KR20220133957A - 지질 나노입자의 제조 방법 - Google Patents

지질 나노입자의 제조 방법 Download PDF

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KR20220133957A
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마이크 스미스
제이슨 아우어
브리 스키너
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모더나티엑스, 인크.
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Abstract

본 개시는 지질 나노입자(LNP) 제형물의 제조 방법 및 제조된 이의 LNP 제형물을 제공한다. 본 개시는 또한 제조된 LNP 제형물에 관련된 치료 및 진단 용도를 제공한다.

Description

지질 나노입자의 제조 방법
관련 출원
본 출원은 2020년 1월 31일에 출원된 미국 가출원 번호 62/968,337에 대한 우선권 및 이익을 주장하며, 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
개시 분야
본 개시는 핵산 지질 나노입자(LNP)의 신규한 제조 방법, 제조된 이의 제형물, 및 관련 치료 및/또는 진단 용도, 예를 들어 핵산과 같은 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 전달하고/하거나 포유류 세포 또는 기관에서 폴리펩티드를 제조하기 위해 핵산 지질 나노입자가 관여되는 방법을 제공한다.
소분자 약물, 단백질 및 핵산과 같은 생물학적 활성 물질의 효과적인 표적화된 전달은 의학적 어려움을 계속 나타낸다. 특히, 핵산의 세포로의 전달은 이러한 종의 상대적인 불안정성과 낮은 세포 투과성으로 인해 어렵게 된다. 따라서, 세포에 핵산과 같은 치료제 및 예방제의 세포로의 전달을 용이하게 하는 방법 및 조성물을 개발할 필요성이 존재한다.
지질 함유 나노입자 또는 지질 나노입자, 리포좀 및 리포플렉스는 소분자 약물, 단백질 및 핵산과 같은 생물학적 활성 물질에 대한 세포 및/또는 세포내 구획으로의 수송 비히클로서 효과적인 것으로 증명되었다. 다양한 이러한 지질 함유 나노 입자가 실증되었지만 안전성, 유효성 및 특이성의 개선은 여전히 부족하다.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계를 포함하는, 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 제조하는 방법을 제공하며, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계를 포함하는, 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 혼합 단계는 이온화 가능 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 제공하며, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 핵산과 연합된 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 핵산과 연합된 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계; 및
ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 핵산을 포함하는 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 핵산을 포함하는 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계; 및
ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 치료제를 포함하는 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
ii) 치료제를 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 다음 단계를 포함하는, 치료제를 포함하는 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계; 및
ii) 치료제를 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
일부 구현예에서, 로딩 단계는 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시의 방법은 다음 단계를 추가로 포함한다:
iii) 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하여 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 형성하는 단계.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 방법에 의해 제조된 빈 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 방법에 의해 제조된 빈 LNP 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 방법에 의해 제조된 로딩 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 방법에 의해 제조된 로딩 LNP 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하고, LNP는 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없고, 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하고, LNP는 실질적으로 핵산이 없고, 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하고, LNP에는 치료제 또는 예방제를 함유하지 않고, 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시는 본 개시의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하고, LNP는 핵산을 함유하지 않고, 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하며, 여기서
(a) LNP는 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP에는 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없고;
(c) 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하며, 여기서
(a) LNP는 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP에는 핵산이 실질적으로 없고;
(c) 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하며, 여기서
(a) LNP는 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP는 치료제 또는 예방제를 함유하지 않고;
(c) 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 제공하며, 여기서
(a) LNP는 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP는 핵산을 함유하지 않고;
(c) 조제물은 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 로딩 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 로딩 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 LNP 제형물을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 LNP 제형물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 로딩 LNP의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 로딩 LNP 용액의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트를 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 개시는 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액을 포함하는 약학 키트를 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 개시는 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 로딩 LNP를 포함하는 약제를 포함하는 약학 키트를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 포함하는 약제를 포함하는 약학 키트를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 빈 LNP 및 핵산 용액을 포함하는 약학 키트를 제공한다. 일부 양태에서, 본 개시는 빈 LNP 용액 및 핵산 용액을 포함하는 약학 키트를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 다음을 포함하는 약학 키트를 제공한다:
(a) 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 제1 용기; 및
(b) 치료제 또는 예방제를 포함하는 용액을 포함하는 제2 용기.
일부 양태에서, 본 개시는 다음을 포함하는 약학 키트를 제공한다:
(a) 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 제1 용기;
(b) 치료제 또는 예방제를 포함하는 용액을 포함하는 제2 용기; 및
(c) 제1 용기 및 제2 용기의 내용물을 조합(예를 들어, 혼합)하기 위한 지침.
일부 구현예에서, 제1 용기는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백이다. 일부 구현예에서, 제2 용기는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백이다. 일부 구현예에서 제3 용기는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본 개시의 빈 LNP를 포함하는 용기를 제공한다. 일부 구현예에서, 용기는 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 개시의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 아래에 기재되어 있다. 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 그 전체가 참조로 포함된다. 상충하는 경우 정의를 포함한 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 물질, 방법 및 예는 예시일 뿐이며 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 개시의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
특허 또는 출원 파일은 컬러로 수행된 적어도 하나의 도면을 포함한다. 컬러 도면(들)이 포함된 이 특허 또는 특허 출원 공보의 사본은 요청 및 필요한 수수료 지불 시 특허청에서 제공될 것이다.
도 1은 PEG 첨가 몰%의 함수로서 로딩 LNP의 지름 변화를 실증하는 그래프이다.
도 2는 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액의 일반적인 제조 공정을 예시하는 도면이다.
도 3은 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액으로부터의 LNP 제형물의 일반적인 공정을 예시하는 도면이다.
도 4는 LNP 제형물의 일반적인 제조 공정을 예시하는 도면이다.
본 개시는 부분적으로, 본원에 개시된 바와 같은 지질 나노입자(LNP) 또는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 제조하는 방법이 지질 나노입자 내의 특정 성분의 분포에 영향을 미치고/미치거나 지시할 수 있으며, 이러한 분포가 지질 나노입자의 물리적(예를 들어, 안정성) 및/또는 생물학적(예를 들어, 유효성, 세포내 전달, 면역원성) 특성에 영향을 미치고/미치거나 지시할 수 있다는 발견에 기초한다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 제조된 지질 나노입자(LNP) 또는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)로부터 요망되지 않는 특성 변화를 완화한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 또는 LNP 제형물과 비교하여 제조된 지질 나노입자(LNP) 또는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)로부터의 요망되지 않는 특성 변화를 완화한다.
일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물) 또는 지질 나노입자(LNP)에 대한 스트레스에 의해 유도된다. 일부 구현예에서, 스트레스는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물) 또는 지질 나노입자를 제조, 정제, 포장, 보관, 수송 및/또는 사용하는 동안 유도된다. 일부 구현예에서, 스트레스는 열, 전단, 과도한 진탕, 막 농도 분극화(충전 상태의 변화), 탈수, 냉동 스트레스, 건조 스트레스, 동결/해동 스트레스, 및/또는 분무화 스트레스이다. 일부 구현예에서, 스트레스는 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물) 또는 지질 나노입자(LNP)를 보관하는 동안 유도된다.
일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 LNP 제형물의 물리적 안정성의 감소이다. 일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 불순물 및/또는 육안으로 확인되지 않는 입자의 양 증가, 또는 LNP 제형물에서 LNP의 평균 크기 증가이다.
일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 LNP 제형물의 화학적 안정성의 감소이다. 일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 LNP 제형물에서 핵산(예를 들어, RNA(예를 들어, mRNA))의 온전성 감소이다.
일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 LNP 제형물의 생물학적 특성의 감소이다. 일부 구현예에서, 요망되지 않는 특성 변화는 LNP 제형물의 유효성, 세포내 전달 및/또는 면역원성의 감소이다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물에 비해 더 안정하다(예를 들어, 경시적으로 LNP의 평균 크기 증가를 경험하지 않음).
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP는 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 평균 LNP 지름에 비해 제조된 약 99% 이하, 약 98% 이하, 약 97% 이하, 약 96% 이하, 약 95% 이하, 약 90% 이하, 약 85% 이하, 약 80% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하, 또는 약 10% 이하의 평균 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 지질 나노입자(LNP)는 약 15 nm 내지 약 150 nm, 약 20 nm 내지 약 125 nm, 약 25 nm 내지 약 100 nm, 약 30 nm 내지 약 80 nm, 약 35 nm 내지 약 70 nm, 약 40 nm 내지 약 60 nm, 또는 약 45 nm 내지 약 50 nm의 평균 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 빈 LNP는 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 빈 LNP 제형물의 평균 지름에 비해 약 99% 이하, 약 98% 이하, 약 97% 이하, 약 96% 이하, 약 95% 이하, 약 90% 이하, 약 85% 이하, 약 80% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하, 또는 약 10% 이하의 평균 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 빈 LNP는 약 15 nm 내지 약 150 nm, 약 20 nm 내지 약 125 nm, 약 25 nm 내지 약 100 nm, 약 30 nm 내지 약 80 nm, 약 35 nm 내지 약 70 nm, 약 40 nm 내지 약 60 nm, 또는 약 45 nm 내지 약 50 nm의 평균 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성보다 높은 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성보다 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 15% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 또는 약 90% 이상 높은 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법에 의해 제조된 LNP 제형물의 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성보다 약 1배 이상, 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 30배 이상, 약 40배 이상, 약 50배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 약 300배 이상, 약 400배 이상, 약 500배 이상, 약 1000배 이상, 약 2000배 이상, 약 3000배 이상, 약 4000배 이상, 약 5000배 이상, 또는 약 10000배 이상 높은 유효성, 세포내 전달, 및/또는 면역원성을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 15% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 또는 약 90% 이상 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 약 1배 이상, 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 30배 이상, 약 40배 이상, 약 50배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 약 300배 이상, 약 400배 이상, 약 500배 이상, 약 1000배 이상, 약 2000배 이상, 약 3000배 이상, 약 4000배 이상, 약 5000배 이상, 또는 약 10000배 이상 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다.
본 발명은 신규한 "병상" 및/또는 "진료 현장" 제형물을 특징으로 하며, 이에 의해 mRNA는 더 이른 시점에 제조되고 이의 제조 시점에 치료제를 포함하지 않는 소포(예를 들어, 빈 LNP) 내에 캡슐화된다. 이러한 제조 방식은 임상 환경에서 mRNA와 조합하기 전에 이러한 소포(예를 들어, 빈 LNP)가 별도로 제조 및 보관될 수 있기 때문에, 임상 공급의 맥락에서 이점을 제공한다. 구체적으로, 각 성분에 대해 별도로 최적화된 조건에서 mRNA 및 빈 원료(예를 들어, 빈 LNP)가 보관될 수 있으므로, 병상 제형물은 안정성 증가를 촉진할 수 있다. 예를 들어, mRNA는 빈 LNP와 다른 조건에서 보관될 수 있다. LNP 제조가 화물과 독립적으로 일어나기 때문에 공정 복잡성 및 상품 비용이 감소될 수 있어서, 다중 mRNA 또는 활성 제제 작제물에 대한 플랫폼 접근을 가능하게 한다. 치료제(예를 들어, mRNA)를 미리 형성된 나노입자("빈 LNP") 내로 캡슐화하여 치료제를 포함하는 LNP(즉, "로딩 LNP")를 제공하는 원리는 본원에서 "사후 로딩(PHL)", "사후 첨가" 또는 "사후"로 나타낸다.
본 개시는 부분적으로 사후 로딩의 기본 원리를 탐구하고 빈 LNP 생성 후 시간 척도에서 mRNA 캡슐화(즉, 로딩 LNP의 형성)의 영향 및 조건을 조사하는 노력에 기초한다. 지질 침전 후 mRNA 첨가 시간은 로딩 LNP의 물리화학적 특성(예를 들어, 입자 크기, 캡슐화, 형태 및/또는 구조적 온전성)에 해로운 영향을 미치지 않으면서 최대 일곱 단위 크기(예를 들어, 1 ms 내지 10,000,000 ms)만큼 다양했다. 올리고뉴클레오티드는 종종 초기 입자 조립 단계에 참여하는 것으로 설명된다. 경험적 실험의 결과는 mRNA 캡슐화가 로딩 LNP의 물리화학적 특성에 해로운 영향을 미치지 않고, 지질 침전/입자 형성 후 상당히 오랜 시기에 발생할 수 있음을 제시한다. 이들 실험은 지질 입자 형성 및 후속 mRNA 캡슐화가 2개의 반응 단계로 분리될 수 있음을 실증하였다. 본원에 기재된 사후 로딩의 개념은 각 단계의 제어 및/또는 최적화를 별도로 가능하게 할 수 있다. 추가로, 사후 로딩은 로딩 LNP의 진료 현장 형성을 허용하는 시간 척도(예를 들어, 빈 LNP 제조 후 몇 시간, 며칠, 몇 달 또는 몇 년)로 mRNA 첨가를 가능하게 할 수 있다.
역사적으로, 임상 공급에 적절한 규모로 미리 형성된 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 제조하는 공정은 개발되지 않았다. 본 개시는 부분적으로 지질 농도, PEG-지질 또는 중합체성 지질 양, 온도, 완충액 조성(예를 들어, 이온 강도, pH, 짝이온) 및 에탄올 함량을 포함하지만 이에 제한되지 않는 규모화된 제조를 위해 유리한 여러 공정 파라미터를 확인하려는 노력에 기초한다.
본 개시는 부분적으로, 본원에 개시된 바와 같은 지질 나노입자(LNP) 또는 지질 나노입자(LNP) 제형물을 제조하는 방법이 지질 나노입자 내의 특정 성분의 분포에 영향을 미치고/미치거나 지시할 수 있고, 이 분포가 지질 나노입자의 물리적(예를 들어, 안정성) 및/또는 생물학적(예를 들어, 유효성, 세포내 전달, 면역원성) 특성에 영향을 미치고/미치거나 지시할 수 있다는 발견에 기초한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 유리한 성분 분포를 갖는 지질 나노입자를 포함하는 조성물을 산출한다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 개시의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 개시의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법(예를 들어, 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 발명의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 약 5% 이상, 약 10% 이상, 15% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 또는 약 90% 이상 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 개시의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물은 상이한 방법에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 약 1배 이상, 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 30배 이상, 약 40배 이상, 약 50배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 약 300배 이상, 약 400배 이상, 약 500배 이상, 약 1000배 이상, 약 2000배 이상, 약 3000배 이상, 약 4000배 이상, 약 5000배 이상, 또는 약 10000배 이상 높은 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)을 나타낸다.
본 개시의 방법
본 개시는 i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계를 포함하는, 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 제조하는 방법을 제공하며, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질 또는 다른 중합체성 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 혼합 단계는 이온화 가능 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계를 포함하는, 핵산과 연합된 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법을 제공한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 로딩 단계는 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액은 유지 또는 보관 없이 로딩 단계를 거친다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액은 일정 시기 동안 유지 후 로딩 단계를 거친다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액은 약 1분, 약 2분, 약 3분, 약 4분, 약 5분, 약 10분, 약 20분, 약 30분, 약 40분, 약 50분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 18시간, 또는 약 24시간 동안 유지 후 로딩 단계를 거친다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액은 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10시간, 약 11시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 1년, 약 2년, 약 3년, 약 4년, 또는 약 5년 동안 보관 후 로딩 단계를 거친다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 형성 시, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액은 일정 시기 동안 보관 또는 유지 없이 로딩 단계를 거친다.
일부 양태에서, 본 개시의 방법은 iii) 로딩 LNP 용액을 가공하여 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
다른 제조 기법(예를 들어, 박막 재수화/압출)과 대조적으로, 에탄올 적가 침전은 핵산 지질 나노입자를 제조하기 위한 산업 표준이었다. 침전 반응은 연속적 성질, 확장성 및 채택 용이성으로 인해 선호된다. 이러한 공정은 일반적으로 제어 가능한 방식으로 지질(에탄올 중)을 적절한 항-용매(즉, 물)에 도입하기 위해 고에너지 혼합기(예를 들어, T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기, 볼텍스 혼합기)를 사용하여, 액체 과포화 및 지질 입자로의 자발적 침전을 유도한다. 일부 구현예에서, 사용된 볼텍스 혼합기는 미국 특허 출원 번호 62/799,636 및 62/886,592에 기재된 것들이며, 이들은 전체가 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 사용된 미세유체 혼합기는 PCT 출원 번호 WO/2014/172045에 기재된 것들이며, 이는 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 혼합 단계는 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행된다.
일부 구현예에서, 로딩 단계는 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행된다.
본 개시의 일부 구현예에서, 혼합 단계는 약 30℃ 미만, 약 28℃ 미만, 약 26℃ 미만, 약 25℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 또는 약 20℃ 미만의 온도에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 로딩 단계는 약 30℃ 미만, 약 28℃ 미만, 약 26℃ 미만, 약 25℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 또는 약 20℃ 미만의 온도에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제1 첨가 단계를 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제2 첨가 단계를 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 빈 LNP에 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 로딩 LNP에 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 약 1.75몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 빈 LNP에 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 로딩 LNP에 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 약 1.0몰% PEG 지질을 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 약 30℃ 미만, 약 28℃ 미만, 약 26℃ 미만, 약 25℃ 미만, 약 24℃, 약 22℃ 미만, 또는 약 20℃ 미만의 온도에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 약 30℃ 미만, 약 28℃ 미만, 약 26℃ 미만, 약 25℃ 미만, 약 24℃, 약 22℃ 미만, 또는 약 20℃ 미만의 온도에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 여과, pH 조정, 완충액 교환, 희석, 투석, 농축, 냉동, 동결건조, 보관, 및 포장으로부터 선택되는 적어도 하나의 단계를 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 pH 조정을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, pH 조정은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는 제2 완충제를 첨가하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 pH 조정 전에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 pH 조정 후에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 pH 조정 전에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 pH 조정 후에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 여과를 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 여과는 접선 유동 여과(TFF)이다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 여과는 LNP 용액으로부터 유기 용매(예를 들어, 에탄올과 같은 알코올)를 제거한다. 일부 구현예에서, 유기 용매(예를 들어, 에탄올과 같은 알코올)의 제거 시, LNP 용액은 중성 pH, 예를 들어 pH 6.5 내지 7.8, pH 6.8 내지 pH 7.5, 바람직하게는 pH 7.0 내지 pH 7.2에서 완충된 용액으로 전환된다(예를 들어, 포스페이트 완충액 또는 HEPES 완충액을 첨가함으로써). 일부 구현예에서, LNP 용액은 약 7.0 내지 약 7.2의 pH에서 완충된 용액으로 전환된다. 일부 구현예에서, 제조된 LNP 용액은 예를 들어 여과에 의해(예를 들어, 0.1 μm~0.5 μm 필터를 통해), 보관 또는 사용 전에 멸균된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 완충액 교환을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 완충액 교환은 제3 완충제를 포함하는 완충 수용액의 첨가를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 완충액 교환 전에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제1 첨가 단계는 완충액 교환 후에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가는 완충액 교환 전에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 제2 첨가 단계는 완충액 교환 후에 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 희석하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 투석하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 농축하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 냉동하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 동결건조하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 동결건조는 로딩 LNP 용액을 약 -100℃ 내지 약 0℃, 약 -80℃ 내지 약 -10℃, 약 -60℃ 내지 약 -20℃, 약 -50℃ 내지 약 -25℃, 또는 약 -40℃ 내지 약 -30℃의 온도에서 냉동하는 것을 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 동결건조는 냉동된 로딩 LNP 용액을 건조하여 동결건조된 빈 LNP 또는 동결건조된 로딩 LNP를 형성하는 것을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 건조는 약 50 mTorr 내지 약 150 mTorr 범위의 진공에서 수행된다.
일부 구현예에서, 건조는 약 -35℃ 내지 약 -15℃에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 건조는 약 25℃에서 수행된다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 보관하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계는 포장을 추가로 포함한다.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 포장하는 단계는 다음 단계 중 하나 이상을 포함한다:
iib) 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 동결보호제를 첨가하는 단계;
iic) 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 동결건조하여 동결건조된 LNP 조성물을 형성하는 단계;
iid) 동결건조된 LNP 조성물의 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 보관하는 단계; 및/또는
iie) 빈 LNP 용액, 로딩 LNP 용액 또는 동결건조된 LNP 조성물에 완충 용액을 첨가하여 LNP 제형물을 형성하는 단계.
본 개시의 방법의 일부 구현예에서, 동결보호제는 동결건조 전에 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 첨가된다. 일부 구현예에서, 동결보호제는 하나 이상의 동결보호제를 포함하고, 각각의 하나 이상의 동결보호제는 독립적으로 폴리올(예를 들어, 디올 또는 트리올, 예컨대 프로필렌 글리콜(즉, 1,2-프로판디올), 1,3-프로판디올, 글리세롤, (+/-)-2-메틸-2,4-펜탄디올, 1,6-헥산디올, 1,2-부탄디올, 2,3-부탄디올, 에틸렌글리콜, 또는 디에틸렌글리콜), 비세제 설포베타인(예를 들어, NDSB-201 (3-(1-피리디노)-1-프로판 설포네이트), 삼투질(예를 들어, L-프롤린 또는 트리메틸아민 N-옥시드 2수화물), 중합체(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 200(PEG 200), PEG 400, PEG 600, PEG 1000, PEG 3350, PEG 4000, PEG 8000, PEG 10000, PEG 20000, 폴리에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르 550(mPEG 550), mPEG 600, mPEG 2000, mPEG 3350, mPEG 4000, mPEG 5000, 폴리비닐피롤리돈(예를 들어, 폴리비닐피롤리돈 K 15), 펜타에리트리톨 프로폭실레이트 또는 폴리프로필렌 글리콜 P 400), 유기 용매(예를 들어, 디메틸 설폭시드(DMSO) 또는 에탄올), 당(예를 들어, D-(+)-수크로스, D-소르비톨, 트레할로스, D-(+)-말토스 1수화물, 메조-에리트리톨, 자일리톨, 미오-이노시톨, D-(+)-라피노스 5수화물, D-(+)-트레할로스 2수화물, 또는 D-(+)-글루코스 1수화물), 또는 염(예를 들어, 리튬 아세테이트, 리튬 클로라이드, 리튬 포르메이트, 리튬 니트레이트, 리튬 설페이트, 마그네슘 아세테이트, 나트륨 클로라이드, 나트륨 포르메이트, 나트륨 말로네이트, 나트륨 니트레이트, 나트륨 설페이트, 또는 이의 임의의 수화물), 또는 이의 임의의 조합이다. 일부 구현예에서, 동결보호제는 수크로스를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결보호제는 수크로스이다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP 용액, 또는 동결건조된 LNP 조성물은 완충 용액을 첨가하기 전에 약 -40℃ 내지 약 0℃, 약 -35℃ 내지 약 -5℃, 약 -30℃ 내지 약 -10℃, 약 -25℃ 내지 약 -15℃, 약 -22℃ 내지 약 -18℃, 또는 약 -21℃ 내지 약 -19℃의 온도에서 보관된다.
지질 용액
일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 지질 용액을 제공한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 이온화 가능 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 캡슐화제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.01 mg/mL, 약 0.05 mg/mL, 약 0.06 mg/mL, 약 0.07 mg/mL, 약 0.08 mg/mL, 약 0.09 mg/mL, 약 0.1 mg/mL, 약 0.15 mg/mL, 약 0.2 mg/mL, 약 0.3 mg/mL, 약 0.4 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 0.6 mg/mL, 약 0.7 mg/mL, 약 0.8 mg/mL, 약 0.9 mg/mL, 또는 약 1.0 mg/mL 초과 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.01 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.05 mg/mL mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.2 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.3 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.4 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 또는 약 0.5 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 최대 약 5.0 mg/mL, 최대 약 4.0 mg/mL, 최대 약 3.0 mg/mL, 최대 약 2.0 mg/mL, 최대 약 1.0 mg/mL, 최대 약 0.09 mg/mL, 최대 약 0.08 mg/mL, 최대 약 0.07 mg/mL, 최대 약 0.06 mg/mL, 또는 최대 약 0.05 mg/mL 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.1 mg/mL 초과, 약 0.5 mg/mL 초과, 약 0.6 mg/mL 초과, 약 0.7 mg/mL 초과, 약 0.8 mg/mL 초과, 약 0.9 mg/mL 초과, 약 1.0 mg/mL 초과, 약 1.5 mg/mL 초과, 약 2.0 mg/mL 초과, 약 3.0 mg/mL 초과, 약 3.0 mg/mL 초과, 약 4.0 mg/mL 초과, 약 5.0 mg/mL 초과, 약 6.0 mg/mL 초과, 약 7.0 mg/mL 초과, 약 8.0 mg/mL 초과, 약 9.0 mg/mL 초과, 약 10 mg/mL 초과, 약 11 mg/mL 초과, 약 12 mg/mL 초과, 약 13 mg/mL 초과, 약 14 mg/mL 초과, 약 15 mg/mL 초과, 약 20 mg/mL 초과, 약 25 mg/mL 초과 또는 약 30 mg/mL 초과 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.1 mg/mL 내지 약 20.0 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 19 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 18 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 17 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 16 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 14 mg/mL, 약 01 mg/mL 내지 약 13 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 12 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 11 mg/mL, 약 0.5 mg/mL mL 내지 약 10.0 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 9 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 8 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 7 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 6 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 5.0 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 4 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 3 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 2 mg/mL, 약 0.5 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 20 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 15 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 12 mg/mL, 약 1 mg/mL 내지 약 10 mg/mL, 또는 약 1 mg/mL 내지 약 8 mg/mL 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 최대 약 30 mg/mL, 약 25, 약 mg/mL, 약 20 mg/mL, 약 18 mg/mL, 약 16 mg/mL, 약 15 mg/mL, 약 14 mg/mL, 약 12 mg/mL, 약 10 mg/mL, 약 8 mg/mL, 약 6 mg/mL, 약 5.0 mg/mL, 약 4.0 mg/mL, 약 3.0 mg/mL, 약 2.0 mg/mL, 약 1.0 mg/mL, 약 0.09 mg/mL, 약 0.08 mg/mL, 약 0.07 mg/mL, 약 0.06 mg/mL, 또는 약 0.05 mg/mL 농도의 이온화 가능 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 수성 완충액 및/또는 유기 용액에 이온화 가능 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 완충제 및/또는 염을 추가로 포함한다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 0.1 mM, 약 0.5 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 4 mM, 약 6 mM, 약 8 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 또는 약 50 mM 이상 농도의 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.1 내지 약 7.8, 약 7.2 내지 약 7.6, 또는 약 7.3 내지 약 7.5의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 지질 용액은 지질 용액의 총 부피에 대해 약 1부피% 내지 약 50부피%의 제1 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 지질 나노입자 제형물의 총 부피에 대해 약 2부피% 내지 약 45부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 지질 나노입자 제형물의 총 부피에 대해 약 3부피% 내지 약 40부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 지질 나노입자 제형물의 총 부피에 대해 약 4부피% 내지 약 35부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, 지질 용액은 지질 나노입자 제형물의 총 부피에 대해 약 5부피% 내지 약 33부피%의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매는 알코올이다.
일부 구현예에서, 유기 용매는 에탄올이다.
완충제
일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 완충제를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 제1 완충제, 제2 완충제, 제3 완충제, 또는 이의 조합을 제공한다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 제1 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 0.1 nM 내지 약 100 mM, 약 0.5 nM 내지 약 90 mM, 약 1.0 nM 내지 약 80 mM, 약 2 nM 내지 약 70 mM, 약 3 nM 내지 약 60 mM, 약 4 nM 내지 약 50 mM, 약 5 nM 내지 약 40 mM, 약 6 nM 내지 약 30 mM, 약 7 nM 내지 약 20 mM, 약 8 nM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 제1 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 0.1 mM 이상, 약 0.5 mM 이상, 약 1 mM 이상, 약 2 mM 이상, 약 4 mM 이상, 약 6 mM 이상, 약 8 mM 이상, 약 10 mM 이상, 약 15 mM 이상, 약 20 mM 이상, 약 25 mM 이상, 약 30 mM 이상, 약 35 mM 이상, 약 40 mM 이상, 약 45 mM 이상, 또는 약 50 mM 이상 농도의 제1 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 완충제는 제1 수성 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 수성 완충액 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 수성 완충액은 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 수성 완충액은 약 0.1 nM 내지 약 100 mM, 약 0.5 nM 내지 약 90 mM, 약 1.0 nM 내지 약 80 mM, 약 2 nM 내지 약 70 mM, 약 3 nM 내지 약 60 mM, 약 4 nM 내지 약 50 mM, 약 5 nM 내지 약 40 mM, 약 6 nM 내지 약 30 mM, 약 7 nM 내지 약 20 mM, 약 8 nM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 12 mM 농도의 수성 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수성 완충액은 약 0.1 mM 이상, 약 0.5 mM 이상, 약 1 mM 이상, 약 2 mM 이상, 약 4 mM 이상, 약 6 mM 이상, 약 8 mM 이상, 약 10 mM 이상, 약 15 mM 이상, 약 20 mM 이상, 약 25 mM 이상, 약 30 mM 이상, 약 35 mM 이상, 약 40 mM 이상, 약 45 mM 이상, 또는 약 50 mM 이상 농도의 수성 완충액을 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 완충제는 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 완충제는 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제1 수성 완충액은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 완충제는 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 1 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 5 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 10 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 15 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 20 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 25 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스 또는 약 30 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 1 mM 내지 약 30 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 내지 약 20 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 3 mM 내지 약 10 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 4 mM 내지 약 8 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 5 mM 내지 약 6 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 5 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 완충 수용액은 약 5 mM 아세테이트를 포함하고, 완충 수용액은 약 5.0의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 완충 수용액은 제2 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제2 완충 수용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 완충 수용액은 약 0.1 mM 이상, 약 0.5 mM 이상, 약 1 mM 이상, 약 2 mM 이상, 또는 약 4 mM 이상, 약 6 mM 이상, 약 8 mM 이상, 약 10 mM 이상, 약 15 mM 이상, 약 20 mM 이상, 약 25 mM 이상, 약 30 mM 이상, 약 35 mM 이상, 약 40 mM 이상, 약 45 mM 이상, 또는 약 50 mM 이상 농도의 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제2 완충제는 제2 수성 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 수성 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 수성 완충액은 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제2 수성 완충액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 수성 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 수성 완충액은 약 0.1 mM 이상, 약 0.5 mM 이상, 약 1 mM 이상, 약 2 mM 이상, 약 4 mM 이상, 약 6 mM 이상, 약 8 mM 이상, 약 10 mM 이상, 약 15 mM 이상, 약 20 mM 이상, 약 25 mM 이상, 또는 약 30 mM 이상, 약 35 mM 이상, 약 40 mM 이상, 약 45 mM 이상, 약 50 mM 이상 농도의 수성 완충액을 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제2 완충제는 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 완충제는 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 완충 수용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 완충 수용액은 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 완충액은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제2 수성 완충액은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제 2 수성 완충제는 트리스 완충액이다.
일부 구현예에서, 제 2 완충제는 트리스 완충액이다.
일부 구현예에서, 제2 완충제는 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 수성 완충액은 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 수성 완충액은 약 7.5의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제2 완충제는 약 7.5의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제3 완충 수용액은 제3 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 수성 완충액 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제3 완충 수용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 제3 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제3 완충 수용액은 약 0.1 mM 이상, 약 0.5 mM 이상, 약 1 mM 이상, 약 2 mM 이상, 약 4 mM 이상, 약 6 mM 이상, 약 8 mM 이상, 약 10 mM 이상, 약 15 mM 이상, 약 20 mM 이상, 약 25 mM 이상, 약 30 mM 이상, 약 35 mM 이상, 약 40 mM 이상, 약 45 mM 이상, 또는 약 50 mM 이상 농도의 제3 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제3 완충제는 제3 수성 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 용액은 하나 이상의 수성 완충액 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 수성 완충액은 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 수성 완충액을 포함한다. 일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 약 0.1 mM, 약 0.5 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 4 mM, 약 6 mM, 약 8 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 또는 약 50 mM 이상 농도의 수성 완충액을 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 제3 완충제는 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 제3 수성 완충액은 약 7.5의 pH를 갖는다.
핵산 및 활성 제제 용액
일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 활성 제제 용액을 제공한다. 치료제 및/또는 예방제는 치료제 및/또는 예방제가 지질 나노입자에 캡슐화될 수 있도록 지질 나노입자 또는 지질 나노입자 용액에 혼합되거나 첨가될 용액으로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 면역 반응을 유발할 수 있는 백신 또는 화합물이다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물은 백신이다.
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 핵산이다.
일부 구현예에서, 본 개시의 방법은 핵산을 포함하는 핵산 용액을 제공한다. 핵산은 핵산이 지질 나노입자에 캡슐화될 수 있도록(이에 따라 "로딩 LNP"를 형성함) 지질 나노입자 또는 지질 나노입자 용액에 혼합되거나 첨가될 용액으로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 캡슐화될 핵산을 다양한 농도로 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.01 mg/mL 이상, 약 0.05 mg/mL 이상, 약 0.06 mg/mL 이상, 약 0.07 mg/mL 이상, 약 0.08 mg/mL 이상, 약 0.09 mg/mL 이상, 약 0.1 mg/mL 이상, 약 0.15 mg/mL 이상, 약 0.2 이상 mg/mL, 약 0.3 mg/mL 이상, 약 0.4 mg/mL 이상, 약 0.5 mg/mL 이상, 약 0.6 mg/mL 이상, 약 0.7 mg/mL 이상, 약 0.8 mg/mL 이상, 약 0.9 mg/mL 이상, 또는 약 1.0 mg/mL 이상 농도의 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.01 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.2 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.3 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.4 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 또는 약 0.5 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL 농도의 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 최대 약 5.0 mg/mL, 최대 약 4.0 mg/mL, 최대 약 3.0 mg/mL, 최대 약 2.0 mg/mL, 최대 약 1.0 mg/mL, 최대 약 0.09 mg/mL, 최대 약 0.08 mg/mL, 최대 약 0.07 mg/mL, 최대 약 0.06 mg/mL, 또는 최대 약 0.05 mg/mL 농도의 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.001 내지 약 1.0 mg/mL의 핵산, 약 0.0025 내지 약 0.5 mg/mL의 핵산, 또는 약 0.005 내지 약 0.2 mg/mL의 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.005 내지 약 0.2 mg/mL의 핵산을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 수성 완충액에 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 적합한 핵산 용액은 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 나트륨 포스페이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 (트리스), HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 0.1 mM 초과, 약 0.5 mM 초과, 약 1 mM 초과, 약 2 mM 초과, 약 4 mM 초과, 약 6 mM 초과, 약 8 mM 초과, 약 10 mM 초과, 약 15 mM 초과, 약 20 mM 초과, 약 25 mM 초과, 약 30 mM 초과, 약 35 mM 초과, 약 40 mM 초과, 약 45 mM 초과, 또는 약 50 mM 초과 농도의 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6.25, 약 4.8 내지 약 6.0, 약 5.0 내지 약 5.8, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.1 내지 약 5.75, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6.25, 약 4.8 내지 약 6.0, 약 5.0 내지 약 5.8, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 핵산 용액은 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 1 mM 내지 약 200 mM 아세테이트 완충액, 약 2 mM 내지 약 180 mM 아세테이트 완충액, 약 3 mM 내지 약 160 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 150 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 140 mM 아세테이트 완충액, 약 5 mM 내지 약 130 mM 아세테이트 완충액, 약 6 mM 내지 약 120 mM 아세테이트 완충액, 약 7 mM 내지 약 110 mM 아세테이트 완충액, 약 8 mM 내지 약 100 mM 아세테이트 완충액, 약 9 mM 내지 약 90 mM 아세테이트 완충액, 약 10 mM 내지 약 80 mM 아세테이트 완충액, 약 15 mM 내지 약 70 mM 아세테이트 완충액, 약 20 mM 내지 약 60 mM 아세테이트 완충액, 약 25 mM 내지 약 50 mM 아세테이트 완충액, 또는 약 30 mM 내지 약 40 mM 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 8.8 mM 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 핵산 용액은 약 130 mM 아세테이트 완충액을 포함한다.
빈 지질 나노입자(빈 LNP)
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 개시된 방법에 의해 제조된 빈 지질 나노 입자(빈 LNP)를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 중합체성 지질을 포함하는 빈 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 약 0.1몰% 내지 약 2.5몰%, 약 0.2몰% 내지 약 2.25몰%, 약 0.25몰% 내지 약 2.0몰%, 약 0.5몰% 내지 약 1.75몰%, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰%, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰%의 중합체성 지질을 포함하는 빈 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 중합체성 지질을 포함하는 빈 LNP를 제공한다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 PEG 지질이다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 PEG 지질이 아니다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 양친매성 중합체-지질 접합체이다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 PEG-지질 접합체이다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 계면활성제이다.
일부 구현예에서, 중합체성 지질은 Brij 또는 OH-PEG-스테아레이트이다.
일부 양태에서, 본 개시는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP를 제공한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질, 인지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 3.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.9몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.8몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.7몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.6몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.4몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.3몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.2몰% 이하의 PEG 지질, 또는 약 0.1몰% 이하의 PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 0몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.1몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.25몰% PEG 지질, 약 0.25몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 1.75몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 0.050몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 30몰% 내지 약 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 0.5 몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 30몰% 내지 약 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 10몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 200 nm 이하, 약 175 nm 이하, 약 150 nm 이하, 약 125 nm 이하, 약 100 nm 이하, 약 90 nm 이하, 약 80 nm 이하, 약 75 nm 이하, 약 70 nm 이하, 약 65 nm 이하, 약 60 nm 이하, 약 55 nm 이하, 약 50 nm 이하, 약 45 nm 이하, 약 40 nm 이하, 약 35 nm 이하, 약 30 nm 이하, 약 25 nm 이하, 또는 약 20 nm 이하의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 20 nm 내지 약 150 nm, 약 25 nm 내지 약 125 nm, 약 30 nm 내지 약 110 nm, 약 35 nm 내지 약 100 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 약 45 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 70 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP는 약 25 내지 약 45 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
빈 지질 나노입자 용액(빈-LNP 용액)
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 개시된 방법에 의해 제조된 빈 지질 나노입자 용액(빈-LNP 용액)을 제공한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 빈 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 0.01 mg/mL, 약 0.05 mg/mL, 약 0.06 mg/mL, 약 0.07 mg/mL, 약 0.08 mg/mL, 약 0.09 mg/mL, 약 0.1 mg/mL, 약 0.15 mg/mL, 약 0.2 mg/mL, 약 0.3 mg/mL, 약 0.4 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 0.6 mg/mL, 약 0.7 mg/mL, 약 0.8 mg/mL, 약 0.9 mg/mL, 또는 약 1.0 mg/mL 초과 농도의 빈 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 0.01 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.01 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 약 0.1 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 약 0.2 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 약 0.3 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 약 0.4 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 또는 약 0.5 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL 농도의 빈 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 최대 약 5.0 mg/mL, 최대 약 4.0 mg/mL, 최대 약 3.0 mg/mL, 최대 약 2.0 mg/mL, 최대 약 1.0 mg/mL, 최대 약 0.09 mg/mL, 최대 약 0.08 mg/mL, 최대 약 0.07 mg/mL, 최대 약 0.06 mg/mL, 또는 최대 약 0.05 mg/mL 농도의 빈 LNP를 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 수성 완충액에 빈 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 0.1 mM, 약 0.5 mM, 약 1 mM, 약 2 mM, 약 4 mM, 약 6 mM, 약 8 mM, 약 10 mM, 약 15 mM, 약 20 mM, 약 25 mM, 약 30 mM, 약 35 mM, 약 40 mM, 약 45 mM, 또는 약 50 mM 이상 농도의 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 빈 LNP 용액은 4.5 이하, 4.6 이하, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 4.5 내지 약 6.25, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 약 5.0 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 약 5 mM 아세테이트 완충액을 포함하고, 아세테이트 완충액은 약 5.0의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 제1 유기 용매를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매는 알코올이다.
일부 구현예에서, 알코올은 에탄올이다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액은 긴장성 제제(예를 들어, 수크로스와 같은 당)를 추가로 포함한다.
로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 개시된 방법에 의해 제조된 로딩 지질 나노 입자(로딩 LNP)를 제공한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질, 인지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 3.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.9몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.8몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.7몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.6몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.4몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.3몰% PEG 이하의 지질, 약 0.2몰% 이하의 PEG 지질, 또는 약 0.1몰% 이하의 PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 0몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 0.1몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.25몰% PEG 지질, 약 0.25몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 1.75몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 0.050몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 30몰% 내지 약 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 30몰% 내지 약 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 10몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 200 nm 이하, 약 175 nm 이하, 약 150 nm 이하, 약 125 nm 이하, 약 100 nm 이하, 약 90 nm 이하, 약 80 nm 이하, 약 75 nm 이하, 약 70 nm 이하, 약 65 nm 이하, 약 60 nm 이하, 약 55 nm 이하, 약 50 nm 이하, 약 45 nm 이하, 약 40 nm 이하, 약 35 nm 이하, 약 30 nm 이하, 약 25 nm 이하, 또는 약 20 nm 이하의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 20 nm 내지 약 150 nm, 약 25 nm 내지 약 125 nm, 약 30 nm 내지 약 110 nm, 약 35 nm 내지 약 100 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 약 45 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 70 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP는 약 25 내지 약 45 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 개시된 방법에 의해 제조된 로딩 LNP 용액을 제공한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 로딩 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 0.01 mg/mL, 약 0.05 mg/mL, 약 0.06 mg/mL, 약 0.07 mg/mL, 약 0.08 mg/mL, 약 0.09 mg/mL, 약 0.1 mg/mLL, 약 0.15 mg/mL, 약 0.2 mg/mL, 약 0.3 mg/mL, 약 0.4 mg/mL, 약 0.5 mg/mL, 약 0.6 mg/mL, 약 0.7 mg/mL, 약 0.8 mg/mL, 약 0.9 mg/mL, 또는 약 1.0 mg/mL 초과 농도의 로딩 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 0.01 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 0.01 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.5 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.2 mg/mL, 0.05 mg/mL 내지 약 0.1 mg/mL, 0.1 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL, 0.2 mg/mL 내지 약 0.9 mg/mL, 0.3 mg/mL 내지 약 0.8 mg/mL, 0.4 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL, 또는 0.5 mg/mL 내지 약 0.6 mg/mL 농도의 로딩 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 최대 약 5.0 mg/mL, 최대 약 4.0 mg/mL, 최대 약 3.0 mg/mL, 최대 약 2.0 mg/mL, 최대 약 1.0 mg/mL, 최대 약 0.09 mg/mL, 최대 약 0.08 mg/mL, 최대 약 0.07 mg/mL, 최대 약 0.06 mg/mL, 또는 최대 약 0.05 mg/mL 농도의 로딩 LNP를 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 수성 완충액에 로딩 LNP를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 완충제 및/또는 염을 추가로 포함할 수 있다. 예시적인 적합한 완충제는 암모늄 설페이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 시트레이트, 나트륨 아세테이트, 칼륨 포스페이트, 나트륨 포스페이트, HEPES 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 0.1 mM 내지 약 100 mM, 약 0.5 mM 내지 약 90 mM, 약 1.0 mM 내지 약 80 mM, 약 2 mM 내지 약 70 mM, 약 3 mM 내지 약 60 mM, 약 4 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 40 mM, 약 6 mM 내지 약 30 mM, 약 7 mM 내지 약 20 mM, 약 8 mM 내지 약 15 mM, 약 9 mM 내지 약 12 mM 농도의 완충제를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, 2 mM, 4 mM, 6 mM, 8 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 또는 50 mM 이상 농도의 완충제를 포함한다. 예시적인 적합한 염은 칼륨 클로라이드, 마그네슘 클로라이드, 나트륨 클로라이드 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 4.5 내지 약 7.0, 약 4.6 내지 약 7.0, 약 4.8 내지 약 7.0, 약 5.0 내지 약 7.0, 약 5.5 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 7.0, 약 6.0 내지 약 6.9, 약 6.0 내지 약 6.8, 약 6.0 내지 약 6.7, 약 6.0 내지 약 6.6, 또는 약 6.0 내지 약 6.5의 pH를 갖는다. 일부 구현예에서, 적합한 로딩 LNP 용액은 4.5 이하, 4.6, 4.7 이하, 4.8 이하, 4.9 이하, 5.0 이하, 5.2 이하, 5.4 이하, 5.6 이하, 5.8 이하, 6.0 이하, 6.1 이하, 6.2 이하, 6.3 이하, 6.4 이하, 6.5 이하, 6.6 이하, 6.7 이하, 6.8 이하, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 4.5 내지 약 6.25, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 또는 약 5.0 내지 약 5.5의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 약 5 mM 아세테이트 완충액을 포함하고, 아세테이트 완충액은 약 5.0의 pH를 갖는다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함한다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 제1 유기 용매를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매는 알코올이다.
