JP2022554175A - 合成ｒｉｇ－ｉ様受容体アゴニスト - Google Patents

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Abstract

本開示は、疾患（例えば、がん）の１つ以上の症状を治療または改善するための方法における、特に、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に結合してこれをアゴナイズするＲＮＡ分子（例えば、ＲＮＡヘアピンアゴニスト）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）内にパッケージングされたＲＬＲアゴニストを含む分子の使用に関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１０月２３日出願の米国仮特許出願第６２／９２５，１２０号の利益を主張するものである。上記出願全体の内容を参照によって本明細書に援用するものである。
細胞内に導入された外因性核酸、特にウイルス核酸は自然免疫応答を誘導し、他の事象の中でも特にインターフェロン（ＩＦＮ）産生及び細胞死をもたらす。ウイルスＲＮＡを検知すると、ＲＩＧ－Ｉ様受容体はＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）分泌を誘導して感染細胞及び隣接細胞における抗ウイルスＩＦＮ誘導タンパク質の発現上昇をもたらし、それによりウイルス複製を阻害する。さらに下流の事象が免疫細胞を呼び寄せ、適応免疫応答を誘発する。さらに、ＲＩＧ－Ｉリガンドは、多くの異なるタイプの腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することが報告されているが、正常細胞のアポトーシスは誘導しない。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）は、１つ以上の種類の多数のタンパク質分子から対称的な形で構築される超分子構造である。ＶＬＰはウイルスゲノムを欠いているため、非感染性である。ＶＬＰは、しばしば異種発現によって大量に生成することができ、容易に精製することができる。
ＶＬＰは、その構造的特性及び非感染性の両方のためにワクチン学、免疫学及び医学の分野で使用されている。ＶＬＰは、おそらくはミクロピノサイトーシスまたは他の細胞取り込み経路による取り込みの後、効率的にプロセシングされ、ＭＨＣクラスＩ上にクロスプライミングされることで、ＭＨＣクラスＩ分子上に効率的に提示されることが示されている。
免疫調節タンパク質の活性を調節するためのさらなる改良された組成物及び方法が依然として求められている。かかる薬剤は、がん免疫療法及び慢性感染などの他の状態の治療に使用することができる。多様な治療的免疫調節用途のために、改良された送達方法を含む改良されたＲＩＧ－Ｉ様受容体リガンドの開発が求められている。
本開示は、少なくともその一部において、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストとして機能する合成ＲＮＡ分子の発見に基づくものである。本開示はまた、免疫刺激性核酸、特にＲＬＲアゴニストをＶＬＰ（ＲＩＧ－ＶＬＰ）にパッケージングすることによって生物学的活性を改善するための組成物及び方法も提供する。本明細書に記載される組成物を使用することで腫瘍の治療に特に有用な強力かつ持続的な免疫応答を誘導することができる。
したがって、いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含むＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物であって、ＲＮＡの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含み、ＲＮＡの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＮＡは一本鎖である。他の態様では、ＲＮＡの一部または全部は二本鎖である。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストのＲＮＡは、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０または３０～３５ヌクレオチドの長さである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを含み、第１のポリヌクレオチドは、第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するだけ十分に相補的である。いくつかの態様では、二重鎖はヘアピンを含む。いくつかの態様では、二重鎖は、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０または３０～３５個の塩基対を含む。いくつかの態様では、二重鎖は、１９個未満の塩基対を含む。いくつかの態様では、第１のポリヌクレオチドは、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較してＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの生物学的活性を与える配列モチーフを含む。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物を提供する。いくつかの態様では、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストは、ウイルス様粒子中にパッケージングされる。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物を提供する。いくつかの態様では、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストは、ウイルス様粒子中にパッケージングされる。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストは、
（ｉ）ＧＴ反復モチーフ、
（ｉｉ）ＧＡ反復モチーフ、
（ｉｉｉ）ＡＵＣＧ反復モチーフ、
（ｉｖ）ＡＵ反復モチーフ、
（ｖ）ジピリミジンモチーフ、
（ｖｉ）ジプリンモチーフ、
（ｖｉｉ）ピリミジントリプレットモチーフ、
（ｖｉｉｉ）プリントリプレットモチーフ、
（ｉｘ）パリンドローム配列モチーフ、及び
（ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれかの組み合わせからなる群から選択される配列モチーフを含む。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、
（ｉ）ＧＴ反復モチーフ、
（ｉｉ）ＧＡ反復モチーフ、
（ｉｉｉ）ＡＵＣＧ反復モチーフ、
（ｉｖ）ＡＵ反復モチーフ、
（ｖ）ジピリミジンモチーフ、
（ｖｉ）ジプリンモチーフ、
（ｖｉｉ）ピリミジントリプレットモチーフ、
（ｖｉｉｉ）プリントリプレットモチーフ、
（ｉｘ）パリンドローム配列モチーフ、及び
（ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれかの組み合わせから選択される配列モチーフを含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフの組み合わせを含む。いくつかの態様では、配列モチーフの組み合わせは、ＧＴ反復モチーフとプリントリプレットモチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフの組み合わせは、ＡＵＣＧ反復モチーフとジピリミジンモチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフの組み合わせは、ＡＵＣＧ反復モチーフとジプリンモチーフである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、少なくとも１つの改善された生物学的活性は、
（ｉ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、
（ｉｉ）インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、
（ｉｉｉ）ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、
（ｉｖ）ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び
（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかの組み合わせから選択される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較してＲＬＲ媒介Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β）産生を増加させる配列モチーフを含む。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較してＲＬＲ媒介ＩＬ－１β産生を増加させる配列モチーフを含む。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較してＲＬＲ媒介ＩＰ－１０産生を増加させる配列モチーフを含む。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較してＲＬＲ媒介ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｐ７０、ＭＣＰ－１及び／またはＭＩＰ－１β産生を増加させる配列モチーフを含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフ（例えば、ＧＴＧＴＧＴ）である。いくつかの態様では、配列モチーフは、１９個未満のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１５～１８個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１５個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１０～１５個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１０個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約５～１０個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約５個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、ＧＴ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１８個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１６個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１２個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１０個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは８個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは６個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフはＧＴ反復モチーフであり、ＧＴ反復モチーフは［ＧＴ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９、３～７、または４～８）である。いくつかの態様では、ＧＴ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された（機能的に連結された）第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１４個のグアニン及びチミンヌクレオチドの配列を含むＧＴ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された（機能的に連結された）第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１４個のグアニン及びチミンヌクレオチドの配列を含むＧＴ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、配列モチーフはＧＴ反復モチーフであり、ＧＴ反復モチーフは［ＧＴ］７である。いくつかの態様では、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが６個のグアニン及びチミンヌクレオチドの配列を含むＧＴ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが６個のグアニン及びチミンヌクレオチドの配列を含むＧＴ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、配列モチーフはＧＴ反復モチーフであり、ＧＴ反復モチーフは［ＧＴ］３である。いくつかの態様では、配列モチーフはＧＴリピートモチーフであり、ＧＴリピートモチーフは［ＧＴ］３であり、ＧＴリピートにそれぞれプリントリプレット及びＵＣＧが続く。いくつかの態様では、プリントリプレットは、ＧＧＡである。いくつかの態様では、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフ（例えば、ＧＡＧＡＧＡ）である。いくつかの態様では、配列モチーフは、１９個未満のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１５～１８個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１５個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１０～１５個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１０個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約５～１０個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約５個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、ＧＡ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１８個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１６個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１２個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは８個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは６個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフはＧＡ反復モチーフであり、ＧＡ反復モチーフは［ＧＴ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９、３～７または４～８）である。いくつかの態様では、ＧＡ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１４個のグアニン及びアデニンヌクレオチドの配列を含むＧＡ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１４個のグアニン及びアデニンヌクレオチドの配列を含むＧＡ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、配列モチーフはＧＡ反復モチーフであり、ＧＡ反復モチーフは［ＧＴ］７である。いくつかの態様では、ＧＡ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１９個未満、約１６個、約１２～１６個、約１２個、約８～１２個、約６、１６、１２、８個のアデニン、ウラシル、シトシン、及びグアニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフ（例えば、ＡＵＣＧＡＵＣＧ）である。いくつかの態様では、配列モチーフは、１９個未満のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１６個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１２～１６個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約１２個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約８～１２個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは、約６個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１６個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは１２個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、配列モチーフは８個のアデニン、ウラシル、シトシン及びグアニンヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］ｎ（ただし、ｎ＝２～４、または２、３、または４）である。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１２個のグアニン及びアデニンヌクレオチドの配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物を提供する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストはウイルス様粒子内にパッケージングされる。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチドが配列モチーフを含み、配列モチーフが約１２個のグアニン及びアデニンヌクレオチドの配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物を提供する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストはウイルス様粒子内にパッケージングされる。
いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは、ＲＬＲアゴニストの改善された生物学的活性を提供し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、モチーフの前にＣＧまたはジピリミジンモチーフが位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＧが位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、その前にＣＧが位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、その前にジピリミジンモチーフＣＣが位置する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、モチーフの前にジプリンモチーフが位置する。いくつかの態様では、ジプリンモチーフはＧＡである。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、その前にジプリンモチーフＧＡが位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフＩＩが位置する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されている。いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、リボチミジン（Ｔ）である。いくつかの態様では、ＡＵＧＣ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）である。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）であり、ＡＵＧＣ反復モチーフの前にＧＧが位置する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）が修飾ヌクレオシドに置換されている。いくつかの態様では、修飾ヌクレオシドは、イノシン（Ｉ）である。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）であり、ＡＵＧＣ反復モチーフの前にＧＧが位置する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、モチーフの前にＩＧが位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、その前にＩＧが位置する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、ＡＵＣＧリピートを含み、１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）がイノシン（Ｉ）に置換されており、ＡＵＣＧリピートの前にイノシン（Ｉ）が位置する。いくつかの態様では、ＡＵＣＧリピートを構成するグアノシンヌクレオシド（Ｇ）がイノシン（Ｉ）に置換され、ＡＵＣＧリピートの前にイノシン（Ｉ）が位置し、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドがイノシン（Ｉ）を含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２である。いくつかの態様では、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置する。いくつかの態様では、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置し、ジプリンモチーフはＧＧである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にプリントリプレットモチーフが位置する。いくつかの態様では、プリントリプレットは、ＧＧＧである。いくつかの態様では、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にプリントリプレットモチーフが位置し、プリントリプレットモチーフはＧＧＧである。いくつかの態様では、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＣＣＣＣＧが位置する。いくつかの態様では、配列モチーフはＡＵＣＧ反復モチーフであり、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２であり、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＴＣＧＵＣＧが位置する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストが、［ＡＵＣＧ］ｎ反復モチーフ（ただし、ｎ＝２～４）を含み、最も５’側のＡＵＣＧ反復モチーフの前にＧＧ、ＣＧ、またはＩＧが位置する、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。いくつかの態様では、ｎ＝３である。いくつかの態様では、ＡＵＣＧモチーフ中の各Ｇは、イノシンに置換されている。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストが、［ＡＵＣＧ］ｎ反復モチーフ（ただし、ｎ＝２～４）を含み、最も５’側のＡＵＣＧ反復モチーフの前にＧＧ、ＣＧ、またはＩＧが位置する、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子内にパッケージングされている、組成物を提供する。いくつかの態様では、ｎ＝３である。いくつかの態様では、ＡＵＣＧモチーフ中の各Ｇは、イノシンに置換されている。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１９個未満のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された約１５～１８個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された約１５個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された約１０～１５個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された約１０個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１８個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１７個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１６個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１５個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１４個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１３個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１２個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１１個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された１０個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された９個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された８個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された７個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された６個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された５個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。いくつかの態様では、配列モチーフは、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された４個のヌクレオチド、またはその誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはリンカーを含み、リンカーにＡＵが隣接する。いくつかの態様では、リンカーにはＡＵ反復モチーフが隣接し、ＡＵ反復モチーフは［ＡＵ］ｎ（ただし、ｎ＝２～３）である。いくつかの態様では、ＡＵ反復モチーフは、［ＡＵ］２である。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、及び／またはＸ１及び／またはＸ２の少なくとも一方は少なくとも１個のイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、少なくとも１つの合成ＲＮＡアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉｖ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｖ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｖｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、及び／またはＸ１及び／またはＸ２の少なくとも一方は少なくとも１個のイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、少なくとも１つの合成ＲＮＡアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＮＡアゴニストと、を含み、
イノシンが存在する場合、シチジンと塩基対合し、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＮＡアゴニストと、を含み、
イノシンが存在する場合、シチジンと塩基対合し、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ４はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、Ｎ１はシチジンを含み、Ｎ４はイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ２はイノシンを含み、Ｎ３はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ２はシチジンを含み、Ｎ３はイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１はグアノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ２はグアノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ２はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を有し、
イノシンが存在する場合、シチジンと塩基対合し、Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ２はイノシンを含み、Ｎ３はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を有し、
イノシンが存在する場合、シチジンと塩基対合し、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１２個であり、１、２、３または４個のイノシンヌクレオシドを含む］を含む。いくつかの態様では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１３個であり、１、２、３、４または５個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１４個であり、１、２、３、４、５または６個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１５個であり、１、２、３、４、５、６または７個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１６個であり、それぞれ、１、２、３、４、５、６、７、または８個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１２個であり、少なくとも１０％、２０％、３０％または４０％、イノシンヌクレオシドを含む。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１は、配列モチーフ［ＡＵＣＮ５］ｘ（ただし、Ｎ５はグアノシンまたはイノシンを含み、ｘはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｘ＝２～４である）を含み、
（ｖｉｉｉ）Ｘ２は、配列モチーフ［ＣＮ６ＡＵ］ｙ（ただし、Ｎ６はグアノシンまたはイノシンを含み、ｙはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｙ＝２～４である）を含み、
（ｉｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
場合により、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉｖ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｖ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｖｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１は、配列モチーフ［ＡＵＣＮ５］ｘ（ただし、Ｎ５はグアノシンまたはイノシンを含み、ｘはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｘ＝２～４である）を含み、
（ｖｉｉｉ）Ｘ２は、配列モチーフ［ＣＮ６ＡＵ］ｙ（ただし、Ｎ６はグアノシンまたはイノシンを含み、ｙはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｙ＝２～４である）を含み、
（ｉｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
場合により、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、Ｎ５はイノシンを含み、Ｎ６はイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ５はグアノシンを含み、Ｎ６はイノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ５はイノシンを含み、Ｎ６はグアノシンを含む。いくつかの態様では、Ｎ５はグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ６はグアノシン（Ｇ）含む。いくつかの態様では、ｘ＝２かつｙ＝２である。いくつかの態様では、ｘ＝３かつｙ＝３である。いくつかの態様では、ｘ＝４かつｙ＝４である。いくつかの態様では、Ｎ１はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ２はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ３はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ２はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ４はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ１はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ２はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ２はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ３及びＮ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３及びＮ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの態様では、Ｎ１及びＮ２はシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４はイノシン（Ｉ）を含む。いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは改善された生物学的活性を有し、改善された生物学的活性は、ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び上記のいずれかの組み合わせである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはリンカーを含み、リンカーはヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、非ヌクレオチドリンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、ヌクレオチドリンカーである。いくつかの態様では、ヌクレオチドリンカーはテトラループを含み、テトラループのヌクレオチド配列は、
（ａ）ＵＮＣＧ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ）、
（ｂ）ＧＮＲＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＲ＝ＡまたはＧ）、
（ｃ）ＡＮＹＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＹ＝ＣまたはＴ）、
（ｄ）ＣＵＹＧ（ただし、Ｙ＝ＣまたはＴ）、
（ｅ）ＵＭＡＣ（ただし、Ｍ＝ＡまたはＣ）、及び
（ｆ）ＣＵＵＧからなる群から選択される。
いくつかの態様では、テトラループの配列はＵＵＣＧである。いくつかの態様では、テトラループの配列はＧＡＵＣである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストはヌクレオチドリンカーを含み、ヌクレオチドリンカーはヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵまたはＵＧＵＵＵを含む。いくつかの態様では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵを含む。いくつかの態様では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＧＵＵＵを含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは非ヌクレオチドリンカーを含み、非ヌクレオチドリンカーは、
（ａ）エチレングリコールリンカー、及び
（ｂ）アルキルリンカーからなる群から選択される。
いくつかの態様では、非ヌクレオチドリンカーはヘキサエチレングリコールリンカーである。いくつかの態様では、非ヌクレオチドリンカーはＣ９アルキルリンカーである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、５’二リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの態様では、アゴニストは、５’三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの態様では、その誘導体または類似体は、ホスホネート、チオホスホネート、ホスホロチオエート、サルフェート、スルホネート、スルファメート、チアゾリジノン、カルボキシレート、マロネート、ボロン酸、ベンゾオキサボロール、ボラノホスフェート、スクアラミドから選択されるホスフェートの生物学的等価体を含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオシド、または修飾核酸塩基、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、アゴニストは、ヌクレオチド間結合またはポリヌクレオチド骨格への修飾を含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本開示のＲＬＲアゴニストは、以下の特性：
（ａ）１つ以上のＲＬＲ（例えば、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５及び／またはＬＧＰ２）に特異的に結合する；
（ｂ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる；
（ｃ）インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のＲＬＲ媒介発現を増加させる；
（ｄ）ＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる；
（ｅ）二重鎖の安定性を増加させる；
（ｆ）ＲＬＲに対する結合親和性を増加させる；
（ｇ）オフターゲット結合を減少させる；
（ｈ）生物学的半減期を増加させる；
（ｉ）体内分布及びバイオアベイラビリティを増加させる；
（ｊ）細胞及び／または組織中への取り込みを増加及び／または増大させる；
（ｋ）免疫原性を低下させる；及び
（ｌ）（ａ）～（ｋ）のいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つ以上を示す。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はそれぞれグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はそれぞれシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はそれぞれグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はそれぞれシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はそれぞれシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はそれぞれシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１つのイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合し、Ｌは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含み、テトラループのヌクレオチド配列はＵＵＣＧである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、非ヌクレオチドリンカーはＣ９アルキルリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を有し、
Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、非ヌクレオチドリンカーチドリンカーが、ヘキサエチレングリコールリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、アゴニストの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５及び３６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、配列番号２２、２３、及び２５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、ならびに
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号６１及び９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、非ヌクレオチドリンカーはＣ９アルキルリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーであり、
Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ１２ヌクレオチドの長さであり、非ヌクレオチドリンカーチドリンカーが、ヘキサエチレングリコールリンカーである］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、アゴニストの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５及び３６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、配列番号２２、２３、及び２５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、ならびに
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号６１及び９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドが、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む］を含む、少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストを構成するヌクレオチド配列は、ゲノムＤＮＡ配列にもｍＲＮＡ配列にも相補的でなく、ＲＬＲアゴニストはＲＮＡ干渉に関与せず、ＲＬＲアゴニストは遺伝子発現をサイレンシングしない。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本明細書に記載されるウイルス様粒子は、リポタンパク質含有エンベロープを有さない。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本明細書に記載されるウイルス様粒子は、組換えウイルス様粒子である。いくつかの態様では、組換えウイルス様粒子は、
（ａ）Ｂ型肝炎ウイルスの組換えタンパク質、
（ｂ）麻疹ウイルスの組換えタンパク質、
（ｃ）シンドビス（Ｓｉｎｂｉｓ）ウイルスの組換えタンパク質、
（ｄ）ロタウイルスの組換えタンパク質、
（ｅ）手足口病ウイルスの組換えタンパク質、
（ｆ）レトロウイルスの組換えタンパク質、
（ｇ）ノーウォークウイルスの組換えタンパク質、
（ｈ）ヒトパピローマウイルスの組換えタンパク質、
（ｉ）ＢＫウイルスの組換えタンパク質、
（ｊ）バクテリオファージの組換えタンパク質、
（ｋ）ＲＮＡファージの組換えタンパク質、
（ｌ）Ｑβファージの組換えタンパク質、
（ｍ）ＧＡファージの組換えタンパク質、
（ｎ）ｆｒファージの組換えタンパク質、
（ｏ）ＡＰ２０５ファージの組換えタンパク質、
（ｐ）Ｔｙの組換えタンパク質、及び
（ｑ）（ａ）～（ｐ）の組換えタンパク質のいずれかのフラグメントからなる群から選択される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本明細書に記載されるウイルス様粒子はＲＮＡファージの組換えタンパク質を含み、ＲＮＡファージは、（ａ）バクテリオファージＱβ、（ｂ）バクテリオファージＲ１７、（ｃ）バクテリオファージｆｒ、（ｄ）バクテリオファージＧＡ、（ｅ）バクテリオファージＳＰ、（ｆ）バクテリオファージＭＳ２、（ｇ）バクテリオファージＭ１１、（ｈ）バクテリオファージＭＸ１、（ｉ）バクテリオファージＮＬ９５、（ｊ）バクテリオファージｆ２、（ｋ）バクテリオファージＰＰ７、及び（ｌ）バクテリオファージＡＰ２０５からなる群から選択される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本明細書に記載されるウイルス様粒子は、バクテリオファージＱβの組換えタンパク質を含む。いくつかの態様では、バクテリオファージＱβの組換えタンパク質は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有するコートタンパク質を含む。いくつかの態様では、バクテリオファージＱβの組換えタンパク質は、配列番号１１２と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を有するコートタンパク質を含む。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）配列番号１１２のアミノ酸配列を有するコートタンパク質を含むＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含み、ＲＮＡの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、組成物であって、
（ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
（ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、配列番号２３のヌクレオチド配列を含み、アゴニストの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
少なくとも１つのＲＬＲアゴニストがウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物を提供する。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストは、ウイルス粒子に非共有結合により結合される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、ＲＬＲアゴニストは、オリゴヌクレオチド結合部位、ＤＮＡ結合部位、及びＲＮＡ結合部位からなる群から選択されるウイルス様粒子の部位に結合される。いくつかの態様では、ウイルス様粒子は、アルギニンリッチリピートを含む。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、本明細書に記載される組成物は、ウイルス様粒子に結合された少なくとも１つの抗原または抗原決定基を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、少なくとも１つの共有結合によってウイルス様粒子に結合される。いくつかの態様では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、非ペプチド結合によってウイルス様粒子に結合される。他の態様では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子に融合される。いくつかの態様では、ウイルス様粒子は少なくとも１つの第１の結合部位を含み、抗原または抗原決定基は、（ａ）抗原または抗原決定基内に天然に存在しない結合部位と、（ｂ）抗原または抗原決定基内に天然に存在する結合部位とからなる群より選択される少なくとも１つの第２の結合部位を含み、
ウイルス様粒子に対する抗原または抗原決定基の結合は第１の結合部位と第２の結合部位との結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を介して行われ、場合により、結合は、少なくとも１つの非ペプチド結合を介して行われる。いくつかの態様では、第１の結合部位はアミノ基またはリシン残基を含み、第２の結合部位はスルフヒドリル基またはシステイン残基を含む。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の低減もしくは阻害を必要とする対象においてそれを行うための医薬組成物であって、本開示によって提供される組成物と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、組成物は、ポリエチエンイミン（ＰＥＩ）担体中に配合される。いくつかの態様では、ＰＥＩ担体は、ＪｅｔＰＥＩ（登録商標）である。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内の１つ以上のサイトカインの産生のＲＬＲ媒介産生を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供される組成物と接触させることを含み、組成物が細胞内のＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる、方法を提供する。いくつかの態様では、組成物は、細胞内のＲＬＲ媒介Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β）産生を増加させる。いくつかの態様では、組成物は、細胞内のＲＬＲ媒介ＩＬ－１β産生を増加させる。いくつかの態様では、組成物は、細胞内のＲＬＲ媒介ＩＰ－１０産生を増加させる。いくつかの態様では、組成物は、細胞内のＲＬＲ媒介ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｐ７０、ＭＣＰ－１及び／またはＭＩＰ－１β産生を増加させる。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供される組成物と接触させることを含み、組成物が細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させる、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供される組成物と接触させることを含み、組成物がＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象の免疫応答を刺激する方法であって、対象に有効量の本開示により提供される組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象のがんを治療するかまたはその進行を遅らせる方法であって、対象に有効量の本開示により提供される組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍増殖の低減または阻害をそれを必要とする対象において行う方法であって、対象に有効量の本開示により提供される組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための方法であって、対象に有効量の本開示により提供される組成物を投与することを含み、組成物が、細胞内の１つ以上のサイトカインのＲＬＲ媒介産生を増加させるか、細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるか、及び／または細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させ、それにより免疫応答を刺激するか、がんを治療もしくはその進行を遅らせるか、または腫瘍の増殖を阻害する、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示により提供される組成物は、１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤またはアゴニスト、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの態様では、本開示により提供される組成物は、１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または１つ以上のさらなる治療剤がアゴニストまたは医薬組成物の投与と同時に、その前もしくはその後に投与される。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの態様では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤＲ００１、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ）、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＦＡＺ０５３、ＴＥＮＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ）、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）（デュルバルマブ）、及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＴＩＭ－３アンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＶＩＳＴＡアンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＢＴＬＡアンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＫＩＲアンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＬＡＧ－３アンタゴニストである。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニストである。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ＨＩＬＴＯＮＯＬ（登録商標）（ｐｏｌｙ ＩＣＬＣ）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ポリアデニル酸－ポリウリジル酸（ｐｏｌｙ Ａ：Ｕ）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）１００）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０バイオコンジュゲート）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ３アゴニストは、ＲＩＢＯＸＸＯＬ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０）である。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストである。いくつかの態様では、ＴＬＲ７アゴニストは、ＧＳ－９６２０（ベサトリモド）である。いくつかの態様では、ＴＬＲ７アゴニストは、イミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（商標））である。いくつかの態様では、ＴＬＲ７アゴニストは、レシキモド（Ｒ－８４８）である。
