JP2023513043A - 脂質ナノ粒子を調製する方法 - Google Patents

脂質ナノ粒子を調製する方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤を生成する方法、及びその生成されたＬＮＰ製剤を提供する。本開示はまた、生成されたＬＮＰ製剤に関連する治療的及び診断的使用を提供する。

Description

関連出願
本出願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる２０２０年１月３１日出願の米国仮出願第６２／９６８，３３７号の優先権及び利益を主張する。
本開示は、核酸などの１つ以上の治療剤及び／または予防剤を送達するための、及び／または哺乳類の細胞もしくは臓器内でポリペプチドを生成するための核酸脂質ナノ粒子が関わる方法などの、核酸脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を生成する新規の方法、生成されたその製剤、ならびに関連する治療的及び／または診断的使用を提供する。
低分子薬物、タンパク質、及び核酸などの生物学的活性物質の効果的な標的送達は、継続的な医学的課題の代表である。特に、細胞への核酸の送達は、かかる種の相対的不安定性及び低い細胞透過性によって困難になる。したがって、細胞への核酸などの治療剤及び予防剤の送達を促進する方法及び組成物を開発する必要性が存在する。
脂質含有ナノ粒子または脂質ナノ粒子、リポソーム、及びリポプレックスは、細胞及び／または細胞内区画への小分子薬物、タンパク質、及び核酸などの生物学的活性物質の輸送ビヒクルとして効果的であることが証明されている。かかる様々な脂質含有ナノ粒子が示されているが、安全性、有効性、及び特異性の改善は依然として欠如している。
いくつかの態様では、本開示は、空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を調製する方法を提供し、当該方法は、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップを含み、空のＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示は、空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を調製する方法を提供し、当該方法は、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップを含む。
いくつかの実施形態では、混合ステップは、イオン化可能な脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、空のＬＮＰを含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む空のＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液を提供し、空のＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの態様では、本開示は、核酸と会合している充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供し、当該方法は、
ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む充填ステップを含む。
いくつかの態様では、本開示は、核酸と会合している充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法をし、当該方法は、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップと、
ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップと、を含む。
いくつかの態様では、本開示は、核酸を含む充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供し、当該方法は、
ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む充填ステップを含む。
いくつかの態様では、本開示は、核酸を含む充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供し、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップと、
ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップと、を含む。
いくつかの態様では、本開示は、治療薬を含む充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供し、当該方法は、
ｉｉ）治療薬を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップを含む。
いくつかの態様では、本開示は、治療薬を含む充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供し、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップと、
ｉｉ）治療薬を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップと、を含む。
いくつかの実施形態では、充填ステップは、核酸を含む核酸溶液を空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって充填されたＬＮＰを含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
いくつかの態様では、本開示の方法は、
ｉｉｉ）空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理し、それによって脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することをさらに含む。
いくつかの態様では、本開示は、開示の方法によって調製された空のＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の方法によって調製された空のＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の方法によって調製された充填されたＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の方法によって調製された充填されたＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の方法によって調製されたＬＮＰ製剤を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、ＬＮＰは、治療薬または予防薬を実質的に含まず、調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。いくつかの態様では、本開示は、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、ＬＮＰは、核酸を実質的に含まず、調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、ＬＮＰは、治療薬または予防薬を含有せず、調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。いくつかの態様では、本開示は、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、ＬＮＰは、核酸を含有せず、調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、
（ａ）ＬＮＰは、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含み、
（ｂ）ＬＮＰは、治療薬または予防薬を実質的に含まず、
（ｃ）調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、
（ａ）ＬＮＰは、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含み、
（ｂ）ＬＮＰは、核酸を実質的に含まず、
（ｃ）調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、
（ａ）ＬＮＰは、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含み、
（ｂ）ＬＮＰは、治療薬または予防薬を実質的に含有せず、
（ｃ）調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を提供し、
（ａ）ＬＮＰは、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含み、
（ｂ）ＬＮＰは、核酸を実質的に含有せず、
（ｃ）調製物は、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、当該方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、開示の充填されたＬＮＰを投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、当該方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、開示の充填されたＬＮＰ溶液を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、当該方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、開示のＬＮＰ製剤を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、充填されたＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、充填されたＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、ＬＮＰ製剤を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、充填されたＬＮＰの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、充填されたＬＮＰ溶液の使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む薬学的キットを提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液を含む、薬学的キットを提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む薬学的キットを提供する。いくつかの態様では、本開示は、ＬＮＰ製剤を含む薬学的キットを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、充填されたＬＮＰを含む医薬品を含む薬学的キットを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を含む医薬品を含む薬学的キットを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、空のＬＮＰ及び核酸溶液を含む、薬学的キットを提供する。いくつかの態様では、本開示は、空のＬＮＰ溶液及び核酸溶液を含む、薬学的キットを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む第１の容器と、
（ｂ）治療薬または予防薬を含む溶液を含む第２の容器と、を含む、薬学的キットを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む第１の容器と、
（ｂ）治療薬または予防薬を含む溶液を含む第２の容器と、
（ｃ）第１の容器及び第２の容器の内容物を合わせる（例えば混合する）ための説明書と、を含む、薬学的キットを提供する。
いくつかの実施形態では、第１の容器は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである。いくつかの実施形態では、第２の容器は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである。いくつかの実施形態では、第３の容器は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである。
いくつかの態様では、本開示は、開示の空のＬＮＰを含む容器を提供する。いくつかの実施形態では、容器は、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである。
別段の定義がない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の方法及び材料が、本開示の実施または試験において使用され得るが、好適な方法及び材料を本明細書に記載する。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、参照によってその全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含めて、本明細書が優先される。加えて、材料、方法、及び実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
開示の他の特色及び利点は、以下の発明を実施するための形態及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
特許または出願書類は、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有する。カラーの図面（複数可）を含むこの特許または特許出願公開のコピーは、要求及び必要な料金の支払い時に、官庁によって提供される。
ＰＥＧ添加量のｍｏｌ％と相関する、充填されたＬＮＰの直径の変化を示すグラフである。 空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液を調製する一般プロセスを示す図である。 空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液からのＬＮＰ製剤の一般プロセスを示す図である。 ＬＮＰ製剤を調製する一般プロセスを示す図である。
本開示は、本明細書に開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）または脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を生成する方法が、脂質ナノ粒子内のある特定の成分の分布に影響を及ぼす及び／または分布を決定することができ、この分布が、脂質ナノ粒子の物理的（例えば、安定性）及び／または生物学的（例えば、有効性、細胞内送達、免疫原性）特性に影響を及ぼす及び／または特性を決定することができるという発見に部分的に基づいている。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、生成された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）または脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）からの望ましくない特性変化を軽減する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰまたはＬＮＰ製剤と比較して、生成された脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）または脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）からの望ましくない特性変化を軽減する。
いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に対するストレスによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、ストレスは、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）または脂質ナノ粒子の生成、精製、包装、保管、輸送、及び／または使用中に誘発される。いくつかの実施形態では、ストレスは、熱、せん断、過度の撹拌、膜濃度の分極化（電荷状態の変化）、脱水、凍結ストレス、乾燥ストレス、凍結／解凍ストレス、及び／または噴霧ストレスである。いくつかの実施形態では、ストレスは、脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の保管中に誘発される。
いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、ＬＮＰ製剤の物理的安定性の低減である。いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、不純物及び／またはほぼ視認可能な粒子の量の増加、またはＬＮＰ製剤中のＬＮＰの平均サイズの増加である。
いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、ＬＮＰ製剤の化学的安定性の低減である。いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、ＬＮＰ製剤中の核酸（例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ））の完全性の低減である。
いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、ＬＮＰ製剤の生物学的特性の低減である。いくつかの実施形態では、望ましくない特性変化は、ＬＮＰ製剤の有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性の低減である。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤よりも安定である（例えば、経時的にＬＮＰの平均サイズの増加を経験しない）。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰは、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径よりも約９９％以下、約９８％以下、約９７％以下、約９６％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、約５５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、または約１０％以下の平均直径を有する。
いくつかの実施形態では、開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、約１５ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１２５ｎｍ、約２５ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３５ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約６０ｎｍ、または約４５ｎｍ～約５０ｎｍの平均直径を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成された空のＬＮＰは、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成された空のＬＮＰの平均直径よりも約９９％以下、約９８％以下、約９７％以下、約９６％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、約５５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、または約１０％以下の平均直径を有する。
いくつかの実施形態では、開示の空のＬＮＰは、約１５ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１２５ｎｍ、約２５ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３５ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約６０ｎｍ、または約４５ｎｍ～約５０ｎｍの平均直径を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性よりも高い有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性よりも約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上高い有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なるによって生成されたＬＮＰ製剤の有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性よりも約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い有効性、細胞内送達、及び／または免疫原性を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法によって生成されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。
本本発明は、より先の時点で調製され、調製時に治療薬を含まない（例えば、空のＬＮＰ）小胞内にｍＲＮＡが封入される、新規の「ベッドサイド」及び／または「ポイントオブケア」製剤を特色とする。この生成様式は、これらの小胞（例えば、空のＬＮＰ）が、臨床現場でｍＲＮＡと組み合わせる前に別々に生成及び保管することができるという、臨床供給の文脈における利点を提供する。具体的には、ｍＲＮＡ及び空の材料（例えば、空のＬＮＰ）が、各成分について別々に最適化された条件下で保管することができるので、ベッドサイド製剤は、安定性の増加を促進することができる。例えば、ｍＲＮＡは、空のＬＮＰとは異なる条件下で保管され得る。ＬＮＰ調製は、カーゴから独立して行われ、複数のｍＲＮＡまたは活性剤構築物に対するプラットフォームアプローチが可能になるので、プロセスの複雑さ及び商品コストを低減することができる。治療薬（例えば、ｍＲＮＡ）を予め形成されたナノ粒子（「空のＬＮＰ」）に封入して、治療薬を含むＬＮＰ（すなわち、「充填されたＬＮＰ」）を提供する原理は、本明細書では、「事後充填」（ＰＨＬ）、「事後添加」、または「事後」と称される。
本開示は、事後充填の基本原理を探求し、空のＬＮＰ生成後のタイムスケールにおけるｍＲＮＡ封入（すなわち、充填されたＬＮＰの形成）の影響及び条件を調査する努力に部分的に基づいている。充填されたＬＮＰの物理化学的特性（例えば、粒径、封入、形態、及び／または構造的完全性）に有害な影響を及ぼさない、脂質沈殿後のｍＲＮＡ添加時間は、７桁以上（例えば、１ｍｓ～１０，０００，０００ｍｓ）上方に変動した。オリゴヌクレオチドは、多くの場合、先の粒子組み立てステップに参与すると説明される。経験的実験の結果は、充填されたＬＮＰの物理化学的特性に有害な影響を及ぼさずに、脂質沈殿／粒子形成後の有意に長い期間、ｍＲＮＡ封入を行うことができることを示唆している。これらの実験は、脂質粒子形成及びその後のｍＲＮＡ封入を、２つの反応ステップに分離することができることを実証した。本明細書に記載の事後充填の概念は、各ステップを別々に制御及び／または最適化することを可能にし得る。さらに、事後充填は、充填されたＬＮＰのポイントオブケア形成を可能にするタイムスケール（例えば、空のＬＮＰ生成後の時間、日数、月数、または年数）でのｍＲＮＡ添加を可能にし得る。
臨床供給に適切なスケールで予め形成された空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を生成するプロセスは、過去開発されていない。本開示は、限定されないが、脂質濃度、ＰＥＧ脂質またはポリマー脂質量、温度、緩衝液組成（例えば、イオン強度、ｐＨ、対イオン）、及びエタノール含有量を含む、スケール化した生成に有利な多数のプロセスパラメータを解明する努力に部分的に基づいている。
本開示は、本明細書に開示の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤を生成する方法が、脂質ナノ粒子内のある特定の成分の分布に影響を及ぼす及び／または分布を決定することができ、この分布が、脂質ナノ粒子の物理的（例えば、安定性）及び／または生物学的（例えば、有効性、細胞内送達、免疫原性）特性に影響を及ぼす及び／または特性を決定することができるという発見に部分的に基づいている。
いくつかの実施形態では、本開示は、成分の有利な分布を有する脂質ナノ粒子を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって調製されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、または約９０％以上高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。いくつかの実施形態では、本開示の方法によって生成されたＬＮＰ製剤は、異なる方法によって調製されたＬＮＰ製剤の核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）よりも約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い核酸発現（例えば、ｍＲＮＡ発現）を呈する。
本開示の方法
本開示は、空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を生成する方法を提供し、当該方法は、ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップを含み、空のＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質または他のポリマー脂質を含む。
いくつかの実施形態では、混合ステップは、イオン化可能な脂質を含む脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、空のＬＮＰを含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップを含む、核酸と会合している充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法を提供する。
開示の方法のいくつかの実施形態では、充填ステップは、核酸を含む核酸溶液を空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって充填されたＬＮＰを含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を形成することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、保持または保管することなく、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液に充填ステップが施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、一定期間保持した後、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液に充填ステップが施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、約１分間、約２分間、約３分間、約４分間、約５分間、約１０分間、約２０分間、約３０分間、約４０分間、約５０分間、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１８時間、または約２４時間保持した後、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液に充填ステップが施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１８時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週間、約２週間、約３週間、約１か月、約２か月、約３か月、約４か月、約５か月、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１年、約２年、約３年、約４年、または約５年の間保管した後、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液に充填ステップが施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、一定期間保管または保持することなく、形成の際に、空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液に充填ステップが施される。
いくつかの態様では、本開示の方法は、ｉｉｉ）充填されたＬＮＰ溶液を処理し、それによって脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することをさらに含む。
生成のための他の技術（例えば、薄膜再水和／押出）とは対照的に、エタノール液滴沈殿は、核酸脂質ナノ粒子を生成するための業界標準である。沈殿反応は、連続性、スケーラビリティ、及び採用の容易さに起因して好ましい。かかるプロセスは、通常、高エネルギー混合器（例えば、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット（ｃｏｎｆｉｎｅｄ ｉｍｐｉｎｇｉｎｇ ｊｅｔ）、マイクロ流体混合器、ボルテックス混合器）を使用して、（エタノール中の）脂質を制御可能な方式で好適な反溶媒（すなわち、水）に導入し、液体過飽和及び自発的沈殿を脂質粒子に引き起こす。いくつかの実施形態では、使用されるボルテックス混合器は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願第６２／７９９，６３６号及び同第６２／８８６，５９２号に記載のものである。いくつかの実施形態では、使用されるマイクロ流体混合器は、全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ出願第ＷＯ２０１４／１７２０４５号に記載のものである。
開示の方法のいくつかの実施形態では、混合ステップは、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される。
いくつかの実施形態では、充填ステップは、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、混合ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２５℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、または約２０℃未満の温度で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、充填ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２５℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、または約２０℃未満の温度で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液に、ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液にポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液に、ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、空のＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰに約１．７５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、空のＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰに約１．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２５℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、または約２０℃未満の温度で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２５℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、または約２０℃未満の温度で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、濾過、ｐＨ調整、緩衝液交換、希釈、透析、濃縮、凍結、凍結乾燥、保管、及び包装から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、ｐＨ調整をさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、ｐＨ調整は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される第２の緩衝剤を添加することを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、ｐＨ調整の前に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、ｐＨ調整の後に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、ｐＨ調整の前に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、ｐＨ調整の後に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、濾過をさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、濾過は、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）である。
開示の方法のいくつかの実施形態では、濾過は、ＬＮＰ溶液から有機溶媒（例えば、エタノールなどのアルコール）を除去する。いくつかの実施形態では、有機溶媒（例えば、エタノールなどのアルコール）を除去した際に、ＬＮＰ溶液は、（例えば、リン酸緩衝液またはＨＥＰＥＳ緩衝液を添加することによって）中性ｐＨ、例えば、ｐＨ６．５～７．８、ｐＨ６．８～ｐＨ７．５、好ましくは、ｐＨ７．０～ｐＨ７．２に緩衝された溶液に変換される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ溶液は、約７．０～ｐＨ～約７．２のｐＨに緩衝された溶液に変換される。いくつかの実施形態では、生じたＬＮＰ溶液は、保管または使用の前に、例えば、濾過によって（例えば、０．１～０．５μｍのフィルターを通して）滅菌される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、緩衝液交換をさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、緩衝液交換は、第３の緩衝剤を含む水性緩衝液の添加を含む。
いくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、緩衝液交換の前に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第１の添加ステップは、緩衝液交換の後に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加は、緩衝液交換の前に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、第２の添加ステップは、緩衝液交換の後に実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を希釈することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を透析することをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を濃縮することをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結させることをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結乾燥させることをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、凍結乾燥は、充填されたＬＮＰ溶液を、約－１００℃～約０℃、約－８０℃～約－１０℃、約－６０℃～約－２０℃、約－５０℃～約－２５℃、または約－４０℃～約－３０℃の温度で凍結させることを含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、凍結乾燥は、凍結された充填されたＬＮＰ溶液を乾燥させて、凍結乾燥された空のＬＮＰまたは凍結乾燥された充填されたＬＮＰを形成することをさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、乾燥は、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空で実施される。
いくつかの実施形態では、乾燥は、約－３５℃～約－１５℃で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、乾燥は、約２５℃で実施される。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を保管することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理するステップは、包装をさらに含む。
開示の方法のいくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を包装するステップは、以下のステップのうちの１つ以上を含む：
ｉｉｂ）空のＬＮＰ溶液もしくは充填されたＬＮＰ溶液に凍結保護剤を添加するステップ、
ｉｉｃ）空のＬＮＰ溶液もしくは充填されたＬＮＰ溶液を凍結乾燥させ、それによって凍結乾燥されたＬＮＰ組成物を形成するステップ、
ｉｉｄ）凍結乾燥されたＬＮＰ組成物の空のＬＮＰ溶液もしくは充填されたＬＮＰ溶液を保管するステップ、及び／または
ｉｉｅ）空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ溶液、もしくは凍結乾燥されたＬＮＰ組成物に緩衝液を添加し、それによってＬＮＰ製剤を形成するステップ。
開示の方法のいくつかの実施形態では、凍結保護剤は、凍結乾燥の前に空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液に添加される。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、１つ以上の凍結保護剤を含み、１つ以上の凍結保護剤の各々は、独立して、ポリオール（例えば、プロピレングリコール（すなわち、１，２－プロパンジオール）、１，３－プロパンジオール、グリセロール、（＋／－）－２－メチル－２，４－ペンタンジオール、１，６－ヘキサンジオール、１，２－ブタンジオール、２，３－ブタンジオール、エチレングリコール、またはジエチレングリコールなどのジオールまたはトリオール）、非洗剤スルホベタイン（例えば、ＮＤＳＢ－２０１（３－（１－ピリジノ）－１－プロパンスルホネート）、オスモライト（例えば、Ｌ－プロリンまたはトリメチルアミンＮ－オキシド二水和物）、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール２００（ＰＥＧ２００）、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ８０００、ＰＥＧ１００００、ＰＥＧ２００００、ポリエチレングリコールモノメチルエーテル５５０（ｍＰＥＧ５５０）、ｍＰＥＧ６００、ｍＰＥＧ２０００、ｍＰＥＧ３３５０、ｍＰＥＧ４０００、ｍＰＥＧ５０００、ポリビニルピロリドン（例えば、ポリビニルピロリドンＫ１５）、ペンタエリスリトールプロポキシレート、またはポリプロピレングリコールＰ４００）、有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはエタノール）、糖（例えば、Ｄ－（＋）－スクロース、Ｄ－ソルビトール、トレハロース、Ｄ－（＋）－マルトース一水和物、メソ－エリスリトール、キシリトール、ミオ－イノシトール、Ｄ－（＋）－ラフィノース五水和物、Ｄ－（＋）－トレハロース二水和物、またはＤ－（＋）－グルコース一水和物）、または塩（例えば、酢酸リチウム、塩化リチウム、ギ酸リチウム、硝酸リチウム、硫酸リチウム、酢酸マグネシウム、塩化ナトリウム、ギ酸ナトリウム、マロン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、またはそれらの任意の水和物）、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、スクロースを含む。いくつかの実施形態では、凍結保護剤は、スクロースである。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ溶液、または凍結乾燥されたＬＮＰ組成物は、緩衝液を添加する前に、約－４０℃～約０℃、約－３５℃～約－５℃、約－３０℃～約－１０℃、約－２５℃～約－１５℃、約－２２℃～約－１８℃、または約－２１℃～約－１９℃の温度で保管される。
脂質溶液
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、脂質溶液を提供する。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、イオン化可能な脂質を含む。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、封入剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、イオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１５ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、または約１．０ｍｇ／ｍＬ超の濃度でイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬの濃度でイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、最大約５．０ｍｇ／ｍＬ、最大約４．０ｍｇ／ｍＬ、最大約３．０ｍｇ／ｍＬ、最大約２．０ｍｇ／ｍＬ、最大約１．０ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０９ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０８ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０７ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０６ｍｇ／ｍＬ、または最大約０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度でイオン化可能な脂質を含む。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、イオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．１ｍｇ／ｍＬ超、約０．５ｍｇ／ｍＬ超、約０．６ｍｇ／ｍＬ超、約０．７ｍｇ／ｍＬ超、約０．８ｍｇ／ｍＬ超、約０．９ｍｇ／ｍＬ超、約１．０ｍｇ／ｍＬ超、約１．５ｍｇ／ｍＬ超、約２．０ｍｇ／ｍＬ超、約３．０ｍｇ／ｍＬ超、約４．０ｍｇ／ｍＬ超、約５．０ｍｇ／ｍＬ超、約６．０ｍｇ／ｍＬ超、約７．０ｍｇ／ｍＬ超、約８．０ｍｇ／ｍＬ超、約９．０ｍｇ／ｍＬ超、約１０ｍｇ／ｍＬ超、約１１ｍｇ／ｍＬ超、約１２ｍｇ／ｍＬ超、約１３ｍｇ／ｍＬ超、約１４ｍｇ／ｍＬ超、約１５ｍｇ／ｍＬ超、約２０ｍｇ／ｍＬ超、約２５ｍｇ／ｍＬ超、または約３０ｍｇ／ｍＬ超の濃度でイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２０．０ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１９ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１８ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１７ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１６ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１４ｍｇ／ｍＬ、約０１ｍｇ／ｍＬ～約１３ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１１ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約１０．０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約９ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約８ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約７ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約６ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約５．０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約３ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２０ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１ｍｇ／ｍＬ～約８ｍｇ／ｍＬの濃度でイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、最大約３０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約１８ｍｇ／ｍＬ、約１６ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ、約４．０ｍｇ／ｍＬ、約３．０ｍｇ／ｍＬ、約２．０ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、または約０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度でイオン化可能な脂質を含む。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、水性緩衝液及び／または有機溶液中にイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、緩衝剤及び／または塩をさらに含む。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約０．１ｍＭ、約０．５ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約４ｍＭ、約６ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、約７．０～約８．０、約７．１～約７．８、約７．２～約７．６、または約７．３～約７．５のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、脂質溶液は、脂質溶液の総体積に対して約１体積％～約５０体積％の第１の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、脂質ナノ粒子製剤の総体積に対して約２体積％～約４５体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、脂質ナノ粒子製剤の総体積に対して約３体積％～約４０体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、脂質ナノ粒子製剤の総体積に対して約４体積％～約３５体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、脂質溶液は、脂質ナノ粒子製剤の総体積に対して約５体積％～約３３体積％の有機溶媒を含む。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒は、アルコールである。
