JP2023538260A - ペイロード分子を気道上皮に送達するための組成物 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ペイロード分子の気道細胞への送達から恩恵を受けるであろう疾患または障害の処置のためのペイロード分子、例えばｍＲＮＡ治療薬を含むＬＮＰを提供する。【選択図】図１

Description

呼吸上皮細胞は、呼吸道を覆っている。呼吸上皮細胞の主な機能は、呼吸道を加湿すること、潜在的な病原体、感染症、及び組織損傷から気道を保護すること、及び／またはガス交換を促進することである。気道上皮細胞の機能不全は、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、及び嚢胞性線維症を含む、多くの障害を招く可能性がある。呼吸上皮細胞へのペイロードの送達を使用して、目的の抗原に対する免疫を誘導することができ、また、気道上皮細胞の機能を、例えば、欠落もしくは変異タンパク質を置き換えるために、またはそのような細胞の機能性を増大もしくは減少させるために、調節することができる。
例えば、嚢胞性線維症（「ＣＦ」）は、患者における粘着性の濃厚粘液の異常集積を特徴とする、常染色体劣性疾患である。ＣＦは、膵臓の嚢胞性線維症、膵臓の線維嚢胞性疾患、または膵線維症としても知られている。粘液は、肺、生殖器系、消化器系、及び他の器官を潤滑及び保護する重要な体液である。しかしながら、ＣＦ患者では濃厚な粘着性粘液が生成され、これが気道のサイズを縮小させることで、慢性的な咳嗽、喘鳴、炎症、細菌感染症、線維症、及び肺の嚢胞が生じる。更に、大半のＣＦ患者では、粘液が膵臓内の管を遮断しており、これがインスリン及び消化酵素の放出を防止することで、下痢、栄養失調、成長不良、及び体重減少が生じる（Ｇｅｒｓｈｍａｎ Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｅｖｅ Ｃｌｉｎ Ｊ Ｍｅｄ．７３：１０６５－１０７４（２００６））。ＣＦの推定発生率は、白人では２，５００～３，５００件の出生中１件であるが、他の集団でははるかに稀である（Ｒａｔｊｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３６１：６８１－６８９（２００３））。ＣＦの最新処置は、症状をコントロールするのみであり、疾患を治癒するものではない。具体的には、症状をコントロールするために、抗生物質、抗炎症薬、気管支拡張薬、うっ血除去薬、高タンパク質・高脂肪食、及びビタミンサプリメントが処方される。進行性肺疾患では、未損傷の肺を患者に提供するために肺移植も実施されている。しかしながら、これらの処置は、疾患を完全にまたは確実にコントロールするものではない。ＣＦの根本原因に焦点を当てた新たな処置が登場した。これらの処置は、Ｐｈｅ５０８ｄｅｌ嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の変異を有する患者のＣＦＴＲを調節する（Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ Ｐ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．３８１：１８０９－１８１９（２０１９））。しかしながら、ＣＦ患者の１００名につき約１名はＰｈｅ５０８ｄｅｌ ＣＦＴＲ変異を有しておらず、この処置から除外されている。
したがって、気道上皮細胞機能不全に関連する障害（例えばＣＦ）を処置するための、予防的治療（例えば免疫）のためにそのような気道上皮細胞を標的とするための、または核酸分子もしくは他のペイロード分子の気道上皮細胞への治療的送達から恩恵を受けるであろう他の障害を処置するための、改善された治療が必要とされている。
本開示は、気道上皮機能不全に関連する障害の処置または患者の予防的利益のために、核酸分子、例えばｍＲＮＡ治療薬を気道上皮細胞に送達するためのＬＮＰ分子を提供する。一実施形態では、主題のＬＮＰ分子は、嚢胞性線維症（ＣＦ）、ＣＯＰＤ、または喘息などの上皮細胞機能不全に関連する障害を処置するために、ならびにワクチンペイロードを投与するために使用することができる。本開示は、細胞に（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで）投与されたときに、改善された特性、例えば、上皮細胞へのペイロード送達の改善（例えば、ＬＮＰの細胞蓄積、所望のタンパク質の発現、及び／またはｍＲＮＡの発現によって測定されるもの）を有する、ＬＮＰを提供する。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、生理学的ｐＨで中性を超えるゼータ電位を有する。
一態様では、
（ａ）以下：
（ｉ）イオン化脂質、
（ｉｉ）リン脂質、
（ｉｉｉ）構造脂質、及び
（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
を含む脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供される。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、上皮細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、上皮細胞中で約５％以上の発現を示す。
一態様では、脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることを含む、ナノ粒子を調製するプロセスが本明細書で提供され、この脂質ナノ粒子は、
（ａ）以下：
（ｉ）イオン化脂質、
（ｉｉ）リン脂質、
（ｉｉｉ）構造脂質、及び
（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
を含む脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、を含む。
一態様では、本明細書に記載のプロセスによって調製されるナノ粒子が、本明細書で提供される。
一態様では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードを細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のナノ粒子と接触させることを含む方法が、本明細書で提供される。
一態様では、患者の疾患を処置するまたは予防する方法であって、本明細書に記載の疾患の処置または予防のためのペイロードを含むナノ粒子を患者に投与することを含む方法が、本明細書で提供される。
本発明の各制限は、本発明の様々な実施形態を包含し得る。したがって、任意の１つの要素または要素の組み合わせを伴う本発明の各制限は、本発明の各態様に含まれ得ることが予期される。本発明は、その適用において、以下の説明に記載されるまたは図面に例示される構成の詳細にも構成要素の配置にも限定されるものではない。本発明は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実践するまたは行うことができる。
ＬＮＰを調製するための例示的な第１世代事後搭載（ＰＨＬ）プロセスの図である。 ＬＮＰを調製するための例示的な第２世代ＰＨＬプロセス（包括的）の図である。 ＬＮＰを調製するための例示的な第２世代ＰＨＬプロセス（具体的）の図である。 中空脂質ナノ粒子のプロトタイプ（「ニュートラルアセンブリ」）の調製に関する例示的なプロセスの図であり、ここでは、中空ＬＮＰをｐＨ８．０で混合しており、最終製剤はｐＨ５．０である。 ステロールアミンを用いてＬＮＰを調製する例示的なプロセスの図である。 ＬＮＰ－１及びＬＮＰ－１ａの小角Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）解析である。 ＬＮＰ－１及びＬＮＰ－１ａのラウルダンの一般極性（ｇｅｎｅｒａｌ ｐｏｌａｒｉｔｙ Ｌａｕｒｄａｎ）（ＧＬＰ）を示すグラフである。
本開示は、核酸分子またはペイロード分子を気道上皮細胞に送達するためのＬＮＰ分子を提供する。例えば、そのようなＬＮＰ分子を使用して、ペイロード分子、例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）の処置のためのｍＲＮＡ治療薬を気道上皮細胞に送達することができる。例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）は、持続的な肺感染症を引き起こし、経時的に呼吸能を制限する、進行性の遺伝性疾患である。この疾患は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）タンパク質の遺伝子の両方のコピーに変異が存在することを特徴とする。汗、消化液、及び粘液の産生に関与するＣＦＴＲがなければ、通常であれば薄い分泌物が濃厚になる。ｍＲＮＡ治療薬は、この技術がＣＦＴＲをコードするｍＲＮＡを細胞内に送達し、続いて標的細胞内での機能的ＣＦＴＲタンパク質のｄｅ ｎｏｖｏ合成をもたらすことから、ＣＦの処置に特に好適である。標的細胞へのｍＲＮＡの送達後、目的のＣＦＴＲタンパク質が細胞自身の翻訳機構によって発現されるため、完全な機能的ＣＦＴＲタンパク質が欠損または欠落タンパク質に置き換わる。別の実施形態では、そのようなＬＮＰを使用して、遺伝子編集用の核酸分子、小分子、または上皮細胞機能不全を緩和するための他のペイロードを送達することができる。別の実施形態では、そのようなＬＮＰを使用して、抗原を気道細胞に送達することができる。一実施形態では、抗原は、抗原に対する免疫応答を生じさせるようなポリペプチドまたはペプチドの発現をもたらす、ＬＮＰ中に存在するｍＲＮＡコンストラクトの形態である。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、ペイロード分子、例えばｍＲＮＡを標的細胞に安全かつ効果的に送達するための理想的なプラットフォームである。ＬＮＰは、細胞取り込み、細胞内輸送、及びエンドソーム放出またはエンドソーム脱出を含む機構によって核酸を送達するユニークな能力を有する。本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、改善された特性を有するＬＮＰを特質とする。いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＬＮＰは、脂質ナノ粒子コア、細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロード、及びナノ粒子の外表面に主に配置されたカチオン性剤を含む。特定の理論に束縛されるものではないが、コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤を有するＬＮＰは、ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）などの細胞中のＬＮＰの蓄積を向上させ、例えば、細胞（例えば気道上皮細胞）中のｍＲＮＡ発現によって測定されるペイロード分子の機能も向上させることができる。
いくつかの実施形態では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、生理学的ｐＨで中性を超えるゼータ電位を有する。
いくつかの実施形態では、
（ａ）以下：
（ｉ）イオン化脂質、
（ｉｉ）リン脂質、
（ｉｉｉ）構造脂質、及び
（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
を含む脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、
（ａ）以下：
（ｉ）イオン化脂質、
（ｉｉ）リン脂質、
（ｉｉｉ）構造脂質、及び
（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
を含む脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供される。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、細胞の少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞の約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、細胞の少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞の約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、細胞中で約０．５％～５０％のタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞中で約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、細胞中で約０．５％～５０％のタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、細胞中で約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、上皮細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、上皮細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、上皮細胞の約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、上皮細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、ＨＢＥ細胞である。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、上皮細胞の約０．５％～５０％のタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、上皮細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、肺細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、肺細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、鼻細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、鼻細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、肺胞上皮細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、肺胞上皮細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、呼吸上皮細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、呼吸上皮細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、呼吸上皮細胞の約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、呼吸上皮細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、呼吸上皮細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、呼吸上皮細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、マクロファージの約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、マクロファージの約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、ＨｅＬａ細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ＨｅＬａ細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、気管支上皮細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、気管支上皮細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、呼吸上皮細胞の約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、気管支上皮細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、気管支上皮細胞の約０．５％～約５０％でタンパク質発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、気管支上皮細胞の約０．１％～約６０％、約０．５％～約４０％、約１％～約３０％、または約１％～約２０％のタンパク質発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、ＨＢＥ細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、ＨＢＥ細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ＨＢＥ中で約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ＨＢＥ細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
一態様では、
（ａ）脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
（ｃ）カチオン性剤と、
を含むナノ粒子が本明細書で提供され、このナノ粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの健常ＨＢＥ細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、ｉｎ ｖｉｔｒｏの健常ＨＢＥ細胞中で約５％以上の発現を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの健常ＨＢＥ細胞中で約１％～約７５％、５％～約５０％、約１０％～約４０％、または約１５％～約２５％の細胞蓄積を示す。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの健常ＨＢＥ細胞中で約０．５％～約５０％、約１％～約４０％、約３％～約２０％、または約５％～約１５％の発現を示す。
いくつかの実施形態では、本明細書中の上記及び本明細書全体で言及される細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞またはｉｎ ｖｉｖｏ細胞であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞である。
いくつかの実施形態では、本発明のナノ粒子は、実質的に同じ組成であるがカチオン性剤の後添加（例えば、予め形成された脂質ナノ粒子にカチオン性剤を層状に重ねることまたは接触させること）なしで調製されたナノ粒子と比較して、（例えば、ＨＢＥなどの気道上皮細胞中の）細胞蓄積が増加している。いくつかの実施形態では、本発明のナノ粒子は、実質的に同じ組成であるがカチオン性剤の後添加（例えば、予め形成された脂質ナノ粒子にカチオン性剤を層状に重ねることまたは接触させること）なしで調製されたナノ粒子と比較して、（例えば、ＨＢＥなどの気道上皮細胞中の）細胞発現が増加している。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約０．１：１～約１５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約０．２：１～約１０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約１０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約８：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約７：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約６：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１：１～約４：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１．２５：１～約３．７５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約１．２５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約２．５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比は、約３．７５：１である。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約０．１：１～約２０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約１０：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約９：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約８：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約７：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約６：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１～約５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約１．５：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約２：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約３：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約４：１である。いくつかの実施形態では、カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードのモル比は、約５：１である。
いくつかの実施形態では、本発明のナノ粒子は、約５ｍＶ～約２０ｍＶのゼータ電位を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約５ｍＶ～約１５ｍＶのゼータ電位を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約５ｍＶ～約１０ｍＶのゼータ電位を有する。
ゼータ電位は、コロイド分散液の表面電荷を測定する。ゼータ電位の大きさは、分散液中の同様に荷電した隣接粒子間の静電反発力の程度を示す。ゼータ電位は、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｍｏｂｉｕｓ Ｚｅｔａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ装置で測定することができる。この装置は、「超並列位相解析光散乱」またはＭＰ－ＰＡＬＳの原理によって移動度及びゼータ電位を特徴付ける。この測定は、１つの検出角度のみを使用し、かつ操作により高い電圧を必要とするＩＳＯ法１３０９９－１：２０１２よりも感度が高く、誘導される応力が低い。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される中空脂質ナノ粒子組成物の脂質のゼータ電位は、ＭＰ－ＰＡＬＳの原理を利用する装置を使用して測定される。ゼータ電位は、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｎａｎｏ ＺＳ）で測定することができる。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子コアは、中性ｐＨで中性電荷を有する。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤の約８０％超がナノ粒子の表面にある。いくつかの実施形態では、カチオン性剤の約９０％超がナノ粒子の表面にある。いくつかの実施形態では、カチオン性剤の約９５％超がナノ粒子の表面にある。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードの少なくとも約５０％がコア内に封入されている。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードの少なくとも約７５％がコア内に封入されている。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードの少なくとも約９０％がコア内に封入されている。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードの少なくとも約９５％がコア内に封入されている。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約０．４未満の多分散値を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約０．３未満の多分散値を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約０．２未満の多分散値を有する。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約１００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約６０ｎｍ～約１００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約６０ｎｍ～約８０ｎｍの平均直径を有する。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子のラウルダンの一般分極（ｇｅｎｅｒａｌ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）は、約０．６以上である。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約６ｎｍ超のｄ間隔を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約７ｎｍ超のｄ間隔を有する。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子の少なくとも５０％が、閾値分極レベルより大きい表面流動性値を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子の少なくとも７５％が、閾値分極レベルより大きい表面流動性値を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子の少なくとも９０％が、閾値分極レベルより大きい表面流動性値を有する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子の少なくとも９５％が、閾値分極レベルより大きい表面流動性値を有する。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞集団の約１０％以上がナノ粒子を蓄積している。いくつかの実施形態では、ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞集団の約１５％以上がナノ粒子を蓄積している。いくつかの実施形態では、ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞集団の約２０％以上がナノ粒子を蓄積している。いくつかの実施形態では、ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞の約５％以上がポリヌクレオチドまたはポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞の約１０％以上がポリヌクレオチドまたはポリペプチドを発現する。いくつかの実施形態では、細胞集団は、上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、呼吸上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、呼吸上皮細胞集団は、肺細胞集団である。いくつかの実施形態では、呼吸上皮細胞集団は、鼻細胞集団である。いくつかの実施形態では、呼吸上皮細胞集団は、肺胞上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、呼吸上皮細胞集団は、気管支上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、呼吸上皮細胞集団は、ＨＢＥ集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、肺細胞集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、鼻細胞集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、肺胞上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、気管支上皮細胞集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、ＨＢＥ集団である。いくつかの実施形態では、細胞集団は、ＨｅＬａ集団である。
カチオン性剤
カチオン性剤は、正味正電荷を有し、脂質ナノ粒子コアの表面に付着することができる任意の水溶性分子または物質を含み得る。そのような薬剤は、脂溶性でもあり得るが、水溶液にも可溶である。カチオン性剤は、生理学的ｐＨで荷電し得る。生理学的ｐＨは、人体で通常観察されるｐＨレベルである。生理学的ｐＨは、約７．３０～７．４５または約７．３５～７．４５であり得る。生理学的ｐＨは、約７．４０であり得る。一般的に言えば、カチオン性剤は、水性媒体中で生理学的ｐＨにおいてプロトン化される１つ以上の塩基性官能基を含有することから、生理学的ｐＨでの正味正電荷を特質とする。例えば、カチオン性剤は、１つ以上のアミン基、例えば、それぞれ８．０以上のｐＫａを有する第一級、第二級、または第三級アミンを含有し得る。ｐＫａは約９超であり得る。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤は、水溶性の両親媒性分子であるカチオン性脂質であり得、この分子は一部が疎水性であり、例えば脂質部分を含んでおり、この分子の他の部分は親水性であり、生理学的ｐＨで通常荷電している１つ以上の官能基を含有している。脂質部分を含む疎水性部分は、カチオン性剤を脂質ナノ粒子コアに固定する役割を果たし得る。親水性部分は、脂質ナノ粒子コアの表面上の電荷を増加させる役割を果たし得る。例えば、カチオン性剤は、アルコール中で約１ｍｇ／ｍＬ超の溶解度を有し得る。アルコール中の溶解度は、約５ｍｇ／ｍＬ超であり得る。アルコール中の溶解度は、約１０ｍｇ／ｍＬ超であり得る。アルコール中の溶解度は、アルコール中約２０ｍｇ／ｍＬ超であり得る。アルコールは、エタノールなどのＣ１～６アルコールであり得る。
分子の脂質部分は、例えば、構造脂質、脂肪酸、または類似のヒドロカルビル基であり得る。
構造脂質は、ステロイド、ジテルペノイド、トリテルペノイド、コレスタン、ウルソール酸、またはそれらの誘導体から選択され得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールまたはフィストステロール（ｐｈｙｓｔｏｓｔｅｒｏｌ）から選択されるがこれらに限定されないステロイドである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールのアナログである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、シトステロール、カンペステロール、またはスチグマステロールである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、シトステロール、カンペステロール、またはスチグマステロールのアナログである。いくつかの実施形態では、構造脂質は、β－シトステロールである。
脂肪酸は、１～４つのＣ６～２０炭化水素鎖を含む。脂肪酸は完全に飽和していてもよく、または１～７つの二重結合を含有してもよい。脂肪酸は、主鎖に沿った、または主鎖に懸垂した１～５つのヘテロ原子を含有してもよい。
いくつかの実施形態では、脂肪酸は、２つのＣ１０～１８炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、２つのＣ１０～１８飽和炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、２つのＣ１６飽和炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、２つのＣ１４飽和炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、２つの不飽和Ｃ１０～１８炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、それぞれ１つの二重結合を有する２つのＣ１６～１８炭化水素鎖を含む。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、３つのＣ８～１８飽和炭化水素鎖を含む。
ヒドロカルビル基は、１～４つのＣ６～２０アルキル鎖、アルケニル鎖、もしくはアルキニル鎖、または３～１０員のシクロアルキル基、シクロアルケニル基、もしくはシクロアルキニル基からなる。
いくつかの実施形態では、ヒドロカルビル鎖は、Ｃ８～１０アルキルである。いくつかの実施形態では、ヒドロカルビル鎖は、Ｃ８～１０アルケニルである。
親水性部分は、７．３～７．４の生理学的ｐＨで荷電する１～５つの官能基を含み得る。親水性基は、生理学的ｐＨでプロトン化され正に荷電する塩基性官能基を含み得る。塩基性官能基のうちの少なくとも１つは、８以上のｐＫａを有する。
いくつかの実施形態では、親水性部分は、アミン基を含む。アミン基は、１～４つの第一級、第二級、または第三級アミン及びそれらの混合物を含み得る。第一級、第二級、または第三級アミンは、－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－、－Ｃ＝Ｃ－Ｎ－、－Ｃ＝Ｎ－、または－Ｎ－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－（但しこれらに限定されない）から選択される官能基を含有する、より大きいアミンの一部であり得る。アミンは、３～８員のヘテロアルキルまたはヘテロアリール環に含有され得る。
いくつかの実施形態では、アミン基は、１つまたは２つの末端第一級アミンを含む。いくつかの実施形態では、アミン基は、１つまたは２つの末端第一級アミン及び１つの内部第二級アミンを含む。いくつかの実施形態では、アミン基は、１つまたは２つの第三級アミンを含む。いくつかの実施形態では、第三級アミンは、（ＣＨ３）２Ｎ－である。いくつかの実施形態では、アミン基は、１つ～２つの末端（ＣＨ３）２Ｎ－を含む。
親水性部分は、ホスホニウム基を含み得る。ホスホニウムイオンの対イオンは、一価のアニオンからなる。
いくつかの実施形態では、ホスホニウム上の置換基のうちの３つは、イソプロピル基である。いくつかの実施形態では、対イオンは、ハロ、硫酸水素、亜硝酸、塩素酸、または炭酸水素である。いくつかの実施形態では、対イオンは、臭化物である。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤は、ステロールアミンであるカチオン性脂質である。ステロールアミンは、その疎水性部分にステロールを有し、その親水性部分にアミン基を有する。ステロール基は、コレステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、またはそれらの誘導体から選択されるが、これらに限定されない。アミン基は、１～５つの第一級、第二級、または第三級アミン、またはそれらの混合物を含み得る。アミンのうちの少なくとも１つは、８以上のｐＫａを有し、生理学的ｐＨで荷電している。第一級、第二級、または第三級アミンは、－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－、－Ｃ＝Ｃ－Ｎ－、－Ｃ＝Ｎ－、または－Ｎ－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－（但しこれらに限定されない）から選択される官能基を含有する、より大きいアミンの一部であり得る。アミンは、３～８員のヘテロアルキルまたはヘテロアリール環に含有され得る。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンのアミン基は、１つまたは２つの末端第一級アミンを含む。いくつかの実施形態では、アミン基は、１つまたは２つの末端第一級アミン及び１つの内部第二級アミンを含む。いくつかの実施形態では、アミン基は、１つまたは２つの第三級アミンを含む。いくつかの実施形態では、第三級アミンは、（ＣＨ３）２Ｎ－である。いくつかの実施形態では、アミン基は、１～２つの末端（ＣＨ３）２Ｎ－を含む。
本発明のナノ粒子に有用なステロールアミンには、式（Ａ１）：
Ａ－Ｌ－Ｂ（Ａ１）
を有する分子またはその塩が含まれ、式中：
Ａはアミン基であり、Ｌは任意選択のリンカーであり、Ｂはステロールである。
いくつかの実施形態では、アミン基は、アルキル（例えば、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～１０アルキルなど）、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されている。いくつかの実施形態では、リンカーは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－である。いくつかの実施形態では、ステロール基は、コレステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、またはそれらの誘導体である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ２ａ：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり、
Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルまたはＣ１～１４アルケニルであり；
Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
の基であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ２ａ：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり、
Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルまたはＣ１～１４アルケニルであり；
Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
の基であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である
（但し、式Ａ２ａの化合物は、
以外である）。
いくつかの実施形態では、
は、二重結合である。いくつかの実施形態では、
は、単結合である。
いくつかの実施形態では、Ｌａは、－ＯＣ（＝Ｏ）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、または－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－である。
いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、ｎは２である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～１４アルケニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、
である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このＣ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
ここで、このＣ１～１０アルキル、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ＯＨ、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、またはＮＨ２でそれぞれ任意選択的に置換されている。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ２：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり、
Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルまたはＣ１～１４アルケニルであり；
Ｌは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ３ａ：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１～６アルキルであり；
Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
の基であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ３ａ：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１～６アルキルであり；
Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
の基であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である
（但し、式Ａ２ａの化合物は、
以外である）。
いくつかの実施形態では、
は、二重結合である。いくつかの実施形態では、
は、単結合である。
いくつかの実施形態では、Ｌａは、－ＯＣ（＝Ｏ）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、または－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－である。
いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、ｎは２である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２はＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ２はエチルである。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このＣ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
ここで、このＣ１～１０アルキル、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ＯＨ、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、またはＮＨ２でそれぞれ任意選択的に置換されている。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ３：
またはその塩を有し、式中：
は、単結合または二重結合であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣ１～６アルキルであり；
Ｌは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
（２８）Ｎ（ＣＨ３）２から選択される。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ４：
またはその塩を有し、式中：
Ｚ１は、ＯＨまたはＣ３～６アルキルであり；
Ｌは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－であり；
Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、またはＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み、
ここで、このアルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）は、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
ｎ＝１または２である。
いくつかの実施形態では、Ｚ１はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｚ１はＣ３～６アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｌは、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｙ１は、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１０アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｙ１は、
である。
いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、ｎは２である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、式Ａ５：
またはその塩を有し、式中：
Ｚ２は、ＯＨまたはイソプロピルであり；
Ｌ３は、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、



またはその塩から選択される。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、
またはその塩から選択される。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、
またはその塩から選択される。
いくつかの実施形態では、ステロールアミンは、ＳＡ３：
またはその塩であり、これは、ＧＬ－６７とも称される。ＳＡ３またはＧＬ－６７は、当該技術分野で公知のプロセスに従って調製することができ、またはＡｖａｎｔｉ（登録商標）Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．などの商業ベンダーから購入することができる（ＳＫＵ ８９０８９３）。
いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、アミン含有側鎖を有するアミノ酸残基がステロール（例えば、コレステロールもしくはその誘導体）、脂肪酸、または類似のヒドロカルビル基などの疎水性基に付加されている、修飾アルギニンなどの修飾アミノ酸である。修飾アミノ酸部分の少なくとも１つのアミンは、８．０以上のｐＫａを有する。修飾アミノ酸部分の少なくとも１つのアミンは、生理学的ｐＨで正に荷電している。アミノ酸残基には、アルギニン、ヒスチジン、リジン、トリプトファン、オルニチン、及び５－ヒドロキシリジンが含まれ得るが、これらに限定されない。アミノ酸は、リンカーを介して疎水性基に結合されている。
いくつかの実施形態では、修飾アミノ酸は、修飾アルギニンである。
いくつかの実施形態では、カチオン性剤は、非脂質カチオン性剤である。非脂質カチオン性剤の例としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジウム、Ｌ－リジン一水和物、またはトロメタミンが挙げられる。
本明細書で一般的に定義される場合、「脂質」という用語は、疎水性または両親媒性特性を有する小分子を指す。脂質は、天然に存在するものでも、または合成であってもよい。脂質のクラスの例としては、脂肪、ワックス、ステロール含有代謝産物、ビタミン、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、サッカロ脂質、及びポリケチド、及びプレノール脂質が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの事例では、一部の脂質の両親媒性特性により、水性媒体中でリポソーム、小胞、または膜が形成される。
イオン化脂質
本明細書で使用される場合、「イオン化脂質」という用語は、当該技術分野におけるその通常の意味を有し、１つ以上の荷電部分を含む脂質を指し得る。いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、正に荷電していても、または負に荷電していてもよい。例えば、イオン化脂質は、比較的低いｐＨで正に荷電している場合があり、その場合、それは「カチオン性脂質」と称され得る。ある特定の実施形態では、イオン化脂質分子は、アミン基を含んでいる場合があり、イオン化アミノ脂質と称され得る。本明細書で使用される場合、「荷電部分」は、電子の形式電荷、例えば、一価（＋１、または－１）、二価（＋２、または－２）、三価（＋３、または－３）などを保有する化学的部分である。荷電部分は、アニオン性（すなわち、負に荷電している）またはカチオン性（すなわち、正に荷電している）であり得る。正に荷電した部分の例としては、アミン基（例えば、第一級、第二級、及び／または第三級アミン）、アンモニウム基、ピリジニウム基、グアニジン基、及びイミジゾリウム基が挙げられる。特定の実施形態では、荷電部分は、アミン基を含む。負に荷電した基またはその前駆体の例としては、カルボキシレート基、スルホネート基、サルフェート基、ホスホネート基、ホスフェート基、ヒドロキシル基などが挙げられる。荷電部分の電荷は、いくつかの場合では、環境条件によって変動する可能性があり、例えば、ｐＨの変化により、この部分の電荷が変化する場合がある、及び／またはこの部分が荷電するようになるかもしくは非荷電になる場合がある。一般に、分子の電荷密度は、必要に応じて選択され得る。
「荷電」または「荷電部分」という用語は、分子上の「部分負電荷」または「部分正電荷」を指さないことを理解されたい。「部分負電荷」及び「部分正電荷」という用語は、当該技術分野におけるその通常の意味が付与されている。「部分負電荷」は、電子密度が結合の１つの原子へと引き寄せられ、その原子上に部分負電荷が生じるように分極化される結合を官能基が含む場合にもたらされ得る。当業者は、一般に、このように分極化され得る結合を認識するであろう。
いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、イオン化アミノ脂質である。一実施形態では、イオン化アミノ脂質は、リンカー構造を介して接続された、正に荷電した親水性頭部及び疎水性尾部を有し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化脂質を含む。
本発明の脂質ナノ粒子組成物は、１つ以上のイオン化（例えば、イオン化アミノ）脂質（例えば、生理学的ｐＨで正電荷または部分正電荷を有し得る脂質）を含み得る。イオン化脂質は、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定的な群から選択され得る。これらに加えて、イオン化脂質はまた、環状アミン基を含む脂質であり得る。
イオン化脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１７／０７５５３１Ａ１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物でもあり得る。例えば、イオン化アミノ脂質としては、
及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
イオン化脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１５／１９９９５２Ａ１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物でもあり得る。例えば、イオン化アミノ脂質としては、
及びそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、イオン化脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０４０１８４号、第ＷＯ２０１１１５３１２０号、第ＷＯ２０１１１４９７３３号、第ＷＯ２０１１０９０９６５号、第ＷＯ２０１１０４３９１３号、第ＷＯ２０１１０２２４６０号、第ＷＯ２０１２０６１２５９号、第ＷＯ２０１２０５４３６５号、第ＷＯ２０１２０４４６３８号、第ＷＯ２０１００８０７２４号、第ＷＯ２０１０２１８６５号、第ＷＯ２００８１０３２７６号、第ＷＯ２０１３０８６３７３号、及び第ＷＯ２０１３０８６３５４号、米国特許第７，８９３，３０２号、第７，４０４，９６９号、第８，２８３，３３３号、及び第８，４６６，１２２号、ならびに米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号、第ＵＳ２０１２０２０２８７１号、第ＵＳ２０１３００６４８９４号、第ＵＳ２０１３０１２９７８５号、第ＵＳ２０１３０１５０６２５号、第ＵＳ２０１３０１７８５４１号、及び第Ｓ２０１３０２２５８３６号（これら各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のイオン化脂質から選択され得るが、これらに限定されない。
別の実施形態では、イオン化脂質は、国際公開第ＷＯ２０１３１１６１２６号またはＵＳ２０１３０２２５８３６（これら各々の内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の式Ａから選択され得るが、これらに限定されない。更に別の実施形態では、イオン化脂質は、国際公開第ＷＯ２００８１０３２７６号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，８９３，３０２号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＸＸＩＩ、及び米国特許公開第ＵＳ２０１０００３６１１５号の式Ｉ－ＶＩ、米国特許公開第ＵＳ２０１３０１２３３３８号の式Ｉ（これらの各々は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）から選択され得るが、これらに限定されない。
非限定的な例として、カチオン性脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－９－アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ５Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－８－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルドコサ－１３，１６－ジエン－５－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘンイコサ－１２，１５－ジエン－４－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－６－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－７－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルへプタコサ－１８，２１－ジエン－１０－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－５－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－４－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ－１９，２２－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルへプタコサ－１８，２１－ジエン－８－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－７－アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－６－アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２，２５－ジエン－１０－アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリアコンタ－２１，２４－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７－エン－９－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ－１９，２２－ジエン－７－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルへプタコサン－１０－アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－１－ノニルイコサ－１１，１４－ジエン－１－イル］ピロリジン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－２０－エン－１０－アミン、（１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエプタコサ－１５－エン－１０－アミン、（１４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１４－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１７－エン－１０－アミン、（２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリトリアコンタ－２４－エン－１０－アミン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０－エン－１０－アミン、（２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２－エン－１０－アミン、（１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６－エン－８－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘンイコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニルドコサ－１３，１６－ジエン－１－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］エプタデカン－８－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヘキシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘンイコサン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン－８－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン－５－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－｛７－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］へプチル｝ドデカン－１－アミン、１－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－へプチルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタデカン－９－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－デシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタデカン－６－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ペンタデカン－８－アミン、Ｒ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、Ｓ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－［（５Ｚ）－オクタ－５－エン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（へプチルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（ノニルオキシ）－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－６，９，１２－トリエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（ペンチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－３－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ）－ドコサ－１３－エン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ）－ドコサ－１３－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－［（９Ｚ）－ヘキサデカ－９－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｈ（１－メチルオクチル）オキシ］－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－１－［（３，７－ジメチルオクチル）オキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（オクチルオキシ）－３－（｛８－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－｛［８－（２－オクチルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、及び（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１１，２０，２－トリエン－１０－アミンまたはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体から選択され得る。
イオン化脂質の追加の例には、以下が含まれる。
一実施形態では、脂質は、切断可能な脂質、例えば、国際公開第ＷＯ２０１２１７０８８９号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のものであり得る。一実施形態では、脂質は、当該技術分野で公知の方法、及び／または国際公開第ＷＯ２０１３０８６３５４号（その各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって合成され得る。別の実施形態では、脂質は、トリアルキルカチオン性脂質であり得る。トリアルキルカチオン性脂質の非限定的な例、ならびにトリアルキルカチオン性脂質を作製及び使用する方法は、国際特許公開第ＷＯ２０１３１２６８０３号に記載されており、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、式（Ｉ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であり得、式中：
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～３０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、－（ＣＨ２）ｎ（ＮＲ４）Ｒ”Ｍ’Ｒ’、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し、この炭素環は、Ｃ６シクロアルキルもしくはＣ５アルキルで任意選択的に置換されており；
Ｒ４は、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、－ＣＨ（ＣＨ２Ｑ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、このＣ３～６炭素環は、－ＯＨまたは－ＯＭｅで任意選択的に置換されており；
各Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから独立して選択されるか；
またはＱは、
から選択され；
各ｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；
各Ｒ５は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
各Ｒは、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、ここで、Ｃ１～３アルキルは、－ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－ＯＭｅ、－Ｏ－ベンジルで任意選択的に置換されており；
各Ｒ’は、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され、ここで、Ｃ１～１８アルキルは、－ＯＭｅで任意選択的に置換されており；
各Ｒ”は、Ｈ、Ｃ３～１４アルキル、及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊は、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、式（Ｉ）：
の化合物またはその塩もしくは異性体であり得、式中：
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４は、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；
各Ｒ５は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
各Ｒは、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’は、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”は、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊は、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２である場合、（ｉ）ｎが１、２、３、４、もしくは５の場合、Ｑが－Ｎ（Ｒ）２ではないもの、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２の場合、Ｑが５、６、または７員ヘテロシクロアルキルではないものが含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットには、