일부 구현예에서, 알코올은 에탄올이다.
일부 구현예에서, 로딩 LNP 용액은 긴장성 제제를 추가로 포함한다.
지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 개시된 방법에 의해 제조된 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 제공한다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 약 30몰% 내지 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 약 30몰% 내지 약 60몰% 이온화 가능 지질; 약 0몰% 내지 약 30몰% 인지질; 약 15몰% 내지 약 50몰% 구조 지질; 및 약 0.1몰% 내지 약 10몰% PEG 지질을 포함한다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 약 200 nm 이하, 약 175 nm 이하, 약 150 nm 이하, 약 125 nm 이하, 약 100 nm 이하, 약 90 nm 이하, 약 80 nm 이하, 약 75 nm 이하, 약 70 nm 이하, 약 65 nm 이하, 약 60 nm 이하, 약 55 nm 이하, 약 50 nm 이하, 약 45 nm 이하, 약 40 nm 이하, 약 35 nm 이하, 약 30 nm 이하, 약 25 nm 이하, 또는 약 20 nm 이하의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 약 20 nm 내지 약 150 nm, 약 25 nm 내지 약 125 nm, 약 30 nm 내지 약 110 nm, 약 35 nm 내지 약 100 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 약 45 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 70 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 약 25 내지 약 45 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, LNP 제형물의 pH는 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.1 내지 약 5.75, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 범위이다.
LNP 제형물 투여
일부 구현예에서, 투여는 (i) 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 약 4.5 내지 약 7.0 범위의 pH를 갖는 활성 제제 용액 및 빈 LNP를 포함하는 약 4.5 내지 약 6.5 범위의 pH를 갖는 빈 LNP 용액을 제공하는 단계로서, 빈 LNP는 이온화 가능 지질을 포함하는, 단계; (ii) LNP 제형물이 약 4.5 내지 약 7.0 미만 범위의 pH를 갖도록 빈 LNP 용액과 활성 제제 용액을 혼합하여 치료제 및/또는 예방제를 캡슐화하는 로딩 LNP를 포함하는 LNP 제형물을 형성하는 단계; 및 (iii) 혼합 후 약 72시간 내에 LNP 제형물을 환자에 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 pH 및 제2 pH는 약 7.0 내지 약 8.1, 또는 약 7.1 내지 약 7.8, 또는 약 7.2 내지 약 7.7, 또는 약 7.3 내지 약 7.6, 또는 약 7.4 내지 약 7.5의 범위이다.
일부 구현예에서, 제1 pH 및 제2 pH는 약 4.5 내지 약 6.5, 또는 약 4.6 내지 약 6.0, 또는 약 4.8 내지 약 5.5의 범위이다.
일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 72시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 60시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 48시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 36시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 24시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 20시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 16시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 12시간 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 8시간 내에 수행된다.
일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 120분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 100분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 90분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 80분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 70분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 60분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 50분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 40분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 30분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 20분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 15분 내에 수행된다. 일부 구현예에서, 투여는 혼합 후 약 10분 내에 수행된다.
일부 구현예에서, 완충 수용액의 pH 및 지질 나노입자 제형물의 pH는 거의 동일하다.
일부 구현예에서, LNP 제형물은 지질 나노입자 제형물의 총 부피에 대해 약 1부피% 내지 약 50부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP 제형물은 LNP 제형물의 총 부피에 대해 약 2부피% 내지 약 45부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP 제형물은 LNP 제형물의 총 부피에 대해 약 3부피% 내지 약 40부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP 제형물은 LNP 제형물의 총 부피에 대해 약 4부피% 내지 약 35부피%의 유기 용매를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP 제형물은 LNP 제형물의 총 부피에 대해 약 5부피% 내지 약 33부피%의 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 유기 용매는 알코올이다.
일부 구현예에서, 유기 용매는 에탄올이다.
일부 구현예에서, 유기 용매는 제1 유기 용매 및 제2 유기 용매를 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매는 알코올이고, 제2 유기 용매는 알코올이다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매는 에탄올이고 제2 유기 용매는 벤질 알코올이다.
일부 구현예에서, 제1 유기 용매 대 제2 유기 용매의 중량/중량비는 약 100:1 내지 약 1:1, 또는 약 50:1 내지 약 1:1, 또는 약 20:1 내지 약 1:1, 또는 약 10:1 내지 약 1:1 범위이다.
일부 구현예에서, 유기 용액은 수화제를 추가로 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 수화제는 액체가 고체 표면 및/또는 액체 표면과 같은 표면과 접촉을 유지하는 능력을 증가, 감소 또는 개선시키는 제제를 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 수화제는 유기 용매이다.
일부 구현예에서, 수화제는 디메틸 설폭시드(DMSO)이다.
일부 구현예에서, 수화제 대 유기 용매의 중량/중량비는 약 1000:1 내지 약 1:1, 또는 약 500:1 내지 약 5:1, 또는 약 100: 1 내지 약 10:1 범위이다.
일부 구현예에서, 완충 수용액은 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다. 일부 구현예에서, 완충 수용액은 생리적 pH를 유지하기에 적합한 임의의 완충액일 수 있다. 일부 구현예에서, 완충 수용액은 환자에 투여하기 적합한 pH를 유지하는 데 적합한 임의의 완충액일 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 포유류 환자이다. 일부 구현예에서, 환자는 인간 환자이다.
일부 구현예에서, 완충 수용액은 긴장성 제제를 추가로 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 긴장성 제제는 두 용액의 수분 포텐셜, 또는 확산 방향 및 정도에 영향을 미치는 용액에 용해된 용질의 상대 농도로 정의된 바와 같은 유효 삼투압 구배를 증가, 감소 또는 개선시키는 제제를 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액은 긴장성 제제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 긴장성 제제는 당이다.
일부 구현예에서, 당은 수크로스이다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액은 약 0.01 g/mL 내지 약 1.0 g/mL, 약 0.05 g/mL 내지 약 0.5 g/mL, 약 0.1 g/mL 내지 약 0.4 g/mL, 약 0.15 g/mL 내지 약 0.3 g/mL, 또는 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액은 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함한다.
빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및 LNP 제형물의 예시적인 구현예
일부 구현예에서, 본 개시의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물은 복수의 LNP를 포함하고, 로딩 LNP 또는 LNP 제형물은 핵산 및 이온화 가능 지질을 포함한다.
본 개시의 방법에 적합한 핵산이 본원에 추가로 개시된다. 일부 구현예에서, 핵산은 RNA(예를 들어, mRNA)이다.
본 개시의 방법에 적합한 이온화 가능 지질이 본원에 추가로 개시된다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물은 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함한다. 본 개시의 방법에 적합한 인지질, PEG 지질, 및 구조 지질이 본원에 추가로 개시된다.
일부 구현예에서, 본 개시의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물은 적어도 하나의 지질 나노입자 성분을 포함한다. 지질 나노입자는 지질 성분 및 핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제와 같은 추가 구성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다. LNP는 하나 이상의 특정 적용 또는 표적을 위해 설계될 수 있다. LNP의 요소는 특정 적용 또는 표적에 기초하여 및/또는 유효성, 독성, 비용, 사용 용이성, 이용 가능성 또는 하나 이상의 요소의 기타 특징에 기초하여 선택될 수 있다. 유사하게, LNP의 특정 제형물이 예를 들어 요소의 특정 조합의 유효성 및 독성에 따라 특정 적용 또는 표적에 대해 선택될 수 있다. LNP 제형물의 유효성 및 내약성은 제형물의 안정성에 영향을 받을 수 있다.
빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 지질 성분은 예를 들어 화학식 IL-I, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7, 또는 IL-IIIa8에 따른 지질, 인지질(예를 들어, 불포화 지질, 예를 들어, DOPE 또는 DSPC), PEG 지질, 및 구조 지질을 포함할 수 있다. 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 지질 성분은 예를 들어 화학식 IL-I, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7, 또는 IL-IIIa8에 따른 지질, 인지질(예를 들어, 불포화 지질, 예를 들어, DOPE 또는 DSPC), 및 구조 지질을 포함할 수 있다. 지질 성분의 요소는 특정 분율로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 지질 성분은 화학식 IL-I, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7 또는 IL-IIIa8에 따른 지질, 인지질, PEG 지질, 및 구조 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 지질 성분은 총 몰%가 100%를 초과하지 않는 한, 약 30몰% 내지 약 60몰%의 화학식 IL-I, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7, 또는 IL-IIIa8의 화합물, 약 0몰% 약 30몰% 인지질, 약 18.5몰% 내지 약 48.5몰% 구조 지질, 및 약 0몰% 내지 약 10몰% PEG 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 지질 성분은 약 35몰% 내지 약 55몰% 화학식 IL-I, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7, 또는 IL-IIIa8의 화합물, 약 5몰% 내지 약 25몰% 인지질, 약 30몰% 내지 약 40몰% 구조 지질, 및 약 0몰% 내지 약 10몰%의 PEG 지질을 포함한다. 특정 구현예에서, 지질 성분은 상기 화합물 약 50몰%, 인지질 약 10몰%, 구조 지질 약 38.5몰%, 및 PEG 지질 약 1.5몰%를 포함한다. 또 다른 특정 구현예에서, 지질 성분은 상기 화합물 약 40몰%, 인지질 약 20몰%, 구조 지질 약 38.5몰%, 및 PEG 지질 약 1.5몰%를 포함한다. 일부 구현예에서, 인지질은 DOPE 또는 DSPC일 수 있다. 일부 구현예에서, PEG 지질은 PEG-DMG일 수 있고/있거나 구조 지질은 콜레스테롤일 수 있다.
지질 나노입자는 하나 이상의 특정 용도 또는 표적을 위해 설계될 수 있다. 일부 구현예에서, LNP는 RNA와 같은 치료제 및/또는 예방제를 포유류 체내의 특정 세포, 조직, 기관, 또는 시스템 또는 이의 그룹에 전달하도록 설계될 수 있다. 지질 나노입자의 물리화학적 특성은 특정 신체 표적에 대한 선택성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 예를 들어, 입자 크기는 다른 기관의 천공 크기에 기초하여 조정될 수 있다. LNP에 포함된 치료제 및/또는 예방제는 또한 요망되는 전달 표적 또는 표적들에 기초하여 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 특정 적응증, 병태, 질환 또는 장애에 대해 및/또는 특정 세포, 조직, 기관, 또는 시스템 또는 이의 그룹으로의 전달(예를 들어, 편재된 또는 특이적 전달)을 위해 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, LNP는 관심 폴리펩티드를 제조하기 위해 세포 내에서 번역될 수 있는 관심 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA를 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 특정 기관에 특이적으로 전달되도록 설계될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 포유류 간에 특이적으로 전달되도록 설계될 수 있다.
LNP에서 치료제 및/또는 예방제의 양은 크기, 조성, 요망되는 표적 및/또는 적용, 또는 지질 나노입자의 기타 특성 뿐만 아니라 치료제 및/또는 예방제의 특성에 의존할 수 있다. 일부 구현예에서, LNP에 유용한 RNA의 양은 RNA의 크기, 서열, 및 기타 특성에 의존할 수 있다. LNP에서 치료제 및/또는 예방제 및 기타 요소(예를 들어, 지질)의 상대량도 변할 수 있다. 일부 구현예에서, LNP에서 지질 성분 대 핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제의 중량/중량비는 약 5:1 내지 약 60:1, 예를 들어 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1 및 60:1일 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 성분 대 치료제 및/또는 예방제의 중량/중량비는 약 10:1 내지 약 40:1일 수 있다. 일부 구현예에서, 중량/중량비는 약 20:1이다. LNP에서 치료제 및/또는 예방제의 양은, 예를 들어 흡수 분광법(예를 들어, 자외선-가시광선 분광법)을 사용하여 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, LNP는 하나 이상의 RNA를 포함하고, 하나 이상의 RNA, 지질, 및 이의 양은 특정 N:P 비를 제공하도록 선택될 수 있다. 조성물의 N:P 비는 하나 이상의 지질에서의 질소 원자 대 RNA에서의 포스페이트기 수의 몰 비를 나타낸다. 일반적으로 낮은 N:P 비가 바람직하다. 하나 이상의 RNA, 지질 및 이의 양은 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 22:1, 24:1, 26:1, 28:1 또는 30:1과 같이 약 2:1 내지 약 30:1의 N:P 비를 제공하도록 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, N:P 비는 약 2:1 내지 약 8:1일 수 있다. 일부 구현예에서, N:P 비는 약 5:1 내지 약 8:1이다. 일부 구현예에서, N:P 비는 약 5.0:1, 약 5.5:1, 약 5.67:1, 약 6.0:1, 약 6.5:1, 또는 약 7.0:1일 수 있다. 일부 구현예에서, N:P 비는 약 5.67:1일 수 있다.
일부 구현예에서, LNP를 포함하는 제형물은 클로라이드 염과 같은 염을 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, LNP를 포함하는 제형물은 이당류와 같은 당을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제형물은 클로라이드염과 같은 염이 아닌 당을 추가로 포함한다.
물성
본 발명의 LNP의 물성은 다양한 방법으로 특성규명될 수 있다. 일부 구현예에서, LNP의 형태 및 크기 분포를 조사하기 위해 현미경(예를 들어, 투과 전자 현미경 또는 주사 전자 현미경)이 사용될 수 있다. 제타 전위를 측정하기 위해 동적 광산란 또는 전위차계(예를 들어, 전위차 적정)가 사용될 수 있다. 입자 크기를 결정하기 위해 동적 광산란이 또한 사용될 수 있다. 입자 크기, 다분산 지수 및 제타 전위와 같은 LNP의 여러 특성을 측정하기 위해 Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, UK)와 같은 기기가 이용될 수 있다.
빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 예를 들어 동적 광산란(DLS)에 의해 측정된 수 십 nm 내지 수 백 nm일 수 있다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 200 nm 이하, 약 175 nm 이하, 약 150 nm 이하, 약 125 nm 이하, 약 100 nm 이하, 약 90 nm 이하, 약 80 nm 이하, 약 75 nm 이하, 약 70 nm 이하, 약 65 nm 이하, 약 60 nm 이하, 약 55 nm 이하, 약 50 nm 이하, 약 45 nm 이하, 약 40 nm 이하, 약 35 nm 이하, 약 30 nm 이하, 약 25 nm 이하, 또는 약 20 nm 이하의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 20 nm 내지 약 150 nm, 약 25 nm 내지 약 125 nm, 약 30 nm 내지 약 110 nm, 약 35 nm 내지 약 100 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 약 45 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 70 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 15 nm 내지 약 55 nm, 약 20 nm 내지 약 50 nm, 약 25 nm 내지 약 45 nm, 또는 약 30 nm 내지 약 40 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 25 내지 약 45 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 70 nm 내지 약 100 nm일 수 있다. 특정 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 80 nm일 수 있다. 일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 100 nm일 수 있다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 약 1 mm 내지 약 500 mm, 약 5 mm 내지 약 200 mm, 약 10 mm 내지 약 100 mm, 약 20 mm 내지 약 80 mm, 약 25 mm 내지 약 60 mm, 약 30 mm 내지 약 55 mm, 약 35 mm 내지 약 50 mm, 또는 약 38 mm 내지 약 42 mm 범위이다.
일부 구현예에서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 평균 LNP 지름은 상이한 방법(예를 들어, 본 발명의 방법의 하나 이상의 단계를 배제한 방법, 또는 적어도 하나의 단계에서 본 발명의 방법과 상이한 방법)에 의해 제조된 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물과 비교하여 약 99% 이하, 약 98% 이하, 약 97% 이하, 약 96% 이하, 약 95% 이하, 약 90% 이하, 약 85% 이하, 약 80% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하, 또는 약 10% 이하이다.
LNP는 비교적 균질할 수 있다. 다분산 지수는 LNP의 균질성, 예를 들어 지질 나노입자의 입자 크기 분포를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 작은(예를 들어, 0.3 미만) 다분산 지수는 일반적으로 좁은 입자 크기 분포를 나타낸다. LNP는 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24 또는 0.25와 같이 약 0 내지 약 0.25의 다분산 지수를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, LNP의 다분산 지수는 약 0.10 내지 약 0.20일 수 있다.
핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제의 캡슐화 효율은 제공된 초기 양에 비해 제조 후 LNP에 캡슐화되거나 달리 연합되는 치료제 및/또는 예방제의 양을 기재한다. 캡슐화 효율은 높은(예를 들어, 100%에 가까운) 것이 요망된다. 캡슐화 효율은 예를 들어 지질 나노입자를 하나 이상의 유기 용매 또는 세제로 분해하기 전에 및 후에 지질 나노입자를 함유하는 용액에서의 치료제 및/또는 예방제의 양을 비교함으로써 측정될 수 있다. 음이온 교환 수지가 용액에서 유리 치료제 및/또는 예방제(예를 들어, RNA)의 양을 측정하는 데 사용될 수 있다. 형광이 용액에서 유리 치료제 및/또는 예방제(예를 들어, RNA)의 양을 측정하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 지질 나노입자의 경우, 치료제 및/또는 예방제의 캡슐화 효율은 적어도 50%, 예를 들어 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%일 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐화 효율은 적어도 80%일 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐화 효율은 적어도 90%일 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐화 효율은 적어도 95%일 수 있다.
LNP는 임의로 하나 이상의 코팅을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, LNP는 캡슐, 필름, 또는 코팅을 갖는 테이블로 제형화될 수 있다. 본원에 기재된 조성물을 포함하는 캡슐, 필름 또는 정제는 임의의 유용한 크기, 인장 강도, 경도 또는 밀도를 가질 수 있다.
정의
본원에 사용된 용어 "알킬" 또는 "알킬기"는 하나 이상의 탄소 원자(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 탄소 원자)를 포함하는 선형 또는 분지형 포화 탄화수소를 의미하며, 이는 임의로 치환된다. "C1-14 알킬"이라는 표기는 1~14개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 선형 또는 분지형 포화 탄화수소를 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 알킬기는 비치환 및 치환 알킬기를 모두 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "알케닐" 또는 "알케닐기"는 2개 이상의 탄소 원자(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 탄소 원자) 및 적어도 하나의 이중 결합을 포함하는 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 이는 임의로 치환된다. "C2-14 알케닐"이라는 표기는 2~14개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하는 임의로 치환된 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 알케닐기는 1, 2, 3, 4개 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, C18 알케닐은 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있다. 2개의 이중 결합을 포함하는 C18 알케닐기는 리놀레일기일 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 알케닐기는 비치환 및 치환 알케닐기를 모두 나타낸다.
본원에 사용된 용어 " 알키닐" 또는 "알키닐기"는 2개 이상의 탄소 원자(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 탄소 원자) 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 이는 임의로 치환된다. "C2-14 알키닐"이라는 표기는 2~14개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 임의로 치환된 선형 또는 분지형 탄화수소를 의미한다. 알키닐기는 1, 2, 3, 4개 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있다. 예를 들어, C18 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 알키닐기는 비치환 및 치환 알키닐기를 모두 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "카보사이클" 또는 "카보사이클릭기"는 탄소 원자의 하나 이상의 고리를 포함하는 임의로 치환된 단환식 또는 다환식 시스템을 의미한다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20원 고리일 수 있다. "C3-6 카보사이클"이라는 표기는 3~6개의 탄소 원자를 갖는 단일 고리를 포함하는 카보사이클을 의미한다. 카보사이클은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수 있고 비방향족 또는 방향족일 수 있다(예를 들어, 사이클로알킬 또는 아릴기). 카보사이클의 예는 사이클로프로필, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 나프틸, 및 1,2-디하이드로나프틸기를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "사이클로알킬"은 비방향족 카보사이클을 의미하고 임의의 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 카보사이클은 비치환 및 치환 카보사이클기, 즉 임의로 치환된 카보사이클을 모두 나타낸다. 일부 구현예에서, 카보사이클은 C3-8 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, 카보사이클은 C3-6 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, 카보사이클은 C6-10 아릴이다.
"아릴"은 적어도 하나의 방향족 고리를 갖는 "공액" 또는 다환식 시스템을 포함하는 방향성을 갖는 기를 포함하고 고리 구조에 임의의 헤테로원자를 함유하지 않는다. 예는 페닐, 벤질, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈레닐 등을 포함한다. 일부 구현예에서, "아릴"은 방향성을 갖는 C6-10 카보사이클이다(예를 들어, "아릴"은 C6-10 아릴임).
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭기"는 하나 이상의 고리를 포함하는 임의로 치환된 단환식 또는 다환식 시스템을 의미하며, 적어도 하나의 고리는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로원자는 예를 들어 질소, 산소 또는 황 원자일 수 있다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14원 고리일 수 있다. 헤테로사이클은 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수 있고 비방향족 또는 방향족일 수 있다(예를 들어, 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴기). 헤테로사이클의 예는 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 티아졸릴, 티아졸리디닐, 피라졸리디닐, 피라졸릴, 이속사졸리디닐, 이속사졸릴, 이소티아졸리디닐, 이소티아졸릴, 모르폴리닐, 피롤릴, 피롤리디닐, 푸릴, 테트라하이드로푸릴, 티오페닐, 피리디닐, 피페리디닐, 퀴놀릴, 및 이소퀴놀릴기를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "헤테로사이클로알킬"은 비방향족 헤테로사이클을 의미하고 임의의 이중 또는 삼중 결합을 포함할 수도 포함하지 않을 수도 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 헤테로사이클은 비치환 및 치환 헤테로사이클기, 즉 임의로 치환된 헤테로사이클을 모두 나타낸다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클은 4 내지 12원 헤테로사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클은 5- 또는 6-원 헤테로아릴이다.
"헤테로아릴"기는 고리 구조에 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 것을 제외하고는 상기 정의된 바와 같은 아릴기이고, 또한 "아릴 헤테로사이클" 또는 "헤테로방향족"으로 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 탄소 원자 및 질소, 산소 황 및 붕소로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들어 1 또는 1~2 또는 1~3 또는 1~4 또는 1~5 또는 1~6개의 헤테로원자 또는 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 헤테로원자로 구성되는, 안정한 5-, 6- 또는 7-원 단환식 또는 7-, 8-, 9-, 10-, 11- 또는 12-원 이환식 방향족 헤테로사이클릭 고리를 포함하도록 의도된다. 질소 원자는 치환 또는 비치환될 수 있다(즉, N 또는 NR로서, R은 H 또는 정의된 바와 같은 다른 치환기임). 질소 및 황 헤테로원자는 임의로 산화될 수 있다(즉, N→O 및 S(O)p로서, p = 1 또는 2임). 방향족 헤테로사이클에서 S 및 O 원자의 총 수는 1 이하임이 주지되어야 한다.
헤테로아릴기의 예는 피롤, 푸란, 티오펜, 티아졸, 이소티아졸, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라졸, 옥사졸, 이속사졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 피리미딘 등을 포함한다.
또한, 용어 "아릴" 및 "헤테로아릴"은 다환식 아릴 및 헤테로아릴기, 예를 들어 삼환식, 이환식, 예를 들어 나프탈렌, 벤족사졸, 벤조디옥사졸, 벤조티아졸, 벤조이미다졸, 벤조티오펜, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 나프트리딘, 인돌, 벤조푸란, 퓨린, 벤조퓨린, 데아자퓨린, 인돌리진을 포함한다.
본원에 사용된 "생분해성 기"는 포유류 개체에서 지질의 더 빠른 대사를 촉진할 수 있는 기이다. 생분해성 기는 -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, 아릴기 및 헤테로아릴기로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 "아릴기"는 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 임의로 치환된 카보사이클릭기이다. 아릴기의 예는 페닐 및 나프틸기를 포함한다. 본원에 사용된 "헤테로아릴기"는 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 임의로 치환된 헤테로사이클릭기이다. 헤테로아릴기의 예는 피롤릴, 푸릴, 티오페닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴 및 티아졸릴을 포함한다. 아릴 및 헤테로아릴기는 둘 다 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, M 및 M'은 임의로 치환된 페닐, 옥사졸 및 티아졸로 구성되는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다. 본원의 화학식에서, M 및 M'은 상기 생분해성 기의 목록에서 독립적으로 선택될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 아릴 또는 헤테로아릴기는 비치환 및 치환기, 즉 임의로 치환된 아릴 또는 헤테로아릴기를 모두 나타낸다.
알킬, 알케닐 및 사이클릴(예를 들어, 카보사이클릴 및 헤테로사이클릴)기는 달리 명시되지 않는 한 임의로 치환될 수 있다. 임의의 치환기는 할로겐 원자(예를 들어, 클로라이드, 브로마이드, 플루오라이드 또는 요오다이드기), 카복실산(예를 들어, -C(O)OH), 알코올(예를 들어, 하이드록실, -OH), 에스테르(예를 들어, -C(O)OR 또는 -OC(O)R), 알데하이드(예를 들어, -C(O)H), 카보닐(예를 들어, -C(O)R, 대안적으로 C=O로 표시됨), 아실 할라이드(예를 들어, -C(O)X로서, X는 브로마이드, 플루오라이드, 클로라이드 및 요오다이드로부터 선택된 할라이드임), 카보네이트(예를 들어, -OC(O)OR), 알콕시(예를 들어, -OR), 아세탈(예를 들어, -C(OR)2 R""로서, 각각의 OR은 동일하거나 상이할 수 있는 알콕시기이고 R""은 알킬 또는 알케닐기임), 포스페이트(예를 들어, P(O)4 3-), 티올(예를 들어, -SH), 설폭시드(예를 들어, -S(O)R), 설핀산(예를 들어 -S(O)OH), 설폰산(예를 들어, -S(O)2OH), 티알(예를 들어, -C(S)H), 설페이트(예를 들어, S(O)4 2-), 설포닐(예를 들어, -S(O)2-), 아미드(예를 들어, -C(O)NR2, 또는 -N(R)C(O)R), 아지도(예를 들어, -N3), 니트로(예를 들어, -NO2), 시아노(예를 들어, -CN), 이소시아노(예를 들어, -NC), 아실옥시(예를 들어, -OC(O)R), 아미노(예를 들어, -NR2, -NRH 또는 -NH2), 카바모일(예를 들어, -OC(O)NR2, -OC(O)NRH, 또는 -OC(O)NH2), 설폰아미드(예를 들어, -S(O)2NR2, -S(O)2NRH, -S(O)2NH2, -N(R)S(O)2R, -N(H)S(O)2R, -N(R)S(O)2H, 또는 -N(H)S(O)2H), 알킬기, 알케닐기, 및 사이클릴(예를 들어, 카보사이클릴 또는 헤테로사이클릴)기로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 전술한 것 중 임의의 것에서, R은 본원에 정의된 바와 같은 알킬 또는 알케닐기이다. 일부 구현예에서, 치환기 자체는 예를 들어 본원에 정의된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, C1-6 알킬기는 본원에 기재된 바와 같은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다.
질소를 함유하는 본 개시의 화합물은 산화제(예를 들어, 3-클로로퍼옥시벤조산(mCPBA) 및/또는 과산화수소)로의 처리에 의해 N-옥시드로 전환되어 본 개시의 다른 화합물을 제공할 수 있다. 따라서, 나타내고 청구된 모든 질소 함유 화합물은, 원자가 및 구조에 의해 허용되는 경우, 나타낸 화합물 및 그 N-옥시드 유도체(N□O 또는 N+-O-로 지정될 수 있음)를 모두 포함하는 것으로 간주된다. 또한, 다른 경우에, 본 개시의 화합물에서의 질소는 N-하이드록시 또는 N-알콕시 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, N-하이드록시 화합물은 m-CPBA와 같은 산화제에 의한 모체 아민의 산화에 의해 제조될 수 있다. 나타내고 청구된 모든 질소 함유 화합물은 또한 원자가 및 구조에 의해 허용되는 경우, 나타낸 화합물 및 그 N-하이드록시(즉, N-OH) 및 N-알콕시(즉, N-OR로서, R은 치환 또는 비치환 C1-C6 알킬, C1-C6 알케닐, C1-C6 알키닐, 3~14원 카보사이클 또는 3~14원 헤테로사이클임) 유도체를 모두 포괄하는 것으로 간주된다.
하나 이상의 관심 값에 적용되는 본원에 사용된 용어 "대략" 및 "약"은 명시된 참조 값과 유사한 값을 나타낸다. 일부 구현예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 명시되지 않거나 달리 맥락 상 자명하지 않은 한, 명시된 참조 값의 양(크거나 작은) 방향으로 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 이하 내에 속하는 값의 범위를 나타낸다(이러한 수치가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우 제외). 일부 구현예에서, LNP의 지질 성분 중 주어진 화합물의 양의 맥락에서 사용될 때, "약"은 인용된 값의 +/- 10%를 의미할 수 있다. 예를 들어, 약 40%의 주어진 화합물을 갖는 지질 성분을 포함하는 LNP는 30~50%의 화합물을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "화합물"은 도시된 구조의 모든 이성질체 및 동위원소를 포함하는 것을 의미한다. "동위원소"는 원자번호는 같지만 핵의 중성자 수가 다르기 때문에 질량수가 다른 원자를 나타낸다. 일부 구현예에서, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 또한, 본 개시의 화합물, 염 또는 복합체는 용매 또는 물 분자와 조합하여 일상적인 방법에 의해 용매화물 및 수화물을 형성하도록 제조될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "접촉하는"은 둘 이상의 엔티티 간 물리적 연결의 설정을 의미한다. 일부 구현예에서, 포유류 세포를 LNP와 접촉시키는 것은 포유류 세포와 나노입자가 물리적 연결을 공유하도록 제조됨을 의미한다. 생체내 및 생체외 모두에서 세포를 외부 엔티티와 접촉시키는 방법은 생물학 분야에 잘 알려져 있다. 일부 구현예에서, LNP 및 포유류 내에 배치된 포유류 세포의 접촉은 다양한 투여 경로(예를 들어, 정맥내, 근육내, 피내 및 피하)에 의해 수행될 수 있고 다양한 양의 지질 나노입자가 관여될 수 있다. 더욱이, 하나 초과의 포유류 세포가 LNP에 의해 접촉될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "필적하는 방법"은 비교되는(예를 들어, 본 개시의 LNP 제형물울 제조하는) 방법과 필적하는 파라미터 또는 단계를 갖는 방법을 나타낸다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 비교되는 방법의 단계 i), ia), iaa), ib), ii), iia), iib), iic), iid), 및 iie) 중 하나 이상을 갖는 방법이다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 비교되는 방법의 단계 i), ia), iaa), ib), ii), iia), iib), iic), iid), 및 iie) 중 하나 이상을 갖지 않는 방법이다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 비교되는 방법의 단계 ia) 및 ib) 중 하나 이상을 갖지 않는 방법이다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 핵산의 수용성 염을 사용하는 방법이다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 유기 용매 가용성 핵산을 포함하지 않는 유기 용액을 사용하는 방법이다. 일부 구현예에서, "필적하는 방법"은 지질 나노입자 제형물을 투여하기 전에 지질 나노입자를 가공하는 단계를 포함하는 방법이다.
본원에서 사용된 용어 "전달하는"은 엔티티를 목적지에 제공하는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 대상체에 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 것에는 (예를 들어, 정맥내, 근육내, 피내 또는 피하 경로에 의해) 대상체에 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 LNP를 투여하는 것이 관여될 수 있다. 포유류 또는 포유류 세포에 대한 LNP의 투여에는 하나 이상의 세포를 지질 나노입자와 접촉시키는 것이 관여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "증강된 전달"은 관심 표적 조직으로의 대조군 나노입자에 의한 치료제 및/또는 예방제의 전달 수준(예를 들어, MC3, KC2, 또는 DLinDMA)과 비교하여 관심 표적 조직(예를 들어, 포유류 간)으로의 나노입자에 의한 치료제 및/또는 예방제의 더 많은(예를 들어, 적어도 1.5배 이상, 적어도 2배 이상, 적어도 3배 이상, 적어도 4배 이상, 적어도 5배 이상, 적어도 6배 이상, 적어도 7배 이상, 적어도 8배 이상, 적어도 9배 이상, 적어도 10배 더 많은) 전달을 의미한다. 특정 조직으로의 나노입자의 전달 수준은 조직에서 제조된 단백질의 양을 상기 조직의 중량과 비교하거나, 조직에서 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 중량과 비교하거나, 조직에서 제조된 단백질의 양을 상기 조직의 총 단백질의 양과 비교하거나, 조직에서 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 총 치료제 및/또는 예방제의 양과 비교함으로써 측정될 수 있다. 표적 조직으로의 나노입자의 증강된 전달은 치료받는 대상체에서 결정될 필요는 없으며, 동물 모델(예를 들어, 래트 모델)과 같은 대리물에서 결정될 수 있음이 이해될 것이다.
본원에 사용된 용어 "특이적 전달", "특이적으로 전달한다" 또는 "특이적으로 전달하는"은 표적외 조직(예를 들어, 포유류 비장)과 비교하여 관심 표적 조직(예를 들어, 포유류 간)으로의 나노입자에 의한 예방제의 더 많은(예를 들어, 적어도 1.5배 더 많은, 적어도 2배 더 많은, 적어도 3배 더 많은, 적어도 4배 더 많은, 적어도 5배 더 많은, 적어도 6배 더 많은, 적어도 7배 더 많은, 적어도 8배 더 많은, 적어도 9배 더 많은, 적어도 10배 더 많은) 전달을 의미한다. 특정 조직으로의 나노입자의 전달 수준은 조직에서 제조된 단백질의 양을 상기 조직의 중량과 비교하거나, 조직에서 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 중량과 비교하거나, 조직에서 제조된 단백질의 양을 상기 조직의 총 단백질의 양과 비교하거나, 조직에서 치료제 및/또는 예방제의 양을 상기 조직의 총 치료제 및/또는 예방제의 양과 비교함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 신혈관 표적화를 위해 치료제 및/또는 예방제의 전신 투여 후 간 또는 비장에 전달되는 것과 비교하여 조직 1 g 당 1.5, 2배, 3배, 5배, 10배, 15배, 또는 20배 더 많은 치료제 및/또는 예방제가 신장으로 전달되는 경우, 치료제 및/또는 예방제는 포유류 신장에 특이적으로 제공된다. 표적 조직에 특이적으로 전달되는 나노입자의 능력은 치료받는 대상체에서 결정될 필요는 없고, 동물 모델(예를 들어, 래트 모델)과 같은 대리물에서 결정될 수 있음이 이해될 것이다.
본원에 사용된 "캡슐화 효율"은 LNP의 제조에 사용된 치료제 및/또는 예방제의 초기 총량에 대한, LNP의 일부가 되는 치료제 및/또는 예방제의 양을 나타낸다. 일부 구현예에서, 초기에 조성물에 제공된 치료제 및/또는 예방제 총 100 mg 중 97 mg의 치료제 및/또는 예방제가 LNP에 캡슐화되는 경우, 캡슐화 효율은 97%로 주어질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "캡슐화"는 완전한, 실질적인 또는 부분적인 봉입, 국한, 둘러쌈, 또는 인케이싱을 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "캡슐화", "캡슐화된", "로딩된" 및 "연합된"은 완전한, 실질적인 또는 부분적인 봉입, 국한, 둘러쌈 또는 인케이싱을 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "캡슐화" 또는 "연합"은 개별 핵산 분자를 나노입자 내에 국한하고/하거나 개별 핵산 분자 및 나노입자 간 물리화학적 관계를 설정하는 과정을 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "빈 나노입자"는 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없는 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 용어 "치료제 또는 예방제가 실질적으로 없는"은 나노입자가 상당량의 치료제 또는 예방제를 함유하지 않음을 의미한다. 본원에 사용된 "빈 나노입자"는 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 1중량% 미만, 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "빈 나노입자" 또는 "빈 지질 나노입자"는 핵산이 실질적으로 없는 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 용어 "핵산이 실질적으로 없는"은 나노입자가 상당량의 핵산(예를 들어, mRNA)을 함유하지 않음을 의미한다. 본원에 사용된 "빈 나노입자"는 실질적으로 지질 성분만으로 구성되는 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "빈 나노입자"는 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 1중량% 미만, 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 핵산(예를 들어, mRNA)을 포함하는 지질 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "빈 나노입자" 또는 "빈 지질 나노입자"는 뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 실질적으로 없는 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "빈 나노입자" 또는 "빈 지질 나노입자"는 실질적으로 지질 성분만으로 구성되는 나노입자를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 "로딩 LNP", "로딩 나노입자" 또는 "로딩 지질 나노입자"("전체 나노입자" 또는 "전체 지질 나노입자"로도 나타냄)는 빈 나노입자의 성분 및 상당량의 치료제 또는 예방제를 포함하는 나노입자를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 내부에 적어도 부분적으로 존재하는 치료제 또는 예방제를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 표면과 연합되거나 LNP의 외부에 접합된 상당량의 치료제 또는 예방제를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "로딩 LNP", "로딩 LNP", "로딩 나노입자" 또는 "로딩 지질 나노입자"("전체 나노입자" 또는 "전체 지질 나노입자"로도 나타냄)는 빈 나노입자의 성분을 포함하는 나노입자, 및 상당량의 뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 내부에 적어도 부분적으로 존재하는 뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 표면과 연합되거나 LNP의 외부에 접합된 뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 포함한다. 본원에 사용된 "로딩 LNP", "로딩 나노입자" 또는 "로딩 지질 나노입자"("전체 나노입자" 또는 "전체 지질 나노입자"로도 나타냄)는 빈 나노입자의 성분, 및 상당량의 핵산을 포함하는 나노입자를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 내부에 적어도 부분적으로 존재하는 핵산(예를 들어, mRNA)을 포함한다. 일부 구현예에서, 로딩 LNP는 LNP의 표면과 연합되거나 LNP의 외부에 접합된 핵산(예를 들어, mRNA)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 핵산 서열의 "발현"은 mRNA의 폴리펩티드 또는 단백질로의 번역 및/또는 폴리펩티드 또는 단백질의 번역 후 변형을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "시험관내"는 유기체(예를 들어, 동물, 식물 또는 미생물) 내가 아니라 인공 환경, 예를 들어, 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양, 페트리 디쉬 등에서 일어나는 사건을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "생체내"는 유기체(예를 들어, 동물, 식물, 또는 미생물 또는 이의 세포 또는 조직) 내에서 발생하는 사건을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "생체외"는 유기체(예를 들어, 동물, 식물 또는 미생물 또는 이의 세포 또는 조직) 외부에서 발생하는 사건을 나타낸다. 생체외 사건은 자연(예를 들어, 생체내) 환경으로부터 최소 변경된 환경에서 일어날 수 있다.
본원에 사용된 용어 "이성질체"는 화합물의 임의의 기하 이성질체, 호변이체, 쯔비터이온, 입체이성질체, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체를 의미한다. 화합물은 하나 이상의 키랄 중심 및/또는 이중 결합을 포함할 수 있으므로 이중 결합 이성질체(즉, 기하 E/Z 이성질체) 또는 부분입체이성질체(예를 들어, 거울상이성질체(즉, (+) 또는 (-)) 또는 시스/트랜스 이성질체)와 같은 입체이성질체로 존재할 수 있다. 본 개시는 입체이성질체적으로 순수한 형태(예를 들어, 기하이성질체으로 순수, 거울상이성질체적으로 순수, 또는 부분입체이성질체적으로 순수) 및 거울상이성질체 및 입체이성질체 혼합물, 예를 들어, 라세미체를 포함하는 본원에 기재된 화합물의 임의의 모든 이성질체를 포괄한다. 화합물의 거울상이성질체 및 입체이성질체 혼합물 및 이들을 이의 성분 거울상이성질체 또는 입체이성질체로 분해하는 수단은 잘 알려져 있다.
"호변이체"는 평형 상태로 존재하고 하나의 이성질체 형태에서 또 다른 이성질체 형태로 쉽게 전환되는 둘 이상의 구조 이성질체 중 하나이다. 이 전환은 인접한 공액 이중 결합의 변환이 동반되는 수소 원자의 겉보기 이동을 초래한다. 호변이체는 용액에서 호변이체 세트의 혼합물로 존재한다. 호변이성화가 가능한 용액에서는, 호변이체의 화학적 평형에 도달할 것이다. 호변이체의 정확한 비는 온도, 용매 및 pH를 포함하는 여러 요인에 의존한다. 호변이성화에 의해 상호전환 가능한 호변이체의 개념은 호변이성으로 불린다.
가능한 다양한 유형의 호변이체 중에서, 두 가지가 일반적으로 관찰된다. 케토-에놀 호변이성에서는 전자 및 수소 원자의 동시 이동이 발생한다. 고리 사슬 호변이성은 당 사슬 분자의 알데하이드기(-CHO)가 동일한 분자의 하이드록시기(-OH) 중 하나와의 반응 결과 글루코스에 의해 나타나는 사이클릭(고리형) 형태를 제공하여 생긴다.
일반적인 호변이체 쌍은 케톤-에놀, 아미드-니트릴, 락탐-락팀, 헤테로사이클릭 고리(예를 들어, 구아닌, 티민 및 시토신과 같은 핵염기)에서의 아미드-이미드산 호변이성, 이민-엔아민 및 엔아민-엔아민이다. 2치환 구아니딘의 호변이성의 예를 아래에 나타낸다.
Figure pct00001
본 개시의 화합물은 상이한 호변이체로서 도시될 수 있음이 이해되어야한다. 화합물이 호변이체 형태를 갖는 경우, 모든 호변이체 형태가 본 개시의 범위에 포함되는 것으로 의도되고, 화합물의 명명은 임의의 호변이체 형태를 배제하지 않음이 이해되어야 한다.
본원에 사용된 "지질 성분"은 하나 이상의 지질을 포함하는 지질 나노입자의 성분이다. 일부 구현예에서, 지질 성분은 하나 이상의 양이온성/이온화 가능, PEG화, 구조, 또는 인지질과 같은 기타 지질을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "링커"는 2개의 모이어티를 연결하는 모이어티, 예를 들어 캡(cap) 종의 2개의 뉴클레오시드 간 연결이다. 링커는 포스페이트기(예를 들어, 포스페이트, 보라노포스페이트, 티오포스페이트, 셀레노포스페이트, 및 포스포네이트), 알킬기, 아미데이트 또는 글리세롤을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 캡 유사체의 2개의 뉴클레오시드는 이의 5' 위치에서 트리포스페이트기에 의해 또는 2개의 포스페이트 모이어티 및 보라노포스페이트 모이어티를 포함하는 사슬에 의해 결합될 수 있다.
본원에 사용된 "투여 방법"은 정맥내, 근육내, 피내, 피하, 또는 대상체에 조성물을 전달하는 다른 방법을 포함할 수 있다. 투여 방법은 신체의 특정 영역 또는 시스템으로 전달을 표적화하기 위해(예를 들어, 구체적으로 전달하기 위해) 선택될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "변형된"은 비천연을 의미한다. 일부 구현예에서, RNA는 변형된 RNA일 수 있다. 즉, RNA는 자연 발생이 아닌 하나 이상의 핵염기, 뉴클레오시드, 뉴클레오티드 또는 링커를 포함할 수 있다. "변형된" 종은 또한 본원에서 "변경된" 종으로 나타낼 수 있다. 종은 화학적으로, 구조적으로 또는 기능적으로 변형되거나 변경될 수 있다. 일부 구현예에서, 변형된 핵염기 종은 자연 발생이 아닌 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "N:P 비"는 지질 내 이온화 가능(생리적 pH 범위 내의) 질소 원자 대 RNA, 예를 들어 지질 성분 및 RNA를 포함하는 LNP 내 포스페이트기의 몰 비이다.
본원에 사용된 바와 같은 "지질 나노입자"는 하나 이상의 지질을 포함하는 조성물이다. 지질 나노입자는 전형적으로 마이크로미터 수준의 크기를 가지며 지질 이중층을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 지질 나노입자는 달리 명시되지 않는 한, 지질 나노입자(LNP), 리포좀(예를 들어, 지질 소포), 및 리포플렉스를 포괄한다. 일부 구현예에서, LNP는 지름이 500 nm 이하인 지질 이중층을 갖는 리포좀일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "자연 발생"은 인공적인 도움 없이 자연에 존재하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은, "환자"는 치료를 원하거나 필요로 할 수 있거나, 치료를 필요로 하거나, 치료를 받고 있거나, 치료를 받을 대상체, 또는 특정 질환 또는 병태에 대해 숙련된 전문가에 의한 케어를 받는 대상체를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 "PEG 지질" 또는 "PEG화 지질"은 폴리에틸렌 글리콜 성분을 포함하는 지질을 나타낸다.