いくつかの実施形態では、有機溶媒は、エタノールである。
緩衝剤
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、緩衝剤を提供する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、第１の緩衝剤、第２の緩衝剤、第３の緩衝剤、またはそれらの組み合わせを提供する。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、第１の緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の緩衝剤及び／または塩をさらに含み得る。例示的な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約０．１ｎＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｎＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｎＭ～約８０ｍＭ、約２ｎＭ～約７０ｍＭ、約３ｎＭ～約６０ｍＭ、約４ｎＭ～約５０ｍＭ、約５ｎＭ～約４０ｍＭ、約６ｎＭ～約３０ｍＭ、約７ｎＭ～約２０ｍＭ、約８ｎＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で第１の緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ超、または約０．５ｍＭ超、または約１ｍＭ超、または約２ｍＭ超、または約４ｍＭ超、または約６ｍＭ超、または約８ｍＭ超、または約１０ｍＭ超、または約１５ｍＭ超、または約２０ｍＭ超、または約２５ｍＭ超、または約３０ｍＭ超、または約３５ｍＭ超、または約４０ｍＭ超、または約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で第１の緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第１の緩衝剤は、第１の水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の水性緩衝液及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な水性緩衝液としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約０．１ｎＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｎＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｎＭ～約８０ｍＭ、約２ｎＭ～約７０ｍＭ、約３ｎＭ～約６０ｍＭ、約４ｎＭ～約５０ｍＭ、約５ｎＭ～約４０ｍＭ、約６ｎＭ～約３０ｍＭ、約７ｎＭ～約２０ｍＭ、約８ｎＭ～約１５ｍＭ、約９～１２ｍＭの濃度で水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ超、または約０．５ｍＭ超、または約１ｍＭ超、または約２ｍＭ超、または約４ｍＭ超、または約６ｍＭ超、または約８ｍＭ超、または約１０ｍＭ超、または約１５ｍＭ超、または約２０ｍＭ超、または約２５ｍＭ超、または約３０ｍＭ超、または約３５ｍＭ超、または約４０ｍＭ超、または約４５ｍＭ超、または約５０ｍＭ超の濃度で水性緩衝液を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第１の緩衝剤は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、第１の緩衝剤は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、緩衝剤は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約１ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約３０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約１ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約３ｍＭ～約１０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約４ｍＭ～約８ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約５ｍＭ～約６ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約５ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、またはトリスを含む。
いくつかの実施形態では、第１の水性緩衝液は、約５ｍＭの酢酸塩を含み、水性緩衝液は、約５．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、第２の緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の緩衝剤及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ超、または約０．５ｍＭ超、または約１ｍＭ超、または約２ｍＭ超、または約４ｍＭ超、または約６ｍＭ超、または約８ｍＭ超、または約１０ｍＭ超、または約１５ｍＭ超、または約２０ｍＭ超、または約２５ｍＭ超、または約３０ｍＭ超、または約３５ｍＭ超、または約４０ｍＭ超、または約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、第２の水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の水性緩衝液及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な水性緩衝液としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ超、約０．５ｍＭ、または約１ｍＭ超、または約２ｍＭ超、または約４ｍＭ超、または約６ｍＭ超、または約８ｍＭ超、または約１０ｍＭ超、または約１５ｍＭ超、または約２０ｍＭ超、または約２５ｍＭ超、または約３０ｍＭ超、または約３５ｍＭ超、または約４０ｍＭ超、または約４５ｍＭ超、または約５０ｍＭ超の濃度で水性緩衝液を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、トリス緩衝液である。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、トリス緩衝液である。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の水性緩衝液は、約７．５のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第２の緩衝剤は、約７．５のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、第３の緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の水性緩衝液及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で第３の緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ超、または約０．５ｍＭ超、または約１ｍＭ超、または約２ｍＭ超、または約４ｍＭ超、または約６ｍＭ超、または約８ｍＭ超、または約１０ｍＭ超、または約１５ｍＭ超、または約２０ｍＭ超、または約２５ｍＭ超、または約３０ｍＭ超、または約３５ｍＭ超、または約４０ｍＭ超、または約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で第３の緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第３の緩衝剤は、第３の水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、好適な溶液は、１つ以上の水性緩衝液及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な水性緩衝液としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で水性緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約０．１ｍＭ、約０．５ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約４ｍＭ、約６ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で水性緩衝液を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、第３の緩衝剤は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、第３の水性緩衝液は、約７．５のｐＨを有する。
核酸及び活性剤溶液
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、治療薬及び／または予防薬を含む活性薬剤溶液を提供する。治療薬及び／または予防薬は、治療薬及び／または予防薬が脂質ナノ粒子に封入されることができるように、脂質ナノ粒子または脂質ナノ粒子溶液に混合または添加される溶液中で提供され得る。
いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬は、免疫応答を誘発することが可能なワクチンまたは化合物である。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤は、ワクチンである。
いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬は、核酸である。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、核酸を含む核酸溶液を提供する。核酸は、核酸が脂質ナノ粒子内に封入される（それによって「充填されたＬＮＰ」を形成する）ことができるように、脂質ナノ粒子または脂質ナノ粒子溶液に混合または添加される溶液中で提供され得る。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、様々な濃度で封入される核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ超、または約０．０５ｍｇ／ｍＬ超、または約０．０６ｍｇ／ｍＬ超、または約０．０７ｍｇ／ｍＬ超、または約０．０８ｍｇ／ｍＬ超、または約０．０９ｍｇ／ｍＬ超、または約０．１ｍｇ／ｍＬ超、または約０．１５ｍｇ／ｍＬ超、または約０．２ｍｇ／ｍＬ超、または約０．３ｍｇ／ｍＬ超、または約０．４ｍｇ／ｍＬ超、または約０．５ｍｇ／ｍＬ超、または約０．６ｍｇ／ｍＬ超、または約０．７ｍｇ／ｍＬ超、または約０．８ｍｇ／ｍＬ超、または約０．９ｍｇ／ｍＬ超、または約１．０ｍｇ／ｍＬ超の濃度で核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬの濃度で核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、最大約５．０ｍｇ／ｍＬ、最大約４．０ｍｇ／ｍＬ、最大約３．０ｍｇ／ｍＬ、最大約２．０ｍｇ／ｍＬ、最大約１．０ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０９ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０８ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０７ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０６ｍｇ／ｍＬ、または最大約０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度で核酸を含み得る。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．００１～約１．０ｍｇ／ｍＬの核酸、約０．００２５～約０．５ｍｇ／ｍＬの核酸、または約０．００５～約０．２ｍｇ／ｍＬの核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．００５～約０．２ｍｇ／ｍＬの核酸を含む。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、水性緩衝液中に核酸を含む。いくつかの実施形態では、好適な核酸溶液は、緩衝剤及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約０．１ｍＭ超、約０．５ｍＭ超、約１ｍＭ超、約２ｍＭ超、約４ｍＭ超、約６ｍＭ超、約８ｍＭ超、約１０ｍＭ超、約１５ｍＭ超、約２０ｍＭ超、約２５ｍＭ超、約３０ｍＭ超、約３５ｍＭ超、約４０ｍＭ超、約４５ｍＭ超、または約５０ｍＭ超の濃度で緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約４．５～約６．５、約４．８～約６．２５、約４．８～約６．０、約５．０～約５．８、または約５．２～約５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約５．０～約６．０、約５．１～約５．７５、または約５．２～約５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約４．５～約６．５、約４．８～約６．２５、約４．８～約６．０、約５．０～約５．８、または約５．２～約５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、好適な核酸溶液は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、酢酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約１ｍＭ～約２００ｍＭの酢酸緩衝液、約２ｍＭ～約１８０ｍＭの酢酸緩衝液、約３ｍＭ～約１６０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１４０ｍＭの酢酸緩衝液、約５ｍＭ～約１３０ｍＭの酢酸緩衝液、約６ｍＭ～約１２０ｍＭの酢酸緩衝液、約７ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸緩衝液、約８ｍＭ～約１００ｍＭの酢酸緩衝液、約９ｍＭ～約９０ｍＭの酢酸緩衝液、約１０ｍＭ～約８０ｍＭの酢酸緩衝液、約１５ｍＭ～約７０ｍＭの酢酸緩衝液、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸緩衝液、約２５ｍＭ～約５０ｍＭの酢酸緩衝液、または約３０ｍＭ～約４０ｍＭの酢酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約８．８ｍＭの酢酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、核酸溶液は、約１３０ｍＭの酢酸緩衝液を含む。
空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に開示の方法によって調製された空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、ポリマー脂質を含む空のＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、約０．１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％、約０．２ｍｏｌ％～約２．２５ｍｏｌ％、約０．２５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％～約１．７５ｍｏｌ％、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のポリマー脂質を含む空のＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のポリマー脂質を含む空のＬＮＰを提供する。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＰＥＧ脂質である。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＰＥＧ脂質ではない。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、両親媒性ポリマー－脂質コンジュゲートである。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＰＥＧ－脂質コンジュゲートである。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、界面活性剤である。
いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＢｒｉｊまたはＯＨ－ＰＥＧ－ステアレートである。
いくつかの態様では、本開示は、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む空のＬＮＰを提供する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、リン脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約３．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．９ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．８ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．７ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．６ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．４ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．３ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、または約０．１ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約０ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約１．７５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約０．０５０ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約２００ｎｍ以下、約１７５ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１２５ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、約９０ｎｍ以下、約８０ｎｍ以下、約７５ｎｍ以下、約７０ｎｍ以下、約６５ｎｍ以下、約６０ｎｍ以下、約５５ｎｍ以下、約５０ｎｍ以下、約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ以下、または約２０ｎｍ以下の平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約１２５ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３５ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、または約５０ｎｍ～約７０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰは、約２５～約４５ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示の方法によって調製された空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を提供する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、空のＬＮＰを含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１５ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、または約１．０ｍｇ／ｍＬ超の濃度で空のＬＮＰを含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、または約０．５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬの濃度で空のＬＮＰを含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、最大約５．０ｍｇ／ｍＬ、最大約４．０ｍｇ／ｍＬ、最大約３．０ｍｇ／ｍＬ、最大約２．０ｍｇ／ｍＬ、最大約１．０ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０９ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０８ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０７ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０６ｍｇ／ｍＬ、または最大約０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度で空のＬＮＰを含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、水性緩衝液中に空のＬＮＰを含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、緩衝剤及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約０．１ｍＭ、約０．５ｍＭ、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約４ｍＭ、約６ｍＭ、約８ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ超の濃度で緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、好適な空のＬＮＰ溶液は、４．５以下、または４．６以下、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約４．５～約６．２５、約４．６～約６．０、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、約５．０～約５．５の範囲のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、約５ｍＭの酢酸緩衝液を含み、酢酸緩衝液は、約５．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、酢酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、第１の有機溶媒をさらに含む。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒は、アルコールである。
いくつかの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液は、等張化剤（例えば、スクロースなどの糖）をさらに含む。
充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示の方法によって調製された充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を提供する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、リン脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約３．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．９ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．８ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．７ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．６ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．４ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．３ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、または約０．１ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約０ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、０．１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約１．７５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約０．０５０ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約２００ｎｍ以下、約１７５ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１２５ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、約９０ｎｍ以下、約８０ｎｍ以下、約７５ｎｍ以下、約７０ｎｍ以下、約６５ｎｍ以下、約６０ｎｍ以下、約５５ｎｍ以下、約５０ｎｍ以下、約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ以下、または約２０ｎｍ以下の平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約１２５ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３５ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、または約５０ｎｍ～約７０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、約２５～約４５ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示の方法によって調製された充填されたＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、充填されたＬＮＰを含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、充填されたＬＮＰを約０．０１ｍｇ／ｍＬ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ、約０．０６ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ、約０．０８ｍｇ／ｍＬ、約０．０９ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ、約０．１５ｍｇ／ｍＬ、約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．３ｍｇ／ｍＬ、約０．４ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．６ｍｇ／ｍＬ、約０．７ｍｇ／ｍＬ、約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．９ｍｇ／ｍＬ、または約１．０ｍｇ／ｍＬ超の濃度で含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、充填されたＬＮＰを約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、０．０１ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．５ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬ、０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬ、０．２ｍｇ／ｍＬ～約０．９ｍｇ／ｍＬ、０．３ｍｇ／ｍＬ～約０．８ｍｇ／ｍＬ、０．４ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬ、または０．５ｍｇ／ｍＬ～約０．６ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、充填されたＬＮＰを最大約５．０ｍｇ／ｍＬ、最大約４．０ｍｇ／ｍＬ、最大約３．０ｍｇ／ｍＬ、最大約２．０ｍｇ／ｍＬ、最大約１．０ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０９ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０８ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０７ｍｇ／ｍＬ、最大約０．０６ｍｇ／ｍＬ、または最大約０．０５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、充填されたＬＮＰを水性緩衝液中に含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、緩衝剤及び／または塩をさらに含み得る。例示的な好適な緩衝剤としては、限定されないが、硫酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、約０．１ｍＭ～約１００ｍＭ、約０．５ｍＭ～約９０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約８０ｍＭ、約２ｍＭ～約７０ｍＭ、約３ｍＭ～約６０ｍＭ、約４ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約６ｍＭ～約３０ｍＭ、約７ｍＭ～約２０ｍＭ、約８ｍＭ～約１５ｍＭ、約９ｍＭ～約１２ｍＭの濃度で緩衝剤を含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、約０．１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、４ｍＭ、６ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、または５０ｍＭ超の濃度で緩衝剤を含む。例示的な好適な塩としては、限定されないが、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、約４．５～約７．０、約４．６～約７．０、約４．８～約７．０、約５．０～約７．０、約５．５～約７．０、約６．０～約７．０、約６．０～約６．９、約６．０～約６．８、約６．０～約６．７、約６．０～約６．６、約６．０～約６．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、好適な充填されたＬＮＰ溶液は、４．５以下、４．６、または４．７以下、または４．８以下、または４．９以下、または５．０以下、または５．２以下、または５．４以下、または５．６以下、または５．８以下、または６．０以下、または６．１以下、または６．２以下、または６．３以下、または６．４以下、または６．５以下、または６．６以下、または６．７以下、または６．８以下、または６．９以下、または７．０以下のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、約４．５～約６．２５、約４．６～約６．０、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、または約５．０～約５．５の範囲のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、約５ｍＭの酢酸緩衝液を含み、酢酸緩衝液は、約５．０のｐＨを有する。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、酢酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、第１の有機溶媒をさらに含む。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒は、アルコールである。
いくつかの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰ溶液は、等張化剤をさらに含む。
脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開示の方法によって調製された脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を提供する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、約３０～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、約２００ｎｍ以下、約１７５ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１２５ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、約９０ｎｍ以下、約８０ｎｍ以下、約７５ｎｍ以下、約７０ｎｍ以下、約６５ｎｍ以下、約６０ｎｍ以下、約５５ｎｍ以下、約５０ｎｍ以下、約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ以下、または約２０ｎｍ以下の平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約１２５ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３５ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、または約５０ｎｍ～約７０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、約２５～約４５ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤のｐＨは、約５．０～約６．０、約５．１～約５．７５、または約５．２～約５．５の範囲である。
ＬＮＰ製剤の投与
いくつかの実施形態では、投与することは、（ｉ）約４．５～約７．０の範囲のｐＨを有し、治療薬及び／または予防薬を含む活性剤溶液、ならびに約４．５～約６．５の範囲のｐＨを有し、空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液を提供すること（空のＬＮＰは、イオン化可能な脂質を含む）と、（ｉｉ）空のＬＮＰ溶液を活性剤溶液と混合することによって、治療薬及び／または予防薬を封入している充填されたＬＮＰを含むＬＮＰ製剤を形成して、ＬＮＰ製剤が約４．５～約７．０未満の範囲のｐＨを有するようにすることと、（ｉｉｉ）混合後約７２時間以内に、患者にＬＮＰ製剤を投与することと、を含む。
いくつかの実施形態では、第１のｐＨ及び第２のｐＨは、約７．０～約８．１、または約７．１～約７．８、または約７．２～約７．７、または約７．３～約７．６、または約７．４～約７．５の範囲である。
いくつかの実施形態では、第１のｐＨ及び第２のｐＨは、約４．５～約６．５、または約４．６～約６．０、または約４．８～約５．５の範囲である。
いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約７２時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約６０時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約４８時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約３６時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約２４時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約２０時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１６時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１２時間以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約８時間以内に実施される。
いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１２０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１００分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約９０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約８０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約７０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約６０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約５０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約４０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約３０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約２０分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１５分以内に実施される。いくつかの実施形態では、投与することは、混合後約１０分以内に実施される。
いくつかの実施形態では、水性緩衝液のｐＨと、脂質ナノ粒子製剤のｐＨとは、ほぼ同じである。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、脂質ナノ粒子製剤の総体積に対して約１体積％～約５０体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＬＮＰ製剤の総体積に対して約２体積％～約４５体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＬＮＰ製剤の総体積に対して約３体積％～約４０体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＬＮＰ製剤の総体積に対して約４体積％～約３５体積％の有機溶媒を含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＬＮＰ製剤の総体積に対して約５体積％～約３３体積％の有機溶媒を含む。
いくつかの実施形態では、有機溶媒は、アルコールである。
いくつかの実施形態では、有機溶媒は、エタノールである。
いくつかの実施形態では、有機溶媒は、第１の有機溶媒及び第２の有機溶媒を含む。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒は、アルコールであり、第２の有機溶媒は、アルコールである。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒は、エタノールであり、第２の有機溶媒は、ベンジルアルコールである。
いくつかの実施形態では、第１の有機溶媒対第２の有機溶媒の重量／重量比は、約１００：１～約１：１、または約５０：１～約１：１、または約２０：１～約１：１、または約１０：１～約１：１の範囲である。
いくつかの実施形態では、有機溶液は、湿潤剤をさらに含む。本明細書で使用する場合、湿潤剤は、固体表面及び／または液体表面などの表面との接触を維持するための液体の能力を増加、減少、または改善する薬剤を指し得る。
いくつかの実施形態では、湿潤剤は、有機溶媒である。
いくつかの実施形態では、湿潤剤は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）である。
いくつかの実施形態では、湿潤剤対有機溶媒の重量／重量比は、約１０００：１～約１：１、または約５００：１～約５：１、または約１００：１～約１０：１の範囲である。
いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、生理的ｐＨを維持するのに好適な任意の緩衝液であり得る。いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、患者に投与するのに好適なｐＨを維持するのに好適な任意の緩衝液であり得る。いくつかの実施形態では、患者は、哺乳類患者である。いくつかの実施形態では、患者は、ヒト患者である。
いくつかの実施形態では、水性緩衝液は、等張化剤をさらに含む。本明細書で使用する場合、等張化剤は、２つの溶液の水ポテンシャル、または拡散の方向及び程度に影響を与える溶液中に溶解する溶質の相対的な濃度によって定義される、有効な浸透圧勾配を増加、減少、または改善する薬剤を指し得る。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液は、等張化剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、等張化剤は、糖である。
いくつかの実施形態では、糖は、スクロースである。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液は、約０．０１ｇ／ｍＬ～約１．０ｇ／ｍＬ、約０．０５ｇ／ｍＬ～約０．５ｇ／ｍＬ、約０．１ｇ／ｍＬ～約０．４ｇ／ｍＬ、約０．１５ｇ／ｍＬ～約０．３ｇ／ｍＬ、または約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液は、約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む。
空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、及びＬＮＰ製剤の例示的な実施形態
いくつかの実施形態では、本開示の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤は、複数のＬＮＰを含み、充填されたＬＮＰまたはＬＮＰ製剤は、核酸及びイオン化可能な脂質を含む。
本開示の方法に好適な核酸が、本明細書でさらに開示される。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）である。
本開示の方法に好適なイオン化可能な脂質が、本明細書でさらに開示される。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤は、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む。本開示の方法に好適なリン脂質、ＰＥＧ脂質、及び構造的脂質が、本明細書でさらに開示される。
いくつかの実施形態では、開示の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤は、少なくとも１つの脂質ナノ粒子成分を含む。脂質ナノ粒子は、脂質成分、ならびに核酸などの治療剤及び／または予防剤などの１つ以上の追加の成分を含み得る。ＬＮＰは、１つ以上の特定の用途または標的のために設計され得る。ＬＮＰの要素は、特定の用途もしくは標的に基づいて、及び／または１つ以上の要素の有効性、毒性、費用、使用の容易さ、可用性、もしくは他の特色に基づいて選択され得る。同様に、ＬＮＰの特定の製剤は、例えば、要素の特定の組み合わせの有効性及び毒性に応じて、特定の用途または標的のために選択され得る。ＬＮＰ製剤の有効性及び忍容性は、製剤の安定性によって影響を受け得る。