Ｒ１が、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４が、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑが、Ｃ３～６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員ヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、ならびにＮ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子（オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノアルキルアミノまたはジアルキルアミノ、及びＣ１～３アルキルから選択される１つ以上の置換基で置換されている）を有する５～１４員ヘテロシクロアルキルから選択され、各ｎが、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；
各Ｒ５が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８が、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
各Ｒが、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’が、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”が、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊が、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙが、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択されるもの、
またはその塩もしくは異性体が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットには、
Ｒ１が、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４が、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑが、Ｃ３～６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、各ｎが、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；Ｑが５～１４員複素環であり、かつ（ｉ）Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ（ｎは１もしくは２である）であるか、または（ｉｉ）Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ（ｎは１である）であるか、または（ｉｉｉ）Ｒ４が－ＣＨＱＲ及び－ＣＱ（Ｒ）２である場合、Ｑは、５～１４員ヘテロアリールまたは８～１４員ヘテロシクロアルキルのいずれかであり；
各Ｒ５が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８が、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
各Ｒが、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’が、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”が、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊が、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙが、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択されるもの、
またはその塩もしくは異性体が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットには、
Ｒ１が、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４が、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑが、Ｃ３～６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つ以上のヘテロ原子を有する５～１４員ヘテロアリール、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＣＲＮ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、
－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２から選択され、各ｎが、１、２、３、４、及び５から独立して選択され；
各Ｒ５が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
Ｒ８が、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
Ｒ９が、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され；
各Ｒが、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’が、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”が、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊が、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙが、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択されるもの、
またはその塩もしくは異性体が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットには、
Ｒ１が、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｃ２～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４が、－（ＣＨ２）ｎＱまたは－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、ここで、Ｑが－Ｎ（Ｒ）２であり、ｎが３、４、及び５から選択され；
各Ｒ５が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
各Ｒが、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’が、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”が、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊が、Ｃ１～１２アルキル及びＣ１～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙが、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択されるもの、
またはその塩もしくは異性体が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物の別のサブセットには、
Ｒ１が、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され；
Ｒ２及びＲ３が、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択されるか、またはＲ２及びＲ３が、それらが結合している原子とともに複素環もしくは炭素環を形成し；
Ｒ４が、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、及び－ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、ここで、Ｑが－Ｎ（Ｒ）２であり、ｎが１、２、３、４、及び５から選択され；
各Ｒ５が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ６が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
Ｍ及びＭ’が、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｒ７が、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され；
各Ｒが、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ’が、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”が、Ｃ３～１４アルキル及びＣ３～１４アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒ＊が、Ｃ１～１２アルキル及びＣ１～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｙが、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｘが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され；
ｍが、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択されるもの、
またはその塩もしくは異性体が含まれる。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＡ）：
のもの、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり；Ｒ４は、非置換Ｃ１～３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり；Ｍ及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＩ）：
のもの、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され；Ｍ１は、結合またはＭ’であり；Ｒ４は、非置換Ｃ１～３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり；Ｍ及びＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、もしくは（ＩＩｅ）：
のもの、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、Ｒ４は、本明細書に記載の通りである。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットには、式（ＩＩｄ）：
のもの、またはその塩もしくは異性体が含まれ、式中、ｎは、２、３、または４であり；ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２～Ｒ６は、本明細書に記載の通りである。例えば、Ｒ２及びＲ３の各々は、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から独立して選択され得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
更なる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群から選択される：
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下からなる群：
ならびにその塩及び異性体から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、化合物４２９：
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化脂質は、化合物１８：
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、本明細書に記載の化合物（例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、または（ＩＩｅ）による化合物）を含む脂質成分を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、中央ピペラジン部分を含むイオン化脂質から構成され得る。そのようなＬＮＰは、有利には、イオン化脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質から構成され得るものであり、任意選択で構造脂質を含んでもよく、または構造脂質を欠いていてもよい。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＳＰＣまたはＤＯＰである。
本明細書に記載の中央ピペラジン部分を含むイオン化脂質は、哺乳動物細胞または器官への治療剤及び／または予防的薬剤の送達のための脂質ナノ粒子組成物中に有利に使用され得る。例えば、本明細書に記載の脂質は、免疫原性をほとんどまたは全く有さない。例えば、本明細書に開示される脂質化合物は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）と比較して免疫原性が低い。例えば、本明細書に開示される脂質と治療剤または予防的薬剤とを含む製剤は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）と、同じ治療剤または予防的薬剤と、を含む対応する製剤と比較して、治療指数が増加している。
脂質は、式（ＩＩＩ）
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり得、式中、
環Ａは、
であり；
ｔは、１または２であり；
Ａ１及びＡ２は、ＣＨまたはＮから各々独立して選択され；
Ｚは、ＣＨ２であるか、または存在せず、ここで、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し；Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｃ５～２０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され；
各Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から独立して選択され；
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、結合、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から独立して選択され；
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｒ＊は、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒは、Ｃ１～３アルキル及びＣ３～６炭素環からなる群から独立して選択され；
各Ｒ’は、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”は、Ｃ３～１２アルキル及びＣ３～１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
式中、環Ａが
である場合、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではなく；及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（ＩＩＩａ１）～（ＩＩＩａ６）のいずれかのものである：
式（ＩＩＩ）または（ＩＩＩａ１）～（ＩＩＩａ６）のうちのいずれかの化合物は、適用可能な場合、以下の特質のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
である。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
である。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
である。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
である。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
である。
いくつかの実施形態では、環Ａは、
であり、環中のＮ原子はＸ２と接続している。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、存在しない。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つは、Ｎである。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は、Ｎである。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は、ＣＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ１はＮであり、Ａ２はＣＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ１はＣＨであり、Ａ２はＮである。
いくつかの実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではない。例えば、ある特定の実施形態では、Ｘ１は、－ＣＨ２－ではない。いくつかの実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは、－Ｃ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ２は、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ３は、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－である。他の実施形態では、Ｘ３は、－ＣＨ２－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ３は、結合または－（ＣＨ２）２－である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、同じである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｒ４及びＲ５は、同じである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうち最大で１つが、－Ｒ”ＭＲ’である。例えば、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’であり得、及び／またはＲ４及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＭは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、各Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＭは、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、各Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＭは、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、各Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ”は、Ｃ３アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ”は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ”は、Ｃ５アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ”は、Ｃ５アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ”は、Ｃ６アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ”は、Ｃ６アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ”は、Ｃ７アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ”は、Ｃ７アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ”は、Ｃ５アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ’は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、少なくとも１つのＲは、Ｃ１アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ’は、Ｃ１アルキルである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ’は、Ｃ２アルキルである。ある特定の実施形態では、各Ｒ’は、Ｃ２アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、Ｃ１２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は、Ｃ１２アルキルである。
ある特定の実施形態では、化合物は、以下からなる群から選択される：
他の実施形態では、脂質は、式（ＩＶ）
またはその塩もしくは異性体を有し、式中、
Ａ１及びＡ２は、ＣＨまたはＮから各々独立して選択され、Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つは、Ｎであり；
Ｚは、ＣＨ２であるか、または存在せず、ここで、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し；Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｃ６～２０アルキル、Ｃ６～２０アルケニルからなる群から独立して選択され；
式中、環Ａが
である場合、
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が、同じであるか（ここで、Ｒ１は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１８アルキル、またはＣ１８アルケニルではない）；
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの１つのみが、Ｃ６～２０アルケニルから選択されるか；
ｉｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つが、他のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つとは異なる数の炭素原子を有するか；
ｉｖ）Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、Ｃ６～２０アルケニルから選択され、Ｒ４及びＲ５が、Ｃ６～２０アルキルから選択されるか；または
ｖ）Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３が、Ｃ６～２０アルキルから選択され、Ｒ４及びＲ５が、Ｃ６～２０アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（ＩＶａ）：
のものである。
式（ＩＶ）または（ＩＶａ）の化合物は、適用可能な場合、以下の特質のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、存在しない。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つは、Ｎである。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は、Ｎである。
いくつかの実施形態では、Ａ１及びＡ２の各々は、ＣＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ１はＮであり、Ａ２はＣＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ１はＣＨであり、Ａ２はＮである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じであり、Ｃ１２アルキル、Ｃ１８アルキル、またはＣ１８アルケニルではない。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じであり、Ｃ９アルキルまたはＣ１４アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの１つのみが、Ｃ６～２０アルケニルから選択される。ある特定のそのような実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同数の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、Ｒ４は、Ｃ５～２０アルケニルから選択される。例えば、Ｒ４は、Ｃ１２アルケニルまたはＣ１８アルケニルであり得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、他のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つとは異なる数の炭素原子を有する。
ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ６～２０アルケニルから選択され、Ｒ４及びＲ５は、Ｃ６～２０アルキルから選択される。他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ６～２０アルキルから選択され、Ｒ４及びＲ５は、Ｃ６～２０アルケニルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は同数の炭素原子を有し、及び／またはＲ４及びＲ５は、同数の炭素原子を有する。例えば、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３、またはＲ４及びＲ５は、６、８、９、１２、１４、または１８個の炭素原子を有し得る。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３、またはＲ４及びＲ５は、Ｃ１８アルケニル（例えば、リノレイル）である。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３、またはＲ４及びＲ５は、６、８、９、１２、または１４個の炭素原子を含むアルキル基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５とは異なる数の炭素原子を有する。他の実施形態では、Ｒ３は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、及びＲ５とは異なる数の炭素原子を有する。更なる実施形態では、Ｒ４は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ５とは異なる数の炭素原子を有する。
いくつかの実施形態では、化合物は、以下からなる群から選択される：
他の実施形態では、化合物は、式（Ｖ）
またはその塩もしくは異性体を有し、式中、
Ａ３は、ＣＨまたはＮであり；
Ａ４は、ＣＨ２またはＮＨであり；Ａ３及びＡ４のうちの少なくとも１つは、ＮまたはＮＨであり；
Ｚは、ＣＨ２であるか、または存在せず、ここで、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し；Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ５～２０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され；
各Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され；
Ｘ１及びＸ２は、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から独立して選択され；
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｒ＊は、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒは、Ｃ１～３アルキル及びＣ３～６炭素環からなる群から独立して選択され；
各Ｒ’は、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”は、Ｃ３～１２アルキル及びＣ３～１２アルケニルからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（Ｖａ）：
のものである。
式（Ｖ）または（Ｖａ）の化合物は、適用可能な場合、以下の特質のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、Ｚは、ＣＨ２である。
いくつかの実施形態では、Ｚは、存在しない。
いくつかの実施形態では、Ａ３及びＡ４のうちの少なくとも１つは、ＮまたはＮＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ３はＮであり、Ａ４はＮＨである。
いくつかの実施形態では、Ａ３はＮであり、Ａ４はＣＨ２である。
いくつかの実施形態では、Ａ３はＣＨであり、Ａ４はＮＨである。
いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではない。例えば、ある特定の実施形態では、Ｘ１は、－ＣＨ２－ではない。いくつかの実施形態では、Ｘ１及びＸ２のうちの少なくとも１つは、－Ｃ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｘ２は、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ５～２０アルキル及びＣ５～２０アルケニルからなる群から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、同じである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、またはＣ１４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、Ｃ１８アルケニルである。例えば、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、リノレイルであり得る。
いくつかの実施形態では、化合物は、以下からなる群から選択される：
別の態様では、本開示は、式（ＶＩ）：
による化合物またはその塩もしくは異性体を提供し、式中、
Ａ６及びＡ７は、ＣＨまたはＮから各々独立して選択され、ここで、Ａ６及びＡ７のうちの少なくとも１つは、Ｎであり；
Ｚは、ＣＨ２であるか、または存在せず、ここで、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し；Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は両方とも存在せず；
Ｘ４及びＸ５は、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－ＣＨ２－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＣＨ２－ＯＣ（Ｏ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から独立して選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ、Ｃ５～２０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から独立して選択され；
各Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から独立して選択され；
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり；
各Ｒ＊は、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から独立して選択され；
各Ｒは、Ｃ１～３アルキル及びＣ３～６炭素環からなる群から独立して選択され；
各Ｒ’は、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され；
各Ｒ”は、Ｃ３～１２アルキル及びＣ３～１２アルケニルからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５はそれぞれ、Ｃ６～２０アルキル及びＣ６～２０アルケニルからなる群から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、同じである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３は、同じである。いくつかの実施形態では、Ｒ４及びＲ５は、同じである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、Ｃ９～１２アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は、独立して、Ｃ９、Ｃ１２、またはＣ１４アルキルである。ある特定の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は、Ｃ９アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ａ６はＮであり、Ａ７はＮである。いくつかの実施形態では、Ａ６はＣＨであり、Ａ７はＮである。
いくつかの実施形態では、Ｘ４は－ＣＨ２－であり、Ｘ５は－Ｃ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｘ４及びＸ５は、－Ｃ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ａ６がＮであり、かつＡ７がＮである場合、Ｘ４及びＸ５のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではなく、例えば、Ｘ４及びＸ５のうちの少なくとも１つは、－Ｃ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ａ６がＮであり、かつＡ７がＮである場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’ではない。
いくつかの実施形態では、化合物は、
である。
一実施形態では、化合物は、以下の式を有する：
ＰＥＧ及びＰＥＧ修飾脂質
概して、本明細書に記載される様々な式の他の脂質成分（例えば、ＰＥＧ脂質）のいくつかは、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ」と題される、２０１６年１２月１０日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号（その全体が参照により組み込まれる）に記載されているように合成され得る。
脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つ以上の分子を含み得る。そのような種は、代替的にＰＥＧ化脂質と称され得る。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物を含む非限定的な群から選択され得る。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＤＭＧ－ＰＥＧ ２ｋまたは化合物４２８である。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ－ＤＭＧは、以下の構造を有する：
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、約１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％のＰＥＧ－脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ－脂質を含む。
一実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号（その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＰＥＧ化脂質であり得る。本明細書に記載されるこれらの例示的なＰＥＧ脂質のうちのいずれかは、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含むように修飾され得る。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義される場合、「ＰＥＧ－ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質」とも称される）は、脂質上に１つ以上のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖上に１つ以上のヒドロキシル基を含む。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨ脂質またはヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に－ＯＨ基を含む。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＶＩＩ）の化合物である。本明細書では、式（ＶＩＩ）：
の化合物またはその塩が提供され、式中：
Ｒ３は、－ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されているアルキル、または酸素保護基であり；
ｒは、１～１００（両端を含む）の整数であり；
Ｌ１は、任意選択的に置換されているＣ１～１０アルキレンであり、ここで、この任意選択的に置換されているＣ１～１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられており；
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分、または生理学的条件下で切断可能な部分であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
のものであり；
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンであり、ここで、この任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択で、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられており；
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキニルであり；任意選択で、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており；
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されているアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、任意選択的に置換されているカルボシクリル、任意選択的に置換されているヘテロシクリル、任意選択的に置換されているアリール、または任意選択的に置換されているヘテロアリールであり；
ｐは、１または２である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である（すなわち、Ｒ３は－ＯＲＯであり、ＲＯは水素である）。ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ－ＯＨ）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分（例えば、トリアゾール）である。ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ－ａ－１）もしくは（ＶＩＩ－ａ－２）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩であり、式中、
ｓは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの（式中、ｒは１～１００である）、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、Ｄは、生理学的条件下で切断可能な部分（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、尿素）である。ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ－ｂ－１）または（ＶＩＩ－ｂ－２）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ－ｂ－１－ＯＨ）または（ＶＩＩ－ｂ－２－ＯＨ）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。ある特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、式（ＶＩＩＩ）の化合物である。本明細書では、式（ＶＩＩＩ）：
の化合物またはその塩が提供され、式中：
Ｒ３は、－ＯＲＯであり；
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されているアルキルまたは酸素保護基であり；
ｒは、１～１００（両端を含む）の整数であり；
Ｒ５は、任意選択的に置換されているＣ１０～４０アルキル、任意選択的に置換されているＣ１０～４０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ１０～４０アルキニルであり；任意選択で、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており；
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されているアルキル、または窒素保護基である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ－ＯＨ）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは４５である。
ある特定の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは４５である。
更に他の実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、
である。
ある特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、以下の式：
のうちの１つ、またはその塩である。いくつかの実施形態では、ｒは４５である。
リン脂質
本明細書で定義されるリン脂質は、リン酸基を含む任意の脂質である。リン脂質は、非カチオン性脂質のサブセットである。脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、１つ以上のリン脂質、例えば、１つ以上の（ポリ）不飽和脂質を含み得る。リン脂質は、１層以上の脂質二重層にアセンブリされ得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含み得る。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。分枝、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然種を含めた非天然種もまた企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられているアルケニル基）で官能化または架橋され得る。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドへの曝露時に銅触媒による付加環化を受ける可能性がある。そのような反応は、ナノ粒子組成物の脂質二重層を機能化して膜透過もしくは細胞認識を促進するのに、またはナノ粒子組成物を標的化部分もしくはイメージング部分（例えば、色素）などの有用な成分にコンジュゲートさせるのに、有用であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、約５ｍｏｌ％～約１５ｍｏｌ％のリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約８ｍｏｌ％～約１３ｍｏｌ％のリン脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約１０ｍｏｌ％～約１２ｍｏｌ％のリン脂質を含む。
本組成物及び方法において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、
１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、
１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、
１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、
１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、
１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、
１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、
１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（４ＭＥ １６：０ ＰＧ）、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ナトリウム塩）（４ＭＥ １６：０ ＰＳ）、
１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、
１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、
１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、
１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、
１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、及び
１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、ならびにスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、ＤＳＰＣを含む。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、ＤＯＰＥを含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子組成物は、ＤＳＰＣとＤＯＰＥの両方を含む。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（４ＭＥ １６：０ ＰＥ）
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（４ＭＥ １６：０ ＰＣ）
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ナトリウム塩）（４ＭＥ １６：０ ＰＧ）、もしくは
１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－Ｌ－セリン（ナトリウム塩）（４ＭＥ １６：０ ＰＳ）
またはそれらの混合物を含む。
リン脂質の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、ＤＳＰＣのアナログまたはバリアントである。
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、式（ＩＸ）：
の化合物またはその塩であり、式中：
各Ｒ１は、独立して、Ｈもしくは任意選択的に置換されているアルキルであるか；または任意選択で、２つのＲ１が、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換されている単環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換されている単環式ヘテロシクリルを形成するか、または任意選択で、３つのＲ１が、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換されている二環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換されている二環式ヘテロシクリルを形成し；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
のものであり；
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンであり、ここで、この任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択で、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられており；
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキニルであり；任意選択で、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており；
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されているアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、任意選択的に置換されているカルボシクリル、任意選択的に置換されているヘテロシクリル、任意選択的に置換されているアリール、または任意選択的に置換されているヘテロアリールであり；
ｐは、１または２である
（但し、この化合物は、式：
（式中、Ｒ２の各事例は、独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである）のものではない）。
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、式（ＩＸ）：
の化合物またはその塩であり、式中：
各Ｒ１は、独立して、任意選択的に置換されているアルキルであるか；または任意選択で、２つのＲ１が、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換されている単環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換されている単環式ヘテロシクリルを形成するか、または任意選択で、３つのＲ１が、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換されている二環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換されている二環式ヘテロシクリルを形成し；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
Ａは、式：
のものであり；
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンであり、ここで、この任意選択的に置換されているＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択で、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられており；
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキニルであり；任意選択で、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられており；
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されているアルキル、または窒素保護基であり；
環Ｂは、任意選択的に置換されているカルボシクリル、任意選択的に置換されているヘテロシクリル、任意選択的に置換されているアリール、または任意選択的に置換されているヘテロアリールであり；
ｐは、１または２である
（但し、この化合物は、式：
（式中、Ｒ２の各事例は、独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである）のものではない）。
リン脂質頭部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾リン脂質頭部（例えば、修飾コリン基）を含む。ある特定の実施形態では、修飾頭部を有するリン脂質は、修飾第四級アミンを有するＤＳＰＣまたはそのアナログである。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つは、メチルではない。ある特定の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つは、水素またはメチルではない。ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩であり、式中：
各ｔは、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
各ｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり；
各ｖは、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つ、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、式（ＩＸ－ａ）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾コアを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の修飾コアを有するリン脂質は、修飾コア構造を有するＤＳＰＣまたはそのアナログである。例えば、式（ＩＸ－ａ）のある特定の実施形態では、基Ａは、以下の式：
のものではない。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ａ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つ、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、グリセリド部分の代わりに環状部分を含む。ある特定の実施形態では、本発明において有用であるリン脂質は、グリセリド部分の代わりに環状部分を有するＤＳＰＣまたはそのアナログである。ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、式（ＩＸ－ｂ）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｂ）の化合物は、式（ＩＸ－ｂ－１）：
のもの、またはその塩であり、式中：
ｗは、０、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｂ）の化合物は、式（ＩＸ－ｂ－２）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｂ）の化合物は、式（ＩＸ－ｂ－３）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｂ）の化合物は、式（ＩＸ－ｂ－４）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｂ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つ、またはその塩である。
リン脂質尾部の修飾
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾尾部を含む。ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾尾部を有するＤＳＰＣまたはそのアナログである。本明細書に記載される場合、「修飾尾部」は、比較的短いもしくは長い脂肪族鎖、分枝が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状基もしくはヘテロ原子基によって置き換えられた脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、（ＩＸ）の化合物は、式（ＩＸ－ａ）のもの、またはその塩であり、式中、Ｒ２の少なくとも１つの事例では、Ｒ２の各事例は、任意選択的に置換されているＣ１～３０アルキルであり、ここで、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられている。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、式（ＩＸ－ｃ）：
のもの、またはその塩であり、式中：
各ｘは、独立して、０～３０（両端を含む）の整数であり；
各事例では、Ｇは、任意選択的に置換されているカルボシクリレン、任意選択的に置換されているヘテロシクリレン、任意選択的に置換されているアリーレン、任意選択的に置換されているヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－からなる群から独立して選択される。各々の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（ＩＸ－ｃ－１）：
のもの、またはその塩であり、式中：
ｖの各事例は、独立して、１、２、または３である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（ＩＸ－ｃ－２）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、式（ＩＸ－ｃ－３）：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下の式：
のもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ－ｃ）の化合物は、以下：
またはその塩である。
ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、ここで、第四級アミンをホスホリル基に連結するアルキル鎖は、エチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。したがって、ある特定の実施形態では、本発明において有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、式（ＩＸ）の化合物であり、式中、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つのもの、またはその塩である。
ある特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式：
のうちの１つ、またはその塩である。
代替脂質
ある特定の実施形態では、代替脂質が、本発明のリン脂質の代わりに使用される。そのような代替脂質の非限定的な例としては、以下：
が挙げられる。
構造脂質
脂質ナノ粒子組成物の脂質成分は、１つ以上の構造脂質を含み得る。脂質ナノ粒子内に構造脂質を導入することは、粒子内の他の脂質の凝集を減らすのに役立ち得る。構造脂質は、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、ホパノイド、フィトステロール、ステロイド、及びそれらの混合物を含むがこれらに限定されない群から選択され得る。いくつかの実施形態では、構造脂質は、ステロールである。本明細書で定義される場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドの亜群である。ある特定の実施形態では、構造脂質は、ステロイドである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、コレステロールのアナログである。ある特定の実施形態では、構造脂質は、アルファ－トコフェロールである。構造脂質の例としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、約２０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の構造脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約３５ｍｏｌ％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、約４０ｍｏｌ％の構造脂質を含む。いくつかの実施形態では、構造脂質は、コレステロールまたは以下の構造：
を有する化合物である。
ペイロード分子
本開示の組成物は、多種多様な異なる薬剤を気道細胞に送達するために使用され得る。気道細胞は、例えば、口腔、鼻部、咽頭、または肺内の呼吸道を覆っている細胞であり得る。治療剤は、そのような気道細胞において治療効果を媒介することができる（例えば、直接媒介するか、またはバイスタンダー効果を介して）。通常、組成物によって送達される治療剤は核酸であるが、小分子、化学療法薬、ペプチド、ポリペプチド、及び他の生体分子などの非核酸剤も本開示によって包含される。送達することができる核酸には、ＤＮＡベースの分子（すなわち、デオキシリボヌクレオチドを含む）及びＲＮＡベースの分子（すなわち、リボヌクレオチドを含む）が含まれる。更に、核酸は、分子の天然に存在する形態、または分子の化学修飾された形態（例えば、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む）であり得る。
タンパク質発現を増強させるための薬剤
一実施形態では、治療剤は、タンパク質発現を増強させる（すなわち、増加させる、刺激する、アップレギュレートさせる）薬剤である。タンパク質発現の増強に使用することができる治療剤のタイプの非限定的な例としては、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、ｓｓＤＮＡ、及びＤＮＡ（例えば、発現ベクター）が挙げられる。
一実施形態では、治療剤は、ＤＮＡ治療剤である。ＤＮＡ分子は、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、または部分的に二本鎖ＤＮＡである分子、すなわち二本鎖である部分と一本鎖である部分とを有する分子であり得る。いくつかの場合では、ＤＮＡ分子は、三本鎖であるか、または部分的に三本鎖であり、すなわち、三本鎖である部分と二本鎖である部分とを有する。ＤＮＡ分子は、環状ＤＮＡ分子または線状ＤＮＡ分子であり得る。
ＤＮＡ治療剤は、遺伝子を細胞に導入することができるＤＮＡ分子、例えば、転写物をコードしてそれを発現させることができるＤＮＡ分子であり得る。例えば、ＤＮＡ治療剤は、目的のタンパク質をコードすることができ、それにより、ＬＮＰによる送達時に気道における目的のタンパク質の発現を増加させることができる。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、天然由来、例えば、天然源から単離されたものであり得る。他の実施形態では、ＤＮＡ分子は、合成分子、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された合成ＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、組換え分子である。非限定的な例示的なＤＮＡ治療剤としては、プラスミド発現ベクター及びウイルス発現ベクターが挙げられる。
本明細書に記載のＤＮＡ治療剤、例えばＤＮＡベクターは、様々な異なる特質を含み得る。本明細書に記載のＤＮＡ治療剤、例えばＤＮＡベクターは、非コードＤＮＡ配列を含み得る。例えば、ＤＮＡ配列は、遺伝子の少なくとも１つの制御エレメント、例えば、プロモーター、エンハンサー、終結エレメント、ポリアデニル化シグナルエレメント、スプライシングシグナルエレメントなどを含み得る。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、イントロンである。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、トランスポゾンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、転写活性のある遺伝子と作動可能に連結された非コードＤＮＡ配列を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、遺伝子に連結されていない非コードＤＮＡ配列を有し得る。すなわち、非コードＤＮＡは、ＤＮＡ配列上の遺伝子を制御しない。
いくつかの実施形態では、ペイロードは、遺伝子調節因子、すなわち、例えば、核酸塩基を変化させることによって、例えば、挿入、欠失、変異（例えば、ミスセンス変異、サイレント変異、もしくはナンセンス変異）、重複、または逆位、あるいはそれらの任意の組み合わせを導入することによってＤＮＡ分子の核酸配列を修飾する系の少なくとも１つの成分を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、ＤＮＡ塩基編集因子、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、メガヌクレアーゼ系、もしくはトランスポザーゼ系、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、鋳型ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、鋳型ＤＮＡを含まない。いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、鋳型ＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、鋳型ＲＮＡを含まない。
いくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系である。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、標的遺伝子の配列に特異的な標的配列を含むガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）分子と、ヌクレアーゼ活性（例えば、エンドヌクレアーゼ活性）を有するペプチド（例えば、Ｃａｓタンパク質またはそのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアント、例えば、Ｃａｓ９タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ３タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１２ａタンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１２ｅタンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１３タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；あるいはＣａｓ１４タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント）と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、標的遺伝子の配列に特異的な標的配列を含むｇＲＮＡ分子と、ヌクレアーゼ活性（例えば、エンドヌクレアーゼ活性）を有するペプチド（例えば、Ｃａｓタンパク質またはそのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアント、例えば、Ｃａｓ９タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ３タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１２ａタンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１２ｅタンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；Ｃａｓ１３タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント；あるいはＣａｓ１４タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアント）をコードする核酸と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、標的遺伝子の配列に特異的な標的配列を含むｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、Ｃａｓ９タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアントと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、標的遺伝子の配列に特異的な標的配列を含むｇＲＮＡ分子をコードする核酸と、Ｃａｓ９タンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアントをコードする核酸と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、鋳型ＤＮＡを更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、鋳型ＲＮＡを更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ遺伝子編集系は、逆転写酵素を更に含む。
本明細書に開示される方法、組成物、または細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系である。いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを有し；及び／またはヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有する、ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ＺｎフィンガーＤＮＡ結合ドメインを有するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｚｎフィンガー結合ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれ以上のジンクフィンガーを含む。いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ活性を有するペプチドは、ＩＩ型制限１様エンドヌクレアーゼ、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼである。いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを有し；及び／またはヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有する、ペプチドをコードする核酸を含む。
いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ＺｎフィンガーＤＮＡ結合ドメインを有するペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、Ｚｎフィンガー結合ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれ以上のジンクフィンガーを含む。いくつかの実施形態では、ＺＦＮ系は、ヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有するペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ活性を有するペプチドは、ＩＩ型制限１様エンドヌクレアーゼ、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼである。
いくつかの実施形態では、系は、鋳型、例えば鋳型ＤＮＡを更に含む。
本明細書に開示される方法、組成物、または細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系である。いくつかの実施形態では、系は、転写活性化因子様（ＴＡＬ）エフェクターＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを有し；及び／またはヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有する、ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、系は、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアントを有するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、系は、ヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有するペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ活性を有するペプチドは、ＩＩ型制限１様エンドヌクレアーゼ、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼである。
いくつかの実施形態では、系は、転写活性化因子様（ＴＡＬ）エフェクターＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを有し；及び／またはヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有する、ペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、系は、転写活性化因子様（ＴＡＬ）エフェクターＤＮＡ結合ドメイン、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）またはバリアントを有するペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、系は、ヌクレアーゼ活性、例えばエンドヌクレアーゼ活性を有するペプチドをコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ活性を有するペプチドは、ＩＩ型制限１様エンドヌクレアーゼ、例えば、ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼである。
いくつかの実施形態では、系は、鋳型、例えば鋳型ＤＮＡを更に含む。
本明細書に開示される方法、組成物、または細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、メガヌクレアーゼ系である。いくつかの実施形態では、メガヌクレアーゼ系は、ＤＮＡ結合ドメインとヌクレアーゼ活性とを有するペプチド、例えばホーミングエンドヌクレアーゼを含む。いくつかの実施形態では、ホーミングエンドヌクレアーゼは、例えば、Ｓｉｌｖａ Ｇ．ｅｔ ａｌ，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １１（１）：１１－２７に記載されているような、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧエンドヌクレアーゼ、ＧＩＹ－ＹＩＧエンドヌクレアーゼ、ＨＮＨエンドヌクレアーゼ、Ｈｉｓ－Ｃｙｓボックスエンドヌクレアーゼ、もしくはＰＤ－（Ｄ／Ｅ）ＸＫエンドヌクレアーゼ、またはそのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、メガヌクレアーゼ系は、ＤＮＡ結合ドメインとヌクレアーゼ活性とを有するペプチド（例えばホーミングエンドヌクレアーゼ）をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、ホーミングエンドヌクレアーゼは、例えば、Ｓｉｌｖａ Ｇ．ｅｔ ａｌ，（２０１１）Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １１（１）：１１－２７に記載されているような、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧエンドヌクレアーゼ、ＧＩＹ－ＹＩＧエンドヌクレアーゼ、ＨＮＨエンドヌクレアーゼ、Ｈｉｓ－Ｃｙｓボックスエンドヌクレアーゼ、もしくはＰＤ－（Ｄ／Ｅ）ＸＫエンドヌクレアーゼ、またはそのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアントを含む。
いくつかの実施形態では、系は、鋳型、例えば鋳型ＤＮＡを更に含む。
本明細書に開示される方法、組成物、または細胞のいずれかのいくつかの実施形態では、遺伝子調節因子は、トランスポザーゼ系である。いくつかの実施形態では、トランスポザーゼ系は、逆転写酵素活性及び／またはヌクレアーゼ活性を有するペプチドをコードする核酸配列（例えば、レトロトランスポゾン、例えば、ＬＴＲレトロトランスポゾンまたは非ＬＴＲレトロトランスポゾン）を含む。いくつかの実施形態では、トランスポザーゼ系は、鋳型、例えばＲＮＡ鋳型を含む。
一実施形態では、治療剤は、ＲＮＡ治療剤である。ＲＮＡ分子は、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、または部分的に二本鎖ＲＮＡである分子、すなわち二本鎖である部分と一本鎖である部分とを有する分子であり得る。ＲＮＡ分子は、環状ＲＮＡ分子または線状ＲＮＡ分子であり得る。
ＲＮＡ治療剤は、遺伝子を細胞に導入することができる、例えば、目的のタンパク質をコードすることにより気道細胞における目的のタンパク質の発現を増加させる、ＲＮＡ治療剤であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子は、天然由来、例えば、天然源から単離されたものであり得る。他の実施形態では、ＲＮＡ分子は、合成分子、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された合成ＲＮＡ分子である。
ＲＮＡ治療剤の非限定的な例としては、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）（例えば、目的のタンパク質をコードするもの）、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位（複数可））を導入したｍＲＮＡ、機能性ＲＮＡエレメントを含む修飾ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴミル、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡを含む）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ならびにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術の構成要素をコードするものが挙げられ、これらの各々は、以下のサブセクションで更に説明される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ調節因子は、ＲＮＡ塩基編集系を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ塩基編集系は、デアミナーゼ、例えば、ＲＮＡ特異的アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡＲ）；Ｃａｓタンパク質、そのフラグメント（例えば、生物学的に活性なフラグメント）もしくはバリアント；及び／またはガイドＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ塩基編集系は、鋳型、例えばＤＮＡ鋳型またはＲＮＡ鋳型を更に含む。
ｍＲＮＡは、天然に存在するｍＲＮＡであっても、または天然に存在しないｍＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡは、以下に記載されるように、１つ以上の修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチドを含んでもよく、その場合、ｍＲＮＡは、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と称され得る。本明細書に記載される場合、「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）と組み合わせて含む化合物と定義される。本明細書に記載される場合、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドとして定義される。
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含み得る。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００）、または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含む、任意の適切な数の塩基対を含み得る。任意の数の（例えば、全ての、一部の、または０個の）核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、置換された、修飾された、またはさもなければ天然に存在しない、カノニカルな種のアナログであり得る。ある特定の実施形態では、特定の核酸塩基タイプの全てが修飾され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、任意選択で、コザック配列（コザックコンセンサス配列としても知られる）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。
５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって接続された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然に存在するキャップ、天然に存在しないキャップもしくはキャップアナログ、またはアンチリバースキャップ（ＡＲＣＡ）から選択され得る。キャップ種には、１つ以上の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分が含まれ得る。例えば、天然ｍＲＮＡキャップには、グアニンヌクレオチド、及び５’位で三リン酸結合によって接続された７位でメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチド、例えば、一般にｍ７ＧｐｐｐＧと記述されるｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇが含まれ得る。キャップ種はまた、アンチリバースキャップアナログであり得る。可能なキャップ種の非限定的なリストには、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが含まれる。
ｍＲＮＡは、鎖終結ヌクレオシドを代わりにまたは追加で含み得る。例えば、鎖終結ヌクレオシドには、糖基の２’及び／または３’位で脱酸素化されたヌクレオシドが含まれ得る。そのような種には、３’デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’デオキシウリジン、３’デオキシシトシン、３’デオキシグアノシン、３’デオキシチミン、ならびに２’，３’ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’ジデオキシアデノシン、２’，３’ジデオキシウリジン、２’，３’ジデオキシシトシン、２’，３’ジデオキシグアノシン、及び２’，３’ジデオキシチミンが含まれ得る。いくつかの実施形態では、鎖終結ヌクレオチドのｍＲＮＡへの、例えば３’末端での導入は、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されているように、ｍＲＮＡの安定化をもたらし得る。
ｍＲＮＡは、ヒストンステムループなどのステムループを代わりにまたは追加で含み得る。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれ以上のヌクレオチド塩基対を含み得る。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８つのヌクレオチド塩基を含み得る。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置し得る。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域もしくは３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくは尾部の内部に、その前に、または後に位置し得る。いくつかの実施形態では、ステムループは、翻訳開始、翻訳効率、及び／または転写終結などのｍＲＮＡの１つ以上の機能（複数可）に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを代わりにまたは追加で含み得る。ポリＡ配列は、アデニンヌクレオチドまたはそのアナログもしくは誘導体から完全にまたは主に構成され得る。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置する尾部であり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外輸送、翻訳、及び／または安定性に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、マイクロＲＮＡ結合部位を代わりにまたは追加で含み得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域及び第２のコード領域（第１及び第２のコード領域間の内部翻訳開始を可能にする内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列、または２Ａペプチドなどの自己切断ペプチドをコードする介在配列を有する）を含むバイシストロン性ｍＲＮＡである。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは、通常、同じベクターからの複数のタンパク質の発現を増強させるために使用される。例えば、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳを含む様々なＩＲＥＳ配列が、当該技術分野で公知かつ利用可能であり、これらを使用することができる。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つ以上の修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチド（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照非修飾ｍＲＮＡと比較して、安定性の増強、細胞内保持、翻訳の増強、及び／またはｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含む有用な特性を有し得る。したがって、修飾ｍＲＮＡの使用により、タンパク質産生効率、核酸の細胞内保持が高まり得るのみならず、免疫原性が低減し得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、または４つ）の異なる修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００個、またはそれ以上）の異なる修飾核酸塩基、修飾ヌクレオシド、または修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する非修飾ｍＲＮＡと比較して、ｍＲＮＡが導入される細胞において分解を低減させている可能性がある。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－シュードウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α－チオ－アデノシン、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－アラ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアノシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ウィブトシン（ｙＷ）、ペルオキシウィブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ）、低修飾（ｕｎｄｅｒｍｏｄｉｆｉｅｄ）ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－シュードウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５－メトキシウリジン、または２’－Ｏ－メチルウリジンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。一実施形態では、修飾核酸塩基は、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）であり、本開示のｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）で完全に修飾されている。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの７５～１００％に相当する。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの１００％に相当する。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンが挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（ψ）、α－チオ－グアノシン、またはα－チオ－アデノシンである。いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２つ、３つ、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾のために均一に修飾される（すなわち、完全に修飾される、配列全体を通して修飾される）。例えば、ｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾され得、このことは、ｍＲＮＡ配列中の全てのウリジンまたは全てのシトシンヌクレオシドが、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で置き換えられることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、上記のものなどの修飾残基で置き換えることによって、配列中に存在する任意のタイプのヌクレオシド残基が均一に修飾され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）内で修飾され得る。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、コード領域以外の領域で修飾され得る。例えば、いくつかの実施形態では、５’－ＵＴＲ及び／または３’－ＵＴＲが提供され、これらは、いずれかまたは両方が独立して１つ以上の異なるヌクレオシド修飾を含有し得る。そのような実施形態では、ヌクレオシド修飾はまた、コード領域内にも存在し得る。
本開示のｍｍＲＮＡに存在し得るヌクレオシド修飾及びそれらの組み合わせの例としては、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、及びＷＯ２０１４１５９８１３に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含み得る。これらの組み合わせは、本明細書に記載の任意の１つ以上の修飾を含み得る。
単一の修飾が記載されている場合、記載されているヌクレオシドまたはヌクレオチドは、修飾されているそのＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣヌクレオチドまたはヌクレオシドのうちの１００％に相当する。パーセンテージが記載されている場合、これらは、存在するＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ三リン酸の総量のうちのその特定のＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ核酸塩基三リン酸のパーセンテージに相当する。例えば、２５％５－アミノアリル－ＣＴＰ＋７５％ＣＴＰ／２５％５－メトキシ－ＵＴＰ＋７５％ＵＴＰという組み合わせは、シトシン三リン酸の２５％が５－アミノアリル－ＣＴＰであると同時にシトシンの７５％がＣＴＰであるのに対し、ウラシルの２５％が５－メトキシＵＴＰであると同時にウラシルの７５％がＵＴＰである、ポリヌクレオチドを指す。修飾ＵＴＰが記載されていない場合、天然に存在するＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、及び／またはＣＴＰが、ポリヌクレオチド中に見出されるこれらのヌクレオチドの部位の１００％で使用される。この例では、全てのＧＴＰ及びＡＴＰヌクレオチドは未修飾のままである。
本開示のｍＲＮＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）及び合成法を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で利用可能な手段によって生成され得る。酵素（ＩＶＴ）、固相、液相、複合合成法、小領域合成、及びライゲーション法を利用することができる。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＶＴ酵素合成法を使用して作製される。ＩＶＴによるポリヌクレオチドの作製方法は当該技術分野で公知であり、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２に記載されており、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。したがって、本開示はまた、本明細書に記載のｍＲＮＡをｉｎ ｖｉｔｒｏで転写するために使用され得るポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、コンストラクト、及びベクターを含む。
非天然修飾核酸塩基は、合成中または合成後にポリヌクレオチド、例えばｍＲＮＡに導入され得る。ある特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖上のものであり得る。特定の実施形態では、修飾は、化学合成によって、またはポリメラーゼ酵素によって、ポリヌクレオチド鎖の末端またはポリヌクレオチド鎖の他のどこかに導入され得る。修飾核酸及びそれらの合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成は、Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９－１３４（１９９８）にも記載されている。
酵素的または化学的ライゲーション法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはその領域を、様々な機能的部分、例えば、標的化剤または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子などとコンジュゲートさせることができる。ポリヌクレオチドのコンジュゲート及び修飾ポリヌクレオチドは、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５－１８７（１９９０）に概説されている。
タンパク質発現を低減させるための治療剤
一実施形態では、治療剤は、タンパク質発現を低減させる（すなわち、減少させる、阻害する、ダウンレギュレートさせる）治療剤である。一実施形態では、治療剤は、標的気道細胞におけるタンパク質発現を低減させる。タンパク質発現を低減させるために使用することができる治療剤のタイプの非限定的な例としては、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位）を導入したｍＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴミル、低分子（短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡを含む）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ならびにＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術が挙げられる。
ペプチド／ポリペプチド治療剤
一実施形態では、治療剤は、ペプチド治療剤である。一実施形態では、治療剤は、ポリペプチド治療剤である。
いくつかの実施形態では、治療的ペイロードまたは予防的ペイロードは、分泌タンパク質、膜結合タンパク質、もしくは細胞間タンパク質、またはそれらのペプチド、ポリペプチド、もしくは生物学的に活性なフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、治療的ペイロードまたは予防的ペイロードは、分泌タンパク質、そのペプチド、ポリペプチド、または生物学的に活性なフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、治療的ペイロードまたは予防的ペイロードは、膜結合タンパク質、そのペプチド、ポリペプチド、または生物学的に活性なフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、治療的ペイロードまたは予防的ペイロードは、細胞内タンパク質、そのペプチド、ポリペプチド、または生物学的に活性なフラグメントをコードするｍＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、治療的ペイロードまたは予防的ペイロードは、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、天然由来、例えば、天然源から単離されたものである。他の実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、合成分子、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで生成された合成ペプチドまたはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、組換え分子である。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、キメラ分子である。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、融合分子である。一実施形態では、本組成物のペプチドまたはポリペプチド治療剤は、天然に存在するペプチドまたはポリペプチドである。一実施形態では、本組成物のペプチドまたはポリペプチド治療剤は、天然に存在するペプチドまたはポリペプチドの修飾バージョンである（例えば、その野生型である、天然に存在するペプチドまたはポリペプチド対応物と比較して、３つ未満、５つ未満、１０個未満、１５個未満、２０個未満、または２５個未満のアミノ置換、欠失、または付加を含有する）。
カチオン性剤を含むＬＮＰ
本発明のＬＮＰは、ＬＮＰコアと、コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤とを含む。そのようなＬＮＰは、生理学的ｐＨで中性を超えるゼータ電位を有する。
コア脂質ナノ粒子は、通常、次の成分：脂質（イオン化アミノ脂質、リン脂質、ヘルパー脂質（中性脂質、双性イオン脂質、アニオン性脂質などであり得る）を含み得る）、構造脂質（例えば、コレステロールまたはコレステロールアナログ）、脂肪酸、ポリマー、安定剤、塩、緩衝液、溶媒などのうちの１つ以上を含む。
本明細書で提供されるある特定のＬＮＰコアは、イオン化脂質、例えば、イオン化アミノ脂質などのイオン化脂質、リン脂質、構造脂質、及び任意選択で、別の脂質にコンジュゲートされて提供されてもまたは提供されなくてもよい安定化剤（例えば、ポリエチレングリコールを含む分子）を含む。
構造脂質は、ステロール（例えばコレステロールなど）であってもよいが、これに限定されない。構造脂質は、β－シトステロールであり得る。
ヘルパー脂質は、非カチオン性脂質である。ヘルパー脂質は、少なくとも８Ｃの少なくとも１つの脂肪酸鎖及び少なくとも１つの極性頭基部分を含み得る。
ポリエチレングリコール（すなわち、ＰＥＧ）を含む分子が使用される場合、その分子は安定剤として使用され得る。いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコールを含む分子は、脂質にコンジュゲートされたポリエチレングリコールであってもよく、したがって、例えば、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧまたはＰＥＧ－ＤＭＧとして提供されてもよい。本明細書で提供されるある特定のＬＮＰは、ＰＥＧ化脂質を含まないかまたは低レベルのＰＥＧ化脂質を含み（アルキル－ＰＥＧ化脂質を含まないかまたは低レベルのアルキルＰＥＧ化脂質を含むことを含む）、本明細書において、ＰＥＧ不含またはＰＥＧ化脂質不含と称される場合がある。したがって、一部のＬＮＰは、０．５ｍｏｌ％未満のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの事例では、ＰＥＧは、メトキシ－ＰＥＧなどのアルキル－ＰＥＧであり得る。更に他のＬＮＰは、ヒドロキシ－ＰＥＧなどの非アルキル－ＰＥＧ、及び／またはヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質などの非アルキル－ＰＥＧ化脂質を含む。本明細書で提供されるある特定のＬＮＰは、高レベルのＰＥＧ化脂質を含む。一部のＬＮＰは、０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質を含む。一部のＬＮＰは、０．５ｍｏｌ％を超えるＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、０．１ｍｏｌ％～３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質、０．５ｍｏｌ％～２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質、または１．０ｍｏｌ％～１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ化脂質を含む。
いくつかの実施形態では、コアナノ粒子組成物は、モル比が５０：１０：３８．５：１．５の化合物１８：リン脂質：コレステロール：Ｎ－ラウロイル－Ｄ－エリスロ－スフィンガニルホスホリルコリンの配合を有し得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子コア組成物は、モル比が５０：１０：３８．５：１．５の化合物１８：ＤＳＰＣ：コレステロール：化合物４２８の配合を有し得る。
化合物４２８：
本開示のナノ粒子は、式（Ｉ）による少なくとも１つの化合物を含む。例えば、ナノ粒子組成物は、化合物１～１４７のうちの１つ以上を含み得る。ナノ粒子はまた、様々な他の成分を含み得る。例えば、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）または（ＩＩ）による脂質に加えて、１つ以上の他の脂質、例えば、（ｉ）少なくとも１つのリン脂質、（ｉｉ）少なくとも１つの構造脂質、（ｉｉｉ）少なくとも１つのＰＥＧ－脂質、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせを含み得る。
いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６、または４８）を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６、または４８）及びリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＥ、またはＭＳＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物１８、２５、２６、または４８）及びリン脂質（例えば、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、またはＭＳＰＣ）を含む。
本開示はまた、脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることを含む、ナノ粒子を調製するプロセスを提供し、この脂質ナノ粒子は、
（ａ）以下：
（ｉ）イオン化脂質、
（ｉｉ）リン脂質、
（ｉｉｉ）構造脂質、及び
（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
を含む脂質ナノ粒子コアと、
（ｂ）細胞への送達のためにコア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、を含む。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることは、カチオン性剤を非イオン性賦形剤に溶解させることを含む。いくつかの実施形態では、非イオン性賦形剤は、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート（ＨＳ １５）、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００（ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ）、化合物４２８、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、及びｄ－α－トコフェロールポリエチレングリコールサクシネート（ＴＰＧＳ）から選択される。いくつかの実施形態では、非イオン性賦形剤は、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート（ＨＳ １５）である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることは、緩衝溶液に溶解したカチオン性剤を含む。いくつかの実施形態では、緩衝溶液は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。いくつかの実施形態では、緩衝溶液は、Ｔｒｉｓベースの緩衝液である。
本明細書に記載のプロセスによって、例えば、脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることによって調製されたナノ粒子が提供される。いくつかの実施形態では、カチオン性剤は、ＧＬ－６７などのステロールアミンであり得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子の脂質ナノ粒子コアは、任意選択でＰＥＧ－脂質を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性剤と接触する脂質ナノ粒子を形成する脂質ナノ粒子コアは、ＰＥＧ－脂質を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ－脂質は、カチオン性剤と接触させる前、またはカチオン性剤と接触させた後に、カチオン性剤とともに脂質ナノ粒子に添加する。
一実施形態では、本発明のＬＮＰは、核酸ペイロードをコアＬＮＰ成分と混合してコアＬＮＰ＋ペイロードを作り出す従来の混合技術を使用して作製することができる。この搭載コアＬＮＰを調製したら、搭載コアＬＮＰにカチオン性剤を接触させる。
別の実施形態では、本発明のＬＮＰは、中空ＬＮＰを出発点として使用して作製することができる。例えば、図１に示すように、中空ＬＮＰは、核酸ペイロードに搭載する前に作製される。核酸ペイロードをＬＮＰと接触させたら、カチオン性剤を添加して本発明のＬＮＰを形成することができる。
例えば、一実施形態では、事後搭載（ＰＨＬ）法において、まず、中空ＬＮＰをナノ沈殿ステップで製剤化し、緩衝液を低ｐＨ緩衝液（すなわちｐＨ５）に交換する。次に、これらの中空ＬＮＰを、混合事象を通じてｍＲＮＡに導入する（同様に低ｐＨで酸性化させる）。混合ステップの後、ｐＨ調整法を使用してｐＨを中和する。最後に、ＰＥＧ脂質、例えば、ＤＭＧ－ＰＥＧ－２ｋを添加して粒子を安定化させる。次に、これらの粒子を目標濃度まで濃縮し、濾過する。カチオン性剤、例えばＧＬ６７を添加する。
中空ＬＮＰの出発点の変形形態を図２に例示する。図２は、ＰＥＧ脂質を除くＬＮＰの脂質を使用して中空ＬＮＰを形成することを示している。次に、核酸溶液を中空ＬＮＰと接触させ、搭載ＬＮＰを形成する。図２に点線の囲み枠で例示されているように、ＰＥＧ脂質を、搭載ＬＮＰの更なる処理中の１つまたは２つの時点で添加し、カチオン性剤をその更なる処理中の任意の時点で添加することができる。図３は、図２のプロセスのより具体的なバージョンであり、先と同様に、カチオン性剤を搭載ＬＮＰのその更なる処理中の任意の時点で添加することができる。
いくつかの実施形態では、本発明のＬＮＰは、ナノ沈殿を使用して調製することができ、これは、動的混合ならびに後続の成熟化及び連続希釈によって、ＬＮＰをそれらの個々の脂質成分から自己組織化させる単位操作である。この単位操作には、水性投入物と有機投入物との混合、ＬＮＰの成熟化、及び制御された滞留時間後の希釈という３つの個々のステップが含まれる。これらのステップは、その連続的な性質によって１つの単位操作と見なされる。単位操作には、３本の液体流と１つのインライン成熟化ステップとの連続的なインラインでの組み合わせ、すなわち、水性緩衝液と脂質原液との混合、制御された滞留時間を通じた成熟化、及びナノ粒子の希釈が含まれる。ナノ沈殿自体は、水溶液と、エタノールに溶解した脂質原液との連続的な高エネルギーでの混ぜ合わせを可能にするように設計された、スケールに適したミキサーで起こる。水溶液と脂質原液の両方が、この操作全体を通して連続的に混合機器に同時に流れ込む。脂質の溶解を維持するエタノール含有量は急激に低減し、全ての脂質が互いに沈殿する。このように、粒子は混合チャンバ内で自己組織化される。
単位操作の目的の１つは、エタノールを含まない完全な水性緩衝液に溶液を交換し、ＬＮＰの目標濃度に到達させることである。これは、最初に目標処理濃度に到達させ、次にダイアフィルトレーションし、続いて、エタノールが完全に除去されたら、（必要に応じて）最終濃縮ステップを行うことによって実現することができる。
いくつかの実施形態では、本発明のＬＮＰは、ナノ沈殿を使用して調製することができ、これは、動的混合ならびに後続の成熟化及び連続希釈によって、ＬＮＰをそれらの個々の脂質成分から自己組織化させる単位操作である。この単位操作には、水性投入物と有機投入物との混合、ＬＮＰの成熟化、及び制御された滞留時間後の希釈という３つの個々のステップが含まれる。これらのステップは、その連続的な性質によって１つの単位操作と見なされる。単位操作には、３本の液体流と１つのインライン成熟化ステップとの連続的なインラインでの組み合わせ、すなわち、水性緩衝液と脂質原液との混合、制御された滞留時間を通じた成熟化、及びナノ粒子の希釈が含まれる。ナノ沈殿自体は、水溶液と、エタノールに溶解した脂質原液との連続的な高エネルギーでの混ぜ合わせを可能にするように設計された、スケールに適したミキサーで起こる。水溶液と脂質原液の両方が、この操作全体を通して連続的に混合機器に同時に流れ込む。脂質の溶解を維持するエタノール含有量は急激に低減し、全ての脂質が互いに沈殿する。このように、粒子は混合チャンバ内で自己組織化される。
単位操作の目的の１つは、エタノールを含まない完全な水性緩衝液に溶液を交換し、ＬＮＰの目標濃度に到達させることである。これは、最初に目標処理濃度に到達させ、次にダイアフィルトレーションし、続いて、エタノールが完全に除去されたら、（必要に応じて）最終濃縮ステップを行うことによって実現することができる。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
ｉ）以下：
ｉ－ａ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ナノ粒子中間体（中空ＬＮＰ中間体）を含む中空脂質ナノ粒子中間体溶液（中空ＬＮＰ中間体溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉ－ｂ）滞留時間にわたり中空ＬＮＰ中間体溶液を保持することと；
ｉ－ｃ）希釈溶液を中空ＬＮＰ中間体溶液に添加し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を形成することと、
を含むナノ沈殿ステップを含む、方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
ｉ）以下：
ｉ－ａ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ナノ粒子中間体（中空ＬＮＰ中間体）を含む中空脂質ナノ粒子中間体溶液（中空ＬＮＰ中間体溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉ－ｂ）滞留時間にわたり中空ＬＮＰ中間体溶液を保持することと；
ｉ－ｃ）希釈溶液を中空ＬＮＰ中間体溶液に添加し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を形成することと；
を含むナノ沈殿ステップと；
ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することと、を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
ｉｉ）中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を処理することを含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉ）以下：
ｉ－ａ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ナノ粒子中間体（中空ＬＮＰ中間体）を含む中空脂質ナノ粒子中間体溶液（中空ＬＮＰ中間体溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉ－ｂ）滞留時間にわたり中空ＬＮＰ中間体溶液を保持することと；
ｉ－ｃ）希釈溶液を中空ＬＮＰ中間体溶液に添加し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を形成することと；
を含むナノ沈殿ステップと；
ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することと；
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ＬＮＰ溶液を形成することを含む搭載ステップと、を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉ）以下：
ｉ－ａ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ナノ粒子中間体（中空ＬＮＰ中間体）を含む中空脂質ナノ粒子中間体溶液（中空ＬＮＰ中間体溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉ－ｂ）滞留時間にわたり中空ＬＮＰ中間体溶液を保持することと；
ｉ－ｃ）希釈溶液を中空ＬＮＰ中間体溶液に添加し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を形成することと；
を含むナノ沈殿ステップと；
ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することと；
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ＬＮＰ溶液を形成することを含む搭載ステップと；
ｉｖ）搭載ＬＮＰ溶液を処理し、それにより搭載ＬＮＰ製剤を形成することと、を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉ）以下：
ｉ－ａ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ナノ粒子中間体（中空ＬＮＰ中間体）を含む中空脂質ナノ粒子中間体溶液（中空ＬＮＰ中間体溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉ－ｂ）滞留時間にわたり中空ＬＮＰ中間体溶液を保持することと；
ｉ－ｃ）希釈溶液を中空ＬＮＰ中間体溶液に添加し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液を形成することと；
を含むナノ沈殿ステップと；
ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することと；
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ＬＮＰ溶液を形成することを含む搭載ステップと；
ｉｖ）搭載ＬＮＰ溶液を処理し、それにより搭載ＬＮＰ製剤を形成することと；
ｖ）カチオン性剤を添加することと、を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ナノ粒子溶液（搭載ＬＮＰ溶液）を形成することを含む搭載ステップを含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ナノ粒子溶液（搭載ＬＮＰ溶液）を形成することを含む搭載ステップと；
ｉｖ）搭載ＬＮＰ溶液を処理し、それにより搭載ＬＮＰ製剤を形成することと、を含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を調製する方法であって、
ｉｉｉ）核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰを含む中空ＬＮＰ溶液と混合し、それにより、搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を含む搭載ナノ粒子溶液（搭載ＬＮＰ溶液）を形成することを含む搭載ステップと；
ｉｖ）搭載ＬＮＰ溶液を処理し、それにより搭載ＬＮＰ製剤を形成することと；
ｖ）カチオン性剤を添加することと、を含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ステップｉ－ａ）～ｉ－ｃ）は、別々の操作ユニット（例えば、別々の反応デバイス）で実施される。
いくつかの実施形態では、ステップｉ－ａ）～ｉ－ｃ）は、単一の操作ユニットで実施される。いくつかの実施形態では、ステップｉ－ａ）～ｉ－ｃ）は、ステップｉ－ｃ）が、ステップｉ－ａ）の下流にあるステップｉ－ｂ）の下流にあるように連続フローデバイスで実施される。
いくつかの実施形態では、ステップｉ－ｃ）で希釈溶液を１回添加する。
いくつかの実施形態では、ステップｉ－ｃ）で希釈溶液を連続的に添加する。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を生成する方法を提供し、本方法は、ｉ）イオン化脂質を第１の緩衝剤と混合し、それにより中空ＬＮＰを形成することを含む、混合ステップを含み、この中空ＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のポリマー脂質（例えば、ＰＥＧ脂質）を含む。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
ｉ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を形成することを含む、混合ステップを含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、中空脂質ナノ粒子（中空ＬＮＰ）を含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
ｉ）イオン化脂質、構造脂質、リン脂質、及びＰＥＧ脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を形成することを含む、混合ステップと；
ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することと、を含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、混合ステップは、イオン化脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝溶液と混合し、それにより、中空ＬＮＰを含む中空脂質ナノ粒子溶液（中空ＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、核酸と会合した搭載脂質ナノ粒子（搭載ＬＮＰ）を調製する方法であって、ｉｉ）核酸を中空ＬＮＰと混合し、続いてカチオン性剤を添加して、それにより搭載ＬＮＰを形成することを含む、搭載ステップを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、搭載ステップは、核酸を含む核酸溶液を中空ＬＮＰ溶液と混合し、続いてカチオン性剤を添加して、それにより搭載ＬＮＰを含む搭載脂質ナノ粒子溶液（搭載ＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰまたは中空ＬＮＰ溶液を、保持または保存することなく搭載ステップに供する。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰまたは中空ＬＮＰ溶液を、一定時間保持した後に搭載ステップに供する。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰまたは中空ＬＮＰ溶液を、約１分間、約２分間、約３分間、約４分間、約５分間、約１０分間、約２０分間、約３０分間、約４０分間、約５０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間保持した後に搭載ステップに供する。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰまたは中空ＬＮＰ溶液を、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１８時間、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間保存した後に搭載ステップに供する。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰまたは中空ＬＮＰ溶液を、形成後一定時間保存または保持することなく搭載ステップに供する。
いくつかの態様では、本開示は、ｉｉ）中空ＬＮＰ溶液を処理することを更に含む方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ｉｖ）搭載ＬＮＰ溶液を処理し、それにより脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することを更に含む方法を提供する。
他の生成技法（例えば、薄膜再水和／押出）とは対照的に、エタノール滴下沈殿は、核酸脂質ナノ粒子作製のための業界標準となっている。沈殿反応は、その連続性、拡張性、及び採用の容易さから好都合である。これらのプロセスは、通常、高エネルギーミキサー（例えば、Ｔ字型接合、拘束衝突噴流、マイクロ流体ミキサー、ボルテックスミキサー）を使用して、制御可能な形で脂質（エタノール中）を適切な貧溶媒（すなわち水）に導入して、液体過飽和及び脂質粒子への自然沈殿を推進する。いくつかの実施形態では、使用されるボルテックスミキサーは、米国特許出願第６２／７９９，６３６号及び第６２／８８６，５９２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものである。いくつかの実施形態では、使用されるマイクロ流体ミキサーは、ＰＣＴ出願第ＷＯ／２０１４／１７２０４５号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものである。
いくつかの実施形態では、混合ステップは、Ｔ字型接合、拘束衝突噴流、マイクロ流体ミキサー、またはボルテックスミキサーを用いて実施される。
いくつかの実施形態では、搭載ステップは、Ｔ字型接合、拘束衝突噴流、マイクロ流体ミキサー、またはボルテックスミキサーを用いて実施される。
いくつかの実施形態では、混合ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または周囲温度付近未満の温度で実施される。
いくつかの実施形態では、搭載ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または周囲温度付近未満の温度で実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、搭載ＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、搭載ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液にＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、中空ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、搭載ＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、搭載ＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液にＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む。いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、約０．１ｍｏｌ％、約０．２ｍｏｌ％、約０．３ｍｏｌ％、約０．４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％、約０．６ｍｏｌ％、約０．７ｍｏｌ％、約０．８ｍｏｌ％、約０．９ｍｏｌ％、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、または約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、約１．７５±０．５ｍｏｌ％、約１．７５±０．４ｍｏｌ％、約１．７５±０．３ｍｏｌ％、約１．７５±０．２ｍｏｌ％、または約１．７５±０．１ｍｏｌ％（例えば、約１．７５ｍｏｌ％）のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップの後、中空ＬＮＰ溶液（例えば、中空ＬＮＰ）は、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、約３．０ｍｏｌ％、約３．１ｍｏｌ％、約３．２ｍｏｌ％、約３．３ｍｏｌ％、約３．４ｍｏｌ％、約３．５ｍｏｌ％、約３．６ｍｏｌ％、約３．７ｍｏｌ％、約３．８ｍｏｌ％、約３．９ｍｏｌ％、約４．０ｍｏｌ％、約４．１ｍｏｌ％、約４．２ｍｏｌ％、約４．３ｍｏｌ％、約４．４ｍｏｌ％、約４．５ｍｏｌ％、約４．６ｍｏｌ％、約４．７ｍｏｌ％、約４．８ｍｏｌ％、約４．９ｍｏｌ％、または約５．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップの後、搭載ＬＮＰ溶液（例えば、搭載ＬＮＰ）は、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、約３．０ｍｏｌ％、約３．１ｍｏｌ％、約３．２ｍｏｌ％、約３．３ｍｏｌ％、約３．４ｍｏｌ％、約３．５ｍｏｌ％、約３．６ｍｏｌ％、約３．７ｍｏｌ％、約３．８ｍｏｌ％、約３．９ｍｏｌ％、約４．０ｍｏｌ％、約４．１ｍｏｌ％、約４．２ｍｏｌ％、約４．３ｍｏｌ％、約４．４ｍｏｌ％、約４．５ｍｏｌ％、約４．６ｍｏｌ％、約４．７ｍｏｌ％、約４．８ｍｏｌ％、約４．９ｍｏｌ％、または約５．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、約０．１ｍｏｌ％、約０．２ｍｏｌ％、約０．３ｍｏｌ％、約０．４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％、約０．６ｍｏｌ％、約０．７ｍｏｌ％、約０．８ｍｏｌ％、約０．９ｍｏｌ％、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、または約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、約１．０±０．５ｍｏｌ％、約１．０±０．４ｍｏｌ％、約１．０±０．３ｍｏｌ％、約１．０±０．２ｍｏｌ％、または約１．０±０．１ｍｏｌ％（例えば、約１．０ｍｏｌ％）のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰに約１．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップの後、中空ＬＮＰ溶液（例えば、中空ＬＮＰ）は、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、約３．０ｍｏｌ％、約３．１ｍｏｌ％、約３．２ｍｏｌ％、約３．３ｍｏｌ％、約３．４ｍｏｌ％、約３．５ｍｏｌ％、約３．６ｍｏｌ％、約３．７ｍｏｌ％、約３．８ｍｏｌ％、約３．９ｍｏｌ％、約４．０ｍｏｌ％、約４．１ｍｏｌ％、約４．２ｍｏｌ％、約４．３ｍｏｌ％、約４．４ｍｏｌ％、約４．５ｍｏｌ％、約４．６ｍｏｌ％、約４．７ｍｏｌ％、約４．８ｍｏｌ％、約４．９ｍｏｌ％、または約５．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を含む。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップの後、搭載ＬＮＰ溶液（例えば、搭載ＬＮＰ）は、約１．０ｍｏｌ％、約１．１ｍｏｌ％、約１．２ｍｏｌ％、約１．３ｍｏｌ％、約１．４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％、約１．６ｍｏｌ％、約１．７ｍｏｌ％、約１．８ｍｏｌ％、約１．９ｍｏｌ％、約２．０ｍｏｌ％、約２．１ｍｏｌ％、約２．２ｍｏｌ％、約２．３ｍｏｌ％、約２．４ｍｏｌ％、約２．５ｍｏｌ％、約２．６ｍｏｌ％、約２．７ｍｏｌ％、約２．８ｍｏｌ％、約２．９ｍｏｌ％、約３．０ｍｏｌ％、約３．１ｍｏｌ％、約３．２ｍｏｌ％、約３．３ｍｏｌ％、約３．４ｍｏｌ％、約３．５ｍｏｌ％、約３．６ｍｏｌ％、約３．７ｍｏｌ％、約３．８ｍｏｌ％、約３．９ｍｏｌ％、約４．０ｍｏｌ％、約４．１ｍｏｌ％、約４．２ｍｏｌ％、約４．３ｍｏｌ％、約４．４ｍｏｌ％、約４．５ｍｏｌ％、約４．６ｍｏｌ％、約４．７ｍｏｌ％、約４．８ｍｏｌ％、約４．９ｍｏｌ％、または約５．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質（例えば、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ）を含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または周囲温度付近未満の温度で実施される。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または周囲温度付近未満の温度で実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、濾過、ｐＨ調整、緩衝液交換、希釈、透析、濃縮、凍結、凍結乾燥、保存、及びパッキングから選択される少なくとも１つのステップを更に含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｐＨ調整を更に含む。
いくつかの実施形態では、ｐＨ調整は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される第２の緩衝剤を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、ｐＨ調整の前に実施される。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、ｐＨ調整の後に実施される。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、ｐＨ調整の前に実施される。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、ｐＨ調整の後に実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、濾過を更に含む。
いくつかの実施形態では、濾過は、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）である。
いくつかの実施形態では、濾過は、ＬＮＰ溶液から有機溶媒（例えば、アルコールまたはエタノール）を除去する。いくつかの実施形態では、有機溶媒（例えば、アルコールまたはエタノール）を除去したら、ＬＮＰ溶液を、中性ｐＨ、ｐＨ６．５～７．８、ｐＨ６．８～ｐＨ７．５、好ましくはｐＨ７．０～ｐＨ７．２で緩衝した溶液（例えば、リン酸緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液）に変換する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ溶液を、ｐＨ約７．０～ｐＨ約７．２で緩衝した溶液に変換する。いくつかの実施形態では、得られたＬＮＰ溶液を、保存または使用前に、例えば濾過によって（例えば、０．１～０．５μｍフィルタを通して）滅菌する。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、緩衝液交換を更に含む。