いくつかの態様では、１つ以上のさらなる治療剤は、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである。いくつかの態様では、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）である。いくつかの態様では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮ）である。いくつかの態様では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）である。いくつかの態様では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＣのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮ）である。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための本開示により提供される組成物の使用であって、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用するための組成物の使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための薬剤の製造における本開示により提供される組成物の使用であって、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用するための組成物の使用を提供する。いくつかの態様では、組成物は、１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、組成物は、１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または１つ以上のさらなる治療剤が組成物の投与と同時に、その前もしくはその後に投与される。
いくつかの態様では、本開示は、本開示により提供される組成物と、対象の免疫応答を刺激する、またはがんを治療またはその進行を遅らせる、または対象の腫瘍増殖を阻害する際に使用される使用説明書とを、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用される使用説明書とともに含むキットを提供する。いくつかの態様では、キットは、組成物を１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与するための使用説明書を含み、１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、組成物は、１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または１つ以上のさらなる治療剤が組成物の投与と同時に、その前もしくはその後に投与される。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、１つ以上のさらなる治療剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
上記のまたは関連する態様のいずれかにおいて、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載される組成物を製造する方法であって、
（ａ）ウイルス様粒子を分解することと、
（ｂ）ＲＬＲアゴニストを添加することと、
（ａ）ウイルス様粒子を再集合化することと、を含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、方法は、分解されたウイルス様粒子の核酸を除去することを含む。いくつかの態様では、方法は、再集合化後に組成物を精製することを含む。いくつかの態様では、方法は、（ｄ）抗原または抗原決定基をウイルス様粒子と結合させることを含む。いくつかの態様では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子を分解する前にウイルス様粒子と結合させられる。他の態様では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子を再集合化させた後にウイルス様粒子と結合させられる。
様々な修飾を有する０．４ｎＭ、２ｎＭ、及び１０ｎＭのＲＬＲアゴニストで処理されたヒトＰＢＭＣからのサイトカインＩＦＮ－α２ａの分泌の定量化を示す棒グラフを示す。 ０．２ｎＭ、２ｎＭ、２０ｎＭ、及び２００ｎＭの濃度のＲＩＧ ５０ｃ（Ｘ２４９０７）及びイノシン置換ＲＩＧ ２７ｃ（Ｘ２４９３５）で処理されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮ－α分泌の定量化を示す棒グラフを示す。 ２ｎＭ、２０ｎＭ、２００ｎＭ、及び６００ｎＭの濃度のＱβ－ＲＩＧ２７（ＲＮＡファージＱβコートタンパク質を含むＶＬＰにパッケージングされたＲＩＧ ２７ｃ）で処理されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮ－α分泌の定量化を示す棒グラフを示す。
概要
ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）は、ウイルスＲＮＡを検出し、自然免疫応答を開始するために不可欠なサイトゾルのパターン認識受容体のファミリーである。ＲＬＲファミリーには、ＲＩＧ－Ｉ（Ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｇｅｎｅ Ｉ）（レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ）、ＭＤＡ５（Ｍｅｌａｎｏｍａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｅｎｅ ５）（メラノーマ分化関連遺伝子５）、及びＬＧＰ２（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２）の３つのメンバーが含まれる。これらの受容体は、免疫細胞型及び非免疫細胞型の両方で発現され、Ｉ型及びＩＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）のＩＲＦ３、ＩＲＦ７依存性発現、及び炎症誘発性サイトカインのＮＦ－κＢ依存性発現を促進するシグナル伝達経路を調節する。
３つのＲＬＲファミリー受容体はいずれも、ＡＴＰアーゼ活性を有するＤＥｘＤ／ＨボックスＲＮＡヘリカーゼドメインを有している。このドメインは、隣接するＣ末端ドメインとともに、ＲＮＡ結合に必要である。さらに、ＲＩＧ－Ｉ及びＬＧＰ２のＣ末端ドメインはリプレッサードメインとして作用することが示されており、これにより、これらの受容体は活性化ＲＮＡが結合するまで不活性な立体構造を維持する。
本開示は、二本鎖ｄｓＲＮＡを形成するようにフォールディングし、かつ１つ以上の改善された生物学的活性を与える１つ以上の配列モチーフを含む合成ＲＮＡ分子を含むＲＬＲアゴニストを提供するものである。本開示はまた、ＶＬＰにパッケージングされた少なくとも１つのＲＬＲアゴニストを含む組成物であって、ＶＬＰ単独と比較して免疫刺激効力、例えばサイトカイン発現の誘導が改善された組成物も提供する。これらのＲＩＧ－ＶＬＰは、例えば腫瘍に対する予防的または治療的レジメンにおいて使用される改善された免疫刺激組成物を提供する。
ＲＩＧ－Ｉ様受容体及びそのリガンド
本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合してＲＬＲを刺激する（ＲＬＲアゴニスト）合成ＲＮＡリガンドを提供する。いくつかの態様では、本開示は、がんの治療に有用であるＲＬＲアゴニストを提供する。いくつかの態様では、本開示は、感染性疾患の治療に有用であるＲＬＲアゴニストを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストはサイトカイン産生を誘導する。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、腫瘍微小環境のＣＤ８＋Ｔ細胞の数を増加させる。いくつかの態様では、ＲＬＲアゴニストは、防御的抗腫瘍免疫を誘導する。
ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の認識を介して病原体の存在を検知するサイトゾルパターン認識受容体（ＰＲＲ）として機能するＤＥｘＤ／ＨボックスＲＮＡヘリカーゼのファミリーを含む。特に、非自己（例えば、ウイルス性）ＲＮＡの細胞内の存在は、ＲＬＲへのＲＮＡの結合を介して感染細胞によって検知され、抗ウイルス免疫の開始及び調節をもたらす。多くのウイルスＲＮＡと同様、内因性ｍＲＮＡ及びＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ転写産物も５’三リン酸化されているが、真核生物のｍＲＮＡは、Ｎ７がメチル化されたグアノシンに連結された５’キャップ構造を有しており、これがＲＩＧ－Ｉ活性化を妨げる。ウイルスＲＮＡと自己ＲＮＡとのこれらの構造的な違いは、細胞内の局在化の違いとともに、ウイルスＲＮＡの選択的検出によって、ウイルス感染に対する防御機構としてのＲＩＧ－Ｉの効果的な機能を可能にするものと考えられる。分子認識及び非自己ＲＮＡリガンドのＲＬＲへの結合は特異的な細胞内シグナル事象を伝播し、その結果、１型インターフェロン（ＩＦＮ）産生及び抗ウイルス遺伝子の発現を誘導する転写因子の活性化をもたらす。ＩＦＮ及び炎症性サイトカイン産生のＲＬＲ媒介性誘導ならびに抗ウイルス遺伝子の発現は、免疫応答を誘発して制御ウイルス感染を抑制する（Ｙｏｎｅｙａｍａ ｅｔ ａｌ．， （２０１５） Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２：４８－５３）。
ＲＩＧ－Ｉ（レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ）（ＲＬＲファミリーの主要メンバーであり、最もよく特徴付けられている）、ＭＤＡ５（メラノーマ分化関連因子５）、及びＬＧＰ２（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ２、マウスＤ１１ ｌｇｐ２のホモログ）の３つのＲＬＲファミリーメンバーが同定されている。ＲＩＧ－Ｉは自然免疫系の重要な要素であり、ＲＮＡウイルスによる感染に対する防御に重要な役割を果たしている。免疫細胞のサブセットのエンドソーム内の核酸を検出するＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、及びＴＬＲ９と異なり、ＲＩＧ－Ｉは、すべての細胞型で発現されるサイトゾルの自然免疫受容体である（Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１（７０８９）：１０１－１０５；Ｌｏｏ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８２（１）：３３５－３４５）。ＲＩＧ－ＩがウイルスＲＮＡを特異的に検出して活性化されることが２つの初期の研究によって独立して確立されている（Ｈｏｒｎｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４（５８０１）：９９４－９９７；Ｐｉｃｈｌｍａｉｒ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４（５８０１）：９９７－１００１）。
ＲＩＧ－Ｉ／リガンド複合体の高分解能の構造は、ＲＮＡリガンド、特に活性化リガンドである二本鎖の５’三リン酸化ＲＮＡ（ｐｐｐ－ｄｓＲＮＡ）に対するＲＩＧ－Ｉの結合の分子的な詳細を与える（Ｃｉｖｒｉｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）ＥＭＢＯ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２（１１）：１１２７－１１３４；Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ ４７９（７３７３）：４２３－４２７；Ｋｏｗａｌｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｅｌｌ １４７（２）：４２３－４３５；Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １８（８）： １０３２－１０４３；Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃｅｌｌ １４７（２）４０９－４２２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７（７）：７８１－７８７；Ｈｏｒｎｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４（５８０１）：９９４－９９７；Ｐｉｃｈｌｍａｉｒ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４（５８０１）：９９７－１００１；Ｓｃｈｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３１（１）：２５－３４））。ＲＩＧ－Ｉ／ＲＮＡ複合体の結晶構造は、塩基ではなく骨格に対するタンパク質結合を示し、ＲＮＡ配列がＲＩＧ－Ｉ結合に影響を及ぼさないか、またはＲＮＡ配列が未だ特徴付けられていない作用または活性を示す可能性を示唆している。ＲＩＧ－Ｉ様受容体との配列依存的な差次的相互作用または親和性、及びＲＩＧ－Ｉ様受容体の活性化についてのエビデンスは、当該技術分野における記載は今日までない（Ｓｃｈｌｅｅ ａｎｄ Ｈａｒｔｍａｎｎ （２０１０） Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １８（７）：１２５４－１２６２）。
したがって、本開示は、非天然に存在する、合成された、及び／または操作されたＲＬＲのＲＮＡリガンドを含む合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含む。いくつかの態様では、ＲＮＡは、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、８５～９０、９０～９５、または９５～１００ヌクレオチドの長さである。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、一本鎖；二重鎖、ステムループまたはヘアピン構造を形成することができる自己相補配列を含む一本鎖；二本鎖；または部分二本鎖のオリゴヌクレオチドであってよい。
いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、完全な二本鎖である。この場合、オリゴヌクレオチドは、同じ長さを有し、互いに１００％相補的な配列を有する２本の一本鎖オリゴヌクレオチドから構成される。
いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的な二本鎖である。この場合、オリゴヌクレオチドを形成する２本の鎖は、異なる長さを有するか、互いに１００％相補的ではない配列を有するか、またはその両方を有する。換言すれば、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの完全二本鎖部分が、一方または両方の末端において一本鎖構造で連結されている。
いくつかの実施形態では、二重鎖、ヘアピン、またはステムループ構造は、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５塩基対を含む。
いくつかの形態では、オリゴヌクレオチドは、１９個未満の塩基対を含む二重鎖を形成する。いくつかの実施形態では、二重鎖の相補的塩基は、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーによって連結される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、一本鎖、自己相補配列を含む一本鎖、または二本鎖であり、オリゴヌクレオチドの長さは一本鎖の長さである。
いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは部分的に二本鎖であり、オリゴヌクレオチドの長さは長い方の鎖の長さである。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、少なくとも一方の鎖が、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、または８５～９０ヌクレオチドの長さである部分二本鎖オリゴヌクレオチドを含む。
いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、二本鎖または部分二本鎖のオリゴヌクレオチドであり、少なくとも一方の鎖が少なくとも１個の５’二または三リン酸基を含む。両方の鎖が５’二または三リン酸基を含む場合、リン酸基の数は、２本の鎖で同じであっても異なっていてもよい。いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、部分二本鎖オリゴヌクレオチドであり、少なくとも１つの５’二リン酸または三リン酸を構成する５’末端の少なくとも１個のリボヌクレオチドは、長い方の鎖または短い方の鎖のどちらにあってもよく、少なくとも長い方の鎖は、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、４５～５０、５０～５５、５５～６０、６０～６５、６５～７０、７０～７５、７５～８０、８０～８５、または８５～９０ヌクレオチドの長さである。
いくつかの態様では、相補性度は、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、より好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、最も好ましくは１００％である。当該技術分野で使用される場合、２個のオリゴヌクレオチド／ポリヌクレオチド間の「相補性度」という用語は、２個のオリゴヌクレオチドの重複領域内の相補的塩基のパーセンテージを指す。２個の塩基は、水素結合を介して塩基対を形成することができる場合に互いに相補的である。塩基対は、ワトソン・クリック塩基対及びゆらぎ塩基対の両方を含む。ワトソン・クリック塩基対には、Ａ－Ｔ、Ｃ－Ｇ、Ａ－Ｕが含まれ、ゆらぎ塩基対には、Ｇ－Ｕ、Ｉ－Ｕ、Ｉ－Ａ、Ｉ－Ｃが含まれる。相補性度は、ＢＬＡＳＴなどの各種のエンジンによって手動または自動のいずれかにより、当業者が当該技術分野では周知の任意の方法を用いて決定することができる。例えば、ＡＴＣＧはＣＧＡＴ及びＣＧＡＴＧＧに対して１００％の相補性を有し、ＣＧＴＴ及びＣＧＴＴＧＧに対して７５％の相補性を有する。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合するＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドは５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含む、ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、以下、すなわち、
（ｉ）ＧＴ反復モチーフ、
（ｉｉ）ＧＡ反復モチーフ、
（ｉｉｉ）ＡＵＣＧ反復モチーフ、
（ｉｖ）ＡＵ反復モチーフ、
（ｖ）ジピリミジンモチーフ、
（ｖｉ）ジプリンモチーフ、
（ｖｉｉ）ピリミジントリプレットモチーフ、
（ｖｉｉｉ）プリントリプレットモチーフ、
（ｉｘ）パリンドローム配列モチーフ、及び
（ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれかの組み合わせからなる群から選択される配列モチーフを含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、少なくとも１つの改善された生物学的活性を含み、改善された生物学的活性は、以下、すなわち、
（ｉ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、
（ｉｉ）インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、
（ｉｉｉ）ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、
（ｉｖ）ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び
（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４個、約１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである。いくつかの実施形態では、ＧＴ反復モチーフは［ＧＴ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９）である。いくつかの実施形態では、ＧＴ反復モチーフは、［ＧＴ］７である。いくつかの実施形態では、ＧＴ反復モチーフは［ＧＴ］３であり、ＧＴ反復モチーフにプリントリプレット及びＵＣＧがそれぞれ続く。いくつかの実施形態では、プリントリプレットは、ＧＧＡである。
いくつかの実施形態では、配列モチーフは、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４個、約１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである。いくつかの実施形態では、ＧＡ反復モチーフは、［ＧＡ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９）である。いくつかの実施形態では、ＧＡ反復モチーフは、［ＧＡ］７である。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは配列モチーフを含み、配列モチーフは、１９個未満、約１６個、約１２～１６個、約１２個、約８～１２個、約６個、約１６、１２、８個のアデニン、ウラシル、シトシン、及びグアニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである。
いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフは、［ＡＵＣＧ］ｎ（ただし、ｎ＝２～４）である。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフは、［ＡＵＣＧ］３である。
いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＧまたはジピリミジンモチーフが位置する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＧが位置する。いくつかの実施形態では、ジピリミジンモチーフはＣＣであるいくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置する。いくつかの実施形態では、ジプリンモチーフはＧＡである。いくつかの実施形態では、ジプリンモチーフはＧＧである。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、ＡＵＣＧ反復モチーフを含み、１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されている。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、リボチミジン（Ｔ）である。いくつかの実施形態では、ＡＵＧＣ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）である。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のウリジンヌクレオシド（Ｕ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）であり、ＡＵＧＣ反復モチーフの前にＧＧが位置する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、ＡＵＣＧ反復モチーフを含み、１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）が修飾ヌクレオシドに置換されている。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、イノシン（Ｉ）である。いくつかの実施形態では、ＡＵＧＣ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）が修飾ヌクレオシドに置換されており、修飾ヌクレオシドはリボチミジン（Ｔ）であり、ＡＵＧＣ反復モチーフの前にＧＧが位置する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復モチーフを含み、モチーフの前にＩＧが位置する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］３であり、その前にＩＧが位置する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、ＡＵＣＧリピートを含み、１つ以上のグアノシンヌクレオシド（Ｇ）がイノシン（Ｉ）に置換されており、ＡＵＣＧリピートの前にイノシン（Ｉ）が位置する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧリピートを構成するグアノシンヌクレオシド（Ｇ）がイノシン（Ｉ）に置換され、ＡＵＣＧリピートの前にイノシン（Ｉ）が位置し、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドがイノシン（Ｉ）を含む。
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドはイノシン（Ｉ）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストはＡＵＣＧ反復配列モチーフを含み、ＡＵＣＧ反復モチーフは［ＡＵＣＧ］２である。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置する。いくつかの実施形態では、ジプリンモチーフはＧＧである。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にプリントリプレットが位置する。いくつかの実施形態では、プリントリプレットは、ＧＧＧである。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＣＣＣＣＧが位置する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＴＣＧＵＣＧが位置する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストはパリンドローム配列を含み、パリンドローム配列は、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含む。
いくつかの実施形態では、リンカーにはＡＵが隣接する。いくつかの実施形態では、リンカーにはＡＵ反復モチーフが隣接し、ＡＵ反復モチーフは［ＡＵ］ｎ（ただし、ｎ＝２～３）である。いくつかの実施形態では、ＡＵ反復モチーフは、［ＡＵ］２である。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＬＲに特異的に結合するＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結するリンカーである］を含む、ＲＮＡアゴニストを提供する。
他の態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を含む、合成ＲＮＡアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、イノシンは、ＲＬＲアゴニスト中に存在する場合、シチジンと塩基対合する。
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）は、ヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーである。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＬＲに特異的に結合するＲＬＲアゴニストであって、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含むＲＬＲアゴニストを提供する。ＲＮＡヘアピンは、最も一般的なＲＮＡの二次構造要素の１つであり、ヘアピンのハイブリダイズされた部分すなわち「ステム」はしばしばＲＮＡテトラループによってキャップされている。ＲＮＡテトラループは、コンパクトで安定した構造を形成する特徴的な４個のループヌクレオチドで構成されている。これらは多くの異なるヌクレオチド配列によって形成されうるが、ＵＮＣＧ（Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ）、ＧＮＲＡ（Ｒ＝ＡまたはＧ）、及びＣＵＵＧテトラループが最も多くみられる。テトラループは、通常、ＲＮＡのフォールディングプロセスの開始を助け、ＲＮＡ内またはＲＮＡ間の三次元的接触及びタンパク質結合のための部位を与えることによってリボヌクレオタンパク質粒子の集合を促進する。テトラループのさらなる説明は、本明細書に参照によりその全体を援用するところのＣｈｅｏｎｇ，Ｈ．，Ｋｉｍ，Ｎ．ａｎｄ Ｃｈｅｏｎｇ，Ｃ．（２０１５）．ＲＮＡ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：Ｔｅｔｒａｌｏｏｐｓ．Ｉｎ ｅＬＳ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ（Ｅｄ．）にみられる。
したがって、いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、テトラループを含むヌクレオチドリンカーを含む。いくつかの実施形態では、テトラループのヌクレオチド配列は、
（ａ）ＵＮＣＧ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ）、
（ｂ）ＧＮＲＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＲ＝ＡまたはＧ）、
（ｃ）ＡＮＹＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＹ＝ＣまたはＴ）、
（ｄ）ＣＵＹＧ（ただし、Ｙ＝ＣまたはＴ）、
（ｅ）ＵＭＡＣ（ただし、Ｍ＝ＡまたはＣ）、及び
（ｆ）ＣＵＵＧからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵまたはＵＧＵＵＵを含む。いくつかの実施形態では、テトラループの配列はＵＵＣＧである。いくつかの実施形態では、テトラループの配列はＧＡＵＣである。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＧＵＵＵを含む。
他の態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、非ヌクレオチドリンカーを含む。本明細書に記載されるように、核酸ループ（例えば、テトラループ）は、核酸二次構造にみられる一般的なエレメントである。ヌクレオチドループは、鎖内二重鎖に生じる折り畳まれたドメイン内で生じる。非ヌクレオチド連結基（例えば、非ヌクレオチドリンカー）を含むヘアピンループを含むように設計された合成核酸は、折り畳まれた二重鎖構造を架橋するいくつかのヌクレオチドを置き換えることができる。非ヌクレオチド基は、同様に非折り畳み構造内でもリンカーとして用いられている。このような連結基は、天然のヌクレオチドリンカー（例えば、テトラループ）の有用な置換となりうる。このような連結基は、例えば、１個の比較的長い非ヌクレオチド連結基で、通常ループを構成し得る数個の個々のヌクレオチドを置き換えることから、所望の二次構造を有する核酸の合成のいくつかの工程を短縮することができる。このような非天然のループまたはリンカー（例えば、非ヌクレオチドリンカー）は、生物学的状況（例えば、投与時の対象の細胞内または循環中）で天然のループ構造に通常作用するヌクレアーゼによる分解に対する耐性を付与することができる。非ヌクレオチド連結基はまた、ヌクレオチドループ及びまたはリンカーで生じるよりも安定した折り畳み構造を与える可能性を有する。非ヌクレオチドリンカーのさらなる説明は、本明細書に参照によりその全体を援用するところのＲｕｍｎｅｙ ａｎｄ Ｋｏｏｌ（１９９５）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １１７：５６３５－５６４６にみられる。
したがって、いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、
（ａ）エチレングリコールリンカー、及び
（ｂ）アルキルリンカーからなる群から選択される非ヌクレオチドリンカーを含む。
いくつかの実施形態では、非ヌクレオチドリンカーはヘキサエチレングリコールリンカーである。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチドリンカーはＣ９アルキルリンカーである。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、５’二リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、アゴニストは、５’三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、その誘導体または類似体は、ホスホネート、チオホスホネート、ホスホロチオエート、サルフェート、スルホネート、スルファメート、チアゾリジノン、カルボキシレート、マロネート、ボロン酸、ベンゾオキサボロール、ボラノホスフェート、スクアラミドから選択されるホスフェートの生物学的等価体を含む。
いくつかの実施形態では、アゴニストは、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオシド、または修飾核酸塩基、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ヌクレオチド間結合またはポリヌクレオチド骨格への修飾を含む。
いくつかの態様では、本開示のＲＬＲアゴニストは、以下の特性、すなわち、
（ａ）１つ以上のＲＬＲ（例えば、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５及び／またはＬＧＰ２）に特異的に結合する；
（ｂ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる；
（ｃ）インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のＲＬＲ媒介発現を増加させる；
（ｄ）ＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる；
（ｅ）二重鎖の安定性を増加させる；
（ｆ）ＲＬＲに対する結合親和性を増加させる；
（ｇ）オフターゲット結合を減少させる；
（ｈ）生物学的半減期を増加させる；
（ｉ）体内分布及びバイオアベイラビリティを増加させる；
（ｊ）細胞及び／または組織中への取り込みを増加及び／または増大させる；
（ｋ）免疫原性を低下させる；及び
（ｌ）（ａ）～（ｋ）のいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つ以上を示す。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
（ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
（ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
（ｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、及び／またはＸ１及び／またはＸ２の少なくとも一方は少なくとも１個のイノシンヌクレオシドを含み、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、合成ＲＮＡアゴニストを提供する。
いくつかの実施形態では、Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ４はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はシチジンを含み、Ｎ４はイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はイノシンを含み、Ｎ３はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はシチジンを含み、Ｎ３はイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はグアノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はグアノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はイノシンを含み、Ｎ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はイノシンを含み、Ｎ３はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２はそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４はシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２はイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４はイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２はイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１２個であり、１、２、３または４個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１３個であり、１、２、３、４または５個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１４個であり、１、２、３、４、５または６個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１５個であり、１、２、３、４、５、６または７個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１６個であり、それぞれ、１、２、３、４、５、６、７、または８個のイノシンヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２はそれぞれヌクレオチド１２個であり、少なくとも１０％、２０％、３０％または４０％、イノシンヌクレオシドを含む。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
（ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
（ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
（ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
（ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
（ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
（ｖｉｉ）Ｘ１は、配列モチーフ［ＡＵＣＮ５］ｘ（ただし、Ｎ５はグアノシンまたはイノシンを含み、ｘはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｘ＝３または４である）を含み、
（ｖｉｉｉ）Ｘ２は、配列モチーフ［ＣＮ６ＡＵ］ｙ（ただし、Ｎ６はグアノシンまたはイノシンを含み、ｙはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｙ＝３または４である）を含み、
（ｉｘ）Ｌは、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
場合により、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、イノシンヌクレオシドはヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、合成ＲＮＡアゴニストを提供する。いくつかの実施形態では、Ｎ５はイノシンを含み、Ｎ６はイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ５はグアノシンを含み、Ｎ６はイノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ５はイノシンを含み、Ｎ６はグアノシンを含む。いくつかの実施形態では、Ｎ５はグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ６はグアノシン（Ｇ）含む。いくつかの実施形態では、ｘ＝３、かつｙ＝３である。いくつかの実施形態では、ｘ＝４、かつｙ＝４である。いくつかの実施形態では、Ｎ１はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ３はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ２はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ４はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ１はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ３及びＮ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４はグアノシン（Ｇ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３及びＮ４はシチジン（Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ１及びＮ２はシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４はイノシン（Ｉ）を含む。
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）は、ヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）はテトラループを含むヌクレオチドリンカーであり、テトラループのヌクレオチド配列は、
（ａ）ＵＮＣＧ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ）、
（ｂ）ＧＮＲＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＲ＝ＡまたはＧ）、
（ｃ）ＡＮＹＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＹ＝ＣまたはＴ）、
（ｄ）ＣＵＹＧ（ただし、Ｙ＝ＣまたはＴ）、
（ｅ）ＵＭＡＣ（ただし、Ｍ＝ＡまたはＣ）、及び
（ｆ）ＣＵＵＧからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）は、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵまたはＵＧＵＵＵを含むヌクレオチドリンカーである。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドリンカーは、ヌクレオチド配列ＵＧＵＵＵを含む。
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）はテトラループを含むヌクレオチドリンカーであり、テトラループの配列はＵＵＧＧである。いくつかの実施形態では、テトラループの配列はＧＡＵＣである。
いくつかの実施形態では、リンカー（Ｌ）は、
（ａ）エチレングリコールリンカー、及び
（ｂ）アルキルリンカーからなる群から選択される非ヌクレオチドリンカーである。
いくつかの実施形態では、非ヌクレオチドリンカーはヘキサエチレングリコールリンカーである。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチドリンカーはＣ９アルキルリンカーである。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、５’二リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、アゴニストは、５’三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む。いくつかの実施形態では、その誘導体または類似体は、ホスホネート、チオホスホネート、ホスホロチオエート、サルフェート、スルホネート、スルファメート、チアゾリジノン、カルボキシレート、マロネート、ボロン酸、ベンゾオキサボロール、ボラノホスフェート、スクアラミドから選択されるホスフェートの生物学的等価体を含む。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオシド、または修飾核酸塩基、またはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、アゴニストは、ヌクレオチド間結合またはポリヌクレオチド骨格への修飾を含む。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、以下の特性、すなわち、
（ａ）１つ以上のＲＬＲ（例えば、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５及び／またはＬＧＰ２）に特異的に結合する；
（ｂ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる；
（ｃ）インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のＲＬＲ媒介発現を増加させる；
（ｄ）ＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる；
（ｅ）二重鎖の安定性を増加させる；
（ｆ）ＲＬＲに対する結合親和性を増加させる；
（ｇ）オフターゲット結合を減少させる；
（ｈ）生物学的半減期を増加させる；
（ｉ）体内分布及びバイオアベイラビリティを増加させる；
（ｊ）細胞及び／または組織中への取り込みを増加及び／または増大させる；
（ｋ）免疫原性を低下させる；及び
（ｌ）（ａ）～（ｋ）のいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つ以上を示す。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドは５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、さらにアゴニストは配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５及び３６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、合成ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドは５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える配列モチーフを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドは、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、合成ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、配列番号２２、２３、及び２５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、合成ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドは、
（ｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、ならびに
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号６１及び９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、合成ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドは、
（ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
（ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
（ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
（ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
（ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
（ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
（ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
（ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
（ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
（ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
（ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
（ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
（ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
（ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
（ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
（ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
（ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
（ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
（ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
（ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
（ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
（ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
（ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
（ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
（ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
（ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
（ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、合成ＲＬＲアゴニストを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、アゴニストを構成するヌクレオチド配列がゲノムＤＮＡ配列にもｍＲＮＡ配列にも相補的でなく、ＲＬＲアゴニストがＲＮＡ干渉に関与せず、ＲＬＲアゴニストが遺伝子発現をサイレンシングしない、ＲＬＲアゴニストを提供する。
修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含むＲＬＲアゴニスト
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、１個以上の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ＲＬＲアゴニストは、参照非修飾ＲＬＲアゴニストと比較して、ＲＬＲアゴニストが導入される細胞の高い安定性、細胞内保持率、高い標的結合性、及び／または自然免疫応答の誘導の増加を含む有用な特性を有しうる。したがって、修飾ＲＬＲアゴニストの使用は、低い免疫原性を有するだけでなく、標的結合の効率、核酸の細胞内保持率を高めることができる。一実施形態では、本開示によって提供されるアゴニストは、標的結合親和性を高めるように修飾された少なくとも１つの領域を含む１つ以上のオリゴヌクレオチドからなる。オリゴヌクレオチドのその標的ポリペプチド（例えばＲＬＲ受容体）に対する親和性は、例えば、蛍光標識オリゴヌクレオチドをその標的と結合させた際の蛍光偏光度（ＦＰ）を測定することによって決定することができる（Ｍｏｅｒｋｅ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ １（１）：１－１５）。
別の実施形態では、本開示により提供されるＲＬＲアゴニストは、二重鎖の安定性を高める少なくとも１つの修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む少なくとも１つの領域を含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチドからなる。二重鎖の安定性は、二重鎖を構成する２本のオリゴヌクレオチド鎖が解離する温度である二重鎖のＴｍを測定することによって常法で決定することができ、解離は分光光度法で検出される。Ｔｍが高いほど、二重鎖の安定性は高くなる。