空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の脂質成分は、例えば、式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）による脂質と、リン脂質（不飽和脂質など、例えば、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣ）と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質とを含み得る。空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の脂質成分は、例えば、式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）による脂質と、リン脂質（不飽和脂質など、例えば、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣ）と、構造的脂質とを含み得る。脂質成分の要素は、特定の分率で提供され得る。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の脂質成分は、式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）による脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質とを含む。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の脂質成分は、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）の化合物と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質と、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質とを含み、ただし、総ｍｏｌ％は１００％を超えない。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の脂質成分は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％の式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）の化合物と、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％のリン脂質と、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質とを含む。特定の実施形態では、脂質成分は、約５０ｍｏｌ％の当該化合物と、約１０ｍｏｌ％のリン脂質と、約３８．５ｍｏｌ％の構造的脂質と、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。別の特定の実施形態では、脂質成分は、約４０ｍｏｌ％の当該化合物と、約２０ｍｏｌ％のリン脂質と、約３８．５ｍｏｌ％の構造的脂質と、約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣであり得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＤＭＧであり得、及び／または構造的脂質は、コレステロールであり得る。
脂質ナノ粒子は、１つ以上の特定の用途または標的のために設計され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、哺乳類の体内の特定の細胞、組織、臓器、またはそれらの系もしくは群にＲＮＡなどの治療剤及び／または予防剤を送達するように設計され得る。脂質ナノ粒子の生理化学的特性は、特定の身体標的に対する選択性を増加させるように改変され得る。例えば、粒径は、異なる臓器の小孔サイズに基づいて調整され得る。ＬＮＰ中に含まれる治療剤及び／または予防剤はまた、所望の送達標的または複数の標的に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤は、特定の適応症、状態、疾患、もしくは障害に対して、及び／または特定の細胞、組織、臓器、もしくはその系もしくは群への送達に対して選択され得る（例えば、局所的または特異的送達）。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、細胞内で翻訳されて目的のポリペプチドを生成することが可能である目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み得る。かかる組成物は、特定の臓器に特異的に送達されるように設計され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、哺乳類の肝臓に特異的に送達されるように設計され得る。
ＬＮＰ中の治療剤及び／または予防剤の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的及び／または用途、または他の特性、ならびに治療剤及び／または予防剤の特性に依存し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ中の有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及び他の特徴に依存し得る。ＬＮＰ中の治療剤及び／または予防剤及び他の要素（例えば、脂質）の相対的な量もまた、変動し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ中の脂質成分対核酸などの治療剤及び／または予防剤の重量／重量比は、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１などの約５：１～約６０：１であり得る。いくつかの実施形態では、脂質成分対治療剤及び／または予防剤の重量／重量比は、約１０：１～約４０：１であり得る。いくつかの実施形態では、重量／重量比は、約２０：１である。ＬＮＰ中の治療剤及び／または予防剤の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外線可視分光法）を使用して測定することができる。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、１つ以上のＲＮＡと、１つ以上のＲＮＡと、脂質とを含み、それらの量は、特定のＮ：Ｐ比を提供するように選択され得る。組成物のＮ：Ｐ比は、ＲＮＡ中のリン酸基の数に対する、１つ以上の脂質中の窒素原子のモル比を指す。一般に、より低いＮ：Ｐ比が好ましい。１つ以上のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量は、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１などの約２：１～約３０：１のＮ：Ｐ比を提供するように選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約２：１～約８：１であり得る。いくつかの実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１～約８：１である。いくつかの実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であり得る。いくつかの実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５．６７：１であり得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰを含む製剤は、塩化物塩などの塩をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰを含む製剤は、二糖などの糖をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化物塩などの塩ではなく、糖をさらに含む。
物理的特性
本開示のＬＮＰの物理的特性は、様々な方法によって特徴評価することができる。いくつかの実施形態では、顕微鏡法（例えば、透過型電子顕微鏡法または走査型電子顕微鏡法）を使用して、ＬＮＰの形態及びサイズ分布を検査することができる。動的光散乱法または電位差測定法（例えば、電位差滴定）を用いて、ゼータ電位を測定してもよい。また、動的光散乱法をまた利用して、粒径を決定してもよい。また、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの機器を使用して、粒径、多分散性指数、及びゼータ電位などのＬＮＰの複数の特徴を測定することができる。
空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定して、数十ｎｍ～数百ｎｍであり得る。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約２００ｎｍ以下、約１７５ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１２５ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、約９０ｎｍ以下、約８０ｎｍ以下、約７５ｎｍ以下、約７０ｎｍ以下、約６５ｎｍ以下、約６０ｎｍ以下、約５５ｎｍ以下、約５０ｎｍ以下、約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ以下、または約２０ｎｍ以下の平均脂質ナノ粒子直径を有する。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約１２５ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３５ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、または約５０ｎｍ～約７０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約１５ｎｍ～約５５ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約４５ｎｍ、または約３０ｎｍ～約４０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約２５～約４５ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約７０ｎｍ～約１００ｎｍであり得る。特定の実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約８０ｎｍであり得る。いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約１００ｎｍであり得る。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、約１ｍｍ～約５００ｍｍ、約５ｍｍ～約２００ｍｍ、約１０ｍｍ～約１００ｍｍ、約２０ｍｍ～約８０ｍｍ、約２５ｍｍ～約６０ｍｍ、約３０ｍｍ～約５５ｍｍ、約３５ｍｍ～約５０ｍｍ、または約３８ｍｍ～約４２ｍｍの範囲である。
いくつかの実施形態では、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤の平均ＬＮＰ直径は、異なる方法（例えば、開示の方法のステップのうちの１つ以上を除外する方法、または少なくとも１つのステップにおいて開示の方法とは異なる方法）によって生成された空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤と比較して、約９９％以下、約９８％以下、約９７％以下、約９６％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、約５５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、または約１０％以下である。
ＬＮＰは、比較的均質であり得る。多分散性指数を使用して、ＬＮＰの均質性、例えば、脂質ナノ粒子の粒径分布を示すことができる。小さい（例えば、０．３未満の）多分散性指数は、一般に、狭い粒径分布を示す。ＬＮＰは、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５などの約０～約０．２５の多分散性指数を有し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰの多分散性指数は、約０．１０～約０．２０であり得る。
核酸などの治療剤及び／または予防剤の封入効率は、調製後にＬＮＰに封入されているかまたはＬＮＰと会合している治療剤及び／または予防剤の量を最初に提供された量と比較して記載する。封入効率は、望ましくは高い（例えば、１００％に近い）。封入効率は、例えば、脂質ナノ粒子を分解する前及び分解した後の、脂質ナノ粒子を含有する溶液中の治療剤及び／または予防剤の量を、１つ以上の有機溶媒または洗剤と比較することによって測定され得る。アニオン交換樹脂を使用して、溶液中の遊離治療剤及び／または予防剤（例えば、ＲＮＡ）の量を測定してもよい。蛍光を使用して、溶液中の遊離治療剤及び／または予防剤（例えば、ＲＮＡ）の量を測定してもよい。本明細書に記載の脂質ナノ粒子の場合、治療剤及び／または予防剤の封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であり得る。いくつかの実施形態では、封入効率は、少なくとも８０％であり得る。いくつかの実施形態では、封入効率は、少なくとも９０％であり得る。いくつかの実施形態では、封入効率は、少なくとも９５％であり得る。
ＬＮＰは、任意選択的に、１つ以上のコーティングを含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、コーティングを有するカプセル、フィルム、または錠剤中に製剤化され得る。本明細書に記載の組成物を含むカプセル、フィルム、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引張強さ、硬さ、または密度を有し得る。
定義
本明細書で使用する場合、「アルキル」または「アルキル基」という用語は、任意選択的に置換された、１つ以上の炭素原子（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれよりも多くの炭素原子）を含む、線状または分岐状の飽和炭化水素を意味する。「Ｃ１～１４アルキル」という表記は、１～１４個の炭素原子を含む、任意選択的に置換された線状または分岐状の飽和炭化水素を意味する。別段の指定がない限り、本明細書に記載のアルキル基は、非置換及び置換アルキル基の両方を指す。
本明細書で使用する場合、「アルケニル」または「アルケニル基」という用語は、任意選択的に置換された、２つ以上の炭素原子（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれよりも多くの炭素原子）及び少なくとも１つの二重結合を含む、線状または分岐状の炭化水素を意味する。「Ｃ２～１４アルケニル」という表記は、任意選択的に置換された、２～１４個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を含む、線状または分岐状の炭化水素を意味する。アルケニル基は、１、２、３、４つ、またはそれよりも多くの炭素－炭素二重結合を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃ１８アルケニルは、１つ以上の二重結合を含み得る。２つの二重結合を含むＣ１８アルケニル基は、リノレイル基であり得る。別段の指定がない限り、本明細書に記載のアルケニル基は、非置換及び置換アルケニル基の両方を指す。
本明細書で使用する場合、「アルキニル」または「アルキニル基」という用語は、任意選択的に置換された、２つ以上の炭素原子（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、またはそれよりも多くの炭素原子）及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含む、線状または分岐状の炭化水素を意味する。「Ｃ２～１４アルキニル」という表記は、任意選択的に置換された、２～１４個の炭素原子及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を含む、線状または分岐状の炭化水素を意味する。アルキニル基は、１、２、３、４つ、またはそれよりも多くの炭素－炭素三重結合を含み得る。例えば、Ｃ１８アルキニルは、１つ以上の炭素－炭素三重結合を含み得る。別段の指定がない限り、本明細書に記載のアルキニル基は、非置換及び置換アルキニル基の両方を指す。
本明細書で使用する場合、「炭素環」または「炭素環式基」という用語は、炭素原子の１つ以上の環を含む、任意選択的に置換された単環式系または多環式系を意味する。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０員環であり得る。「Ｃ３～６炭素環」という表記は、３～６つの炭素原子を有する単一の環を含む炭素環を意味する。炭素環は、１つ以上の炭素－炭素二重または三重結合を含み得、非芳香族または芳香族（例えば、シクロアルキルまたはアリール基）であり得る。炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、フェニル、ナフチル、及び１，２－ジヒドロナフチル基が挙げられる。本明細書で使用する「シクロアルキル」という用語は、非芳香族炭素環を意味し、二重または三重結合を含んでも含まなくてもよい。別段の指定がない限り、本明細書に記載の炭素環は、非置換炭素環基、及び置換炭素環基、すなわち、任意選択的に置換された炭素環の両方を指す。いくつかの実施形態では、炭素環は、Ｃ３～８シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、炭素環は、Ｃ３～６シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、炭素環は、Ｃ６～１０アリールである。
「アリール」は、環構造にヘテロ原子を含有しない、少なくとも１つの芳香環を有する、「コンジュゲートされた」系、または多環式系を含む、芳香族性を有する基を含む。例としては、フェニル、ベンジル、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、「アリール」は、芳香族性を有するＣ６～１０炭素環である（例えば、「アリール」は、Ｃ６～１０アリールである）。
本明細書で使用する場合、「複素環」または「複素環式基」という用語は、少なくとも１つの環が少なくとも１つのヘテロ原子を含む、１つ以上の環を含む任意選択的に置換された単環式系または多環式系を意味する。ヘテロ原子は、例えば、窒素、酸素、または硫黄原子であり得る。環は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４員環であり得る。複素環は、１つ以上の二重または三重結合を含み得、非芳香族または芳香族（例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリール基）であり得る。複素環の例としては、イミダゾリル、イミダゾリジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、チアゾリル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリル、イソオキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、モルホリニル、ピロリル、ピロリジニル、フリル、テトラヒドロフリル、チオフェニル、ピリジニル、ピペリジニル、キノリル、及びイソキノリル基が挙げられる。本明細書で使用する「ヘテロシクロアルキル」という用語は、非芳香族複素環を意味し、二重または三重結合を含んでも含まなくてもよい。別段の指定がない限り、本明細書に記載の複素環は、非置換複素環基、及び置換複素環基、すなわち、任意選択的に置換された複素環の両方を指す。いくつかの実施形態では、複素環は、４～１２員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、複素環は、５または６員ヘテロアリールである。
「ヘテロアリール」基は、環構造に１～４つのヘテロ原子を有することを除いて、上に定義されるアリール基であり、「アリール複素環」または「複素芳香族」とも称され得る。本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子、及び例えば、窒素、酸素硫黄、及びホウ素からなる群から独立して選択される、１つ以上のヘテロ原子、例えば、１つ、もしくは１～２、もしくは１～３、もしくは１～４、もしくは１～５、もしくは１～６つのヘテロ原子、または、例えば、１、２、３、４、５、もしくは６つのヘテロ原子からなる、安定な５、６、もしくは７員単環式、または７、８、９、１０、１１、もしくは１２員二環式芳香族複素環式環を含むことが意図される。窒素原子は、置換または非置換（すなわち、Ｎ、またはＲが、Ｈもしくは定義されるような他の置換基であるＮＲ）であり得る。窒素及び硫黄ヘテロ原子は、任意選択的に酸化され得る（すなわち、Ｎ→Ｏ及びＳ（Ｏ）ｐであり、ｐ＝１または２である）。芳香族複素環のＳ及びＯ原子の総数は、１を超えないことに留意されたい。
ヘテロアリール基の例としては、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジンなどが挙げられる。
さらに、「アリール」及び「ヘテロアリール」という用語には、多環式アリール及びヘテロアリール基、例えば、三環式、二環式、例えば、ナフタレン、ベンゾオキサゾール、ベンゾジオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチオフェン、キノリン、イソキノリン、ナフトリジン、インドール、ベンゾフラン、プリン、ベンゾフラン、デアザプリン、インドリジンが含まれる。
本明細書で使用する場合、「生分解性基」は、哺乳類実体における脂質のより速い代謝を促進し得る基である。生分解性基は、限定されないが、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され得る。本明細書で使用する場合、「アリール基」は、１つ以上の芳香族環を含む任意選択的に置換された炭素環式基である。アリール基の例としては、フェニル及びナフチル基が挙げられる。本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール基」は、１つ以上の芳香族環を含む任意選択的に置換された複素環式基である。ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フリル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、及びチアゾリルが挙げられる。アリール及びヘテロアリール基の両方は、任意選択的に置換され得る。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、任意選択的に置換されたフェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる非限定的な群から選択され得る。本明細書の式において、Ｍ及びＭ’は、独立して、上の生分解性基の列挙から選択され得る。別段の指定がない限り、本明細書に記載のアリールまたはヘテロアリール基は、非置換基、及び置換基、すなわち、任意選択的に置換されたアリールまたはヘテロアリール基の両方を指す。
アルキル、アルケニル、及びシクリル（例えば、カルボシクリル及びヘテロシクリル）基は、別段の指定がない限り、任意選択的に置換され得る。任意の置換基は、限定されないが、ハロゲン原子（例えば、塩化物、臭化物、フッ化物、またはヨウ化物基）、カルボン酸（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ）、アルコール（例えば、ヒドロキシル、－ＯＨ）、エステル（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＯＲまたは－ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アルデヒド（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｈ）、カルボニル（例えば、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、代替的にＣ＝Ｏによって表される）、ハロゲン化アシル（例えば、Ｘが臭化物、フッ化物、塩化物、及びヨウ化物から選択されるハロゲン化物である－Ｃ（Ｏ）Ｘ）、カーボネート（例えば、－ＯＣ（Ｏ）ＯＲ）、アルコキシ（例えば、－ＯＲ）、アセタール（例えば、各ＯＲが同じかまたは異なり得るアルコキシ基であり、Ｒ””がアルキルまたはアルケニル基である－Ｃ（ＯＲ）２Ｒ””）、ホスフェート（例えば、Ｐ（Ｏ）４ ３－）、チオール（例えば、－ＳＨ）、スルホキシド（例えば、－Ｓ（Ｏ）Ｒ）、スルフィン酸（例えば、－Ｓ（Ｏ）ＯＨ）、スルホン酸（例えば、－Ｓ（Ｏ）２ＯＨ）、チアル（例えば、－Ｃ（Ｓ）Ｈ）、スルフェート（例えば、Ｓ（Ｏ）４ ２－）、スルホニル（例えば、－Ｓ（Ｏ）２－）、アミド（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ２または－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ）、アジド（例えば、－Ｎ３）、ニトロ（例えば、－ＮＯ２）、シアノ（例えば、－ＣＮ）、イソシアノ（例えば、－ＮＣ）、アシルオキシ（例えば、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、アミノ（例えば、－ＮＲ２、－ＮＲＨ、または－ＮＨ２）、カルバモイル（例えば、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲＨ、または－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ２）、スルホンアミド（例えば、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲＨ、－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ、または－Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｈ）、アルキル基、アルケニル基、及びシクリル（例えば、カルボシクリルまたはヘテロシクリル）基からなる群から選択され得る。前述のいずれにおいても、Ｒは、本明細書に定義されるアルキルまたはアルケニル基である。いくつかの実施形態では、置換基自体は、例えば、１、２、３、４、５、または６つの本明細書に定義される置換基でさらに置換され得る。いくつかの実施形態では、Ｃ１～６アルキル基は、１、２、３、４、５、または６つの本明細書に記載の置換基でさらに置換され得る。
窒素を含有する開示の化合物を、酸化剤（例えば、３－クロロペルオキシ安息香酸（ｍＣＰＢＡ）及び／または過酸化水素）で処理することによってＮ－オキシドに変換して、開示の他の化合物を得ることができる。したがって、示され、特許請求されるすべての窒素含有化合物は、価数及び構造によって許容される場合、示される化合物及びそのＮ－オキシド誘導体（Ｎ□ＯまたはＮ＋－Ｏ－として指定され得る）の両方を含むとみなされる。さらに、他の事例では、開示の化合物中の窒素は、Ｎ－ヒドロキシまたはＮ－アルコキシ化合物に変換され得る。例えば、Ｎ－ヒドロキシ化合物は、ｍ－ＣＰＢＡなどの酸化剤による親アミンの酸化によって調製され得る。示され、特許請求されるすべての窒素含有化合物はまた、価数及び構造によって許容される場合、示される化合物、及びそのＮ－ヒドロキシ（すなわち、Ｎ－ＯＨ）、及びＮ－アルコキシ（すなわち、Ｒは、置換または非置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルケニル、Ｃ１～Ｃ６アルキニル、３～１４員炭素環、または３～１４員複素環であるＮ－ＯＲ）誘導体の両方を網羅するとみなされる。
本明細書で使用する場合、「およそ」及び「約」という用語は、１つ以上の目的の値に適用される場合、記載の参照値と同様の値を指す。いくつかの実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％超の場合を除く）、記載された参照値のいずれかの方向（よりも大きいか、よりも小さい）で２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％またはそれ以下に収まる値の範囲を指す。いくつかの実施形態では、ＬＮＰの脂質成分中の所与の化合物の量の文脈で使用されるとき、「約」は、列挙された値の±１０％を意味し得る。例えば、所与の化合物の約４０％を有する脂質成分を含むＬＮＰは、化合物の３０～５０％を含み得る。
本明細書で使用する場合、「化合物」という用語は、示される構造のすべての異性体及び同位体を含むことを意味する。「同位体」は、核内の異なる数の中性子から生じる、同じ原子数であるが、異なる質量数を有する原子を指す。いくつかの実施形態では、水素の同位体は、トリチウム及び重水素を含む。さらに、本開示の化合物、塩、または複合体を、通常の方法によって溶媒または水分子と組み合わせて調製して、溶媒和物及び水和物を形成することができる。
本明細書で使用する場合、「接触させること」という用語は、２つ以上の実体間の物理的接続を確立することを意味する。いくつかの実施形態では、哺乳類の細胞をＬＮＰと接触させることは、哺乳類の細胞及びナノ粒子が物理的接続を共有するように作製されることを意味する。細胞を、インビボ及びエクスビボの両方で外部実体と接触させる方法は、生物学分野で周知である。いくつかの実施形態では、ＬＮＰと哺乳類内に配置された哺乳類の細胞とを接触させることは、様々な投与経路（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下）によって実施することができ、様々な量の脂質ナノ粒子が関わり得る。さらに、２つ以上の哺乳類の細胞を、ＬＮＰと接触させてもよい。
本明細書で使用する場合、「同等の方法」という用語は、比較される（例えば、本開示のＬＮＰ製剤を生成する）方法のものと、同等のパラメータまたはステップを用いる方法を指す。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、比較される方法のステップｉ）、ｉａ）、ｉａａ）、ｉｂ）、ｉｉ）、ｉｉａ）、ｉｉｂ）、ｉｉｃ）、ｉｉｄ）、及びｉｉｅ）のうちの１つ以上を用いる方法である。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、比較される方法のステップｉ）、ｉａ）、ｉａａ）、ｉｂ）、ｉｉ）、ｉｉａ）、ｉｉｂ）、ｉｉｃ）、ｉｉｄ）、及びｉｉｅ）のうちの１つ以上を用いない方法である。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、比較される方法のステップｉａ）及びｉｂ）のうちの１つ以上を用いない方法である。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、核酸の水溶性塩を用いる方法である。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、有機溶媒に可溶性の核酸を含まない有機溶液を用いる方法である。いくつかの実施形態では、「同等の方法」は、脂質ナノ粒子製剤を投与する前に、脂質ナノ粒子を処理することを含む方法である。
本明細書で使用する場合、「送達すること」という用語は、実体を対象とする場所に提供することを意味する。いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤を対象に送達することは、治療剤及び／または予防剤を含むＬＮＰを対象に（例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路によって）投与することが関わり得る。哺乳類または哺乳類の細胞へのＬＮＰの投与は、１つ以上の細胞を脂質ナノ粒子と接触させることが関わり得る。
本明細書で使用する場合、「向上された送達」という用語は、目的の標的細胞（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）への対照ナノ粒子による治療剤及び／または予防剤の送達レベルと比較して、目的の標的細胞（例えば、哺乳類の肝臓）へのナノ粒子による治療剤及び／または予防剤がより多く（例えば、少なくとも１．５倍以上、少なくとも２倍以上、少なくとも３倍以上、少なくとも４倍以上、少なくとも５倍以上、少なくとも６倍以上、少なくとも７倍以上、少なくとも８倍以上、少なくとも９倍以上、少なくとも１０倍以上）送達されることを意味する。特定の組織へのナノ粒子の送達レベルは、組織内で生成されたタンパク質の量を当該組織の重量と比較すること、組織内の治療剤及び／または予防剤の量を当該組織の重量と比較すること、組織内で生成されたタンパク質の量を当該組織内のタンパク質の総量と比較すること、または組織内の治療剤及び／または予防剤の量を当該組織内の治療剤及び／または予防剤の総量と比較することによって、測定され得る。ナノ粒子の標的細胞への向上された送達は、治療される対象において決定される必要はなく、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代理において決定され得ることが理解されるであろう。
本明細書で使用する場合、「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、標的外細胞（例えば、哺乳類の脾臓）と比較して、目的の標的組織（例えば、哺乳類の肝臓）へのナノ粒子による治療剤及び／または予防剤がより多く（例えば、少なくとも１．５倍以上、少なくとも２倍以上、少なくとも３倍以上、少なくとも４倍以上、少なくとも５倍以上、少なくとも６倍以上、少なくとも７倍以上、少なくとも８倍以上、少なくとも９倍以上、少なくとも１０倍以上）送達されることを意味する。特定の組織へのナノ粒子の送達レベルは、組織内で生成されたタンパク質の量を当該組織の重量と比較すること、組織内の治療剤及び／または予防剤の量を当該組織の重量と比較すること、組織内で生成されたタンパク質の量を当該組織内のタンパク質の総量と比較すること、または組織内の治療剤及び／または予防剤の量を当該組織内の治療剤及び／または予防剤の総量と比較することによって、測定され得る。いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤の全身投与に続いて肝臓または脾臓に送達されるものと比較して、組織１ｇ当たり１．５、２倍、３倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍以上の治療剤及び／または予防剤が腎臓に送達される場合、腎血管標的化において、治療剤及び／または予防剤は、肝臓及び脾臓と比較して、哺乳類の腎臓に特異的に提供される。標的組織に特異的に送達されるナノ粒子の能力は、治療される対象において決定される必要はなく、動物モデル（例えば、ラットモデル）などの代理において決定され得ることが理解されるであろう。
本明細書で使用する場合、「封入効率」は、ＬＮＰの調製に使用される治療剤及び／または予防剤の初期総量に対する、ＬＮＰの一部となる治療剤及び／または予防剤の量を指す。いくつかの実施形態では、組成物に最初に提供される合計１００ｍｇの治療剤及び／または予防剤のうち、９７ｍｇの治療剤及び／または予防剤がＬＮＰに封入される場合、封入効率は９７％とすることができる。本明細書で使用する場合、「封入」は、完全な、実質的な、または部分的な密閉、閉じ込め、包囲、または詰め込みを指し得る。本明細書で使用する場合、「封入」、「封入された」、「充填された」、及び「会合した」は、完全な、実質的な、または部分的な密閉、閉じ込め、包囲、または詰め込みを指し得る。本明細書で使用する場合、「封入」または「会合」は、個々の核酸分子をナノ粒子内に閉じ込めるプロセス、及び／または個々の核酸分子とナノ粒子との間の生理化学的関係を確立するプロセスを指し得る。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」は、治療薬または予防薬を実質的に含まないナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「治療薬または予防薬を実質的に含まない」という用語は、ナノ粒子が有意な量の治療薬または予防薬を含有しないことを意味する。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」は、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、１重量％未満、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１重量％未満の治療薬または予防薬を含む脂質ナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」または「空の脂質ナノ粒子」は、核酸を実質的に含まないナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「核酸を実質的に含まない」という用語は、ナノ粒子が有意な量の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含有しないことを意味する。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」は、実質的に脂質成分のみからなるナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」は、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、１重量％未満、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む脂質ナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」または「空の脂質ナノ粒子」は、ヌクレオチドまたはポリペプチドを実質的に含まないナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合、「空のナノ粒子」または「空の脂質ナノ粒子」は、実質的に脂質成分のみからなるナノ粒子を指し得る。本明細書で使用する場合「充填されたＬＮＰ」、「充填されたナノ粒子」、または「充填された脂質ナノ粒子」（「完全なナノ粒子」または「完全な脂質ナノ粒子」とも称される）は、空のナノ粒子の成分と、実質的な量の治療薬または予防薬とを含む、ナノ粒子を指し得る。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの内部に少なくとも部分的に存在する治療薬または予防薬を含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの表面と会合しているか、またはＬＮＰの外部にコンジュゲートされている、実質的な量の治療薬または予防薬を含む。本明細書で使用する場合、「充填されたＬＮＰ」、「充填されたナノ粒子」、または「充填された脂質ナノ粒子」（「完全なナノ粒子」または「完全な脂質ナノ粒子」とも称される）は、空のナノ粒子の成分と、実質的な量のヌクレオチドまたはポリペプチドとを含む、ナノ粒子を指し得る。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの内部に少なくとも部分的に存在するヌクレオチドまたはポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの表面と会合しているか、またはＬＮＰの外部にコンジュゲートされているヌクレオチドまたはポリペプチドを含む。本明細書で使用する場合「充填されたＬＮＰ」、「充填されたナノ粒子」、または「充填された脂質ナノ粒子」（「完全なナノ粒子」または「完全な脂質ナノ粒子」とも称される）は、空のナノ粒子の成分と、実質的な量の核酸とを含む、ナノ粒子を指し得る。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの内部に少なくとも部分的に存在する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、充填されたＬＮＰは、ＬＮＰの表面と会合しているか、またはＬＮＰの外部にコンジュゲートされている核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、ｍＲＮＡのポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳、及び／またはポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾を指す。
本明細書で使用する場合、「インビトロ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、または微生物）の中ではなく、人工環境において、例えば、試験管または反応容器内、細胞培養物中、ペトリ皿内などで起こる事象を指す。
本明細書で使用する場合、「インビボ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはそれらの細胞もしくは組織）内で生じる事象を指す。
本明細書で使用する場合、「エクスビボ」という用語は、生物（例えば、動物、植物、または微生物もしくはその細胞もしくは組織）の外で生じる事象を指す。エクスビボ事象は、天然（例えば、インビボ）環境から最小限に変更された環境で生じ得る。
本明細書で使用する場合、「異性体」という用語は、化合物の任意の幾何異性体、互変異性体、両性イオン、立体異性体、エナンチオマー、またはジアステレオマーを意味する。化合物は、１つ以上のキラル中心及び／または二重結合を含み得、したがって、二重結合異性体（すなわち、幾何学的Ｅ／Ｚ異性体）、またはジアステレオマー（例えば、エナンチオマー（すなわち、（＋）または（－））、またはシス／トランス異性体）などの立体異性体として存在し得る。本開示は、立体異性体的に純粋な形態（例えば、幾何学的に純粋な、エナンチオマー的に純粋な、またはジアステレオマー的に純粋な）、ならびにエナンチオマーの混合物及び立体異性体の混合物、例えばラセミ体を含む、本明細書に記載の化合物の任意かつすべての異性体を包含する。化合物のエナンチオマーの混合物及び立体異性体の混合物、ならびにそれらをそれらのエナンチオマー成分または立体異性体成分に分割する手段は、周知である。
「互変異性体」は、平衡で存在する２つ以上の構造異性体のうちの１つであり、１つの異性形態から別の異性形態に容易に変換される。この変換は、隣接する共役二重結合の切り換えを伴う水素原子の形式的な移動を生じる。互変異性体は、溶液中の互変異性体の組の混合物として存在する。互変異性化が可能である溶液中では、互変異性体の化学的平衡に到達するであろう。互変異性体の正確な比は、温度、溶媒、及びｐＨを含む、いくつかの要因に依存する。互変異性化によって相互変換可能である互変異性体の概念は、互変異性と呼ばれる。
可能である様々な種類の互変異性のうち、２つが一般的に観察されている。ケト－エノール互変異性では、電子及び水素原子の同時シフトが生じる。環鎖互変異性は、糖鎖分子のアルデヒド基（－ＣＨＯ）が同じ分子のヒドロキシ基（－ＯＨ）のうちの１つと反応する結果として生じて、グルコースによって呈される環式（環形状）形態をもたらす。
一般的な互変異性ペアは、複素環式環の（例えば、グアニン、チミン、及びシトシンなどの核酸塩基の）ケトン－エノール、アミド－ニトリル、ラクタム－ラクチム、アミド－イミド酸互変異性、イミン－エナミン、及びエナミン－エナミンである。二置換グアニジンにおける互変異性の例を以下に示す。
Figure 2023513043000002
開示の化合物が異なる互変異性体として示され得ることを理解されたい。また、化合物が互変異性形態を有する場合、すべての互変異性形態が開示の範囲に含まれることを意図し、化合物の命名が、いかなる互変異性形態をも排除しないことが理解されるべきである。
本明細書で使用する場合、「脂質成分」は、１つ以上の脂質を含む脂質ナノ粒子のその成分である。いくつかの実施形態では、脂質成分としては、１つ以上のカチオン性／イオン化可能な脂質、ＰＥＧ化脂質、構造的脂質、またはリン脂質などの他の脂質が挙げられ得る。
本明細書で使用する場合、「リンカー」は、２つの部分を接続する部分、例えば、キャップ種の２つのヌクレオシド間の接続である。リンカーとしては、限定されないが、ホスフェート基（例えば、ホスフェート、ボラノホスフェート、チオホスフェート、セレノホスフェート、及びホスホネート）、アルキル基、アミデート、またはグリセロールを含む１つ以上の基が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、キャップ類似体の２つのヌクレオシドは、三リン酸塩基によって、または２つのホスフェート部分及びボラノホスホネート部分を含む鎖によって、それらの５’位で結合され得る。
本明細書で使用する場合、「投与方法」としては、組成物を対象に送達する静脈内、筋肉内、皮内、皮下、または他の方法が挙げられ得る。投与方法は、身体の特定の領域または系への送達を標的とする（例えば、特異的に送達する）ように選択され得る。
本明細書で使用する場合、「修飾された」は、非天然を意味する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、修飾ＲＮＡであり得る。すなわち、ＲＮＡは、非天然に存在する１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーを含み得る。「修飾」種は、本明細書では、「改変」種とも称され得る。種は、化学的、構造的、または機能的に修飾または改変され得る。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基種は、天然に存在しない１つ以上の置換を含み得る。
本明細書で使用する場合、「Ｎ：Ｐ比」は、例えば、脂質成分及びＲＮＡを含むＬＮＰ中における、脂質中の（生理的ｐＨ範囲で）イオン化可能な窒素原子対ホスフェート基のＲＮＡ中のモル比である。
本明細書で使用する場合、「脂質ナノ粒子」は、１つ以上の脂質を含む組成物である。脂質ナノ粒子は、典型的には、およそ数マイクロメートル以下のサイズであり、脂質二重層を含み得る。本明細書で使用する場合、脂質ナノ粒子は、別段の指定がない限り、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、リポソーム（例えば、脂質小胞）、及びリポプレックスを包含する。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、５００ｎｍ以下の直径を有する脂質二重層を有するリポソームであり得る。
本明細書で使用する場合、「天然に存在する」は、人工的な補助なしで、天然で存在することを意味する。
本明細書で使用する場合、「患者」は、治療を求め得るかもしくは治療を必要とし得るか、治療を必要とするか、治療を受けているか、治療を受けるであろう対象、または特定の疾患もしくは状態について訓練された専門家によって治療されている対象を指す。
本明細書で使用する場合、「ＰＥＧ脂質」または「ＰＥＧ化脂質」は、ポリエチレングリコール成分を含む脂質を指す。
本明細書で使用する場合、「ポリマー脂質」は、その化学構造に繰り返しサブユニットを含む脂質を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ポリマー成分を含む脂質である。いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＰＥＧ脂質である。いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＰＥＧ脂質ではない。いくつかの実施形態では、ポリマー脂質は、ＢｒｉｊまたはＯＨ－ＰＥＧ－ステアレートである。
「薬学的に許容される」という表現は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または合理的な利益／リスク比に見合った、他の問題もしくは複雑な事柄を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適な化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために本明細書で使用される。
「薬学的に許容される賦形剤」という表現は、本明細書で使用する場合、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁、複合体化、または溶解させることが可能なビヒクル）を指し、患者において実質的に非毒性であり、非炎症性である特性を有する。賦形剤としては、例えば、接着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、香料、香料、流動促進剤（流動促進剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味剤、及び水和水が挙げられ得る。例示的な賦形剤としては、限定されないが、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、ゼラチン化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ（アルファ－トコフェロール）、ビタミンＣ、キシリトール、及び本明細書に開示の他の種が挙げられる。