いくつかの実施形態では、緩衝液交換は、第３の緩衝剤を含む水性緩衝溶液の添加を含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、緩衝液交換の前に実施される。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、緩衝液交換の後に実施される。
いくつかの実施形態では、第２の添加は、緩衝液交換の前に実施される。
いくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、緩衝液交換の後に実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、希釈を更に含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、透析を更に含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、濃縮を更に含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、凍結を更に含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、凍結乾燥を更に含む。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥は、約－１００℃～約０℃、約－８０℃～約－１０℃、約－６０℃～約－２０℃、約－５０℃～約－２５℃、または約－４０℃～約－３０℃の温度で、搭載ＬＮＰ溶液を凍結させることを含む。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥は、凍結した搭載ＬＮＰ溶液を乾燥させて、凍結乾燥中空ＬＮＰまたは凍結乾燥搭載ＬＮＰを形成することを更に含む。
いくつかの実施形態では、乾燥は、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて実施される。
いくつかの実施形態では、乾燥は、約－３５℃～約－１５℃で実施される。
いくつかの実施形態では、乾燥は、室温付近～約２５℃で実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、保存を更に含む。
いくつかの実施形態では、保存は、約－８０℃、約－７８℃、約－７６℃、約－７４℃、約－７２℃、約－７０℃、約－６５℃、約－６０℃、約－５５℃、約－５０℃、約－４５℃、約－４０℃、約－３５℃、または約－３０℃の温度で、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、または少なくとも１年間、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰを保存することを含む。
いくつかの実施形態では、保存は、約－４０℃、約－３５℃、約－３０℃、約－２５℃、約－２０℃、約－１５℃、約－１０℃、約－５℃、約０℃、約５℃、約１０℃、約１５℃、約２０℃、または約２５℃の温度で、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、または少なくとも１年間、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰを保存することを含む。
いくつかの実施形態では、保存は、約－４０℃～約０℃、約－３５℃～約－５℃、約－３０℃～約－１０℃、約－２５℃～約－１５℃、約－２２℃～約－１８℃、または約－２１℃～約－１９℃の温度で、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、または少なくとも１年間、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰを保存することを含む。
いくつかの実施形態では、保存は、約－２０℃の温度で、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、または少なくとも１年間、中空ＬＮＰまたは搭載ＬＮＰを保存することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、パッキングを更に含む。
本明細書で使用される場合、「パッキング」は、医薬品をその最終状態で保存すること、または中空ＬＮＰ、搭載ＬＮＰ、もしくはＬＮＰ製剤の、最終包装に入れる前の処理中の保存を指し得る。保存方式及び／またはパッキング方式としては、滅菌バッグでの冷蔵、バイアル中の冷蔵製剤または凍結製剤、バイアル及びシリンジ中の凍結乾燥製剤などが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｉｉａ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｉｉｂ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を濾過することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、
ｉｉａ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加することと；
ｉｉｃ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を濾過することと、を含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を処理するステップは、以下のステップ：
ｉｉｂ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加すること；
ｉｉｃ）中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を凍結乾燥させ、それにより凍結乾燥ＬＮＰ組成物を形成すること；
ｉｉｄ）凍結乾燥ＬＮＰ組成物の中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液を保存すること；及び
ｉｉｅ）中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物に緩衝溶液を添加し、それによりＬＮＰ製剤を形成すること、のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｉｉａ）中空ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｉｉｂ）中空ＬＮＰ溶液を濾過することを含む。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液を処理するステップは、
ｉｉａ）中空ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加することと；
ｉｉｃ）中空ＬＮＰ溶液を濾過することと、を含む。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥の前に、中空ＬＮＰ溶液または搭載ＬＮＰ溶液に凍結防止剤を添加する。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、１つ以上の凍結保護剤を含み、その１つ以上の凍結保護剤の各々は、独立して、ポリオール（例えば、ジオールもしくはトリオール、例えば、プロピレングリコール（すなわち、１，２－プロパンジオール）、１，３－プロパンジオール、グリセロール、（＋／－）－２－メチル－２，４－ペンタンジオール、１，６－ヘキサンジオール、１，２－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、エチレングリコール、もしくはジエチレングリコール）、非界面活性型スルホベタイン（例えば、ＮＤＳＢ－２０１（３－（１－ピリジノ）－１－プロパンスルホネート））、オスモライト（例えば、Ｌ－プロリンもしくはトリメチルアミンＮ－オキシド二水和物）、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール２００（ＰＥＧ ２００）、ＰＥＧ ４００、ＰＥＧ ６００、ＰＥＧ １０００、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧ、ＰＥＧ ３３５０、ＰＥＧ ４０００、ＰＥＧ ８０００、ＰＥＧ １００００、ＰＥＧ ２００００、ポリエチレングリコールモノメチルエーテル５５０（ｍＰＥＧ ５５０）、ｍＰＥＧ ６００、ｍＰＥＧ ２０００、ｍＰＥＧ ３３５０、ｍＰＥＧ ４０００、ｍＰＥＧ ５０００、ポリビニルピロリドン（例えば、ポリビニルピロリドンＫ １５）、ペンタエリスリトールプロポキシレート、もしくはポリプロピレングリコールＰ ４００）、有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）もしくはエタノール）、糖（例えば、Ｄ－（＋）－スクロース、Ｄ－ソルビトール、トレハロース、Ｄ－（＋）－マルトース一水和物、メソ－エリスリトール、キシリトール、ミオ－イノシトール、Ｄ－（＋）－ラフィノース五水和物、Ｄ－（＋）－トレハロース二水和物、もしくはＤ－（＋）－グルコース一水和物）、または塩（例えば、酢酸リチウム、塩化リチウム、ギ酸リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウム、酢酸マグネシウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ギ酸ナトリウム、マロン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、もしくはそれらの任意の水和物）、あるいはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、スクロースを含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤及び／または賦形剤は、スクロースである。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤及び／または賦形剤は、酢酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、スクロース及び酢酸ナトリウムを含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約１０ｇ／Ｌ～約１０００ｇ／Ｌ、約２５ｇ／Ｌ～約９５０ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ～約９００ｇ／Ｌ、約７５ｇ／Ｌ～約８５０ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ～約８００ｇ／Ｌ、約１５０ｇ／Ｌ～約７５０ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ～約７００ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ～約６５０ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ～約６００ｇ／Ｌ、約３５０ｇ／Ｌ～約５５０ｇ／Ｌ、約４００ｇ／Ｌ～約５００ｇ／Ｌ、及び約４５０ｇ／Ｌ～約５００ｇ／Ｌの濃度で存在する凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約１０ｇ／Ｌ～約５００ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ～約４５０ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ～約４００ｇ／Ｌ、約１５０ｇ／Ｌ～約３５０ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ～約３００ｇ／Ｌ、及び約２００ｇ／Ｌ～約２５０ｇ／Ｌの濃度で存在する凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約１０ｇ／Ｌ、約２５ｇ／Ｌ、約５０ｇ／Ｌ、約７５ｇ／Ｌ、約１００ｇ／Ｌ、約１５０ｇ／Ｌ、約２００ｇ／Ｌ、約２５０ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ、約３００ｇ／Ｌ、約３５０ｇ／Ｌ、約４００ｇ／Ｌ、約４５０ｇ／Ｌ、約５００ｇ／Ｌ、約５５０ｇ／Ｌ、約６００ｇ／Ｌ、約６５０ｇ／Ｌ、約７００ｇ／Ｌ、約７５０ｇ／Ｌ、約８００ｇ／Ｌ、約８５０ｇ／Ｌ、約９００ｇ／Ｌ、約９５０ｇ／Ｌ、及び約１０００ｇ／Ｌの濃度で存在する凍結保護剤を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２５ｍＭ、約８ｍＭ～約２０ｍＭ、約９ｍＭ～約１５ｍＭ、及び約１０ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で存在する凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９ｍＭ、約１ｍＭ～約８ｍＭ、約２ｍＭ～約７ｍＭ、約３ｍＭ～約６ｍＭ、及び約４ｍＭ～約５ｍＭの濃度で存在する凍結保護剤を含む。いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約０．１ｍＭ、約０．５ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭ、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、及び約１００ｍＭの濃度で存在する凍結保護剤を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、スクロースを含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、スクロースを含む水溶液を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、約７００±３００ｇ／Ｌ、７００±２００ｇ／Ｌ、７００±１００ｇ／Ｌ、７００±９０ｇ／Ｌ、７００±８０ｇ／Ｌ、７００±７０ｇ／Ｌ、７００±６０ｇ／Ｌ、７００±５０ｇ／Ｌ、７００±４０ｇ／Ｌ、７００±３０ｇ／Ｌ、７００±２０ｇ／Ｌ、７００±１０ｇ／Ｌ、７００±９ｇ／Ｌ、７００±８ｇ／Ｌ、７００±７ｇ／Ｌ、７００±６ｇ／Ｌ、７００±５ｇ／Ｌ、７００±４ｇ／Ｌ、７００±３ｇ／Ｌ、７００±２ｇ／Ｌ、または７００±１ｇ／Ｌのスクロースを含む水溶液を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、酢酸ナトリウムとスクロースとを含む水溶液を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、
（ａ）約５±１ｍＭ、約５±０．９ｍＭ、約５±０．８ｍＭ、約５±０．５ｍＭ、約５±０．６ｍＭ、約５±０．５ｍＭ、約５±０．４ｍＭ、約５±０．３ｍＭ、約５±０．２ｍＭ、または約５±０．１ｍＭの酢酸ナトリウムと；
（ｂ）約７００±３００ｇ／Ｌ、７００±２００ｇ／Ｌ、７００±１００ｇ／Ｌ、７００±９０ｇ／Ｌ、７００±８０ｇ／Ｌ、７００±７０ｇ／Ｌ、７００±６０ｇ／Ｌ、７００±５０ｇ／Ｌ、７００±４０ｇ／Ｌ、７００±３０ｇ／Ｌ、７００±２０ｇ／Ｌ、７００±１０ｇ／Ｌ、７００±９ｇ／Ｌ、７００±８ｇ／Ｌ、７００±７ｇ／Ｌ、７００±６ｇ／Ｌ、７００±５ｇ／Ｌ、７００±４ｇ／Ｌ、７００±３ｇ／Ｌ、７００±２ｇ／Ｌ、または７００±１ｇ／Ｌのスクロースと、を含む水溶液を含む。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、酢酸ナトリウムとスクロースとを含む水溶液を含み、この水溶液は、５．０±２．０、５．０±１．５、５．０±１．０、５．０±０．９、５．０±０．８、５．０±０．７、５．０±０．６、５．０±０．５、５．０±０．４、５．０±０．３、５．０±０．２、または５．０±０．１のｐＨ値を有する。
いくつかの実施形態では、凍結防止剤は、
（ａ）約５±１ｍＭ、約５±０．９ｍＭ、約５±０．８ｍＭ、約５±０．５ｍＭ、約５±０．６ｍＭ、約５±０．５ｍＭ、約５±０．４ｍＭ、約５±０．３ｍＭ、約５±０．２ｍＭ、または約５±０．１ｍＭの酢酸ナトリウムと；
（ｂ）約７００±３００ｇ／Ｌ、７００±２００ｇ／Ｌ、７００±１００ｇ／Ｌ、７００±９０ｇ／Ｌ、７００±８０ｇ／Ｌ、７００±７０ｇ／Ｌ、７００±６０ｇ／Ｌ、７００±５０ｇ／Ｌ、７００±４０ｇ／Ｌ、７００±３０ｇ／Ｌ、７００±２０ｇ／Ｌ、７００±１０ｇ／Ｌ、７００±９ｇ／Ｌ、７００±８ｇ／Ｌ、７００±７ｇ／Ｌ、７００±６ｇ／Ｌ、７００±５ｇ／Ｌ、７００±４ｇ／Ｌ、７００±３ｇ／Ｌ、７００±２ｇ／Ｌ、または７００±１ｇ／Ｌのスクロースと、を含む水溶液を含み、
この水溶液は、５．０±２．０、５．０±１．５、５．０±１．０、５．０±０．９、５．０±０．８、５．０±０．７、５．０±０．６、５．０±０．５、５．０±０．４、５．０±０．３、５．０±０．２、または５．０±０．１のｐＨ値を有する。
いくつかの実施形態では、凍結乾燥は、適切なガラスレセプタクル（例えば、１０ｍＬの円柱状ガラスバイアル）中で行われる。いくつかの実施形態では、ガラスレセプタクルは、短時間での－４０℃未満～室温超の極端な温度変化に耐性があり、及び／または均一な形状に切断されている。いくつかの実施形態では、凍結乾燥のステップは、約－４０℃を超える温度でＬＮＰ溶液を凍結させ、それにより凍結ＬＮＰ溶液を形成することと；凍結ＬＮＰ溶液を乾燥させて凍結乾燥ＬＮＰ組成物を形成することと、を含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥のステップは、ＬＮＰ溶液を約－４０℃超かつ約－３０℃未満の温度で凍結させることを含む。凍結ステップによって、約６分間にわたり、好ましくは毎分約１℃で２０℃から－４０℃まで、直線的に最終温度まで低下する。いくつかの実施形態では、凍結ステップによって、約６分間にわたり、毎分約１℃で２０℃から－４０℃まで、直線的に最終温度まで低下する。いくつかの実施形態では、１２～１５％のスクロースを使用することができ、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて実施される。いくつかの実施形態では、１２～１５％のスクロースを使用することができ、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて、最初に約－３５℃～約－１５℃の範囲の低温で、次に室温～約２５℃の範囲の高温で実施される。いくつかの実施形態では、１２～１５％のスクロースを使用することができ、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて実施され、乾燥ステップは３～７日で完了する。いくつかの実施形態では、１２～１５％のスクロースを使用することができ、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて、最初に約－３５℃～約－１５℃の範囲の低温で、次に室温～約２５℃の範囲の高温で実施され、乾燥ステップは３～７日で完了する。いくつかの実施形態では、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１００ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて実施される。いくつかの実施形態では、乾燥ステップは、約５０ｍＴｏｒｒ～約１００ｍＴｏｒｒの範囲の真空にて、最初に約－１５℃～約０℃の範囲の低温で、次に高温で実施される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、約３．５～約８．０、約４．０～約７．５、約４．５～約７．０、約５．０～約６．５、及び約５．５～約６．０のｐＨで保存される。いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、約３．５、約４．０、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約４．５、約５．５、約６．５、約７．０、約７．５、及び約８．０のｐＨで保存される。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、スクロースと酢酸ナトリウムとを含む凍結防止剤中に保存される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、約１５０ｇ／Ｌ～約３５０ｇのスクロースと約３ｍＭ～約６ｍＭの酢酸ナトリウムとをｐＨ約４．５～約７．０で含む凍結防止剤中に保存される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、約２００ｇ／Ｌのスクロースと５ｍＭの酢酸ナトリウムとをｐＨ約５．０で含む凍結防止剤中に保存される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、緩衝溶液を添加する前に、約－８０℃、約－７８℃、約－７６℃、約－７４℃、約－７２℃、約－７０℃、約－６５℃、約－６０℃、約－５５℃、約－５０℃、約－４５℃、約－４０℃、約－３５℃、または約－３０℃の温度で保存される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、緩衝溶液を添加する前に、約－４０℃、約－３５℃、約－３０℃、約－２５℃、約－２０℃、約－１５℃、約－１０℃、約－５℃、約０℃、約５℃、約１０℃、約１５℃、約２０℃、または約２５℃の温度で保存される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、緩衝溶液を添加する前に、約－４０℃～約０℃、約－３５℃～約－５℃、約－３０℃～約－１０℃、約－２５℃～約－１５℃、約－２２℃～約－１８℃、または約－２１℃～約－１９℃の範囲の温度で保存される。
いくつかの実施形態では、中空ＬＮＰ溶液、搭載ＬＮＰ溶液、または凍結乾燥ＬＮＰ組成物は、緩衝溶液を添加する前に、約－２０℃の温度で保存される。
本方法のある特定の態様は、ＰＣＴ出願第ＷＯ／２０２０／１６０３９７号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本明細書には、ナノ粒子を含む細胞も記載される。細胞は、上皮細胞であり得る。例えば、細胞は肺細胞であり得る。細胞は、呼吸上皮細胞であり得る。例えば、細胞は、肺細胞、鼻細胞、肺胞上皮細胞、または気管支上皮細胞であり得る。細胞は、ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）細胞であり得る。細胞は、ＨｅＬａ細胞であり得る。そのような細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでＬＮＰと接触させることができる。
医薬組成物及び製剤
本開示は、本明細書に記載のナノ粒子のいずれかを含む医薬組成物及び製剤を提供する。
医薬組成物または製剤は、任意選択で、１つ以上の追加の活性物質、例えば、治療的及び／または予防的に活性な物質を含み得る。本開示の医薬組成物または製剤は、無菌及び／またはパイロジェンフリーであり得る。医薬薬剤の製剤化及び／または製造における全般的考慮事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に見出され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、ヒト、ヒト患者、またはヒト対象に投与される。本開示の目的のために、「活性成分」という語句は、一般に、本明細書に記載の通りに送達されるポリヌクレオチドまたはポリペプチドペイロードを含むナノ粒子を指す。
本明細書に記載の製剤及び医薬組成物は、薬理学の分野において公知の、または今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、ナノ粒子を、賦形剤及び／または１つ以上の他の補助成分と会合させるステップと、次いで必要に応じて及び／または所望により、生成物を所望の単回または複数回用量単位に分割、成形、及び／または包装するステップとを含む。
本開示による医薬組成物または製剤は、単一単位用量として、及び／または複数の単一単位用量として、バルクで調製、包装、及び／または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、規定量の活性成分を含む医薬組成物の個別量を指す。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の投与量及び／またはそのような投与量の好都合な割合、例えば、そのような投与量の２分の１または３分の１に等しい。
本開示による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意の追加の成分の相対量は、処置される対象の固有性、サイズ、及び／または状態に応じて、また更にはその組成物が投与される経路に応じて変動し得る。
本明細書で提供される医薬組成物及び製剤の説明は、主に、ヒトへの投与に適した医薬組成物及び製剤を対象とするが、当業者には、そのような組成物が一般に、他の任意の動物、例えば、非ヒト動物（例えば非ヒト哺乳動物）への投与に適していることが理解されるであろう。
本明細書で使用される場合、薬学的に許容される賦形剤には、限定されないが、所望の特定の剤形に適した、あらゆる全ての溶媒、分散媒、または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、希釈剤、造粒剤及び／または分散剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤または油、着色剤、甘味剤または香味剤、安定剤、抗酸化剤、抗菌剤または抗真菌剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、緩衝液、キレート剤、凍結防止剤、及び／または増量剤が含まれる。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物を調製するための技法は、当該技術分野において公知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。
例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウムもしくは炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトールなど、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な造粒剤及び／または分散剤としては、デンプン、アルファ化デンプン、もしくは微結晶デンプン、アルギン酸、グアーガム、寒天、ポリ（ビニル－ピロリドン）、（プロビドン（ｐｒｏｖｉｄｏｎｅ））、架橋ポリ（ビニル－ピロリドン）（クロスポビドン）、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、ケイ酸マグネシウムアルミニウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウムなど、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な界面活性剤及び／または乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アラビアゴム、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、ｃｈｏｎｄｒｕｘ、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、モノオレイン酸グリセリル、ポリオキシエチレンエステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル）［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ＰＬＵＯＲＩＮＣ（登録商標）Ｆ ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８など、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、アミノ酸（例えば、グリシン）、天然及び合成ゴム（例えば、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム）、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど、ならびにそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
酸化は、ｍＲＮＡ、特に液体ｍＲＮＡ製剤の潜在的な分解経路である。酸化を防止するために、抗酸化剤を製剤に添加することができる。例示的な抗酸化剤としては、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ｍ－クレゾール、メチオニン、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的なキレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、エデト酸三ナトリウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な抗菌剤または抗真菌剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウムまたは安息香酸ナトリウム、ソルビン酸カリウムまたはソルビン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、ソルビン酸など、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
例示的な防腐剤としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ－カロテン、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシアニソール、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）など、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド溶液のｐＨは、安定性を向上させるためにｐＨ５～ｐＨ８の間に維持される。ｐＨを制御するための例示的な緩衝液としては、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、ヒスチジン（またはヒスチジン－ＨＣｌ）、リンゴ酸ナトリウム、炭酸ナトリウムなど、及び／またはそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。
例示的な滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、硬化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウムまたはラウリル硫酸マグネシウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の医薬組成物には、凍結中に本明細書に記載のポリヌクレオチドを安定化させるための凍結防止剤を含めることができる。例示的な凍結防止剤としては、マンニトール、スクロース、トレハロース、ラクトース、グリセロール、デキストロースなど、及びそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の医薬組成物は、凍結乾燥ポリヌクレオチド製剤中に増量剤を含有させ、「薬学的に洗練された」ケークを生じさせて、長期（例えば、３６ヶ月）保存中に凍結乾燥ポリヌクレオチドを安定化させることができる。本開示の例示的な増量剤としては、スクロース、トレハロース、マンニトール、グリシン、ラクトース、ラフィノース、及びそれらの組み合わせを挙げることができるが、これらに限定されない。
組成物は、液体形態または固体形態であり得る。いくつかの実施形態では、組成物または製剤は、液体形態である。いくつかの実施形態では、組成物は、吸入に適している。組成物は、肺管に投与され得る。エアロゾル化医薬製剤は、肺へと、好ましくは多数の市販のデバイスを使用して送達され得る。
組成物は、鼻腔内注入、気管内注入、及び気管内注射などの適切な方法によって呼吸道に投与され得る。いくつかの実施形態では、組成物またはナノ粒子は、鼻腔内投与、気管支内投与、または経肺投与によって投与される。例えば、組成物及びナノ粒子は、ネブライザまたは吸入器によって投与される。
いくつかの実施形態では、組成物は、エアロゾル化医薬製剤の吸入によって肺に送達される。吸入は、対象の鼻部及び／または口腔を通じて行われ得る。投与は、吸入時に製剤を自己投与することによって、またはレスピレータを装着した対象にレスピレータを介して製剤を投与することによって行われ得る。製剤を肺に送達するための例示的なデバイスとしては、乾燥粉末吸入器、加圧式定量吸入器、ネブライザ、及び電気流体力学的エアロゾルデバイスが含まれるが、これらに限定されない。
液体製剤は、加圧式定量吸入器（ｐＭＤＩ）を使用して患者の肺に投与され得る。ｐＭＤＩは一般に、少なくとも２つの構成要素、すなわち、液体製剤がその中で１つ以上の噴射剤と組み合わされて圧力下で保持されるキャニスタ、ならびにキャニスタを保持及び作動させるために使用されるレセプタクルを含む。キャニスタは、製剤の単回または複数回用量を含有し得る。キャニスタは、キャニスタの内容物を吐出することができる弁、通常は絞り弁を含み得る。エアロゾル化薬は、キャニスタに力を加えキャニスタをレセプタクルに押し込むことによって、弁が開口し、薬剤粒子が弁からレセプタクルの出口を通って運搬されることにより、ｐＭＤＩから供給される。キャニスタから吐出されると、液体製剤は霧化し、エアロゾルを形成する。ｐＭＤＩは通常、キャニスタの内容物を加圧し、液体製剤をレセプタクル出口外へと進ませてエアロゾルを形成するために、１つ以上の噴射剤を用いる。任意の適切な噴射剤を利用することができる。噴射剤は様々な形態をとることができる。例えば、噴射剤は、圧縮ガスまたは液化ガスであり得る。
液体製剤は、ネブライザを使用して投与することもできる。ネブライザは、液体製剤を霧状または雲状の微小液滴に変換する液体エアロゾル発生器であり、好ましくはその液滴は、空気動力学的質量中央径が、下部呼吸道に吸入され得る直径５ミクロン未満である。このプロセスは霧化と呼ばれる。雲状エアロゾルが吸入されると、液滴によって１種以上の活性剤が鼻部、上気道、または肺深部に運ばれる。空気（ジェット）式ネブライザ及び電気機械式ネブライザを含むがこれらに限定されない任意のタイプのネブライザを使用して、製剤を患者に投与することができる。空気（ジェット）式ネブライザは、加圧ガスの供給を液体製剤の霧化の駆動力として使用する。圧縮ガスは、ノズルまたは噴出口を通じて送達され、周囲の液体製剤を同伴し、それを薄膜またはフィラメントに剪断する低圧場を作り出す。膜またはフィラメントは不安定であり、圧縮ガス流によって吸気へと運ばれる、微小液滴に分裂する。液滴プルームに挿入されたバッフルは、大型液滴を選別除去し、それらをバルク液体リザーバに戻す。電気機械式ネブライザは、電気的に発生した機械的力を使用して液体製剤を霧化する。電気機械的駆動力は、例えば、液体製剤を超音波周波数で振動させることによって、またはバルク液体を薄膜の小孔を通過させることによって印加することができる。この力により、液体薄膜またはフィラメント流が発生し、これらが微小液滴に分裂して、吸気流に同伴され得る緩徐に移動するエアロゾル流が形成される。液体製剤はまた、電気流体力学的（ＥＨＤ）エアロゾルデバイスを使用して投与され得る。ＥＨＤエアロゾルデバイスは、電気エネルギーを使用して、液剤の溶液または懸濁液をエアロゾル化する。
乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）は、通常、ガスの破裂などの機構を使用して容器内に乾燥粉末の雲を作り出し、その後、対象がそれを吸入することができる。ＤＰＩでは、投与される用量は、加圧されていない乾燥粉末の形態で保存され、吸入器の作動時に、対象が粉末の粒子を吸入する。いくつかの場合では、加圧式定量吸入器（ｐＭＤＩ）と同様に、圧縮ガス（すなわち噴射剤）を使用して粉末を供給することができる。いくつかの場合では、ＤＰＩは、呼吸で作動し得る。これは、吸気に正確に反応してエアロゾルが作り出されることを意味する。通常、乾燥粉末吸入器は、咳嗽の誘発を避けるために、吸入１回あたり数十ミリグラム未満の用量を投与する。ＤＰＩの例としては、Ｔｕｒｂｏｈａｌｅｒ（登録商標）吸入器（Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ．）、Ｃｌｉｃｋｈａｌｅｒ（登録商標）吸入器（Ｉｎｎｏｖａｔａ，Ｒｕｄｄｉｎｇｔｏｎ，Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍ，ＵＫＬ）、Ｄｉｓｋｕｓ（登録商標）吸入器（Ｇｌａｘｏ，Ｇｒｅｅｎｆｏｒｄ，Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ，ＵＫ）、ＥａｓｙＨａｌｅｒ（登録商標）（Ｏｒｉｏｎ，Ｅｘｐｏｏ，ＦＩ）、Ｅｘｕｂｅｒａ（登録商標）吸入器（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）、Ｑｄｏｓｅ（登録商標）吸入器（Ｍｉｃｒｏｄｏｓｅ，Ｍｏｎｍｏｕｔｈ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、及びＳｐｉｒｏｓ（登録商標）吸入器（Ｄｕｒａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
本発明の医薬組成物は、所望の生物学的効果、例えば、治療的効果または予防的効果（例えば、いくつかの実施形態では１つ以上の症状の軽減によって測定される、欠損タンパク質を補充するかもしくは置き換えるための、または望ましくないタンパク質発現を低減させるための、正常な遺伝子産物の発現によるもの）を生じさせるための有効量で投与される。製剤は、ペイロードを送達するために、例えば、呼吸上皮細胞及び非呼吸上皮細胞の頂端膜にＬＮＰを送達するための有効量で投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＣＦに罹患している患者において欠如しているＣＦＴＲ活性を誘導するための、またはＣＦに罹患している患者において残存するＣＦＴＲ活性の既存のレベルを増大させるための有効量で投与される。
所望の生物活性、例えば、上皮表面における残存するＣＦＴＲ活性の存在は、標準的な電気生理学的、生化学的、及び／または組織化学的技法を含む、当該技術分野で公知の方法を使用して容易に検出され得る。そのような方法により、ｉｎ ｖｉｖｏもしくはｅｘ ｖｉｖｏ電気生理学的技法、汗もしくは唾液のＣＴ濃度の測定、またはＣＦＴＲ細胞表面密度をモニタリングするｅｘ ｖｉｖｏの生化学的もしくは組織化学的技法を使用して、ＣＦＴＲ活性が同定及び／または定量化される。
使用方法
本明細書には、患者の疾患を処置するまたは予防する方法であって、疾患が気道細胞の機能不全に関連している方法が記載される。本方法は、疾患の処置または予防のために、本明細書に記載の核酸ペイロードを含むナノ粒子または組成物を患者に投与することを含む。例えば、一実施形態では、ペイロードは、核酸分子、例えばｍＲＮＡ分子であり、疾患は、気道上皮細胞におけるタンパク質またはポリペプチドの発現によって緩和される。いくつかの実施形態では、疾患は、嚢胞性線維症である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、細胞のナトリウムレベルを低減させることを必要とする対象において、それを低減させるための方法で使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、ＣＦに関連する代謝産物（例えば、基質または産物）のレベルを低減させるために使用され、本方法は、ＣＦＴＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの有効量を対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、有効量の本明細書に記載のナノ粒子の投与は、ＣＦのバイオマーカーのレベル、例えば細胞内ナトリウムレベルを低減させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子の投与により、本明細書に記載のナノ粒子を投与した後の短期間内に、ＣＦの１つ以上のバイオマーカーのレベル、例えば細胞内ナトリウムレベルが低減する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子の対象への投与により、細胞における細胞内ナトリウムレベルが、組成物または製剤の投与前に認められたレベルより、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％低いレベルまで低下する。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードを細胞に送達する方法であって、細胞を本明細書に記載のナノ粒子と接触させることを含む方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子の投与により、対象の細胞においてＣＦＴＲが発現される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子を投与することにより、対象のＣＦＴＲ酵素活性が増加する。例えば、本方法は、対象の少なくとも一部の細胞においてＣＦＴＲ酵素活性を増加させることができる。
いくつかの実施形態では、ＣＦＴＲポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む本明細書に記載のナノ粒子の対象への投与により、対象の細胞におけるＣＦＴＲ酵素活性が、正常対象、例えば、ＣＦに罹患していないヒトにおいて予想される活性レベルの少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは１００％まで、またはそれ以上のレベルまで増加する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子の投与により、対象の細胞の少なくとも一部において、ＣＦＴＲタンパク質が発現され、これは、有意なクロライドチャネル活性を生じさせるのに十分な期間持続する。
いくつかの実施形態では、コードされたポリペプチドの発現が増加する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、細胞に導入されると、その細胞のＣＦＴＲ発現レベルを、ポリペプチドが細胞に導入される前の細胞のＣＦＴＲ発現レベルに対して、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％まで増加させる。
当業者には理解されるように、本明細書に開示されるステロールアミンには、更なる用途がある。例えば、ステロールアミンは、炎症性疾患の処置に使用することができる。ステロールアミンはまた、抗菌剤として使用することができる。
キット及びデバイス
本開示は、本開示の特許請求されたナノ粒子を便利に及び／または効果的に使用するための様々なキットを提供する。通常、キットには、ユーザーが対象（複数可）の複数回の処置を実施することができるように、及び／または複数回の実験を実施することができるように、十分な量及び／または数の構成要素が含まれる。
一態様では、本開示は、本開示のナノ粒子を含むキットを提供する。
キットは、包装及び説明書及び／または製剤組成物を形成するための送達剤を更に含み得る。送達剤は、生理食塩水、緩衝溶液、リピドイド、または本明細書に開示される任意の送達剤を含み得る。一実施形態では、そのようなキットは、ネブライザまたは吸入器などの投与デバイスを更に含む。
呼吸器症状の改善のための呼吸機能検査及び他の検査
いくつかの実施形態では、ポリペプチドまたはタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むｍＲＮＡを含むナノ粒子または医薬組成物。そのようなポリペプチドまたはタンパク質は、呼吸機能または症状の改善について試験することができる。例えば、一実施形態では、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）ポリペプチドは、それを必要とする対象に投与された場合、投与の少なくとも２４時間後、少なくとも４８時間後、少なくとも７２時間後、少なくとも９６時間後、または少なくとも１２０時間後に、嚢胞性線維症が未処置である対象において測定された少なくとも１回の参照呼吸量と比較して、少なくとも１回の呼吸量の測定値を、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、または少なくとも３０％改善するのに十分である。呼吸量は、任意の所与の時点で吸息され、呼気され、肺内に蓄えられる空気の量である。測定することができる様々な呼吸量の非限定的な例を以下に示す。
全肺気量（ＴＬＣ）は、最大拡張時の肺の容積であり、ＶＣとＲＶの合計である。平均全肺気量は６０００ｍｌであるが、これは年齢、身長、性別、及び健康状態によって異なる。
一回換気量（ＴＶ）は、安静呼吸中に肺に出入りする空気の体積である（ＴＶは肺の分画を示す。ガス交換計算のように一回換気量が正確に測定される場合、記号ＴＶまたはＶＴが使用される）。平均一回換気量は５００ｍｌである。
残気量（ＲＶ）は、最大呼気後に肺に残存している空気の体積である。残気量（ＲＶ／ＴＬＣ％）は、ＴＬＣのパーセントで表される。
予備呼気量（ＥＲＶ）は、強制的に息を吐く際に（一回換気量を超えて）呼気することができる空気の最大体積である。
予備吸気量（ＩＲＶ）は、終末吸気位から吸息することができる最大体積である。
最大吸気量（ＩＣ）は、ＩＲＶとＴＶの合計である。
吸気肺活量（ＩＶＣ）は、最大呼気点から吸息される空気の最大体積である。
肺活量（ＶＣ）は、最も深く吸息した後に吐き出される空気の体積である。
機能的残気量（ＦＲＣ）は、終末呼気位での肺の容積である。
努力肺活量（ＦＶＣ）は、最大強制呼気努力からの肺活量の決定である。
努力呼気量（時間）（ＦＥＶｔ）は、最初のｔ秒間に努力条件下で呼気された空気の体積を示す総称である。ＦＥＶ１は、努力呼気の最初の１秒の終了時に呼気された体積である。ＦＥＦｘは、ＦＶＣ曲線の一部分に関連する努力呼気流量である。修飾子は、既に呼気されたＦＶＣの量を指す。ＦＥＦｍａｘは、ＦＶＣ手技中に到達する最大瞬間流量である。
努力性吸気流量（ＦＩＦ）は、努力性吸気曲線の特定の測定値であり、努力性呼気曲線と類似した術語によって表記される。例えば、最大吸気流量は、ＦＩＦｍａｘで表記される。別途明記されない限り、体積限定子は、測定時点でＲＶから吸気された体積を示す。
ピーク呼気流量（ＰＥＦ）は、ピークフローメーターで測定された最大努力呼気流量である。
最大換気量（ＭＶＶ）は、反復最大努力の間の特定期間内に呼気された空気の体積である。
合成
当業者には理解されるように、本明細書で提供される化合物（その塩及び立体異性体を含む）は、公知の有機合成技法を使用して調製することができ、以下のスキームに示されているものなどの多数の考えられる合成経路のいずれかに従って合成することができる。
本明細書に記載の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者が容易に選択可能である適切な溶媒中で行うことができる。適切な溶媒は、反応が行われる温度（例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲に及び得る温度）において、出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に反応しないものであり得る。所与の反応は、１種の溶媒または複数の溶媒の混合物中で行うことができる。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに適した溶媒が当業者によって選択され得る。
本明細書で使用される場合、「周囲温度」または「室温」または「ｒｔ」という表現は、当該技術分野で理解されており、一般に、反応が行われる部屋の温度（例えば、約２０℃～約３０℃の温度）に近い温度、例えば反応温度を指す。
本明細書に記載の化合物の調製は、様々な化学基の保護及び脱保護を伴い得る。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学作用は、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に見出され得る。
反応は、当該技術分野で公知の任意の適切な方法に従ってモニタリングすることができる。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈもしくは１３Ｃ）、赤外線分光法、分光光度法（例えば、紫外－可視）、質量分析法によって、またはクロマトグラフィー法、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）、もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって、モニタリングすることができる。化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び順相シリカクロマトグラフィーを含む様々な方法によって、当業者によって精製され得る。
式Ａ２ａの化合物は、例えば、以下のスキームに例示されるプロセスを使用して調製することができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム１に概説する合成経路を介して調製することができる。クロロギ酸コレステリルとアミンとの間の適切な反応を適切な条件下で行って、式Ａ２ａの化合物を作製することができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム２に概説する合成経路を介して調製することができる。コレステロールまたはコレステロール誘導体（スチグマステロールなど）とクロロギ酸４－ニトロフェニルとの間の適切な反応を、適切な条件下（トリエチルアミン及び４－ジメチルアミノピリジンを使用するなど）で行うことができる。上記反応の生成物を、適切な条件下（トリエチルアミンを使用するなど）でアミンと反応させて、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム３に概説する合成経路を介して調製することができる。コレステロールまたはコレステロール誘導体（スチグマステロールなど）とカルボン酸との間の適切な反応を、活性化試薬（例えば、ＥＤＣ－ＨＣｌ、ＤＭＡＰ、ＤＣＣ、またはピバル酸無水物など）の存在下にて適切な条件で行って、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム４に概説する合成経路を介して調製することができる。ヘミコハク酸コレステロールまたはヘミコハク酸コレステロール誘導体と活性化剤との間の適切な反応を、適切な条件下で行うことができる。上記反応の生成物を、適切な条件下でアミンと反応させて、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム５に概説する合成経路を介して調製することができる。クロロギ酸コレステリルとエタン－１，２－ジアミンとの間の適切な反応を適切な条件下で行って、ＳＡ２２を得ることができる。ＳＡ２２を、適切な条件下で２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾールヨウ化水素酸塩と反応させて、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。ＳＡ２２はまた、適切な条件下でスクアリン酸ジメチルと反応させることができ、反応の生成物を、適切な条件下で第二級アミンと更に反応させて、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物は、スキーム６に概説する合成経路を介して調製することができる。アミノアルキルカルバメートとグアニジニル化剤との間の適切な反応を、適切な条件下で行うことができる。上記反応の生成物を、適切な条件下でＨＣｌと反応させて、式Ａ２ａの化合物を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物に対する前駆体は、スキーム７に概説する合成経路を介して調製することができる。コレステロールまたはコレステロール誘導体（スチグマステロールなど）の間の適切な反応を、適切な条件下（トリエチルアミン及び４－ジメチルアミノピリジンを使用するなど）で行うことができる。上記反応の生成物を、適切な条件下（トリエチルアミンを使用するなど）でアミンと反応させて、式Ａ２ａの化合物に対する前駆体を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物に対する前駆体は、スキーム８に概説する合成経路を介して調製することができる。コレステロールまたはコレステロール誘導体（スチグマステロールなど）とｂｏｃ－ヘミエステルとの間の適切な反応を、適切な条件下で行うことができる。上記反応の生成物を、適切な条件下で反応させて、式Ａ２ａの化合物に対する前駆体を得ることができる。
式Ａ２ａの化合物を合成するための中間体は、スキーム９に概説する合成経路を介して調製することができる。スペルミジンまたはスペルミンと（Ｅ）－Ｎ－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）オキシ）ベンズイミドイルシアニド（ＢＯＣ－ＯＮ）との間の適切な反応を適切な条件下で行って、式Ａ２ａの化合物を合成するための中間体を得ることができる。
定義
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語が最初に定義される。本出願で使用される場合、本明細書中に別途明示的に示されている場合を除き、次の用語の各々は、以下に記載する意味を有するものとする。更なる定義は、本出願全体を通して記載されている。
本開示は、群の正確に１つの要素が、所与の生成物またはプロセスにおいて存在するか、用いられるか、または他の方法でそれと関連する実施形態を含む。本開示は、複数の、または全ての群要素が、所与の生成物またはプロセスにおいて存在するか、用いられるか、または他の方法でそれと関連する実施形態を含む。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈により別途明確に示されない限り、複数の指示対象を含む。「ａ」（または「ａｎ」）という用語、ならびに「１つ以上」及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用され得る。ある特定の態様では、「ａ」または「ａｎ」という用語は、「単一」を意味する。他の態様では、「ａ」または「ａｎ」という用語は、「２つ以上」または「複数」を含む。
更に、本明細書で使用される「及び／または」は、他方の有無にかかわらず、２つの明示された特質または成分の各々の特定の開示と見なされるべきである。したがって、本明細書において、「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される場合、「及び／または」という用語は、次の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。
別途定義されない限り、本明細書中で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。
態様が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語とともに本明細書中に記載されるときは常に、「からなる」及び／または「から本質的になる」という用語で記載される、他の点では類似の態様も提供される。
単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で認められている形式で表記される。数値範囲には、その範囲を画定する数が含まれる。値の範囲が列挙されている場合、その範囲の列挙された上限値と下限値の間に介在する各整数値、及びその各分数も、そのような値の間の各部分範囲とともに具体的に開示されていることを理解されたい。任意の範囲の上限値及び下限値は、独立してその範囲に含まれてもよく、またはその範囲から除外されてもよく、限界値のいずれかが含まれる、どちらも含まれない、または両方とも含まれる範囲の各々も、本開示内に包含される。値が明示的に列挙されている場合、列挙された値とほぼ同じ数量または量である値も本開示の範囲内にあることを理解されたい。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の部分組み合わせの各々も具体的に開示され、本開示の範囲内にある。逆に、異なる要素または要素群が個別に開示されている場合、それらの組み合わせも開示されている。本開示の任意の要素が複数の代替物を有するものとして開示される場合、各代替物が単独で、または他の代替物との任意の組み合わせで除外される本開示の例も本明細書に開示される。本開示の複数の要素がそのような除外を有することができ、そのような除外を有する要素の全ての組み合わせが本明細書に開示される。
約：本明細書及び特許請求の範囲全体を通して数値に関連して使用される「約」という用語は、当業者によく知られ、許容される精度の間隔を示す。そのような精度の間隔は、±１０％である。
範囲が与えられている場合、端点が含まれる。更に、別途示されない限り、または文脈及び当業者の理解から別途明らかでない限り、範囲として表現される値は、文脈上別途明確に示されない限り、本開示の異なる実施形態における記載された範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、その範囲の下限値の単位の１０分の１までと見なすことができる。
組み合わせて投与される：本明細書で使用される場合、「組み合わせて投与される」または「組み合わせ投与」という用語は、２種以上の薬剤が、患者に対する各薬剤の効果が重複され得るように、同時にまたはある間隔内で対象に投与されることを意味する。いくつかの実施形態では、それら薬剤は、互いに約６０、３０、１５、１０、５、または１分以内に投与される。いくつかの実施形態では、薬剤の投与は、組み合わせ（例えば、相乗）効果が得られるように、互いに十分に近接した間隔で行われる。
動物：本明細書で使用される場合、「動物」という用語は、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発生段階にあるヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、任意の発生段階にある非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。いくつかの実施形態では、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び虫類が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、またはクローンである。
およそ：本明細書で使用される場合、１つ以上の対象の値に適用される「およそ」という用語は、記載された基準値と類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「およそ」という用語は、別途記載のない限り、または別途文脈から明らかでない限り、記載された基準値のいずれかの方向（上回るまたは下回る）で、記載された基準値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下に収まる値の範囲を指す（但し、そのような数が、考えられる値の１００％を超える場合を除く）。
化合物：本明細書で使用される場合、「化合物」という用語は、描写された構造の全ての立体異性体及び同位体を含むことを意味する。本明細書で使用される場合、「立体異性体」という用語は、化合物の任意の幾何異性体（例えば、シス異性体及びトランス異性体）、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示は、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオマー的に純粋）ならびに鏡像異性体混合物及び立体異性体混合物、例えばラセミ体を含む、本明細書に記載の化合物のあらゆる全ての立体異性体を包含する。化合物の鏡像異性体混合物及び立体異性体混合物、ならびにそれらの成分である鏡像異性体または立体異性体にそれらを分割する手段は周知である。「同位体」は、原子番号は同じであるが、核内の中性子数が異なるために質量数が異なる原子を指す。例えば、水素の同位体には、トリチウム及び重水素が含まれる。更に、本開示の化合物、塩、または複合体を、常法によって、溶媒または水分子と組み合わせて調製し、溶媒和物及び水和物を形成することができる。
接触させる：本明細書で使用される場合、「接触させる」という用語は、２つ以上の実体間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、哺乳動物細胞をナノ粒子組成物と接触させることは、哺乳動物細胞及びナノ粒子に物理的接続を共有させることを意味する。ｉｎ ｖｉｖｏとｅｘ ｖｉｖｏの両方で細胞を外部実体と接触させる方法は、生物学分野で周知である。例えば、ナノ粒子組成物と哺乳動物内に配置された哺乳動物細胞とを接触させることは、様々な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下）によって実施することができ、様々な量のナノ粒子組成物を含めることができる。更に、複数の哺乳動物細胞を、ナノ粒子組成物と接触させることができる。接触させることの更なる例は、ナノ粒子とカチオン性剤との間である。ナノ粒子とカチオン性剤とを接触させることとは、ナノ粒子の表面をカチオン性剤と物理的に接続した状態にさせて、カチオン性剤がナノ粒子との非結合相互作用を形成できるようにすることを意味し得る。いくつかの実施形態では、ナノ粒子とカチオン性剤とを接触させることにより、カチオン性剤がナノ粒子に、例えばナノ粒子の表面から開始してインターカレートされる。いくつかの実施形態では、「層状に重ねる」、「コーティング」ならびに「後添加」及び「添加」という用語は、ナノ粒子とカチオン性剤とを接触させることに関して、「接触させる」ことを意味するために使用され得る。
送達する：本明細書で使用される場合、「送達する」という用語は、実体を目的地に提供することを意味する。例えば、ポリヌクレオチドを対象に送達することは、ポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物を対象に（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路によって）投与することを含み得る。哺乳動物または哺乳動物細胞へのナノ粒子組成物の投与は、１つ以上の細胞をナノ粒子組成物と接触させることを含み得る。
送達剤：本明細書で使用される場合、「送達剤」は、標的細胞へのポリヌクレオチドのｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、またはｅｘ ｖｉｖｏ送達を少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。
ジアステレオマー：本明細書で使用される場合、「ジアステレオマー」という用語は、互いの鏡像ではなく、かつ互いに重ね合わせることができない立体異性体を意味する。
配置された：本明細書で使用される場合、「配置された」という用語は、分子とナノ粒子が互いに接触した後、その分子がナノ粒子と非結合相互作用を形成したことを意味する。
投与レジメン：本明細書で使用される場合、「投与レジメン」または「投与レジメン」は、処置、予防、または緩和ケアの施行スケジュールまたは医師が決定したレジメンである。
有効量：本明細書で使用される場合、薬剤の「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果、例えば臨床結果をもたらすのに十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用される状況に依存する。例えば、タンパク質欠損（例えば、ＣＦＴＲ欠損）を処置する薬剤を投与する状況において、薬剤の有効量は、例えば、薬剤の投与なしで認められる症状の重症度と比較して、ＣＦＴＲ欠損に関連する徴候及び症状を緩和させる、低減させる、なくす、または予防するのに十分なＣＦＴＲを発現するｍＲＮＡの量である。「有効量」という用語は、「有効用量」、「治療有効量」、または「治療有効用量」と互換的に使用され得る。
鏡像異性体：本明細書で使用される場合、「鏡像異性体」という用語は、少なくとも８０％（すなわち、一方の鏡像異性体が少なくとも９０％、かつ他方の鏡像異性体が最大１０％）、少なくとも９０％、または少なくとも９８％の光学純度または鏡像異性体過剰率（当該技術分野の標準的方法により決定される）を有する、本開示の化合物の各々個々の光学活性形態を意味する。
封入する：本明細書で使用される場合、「封入する」という用語は、密閉すること、包囲すること、または包むことを意味する。
封入効率：本明細書で使用される場合、「封入効率」は、ナノ粒子組成物の調製に使用されたポリヌクレオチドの当初総量に対する、ナノ粒子組成物の一部となるポリヌクレオチドの量を指す。例えば、ナノ粒子組成物へと当初提供された合計１００ｍｇのポリヌクレオチドのうち、９７ｍｇのポリヌクレオチドがその組成物に封入される場合、封入効率は９７％と表すことができる。本明細書で使用される場合、「封入」は、完全に、実質的に、または部分的に密閉すること、閉じ込めること、包囲すること、または包むことを指し得る。
上皮細胞：本明細書で使用される場合、「上皮細胞」には、上皮由来の細胞が含まれる。上皮細胞の例は、呼吸上皮細胞、鼻上皮細胞、肺胞上皮細胞、肺上皮細胞、または気管支上皮細胞である。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）細胞である。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、上皮細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞である。
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、以下の事象：（１）ＤＮＡ配列からのｍＲＮＡ鋳型の（例えば、転写による）生成；（２）ｍＲＮＡ転写物の（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）プロセシング；（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのｍＲＮＡの翻訳；ならびに（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾、のうちの１つ以上を指す。
ｅｘ ｖｉｖｏ：本明細書で使用される場合、「ｅｘ ｖｉｖｏ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、もしくは微生物またはその細胞もしくは組織）の外部で起こる事象を指す。ｅｘ ｖｉｖｏ事象は、天然（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ）環境から最小限に変化した環境で生じる場合がある。
ヘルパー脂質：本明細書で使用される場合、「ヘルパー脂質」という用語は、脂質部分（脂質層、例えば脂質二重層への挿入のため）と極性部分（脂質層表面での生理学的溶液との相互作用のため）とを含む化合物または分子を指す。通常、ヘルパー脂質はリン脂質である。ヘルパー脂質の機能は、アミノ脂質を「補完」して二重層の膜融合性を増大させること、及び／または（例えば、細胞に送達された核酸の）エンドソーム脱出の促進を補助することである。ヘルパー脂質はまた、ＬＮＰの表面の重要な構造成分であると考えられている。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、及び／または微生物）の内部ではなく、人工的環境、例えば試験管または反応容器内、細胞培養物内、ペトリ皿内などで起こる事象を指す。
