CN104531812A - 设计核酸及其使用方法 - Google Patents

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贾森·施伦
格雷戈里·J·西兹克维克兹
凯内齐·伊杰贝
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Abstract

本发明提供了递送生物物质(例如修饰的核酸)到细胞以调节蛋白质表达的组合物和方法。所述组合物和方法包括使用修饰的信使RNA，且可用于生产蛋白质。

Description

设计核酸及其使用方法
本申请是申请日为2011年10月3日，题为“设计核酸及其使用方法”的中国专利申请201180057555.4的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年10月1日提交的美国临时申请61/404,413的优先权，其公开的内容视为本申请公开内容的一部分(并在此通过引用而全文引入)。
背景技术
天然存在的RNA是由四种基本的核糖核苷酸ATP、CTP、UTP和GTP合成的，但也可以含有转录后修饰的核苷酸。而且，在RNA中已经鉴定出大约100种不同的核苷修饰(Rozenski，J，Crain，P，和McCloskey，J(1999)。RNA修饰数据库：1999年更新，Nucl Acids Res 27:196-197)。但是，在免疫刺激潜能和RNA翻译效率方面，核苷修饰所起的作用尚不明了。
影响蛋白质表达的现有方法学中存在许多问题。例如，引入细胞的异源DNA(不论异源DNA是否整合入染色体)可能由子代或后代细胞遗传。引入的DNA可以以某种频率整合入宿主细胞的基因组DNA，从而改变和/或破坏宿主细胞的基因组DNA。此外，在产生蛋白质之前必须经过多个步骤。一旦进入细胞，DNA必须转运到细胞核中，在细胞核内转录成RNA。之后从DNA转录的RNA必须进入细胞质，在细胞质内翻译成蛋白质。对多个处理步骤的需求导致了在感兴趣的蛋白质产生之前的时间延滞。此外，在细胞内实现DNA的表达存在困难；经常地，DNA进入细胞但没有表达，或者没有以合理的速度或浓度表达。将DNA引入诸如原代细胞或修饰的细胞系的细胞时，这可能尤其是个问题。
本领域需要解决核调节酸细胞内翻译的生物学模式。
除非另有解释，否则在本文中使用的所有技术和科学术语与本发明所属技术领域普通技术人员通常的理解具有相同的含义。尽管，类似于或等同于本文所述的方法和材料也可用于本发明的实施和检测，但在此描述了适合的方法与材料。材料、方法和实施例仅为示例性的，而非旨在限制。本发明其他特征可以自以下发明详述和权利要求明显看出。
发明简述
本文描述了生产蛋白质、多肽和肽的方法。例如，所述方法包括在所述感兴趣的蛋白质、多肽或肽在细胞内产生(例如，翻译)的条件下，将编码感兴趣的蛋白质、多肽或肽的核酸(例如，本文所述的修饰核酸)引入细胞(例如，人细胞)。在一些具体实施方式中，所述核酸包含一个或多个核苷修饰(例如，一个或多个本文所述的核苷修饰)。在一些具体实施方式中，所述核酸能逃脱该核酸所引入的细胞的天然免疫反应。在一些具体实施方式中，所述蛋白质、多肽或肽是本文所述的治疗性蛋白质。在一些具体实施方式中，所述蛋白质、多肽或肽包含一个或多个翻译后修饰(例如，人细胞中存在的翻译后修饰)。本文还描述了用以生产蛋白质的组合物和试剂盒。本文进一步描述了具有(例如，通过本文所述的方法产生的)改变的蛋白质水平的细胞和培养物。
一方面，本发明涉及在细胞内生产感兴趣的蛋白质(例如，异源蛋白质)的方法，所述方法包括步骤：(ⅰ)提供能进行蛋白质翻译的靶细胞；以及(ⅱ)在所述感兴趣的蛋白质在靶细胞内生产的条件下，向靶细胞内引入包含第一分离的核酸的组合物，所述第一分离的核酸包含编码感兴趣的蛋白质的可翻译区和核苷修饰。在一些实施方式中，所述方法进一步包括从细胞中充分纯化感兴趣的蛋白质的步骤。在一些实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是分泌蛋白。
另一方面，本发明涉及在细胞内生产感兴趣的蛋白质(例如，异源蛋白质)的方法，所述方法包括步骤：(ⅰ)提供能进行蛋白质翻译的靶细胞，以及(ⅱ)在所述感兴趣的蛋白质在细胞内产生的条件下，向靶细胞内引入组合物，所述组合物包含：(a)包含编码感兴趣的蛋白质的可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸；和(b)包含抑制性核酸的第二核酸。在一些实施方式中，所述方法进一步包括从细胞中充分纯化感兴趣的蛋白质的步骤。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是分泌蛋白。
一方面，本发明涉及提高细胞内感兴趣的重组表达蛋白质的产量的方法，包括步骤：(ⅰ)提供包含编码感兴趣的蛋白质的重组核酸的靶细胞；和(ⅱ)在效应蛋白(effector protein)在靶细胞内生产的条件下，向靶细胞引入含有第一分离的核酸的组合物，从而提高细胞内重组表达蛋白的产量，所述第一分离的核酸包含编码翻译效应蛋白的可翻译区和核苷修饰。
在一些具体实施方式中，所述靶细胞是哺乳动物细胞。在一些具体实施方式中，所述靶细胞是酵母细胞。在一些具体实施方式中，所述靶细胞是细菌细胞、昆虫细胞或植物细胞。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是分泌蛋白质。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是跨膜蛋白。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是抗体或其抗原结合片段。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是生长因子或细胞因子。在一些具体实施方式中，所述感兴趣的蛋白质是肽或肽类似物。在一些具体实施方式中，所述翻译效应蛋白是神经酰胺转移蛋白(CERT)。在一些具体实施方式中，在靶细胞中以有效提高重组表达蛋白质翻译效率的量翻译所述翻译效应蛋白。在一些具体实施方式中，在靶细胞中以有效减少细胞内除了重组表达蛋白质以外的蛋白质的翻译效率的量翻译所述翻译效应蛋白。在一些具体实施方式中，在靶细胞中以有效减少含有重组表达蛋白质的包涵体的形成的量翻译所述翻译效应蛋白。在一些具体实施方式中，在靶细胞中以有效减少细胞内重组表达蛋白质的降解的量翻译所述翻译效应蛋白。在一些具体实施方式中，在靶细胞中以有效增加重组表达蛋白质的分泌的量翻译所述翻译效应蛋白。
另一方面，本发明涉及用以改变靶细胞中感兴趣的蛋白质的水平的方法，所述方法包括步骤：(ⅰ)调节靶细胞内的至少一种翻译效应分子的活性；以及(ⅱ)培养所述细胞。在一些具体实施方式中，所述靶细胞不包含重组核酸。在一些具体实施方式中，所述方法进一步包括分离感兴趣的蛋白质的步骤。
另一方面，本发明涉及用以调整靶细胞内感兴趣的蛋白质水平的方法，包括步骤：ⅰ)调节靶细胞内至少一种翻译效应分子的活性，其中所述调节包括向靶细胞中引入含有编码翻译效应蛋白的可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸；以及ⅱ)培养所述细胞。
一方面，本发明涉及一种具有改变了的蛋白质水平的动物细胞(例如，哺乳动物细胞)，其通过下述步骤产生：(ⅰ)向细胞内引入有效量的含有编码翻译效应蛋白的可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸；以及(ⅱ)培养所述细胞。在某些实施方式中，引入细胞的第一分离的核酸的有效量通过滴定由可翻译区翻译的蛋白质的预期量确定。
一方面，本发明涉及含有大量本发明所述细胞的高密度培养物。在一些具体实施方式中，所述培养包括分批补料过程。在一些具体实施方式中，所述培养包括连续给料过程。
一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的组合物，所述组合物包含含有可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸，以及适合第一核酸的可翻译区翻译的哺乳动物细胞，其中所述核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解。在一些具体实施方式中，所述哺乳动物细胞含有重组核酸。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的组合物，所述组合物包含：(ⅰ)含有可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸，其中所述核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解；(ⅱ)含有抑制性核酸的第二核酸；以及(ⅲ)适合第一核酸的可翻译区翻译的哺乳动物细胞，其中所述哺乳动物细胞含有能与抑制性核酸反应的目标核酸。在一些具体实施方式中，所述哺乳动物细胞含有重组核酸。
一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括包含可翻译区和核酸修饰的第一分离的核酸，及其包装和说明书，其中所述核酸能逃脱所述第一分离的核酸所引入的细胞的天然免疫反应。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括：(ⅰ)以引入靶细胞时有效产生预期量的由可翻译区编码的蛋白质的量提供的，含有可翻译区的第一分离的核酸；(ⅱ)以有效地基本抑制细胞天然免疫反应的量提供的含有抑制性核酸的第二核酸；以及(ⅲ)其包装和说明书。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括含有可翻译区和核苷修饰的第一分离的核酸，及其包装和说明书，其中所述核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解。
一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括含有可翻译区和至少二个不同核苷修饰的第一分离的核酸，及其包装和说明书，其中所述核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括：(ⅰ)含有可翻译区的第一分离的核酸；(ⅱ)含有抑制性核酸的第二核酸；以及(ⅲ)其包装和说明书。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，所述试剂盒包括：(ⅰ)含有可翻译区和至少一个核苷修饰的第一分离的核酸，其中所述核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解；(ⅱ)含有抑制性核酸的第二核酸；以及(ⅲ)其包装和说明书。
一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，包括编码可翻译区的第一分离的核酸，以及其包装和说明书，其中可翻译区编码蛋白质，其中所述第一核酸含有核酸修饰，其中所述第一核酸与不含核酸修饰的核酸相比，在所述第一分离的核酸所引入的细胞中的降解显示出减少。
另一方面，本发明涉及用于蛋白质生产的试剂盒，包括编码可翻译区的第一分离的核酸，以及其包装和说明书，其中可翻译区编码蛋白质，其中所述第一核酸含有核酸修饰，其中所述第一核酸与不含核酸修饰的核酸相比，在所述第一分离的核酸所引入的细胞中显示出更稳定。
一方面，本发明涉及用于免疫球蛋白生产的试剂盒，包括第一分离的核酸，以及包装和说明书，其中所述第一分离的核酸包含：ⅰ)编码免疫球蛋白的可翻译区和ⅱ)核酸修饰，其中所述第一核酸能逃脱所述第一分离的核酸所引入的细胞的天然免疫反应，其中所述可翻译区基本不含胞苷和尿嘧啶核苷酸。
另一方面，本发明涉及通过使用上述试剂盒产生的哺乳动物细胞。
另一方面，本发明涉及自含有第一分离的核酸的生产细胞产生的分离的免疫球蛋白，所述第一分离的核酸含有ⅰ)编码免疫球蛋白的可翻译区和ⅱ)核酸修饰，其中所述第一分离的核酸能逃脱所述细胞的天然免疫反应，其中所述可翻译区基本不含胞苷或尿嘧啶核苷酸或胞苷和尿嘧啶核苷酸的组合。
一方面，本发明涉及含有有效量的本文所述蛋白质的药物制剂。
另一方面，本发明涉及含有有效量的第一核酸的药物制剂，所述第一核酸含有ⅰ)编码免疫球蛋白的可翻译区和ⅱ)核酸修饰，其中所述第一核酸显示出减少的由细胞核酸酶引起的降解且能逃脱所述第一核酸所引入的细胞的天然免疫反应，其中所述可翻译区基本不含胞苷和尿嘧啶核苷酸。
前述方法、细胞、培养物、组合物、制剂和试剂盒的具体实施方式可以包含一个或多个以下特征：
在一些具体实施方式中，所述第一分离的核酸包括信使RNA(mRNA)。在一些具体实施方式中，所述mRNA包括选自以下组成组的至少一个核苷：嘧啶-4-酮核苷、5-氮-尿苷、2-硫-5-氮-尿苷、2-硫代尿苷、4-硫-假尿苷、2-硫-假尿苷、5-羟基尿苷、3-甲基尿苷、5-羧甲基-尿苷、1-羧甲基-假尿苷、5-炔丙基-尿苷、1-炔丙基-假尿苷、5-牛磺酸甲基尿苷、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫-尿苷、1-牛磺酸甲基-4-硫-尿苷、5-甲基-尿苷、1-甲基-假尿苷、4-硫-1-甲基-假尿苷、2-硫-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫-1-甲基-1-去氮-假尿苷、二氢尿苷、二氢假尿苷、2-硫-二氢尿苷、2-硫-二氢假尿苷、2-甲氧基尿苷、2-甲氧基-4-硫-尿苷、4-甲氧基-假尿苷和4-甲氧基-2-硫-假尿苷。在一些具体实施方式中，所述mRNA包括选自以下组成组的至少一个核苷：5-氮-胞苷、伪异胞苷、3-甲基-胞苷、N4-乙酰基胞苷、5-甲酰基基胞苷、N4-甲基胞苷、5-羟甲基胞苷、1-甲基-伪异胞苷、吡咯并胞苷、吡咯并伪异胞苷、2-硫-胞苷、2-硫-5-甲基-胞苷、4-硫-伪异胞苷、4-硫-1-甲基-伪异胞苷、4-硫-1-甲基-1-去氮-伪异胞苷、1-甲基-1-去氮-伪异胞苷、zebularine、5-氮-zebularine、5-甲基-zebularine、5-氮-2-硫-zebularine、2-硫-zebularine、2-甲氧基-胞苷、2-甲氧基-5-甲基-胞苷、4-甲氧基-伪异胞苷和4-甲氧基-1-甲基-伪异胞苷。在一些具体实施方式中，所述mRNA包括选自以下组成组的至少一个核苷：2-氨基嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、7-去氮-腺嘌呤、7-去氮-8-氮-腺嘌呤、7-去氮-2-氨基嘌呤、7-去氮-8-氮-2-氨基嘌呤、7-去氮-2,6-二氨基嘌呤、7-去氮-8-氮-2,6-二氨基嘌呤、1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、N6-异戊烯基腺苷、N6-(顺式羟基异戊烯基)腺苷、2-甲硫基-N6-(顺式羟基异戊烯基)腺苷、N6-甘氨酰氨基甲酰腺苷、N6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、2-甲硫基-N6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、N6,N6-二甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、2-甲硫基-腺嘌呤、和2-甲氧基-腺嘌呤。在一些具体实施方式中，mRNA包括选自以下组成组的至少一个核苷：肌苷、1-甲基-肌苷、丫苷、怀丁苷(wybutosine)、7-去氮-鸟苷、7-去氮-8-氮-鸟苷、6-硫-鸟苷、6-硫-7-去氮-鸟苷、6-硫-7-去氮-8-氮-鸟苷、7-甲基-鸟苷、6-硫-7-甲基-鸟苷、7-甲基肌苷、6-甲氧基鸟苷、1-甲基鸟苷、N2-甲基鸟苷、N2,N2-二甲基鸟苷、8-氧-鸟苷、7-甲基-8-氧-鸟苷、1-甲基-6-硫-鸟苷、N2-甲基-6-硫-鸟苷和N2,N2-二甲基-6-硫-鸟苷。
附图说明
图1描述了用编码人G-CSF的modRNA体外转染中国仓鼠卵巢后12和24小时测量的人G-CSF酶联免疫实验(ELISA)的条形图。
图2描述了用编码曲妥珠单抗(Trastuzumab)的modRNA的重链和轻链体外转染中国仓鼠卵巢细胞后12、24和36小时的人IgG的酶联免疫实验(ELISA)的条形图。
图3描述了用编码曲妥珠单抗的modRNA的重链和轻链体外转染人胚肾细胞(HEK293)后36小时测量的人IgG的酶联免疫实验(ELISA)的条形图。R1、R2、R3是在24孔板中进行的三次转染实验且通过未处理样品校正。
图4描述了用编码曲妥珠单抗的modRNA的重链和轻链体外转染中国仓鼠卵巢细胞后24小时测定的western blot图像。HC和LC分别表示曲妥珠单抗的重链和轻链。
图5描述了用编码曲妥珠单抗和利妥昔单抗(Rituximab)两者的modRNA的重链和轻链体外转染中国仓鼠卵巢细胞后13小时的细胞免疫染色的图像。
图6描述了编码曲妥珠单抗和利妥昔单抗的modRNA的结合免疫印迹实验的图像。黑框表示感兴趣的蛋白。
发明详述
本文描述了生产蛋白质、多肽和肽的方法。本发明至少部分地提供了在细胞内生产感兴趣的蛋白质、多肽或肽(例如，异源蛋白质)的方法，提高细胞内感兴趣的蛋白质、多肽或肽(例如，重组表达蛋白质)的产量的方法，以及改变细胞内感兴趣的蛋白质、多肽或肽的水平的方法。例如，所述方法可以包括在所述感兴趣的蛋白质、多肽或肽在细胞内生产(例如，翻译)的条件下，将编码感兴趣的蛋白质、多肽或肽的核酸(例如，本文所述的修饰核酸)引入细胞(例如，人细胞)的步骤。在一些具体实施方式中，所述核酸含有一个或多个核苷修饰(例如，本文所述的一个或多个核苷修饰)。在一些具体实施方式中，所述核酸包括一个或多个核苷修饰(例如，一个或多个本文所述的核苷修饰)。在一些具体实施方式中，所述核酸能逃脱所述核酸所引入的细胞的天然免疫反应，从而提高细胞内蛋白生产效率。在一些具体实施方式中，所述蛋白质是本文所述的治疗性蛋白质。在一些具体实施方式中，所述蛋白质含有一个或多个翻译后修饰(例如，存在于人类细胞中的翻译后修饰)。本文还描述了用于蛋白质生产的组合物和试剂盒。本文进一步描述了具有(例如，通过本文所述方法产生的)改变的蛋白质水平的细胞和培养物。
通常，引入细胞内的外源核酸(特别是病毒核酸)引起天然免疫反应，从而导致产生干扰素(IFN)和细胞死亡。尽管如此，对于重组蛋白质的生产，人们仍感兴趣于将核酸(例如核糖核酸(RNA))递送入细胞(例如，在细胞培养物中、在体外、在体内或离体)从而在细胞内翻译该核酸和生产编码的蛋白质。本文部分地提供了编码能调节细胞功能和/或活性的有用的多肽的核酸，以及制备和使用这些核酸和多肽的方法。如本文所述，这些核酸能减少其所引入的细胞群的天然免疫活性，因而提高蛋白质在该细胞群中的生产效率。进一步地，本文描述了本发明所述核酸和蛋白质的一个或多个额外的有利活性和/或性质。
蛋白质生产方法
本文提供的方法可用于提高细胞培养过程中蛋白质产物的产量。相对于相应的未修饰核酸，在含有大量宿主细胞的细胞培养物中，本文所述的修饰的mRNA的引入导致蛋白质生产效率提高。例如通过表现出细胞转染的增加、自所述核酸翻译的蛋白质的增加、核酸降解的减少和/或所述宿主细胞天然免疫反应的减少，可以证明蛋白质生产效率的这种提高。可以通过ELISA测定蛋白质的生产，可以通过本领域已知的多种功能试验测定蛋白质活性。可以在连续补料或分批补料的过程中产生所述蛋白质产物。
细胞培养和生长
在本发明的方法中，培养细胞。细胞可以悬浮培养或贴壁培养。细胞可以在多种容器(包括，例如生物反应器、细胞袋、摇袋(wave bag)、培养皿、烧瓶、超级烧瓶(hyperflasks)和其他本领域普通技术人员已知的容器)中培养。细胞可以在IMDM(Invitrogen，目录编号12440-53)或包括化学上确定的培养基配方在内的任意其他合适的培养基中培养。对本领域普通技术人员而言，适合细胞培养的周围环境条件(例如温度和大气组成)是熟知的。本发明的方法可用于任何适于在蛋白质生产中使用的细胞。一个具体实施方式中，所述细胞选自由动物细胞(例如，哺乳动物细胞)、细菌细胞、植物、微生物、藻类和真菌细胞组成的组。在一些具体实施方式中，所述细胞是哺乳动物细胞，例如人类、小鼠、大鼠、山羊、马、兔、仓鼠或牛细胞。例如，所述细胞可以来自任何已建立的细胞系，包括但不限于HeLa、NS0、SP2/0、HEK 293T、Vero、Caco、Caco-2、MDCK、COS-1、COS-7、K562、Jurkat、CHO-K1、DG44、CHOK1SV、CHO-S、Huvec、CV-1、HuH-7、NIH3T3、HEK293、293、A549、HepG2、IMR-90、MCF-7、U-20S、Per.C6、SF9、SF21或中国仓鼠卵巢细胞(CHO)。某些具体实施方式中，所述细胞是真菌细胞，例如选自由黄孢菌(Chrysosporium)细胞、曲霉(Aspergillus)细胞、木霉(Trichoderma)细胞、网柱黏菌(Dictyostelium)细胞、假丝酵母(Candida)细胞、酵母(Saccharomyces)细胞、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces)细胞和青霉(Penicillium)细胞组成的组的细胞。在某些其他具体实施方式中，所述细胞是细菌细胞，例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或BL21细胞。用于本方法转染的初级和次级细胞可以自多种组织获得，且包括所有能在培养中维持的细胞种类。例如，通过本方法转染的初级和次级细胞可以包括成纤维细胞、角化细胞、上皮细胞(例如，乳腺上皮细胞、肠上皮细胞)、内皮细胞、神经胶质细胞、神经细胞、血液组成成分(例如，淋巴细胞、骨髓细胞)、肌肉细胞和上述体细胞种类的前体细胞。初级细胞可以自同一物种或另一物种供体(例如，小鼠、大鼠、兔、猫、狗、猪、牛、鸟、绵羊、山羊、马)获得。
本发明的细胞可用于能纯化和通过常规给药方式递送的治疗性产品的体外生产。无论是否扩大，这些细胞均能用于收获细胞内或细胞外蛋白质产物的大规模培养。
细胞核酸递送的方法
本发明的方法增强了核酸在体内、离体或在培养物中向细胞群中的递送。例如，将包含大量宿主细胞(例如真核细胞，例如酵母或哺乳动物细胞)的细胞培养物与含有增强的核酸的组合物相接触，所述增强的核酸具有至少一个核苷修饰和任选的可翻译区。所述组合物还通常含有转染试剂或其他提高增强的核酸向宿主细胞中的摄取效率的化合物。相对于相应的未修饰核酸，所述增强的核酸在细胞群中显示出增强的保留能力。所述增强的核酸的保留能力比未修饰核酸的保留能力高。在一些具体实施方式中，比未修饰的核酸的保留能力至少高50％、75％、90％、95％、100％、150％、200％或超过200％。这种保留能力的优势可以通过用增强的核酸进行一轮转染获得或者通过后续多轮重复转染获得。
向细胞中引入修饰的或瞬时的RNA用于蛋白质生产
瞬时转染的细胞可通过本领域普通技术人员熟知的转染、电穿孔、阳离子介质、聚合物或基于脂质的递送分子的方法产生。如果合适，可以在传统分批式步骤或连续流加(continuous flow through)步骤中，将所述修饰的瞬时RNA引入培养的细胞中。本发明的方法和组合物可用于制备具有提高的一个或多个感兴趣蛋白质产量的细胞。可以用一个或多个RNA转染细胞或者将其引入细胞。可以用二个或更多个RNA构建体同时或相继转染细胞。在某些具体实施方式中，可以多次使用本文所述方法以获得具有提高的一个或多个感兴趣的RNA或蛋白质的表达的细胞。例如，可以使用一个或多个编码感兴趣的RNA或蛋白质的RNA构建体转染细胞，并按照本文所述方法进行分离。所述分离的细胞可以随后进一步地用于一个或多个编码感兴趣的RNA或蛋白质的其他RNA转染并再次分离。例如，所述方法可用于产生细胞，所述细胞在相同或相关生物学途径中的蛋白质复合物、RNA或蛋白质，彼此作为上下游的RNA或蛋白质，彼此具有调节、激活或抑制功能的RNA或蛋白质，依赖彼此功能或活性的RNA或蛋白质，同源(例如，序列、结构或功能同源)的RNA或蛋白质的表达提高。例如，该方法可用于产生免疫球蛋白(例如，IgA、IgD、IgE、IgF和IgM)的轻链和重链或其抗原结合片段的表达提高的细胞系。所述免疫球蛋白可以是全人的、人源化的或嵌合的免疫球蛋白。转染入本发明的细胞的RNA可以包括编码感兴趣的蛋白质的RNA序列。可按照本文所述方法生产任意蛋白质。可按照本发明所述方法生产的蛋白质的实例包括但不限于，肽激素(例如，胰岛素)、糖蛋白激素(例如，促红细胞生成素)、抗生素、细胞因子、酶、疫苗(例如，HIV疫苗，HPV疫苗、HBV疫苗)、抗癌治疗剂(例如，Muc 1)和治疗性抗体。在个别具体实施方式中，所述RNA编码免疫球蛋白或其抗原结合片段，例如免疫球蛋白的重链、免疫球蛋白的轻链、单链Fv、抗体片段(例如Fab、Fab’或(Fab’)2)或免疫球蛋白抗原结合片段。在特定具体实施方式中，所述RNA编码促红细胞生成素。在另一特定具体实施方式中，所述RNA编码一个或多个结合细胞表面受体(表皮生长因子受体(EGFR)、HER2或c-ErbB-1)且任选地拮抗或激活细胞表面受体的免疫球蛋白或其片段，例如ErbituxTM(cetuximab)。
蛋白质的分离或纯化
本文所述方法可以进一步包括分离或纯化通过本文所述方法制备的蛋白质、多肽或肽的步骤。本领域普通技术人员可以容易地确定从培养的细胞中纯化或分离感兴趣的蛋白质的合适方式。通常，通过采用亲和结合的捕获方法或非亲和纯化而进行。如果感兴趣的蛋白质不被培养的细胞分泌，则在前述纯化或分离之前裂解培养的细胞。可以使用包含感兴趣的蛋白质、细胞培养基成分和细胞培养添加成分(例如本发明中的消泡化合物和其他营养和补充物、细胞、细胞碎片、宿主细胞蛋白质、DNA、病毒等等)不明的细胞培养液体。此外，如果希望的话，该过程本身可以在生物反应器内进行。可以将所述液体预处理至期望的促进因素，例如pH、温度或其他促进因素，或者可以在加入聚合物后对液体进行处理，或者可以将聚合物加入到载液(carrier liquid)中，所述载液被正确处理至促进条件所需的参数，而所述促进条件是待溶解至液体中的聚合物所需的。多聚物使得与所述液体完全流转，而后施加促进因素(改变pH、温度、盐浓度等等)，目标蛋白质和多聚物从溶液中沉淀出来。将多聚物和目标蛋白质从液体剩余部分分离并任选地洗涤一次或多次以去除任何粘合的或松散结合的杂质。随后通过例如洗提等自多聚物回收所述目标蛋白质。一般，在一系列的条件下完成所述洗提，从而使聚合物保持其固体(沉淀)形式，并且在期望蛋白质的选择性洗提过程中保留其任意杂质。或者，可以将聚合物和蛋白质以及任意杂质溶解在新的液体(例如水或缓冲液)中，并且通过与多聚物或杂质相比，对蛋白质更具偏爱性和选择性的方式，例如亲和、离子交换、疏水或其他种类的层析方法回收所述蛋白质。随后回收所洗提的蛋白质，并且如果需要对其进行额外的加工步骤，或者传统的分批式步骤或者连续流加步骤(如果合适)。
此外，优化特定多肽在可能感兴趣的细胞系或细胞系集中的表达是有用的，尤其是工程化蛋白，例如具有已知活性的对照蛋白的蛋白变体。在一种具体实施方式中，提供了通过提供多种靶细胞种类，并且使所述多种靶细胞种类的每一种均独立地与编码工程化多肽的修饰mRNA接触，而优化工程化蛋白质在靶细胞中的表达的方法。此外，可以改变培养条件以提高蛋白质生产效率。随后，检测和/或量化多种靶细胞类型中工程化多肽的存在和/或水平，使得可以通过选择有效的靶细胞和与之相关的细胞培养条件而对工程化多肽的表达进行优化。特别地，当工程化多肽包含一个或多个翻译后修饰或具有实质的三级结构或常使蛋白质高效生产复杂化的条件时，此类方法尤其有用。
“感兴趣的蛋白”或“目标蛋白”包括在本文提供的蛋白及其片段、突变体、变体及改变。特别地，目标蛋白/多肽或感兴趣的蛋白的实例为，但不限于，胰岛素，胰岛素样生长因子，人生长激素(hGH)，组织纤溶酶原激活剂(tPA)，细胞因子，例如白介素(IL)，例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18，干扰素(IFN)α、IFNβ、IFNγ、IFNΩ或IFNτ，肿瘤坏死因子(TNF)，例如TNFα和TNFβ、TNFγ，TNF相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)；粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和血管内皮生长因子(VEGF)。还包括促红细胞生成素或其他激素生长因子的生产。按照本发明的方法还可以有利地用于生产抗体或其片段。所述片段包括，例如，Fab片段(抗原结合片段)。Fab片段是由通过相邻恒定区连在一起的双链可变区组成的，其可以通过蛋白酶(例如木瓜蛋白酶)消化常规抗体而形成，但是相似的Fab片段也同时会通过遗传工程产生。其他的抗体片段包括F(ab’)2片段，可通过胃蛋白酶酶解制备。
一般而言，感兴趣的蛋白是作为分泌多肽自培养基中回收的，或者，如果没有分泌性信号表达，则可从宿主细胞裂解物中回收。需要采用可以获得基本上均一的感兴趣蛋白质制备物的方式自其他重组蛋白质和宿主细胞蛋白质中纯化感兴趣的蛋白质。作为第一步，自培养基或裂解物中移除细胞和/或粒状细胞碎片。随后，通过例如免疫亲合或离子交换柱分级、醇沉淀、反相HPLC、Sephadex色谱、硅石色谱或诸如DEAE的阳离子交换树脂色谱，自可溶性蛋白、多肽和核酸杂质中纯化感兴趣的产物。通常，教导本领域技术人员如何纯化宿主细胞表达的异源蛋白质的方法是本领域已知的。所述方法例如描述在(Harris and ngal，Protein Purification Methods：A Practical Approach，Oxford University Press，1995)或(Robert Scopes，ProteinPurification：Principles and Practice，Springer，1988)中。
本发明的方法促进了核酸向体内、离体或培养物中细胞群的递送。例如，将包含大量宿主细胞(例如，真核细胞，如酵母或哺乳动物细胞)的细胞培养物与含有增强的核酸的组合物接触，所述增强的核酸具有至少一个核苷修饰以及任选的可翻译区。所述组合物通常还包含转染试剂或其他提高增强的核酸向宿主细胞的摄入效率的化合物。与相应未修饰核酸相比，所述增强的核酸在细胞群中显示出增强的保留能力。所述增强的核酸的保留能力比未修饰的核酸的保留能力高。在一些具体实施方式中，比未修饰核酸的保留能力至少高约50％、75％、90％、95％、100％、150％、200％或超过200％。这样的保留能力优势可以通过使用增强的核酸进行一轮转染获得，或者可以通过后续多轮重复转染获得。
在一些具体实施方式中，增强的核酸与一个或多个其他核酸被递送到靶细胞群。这种递送可以同时进行，或者在递送一个或多个其他核酸之前递送增强的核酸。所述其他一个或多个核酸可以是修饰的核酸或未修饰的核酸。应该理解，起始存在的增强的核酸基本上不诱导细胞群的天然免疫反应，并且随后存在的未修饰的核酸也不会激活天然免疫反应。因此，如果期望在靶细胞群中存在的蛋白质由未修饰的核酸翻译，则增强的核酸自身可以不含可翻译区。
拮抗蛋白的表达
本文所述方法和组合物可用于制备能削弱或阻止哺乳动物受试者的内源性激动生物反应和/或拮抗受体或信号转导分子的蛋白质。例如，IL-12和IL-23受体信号转导在慢性自体免疫病(例如多发性硬化)和炎性疾病(例如类风湿性关节炎、银屑病、红斑狼疮、强直性脊柱炎和克罗恩氏病)中增强(Kikly K，Liu L，Na S SedgwickJD(2006)Curr.Opin.Immunol.第18卷第6期，第670–5页)。另一具体实施方式中，核酸编码针对趋化因子受体的拮抗剂。趋化因子受体CXCR-4和CCR-5是HIV进入宿主细胞所需的(Arenzana-Seisdedos F等，(1996)Nature，3月10日；第383卷第6599期，第400页)。
靶物质(moiety)。本发明的具体实施方式中，提供修饰的核酸以表达蛋白质结合伴侣或位于细胞表面的的受体，所述受体的功能是在体内或体外将细胞靶向特定组织空间或者使其与特定物质反应。合适的蛋白质结合伴侣包括抗体及其功能片段、支架蛋白质或肽。此外，修饰的核酸可用于指导脂类、糖类或其他生物物质的合成和细胞外定位。
永久性基因表达沉默。在哺乳动物受试者中通过表观遗传学沉默基因表达的方法，该方法包括核酸，所述核酸的可翻译区编码一种或多种多肽，所述多肽能够指导序列特异性组蛋白H3甲基化，从而起始异染色质的形成并且减少特定基因周围的基因转录，实现沉默基因的目的。例如，酪氨酸激酶2基因的功能获得性突变是骨髓增生疾病家族的原因。
机理详情。裂殖酵母需要2个RNAi复合体用于siRNA介导的异染色质装配：RNA诱导的转录沉默(RITS)复合体和RNA引导的RNA聚合酶复合体(RDRC)(Motamedi等，Cell，2004年，119，第789-802页)。裂殖酵母中，RITX复合体包括siRNA结合Argonaute家族蛋白Ago1，染色质结构域蛋白质Chp1和Tas3。裂殖酵母RDRC复合体由RNA依赖性RNA聚合酶Rdp1、推定的RNA螺旋酶Hrr1和polyA聚合酶家族蛋白Cid12组成。这两种复合物需要Dicer核糖核酸酶和Clr4组蛋白H3甲基转移酶才能有活性。同时，Ago1与siRNA分子(Dicer介导的对Rdp1共转录产生的dsRNA转录本进行切割而产生)结合并且允许Chp1、Tas3、Hrr1和Clr4与DNA区域序列特异性直接结合，所述DNA区域必定用于甲基化和组蛋白修饰并随后包装成转录水平沉默的异染色质。虽然该机制与DNA着丝粒区域顺式发挥作用，但通过针对DNA特定区域的双链siRNA的共转染和杂RNAi引导的siRNA核糖核酸酶Eri1沉默使序列特异性反式沉默成为可能(Buhler等.Cell 2006，125，873-886)。
制备多肽变体
本文所述方法和组合物可用于制备多肽变体。本文提供了编码与对照多肽序列具有一定同一性的变体多肽的核酸。术语“同一性”如本领域所知，是指通过比较序列而测定的两条或更多多肽序列之间的相互关系。在本领域，“同一性”还表示通过两条或更多氨基酸残基链之间的匹配数量而测定的肽之间的序列相关性。“同一性”测定两条或更多序列的较小者之间相同匹配的百分数，其以特定的数学模型或计算机程序(例如，“运算法则”)解决缺口序列(若有的话)。通过已知方法可以容易地计算相关肽的同一性。这样的方法包括，但不限于，Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994；Sequence Analysis in MolecularBiology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M.Stockton Press,New York,1991；andCarillo et al.,SIAM J.Applied Math.48,1073(1988)。
在一些具体实施方式中，多肽变体与对照多肽具有相同或相似活性。或者，变体具有相对于对照多肽的改变的活性(例如，增加或降低)。通常，当通过本文所述的和本领域技术人员已知的序列比对程序以及参数测定时，本发明的特定多核苷酸或多肽的变体与特定对照多核苷酸或多肽相比，具有至少大约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
如本领域技术人员所知，蛋白质片段、功能性蛋白质结构域和同源蛋白质也被认为是落入本发明的范围。例如，本文提供了对照蛋白质的任意蛋白质片段(表示比对照多肽序列短至少一个氨基酸残基的多肽序列，但其他部分相同)，其具有大约10、20、30、40、50、60、70、80、90、100或多于100个氨基酸长度。另一个实施例中，可以依照本发明使用具有约20、约30、约40、约50或约100个氨基酸的任何蛋白质，其与任一本文所述序列相比，具有约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或约100％的同一性。在某些具体实施方式中，如本文提供或涉及的任一序列中所示，按照本发明而使用的蛋白质序列包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多突变。
制备多肽文库
本文所述方法和组合物可用于多肽文库的构建。本文提供包含核苷修饰的多核苷酸文库，其中所述多核苷酸各自包含编码多肽(例如抗体、蛋白质结合伴侣、支架蛋白和本领域已知的其他多肽)的第一核酸序列。一般而言，多核苷酸是适于直接引入目标宿主细胞形式的mRNA，所述目标宿主细胞合成所编码的多肽。
在某些具体实施方式中，制备蛋白质的多种变体(每一个均具有不同的氨基酸修饰)并测试以确定在药物代谢动力学、稳定性、生物适应性和/或生物活性或生物物理学特性(例如表达水平)方面的最佳变体。这样的文库可以包含约10、102、103、104、105、106、107、108、109或超过109种可能的变体(包括替换、删除一个或多个残基，和插入一个或多个残基)。
制备多肽-核酸复合物
本文所述方法和组合物可用于制备多肽-核酸复合物。合适的蛋白质翻译包括与mRNA相关的多个多肽和核酸的物理聚集。本发明提供蛋白质-核酸复合物，包含具有一个或多个核苷修饰(例如，至少2个不同的核苷修饰)的可翻译mRNA以及与mRNA结合的一个或多个多肽。通常地，按有效阻止或减少所述复合物所引入的细胞的天然免疫反应的量提供蛋白质。
制备不可翻译的修饰核酸
本文所述方法和组合物可用于制备不可翻译的修饰核酸。如本文所述，提供具有基本上不可翻译的序列的mRNA。当施用于哺乳动物受试者时，所述mRNA是有效的疫苗。
本文还提供了包含一个或多个非编码区的修饰核酸。这种修饰核酸通常不翻译，但是能结合和螯合一个或多个翻译器组分，例如核糖体蛋白或转移RNA(tRNA)，从而有效减少细胞内的蛋白质表达。该修饰核酸可以包含小核仁RNA(sno-RNA)、微小RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、小发卡RNA(shRNA)或Piwi-相互作用RNA(piRNA)。
修饰核酸
本发明提供利了用含有一个或多个修饰核苷的包括RNA(例如信使RNA(mRNA))在内的核酸(称为“修饰的核酸(或修饰核酸)”)生产蛋白质的方法，所述修饰核酸具有有用的特性，包括基本上缺失诱导该mRNA所引入的细胞的天然免疫反应。由于这些修饰核酸增强了蛋白质的生产效率、核酸的细胞内保留能力和所接触的细胞的生存能力，并且具有降低的免疫原性，具有这些性质的核酸在本文中称为“增强的核酸(或增强核酸)”。
术语“核酸”，以其最广泛的含义包括引入或者能够引入至寡核苷酸链的任意化合物和/或物质。可用于本发明的示例性核酸包括，但不限于本文详细描述的一个或多个DNA、包括信使mRNA(mRNA)在内的RNA或DNA与RNA的杂合体、RNA干扰(RNAi)诱导剂、RNAi药剂、小干扰RNA(siRNAs)、小发卡RNA(shRNAs)、微小RNA(miRNAs)、反义RNA、核酶、催化性DNA、诱导三螺旋形成的RNA、适体、载体等。
本文提供了含有可翻译区和一个、二个或多于二个不同的核苷修饰的修饰核酸。在一些具体实施方式中，与相应的未修饰核酸相比，修饰核酸在该核酸所引入的细胞中显示出减少的降解。例如，与相应的未修饰核酸的降解率相比，修饰核酸的降解率降低了大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或多于90％。示例性的核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、苏糖核酸(TNA)、乙二醇核酸(GNA)或其杂合体。在典型的具体实施方式中，修饰核酸包括信使RNA(mRNA)。如本文所述，本发明的核酸基本不诱导该mRNA所引入的细胞的天然免疫反应。
在一些具体实施方式中，修饰核苷包括嘧啶-4-酮核苷、5-氮-尿苷、2-硫-5-氮-尿苷、2-硫尿苷、4-硫-假尿苷、2-硫-假尿苷、5-羟基尿苷、3-甲基尿苷、5-羧甲基-尿苷、1-羧甲基-假尿苷、5-炔丙基-尿苷、1-炔丙基-假尿苷、5-牛磺酸甲基尿苷、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫-尿苷、1-牛磺酸甲基-4-硫-尿苷、5-甲基-尿苷、1-甲基-假尿苷、4-硫-1-甲基-假尿苷、2-硫-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫-1-甲基-1-去氮-假尿苷、二氢尿苷、二氢假尿苷、2-硫-二氢尿苷、2-硫-二氢假尿苷、2-甲氧基尿苷、2-甲氧基-4-硫-尿苷、4-甲氧基-假尿苷和4-甲氧基-2-硫-假尿苷。
在一些具体实施方式中，修饰核苷包括5-氮-胞苷、伪异胞苷、3-甲基胞苷、N4-乙酰基胞苷、5-甲酰基胞苷、N4-甲基胞苷、5-羟甲基胞苷、1-甲基-伪异胞苷、吡咯并胞苷、吡咯并伪异胞苷、2-硫-胞苷、2-硫-5-甲基-胞苷、4-硫-伪异胞苷、4-硫-1-甲基-伪异胞苷、4-硫-1-甲基-1-去氮-伪异胞苷、1-甲基-1-去氮-伪异胞苷、zebularine、5-氮-zebularine、5-甲基-zebularine、5-氮-2-硫-zebularine、2-硫-zebularine、2-甲氧基-胞苷、2-甲氧基-5-甲基-胞苷、4-甲氧基-伪异胞苷和4-甲氧基-1-甲基-伪异胞苷。
在其他具体实施方式中，修饰核苷包括2-氨基嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、7-去氮-腺嘌呤、7-去氮-8-氮-腺嘌呤、7-去氮-2-氨基嘌呤、7-去氮-8-氮-2-氨基嘌呤、7-去氮-2,6-二氨基嘌呤、7-去氮-8-氮-2,6-二氨基嘌呤、1-甲基腺苷、N6-甲基腺苷、N6-异戊烯基腺苷、N6-(顺式羟基异戊烯基)腺苷、2-甲硫基-N6-(顺式羟基异戊烯基)腺苷、N6-甘氨酰氨基甲酰腺苷、N6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、2-甲硫基-N6-苏氨酰氨基甲酰腺苷、N6,N6-二甲基腺苷、7-甲基腺嘌呤、2-甲硫基-腺嘌呤和2-甲氧基-腺嘌呤。
在特定具体实施方式中，修饰核苷是5’-O-(1-硫代磷酸)-腺苷、5’-O-(1-硫代磷酸)-胞苷、5’-O-(1-硫代磷酸)-鸟苷、5’-O-(1-硫代磷酸)-尿苷或5’-O-(1-硫代磷酸)-假尿苷。
5’-O-(1-硫代磷酸)-腺苷
5’-O-(1-硫代磷酸)-胞苷
5’-O-(1-硫代磷酸)-鸟苷
5’-O-(1-硫代磷酸)-尿苷
5’-O-(1-硫代磷酸)-假尿苷
本文提供α-硫取代的磷酸分子以通过非天然硫代磷酸酯骨架连接而赋予RNA和DNA聚合体以稳定性。硫代磷酸DNA和RNA具有提高的核酸酶抗性并因此在细胞环境中具有更长的半衰期。还预期硫代磷酸酯连接的核酸通过较弱地结合/激活细胞天然免疫分子而降低天然免疫反应。
在某些具体实施方式中，例如，如果需要精确的蛋白质生产时间，期望在细胞内降解引入该细胞的修饰核酸。因此，本发明提供包含降解结构域的修饰核酸，在细胞内能够以被引导的方式作用于其上。
在其他具体实施方式中，修饰核苷包括肌苷、1-甲基-肌苷、丫苷、怀丁苷(wybutosine)、7-去氮-鸟苷、7-去氮-8-氮-鸟苷、6-硫-鸟苷、6-硫-7-去氮-鸟苷、6-硫-7-去氮-8-氮-鸟苷、7-甲基-鸟苷、6-硫-7-甲基-鸟苷、7-甲基肌苷、6-甲氧基-鸟苷、1-甲基鸟苷、N2-甲基鸟苷、N2,N2-二甲基鸟苷、8-氧-鸟苷、7-甲基-8-氧-鸟苷、1-甲基-6-硫-鸟苷、N2-甲基-6-硫-鸟苷和N2,N2-二甲基-6-硫-鸟苷。
核酸的其他组分是任选的，并且在一些具体实施方式中是有益的。例如，提供了5’非翻译区(UTR)和/或3’UTR，其中之一或两者能独立地包含一个或多个不同的核苷修饰。在这样的具体实施方式中，核苷修饰也可以存在于可翻译区。还提供了具有Kozak序列的核酸。
此外，还提供了具有一个或多个能从所述核酸剪切的内含子核苷酸序列的核酸。
进一步的，还提供了含有内核糖体进入位点(IRES)的核酸。IRES可以作为单一核糖体结合位点起作用或也可以作为mRNA的多个核糖体结合位点之一而发挥功效。包含多于一个功能性核糖体结合位点的mRNA可编码数个通过核糖体而独立翻译的肽或多肽(多顺反子mRNA)。当提供具有IRES的核酸时，进一步任选提供第二可翻译区。可用于本发明的IRES序列的实例包括但不限于，来自细小核糖核酸病毒(例如，FMDV)、鼠疫病毒(CFFV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、脑心肌炎病毒(ECMV)、手足口病毒(FMDV)、丙肝病毒(HCV)、典型猪瘟病毒(CSFV)、鼠白血病病毒(MLV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)或蟋蟀麻痹病毒(CrPV)。
利用修饰核酸阻止或降低天然细胞免疫反应的活化。
本文所述的修饰核酸能够逃脱该核酸所引入的细胞的天然免疫反应，从而提高细胞内蛋白质的生产效率。术语“天然免疫反应”包括针对通常为病毒或细菌来源的外源单链核酸的细胞反应，其包括诱导细胞因子(特别是干扰素)表达和释放以及细胞死亡。在天然细胞免疫反应中，蛋白质合成也降低。虽然消除细胞内天然免疫反应是有利的，但本发明提供了显著降低免疫反应(包括干扰素信号转导)但不完全消除该反应的修饰mRNA。在一些具体实施方式中，与由相应的未修饰核酸诱导的免疫反应相比，所述免疫反应降低大约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.9％或大于99.9％。这样的减少可以通过I型干扰素的表达或活性水平或者干扰素调节基因(例如Toll样受体，例如TLR7和TLR8)的表达而测量。天然免疫反应的减少也可以通过在向细胞群一次或多次施以修饰RNA之后细胞死亡的减少而测定；例如比用相应的未修饰核酸观察到的细胞死亡频率低约10％、25％、50％、75％、85％、90％、95％或超过95％。而且，细胞死亡可影响少于约50％、40％、30％、20％、10％、5％、1％、0.1％、0.01％或少于0.01％的与修饰核酸接触的细胞。
本发明提供了重复地将修饰核酸引入(例如转染)至靶细胞群，例如在体外、离体或在体内。接触细胞群的步骤可以重复一次或多次(例如，二次、三次、四次、五次或多于五次)。在一些具体实施方式中，用修饰核酸接触细胞群的步骤重复多次，使其足以在细胞群内实现预定的蛋白质翻译效率。考虑到由核酸修饰产生的降低的靶细胞群细胞毒性，在不同的细胞类型中都可实现所述重复转染。
修饰核酸的合成