一実施形態では、二重鎖安定性を増大させるように修飾されたオリゴヌクレオチドの領域は、糖の２’位が修飾された少なくとも１つのヌクレオチドを含み、最も好ましくは、２’－Ｏ－アルキル、２’－Ｏ－アルキル－Ｏ－アルキルまたは２’－フルオロ修飾ヌクレオチドである。別の実施形態では、ＲＬＲアゴニストを構成するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性を高めるようにも修飾される。細胞は、核酸を分解することができる様々なエキソヌクレアーゼ及びエンドヌクレアーゼを含んでいる。多くのヌクレオチド及びヌクレオシドの修飾が、非修飾オリゴヌクレオチドと比べて、修飾が組み込まれたオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ消化に対する耐性を高めることが示されている。ヌクレアーゼ耐性は、オリゴヌクレオチドを細胞抽出物または単離ヌクレアーゼ溶液とインキュベートし、時間の経過とともに残存するインタクトなオリゴヌクレオチドの程度を通常はゲル電気泳動によって測定することによって、常法により測定される。ヌクレアーゼ耐性を高めるように修飾されたオリゴヌクレオチドは、非修飾オリゴヌクレオチドよりも長い時間にわたってインタクトで存在する。様々なオリゴヌクレオチド修飾が、ヌクレアーゼ耐性を高める、または付与することが示されている。一実施形態では、少なくとも１つのホスホロチオエート修飾を含むオリゴヌクレオチドが使用される。特定の場合では、標的結合親和性を高めるオリゴヌクレオチド修飾は、独立してヌクレアーゼ耐性も高めることができる（Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．２８：３６６－３７４）。
本開示で相当される特定のオリゴヌクレオチドの具体的な例としては、修飾骨格、例えば、ホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルの糖間結合、または短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環の糖間結合を含むものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエート骨格（立体特異的に合成されたものを含む）を有するオリゴヌクレオチド及びヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオチド、特に、ＣＨ２－ＮＨ－Ｏ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｏ－ＣＨ２［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる）、ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２、及びＯ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２骨格（天然のホスホジエステル骨格はＯ－Ｐ－Ｏ－ＣＨ２として表される）が用いられる。Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９５，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２８：３６６－３７４）により開示されるアミド骨格も、いくつかの実施形態では使用される。オリゴヌクレオチドは、１つ以上の置換糖部分を含んでもよい。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、以下、すなわち、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣＮ、ＯＣＨ３ＯＣＨ３、ＯＣＨ３Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、またはＯ（ＣＨ２）ｎＣＨ３（式中、ｎは１～約１０である）；Ｃ１～Ｃ１０の低級アルキル、アルコキシアルコキシ（当該技術分野でＯ－アルキル－Ｏ－アルキルとしても知られる）、置換された低級アルキル、アルカリル、またはアラルキル；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ３；ＯＣＦ３；Ｏ－、Ｓ－、またはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、またはＮ－アルケニル；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２；Ｎ３；ＮＨ２；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換されたシリル；ＲＮＡ切断基；レポーター基；インターカレーター；オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善する基；またはオリゴヌクレオチドの薬力学特性を改善する基及び同様の特性を有する他の置換基のうちの１つを２位に有する。一実施形態では、修飾は、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても知られる）を含む（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６）。いくつかの実施形態では、修飾は、２’－メトキシ（２’－Ｏ－ＣＨ３）、２’－プロポキシ（２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、及び２’－フルオロ（２’－Ｆ）を含む。また、同様の修飾をオリゴヌクレオチド上の他の位置、特に３’末端のヌクレオチドの糖の３’位、及び５’末端のヌクレオチドの５’位に行うこともできる。また、オリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル基の代わりにシクロブチルなどの糖模倣体を有してもよい。
オリゴヌクレオチドは、上記に加えてまたは上記に代えて、核酸塩基（当該技術分野ではしばしば単に「塩基」と呼ばれる）の修飾または置換も含み得る。本明細書において、「非修飾」または「天然」の核酸塩基としては、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、及びウラシル（Ｕ）が挙げられる。修飾核酸塩基としては、天然の核酸では低頻度または一過性にしか見出されない核酸塩基、例えば、ヒポキサンチン、６－メチルアデニン、５－Ｍｅピリミジン、特に５－メチルシトシン（５－メチル－２’デオキシシトシンとも呼ばれ、当該技術分野ではしばしば５－ｍｅ－Ｃと呼ばれる）、５－ヒドロキシメチルシトシン（ＨＭＣ）、グリコシルＨＭＣ及びゲントビオシルＨＭＣ、ならびに合成核酸塩基、例えば、２－アミノアデニン、２－チオウラシル、２－チオチミン、５－ブロモウラシル、５－ヒドロキシメチルウラシル、８－アザグアニン、７－デアザグアニン、Ｎ６（６－アミノヘキシル）アデニン、及び２，６－ジアミノプリンが挙げられる。Ｋｏｒｎｂｅｒｇ，Ａ．，ＤＮＡ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，１９８０，ｐｐ７５－７７；Ｇｅｂｅｙｅｈｕ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ ｒｅｓ．１５：４５１３）。当該技術分野では周知の「ユニバーサル」塩基、例えば、イノシンが含まれていてもよい。５－ｍｅ－Ｃ置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６～１．２℃増加させることが示されており（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，ｉｎ Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６－２７８）、現在、塩基置換としていくつかの実施形態で使用されている。
本発明のオリゴヌクレオチドの別の修飾は、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増加させる１つ以上の部分または結合体をオリゴヌクレオチドに化学的に連結することを含む。このような部分としては、これらに限定されるものではないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４，１０５３）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６；Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０，１１１；Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９）、リン脂質、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１）が挙げられる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチド、及びかかるオリゴヌクレオチドを調製するための方法は、例えば、米国特許第５，１３８，０４５号、同第第５，２１８，１０５号及び同第第５，４５９，２５５号など、当該技術分野では周知である。
本発明のオリゴヌクレオチドは、一般に体内で切断されて活性オリゴヌクレオチドを生じる１つ以上の部分を含むプロドラッグとして提供されてもよい。プロドラッグのアプローチの一例は、Ｉｍｂａｃｈらにより国際公開第ＷＯ９４／２６７６４号に記載されている。
特定のオリゴヌクレオチド内のすべての位置が一様に修飾される必要はなく、実際には上記の修飾の２つ以上を単一のオリゴヌクレオチドまたはさらにはオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシド内に組み込むことができる。
本発明によるオリゴヌクレオチドは、好ましくは、約８～約５０ヌクレオチドの長さである。本発明との関連において、これには、８～５０個のモノマーを有する本明細書中で上記に記載した非天然のオリゴマーが包含されることが理解される。
本発明に従って使用されるオリゴヌクレオチドは、固相合成の周知の方法によって簡便かつ常法で作製することができる。このような合成のための機器は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓを含むいくつかの業者によって市販されている。このような合成のためのあらゆる他の手段を用いることができる。オリゴヌクレオチドの実際の合成は、十分に当業者の知識及び技能の範囲内である。同様の技術を用いてホスホロチオエート及びアルキル化誘導体などの他のオリゴヌクレオチドを調製することも周知である。同様の技術、ならびにビオチン、フルオレセイン、アクリジンまたはソラレン修飾アミダイト及び／またはＣＰＧ（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓｔｅｒｌｉｎｇ Ｖａより市販されるもの）などの市販の修飾アミダイト及び制御細孔ガラス（ＣＰＧ）製品を使用して、蛍光標識オリゴヌクレオチド、ビオチン化オリゴヌクレオチド、またはコレステロール修飾オリゴヌクレオチドなどの他の修飾オリゴヌクレオチドを合成することもよく知られている。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、１つ以上（例えば、１、２、３、または４個）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個、またはそれ以上）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ＲＬＲアゴニストは、対応する非修飾ＲＬＲアゴニストと比較して、ＲＬＲアゴニストが導入される細胞内での分解を低減させることができる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、シュードウリジン（φ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン）、３－メチルウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン メチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニルウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、デオキシチミン核酸塩基を有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、５－メチル－２－チオウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュード－ウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチルジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－シュードウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオゼブラリン、２－チオゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４ ２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α－チオ－アデノシン、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロプリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジドアデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチルアデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６ ２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６ ２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ウィオシン（ｉｍＧ）、メチルウィオシン（ｍｉｍＧ）、４－ジメチル－ウィオシン（ｉｍＧ－１４）、イソウィオシン（ｉｍＧ２）、ウィブトシン（ｙＷ）、ペルオキシウィブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ）、非修飾ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、クオシン（Ｑ）、エポキシクオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－クオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－クオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザグアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２ ２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２ ２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、１つ以上の前述の修飾核酸塩基の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基の２、３または４の組み合わせ）を含む。
特定の実施形態では、本開示のＲＬＲアゴニストは、特定の修飾について均一に修飾される（すなわち、完全に修飾され、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ＲＬＲアゴニストは、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾することができるが、これは、ｍＲＮＡ配列中のすべてのシトシン残基が５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）に置換されていることを意味する。同様に、本開示のＲＬＲアゴニストは、上記に記載したものなどの修飾残基による置換によって、配列中に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について均一に修飾することができる。
本開示のＲＬＲアゴニスト中に存在しうるヌクレオシド修飾及びそれらの組み合わせの例としては、これらに限定されるものではないが、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、及びＷＯ２０１４１５９８１３に記載されるものが挙げられる。
本開示のＲＬＲアゴニストは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含むことができる。これらの組み合わせは、本明細書に記載される任意の１つ以上の修飾を含むことができる。
修飾ヌクレオシド及び修飾ヌクレオシドの組み合わせの例を、下記表１及び表２に示す。修飾ヌクレオチドのこれらの組み合わせを用いて、本開示のＲＬＲアゴニストを形成することができる。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、本開示のＲＬＲアゴニストの天然ヌクレオチドについて部分的または完全に置換することができる。非限定的な例として、天然ヌクレオチドであるウリジンを本明細書に記載される修飾ヌクレオシドで置換することができる。別の非限定的な例では、天然ヌクレオシドであるウリジンを、本明細書に開示される修飾ヌクレオシドの少なくとも１つで部分的に置換することができる（例えば、天然ウリジンの約０．１％、１％、５％、１％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８５％、９０％、９５％または９９．９％）。
Figure 2022554175000001
Figure 2022554175000002
Figure 2022554175000003
Figure 2022554175000004
Figure 2022554175000005
Figure 2022554175000006
Figure 2022554175000007
Figure 2022554175000008
Figure 2022554175000009
本開示によれば、本開示のポリヌクレオチドは、表１または表２の組み合わせまたは単一の修飾を含むように合成することができる。
単一の修飾が記載されている場合、記載されたヌクレオシドまたはヌクレオチドは、修飾されたそのＡ、Ｕ、ＧまたはＣヌクレオチドまたはヌクレオシドの１００％を表す。パーセンテージが記載されている場合、これらは、存在するＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ三リン酸の総量に対するその特定のＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ核酸塩基三リン酸のパーセンテージを表す。例えば、２５％ ５－アミノアリル－ＣＴＰ＋７５％ＣＴＰ／２５％ ５－メトキシ－ＵＴＰ＋７５％ＵＴＰの組み合わせは、シトシン三リン酸の２５％が５－アミノアリル－ＣＴＰであり、シトシンの７５％がＣＴＰである一方で、ウラシルの２５％が５－メトキシＵＴＰであり、ウラシルの７５％はＵＴＰであるようなポリヌクレオチドを指す。修飾ＵＴＰが記載されていない場合、天然のＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、及び／またはＣＴＰが、ポリヌクレオチド中に見出されるこれらのヌクレオチドの部位の１００％に用いられている。この例では、ＧＴＰ及びＡＴＰヌクレオチドのすべてが非修飾のままである。
ＲＬＲアゴニストの製造方法
本開示のＲＬＲアゴニストは、これらに限定されるものではないが、インビトロの転写（ＩＶＴ）及び合成法を含む当該技術分野で利用可能な手段によって製造することができる。酵素（ＩＶＴ）法、固相法、液相法、複合合成法、小領域合成法、及びライゲーション法を用いることができる。一実施形態において、ＲＬＲアゴニストは、ＩＶＴ酵素合成法を用いて作製される。ＩＶＴによってポリヌクレオチドを作製する方法は、当該技術分野では周知のものであり、本明細書に参照によりその全体の内容を援用するところの国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２に記載されている。したがって、本開示はまた、本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストをインビトロで転写するために使用することができるポリヌクレオチド、例えばＤＮＡのコンストラクト及びベクターを含む。
非天然の修飾核酸塩基は、合成時または合成後にポリヌクレオチド、例えばＲＮＡに導入することができる。特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖に行うことができる。特定の実施形態では、修飾は、化学合成またはポリメラーゼ酵素を用いて、ポリヌクレオチド鎖の末端またはポリヌクレオチド鎖の他の任意の場所に導入することができる。修飾核酸及びそれらの合成の例は、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成については、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９－１３４（１９９８）にも記載されている。
酵素的または化学的ライゲーション法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはその領域を、標的化剤または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子などの異なる機能的部分と結合させてもよい。ポリヌクレオチド及び修飾ポリヌクレオチドの結合体は、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５－１８７（１９９０）に概説されている。
オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチドの合成、ならびにそれらのコンジュゲーション及びライゲーションについては、Ｔａｓｋｏｖａ ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ １８（１７）：１６７１－１６８２；Ｇｏｏｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ １０７：３２１－４０；Ｍｅｎｚｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｆｕｔｕｒｅ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ７（１３）：１７３３－４９；Ｗｉｎｋｌｅｒ Ｊ．，（２０１３）Ｔｈｅｒ Ｄｅｌｉｖ． （７）：７９１－８０９；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ ３９（６）：２０５４－７０；及びＬｕ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ２１（２）：１８７－２０２にさらに記載されている。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）
いくつかの実施形態では、本開示は、記載される少なくとも１つのＲＬＲアゴニストとウイルス様粒子（ＶＬＰ）とを含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、ＶＬＰに結合される。いくつかの態様では、ＲＬＲアゴニストはＶＬＰ内にパッケージングされる。
本出願との関連でのウイルス様粒子とは、ウイルス粒子に似ているが病原性のない構造を指す。一般的にウイルス様粒子はウイルスゲノムを欠いているため、非感染性である。また、ウイルス様粒子は異種発現によって大量に生成することができ、容易に精製することができる。
本明細書に記載される組成物における使用に適した例示的なウイルス様粒子は、この参照により本明細書にその全体の内容をそれぞれ援用するＰＣＴ公開第ＷＯ２００３／０２４４８１号及び国際公開第ＷＯ２００４／０８４９４０号に示されている。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、組換えウイルス様粒子である。当業者は、組換えＤＮＡ技術及び一般に容易に入手可能な本明細書に記載されるウイルスコーディング配列を用いてＶＬＰを作製することができる。例えば、ウイルスのエンベロープまたはコアタンパク質のコーディング配列は、市販のバキュロウイルスベクターを用い、ウイルスプロモーターの調節制御下で、コーディング配列と調節配列との機能的連結を可能にするような配列の適当な改変を行って、バキュロウイルス発現ベクターで発現させるように操作することができる。ウイルスのエンベロープまたはコアタンパク質のコーディング配列は、例えば細菌発現ベクターで発現させるように操作することもできる。
ＶＬＰの例としては、これらに限定されるものではないが、Ｂ型肝炎ウイルス（Ｕｌｒｉｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．５０：１４１－１８２ （１９９８））、麻疹ウイルス（Ｗａｒｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １６０：１７３－１７８ （１９９５））、シンドビスウイルス、ロタウイルス（米国特許第５，０７１，６５１号及び同第５，３７４，４２６号）、口蹄疫ウイルス（Ｔｗｏｍｅｙ，ｅｔａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ １３：１６０３－１６１０，（１９９５））、ノーウォークウイルス（Ｊｉａｎｇ，Ｘ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５０：１５８０－１５８３ （１９９０）；Ｍａｔｓｕｉ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７：１４５６－１４６１ （１９９１））のカプシドタンパク質、レトロウイルスＧＡＧタンパク質（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ９６／３０５２３号）、レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１、Ｂ型肝炎ウイルスの表面タンパク質（ＷＯ９２／１１２９１）、ヒトパピローマウイルス（ＷＯ９８／１５６３１）、ヒトポリオーマウイルス（Ｓａｓｎａｕｓｋａｓ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ３８０（３）：３８１－３８６ （１９９９）；Ｓａｓｎａｕｓｋａｓ Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓｅｓ ｉｎ ｙｅａｓｔ ３ｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ“Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｖａｃｃｉｎｅｓ．” Ｂｅｒｌｉｎ，Ｓｅｐ．２６－２９， ２００１）、ＲＮＡファージ、Ｔｙ、ｆｒファージ、ＧＡファージ、ＡＰ２０５ファージ、特にＱβファージが挙げられる。
当業者には直ちに明らかであるように、本開示のＶＬＰは、いずれの特定の形態にも限定されない。粒子は、化学的に、または天然または非天然であってよい生物学的プロセスによって合成することができる。例として、この種の実施形態は、ウイルス様粒子またはその組換え形態を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬＰは、ロタウイルスの組換えポリペプチド；ノーウォークウイルスの組換えポリペプチド；アルファウイルスの組換えポリペプチド；細菌の繊毛または繊毛様構造を形成する組換えタンパク質；口蹄疫ウイルスの組換えポリペプチド；麻疹ウイルスの組換えポリペプチド、シンドビスウイルスの組換えポリペプチド、レトロウイルスの組換えポリペプチド；Ｂ型肝炎ウイルスの組換えポリペプチド（例えば、ＨＢｃＡｇ）；タバコモザイクウイルスの組換えポリペプチド；フロックハウスウイルスの組換えポリペプチド；ヒトパピローマウイルスの組換えポリペプチド；ポリオーマウイルスの組換えポリペプチド、特にヒトポリオーマウイルスの組換えポリペプチド、及び特にＢＫウイルスの組換えポリペプチド；バクテリオファージの組換えポリペプチド、ＲＮＡファージの組換えポリペプチド；Ｔｙの組換えポリペプチド；ｆｒファージの組換えポリペプチド、ＧＡファージの組換えポリペプチド、ＡＰ２０５ファージの組換えポリペプチド、及び、特に、Ｑβファージの組換えポリペプチドを含む。ウイルス様粒子は、そのようなポリペプチドの１つ以上のフラグメント、及びそのようなポリペプチドのバリアントをさらに含むか、または代替的にそれらからなるものであってよい。ポリペプチドのバリアントは、例えば、それらの野生型ポリペプチドとアミノ酸レベルで少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の同一性を共有することができる。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡファージの組換えタンパク質、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡファージは、ａ）バクテリオファージＱβ、ｂ）バクテリオファージＲ１７、ｃ）バクテリオファージｆｒ、ｄ）バクテリオファージＧＡ、ｅ）バクテリオファージＳＰ、ｆ）バクテリオファージＭＳ２、ｇ）バクテリオファージＭ１１、ｈ）バクテリオファージＭＸ１、ｉ）バクテリオファージＮＬ９５、ｋ）バクテリオファージｆ２、及びｌ）バクテリオファージＰＰ７からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡバクテリオファージＱβまたはＲＮＡバクテリオファージｆｒの組換えタンパク質、またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えタンパク質、またはそのフラグメントを含む。
いくつかの実施形態において、組換えタンパク質は、ＲＮＡファージのコートタンパク質を含む。
したがって、カプシドもしくはＶＬＰを形成するＲＮＡファージのコートタンパク質、またはカプシドもしくはＶＬＰへの自己集合に適合したバクテリオファージコートタンパク質のフラグメントは、本開示のさらなる実施形態である。バクテリオファージＱβのコートタンパク質は、例えば、大腸菌で組換えにより発現させることができる。また、このような発現に際し、これらのタンパク質は自然にカプシドを形成する。さらに、これらのカプシドは、固有の反復組織を有する構造を形成する。
本開示の組成物を調製するために使用することができるバクテリオファージコートタンパク質の例としては、バクテリオファージＱβ（配列番号１１２：ＰＩＲデータベース、Ｑβ ＣＰを指すアクセッション番号ＶＣＢＰＱｂ及び配列番号１１３：Ｑβ Ａ１タンパク質を指すアクセッション番号ＡＡＡ１６６６３）、バクテリオファージＲ１７（配列番号１１４：ＰＩＲアクセッション番号ＶＣＢＰＲ７）、バクテリオファージｆｒ（配列番号１１５：ＰＩＲアクセッション番号ＶＣＢＰＦＲ）、バクテリオファージＧＡ（配列番号１１６：ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ－０４０７５４）、バクテリオファージＳＰ（配列番号１１７：ＳＰＣＰを指すＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ３０３７４及び配列番号１１８：ＳＰ Ａ１タンパク質を指すアクセッション番号）、バクテリオファージＭＳ２（配列番号１１９：ＰＩＲアクセッション番号ＶＣＢＰＭ２）、バクテリオファージＭ１１（配列番号１２０：ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ０６２５０）、バクテリオファージＭＸ１（配列番号１２１：ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ１４６９９）、バクテリオファージＮＬ９５（配列番号１２２：ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＣ１４７０４）、バクテリオファージｆ２（配列番号１２３：ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０３６１１）、バクテリオファージＰＰ７（配列番号１２４）などのＲＮＡバクテリオファージのコートタンパク質が挙げられる。さらに、バクテリオファージＱβのＡ１タンパク質またはそのＣ末端から最大１００個、１５０個もしくは１８０個のアミノ酸が欠失したＣ末端切断型は、Ｑβコートタンパク質のカプシド集合体に組み込まれうる。一般に、カプシド集合体中のＱβ ＣＰに対するＱβ Ａ１タンパク質のパーセンテージは、カプシド形成を確実にする目的で制限される。
Ｑβコートタンパク質はまた、大腸菌で発現するとカプシドに自己集合することが見出されている（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ Ｔ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，ＧＥＮＥ １３７：１３３－１３７（１９９３））。得られたカプシドまたはウイルス様粒子は、直径２５ｎｍ、Ｔ＝３の準対称性の二十面体のファージ様カプシド構造を示した。さらに、ファージＱβの結晶構造も解明されている。カプシドは、１８０コピーのコートタンパク質を含み、これらはジスルフィド架橋によって共有結合性５量体及び６量体として連結されており（Ｇｏｌｍｏｈａｍｍａｄｉ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：５４３－５５５４（１９９６））、Ｑβコートタンパク質のカプシドの高い安定性をもたらす。しかしながら、組換えＱβコートタンパク質から形成されたカプシドまたはＶＬＰは、カプシド内の他のサブユニットにジスルフィドリンクを介して連結されていない、または不完全に連結されたサブユニットを含みうる。したがって、組換えＱβカプシドを非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥにかけると、単量体Ｑβコートタンパク質に相当するバンドだけでなく、Ｑβコートタンパク質の６量体または５量体に相当するバンドが視認される。不完全にジスルフィド結合されたサブユニットは、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥで二量体、三量体または四量体バンドとして現れる場合がある。Ｑβカプシドタンパク質は、有機溶媒及び変性剤に対して特殊な耐性も示す。ＤＭＳＯ及びアセトニトリル濃度が３０％と高く、グアニジニウム濃度が１Ｍと高いことは、カプシドの安定性に影響しないことが観察されている。Ｑβコートタンパク質のカプシドの高い安定性は、特に本発明による哺乳動物及びヒトの免疫化及びワクチン接種におけるその使用にとって有利な特質である。
大腸菌で発現させた場合、Ｑβコートタンパク質のＮ末端メチオニンは、Ｓｔｏｌｌ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：９９０－９９３（１９７７）に記載されるＮ末端エドマン配列決定法によって観察されるように通常は除去される。Ｎ末端メチオニンが除去されていないＱβコートタンパク質で構成されたＶＬＰ、またはＮ末端メチオニンが切断されているかもしくは存在しているＱβコートタンパク質の混合物を含むＶＬＰもまた、本開示の範囲に含まれる。
さらなるＲＮＡファージのコートタンパク質も、細菌宿主で発現される際に自己集合することが示されている（Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ，Ｒ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ２３： ２４５－２５４ （１９８３）、Ｋｏｚｌｏｖｓｋａｙａ，Ｔ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｏｋｌ．Ａｋａｄ．Ｎａｕｋ ＳＳＳＲ ２８７： ４５２－４５５ （１９８６）、Ａｄｈｉｎ，Ｍ Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：２３８－２４２ （１９８９）、Ｎｉ，Ｃ Ｚ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２４８５－２４９３ （１９９６）、Ｐｒｉａｎｏ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４９： ２８３－２９７ （１９９５））。Ｑβファージカプシドには、コートタンパク質以外に、いわゆるリードスルータンパク質Ａ１及び成熟タンパク質Ａ２が含まれている。Ａ１はＵＧＡ終止コドンにおける抑制により生成され、アミノ酸３２９個の長さを有する。いくつかの実施形態では、本開示で使用されるファージＱβの組換えコートタンパク質のカプシドは、Ａ２溶解タンパク質を含んでおらず、宿主由来のＲＮＡを含んでいる。ＲＮＡファージのコートタンパク質はＲＮＡ結合タンパク質であり、ウイルスの生活環の中で翻訳抑制因子として作用するレプリカーゼ遺伝子のリボソーム結合部位のステムループと相互作用する。相互作用の配列及び構造的要素は周知のものである（Ｗｉｔｈｅｒｅｌｌ，Ｇ Ｗ．＆ Ｕｈｌｅｎｂｅｃｋ，Ｏ Ｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８：７１－７６（１９８９）；Ｌｉｍ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１： ３１８３９－３１８４５（１９９６））。ステムループ及びＲＮＡは一般的にウイルス集合に関与していることが知られている（Ｇｏｌｍｏｈａｍｍａｄｉ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：５４３－５５５４ （１９９６））。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡファージの組換えタンパク質またはそのフラグメントを含み、組換えタンパク質は、ＲＮＡファージの変異コートタンパク質、好ましくは上記に述べたＲＮＡファージの変異コートタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡファージの変異コートタンパク質は、置換による少なくとも１つのリシン残基の除去によって、または置換による少なくとも１つのリシン残基の付加によって改変されているか、あるいは、ＲＮＡファージの変異コートタンパク質は、少なくとも１つのリシン残基の欠失によって、または挿入による少なくとも１つのリシン残基の付加によって改変されている。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡバクテリオファージＱβの組換えタンパク質またはそのフラグメントを含み、組換えタンパク質は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有するコートタンパク質、または配列番号１１２及び配列番号１１３のアミノ酸配列を有するコートタンパク質の混合物、または配列番号１１３の変異体を含み、好ましくはＮ末端メチオニンが切断されている。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、Ｑβの組換えタンパク質またはそのフラグメントを含み、組換えタンパク質は変異体Ｑβコートタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、これらの変異体コートタンパク質は、置換による少なくとも１つのリシン残基の除去によって、または置換による少なくとも１つのリシン残基の付加によって改変されている。あるいは、これらの変異体コートタンパク質は、少なくとも１つのリシン残基の欠失によって、または挿入による少なくとも１つのリシン残基の付加によって改変されている。
Ｑβコートタンパク質のカプシドの表面には４個のリシン残基が露出している。露出したリシン残基がアルギニンに置換されたＱβ変異体も、本発明で使用することができる。したがって、以下のＱβコートタンパク質変異体及び変異体Ｑβ ＶＬＰ、すなわち、「Ｑβ２４０」（Ｌｙｓ１３－Ａｒｇ、配列番号１２５）、「Ｑβ－２４３」（Ａｓｎ １０－Ｌｙｓ、配列番号１２６）、「Ｑβ－２５０」（Ｌｙｓ ２－Ａｒｇ、Ｌｙｓ１３－Ａｒｇ、配列番号１２７）、「Ｑβ－２５１」（配列番号１２８）及び「Ｑβ－２５９」（Ｌｙｓ ２－Ａｒｇ、Ｌｙｓ１６－Ａｒｇ、配列番号１２９）を本発明の実施において使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ａ）配列番号１２５のアミノ酸配列、ｂ）配列番号１２６のアミノ酸配列、ｃ）配列番号１２７のアミノ酸配列、ｄ）配列番号１２８のアミノ酸配列、及びｅ）配列番号１２９のアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質を含む変異体Ｑβコートタンパク質の組換えタンパク質を含む。上記に示されたＱβコートタンパク質、変異体Ｑβコートタンパク質ＶＬＰ及びカプシドの構造、発現及び精製については、この参照により本明細書にその全体を援用する米国公開ＵＳ２００３－０１７５２９０号にそれぞれ開示されている。詳細には、上記の出願の実施例１８を本明細書に参照する。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、Ｑβの組換えタンパク質またはそのフラグメントを含み、組換えタンパク質は上記のＱβ変異体及び対応するＡ１タンパク質のいずれか一方の混合物を含む。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡファージＡＰ２０５の組換えタンパク質、またはそのフラグメントを含む。
ＡＰ２０５ゲノムは、成熟化タンパク質、コートタンパク質、レプリカーゼ、ならびに、関連するファージには存在しない２つのオープンリーディングフレームからなり、溶解遺伝子及びオープンリーディングフレームが成熟化遺伝子の翻訳にある役割を果たしている（Ｋｌｏｖｉｎｓ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８３：１５２３－３３（２００２））。ＡＰ２０５コートタンパク質は、ｐＱｂ１０の誘導体であり（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １３７：１３３－３７ （１９９３））、ＡＰ２０５リボソーム結合部位を含むプラスミドｐＡＰ２８３－５８（配列番号７９）から発現させることができる。あるいは、ＡＰ２０５コートタンパク質は、ベクター中に存在するリボソーム結合部位の下流のｐＱｂ１８５にクローニングすることもできる。いずれのアプローチも、参照によりその全体の内容を援用する米国特許第７，１３８，２５２号に記載されるようなタンパク質の発現とカプシドの形成をもたらす。ベクターｐＱｂ１０及びｐＱｂ１８５は、ｐＧＥＭベクターに由来するベクターであり、これらのベクターにクローニングされた遺伝子の発現はｔｒｐプロモーターによって制御される（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １３７：１３３－３７（１９９３））。プラスミドｐＡＰ２８３－５８（配列番号１３０）は、ＸｂａＩ部位の下流、かつＡＰ２０５コートタンパク質のＡＴＧ開始コドンのすぐ上流に位置する以下の配列：ｔｃｔａｇａＡＴＴＴＴＣＴＧＣＧＣＡＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＴＧＧＣＧＣＣＣＡＡＡＧＴＧＡＧＧＡＡＡＡＴＣＡＣａｔｇ（配列番号１３１）内に推定されるＡＰ２０５リボソーム結合部位を含む。ベクターｐＱｂ１８５は、ＸｂａＩ部位の下流かつ開始コドンの上流にシャイン・ダルガノ配列を含む（ｔｃｔａｇａＴＴＡＡＣＣＣＡＡＣＧＣＧＴＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＣＣａｔｇ、シャイン・ダルガノ配列は下線で示す。配列番号１３２）。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡファージＡＰ２０５の組換えコートタンパク質、またはそのフラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＰ２０５のコートタンパク質は、カプシドを形成する。このようなタンパク質は、組換えにより発現されるか、または天然の由来源から調製される。電子顕微鏡（ＥＭ）及び免疫拡散法によって証明されているように、細菌内で産生されたＡＰ２０５コートタンパク質は自然にカプシドを形成する。ＡＰ２０５コートタンパク質（配列番号１３３）によって形成されるカプシドとＡＰ２０５ ＲＮＡファージのコートタンパク質によって形成されるカプシドの構造特性は、電子顕微鏡でみた場合、ほとんど区別がつかない。ＡＰ２０５ ＶＬＰは免疫原性が高く、抗原及び／または抗原決定基と連結して、反復的な向きで抗原及び／または抗原決定基を提示するワクチンコンストラクトを生成することができる。そのように提示された抗原に対して高い力価が誘発されることで、結合した抗原及び／または抗原決定基が抗体分子との相互作用を行うためにアクセス可能であり、免疫原性を有することが示される。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、ＲＮＡファージＡＰ２０５の組換え変異体コートタンパク質、またはそのフラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、アミノ酸５のプロリンからスレオニンへの置換を有するＡＰ２０５コートタンパク質（配列番号１３４）を含む、ＡＰ２０５ ＶＬＰの自己集合能を有する変異体形態が、本開示の実施において使用される。これらのＶＬＰ、天然由来源に由来するＡＰ２０５ ＶＬＰ、またはＡＰ２０５ウイルス粒子は、抗原と結合して本発明に基づく抗原の規則的かつ反復したアレイを生成することができる。
ＡＰ２０５ Ｐ５－Ｔ変異体コートタンパク質は、ｐＱｂ１８５から直接誘導される、Ｑβコートタンパク質遺伝子の代わりに変異型ＡＰ２０５コートタンパク質遺伝子を含むプラスミドｐＡＰ２８１－３２（配列番号１３５）から発現させることができる。ＡＰ２０５コートタンパク質の発現用のベクターを、大腸菌にトランスフェクトすることでＡＰ２０５コートタンパク質を発現させる。
いくつかの実施形態では、本開示は、規則的なアレイを形成し、固有の繰り返し構造を有する野生型タンパク質と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、本発明の組成物を調製するために使用されるタンパク質をコードする核酸分子を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、配列番号１１２～１２９に示されるアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含むタンパク質を含む。
本開示での使用に適したタンパク質はまた、カプシドもしくはカプシド様構造、またはＶＬＰを形成するタンパク質のＣ末端切断変異体を含む。このような切断変異体の具体例としては、Ｃ末端から１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、または１７個のアミノ酸が除去された、配列番号１１２～１２９のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質が挙げられる。一般的には、これらのＣ末端切断変異体は、カプシドまたはカプシド様構造を形成する能力を保持している。
本開示での使用に適したさらなるタンパク質には、カプシドまたはカプシド様構造を形成するタンパク質のＮ末端切断変異体も含まれる。このような切断変異体の具体例としては、Ｎ末端から１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、または１７個のアミノ酸が除去された、配列番号１１２～１２９のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質が挙げられる。一般的には、これらのＮ末端切断変異体は、カプシドまたはカプシド様構造を形成する能力を保持している。
本開示での使用に適したさらなるタンパク質には、カプシドまたはカプシド様構造を形成するＮ及びＣ末端切断変異体も含まれる。適当な切断変異体としては、Ｎ末端から１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、または１７個のアミノ酸が除去され、かつＣ末端から１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、または１７個のアミノ酸が除去された、配列番号１１２～１２９のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するタンパク質が挙げられる。一般的には、これらのＮ末端及びＣ末端切断変異体は、カプシドまたはカプシド様構造を形成する能力を保持している。
免疫応答を誘導する能力を保持したＶＬＰのフラグメントは、アミノ酸約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００個の長さのポリペプチドを含むか、またはこれからなるものでありうるが、ＶＬＰを構成するサブユニットの配列の長さに依存することは明らかである。このようなフラグメントの例としては、免疫応答を増強する組成物の調製に適した、本明細書で検討するタンパク質のフラグメントが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＶＬＰは、リポタンパク質エンベロープもリポタンパク質含有エンベロープも含まない。いくつかの実施形態では、ＶＬＰはエンベロープをまったく含まない。
リポタンパク質エンベロープまたはリポタンパク質含有エンベロープの欠如、特にエンベロープの完全な欠如は、その構造及び組成がより規定されたウイルス様粒子を与える。したがって、このようなより規定されたウイルス様粒子では、副作用を最小限に抑えることができる。さらに、リポタンパク質含有エンベロープの欠如、または特にエンベロープの完全な欠如は、ウイルス様粒子への潜在的に有毒な分子及び発熱物質の取り込みを防止または最小限に抑えることができる。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物に使用される粒子は、Ｂ型肝炎カプシド（コア）タンパク質（ＨＢｃＡｇ）または遊離システイン残基をなくすかまたはその数を減少させるように改変されたＨＢｃＡｇのフラグメントで構成される。Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：５３９３－５３９８（１９９２））によって、天然に存在するシステイン残基を除去するように改変されたＨＢｃＡｇが結合して多量体構造を形成する能力を保持していることが示されている。したがって、本開示の組成物での使用に適したコア粒子としては、天然に存在するシステイン残基の１つ以上が欠失されるかまたは別のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）で置換された改変ＨＢｃＡｇまたはそのフラグメントを含むものが挙げられる。
ＨＢｃＡｇとは、Ｂ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のプロセシングにより生成されるタンパク質である。ＨＢｃＡｇの多くのアイソタイプが同定されており、それらのアミノ酸配列は当業者に容易に入手可能である。例えば、配列番号１３６に示されるアミノ酸配列を有するＨＢｃＡｇタンパク質はアミノ酸１８５個の長さであり、アミノ酸２１２個のＢ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のプロセシングによって生成される。このプロセシングによって、Ｂ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のＮ末端から２９個のアミノ酸が除去される。同様に、アミノ酸１８５個の長さのＨＢｃＡｇタンパク質は、アミノ酸２１４個のＢ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のプロセシングによって生成される。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、ＨＢｃＡｇのプロセシング後の形態（すなわち、Ｂ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のＮ末端リーダー配列が除去されたＨＢｃＡｇ）を用いて調製される。
さらに、プロセシングが起こらない条件下でＨＢｃＡｇを生産する場合、ＨＢｃＡｇは一般に「プロセシング後」の形態で発現させる。例えば、大腸菌などの細菌系は、真核細胞で通常発現されるタンパク質のリーダー配列（「シグナルペプチド」とも呼ばれる）を一般的に除去しない。したがって、タンパク質を細胞質に発現させる大腸菌発現系を使用して本開示のＨＢｃＡｇを生産する場合、これらのタンパク質は、Ｂ型肝炎コア抗原前駆体タンパク質のＮ末端リーダー配列が存在しないように一般的に発現される。
本開示に使用することができるＢ型肝炎ウイルス様粒子の調製については、例えば、ＷＯ００／３２２２７号、特にその実施例１７～１９及び２１～２４に、またＷＯ０１／８５２０８号、特にその実施例１７～１９、２１～２４、３１及び４１に、またさらに、係属中の米国公開第ＵＳ２００３－０１７５２９０号に開示されている。後者の出願については、特に実施例２３、２４、３１及び５１を参照されたい。これら３つの文献はいずれも、本明細書に参照によって明確に援用するものである。
本開示はまた、１つ以上のさらなるシステイン残基を欠失または置換するように改変されたＨＢｃＡｇバリアントを含む。したがって、本発明のワクチン組成物には、配列番号１３６に示されるアミノ酸配列中に存在しないシステイン残基が欠失させられたＨＢｃＡｇを含む組成物が含まれる。
遊離システイン残基が多くの化学副反応に関与しうることは当該技術分野では周知である。これらの副反応には、ジスルフィド交換、例えば、他の物質との併用療法で注入または形成される化学物質または代謝産物との反応、またはＵＶ光への曝露による直接的酸化及びヌクレオチドとの反応が含まれる。したがって、特に、ＨＢｃＡｇが核酸と結合する強い傾向を有する事実を考慮すると、毒性付加物が生成される可能性がある。したがって、それぞれは低い濃度で存在しうるが、一緒になると毒性レベルに達する可能性がある毒性付加物が複数の種間に分布する場合がある。
上記を考慮すると、天然に存在するシステイン残基を除去するように改変されたＨＢｃＡｇを組成物中に使用することの１つの利点は、抗原または抗原決定基が結合する際に毒性種が結合することができる部位の数が減るかまたは完全になくなることである。
本開示の実施における使用に適した多くの天然に存在するＨＢｃＡｇバリアントが同定されている。例えば、Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ．，（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：１０１２２－１０１２８ （１９９９））は、配列番号１３７の９７位に対応する位置のイソロイシン残基がロイシン残基またはフェニルアラニン残基のいずれかに置換されたバリアントを記載している。多くのＨＢｃＡｇバリアント、ならびにいくつかのＢ型肝炎コア抗原前駆体バリアントのアミノ酸配列が、本明細書に参照によってそれぞれの開示内容を援用するところのＧｅｎＢａｎｋレポートＡＡＦ１２１２４０（配列番号１３８）、ＡＦ１２１２３９（配列番号１３９）、Ｘ８５２９７（配列番号１４０）、Ｘ０２４９６（配列番号１４１）、Ｘ８５３０５（配列番号１４２）、Ｘ８５３０３（配列番号１４３）、ＡＦ１５１７３５（配列番号１４４）、Ｘ８５２５９（配列番号１４５）、Ｘ８５２８６（配列番号１４６）、Ｘ８５２６０（配列番号１４７）、Ｘ８５３１７（配列番号１４８）、Ｘ８５２９８（配列番号１４９）、ＡＦ０４３５９３（配列番号１５０）、Ｍ２０７０６（配列番号１５１）、Ｘ８５２９５（配列番号１５２）、Ｘ８０９２５（配列番号１５３）、Ｘ８５２８４（配列番号１５４）、Ｘ８５２７５（配列番号１５５）、Ｘ７２７０２（配列番号１５６）、Ｘ８５２９１（配列番号１５７）、Ｘ６５２５８（配列番号１５８）、Ｘ８５３０２（配列番号１５９）、Ｍ３２１３８（配列番号１６０）、Ｘ８５２９３（配列番号１６１）、Ｘ８５３１５（配列番号１６２）、Ｕ９５５５１（配列番号１６３）、Ｘ８５２５６（配列番号１６４）、Ｘ８５３１６（配列番号１６５）、Ｘ８５２９６（配列番号１６６）、ＡＢ０３３５５９（配列番号１６７）、Ｘ５９７９５（配列番号１６８）、Ｘ８５２９９（配列番号１６９）、Ｘ８５３０７（配列番号１７０）、Ｘ６５２５７（配列番号１７１）、Ｘ８５３１１（配列番号１７２）、Ｘ８５３０１（配列番号１７３）、Ｘ８５３１４（配列番号１７４）、Ｘ８５２８７（配列番号１７５）、Ｘ８５２７２（配列番号１７６）、Ｘ８５３１９（配列番号１７７）、ＡＢ０１０２８９（配列番号１７８）、Ｘ８５２８５（配列番号１７９）、ＡＢ０１０２８９（配列番号１８０）、ＡＦ１２１２４２（配列番号１８１）、Ｍ９０５２０（配列番号１８２）、Ｐ０３１５３（配列番号１８３）、ＡＦ１１０９９９（配列番号１８４）、及びＭ９５５８９（配列番号１８５）に開示されている。これらのＨＢｃＡｇバリアントは、配列番号７７の１２、１３、２１、２２、２４、２９、３２、３３、３５、３８、４０、４２、４４、４５、４９、５１、５７、５８、５９、６４、６６、６７、６９、７４、７７、８０、８１、８７、９２、９３、９７、９８、１００、１０３、１０５、１０６、１０９、１１３、１１６、１２１、１２６、１３０、１３３、１３５、１４１、１４７、１４９、１５７、１７６、１７８、１８２及び１８３位に位置するアミノ酸残基に対応するアミノ酸残基を含む多くの位置でアミノ酸配列が異なる。本発明の組成物中での使用に適し、かつ本明細書の開示に従ってさらに改変することができるさらなるＨＢｃＡｇバリアントが、ＷＯ００／１９８３３３、ＷＯ００／１７７１５８及びＷＯ００／２１４４７８に記載されている。