본원에 사용된 "중합체성 지질"은 그 화학 구조에 반복 서브유닛을 포함하는 지질을 나타낸다. 일부 구현예에서, 중합체성 지질은 중합체 성분을 포함하는 지질이다. 일부 구현예에서, 중합체성 지질은 PEG 지질이다. 일부 구현예에서, 중합체성 지질은 PEG 지질이 아니다. 일부 구현예에서, 중합체성 지질은 Brij 또는 OH-PEG-스테아레이트이다.
문구 "약학적으로 허용 가능한"은 철저한 의학적 판단 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고 합리적인 이익/위험비에 상응하는, 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여형을 나타내기 위해 본원에 사용된다.
본원에 사용된 문구 "약학적으로 허용 가능한 부형제"는 본원에 기재된 화합물 이외의, 실질적으로 비독성이고 환자에서 비염증성인 특성을 갖는 임의의 성분(예를 들어, 활성 화합물을 현탁, 착화 또는 용해할 수 있는 비히클)을 나타낸다. 부형제는 예를 들어 접착 방지제, 항산화제, 결합제, 코팅, 압축 보조제, 붕해제, 염료(색소), 연화제, 유화제, 충전제(희석제), 필름 형성제 또는 코팅, 향료, 방향제, 활택제(흐름 증강제), 윤활제, 보존제, 인쇄 잉크, 흡착제, 현탁 또는 분산제, 감미료 및 수화용수를 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트(이염기성), 칼슘 스테아레이트, 크로스카멜로스, 가교 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 마그네슘 스테아레이트, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸파라벤, 미정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 사전젤라틴화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 셸락, 실리콘 디옥시드, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 나트륨 시트레이트, 전분 글리콜레이트, 소르비톨, 전분(옥수수), 스테아르산, 수크로스, 활석, 티타늄 디옥시드, 비타민 A, 비타민 E(알파-토코페롤), 비타민 C, 자일리톨, 및 본원에 개시된 기타 종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서, 상기 화합물의 구조식은 일부 경우 편의상 특정 이성질체를 나타내지만, 본 개시는 기하 이성질체, 비대칭 탄소계 광학 이성질체, 입체이성질체, 호변이체 등과 같은 모든 이성질체를 포함하고, 모든 이성질체가 동일한 수준의 활성을 가질 수 있는 것이 아님이 이해된다. 또한, 상기 화학식으로 표시되는 화합물에 대해 결정 다형성이 존재할 수 있다. 임의의 결정 형태, 결정 형태 혼합물, 또는 이의 무수물 또는 수화물이 본 개시의 범위에 포함됨이 주지되어야 한다.
용어 "결정 다형체", "다형체" 또는 "결정 형태"는 화합물(또는 이의 염 또는 용매화물)이 모두 동일한 원소 조성을 갖는 상이한 결정 패킹 배열로 결정화할 수 있는 결정 구조를 의미한다. 다른 결정 형태는 일반적으로 상이한 X선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 융점, 밀도 경도, 결정 모양, 광학적 및 전기적 특성, 안정성 및 용해도를 갖는다. 재결정화 용매, 결정화 속도, 보관 온도 및 기타 요인은 하나의 결정 형태가 우세하도록 유도할 수 있다. 화합물의 결정 다형체는 상이한 조건 하의 결정화에 의해 제조될 수 있다.
조성물은 또한 하나 이상의 화합물의 염을 포함할 수 있다. 염은 약학적으로 허용 가능한 염일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "약학적으로 허용 가능한 염"은 모체 화합물이 존재하는 산 또는 염기 모이어티를 그 염 형태로 전환함으로써(예를 들어, 유리 염기 기를 적합한 유기산과 반응시킴으로써) 변경된 개시된 화합물의 유도체를 나타낸다. 약학적으로 허용 가능한 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 무기산염 또는 유기산염; 카복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이드, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등 뿐만 아니라 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 비독성 암모늄, 사차 암모늄, 및 아민 양이온을 포함한다. 본 개시의 약학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모체 화합물의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 본 개시의 약학적으로 허용 가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모체 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매, 또는 둘의 혼합물에서 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 비수성 매질은 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴이다. 적합한 염의 목록은 각각 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 문헌(Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, 및 Berge 등, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977))에서 확인된다.
본원에 사용된 바와 같은 "인지질"은 포스페이트 모이어티 및 불포화 지방산 사슬과 같은 하나 이상의 탄소 사슬을 포함하는 지질이다. 인지질은 하나 이상의 다중(예를 들어, 이중 또는 삼중) 결합(예를 들어, 하나 이상의 불포화부)을 포함할 수 있다. 인지질 또는 이의 유사체 또는 유도체는 콜린을 포함할 수 있다. 인지질 또는 그의 유사체 또는 유도체는 콜린을 포함하지 않을 수 있다. 특정 인지질은 막에 대한 융합을 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 양이온성 인지질은 막(예를 들어, 세포막 또는 세포내막)의 하나 이상의 음으로 하전된 인지질과 상호작용할 수 있다. 막에 대한 인지질의 융합은 지질-함유 조성물의 하나 이상의 요소가 막을 통과하도록 하여, 예를 들어 하나 이상의 요소의 세포로의 전달을 허용할 수 있다.
본원에 사용된 "다분산 지수"는 시스템의 입자 크기 분포의 균질성을 설명하는 비이다. 작은 값, 예를 들어 0.3 미만은 좁은 입자 크기 분포를 나타낸다.
본원에 사용된 양친매성 "중합체"는 올리고머 또는 중합체를 포함하는 양친매성 화합물이다. 일부 구현예에서, 양친매성 중합체는 2개 이상의 PEG 단량체 단위와 같은 올리고머 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 양친매성 중합체는 PS 20일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "폴리펩티드" 또는 "관심 폴리펩티드"는 자연적으로, 예를 들어, 단리 또는 정제되어) 또는 합성적으로 제조될 수 있는 펩티드 결합에 의해 전형적으로 연결된 아미노산 잔기의 중합체를 나타낸다.
본원에 사용된 "RNA"는 자연 또는 비-자연 발생일 수 있는 리보핵산을 나타낸다. 일부 구현예에서, RNA는 하나 이상의 핵염기, 뉴클레오시드, 뉴클레오티드 또는 링커와 같은 변형된 및/또는 비-자연 발생 성분을 포함할 수 있다. RNA는 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오시드, 줄기 루프, 폴리 A 서열 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. RNA는 관심 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, RNA는 메신저 RNA(mRNA)일 수 있다. 특정 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA의 번역, 예를 들어 포유류 세포 내부의 mRNA의 생체내 번역은 암호화된 폴리펩티드를 제조할 수 있다. RNA는 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서(Dicer)-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), mRNA, 긴 비-코딩 RNA(lncRNA) 및 이의 혼합물로 구성되는 비제한적 군으로부터 선택될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "단일 단위 용량"은 1회 용량/1회/단일 경로/단일 접촉 지점, 즉 단일 투여 사건으로 투여되는 임의의 치료제의 용량이다.
본원에 사용된 바와 같은 "분할 용량"은 단일 단위 용량 또는 총 1일 용량의 2개 이상의 용량으로의 분할이다.
본원에 사용된 바와 같은 "총 1일 용량"은 24시간의 기간 동안 주어지거나 처방되는 양이다. 단일 단위 용량으로 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "대상체"는 예를 들어 실험, 진단, 예방 및/또는 치료 목적을 위해 본 개시에 따른 조성물 또는 제형물이 투여될 수 있는 임의의 유기체를 나타낸다. 전형적인 대상체는 동물(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 비인간 영장류 및 인간과 같은 포유류) 및/또는 식물을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "Tx"는 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물 또는 LNP 제형물의 핵산 온전성(예를 들어, mRNA 온전성)이 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물 또는 LNP 제형물의 제조에 사용되는 핵산(예를 들어, mRNA)의 최초 온전성의 약 X로 분해되는 데 걸리는 시간의 양을 나타낸다. 예를 들어, "T80%"는 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물 또는 LNP 제형물의 핵산 온전성(예를 들어, mRNA 온전성)이 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물, 또는 LNP 제형물의 제조에 사용되는 핵산(예를 들어, mRNA)의 초기 온전성의 약 80%로 분해되는 데 걸리는 시간의 양을 나타낸다. 또 다른 예에서, "T1/2"은 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물 또는 LNP 제형물의 핵산 온전성(예를 들어, mRNA 온전성)이 LNP, LNP 용액, 동결건조된 LNP 조성물 또는 LNP 제형물의 제조에 사용된 핵산(예를 들어, mRNA)의 초기 온전성의 약 1/2로 분해되는 데 걸리는 시간의 양을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 "표적화된 세포"는 임의의 하나 이상의 관심 세포를 나타낸다. 세포는 시험관내, 생체내, 원 위치, 또는 유기체의 조직 또는 기관에서 확인될 수 있다. 유기체는 동물일 수 있다. 일부 구현예에서, 유기체는 포유류이다. 일부 구현예에서, 유기체는 인간이다. 일부 구현예에서, 유기체는 환자이다.
본원에 사용된 바와 같은 "표적 조직"은 치료제 및/또는 예방제의 전달이 요망되는 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 초래할 임의의 하나 이상의 관심 조직 유형을 나타낸다. 관심 표적 조직의 예는 특정 조직, 기관, 시스템 또는 이의 그룹을 포함한다. 특정 적용에서, 표적 조직은 신장, 폐, 비장, 혈관 내의 혈관 내피(예를 들어, 관상동맥내 또는 대퇴골내), 또는 종양 조직(예를 들어, 종양내 주사를 통해)일 수 있다. "표적-외 조직"은 암호화된 단백질의 발현이 요망되는 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 초래하지 않는 임의의 하나 이상의 조직 유형을 나타낸다. 특정 적용에서, 표적-외 조직은 간과 비장을 포함할 수 있다.
용어 "치료제" 또는 "예방제"는 대상체에 투여되는 경우, 치료, 진단 및/또는 예방 효과를 갖고/갖거나 요망되는 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 유발하는 임의의 제제를 나타낸다. 치료제는 "활성제" 또는 "활성 제제"로도 나타낸다. 이러한 제제는 세포독소, 방사성 이온, 화학치료제, 소분자 약물, 단백질 및 핵산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 감염, 질환, 장애 및/또는 병태를 앓고 있거나 이에 취약한 대상체에 투여되는 경우, 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 치료, 증상 개선, 진단, 예방 및/또는 발병 지연을 위해 충분한 전달될 제제(예를 들어, 핵산, 약물, 조성물, 치료제, 진단제, 예방제 등)의 양을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 "형질감염"은 세포 내로의 종(예를 들어, RNA)의 도입을 나타낸다. 형질감염은 예를 들어 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 일어날 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료하는"은 특정 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징의 부분적인 또는 완전한 경감, 완화, 개선, 해소, 발병 지연, 진행 억제, 중증도 감소 및/또는 발생률 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 암을 "치료하는" 것은 종양의 생존, 성장 및/또는 확산을 억제하는 것을 나타낼 수 있다. 치료는 질환, 장애, 및/또는 병태와 연관된 병리 발생의 위험을 감소시킬 목적으로 질환, 장애 및/또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체에 및/또는 질환, 장애 및/또는 병태의 초기 징후만 나타내는 대상체에 투여될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "제타 전위"는 예를 들어 입자 조성물에서 지질의 동전기적 전위이다.
이온화 가능 지질
본 개시는 이온화 가능 지질을 제공한다. 일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 중심 아민 모이어티 및 적어도 하나의 생분해성 기를 포함한다. 일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 아미노 지질이다. 본원에 기재된 지질은 포유류 세포 또는 기관으로의 치료제 및/또는 예방제, 예를 들어 핵산의 전달을 위한 지질 나노입자 및 지질 나노입자 제형물에서 유리하게 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-1의 화합물, 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-1]
Figure pct00002
식 중,
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R2 및 R3은 이들이 부착된 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카보사이클을 형성하고;
R4는 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환 C1-6 알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며, Q는 카보사이클, 헤테로사이클, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, -N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 각각의 o는 1, 2, 3 및 4로부터 독립적으로 선택되고, 각각의 n은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5는 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고, M"은 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR* , 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고,
각각의 q는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br 및 I로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 13으로부터 선택되고; R4가 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2인 경우, (i) n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 Q는 -N(R)2가 아니거나, (ii) n이 1 또는 2일 때 Q는 5, 6 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-X의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-X]
Figure pct00003
식 중,
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R2 및 R3은 이들이 부착된 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카보사이클을 형성하고;
R4는 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ,-CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환 C1-6 알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며, Q는 카보사이클, 헤테로사이클, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, -N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 각각의 o는 독립적으로 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고, 각각의 n은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 독립적으로 선택되고;
Rx는 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, -(CH2)vOH, 및 -(CH2)vN(R)2로 구성되는 군으로부터 선택되고,
v는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되고;
각각의 R5는 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴기, 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고, M"은 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R10은 H, OH, C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, (CH2)qOR* , 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고,
각각의 q는 1, 2 및 3으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br 및 I로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 13으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-IA의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-IA]
Figure pct00004
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고; m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, -(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ, 또는 -(CH2)nQ이고, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 예를 들어, m은 5, 7 또는 9이다. 예를 들어, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2 또는 -NHC(O)N(R)2이다. 예를 들어, Q는 -N(R)C(O)R 또는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-IB의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-IB]
Figure pct00005
,
식 중, 모든 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 일부 구현예에서, m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, 또는 -(CH2)nQ이며, Q는 -OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, m은 5, 7, 또는 9이다. 일부 구현예에서, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, 또는 -NHC(O)N(R)2이다. 일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-II의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 슬랫(slat) 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-II]
Figure pct00006
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되며; M1은 결합 또는 M'이고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, 또는 -(CH2)nQ이며, n은 2, 3 또는 4이고 Q는 -OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-VI의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-VI]
Figure pct00007
식 중,
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR" 및 -R"M'R'으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R2 및 R3은 이들이 부착된 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카보사이클을 형성하고;
각각의 R5는 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 OH, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴기, 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고, M"은 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, 및 C2-3 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
RN은 H, 또는 C1-3 알킬이고;
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br 및 I로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
Xa 및 Xb는 각각 독립적으로 O 또는 S이고;
R10은 H, 할로, -OH, R, -N(R)2, -CN, -N3, -C(O)OH, -C(O)OR, -OC(O)R, -OR, -SR, -S(O)R, -S(O)OR, -S(O)2OR, -NO2, -S(O)2N(R)2, -N(R)S(O)2R, -NH(CH2)t1N(R)2, -NH(CH2)p1O(CH2)q1N(R)2, -NH(CH2)s1OR, -N((CH2)s1OR)2, 카보사이클, 헤테로사이클, 아릴 및 헤테로아릴로 구성되는 군으로부터 선택되고;
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 13으로부터 선택되고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
r은 0 또는 1이고;
t1은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고;
p1은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고;
q1은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고; 및
s1은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VI-a의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VI-a]
Figure pct00008
식 중,
R1a 및 R1b는 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
R2 및 R3은 C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR" 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R2 및 R3은 이들이 부착된 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카보사이클을 형성한다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VII의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VII]
Figure pct00009
식 중,
l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고;
M1은 결합 또는 M'이고; 및
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIII의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIII]
Figure pct00010
식 중,
l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고;
M1은 결합 또는 M'이고; 및
Ra' 및 Rb'은 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
R2 및 R3은 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
화학식 IL-I, IL-IA, IL-VI, IL-VI-a, IL-VII 또는 IL-VIII 중 어느 하나의 화합물은 해당되는 경우 하기 특징 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, M1은 M'이다.
일부 구현예에서, M 및 M'은 독립적으로 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이다.
특정 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-이다.
특정 구현예에서, M은 -OC(O)-이고 M'은 -C(O)O-이다. 일부 구현예에서, M은 -C(O)O-이고 M'은 -OC(O)-이다. 특정 구현예에서, M 및 M'은 각각 -OC(O)-이다. 일부 구현예에서, M 및 M'은 각각 -C(O)O-이다.
특정 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -OC(O)-M"-C(O)O-이다.
일부 구현예에서, M 및 M'은 독립적으로 -S-S-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 적어도 하나는 -S-S-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 하나는 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고 다른 하나는 -S-S-이다. 예를 들어, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고 M'은 -S-S-이거나 M'은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고 M은 -S-S-이다.
일부 구현예에서, M 및 M' 중 하나는 -OC(O)M"-C(O)O-이고, M"은 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이다. 다른 구현예에서, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이다. 특정 구현예에서, M"은 C1-4 알킬 또는 C2-4 알케닐이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C1 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C2 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C3 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C4 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C2 알케닐이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C3 알케닐이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, M"은 C4 알케닐이다.
일부 구현예에서, l은 1, 3, 또는 5이다.
일부 구현예에서, R4는 수소이다.
일부 구현예에서, R4는 수소가 아니다.
일부 구현예에서, R4는 비치환 메틸 또는 -(CH2)nQ이고, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, Q는 OH이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(S)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(O)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)S(O)2R이다.
일부 구현예에서, Q는 -O(CH2)nN(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -O(CH2)nOR이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)R8이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(=NR9)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -NHC(=CHR9)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -OC(O)N(R)2이다.
일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)OR이다.
일부 구현예에서, n은 2이다.
일부 구현예에서, n은 3이다.
일부 구현예에서, n은 4이다.
일부 구현예에서, M1은 존재하지 않는다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 R5는 하이드록실이다. 예를 들어, 하나의 R5는 하이드록실이다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 R6은 하이드록실이다. 예를 들어, 하나의 R6은 하이드록실이다.
일부 구현예에서 R5 및 R6 중 하나는 하이드록실이다. 예를 들어, 하나의 R5는 하이드록실이고 각각의 R6은 수소이다. 예를 들어, 하나의 R6은 하이드록실이고 각각의 R5는 수소이다.
일부 구현예에서, Rx는 C1-6 알킬이다. 일부 구현예에서, Rx는 C1-3 알킬이다. 예를 들어, Rx는 메틸이다. 예를 들어, Rx는 에틸이다. 예를 들어, Rx는 프로필이다.
일부 구현예에서, Rx는 -(CH2)vOH이고, v는 1, 2 또는 3이다. 예를 들어, Rx는 메타노일이다. 예를 들어, Rx는 에타노일이다. 예를 들어, Rx는 프로파노일이다.
일부 구현예에서, Rx는 -(CH2)vN(R)2이고, v는 1, 2 또는 3이고 각각의 R은 H 또는 메틸이다. 예를 들어, Rx는 메탄아미노, 메틸메탄아미노 또는 디메틸메탄아미노이다. 예를 들어, Rx는 아미노메타닐, 메틸아미노메타닐 또는 디메틸아미노메타닐이다. 예를 들어, Rx는 아미노에타닐, 메틸아미노에타닐 또는 디메틸아미노에타닐이다. 예를 들어, Rx는 아미노프로파닐, 메틸아미노프로파닐 또는 디메틸아미노프로파닐이다.
일부 구현예에서, R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", 또는 -YR"이다.
일부 구현예에서, R2 및 R3은 독립적으로 C3-14 알킬 또는 C3-14 알케닐이다.
일부 구현예에서, R1b는 C1-14 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C2-14 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C3-14 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C1-8 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C1-5 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C1-3 알킬이다. 일부 구현예에서, R1b는 C1 알킬, C2 알킬, C3 알킬, C4 알킬, 및 C5 알킬로부터 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1b는 C1 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1b는 C2 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1b는 C3 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1b는 C4 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R1b는 C5 알킬이다.
일부 구현예에서, R1은 -(CHR5 R6)m-M-CR2R3R7과 상이하다.
일부 구현예에서, -CHR1aR1b-는 -(CHR5R6)m-M-CR2R3R7과 상이하다.
일부 구현예에서, R7은 H이다. 일부 구현예에서, R7은 C1-3 알킬로부터 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R7은 C1 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R7은 C2 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, R7은 C3 알킬이다. 일부 구현예에서, R7은 C4 알킬, C4 알케닐, C5 알킬, C5 알케닐, C6 알킬, C6 알케닐, C7 알킬, C7 알케닐, C9 알킬, C9 알케닐, C11 알킬, C11 알케닐, C17 알킬, C17 알케닐, C18 알킬, 및 C18 알케닐로부터 선택된다.
일부 구현예에서, Rb'은 C1-14 알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C2-14알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C3-14 알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C1-8 알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C1-5 알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C1-3 알킬이다. 일부 구현예에서, Rb'은 C1 알킬, C2 알킬, C3 알킬, C4 알킬 및 C5 알킬로부터 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Rb'은 C1 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Rb'은 C2 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Rb'은 C3 알킬이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Rb'은 C4 알킬이다.
한 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IIa의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IIa]
Figure pct00011
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IIb의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IIb]
Figure pct00012
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IIc 또는 IL-IIe의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IIc]
Figure pct00013
또는
[화학식 IL-IIe]
Figure pct00014
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IIf의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IIf]
Figure pct00015
식 중, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이고, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고, n은 2, 3 및 4로부터 선택된다.
추가 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IId의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IId]
Figure pct00016
식 중, n은 2, 3 또는 4이고; m, R', R", 및 R2 내지 R6은 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R2 및 R3 각각은 C5-14 알키 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
추가 구현예에서, 화학식 IL-I의 화합물은 화학식 IL-IIg의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 IL-IIg]
Figure pct00017
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되며; m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, M"은 C1-6 알킬(예를 들어, C1-4 알킬) 또는 C2-6 알케닐(예를 들어, C2-4 알케닐)이다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIa의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIa]
Figure pct00018
.
또 다른 구현예에서, 화학식 VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIIa의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIIa]
Figure pct00019
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIIb의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIIb]
Figure pct00020
.
일부 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIb-1의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIb-1]
Figure pct00021
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIb-2의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIb-2]
Figure pct00022
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIb-3의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIb-3]
Figure pct00023
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIc의 화합물을 포함한다:
[화학식 IL-VIIc]
Figure pct00024
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIId의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIId]
Figure pct00025
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIIc의 화합물을 포함한다:
[화학식 IL-VIIIc]
Figure pct00026
.
또 다른 구현예에서, 화학식 IL-VI의 화합물의 하위세트는 화학식 IL-VIIId의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체를 포함한다:
[화학식 IL-VIIId]
Figure pct00027
.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 PCT 출원 번호 PCT/US2020/051613, PCT/US2020/051613, 및 PCT/US2020/051629, 및 PCT 공개 번호 WO 2017/049245, WO 2018/170306, WO 2018/170336, 및 WO 2020/061367에 기재된 화합물 중 하나 이상이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 미국 출원 번호 62/475,166에 기재된 화합물 1~280으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은
Figure pct00028
, 또는 이의 염이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은
Figure pct00029
, 또는 이의 염이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은
Figure pct00030
, 또는 이의 염이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은
Figure pct00031
, 또는 이의 염이다.
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-VIVa의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-VIVa]
Figure pct00032
식 중,
R'a는 R'분지형 또는 R'고리형이고;
R'분지형은
Figure pct00033
이고, R'고리형은
Figure pct00034
이고;
R'b는
Figure pct00035
또는
Figure pct00036
이고;
Figure pct00037
는 부착점을 표시하고;
Raγ 및 Rbγ는 각각 독립적으로 C2-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R4는 -(CH2)2OH이고;
각각의 R'은 독립적으로 C1-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
Ya는 C3-6 카보사이클이고;
R*"a는 C1-15 알킬 및 C2-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
s는 2 또는 3이다.
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-VIVb의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-VIVb]
Figure pct00038
식 중,
R'a는 R'분지형 또는 R'고리형이고;
R'분지형은
Figure pct00039
이고 R'고리형은
Figure pct00040
이고; 및
R'b 는
Figure pct00041
또는
Figure pct00042
이고;
Figure pct00043
는 부착점을 표시하고;
Raγ 및 Rbγ는 각각 독립적으로 C2-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R4는
Figure pct00044
이고,
Figure pct00045
는 부착점을 표시하고;
R10은 N(R)2이고; 각각의 R은 C1-6 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; n2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R'은 독립적으로 C1-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
Ya는 C3-6 카보사이클이고;
R*"a는 C1-15 알킬 및 C2-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
s는 2 또는 3이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00046
Figure pct00047
일부 양태에서, 본 개시의 이온화 가능 지질은 화학식 IL-III의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체 중 하나 이상일 수 있다:
[화학식 IL-III]
Figure pct00048
식 중,
W는
Figure pct00049
또는
Figure pct00050
이고,
고리 A는
Figure pct00051
또는
Figure pct00052
이고;
t는 1 또는 2이고;
A1 및 A2는 각각 독립적으로 CH 또는 N으로부터 선택되고;
Z는 CH2이거나 부재하며, Z가 CH2인 경우 점선 (1) 및 (2)는 각각 단일 결합을 나타내고; Z가 부재하는 경우 점선 (1) 및 (2)는 모두 부재하고;
R1, R2, R3, R4 및 R5는 C5-20 알킬, C5-20 알케닐, -R"MR', -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
RX1 및 RX2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
각각의 M은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -C(O)S-, -SC(O)-, 아릴기 및 헤테로아릴기로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M*은 C1-C6 알킬이고,
W1 및 W2는 각각 독립적으로 -O- 및 -N(R6)-으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R6은 H 및 C1-5 알킬로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
X1, X2 및 X3은 결합, -CH2-, -(CH2)2-, -CHR-, -CHY-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -(CH2)n-C(O)-, -C(O)-(CH2)n-, -(CH2)n-C(O)O-, -OC(O)-(CH2)n-, -(CH2)n-OC(O)-, -C(O)O-(CH2)n-, -CH(OH)-, -C(S)-, 및 -CH(SH)-로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬 및 C3-6 카보사이클로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-12 알킬, C2-12 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-12 알킬, C3-12 알케닐 및 -R*MR'으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
n은 1~6의 정수이고;
고리 A가
Figure pct00053
인 경우,
i) X1, X2, 및 X3 중 적어도 하나는 -CH2-가 아니며; 및/또는
ii) R1, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 -R"MR'이다.
일부 구현예에서, 화합물은 화학식 IL-IIIa1 내지 IL-IIIa8 중 임의의 화합물이다:
[화학식 IL-IIIa1]
Figure pct00054
,
[화학식 IL-IIIa2]
Figure pct00055
,
[화학식 IL-IIIa3]
Figure pct00056
,
[화학식 IL-IIIa4]
Figure pct00057
,
[화학식 IL-IIIa5]
Figure pct00058
,
[화학식 IL-IIIa6]
Figure pct00059
,
[화학식 IL-IIIa7]
Figure pct00060
, 또는
[화학식 IL-IIIa8]
Figure pct00061
.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 PCT 공개 번호 WO 2017/112865, WO 2018/232120에 기재된 화합물 중 하나 이상이다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 PCT 공개 번호 WO 2018/232120에 기재된 화합물 1~156으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 PCT 공개 번호 WO 2017/112865에 기재된 화합물 1~16, 42~66, 68~76, 및 78~156으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은
Figure pct00062
, 또는 이의 염이다.
화학식 IL-1, IL-IA, IL-IB, IL-II, IL-IIa, IL-IIb, IL-IIc, IL-IId, IL-IIe, IL-IIf, IL-IIg, IL-VI, IL-VIIa, IL-VIIIa, IL-VIIIb, IL-VIIb-1, IL-VIIb-2, IL-VIIb-3, IL-VIIc, IL-VIId, IL-VIIIc, IL-VIIId, IL-VIVa, IL-VIVb, IL-III, IL-IIIa1, IL-IIIa2, IL-IIIa3, IL-IIIa4, IL-IIIa5, IL-IIIa6, IL-IIIa7, 또는 IL-IIIa8에 따른 지질의 중심 아민 모이어티는 생리적 pH에서 양성자화될 수 있다. 따라서 지질은 생리적 pH에서 양전하 또는 부분 양전하를 가질 수 있다. 이러한 지질은 양이온성 또는 이온화 가능 (아미노) 지질로 나타낼 수 있다. 지질은 또한 쯔비터이온성, 즉 양전하 및 음전하를 모두 갖는 중성 분자일 수 있다.
일부 구현예에서, 이온화 가능 지질은 3-(디도데실아미노)-N1,N1,4-트리도데실-1-피페라진에탄아민(KL10), N1-[2-(디도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트리도데실-1,4-피페라진디에탄아민(KL22), 14,25-디트리데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트리아콘탄(KL25), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLin-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA), 헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노)부타노에이트(DLin-MC3-DMA), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[1,3]-디옥솔란(DLin-KC2-DMA), 1,2-디올레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DODMA), 2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA(2R)), 및 (2S)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA(2S))으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
폴리에틸렌 글리콜(PEG) 지질
본원에 사용된 용어 "PEG 지질"은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-변형 지질을 나타낸다. PEG 지질의 비제한적인 예는 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티드산, PEG-세라마이드 접합체(예를 들어, PEG-CerC14 또는 PEG-CerC20), PEG-변형 디알킬아민 및 PEG-변형 1,2-디아실옥시프로판-3-아민을 포함한다. 이러한 지질은 또한 PEG화 지질로도 나타낸다. 일부 구현예에서, PEG 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
일부 구현예에서, PEG 지질은 1,2-디미리스토일-sn-글리세롤 메톡시폴리에틸렌 글리콜(PEG-DMG), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[아미노 (폴리에틸렌글리콜)](PEG-DSPE), PEG-디스테릴 글리세롤(PEG-DSG), PEG-디팔메톨레일, PEG-디올레일, PEG-디스테아릴, PEG-디아실글리카미드(PEG-DAG), PEG-디팔미토일 포스파티딜에탄올아민(PEG-DPPE), 또는 PEG-1,2-디미리스틸옥슬프로필-3-아민(PEG-c-DMA)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
한 구현예에서, PEG 지질은 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG-변형 세라마이드, PEG-변형 디알킬아민, PEG-변형 디아실글리세롤, PEG-변형 디알킬글리세롤 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, PEG 지질의 지질 모이어티는 길이가 약 C14 내지 약 C22인 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 지질의 지질 모이어티는 길이가 약 C14 내지 약 C16인 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, PEG 모이어티, 예를 들어 mPEG-NH2는 약 1000, 2000, 5000, 10,000, 15,000 또는 20,000달톤의 크기를 갖는다. 한 구현예에서, PEG 지질은 PEG2k-DMG이다.
한 구현예에서, 본원에 기재된 지질 나노입자는 비확산성 PEG인 PEG 지질을 포함할 수 있다. 비확산성 PEG의 비제한적인 예는 PEG-DSG 및 PEG-DSPE를 포함한다.
PEG 지질은 미국 특허 번호 8158601 및 국제 공개 WO 2015/130584 A2에 기재된 것들과 같이 당분야에 알려져 있으며, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일반적으로, 본원에 기재된 다양한 화학식의 다른 지질 성분(예를 들어, PEG 지질) 중 일부는 "Compositions and Methods for Delivery of the Therapeutic Agents"를 표제로 2016년 12월 10일에 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/US2016/000129에 기재된 바와 같이 합성될 수 있으며, 그 전체가 참조로 포함된다.
지질 나노입자 또는 지질 나노입자 제형물의 지질 성분은 PEG 또는 PEG-변형 지질과 같은 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 하나 이상의 분자를 포함할 수 있다. 이러한 종은 대안적으로 PEG화 지질로 나타낼 수 있다. PEG 지질은 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 지질이다. PEG 지질은 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG-변형 세라마이드, PEG-변형 디알킬아민, PEG-변형 디아실글리세롤, PEG-변형 디알킬글리세롤, 및 이의 혼합물을 포함하는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, PEG 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
일부 구현예에서, PEG-변형 지질은 PEG DMG의 변형된 형태이다. PEG-DMG는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00063
한 구현예에서, 본 발명에서 유용한 PEG 지질은 국제 공개 번호 WO2012099755에 기재된 PEG화 지질일 수 있으며, 이의 내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 본원에 기재된 이들 예시적인 PEG 지질 중 임의의 것은 PEG 사슬 상에 하이드록실기를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, PEG 지질은 PEG-OH 지질이다. 본원에 일반적으로 정의된 바와 같이, "PEG-OH 지질"(또한 본원에서 "하이드록시-PEG화 지질"로 나타냄)은 지질 상에 하나 이상의 하이드록실(-OH)기를 갖는 PEG화 지질이다. 일부 구현예에서, PEG-OH 지질은 PEG 사슬 상에 하나 이상의 하이드록실기를 포함한다. 일부 구현예에서, PEG-OH 또는 하이드록시-PEG화 지질은 PEG 사슬의 말단에 -OH기를 포함한다. 각각의 가능성이 본 발명의 별도 구현예를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용한 PEG 지질은 화학식 PL-I의 화합물이다. 화학식 PL-I의 화합물 또는 이의 염이 본원에 제공된다:
[화학식 PL-I]
Figure pct00064
식 중,
R3은 -ORO이고;
RO는 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 산소 보호기이고;
r은 1 내지 100(경계 포함)의 정수이며,
L1은 임의로 치환된 C1-10 알킬렌이고, 임의로 치환된 C1-10 알킬렌 중 적어도 하나의 메틸렌은 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, -OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 독립적으로 대체되고;
D는 클릭 화학에 의해 수득된 모이어티 또는 생리적 조건 하에 절단 가능한 모이어티이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
A는 화학식
Figure pct00065
또는
Figure pct00066
을 갖고;
L2의 각 경우는 독립적으로 결합 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬렌이고, 임의로 치환된 C1-6 알킬렌의 1개의 메틸렌 단위는 O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), -NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 임의로 대체되고;
R2의 각 경우는 독립적으로 임의로 치환된 C1-30 알킬, 임의로 치환된 C1-30 알케닐, 또는 임의로 치환된 C1-30 알키닐이고; 임의로 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), -NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), -C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), -S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 임의로 대체되고;
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이고;
고리 B는 임의로 치환된 카보사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고; 및
p는 1 또는 2이다.
일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 PEG-OH 지질이다(즉, R3은 -ORO이고, RO는 수소임). 일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 화학식 PL-I-OH의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-I-OH]
Figure pct00067
.
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용한 PEG 지질은 PEG화 지방산이다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 유용한 PEG 지질은 화학식 PL-II의 화합물이다. 화학식 PL-II의 화합물 또는 이의 염이 본원에 제공된다:
[화학식 PL-II]
Figure pct00068
식 중,
R3은 -ORO이고;
RO은 수소, 임의로 치환된 알킬 또는 산소 보호기이고;
r은 1 내지 100(경계 포함)의 정수이고,
R5는 임의로 치환된 C10-40 알킬, 임의로 치환된 C10-40 알케닐, 또는 임의로 치환된 C10-40 알키닐이고; 임의로 R5의 하나 이상의 메틸렌기는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), -C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), -NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN)-, -NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, -S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 대체되고; 및
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이다.
일부 구현예에서, 화학식 PL-II의 화합물은 화학식 PL-II-OH의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-II-OH]
Figure pct00069
식 중,
r은 1 내지 100의 정수이고;
R5는 임의로 치환된 C10-40 알킬, 임의로 치환된 C10-40 알케닐, 또는 임의로 치환된 C10-40 알키닐이고; 임의로 R5의 하나 이상의 메틸렌기는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), -C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), -NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, -S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 대체되고; 및
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이다.
일부 구현예에서, r은 10 내지 80, 20 내지 70, 30 내지 60, 또는 40 내지 50의 정수이다.
일부 구현예에서, r은 45이다.
일부 구현예에서, R5는 C17 알킬이다.
또 다른 구현예에서 화학식 PL-II의 화합물은 다음 화학식의 화합물 또는 이의 염이다
Figure pct00070
.
한 구현예에서, 화학식 PL-II의 화합물은 다음 화학식의 화합물이다
[화학식 PEG-1]
Figure pct00071
.
일부 양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물의 지질 조성은 PEG 지질을 포함하지 않는다.
일부 구현예에서, PEG 지질은 미국 출원 번호 62/520,530에 기재된 PEG 지질 중 하나 이상일 수 있다.
일부 구현예에서, PEG 지질은 화학식 PL-III의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 PL-III]
Figure pct00072
식 중, s는 1 내지 100의 정수이다.
일부 구현예에서, PEG 지질은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 PEG-2]
Figure pct00073
.
구조 지질
본원에 사용된 용어 "구조 지질"은 스테롤 및 또한 스테롤 모이어티를 함유하는 지질을 나타낸다.
지질 나노입자에서 구조 지질의 혼입은 입자에서 다른 지질의 응집을 완화하는 데 도움이 될 수 있다. 구조 지질은 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 토마틴, 우르솔산, 알파-토코페롤, 호파노이드, 피토스테롤, 스테로이드 및 이의 혼합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 토마틴, 우르솔산, 알파-토코페롤, 호파노이드, 피토스테롤, 및 스테로이드로부터 각각 독립적으로 선택된 2개 이상의 성분의 혼합물이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 스테롤이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 2개 이상의 스테롤의 혼합물이다. 본원에 정의된 바와 같이, "스테롤"은 스테로이드 알코올로 구성되는 스테로이드의 하위군이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 콜레스테롤이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 콜레스테롤의 유사체이다. 일부 구현예에서, 구조 지질은 알파-토코페롤이다.
일부 구현예에서, 구조 지질은 미국 출원 번호 62/520,530에 기재된 하나 이상의 구조 지질일 수 있다.
캡슐화제
본 개시의 일부 구현예에서, 캡슐화제는 화학식 EA-I의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 EA-I]
Figure pct00074
식 중,
R201 및 R202는 H, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 및 (C=NH)N(R101)2로 구성되는 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 각각의 R101은 H, C1-C6 알킬, 및 C2-C6 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R203은 C1-C20 알킬 및 C2-C20 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R204는 H, C1-C20 알킬, C2-C20 알케닐, C(O)(OC1-C20 알킬), C(O)(OC2-C20 알케닐), C(O)(NHC1-C20 알킬), 및 C(O)(NHC2-C20 알케닐)로 구성되는 군으로부터 선택되고;
n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R201 및 R202는 각각 독립적으로 H 및 CH3으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R201 및 R202는 각각 독립적으로 (C=NH)NH2 및 (C=NH)N(CH3)2로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R203은 C1-C20 알킬, C8-C18 알킬, 및 C12-C16 알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R204는 H, C1-C20 알킬, C2-C20 알케닐, C(O)(OC1-C20 알킬), C(O)(OC2-C20 알케닐), C(O)(NHC1-C20 알킬), 및 C(O)(NHC2-C20 알케닐); C8-C18 알킬, C8-C18 알케닐, C(O)(OC8-C18 알킬), C(O)(OC8-C18 알케닐), C(O)(NHC8-C18 알킬), 및 C(O)(NHC8-C18 알케닐); 및 C12-C16 알킬, C12-C16 알케닐, C(O)(OC12-C16 알킬), C(O)(OC12-C16 알케닐), C(O)(NHC12-C16 알킬), 및 C(O)(NHC12-C16 알케닐)로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고; n1은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되고; n1은 2, 3, 4로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n1은 3이다.
본 개시의 일부 구현예에서, 캡슐화제는 화학식 EA-II의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 EA-II]
Figure pct00075
식 중,
X101은 결합, NH 또는 O이고;
R101 및 R102는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬 및 C2-C6 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R103 및 R104는 각각 독립적으로 C1-C20 알킬 및 C2-C20 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, X101은 결합이다.
일부 구현예에서, X101은 NH이다.
일부 구현예에서, X101은 O이다.
일부 구현예에서, R101 및 R102는 각각 독립적으로 H 및 CH3로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R103은 C1-C20 알킬, C8-C18 알킬, 및 C12-C16 알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R104는 C1-C20 알킬, C8-C18 알킬, 및 C12-C16 알킬로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고; n1은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되고; n1은 2, 3, 4로부터 선택된다.
일부 구현예에서, n1은 3이다.
예시적인 캡슐화제는 에틸 라우로일 알기네이트, 에틸 미리스토일 알기네이트, 에틸 팔미토일 알기네이트, 에틸 콜레스테롤-알기네이트, 에틸 올레산 알기네이트, 에틸 카프르산 알기네이트, 및 에틸 카프릴산 알기네이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
특정 구현예에서, 캡슐화제는 에틸 라우로일 알기네이트, 또는 이의 염 또는 이성질체이다:
[화학식 ELA-1]
Figure pct00076
.
특정 구현예에서, 캡슐화제는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물 또는 이의 염 및 이성질체, 예를 들어 유리 염기, TFA 염 및/또는 HCl 염이다:
[화학식 EA-2]
Figure pct00077
,
[화학식 EA-3]
Figure pct00078
,
[화학식 EL-4]
Figure pct00079
,
[화학식 EA-5]
Figure pct00080
,
[화학식 EA-6]
Figure pct00081
,
[화학식 EA-7]
Figure pct00082
,
[화학식 EA-8]
Figure pct00083
,
[화학식 EA-9]
Figure pct00084
, 및
[화학식 EA-10]
Figure pct00085
.
인지질
인지질은 하나 이상의 지질 이중층으로 조립될 수 있다. 일반적으로, 인지질은 인지질 모이어티 및 하나 이상의 지방산 모이어티를 포함한다.
인지질 모이어티는 예를 들어 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 세린, 포스파티드산, 2-라이소포스파티딜 콜린, 및 스핑고미엘린으로 구성되는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다.
지방산 모이어티는 예를 들어 라우르산, 미리스트산, 미리스톨레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 알파-리놀렌산, 에루크산, 피탄산, 아라키드산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 베헨산, 도코사펜타엔산 및 도코사헥사엔산으로 구성되는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 인지질은 막에 대한 융합을 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 양이온성 인지질은 막(예를 들어, 세포막 또는 세포내막)의 하나 이상의 음으로 하전된 인지질과 상호작용할 수 있다. 막에 대한 인지질의 융합은 지질 함유 조성물(예를 들어, LNP)의 하나 이상의 요소(예를 들어, 치료제)가 막을 통과하도록 하여, 예를 들어 하나 이상의 요소의 표적 조직으로의 전달을 허용할 수 있다.
분지화, 산화, 고리화 및 알킨을 포함하는 변형 및 치환을 갖는 천연 종을 포함하는 비천연 인지질 종이 또한 고려된다. 일부 구현예에서, 인지질은 하나 이상의 알킨(예를 들어, 하나 이상의 이중 결합이 삼중 결합으로 대체된 알케닐기)으로 작용화되거나 이에 가교될 수 있다. 적절한 반응 조건 하에서, 알킨기는 아지드로의 노출 시 구리-촉매 고리부가 반응을 거칠 수 있다. 이러한 반응은 나노입자 조성물의 지질 이중층을 작용화하여 막 투과 또는 세포 인식을 촉진하는 데 또는 나노입자 조성물을 표적화 또는 조영 모이어티(예를 들어, 염료)와 같은 유용한 성분에 접합하는데 유용할 수 있다.
인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티디 글리세롤, 및 포스파티드산과 같은 글리세로인지질을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 인지질은 또한 스핑고미엘린과 같은 포스포스핑고지질을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 DSPC의 유사체 또는 변이체이다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 화학식 PL-I의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-I]
Figure pct00086
식 중,
각각의 R1은 독립적으로 임의로 치환된 알킬이거나; 임의로 2개의 R1은 개재 원자와 함께 연결되어 임의로 치환된 단환식 카보사이클릴 또는 임의로 치환된 단환식 헤테로사이클릴을 형성하거나; 임의로 3개의 R1은 개재 원자와 함께 연결되어 임의로 치환된 이환식 카보사이클릴 또는 임의로 치환된 이환식 헤테로사이클릴을 형성하고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
A는 화학식
Figure pct00087
또는
Figure pct00088
을 갖고;
L2의 각 경우는 독립적으로 결합 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬렌이고, 임의로 치환된 C1-6 알킬렌의 하나의 메틸렌 단위는 -O-, -N(RN)-, -S-, -C(O)-, -C(O)N(RN)-, -NRNC(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -OC(O)N(RN)-, -NRNC(O)O-, 또는 -NRNC(O)N(RN)-로 임의로 대체되고;
R2의 각 경우는 독립적으로 임의로 치환된 C1-30 알킬, 임의로 치환된 C1-30 알케닐, 또는 임의로 치환된 C1-30 알키닐이고; 임의로 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, -N(RN)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)N(RN)-, -NRNC(O)-, -NRNC(O)N(RN)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -OC(O)N(RN)-, -NRNC(O)O-, -C(O)S-, -SC(O)-, -C(=NRN)-, -C(=NRN)N(RN)-, -NRNC(=NRN)-, -NRNC(=NRN)N(RN)-, -C(S)-, -C(S)N(RN)-, -NRNC(S)-, -NRNC(S)N(RN)-, -S(O)-, -OS(O)-, -S(O)O-, -OS(O)O-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -OS(O)2O-, -N(RN)S(O)-, -S(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)N(RN)-, -OS(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)O-, -S(O)2-, -N(RN)S(O)2-, -S(O)2N(RN)-, -N(RN)S(O)2N(RN)-, -OS(O)2N(RN)-, 또는 -N(RN)S(O)2O-로 독립적으로 대체되고;
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이고;
고리 B는 임의로 치환된 카보사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고; 및
p는 1 또는 2이고;
단, 화합물이 화학식
Figure pct00089
이 아닌 경우,
R2의 각 경우는 독립적으로 비치환 알킬, 비치환 알케닐, 또는 비치환 알키닐이다.