本明細書における化合物の構造式は、場合によっては便宜上ある特定の異性体を表すが、本開示は、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体などのすべての異性体を含み、すべての異性体が同じレベルの活性を有し得るわけではないことが理解される。加えて、式によって表される化合物には、結晶多形が存在し得る。任意の結晶形態、結晶形態混合物、またはそれらの無水物もしくは水和物は、本開示の範囲に含まれることに留意されたい。
「結晶多形」、「多形」、または「結晶形態」という用語は、化合物（またはその塩もしくは溶媒和物）が、異なる結晶充填配置で結晶化し得る結晶構造を意味し、それらのすべてが同じ元素組成を有する。異なる結晶形態は、通常、異なるＸ線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度硬度、結晶形状、光学的及び電気的特性、安定性及び溶解性を有する。再結晶溶媒、結晶化速度、保管温度、及び他の要因は、１つの結晶形態の優勢を生じ得る。化合物の結晶多形は、異なる条件下での結晶化によって調製され得る。
組成物はまた、１つ以上の化合物の塩を含み得る。塩は、薬学的に許容される塩であり得る。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることによって）、親化合物が改変されている、開示の化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱物塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシルスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むが、これらに限定されない無毒アンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性の無機または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から、従来の化学方法によって合成され得る。一般に、かかる塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を、水もしくは有機溶媒、または２つの混合物中の化学量論的量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる。いくつかの実施形態では、非水性媒体は、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルである。好適な塩の列挙は、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）で見出される。
本明細書で使用する場合、「リン脂質」は、リン酸部分と、不飽和脂肪酸鎖などの１つ以上の炭素鎖と、を含む脂質である。リン脂質は、１つ以上の複数（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つ以上の不飽和）を含み得る。リン脂質またはその類似体もしく誘導体は、コリンを含み得る。リン脂質、またはその類似体もしくは誘導体は、コリンを含まなくてもよい。特定のリン脂質は、膜への融合を促進し得る。いくつかの実施形態では、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質を膜に融合させることによって、脂質含有組成物の１つ以上の要素が膜を通過することを可能に、例えば、１つ以上の要素の細胞への送達を可能にすることができる。
本明細書で使用する場合、「多分散性指数」は、ある系の粒径分布の均質性を説明する比率である。例えば０．３未満の小さい値は、狭い粒径分布を示す。
本明細書で使用する場合、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。いくつかの実施形態では、両親媒性ポリマーは、２つ以上のＰＥＧモノマー単位などのオリゴマー断片を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の両親媒性ポリマーは、ＰＳ２０であり得る。
本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」または「目的のポリペプチド」という用語は、典型的には、天然に（例えば、単離または精製）または合成的に生成され得るペプチド結合によって接合されるアミノ酸残基のポリマーを指す。
本明細書で使用する場合、「ＲＮＡ」は、天然または非天然であり得るリボ核酸を指す。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、１つ以上の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどの修飾及び／または非天然に存在する成分を含み得る。ＲＮＡは、キャップ構造、鎖終結ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。特定のポリペプチドをコードするｍＲＮＡの翻訳、例えば哺乳類の細胞内のｍＲＮＡのインビボ翻訳は、コードされたポリペプチドを生成し得る。ＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ｍＲＮＡ、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる非限定群から選択され得る。
本明細書で使用する場合、「単一単位用量」は、１つの用量／１回／単一経路／単一接触点、すなわち単一投与事象で投与される任意の治療剤の用量である。
本明細書で使用する場合、「分割用量」は、単一単位用量または１日総用量を２つ以上の用量に分割することである。
本明細書で使用する場合、「１日総用量」は、２４時間の期間に与えられるか、または処方される量である。これは、単一単位用量として投与してもよい。
本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、例えば、実験的、診断的、予防的、及び／または治療的目的のために、開示による組成物または製剤が投与され得る任意の生物を指す。典型的な対象としては、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなどの哺乳類）及び／または植物が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「Ｔｘ」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製に使用する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の初期完全性が約Ｘまで分解されるまでのＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）が持続する時間の量を指す。例えば、「Ｔ８０％」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製に使用する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の初期完全性が約８０％まで分解されるまでのＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）が持続する時間の量を指す。別の例では、「Ｔ１／２」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製に使用する核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の初期完全性が約１／２まで分解されるまでのＬＮＰ、ＬＮＰ溶液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）が持続する時間の量を指す。
本明細書で使用する場合、「標的細胞」は、任意の１つ以上の目的の細胞を指す。細胞は、インビトロ、インビボ、インサイチュ、または生物の組織もしくは臓器に見出され得る。生物は、動物であり得る。いくつかの実施形態では、生物は、哺乳類である。いくつかの実施形態では、生物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、生物は、患者である。
本明細書で使用する場合、「標的組織」は、治療剤及び／または予防剤の送達が、所望の生物学的及び／または薬理学的効果を生じるであろう、任意の１つ以上の目的の組織の種類を指す。目的の標的組織の例としては、特定の組織、臓器、及びそれらの系または群が挙げられる。特定の用途では、標的組織は、腎臓、肺、脾臓、血管（例えば、冠状動脈または大腿動脈）内の血管内皮、または（例えば、腫瘍内注射を介した）腫瘍組織であり得る。「標的外組織」は、コードされるタンパク質の発現が所望の生物学的及び／または薬理学的効果を生じない任意の１つ以上の組織の種類を指す。特定の用途では、標的外組織としては、肝臓及び脾臓が挙げられ得る。
「治療薬」または「予防薬」という用語は、対象に投与されると、治療、診断、及び／または予防効果を有し、及び／または所望の生物学的及び／または薬理学的効果を誘発する、任意の薬剤を指す。治療薬はまた、「活性剤」または「活性剤」と称される。かかる薬剤としては、限定されないが、細胞毒素、放射性イオン、化学療法剤、小分子薬物、タンパク質、及び核酸が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、感染、疾患、障害、及び／または状態に罹患しているかまたはそれに罹患しやすい対象に投与されると、感染、疾患、障害、及び／または状態を治療し、それらの症状を改善、診断、防止し、及び／またはそれらの発症を遅延させるのに十分である、送達される薬剤（例えば、核酸、薬物、組成物、治療薬、診断薬剤、予防薬など）の量を意味する。
本明細書で使用する場合、「トランスフェクション」は、細胞に種（例えば、ＲＮＡ）を導入することを指す。トランスフェクションは、例えば、インビトロ、エクスビボ、またはインビボで行われ得る。
本明細書で使用する場合、「治療すること」という用語は、特定の感染症、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状または特色の部分的なまたは完全な軽減、寛解、改善、緩和、発症の遅延、進行の阻害、重症度の低減、及び／または発生率の低減を指す。いくつかの実施形態では、がんを「治療すること」は、腫瘍の生存、成長、及び／または拡散を阻害することを指し得る。治療は、疾患、障害、及び／または状態の兆候を呈さない対象、及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を発症するリスクを低減する目的で、疾患、障害、及び／または状態の早期兆候のみを呈する対象に投与され得る。
本明細書で使用する場合、「ゼータ電位」は、例えば、粒子組成物における脂質の界面動電位である。
イオン化可能な脂質
本開示は、イオン化可能な脂質を提供する。いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、中心アミン部分及び少なくとも１つの生分解性基を含む。いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、アミノ脂質である。本明細書に記載の脂質は、哺乳類の細胞または臓器に核酸などの治療剤及び／または予防剤を送達するために、脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子製剤で有利に使用され得る。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－１）：
Figure 2023513043000003
の化合物のうちの１つ以上、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、及びＣ２～３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１５アルキル及びＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５である場合に－Ｎ（Ｒ）２ではないか、あるいは（ｉｉ）Ｑは、ｎが１または２である場合に５、６、または７員のヘテロシクロアルキルではない。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－Ｘ）：
Figure 2023513043000004
の化合物のうちの１つ以上、もしくはそれらのＮ－オキシド、または塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｏは、独立して、１、２、３、及び４から選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｒｘは、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、－（ＣＨ２）ｖＯＨ、及び－（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２からなる群から選択され、
ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３－６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、及びＣ２～３アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から選択され、
各ｑは、独立して、１、２、及び３から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１５アルキル及びＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
いくつかの実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＩＡ）：
Figure 2023513043000005
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、－（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ－ｏＱ、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＩＢ）：
Figure 2023513043000006
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、そのすべての可変要素は、本明細書に定義されるとおりである。いくつかの実施形態では、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、または（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、－ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000007
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、－ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－ＶＩ）：
Figure 2023513043000008
の化合物のうちの１つ以上、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
各Ｒ５は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、ＯＨ、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキル、またはＣ２～１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、及びＣ２～３アルケニルからなる群から選択され、
ＲＮは、Ｈ、またはＣ１～３アルキルであり、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１５アルキル及びＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘａ及びＸｂは、各々独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、－ＯＨ、Ｒ、－Ｎ（Ｒ）２、－ＣＮ、－Ｎ３、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＯＲ、－ＳＲ、－Ｓ（Ｏ）Ｒ、－Ｓ（Ｏ）ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、－ＮＯ２、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、－Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、炭素環、複素環、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは、０または１であり、
ｔ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｓ１は、１、２、３、４、及び５から選択される。
いくつかの実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩ－ａ）：
Figure 2023513043000009
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、あるいはＲ２及びＲ３は、それらが結合される原子と一緒になって、複素環または炭素環を形成する。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩ）：
Figure 2023513043000010
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩＩ）：
Figure 2023513043000011
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は、結合またはＭ’であり、
Ｒａ’及びＲｂ’は、独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。
式（ＩＬ－Ｉ）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩ－ａ）、（ＩＬ－ＶＩＩ）、または（ＩＬ－ＶＩＩＩ）のうちのいずれの化合物も、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、Ｍ’である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、－ＯＣ（Ｏ）－である。
ある特定の実施形態では、Ｍは、－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。いくつかの実施形態では、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、Ｍ’は、－ＯＣ（Ｏ）－である。ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’は、各々－ＯＣ（Ｏ）－である。いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、各々－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
ある特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの一方は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、他方は、－Ｓ－Ｓ－である。例えば、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ’は、－Ｓ－Ｓ－であるか、あるいはＭ’は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍは、－Ｓ－Ｓ－である。
いくつかの実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－であり、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルである。他の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１～６アルキルまたはＣ２～６アルケニルである。ある特定の実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１～４アルキルまたはＣ２～４アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ２アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ３アルケニルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素ではない。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、非置換メチルまたは－（ＣＨ２）ｎＱであり、ここで、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲである。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
いくつかの実施形態では、ｎは、２である。
いくつかの実施形態では、ｎは、３である。
いくつかの実施形態では、ｎは、４である。
いくつかの実施形態では、Ｍ１は、存在しない。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ５は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ６は、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６は、ヒドロキシルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの１つは、ヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルであり、各Ｒ６は水素である。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルであり、各Ｒ５は水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１～６アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｘは、Ｃ１～３アルキルである。例えば、Ｒｘは、メチルである。例えば、Ｒｘは、エチルである。例えば、Ｒｘは、プロピルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、－（ＣＨ２）ｖＯＨであり、ｖは、１、２、または３である。例えば、Ｒｘは、メタノイルである。例えば、Ｒｘは、エタノイルである。例えば、Ｒｘは、プロパノイルである。
いくつかの実施形態では、Ｒｘは、－（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２であり、ｖは、１、２、または３であり、各Ｒは、Ｈまたはメチルである。例えば、Ｒｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、または－ＹＲ”である。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ３～１４アルキルまたはＣ３～１４アルケニルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１～８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１～５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１～３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ４アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ５アルキルである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、－ＣＨＲ１ａＲ１ｂ－は、－（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ－Ｍ－ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１～３アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３～１４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１～８アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１～５アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１～３アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ２アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ３アルキルである。例えば、いくつかの実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ４アルキルである。
一実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩａ）：
Figure 2023513043000012
のもの、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである。
別の実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩｂ）：
Figure 2023513043000013
のもの、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである。
別の実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩｃ）または（ＩＬ－ＩＩｅ）：
Figure 2023513043000014
のもの、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである。
別の実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩｆ）：
Figure 2023513043000015
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ”は、Ｃ１～６アルキルまたはＣ２～６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。
さらなる実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩｄ）：
Figure 2023513043000016
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２～Ｒ６は、本明細書に記載されるとおりである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され得る。
さらなる実施形態では、式（ＩＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＩＬ－ＩＩｇ）：
Figure 2023513043000017
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１～６アルキル（例えば、Ｃ１～４アルキル）またはＣ２～６アルケニル（例えば、Ｃ２～４アルケニル）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され得る。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩａ）：
Figure 2023513043000018
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）：
Figure 2023513043000019
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）：
Figure 2023513043000020
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）：
Figure 2023513043000021
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）：
Figure 2023513043000022
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）：
Figure 2023513043000023
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩｃ）：
Figure 2023513043000024
のものを含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩｄ）：
Figure 2023513043000025
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）：
Figure 2023513043000026
のものを含む。
別の実施形態では、式（ＩＬ－ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）：
Figure 2023513043000027
のもの、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体を含む。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６１３号、同第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６１３号、及び同第ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０５１６２９号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０４９２４５号、同第ＷＯ２０１８／１７０３０６号、同第ＷＯ２０１８／１７０３３６号、及び同第ＷＯ２０２０／０６１３６７号に記載の化合物のうちの１つ以上である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、米国出願第６２／４７５，１６６号に記載の化合物１～２８０から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000028
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000029
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000030
またはその塩である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000031
またはその塩である。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－ＶＩＶａ）：
Figure 2023513043000032
の化合物のうちの１つ以上、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり得、
式中、Ｒ’ａは、Ｒ’分岐状またはＲ’環式であり、
Ｒ’分岐状は、
Figure 2023513043000033
であり、Ｒ’環式は、
Figure 2023513043000034
であり、
Ｒ’ｂは、
Figure 2023513043000035
であり、
Figure 2023513043000036
は、結合点を示し、
Ｒａγ及びＲｂγは、各々独立して、Ｃ２～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、－（ＣＨ２）２ＯＨであり、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｙａは、Ｃ３～６炭素環であり、
Ｒ＊”ａは、Ｃ１～１５アルキル及びＣ２～１５アルケニルからなる群から選択され、
ｓは、２または３である。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－ＶＩＶｂ）：
Figure 2023513043000037
の化合物のうちの１つ以上、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり得、
式中、Ｒ’ａは、Ｒ’分岐状またはＲ’環式であり、
Ｒ’分岐状は、
Figure 2023513043000038
であり、Ｒ’環式は、
Figure 2023513043000039
であり、
Ｒ’ｂは、
Figure 2023513043000040
であり、
Figure 2023513043000041
は、結合点を示し、
Ｒａγ及びＲｂγは、各々独立して、Ｃ２～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、
Figure 2023513043000042
であり、
Figure 2023513043000043
は、結合点を示し、
Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２であり、各Ｒは、独立して、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、ｎ２は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｙａは、Ｃ３～６炭素環であり、
Ｒ＊”ａは、Ｃ１～１５アルキル及びＣ２～１５アルケニルからなる群から選択され、
ｓは、２または３である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000044
から選択される。
いくつかの態様では、本開示のイオン化可能な脂質は、式（ＩＬ－ＩＩＩ）：
Figure 2023513043000045
の化合物のうちの１つ以上、またはそれらの塩もしくは異性体であり得、式中、
Ｗは、
Figure 2023513043000046
であり、
環Ａは、
Figure 2023513043000047
であり、
ｔは、１または２であり、
Ａ１及びＡ２は、各々独立して、ＣＨまたはＮから選択され、
Ｚは、ＣＨ２であるか、または不在であり、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）は、各々単結合を表し、Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は、両方とも存在せず、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、独立して、Ｃ５～２０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択され、
ＲＸ１及びＲＸ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１～３アルキルであり、
各Ｍは、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
Ｍ＊は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２は、各々独立して、－Ｏ－及び－Ｎ（Ｒ６）－からなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１～５アルキルからなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、結合、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から独立して選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１～３アルキル及びＣ３～６炭素環からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１２アルキル、Ｃ３～１２アルケニル、及び－Ｒ＊ＭＲ’からなる群から選択され、
ｎは、１～６の整数であり、
式中、環Ａが
Figure 2023513043000048
である場合、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではない、及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である。
いくつかの実施形態では、化合物は、式（ＩＬ－ＩＩＩａ１）～（ＩＬ－ＩＩＩａ８）：
Figure 2023513043000049
のうちのいずれかのものである。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／１１２８６５号、同第ＷＯ２０１８／２３２１２０号に記載の化合物のうちの１つ以上である。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／２３２１２０号に記載の化合物１～１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／１１２８６５号に記載の化合物１～１６、４２～６６、６８～７６、及び７８～１５６から選択される。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、
Figure 2023513043000050
またはその塩である。
式（ＩＬ－１）、（ＩＬ－ＩＡ）、（ＩＬ－ＩＢ）、（ＩＬ－ＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩａ）、（ＩＬ－ＩＩｂ）、（ＩＬ－ＩＩｃ）、（ＩＬ－ＩＩｄ）、（ＩＬ－ＩＩｅ）、（ＩＬ－ＩＩｆ）、（ＩＬ－ＩＩｇ）、（ＩＬ－ＶＩ）、（ＩＬ－ＶＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩａ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｂ）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－１）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－２）、（ＩＬ－ＶＩＩｂ－３）、（ＩＬ－ＶＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｃ）、（ＩＬ－ＶＩＩＩｄ）、（ＩＬ－ＶＩＶａ）、（ＩＬ－ＶＩＶｂ）、（ＩＬ－ＩＩＩ）、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）、（ＩＬ－ＩＩＩａ２）、（ＩＬ－ＩＩＩａ３）、（ＩＬ－ＩＩＩａ４）、（ＩＬ－ＩＩＩａ５）、（ＩＬ－ＩＩＩａ６）、（ＩＬ－ＩＩＩａ７）、または（ＩＬ－ＩＩＩａ８）による脂質の中心アミン部分は、生理的ｐＨでプロトン化され得る。したがって、脂質は、生理的ｐＨで正または部分的正電荷を有し得る。かかる脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と称される場合がある。脂質はまた、双性イオン性、すなわち、正電荷及び負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。
いくつかの実施形態では、イオン化可能な脂質は、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、オクタトリアコンタン－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される。
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質
本明細書で使用する場合、「ＰＥＧ脂質」という用語は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質を指す。ＰＥＧ脂質の非限定的な例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、及びＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。かかる脂質は、ＰＥＧ化脂質とも称される。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質としては、限定されないが、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ－ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ－ジステルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＳＧ）、ＰＥＧ－ジパルメトレイル、ＰＥＧ－ジオレイル、ＰＥＧ－ジステアリル、ＰＥＧ－ジアシルグリカミド（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、ＰＥＧ－ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ－１，２－ジミリスチルオクスプロピル（ｄｉｍｙｒｉｓｔｙｌｏｘｌｐｒｏｐｙｌ）－３－アミン（ＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ）が挙げられる。
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分は、約Ｃ１４～約Ｃ２２の長さを有するものを含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分は、約Ｃ１４～約Ｃ１６の長さを有するものを含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ－ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである。
一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含むことができる。非拡散性ＰＥＧの非限定的な例としては、ＰＥＧ－ＤＳＧ及びＰＥＧ－ＤＳＰＥが挙げられる。
ＰＥＧ脂質は、当該技術分野で既知であり、例えば、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４Ａ２号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるものである。
一般に、本明細書に記載される様々な式の他の脂質成分（例えば、ＰＥＧ脂質）のいくつかは、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｇｅｎｔｓ，」と題される、２０１６年１２月１０日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号（参照によりその全体が組み込まれる）に記載されるように合成され得る。
脂質ナノ粒子または脂質ナノ粒子製剤の脂質成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つ以上の分子を含み得る。かかる種は、代替的にＰＥＧ化脂質と称され得る。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、及びそれらの混合物を含む非限定的な群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ－ＤＭＧは、以下の構造を有する。
Figure 2023513043000051
一実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号に記載されるＰＥＧ化脂質であり得、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載のこれらの例示的なＰＥＧ脂質のうちのいずれもが、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含むように修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である。本明細書で一般的に定義されるとき、「ＰＥＧ－ＯＨ脂質」（本明細書では「ヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質」とも称される）は、脂質上に１つ以上のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖上に１つ以上のヒドロキシル基を含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ－ＯＨまたはヒドロキシ－ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に－ＯＨ基を含む。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物である。本明細書で提供されるのは、式（ＰＬ－Ｉ）：
Figure 2023513043000052
の化合物、またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｌ１は、任意選択的に置換されたＣ１～１０アルキレンであり、任意選択的に置換されたＣ１～１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられ、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分、または生理学的条件下で切断可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
Figure 2023513043000053
のものであり、
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンであり、任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択的に、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられ、
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、－Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である。
いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、ＰＥＧ－ＯＨ脂質である（すなわち、Ｒ３は、－ＯＲＯであり、ＲＯは、水素である）。いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＰＬ－Ｉ－ＯＨ）：
Figure 2023513043000054
のもの、またはその塩である。
いくつかの実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ化脂肪酸である。いくつかの実施形態では、本発明で有用なＰＥＧ脂質は、式（ＰＬ－ＩＩ）の化合物である。本明細書で提供されるのは、式（ＰＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000055