本開示における使用に適したＨＢｃＡｇは、ＲＬＲアゴニストを封入することができるか、または結合するかもしくは他の形で付着することができるものであれば、特にＲＬＲアゴニストをパッケージングして免疫応答を誘導することができるものであれば、いずれの生物に由来するものであってもよい。
いくつかの実施形態では、組成物は、二量体または多量体構造を形成するように結合することができるＨＢｃＡｇバリアントを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、野生型アミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＨＢｃＡｇポリペプチド、及び、適当な場合に、Ｎ末端リーダー配列を除去するようにプロセシングされたこれらのタンパク質の形態を含む。
ポリペプチドのアミノ酸配列が、野生型アミノ酸配列のいずれか、またはその部分と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を有するかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムなどの公知のコンピュータプログラムを使用して従来の方法で判定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔまたは他の配列アライメントプログラムを使用して、特定の配列が、例えば参照アミノ酸配列と９５％同一であるかどうかを判定する場合、各パラメータは、同一率（％）が参照アミノ酸配列の全長にわたって計算され、かつ参照配列中のアミノ酸残基の総数の最大５％の相同性のギャップが許容されるように設定される。
配列番号１３８～１８１及び１８２～１８５に記載されるアミノ酸配列を有するＨＢｃＡｇバリアント及び前駆体は、比較的互いに類似している。したがって、配列番号１８６の特定の位置に対応する位置に位置するＨＢｃＡｇバリアントのアミノ酸残基について言及する場合、配列番号１８６に示されるアミノ酸配列のその位置に存在するアミノ酸残基を指す。これらのＨＢｃＡｇバリアント間の相同性は、哺乳動物に感染するＢ型肝炎ウイルスの間で大部分において十分に高いため、当業者であれば、配列番号１８６及び配列番号１３６に示されるアミノ酸配列、ならびに特定のＨＢｃＡｇバリアントのアミノ酸配列を検討して、「対応する」アミノ酸残基を同定することに困難はほとんどないであろう。さらに、ウッドチャックに感染するウイルス由来のＨＢｃＡｇのアミノ酸配列を示す、配列番号１８２に示されるＨＢｃＡｇアミノ酸配列は、配列番号１８６に示されるアミノ酸配列を有するＨＢｃＡｇと十分な相同性を有しているため、配列番号１８２において、配列番号１８６のアミノ酸残基１５５と１５６との間に３個のアミノ酸残基からなるインサートが存在することが直ちに明らかである。
上記に述べたように、遊離システイン残基の除去は、毒性成分がＨＢｃＡｇに結合できる部位の数を減少させ、また、同じまたは隣接するＨＢｃＡｇ分子のリシン及びシステイン残基の架橋が起こりうる部位をなくすものである。したがって、いくつかの実施形態では、Ｂ型肝炎ウイルスカプシドタンパク質の１つ以上のシステイン残基を欠失させるか、または別のアミノ酸残基で置換する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、Ｃ末端領域（例えば、配列番号１８６のアミノ酸残基１４５～１８５または１５０～１８５）が除去されたＨＢｃＡｇを含む。したがって、本開示の実施における使用に適したさらなる改変ＨＢｃＡｇには、Ｃ末端切断変異体が含まれる。適当な切断変異体としては、Ｃ末端から１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３４、３５個のアミノ酸が除去されたＨＢｃＡｇが挙げられる。
したがって、本開示の実施における使用に適したＨＢｃＡｇには、Ｎ末端切断変異体も含まれる。適当な切断変異体としては、Ｎ末端から、１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、または１７個のアミノ酸が除去された改変ＨＢｃＡｇが挙げられる。
本開示の実施における使用に適したさらなるＨＢｃＡｇには、Ｎ及びＣ末端切断変異体が含まれる。適当な切断変異体としては、Ｎ末端から１、２、５、７、９、１０、１２、１４、１５、及び１７個のアミノ酸が除去され、かつＣ末端から１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３４個のアミノ酸が除去されたＨＢｃＡｇが挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＨＢｃＡｇポリペプチドを含む組成物は、上記に述べた切断変異体と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、リシン残基をＨＢｃＡｇポリペプチドに導入して、ＨＢｃＡｇのＶＬＰへの抗原または抗原決定基の結合を媒介する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、７９位及び８０位に対応するアミノ酸がＧｌｙ－Ｇｌｙ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ（配列番号１８７）のアミノ酸配列を有するペプチドに置換されるように改変された、配列番号１８６のアミノ酸１～１４４、または１～１４９、１～１８５を含むＨＢｃＡｇを用いて調製される。これらの組成物は、抗原決定基がＨＢｃＡｇのＶＬＰに結合される実施形態において特に有用である。いくつかの実施形態では、配列番号１８６の４８位及び１０７位のシステイン残基は、セリンに変異されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、上記に示されたアミノ酸改変をやはり有する、配列番号１３８～１８３のいずれかに示されるアミノ酸配列を有する対応するポリペプチドを含む。本開示の範囲内には、結合してカプシドまたはＶＬＰを形成することができ、かつ上記に示されたアミノ酸改変を有するさらなるＨＢｃＡｇバリアントがさらに含まれる。したがって、本開示は、野生型アミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％同一であるアミノ酸配列を含むＨＢｃＡｇポリペプチド、及び、適当な場合に、Ｎ末端リーダー配列を除去するようにプロセシングされ、上記に示される改変を有するように改変されたこれらのタンパク質の形態を含む組成物をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、異なるＨＢｃＡｇの混合物を含む。したがって、これらの組成物は、アミノ酸配列が異なるＨＢｃＡｇで構成されうる。例えば、「野生型」ＨＢｃＡｇと、１つ以上のアミノ酸残基が改変（例えば、欠失、挿入または置換）された改変ＨＢｃＡｇとを含む組成物を調製することができる。
いくつかのＲＮＡバクテリオファージの結晶構造が決定されている（Ｇｏｌｍｏｈａｍｍａｄｉ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ４：５４３－５５４（１９９６））。このような情報を用いることで、表面露出残基を同定することができ、したがって、ＲＮＡファージコートタンパク質を、１つ以上の反応性アミノ酸残基を挿入または置換によって挿入することができるように改変することができる。その結果、バクテリオファージのコートタンパク質の改変形態も本開示で使用することができる。したがって、カプシドまたはカプシド様構造を形成するタンパク質（例えば、バクテリオファージＱβ、バクテリオファージＲ１７、バクテリオファージｆｒ、バクテリオファージＧＡ、バクテリオファージＳＰ、及びバクテリオファージＭＳ２、バクテリオファージＡＰ２０５のコートタンパク質）のバリアントも、本明細書に記載される組成物を調製するために使用することができる。
上記に述べたバリアントタンパク質の配列はそれらの野生型タンパク質の配列とは異なるが、これらのバリアントタンパク質は一般に、カプシドまたはカプシド様構造を形成する能力を保持している。したがって、本発明は、カプシドまたはカプシド様構造を形成するタンパク質のバリアントをさらに含む組成物、ならびにかかる組成物を調製するための方法、かかる組成物を調製するために使用される個々のタンパク質サブユニット、及びこれらのタンパク質サブユニットをコードする核酸分子をさらに含む。したがって、本開示の範囲内には、カプシドまたはカプシド様構造を形成し、結合してカプシドまたはカプシド様構造を形成する能力を保持する野生型タンパク質のバリアント型が含まれる。
抗原及び抗原決定基
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、ウイルス様粒子に結合した抗原または抗原決定基を含む。本開示は、所望の治療効果を考慮して選択される抗原または抗原決定基に応じて異なる組成物を提供する。本発明での使用に適した例示的な抗原または抗原決定基が、本明細書に参照によりそれらの開示内容の全体を援用するところの米国特許第７，２２９，６２４号、米国特許第６，９６４，７６９号及び米国特許第７，２６４，８１０号に開示されている。
抗原は、既知のまたは由来不明の任意の抗原であってよい。抗原は、細菌、ウイルスまたは他の病原体から単離することができ、または抗原をコードする適当な核酸の発現によって得られる組換え抗原であってもよい。抗原は、プリオン、腫瘍、自己分子、非ペプチド性ハプテン分子、アレルゲン及びホルモンから単離することもできる。いくつかの実施形態では、抗原は、組換え抗原である。抗原の選択は、当然のことながら、所望の免疫学的応答及び宿主に依存する。
いくつかの実施形態では、免疫応答は、ＶＬＰ自体に対して誘導される。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、それに対する増強された免疫応答が望ましい抗原／免疫原に結合、融合、または他の形で付着される。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子に融合される。上記で概説したように、ＶＬＰは通常、集合してＶＬＰを形成する少なくとも１つのサブユニットで構成されている。したがって、いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子またはＶＬＰに組み込まれることが可能なタンパク質の少なくとも１つのサブユニットに融合され、キメラＶＬＰ－サブユニット－抗原融合体を形成する。
抗原または抗原決定基の融合は、ＶＬＰサブユニット配列内への挿入によって、またはＶＬＰサブユニットまたはＶＬＰに組み込まれることが可能なタンパク質のＮ末端またはＣ末端のいずれかへの融合によって行うことができる。以下、ＶＬＰサブユニットとペプチドとの融合タンパク質について言及する場合、サブユニット配列の両末端への融合、またはサブユニット配列内へのペプチドの内部挿入が包含される。
融合はまた、切断変異体とさらに呼ばれる、サブユニット配列の一部が欠失したＶＬＰサブユニットのバリアントに抗原または抗原決定基配列を挿入することによって行うこともできる。切断変異体は、ＶＬＰサブユニットの配列のＮ末端もしくはＣ末端、または配列の一部の内部欠失を有することができる。例えばアミノ酸残基７９～８１の欠失を有する特定のＶＬＰ ＨＢｃＡｇは、内部欠失を有する切断変異体である。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ＶＬＰサブユニットの切断変異体のＮ末端またはＣ末端のいずれかに融合される。同様に、ＶＬＰサブユニットの配列内へのエピトープの融合も置換によって行うことができ、例えば特定のＶＬＰ ＨＢｃＡｇではアミノ酸７９～８１が外来エピトープに置換される。したがって、以下で呼ぶところの融合は、ＶＬＰサブユニットの配列内への抗原または抗原決定基配列の挿入、ＶＬＰサブユニットの配列の一部の抗原または抗原決定基による置換、または欠失、置換もしくは挿入の組み合わせによって行うことができる。
キメラ抗原－ＶＬＰサブユニットまたはキメラ抗原決定基－ＶＬＰサブユニットは、一般に自己集合してＶＬＰを形成することができる。本明細書ではＶＬＰのサブユニットに融合されたエピトープを提示するＶＬＰもキメラＶＬＰと呼ぶ。示されるように、ウイルス様粒子は少なくとも１つのＶＬＰサブユニットを含むかまたはこれから構成される。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は、キメラＶＬＰサブユニットと非キメラＶＬＰサブユニット（すなわち抗原が融合されていないＶＬＰサブユニット）との混合物を含むかまたはこれから構成され、いわゆるモザイク粒子を与える。これは、ＶＬＰの形成、及びＶＬＰへの集合を確実とするうえで有利となりうる。これらの実施形態では、キメラＶＬＰサブユニットの割合は、１、２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５％またはそれ以上とすることができる。
隣接するアミノ酸残基を、ＶＬＰのサブユニットの配列のいずれかの末端に融合されるペプチドまたはエピトープの配列のいずれかの末端に、またはＶＬＰのサブユニットの配列内へのそのようなペプチド配列の内部挿入に付加することができる。グリシン残基及びセリン残基は、融合されるペプチドに付加される隣接配列中に使用するのに特に好ましいアミノ酸である。グリシン残基はさらなる柔軟性を与え、ＶＬＰサブユニットの配列に外来配列を融合させることによる潜在的な不安定化作用を減らすことができる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、Ｑβコートタンパク質に融合される。エピトープがＱβのＡ１タンパク質の切断型のＣ末端に融合されるかまたはＡ１タンパク質内に挿入された融合タンパク質コンストラクトが記載されている（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，３９：９－１５（１９９６））。Ａ１タンパク質は、ＵＧＡ終止コドンにおける抑制によって生成され、アミノ酸３２９個、またはＮ末端メチオニンの切断を考慮に入れた場合、アミノ酸３２８個の長さを有する。アラニン（Ｑβ ＣＰ遺伝子によってコードされる２番目のアミノ酸）の前のＮ末端メチオニンの切断は、通常、大腸菌で行われ、Ｑβコートタンパク質のＮ末端の場合も同様である。Ａ１遺伝子の部分、ＵＧＡアンバーコドンの３’末端は、アミノ酸１９５個の長さを有するＣＰ伸長部をコードしている。ＣＰ伸長部の７２位と７３位の間への少なくとも１つの抗原または抗原決定基の挿入は、本発明のさらなる実施形態を与える（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９：９－１５ （１９９６））。Ｃ末端切断型Ｑβ Ａ１タンパク質のＣ末端における抗原または抗原決定基の融合は、本発明のさらなる実施形態を与える。例えば、Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．，（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，３９：９－１５ （１９９６））は、１９位で切断されたＱβのＣＰ伸長部のＣ末端にエピトープが融合されたＱβ Ａ１融合タンパク質について記載している。
Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，３９： ９－１５ （１９９６））によって記載されているように、融合エピトープを提示する粒子の集合は、モザイク粒子を形成するうえでＡ１タンパク質－抗原融合体及び野生型ＣＰの両方の存在を通常は必要とする。しかしながら、ウイルス様粒子、及び本明細書では特に、少なくとも１つの抗原または抗原決定基が融合されたＶＬＰサブユニットのみで構成されたＲＮＡファージＱβのコートタンパク質のＶＬＰを含む実施形態も本開示の範囲内に含まれる。
モザイク粒子の生成は、多くの方法で行うことができる。Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ，３９：９－１５（１９９６）は、３つの方法を記載しており、これらをいずれも本開示の実施に用いることができる。第１のアプローチでは、ＶＬＰ上への融合エピトープの効率的な提示は、ＵＧＡコドンのＴｒｐへの翻訳をもたらす、クローニングされたＵＧＡサプレッサーｔＲＮＡをコードするプラスミドを保有する大腸菌株におけるＣＰとＣＰ伸長部との間にＵＧＡ終止コドンを有するＱβ Ａ１融合タンパク質をコードするプラスミドの発現によって媒介される（ｐＩＳＭ３００１プラスミド（Ｓｍｉｌｅｙ Ｂ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １３４：３３－４０（１９９３）））。別のアプローチでは、ＣＰ遺伝子終止コドンをＵＡＡに改変し、Ａ１タンパク質抗原融合体を発現する第２のプラスミドを共形質転換する。第２のプラスミドは異なる抗生物質耐性をコードし、複製起点は第１のプラスミドと適合性を有する（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９：９－１５（１９９６））。第３のアプローチでは、Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ， ３９：９－１５ （１９９６）の図１に記載されるように、ＣＰ及びＡ１タンパク質抗原融合体はバイシストロニック形態でコードされ、Ｔｒｐプロモーターなどのプロモーターに機能的に連結される。
いくつかの実施形態では、組換えＤＮＡ技術を利用して、異種タンパク質をＶＬＰタンパク質に融合させることができる（Ｋｒａｔｚ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：１９１５（１９９９））。例えば、本開示は、融合タンパク質または結合体を生成するために、抗原（またはその一部、好ましくは少なくともアミノ酸１０、２０または５０個）に組換えにより融合されるかまたは化学的に結合された（共有結合的及び非共有結合的な結合の両方を含む）ＶＬＰを包含する。融合は必ずしも直接的である必要はないが、リンカー配列を介して生じうる。より一般的には、ウイルス様粒子に融合、連結、または他の方法で結合されたエピトープが、本発明に従って抗原として使用される場合、エピトープの一方または両方の末端にスペーサーまたはリンカー配列が付加される。このようなリンカー配列は、好ましくは、プロテアソーム、エンドソームまたは細胞の他の小胞区画のプロテアーゼによって認識される配列を含む。
結合の１つの方法は、ペプチド結合によるものであり、結合体は、連続したポリペプチド、すなわち融合タンパク質でありうる。いくつかの実施形態において、異なるペプチドまたはポリペプチドは、互いにインフレームで連結されて連続したポリペプチドを形成する。したがって、融合タンパク質の第１の部分は抗原または免疫原を含み、第１の部分のＮ末端側またはＣ末端側の融合タンパク質の第２の部分はＶＬＰを含む。あるいは、ＶＬＰ内への内部挿入を、抗原の両末端の任意の連結配列とともに、本発明に従って使用することもできる。
柔軟なリンカー配列（例えば、［Ｇｌｙ４ Ｓｅｒ］２のようなポリグリシン／ポリセリン含有配列（Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ ２０３：４６－８８（１９９１））を融合タンパク質の抗原とリガンドの間に挿入することができる。また、融合タンパク質は、例えば標識または精製の目的で融合タンパク質が抗体（例えばモノクローナル抗体）と結合することを可能にする「エピトープタグ」を含むように構成することもできる。エピトープタグの１つの例として、モノクローナル抗体ＹＬ１／２によって認識されるＧｌｕ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅトリペプチドがある。
本開示はまた、ＶＬＰをコードする配列と抗原／免疫原をコードする配列とを含むキメラＤＮＡにも関する。ＤＮＡは、例えば、バキュロウイルスで形質転換した昆虫細胞で、または酵母で、または細菌で発現させることができる。発現系に関する制限はなく、発現系の幅広い選択肢が通常の使用のために利用可能である。好ましくは、タンパク質を大量に発現させることが可能な系が用いられる。一般的に、細菌発現系がその効率のために使用される。本発明の範囲内での使用に適した細菌発現系の１つの例としてＣｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７１：１１０９－１１１７（１９９０）、Ｂｏｒｉｓｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：３６９６－３７０１（１９９３）、及びＳｔｕｄｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：６０－８９（１９９０）に記載されるものがある。適当な酵母発現系の１つの例として、Ｅｍｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：２３１－３ （１９９０）に記載されるものがあり、従来よりカプシドタンパク質を調製するために使用されているバキュロウイルス系も適当である。構成的または誘導性の発現系を使用することもできる。利用可能な発現系の選択及び可能な改変によって、タンパク質が得られる形態を制御することができる。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、少なくとも１つの共有結合によってウイルス様粒子に結合される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は少なくとも１つの共有結合によってウイルス様粒子に結合され、この共有結合は、それぞれ抗原または抗原決定基のアレイ及び抗原または抗原決定基ＶＬＰ結合体を与える非ペプチド結合である。この抗原または抗原決定基のアレイ及び結合体は、少なくとも１つの抗原または抗原決定基が方向付けられた形でＶＬＰに結合されることから、通常は好ましくは反復的で規則的な構造をそれぞれ有する。いくつかの実施形態では、１２０個以上、１８０個以上、２７０個以上、及び３６０個以上の抗原がＶＬＰに結合される。反復的かつ規則的な抗原または抗原決定基－ＶＬＰアレイ及び結合体の形成は、以下より明らかとなるように、それぞれＶＬＰに対する少なくとも１つの抗原または抗原決定基の方向付けられ、指向性を有し、規定された結合及び連結によってそれぞれ確実なものとされる。さらに、ＶＬＰの典型的な固有の高度に反復的及び組織化された構造は、有利な点として、それぞれ高度に組織化された反復的な抗原または抗原決定基－ＶＬＰアレイ及び結合体を与える高度に規則的かつ反復的な形での抗原または抗原決定基の提示に寄与する。
Ｑβコートタンパク質のＶＬＰまたはカプシドはその表面に規定の数のリシン残基を提示し、３個のリシン残基がカプシドの内部を向いてＲＮＡと相互作用し、他の４個のリシン残基がカプシドの外部に露出した規定のトポロジーを有する。これらの規定の特性は、リシン残基がＲＮＡと相互作用する粒子の内側に対する結合よりも、粒子の外側に対する抗原の結合にとって有利である。他のＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰもまた、その表面に規定の数のリシン残基を有し、これらのリシン残基の規定のトポロジーを有する。
いくつかの実施形態では、第１の結合部位はリシン残基であり、及び／または第２の結合部位はスルフヒドリル基またはシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合部位はリシン残基であり、第２の結合部位はシステイン残基である。
いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基はシステイン残基を介して、ＲＮＡファージのコートタンパク質のＶＬＰ、特にＱβのコートタンパク質のＶＬＰのリシン残基に結合される。
担体としてＶＬＰを使用することで、異なる抗原密度を有する安定した抗原アレイ及び結合体の形成がそれぞれ可能となる。特に、ＲＮＡファージのＶＬＰの使用、及び本明細書では特にＲＮＡファージＱβのコートタンパク質のＶＬＰの使用により、極めて高いエピトープ密度を得ることができる。特に、例えばヒトＡβ１－６ペプチドをＱβコートタンパク質のＶＬＰに結合させることによって、サブユニット当たり１．５個を超えるエピトープの密度が得られている（ＷＯ２００４／０１６２８２号）。高いエピトープ密度を有するＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰの組成物の調製は、本出願の教示を用いて行うことができる。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基がＶＬＰ Ｑβコートタンパク質に結合される場合、サブユニット当たりの抗原または抗原決定基の平均数として０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、またはそれ以上が用いられる。
第２の結合部位は、本明細書で定義されるように、抗原または抗原決定基に天然または非天然に存在しうる。抗原または抗原決定基上に適当な天然の第２の結合部位が存在しない場合、非天然の第２の結合部位を抗原に付加する必要がある。
上記で述べたように、Ｑβコートタンパク質のＶＬＰの表面には４個のリシン残基が露出している。通常、これらの残基は、架橋分子と反応して誘導体化される。露出したリシン残基のすべてが抗原に結合できるわけではない場合、架橋剤と反応したリシン残基は、誘導体化段階後、四級アミノ基に架橋分子が結合したままとなる。これは、１つまたは複数の正電荷の消失をもたらし、ＶＬＰの溶解性及び安定性にとって不利となりうる。後述する開示されるＱβコートタンパク質変異体におけるように、リシン残基の一部のものをアルギニンに置換することにより、アルギニン残基は架橋剤と反応しないことから、正電荷の過剰な消失が防止される。さらに、アルギニンによるリシン残基の置換は、抗原との反応に利用可能な部位が少なくなるため、より明確な抗原アレイを与えることができる。
いくつかの実施形態では、露出したリシン残基は、本明細書に開示される以下のＱβコートタンパク質変異体及び変異型Ｑβ ＶＬＰ、すなわち、Ｑβ－２４０（Ｌｙｓ１３－Ａｒｇ、配列番号１２５）、Ｑβ－２５０（Ｌｙｓ ２－Ａｒｇ、Ｌｙｓ１３－Ａｒｇ、配列番号１２７）及びＱβ－２５９（Ｌｙｓ ２－Ａｒｇ、Ｌｙｓ１６－Ａｒｇ、配列番号１２９）においてアルギニンに置換される。
いくつかの実施形態では、Ｑβ変異コートタンパク質は、さらにより高い密度の抗原のアレイを得るのに適したさらに１個のリシン残基を含む。この変異型Ｑβコートタンパク質Ｑβ－２４３（Ａｓｎ １０－Ｌｙｓ、配列番号１２６）をクローニングし、タンパク質を発現させ、カプシドまたはＶＬＰを単離、精製したところ、さらなるリシン残基の導入はカプシドまたはＶＬＰへのサブユニットの自己組織化と適合性があることが示された。したがって、抗原または抗原決定基のアレイ及び結合体を、それぞれ、Ｑβコートタンパク質変異体のＶＬＰを用いて調製することができる。ＶＬＰ、特にＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰに抗原を結合させるための特に好ましい方法は、ＲＮＡファージのコートタンパク質のＶＬＰの表面に存在するリシン残基と、抗原に付加されたシステイン残基とを連結することである。システイン残基が第２の結合部位として効果的であるためには、スルフヒドリル基が結合に利用可能でなければならない。したがって、システイン残基はその還元状態になければならない。つまり、遊離システインまたは遊離スルフヒドリル基を有するシステイン残基が存在する必要がある。第２の結合部位として機能するシステイン残基が酸化型である場合、例えばそれがジスルフィド架橋を形成している場合、このジスルフィド架橋の例えばＤＴＴ、ＴＣＥＰまたはβ－メルカプトエタノールによる還元が必要である。還元剤の濃度及び抗原に対する還元剤のモル過剰を、各抗原について調整する必要がある。１０μＭ以下の低濃度から開始し、必要に応じて１０～２０ｍＭ以上の還元剤の範囲で滴定範囲を試験し、担体への抗原の結合を評価した。ＷＯ０２／０５６９０５号に記載されるように低濃度の還元剤はカップリング反応と適合性があるものの、当業者であれば理解されるように、より高い濃度ではカップリング反応を阻害し、その場合、例えば透析、ゲル濾過または逆相ＨＰＬＣによって還元剤を除去するか、またはその濃度を低下させなければならない。透析または平衡化緩衝液のｐＨは７より低いことが有利であり、好ましくは６である。低ｐＨの緩衝液と抗原活性または安定性との適合性は試験する必要がある。
ＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰ上のエピトープ密度は、架橋剤及び他の反応条件の選択によって調節することができる。例えば、架橋剤であるＳｕｌｆｏ－ＧＭＢＳ及びＳＭＰＨは、通常、高いエピトープ密度に達することを可能とする。誘導体化は、高濃度の反応物質によって正の影響を受けるため、反応条件の操作を用いてＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰ、特にＱβコートタンパク質のＶＬＰに結合される抗原の数を制御することができる。
非天然の第２の結合部位の設計に先立って、第２の結合部位を融合、挿入、または一般的に操作によって付与する位置を選択する必要がある。第２の結合部位の位置の選択は、例として、抗原の結晶構造に基づいたものとすることができる。抗原のこのような結晶構造から、分子のＣ末端またはＮ末端のアベイラビリティ（例えば溶媒へのそれらのアクセス性により測定される）、またはシステイン残基などの第２の結合部位としての使用に適した残基の溶媒への曝露に関する情報を得ることができる。露出したジスルフィド架橋は、Ｆａｂフラグメントの場合と同様、例えば２－メルカプトエチルアミン、ＴＣＥＰ、β－メルカプトエタノールまたはＤＴＴによる穏やかな還元によって１個のシステイン残基に一般的に変換できることから、やはり第２の結合部位のソースとなりうる。抗原の免疫原性に影響を及ぼさない穏やかな還元条件が選択される。一般的に、自己抗原による免疫が、この自己抗原とその天然リガンドとの相互作用を阻害することを目的としている場合、第２の結合部位は天然リガンドとの相互作用部位に対する抗体の生成を可能とするように付加される。したがって、第２の結合部位の位置は、第２の結合部位またはそれを含む任意のアミノ酸リンカーによる立体障害が防止されるように選択される。さらなる実施形態では、自己抗原とその天然リガンドとの相互作用部位とは異なる部位に対する抗体応答が望ましい。かかる実施形態では、第２の結合部位は、自己抗原とその天然リガンドとの相互作用部位に対する抗体の生成を防止するように選択することができる。
第２の結合部位の位置を選択する際のその他の基準としては、抗原のオリゴマー化状態、オリゴマー化部位、補因子の存在、ならびに抗原の改変が自己抗原の機能と、または自己抗原を認識する抗体の生成と適合するような抗原の構造及び配列中の部位を開示する実験的証拠の存在が挙げられる。
いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、それぞれコア粒子及びＶＬＰまたはＶＬＰサブユニット上の第１の結合部位と結合することができる単一の第２の結合部位または単一の反応性結合部位を含む。これはさらに、それぞれコア粒子及びＶＬＰと、少なくとも１個、一般的には複数個、好ましくは１０、２０、４０、８０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０、３００、３６０、４００、４５０個を超える抗原との規定の均一な結合及び結合を確実とする。したがって、抗原上の単一の第２の結合部位または単一の反応性結合部位が与えられることで、単一かつ均一な種類の結合（ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を確実とし、それぞれ極めて高度に規則的な反復配列を与える。例えば、結合が、それぞれリシン（第１の結合部位として）及びシステイン（第２の結合部位として）の相互作用を介して行われる場合、本発明の一実施形態によれば、抗原当たり１個のみのシステイン残基が、このシステイン残基が抗原上に天然または非天然に存在するかどうかによらず、ＶＬＰ及びコア粒子の第１の結合部位とそれぞれ結合することができる。
いくつかの実施形態では、抗原への第２の結合部位の操作による付与は、本発明の開示による第２の結合部位として適当なアミノ酸を含むアミノ酸リンカーの融合を必要とする。したがって、いくつかの実施形態では、アミノ酸リンカーは、少なくとも１つの共有結合を介して抗原または抗原決定基に結合される。いくつかの実施形態では、アミノ酸リンカーは、第２の結合部位を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸リンカーは、スルフヒドリル基またはシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーのアミノ酸はシステインである。
いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子は少なくとも１つの第１の結合部位を含み、抗原または抗原決定基は少なくとも１つの第２の結合部位を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合部位は、アミノ基またはリシン残基を含む。いくつかの実施形態では、第２の結合部位は、（ａ）上記の抗原または抗原決定基に天然には存在しない結合部位、及び（ｂ）上記の抗原または抗原決定基に天然に存在する結合部位からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第２の結合部位は、スルフヒドリル基またはシステイン残基を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス様粒子への抗原または抗原決定基の結合は、第１の結合部位と第２の結合部位との結合によって行われ、結合は少なくとも１つのペプチド結合を介し、抗原または抗原決定基とウイルス様粒子とは上記の結合を介して相互作用して規則的かつ反復的なアレイを形成する。いくつかの実施形態では、第１の結合部位はリシン残基であり、第２の結合部位はシステイン残基である。いくつかの実施形態では、第１の結合部位はアミノ基であり、第２の結合部位はスルフヒドリル基である。
本開示は、広範な抗原に適用可能である。いくつかの実施形態において、抗原は、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである。いくつかの実施形態では、抗原はＤＮＡである。抗原は、脂質、炭水化物、または有機分子、特にニコチンなどの小さな有機分子の場合もある。
ＶＬＰを製造し、ＶＬＰにＲＬＲアゴニストをパッケージングするための方法
それぞれ、ＶＬＰへの自己組織化をもたらすコートタンパク質及び変異コートタンパク質の発現のための方法は、その全体を援用するところの米国特許第７，１３８，２５２号に記載されている。適当な大腸菌株としては、これらに限定されるものではないが、大腸菌Ｋ８０２、ＪＭ １０９、ＲＲ１が挙げられる。適当なベクター及び菌株ならびにそれらの組み合わせは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びカプシド形成及び集合によって、場合により、最初にゲル濾過によってカプシドを精製した後、免疫拡散アッセイ（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ試験）または電子顕微鏡法（Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １３７：１３３－３７（１９９３））でそれらを試験することにより、それぞれ、コートタンパク質及び変異コートタンパク質の発現を試験することによって同定することができる。
ＲＮＡファージ由来のＶＬＰを使用する利点は、手頃なコストで大量の材料の生産を可能にする、細菌におけるそれらの高い発現収率である。商業規模に拡張可能な方法を含む、本明細書に記載されるウイルス様粒子を製造するための方法は、それぞれ、本明細書に参照によりそれらの全体を援用する米国特許第９，５１８，０９５号及び第９，６５７，０６５号に記載されている。
本開示はまた、ＶＬＰ及びＶＬＰ内にパッケージングされたＲＬＲアゴニストを含む組成物を製造する方法であって、ＶＬＰをＲＬＲアゴニストとインキュベートすることと、ＲＮアーゼを加えることと、上記の組成物を精製することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗原または抗原決定基を上記のウイルス様粒子と結合させる工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子をＲＬＲアゴニストとインキュベートする前にウイルス様粒子と結合させられる。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、組成物を精製した後でウイルス様粒子と結合させられる。いくつかの実施形態では、方法は、ＶＬＰをＲＮアーゼとインキュベートすることと、ＲＬＲアゴニストを添加することと、組成物を精製することと、を含む。いくつかの実施形態では、方法は、抗原または抗原決定基を上記のウイルス様粒子と結合させる工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子をＲＮアーゼとインキュベートする前にウイルス様粒子と結合させられる。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、組成物を精製した後でウイルス様粒子と結合させられる。いくつかの実施形態では、ＶＬＰは細菌発現系で発現させられる。別の実施形態では、ＲＮアーゼは、ＲＮアーゼＡである。
本開示は、ＶＬＰ内にパッケージングされたＲＬＲアゴニストを含む組成物を製造する方法であって、ＶＬＰを分解することと、ＲＬＲアゴニストを加えることと、ＶＬＰを再集合させることと、を含む、方法をさらに提供する。いくつかの実施形態では、分解されたＶＬＰは、ＶＬＰを製造する際に生成される。いくつかの実施形態では、分解されたＶＬＰは、コートタンパク質の単離された二量体（例えば、Ｑβ二量体）を含む。いくつかの実施形態では、単離された二量体は、ＲＬＲアゴニストの周囲で集合してＶＬＰを形成し、アゴニストをＶＬＰ内にパッケージングする。この方法は、分解されたＶＬＰの核酸を除去することと、及び／または再集合後に組成物を精製することと、をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、方法は、抗原または抗原決定基をウイルス様粒子と結合させる工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子を分解する前にウイルス様粒子と結合させられる。いくつかの実施形態では、抗原または抗原決定基は、ウイルス様粒子を再集合させた後、好ましくは組成物を精製した後にウイルス様粒子と結合させられる。
本開示は、ＶＬＰに抗原または抗原決定基を結合させる方法を提供する。示されるように、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの抗原または抗原決定基は、化学的架橋によって、通常、好ましくはヘテロ二官能性架橋剤を使用することによってＶＬＰに結合される。いくつかのヘテロ二官能性架橋剤が当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、ヘテロ二官能性架橋剤は、第１の結合部位、すなわちＶＬＰまたは少なくとも１つのＶＬＰサブユニットのリシン残基の側鎖アミノ基と反応することができる官能基、及び第２の結合部位、すなわち抗原または抗原決定基に融合され、場合により還元によって反応に利用可能となるシステイン残基と反応することができるさらなる官能基を含む。一般的には誘導体化と呼ばれるこの手順の最初の工程は、ＶＬＰと架橋剤との反応である。この反応の生成物は、活性化担体とも呼ばれる活性化ＶＬＰである。第２の工程では、未反応の架橋剤をゲル濾過や透析などの通常の方法を用いて除去する。第３の工程では、抗原または抗原決定基を活性化ＶＬＰと反応させるが、この工程は一般的にはカップリング工程と呼ばれる。未反応の抗原または抗原決定基は、場合により、第４の工程で例えば透析によって除去することができる。いくつかのヘテロ二官能性架橋剤が当該技術分野で知られている。これらには、架橋剤であるＳＭＰＨ（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｓｕｌｆｏ－ＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＥＭＣＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＧＭＢＳ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＩＡＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＰＢ、Ｓｕｌｆｏ－ＳＭＣＣ及びＳＶＳＢ、ＳＩＡ、及び例えばＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，ＵＳＡ）より販売される、アミノ基に対して反応性を有する１つの官能基及びシステイン残基に対して反応性を有する１つの官能基を有する他の架橋剤が含まれる。上記の架橋剤はいずれもチオエーテル結合を形成させる。適当な別のクラスの架橋剤として、カップリング時の抗原または抗原決定基とＶＬＰとの間のジスルフィド結合の導入を特徴とするものがある。一実施形態では、このクラスに属する架橋剤には、例えばＳＰＤＰ及びＳｕｌｆｏ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）が含まれる。架橋剤によるＶＬＰの誘導体化の程度は、それぞれの反応パートナーの濃度、一方の試薬の他方に対する過剰量、ｐＨ、温度及びイオン強度などの様々な実験条件によって影響されうる。カップリングの程度、すなわちＶＬＰのサブユニット当たりの抗原または抗原決定基の量は、ワクチンの要件に合うように上述の実験条件を変えることによって調整することができる。
いくつかの実施形態では、ＶＬＰに抗原または抗原決定基を結合させる方法は、ＶＬＰの表面上のリシン残基を抗原または抗原決定基上のシステイン残基と連結することを含む。いくつかの実施形態では、ＶＬＰとカップリングさせるために、第２の結合部位としてまたはその一部として、システイン残基を含むアミノ酸リンカーの抗原または抗原決定基との融合が必要となりうる。
いくつかの実施形態では、柔軟なアミノ酸リンカーが使用される。アミノ酸リンカーの例は、（ａ）ＣＧＧ、（ｂ）Ｎ末端γ１－リンカー、（ｃ）Ｎ末端γ３リンカー、（ｄ）Ｉｇヒンジ領域（ｅ）Ｎ末端グリシンリンカー、（ｆ）（Ｇ）ｋＣ（Ｇ）ｎ、ただし、ｎ＝０～１２かつｋ＝０～５、（ｇ）Ｎ末端グリシン－セリンリンカー、（ｈ）（Ｇ）ｋＣ（Ｇ）ｍ（Ｓ）ｌ（ＧＧＧＧＳ）ｎ、ただし、ｎ＝０～３、ｋ＝０～５、ｍ＝０～１０、ｌ＝０～２（配列番号１８８）、（ｉ）ＧＧＣ、（ｋ）ＧＧＣ－ＮＨ２、（ｌ）Ｃ末端γ１－リンカー、（ｍ）Ｃ末端γ３リンカー、（ｎ）Ｃ末端グリシンリンカー、（ｏ）（Ｇ）ｎＣ（Ｇ）ｋ、ただし、ｎ＝０～１２及びｋ＝０～５、（ｐ）Ｃ末端グリシン－セリンリンカー、（ｑ）（Ｇ）ｍ（Ｓ）ｌ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（Ｇ）ｏＣ（Ｇ）ｋ、ただし、ｎ＝０～３、ｋ＝０～５、ｍ＝０～１０、ｌ＝０～２、及びｏ＝０～８（配列番号１８９）からなる群から選択される。
アミノ酸リンカーのさらなる例としては、いずれも第２の結合部位としてのシステイン残基及び場合によりさらなるグリシン残基を含む、免疫グロブリンのヒンジ領域、グリシンセリンリンカー（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１９０）、及びグリシンリンカー（Ｇ）ｎがある。アミノ酸リンカーの一般的な例としては、Ｎ末端γ１：ＣＧＤＫＴＨＴＳＰＰ（配列番号１９１）、Ｃ末端γ１：ＤＫＴＨＴＳＰＰＣＧ（配列番号１９２）、Ｎ末端γ３：ＣＧＧＰＫＰＳＴＰＰＧＳＳＧＧＡＰ（配列番号１９３）、Ｃ末端γ３：ＰＫＰＳＴＰＰＧＳＳＧＧＡＰＧＧＣＧ（配列番号１９４）、Ｎ末端グリシンリンカー：ＧＣＧＧＧＧ（配列番号１９５）、Ｃ末端グリシンリンカー：ＧＧＧＧＣＧ（配列番号１９６）、Ｃ末端グリシン－リシンリンカー：ＧＫＫＫＧＣ（配列番号１９７）、Ｎ末端グリシン－リシンリンカー：ＣＧＫＫＧＧ（配列番号１９８）がある。
いくつかの実施形態では、疎水性抗原または抗原決定基がＶＬＰに結合される場合の他のアミノ酸リンカーとして、ＣＧＫＫＧＧ（配列番号１９９）、またはＮ末端リンカーについてはＣＧＤＥＧＧ（配列番号２００）が、またはＣ末端リンカーについてはＧＧＫＫＧＣ（配列番号２０１）及びＧＧＥＤＧＣ（配列番号２０２）がある。Ｃ末端リンカーの場合、末端システインは、場合によりＣ末端アミド化される。
いくつかの実施形態では、ペプチドのＣ末端ではＧＧＣＧ（配列番号２０３）、ＧＧＣまたはＧＧＣ－ＮＨ２（「ＮＨ２」はアミド化を意味する）リンカーが、またはそのＮ末端ではＣＧＧがアミノ酸リンカーとして使用される。一般に、グリシン残基が嵩高いアミノ酸と第２の結合部位として用いられるシステインとの間に挿入されることで、カップリング反応におけるより嵩高いアミノ酸の潜在的な立体障害が防止される。いくつかの実施形態では、アミノ酸リンカーＧＧＣ－ＮＨ２が、抗原または抗原決定基のＣ末端に融合される。
抗原または抗原決定基に存在するシステイン残基は、活性化ＶＬＰ上のヘテロ二官能性架橋剤と反応するためにはその還元状態にある必要がある。つまり、遊離システインまたは遊離スルフヒドリル基を有するシステイン残基が存在しなければならない。結合部位として機能するシステイン残基が酸化型である場合、例えばそれがジスルフィド架橋を形成している場合、このジスルフィド架橋の例えばＤＴＴ、ＴＣＥＰまたはβ－メルカプトエタノールによる還元が必要である。ＷＯ０２／０５６９０号に記載されるように低濃度の還元剤はカップリングと適合性があるが、当業者であれば理解されるように、より高い濃度ではカップリング反応を阻害し、その場合、例えば透析、ゲル濾過または逆相ＨＰＬＣによってカップリングの前に還元剤を除去するか、またはその濃度を低下させなければならない。
上記に述べた方法によるヘテロ二官能性架橋剤を使用することによるＶＬＰに対する抗原または抗原決定基の結合は、方向性を有する形でのＶＬＰと抗原または抗原決定基とのカップリングを可能にする。ＶＬＰに抗原または抗原決定基を結合させる他の方法としては、カルボジイミドＥＤＣ、及びＮＨＳを使用して抗原または抗原決定基をＶＬＰと架橋させる方法が含まれる。さらなる方法では、抗原または抗原決定基は、グルタルアルデヒド、ＤＳＧ、ＢＭ［ＰＥＯ］４、ＢＳ３（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，ＵＳＡ）、またはＶＬＰのアミン基またはカルボキシル基に対して反応性を有する官能基を有する他の既知のホモ二官能性架橋剤などのホモ二官能性架橋剤を使用してＶＬＰに結合される。
ＶＬＰを抗原または抗原決定基に結合させる他の方法としては、例えばＷＯ００／２３９５５号に記載されるような、ＶＬＰをビオチン化し、抗原または抗原決定基をストレプトアビジン融合タンパク質として発現させる方法、または抗原または抗原決定基とＶＬＰの両方をビオチン化する方法が含まれる。この場合、抗原または抗原決定基は、ストレプトアビジンに対する抗原または抗原決定基の比率を調整することによって最初にストレプトアビジンまたはアビジンと結合させることで、次の工程で加えられるＶＬＰの結合に遊離結合部位が利用可能であるようにすることができる。あるいは、すべての成分を「ワンポット」反応で混合してもよい。受容体及びリガンドの可溶性形態が利用可能であり、ＶＬＰまたは抗原もしくは抗原決定基と架橋させることが可能である場合、他のリガンド－受容体のペアを、ＶＬＰに抗原または抗原決定基を結合させるための結合剤として使用することができる。あるいは、リガンドまたは受容体のいずれか一方を抗原または抗原決定基に融合させ、それぞれ受容体、またはリガンドに化学的に結合または融合されたＶＬＰへの結合を媒介することもできる。融合はまた、挿入または置換によって行うこともできる。
医薬組成物及び製剤
特定の実施形態では、本発明は、ＲＬＲアゴニストを、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤及び／またはアジュバントとともに含む医薬組成物を提供する。
特定の実施形態では、許容可能な製剤材料は、好ましくは、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。特定の実施形態では、製剤材料（複数可）は、皮下（ｓ．ｃ）及び／または静脈内（ＩＶ）投与用である。特定の実施形態において、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張度、匂い、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着または浸透を改変、維持または保存するための製剤材料を含むことができる。特定の実施形態において、適当な製剤材料としては、これらに限定されるものではないが、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシンなど）；抗微生物剤；抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩または他の有機酸など）；増量剤（マンニトールまたはグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β－シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；及びその他の炭水化物（ブドウ糖、マンノースまたはデキストリンなど）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）；着色剤、香料及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩を形成する対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸または過酸化水素など）；溶媒（グリセリン、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）；懸濁化剤；界面活性剤または湿潤剤（プルロニック（登録商標）、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサポールなど）；安定性向上剤（スクロースまたはソルビトールなど）；張度増強剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムまたはカリウム、マンニトールソルビトールなど）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／または医薬アジュバントが挙げられる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５））。特定の実施形態では、製剤は、ＰＢＳ；２０ｍＭ ＮａＯＡＣ（ｐＨ５．２）、５０ｍＭ ＮａＣｌ；及び／または１０ｍＭ ＮＡＯＡＣ（ｐＨ５．２）、９％スクロースを含む。特定の実施形態において、最適な医薬組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形式、及び所望の投与量に応じて当業者によって決定される。例えば、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓを参照されたい。特定の実施形態において、そのような組成物は、ＲＬＲアゴニストの物理的状態、安定性、インビボ放出速度、及び／またはインビボクリアランス速度に影響を及ぼしうる。
特定の実施形態において、医薬組成物中の主要なビヒクルまたは担体は、本質的に水性または非水性のいずれかであってよい。例えば、特定の実施形態において、適当なビヒクルまたは担体は、注射用水、生理食塩水または人工脳脊髄液とすることができ、非経口投与用の組成物において一般的な他の材料が添加されてもよい。特定の実施形態において、生理食塩水は、等張性リン酸緩衝生理食塩水を含む。特定の実施形態において、中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。特定の実施形態において、医薬組成物は、約ｐＨ７．０～８．５のＴｒｉｓ緩衝液、または約ｐＨ４．０～５．５の酢酸緩衝液を含み、ソルビトールまたはその適当な代替物をさらに含むことができる。特定の実施形態においてＲＬＲアゴニストを含む組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態の任意の配合剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、前出）と混合することによって保存用に調製することができる。さらに、特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストを含む組成物は、スクロースなどの適切な賦形剤を用いて凍結乾燥物として製剤化することができる。
特定の実施形態において、医薬組成物は、非経口送達用に選択することができる。特定の実施形態において、組成物は、吸入または例えば経口などの消化管を介した送達用に選択することができる。かかる薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の技能の範囲内である。
特定の実施形態では、製剤成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。特定の実施形態では、緩衝剤を用いて組成物を生理学的ｐＨまたはわずかに低いｐＨ、一般的には約５～約８のｐＨ範囲内に維持する。
特定の実施形態では、非経口投与が想定される場合、治療用組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中にＲＬＲアゴニストを含む、パイロジェンフリーの非経口的に許容される水溶液の形態とすることができる。特定の実施形態では、非経口注射用のビヒクルは、ＲＬＲアゴニストが無菌等張溶液として配合され、適切に保存されている無菌蒸留水である。特定の実施形態では、製剤は、製品の制御された、または持続的放出を可能とする、注射可能なミクロスフェア、生体浸食性粒子、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸またはポリグリコール酸またはポリエチレンイミン（例えば、ＪｅｔＰＥＩ（登録商標））など）、ビーズまたはリポソームなどの送達ビヒクルまたは物質と、所望の分子との配合物を含むことができ、その後、これをデポー注射により投与することができる。特定の実施形態では、ヒアルロン酸も使用することができ、循環中の持続時間の延長を促進する効果を与えることができる。特定の実施形態では、埋め込み式の薬物送達装置を用いて所望の分子を導入することができる。
特定の実施形態では、医薬組成物は、吸入用に製剤化することができる。特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、吸入用の乾燥粉末として製剤化することができる。特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストを含む吸入溶液を、エアロゾル投与用の噴射剤とともに製剤化することができる。特定の実施形態では、溶液を噴霧化することができる。ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／００１８７５には経肺投与についてさらに記載されており、当該出願には、化学的に修飾されたタンパク質の肺投与について記載されている。