ｉｎ ｖｉｖｏ：本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、もしくは微生物またはその細胞もしくは組織）の内部で起こる事象を指す。
イオン化アミノ脂質：「イオン化アミノ脂質」という用語は、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上の脂肪酸または脂肪アルキル鎖、及びｐＨ滴定可能なアミノ頭部基（例えば、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ頭部基）を有する脂質を含む。イオン化アミノ脂質は、通常、アミノ頭部基のｐＫａ未満のｐＨでプロトン化され（すなわち正に荷電し）、ｐＫａを上回るｐＨでは実質的に荷電していない。そのようなイオン化アミノ脂質としては、ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ（ＭＣ３）及び（１３Ｚ，１６５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニドコサ－１３－１６－ジエン－１－アミン（Ｌ６０８）が挙げられるが、これらに限定されない。
異性体：本明細書で使用される場合、「異性体」という用語は、本開示の化合物のいずれかの任意の互変異性体、立体異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーを意味する。本開示の化合物は、１つ以上のキラル中心及び／または二重結合を有してもよく、したがって、立体異性体、例えば、二重結合異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）またはジアステレオマー（例えば、鏡像異性体（すなわち、（＋）もしくは（－））もしくはシス／トランス異性体）として存在し得ることが認識されている。本開示によれば、本明細書に描写される化学構造、したがって本開示の化合物は、対応する立体異性体の全て、すなわち、立体異性的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋、鏡像異性的に純粋、またはジアステレオマー的に純粋）ならびに鏡像異性体混合物及び立体異性体混合物（例えば、ラセミ体）の両方を包含する。本開示の化合物の鏡像異性体混合物及び立体異性体混合物は、典型的には、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体としての化合物の結晶化、またはキラル溶媒中での化合物の結晶化などの周知の方法によって、それらの成分である鏡像異性体または立体異性体に分割することができる。鏡像異性体及び立体異性体は、周知の不斉合成法によって、立体異性的にまたは鏡像異性的に純粋な中間体、試薬、及び触媒から得ることもできる。
脂質ナノ粒子コア：本明細書で使用される場合、脂質ナノ粒子コアは、カチオン性剤及び／またはＰＥＧ－脂質もしくは他の脂質などの追加の成分の後添加層が添加され得る脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子コアは、（ｉ）イオン化脂質、（ｉｉ）リン脂質、（ｉｉｉ）構造脂質、及び（ｉｖ）任意選択でＰＥＧ－脂質を含む。更なる実施形態では、脂質ナノ粒子コアは、（ｉ）イオン化脂質、（ｉｉ）リン脂質、（ｉｉｉ）構造脂質、及び（ｉｖ）ＰＥＧ－脂質を含む。
リンカー：本明細書で使用される場合、「リンカー」は、原子団、例えば、１０～１，０００個の原子を指し、限定されるものではないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子または基から構成され得る。リンカーは、第１の末端で核酸塩基または糖部分上の修飾ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオチドに結合することができ、第２の末端でペイロード、例えば検出可能な薬剤または治療剤に結合することができる。リンカーは、核酸配列への導入を妨害しないような十分な長さのものであり得る。リンカーは、本明細書に記載のように、ポリヌクレオチド多量体を形成するため（例えば、２つ以上のキメラポリヌクレオチド分子もしくはＩＶＴポリヌクレオチドの結合を介して）またはポリヌクレオチドコンジュゲートを形成するため、及びペイロードを投与するためなどの、任意の有用な目的に使用することができる。リンカーに導入することができる化学基の例としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリル（これらの各々は、本明細書に記載のように任意選択的に置換されていてもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。リンカーの例としては、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレンまたはプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマー、ならびにそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、還元剤または光分解を使用して切断することができるリンカー内の切断可能な部分、例えば、ジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）またはアゾ結合（－Ｎ＝Ｎ－）などが挙げられるが、これらに限定されない。選択的に切断可能な結合の非限定的な例としては、例えばトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）または他の還元剤及び／または光分解を使用することによって切断することができるアミド結合、ならびに、例えば酸性または塩基性加水分解によって切断することができるエステル結合が挙げられる。
肺細胞：本明細書で使用される場合、「肺細胞」には、肺由来の細胞が含まれる。肺細胞は、例えば、肺上皮細胞、気道基底細胞、細気管支外分泌細胞、肺神経内分泌細胞、肺胞細胞、または気道上皮細胞であり得る。いくつかの実施形態では、肺細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞である。いくつかの実施形態では、肺細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞である。
投与方法：本明細書で使用される場合、「投与方法」には、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、または対象に組成物を送達する他の方法が含まれ得る。投与方法は、身体の特定の領域または系への送達を標的とする（例えば、特異的に送達する）ように選択され得る。
「核酸」という用語には、その最も広い意味において、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質が含まれる。これらのポリマーは、ポリヌクレオチドと称されることが多い。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドとしては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ。β－Ｄ－リボ立体配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ立体配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡ、及び２’－アミノ官能化を有する２’－アミノ－α－ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、またはそれらのハイブリッドもしくは組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
患者：本明細書で使用される場合、「患者」は、処置を探し求めている場合があるか、もしくは処置が必要であり得るか、処置を必要とするか、処置を受けているか、処置を受けることになる対象、または特定の疾患もしくは状態について熟練した専門家による医療を受けている対象を指す。
ＣＦＴＲ関連疾患：本明細書で使用される場合、「ＣＦＴＲ関連疾患」または「ＣＦＴＲ関連障害」という用語は、ＣＦＴＲの異常活性（例えば、活性の低下または活性の増加）に起因する疾患または障害をそれぞれ指す。非限定的な例として、嚢胞性線維症は、ＣＦＴＲ関連疾患である。嚢胞性線維症の多数の臨床バリアントが当該技術分野で公知である。例えば、ｗｗｗ．ｏｍｉｍ．ｏｒｇ／ｅｎｔｒｙ／２１９７００を参照されたい。
「ＣＦＴＲ酵素活性」、「ＣＦＴＲ活性」、及び「嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子活性」という用語は、本開示において互換的に使用され、細胞膜を通して塩化物イオンを輸送するＣＦＴＲの能力を指す。したがって、ＣＦＴＲ酵素活性またはＣＦＴＲ活性を保持するまたは有するフラグメントまたはバリアントとは、細胞膜を横切る測定可能な塩化物輸送を行うフラグメントまたはバリアントを指す。
薬学的に許容される：「薬学的に許容される」という語句は、本明細書では、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、合理的な利益／リスク比に見合ったヒト及び動物の組織との接触に使用するのに適した化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために用いられる。
薬学的に許容される賦形剤：「薬学的に許容される賦形剤」という語句は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることができるビヒクル）であり、患者において実質的に非毒性であり、非炎症性である特性を有するものを指す。賦形剤としては、例えば、接着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、香味料、香料、流動化剤（流動促進剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味剤、及び水和水を挙げることができる。例示的な賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるが、これらに限定されない。
薬学的に許容される塩：本開示は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって）修飾される、本開示の化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに無毒アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオン（限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが含まれる）が挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から、従来の化学的方法によって合成され得る。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸形態または遊離塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中、またはその２つの混合物中（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が使用される）で、化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることにより調製され得る。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）に見出され、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用される場合、「溶媒和物」という用語は、適切な溶媒の分子が結晶格子に導入されている本開示の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与される投与量で生理学的に忍容性のあるものである。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、またはそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化、または沈殿によって調製され得る。適切な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一水和物、二水和物、及び三水和物）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ＮＮ’－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２－（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２－ピロリドン、安息香酸ベンジルなどである。水が溶媒の場合、溶媒和物は「水和物」と称される。
ポリヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物を含む、任意長のヌクレオチドのポリマーを指す。この用語は、分子の一次構造を指す。したがって、この用語には、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖のデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖のリボ核酸（「ＲＮＡ」）が含まれる。また、この用語には、ポリヌクレオチドの修飾形態（例えばアルキル化及び／またはキャッピングによるもの）、ならびに未修飾形態が含まれる。より具体的には、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含有する）、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含有する）（スプライシングされているか否かを問わず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍＲＮＡを含む）、プリン塩基またはピリミジン塩基のＮ－グリコシドまたはＣ－グリコシドである他の任意のタイプのポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えばポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびに他の合成配列特異的核酸ポリマー（但し、ポリマーがＤＮＡ及びＲＮＡに見られるような塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする立体配置で核酸塩基を含むものに限る）を含む。特定の態様では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。他の態様では、ｍＲＮＡは、合成ｍＲＮＡである。いくつかの態様では、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ある特定のクラスの全ての核酸塩基が非天然核酸塩基で置き換えられている（例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド中の全てのウリジンは、非天然核酸塩基、例えば５－メトキシウリジンで置き換えられ得る）。いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、合成ＲＮＡまたは合成ＤＮＡ）は、天然核酸塩基のみ、すなわち、合成ＤＮＡの場合はＡ（アデノシン）、Ｇ（グアノシン）、Ｃ（シチジン）、及びＴ（チミジン）を含み、または合成ＲＮＡの場合はＡ、Ｃ、Ｇ、及びＵ（ウリジン）を含む。
当業者は、本明細書に開示されるコドンマップ中のＴ塩基がＤＮＡに存在するのに対し、対応するＲＮＡではＴ塩基がＵ塩基に置き換えられることを理解するであろう。例えば、ベクターまたはｉｎ－ｖｉｔｒｏ翻訳（ＩＶＴ）鋳型などのＤＮＡ形態で本明細書に開示されるコドン－ヌクレオチド配列は、その対応する転写ｍＲＮＡに基づいてＵとして転写されるＴ塩基を有する。この点に関して、コドン最適化ＤＮＡ配列（Ｔを含む）及びそれらの対応するｍＲＮＡ配列（Ｕを含む）の両方が、本開示のコドン最適化ヌクレオチド配列と見なされる。当業者はまた、１つ以上の塩基を非天然塩基で置き換えることによって同等のコドンマップを作成することができることを理解するであろう。したがって、例えば、ＴＴＣコドン（ＤＮＡマップ）はＵＵＣコドン（ＲＮＡマップ）に対応し、次にこれはΨΨＣコドン（Ｕがシュードウリジンで置き換えられているＲＮＡマップ）に対応する。
標準的なＡ－Ｔ及びＧ－Ｃ塩基対は、チミジンのＮ３－Ｈ及びＣ４－オキシと、アデノシンのＮ１及びＣ６－ＮＨ２との間のそれぞれ、ならびにシチジンのＣ２－オキシ、Ｎ３、及びＣ４－ＮＨ２と、グアノシンのＣ２－ＮＨ２、Ｎ’－Ｈ、及びＣ６－オキシとの間のそれぞれで水素結合の形成が可能となる条件下で形成される。したがって、例えば、グアノシン（２－アミノ－６－オキシ－９－β－Ｄ－リボフラノシル－プリン）を修飾して、イソグアノシン（２－オキシ－６－アミノ－９－β－Ｄ－リボフラノシル－プリン）を形成することができる。そのような修飾により、シトシンとの標準的な塩基対をもはや効果的に形成しないヌクレオシド塩基が生じる。しかしながら、イソシトシン（１－β－Ｄ－リボフラノシル－２－アミノ－４－オキシ－ピリミジン）を形成するためのシトシン（１－β－Ｄ－リボフラノシル－２－オキシ－４－アミノ－ピリミジン）の修飾により、グアノシンと効果的に塩基対を形成しないが、イソグアノシンとは塩基対を形成する修飾ヌクレオチドが生じる（Ｃｏｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，６８１，７０２号）。イソシトシンは、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）から入手可能であり；イソシチジンは、Ｓｗｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１０４８９－１０４９６及びその中に引用されている参照文献により記載されている方法によって調製することができ；２’－デオキシ－５－メチル－イソシチジンは、Ｔｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１５：４４６１－４４６７及びその中に引用されている参照文献の方法によって調製することができ；イソグアニンヌクレオチドは、Ｓｗｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，上掲及びＭａｎｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５９３－５６０１により記載されている方法を使用して、またはＣｏｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，７８０，６１０号に記載されている方法によって調製することができる。他の非天然塩基対は、２，６－ジアミノピリミジン及びその相補体（１－メチルピラゾロ－［４，３］ピリミジン－５，７－（４Ｈ，６Ｈ）－ジオン）の合成についてＰｉｃｃｉｒｉｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４３：３３－３７に記載されている方法によって合成することができる。Ｌｅａｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：３６７５－３６８３及びＳｗｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，上掲に記載されているものなどの、ユニークな塩基対を形成する他のそのような修飾ヌクレオチド単位が公知である。
ポリペプチド：「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では、任意長のアミノ酸のポリマーを指すために互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、自然に、または介入、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作または修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションにより修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。また、例えば、アミノ酸（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸を含む）の１つ以上のアナログを含有するポリペプチド、ならびに当該技術分野で公知の他の修飾もこの定義に含まれる。
本明細書で使用される場合、この用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。ポリペプチドには、コードされたポリヌクレオチド産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、フラグメント、及び他の等価物、バリアント、ならびに前述のもののアナログが含まれる。ポリペプチドは、単量体であってもよく、または二量体、三量体、もしくは四量体などの多分子複合体であってもよい。ポリペプチドはまた、単鎖または多重鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的なジスルフィド結合は、多重鎖ポリペプチドに見られる。このポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学的アナログであるアミノ酸ポリマーにも適用され得る。いくつかの実施形態では、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。
予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）：本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、感染症、疾患、障害、及び／または状態の発病を部分的にまたは完全に遅延させること；特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の徴候及び症状、特質、または臨床症候の発病を部分的にまたは完全に遅延させること；特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の徴候及び症状、特質、または症候の発病を部分的にまたは完全に遅延させること；感染症、特定の疾患、障害、及び／または状態からの進行を部分的にまたは完全に遅延させること；及び／または感染症、疾患、障害、及び／または状態に関連する病態が発症するリスクを減少させることを指す。
予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）：本明細書で使用される場合、「予防的」は、疾患の蔓延を予防するために用いられる治療的または一連の行為を指す。
予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）：本明細書で使用される場合、「予防」は、健康を維持し、疾患の蔓延を予防するためにとられる措置を指す。「免疫予防」は、生成するための措置を指す。
塩：いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、それらの脂質成分の一部の塩を含む。「塩」という用語には、任意のアニオン性及びカチオン性錯体が含まれる。アニオンの非限定的な例としては、無機及び有機アニオン、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、シュウ酸（例えば、ヘミシュウ酸）、リン酸、ホスホン酸、リン酸水素、リン酸二水素、酸化物、炭酸、炭酸水素、硝酸、亜硝酸、窒化物、亜硫酸水素、硫化物、重硫酸、硫酸、チオ硫酸、硫酸水素、ホウ酸、ギ酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、アクリル酸、ポリアクリル酸、フマル酸、マレイン酸、イタコン酸、グリコール酸、グルコン酸、リンゴ酸、マンデル酸、チグリン酸、アスコルビン酸、サリチル酸、ポリメタクリル酸、過塩素酸、塩素酸、亜塩素酸、次亜塩素酸、臭素酸、次亜臭素酸、ヨウ素酸、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、ヒ酸、亜ヒ酸、クロム酸、二クロム酸、シアン化物、シアン酸、チオシアン酸、水酸化物、過酸化物、過マンガン酸、及びそれらの混合物が挙げられる。
試料：本明細書で使用される場合、「試料」または「生体試料」という用語は、その組織、細胞、または構成部分のサブセット（例えば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、羊膜臍帯血、尿、膣液、及び精液を含むがこれらに限定されない体液）を指す。試料には、生物全体またはその組織、細胞、もしくは構成部分のサブセット、もしくはそれらの画分もしくは部分（例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、外部切片（皮膚、呼吸器、腸管、及び泌尿生殖器のもの）、涙、唾液、乳汁、血球、腫瘍、器官を含むがこれらに限定されない）から調製されるホモジネート、溶解物、または抽出物が更に含まれ得る。試料とは更に、タンパク質または核酸分子などの細胞成分を含有し得るニュートリエントブロスまたはゲルなどの媒体を指す。
単一単位用量：本明細書で使用される場合、「単一単位用量」は、１用量で／１回で／単一経路で／単一の接触時点で、すなわち単一の投与イベントで、投与される任意の治療薬の用量である。
分割用量：本明細書で使用される場合、「分割用量」は、単一単位用量または１日総用量を２回以上の用量に分割したものである。
立体異性体：本明細書で使用される場合、「立体異性体」という用語は、化合物が有し得る全ての可能な異なる異性体及び立体構造形態（例えば、本明細書に記載のいずれかの式の化合物）、特に、基本的分子構造の全ての可能な立体化学的及び立体構造的な異性体形態、全てのジアステレオマー、鏡像異性体、及び／または配座異性体を指す。本開示のいくつかの化合物は、異なる互変異性形態で存在することができ、後者は全て、本開示の範囲内に含まれる。
対象：「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、診断、予後予測、または治療が望まれる任意の対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象としては、ヒト、飼育動物、家畜、動物園の動物、競技用動物、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、雌ウシ）；類人猿、サル、オランウータン、及びチンパンジーなどの霊長類；イヌ及びオオカミなどのイヌ科動物；ネコ、ライオン、及びトラなどのネコ科動物；ウマ、ロバ、及びシマウマなどのウマ科動物；クマ、食用動物（例えば、雌ウシ、ブタ、ヒツジ）；シカ及びキリンなどの有蹄動物；マウス、ラット、ハムスター、及びモルモットなどのげっ歯類などが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、哺乳動物は、ヒト対象である。他の実施形態では、対象は、ヒト患者である。特定の実施形態では、対象は、処置を必要とするヒト患者である。
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、対象となる特徴または特性の全てのまたはほぼ全ての範囲または程度を示す定性的状態を指す。生物学分野の当業者であれば、生物学的及び化学的特徴が、完全となること、及び／または完全へと進むこと、あるいは絶対的な結果を達成することまたは回避することは、たとえあったとしても稀であることを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的特徴に内在する潜在的な完全性の欠如を捕捉するために本明細書で使用される。
罹患している：疾患、障害、及び／または状態に「罹患している」個体は、その疾患、障害、及び／または状態と診断されているか、あるいはその１つ以上の徴候及び症状を示す。
罹患しやすい：疾患、障害、及び／または状態に「罹患しやすい」個体は、その疾患、障害、及び／または状態とは診断されておらず、及び／またはその疾患、障害、及び／または状態の徴候及び症状を呈し得ないが、疾患またはその徴候及び症状を発症する傾向を有している。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態（例えば、がん）に罹患しやすい個体は、以下：（１）疾患、障害、及び／または状態の発症に関連する遺伝子変異、（２）疾患、障害、及び／または状態の発症に関連する遺伝子多型、（３）疾患、障害、及び／または状態に関連するタンパク質及び／または核酸の発現及び／または活性の増加及び／または減少、（４）疾患、障害、及び／または状態の発症に関連する習慣及び／または生活様式、（５）疾患、障害、及び／または状態の家族歴、ならびに（６）疾患、障害、及び／または状態の発症に関連する微生物への曝露及び／またはそれらへの感染、のうちの１つ以上を特徴とし得る。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害、及び／または状態を発症する。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／または状態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害、及び／または状態を発症しない。
合成：「合成」という用語は、人為的に生成された、調製された、及び／または製造されたことを意味する。本開示のポリヌクレオチドまたは他の分子の合成は、化学的または酵素的であり得る。
治療剤：「治療剤」という用語は、対象に投与されたときに、治療的、診断的、及び／または予防的効果を有し、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を引き出す薬剤を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＦＴＲポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、治療剤であり得る。
治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、感染症、疾患、障害、及び／または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与されたときに、その感染症、疾患、障害、及び／または状態の徴候及び症状を処置する、改善する、それらの発病を診断する、予防する、及び／または遅延させるのに十分である、送達される薬剤（例えば、核酸、薬物、治療剤、診断用薬剤、予防的薬剤など）の量を意味する。
治療上有効なアウトカム：本明細書で使用される場合、「治療上有効なアウトカム」という用語は、感染症、疾患、障害、及び／または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象において、その感染症、疾患、障害、及び／または状態の徴候及び症状を処置する、改善する、それらの発病を診断する、予防する、及び／または遅延させるのに十分であるアウトカムを意味する。
１日総用量：本明細書で使用される場合、「１日総用量」は、２４時間の期間内に与えられるまたは処方される量である。１日総用量は、単一単位用量または分割用量として投与され得る。
処置する、処置、治療：本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」または「治療」という用語は、疾患、例えば嚢胞性線維症の１つ以上の徴候及び症状または特質を部分的にまたは完全に軽減すること、緩和すること、改善すること、和らげること、その発病を遅延させること、その進行を阻害すること、その重症度を低減させること、及び／またはその発生率を低減させることを指す。例えば、嚢胞性線維症を「処置する」とは、疾患に関連する徴候及び症状を減らすこと、患者の寿命を延長させる（生存率を増加させる）こと、疾患の重症度を低減させること、疾患の発病を予防するまたは遅延させることなどを指し得る。処置は、疾患、障害、及び／または状態に関連する病態を発症するリスクを減少させる目的で、疾患、障害、及び／または状態の徴候を呈さない対象に、及び／または疾患、障害、及び／または状態の初期徴候のみを呈する対象に施すことができる。
本明細書で使用される場合、「アルキル」または「アルキル基」という用語は、１つ以上の炭素原子（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれ以上の炭素原子）を含む直鎖状または分枝状の飽和炭化水素を意味する。
「Ｃ１～１４アルキル」という表記は、１～１４個の炭素原子を含む直鎖状または分枝状の飽和炭化水素を意味する。アルキル基は、任意選択的に置換されていてもよい。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」または「アルケニル基」という用語は、２つ以上の炭素原子（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれ以上の炭素原子）と少なくとも１つの二重結合とを含む直鎖状または分枝状の炭化水素を意味する。
「Ｃ２～１４アルケニル」という表記は、２～１４個の炭素原子と少なくとも１つの二重結合とを含む直鎖状または分枝状の炭化水素を意味する。アルケニル基は、１、２、３、４つ、またはそれ以上の二重結合を含み得る。アルケニル基は、任意選択的に置換されていてもよい。
本明細書で使用される場合、「炭素環」または「炭素環基」という用語は、炭素原子の環を１つ以上含む単環系または多環系を意味する。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５員環であり得る。
「Ｃ３～６炭素環」という表記は、３～６つの炭素原子を有する単環を含む炭素環を意味する。炭素環は、１つ以上の二重結合を含むことができ、芳香族（例えば、アリール基）であり得る。炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、ナフチル、及び１，２－ジヒドロナフチル基が挙げられる。炭素環は、任意選択的に置換されていてもよい。
本明細書で使用される場合、「複素環」または「複素環基」という用語は、１つ以上の環を含み、少なくとも１つの環が少なくとも１つのヘテロ原子を含む、単環系または多環系を意味する。ヘテロ原子は、例えば、窒素、酸素、または硫黄原子であり得る。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２員環であり得る。複素環は、１つ以上の二重結合を含むことができ、芳香族（例えば、ヘテロアリール基）であり得る。複素環の例としては、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、チアゾリル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フリル、テトラヒドロフリル、チオフェニル、ピリジニル、ピペリジニル、キノリル、及びイソキノリル基が挙げられる。複素環は、任意選択的に置換されていてもよい。
本明細書で使用される場合、「アリール基」は、１つ以上の芳香環を含む炭素環基である。アリール基の例としては、フェニル及びナフチル基が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール基」は、１つ以上の芳香環を含む複素環基である。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、及びチアゾリルが挙げられる。アリール基とヘテロアリール基の両方が任意選択的に置換されていてもよい。
アルキル、アルケニル、及びシクリル（例えば、カルボシクリル及びヘテロシクリル）基は、別途明記されない限り、任意選択的に置換されていてもよい。任意選択的な置換基は、ハロゲン原子（例えば、塩化物、臭化物、フッ化物、またはヨウ化物基）、カルボン酸（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、アルコール（例えば、ヒドロキシル、ＯＨ）、エステル（例えば、Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アルデヒド（例えば、Ｃ（Ｏ）Ｈ）、カルボニル（例えば、Ｃ（Ｏ）Ｒ、あるいはＣ＝Ｏによって表される）、ハロゲン化アシル（例えば、Ｃ（Ｏ）Ｘ（Ｘは、臭化物、フッ化物、塩化物、及びヨウ化物から選択されるハロゲン化物である））、カーボネート（例えば、ＯＣ（Ｏ）ＯＲ）、アルコキシ（例えば、ＯＲ）、アセタール（例えば、Ｃ（ＯＲ）２Ｒ”“（各ＯＲは、同じであってもまたは異なっていてもよいアルコキシ基であり、Ｒ”“は、アルキルまたはアルケニル基である））、ホスフェート（例えば、Ｐ（Ｏ）４ ３）、チオール（例えば、ＳＨ）、スルホキシド（例えば、Ｓ（Ｏ）Ｒ）、スルフィン酸（例えば、Ｓ（Ｏ）ＯＨ）、スルホン酸（例えば、Ｓ（Ｏ）２ＯＨ）、チアール（例えば、Ｃ（Ｓ）Ｈ）、サルフェート（例えば、Ｓ（Ｏ）４ ２）、スルホニル（例えば、Ｓ（Ｏ）２）、アミド（例えば、Ｃ（Ｏ）ＮＲ２、またはＮ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ）、アジド（例えば、Ｎ３）、ニトロ（例えば、ＮＯ２）、シアノ（例えば、ＣＮ）、イソシアノ（例えば、ＮＣ）、アシルオキシ（例えば、ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アミノ（例えば、ＮＲ２、ＮＲＨ、またはＮＨ２）、カルバモイル（例えば、ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、ＯＣ（Ｏ）ＮＲＨ、または－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２）、スルホンアミド（例えば、Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２、Ｓ（Ｏ）２ＮＲＨ、Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ、またはＮ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ）、アルキル基、アルケニル基、ならびにシクリル（例えば、カルボシクリルまたはヘテロシクリル）基からなる群から選択され得るが、これらに限定されない。本明細書で定義される場合、Ｒは、アルキルまたはアルケニル基である。
本明細書で使用される場合、「１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含む」とは、他の原子に加えて、少なくとも１つの窒素原子を含む、アルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。窒素原子は、第一級、第二級、または第三級アミン基の一部である。アミン基は、
から選択され得るが、これらに限定されない。第一級、第二級、または第三級アミンは、－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－、－Ｃ＝Ｃ－Ｎ－、－Ｃ＝Ｎ－、及び－Ｎ－Ｃ（＝Ｎ－）－Ｎ－（但しこれらに限定されない）から選択される官能基を含有する、より大きいアミンの一部であり得る。
当業者であれば、通例の実験を使用するだけで、本明細書に記載される本開示による具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識するか、またはそれを確認することができるであろう。本開示の範囲は、前述の説明に限定されることを意図するものではなく、添付の特許請求の範囲に記載されるものである。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、開放的であることを意図し、追加の要素またはステップの包含を許容するが、それを必要としないことにも留意されたい。したがって、本明細書で「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語が使用されるとき、「からなる」という用語も包含され、開示される。
範囲が与えられている場合、端点が含まれる。更に、別途示されない限り、または文脈及び当業者の理解から別途明らかでない限り、範囲として表現される値は、文脈上別途明確に示されない限り、本開示の異なる実施形態における記載された範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、その範囲の下限値の単位の１０分の１までと見なすことができることを理解されたい。
加えて、先行技術内の本開示の任意の特定の実施形態が、請求項のうちのいずれか１つ以上から明示的に除外され得ることを理解されたい。そのような実施形態は、当業者に公知であると見なされるので、本明細書にその除外が明示的に記載されていない場合であっても除外され得る。本開示の組成物のいずれかの特定の実施形態（例えば、任意の核酸またはそれによりコードされるタンパク質、任意の生成方法、任意の使用方法など）は、先行技術の存在に関連するか否かにかかわらず、あらゆる理由により、任意の１つ以上の請求項から除外され得る。
全ての引用文献、例えば、参照文献、刊行物、データベース、データベースエントリ、及び本明細書に引用される技術は、引用に明示的に記載されていなくても、参照により本出願に組み込まれる。引用元及び本出願の記述が相反する場合、本出願の記述を優先するものとする。
セクション及び表の見出しは、限定を意図したものではない。
実施例１
式（Ｉ）による化合物の合成
Ａ．全般的考慮事項
使用した全ての溶媒及び試薬は市販のものを入手し、特に断りのない限りそのまま使用した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ ３００ＭＨｚ装置を使用して３００ＫでＣＤＣｌ３中で記録した。化学シフトは、１ＨについてＴＭＳ（０．００）に対する百万分率（ｐｐｍ）として報告する。シリカゲルクロマトグラフィーは、ＩＳＣＯ ＲｅｄｉＳｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ Ｆｌａｓｈ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（粒径：２０～４０ミクロン）を使用して、ＩＳＣＯ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ＋ Ｌｕｍｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで実施した。逆相クロマトグラフィーは、ＲｅｄｉＳｅｐ Ｒｆ Ｇｏｌｄ Ｃ１８ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅカラムを使用して、ＩＳＣＯ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ Ｒｆ＋ Ｌｕｍｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで実施した。ＤＡＤ及びＥＬＳＤならびにＺＯＲＢＡＸ Ｒａｐｉｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｈｉｇｈ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ（ＲＲＨＤ）ＳＢ－Ｃ１８ ＬＣカラム（２．１ｍｍ、５０ｍｍ、１．８μｍ）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ装置を使用し、５分間にわたり１．２ｍＬ／分で０．１％ＴＦＡを含む水中の６５～１００％アセトニトリルの勾配を使用した、逆相ＵＰＬＣ－ＭＳ（保持時間、ＲＴ（分））による解析を介して、全ての最終化合物が８５％超の純度であることを確認した。注入量は５μＬであり、カラム温度は８０℃であった。検出は、Ｗａｔｅｒｓ ＳＱＤ質量分析計（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用した正モードのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）及び蒸発光散乱検出器に基づくものであった。
下記の代表的な手順は、化合物１～１４７の合成に有用である。
本明細書では以下の略語を使用する。
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＡＰ：４－ジメチルアミノピリジン
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド
ｒｔ：室温
ＤＭＥ：１，２－ジメトキシエタン
ｎ－ＢｕＬｉ：ｎ－ブチルリチウム
Ｂ．化合物２：ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート
代表的手順１：
ヘプタデカン－９－イル８－ブロモオクタノエート（方法Ａ）
８－ブロモオクタン酸（１．０４ｇ、４．６ｍｍｏｌ）とヘプタデカン－９－オール（１．５ｇ、５．８ｍｍｏｌ）とのジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（１．１ｇ、５．８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．３ｍＬ、１８．７ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（１１４ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。有機層を濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％酢酸エチル）により精製して、ヘプタデカン－９－イル８－ブロモオクタノエート（８７５ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ、４１％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．８９ （ｍ， １Ｈ）；３．４２ （ｍ， ２Ｈ）；２．３１ （ｍ， ２Ｈ）；１．８９ （ｍ， ２Ｈ）；１．７３－１．１８ （ｂｒ． ｍ， ３６Ｈ）；０．８８ （ｍ， ６Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（方法Ｂ）
ヘプタデカン－９－イル８－ブロモオクタノエート（３．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）と２－アミノエタン－１－オール（１５ｍＬ、２４８ｍｍｏｌ）とのエタノール（３ｍＬ）溶液を、６２℃で１８時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を酢酸エチル及び水に取った。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。混合物を濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０～１００％（１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨのジクロロメタン中混合物））により精製して、ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（３．１ｇ、７ｍｍｏｌ、８５％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．６７分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２７Ｈ５５ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）４４２．６８
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．８９ （ｐ， １Ｈ）；３．６７ （ｔ， ２Ｈ）；２．８１ （ｔ， ２Ｈ）；２．６５ （ｔ， ２Ｈ）；２．３０ （ｔ， ２Ｈ）；２．０５ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；１．７２－１．４１ （ｂｒ． ｍ， ８Ｈ）；１．４０－１．２０ （ｂｒ． ｍ， ３０Ｈ）；０．８８ （ｍ， ６Ｈ）。
ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート（方法Ｃ）
ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（１２５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と、１－ブロモテトラデカン（９４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）とのエタノール溶液を、６５℃で１８時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を酢酸エチル及び飽和炭酸水素ナトリウムに取った。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０～１００％（１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨのジクロロメタン中混合物））により精製して、ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（テトラデシル）アミノ）オクタノエート（８９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、５０％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．６１分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ８３ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）６３８．９１。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．８６ （ｐ， １Ｈ）；３．７２－３．４７ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；２．７８－２．４０ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）；２．２８ （ｔ， ２Ｈ）；１．７０－１．４０ （ｍ， １０Ｈ）；１．３８－１．１７ （ｂｒ． ｍ， ５４Ｈ）；０．８８ （ｍ， ９Ｈ）。
中間体の合成：
中間体Ａ：２－オクチルデカン酸
ジイソプロピルアミン（２．９２ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を－７８℃に冷却し、ｎ－ＢｕＬｉ（７．５ｍＬ、１８．９ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）の溶液を添加した。反応物を０℃に加温した。デカン酸（２．９６ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）とＮａＨ（７５４ｍｇ、１８．９ｍｍｏｌ、６０ｗ／ｗ％）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に、０℃でＬＤＡの溶液を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌した。この時間の経過後、１－ヨードオクタン（５ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合物を４５℃で６時間加熱した。１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で反応をクエンチした。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％酢酸エチル）により精製して、２－オクチルデカン酸（１．９ｇ、６．６ｍｍｏｌ、３８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ２．３８ （ｂｒ． ｍ， １Ｈ）；１．７４－１．０３ （ｂｒ． ｍ， ２８Ｈ）；０．９１ （ｍ， ６Ｈ）。
中間体Ｂ：７－ブロモヘプチル２－オクチルデカノエート
７－ブロモヘプチル２－オクチルデカノエートを、方法Ａを使用して、２－オクチルデカン酸及び７－ブロモヘプタン－１－オールから合成した。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．０９ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；３．４３ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；２．４８－２．２５ （ｂｒ． ｍ， １Ｈ）；１．８９ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；１．７４－１．１６ （ｂｒ． ｍ， ３６Ｈ）；０．９０ （ｍ， ６Ｈ）。
中間体Ｃ：（２－ヘキシルシクロプロピル）メタノール
ジエチル亜鉛（２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ、ヘキサン中１Ｍ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を、５分間で－４０℃に冷却した。次に、ジヨードメタン（３．２２ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を滴加した。反応物を－４０℃で１時間撹拌した後、トリクロロ－酢酸（３２７ｍｇ、２ｍｍｏｌ）とＤＭＥ（１ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）とのジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を添加した。反応物を－１５℃に加温し、この温度で１時間撹拌した。次に、（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－オール（１．４２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を、この－１５℃の溶液に添加した。次に、反応物をゆっくりと室温に加温し、１８時間撹拌した。この時間の経過後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（２００ｍＬ）を添加し、反応物をジクロロメタンで抽出し（３回）、ブラインで洗浄して、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。有機層を濾過し、真空中で蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～５０％酢酸エチル）により精製して、（２－ヘキシルシクロプロピル）メタノール（１．４３ｇ、９．２ｍｍｏｌ、９２％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ３．６４ （ｍ， ２Ｈ）；１．５７－１．０２ （ｍ， １２Ｈ）；０．９９－０．８０ （ｍ， ４Ｈ）；０．７２ （ｍ， １Ｈ）， ０．００ （ｍ， １Ｈ）。
Ｃ．化合物１８：ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（８－（ノニルオキシ）－８－オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
化合物１８を、上記の全般的手順及び代表的手順１に従って合成した。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．５９分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４４Ｈ８７ＮＯ５についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）７１０．８９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．８６ （ｍ， １Ｈ）；４．０５ （ｔ， ２Ｈ）；３．５３ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；２．８３－２．３６ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）；２．２９ （ｍ， ４Ｈ）；０．９６－１．７１ （ｍ， ６４Ｈ）；０．８８ （ｍ， ９Ｈ）。
Ｄ．化合物１３６：ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）オクタノエート
代表的手順２：
ノニル８－ブロモオクタノエート（方法Ａ）
８－ブロモオクタン酸（５ｇ、２２ｍｍｏｌ）とノナン－１－オール（６．４６ｇ、４５ｍｍｏｌ）とのジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（４．３ｇ、２２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５４７ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１８時間撹拌した。反応物をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。有機層を濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％酢酸エチル）により精製して、ノニル８－ブロモオクタノエート（６．１ｇ、１７ｍｍｏｌ、７７％）を得た。
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．０６ （ｔ， ２Ｈ）；３．４０ （ｔ， ２Ｈ）；２．２９ （ｔ， ２Ｈ）；１．８５ （ｍ， ２Ｈ）；１．７２－０．９７ （ｍ， ２２Ｈ）；０．８８ （ｍ， ３Ｈ）。
ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート
ノニル８－ブロモオクタノエート（１．２ｇ、３．４ｍｍｏｌ）と２－アミノエタン－１－オール（５ｍＬ、８３ｍｍｏｌ）とのエタノール（２ｍＬ）溶液を、６２℃で１８時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣を酢酸エチル及び水で抽出した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。有機層を濾過し、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０～１００％（１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨのジクロロメタン中混合物））により精製して、ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（２９５ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、２６％）を得た。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．２９分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ１９Ｈ３９ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３３０．４２
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．０７ （ｔ， ２Ｈ）；３．６５ （ｔ， ２Ｈ）；２．７８ （ｔ， ２Ｈ）；２．６３ （ｔ， ２Ｈ）；２．３２－２．１９ （ｍ， ４Ｈ）；１．７３－１．２０ （ｍ， ２４Ｈ）；０．８９ （ｍ， ３Ｈ）
ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）オクタノエート
ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）アミノ）オクタノエート（１５０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）と、（６Ｚ，９Ｚ）－１８－ブロモオクタデカ－６，９－ジエン（１６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）とのエタノール（２ｍＬ）溶液を、４８時間還流撹拌した。反応物を室温に冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０～１０％ＭｅＯＨ）により精製して、ノニル８－（（２－ヒドロキシエチル）（（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イル）アミノ）オクタノエート（８１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、３０％）をＨＢｒ塩として得た。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．２４分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３７Ｈ７１ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５７８．６４
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ １０．７１ （ｂｒ．， １Ｈ）；５．３６ （ｂｒ． ｍ， ４Ｈ）；４．０４ （ｍ， ４Ｈ）；３．２２－２．９６ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）；２．７７ （ｍ， ２Ｈ）；２．２９ （ｍ， ２Ｈ）；２．０４ （ｂｒ． ｍ， ４Ｈ）；１．８６ （ｂｒ． ｍ， ４Ｈ）；１．６６－１．１７ （ｂｒ． ｍ， ４０Ｈ）；０．８９ （ｍ， ６Ｈ）
Ｅ．化合物１３８：ジノニル８，８’－（（２－ヒドロキシエチル）アザンジイル）ジオクタノエート
代表的手順３：
ジノニル８，８’－（（２－ヒドロキシエチル）アザンジイル）ジオクタノエート
ノニル８－ブロモオクタノエート（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）と、２－アミノエタン－１－オール（１６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）と、Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（７４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）とのＴＨＦ／ＣＨ３ＣＮ（１：１）（３ｍＬ）溶液を、６３℃で７２時間撹拌した。反応物を室温に冷却し、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を酢酸エチル及び飽和炭酸水素ナトリウムで抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空中で蒸発させた。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０～１０％ＭｅＯＨ）により精製して、ジノニル８，８’－（（２－ヒドロキシエチル）アザンジイル）ジオクタノエート（８０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、４３％）を得た。
ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．０９分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ７１ＮＯ５についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５９８．８５
１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ４．０５ （ｍ， ４Ｈ）；３．５７ （ｂｒ． ｍ， ２Ｈ）；２．７１－２．３８ （ｂｒ． ｍ， ６Ｈ）；２．２９ （ｍ， ４Ｈ）， １．７１－１．０１ （ｂｒ． ｍ， ４９Ｈ）， ０．８８ （ｍ， ６Ｈ）。
本開示の式（Ｉ）の他の全ての化合物は、上記の代表的手順１～３に類似の方法によって得ることができる。
実施例２
ナノ粒子組成物の生成
脂質ナノ粒子コアをエタノール滴下ナノ沈殿を使用して調製した後、脱塩クロマトグラフィーカラムを使用して水性緩衝液に溶媒交換した。例示的な脂質ナノ粒子は、脂質を１５．４ｍＭの濃度及び５０：１０：３８．５：１．５（イオン化脂質：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ脂質）のモル比でエタノールに溶解させ、２５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）で希釈した濃度０．１５１５ｍｇ／ｍＬのｍＲＮＡと混合するプロセスによって調製することができる。各製剤のＮ：Ｐ比を５．８に設定した。脂質溶液及びｍＲＮＡを、Ｔ型マイクロミキサーを使用して、脂質：ｍＲＮＡ体積比１：３で混合した。ナノ粒子が形成されたら、それらをｐＨ７．０の１×ＰＢＳ緩衝液でプレコンディショニングした脱塩クロマトグラフィーカラムでの溶媒交換に供した。ＵＶ、ｐＨ、及び伝導度検出器によって、ナノ粒子の溶出プロファイルを取得した。ＵＶプロファイルは、溶媒交換されたナノ粒子を収集するために使用した。得られたナノ粒子懸濁液を、Ａｍｉｃｏｎウルトラ遠心式フィルタを使用して濃縮し、０．２２μｍのシリンジフィルタに通した。ナノ粒子を特定の濃度に調製した。
マクロゴール（１５）－ヒドロキシステアレート（Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（登録商標）ＨＳ１５（ＨＳ１５））にＧＬ６７を溶解させることにより、ＧＬ６７をナノ粒子コアに添加して、質量比１．２５（ＧＬ６７対ｍＲＮＡ）でＬＮＰに後添加した。具体的には、３ＨＣｌ－ＧＬ６７をＨＳ１５（１ｍｇ／ｍＬ、約７０μＭ、水）に直接溶解させ、初期原液を５ｍｇ／ｍＬ（６．９２ｍＭ）で作製した。これは、溶液中でミセル形態である可能性があった。５ｍｇ／ｍＬのＧＬ６７を、ＨＳ１５（１ｍｇ／ｍＬ）で更に希釈して（［ＧＬ６７］は、特定のＧＬ６７：ｍＲＮＡ重量比での後添加（ＰＡ）を必要とした）、周囲温度で単に混合することにより、ＬＮＰに添加した（１：１（体積））：［ｍＲＮＡ］０．２ｍｇ／ｍＬ、［３ＨＣｌ－ＧＬ６７］０．２５ｍｇ／ｍＬ、［ＨＳ１５］０．５ｍｇ／ｍＬ、［ＰＢＳ］０．５×。
ＬＮＰを１×ＰＢＳで更に希釈した（１：１（体積））：［ｍＲＮＡ］０．１ｍｇ／ｍＬ、［３ＨＣｌ－ＧＬ６７］０．１２５ｍｇ／ｍＬ、［ＨＳ１５］０．５ｍｇ／ｍＬ、［ＰＢＳ］０．７５×。
ＬＮＰ－１ａと命名したＬＮＰコアの例は以下の通りである。
ＬＮＰ－１と命名した、記載したＬＮＰの例は以下の通りである。
例示的なＬＮＰ（ＧＬ６７を含まない）は、図１～３の模式図に従って調製することができる。図１は、中空脂質ナノ粒子を作製し、続いて核酸を含有する溶液を中空ＬＮＰに添加する、事後搭載（ＰＨＬ）プロセスを指している。図２は、脂質ナノ粒子にＰＥＧ脂質を添加することを指す、後挿入／後添加（ＰＨＬ－ＰＩＰＡ）プロセスを指している。図３は、ＰＥＧステップの後挿入／後添加を含む、第２世代の事後搭載プロセスを指している。図４は、中空脂質ナノ粒子のプロトタイプ（「ニュートラルアセンブリ」）を指しており、ここでは、中空ＬＮＰをｐＨ８．０で混合しており、最終製剤はｐＨ５．０である。
実施例３
小角Ｘ線散乱（ＳＡＸＳ）