用于本发明的核酸可以按照任何可行的技术制备，所述技术包括，但不限于化学合成，酶法合成(其通常是指体外转录)，长前体的酶法或化学裂解等等。合成RNA的方法在本领域已知(参见，例如，Gait，M.J.(编)Oligonucleotide synthesis：a practicalapproach，Oxford[Oxfordshire]，Washington，DC：IRL Press，1984；和Herdewijn，P.(编)Oligonucleotide synthesis：methods and applications，Methods in MolecularBiology，v.288(Clifton，N.J.)Totowa，N.J.：Humana Press，2005；两者通过引证而全文引入)。
修饰核酸不需要沿该分子的全长进行均一修饰。不同的核苷酸修饰和/或骨架结构可以存在于核酸的不同位置。本领域普通技术人员理解，核苷酸类似物或其他修饰可以存在于核酸的基本不降低核酸功能的任意位置。修饰可以是5’或3’末端修饰。核酸可以包括最少一个到最多100％修饰核苷酸，或任何中间的百分比，例如至少约50％修饰核苷酸、至少约80％修饰核苷酸或至少约90％修饰核苷酸。
通常地，本发明的修饰mRNA的长度适于在细胞(例如，人细胞)内生产蛋白质、多肽或肽。例如，mRNA的长度足以能够在细胞内翻译至少二肽。一个具体实施方式中，修饰mRNA的长度大于30个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度大于35个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少为40个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是45个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是55个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是60个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是60个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是80个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是90个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是100个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是120个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是140个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是160个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是180个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是200个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是250个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是300个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是350个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是400个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是450个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是500个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是600个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是700个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是800个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是900个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1000个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1100个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1200个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1300个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1400个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1500个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1600个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是1800个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是20000个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是2500个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是3000个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是4000个核苷酸。另一个具体实施方式中，长度至少是5000个核苷酸，或大于5000个核苷酸。
修饰核酸的应用
通过本文所述方法生产的蛋白质、多肽或肽可以作为治疗性药剂用以治疗或预防一种或多种本文所述的疾病或病症。
治疗剂。提供组合物、方法、试剂盒和试剂，以治疗或预防人类和其他动物(例如，哺乳动物)的疾病或病症。本发明的活性治疗剂包括由修饰核酸翻译的多肽、含有修饰核酸或由修饰核酸翻译的多肽的细胞，以及与含有修饰核酸或自修饰核酸翻译的多肽的细胞接触的细胞。
提供使用本文所述修饰核酸诱导重组多肽在细胞群内翻译的方法。所述翻译可以是在体内、离体、培养基中(in culture)或在体外。所述细胞群与含有核酸的有效量的组合物接触，所述核酸具有至少一个核苷修饰和编码重组多肽的可翻译区。所述细胞群在该核酸定位在细胞群的一个或多个细胞内且在细胞内由所述核酸翻译重组多肽的条件下发生接触。
基于，至少部分地基于靶组织、靶细胞类型、给药方式、由修饰核酸翻译的蛋白质的物理性质(例如，大小)和其他决定因素，提供有效量的所述组合物。
配制包含修饰核酸的组合物，以肌肉内给药、动脉内给药、腹膜内给药、静脉内给药、鼻内给药、皮下给药、内窥镜(endoscopically)给药、透皮给药或鞘内给药。在一些具体实施方式中，组合物经配制缓释给药。
施用治疗剂的受试者患有疾病、病症或病况或有此风险。提供有基于包括临床诊断、生物标志物水平、基因组开放式相关研究(genome-wide association study，GWAS)以及本领域已知的其他方法在内的基础而鉴别、诊断受试者并对其进行分型的方法。
在某些具体实施方式中，所施用的由本文所述的修饰核酸翻译的重组多肽提供了在该重组多肽所施用的细胞中基本没有的功能性活性。例如，缺少的功能性活性性质上可以是酶促的、结构性的或基因调节的活性。
在其他具体实施方式中，所施用的重组多肽代替在重组多肽所施用的细胞中基本没有的多肽(或多个多肽)。这种没有可以是由于编码基因或其调节通路的基因突变。或者，重组多肽的功能是拮抗存在于细胞内、细胞表面上或者自细胞分泌的内源蛋白的活性。通常，内源蛋白的活性对于受试者而言是有害的。例如，由于内源蛋白的突变而导致改变活性或定位。此外，重组多肽直接地或间接地拮抗存在于细胞内、细胞表面上或者自细胞分泌的生物分子的活性。拮抗的生物分子的示例包括脂类(例如，胆固醇)、脂蛋白(例如，低密度脂蛋白)、核酸、糖类或小分子毒素。
本文所述重组蛋白经设计而定位在细胞内，潜在定位在特定的细胞区室(例如细胞核)或者经设计而由细胞分泌或转移到细胞质膜上。
如本文所述，本发明的修饰核酸的有用特性是能够降低细胞对于外源核酸的天然免疫反应，例如，以提高蛋白产量。提供用以滴定、减少或消除细胞或细胞群内免疫反应的方法。在一些具体实施方式中，所述细胞与包含第一剂量的第一外源核酸的第一组合物接触，并测定细胞对第一外源核酸的天然免疫反应的水平，所述第一外源核酸包含可翻译区和至少一个核苷修饰。随后，所述细胞与包含第二剂量的第一外源核酸的第二组合物接触，所述第二剂量具有含量比第一剂量少的第一外源核酸。或者，所述细胞与第一剂量的第二外源核酸接触。所述第二外源核酸可以包含一个或多个可与第一外源核酸相同或不同的修饰核苷，或者，第二外源核酸可以不含修饰核苷。细胞与第一组合物和/或第二组合物接触的步骤可以重复一次或多次。此外，可任选地测定细胞内蛋白质的生产(例如，蛋白质翻译)效率，细胞可以重复转染第一和/或第二组合物直到实现目标蛋白生产效率。
疾病和病症的疗法。提供有通过取代缺失的蛋白活性或者克服异常的蛋白活性而治疗或预防征在于缺失的或异常的蛋白质活性的疾病症状的方法。
以功能异常或异常蛋白质活性为特征的疾病包括，但不限于癌症和增生疾病、遗传病(例如，囊性纤维化)、自体免疫疾病、糖尿病、神经退化病、心血管疾病和代谢疾病。本发明提供通过引入蛋白质或基于细胞的药剂以治疗受试者的所述病症或疾病的方法，所述蛋白质或基于细胞的药剂是通过利用本文提供的修饰核酸的方法产生的，其中修饰核酸编码拮抗或者克服受试者细胞中存在的异常蛋白质活性的蛋白质。功能异常的蛋白质的特例是囊性纤维化跨膜转运调节物(CFTR)基因的错义突变变体，其产生导致囊性纤维化的CFTR蛋白的功能紊乱蛋白变体。
大量疾病以缺失蛋白活性(或基本上消除蛋白活性，从而不产生正确的蛋白功能)为特征。所述蛋白质可以不存在，或基本上是无功能的。本发明提供了治疗受试者的上述病症或疾病的方法，所述方法通过引入或包含本文提供的修饰核酸的核酸或基于细胞的药剂，其中所述修饰核酸编码取代受试者靶细胞缺失的蛋白活性的蛋白质。功能异常的蛋白的特例是囊性纤维化跨膜转运调节物(CFTR)基因的无义突变变体，其产生导致囊性纤维化的CFTR蛋白的无功能蛋白变体。
因此，提供在细胞中存在有效量的CTFR多肽的条件下通过使受试者的细胞与修饰核酸接触而治疗哺乳动物受试者的囊性纤维化的方法，其中，所述修饰合适地包含编码功能性CFTR多肽的可翻译区。通常的靶细胞是上皮细胞(例如肺)，并且给药方式根据靶组织确定，例如，针对肺部递送，RNA分子被配制成通过吸入而给药。
另一个具体实施方式中，本发明提供用以治疗受试者高脂血的方法，所述方法通过向受试者的细胞群引入分拣蛋白(Sortilin，近来通过基因组研究表征的蛋白)从而改善受试者的高脂血，所述分拣蛋白是使用本文所述的方法通过编码分拣蛋白的修饰mRNA分子而产生的。SORT1基因编码称为分拣蛋白的反高尔基网(TGN)跨膜蛋白。遗传学研究表明，五分之一的个体具有单一核苷酸多态性，rs12740374，在SORT1基因的lp13基因座，使其偏向于拥有低水平的低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)。存在于约30％的人群中的次等位基因的每一个拷贝使LDL胆固醇改变8mg/dL；而存在于约5％的人群中的次等位基因的二个拷贝会降低LDL胆固醇16mg/dL。次等位基因的携带者还显示出40％的降低的心肌梗死风险。小鼠体内功能性研究描述了在小鼠肝脏组织中过表达SORT1导致LDL-胆固醇水平显著降低，降低80％之多，而沉默SORT1则提高LDL胆固醇接近200％(Musunuru K等，Fromnoncoding variant to phenotype via SORT1 at the lp13 cholesterol locus，Nature 2010；466:714-721)。
药物组合物
本发明提供了由修饰mRNA产生的蛋白质，并且本文所述方法生产的蛋白质能够用于药物组合物。药物组合物可任选地包含一个或多个额外的治疗活性物质。按照一些具体实施方式，提供了施用药物组合物的方法，所述药物组合物包含要递送到有需要的受试者中的一个或多个蛋白质。在一些具体实施方式中，药物组合物被施用于人。出于本发明的目，术语“活性成分”通常是指本文所述的蛋白质或含蛋白质的复合物。
尽管本文提供的药物组合物的描述主要指向适合施用于人的药物组合物，但本领域技术人员可以理解，所述组合物通常也适合于施用于所有种类的动物。改良适合于施用于人的药物组合物以使组合物适合施用于多种动物的方法是公知的，并且，兽药领域普通技术人员能仅仅通过常规的实验设计和/或实施这样的改良。计划给予药物组合物的受试者包括，但不限于人和/或其它灵长类；哺乳动物，包括商业相关的哺乳动物，例如牛、猪、马、绵羊、猫、狗、小鼠和/或大鼠；和/或鸟类，包括商业相关的鸟类，诸如鸡、鸭、鹅和/或火鸡。
本文所述药物组合物的配方可以通过制药领域任何已知或今后形成的方法配制。通常，这样的配制方法包括将活性成分混入赋形剂和/或一个或多个其他附加成分的步骤，以及随后(如果有需要和/或期望的话)将所述产品成型和/或包装成预期的单剂量或多剂量单元。
按照本发明的药物组合物可以作为单单位剂量和/或作为多个单单位剂量成批制备、包装和/或销售。如本文使用的，“单位剂量”是指包含预定量的活性成分的药物组合物的单份量。活性成分的量通常等于施用于受试者的活性成分用量和/或此剂量的便于使用的部分用量，例如，用量的二分之一或三分之一。
活性成分的相对量、药学上可接受的赋形剂和/或本发明的药物组合物中的任何额外成分将根据所治疗的受试者的特性、大小和/或条件以及更进一步根据组合物的给药途径而变化。作为示例，组合物可以包含0.1％到100％(w/w)的活性成分。
药物组合物可以配制成额外包含药学上可接受的赋形剂，如本文所用的，所述药学上可接受的赋形剂可以包括任意和全部溶剂、分散剂、稀释剂或其他液体介质、分散或悬浮辅剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等等，使其适合期望的特定剂型。Remington的The Science and Practice ofPharmacy,21st Edition,A.R.Gennaro(Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006；本文通过引证而全文引入)公开了多种用于配制药物组合物的赋形剂及已知的配制技术。目前除了与物质或其衍生物不兼容的任何常规赋形剂介质(例如通过产生任何不利的生物作用或者以有害的方式与药物组合物中的其他成分相互作用)外，其用途落入本发明的范围。
在一些具体实施方式中，药学上可接受的赋形剂的纯度至少是95％、至少是96％、至少是97％、至少是98％、至少是99％或100％。在一些具体实施方式中，赋形剂已被批准用于人类或供兽医使用。在一些具体实施方式中，赋形剂已经被美国食品药品管理局(United States Food and Drug Administration)批准。在一些具体实施方式中，赋形剂是药品级的。在一些具体实施方式中，赋形剂符合美国药典(UnitedStates Pharmacopoeia，USP)、欧盟药典(European Pharmacopoeia，EP)、英国药典(BritishPharmacopoeia)和/或国际药典(International Pharmacopoeia)标准。
用于药物组合物的制备的药学上可接受的赋形剂包括，但不限于，惰性稀释剂、分散剂和/或制粒剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。这些赋形剂可选择地包含于药物组合物中。按照配方师的判断，组合物中可以有赋形剂，诸如椰子油和栓蜡、着色剂、包被剂、甜味剂、调味剂和/或赋香剂。
示例性的稀释剂包括，但不限于，碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、乳糖磷酸钠、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、糖粉等等，和/或它们的组合。
示例性的制粒剂和/或分散剂包括但不限于，土豆淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羟基乙酸淀粉钠、粘土、海藻酸、瓜尔胶、柑桔渣、琼脂、斑脱土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联多聚乙烯吡咯烷酮(交聚烯吡酮)、羧甲基淀粉钠(羟基乙酸淀粉钠)、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠(交联甲羧纤维素)、甲基纤维素、预糊化淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、非水溶淀粉、羟甲基纤维素钙、硅酸镁铝(Veegum)、月桂基硫酸钠、季铵化合物等，和/或它们的组合。
示例性的表面活性剂和/或乳化剂包括，但不限于，天然乳化剂(例如，阿拉伯树胶、琼脂、海藻酸、海藻酸钠、黄芪胶、软骨酸、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、卵黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、胶质粘土(例如，斑脱土[硅酸铝]和[硅酸镁铝])、长链氨基酸衍生物、高分子量醇(例如，十八烷醇、十六烷醇、油醇、乙酸甘油单硬脂酸酯、乙二醇双硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯和丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如，聚亚甲基羧酸、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物、羧基乙烯基聚合物)、角叉胶、纤维素衍生物(例如，羧甲基纤维素钠、粉末状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、山梨糖醇酐脂肪酸酯(例如，聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯[20]、聚氧乙烯山梨糖醇[60]、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸[80]、山梨糖醇酐单棕榈酸酯[40]、山梨糖醇酐单硬脂酸酯[60]、山梨糖醇酐三硬脂酸酯[65]、甘油单油酸酯、山梨糖醇酐单油酸酯[80]、聚氧乙烯酯(例如，聚氧乙烯单硬脂酸酯[45]、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙氧基蓖麻油、聚氧乙烯硬脂酸酯和)、脂肪酸糖酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如，)、聚氧乙烯醚(例如，聚氧乙烯月桂醚[30])、聚乙烯吡咯烷酮、二乙二醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、硫酸月桂酸纳、F 68、188、西曲溴铵、氯化十六烷基吡啶、苯扎氯铵、琥珀辛酯钠等，和/或它们的组合。
示例性的粘合剂包括，但不限于，淀粉(例如，玉米淀粉和淀粉糊)、凝胶、糖(例如，蔗糖、葡萄糖、右旋葡萄糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)、天然和合成的树胶(例如，阿拉伯树胶、海藻酸钠、爱尔兰藓提取物、潘瓦尔胶(panwar gum)、加特胶(ghatti gum)、isapol husk胶、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、醋酸纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸镁铝()和落叶松阿拉伯半乳聚糖)、海藻酸酯、聚环氧乙烷、聚乙二醇、无机钙盐、硅酸、聚甲基丙烯酸酯、蜡、水、醇等等，以及它们的组合。
示例性的防腐剂可以包括，但不限于，抗氧化剂、螯合剂、抗菌性防腐剂、抗真菌性防腐剂、醇类防腐剂、酸类防腐剂和/或其他防腐剂。示例性的抗氧化剂包括，但不限于，生育酚、抗坏血酸、VC棕榈酸酯(acorbyl palmitate)、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、硫代甘油、焦亚硫酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和/或亚硫酸钠。示例性的螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)、一水合柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸二钾、依地酸、延胡酸、苹果酸、磷酸、依地酸钠、酒石酸和/或依地酸三钠。示例性的抗菌性防腐剂包括，但不限于，苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝醇、西曲溴銨、氯化十六烷基吡啶、氯己定、氯丁醇、氯化甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、合克替啶、咪唑烷基脲、苯酚、苯氧乙醇、苯基乙醇、硝酸苯汞、丙二醇和/或.硫柳汞。示例性的抗真菌性防腐剂包括，但不限于，对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、水杨酸、苯甲酸钾、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠和/或山梨酸。示例性的醇类防腐剂包括，但不限于，乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚类化合物、双酚、氯代丁醇、羟基苯甲酸酯和/或苯乙醇。示例性的酸类防腐剂包括，但不限于，维生素A、维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、柠檬酸、乙酸、脱氢乙酸、抗坏血酸、山梨酸和/或植酸。其他防腐剂包括，但不限于，生育酚、生育酚乙酯、deteroxime mesylate、西曲溴铵、丁基化羟基茴香醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺、十二烷基硫酸钠(SLS)、月桂基乙醚硫酸钠(SLES)、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、焦亚硫酸钾、Glydant 对羟基苯甲酸甲酯、115、II、NeoloneTM、KathonTM和/或
示例性的缓冲剂包括，但不限于，柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、D-葡糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酸、乙酰丙酸钙、戊酸、磷酸氢二钙、磷酸、磷酸钙、磷酸氢钙、醋酸钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、钾混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾混合物、醋酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠混合物、三羟甲基氨基甲烷、氢氧化镁、氢氧化铝、海藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、乙醇等，和/或它们的组合。
示例性的润滑剂包括，但不限于，硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、二氧化硅、滑石、麦芽、甘油二十二烷酸酯、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、十二烷基硫酸镁、十二烷基硫酸钠等等，以及它们的组合。
示例性的油类包括，但不限于，扁桃、杏仁、鳄梨、巴巴苏、佛手柑、黑加仑籽、琉璃苣、杜松、春黄菊、菜籽、香菜、巴西棕榈、蓖麻、肉桂、可可油、椰子、鱼肝、咖啡、玉米、棉籽、鸸鹋、桉树、月见草、鱼、亚麻籽、香叶醇、葫芦、葡萄籽、榛子、牛膝草、豆蔻酸异丙酯、荷荷巴、奇异果、醒目薰衣草(lavandin)、薰衣草(lavender)、柠檬、山鸡椒、澳洲坚果、锦葵、芒果籽、白绒花籽、水貂、肉豆蔻、橄榄、柑桔、罗非鱼(orange roughy)、棕榈、棕榈仁、桃仁、花生、罂粟籽、南瓜子、油菜籽、米糠、迷迭香、红花、檀香、sasquana、香薄荷、沙棘、芝麻、黄油、硅酮、大豆、向日葵、茶树、蓟、椿、香根草、胡桃和麦胚芽油。示例性的油类包括，但不限于，硬脂酸丁酯、辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、环甲基硅油、癸二酸二乙酯、二甲基硅油360，豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二烷醇、油醇、硅酮油和/或它们的组合。
用于口服或肠胃外给药的液体剂型包括，但不限于，药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬液、糖浆和/或酏剂。除活性成分以外，液体剂型可以包括通常用于本领域的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别地，棉籽、落花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯和它们的组合。除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和/或香香剂。在胃肠外给药的某些具体实施方式中，组合物可以与增溶剂，例如醇类、油类、改性油类、二元醇、聚山梨醇酯、环式糊精、多聚物和/或它们的组合混合。
注射剂，例如无菌注射水性或油性悬浮液，可以依据已知技术利用合适的分散剂、润湿剂和或悬浮剂配制。无菌注射剂可以是无毒的胃肠道外可接受的稀释剂和/或溶剂中的无菌注射溶液、悬浮液和/或乳剂，例如，1,3-丁二醇溶液。可使用的可接受媒介和/溶剂是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。通常可使用无菌的非挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于这个目的，可以使用任何温和的非挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸(例如油酸)可用于注射制剂。
注射组合物可以例如通过细菌阻留性滤器过滤和/或通过引入灭菌剂而除菌，所述灭菌剂是无菌固体组合物的形式，并且可以在使用前溶解于或分散于无菌水或其他无菌注射介质中。
为了延长活性成分的作用，常常希望延缓皮下注射或肌肉内注射的活性成分的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬液而实现。药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率可依赖于其晶体大小和结晶形式。或者，可以通过将药物溶解或悬浮于油性媒介中而实现胃肠道外施用药物的延缓稀释。通过在生物可降解多聚物(例如聚乳酸聚乙醇酸交酯)中形成药物的微囊基质，可以制备药效持久的可注射组合物。根据药物和多聚物的比例和所使用的特定多聚物的性质，可以控制药物释放速率。其他生物可降解多聚物的实例包括多聚原酸酯和聚酸酐。可以通过将药物包裹入和身体组织兼容的脂质体或是微乳液而配制或制备药效持久的可注射组合物。
用于直肠或阴道给药的组合物一般是栓剂，其可以通过将组合物与适宜的非刺激性赋形剂(例如可可油、聚乙二醇或栓蜡)混合配置而成，所述赋形剂在室温下是固体，但在体温下是液态，从而在直肠或阴道径中是融化状态并释放活性成分。
用于口服给药的固态剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和粒剂。在所述固态剂型中，活性物质与至少一个惰性的药学上可接受的赋形剂(例如柠檬酸钠或磷酸氢二钙)和/或填料或增量剂(例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)，粘合剂(例如，羟甲基纤维素、海藻酸盐、凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶)，保湿剂(例如甘油)，崩解剂(例如，琼脂、碳酸钙、土豆或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠)，溶解延迟剂(例如，石蜡)，吸收促进剂(例如，四铵化合物)，润湿剂(例如，十六醇和甘油单硬脂酸酯)，吸附剂(例如，高岭土、班脱土)和润滑剂(例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)和它们的组合混合。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型可以包含缓冲剂。
可以采用相似类型的固体组合物作为软和硬填料凝胶胶囊中的填料，所述胶囊使用了诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。可以用包衣或包壳(例如肠衣或制药领域已知的其他包衣)配制固体剂型的片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和粒剂。所述固体剂型可任选包含乳浊剂，并且可以是任选以延迟方式仅向或优选向肠道的特定部分释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的示例包括多聚物和蜡。可以采用相似类型的固体组合物作为软和硬填料凝胶胶囊中的填料，所述胶囊使用了诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂。
用于外用和/或透皮施用组合物的剂型可以包括膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾、吸入剂和/或贴剂。通常地，当需要时，活性成分可以在无菌条件下与药学上可接受的赋形剂和/或任何需要的防腐剂和/或缓冲剂混合。此外，本发明还涉及透皮贴剂的使用，所述透皮贴剂通常具有向身体提供化合物的缓释的额外优势。此类剂型可以通过，例如将化合物溶解和/或分散在正确的介质中而制备。可选地或者另外，可以通过提供速度控制膜和/或将化合物分散到多聚物基质和/或凝胶中对速度进行控制。
适合在递送本文所述的皮内药物组合物中使用的装置包括短针装置，例如在US4,886,499、US5,190,521、US5,328,483、US5,527,288、US4,270,537、US5,015,235、US5,141,496和US5,417,662专利中描述的那些。可以通过限制针有效刺入皮肤的长度的装置，例如在国际公开号为WO99/34850中描述的装置或及其功能等效物，施用皮下组合物。合适的装置有将液体组合物经液体喷射注射器和/或经刺入角质层并产生到达真皮的喷射流的针递送至真皮的喷射注射装置。喷射注射装置描述在，例如US5,480,381、US5,599,302、US5,334,144、US5,993,412、US5,649,912、US5,569,189、US5,704,911、US5,383,851、US5,893,397、US5,466,220、US5,339,163、US5,312,335、US5,503,627、US5,064,413、US5,520,639、US4,596,556、US4,790,824、US4,941,880、US4,940,460美国专利和国际公开号为WO97/37705和WO97/13535中。合适的装置有使用压缩气体以促进粉末形式的疫苗穿过皮肤表层到达真皮的冲击性粉末/颗粒递送装置。可选择地或者另外，可以将常规注射器用在皮内给药的经典曼托方法中。
配制用于外用给药的组合物包括，但不限于，液体和/或半液体制剂，例如擦剂、洗剂、水包油和/或油包水乳剂，例如霜剂、膏剂和/或糊剂，和/或溶液和/或悬液。例如，可以配制包含大约1％到大约10％(w/w)活性成分的外用组合物，尽管活性成分的浓度可能高至活性成分在该溶剂中的溶解度界限。配制的外用组合物可以进一步包含本文所述的一个或多个附加的活性成分。
可以配制、制备、包装和/或销售通过口腔进行肺部给药的药物组合物。可以将这样的组合物配制成包含含有活性成分并且直径在约0.5nm到约7nm之间或在约1nm到约6nm之间的干颗粒。所述组合物便利地为干粉形式，用于利用包括干粉储器的装置(推进剂的气流可以指向所述干粉储器从而分散干粉)给药或利用自推进溶剂/粉末分散容器(例如包含溶解和/或悬浮在密封容器中的低沸点推进剂中的活性成分的装置)给药。所述粉剂包括颗粒，其中以重量计至少98％的颗粒的直径大于0.5nm且以数量计至少95％的颗粒的直径小于7nm。或者，以重量计至少95％的颗粒的直径大于1nm且以数量计至少90％的颗粒的直径小于6nm。干粉组合物可以包括固体细粉稀释剂(例如糖)且便利地以单位剂量形式提供。
低沸点推进剂通常包括在大气压下沸点低于65℉的液体推进剂。通常，推进剂可以占组合物的大约50％到大约99.9％(w/w)，活性成分可可占组合物的大约0.1％到大约20％(w/w)。推进剂可以进一步包括额外的成分，例如液态非离子和/或固态阴离子表面活性剂和/或固态稀释剂(其颗粒大小可以与包含活性成分的颗粒具有同等级)。
配制的用于肺部给药的药物组合物可以提供溶液和/或悬液的微滴形式的活性成分。所述组合物可以作为包含活性成分、任选无菌的水溶液和/或稀释醇溶液和/或悬液形式配制、制备、包装和/或出售，并且可以利用任何喷雾和/或雾化装置方便地给药。所述组合物还可以进一步包含一个或多个额外的成分所述成分包括，但不限于，芳香剂、例如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂和/或防腐剂例如甲羟基苯甲酸盐(酯)。通过这种给药途径提供的微滴的平均直径可以在大约0.1nm到大约200nm之间。
本文所述用于肺部给药的配方也用于药物组合物的鼻内给药。另一个配制用于鼻内给药的组合物是包含活性成分且平均颗粒为0.2μm到500μm的粗粉。所述组合物经配制用于以吸鼻烟的方式(即，通过鼻道从靠近鼻子手持的粉末容器快速吸入)给药。
配制用于鼻腔给药方式的组合物可以，例如包含大约少至0.1％(w/w)到多至100％(w/w)的活性成分，并且可以包含本文所述的一个或多个其他成分。可以配制、制备、包装和/或销售药物组合物，用于口腔给药。例如，所述组合物可以使用常规方法配制成片剂和/或锭剂的形式，且可以含有例如0.1％到20％(w/w)的活性成分，包含口服可溶的和/或可降解组合物的主要部分(balance)和任选的本文所述的一个或多个额外成分。或者，配制的用于口腔给药的组合物可以包括含有活性成分的粉末化和/或烟雾化和/或喷雾化的溶液和/或悬液。在被分散时，所述粉末化、烟雾化和/或喷雾化的组合物的平均颗粒和/或微滴大小可以在大约0.1nm到大约200nm的范围内，并且可以进一步包含一个或多个本文所述的额外成分。
可以配制、制备、包装和/或销售药物组合物，用于眼部给药。例如，所述组合物可以配制成滴眼液的形式，所述滴眼液含有例如0.1/1v.0％(w/w)活性成分的水性或油性液体赋形剂的溶液和/或悬液。所述滴液可以进一步包含缓冲剂、盐和/或本文所述的一个或多个其他任意额外成分。其他可使用的眼部给药组合物包括含有微晶形式的活性成分和/或在脂质体制剂中的活性成分的组合物。滴耳液和/或滴眼液被认为是落入本发明的范围。
药物制剂的配制和/或制备的常规思路可见于，例如Remington：The Science andPractice of Pharmacy 21st出版社、Lippincott Williams&Wilkins，2005年(本文通过参考而全文引入)中。
给药
本发明提供包括向有需要的受试者施用通过本文所述方法生产的蛋白或组合物的方法。可以使用可有效预防、治疗、诊断疾病或病况和/或病症(例如，与工作记忆缺失(working memory deficits)有关的疾病、病况和/或病症)或使其成像的任意数量和任意给药方法向受试者施用蛋白或复合物，或其药物、成像、诊断或预防组合物。所需准确用量根据受试者的物种、年龄和整体情况、疾病的严重程度、特定组合物及其给药方式、活性方式等等而随受试者变化。一般将按照本发明的组合物配制成剂量单位形式以便于给药和统一用量。尽管如此，可以理解的是，本发明组合物的日用总量可以由主治医在可靠的医学判断范围内决定。特定病人的特定治疗效果、预防效果或合适的成像剂量水平随多种因素变化，所述因素包括待治疗的病症和病症的严重程度；使用的特定化合物的活性；使用的特定组合物；病人的年龄、体重、整体健康状况、性别和饮食情况；给药的时间；给药的方式，和使用的特定化合物的排泄率；治疗的时间长度；与使用的特定化合物联合或同时使用的药物；以及医学领域已知的类似因素。
递送的蛋白质和/或其药物、预防、诊断或成像组合物可以施用于动物，例如哺乳动物(例如，人类、驯化动物、猫、狗、小鼠、大鼠及其他)。在一些具体实施方式中，其药物、预防、诊断或成像组合物施用于人。
根据本发明的待递送蛋白质和/或其药物、预防、诊断或成像组合物可以通过任何方式给药。在一些具体实施方式中，蛋白质和/或其药物、预防、诊断或成像组合物可以通过一种或多种途径给药，所述途径包括口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、皮下、心室内、透皮、皮内、直肠、阴道内、腹膜内、外用(例如，通过粉剂、油膏、霜剂、凝胶、洗液和/或滴剂)、粘膜、鼻、口腔、肠、玻璃体、瘤内、舌下；通过气管滴注法、支气管滴注法和/或吸入法；作为空腔喷雾，鼻喷雾，和/或气溶胶，和/或通过门静脉导管。在一些具体实施方式中，蛋白质或复合物，和/或其药物、预防、诊断或成像组合物可以通过系全身静脉注射给药。特定具体实施方式中，蛋白质或复合物，和/或其药物、预防、诊断或成像化合物可以静脉内和/或口服给药。特定具体实施方式中，蛋白质或复合物，和/或其药物、预防、诊断或成像组合物可以使蛋白质或复合物穿过血脑屏障、血管屏障或其他上皮屏障的方式给药。
不论如何，本发明包含通过任何考虑到在药物递送科学可能的进步的合适方式递送蛋白质或复合物，和/或其药物、预防、诊断或成像化合物。
通常，给药的最适方式依赖于多种因素，包括蛋白质或含有与至少一个待递送的物质相结合的蛋白质的复合物的特性(例如在胃肠道、血液等环境中的稳定性)，病人的状态(例如，病人是否能忍受特定的给药方式)。本发明包括通过考虑到药物递送科学可能的进步的合适方式递送所述药物、预防、诊断或成像组合物。
某些具体实施方式中，按照本发明的组合物可以以每天足以递送以受试者体重计大约0.0001mg/kg到大约100mg/kg，0.01mg/kg到大约50mg/kg，大约0.1mg/kg到大约40mg/kg，大约0.5mg/kg到大约30mg/kg，大约0.01mg/kg到大约10mg/kg，大约0.1mg/kg到大约10mg/kg或大约1mg/kg到大约25mg/kg，每天一次或多次，以达到期待的治疗、诊断、预防或成像效果的剂量水平给药。可以每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天、每隔两天、每周、每两周、每三周或每四周递送期待的剂量。某些具体实施方式中，利用多次给药而递送期待的剂量(例如，二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四或更多次给药)。
蛋白质或复合物可以与一个或多个其他治疗、预防、诊断或成像药剂联合使用。所述“联合”，并非意味着药剂必须同时给药和/或配制成用于一起递送，尽管这些递送方法也落在本发明的范围内。组合物的给药可以与一个或多个其他期待的治疗或医学过程同时、在先或随后发生。通常，按照药物的确定剂量和/或时间表施用每种药剂。在一些具体实施方式中，本发明包括与改善其生物利用度、减少和/或调节其代谢、抑制其排出、和/或调解其体内分布的药剂联合递送所述药物、预防、诊断或成像组合物。特定的具体实施方式中，提供包含一个或多个修饰核酸与诱导抗体依赖性细胞毒性的蛋白质的联合治疗，其中，所述修饰核酸包含可翻译区，所述可翻译区编码促进哺乳动物受试者免疫性的蛋白质。例如，提供包括一个或多个编码曲妥珠单抗的核酸和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的治疗。这种联合治疗对于针对曲妥珠单抗产生诱导抗性的Her2+胸腺癌患者特别有用(参见，例如，Albrecht，Immunotherapy.2(6):795-8(2010))。
可以进一步理解，联合使用的治疗、预防、诊断或成像活性药物可以以单个组合给药或以不同组合分别给药。通常，预期用于联合给药的药剂以不超过其单独使用时的剂量水平的水平使用。在一些具体实施方式中，用于联合给药的水平低于其单独给药时的剂量水平。
自联合方案中采用的治疗(疗法或过程)的特定组合需要考虑所需治疗和/或过程的兼容性和要达到的预期治疗效果。还应理解，所采用的治疗对于相同病症可以达到预期的效果(例如，按照本发明的用于治疗癌症的组合物可以与化疗药物同时给药)，或者其可达到不同的效果(例如，任何不良效果的控制)。
试剂盒
本发明提供多种用于方便地和/或有效地实现本发明方法的试剂盒。例如，本文所述的是用于利用本文所述修饰核酸生产蛋白质的试剂盒。一般，试剂盒包含足够量和/或大量组分以允许使用者完成受试者的重复治疗和/或完成多次实验。
定义
治疗药物(therapeutic agent)：术语“治疗药物”是指当施用给受试者时，具有治疗、诊断和/或预防效果和/或得到预期的生物学和/或药学效果的任何药物。
动物：如同本文所用，术语“动物”是指动物中的任何一种。在某些具体实施方式中，“动物”是指处于任何发育阶段的人类。在某些具体实施方式中，“动物”是指处于任何发育阶段的非人动物。某些的具体实施方式中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、绵羊、牛、灵长类或猪)。在一些具体实施方式中，动物包括，但不限于，哺乳动物、鸟类、爬虫类、两栖类、鱼类和虫类。在一些具体实施方式中，动物是转基因动物，基因工程动物或克隆动物。
近似：如同本文所用，术语“近似”或“大约”，当用于一个或多个目标值时，是指近似于所述参照值的值。某些具体实施方式中，除非明确指出或根据上下文显而易见(除了所述数超过100％的可能值)，术语“近似”或“大约”是指在任一方向上(大于或少于)落入所示参考值的25％、20％、29％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少的数值范围。
结合：如同本文所用，当用于两个或更多物质时，术语“结合”、“共轭”、“相连”、“螯合”和“连接”表示物质直接或者通过作为连接物的一个或多个其他物质彼此物理结合或连接，以形成足够稳定的结构，从而使物质在使用该结构的条件(例如生理条件)下保持物理结合。
生物学活性：如同本文所用，短语“生物学活性”是指任意物质在生物系统和/或生物体中有活性的性质。例如，当向生物体给药时，对所述生物体有生物学作用的物质被认为是有生物学活性的。特定具体实施方式中，当核酸是具有生物学活性的时，具有整条核酸的至少一个生物学活性的核酸部分一般被称作“生物学活性”部分。
保守：如同本文所用，术语“保守的”是指多核苷酸序列或氨基酸序列各自的核苷酸或氨基酸残基，所述残基在所比较的两条或更多相关序列的相同位点不发生改变。相对保守的核苷酸或氨基酸是在较序列其他位置出现的核苷酸或氨基酸更相关的序列中保守的核苷酸或氨基酸。在一些具体实施方式中，如果两条或更多序列彼此具有100％同一性，则被称作“完全保守”。在一些具体实施方式中，如果两条或更多序列彼此具有至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性，则被称作“高度保守”。在一些具体实施方式中，如果两条或更多序列彼此具有大约70％同一性、大约80％同一性、大约90％同一性、大约95％同一性、大约98％同一性或大约99％同一性，则被称为“高度保守”。在一些具体实施方式中，如果两条或更多序列彼此之间具有至少30％同一性、至少40％同一性、至少50％同一性、至少60％同一性、至少70％同一性、至少80％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性则被称为“保守”。在一些具体实施方式中，如果两条或更多序列彼此之间具有大约30％同一性、大约40％同一性、大约50％同一性、大约60％同一性、大约70％同一性、大约80％同一性、大约90％同一性、大约95％同一性、大约98％同一性或大约99％同一性则被称作“保守”。
表达：如同本文所用，核酸序列的“表达”是指一个或多个以下事件：(1)从DNA序列产生RNA模板(例如，通过转录)；(2)加工RNA转录本(例如，剪接、编辑、5’加帽和/或3’末端处理)；(3)将RNA翻译成多肽或蛋白；以及(4)多肽或蛋白的翻译后修饰。
离体：如同本文所用，“离体”是指事件在生物体外发生，例如，在生物体外的人工环境中的组织内或组织上，例如，对天然条件具有最小改变。
有功能的：如同本文所用，“有功能的”生物分子是以显示以之表征的性质和/或活性的形式的生物分子。
同源：如同本文所用，术语“同源”是指聚合分子之间(例如，核酸分子(例如，DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间)的总的关联整体相关性。在一些具体实施方式中，如果聚合分子的序列有至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同一性，则认为其彼此“同源”。在一些具体实施方式中，如果聚合分子的序列有至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％相似，则认为其彼此“同源”。术语“同源”必然涉及至少两条序列(核苷酸序列或氨基酸序列)之间的比较。按照本发明，如果其编码的多肽中至少约20个氨基酸的至少一段有至少约50％同一性、至少约60％同一性、至少约70％同一性、至少约80％同一性或至少约90％同一性，则认为两条核苷酸同源。在一些具体实施方式中，通过编码至少4-5个独特的氨基酸的片段的能力鉴定同源核苷酸序列。对于待考虑同一性的核苷酸序列，必须考虑这些氨基酸彼此相对的同一性和临近空间(approximate spacing)两者。对于长度少于60个核苷酸的核苷酸序列，通过编码至少4-5个独特氨基酸的片段的能力确定同源性。按照本发明，如果蛋白质的至少约20个氨基酸至少一段之间具有至少约50％同一性、至少约60％同一性、至少约70％同一性、至少约80％同一性或至少约90％同一性，则认为这两条蛋白序列是同源的。