特定の実施形態では、製剤を経口投与することが想到される。特定の実施形態では、この様式で投与されるＲＬＲアゴニストは、錠剤及びカプセルなどの固体剤形の配合において慣用的に使用されている担体とともに、またはこれを用いずに製剤化することができる。特定の実施形態では、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大化され、全身循環以前の分解が最小限に抑えられるような消化管内における時点で製剤の活性部分を放出するように設計することができる。特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストの吸収を促進するための少なくとも１つのさらなる薬剤を含めることができる。特定の実施形態では、希釈剤、香味料、低融点ワックス、植物油、滑沢剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤を用いることもできる。
特定の実施形態では、医薬組成物は、錠剤の製造に適した非毒性賦形剤との混合物中に有効量のＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを含むことができる。特定の実施形態では、錠剤を滅菌水、または別の適切なビヒクルに溶解することによって、溶液を単位用量形態で調製することができる。特定の実施形態では、適切な賦形剤としては、これらに限定されるものではないが、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、もしくはリン酸カルシウムなどの不活性希釈剤；または、例えばデンプン、ゼラチン、もしくはアカシアなどの結合剤；または、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクなどの潤滑剤が挙げられる。
持続性または徐放製剤中にＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを含む製剤を含むさらなる医薬組成物は、当業者には明らかであろう。特定の実施形態では、リポソーム担体、生体浸食性微粒子または多孔質ビーズ及びデポー注射剤などの様々な他の持続性または徐放手段を製剤化するための技術も、当業者に周知である。例えば、医薬組成物を送達するための多孔質ポリマー微粒子の徐放について記載しているＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９を参照されたい。特定の実施形態では、徐放性製剤は、成形物品、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリクスを含むことができる。徐放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及びＥＰ０５８，４８１）、Ｌ－グルタミン酸とγ－エチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７，１９８３）、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５： １６７－２７７ （１９８１）及びＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８－１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，前出）またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８）を挙げることができる。特定の実施形態では、徐放性組成物は、当該技術分野では周知のいくつかの方法のいずれかによって調製することができるリポソームを含んでもよい。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８－３６９２ （１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６及びＥＰ１４３，９４９を参照されたい。
インビボ投与に用いられる医薬組成物は一般的に無菌のものである。特定の実施形態では、これは、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に実現可能である。組成物が凍結乾燥される特定の実施形態では、この方法を用いた滅菌は、凍結乾燥及び再溶解の前または後に行うことができる。特定の実施形態において、非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態または溶液中で保存することができる。特定の実施形態では、非経口組成物は、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈内注射用溶液のバッグまたはバイアルに一般的に入れられる。
特定の実施形態では、医薬組成物が製剤化された後、これを、溶液、懸濁液、ゲル、エマルション、固体として、または脱水もしくは凍結乾燥された粉末として、滅菌バイアル中で保存することができる。特定の実施形態では、かかる製剤は、即時使用形態、または投与前に再溶解される形態（例えば、凍結乾燥された）のいずれかで保存することができる。
特定の実施形態では、単回用量投与単位を与えるためのキットが提供される。特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器の両方を含むことができる。特定の実施形態では、シングルチャンバー型及びマルチチャンバー型のプレフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジ及びリオシリンジ）を含むキットが含まれる。
特定の実施形態では、治療に用いられるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを含む医薬組成物の有効量は、例えば、治療の背景及び目的に依存する。したがって、当業者には、特定の実施形態に基づく治療用の適切な投与量レベルは、投与される分子、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰが用いられる適応症、投与経路、ならびに患者のサイズ（体重、体表面または臓器のサイズ）及び／または状態（年齢及び一般的な健康状態）に応じて異なることが理解されよう。特定の実施形態では、臨床医は、最適な治療効果を得るために、投与量を力価測定し、投与経路を変更することができる。
特定の実施形態では、投薬の頻度は、使用される製剤中のＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰの薬物動態パラメータを考慮に入れたものとなる。特定の実施形態では、臨床医は、所望の効果が得られる投与量に達するまで組成物を投与する。したがって、特定の実施形態では、組成物は、単回用量として、または時間をかけて複数用量（同量の所望の分子を含む場合も含まない場合もある）として、または埋め込み装置またはカテーテルによる連続注入として投与することができる。適切な投与量のさらなる改良が当業者によって日常的に行われるが、これは当業者によって日常的に実施される業務の範囲内のものである。特定の実施形態では、適切な投与量は、適切な用量反応データを使用して決定することができる。
特定の実施形態では、医薬組成物の投与経路は、既知の方法、例えば、経口、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、皮下、眼内、動脈内、門脈内、または病巣内注射による経路；徐放システムによる、または埋め込み装置によるものである。特定の実施形態では、組成物は、ボーラス注射によって、または注入によって連続的に、または埋め込み装置によって投与することができる。特定の実施形態では、併用療法の個々の要素を異なる経路によって投与することができる。
特定の実施形態では、組成物は、膜、スポンジ、または所望の分子を吸収またはカプセル化させた別の適切な材料を埋め込むことによって局所的に投与することができる。埋め込み装置が使用される特定の実施形態において、装置は、任意の適切な組織または器官内に埋め込むことができ、所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボーラス、または連続投与によって行われる。特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストを含む医薬組成物をエクスビボで使用することが望ましい場合がある。その場合、患者から取り出された細胞、組織及び／または臓器を、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを含む医薬組成物に曝露し、その後、これらの細胞、組織及び／または臓器を患者に体内に再び移植する。
特定の実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、アゴニストを発現及び分泌するように本明細書に記載されるような方法を使用して遺伝子操作された特定の細胞を移植することによって送達することができる。特定の実施形態において、かかる細胞は、動物またはヒトの細胞であってよく、自家、他家、または異種であってよい。特定の実施形態では、細胞は不死化することができる。特定の実施形態では、免疫応答の可能性を減らすため、周囲組織の浸潤を防ぐように細胞をカプセル化することができる。特定の実施形態では、カプセル化材料は、タンパク質産物（複数可）の放出は可能とするが、患者の免疫系または周囲組織からの他の有害な因子による細胞の破壊を防ぐ、通常は生体適合性の半透性ポリマー封入材料または膜である。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の減少もしくは阻害を必要とする対象においてそれを行うための本開示に基づくＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、ポリエチエンイミン（ＰＥＩ）担体中に配合される。いくつかの実施形態では、ＰＥＩ担体は、ＪｅｔＰＥＩ（登録商標）である。
用途
本明細書に記載される組成物は、診断及び治療用途において使用することができる。例えば、検出可能に標識されたＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを、試料（例えば、生物学的試料）中の標的タンパク質の存在または量を検出するためのアッセイにおいて使用することができる。組成物は、標的機能（例えば、ＲＬＲ媒介性細胞シグナル伝達または応答）の阻害を試験するためのインビトロアッセイにおいて使用することができる。例えば、組成物が標的（例えばタンパク質またはポリペプチド）に結合して活性化するようないくつかの実施形態では、標的タンパク質またはポリペプチドの活性も誘導し、及び／またはそれ以外に標的タンパク質またはポリペプチドに関連する疾患を治療するうえで有用であるさらなる新規化合物を同定するために設計されたアッセイにおいて組成物をポジティブコントロールとして使用することができる。例えば、ＲＬＲ活性化組成物を、ＲＬＲ機能を誘導、増加、または刺激するさらなる化合物（例えば、小分子、アプタマー、または抗体）を同定するためのアッセイにおいてポジティブコントロールとして使用することができる。組成物は、以下に詳述するような治療方法において使用することもできる。
キット
キットは、本明細書に開示されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰと、使用説明書とを含むことができる。キットは、適切な容器内に、ＲＬＲアゴニスト、１つ以上のコントロール、ならびに当該技術分野では周知の各種の緩衝液、試薬、酵素及び他の標準的な成分を含むことができる。
容器は、少なくとも１つのバイアル、ウェル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、または他の容器手段を含み、その中にＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを、場合により、適当に等分して入れることができる。追加の成分が提供される場合、キットは、この成分を入れることができる追加の容器を含んでもよい。キットは、販売用に緊密に閉じ込められたＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ、及び他の任意の試薬容器の手段を含んでもよい。かかる容器は、その中に所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形されたプラスチック容器を含むことができる。容器及び／またはキットは、使用説明書及び／または警告が記されたラベルを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰを含む、または、本開示により提供される組成物と、対象の免疫応答を刺激する、またはがんを治療またはその進行を遅らせる、または対象の腫瘍増殖を阻害する際に使用される使用説明書とを、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用される使用説明書とともに含むキットを提供する。
いくつかの実施形態では、アゴニストまたは医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたは医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または１つ以上のさらなる治療剤がＲＬＲアゴニストまたは医薬組成物の投与と同時に、その前もしくはその後に投与される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである。
いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである。
使用方法
本発明の組成物は、ＲＬＲ及び／またはＲＬＲ機能のアゴニズムの検出及び／または定量化を行う多くのインビトロ及びインビボの有用性を有する。
上記に述べた組成物は、とりわけ、対象の広範ながんまたは感染症を治療または予防するための方法において有用である。組成物は、対象、例えば、ヒト対象に、投与経路に一部依存する様々な方法を用いて投与することができる。経路は、例えば、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、皮内注射（ＩＤ）、腹腔内（ＩＰ）注射、筋肉内注射（ＩＭ）、腫瘍内注射（ＩＴ）またはくも膜下腔内注射とすることができる。注射は、ボーラス注射または連続注入であってよい。
投与は、例えば、局所注入、注射、またはインプラントによって行うことができる。インプラントは、シラスティック膜、または繊維などの膜を含む多孔質、非多孔質、またはゼラチン状の材料のものとすることができる。インプラントは、対象に組成物を持続的または周期的に放出するように構成することができる。例えば、本明細書に参照によりそれぞれの開示内容の全体を援用するところの米国特許出願公開第２００８０２４１２２３号、米国特許第５，５０１，８５６号、同第４，８６３，４５７号、及び同第３，７１０，７９５号、ＥＰ４８８４０１、及びＥＰ４３０５３９を参照されたい。組成物は、例えば、拡散性、浸食性、または対流システムに基づく埋め込み式装置、例えば、浸透圧ポンプ、生分解性インプラント、電気拡散システム、電気浸透システム、蒸気圧ポンプ、電解ポンプ、発泡性ポンプ、圧電ポンプ、浸食ベースのシステム、または電気機械的システムによって対象に投与することができる。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、局所投与によって対象に治療用に投与される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストはＶＬＰ内にパッケージングされる。一実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、抗原とともに治療用に投与される。他の実施形態において、ＶＬＰは抗原に結合させることができる。他の実施形態では、ＲＬＲアゴニストはＶＬＰ内にパッケージングされ、抗原に結合された別のＶＬＰと併用して投与される。
対象のがんを治療または予防することができる本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰの適当な用量は、例えば、治療される対象の年齢、性別、及び体重、ならびに使用される特定の阻害剤化合物を含む様々な要因によって決まる。対象に投与される用量に影響する他の因子としては、例えば、がんまたは感染症の種類または重症度が挙げられる。例えば、転移性黒色腫を有する対象は、膠芽腫を有する対象とは異なる用量のＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰの投与を必要としうる。他の因子としては、例えば、対象が同時または以前に罹患した他の医学的疾患、対象の一般的な健康状態、対象の遺伝的素因、食事、投与時間、排出速度、薬剤の組み合わせ、及び対象に投与される他の任意の追加の治療薬が挙げられる。また、任意の特定の対象に対する特定の投与量及び治療レジメンは、治療を行う医療従事者（例えば、医師または看護師）の判断にも依存する点を理解されたい。適当な投与量は本明細書に記載される。
医薬組成物は、治療有効量の本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはそのＲＩＧ－ＶＬＰを含むことができる。かかる有効量は、投与されるＲＬＲアゴニストもしくはＲＩＧ－ＶＬＰの作用、またはＲＬＲアゴニストもしくはＲＩＧ－ＶＬＰと１つ以上のさらなる活性剤（複数の薬剤が使用される場合）との組み合わせ効果に一部基づいて当業者が容易に決定することができる。本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰの治療有効量は、個人の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの要因、ならびに所望の反応、例えば、腫瘍増殖の低減を個人において誘発するアゴニスト（及び１つ以上のさらなる活性剤）の能力によっても異なりうる。例えば、治療有効量のＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、当該技術分野では周知であるかまたは本明細書に記載される特定の疾患、及び／または特定の疾患の症状のいずれか１つを阻害（その重症度を軽減するかまたはその発生を防止する）及び／または予防することができる。治療有効量とは、組成物の毒性または有害作用を治療上の有用な作用が上回る量でもある。
本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰのいずれかの適当なヒト用量は、例えば第Ｉ相用量漸増試験でさらに評価することができる。例えば、ｖａｎ Ｇｕｒｐ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ８（８）：１７１１－１７１８；Ｈａｎｏｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３（２，ｐａｒｔ １）：５２３－５３１；及びＨｅｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ５０（１０）：３４９９－３５００を参照されたい。
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰのいずれかと、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１以上）のさらなる治療剤とを含有することで、組成物が全体として治療上有効となる。例えば、組成物は、本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰとアルキル化剤とを含有することができ、アゴニスト及び薬剤は、それぞれ、組み合わせた場合に対象のがん（例えば、黒色腫）を治療または予防するうえで治療上有効な濃度である。
かかる組成物の毒性及び治療有効性は、公知の薬学的手法によって細胞培養または実験動物（例えば、本明細書に記載されるいずれかのがんの動物モデル）において決定することができる。これらの手法は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療効果のある用量）を決定するために使用することができる。毒性と治療効果と用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表される。高い治療指数を示すＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰが好ましい。毒性の副作用を示す組成物を使用することもできるが、患部組織の部位にこうした化合物を標的化し、正常細胞に対する傷害の可能性を最小限に抑えることによって副作用を低減するような送達システムを設計するように配慮がなされなければならない。
細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータを、ヒトで使用する投与量の範囲を決定するうえで使用することができる。本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰでは、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。ある用量を動物モデルで処方することで、細胞培養で求められたＥＣ５０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成するアゴニストの濃度）を含む循環血漿濃度範囲を得ることができる。こうした情報を用いて、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中の濃度は、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。例えば、局所投与（例えば、眼または関節への）が望ましいいくつかの実施形態では、細胞培養または動物モデリングを用いて局所部位内で治療有効濃度を得るために必要とされる用量を決定することができる。
いくつかの実施形態では、本方法は、がんまたは感染症に対する他の療法と併用して行うことができる。例えば、組成物は、放射線、外科手術、標的化または細胞傷害性化学療法、化学放射線療法、ホルモン療法、免疫療法、遺伝子療法、細胞移植療法、精密医療、ゲノム編集療法、または他の薬物療法と同時に、その前、またはその後に対象に投与することができる。
上記に述べたように、本明細書に記載の組成物（例えば、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ組成物）は、これらに限定されるものではないが、がん（例えば、カポジ肉腫、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球、前骨髄球、骨髄単球性、単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫及び細胞癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳及び中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口及び咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、呼吸器系癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌及び泌尿器系癌などの広範ながんを治療するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＶＬＰ内にパッケージングされたＲＬＲアゴニストと、ＶＬＰに結合された抗原または抗原決定基とを含むワクチンを提供する。いくつかの実施形態では、ワクチンは、ＶＬＰに結合された抗原または抗原決定基に対する免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、ワクチンは予防的である。いくつかの実施形態では、ワクチンは治療的である。いくつかの実施形態では、ＶＬＰに結合された抗原または抗原決定基はがんまたは腫瘍抗原であり、したがってワクチンは抗腫瘍免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、ワクチンは防御免疫を誘導する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内の１つ以上のサイトカインの産生のＲＬＲ媒介産生を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰと接触させることを含み、アゴニストが細胞内のＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰと接触させることを含み、アゴニストが細胞内のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させる、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させるための方法であって、細胞を本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰと接触させることを含み、アゴニストがＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象の免疫応答を刺激する方法であって、対象に有効量の本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ、または本開示により提供される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象のがんを治療するかまたはその進行を遅らせる方法であって、対象に有効量の本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ、または本開示により提供される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍増殖の低減または阻害をそれを必要とする対象において行う方法であって、対象に有効量の本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ、または本開示により提供される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための方法であって、対象に有効量の本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰ、または本開示により提供される医薬組成物を投与することを含み、アゴニストまたは医薬組成物が、細胞内の１つ以上のサイトカインのＲＬＲ媒介産生を増加させるか、細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるか、及び／または細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させ、それにより免疫応答を刺激するか、がんを治療もしくはその進行を遅らせるか、または腫瘍の増殖を阻害する、方法を提供する。
ＲＬＲアゴニストとさらなる治療剤との併用
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、単独療法として対象に投与することができる。あるいは、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、別の治療、例えば、がんに対する別の治療との併用療法として対象に投与することもできる。例えば、併用療法は、がんを有するかまたは発症するリスクのある対象（例えば、ヒト患者）に治療上の利益をもたらす１つ以上のさらなる薬剤を対象に投与することを含むことができる。
いくつかの実施形態では、本開示により提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰまたは医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤またはアゴニスト、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、併用療法は、同時に（例えば、混合物として）、別々であるが同時または同時期に、または順次、投与することができる。これには、併用薬剤が治療用混合物として一緒に投与されるような投与だけでなく、併用薬剤が別々であるが同時に、例えば、同じ個人に別々の静脈内ラインを通じて投与されるような手順も含まれる。「併用」投与にはさらに、化合物または薬剤の一方を最初に投与した後、第２の化合物または薬剤を投与するような別々の投与も含まれる。
いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、または医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または１つ以上のさらなる治療剤がアゴニストまたは医薬組成物の投与と同時に、その前もしくはその後に投与される。
いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる治療剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである。
化学療法剤との併用
本発明の組成物との併用及び／または同時投与に適した化学療法剤としては、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシンならびにそれらの類似体またはホモログが挙げられる。さらなる薬剤としては、例えば、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、プロカルバジン、アルトレタミン、シスプラチン、カルボプラチン、オキザリプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、またはトリプラチンテトラニトラート）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン及びビンブラスチン）及びテモゾロミドが挙げられる。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストとの併用
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、またはそれらの医薬組成物は、ヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合して、ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達によって媒介されるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の生物学的活性及び／または下流経路（複数可）及び／または細胞プロセスまたは他のヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１媒介機能を阻害する１つ以上のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。
したがって、本明細書では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に対する受容体結合及び／または細胞応答の誘発などのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達によって媒介される下流経路及び／または細胞プロセスを含む、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の生物学的活性を直接またはアロステリック作用により遮断、アンタゴナイズ、抑制、阻害または減少させるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが提供される。また、本明細書では、細胞または対象によって産生されるヒトＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の量を減少させるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストも提供される。
いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトＰＤ－１に結合して、ＰＤ－１に対するＰＤ－Ｌ１の結合を防止、阻害または減少させるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを提供する。いくつかの態様では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１をコードするｍＲＮＡに結合して翻訳を防止する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１をコードするｍＲＮＡに結合して分解及び／またはターンオーバーを引き起こす。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のシグナル伝達または機能を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１に対する、ＰＤ－Ｌ２に対する、またはＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方に対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１に対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２に対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に対する結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストはＰＤ－１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のその同種リガンドに対する結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１に対する、ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ２に対する、またはＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の両方に対する結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１のその同種リガンドに対する結合を阻害しない。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する単離モノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合してＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１に対する結合を阻害する抗体または抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に結合してＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１に対する結合を阻害する抗体または抗原結合フラグメントである。
ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の一方または両方との間の相互作用を阻害または阻止するいくつかの免疫チェックポイントアンタゴニストが臨床開発中であるか、または現在、がんの治療用に臨床医に利用可能となっている。
本開示により提供される組成物、方法、及び使用のいずれかにおいてＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含みうる抗ヒトＰＤ－１モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントの例としては、これらに限定されるものではないが、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ｈ４０９Ａ１１；いずれも本明細書に参照によりそれらの全体を包含するＵＳ８９５２１３６、ＵＳ８３５４５０９、ＵＳ８９００５８７、及びＥＰ２１７０９５９を参照。Ｍｅｒｃｋ）、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８；いずれも本明細書に参照によりそれらの全体を包含するＵＳ７５９５０４８、ＵＳ８７２８４７４、ＵＳ９０７３９９４、ＵＳ９０６７９９９、ＥＰ１５３７８７８、ＵＳ８００８４４９、ＵＳ８７７９１０５、及びＥＰ２１６１３３６を参照。Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＢＧＢ－Ａ３１７及びＢＧＢ－１０８（ＢｅｉＧｅｎｅ）、２４４Ｃ８及び３８８Ｄ４（本明細書に参照によりその全体を援用するＷＯ２０１６１０６１５９を参照。Ｅｎｕｍｅｒａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ニボルマブである。
本開示により提供される任意の組成物、方法、及び使用においてＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含みうる抗ヒトＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントの例としては、これらに限定されるものではないが、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、本明細書に参照によりその全体を援用するＷＯ２０１３／７９１７４を参照。Ｍｅｒｃｋ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）（デュルバルマブ、ＭＥＤＩ４７３６）、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６；本明細書に参照によりその全体を援用するＷＯ２０１０／０７７６３４を参照。Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（ＢＭＳ－９３６５５９、１２Ａ４；いずれも本明細書に参照によりそれらの全体を援用するＵＳ７９４３７４３及びＷＯ２０１３／１７３２２３を参照。Ｍｅｄａｒｅｘ／ＢＭＳ）、及びＦＡＺ０５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、アベルマブである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、アテゾリズマブである。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１またはヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合するイムノアドヘシンである（例えば、免疫グロブリン分子のＦｃ領域などの定常領域に融合されたＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含む融合タンパク質）。ＰＤ－１に特異的に結合するイムノアドヘシン分子の例は、いずれも本明細書に参照によりそれらの全体を援用するＷＯ２０１０／０２７８２７及びＷＯ２０１１／０６６３４２に記載されている。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ヒトＰＤ－１に特異的に結合するＰＤ－Ｌ２－ＦＣ融合タンパク質であるＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られる）である。
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合してＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のシグナル伝達経路を阻害するいずれのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストも、本明細書に開示される組成物、方法、及び使用に適していることが当業者には理解されよう。
いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、小分子、核酸、ペプチド、ペプチド模倣体、タンパク質、炭水化物、炭水化物誘導体、または糖ポリマーである。例示的な小分子ＰＤ－１阻害剤が、Ｚｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２１（６）：１０２７－１０３６に記載されている。
本開示により提供される方法のいくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと併用され、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤＲ００１、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ）、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＦＡＺ０５３、ＴＥＮＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ）、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）（デュルバルマブ）、及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される。
ＴＩＭ－３アンタゴニストとの併用
いくつかの実施形態では、本開示により提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、またはそれらの医薬組成物は、ＴＩＭ－３アンタゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。ＴＩＭ－３アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドでありうる。いくつかの実施形態では、ＴＩＭ－３アンタゴニストは、ＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＳＲ－０２２（Ｔｅｓａｒｏ）、またはＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）から選択される。
ＬＡＧ－３アンタゴニストとの併用
いくつかの実施形態では、本開示により提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、またはそれらの医薬組成物は、ＬＡＧ－３アンタゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。ＬＡＧ－３アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドでありうる。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ－３阻害剤は、ＬＡＧ５２５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＭＫ－４２８０（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ）、またはＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）から選択される。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストとの併用
いくつかの実施形態では、本開示により提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、またはそれらの医薬組成物は、ＴＬＲアゴニストと併用される（例えば併用して投与される）。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、病原体の認識及び自然免疫系の活性化を促進する生殖細胞系にコードされた膜貫通タンパク質のファミリーである（Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４：１３１３－１３１８；Ｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５：５８８－５９３）。ＴＬＲはパターン認識受容体（ＰＲＲ）であり、自然免疫系の細胞によって発現される。ＴＬＲに対する公知のリガンドの例としては、グラム陽性細菌（ＴＬＲ－２）、細菌エンドトキシン（ＴＬＲ－４）、フラジェリンタンパク質（ＴＬＲ－５）、細菌ＤＮＡ（ＴＬＲ－９）、二本鎖ＲＮＡ及びｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ（ＴＬＲ－３）、ならびに酵母（ＴＬＲ－２）が挙げられる。ＴＬＲのインビボ活性化は、特定のサイトカイン、ケモカイン及び成長因子が関与する自然免疫応答を開始する。すべてのＴＬＲは、核因子κＢ（ＮＦ－κＢ）及びマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）などの特定の細胞内シグナル伝達分子を活性化することができるが、放出されるサイトカイン及びケモカインの特定のセットは、各ＴＬＲに固有のものと考えられる。ＴＬＲ７、８、及び９は、樹状細胞及び単球などの免疫細胞のエンドソームまたはリソソーム区画内に位置するＴＬＲのサブファミリーを含む。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）で高発現されているＴＬＲ７及び９に対して、ＴＬＲ８は主として骨髄系ＤＣ（ｍＤＣ）及び単球で発現される。このサブファミリーは、一本鎖ＲＮＡなどの微生物核酸の認識を媒介する。
プリンヌクレオチドアデノシン及びグアノシンに類似した小さい、低分子量（４００ダルトン未満）の合成イミダゾキノリン化合物は、最初に同定されたＴＬＲ７及びＴＬＲ８アゴニストである。これらの化合物の多くが、抗ウイルス性及び抗がん性を示している。例えば、ＴＬＲ７アゴニストのイミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（商標））は、ヒトパピローマウイルスの特定の株によって引き起こされる皮膚病変の治療用の局所薬として米国食品医薬品局によって承認された。イミキモドはまた、基底細胞癌、ケラトアカントーマ、光線性角化症、及びボーエン病などの原発性皮膚がん及び皮膚腫瘍の治療にも有用でありうる。ＴＬＲ７／８アゴニストのレシキモド（Ｒ－８４８）は、ヒト性器ヘルペスの治療用の局所薬として評価が行われている。
本開示によるＴＬＲアゴニストは、いずれのＴＬＲアゴニストであってもよい。例えば、ＴＬＲアゴニストは、天然または合成のＴＬＲリガンド、ムテインまたはＴＬＲリガンドの誘導体、ＴＬＲリガンドのペプチド模倣体、ＴＬＲリガンドの生物学的機能を模倣する小分子、またはＴＬＲ受容体を刺激する抗体を包含することができる。ＴＬＲリガンドとは、ＴＬＲに結合するあらゆる分子である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰ、またはそれらの医薬組成物は、ＴＬＲアゴニストと併用され、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１アゴニスト、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ５アゴニスト、ＴＬＲ６アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＴＬＲ１０アゴニスト、及びＴＬＲ１１アゴニストからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＴＬＲ３アゴニストと併用される。ＴＬＲ３アゴニストは、ＴＬＲ３を介してシグナル伝達応答を引き起こすアゴニストである。例示的なＴＬＲ３アゴニストとしては、これらに限定されるものではないが、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）、ＨＩＬＴＯＮＯＬ（登録商標）（ポリＩＣＬＣ）、ポリアデニルポリウリジル酸（ｐｏｌｙ Ａ：Ｕ）、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）１００）、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０バイオコンジュゲート）、及びＲＩＢＯＸＸＯＬ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ポリイノシン：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＨＩＬＴＯＮＯＬ（登録商標）（ｐｏｌｙ ＩＣＬＣ）と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、ポリアデニルポリウリジル酸（ｐｏｌｙ Ａ：Ｕ）と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）１００）と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０バイオコンジュゲート）と組み合わされる。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、ＲＩＢＯＸＸＯＬ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０）と併用される。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＴＬＲ７アゴニストと併用される。ＴＬＲ７アゴニストは、ＴＬＲ７を介してシグナル伝達応答を引き起こすアゴニストである。ＴＬＲ７アゴニストの非限定的な例としては、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、ロキソリビン（Ｎ７位及びＣ８位で誘導体化されたグアノシン類似体）、イミダゾキノリン化合物（例えば、イミキモド及びレシキモド）、またはそれらの誘導体が挙げられる。さらなる例示的なＴＬＲ７アゴニストとしては、これらに限定されるものではないが、ＧＳ－９６２０（ベサトリモド）、イミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（商標））、及びレシキモド（Ｒ－８４８）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＧＳ－９６２０（ベサトリモド）と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、イミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（商標））と併用される。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、レシキモド（Ｒ－８４８）と併用される。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＴＬＲ９アゴニストと併用される。ＴＬＲ９アゴニストは、ＴＬＲ９を介してシグナル伝達応答を引き起こすアゴニストである。例示的なＴＬＲ９アゴニストとしては、これらに限定されるものではないが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＧｐＧ ＯＤＮ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮ）、クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）、またはクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）である。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＧｐＧ ＯＤＮ）と併用される。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮ）である。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）である。いくつかの実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＣのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮ）である。
他の組み合わせ
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰまたはそれらの医薬組成物は、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、またはＫＩＲアンタゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰまたはそれらの医薬組成物は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。
いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニスト、ＲＩＧ－ＶＬＰまたはそれらの医薬組成物は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストと併用される（例えば、併用して投与される）。
本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、以前にまたは現在投与されている療法を置換または増強することができる。例えば、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰによる治療の際、１つ以上のさらなる活性剤の投与を中止または減少させる（例えば、より低いレベルまたは投与量で投与する）ことができる。いくつかの実施形態では、以前の療法の投与を維持することができる。いくつかの実施形態では、以前の療法は、ＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰのレベルが治療効果をもたらすのに十分なレベルに達するまで維持することができる。これら２つの療法は併用して投与することができる。
本明細書で定義される、がんの改善について対象（例えば、ヒト患者）をモニタリングする、とは、疾患パラメータの変化（例えば、腫瘍増殖の減少）について対象を評価することを意味する。いくつかの実施形態では、評価は、投与の少なくとも１時間、例えば、少なくとも２、４、６、８、１２、２４、または４８時間、または少なくとも１日、２日、４日、１０日、１３日、２０日以上、または少なくとも１週間、２週間、４週間、１０週間、１３週間、２０週間以上後に行われる。対象は、以下の期間、すなわち、治療開始前、治療中、または治療の１つ以上の要素が投与された後、のうちの１つ以上で評価することができる。評価は、さらなる治療の必要性を評価すること、例えば、投与量、投与頻度、または治療期間を変更するべきかどうかを評価することを含むことができる。評価はまた、選択された治療様式を追加するかまたは省略する（例えば、本明細書に記載されるがんに対するいずれかの治療を追加または省略する）必要性を評価することを含んでもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰは、例えば、Ｔ細胞の活性化及び／または増殖を増加させることによって患者のＴ細胞応答を調節するために投与される。Ｔ細胞の増殖、ＩＦＮの産生及び分泌、及び／またはＴ細胞の細胞溶解活性の増強は、疾患または状態を治療するうえでそれらを必要とする患者にとって有益となりうる。したがって、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化を誘導または増加させ、Ｔ細胞増殖を増強し、ＩＦＮの産生及び／または分泌を誘導し、及び／または細胞溶解性Ｔ細胞応答を誘導するために、本開示のＲＬＲアゴニストまたはＲＩＧ－ＶＬＰをそれらを必要とする患者に投与する。