の化合物またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５は、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－ＩＩ）の化合物は、式（ＰＬ－ＩＩ－ＯＨ）：
Figure 2023513043000056
のもの、またはその塩であり、式中、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５は、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である。
いくつかの実施形態では、ｒは、１０～８０、２０～７０、３０～６０、または４０～５０の整数である。
いくつかの実施形態では、ｒは、４５である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、Ｃ１７アルキルである。
さらに他の実施形態では、式（ＰＬ－ＩＩ）の化合物は、
Figure 2023513043000057
またはその塩である。
一実施形態では、式（ＰＬ－ＩＩ）の化合物は、
Figure 2023513043000058
である。
いくつかの態様では、本明細書に記載の薬学的組成物の脂質組成物は、ＰＥＧ脂質を含まない。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、米国出願第６２／５２０，５３０号に記載のＰＥＧ脂質のうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＬ－ＩＩＩ）：
Figure 2023513043000059
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１～１００の整数である。
いくつかの実施形態では、ＰＥＧ脂質は、以下の式：
Figure 2023513043000060
の化合物、またはその塩もしくは異性体である。
構造的脂質
本明細書で使用する場合、「構造的脂質」という用語は、ステロールを指し、また、ステロール部分を含有する脂質を指す。
脂質ナノ粒子内に構造的脂質を組み込むことにより、粒子内の他の脂質の凝集を軽減するのに役立つことができる。構造的脂質は、限定されないが、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、ホパノイド、フィトステロール、ステロイド、及びそれらの混合物を含む群から選択され得る。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、各々独立して、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラジカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、ホパノイド、フィトステロール、及びステロイドから選択される２つ以上の成分の混合物である。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、ステロールである。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、２つ以上のステロールの混合物である。本明細書で定義する場合、「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、ステロールである。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、コレステロールである。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、コレステロールの類似体である。いくつかの実施形態では、構造的脂質は、アルファ－トコフェロールである。
いくつかの実施形態では、構造的脂質は、米国出願第６２／５２０，５３０号に記載の１つ以上の構造的脂質であり得る。
封入剤
本開示のいくつかの実施形態では、封入剤は、式（ＥＡ－Ｉ）：
Figure 2023513043000061
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｒ２０１及びＲ２０２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、及び（Ｃ＝ＮＨ）Ｎ（Ｒ１０１）２からなる群から選択され、各Ｒ１０１は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、及びＣ２～Ｃ６アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２０３は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル及びＣ２～Ｃ２０アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２０４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１～Ｃ２０アルキル）、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ２～Ｃ２０アルケニル）、Ｃ（Ｏ）（ＮＨＣ１～Ｃ２０アルキル）、及びＣ（Ｏ）（ＮＨＣ２～Ｃ２０アルケニル）からなる群から選択され、
ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０１及びＲ２０２は、各々独立して、Ｈ及びＣＨ３からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０１及びＲ２０２は、各々独立して、（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２及び（Ｃ＝ＮＨ）Ｎ（ＣＨ３）２からなる群から選択され得る。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０３は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ８～Ｃ１８アルキル、及びＣ１２～Ｃ１６アルキルからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ２０４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１～Ｃ２０アルキル）、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ２～Ｃ２０アルケニル）、Ｃ（Ｏ）（ＮＨＣ１～Ｃ２０アルキル）、及びＣ（Ｏ）（ＮＨＣ２～Ｃ２０アルケニル）；Ｃ８～Ｃ１８アルキル、Ｃ８～Ｃ１８アルケニル、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ８～Ｃ１８アルキル）、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ８～Ｃ１８アルケニル）、Ｃ（Ｏ）（ＮＨＣ８～Ｃ１８アルキル）、及びＣ（Ｏ）（ＮＨＣ８～Ｃ１８アルケニル）；ならびにＣ１２～Ｃ１６アルキル、Ｃ１２～Ｃ１６アルケニル、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１２～Ｃ１６アルキル）、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１２～Ｃ１６アルケニル）、Ｃ（Ｏ）（ＮＨＣ１２～Ｃ１６アルキル）、及びＣ（Ｏ）（ＮＨＣ１２～Ｃ１６アルケニル）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、ｎ１は、１、２、３、４、５、及び６から選択され、ｎ１は、２、３、及び４から選択される。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、３である。
本開示のいくつかの実施形態では、封入剤は、式（ＥＡ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000062
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｘ１０１は、結合、ＮＨ、またはＯであり、
Ｒ１０１及びＲ１０２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、及びＣ２～Ｃ６アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ１０３及びＲ１０４は、各々独立して、Ｃ１～Ｃ２０アルキル及びＣ２～Ｃ２０アルケニルからなる群から選択され、
ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｘ１０１は、結合である。
いくつかの実施形態では、Ｘ１０１は、ＮＨである。
いくつかの実施形態では、Ｘ１０１は、Ｏである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０１及びＲ１０２は、各々独立して、Ｈ及びＣＨ３からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０３は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ８～Ｃ１８アルキル、及びＣ１２～Ｃ１６アルキルからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ１０４は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ８～Ｃ１８アルキル、及びＣ１２～Ｃ１６アルキルからなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、ｎ１は、１、２、３、４、５、及び６から選択され、ｎ１は、２、３、及び４から選択される。
いくつかの実施形態では、ｎ１は、３である。
例示的な封入剤としては、限定されないが、アルギン酸エチルラウロイル、アルギン酸エチルミリストイル、アルギン酸エチルパルミトイル、アルギン酸エチルコレステロール、アルギン酸エチルオレイン、アルギン酸エチルカプリン、及びアルギン酸エチルカルプリルが挙げられる。
ある特定の実施形態では、封入剤は、アルギン酸エチルラウロイル、
Figure 2023513043000063
またはその塩もしくは異性体である。
ある特定の実施形態では、封入剤は、
Figure 2023513043000064
Figure 2023513043000065
からなる群から選択される少なくとも１つの化合物、または例えば、遊離塩基、ＴＦＡ塩、及び／またはＨＣｌ塩などのそれらの塩及び異性体である。
リン脂質
リン脂質は、１つ以上の脂質二重層に組み立てられ得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つ以上の脂肪酸部分を含む。
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リソホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、α－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸（ｐｈｙｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。
特定のリン脂質は、膜への融合を促進することができる。いくつかの実施形態では、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つ以上の負に帯電したリン脂質と相互作用し得る。膜へのリン脂質の融合により、脂質含有組成物（例えばＬＮＰ）の１つ以上の要素（例えば治療薬）が膜を通過することを可能にし、例えば、１つ以上の要素の標的組織への送達を可能にすることができる。
分岐、酸化、環化を含む修飾及び置換を有する天然種を含む非天然のリン脂質種、ならびにアルキンも企図される。いくつかの実施形態では、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合で置き換えられたアルケニル基）で官能化され得るか、またはそれに架橋され得る。適切な反応条件下で、アルキン基は、アジドに曝露されると、銅が触媒する環化付加反応を受け得る。かかる反応は、ナノ粒子組成物の脂質二重層を機能化して膜透過または細胞認識を促進するのに、またはナノ粒子組成物を標的化もしくはイメージング部分（例えば、色素）などの有用な成分に結合するのに有用であり得る。
リン脂質には、限定されないが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジグリセロール（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙ ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、及びホスファチジン酸などのグリセロリン脂質が含まれる。リンスフィンゴ脂質には、スフィンゴミエリンなどのリン脂質も含まれる。
いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、ＤＳＰＣの類似体またはバリアントである。いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、式（ＰＬ－Ｉ）：
Figure 2023513043000066
の化合物、またはその塩であり、式中、
各Ｒ１は、独立して、任意選択的に置換されたアルキルであるか、または任意選択的に２つのＲ１は、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換された単環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換された単環式ヘテロシクリルを形成するか、または任意選択的に３つのＲ１は、介在原子と一緒に接続されて、任意選択的に置換された二環式カルボシクリルもしくは任意選択的に置換された二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
Figure 2023513043000067
のものであり、
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンであり、任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択的に、－Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、または－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－で置き換えられ、
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２であり、
ただし、この化合物は、式：
Figure 2023513043000068
ではないことを条件とし、
Ｒ２の各事例は、独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである。
いくつかの実施形態では、リン脂質は、米国出願第６２／５２０，５３０号に記載のリン脂質のうちの１つ以上であり得る。
いくつかの実施形態では、リン脂質は、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＯＰＥを含む。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、ＤＳＰＣ及びＤＯＰＥの両方を含む。
ｉ）リン脂質頭部の修飾
いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾されたリン脂質頭部（例えば、修飾コリン基）を含む。いくつかの実施形態では、修飾された頭部を有するリン脂質は、修飾四級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つは、メチルではない。いくつかの実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つは、水素またはメチルではない。いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、以下の式：
Figure 2023513043000069
のうちの１つ、またはそれらの塩であり、式中、
各ｔは、独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｕは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
各ｖは、独立して、１、２、または３である。
いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＰＬ－Ｉ－ａ）：
Figure 2023513043000070
のもの、またはその塩である。
いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、グリセリド部分の代わりに環式部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明で有用なリン脂質は、グリセリド部分の位置に環式部分を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＰＬ－Ｉ－ｂ）：
Figure 2023513043000071
のもの、またはその塩である。
（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾された尾部を含む。いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用なリン脂質は、修飾された尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載されるように、「修飾尾部」は、より短いもしくはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つ以上のメチレンが環状もしくはヘテロ原子基によって置換された脂肪族鎖、またはそれらの任意の組み合わせを有する尾部であり得る。いくつかの実施形態では、（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＰＬ－Ｉ－ａ）のもの、またはその塩であり、式中、Ｒ２のうちの少なくとも１つの事例は、Ｒ２が任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキルである各事例であり、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位が、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－で置き換えられる。
いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、式（ＰＬ－Ｉ－ｃ）：
Figure 2023513043000072
のもの、またはその塩であり、式中、
各ｘは、独立して、０～３０（両端を含む）の整数であり、
各事例では、Ｇは、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、－Ｎ（ＲＮ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）－、－Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）－、－ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、－ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）－、または－Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ－からなる群から選択される。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、四級アミンをホスホリル基に結合するアルキル鎖は、エチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。したがって、いくつかの実施形態では、本発明で有用であるか、または潜在的に有用であるリン脂質は、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物であり、式中、ｎは、１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。いくつかの実施形態では、式（ＰＬ－Ｉ）の化合物は、以下の式：
Figure 2023513043000073
のうちの１つのもの、またはそれらの塩である。
代替的な脂質
いくつかの実施形態では、代替的な脂質が、本開示のリン脂質の代わりに使用される。かかる代替的な脂質の非限定的な例としては、以下が挙げられる。
Figure 2023513043000074
アジュバント
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の脂質を含むＬＮＰは、１つ以上のアジュバント、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４をさらに含み得る。
治療薬
脂質ナノ粒子（例えば、空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）は、１つ以上の治療剤及び／または予防剤を含み得る。開示は、治療剤及び／または予防剤を哺乳類の細胞または臓器に送達する方法、哺乳類の細胞において目的のポリペプチドを生成する方法、ならびに疾患または障害の治療を、それを必要とする哺乳類において行うための方法であって、治療剤及び／または予防剤を含む脂質ナノ粒子（例えば、空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）を哺乳類に投与すること、及び／または哺乳類の細胞を治療剤及び／または予防剤を含む脂質ナノ粒子（例えば、空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）と接触させることを含む、方法を特色とする。
治療剤及び／または予防剤は、生物学的活性物質を含み、代替的に「活性薬剤」と称される。治療剤及び／または予防剤は、一旦細胞または臓器に送達されると、細胞、臓器、または他の身体組織もしくは系に望ましい変化をもたらす物質であり得る。かかる種は、１つ以上の疾患、障害、または状態の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤は、特定の疾患、障害、または状態の治療に有用な小分子薬物である。
いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤は、免疫応答を誘発するワクチン、化合物（例えば、タンパク質もしくはポリペプチドもしくはペプチドをコードするポリヌクレオチドもしくは核酸分子、またはタンパク質もしくはポリペプチドもしくはタンパク質）、及び／または別の治療剤及び／または予防剤である。ワクチンは、感染症に関連する１つ以上の状態に対する免疫を提供することが可能である化合物及び調製物を含み、感染症に由来する抗原及び／またはエピトープをコードするｍＲＮＡを含み得る。ワクチンはまた、がん細胞に対する免疫応答を誘導する化合物及び調製物を含み、腫瘍細胞に由来する抗原、エピトープ、及び／またはネオエピトープをコードするｍＲＮＡを含み得る。いくつかの実施形態では、免疫応答を誘発することが可能なワクチン及び／または化合物は、開示の組成物を介して筋肉内投与される。
他の実施形態では、治療剤及び／または予防剤は、タンパク質、例えば、目的の天然に存在するタンパク質を増強または置き換えるのに必要とされるタンパク質である。かかるタンパク質またはポリペプチドは、天然に存在し得るか、または当該技術分野で既知の方法を使用して、例えば、半減期を増加させるように修飾され得る。例示的なタンパク質は、細胞内、膜貫通、または分泌タンパク質である。
ポリヌクレオチド及び核酸
いくつかの実施形態では、治療薬は、タンパク質発現を向上（すなわち、増加、刺激、上方制御）する薬剤である。タンパク質発現を向上するために使用することができる治療薬の種類の非限定的な例としては、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、ｓｓＤＮＡ及びＤＮＡ（例えば、発現ベクター）が挙げられる。タンパク質発現を上方制御する薬剤は、天然に存在するかまたは非天然に存在するタンパク質（例えば、半減期を改善するように修飾されたキメラタンパク質、または所望のアミノ酸変化を含むもの）の発現を上方制御し得る。例示的なタンパク質としては、細胞内、膜貫通、または分泌タンパク質、ペプチド、またはポリペプチドが挙げられる。
いくつかの実施形態では、治療薬は、ＤＮＡ治療薬である。ＤＮＡ分子は、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、または部分的に二本鎖ＤＮＡである、すなわち、二本鎖である部分と一本鎖である部分とを有する分子であり得る。場合によっては、ＤＮＡ分子は、三本鎖であるか、または部分的に三本鎖である、すなわち、三本鎖である部分と二本鎖である部分とを有する。ＤＮＡ分子は、環状ＤＮＡ分子または線状ＤＮＡ分子であり得る。
ＤＮＡ治療薬は、遺伝子を細胞に転写することが可能である、例えば、転写物をコードし、発現することができるＤＮＡ分子であり得る。他の実施形態では、ＤＮＡ分子は、合成分子、例えば、インビトロで生成される合成ＤＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子は、組換え分子である。非限定的な例示的なＤＮＡ治療薬としては、プラスミド発現ベクター及びウイルス発現ベクターが挙げられる。
本明細書に記載のＤＮＡ治療薬、例えばＤＮＡベクターは、様々な異なる特色を含み得る。本明細書に記載のＤＮＡ治療薬、例えばＤＮＡベクターは、非コードＤＮＡ配列を含み得る。例えば、ＤＮＡ配列は、遺伝子の少なくとも１つの調節要素、例えば、プロモーター、エンハンサー、終結要素、ポリアデニル化シグナル要素、スプライシングシグナル要素などを含み得る。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、イントロンである。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡ配列は、トランスポゾンである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、転写活性である遺伝子に操作可能に結合された非コードＤＮＡ配列を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載のＤＮＡ配列は、遺伝子に結合されていない非コードＤＮＡ配列を有し得、すなわち、非コードＤＮＡは、ＤＮＡ配列上の遺伝子を調節しない。
いくつかの実施形態では、開示の充填されたＬＮＰでは、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、核酸である。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、リボ核酸（ＲＮＡ）及びデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）からなる群から選択される。
例えば、いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬がＤＮＡである場合、ＤＮＡは、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、部分的二本鎖ＤＮＡ、三本鎖ＤＮＡ、及び部分的三本鎖ＤＮＡからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、環状ＤＮＡ、線状ＤＮＡ、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、開示の充填されたＬＮＰでは、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、プラスミド発現ベクター、ウイルス発現ベクター、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
例えば、いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬がＲＮＡである場合、ＲＮＡは、一本鎖ＲＮＡ、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、部分的二本鎖ＲＮＡ、及びそれらの混合物からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、環状ＲＮＡ、線状ＲＮＡ、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
例えば、いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬がＲＮＡである場合、ＲＮＡは、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴミル、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小さいヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ）、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術、ならびにそれらの混合物からなる群から選択される。
例えば、いくつかの実施形態では、治療薬及び／または予防薬がＲＮＡである場合、ＲＮＡは、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小さいヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及びそれらの混合物からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、修飾ｍＲＮＡ（ｍｍＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、マイクロＲＮＡ結合部位（ｍｉＲ結合部位）を組み込むｍＲＮＡである。さらに、いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び／または５’キャップ構造のうちの１つ以上を含む。
ｍＲＮＡは、天然または非天然に存在するｍＲＮＡであり得る。ｍＲＮＡは、以下に記載の１つ以上の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含み得、その場合、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と称され得る。本明細書に記載の「ヌクレオシド」は、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書では「核酸塩基」とも称される）と組み合わせた、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含有する化合物として定義される。本明細書に記載の「ヌクレオチド」は、ホスフェート基を含むヌクレオシドとして定義される。
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’－ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含み得る。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００）、または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含む、任意の好適な数の塩基対を含み得る。任意の数（例えば、すべて、いくつか、またはなし）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、正準種、置換、修飾、またはそれ以外の非天然に存在するものの類似体であり得る。ある特定の実施形態では、特定の核酸塩基のすべての種類が修飾され得る。いくつかの実施形態では、すべてのウラシルまたはウリジンは修飾される。すべての核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドが、例えば、すべてのウラシルまたはウリジンが修飾される場合、ｍＲＮＡは、例えば、「完全修飾された」ウラシルまたはウリジンと称され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、任意選択的にＫｏｚａｋ配列（Ｋｏｚａｋコンセンサス配列としても知られる）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。
５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって接合された２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然に存在するキャップ、非天然に存在するキャップもしくはキャップ類似体、または逆転防止キャップ類似体（ＡＲＣＡ）から選択され得る。キャップ種は、１つ以上の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含み得る。例えば、天然のｍＲＮＡキャップは、グアニンヌクレオチド、及び５’位で三リン酸結合によって接合された７位でメチル化されたグアニン（Ｇ）ヌクレオチド、例えば、一般にｍ７ＧｐｐｐＧと書かれるｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを含み得る。キャップ種はまた、逆転防止キャップ類似体であり得る。可能なキャップ種の非限定的な列挙としては、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが挙げられる。
ｍＲＮＡは、代わりに、または加えて、鎖終結ヌクレオシドを含み得る。例えば、鎖終結ヌクレオシドは、糖基の２’及び／または３’位で脱酸素化されたヌクレオシドが挙げられ得る。かかる種としては、３’デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’デオキシウリジン、３’デオキシシトシン、３’デオキシグアノシン、３’デオキシチミン、ならびに２’，３’ジデオキシアデノシン、２’，３’ジデオキシウリジン、２’，３’ジデオキシシトシン、２’，３’ジデオキシグアノシン、及び２’，３’ジデオキシチミンなどの２’，３’ジデオキシヌクレオシドが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、例えば３’末端でのｍＲＮＡへの鎖終結ヌクレオチドの組み込みは、ｍＲＮＡの安定化を生じ得る。
ｍＲＮＡは、代わりに、または加えて、ヒストンステムループなどのステムループを含み得る。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８つ、またはそれよりも多くのヌクレオチド塩基対を含み得る。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８つのヌクレオチド塩基対を含み得る。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置し得る。例えば、ステムループは、非翻訳領域（５’非翻訳領域または３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列、または尾部の中に、前に、または後に位置し得る。いくつかの実施形態では、ステムループは、翻訳の開始、翻訳効率、及び／または転写終結などのｍＲＮＡの１つ以上の機能（複数可）に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、代わりに、または加えて、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ポリＡ配列は、全体または大部分がアデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体で構成され得る。ポリＡ配列はまた、安定化ヌクレオチドまたは類似体を含み得る。例えば、ポリＡ配列は、安定化ヌクレオチドまたは類似体として、デオキシチミジン、例えば、反転（または逆結合）デオキシチミジン（ｄＴ）を含み得る。反転ｄＴ及び他の安定化ポリＡ配列修飾の使用に関する詳細は、例えば、ＷＯ２０１７／０４９２７５Ａ２に見出すことができ、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置する尾部であり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核輸出、翻訳、及び／または安定性に影響を及ぼし得る。
ｍＲＮＡは、代わりに、または加えて、マイクロＲＮＡ結合部位を含み得る。マイクロＲＮＡ結合部位（またはｍｉＲ結合部位）を使用して、様々な組織または細胞の種類のｍＲＮＡ発現を調節することができる。例示的な実施形態では、ｍｉＲ結合部位は、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲ配列に操作されて、同族ｍｉＲを発現する細胞または組織のｍＲＮＡの分解を調節、例えば向上する。かかる調節は、「標的外」発現ｉｒ ｍＲＮＡ、すなわち、望ましくない細胞または組織におけるインビボでの発現を調節または制御するのに有用である。ｍｉｒ結合部位の使用に関する詳細は、例えば、ＷＯ２０１７／０６２５１３Ａ２に見出すことができ、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域と、第２のコード領域と、を含み、第１と第２のコード領域との間の内部翻訳開始を可能にする内部リボソームエントリー部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有するか、または２Ａペプチドなどの自己切断ペプチドをコードする介在配列を有する、バイシストロニックｍＲＮＡである。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは、典型的には、同じベクターに由来する複数のタンパク質の発現を向上するために使用される。例えば、脳筋炎ウイルスＩＲＥＳを含む様々なＩＲＥＳ配列は、当該技術分野で既知かつ利用可能であり、使用され得る。
いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、１つ以上の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチド（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と称される）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照非修飾ｍＲＮＡと比較して、安定性の向上、細胞内保持、翻訳の向上、及び／またはｍＲＮＡが導入される細胞の自然免疫応答の実質的な誘発の欠如を含む有用な特性を有し得る。したがって、修飾ｍＲＮＡの使用は、タンパク質生成の効率、核酸の細胞内保持を向上し得、ならびに低減された免疫原性を有し得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、または４つ）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、またはそれよりも多く）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する非修飾ｍＲＮＡと比較して、ｍＲＮＡが導入される細胞の分解を低減し得る。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、シュードウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウリジン、６－アザ－ウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ウリジン（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウリジン（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウリジン、５－ハロ－ウリジン（例えば、５－ヨード－ウリジンまたは５－ブロモ－ウリジン）、３－メチル－ウリジン（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオーウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウリジン、１－プロピニル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－ウリジン（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチル－ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウリジン、２－メトキシ－４－チオ－ウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニーラミノメチル）－２－チオ－ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α－チオ－ウリジン、２’－Ｏ－メチル－ウリジン（Ｕｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’－Ｏ－メチル－シュードウリジン（ψｍ）、２－チオ－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチル－ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウリジン、デオキシチミジン、２’－Ｆ－アラ－ウリジン、２’－Ｆ－ウリジン、２’－ＯＨ－アラ－ウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウリジン）が含まれる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、５－アザ－シチジン、６－アザ－シチジン、シュードイソシチジン、３－メチル－シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シチジン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シチジン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シチジン、２－メトキシ－５－メチル－シチジン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α－チオ－シチジン、２’－Ｏ－メチル－シチジン（Ｃｍ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シチジン、２’－Ｆ－アラ－シチジン、２’－Ｆ－シチジン、及び２’－ＯＨ－アラ－シチジンが含まれる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、α－チオ－アデノシン、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデノシン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－スレオニルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデノシン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデノシン、２－メトキシ－アデノシン、α－チオ－アデノシン、２’－Ｏ－メチル－アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデノシン、８－アジド－アデノシン、２’－Ｆ－アラ－アデノシン、２’－Ｆ－アデノシン、２’－ＯＨ－ａｒａ－アデノシン、及びＮ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデノシンが含まれる。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアノシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、α－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ウィブトシン（ｙＷ）、ペルオキシウィブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ）、低修飾ヒドロキシウィブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７－デアザ－グアノシン、クエオシン（Ｑ）、エポキシクエオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－クエオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－クエオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアノシン、６－チオ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－グアノシン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアノシン、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアノシン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアノシン、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシン、１－メチル－６－チオ－グアノシン、Ｎ２－メチル－６－チオグアノシン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオグアノシン、α－チオ－グアノシン、２’－Ｏ－メチル－グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１－チオ－グアノシン、Ｏ６－メチル－グアノシン、２’－Ｆ－アラ－グアノシン、及び２’－Ｆ－グアノシンが含まれる。
いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、２－チオウリジン、４´－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－シュードウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５－メトキシウリジン、または２’－Ｏ－メチルウリジンである。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）であり、開示のｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）で完全に修飾される。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの７５～１００％に相当する。いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）は、ｍＲＮＡ中のウラシルの１００％に相当する。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジンが含まれる。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）が含まれる。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンが含まれる。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（ψ）、α－チオ－グアノシン、またはα－チオ－アデノシンである。いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、前述の修飾核酸塩基のうちの１つ以上の組み合わせ（例えば、前述の修飾核酸塩基のうちの２、３、または４つの組み合わせ）を含む。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、シュードウリジン（ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２－チオウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２’－Ｏ－メチルウリジン及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）及び５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
