히 기술되었지만, 첨부된 청구범위의 사상 또는 범주로부터 벗어나지 않으면서 이들에 대한 특정 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것은 본 개시내용에 비추어서 관련 기술 분야에서 통상의 기술자에게 쉽게 명백할 것이다. 하기 실시예는 제한의 방식이 아닌 단지 설명을 위해서 제공된다. 관련 기술 분야의 통상의 기술자는 본질적으로 유사한 결과를 수득하도록 변경 또는 변형될 수 있는 다양한 비임계적 파라미터를 쉽게 인식할 수 있을 것이다.
서열 목록 표
Figure 112018119163363-pct00080
실시예
물질
1. HGPS 마우스 모델
인간 BAC 클론, RP11-702H12(RPCI-11 인간 BAC 라이브러리, 아동 병원 오클랜드 연구소의 BACPAC 리소스 센터(BACPAC Resource Center at Children's Hospital Oakland Research Institute), 미국 캘리포니아주 오클랜드 소재)는 LMNA 유전자(25.4kb) 및 3종의 다른 공지된 유전자, UBQLN4, MAPBPIP 및 RAB25를 포함하는 염색체 1q로부터의 게놈 DNA 164.4kb의 삽입부를 함유한다. BAC 클론 RP11-702H12의 리콤비노제닉(recombinogenic) 표적화를 HGPS 섬유아세포 세포주 AG11498(코리엘 셀 리포지토리즈(Coriell Cell Repositories), NIA 컬렉션)의 게놈 DNA로부터 PCR에 의해서 생성된 G608G 돌연변이를 함유하는 셔틀 단편을 사용하여 수행하였다. HGPS에 대한 인간 BACG608G 유전자 이식된 마우스 모델은 모든 조직에서, 프로저린이라 지칭되는 돌연변이체 인간 LMNA 단백질을 발현한다. 마우스는 HGPS 환자와 동일한 다수의 병리학을 제시한다. 이형접합 상태에서, 마우스는 비반응성 혈관 탄성이 뻣뻣해지면서, 주요 동맥에서 혈관 평활근 근육 세포(VSMC)의 손실을 나타낸다. 동형접합 상태에서, 마우스는 외막 두꺼워짐, 전체 지방이영양증, 당기고 건조한 피부(taut desiccated skin), 모발 얇아짐, 척추후만증, 관절 구축 및 제한된 걸음과 함께 더 진행된 VSMC 손실을 나타낸다. 트랜스진의 2개의 카피를 갖는 이들 마우스는 6 내지 8개월령에 조기에 사망한다.
2. PPMO
Figure 112018119163363-pct00081
"Gly"는 글리신 카복실에서 아마이드 결합에 의해서 3 말단 모폴리노 소단위 고리 질소에 부착되고, 그리고 또한 펩타이드의 CPP 카복시 말단에서 아마이드 결합에 의해서 글리신 NH2에 부착된 글리신 링커를 나타낸다. "R"은 아르기닌이고, "Ac"는 아세틸이다.
실시예 1
LMNA를 표적화하는 PPMO로의 치료 후 HGPS 마우스의 DD PCR 분석
디지털 드로플렛(Digital Droplet) PCR(ddPCR) 실험을 수행하여 PPMO1(서열번호 3) 및 PPMO2(서열번호 4)로의 치료 후 HGPS 유전자 이식된 마우스에서 프로저린 및 야생형 LMNA의 발현 수준을 측정하였다. 총 37마리의 마우스를 하기 시험 군으로 나누었다:
Figure 112018119163363-pct00082
마우스에게 4주령에서 시작하여 상기 표에 따라서 투여하였고, 12주 후에 희생시켰다. 표준 트리졸(Trizol) 절차(암비온(Ambion))를 사용하여 RNA를 심장, 간, 사두근 및 대동맥으로부터 추출하였다. 표준 아이스크립트(iScript)(상표명) cDNA 합성 절차(바이오-라드(Bio-Rad))를 사용하여 0.5㎍의 총 RNA로부터 cDNA를 제조하였고, ddPCR에 의해서 스플라이스 저해에 대해서 분석하였다. 실험 결과를 도 1 내지 도 4에 나타낸다.
참고 문헌
Figure 112018119163363-pct00083
Figure 112018119163363-pct00084
SEQUENCE LISTING <110> SAREPTA THERAPEUTICS, INC. THE USA, AS REPRESENTED BY THE SECRETARY, DEPT. OF HEALTH & HUMAN SERVICES UNIVERSITY OF MARYLAND THE PROGERIA RESEARCH FOUNDATION <120> OLIGONUCLEOTIDE ANALOGUES TARGETING HUMAN LMNA <130> IPA181283-US <140> PCT/US2017/030174 <141> 2017-04-28 <150> US 62/330,027 <151> 2016-04-29 <160> 25 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 270 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ggctcccact gcagcagctc gggggacccc gctgagtaca acctgcgctc gcgcaccgtg 60 ctgtgcggga cctgcgggca gcctgccgac aaggcatctg ccagcggctc aggagcccag 120 gtgggcggac ccatctcctc tggctcttct gcctccagtg tcacggtcac tcgcagctac 180 cgcagtgtgg ggggcagtgg gggtggcagc ttcggggaca atctggtcac ccgctcctac 240 ctcctgggca actccagccc ccgaacccag 270 <210> 2 <211> 270 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 ggctcccact gcagcagctc gggggacccc gctgagtaca acctgcgctc gcgcaccgtg 60 ctgtgcggga cctgcgggca gcctgccgac aaggcatctg ccagcggctc aggagcccag 120 gtgggtggac ccatctcctc tggctcttct gcctccagtg tcacggtcac tcgcagctac 180 cgcagtgtgg ggggcagtgg gggtggcagc ttcggggaca atctggtcac ccgctcctac 240 ctcctgggca actccagccc ccgaacccag 270 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 3 ctgagccgct ggcagatgcc ttgtc 25 <210> 4 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 4 gaggagatgg gtccacccac ctggg 25 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 5 Arg Arg Arg Gln Arg Arg Lys Lys Arg 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 6 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 1 5 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 7 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Phe Phe 1 5 10 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 8 Arg Arg Arg Arg Arg Phe Phe Arg Arg Arg Arg 1 5 10 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 9 Arg Arg Arg Arg 1 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 10 Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 11 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 11 Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 12 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 13 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 13 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 14 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 2,4,6,8,10,12,14,16 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <400> 15 Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 16 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 2,5,8,11 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <400> 16 Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg 1 5 10 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 2,5,8,11,14 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <400> 17 Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg 1 5 10 15 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 2 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <220> <221> VARIANT <222> 5 <223> Xaa = beta-alanine <220> <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <220> <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa = beta-alanine <400> 18 Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg 1 5 10 <210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 19 Arg Ala Arg Arg Ala Arg Arg Ala Arg Arg Ala Arg Phe Phe 1 5 10 <210> 20 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 20 Arg Gly Arg Arg Gly Arg Arg Gly Arg Arg Gly Arg Phe Phe 1 5 10 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 21 Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg 1 5 10 <210> 22 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 2,5,8,11,13 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = beta-alanine <400> 22 Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Arg Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 10 <210> 23 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <220> <221> VARIANT <222> 11 <223> Xaa = 6-aminohexanoic acid <220> <221> VARIANT <222> 12 <223> Xaa = beta-alanine <400> 23 Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg Xaa Xaa 1 5 10 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 24 Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg Phe Phe Arg Gly 1 5 10 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cell penetrating peptide <400> 25 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly 1 5