以上、本開示を、その特定の実施形態を参照しながら説明したが、当業者には、本発明の真の主旨及び範囲から逸脱することなく、様々な改変を行うことが可能であり、また、均等物を置き換えることが可能である点は理解されよう。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、１乃至複数のプロセスのステップを、本開示の目的、主旨、及び範囲に適応させるために多くの改変を行うことができる。これらの改変はいずれも、本開示の範囲内に含まれるものとする。
定義
特許請求の範囲及び明細書において使用される用語は、特に断りのない限り以下に記載するように定義される。親仮特許出願で使用されている用語と直接矛盾する場合には、本出願で使用されている用語が優先するものとする。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈によってそうでない旨が明示されない限り、複数の指示対象を含む点に留意されなければならない。さらに、文脈上必要とされない限りは、単数形の用語は複数を含み、複数形の用語は単数を含むものとする。
約：本明細書で使用される場合、「約」（あるいは「およそ」）なる用語は、当業者によって理解され、使用される文脈に応じてある程度異なる。その用語が使用される文脈を考慮しても当業者に明確でない用語の使用がある場合、「約」とは、特定の値のプラスマイナス１０％以内を意味するものとする。
アゴニスト：本明細書で使用される場合、「アゴニスト」なる用語は、その最も広い意味で使用され、本明細書に開示される天然ポリペプチドの生物学的活性を部分的または完全に促進、誘導、増加、及び／または活性化するあらゆる分子または化合物を包含する。本開示によるアゴニスト分子は、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド）、抗体または抗原結合フラグメント、天然ポリペプチドのフラグメントまたはアミノ酸配列バリアント、ペプチド、オリゴヌクレオチド、脂質、炭水化物、及び小有機分子を含みうる。いくつかの実施形態では、アゴニストの存在下での活性化は、用量依存的に観察される。いくつかの態様では、測定されるシグナル（例えば、生物学的活性）は、同等の条件下でネガティブコントロールで測定されるシグナルよりも少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約１００％高い。本明細書では、本開示の方法における使用に適したアゴニストを同定する方法も開示される。例えば、これらの方法として、これらに限定されるものではないが、酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏ（Ｃ）システム、蛍光偏光（ＦＰ）アッセイ、及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）などの結合アッセイが挙げられる。これらのアッセイは、アゴニストが目的のポリペプチド（例えば、受容体またはリガンド）に結合する能力を決定し、したがって、アゴニストがポリペプチドの活性を促進、増加または活性化する能力を示す。ポリペプチドの機能を活性化または促進するアゴニストの能力などのアゴニストの有効性は、機能的アッセイを使用して決定することもできる。例えば、機能的アッセイは、ポリペプチドを候補アゴニスト分子と接触させることと、ポリペプチドに通常関連する１つ以上の生物学的活性の検出可能な変化を測定することと、を含むことができる。アゴニストの効力は、通常、そのＥＣ５０値（アゴニスト応答の５０％を活性化するのに必要な濃度）によって定義される。ＥＣ５０値が低いほど、アゴニストの効力は高くなり、最大の生物学的応答を活性化するのに必要な濃度は低くなる。
改善する：本明細書で使用される場合、「改善する」なる用語は、予防、重症度または進行の軽減、寛解、またはそれらの治癒を含む、疾患状態、例えばがんの治療におけるあらゆる治療上の有益な結果を指す。
アミノ酸：本明細書で使用される場合、「アミノ酸」なる用語は、天然アミノ酸、合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体のことを指す。天然に存在するアミノ酸とは、遺伝子コードによってコードされるもの、ならびに、例えばヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンなどの後で修飾されたアミノ酸である。「アミノ酸類似体」とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したａ炭素）を有する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムなど）のことを指す。かかる類似体は、修飾されたＲ基（例えばノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的化学構造を保持している。アミノ酸模倣体とは、アミノ酸の一般的化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物のことを指す。
本明細書では、アミノ酸は、それらの一般的に知られる３文字記号によるか、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会により推奨される１文字記号で呼称する場合がある。同様にヌクレオチドも、広く認められている１文字の略号で呼称する場合がある。
アミノ酸置換：本明細書で使用される場合、「アミノ酸置換」とは、所定のアミノ酸配列（出発ポリペプチドのアミノ酸配列）中の少なくとも１個の既存のアミノ酸残基の第２の異なる「置換」アミノ酸残基による置換を指す。「アミノ酸挿入」とは、所定のアミノ酸配列中への少なくとも１個のさらなるアミノ酸の組み込みを指す。挿入は通常、１個または２個のアミノ酸残基の挿入からなるが、より大きな「ペプチド挿入」、例えば、約３～約５個、または最大で約１０、１５、または２０個のアミノ酸残基の挿入を行うこともできる。挿入される残基（複数可）は、上記に開示したように、天然のものでも非天然のものでもよい。「アミノ酸欠失」とは、所定のアミノ酸配列からの少なくとも１個のアミノ酸残基の除去を指す。
抗原：本明細書で使用される場合、「抗原」なる用語は、抗体またはＭＨＣ分子によって提示された場合にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が結合することができる分子を指す。「抗原」なる用語には、本明細書で使用される場合、Ｔ細胞エピトープも包含される。抗原は、さらに免疫系によって認識されるか、及び／または体液性免疫応答及び／または細胞性免疫応答を誘導することができ、それによりＢリンパ球及び／またはＴリンパ球が活性化される。しかしながら、これは、少なくとも特定の場合において、抗原がＴヘルパー細胞エピトープ（Ｔｈ細胞エピトープ）を含むかまたはこれと連結され、アジュバント中で与えられることを必要とする場合がある。抗原は、１つ以上のエピトープ（Ｂ－エピトープ及びＴ－エピトープ）を有しうる。上記で言うところの特異的反応とは、抗原が、その対応する抗体またはＴＣＲと、通常は高度に選択的な形で好ましくは反応することを意味し、他の抗原によって誘発されうる多くの他の抗体またはＴＣＲとは反応しないことを示すために用いられる。本明細書で使用される場合の抗原とは、いくつかの個々の抗原の混合物であってもよい。
抗原決定基：本明細書で使用される場合、「抗原決定基」なる用語は、Ｂリンパ球またはＴリンパ球のいずれかによって特異的に認識される抗原の部分を指すものである。Ｂリンパ球が抗体産生を介して外来抗原決定基に応答するのに対して、Ｔリンパ球は細胞性免疫を媒介する。したがって、抗原決定基またはエピトープは、抗体によって認識される、またはＭＨＣとの関連ではＴ細胞受容体によって認識される抗原の部分である。
結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）：本明細書で使用される場合、第１及び第２の結合部位に適用される「結合」（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）なる用語は、好ましくは少なくとも１つの非ペプチド結合を介した第１の結合部位と第２の結合部位との結合を指す。結合の性質は、共有結合、イオン性、疎水性、極性またはそれらの任意の組み合わせであってよく、好ましくは結合の性質は共有結合であり、やはりより好ましくは結合は少なくとも１つ、好ましくは１つの非ペプチド結合を介する。本明細書で使用される場合、第１及び第２の結合部位に適用される「結合」（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）なる用語は、本発明の組成物を形成する第１の結合部位と第２の結合部位との直接的な結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）または結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を包含するばかりでなく、それに代えて、かつ好ましくは、本明細書においては通常、かつ好ましくはヘテロ二官能性架橋剤を使用する、本発明の組成物につながる第１の結合部位と第２の結合部位との間接的な結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）または結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）をも包含する。
第１の結合部位：本明細書で使用される場合、「第１の結合部位」なる語句は、通常、好ましくは抗原または抗原決定基からなる第２の結合部位が結合することができる、通常、好ましくはウイルス様粒子からなる非天然または天然由来の要素を指す。第１の結合部位は、タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然または合成ポリマー、二次代謝産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フェニルメチルスルホニルフルオリド）、またはそれらの組み合わせ、またはそれらの化学反応基であってよい。第１の結合部位は、通常、好ましくはウイルス様粒子の表面に位置する。複数の第１の結合部位が、通常、反復形態でウイルス様粒子の表面に存在している。好ましくは、第１の結合部位は、アミノ酸またはその化学反応基である。
第２の結合部位：本明細書で使用される場合、「第２の結合部位」なる語句は、ウイルス様粒子の表面に位置する第１の結合部位が結合することができる、抗原または抗原決定基に関連した、通常、好ましくはこれからなる要素を指す。抗原または抗原決定基の第２の結合部位は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、糖、ポリヌクレオチド、天然または合成ポリマー、二次代謝産物または化合物（ビオチン、フルオレセイン、レチノール、ジゴキシゲニン、金属イオン、フェニルメチルスルホニルフルオリド）、またはそれらの組み合わせ、またはそれらの化学反応基であってよい。少なくとも１つの第２の結合部位が、抗原または抗原決定基上に存在する。したがって、「少なくとも１つの第２の結合部位を有する抗原または抗原決定基」とは、少なくとも抗原または抗原決定基及び第２の結合部位を含む抗原または抗原コンストラクトを指す。しかしながら、特に非天然由来の、すなわち抗原または抗原決定基内に天然に存在しない第２の結合部位では、これらの抗原または抗原コンストラクトは、「アミノ酸リンカー」を含む。
塩基組成：本明細書で使用される場合、「塩基組成」なる用語は、グアニン（またはヒポキサンチン）＋シトシン及び／またはウラシル（またはチミン）＋アデニン核酸塩基からなる核酸（例えば、ＲＮＡ）の全ヌクレオチドの割合を指す。
塩基対：本明細書で使用される場合、「塩基対」なる用語は、特定の水素結合の形成を介して相互作用する、対向した相補的なポリヌクレオチド鎖、または同じ鎖の領域上の２個の核酸塩基を指す。本明細書で使用される場合、「相補的塩基対合」と互換的に使用される「ワトソン・クリック塩基対合」なる用語は、プリンは常にピリミジンと結合し、したがって、ＤＮＡ分子中の核酸塩基アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）と相補的な塩基対を形成し、グアニン（Ｇ）はシトシン（Ｃ）と相補的な塩基対を形成する、という塩基対合の一連の規則を指す。ＲＮＡ分子ではチミンはウラシル（Ｕ）に置き換えられ、チミン（Ｔ）と同様、アデニン（Ａ）と相補的な塩基対を形成する。相補的な塩基対同士は水素結合によって互いに結合され、水素結合の数は塩基対間で異なる。当該技術分野では周知であるように、グアニン（Ｇ）とシトシン（Ｃ）との塩基対は３個の水素結合によって結合され、アデニン（Ａ）とチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）との塩基対は２個の水素結合によって結合される。
これらの規則に従わない塩基対合相互作用が天然、非天然、及び合成核酸において生じうるが、これらは本明細書では「非ワトソン・クリック塩基対合」、あるいは「非標準的な塩基対合」と呼ばれる。「ゆらぎ塩基対」とは、ワトソン・クリック塩基対合則に従わないＲＮＡ分子中の２個の核酸塩基間の対合のことである。例えば、イノシンはグアノシンと構造的に類似しているが、２－アミノ基を欠いているヌクレオシドである。イノシンは、４種類の天然核酸塩基のそれぞれと２個の水素結合を形成することができ（Ｏｄａ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １９：５２６３－５２６７）、研究者によって「ユニバーサル」塩基としてしばしば使用されるが、これは天然に存在するすべての塩基すなわち標準的な塩基と塩基対合できることを意味する。４つの主要なゆらぎ塩基対として、グアニン－ウラシル（Ｇ－Ｕ）塩基対、ヒポキサンチン－ウラシル（Ｉ－Ｕ）塩基対、ヒポキサンチン－アデニン（Ｉ－Ａ）塩基対、及びヒポキサンチン－シトシン（Ｉ－Ｃ）塩基対がある。核酸命名法の一貫性を保つため、ヒポキサンチンはイノシンの核酸塩基であることからヒポキサンチンには「Ｉ」を用いる。それ以外の点では、命名法は、核酸塩基及びそれらに対応するヌクレオシドの名称に従う（例えば、グアニン及びグアノシンの両方に対して、またデオキシグアノシンに対して「Ｇ」）。ゆらぎ塩基対の熱力学的安定性は、ワトソン・クリック塩基対の熱力学的安定性と同等である。ゆらぎ塩基対は、ＲＮＡ分子の二次構造の形成において役割を果たしている。
一態様では、本開示では、１つ以上のＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）をアゴナイズするかまたは活性化する合成ＲＮＡ分子を提供するが、その場合、イノシンはシチジンと塩基対合する（Ｉ－Ｃ塩基対）位置にのみ挿入することができる。すなわち、イノシンはグアノシンを置換することができるが、他のヌクレオシドを置換することはできない。
生物学的に活性な：本明細書で使用される場合、「生物学的に活性な」なる語句は、生物学的システム及び／または生物で活性を有する任意の物質の特性を指す。例えば、ある生物に投与された場合に、その生物に生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であるとみなされ、したがって「生物学的活性」を有する。核酸が生物学的に活性であるような特定の実施形態では、核酸全体の少なくとも１つの生物学的活性を共有するその核酸の部分は、一般的に「生物学的に活性な」部分と呼ばれる。
結合した（ｂｏｕｎｄ）：本明細書で使用される場合、「結合した（ｂｏｕｎｄ）」なる用語は、例えば、共有結合（例えば、化学的結合による）、または非共有結合（例えば、イオン性相互作用、疎水性相互作用、水素結合など）であってよい結合を指す。共有結合は、例えば、エステル結合、エーテル結合、ホスホジエステル結合、アミド結合、ペプチド結合、イミド結合、炭素硫黄結合、炭素リン結合などでありうる。「結合した（ｂｏｕｎｄ）」なる用語は、「結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）」、「融合した」、「結合した（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」及び「付着した」などの用語よりも広く、これらを包含する。さらに、ウイルス様粒子に結合しているＲＬＲアゴニストに関して、「結合した（ｂｏｕｎｄ）」なる用語は、ＲＬＲアゴニストの封入、または部分的な封入も含む。したがって、ウイルス様粒子に結合しているＲＬＲアゴニストに関して、「結合した（ｂｏｕｎｄ）」なる用語は、「結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）」、「融合した」、「封入された」、「パッケージングされた」及び「付着した」などの用語よりも広く、これらを包含する。例えば、ＲＬＲアゴニストは、共有結合にも非共有結合にもよらず、実際の結合なしでＶＬＰによって封入されうる。
コートタンパク質：本明細書で使用される場合、「コートタンパク質（複数可）」なる用語は、バクテリオファージまたはＲＮＡファージのカプシドアセンブリに組み込まれうるバクテリオファージまたはＲＮＡファージのタンパク質（複数可）を指す。しかしながら、ＲＮＡファージのコートタンパク質遺伝子の特定の遺伝子産物について言う場合、「ＣＰ」なる用語が用いられる。例えば、ＲＮＡファージＱβのコートタンパク質遺伝子の特定の遺伝子産物が「Ｑβ ＣＰ」と呼ばれるのに対して、バクテリオファージＱβの「コートタンパク質」には「Ｑβ ＣＰ」だけでなくＡ１タンパク質も含まれる。バクテリオファージＱβのカプシドは、主としてＱβ ＣＰで構成され、少量のＡ１タンパク質を含有する。同様に、ＶＬＰ Ｑβのコートタンパク質は主としてＱβ ＣＰを含有し、少量のＡ１タンパク質を含有する。
共有結合により連結された：本明細書で使用される場合、「共有結合により連結された」（あるいは、「結合された（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）」、「連結された」、「付着された」、「融合された」、または「繋留された」）なる用語は、２つ以上の部分に関して使用される場合、化学的結合、組換え技術または酵素活性を含む何らかの手段によって、各部分同士が、直接的にまたは架橋剤として働く１つ以上のさらなる部分を介して互いに物理的に結合または連結されることで、各部分同士が、使用される条件（例えば生理学的条件）下で物理的な結合状態に維持されるように十分に安定した構造を形成することを指す。
相補的な：本明細書で使用される場合、「相補的な」または「相補性」なる用語は、２本のポリヌクレオチド鎖、または同じポリヌクレオチド鎖の複数の領域を構成するヌクレオチドの配列と、これらの鎖または領域を含む二重鎖の形成との間の関係であって、２本の鎖または各領域間の連続する塩基対合の程度が二重鎖構造の形成に十分であるような関係を指す。アデニン（Ａ）はチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）と特定の水素結合、すなわち「塩基対」を形成することが知られている。同様に、シトシン（Ｃ）はグアニン（Ｇ）と塩基対合することが知られている。また、非標準的な核酸塩基（例えば、イノシン）が天然塩基と水素結合できることも知られている。ポリヌクレオチドの第１の鎖、またはその領域、部分もしくは断片を構成するヌクレオチドの配列は、同じもしくは異なる核酸の第２の鎖、またはその領域、部分、もしくは断片を構成するヌクレオチドの配列と、第１の鎖と第２の鎖とが逆平行に配置されている場合、２本の鎖間の塩基対合の程度が、二重鎖構造が使用される条件（例えば、細胞内の生理学的条件）下で二重鎖構造を維持する場合に「十分に相補的である」と言われる。ポリヌクレオチドの相補的な鎖または領域は、非相補的であるいくらかの塩基対を含みうる点を理解されたい。相補性は「部分的」であってもよく、その場合、ポリヌクレオチドを構成する核酸塩基の一部のみが塩基対合則に従って一致する。または、核酸間の相補性は「完全」または「全体的」であってもよい。ポリヌクレオチド鎖または領域間の相補性度は、鎖または領域間のハイブリダイゼーションの効率及び強さに大きく影響するが、２つの相補的ポリヌクレオチドがすべてのヌクレオチド位置で塩基対合する必要はない。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、第２のポリヌクレオチドと１００％または「完全に」相補的であり、したがって、すべてのヌクレオチド位置で塩基対を形成する。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、１００％相補的ではなく（例えば、９０％、または８０％または７０％相補的である）、１つ以上のヌクレオチド位置においてミスマッチヌクレオチドを含む。完全な相補性がしばしば望ましいが、実施形態によっては、１つ以上、好ましくは６、５、４、３、２、または１個のミスマッチを含む場合もある。
接触させる：本明細書で使用される場合、「接触させる」なる用語は、２つ以上の実体間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、細胞を薬剤（例えばＲＮＡ、脂質ナノ粒子組成物、または本開示の他の医薬組成物）と接触させることは、細胞と薬剤とに物理的接続を共有させることを意味する。インビボ、インビトロ、及びエクスビボの両方で細胞を外部実体と接触させる方法は、生物学の技術分野では周知のものである。本開示の例示的な実施形態では、哺乳動物細胞を組成物（例えば、単離されたＲＮＡ、ナノ粒子、または本開示の医薬組成物）と接触させる工程は、インビボで行われる。例えば、脂質ナノ粒子組成物と、生物（例えば、哺乳動物）体内に配置されうる細胞（例えば、哺乳動物細胞）との接触は、任意の適当な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下投与を含む、生物への非経口投与）によって行うことができる。インビトロに存在する細胞の場合、例えば、組成物を細胞の培養培地に添加することによって組成物（例えば、脂質ナノ粒子または単離されたＲＮＡ）と細胞とを接触させてもよく、これにより、トランスフェクションが行われるかまたは生じうる。さらに、複数の細胞を１つの薬剤と接触させてもよい。
結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）：本明細書で使用される場合、「結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）」なる用語は、共有結合による付着または強い非共有結合相互作用による付着を指す。ウイルス様粒子への抗原の結合に関して、「結合された（ｃｏｕｐｌｅｄ）」なる用語は、好ましくは、共有結合による付着を指す。さらに、ウイルス様粒子への抗原の結合に関して、「結合された」なる用語は、好ましくは、少なくとも１つの非ペプチド結合による結合及び付着をそれぞれ指す。生物学的活性物質の結合のために当業者により通常使用される任意の方法を本発明において使用することができる。
変性：本明細書で使用される場合、「変性」なる用語は、核酸中の塩基対合したヌクレオチド間の水素結合が切断され、二次及び／または三次核酸構造の喪失（例えば、以前にアニーリングされた鎖の分離）をもたらすプロセスを指す。変性は、核酸への外部の物質、エネルギー、または生化学的プロセスの適用によって生じうる。
抗原提示細胞：「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」なる用語は、ＭＨＣと複合体化された外来抗原をその表面に提示する細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこの複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、これらに限定されるものではないが、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球（ＴＨＰ－１など）、Ｂリンパ芽球細胞（Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８ Ｂ－ＬＣＬなど）及び単球由来樹状細胞（ＤＣ）が挙げられる。ＡＰＣの一部のものは、食作用または受容体介在性エンドサイトーシスにより抗原を取り込む。
アポトーシス：本明細書で使用される場合、「アポトーシス」なる用語は、多細胞生物（例えばヒト）において起こるプログラムされた細胞死のプロセスを指す。アポトーシスをもたらす高度に調節された生化学的及び分子的事象は、膜ブレビング、細胞体積の収縮、染色体ＤＮＡの凝縮及び断片化、及びｍＲＮＡ崩壊を含む、観察可能で特徴的な形態学的変化を細胞にもたらしうる。アポトーシスを起こしているＴ細胞を含む細胞を同定する一般的な方法として、細胞をフルオロフォア結合タンパク質（アネキシンＶ）に曝露することがある。アネキシンＶは、細胞がアポトーシスのプロセスにあることの初期の指標である原形質膜の外側小葉上のホスファチジルセリンに結合するその能力によってアポトーシス細胞を検出するために一般的に使用されている。
平滑末端：本明細書で使用される場合、「平滑末端」、「平滑末端化された」なる用語は、二重鎖を構成する相補鎖の両方が、少なくとも一方の末端において１つの塩基対で終端する、二重鎖または二本鎖核酸の末端の構造を指す。したがって、二重鎖を構成するどちらの鎖も、他方よりも末端からさらに延びていない。
がん抗原：本明細書で使用される場合、「がん抗原」とは、（ｉ）新生抗原などの腫瘍特異的抗原、（ｉｉ）腫瘍関連抗原、（ｉｉｉ）腫瘍特異的抗原を発現する細胞、（ｉｖ）腫瘍関連抗原を発現する細胞、（ｖ）腫瘍上の胚性抗原、（ｖｉ）自家腫瘍細胞、（ｖｉｉ）腫瘍特異的膜抗原、（ｖｉｉｉ）腫瘍関連膜抗原、（ｉｘ）増殖因子受容体、（ｘ）増殖因子リガンド、及び（ｘｉ）がんに関連する任意の他の種類の抗原または抗原提示細胞または物質を指す。
がん：本明細書で使用される場合、「がん」なる用語は、当該技術分野では認識されているものであり、呼吸器系がん、消化器系がん、尿生殖器系がん、精巣癌、乳癌、前立腺癌、内分泌系がん、及び黒色腫を含む上皮または内分泌組織の悪性腫瘍を指す。本明細書に記載されるＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）アゴニストは、腎癌または黒色腫を含むあらゆる種類のがんを有するか、有することが疑われるか、または発症するリスクが高いと考えられる患者を治療するために使用することができる。例示的ながんとしては、子宮頸部、肺、前立腺、乳房、頭頸部、結腸及び卵巣の組織から発生するがんが挙げられる。この用語には、がん性及び肉腫性組織で構成される悪性腫瘍を含むがん肉腫も含まれる。「腺癌」は、腺組織に由来するがん、または腫瘍細胞が認識可能な腺構造を形成するがんを指す。
細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答：本明細書で使用される場合、「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答」なる用語は、細胞傷害性Ｔ細胞によって誘導される免疫反応を指す。ＣＴＬ応答は、主としてＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。
二重鎖：本明細書で使用される場合、「二重鎖」なる用語は、二本鎖ポリヌクレオチドの相補鎖またはそれ自体に折り返される一本鎖ポリヌクレオチドの相補的領域によって形成される構造を指す。核酸の二重鎖構造は、塩基対合の相互作用によって相補的なヌクレオチド配列が互いに結合またはハイブリダイズする結果として生じる。
ＥＣ５０：本明細書で使用される場合、「ＥＣ５０」なる用語は、インビボまたはインビトロのアッセイにおいて、最大応答の５０％、すなわち最大応答とベースラインとの中間の応答を誘導するアゴニストの濃度を指す。
有効量：本明細書で使用される場合、「有効量」または「有効投与量」なる用語は、所望の効果を得る、または少なくとも部分的に得るうえで十分な量として定義される。
融合：本明細書で使用される場合、「融合」なる用語は、異なる由来のアミノ酸配列のコードヌクレオチド配列のインフレームでの組み合わせによる、１つのポリペプチド鎖内でのそれらの組み合わせを指す。「融合」なる用語は、その一方の末端への融合以外に、内部融合、すなわちポリペプチド鎖内への異なる由来の配列の挿入を明示的に包含する。
ヘアピンＲＮＡ：本明細書で使用される場合、「ヘアピンＲＮＡ」または「ＲＮＡヘアピン」なる用語は、相補的ヌクレオチド鎖からなる二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）ステムを含む自己相補的なＲＮＡを指し、その相補的ヌクレオチド鎖は塩基対合して二重鎖を形成し、一方の端部において、不対ヌクレオチドからなる不対ヌクレオチドのループ（例えば、テトラループ）を含むヌクレオチドリンカーまたは柔軟な化学部分（例えば、エチレングリコール）を含む非ヌクレオチドリンカーで終端し、これらのいずれかが相補的ヌクレオチド鎖同士を連結する。ＲＮＡヘアピンは、ステムの長さ、ループ及び／またはリンカーのサイズ及び／または組成、ステム内の塩基対ミスマッチの数、及び実際のヌクレオチド配列において異なりうる。ＲＮＡヘアピンは、これらに限定されるものではないが、ヘアピンを含むＲＮＡ分子の全体的なフォールディングを導くこと、リボザイムにおける相互作用を決定すること、メッセンジャーＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を分解から保護すること、ＲＮＡ結合タンパク質の認識モチーフまたは構造として機能すること、及び酵素反応の基質として作用することを含む１つ以上の機能を与えることができる。ＲＮＡヘアピンの構造及び機能のさらなる説明は、Ｓｖｏｂｏｄａ ａｎｄ Ｄｉ Ｃａｒａ（２００６）Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ６３（７－８）：９０１－９０８、及び当該文献に含まれる参考文献に見ることができる。いくつかの実施形態では、本開示によって提供されるＲＬＲアゴニストを構成するヘアピンＲＮＡのステム領域は、５’三リン酸または二リン酸を有する平滑末端で終端する。
改善された生物学的活性：本明細書で使用される場合、生物学的活性を「改善する」組成物とは、組成物の添加なしで測定された同じ生物学的活性と比較した場合に組成物の添加によって生物学的活性が何らかの形でより高くなるか、または強度が高くなるか、または逸脱することが観察されるような物質を指す。例えば、分泌されるサイトカインの量を、例えばＥＬＩＳＡアッセイを用いて、組成物によってまたは組成物なしで処理した試料から測定することができる。組成物の非存在下でのサイトカイン分泌量と比較してサイトカイン分泌が増加する組成物の量は、生物活性を改善するのに十分な量であるといえる。一実施形態では、生物学的活性は、少なくとも約２倍、より好ましくは約３倍以上改善される。細胞傷害性Ｔ細胞の溶解活性も変化しうる。
必要とする：本明細書で使用される場合、「予防を必要とする」、「治療を必要とする」、または「それを必要とする」対象とは、適切な医療従事者（例えば、ヒトの場合では医師、看護師、または診療看護師、非ヒト哺乳動物の場合では獣医師）の判断により、特定の治療（ＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニストを含む組成物による治療など）から妥当な利益を得ると考えられる者を指す。
リンカー：本明細書で使用される場合、「リンカー」（あるいは「テザー」または「スペーサー」）なる用語は、２つのポリヌクレオチド鎖または領域同士を互いに共有結合により結合、付着または連結する部分を指す。本明細書で使用される場合、ヌクレオチドを含むリンカーは、「ヌクレオチドリンカー」（例えばテトラループ）と呼ばれる。本明細書で使用される場合、「非ヌクレオチドリンカー」なる用語は、化学的部分を含み、ヌクレオチドを含まないリンカーを指す。非ヌクレオチドリンカーの非限定的な例としては、エチレングリコール（例えば、ヘキサエチレングリコール）、アルキル鎖（例えば、Ｃ９アルキルリンカー）、及びスチルベンジエーテルを含むリンカーが挙げられる。リンカーのさらなる説明は、本明細書に参照によりその全体を援用するＰａｒｅｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｍｅｔｈｏｄｓ ５４：２５１－２５９に見ることができる。
ＬＧＰ２：本明細書で使用される場合、「ＬＧＰ２」なる用語は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体ファミリーの特定のメンバーであり、ヒトにおいてＤＨＸ５８遺伝子によってコードされるＬａｂｒｏｔａｔｏｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ２ポリペプチドを指す。当該技術分野におけるＬＧＰ２の別名及び頭字語としては、ＤＨＸ５８、Ｄ１１ＬＧＰ２、Ｄ１１Ｉｇｐ２ｅ、及びＲＬＲ－３が含まれる。完全長のヒトＬＧＰ２の例示的なアミノ酸配列を表４（配列番号１００）及び以下に記載する。
ＭＥＬＲＳＹＱＷＥＶＩＭＰＡＬＥＧＫＮＩＩＩＷＬＰＴＧＡＧＫＴＲＡＡＡＹＶＡＫＲＨＬＥＴＶＤＧＡＫＶＶＶＬＶＮＲＶＨＬＶＴＱＨＧＥＥＦＲＲＭＬＤＧＲＷＴＶＴＴＬＳＧＤＭＧＰＲＡＧＦＧＨＬＡＲＣＨＤＬＬＩＣＴＡＥＬＬＱＭＡＬＴＳＰＥＥＥＥＨＶＥＬＴＶＦＳＬＩＶＶＤＥＣＨＨＴＨＫＤＴＶＹＮＶＩＭＳＱＹＬＥＬＫＬＱＲＡＱＰＬＰＱＶＬＧＬＴＡＳＰＧＴＧＧＡＳＫＬＤＧＡＩＮＨＶＬＱＬＣＡＮＬＤＴＷＣＩＭＳＰＱＮＣＣＰＱＬＱＥＨＳＱＱＰＣＫＱＹＮＬＣＨＲＲＳＱＤＰＦＧＤＬＬＫＫＬＭＤＱＩＨＤＨＬＥＭＰＥＬＳＲＫＦＧＴＱＭＹＥＱＱＶＶＫＬＳＥＡＡＡＬＡＧＬＱＥＱＲＶＹＡＬＨＬＲＲＹＮＤＡＬＬＩＨＤＴＶＲＡＶＤＡＬＡＡＬＱＤＦＹＨＲＥＨＶＴＫＴＱＩＬＣＡＥＲＲＬＬＡＬＦＤＤＲＫＮＥＬＡＨＬＡＴＨＧＰＥＮＰＫＬＥＭＬＥＫＩＬＱＲＱＦＳＳＳＮＳＰＲＧＩＩＦＴＲＴＲＱＳＡＨＳＬＬＬＷＬＱＱＱＱＧＬＱＴＶＤＩＲＡＱＬＬＩＧＡＧＮＳＳＱＳＴＨＭＴＱＲＤＱＱＥＶＩＱＫＦＱＤＧＴＬＮＬＬＶＡＴＳＶＡＥＥＧＬＤＩＰＨＣＮＶＶＶＲＹＧＬＬＴＮＥＩＳＭＶＱＡＲＧＲＡＲＡＤＱＳＶＹＡＦＶＡＴＥＧＳＲＥＬＫＲＥＬＩＮＥＡＬＥＴＬＭＥＱＡＶＡＡＶＱＫＭＤＱＡＥＹＱＡＫＩＲＤＬＱＱＡＡＬＴＫＲＡＡＱＡＡＱＲＥＮＱＲＱＱＦＰＶＥＨＶＱＬＬＣＩＮＣＭＶＡＶＧＨＧＳＤＬＲＫＶＥＧＴＨＨＶＮＶＮＰＮＦＳＮＹＹＮＶＳＲＤＰＶＶＩＮＫＶＦＫＤＷＫＰＧＧＶＩＳＣＲＮＣＧＥＶＷＧＬＱＭＩＹＫＳＶＫＬＰＶＬＫＶＲＳＭＬＬＥＴＰＱＧＲＩＱＡＫＫＷＳＲＶＰＦＳＶＰＤＦＤＦＬＱＨＣＡＥＮＬＳＤＬＳＬＤ
（ＮＣＢＰアクセッション番号：ＮＰ＿０７７０２４．２）
局所投与：本明細書で使用される場合、「局所投与」または「局所送達」は、血管系を介したその目的とする標的組織または部位への組成物または薬剤の輸送に依存しない送達を指す。例えば、組成物は、組成物または薬剤の注射もしくは埋め込みによって、または組成物または薬剤が入った装置の注射もしくは埋め込みによって送達することができる。標的組織または部位の近傍での局所投与の後、組成物もしくは薬剤、またはそれらの１つ以上の成分は目的とする標的組織または部位へと拡散することができる。
ＭＤＡ５：本明細書で使用される場合、「ＭＤＡ５」なる用語は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体ファミリーの特定のメンバーであり、ヒトにおいてＩＦＩＨ１遺伝子によってコードされるＭｅｌａｎｏｍａ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ５ポリペプチドを指す。当該技術分野におけるＭＤＡ５の別名及び頭字語としては、ＡＧＳ７、Ｈｌｃｄ、ＩＤＤＭ１９、ＭＤＡ－５、ＲＬＲ－２、ＳＧＭＲＴ１、及びヘリカーゼＣドメイン１により誘導されるインターフェロンが含まれる。完全長のヒトＭＤＡ５の例示的なアミノ酸配列を表４（配列番号９９）及び以下に記載する。
ＭＳＮＧＹＳＴＤＥＮＦＲＹＬＩＳＣＦＲＡＲＶＫＭＹＩＱＶＥＰＶＬＤＹＬＴＦＬＰＡＥＶＫＥＱＩＱＲＴＶＡＴＳＧＮＭＱＡＶＥＬＬＬＳＴＬＥＫＧＶＷＨＬＧＷＴＲＥＦＶＥＡＬＲＲＴＧＳＰＬＡＡＲＹＭＮＰＥＬＴＤＬＰＳＰＳＦＥＮＡＨＤＥＹＬＱＬＬＮＬＬＱＰＴＬＶＤＫＬＬＶＲＤＶＬＤＫＣＭＥＥＥＬＬＴＩＥＤＲＮＲＩＡＡＡＥＮＮＧＮＥＳＧＶＲＥＬＬＫＲＩＶＱＫＥＮＷＦＳＡＦＬＮＶＬＲＱＴＧＮＮＥＬＶＱＥＬＴＧＳＤＣＳＥＳＮＡＥＩＥＮＬＳＱＶＤＧＰＱＶＥＥＱＬＬＳＴＴＶＱＰＮＬＥＫＥＶＷＧＭＥＮＮＳＳＥＳＳＦＡＤＳＳＶＶＳＥＳＤＴＳＬＡＥＧＳＶＳＣＬＤＥＳＬＧＨＮＳＮＭＧＳＤＳＧＴＭＧＳＤＳＤＥＥＮＶＡＡＲＡＳＰＥＰＥＬＱＬＲＰＹＱＭＥＶＡＱＰＡＬＥＧＫＮＩＩＩＣＬＰＴＧＳＧＫＴＲＶＡＶＹＩＡＫＤＨＬＤＫＫＫＫＡＳＥＰＧＫＶＩＶＬＶＮＫＶＬＬＶＥＱＬＦＲＫＥＦＱＰＦＬＫＫＷＹＲＶＩＧＬＳＧＤＴＱＬＫＩＳＦＰＥＶＶＫＳＣＤＩＩＩＳＴＡＱＩＬＥＮＳＬＬＮＬＥＮＧＥＤＡＧＶＱＬＳＤＦＳＬＩＩＩＤＥＣＨＨＴＮＫＥＡＶＹＮＮＩＭＲＨＹＬＭＱＫＬＫＮＮＲＬＫＫＥＮＫＰＶＩＰＬＰＱＩＬＧＬＴＡＳＰＧＶＧＧＡＴＫＱＡＫＡＥＥＨＩＬＫＬＣＡＮＬＤＡＦＴＩＫＴＶＫＥＮＬＤＱＬＫＮＱＩＱＥＰＣＫＫＦＡＩＡＤＡＴＲＥＤＰＦＫＥＫＬＬＥＩＭＴＲＩＱＴＹＣＱＭＳＰＭＳＤＦＧＴＱＰＹＥＱＷＡＩＱＭＥＫＫＡＡＫＥＧＮＲＫＥＲＶＣＡＥＨＬＲＫＹＮＥＡＬＱＩＮＤＴＩＲＭＩＤＡＹＴＨＬＥＴＦＹＮＥＥＫＤＫＫＦＡＶＩＥＤＤＳＤＥＧＧＤＤＥＹＣＤＧＤＥＤＥＤＤＬＫＫＰＬＫＬＤＥＴＤＲＦＬＭＴＬＦＦＥＮＮＫＭＬＫＲＬＡＥＮＰＥＹＥＮＥＫＬＴＫＬＲＮＴＩＭＥＱＹＴＲＴＥＥＳＡＲＧＩＩＦＴＫＴＲＱＳＡＹＡＬＳＱＷＩＴＥＮＥＫＦＡＥＶＧＶＫＡＨＨＬＩＧＡＧＨＳＳＥＦＫＰＭＴＱＮＥＱＫＥＶＩＳＫＦＲＴＧＫＩＮＬＬＩＡＴＴＶＡＥＥＧＬＤＩＫＥＣＮＩＶＩＲＹＧＬＶＴＮＥＩＡＭＶＱＡＲＧＲＡＲＡＤＥＳＴＹＶＬＶＡＨＳＧＳＧＶＩＥＨＥＴＶＮＤＦＲＥＫＭＭＹＫＡＩＨＣＶＱＮＭＫＰＥＥＹＡＨＫＩＬＥＬＱＭＱＳＩＭＥＫＫＭＫＴＫＲＮＩＡＫＨＹＫＮＮＰＳＬＩＴＦＬＣＫＮＣＳＶＬＡＣＳＧＥＤＩＨＶＩＥＫＭＨＨＶＮＭＴＰＥＦＫＥＬＹＩＶＲＥＮＫＡＬＱＫＫＣＡＤＹＱＩＮＧＥＩＩＣＫＣＧＱＡＷＧＴＭＭＶＨＫＧＬＤＬＰＣＬＫＩＲＮＦＶＶＶＦＫＮＮＳＴＫＫＱＹＫＫＷＶＥＬＰＩＴＦＰＮＬＤＹＳＥＣＣＬＦＳＤＥＤ
（ＮＣＢＰアクセッション番号：ＮＰ＿０７１４５１．２）
修飾された：本明細書で使用される場合、「修飾された」または「修飾」は、ポリヌクレオチド、例えばＲＮＡの修飾から生じる変化した状態または構造の変化を指す。ポリヌクレオチドは、化学的、構造的、及び／または機能的を含む様々な形で修飾されうる。例えば、本開示のＲＮＡ分子は、非天然塩基、または生物学的活性を与える機能的配列または二次構造を含む配列モチーフの組み込みによって修飾することができる。一実施形態では、ＲＮＡは、天然リボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関連する非天然または化学的に修飾された塩基、ヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。
本明細書で使用される場合、「天然の」なる用語は、ある対象について用いられる場合、対象が自然界にみられることを指す。例えば、自然界のソースから単離可能であり、実験室で人間によって人為的に改変されていない、生物（ウイルスを含む）中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列、またはアミノ酸もしくはヌクレオチドなどのその成分は、天然のものである。
核酸：本明細書で使用される場合、「核酸」なる用語は、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド及びそれらのポリマーまたはオリゴマーを指す。特に限定されない限り、この用語には、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然のヌクレオチドと同様の形で代謝される天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸が含まれる。ヌクレオチドのポリマーは、「ポリヌクレオチド」と呼ばれる。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、これらに限定されるものではないが、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、スレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ、β－Ｄ－リボ配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡ、及び２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－α－ＬＮＡを含む）、またはこれらのハイブリッドが挙げられる。
本明細書で使用されるポリヌクレオチドは、未修飾のＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドで構成することができる。例えば、ポリヌクレオチドは、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、及び一本鎖及び二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖またはより一般的には二本鎖、または一本鎖及び二本鎖領域の混合物であってよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子で構成することができる。さらに、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ、またはＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域で構成されてもよい。ポリヌクレオチドはまた、安定性または他の理由のために修飾された１つ以上の修飾塩基またはＤＮＡもしくはＲＮＡ骨格も含みうる。「修飾された」塩基としては、例えば、トリチル化塩基が挙げられる。「修飾ヌクレオシド」としては、例えば、イノシン及びＲＮＡ中に見出されるかまたはＲＮＡを構成する場合、チミンが挙げられる。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」には、化学的、酵素的、または代謝的に修飾された形態が含まれる。
核酸構造：本明細書で使用される場合、「核酸構造」なる用語は、核酸（例えばＲＮＡ）を構成する原子、化学成分、要素、モチーフ、及び／または核酸の配列の配置または組織を指し、及び／または核酸の２次元または３次元状態を指す場合もある。したがって、「ＲＮＡ構造」なる用語は、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）を構成する原子、化学成分、要素、モチーフ、及び／または核酸の配列の配置または組織を指し、及び／またはＲＮＡ分子の２次元及び／または３次元状態を指す場合もある。核酸構造は、組織の複雑さが大きくなる順に、本明細書で「分子構造」、「一次構造」、「二次構造」、及び「三次構造」と呼ばれる４つの組織カテゴリーにさらに区分することができる。
核酸塩基：本明細書で使用される場合、「核酸塩基」（あるいは「ヌクレオチド塩基」または「窒素含有塩基」）なる用語は、核酸中に見出されるプリンまたはピリミジン複素環式化合物を指し、核酸またはその部分もしくはセグメントに改善された特性（例えば結合親和性、ヌクレアーゼ耐性、化学的安定性）を付与する天然のプリン及びピリミジンの任意の誘導体または類似体を含む。アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルは、主として天然核酸にみられる主要なまたは標準的な核酸塩基である。他の天然、非天然、非標準的及び／または合成核酸塩基を、本明細書に開示されるものなどの核酸に組み込むこともできる。
ヌクレオシド／ヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ヌクレオシド」なる用語は、核酸塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）、またはその誘導体もしくは類似体（本明細書ではやはり「核酸塩基」と呼ばれる）に共有結合で連結された糖分子（例えば、ＲＮＡ中のリボースまたはＤＮＡ中のデオキシリボース）、またはその誘導体もしくは類似体を含む化合物を指す。本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」なる用語は、リン酸基に共有結合で連結されたヌクレオシドを指す。本明細書において使用される場合、「リボヌクレオシド」なる用語は、リボースと核酸塩基（例えば、アデノシン（Ａ）、シチジン（Ｃ）、グアノシン（Ｇ）、５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）、ウリジン（Ｕ）、またはイノシン（Ｉ））とを含むヌクレオシドを指す。
機能的に連結された：本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドなどの核酸、またはそのフラグメントもしくはその部分は、別の核酸配列、またはフラグメントもしくはその部分と機能的関係に置かれる場合に「機能的に連結」される。
規則的かつ反復的な抗原または抗原決定基のアレイ：本明細書で使用される場合、「規則的かつ反復的な抗原または抗原決定基のアレイ」なる用語は、それぞれコア粒子及びウイルス様粒子に対する抗原または抗原決定基の通常、好ましくは均一な空間的配置によって特徴付けられる、抗原または抗原決定基の反復パターンを一般的に指す。いくつかの実施形態では、反復パターンは、幾何学的パターンでありうる。規則的かつ反復的な抗原または抗原決定基のアレイの一般的な例は、好ましくは０．５～３０ナノメートル、より好ましくは３～１５ナノメートル、さらにより好ましくは３～８ナノメートルの間隔を有する、厳密に反復的な準結晶秩序の抗原または抗原決定基を有するものである。
パッケージング：本明細書で使用される場合、「パッケージング」なる用語は、ＶＬＰに関連するＲＬＲアゴニストの状態を指す。本明細書で使用される場合、「パッケージング」なる用語は、例えば、共有結合（例えば、化学的結合による）、または非共有結合（例えば、イオン性相互作用、疎水性相互作用、水素結合など）であってよい結合を含む。共有結合は、例えば、エステル結合、エーテル結合、ホスホエステル結合、アミド結合、ペプチド結合、イミド結合、炭素硫黄結合、炭素リン結合などでありうる。この用語には、物質の封入、または部分的な封入も含まれる。「パッケージング」なる用語には、「結合された」、「封入された」及び「付着された」などの用語が含まれる。例えば、ＲＬＲアゴニストは、共有結合にも非共有結合にもよらず、実際の結合なしでＶＬＰによって封入されうる。いくつかの実施形態では、「パッケージングされた」なる用語は、パッケージングされた状態の核酸がＤＮＡｓｅまたはＲＮＡｓｅによる加水分解を受けないことを示す。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、ＶＬＰカプシドの内部に、最も好ましくは非共有結合による形でパッケージングされる。
ポリヌクレオチド／オリゴヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」なる用語は互換的に使用され、天然の塩基、糖及び糖間（骨格）結合からなるヌクレオチドまたはヌクレオシドモノマーの一本鎖または二本鎖ポリマーもしくはオリゴマーを指す。「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」なる用語には、同様に機能する非天然の塩基、糖及び糖間（骨格）結合、またはそれらの部分を含むポリマー及びオリゴマーも含まれる。「ポリヌクレオチド」なる用語は任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を包含するため、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド配列のいずれの特定の長さにも限定されない。短いポリヌクレオチドは、当該技術分野では一般的には「オリゴヌクレオチド」と呼ばれる。本開示との関連においては、修飾によってサイトカイン産生の増加、細胞取り込みの増加及び／またはヌクレアーゼの存在下での安定性の増加を含む（ただしこれらに限定されない）１つ以上の望ましい、または有益な生物学的特性または活性が増加することから、このような修飾または置換ポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドが天然のポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドに優先してしばしば使用される。いくつかの実施形態では、本開示のアゴニストは、１つ以上の有益な特性を付与するか、または生物学的活性を増加させる（例えば、ヌクレアーゼ耐性の増加、細胞への取り込みの増加、二重鎖安定性の増加、標的ポリペプチドへの結合親和性の増加）修飾ヌクレオチドの少なくとも１つの領域を含むポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドを含む。
パリンドローム配列：本明細書で使用される場合、「パリンドローム配列」（あるいは「パリンドローム」）なる用語は、自己相補的であるヌクレオチドの配列であって、５’から３’方向のヌクレオチドの配列が、相補鎖を構成するヌクレオチドの配列を５’から３’方向に読んだ場合に同じであるような配列を指す。例えば、配列５’－ＡＣＣＴＡＧＧＴ－３’は、その相補配列である３’－ＴＧＧＡＴＣＣＡ－５’が、５’から３’方向に読んだ場合に元の配列と同じであるため、パリンドローム配列である。これに対して、配列５’－ＡＧＴＧＧＣＴＧ－３’は、その相補配列である３’－ＴＣＡＣＣＧＡＣ－５’が、５’から３’方向に読んだ場合に元の配列と同じでないため、パリンドローム配列ではない。
一実施形態では、アゴニストは第１のオリゴヌクレオチドからなり、第１のオリゴヌクレオチドの配列はパリンドローム配列である。別の実施形態では、アゴニストは第１のオリゴヌクレオチドからなり、第１のオリゴヌクレオチドはパリンドローム配列を含む。
一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドのパリンドローム配列は、オリゴヌクレオチドの５’末端とオリゴヌクレオチドの３’末端の両方を含み、したがって平滑末端を形成する。本発明の一実施形態では、オリゴヌクレオチドは単一のパリンドローム配列を含み、本発明の別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、平滑末端を有するヘアピン二重鎖を形成するように、１つまたは２つの異なるオリゴヌクレオチド内の２つのパリンドロームを連結する介在配列、スペーサー、またはリンカーを挟んだ２つの相補的なパリンドロームを含む。
非経口投与：本明細書で使用される場合、「非経口投与」及び「非経口投与される」ならびに他の文法的に等価な語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を指し、通常、注射によるものであり、これらに限定されるものではないが、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、及び胸骨内注射及び注入が含まれる。
患者：本明細書で使用される場合、「患者」なる用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳動物対象を含む。
本明細書において使用される場合、２つ以上の核酸またはポリペプチドの配列との関連での「同一率」（％）なる用語は、下記の配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰ及びＢＬＡＳＴＮ、または当業者が利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを用いて、または目視検査により測定される、最大の一致について比較し、整列させた場合に、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定の比率（％）が同じであるような２つ以上の配列または部分配列のことを指す。用途に応じて、「同一率」（％）は、比較される配列の領域にわたって、例えば、機能ドメインにわたって存在するか、あるいは、比較される２つの配列の完全長にわたって存在することができる。配列比較では、一般的に、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを用いる場合、試験配列及び参照配列をコンピュータに入力し、必要な場合には部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムのパラメータを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムが、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列（複数可）の配列同一率（％）を算出する。２個の配列間の同一率（％）は、２個の配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、２個の配列によって共有された同一位置の数の関数である（すなわち、相同率（％）＝同一位置の数／位置の総数×１００）。２個の配列間の配列の比較及び同一率（％）の決定は、以下の非限定的な例に述べられるように数学的アルゴリズムを用いて実現することができる。
比較を行うための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性の探索法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータ処理による実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．におけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視検査によって（一般的には、下記のＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．を参照）実施することができる。
配列同一率（％）及び配列類似率（％）を決定するのに適したアルゴリズムの１つの例として、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムがある。ＢＬＡＳＴ解析を行うためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎウェブサイトを通じて公に入手可能である。２個のヌクレオチド配列間の同一率（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍより入手可能）のＧＡＰプログラムを使用し、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリクス及びギャップ重み＝４０、５０、６０、７０、または８０、及び長さ重み＝１、２、３、４、５、または６を用いて求めることができる。２個のヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一率（％）は、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ， ４：１１－１７ （１９８９））を使用し、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ＝１２、ギャップペナルティ＝４を用いて求めることもできる。さらに、２個のアミノ酸配列間の同一率（％）は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍより入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． （４８）：４４４－４５３ （１９７０））を用い、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリクスまたはＰＡＭ２５０マトリクスのいずれか、及びギャップ重み＝１６、１４、１２、１０、８、６または４、及び長さ重み＝１、２、３、４、５または６を用いて求めることができる。
本開示の核酸及びタンパク質配列をさらに「クエリー配列」として用いて公開データベースに対する検索を行って例えば関連する配列を同定することができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索をＮＢＬＡＳＴプログラムを用い、スコア＝１００、ワード長さ＝１２として行うことで本発明の核酸分子に対して相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索をＸＢＬＡＳＴプログラムを用い、スコア＝５０、ワード長さ＝３として行うことで本発明のタンパク質分子に対して相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のギャップを含むアラインメントを得るには、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２の記載にしたがって用いることができる。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを用いる場合、各プログラム（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを用いることができる（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照）。
薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」なる用語は、本明細書では、妥当なベネフィット／リスク比に釣り合う、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症をともなわずに、正しい医学的判断の範囲内でヒト及び動物の組織、臓器、及び／または体液と接触する使用に適した化合物、材料、組成物、及び／または剤形のことを指す。
薬学的に許容される担体：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」なる用語は、生理学的適合性を有するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを指し、これらを含む。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含むことができる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９７７） Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ６６：１－１９を参照）。
リン酸：本明細書で使用される「リン酸」なる用語は、リン酸の塩またはエステルを意味する。ポリリン酸は、酸素原子を共有することによって互いに連結された四面体ＰＯ４（リン酸）構造単位から形成されるポリマー性オキシアニオンの塩またはエステルである。本明細書で使用される場合、「二リン酸」なる用語は、２個のリン酸構造単位を含むポリリン酸を指す。本明細書で使用される場合、「三リン酸」なる用語は、３個のリン酸構造単位を含むポリリン酸を指す。いくつかの実施形態では、本開示は、５’末端に連結された二リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含むＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニストを提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、５’末端に連結された三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含むＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニストを提供する。いくつかの実施形態では、その誘導体または類似体は、リン酸の生物学的等価体である。
リン酸の生物学的等価体：本明細書で使用される場合、「リン酸の生物学的等価体」（あるいは「リン酸模倣体」）なる用語は、リン酸に類似した物理的または化学的特性を有し、二リン酸及び三リン酸部分を含むリン酸に大まかに類似した生物学的特性を生じる化学置換基または基を指す。薬物設計において、ある生物学的等価体を別の生物学的等価体と交換する目的は、化学構造に大きな変化をもたらすことなく化合物の所望の生物学的または物理的特性を高めることである。生物学的等価体の使用は、医薬品開発において広く普及しており、例えば、毒性の低減、バイオアベイラビリティの変更、または親化合物またはリード化合物の活性または代謝の改変に使用されている（例えば、本明細書に参照によりその全体を援用するところのＲｙｅ ａｎｄ Ｂａｅｌｌ（２００５）Ｃｕｒｒ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １２（２６）：３１２７－３１４１；Ｅｌｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）ＭｅｄＣｈｅｍＣｏｍ ３（７）：７３５－７５１を参照）。
ポリヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」なる用語は、アミノ酸残基のポリマーを指して互換的に使用される。これらの用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学模倣体であるようなアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然のアミノ酸ポリマーにも適用される。
予防する：本明細書で使用される場合、「予防する」なる用語は、状態に関連して使用される場合、組成物を投与しない対象と比較して、対象における医学的状態の症状の頻度を減少させるか、またはその発症を遅らせる組成物の投与を指す。
精製された：本明細書で使用される場合、本明細書に記載されるタンパク質（抗体またはフラグメント）のいずれかに適用される「精製された」または「単離された」なる用語は、それに天然に付随する成分（例えば、そのタンパク質を発現する原核生物中の他のタンパク質、脂質、及び核酸）から分離または精製されたポリペプチド（例えば、タンパク質または他の天然の生物学的または有機分子）を指す。一般的には、あるポリペプチドは、試料中の全タンパク質の少なくとも６０（例えば、少なくとも６５、７０、７５、８０、８５、９０、９２、９５、９７、または９９）重量％を構成する場合に精製されている。
参照リガンド：本明細書で使用される場合、「参照リガンド」（「参照アゴニスト」と互換的に使用される）または「参照分子」なる用語は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体リガンドを指し、それ自身と１つ以上の別個のＲＩＧ－Ｉ様受容体リガンドとの間の関係性を確立するために用いられ、その関係性は、参照リガンド及び１つ以上の別個のＲＩＧ－Ｉ様受容体リガンドの相対的アゴニスト作用である。本明細書で使用される場合、この用語は、本明細書に記載されるものなどの試験またはアッセイ（例えば、ＩＦＮ誘導アッセイ）において競合物質として有用であるＲＩＧ－Ｉ様受容体リガンドまたはアゴニストを意味し、このアッセイは、ＲＩＧ－Ｉ様受容体に結合する１つ以上の別個のアゴニストの発見、同定または開発に有用である。
ＲＩＧ－Ｉ：本明細書で使用される場合、「ＲＩＧ－Ｉ」なる用語は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体ファミリーの特定のメンバーであり、ヒトにおいてＤＤＸ５８遺伝子によってコードされるＲｅｔｉｎｏｉｃ Ａｃｉｄ－Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｇｅｎｅ Ｉポリペプチドを指す。当該技術分野におけるＲＩＧ－Ｉの別名及び頭字語としては、ＤＥＡＤボックスポリペプチド５８、ＲＩＧＩ、ＲＬＲ－１、ＳＧＭＲＴ２、及びＤＥＸＤ／Ｈ－ボックスヘリカーゼ５８が含まれる。完全長のヒトＲＩＧ－Ｉの例示的なアミノ酸配列を表４（配列番号９８）及び以下に記載する。
ＭＴＴＥＱＲＲＳＬＱＡＦＱＤＹＩＲＫＴＬＤＰＴＹＩＬＳＹＭＡＰＷＦＲＥＥＥＶＱＹＩＱＡＥＫＮＮＫＧＰＭＥＡＡＴＬＦＬＫＦＬＬＥＬＱＥＥＧＷＦＲＧＦＬＤＡＬＤＨＡＧＹＳＧＬＹＥＡＩＥＳＷＤＦＫＫＩＥＫＬＥＥＹＲＬＬＬＫＲＬＱＰＥＦＫＴＲＩＩＰＴＤＩＩＳＤＬＳＥＣＬＩＮＱＥＣＥＥＩＬＱＩＣＳＴＫＧＭＭＡＧＡＥＫＬＶＥＣＬＬＲＳＤＫＥＮＷＰＫＴＬＫＬＡＬＥＫＥＲＮＫＦＳＥＬＷＩＶＥＫＧＩＫＤＶＥＴＥＤＬＥＤＫＭＥＴＳＤＩＱＩＦＹＱＥＤＰＥＣＱＮＬＳＥＮＳＣＰＰＳＥＶＳＤＴＮＬＹＳＰＦＫＰＲＮＹＱＬＥＬＡＬＰＡＭＫＧＫＮＴＩＩＣＡＰＴＧＣＧＫＴＦＶＳＬＬＩＣＥＨＨＬＫＫＦＰＱＧＱＫＧＫＶＶＦＦＡＮＱＩＰＶＹＥＱＱＫＳＶＦＳＫＹＦＥＲＨＧＹＲＶＴＧＩＳＧＡＴＡＥＮＶＰＶＥＱＩＶＥＮＮＤＩＩＩＬＴＰＱＩＬＶＮＮＬＫＫＧＴＩＰＳＬＳＩＦＴＬＭＩＦＤＥＣＨＮＴＳＫＱＨＰＹＮＭＩＭＦＮＹＬＤＱＫＬＧＧＳＳＧＰＬＰＱＶＩＧＬＴＡＳＶＧＶＧＤＡＫＮＴＤＥＡＬＤＹＩＣＫＬＣＡＳＬＤＡＳＶＩＡＴＶＫＨＮＬＥＥＬＥＱＶＶＹＫＰＱＫＦＦＲＫＶＥＳＲＩＳＤＫＦＫＹＩＩＡＱＬＭＲＤＴＥＳＬＡＫＲＩＣＫＤＬＥＮＬＳＱＩＱＮＲＥＦＧＴＱＫＹＥＱＷＩＶＴＶＱＫＡＣＭＶＦＱＭＰＤＫＤＥＥＳＲＩＣＫＡＬＦＬＹＴＳＨＬＲＫＹＮＤＡＬＩＩＳＥＨＡＲＭＫＤＡＬＤＹＬＫＤＦＦＳＮＶＲＡＡＧＦＤＥＩＥＱＤＬＴＱＲＦＥＥＫＬＱＥＬＥＳＶＳＲＤＰＳＮＥＮＰＫＬＥＤＬＣＦＩＬＱＥＥＹＨＬＮＰＥＴＩＴＩＬＦＶＫＴＲＡＬＶＤＡＬＫＮＷＩＥＧＮＰＫＬＳＦＬＫＰＧＩＬＴＧＲＧＫＴＮＱＮＴＧＭＴＬＰＡＱＫＣＩＬＤＡＦＫＡＳＧＤＨＮＩＬＩＡＴＳＶＡＤＥＧＩＤＩＡＱＣＮＬＶＩＬＹＥＹＶＧＮＶＩＫＭＩＱＴＲＧＲＧＲＡＲＧＳＫＣＦＬＬＴＳＮＡＧＶＩＥＫＥＱＩＮＭＹＫＥＫＭＭＮＤＳＩＬＲＬＱＴＷＤＥＡＶＦＲＥＫＩＬＨＩＱＴＨＥＫＦＩＲＤＳＱＥＫＰＫＰＶＰＤＫＥＮＫＫＬＬＣＲＫＣＫＡＬＡＣＹＴＡＤＶＲＶＩＥＥＣＨＹＴＶＬＧＤＡＦＫＥＣＦＶＳＲＰＨＰＫＰＫＱＦＳＳＦＥＫＲＡＫＩＦＣＡＲＱＮＣＳＨＤＷＧＩＨＶＫＹＫＴＦＥＩＰＶＩＫＩＥＳＦＶＶＥＤＩＡＴＧＶＱＴＬＹＳＫＷＫＤＦＨＦＥＫＩＰＦＤＰＡＥＭＳＫ
（ＮＣＢＰアクセッション番号：ＮＰ＿０５５１２９．２）
ＲＩＧ－Ｉ様受容体：本明細書で使用される場合、「ＲＩＧ－Ｉ様受容体」（「ＲＬＲ」と略記する）なる用語は、一般的にウイルスＲＮＡに見出される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の細胞質パターン認識センサーとして機能するＤＥｘＤ／ＨボックスＲＮＡヘリカーゼのファミリーのすべてのメンバーを指す。リガンドと結合すると、ＲＬＲは下流の転写因子活性化にシグナルを送って１型インターフェロン（ＩＦＮ）の産生及び抗ウイルス遺伝子の発現を誘導し、これにより、ウイルス感染を制御する細胞内免疫応答を誘発する。ＲＩＧ－Ｉ（ｒｅｔｉｎｏｉｃ ａｃｉｄ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｇｅｎｅ Ｉ）（レチノイン酸誘導遺伝子Ｉ）、ＭＤＡ５（ｍｅｌａｎｏｍａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒ ５）（黒色腫分化関連因子５）、及びＬＧＰ２（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２ ａｎｄ ａ ｈｏｍｏｌｏｇ ｏｆ ｍｏｕｓｅ Ｄ１１ｌｇｐ２）の３つのＲＬＲメンバーが同定されている（Ｌｏｏ ａｎｄ Ｇａｌｅ（２０１１）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３４（５）：６８０－６９２）。
ＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニスト：本明細書で使用される場合、「ＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニスト」なる用語（「ＲＬＲアゴニスト」なる用語と交換可能に使用される）は、ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に結合して、ＲＬＲシグナル伝達または他のＲＬＲ媒介機能によって媒介される生物学的活性、応答、及び／または下流経路を部分的または完全に促進、誘導、増加、及び／または活性化する核酸（例えば、ＲＮＡ）を指す。ＲＩＧ－Ｉ受容体アゴニストの例が本明細書に示されている。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、一本鎖核酸（例えば、ＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、ＲＬＲアゴニストは、二本鎖核酸（例えば、ＲＮＡ）である。
安定なＲＮＡ二次構造：本明細書で使用される場合、「安定なＲＮＡ二次構造」なる用語は、生理学的条件下で持続的に維持され、低い自由エネルギー状態によって特徴付けられるＲＮＡ分子、またはその局所セグメントもしくはその部分が取りうる構造、フォールド、または立体配置を指す。安定なＲＮＡ二次構造の一般的な例としては、二重鎖、ヘアピン、及びステムループが挙げられる。安定なＲＮＡ二次構造が様々な生物学的活性を示すことは当該技術分野では周知のことである。ポリヌクレオチド二重鎖に関して使用される「安定した」なる用語は、生理学的条件下で、または核酸診断もしくは治療用途において用いられる一般的な塩及び温度条件下で二重鎖が、基本的にもっぱら二重鎖の形態としてハイブリダイズ、構造化またはアニーリングした状態を維持することを意味する。
対象：本明細書で使用される場合、「対象」なる用語は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法及び組成物は、免疫疾患を有する対象を治療するために使用することができる。「非ヒト動物」なる用語には、ヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物などのすべての脊椎動物が含まれる。
Ｔ細胞：「Ｔ細胞」なる用語は、細胞表面のＴ細胞受容体の存在によって他の白血球と区別することができる白血球の一種を指す。Ｔ細胞には、これらに限定されるものではないが、ヘルパーＴ細胞（別名ＴＨ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞）及びサブタイプ（ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、ＴＨ９、及びＴＦＨ細胞を含む）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、Ｔキラー細胞、キラーＴ細胞としても知られる）、メモリーＴ細胞及びサブタイプ（セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ及びＴＥＭＲＡ細胞）、ならびに常駐メモリーＴ細胞（ＴＲＭ細胞）を含む）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞またはサプレッサーＴ細胞としても知られる）及びサブタイプ（ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ４＋ＦＯＸＰ３－Ｔｒｅｇ細胞、Ｔｒ１細胞、Ｔｈ３細胞、及びＴｒｅｇ１７細胞を含む）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞としても知られる）、粘膜関連インバリアントＴ細胞（ＭＡＩＴ）、及びガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）（Ｖγ９／Ｖδ２ Ｔ細胞を含む）を含むいくつかのサブセットがある。上記に述べた、または上記に述べられていないＴ細胞のいずれか１つ以上を、本発明の使用方法における標的細胞型とすることができる。
Ｔ細胞活性化：本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞活性化」または「Ｔ細胞の活性化」なる用語は、その表面に抗原特異的Ｔ細胞受容体を発現する成熟Ｔ細胞が、それらの同種抗原を認識して、細胞周期に入り、サイトカインまたは溶解性酵素を分泌し、細胞ベースのエフェクター機能を開始するかまたはこれを行う能力を獲得することによって応答する細胞プロセスを指す。Ｔ細胞活性化は、完全に活性化されるために少なくとも２つのシグナルを必要とする。第１のシグナルは、抗原主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によるＴ細胞抗原特異的受容体（ＴＣＲ）の結合後に生じ、第２のシグナルは、その後の共刺激分子（例えば、ＣＤ２８）の結合によって生じる。これらのシグナルは核に伝達されて、Ｔ細胞のクローン増殖、細胞表面上の活性化マーカーの発現増加、エフェクター細胞への分化、細胞毒性またはサイトカイン分泌の誘導、アポトーシスの誘導、またはこれらの組み合わせをもたらす。
Ｔ細胞媒介応答：本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞媒介応答」なる用語は、これらに限定されるものではないが、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）及びヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含むＴ細胞によって媒介される任意の応答を指す。Ｔ細胞媒介応答には、例えば、Ｔ細胞傷害性及び増殖が含まれる。
テトラループ：本明細書で使用される場合、「テトラループ」なる用語は、二重鎖の一方の末端をキャップして二重鎖を構成する２本の鎖同士を連結することでヘアピン構造に安定性を与える、ヘアピン型またはステムループ型のＲＮＡ二次構造中に見出される４塩基のループモチーフの一種を指す。
治療剤：本明細書で使用される場合、「治療剤」なる用語は、対象に投与された場合に、治療的、診断的、及び／または予防的効果を有し、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。
治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」または「治療有効用量」なる用語、または本明細書で使用される同様の用語は、例えば、疾患に既に罹患している患者における状態または疾患及びその合併症を治癒または少なくとも部分的に抑制する（例えば、癌の１つ以上の症状の改善）といった所望の生物学的または医学的応答を誘発する薬剤（例えば、合成ＲＩＧ－Ｉ様受容体アゴニスト）の量を意味するものとする。このような使用における有効量は、治療される疾患の重症度及び患者自身の免疫系の一般的状態に応じて決められる。
治療する：本明細書で使用される「治療する」、「治療中の」、及び「治療」なる用語は、本明細書に記載される治療的または予防的措置を指す。「治療」の方法は、かかる治療を必要とする対象、例えば特定の抗原に対する高い免疫応答を必要とする対象または最終的にそのような疾患に罹る可能性のある対象に本開示のヒト抗体の投与を行うことによって、疾患または再発疾患の１つ以上の症状を予防、治癒、遅延、その重症度を軽減、もしくは改善するか、またはかかる治療が行われない場合に予想される生存期間を超えて対象の生存期間を延ばすものである。
腫瘍微小環境：本明細書で使用される場合、「腫瘍微小環境」（あるいは「がん微小環境」。ＴＭＥと略記する）なる用語は、周囲の血管ならびに免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症細胞、及びリンパ球を含むがこれらに限定されない非がん性細胞を含む、腫瘍または新生物が存在する細胞環境を指す。シグナル伝達分子及び細胞外マトリクスもＴＭＥを構成する。腫瘍と周囲の微小環境とは密接に関連しており、常に相互作用している。腫瘍が細胞外シグナルを放出し、腫瘍血管新生を促進し、末梢免疫寛容を誘導することによって微小環境に影響を与えることができるのに対して、微小環境中の免疫細胞は腫瘍細胞の成長及び進化に影響しうる。
ウイルス様粒子（ＶＬＰ）：本明細書で使用される場合、「ウイルス様粒子」または「ＶＬＰ」なる用語は、ウイルス粒子に類似しているが病原性が示されていない構造を指す。一般的に、本開示によるウイルス様粒子は、ウイルス様粒子のタンパク質をコードする遺伝情報を有していない。一般的にＶＬＰはウイルスゲノムを欠いているため、非感染性である。また、ウイルス様粒子は異種発現によってしばしば大量に生成することができ、容易に精製することができる。一部のウイルス様粒子は、それらのゲノムとは異なる核酸を含んでいる場合もある。示されるように、本開示によるウイルス様粒子は、ウイルスゲノムの全部または一部、特にウイルスゲノムの複製性及び感染性要素を欠いているため、非複製性及び非感染性である。本開示によるウイルス様粒子は、それらのゲノムとは異なる核酸を含んでいる場合もある。いくつかの実施形態では、本開示によるウイルス様粒子は、対応するウイルス、バクテリオファージ、またはＲＮＡファージのウイルス性カプシドなどのウイルス性カプシドである。本明細書で互換的に使用される「ウイルス性カプシド」または「カプシド」なる用語は、ウイルスタンパク質サブユニットで構成されるマクロ分子集合体を指す。一般的に、好ましくは、ウイルスタンパク質サブユニットは、固有の反復組織を含む構造を有するウイルス性カプシド及びカプシドにそれぞれ集合し、この構造は通常、球状または管状である。例えば、ＲＮＡファージまたはＨＢｃＡｇのカプシドは、正二十面体対称性の球形の形態を有する。本明細書で使用される場合、「カプシド様構造」なる用語は、上記に定義した意味においてカプシド形態に類似しているが、十分な規則性及び反復性を維持する一方で一般的な対称性集合体から逸脱しているウイルスタンパク質サブユニットで構成されたマクロ分子集合体を指す。
バクテリオファージのウイルス様粒子：本明細書で使用される場合、「バクテリオファージのウイルス様粒子」なる用語は、バクテリオファージの構造に類似しており、非複製性及び非感染性であり、バクテリオファージの複製マシナリーをコードする１乃至複数の遺伝子を少なくとも欠いており、宿主へのウイルスの付着または侵入に関与する１乃至複数のタンパク質をコードする１乃至複数の遺伝子も通常は欠いているウイルス様粒子を指す。しかしながら、この定義には、上記の遺伝子が依然存在しているが不活性であるために、非複製性及び非感染性のバクテリオファージのウイルス様粒子となるようなバクテリオファージのウイルス様粒子も包含されるはずである。
ＲＮＡファージコートタンパク質の１８０個のサブユニットの自己集合によって形成され、場合により宿主ＲＮＡを含むカプシド構造は、「ＲＮＡファージコートタンパク質のＶＬＰ」と呼ばれる。具体例として、Ｑβコートタンパク質のＶＬＰがある。この特定の場合では、Ｑβコートタンパク質のＶＬＰは、Ｑβ ＣＰサブユニットのみから集合化させることもでき（例えば、抑制によってより長いＡ１タンパク質の発現を阻止するＴＡＡ終止コドンを含むＱβ ＣＰ遺伝子の発現によって生成される。Ｋｏｚｌｏｖｓｋａ，Ｔ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９：９－１５ （１９９６）を参照）、またはカプシドアセンブリ中にＡ１タンパク質サブユニットをさらに含む場合もある。
ウイルス粒子：本明細書で使用される場合、「ウイルス粒子」なる用語は、ウイルスの形態学的な形態を指す。一部のウイルスのタイプでは、ウイルス粒子はタンパク質カプシドに取り囲まれたゲノムを含み、さらなる構造（例えば、エンベロープ、尾部など）を有するものもある。非エンベロープウイルス粒子は、ウイルスゲノムを取り囲んで保護するタンパク質性カプシドで構成されている。エンベロープウイルスもウイルスの遺伝物質を取り囲むカプシド構造を有するが、カプシドを取り囲む脂質二重層エンベロープをさらに有している。いくつかの実施形態では、ＶＬＰは、リポタンパク質エンベロープもリポタンパク質含有エンベロープも含まない。さらなる実施形態では、ＶＬＰはエンベロープをまったく含まない。
別段の定義がなされない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。方法及び材料について以下に述べるが、本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料も、本開示の方法及び組成物の実施または試験において使用することができる。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、参照によりそれらの全体の内容を援用する。
等価物及び範囲
当業者であれば、通常の実験以上のことを行うことなく、本明細書に記載される特定の実施形態の多くの均等物が認識されるか、または確認できるであろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に記載されるものである。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」といった冠詞は、そうでない旨が示されるか、または他の形で文脈から明らかでない限り、１つまたは複数を意味しうる。群の１つ以上の要素間に「または」を含む請求項または記載は、そうでない旨が示されるか、または他の形で文脈から明らかでない限り、１つ、複数、またはすべての群要素が、特定の製品またはプロセスにおいて存在するか、用いられているか、または他の形で関連している場合に満たされるものとみなされる。本開示は、その群の正確に１つの要素が、特定の製品またはプロセスにおいて存在するか、用いられているか、または他の形で関連している実施形態を含む。本開示は、その群の複数の、またはすべての要素が、特定の製品またはプロセスにおいて存在するか、用いられているか、または他の形で関連している実施形態を含む。さらに、本開示は、記載される請求項のうちの１つ以上からの１つ以上の限定、要素、節、記述用語などが別の請求項に導入されるようなすべての変化形、組み合わせ、及び順列を包含する点は理解されなければならない。例えば、別の請求項に従属する任意の請求項は、同じ基本請求項に従属する任意の他の請求項にみられる１つ以上の限定を含むように修正することができる。さらに、請求項が組成物を記載している場合、他の形で示されない限り、または矛盾もしくは不一致が生じることが当業者にとって明らかでない限り、本明細書に開示される目的のいずれか１つで組成物を使用する方法が含まれ、また、本明細書に開示された製造方法のいずれかまたは当該技術分野では周知の他の方法に従って組成物を製造する方法が含まれる点は理解されなければならない。
要素がリストとして、例えば、マーカッシュ群形式で記載されている場合、要素の各部分群も開示され、いずれの要素（複数可）もこの群から除外されうる点は理解されなければならない。一般的に本発明、または本発明の態様が特定の要素、特徴などを含むものとみなされる場合、本発明の特定の実施形態または本発明の態様が、かかる要素、特徴などから構成されるか、または本質的に構成されるものである点は理解されなければならない。簡単の目的で、これらの実施形態は、本明細書では具体的にこれらの文言では記載されていない。
「含む」なる用語はオープンであることを意図し、さらなる要素またはステップが包含されることを許容するが必要としない点に留意されたい。「含む」なる用語が本明細書で使用される場合、「からなる」なる用語もしたがって包含され、開示される範囲が与えられている場合には端点を含む。さらに、他の形で示されるか、または他の形で文脈上及び当業者の理解から明白でない限り、範囲として表される値は、文脈上そうでない旨が明らかに示されない限り、範囲の下限の単位の１０分の１まで、本発明の異なる実施形態に記載される範囲内の任意の特定の値または部分範囲を取り得る点は理解されなければならない。
さらに、先行技術の範囲内の本発明の任意の特定の実施形態は、請求項のいずれか１つ以上から明らかに除外されうる点は理解されなければならない。かかる実施形態は、当業者には周知のものとみなされるため、その除外が明らかに本明細書に記載されていない場合であっても除外されうる。本発明の組成物のいずれの特定の実施形態（例えば、任意の核酸またはそれによりコードされるタンパク質、任意の製造方法、任意の使用方法など）も、先行技術の存在に関連するか否かによらず、あらゆる理由により、任意の１つ以上の請求項から除外されうる。
すべての引用元、例えば、参考文献、刊行物、データベース、データベースエントリ、及び本明細書に引用される技術分野は、引用文献に明示的に記載されていない場合であっても、参照によって本出願に援用されるものである。引用文献と本出願の記載が矛盾する場合、本出願の記載が優先するものとする。
以下の実施例を参照することにより本開示のより深い理解が得られよう。しかしながら、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に述べられる実施例及び実施形態はあくまで例示的な目的のものに過ぎず、これらを考慮することで様々な改変または変更が当業者に示唆され、かかる改変及び変更は本出願の主旨及び範囲、ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるものである点は理解されよう。
実施例１：ＲＬＲアゴニストによるＨｕＰＢＭＣのトランスフェクションは、インビトロでサイトカイン産生を誘導する
サイトカイン誘導に様々な改変を有するＲＬＲアゴニストの効果を決定するため、サイトカイン産生を誘導するＲＬＲアゴニストの能力をインビトロで評価した。ヒト末梢血単核球（ｈｕＰＢＭＣ）を２人の健康なドナーから調製し、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、Ｌ－グルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを添加した１００μＬのＲＰＭＩ １６４０細胞培地中、標準的な９６ウェル組織培養プレートに２×１０５細胞／ウェルの密度で播種した。図１に示されるようなＲＬＲアゴニストによるｈｕＰＢＭＣの独立したトランスフェクションを、トランスフェクション試薬としてリポフェクタミン２０００を用いて行った。細胞を加湿インキュベーター中、３７℃で２４時間インキュベートした後、細胞培養上清を回収した。上清を直ちに凍結し、－２０℃で保存した。試料を、製造業者の指示に従ってＵ－Ｐｌｅｘ ＭＳＤプラットフォームを使用してサイトカインＩＦＮ－α２ａ（図１）、ならびにＩＦＮ－β、ＩＬ－１β、ＩＰ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－６、ＭＣＰ－１及びＭＩＰ－１β（データは示さず）の分析を行うために１回解凍した。図１は、異なる改変及び／または配列モチーフを含む新規な候補ＲＬＲアゴニストで処理したヒトＰＢＭＣからのサイトカイン分泌の用量依存的誘導を示す。ＲＬＲアゴニストは、１０ｎＭ、２ｎＭ、または０．４ｎＭのいずれかで添加した。ＲＬＲアゴニストのトランスフェクションに応じて細胞から放出されるサイトカインの量をｐｇ／ｍＬで示している。
表３及び表４に、各ＲＬＲアゴニストの配列を示す。表３は、図１で試験した各化合物に対応する配列及び番号も示している。例えば、図１の化合物Ｘ２５２２４は、リンカー「ＵＵＣＧ」を介して配列番号７３を含む第２のオリゴヌクレオチドに連結された配列番号４２を含む第１のオリゴヌクレオチドを含む「ＲＩＧ７」に相当し、５’二リン酸部分を有している。ＲＩＧ７の配列は、表４にも配列番号６として記載されている。ヌクレオチドリンカーを介して連結された第１と第２のオリゴヌクレオチドを有する表３のＲＬＲアゴニストの場合、このアゴニストは、オリゴヌクレオチド合成装置を使用して単一のオリゴヌクレオチドとして合成される。表３に示されるように、特定のＲＬＲアゴニストは、合成リンカーを介して第２のオリゴヌクレオチドに連結された第１のオリゴヌクレオチドを有している。例えば、「ＲＩＧ４３ａ」は、Ｃ９アルキルリンカーを介して配列番号９１を含む第２のオリゴヌクレオチドに連結された配列番号６３を含む第１のオリゴヌクレオチドを含んでおり、「ＲＩＧ ４３ｂ」は、Ｃ９アルキルリンカーを介して配列番号９１を含む第２のオリゴヌクレオチドに連結された配列番号６３を含む第１のオリゴヌクレオチドを含み、かつ５’二リン酸部分を含んでおり、「ＲＩＧ ４４」は、ヘキサエチレングリコールリンカーを介して配列番号９１を含む第２のオリゴヌクレオチドに連結された配列番号６３を含む第１のオリゴヌクレオチドを含み、かつ５’二リン酸部分を含んでいる。
別の実験において、異なる濃度でＩＦＮ－α発現を誘導する２つのＲＬＲアゴニストの効力をさらに評価した。ＲＩＧ ５０ｃ（Ｘ２４９０７）（Ｌｉｎｅｈａｎ ｅｔ ａｌ．，（２０１８）Ｓｃｉ．Ａｄｖ．４（２）：ｅ１７０１８５４）及びイノシン置換ＲＩＧ ２７ｃ（Ｘ２４９３５）を、０．２ｎＭ、２ｎＭ、２０ｎＭ、及び２００ｎＭの濃度で上記で述べたようにインビトロアッセイで試験した。図２は、非特異的コントロール、すなわち、培地、リポフェクタミン、または免疫血清とインキュベートしたＰＢＭＣによって誘導されるサイトカインレベルと比較した、両化合物によるＩＦＮ－α発現の用量依存的誘導を示す。試験した、より低い濃度では、ＰＢＭＣをＲＩＧ ２７ｃとインキュベートした場合に、ＲＩＧ ５０ｃとのインキュベーションによって誘発されたＩＦＮ－αレベルと比較してＩＦＮ－αの分泌量は高くなった。０．２ｎＭまたは２ｎＭのＲＩＧ ２７ｃをトランスフェクトしたＰＢＭＣは、同じ濃度のＲＩＧ ５０ｃをトランスフェクトしたＰＢＭＣと比較して、それぞれ、４９８±８７ｐｇ／ｍＬ（１６７．２±２１ｐｇ／ｍＬに対して）、及び３１５２±２００ｐｇ／ｍＬ（２４６９±９１ｐｇ／ｍＬに対して）のＩＦＮ－αレベルを誘発した（図２）。
Figure 2022554175000010
Figure 2022554175000011
実施例２：Ｑβ ＶＬＰの合成
Ｑβ ＶＬＰの合成については、本明細書に参照により援用し、下記に簡単に述べる米国特許第９，５１８，０９５号に記載されている。
発現プラスミドｐＴａｃ－ｎＳＤ－Ｑｂ－Ｍｕｔ（配列番号１０１）のクローニング戦略
大腸菌ＲＮＡバクテリオファージＱβのコートタンパク質コード遺伝子（Ｃ）をプラスミドｐＳＤＱｂ－ｒｏｕｔ（配列番号１０９）から増幅した。このプラスミドは、アミノ酸１３３個からなるＱβコートタンパク質（ＣＰ）及びアミノ酸３２９個からなるリードスルータンパク質（Ａ１）をコードする遺伝子Ｃの配列を含むものである。リードスルーを防止するために、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ９９０３０によるヌクレオチド４４５～４５０であるＴＧＡＡＣＡ（配列番号１０２）を配列ＴＡＡＴＧＡ（配列番号１０３）で置換してある。
プラスミドｐＳＤＱｂ－ｍｕｔ由来のコートタンパク質コード遺伝子ＣをＰＣＲにより増幅した。内部ＥｃｏＲＩ部位及び合成シャイン・ダルガノ（ＳＤ、配列番号１０５）配列を有するオリゴヌクレオチドＱｂ－ＦＯＲ３／２（配列番号１０４）を、Ｑｂ ＣＰ遺伝子の５’末端にアニールする。オリゴヌクレオチドＱｂｌａｎｇ－ＲＥＶ２／２（配列番号１０６）は内部ＨｉｎｄＩＩＩ部位を含み、遺伝子Ｃの非コード領域の３’末端にプライミングする。１０５４ｂｐの増幅ＰＣＲ断片には、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ９９０３９のヌクレオチド４６～１０６２（上記に述べたヌクレオチド変化を除く）及び合成ＳＤ配列が含まれる。ＰＣＲ断片を制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ／ＥｃｏＲＩで消化し、得られた１０３６ｂｐの断片を改変ｐＫＫ２２３－３ベクター（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ７７７４９（配列番号１０７）のＨｉｎｄＩＩＩ／ＥｃｏＲＩ制限部位に挿入した。この改変ｐＫＫ２２３－３ベクターにおいて、アンピシリン耐性遺伝子をベクターｐＵＣ４Ｋ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ０６４０４、配列番号１０８）のカナマイシン耐性遺伝子に置き換えた。
ベクターｐＴａｃ－ｎＳＤＱｂ－ｍｕｔ（配列番号１０９）とベクターｐＴａｃＱｂ－ｍｕｔとは、シャイン・ダルガノ配列において異なっている。このシャイン・ダルガノ配列（ｎＳＤ、配列番号１１０）は、プラスミドｐＴａｃＱｂ－ｍｕｔからのＰＣＲによってＱβコートタンパク質コード遺伝子Ｃを増幅することによって導入した。内部ＥｃｏＲＩ部位及び対応する合成シャイン・ダルガノ（ｎＳＤ）配列を有するオリゴヌクレオチドｎＳＤＱｂ－ｍｕｔＥｃｏＲＩｆｏｒ（配列番号１１１）は、Ｑｂ ＣＰ遺伝子の５’末端にアニールする。
Ｑβの発現。Ｔａｃプロモーター及びｎＳＤの制御下にあるＣＰ
大腸菌ＲＢ７９１株をプラスミドｐＴａｃ－ｎＳＤ－Ｑｂ－ｍｕｔ（配列番号１０１）で形質転換した。クローンを振とうフラスコ中で増殖させた。各フラスコにカナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）を含むＲ４０培地（主培地、Ｈｙｐｅｐ ７４５５、グリセロール）１００ｍｌを入れ、開始時点のＯＤ６００＝０．３で一晩培養物を接種した。各振とうフラスコを３０℃、２２０ｒｐｍの攪拌下で４時間インキュベートした（ＯＤ６００＝４～５）。０．５％ラクトースで４時間誘導を行った。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによりタンパク質産生量を測定した。ゲルは強いタンパク質バンドを示し、Ｑβ ＣＰとして同定された。
Ｑβ－ＶＬＰの製造及び精製のためのスケールアッププロセスは、参照により本明細書に援用する米国特許第９，６５７，０６５号に開示されている。簡単に説明すると、大腸菌細胞ペレットを０．１（ｖ／ｖ）％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ－１００溶液に懸濁し、ＡＰＶ ＬＡＢ １００高圧液体ホモジナイザー（ＨＰＬＨ）を通じて７００±５０ｂａｒで３回通過させて破砕した。次に、ホモジネートを接線流濾過（ＴＦＦ）及び滅菌濾過によって処理し、及び／または遠心分離によって清澄化した。
細胞ホモジネートを、ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ（登録商標）ＥＭＤ ＴＭＡＥカラムで陰イオン交換（ＡＩＸクロマトグラフィー）を用いてさらに精製した後、０．２２μＭ細孔径で滅菌濾過し、次いでＭＡＣＲＯ－ＰＲＥＰ（登録商標）セラミックハイドロキシアパタイトタイプＩＩカラムにロードした。
実施例３：ＲＬＲアゴニストのＶＬＰへのパッケージング
ＲＬＲアゴニストは、参照により本明細書に援用される米国特許第９，９５０，０５５号に記載されるようにＶＬＰ内にパッケージングすることができる。簡単に述べると、精製されたＱβ二量体タンパク質を、上記の実施例２に記載されるように単離する。精製されたＱβ二量体カプシドタンパク質は、後述するパッケージング工程の間にＲＬＲアゴニストの周囲にＶＬＰとして再集合される。
ＲＬＲアゴニストの原液（３．３ｍｇ／ｍＬ）をＮａＣＰ１緩衝液（２５０ｍＭ ＮａＣＩ、２０ｎＭ ＮａＰｉ、ｐＨ７．２）に２．２ｍｇ／ｍＬの濃度に溶解させることによってＲＬＲアゴニストのアニーリングを行う。混合物を７０℃に５分間加熱し、室温で１５分間冷却した後、Ｑβの還元が完了するまで氷上に置く。Ｑβ二量体（４．１６５ｍｇ／ｍＬ）を５ｍＭ ＤＴＴ及びＮａＣＰ１緩衝液中で還元する。Ｑβ二量体とＲＬＲアゴニストを室温で１時間振とうすることにより混合する。次に、Ｈ２Ｏ２を１０ｍＭまで加え、Ｑβ ＲＬＲアゴニスト溶液を室温でさらに１時間振とうする。次いで、Ｑβ ＲＬＲアゴニスト再集合混合物を、ＭＷＣＯが１００ｋＤａの膜で透析する。
あるいは、ＲＬＲアゴニストを水に溶解し、０．２× ＨＢＳ中、１、１０及び１００ｎｍｏｌ／ｍｌでＱβ ＶＬＰに加え、サーモミキサー中、３７℃で３時間インキュベートした。過剰の核酸は、酵素による加水分解または透析によって除去した。
実施例４：Ｑβ ＲＩＧによるＨｕＰＢＭＣのトランスフェクションは、インビトロでサイトカイン産生を誘導する
上記実施例３に従って作製されたＱβ－ＲＩＧであるＱβ－ＲＩＧ ２７ｃ（配列番号１１２のアミノ酸配列を有するＲＮＡファージＱβのコートタンパク質を含むＶＬＰにパッケージングされた、配列番号２３のヌクレオチド配列を有するＲＬＲアゴニスト）が、異なる濃度でＩＦＮ－α発現を誘導する能力をさらに評価した。具体的には、Ｑβ－ＲＩＧ ２７ｃを、２ｎＭ、２０ｎＭ、２００ｎＭ、及び６００ｎＭ（ＲＬＲアゴニストに基づく濃度）の濃度で上記に述べたインビトロアッセイで試験した。図３は、非特異的コントロール、すなわち、培地、リポフェクタミン、または免疫血清とインキュベートしたＰＢＭＣによって誘導されるサイトカイン発現レベルと比較した、Ｑβ－ＲＩＧ ２７ｃによるＩＦＮ－α発現の用量依存的誘導を示す。
この結果は、Ｑβ ＶＬＰ送達ビヒクルを使用してＲＬＲアゴニストをパッケージングすることができ、得られたＲＩＧ－ＶＬＰ、例えばＱβ－ＲＩＧ ２７ｃが免疫血清の存在下でＰＢＭＣからのＩＦＮ－αの発現を誘導することを示している。ＰＢＭＣには空のカプシドをトランスフェクトしたが、「カプシド＋血清」はＩＦＮ－α応答を誘導しない。
実施例５：Ｑβ－ＲＩＧのインビボ有効性
Ｑβ－ＲＩＧのインビボ有効性は、参照により本明細書に援用する米国特許第９，９５０，０５５号に記載されるように、前臨床動物試験で評価することができる。マウスにＱβ－ＲＩＧを皮下投与する。Ｑβ－ＲＩＧの免疫刺激効果は、投与後の異なる時点における免疫細胞の細胞内サイトカイン染色によって測定される。
予防的試験では、各Ｑβ－ＲＩＧとウイルス抗原を含むＶＬＰ（抗原－ＶＬＰ）の皮下投与によりマウスをプライミングする。プライミング後の異なる時点で、テトラマー染色によって抗原特異的の頻度を測定する。次いで、ウイルス抗原を発現する生ウイルスでマウスをチャレンジし、チャレンジ後の抗原特異的Ｔ細胞の頻度を例えばテトラマーアッセイで測定する。各Ｑβ－ＲＩＧの免疫刺激効果は、Ｑβ－ＲＩＧ及び抗原－ＶＬＰでプライミングしたマウスにおける抗原特異的Ｔ細胞の頻度を、抗原－ＶＬＰのみでプライミングしたマウスと比較することにより測定することができる。
治療的試験では、マウスにウイルス抗原を発現する生ウイルスに感染させる。テトラマー染色を行って、感染後の抗原特異的Ｔ細胞の頻度を測定する。次いで、マウスにＱβ－ＲＩＧ及び抗原ＶＬＰを皮下投与し、投与後の異なる時点で抗原特異的Ｔ細胞の頻度を測定する。各Ｑβ－ＲＩＧの免疫刺激効果は、Ｑβ－ＲＩＧ及び抗原－ＶＬＰを投与したマウスにおける抗原特異的Ｔ細胞の頻度を、抗原－ＶＬＰのみを投与したマウスと比較することにより測定することができる。
抗がん療法としての各Ｑβ－ＲＩＧの効力を評価するため、マウスにＡ２０ Ｂ細胞リンパ腫またはＢ１６Ｆ１０メラノーマのいずれかを両側性に皮下投与する。各Ｑβ－ＲＩＧ、または生理食塩水コントロールを、腫瘍チャレンジの３～７日後に開始して合計３回の用量で一方の脇腹に腫瘍内（ｉ．ｔ．）投与して、Ｑβ－ＲＩＧ療法の局所的（処理した腫瘍）及び全身的（非処理の腫瘍）効果を評価する。体重、腫瘍体積（処理及び非処理）、及び全生存率を測定する。
各Ｑβ－ＲＩＧと抗がん療法、例えば抗ＰＤ１との併用について同じ腫瘍モデルを用いて試験を行う。マウスに、Ａ２０またはＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞のいずれかを皮下投与し、上記に述べた各Ｑβ－ＲＩＧのみ、または抗ＰＤ－１もしくは生理食塩水コントロールと併用して、腫瘍チャレンジの３～７日後に開始して週２回腹腔内投与することにより処理する。この試験には、抗ＰＤ－１のみの追加治療群も含める。抗がん性の促進を、抗ＰＤ１もしくは各Ｑβ－ＲＩＧのみ、またはこれらを併用して処理したマウスの体重、腫瘍体積（処理及び非処理）、及び全生存率を比較することによって測定する。
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Claims (231)

  1. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＩＧ－Ｉ様受容体（ＲＬＲ）に特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含み、前記ＲＮＡの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、前記ＲＬＲアゴニストと、を含む、組成物であって
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、前記組成物。
  2. 前記ＲＮＡが一本鎖である、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ＲＮＡが二本鎖である、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記ＲＮＡが、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０または３０～３５ヌクレオチドの長さである、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
  5. 前記ＲＬＲアゴニストが、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドとを含み、前記第１のポリヌクレオチドが、前記第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するだけ十分に相補的である、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記二重鎖がヘアピンを含む、請求項５に記載の組成物。
  7. 前記二重鎖が、１０～１５、１５～２０、２０～２５、２５～３０または３０～３５塩基対を含む、請求項５～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記二重鎖が１９個未満の塩基対を含む、請求項５～６のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記第１のポリヌクレオチドがリンカーによって前記第２のポリヌクレオチドに連結されている、請求項５～８のいずれか１項に記載の組成物。
  10. 前記ＲＬＲアゴニストが、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、前記ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの生物学的活性を与える前記配列モチーフを含む、請求項５～９のいずれか１項に記載の組成物。
  11. 前記配列モチーフが、
    （ｉ）ＧＴ反復モチーフ、
    （ｉｉ）ＧＡ反復モチーフ、
    （ｉｉｉ）ＡＵＣＧ反復モチーフ、
    （ｉｖ）ＡＵ反復モチーフ、
    （ｖ）ジピリミジンモチーフ、
    （ｖｉ）ジプリンモチーフ、
    （ｖｉｉ）ピリミジントリプレットモチーフ、
    （ｖｉｉｉ）プリントリプレットモチーフ、
    （ｉｘ）パリンドローム配列モチーフ、及び
    （ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれかの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
  12. 前記少なくとも１つの改善された生物活性が、
    （ｉ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生の増加、
    （ｉｉ）インターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現の増加、
    （ｉｉｉ）ＲＬＲ媒介細胞内シグナル伝達の増加、
    （ｉｖ）ＲＬＲに対する結合親和性の増加、及び
    （ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）のいずれかの組み合わせから選択される、請求項１０～１１のいずれか１項に記載の組成物。
  13. 前記配列モチーフが、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びチミンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＴ反復モチーフである、請求項１０～１２に記載の組成物。
  14. 前記ＧＴ反復モチーフが、［ＧＴ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９）である、請求項１３に記載の組成物。
  15. 前記ＧＴ反復モチーフが、［ＧＴ］７である、請求項１３～１４のいずれか１項に記載の組成物。
  16. 前記ＧＴ反復モチーフが［ＧＴ］３であり、前記ＧＴ反復モチーフにプリントリプレットモチーフ及びＵＣＧがそれぞれ続く、請求項１３～１４のいずれか１項に記載の組成物。
  17. 前記プリントリプレットモチーフが、ＧＧＡである、請求項１６に記載の組成物。
  18. 前記配列モチーフが、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０個、約５～１０個、約５個、約４、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のグアニン及びアデニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＧＡ反復モチーフである、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の組成物。
  19. 前記ＧＡ反復モチーフが、［ＧＡ］ｎ（ただし、ｎ＝２～９）である、請求項１８に記載の組成物。
  20. 前記ＧＡ反復モチーフが、［ＧＡ］７である、請求項１９に記載の組成物。
  21. 前記配列モチーフが、１９個未満、約１６個、約１２～１６個、約１２個、約８～１２個、約６、１６、１２、８個のアデニン、ウラシル、シトシン、及びグアニンヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むＡＵＣＧ反復モチーフである、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の組成物。
  22. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフが、［ＡＵＣＧ］ｎ（ただし、ｎ＝２～４）である、請求項２１に記載の組成物。
  23. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフが、［ＡＵＣＧ］３である、請求項２２に記載の組成物。
  24. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＧまたはジピリミジンモチーフが位置する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の組成物。
  25. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＧが位置する、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記ジピリミジンモチーフが、ＣＣである、請求項２４に記載の組成物。
  27. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の組成物。
  28. 前記ジプリンモチーフが、ＧＡである、請求項２７に記載の組成物。
  29. 前記ジプリンモチーフが、ＩＩである、請求項２７に記載の組成物。
  30. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する前記Ｕが、修飾ヌクレオシドで置換されている、請求項２１～２９のいずれか１項に記載の組成物。
  31. 前記修飾ヌクレオシドが、リボチミジン（Ｔ）である、請求項３０に記載の組成物。
  32. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフを構成する前記Ｇが、修飾ヌクレオシドで置換されている、請求項２１～２９のいずれか１項に記載の組成物。
  33. 前記修飾ヌクレオシドが、イノシン（Ｉ）である、請求項３２に記載の組成物。
  34. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＩＧが位置する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の組成物。
  35. 前記ＡＵＣＧリピートを構成する前記Ｇがイノシン（Ｉ）で置換され、前記ＡＵＣＧリピートの前にイノシン（Ｉ）が位置する、請求項２１～２３のいずれか１項に記載の組成物。
  36. 前記第１のポリヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドがイノシン（Ｉ）である、請求項３５に記載の組成物。
  37. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフが、［ＡＵＣＧ］２である、請求項２１～２２のいずれか１項に記載の組成物。
  38. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にジプリンモチーフが位置する、請求項３７に記載の組成物。
  39. 前記ジプリンモチーフが、ＧＧである、請求項３８に記載の組成物。
  40. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にプリントリプレットが位置する、請求項３７に記載の組成物。
  41. 前記プリントリプレットが、ＧＧＧである、請求項４０に記載の組成物。
  42. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＣＣＣＣＣＧが位置する、請求項３７に記載の組成物。
  43. 前記ＡＵＣＧ反復モチーフの前にＴＣＧＵＣＧが位置する、請求項３７に記載の組成物。
  44. 前記配列モチーフが、パリンドロームを生じる任意の順序で連結された、１９個未満、約１５～１８個、約１５個、約１０～１５個、約１０、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、または４個のヌクレオチド、またはそれらの誘導体もしくは類似体の配列を含むパリンドローム配列である、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の組成物。
  45. 前記リンカーにＡＵが隣接している、請求項９～４４のいずれか１項に記載の組成物。
  46. 前記リンカーにＡＵ反復モチーフが隣接し、前記ＡＵ反復モチーフが［ＡＵ］ｎ（ただし、ｎ＝２～３）である、請求項９～４５のいずれか１項に記載の組成物。
  47. 前記ＡＵ反復モチーフが、［ＡＵ］２である、請求項４６に記載の組成物。
  48. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つのＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
    ５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
    （ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
    （ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
    （ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
    （ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
    （ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
    （ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
    （ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
    （ｘ）Ｌは、前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
    Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、及び／またはＸ１及び／またはＸ２の少なくとも一方は少なくとも１個のイノシンヌクレオシドを含み、前記イノシンヌクレオシドは前記ヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  49. Ｎ１がイノシンを含み、Ｎ４がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  50. Ｎ１がシチジンを含み、Ｎ４がイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  51. Ｎ２がイノシンを含み、Ｎ３がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  52. Ｎ２がシチジンを含み、Ｎ３がイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  53. Ｎ１がグアノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  54. Ｎ２がグアノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  55. Ｎ１がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  56. Ｎ２がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  57. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  58. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  59. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  60. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  61. Ｎ１がイノシンを含み、Ｎ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  62. Ｎ２がイノシンを含み、Ｎ３がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  63. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  64. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  65. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  66. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項４８に記載の組成物。