ある特定の実施形態では、開示のｍＲＮＡは、特定の修飾のために均一に修飾される（すなわち、完全に修飾される、配列全体を通して修飾される）。例えば、ｍＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾され得、このことは、ｍＲＮＡ配列中のすべてのウリジンまたはすべてのシトシンヌクレオシドが、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）または５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で置き換えられることを意味する。同様に、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基についての開示のｍＲＮＡは、上記のものなどの修飾残基での置換によって、均一に修飾され得る。
いくつかの実施形態では、開示のｍＲＮＡは、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）が修飾され得る。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、コード領域以外の領域が修飾され得る。例えば、いくつかの実施形態では、５’－ＵＴＲ及び／または３’－ＵＴＲが提供され、いずれかまたは両方が、独立して、１つ以上の異なるヌクレオシド修飾を含有し得る。かかる実施形態では、ヌクレオシド修飾はまた、コーディング領域にも存在し得る。
開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間の結合に対する修飾の組み合わせを含み得る。これらの組み合わせは、本明細書に記載される任意の１つ以上の修飾を含み得る。
単一修飾が列挙される場合、列挙されるヌクレオシドまたはヌクレオチドは、修飾されたそのＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣヌクレオチドまたはヌクレオシドの１００％に相当する。パーセンテージが列挙される場合、これらは、存在するＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ三リン酸の総量の、その特定のＡ、Ｕ、Ｇ、またはＣ三リン酸核酸塩基のパーセンテージを表す。例えば、組み合わせ：２５％の５－アミノアリル－ＣＴＰ＋７５％のＣＴＰ／２５％の５－メトキシ－ＵＴＰ＋７５％のＵＴＰは、シトシン三リン酸の２５％が５－アミノアリル－ＣＴＰであり、シトシンの７５％がＣＴＰであるが、ウラシルの２５％が５－メトキシＵＴＰであり、ウラシルの７５％がＵＴＰであるポリヌクレオチドを指す。修飾ＵＴＰが列挙されていない場合、天然に存在するＡＴＰ、ＵＴＰ、ＧＴＰ、及び／またはＣＴＰは、ポリヌクレオチド中に見出されるそれらのヌクレオチドの部位の１００％で使用される。この例では、ＧＴＰ及びＡＴＰヌクレオチドのすべてが非修飾のままである。
本開示のｍＲＮＡまたはその領域は、コドン最適化され得る。コドン最適化の方法は、当該技術分野で既知であり、以下の様々な目的、すなわち適切な折り畳みが確実となるように、宿主生物におけるコドン頻度を一致させる目的、ｍＲＮＡ安定性を増加させるかもしくは二次構造を低減するようにＧＣ含有量にバイアスをかける目的、遺伝子構築もしくは発現を損ない得る縦列型反復コドンもしくは塩基の連なりを最小化する目的、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズする目的、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去する目的、コードされたタンパク質における翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加する目的、タンパク質ドメインを追加、除去、もしくはシャッフルする目的、制限部位を挿入もしくは欠失する目的、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾する目的、タンパク質の様々なドメインが適切に折り畳まれることを可能にするように翻訳率を調整する目的、またはポリヌクレオチド内の問題の二次構造を低減もしくは排除する目的に有用であり得る。コドン最適化ツール、アルゴリズム、及びサービスは、当該技術分野で既知であり、非限定的な例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）からのサービス及び／または専有の方法が挙げられる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、最適化アルゴリズムを使用して、例えば、哺乳類の細胞内での発現を最適化するか、またはｍＲＮＡ安定性を向上させるように最適化される。
ある特定の実施形態では、本開示は、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列のうちのいずれかとの配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。
本開示のｍＲＮＡは、限定されないが、インビトロ転写（ＩＶＴ）及び合成方法を含む、当該技術分野で利用可能な手段によって生成され得る。酵素的（ＩＶＴ）、固相、液相、組み合わせた合成方法、小領域合成、及びライゲーション方法を利用することができる。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ＩＶＴ酵素合成方法を使用して作製される。したがって、本開示はまた、本明細書に記載のｍＲＮＡをインビトロで転写するために使用され得るポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、構築物、及びベクターを含む。
非天然修飾核酸塩基は、合成中または合成後に、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡに導入され得る。ある特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間結合、プリンもしくはピリミジン塩基、または糖上に存在し得る。特定の実施形態では、修飾は、ポリヌクレオチド鎖の末端に、またはポリヌクレオチド鎖内の任意の他の場所に、化学合成を用いてまたはポリメラーゼ酵素を用いて導入され得る。
酵素または化学的ライゲーション方法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはそれらの領域を、標的または送達剤、蛍光標識、液体、ナノ粒子などの異なる機能部分とコンジュゲートすることができる。
タンパク質発現を低減するための治療薬
いくつかの実施形態では、治療薬は、タンパク質発現を低減する（すなわち、低減する、阻害する、下方制御する）治療薬である。タンパク質発現を低減するために使用され得る治療薬の種類の非限定的な例としては、マイクロＲＮＡ結合部位（複数可）（ｍｉＲ結合部位）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンタゴミル、（ショートマー及びダイサー基質ＲＮＡを含む）小（短）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）分子、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ）、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術を組み込んだｍＲＮＡが挙げられる。
センサー配列及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
センサー配列としては、例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化ｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内因性核酸結合分子の擬似受容体として作用するように操作された人工結合部位、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。センサー配列の非限定的な例は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる米国公開第２０１４／０２００２６１号に記載されている。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む開示のポリリボヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））は、センサー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、センサー配列は、ｍｉＲＮＡ結合部位である。
ｍｉＲＮＡは、ポリリボヌクレオチドに結合し、安定性を低減するか、またはポリリボヌクレオチドの翻訳を阻害するかのいずれかによって遺伝子発現を下方制御する、１９～２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位の領域の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは、成熟ｍｉＲＮＡの２～８位または２～７位を含み得る。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、７つのヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～８）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ結合部位のシード相補部位は、ｍｉＲＮＡ１位と対向するアデノシン（Ａ）に隣接する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは、６つのヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２～７）を含み得、対応するｍｉＲＮＡ結合部位のシード相補部位は、ｍｉＲＮＡ１位と対向するアデノシン（Ａ）に隣接する。例えば、Ｇｒｉｍｓｏｎ Ａ，Ｆａｒｈ ＫＫ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ－Ｅｎｇｅｌｅ Ｐ，Ｌｉｍ ＬＰ，Ｂａｒｔｅｌ ＤＰ；Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．２００７ Ｊｕｌ ６；２７（１）：９１－１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングは、細胞または組織におけるｍｉＲＮＡの存在または不在を決定するために行われ得る。いくつかの実施形態では、開示のポリリボヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））は、１つ以上のマイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ配列、またはマイクロＲＮＡシードを含む。かかる配列は、それらの各々の内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる米国公開第ＵＳ２００５／０２６１２１８号及び米国公開第ＵＳ２００５／００５９００５号に教示されているものなどの任意の既知のマイクロＲＮＡに対応し得る。
本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」という用語は、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含む、ポリリボヌクレオチド内、例えば、ＤＮＡ内またはＲＮＡ転写物内で、ｍｉＲＮＡと相互作用するか、会合するか、または結合するためのｍｉＲＮＡのすべてのまたは１つの領域に対する十分な相補性を有する配列を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドをコードするＯＲＦを含む開示のポリリボヌクレオチドは、ｍｉＲＮＡ結合部位をさらに含む。例示的な実施形態では、ポリリボヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む。
ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリリボヌクレオチドのｍｉＲＮＡによって媒介される調節、例えば、ｍｉＲＮＡによって媒介されるポリリボヌクレオチドの翻訳の抑制または分解を促進するのに十分な相補性の程度を指す。開示の例示的な態様では、ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリリボヌクレオチドのｍｉＲＮＡによって媒介される分解、例えば、ｍｉＲＮＡによって誘導されるＲＮＡ誘発サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）によって媒介されるｍＲＮＡ切断を促進するのに十分な相補性の程度を指す。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９～２５ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列、１９～２３ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドｍｉＲＮＡ配列に対する相補性を有し得る。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部分のみ、例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の全長の１、２、３、または４ヌクレオチド未満の部分に対して相補的であり得る。いくつかの実施形態では、所望の調節は、ｍＲＮＡ分解である。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、全面的なまたは完全な相補性（例えば、天然に存在するｍｉＲＮＡの長さのすべてのまたはかなりの部分にわたる全面的な相補性または完全な相補性）を有する。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡ分解は、全面的なまたは完全な相補性を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との相補性（例えば、部分的なまたは完璧な相補性）を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との完璧な相補性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との相補性（例えば、部分的なまたは完璧な相補性）を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との完全な相補性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、１、２、または３つのヌクレオチド置換、末端付加、及び／または切断以外は、ｍｉＲＮＡ配列との完全な相補性を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同じ長さである。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、または両方における対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヌクレオチド（複数可）短い。さらに他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、または両方における対応するマイクロＲＮＡよりも２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、依然として、ｍｉＲＮＡ結合部位のうちの１つ以上を組み込むｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡの翻訳を防止することが可能である。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、Ｄｉｃｅｒを含有する活性ＲＩＳＣの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の実施形態では、ＲＩＳＣにおける対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合は、ｍｉＲＮＡ結合部位を含有するｍＲＮＡを分解するか、またはｍＲＮＡが翻訳されることを防止する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリリボヌクレオチドを切断するように、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有する。いくつかの実施形態では、ＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリリボヌクレオチドに不安定性を誘発するように、ｍｉＲＮＡ結合部位は、不完全な相補性を有するｍｉＲＮＡを含む。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリリボヌクレオチドの転写を抑制するように、ｍｉＲＮＡ結合部位は、不完全な相補性を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡとの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個のミスマッチ（複数可）を有する。
いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１個の連続的なヌクレオチドに対してそれぞれ、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１個の連続的なヌクレオチド相補性を有する。
問題のｍｉＲＮＡが入手可能であることを条件として、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を開示のポリリボヌクレオチドに操作することによって、分解または翻訳の低減のためにポリリボヌクレオチドを標的化することができる。これは、ポリリボヌクレオチドの送達時のオフターゲット効果を低減し得る。いくつかの実施形態では、開示のポリリボヌクレオチドが組織または細胞に送達されることが意図されず、そこで終わる場合、ｍｉＲＮＡの１つまたは複数の結合部位が、ポリリボヌクレオチドの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作される場合、組織または細胞に豊富に存在するｍｉＲＮＡは、目的の遺伝子の発現を阻害することができる。
逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位を、それらが天然に存在するポリリボヌクレオチド配列から除去して、特定の組織におけるタンパク質発現を増加させることができる。いくつかの実施形態では、特定のｍｉＲＮＡの結合部位をポリリボヌクレオチドから除去して、ｍｉＲＮＡを含有する組織または細胞におけるタンパク質発現を改善することができる。
一実施形態では、開示のポリリボヌクレオチドは、細胞傷害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療剤を、限定されないが正常細胞及び／またはがん細胞などの特定の細胞に誘導するために、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含み得る。別の実施形態では、開示のポリリボヌクレオチドは、細胞傷害性または細胞保護性ｍＲＮＡ治療剤を、限定されないが正常細胞及び／またはがん細胞などの特定の細胞に誘導するために、５’－ＵＴＲ及び／または３’－ＵＴＲに２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含み得る。
複数の組織における発現の調節は、１つ以上のｍｉＲＮＡ結合部位の導入または除去を通じて達成することができる。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去するか、または挿入するかの決定は、ｍｉＲＮＡ発現パターン及び／または疾患におけるそれらのプロファイルに基づいて行うことができる。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、及びそれらの発現パターン、ならびに生物学における役割の同定について報告されている（例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｏｎａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ２０１０ １１：９４３－９４９、Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１－１７６、Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ ａｎｄ Ｒａｏ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１２ ２６：４０４－４１３（２０１１ Ｄｅｃ ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）、Ｂａｒｔｅｌ Ｃｅｌｌ ２００９ １３６：２１５－２３３、Ｌａｎｄｇｒａｆ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，２００７ １２９：１４０１－１４１４、Ｇｅｎｔｎｅｒ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２ ８０：３９３－４０３、及びすべての参照文献）。
ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国公開第２０１４／０２００２６１号、同第２００５／０２６１２１８号、及び同第２００５／００５９００５号に記載の非限定的な例を含む、任意の既知の配列に対応し得る。
ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを調節し、それによってタンパク質発現を調節することが知られている組織の例としては、限定されないが、肝臓（ｍｉＲ－１２２）、筋肉（ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ－１７－９２、ｍｉＲ－１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１６、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２４、ｍｉＲ－２７）、脂肪組織（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ－１ｄ、ｍｉＲ－１４９）、腎臓（ｍｉＲ－１９２、ｍｉＲ－１９４、ｍｉＲ－２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ－７、ｍｉＲ－１３３、ｍｉＲ－１２６）が挙げられる。
具体的には、ｍｉＲＮＡは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）、マクロファージ、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラー細胞などの免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）において差次的に発現することが知られている。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫性、感染に対する免疫応答、炎症、ならびに遺伝子治療及び組織／臓器移植後の望ましくない免疫応答が関わる。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡはまた、造血細胞（免疫細胞）の発達、増殖、分化、及びアポトーシスの多くの局面を調節する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ－１４２及びｍｉＲ－１４６は、特に骨髄樹状細胞に豊富に存在する免疫細胞において排他的に発現する。ポリリボヌクレオチドに対する免疫応答は、ポリリボヌクレオチドの３’－ＵＴＲにｍｉＲ－１４２結合部位を付加することによって遮断することができ、組織及び細胞におけるより安定した遺伝子導入を可能にすることが示されている。ｍｉＲ－１４２は、抗原提示細胞において外因性ポリリボヌクレオチドを効率的に分解し、形質導入細胞の細胞傷害性排除を抑制する（例えば、各々全体が、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｎｎｏｎｉ Ａ ｅｔ ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００９，１１４，５１５２－５１６１、Ｂｒｏｗｎ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ ｍｅｄ．２００６，１２（５），５８５－５９１、Ｂｒｏｗｎ ＢＤ，ｅｔ ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（１３）：４１４４－４１５２）。
抗原によって媒介される免疫応答は、外来抗原が生物に進入した場合、抗原提示細胞によって処理され、抗原提示細胞の表面に表示される外来抗原によって引き起こされる免疫応答を指し得る。Ｔ細胞は、提示された抗原を認識し、抗原を発現する細胞の細胞傷害性排除を誘発することができる。
開示のポリリボヌクレオチドの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにｍｉＲ－１４２結合部位を導入することによって、ポリリボヌクレオチドの送達後、ｍｉＲ－１４２によって媒介される分解を通じて抗原提示細胞における遺伝子発現を選択的に抑制し、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）における抗原提示を制限し、それによって、抗原によって媒介される免疫応答を防止することができる。次いで、ポリリボヌクレオチドは、細胞傷害性排除を引き起こすことなく、標的組織または細胞内で安定して発現される。
一実施形態では、免疫細胞、特に抗原提示細胞において発現することが知られているｍｉＲＮＡの結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに操作して、ｍｉＲＮＡによって媒介されるＲＮＡ分解を通じて抗原提示細胞におけるポリリボヌクレオチドの発現を抑制し、抗原によって媒介される免疫応答を抑制することができる。ポリリボヌクレオチドの発現は、免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡが発現しない非免疫細胞に維持される。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性応答を防止するために、任意のｍｉＲ－１２２結合部位が除去され得、ｍｉＲ－１４２（及び／またはｍｉｒＲ－１４６）結合部位が開示のポリリボヌクレオチドの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに操作され得る。
ＡＰＣ及びマクロファージにおける選択的分解及び抑制をさらに推進するために、開示のポリリボヌクレオチドは、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲのさらなる負の調節要素を、単独で、またはｍｉＲ－１４２及び／またはｍｉＲ－１４６の結合部位との組み合わせのいずれかで含み得る。非限定的な例として、さらなる負の調節要素は、構成的分解要素（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ Ｄｅｃａｙ Ｅｌｅｍｅｎｔ）（ＣＤＥ）である。
免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ａ－３ｐ、ｈｓａ－７ａ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｃ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｅ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｇ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｇ－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｉ－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｉ－５ｐ、ｍｉＲ－１０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１１８４、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－１－－３ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－２－－５ｐ、ｈｓａ－ｌｅｔ－７ｆ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２７９、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－５ｐ、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－１４２－５ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１４７ａ、ｍｉＲ－１４７ｂ、ｍｉＲ－１４８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１４８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５０－３ｐ、ｍｉＲ－１５０－５ｐ、ｍｉＲ－１５１ｂ、ｍｉＲ－１５５－３ｐ、ｍｉＲ－１５５－５ｐ、ｍｉＲ－１５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１６－１－３ｐ、ｍｉＲ－１６－２－３ｐ、ｍｉＲ－１６－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１８１ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１８２－３ｐ、ｍｉＲ－１８２－５ｐ、ｍｉＲ－１９７－３ｐ、ｍｉＲ－１９７－５ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－５ｐ、ｍｉＲ－２２３－３ｐ、ｍｉＲ－２２３－５ｐ、ｍｉＲ－２２１－３ｐ、ｍｉＲ－２２１－５ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２４－１－５ｐ，ｍｉＲ－２４－２－５ｐ、ｍｉＲ－２４－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－１－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－２６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２７ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２７ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２７ｂ－３ｐ，ｍｉＲ－２７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２８－３ｐ、ｍｉＲ－２８－５ｐ、ｍｉＲ－２９０９、ｍｉＲ－２９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｂ－１－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｂ－２－５ｐ、ｍｉＲ－２９ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２９ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－３３１－５ｐ、ｍｉＲ－３３９－３ｐ、ｍｉＲ－３３９－５ｐ、ｍｉＲ－３４５－３ｐ、ｍｉＲ－３４５－５ｐ、ｍｉＲ－３４６、ｍｉＲ－３４ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３４ａ－５ｐ、、ｍｉＲ－３６３－３ｐ、ｍｉＲ－３６３－５ｐ、ｍｉＲ－３７２、ｍｉＲ－３７７－３ｐ、ｍｉＲ－３７７－５ｐ、ｍｉＲ－４９３－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－５ｐ、ｍｉＲ－５４２、ｍｉＲ－５４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ５４８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｉ、ｍｉＲ－５４８ｊ、ｍｉＲ－５４８ｎ、ｍｉＲ－５７４－３ｐ、ｍｉＲ－５９８、ｍｉＲ－７１８、ｍｉＲ－９３５、ｍｉＲ－９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－９９ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９９ｂ－５ｐが挙げられる。さらに、マイクロアレイハイブリダイゼーション及びミクロトーム分析（例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｉｍａ ＤＤ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６：ｅ１１８－ｅ１２７、Ｖａｚ Ｃ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，１１，２８８）を通じて、新規のｍｉＲＮＡを免疫細胞内で同定することができる。
肝臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１０７、ｍｉＲ－１２２－３ｐ、ｍｉＲ－１２２－５ｐ、ｍｉＲ－１２２８－３ｐ、ｍｉＲ－１２２８－５ｐ、ｍｉＲ－１２４９、ｍｉＲ－１２９－５ｐ、ｍｉＲ－１３０３、ｍｉＲ－１５１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１５２、ｍｉＲ－１９４－３ｐ、ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－５５７、ｍｉＲ－５８１、ｍｉＲ－９３９－３ｐ、及びｍｉＲ－９３９－５ｐが挙げられる。任意の肝臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、肝臓におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。肝臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
肺で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｍｉＲ－１２７－３ｐ、ｍｉＲ－１２７－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１３４、ｍｉＲ－１８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１８ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２４－１－５ｐ、ｍｉＲ－２４－２－５ｐ、ｍｉＲ－２４－３ｐ、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－３２－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－３ｐ、ｍｉＲ－３３７－５ｐ、ｍｉＲ－３８１－３ｐ、及びｍｉＲ－３８１－５ｐが挙げられる。任意の肺特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、肺におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。肺特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
心臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１４９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－５ｐ、ｍｉＲ－１８６－３ｐ、ｍｉＲ－１８６－５ｐ、ｍｉＲ－２０８ａ、ｍｉＲ－２０８ｂ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－３２０、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－４５１ｂ、ｍｉＲ－４９９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－４９９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－４９９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－４９９ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－７４４－３ｐ、ｍｉＲ－７４４－５ｐ、ｍｉＲ－９２ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９２ｂ－５ｐが挙げられる。任意の心臓特異的マイクロＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、心臓におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。心臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
神経系で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１２４－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－１－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１２５ｂ－５ｐ，ｍｉＲ－１２７１－３ｐ、ｍｉＲ－１２７１－５ｐ、ｍｉＲ－１２８、ｍｉＲ－１３２－５ｐ、ｍｉＲ－１３５ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３５ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１３５ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１３５ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１３７、ｍｉＲ－１３９－５ｐ、ｍｉＲ－１３９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－３ｐ、ｍｉＲ－１４９－５ｐ、ｍｉＲ－１５３、ｍｉＲ－１８１ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－１８１ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－１８３－３ｐ、ｍｉＲ－１８３－５ｐ、ｍｉＲ－１９０ａ、ｍｉＲ－１９０ｂ、ｍｉＲ－２１２－３ｐ、ｍｉＲ－２１２－５ｐ、ｍｉＲ－２１９－１－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－２－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ，ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－１－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－２－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３２９、ｍｉＲ－３４２－３ｐ、ｍｉＲ－３６６５、ｍｉＲ－３６６６、ｍｉＲ－３８０－３ｐ、ｍｉＲ－３８０－５ｐ、ｍｉＲ－３８３、ｍｉＲ－４１０、ｍｉＲ－４２５－３ｐ、ｍｉＲ－４２５－５ｐ、ｍｉＲ－４５４－３ｐ、ｍｉＲ－４５４－５ｐ、ｍｉＲ－４８３、ｍｉＲ－５１０、ｍｉＲ－５１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－５７１、ｍｉＲ－７－１－３ｐ、ｍｉＲ－７－２－３ｐ、ｍｉＲ－７－５ｐ、ｍｉＲ－８０２、ｍｉＲ－９２２、ｍｉＲ－９－３ｐ、及びｍｉＲ－９－５ｐが挙げられる。さらに、神経系に豊富なｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１３２－３ｐ、ｍｉＲ－１４８ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１４８ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１５１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１２－３ｐ、ｍｉＲ－２１２－５ｐ、ｍｉＲ－３２０ｂ、ｍｉＲ－３２０ｅ、ｍｉＲ－３２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３２４－５ｐ、ｍｉＲ－３２５、ｍｉＲ－３２６、ｍｉＲ－３２８、ｍｉＲ－９２２を含む、ニューロンで特異的に発現するもの、ならびに限定されないが、ｍｉＲ－１２５０、ｍｉＲ－２１９－１－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－２－３ｐ、ｍｉＲ－２１９－５ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０６５－３ｐ、ｍｉＲ－３０６５－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｅ－５ｐ、ｍｉＲ－３２－５ｐ、ｍｉＲ－３３８－５ｐ、及びｍｉＲ－６５７を含む、グリア細胞において特異的に発現するものが挙げられる。任意のＣＮＳ特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、神経系におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。神経系特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
膵臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１０５－３ｐ、ｍｉＲ－１０５－５ｐ、ｍｉＲ－１８４、ｍｉＲ－１９５－３ｐ、ｍｉＲ－１９５－５ｐ、ｍｉＲ－１９６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１４－３ｐ、ｍｉＲ－２１４－５ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３７５、ｍｉＲ－７－１－３ｐ、ｍｉＲ－７－２－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－３ｐ、ｍｉＲ－４９３－５ｐ、及びｍｉＲ－９４４が挙げられる。任意の膵臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、膵臓におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。膵臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
腎臓で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｍｉＲ－１２２－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１９２－３ｐ、ｍｉＲ－１９２－５ｐ、ｍｉＲ－１９４－３ｐ、ｍｉＲ－１９４－５ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２０４－３ｐ、ｍｉＲ－２０４－５ｐ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２１６ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２１６ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－３ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－１－３ｐ、ｍｉＲ－３０ｃ－２－３ｐ、ｍｉＲ３０ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３２４－３ｐ、ｍｉＲ－３３５－３ｐ、ｍｉＲ－３３５－５ｐ、ｍｉＲ－３６３－３ｐ、ｍｉＲ－３６３－５ｐ、及びｍｉＲ－５６２が挙げられる。任意の腎臓特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、腎臓におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。腎臓特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
筋肉内で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｌｅｔ－７ｇ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－１、ｍｉＲ－１２８６、ｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１４０－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－３ｐ、ｍｉＲ－１４３－５ｐ、ｍｉＲ－１４５－３ｐ、ｍｉＲ－１４５－５ｐ、ｍｉＲ－１８８－３ｐ、ｍｉＲ－１８８－５ｐ、ｍｉＲ－２０６、ｍｉＲ－２０８ａ、ｍｉＲ－２０８ｂ、ｍｉＲ－２５－３ｐ、及びｍｉＲ－２５－５ｐが挙げられる。任意の筋肉特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、筋肉におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。筋肉特異的ｍｉＲＮＡ結合部位は、単独で、またはさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）ｍｉＲＮＡ結合部位と組み合わせて、開示のポリリボヌクレオチドに操作することができる。