일부 구현예에서, 인지질은 미국 출원 번호 62/520,530에 기재된 인지질 중 하나 이상일 수 있다.
일부 구현예에서, 인지질은 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE), 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린(DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 1,2-디운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린(DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린(18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미숙시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린(OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린(C16 라이소 PC), 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨염(DOPG), 및 스핑고미엘린으로 구성되는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, LNP는 DSPC를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP는 DOPE를 포함한다. 일부 구현예에서, LNP는 DSPC 및 DOPE 둘 다를 포함한다.
i) 인지질 헤드 변형
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 인지질 헤드(예를 들어, 변형된 콜린기)를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 헤드를 갖는 인지질은 DSPC 또는 변형된 4차 아민을 갖는 이의 유사체이다. 일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 구현예에서, R1 중 적어도 하나는 메틸이 아니다. 일부 구현예에서, R1 중 적어도 하나는 수소 또는 메틸이 아니다. 일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 하기 화학식의 화합물 중 하나 또는 이의 염이다:
Figure pct00090
식 중,
각각의 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
각각의 u는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고; 및
각 v는 독립적으로 1, 2 또는 3이다.
일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 화학식 PL-I-a의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-I-a]
Figure pct00091
.
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 글리세리드 모이어티 대신에 고리형 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 유용한 인지질은 글리세리드 모이어티 대신에 고리형 모이어티를 갖는, DSPC 또는 이의 유사체이다. 일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 화학식 PL-I-b의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-I-b]
Figure pct00092
.
ii) 인지질 꼬리 변형
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 꼬리를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 꼬리를 갖는, DSPC 또는 이의 유사체이다. 본원에 기재된 바와 같은 "변형된 꼬리"는 더 짧거나 더 긴 지방족 사슬을 갖는 꼬리, 분지가 도입된 지방족 사슬, 치환기가 도입된 지방족 사슬, 하나 이상의 메틸렌이 고리형 또는 헤테로원자기로 대체된 지방족 사슬, 또는 이의 임의의 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, (PL-I)의 화합물은 화학식 PL-I-a 또는 이의 염이고, R2의 적어도 한 경우는 R2의 각 경우가 임의로 치환된 C1-30 알킬이고, R2의 하나 이상의 메틸렌 단위 는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, -N(RN)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)N(RN)-, -NRNC(O)-, -NRNC(O)N(RN)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -OC(O)N(RN)-, -NRNC(O)O-, -C(O)S-, -SC(O)-, -C(=NRN)-, -C(=NRN)N(RN)-, -NRNC(=NRN)-, -NRNC(=NRN)N(RN)-, -C(S)-, -C(S)N(RN)-, -NRNC(S)-, -NRNC(S)N(RN)-, -S(O)-, -OS(O)-, -S(O)O-, -OS(O)O-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -OS(O)2O-, -N(RN)S(O)-, -S(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)N(RN)-, -OS(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)O-, -S(O)2-, -N(RN)S(O)2-, -S(O)2N(RN)-, -N(RN)S(O)2N(RN)-, -OS(O)2N(RN)-, 또는 -N(RN)S(O)2O-로 독립적으로 대체된다.
일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 화학식 PL-I-c의 화합물 또는 이의 염이다:
[화학식 PL-I-c]
Figure pct00093
식 중,
각각의 x는 독립적으로 0~30(경계 포함)의 정수이고; 및
각각의 경우 G는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, -N(RN)-, -O-, -S-, -C(O)-, -C(O)N(RN)-, -NRNC(O)-, -NRNC(O)N(RN)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -OC(O)N(RN)-, -NRNC(O)O-, -C(O)S-, -SC(O)-, -C(=NRN)-, -C(=NRN)N(RN)-, -NRNC(=NRN)-, -NRNC(=NRN)N(RN)-, -C(S)-, -C(S)N(RN)-, -NRNC(S)-, -NRNC(S)N(RN)-, -S(O)-, -OS(O)-, -S(O)O-, -OS(O)O-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -OS(O)2O-, -N(RN)S(O)-, -S(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)N(RN)-, -OS(O)N(RN)-, -N(RN)S(O)O-, -S(O)2-, -N(RN)S(O)2-, -S(O)2N(RN)-, -N(RN)S(O)2N(RN)-, -OS(O)2N(RN)-, 또는 -N(RN)S(O)2O-로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 각각의 가능성이 본 발명의 별도 구현예를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 포스포콜린 모이어티를 포함하며, 4차 아민을 포스포릴기에 연결하는 알킬 사슬은 에틸렌이 아니다(예를 들어, n은 2가 아님). 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 n이 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인 화학식 PL-I의 화합물이다. 일부 구현예에서, 화학식 PL-I의 화합물은 하기 화학식 중 하나 또는 이의 염이다:
Figure pct00094
.
대안적 지질
일부 구현예에서, 대안적 지질이 본 개시의 인지질 대신에 사용된다. 이러한 대안적 지질의 비제한적인 예는 하기를 포함한다:
Figure pct00095
아주반트
일부 구현예에서, 본원에 기재된 하나 이상의 지질을 포함하는 LNP는 하나 이상의 아주반트, 예를 들어 글루코피라노실 지질 아주반트(GLA), CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(예를 들어, 클래스 A 또는 B), 폴리(I:C), 알루미늄 하이드록시드, 및 Pam3CSK4를 추가로 포함할 수 있다.
치료제
지질 나노입자(예를 들어, 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함할 수 있다. 본 개시는 포유류 세포 또는 기관에 치료제 및/또는 예방제를 전달하고, 포유류 세포에서 관심 폴리펩티드를 제조하고, 포유류에 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자(예를 들어, 빈 LNP 또는 로딩 LNP)를 투여하고/하거나 포유류 세포를 이와 접촉시키는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 포유류에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
치료제 및/또는 예방제는 생물학적 활성 물질을 포함하며 대안적으로 "활성 제제"로 나타낸다. 치료제 및/또는 예방제는 세포 또는 기관에 일단 전달되면 세포, 기관 또는 기타 신체 조직 또는 시스템에서 요망되는 변화를 일으키는 물질일 수 있다. 이러한 종은 하나 이상의 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 특정 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 소분자 약물이다.
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 면역 반응을 유발하는 백신, 화합물(예를 들어, 단백질 또는 폴리펩티드 또는 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자 또는 단백질 또는 폴리펩티드 또는 단백질), 및/또는 또 다른 치료제 및/또는 예방제이다. 백신은 감염성 질환과 관련된 하나 이상의 병태에 대한 면역성을 제공할 수 있고 감염성 질환 유래 항원 및/또는 에피토프를 암호화하는 mRNA를 포함할 수 있는 화합물 및 조제물을 포함한다. 백신은 또한 암세포에 대한 면역 반응을 유도하는 화합물 및 조제물을 포함하고 종양 세포 유래 항원, 에피토프 및/또는 신생에피토프를 암호화하는 mRNA를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 반응을 유발할 수 있는 백신 및/또는 화합물은 본 개시의 조성물을 통해 근육내 투여된다.
다른 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 단백질, 예를 들어 관심 자연 발생 단백질을 증가시키거나 대체하는 데 필요한 단백질이다. 이러한 단백질 또는 폴리펩티드는 자연 발생일 수 있거나, 예를 들어 반감기를 증가시키기 위해 당분야에 알려진 방법을 사용하여 변형될 수 있다. 예시적인 단백질은 세포내거나, 막관통이거나, 분비된다.
폴리뉴클레오티드 및 핵산
일부 구현예에서, 치료제는 단백질 발현을 증강(즉, 증가, 자극, 상향조절)시키는 제제이다. 단백질 발현을 증강시키기 위해 사용될 수 있는 치료제 유형의 비제한적인 예는 RNA, mRNA, dsRNA, CRISPR/Cas9 기술, ssDNA 및 DNA(예를 들어, 발현 벡터)를 포함한다. 단백질 발현을 상향조절하는 제제는 자연 발생 또는 비-자연 발생 단백질(예를 들어, 반감기를 개선하도록 변형된 키메라 단백질, 또는 요망되는 아미노산 변화를 포함하는 단백질)의 발현을 상향조절할 수 있다. 예시적인 단백질은 세포내, 막관통 또는 분비된 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료제는 DNA 치료제이다. DNA 분자는 이중 가닥 DNA, 단일 가닥 DNA(ssDNA), 또는 부분적으로 이중 가닥 DNA인, 즉, 이중 가닥인 부분과 단일 가닥인 부분을 갖는 분자일 수 있다. 일부 경우에 DNA 분자는 삼중 가닥이거나 부분적으로 삼중 가닥이다, 즉, 삼중 가닥인 부분과 이중 가닥인 부분을 갖는다. DNA 분자는 원형 DNA 분자 또는 선형 DNA 분자일 수 있다.
DNA 치료제는 유전자를 세포 내로 전달할 수 있는, 예를 들어 전사체를 암호화하고 발현할 수 있는 DNA 분자일 수 있다. 다른 구현예에서, DNA 분자는 합성 분자, 예를 들어 시험관내 제조된 합성 DNA 분자이다. 일부 구현예에서, DNA 분자는 재조합 분자이다. 비제한적인 예시적인 DNA 치료제는 플라스미드 발현 벡터 및 바이러스 발현 벡터를 포함한다.
본원에 기재된 DNA 치료제, 예를 들어 DNA 벡터는 다양한 상이한 특징을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 DNA 치료제, 예를 들어 DNA 벡터는 비-코딩 DNA 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, DNA 서열은 유전자에 대한 적어도 하나의 조절 요소, 예를 들어 프로모터, 인핸서, 종결 요소, 폴리아데닐화 신호 요소, 스플라이싱 신호 요소 등을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 비-코딩 DNA 서열은 인트론이다. 일부 구현예에서, 비-코딩 DNA 서열은 트랜스포존이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 DNA 서열은 전사적으로 활성인 유전자에 작동 가능하게 연결된 비-코딩 DNA 서열을 가질 수 있다. 다른 구현예에서, 본원에 기재된 DNA 서열은 유전자에 연결되지 않은 비-코딩 DNA 서열을 가질 수 있으며, 즉 비-코딩 DNA는 DNA 서열 상의 유전자를 조절하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 개시의 로딩 LNP에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 핵산이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 리보핵산(RNA) 및 데옥시리보핵산(DNA)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제가 DNA인 경우, DNA는 이중 가닥 DNA, 단일 가닥 DNA(ssDNA), 부분 이중 가닥 DNA, 삼중 가닥 DNA 및 부분 삼중 가닥 DNA로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, DNA는 원형 DNA, 선형 DNA, 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 개시의 로딩 LNP에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 플라스미드 발현 벡터, 바이러스 발현 벡터, 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제가 RNA인 경우, RNA는 단일 가닥 RNA, 이중 가닥 RNA(dsRNA), 부분 이중 가닥 RNA, 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, RNA는 원형 RNA, 선형 RNA 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제가 RNA인 경우, RNA는 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), RNA 간섭(RNAi) 분자, 마이크로 RNA(miRNA), 안타고미르(antagomir), 안티센스 RNA, 리보자임, 다이서-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA), 잠긴 핵산(LNA) 및 CRISPR/Cas9 기술, 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제가 RNA인 경우, RNA는 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA), 및 이의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 mRNA이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 변형된 mRNA(mmRNA)이다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 마이크로-RNA 결합 부위(miR 결합 부위)를 포함하는 mRNA이다. 추가로, 일부 구현예에서, mRNA는 줄기 루프, 사슬 종결 뉴클레오시드, 폴리 A 서열, 폴리아데닐화 신호, 및/또는 5' 캡 구조 중 하나 이상을 포함한다.
mRNA는 자연 또는 비-자연 발생 mRNA일 수 있다. mRNA는 아래에 기재된 바와 같이 하나 이상의 변형된 핵염기, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 이 경우 "변형된 mRNA" 또는 "mmRNA"로 나타낼 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 "뉴클레오시드"는 유기 염기(예를 들어, 퓨린 또는 피리미딘) 또는 이의 유도체(본원에서 "핵염기"로도 나타냄)와 조합된 당 분자(예를 들어, 펜토스 또는 리보스) 또는 이의 유도체를 함유하는 화합물로 정의된다. 본원에 기재된 바와 같이, "뉴클레오티드"는 포스페이트기를 포함하는 뉴클레오시드로 정의된다.
mRNA는 5' 비번역 영역(5'-UTR), 3' 비번역 영역(3'-UTR), 및/또는 코딩 영역(예를 들어, 개방 해독틀)을 포함할 수 있다. mRNA는 수십(예를 들어, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100)개, 수백(예를 들어, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 또는 900)개 또는 수천(예를 들어, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10,000)개의 염기쌍을 포함하는 임의의 적합한 수의 염기쌍을 포함할 수 있다. 핵염기, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 임의의 수(예를 들어, 모두, 일부 또는 없음)는 정규 종의 유사체이거나, 치환되거나, 변형되거나, 달리 비-자연 발생일 수 있다. 특정 구현예에서, 특정 핵염기 유형 모두가 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 모든 우라실 또는 우리딘이 변형된다. 모든 핵염기, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드, 예를 들어 모든 우라실 또는 우리딘이 변형되는 경우, mRNA는 예를 들어 우라실 또는 우리딘에 대해 "완전히 변형된"으로 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 mRNA는 5' 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오티드, 임의로 코작 서열(코작 공통 서열로도 알려짐), 줄기 루프, 폴리 A 서열 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다.
5' 캡 구조 또는 캡 종은 링커에 의해 연결된 2개의 뉴클레오시드 모이어티를 포함하는 화합물이며 자연 발생 캡, 비-자연 발생 캡 또는 캡 유사체, 또는 항-역방향 캡 유사체(ARCA)로부터 선택될 수 있다. 캡 종은 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드 및/또는 링커 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들어, 천연 mRNA 캡은 구아닌 뉴클레오티드 및 이의 5' 위치에서 트리포스페이트 결합으로 연결된 7 위치에서 메틸화된 구아닌(G) 뉴클레오티드, 예를 들어 일반적으로 m7GpppG로 쓰여지는, m7G(5')ppp(5')G를 포함할 수 있다. 캡 종은 또한 항-역방향 캡 유사체일 수 있다. 가능한 캡 종의 비제한적 목록은 m7GpppG, m7Gpppm7G, m73'dGpppG, m27,O3'GpppG, m27,O3'GppppG, m27,O2'GppppG, m7Gpppm7G, m73'dGpppG, m27,m73'dGpppG, m27,O3'GppppG 및 m27,O2'GppppG를 포함한다.
mRNA는 대신에 또는 추가로 사슬 종결 뉴클레오시드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 사슬 종결 뉴클레오시드는 이 당기의 2' 및/또는 3' 위치에서 탈산소화된 뉴클레오시드를 포함할 수 있다. 이러한 종은 3' 데옥시아데노신(코르디세핀), 3' 데옥시우리딘, 3' 데옥시시토신, 3' 데옥시구아노신, 3' 데옥시티민 및 2',3' 디데옥시뉴클레오시드, 예를 들어 2',3' 디데옥시아데노신, 2',3' 디데옥시우리딘, 2',3' 디데옥시시토신, 2',3' 디데옥시구아노신 및 2',3' 디데옥시티민을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어 3'-말단에서, mRNA로의 사슬 종결 뉴클레오티드의 혼입은 mRNA의 안정화를 초래할 수 있다.
mRNA는 대신에 또는 추가로 히스톤 줄기 루프와 같은 줄기 루프를 포함할 수 있다. 줄기 루프는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개 이상의 뉴클레오티드 염기쌍을 포함할 수 있다. 예를 들어, 줄기 루프는 4, 5, 6, 7 또는 8개의 뉴클레오티드 염기쌍을 포함할 수 있다. 줄기 루프는 mRNA의 임의의 영역에 위치할 수 있다. 예를 들어, 줄기 루프는 비번역 영역(5' 비번역 영역 또는 3' 비번역 영역), 코딩 영역, 또는 폴리 A 서열 또는 꼬리 내에, 전에 또는 후에 위치할 수 있다. 일부 구현예에서, 줄기 루프는 번역 개시, 번역 효율 및/또는 전사 종결과 같은 mRNA의 하나 이상의 기능(들)에 영향을 미칠 수 있다.
mRNA는 대신에 또는 추가로 폴리 A 서열 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. 폴리 A 서열은 전체적으로 또는 대부분이 아데닌 뉴클레오티드 또는 이의 유사체 또는 유도체로 이루어질 수 있다. 폴리 A 서열은 또한 안정화 뉴클레오티드 또는 유사체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 폴리 A 서열은 안정화 뉴클레오티드 또는 유사체로서 데옥시티미딘, 예를 들어 역(또는 역결합) 데옥시티미딘(dT)을 포함할 수 있다. 역 dT 및 기타 안정화 폴리 A 서열 변형의 사용에 대한 상세사항은 예를 들어 WO2017/049275 A2에서 확인될 수 있으며, 그 내용이 본원에 참조로 포함된다. 폴리 A 서열은 mRNA의 3' 비번역 영역에 인접하여 위치하는 꼬리일 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리 A 서열은 mRNA의 핵 외수송, 번역 및/또는 안정성에 영향을 미칠 수 있다.
mRNA는 대신에 또는 추가적으로 마이크로RNA 결합 부위를 포함할 수 있다. 마이크로RNA 결합 부위(또는 miR 결합 부위)는 다양한 조직 또는 세포 유형에서 mRNA 발현을 조절하는 데 사용될 수 있다. 예시적인 구현예에서, miR 결합 부위는 mRNA의 3' UTR 서열 내로 조작되어, 예를 들어 인지체 miR을 발현하는 세포 또는 조직에서 mRNA의 분해를 조절한다, 예를 들어 증강시킨다. 이러한 조절은 mRNA의 "표적-외" 발현, 즉 생체내 요망되지 않는 세포 또는 조직에서의 발현을 조절하거나 제어하는 데 유용하다. mir 결합 부위의 사용에 대한 상세사항은 예를 들어 WO 2017/062513 A2에서 확인될 수 있으며, 그 내용이 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, mRNA는 제1 코딩 영역 및 제2 코딩 영역 사이의 내부 번역 개시를 허용하는 내부 리보솜 진입 부위(IRES) 서열을 포함하는 개재 서열, 또는 2A 펩티드와 같은 자가 절단 펩티드를 암호화하는 개재 서열을 갖는 제1 코딩 영역 및 제2 코딩 영역을 포함하는 바이시스트론 mRNA이다. IRES 서열 및 2A 펩티드는 전형적으로 동일한 벡터로부터 여러 단백질의 발현을 증강시키는 데 사용된다. 다양한 IRES 서열이 알려져 있고 당분야에서 이용 가능하며, 예를 들어 뇌심근염 바이러스 IRES를 포함하여 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 하나 이상의 변형된 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드("변형된 mRNA" 또는 "mmRNA"로 나타냄)를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 mRNA는 참조 비변형 mRNA에 비해 증강된 안정성, 세포내 잔류, 증강된 번역 및/또는 mRNA가 도입되는 세포의 선천성 면역 반응의 실질적인 유도의 결여를 포함하는 유용한 특성을 가질 수 있다. 따라서 변형된 mRNA의 사용은 단백질 제조의 효율성, 핵산의 세포내 잔류를 증강시킬 뿐만 아니라 감소된 면역원성을 보유할 수 있다.
일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 상이한 변형된 핵염기, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개 이상)의 상이한 변형된 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 mRNA는 상응하는 비변형 mRNA에 비해, mRNA가 도입된 세포에서 감소된 분해를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 우라실이다. 변형된 우라실을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 슈도우리딘(ψ), 피리딘-4-온 리보뉴클레오시드, 5-아자-우리딘, 6-아자-우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-우리딘(s2U), 4-티오-우리딘(s4U), 4-티오-슈도우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 5-하이드록시-우리딘(ho5U), 5-아미노알릴-우리딘, 5-할로-우리딘(예를 들어, 5-요오도-우리딘 또는 5-브로모-우리딘), 3-메틸-우리딘(m3U), 5-메톡시-우리딘(mo5U), 우리딘 5-옥시아세트산(cmo5U), 우리딘 5-옥시아세트산 메틸 에스테르(mcmo5U), 5-카복시메틸-우리딘(cm5U), 1-카복시메틸-슈도우리딘, 5-카복시하이드록시메틸-우리딘(chm5U), 5-카복시하이드록시메틸-우리딘 메틸 에스테르(mchm5U), 5-메톡시카보닐메틸-우리딘(mcm5U), 5-메톡시카보닐메틸-2-티오-우리딘(mcm5s2U), 5-아미노메틸-2-티오-우리딘(nm5s2U), 5-메틸아미노메틸-우리딘(mnm5U), 5-메틸아미노메틸-2-티오-우리딘(mnm5s2U), 5-메틸아미노메틸-2-셀레노-우리딘(mnm5se2U), 5-카바모일메틸-우리딘(ncm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-우리딘(cmnm5U), 5-카복시메틸아미노메틸-2-티오-우리딘(cmnm5s2U), 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-우리딘(τm5U), 1-타우리노메틸-슈도우리딘, 5-타우리노메틸-2-티오-우리딘(τm5s2U), 1-타우리노메틸-4-티오-슈도우리딘, 5-메틸-우리딘(m5U, 즉, 핵염기 데옥시티민을 가짐), 1-메틸-슈도우리딘(m1ψ), 5-메틸-2-티오-우리딘(m5s2U), 1-메틸-4-티오-슈도우리딘(m1s4ψ), 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 3-메틸-슈도우리딘(m3ψ), 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 디하이드로우리딘(D), 디하이드로슈도우리딘, 5,6-디하이드로우리딘, 5-메틸-디하이드로우리딘(m5D), 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-메톡시-우리딘, 2-메톡시-4-티오-우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, N1-메틸-슈도우리딘, 3-(3-아미노-3-카복시프로필)우리딘(acp3U), 1-메틸-3-(3-아미노-3-카복시프로필)슈도우리딘(acp3ψ), 5-(이소펜테닐아미노메틸)우리딘(inm5U), 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2-티오-우리딘(inm5s2U), α-티오-우리딘, 2'-O-메틸-우리딘(Um), 5,2'-O-디메틸-우리딘(m5Um), 2'-O-메틸-슈도우리딘(ψm), 2-티오-2'-O-메틸-우리딘(s2Um), 5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸-우리딘(mcm5Um), 5-카바모일메틸-2'-O-메틸-우리딘(ncm5Um), 5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸-우리딘(cmnm5Um), 3,2'-O-디메틸-우리딘(m3Um), 및 5-(이소펜테닐아미노메틸)-2'-O-메틸-우리딘(inm5Um), 1-티오-우리딘, 데옥시티미딘, 2'-F-아라-우리딘, 2'-F-우리딘, 2'-OH-아라-우리딘, 5-(2-카보메톡시비닐)우리딘, 5-[3(1-E-프로페닐아미노)]우리딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 시토신이다. 변형된 시토신을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 5-아자-시티딘, 6-아자-시티딘, 슈도이소시티딘, 3-메틸-시티딘(m3C), N4-아세틸-시티딘(ac4C), 5-포르밀-시티딘(f5C), N4-메틸-시티딘(m4C), 5-메틸-시티딘(m5C), 5-할로-시티딘(예를 들어, 5-요오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘(hm5C), 1-메틸-슈도이소시티딘, 피롤로-시티딘, 피롤로-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘(s2C), 2-티오-5-메틸-시티딘, 4-티오-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-슈도이소시티딘, 4-티오-1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-슈도이소시티딘, 제불라린, 5-아자-제불라린, 5-메틸-제불라린, 5-아자-2-티오-제불라린, 2-티오-제불라린, 2-메톡시-시티딘, 2-메톡시-5-메틸-시티딘, 4-메톡시-슈도이소시티딘, 4-메톡시-1-메틸-슈도이소시티딘, 라이시딘(k2C), α-티오-시티딘, 2'-O-메틸-시티딘(Cm), 5,2'-O-디메틸-시티딘(m5Cm), N4-아세틸-2'-O-메틸-시티딘(ac4Cm), N4,2'-O-디메틸-시티딘(m4Cm), 5-포르밀-2'-O-메틸-시티딘(f5Cm), N4,N4,2'-O-트리메틸-시티딘(m42Cm), 1-티오-시티딘, 2'-F-아라시티딘, 2'-F-시티딘 및 2'-OH-아라시티딘을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 α-티오-아데노신, 2-아미노-퓨린, 2,6-디아미노퓨린, 2-아미노-6-할로-퓨린(예를 들어, 2-아미노-6-클로로-퓨린), 6-할로-퓨린(예를 들어, 6-클로로-퓨린), 2-아미노-6-메틸-퓨린, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-2,6-디아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-디아미노퓨린, 1-메틸-아데노신(m1A), 2-메틸-아데닌(m2A), N6-메틸-아데노신(m6A), 2-메틸티오-N6-메틸-아데노신(ms2m6A), N6-이소펜테닐-아데노신(i6A), 2-메틸티오-N6-이소펜테닐-아데노신(ms2i6A), N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신(io6A), 2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신(ms2io6A), N6-글리시닐카바모일-아데노신(g6A), N6-트레오닐카바모일-아데노신(t6A), N6-메틸-N6-트레오닐카바모일-아데노신(m6t6A), 2-메틸티오-N6-트레오닐카바모일-아데노신(ms2g6A), N6,N6-디메틸-아데노신(m62A), N6-하이드록시노발릴카바모일-아데노신(hn6A), 2-메틸티오-N6-하이드록시노발릴카바모일-아데노신(ms2hn6A), N6-아세틸-아데노신(ac6A), 7-메틸-아데닌, 2-메틸티오-아데닌, 2-메톡시-아데닌, α-티오-아데노신, 2'-O-메틸-아데노신(Am), N6,2'-O-디메틸-아데노신(m6Am), N6,N6,2'-O-트리메틸-아데노신(m62Am), 1,2'-O-디메틸-아데노신(m1Am), 2'-O-리보실아데노신(포스페이트)(Ar(p)), 2-아미노-N6-메틸-퓨린, 1-티오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 2'-F-아라-아데노신, 2'-F-아데노신, 2'-OH-아라-아데노신 및 N6-(19-아미노-펜타옥사노나데실)-아데노신을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 a-티오-구아노신, 이노신(I), 1-메틸-이노신(m1I), 와이오신(imG), 메틸와이오신(mimG), 4-데메틸-와이오신(imG-14), 이소와이오신(imG2), 와이부토신(yW), 퍼옥시와이부토신(o2yW), 하이드록시와이부토신(OhyW), 저변형 하이드록시와이부토신(OhyW*), 7-데아자-구아노신, 퀘오신(Q), 에폭시퀘오신(oQ), 갈락토실-퀘오신(galQ), 만노실-퀘오신(manQ), 7-시아노-7-데아자-구아노신(preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신(preQ1), 아르캐오신(G+), 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-티오-구아노신, 6-티오-7-데아자-구아노신, 6-티오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신(m7G), 6-티오-7-메틸-구아노신, 7-메틸-이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸-구아노신(m1G), N2-메틸-구아노신(m2G), N2,N2-디메틸-구아노신(m22G), N2,7-디메틸-구아노신(m2,7G), N2,N2,7-디메틸-구아노신(m2,2,7G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 1-메틸-6-티오-구아노신, N2-메틸-6-티오-구아노신, N2,N2-디메틸-6-티오-구아노신, α-티오-구아노신, 2'-O-메틸-구아노신(Gm), N2-메틸-2'-O-메틸-구아노신(m2Gm), N2,N2-디메틸-2'-O-메틸-구아노신(m22Gm), 1-메틸-2'-O-메틸-구아노신(m1Gm), N2,7-디메틸-2'-O-메틸-구아노신(m2,7Gm), 2'-O-메틸-이노신(Im), 1,2'-O-디메틸-이노신(m1Im), 2'-O-리보실구아노신(포스페이트)(Gr(p)), 1-티오-구아노신, O6-메틸-구아노신, 2'-F-아라-구아노신 및 2'-F-구아노신을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 슈도우리딘(ψ), N1-메틸슈도우리딘(m1ψ), 2-티오우리딘, 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메톡시우리딘, 또는 2'-O-메틸우리딘이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)이며 본 개시의 mRNA는 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)으로 완전 변형된다. 일부 구현예에서, N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)은 mRNA에서 우라실의 75~100%를 차지한다. 일부 구현예에서, N1-메틸슈도우리딘(m1ψ)은 mRNA에서 우라실의 100%를 차지한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 시토신이다. 변형된 시토신을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 N4-아세틸-시티딘(ac4C), 5-메틸-시티딘(m5C), 5-할로-시티딘(예를 들어, 5-요오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘(hm5C), 1-메틸-슈도이소시티딘, 2-티오-시티딘(s2C), 2-티오-5-메틸-시티딘을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 7-데아자-아데닌, 1-메틸-아데노신(m1A), 2-메틸-아데닌(m2A), N6-메틸-아데노신(m6A)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 갖는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 이노신(I), 1-메틸-이노신(m1I), 와이오신(imG), 메틸와이오신(mimG), 7-데아자-구아노신, 7-시아노-7-데아자-구아노신(preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신(preQ1), 7-메틸-구아노신(m7G), 1-메틸-구아노신(m1G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구현예에서, 변형된 핵염기는 1-메틸-슈도우리딘(m1ψ), 5-메톡시-우리딘(mo5U), 5-메틸-시티딘(m5C), 슈도우리딘(ψ), α-티오-구아노신, 또는 α-티오-아데노신이다. 일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기 중 하나 이상의 조합(예를 들어, 전술한 변형된 핵염기 중 2, 3 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구현예에서, mRNA는 슈도우리딘(ψ)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 슈도우리딘(ψ) 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 1-메틸-슈도우리딘(m1ψ)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 1-메틸-슈도우리딘(m1ψ) 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 2-티오우리딘(s2U)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 2-티오우리딘 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 5-메톡시-우리딘(mo5U)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 5-메톡시-우리딘(mo5U) 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 2'-O-메틸 우리딘을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 2'-O-메틸 우리딘 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 N6-메틸-아데노신(m6A)을 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA는 N6-메틸-아데노신(m6A) 및 5-메틸-시티딘(m5C)을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 특정 변형에 대해 균일하게 변형된다(즉, 완전 변형되거나, 전체 서열에 걸쳐 변형됨). 예를 들어, mRNA는 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-시티딘(m5C)으로 균일하게 변형될 수 있으며, 이는 mRNA 서열의 모든 우리딘 또는 모든 시토신 뉴클레오시드가 N1-메틸슈도우리딘(m1ψ) 또는 5-메틸-시티딘(m5C)으로 대체됨을 의미한다. 유사하게, 본 개시의 mRNA는 상기 제시된 것과 같은 변형된 잔기로의 대체에 의해 서열에 존재하는 임의의 유형의 뉴클레오시드 잔기에 대해 균일하게 변형될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시의 mRNA는 코딩 영역 (예를 들어, 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀)에서 변형될 수 있다. 다른 구현예에서, mRNA는 코딩 영역 이외의 영역에서 변형될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 5'-UTR 및/또는 3'-UTR이 제공되고, 어느 하나 또는 둘 모두는 독립적으로 하나 이상의 상이한 뉴클레오시드 변형을 함유할 수 있다. 이러한 구현예에서, 뉴클레오시드 변형은 또한 코딩 영역에 존재할 수 있다.
본 개시의 mmRNA는 당, 핵염기, 및/또는 뉴클레오시드간 결합으로의 변형의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 조합은 본원에 기재된 임의의 하나 이상의 변형을 포함할 수 있다.
단일 변형이 나열된 경우, 나열된 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드는 변형된 A, U, G 또는 C 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드의 100%를 나타낸다. 백분율이 나열된 경우, 이는 존재하는 A, U, G 또는 C 트리포스페이트의 총량 중 특정 A, U, G 또는 C 핵염기 트리포스페이트의 백분율을 나타낸다. 예를 들어, 조합: 25% 5-아미노알릴-CTP + 75% CTP/25% 5-메톡시-UTP + 75% UTP는 25%의 시토신은 트리포스페이트 5-아미노알릴-CTP이고 75%의 시토신은 CTP인 반면 25%의 우라실은 5-메톡시 UTP이고 75%의 우라실은 UTP인 폴리뉴클레오티드를 나타낸다. 변형된 UTP가 나열되지 않은 경우 자연 발생 ATP, UTP, GTP 및/또는 CTP는 폴리뉴클레오티드에서 확인된 해당 뉴클레오티드 부위의 100%에서 사용된다. 이 예에서 모든 GTP 및 ATP 뉴클레오티드는 비변형 상태로 남아 있다.
본 개시의 mRNA, 또는 이의 영역은 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화 방법은 당분야에 알려져 있으며 다양한 목적을 위해: 적절한 폴딩을 보장하기 위해 숙주 유기체에서 코돈 빈도를 일치시키거나, mRNA 안정성을 증가시키거나 2차 구조를 감소시키기 위해 GC 함량을 바이어스하거나, 유전자 작제 또는 발현을 손상시킬 수 있는 일렬 반복 코돈 또는 염기 진행을 최소화하거나, 전사 및 번역 제어 영역을 맞춤하거나, 단백질 수송 서열을 삽입 또는 제거하거나, 암호화된 단백질에서의 번역 후 변형 부위(예를 들어, 글리코실화 부위)를 제거/부가하거나, 단백질 도메인을 부가, 제거 또는 셔플링하거나, 제한효소 부위를 삽입 또는 삭제하거나, 리보솜 결합 부위 및 mRNA 분해 부위를 변형하거나, 단백질의 다양한 도메인이 적절하게 폴딩하도록 번역 속도를 조정하거나, 폴리뉴클레오티드 내의 문제 이차 구조를 줄이거나 제거하는 데 유용할 수 있다. 코돈 최적화 도구, 알고리즘 및 서비스는 당분야에 알려져 있으며; 비제한적 예는 GeneArt(Life Technologies), DNA2.0(Menlo Park, CA) 및/또는 독점 방법으로부터의 서비스를 포함한다. 일부 구현예에서, mRNA 서열은 예를 들어 포유류 세포에서의 발현을 최적화하거나 mRNA 안정성을 증강시키기 위해, 최적화 알고리즘을 사용하여 최적화된다.
특정 구현예에서, 본 개시는 본원에 기재된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 개시의 mRNA는 시험관내 전사(IVT) 및 합성 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 당분야에서 이용 가능한 수단에 의해 제조될 수 있다. 효소(IVT), 고상, 액상, 복합 합성 방법, 소규모 영역 합성 및 결찰 방법이 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 IVT 효소 합성 방법을 사용하여 제조된다. 따라서, 본 개시는 또한 본원에 기재된 mRNA를 시험관내 전사하는 데 사용될 수 있는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 DNA, 작제물 및 벡터를 포함한다.
비천연 변형된 핵염기는 합성 동안 또는 합성 후 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 mRNA 내로 도입될 수 있다. 특정 구현예에서, 변형은 뉴클레오시드간 결합, 퓨린 또는 피리미딘 염기, 또는 당 상에 있을 수 있다. 특정 구현예에서, 변형은 폴리뉴클레오티드 사슬의 말단 또는 폴리뉴클레오티드 사슬의 다른 임의의 곳에서; 화학 합성 또는 중합 효소로 도입될 수 있다.
효소적 또는 화학적 결찰 방법이 표적화제 또는 전달제, 형광 표지, 액체, 나노입자 등과 같은 다양한 기능적 모이어티를 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 영역을 접합하는 데 사용될 수 있다. 단백질 발현을 감소시키기 위한 치료제
일부 구현예에서, 치료제는 단백질 발현을 절감(즉, 감소, 억제, 하향조절)시키는 치료제이다. 단백질 발현을 감소시키기 위해 사용될 수 있는 유형의 치료제의 비제한적 예는 마이크로-RNA 결합 부위(들)(miR 결합 부위)를 포함하는 mRNA, 마이크로RNA(miRNA), 안타고미르, 소형(짧은) 간섭 RNA(siRNA)(쇼트머 및 다이서 기질 RNA 포함), RNA 간섭(RNAi) 분자, 안티센스 RNA, 리보자임, 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 잠긴 핵산(LNA) 및 CRISPR/Cas9 기술을 포함한다.
센서 서열 및 마이크로RNA(miRNA) 결합 부위
센서 서열은 예를 들어, 마이크로RNA(miRNA) 결합 부위, 전사 인자 결합 부위, 구조화된 mRNA 서열 및/또는 모티프, 내인성 핵산 결합 분자에 대한 위(pseudo)-수용체로서 작용하도록 조작된 인공 결합 부위, 및 이의 조합을 포함한다. 센서 서열의 비제한적인 예는 미국 공개 2014/0200261에 기재되어 있으며, 그 내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.
일부 구현예에서, 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀(ORF)을 포함하는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드(예를 들어, 리보핵산(RNA), 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA))는 센서 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 센서 서열은 miRNA 결합 부위이다.
miRNA는 폴리리보뉴클레오티드에 결합하고 폴리리보뉴클레오티드의 안정성을 감소시키거나 번역을 억제함으로써 유전자 발현을 하향 조절하는 19~25개 뉴클레오티드 길이의 비-코딩 RNA이다. miRNA 서열은 "씨드" 영역, 즉, 성숙 miRNA의 위치 2~8의 영역에서의 서열을 포함한다. miRNA 씨드는 성숙 miRNA의 위치 2~8 또는 2~7을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, miRNA 씨드는 7개의 뉴클레오티드(예를 들어, 성숙 miRNA의 뉴클레오티드 2~8)를 포함할 수 있으며, 상응하는 miRNA 결합 부위의 씨드-상보성 부위는 miRNA 위치 1에 대치되는 아데노신(A)이 측면에 있다. 일부 구현예에서, miRNA 씨드는 6개의 뉴클레오티드(예를 들어, 성숙 miRNA의 뉴클레오티드 2~7)를 포함할 수 있으며, 상응하는 miRNA 결합 부위의 씨드-상보성 부위는 miRNA 위치 1에 대치되는 아데노신(A)이 측면에 있다. 예를 들어, 문헌(Grimson A, Farh KK, Johnston WK, Garrett-Engele P, Lim LP, Bartel DP; Mol Cell. 2007 Jul 6;27(1):91-105)을 참고한다. 표적 세포 또는 조직의 miRNA 프로파일링이 세포 또는 조직에서 miRNA의 존재 또는 부재를 결정하기 위해 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드(예를 들어, 리보핵산(RNA), 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA))는 하나 이상의 마이크로RNA 표적 서열, 마이크로RNA 서열, 또는 마이크로RNA 씨드를 포함한다. 이러한 서열은 미국 공개 US 2005/0261218 및 미국 공개 US2005/0059005에 교시된 것과 같은 임의의 알려진 마이크로RNA에 상응할 수 있으며, 그 각각의 내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "마이크로RNA(miRNA 또는 miR) 결합 부위"는 miRNA와 상호작용, 연합 또는 결합하기 위해 miRNA의 전체 또는 영역에 대해 충분한 상보성을 갖는, 5'UTR 및/또는 3'UTR에서를 포함하는 폴리리보뉴클레오티드 내의, 예를 들어 DNA 내의 또는 RNA 전사체 내의 서열을 나타낸다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드를 암호화하는 ORF를 포함하는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드는 miRNA 결합 부위를 추가로 포함한다. 예시적인 구현예에서, 폴리리보뉴클레오티드(예를 들어, 리보핵산(RNA), 예를 들어, 메신저 RNA(mRNA))의 5'UTR 및/또는 3'UTR은 miRNA 결합 부위를 포함한다.
miRNA에 대해 충분한 상보성을 갖는 miRNA 결합 부위는 폴리리보뉴클레오티드의 miRNA-매개 조절, 예를 들어, 폴리리보뉴클레오티드의 miRNA-매개 번역 억제 또는 분해를 촉진하기 충분한 상보성 정도를 나타낸다. 본 개시의 예시적인 양태에서, miRNA에 대해 충분한 상보성을 갖는 miRNA 결합 부위는 폴리리보뉴클레오티드의 miRNA-매개 분해, 예를 들어 mRNA의 miRNA-가이드 RNA-유도 침묵화 복합체(RISC)-매개 절단을 촉진하기 충분한 상보성 정도를 나타낸다. miRNA 결합 부위는 예를 들어 19~25개 뉴클레오티드 miRNA 서열, 19~23개 뉴클레오티드 miRNA 서열, 또는 22개 뉴클레오티드 miRNA 서열에 대해 상보성을 가질 수 있다. miRNA 결합 부위는 miRNA의 일부에만 상보성일 수 있으며, 예를 들어 자연 발생 miRNA 서열의 전체 길이 중 1, 2, 3 또는 4개 미만의 뉴클레오티드 부분에 대해 상보성일 수 있다. 일부 구현예에서, 요망되는 조절은 mRNA 분해이다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 전체 또는 완전한 상보성(예를 들어, 자연 발생 miRNA의 길이의 전부 또는 상당부에 대한 전체 상보성 또는 완전한 상보성)을 갖는다. 일부 구현예에서, mRNA 분해는 전체 또는 완전한 상보성을 갖는다.
일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 씨드 서열과 상보성(예를 들어, 부분적 또는 완전한 상보성)을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 씨드 서열과 완전한 상보성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 상보성(예를 들어, 부분적 또는 완전한 상보성)을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 완전한 상보성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 완전한 상보성을 갖지만 1, 2 또는 3개의 뉴클레오티드 치환, 말단 부가 및/또는 절단을 갖는다.
일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA와 동일한 길이이다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 5' 말단, 터미널 또는 둘 다에서 상응하는 miRNA보다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 뉴클레오티드(들)가 더짧다. 또 다른 구현예에서, 마이크로RNA 결합 부위는 5' 말단, 3' 말단, 또는 둘 모두에서 상응하는 마이크로RNA보다 2개의 뉴클레오티드가 더 짧다. 상응하는 miRNA보다 더 짧은 miRNA 결합 부위는 여전히 하나 이상의 miRNA 결합 부위를 포함하는 mRNA를 분해하거나 mRNA가 번역되는 것을 방지할 수 있다.
일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 다이서를 함유하는 활성 RISC의 일부인 상응하는 성숙 miRNA에 결합한다. 또 다른 구현예에서, RISC에서 상응하는 miRNA에 대한 miRNA 결합 부위의 결합은 miRNA 결합 부위를 함유하는 mRNA를 분해하거나 mRNA가 번역되는 것을 방지한다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA를 포함하는 RISC 복합체가 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리리보뉴클레오티드를 절단하도록 miRNA에 대해 충분한 상보성을 갖는다. 일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA를 포함하는 RISC 복합체가 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리리보뉴클레오티드에서 불안정성을 유도하도록 불완전한 상보성을 갖는다. 또 다른 구현예에서, miRNA 결합 부위는 miRNA를 포함하는 RISC 복합체가 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리리보뉴클레오티드의 전사를 억제하도록 불완전한 상보성을 갖는다.
일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 미스매치(들)를 갖는다.
일부 구현예에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA의 적어도 약 10개, 적어도 약 11개, 적어도 약 12개, 적어도 약 13개, 적어도 약 14개, 적어도 약 15개, 적어도 약 16개, 적어도 약 17개, 적어도 약 18개, 적어도 약 19개, 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 21개의 인접 뉴클레오티드와 상보적인 각각 적어도 약 10개, 적어도 약 11개, 적어도 약 12개, 적어도 약 13개, 적어도 약 14개, 적어도 약 15개, 적어도 약 16개, 적어도 약 17개, 적어도 약 18개, 적어도 약 19개, 적어도 약 20개, 또는 적어도 약 21개의 인접 뉴클레오티드를 갖는다.