Ｘ線散乱実験を、社内にあるＡｎｔｏｎ Ｐａａｒの小角Ｘ線散乱装置ＳＡＸＳ ｐｏｉｎｔ ２．０を使用して実施した。ＬＮＰは、典型的にはｍＲＮＡ濃度が０．５～１ｍｇ／ｍＬの範囲であり、これを直径１ｍｍの石英キャピラリーに詰めた。波長０．１５４ｎｍのＸ線を、Ｐｒｉｍｕｘ １００マイクロＸ線源から発生させた。散乱強度を、試料から検出器までの距離５７５ｍｍで、ＤＥＣＴＲＩＳの２次元（２Ｄ）ＥＩＧＥＲ ＲシリーズＣＭＯＳ検出器を使用して測定した。次に、２Ｄデータを円環平均化し、０．０６ｎｍ－１～４ｎｍ－１の範囲の１次元（１Ｄ）プロファイルｑを得た（ここで、ｑ
は波数ベクトルであり、λ及びθはそれぞれ波長及び散乱角である）。試料の透過性及び緩衝液のバックグラウンドについて、１Ｄデータを更に補正した。実施例３に従って調製したＬＮＰ－１は、ｄ間隔が６．４２ｎｍである。ＬＮＰ－１ａのｄ間隔は５．４７ｎｍである。図６は、ＬＮＰ－１及びＬＮＰ－１ａのｌ（ｑ）（ａｕ）対ｑ（ｎｍ－１）のグラフを示す。
実施例４
一般化分極（ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）（ＧＰ）
ラウルダン（６－ドデカノイル－２－ジメチルアミノナフタン）を、濃度０．０７５ｍｇ／ｍＬでジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に事前に溶解させた。次に、ラウルダン／ＤＭＳＯ溶液を、脂質濃度０．１８ｍｇ／ｍＬ、ＤＭＳＯ対水性緩衝液の体積比１：５００で、ＬＮＰ溶液に添加した。対照実験では、ラウルダン／ＤＭＳＯの代わりにＤＭＳＯをＬＮＰ溶液に添加して、同じプロトコルに従った。ラウルダン色素を、ＬＮＰ溶液と３時間インキュベートさせた。社内にあるＨｏｒｉｂａの蛍光分光計ＦｌｕｏｒｏＭａｘ－４に接続したＭｉｃｒｏＭａｘ ３８４ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌプレートリーダーを使用して、４３５ｎｍ及び４９０ｎｍでの蛍光強度を３４０ｎｍの励起波長で収集した。一般化分極（ＧＰ）を、次の式に基づいて算出した。
図７は、ＬＮＰ－１（実施例３に従って調製）及びＬＮＰ－１ａのラウルダンの一般極性（ＧＰＬ）値を示す。
実施例５
ｍＲＮＡ封入率
封入効率（ＥＥ％）を、改変したＱｕａｎｔ－ｉＴ ＲｉｂｏＧｒｅｅｎアッセイを使用して測定した。ＥＥ％を求めるために、ナノ粒子（またはＰＢＳ、ブランク）を１×ＴＥで希釈して、ウェルあたり２～４μｇ／ｍＬのｍＲＮＡ濃度を得た。これらの試料を等分し、１×ＴＥもしくは２．５ｍｇ／ｍＬヘパリン緩衝液を含む１×ＴＥ（遊離ｍＲＮＡを測定）、または２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＴＥ緩衝液もしくは２．５ｍｇ／ｍＬヘパリンを含む２％Ｔｒｉｔｏｎ（総ｍＲＮＡを測定）で、１：１で希釈した。Ｑｕａｎｔ－ｉＴ ＲｉＢｏｇｒｅｅｎ試薬を添加し、プレートリーダーを使用して蛍光シグナルを定量化した。封入効率は以下の通り算出した。
総ｍＲＮＡ：ヘパリンを含むまたは含まない界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ（ＴＸ）を用いた粒子の溶解による、ｍＲＮＡの総量の定量化。
遊離ｍＲＮＡ：ヘパリンを含むまたは含まないＴＥ（Ｔｒｉｓ＋ＥＤＴＡ緩衝液）での粒子の希釈による、封入されていないｍＲＮＡの総量の定量化。
ヘパリンはアニオン性グリコサミノグリカンであり、ｍＲＮＡについてステロールアミンと競合し、ステロールアミンなどのカチオン性剤を含むＬＮＰ中のｍＲＮＡの量を定量化するために使用される。
実施例２に従って調製したＬＮＰ－１は、ｍＲＮＡが９８％封入されている。
実施例６
健常ヒト気管支上皮細胞モデルにおけるＬＮＰの細胞取り込み及びタンパク質発現
健常ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥ）におけるＬＮＰの細胞取り込み及びタンパク質発現を評価するために、直ちに使用可能な３Ｄ組織モデルであるＭａｔＴｅｋ（Ａｓｈｌａｎｄ，ＭＡ）のＥｐｉＡｉｒｗａｙモデルを使用する。モデルは、健常ドナーに由来する、ヒト由来気管／気管支上皮細胞からなる。
孔径０．４μｍの２４ｍｍトランスウェルインサートに細胞を播種し、コンフルエントな単層が成長したら、頂端側チャンバから培地を除去し、培養物を気液界面（ＡＬＩ）で最大４週間維持し、完全な細胞分化及び偽層状化に到達させる。このモデルは、粘膜線毛バリアのｉｎ ｖｉｖｏ表現型を再現し、組織化されたケラチン５＋基底細胞、粘液産生杯細胞、機能的タイトジャンクション、及び運動性繊毛（ｂｅａｔｉｎｇ ｃｉｌｉａ）からなる３Ｄ構造を有する、ヒトに関連する組織構造及び細胞形態を示す。
健常ＨＢＥ細胞における蓄積及び発現アッセイ
０．１モル％のローダミン－ＤＯＰＥを導入し、ＮＰＩ－ＬｕｃレポーターｍＲＮＡを封入したＬＮＰを、Ｈｙｃｌｏｎｅリン酸緩衝生理食塩水中の健常ＨＢＥに頂端側から投与した。ＡＬＩ分化後の間に蓄積した粘液を除去するために、ＬＮＰの添加前に、ＰＢＳ中の１ｍＭ ＤＴＴで細胞を１０分間洗浄した。ＮＰＩ－Ｌｕｃレポーターには、発現したタンパク質分子の検出感度を高めるために、Ｎ末端に核局在化配列及び複数のＶ５タグが含まれている。ＬＮＰをトランスフェクトした細胞を４～７２時間インキュベートした後、細胞を、トリプシンＥＤＴＡを使用して膜から剥離させ、ＰＢＳ中の４％ＰＦＡを含む懸濁液中で固定した。
ＬＮＰ蓄積用及びタンパク質発現用に、細胞を別々に処理した。ＬＮＰ蓄積を定量化するために、ＰＦＡ固定細胞を、ハイコンテント解析用に底部が光学的に透明な環状オレフィンである９６ウェルＣｅｌｌ Ｃａｒｒｉｅ Ｕｌｔｒａプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に移し、Ｏｐｅｒａ Ｐｈｅｎｉｘ回転ディスク共焦点顕微鏡（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してイメージングした。ＤＡＰＩ（４０５ｎｍチャネル）を使用して細胞を検出し、ローダミン－ＤＯＰＥ（５６１ｎｍチャネル）を使用してＬＮＰ蓄積を検出した。画像解析を、Ｈａｒｍｏｎｙ４．８で５６１ｎｍチャネルのスポットセグメンテーションを使用して実施して、エンドサイトーシスオルガネラにおけるＬＮＰ蓄積を定量化し、ＬＮＰ取り込みが陽性である細胞の％及び細胞あたりのＬＮＰ蓄積を導出した。
タンパク質発現を定量化するために、ＰＦＡ固定細胞を９６ウェルＶ字底プレートに移し、抗Ｖ５ウサギモノクローナル抗体を使用して免疫蛍光（ＩＦ）用に処理した。簡潔に述べると、細胞を０．５％ＴＸ－１００で５分間透過処理し、ＰＢＳ中の１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で３０分間ブロッキングし、続いて抗Ｖ５一次抗体と室温で１時間インキュベートし、Ａｌｅｘａ ４８８コンジュゲート二次抗体と３０分間インキュベートした。異なるインキュベーションステップの間に、細胞をスピンダウンし、ＰＢＳに再懸濁させて洗浄した。抗Ｖ５ ＩＦ染色後、Ｏｐｅｒａ Ｐｈｅｎｉｘによるイメージングのために細胞を９６ウェルＣｅｌｌ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｕｌｔｒａプレートに移し、４８８ｎｍチャネルを使用してＮＰＩ－Ｌｕｃ発現を検出した。画像解析をＨａｒｍｏｎｙ４．８で実施し、４８８ｎｍチャネルでの平均核内強度を使用して、タンパク質発現が陽性である細胞の％及び細胞あたりのタンパク質発現を導出した。
実施例７
ヒト子宮頸癌上皮細胞（ＨｅＬａ）モデルにおけるタンパク質発現
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのタンパク質発現を評価するために、ＡＴＣＣ．ｏｒｇのＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－２）を使用する。細胞を、完全最小必須培地（ＭＥＭ）で培養し、実験を行う前に、表面がＰＤＬでコーティングされた９６ウェルＣｅｌｌ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｕｌｔｒａプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）に播種する。
ＨｅＬａ細胞における発現アッセイ
ＮＰＩ－Ｌｕｃ ｍＲＮＡを封入したＬＮＰに、血清の非存在下でＭＥＭ培地を与えた。ＬＮＰをトランスフェクトした細胞を、ＬＮＰのトランスフェクション後５時間インキュベートし、Ｏｐｅｒａ Ｐｈｏｅｎｉｘ回転ディスク共焦点顕微鏡（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して細胞をライブイメージングした。ＤＡＰＩ（４０５ｎｍチャネル）を使用して細胞を検出し、画像解析をＨａｒｍｏｎｙ４．９で実施して細胞数を定量化した。イメージング後、細胞をＯｎｅ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で処理して、タンパク質発現を定量化した。細胞数に対して正規化した相対発光単位（ＲＬＵ）で結果を報告した。
実施例８
事後アプローチを使用したナノ粒子組成物の生成
例示的な中空脂質ナノ粒子は、脂質を４０ｍＭの濃度及び５０．５：１０．１：３８．９：０．５（イオン化脂質：ＤＳＰＣ：コレステロール：ＤＭＧ－ＰＥＧ２Ｋ脂質）のモル比でエタノールに溶解させ、７．１５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）と混合するプロセスによって調製することができる。脂質溶液及び緩衝液を、マルチインレットボルテックスミキサーを使用して、脂質：緩衝液体積比３：７で混合した。５秒間の滞留時間後、ｅＬＮＰを、５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）とｅＬＮＰ：緩衝液体積比５：７で混合した。次いで、希釈したｅＬＮＰを緩衝液交換し、タンジェンシャルフロー濾過を使用して５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）を含有する最終緩衝液に濃縮し、続いてスクロース溶液を添加して保存マトリックスを完成させた。ｅＬＮＰへのｍＲＮＡの搭載を、ＰＨＬプロセスを使用して行った。例示的なｍＲＮＡ搭載ナノ粒子は、４２．５ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で、脂質濃度２．８５ｍｇ／ｍＬのｅＬＮＰを、濃度０．２５ｍｇ／ｍＬのｍＲＮＡと混合することによって調製することができる。各製剤のＮ：Ｐ比を４．９３に設定した。ｅＬＮＰ溶液及びｍＲＮＡを、マルチインレットボルテックスミキサーを使用して、ｅＬＮＰ：ｍＲＮＡ体積比３：２で混合した。ｅＬＮＰにｍＲＮＡを搭載したら、３０秒～６０秒の滞留時間の経過後、これらを１２０ｍＭ ＴＲＩＳ（ｐＨ８．１２）を含有する緩衝液と、ナノ粒子：緩衝液体積比５：１でインライン混合した。この添加ステップの後、ナノ粒子製剤を、２０ｍＭ ＴＲＩＳ、０．３５２ｍｇ／ｍＬ ＤＭＧ－ＰＥＧ２ｋ、０．６２５ｍｇ／ｍＬ ＧＬ－６７（ｐＨ７．５）を含有する緩衝液と、ナノ粒子：緩衝液体積比６：１でインライン混合した。得られたナノ粒子懸濁液を、タンジェンシャルフロー濾過を使用して濃縮し、塩溶液で希釈して７０ｍＭ ＮａＣｌを含有する最終緩衝液マトリックスにした。得られたナノ粒子懸濁液を、０．８／０．２μｍカプセルフィルタに通して濾過し、ｍＲＮＡ濃度０．５～２ｍｇ／ｍＬでガラスバイアルに充填した。
実施例９
ステロールアミンの合成
Ａ．化合物ＳＡ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－Ｎ，Ｎ，１０，１３－テトラメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－アミン
ＳＡ１を、Ｊｕｓｔｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎａｌｅｎ ｄｅｒ Ｃｈｅｍｉｅ，６６３，１３５－４９（１９６３）に記載されているように調製した。
Ｂ．化合物ＳＡ２：２－（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタン－１－アミン
ＳＡ２を、Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，６，３５９（１９６１）に記載されているように調製した。
Ｃ．化合物ＳＡ３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート・三塩酸塩
ＳＡ３は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）から購入した。
Ｄ．化合物ＳＡ４：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩
ＳＡ４は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）から購入した。
Ｅ．化合物ＳＡ５：４－（（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ジスルファネイル）メチル）－１Ｈ－イミダゾール
ＳＡ５を、米国特許出願２０１４０２８８１６０（「Ｃｌｅａｖａｂｌｅ Ｌｉｐｉｄｓ」）に記載されているように調製した。
Ｆ．化合物ＳＡ６：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート
２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノール（５３ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１ｍＬ）撹拌溶液に、０℃の乾燥窒素下で、クロロギ酸コレステリル（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を５分間かけて滴加した。反応物を室温までゆっくりと加温し、一晩撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。白色混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから２０％ＤＣＭ／８０％ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（８０：２０：１））により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート（５７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、４８％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ６４Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５３１．５。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；５．０２ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ）；４．４８ （ｍ， １Ｈ）；３．６１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ）；３．２７ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ， １１．２ Ｈｚ）；２．６９ （ｂｒ． ｓ， ４Ｈ）；２．５５ （ｍ， ４Ｈ）；２．４２－２．１６ （ｍ， ５Ｈ）；２．１０－１．７１ （ｍ， ５Ｈ）；１．６３－１．２２ （ｍ， １１Ｈ）；１．２１－０．９５ （ｍ， １３Ｈ）；０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８８ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６６ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｇ．化合物ＳＡ７：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル）カルバメート
ＳＡ７を、ＳＡ６と同様の方法で（但し、２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノールの代わりに２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エタンアミンを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル）カルバメート（１１５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ、９３％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ６１Ｎ３Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５５６．５。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ）；５．０８ （ｍ， １Ｈ）；４．４８ （ｍ， １Ｈ）；３．５９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；３．２７ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ）；２．７１ （ｂｒ． ｓ， ４Ｈ）；２．５７－２．４５ （ｍ， ８Ｈ）；２．４２－２．１８ （ｍ， ３Ｈ）；２．０５－１．７２ （ｍ， ５Ｈ）；１．７０－１．２３ （ｍ， １１Ｈ）；１．２２－０．９５ （ｍ， １３Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．１ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｈ．化合物ＳＡ８：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル）エチル）カルバメート
ＳＡ８を、ＳＡ６と同様の方法で（但し、２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノールの代わりに２－［４－（２－アミノエチル）ピペラジン－１－イル］エタノールを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル）エチル）カルバメート（８５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、８７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ６３Ｎ３Ｏ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５８９．９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ）；５．０８ （ｍ， １Ｈ）；４．５０ （ｍ， １Ｈ）；３．６１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；３．２７ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ）；２．６９ （ｂｒ． ｓ， ４Ｈ）；２．５７－２．４５ （ｍ， １１Ｈ）；２．４２－２．１８ （ｍ， ３Ｈ）；２．０５－１．７２ （ｍ， ５Ｈ）；１．７０－１．２３ （ｍ， １１Ｈ）；１．２２－０．９５ （ｍ， １３Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．１ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｉ．化合物ＳＡ９：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）プロピル）カルバメート
ＳＡ９を、ＳＡ６と同様の方法で（但し、２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノールの代わりに２－［（３－アミノプロピル）（エチル）アミノ］エタノールを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）プロピル）カルバメート（９７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ、８０％）を無色油状物として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３４Ｈ６０Ｎ２Ｏ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５４５．５。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３５ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；５．１９ （ｍ， １Ｈ）；４．４５ （ｍ， １Ｈ）；３．６０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ）；３．２１ （ｍ， ２Ｈ）；２．５１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．２Ｈｚ）；２．４４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）；２．３９－１．７３ （ｍ， １０Ｈ）；１．７１－１．２５ （ｍ， １４Ｈ）；１．２４－０．９５ （ｍ， １２Ｈ）；０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８４ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｊ．化合物ＳＡ１０：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート
ステップ１：β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート
β－シトステロール（８．００ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（５．４ｍＬ、３９ｍｍｏｌ）と、４－ジメチルアミノピリジン（０．４７１ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（８０ｍＬ）撹拌溶液を、氷浴中で０℃に冷却した。クロロギ酸４－ニトロフェニル（４．２７７ｇ、２１．２２ｍｍｏｌ）を２分間かけて少しずつ添加した。反応混合物を一晩でゆっくりと室温にし、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２１時間時点で、反応混合物を氷浴中で０℃に冷却し、次いでトリエチルアミン（２．７ｍＬ）及びクロロギ酸４－ニトロフェニル（３．００ｇ）を添加した。反応混合物を室温にした。４０時間時点で、反応混合物を濾過し、氷浴中で０℃に冷却した撹拌ＡＣＮ（２５０ｍＬ）のフラスコに濾液を１時間かけて滴加した。固体を真空濾過によって収集し、ＡＣＮですすいで、β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート（９．１５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、８１．８％）を灰白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．３８分。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３７－５．４９ （ｍ， １Ｈ）， ４．５４－４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ２．３６－２．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８６－２．１０ （ｂｒ． ｍ， ２７Ｈ）， １．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７８－０．８８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６９ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２ａ：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート
（２－アミノエチル）ジメチルアミン（０．１１ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を、β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート（０．４８７ｇ、０．８４０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．１８ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（８．４ｍＬ）撹拌溶液に添加した。反応混合物を４０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２時間時点で、反応混合物を室温に冷却した。反応混合物をＤＣＭで希釈して、水で洗浄した。水性混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％（ＭｅＯＨ中５％濃ＮＨ４ＯＨ水溶液））を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート（０．２９６ｇ、０．５６ｍｍｏｌ、６６．６％）を灰白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．４３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３４Ｈ６０Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ＝５２９．３［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３４－５．４１ （ｍ， １Ｈ）， ５．０１－５．７１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４２－４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ３．２４ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６， ５．４ Ｈｚ）， ２．１９－２．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）， ２．２２ （ｓ， ６Ｈ）， １．７６－２．０５ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．８８－１．７２ （ｂｒ． ｍ， ２２Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７７－０．８８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２ｂ：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート塩酸塩
β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート（２．５０ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）とＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）との撹拌溶液に、（２－アミノエチル）ジメチルアミン（０．５６ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．９１ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２６時間時点で、反応混合物を室温に冷却し、水で洗浄し（３回）、疎水性フリットに通し、次いで濃縮した。残渣をｉＰｒＯＨ（１５ｍＬ）及びＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させ、黄色溶液を得た。この黄色溶液に、ｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（１．０ｍＬ）を滴加して、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。溶液を濃縮してＤＣＭを除去し、次いでＡＣＮ（１０ｍＬ）を添加した。混合物を、氷浴中０℃で１５分間撹拌し、次いで固体を真空濾過により収集し、１：１のＡＣＮ：ｉＰｒＯＨですすいで、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート塩酸塩（１．９８４ｇ、３．３４４ｍｍｏｌ、７７．６％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．４３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３４Ｈ６０Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ＝５２９．３［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １２．４９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ６．２５－６．３７ （ｍ， １Ｈ）， ５．３３－５．４０ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０－４．５５ （ｍ， １Ｈ）， ３．６６ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．４， ５．３ Ｈｚ）， ３．１９ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．４， ５．３ Ｈｚ ）， ２．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）， ２．２４－２．４２ （ｍ， ２Ｈ）， １．７５－２．０７ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．８８－１．７２ （ｂｒ． ｍ， ２２Ｈ）， １．００ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７７－０．８８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｋ．化合物ＳＡ１１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）プロパノエート・塩酸塩
ＳＡ１１を、ＷＯ２０１１／０６８８１０（「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍＲＮＡ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ」）に記載されているように調製し、次にジエチルエーテル中の２．５当量の２Ｍ塩化水素で塩酸塩に変換した。得られた沈殿物を追加のエーテルで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（１Ｈ－イミダゾール－５－イル）プロパノエート・塩酸塩（２９ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、７７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３３Ｈ５２Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５０９．８。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．５４ （ｓ， １Ｈ）；６．８０ （ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．０ Ｈｚ）；４．６２ （ｍ， １Ｈ）；２．９１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ）；２．６４ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）；２．３０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ）；２．０７－１．７２ （ｍ， ６Ｈ）；１．７０－０．９４ （ｍ， ２８Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．０ Ｈｚ， ６．５ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｌ．化合物ＳＡ１２：（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート
（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オール（２８０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）撹拌溶液を、乾燥窒素下で０℃に冷却し、トリエチルアミン（６０μＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いでクロロギ酸パラ－ニトロフェニル（２２０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２ｍＬ）溶液を、５分間かけて滴加した。１０分後、冷却浴を取り外し、混合物を室温で３時間撹拌した。その後、ＴＬＣによる出発物質の残留はなかった。反応物に、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（非希釈；９０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで、反応混合物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＮａＯＨ水溶液で２回洗浄した。有機物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮して淡黄色固体とした。これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％（ＭｅＯＨ中５％濃ＮＨ４ＯＨ水溶液））を介して精製して、（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート（２７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、７５％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３２Ｈ５８Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５０３．９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．１２ （ｍ， １Ｈ）；４．５６ （ｍ， １Ｈ）；３．２５ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ）；２．４１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ）；２．２３ （ｓ， ６Ｈ）；２．１５－１．９０ （ｍ， １Ｈ）；１．８９－１．４１ （ｍ， １１Ｈ）： １．４０－０．９４ （ｍ， １８Ｈ）；０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．８０ （ｓ， ３Ｈ）；０．６４ （ｍ， ４Ｈ）。
Ｍ．化合物ＳＡ１３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート
ＳＡ１３を、ＳＡ１２と同様の方法で（但し、（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オールの代わりに、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オールを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジメチルアミノ）エチル）カルバメート（２１０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、７７％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３４Ｈ５８Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５２７．９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；５．１５ （ｄｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １５．１ Ｈｚ）， ５．０１ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １５．１ Ｈｚ）， ４．４８ （ｍ， １Ｈ）， ３．２５ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １１ Ｈｚ）；２．４０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）；２．３６－２．１３ （ｍ， ８Ｈ）；２．１２－１．７７ （ｍ， ６Ｈ）；１．７６－１．３９ （ｍ， ９Ｈ）；１．３７－１．０７ （ｍ， ６Ｈ）；１．０６－０．９０ （ｍ， ８Ｈ）；０．８９－０．７４ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６９ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｎ．化合物ＳＡ１４：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート
化合物ＳＡ１４を、ＳＡ１２と同様の方法で（但し、（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オールの代わりに（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オールを使用し、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンの代わりに２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノールを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート（９２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、９３％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ６０Ｎ２Ｏ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５５７．４６。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；５．１９－５．１１ （ｍ， １Ｈ）；５．０４－４．９７ （ｍ， １Ｈ）；４．４９ （ｍ， １Ｈ）， ３．６２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ）；３．２８ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ）；２．５７ （ｍ， ４Ｈ）；２．４５－２．１８ （ｍ， ５Ｈ）；２．１６－１．６２ （ｍ， ８Ｈ）；１．６０－１．０８ （ｍ， １５Ｈ）；１．０７－０．８９ （ｍ， ８Ｈ）；０．８８－０．７４ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６９ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｏ．化合物ＳＡ１５：（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート
化合物ＳＡ１４を、ＳＡ１２と同様の方法で（但し、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンの代わりに２－［（２－アミノエチル）（メチル）アミノ］エタノールを使用して）調製し、（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）ヘキサデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）カルバメート（７９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ、８２％）を白色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３３Ｈ６０Ｎ２Ｏ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５３２．９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．１９ （ｍ， １Ｈ）；４．５３ （ｍ， １Ｈ）；３．５９ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ）；３．２４ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ）；２．５３ （ｍ， ４Ｈ）；２．２５ （ｓ， ３Ｈ）；２．０２－１．３８ （ｍ， １０Ｈ）；１．３７－０．９１ （ｍ， １９Ｈ）；０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）；０．８３ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．７７ （ｓ， ３Ｈ）；０．６１ （ｍ， ４Ｈ）。
Ｐ．化合物ＳＡ１６：３－（ジメチルアミノ）－Ｎ－（（（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－７－イソプロピル－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－イル）メチル）プロペンアミド
３－（ジメチルアミノ）プロパン酸（１．０６７ｇ、９．１０８ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（５．１ｍＬ、７０．１ｍｍｏｌ）溶液を、３０分間還流した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＤＣＭに溶解させ、（（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－７－イソプロピル－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－イル）メタンアミン（デヒドロアビエチルアミン；Ｃｏｍｂｉ－Ｂｌｏｃｋｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）（２ｇ、７ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（２．９ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。次に、反応混合物を水でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。有機層をＤＣＭで希釈して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨ）により精製して、３－（ジメチルアミノ）－Ｎ－（（（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－７－イソプロピル－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－イル）メチル）プロペンアミド（０．４４１ｇ、１．１４７ｍｍｏｌ、収率１６．４％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．１９分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２５Ｈ４０Ｎ２Ｏについてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３８５．４６；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ８．４２ （ｂｓ， １Ｈ）；７．１８ （ｍ， １Ｈ）；６．９９ （ｍ， １Ｈ）；６．９０ （ｍ；１Ｈ）；３．１７ （ｍ， ２Ｈ）；３．０１－２．７３ （ｍ， ３Ｈ）；２．７１－２．５３ （ｍ， ２Ｈ）；２．４４ （ｍ， ２Ｈ）；２．３７－２．１６ （ｍ， ７Ｈ）；１．９５－１．６１ （ｍ， ４Ｈ）；１．５１－１．１８ （ｍ， １３Ｈ）；０．９６ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｑ．化合物ＳＡ１７：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）エチル）カルバメート
乾燥ＤＣＭと乾燥２－プロパノールとの１：１混合物（２０ｍＬ）中の３－メチルヒスタミン二塩酸塩（２６５ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥窒素下で撹拌しながら０℃に冷却して、白色スラリーを得た。これに、トリエチルアミン（５２０μＬ、３．７ｍｍｏｌ）を添加し、続いてクロロギ酸コレステリル（５００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０分間かけて滴加した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌した。その後ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。混合物を真空下で還元した。残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮して淡黄色固体とした。これを、シリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから９０％ＤＣＭ／１０％ＭｅＯＨ）により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－５－イル）エチル）カルバメート（５３０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ、９３％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．８５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３４Ｈ５５Ｎ３Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５３８．７９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．４２ （ｓ， １Ｈ）；６．８３ （ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；４．８２ （ｍ， １Ｈ）；４．４８ （ｍ， １Ｈ）；３．５８ （ｓ， ３Ｈ）；３．３９ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ， １３．２ Ｈｚ）；２．４２－２．１８ （ｍ， ２Ｈ）；２．１６－１．９１ （ｍ， ３Ｈ）；１．９０－１．７３ （ｍ， ３Ｈ）；１．６５－１．４４ （ｍ， ６Ｈ）；１．４３－１．２２ （ｍ， ４Ｈ）；１．２１－１．０６ （ｍ， ６Ｈ）；１．０５－０．９４ （ｍ， ６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｒ．化合物ＳＡ１８：（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキサミド
ステップ１；（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボン酸
（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボン酸（ポドカルピン酸；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（０．５ｇ、１．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９．１ｍＬ、０．２Ｍ）撹拌溶液に、イミダゾール（０．４９６ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）及びｔ－ブチルジメチルクロロシラン（０．２７５ｇ、１．８２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機物を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨ）により精製して、（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボン酸（０．４７１ｇ、１．２１２ｍｍｏｌ、収率６７％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．５５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２３Ｈ３６Ｏ３Ｓｉについてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３８９．５６；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ６．８０ （ｍ， １Ｈ）；６．６３ （ｍ， １Ｈ）；６．４８ （ｍ， １Ｈ）；２．８１－２．５１ （ｍ， ２Ｈ）；２．１８－２．００ （ｍ， ３Ｈ）；２．００－１．７５ （ｍ， ２Ｈ）；１．５７－１．２１ （ｍ， ３Ｈ）；１．１７ （ｓ， ３Ｈ）；１．０５－０．７７ （ｍ， １４Ｈ）；０．１５ （ｍ， ６Ｈ）。
ステップ２：（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－Ｎ－（２－（ジメチルアミノ）エチル）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキサミド
（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボン酸（０．２１３ｇ、０．５４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．７ｍＬ）溶液に、（１－クロロ－２－メチルプロパ－１－エン－１－イル）ジメチルアミン（０．１６ｍＬ、１．２０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１時間撹拌し、真空下で蒸発させた。残渣をＤＣＭ（２．７ｍＬ）に再溶解させ、（２－アミノエチル）ジメチルアミン（０．０８１ｍＬ、０．８２２ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．２ｍＬ、１．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１６時間撹拌し、ＤＣＭで希釈して、飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨ）により精製して、（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－Ｎ－［２－（ジメチルアミノ）エチル］－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキサミド（０．０９５ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ、収率５０％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．５３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２１Ｈ３２Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３４５．３７；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ６．９２ （ｍ， １Ｈ）；６．７７ （ｍ， １Ｈ）；６．７４－６．５７ （ｍ， ２Ｈ）；３．４４ （ｍ， ２Ｈ）；２．９４－２．５８ （ｍ， ４Ｈ）；２．４２ （ｂｓ， ６Ｈ）；２．３２－２．１６ （ｍ， ３Ｈ）；２．１４－１．９２ （ｍ， ２Ｈ）；１．７４－１．６１ （ｍ， １Ｈ）；１．５９－１．０７ （ｍ， １０Ｈ）。
Ｓ．化合物ＳＡ１９：２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート
ステップ１：メチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート
（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボン酸（ポドカルピン酸；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（１．９ｇ、６．９２５ｍｍｏｌ）の、ＭｅＯＨ（９ｍＬ）とトルエン（１８ｍＬ）との撹拌溶液に、トリメチルシリルジアゾメタン［４．９ｍＬ（ヘキサン中の２Ｍ溶液）、９．６９５ｍｍｏｌ］を５分間かけて滴加した。溶液を室温で１時間撹拌した。過剰のトリメチルシリルジアゾメタンをＡｃＯＨでクエンチし、反応混合物を真空下で蒸発させた。残渣をＤＭＦ（３５ｍＬ）に溶解させ、炭酸セシウム（９．０３ｇ、２７．７４ｍｍｏｌ）及び臭化ベンジル（１．３ｍＬ、１０．４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１００％酢酸エチル）により精製して、メチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート（２．１２ｇ、５．６０ｍｍｏｌ、収率８１％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．５３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２５Ｈ３０Ｏ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３７９．４８；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．３８－７．１７ （ｍ， ５Ｈ）；６．８６ （ｍ， １Ｈ）；６．７８ （ｍ， １Ｈ）；６．６４ （ｍ， １Ｈ）；４．９２ （ｓ， ２Ｈ）；３．５６ （ｓ， ３Ｈ）；２．８２－２．５５ （ｍ， ２Ｈ）；２．２３－２．０２ （ｍ， ３Ｈ）；１．９６－１．７４ （ｍ， ２Ｈ）；１．５６－１．１４ （ｍ， ６Ｈ）；１．０５－０．８９ （ｍ， ４Ｈ）。
ステップ２：２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート
メチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート（２．１ｇ、５．５４８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２８ｍＬ）撹拌溶液に、カリウムｔｅｒｔブトキシド（９．３４ｇ、８３．２２ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１時間撹拌した。次に、反応混合物を氷水に注ぎ、２Ｎ ＨＣｌ水溶液で酸性化させ、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発除去した。残渣をＤＣＭ（６５ｍＬ）に溶解させ、塩化オキサリル（２．２ｍＬ、２５．８ｍｍｏｌ）、続いてＤＭＦ（０．０１ｍＬ）を添加した。溶液を１時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、残渣をＤＣＭ（７ｍＬ）に溶解させた。ジメチルアミノエタノール（０．２１ｍＬ、２．０６ｍｍｏｌ）及び４－（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０３３ｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）を添加し、続いてトリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を１時間撹拌した。残渣をＤＣＭで希釈して、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨ）により精製して、２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート（０．３２３ｇ、０．７４１ｍｍｏｌ、収率５４％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．１３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２８Ｈ３７ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）４３６．１４；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．５１－７．３０ （ｍ， ５Ｈ）；６．９９ （ｍ， １Ｈ）；６．９１ （ｍ， １Ｈ）；６．７６ （ｍ，１Ｈ）；５．０４ （ｓ， ２Ｈ）；４．２３ （ｍ， ２Ｈ）；２．９３－２．６０ （ｍ， ４Ｈ）；２．４４－２．１３ （ｍ， ９Ｈ）；２．１０－１．９１ （ｍ， ２Ｈ）；１．７１－１．５１ （ｍ， ２Ｈ）；１．４８－１．３５ （ｍ， １Ｈ）；１．３１ （ｓ， ３Ｈ）；１．１７－１．０３ （ｍ， ４Ｈ）。
ステップ３：２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ－オクタヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート
水酸化パラジウム（０．０７ｇ）を含有するフラスコに、２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－（ベンジルオキシ）－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート（０．３１ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のエタノール（４ｍＬ）溶液をＮ２下で添加した。反応物を、水素バルーン下で週末にわたり室温で撹拌した。反応物をセライトのプラグに通して濾過し、濾液を真空下で蒸発させた。残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％ＭｅＯＨ）により精製して、２－（ジメチルアミノ）エチル（１Ｒ，４ａＳ，１０ａＲ）－６－ヒドロキシ－１，４ａ－ジメチル－２，３，４，９，１０，１０ａ－ヘキサヒドロフェナントレン－１－カルボキシレート（０．１４ｇ、０．４１ｍｍｏｌ、収率５７％）を得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．０４分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ２１Ｈ３１ＮＯ３についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）３４６．１１。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ６．９２ （ｍ， １Ｈ）；６．７５ （ｍ， １Ｈ）；６．６０ （ｍ， １Ｈ）；４．２１ （ｍ， ２Ｈ）；２．９０－２．６０ （ｍ， ４Ｈ）；２．４２－２．１２ （ｍ， ９Ｈ）；２．０８－１．９０ （ｍ， ２Ｈ）；１．６９－１．５１ （ｍ， ２Ｈ）；１．４８－１．３４ （ｍ， １Ｈ）；１．３０ （ｓ， ３Ｈ）；１．１７－１．０２ （ｍ， ４Ｈ）。
Ｔ．化合物ＳＡ２０：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（ピリジン－４－イル）プロパノエート
３－（ピリジン－４－イル）プロパン酸（１９６ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）とコレステロール（４１５ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）撹拌溶液に、乾燥窒素下でＥＤＣ－ＨＣｌ（３２０ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６５ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（５６０μＬ、３．２ｍｍｏｌ）を添加して、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかったため、反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１０％ＭｅＯＨ）により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（ピリジン－４－イル）プロパノエート（３７０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、６７％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．０９分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ５３ＮＯ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５２０．５９。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ８．５２ （ｄ ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）；７．２０ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ）；５．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ）；４．６０ （ｍ， １Ｈ）；２．９７ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ）；２．６４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ）；２．２７ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ）；２．０８－１．９１ （ｍ， ２Ｈ）；１．９０－１．７４ （ｍ， ３Ｈ）；１．６４－１．２２ （ｍ， １１Ｈ）；１．２１－１．０５ （ｍ， ７Ｈ）；１．０４－０．９５ （ｍ， ６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．５ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｕ．化合物ＳＡ２１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（６－アミノピリジン－３－イル）プロパノエート
３－（６－アミノピリジン－３－イル）プロパン酸（２７０ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）とコレステロール（５００ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）撹拌溶液に、乾燥窒素下で、ＥＤＣ－ＨＣｌ（３９０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７９ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＥＡ（６８０μＬ、３．８ｍｍｏｌ）を添加して、得られた混合物を室温で一晩撹拌した。ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかったため、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濾液を濃縮して淡黄色固体とした。これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１０％ＭｅＯＨ）により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル３－（６－アミノピリジン－３－イル）プロパノエート（２８１ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、４１％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．１０分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ５４Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５３５．６８。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．８８ （ｄ ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ）；７．３６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ， ８．５ Ｈｚ）；６．５０ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ）；４．７５－４．５４ （ｍ， ３Ｈ）；２．８１ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ）；２．５４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ）；２．２８ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ）；２．０８－１．９１ （ｍ， ３Ｈ）；１．９０－１．７４ （ｍ， ３Ｈ）；１．６５－１．２３ （ｍ， １０Ｈ）；１．２２－０．９４ （ｍ， １３Ｈ）；１．０４－０．９５ （ｍ， ６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｖ．化合物ＳＡ２２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－アミノエチル）カルバメート