ｍｉＲＮＡはまた、限定されないが、内皮細胞、上皮細胞、及び脂肪細胞などの異なる種類の細胞において差次的に発現する。
内皮細胞で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｌｅｔ－７ｂ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１００－３ｐ、ｍｉＲ－１００－５ｐ、ｍｉＲ－１０１－３ｐ、ｍｉＲ－１０１－５ｐ、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１２６－５ｐ、ｍｉＲ－１２３６－３ｐ、ｍｉＲ－１２３６－５ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１７－５ｐ、ｍｉＲ－１７－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１８ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９ａ－３ｐ、ｍｉＲ－１９ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－１－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－２－５ｐ、ｍｉＲ－１９ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２０ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２１７、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２１－３ｐ、ｍｉＲ－２１－５ｐ、ｍｉＲ－２２１－３ｐ、ｍｉＲ－２２１－５ｐ、ｍｉＲ－２２２－３ｐ、ｍｉＲ－２２２－５ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２９６－５ｐ、ｍｉＲ－３６１－３ｐ、ｍｉＲ－３６１－５ｐ、ｍｉＲ－４２１、ｍｉＲ－４２４－３ｐ、ｍｉＲ－４２４－５ｐ、ｍｉＲ－５１３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－１－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－２－５ｐ、ｍｉＲ－９２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－９２ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９２ｂ－５ｐが挙げられる。多くの新規のｍｉＲＮＡは、ディープシーケンシング分析から内皮細胞で発見される（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｖｏｅｌｌｅｎｋｌｅ Ｃ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ，２０１２，１８，４７２－４８４）。任意の内皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、内皮細胞におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。
上皮細胞で発現することが知られているｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｌｅｔ－７ｂ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４６、ｍｉＲ－２００ａ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ａ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３３８－３ｐ、ｍｉＲ－４２９、ｍｉＲ－４５１ａ、ｍｉＲ－４５１ｂ、ｍｉＲ－４９４、ｍｉＲ－８０２、及びｍｉＲ－３４ａ、ｍｉＲ－３４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３４ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－４４９ａ、ｍｉＲ－４４９ｂ－３ｐ、呼吸器の線毛上皮細胞に特異的なｍｉＲ－４４９ｂ－５ｐ、肺上皮細胞に特異的なｌｅｔ－７ファミリー、腎上皮細胞に特異的なｍｉＲ－１３３ａ、ｍｉＲ－１３３ｂ、ｍｉＲ－１２６、ｍｉＲ－３８２－３ｐ、ｍｉＲ－３８２－５ｐ、及び角膜上皮細胞に特異的なｍｉＲ－７６２が挙げられる。任意の上皮細胞特異的ｍｉＲＮＡからのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドに導入するか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、上皮細胞におけるポリリボヌクレオチドの発現を調節することができる。
加えて、多くのグループのｍｉＲＮＡは、胚性幹細胞に豊富であり、幹細胞の自己更新、ならびに神経細胞、心細胞、造血細胞、皮膚細胞、骨形成細胞、及び筋細胞などの様々な細胞系統の発達及び／または分化を制御する（例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｕｐｐｕｓａｍｙ ＫＴ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２０１３，１３（５），７５７－７６４、Ｖｉｄｉｇａｌ ＪＡ ａｎｄ Ｖｅｎｔｕｒａ Ａ，Ｓｅｍｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．２０１２，２２（５－６），４２８－４３６、Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９，４：ｅ７１９２、Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８，６１０－６２１、Ｙｏｏ ＪＫ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄｅｖ．２０１２，２１（１１），２０４９－２０５７）。胚性幹細胞に豊富に存在するｍｉＲＮＡとしては、限定されないが、ｌｅｔ－７ａ－２－３ｐ、ｌｅｔ－ａ－３ｐ、ｌｅｔ－７ａ－５ｐ、ｌｅｔ７ｄ－３ｐ、ｌｅｔ－７ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－１０３ａ－２－３ｐ、ｍｉＲ－１０３ａ－５ｐ、ｍｉＲ－１０６ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－１０６ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－１２４６、ｍｉＲ－１２７５、ｍｉＲ－１３８－１－３ｐ、ｍｉＲ－１３８－２－３ｐ、ｍｉＲ－１３８－５ｐ、ｍｉＲ－１５４－３ｐ、ｍｉＲ－１５４－５ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－２００ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－２９０、ｍｉＲ－３０１ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０１ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ａ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｃ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｄ－３ｐ、ｍｉＲ－３０２ｄ－５ｐ、ｍｉＲ－３０２ｅ、ｍｉＲ－３６７－３ｐ、ｍｉＲ－３６７－５ｐ、ｍｉＲ－３６９－３ｐ、ｍｉＲ－３６９－５ｐ、ｍｉＲ－３７０、ｍｉＲ－３７１、ｍｉＲ－３７３、ｍｉＲ－３８０－５ｐ、ｍｉＲ－４２３－３ｐ、ｍｉＲ－４２３－５ｐ、ｍｉＲ－４８６－５ｐ、ｍｉＲ－５２０ｃ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｅ、ｍｉＲ－５４８ｆ、ｍｉＲ－５４８ｇ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｇ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｉ、ｍｉＲ－５４８ｋ、ｍｉＲ－５４８ｌ、ｍｉＲ－５４８ｍ、ｍｉＲ－５４８ｎ、ｍｉＲ－５４８ｏ－３ｐ、ｍｉＲ－５４８ｏ－５ｐ、ｍｉＲ－５４８ｐ、ｍｉＲ－６６４ａ－３ｐ、ｍｉＲ－６６４ａ－５ｐ、ｍｉＲ－６６４ｂ－３ｐ、ｍｉＲ－６６４ｂ－５ｐ、ｍｉＲ－７６６－３ｐ、ｍｉＲ－７６６－５ｐ、ｍｉＲ－８８５－３ｐ、ｍｉＲ－８８５－５ｐ，ｍｉＲ－９３－３ｐ、ｍｉＲ－９３－５ｐ、ｍｉＲ－９４１，ｍｉＲ－９６－３ｐ、ｍｉＲ－９６－５ｐ、ｍｉＲ－９９ｂ－３ｐ、及びｍｉＲ－９９ｂ－５ｐが挙げられる。多くの予測される新規のｍｉＲＮＡが、ヒト胚性幹細胞におけるディープシーケンシングによって発見される（例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｉｎ ＲＤ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ，２００８，１８，６１０－６２１、Ｇｏｆｆ ＬＡ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２００９，４：ｅ７１９２、Ｂａｒ Ｍ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，２００８，２６，２４９６－２５０５）。
一実施形態では、胚性幹細胞特異的ｍｉＲＮＡの結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドの３’ＵＴＲに含めるか、またはポリリボヌクレオチドから除去して、胚性幹細胞の発達及び／または分化を調節するか、変性状態（例えば、変性疾患）における幹細胞の老化を阻害するか、または疾患状態における幹細胞（例えば、がん幹細胞）の老化及びアポトーシスを刺激することができる。
様々ながん細胞／組織及び他の疾患におけるｍｉＲＮＡの差異的発現をプロファイルするために、多くのｍｉＲＮＡ発現試験が行われている。いくつかのｍｉＲＮＡは、ある特定のがん細胞で異常に過剰発現し、他のｍｉＲＮＡは、低発現する。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡは、がん細胞（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＵＳ２０１３／００５９０１５、ＵＳ２０１３／００４２３３３、ＷＯ２０１１／１５７２９４）、がん幹細胞（ＵＳ２０１２／００５３２２４）；膵臓癌及び膵臓疾患（ＵＳ２００９／０１３１３４８、ＵＳ２０１１／０１７１６４６、ＵＳ２０１０／０２８６２３２、ＵＳ８３８９２１０）、ぜんそく及び炎症（ＵＳ８４１５０９６）；前立腺癌（ＵＳ２０１３／００５３２６４）、肝細胞癌（ＷＯ２０１２／１５１２１２、ＵＳ２０１２／０３２９６７２、ＷＯ２００８／０５４８２８、ＵＳ８２５２５３８）、肺癌細胞（ＷＯ２０１１／０７６１４３、ＷＯ２０１３／０３３６４０、ＷＯ２００９／０７０６５３、ＵＳ２０１０／０３２３３５７）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＷＯ２０１３／０１１３７８）、結腸直腸癌細胞（ＷＯ２０１１／０２８１７５６、ＷＯ２０１１／０７６１４２）、がん陽性リンパ節（ＷＯ２００９／１００４３０、ＵＳ２００９／０２６３８０３）、鼻咽頭癌（ＥＰ２１１２２３５）、慢性閉塞性肺疾患（ＵＳ２０１２／０２６４６２６、ＵＳ２０１３／００５３２６３）、甲状腺癌（ＷＯ２０１３／０６６６７８）；卵巣癌細胞（ＵＳ２０１２／０３０９６４５、ＷＯ２０１１／０９５６２３）、乳癌細胞（ＷＯ２００８／１５４０９８、ＷＯ２００７／０８１７４０、ＵＳ２０１２／０２１４６９９）、白血病及びリンパ腫（ＷＯ２００８／０７３９１５、ＵＳ２００９／００９２９７４、ＵＳ２０１２／０３１６０８１、ＵＳ２０１２／０２８３３１０、ＷＯ２０１０／０１８５６３で差次的に発現する（各々全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
非限定的な例として、ある特定のがん及び／または腫瘍細胞で過剰発現するｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ結合部位を、開示のポリリボヌクレオチドの３’ＵＴＲから除去して、がん細胞で過剰発現したｍｉＲＮＡによって抑制された発現を回復させ、したがって、応答生物学的機能、例えば、転写刺激及び／または抑制、細胞周期停止、アポトーシス、ならびに細胞死を改善することができる。ｍｉＲＮＡ発現が上方制御されていない正常な細胞及び組織は、影響を受けないままであろう。
ＭｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－１３２）はまた、血管新生などの複雑な生物学的プロセスを調節することができる（Ａｎａｎｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０１１ １８：１７１－１７６）。開示のポリリボヌクレオチドでは、ポリリボヌクレオチドの発現を生物学的に関連する細胞型または関連する生物学的プロセスに適合させるために、かかるプロセスが関わるｍｉＲＮＡ結合部位を除去または導入することができる。この背景では、開示のポリリボヌクレオチドは、補助栄養性ポリリボヌクレオチドとして定義される。
ペプチド／ポリペプチド治療薬
いくつかの実施形態では、治療薬は、ペプチド治療薬である。いくつかの実施形態では、治療薬は、ポリペプチド治療薬である。
いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、天然由来であり、例えば、天然源から単離される。他の実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、合成分子、例えば、インビトロで生成される合成ペプチドまたはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、組換え分子である。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、キメラ分子である。いくつかの実施形態では、ペプチドまたはポリペプチドは、融合分子である。いくつかの実施形態では、組成物のペプチドまたはポリペプチド治療薬は、天然に存在するペプチドまたはポリペプチドである。いくつかの実施形態では、組成物のペプチドまたはポリペプチド治療薬は、天然に存在するペプチドまたはポリペプチドの修飾されたバージョンである（例えば、その野生型の天然に存在するペプチドまたはポリペプチドの対応物と比較して、３未満、５未満、１０未満、１５未満、２０未満、または２５未満のアミノ置換、欠失、または付加を含有する）。
いくつかの実施形態では、開示の充填されたＬＮＰでは、１つ以上の治療薬及び／または予防薬は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。
ゲノム編集技術
いくつかの実施形態では、核酸は、ゲノム編集技術に好適である。
いくつかの実施形態では、ゲノム編集技術は、クラスター化された規則的な間隔の短い回文反復（ＣＲＩＳＰＲ）または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）である。
いくつかの実施形態では、核酸は、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）、及びＤＮＡ修復テンプレートからなる群から選択されるゲノム編集技術に好適な少なくとも１つの核酸である。
ワクチン
いくつかの実施形態では、治療剤及び／または予防剤は、ほぼすべての目的のがんタンパク質またはその断片を生成する身体の細胞機構を安全に導くことができるＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））のリボ核酸（ＲＮＡ）がんワクチンである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、修飾ＲＮＡである。本開示のＲＮＡワクチンは、例えば、挿入変異誘発の可能性のリスクを伴わずに、細胞及び体液性免疫の両方を含む、がんに対するバランスの取れた免疫応答を誘発するために使用され得る。
ＲＮＡワクチンは、がんの有病率、または満たされていない医療ニーズの程度もしくはレベルに応じて、様々な状況で利用することができる。ＲＮＡワクチンは、様々な段階または程度の転移性のがんを治療及び／または防止するために利用することができる。ＲＮＡワクチンは、がんワクチンを含む代替的な抗がん療法よりもはるかに大きい抗体力価を生成し、応答を早期に生成するという点で優れた特性を有する。理論に拘束されることを望まないが、ＲＮＡワクチンは天然の細胞機構を受け入れるので、ｍＲＮＡポリヌクレオチドとしてのＲＮＡワクチンは、翻訳時に適切なタンパク質立体構造を生成するようにより良好に設計されていると考えられる。エクスビボで製造され、望ましくない細胞応答を引き起こし得る従来のワクチンとは異なり、ＲＮＡワクチンは、より天然の方式で細胞系に提示される。
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのがん抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチド、またはその免疫原性断片（例えば、がんに対する免疫応答を誘発することが可能な免疫原性断片）を含むがんワクチンを提供する。他の実施形態は、がんに対する免疫応答を誘発すること可能な２つ以上の抗原またはエピトープをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
本本発明は、いくつかの態様において、がん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡのワクチン、及び免疫チェックポイント調節因子をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡのワクチンである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節因子は、阻害性チェックポイントポリペプチドである。いくつかの実施形態では、阻害性チェックポイントポリペプチドは、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、及びＬＡＧ３からなる群から選択される分子に特異的に結合する抗体またはその断片である。いくつかの実施形態では、阻害性チェックポイントポリペプチドは、抗ＣＴＬＡ４または抗ＰＤ１抗体である。任意選択的に、ワクチンは、脂質ナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、がん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡのワクチンが、対象に投与される。他の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、３～１０週間後である。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、４週間後に投与される。
他の態様では、本発明は、少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡの個別化されたがんワクチン、及び脂質ナノ粒子担体であり、少なくとも２つのがん抗原は、患者特異的がん抗原である。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、５０～２００ｎｍの平均直径を有する。
さらに他の態様では、本発明は、少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡの個別化されたがんワクチンであり、少なくとも２つのがん抗原は、患者の代表的な抗原である。いくつかの実施形態では、患者の抗原は、患者のエクソソームで同定された抗原である。いくつかの実施形態では、単一のｍＲＮＡは、がん抗原をコードする。他の実施形態では、複数のｍＲＮＡががん抗原をコードしている。
各ｍＲＮＡは、他の実施形態において、５～１０個のがん抗原または単一のがん抗原をコードし得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２～１００個のがん抗原をコードする。他の実施形態では、ｍＲＮＡは、１０～１００、２０～１００、５０～１００、１００～２００、３００～４００、５００～６００、６００～７００、７００～８００、９００～１，０００、または１，０００～１０，０００個のがん抗原をコードする。
いくつかの実施形態では、
ａ）各がん抗原をコードするｍＲＮＡは、切断感受性部位によって離散している、
ｂ）各がん抗原をコードするｍＲＮＡは、リンカーなしで互いに直接結合している、
ｃ）各がん抗原をコードするｍＲＮＡは、単一のヌクレオチドリンカーで互いに結合している、
ｄ）各がん抗原は、２５～３５個のアミノ酸を含み、中心に位置するＳＮＰ変異を含む、
ｅ）がん抗原の少なくとも３０％は、対象からのクラスＩ ＭＨＣ分子に対して最も高い親和性を有する、
ｆ）がん抗原の少なくとも３０％は、対象からのクラスＩＩ ＭＨＣ分子に対して最も高い親和性を有する、
ｇ）がん抗原の少なくとも５０％は、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及び／またはＤＲＢ １に対するＩＣ＞５００ｎＭの予測される結合親和性を有する、
ｈ）ｍＲＮＡは、２０個のがん抗原をコードする、
ｉ）がん抗原の５０％は、クラスＩ ＭＨＣに対する結合親和性を有し、がん抗原の５０％は、クラスＩＩ ＭＨＣに対する結合親和性を有する、及び／または
ｊ）がん抗原をコードするｍＲＮＡは、偽エピトープを最小限に抑えるようにがん抗原が配置される。
いくつかの実施形態では、各がん抗原は、３１個のアミノ酸を含み、ＳＮＰ変異の各側面に１５個の隣接するアミノ酸を有する中央に位置するＳＮＰ変異を含む。
いくつかの実施形態では、ワクチンは、個別化されたがんワクチンであり、がん抗原は、対象特異的がん抗原である。いくつかの実施形態では、対象特異的がん抗原は、対象の腫瘍試料のエクソーム、または対象の腫瘍試料のトランスクリプトームを表すものであり得る。いくつかの実施形態では、対象特異的がん抗原は、対象のエクソソームを表すものであり得る。
いくつかの実施形態では、オープンリーディングフレームは、１つ以上の従来のがん抗原をさらにコードする。いくつかの実施形態では、従来のがん抗原は、非変異抗原である。いくつかの実施形態では、従来のがん抗原は、変異抗原である。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡワクチンは、１つ以上の従来のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡをさらに含む。
いくつかの実施形態では、単一のｍＲＮＡが、がん抗原をコードする。他の実施形態では、複数のｍＲＮＡが、がん抗原をコードしている。いくつかの実施形態では、各がん抗原は、１０～５０アミノ酸長である。他の実施形態では、各がん抗原は、１５～２０アミノ酸長である。他の実施形態では、がん抗原は、２０～５０、２５～１００、１００～２００、２００～３００、３００～４００、４００～５００、５００～１０００、または１，０００～１０，０００アミノ酸長である。
いくつかの実施形態では、ワクチンは、アジュバントをさらに含む。
本開示のいくつかの実施形態は、脂質ナノ粒子内に製剤化された、少なくとも１つのがんポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、少なくとも１つの５’末端キャップ、及び少なくとも１つの化学修飾を有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むがんワクチンを提供する。いくつかの実施形態では、５’末端キャップは、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐである。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの化学修飾は、シュードウリジン、Ｎｌ－メチルシュードウリジン、Ｎｌ－エチルシュードウリジン、２－チオウリジン、４´－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、４－メトキシ－シュードウリジン、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、４－チオ－シュードウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５－メチルウリジン、５－メトキシウリジン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンから選択される。いくつかの実施形態では、化学修飾ヌクレオチドの組み込みの程度は、ワクチン製剤に対する免疫応答を改善するために最適化されている。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）は、カチオン性脂質、ＰＥＧ修飾脂質、ステロール、及び非カチオン性脂質を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、イオン化可能なカチオン性脂質であり、非カチオン性脂質は、中性脂質であり、ステロールは、コレステロールである。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）９－（（４－（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子製剤は、ワクチン（製剤）の免疫原性を向上するための免疫増強剤（例えば、ＴＬＲアゴニスト）を含む。
いくつかの実施形態では、オープンリーディングフレームのウラシルの１００％が化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、化学修飾は、５位のウラシルにある。いくつかの実施形態では、化学修飾は、Ｎｌ－メチルシュードウリジンである。
他の実施形態では、ＡＰＣ再プログラム分子をコードするｍＲＮＡが、ワクチンに含まれるか、またはワクチンと同時に投与される。ＡＰＣ再プログラム分子は、ＣＩＩＴＡか、ＣＬＩＰ、ＨＬＡ－ＤＯ、ＨＬＡ－ＤＭなどのシャペロンタンパク質か、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６などの共刺激分子か、ＣＩＩＴＡのアミノ酸２６～１３７などのＣＩＩＴＡ断片、またはＣＩＩＴＡと８０％の配列同一性を有するタンパク質であり得る。
他の態様では、対象の試料から少なくとも２つのがん抗原を同定すること（少なくとも２つのがん抗原は、フレームシフト変異及び組換えからなる群から選択される変異を含む）、及び対象に少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを投与することによって、対象において免疫応答を誘発する方法が提供される。
いくつかの実施形態では、がん抗原は、対象のエクソソームから同定される。いくつかの実施形態では、２～１００個の抗原が、エクソソームから同定される。他の実施形態では、ｍＲＮＡワクチンは、２～１００個の抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する。単一のｍＲＮＡまたは複数のｍＲＮＡは、抗原をコードし得る。
いくつかの実施形態では、抗原は、がん抗原である。がん抗原は、点変異、フレームシフト変異、及び組換えから選択される変異を有し得る。方法は、エクソーム分析によってがん抗原が対象特異的であることを確認することがさらに関わり得る。
いくつかの実施形態では、方法は、トランスクリプトーム分析によってがん抗原が対象特異的であることを確認することがさらに関わり得る。
いくつかの実施形態では、方法はまた、ｍＲＮＡワクチンの投与の少なくとも１ヶ月後に、対象の試料から少なくとも２つのがん抗原を同定して第２の組のがん抗原を生成し、対象に対する第２の組のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを対象に投与することが関わる。
他の実施形態では、対象の試料は、腫瘍試料である。
他の態様では、本発明は、対象の試料から少なくとも２つのがん抗原を同定して、第１の組のがん抗原を生成することと、対象に第１の組のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを対象に投与することと、ｍＲＮＡワクチンの投与の少なくとも１か月後に、対象の試料から少なくとも２つのがん抗原を同定して、第２の組のがん抗原を生成することと、対象に第２の組のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを対象に投与することと、によって対象における免疫応答を誘発する方法を含む。
第２の組の抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンは、いくつかの実施形態では、第１の組のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンの６か月～１年後に対象に投与される。他の実施形態では、第２の組の抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンは、第１の組のがん抗原をコードするオープンリーディングを有するｍＲＮＡワクチンの１～２年後に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、単一のｍＲＮＡは、がん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有する。他の実施形態では、複数のｍＲＮＡが、抗原をコードしている。いくつかの実施形態では、第２の組のがん抗原は、２～１００個の抗原を含む。他の実施形態では、がん抗原は、点変異、フレームシフト変異、及び組換えから選択される変異を有する。
他の態様では、本発明は、対象の試料から少なくとも２つのがん抗原を同定することと、対象に少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを投与することと、がん治療薬を対象に投与することと、によって、対象における免疫応答を誘発する方法を含む。いくつかの実施形態では、がん治療薬は、標的療法である。標的療法は、ベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２）またはダブラフェニブなどのＢＲＡＦ阻害剤であり得る。
他の実施形態では、がん治療薬は、Ｔ細胞治療薬である。Ｔ細胞治療約は、抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体などのチェックポイント阻害剤であり得る。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５８（ニボルマブ）である。他の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブである。他の実施形態では、Ｔ細胞治療薬は、ＯＸ４０Ｌである。さらに他の実施形態では、がん治療薬は、集団ベースの腫瘍特異的抗原を含むワクチンである。
他の実施形態では、がん治療薬は、１つ以上の従来のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを含むワクチンである。
いくつかの実施形態では、少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡは、がん治療薬と同時に対象に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡは、がん治療薬の投与前に対象に投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡは、がん治療薬の投与後に対象に投与される。
がん抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡを脂質ナノ粒子製剤と混合して、ｍＲＮＡがんワクチンを生成することと、混合の２４時間以内にｍＲＮＡがんワクチンを対象に投与することと、を含む方法が、本発明の他の態様で提供される。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡがんワクチンは、混合の１２時間以内に対象に投与される。他の実施形態では、ｍＲＮＡがんワクチンは、混合の１時間以内に対象に投与される。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡがんワクチンは、２～１００個のがん抗原または１０～１００個のがん抗原をコードする。
いくつかの実施形態では、ワクチンは、個別化されたがんワクチンであり、がん抗原は、対象特異的がん抗原である。
いくつかの実施形態では、単一のｍＲＮＡが、がん抗原をコードする。他の実施形態では、複数のｍＲＮＡが、がん抗原をコードしている。各ｍＲＮＡは、他の実施形態では、５～１０個のがん抗原または単一のがん抗原をコードする。さらに他の実施形態では、各がん抗原は、１０～５０アミノ酸長、または１５～２０アミノ酸長である。
本明細書でさらに提供されるのは、対象において抗原特異的免疫応答を誘発する方法で使用するための医薬品の製造におけるがんワクチンの使用であり、方法は、抗原特異的免疫応答を生成する有効量で対象にがんワクチンを投与することを含む。
対象から単離されたエクソソームから少なくとも２つのがん抗原を同定することと、同定された抗原に基づいて、抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを生成することと、対象にｍＲＮＡワクチン（ｍＲＮＡワクチンは、対象において腫瘍特異的免疫応答を誘発し、それによって、対象におけるがんを治療する）を投与することと、によって、がんを治療することを、それを必要とする対象において行う方法が、他の態様で提供される。他の態様における本発明は、対象から単離されたエクソソームから少なくとも２つのがん抗原を同定することと、同定された抗原に基づいて、抗原をコードするオープンリーディングフレームを有するｍＲＮＡワクチンを生成することと、が関わる方法に従って調製可能なＲＮＡワクチンである。
対象においてがん抗原に対する免疫応答を誘発する方法が、本発明の態様で提供される。方法は、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むＲＮＡワクチンを対象に投与し、それによって、対象において抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘発することが関わり、ワクチン接種後の対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して、より増加する。「抗抗原性ポリペプチド抗体」は、抗原性ポリペプチドに特異的に結合する血清抗体である。
予防有効用量は、臨床的に許容されるレベルでがんの進行を防止する治療有効用量である。いくつかの実施形態では、治療有効用量は、ワクチンについて、パッケージ添付文書に列記されている用量である。本明細書で使用する場合、従来のワクチンは、本発明のｍＲＮＡワクチン以外のワクチンを指す。例えば、従来のワクチンとしては、限定されないが、微生物生ワクチン、微生物不活化ワクチン、サブユニットワクチン、タンパク質抗原ワクチン、ＤＮＡワクチンなどが挙げられる。例示的な実施形態では、従来のワクチンは、国の薬物規制機関、例えば、米国の食品医薬品局（ＦＤＡ）または欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって規制上の承認を達成し、及び／または登録されているワクチンである。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して１ｌｏｇ～１０ｌｏｇ増加する。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して１ｌｏｇ増加する。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して２ｌｏｇ増加する。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して３ｌｏｇ増加する。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して５ｌｏｇ増加する。
いくつかの実施形態では、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価が、ワクチン接種後、予防有効用量のがんに対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価に対して１０ｌｏｇ増加する。
対象においてがん抗原に対する免疫応答を誘発する方法が、本発明の他の態様で提供される。方法は、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むＲＮＡワクチンを対象に投与し、それによって、対象において抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘発することが関わり、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して２倍～１００倍の投薬レベルでがん抗原に対する従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して２倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して３倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して４倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して５倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して１０倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して５０倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して１００倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して１０倍～１０００倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して１００倍～１０００倍の投薬レベルで従来のワクチンをワクチン接種した対象における免疫応答と同等である。
他の実施形態では、免疫応答は、対象における抗体力価を決定することによって評価される。
他の態様では、本発明は、少なくとも１つのがん抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むＲＮＡワクチンを対象に投与し、それによって、対象において抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘発することによって、対象において、対する免疫応答を誘発する方法を含み、対象における免疫応答は、予防有効用量のがん抗原に対する従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して２日～１０週間早く誘発される。いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、ＲＮＡワクチンに対して２倍～１００倍の投薬レベルで予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して２日早く誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答よりも３日早く誘発される。いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答よりも１週間早く誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して２週間早く誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して３週間早く誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して５週間早く誘発される。
いくつかの実施形態では、対象における免疫応答は、予防有効用量の従来のワクチンをワクチン接種した対象において誘発される免疫応答に対して１０週間早く誘発される。
第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するがんＲＮＡワクチンを対象に投与することによって、対象においてがんに対する免疫応答を誘発する方法であって、ＲＮＡポリヌクレオチドが安定化要素を含まず、アジュバントがワクチンと同時に製剤化または同時に投与されない、方法。
さらに他の態様では、本発明は、１０００～３０００個のヌクレオチドを含む、鎖状のがん抗原をコードするｍＲＮＡを生成する方法を含み、方法は、
（ａ）鎖状のがん抗原をコードするオープンリーディングフレームを含む第１のポリヌクレオチド及び５’－ＵＴＲを含む第２のポリヌクレオチドを、固体支持体にコンジュゲートされたポリヌクレオチドに結合すること、
（ｂ）第２のポリヌクレオチドの３’末端を、好適な条件下で第１のポリヌクレオチドの５’末端にライゲーションすることであって、好適な条件は、ＤＮＡリガーゼを含み、それによって、第１のライゲーション生成物を生成する、ライゲーションすること、
（ｃ）３’－ＵＴＲを含む第３のポリヌクレオチドの５’末端を、好適な条件下で第１のライゲーション生成物の３’末端にライゲーションすることであって、好適な条件は、ＲＮＡリガーゼを含み、それによって、第２のライゲーション生成物を生成する、ライゲーションすること、ならびに
（ｄ）固体支持体から第２のライゲーション生成物を解放し、それによって、１０００～３０００個のヌクレオチドを含む鎖状のがん抗原をコードするｍＲＮＡを生成すること、による。提供される組成物または方法のうちのいずれか１つのいくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、１つ以上の再発多型をコードする。いくつかの実施形態では、１つ以上の再発多型は、ｐ５３における再発体細胞がん変異を含む。いくつかのかかる実施形態では、ｐ５３における１つ以上の再発体細胞がん変異は、
（１）隣接するコドンｐ．Ｔ１２５の正準５’スプライス部位における変異、
（２）隣接するコドンｐ．３３１の正準５’スプライス部位における変異、
（３）隣接するコドンｐ．１２６の正準３’スプライス部位における変異、
（４）暗号的な代替イントロン５’スプライス部位を誘発する、隣接するコドンｐ．２２４の正準５’スプライス部位における変異、からなる群から選択される。
一実施形態では、本発明は、ネオ抗原ペプチド（１）～（４）のうちの１つ以上をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードするｍＲＮＡを含むがん治療ワクチンを提供する。一実施形態では、本発明は、上の変異のうちのいずれかを含有する患者の腫瘍に基づいて、ペプチド（ｌ）～（４）のうちの１つ以上を含有するか、またはコードするワクチンの選択的投与を提供する。一実施形態では、本発明は、上の変異のうちのいずれかを含有する対象の腫瘍、及び生じるネオ抗原に結合すると予測される対応するＨＬＡ対立遺伝子を含有する対象の正常なＨＬＡタイプの二重基準に基づくワクチンの選択的投与を提供する。
個別化されたｍＲＮＡがんワクチンを用いて対象を治療するための方法であって、対象から試料を単離し、試料から患者トランスクリプトーム及び／または患者エクソームを分析して患者特異的ミュータノームを生成することによってネオエピトープの組を同定し、ＭＨＣ結合強度、ＭＨＣ結合多様性、予測される免疫原性の程度、低い自己応答性、及び／またはＴ細胞応答性に基づいてミュータノームからワクチンのネオエピトープの組を選択し、ネオエピトープの組をコードするようにｍＲＮＡワクチンを調製し、試料を対象から単離した２か月以内に対象にｍＲＮＡワクチンを投与することによる、方法が、本発明の他の態様で提供される。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡワクチンは、試料を対象から単離した１か月以内に対象に投与される。
他の態様では、本発明は、ネオエピトープの組をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを有する個別化されたｍＲＮＡがんワクチンで使用するためのネオエピトープの組を同定する方法を含み、方法は、ａ．患者トランスクリプトーム及び患者エクソームを分析することによって患者特異的ミュータノームを同定すること、ｂ．患者ＲＮＡ配列における遺伝子または転写レベルの発現の評価；バリアントコール信頼度スコア；ＲＮＡ配列対立遺伝子特異的発現；保存的対非保存的アミノ酸置換；点突然変異の位置（ＴＣＲ係合増加についてのセンタリングスコア）；点突然変異の位置（差異的ＨＬＡ結合についてのアンカリングスコア）；自己性；患者ＷＥＳデータとの＜１００％のコアエピトープ相同性；８ｍｅｒｓ－ｌ ｌｍｅｒｓのＨＬＡ－Ａ及び－Ｂ ＩＣ５０；１５ｍｅｒｓ－２０ｍｅｒｓのＨＬＡ－ＤＲＢ １ ＩＣ５０；でたらめ性（ｐｒｏｍｉｓｃｕｉｔｙ）スコア（すなわち、結合が予測される患者ＨＬＡの数）；８ｍｅｒｓ－ｌ ｌｍｅｒのＨＬＡ－Ｃ ＩＣ５０；１５ｍｅｒｓ－２０ｍｅｒｓのＨＬＡ－ＤＲＢ３－５ ＩＣ５０；１５ｍｅｒｓ－２０ｍｅｒｓのＨＬＡ－ＤＱＢ １／Ａ１ ＩＣ５０；１５ｍｅｒｓ－２０ｍｅｒｓのＨＬＡ－ＤＰＢ １／Ａ１ ＩＣ５０；クラスＩ対クラスＩＩの比率；網羅される患者ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、及びＤＲＢ １アロタイプの多様性；点変異対複合体エピトープ（例えば、フレームシフト）の割合；及び／または偽エピトープＨＬＡ結合スコア、のうちの少なくとも３つに基づいて、ネオエピトープについての重み付け値を使用して、ミュータノームから１５～５００個のネオエピトープのサブセットを選択すること、ならびにｃ．最も高い重み付け値に基づいて、個別化されたｍＲＮＡがんワクチンで使用するためのネオエピトープの組を、サブセットから選択することにより、ネオエピトープの組は、１５～４０個のネオエピトープを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の核酸ワクチンは、化学修飾される。他の実施形態では、核酸ワクチンは、非修飾である。
さらに他の態様は、対象をワクチン接種するための組成物及び方法を提供し、方法及びワクチン接種は、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを対象に投与することを含み、ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を含まず、アジュバントは、ワクチンと同時に製剤化または同時に投与されない。