하나 이상의 miRNA 결합 부위를 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드 내로 조작함으로써, 해당 miRNA가 이용 가능한 한, 폴리리보뉴클레오티드가 분해 또는 감소된 번역을 위해 표적화될 수 있다. 이것은 폴리리보뉴클레오티드의 전달 시 표적-외 효과를 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드가 조직 또는 세포에 전달되도록 의도되지 않았지만 그곳에서 끝나는 경우, 조직 또는 세포에 풍부한 miRNA는 miRNA의 하나 또는 여러 결합 부위가 폴리리보뉴클레오티드의 5'UTR 및/또는 3'UTR 내로 조작되는 경우 관심 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
반대로 miRNA 결합 부위는 특정 조직에서 단백질 발현을 증가시키기 위해 자연 발생하는 폴리리보뉴클레오티드 서열로부터 제거될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 miRNA에 대한 결합 부위는 miRNA를 함유하는 조직 또는 세포에서 단백질 발현을 개선하기 위해 폴리리보뉴클레오티드로부터 제거될 수 있다.
한 구현예에서, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드는 세포독성 또는 세포보호 mRNA 치료제를 정상 세포 및/또는 암 세포와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 특정 세포로 유도하기 위해 5'UTR 및/또는 3'UTR에 적어도 하나의 miRNA-결합 부위를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드는 세포독성 또는 세포보호 mRNA 치료제를 정상 및/또는 암 세포와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 특정 세포로 유도하기 위해 5'-UTR 및/또는 3'-UTR에 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 miRNA-결합 부위를 포함할 수 있다.
여러 조직에서의 발현 조절은 하나 이상의 miRNA 결합 부위의 도입 또는 제거를 통해 달성될 수 있다. miRNA 결합 부위를 제거할지 또는 삽입할지 여부는 miRNA 발현 패턴 및/또는 질환에서의 이의 프로파일링에 기초하여 결정될 수 있다. miRNA의 확인, miRNA 결합 부위, 및 이의 발현 패턴 및 생물학에서의 역할이 보고되었다(예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참조로 포함되는, Bonauer 등, Curr Drug Targets 2010 11:943-949; Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18:171-176; Contreras and Rao Leukemia 2012 26:404-413 (2011 Dec 20. doi: 10.1038/leu.2011.356); Bartel Cell 2009 136:215-233; Landgraf 등, Cell, 2007 129:1401-1414; Gentner and Naldini, Tissue Antigens. 2012 80:393-403 및 여기서의 모든 참고문헌).
miRNA 및 miRNA 결합 부위는 미국 공개 번호 2014/0200261, 2005/0261218, 및 2005/0059005에 기재된 비제한적인 예를 포함하는 임의의 알려진 서열에 상응할 수 있으며, 그 각각은 전체가 본원에 참조로 포함된다.
miRNA가 mRNA를 조절하여 단백질 발현을 조절하는 것으로 알려진 조직의 예는 간(miR-122), 근육(miR-133, miR-206, miR-208), 내피 세포(miR -17-92, miR-126), 골수 세포(miR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR-223, miR-24, miR-27), 지방 조직(let-7, miR-30c), 심장(miR-1d, miR-149), 신장(miR-192, miR-194, miR-204) 및 폐 상피 세포(let-7, miR-133, miR-126)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
구체적으로, miRNA는 항원 제시 세포(APC)(예를 들어, 수지상 세포 및 대식구), 대식구, 단핵구, B 림프구, T 림프구, 과립구, 자연 살해 세포 등과 같은 면역 세포(조혈 세포로도 불림)에서 차별적으로 발현되는 것으로 알려져 있다. 면역 세포 특이적 miRNA는 면역원성, 자가면역, 감염에 대한 면역 반응, 염증뿐만 아니라 유전자 치료 및 조직/장기 이식 후 원치 않는 면역 반응에 관여된다. 면역 세포 특이적 miRNA는 또한 조혈 세포(면역 세포)의 발생, 증식, 분화 및 아폽토시스의 많은 양태를 조절한다. 일부 구현예에서, miR-142 및 miR-146은 면역 세포에서 독점적으로 발현되며, 특히 골수성 수지상 세포에 풍부하다. 폴리리보뉴클레오티드에 대한 면역 반응이 폴리리보뉴클레오티드의 3'-UTR에 miR-142 결합 부위를 부가하여 차단되어 조직 및 세포에서 보다 안정적인 유전자 전달을 가능하게 함이 실증되었다. miR-142는 항원 제시 세포에서 외인성 폴리리보뉴클레오티드를 효율적으로 분해하고 형질도입된 세포의 세포독성 제거를 억제한다(예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참조로 포함되는, Annoni A 등, blood, 2009, 114, 5152-5161; Brown BD, 등, Nat med. 2006, 12(5), 585-591; Brown BD, 등, blood, 2007, 110(13): 4144-4152).
항원-매개 면역 반응은 유기체에 들어갈 때 항원 제시 세포에 의해 처리되고 항원 제시 세포의 표면 상에 디스플레이되는 외래 항원에 의해 유발되는 면역 반응을 나타낼 수 있다. T 세포는 제시된 항원을 인식하고 항원을 발현하는 세포의 세포독성 제거를 유도할 수 있다.
본 개시의 폴리리보뉴클레오티드의 5'UTR 및/또는 3'UTR 내로의 miR-142 결합 부위의 도입은 miR-142 매개 분해를 통해 항원 제시 세포에서 유전자 발현을 선택적으로 억제하여 항원 제시 세포(예를 들어, 수지상 세포)에서 항원 제시를 제한함으로써 폴리리보뉴클레오티드의 전달 후 항원 매개 면역 반응을 방지할 수 있다. 그런 다음 폴리리보뉴클레오티드는 세포독성 제거를 유발하지 않고 표적 조직 또는 세포에서 안정적으로 발현된다.
한 구현예에서, 면역 세포, 특히 항원 제시 세포에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA에 대한 결합 부위는 miRNA 매개 RNA 분해를 통해 항원 제시 세포에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 억제하여 항원 매개 면역 반응을 억제하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드 내로 조작될 수 있다. 폴리리보뉴클레오티드의 발현은 면역 세포 특이적 miRNA가 발현되지 않는 비면역 세포에서 유지된다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 간 특이적 단백질에 대한 면역원성 반응을 방지하기 위해, 임의의 miR-122 결합 부위가 제거될 수 있고 miR-142(및/또는 mirR-146) 결합 부위가 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드의 5' UTR 및/또는 3'UTR 내로 조작될 수 있다.
APC 및 대식구에서 선택적 분해 및 억제를 추가로 유도하기 위해, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드는 단독으로 또는 miR-142 및/또는 miR-146 결합 부위와 조합하여 5'UTR 및/또는 3'UTR에 추가 음성 조절 요소를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 추가 음성 조절 요소는 구성적 붕괴 요소(CDE)이다.
면역 세포 특이적 miRNA는 hsa-let-7a-2-3p, hsa-let-7a-3p, hsa-7a-5p, hsa-let-7c, hsa-let-7e-3p, hsa-let-7e-5p, hsa-let-7g-3p, hsa-let-7g-5p, hsa-let-7i-3p, hsa-let-7i-5p, miR-10a-3p, miR-10a-5p, miR-1184, hsa-let-7f-1--3p, hsa-let-7f-2--5p, hsa-let-7f-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p, miR-1279, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-132-3p, miR-132-5p, miR-142-3p, miR-142-5p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-146a-3p, miR-146a-5p, miR-146b-3p, miR-146b-5p, miR-147a, miR-147b, miR-148a-5p, miR-148a-3p, miR-150-3p, miR-150-5p, miR-151b, miR-155-3p, miR-155-5p, miR-15a-3p, miR-15a-5p, miR-15b-5p, miR-15b-3p, miR-16-1-3p, miR-16-2-3p, miR-16-5p, miR-17-5p, miR-181a-3p, miR-181a-5p, miR-181a-2-3p, miR-182-3p, miR-182-5p, miR-197-3p, miR-197-5p, miR-21-5p, miR-21-3p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-223-3p, miR-223-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-23b-3p, miR-23b-5p, miR-24-1-5p, miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-26a-1-3p, miR-26a-2-3p, miR-26a-5p, miR-26b-3p, miR-26b-5p, miR-27a-3p, miR-27a-5p, miR-27b-3p, miR-27b-5p, miR-28-3p, miR-28-5p, miR-2909, miR-29a-3p, miR-29a-5p, miR-29b-1-5p, miR-29b-2-5p, miR-29c-3p, miR-29c-5p,, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-331-5p, miR-339-3p, miR-339-5p, miR-345-3p, miR-345-5p, miR-346, miR-34a-3p, miR-34a-5p, miR-363-3p, miR-363-5p, miR-372, miR-377-3p, miR-377-5p, miR-493-3p, miR-493-5p, miR-542, miR-548b-5p, miR548c-5p, miR-548i, miR-548j, miR-548n, miR-574-3p, miR-598, miR-718, miR-935, miR-99a-3p, miR-99a-5p, miR-99b-3p, 및 miR-99b-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 신규한 miRNA는 마이크로어레이 혼성화 및 마이크로톰 분석을 통해 면역 세포에서 확인될 수 있다(예를 들어, 각각의 내용은 전체가 본원에 참조로 포함되는 Jima DD 등, Blood, 2010, 116:e118-e127; Vaz C 등, BMC Genomics, 2010, 11,288).
간에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 miR-107, miR-122-3p, miR-122-5p, miR-1228-3p, miR-1228-5p, miR-1249, miR-129-5p, miR-1303, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-152, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-199a-3p, miR-199a-5p, miR-199b-3p, miR-199b-5p, miR-296-5p, miR-557, miR-581, miR-939-3p, 및 miR-939-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 간 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 간에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 간 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
폐에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 let-7a-2-3p, let-7a-3p, let-7a-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-127-3p, miR-127-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-130b-3p, miR-130b-5p, miR-133a, miR-133b, miR-134, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-18b-3p, miR-18b-5p, miR-24-1-5p, miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-296-3p, miR-296-5p, miR-32-3p, miR-337-3p, miR-337-5p, miR-381-3p, 및 miR-381-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 폐 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 폐에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 폐 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
심장에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 miR-1, miR-133a, miR-133b, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-186-3p, miR-186-5p, miR-208a, miR-208b, miR-210, miR-296-3p, miR-320, miR-451a, miR-451b, miR-499a-3p, miR-499a-5p, miR-499b-3p, miR-499b-5p, miR-744-3p, miR-744-5p, miR-92b-3p, 및 miR-92b-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 심장 특이적 마이크로RNA로부터의 miRNA 결합 부위는 심장에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 심장 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
신경계에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 miR-124-5p, miR-125a-3p, miR-125a-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p, miR-1271-3p, miR-1271-5p, miR-128, miR-132-5p, miR-135a-3p, miR-135a-5p, miR-135b-3p, miR-135b-5p, miR-137, miR-139-5p, miR-139-3p, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-153, miR-181c-3p, miR-181c-5p, miR-183-3p, miR-183-5p, miR-190a, miR-190b, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR-30c-5p, miR-30d-3p, miR-30d-5p, miR-329, miR-342-3p, miR-3665, miR-3666, miR-380-3p, miR-380-5p, miR-383, miR-410, miR-425-3p, miR-425-5p, miR-454-3p, miR-454-5p, miR-483, miR-510, miR-516a-3p, miR-548b-5p, miR-548c-5p, miR-571, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-7-5p, miR-802, miR-922, miR-9-3p, 및 miR-9-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 신경계에 풍부한 miRNA는 추가로 miR-132-3p, miR-132-3p, miR-148b-3p, miR-148b-5p, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-320b, miR-320e, miR-323a-3p, miR-323a-5p, miR-324-5p, miR-325, miR-326, miR-328, miR-922를 포함하지만 이에 제한되지 않는 뉴런에서 특이적으로 발현되는 것들 및 miR-1250, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-219-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-3065-3p, miR-3065-5p, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-32-5p, miR-338-5p, 및 miR-657을 포함하지만 이에 제한되지 않는 아교 세포에서 특이적으로 발현되는 것들을 추가로 포함한다. 임의의 CNS 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 신경계에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 신경계 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
췌장에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 miR-105-3p, miR-105-5p, miR-184, miR-195-3p, miR-195-5p, miR-196a-3p, miR-196a-5p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-30a-3p, miR-33a-3p, miR-33a-5p, miR-375, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-493-3p, miR-493-5p, 및 miR-944를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 췌장 특이적 miRNA로부터의 MiRNA 결합 부위는 췌장에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 췌장 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
신장에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 miR-122-3p, miR-145-5p, miR-17-5p, miR-192-3p, miR-192-5p, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-204-3p, miR-204-5p, miR-210, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-296-3p, miR-30a-3p, miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR30c-5p, miR-324-3p, miR-335-3p, miR-335-5p, miR-363-3p, miR-363-5p, 및 miR-562를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 신장 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 신장에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 신장 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
근육에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 let-7g-3p, let-7g-5p, miR-1, miR-1286, miR-133a, miR-133b, miR-140-3p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-145-3p, miR-145-5p, miR-188-3p, miR-188-5p, miR-206, miR-208a, miR-208b, miR-25-3p, 및 miR-25-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 근육 특이적 miRNA로부터의 MiRNA 결합 부위는 근육에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 근육 특이적 miRNA 결합 부위는 단독으로 또는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서 면역 세포(예를 들어, APC) miRNA 결합 부위와 조합하여 추가로 조작될 수 있다.
miRNA는 또한 내피 세포, 상피 세포 및 지방세포와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 상이한 유형의 세포에서 차별적으로 발현된다.
내피 세포에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 let-7b-3p, let-7b-5p, miR-100-3p, miR-100-5p, miR-101-3p, miR-101-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-1236-3p, miR-1236-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-17-5p, miR-17-3p, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-19a-3p, miR-19a-5p, miR-19b-1-5p, miR-19b-2-5p, miR-19b-3p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-217, miR-210, miR-21-3p, miR-21-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-222-3p, miR-222-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-296-5p, miR-361-3p, miR-361-5p, miR-421, miR-424-3p, miR-424-5p, miR-513a-5p, miR-92a-1-5p, miR-92a-2-5p, miR-92a-3p, miR-92b-3p, 및 miR-92b-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 많은 신규한 miRNA가 심층 시퀀싱 분석으로부터 내피 세포에서 발견된다(예를 들어, 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 Voellenkle C등, RNA, 2012, 18, 472-484). 임의의 내피 세포 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 내피 세포에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다.
상피 세포에서 발현되는 것으로 알려진 miRNA는 let-7b-3p, let-7b-5p, miR-1246, miR-200a-3p, miR-200a-5p, miR-200b-3p, miR-200b-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-338-3p, miR-429, miR-451a, miR-451b, miR-494, miR-802 및 miR-34a, miR-34b-5p, miR-34c-5p, miR-449a, miR-449b-3p, 호흡기 섬모 상피 세포에서 특이적인 miR-449b-5p, let-7 패밀리, miR-133a, miR-133b, 폐 상피 세포에서 특이적인 miR-126, miR-382-3p, 신장 상피 세포에서 특이적인 miR-382-5p, 및 각막 상피 세포에서 특이적인 miR-762를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 상피 세포 특이적 miRNA로부터의 miRNA 결합 부위는 상피 세포에서 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다.
또한, 큰 miRNA 군은 배아 줄기 세포에 풍부하여 줄기 세포 자가 재생뿐만 아니라 신경 세포, 심장, 조혈 세포, 피부 세포, 골형성 세포 및 근육 세포와 같은 다양한 세포 계통의 발생 및/또는 분화를 제어한다(예를 들어, 각각은 전체가 본원에 참조로 포함되는 Kuppusamy KT 등, Curr. Mol Med, 2013, 13(5), 757-764; Vidigal JA and Ventura A, Semin Cancer Biol. 2012, 22(5-6), 428-436; Goff LA 등, PLoS One, 2009, 4:e7192; Morin RD 등, Genome Res, 2008, 18, 610-621; Yoo JK 등, Stem Cells Dev. 2012, 21(11), 2049-2057). 배아 줄기 세포에 풍부한 miRNA는 let-7a-2-3p, let-a-3p, let-7a-5p, let7d-3p, let-7d-5p, miR-103a-2-3p, miR-103a-5p, miR-106b-3p, miR-106b-5p, miR-1246, miR-1275, miR-138-1-3p, miR-138-2-3p, miR-138-5p, miR-154-3p, miR-154-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-290, miR-301a-3p, miR-301a-5p, miR-302a-3p, miR-302a-5p, miR-302b-3p, miR-302b-5p, miR-302c-3p, miR-302c-5p, miR-302d-3p, miR-302d-5p, miR-302e, miR-367-3p, miR-367-5p, miR-369-3p, miR-369-5p, miR-370, miR-371, miR-373, miR-380-5p, miR-423-3p, miR-423-5p, miR-486-5p, miR-520c-3p, miR-548e, miR-548f, miR-548g-3p, miR-548g-5p, miR-548i, miR-548k, miR-548l, miR-548m, miR-548n, miR-548o-3p, miR-548o-5p, miR-548p, miR-664a-3p, miR-664a-5p, miR-664b-3p, miR-664b-5p, miR-766-3p, miR-766-5p, miR-885-3p, miR-885-5p, miR-93-3p, miR-93-5p, miR-941, miR-96-3p, miR-96-5p, miR-99b-3p 및 miR-99b-5p를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 많은 예측된 신규한 miRNA는 인간 배아 줄기 세포에서 심층 시퀀싱에 의해 발견된다(예를 들어, 각각의 내용 전체가 본원에 참조로 포함되는 Morin RD 등, Genome Res,2008,18, 610-621; Goff LA 등, PLoS One, 2009, 4:e7192; Bar M 등, Stem cells, 2008, 26, 2496-2505).
한 구현예에서, 배아 줄기 세포 특이적 miRNA의 결합 부위는 배아 줄기 세포의 발생 및/또는 분화를 조절하거나 퇴행성 병태(예를 들어, 퇴행성 질환)에서 줄기 세포의 노화를 억제하거나, 이환 병태에서 줄기 세포(예를 들어, 암 줄기 세포)의 노화 및 아폽토시스를 자극하기 위해 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드의 3'UTR에 포함되거나 이로부터 제거될 수 있다.
다양한 암 세포/조직 및 기타 질환에서 miRNA의 차별적 발현을 프로파일링하기 다음 위해 많은 miRNA 발현 연구가 수행된다. 일부 miRNA는 특정 암 세포에서 비정상적으로 과발현되고 다른 miRNA는 저발현된다. 일부 구현예에서, miRNA는 암 세포(WO2008/154098, US2013/0059015, US2013/0042333, WO2011/157294); 암 줄기 세포(US2012/0053224); 췌장암 및 질환(US2009/0131348, US2011/0171646, US2010/0286232, US8389210); 천식 및 염증(US8415096); 전립샘암(US2013/0053264); 간세포 암종(WO2012/151212, US2012/0329672, WO2008/054828, US8252538); 폐암 세포(WO2011/076143, WO2013/033640, WO2009/070653, US2010/0323357); 피부 T 세포 림프종(WO2013/011378); 결장직장암 세포(WO2011/0281756, WO2011/076142); 암 양성 림프절(WO2009/100430, US2009/0263803); 비인두 암종(EP2112235); 만성 폐쇄성 폐 질환(US2012/0264626, US2013/0053263); 갑상샘암(WO2013/066678); 난소암 세포(US2012/0309645, WO2011/095623); 유방암 세포(WO2008/154098, WO2007/081740, US2012/0214699), 백혈병 및 림프종(각각의 내용 전체가 본원에 참조로 포함되는 WO2008/073915, US2009/0092974, US2012/0316081, US2012/0283310, WO2010/018563)에서 차별적으로 발현된다.
비제한적 예로서, 특정 암 및/또는 종양 세포에서 과발현되는 miRNA에 대한 miRNA 결합 부위는 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드의 3'UTR로부터 제거되어, 암 세포에서 과발현된 miRNA에 의해 억제된 발현을 회복시킴으로써 상응하는 생물학적 기능, 예를 들어 전사 자극 및/또는 억제, 세포 주기 정지, 아폽토시스 및 세포사를 완화시킬 수 있다. miRNA의 발현이 상향 조절되지 않는 정상 세포 및 조직은 영향을 받지 않고 유지될 것이다.
MiRNA는 또한 혈관신생(예를 들어, miR-132)과 같은 복잡한 생물학적 공정을 조절할 수 있다(Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18:171-176). 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드에서, 생물학적으로 관련된 세포 유형 또는 관련 생물학적 공정으로 폴리리보뉴클레오티드의 발현을 맞춤하기 위해, 이러한 공정에 관여되는 miRNA 결합 부위가 제거되거나 도입될 수 있다. 이러한 맥락에서, 본 개시의 폴리리보뉴클레오티드는 영양요구성 폴리리보뉴클레오티드로 정의된다.
펩티드/폴리펩티드 치료제
일부 구현예에서, 치료제는 펩티드 치료제이다. 일부 구현예에서 치료제는 폴리펩티드 치료제이다.
일부 구현예에서, 펩티드 또는 폴리펩티드는 자연 유래, 예를 들어 천연 공급원으로부터 단리된다. 다른 구현예에서, 펩티드 또는 폴리펩티드는 합성 분자, 예를 들어 시험관내 제조된 합성 펩티드 또는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 펩티드 또는 폴리펩티드는 재조합 분자이다. 일부 구현예에서, 펩티드 또는 폴리펩티드는 키메라 분자이다. 일부 구현예에서, 펩티드 또는 폴리펩티드는 융합 분자이다. 일부 구현예에서, 조성물의 펩티드 또는 폴리펩티드 치료제는 자연 발생 펩티드 또는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 조성물의 펩티드 또는 폴리펩티드 치료제는 자연 발생 펩티드 또는 폴리펩티드의 변형된 버전이다(예를 들어, 야생형, 자연 발생 펩티드 또는 폴리펩티드 대응물과 비교하여 3개 미만, 5개 미만, 10개 미만, 15개 미만, 20개 미만, 또는 25개 미만의 아미노 치환, 결실 또는 부가를 함유함).
일부 구현예에서, 본 개시의 로딩 LNP에서, 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드이다.
게놈 편집 기법
일부 구현예에서, 핵산은 게놈 편집 기법에 적합하다.
일부 구현예에서, 게놈 편집 기법은 클러스터링되고 규칙적으로 이격된 짧은 회문 반복체(CRISPR) 또는 전사 활성제-유사 효과기 뉴클레아제(TALEN)이다.
일부 구현예에서, 핵산은 CRISPR RNA(crRNA), 트랜스-활성화 crRNA(tracrRNA), 단일 가이드 RNA(sgRNA), 및 DNA 복구 주형으로 구성되는 군으로부터 선택되는 게놈 편집 기법에 적합한 적어도 하나의 핵산이다.
백신
일부 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제는 거의 모든 관심 암 단백질 또는 이의 단편을 제조하도록 신체의 세포 기구를 안전하게 유도할 수 있는 RNA(예를 들어, 메신저 RNA(mRNA))의 리보핵산(RNA) 암 백신이다. 일부 구현예에서, RNA는 변형된 RNA이다. 본 개시의 RNA 백신은 예를 들어 삽입 돌연변이유발 가능성의 위험 없이 세포성 및 체액성 면역 둘 다를 포함하는, 암에 대해 균형 잡힌 면역 반응을 유도하기 위해 사용될 수 있다.
RNA 백신은 암의 유병률 또는 충족되지 않은 의학적 요구 정도 또는 수준에 따라 다양한 설정에서 이용될 수 있다. RNA 백신은 다양한 단계 또는 전이 정도의 암을 치료 및/또는 예방하는 데 이용될 수 있다. RNA 백신은 암 백신을 포함하는 대안적 항암 치료법보다 훨씬 더 큰 항체 역가를 생성하고 더 빠른 반응을 일으킨다는 점에서 더 우수한 특성을 갖는다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, RNA 백신은 RNA 백신이 천연 세포 기구를 공동-채택하기 때문에 번역 시 적절한 단백질 형태를 제조하기 위한 mRNA 폴리뉴클레오티드로서 더 잘 설계되는 것으로 여겨진다. 생체외 제조되고 원치 않는 세포 반응을 유발할 수 있는 전통적 백신과 달리, RNA 백신은 보다 고유한 방식으로 세포 시스템에 제시된다.
본 개시의 일부 구현예는 적어도 하나의 암 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편{예를 들어, 암에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 면역원성 단편)을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 리보핵산(RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함하는 암 백신을 제공한다. 다른 구현예는 암에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 2개 이상의 항원 또는 에피토프를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 리보핵산(RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 양태에서 본 발명은 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 및 면역 체크포인트 조절인자를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA의 백신이다. 일부 구현예에서 면역 체크포인트 조절인자는 억제성 체크포인트 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 억제성 체크포인트 폴리펩티드는 PD-1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성되는 군으로부터 선택되는 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편이다. 억제성 체크포인트 폴리펩티드는 일부 구현예에서 항-CTLA4 또는 항-PD1 항체이다. 임의로 백신은 지질 나노입자를 포함한다. 일부 구현예에서 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA의 백신이 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서 체크포인트 억제제는 3~10주 후에 투여된다. 일부 구현예에서 체크포인트 억제제는 4주 후에 투여된다.
다른 양태에서, 본 발명은 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 및 지질 나노입자 담체의 개인화 암 백신이며, 적어도 2개의 암 항원은 환자 특이적 암 항원이다. 일부 구현예에서 지질 나노입자는 50~200 nm의 평균 지름을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA의 개인화 암 백신이고, 적어도 2개의 암 항원은 환자의 항원을 나타낸다. 일부 구현예에서, 환자의 항원은 환자의 엑소좀 확인된 항원이다. 일부 구현예에서, 단일 mRNA가 암 항원을 암호화한다. 다른 구현예에서, 복수의 mRNA가 암 항원을 암호화한다.
각각의 mRNA는 5~10개의 암 항원 또는 다른 구현예에서 단일 암 항원을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서 mRNA는 2~100개의 암 항원을 암호화한다. 다른 구현예에서 mRNA는 10~100, 20~100, 50~100, 100~200, 300~400, 500~600, 600~700, 700~800, 900~1,000, 또는 1,000~10,000개의 암 항원을 암호화한다.
일부 구현예에서,
a) 각각의 암 항원을 암호화하에는 mRNA는 절단 민감 부위가 산재되어 있고;
b) 각각의 암 항원을 암호화하는 mRNA는 링커 없이 서로 직접 결합되고;
c) 각각의 암 항원을 암호화하는 mRNA는 단일 뉴클레오티드 링커로 서로 결합되고;
d) 각각의 암 항원은 25~35개의 아미노산을 포함하고 중앙에 위치한 SNP 돌연변이를 포함하고;
e) 암 항원의 적어도 30%는 대상체로부터의 클래스 I MHC 분자에 대해 가장 높은 친화도를 가지고;
f) 암 항원의 적어도 30%는 대상체로부터의 클래스 II MHC 분자에 대해 가장 높은 친화도를 가지고;
g) 암 항원의 적어도 50%는 HLA-A, HLA-B 및/또는 DRB 1에 대해 IC >500 nM의 예측된 결합 친화도를 가지고;
h) mRNA는 20개의 암 항원을 암호화하고;
i) 암 항원의 50%는 클래스 I MHC에 대한 결합 친화도를 갖고 암 항원의 50%는 클래스 II MHC에 대한 결합 친화도를 갖고; 및/또는
j) 암 항원을 암호화하는 mRNA는 암 항원이 위-에피토프를 최소화하도록 정렬되도록 배열된다.
일부 구현예에서, 각각의 암 항원은 31개의 아미노산을 포함하고 SNP 돌연변이의 각 측면에 15개의 측면 아미노산이 있는 중앙에 위치한 SNP 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서 백신은 개인화 암 백신이고 암 항원은 대상체 특이적 암 항원이다. 일부 구현예에서, 대상체 특이적 암 항원은 대상체의 종양 샘플의 엑솜, 또는 대상체의 종양 샘플의 트랜스크립톰을 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체 특이적 암 항원은 대상체의 엑소좀을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 개방 해독틀은 하나 이상의 전통적인 암 항원을 추가로 암호화한다. 일부 구현예에서, 전통적인 암 항원은 돌연변이되지 않은 항원이다. 일부 구현예에서, 전통적인 암 항원은 돌연변이된 항원이다.
일부 구현예에서, mRNA 백신은 하나 이상의 전통적인 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 단일 mRNA가 암 항원을 암호화한다. 다른 구현예에서, 복수의 mRNA가 암 항원을 암호화한다. 일부 구현예에서 각각의 암 항원은 10~50개 아미노산 길이이다. 다른 구현예에서 각각의 암 항원은 15~20개 아미노산 길이이다. 다른 구현예에서 암 항원은 20~50, 25~100, 100~200, 200~300, 300~400, 400~500, 500~1,000, 또는 1,000~10,000개의 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 백신은 아주반트를 추가로 포함한다.
본 개시의 일부 구현예는 지질 나노입자 내에 제형화된, 적어도 하나의 암 폴리펩티드, 적어도 하나의 5' 말단 캡 및 적어도 하나의 화학적 변형을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 리보핵산(RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함하는 암 백신을 제공한다. 일부 구현예에서, 5' 말단 캡은 7mG(5')ppp(5')NlmpNp이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 화학적 변형은 슈도우리딘, N1-메틸슈도우리딘, N1-에틸슈도우리딘, 2-티오우리딘, 4'-티오우리딘, 5-메틸시토신, 2-티오-1-메틸-1-데아자-슈도우리딘, 2-티오-1-메틸-슈도우리딘, 2-티오-5-아자-우리딘, 2-티오-디하이드로슈도우리딘, 2-티오-디하이드로우리딘, 2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-2-티오-슈도우리딘, 4-메톡시-슈도우리딘, 4-티오-1-메틸-슈도우리딘, 4-티오-슈도우리딘, 5-아자-우리딘, 디하이드로슈도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘 및 2'-O-메틸 우리딘으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오티드의 혼입 정도는 백신 제형물에 대한 개선된 면역 반응을 위해 최적화되었다.
일부 구현예에서, 지질 나노입자(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 양이온성 지질, PEG-변형 지질, 스테롤 및 비-양이온성 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 이온화 가능한 양이온성 지질이고 비-양이온성 지질은 중성 지질이고 스테롤은 콜레스테롤이다. 일부 구현예에서, 양이온성 지질은 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노에틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-KC2-DMA), 디리놀레일-메틸-4-디메틸아미노부티레이트(DLin-MC3-DMA), 및 디((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(디메틸아미노)부타노일)옥시)헵타데칸디오에이트(L319)로부터 선택된다.
일부 구현예에서 지질 나노입자 제형물은 백신(제형물)의 면역원성을 증강시키기 위한 면역 강화제(예를 들어, TLR 작용제)를 포함한다.
일부 구현예에서, 개방 해독틀에 있는 우라실의 100%는 화학적 변형을 갖는다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 우라실의 5-위치에 있다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 N1-메틸 슈도우리딘이다.
다른 구현예에서, APC 재프로그래밍 분자를 암호화하는 mRNA는 백신에 포함되거나 백신과 공동 투여된다. APC 재프로그래밍 분자는 CIITA, 샤페론 단백질, 예컨대 CLIP, HLA-DO, HLA-DM, 공동자극 분자, 예컨대 CD40, CD80, CD86, CIITA 단편, 예컨대 CIITA의 아미노산 26~137 또는 CIITA와 80% 서열 동일성을 갖는 단백질일 수 있다.
다른 양태에서 대상체의 샘플로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하는 단계로서, 적어도 2개의 암 항원은 프레임-이동 돌연변이 및 재조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 돌연변이를 포함하는, 단계 및 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 대상체에 투여하는 단계에 의해 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 암 항원은 대상체의 엑소좀으로부터 확인된다. 일부 구현예에서 2~100개의 항원이 엑소좀으로부터 확인된다. 다른 구현예에서, mRNA 백신은 2~100개의 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는다. 단일 mRNA 또는 복수의 mRNA가 항원을 암호화할 수 있다.
일부 구현예에서 항원은 암 항원이다. 암 항원은 점 돌연변이, 프레임-이동 돌연변이 및 재조합으로부터 선택된 돌연변이를 가질 수 있다. 방법에는 암 항원이 엑솜 분석에 의해 대상체 특이적임을 확인하는 단계가 추가로 관여될 수 있다.
일부 구현예에서, 방법에는 암 항원이 트랜스크립톰 분석에 의해 대상체 특이적임을 확인하는 단계가 추가로 관여될 수 있다.
일부 구현예에서, 방법에는 또한 mRNA 백신 투여 후 적어도 1개월째에, 대상체의 샘플로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하여 제2 암 항원 세트를 생성하는 단계, 및 대상체에 제2 암 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 투여하는 단계가 관여된다.
다른 구현예에서 대상체의 샘플은 종양 샘플이다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체의 샘플로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하여 제1 암 항원 세트를 생성하는 단계, 대상체에 제1 암 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 투여하는 단계, mRNA 백신의 투여 후 적어도 1개월째에 대상체의 샘플로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하여 제2 암 항원 세트를 생성하는 단계, 및 대상체에 제2 암 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 투여하는 단계에 의해, 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 제2 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신은 제1 암 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신 후 6개월 내지 1년째에 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서, 제2 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신은 제1 암 항원 세트를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신 후 1~2년째에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 단일 mRNA가 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는다. 다른 구현예에서, 복수의 mRNA가 항원을 암호화한다. 일부 구현예에서 제2 암 항원 세트는 2~100개의 항원을 포함한다. 다른 구현예에서 암 항원은 점 돌연변이, 프레임-이동 돌연변이 및 재조합으로부터 선택된 돌연변이를 갖는다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체의 샘플로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하는 단계, 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA를 대상체에 투여하는 단계, 및 대상체에 암 치료제를 투여하는 단계에 의해, 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서 암 치료제는 표적화 치료법이다. 표적화 치료법은 베무라페닙(PLX4032) 또는 다브라페닙과 같은 BRAF 억제제일 수 있다.
다른 구현예에서 암 치료제는 T-세포 치료제이다. T-세포 치료제는 항-PD-1 항체 또는 항-CTLA-4 항체와 같은 체크포인트 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서 항-PD-1 항체는 BMS-936558(니볼루맙)이다. 다른 구현예에서 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙이다. 다른 구현예에서 T-세포 치료제는 OX40L이다. 또 다른 구현예에서 암 치료제는 집단 기반 종양 특이적 항원을 포함하는 백신이다.
다른 구현예에서, 암 치료제는 하나 이상의 전통적인 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA를 포함하는 백신이다.
일부 구현예에서, 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA는 암 치료제와 동시에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA는 암 치료제의 투여 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 적어도 2개의 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA는 암 치료제의 투여 후에 대상체에 투여된다.
암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA를 지질 나노입자 제형물과 혼합하여 mRNA 암 백신을 제조하는 단계, 및 혼합 후 24시간 내에 대상체에 mRNA 암 백신을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본 발명의 다른 양태에서 제공된다. 일부 구현예에서 mRNA 암 백신은 혼합 후 12시간 내에 대상체에 투여된다. 다른 구현예에서 mRNA 암 백신은 혼합 1시간 내에 대상체에 투여된다. mRNA 암 백신은 일부 구현예에서 2~100개의 암 항원 또는 10~100개의 암 항원을 암호화한다.
일부 구현예에서 백신은 개인화 암 백신이고 암 항원은 대상체 특이적 암 항원이다.
일부 구현예에서, 단일 mRNA가 암 항원을 암호화한다. 다른 구현예에서, 복수의 mRNA가 암 항원을 암호화한다. 각각의 mRNA는 5~10개의 암 항원을 또는 다른 구현예에서는 단일 암 항원을 암호화한다. 또 다른 구현예에서, 각각의 암 항원은 10~50개 아미노산 길이 또는 15~20개 아미노산 길이이다.
추가로 대상체에서 항원 특이적 면역 반응을 유도하는 방법에 사용하기 위한 약제의 제조에서 암 백신의 용도가 본원에 제공되며, 이 방법은 항원 특이적 면역 반응을 생성하기에 효과적인 양으로 대상체에 암 백신을 투여하는 단계를 포함한다.
다른 양태에서, 대상체로부터 단리된 엑소좀으로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하는 단계; 확인된 항원에 기초하여, 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 제조하는 단계; 및 대상체에 mRNA 백신을 투여하는 단계에 의해, 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, mRNA 백신은 대상체에서 종양-특이적 면역 반응을 유도함으로써 대상체에서 암을 치료하는, 방법이 제공된다. 다른 양태에서 본 발명은 대상체로부터 단리된 엑소좀으로부터 적어도 2개의 암 항원을 확인하는 단계; 확인된 항원에 기초하여 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 mRNA 백신을 제조하는 단계가 관여되는 방법에 따라 제조 가능한 RNA 백신이다.
암 항원에 대해 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법이 본 발명의 양태에서 제공된다. 이 방법은 적어도 하나의 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 RNA 백신을 대상체에 투여함으로써 대상체에서 항원성 폴리펩티드 또는 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 유도하는 단계가 관여되며, 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효량의 암에 대한 전통적 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 증가된다. "항-항원성 폴리펩티드 항체"는 항원성 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 혈청 항체이다.
예방 유효량은 임상적으로 허용되는 수준에서 암의 진행을 예방하는 치료 유효량이다. 일부 구현예에서 치료 유효 용량은 백신에 대한 패키지 삽입물에 나열된 용량이다. 본원에 사용된 전통적인 백신은 본 발명의 mRNA 백신 이외의 백신을 나타낸다. 예를 들어, 전통적인 백신은 미생물 생백신, 미생물 사백신, 서브유닛 백신, 단백질 항원 백신, DNA 백신 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 구현예에서, 전통적인 백신은 규제 승인을 획득하였고 및/또는 국가 약물 규제 기관, 예를 들어 미국 식품의약국(FDA) 또는 유럽 의약품청(EMA)에 등록되어 있는 백신이다.
일부 구현예에서 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효 용량의 암에 대한 전통적 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 1 log 내지 10 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효량의 암에 대한 전통적 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 1 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효 용량의 암에 대한 전통적인 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 2 log 증가된다.
일부 구현예에서, 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효 용량의 암에 대한 전통적인 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 3 log 증가된다.
일부 구현예에서, 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효 용량의 암에 대한 전통적인 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 5 log 증가된다.
일부 구현예에서 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가는 예방 유효 용량의 암에 대한 전통적인 백신이 예방접종된 대상체의 항-항원성 폴리펩티드 항체 역가에 비해 예방접종 후 10 log 증가된다.
암 항원에 대해 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법이 본 발명의 다른 양태에서 제공된다. 이 방법에는 적어도 하나의 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 RNA 백신을 대상체에 투여함으로써 대상체에서 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 유도하는 단계가 관여되며, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 2배 내지 100배로 암 항원에 대한 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 2배의 투여량 수준으로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 3배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 4배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 5배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다. 일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 10배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 50배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 100배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 10배 내지 1000배로 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
일부 구현예에서 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 100배 내지 1000배의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서의 면역 반응과 동등하다.
다른 구현예에서 면역 반응은 대상체에서 항체 역가를 결정함으로써 평가된다.
다른 양태에서, 본 발명은 적어도 하나의 암 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편을 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 적어도 하나의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 RNA 백신을 대상체에 투여함으로써 대상체에서 항원성 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편에 특이적인 면역 반응을 유도하는 단계에 의해 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법을 포함하며, 대상체에서의 면역 반응은 암 항원에 대한 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2일 내지 10주 더 빨리 유도된다. 일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 RNA 백신에 비해 투여량 수준의 2배 내지 100배에서 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2일 더 빨리 유도된다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효량의 전통적인 백신을 접종한 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 3일 더 빨리 유도된다. 일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 1주 더 빨리 유도된다.
일부 구현예에서 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 2주 더 빨리 유도된다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 3주 더 빨리 유도된다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 5주 더 빨리 유도된다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 면역 반응은 예방 유효 용량의 전통적인 백신이 예방접종된 대상체에서 유도된 면역 반응에 비해 10주 더 빨리 유도된다.
대상체에 제1 항원성 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 암 RNA 백신을 투여하는 단계에 의해 암에 대해 대상체에서 면역 반응을 유발하는 방법으로서, RNA 폴리뉴클레오티드는 안정화 요소를 포함하지 않고, 아주반트는 백신과 공동 제형화되거나 공동 투여되지 않는 방법.
또 다른 양태에서, 본 발명은 1000 내지 3000개의 뉴클레오티드를 포함하는 연쇄동일서열(concatamer) 암 항원을 암호화하는 mRNA를 제조하는 방법을 포함하고, 이방법은 다음 단계에 의한다:
(a) 연쇄동일서열 암 항원을 암호화하는 개방 해독틀을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 5'-UTR을 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드를 고체 지지체에 접합된 폴리뉴클레오티드에 결합시키는 단계;
(b) 제2 폴리뉴클레오티드의 3'-말단을 제1 폴리뉴클레오티드의 5'-말단에 적합한 조건 하에 결합시켜 제1 결찰 산물을 제조하는 단계로서, 적합한 조건은 DNA 리가아제를 포함하는, 단계;
(c) 3'-UTR을 포함하는 제3 폴리뉴클레오티드의 5' 말단을 제1 결찰 산물의 3'-말단에 적합한 조건 하에 결찰시켜 제2 결찰 산물을 제조하는 단계로서, 적합한 조건은 RNA 리가제를 포함하는, 단계; 및
(d) 고체 지지체로부터 제2 결찰 산물을 방출시켜 1000 내지 3000개의 뉴클레오티드를 포함하는 연쇄동일서열 암 항원을 암호화하는 mRNA를 제조하는 단계. 제공된 조성물 또는 방법 중 어느 하나의 일부 구현예에서, mRNA는 하나 이상의 재발성 다형성을 암호화한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 재발성 다형성은 p53에 재발성 체세포 암 돌연변이를 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, p53에서의 하나 이상의 재발성 체세포 암 돌연변이는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택된다:
(1) 정규 5' 스플라이스 부위 근처 코돈 p.T125의 돌연변이;
(2) 정규 5' 스플라이스 부위 근처 코돈 p.331의 돌연변이;
(3) 정규 3' 스플라이스 부위 근처 코돈 p.126의 돌연변이;
(4) 숨겨진 대안적 인트론 5' 스플라이스 부위를 유도하는, 정규 5' 스플라이스 부위 근처 코돈 p.224의 돌연변이.
한 구현예에서, 본 발명은 신생항원 펩티드 (1) 내지 (4) 중 하나 이상을 코딩하는 개방 해독틀(ORF)을 암호화하는 mRNA를 포함하는 암 치료 백신을 제공한다. 한 구현예에서, 본 발명은 임의의 상기 돌연변이를 함유하는 환자의 종양에 기초하여 펩티드 (1)-(4) 중 하나 이상을 함유하거나 코딩하는 백신의 선택적 투여를 제공한다. 한 구현예에서, 본 발명은 임의의 상기 돌연변이를 함유하는 대상체의 종양 및 생성된 신생항원에 결합할 것으로 예측되는 상응하는 HLA 대립유전자를 함유하는 대상체의 일반 HLA 유형의 이중 기준에 기초하여 백신의 선택적 투여를 제공한다.
개체로부터 샘플을 단리하는 단계, 샘플로부터 환자 트랜스크립톰 및/또는 환자 엑솜을 분석하여 신생에피토프 세트를 확인함으로써 환자 특이적 뮤타놈을 생성하는 단계, MHC 결합 강도, MHC 결합 다양성, 예측된 면역원성 정도, 낮은 자가 반응성 및/또는 T 세포 반응성에 기초하여 뮤타놈으로부터 백신에 대한 신생에피토프 세트를 선택하는 단계, 신생에피토프 세트를 암호화하도록 mRNA 백신을 제조하는 단계 및 대상체로부터 샘플을 단리한 후 2개월 이내에 mRNA 백신을 투여하는 단계에 의해, 개인화 mRNA 암 백신으로 개체를 치료하는 방법이 본 발명의 다른 양태에서 제공된다. 일부 구현예에서, mRNA 백신은 대상체로부터 샘플을 단리한 후 1개월 이내에 대상체에 투여된다.