Claims (20)

  1. 하기 화학식 (III)의 안티센스 올리고머 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112021038968911-pct00107

    식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서
    a) 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)(식 중, Z는 23임); 및
    b) 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)(식 중, Z는 23임)
    로부터 선택된 표적화 서열(5'에서 3')을 형성하는 핵염기이고,
    Ra는 아세틸이다.
  2. 제1항에 있어서, 상기 표적화 서열은 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)이고, Z는 23인, 안티센스 올리고머 화합물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 표적화 서열은 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)이고, Z는 23인, 안티센스 올리고머 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 안티센스 올리고머 화합물은 하기 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 안티센스 올리고머 화합물:
    Figure 112021038968911-pct00094

    식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열(5'에서 3')을 형성하는 핵염기이고, 상기 표적화 서열은 서열번호 3(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)이고, Z는 23이다.
  5. 제1항에 있어서, 상기 안티센스 올리고머 화합물은 하기 화학식 (IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 안티센스 올리고머 화합물:
    Figure 112021038968911-pct00095

    식 중, 각각의 Nu는 함께 취해져서 표적화 서열(5'에서 3')을 형성하는 핵염기이고, 상기 표적화 서열은 서열번호 4(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)이고, Z는 23이다.
  6. 하기로부터 선택된 안티센스 올리고머 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112021038968911-pct00096