同一性：如同本文所用，术语“同一性”是指聚合分子(例如，核酸分子(例如，DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间)的整体相关性。例如，计算两条核酸序列的同一性百分数可以通过，例如出于最佳比较目的而对齐所述两条序列(例如，出于最佳对齐目的在第一和第二核酸序列之一或两条中都引入间隔，为比较的目的而可以忽视不相同的序列)而进行。某些具体实施方式中，出于比较目的对齐的序列的长度是参照序列长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或100％。随后比较相应核苷酸位置的核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列相应位点的核苷酸相同的核苷酸所占据时，则该位置的分子是相同的。两条序列之间的同一性百分数是考虑了出于两条序列最佳对齐的目的而需要引入的间隔的数量和每个间隔的长度后，序列间共有的相同位点的数量的函数。两条序列间的序列比较和同一性百分数的计算可以利用数学算法实现。例如，两条序列间的同一性百分数可以利用如Computational MolecularBiology，Lesk,A.M.编,牛津大学印制，纽约，1988年；Biocomputing:Informatics andGenome Projects，Smith,D.W.编，Academic Press，纽约，1993年；Sequence Analysisin Molecular Biology，von Heinje,G，Academic Press，1987年；Computer Analysis ofSequence Data，部分I，Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编,Humana Press，新泽西，1994年；以及Sequence Analysis Primer，Gribskov,M.和Devereux,J.编，M Stockton Press，纽约，1991年描述的方法测定，以上全部在此通过引证而全文引入。例如，两条核苷酸序列间的同一性百分数可以利用已被嵌入使用PAM120加权余数表(间隔长度罚分为12，间隔罚分为4)的ALIGN程序(2.0版)的Meyers和Miller算法(CABIOS，1989年，4:11-17)测定。或者，两条核苷酸序列之间的同一性百分数也可以通过利用NWS gapdna.CMP矩阵的GCG软件包中的GAP程序测定。通常用于测定序列间同一性百分数的方法包括，但不限于在Carillo,H.和Lipman,D.,SIAM J Applied Math.，48:1073(1988年)(在此通过引证而全文引入)中公开的那些。用于测定同一性的技术被编码成公众可获得的计算机程序。用于测定两条序列间同源性的示例性计算机软件包括，但不限于，GCG程序包,Devereux,J.等，Nucleic Acids Research,12(1)，387(1984年))，BLASTP、BLASTN和FASTA Atschul,S.F.等,J.Molec.Biol.,215,403(1990年))。
抑制基因表达：如同本文所用，短语“抑制基因表达”表示导致基因表达产物数量的减少。表达产物可以是自基因转录的RNA(例如，mRNA)或自基因转录的mRNA所翻译的多肽。mRNA水平的降低一般导致由此翻译的多肽水平的降低。可以通过用于测定mRNA或蛋白质的标准技术测定表达水平。
体外：如同本文所用，术语“体外”是指发生在人工环境(例如，试管或反应器、细胞培养物、皮氏培养皿等)的事件，而非在生物体内(例如，动物、植物或微生物)。
体内：如同本文所用，术语“体内”是指发生在生物体内(例如，动物、植物或微生物)的事件。
分离的：如同本文所用，术语“分离的”是指物质或实体已经(1)从在产生之初与之相关的至少一些成分中分离(不论天然环境或试验环境)，和/或(2)人工进行生产、制备和/或制造。分离的物质和/或分子可以自产生之初与之相关的至少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或更多的其他成分中分离。在一些具体实施方式中，分离的物质有大于约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或超过99％的纯度。如同本文所用，如果基本上不含其他化合物，则物质是“纯”的。
预防：如同本文所用，术语“预防”是指部分地或彻底地延缓特定疾病、病况和/或病症的发作；部分地或彻底地延缓特定疾病、病况和/或症状的一个或多个症状、特征或临床表现的发作(例如，在可鉴别的疾病、病况和/或病症之前)；部分地或彻底地延缓从潜在疾病、病况和/或症状发展到活跃的疾病、病况和/或病症；和/或减少发展成为与特定疾病、病况和/或症状相关的病理的风险。
相似性：如同本文所用，术语“相似性”是指多聚物分子之间的整体相关性，例如，核酸分子(例如，DNA分子和/或RNA分子)之间和/或多肽分子之间。如本领域所理解的，除了计算相似性百分数考虑保守取代外，可以通过与计算同一性百分数相同的方式计算多聚物分子彼此之间的相似性百分数。
受试者：如同本文所用，术语“受试者”或“病人或患者”是指例如，出于实验、诊断、预防和/或治疗目的的，可以施用按照本发明的组合物的任意的生物体。典型的受试者包括动物(例如，哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类和人)和/或植物。
基本上：如同本文所用，术语“基本上”是指目标特征或性质表现整个或近乎整个程度(extend或degree)的定性情况。生物领域普通技术人员理解，生物和化学现象几乎不会，如果有的话，达到完成和/或进行到完全或者达到或避免绝对结果。因此术语“基本上”本文用于表示许多生物和化学现象内在具有的潜在缺乏的完全性(completeness)。
遭受或患有：“患有”疾病、病况和/或病症的个体被诊断为患有或表现出疾病、病况和/或病症的一个或多个症状。
易感或易患：对疾病、病况和/或病症“易感”的个体未被诊断患有和/或可能没有显示出疾病、病况和/或病症的症状。在一些具体实施方式中，对于疾病、病况和/或病症(例如，癌症)易感的个体可能由以下一个或多个进行表征：(1)与疾病、病况和/或病症形成有关的基因突变；(2)与疾病、病况和/或病症有关的遗传多态性；(3)与疾病、病况和/或病症有关的蛋白质和/或核酸活性和/或表达的提高和/或降低；(4)与疾病、病况和/或病症形成有关的习惯和/或生活方式；(5)疾病、病况和/或病症的家族史；以及(6)接触和/或感染了与疾病、病况和/或病症有关的微生物。在一些具体实施方式中，对于疾病、病况和/或病症易感的个体会罹患疾病、病况和/或病症。在一些具体实施方式中，对于疾病、病况和/或病症易感的个体不会罹患疾病、病况和/或病症。
治疗有效量：如同本文所用，术语“治疗有效量”表示当施用于患有或易感于疾病、病况和/或病症的受试者时，待递送药剂(例如，核酸、药物、治疗药剂、诊断药剂、预防药剂等等)的量足以治疗、改善疾病、病况和/或病症的症状，诊断、预防和/或延缓其发作。
转录因子：如同本文所用，术语“转录因子”是指调节(例如，通过激活或抑制转录)DNA转录成RNA的DNA结合蛋白。某些转录因子单独影响转录调节，而其他则于其他的蛋白质共同起作用。某些转录因子在一定的条件下既可以激活转录也可以抑制转录。通常，转录因子结合特定靶序列或与靶基因的调节区中的特定共有序列高度相似的序列。转录因子可以单独调节靶基因的转录或与其他分子构成复合物而调节。
治疗：如同本文所用，术语“治疗”是指部分地或彻底地缓解、改善、改进、解除特定疾病、病况和/或症病症，延缓其发作，抑制其发展，降低其严重度，和/或减少其一个或多个症状、特征、或临床表现的发生。例如，“治疗”癌症可以是指抑制肿瘤的存活、生长和/或扩散。治疗可以是施用于没有出现疾病、病况和/或病症的征兆(例如，在可鉴别的疾病、病况和/或病症之前)的受试者，和/或出于降低发展成与疾病、病况和/或病症相关的病理的风险的目的，施用于仅出现疾病、病况和/或病症早期征兆的受试者。在一些具体实施方式中，治疗包括向有需要的受试者递送与治疗活性核酸有关的蛋白质。
非修饰的：如同本文所用，“非修饰的”是指修饰前的核酸。
实施例
实施例1：合成修饰的mRNA
本发明的修饰的mRNA(modRNA)是利用标准实验室方法和材料而制备的。感兴趣的基因的开放阅读框(ORF)两侧为包含强Kozak翻译起始信号的5’非翻译区(UTR)和α-球蛋白3’UTR，所述α-球蛋白3’UTR以用作polyA加尾模板的oligo(dT)序列结尾。用假尿苷(ψ)和5-甲基-胞苷(5meC)修饰modRNA，以减少细胞天然免疫反应的。Kariko K等，Immunity 23:165-75(2005年)，Kariko K等，Mol Ther16:1833-40(2008年)，Anderson BR等，NAR(2010年)。
克隆、基因合成和载体测序由DNA2.0 Inc(Menlo Park，CA)完成。载体序列和插入序列如SEQ ID NOs:5-8所示。利用XbaI或HindⅢ对ORF进行限制性酶切消化并且利用加尾-PCR用于cDNA合成。该加尾-PCR的cDNA产物作为修饰的mRNA合成反应的模板使用，所述合成反应利用修饰的核苷混合物(修饰的U/C由TriLink Biotech，San Diego，CA制造，未修饰的A/G自Epicenter Biotechnologies，Madison，WI购买)和CellScript MegaScriptTM(Epicenter Biotechnologies，Madison，WI)完全mRNA合成试剂盒，其中每种核苷的浓度为25mM。该体外转录反应在37℃下进行3-4小时。PCR反应使用HiFi PCR 2X Master MixTM(Kapa Biosystems，Woburn，MA)。该体外转录的mRNA产物进行琼脂糖凝胶电泳并显像。利用Ambion/AppliedBiosystems(Austin,TX)MEGAClear RNATM纯化试剂盒纯化mRNA。利用PureLinkTMPCR纯化试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)或PCR cleanup试剂盒(Qiagen,Valencia,CA)进行PCR。产物在NanodropTMUV Absorbance(ThermoFisher，Waltham，MA)上定量。产物的质量、紫外吸收性质和可视化在1.2％琼脂糖凝胶上进行。产物在TE缓冲液中重悬。
利用酵母Poly(A)聚合酶(Affymetrix，Santa Clara，CA)对带有腺苷类似物的修饰mRNA进行poly(A)加尾。利用HiFi PCR 2X Master MixTM(Kapa Biosystems，Woburn，MA)进行PCR反应。利用重组痘病毒加帽酶(New England BioLabs，Ipswich，MA)和重组2’-氧-甲基转移酶(Epicenter Biotechnologies，Madison，WI)对修饰RNA进行转录后加帽，以产生5’-鸟苷Cap 1结构。Cap 2结构和Cap 3结构可以利用额外的2’-o-甲基转移酶产生。体外转录的mRNA产物进行琼脂糖电泳并显像。修饰的RNA用Ambion/Applied Biosystems(Austin，TX)MEGAClear RNATM纯化试剂盒纯化。利用PureLinkTMPCR纯化试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)进行PCR。产物在NanodropTMUV Absorbance(ThermoFisher，Waltham，MA)上定量。产物的质量、紫外吸收性质和可视化在1.2％琼脂糖凝胶上进行。产物在TE缓冲液中重悬。
示例性的加帽结构可以在体外转录反应期间，按照厂家说明利用用以产生5’鸟苷帽子结构的以下化学RNA帽子类似物同时完成修饰RNA的5’加帽：3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')G；G(5')ppp(5')A；G(5')ppp(5')G；m7G(5')ppp(5')A；m7G(5')ppp(5')G(New England BioLabs，Ipswich，MA)。可以利用用以产生“Cap 0”结构(m7G(5')ppp(5')G)的痘病毒加帽酶在转录后完成修饰RNA的5’加帽(NewEngland BioLabs，Ipswich，MA)。可以利用痘病毒加帽酶和2’-氧-甲基转移酶产生Cap 1结构(m7G(5')ppp(5')G-2’-O-甲基)。可以通过2’-氧-甲基转移酶将5’端倒数第三个核苷酸2’-氧-甲基化从而自Cap 1结构产生Cap 2结构。可以通过2’-氧-甲基转移酶将5’-倒数第二个核苷酸2’-氧-甲基化从而自Cap 2结构产生Cap 3结构。酶优选获自于重组来源。
当转染哺乳动物细胞时，修饰的mRNA可在12-18小时之内保持稳定或保持稳定的时间大于18小时(例如，24、36、48、60、72小时或者高于72小时)。
实施例2：在模式生物反应器中表达作为治疗药物的人G-CSF的哺乳动物商业 生产细胞系的再生
人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)前体的核酸序列如SEQ ID NO：1所示：
agcttttggaccctcgtacagaagctaatacgactcactatagggaaataagagagaaaagaagagtaagaagaaatataagagccaccatggccggtcccgcgacccaaagccccatgaaacttatggccctgcagttgctgctttggcactcggccctctggacagtccaagaagcgactcctctcggacctgcctcatcgttgccgcagtcattccttttgaagtgtctggagcaggtgcgaaagattcagggcgatggagccgcactccaagagaagctctgcgcgacatacaaactttgccatcccgaggagctcgtactgctcgggcacagcttggggattccctgggctcctctctcgtcctgtccgtcgcaggctttgcagttggcagggtgcctttcccagctccactccggtttgttcttgtatcagggactgctgcaagcccttgagggaatctcgccagaattgggcccgacgctggacacgttgcagctcgacgtggcggatttcgcaacaaccatctggcagcagatggaggaactggggatggcacccgcgctgcagcccacgcagggggcaatgccggcctttgcgtccgcgtttcagcgcagggcgggtggagtcctcgtagcgagccaccttcaatcatttttggaagtctcgtaccgggtgctgagacatcttgcgcagccgtgaagcgctgccttctgcggggcttgccttctggccatgcccttcttctctcccttgcacctgtacctcttggtctttgaataaagcctgagtaggaaggcggccgctcgagcatgcatctagagggcccaattcgccctattcgaagtcg(SEQ ID NO：1 )
G-CSF mRNA的核酸序列如SEQ ID NO：2所示：
agcuuuuggacccucguacagaagcuaauacgacucacuauagggaaauaagagagaaaagaagaguaagaagaaauauaagagccaccauggccggucccgcgacccaaagccccaugaaacuuauggcccugcaguugcugcuuuggcacucggcccucuggacaguccaagaagcgacuccucucggaccugccucaucguugccgcagucauuccuuuugaagugucuggagcaggugcgaaagauucagggcgauggagccgcacuccaagagaagcucugcgcgacauacaaacuuugccaucccgaggagcucguacugcucgggcacagcuuggggauucccugggcuccucucucguccuguccgucgcaggcuuugcaguuggcagggugccuuucccagcuccacuccgguuuguucuuguaucagggacugcugcaagcccuugagggaaucucgccagaauugggcccgacgcuggacacguugcagcucgacguggcggauuucgcaacaaccaucuggcagcagauggaggaacuggggauggcacccgcgcugcagcccacgcagggggcaaugccggccuuugcguccgcguuucagcgcagggcggguggaguccucguagcgagccaccuucaaucauuuuuggaagucucguaccgggugcugagacaucuugcgcagccgugaagcgcugccuucugcggggcuugccuucuggccaugcccuucuucucucccuugcaccuguaccucuuggucuuugaauaaagccugaguaggaaggcggccgcucgagcaugcaucuagagggcccaauucgcccuauucgaagucg(SEQ ID NO：2)
示例性G-CSF修饰mRNA(modRNA)的核酸序列如SEQ ID NO：3所示：
ag5meCψψψψgga5meC5meC5meCψ5meCgψa5meCagaag5meCψaaψa5meCga5meCψ5meCa5meCψaψagggaaaψaagagagaaaagaagagψaagaagaaaψaψaagag5meC5meCa5meC5meCaψgg5meC5meCggψ5meC5meC5meCg5meCga5meC5meC5meCaaag5meC5meC5meC5meCaψgaaa5meCψψaψgg5meC5meC5meCψg5meCagψψg5meCψg5meCψψψgg5meCa5meCψ5meCgg5meC5meC5meCψ5meCψgga5meCagψ5meC5meCaagaag5meCga5meCψ5meC5meCψ5meCψ5meCgga5meC5meCψg5meC5meCψ5meCaψ5meCgψψg5meC5meCg5meCagψ5meCaψψ5meC5meCψψψψgaagψgψ5meCψggag5meCaggψg5meCgaaagaψψ5meCaggg5meCgaψggag5meC5meCg5meCa5meCψ5meC5meCaagagaag5meCψ5meCψg5meCg5meCga5meCaψa5meCaaa5meCψψψg5meC5meCaψ5meC5meC5meCgaggag5meCψ5meCgψa5meCψg5meCψ5meCggg5meCa5meCag5meCψψggggaψψ5meC5meC5meCψggg5meCψ5meC5meCψ5meCψ5meCψ5meCgψ5meC5meCψgψ5meC5meCgψ5meCg5meCagg5meCψψψg5meCagψψgg5meCagggψg5meC5meCψψψ5meC5meC5meCag5meCψ5meC5meCa5meCψ5meC5meCggψψψgψψ5meCψψgψaψ5meCaggga5meCψg5meCψg5meCaag5meC5meC5meCψψgagggaaψ5meCψ5meCg5meC5meCagaaψψggg5meC5meC5meCga5meCg5meCψgga5meCa5meCgψψg5meCag5meCψ5meCga5meCgψgg5meCggaψψψ5meCg5meCaa5meCaa5meC5meCaψ5meCψgg5meCag5meCagaψggaggaa5meCψggggaψgg5meCa5meC5meC5meCg5meCg5meCψg5meCag5meC5meC5meCa5meCg5meCaggggg5meCaaψg5meC5meCgg5meC5meCψψψg5meCgψ5meC5meCg5meCgψψψ5meCag5meCg5meCaggg5meCgggψggagψ5meC5meCψ5meCgψag5meCgag5meC5meCa5meC5meCψψ5meCaaψ5meCaψψψψψggaagψ5meCψ5meCgψa5meC5meCgggψg5meCψgaga5meCaψ5meCψψg5meCg5meCag5meC5meCgψgaag5meCg5meCψg5meC5meCψψ5meCψg5meCgggg5meCψψg5meC5meCψψ5meCψgg5meC5meCaψg5meC5meC5meCψψ5meCψψ5meCψ5meCψ5meC5meC5meCψψg5meCa5meC5meCψgψa5meC5meCψ5meCψψggψ5meCψψψgaaψaaag5meC5meCψgagψaggaagg5meCgg5meC5meCg5meCψ5meCgag5meCaψg5meCaψ5meCψagaggg5meC5meC5meCaaψψ5meCg5meC5meC5meCψaψψ5meCgaagψ5meCg(SEQ IDNO:3)
图1显示了获自转染有G-CSF的modRNA的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的酶联免疫试验(ELISA)。CHO细胞在补充了L-谷氨酰、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的CD CHO培养基中生长。在盛有7ml培养基的获自Corning的75cm2培养皿中用复合了购自Invitrogen的RNAiMax的24μg modRNA转染2×106个细胞。RNA:RNAiMAX复合体的制备：首先，将RNA在室温下与5×体积稀释的CD CHO培养基孵育10分钟；在第二个瓶中，将RNAiMAX试剂在室温下与10×体积稀释的CD CHO培养基孵育10分钟；随后将RNA瓶与RNAiMAX瓶混合并在室温下孵育20-30，然后以逐滴方式加入至细胞中。在转染后12和24小时测量培养基中分泌的huG-CSF浓度。将细胞悬液贮存在-20℃。按厂家说明使用购自Invitrogen的ELISA试剂盒测定自转染的人胚肾细胞中分泌的人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的量。这些数据显示，huG-CSF modRNA(SEQ ID NO:3)能在CHO细胞中翻译，huG-CSF被分泌到细胞外并释放到细胞外环境中。进一步，这些数据证明为生产分泌的蛋白质的目的，用modRNA huG-CSF对细胞进行转染而进行分泌蛋白的生产规模可以等比例放大生物反应器或大型细胞培养条件。
实施例3：表达作为治疗药剂的人源化IgG抗体(曲妥珠单抗和利妥昔单抗) 的哺乳动物商业生产细胞株在模式生物反应器中的再生(de novo)
利妥昔单抗重链的核酸序列如SEQ ID NO:4所示：
CTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAA
ATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAG
AGCCACCATGGCCGTGATGGCGCCGAGGACCCTGG
TGCTCTTGCTCACGGGTGCCTTGGCCCTCACGCAA
ACATGGGCGGGACAGGCGTACTTGCAGCAGTCAGG
GGCAGAACTCGTAAGGCCCGGAGCGTCGGTGAAGA
TGTCGTGTAAAGCGTCGGGCTATACTTTCACATCG
TACAACATGCACTGGGTCAAACAGACGCCCCGACA
AGGGCTGGAGTGGATTGGAGCTATCTACCCCGGTA
ACGGGGATACGTCGTACAACCAGAAGTTTAAGGGG
AAGGCGACTCTTACTGTCGACAAGTCGTCCTCCAC
CGCCTATATGCAGCTGTCGAGCCTGACTTCGGAAG
ATTCAGCGGTGTACTTTTGTGCGCGCGTGGTCTAT
TACTCAAATTCGTATTGGTATTTCGATGTGTGGGG
TACGGGGACCACTGTGACCGTGTCAGGACCCTCGG
TATTCCCCCTCGCGCCTAGCTCAAAGTCCACCTCC
GGGGGAACAGCCGCCTTGGGTTGCTTGGTAAAGGA
CTATTTCCCCGAGCCCGTCACAGTGAGCTGGAACT
CCGGGGCACTGACATCGGGAGTGCACACGTTTCCC
GCGGTACTTCAGTCATCAGGACTCTACTCGCTGTC
AAGCGTGGTCACGGTGCCTTCATCCTCCCTTGGAA
CGCAGACTTACATCTGCAACGTGAATCATAAGCCT
AGCAATACCAAGGTCGACAAGAAAGCCGAACCCAA
ATCATGTGATAAAACACACACGTGTCCTCCCTGCC
CCGCACCGGAGCTTCTCGGGGGACCGAGCGTGTTC
TTGTTTCCACCTAAGCCGAAAGATACGCTTATGAT
CTCCCGGACCCCCGAAGTAACTTGCGTAGTAGTAG
ACGTAAGCCACGAGGACCCCGAAGTGAAATTCAAT
TGGTACGTCGACGGAGTGGAGGTCCATAATGCGAA
AACAAAGCCGAGAGAGGAACAGTACAATTCCACAT
ACCGCGTCGTAAGCGTCTTGACAGTATTGCATCAG
GATTGGCTGAACGGAAAGGAATACAAGTGCAAAGT
ATCAAACAAAGCACTTCCGGCACCGATTGAAAAGA
CGATCTCAAAAGCAAAAGGGCAACCTCGGGAGCCA
CAAGTCTATACTCTCCCGCCGTCGCGCGATGAATT
GACCAAAAACCAGGTGTCCCTTACATGTCTCGTAA
AGGGTTTTTACCCGTCAGACATCGCCGTCGAGTGG
GAGTCAAACGGTCAGCCGGAGAATAACTATAAGAC
GACCCCACCAGTCTTGGACAGCGATGGCTCCTTCT
TCTTGTATTCAAAGCTGACGGTGGACAAATCGAGA
TGGCAGCAGGGTAATGTGTTTTCGTGCAGCGTCAT
GCACGAGGCGCTTCATAATCATTACACTCAAAAGT
CCCTGTCGCTGTCGCCCGGAAAGCACCATCACCAC
CACCATTGAAGCGCTGCCTTCTGCGGGGCTTGCCT
TCTGGCCATGCCCTTCTTCTCTCCCTTGCACCTGT
ACCTCTTGGTCTTTGAATAAAGCCTGAGTAGGAAG
GCGGCCGCTCGAGCATGCATCTAGA(SEQ ID NO:4)
利妥昔单抗重链的mRNA的核酸序列如SEQ ID NO:5所示：
CUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAA
AUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAG
AGCCACCAUGGCCGUGAUGGCGCCGAGGACCCUGG
UGCUCUUGCUCACGGGUGCCUUGGCCCUCACGCAA
ACAUGGGCGGGACAGGCGUACUUGCAGCAGUCAGG
GGCAGAACUCGUAAGGCCCGGAGCGUCGGUGAAGA
UGUCGUGUAAAGCGUCGGGCUAUACUUUCACAUCG
UACAACAUGCACUGGGUCAAACAGACGCCCCGACA
AGGGCUGGAGUGGAUUGGAGCUAUCUACCCCGGUA
ACGGGGAUACGUCGUACAACCAGAAGUUUAAGGGG
AAGGCGACUCUUACUGUCGACAAGUCGUCCUCCAC
CGCCUAUAUGCAGCUGUCGAGCCUGACUUCGGAAG
AUUCAGCGGUGUACUUUUGUGCGCGCGUGGUCUAU
UACUCAAAUUCGUAUUGGUAUUUCGAUGUGUGGGG
UACGGGGACCACUGUGACCGUGUCAGGACCCUCGG
UAUUCCCCCUCGCGCCUAGCUCAAAGUCCACCUCC
GGGGGAACAGCCGCCUUGGGUUGCUUGGUAAAGGA
CUAUUUCCCCGAGCCCGUCACAGUGAGCUGGAACU
CCGGGGCACUGACAUCGGGAGUGCACACGUUUCCC
GCGGUACUUCAGUCAUCAGGACUCUACUCGCUGUC
AAGCGUGGUCACGGUGCCUUCAUCCUCCCUUGGAA
CGCAGACUUACAUCUGCAACGUGAAUCAUAAGCCU
AGCAAUACCAAGGUCGACAAGAAAGCCGAACCCAA
AUCAUGUGAUAAAACACACACGUGUCCUCCCUGCC
CCGCACCGGAGCUUCUCGGGGGACCGAGCGUGUUC
UUGUUUCCACCUAAGCCGAAAGAUACGCUUAUGAU
CUCCCGGACCCCCGAAGUAACUUGCGUAGUAGUAG
ACGUAAGCCACGAGGACCCCGAAGUGAAAUUCAAU
UGGUACGUCGACGGAGUGGAGGUCCAUAAUGCGAA
AACAAAGCCGAGAGAGGAACAGUACAAUUCCACAU
ACCGCGUCGUAAGCGUCUUGACAGUAUUGCAUCAG
GAUUGGCUGAACGGAAAGGAAUACAAGUGCAAAGU
AUCAAACAAAGCACUUCCGGCACCGAUUGAAAAGA
CGAUCUCAAAAGCAAAAGGGCAACCUCGGGAGCCA
CAAGUCUAUACUCUCCCGCCGUCGCGCGAUGAAUU
GACCAAAAACCAGGUGUCCCUUACAUGUCUCGUAA
AGGGUUUUUACCCGUCAGACAUCGCCGUCGAGUGG
GAGUCAAACGGUCAGCCGGAGAAUAACUAUAAGAC
GACCCCACCAGUCUUGGACAGCGAUGGCUCCUUCU
UCUUGUAUUCAAAGCUGACGGUGGACAAAUCGAGA
UGGCAGCAGGGUAAUGUGUUUUCGUGCAGCGUCAU
GCACGAGGCGCUUCAUAAUCAUUACACUCAAAAGU
CCCUGUCGCUGUCGCCCGGAAAGCACCAUCACCAC
CACCAUUGAAGCGCUGCCUUCUGCGGGGCUUGCCU
UCUGGCCAUGCCCUUCUUCUCUCCCUUGCACCUGU
ACCUCUUGGUCUUUGAAUAAAGCCUGAGUAGGAAG
GCGGCCGCUCGAGCAUGCAUCUAGA(SEQ ID NO:5)
利妥昔单抗轻链的核酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:6所示：
CTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAA
ATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAG
AGCCACCATGGCTGTCATGGCCCCGAGAACACTTG
TGCTGTTGTTGACAGGAGCGCTCGCACTCACACAG
ACTTGGGCCGGTCAGATTGTGCTCAGCCAGTCGCC
AGCGATCCTTTCGGCCTCCCCTGGTGAGAAAGTAA
CGATGACGTGCCGAGCCTCCTCAAGCGTGTCATAC
ATGCATTGGTATCAGCAGAAGCCTGGGTCGTCGCC
CAAGCCCTGGATCTACGCCCCGTCCAATCTTGCGT
CAGGGGTCCCGGCACGGTTCAGCGGATCGGGGTCG
GGTACATCGTATTCACTCACGATTAGCCGCGTAGA
GGCCGAGGACGCGGCGACTTACTACTGTCAGCAAT
GGTCCTTTAATCCACCCACGTTTGGAGCGGGCACC
AAGCTCGAACTTAAAAGAACGGTCGCCGCACCCTC
AGTGTTTATCTTCCCGCCCTCGGACGAACAACTTA
AGTCGGGGACCGCTTCCGTGGTGTGCTTGCTGAAC
AATTTCTATCCTCGGGAAGCTAAAGTGCAATGGAA
AGTCGATAACGCATTGCAGAGCGGAAACTCACAAG
AGTCGGTAACTGAGCAGGATAGCAAGGATTCGACA
TACTCGCTGAGCAGCACGCTGACGTTGTCCAAGGC
GGACTACGAGAAACACAAGGTATATGCGTGTGAAG
TCACCCACCAGGGATTGTCATCGCCGGTCACCAAA
TCATTCAACAGGTGATAAAGCGCTGCCTTCTGCGG
GGCTTGCCTTCTGGCCATGCCCTTCTTCTCTCCCT
TGCACCTGTACCTCTTGGTCTTTGAATAAAGCCTG
AGTAGGAAGGCGGCCGCTCGAGCATGCATCTAGA
(SEQ ID NO:6)
利妥昔单抗的轻链的mRNA的核酸序列如SEQ ID NO:7所示。
CUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAA
AUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAG
AGCCACCAUGGCUGUCAUGGCCCCGAGAACACUUG
UGCUGUUGUUGACAGGAGCGCUCGCACUCACACAG
ACUUGGGCCGGUCAGAUUGUGCUCAGCCAGUCGCC
AGCGAUCCUUUCGGCCUCCCCUGGUGAGAAAGUAA
CGAUGACGUGCCGAGCCUCCUCAAGCGUGUCAUAC
AUGCAUUGGUAUCAGCAGAAGCCUGGGUCGUCGCC
CAAGCCCUGGAUCUACGCCCCGUCCAAUCUUGCGU
CAGGGGUCCCGGCACGGUUCAGCGGAUCGGGGUCG
GGUACAUCGUAUUCACUCACGAUUAGCCGCGUAGA
GGCCGAGGACGCGGCGACUUACUACUGUCAGCAAU
GGUCCUUUAAUCCACCCACGUUUGGAGCGGGCACC
AAGCUCGAACUUAAAAGAACGGUCGCCGCACCCUC
AGUGUUUAUCUUCCCGCCCUCGGACGAACAACUUA
AGUCGGGGACCGCUUCCGUGGUGUGCUUGCUGAAC
AAUUUCUAUCCUCGGGAAGCUAAAGUGCAAUGGAA
AGUCGAUAACGCAUUGCAGAGCGGAAACUCACAAG
AGUCGGUAACUGAGCAGGAUAGCAAGGAUUCGACA
UACUCGCUGAGCAGCACGCUGACGUUGUCCAAGGC
GGACUACGAGAAACACAAGGUAUAUGCGUGUGAAG
UCACCCACCAGGGAUUGUCAUCGCCGGUCACCAAA
UCAUUCAACAGGUGAUAAAGCGCUGCCUUCUGCGG
GGCUUGCCUUCUGGCCAUGCCCUUCUUCUCUCCCU
UGCACCUGUACCUCUUGGUCUUUGAAUAAAGCCUG
AGUAGGAAGGCGGCCGCUCGAGCAUGCAUCUAGA
(SEQ ID NO:7)
曲妥珠单抗(Trastuzumab)的重链的核酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:8所示：
CTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAA
ATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAG
AGCCACCATGGCCGTGATGGCGCCGCGGACCCTGG
TCCTCCTGCTGACCGGCGCCCTCGCCCTGACGCAG
ACCTGGGCCGGGGAGGTGCAGCTGGTCGAGAGCGG
CGGGGGCCTCGTGCAGCCGGGCGGGTCGCTGCGGC
TGAGCTGCGCCGCGAGCGGGTTCAACATCAAGGAC
ACCTACATCCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCAA
GGGCCTCGAGTGGGTCGCCCGGATCTACCCCACGA
ACGGGTACACCCGCTACGCCGACAGCGTGAAGGGC
CGGTTCACCATCAGCGCGGACACCTCGAAGAACAC
GGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCCGAGG
ACACCGCCGTGTACTACTGCAGCCGGTGGGGCGGC
GACGGGTTCTACGCCATGGACTACTGGGGGCAGGG
CACCCTCGTCACCGTGAGCAGCGCGTCGACGAAGG
GGCCCAGCGTGTTCCCGCTGGCCCCCAGCAGCAAG
AGCACCAGCGGCGGGACCGCCGCCCTGGGCTGCCT
CGTCAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGT
CGTGGAACAGCGGCGCGCTGACGAGCGGGGTCCAC
ACCTTCCCGGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTCTA
CTCGCTGAGCAGCGTGGTCACCGTGCCCAGCAGCA
GCCTGGGGACCCAGACGTACATCTGCAACGTGAAC
CACAAGCCCTCGAACACCAAGGTCGACAAGAAGGT
GGAGCCCCCGAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCT
GCCCGCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTCCTGGGCGGG
CCCAGCGTGTTCCTGTTCCCGCCCAAGCCCAAGGA
CACGCTCATGATCAGCCGCACCCCCGAGGTCACCT
GCGTGGTGGTCGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAG
GTGAAGTTCAACTGGTACGTCGACGGCGTGGAGGT
GCACAACGCCAAGACCAAGCCGCGGGAGGAGCAGT
ACAACTCGACGTACCGCGTCGTGAGCGTGCTGACC
GTCCTGCACCAGGACTGGCTCAACGGCAAGGAGTA
CAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCGC
CCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGGCAG
CCCCGGGAGCCGCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAG
CCGCGACGAGCTCACGAAGAACCAGGTCAGCCTGA
CCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCTCGGACATC
GCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAA
CAACTACAAGACCACCCCGCCCGTCCTCGACAGCG
ACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACGGTG
GACAAGTCGCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAG
CTGCAGCGTCATGCACGAGGCCCTCCACAACCACT
ACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGGAAG
CATCATCATCATCATCATTGAAGCGCTGCCTTCTG
CGGGGCTTGCCTTCTGGCCATGCCCTTCTTCTCTC
CCTTGCACCTGTACCTCTTGGTCTTTGAATAAAGC
CTGAGTAGGAAGGCGGCCGCTCGAGCATGCATCTA
GA(SEQ ID NO:8)
曲妥珠单抗的重链的mRNA的核酸序列如SEQ ID NO:9所示：
CUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAA
AUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAG
AGCCACCAUGGCCGUGAUGGCGCCGCGGACCCUGG
UCCUCCUGCUGACCGGCGCCCUCGCCCUGACGCAG
ACCUGGGCCGGGGAGGUGCAGCUGGUCGAGAGCGG
CGGGGGCCUCGUGCAGCCGGGCGGGUCGCUGCGGC
UGAGCUGCGCCGCGAGCGGGUUCAACAUCAAGGAC
ACCUACAUCCACUGGGUGCGCCAGGCCCCCGGCAA
GGGCCUCGAGUGGGUCGCCCGGAUCUACCCCACGA
ACGGGUACACCCGCUACGCCGACAGCGUGAAGGGC
CGGUUCACCAUCAGCGCGGACACCUCGAAGAACAC
GGCCUACCUGCAGAUGAACAGCCUGCGCGCCGAGG
ACACCGCCGUGUACUACUGCAGCCGGUGGGGCGGC
GACGGGUUCUACGCCAUGGACUACUGGGGGCAGGG
CACCCUCGUCACCGUGAGCAGCGCGUCGACGAAGG
GGCCCAGCGUGUUCCCGCUGGCCCCCAGCAGCAAG
AGCACCAGCGGCGGGACCGCCGCCCUGGGCUGCCU
CGUCAAGGACUACUUCCCCGAGCCCGUGACCGUGU
CGUGGAACAGCGGCGCGCUGACGAGCGGGGUCCAC
ACCUUCCCGGCCGUGCUGCAGAGCAGCGGCCUCUA
CUCGCUGAGCAGCGUGGUCACCGUGCCCAGCAGCA
GCCUGGGGACCCAGACGUACAUCUGCAACGUGAAC
CACAAGCCCUCGAACACCAAGGUCGACAAGAAGGU
GGAGCCCCCGAAGAGCUGCGACAAGACCCACACCU
GCCCGCCCUGCCCCGCCCCCGAGCUCCUGGGCGGG
CCCAGCGUGUUCCUGUUCCCGCCCAAGCCCAAGGA
CACGCUCAUGAUCAGCCGCACCCCCGAGGUCACCU
GCGUGGUGGUCGACGUGAGCCACGAGGACCCCGAG
GUGAAGUUCAACUGGUACGUCGACGGCGUGGAGGU
GCACAACGCCAAGACCAAGCCGCGGGAGGAGCAGU
ACAACUCGACGUACCGCGUCGUGAGCGUGCUGACC
GUCCUGCACCAGGACUGGCUCAACGGCAAGGAGUA
CAAGUGCAAGGUGAGCAACAAGGCCCUGCCCGCGC
CCAUCGAGAAGACCAUCAGCAAGGCCAAGGGGCAG
CCCCGGGAGCCGCAGGUGUACACCCUGCCCCCCAG
CCGCGACGAGCUCACGAAGAACCAGGUCAGCCUGA
CCUGCCUGGUGAAGGGCUUCUACCCCUCGGACAUC
GCCGUGGAGUGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAA
CAACUACAAGACCACCCCGCCCGUCCUCGACAGCG
ACGGCAGCUUCUUCCUGUACAGCAAGCUGACGGUG
GACAAGUCGCGGUGGCAGCAGGGCAACGUGUUCAG
CUGCAGCGUCAUGCACGAGGCCCUCCACAACCACU
ACACCCAGAAGAGCCUGAGCCUGAGCCCCGGGAAG
CAUCAUCAUCAUCAUCAUUGAAGCGCUGCCUUCUG
CGGGGCUUGCCUUCUGGCCAUGCCCUUCUUCUCUC
CCUUGCACCUGUACCUCUUGGUCUUUGAAUAAAGC
CUGAGUAGGAAGGCGGCCGCUCGAGCAUGCAUCUA
GA(SEQ ID NO:9)
曲妥珠单抗轻链的核酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:10所示：
CTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAA
ATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAG
AGCCACCATGGCCGTGATGGCGCCGCGGACCCTGG
TCCTCCTGCTGACCGGCGCCCTCGCCCTGACGCAG
ACCTGGGCCGGGGACATCCAGATGACCCAGAGCCC
GTCGAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACCGGGTCA
CGATCACCTGCCGCGCGAGCCAGGACGTGAACACC
GCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCCGGGAAGGC
CCCCAAGCTCCTGATCTACTCGGCGAGCTTCCTGT
ACAGCGGCGTCCCCAGCCGGTTCAGCGGGTCGCGC
AGCGGCACCGACTTCACGCTCACCATCAGCAGCCT
GCAGCCGGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGC
AGCACTACACCACGCCCCCCACCTTCGGGCAGGGC
ACCAAGGTGGAGATCAAGCGGACCGTGGCCGCCCC
CAGCGTCTTCATCTTCCCGCCCAGCGACGAGCAGC
TGAAGTCGGGCACGGCCAGCGTGGTGTGCCTCCTG
AACAACTTCTACCCCCGCGAGGCGAAGGTCCAGTG
GAAGGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGGAACAGCC
AGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACTCGAAGGACAGC
ACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA
GGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTCTACGCCTGCG
AGGTGACCCACCAGGGGCTCTCGAGCCCCGTGACC
AAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCTGAAGCGCTGC
CTTCTGCGGGGCTTGCCTTCTGGCCATGCCCTTCT
TCTCTCCCTTGCACCTGTACCTCTTGGTCTTTGAA
TAAAGCCTGAGTAGGAAGGCGGCCGCTCGAGCATG
CATCTAGA(SEQ ID NO:10)
曲妥珠单抗轻链的mRNA的核酸序列如SEQ ID NO:11所示：
CUCGUACAGAAGCUAAUACGACUCACUAUAGGGAAAUAAGAGAGAAAAGAAGAGUAAGAAGAAAUAUAAGAGCCACCAUGGCCGUGAUGGCGCCGCGGACCCUGGUCCUCCUGCUGACCGGCGCCCUCGCCCUGACGCAGACCUGGGCCGGGGACAUCCAGAUGACCCAGAGCCCGUCGAGCCUGAGCGCCAGCGUGGGCGACCGGGUCACGAUCACCUGCCGCGCGAGCCAGGACGUGAACACCGCCGUGGCCUGGUACCAGCAGAAGCCCGGGAAGGCCCCCAAGCUCCUGAUCUACUCGGCGAGCUUCCUGUACAGCGGCGUCCCCAGCCGGUUCAGCGGGUCGCGCAGCGGCACCGACUUCACGCUCACCAUCAGCAGCCUGCAGCCGGAGGACUUCGCCACCUACUACUGCCAGCAGCACUACACCACGCCCCCCACCUUCGGGCAGGGCACCAAGGUGGAGAUCAAGCGGACCGUGGCCGCCCCCAGCGUCUUCAUCUUCCCGCCCAGCGACGAGCAGCUGAAGUCGGGCACGGCCAGCGUGGUGUGCCUCCUGAACAACUUCUACCCCCGCGAGGCGAAGGUCCAGUGGAAGGUGGACAACGCCCUGCAGAGCGGGAACAGCCAGGAGAGCGUGACCGAGCAGGACUCGAAGGACAGCACCUACAGCCUCAGCAGCACCCUGACGCUGAGCAAGGCCGACUACGAGAAGCACAAGGUCUACGCCUGCGAGGUGACCCACCAGGGGCUCUCGAGCCCCGUGACCAAGAGCUUCAACCGGGGCGAGUGCUGAAGCGCUGCCUUCUGCGGGGCUUGCCUUCUGGCCAUGCCCUUCUUCUCUCCCUUGCACCUGUACCUCUUGGUCUUUGAAUAAAGCCUGAGUAGGAAGGCGGCCGCUCGAGCAUGCAUCUAGA(SEQ ID NO:11)
野生型CERT蛋白质的核苷酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:12所示：
atgtcggata atcagagctg gaactcgtcg ggctcggagg aggatccaga gacggagtct
gggccgcctg tggagcgctg cggggtcctc agtaagtgga caaactacat tcatgggtgg
caggatcgtt gggtagtttt gaaaaataat gctctgagtt actacaaatc tgaagatgaa
acagagtatg gctgcagagg atccatctgt cttagcaagg ctgtcatcac acctcacgat
tttgatgaat gtcgatttga tattagtgta aatgatagtg tttggtatct tcgtgctcag
gatccagatc atagacagca atggatagat gccattgaac agcacaagac tgaatctgga
tatggatctg aatccagctt gcgtcgacat ggctcaatgg tgtccctggt gtctggagca
agtggctact ctgcaacatc cacctcttca ttcaagaaag gccacagttt acgtgagaag
ttggctgaaa tggaaacatt tagagacatc ttatgtagac aagttgacac gctacagaag
tactttgatg cctgtgctga tgctgtctct aaggatgaac ttcaaaggga taaagtggta
gaagatgatg aagatgactt tcctacaacg cgttctgatg gtgacttctt gcatagtacc
aacggcaata aagaaaagtt atttccacat gtgacaccaa aaggaattaa tggtatagac
tttaaagggg aagcgataac ttttaaagca actactgctg gaatccttgc aacactttct
cattgtattg aactaatggt taaacgtgag gacagctggc agaagagact ggataaggaa
actgagaaga aaagaagaac agaggaagca tataaaaatg caatgacaga acttaagaaa
aaatcccact ttggaggacc agattatgaa gaaggcccta acagtctgat taatgaagaa
gagttctttg atgctgttga agctgctctt gacagacaag ataaaataga agaacagtca
cagagtgaaa aggtgagatt acattggcct acatccttgc cctctggaga tgccttttct
tctgtgggga cacatagatt tgtccaaaag gttgaagaga tggtgcagaa ccacatgact
tactcattac aggatgtagg cggagatgcc aattggcagt tggttgtaga agaaggagaa
atgaaggtat acagaagaga agtagaagaa aatgggattg ttctggatcc tttaaaagct
acccatgcag ttaaaggcgt cacaggacat gaagtctgca attatttctg gaatgttgac
gttcgcaatg actgggaaac aactatagaa aactttcatg tggtggaaac attagctgat
aatgcaatca tcatttatca aacacacaag agggtgtggc ctgcttctca gcgagacgta
ttatatcttt ctgtcattcg aaagatacca gccttgactg aaaatgaccc tgaaacttgg
atagtttgta atttttctgt ggatcatgac agtgctcctc taaacaaccg atgtgtccgt
gccaaaataa atgttgctat gatttgtcaa accttggtaa gcccaccaga gggaaaccag
gaaattagca gggacaacat tctatgcaag attacatatg tagctaatgt gaaccctgga
ggatgggcac cagcctcagt gttaagggca gtggcaaagc gagagtatcc taaatttcta
aaacgtttta cttcttacgt ccaagaaaaa actgcaggaa agcctatttt gttctag
(SEQ ID NO:12)
野生型CERT蛋白质的蛋白质序列如SEQ ID NO:13所示：
Met Ser Asp Asn Gin Ser Trp Asn Ser Ser Gly Ser Glu Glu Asp Pro
Glu Thr Glu Ser Gly Pro Pro Val Glu Arg Cys Gly Val Leu Ser Lys
Trp Thr Asn Tyr Ile His Gly Trp Gin Asp Arg Trp Val Val Leu Lys
Asn Asn Ala Leu Ser Tyr Tyr Lys Ser Glu Asp Glu Thr Glu Tyr Gly
Cys Arg Gly Ser Ile Cys Leu Ser Lys Ala Val Ile Thr Pro His Asp
Phe Asp Glu Cys Arg Phe Asp Ile Ser Val Asn Asp Ser Val Trp Tyr
Leu Arg Ala Gin Asp Pro Asp His Arg Gin Gin Trp Ile Asp Ala Ile
Glu Gin His Lys Thr Glu Ser Gly Tyr Gly Ser Glu Ser Ser Leu Arg
Arg His Gly Ser Met Val Ser Leu Val Ser Gly Ala Ser Gly Tyr Ser
Ala Thr Ser Thr Ser Ser Phe Lys Lys Gly His Ser Leu Arg Glu Lys
Leu Ala Glu Met Glu Thr Phe Arg Asp Ile Leu Cys Arg Gin Val Asp
Thr Leu Gin Lys Tyr Phe Asp Ala Cys Ala Asp Ala Val Ser Lys Asp
Glu Leu Gin Arg Asp Lys Val Val Glu Asp Asp Glu Asp Asp Phe Pro
Thr Thr Arg Ser Asp Gly Asp Phe Leu His Ser Thr Asn Gly Asn Lys
Glu Lys Leu Phe Pro His Val Thr Pro Lys Gly Ile Asn Gly Ile Asp
Phe Lys Gly Glu Ala Ile Thr Phe Lys Ala Thr Thr Ala Gly Ile Leu
Ala Thr Leu Ser His Cys Ile Glu Leu Met Val Lys Arg Glu Asp Ser
Trp Gin Lys Arg Leu Asp Lys Glu Thr Glu Lys Lys Arg Arg Thr Glu
Glu Ala Tyr Lys Asn Ala Met Thr Glu Leu Lys Lys Lys Ser His Phe
Gly Gly Pro Asp Tyr Glu Glu Gly Pro Asn Ser Leu Ile Asn Glu Glu
Glu Phe Phe Asp Ala Val Glu Ala Ala Leu Asp Arg Gin Asp Lys Ile
Glu Glu Gin Ser Gin Ser Glu Lys Val Arg Leu His Trp Pro Thr Ser
Leu Pro Ser Gly Asp Ala Phe Ser Ser Val Gly Thr His Arg Phe Val
Gin Lys Val Glu Glu Met Val Gin Asn His Met Thr Tyr Ser Leu Gin
Asp Val Gly Gly Asp Ala Asn Trp Gin Leu Val Val Glu Glu Gly Glu
Met Lys Val Tyr Arg Arg Glu Val Glu Glu Asn Gly Ile Val Leu Asp
Pro Leu Lys Ala Thr His Ala Val Lys Gly Val Thr Gly His Glu Val
Cys Asn Tyr Phe Trp Asn Val Asp Val Arg Asn Asp Trp Glu Thr Thr
Ile Glu Asn Phe His Val Val Glu Thr Leu Ala Asp Asn Ala Ile Ile
Ile Tyr Gin Thr His Lys Arg Val Trp Pro Ala Ser Gin Arg Asp Val
Leu Tyr Leu Ser Val Ile Arg Lys Ile Pro Ala Leu Thr Glu Asn Asp
Pro Glu Thr Trp Ile Val Cys Asn Phe Ser Val Asp His Asp Ser Ala
Pro Leu Asn Asn Arg Cys Val Arg Ala Lys Ile Asn Val Ala Met Ile
Cys Gin Thr Leu Val Ser Pro Pro Glu Gly Asn Gin Glu Ile Ser Arg
(SEQ ID NO:13)
Ser132A Cert突变体的核苷酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:14所示：
atgtcggata atcagagctg gaactcgtcg ggctcggagg aggatccaga gacggagtct
gggccgcctg tggagcgctg cggggtcctc agtaagtgga caaactacat tcatgggtgg
caggatcgtt gggtagtttt gaaaaataat gctctgagtt actacaaatc tgaagatgaa
acagagtatg gctgcagagg atccatctgt cttagcaagg ctgtcatcac acctcacgat
tttgatgaat gtcgatttga tattagtgta aatgatagtg tttggtatct tcgtgctcag
gatccagatc atagacagca atggatagat gccattgaac agcacaagac tgaatctgga
tatggatctg aatccagctt gcgtcgacat ggcgcaatgg tgtccctggt gtctggagca
agtggctact ctgcaacatc cacctcttca ttcaagaaag gccacagttt acgtgagaag
ttggctgaaa tggaaacatt tagagacatc ttatgtagac aagttgacac gctacagaag
tactttgatg cctgtgctga tgctgtctct aaggatgaac ttcaaaggga taaagtggta
gaagatgatg aagatgactt tcctacaacg cgttctgatg gtgacttctt gcatagtacc
aacggcaata aagaaaagtt atttccacat gtgacaccaa aaggaattaa tggtatagac
tttaaagggg aagcgataac ttttaaagca actactgctg gaatccttgc aacactttct
cattgtattg aactaatggt taaacgtgag gacagctggc agaagagact ggataaggaa
actgagaaga aaagaagaac agaggaagca tataaaaatg caatgacaga acttaagaaa
aaatcccact ttggaggacc agattatgaa gaaggcccta acagtctgat taatgaagaa
gagttctttg atgctgttga agctgctctt gacagacaag ataaaataga agaacagtca
cagagtgaaa aggtgagatt acattggcct acatccttgc cctctggaga tgccttttct
tctgtgggga cacatagatt tgtccaaaag gttgaagaga tggtgcagaa ccacatgact
tactcattac aggatgtagg cggagatgcc aattggcagt tggttgtaga agaaggagaa
atgaaggtat acagaagaga agtagaagaa aatgggattg ttctggatcc tttaaaagct
acccatgcag ttaaaggcgt cacaggacat gaagtctgca attatttctg gaatgttgac
gttcgcaatg actgggaaac aactatagaa aactttcatg tggtggaaac attagctgat
aatgcaatca tcatttatca aacacacaag agggtgtggc ctgcttctca gcgagacgta
ttatatcttt ctgtcattcg aaagatacca gccttgactg aaaatgaccc tgaaacttgg
atagtttgta atttttctgt ggatcatgac agtgctcctc taaacaaccg atgtgtccgt
gccaaaataa atgttgctat gatttgtcaa accttggtaa gcccaccaga gggaaaccag
gaaattagca gggacaacat tctatgcaag attacatatg tagctaatgt gaaccctgga
ggatgggcac cagcctcagt gttaagggca gtggcaaagc gagagtatcc taaatttcta
aaacgtttta cttcttacgt ccaagaaaaa actgcaggaa agcctatttt gttctag(SEQ ID NO:14)
Ser132A Cert突变体的蛋白质序列如SEQ ID NO.15所示：
Met Ser Asp Asn Gin Ser Trp Asn Ser Ser Gly Ser Glu Glu Asp Pro
Glu Thr Glu Ser Gly Pro Pro Val Glu Arg Cys Gly Val Leu Ser Lys
Trp Thr Asn Tyr Ile His Gly Trp Gin Asp Arg Trp Val Val Leu Lys
Asn Asn Ala Leu Ser Tyr Tyr Lys Ser Glu Asp Glu Thr Glu Tyr Gly
Cys Arg Gly Ser Ile Cys Leu Ser Lys Ala Val Ile Thr Pro His Asp
Phe Asp Glu Cys Arg Phe Asp Ile Ser Val Asn Asp Ser Val Trp Tyr
Leu Arg Ala Gin Asp Pro Asp His Arg Gin Gin Trp Ile Asp Ala Ile
Glu Gin His Lys Thr Glu Ser Gly Tyr Gly Ser Glu Ser Ser Leu Arg
Arg His Gly Ala Met Val Ser Leu Val Ser Gly Ala Ser Gly Tyr Ser
Ala Thr Ser Thr Ser Ser Phe Lys Lys Gly His Ser Leu Arg Glu Lys
Leu Ala Glu Met Glu Thr Phe Arg Asp Ile Leu Cys Arg Gin Val Asp
Thr Leu Gin Lys Tyr Phe Asp Ala Cys Ala Asp Ala Val Ser Lys Asp
Glu Leu Gin Arg Asp Lys Val Val Glu Asp Asp Glu Asp Asp Phe Pro
Thr Thr Arg Ser Asp Gly Asp Phe Leu His Ser Thr Asn Gly Asn Lys
Glu Lys Leu Phe Pro His Val Thr Pro Lys Gly Ile Asn Gly Ile Asp
Phe Lys Gly Glu Ala Ile Thr Phe Lys Ala Thr Thr Ala Gly Ile Leu
Ala Thr Leu Ser His Cys Ile Glu Leu Met Val Lys Arg Glu Asp Ser
Trp Gin Lys Arg Leu Asp Lys Glu Thr Glu Lys Lys Arg Arg Thr Glu
Glu Ala Tyr Lys Asn Ala Met Thr Glu Leu Lys Lys Lys Ser His Phe
Gly Gly Pro Asp Tyr Glu Glu Gly Pro Asn
Glu Phe Phe Asp Ala Val Glu Ala Ala Leu Asp Arg Gin Asp Lys Ile
Glu Glu Gin Ser Gin Ser Glu Lys Val Arg Leu His Trp Pro Thr Ser
Leu Pro Ser Gly Asp Ala Phe Ser Ser Val Gly Thr His Arg Phe Val
Gin Lys Val Glu Glu Met Val Gin Asn His Met Thr Tyr Ser Leu Gin
Asp Val Gly Gly Asp Ala Asn Trp Gin Leu Val Val Glu Glu Gly Glu
Met Lys Val Tyr Arg Arg Glu Val Glu Glu Asn Gly Ile Val Leu Asp
Pro Leu Lys Ala Thr His Ala Val Lys Gly Val Thr Gly His Glu Val
Cys Asn Tyr Phe Trp Asn Val Asp Val Arg Asn Asp Trp Glu Thr Thr
Ile Glu Asn Phe His Val Val Glu Thr Leu Ala Asp Asn Ala Ile Ile
Ile Tyr Gin Thr His Lys Arg Val Trp Pro Ala Ser Gin Arg Asp Val
Leu Tyr Leu Ser Val Ile Arg Lys Ile Pro Ala Leu Thr Glu Asn Asp
Pro Glu Thr Trp Ile Val Cys Asn Phe Ser Val Asp His Asp Ser Ala
Pro Leu Asn Asn Arg Cys Val Arg Ala Lys Ile Asn Val Ala Met Ile
Cys Gin Thr Leu Val Ser Pro Pro Glu Gly Asn Gin Glu Ile Ser Arg
Asp Asn Ile Leu Cys Lys Ile Thr Tyr Val Ala Asn Val Asn Pro Gly
Gly Trp Ala Pro Ala Ser Val Leu Arg Ala Val Ala Lys Arg Glu Tyr
Pro Lys Phe Leu Lys Arg Phe Thr Ser Tyr Val Gin Glu Lys Thr Ala
Gly Lys Pro Ile Leu Phe(SEQ ID NO:15)
人IgG抗体的ELISA检测
图2和图3分别显示了来自转染了人IgG modRNA的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾(HEK，HER-2阴性)293细胞的酶联免疫实验(ELISA)。人胚肾(HEK)293细胞在添加了购自Invitrogen的L-谷氨酰的CD293培养基中培养到融合度达到80-90％。CHO细胞在添加了L-谷氨酰、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的CD CHO培养基中培养。图2中，在盛有7ml培养基的购自Corning的75cm2培养皿中，用复合了购自Invitrogen的RNAiMax的24μg modRNA转染2×106个细胞。图3中，在24孔板中用复合了购自Invitrogen的RNAiMax的1μg modRNA转染3,80,000个细胞。RNA:RNAiMAX复合体的制备：首先，将RNA在室温下与5×体积稀释的CD 293培养基或CD CHO培养基孵育10分钟；在第二个瓶中，将RNAiMAX试剂在室温下与10×体积稀释的CD 293培养基或CD CHO培养基孵育10分钟；随后，在添加到在滴状冷凝器中的细胞之前，将RNA瓶与RNAiMAX瓶混合并在室温下孵育20-30，然后以逐滴方式加入至细胞中。图2中，在转染后12、24、36小时测量培养基中的分泌人IgG的浓度。图3中，在36小时时测量分泌的人IgG。培养物上清贮存在4摄氏度。按厂家说明使用购自Abcam的ELISA试剂盒测定自转染的人胚肾293细胞中分泌的曲妥珠单抗的量。这些数据显示了人源化IgG抗体(曲妥珠单抗)的modRNA(SEQ IDNOs:6和7)能在人胚肾细胞中翻译，以及曲妥珠单抗被分泌到细胞外并释放到细胞外环境中。进一步的，这些数据证明，以编码曲妥珠单抗的modRNA对细胞进行转染生产分泌蛋白可以规模放大至生物反应器或大型细胞培养条件。
modRNA产生的人IgG抗体的Western检测
图4显示了以各1μg的曲妥珠单抗重链和轻链的modRNA共转染CHO-K1细胞的Western Blot结果。为了检测蛋白质产物的翻译，按标准流程在24孔板中培养细胞，转染24小时后收集细胞上清或细胞裂解物并利用12％SDS-Page凝胶电泳进行分离，然后利用购自Invitrogen的iBlot转膜到硝化纤维膜上。在与缀合了594的抗人IgG抗体的兔多克隆抗体(ab96904，abcm，Cambridge，MA)以及缀合了碱性磷酸酶的抗Rb IgG的羊多克隆第二抗体孵育后，使用购自Invitrogen的碱性磷酸酶显色底物检测抗体。
modRNA产生的曲妥珠单抗和利妥昔单抗的细胞免疫染色
图5显示了以曲妥珠单抗或利妥昔单抗的重链和轻链各500ng共转染CHO-K1细胞。在购自Gibco的F-12K培养基和10％FBS中培养细胞。用含4％聚甲醛的PBS溶液固定细胞并在室温下以0.1％Triton X-100的PBS溶液渗透5-10分钟。随后以室温PBS溶液洗涤细胞三次。用缀合了594的抗人IgG抗体的兔多克隆抗体(ab96904，abcm，Cambridge，MA)对曲妥珠单抗株和利妥昔单抗株进行染色。用购自Invitrogen的DAPI染色剂对核DNA进行染色。modRNA转染后，曲妥珠单抗和利妥昔单抗的蛋白质被翻译并定位在细胞膜上。图片摄于转染后13小时。
modRNA产生的曲妥珠单抗和利妥昔单抗的结合免疫印迹实验
图6显示了曲妥珠单抗和利妥昔单抗的结合免疫印迹实验结果。不同浓度的ErB2多肽(ab40048，abcam，Cambridge，MA)
针对曲妥珠单抗的抗原和CD20多肽(ab97360，abcam，Cambridge，MA)、针对利妥昔单抗的抗原以不同浓度(100ng/μl)在12％SDS-Page的凝胶上进行电泳并利用购自Invitrogen的iBlot转移到膜上。所述膜与其各自的细胞上清共孵育1小时，所述上清获自以曲妥珠单抗或利妥昔单抗的各500ng的重链和轻链共转染的CHO-K1细胞。所述膜用1％BSA封闭并添加缀合了碱性磷酸酶的抗人IgG第二抗体(abcam，Cambridge，MA)。利用购自Invitrogen的碱性磷酸酶显色底物进行抗体检测。该数据显示产生自modRNA的人源化的IgG抗体可以识别并结合其各自的抗原。
细胞增殖实验
SK-BR-3细胞系，来源于人乳腺癌的粘附细胞系，其过表达HER2/neu受体，可用于比较modRNA产生的曲妥珠单抗的抗增殖性质。可以向细胞培养物中添加不同浓度的产生自modRNA的纯化曲妥珠单抗和曲妥珠单抗，并通过一式三份的细胞毒性和存活力实验测定其对细胞生长的影响。
SKOV-3肿瘤模型
modRNA产生的曲妥珠单抗的抗癌效果可以通过在28天的周期内向SKOV-3转基因小鼠中连续注射1)modRNA曲妥珠单抗，2)曲妥珠单抗，和3)modRNA曲妥珠单抗+modRNA GCSF测定。可以随时间监测肿瘤生长尺寸的减少。
实施例4.过表达神经酰胺转移蛋白以提高治疗性抗体蛋白质在已建立 的CHO细胞系中的生产能力。
a)分批培养
以单独的阳离子脂质递送介质(对照)或编码野生型神经酰胺转移蛋白(CERT)或无磷酸化能力(non-phosphorylation competent)的Ser132A CERT突变体的合成mRNA转录本单次转染分泌人源化治疗性IgG抗体的产抗体CHO细胞系(CHO DG44)。CERT是哺乳动物中的重要胞质蛋白，其将鞘磷脂神经酰胺自内质网转移到高尔基复合体，在此神经酰胺被转化成鞘脂(Hanada等，2003年)。CERT的过表达大大增强分泌蛋白向胞质膜的转移并改善通过分泌途径自真核细胞转运的蛋白质的生产，从而增强了蛋白质向培养基中的分泌。合成的mRNA转录本以2-5:1的载体:RNA比与阳离子脂质递送介质预混。起始接种浓度为约2×105活细胞/mL。在指数培养生长期过程中在起始培养接种后，递送合成mRNA转录本以达到合成的mRNA的最终拷贝数量在每细胞10×102到10×103之间。用于产生细胞接种物的所有阶段和生物反应器中的培养物生长的基础细胞培养基是包含谷氨酰、碳酸氢钠、胰岛素和甲氨蝶呤的改良CD-CHO培养基。在添加全部组分后用1N HCl或1N NaOH将培养基的pH值调节到7.0。在第7、14、21或28+天结束培养运行时间。可以使用生产水平50L级的反应器(带有2个船用叶轮的不锈钢反应器)且可升级到＞10,000L不锈钢反应器(申请日为2002年12月23日的普通转让专利申请U.S.Ser.No.60/436,050，和U.S.Ser.No.10/740,645中所述)。数据获取系统(IntellutionFix32)全程记录温度、pH值和溶解氧(DO)。气流通过旋转式流量计控制。空气通过液下玻璃料(孔径5μm)向反应器鼓气并通过反应器顶部空间移除CO2。通过同样的玻璃料鼓入分子氧以进行DO控制。CO2通过同样的玻璃料鼓泡鼓入以进行pH控制。每天从反应器中移出细胞样品。用于细胞计数的样品用台盼蓝(Sigma,St.Louis,Mo.)染色。使用显微通过细胞计数器进行细胞计数和细胞活力的测定。为了分析代谢物，以2000rpm(4℃)离心额外的样品20分钟以分离细胞。分析上清的下述参数：效价、唾液酸、葡萄糖、乳酸盐、谷酰胺、谷氨酸盐、pH、pO2、pCO2、氨水和任选的乳酸脱氢酶(LDH)。将额外的备份样品冷冻在-20℃。为测定分泌的人源化IgG抗体的效价，自所有稳定细胞库的留种培养物获得上清，通过ELISA测量IgG效价并除以平均细胞数以计算特定生产能力。最高值是有Ser132A CERT突变(SEQ ID NO.14)的细胞库，其次是野生型CERT(SEQ ID NO.12)。相对于只有载体或未转染细胞，以上两者的IgG表达显著增强。
b)连续或分批补料培养
用单独的阳离子脂质递送介质(对照)或编码野生型神经酰胺转移蛋白或无磷酸化能力的Ser132A CERT突变的合成mRNA转录本转染分泌人源化IgG抗体的产抗体CHO细胞系(CHO DG44)。合成的mRNA转录本以2-5:1的载体:RNA比与阳离子脂质递送介质预混。起始接种浓度为约2×105活细胞/mL。在指数培养生长期过程中在起始培养接种后，递送合成的mRNA转录本以达到合成mRNA的最终拷贝数量在每细胞10×102到10×103之间。在产生细胞接种物的整个阶段以及在生物反应器中培养物的生长阶段所使用的基础细胞培养基是包含谷氨酰、重碳酸钠、胰岛素和甲氨蝶呤的改良CD-CHO培养基。在添加全部组分后将培养基的pH值用1N HCl或1N NaOH调节到7.0。使用5L级生物反应器(带有一个船用叶轮的玻璃反应器)以获得最大的CERT蛋白产量和分泌人源化IgG抗体曲线。对于连续或分批补料培养，在运行期间，通过每天一次或多次(或持续地)以新鲜培养基补充培养物培养基而延长培养运行时间。在连续或分批补料培养的方案中，培养物以持续地补充注入或其他添加到培养基的方式按时、定受控的和/或编程程序化的方式自动接受培养基，从而在培养物中达到和保持培养物中合成mRNA:载体的合适量。典型的方法是从开始进行培养到收获细胞的当天，在进行培养的每天推注给料一次包含合成的mRNA:载体的给料培养基的给料方式。每日给料量记录在批次表格上。使用生产水平50L级的反应器(带有2个船用叶轮的不锈钢反应器)且可升级到＞10,000L不锈钢反应器。数据获取系统(Intellution Fix32)全程记录温度、pH值和溶解氧(DO)。气流通过旋转式流量计控制。空气通过液下玻璃料(孔径5μm)鼓入反应器并通过反应器顶部空间移除CO2。分子氧通过同样的玻璃料鼓入以进行DO控制。CO2通过同样的玻璃料鼓入以进行pH控制。每天从反应器中移出细胞样品。用于细胞计数的样品一般用台盼蓝(Sigma,St.Louis,Mo.)染色。利用显微镜通过细胞计数器进行细胞计数和细胞活力的测定。为了分析代谢物，以2000 rpm(4℃)离心额外的样品20分钟以分离细胞。分析上清的下述参数：效价、唾液酸、葡萄糖、乳酸盐、谷酰胺、谷氨酸盐、pH、pO2、pCO2、氨水和任选的乳酸脱氢酶(LDH)。额外的备份样品冷冻在-20℃。为测定分泌的人源化IgG抗体的效价，自所有稳定细胞库的留种培养物获得上清，通过ELISA测量IgG效价并除以平均细胞数以计算特定生产能力。最高值是有Ser132A CERT突变(SEQ ID NO.14)的细胞库，其次是野生型CERT(SEQ ID NO:10或12)。相对于只有载体或未转染细胞，以上两者的IgG表达显著增强。
等价物和范围
本领域技术人员可以仅使用常规实验认识到或能够确定本文所述的特定具体实施方式的多种等价物。本发明的范围并非意图限定到上述说明书，而是如随附的权利要求所示。
本领域技术人员可以仅使用常规实验认识到或能够确定按照本发明所公开的的具体实施方式的多种等价物。本发明的范围并非意图限定到上述说明书，而是如随附的权利要求所示。
权利要求书中，除非根据上下文有相反或其他的证据，所述“a”、“an”和“the”可以表示一个或多于一个。除非根据上下文有相反或其他证据，认为在一个或多个组的成员之间包含“或”的权利要求或说明是一个、多于一个或全部组成员存在于、参与或以其他方式关联于给定的产品或方法中。本发明包括只有组中的一员存在于、参与或以其他方式关联于给定的产品或方法中的具体实施方式。本发明包括超过一个或全部组的成员都存在于、参与或以其他方式关联于给定的产品或方法中的具体实施方式。进一步的，可以理解的是，本发明包括将一个或多个所列权利要求的一个或多个限制、元素、从句、描述术语等从引入另一个权利要求的所有的变形、组合和替换。例如，可以限定任何引用另一个权利要求的权利要求，使其包括一个或多个任意其他引用同一权利要求的权利要求中的限定。进一步的，除非另有说明或除非对于本领域普通技术人员而言出现反例或矛盾是显而易见的情况，则当权利要求叙及组合物，应当理解为包括出于本发明公开的任何目的的该组合物的使用方法，以及按照本发明公开的任意制备方法或本领域已知的其他方法以制备该组合物的方法。
当元素以列表形式存在，例如，马库什形式，应当理解的是，同样公开了元素的每一个亚群，并且任何元素都可以自组中删除。应当理解的是，通常，当本发明或本发明的各方面被称为包含特定要素、特征等时，本发明或本发明各方面的某些具体实施方式由所述特定要素、特征等组成或基本由其组成。出于简明性目的，这些具体实施方式在本文中并没有从字词上做详细描述。还应当注意到，术语“包含”是开放式的并且允许包含额外的组成成分或步骤。
给定的范围包括端值。进一步地，应当理解，除非另有说明或根据上下文和本领域常规技术人员的理解另有证据，在本发明不同具体技术方案中，以范围表示的值可以假设成任意特定值或所述范围的子范围，除非上下文有清楚地其他指示，否则可以到范围下限的十分之一单位。
此外，应当理解，任何落入现有技术的本发明的特定技术方案可以明确排除在任意一个或多个权利要求外。因为这样的具体实施方式被认为是本领域普通技术人员已知的，即使该排除并未在本文中明确表明，其也可以被排除。不论是否与现有技术有关，可以基于任何原因从任意一个或多个权利要求中排除本发明组合物的任何特定具体实施方式(例如，任意的蛋白质、任意的核酸、任意的生产方法、任意的使用方法等)。
即使在引用中未明确表示，所有引用的来源，例如，参考文献、出版物、数据库、数据条目和本文引用的技术通过引用而引入到本申请。在引用的来源和本申请出现矛盾的情况下，应根据本申请的内容。
其他具体实施方式在权利要求中。

Claims (6)

1.在人细胞内体外生产抗体的方法，所述方法包括使所述人细胞在体外与组合物接触，所述组合物包含：
a)mRNA，其编码所述抗体的重链，和
b)mRNA，其编码所述抗体的轻链，
其中，a)和b)的mRNA均包含至少一个核苷修饰，并且均基本不含尿嘧啶核苷酸。
2.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个核苷修饰是1-甲基-假尿苷。
3.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个核苷修饰是5-甲基-胞苷和假尿苷。
4.权利要求1所述的方法，其中a)和b)的mRNA各自的5’帽结构独立的选自由Cap 0、Cap 1、Cap 2和Cap 3组成的组。
5.权利要求1所述的方法，其中由所述人细胞产生的抗体的量大于由包含未被修饰的a)和b)的mRNA的组合物产生的量。
6.权利要求1所述的方法，其中所述组合物中a)所述的mRNA和b)所述的mRNA的比例为1:1。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106929513A (zh) * 2017-04-07 2017-07-07 东南大学 mRNA编码的纳米抗体及其应用

Families Citing this family (205)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
DK2506857T3 (en) 2009-12-01 2018-05-07 Translate Bio Inc SUPPLY OF MRNA FOR AMPLIFICATION OF PROTEINS AND ENZYMES IN HUMAN GENETIC DISEASES
US8808982B2 (en) 2009-12-07 2014-08-19 Cellscript, Llc Compositions and methods for reprogramming eukaryotic cells
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
CA2804492A1 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN103179984A (zh) 2010-08-31 2013-06-26 诺华有限公司 用于递送免疫原编码rna的peg化脂质体
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
CN103269713B (zh) 2010-10-11 2016-01-20 诺华有限公司 抗原递送平台
WO2012075040A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA FOR USE IN TREATMENT OF HUMAN GENETIC DISEASES
EP2686014A1 (en) * 2011-03-16 2014-01-22 Sanofi Uses of a dual v region antibody-like protein
WO2012135805A2 (en) 2011-03-31 2012-10-04 modeRNA Therapeutics Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CN103608033B (zh) 2011-05-24 2016-06-15 生物技术公司 用于癌症的个体化疫苗
JP6184945B2 (ja) 2011-06-08 2017-08-23 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド ｍＲＮＡ送達のための脂質ナノ粒子組成物および方法
JP2014522842A (ja) 2011-07-06 2014-09-08 ノバルティス アーゲー 免疫原性組み合わせ組成物およびその使用
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
LT3682905T (lt) 2011-10-03 2022-02-25 Modernatx, Inc. Modifikuoti nukleozidai, nukleotidai ir nukleorūgštys bei jų naudojimas
KR20210134808A (ko) 2011-12-05 2021-11-10 팩터 바이오사이언스 인크. 세포를 형질감염시키는 방법들 및 생성물들
CA2858884A1 (en) 2011-12-12 2013-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Proteins comprising mrsa pbp2a and fragments thereof, nucleic acids encoding the same, and compositions and their use to prevent and treat mrsa infections
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
DE18200782T1 (de) 2012-04-02 2021-10-21 Modernatx, Inc. Modifizierte polynukleotide zur herstellung von proteinen im zusammenhang mit erkrankungen beim menschen
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
ES2864878T5 (es) 2012-06-08 2024-10-23 Translate Bio Inc Administración pulmonar de ARN, a células objetivo no pulmonares
WO2013185067A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Nuclease resistant polynucleotides and uses thereof
EP2885419A4 (en) 2012-08-14 2016-05-25 Moderna Therapeutics Inc ENZYMES AND POLYMERASES FOR RNA SYNTHESIS
BR122019025678B1 (pt) 2012-11-01 2023-04-18 Factor Bioscience Inc Composições que compreendem ácido nucleico que codifica uma proteína de edição gênica
RS63237B1 (sr) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx Inc Terminalno modifikovana rnk
EP2925348B1 (en) 2012-11-28 2019-03-06 BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH Individualized vaccines for cancer
EP2931319B1 (en) 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
CA2897941A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
WO2014124457A1 (en) * 2013-02-11 2014-08-14 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods for producing antibodies
WO2014159813A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
RS62565B1 (sr) * 2013-03-14 2021-12-31 Translate Bio Inc Metode i kompozicije za isporuku antitela kodiranih od strane irnk
MX365409B (es) 2013-03-14 2019-05-31 Shire Human Genetic Therapies Composiciones de ácido ribonucleico mensajero del regulador transmembrana de fibrosis quística y métodos y usos relacionados.