  67. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項４８に記載の組成物。
  68. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  69. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  70. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項４８に記載の組成物。
  71. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項４８に記載の組成物。
  72. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項４８に記載の組成物。
  73. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１２個であり、１、２、３または４個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  74. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１３個であり、１、２、３、４または５個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  75. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１４個であり、１、２、３、４、５または６個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  76. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１５個であり、１、２、３、４、５、６、または７個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  77. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１６個であり、それぞれ、１、２、３、４、５、６、７、または８個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  78. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１２個であり、少なくとも１０％、２０％、３０％、または４０％、イノシンヌクレオシドを含む、請求項４８に記載の組成物。
  79. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
    ５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
    （ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
    （ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
    （ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
    （ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
    （ｖｉｉ）Ｘ１は、配列モチーフ［ＡＵＣＮ５］ｘ（ただし、Ｎ５はグアノシンまたはイノシンを含み、ｘはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｘ＝２～４である）を含み、
    （ｖｉｉｉ）Ｘ２は、配列モチーフ［ＣＮ６ＡＵ］ｙ（ただし、Ｎ６はグアノシンまたはイノシンを含み、ｙはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｙ＝２～４である）を含み、
    （ｉｘ）Ｌは、前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
    場合により、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、前記イノシンヌクレオシドは前記ヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＮＡアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  80. Ｎ５がイノシンを含み、Ｎ６がイノシンを含む、請求項７９に記載の組成物。
  81. Ｎ５がグアノシンを含み、Ｎ６がイノシンを含む、請求項８０に記載の組成物。
  82. Ｎ５がイノシンを含み、Ｎ６がグアノシンを含む、請求項８１に記載の組成物。
  83. Ｎ５がグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ６がグアノシン（Ｇ）を含む、請求項８２に記載の組成物。
  84. （ｉ）ｘ＝２かつｙ＝２であるか、または（ｉｉ）ｘ＝３かつｙ＝３である、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  85. ｘ＝４かつｙ＝４である、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  86. Ｎ１がイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ４がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  87. Ｎ２がイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  88. Ｎ３がイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ２がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  89. Ｎ４がイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ１がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  90. Ｎ１がグアノシン（Ｇ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  91. Ｎ２がグアノシン（Ｇ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  92. Ｎ１がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  93. Ｎ２がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  94. Ｎ１及びＮ２がグアノシン（Ｇ）を含み、Ｎ３及びＮ４がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  95. Ｎ１及びＮ２がシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシン（Ｇ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  96. Ｎ１及びＮ２がイノシン（Ｉ）を含み、Ｎ３及びＮ４がシチジン（Ｃ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  97. Ｎ１及びＮ２がシチジン（Ｃ）を含み、Ｎ３及びＮ４がイノシン（Ｉ）を含む、請求項７９～８３のいずれか１項に記載の組成物。
  98. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
    ５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’、［式中、
    （ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
    （ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
    （ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
    （ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
    （ｖｉｉ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドであり、
    （ｖｉｉｉ）Ｘ１はＸ２と相補的であり、
    （ｉｘ）Ｘ１及びＸ２はそれぞれ、１２ヌクレオチド～１６ヌクレオチドの長さで、かつ同じ長さであり、
    （ｘ）Ｌは、前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドとを共有結合により連結する非ヌクレオチドリンカーである］を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＮＡアゴニストと、を含み、
    イノシンが存在する場合、シチジンと塩基対合し、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  99. Ｎ１がイノシンを含み、Ｎ４がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  100. Ｎ１がシチジンを含み、Ｎ４がイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  101. Ｎ２がイノシンを含み、Ｎ３がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  102. Ｎ２がシチジンを含み、Ｎ３がイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  103. Ｎ１がグアノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  104. Ｎ２がグアノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  105. Ｎ１がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  106. Ｎ２がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  107. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  108. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  109. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  110. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  111. Ｎ１がイノシンを含み、Ｎ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  112. Ｎ２がイノシンを含み、Ｎ３がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  113. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  114. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  115. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  116. Ｎ１及びＮ２がグアノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項９８に記載の組成物。
  117. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がグアノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項９８に記載の組成物。
  118. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  119. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  120. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含み、Ｘ１及び／またはＸ２がそれぞれ少なくとも１個のイノシンを含む、請求項９８に記載の組成物。
  121. Ｎ１及びＮ２がイノシンを含み、Ｎ３及びＮ４がシチジンを含み、Ｘ１及びＸ２がイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項９８に記載の組成物。
  122. Ｎ１及びＮ２がシチジンを含み、Ｎ３及びＮ４がイノシンを含み、Ｘ１及びＸ２がイノシンを含み、グアノシンヌクレオシドを含まない、請求項９８に記載の組成物。
  123. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１２個であり、１、２、３または４個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  124. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１３個であり、１、２、３、４または５個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  125. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１４個であり、１、２、３、４、５または６個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  126. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１５個であり、１、２、３、４、５、６、または７個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  127. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１６個であり、それぞれ、１、２、３、４、５、６、７、または８個のイノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  128. Ｘ１及びＸ２がそれぞれヌクレオチド１２個であり、少なくとも１０％、２０％、３０％、または４０％、イノシンヌクレオシドを含む、請求項９８に記載の組成物。
  129. 前記リンカーがヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーである、請求項９～９７のいずれか１項に記載の組成物。
  130. 前記リンカーが非ヌクレオチドリンカーである、請求項１２９に記載の組成物。
  131. 前記リンカーがヌクレオチドリンカーである、請求項１２９に記載の組成物。
  132. 前記ヌクレオチドリンカーがテトラループを含み、前記テトラループのヌクレオチド配列が、
    （ａ）ＵＮＣＧ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ）、
    （ｂ）ＧＮＲＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＲ＝ＡまたはＧ）、
    （ｃ）ＡＮＹＡ（ただし、Ｎ＝Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵ、かつＹ＝ＣまたはＴ）、
    （ｄ）ＣＵＹＧ（ただし、Ｙ＝ＣまたはＴ）、
    （ｅ）ＵＭＡＣ（ただし、Ｍ＝ＡまたはＣ）、及び
    （ｆ）ＣＵＵＧからなる群から選択される、請求項１３１に記載の組成物。
  133. 前記ヌクレオチドリンカーが、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵまたはＵＧＵＵＵを含む、請求項１３１に記載の組成物。
  134. 前記テトラループの配列が、ＵＵＣＧである、請求項１３２に記載の組成物。
  135. 前記テトラループの配列が、ＧＡＵＣである、請求項１３２に記載の組成物。
  136. 前記ヌクレオチドリンカーが、ヌクレオチド配列ＵＵＵＧＡＵを含む、請求項１３３に記載の組成物。
  137. 前記ヌクレオチドリンカーが、ヌクレオチド配列ＵＧＵＵＵを含む、請求項１３３に記載の組成物。
  138. 前記非ヌクレオチドリンカーが、
    （ａ）エチレングリコールリンカー、及び
    （ｂ）アルキルリンカーからなる群から選択される、請求項９８～１２８及び１３０のいずれか１項に記載の組成物。
  139. 前記非ヌクレオチドリンカーが、ヘキサエチレングリコールリンカーである、請求項１３８に記載の組成物。
  140. 前記非ヌクレオチドリンカーが、Ｃ９アルキルリンカーである、請求項１３８に記載の組成物。
  141. 前記アゴニストが、５’二リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、請求項１～１４０のいずれか１項に記載の組成物。
  142. 前記アゴニストが、５’三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、請求項１～１４０のいずれか１項に記載の組成物。
  143. 前記その誘導体もしくは類似体が、ホスホネート、チオホスホネート、ホスホロチオエート、サルフェート、スルホネート、スルファメート、チアゾリジノン、カルボキシレート、マロネート、ボロン酸、ベンゾオキサボロール、ボラノホスフェート、スクアラミドから選択されるホスフェートの生物学的等価体を含む、請求項１４１または１４２に記載の組成物。
  144. 前記アゴニストが、修飾ヌクレオチド、修飾ヌクレオシド、または修飾核酸塩基、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１～１４３のいずれか１項に記載の組成物。
  145. 前記アゴニストが、ヌクレオチド間結合またはポリヌクレオチド骨格への修飾を含む、請求項１～１４４のいずれか１項に記載の組成物。
  146. 前記アゴニストが、以下の特性：
    （ａ）１つ以上のＲＬＲ（例えば、ＲＩＧ－１、ＭＤＡ５及び／またはＬＧＰ２）に特異的に結合する；
    （ｂ）ＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる；
    （ｃ）インターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）のＲＬＲ媒介発現を増加させる；
    （ｄ）ＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる；
    （ｅ）二重鎖の安定性を増加させる；
    （ｆ）ＲＬＲに対する結合親和性を増加させる；
    （ｇ）オフターゲット結合を減少させる；
    （ｈ）生物学的半減期を増加させる；
    （ｉ）体内分布及びバイオアベイラビリティを増加させる；
    （ｊ）細胞及び／または組織中への取り込みを増加及び／または増大させる；
    （ｋ）免疫原性を低下させる；及び
    （ｌ）（ａ）～（ｋ）のいずれかの組み合わせのうちの少なくとも１つ以上を示す、請求項１～１４５のいずれか１項に記載の組成物。
  147. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、前記アゴニストの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、前記アゴニストが、配列番号１～３６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  148. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、前記第１のポリヌクレオチドは前記第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、前記二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、前記第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、前記アゴニストは、配列モチーフを含まないアゴニストと比較して、前記ＲＬＲによって媒介される少なくとも１つの改善された生物学的活性を与える前記配列モチーフを含み、前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、
    （ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
    （ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
    （ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
    （ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
    （ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
    （ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
    （ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
    （ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
    （ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
    （ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
    （ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
    （ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
    （ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
    （ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
    （ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
    （ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
    （ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
    （ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
    （ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
    （ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
    （ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
    （ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
    （ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
    （ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
    （ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
    （ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
    （ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
    （ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
    （ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
    （ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  149. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、配列番号２２、２３、及び２５からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  150. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、シチジンと塩基対合するイノシンを含む少なくとも１つ以上のヌクレオチドを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、
    （ｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、ならびに
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号６１及び９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む］を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  151. （ａ）ウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、非ヌクレオチドリンカーを含む平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は第１のポリヌクレオチドを含み、（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は第２のポリヌクレオチドを含み、前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、
    （ｉ）それぞれ、配列番号３７及び６８、
    （ｉｉ）それぞれ、配列番号３８及び６９、
    （ｉｉｉ）それぞれ、配列番号３９及び７０、
    （ｉｖ）それぞれ、配列番号４０及び７１、
    （ｖ）それぞれ、配列番号４１及び７２、
    （ｖｉ）それぞれ、配列番号４２及び７３、
    （ｖｉｉ）それぞれ、配列番号４３及び７４、
    （ｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号４４及び７５、
    （ｉｘ）それぞれ、配列番号４５及び７６、
    （ｘ）それぞれ、配列番号４６及び７７、
    （ｘｉ）それぞれ、配列番号４７及び７８、
    （ｘｉｉ）それぞれ、配列番号４８及び７９、
    （ｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号４９及び８０、
    （ｘｉｖ）それぞれ、配列番号５０及び８１、
    （ｘｖ）それぞれ、配列番号５１及び８２、
    （ｘｖｉ）それぞれ、配列番号５２及び８３、
    （ｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号５３及び８４、
    （ｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号５４及び８５、
    （ｘｉｘ）それぞれ、配列番号５５及び８６、
    （ｘｘ）それぞれ、配列番号５６及び８７、
    （ｘｘｉ）それぞれ、配列番号５７及び８８、
    （ｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号５８及び８９、
    （ｘｘｉｉｉ）それぞれ、配列番号５９及び８９、
    （ｘｘｉｖ）それぞれ、配列番号６０及び９０、
    （ｘｘｖ）それぞれ、配列番号６１及び９１、
    （ｘｘｖｉ）それぞれ、配列番号６２及び９２、
    （ｘｘｖｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９１、
    （ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、配列番号６４及び９３、
    （ｘｘｉｘ）それぞれ、配列番号６５及び９４、
    （ｘｘｘ）それぞれ、配列番号６６及び９５、
    （ｘｘｘｉ）それぞれ、配列番号６７及び９６、ならびに
    （ｘｘｘｉｉ）それぞれ、配列番号６３及び９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む］を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  152. 前記アゴニストを構成する前記ヌクレオチド配列がゲノムＤＮＡ配列にもｍＲＮＡ配列にも相補的でなく、前記ＲＬＲアゴニストがＲＮＡ干渉に関与せず、前記ＲＬＲアゴニストが遺伝子発現をサイレンシングしない、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  153. 前記ウイルス様粒子が、リポタンパク質含有エンベロープを有さない、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  154. 前記ウイルス様粒子が組換えウイルス様粒子である、請求項１～１５２のいずれか１項に記載の組成物。
  155. 前記組換えウイルス様粒子が、
    （ａ）Ｂ型肝炎ウイルスの組換えタンパク質、
    （ｂ）麻疹ウイルスの組換えタンパク質、
    （ｃ）シンドビス（Ｓｉｎｂｉｓ）ウイルスの組換えタンパク質、
    （ｄ）ロタウイルスの組換えタンパク質、
    （ｅ）手足口病ウイルスの組換えタンパク質、
    （ｆ）レトロウイルスの組換えタンパク質、
    （ｇ）ノーウォークウイルスの組換えタンパク質、
    （ｈ）ヒトパピローマウイルスの組換えタンパク質、
    （ｉ）ＢＫウイルスの組換えタンパク質、
    （ｊ）バクテリオファージの組換えタンパク質、
    （ｋ）ＲＮＡファージの組換えタンパク質、
    （ｌ）Ｑβファージの組換えタンパク質、
    （ｍ）ＧＡファージの組換えタンパク質、
    （ｎ）ｆｒファージの組換えタンパク質、
    （ｏ）ＡＰ２０５ファージの組換えタンパク質、
    （ｐ）Ｔｙの組換えタンパク質、及び
    （ｑ）（ａ）～（ｐ）の組換えタンパク質のいずれかのフラグメントからなる群から選択される、請求項１５４に記載の組成物。
  156. 前記ウイルス様粒子がＲＮＡファージの組換えタンパク質を含み、前記ＲＮＡファージが、（ａ）バクテリオファージＱβ、（ｂ）バクテリオファージＲ１７、（ｃ）バクテリオファージｆｒ、（ｄ）バクテリオファージＧＡ、（ｅ）バクテリオファージＳＰ、（ｆ）バクテリオファージＭＳ２、（ｇ）バクテリオファージＭ１１、（ｈ）バクテリオファージＭＸ１、（ｉ）バクテリオファージＮＬ９５、（ｊ）バクテバクテリオファージｆ２、（ｋ）バクテリオファージＰＰ７、及び（ｌ）バクテリオファージＡＰ２０５からなる群から選択される、請求項１～１５２のいずれか１項に記載の組成物。
  157. 前記ウイルス様粒子が、バクテリオファージＱβの組換えタンパク質を含む、請求項１５６に記載の組成物
  158. 前記ウイルス様粒子が、ＲＮＡファージＱβの組換えタンパク質、またはそのフラグメントを含む、請求項１～１５２のいずれか１項に記載の組成物。
  159. （ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、１０～１００ヌクレオチドの長さのリボ核酸（ＲＮＡ）を含み、前記ＲＮＡの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  160. （ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、リンカーによって第２のポリヌクレオチドに接続された第１のポリヌクレオチドを含む、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、前記第１のポリヌクレオチドは前記第２のポリヌクレオチドと二重鎖を形成するのに十分に相補的であり、前記二重鎖は１９個未満の塩基対を含み、前記第１のオリゴヌクレオチドの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、前記アゴニストが、
    （ｉ）ＧＴ反復モチーフ、
    （ｉｉ）ＧＡ反復モチーフ、
    （ｉｉｉ）ＡＵＣＧ反復モチーフ、
    （ｉｖ）ＡＵ反復モチーフ、
    （ｖ）ジピリミジンモチーフ、
    （ｖｉ）ジプリンモチーフ、
    （ｖｉｉ）ピリミジントリプレットモチーフ、
    （ｖｉｉｉ）プリントリプレットモチーフ、
    （ｉｘ）パリンドローム配列モチーフ、及び
    （ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれかの組み合わせから選択される配列モチーフを含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  161. （ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、平滑末端化されたヘアピンＲＮＡを含み、式：
    ５’－（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）－Ｌ－（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）－３’［式中、
    （ｉ）（Ｎ１－Ｎ２－Ｘ１）は、連結されたヌクレオチドＮ１、Ｎ２及びＸ１を含む第１のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉ）（Ｘ２－Ｎ３－Ｎ４）は、連結されたヌクレオチドＸ２、Ｎ３及びＮ４を含む第２のポリヌクレオチドを含み、
    （ｉｉｉ）Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３及びＮ４は、それぞれ、アデノシン、グアノシン、シチジン、５－メチルウリジン、ウリジン、及びイノシンからなる群から選択されるヌクレオシドを含む単一のヌクレオチドを含み、
    （ｉｖ）Ｎ１はＮ４と塩基対合し、
    （ｖ）Ｎ２はＮ３と塩基対合し、
    （ｖｉ）Ｎ１は５’二リン酸または三リン酸部分、またはそれらの誘導体もしくは類似体を含み、
    （ｖｉｉ）Ｘ１は、配列モチーフ［ＡＵＣＮ５］ｘ（ただし、Ｎ５はグアノシンまたはイノシンを含み、ｘはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｘ＝２～４である）を含み、
    （ｖｉｉｉ）Ｘ２は、配列モチーフ［ＣＮ６ＡＵ］ｙ（ただし、Ｎ６はグアノシンまたはイノシンを含み、ｙはその値が配列モチーフの数を示す整数であり、ｙ＝２～４である）を含み、
    （ｉｘ）Ｌは、前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドとを機能的に連結するリンカーであり、
    場合により、Ｎ１、Ｎ２、Ｎ３、及びＮ４のうちの少なくとも１つはイノシンであり、前記イノシンヌクレオシドは前記ヘアピンＲＮＡ内のシチジンと塩基対合する］を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＮＡアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  162. （ａ）ＲＮＡファージＱβのウイルス様粒子と、
    （ｂ）ＲＬＲに特異的に結合する少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストであって、配列番号２３のヌクレオチド配列を含み、前記アゴニストの最も５’側のヌクレオチドが５’二リン酸もしくは三リン酸部分、またはその誘導体もしくは類似体を含む、前記少なくとも１つの合成ＲＬＲアゴニストと、を含み、
    前記少なくとも１つのＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子にパッケージングされている、組成物。
  163. 前記ウイルス様粒子が、配列番号１１２のアミノ酸配列をそれぞれ有するＲＮＡファージＱβコートタンパク質を含む、請求項１５９～１６２のいずれか１項に記載の組成物。
  164. 前記ウイルス様粒子が、配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列をそれぞれ有するＲＮＡファージＱβコートタンパク質を含む、請求項１５９～１６２のいずれか１項に記載の組成物。
  165. 前記ＲＬＲアゴニストが前記ウイルス様粒子に非共有結合により結合している、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  166. 前記ＲＬＲアゴニストが、オリゴヌクレオチド結合部位、ＤＮＡ結合部位、及びＲＮＡ結合部位からなる群から選択されるウイルス様粒子の部位に結合される、請求項１～１６４のいずれか１項に記載の組成物。
  167. 前記ウイルス様粒子の部位がアルギニンリッチリピートを含む、請求項１６６に記載の組成物。
  168. 前記ウイルス様粒子に結合された少なくとも１つの抗原または抗原決定基をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
  169. 前記少なくとも１つの抗原または抗原決定基が、少なくとも１つの共有結合によって前記ウイルス様粒子に結合される、請求項１６８に記載の組成物。
  170. 前記少なくとも１つの抗原または抗原決定基が、非ペプチド結合によって前記ウイルス様粒子に結合される、請求項１６８に記載の組成物。
  171. 前記抗原または抗原決定基が、前記ウイルス様粒子に融合される、請求項１６８に記載の組成物。
  172. 前記ウイルス様粒子が少なくとも１つの第１の結合部位を含み、前記抗原または抗原決定基が、（ａ）前記抗原または抗原決定基内に天然に存在しない結合部位と、（ｂ）前記抗原または抗原決定基内に天然に存在する結合部位とからなる群より選択される少なくとも１つの第２の結合部位を含み、
    前記ウイルス様粒子に対する前記抗原または抗原決定基の前記結合が前記第１の結合部位と前記第２の結合部位との結合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）を介して行われ、場合により、前記結合は、少なくとも１つの非ペプチド結合を介して行われる、請求項１６８に記載の組成物。
  173. 前記第１の結合部位がアミノ基またはリシン残基を含み、前記第２の結合部位がスルフヒドリル基またはシステイン残基を含む、請求項１７２に記載の組成物。
  174. 免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の低減もしくは阻害を必要とする対象においてそれを行うための医薬組成物であって、請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体とを含む、前記医薬組成物。
  175. ポリエチエンイミン（ＰＥＩ）担体中に配合される、請求項１７４に記載の医薬組成物。
  176. 前記ＰＥＩ担体がＪｅｔＰＥＩ（登録商標）である、請求項１７５に記載の医薬組成物。
  177. 細胞内の１つ以上のサイトカインの産生のＲＬＲ媒介産生を増加させるための方法であって、前記細胞を請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含み、前記アゴニストが細胞内のＲＬＲ媒介サイトカイン産生を増加させる、前記方法。
  178. 細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるための方法であって、前記細胞を請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含み、前記アゴニストが細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させる、前記方法。
  179. 細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させるための方法であって、前記細胞を請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含み、前記アゴニストがＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させる、前記方法。
  180. 対象の免疫応答を刺激するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  181. 対象のがんを治療するかまたはその進行を遅らせる方法であって、前記対象に有効量の請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  182. 腫瘍増殖の低減または阻害をそれを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に有効量の請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
  183. 免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための方法であって、前記対象に有効量の請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記アゴニストが、細胞内の１つ以上のサイトカインのＲＬＲ媒介産生を増加させるか、細胞内の１つ以上のインターフェロン刺激遺伝子のＲＬＲ媒介発現を増加させるか、及び／または細胞内のＲＬＲ依存性細胞内シグナル伝達を増加させ、それにより前記免疫応答を刺激するか、前記がんを治療もしくはその進行を遅らせるか、または前記腫瘍の増殖を阻害する、前記方法。
  184. 前記組成物が１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、前記１つ以上のさらなる治療剤は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤またはアゴニスト、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８０～１８３のいずれか１項に記載の方法。
  185. 前記組成物が、前記１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または前記１つ以上のさらなる治療剤が前記アゴニストまたは医薬組成物の前記投与と同時に、その前もしくはその後に投与される、請求項１８４に記載の方法。
  186. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである、請求項１８４または１８５に記載の方法。
  187. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである、請求項１８４または１８５に記載の方法。
  188. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである、請求項１８４または１８５に記載の方法。
  189. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  190. 前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、ＰＤＲ００１、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ）、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）、ピジリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＲＥＧＮ２８１０、ＴＳＲ－０４２、ＰＦ－０６８０１５９１、及びＡＭＰ－２２４からなる群から選択される、請求項１８９に記載の方法。
  191. 前記ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、ＦＡＺ０５３、ＴＥＮＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）（アテゾリズマブ）、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）（アベルマブ）、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）（デュルバルマブ）、及びＢＭＳ－９３６５５９からなる群から選択される、請求項１８９に記載の方法。
  192. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＴＩＭ－３アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  193. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＶＩＳＴＡアンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  194. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  195. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  196. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  197. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＢＴＬＡアンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  198. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＣＴＬＡ－４アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  199. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＩＤＯアンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  200. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＫＩＲアンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  201. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＬＡＧ－３アンタゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  202. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  203. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐｏｌｙ Ｉ：Ｃ）である、請求項２０２に記載の方法。
  204. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ＨＩＬＴＯＮＯＬ（登録商標）（ｐｏｌｙ ＩＣＬＣ）である、請求項２０２に記載の方法。
  205. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ポリアデニル酸－ポリウリジル酸（ｐｏｌｙ Ａ：Ｕ）である、請求項２０２に記載の方法。
  206. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ＲＩＢＯＸＸＩＭ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）１００）である、請求項２０２に記載の方法。
  207. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ＲＩＢＯＸＸＯＮ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０バイオコンジュゲート）である、請求項２０２に記載の方法。
  208. 前記ＴＬＲ３アゴニストが、ＲＩＢＯＸＸＯＬ（登録商標）（ＲＧＩＣ（登録商標）５０）である、請求項２０２に記載の方法。
  209. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  210. 前記ＴＬＲ７アゴニストが、ＧＳ－９６２０（ベサトリモド）である、請求項２０９に記載の方法。
  211. 前記ＴＬＲ７アゴニストが、イミキモド（ＡＬＤＡＲＡ（商標））である、請求項２０９に記載の方法。
  212. 前記ＴＬＲ７アゴニストが、レシキモド（Ｒ－８４８）である、請求項２０９に記載の方法。
  213. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである、請求項１８６に記載の方法。
  214. 前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）である、請求項２１３に記載の方法。
  215. 前記ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＡのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮ）である、請求項２１４に記載の方法。
  216. 前記ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＢのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮ）である、請求項２１４に記載の方法。
  217. 前記ＣｐＧ ＯＤＮが、クラスＣのＣｐＧ ＯＤＮ（ＣｐＧ－Ｃ ＯＤＮ）である、請求項２１４に記載の方法。
  218. 免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用するための前記組成物または前記医薬組成物の使用。
  219. 免疫応答の刺激、がんの治療もしくはその進行を遅らせること、または腫瘍増殖の阻害をそれを必要とする対象において行うための薬剤の製造における請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用するための前記組成物または前記医薬組成物の使用。
  220. 請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物、または請求項１７４～１７６のいずれか１項に記載の医薬組成物と、対象の免疫応答を刺激する、またはがんを治療またはその進行を遅らせる、または対象の腫瘍増殖を阻害する際に使用される使用説明書とを、場合により、１つ以上のさらなる治療剤と併用される使用説明書とともに含む、キット。
  221. 前記アゴニストまたは医薬組成物が１つ以上のさらなる治療剤と併用して投与され、前記１つ以上のさらなる治療剤が、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞死誘導剤、オプソニン化剤（例えば、オプソニン化抗体）、細胞毒性剤、免疫療法、サイトカイン、共刺激分子の活性化剤、阻害性分子の阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２１８に記載の使用または請求項２２０に記載のキット。
  222. 前記アゴニストまたは医薬組成物が前記１つ以上のさらなる治療剤の投与の前もしくはその後に投与されるか、または前記１つ以上のさらなる治療剤が前記アゴニストまたは医薬組成物の前記投与と同時に、その前もしくはその後に投与される、請求項２２１に記載の使用またはキット。
  223. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、ＴＩＭ－３アンタゴニスト、ＶＩＳＴＡアンタゴニスト、アデノシンＡ２ＡＲアンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ３アンタゴニスト、Ｂ７－Ｈ４アンタゴニスト、ＢＴＬＡアンタゴニスト、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、ＩＤＯアンタゴニスト、ＫＩＲアンタゴニスト、ＬＡＧ－３アンタゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニストである、請求項２１８、２１９、２２１、もしくは２２２のいずれか１項に記載の使用、または請求項２２０～２２２に記載のキット。
  224. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである、請求項２１８、２１９、２２１、もしくは２２２のいずれか１項に記載の使用、または請求項２２０～２２２に記載のキット。
  225. 前記１つ以上のさらなる治療剤が、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）に特異的に結合するポリペプチド（例えば、抗体、またはその抗原結合部分）を含むアゴニストである、請求項２１８、２１９、２２１、もしくは２２２のいずれか１項に記載の使用、または請求項２２０～２２２に記載のキット。
  226. 請求項１～１７３のいずれか１項に記載の組成物を製造する方法であって、
    （ａ）前記ウイルス様粒子を分解することと、
    （ｂ）前記ＲＬＲアゴニストを添加することと、
    （ａ）前記ウイルス様粒子を再集合化することと、を含む、前記方法。
  227. 前記分解されたウイルス様粒子の核酸を除去することをさらに含む、請求項２２６に記載の方法。
  228. 再集合化後に前記組成物を精製することをさらに含む、請求項２２６または２２７に記載の方法。
  229. （ｄ）抗原または抗原決定基を前記ウイルス様粒子に結合させることを含む、請求項２２６～２２８のいずれか１項に記載の方法。
  230. 前記抗原または抗原決定基が、前記ウイルス様粒子を分解する前に前記ウイルス様粒子と結合させられる、請求項２２９に記載の方法。
  231. 前記抗原または抗原決定基が、前記ウイルス様粒子を再集合化させた後に前記ウイルス様粒子と結合させられる、請求項２２９に記載の方法。
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