다른 양태에서, 본 발명은 a. 환자 트랜스크립톰 및 환자 엑솜을 분석하여 환자 특이적 뮤타놈을 확인하는 단계, b. 하기: 환자 RNA-seq에서 유전자 또는 전사체 수준 발현의 평가; 변이체 콜(call) 신뢰도 점수; RNA-seq 대립유전자 특이적 발현; 보존적 대 비보존적 아미노산 치환; 점 돌연변이의 위치(증가된 TCR 연루에 대한 센터링 점수); 점 돌연변이의 위치(차별적 HLA 결합에 대한 앵커링 점수); 자기성: 환자 WES 데이터와 <100% 코어 에피토프 상동성; 8머~11머에 대한 HLA-A 및 -B IC50; 15머~20머에 대한 HLA-DRB 1 IC50; 무차별 점수(즉, 결합할 것으로 예측되는 환자 HLA의 수); 8머~11머에 대한 HLA-C IC50; 15머~20머에 대한 HLA-DRB3-5 IC50; 15머~20머에 대한 HLA-DQB 1/A1 IC50; 15머~20머에 대한 HLA-DPB 1/A1 IC50; 클래스 I 대 클래스 II 비율; 커버된 환자 HLA-A, -B 및 DRB 1 동종이형의 다양성; 점 돌연변이 대 복합 에피토프(예를 들어, 틀 이동)의 비율; 및/또는 위-에피토프 HLA 결합 점수 중 적어도 3개에 기초하여 신생에피토프에 대한 가중 값을 사용하여 뮤타놈으로부터 15~500개 신생에피토프의 하위세트를 선택하는 단계, 및 c. 최고 가중 값에 기초하여 하위세트로부터 개인화 mRNA 암 백신에서 사용하기 위한 신생에피토프 세트를 선택하는 단계로서, 신생에피토프 세트는 15~40개의 신생에피토프를 포함하는, 단계에 의해 신생에피토프 세트를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 갖는 개인화 mRNA 암 백신에서 사용하기 위한 신생에피토프 세트를 확인하는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 핵산 백신은 화학적으로 변형된다. 다른 구현예에서 핵산 백신은 변형되지 않는다.
또 다른 양태는 대상체에게 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 예방접종을 위한 조성물 및 방법을 제공하며, RNA 폴리뉴클레오티드는 안정화 요소를 포함하지 않고, 아주반트는 백신과 공동 제형화되거나 공동 투여되지 않는다.
다른 양태에서, 본 발명은 제1 항원성 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 예방접종하기 위한 조성물 또는 백신이며, 투여량 10 ug/kg 내지 400 ug/kg의 핵산 백신이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드의 투여량은 용량 당 1~5 ug, 5~10 ug, 10~15 ug, 15~20 ug, 10~25 ug, 20~25 ug, 20~50 ug, 30~50 ug, 40~50 ug, 40~60 ug, 60~80 ug, 60~100 ug, 50~100 ug, 80~120 ug, 40~120 ug, 40~150 ug, 50~150 ug, 50~200 ug, 80~200 ug, 100~200 ug, 120~250 ug, 150~250 ug, 180~280 ug, 200~300 ug, 50~300 ug, 80~300 ug, 100~300 ug, 40~300 ug, 50~350 ug, 100~350 ug, 200~350 ug, 300~350 ug, 320~400 ug, 40~380 ug, 40~100 ug, 100~400 ug, 200~400 ug, 또는 300~400 ug이다. 일부 구현예에서, 핵산 백신은 피내 또는 근육내 주사에 의해 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 핵산 백신은 제0일에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 핵산 백신의 제2 용량은 제21일에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 투여량 25마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 100마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 50마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 75마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 150마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 400마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, 투여량 200마이크로그램의 RNA 폴리뉴클레오티드가 대상체에 투여되는 핵산 백신에 포함된다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 원위 림프절과 비교하여 국소 림프절에서 100배 더 높은 수준으로 축적된다. 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되고 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되지 않는다.
본 발명의 양태는 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 핵산 백신을 제공하며, RNA 폴리뉴클레오티드는 안정화 요소를 포함하지 않고, 아주반트는 백신에 포함되지 않는다. 일부 구현예에서, 안정화 요소는 히스톤 줄기-루프이다. 일부 구현예에서, 안정화 요소는 야생형 서열에 비해 증가된 GC 함량을 갖는 핵산 서열이다.
본 발명의 양태는 제1 항원성 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 제공하며, RNA 폴리뉴클레오티드는 숙주에 대한 생체내 투여를 위한 제형물에 존재하고, 이는 허용 가능한 백분율의 인간 대상체에 대해 제1 항원에 대한 혈청 보호 기준보다 우수한 항체 역가를 부여한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생성된 항체 역가는 중화 항체 역가이다. 일부 구현예에서 중화 항체 역가는 단백질 백신보다 크다. 다른 구현예에서, 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생성된 중화 항체 역가는 아주반트 첨가 단백질 백신보다 더 크다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 mRNA 백신에 의해 생성된 중화 항체 역가는 1,000~10,000, 1,200~10,000, 1,400~10,000, 1,500~10,000, 1,000~5,000, 1,000~4,000, 1,800~10,000, 2,000~10,000, 2,000~5,000, 2,000~3,000, 2,000~4,000, 3,000~5,000, 3,000~4,000 또는 2,000~2,500이다. 중화 역가는 전형적으로 플라크 수의 50% 감소를 달성하는 데 필요한 최고 혈청 희석도로 표현된다.
특정 양태에서, 본 발명의 백신(예를 들어, LNP-캡슐화 mRNA 백신)은 예방접종된 대상체의 혈액 또는 혈청에서 항원-특이적 항체의 예방적- 및/또는 치료적-유효 수준, 농도 및/또는 역가를 생성한다. 본원에 정의된 용어 항체 역가는 대상체, 예를 들어 인간 대상체에서 생성하는 항원-특이적 항체의 양을 나타낸다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 여전히 양성 결과를 제공하는 최대 희석도(연속 희석에서)의 역수로 표현된다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 결정 또는 측정된다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 중화 검정, 예를 들어 마이크로중화 검정에 의해 결정 또는 측정된다. 특정 양태에서, 항체 역가 측정은 1:40, 1:100 등과 같은 비로 표현된다.
본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효 백신은 1:40 초과, 1:100 초과, 1:400 초과, 1:1000 초과, 1:2000 초과, 1:3000 초과, 1:4000 초과, 1:500 초과, 1:6000 초과, 1:7500 초과, 1:10000 초과의 항체 역가를 생성한다. 예시적인 구현예에서, 항체 역가는 예방접종 후 10일까지, 예방접종 후 20일까지, 예방접종 후 30일까지, 예방접종 후 40일까지 또는 예방접종 후 50일까지 생성되거나 도달된다. 예시적인 구현예에서, 역가는 대상체에 투여된 단일 용량의 백신 후에 생성되거나 도달된다. 다른 구현예에서, 역가는 다회 용량, 예를 들어 제1 및 제2 용량(예를 들어, 부스터 용량) 후에 생성되거나 도달된다.
본 발명의 예시적인 양태에서, 항원-특이적 항체는 μg/ml의 단위로 측정되거나 IU/L(리터 당 국제 단위) 또는 mlU/ml(ml당 밀리 국제 단위)의 단위로 측정된다. 본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효 백신은 >0.5 μg/ml, >0.1 μg/ml, >0.2 μg/ml, >0.35 μg/ml, >0.5 μg/ml, >1 μg/ml, >2 μg/ml, >5 μg/ml 또는 >10 μg/ml을 생성한다. 본 발명의 예시적인 구현예에서, 유효 백신은 >10 mlU/ml, >20 mlU/ml, >50 mlU/ml, >100 mlU/ml, >200 mlU/ml, >500 mlU/ml 또는 >1000 mlU/ml을 생성한다. 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 예방접종 후 10일까지, 예방접종 후 20일까지, 예방접종 후 30일까지, 예방접종 후 40일까지, 또는 예방접종 후 50일까지 생성되거나 도달된다. 예시적인 구현예에서, 수준 또는 농도는 대상체에 투여된 단회 용량의 백신 후에 생성되거나 도달된다. 다른 구현예에서, 수준 또는 농도는 다회 용량, 예를 들어 제1 및 제2 용량(예를 들어, 부스터 용량) 후에 생성되거나 도달된다. 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 결정되거나 측정된다. 예시적인 구현예에서, 항체 수준 또는 농도는 중화 검정, 예를 들어 마이크로중화 검정에 의해 결정 또는 측정된다. 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신이 또한 제공되며, RNA 폴리뉴클레오티드는 안정화 요소를 갖거나 아주반트와 함께 제형화되고 제1 항원성 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA 백신에 의해 유발되는 항체 역가보다 높고 더 오래 지속되는 항체 역가를 유발하기 위해 숙주에 생체내 투여하기 위한 제형물에 존재한다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 단회 투여 후 1주일 이내에 중화 항체를 생성하도록 제형화된다. 일부 구현예에서, 아주반트는 양이온성 펩티드 및 면역자극 핵산으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 양이온성 펩티드는 프로타민이다.
양태는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하거나 임의로 뉴클레오티드 변형이 없는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 제공하고, 개방 해독틀은 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하며, RNA 폴리뉴클레오티드는 숙주에서의 항원 발현 수준이 안정화 요소를 갖거나 아주반트와 함께 제형화되고 제1 항원성 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA 백신에 의해 생성된 항원 발현 수준을 크게 초과하도록 숙주에 생체내 투여하기 위한 제형물에 존재한다.
다른 양태는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하거나 임의로 뉴클레오티드 변형이 없는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 제공하고, 개방 해독틀은 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하며, 백신은 동등한 항체 역가를 생성하기 위해 비변형 mRNA 백신에 필요한 것보다 적어도 10배 더 적은 RNA 폴리뉴클레오티드를 갖는다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 25~100마이크로그램의 투여량으로 존재한다.
본 발명의 양태는 또한 인간 대상체로의 전달을 위해 제형화된, 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하거나 임의로 뉴클레오티드 변형이 없는 개방 해독틀을 갖는 10 ug 내지 400 ug의 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 사용 단위 백신을 제공하며, 개방 해독틀은 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 구현예에서, 백신은 양이온성 지질 나노입자를 추가로 포함한다.
본 발명의 양태는 (a) 적어도 하나의 RNA 폴리뉴클레오티드로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하거나 임의로 뉴클레오티드 변형이 없고 2개 이상의 코돈-최적화 개방 해독틀을 포함하고, 상기 개방 해독틀은 참조 항원성 폴리펩티드 세트를 암호화하는, 폴리뉴클레오티드, 및 (b) 임의로 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 항원 기억 부스터 핵산 백신을 상기 개체 또는 집단에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 또는 개체 집단에서 종양에 대한 항원 기억을 생성, 유지 또는 복원하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 백신은 근육내 투여, 피내 투여 및 피하 투여로 구성되는 군으로부터 선택되는 경로를 통해 개체에 투여된다. 일부 구현예에서, 투여 단계는 대상체의 근육 조직을 조성물의 주사에 적합한 장치와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여 단계는 대상체의 근육 조직을 전기천공과 조합하여 조성물의 주사에 적합한 장치와 접촉시키는 것을 포함한다.
본 발명의 양태는 대상체를 예방접종하기 위한 유효량으로 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신 25 ug/kg 내지 400 ug/kg의 단회 투여량을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체를 예방접종하는 방법을 제공한다.
다른 양태는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 제공하며, 개방 해독틀은 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하고, 백신은 비변형 mRNA 백신이 동등한 항체 역가를 생성하는 데 필요한 것보다 적어도 10배 더 적은 RNA 폴리뉴클레오티드를 갖는다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 25~100마이크로그램의 투여량으로 존재한다.
다른 양태는 뉴클레오티드 변형을 포함하지 않는(비변형) 개방 해독틀을 갖는 LNP 제형화된 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 제공하며, 개방 해독틀은 제1 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하고, 백신은 LNP로 제형화되지 않은 비변형 mRNA 백신이 동일한 항체 역가를 생성하는 데 필요한 것보다 적어도 10배 더 적은 RNA 폴리뉴클레오티드를 갖는다. 일부 구현예에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 25~100마이크로그램의 투여량으로 존재한다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체를 예방접종하기 위한 유효량으로 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 60세 이상의 고령 대상체를 치료하는 방법을 포괄한다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체를 예방접종하기 위한 유효량으로 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 17세 이하의 어린 대상체를 치료하는 방법을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 대상체를 예방접종하기 위한 유효량으로 항원성 폴리펩티드 또는 연쇄동일서열 폴리펩티드를 암호화하는 개방 해독틀을 갖는 하나 이상의 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 백신을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 성인 대상체를 치료하는 방법을 포괄한다.
일부 양태에서, 본 발명은 항원을 암호화하는 적어도 2개의 핵산 서열을 포함하는 조합 백신으로 대상체를 예방접종하는 방법을 포함하며, 백신에 대한 투여량은 조합된 치료 투여량이고, 항원을 암호화하는 각각의 개별 핵산의 투여량은 하위 치료 투여량이다. 일부 구현예에서, 조합된 투여량은 대상체에 투여된 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 25마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 조합 투여량은 대상체에 투여되는 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 100마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 조합 투여량은 대상체에 투여된 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 50마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 조합된 투여량은 대상체에 투여되는 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 75마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 조합 투여량은 대상체에 투여되는 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 150마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 조합 투여량은 대상체에 투여되는 핵산 백신 중 RNA 폴리뉴클레오티드 400마이크로그램이다. 일부 구현예에서, 항원을 암호화하는 각각의 개별 핵산의 하위 치료 투여량은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20마이크로그램이다. 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되고 다른 구현예에서 핵산 백신은 화학적으로 변형되지 않는다.
기타 성분
LNP(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 이전 섹션에서 설명된 것들에 더하여 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, LNP(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 비타민(예를 들어, 비타민 A 또는 비타민 E) 또는 스테롤과 같은 하나 이상의 작은 소수성 분자를 포함할 수 있다.
지질 나노입자(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 또한 하나 이상의 투과성 증강제 분자, 탄수화물, 중합체, 표면 변경제, 또는 기타 성분을 포함할 수 있다. 투과성 증강제 분자는 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2005/0222064에 기재된 분자일 수 있다. 탄수화물은 단순 당(예를 들어, 글루코스) 및 다당류(예를 들어, 글리코겐 및 이의 유도체 및 유사체)를 포함할 수 있다.
중합체는 LNP를 캡슐화하거나 부분적으로 캡슐화하기 위해 포함 및/또는 사용될 수 있다. 중합체는 생분해성 및/또는 생체적합성일 수 있다. 중합체는 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리카바메이트, 폴리우레아, 폴리카보네이트, 폴리스티렌, 폴리이미드, 폴리설폰, 폴리우레탄, 폴리아세틸렌, 폴리에틸렌, 폴리에틸렌이민, 폴리이소시아네이트, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리아릴레이트로부터 선택될 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 중합체는 폴리(카프로락톤)(PCL), 에틸렌 비닐 아세테이트 중합체(EVA), 폴리(락트산)(PLA), 폴리(L-락트산)(PLLA), 폴리(글리콜산)(PGA), 폴리(락트산-코-글리콜산)(PLGA), 폴리(L-락트산-코-글리콜산)(PLLGA), 폴리(D,L-락티드)(PDLA), 폴리(L-락티드)(PLLA), 폴리(D,L-락티드-코-카프로락톤), 폴리(D,L-락티드-코-카프로락톤-코-글리콜리드), 폴리(D,L-락티드-코-PEO-코-D,L-락티드), 폴리(D,L-락티드-코-PPO-코-D,L-락티드), 폴리알킬 시아노아크릴레이트, 폴리우레탄, 폴리-L-라이신(PLL), 하이드록시프로필 메타크릴레이트(HPMA), 폴리에틸렌글리콜, 폴리-L-글루탐산, 폴리(하이드록시산), 폴리무수물, 폴리오르토에스테르, 폴리(에스테르 아미드), 폴리아미드, 폴리(에스테르 에테르), 폴리카보네이트, 폴리에틸렌 및 폴리프로필렌과 같은 폴리알킬렌, 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG)과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 옥시드(PEO), 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)와 같은 폴리알킬렌 테레프탈레이트, 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리비닐 에테르, 폴리(비닐 아세테이트)와 같은 폴리비닐 에스테르, 폴리(비닐 클로라이드)(PVC)와 같은 폴리비닐 할라이드, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리실록산, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 알킬 셀룰로스, 하이드록시알킬 셀룰로스, 셀룰로스 에테르, 셀룰로스 에스테르, 니트로 셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스와 같은 유도체화된 셀룰로스, 예를 들어 폴리(메틸(메트)아크릴레이트)(PMMA), 폴리(에틸(메트)아크릴레이트), 폴리(부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(이소부틸(메트)아크릴레이트), 폴리(헥실(메트)아크릴레이트), 폴리(이소데실(메트)아크릴레이트), 폴리(라우릴(메트)아크릴레이트), 폴리(페닐(메트)아크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 폴리(옥타데실 아크릴레이트)와 같은 아크릴산 중합체 및 이의 공중합체 및 혼합물, 폴리디옥사논 및 그 공중합체, 폴리하이드록시알카노에이트, 폴리프로필렌 푸마레이트, 폴리옥시메틸렌, 폴록사머, 폴록사민, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락티드-코-카프로락톤), 트리메틸렌 카보네이트, 폴리(N -아크릴로일모르폴린)(PAcM), 폴리(2-메틸-2-옥사졸린)(PMOX), 폴리(2-에틸-2-옥사졸린)(PEOZ) 및 폴리글리세롤을 포함할 수 있다.
표면 변경제는 음이온성 단백질(예를 들어, 소 혈청 알부민), 계면활성제(예를 들어, 디메틸디옥타데실-암모늄 브로마이드와 같은 양이온성 계면활성제), 당 또는 당 유도체(예를 들어, 사이클로덱스트린), 핵산, 중합체(예를 들어, 헤파린, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴록사머), 점액 용해제(예를 들어, 아세틸시스테인, 쑥, 브로멜라인, 파파인, 클레로덴드룸, 브롬헥신, 카보시스테인, 에프라지논, 메스나, 암브록솔, 소브레롤, 도미오돌, 레토스테인, 스테프로닌, 티오프로닌, 겔솔린, 타이모신 β4, 도르나제 알파, 넬테넥신, 및 에르도스테인), 및 DNase(예를 들어, rhDNase)를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 표면 변경제는 나노입자 내에 및/또는 LNP의 표면 상에(예를 들어, 코팅, 흡착, 공유 결합, 또는 다른 공정에 의해) 배치될 수 있다.
LNP (예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 또한 하나 이상의 작용화된 지질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지질은 적절한 반응 조건 하에 아지드에 노출되는 경우 고리부가 반응을 겪을 수 있는 알킨기로 작용화될 수 있다. 특히, 지질 이중층은 막 투과, 세포 인식 또는 조영을 촉진하는 데 유용한 하나 이상의 기로 이러한 방식으로 작용화될 수 있다. LNP의 표면(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)은 또한 하나 이상의 유용한 항체와 접합될 수 있다. 표적화된 세포 전달, 조영 및 막 투과에 유용한 작용기 및 접합체는 당분야에 잘 알려져 있다.
이들 성분에 더하여, 지질 나노입자(예를 들어, 본 개시의 빈 LNP 또는 로딩 LNP)는 약학 조성물에 유용한 임의의 물질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지질 나노입자는 하나 이상의 용매, 분산 매질, 희석제, 분산 보조제, 현탁 보조제, 과립화 아주반트, 붕해제, 충전제, 활택제, 액체 비히클, 결합제, 표면 활성제, 등장성 제제, 증점제 또는 유화제, 완충제, 윤활제, 오일, 보존제 및 기타 종과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 보조 성분을 포함할 수 있다. 왁스, 버터, 착색제, 코팅제, 향료 및 방향제와 같은 부형제도 포함될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 당분야에 잘 알려져 있다(예를 들어 Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006 참고).
희석제의 예는 칼슘 카보네이트, 나트륨 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 이칼슘 포스페이트, 칼슘 설페이트, 칼슘 하이드로겐 포스페이트, 나트륨 포스페이트 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 나트륨 클로라이드, 건조 전분, 옥수수 전분, 분말 당, 및/또는 이의 조합을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 과립화제 및 분산제는 감자 전분, 옥수수 전분, 타피오카 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트, 점토, 알긴산, 구아 검, 시트러스 펄프, 한천, 벤토나이트, 셀룰로스 및 목제품, 천연 스펀지, 양이온 교환 수지, 칼슘 카보네이트, 실리케이트, 나트륨 카보네이트, 가교 폴리(비닐-피롤리돈)(크로스포비돈), 나트륨 카복시메틸 전분(나트륨 전분 글리콜레이트), 카복시메틸 셀룰로스, 가교 나트륨 카복시메틸 셀룰로스(크로스카멜로스), 메틸셀룰로스, 사전젤라틴화 전분(전분 1500), 미정질 전분, 수불용성 전분, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트(VEEGUM®), 나트륨 라우릴 설페이트, 4차 암모늄 화합물, 및/또는 이의 조합으로 구성되는 비제한적인 목록으로부터 선택될 수 있다.
표면 활성 제제 및/또는 유화제는 천연 유화제(예를 들어, 아카시아, 한천, 알긴산, 나트륨 알기네이트, 트라가칸트, 콘드룩스, 콜레스테롤, 잔탄, 펙틴, 젤라틴, 난황, 카제인, 양모 지방, 콜레스테롤, 왁스 및 레시틴), 콜로이드 점토(예를 들어, 벤토나이트[알루미늄 실리케이트] 및 VEEGUM®[마그네슘 알루미늄 실리케이트]), 장쇄 아미노산 유도체, 고분자량 알코올(예를 들어, 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 올레일 알코올, 트리아세틴 모노스테아레이트, 에틸렌 글리콜 디스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리비닐 알코올), 카보머(예를 들어, 카복시 폴리메틸렌, 폴리아크릴산, 아크릴산 중합체 및 카복시비닐 중합체), 카라기난, 셀룰로스 유도체(예를 들어, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 분말화 셀룰로스, 하이드록시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스), 소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트[TWEEN®20], 폴리옥시에틸렌 소르비탄[TWEEN® 60], 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트[TWEEN®80], 소르비탄 모노팔미테이트[SPAN®40], 소르비탄 모노스테아레이트[SPAN®60], 소르비탄 트리스테아레이트[SPAN®65], 글리세릴 모노올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트[SPAN®80]), 폴리옥시에틸렌 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트[MYRJ® 45], 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유, 폴리에톡실화 피마자유, 폴리옥시메틸렌 스테아레이트 및 SOLUTOL®), 수크로스 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르(예를 들어, CREMOPHOR®), 폴리옥시에틸렌 에테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르[BRIJ® 30]), 폴리(비닐-피롤리돈), 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 나트륨 올레에이트, 칼륨 올레에이트, 에틸 올레에이트, 올레산, 에틸 라우레이트, 나트륨 라우릴 설페이트, PLURONIC ®F 68, POLOXAMER® 188, 세트리모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드, 도쿠세이트 나트륨, 및/또는 이의 조합을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
결합제는 전분(예를 들어, 옥수수 전분 및 전분 페이스트); 젤라틴; 당(예를 들어, 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 덱스트린, 당밀, 락토스, 락티톨, 만니톨); 천연 및 합성 검(예를 들어, 아카시아, 나트륨 알기네이트, 아일랜드 이끼 추출물, 판와르 검, 가티 검, 이사폴 껍질의 점액질, 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐-피롤리돈), 마그네슘 알루미늄 실리케이트(VEEGUM®) 및 낙엽송 아라보갈락탄); 알기네이트; 폴리에틸렌 옥시드; 폴리에틸렌 글리콜; 무기 칼슘염; 규산; 폴리메타크릴레이트; 왁스; 물; 알코올; 및 이의 조합, 또는 임의의 다른 적합한 결합제일 수 있다.
보존제의 예는 항산화제, 킬레이트화제, 항미생물 보존제, 항진균 보존제, 알코올 보존제, 산성 보존제, 및/또는 기타 보존제를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 항산화제의 예는 알파 토코페롤, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시톨루엔, 모노티오글리세롤, 칼륨 메타바이설파이트, 프로피온산, 프로필 갈레이트, 나트륨 아스코르베이트, 나트륨 바이설파이트, 나트륨 메타바이설파이트, 및/또는 나트륨 설파이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 킬레이트화제의 예는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 시트르산 1수화물, 이나트륨 에데테이트, 이칼륨 에데테이트, 에데트산, 푸마르산, 말산, 인산, 나트륨 에데테이트, 타르타르산 및/또는 삼나트륨 에데테이트를 포함한다. 항균 보존제의 예는 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 벤질 알코올, 브로노폴, 세트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로록실레놀, 크레졸, 에틸 알코올, 글리세린, 헥세토늄, 페놀, 이미드요소, 페놀, 페녹시에탄올, 페닐에틸 알코올, 페닐수은 니트레이트, 프로필렌 글리콜 및/또는 티메로살을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 항진균성 보존제의 예는 부틸 파라벤, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤조산, 하이드록시벤조산, 칼륨 벤조에이트, 칼륨 소르베이트, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 프로피오네이트, 및/또는 소르브산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알코올 보존제의 예는 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 벤질 알코올, 페놀, 페놀계 화합물, 비스페놀, 클로로부탄올, 하이드록시벤조에이트 및/또는 페닐에틸 알코올을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 산성 보존제의 예는 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로틴, 시트르산, 아세트산, 데하이드로아스코르브산, 아스코르브산, 소르브산 및/또는 피트산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 보존제는 토코페롤, 토코페롤 아세테이트, 데테록심 메실레이트, 세트리미드, 부틸화 하이드록시아니솔(BHA), 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 에틸렌디아민, 나트륨 라우릴 설페이트(SLS), 나트륨 라우릴 에테르 설페이트(SLES), 나트륨 바이설파이트, 나트륨 메타바이설파이트, 칼륨 설파이트, 칼륨 메타바이설파이트, GLYDANT PLUS®, PHENONIP®, 메틸파라벤, GERMALL® 115, GERMABEN®II, NEOLONE™, KATHON™ 및/또는 EUXYL®을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
완충제의 예는 시트레이트 완충 용액, 아세테이트 완충 용액, 포스페이트 완충 용액, 암모늄 클로라이드, 칼슘 카보네이트, 칼슘 클로라이드, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루바이오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, d-글루콘산, 칼슘 글리세로포스페이트, 칼슘 락테이트, 칼슘 락토바이오네이트, 프로판산, 칼슘 레불리네이트, 펜탄산, 이염기성 칼슘 포스페이트, 인산, 삼염기성 칼슘 포스페이트, 칼슘 하이드록시드 포스페이트, 칼륨 아세테이트, 칼륨 클로라이드, 칼륨 글루코네이트, 칼륨 혼합물, 이염기성 칼륨 포스페이트, 일염기성 칼륨 포스페이트, 칼륨 포스페이트 혼합물, 나트륨 아세테이트, 나트륨 바이카보네이트, 나트륨 클로라이드, 나트륨 시트레이트, 나트륨 락테이트, 이염기성 나트륨 포스페이트, 일염기성 나트륨 포스페이트, 나트륨 포스페이트 혼합물, 트로메타민, 아미노-설포네이트 완충제(예를 들어, HEPES), 마그네슘 하이드록시드, 알루미늄 하이드록시드, 알긴산, 발열원-비함유수, 등장성 식염수, 링거 용액, 에틸 알코올, 및/또는 이의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 활석, 맥아, 글리세릴 베헤네이트, 수소화 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트, 나트륨 클로라이드, 류신, 마그네슘 라우릴 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 및 이의 조합으로 구성되는 비제한적인 군으로부터 선택될 수 있다.
오일의 예는 아몬드, 살구 속씨, 아보카도, 바바수, 베르가못, 블랙 커런트씨, 서양지치, 케이드, 카모마일, 카놀라, 캐러웨이, 카르나우바, 피마자, 계피, 코코아 버터, 코코넛, 대구 간, 커피, 옥수수, 목화씨, 에뮤, 유칼립투스, 달맞이꽃, 물고기, 아마씨, 제라니올, 박, 포도씨, 헤이즐 너트, 우슬초, 이소프로필 미리스테이트, 호호바, 쿠쿠이 너트, 라반딘, 라벤더, 레몬, 리체아 큐브바, 마카데미아 너트, 당아욱, 망고씨, 메도우폼씨, 밍크, 육두구, 올리브, 오렌지, 오렌지 러피(roughy), 야자, 야자 속씨, 복숭아 속씨, 땅콩, 양귀비 씨, 호박 씨, 평지씨, 쌀겨, 로즈마리, 홍화, 백단, 사스콰나, 세이버리, 바다 갈매 나무속, 참깨, 셰아 버터, 실리콘, 대두, 해바라기, 티트리, 엉겅퀴, 츠바키, 베티버, 호두, 및 밀 배아 오일뿐만 아니라 부틸 스테아레이트, 카프릴릭 트리글리세리드, 카프릭 트리글리세리드, 사이클로메티콘, 디에틸 세바케이트, 디메티콘 360, 시메티콘, 이소프로필 미리스테이트, 미네랄 오일, 옥틸도데칸올, 올레일 알코올, 실리콘 오일, 및/또는 이의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
약학 조성물
지질 나노입자를 포함하는 제형물은 약학 조성물로서 전체 또는 부분 제형화될 수 있다. 약학 조성물은 하나 이상의 지질 나노입자를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 하나 이상의 상이한 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 하나 이상의 지질 나노입자를 포함할 수 있다. 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제 또는 본원에 기재된 것들과 같은 보조 구성분을 추가로 포함할 수 있다. 약학 조성물 및 제제의 제형화 및 제조에 대한 일반 지침은 예를 들어 문헌(Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro; Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006)에서 이용 가능하다. 본 개시의 제형물에서 LNP의 하나 이상의 성분과 비혼화성일 수 있는 경우를 제외하고, 통상적인 부형제 및 보조 구성분은 임의의 통상적인 부형제 또는 보조 구성분이 임의의 약학적 조성물에서 사용될 수 있다. 부형제 또는 보조 구성분은 성분 또는 LNP와의 조합이 요망되지 않는 생물학적 효과 또는 달리 해로운 효과를 초래할 수 있는 경우 제형물의 LNP의 성분과 비혼화성일 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 부형제 또는 보조 구성분은 LNP를 포함하는 약학 조성물의 총 질량 또는 부피의 50% 초과를 구성할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 부형제 또는 보조 구성분은 약학 관습의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상을 구성할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용 가능한 부형제는 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 순수하다. 일부 구현예에서, 부형제는 인간에서의 사용 및 수의학적 사용에 대해 승인되어 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 식품의약국에 의해 승인되어 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 약학 등급이다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전 및/또는 국제 약전의 표준을 충족한다.
본 개시에 따른 약학 조성물에서 하나 이상의 지질 나노입자, 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제, 및/또는 임의의 추가 구성분의 상대량은 정체, 크기 및/또는 치료받는 대상체의 상태에 따라 그리고 추가로 조성물이 투여될 경로에 따라 변할 것이다. 예로서, 약학 조성물은 0.1% 내지 100%(중량/중량)의 하나 이상의 지질 나노입자를 포함한다. 또 다른 예로서, 약학 조성물은 0.1% 내지 15%(중량/부피)의 하나 이상의 양친매성 중합체(예를 들어, 0.5%, 1%, 2.5%, 5%, 10%, 또는 12.5% w/v)를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시의 지질 나노입자 및/또는 약학 조성물은 보관 및/또는 선적을 위해 냉장 또는 냉동된다(예를 들어, 약 -150℃ 내지 약 0℃ 또는 약 -80℃ 내지 약 -20℃의 온도와 같은 4℃ 이하의 온도(예를 들어, 약 -5℃, -10℃, -15℃, -20℃, -25℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃, -130℃ 또는 -150℃)에서 보관됨). 예를 들어, 하나 이상의 지질 나노입자를 포함하는 약학 조성물은 예를 들어, 약 -20℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, 또는 -80℃에서 보관 및/또는 선적을 위해 냉장되는 용액 또는 고체(예를 들어, 동결건조를 통한)이다. 특정 구현예에서, 본 개시는 또한 약 -150℃ 내지 약 0℃ 또는 약 -80℃ 내지 약 -20℃의 온도와 같이 4℃ 이하의 온도, 예를 들어, 약 -5℃, -10℃, -15℃, -20℃, -25℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃, -130℃ 또는 -150℃)에서 지질 나노입자 및/또는 이의 약학 조성물을 보관하는 단계에 의해 지질 나노 입자의 안정성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
지질 나노입자 및/또는 하나 이상의 지질 나노입자를 포함하는 약학 조성물은 신장 시스템과 같은 하나 이상의 특정 세포, 조직, 기관, 또는 이의 시스템 또는 그룹으로의 치료제 및/또는 예방제의 전달에 의해 제공되는 치료 효과로부터 이익을 얻을 수 있는 환자 또는 대상체를 포함하는 임의의 환자 또는 대상체에 투여될 수 있다. 지질 나노입자 및 지질 나노입자를 포함하는 약학 조성물의 본원에 제공된 설명은 주로 인간으로의 투여에 적합한 조성물에 대한 것이지만, 당업자는 이러한 조성물이 일반적으로 임의의 다른 포유류로의 투여에 적합함을 이해할 것이다. 다양한 동물에 대한 투여에 적합한 조성물을 만들기 위해 인간으로의 투여에 적합한 조성물의 변형은 잘 이해되어 있으며, 보통의 숙련된 수의 약리학자는, 있더라도, 단순히 일반적인 실험으로 이러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다. 조성물의 투여가 고려되는 대상체는 인간, 기타 영장류, 및 소, 돼지, 호스, 양, 고양이, 개, 마우스 및/또는 래트와 같은 상업적으로 관련된 포유류를 포함하는 기타 포유류을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
하나 이상의 지질 나노입자를 포함하는 약학 조성물은 약리학 분야에 알려져 있거나 이후 개발될 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로 이러한 제조 방법은 활성 구성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 구성분과 연합시키는 단계, 이어서 요망되거나 필요한 경우, 산물을 요망되는 단회 또는 다회 용량 단위로 분할, 형상화 및/또는 포장하는 단계를 포함한다.
본 개시에 따른 약학 조성물은 단일 단위 용량 및/또는 복수의 단일 단위 용량으로서, 대량으로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "단위 용량"은 사전 결정된 양의 활성 구성분(예를 들어, 지질 나노입자)을 포함하는 약학 조성물의 별개의 양이다. 활성 구성분의 양은 일반적으로 대상체에게 투여될 활성 구성분의 투여량 및/또는 예를 들어 이러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 같은 이러한 투여량의 편리한 분획과 같다.
약학 조성물은 다양한 투여 경로 및 방법에 적합한 다양한 형태로 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 액체 투여형(예를 들어, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭서), 주사제 형태, 고체 투여형(예를 들어, 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립), 국소 및/또는 경피 투여용 투여형(예를 들어, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 및 패치), 현탁액, 분말 및 기타 형태로 제조될 수 있다.
경구 및 비경구 투여를 위한 액체 투여형은 약학적으로 허용 가능한 에멀젼, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및/또는 엘릭서를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 활성 구성분 이외에, 액체 투여형은 예를 들어 물 또는 기타 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들어 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일(특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 그리고 이의 혼합물과 같은 당분야에서 일반적으로 사용되는 불활성 희석제를 포함한다. 불활성 희석제 외에, 경구 조성물은 추가 치료제 및/또는 예방제, 수화제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향료 및/또는 방향제와 같은 추가 제제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 구현예에서, 조성물은 Cremophor®, 알코올, 오일, 변형된 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 사이클로덱스트린, 중합체 및/또는 이의 조합과 같은 가용화제와 혼합된다.
주사제 조제물, 예를 들어 멸균 주사제 수성 또는 유성 현탁액은 적합한 분산제, 수화제 및/또는 현탁제를 사용하여 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사제 조제물은 비독성 비경구로 허용 가능한 희석제 및/또는 용매 중 멸균 주사제 용액, 현탁액 및/또는 에멀젼, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액, U.S.P. 및 등장성 나트륨 클로라이드 용액이 있다. 멸균 신전유는 통상적으로 용매 또는 현탁 매질로 사용된다. 이 목적을 위해 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 온건한 신전유가 사용될 수 있다. 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용될 수 있다.
주사제 제형물은 예를 들어 세균-보유 필터를 통한 여과에 의해, 및/또는 사용 전 멸균수 또는 기타 멸균 주사제 매질 중 용해되거나 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다.
활성 구성분의 효과를 연장하기 위해, 종종 피하 또는 근육내 주사로부터 활성 구성분의 흡수를 늦추는 것이 요망된다. 이것은 수용성이 불량한 결정형 또는 무정형 물질의 액체 현탁액을 사용하여 달성될 수 있다. 이어서 약물의 흡수 속도는 그 용해 속도에 의존하며, 이는 다시 결정 크기 및 결정 형태에 의존할 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다. 주사제 데포 형태는 폴리락티드-폴리글리콜리드와 같은 생분해성 중합체에서 약물의 마이크로캡슐화 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비 및 사용된 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주사제 제형물은 약물을 신체 조직과 상용성인 리포좀 또는 마이크로에멀젼에 포획하여 제조된다.
직장 또는 질 투여용 조성물은 전형적으로 상온에서는 고체이지만 체온에서는 액체이므로 직장 또는 질 강에서 녹아 활성 구성분을 방출하는 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜 또는 좌약 왁스와 같은 적절한 비자극성 부형제와 조성물을 혼합하여 제조될 수 있는 좌약이다.
경구 투여를 위한 고형 투여형은 캡슐, 정제, 환제, 필름, 분말 및 과립을 포함한다. 이러한 고체 투여형에서, 활성 구성분은 적어도 하나의 불활성, 약학적으로 허용 가능한 부형제, 예컨대 나트륨 시트레이트 또는 이칼슘 포스페이트 및/또는 충전제 또는 증량제(예를 들어, 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및 규산), 결합제(예를 들어, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 수크로스 및 아카시아), 습윤제(예를 들어, 글리세롤), 붕해제(예를 들어, 한천, 칼슘 카보네이트, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 나트륨 카보네이트), 용액 지연제(예를 들어, 파라핀), 흡수 촉진제(예를 들어, 4차 암모늄 화합물), 수화제(예를 들어, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트), 흡수제(예를 들어, 카올린 및 벤토나이트 점토, 실리케이트) 및 윤활제(예를 들어, 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 라우릴 설페이트), 및 이의 혼합물과 혼합된다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 투여형은 완충제를 포함할 수 있다.
유사한 유형의 고체 조성물은 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 부형제를 사용하여 연질 및 경질 충전 젤라틴 캡슐의 충전제로 사용될 수 있다. 정제, 당의정, 캡슐, 환제 및 과립의 고체 투여형은 코팅 및 쉘, 예를 들어 장용 코팅 및 약학 제형 분야에 널리 알려진 기타 코팅과 함께 제조될 수 있다. 이들은 임의로 불투명화제를 포함할 수 있고 활성 구성분(들)만을 방출하는 조성물일 수 있다. 일부 구현예에서, 고체 조성물은 임의로 불투명화제를 포함할 수 있고, 임의로 지연된 방식으로 장관의 특정 부분에서 활성 구성분(들)을 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 유사한 유형의 고체 조성물은 락토스 또는 유당뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 부형제를 사용하여 연질 및 경질 충전 젤라틴 캡슐에서 충전제로 사용될 수 있다.
조성물의 국소 및/또는 경피 투여를 위한 투여형은 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 분말, 용액, 스프레이, 흡입제 및/또는 패치를 포함할 수 있다. 일반적으로, 활성 구성분은 멸균 조건 하에 약학적으로 허용 가능한 부형제 및/또는 요구될 수 있는 임의의 필요한 보존제 및/또는 완충액과 혼합된다. 추가로, 본 개시는 종종 신체에 대한 화합물의 제어된 전달을 제공하는 추가 이점을 갖는 경피 패치의 사용을 고려한다. 이러한 투여형은 예를 들어 적절한 매질 중 화합물을 용해 및/또는 분배함으로써 제조될 수 있다. 대안적으로 또는 부가적으로, 속도는 속도 제어 막을 제공함으로써 및/또는 중합체 매트릭스 및/또는 겔에 화합물을 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
본원에 기재된 피내 약학 조성물을 전달하는 데 사용하기 적합한 장치는 미국 특허 4,886,499; 5,190,521; 5,328,483; 5,527,288; 4,270,537; 5,015,235; 5,141,496; 및 5,417,662에 기재된 것들과 같은 짧은 바늘 장치를 포함한다. 피내 조성물은 PCT 공개 WO 99/34850에 기재된 것들과 같은 피부 내로의 바늘의 유효 침투 길이를 제한하는 장치 및 그의 기능적 동등물에 의해 투여될 수 있다. 액체 제트 주입기를 통해 및/또는 각질층을 관통하고 진피에 도달하는 제트를 생성하는 바늘을 통해 액체 조성물을 진피에 전달하는 제트 주입 장치가 적합하다. 제트 주입 장치는 예를 들어 미국 특허 5,480,381; 5,599,302; 5,334,144; 5,993,412; 5,649,912; 5,569,189; 5,704,911; 5,383,851; 5,893,397; 5,466,220; 5,339,163; 5,312,335; 5,503,627; 5,064,413; 5,520,639; 4,596,556; 4,790,824; 4,941,880; 4,940,460; 및 PCT 공개 WO 97/37705 및 WO 97/13537에 기재되어 있다. 압축 가스를 사용하여 피부의 외부 층을 통해 진피까지 분말 형태의 백신을 가속화하는 탄도 분말/입자 전달 장치가 적합하다. 대안적으로 또는 부가적으로, 통상적인 주사기가 피내 투여의 고전적인 망투(mantoux) 방법에서 사용될 수 있다.
국소 투여에 적합한 제형물은 도찰제, 로션, 크림, 연고 및/또는 페이스트와 같은 수중유 및/또는 유중수 에멀젼 및/또는 용액 및/또는 현탁액과 같은 액체 및/또는 반액체 조제물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 국소 투여 가능한 제형물은, 예를 들어 약 1% 내지 약 10%(중량/중량) 활성 구성분을 포함할 수 있지만, 활성 구성분의 농도는 용매 중 활성 구성분의 용해도 한계만큼 높을 수 있다. 국소 투여용 제형물은 본원에 기재된 추가 구성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
약학 조성물은 구강을 통한 폐 투여에 적합한 제형물로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형물은 활성 구성분을 포함하는 건조 입자를 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 편리하게는 분말을 분산시키기 위해 추진제의 흐름이 지향될 수 있는 건조 분말 저장소를 포함하는 장치를 사용하여 및/또는 밀봉된 용기 내의 저비점 추진제에 용해 및/또는 현탁된 활성 구성분을 포함하는 장치와 같은 자체 추진 용매/분말 분배 용기를 사용하여 투여하기 위한 건조 분말 형태이다. 건조 분말 조성물은 설탕과 같은 고체 미세 분말 희석제를 포함할 수 있고 단위 용량 형태로 편리하게 제공된다.
저비점 추진제는 일반적으로 대기압에서 65℉ 미만의 비점을 갖는 액체 추진제를 포함한다. 일반적으로 추진제는 조성물의 50% 내지 99.9%(중량/중량)를 구성할 수 있고, 활성 구성분은 조성물의 0.1% 내지 20%(중량/중량)를 구성할 수 있다. 추진제는 액체 비이온성 및/또는 고체 음이온성 계면활성 제제 및/또는 고체 희석제(활성 구성분을 포함하는 입자와 동일한 차수의 입자 크기를 가질 수 있음)와 같은 추가 구성분을 추가로 포함할 수 있다.
폐 전달을 위해 제형화된 약학 조성물은 용액 및/또는 현탁액의 액적 형태로 활성 구성분을 제공할 수 있다. 이러한 제형물은 활성 구성분을 포함하고, 임의로 멸균의, 수성 및/또는 묽은 알코올성 용액 및/또는 현탁액으로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있고, 임의의 분무 및/또는 분무화 장치를 사용하여 편리하게 투여될 수 있다. 이러한 제형물은 사카린 나트륨과 같은 향미제, 휘발성 오일, 완충제, 표면 활성제, 및/또는 메틸하이드록시벤조에이트와 같은 보존제를 포함하지만 이에 제한되지 않는 추가 구성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 투여 경로에 의해 제공된 액적은 약 1 nm 내지 약 200 nm 범위의 평균 지름을 가질 수 있다.
폐 전달에 유용한 것으로 본원에 기재된 제형물은 약학 조성물의 비강내 전달에 유용하다. 비강내 투여에 적합한 또 다른 제형물은 활성 구성분을 포함하고 약 0.2 μm 내지 500 μm의 평균 입자를 갖는 거친 분말이다. 이러한 제형물은 코담배를 취하는 방식으로, 즉 코에 가까이 댄 분말 용기로부터 비강을 통한 빠른 흡입에 의해 투여된다.