エチレンジアミン（４．６ｍＬ、６４．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）撹拌溶液を、乾燥窒素下で０℃に冷却し、クロロギ酸コレステリル（２．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液を、２０分間かけて滴加した。得られた混合物を、撹拌しながら一晩、室温に加温した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で３回洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濾液を濃縮して白色固体とした。これを熱エタノールに溶解させ、綿栓に通した。物質が沈殿し始めるまで、濾液をアセトニトリルで希釈した。混合物を４℃で一晩置いた。得られた固体を濾過により単離して、アセトニトリルで洗浄した。濾液を濃縮し、アセトニトリルでトリチュレートし、濾過した。濾過した固体をアセトニトリルで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－アミノエチル）カルバメート（１．５６ｇ、３．３ｍｍｏｌ、７６％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．７０分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３０Ｈ５２Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）４７３．５５。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．６ Ｈｚ）；４．９６ （ｍ， １Ｈ）；４．５０ （ｍ， １Ｈ）；３．２３ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １１．６ Ｈｚ）；２．８３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ）；２．４２－２．１９ （ｍ， ２Ｈ）；２．０６－１．７５ （ｍ， ５Ｈ）；１．６５－１．０５ （ｍ， １９Ｈ）；１．０４－０．９４ （ｍ， ６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｗ．化合物ＳＡ２３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－グアニジノエチル）カルバメート・塩酸塩
ステップ１：
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－アミノエチル）カルバメートＳＡ２２（３００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）とＮ１，Ｎ２－ビス－Ｂｏｃ－グアニジン－Ｎ３－トリフレート（２５０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）撹拌溶液に、トリエチルアミン（９２μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で一晩撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮して淡黄色シロップ状物とした。これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物（３８４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ、８５％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．３５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ７０Ｎ４Ｏ６についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）７１５．６６。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ １１．４５ （ｓ， １Ｈ）；８．５９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．５６ （ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；４．４９ （ｍ， １Ｈ）；３．６０ （ｓ， ２Ｈ）；３．３７ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ）；２．４２－２．１９ （ｍ， ２Ｈ）；２．０６－１．７５ （ｍ， ５Ｈ）；１．６７－１．４４ （ｍ， ２３Ｈ）；１．４３－１．２２ （ｍ， ４Ｈ）；１．２１－０．９４ （ｍ， １１Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．１ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－グアニジノエチル）カルバメート・塩酸塩
ステップ１の生成物（３８４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）撹拌溶液に、ジエチルエーテル中のＨＣｌ ２Ｍ溶液（１．３３ｍＬ、２．６６ｍｍｏｌ）を添加した。反応容器をきつく密封した。反応混合物を４０℃に加熱し、一晩撹拌した。追加のエーテル中２Ｍ ＨＣｌ（５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを密封し、反応物を一晩４０℃に加熱した。ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかったため、混合物を窒素流中で濃縮した。白色残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、濾過した。濾過固体をジエチルエーテルで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、（１Ｒ，３ａＳ，３ｂＳ，７Ｓ，９ａＲ，９ｂＳ，１１ａＲ）－９ａ，１１ａ－ジメチル－１－［（２Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル］－１Ｈ，２Ｈ，３Ｈ，３ａＨ，３ｂＨ，４Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ，９Ｈ，９ｂＨ，１０Ｈ，１１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－７－イルＮ－（２－｛［（Ｚ）－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）イミノ］メチル］アミノ｝エチル）カルバメート塩酸塩（２３５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ、７９％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．７１分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３１Ｈ５４Ｎ４Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５１５．７３。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．８８ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；７．１６ （ｂｒ． ｓ， ４Ｈ）；５．９６ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｓ， １Ｈ）；４．４２ （ｍ， １Ｈ）；３．５５－３．１８ （ｍ， ４Ｈ）；２．３１ （ｓ， ２Ｈ）；２．０８－１．６５ （ｍ， ７Ｈ）；１．６４－１．２２ （ｍ， １１Ｈ）；１．２３－０．９４ （ｍ， １４Ｈ）；０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ）；０．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）；０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｘ．化合物ＳＡ２４：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
ステップ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート
（－）－コレステロールＮＨＳサクシネート（５１７ｍｇ、０．８８６ｍｍｏｌ）及び３，３’－イミノビス（Ｎ，Ｎ－ジメチルプロピルアミン）（０．４０ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６．０ｍＬ）中で合わせた。反応混合物を室温で撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。２０時間時点で、反応混合物をＤＣＭで希釈して、次いで水で洗浄した。水層をＤＣＭで抽出した（２回）。合わせた有機物を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２０％（ＭｅＯＨ中１０％濃ＮＨ４ＯＨ水溶液））を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（４２５ｍｇ、０．６０７ｍｍｏｌ、６８．５％）を、澄明粘性油状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．１１分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ７３Ｎ３Ｏ３についてｍ／ｚ＝６５６．６［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３２－５．３９ （ｍ， １Ｈ）， ４．５４－４．６８ （ｍ， １Ｈ）， ３．２９－３．４０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６４ （ｓ， ４Ｈ）， ２．１８－２．３５ （ｍ， ５Ｈ）， ２．２１ （ｓ， １２Ｈ）， ０．８２－２．０５ （ｂｒ． ｍ， ３１Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
ＤＣＭ（６．８ｍＬ）とｉＰｒＯＨ（２．７ｍＬ）との混合物中の、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（０．１３５ｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（０．１０ｍＬ）を滴加した。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次いで濃縮した。ＡＣＮ（５ｍＬ）を添加して、混合物を０℃の氷浴中で撹拌した。ＡＣＮ（５ｍＬ）を添加した。混合物を濃縮した。ＡＣＮ（３ｍＬ）を添加して、混合物を超音波処理した。固体を真空濾過により収集し、冷ＡＣＮですすいだ。固体を１：１のＡＣＮ／ｉＰｒＯＨに懸濁させ、濃縮して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩（０．０７９ｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４９．１％）を灰白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．９４分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ７３Ｎ３Ｏ３についてｍ／ｚ＝６５６．３［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １２．３３ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， １２．１４ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ５．２８－５．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．４５－４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５１－３．７２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１３－３．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９７－３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９０ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）， ２．８１ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）， ２．５５－２．７２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２５－２．４３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．１０－２．２４ （ｍ， ２Ｈ）， １．７５－２．０６ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．９２－１．７１ （ｂｒ． ｍ， ２１Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， ６．４ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｙ．化合物ＳＡ２５：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（２－（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩
ステップ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－メトキシ－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート
２０ｍＬのＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：１）混合物中の、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－アミノエチル）カルバメート（ＳＡ２２、１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）と３，４－ジメトキシ－３－シクロブテン－１，２－ジオン（６００ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）との撹拌混合物を、３５℃に加温した。混合物は透明になり、得られた無色溶液を室温で一晩撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－メトキシ－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート（１．０６ｇ、１．８ｍｍｏｌ、８６％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．２７分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ５４Ｎ２Ｏ５についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５８３．６８。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ６．３０ （ｂｒ． ｓ， ０．５Ｈ）；５．９９ （ｂｒ． ｓ， ０．５Ｈ）；５．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ）；４．９５ （ｍ， １Ｈ）；４．４８ （ｍ， １Ｈ）；４．３８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ）；３．７９ （ｍ， １Ｈ）；３．５６ （ｍ， １Ｈ）；３．４０ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １０．６ Ｈｚ）；２．４０－２．１９ （ｍ， ２Ｈ）；２．０７－１．７５ （ｍ， ５Ｈ）；１．６８－１．２３ （ｍ， １１Ｈ）；１．２２－０．９４ （ｍ， １２Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．１ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（２－（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－メトキシ－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート（２００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の５ｍＬメタノール撹拌懸濁液に、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミン（６０μＬ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４５℃に加熱し、一晩撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。乳白色混合物を室温に冷却し、濾過した。濾過固体をメタノールで洗浄し、次いでアセトニトリルで洗浄した。固体を風乾させ、脆性の黄色固体を得た。これを微粉砕し、真空下で乾燥させ、ＤＣＭ／メタノールの１：１混合物１０ｍＬに懸濁させた。混合物を加熱してほぼ完全に溶解させ、濾過した。濾液にジエチルエーテル中の２Ｍ ＨＣｌ溶液（１．０ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を撹拌しながら添加した。得られた溶液を窒素流中で濃縮し、得られた固体を真空下で乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（２－（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート塩酸塩（１５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、６５％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．５７分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３８Ｈ６２Ｎ４Ｏ４についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）６３９．５６。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ｐｐｍ １０．００ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；７．９４ （ｍ， ２Ｈ）；７．１６ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ）；５．３２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．６ Ｈｚ）；４．２９ （ｍ， １Ｈ）；３．８３ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ）；３．５０ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；３．３７ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；３．２６ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；３．１３ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １１．１ Ｈｚ）；２．８０ （ｓ， ６Ｈ）；２．３３－２．１０ （ｍ， ２Ｈ）；２．０４－１．６８ （ｍ， ５Ｈ）；１．６３－１．２３ （ｍ， １０Ｈ）；１．２２－０．９７ （ｍ， １１Ｈ）；０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８３ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．５ Ｈｚ）；０．６４ （ｓ， ３Ｈ）。
Ｚ．化合物ＳＡ２６：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩
ＳＡ２６を、ＳＡ２５と同様の方法で（但し、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンの代わりにステップ２でＮ，Ｎ－ジメチルプロピレンジアミンを使用して）調製した。ＨＣｌ塩への同様の変換を実施して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩（１６８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、７１％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．６０分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３９Ｈ６４Ｎ４Ｏ４についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）６５３．７４。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ｐｐｍ １０．００ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；７．９５ （ｍ， ２Ｈ）；７．１５ （ｍ， １Ｈ）；５．３２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ）；４．２９ （ｍ， １Ｈ）；３．６０－３．４３ （ｍ， ４Ｈ）；３．１９－３．００ （ｍ， ４Ｈ）；２．８０ （ｓ， ６Ｈ）；２．３５－２．１０ （ｍ， ２Ｈ）；２．０４－１．６８ （ｍ， ５Ｈ）；１．５６－１．２３ （ｍ， １０Ｈ）；１．２２－０．９７ （ｍ， １１Ｈ）；０．８８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８３ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ０．９ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６４ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＡ．化合物ＳＡ２７：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（４－（ジメチルアミノ）ブチル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩
ＳＡ２７を、ＳＡ２５と同様の方法で（但し、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンの代わりにステップ２でＮ，Ｎ－ジメチルブタンジアミンを使用して）調製した。ＨＣｌ塩への同様の変換を実施して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（（４－（ジメチルアミノ）ブチル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート・塩酸塩（１４５ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ、６０％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．６２分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３９Ｈ６４Ｎ４Ｏ４についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）６６７．６６。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ： ｐｐｍ １０．０１ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；８．０４ （ｍ， ２Ｈ）；７．１４ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ）；５．３２ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ２．９ Ｈｚ）；４．２９ （ｍ， １Ｈ）；３．９５ （ｍ， ２Ｈ）；３．４９ （ｂｒ． ｄ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ４．８ Ｈｚ）；３．１９－２．９６ （ｍ， ４Ｈ）；２．７２ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；２．３４－２．０８ （ｍ， ２Ｈ）；２．０４－１．６０ （ｍ， ５Ｈ）；１．５９－１．２３ （ｍ， １０Ｈ）；１．２２－０．９７ （ｍ， １１Ｈ）；０．８８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８３ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．０ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６４ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＢ．化合物ＳＡ２８：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
ステップ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート
（－）－コレステロールＮＨＳサクシネート（０．１００ｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．８６ｍＬ）溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－（｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）プロピル］カルバメート（０．０７４ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．４０ｍＬ）溶液を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。５時間時点で、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－（｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）プロピル］カルバメート（４０ｍｇ）を添加した。２１時間時点で、反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。水層をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～７５％ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（定量的）を澄明油状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．９８分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４７Ｈ８１Ｎ３Ｏ７についてｍ／ｚ＝７００．７［（Ｍ＋Ｈ）－（ＣＨ３）２Ｃ＝ＣＨ２－ＣＯ２］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３２－５．４０ （ｍ， １Ｈ）， ５．２９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．５０－４．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）， ３．３２ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ）， ３．１５ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．０， ６．４ Ｈｚ）， ３．０４ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６， ５．７ Ｈｚ）， ２．５４－２．７０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２８－２．３７ （ｍ， ２Ｈ）， １．７５－２．０７ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．９４－１．７１ （ｂｒ． ｍ， ２５Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．４３ （ｓ， ９Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
氷浴中で０℃に冷却した、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（１１０ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．０ｍＬ）撹拌溶液に、ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．１７ｍＬ）を滴加した。反応混合物を撹拌しながら室温にゆっくりと加温し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。３時間時点で、懸濁液をＥｔ２Ｏで希釈した。固体を真空濾過により収集し、Ｅｔ２Ｏですすいで、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（ビス（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩（５５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ、５８．７％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．１３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３７Ｈ６５Ｎ３Ｏ３についてｍ／ｚ＝６００．５［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．０７ （ｂｒ． ｓ， ３Ｈ）， ７．９０ （ｂｒ． ｓ， ３Ｈ）， ５．３０－５．３７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６－４．５１ （ｍ， １Ｈ）， ３．３４－３．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６４－２．９１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．４７－２．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１９－２．３２ （ｍ， ２Ｈ）， １．６９－２．０５ （ｂｒ． ｍ， ７Ｈ）， ０．９１－１．６４ （ｂｒ． ｍ， ２５ Ｈ）， ０．９８， （ｓ， ３Ｈ）， ０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＣ．化合物ＳＡ２９：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（４－アミノブチル）（３－アミノプロピル）カルバメート二塩酸塩
ＤＣＭ（３．４ｍＬ）中の（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート（Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７（１４），１７０１－１７１７（１９９６）に記載されているように調製）（１９０ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、氷浴中で０℃に冷却した。ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．３１ｍＬ）を滴加し、反応混合物を撹拌しながら室温にゆっくりと加温した。反応をＬＣＭＳによってモニタリングした。４時間時点で、ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．１０ｍＬ）を添加した。９時間時点で、反応混合物をＥｔ２Ｏで希釈して約２０ｍＬにした。懸濁液を濾過し、Ｅｔ２Ｏですすいだ。固体をヘプタンに懸濁させ、懸濁液を濃縮して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（４－アミノブチル）（３－アミノプロピル）カルバメート二塩酸塩（１４７ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ、９１．０％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．０５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ６３Ｎ３Ｏ２についてｍ／ｚ＝５５８．５［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ７．９３ （ｂｒ． ｓ， ６Ｈ）， ５．２９－５．３８ （ｍ， １Ｈ）， ４．２６－４．４０ （ｍ， １Ｈ）， ３．１０－３．３０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６８－２．８６ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２０－２．３５ （ｍ， ２Ｈ）， １．７０－２．０３ （ｂｒ． ｍ， ７Ｈ）， ０．９１－１．６４ （ｂｒ． ｍ， ２５Ｈ）， ０．９９ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＤ．化合物ＳＡ３０：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（（４－アミノブチル）アミノ）プロピル）カルバメート二塩酸塩
ＤＣＭ（３．９ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）（３－（（（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）オキシ）カルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート（Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，７（１４），１７０１－１７１７（１９９６）に記載されているように調製）（２１５ｍｇ、０．２８４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を、氷浴中で０℃に冷却した。ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．３５ｍＬ）を滴加し、反応混合物を撹拌しながら室温にゆっくりと加温した。反応をＬＣＭＳによってモニタリングした。４時間時点で、追加のジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．１０ｍＬ）を添加した。９時間時点で、反応混合物をＥｔ２Ｏで希釈して約２０ｍＬにした。固体を真空濾過により収集し、Ｅｔ２Ｏですすいだ。固体をヘプタンに懸濁させ、次いで濃縮して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（（４－アミノブチル）アミノ）プロピル）カルバメート二塩酸塩（１４２ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ、７６．１％）を半透明固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．１６分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ６３Ｎ３Ｏ２についてｍ／ｚ＝５５８．５［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ８．９７ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）， ８．０３ （ｂｒ． ｓ， ３Ｈ）， ７．２０ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ）， ５．２６－５．４３ （ｍ， １Ｈ）， ４．２３－４．３９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７－３．１２ （ｄｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．１， ６．３ Ｈｚ）， ２．７０－２．９５ （ｍ， ６Ｈ）， ２．１３－２．３６ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９１－２．０５ （ｂｒ． ｍ， ３２Ｈ）， ０．９７ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．１ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＥ．化合物ＳＡ３１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－アミノブチル）（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
ステップ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート
（－）－コレステロールＮＨＳサクシネート（２０１ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．７ｍＬ）溶液に、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［３－（｛４－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］ブチル｝アミノ）プロピル］カルバメート（０．１７８ｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１９時間時点で、反応混合物をＤＣＭ（３０ｍＬ）で希釈して、次いで水で洗浄した。水層をＤＣＭ（１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～６５％ＥｔＯＡｃ）により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（２４１ｍｇ、０．２９６ｍｍｏｌ、８６．１％）を白色泡状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．９８分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４８Ｈ８３Ｎ３Ｏ７についてｍ／ｚ＝８１４．７［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．２１－５．４３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４９－４．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３３ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ３．２２－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．９７－３．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５２－２．７２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２４－２．３８ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３－２．０７ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．７５－１．６４ （ｂｒ． ｍ， ２７Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－アミノブチル）（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）ブチル）（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート（０．２３０ｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４．１ｍＬ）溶液を、氷浴中で０℃に冷却した。ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．３５ｍＬ）を滴加し、反応混合物を撹拌しながら室温にゆっくりと加温した。反応をＬＣＭＳによってモニタリングした。４時間時点で、追加のジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．１０ｍＬ）を添加した。９時間時点で、反応混合物をＥｔ２Ｏで希釈して約２０ｍＬにした。固体を真空濾過により収集し、Ｅｔ２Ｏですすいだ。固体をヘプタンに懸濁させ、濃縮し、高真空下で更に乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（４－アミノブチル）（３－アミノプロピル）アミノ）－４－オキソブタノエート二塩酸塩（１７１ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ、８７．４％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．２２分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３８Ｈ６７Ｎ３Ｏ３についてｍ／ｚ＝６１４．３［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ７．７３－８．１４ （ｍ， ６Ｈ）， ５．２９－５．３７ （ｍ， １Ｈ）， ４．３６－４．５１ （ｍ， １Ｈ）， ３．１５－３．４３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．６４－２．８８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．４７－２．６３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．２１－２．２９ （ｍ， ２Ｈ）， １．６９－２．０３ （ｂｒ． ｍ， ７Ｈ）， ０．８０－１．６４ （ｂｒ． ｍ， ２７ Ｈ）， ０．９８， （ｓ， ３Ｈ）， ０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＦ．化合物ＳＡ３２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル２－（キヌクリジン－３－イル）アセテート
３－（カルボキシメチル）－１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－１－イウムクロリド（ＡｓｔａＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｉｓｔｏｌ，ＰＡ）（０．１００ｇ、０．４８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．２ｍＬ）溶液に、コレステロール（４７０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（３０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．１０３ｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）を添加した。ＴＨＦ（３．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１６．５時間時点で、反応混合物を５０℃で加熱した。２１時間時点で、反応混合物を室温に冷却した。粗物質を３：１のＣＨＣｌ３／ｉＰｒＯＨ（約４０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機物を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中５～２０％（ＭｅＯＨ中１０％濃ＮＨ４ＯＨ水溶液））を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル２－（キヌクリジン－３－イル）アセテート（０．１９３ｇ、０．３５７ｍｍｏｌ、７３．５％）を澄明油状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．０２分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ５９ＮＯ２についてｍ／ｚ＝５３８．５［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ５．３２－５．４３ （ｍ， １Ｈ）， ４．４７－４．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．０６－３．１８ （ｍ， １Ｈ）， ２．７３－２．９２ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２５－２．５０ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．９１－２．２３ （ｂｒ． ｍ， ３２Ｈ）， １．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８８ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．７３ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＧ．化合物ＳＡ３３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イルキヌクリジン－３－カルボキシレート
コレステロール（５０４ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）と、１－アザビシクロ［２．２．２］オクタン－３－カルボン酸塩酸塩（Ｅｎａｍｉｎｅ，Ｍｏｎｍｏｕｔｈ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＮＪ）（１００ｍｇ、０．５２２ｍｍｏｌ）と、４－（ジメチルアミノ）ピリジン（０．０３２ｇ、０．２６１ｍｍｏｌ）とのＴＨＦ（３．５ｍＬ）懸濁液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．１１０ｇ、０．５７４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１６時間時点で、反応混合物を５０℃で撹拌した。４０時間時点で、反応混合物を室温に冷却し、３：１のＣＨＣｌ３：ｉＰｒＯＨ（約４０ｍＬ）で希釈した。有機物を水で洗浄し、疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～１０％（ＭｅＯＨ中１０％濃ＮＨ４ＯＨ水溶液））を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イルキヌクリジン－３－カルボキシレート（０．１２１ｇ、０．２２６ｍｍｏｌ、４３．４％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．０６分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３５Ｈ５７ＮＯ２についてｍ／ｚ＝５２４．５［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３４－５．４３ （ｍ， １Ｈ）， ４．５８－４．７２ （ｍ， １Ｈ）， ３．２９ （ｄｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １３．９， ６．０， １．７ Ｈｚ）， ２．７２－３．０５ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ２．４６－２．５６ （ｍ， １Ｈ）， ２．２２－２．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．１２－２．１９ （ｍ， １Ｈ）， １．７５－２．０９ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．９２－１．７０ （ｂｒ． ｍ， ２５Ｈ）， １．０２ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＨ．化合物ＳＡ３４：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）アミノ）エチル）カルバメート・ヨウ化水素塩
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－アミノエチル）カルバメート（ＳＡ２２、２００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）と２－（メチルチオ）－４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾールヨウ化水素酸塩（９４ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を４０℃に加熱し、一晩撹拌した。その後、溶液は白色懸濁液になった。ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかったため、溶液を室温に冷却し、濃縮した（悪臭！）。得られた固体をジエチルエーテルでトリチュレートした。混合物を濾過し、濾過固体をエーテルで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（４，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－イル）アミノ）エチル）カルバメートヨウ化水素酸塩（７７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、３０％）を吸湿性白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．７６分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３３Ｈ５６Ｎ４Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５４１．６３。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．９７ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）；７．２９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．６１ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ）；４．４３ （ｂｒ． ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ８．７ Ｈｚ）；３．７８ （ｓ， ４Ｈ）；３．６１－３．２１ （ｍ， ４Ｈ）；２．３１ （ｓ， ２Ｈ）；２．３０ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ）；２．１４－１．７０ （ｍ， ５Ｈ）；１．６９－１．２２ （ｍ， １１Ｈ）；１．２１－０．９４ （ｍ， １３Ｈ）；０．９０ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）；０．８５ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．６６ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＩ．化合物ＳＡ３５：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート
ＳＡ３５を、ＳＡ２５と同様の方法で（但し、Ｎ，Ｎ－ジメチルエチレンジアミンの代わりにステップ２で３，３’－イミノビス（Ｎ，Ｎ－ジメチルプロピルアミン）を使用して）調製した。反応が完了したら、乳白色混合物を室温に冷却し、濾過した。濾過固体をメタノールで洗浄し、濾液を濃縮して淡黄色の薄膜とした。これを、シリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２５％ＭｅＯＨ）により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（（２－（ビス（３－（ジメチルアミノ）プロピル）アミノ）－３，４－ジオキソシクロブタ－１－エン－１－イル）アミノ）エチル）カルバメート（４５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、１４％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．１２分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４４Ｈ７５Ｎ５Ｏ４についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）７３８．６０。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ８．８５ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．３４ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．７ Ｈｚ）；５．１９ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）；４．４４ （ｍ， １Ｈ）；３．７６ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １１．８ Ｈｚ）；３．７０－３．４７ （ｍ， ３Ｈ）；３．３９ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．８ Ｈｚ， １１．４ Ｈｚ）；２．８５－２．３３ （ｍ， １５Ｈ）；２．２７ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ）；２．１０－１．７０ （ｍ， ９Ｈ）；１．６６－１．２２ （ｍ， １１Ｈ）；１．２１－０．９５ （ｍ， １２Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．１ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＪ．化合物ＳＡ３６：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩
ステップ１：スチグマステロール４－ニトロフェニルカーボネート
スチグマステロール（０．６００ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．４１ｍＬ、２．９ｍｍｏｌ）と、４－ジメチルアミノピリジン（０．０３６ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（６．０ｍＬ）撹拌懸濁液を、氷浴中で０℃に冷却した。次に、クロロギ酸４－ニトロフェニル（０．３２２ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一晩でゆっくりと室温にし、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２１時間時点で、反応混合物を濾過した。撹拌ＡＣＮ（３０ｍＬ）のフラスコに濾液を滴加した。固体が沈殿し、黄色懸濁液が得られた。固体を真空濾過により収集し、ＣＡＮですすぎ、スチグマステロール４－ニトロフェニルカーボネート（０．５２６ｇ、０．９１０ｍｍｏｌ、６２．６％）を得た。更なる固体が母液から沈殿した。母液を部分的に濃縮して、ＤＣＭの大部分を除去した。室温に冷却したら、固体を真空濾過により収集し、ＡＣＮですすぎ、スチグマステロール４－ニトロフェニルカーボネート（０．１６２ｇ、０．２８０ｍｍｏｌ、１９．３％）を得た。合計収率＝８１．９％。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．４０－５．４７ （ｍ， １Ｈ）， ５．１５ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ５．０２ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ４．５５－４．６８ （ｍ， １Ｈ）， ２．４１－２．５５ （ｍ， ２Ｈ）， １．８９－２．１３ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．８８－１．８４ （ｂｒ． ｍ， １８Ｈ）， １．０５ （ｓ， ３Ｈ）， １．０３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．７６－０．８７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．７１ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝－Ｎ－［４－（｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）ブチル］カルバメート（０．５６６ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、スチグマステロール４－ニトロフェニルカーボネート（０．５００ｇ、０．８６５ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．３６ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を、トルエン（５．０ｍＬ）中で合わせた。反応混合物を９０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２４時間時点で、反応混合物を室温に冷却した。反応混合物を水（３×５ｍＬ）で洗浄し、次いで濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～６０％ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）（０．７０３ｇ、０．７４７ｍｍｏｌ、８６．３％）を白色泡状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．４５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ５５Ｈ９６Ｎ４Ｏ８についてｍ／ｚ＝８４１．８［（Ｍ＋Ｈ）－（ＣＨ３）２Ｃ＝ＣＨ２－ＣＯ２］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３３－５．４１ （ｍ， １Ｈ）， ５．２８ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ５．１６ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ５．０１ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ４．７９ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．４２－４．５９ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７－３．４８ （ｂｒ． ｍ， １２Ｈ）， ２．２０－２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， １．７９－２．１２ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．８８－１．７７ （ｂｒ． ｍ， ２６Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）， １．４３ （ｓ， １８Ｈ）， １．０２ （ｓ， ３Ｈ）， １．０２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７５－０．８８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６９ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩
ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）（０．７００ｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）のｉＰｒＯＨ（３．２ｍＬ）溶液を、３０℃で撹拌した。ｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（１．５ｍＬ）を滴加した。反応混合物を４０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１８．５時間時点で、ＡＣＮ（３．２ｍＬ）を添加し、スラリーを超音波処理し、次いで室温で１時間撹拌した。この時間の経過後、固体を真空濾過により収集し、３：１のＡＣＮ：ｉＰｒＯＨ、次いでＡＣＮですすぎ、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｓ，Ｅ）－５－エチル－６－メチルヘプタ－３－エン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩（０．５０９ｇ、０．６３６ｍｍｏｌ、８５．５％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．５６分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４０Ｈ７２Ｎ４Ｏ２についてｍ／ｚ＝６４１．４［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３８－５．４５ （ｍ， １Ｈ）， ５．２０ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ５．０７ （ｄｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ １５．１， ８．４ Ｈｚ）， ４．４０－４．５４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２９－３．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ３．０５－３．２０ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９２－３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３４－２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８７－２．２０ （ｍ， ９Ｈ）， ０．９２－１．８３ （ｂｒ． ｍ， ２２Ｈ）， １．０９ （ｓ， ３Ｈ）， １．０７ （ｄ， ３Ｈ， ６．６ Ｈｚ）， ０．８０－０．９２ （ｍ， ９Ｈ）， ０．７７ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＫ．化合物ＳＡ３７：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩
ステップ１：β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート
β－シトステロール（８．００ｇ、１９．３ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（５．４ｍＬ、３９ｍｍｏｌ）と、４－ジメチルアミノピリジン（０．４７１ｇ、３．８６ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（８０ｍＬ）撹拌溶液を、氷浴中で０℃に冷却した。この溶液に、クロロギ酸４－ニトロフェニル（４．２７７ｇ、２１．２２ｍｍｏｌ）を２分間かけて少しずつ添加した。反応混合物を一晩でゆっくりと室温にし、ＬＣＭＳによってモニタリングした。２１時間時点で、反応混合物を氷浴中で０℃に冷却し、次いでトリエチルアミン（２．７ｍＬ）及びクロロギ酸４－ニトロフェニル（３．００ｇ）を添加した。反応混合物を室温にした。４０時間時点で、反応混合物を濾過し、氷浴中で０℃に冷却した撹拌ＡＣＮ（２５０ｍＬ）のフラスコに濾液を１時間かけて滴加した。固体を真空濾過によって収集し、ＣＡＮですすぎ、β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート（９．１５ｇ、１５．８ｍｍｏｌ、８１．８％）を灰白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．３８分。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ８．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．３７－５．４９ （ｍ， １Ｈ）， ４．５４－４．６９ （ｍ， １Ｈ）， ２．３６－２．５７ （ｍ， ２Ｈ）， ０．８６－２．１０ （ｂｒ． ｍ， ２７Ｈ）， １．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９３ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７８－０．８８ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６９ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝－Ｎ－［４－（｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）ブチル］カルバメート（０．５６４ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、β－シトステロール４－ニトロフェニルカーボネート（０．５００ｇ、０．８６２ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミン（０．３６ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を、ＰｈＭｅ（５．０ｍＬ）中で合わせた。反応混合物を９０℃で撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。４４時間時点で、反応混合物を室温に冷却した。反応混合物を水（３×５ｍＬ）で洗浄し、次いで濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～６０％ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）（０．７０４ｇ、０．７４６ｍｍｏｌ、８６．５％）を白色泡状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３２－５．４４ （ｍ， １Ｈ）， ５．２８ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．７８ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．４３－４．５８ （ｍ， １Ｈ）， ２．９７－３．４５ （ｂｒ． ｍ， １２Ｈ）， ２．２０－２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， １．７６－２．０６ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．８７－１．７３ （ｂｒ． ｍ， ３０Ｈ）， １．４５ （ｓ， ９Ｈ）， １．４３ （ｓ， １８Ｈ），１．０２ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９２ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．７７－０．８７ （ｍ， ９Ｈ）， ０．６８ （ｓ， ３Ｈ）。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．５１分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ５５Ｈ９８Ｎ４Ｏ８についてｍ／ｚ＝８４３．９［（Ｍ＋Ｈ）－（ＣＨ３）２Ｃ＝ＣＨ２－ＣＯ２］＋。