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
AU2014236396A1 (en) 2013-03-14 2015-08-13 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Methods for purification of messenger RNA
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP2983804A4 (en) 2013-03-15 2017-03-01 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
ES2670529T3 (es) 2013-03-15 2018-05-30 Translate Bio, Inc. Mejora sinergística de la entrega de ácidos nucleicos a través de formulaciones mezcladas
US11377470B2 (en) 2013-03-15 2022-07-05 Modernatx, Inc. Ribonucleic acid purification
EP2971033B8 (en) 2013-03-15 2019-07-10 ModernaTX, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
DE102013005361A1 (de) 2013-03-28 2014-10-02 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Polyribonucleotid
WO2014180490A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Biontech Ag Predicting immunogenicity of t cell epitopes
SI3019619T1 (sl) 2013-07-11 2021-12-31 Modernatx, Inc. Sestave, ki zajemajo sintetične polinukleotide, ki kodirajo proteine, pozvezane s crispr, in sintetične sgrna, ter metode uporabe
EP3041938A1 (en) * 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US10385088B2 (en) 2013-10-02 2019-08-20 Modernatx, Inc. Polynucleotide molecules and uses thereof
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
CA2928188A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Mrna therapy for argininosuccinate synthetase deficiency
AU2014340149B2 (en) 2013-10-22 2020-12-24 Shire Human Genetic Therapies, Inc. CNS delivery of mRNA and uses thereof
US9522176B2 (en) 2013-10-22 2016-12-20 Shire Human Genetic Therapies, Inc. MRNA therapy for phenylketonuria
CN105813656B (zh) 2013-10-22 2021-01-15 夏尔人类遗传性治疗公司 用于递送信使rna的脂质制剂
EP3082760A1 (en) 2013-12-19 2016-10-26 Novartis AG LEPTIN mRNA COMPOSITIONS AND FORMULATIONS
CN105940110A (zh) 2014-01-31 2016-09-14 菲克特生物科学股份有限公司 用于核酸产生和递送的方法和产品
AU2015249553B2 (en) 2014-04-23 2021-03-04 Modernatx, Inc. Nucleic acid vaccines
SG11201608725YA (en) 2014-04-25 2016-11-29 Shire Human Genetic Therapies Methods for purification of messenger rna
US10022455B2 (en) 2014-05-30 2018-07-17 Translate Bio, Inc. Biodegradable lipids for delivery of nucleic acids
WO2015196128A2 (en) 2014-06-19 2015-12-23 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules and uses thereof
AU2015279968B2 (en) 2014-06-24 2019-11-14 Translate Bio, Inc. Stereochemically enriched compositions for delivery of nucleic acids
JP6782171B2 (ja) 2014-07-02 2020-11-11 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド メッセンジャーｒｎａのカプセル化
JP2017522028A (ja) 2014-07-16 2017-08-10 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 環状ポリヌクレオチド
WO2016045732A1 (en) 2014-09-25 2016-03-31 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Stable formulations of lipids and liposomes
GB201418965D0 (zh) * 2014-10-24 2014-12-10 Ospedale San Raffaele And Fond Telethon
WO2016077125A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Moderna Therapeutics, Inc. Alternative nucleic acid molecules containing reduced uracil content and uses thereof
EP3884964A1 (en) 2014-12-05 2021-09-29 Translate Bio, Inc. Messenger rna therapy for treatment of articular disease
WO2016128060A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 Biontech Ag Predicting t cell epitopes useful for vaccination
WO2016130943A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Rana Therapeutics, Inc. Hybrid oligonucleotides and uses thereof
EP3256585A4 (en) 2015-02-13 2018-08-15 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
JP6895892B2 (ja) 2015-03-19 2021-06-30 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド ポンペ病のｍＲＮＡ治療
EP3294885B1 (en) 2015-05-08 2020-07-01 CureVac Real Estate GmbH Method for producing rna
PT3303583T (pt) 2015-05-29 2020-07-07 Curevac Ag Um método para produção e purificação de rna, compreendendendo pelo menos um passo de filtração por fluxo tangencial
WO2017015463A2 (en) 2015-07-21 2017-01-26 Modernatx, Inc. Infectious disease vaccines
US11364292B2 (en) 2015-07-21 2022-06-21 Modernatx, Inc. CHIKV RNA vaccines
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
ES2908449T3 (es) 2015-09-17 2022-04-29 Modernatx Inc Polinucleótidos que contienen una región de cola estabilizadora
WO2017049286A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides containing a morpholino linker
EP3359670B2 (en) 2015-10-05 2024-02-14 ModernaTX, Inc. Methods for therapeutic administration of messenger ribonucleic acid drugs
WO2017059902A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh 3' utr sequences for stabilization of rna
JP6997704B2 (ja) 2015-10-14 2022-02-04 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド 生産性向上のためのｒｎａ関連酵素の修飾
AU2016342045A1 (en) 2015-10-22 2018-06-07 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
EP3364982A4 (en) 2015-10-22 2019-04-17 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST SEXUALLY TRANSMITTED DISEASES
TN2018000152A1 (en) 2015-10-22 2019-10-04 Modernatx Inc Nucleic acid vaccines for varicella zoster virus (vzv)
EP3364950A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST TROPICAL DISEASES
EP3364983A4 (en) 2015-10-22 2019-10-23 ModernaTX, Inc. VACCINES AGAINST RESPIRATORY VIRUS
EP3656872A1 (en) 2015-12-09 2020-05-27 Novartis AG Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry
EP3964200A1 (en) 2015-12-10 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Compositions and methods for delivery of therapeutic agents
US10465190B1 (en) 2015-12-23 2019-11-05 Modernatx, Inc. In vitro transcription methods and constructs
WO2017127750A1 (en) 2016-01-22 2017-07-27 Modernatx, Inc. Messenger ribonucleic acids for the production of intracellular binding polypeptides and methods of use thereof
TW201738256A (zh) * 2016-04-04 2017-11-01 日產化學工業股份有限公司 蛋白質產生方法
CA3020343A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Translate Bio, Inc. Multimeric coding nucleic acid and uses thereof
US20180126003A1 (en) * 2016-05-04 2018-05-10 Curevac Ag New targets for rna therapeutics
CN109640962B (zh) 2016-05-18 2022-07-19 摩登纳特斯有限公司 编码松弛素的多核苷酸
MA45052A (fr) 2016-05-18 2019-03-27 Modernatx Inc Polynucléotides codant pour jagged1 pour le traitement du syndrome d'alagille
JP2019522047A (ja) 2016-06-13 2019-08-08 トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症治療のためのメッセンジャーｒｎａ療法
EP3481943A1 (en) 2016-07-07 2019-05-15 Rubius Therapeutics, Inc. Compositions and methods related to therapeutic cell systems expressing exogenous rna
EP3500581A4 (en) 2016-08-17 2021-10-06 Solstice Biologics, Ltd. POLYNUCLEOTIDE CONSTRUCTS
WO2018035377A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
MX2019002904A (es) 2016-09-14 2019-09-26 Modernatx Inc Composiciones de arn de alta pureza y métodos para su preparación.
TW201815818A (zh) * 2016-09-26 2018-05-01 美商碩拿生物科學有限責任公司 細胞相關之分泌增強融合蛋白
CA3041307A1 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Giuseppe Ciaramella Human cytomegalovirus vaccine
SG11201903674YA (en) 2016-10-26 2019-05-30 Modernatx Inc Messenger ribonucleic acids for enhancing immune responses and methods of use thereof
US10925958B2 (en) 2016-11-11 2021-02-23 Modernatx, Inc. Influenza vaccine
MA50335A (fr) 2016-12-08 2020-08-19 Modernatx Inc Vaccins à acide nucléique contre des virus respiratoires
WO2018111967A1 (en) 2016-12-13 2018-06-21 Modernatx, Inc. Rna affinity purification
US11993645B2 (en) 2017-01-11 2024-05-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Compositions comprising R-Spondin (RSPO) surrogate molecules
CN110234662A (zh) 2017-01-26 2019-09-13 瑟罗泽恩公司 组织特异性wnt信号增强分子和其用途
US10093706B2 (en) 2017-01-30 2018-10-09 Indiana University Research And Technology Corporation Dominant positive hnRNP-E1 polypeptide compositions and methods
KR20190110612A (ko) 2017-02-01 2019-09-30 모더나티엑스, 인크. 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물
MA47515A (fr) 2017-02-16 2019-12-25 Modernatx Inc Compositions immunogènes très puissantes
US11253605B2 (en) 2017-02-27 2022-02-22 Translate Bio, Inc. Codon-optimized CFTR MRNA
KR102700956B1 (ko) 2017-02-28 2024-09-03 사노피 치료적 rna
WO2018170260A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Respiratory syncytial virus vaccine
WO2018170256A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Herpes simplex virus vaccine
EP3609534A4 (en) 2017-03-15 2021-01-13 ModernaTX, Inc. BROAD SPECTRUM VACCINE AGAINST THE INFLUENZA VIRUS
US11045540B2 (en) 2017-03-15 2021-06-29 Modernatx, Inc. Varicella zoster virus (VZV) vaccine
EP3595676A4 (en) 2017-03-17 2021-05-05 Modernatx, Inc. RNA VACCINES AGAINST ZOONOSES
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
IL270631B2 (en) 2017-05-16 2024-03-01 Translate Bio Inc Treatment of cystic fibrosis through the administration of mRNA with an optimal codon encoding ctfr
WO2018213789A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Modified messenger rna comprising functional rna elements
WO2018217897A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 David Weiner Compositions and method for inducing an immune response
US11786607B2 (en) 2017-06-15 2023-10-17 Modernatx, Inc. RNA formulations
US11597744B2 (en) 2017-06-30 2023-03-07 Sirius Therapeutics, Inc. Chiral phosphoramidite auxiliaries and methods of their use
CA3069105A1 (en) * 2017-07-03 2019-01-10 Torque Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immunostimulatory fusion molecules and uses thereof
CN111212905A (zh) 2017-08-18 2020-05-29 摩登纳特斯有限公司 Rna聚合酶变体
US11866696B2 (en) 2017-08-18 2024-01-09 Modernatx, Inc. Analytical HPLC methods
US11912982B2 (en) 2017-08-18 2024-02-27 Modernatx, Inc. Methods for HPLC analysis
MX2020002348A (es) 2017-08-31 2020-10-08 Modernatx Inc Métodos de elaboración de nanopartículas lipídicas.
US10653767B2 (en) 2017-09-14 2020-05-19 Modernatx, Inc. Zika virus MRNA vaccines
EP3704245A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Novartis AG Synthetic rnas and methods of use
EP3727428A1 (en) 2017-12-20 2020-10-28 Translate Bio, Inc. Improved composition and methods for treatment of ornithine transcarbamylase deficiency
US11802146B2 (en) 2018-01-05 2023-10-31 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding anti-chikungunya virus antibodies
US11911453B2 (en) 2018-01-29 2024-02-27 Modernatx, Inc. RSV RNA vaccines
CA3089117A1 (en) 2018-01-30 2019-08-08 Modernatx, Inc. Compositions and methods for delivery of agents to immune cells
EP3773745A1 (en) 2018-04-11 2021-02-17 ModernaTX, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements
EP3781689A1 (en) 2018-04-19 2021-02-24 Checkmate Pharmaceuticals, Inc. Synthetic rig-i-like receptor agonists
WO2020041793A1 (en) 2018-08-24 2020-02-27 Translate Bio, Inc. Methods for purification of messenger rna
JP7450945B2 (ja) 2018-08-30 2024-03-18 テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド ミオカルディンおよびａｓｃｌ１を用いた心細胞リプログラミング
US20230081530A1 (en) 2018-09-14 2023-03-16 Modernatx, Inc. Methods and compositions for treating cancer using mrna therapeutics
CN113271926A (zh) 2018-09-20 2021-08-17 摩登纳特斯有限公司 脂质纳米颗粒的制备及其施用方法
US20220001026A1 (en) 2018-11-08 2022-01-06 Modernatx, Inc. Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients
US11351242B1 (en) 2019-02-12 2022-06-07 Modernatx, Inc. HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition
CN113795579A (zh) 2019-02-20 2021-12-14 摩登纳特斯有限公司 用于共转录加帽的rna聚合酶变体
US11851694B1 (en) 2019-02-20 2023-12-26 Modernatx, Inc. High fidelity in vitro transcription
EP3938379A4 (en) 2019-03-15 2023-02-22 ModernaTX, Inc. HIV RNA VACCINE
US20230085318A1 (en) 2019-05-07 2023-03-16 Modernatx, Inc. Polynucleotides for disrupting immune cell activity and methods of use thereof
WO2020227537A1 (en) 2019-05-07 2020-11-12 Modernatx, Inc Differentially expressed immune cell micrornas for regulation of protein expression
MA56539A (fr) 2019-06-24 2022-04-27 Modernatx Inc Arn messager résistant à l'endonucléase et utilisations correspondantes
WO2020263985A1 (en) 2019-06-24 2020-12-30 Modernatx, Inc. Messenger rna comprising functional rna elements and uses thereof
US20230137971A1 (en) 2019-07-11 2023-05-04 Tenaya Therapeutics Inc. Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors
US10501404B1 (en) 2019-07-30 2019-12-10 Factor Bioscience Inc. Cationic lipids and transfection methods
US20220323482A1 (en) 2019-09-11 2022-10-13 Modernatx, Inc. Lnp-formulated mrna therapeutics and use thereof for treating human subjects
JP2022554175A (ja) 2019-10-23 2022-12-28 チェックメイト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合成ｒｉｇ－ｉ様受容体アゴニスト
US11241493B2 (en) 2020-02-04 2022-02-08 Curevac Ag Coronavirus vaccine
US20240277830A1 (en) 2020-02-04 2024-08-22 CureVac SE Coronavirus vaccine
AU2021230476A1 (en) 2020-03-02 2022-10-20 Tenaya Therapeutics, Inc. Gene vector control by cardiomyocyte-expressed microRNAs
EP4114940A4 (en) * 2020-03-04 2024-09-04 Flagship Pioneering Innovations Vi Llc METHODS AND COMPOSITIONS FOR MODULATING A GENOME
AU2021252164A1 (en) 2020-04-09 2022-12-15 Finncure Oy Mimetic nanoparticles for preventing the spreading and lowering the infection rate of novel coronaviruses
GB2594364A (en) 2020-04-22 2021-10-27 Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh Coronavirus vaccine
WO2021243207A1 (en) 2020-05-28 2021-12-02 Modernatx, Inc. Use of mrnas encoding ox40l, il-23 and il-36gamma for treating cancer
JP2023538260A (ja) 2020-08-06 2023-09-07 モダーナティエックス・インコーポレイテッド ペイロード分子を気道上皮に送達するための組成物
US11406703B2 (en) 2020-08-25 2022-08-09 Modernatx, Inc. Human cytomegalovirus vaccine
JP2023553343A (ja) 2020-11-25 2023-12-21 アカゲラ・メディスンズ，インコーポレイテッド 核酸を送達するための脂質ナノ粒子および関連する使用方法
TW202237844A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 德商拜恩技術股份公司 Ｒｎａ製造
KR20230164648A (ko) 2020-12-22 2023-12-04 큐어백 에스이 SARS-CoV-2 변이체에 대한 RNA 백신
EP4277929A1 (en) * 2021-01-14 2023-11-22 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
MX2023007788A (es) 2021-01-24 2023-11-17 Michael David Forrest Inhibidores de la atp sintasa, usos cosmeticos y terapeuticos.
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
CN118019527A (zh) 2021-07-26 2024-05-10 摩登纳特斯有限公司 用于制备脂质纳米颗粒组合物的方法
CN118019526A (zh) 2021-07-26 2024-05-10 摩登纳特斯有限公司 用于制备将有效负载分子递送至气道上皮的脂质纳米颗粒组合物的方法
CN113736768B (zh) * 2021-08-18 2023-06-23 新发药业有限公司 假尿苷合成酶突变体、突变基因及其在制备维生素b2中的应用
CN117999355A (zh) 2021-08-24 2024-05-07 生物技术欧洲股份公司 体外转录技术
WO2023064469A1 (en) 2021-10-13 2023-04-20 Modernatx, Inc. Compositions of mrna-encoded il15 fusion proteins and methods of use thereof
WO2023068931A1 (en) 2021-10-21 2023-04-27 Curevac Netherlands B.V. Cancer neoantigens
CA3235867A1 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Munir MOSAHEB Mrna vaccine composition
EP4429644A1 (en) 2021-11-12 2024-09-18 ModernaTX, Inc. Compositions for the delivery of payload molecules to airway epithelium
CN118488834A (zh) 2021-11-23 2024-08-13 赛欧生物医药股份有限公司 细菌源性脂质组合物和其用途
WO2023122080A1 (en) 2021-12-20 2023-06-29 Senda Biosciences, Inc. Compositions comprising mrna and lipid reconstructed plant messenger packs
TW202345863A (zh) 2022-02-09 2023-12-01 美商現代公司 黏膜投與方法及調配物
WO2023196988A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 Modernatx, Inc. Methods of use of mrnas encoding il-12
WO2023196898A1 (en) 2022-04-07 2023-10-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Beta globin mimetic peptides and their use
WO2023199113A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Smartcella Solutions Ab COMPOSITIONS AND METHODS FOR EXOSOME-MEDIATED DELIVERY OF mRNA AGENTS
WO2023230587A2 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and methods of use thereof
US11878055B1 (en) 2022-06-26 2024-01-23 BioNTech SE Coronavirus vaccine
WO2024044741A2 (en) * 2022-08-26 2024-02-29 Trilink Biotechnologies, Llc Efficient method for making highly purified 5'-capped oligonucleotides
WO2024083345A1 (en) 2022-10-21 2024-04-25 BioNTech SE Methods and uses associated with liquid compositions
WO2024102434A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Senda Biosciences, Inc. Rna compositions comprising lipid nanoparticles or lipid reconstructed natural messenger packs
WO2024107827A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 The Broad Institute, Inc. Therapeutic exploitation of sting channel activity
WO2024158824A1 (en) 2023-01-23 2024-08-02 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
WO2024159172A1 (en) 2023-01-27 2024-08-02 Senda Biosciences, Inc. A modified lipid composition and uses thereof
WO2024178305A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Modernatx, Inc. Compositions of mrna-encoded il-15 fusion proteins and methods of use thereof for treating cancer
WO2024189583A1 (en) 2023-03-15 2024-09-19 Kyoto Prefectural Public University Corporation Peptide expression constructs and uses thereof
WO2024197310A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Modernatx, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
WO2024197307A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Modernatx, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
WO2024197309A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Modernatx, Inc. Peg targeting compounds for delivery of therapeutics
WO2024220752A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Rna therapeutic compositions
WO2024220625A1 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Delivery of polynucleotides from lipid nanoparticles comprising rna and ionizable lipids
WO2024220712A2 (en) 2023-04-19 2024-10-24 Sail Biomedicines, Inc. Vaccine compositions

Family Cites Families (1162)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2008526A (en) 1932-11-03 1935-07-16 Wappler Frederick Charles Method and means for treating living tissue
US3467096A (en) 1966-04-12 1969-09-16 Ferrell S Horn Multiple hypodermic syringe arrangement
BE757653A (fr) 1969-10-21 1971-04-16 Ugine Kuhlmann Nouveaux medicaments derives d'acides nucleiques et procedes pour leur preparation
BE786542A (fr) 1971-07-22 1973-01-22 Dow Corning Dispositif d'aspiration permettant d'obtenir des echantillons de cellules
US3906092A (en) 1971-11-26 1975-09-16 Merck & Co Inc Stimulation of antibody response
US4270537A (en) 1979-11-19 1981-06-02 Romaine Richard A Automatic hypodermic syringe
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4411657A (en) 1980-05-19 1983-10-25 Anibal Galindo Hypodermic needle
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4373071A (en) 1981-04-30 1983-02-08 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4401796A (en) 1981-04-30 1983-08-30 City Of Hope Research Institute Solid-phase synthesis of polynucleotides
US4474569A (en) 1982-06-28 1984-10-02 Denver Surgical Developments, Inc. Antenatal shunt
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4579849A (en) 1984-04-06 1986-04-01 Merck & Co., Inc. N-alkylguanine acyclonucleosides as antiviral agents
US4957735A (en) 1984-06-12 1990-09-18 The University Of Tennessee Research Corporation Target-sensitive immunoliposomes- preparation and characterization
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US5036006A (en) 1984-11-13 1991-07-30 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5116943A (en) 1985-01-18 1992-05-26 Cetus Corporation Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein
CA1288073C (en) 1985-03-07 1991-08-27 Paul G. Ahlquist Rna transformation vector
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
EP0204401A1 (en) 1985-04-09 1986-12-10 Biogen, Inc. Method of improving the yield of polypeptides produced in a host cell by stabilizing mRNA
US5017691A (en) 1986-07-03 1991-05-21 Schering Corporation Mammalian interleukin-4
US5153319A (en) 1986-03-31 1992-10-06 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4879111A (en) 1986-04-17 1989-11-07 Cetus Corporation Treatment of infections with lymphokines
US4886499A (en) 1986-12-18 1989-12-12 Hoffmann-La Roche Inc. Portable injection appliance
GB8704027D0 (en) 1987-02-20 1987-03-25 Owen Mumford Ltd Syringe needle combination
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US6090591A (en) 1987-07-31 2000-07-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective amplification of target polynucleotide sequences
IE72468B1 (en) 1987-07-31 1997-04-09 Univ Leland Stanford Junior Selective amplification of target polynucleotide sequences
WO1989006700A1 (en) 1988-01-21 1989-07-27 Genentech, Inc. Amplification and detection of nucleic acid sequences
CA1340807C (en) 1988-02-24 1999-11-02 Lawrence T. Malek Nucleic acid amplification process
JP2650159B2 (ja) 1988-02-24 1997-09-03 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー 核酸増幅方法
DE68923027D1 (de) 1988-03-04 1995-07-20 Cancer Res Campaign Tech Antigene.
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
AU631545B2 (en) 1988-04-15 1992-12-03 Protein Design Labs, Inc. Il-2 receptor-specific chimeric antibodies
US5168038A (en) 1988-06-17 1992-12-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5021335A (en) 1988-06-17 1991-06-04 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In situ transcription in cells and tissues
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
US5759802A (en) 1988-10-26 1998-06-02 Tonen Corporation Production of human serum alubumin A
FR2638359A1 (fr) 1988-11-03 1990-05-04 Tino Dalto Guide de seringue avec reglage de la profondeur de penetration de l'aiguille dans la peau
US5047524A (en) 1988-12-21 1991-09-10 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5262530A (en) 1988-12-21 1993-11-16 Applied Biosystems, Inc. Automated system for polynucleotide synthesis and purification
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
US6214804B1 (en) 1989-03-21 2001-04-10 Vical Incorporated Induction of a protective immune response in a mammal by injecting a DNA sequence
US6867195B1 (en) 1989-03-21 2005-03-15 Vical Incorporated Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected
US5693622A (en) 1989-03-21 1997-12-02 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences cardiac muscle of a mammal
EP1026253B2 (en) 1989-03-21 2012-12-19 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US5012818A (en) 1989-05-04 1991-05-07 Joishy Suresh K Two in one bone marrow surgical needle
IE66597B1 (en) 1989-05-10 1996-01-24 Akzo Nv Method for the synthesis of ribonucleic acid (RNA)
US5240855A (en) 1989-05-12 1993-08-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Particle gun
US5332671A (en) 1989-05-12 1994-07-26 Genetech, Inc. Production of vascular endothelial cell growth factor and DNA encoding same
CA2020958C (en) 1989-07-11 2005-01-11 Daniel L. Kacian Nucleic acid sequence amplification methods
US5545522A (en) 1989-09-22 1996-08-13 Van Gelder; Russell N. Process for amplifying a target polynucleotide sequence using a single primer-promoter complex
FR2740360B1 (fr) 1995-10-25 1997-12-26 Rhone Poulenc Chimie Granules redispersables dans l'eau comprenant une matiere active sous forme liquide
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5215899A (en) 1989-11-09 1993-06-01 Miles Inc. Nucleic acid amplification employing ligatable hairpin probe and transcription
NO904633L (no) 1989-11-09 1991-05-10 Molecular Diagnostics Inc Amplifikasjon av nukleinsyrer ved transkriberbar haarnaalsprobe.
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5633076A (en) 1989-12-01 1997-05-27 Pharming Bv Method of producing a transgenic bovine or transgenic bovine embryo
US5697901A (en) 1989-12-14 1997-12-16 Elof Eriksson Gene delivery by microneedle injection
US5194370A (en) 1990-05-16 1993-03-16 Life Technologies, Inc. Promoter ligation activated transcription amplification of nucleic acid sequences
EP0542874A4 (en) 1990-07-25 1994-05-11 Syngene Inc Circular extension for generating multiple nucleic acid complements
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5190521A (en) 1990-08-22 1993-03-02 Tecnol Medical Products, Inc. Apparatus and method for raising a skin wheal and anesthetizing skin
US6140496A (en) 1990-10-09 2000-10-31 Benner; Steven Albert Precursors for deoxyribonucleotides containing non-standard nucleosides
US5527288A (en) 1990-12-13 1996-06-18 Elan Medical Technologies Limited Intradermal drug delivery device and method for intradermal delivery of drugs
US6100024A (en) 1991-02-08 2000-08-08 Promega Corporation Methods and compositions for nucleic acid detection by target extension and probe amplification
EP1905782A1 (en) 1991-03-18 2008-04-02 New York University Monoclonal and chimeric antibodies specific for human tumor necrosis factor
US5426180A (en) 1991-03-27 1995-06-20 Research Corporation Technologies, Inc. Methods of making single-stranded circular oligonucleotides
DK0628639T3 (da) 1991-04-25 2000-01-24 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Rekonstitueret humant antistof mod human interleukin-6-receptor
US5169766A (en) 1991-06-14 1992-12-08 Life Technologies, Inc. Amplification of nucleic acid molecules
US5199441A (en) 1991-08-20 1993-04-06 Hogle Hugh H Fine needle aspiration biopsy apparatus and method
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
SE9102652D0 (sv) 1991-09-13 1991-09-13 Kabi Pharmacia Ab Injection needle arrangement
US5298422A (en) 1991-11-06 1994-03-29 Baylor College Of Medicine Myogenic vector systems
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
WO1993014778A1 (en) 1992-01-23 1993-08-05 Vical, Inc. Ex vivo gene transfer
US5328483A (en) 1992-02-27 1994-07-12 Jacoby Richard M Intradermal injection device with medication and needle guard
JP3368603B2 (ja) 1992-02-28 2003-01-20 オリンパス光学工業株式会社 遺伝子治療用処置具
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6132419A (en) 1992-05-22 2000-10-17 Genetronics, Inc. Electroporetic gene and drug therapy
US5514545A (en) 1992-06-11 1996-05-07 Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for characterizing single cells based on RNA amplification for diagnostics and therapeutics
US6670178B1 (en) 1992-07-10 2003-12-30 Transkaryotic Therapies, Inc. In Vivo production and delivery of insulinotropin for gene therapy
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
DE69310179T2 (de) 1992-07-31 1997-07-31 Behringwerke Ag Verfahren zur einführung von definierten sequenzen am 3' ende von polynukleotiden
US5273525A (en) 1992-08-13 1993-12-28 Btx Inc. Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery
US5240885A (en) 1992-09-21 1993-08-31 Corning Incorporated Rare earth-doped, stabilized cadmium halide glasses
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
WO1994009838A1 (en) 1992-11-04 1994-05-11 Denver Biomaterials, Inc. Apparatus for removal of pleural effusion fluid
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
NZ261259A (en) 1993-01-12 1996-12-20 Biogen Inc Humanised recombinant anti-vla4 antibody and diagnostic compositions and medicaments
FR2703253B1 (fr) 1993-03-30 1995-06-23 Centre Nat Rech Scient Applicateur d'impulsions electriques pour traitement de tissus biologiques.
US7135312B2 (en) 1993-04-15 2006-11-14 University Of Rochester Circular DNA vectors for synthesis of RNA and DNA
US5773244A (en) 1993-05-19 1998-06-30 Regents Of The University Of California Methods of making circular RNA
US5851829A (en) 1993-07-16 1998-12-22 Dana-Farber Cancer Institute Method of intracellular binding of target molecules
US5672491A (en) 1993-09-20 1997-09-30 The Leland Stanford Junior University Recombinant production of novel polyketides
US6432711B1 (en) 1993-11-03 2002-08-13 Diacrin, Inc. Embryonic stem cells capable of differentiating into desired cell lines
US6096503A (en) 1993-11-12 2000-08-01 The Scripps Research Institute Method for simultaneous identification of differentially expresses mRNAs and measurement of relative concentrations
US7435802B2 (en) 1994-01-25 2008-10-14 Elan Pharaceuticals, Inc. Humanized anti-VLA4 immunoglobulins
US5840299A (en) 1994-01-25 1998-11-24 Athena Neurosciences, Inc. Humanized antibodies against leukocyte adhesion molecule VLA-4
DE69533295T3 (de) 1994-02-16 2009-07-16 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, The Department Of Health And Human Services Melanoma-assoziierte Antigene, Epitope davon und Impstoffe gegen Melanoma
IL112820A0 (en) 1994-03-07 1995-05-26 Merck & Co Inc Coordinate in vivo gene expression
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
HUT76094A (en) 1994-03-18 1997-06-30 Lynx Therapeutics Oligonucleotide n3'-p5' phosphoramidates: synthesis and compounds; hybridization and nuclease resistance properties
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5457041A (en) 1994-03-25 1995-10-10 Science Applications International Corporation Needle array and method of introducing biological substances into living cells using the needle array
US6074642A (en) 1994-05-02 2000-06-13 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of antibodies specific to human complement component C5 for the treatment of glomerulonephritis
IL113776A (en) 1994-05-18 2008-12-29 Bayer Bioscience Gmbh Dna sequences coding for enzymes which catalyze the synthesis of linear alpha 1,4 - glucans in plants, fungi and microorganisms
US6355247B1 (en) 1994-06-02 2002-03-12 Chiron Corporation Nucleic acid immunization using a virus-based infection/transfection system
GB9412230D0 (en) 1994-06-17 1994-08-10 Celltech Ltd Interleukin-5 specific recombiant antibodies
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
DE69534530T2 (de) 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
US5665545A (en) 1994-11-28 1997-09-09 Akzo Nobel N.V. Terminal repeat amplification method
US5641665A (en) 1994-11-28 1997-06-24 Vical Incorporated Plasmids suitable for IL-2 expression
US5588960A (en) 1994-12-01 1996-12-31 Vidamed, Inc. Transurethral needle delivery device with cystoscope and method for treatment of urinary incontinence
US5807718A (en) 1994-12-02 1998-09-15 The Scripps Research Institute Enzymatic DNA molecules
EP0795018B1 (en) 1995-01-06 2007-09-12 Plant Research International B.V. Dna sequences encoding carbohydrate polymer synthesizing enzymes and method for producing transgenic plants
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
US5795587A (en) 1995-01-23 1998-08-18 University Of Pittsburgh Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
US5824497A (en) 1995-02-10 1998-10-20 Mcmaster University High efficiency translation of mRNA molecules
DE69629326D1 (de) 1995-02-15 2003-09-11 Joseph Eldor Spinalnadel mit mehreren Löchern
US5707807A (en) 1995-03-28 1998-01-13 Research Development Corporation Of Japan Molecular indexing for expressed gene analysis
US5869230A (en) 1995-03-30 1999-02-09 Beth Israel Hospital Association Gene transfer into the kidney
US5986054A (en) 1995-04-28 1999-11-16 The Hospital For Sick Children, Hsc Research And Development Limited Partnership Genetic sequences and proteins related to alzheimer's disease
FR2733762B1 (fr) 1995-05-02 1997-08-01 Genset Sa Methode de couplage specifique de la coiffe de l'extremite 5' d'un fragment d'arnm et preparation d'arnm et d'adnc complet
US5700642A (en) 1995-05-22 1997-12-23 Sri International Oligonucleotide sizing using immobilized cleavable primers
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US6051429A (en) 1995-06-07 2000-04-18 Life Technologies, Inc. Peptide-enhanced cationic lipid transfections
US6111095A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Merck & Co., Inc. Capped synthetic RNA, analogs, and aptamers
US5889136A (en) 1995-06-09 1999-03-30 The Regents Of The University Of Colorado Orthoester protecting groups in RNA synthesis
US5766903A (en) 1995-08-23 1998-06-16 University Technology Corporation Circular RNA and uses thereof
US6265389B1 (en) 1995-08-31 2001-07-24 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides
WO1997011085A1 (en) 1995-09-19 1997-03-27 University Of Massachusetts Inhibited biological degradation of oligodeoxynucleotides
US5830879A (en) 1995-10-02 1998-11-03 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. Treatment of vascular injury using vascular endothelial growth factor
US6265387B1 (en) 1995-10-11 2001-07-24 Mirus, Inc. Process of delivering naked DNA into a hepatocyte via bile duct
US6132988A (en) 1995-10-27 2000-10-17 Takeda Chemical Industries, Ltd. DNA encoding a neuronal cell-specific receptor protein
CU22584A1 (es) 1995-11-17 1999-11-03 Centro Inmunologia Molecular Composiciones farmacéuticas que contienen un anticuerpo monoclonal que reconoce el antígeno de diferenciación leucocitario humano cd6 y sus usos para el diagnóstico y tratamiento de la psoriasis
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
US5962271A (en) 1996-01-03 1999-10-05 Cloutech Laboratories, Inc. Methods and compositions for generating full-length cDNA having arbitrary nucleotide sequence at the 3'-end
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
US6261584B1 (en) 1996-02-02 2001-07-17 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
US6395292B2 (en) 1996-02-02 2002-05-28 Alza Corporation Sustained delivery of an active agent using an implantable system
WO1997030064A1 (en) 1996-02-16 1997-08-21 Stichting Rega Vzw Hexitol containing oligonucleotides and their use in antisense strategies
US6534312B1 (en) 1996-02-22 2003-03-18 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
US6090391A (en) 1996-02-23 2000-07-18 Aviron Recombinant tryptophan mutants of influenza
US6300487B1 (en) 1996-03-19 2001-10-09 Cell Therapuetics, Inc. Mammalian lysophosphatidic acid acyltransferase
SE9601245D0 (sv) 1996-03-29 1996-03-29 Pharmacia Ab Chimeric superantigens and their use
TW517061B (en) 1996-03-29 2003-01-11 Pharmacia & Amp Upjohn Ab Modified/chimeric superantigens and their use
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
US5712127A (en) 1996-04-29 1998-01-27 Genescape Inc. Subtractive amplification
US5853719A (en) 1996-04-30 1998-12-29 Duke University Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA
US7329741B2 (en) 1996-06-05 2008-02-12 Chiron Corporation Polynucleotides that hybridize to DP-75 and their use
EP0938553B1 (en) 1996-06-05 2009-08-05 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Dna encoding dp-75 and a process for its use
CA2258568A1 (en) 1996-06-21 1997-12-24 Merck & Co., Inc. Vaccines comprising synthetic genes
US6234990B1 (en) 1996-06-28 2001-05-22 Sontra Medical, Inc. Ultrasound enhancement of transdermal transport
US5939262A (en) 1996-07-03 1999-08-17 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant RNA preparation and utilization
US5677124A (en) 1996-07-03 1997-10-14 Ambion, Inc. Ribonuclease resistant viral RNA standards
US7288266B2 (en) 1996-08-19 2007-10-30 United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Liposome complexes for increased systemic delivery
US5849546A (en) 1996-09-13 1998-12-15 Epicentre Technologies Corporation Methods for using mutant RNA polymerases with reduced discrimination between non-canonical and canonical nucleoside triphosphates
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
PT932678E (pt) 1996-09-24 2006-07-31 Tanox Inc Familia de genes que codificam peptidos relacionados com apoptose, peptidos por eles codificados e metodos para sua utilizacao
US6214966B1 (en) 1996-09-26 2001-04-10 Shearwater Corporation Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
EP0839912A1 (en) 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
GB9623051D0 (en) 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
US5980887A (en) 1996-11-08 1999-11-09 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston Methods for enhancing angiogenesis with endothelial progenitor cells
US6143559A (en) * 1996-11-18 2000-11-07 Arch Development Corporation Methods for the production of chicken monoclonal antibodies
US5759179A (en) 1996-12-31 1998-06-02 Johnson & Johnson Medical, Inc. Needle and valve assembly for use with a catheter
WO1998031700A1 (en) 1997-01-21 1998-07-23 The General Hospital Corporation Selection of proteins using rna-protein fusions
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
US6696291B2 (en) 1997-02-07 2004-02-24 Merck & Co., Inc. Synthetic HIV gag genes
US6228640B1 (en) 1997-02-07 2001-05-08 Cem Cezayirli Programmable antigen presenting cell of CD34 lineage
US6251665B1 (en) 1997-02-07 2001-06-26 Cem Cezayirli Directed maturation of stem cells and production of programmable antigen presenting dentritic cells therefrom
ATE342916T1 (de) 1997-02-07 2006-11-15 Merck & Co Inc Synthetische hiv gag gene
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
US5914269A (en) 1997-04-04 1999-06-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide inhibition of epidermal growth factor receptor expression
AU6972798A (en) 1997-04-18 1998-11-13 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Inhibition of hiv-1 replication by a tat rna-binding domain peptide analog
US5958688A (en) 1997-04-28 1999-09-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Characterization of mRNA patterns in neurites and single cells for medical diagnosis and therapeutics
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5989911A (en) 1997-05-09 1999-11-23 University Of Massachusetts Site-specific synthesis of pseudouridine in RNA
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
US6124091A (en) 1997-05-30 2000-09-26 Research Corporation Technologies, Inc. Cell growth-controlling oligonucleotides
AU753172B2 (en) 1997-06-06 2002-10-10 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US6589940B1 (en) 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
DE69834038D1 (de) 1997-07-01 2006-05-18 Isis Pharmaceutical Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
US5994511A (en) 1997-07-02 1999-11-30 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides
CN1275085A (zh) 1997-07-21 2000-11-29 法玛西雅和厄普约翰公司 靶细胞的定向细胞溶解、引起细胞溶解的试剂和组合物以及可用于制备这些试剂的化合物
WO1999006073A1 (en) 1997-07-31 1999-02-11 St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. Method for the treatment of grafts
PT2044950E (pt) 1997-09-18 2012-09-18 Univ Pennsylvania Cassetes de imunização adn de vif atenuadas para vacinas genéticas
AU9319398A (en) * 1997-09-19 1999-04-05 Sequitur, Inc. Sense mrna therapy
US6004573A (en) 1997-10-03 1999-12-21 Macromed, Inc. Biodegradable low molecular weight triblock poly(lactide-co-glycolide) polyethylene glycol copolymers having reverse thermal gelation properties
AU750106B2 (en) 1997-10-07 2002-07-11 University Of Maryland Biotechnology Institute Method for introducing and expressing RNA in animal cells
WO1999020766A2 (en) 1997-10-20 1999-04-29 Genzyme Transgenics Corporation NOVEL MODIFIED NUCLEIC ACID SEQUENCES AND METHODS FOR INCREASING mRNA LEVELS AND PROTEIN EXPRESSION IN CELL SYSTEMS
US6019747A (en) 1997-10-21 2000-02-01 I-Flow Corporation Spring-actuated infusion syringe
US6303378B1 (en) 1997-10-24 2001-10-16 Valentis, Inc. Methods for preparing polynucleotide transfection complexes
ATE243045T1 (de) 1997-11-20 2003-07-15 Vical Inc Behandlung von krebs durch verwendung von zytokin-exprimierender polynukleotiden und zusammensetzungen dafür
US7655777B2 (en) 1997-11-24 2010-02-02 Monsanto Technology Llc Nucleic acid molecules associated with the tocopherol pathway
US6517869B1 (en) 1997-12-12 2003-02-11 Expression Genetics, Inc. Positively charged poly(alpha-(omega-aminoalkyl)lycolic acid) for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
WO1999029758A1 (en) 1997-12-12 1999-06-17 Samyang Corporation Positively-charged poly[alpha-(omega-aminoalkyl)glycolic acid] for the delivery of a bioactive agent via tissue and cellular uptake
WO1999033982A2 (en) 1997-12-23 1999-07-08 Chiron Corporation Human genes and gene expression products i
US6383811B2 (en) 1997-12-30 2002-05-07 Mirus Corporation Polyampholytes for delivering polyions to a cell
DE69941447D1 (de) 1998-01-05 2009-11-05 Univ Washington Erhöhter transport unter benutzung membranzerstörender stoffe
AU740999B2 (en) 1998-01-08 2001-11-22 Sontra Medical, Inc. Sonophoretic enhanced transdermal transport
US8287483B2 (en) 1998-01-08 2012-10-16 Echo Therapeutics, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
US6365346B1 (en) 1998-02-18 2002-04-02 Dade Behring Inc. Quantitative determination of nucleic acid amplification products
US5955310A (en) 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
US6432925B1 (en) 1998-04-16 2002-08-13 John Wayne Cancer Institute RNA cancer vaccine and methods for its use
US6429301B1 (en) 1998-04-17 2002-08-06 Whitehead Institute For Biomedical Research Use of a ribozyme to join nucleic acids and peptides
GB9808327D0 (en) 1998-04-20 1998-06-17 Chiron Spa Antidiotypic compounds
US6395253B2 (en) 1998-04-23 2002-05-28 The Regents Of The University Of Michigan Microspheres containing condensed polyanionic bioactive agents and methods for their production
WO1999054455A1 (en) 1998-04-23 1999-10-28 Takara Shuzo Co., Ltd. Method for synthesizing dna
US20020064517A1 (en) 1998-04-30 2002-05-30 Stewart A. Cederholm-Williams Fibrin sealant as a transfection/transformation vehicle for gene therapy
US20090208418A1 (en) 2005-04-29 2009-08-20 Innexus Biotechnology Internaltional Ltd. Superantibody synthesis and use in detection, prevention and treatment of disease
AU4193199A (en) 1998-05-20 1999-12-06 Expression Genetics, Inc. A hepatocyte targeting polyethylene glyco-grafted poly-l-lysine polymeric gene carrier
US6503231B1 (en) 1998-06-10 2003-01-07 Georgia Tech Research Corporation Microneedle device for transport of molecules across tissue
US7091192B1 (en) 1998-07-01 2006-08-15 California Institute Of Technology Linear cyclodextrin copolymers
CA2337680A1 (en) 1998-07-13 2000-01-20 Expression Genetics, Inc. Polyester analogue of poly-l-lysine as a soluble, biodegradable gene delivery carrier
US6222030B1 (en) 1998-08-03 2001-04-24 Agilent Technologies, Inc. Solid phase synthesis of oligonucleotides using carbonate protecting groups and alpha-effect nucleophile deprotection
EP2990054A1 (en) 1998-08-11 2016-03-02 Biogen Inc. Combination therapies for B-cell lyphomas comprising administration of anti-CD20 antibody
GB9817662D0 (en) 1998-08-13 1998-10-07 Crocker Peter J Substance delivery
US6924365B1 (en) 1998-09-29 2005-08-02 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger RNA
US20090017533A1 (en) 1998-09-29 2009-01-15 Shire Human Genetic Therapies, Inc., A Delaware Corporation Optimized messenger rna
JP2002528109A (ja) 1998-11-03 2002-09-03 エール ユニバーシティ マルチドメインポリヌクレオチド分子センサ
PT2055313E (pt) 1998-11-09 2015-08-25 Biogen Idec Inc Tratamento de malignidades hematológicas associadas a células tumorais em circulação utilizando anticorpo quimérico anti-cd20
CA2350064C (en) 1998-11-09 2012-05-08 Idec Pharmaceuticals Corporation Chimeric anti-cd20 antibody treatment of patients receiving bmt or pbsc transplants
AU2023400A (en) 1998-11-12 2000-05-29 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for inhibiting angiogenesis using trna and fragments thereof
US6210931B1 (en) 1998-11-30 2001-04-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Ribozyme-mediated synthesis of circular RNA
US20040171980A1 (en) 1998-12-18 2004-09-02 Sontra Medical, Inc. Method and apparatus for enhancement of transdermal transport
WO2000039327A1 (en) 1998-12-23 2000-07-06 Human Genome Sciences, Inc. Peptidoglycan recognition proteins
US6255476B1 (en) 1999-02-22 2001-07-03 Pe Corporation (Ny) Methods and compositions for synthesis of labelled oligonucleotides and analogs on solid-supports
WO2000050586A2 (en) 1999-02-22 2000-08-31 European Molecular Biology Laboratory In vitro translation system
US7629311B2 (en) 1999-02-24 2009-12-08 Edward Lewis Tobinick Methods to facilitate transmission of large molecules across the blood-brain, blood-eye, and blood-nerve barriers
JP2002537102A (ja) 1999-02-26 2002-11-05 カイロン コーポレイション 吸着された高分子および微粒子を有するミクロエマルジョン
AU778809B2 (en) 1999-03-29 2004-12-23 Statens Serum Institut Method for producing a nucleotide sequence construct with optimised codons for an HIV genetic vaccine based on primary, early HIV isolate and synthetic envelope BX08 constructs
CN1189495C (zh) 1999-04-09 2005-02-16 迪纳尔生物技术公司 用于制备单分散聚合物颗粒的方法
ATE311199T1 (de) 1999-05-07 2005-12-15 Genentech Inc Behandlung von autoimmunkrankheiten mit antagonisten die oberflächenmarker von b zellen binden
US8663692B1 (en) 1999-05-07 2014-03-04 Pharmasol Gmbh Lipid particles on the basis of mixtures of liquid and solid lipids and method for producing same
US6346382B1 (en) 1999-06-01 2002-02-12 Vanderbilt University Human carbamyl phosphate synthetase I polymorphism and diagnostic methods related thereto
US6611707B1 (en) 1999-06-04 2003-08-26 Georgia Tech Research Corporation Microneedle drug delivery device
US6743211B1 (en) 1999-11-23 2004-06-01 Georgia Tech Research Corporation Devices and methods for enhanced microneedle penetration of biological barriers
WO2000075356A1 (en) 1999-06-04 2000-12-14 Lin Shi Lung Rna polymerase chain reaction
US6303573B1 (en) 1999-06-07 2001-10-16 The Burnham Institute Heart homing peptides and methods of using same
AU776268B2 (en) 1999-06-08 2004-09-02 Aventis Pasteur Immunostimulant oligonucleotide
AU782160B2 (en) 1999-06-09 2005-07-07 Immunomedics Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells
US6949245B1 (en) 1999-06-25 2005-09-27 Genentech, Inc. Humanized anti-ErbB2 antibodies and treatment with anti-ErbB2 antibodies
AU782286B2 (en) 1999-06-30 2005-07-14 Advanced Cell Technology, Inc. Cytoplasmic transfer to de-differentiate recipient cells
US6514948B1 (en) 1999-07-02 2003-02-04 The Regents Of The University Of California Method for enhancing an immune response
MXPA01013462A (es) 1999-07-09 2002-07-02 Wyeth Corp Metodos y composiciones para prevenir la formacion de arn aberrante durante la transcripcion de una secuencia plasmidica.