비강 투여에 적합한 제형물은 예를 들어 약 0.1%(중량/중량)만큼 적은 그리고 100%(중량/중량)만큼 많은 활성 구성분을 포함할 수 있으며, 본원에 기재된 추가 구성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 약학 조성물은 협측 투여에 적합한 제형물로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형물은 예를 들어, 통상적인 방법을 사용하여 제조된 정제 및/또는 로젠지의 형태일 수 있고, 예를 들어 0.1% 내지 20%(중량/중량) 활성 구성분일 수 있으며, 나머지는 경구 용해 가능 및/또는 분해 가능 조성물 및 임의로 본원에 기재된 추가 구성분 중 하나 이상을 포함한다. 대안적으로, 협측 투여에 적합한 제형물은 활성 구성분을 포함하는 분말 및/또는 에어로졸화 및/또는 분무화 용액 및/또는 현탁액을 포함할 수 있다. 이러한 분말화, 에어로졸화 및/또는 에어로졸화 제형물은 분산되는 경우 약 0.1 nm 내지 약 200 nm 범위의 평균 입자 및/또는 액적 크기를 가질 수 있고, 본원에 기재된 임의의 추가 구성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.
약학 조성물은 안과 투여에 적합한 제형물로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 이러한 제형물은, 예를 들어, 수성 또는 유성 액체 부형제 중 활성 구성분의 0.1/1.0%(중량/중량) 용액 및/또는 현탁액을 포함하는 점안제의 형태일 수 있다. 이러한 점적제는 완충제, 염, 및/또는 본원에 기재된 임의의 추가 구성분 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 유용한 기타 안과적으로 투여 가능한 제형물은 활성 구성분을 미정질 형태 및/또는 리포좀 조제물로 포함하는 것들을 포함한다. 점이제 및/또는 점안제는 본 개시의 범위 내에 있는 것으로 고려된다.
세포에서 폴리펩티드를 제조하는 방법
본 개시는 포유류 세포에서 관심 폴리펩티드를 제조하는 방법을 제공한다. 폴리펩티드를 제조하는 방법에는 세포를 관심 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA를 포함하는 LNP를 포함하는 본 개시의 제형물과 접촉시키는 단계가 관여된다. 세포와 지질 나노입자의 접촉 시, mRNA는 세포에서 흡수되고 번역되어 관심 폴리펩티드를 제조할 수 있다.
일반적으로, 포유류 세포를 관심 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA를 포함하는 LNP와 접촉시키는 단계는 생체내, 생체외, 배양내 또는 시험관내 수행될 수 있다. 세포와 접촉된 지질 나노입자의 양 및/또는 여기서의 mRNA의 양은 접촉되는 세포 또는 조직의 유형, 투여 수단, 지질 나노입자 및 여기서의 mRNA의 물리화학적 특성(예를 들어, 크기, 전하 및 화학적 조성) 및 기타 요인에 의존할 수 있다. 일반적으로, 지질 나노입자의 유효량은 세포에서 효율적인 폴리펩티드 제조를 가능하게 할 것이다. 효율에 대한 계측은 폴리펩티드 번역(폴리펩티드 발현에 의해 표시됨), mRNA 분해 수준 및 면역 반응 지표를 포함할 수 있다.
mRNA를 포함하는 LNP를 세포와 접촉시키는 단계에는 형질감염이 관여되거나 이를 유도할 수 있다. LNP의 지질 성분을 포함하는 인지질은 예를 들어 세포막 또는 세포내막과 상호작용 및/또는 융합함으로써 형질감염을 촉진하고/하거나 형질감염 효율을 증가시킬 수 있다. 형질감염은 세포 내에서 mRNA의 번역을 허용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 지질 나노입자는 치료적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, LNP에 포함된 mRNA는 (예를 들어, 번역 가능한 영역에서) 치료용 폴리펩티드를 암호화하고 세포 내로 접촉 및/또는 진입(예를 들어, 형질감염) 시 치료용 폴리펩티드를 제조할 수 있다. 다른 구현예에서, LNP에 포함된 mRNA는 대상체의 면역성을 개선하거나 증가시킬 수 있는 폴리펩티드를 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, mRNA는 과립구-집락 자극 인자 또는 트라스투주맙을 암호화할 수 있다.
일부 구현예에서, LNP에 포함된 mRNA는 지질 나노입자와 접촉된 세포에 실질적으로 부재할 수 있는 하나 이상의 폴리펩티드를 대체할 수 있는 재조합 폴리펩티드를 암호화할 수 있다. 하나 이상의 실질적으로 부재하는 폴리펩티드는 암호화 유전자 또는 이의 조절 경로의 유전적 돌연변이로 인해 결여될 수 있다. 대안적으로, mRNA의 번역에 의해 제조된 재조합 폴리펩티드는 세포 내에, 그 표면 상에 존재하거나, 세포로부터 분비되는 내인성 단백질의 활성을 길항할 수 있다. 길항성 재조합 폴리펩티드는 돌연변이에 의해 유도되는 변경된 활성 또는 편재와 같은 내인성 단백질의 활성에 의해 유도되는 유해한 효과를 퇴치하기 위해 요망될 수 있다. 또 다른 대안에서, mRNA의 번역에 의해 제조된 재조합 폴리펩티드는 세포 내에, 이의 표면 상에 존재하거나, 세포로부터 분비되는 생물학적 모이어티의 활성을 간접적으로 또는 직접적으로 길항할 수 있다. 길항된 생물학적 모이어티는 지질(예를 들어, 콜레스테롤), 지단백질(예를 들어, 저밀도 지단백질), 핵산, 탄수화물, 및 소분자 독소를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. mRNA의 번역에 의해 제조된 재조합 폴리펩티드는 핵과 같은 특정 구획 내에서와 같은 세포 내에서 편재를 위해 조작될 수 있거나, 세포로부터의 분비 또는 세포의 원형질막으로의 전위를 위해 조작될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포를 mRNA를 포함하는 LNP와 접촉시키는 것은 외인성 핵산에 대한 세포의 선천성 면역 반응을 감소시킬 수 있다. 세포는 번역 가능한 영역을 포함하는 제1 양의 제1 외인성 mRNA 포함하는 제1 지질 나노입자와 접촉될 수 있고, 제1 외인성 mRNA에 대한 세포의 선천성 면역 반응의 수준이 결정될 수 있다. 후속적으로, 세포는 제2 양의 제1 외인성 mRNA를 포함하는 제2 조성물과 접촉될 수 있으며, 제2 양은 제1 양에 비해 더 적은 양의 제1 외인성 mRNA이다. 대안적으로, 제2 조성물은 제1 외인성 mRNA와 상이한 제1 양의 제2 외인성 mRNA를 포함할 수 있다. 세포를 제1 및 제2 조성물과 접촉시키는 단계는 1회 이상 반복될 수 있다. 추가로, 세포에서 폴리펩티드 제조(예를 들어, 번역)의 효율이 임의로 결정될 수 있고, 표적 단백질 제조 효율이 달성될 때까지 세포는 제1 및/또는 제2 조성물과 반복적으로 재접촉될 수 있다.
세포 및 기관에 치료제를 전달하는 방법
본 개시는 포유류 세포 또는 기관에 핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 방법을 제공한다. 세포로의 치료제 및/또는 예방제의 전달에는 핵산과 같은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 LNP를 포함하는 본 개시의 제형물을 대상체에 투여하는 단계가 관여되며, 조성물의 투여에는 세포를 조성물과 접촉시키는 것이 관여된다. 일부 구현예에서, 단백질, 세포독성제, 방사성 이온, 화학치료제 또는 핵산(예를 들어, RNA, 예를 들어, mRNA)은 세포 또는 기관으로 전달될 수 있다. 치료제 및/또는 예방제가 mRNA인 경우, 세포와 지질 나노입자의 접촉 시, 번역 가능한 mRNA가 세포에서 번역되어 관심 폴리펩티드를 제조할 수 있다. 그러나, 실질적으로 번역 불가능한 mRNA도 세포로 전달될 수 있다. 실질적으로 번역 불가능한 mRNA는 백신으로 유용할 수 있고/있거나 세포의 번역 성분을 격리하여 세포에서 다른 종의 발현을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, LNP는 특정 유형 또는 클래스의 세포(예를 들어, 특정 기관 또는 이의 시스템의 세포)를 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 관심 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 LNP는 포유류의 간, 신장, 비장, 대퇴 또는 폐에 특이적으로 전달될 수 있다. 특정 클래스의 세포, 기관, 또는 시스템 또는 이의 그룹에 대한 특이적 전달은 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자의 더 높은 비율이 예를 들어, 포유류에 대한 LNP의 투여 시, 다른 목적지에 비해 관심 목적지(예를 들어, 조직)로 전달됨을 시사한다. 일부 구현예에서, 특이적 전달은 또 다른 목적지(예를 들어, 비장)와 비교하여 표적화된 목적지의 조직(예를 들어, 간과 같은 관심 조직) 1 g 당 치료제 및/또는 예방제의 양의 2배, 5배, 10배, 15배 또는 20배 초과 증가를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 관심 조직은 간, 신장, 폐, 비장, 대퇴, 혈관(예를 들어, 관상동맥내 또는 대퇴내) 혈관 내피 또는 신장, 및 종양 조직(예를 들어, 종양내 주사를 통한)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
세포 표면 상의 단백질-결합 파트너(예를 들어, 항체 또는 이의 기능적 단편, 스캐폴드 단백질 또는 펩티드) 또는 수용체를 암호화하는 mRNA가 LNP에 포함될 수 있다. mRNA는 지질, 탄수화물 또는 기타 생물학적 모이어티의 합성 및 세포외 편재를 유도하기 위해 추가로 또는 대신 사용될 수 있다. 대안적으로, LNP의 다른 치료제 및/또는 예방제 또는 요소(예를 들어, 지질 또는 리간드)는 LNP가 수용체를 포함하는 표적 세포 집단과 보다 쉽게 상호작용할 수 있도록 특정 수용체(예를 들어, 저밀도 지단백질 수용체)에 대한 이의 친화도에 기초하여 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 리간드는 특이적 결합 쌍의 구성원, 항체, 모노클로날 항체, Fv 단편, 단일쇄 Fv(scFv) 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, 단일 도메인 항체, 카멜화된 항체 및 이의 단편, 인간화 항체 및 이의 단편, 및 이의 다가 버전; 이황화 안정화된 Fv 단편, scFv 탠덤, 디아바디, 트리바디 또는 테트라바디와 같은 단일- 또는 이중-특이적 항체를 포함하는 다가 결합 시약; 및 압타머, 수용체 및 융합 단백질을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 리간드는 세포 표적화 특이성의 조정을 허용할 수 있는, 표면-결합 항체일 수 있다. 이것은 요망되는 표적화 부위에 대한 관심 에피토프에 대해 고도로 특이적인 항체가 생성될 수 있기 때문에 특히 유용하다. 한 구현예에서, 다수의 항체가 세포의 표면 상에서 발현되고, 각각의 항체는 요망되는 표적에 대해 상이한 특이성을 가질 수 있다. 이러한 접근은 표적 상호 작용의 결합력 및 특이성을 증가시킬 수 있다.
리간드는 예를 들어 세포의 요망되는 편재 또는 기능에 기초하여 생물학 분야의 당업자에 의해 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, LNP는 간세포를 표적화할 수 있다. 아포지단백질 E(apoE)와 같은 아포지단백질은 체내 중성 또는 거의 중성인 지질 함유 지질 나노입자와 연합하는 것으로 나타났으며 간세포 표면 상에서 확인되는 저밀도 지단백질 수용체(LDLR)와 같은 수용체와 연합하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 대상체에 투여되는 중성 또는 거의 중성 전하를 갖는 지질 성분을 포함하는 LNP는 대상체의 체내에서 apoE를 획득할 수 있고, 후속적으로 표적화된 방식으로 LDLR을 포함하는 간세포에 치료제 및/또는 예방제(예를 들어, RNA)를 전달할 수 있다.
질환 및 장애를 치료하는 방법
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 빈 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 빈 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 로딩 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 로딩 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본원에 기재된 LNP 제형물을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 빈 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 빈 LNP 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 로딩 LNP를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 로딩 LNP 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본원에 개시된 LNP 제형물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 본원에 개시된 빈 LNP의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 본원에 개시된 빈 LNP 용액의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 본원에 개시된 로딩 LNP의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 본원에 개시된 로딩 LNP 용액의 용도를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에 본원에 개시된 빈 LNP를 투여하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에 본원에 개시된 빈 LNP 용액을 투여하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에 본원에 개시된 로딩 LNP를 투여하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에 본원에 개시된 로딩 LNP 용액을 투여하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체에 본원에 개시된 LNP 제형물을 투여하는 방법을 제공한다.
지질 나노입자는 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 데 유용할 수 있다. 특히, 이러한 조성물은 소실되거나 비정상적인 단백질 또는 폴리펩티드 활성을 특징으로 하는 질환, 장애 또는 병태를 치료하는 데 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 소실되거나 비정상적인 폴리펩티드를 암호화하는 mRNA를 포함하는 LNP를 포함하는 본 개시의 제형물은 세포에 투여되거나 전달될 수 있다. mRNA의 후속 번역은 폴리펩티드를 제조할 수 있으며, 이에 의해 폴리펩티드에 의해 유도되는 소실되거나 비정상적인 활성으로 인해 유도되는 문제를 감소 또는 제거할 수 있다. 번역이 빠르게 일어날 수 있기 때문에, 방법 및 조성물은 패혈증, 뇌졸중 및 심근경색과 같은 급성 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용할 수 있다. LNP에 포함된 치료제 및/또는 예방제는 또한 주어진 종의 전사 속도를 변경하여 유전자 발현에 영향을 미칠 수 있다.
본 개시는 핵산과 같은 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자, 및 이를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계가 관여되는 방법을 제공한다. 용어 치료제 및 예방제는 본 개시의 특징 및 구현예와 관련하여 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다. 치료 조성물, 또는 이의 조영, 진단 또는 예방 조성물은 질환, 장애, 및/또는 병태의 예방, 치료, 진단 또는 조영 및/또는 다른 목적을 위해 효과적인 임의의 합리적인 양 및 임의의 투여 경로를 사용하여 대상체에 투여될 수 있다. 주어진 대상체에 투여되는 특정 양은 대상체의 종, 연령 및 일반적인 상태; 투여 목적; 특정 조성; 투여 방식 등에 따라 다를 수 있다. 본 개시에 따른 조성물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여량 단위 형태로 제형화될 수 있다. 그러나, 본 개시의 조성물의 총 일일 사용량은 철저한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 것임이 이해될 것이다. 임의의 특정 환자에 대한 특정 치료 유효, 예방 유효, 또는 달리 적절한 용량 수준(예를 들어, 조영를 위한)은, 있는 경우, 치료받는 장애의 중증도 및 확인; 사용되는 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제; 사용된 특정 조성; 환자의 나이, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 사용된 특정 약학 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 속도; 치료 지속기간; 사용된 특정 약학 조성물과 조합하여 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 요인을 포함하는 다양한 요인에 의존할 것이다.
핵산과 같은 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 LNP는 임의의 경로로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 하나 이상의 지질 나노입자를 포함하는 예방, 진단 또는 조영 조성물을 포함하는 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 피하, 심실내, 경피 또는 피내, 피간, 직장, 질내, 복강내, 국소(예를 들어, 분말, 연고, 크림, 겔, 로션 및/또는 점적제에 의해), 점막, 비강, 협측, 장, 유리체내, 종양내, 설하, 비강내; 기관내 점적, 기관지 점적 및/또는 흡입에 의해; 경구 스프레이 및/또는 분말, 비강 스프레이 및/또는 에어로졸, 및/또는 문맥 카테터를 통하는 것을 포함하는 다양한 경로 중 하나 이상에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 피내, 동맥내, 종양내, 피하 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 본 개시는 약물 전달 과학의 가능한 발전을 고려하여 임의의 적절한 경로에 의한 본원에 기재된 조성물의 전달 또는 투여를 포괄한다. 일반적으로, 가장 적절한 투여 경로는 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자의 성질(예를 들어, 혈류 및 위장관과 같은 다양한 신체 환경에서의 안정성), 환자의 상태(예를 들어, 환자가 특정 투여 경로를 견딜 수 있는지 여부) 등을 포함하는 다양한 요인에 의존할 것이다.
특정 구현예에서, 본 개시에 따른 조성물은 주어진 용량에서 약 0.0001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg, 약 0.05 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg의 치료제 및/또는 예방제(예를 들어, mRNA)를 전달하기 충분한 투여량 수준으로 투여될 수 있으며, 1 mg/kg(mpk)의 용량은 대상체 체중 1 kg 당 치료제 및/또는 예방제 1 mg을 제공한다. 일부 구현예에서, LNP의 치료제 및/또는 예방제(예를 들어, mRNA)의 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 치료제 및/또는 예방제의 약 0.005 mg/kg 내지 약 2.5 mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 다른 구현예에서, 약 0.05 mg/kg 내지 약 0.25 mg/kg의 용량이 투여될 수 있다. 용량은 요망되는 수준의 mRNA 발현 및/또는 치료, 진단, 예방 또는 조영 효과를 얻기 위해 동일하거나 상이한 양으로 하루에 한 번 이상 투여될 수 있다. 요망되는 투여량은 예를 들어, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일, 3일마다, 매주, 2주마다, 3주마다, 또는 4주마다 전달될 수 있다. 특정 구현예에서, 요망되는 투여량은 다회 투여(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14회 이상의 투여)를 사용하여 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 단회 용량은 예를 들어 수술 절차 전에 또는 후에 또는 급성 질환, 장애 또는 병태의 경우에서 투여될 수 있다.
핵산과 같은 하나 이상의 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 지질 나노입자는 하나 이상의 다른 치료제, 예방제, 진단제 또는 조영제와 조합하여 사용될 수 있다. "~와 조합하여"는 이러한 전달 방법이 본 개시의 범위 내에 있지만, 제제가 동시에 투여되어야 하고/하거나 함께 전달을 위해 제형화되어야 함을 시사하는 것으로 의도되지 않는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상이한 치료제 및/또는 예방제를 포함하는 하나 이상의 지질 나노입자는 조합하여 투여될 수 있다. 조성물은 하나 이상의 다른 요망되는 치료제 또는 의학 절차와 동시에, 그 전에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 해당 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 일정에 투여될 것이다. 일부 구현예에서, 본 개시는 이의 생체이용률을 개선하고, 이의 대사를 감소 및/또는 변형하고, 이의 배출을 억제하고 및/또는 이의 체내 분포를 변형하는 제제와 조합하여 조성물, 또는 이의 조영, 진단 또는 예방 조성물의 전달을 포괄한다.
조합하여 이용되는 치료적으로, 예방적으로, 진단적으로 또는 조영 활성제가 단일 조성물로 함께 투여되거나 상이한 조성물로 별도로 투여될 수 있음이 추가로 이해될 것이다. 일반적으로 조합하여 이용되는 제제는 개별적으로 이용되는 수준을 초과하지 않는 수준으로 이용될 것으로 예상된다. 일부 구현예에서, 조합하여 이용되는 수준은 개별적으로 이용되는 수준보다 낮을 수 있다.
조합 요법에서 사용할 치료법(치료제 또는 절차)의 특정 조합은 요망되는 치료제 및/또는 절차의 상용성 그리고 달성하고자 하는 요망되는 치료 효과를 고려할 것이다. 또한 사용된 치료법이 동일한 장애에 대해 요망되는 효과를 달성할 수 있거나(예를 들어, 암 치료에 유용한 조성물이 화학치료제와 동시에 투여될 수 있음), 이들이 상이한 효과(예를 들어, 주입 관련 반응과 같은 임의의 유해 효과의 제어)를 달성할 수 있음이 이해될 것이다.
LNP는 조성물의 효과 및/또는 치료 윈도우를 증가시키기 위해 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 제제는 예를 들어 소염 화합물, 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), 스타틴, 에스트라디올, BTK 억제제, S1P1 작용제, 글루코코르티코이드 수용체 조절제(GRM), 또는 항-히스타민일 수 있다. 일부 구현예에서, LNP는 덱사메타손, 메토트렉세이트, 아세트아미노펜, H1 수용체 차단제 또는 H2 수용체 차단제와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하거나 대상체(예를 들어, 포유류)에 치료제 및/또는 예방제를 전달하는 방법에는 LNP를 투여하기 전에 대상체를 하나 이상의 제제로 사전 처리하는 단계가 관여될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 유용한 양(예를 들어, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 또는 임의의 다른 유용한 양)의 덱사메타손, 메토트렉세이트, 아세트아미노펜, H1 수용체 차단제 또는 H2 수용체 차단제로 사전-처리될 수 있다. 사전 처리는 지질 나노입자의 투여 24시간 이하(예를 들어, 24시간, 20시간, 16시간, 12시간, 8시간, 4시간, 2시간, 1시간, 50분, 40분, 30분, 20분 또는 10분) 전에 일어날 수 있으며, 예를 들어 증가하는 투여량으로 1회, 2회 이상 일어날 수 있다.
당업자는 본원에 기재된 개시에 따른 특정 구현예에 대한 많은 동등물을 일상적인 실험만을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 본 개시의 범위는 상기 설명으로 제한되는 것으로 의도되지 않고, 오히려 첨부된 청구범위에 제시된 바와 같다.
청구범위에서, "a", "an" 및 "the"와 같은 관사는 반대로 표시되거나 달리 맥락 상 자명하지 않은 한, 하나 또는 하나 초과를 의미할 수 있다. 군의 하나 이상의 구성원 간에 "또는"을 포함하는 청구항 또는 기재는 반대로 표시되거나 달리 맥락 상 자명하지 않은 한, 군 구성원 중 하나, 하나 초과 또는 모두가 주어진 제품 또는 공정에 존재하거나, 사용되거나, 달리 관련되는 경우 충족된 것으로 간주된다. 본 개시는 군의 정확히 한 구성원이 주어진 제품 또는 공정에 존재하거나, 사용되거나, 달리 관련되는 구현예를 포함한다. 본 개시는 군 구성원 중 하나 초과 또는 모두가 주어진 제품 또는 공정에 존재하거나, 사용되거나, 달리 관련되는 구현예를 포함한다.
또한 용어 "포함하는"은 개방적이며 추가 요소 또는 단계의 포함을 허용하지만 필요로 하지 않는 것으로 의도됨이 주지되어야 한다. 용어 "포함하는"이 본원에서 사용되는 경우, 용어 "본질적으로 ~로 구성되는" 및 "~로 구성되는"도 따라서 포괄되고 개시된다. 기재에 걸쳐, 조성물이 특정 성분을 갖거나 포함하는 것으로 기재되는 경우, 조성물은 또한 인용된 성분으로 본질적으로 구성되거나 이로 구성되는 것으로 고려된다. 유사하게, 방법 또는 공정이 특정 공정 단계를 갖거나 포함하는 것으로 기재되는 경우, 공정은 또한 인용된 가공 단계로 본질적으로 구성되거나 구성된다. 또한, 단계 순서 또는 특정 작업을 수행하기 위한 순서는 본 발명이 작동 가능한 상태로 유지되는 한 중요하지 않음을 이해되어야 한다. 또한 두 개 이상의 단계 또는 작업이 동시에 수행될 수 있다.
범위가 주어지면 종결점이 포함된다. 더욱이, 달리 나타내거나 달리 맥락 및 당업자의 이해로부터 자명하지 않은 한, 범위로 표현되는 값은 맥락 상 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 범위의 하한 단위의 10분의 1까지 본 개시의 상이한 구현예에서 언급된 범위 내의 임의의 특정 값 또는 하위 범위를 추정할 수 있음이 이해되어야 한다.
또한, 선행 기술에 속하는 본 개시의 임의의 특정 구현예는 임의의 하나 이상의 청구범위로부터 명시적으로 제외될 수 있음이 이해되어야 한다. 이러한 구현예는 당업자에게 알려진 것으로 간주되므로, 본원에서 명시적으로 배제를 기재하지 않더라도 배제될 수 있다.
인용된 모든 출처, 예를 들어 참고문헌, 간행물, 특허 출원, 데이터베이스, 데이터베이스 엔트리 및 여기에서 인용된 분야는 인용에서 명시적으로 언급되지 않더라도 참조에 의해 본 출원에 포함된다. 인용된 출처 및 본 출원의 설명이 상충하는 경우, 본 출원의 설명이 우선한다.
본 개시가 설명되었지만, 하기 실시예는 제한이 아니라 예시로서 제공된다.
균등부
본 발명의 하나 이상의 구현예의 상세사항은 상기 동반 설명에 제시되어 있다. 본원에 기재된 것들과 유사하거나 동등인 임의의 방법 및 물질이 본 개시의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 이제 기재된다. 본 개시의 다른 특징, 목적 및 이점은 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다. 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 맥락 상 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 단수 형태는 복수의 지시대상을 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 간행물은 참조로 포함된다.
전술한 설명은 예시의 목적으로만 제시되었으며 본 발명을 개시된 정확한 형태로 제한하려는 것이 아니라 본원에 첨부된 청구범위에 의한 것이다.
열거된 구현예
구현예 1. 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈-LNP 용액)을 제조하는 방법으로서,
(i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계를 포함하며, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 2. 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈-LNP 용액)을 제조하는 방법으로서,
(i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계를 포함하고, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하며, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 3. 구현예 1에 있어서, 빈 LNP 용액을 가공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구현예 4. 다음 단계를 포함하는, 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 제조하는 방법:
(i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계로서, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 가지는, 단계; 및
(ii) 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
구현예 5. 다음 단계를 포함하는, 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 제조하는 방법:
(i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계로서, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하고, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 가지는, 단계; 및
(ii) 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
구현예 6. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액을 가공하여 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구현예 7. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 로딩 LNP에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제1 첨가 단계를 포함하는, 방법.
구현예 8. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 로딩 LNP 용액에 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 첨가하는 것을 포함하는, 방법.
구현예 9. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 10. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액을 가공하는 단계가 pH 조정을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 11. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, pH 조정이 제2 완충제의 첨가를 포함하는, 방법.
구현예 12. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 완충제가 제2 완충 수용액을 포함하는, 방법.
구현예 13. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 14. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충제가 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 15. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충제가 아세테이트인, 방법.
구현예 16. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액을 가공하는 단계는 여과를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 17. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 여과가 접선 유동 여과에 의해 수행되는, 방법.
구현예 18. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 완충액 교환을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 19. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충제 교환이 제3 완충제를 포함하는 완충 수용액의 첨가를 포함하는, 방법.
구현예 20. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 완충제가 제3 완충 수용액을 포함하는, 방법.
구현예 21. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 완충 수용액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 22. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 완충 수용액이 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 23. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 완충 수용액이 약 7.5의 pH를 갖는, 방법.
구현예 24. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법.
구현예 25. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법.
구현예 26. 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 로딩 LNP에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제2 첨가 단계를 포함하는, 방법.
구현예 27. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법.
구현예 28. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법.
구현예 29. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액을 희석하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 30. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 냉동하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 31. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 냉동하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 32. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 보관하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 33. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 혼합 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법.
구현예 34. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법.
구현예 35. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충 수용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.7 내지 약 5.75, 약 4.8 내지 약 5.5, 또는 약 4.9 내지 약 5.25 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 36. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법.
구현예 37. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 또는 약 5.0 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 38. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6.25, 약 4.8 내지 약 6.0, 약 5.0 내지 약 5.8, 또는 약 5.2 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 39. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액, 빈 LNP 용액, 및 LNP 제형물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.1 내지 약 5.75, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 범위인, 방법.
구현예 40. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액이 약 4.5 내지 약 6.0, 약 4.6 내지 약 5.8, 약 4.8 내지 약 5.6, 약 5.0 내지 약 5.5, 또는 약 5.1 내지 약 5.4 범위의 pH를 갖는, 방법.
구현예 41. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 42. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 43. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 유기 용매가 알코올인, 방법.
구현예 44. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 유기 용매가 에탄올인, 방법.
구현예 45. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충제가 제1 완충 수용액을 포함하는, 방법.
구현예 46. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 47. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충 수용액이 약 1 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 5 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 10 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 15 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 20 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 25 mM 초과 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 30 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
구현예 48. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충 수용액이 약 1 mM 내지 약 30 mM의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 내지 약 20 mM의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 3 mM 내지 약 10 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 4 mM 내지 약 8 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 5 mM 내지 약 6 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
구현예 49. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충 수용액이 약 5 mM의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
구현예 50. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충 수용액이 약 5 mM 아세테이트를 포함하고, 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법.
구현예 51. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 52. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 긴장성 제제가 당인, 방법.
구현예 53. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 당이 수크로스인, 방법.
구현예 54. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.01 g/mL 내지 약 1.0 g/mL, 약 0.05 g/mL 내지 약 0.5 g/mL, 약 0.1 g/mL 내지 약 0.4 g/mL, 약 0.15 g/mL 내지 약 0.3 g/mL, 또는 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 포함하는, 방법.
구현예 55. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 56. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 수크로스를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 57. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 0.01 내지 약 1.0 mg/mL의 핵산, 약 0.05 내지 약 0.5 mg/mL의 핵산, 또는 약 0.1 내지 약 0.25 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법.
구현예 58. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는 완충액을 포함하는, 방법.
구현예 59. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
구현예 60. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 1 mM 내지 약 200 mM 아세테이트 완충액, 약 2 mM 내지 약 180 mM 아세테이트 완충액, 약 3 mM 내지 약 160 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 150 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 140 mM 아세테이트 완충액, 약 5 mM 내지 약 130 mM 아세테이트 완충액, 약 6 mM 내지 약 120 mM 아세테이트 완충액, 약 7 mM 내지 약 110 mM 아세테이트 완충액, 약 8 mM 내지 약 100 mM 아세테이트 완충액, 약 9 mM 내지 약 90 mM 아세테이트 완충액, 약 10 mM 내지 약 80 mM 아세테이트 완충액, 약 15 mM 내지 약 70 mM 아세테이트 완충액, 약 20 mM 내지 약 60 mM 아세테이트 완충액, 약 25 mM 내지 약 50 mM 아세테이트 완충액, 또는 약 30 mM 내지 약 40 mM 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
구현예 61. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액 및 빈 LNP 용액이 로딩 단계 동안 약 5:1 내지 약 7:1, 약 4:1 내지 약 6:1, 약 3:1 내지 약 5:1, 또는 약 2:1 내지 약 4:1의 체적 유량비로 혼합되는, 방법.
구현예 62. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
구현예 63. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 캡슐화제를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 64. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함하는, 방법.
구현예 65. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 다음을 포함하는, 방법:
약 30~60몰% 이온화 가능 지질;
약 0~30몰% 인지질;
약 15~50몰% 구조 지질; 및
약 0.1~0.5몰% PEG 지질.
구현예 66. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG-변형 세라마이드, PEG-변형 디알킬아민, PEG-변형 디알킬아민, 디아실글리세롤, 및 PEG-변형 디알킬글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 67. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 구조 지질이 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 우르솔산, 알파-토코페롤, 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 68. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질이 1,2-다이리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린(DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 1,2-디운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린(DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린(18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미숙시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린(OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린(C16 라이소 PC), 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린,1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE), 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨염(DOPG), 스핑고미엘린 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 69. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 이온화 가능한 아미노 지질을 포함하는, 방법.
구현예 70. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 리보핵산인, 방법.
구현예 71. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 리보핵산이 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서(Dicer)-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA) 및 긴 비-코딩 RNA(lncRNA)로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 리보핵산인, 방법.
구현예 72. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 메신저 RNA(mRNA)인, 방법.
구현예 73. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 줄기 루프, 사슬 종결 뉴클레오시드, 폴리 A 서열, 폴리아데닐화 신호, 및 5' 캡 구조로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모티프를 포함하는, 방법.
구현예 74. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 적어도 30개의 뉴클레오티드 길이인, 방법.
구현예 75. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 적어도 300개 뉴클레오티드 길이인, 방법.
구현예 76. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 1.1:1 내지 약 30.1의 N:P 비를 갖는, 방법.
구현예 77. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 20:1의 N:P 비를 갖는, 방법.
구현예 78. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 10:1 또는 약 2:1 내지 약 5:1의 N:P 비를 갖는, 방법.
구현예 79. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 0.01 내지 약 500 mg/mL의 핵산, 약 0.1 내지 약 100 mg/mL, 약 0.25 내지 약 50 mg/mL, 약 0.5 내지 약 10 mg/mL, 또는 약 1.0 내지 약 10 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법.
구현예 80. 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP.
구현예 81. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 빈 LNP.
구현예 82. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 빈 LNP 용액.
구현예 83. 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액으로서, 빈 LNP가 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 용액.
구현예 84. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 로딩 LNP.
구현예 85. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 로딩 LNP 용액.
구현예 86. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조된 LNP 제형물.
구현예 87. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 88. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 89. 이전 구현예들 중 어느 하나의 LNP 제형물을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 90. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 투여가 비경구로 수행되는, 방법.
구현예 91. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 투여가 근육내, 피내, 피하 및/또는 정맥내 수행되는, 방법.
구현예 92. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP.
구현예 93. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP 용액.
구현예 94. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 LNP 제형물.
구현예 95. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP의 용도.
구현예 96. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP 용액의 용도.
구현예 97. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 LNP 제형물의 용도.
구현예 98. 구현예 77~83 중 어느 하나의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트.
구현예 99. 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP.
구현예 100. 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP.
구현예 101. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질을 추가로 포함하는, 빈 LNP.
구현예 102. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질 및 구조 지질을 추가로 포함하는, 빈 LNP.
구현예 103. 약 30~60몰% 이온화 가능 지질; 약 0~30몰% 인지질; 약 15~50몰% 구조 지질; 및 약 0.1~10몰% PEG 지질을 포함하는 빈 LNP.
구현예 104. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 105. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 아세테이트 완충액을 추가로 포함하는, 빈 LNP 용액.
구현예 106. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 빈 LNP 용액.
구현예 107. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 긴장성 제제가 수크로스인, 빈 LNP 용액.
구현예 108. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
(i) 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP; 및
(ii) 아세테이트 완충액.
구현예 109. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
(i) 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP;
(ii) 아세테이트 완충액; 및
(iii) 수크로스.
구현예 110. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
(i) 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP; 및
(ii) 아세테이트 완충액.
구현예 111. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
(i) 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP;
(ii) 아세테이트 완충액; 및
(iii) 수크로스.
구현예 112. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 약 4.5 내지 약 6.25, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 또는 약 5.0 내지 약 5.5의 pH 값을 갖는 빈 LNP 용액.
구현예 113. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 약 5 mM 아세테이트 완충액을 포함하고, 아세테이트 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
구현예 114. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 약 0.2 g/mL 수크로스를 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 115. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 약 30몰% 내지 약 60몰%의 이온화 가능 지질, 약 0몰% 내지 약 30몰%의 인지질, 약 15몰% 내지 약 50몰%의 구조 지질, 및 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
구현예 116. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 약 40몰% 내지 약 60몰%의 이온화 가능 지질, 약 5몰% 내지 약 20몰%의 인지질, 약 30몰% 내지 약 50몰%의 구조 지질, 및 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
구현예 117. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 약 0.2몰% 내지 약 0.7몰% 농도의 존재하는, 빈 LNP 용액.
구현예 118. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 약 0.5몰% 농도의 존재하는, 빈 LNP 용액.
구현예 119. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 120. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 30 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 121. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 20 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 122. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 10 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 123. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 5 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 빈 LNP 용액.
구현예 124. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
구현예 125. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 5.5 미만의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
구현예 126. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
구현예 127. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는 빈 LNP 용액.
구현예 128. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 5.5 미만의 pH를 갖는 빈 LNP 용액.
구현예 129. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 5.0의 pH를 갖는 빈 LNP 용액.
구현예 130. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP가 약 45몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
구현예 131. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00096
, 또는 이의 염인, 빈 LNP 용액.
구현예 132. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00097
, 또는 이의 염인, 빈 LNP 용액.
구현예 133. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 PEG2k-DMG인, 빈 LNP 용액.
구현예 134. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 구조 지질이 콜레스테롤인, 빈 LNP 용액.
구현예 135. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질이 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)인, 빈 LNP 용액.
구현예 136. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP에 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 137. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 치료제 또는 예방제를 포함하지 않는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 138. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 또는 1중량% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 139. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 140. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP에 핵산이 실질적으로 없는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 141. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 핵산을 포함하지 않는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 142. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 또는 1중량% 미만의 핵산을 포함하는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 143. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 핵산을 포함하는, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액.
구현예 144. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 조제물.
구현예 145. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 및 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 146. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물.
구현예 147. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP에 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 148. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 치료제 또는 예방제를 포함하지 않고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 149. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만 또는 1중량% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 150. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 151. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP에 핵산이 실질적으로 없고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 152. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 핵산을 포함하지 않고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 153. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만 또는 1중량% 미만의 핵산을 포함하고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 154. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물로서, LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 핵산을 포함하고, 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 155. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하며:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP에 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 156. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 치료제 또는 예방제를 포함하지 않고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 157. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 또는 1중량% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 158. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 치료제 또는 예방제를 포함하고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 159. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP에 핵산이 실질적으로 없고;
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 160. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 핵산을 포함하지 않고,
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 161. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하고:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 5중량% 미만, 4중량% 미만, 3중량% 미만, 2중량% 미만, 또는 1중량% 미만의 핵산을 포함하고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 162. 다음과 같은, 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물:
(a) LNP가 다음을 포함하며:
약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질;
(b) LNP가 0.9중량% 미만, 0.8중량% 미만, 0.7중량% 미만, 0.6중량% 미만, 0.5중량% 미만, 0.4중량% 미만, 0.3중량% 미만, 0.2중량% 미만, 또는 0.1% 미만의 핵산을 포함하고; 및
(c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함함.
구현예 163. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 약 0.2몰% 내지 약 0.7몰% 농도의 존재하는, 조제물.
구현예 164. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 약 0.5몰% 농도의 존재하는, 조제물.
구현예 165. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 조제물이 약 2 mM 내지 약 30 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 166. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 조제물이 약 2 mM 내지 약 20 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 167. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 조제물이 약 2 mM 내지 약 10 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 168. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 조제물이 약 5 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는 조제물.
구현예 169. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는, 조제물.
구현예 170. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 5.5 미만의 pH를 갖는, 조제물.
구현예 171. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 조제물.
구현예 172. 이전 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서, LNP가 약 45몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질을 포함하는, 조제물.
구현예 173. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00098
또는 이의 염인, 조제물.
구현예 174. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00099
또는 이의 염인, 조제물.
구현예 175. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 PEG2k-DMG인, 조제물.
구현예 176. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 구조 지질이 콜레스테롤인, 조제물.
구현예 177. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질이 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)인, 조제물.
구현예 178. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 집단.
구현예 179. 다음 단계를 포함하는, 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 제조하는 방법:
i) 이온화 가능 지질을 제1 완충제와 혼합하여 빈 LNP를 형성하는 것을 포함하는 혼합 단계로서, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 단계.
구현예 180. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 혼합 단계가 이온화 가능 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함하는, 빈 LNP.
구현예 181. 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP.
구현예 182. 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액으로서, 빈 LNP가 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 용액.
구현예 183. 다음 단계를 포함하는, 핵산과 연합된 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 제조하는 방법:
ii) 핵산을 빈 LNP와 혼합하여 로딩 LNP를 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
구현예 184. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 단계가 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 형성하는 것을 포함하는, 방법.
구현예 185. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 형성 시, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액이 유지 또는 보관 없이 로딩 단계를 거치는, 방법.
구현예 186. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액이 일정 시기 동안 유지 후 로딩 단계를 거치는, 방법.
구현예 187. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액이 일정 시기 동안 보관 후 로딩 단계를 거치는, 방법.
구현예 188. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 형성 시, 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액이 일정 시기 동안 보관 또는 유지 없이 로딩 단계를 거치는, 방법.
구현예 189. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 다음 단계를 추가로 포함하는 방법:
iii) 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하여 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 형성하는 단계.
구현예 190. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되는 빈 LNP.
구현예 191. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되는 빈 LNP 용액.
구현예 192. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되는 로딩 LNP.
구현예 193. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되는 로딩 LNP 용액.
구현예 194. 이전 구현예들 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되는 LNP 제형물.