    및
    Figure 112021038968911-pct00097
    .
  7. 제6항에 있어서, 상기 안티센스 올리고머 화합물은 하기와 같은, 안티센스 올리고머 화합물:
    Figure 112021038968911-pct00098
    .
  8. 제6항에 있어서, 상기 안티센스 올리고머 화합물은 하기와 같은, 안티센스 올리고머 화합물:
    Figure 112021038968911-pct00099
    .
  9. 하기로부터 선택되는 안티센스 올리고머 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112021038968911-pct00100

    및
    Figure 112021038968911-pct00101
    .
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 올리고머 화합물은 0.6 HCl의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 안티센스 올리고머 화합물.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 안티센스 올리고머 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 허친슨 길포오드 조로증 증후군(Hutchinson-Gilford progeria syndrome: HGPS)의 치료를 위한 약제학적 조성물.
  12. 제10항에 따른 안티센스 올리고머 화합물을 포함하는, 허친슨 길포오드 조로증 증후군(Hutchinson-Gilford progeria syndrome: HGPS)의 치료를 위한 약제학적 조성물.
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA201892467A1 (ru) * 2016-04-29 2019-05-31 Сарепта Терапьютикс, Инк. Олигонуклеотидные аналоги, нацеленные на lmna человека
AU2017306676B2 (en) 2016-08-03 2024-02-22 President And Fellows Of Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
AU2017308889B2 (en) 2016-08-09 2023-11-09 President And Fellows Of Harvard College Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US11542509B2 (en) 2016-08-24 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
SG10202100491QA (en) * 2016-12-19 2021-02-25 Sarepta Therapeutics Inc Exon skipping oligomer conjugates for muscular dystrophy
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
WO2018165504A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11542496B2 (en) 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
IL306092A (en) 2017-03-23 2023-11-01 Harvard College Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
JP2020534795A (ja) 2017-07-28 2020-12-03 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ファージによって支援される連続的進化（ｐａｃｅ）を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
TW202020153A (zh) * 2018-07-27 2020-06-01 美商薩羅塔治療公司 用於肌肉萎縮症之外顯子跳躍寡聚物
WO2020051360A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-12 The Broad Institute, Inc. Base editing for treating hutchinson-gilford progeria syndrome
JP2022526908A (ja) 2019-03-19 2022-05-27 ザ ブロード インスティテュート，インコーポレーテッド 編集ヌクレオチド配列を編集するための方法および組成物
AU2021267940A1 (en) 2020-05-08 2022-12-08 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
WO2022098014A1 (ko) * 2020-11-03 2022-05-12 한국생명공학연구원 유전자 교정을 이용한 조로증 및 자연노화의 예방 또는 치료용 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013086441A2 (en) 2011-12-08 2013-06-13 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues targeting human lmna
JP2014515762A (ja) 2011-05-05 2014-07-03 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
WO2015175977A2 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Geller Bruce L Antisense antibacterial compounds and methods