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
AU784012B2 (en) 1999-08-24 2006-01-12 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human CTLA-4 antibodies and their uses
US20050112141A1 (en) 2000-08-30 2005-05-26 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
US20040106567A1 (en) 1999-09-07 2004-06-03 Hagstrom James E. Intravascular delivery of non-viral nucleic acid
ATE289630T1 (de) 1999-09-09 2005-03-15 Curevac Gmbh Transfer von mrnas unter verwendung von polykationischen verbindungen
AU7398200A (en) 1999-09-17 2001-04-24 Aventis Pasteur Limited Chlamydia antigens and corresponding dna fragments and uses thereof
US6623457B1 (en) 1999-09-22 2003-09-23 Becton, Dickinson And Company Method and apparatus for the transdermal administration of a substance
WO2002064799A2 (en) 1999-09-28 2002-08-22 Transkaryotic Therapies, Inc. Optimized messenger rna
WO2001025488A2 (en) 1999-10-06 2001-04-12 Quark Biotech, Inc. Method for enrichment of natural antisense messenger rna
US7060291B1 (en) 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
US6613026B1 (en) 1999-12-08 2003-09-02 Scimed Life Systems, Inc. Lateral needle-less injection apparatus and method
US6277974B1 (en) 1999-12-14 2001-08-21 Cogent Neuroscience, Inc. Compositions and methods for diagnosing and treating conditions, disorders, or diseases involving cell death
US6245929B1 (en) 1999-12-20 2001-06-12 General Electric Company Catalyst composition and method for producing diaryl carbonates, using bisphosphines
DE60015090T2 (de) 1999-12-22 2006-03-02 Basell Poliolefine Italia S.P.A. Alpha-olefin enthaltendes polymerisationskatalysatorsystem, das ein aromatisches silan enthält
AU2764801A (en) 2000-01-07 2001-07-24 University Of Washington Enhanced transport of agents using membrane disruptive agents
EP1276901A2 (en) 2000-01-13 2003-01-22 Amsterdam Support Diagnostics B.V. A universal nucleic acid amplification system for nucleic acids in a sample
CA2395811A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
CA2398756A1 (en) 2000-01-31 2001-08-02 Eyal Raz Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
US6602498B2 (en) 2000-02-22 2003-08-05 Shearwater Corporation N-maleimidyl polymer derivatives
WO2001062801A2 (en) 2000-02-24 2001-08-30 Washington University Humanized antibodies that sequester amyloid beta peptide
ATE511400T1 (de) 2000-03-03 2011-06-15 Genetronics Inc Nukleinsäure-fomulierungen zur genverabreichung
JP2003529774A (ja) 2000-03-31 2003-10-07 ジェネンテック・インコーポレーテッド 遺伝子発現を検出し定量するための構成物及び方法
EP1283722A1 (en) 2000-03-31 2003-02-19 Idec Pharmaceuticals Corporation Combined use of anti-cytokine antibodies or antagonists and anti-cd20 for the treatment of b cell lymphoma
US6565572B2 (en) 2000-04-10 2003-05-20 Sdgi Holdings, Inc. Fenestrated surgical screw and method
CA2405557C (en) 2000-04-12 2013-09-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
US6368801B1 (en) 2000-04-12 2002-04-09 Molecular Staging, Inc. Detection and amplification of RNA using target-mediated ligation of DNA by RNA ligase
US20010046496A1 (en) 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
US6375972B1 (en) 2000-04-26 2002-04-23 Control Delivery Systems, Inc. Sustained release drug delivery devices, methods of use, and methods of manufacturing thereof
US7871598B1 (en) 2000-05-10 2011-01-18 Novartis Ag Stable metal ion-lipid powdered pharmaceutical compositions for drug delivery and methods of use
US20040229271A1 (en) 2000-05-19 2004-11-18 Williams Richard B. Compositions and methods for the identification and selection of nucleic acids and polypeptides
WO2001092523A2 (en) 2000-05-30 2001-12-06 Curagen Corporation Human polynucleotides and polypeptides encoded thereby
CA2412026A1 (en) 2000-06-07 2001-12-13 Biosynexus Incorporated Immunostimulatory rna/dna hybrid molecules
DE60124098T2 (de) 2000-06-23 2007-04-05 Wyeth Holdings Corp. Modifiziertes Morbillivirus V Proteine
US20040005667A1 (en) 2000-07-03 2004-01-08 Giuloi Ratti Immunisation against chlamydia pneumoniae
US6440096B1 (en) 2000-07-14 2002-08-27 Becton, Dickinson And Co. Microdevice and method of manufacturing a microdevice
DE60124918T2 (de) 2000-07-21 2007-08-02 Glaxo Group Ltd., Greenford Kodon-optimierte papillomavirussequenzen
US6902734B2 (en) 2000-08-07 2005-06-07 Centocor, Inc. Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof
US6696038B1 (en) 2000-09-14 2004-02-24 Expression Genetics, Inc. Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent
US20040142474A1 (en) 2000-09-14 2004-07-22 Expression Genetics, Inc. Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent
WO2002024873A1 (en) 2000-09-20 2002-03-28 Christopher Ralph Franks Stem cell therapy
AU2002211490A1 (en) 2000-10-04 2002-04-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods of using capsid protein from flaviviruses and pestiviruses
US6998115B2 (en) 2000-10-10 2006-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable poly(β-amino esters) and uses thereof
US7202226B2 (en) 2000-10-23 2007-04-10 Detroit R & D Augmentation of wound healing by elF-4E mRNA and EGF mRNA
US20030077604A1 (en) 2000-10-27 2003-04-24 Yongming Sun Compositions and methods relating to breast specific genes and proteins
US20020132788A1 (en) 2000-11-06 2002-09-19 David Lewis Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo
AU2002226930A1 (en) 2000-11-17 2002-05-27 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Reduction of the nonspecific animal toxicity of immunotoxins by mutating the framework regions of the fv to lower the isoelectric point
WO2002046477A2 (en) 2000-12-07 2002-06-13 Chiron Corporation Endogenous retroviruses up-regulated in prostate cancer
US7708915B2 (en) 2004-05-06 2010-05-04 Castor Trevor P Polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins therein
US20020130430A1 (en) 2000-12-29 2002-09-19 Castor Trevor Percival Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products
UA93981C2 (ru) 2001-01-19 2011-03-25 Вироновативе Б.B. Вирус, который вызывает заболевание дыхательных путей у чувствительных k этому млекопитающих
EP1224943A1 (en) 2001-01-19 2002-07-24 Crucell Holland B.V. Fibronectin as a tumor marker detected by phage antibodies
US20040110191A1 (en) 2001-01-31 2004-06-10 Winkler Matthew M. Comparative analysis of nucleic acids using population tagging
US20030186237A1 (en) 2001-02-14 2003-10-02 Baylor College Of Medicine Methods and compositions of amplifying RNA
US6652886B2 (en) 2001-02-16 2003-11-25 Expression Genetics Biodegradable cationic copolymers of poly (alkylenimine) and poly (ethylene glycol) for the delivery of bioactive agents
DE10109897A1 (de) 2001-02-21 2002-11-07 Novosom Ag Fakultativ kationische Liposomen und Verwendung dieser
US7232425B2 (en) 2001-03-02 2007-06-19 Sorenson Development, Inc. Apparatus and method for specific interstitial or subcutaneous diffusion and dispersion of medication
DE02708018T1 (de) 2001-03-09 2004-09-30 Gene Stream Pty. Ltd. Neue expressionsvektoren
JP2002262882A (ja) 2001-03-12 2002-09-17 Nisshinbo Ind Inc Ｒｎａの増幅法
FR2822164B1 (fr) 2001-03-19 2004-06-18 Centre Nat Rech Scient Polypeptides derives des arn polymerases, et leurs utilisations
US6520949B2 (en) 2001-04-02 2003-02-18 Martin St. Germain Method and apparatus for administering fluid to animals subcutaneously
DE10119005A1 (de) 2001-04-18 2002-10-24 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Proteinexpression ausgehend von stabilisierter linearer kurzer DNA in zellfreien in vitro-Transkription/Translations-Systemen mit Exonuklease-haltigen Lysaten oder in einem zellulären System enthaltend Exonukleasen
US20030171253A1 (en) 2001-04-19 2003-09-11 Averil Ma Methods and compositions relating to modulation of A20
ES2230502T3 (es) 2001-04-23 2005-05-01 Amaxa Gmbh Disolucion tampon para la electroporacion y procedimiento que incluye el uso de la misma.
US7560424B2 (en) 2001-04-30 2009-07-14 Zystor Therapeutics, Inc. Targeted therapeutic proteins
US6777187B2 (en) 2001-05-02 2004-08-17 Rubicon Genomics, Inc. Genome walking by selective amplification of nick-translate DNA library and amplification from complex mixtures of templates
US6527216B2 (en) 2001-05-08 2003-03-04 Magnatech International Llp Electronic length control wire pay-off system and method
US20050137155A1 (en) 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US8137911B2 (en) 2001-05-22 2012-03-20 Cellscript, Inc. Preparation and use of single-stranded transcription substrates for synthesis of transcription products corresponding to target sequences
CN100384480C (zh) 2001-05-30 2008-04-30 斯克里普斯研究学院 核酸传递系统
EP1832603B1 (de) 2001-06-05 2010-02-03 CureVac GmbH Stabilisierte mRNA mit erhöhtem G/C-Gehalt, enkodierend für ein bakterielles Antigen sowie deren Verwendung
AU2002317824A1 (en) 2001-06-18 2003-01-02 Novartis Pharma Gmbh Novel g-protein coupled receptors and dna sequences thereof
US7547551B2 (en) 2001-06-21 2009-06-16 University Of Antwerp. Transfection of eukaryontic cells with linear polynucleotides by electroporation
US7785610B2 (en) 2001-06-21 2010-08-31 Dynavax Technologies Corporation Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same—III
EP1404716A2 (en) 2001-06-26 2004-04-07 Novartis AG Novel g protein-coupled receptors and dna sequences thereof
SE0102327D0 (sv) 2001-06-28 2001-06-28 Active Biotech Ab A novel engineered superantigen for human therapy
WO2003029401A2 (en) 2001-07-13 2003-04-10 Advanced Research And Technology Institute Peptidoglycan recognition protein encoding nucleic acids and methods of use thereof
US6586524B2 (en) 2001-07-19 2003-07-01 Expression Genetics, Inc. Cellular targeting poly(ethylene glycol)-grafted polymeric gene carrier
JP2004536614A (ja) 2001-08-01 2004-12-09 ユニバーシティ オブ ユタ Ｐｄｅ３環状ヌクレオチド・ホスホジエステラーゼのアイソフォーム選択的な阻害剤および活性化剤
JP2005502344A (ja) 2001-08-27 2005-01-27 ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト 新規ｇタンパク質共役受容体およびそのｄｎａ配列
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
AR045702A1 (es) 2001-10-03 2005-11-09 Chiron Corp Composiciones de adyuvantes.
DE10148886A1 (de) 2001-10-04 2003-04-30 Avontec Gmbh Inhibition von STAT-1
US7276489B2 (en) 2002-10-24 2007-10-02 Idera Pharmaceuticals, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5′ ends
WO2003042383A1 (fr) 2001-11-14 2003-05-22 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Promoteurs de replication de l'adn, facteurs associes a l'adn polymerase et utilisation de ces derniers
AU2002361642A1 (en) 2001-11-16 2003-06-10 The University Of Tennessee Research Corporation Recombinant antibody fusion proteins and methods for detection of apoptotic cells
WO2003046578A2 (en) 2001-11-29 2003-06-05 Novartis Ag Method for the assessment and prognosis of sarcoidosis
CA2409775C (en) 2001-12-03 2010-07-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Reversibly modified thermostable enzymes for dna synthesis and amplification in vitro
JP4822490B2 (ja) 2001-12-07 2011-11-24 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 腫瘍形成形質転換に関連する内因性レトロウイルスポリペプチド
ES2339433T3 (es) 2001-12-07 2010-05-20 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Aumento de la expresion de retrovirus endogeno en cancer de prostata.
US20060275747A1 (en) 2001-12-07 2006-12-07 Hardy Stephen F Endogenous retrovirus up-regulated in prostate cancer
AU2002361429A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 Novartis Ag Novel g-protein coupled receptors and dna sequences thereof
DE10162480A1 (de) 2001-12-19 2003-08-07 Ingmar Hoerr Die Applikation von mRNA für den Einsatz als Therapeutikum gegen Tumorerkrankungen
JP2005514429A (ja) 2001-12-21 2005-05-19 アルコン、インコーポレイテッド 眼／耳用薬物のキャリヤーとしての合成無機質ナノ粒子の使用
AU2003235707A1 (en) 2002-01-18 2003-07-30 Curevac Gmbh Immunogenic preparations and vaccines on the basis of mrna
EP1474432A1 (en) 2002-02-04 2004-11-10 Biomira Inc. Immunostimulatory, covalently lipidated oligonucleotides
DK1472275T3 (da) 2002-02-05 2009-04-14 Genentech Inc Proteinoprensning
FR2835749B1 (fr) 2002-02-08 2006-04-14 Inst Nat Sante Rech Med Composition pharmaceutique ameliorant le transfert de gene in vivo
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
AR038568A1 (es) 2002-02-20 2005-01-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-a beta y su uso
US7354742B2 (en) 2002-02-22 2008-04-08 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Method for generating amplified RNA
CA2481479C (en) 2002-02-26 2012-12-11 Maxygen, Inc. Novel flavivirus antigens
CA2478169C (en) 2002-03-04 2013-04-16 Imclone Systems Incorporated Human antibodies specific to kdr and uses thereof
WO2003075892A1 (en) 2002-03-13 2003-09-18 Novartis Ag Pharmaceutical microparticles
US7074596B2 (en) 2002-03-25 2006-07-11 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse mRNA cap analogues
AU2003230806B2 (en) 2002-04-04 2009-05-07 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides
WO2003087815A2 (en) 2002-04-17 2003-10-23 Novartis Ag Method for the identification of inhibitors of the binding of are-containing mrn a and an hur protein
GB0209539D0 (en) 2002-04-26 2002-06-05 Avecia Ltd Monomer Polymer and process
EP1361277A1 (en) 2002-04-30 2003-11-12 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Optimization of transgene expression in mammalian cells
PL224001B1 (pl) 2002-05-02 2016-11-30 Wyeth Corp Sposób wytwarzania stabilnej liofilizowanej kompozycji obejmującej monomeryczne koniugaty pochodna kalicheamycyny/przeciwciało anty-CD22, kompozycja otrzymana tym sposobem oraz jej zastosowanie
US7374930B2 (en) 2002-05-21 2008-05-20 Expression Genetics, Inc. GLP-1 gene delivery for the treatment of type 2 diabetes
US20040018525A1 (en) 2002-05-21 2004-01-29 Bayer Aktiengesellschaft Methods and compositions for the prediction, diagnosis, prognosis, prevention and treatment of malignant neoplasma
DE10224200C1 (de) 2002-05-31 2003-08-21 Artus Ges Fuer Molekularbiolog Vermehrung von Ribonukleinsäuren
AU2003237367A1 (en) 2002-06-03 2003-12-19 Chiron Corporation Use of nrg4, or inhibitors thereof, in the treatment of colon and pancreatic cancer
SE0201907D0 (sv) 2002-06-19 2002-06-19 Atos Medical Ab Plaster for tracheostoma valves
CA2491164C (en) 2002-06-28 2012-05-08 Cory Giesbrecht Method and apparatus for producing liposomes
MXPA05000063A (es) 2002-07-01 2005-04-08 Kenneth S Warren Inst Inc Citocinas recombinantes protectoras de tejido y acidos nucleicos que las codifican para la proteccion, restauracion y mejora de celulas, tejidos y organos respondedores.
DE10229872A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Curevac Gmbh Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA
GB0215509D0 (en) 2002-07-04 2002-08-14 Novartis Ag Marker genes
AR040575A1 (es) 2002-07-16 2005-04-13 Advisys Inc Plasmidos sinteticos optimizados en codones de expresion en mamiferos
WO2004010106A2 (en) 2002-07-24 2004-01-29 Ptc Therapeutics, Inc. METHODS FOR IDENTIFYING SMALL MOLEDULES THAT MODULATE PREMATURE TRANSLATION TERMINATION AND NONSENSE MEDIATED mRNA DECAY
EP1393745A1 (en) 2002-07-29 2004-03-03 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5'ends
EP1386925A1 (en) 2002-07-31 2004-02-04 Girindus AG Method for preparing oligonucleotides
US6653468B1 (en) 2002-07-31 2003-11-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Universal support media for synthesis of oligomeric compounds
EP1873180B1 (en) 2002-08-14 2014-05-07 Novartis AG Ophthalmic device made from a radiation-curable prepolymer
EP3332811A1 (en) 2002-09-06 2018-06-13 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for delivering covalently attached camptothecin
CA2497980C (en) 2002-09-09 2011-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Method for preparing water-soluble polymer derivatives bearing a terminal carboxylic acid
US7534872B2 (en) 2002-09-27 2009-05-19 Syngen, Inc. Compositions and methods for the use of FMOC derivatives in DNA/RNA synthesis
MXPA05004022A (es) 2002-10-17 2005-10-05 Genmab As Anticuerpos monoclonales humanos contra cd20.
EP1561814B1 (en) 2002-10-22 2010-12-22 Eisai R&D Management Co., Ltd. Gene specifically expressed in postmitotic dopaminergic neuron precursor cells
EP1576188B1 (en) 2002-11-21 2008-10-15 Epicentre Technologies Methods for using riboprimers for strand displacement replication of target sequences
US7491234B2 (en) 2002-12-03 2009-02-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices for delivery of therapeutic agents
EP2289936B1 (en) 2002-12-16 2017-05-31 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
US7625872B2 (en) 2002-12-23 2009-12-01 Dynavax Technologies Corporation Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same
US7169892B2 (en) 2003-01-10 2007-01-30 Astellas Pharma Inc. Lipid-peptide-polymer conjugates for long blood circulation and tumor specific drug delivery systems
WO2004067728A2 (en) 2003-01-17 2004-08-12 Ptc Therapeutics Methods and systems for the identification of rna regulatory sequences and compounds that modulate their function
US8426194B2 (en) 2003-01-21 2013-04-23 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating VEGF expression
EP2500437B1 (en) 2003-01-21 2016-11-30 PTC Therapeutics, Inc. Methods for identifying compounds that modulate untranslated region-dependent gene expression and methods of using same
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
US20040147027A1 (en) 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
RU2358763C2 (ru) 2003-02-10 2009-06-20 Элан Фармасьютикалз, Инк. Композиции иммуноглобулина и способ их получения
US20040167090A1 (en) 2003-02-21 2004-08-26 Monahan Sean D. Covalent modification of RNA for in vitro and in vivo delivery
CA2450289A1 (en) 2003-03-20 2005-05-19 Imclone Systems Incorporated Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor
US7320961B2 (en) 2003-03-24 2008-01-22 Abbott Laboratories Method for treating a disease, disorder or adverse effect caused by an elevated serum concentration of an UGT1A1 substrate
EP2194123B1 (en) 2003-03-25 2012-08-22 Stratagene California DNA polymerase fusions and uses thereof
CA2522213A1 (en) 2003-04-08 2004-10-28 Dante J. Marciani Semi-synthetic saponin analogs with carrier and immune stimulatory activities for dna and rna vaccines
KR101092171B1 (ko) 2003-04-09 2011-12-13 제넨테크, 인크. Ｔｎｆ-알파 저해제에 대해 부적절한 반응을 하는환자에서의 자가면역 질환의 치료법
WO2004098669A1 (en) 2003-05-05 2004-11-18 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Injectable cross-linked polymeric preparations and uses thereof
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
ES2558102T3 (es) 2003-05-06 2016-02-02 Biogen Hemophilia Inc. Proteínas quiméricas del factor de coagulación para el tratamiento de un trastorno hemostático
US9567591B2 (en) 2003-05-15 2017-02-14 Mello Biotechnology, Inc. Generation of human embryonic stem-like cells using intronic RNA
GB0313132D0 (en) 2003-06-06 2003-07-09 Ich Productions Ltd Peptide ligands
WO2005009346A2 (en) 2003-06-24 2005-02-03 Mirus Corporation Inhibition of gene function by delivery of polynucleotide-based gene expression inhibitors to mammalian cells in vivo
GB0316089D0 (en) 2003-07-09 2003-08-13 Xo Bioscience Ltd Differentiation method
US8592197B2 (en) 2003-07-11 2013-11-26 Novavax, Inc. Functional influenza virus-like particles (VLPs)
US7575572B2 (en) 2003-07-15 2009-08-18 Spinal Generations, Llc Method and device for delivering medicine to bone
US20050013870A1 (en) 2003-07-17 2005-01-20 Toby Freyman Decellularized extracellular matrix of conditioned body tissues and uses thereof
TW201319088A (zh) 2003-07-18 2013-05-16 Amgen Inc 對肝細胞生長因子具專一性之結合劑
DE10335833A1 (de) 2003-08-05 2005-03-03 Curevac Gmbh Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie
US20050048112A1 (en) 2003-08-28 2005-03-03 Jorg Breitenbach Solid pharmaceutical dosage form
US8668926B1 (en) 2003-09-15 2014-03-11 Shaker A. Mousa Nanoparticle and polymer formulations for thyroid hormone analogs, antagonists, and formulations thereof
US7135010B2 (en) 2003-09-30 2006-11-14 Damage Control Surgical Technologies, Inc. Method and apparatus for rapid deployment chest drainage
CN1890384A (zh) 2003-10-06 2007-01-03 诺瓦提斯公司 与炎性疾病的治疗功效相关的遗传多态性的用途
US20050130201A1 (en) 2003-10-14 2005-06-16 Dharmacon, Inc. Splint-assisted enzymatic synthesis of polyribounucleotides
DE10347710B4 (de) 2003-10-14 2006-03-30 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung
SG10202008722QA (en) 2003-11-05 2020-10-29 Roche Glycart Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2005047536A2 (en) 2003-11-13 2005-05-26 Novartis Ag Detection of genomic amplification and deletion in cancer
US20070054278A1 (en) 2003-11-18 2007-03-08 Applera Corporation Polymorphisms in nucleic acid molecules encoding human enzyme proteins, methods of detection and uses thereof
US7699852B2 (en) 2003-11-19 2010-04-20 Zimmer Spine, Inc. Fenestrated bone tap and method
US20050153333A1 (en) 2003-12-02 2005-07-14 Sooknanan Roy R. Selective terminal tagging of nucleic acids
EP1691746B1 (en) 2003-12-08 2015-05-27 Gel-Del Technologies, Inc. Mucoadhesive drug delivery devices and methods of making and using thereof
US7674884B2 (en) 2003-12-10 2010-03-09 Novimmune S.A. Neutralizing antibodies and methods of use thereof
US7927873B2 (en) 2003-12-19 2011-04-19 University Of Cincinnati Polyamides for nucleic acid delivery
ES2967485T3 (es) 2003-12-23 2024-04-30 Genentech Inc Nuevos anticuerpos anti-IL 13 y usos de los mismos
EP1713514B1 (en) 2004-01-28 2021-11-24 Johns Hopkins University Drugs and gene carrier particles that rapidly move through mucous barriers
DE602005016218D1 (de) 2004-01-30 2009-10-08 Maxygen Aps Gesteuertes überlesen von stopcodons
US7309487B2 (en) 2004-02-09 2007-12-18 George Inana Methods and compositions for detecting and treating retinal diseases
JP4805848B2 (ja) 2004-02-12 2011-11-02 モルフォテック、インク． 腫瘍抗原の生物活性を特異的に阻止するモノクローナル抗体
US20070265220A1 (en) * 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
WO2005090405A1 (ja) 2004-03-24 2005-09-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha インターロイキン－６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ
WO2005098433A2 (en) 2004-04-01 2005-10-20 Novartis Ag Diagnostic assays for alzheimer’s disease
EP1740946B1 (en) 2004-04-20 2013-11-06 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
ES2246694B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Nanoparticulas pegiladas.