구현예 195. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 로딩 LNP가 약 0.1~0.5몰% PEG 지질, 인지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 196. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제1 첨가 단계를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 197. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 198. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 첨가하는 것을 포함하는 제2 첨가 단계를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 199. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액에 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 200. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG를 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 201. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG를 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 202. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 약 1.75몰% PEG 지질을 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 203. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG를 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 204. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG, 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG를 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 205. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 약 1.0몰% PEG 지질을 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 206. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 로딩 LNP가 약 3.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 2.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.75몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.25몰% 이하의 PEG 지질, 약 1.0몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.9몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.8몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.7몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.6몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.5몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.4몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.3몰% 이하의 PEG 지질, 약 0.2몰% 이하의 PEG 지질, 또는 약 0.1몰% 이하의 PEG 지질을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 207. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 로딩 LNP가 약 0몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 0.1몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.25몰% PEG 지질, 약 0.25몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 1.75몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 208. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 또는 로딩 LNP가 약 0몰% 내지 약 0.5몰% PEG 지질을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 209. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 여과, pH 조정, 완충액 교환, 희석, 투석, 농축, 냉동, 동결건조, 보관 및 포장으로부터 선택되는 적어도 하나의 단계를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 210. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 pH 조정을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 211. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, pH 조정이 제2 완충제를 첨가하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 212. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 완충제가 제2 수성 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 213. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 214. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 수성 완충액이 트리스 완충액인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 215. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 수성 완충액이 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 216. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 수성 완충액이 약 7.5의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 217. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 pH 조정 전에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 218. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 pH 조정 후에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 219. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 pH 조정 전에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 220. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 pH 조정 후에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 221. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 여과를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 222. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 여과가 접선 유동 여과인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 223. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 완충액 교환을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 224. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충액 교환이 제3 완충제를 포함하는 완충 수용액의 첨가를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 225. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 완충제가 제3 수성 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 226. 이전 구현예들 중 어느 하나에서, 제3 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 227. 이전 구현예들 중 어느 하나에서, 제3 수성 완충액이 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 228. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제3 수성 완충액이 약 7.5의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 229. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 230. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 231. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 232. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 233. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 희석을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 234. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 투석을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 235. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 농축을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 236. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 냉동을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 237. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 동결건조를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 238. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 동결건조가 로딩 LNP 용액을 약 -100℃ 내지 약 0℃, 약 -80℃ 내지 약 -10℃, 약 -60℃ 내지 약 -20℃, 약 -50℃ 내지 약 -25℃, 또는 약 -40℃ 내지 약 -30℃의 온도에서 냉동하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 239. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 동결건조가 냉동된 로딩 LNP 용액을 건조하여 동결건조된 빈 LNP 또는 동결건조된 로딩 LNP를 형성하는 것을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 240. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 건조가 약 50 mTorr 내지 약 150 mTorr 범위의 진공에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 241. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 건조가 약 -35℃ 내지 약 -15℃에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 242. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 건조가 약 실온 내지 약 25℃에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 243. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 보관하는 것을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 244. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 보관이 빈 LNP 또는 로딩 LNP를 약 -80℃, 약 -78℃, 약 -76℃, 약 -74℃, 약 -72℃, 약 -70℃, 약 -65℃, 약 -60℃, 약 -55℃, 약 -50℃, 약 -45℃, 약 -40℃, 약 -35℃, 또는 약 -30℃의 온도에서 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주 동안, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 적어도 1년 동안 보관하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 245. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서서, 보관이 빈 LNP 또는 로딩 LNP를 약 -40℃, 약 -35℃, 약 -30℃, 약 -25℃, 약 -20℃, 약 -15℃, 약 -10℃, 약 -5℃, 약 0℃, 약 5℃, 약 10℃, 약 15℃, 약 20℃, 또는 약 25℃의 온도에서 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주 동안, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 적어도 1년 동안 보관하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 246. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 보관이 빈 LNP 또는 로딩 LNP를 약 -40℃ 내지 약 0℃, 약 -35℃ 내지 약 -5℃, 약 -30℃ 내지 약 -10℃, 약 -25℃ 내지 약 -15℃, 약 -22℃ 내지 약 -18℃, 또는 약 -21℃ 내지 약 -19℃의 온도에서 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 최소 1년 동안 보관하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 247. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 보관이 빈 LNP 또는 로딩 LNP를 약 -20℃의 온도에서 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월 또는 적어도 1년 동안 보관하는 것을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 248. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 포장을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 249. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 혼합 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 250. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 251. 이전 구현예 중 어느 하나에 있어서, 혼합 단계가 약 30℃ 미만, 약 28℃ 미만, 약 26℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 약 20℃ 미만, 또는 대략 상온 미만의 온도에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 252. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 단계가 약 30℃ 미만, 28℃, 약 26℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 약 20℃ 미만, 또는 대략 상온 미만에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 253. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 첨가 단계가 약 30℃ 미만, 약 28℃, 약 26℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 약 20℃ 미만, 또는 대략 상온 미만에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 254. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 첨가 단계가 약 30℃ 미만, 약 28℃, 약 26℃ 미만, 약 24℃ 미만, 약 22℃ 미만, 약 20℃ 미만, 또는 대략 상온 미만에서 수행되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 255. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 혼합 단계 및 제1 첨가 단계 간 잔류 시간이 약 1.0밀리초 내지 약 60분, 약 2.0밀리초 내지 약 30분, 약 3.0밀리초 내지 약 15분, 약 4.0밀리초 내지 약 10분, 약 5.0밀리초 내지 약 5분, 약 10.0밀리초 내지 약 2분, 약 100.0밀리초 내지 약 1.0분, 약 1000밀리초 내지 약 1.0분 범위인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 256. 이전 구현예 중 어느 하나에 있어서, 완충 수용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.7 내지 약 5.75, 약 4.8 내지 약 5.5, 또는 약 4.9 내지 약 5.25 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 257. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 258. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액이 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.1 내지 약 7.8, 약 7.2 내지 약 7.6, 또는 약 7.3 내지 약 7.5 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 259. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액이 약 4.5 내지 약 6.25, 4.6 내지 약 6.0, 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 약 5.0 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 260. 이전 구현예 중 어느 한 구현예에 있어서, 핵산 용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6.25, 약 4.8 내지 약 6.0, 약 5.0 내지 약 5.8, 또는 약 5.2 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 261. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액, 빈 LNP 용액, 및 LNP 제형물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.1 내지 약 5.75, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 범위인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 262. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 로딩 LNP 용액이 약 4.5 내지 약 6.0, 4.6 내지 약 5.8, 약 4.8 내지 약 5.6, 약 5.0 내지 약 5.5, 또는 약 5.1 내지 약 5.4 범위의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 263. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 264. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 265. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 유기 용매가 알코올인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 266. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 유기 용매가 에탄올인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 267. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 완충제가 제1 수성 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 268. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액, 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 269. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 약 10 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 15 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 20 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 25 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 30 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 270. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 약 1 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 5 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 10 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 15 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 20 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 25 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 30 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 271. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 약 1 mM 내지 약 30 mM의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 내지 약 20 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 3 mM 내지 약 10 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 4 mM 내지 약 8 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 5 mM 약 6 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 272. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 약 5 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 273. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 수성 완충액이 약 5 mM 아세테이트를 포함하고, 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 274. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 275. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 긴장성 제제와 함께 로딩 단계 전에 보관되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 276. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 긴장성 제제가 당인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 277. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 당이 수크로스인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 278. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.01 g/mL 내지 약 1.0 g/mL, 약 0.05 g/mL 내지 약 0.5 g/mL, 약 0.1 g/mL 내지 약 0.4 g/mL, 약 0.15 g/mL 내지 약 0.3 g/mL, 또는 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 279. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 280. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 수크로스를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 281. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 0.01 내지 약 1.0 mg/mL의 핵산, 약 0.05 내지 약 0.5 mg/mL의 핵산, 또는 약 0.1 내지 약 0.25 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 282. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 0.001 내지 약 1.0 mg/mL의 핵산, 약 0.0025 내지 약 0.5 mg/mL의 핵산, 또는 약 0.005 내지 약 0.2 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 283. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 0.005 내지 약 0.2 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 284. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 285. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 286. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 1 mM 내지 약 200 mM 아세테이트 완충액, 약 2 mM 내지 약 180 mM 아세테이트 완충액, 약 3 mM 내지 약 160 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 150 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 140 mM 아세테이트 완충액, 약 5 mM 내지 약 130 mM 아세테이트 완충액, 약 6 mM 내지 약 120 mM 아세테이트 완충액, 약 7 mM 내지 약 110 mM 아세테이트 완충액, 약 8 mM 내지 약 100 mM 아세테이트 완충액, 약 9 mM 내지 약 90 mM 아세테이트 완충액, 약 10 mM 내지 약 80 mM 아세테이트 완충액, 약 15 mM 내지 약 70 mM 아세테이트 완충액, 약 20 mM 내지 약 60 mM 아세테이트 완충액, 약 25 mM 내지 약 50 mM 아세테이트 완충액, 또는 약 30 mM 내지 약 40 mM 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 287. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 8.8 mM 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 288. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액이 약 130 mM 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 289. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액 및 빈 LNP 용액이 로딩 단계 동안 약 5:1 내지 약 7:1, 약 4:1 내지 약 6:1, 약 3:1 내지 약 5:1, 또는 약 2:1 내지 약 4:1의 체적 유량비로 혼합되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 290. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산 용액 및 빈 LNP 용액이 로딩 단계 동안 약 3:1의 체적 유량비로 혼합되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 291. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 292. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 5 mM 아세테이트 완충액을 포함하고, 아세테이트 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 293. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 캡슐화제를 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 294. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 캡슐화제가 화학식 EA-I의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 EA-I]
Figure pct00100
식 중,
R201 및 R202는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 및 (C=NH)N(R101)2로 구성되는 군으로부터 선택되고, 각각의 R101은 H, C1-C6 알킬, 및 C2-C6 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R203은 C1-C20 알킬 및 C2-C20 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R204는 H, C1-C20 알킬, C2-C20 알케닐, C(O)(OC1-C20 알킬), C(O)(OC2-C20 알케닐), C(O)(NHC1-C20 알킬), 및 C(O)(NHC2-C20 알케닐)로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다.
구현예 295. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 캡슐화제가 화학식 EA-II의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 EA-II]
Figure pct00101
식 중,
X101은 결합, NH 또는 O이고;
R101 및 R102는 각각 독립적으로 H, C1-C6 알킬 및 C2-C6 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R103 및 R104는 각각 독립적으로 C1-C20 알킬 및 C2-C20 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
n1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다.
구현예 296. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 캡슐화제가 에틸 라우로일 알기네이트 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 297. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물 대 핵산의 중량/중량비가 약 5:1 내지 약 60:1인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 298. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물 대 핵산의 중량/중량비가 약 10:1 내지 약 50:1인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 299. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 지질 용액, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 300. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 다음을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
약 30~60몰% 이온화 가능 지질;
약 0~30몰% 인지질;
약 15~50몰% 구조 지질; 및
약 0.1~0.5몰% PEG 지질.
구현예 301. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 다음을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
약 30~60몰% 이온화 가능 지질;
약 0~30몰% 인지질;
약 15~50몰% 구조 지질; 및
약 0.01~10몰% PEG 지질.
구현예 302. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG 변형 세라마이드, PEG 변형 디알킬아민, PEG 변형 디아실글리세롤, PEG 변형 디알킬글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 303. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-I의 화합물 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PL-I]
Figure pct00102
식 중,
R3은 -ORO이고;
RO는 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 산소 보호기이고;
r은 1 내지 100(경계 포함)의 정수이며,
L1은 임의로 치환된 C1-10 알킬렌이고, 임의로 치환된 C1-10 알킬렌 중 적어도 하나의 메틸렌은 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, -OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 독립적으로 대체되고;
D는 클릭 화학에 의해 수득된 모이어티 또는 생리적 조건 하에 절단 가능한 모이어티이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
A는 화학식
Figure pct00103
또는
Figure pct00104
이고;
L2의 각 경우는 독립적으로 결합 또는 임의로 치환된 C1-6 알킬렌이고, 임의로 치환된 C1-6 알킬렌의 1개의 메틸렌 단위는 O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)로 임의로 대체되고;
R2의 각 경우는 독립적으로 임의로 치환된 C1-30 알킬, 임의로 치환된 C1-30 알케닐, 또는 임의로 치환된 C1-30 알키닐이고; 임의로 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), -NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), -C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), -S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN)-, 또는 -N(RN)S(O)2O-으로 독립적으로 대체되고;
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이고;
고리 B는 임의로 치환된 카보사이클릴, 임의로 치환된 헤테로사이클릴, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이고; 및
p는 1 또는 2이다.
구현예 304. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-I-OH의 화합물 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[PL-1-OH]
Figure pct00105
.
구현예 305. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-II의 화합물 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[PL-II]
Figure pct00106
식 중,
R3은 -ORO이고;
RO은 수소, 임의로 치환된 알킬 또는 산소 보호기이고;
r은 1 내지 100의 정수이고;
R5는 임의로 치환된 C10-40 알킬, 임의로 치환된 C10-40 알케닐, 또는 임의로 치환된 C10-40 알키닐이고; 임의로 R5의 하나 이상의 메틸렌기는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), -C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), -NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, -S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 대체되고; 및
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이다.
구현예 306. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-II-OH의 화합물 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PL-II-OH]
Figure pct00107
식 중,
r은 1 내지 100의 정수이고;
R5는 임의로 치환된 C10-40 알킬, 임의로 치환된 C10-40 알케닐, 또는 임의로 치환된 C10-40 알키닐이고; 임의로 R5의 하나 이상의 메틸렌기는 임의로 치환된 카보사이클릴렌, 임의로 치환된 헤테로사이클릴렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), -C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), -NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, -S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O-로 대체되고; 및
RN의 각 경우는 독립적으로 수소, 임의로 치환된 알킬, 또는 질소 보호기이다.
구현예 307. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, r이 40 내지 50의 정수인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 308. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, r이 45인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 309. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, R5가 C17 알킬인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 310. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-II의 화합물이고 다음 화학식의 화합물 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PL-II]
Figure pct00108
.
구현예 311. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-II의 화합물이고 다음 화학식의 화합물인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PEG-1]
Figure pct00109
.
구현예 312. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식 PL-III의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PL-III]
Figure pct00110
식 중, s는 1 내지 100의 정수이다.
구현예 313. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, PEG 지질이 화학식의 화합물인 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 PEG-2]
Figure pct00111
.
구현예 314. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 구조 지질이 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 우르솔산, 알파-토코페롤 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 315. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질이 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린(DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 1,2-디운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린(DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린(18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미숙시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린(OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린(C16 라이소 PC), 1,2-딜리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE), 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨염(DOPG), 스핑고미엘린 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 316. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 인지질이 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 317. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 이온화 가능한 아미노 지질을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 318. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-1의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-1]
Figure pct00112
식 중,
R1은 C5-30 알킬, C5-20 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R"M'R'으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, C2-14 알케닐, -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되거나, R2 및 R3은 이들이 부착된 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카보사이클을 형성하고;
R4는 수소, C3-6 카보사이클, -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, -CQ(R)2, 및 비치환 C1-6 알킬로 구성되는 군으로부터 선택되며, Q는 카보사이클, 헤테로사이클, -OR, -O(CH2)nN(R)2, -C(O)OR, -OC(O)R, -CX3, -CX2H, -CXH2, -CN, -N(R)2, -C(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)C(O)N(R)2, -N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, N(R)S(O)2R8, -O(CH2)nOR, -N(R)C(=NR9)N(R)2, -N(R)C(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, -N(OR)C(O)R, -N(OR)S(O)2R, -N(OR)C(O)OR, -N(OR)C(O)N(R)2, -N(OR)C(S)N(R)2, -N(OR)C(=NR9)N(R)2, -N(OR)C(=CHR9)N(R)2, -C(=NR9)N(R)2, -C(=NR9)R, -C(O)N(R)OR, 및 -C(R)N(R)2C(O)OR로부터 선택되고, 각각의 n은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R5는 C1-3 알킬, C2-3 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고, M"은 결합, C1-13 알킬 또는 C2-13 알케닐이고;
R7은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R8은 C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카보사이클 및 헤테로사이클로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고,
각각의 R'은 C1-18 알킬, C2-18 알케닐, -R*YR", -YR", 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-15 알킬 및 C3-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 X는 F, Cl, Br 및 I로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 및 13으로부터 선택되고; R4가 -(CH2)nQ, -(CH2)nCHQR, -CHQR, 또는 -CQ(R)2인 경우, (i) n이 1, 2, 3, 4 또는 5일 때 Q는 -N(R)2가 아니거나, (ii) n이 1 또는 2일 때 Q는 5, 6 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아니다.
구현예 319. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IA의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IA]
Figure pct00113
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되고; m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, 또는 -(CH2)nQ이고, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, m은 5, 7 또는 9이다. 일부 구현예에서, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2 또는 -NHC(O)N(R)2이다. 일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R 또는 -N(R)S(O)2R이다.
구현예 320. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IB의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IB]
Figure pct00114
식 중, 모든 변수는 본원에 정의된 바와 같다. 일부 구현예에서, m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, 또는 -(CH2)nQ이며, Q는 -OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, m은 5, 7, 또는 9이다. 일부 구현예에서, Q는 OH, -NHC(S)N(R)2, 또는 -NHC(O)N(R)2이다. 일부 구현예에서, Q는 -N(R)C(O)R, 또는 -N(R)S(O)2R이다.
구현예 321. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-II의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 슬랫 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-II]
Figure pct00115
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되며; M1은 결합 또는 M'이고; R4는 수소, 비치환 C1-3 알킬, 또는 -(CH2)nQ이며, n은 2, 3 또는 4이고 Q는 -OH, -NHC(S)N(R)2, -NHC(O)N(R)2, -N(R)C(O)R, -N(R)S(O)2R, -N(R)R8, -NHC(=NR9)N(R)2, -NHC(=CHR9)N(R)2, -OC(O)N(R)2, -N(R)C(O)OR, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 322. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIa의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIa]
Figure pct00116
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예 323. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIb의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIb]
Figure pct00117
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예 324. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIc 또는 IL-IIe의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIc]
Figure pct00118
또는
[화학식 IL-IIe]
Figure pct00119
식 중, R4는 본원에 기재된 바와 같다.
구현예 325. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIf의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIf]
Figure pct00120
식 중, M은 -C(O)O- 또는 -OC(O)-이고, M"은 C1-6 알킬 또는 C2-6 알케닐이고, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고, n은 2, 3 및 4로부터 선택된다.
구현예 326. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IId의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IId]
Figure pct00121
식 중, n은 2, 3 또는 4이고; m, R', R", 및 R2 내지 R6은 본원에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, R2 및 R3 각각은 C5-14 알키 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
구현예 327. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIg의 화합물 또는 이의 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIg]
Figure pct00122
식 중, l은 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택되며; m은 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택되고; M1은 결합 또는 M'이고; M 및 M'은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)-M"-C(O)O-, -C(O)N(R')-, -P(O)(OR')O-, -S-S-, 아릴기 및 헤테로아릴기로부터 독립적으로 선택되고; R2 및 R3은 H, C1-14 알킬, 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, M"은 C1-6 알킬(예를 들어, C1-4 알킬) 또는 C2-6 알케닐(예를 들어, C2-4 알케닐)이다. 일부 구현예에서, R2 및 R3은 C5-14 알킬 및 C5-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
구현예 328. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00123
또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 329. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00124
, 또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 330. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00125
또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 331. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00126
또는 이의 염인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 332. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-III의 화합물 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-III]
Figure pct00127
식 중,
W는
Figure pct00128
또는
Figure pct00129
이고,
고리 A는
Figure pct00130
또는
Figure pct00131
이고;
t는 1 또는 2이고;
A1 및 A2는 각각 독립적으로 CH 또는 N으로부터 선택되고;
Z는 CH2이거나 부재하며, Z가 CH2인 경우 점선 (1) 및 (2)는 각각 단일 결합을 나타내고; Z가 부재하는 경우 점선 (1)과 (2)는 모두 부재하고;
R1, R2, R3, R4 및 R5는 C5-20 알킬, C5-20 알케닐, -R"MR', -R*YR", -YR", 및 -R*OR"으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
RX1 및 RX2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3 알킬이고;
각각의 M은 -C(O)O-, -OC(O)-, -OC(O)O-, -C(O)N(R')-, -N(R')C(O)-, -C(O)-, -C(S)-, -C(S)S-, -SC(S)-, -CH(OH)-, -P(O)(OR')O-, -S(O)2-, -C(O)S-, -SC(O)-, 아릴기 및 헤테로아릴기로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
M*은 C1-C6 알킬이고,
W1 및 W2는 각각 독립적으로 -O- 및 -N(R6)-으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R6은 H 및 C1-5 알킬로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
X1, X2 및 X3은 결합, -CH2-, -(CH2)2-, -CHR-, -CHY-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -(CH2)n-C(O)-, -C(O)-(CH2)n-, -(CH2)n-C(O)O-, -OC(O)-(CH2)n-, -(CH2)n-OC(O)-, -C(O)O-(CH2)n-, -CH(OH)-, -C(S)-, 및 -CH(SH)-로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 Y는 독립적으로 C3-6 카보사이클이고;
각각의 R*은 C1-12 알킬 및 C2-12 알케닐로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R은 C1-3 알킬 및 C3-6 카보사이클로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R'은 C1-12 알킬, C2-12 알케닐 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R"은 C3-12 알킬, C3-12 알케닐 및 -R*MR'으로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; 및
n은 1~6의 정수이고;
고리 A가
Figure pct00132
인 경우,
i) X1, X2, 및 X3 중 적어도 하나는 -CH2-가 아니며; 및/또는
ii) R1, R2, R3, R4 및 R5 중 적어도 하나는 -R"MR'이다.
구현예 333. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-IIIa1 내지 IL-IIIa8 중 어느 하나의 화합물인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-IIIa1]
Figure pct00133
[화학식 IL-IIIa2]
Figure pct00134
[화학식 IL-IIIa3]
Figure pct00135
[화학식 IL-IIIa4]
Figure pct00136
[화학식 IL-IIIa5]
Figure pct00137
[화학식 IL-IIIa6]
Figure pct00138
[화학식 IL-IIIa7]
Figure pct00139
, 또는
[화학식 IL-IIIa8]
Figure pct00140
.
구현예 334. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이
Figure pct00141
또는 이의 염인 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 335. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-VIVa의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-VIVa]
Figure pct00142
식 중,
R'a는 R'분지형 또는 R'고리형이고;
R'분지형은
Figure pct00143
이고, R'고리형은
Figure pct00144
이고;
R'b는
Figure pct00145
또는
Figure pct00146
이고;
Figure pct00147
는 부착점을 나타내고;
Raγ 및 Rbγ는 각각 독립적으로 C2-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R4는 -(CH2)2OH이고;
각각의 R'은 독립적으로 C1-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
Ya는 C3-6 카보사이클이고;
R*"a는 C1-15 알킬 및 C2-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
s는 2 또는 3이다.
구현예 336. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 화학식 IL-VIVb의 화합물 또는 그 N-옥시드, 또는 이의 염 또는 이성질체인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
[화학식 IL-VIVb]
Figure pct00148
식 중,
R'a는 R'분지형 또는 R'고리형이고;
R'분지형은
Figure pct00149
이고 R'고리형은
Figure pct00150
이고; 및
R'b 는
Figure pct00151
또는
Figure pct00152
이고; 및
Figure pct00153
는 부착점을 나타내고;
Raγ 및 Rbγ는 각각 독립적으로 C2-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
R2 및 R3은 각각 독립적으로 C1-14 알킬 및 C2-14 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고;
R4는
Figure pct00154
이고,
Figure pct00155
는 부착점을 나타내고;
R10은 N(R)2이고; 각각의 R은 C1-6 알킬, C2-3 알케닐, 및 H로 구성되는 군으로부터 독립적으로 선택되고; n2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10으로 구성되는 군으로부터 선택되고;
각각의 R'은 독립적으로 C1-12 알킬 또는 C2-12 알케닐이고;
Ya는 C3-6 카보사이클이고;
R*"a는 C1-15 알킬 및 C2-15 알케닐로 구성되는 군으로부터 선택되고; 및
s는 2 또는 3이다.
구현예 337. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 다음으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물:
Figure pct00156
Figure pct00157
구현예 338. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 이온화 가능 지질이 3-(디도데실아미노)-N1,N1,4-트리도데실-1-피페라진에탄아민(KL10), N1-[2-(디도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트리도데실-1,4-피페라진디에탄아민(KL22), 14,25-디트리데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트리아콘탄(KL25), 1,2-디리놀레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DLin-DMA), 2,2-디리놀레일-4-디메틸아미노메틸-[1,3]-디옥솔란(DLin-K-DMA), 헵타트리아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(디메틸아미노)부타노에이트(DLin-MC3-DMA), 2,2-디리놀레일-4-(2-디메틸아미노에틸)-[1,3]-디옥솔란(DLin-KC2-DMA), 1,2-디올레일옥시-N,N-디메틸아미노프로판(DODMA), 2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA(2R)), 및 (2S)-2-({8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-디메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디엔-1-일옥시]프로판-1-아민(옥틸-CLinDMA(2S))으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 339. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 리보핵산인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 340. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 리보핵산이 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA) 및 긴 비코딩 RNA(lncRNA)로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 리보핵산인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 341. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 메신저 RNA(mRNA)인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 342. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 줄기 루프, 사슬 종결 뉴클레오시드, 폴리 A 서열, 폴리아데닐화 신호 및 5' 캡 구조로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모티프를 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 343. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 적어도 30개 뉴클레오티드 길이인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 344. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, mRNA가 적어도 300개 뉴클레오티드 길이인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 345. 이전 구현예 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 1.1:1 내지 약 30.1의 N:P 비를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 346. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 20:1의 N:P 비를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 347. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 10:1 또는 약 2:1 내지 약 5:1의 N:P 비를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 348. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP가 약 0.01 내지 약 500 mg/mL의 핵산, 약 0.1 내지 약 100 mg/mL, 약 0.25 내지 약 50 mg/mL, 약 0.5 내지 약 10 mg/mL, 또는 약 1.0 내지 약 10 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 349. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 약 0.01 내지 약 0.25의 다분산 지수(PDI)를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 350. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%의 캡슐화 효율을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 351. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%의 캡슐화 효율을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 352. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물이 적어도 약 90%, 적어도 약 92%, 적어도 약 94%, 적어도 약 96%, 또는 적어도 약 98%의 캡슐화 효율을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 353. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)이 약 20% 이상, 약 25% 이상, 약 30% 이상, 약 35% 이상, 약 40% 이상, 약 45% 이상, 약 50% 이상, 약 55% 이상, 약 60% 이상, 약 65% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 또는 약 99% 이상인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 354. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 약 200 nm 이하, 약 175 nm 이하, 약 150 nm 이하, 약 125 nm 이하, 약 100 nm 이하, 약 90 nm 이하, 약 80 nm 이하, 약 75 nm 이하, 약 70 nm 이하, 약 65 nm 이하, 약 60 nm 이하, 약 55 nm 이하, 약 50 nm 이하, 약 45 nm 이하, 약 40 nm 이하, 약 35 nm 이하, 약 30 nm 이하, 약 25 nm 이하, 또는 약 20 nm 이하의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 355. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 약 20 nm 내지 약 150 nm, 약 25 nm 내지 약 125 nm, 약 30 nm 내지 약 110 nm, 약 35 nm 내지 약 100 nm, 약 40 nm 내지 약 90 nm, 약 45 nm 내지 약 80 nm, 또는 약 50 nm 내지 약 70 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 356. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 약 15 nm 내지 약 55 nm, 약 20 nm 내지 약 50 nm, 약 25 nm 내지 약 45 nm, 또는 약 30 nm 내지 약 40 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 357. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물이 약 25 내지 약 45 nm의 평균 지질 나노입자 지름을 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 358. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액 및/또는 LNP 제형물의 다분산 지수(PDI)가 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 적어도 1년 동안 약 -5~25℃, 약 0~10℃, 또는 약 2~8℃에서 LNP 제형물의 보관 후 약 0.25 미만, 약 0.20 미만, 약 0.15 미만, 약 0.10 미만, 약 0.05 미만, 약 0.04 미만, 약 0.03 미만, 약 0.02 미만 또는 약 0.01 미만만큼 증가하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 359. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물의 다분산 지수(PDI)가 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 적어도 1년 동안 약 -100℃ 내지 약 80℃, 약 -80℃ 내지 약 60℃, 약 -40℃ 내지 약 40℃, 약 -20℃ 내지 약 30℃, 약 -5℃ 내지 약 25℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 LNP 제형물의 보관 후 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 또는 약 1% 미만만큼 증가하는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 360. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액 및/또는 LNP 제형물이 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 8개월, 또는 적어도 1년 동안 약 -100℃ 내지 약 80℃, 약 -80℃ 내지 약 60℃, 약 -40℃ 내지 약 40℃, 약 -20℃ 내지 약 30℃, 약 -5℃ 내지 약 25℃, 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 LNP 제형물의 보관 후 캡슐화 효율의 약 25% 미만 감소, 약 20% 미만 감소, 약 15% 미만 감소, 약 10% 미만 감소, 약 5% 미만 감소, 약 4% 미만 감소, 약 3% 미만 감소, 약 2% 미만 감소, 또는 캡슐화 효율의 약 1% 미만 감소를 갖는, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 361. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 빈 LNP, 로딩 LNP, 및/또는 LNP 제형물의 평균 지질 나노입자 지름이 필적하는 방법에 의해 제조된 LNP 제형물과 비교하여 약 99% 이하, 약 98% 이하, 약 97% 이하, 약 96% 이하, 약 95% 이하, 약 90% 이하, 약 85% 이하, 약 80% 이하, 약 75% 이하, 약 70% 이하, 약 65% 이하, 약 60% 이하, 약 55% 이하, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하, 또는 약 10% 이하인, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 362. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물의 캡슐화 효율이 필적하는 방법에 의해 제조된 LNP 제형물의 캡슐화 효율보다 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 15% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 1배 이상, 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 30배 이상, 약 40배 이상, 약 50배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 약 300배 이상, 약 400배 이상, 약 500배 이상, 약 1000배 이상, 약 2000배 이상, 약 3000배 이상, 약 4000배 이상, 약 5000배 이상, 또는 약 10000배 이상 더 높은, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 363. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)이 필적하는 방법에 의해 제조된 LNP 제형물의 핵산 발현(예를 들어, mRNA 발현)보다 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 15% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 1배 이상, 약 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 30배 이상, 약 40배 이상, 약 50배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 약 300배 이상, 약 400배 이상, 약 500배 이상, 약 1000배 이상, 약 2000배 이상, 약 3000배 이상, 약 4000배 이상, 약 5000배 이상, 또는 약 10000배 이상 더 높은, 방법, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물.
구현예 364. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 365. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 366. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 367. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 368. 이전 구현예들 중 어느 하나의 LNP 제형물을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
구현예 369. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 투여가 비경구로 수행되는, 방법.
구현예 370. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 투여가 근육내, 피내, 피하 및/또는 정맥내 수행되는, 방법.
구현예 371. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 빈 LNP.
구현예 372. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 빈 LNP 용액.
구현예 373. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP.
구현예 374. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP 용액.
구현예 375. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 LNP 제형물.
구현예 376. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP의 용도.
구현예 377. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 용액의 용도.
구현예 378. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP의 용도.
구현예 379. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP 용액의 용도.
구현예 380. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트.
구현예 381. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트.
구현예 382. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 또는 빈 LNP 용액을 포함하는 약학 키트.
구현예 383. 이전 구현예 중 어느 하나의 로딩 LNP 또는 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트.
구현예 384. 이전 구현예들 중 어느 하나의 LNP 제형물을 포함하는 약학 키트.
구현예 385. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP를 포함하는 약제를 포함하는 약학 키트.
구현예 386. 이전 구현예들 중 어느 하나의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 포함하는 약제를 포함하는 약학 키트.
구현예 387. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 집단을 포함하는 약학 키트.
구현예 388. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 집단 및 치료제 또는 예방제 용액을 포함하는 약학 키트.
구현예 389. 다음을 포함하는 약학 키트:
(a) 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 제1 용기; 및
(b) 치료제 또는 예방제를 포함하는 용액을 포함하는 제2 용기.
구현예 390. 다음을 포함하는 약학 키트:
(a) 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 제1 용기;
(b) 치료제 또는 예방제를 포함하는 용액을 포함하는 제2 용기; 및
(c) 제1 용기 및 제2 용기의 내용물을 조합하기 위한 지침.
구현예 391. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제1 용기가 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백인, 약학 키트.
구현예 392. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 제2 용기가 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백인, 약학 키트.
구현예 393. 이전 구현예들 중 어느 하나의 로딩 LNP를 포함하는 약제를 포함하는 용기.
구현예 394. 이전 구현예들 중 어느 하나의 구현예의 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 조제물을 포함하는 약제를 포함하는 용기.
구현예 395. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP를 포함하는 용기.
구현예 396. 이전 구현예들 중 어느 하나의 빈 LNP 집단을 포함하는 용기.
구현예 397. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 용기가 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 백인 용기.
구현예 398. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 치료제 또는 예방제가 핵산인, 약학 키트.
구현예 399. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 리보핵산인, 약학 키트.
구현예 400. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 리보핵산이 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서 기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA) 및 긴 비-코딩 RNA(lncRNA)로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 리보핵산인, 약학 키트.
구현예 401. 이전 구현예들 중 어느 하나에 있어서, 핵산이 메신저 RNA(mRNA)인, 약학 키트.

Claims (147)

  1. 빈 지질 나노입자(빈 LNP)를 포함하는 빈 지질 나노입자 용액(빈-LNP 용액)을 제조하는 방법으로서,
    (i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 단계를 포함하며, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하며,
    빈-LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 갖는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액을 가공하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  3. 다음 단계를 포함하는, 로딩 지질 나노입자(로딩 LNP)를 포함하는 로딩 지질 나노입자 용액(로딩 LNP 용액)을 제조하는 방법:
    (i) 이온화 가능 지질, 인지질, PEG 지질 및 구조 지질을 포함하는 지질 용액을 제1 완충제를 포함하는 완충 수용액과 혼합하여 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액을 형성하는 단계로서, 빈 LNP는 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하고, 빈 LNP 용액은 아세테이트 완충액을 포함하고 약 4.6 내지 약 6.0 범위의 pH를 가지는, 단계; 및
    (ii) 핵산을 포함하는 핵산 용액을 빈 LNP 용액과 혼합하여 로딩 LNP를 포함하는 로딩 LNP 용액을 형성하는 것을 포함하는 로딩 단계.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액을 가공하여 지질 나노입자 제형물(LNP 제형물)을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는 제1 첨가 단계를 포함하는, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 첨가 단계가 PEG 지질을 포함하는 폴리에틸렌 글리콜 용액(PEG 용액)을 로딩 LNP 용액에 첨가하는 것을 포함하는, 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 첨가 단계가 약 0.1몰% 내지 약 3.0몰% PEG 지질, 약 0.2몰% 내지 약 2.5몰% PEG 지질, 약 0.5몰% 내지 약 2.0몰% PEG 지질, 약 0.75몰% 내지 약 1.5몰% PEG 지질, 또는 약 1.0몰% 내지 약 1.25몰% PEG 지질을 빈 LNP 또는 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액을 가공하는 단계가 pH 조정을 추가로 포함하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 pH 조정이 제2 완충제를 첨가하는 것을 포함하는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 완충제가 제2 완충 수용액을 포함하는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액을 가공하는 단계가 여과를 추가로 포함하는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 여과가 접선 흐름 여과(tangential flow filtration)에 의해 수행되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 완충액 교환을 추가로 포함하는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제 교환이 제3 완충제를 포함하는 완충 수용액의 첨가를 포함하는, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 완충제가 제3 완충 수용액을 포함하는, 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 완충 수용액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 완충 수용액이 약 6.5 내지 약 8.5, 약 7.0 내지 약 8.0, 약 7.2 내지 약 7.8, 또는 약 7.4 내지 약 7.6 범위의 pH를 갖는, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 완충 수용액이 약 7.5의 pH를 갖는, 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 첨가 단계가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 폴리에틸렌 글리콜 지질(PEG 지질)을 로딩 LNP에 첨가하는 것을 포함하는 제2 첨가 단계를 포함하는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 첨가 단계가 완충액 교환 전에 수행되는, 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 첨가 단계가 완충액 교환 후에 수행되는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액을 희석하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 냉동하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 동결건조하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 가공하는 단계가 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액을 보관하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 단계가 T-접합, 국한된 충돌 제트, 미세유체 혼합기 또는 볼텍스 혼합기로 수행되는, 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충 수용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.7 내지 약 5.75, 약 4.8 내지 약 5.5, 또는 약 4.9 내지 약 5.25 범위의 pH를 갖는, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 또는 약 5.0 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액이 약 4.5 내지 약 6.5, 약 4.8 내지 약 6.25, 약 4.8 내지 약 6.0, 약 5.0 내지 약 5.8 또는 약 5.2 내지 약 5.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액, 빈 LNP 용액, 및 LNP 제형물의 pH가 약 5.0 내지 약 6.0, 약 5.1 내지 약 5.75, 또는 약 5.2 내지 약 5.5의 범위인, 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액이 약 4.5 내지 약 6.0, 약 4.6 내지 약 5.8, 약 4.8 내지 약 5.6, 약 5.0 내지 약 5.5, 또는 약 5.1 내지 약 5.4 범위의 pH를 갖는, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 제1 유기 용매를 추가로 포함하는, 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 유기 용매가 알코올인, 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 유기 용매가 에탄올인, 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 완충제가 제1 완충 수용액을 포함하는, 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 수성 완충액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 완충 수용액이 약 1 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 5 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 10 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 15 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 20 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 25 mM 초과 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 30 mM 초과의 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 완충 수용액이 약 1 mM 내지 약 30 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 2 mM 내지 약 20 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 3 mM 내지 약 10 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 약 4 mM 내지 약 8 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스, 또는 약 5 mM 내지 약 6 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 완충 수용액이 약 5 mM 시트레이트, 아세테이트, 포스페이트 또는 트리스를 포함하는, 방법.
  46. 제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 완충 수용액이 약 5 mM 아세테이트를 포함하고, 완충 수용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법.
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 긴장성 제제가 당(sugar)인, 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 당이 수크로스인, 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.01 g/mL 내지 약 1.0 g/mL, 약 0.05 g/mL 내지 약 0.5 g/mL, 약 0.1 g/mL 내지 약 0.4 g/mL, 약 0.15 g/mL 내지 약 0.3 g/mL, 또는 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 포함하는, 방법.
  51. 제1항 내지 제50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 내지 약 0.25 g/mL 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 방법.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액 또는 로딩 LNP 용액이 약 0.2 g/mL 수크로스를 추가로 포함하는, 방법.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액이 약 0.01 내지 약 1.0 mg/mL의 핵산, 약 0.05 내지 약 0.5 mg/mL의 핵산, 또는 약 0.1 내지 약 0.25 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액이 아세테이트 완충액, 시트레이트 완충액, 포스페이트 완충액 및 트리스 완충액으로 구성되는 군으로부터 선택되는 완충액을 포함하는, 방법.
  55. 제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
  56. 제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액이 약 1 mM 내지 약 200 mM 아세테이트 완충액, 약 2 mM 내지 약 180 mM 아세테이트 완충액, 약 3 mM 내지 약 160 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 150 mM 아세테이트 완충액, 약 4 mM 내지 약 140 mM 아세테이트 완충액, 약 5 mM 내지 약 130 mM 아세테이트 완충액, 약 6 mM 내지 약 120 mM 아세테이트 완충액, 약 7 mM 내지 약 110 mM 아세테이트 완충액, 약 8 mM 내지 약 100 mM 아세테이트 완충액, 약 9 mM 내지 약 90 mM 아세테이트 완충액, 약 10 mM 내지 약 80 mM 아세테이트 완충액, 약 15 mM 내지 약 70 mM 아세테이트 완충액, 약 20 mM 내지 약 60 mM 아세테이트 완충액, 약 25 mM 내지 약 50 mM 아세테이트 완충액, 또는 약 30 mM 내지 약 40 mM 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 용액 및 빈 LNP 용액이 로딩 단계 동안 약 5:1 내지 약 7:1, 약 4:1 내지 약 6:1, 약 3:1 내지 약 5:1, 또는 약 2:1 내지 약 4:1의 체적 유량비로 혼합되는, 방법.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 로딩 LNP 용액이 아세테이트 완충액을 포함하는, 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 용액, 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 캡슐화제를 추가로 포함하는, 방법.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 용액, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 및/또는 LNP 제형물이 인지질, PEG 지질, 구조 지질, 또는 이의 임의의 조합을 추가로 포함하는, 방법.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP가 다음을 포함하는, 방법:
    약 30~60몰% 이온화 가능 지질;
    약 0~30몰% 인지질;
    약 15~50몰% 구조 지질; 및
    약 0.1~0.5몰% PEG 지질.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 PEG-변형 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형 포스파티드산, PEG-변형 세라마이드, PEG-변형 디알킬아민, PEG-변형 디아실글리세롤, 및 PEG-변형 디알킬글리세롤로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  63. 제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조 지질이 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 우르솔산, 알파-토코페롤, 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질이 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DLPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린(DMPC), 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DOPC), 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DPPC), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC), 1,2-디운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린(DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린(POPC), 1,2-디-O-옥타데세닐-sn-글리세로-3-포스포콜린(18:0 디에테르 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미숙시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린(OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린(C16 라이소 PC), 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DOPE), 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(ME 16.0 PE), 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디도코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 나트륨염(DOPG), 스핑고미엘린 및 이의 유도체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이온화 가능 지질이 이온화 가능한 아미노 지질을 포함하는, 방법.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 리보핵산인, 방법.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 리보핵산이 소형 간섭 RNA(siRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), 다이서(Dicer)-기질 RNA(dsRNA), 소형 헤어핀 RNA(shRNA), 메신저 RNA(mRNA) 및 긴 비-코딩 RNA(lncRNA)로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 리보핵산인, 방법.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 메신저 RNA(mRNA)인, 방법.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA가 줄기 루프, 사슬 종결 뉴클레오시드, 폴리 A 서열, 폴리아데닐화 신호, 및 5' 캡 구조로 구성되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 모티프를 포함하는, 방법.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA가 적어도 30개의 뉴클레오티드 길이인, 방법.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 mRNA가 적어도 300개의 뉴클레오티드 길이인, 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP 제형물이 약 1.1:1 내지 약 30.1의 N:P 비를 갖는, 방법.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 20:1의 N:P 비를 갖는, 방법.
  74. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP 제형물이 약 2:1 내지 약 10:1 또는 약 2:1 내지 약 5:1의 N:P 비를 갖는, 방법.
  75. 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP 제형물이 약 0.01 내지 약 500 mg/mL의 핵산, 약 0.1 내지 약 100 mg/mL, 약 0.25 내지 약 50 mg/mL, 약 0.5 내지 약 10 mg/mL, 또는 약 1.0 내지 약 10 mg/mL의 핵산을 포함하는, 방법.
  76. 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, 빈 LNP.
  78. 제1항 내지 제77항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, 빈 LNP 용액.
  79. 빈 LNP를 포함하는 빈 LNP 용액으로서, 상기 빈 LNP가 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 용액.
  80. 제1항 내지 제79항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, 로딩 LNP.
  81. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, 로딩 LNP 용액.
  82. 제1항 내지 제81항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된, LNP 제형물.
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항의 로딩 LNP를 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
  84. 제1항 내지 제83항 중 어느 한 항의 로딩 LNP 용액을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
  85. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항의 LNP 제형물을 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 비경구로 수행되는, 방법.
  87. 제1항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 근육내, 피내, 피하 및/또는 정맥내 수행되는, 방법.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 로딩 LNP 용액.
  90. 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 LNP 제형물.
  91. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 제1항 내지 제90항 중 어느 한 항의 로딩 LNP의 용도.
  92. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 제1항 내지 제91항 중 어느 한 항의 로딩 LNP 용액의 용도.
  93. 질환 또는 장애의 치료 또는 예방용 약제의 제조에서 제1항 내지 제92항 중 어느 한 항의 LNP 제형물의 용도.
  94. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항의 빈 LNP, 빈 LNP 용액, 로딩 LNP, 로딩 LNP 용액, 또는 LNP 제형물을 포함하는, 약학 키트.
  95. 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP.
  96. 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP.
  97. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 이온화 가능 지질을 추가로 포함하는, 빈 LNP.
  98. 제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 인지질 및 구조 지질을 추가로 포함하는, 빈 LNP.
  99. 약 30~60몰% 이온화 가능 지질; 약 0~30몰% 인지질; 약 15~50몰% 구조 지질; 및 약 0.1~10몰% PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP.
  100. 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항의 빈 LNP를 포함하는, 빈 LNP 용액.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 아세테이트 완충액을 추가로 포함하는, 빈 LNP 용액.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 긴장성 제제를 추가로 포함하는, 빈 LNP 용액.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 긴장성 제제가 수크로스인, 빈 LNP 용액.
  104. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
    (i) 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP; 및
    (ii) 아세테이트 완충액.
  105. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
    (i) 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP;
    (ii) 아세테이트 완충액; 및
    (iii) 수크로스.
  106. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
    (i) 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP; 및
    (ii) 아세테이트 완충액.
  107. 다음을 포함하는 빈 LNP 용액:
    (i) 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는 빈 LNP;
    (ii) 아세테이트 완충액; 및
    (iii) 수크로스.
  108. 제1항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 4.5 내지 약 6.25, 약 4.6 내지 약 6.0, 약 4.8 내지 약 5.8, 약 5.0 내지 약 5.75, 또는 약 5.0 내지 약 5.5의 pH값을 갖는, 빈 LNP 용액.
  109. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5 mM 아세테이트 완충액을 포함하고, 아세테이트 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  110. 제1항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.2 g/mL 수크로스를 포함하는, 빈 LNP 용액.
  111. 제1항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP가 약 30몰% 내지 약 60몰%의 이온화 가능 지질, 약 0몰% 내지 약 30몰%의 인지질, 약 15몰% 내지 약 50몰%의 구조 지질, 및 약 0.1몰% 내지 약 0.5몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  112. 제1항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP가 약 40몰% 내지 약 60몰%의 이온화 가능 지질, 약 5몰% 내지 약 20몰%의 인지질, 약 30몰% 내지 약 50몰%의 구조 지질, 및 약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  113. 제1항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 약 0.2몰% 내지 약 0.7몰% 농도의 존재하는, 빈 LNP 용액.
  114. 제1항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 약 0.5몰% 농도의 존재하는, 빈 LNP 용액.
  115. 제1항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  116. 제1항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 30 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  117. 제1항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 20 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  118. 제1항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 2 mM 내지 약 10 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  119. 제1항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 5 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  120. 제1항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  121. 제1항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 5.5 미만의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  122. 제1항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  123. 제1항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  124. 제1항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 5.5 미만의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  125. 제1항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 빈 LNP 용액이 약 5.0의 pH를 갖는, 빈 LNP 용액.
  126. 제1항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP가 약 45몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질을 포함하는, 빈 LNP 용액.
  127. 제1항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이온화 가능 지질이
    Figure pct00158
    , 또는 이의 염인, 빈 LNP 용액.
  128. 제1항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이온화 가능 지질이
    Figure pct00159
    , 또는 이의 염인, 빈 LNP 용액.
  129. 제1항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 PEG2k-DMG인, 빈 LNP 용액.
  130. 제1항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조 지질이 콜레스테롤인, 빈 LNP 용액.
  131. 제1항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질이 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)인, 빈 LNP 용액.
  132. 지질 나노입자(LNP)를 포함하는 제조물로서,
    (a) LNP가,
    약 40몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질,
    약 30몰% 내지 약 50몰% 구조 지질,
    약 5몰% 내지 약 20몰% 인지질, 및
    약 0.1몰% 내지 약 1.25몰%의 PEG 지질을 포함하고;
    (b) LNP에 치료제 또는 예방제가 실질적으로 없고; 그리고
    (c) 조제물이 약 2 mM 내지 약 40 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 제조물.
  133. 제1항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 약 0.2몰% 내지 약 0.7몰% 농도로 존재하는, 조제물.
  134. 제1항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 약 0.5몰% 농도로 존재하는, 조제물.
  135. 제1항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조제물이 약 2 mM 내지 약 30 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 조제물.
  136. 제1항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조제물이 약 2 mM 내지 약 20 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 조제물.
  137. 제1항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조제물이 약 2 mM 내지 약 10 mM의 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 조제물.
  138. 제1항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조제물이 약 5 mM 농도를 갖는 아세테이트 완충액을 포함하는, 조제물.
  139. 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 이온화 가능 지질의 pKa보다 적어도 1 단위 낮은 pH를 갖는, 조제물.
  140. 제1항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 5.5 미만의 pH를 갖는, 조제물.
  141. 제1항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충액이 약 5.0의 pH를 갖는, 조제물.
  142. 제1항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 LNP가 약 45몰% 내지 약 50몰% 이온화 가능 지질을 포함하는, 조제물.
  143. 제1항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이온화 가능 지질이
    Figure pct00160
    , 또는 이의 염인, 조제물.
  144. 제1항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이온화 가능 지질이
    Figure pct00161
    , 또는 이의 염인, 조제물.
  145. 제1항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG 지질이 PEG2k-DMG인, 조제물.
  146. 제1항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 구조 지질이 콜레스테롤인, 조제물.
  147. 제1항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인지질이 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DSPC)인, 조제물.
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