ステップ３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩
ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ブタン－１，４－ジイルビス（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）カルバメート）（０．７００ｇ、０．７４２ｍｍｏｌ）のｉＰｒＯＨ（３．２ｍＬ）撹拌溶液を、３０℃に加熱した。この溶液に、ｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（１．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を４０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１８．５時間時点で、ＡＣＮ（３．２ｍＬ）を添加した。混合物を超音波処理し、次いで室温で１時間撹拌した。この時間の経過後、固体を真空濾過により収集し、３：１のＡＣＮ：ｉＰｒＯＨ、次いでＡＣＮですすいで、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）カルバメート三塩酸塩（０．４９８ｇ、０．６３９ｍｍｏｌ、８６．１％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．６３分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４０Ｈ７４Ｎ４Ｏ２についてｍ／ｚ＝６４３．４［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ５．３９－５．４５ （ｍ， １Ｈ）， ４．４０－４．５４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２９－３．４８ （ｍ， ４Ｈ）， ３．０５－３．１９ （ｍ， ６Ｈ）， ２．９１－３．０２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．３４－２．４３ （ｍ， ２Ｈ）， １．８３－２．２０ （ｂｒ． ｍ， ９Ｈ）， ０．９２－１．８２ （ｂｒ． ｍ， ２６Ｈ）， １．０８ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９７ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８０－０．９３ （ｍ， ９Ｈ）， ０．７５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＬ．化合物ＳＡ３８：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）アミノ）－４－オキソブタノエート三塩酸塩
ステップ１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル９－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１４－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）－２，２－ジメチル－４，１５－ジオキソ－３－オキサ－５，９，１４－トリアザオクタデカン－１８－オエート
ｔｅｒｔ－ブチルＮ－｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝－Ｎ－［４－（｛３－［（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ］プロピル｝アミノ）ブチル］カルバメート（０．３４１ｇ、０．６７８ｍｍｏｌ）とヘミコハク酸コレステリル（０．３００ｇ、０．６１６ｍｍｏｌ）とのＤＣＭ（６．０ｍＬ）撹拌溶液に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．１７７ｇ、０．９２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＴＬＣによってモニタリングした。１８時間時点で、水（１０ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。この時間の経過後、層を分離した。水性物をＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を疎水性フリットに通し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～７０％ＥｔＯＡｃ）を介して精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル９－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１４－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）－２，２－ジメチル－４，１５－ジオキソ－３－オキサ－５，９，１４－トリアザオクタデカン－１８－オエート（３７１ｍｇ、０．３８２ｍｍｏｌ、６２．０％）を白色泡状物として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．３７分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ５６Ｈ９８Ｎ４Ｏ９についてｍ／ｚ＝９９４．２［Ｍ＋Ｎａ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ５．３１－５．４９ （ｍ， １Ｈ）， ５．２５ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．７４ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ４．５１－４．６７ （ｍ， １Ｈ）， ２．９５－３．５３ （ｂｒ． ｍ， １２Ｈ）， ２．５２－２．７１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２３－２．３８ （ｍ， ２Ｈ）， １．７３－２．０８ （ｂｒ． ｍ， ５Ｈ）， ０．９３－１．７２ （ｂｒ． ｍ， ２９Ｈ）， １．４６ （ｓ， ９Ｈ）， １．４４ （ｓ， ９Ｈ）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ）， １．０１ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）， ０．８６ （ｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）， ０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）アミノ）－４－オキソブタノエート三塩酸塩
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル９－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－１４－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）－２，２－ジメチル－４，１５－ジオキソ－３－オキサ－５，９，１４－トリアザオクタデカン－１８－オエート（３６３ｍｇ、０．３７４ｍｍｏｌ）のｉＰｒＯＨ（２．５ｍＬ）溶液に、ｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（０．７８ｍＬ）を添加した。反応混合物を４０℃で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。１６．５時間時点で、追加のｉＰｒＯＨ中の５～６Ｎ ＨＣｌ（０．２０ｍＬ）を添加して、反応混合物を室温で撹拌した。２２．５時間時点で、ＡＣＮ（７．５ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１０分間撹拌した。この時間の経過後、固体を真空濾過により収集し、ＡＣＮですすぎ、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル４－（（３－アミノプロピル）（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）アミノ）－４－オキソブタノエート三塩酸塩（０．２４０ｇ、０．２８５ｍｍｏｌ、７６．３％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．８４分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４１Ｈ７４Ｎ４Ｏ３についてｍ／ｚ＝６７１．９［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ）： δ ５．３５－５．４１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４６－４．５９ （ｍ， １Ｈ）， ３．３６－３．５８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．９９－３．１９ （ｍ， ６Ｈ）， ２．８６－２．９４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．５８－２．７５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２５－２．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９６－２．１９ （ｂｒ． ｍ， ３４Ｈ）， １．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８８ （ｍ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．７３ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＭ．化合物ＳＡ３９：Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）－３－（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ジスルファネイル）プロパンアミド三塩酸塩
ｔｅｒｔ－ブチル（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（４－（Ｎ－（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）－３－（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ジスルファネイル）プロパンアミド）ブチル）カルバメート（ＷＯ９８／５０４１７「Ｃａｔｉｏｎｉｃ Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａ Ｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅ Ｌｉｎｋｅｒ ｆｏｒ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｓ」に記載されているように調製）（０．４６０ｇ、０．４６４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９．２ｍＬ）撹拌溶液に、ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（０．８１ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌し、ＬＣＭＳによってモニタリングした。５時間時点で、反応混合物をＭＴＢＥで３５ｍＬに希釈し、次いで遠心分離した（５０００ＲＰＭ、３０分）。上清をデカントした。固体をヘプタンに懸濁させ、次いで濃縮して、Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－（４－（（３－アミノプロピル）アミノ）ブチル）－３－（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）ジスルファネイル）プロパンアミド三塩酸塩（０．２８８ｇ、０．３４７ｍｍｏｌ、７４．９％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝１．７８分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ４０Ｈ７４Ｎ４ＯＳ２についてｍ／ｚ＝６９１．２［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６）： δ ９．２０ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ９．１１ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）， ８．１０ （ｂｒ． ｓ， ４Ｈ）， ７．９４ （ｂｒ． ｓ， ２Ｈ）， ５．３０－５．４０ （ｍ， １Ｈ）， ３．２０－３．５１ （ｂｒ． ｍ， ６Ｈ）， ２．６１－３．０３ （ｂｒ． ｍ， １３Ｈ）， ２．２０－２．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９１－２．０７ （ｂｒ． ｍ， ２９Ｈ）， ０．９６ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８９ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ）， ０．８４ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＮ．化合物ＳＡ４０：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）カルバメート・塩酸塩
ステップ１：ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）プロパン－１，３－ジイルジカルバメート
クロロギ酸コレステリル（５ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（９０ｍＬ）撹拌溶液を、乾燥窒素下で０℃に冷却した。トリエチルアミン（３ｍＬ、２１．６ｍｍｏｌ）を添加した。Ｎ－Ｂｏｃ－１，３－ジアミノプロパン（２．３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を、１５分間かけて滴加した。得られた無色溶液を室温で一晩撹拌し、ＤＣＭで希釈し、５０％飽和ブラインで２回洗浄し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液で２回洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮して無色油状物としたところ、この油状物はゆっくりと凝固し始めた。これを、少量のＤＣＭ（約１０ｍＬ）で回旋させながら希釈して物質の大半を溶解させ、混合物を約１００ｍＬのヘキサンで希釈して白色沈殿物を得た。固体を微粉砕した。混合物を室温で６０分間激しく撹拌し、濾過した。濾過固体をヘキサンで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）プロパン－１，３－ジイルジカルバメート（５．４５ｇ、９．３ｍｍｏｌ、８６％）を白色固体として得た。物質は、更に精製することなく使用するのに十分な純度であった。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３．３７分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ６２Ｎ２Ｏ４についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５８７．２６。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３７ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ）；５．００ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；４．８４ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；４．４９ （ｍ， １Ｈ）；３．１９ （ｍ， ４Ｈ）；２．４３－２．２０ （ｍ， ２Ｈ）；２．１０－１．７４ （ｍ， ５Ｈ）；１．６９－１．３９ （ｍ， １８Ｈ）；１．３８－０．９４ （ｍ， １６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）カルバメート・塩酸塩
ｔｅｒｔ－ブチル（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）プロパン－１，３－ジイルジカルバメート（２ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２５ｍＬ）撹拌溶液に、ジエチルエーテル中のＨＣｌ ２Ｍ溶液（８．４ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応容器をきつく密封し、４０℃に加熱して、一晩撹拌した。ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかったため、混合物を窒素流中で濃縮した。白色残渣をジエチルエーテルでトリチュレートし、濾過した。濾過固体をジエチルエーテルで洗浄し、風乾させ、次いで真空下で乾燥させて、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）カルバメート・塩酸塩（１．６５ｇ、３．１２ｍｍｏｌ、９３％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．３５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３１Ｈ５４Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）４８７．１２。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ｐｐｍ ５．３８ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．３ Ｈｚ）；４．４０ （ｍ， １Ｈ）；３．２０ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ）；２．９６ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ）；２．３２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ）；２．１３－１．７２ （ｍ， ７Ｈ）；１．７１－１．２６ （ｍ， １１Ｈ）；１．２６－０．９８ （ｍ， １３Ｈ）；０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８８ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ０．８ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．７２ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＯ．化合物ＳＡ４１：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－グアニジノプロピル）カルバメート・塩酸塩
ステップ１：
（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－アミノプロピル）カルバメート・塩酸塩（ＳＡ４０、６００ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）とＮ１，Ｎ２－ビス－Ｂｏｃ－グアニジン－Ｎ３－トリフレート（４５０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）撹拌溶液に、トリエチルアミン（３３０μＬ、２．３２ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で９６時間撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。混合物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液で１回洗浄し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮し、無色油状物とした。これをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～３０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、生成物（５２１ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ、６２％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ １１．３９ （ｓ， １Ｈ）；８．４４ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．９８ （ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ３．２ Ｈｚ）；４．５０ （ｍ， １Ｈ）；３．５３ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ）；３．２０ （ｓ， ２Ｈ）；２．４３－２．１２０ （ｍ， ２Ｈ）；２．０８－１．６３ （ｍ， ７Ｈ）；１．６２－１．２２ （ｍ， ２９Ｈ）；１．２０－０．９５ （ｍ， １１Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ステップ２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－グアニジノプロピル）カルバメート・塩酸塩
ＳＡ４１を、ＳＡ２３と同様の方法でステップ１の生成物を使用して調製し、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－グアニジノプロピル）カルバメート・塩酸塩（４５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、１０％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．３８分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３２Ｈ５６Ｎ４Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５２９．３０。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ： ｐｐｍ ７．８８ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；６．９０ （ｔ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）；５．３９ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；４．３９ （ｍ， １Ｈ）；３．１８ （ｍ， ４Ｈ）；２．３１ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ）；２．１２－１．６８ （ｍ， ５Ｈ）；１．６６－１．２７ （ｍ， ９Ｈ）；１．２６－０．９７ （ｍ， １４Ｈ）；０．９５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８８ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ ０．８ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．７２ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＰ．化合物ＳＡ４２：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（ジイソプロピルアミノ）プロピル）カルバメート
３－（ジイソプロピルアミノ）プロピルアミン（１７５ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）撹拌溶液に、０℃の乾燥窒素下で、クロロギ酸コレステリル（５００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を、５分間にわたり滴加した。反応物を室温までゆっくりと加温し、２時間撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。溶液をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮し、淡黄色油状物とした。これをシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから１００％ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（８０：２０：１））により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（３－（ジイソプロピルアミノ）プロピル）カルバメート（３９２ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、６０％）を無色シロップ状物として得た。このシロップ状物は放置すると凝固した。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．５５分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３７Ｈ６６Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５７１．４８。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ６．００ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；４．４８ （ｍ， １Ｈ）；３．２３ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ）；３．０４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ）；２．５２ （ｓ， ２Ｈ）；２．４２－２．１６ （ｍ， ２Ｈ）；２．０７－１．７４ （ｍ， ５Ｈ）；１．７２－１．０６ （ｍ， ２２Ｈ）；１．０５－０．９４ （ｍ， １６Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．３ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
ＡＱ．化合物ＳＡ４３：（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジイソプロピルアミノ）エチル）カルバメート
３－（ジイソプロピルアミノ）エチルアミン（２１０μＬ、１．１５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）撹拌溶液に、０℃の乾燥窒素下で、クロロギ酸コレステリル（５００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５ｍＬ）溶液を、５分間にわたり滴加した。反応物を室温までゆっくりと加温し、２時間撹拌した。その後、ＬＣＭＳによる出発物質の残留はなかった。溶液をＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過した。濾液を濃縮し、淡黄色油状物とした。これをシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＤＣＭから２５％ＤＣＭ／７５％ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（８０：２０：１））により精製して、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル（２－（ジイソプロピルアミノ）エチル）カルバメート（３００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、４７％）を白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝２．６２分。ＭＳ（ＥＳ）：Ｃ３６Ｈ６４Ｎ２Ｏ２についてｍ／ｚ（ＭＨ＋）５５７．４２。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ５．３６ （ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ）；５．０６ （ｂｒ． ｓ， １Ｈ）；４．５０ （ｍ， １Ｈ）；３．１２ （ｑ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， １１．３ Ｈｚ）；２．９９ （ｍ， ２Ｈ）；２．５４ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）；２．４２－２．１７ （ｍ， ２Ｈ）；２．０７－１．７２ （ｍ， ５Ｈ）；１．６４－１．２５ （ｍ， １０Ｈ）；１．２４－１．０４ （ｍ， ８Ｈ）；１．０３－０．９４ （ｍ， １８Ｈ）；０．９１ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ）；０．８６ （ｄｄ， ６Ｈ， Ｊ ＝ １．２ Ｈｚ， ６．６ Ｈｚ）；０．６７ （ｓ， ３Ｈ）。
実施例１０
ヒト子宮頸癌上皮細胞（ＨｅＬａ）モデルにおけるタンパク質発現データ
ＮＰＩ－ＬｕｃをｍＲＮＡコンストラクトとして使用して、ＬＮＰを実施例２に従って調製した。ＮＰＩ－Ｌｕｃは、シグナル対ノイズ比を高めるために、Ｆｉｒｅｆｌｙ ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅのＮ末端に５ｘＶ５タグ及びＣ－ｍｙｃ核局在化配列を追加することによって作製された二重読み取りレポーターである。タンパク質発現は、発光読み取りを用いたＯｎｅＧＬｏアッセイを使用するか、または抗Ｖ５抗体を用いた免疫蛍光法によって検出することができる。タンパク質発現を実施例７に概説した手順に従って評価した。ＬＮＰを４つのウェルに投与し、平均応答を報告した。ＨｅＬａアッセイでは、発光読み取り値（ＲＬＵ）を細胞数に対して正規化した。結果を表１０ａに示す。
実施例１１
健常ＨＢＥ細胞におけるＬＮＰの細胞取り込み及びタンパク質発現データ
ＮＰＩ－ＬｕｃをｍＲＮＡコンストラクトとして使用して、ＬＮＰを実施例２に従って調製した。ＮＰＩ－Ｌｕｃは、シグナル対ノイズ比を高めるために、Ｆｉｒｅｆｌｙ ＬｕｃｉｆｅｒａｓｅのＮ末端に５ｘＶ５タグ及びＣ－ｍｙｃ核局在化配列を追加することによって作製された二重読み取りレポーターである。タンパク質発現は、発光読み取りを用いたＯｎｅＧＬｏアッセイを使用するか、または抗Ｖ５抗体を用いた免疫蛍光法によって検出することができる。ＬＮＰの細胞取り込み及びタンパク質発現を、実施例６に概説した手順に従って評価した。結果を表１１ａに示す。
実施例１２
ナノ粒子のゼータ電位
実施例２に従ってＬＮＰを調製した。ゼータ電位は、ＬＮＰを０．１×ＰＢＳで［ｍＲＮＡ］０．０１ｍｇ／ｍＬに希釈することにより、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（ＮａｎｏＺＳ）で測定した。結果を表１２ａに示す。
実施例１３
ｉｎ ｖｉｖｏ試験
投与手順Ａ：気管内ｍＲＮＡ送達
動物にイソフルランで麻酔をかける。舌をずらし、小径カニューレを気管（中咽頭経路）に挿入する。カニューレの先端は、声帯を通過させ、気管を下るようにし、先端が気管分岐部に非常に近くなるが、触れないようにする。留置したら、５０μＬ（マウス）または２００μＬ（ラット）の製剤を肺に注入する。３０秒間直立させた後、動物を回復ケージに放し、回復したらそれぞれのケージに戻す。
投与手順Ｂ：鼻部のみのエアロゾル曝露
振動メッシュ式ネブライザ及び所定の流入空気流量を使用して、エアロゾルを発生させる。エアロゾルは、曝露層に流入する前に、最初に混合チャンバを通過させることにより、げっ歯類の鼻部のみを対象とする流入曝露チャンバに導入する。動物を、各鼻部ポートで新鮮なエアロゾルに曝露させ、その後エアロゾルを系から排出する。
動物を、試験開始前の３日間にわたり、鼻部のみの投与コーンについて訓練させた。試験日に、動物を投与コーンに入れ、その後、投与コーンを、０．４、０．６、及び１．１ｍｐｋの肺への用量で１群あたり６０、１２０、または２４０分の指定の曝露時間にわたって、エアロゾル曝露チャンバに取り付けた。曝露全体を通して、動物を継続的にモニタリングし、続いて観察可能なあらゆる有害反応についてモニタリングした。到達した用量レベル及び呼吸可能なエアロゾル粒径の目標（ラットの場合は１～４μｍ）をそれぞれ評価するために、エアロゾル濃度（ｍＲＮＡ）及び空気力学的粒径分布を、各投与時の前後に投与ポートでモニタリングした。
試料収集及びアッセイ手順Ａ：組織診断用の組織収集
気管、肺、ならびにエアロゾル試験用の鼻腔、鼻咽頭、及び喉頭を、解析用に収集する。肺を１０％ＮＢＦ固定液で膨張させ、気管を結紮して膨張を維持する。肺は、気管、気管支、及び肺葉が付着した状態でまとめて摘出する。肺全体をまとめて、１０％ＮＢＦ中で少なくとも２４時間、最大４８時間室温で固定し、次いで固定液から取り出してＰＢＳに入れる。試料を、パラフィン５ミクロン切片及びＨ＆Ｅ染色用の処理のために直ちに送る。
エアロゾル試験では、気管及び肺に加えて、鼻腔、鼻咽頭、及び喉頭も収集した。
試料収集及びアッセイ手順Ｂ：免疫組織化学（ＩＨＣ）
Ｌｅｉｃａ Ｂｏｎｄ ＲＸオートステイナーを使用して、ＦＦＰＥ切片でＩＨＣを実施した。ＮＰＩ－Ｌｕｃタンパク質の発現を、１：１００希釈の抗Ｖ５タグ抗体によって検出した。Ｖ５抗体を、Ｂｏｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｒｅｆｉｎｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎキットで検出し、続いてヘマトキシリン及びブルーイング試薬対比染色を行った。Ｐａｎｏｒａｍｉｃ ２５０ Ｆｌａｓｈ ＩＩＩホールスライドスキャナを用いて、倍率２０倍で画像をイメージングした。Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓ ＨＡＬＯ画像解析ソフトウェアを用いて画像解析を完了させた。気管、肺、及び／または鼻腔の画像を解析して、気管上皮細胞、気管支上皮細胞、または鼻上皮細胞の全体を捕捉し、適切な場合に、動物１匹毎の全上皮細胞に対するＶ５陽性上皮細胞の％としてデータを示した。
気管内送達によるｍＲＮＡ－ＬＮＰの単回投与後のマウスにおけるＬＮＰタンパク質発現データ
ＮＰＩ－ＬｕｃをｍＲＮＡコンストラクトとして使用して、ＬＮＰを実施例２に従って調製した。ＬＮＰを、約０．７ｍｐｋの用量で気管内注入によりマウスに送達した。呼吸上皮におけるＬＮＰタンパク質の発現を、試料収集及びアッセイ手順Ａ及びＢに従って評価した。結果を表１３ａに示す。外表面に主に配置されたカチオン性剤を含むＬＮＰは、気管及び気管支において呼吸上皮タンパク質の陽性発現を示した。
気管内送達によるｍＲＮＡ－ＬＮＰの単回投与後のラットにおけるＬＮＰタンパク質発現データ
ＮＰＩ－ＬｕｃをｍＲＮＡコンストラクトとして使用して、ＬＮＰを実施例２に従って調製した。ＬＮＰを、約１．２ｍｐｋの用量で気管内注入によりラットに送達した。呼吸上皮におけるＬＮＰタンパク質の発現を、試料収集及びアッセイ手順Ａ及びＢに従って評価した。結果を表１３ｂに示す。外表面に主に配置されたカチオン性剤を含むＬＮＰは、気管及び気管支において呼吸上皮タンパク質の陽性発現を示した。
エアロゾル送達によるｍＲＮＡ－ＬＮＰの単回投与後のラットにおけるＬＮＰタンパク質発現データ
ＮＰＩ－ＬｕｃをｍＲＮＡコンストラクトとして使用して、ＬＮＰを実施例８に従って調製した。ＬＮＰを、鼻部のみのエアロゾル投与系を使用してエアロゾル送達によってラットに送達した。呼吸上皮におけるＬＮＰタンパク質の発現を、試料収集及びアッセイ手順Ａ及びＢに従って評価した。結果を表１３ｃに示す。鼻腔、気管、及び気管支の呼吸上皮は、ＬＮＰのエアロゾル送達後にタンパク質発現が陽性であった。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が優先する。

Claims (119)

  1. （ａ）脂質ナノ粒子コアと、
    （ｂ）細胞への送達のために前記コア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
    （ｃ）前記コアの外表面に主に配置されたカチオン性剤と、
    を含むナノ粒子であって、
    生理学的ｐＨで中性を超えるゼータ電位を有する、前記ナノ粒子。
  2. （ａ）以下：
    （ｉ）イオン化脂質、
    （ｉｉ）リン脂質、
    （ｉｉｉ）構造脂質、及び
    （ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
    を含む脂質ナノ粒子コアと、
    （ｂ）細胞への送達のために前記コア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
    （ｃ）カチオン性剤と、
    を含む、ナノ粒子。
  3. （ａ）脂質ナノ粒子コアと、
    （ｂ）細胞への送達のために前記コア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
    （ｃ）カチオン性剤と、
    を含むナノ粒子であって、
    上皮細胞中で少なくとも約２０％の細胞蓄積を示し、上皮細胞中で約５％以上の発現を示す、前記ナノ粒子。
  4. （ａ）脂質ナノ粒子コアと、
    （ｂ）細胞への送達のために前記コア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
    （ｃ）カチオン性剤と、
    を含むナノ粒子であって、
    前記ナノ粒子が、細胞中で約０．５％～５０％のタンパク質発現を示し、前記細胞が、ｉｎ ｖｉｖｏである、前記ナノ粒子。
  5. 前記カチオン性剤対ポリヌクレオチドペイロードの重量比が、約１：１～約４：１、約１．２５：１～約３．７５：１、約１．２５：１、約２．５：１、または約３．７５：１である、請求項１～４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  6. 前記ナノ粒子が、約５ｍＶ～約２０ｍＶ、約５ｍＶ～約２０ｍＶ、約５ｍＶ～約１５ｍＶ、または約５ｍＶ～約１０ｍＶのゼータ電位を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  7. 前記脂質ナノ粒子コアが、中性ｐＨで中性電荷を有する、請求項１～６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  8. 前記カチオン性剤の約８０％超、９０％超、９５％超、または９５％超が、前記ナノ粒子の表面にある、請求項１～７のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  9. 前記ポリヌクレオチドペイロードまたは前記ポリペプチドペイロードの少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％が、前記コア内に封入されている、請求項１～８のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  10. 前記ナノ粒子が、約０．４未満、約０．３未満、または約０．２未満の多分散値を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  11. 前記ナノ粒子が、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１００ｎｍ、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１００ｎｍ、または約６０ｎｍ～約８０ｎｍの平均直径を有する、請求項１～１０のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  12. 前記ナノ粒子のラウルダンの一般分極（ＧＰＬ）が、約０．６以上である、請求項１～１１のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  13. 前記ナノ粒子が、約６ｎｍ超または約７ｎｍ超のｄ間隔を有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  14. 前記ナノ粒子の少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％が、閾値分極レベルより大きい表面流動性値を有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  15. 前記ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞集団の約１０％以上、約１５％以上、または約２０％以上が前記ナノ粒子を蓄積している、請求項１～１４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  16. 前記ナノ粒子が細胞集団と接触した場合、細胞の約５％以上または約１０％以上が前記ポリヌクレオチドまたは前記ポリペプチドを発現する、請求項１～１５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  17. 前記細胞集団が、上皮細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  18. 前記細胞集団が、呼吸上皮細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  19. 前記細胞集団が、鼻細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  20. 前記細胞集団が、肺胞上皮細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  21. 前記細胞集団が、肺細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  22. 前記細胞集団が、気管支上皮細胞集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  23. 前記細胞集団が、ＨＢＥ集団である、請求項１～１６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  24. 前記カチオン性剤が、アルコール中で約１ｍｇ／ｍＬ超、約５ｍｇ／ｍＬ超、約１０ｍｇ／ｍＬ超、または約２０ｍｇ／ｍＬ超の溶解度を有する、請求項１～２３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  25. 前記アルコールが、Ｃ１～６アルコールである、請求項２４に記載のナノ粒子。
  26. 前記アルコールが、エタノールである、請求項２５に記載のナノ粒子。
  27. 前記カチオン性剤が、カチオン性脂質である、請求項１～２６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  28. 前記カチオン性脂質が、水溶性の両親媒性分子である、請求項２７に記載のナノ粒子。
  29. 前記両親媒性分子が、脂質部分及び親水性部分を含む、請求項２８に記載のナノ粒子。
  30. 前記脂質部分が、構造脂質、脂肪酸、またはヒドロカルビル基を含む、請求項２９に記載のナノ粒子。
  31. 前記カチオン性脂質が、疎水性部分と親水性部分とを含むステロールアミンである、請求項２７に記載のナノ粒子。
  32. 前記親水性部分が、１～４つの第一級、第二級、もしくは第三級アミンまたはそれらの混合物を含むアミン基を含む、請求項３１に記載のナノ粒子。
  33. 前記アミン基が、１つまたは２つの末端第一級アミンを含む、請求項３２に記載のナノ粒子。
  34. 前記アミン基が、１つまたは２つの末端第一級アミン及び１つの内部第二級アミンを含む、請求項３２に記載のナノ粒子。
  35. 前記アミン基が、１つまたは２つの第三級アミンを含む、請求項３２に記載のナノ粒子。
  36. 前記アミン基が、約８超のｐＫａ値を有する、請求項３２～３５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  37. 前記アミン基が、約９超のｐＫａ値を有する、請求項３２～３５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  38. 前記ステロールアミンが、式（Ａ１）：
    Ａ－Ｌ－Ｂ（Ａ１）
    の化合物またはその塩であり、式中：
    Ａはアミン基であり、Ｌは任意選択のリンカーであり、Ｂはステロールである、請求項３１～３７のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  39. 前記ステロールアミンが、式Ａ２ａ：
    またはその塩を有し、式中：
    は、単結合または二重結合であり、
    Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルまたはＣ１～１４アルケニルであり；
    Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
    の基であり；
    Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、－ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、－ＮＨ－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－ＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から独立して選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
    ｎは１または２である、
    請求項３１～３８に記載のナノ粒子。
  40. が、二重結合である、請求項３９に記載のナノ粒子。
  41. が、単結合である、請求項３９に記載のナノ粒子。
  42. Ｌａが、－ＯＣ（＝Ｏ）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、または－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－である、請求項３９または４０に記載のナノ粒子。
  43. ｎが１である、請求項３９～４２のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  44. ｎが２である、請求項３９～４２のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  45. Ｒ１が、Ｃ１～１４アルキルである、請求項３９～４４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  46. Ｒ１が、Ｃ１～１４アルケニルである、請求項３９～４４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  47. Ｒ１が、
    である、請求項３９～４４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  48. Ｙ１が、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ＯＨ、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、またはＮＨ２でそれぞれ任意選択的に置換されている、
    請求項３９～４７のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  49. Ｙ１が、
    から選択される、請求項３９～４７のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  50. 前記ステロールアミンが、式Ａ４：
    またはその塩を有し、式中：
    Ｚ１は、ＯＨまたはＣ３～６アルキルであり；
    Ｌは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－であり；
    Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、－ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、－ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－ＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
    ｎは１または２である、
    請求項３１～３８のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  51. Ｚ１が、ＯＨである、請求項５０に記載のナノ粒子。
  52. Ｚ１が、Ｃ３～６アルキルである、請求項５０に記載のナノ粒子。
  53. Ｌが、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、または－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－である、請求項５０～５２のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  54. Ｙ１が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１０アルキルである、請求項５０～５３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  55. Ｙ１が、
    である、請求項５０～５３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  56. ｎが１である、請求項５０～５５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  57. ｎが２である、請求項５０～５５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  58. 前記ステロールアミンが、




    またはその塩から選択される、請求項３８に記載のナノ粒子。
  59. カチオン性剤が、非脂質カチオン性剤である、請求項１～３８のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  60. 前記非脂質カチオン性剤が、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジウム、Ｌ－リジン一水和物、またはトロメタミンである、請求項５９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  61. 前記カチオン性剤が、修飾アルギニンである、請求項１～２６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  62. 前記ナノ粒子が、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％または約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化脂質を含む、請求項１～６１のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  63. イオン化脂質が、化合物１８：
    またはその塩である、請求項１～６１のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  64. 前記ナノ粒子が、約５ｍｏｌ％～約１５ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％～約１３ｍｏｌ％、または約１０ｍｏｌ％～約１２ｍｏｌ％のリン脂質を含む、請求項１～６３のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  65. 前記リン脂質が、１，２ジステアロイルｓｎグリセロ３ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、請求項１～６４のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  66. 前記ナノ粒子が、約２０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％の構造脂質を含む、請求項１～６５のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  67. 前記構造脂質が、ステロイド、ジテルペノイド、トリテルペノイド、コレスタン、及びウルソール酸、またはそれらの誘導体から選択される、請求項１～６６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  68. 前記構造脂質が、コレステロール及びフィストステロールから選択される、請求項１～６６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  69. 前記構造脂質が、コレステロールまたは以下の構造：
    を有する化合物である、請求項１～６６のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  70. 前記ＰＥＧ－脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物から選択される、請求項１～６９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  71. 前記ＰＥＧ－脂質が、ＰＥＧ－ＤＭＧである、請求項１～６９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  72. 前記ＰＥＧ－脂質が、ＤＭＧ－ＰＥＧ ２ｋである、請求項１～６９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  73. 前記ＰＥＧ－脂質が、化合物４２８である、請求項１～６９のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  74. 前記ナノ粒子が、約１ｍｏｌ％～約５ｍｏｌ％のＰＥＧ－脂質、または約１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ－脂質を含む、請求項１～７１のいずれか１項に記載のナノ粒子。
  75. 請求項１～７４のいずれか１項に記載のナノ粒子を含む、細胞。
  76. 前記細胞が、上皮細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  77. 前記細胞が、呼吸上皮細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  78. 前記細胞が、鼻細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  79. 前記細胞が、肺胞上皮細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  80. 前記細胞が、肺細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  81. 前記細胞が、気管支上皮細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  82. 前記細胞が、ヒト気管支上皮（ＨＢＥ）細胞である、請求項７５に記載の細胞。
  83. 請求項１～７４のいずれか１項に記載のナノ粒子を含む、医薬組成物。
  84. 前記組成物が、液体形態である、請求項８３に記載の医薬組成物。
  85. 前記組成物が、吸入に適している、請求項８３に記載の医薬組成物。
  86. 脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることを含む、ナノ粒子を調製するプロセスであって、前記脂質ナノ粒子が、
    （ａ）以下：
    （ｉ）イオン化脂質、
    （ｉｉ）リン脂質、
    （ｉｉｉ）構造脂質、及び
    （ｉｖ）ＰＥＧ－脂質
    を含む脂質ナノ粒子コアと、
    （ｂ）細胞への送達のために前記コア内に封入されたポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードと、
    を含む、前記プロセス。
  87. 前記脂質ナノ粒子をカチオン性剤と接触させることが、前記カチオン性剤を非イオン性賦形剤に溶解させることを含む、請求項８６に記載のプロセス。
  88. 前記非イオン性賦形剤が、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート（ＨＳ １５）である、請求項８７に記載のプロセス。
  89. 前記カチオン性剤が、ステロールアミンである、請求項８６～８８のいずれか１項に記載のプロセス。
  90. 前記ステロールアミンが、ＧＬ－６７：
    またはその塩である、請求項８９に記載のプロセス。
  91. 請求項８６～９０のいずれか１項に記載のプロセスによって調製された、ナノ粒子。
  92. ポリヌクレオチドペイロードまたはポリペプチドペイロードを細胞に送達する方法であって、前記細胞を請求項１～７４及び９１のいずれか１項に記載のナノ粒子と接触させることを含む、前記方法。
  93. 患者の疾患を処置するまたは予防する方法であって、前記疾患の処置または予防のためのペイロードを含む、請求項１～７４及び９１のいずれか１項に記載のナノ粒子または請求項８３～８５のいずれか１項に記載の組成物を、前記患者に投与することを含む、前記方法。
  94. 前記疾患が、嚢胞性線維症である、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記ナノ粒子または前記組成物が、鼻腔内投与、気管支内投与、または経肺投与によって投与される、請求項９３または９４に記載の方法。
  96. 前記ナノ粒子または前記組成物が、ネブライザまたは吸入器によって投与される、請求項９５に記載の方法。
  97. 式Ａ２ａ：
    の化合物またはその塩（式中：
    は、単結合または二重結合であり、
    Ｒ１は、Ｃ１～１４アルキルまたはＣ１～１４アルケニルであり；
    Ｌａは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－、または式（ａ）：
    の基であり；
    Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、－ＮＨ－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－ＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から独立して選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
    ｎは１または２であり、
    但し、前記式Ａ２ａの化合物は、
    以外である）。
  98. が、二重結合である、請求項９７に記載の化合物、またはその塩。
  99. が、単結合である、請求項９７に記載の化合物、またはその塩。
  100. Ｌａが、－ＯＣ（＝Ｏ）、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、もしくは－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－である、請求項９７～９９のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  101. ｎが１である、請求項９７～１００のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  102. ｎが２である、請求項９７～１００のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  103. Ｒ１が、Ｃ１～１４アルキルである、請求項９７～１０２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  104. Ｒ１が、Ｃ１～１４アルケニルである、請求項９７～１０２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  105. Ｒ１が、
    である、請求項９７～１０２のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  106. Ｙ１が、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及びＣ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ＯＨ、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、またはＮＨ２でそれぞれ任意選択的に置換されている、請求項９７～１０５のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその塩。
  107. Ｙ１が、
    である、請求項９７～１０５のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  108. 式Ａ４：
    の化合物またはその塩（式中：
    Ｚ１は、ＯＨまたはＣ３～６アルキルであり；
    Ｌは、存在しないか、－Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、－ＯＣ（＝Ｏ）、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（＝Ｏ）－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２、または－ＳＳ－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｃ（Ｏ）Ｎ－であり；
    Ｙ１は、Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、または－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）であり、
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含み；
    前記Ｃ１～１０アルキル、３～８員ヘテロシクロアルキル、５～６員ヘテロアリール、－Ｃ１～６アルキル－（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－Ｃ１～６アルキル－（５～６員ヘテロアリール）が、Ｃ１～６アルキル、ハロ、ＯＨ、－Ｏ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｃ１～６アルキル－ＯＨ、ＮＨ２、－ＮＨ（Ｃ１～６アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～６アルキル）２、３～８員ヘテロシクロアルキル（１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１４アルキルで任意選択的に置換されている）、５～６員ヘテロアリール、－ＮＨ（３～８員ヘテロシクロアルキル）、及び－ＮＨ（５～６員ヘテロアリール）から選択される１、２、３、または４つの置換基でそれぞれ任意選択的に置換されており；
    ｎは１または２である）。
  109. Ｚ１がＯＨである、請求項１０８に記載の化合物、またはその塩。
  110. Ｚ１がＣ３～６アルキルである、請求項１０８に記載の化合物、またはその塩。
  111. Ｌが、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ－、－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－、もしくは－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－である、請求項１０８～１１０のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  112. Ｙ１が、１～５つの第一級、第二級、もしくは第三級アミン、またはそれらの組み合わせを含むＣ１～１０アルキルである、請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載の化合物、あるいはその塩。
  113. Ｙ１が、
    である、請求項１０８～１１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  114. ｎが１である、請求項１０８～１１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  115. ｎが２である、請求項１０８～１１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその塩。
  116. 以下から選択される化合物、またはその塩。



  117. 請求項９７～１１６のいずれか１項に記載の化合物またはその塩と、薬学的に許容される担体と、を含む、組成物。
  118. 前記薬学的に許容される担体が、非イオン性賦形剤である、請求項１１７に記載の組成物。
  119. 前記非イオン性賦形剤が、ＨＳ１５である、請求項１１８に記載の組成物。
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