US20080119645A1 (en) 2004-05-05 2008-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amidites and Methods of Rna Synthesis
EP2072040B1 (en) 2004-05-12 2013-05-01 Baxter International Inc. Therapeutic use of nucleic acid micropheres
US8012747B2 (en) 2004-06-01 2011-09-06 San Diego State University Foundation Expression system
AU2005251403B2 (en) 2004-06-07 2011-09-01 Arbutus Biopharma Corporation Cationic lipids and methods of use
AU2005252273B2 (en) 2004-06-07 2011-04-28 Arbutus Biopharma Corporation Lipid encapsulated interfering RNA
CA2608862C (en) 2004-06-11 2020-05-05 Trustees Of Tufts College Silk-based drug delivery system
WO2006046978A2 (en) 2004-06-28 2006-05-04 Argos Therapeutics, Inc. Cationic peptide-mediated transformation
EP1765411B2 (en) 2004-06-30 2017-10-11 Nektar Therapeutics Polymer-factor ix moiety conjugates
DE102004035227A1 (de) 2004-07-21 2006-02-16 Curevac Gmbh mRNA-Gemisch zur Vakzinierung gegen Tumorerkrankungen
EP1828215A2 (en) 2004-07-21 2007-09-05 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
US7603349B1 (en) 2004-07-29 2009-10-13 Yahoo! Inc. User interfaces for search systems using in-line contextual queries
GB0417487D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Novartis Ag Organic compound
SE0402025D0 (sv) 2004-08-13 2004-08-13 Active Biotech Ab Treatment of hyperproliferative disease with superantigens in combination with another anticancer agent
US7291208B2 (en) 2004-08-13 2007-11-06 Gore Enterprise Holdings, Inc. Grooved active and passive adsorbent filters
CA2478458A1 (en) 2004-08-20 2006-02-20 Michael Panzara Treatment of pediatric multiple sclerosis
DK2386640T3 (en) 2004-08-26 2015-04-27 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd The making of functional nucleic acids into mammalian cells via bacterially derived intact minicells
DE102004042546A1 (de) 2004-09-02 2006-03-09 Curevac Gmbh Kombinationstherapie zur Immunstimulation
US7501486B2 (en) 2004-09-07 2009-03-10 Burnham Institute For Medical Research Peptides that selectively home to heart vasculature and related conjugates and methods
US8663599B1 (en) 2004-10-05 2014-03-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
JPWO2006041088A1 (ja) 2004-10-12 2008-05-15 株式会社ティッシュターゲティングジャパン 脳移行性骨髄前駆細胞
WO2006044505A2 (en) 2004-10-13 2006-04-27 Ptc Therapeutics, Inc. Compounds for nonsense suppression, and methods for their use
US8057821B2 (en) 2004-11-03 2011-11-15 Egen, Inc. Biodegradable cross-linked cationic multi-block copolymers for gene delivery and methods of making thereof
EP1812569A2 (en) 2004-11-08 2007-08-01 K.U. Leuven Research and Development Modified nucleosides for rna interference
CA2588389A1 (en) 2004-11-23 2006-06-22 Ptc Therapeutics, Inc. Substituted phenols as active agents inhibiting vegf production
US7964571B2 (en) 2004-12-09 2011-06-21 Egen, Inc. Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases
US8354476B2 (en) 2004-12-10 2013-01-15 Kala Pharmaceuticals, Inc. Functionalized poly(ether-anhydride) block copolymers
US9068969B2 (en) 2004-12-28 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Cell based methods and systems for the identification of RNA regulatory sequences and compounds that modulate their functions
US8535702B2 (en) 2005-02-01 2013-09-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices having porous polymeric regions for controlled drug delivery and regulated biocompatibility
EP2287608B1 (en) 2005-03-11 2014-01-08 Firalis SAS Biomarkers for cardiovascular side-effects induced by cox-2 inhibitory compounds
US8415325B2 (en) 2005-03-31 2013-04-09 University Of Delaware Cell-mediated delivery and targeted erosion of noncovalently crosslinked hydrogels
JP2008535494A (ja) 2005-04-07 2008-09-04 サグレシュ ディスカバリー， インコーポレイテッド 癌関連遺伝子（ｐｒｌｒ）
JP2008535857A (ja) 2005-04-07 2008-09-04 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド 癌の診断、検出および処置におけるｃａｃｎａ１ｅ
WO2006110776A2 (en) 2005-04-12 2006-10-19 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polyethylene glycol cojugates of antimicrobial agents
WO2006116269A2 (en) 2005-04-25 2006-11-02 Pfizer Inc. Antibodies to myostatin
US20060241076A1 (en) 2005-04-26 2006-10-26 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity
EP2439273B1 (en) 2005-05-09 2019-02-27 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US20070072175A1 (en) 2005-05-13 2007-03-29 Biogen Idec Ma Inc. Nucleotide array containing polynucleotide probes complementary to, or fragments of, cynomolgus monkey genes and the use thereof
US20060265771A1 (en) 2005-05-17 2006-11-23 Lewis David L Monitoring microrna expression and function
DE102005023170A1 (de) 2005-05-19 2006-11-23 Curevac Gmbh Optimierte Formulierung für mRNA
AU2006255085A1 (en) 2005-06-03 2006-12-14 Genentech, Inc. Method of producing antibodies with modified fucosylation level
US7550264B2 (en) 2005-06-10 2009-06-23 Datascope Investment Corporation Methods and kits for sense RNA synthesis
PT2279758E (pt) 2005-06-16 2015-05-27 Nektar Therapeutics Conjugados possuindo uma ligação degradável e reagentes poliméricos úteis na preparação de tais conjugados
AU2006282042B2 (en) 2005-06-17 2011-12-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Nanoparticle fabrication methods, systems, and materials
US8202835B2 (en) 2005-06-17 2012-06-19 Yitzchak Hillman Disease treatment via antimicrobial peptides or their inhibitors
JP5015923B2 (ja) 2005-06-30 2012-09-05 アーケミックス コーポレイション 完全な２’改変核酸転写物を生成するための材料および方法
US8101385B2 (en) 2005-06-30 2012-01-24 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
US20080220471A1 (en) 2005-07-27 2008-09-11 Genentech, Inc. Vectors and Methods Using Same
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
SI3611266T1 (sl) 2005-08-23 2023-02-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modificirani nukleozidi, ki vsebujejo RNA, in postopki za njihovo uporabo
US9012219B2 (en) 2005-08-23 2015-04-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells
US20070048741A1 (en) 2005-08-24 2007-03-01 Getts Robert C Methods and kits for sense RNA synthesis
ATE499112T1 (de) 2005-09-01 2011-03-15 Celgene Corp Immunologische verwendungen von immunmodulatorischen verbindungen für einen impfstoff und therapie gegen infektionskrankheiten
RU2457858C2 (ru) 2005-09-01 2012-08-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Гмбх Унд Ко Кг Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы с
US8420605B2 (en) 2005-09-07 2013-04-16 The University Of Strathclyde Hydrogel compositions
US20120021042A1 (en) 2005-09-15 2012-01-26 Steffen Panzner Efficient Method For Loading Amphoteric Liposomes With Nucleic Acid Active Substances
DE102005046490A1 (de) 2005-09-28 2007-03-29 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Modifikationen von RNA, die zu einer erhöhten Transkriptstabilität und Translationseffizienz führen
US20070087437A1 (en) 2005-10-14 2007-04-19 Jifan Hu Methods for rejuvenating cells in vitro and in vivo
NZ568211A (en) 2005-11-04 2011-11-25 Novartis Vaccines & Diagnostic Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
US20070105124A1 (en) 2005-11-08 2007-05-10 Getts Robert C Methods and kits for nucleic acid amplification
WO2007057167A2 (en) 2005-11-18 2007-05-24 Bioline Limited A method for enhancing enzymatic dna polymerase reactions
US10155816B2 (en) 2005-11-28 2018-12-18 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
EP1954706B1 (en) 2005-11-30 2012-03-28 Epicentre Technologies Corporation Method using reversibly blocked tagging oligonucleotides
TWI389709B (zh) 2005-12-01 2013-03-21 Novartis Ag 經皮治療系統
CA2631714C (en) 2005-12-02 2014-09-16 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
US8603457B2 (en) 2005-12-02 2013-12-10 University Of Rochester Nonsense suppression and genetic codon alteration by targeted modification
EP1969000A2 (en) 2005-12-06 2008-09-17 Centre National de la Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
US7579318B2 (en) 2005-12-06 2009-08-25 Centre De La Recherche De La Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
KR20080080525A (ko) 2005-12-08 2008-09-04 노파르티스 아게 유전자 전사에 대한 ｆｇｆｒ３의 억제제의 효과
EP2208786B1 (en) 2005-12-13 2018-08-01 Kyoto University Nuclear reprogramming factor
WO2007069068A2 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Diatos Cell penetrating peptide conjugates for delivering nucleic acids into cells
WO2007077042A1 (en) 2006-01-06 2007-07-12 Topotarget Switzerland Sa New method for the treatment of gout or pseudogout
CN101432300A (zh) 2006-01-13 2009-05-13 宾夕法尼亚州立大学托管会 采用密码子优化的il-15的疫苗和免疫治疗剂及其使用方法
US20070178103A1 (en) 2006-01-30 2007-08-02 Fey Georg H CD19-specific immunotoxin and treatment method
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
DE102006007433A1 (de) 2006-02-17 2007-08-23 Curevac Gmbh Adjuvanz in Form einer Lipid-modifizierten Nukleinsäure
US20100168034A1 (en) 2006-02-20 2010-07-01 Ewha University-Industry Collaboration Foundation Peptide having cell membrane penetrating activity
AU2007216998B8 (en) 2006-02-21 2013-12-19 Nektar Therapeutics Segmented degradable polymers and conjugates made therefrom
WO2007100789A2 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Wyeth Gpat3 encodes a mammalian, microsomal acyl-coa:glycerol 3-phosphate acyltransferase
CA2643322C (en) 2006-02-24 2015-07-21 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
JP2009528359A (ja) 2006-02-28 2009-08-06 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド ナタリズマブを用いて炎症性疾患および自己免疫性疾患を治療する方法
US7910152B2 (en) 2006-02-28 2011-03-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Poly(ester amide)-based drug delivery systems with controlled release rate and morphology
GB0605217D0 (en) 2006-03-15 2006-04-26 Novartis Ag Method and compositions for assessing acute rejection
WO2007109244A2 (en) 2006-03-21 2007-09-27 Morehouse School Of Medicine Novel nanoparticles for delivery of active agents
ES2776100T3 (es) 2006-03-31 2020-07-29 Massachusetts Inst Technology Sistema para el suministro dirigido de agentes terapéuticos
CA2648291A1 (en) 2006-04-04 2007-11-01 Stc.Unm Swellable particles for drug delivery
CA2649325C (en) 2006-04-14 2019-01-08 Epicentre Technologies Corporation Kits and methods for generating 5' capped rna
EP1852127A1 (en) 2006-05-02 2007-11-07 Charité - Universitätsmedizin Berlin Use of a B-cell-depleting antibody for treatment of polyoma virus infections
CA2652280C (en) 2006-05-15 2014-01-28 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for functional particles
EP2026832B1 (en) 2006-05-24 2012-05-02 Merck Serono SA Combination of interferon-beta and a cladribine regimen for treating multiple sclerosis
EP2492684B1 (en) 2006-06-02 2016-12-28 President and Fellows of Harvard College Protein surface remodeling
US20130004480A1 (en) 2006-07-04 2013-01-03 Paul Parren CD20 Binding Molecules for the Treatment of Copd
EP2397123A1 (en) 2006-07-07 2011-12-21 Aarhus Universitet Nanoparticles for nucleic acid delivery
EP2038310B1 (en) 2006-07-12 2010-06-09 Novartis AG Actinically crosslinkable copolymers for manufacturing contact lenses
WO2008011519A2 (en) 2006-07-20 2008-01-24 Novartis Ag Amigo-2 inhibitors for treating, diagnosing or detecting cancer
WO2008013785A2 (en) 2006-07-24 2008-01-31 Singh-Broemer And Company, Inc. Solid nanoparticle formulation of water insoluble pharmaceutical substances with reduced ostwald ripening
US8304529B2 (en) 2006-07-28 2012-11-06 Life Technologies Corporation Dinucleotide MRNA cap analogs
DE102006035618A1 (de) 2006-07-31 2008-02-07 Curevac Gmbh Nukleinsäure der Formel (I): GlXmGn, insbesondere als immunstimulierendes Adjuvanz
EP2046954A2 (en) 2006-07-31 2009-04-15 Curevac GmbH NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
JP2010507567A (ja) 2006-08-07 2010-03-11 ジェンザイム・コーポレーション 併用療法
US20080076701A1 (en) 2006-08-18 2008-03-27 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Dicer substrate rna peptide conjugates and methods for rna therapeutics
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
WO2008030988A2 (en) 2006-09-06 2008-03-13 The Regents Of The University Of California Selectively targeted antimicrobial peptides and the use thereof
EP2450377A1 (en) 2006-09-07 2012-05-09 Crucell Holland B.V. Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus H5N1 and uses thereof
AU2007292902B8 (en) 2006-09-08 2013-09-05 Johns Hopkins University Compositions and methods for enhancing transport through mucus
US8454948B2 (en) 2006-09-14 2013-06-04 Medgenics Medical Israel Ltd. Long lasting drug formulations
GB0619182D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Leuven K U Res & Dev Oligonucleotide arrays
CA2848238C (en) 2006-10-03 2016-07-19 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
BRPI0715299A2 (pt) 2006-10-05 2013-07-23 The Johns Hopkins University mÉtodo para preparar nanoparticulas polimÉricas, mÉtodod para preparar uma coposiÇço micelar, micelas polimÉricas reconstituÍveis, composiÇço polimÉrica bioativa de nanopartÍculas, mÉtodo para proporcionar um medicamento a um paciente e processo para preparar composiÇÕes de nanoparticulas polimÉricas
DE102006051516A1 (de) * 2006-10-31 2008-05-08 Curevac Gmbh (Basen-)modifizierte RNA zur Expressionssteigerung eines Proteins
US8414927B2 (en) 2006-11-03 2013-04-09 Boston Scientific Scimed, Inc. Cross-linked polymer particles
US7999087B2 (en) 2006-11-15 2011-08-16 Agilent Technologies, Inc. 2′-silyl containing thiocarbonate protecting groups for RNA synthesis
US8242258B2 (en) 2006-12-03 2012-08-14 Agilent Technologies, Inc. Protecting groups for RNA synthesis
US8399007B2 (en) 2006-12-05 2013-03-19 Landec Corporation Method for formulating a controlled-release pharmaceutical formulation
EP2679240A1 (en) 2006-12-06 2014-01-01 Novartis AG Vaccines including antigen from four strains of influenza virus
US9034348B2 (en) 2006-12-11 2015-05-19 Chi2Gel Ltd. Injectable chitosan mixtures forming hydrogels
BRPI0720476B1 (pt) 2006-12-18 2022-05-31 Acceleron Pharma Inc Uso de um polipeptídeo de actrii para tratar anemia em um paciente humano
CA2671925A1 (en) 2006-12-21 2008-07-10 Stryker Corporation Sustained-release formulations comprising crystals, macromolecular gels, and particulate suspensions of biologic agents
DK2104739T3 (da) 2006-12-21 2013-10-07 Novozymes Inc Modificerede messenger-RNA-stabiliseringssekvenser til ekspression af gener i bakterieceller
WO2008078180A2 (en) 2006-12-22 2008-07-03 Archemix Corp. Materials and methods for the generation of transcripts comprising modified nucleotides
DE102006061015A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Curevac Gmbh Verfahren zur Reinigung von RNA im präparativen Maßstab mittels HPLC
US8338166B2 (en) 2007-01-04 2012-12-25 Lawrence Livermore National Security, Llc Sorting, amplification, detection, and identification of nucleic acid subsequences in a complex mixture
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
WO2008091799A2 (en) 2007-01-22 2008-07-31 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Cell-based methods for identifying inhibitors of parkinson's disease-associated lrrk2 mutants
CA2963138C (en) 2007-01-30 2019-05-14 Epivax, Inc. Regulatory t cell epitopes, compositions and uses thereof
TW201940502A (zh) 2007-02-02 2019-10-16 美商艾瑟勒朗法瑪公司 衍生自ＡｃｔＲＩＩＢ的變體與其用途
US8859229B2 (en) 2007-02-02 2014-10-14 Yale University Transient transfection with RNA
WO2008096370A2 (en) 2007-02-05 2008-08-14 Natco Pharma Limited An efficient and novel purification method of recombinant hg-csf
US8333799B2 (en) 2007-02-12 2012-12-18 C. R. Bard, Inc. Highly flexible stent and method of manufacture
US8242087B2 (en) 2007-02-27 2012-08-14 K.U.Leuven Research & Development Phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
EP1964922A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-03 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Improvement of protein production
TWI419902B (zh) * 2007-03-02 2013-12-21 百靈佳殷格翰製藥公司 蛋白質產製之改良
US7943168B2 (en) 2007-03-05 2011-05-17 Washington University Nanoparticle delivery systems comprising a hydrophobic core and a lipid/surfactant layer comprising a membrane-lytic peptide
US20100297699A1 (en) 2007-03-20 2010-11-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic Acids Encoding Humanized Immunoglobulin That Binds Alpha4Beta7 Integrin
PL2152358T3 (pl) 2007-04-27 2011-09-30 Echo Therapeutics Inc Urządzenie do realizacji permeacji skórnej dla pomiaru analitów i przezskórnego podawania leku
EP2152310A4 (en) 2007-04-30 2010-05-26 Glaxosmithkline Llc METHODS OF ADMINISTERING ANTI-IL-5 ANTIBODIES
US8703204B2 (en) 2007-05-03 2014-04-22 Bend Research, Inc. Nanoparticles comprising a cholesteryl ester transfer protein inhibitor and anon-ionizable polymer
US7939505B2 (en) 2007-05-04 2011-05-10 Marina Biotech, Inc. Amino acid lipids and uses thereof
US7682789B2 (en) 2007-05-04 2010-03-23 Ventana Medical Systems, Inc. Method for quantifying biomolecules conjugated to a nanoparticle
WO2009023311A2 (en) 2007-05-07 2009-02-19 Alba Therapeutics Corporation Transcutaneous delivery of therapeutic agents
JP5296328B2 (ja) 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
JP5520818B2 (ja) 2007-05-10 2014-06-11 アジレント・テクノロジーズ・インク Ｒｎａ合成のためのチオ炭素保護基
DK3072525T3 (en) 2007-05-14 2018-04-30 Astrazeneca Ab PROCEDURES FOR REDUCING BASOFILE CELL LEVELS
WO2008144365A2 (en) 2007-05-17 2008-11-27 Novartis Ag Method for making dry powder compositions containing ds-rna based on supercritical fluid technology
WO2008153705A2 (en) 2007-05-22 2008-12-18 Novartis Ag Methods of treating, diagnosing and detecting fgf21-associated disorders
DK2160464T3 (da) 2007-05-30 2014-08-04 Univ Northwestern Nukleinsyrefunktionaliserede nanopartikler til terapeutiske anvendelser
CN101802172A (zh) 2007-05-30 2010-08-11 通用医疗公司 由体细胞产生多能细胞的方法
EP2167523B1 (en) 2007-06-19 2014-07-23 Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College Synthesis and use of anti-reverse phosphorothioate analogs of the messenger rna cap
CA2707436C (en) 2007-06-29 2014-01-28 Epicentre Technologies Corporation Copy dna and sense rna
WO2009015071A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Dharmacon, Inc. Screening of micro-rna cluster inhibitor pools
US9144546B2 (en) 2007-08-06 2015-09-29 Clsn Laboratories, Inc. Nucleic acid-lipopolymer compositions
US20090042825A1 (en) 2007-08-06 2009-02-12 Majed Matar Composition, method of preparation & application of concentrated formulations of condensed nucleic acids with a cationic lipopolymer
BRPI0815725A2 (pt) 2007-08-23 2015-02-10 Novartis Ag Métodos para detecção de oligonucleotídeos
US20110243931A1 (en) 2007-09-02 2011-10-06 Thomas Friess Combination therapy with type i and type ii anti-cd20 antibodies
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
US8506928B2 (en) 2007-09-07 2013-08-13 The Regents Of The University Of California Methods and compounds for targeting tissues
WO2009039198A2 (en) 2007-09-17 2009-03-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Generation of hyperstable mrnas
CA2700536A1 (en) 2007-09-26 2009-04-02 Oregon Health & Science University Cyclic undecapeptides and derivatives as multiple sclerosis therapies
AU2008304201C1 (en) 2007-09-26 2015-02-05 Intrexon Corporation Synthetic 5'UTRs, expression vectors, and methods for increasing transgene expression
EP2042193A1 (en) 2007-09-28 2009-04-01 Biomay AG RNA Vaccines
PT2644192T (pt) 2007-09-28 2017-07-12 Pfizer Direcionamento a células cancerosas utilizando nanopartículas
WO2009046388A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 United States Medical Research & Material Command Cr-2 binding peptide p28 as molecular adjuvant for dna vaccines
WO2009046739A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating prostate cancer (pca)
WO2009046738A1 (en) 2007-10-09 2009-04-16 Curevac Gmbh Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc)
BRPI0817664A2 (pt) 2007-10-12 2015-03-24 Massachusetts Inst Technology Nanopartículas, método para preparar nanopartículas e método para tratar terapeuticamente ou profilaticamente um indivíduo
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US20110091473A1 (en) 2007-10-22 2011-04-21 Genmab A/S Novel antibody therapies
US8183345B2 (en) 2007-11-01 2012-05-22 University Of Rochester Recombinant factor VIII having reduced inactivation by activated protein C
MX2010005099A (es) 2007-11-09 2010-05-27 Novartis Ag Usos de anticuerpos anti-cd40.
EP2223934B1 (en) 2007-11-14 2012-10-03 Institute Of Microbiology, Chinese Academy Of Sciences Polypeptides for inhibiting influenza virus infection
CN101932608A (zh) 2007-11-30 2010-12-29 葛兰素集团有限公司 抗原结合构建体
JP5530933B2 (ja) 2007-12-10 2014-06-25 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 第ｖｉｉ因子遺伝子発現阻害のための組成物及び方法
EP2610341B1 (en) 2007-12-11 2014-09-17 The Scripps Research Institute Compositions and methods related to mRNA translational enhancer elements
EP2229459B1 (en) 2007-12-13 2014-08-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of RSV infection
EP2072618A1 (en) 2007-12-14 2009-06-24 Johannes Gutenberg-Universität Mainz Use of RNA for reprogramming somatic cells
KR20100102172A (ko) 2007-12-21 2010-09-20 제넨테크, 인크. 리툭시마브-난치성 류마티스성 관절염 환자의 요법
WO2009093703A1 (ja) 2008-01-23 2009-07-30 Ajinomoto Co., Inc. Ｌ-アミノ酸の製造法
EP2246422A4 (en) 2008-01-24 2012-07-25 Nat Inst Of Advanced Ind Scien POLYNUCLEOTIDE OR ITS ANALOGUE, AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION USING THE POLYNUCLEOTIDE OR ITS ANALOGUE
MX2010008468A (es) 2008-01-31 2010-08-30 Curevac Gmbh Acidos nucleicos de la formula (i) (nug1xmgnnv)a y derivados de los mismos como un agente/adyuvante inmunoestimulante.
EP2250252A2 (en) 2008-02-11 2010-11-17 Cambridge Enterprise Limited Improved reprogramming of mammalian cells, and the cells obtained
US8343140B2 (en) 2008-02-13 2013-01-01 Intarcia Therapeutics, Inc. Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
DE102008009920A1 (de) 2008-02-15 2009-08-20 Aj Innuscreen Gmbh Mobiles Gerät für die Nukleinsäureisolierung
US20120027813A1 (en) 2008-02-22 2012-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
US8506966B2 (en) 2008-02-22 2013-08-13 Novartis Ag Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
WO2009108891A2 (en) 2008-02-29 2009-09-03 Egen, Inc. Modified poloxamers for gene expression and associated methods
BRPI0822447A2 (pt) 2008-03-14 2015-06-16 Biocon Ltd Anticorpo monoclonal e método do mesmo
CN102027043A (zh) 2008-03-14 2011-04-20 艾根股份有限公司 生物可降解的交联支链聚(亚烷基亚胺)
EP2274009B1 (en) 2008-03-28 2013-11-13 GlaxoSmithKline LLC Methods of treatment
HUE034483T2 (en) 2008-04-15 2018-02-28 Protiva Biotherapeutics Inc New lipid preparations for introducing a nucleic acid
WO2009127230A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Curevac Gmbh MODIFIED (m)RNA FOR SUPPRESSING OR AVOIDING AN IMMUNOSTIMULATORY RESPONSE AND IMMUNOSUPPRESSIVE COMPOSITION
AU2009238607B2 (en) 2008-04-25 2015-08-06 Northwestern University Nanostructures suitable for sequestering cholesterol
AU2009243187C1 (en) 2008-04-28 2015-12-24 President And Fellows Of Harvard College Supercharged proteins for cell penetration
US8715689B2 (en) 2008-04-30 2014-05-06 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Chimeric west nile/dengue viruses
US9394538B2 (en) 2008-05-07 2016-07-19 Shi-Lung Lin Development of universal cancer drugs and vaccines
CA2723753A1 (en) 2008-05-08 2009-11-12 Replenish Pumps, Llc Drug-delivery pumps and methods of manufacture
US8697098B2 (en) 2011-02-25 2014-04-15 South Dakota State University Polymer conjugated protein micelles
CA3065577C (en) 2008-05-13 2022-05-31 Phaserx, Inc. Diblock copolymers and polynucleotide complexes thereof for delivery into cells
EP2297323A1 (en) 2008-05-21 2011-03-23 Hartmann, Gunther 5' triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof
FR2931824B1 (fr) 2008-05-29 2014-11-28 Centre Nat Rech Scient Procede de synthese d'arn par voie chimique.
ATE548381T1 (de) 2008-05-29 2012-03-15 Hanall Biopharma Co Ltd Modifizierte erythropoietin (epo)-polypeptide mit erhöhter proteaseresistenz und pharmazeutische zusammensetzungen daraus
US20100086922A1 (en) 2008-05-30 2010-04-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Assessment of chromosomal alterations to predict clinical outcome of bortezomib treatment
PL215513B1 (pl) 2008-06-06 2013-12-31 Univ Warszawski Nowe boranofosforanowe analogi dinukleotydów, ich zastosowanie, czasteczka RNA, sposób otrzymywania RNA oraz sposób otrzymywania peptydów lub bialka
TWI451876B (zh) 2008-06-13 2014-09-11 Lilly Co Eli 聚乙二醇化之離脯胰島素化合物
PL2285350T3 (pl) 2008-06-16 2018-03-30 Pfizer Inc. Sposoby otrzymywania funkcjonalizowanych kopolimerów dwublokowych stanowiących środki kierujące do stosowania przy wytwarzaniu nanocząstek terapeutycznych
WO2010005726A2 (en) 2008-06-16 2010-01-14 Bind Biosciences Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mtor inhibitors and methods of making and using same
PL2774608T3 (pl) 2008-06-16 2020-05-18 Pfizer Inc. Polimerowe nanocząstki napełnione lekiem oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
US20100009424A1 (en) 2008-07-14 2010-01-14 Natasha Forde Sonoporation systems and methods
WO2010009277A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Immunogenic amphipathic peptide compositions
WO2010009065A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Novartis Ag Amphipathic peptide compositions
US20110172126A1 (en) 2008-09-03 2011-07-14 Xenome Ltd Libraries of peptide conjugates and methods for making them
US8309707B2 (en) 2008-09-06 2012-11-13 Chemgenes Corporation RNA synthesis-phosphoramidites for synthetic RNA in the reverse direction, and application in convenient introduction of ligands, chromophores and modifications of synthetic RNA at the 3′-end
US20120100558A1 (en) 2008-09-08 2012-04-26 Hanash Samir M Lung cancer diagnosis
WO2010030763A2 (en) 2008-09-10 2010-03-18 Bind Biosciences, Inc. High throughput fabrication of nanoparticles
AR073295A1 (es) 2008-09-16 2010-10-28 Genentech Inc Metodos para tratar la esclerosis multiple progresiva. articulo de fabricacion.
WO2010033906A2 (en) 2008-09-19 2010-03-25 President And Fellows Of Harvard College Efficient induction of pluripotent stem cells using small molecule compounds
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
WO2010042490A1 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Boston Medical Center Corporation A single lentiviral vector system for induced pluripotent (ips) stem cells derivation
CA2984026C (en) 2008-10-09 2020-02-11 Arbutus Biopharma Corporation Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids
US8535655B2 (en) 2008-10-10 2013-09-17 Polyactiva Pty Ltd. Biodegradable polymer—bioactive moiety conjugates
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8603532B2 (en) 2008-10-20 2013-12-10 Massachusetts Institute Of Technology Nanostructures for drug delivery
WO2010047839A1 (en) 2008-10-25 2010-04-29 Aura Biosciences Modified plant virus particles and uses therefor
CA2742954C (en) 2008-11-07 2018-07-10 Massachusetts Institute Of Technology Aminoalcohol lipidoids and uses thereof
CA3033577A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
WO2010057203A2 (en) 2008-11-17 2010-05-20 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Hdl particles for delivery of nucleic acids
EP2191840A1 (en) 2008-11-28 2010-06-02 Sanofi-Aventis Antitumor combinations containing antibodies recognizing specifically CD38 and melphalan
EP2196476A1 (en) 2008-12-10 2010-06-16 Novartis Ag Antibody formulation
NZ593618A (en) 2008-12-10 2013-02-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
EP2376091A4 (en) 2008-12-12 2012-08-01 Univ California NEW TARGETS FOR THE TREATMENT OF HYPERCHOLESTEROLEMIA
US8563041B2 (en) 2008-12-12 2013-10-22 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic particles suitable for parenteral administration and methods of making and using same
ES2776126T3 (es) 2008-12-15 2020-07-29 Pfizer Nanopartículas de circulación prolongada para la liberación sostenida de agentes terapéuticos
EP2405937A4 (en) 2009-01-16 2012-06-20 Glaxosmithkline Llc CANCER THERAPY USING A COMBINATION OF BENDAMUSTIN AND AN ANTIBODY AGAINST CD20
WO2010084371A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Mitoprod Novel circular interfering rna molecules
AU2010208035B2 (en) 2009-01-29 2016-06-23 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation for the delivery of nucleic acids
WO2010088927A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Curevac Gmbh Use of pei for the improvement of endosomal release and expression of transfected nucleic acids, complexed with cationic or polycationic compounds
US20140141089A1 (en) 2009-02-11 2014-05-22 Colorado School Of Mines Nanoparticles, Compositions Thereof, and Methods of Use, and Methods of Making the Same
KR20110126717A (ko) 2009-02-24 2011-11-23 더 스크립스 리서치 인스티튜트 단백질 생성 증강을 위한 ｍｒｎａ １차 구조의 재구조화
PE20160653A1 (es) 2009-03-05 2016-07-24 Abbvie Inc Proteinas de union a il-17
US8685458B2 (en) 2009-03-05 2014-04-01 Bend Research, Inc. Pharmaceutical compositions of dextran polymer derivatives
WO2010141135A2 (en) 2009-03-05 2010-12-09 Trustees Of Boston University Bacteriophages expressing antimicrobial peptides and uses thereof
CN102625842A (zh) 2009-03-13 2012-08-01 艾根股份有限公司 用于输送生物活性rna的组合物和方法
ES2931174T3 (es) 2009-03-20 2022-12-27 Egen Inc Derivados de poliamina
WO2010111290A1 (en) * 2009-03-23 2010-09-30 University Of Utah Research Foundation Methods and compositions related to modified guanine bases for controlling off-target effects in rna interference
JP5622254B2 (ja) 2009-03-31 2014-11-12 国立大学法人東京大学 二本鎖リボ核酸ポリイオンコンプレックス
BRPI1010307B1 (pt) 2009-04-03 2021-07-27 University Of Chicago Polipeptídeos variantes de proteína a (spa), composição imunogênica compreendendo os mesmos, vacina, método de produção da referida vacina, bem como uso dos referidos polipeptídeos
CN107252489A (zh) 2009-04-13 2017-10-17 法国健康和医学研究院 Hpv颗粒及其用途
BRPI1011389A2 (pt) 2009-04-17 2018-07-10 Biogen Idec Inc método para tratar a leucemia mielógena aguda (aml) em um paciente
US20100273220A1 (en) 2009-04-22 2010-10-28 Massachusetts Institute Of Technology Innate immune suppression enables repeated delivery of long rna molecules
WO2010125003A1 (en) 2009-04-27 2010-11-04 Novartis Ag Compositions and methods for increasing muscle growth
WO2010129033A2 (en) 2009-04-29 2010-11-11 Calmune Corporation Modified antibodies for passive immunotherapy
US8287910B2 (en) 2009-04-30 2012-10-16 Intezyne Technologies, Inc. Polymeric micelles for polynucleotide encapsulation
US8715736B2 (en) 2009-04-30 2014-05-06 Florida Agricultural And Mechanical University Nanoparticle formulations for skin delivery
JP5769701B2 (ja) 2009-05-05 2015-08-26 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイションＴｅｋｍｉｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 脂質組成物
DE202009007116U1 (de) 2009-05-18 2010-10-14 Amoena Medizin-Orthopädie-Technik GmbH Antidekubituskissen
US8574835B2 (en) 2009-05-29 2013-11-05 Life Technologies Corporation Scaffolded nucleic acid polymer particles and methods of making and using
EP2440556A1 (en) 2009-06-10 2012-04-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase
PL2440183T3 (pl) 2009-06-10 2019-01-31 Arbutus Biopharma Corporation Ulepszona formulacja lipidowa
BRPI1010689A2 (pt) 2009-06-15 2016-03-15 Alnylam Pharmaceuticals Inc "dsrna formulado por lipídios direcionados para o gene pcsk9"
WO2010151664A2 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treating cancer and modulating stress granule formation
EP2449114B9 (en) 2009-07-01 2017-04-19 Protiva Biotherapeutics Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
CA2766907A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Novartis Ag Self replicating rna molecules and uses thereof
EP2459231B1 (de) 2009-07-31 2016-06-08 Ethris Gmbh Rna mit einer kombination aus unmodifizierten und modifizierten nucleotiden zur proteinexpression
EP2281579A1 (en) 2009-08-05 2011-02-09 BioNTech AG Vaccine composition comprising 5'-Cap modified RNA
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
US8859284B2 (en) 2009-10-22 2014-10-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Navy Delivery of nanoparticles to neurons
US8449916B1 (en) 2009-11-06 2013-05-28 Iowa State University Research Foundation, Inc. Antimicrobial compositions and methods
WO2011060250A1 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Bend Research, Inc. Cationic dextran polymer derivatives
US9415113B2 (en) 2009-11-18 2016-08-16 University Of Washington Targeting monomers and polymers having targeting blocks
US8530429B2 (en) 2009-11-24 2013-09-10 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
DK2506857T3 (en) 2009-12-01 2018-05-07 Translate Bio Inc SUPPLY OF MRNA FOR AMPLIFICATION OF PROTEINS AND ENZYMES IN HUMAN GENETIC DISEASES
US20110245756A1 (en) 2009-12-03 2011-10-06 Rishi Arora Devices for material delivery, electroporation, sonoporation, and/or monitoring electrophysiological activity
DE102009056884B4 (de) 2009-12-03 2021-03-18 Novartis Ag Impfstoff-Adjuvantien und verbesserte Verfahren zur Herstellung derselben
CA2782424C (en) 2009-12-06 2021-07-27 Biogen Idec Hemophilia Inc. Factor viii-fc chimeric and hybrid polypeptides, and methods of use thereof
US8808982B2 (en) 2009-12-07 2014-08-19 Cellscript, Llc Compositions and methods for reprogramming eukaryotic cells
CA3044884A1 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Arbutus Biopharma Corporation Compositions for nucleic acid delivery
US20130189741A1 (en) 2009-12-07 2013-07-25 Cellscript, Inc. Compositions and methods for reprogramming mammalian cells
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
WO2011069528A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Lyophilization of nucleic acids in lactate-containing solutions
CA2783535C (en) 2009-12-11 2017-11-28 Greg Troiano Stable formulations for lyophilizing therapeutic particles
EP2512487A4 (en) 2009-12-15 2013-08-07 THERAPEUTIC POLYMERNANOPARTICLES WITH CORTICOSTEROIDS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF
US9295649B2 (en) 2009-12-15 2016-03-29 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticle compositions with high glass transition temperature or high molecular weight copolymers
JP2013514977A (ja) 2009-12-16 2013-05-02 ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッド 複数の物質の送達のための粒子
DE102009058769A1 (de) 2009-12-16 2011-06-22 MagForce Nanotechnologies AG, 10589 Temperaturabhängige Aktivierung von katalytischen Nukleinsäuren zur kontrollierten Wirkstofffreisetzung
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
EP2338520A1 (de) 2009-12-21 2011-06-29 Ludwig Maximilians Universität Konjugat mit Zielfindungsligand und dessen Verwendung
EP3721943A1 (en) 2009-12-23 2020-10-14 Novartis AG Lipids, lipid compositions and methods of using them
WO2011088309A1 (en) 2010-01-14 2011-07-21 Regulus Therapeutics Inc. Microrna compositions and methods
MX2012009178A (es) 2010-02-24 2012-11-30 Arrowhead Res Corp Composiciones para liberacion dirigida de arnsi.
EP2538929A4 (en) 2010-02-25 2014-07-09 Univ Johns Hopkins PROLONGED DELIVERY OF THERAPEUTIC AGENTS TO AN OCULAR COMPARTMENT
US20130133483A1 (en) 2010-03-08 2013-05-30 University Of Rochester Synthesis of Nanoparticles Using Reducing Gases
WO2011116072A1 (en) 2010-03-16 2011-09-22 Escape Therapeutics, Inc. Hybrid hydrogel scaffold compositions and methods of use
CN102892809A (zh) 2010-03-16 2013-01-23 犹他大学研究基金会 对可还原聚(酰氨基亚乙基亚胺)的可切割修饰以增强核苷酸递送
US20110230816A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Tyco Healthcare Group Lp Gels for Transdermal Delivery
US9149432B2 (en) 2010-03-19 2015-10-06 Massachusetts Institute Of Technology Lipid vesicle compositions and methods of use
GB201005005D0 (en) 2010-03-25 2010-05-12 Angeletti P Ist Richerche Bio New vaccine
US8349308B2 (en) 2010-03-26 2013-01-08 Mersana Therapeutics, Inc. Modified polymers for delivery of polynucleotides, method of manufacture, and methods of use thereof
US8207290B2 (en) 2010-03-26 2012-06-26 Cerulean Pharma Inc. Methods and systems for generating nanoparticles
US20110247090A1 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Intrexon Corporation Synthetic 5'UTRs, Expression Vectors, and Methods for Increasing Transgene Expression
JP2013523818A (ja) 2010-04-05 2013-06-17 ザ・ユニバーシティー・オブ・シカゴ 免疫反応のエンハンサーとしてのプロテインＡ（ＳｐＡ）抗体に関連する組成物および方法
EP2556151A1 (en) 2010-04-07 2013-02-13 Novartis AG Method for generating a parvovirus b19 virus-like particle
WO2011127255A1 (en) 2010-04-08 2011-10-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Preparation of lipid nanoparticles
CN103002878B (zh) 2010-04-09 2015-07-01 帕西拉制药有限公司 用于配制大直径合成膜囊泡的方法
WO2011125469A1 (ja) 2010-04-09 2011-10-13 国立大学法人東京大学 マイクロrna制御組換えワクシニアウイルス及びその使用
KR101196667B1 (ko) 2010-04-15 2012-11-02 포항공과대학교 산학협력단 피에이치 민감성 금속 나노 입자를 이용한 항암제 전달 시스템
WO2011127933A1 (en) 2010-04-16 2011-10-20 Nuevolution A/S Bi-functional complexes and methods for making and using such complexes
CA2796464C (en) 2010-04-16 2021-08-03 Immune Disease Institute, Inc. Sustained polypeptide expression from synthetic, modified rnas and uses thereof
EP2377938A1 (en) 2010-04-16 2011-10-19 Eukarys Capping-prone RNA polymerase enzymes and their applications
WO2011133868A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
WO2012046149A1 (en) 2010-04-28 2012-04-12 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method for increasing permeability of an epithelial barrier
WO2011139911A2 (en) 2010-04-29 2011-11-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated single stranded rna
CA2797854A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Novartis Ag Predictive markers useful in the treatment of fragile x syndrome (fxs)
WO2011143230A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Alnylam Pharmaceuticals Methods and compositions for delivery of active agents
JP2013527856A (ja) 2010-05-12 2013-07-04 プロチバ バイオセラピューティクス インコーポレイティッド 陽イオン性脂質およびその使用方法
WO2011141704A1 (en) 2010-05-12 2011-11-17 Protiva Biotherapeutics, Inc Novel cyclic cationic lipids and methods of use
EP2387999A1 (en) 2010-05-21 2011-11-23 CureVac GmbH Histidine-containing solution for transfection and/or injection of nucleic acids and uses thereof
EP2575895A2 (en) 2010-05-24 2013-04-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel amino alcohol cationic lipids for oligonucleotide delivery
WO2011153120A1 (en) 2010-06-04 2011-12-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel low molecular weight cationic lipids for oligonucleotide delivery
CA2800650C (en) 2010-06-14 2018-04-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Cell-penetrating peptides and uses therof
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
AU2011268507B2 (en) 2010-06-25 2014-08-14 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor H binding proteins
CN103079592B (zh) 2010-07-01 2015-10-21 浦项工科大学校产学协力团 使用来自细胞的微泡治疗和诊断癌症的方法
CN103037885B (zh) 2010-07-02 2015-08-26 芝加哥大学 与蛋白A(SpA)变体相关的组合物和方法
US9770463B2 (en) 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
RU2625546C2 (ru) 2010-07-06 2017-07-14 Новартис Аг Катионные эмульсии "масло-в-воде"
ES2557382T3 (es) 2010-07-06 2016-01-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Liposomas con lípidos que tienen un valor de pKa ventajoso para el suministro de ARN
CA2804492A1 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
BR112013000392B8 (pt) 2010-07-06 2022-10-04 Novartis Ag Composição farmacêutica contendo partícula de distribuição semelhante a vírion para moléculas de rna autorreplicantes e seu uso
US9192661B2 (en) 2010-07-06 2015-11-24 Novartis Ag Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
LT3243526T (lt) 2010-07-06 2020-02-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Rnr pristatymas, skirtas keleto imuninio atsako paleidimui
CN103140237A (zh) 2010-07-09 2013-06-05 比奥根艾迪克依蒙菲利亚公司 因子ix多肽及其使用方法
EP3508573A1 (en) 2010-07-09 2019-07-10 Bioverativ Therapeutics Inc. Systems for factor viii processing and methods thereof
US20130177523A1 (en) 2010-07-13 2013-07-11 University Of Utah Research Foundation Gold particles and methods of making and using the same in cancer treatment
GB201012410D0 (en) 2010-07-23 2010-09-08 Medical Res Council Intracellular immunity
CN103025876A (zh) 2010-07-30 2013-04-03 库瑞瓦格有限责任公司 用于转染和免疫刺激的核酸与二硫化物交联的阳离子成分的复合体
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012021516A2 (en) 2010-08-09 2012-02-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nanoparticle-oligonucletide hybrid structures and methods of use thereof
WO2012019630A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Curevac Gmbh Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded protein
EP2605792B1 (en) 2010-08-20 2014-12-10 Novartis AG Soluble needle arrays for delivery of influenza vaccines
MX2013002048A (es) 2010-08-20 2013-07-03 Cerulean Pharma Inc Conjugados, particulas, composiciones y metodos relacionados.