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH445129A (fr) 1964-04-29 1967-10-15 Nestle Sa Procédé pour la préparation de composés d'inclusion à poids moléculaire élevé
US3459731A (en) 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US3426011A (en) 1967-02-13 1969-02-04 Corn Products Co Cyclodextrins with anionic properties
US3453257A (en) 1967-02-13 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin with cationic properties
US3453259A (en) 1967-03-22 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin polyol ethers and their oxidation products
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
DE3650699T2 (de) 1985-03-15 1999-04-15 Antivirals Inc Immunotestmittel für Polynukleotid und Verfahren
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
JPH07501204A (ja) 1991-06-28 1995-02-09 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 局所的オリゴヌクレオチド療法
WO1994002595A1 (en) 1992-07-17 1994-02-03 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for treatment of animal diseases
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
US6245747B1 (en) 1996-03-12 2001-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Targeted site specific antisense oligodeoxynucleotide delivery method
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
WO1999042091A2 (en) 1998-02-19 1999-08-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of polycations as endosomolytic agents
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
NZ514348A (en) 1999-05-04 2004-05-28 Exiqon As L-ribo-LNA analogues
CA2394758A1 (en) 1999-12-29 2001-07-05 A. James Mixson Histidine-containing copolymers enhance pharmaceutical agent delivery
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
WO2003020739A2 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
KR100464261B1 (ko) 2002-01-24 2005-01-03 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
KR20030084444A (ko) 2002-04-26 2003-11-01 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
WO2004043978A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
DK2351844T3 (da) 2003-04-29 2014-09-22 Sarepta Therapeutics Inc Præparater til forøgelse af transport- og antisense-effektivitet af nukleinsyreanalog i celler
US7211668B2 (en) 2003-07-28 2007-05-01 Panagene, Inc. PNA monomer and precursor
US8258109B2 (en) * 2005-10-20 2012-09-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of LMNA expression
DK2024499T3 (da) 2006-05-10 2018-01-29 Sarepta Therapeutics Inc Oligonukleotidanaloger med kationiske intersubunit-koblinger
MX2009002859A (es) * 2006-09-15 2009-03-30 Enzon Pharmaceuticals Inc Enlazadores biodegradables a base de ester impedido para suministro de oligonucleotidos.
ES2694726T3 (es) 2007-06-29 2018-12-26 Sarepta Therapeutics, Inc. Conjugados peptídicos específicos de tejido y métodos
AU2008273094B2 (en) 2007-07-12 2013-05-09 Prosensa Technologies B.V. Molecules for targeting compounds to various selected organs, tissues or tumor cells
CA2884340C (en) 2007-11-15 2017-07-25 Sarepta Therapeutics, Inc. Method of synthesis of morpholino oligomers
CA2744987C (en) 2008-12-02 2018-01-16 Chiralgen, Ltd. Method for the synthesis of phosphorus atom modified nucleic acids
WO2010115993A1 (en) 2009-04-10 2010-10-14 Association Institut De Myologie Tricyclo-dna antisense oligonucleotides, compositions, and methods for the treatment of disease
US20110269665A1 (en) * 2009-06-26 2011-11-03 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
BR112012000828A8 (pt) 2009-07-06 2017-10-10 Ontorii Inc Novas pró-drogas de ácido nucleico e métodos de uso das mesmas
WO2011034072A1 (ja) 2009-09-16 2011-03-24 株式会社キラルジェン Rna及びその誘導体合成のための新規保護基
ES2816898T3 (es) * 2010-05-13 2021-04-06 Sarepta Therapeutics Inc Compuestos que modulan la actividad de señalización de las interleucinas 17 y 23
CA2799501C (en) * 2010-05-28 2022-02-15 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
US10428019B2 (en) 2010-09-24 2019-10-01 Wave Life Sciences Ltd. Chiral auxiliaries
RS55610B1 (sr) 2010-09-30 2017-06-30 Nippon Shinyaku Co Ltd Derivat morfolino nukleinske kiseline
JP5653160B2 (ja) 2010-10-15 2015-01-14 ダンロップスポーツ株式会社 ゴルフボール
US9161948B2 (en) * 2011-05-05 2015-10-20 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
EP2751128B1 (en) 2011-08-30 2021-03-03 United Kingdom Research and Innovation Cell-penetrating peptides having a central hydrophobic domain
PL2581448T3 (pl) 2011-10-13 2015-08-31 Association Inst De Myologie Tricyklo-tiofosforanowy DNA
EA035030B1 (ru) 2011-11-18 2020-04-20 Сарепта Терапьютикс, Инк. Модифицированные морфолиновые аналоги олигонуклеотидов
BR112014018427B1 (pt) 2012-01-27 2021-11-03 Biomarin Technologies B.V. Oligonucleotídeos moduladores de rna com características melhoradas para o tratamento da distrofia muscular de duchenne e becker
DE102012101676A1 (de) 2012-02-29 2013-08-29 Klaus-Dieter Rösler Verfahren und Vorrichtung zum Bearbeiten von Formularen mit einer Datenverarbeitungsanlage
SG10201912895PA (en) 2012-07-13 2020-02-27 Wave Life Sciences Ltd Chiral control
JP6268157B2 (ja) 2012-07-13 2018-01-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ 不斉補助基
AU2014253960B2 (en) * 2013-04-16 2020-06-18 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Age-modified cells and methods for making age-modified cells
JPWO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
JPWO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
WO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
KR102423317B1 (ko) 2014-01-16 2022-07-22 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 디자인
EP3569252B1 (en) * 2014-05-19 2021-12-15 Oregon State University Antisense antibacterial compounds and methods
WO2015179743A1 (en) * 2014-05-23 2015-11-26 Genzyme Corporation Library and screening approach for improved cell penetrating peptides
EA201892467A1 (ru) * 2016-04-29 2019-05-31 Сарепта Терапьютикс, Инк. Олигонуклеотидные аналоги, нацеленные на lmna человека

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014515762A (ja) 2011-05-05 2014-07-03 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
WO2013086441A2 (en) 2011-12-08 2013-06-13 Sarepta Therapeutics, Inc. Oligonucleotide analogues targeting human lmna
JP2015505839A (ja) 2011-12-08 2015-02-26 サレプタ セラピューティクス， インコーポレイテッド ヒトｌｍｎａを標的とするオリゴヌクレオチド類似体
WO2015175977A2 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Geller Bruce L Antisense antibacterial compounds and methods

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