EP2605816B1 (en) 2010-08-20 2019-01-23 University Of Washington Circumferential aerosol device for delivering drugs to olfactory epithelium and brain
SI2611467T1 (sl) 2010-08-31 2022-10-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Majhni liposomi za dostavo RNA, ki kodira imunogen
CN103179984A (zh) 2010-08-31 2013-06-26 诺华有限公司 用于递送免疫原编码rna的peg化脂质体
KR20130100278A (ko) 2010-08-31 2013-09-10 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 올리고뉴클레오티드의 전달을 위한 신규 단일 화학 존재물 및 방법
CN103384515B (zh) 2010-08-31 2017-02-15 诺华有限公司 适用于脂质体递送编码蛋白质的rna的脂质
ES2920140T3 (es) 2010-08-31 2022-08-01 Theraclone Sciences Inc Anticuerpos neutralizantes del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)
WO2012031205A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Lipid-polymer hybrid particles
WO2012034067A1 (en) 2010-09-09 2012-03-15 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens
WO2012034077A2 (en) 2010-09-09 2012-03-15 The University Of Chicago Compositions and methods related to attenuated staphylococcal strains
US10307372B2 (en) 2010-09-10 2019-06-04 The Johns Hopkins University Rapid diffusion of large polymeric nanoparticles in the mammalian brain
US8466122B2 (en) 2010-09-17 2013-06-18 Protiva Biotherapeutics, Inc. Trialkyl cationic lipids and methods of use thereof
BR112013004585B1 (pt) 2010-09-20 2021-09-08 Merck Sharp & Dohme Corp Lipídeo catiônico, composição de lnp, e, uso de um lipídeo catiônico
EP2619307A1 (en) 2010-09-21 2013-07-31 RiboxX GmbH Method for synthesizing rna using dna template
WO2012040623A2 (en) 2010-09-24 2012-03-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nanostructured gels capable of controlled release of encapsulated agents
WO2012050975A2 (en) 2010-09-29 2012-04-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Novel circular mammalian rna molecules and uses thereof
JP2013545723A (ja) 2010-09-30 2013-12-26 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション オリゴヌクレオチドの送達のための低分子量カチオン性脂質
DE19177059T1 (de) 2010-10-01 2021-10-07 Modernatx, Inc. N1-methyl-pseudouracile enthältendes ribonucleinsäuren sowie ihre verwendungen
US10078075B2 (en) 2011-12-09 2018-09-18 Vanderbilt University Integrated organ-on-chip systems and applications of the same
CN103269713B (zh) 2010-10-11 2016-01-20 诺华有限公司 抗原递送平台
WO2012053297A1 (ja) 2010-10-19 2012-04-26 三菱電機株式会社 レーザ加工機制御装置およびレーザ加工機制御方法
JP2013545727A (ja) 2010-10-21 2013-12-26 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション オリゴヌクレオチド送達用の新規低分子量カチオン性脂質
SG10201508700XA (en) 2010-10-29 2015-11-27 Merck Sharp & Dohme Recombinant subunit dengue virus vaccine
CA2816977C (en) 2010-11-05 2019-10-29 The Johns Hopkins University Compositions and methods relating to reduced mucoadhesion
EP2638162B1 (en) 2010-11-09 2016-08-10 The Regents of The University of California Skin permeating and cell entering (space) peptides and methods of use thereof
JP6077450B2 (ja) 2010-11-12 2017-02-08 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア コンセンサス前立腺抗原、それをコードする核酸分子、ならびにそれを含むワクチンおよび用途
BR112013012195A2 (pt) 2010-11-16 2018-07-10 Selecta Biosciences Inc oligonucleotídeo imunoestimulatórios
ES2684684T3 (es) 2010-11-17 2018-10-04 Aduro Biotech, Inc. Métodos y composiciones para inducir una respuesta inmune al EGFRVIII
KR101985382B1 (ko) 2010-11-19 2019-06-03 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 톨-유사 수용체 기반 면역 반응을 조절하기 위한 면역 조절 올리고뉴클레오타이드(ｉｒｏ) 화합물
WO2012075040A2 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. mRNA FOR USE IN TREATMENT OF HUMAN GENETIC DISEASES
WO2012072096A1 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Biontech Ag Method for cellular rna expression
AU2011358150B2 (en) 2010-12-16 2016-11-03 Sprna Gmbh Pharmaceutical composition consisting of RNA having alkali metal as counter ion and formulated with dications
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
WO2012088381A2 (en) 2010-12-22 2012-06-28 President And Fellows Of Harvard College Continuous directed evolution
CN103282503B (zh) 2010-12-29 2015-12-02 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于细胞内递送核酸的小分子缀合物
WO2012089225A1 (en) 2010-12-29 2012-07-05 Curevac Gmbh Combination of vaccination and inhibition of mhc class i restricted antigen presentation
CA2862765A1 (en) 2011-01-04 2012-07-12 Brown University Nanotubes as carriers of nucleic acids into cells
WO2012094574A2 (en) 2011-01-06 2012-07-12 The Johns Hopkins University Stabilized polyribonucleotide nanoparticles
WO2012094653A2 (en) 2011-01-07 2012-07-12 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for macromolecular drug delivery
CA2824526C (en) 2011-01-11 2020-07-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
WO2012099805A2 (en) 2011-01-19 2012-07-26 Ocean Nanotech, Llc Nanoparticle based immunological stimulation
CA2825023A1 (en) 2011-01-26 2012-08-02 Cenix Bioscience Gmbh Delivery system and conjugates for compound delivery via naturally occurring intracellular transport routes
US10363309B2 (en) 2011-02-04 2019-07-30 Case Western Reserve University Targeted nanoparticle conjugates
US20140066363A1 (en) 2011-02-07 2014-03-06 Arun K. Bhunia Carbohydrate nanoparticles for prolonged efficacy of antimicrobial peptide
WO2012116715A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in newborns and infants
US20120207840A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment Of Non-Melanoma Skin Cancer
WO2012112582A2 (en) 2011-02-14 2012-08-23 Swift Biosciences, Inc. Polynucleotide primers and probes
US20140081012A1 (en) 2011-02-15 2014-03-20 The University Of North Carolina At Chapel Hill Nanoparticle, liposomes, polymers, agents and proteins modified with reversible linkers
WO2012112730A2 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivering nucleic acid to a cell
EP2489371A1 (en) 2011-02-18 2012-08-22 Instituto Nacional de Investigacion y Tecnologia Agraria y Alimentaria Carrier peptides for drug delivery
WO2012113413A1 (en) 2011-02-21 2012-08-30 Curevac Gmbh Vaccine composition comprising complexed immunostimulatory nucleic acids and antigens packaged with disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates
CN103492574B (zh) 2011-02-22 2015-12-09 加州理工学院 使用腺相关病毒（aav）载体递送蛋白
US8696637B2 (en) 2011-02-28 2014-04-15 Kimberly-Clark Worldwide Transdermal patch containing microneedles
WO2012116714A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Curevac Gmbh Vaccination in elderly patients
EP2680885B8 (en) 2011-03-02 2018-07-25 GlaxoSmithKline Biologicals SA Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
CA2832807A1 (en) 2011-03-07 2012-09-13 Massachusetts Institute Of Technology Methods for transfecting cells with nucleic acids
WO2012125680A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Novartis Ag Methods of treating vasculitis using an il-17 binding molecule
US20140212503A1 (en) 2011-03-17 2014-07-31 Hyukjin Lee Delivery system
AU2012229107A1 (en) 2011-03-17 2013-09-19 Novartis Ag FGFR and ligands thereof as biomarkers for breast cancer in HR positive subjects
EP2688590B1 (en) 2011-03-24 2020-02-12 GlaxoSmithKline Biologicals SA Adjuvant nanoemulsions with phospholipids
US9238716B2 (en) 2011-03-28 2016-01-19 Massachusetts Institute Of Technology Conjugated lipomers and uses thereof
CN103476949A (zh) 2011-03-28 2013-12-25 诺瓦提斯公司 与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂相关的标志物
WO2012135805A2 (en) 2011-03-31 2012-10-04 modeRNA Therapeutics Delivery and formulation of engineered nucleic acids
WO2012138453A1 (en) 2011-04-03 2012-10-11 The General Hospital Corporation Efficient protein expression in vivo using modified rna (mod-rna)
ES2587512T3 (es) 2011-04-04 2016-10-25 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Derivados de 2'-O-aminooximetil nucleósido para su uso en la síntesis y modificación de nucleósidos, nucleótidos y oligonucleótidos
WO2012142132A1 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Life Technologies Corporation Polymer particles and methods of making and using same
US11135174B2 (en) 2011-04-13 2021-10-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Coated mesoporous nanoparticles
WO2013158127A1 (en) 2012-04-16 2013-10-24 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
US20140178894A1 (en) 2011-04-20 2014-06-26 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Culture medium suitable for the culture of undifferentiated cells
KR101998431B1 (ko) 2011-04-26 2019-07-09 몰레큘라 익스프레스 인코포레이티드 리포솜 제제
US20160272697A2 (en) 2011-04-28 2016-09-22 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Neutralizing Antibodies to Nipah and Hendra Virus
AU2012249474A1 (en) 2011-04-28 2013-11-07 Stc.Unm Porous nanoparticle-supported lipid bilayers (protocells) for targeted delivery and methods of using same
EP2702408A1 (en) 2011-04-29 2014-03-05 Novartis AG Methods of treating squamous cell carcinoma related applications
BR112013027508A2 (pt) 2011-04-29 2017-03-14 Selecta Biosciences Inc nanotransportadores sintéticos tolerogênicos para reduzir respostas de anticorpos
UA116189C2 (uk) 2011-05-02 2018-02-26 Мілленніум Фармасьютікалз, Інк. КОМПОЗИЦІЯ АНТИ-α4β7 АНТИТІЛА
PT2705143T (pt) 2011-05-02 2021-04-07 Univ Wayne State Tecnologia de células pluripotentes induzidas por proteínas e utilizações da mesma
US8945588B2 (en) 2011-05-06 2015-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides
WO2012152810A1 (de) 2011-05-10 2012-11-15 Basf Se Öl-in-wasser-emulsionen
EP2707033A1 (en) 2011-05-11 2014-03-19 Ramot at Tel Aviv University, Ltd. Targeted polymeric conjugates and uses thereof
EP2706983A1 (en) 2011-05-12 2014-03-19 Helmut Vockner Novel pharmaceutical formulation
CN104023708A (zh) 2011-05-12 2014-09-03 耶路撒冷希伯来大学依苏姆研究发展公司 包含聚合物缀合的脂质的脂质体和有关用途
LT3275892T (lt) 2011-05-13 2020-04-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Struktūros prieš suliejimą rsv f antigenai
WO2012158736A1 (en) 2011-05-17 2012-11-22 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof for non-human vertebrates
US8691750B2 (en) 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
US8978170B2 (en) 2011-05-20 2015-03-17 Kohler Co. Toilet installation system and method
CN103608033B (zh) 2011-05-24 2016-06-15 生物技术公司 用于癌症的个体化疫苗
US20140227372A1 (en) 2011-05-25 2014-08-14 Novartis Ag Biomarkers for lung cancer
WO2012166923A2 (en) 2011-05-31 2012-12-06 Bind Biosciences Drug loaded polymeric nanoparticles and methods of making and using same
ES2685333T3 (es) 2011-06-02 2018-10-08 The Regents Of The University Of California Nanopartículas encapsuladas en membrana y método de utilización
WO2012166241A1 (en) 2011-06-02 2012-12-06 Novartis Ag Biomarkers for hedgehog inhibitor therapy
WO2012168259A1 (en) 2011-06-06 2012-12-13 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 11 (ptpn11) and triple-negative breast cancer
JP6184945B2 (ja) 2011-06-08 2017-08-23 シャイアー ヒューマン ジェネティック セラピーズ インコーポレイテッド ｍＲＮＡ送達のための脂質ナノ粒子組成物および方法
WO2012170889A1 (en) 2011-06-08 2012-12-13 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cleavable lipids
WO2012168491A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Pharmaceutical formulations of pcsk9 antagonists
WO2012170607A2 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Novartis Ag Use of pcsk9 antagonists
PE20140576A1 (es) 2011-06-10 2014-05-24 Novartis Ag Vacunas bovinas y metodos
US8636696B2 (en) 2011-06-10 2014-01-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Transdermal device containing microneedles
US8916696B2 (en) 2011-06-12 2014-12-23 City Of Hope Aptamer-mRNA conjugates for targeted protein or peptide expression and methods for their use
WO2012172495A1 (en) 2011-06-14 2012-12-20 Novartis Ag Compositions and methods for antibodies targeting tem8
CA2839196A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 Chrontech Pharma Ab Injection needle and device
BR112013031762A2 (pt) 2011-06-16 2016-09-13 Novartis Ag proteínas solúveis para utilização como terapêuticos
CA2839995A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Computationally optimized broadly reactive antigens for h1n1 influenza
WO2013003475A1 (en) 2011-06-27 2013-01-03 Cellscript, Inc. Inhibition of innate immune response
JP2014524796A (ja) 2011-06-28 2014-09-25 イノビオ ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 低侵襲表皮電気穿孔装置
PT2726099T (pt) 2011-07-01 2018-11-13 Novartis Ag Método para o tratamento de distúrbios metabólicos
JP2014520506A (ja) 2011-07-04 2014-08-25 コモンウェルス サイエンティフィック アンド インダストリアル リサーチ オーガニゼイション 核酸複合体
MX350764B (es) 2011-07-06 2017-09-18 Novartis Ag Liposomas con relacion nitrogeno:fosfato (n:p) util para el suministro de moleculas de arn.
JP6059220B2 (ja) 2011-07-06 2017-01-18 ノバルティス アーゲー 核酸を含む水中油型エマルジョン
US11058762B2 (en) 2011-07-06 2021-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic compositions and uses thereof
JP2014522842A (ja) 2011-07-06 2014-09-08 ノバルティス アーゲー 免疫原性組み合わせ組成物およびその使用
CN103796639B (zh) 2011-07-06 2017-05-31 诺华股份有限公司 阳离子水包油乳液
EP2729501A2 (en) 2011-07-07 2014-05-14 Life Technologies Corporation Polymer particles, nucleic acid polymer particles and methods of making and using the same
US9617392B2 (en) 2011-07-10 2017-04-11 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods for self-assembly of polymers with complementary macroscopic and microscopic scale units
US20130012566A1 (en) 2011-07-10 2013-01-10 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Diagnostic Or Therapeutic Agents For The Treatment of Alopecia
WO2013009717A1 (en) 2011-07-10 2013-01-17 Elisabet De Los Pinos Virion derived protein nanoparticles for delivering diagnostic or therapeutic agents for the treatment of skin-related diseases
GB2492999A (en) 2011-07-20 2013-01-23 Univ Central Lancashire Neutron detector
WO2013012921A2 (en) 2011-07-20 2013-01-24 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid aptamers
US10376461B2 (en) 2011-07-21 2019-08-13 Croda International Plc Branched polyether-polyamide block copolymers and methods of making and using the same
US9493549B2 (en) 2011-07-25 2016-11-15 The Rockefeller University Antibodies directed toward the HIV-1 GP120 CD4 binding site with increased potency and breadth
WO2013016460A1 (en) 2011-07-25 2013-01-31 Novartis Ag Compositions and methods for assessing functional immunogenicity of parvovirus vaccines
EA201490381A1 (ru) 2011-07-29 2014-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Синтетические наноносители, которые стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и иммунного ответа, опосредованного цитотоксическими т-лимфоцитами (ctl)
JP6317670B2 (ja) 2011-08-15 2018-04-25 ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ ブドウ球菌プロテインａに対する抗体に関連した組成物および方法
WO2013032829A1 (en) 2011-08-26 2013-03-07 Arrowhead Research Corporation Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
CN103930135A (zh) 2011-08-31 2014-07-16 马林克罗特有限公司 使用h-膦酸酯的纳米颗粒peg修饰
US9126966B2 (en) 2011-08-31 2015-09-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use thereof
TR201900264T4 (tr) 2011-08-31 2019-02-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa İmmünojen şifreleyici rna'nın verilmesi için pegile edilmiş lipozomlar.
US20140206682A1 (en) 2011-09-01 2014-07-24 Novartis Pharmaceuticals Uk Limited Compounds and compositions as pdgfr kinase inhibitors
JP2014525435A (ja) 2011-09-02 2014-09-29 ノバルティス アーゲー Ｈｓｆ１関連疾患を処置するための有機組成物
EP2755986A4 (en) 2011-09-12 2015-05-20 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED NUCLEIC ACIDS AND METHODS OF USE
WO2013039861A2 (en) 2011-09-12 2013-03-21 modeRNA Therapeutics Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
TR201909110T4 (tr) 2011-09-14 2019-07-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sakarit-protein glikokonjugatları yapmaya yönelik yöntemler.
US10421960B2 (en) 2011-09-16 2019-09-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA engineered T cells for the treatment of cancer
US20150017245A1 (en) 2011-09-22 2015-01-15 Bind Therapeutics, Inc. Methods of treating cancers with therapeutic nanoparticles
US9375388B2 (en) 2011-09-23 2016-06-28 Indian Institute Of Technology, Bombay Nanoparticle based cosmetic composition
TWI593708B (zh) 2011-09-26 2017-08-01 諾華公司 治療代謝病症之融合蛋白質
TW201315742A (zh) 2011-09-26 2013-04-16 Novartis Ag 治療代謝病症之雙功能蛋白質
AU2012315965A1 (en) 2011-09-27 2014-04-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted PEGylated lipids
WO2013045505A1 (en) 2011-09-28 2013-04-04 Novartis Ag Biomarkers for raas combination therapy
LT3682905T (lt) 2011-10-03 2022-02-25 Modernatx, Inc. Modifikuoti nukleozidai, nukleotidai ir nukleorūgštys bei jų naudojimas
WO2013055971A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University Polymers for delivering a substance into a cell
JP6305925B2 (ja) 2011-10-11 2018-04-18 ノバルティス アーゲー 組換え自己複製ポリシストロニックｒｎａ分子
WO2014066811A1 (en) 2012-10-25 2014-05-01 The Johns Hopkins University Bioreducible poly (b-amino ester)s for sirna delivery
EP2766407B1 (en) 2011-10-12 2018-06-27 The Curators Of The University Of Missouri Pentablock polymers
EP2765997A4 (en) 2011-10-14 2015-06-24 Stc Unm POROUS NANOPARTICLE-SUPPORTED LIPIDIC BILCHES (PROTOCELLS) FOR TARGETED DELIVERY, COMPRISING TRANSDERMAL DELIVERY OF CARGO MOLECULE, AND ASSOCIATED METHODS
CN109111523B (zh) 2011-10-14 2022-06-07 诺华股份有限公司 用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法
CN106421933A (zh) 2011-10-18 2017-02-22 米歇尔技术公司 药物递送医疗装置
PL3597644T3 (pl) 2011-10-18 2022-01-17 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Aminowe lipidy kationowe i ich zastosowania
WO2013057715A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Novartis Ag Adjuvanted influenza b virus vaccines for pediatric priming
AU2012324458B2 (en) 2011-10-20 2016-05-19 Novartis Ag Biomarkers predictive of responsiveness to alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor activator treatment
US20140328759A1 (en) 2011-10-25 2014-11-06 The University Of British Columbia Limit size lipid nanoparticles and related methods
WO2013061290A1 (en) 2011-10-26 2013-05-02 Nanopass Technologies Ltd. Microneedle intradermal drug delivery device with auto-disable functionality
KR102265775B1 (ko) 2011-10-27 2021-06-16 소렌토 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 고점도 생체활성 제제의 경피 전달 방법
KR102596685B1 (ko) 2011-10-27 2023-11-01 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 약물 캡슐화 마이크로스피어를 형성할 수 있는, ｎ-말단 상에 관능화된 아미노산 유도체
CA2851828A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Presage Biosciences, Inc. Methods for drug delivery
EP3578203A1 (en) 2011-10-28 2019-12-11 Integritybio Inc. Protein formulations containing amino acids
WO2013062140A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Kyoto University Method for efficiently inducing differentiation of pluripotent stem cells into hepatic lineage cells
EP2773426B1 (en) 2011-10-31 2018-08-22 Mallinckrodt LLC Combinational liposome compositions for cancer therapy
RU2665810C2 (ru) 2011-10-31 2018-09-04 Дженентек, Инк. Содержащие антитела составы
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
SG11201401964TA (en) 2011-11-04 2014-05-29 Agency Science Tech & Res Self-assembled composite ultrasmall peptide-polymer hydrogels
AR088633A1 (es) 2011-11-04 2014-06-25 Novartis Ag Constructos extensores de vida media de lrp6 (proteina relacionada con lipoproteinas de baja densidad 6)
US9872870B2 (en) 2011-11-04 2018-01-23 University Of Notre Dame Du Lac Multifunctional micellar nanoparticle-based drug and targeting agent system
ES2721325T3 (es) 2011-11-04 2019-07-31 Nitto Denko Corp Método para producir de manera estéril partículas de lípido-ácido nucleico
US20130115247A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
US20130116408A1 (en) 2011-11-05 2013-05-09 Aura Biosciences, Inc. Virion Derived Protein Nanoparticles For Delivering Radioisotopes For The Diagnosis And Treatment Of Malignant And Systemic Disease And The Monitoring Of Therapy
EP2776459A1 (en) 2011-11-08 2014-09-17 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research Rod cell-specific promoter
US20140294732A1 (en) 2011-11-08 2014-10-02 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung, Friedrich Miescher Institute Early diagnostic of neurodegenerative diseases
EP2776022A1 (en) 2011-11-08 2014-09-17 Novartis Forschungsstiftung, Zweigniederlassung Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research New treatment for neurodegenerative diseases
WO2013070872A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Methods and compositions for x-ray induced release from ph sensitive liposomes
US9581590B2 (en) 2011-11-09 2017-02-28 Board Of Trustees Of Michigan State University Metallic nanoparticle synthesis with carbohydrate capping agent
WO2013071047A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for in vitro transcription of rna
MX353189B (es) 2011-11-11 2018-01-05 Variation Biotechnologies Inc Composiciones y su uso en el tratamiento de citomegalovirus.
BR112014011560A2 (pt) 2011-11-14 2017-05-09 Novartis Ag complexos imunogênicos de carbômeros polianiônicos e polipeptídeos env, e métodos de fabricação e uso dos mesmos
EP2780017A1 (en) 2011-11-15 2014-09-24 Novartis AG Combination of a phosphoinositide 3-kinase inhibitor and a modulator of the janus kinase 2-signal transducer and activator of transcription 5 pathway
CA3076725A1 (en) 2011-11-18 2013-05-23 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Polymer protein microparticles
KR20140097178A (ko) 2011-11-21 2014-08-06 노파르티스 아게 IL-17 길항제 및 건선성 관절염 (PsA) 반응 또는 비-반응 대립유전자를 이용하여 PsA를 치료하는 방법
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
US20150037428A1 (en) 2011-11-29 2015-02-05 The University Of North Carolina At Chapel Hill Geometrically engineered particles and methods for modulating macrophage or immune responses
US9623087B2 (en) 2011-11-30 2017-04-18 3M Innovative Properties Company Microneedle device including a peptide therapeutic agent and an amino acid and methods of making and using the same
US9364549B2 (en) 2011-11-30 2016-06-14 Andreas Voigt Hydrophobic drug-delivery material, method for manufacturing thereof and methods for delivery of a drug-delivery composition
WO2013082590A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Invivo Therapeutics Corporation Peg based hydrogel for peripheral nerve injury applications and compositions and method of use of synthetic hydrogel sealants
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
BR112014013175B1 (pt) 2011-12-02 2022-08-09 Pegasus Laboratories, Inc Processo para preparar comprimidos de composição de liberação prolongada
EP2788439A4 (en) 2011-12-05 2015-09-02 Nano Prec Medical Inc DEVICE HAVING A MEMBRANE FOR TITANIUM DIOXIDE NANOTUBE FOR DRUG DELIVERY
KR20210134808A (ko) 2011-12-05 2021-11-10 팩터 바이오사이언스 인크. 세포를 형질감염시키는 방법들 및 생성물들
US8497124B2 (en) 2011-12-05 2013-07-30 Factor Bioscience Inc. Methods and products for reprogramming cells to a less differentiated state
WO2013086322A1 (en) 2011-12-07 2013-06-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Branched alkyl and cycloalkyl terminated biodegradable lipids for the delivery of active agents
HUE21212055T1 (hu) 2011-12-07 2022-11-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc Biológiailag lebontható lipidek hatóanyagok bejuttatására
US20140308304A1 (en) 2011-12-07 2014-10-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids for the delivery of active agents
GB201121070D0 (en) 2011-12-07 2012-01-18 Isis Innovation composition for delivery of biotherapeutics
WO2013086526A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 The Regents Of The University Of California Liposomal drug encapsulation
WO2013086502A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 President And Fellows Of Harvard College Organ chips and uses thereof
WO2013086486A1 (en) 2011-12-09 2013-06-13 President And Fellows Of Harvard College Integrated human organ-on-chip microphysiological systems
EP2792368A4 (en) 2011-12-12 2015-09-30 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd LIPID NANOPARTICLES WITH COMBINATIONS OF CATIONIC LIPIDES
US9839616B2 (en) 2011-12-12 2017-12-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Lipid nano particles comprising cationic lipid for drug delivery system
CA2858884A1 (en) 2011-12-12 2013-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Proteins comprising mrsa pbp2a and fragments thereof, nucleic acids encoding the same, and compositions and their use to prevent and treat mrsa infections
US20150000936A1 (en) 2011-12-13 2015-01-01 Schlumberger Technology Corporation Energization of an element with a thermally expandable material
EP2604253A1 (en) 2011-12-13 2013-06-19 Otto Glatter Water-in-oil emulsions and methods for their preparation
SG10201601349XA (en) 2011-12-13 2016-03-30 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Bacterially derived, intact minicells for delivery of therapeutic agents to brain tumors
US20140343129A1 (en) 2011-12-14 2014-11-20 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleic acids, and acute care uses thereof
WO2013130161A1 (en) 2011-12-14 2013-09-06 modeRNA Therapeutics Methods of responding to a biothreat
US20140349320A1 (en) 2011-12-15 2014-11-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Using Adaptive Immunity to Detect Drug Resistance
US9636414B2 (en) 2011-12-15 2017-05-02 Biontech Ag Particles comprising single stranded RNA and double stranded RNA for immunomodulation
EP2791170A1 (en) 2011-12-16 2014-10-22 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Compounds and methods for treating inflammatory diseases
WO2013090601A2 (en) 2011-12-16 2013-06-20 Massachusetts Institute Of Technology Compact nanoparticles for biological applications
CN104245794A (zh) 2011-12-16 2014-12-24 麻省理工学院 α-氨基脒聚合物及其用途
RU2014129268A (ru) 2011-12-16 2016-02-10 Аллерган, Инк. Офтальмологические составы, которые содержат привитые сополимеры поливинилкапролактам-поливинилацетат-полиэтиленгликоля
RU2615076C2 (ru) 2011-12-16 2017-04-03 Новартис Аг Устройство аэрозолизации для независимой от профиля вдоха доставки лекарственного средства
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
WO2013091001A1 (en) 2011-12-19 2013-06-27 The University Of Sydney A peptide-hydrogel composite
US9241829B2 (en) 2011-12-20 2016-01-26 Abbott Medical Optics Inc. Implantable intraocular drug delivery apparatus, system and method
US20130165504A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 modeRNA Therapeutics Methods of increasing the viability or longevity of an organ or organ explant
WO2013096812A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Articles of manufacture and methods for co-administration of antibodies
KR101963230B1 (ko) 2011-12-26 2019-03-29 삼성전자주식회사 복수개의 단일 항체를 포함하는 단백질 복합체
WO2013101908A1 (en) 2011-12-27 2013-07-04 Massachusetts Institute Of Technology Microneedle devices and uses thereof
EP2797634A4 (en) 2011-12-29 2015-08-05 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED mRNA ENCODING POLYPEPTIDES PENETRATING IN CELLS
AU2011384634A1 (en) 2011-12-29 2014-06-19 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor H binding proteins
CA2862377A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Cellscript, Llc Making and using in vitro-synthesized ssrna for introducing into mammalian cells to induce a biological or biochemical effect
CN104136023A (zh) 2012-01-06 2014-11-05 密执安生命治疗有限责任公司 降低心血管疾病风险的方法
WO2013106496A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 modeRNA Therapeutics Methods and compositions for targeting agents into and across the blood-brain barrier
KR20140129054A (ko) 2012-01-26 2014-11-06 라이프 테크놀로지스 코포레이션 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법
KR20140128966A (ko) 2012-01-26 2014-11-06 라이프 테크놀로지스 코포레이션 바이러스의 감염성을 증가시키는 방법
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
EP2623121A1 (en) 2012-01-31 2013-08-07 Bayer Innovation GmbH Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and an antigen
WO2013113325A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Negatively charged nucleic acid comprising complexes for immunostimulation
KR102081560B1 (ko) 2012-02-09 2020-02-25 라이프 테크놀로지스 코포레이션 친수성 중합체성 입자 및 그의 제조 방법
WO2013126564A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 Cerulean Pharma Inc. Conjugates, particles, compositions, and related methods
US20130243867A1 (en) 2012-02-23 2013-09-19 University Of South Florida (A Florida Non-Profit Corporation) Micelle compositions and methods for their use
US20130224268A1 (en) 2012-02-27 2013-08-29 Newgen Biopharma Corp. Topical delivery of hormonal and non hormonal nano formulations, methods of making and using the same
CA2864177C (en) 2012-03-01 2019-11-26 Amgen Research (Munich) Gmbh Prolonged half-life albumin-binding protein fused bispecific antibodies
DE112013001457T5 (de) 2012-03-13 2014-12-04 University Of Kwazulu-Natal Transdermales Applikationssystem
US10322089B2 (en) 2012-03-14 2019-06-18 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Nanoparticles, nanoparticle delivery methods, and systems of delivery
JP6138904B2 (ja) 2012-03-16 2017-05-31 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 活性剤の送達のための非線状マルチブロックコポリマー薬物コンジュゲート
EP2825206A1 (en) 2012-03-16 2015-01-21 The Johns Hopkins University Controlled release formulations for the delivery of hif-1 inhibitors
DK2825156T3 (en) 2012-03-16 2017-10-30 Merck Patent Gmbh TARGETED AMINO ACID LIPIDS
WO2013142349A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal sbi
US9610346B2 (en) 2012-03-23 2017-04-04 International Aids Vaccine Initiative Recombinant viral vectors
WO2013143555A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 Biontech Ag Rna formulation for immunotherapy
WO2013148186A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 President And Fellows Of Harvard College Lipid-coated nucleic acid nanostructures of defined shape
SG11201403450VA (en) 2012-03-27 2014-09-26 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules for improved protein or peptide expression
DK2830594T3 (en) 2012-03-27 2018-08-13 Sirna Therapeutics Inc DIETHER-BASED BIOLOGICALLY DEGRADABLE CATIONIC LIPIDS FOR siRNA RELEASE
CA2866945C (en) 2012-03-27 2021-05-04 Curevac Gmbh Artificial nucleic acid molecules comprising a 5'top utr
MX357803B (es) 2012-03-27 2018-07-24 Curevac Ag Moléculas de ácido nucleico artificiales.
CA2868030C (en) 2012-03-29 2021-05-25 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Lipid-derived neutral nanoparticles
CN104411338A (zh) 2012-04-02 2015-03-11 现代治疗公司 用于产生与人类疾病相关的生物制剂和蛋白质的修饰多核苷酸
DE18200782T1 (de) 2012-04-02 2021-10-21 Modernatx, Inc. Modifizierte polynukleotide zur herstellung von proteinen im zusammenhang mit erkrankungen beim menschen
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US20150050354A1 (en) 2012-04-02 2015-02-19 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the treatment of otic diseases and conditions
US20140275229A1 (en) 2012-04-02 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1
EP2833918B1 (en) 2012-04-05 2019-05-08 Massachusetts Institute of Technology Immunostimulatory compositions and methods of use thereof
WO2013151650A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 University Of Florida Research Foundation, Inc. Neurophilic nanoparticles
WO2013152351A2 (en) 2012-04-06 2013-10-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fusion polypeptides and methods of use thereof
ES2821098T3 (es) 2012-04-08 2021-04-23 Urogen Pharma Ltd Preparaciones de hidrogel térmico reversible para su uso en el tratamiento de trastornos del urotelio
KR101607422B1 (ko) 2012-04-11 2016-03-29 인터자인 테크놀로지스, 인코포레이티드 안정된 미셀을 위한 블록 공중합체
WO2013155487A1 (en) 2012-04-12 2013-10-17 Yale University Vehicles for controlled delivery of different pharmaceutical agents
US11001797B2 (en) 2012-04-13 2021-05-11 President And Fellows Of Harvard College Devices and methods for in vitro aerosol delivery
WO2013154766A1 (en) 2012-04-13 2013-10-17 New York University Microrna control of ldl receptor pathway
MX2014001965A (es) 2012-04-18 2014-03-31 Arrowhead Res Corp Polimeros de poli(acrilato) para suministro de acido nucleico in vivo.
JP6232416B2 (ja) 2012-04-19 2017-11-15 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． オリゴヌクレオチド送達のための、新規なジエステルおよびトリエステルベースの低分子量、生分解性カチオン性脂質
US10278927B2 (en) 2012-04-23 2019-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Stable layer-by-layer coated particles
CA2869639A1 (en) 2012-04-25 2013-10-31 Regulus Therapeutics Inc. Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity
KR102140989B1 (ko) 2012-05-03 2020-08-04 칼라 파마슈티컬스, 인크. 개선된 점막 수송을 나타내는 제약 나노입자
AU2013256008B2 (en) 2012-05-04 2016-02-25 The Johns Hopkins University Lipid-based drug carriers for rapid penetration through mucus linings
US20150087671A1 (en) 2012-05-16 2015-03-26 Micell Technologies, Inc. Low burst sustained release lipophilic and biologic agent compositions
WO2013173582A1 (en) 2012-05-17 2013-11-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hepatitis c virus neutralizing antibody
WO2013173693A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Nanoparticles with enhanced entry into cancer cells
AU2013266238B2 (en) 2012-05-23 2017-07-27 The Ohio State University Lipid-coated albumin nanoparticle compositions and methods of making and method of using the same
EP3498267A1 (en) 2012-05-25 2019-06-19 CureVac AG Reversible immobilization and/or controlled release of nucleic acid containing nanoparticles by (biodegradable) polymer coatings
ES2811798T3 (es) 2012-06-06 2021-03-15 Loma Vista Medical Inc Dispositivos médicos inflables
EP2858677B1 (en) 2012-06-08 2020-08-05 ethris GmbH Pulmonary delivery of messenger rna
PL3489220T3 (pl) 2012-06-08 2021-11-02 Nitto Denko Corporation Lipidy do preparatów do dostarczania środka terapeutycznego
ES2864878T5 (es) 2012-06-08 2024-10-23 Translate Bio Inc Administración pulmonar de ARN, a células objetivo no pulmonares
CN104507458B (zh) 2012-06-20 2018-05-22 滑铁卢大学 粘膜粘合剂纳米颗粒递送系统
US20150218252A1 (en) 2012-06-20 2015-08-06 President And Fellows Of Harvard College Self-assembling peptides, peptide nanostructures and uses thereof
ES2729603T3 (es) 2012-06-27 2019-11-05 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos IL-23 antihumanos cristalinos
US9150841B2 (en) 2012-06-29 2015-10-06 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Cells for producing recombinant iduronate-2-sulfatase
WO2014008334A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Stable non-aggregating nucleic acid lipid particle formulations
US9956291B2 (en) 2012-07-10 2018-05-01 Shaker A. Mousa Nanoformulation and methods of use of thyroid receptor beta1 agonists for liver targeting
EP2872120B1 (en) 2012-07-16 2017-05-03 Nanoderm Sciences, Inc. Therapeutic nanoparticles with a polymyxin b as targeting agent
EP2687251A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
EP2687252A1 (en) 2012-07-17 2014-01-22 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Drug delivery device
CN112587671A (zh) 2012-07-18 2021-04-02 博笛生物科技有限公司 癌症的靶向免疫治疗
WO2014015334A1 (en) 2012-07-20 2014-01-23 Brown University System and methods for nanostructure protected delivery of treatment agent and selective release thereof
KR20160073936A (ko) 2012-07-24 2016-06-27 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산 나노구조의 자기-조립
WO2014015422A1 (en) 2012-07-27 2014-01-30 Ontario Institute For Cancer Research Cellulose-based nanoparticles for drug delivery
GB201213624D0 (en) 2012-07-27 2012-09-12 Univ Ulster The Method and system for production of conjugated nanoparticles
US9931418B2 (en) 2012-08-07 2018-04-03 Northeastern University Compositions for the delivery of RNA and drugs into cells
WO2014024193A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Prodel Pharma Ltd. Compositions and methods for rapid transmucosal delivery of pharmaceutical ingredients
EP2882474A4 (en) 2012-08-08 2016-05-11 Presage Biosciences Inc EXTRUSION METHODS AND DEVICES FOR ACTIVE INGREDIENT RELIEF
US9974886B2 (en) 2012-08-08 2018-05-22 Nanyang Technological University Methods of manufacturing hydrogel microparticles having living cells, and compositions for manufacturing a scaffold for tissue engineering
EP2882459A1 (en) 2012-08-10 2015-06-17 University of North Texas Health Science Center Drug delivery vehicle comprising conjugates between targeting polyamino acids and fatty acids
WO2014027006A1 (en) 2012-08-13 2014-02-20 Edko Pazarlama Tanitim Ticaret Limited Sirketi Bioadhesive formulations for use in drug delivery
CA2884870C (en) 2012-08-13 2022-03-29 Massachusetts Institute Of Technology Amine-containing lipidoids and uses thereof
US9775804B2 (en) 2012-08-14 2017-10-03 Aaron Froese Internal structured self assembling liposomes
EP2885419A4 (en) 2012-08-14 2016-05-25 Moderna Therapeutics Inc ENZYMES AND POLYMERASES FOR RNA SYNTHESIS
WO2014028209A1 (en) 2012-08-14 2014-02-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Stabilizing shear-thinning hydrogels
US10231997B2 (en) 2012-08-15 2019-03-19 The University Of Chicago Exosome-based therapeutics against neurodegenerative disorders
WO2014039185A1 (en) 2012-09-05 2014-03-13 Creighton University Polymeric nanoparticles in a thermosensitive gel for coital-independent vaginal prophylaxis of hiv
US8703197B2 (en) 2012-09-13 2014-04-22 International Business Machines Corporation Branched polyamines for delivery of biologically active materials
US9877923B2 (en) 2012-09-17 2018-01-30 Pfizer Inc. Process for preparing therapeutic nanoparticles
WO2014047649A1 (en) 2012-09-24 2014-03-27 The Regents Of The University Of California Methods for arranging and packing nucleic acids for unusual resistance to nucleases and targeted delivery for gene therapy
CA2925687A1 (en) 2012-09-27 2014-04-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Lipid coated nanoparticles containing agents having low aqueous and lipid solubilities and methods thereof
CN104812372A (zh) 2012-10-04 2015-07-29 约翰内斯堡金山大学 脂质体药物递送系统
WO2014053882A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
US20140100178A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Aslam Ansari Composition and methods for site-specific drug delivery to treat malaria and other liver diseases
WO2014053879A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053880A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
WO2014053881A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Centre National De La Recherche Scientifique Cell penetrating peptides for intracellular delivery of molecules
EP2716655A1 (en) 2012-10-04 2014-04-09 Institut Pasteur Neutralizing antibodies directed against Hepatitis C virus ectodomain glycoprotein E2
EP2716689A1 (en) 2012-10-05 2014-04-09 National University of Ireland, Galway Polymer comprising a plurality of branches having at least one disulfide group and/or at least one vinyl group
WO2014064534A2 (en) 2012-10-05 2014-05-01 Chrontech Pharma Ab Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use
US9931410B2 (en) 2012-10-09 2018-04-03 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nanoparticles for targeted delivery of multiple therapeutic agents and methods of use
US20140106260A1 (en) 2012-10-11 2014-04-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Core-shell nanoparticulate compositions and methods
WO2014062697A2 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
DK2908912T3 (da) 2012-10-18 2020-10-26 Univ Rockefeller Bredt neutraliserende anti-hiv-antistoffer
AU2013336237A1 (en) 2012-10-22 2015-06-11 Sabag-Rfa Ltd A system for delivering therapeutic agents into living cells and cells nuclei
CA2889608A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Nlife Therapeutics, S.L. Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to cell types
WO2014066912A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 Vanderbilt University Polymeric nanoparticles
WO2014066898A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 The Johns Hopkins University A layer-by-layer approach to co-deliver dna and sirna via aunps: a potential platform for modifying release kinetics
WO2014067551A1 (en) 2012-10-29 2014-05-08 Technische Universität Dortmund T7 rna polymerase variants and methods of using the same
BR122019025678B1 (pt) 2012-11-01 2023-04-18 Factor Bioscience Inc Composições que compreendem ácido nucleico que codifica uma proteína de edição gênica
WO2014071072A2 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Pungente Michael D Novel cationic carotenoid-based lipids for cellular nucleic acid uptake
US10017767B2 (en) 2012-11-05 2018-07-10 Fondazione Centro San Raffaele Targets in multiple myeloma and other disorders
US9975916B2 (en) 2012-11-06 2018-05-22 President And Fellows Of Harvard College Compositions and methods relating to complex nucleic acid nanostructures
CA2890333C (en) 2012-11-06 2021-03-23 Rochal Industries, Llc Delivery of biologically-active agents using volatile, hydrophobic solvents
EP2916873B1 (en) 2012-11-07 2017-07-26 Council of Scientific & Industrial Research Nanocomplex containing amphipathic peptide useful for efficient transfection of biomolecules
EP2916874B1 (en) 2012-11-07 2018-08-29 Council of Scientific and Industrial Research Nanocomplex containing cationic peptide for biomolecule delivery
JP6480338B2 (ja) 2012-11-08 2019-03-06 セセン バイオ， インコーポレイテッド Ｉｌ−６アンタゴニストおよびその使用
US20140128326A1 (en) 2012-11-08 2014-05-08 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
TW201920677A (zh) 2012-11-08 2019-06-01 美商武田疫苗股份有限公司 登革熱病毒血清型４型之建構物的組成物、方法及用途
KR20210133321A (ko) 2012-11-08 2021-11-05 클리어사이드 바이오메디컬, 인코포레이드 인간 대상체에서 안구 질병을 치료하기 위한 방법 및 장치
WO2014072061A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
US9200119B2 (en) 2012-11-09 2015-12-01 Momentive Performance Materials Inc. Silicon-containing zwitterionic linear copolymer composition
WO2014071963A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Biontech Ag Method for cellular rna expression
EP2916853B1 (en) 2012-11-09 2020-05-06 Velin-Pharma A/S Compositions for pulmonary delivery
AU2013341711A1 (en) 2012-11-12 2015-05-21 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
US9833502B2 (en) 2012-11-12 2017-12-05 Genvec, Inc. Malaria antigens and methods of use
GB201220354D0 (en) 2012-11-12 2012-12-26 Medpharm Ltd Dermal compositions
US9943608B2 (en) 2012-11-13 2018-04-17 Baylor College Of Medicine Multi-arm biodegradable polymers for nucleic acid delivery
US9310374B2 (en) 2012-11-16 2016-04-12 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-indole compounds and methods for producing a conjugate
WO2014078636A1 (en) 2012-11-16 2014-05-22 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid hydrogel self-assembly
EP2732825B1 (en) 2012-11-19 2015-07-01 Invivogen Conjugates of a TLR7 and/or TLR8 agonist and a TLR2 agonist
WO2014076709A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Technion Research And Development Foundation Ltd. Liposomes for in-vivo delivery
US20140141037A1 (en) 2012-11-20 2014-05-22 Novartis Ag Rsv f prefusion trimers
US20150290328A1 (en) 2012-11-20 2015-10-15 Phasebio Pharmaceuticals, Inc. Formulations of active agents for sustained release
WO2014081299A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Activatable liposomes
DK2922574T3 (da) 2012-11-22 2023-08-21 Tagworks Pharmaceuticals B V Kemisk spaltbar gruppe
WO2014081300A1 (en) 2012-11-22 2014-05-30 Tagworks Pharmaceuticals B.V. Channel protein activatable liposomes
RS63237B1 (sr) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx Inc Terminalno modifikovana rnk
EP2931914A4 (en) 2012-12-13 2016-08-17 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR CHANGING THE CELL PHENOTYPE
EP2931319B1 (en) 2012-12-13 2019-08-21 ModernaTX, Inc. Modified nucleic acid molecules and uses thereof
CA2897752A1 (en) 2013-01-10 2014-07-17 Novartis Ag Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof
CA2897941A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Moderna Therapeutics, Inc. Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes
WO2014164253A1 (en) 2013-03-09 2014-10-09 Moderna Therapeutics, Inc. Heterologous untranslated regions for mrna
US20160022774A1 (en) 2013-03-12 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Diagnosis and treatment of fibrosis
WO2014159813A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Moderna Therapeutics, Inc. Long-lived polynucleotide molecules
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
WO2014144711A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Moderna Therapeutics, Inc. Analysis of mrna heterogeneity and stability
US11377470B2 (en) 2013-03-15 2022-07-05 Modernatx, Inc. Ribonucleic acid purification
EP2971033B8 (en) 2013-03-15 2019-07-10 ModernaTX, Inc. Manufacturing methods for production of rna transcripts
US20160032273A1 (en) 2013-03-15 2016-02-04 Moderna Therapeutics, Inc. Characterization of mrna molecules
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP2971165A4 (en) 2013-03-15 2016-11-23 Moderna Therapeutics Inc DISSOLUTION OF DNA FRAGMENTS IN MRNA MANUFACTURING METHODS
EP2983804A4 (en) 2013-03-15 2017-03-01 Moderna Therapeutics, Inc. Ion exchange purification of mrna
SI3019619T1 (sl) 2013-07-11 2021-12-31 Modernatx, Inc. Sestave, ki zajemajo sintetične polinukleotide, ki kodirajo proteine, pozvezane s crispr, in sintetične sgrna, ter metode uporabe
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
CA2923029A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US9925277B2 (en) 2013-09-13 2018-03-27 Modernatx, Inc. Polynucleotide compositions containing amino acids
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EA201690675A1 (ru) 2013-10-03 2016-08-31 Модерна Терапьютикс, Инк. Полинуклеотиды, кодирующие рецептор липопротеинов низкой плотности
CA2927393A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods for tolerizing cellular systems
WO2015105926A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides for the in vivo production of antibodies

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106929513A (zh) * 2017-04-07 2017-07-07 东南大学 mRNA编码的纳米抗体及其应用

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