他の態様では、本発明は、対象をワクチン接種するための組成物または方法であり、組成物または方法は、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを対象に投与することを含み、１０ｕｇ／ｋｇ～４００ｕｇ／ｋｇの投薬量の核酸ワクチンが、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドの投薬量は、用量当たり、１～５ｕｇ、５～１０ｕｇ、１０～１５ｕｇ、１５～２０ｕｇ、１０～２５ｕｇ、２０～２５ｕｇ、２０～５０ｕｇ、３０～５０ｕｇ、４０～５０ｕｇ、４０～６０ｕｇ、６０～８０ｕｇ、６０～１００ｕｇ、５０～１００ｕｇ、８０～１２０ｕｇ、４０～１２０ｕｇ、４０～１５０ｕｇ、５０～１５０ｕｇ、５０～２００ｕｇ、８０～２００ｕｇ、１００～２００ｕｇ、１２０～２５０ｕｇ、１５０～２５０ｕｇ、１８０～２８０ｕｇ、２００～３００ｕｇ、５０～３００ｕｇ、８０～３００ｕｇ、１００～３００ｕｇ、４０～３００ｕｇ、５０～３５０ｕｇ、１００～３５０ｕｇ、２００～３５０ｕｇ、３００～３５０ｕｇ、３２０～４００ｕｇ、４０～３８０ｕｇ、４０～１００ｕｇ、１００～４００ｕｇ、２００～４００ｕｇ、または３００～４００ｕｇである。いくつかの実施形態では、核酸ワクチンは、皮内または筋肉内注射によって対象に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ワクチンが、初日に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第２の用量の核酸ワクチンが、２１日目に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、２５マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、１００マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、５０マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、７５マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、１５０マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、４００マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、２００マイクログラムの投薬量のＲＮＡポリヌクレオチドが、対象に投与される核酸ワクチンに含まれる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、遠位リンパ節と比較して、局所リンパ節で１００倍高いレベルで蓄積する。他の実施形態では、核酸ワクチンは化学的に改変されており、他の実施形態では、核酸ワクチンは化学的に改変されていない。
本発明の態様は、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチド（ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を含まない）、及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含む核酸ワクチンを提供し、ワクチンにはアジュバントは含まれない。いくつかの実施形態では、安定化要素は、ヒストンステムループである。いくつかの実施形態では、安定化要素は、野生型配列に対して増加したＧＣ含有量を有する核酸配列である。
本発明の態様は、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを提供し、ＲＮＡポリヌクレオチドは、宿主へのインビボ投与のための製剤中に存在し、それによって、ヒト対象の許容可能な割合の第１の抗原についての抗体保有率の基準よりも優れた抗体力価が付与される。いくつかの実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンによって生成される抗体力価は、中和抗体力価である。いくつかの実施形態では、中和抗体力価は、タンパク質ワクチンよりも高い。他の実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンによって生成される中和抗体力価は、アジュバントを含むタンパク質ワクチンよりも高い。さらに他の実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンによって生成される中和抗体力価は、１，０００～１０，０００、１，２００～１０，０００、１，４００～１０，０００、１，５００～１０，０００、１，０００～５，０００、１，０００～４，０００、１，８００～１０，０００、２０００－１０，０００、２，０００～５，０００、２，０００～３，０００、２，０００～４，０００、３，０００～５，０００、３，０００～４，０００、または２，０００～２，５００である。中和力価は、典型的には、プラーク数の５０％低減を達成するために必要な最も高い血清希釈として表される。
ある特定の態様では、本発明のワクチン（例えば、ＬＮＰ封入ｍＲＮＡワクチン）は、ワクチン接種された対象の血液または血清中の抗原特異的抗体の予防的及び／または治療的に有効な、レベル、濃度、及び／または力価を生成する。本明細書で定義する場合、抗体力価という用語は、対象、例えば、ヒト対象において生成される抗原特異的抗体の量を指す。例示的な実施形態では、抗体力価は、依然として陽性結果をもたらす（段階希釈での）最大希釈の逆数として表される。例示的な実施形態では、抗体力価は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定される。例示的な実施形態では、抗体力価は、中和アッセイによって、例えば、マイクロ中和アッセイによって決定または測定される。ある特定の態様では、抗体力価測定は、１：４０、１：１００などの比として表される。
本発明の例示的な実施形態では、有効なワクチンは、１：４０超、１：１００超、１：４００超、１：１０００超、１：２０００超、１：３０００超、１：４０００超、１：５００超、１：６０００超、１：７５００超、１：１００００超の抗体力価を生成する。例示的な実施形態では、抗体力価は、ワクチン接種の１０日後、ワクチン接種の２０日後、ワクチン接種の３０日後、ワクチン接種の４０日後、またはワクチン接種の５０日以上後に生成されるか、または到達する。例示的な実施形態では、力価は、対象に投与される単回用量のワクチンの後に生成されるか、または到達する。他の実施形態では、力価は、複数用量の後、例えば、第１及び第２の用量（例えば、ブースター用量）の後に生成されるか、または到達する。
本発明の例示的な態様では、抗原特異的抗体は、μｇ／ｍｌの単位で測定されるか、またはＩＵ／Ｌ（リットル当たりの国際単位）もしくはｍｌＵ／ｍｌ（ｍｌ当たりのミリ国際単位）の単位で測定される。本発明の例示的な実施形態では、有効なワクチンは、０．５μｇ／ｍｌ未満、０．１μｇ／ｍｌ未満、０．２μｇ／ｍｌ未満、０．３５μｇ／ｍｌ未満、０．５μｇ／ｍｌ未満、１μｇ／ｍｌ未満、２μｇ／ｍｌ未満、５μｇ／ｍｌ未満、または１０μｇ／ｍｌ未満を生成する。本発明の例示的な実施形態では、有効なワクチンは、１０ｍｌＵ／ｍｌ未満、２０ｍｌＵ／ｍｌ未満、５０ｍｌＵ／ｍｌ未満、１００ｍｌＵ／ｍｌ未満、２００ｍｌＵ／ｍｌ未満、５００ｍｌＵ／ｍｌ未満、または１０００ｍｌＵ／ｍｌ未満を生成する。例示的な実施形態では、抗体レベルまたは濃度は、ワクチン接種の１０日後、ワクチン接種の２０日後、ワクチン接種の３０日後、ワクチン接種の４０日後、またはワクチン接種の５０日以上後に生成されるか、または到達する。例示的な実施形態では、レベルまたは濃度は、対象に投与される単回用量のワクチンの後に生成されるか、または到達する。他の実施形態では、レベルまたは濃度は、複数用量の後、例えば、第１及び第２の用量（例えば、ブースター用量）の後に生成されるか、または到達する。例示的な実施形態では、抗体レベルまたは濃度は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定される。例示的な実施形態では、抗体レベルまたは濃度は、中和アッセイによって、例えば、マイクロ中和アッセイによって決定または測定される。また提供されるのは、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンであり、ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を有するか、またはアジュバントとともに製剤化され、第１の抗原性ポリペプチドをコードするｍＲＮＡワクチンによって誘発される抗体力価よりも長時間持続する高い抗体力価を誘発するための、宿主へのインビボ投与のための製剤中に存在する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、単回投与から１週間以内に中和抗体を生成するように製剤化される。いくつかの実施形態では、アジュバントは、カチオン性ペプチド及び免疫刺激性核酸から選択される。いくつかの実施形態では、カチオン性ペプチドは、プロタミンである。
態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むかまたは任意選択的にヌクレオチド修飾がないオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを提供し、オープンリーディングフレームは、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードし、ＲＮＡポリヌクレオチドは、宿主における抗原発現レベルが、安定化要素を有するか、またはアジュバントとともに製剤化され、第１の抗原性ポリペプチドをコードするｍＲＮＡワクチンによって生成される抗原発現レベルを有意に超えるように、宿主へのインビボ投与のための製剤中に存在する。
他の態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むかまたは任意選択的にヌクレオチド修飾がないオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを提供し、オープンリーディングフレームは、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードし、ワクチンは、非修飾ｍＲＮＡワクチンが同等な抗体力価を生成するのに必要とされるよりも少なくとも１０倍少ないＲＮＡポリヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５～１００マイクログラムの投薬量で存在する。
本発明の態様はまた、少なくとも１つの化学修飾を含むかまたは任意選択的にヌクレオチド修飾がないオープンリーディングフレームを有する、ｌＯｕｇ～４００ｕｇの１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドであって、オープンリーディングフレームは、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードする、ＲＮＡポリヌクレオチドと、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、ヒト対象への送達のために製剤化された、使用単位のワクチンを提供する。いくつかの実施形態では、ワクチンは、カチオン性脂質ナノ粒子をさらに含む。
本発明の態様は、個体または個体集団における腫瘍への抗原記憶を作成、維持、または回復する方法を提供し、方法は、当該個体または集団に、（ａ）少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドであって、当該ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学修飾を含むかまたは任意選択的にヌクレオチド修飾がなく、２つ以上のコドン最適化オープンリーディングフレームを含み、当該オープンリーディングフレームは、参照抗原性ポリペプチドの組をコードする、ＲＮＡポリヌクレオチドと、（ｂ）任意選択的に、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、抗原記憶ブースター核酸ワクチンを投与することを含む。いくつかの実施形態では、ワクチンは、筋肉内投与、皮内投与、及び皮下投与からなる群から選択される経路を介して個体に投与される。いくつかの実施形態では、投与ステップは、対象の筋肉組織を、組成物の注射に好適なデバイスと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、投与ステップは、対象の筋肉組織を、エレクトロポレーションと組み合わせた、組成物の注射に好適なデバイスと接触させることを含む。
本発明の態様は、対象をワクチン接種するための方法を提供し、方法は、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、２５ｕｇ／ｋｇ～４００ｕｇ／ｋｇの有効量の核酸ワクチンの単回投薬量を対象に投与して、対象をワクチン接種することを含む。
他の態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを提供し、オープンリーディングフレームは、第１の抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードし、ワクチンは、非修飾ｍＲＮＡワクチンが同等な抗体力価を生成するのに必要とされるよりも少なくとも１０倍少ないＲＮＡポリヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５～１００マイクログラムの投薬量で存在する。
他の態様は、ヌクレオチド修飾を含まない（非修飾）オープンリーディングフレームを有するＬＮＰ製剤化ＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを提供し、オープンリーディングフレームは、第１の抗原性ポリペプチドまたは
鎖状のポリペプチドをコードし、ワクチンは、ＬＮＰに製剤化されていない非 修飾ｍＲＮＡワクチンが等価な抗体力価を生成するのに必要とされるよりも少なくとも１０倍少ないＲＮＡポリヌクレオチドを有する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５～１００マイクログラムの投薬量で存在する。
他の態様では、本発明は、６０歳以上の高齢対象を治療する方法を包含し、方法は、抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、有効量の核酸ワクチンを対象に投与して、対象をワクチン接種することを含む。
他の態様では、本発明は、１７歳以下の若い対象を治療する方法を包含し、方法は、抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、有効量の核酸ワクチンを対象に投与して、対象をワクチン接種することを含む。
他の態様では、本発明は、成人対象を治療する方法を包含し、方法は、抗原性ポリペプチドまたは鎖状のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、有効量の核酸ワクチンを対象に投与して、対象をワクチン接種することを含む。
いくつかの態様では、本発明は、抗原をコードする少なくとも２つの核酸配列を含む組み合わせワクチンで対象をワクチン接種する方法を含み、ワクチンの投薬量は、組み合わせた治療投薬量であり、抗原をコードする各個々の核酸の投薬量は、治療投薬未満量である。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中２５マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中１００マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中５０マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中７５マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中１５０マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、組み合わせた投薬量は、対象に投与される核酸ワクチン中４００マイクログラムのＲＮＡポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、抗原をコードする各個々の核酸の治療投薬未満量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０マイクログラムである。他の実施形態では、核酸ワクチンは化学的に改変されており、他の実施形態では、核酸ワクチンは化学的に改変されていない。
他の成分
ＬＮＰ（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）は、前述のセクションに記載のものに加えて１つ以上の成分を含み得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）は、ビタミン（例えば、ビタミンＡまたはビタミンＥ）またはステロールなどの１つ以上の小さい疎水性分子を含み得る。
脂質ナノ粒子（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）はまた、１つ以上の透過性向上分子、炭水化物、ポリマー、表面改変剤、または他の成分を含み得る。例えば、透過促進分子は、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載される分子であってもよい。炭水化物は、単糖（例えば、グルコース）及び多糖類（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）を含んでもよい。
ＬＮＰを封入するかまたは部分的に封入するためのポリマーが、含まれ得る及び／または使用され得る。ポリマーは、生分解性及び／または生体適合性であってもよい。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリエタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択され得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリマーとしては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸－グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－カプロラクトン－コ－グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－ＰＥＯ－コ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－ＰＰＯ－コ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ－Ｌ－リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ－Ｌ－グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレン及びポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ（ビニルアセテート）などのポリビニルエステル、ポリ（ビニルクロリド）（ＰＶＣ）などのポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、アルキルセルロースなどの誘導体化セルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）ならびにそれらのコポリマー及び混合物などのアクリル酸のポリマー、ポリジオキサノン及びそれらのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド－コ－カプロラクトン）、トリメチレンカーボネート、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、ならびにポリグリセロールが挙げられ得る。
表面改変剤としては、限定されないが、陰イオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、ジメチルジオクタデシル－臭化アンモニウムなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、マグワート、ブロメライン、パパイン、クレロデンドラム、ブロメキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステップロニン、チオプロニン、ゲルソリン、チモシン、β４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、ならびにＤＮアーゼ（例えば、ｒｈＤＮアーゼ）が挙げられ得る。表面改変剤は、ナノ粒子内及び／またはＬＮＰの表面上に（例えば、コーティング、吸着、共有結合、または他のプロセスによって）配置されてもよい。
ＬＮＰ（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）はまた、１つ以上の官能化脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露されると、付加環化反応を受け得るアルキン基で官能化され得る。特に、脂質二重層は、膜貫通、細胞認識、またはイメージングを促進するのに有用な１つ以上の基でこの方式で官能化されてもよい。ＬＮＰ（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）の表面はまた、１つ以上の有用な抗体とコンジュゲートされ得る。標的細胞送達、イメージング、及び膜貫通において有用な官能基及びコンジュゲートは、当該技術分野において周知である。
これらの成分に加えて、脂質ナノ粒子（例えば、開示の空のＬＮＰまたは充填されたＬＮＰ）は、薬学的組成物に有用な任意の物質を含み得る。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、限定されないが、１つ以上の溶媒、分散媒、希釈剤、分散補助剤、懸濁液補助剤、造粒補助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体ビヒクル、結合剤、表面活性剤、等張剤、増粘または乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油、保存剤、及び他の種などの１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または付属成分を含み得る。また、ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香料、及び芳香剤などの賦形剤を含んでもよい。薬学的に許容される賦形剤は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照されたい）。
希釈剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉末糖、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。造粒剤及び分散剤は、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、タピオカデンプン、グリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘類パルプ、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材製品、天然スポンジ、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニルピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（グリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、プレゲラチン化デンプン（デンプン１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標））、ラウジル硫酸ナトリウム、四級アンモニウム化合物、及び／またはそれらの組み合わせからなる非限定的な列挙から選択され得る。
表面活性剤及び／または乳化剤としては、限定されないが、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドルックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、ウール脂肪、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びＶＥＥＧＵＭ（登録商標）［ケイ酸マグネシウムアルミニウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びＳＯＬＵＴＯＬ（商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニルピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられ得る。
結合剤は、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）、ゼラチン、糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、天然及び合成ガム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワーガム（ｐａｎｗａｒ ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ ｇｕｍ）、イサポールハスク（ｉｓａｐｏｌ ｈｕｓｋｓ）の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニルピロリドン）、ケイ酸マグネシウムアルミニウム（ＶＥＥＧＵＭ（登録商標）、及びカラマツアラビノガラクタン（ｌａｒｃｈ ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））、アルギネート、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、無機カルシウム塩、ケイ酸、ポリメタクリレート、ワックス、水、ならびにそれらの組み合わせ、または任意の好適な結合剤であってもよい。
防腐剤の例には、限定されないが、抗酸化剤、キレート剤、抗菌防腐剤、抗真菌防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤、及び／または他の防腐剤が含まれ得る。抗酸化剤の例としては、限定されないが、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、ギ酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられる。キレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌保存剤の例としては、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられる。抗真菌剤の例としては、限定されないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられる。アルコール保存剤の例としては、限定されないが、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられる。酸性保存剤の例としては、限定されないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β－カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられる。他の防腐剤としては、限定されないが、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸ジストキシム、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられる。
緩衝剤の例には、限定されないが、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ－グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、水酸化カルシウムリン酸、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノスルホン酸緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リンガー液、エチルアルコール、及び／またはそれらの組み合わせが含まれる。滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせからなる非限定的な群から選択され得る。
油の例としては、限定されないが、アーモンド、アプリコットカーネル、アボカド、ババス、ベルガモット、ブラックカレント（ｂｌａｃｋ ｃｕｒｒｅｎｔ）シード、ボリジ（ｂｏｒａｇｅ）、カデ（ｃａｄｅ）、カモミール、カノーラ、キャラウェイ、カルナウバ、ヒマシ、シナモン、ココアバター、ココナッツ、タラ肝、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、イブニングプリムローズ、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、グレープシード、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイナッツ、ラバンディン、ラベンダー、レモン、アオモジ（ｌｉｔｓｅａ ｃｕｂｅｂａ）、マカデミアナッツ、ゼニアオイ（ｍａｌｌｏｗ）、マンゴーシード、メドウフォームシード、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パーム核、トウニン、ピーナッツ、ポピーシード、パンプキンシード、ナタネ、米ぬか、ローズマリー、ベニバナ、サンダルウッド、サスクアナ（ｓａｓｑｕａｎａ）、セイボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、大豆、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ、及び小麦胚芽油、ならびにステアリン酸ブチル、トリカプリル酸グリセリル（ｃａｐｒｙｌｉｃ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、トリカプリン酸グリセリル（ｃａｐｒｉｃ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーンオイル、及び／またはそれらの組み合わせが挙げられる。
薬学的組成物
脂質ナノ粒子を含む製剤は、薬学的組成物として全体的にまたは部分的に製剤化され得る。薬学的組成物は、１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の異なる治療剤及び／または予防剤を含む１つ以上の脂質ナノ粒子を含み得る。薬学的組成物は、本明細書に記載されるものなどの１つ以上の薬学的に許容される賦形剤または付属成分をさらに含み得る。薬学的組成物及び薬剤の製剤化及び製造のための一般的なガイドラインが、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６において入手可能である。従来の賦形剤及び付属成分が、任意の従来の賦形剤または付属成分が、本開示の製剤中のＬＮＰの１つ以上の成分と不適合であり得る場合を除き、任意の薬学的組成物で使用してもよい。賦形剤または付属成分は、成分もしくはＬＮＰとのその組み合わせが任意の望ましくない生物学的影響またはその他の有害な影響を生じ得る場合、製剤のＬＮＰの成分と不適合であり得る。
いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤または付属成分は、ＬＮＰを含む薬学的組成物の総質量または総体積の５０％超を構成し得る。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤または付属成分は、薬学的慣習の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上を構成し得る。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋である。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトでの使用及び獣医学的使用が承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認される。いくつかの実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たす。
本開示による薬学的組成物中の１つ以上の脂質ナノ粒子、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、及び／または任意の追加の成分の相対量は、治療される対象の識別、サイズ、及び／または状態に応じて、さらに組成物が投与される経路に応じて変化するであろう。例として、薬学的組成物は、０．１％～１００％（重量／重量）の１つ以上の脂質ナノ粒子を含む。別の例として、薬学的組成物は、０．１％～１５％（重量／体積）の１つ以上の両親媒性ポリマー（例えば、０．５％、１％、２．５％、５％、１０％、または１２．５％重量／体積）を含む。
いくつかの実施形態では、開示の脂質ナノ粒子及び／または薬学的組成物は、保管及び／または出荷のために冷蔵または凍結される（例えば、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃～約０℃、または約－８０℃～約－２０℃（例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃、もしくは－１５０℃）で保管される）。例えば、１つ以上の脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物は、例えば、約－２０℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、または－８０℃で保管及び／または出荷するために冷蔵される溶液または固体（例えば、凍結乾燥を介して）である。ある特定の実施形態では、本開示はまた、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃～約０℃、または約－８０℃～約－２０℃、例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃、もしくは－１５０℃の温度で脂質ナノ粒子及び／またはその薬学的組成物を保管することによって、脂質ナノ粒子の安定性を増加させる方法に関する。
１つ以上の脂質ナノ粒子を含む脂質ナノ粒子及び／または薬学的組成物は、腎臓系などの１つ以上の特定の細胞、組織、臓器、またはそれらの系もしくは群への治療的及び／または予防的送達によって提供される治療効果から利益を得る可能性がある患者または対象を含む、任意の患者または対象に投与され得る。脂質ナノ粒子及び脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物の本明細書で提供される説明は、主に、ヒトへの投与に好適な組成物を対象とするが、かかる組成物が、一般に、任意の他の哺乳類への投与に好適であることが当業者によって理解されるであろう。様々な動物への投与に好適な組成物を作製するために、ヒトへの投与に好適な組成物の修正が十分に理解されており、通常の知識を有する獣医薬理学者であれば、かかる修正を、単なる普通の実験（もしあれば）で設計及び／または実施することができる。組成物の投与が企図される対象には、限定されないが、ヒト、他の霊長類、及び他の哺乳類、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどの商業的に関連する哺乳類が含まれる。
１つ以上の脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物が、薬理学の分野で知られているか、または今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を賦形剤及び／または１つ以上の他の付属成分と会合させることと、次いで、望ましいか、必要な場合、生成物を所望の単一または複数回投与単位に分割、成形、及び／または包装することを含む。
本開示による薬学的組成物は、単一の単位用量として、及び／または複数の単位用量として、バルクで調製、包装、及び／または販売してもよい。本明細書で使用する場合、「単位用量」は、所定量の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子）を含む薬学的組成物の別個の量である。活性成分の量は、概して、対象に投与される活性成分の投薬量及び／またはかかる投薬量の好都合な部分、例えば、かかる投薬量の２分の１または３分の１に等しい。
薬学的組成物は、様々な投与の経路及び方法に好適な様々な形態で調製され得る。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、液体剤形（例えば、エマルション、マイクロエマルション、ナノエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル）、注射剤形、固体剤形（例えば、カプセル、錠剤、丸剤、粉末、及び顆粒）、局所及び／または経皮投与用の剤形（例えば、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、及びパッチ）、懸濁液、粉末、ならびに他の形態で調製され得る。
経口及び非経口投与のための液体剤形には、限定されないが、薬学的に許容されるエマルション、マイクロエマルション、ナノエマルション、溶液、懸濁液、シロップ、及び／またはエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当該技術分野で一般的に使用される不活性希釈剤、可溶化剤ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、シクロデキストリン、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及び脂肪酸エステルソルビタンなどの乳化剤、ならびにこれらの混合物を含む。不活性希釈剤以外に、経口組成物は、追加の治療剤及び／または予防剤、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、香味剤、及び／または芳香剤などの追加の薬剤を含み得る。非経口投与のためのある特定の実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／またはそれらの組み合わせと混合される。
注射用調製物、例えば、滅菌の注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁剤を使用して、公知の技術に従って製剤化され得る。滅菌の注射用調製物は、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤及び／または溶媒中の滅菌注射用溶液、懸濁液、及び／またはエマルションであり得る。使用され得る許容されるビヒクル及び溶媒には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒体として従来使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性（ｂｌａｎｄ）固定油を使用することができる。オレイン酸などの脂肪酸を、注射剤の調製に使用することができる。
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通して濾過することによって、及び／または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散させることができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌され得る。
活性成分の効果を延長するために、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの活性成分の吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性が低い結晶性または非晶質材料の液体懸濁液を使用することによって達成され得る。次いで、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、次いで、その溶解速度は、結晶サイズ及び結晶形態に依存し得る。代替的に、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、薬物を油ビヒクルに溶解または懸濁させることによって達成される。注射用デポ形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中で薬物のマイクロ封入マトリックスを形成することによって作製される。薬物対ポリマーの比及び使用される特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が挙げられる。デポ注射用製剤は、薬物を、身体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルションに封入することによって調製される。
直腸または膣投与のための組成物は、典型的には、周囲温度では固体であるが、体温では液体である、好適な非刺激性賦形剤、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、または座薬ワックスと、組成物を混合することによって調製することができる座薬であり、したがって、直腸または膣腔内で融解し、活性成分を放出する。
経口投与用の固体剤形としては、カプセル、錠剤、丸剤、フィルム、粉末、及び顆粒が挙げられる。かかる固体剤形の活性成分は、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの賦形剤、及び／または充填剤もしくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケート、及び炭酸ナトリウム）、溶液遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレート）、吸収剤（例えば、カオリン及びベントナイト粘土、シリケート）、及び滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル酸硫酸ナトリウム）、ならびにそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤、及び丸剤の場合、剤形は、緩衝剤を含み得る。
同様の種類の固体組成物が、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中で充填剤として使用され得る。錠剤、糖衣剤、カプセル、丸剤、及び顆粒の固体剤形は、腸溶コーティング及び薬学的製剤分野で周知の他のコーティングなどのコーティング及びシェルとともに調製され得る。それらは、任意選択的に、乳白剤を含み得、活性成分（複数可）のみを放出する組成物のものであり得る。いくつかの実施形態では、固体組成物は、任意選択的に、乳白剤を含み得、任意選択的に遅延様式で、腸管のある特定の部分で、活性成分（複数可）を放出する組成物のものであり得る。使用され得る埋封組成物の例としては、ポリマー性物質及びワックスが挙げられる。同様の種類の固体組成物が、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中で充填剤として使用され得る。
組成物の局所及び／または経皮投与のための剤形としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤、及び／またはパッチが挙げられ得る。一般に、活性成分は、必要に応じて、薬学的に許容される賦形剤及び／または任意の必要な防腐剤及び／または緩衝剤と滅菌条件下で混合される。加えて、本開示は、多くの場合、化合物の身体への制御された送達を提供する追加の利点を有する経皮パッチの使用を企図する。かかる剤形は、例えば、化合物を適切な培地に溶解及び／または分配することによって調製され得る。代替的または追加的に、速度は、速度制御膜を提供すること、及び／またはポリマーマトリックス及び／またはゲル中に化合物を分散させることのいずれかによって制御され得る。
本明細書に記載の皮内薬学的組成物の送達に使用するのに好適なデバイスは、米国特許第４，８８６，４９９号、同第５，１９０，５２１号、同第５，３２８，４８３号、同第５，５２７，２８８号、同第４，２７０，５３７号、同第５，０１５，２３５号、同第５，１４１，４９６号、及び同第５，４１７，６６２号に記載されるものなどの短い針デバイスを含む。皮内組成物は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／３４８５０号及びその機能的に等価な物に記載のものなどの、皮膚を貫通するのに有効な針の長さに制限するデバイスによって投与され得る。液体ジェット注入器を介して、及び／または角質層を貫通し、真皮に到達するジェットを生成する針を介して、液体組成物を真皮に送達するジェット注入デバイスが好適である。ジェット注入デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号、同第５，５９９，３０２号、同第５，３３４，１４４号、同第５，９９３，４１２号、同第５，６４９，９１２号、同第５，５６９，１８９号、同第５，７０４，９１１号、同第５，３８３，８５１号、同第５，８９３，３９７号、同第５，４６６，２２０号、同第５，３３９，１６３号、同第５，３１２，３３５号、同第５，５０３，６２７号、同第５，０６４，４１３号、同第５，５２０，６３９号、同第４，５９６，５５６号、同第４，７９０，８２４号、同第４，９４１，８８０号、同第４，９４０，４６０号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９７／３７７０５及び同第ＷＯ９７／１３５３７号に記載されている。圧縮ガスを使用して、皮膚の外層を通って真皮に至る粉末形態のワクチンを加速する弾道送達粉末／粒子送達デバイスが好適である。代替的または追加的に、従来の注射器は、皮内投与の古典的なマントー法で使用され得る。
局所投与に好適な製剤には、限定されないが、塗布剤、ローション、水中油型及び／または油中水型エマルション（例えば、クリーム、軟膏及び／またはペースト）、及び／または溶液、及び／または懸濁液などの液体及び／または半液体調製物が含まれる。局所投与が可能な製剤は、例えば、約１％～約１０％（重量／重量）の活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒への活性成分の溶解限界と同程度であり得る。局所投与用の製剤は、本明細書に記載される追加の成分のうちの１つ以上をさらに含んでもよい。
薬学的組成物は、頬腔を介した肺投与に好適な製剤で調製、包装、及び／または販売され得る。かかる製剤は、活性成分を含む乾燥粒子を含んでもよい。かかる組成物は、好都合には、推進剤の流れが粉末を分散させるように向けられ得る乾燥粉末貯蔵器を含むデバイスを使用して、及び／または密閉された容器内の低沸騰推進剤に溶解及び／または懸濁された活性成分を含むデバイスなどの自己推進溶媒／粉末分注容器を使用して、投与するための乾燥粉末の形態である。乾燥粉末組成物は、砂糖などの固体微細粉末希釈剤を含み得、単位用量形態で便宜的に提供される。
低沸騰推進剤は、一般に、大気圧で６５°Ｆ未満の沸点を有する液体推進剤を含む。一般に、推進剤は組成物の５０％～９９．９％（重量／重量）を構成してもよく、活性成分は組成物の０．１％～２０％（重量／重量）を構成してもよい。推進剤は、液体非イオン性及び／または固体アニオン性界面活性剤及び／または固体希釈剤（活性成分を含む粒子と同じ程度の粒径を有し得る）などの追加の成分をさらに含み得る。
肺送達のために製剤化された薬学的組成物は、溶液及び／または懸濁液の液滴の形態の活性成分を提供し得る。かかる製剤は、活性成分を含む、任意選択的に滅菌された、水性及び／または希釈アルコール溶液及び／または懸濁液として、調製、包装、及び／または販売され得、任意の噴霧及び／または噴霧装置を使用して便利に投与することができる。かかる製剤は、限定されないが、サッカリンナトリウムなどの香味剤、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤、及び／またはヒドロキシ安息香酸メチルなどの防腐剤を含む１つ以上の追加の成分をさらに含んでもよい。この投与経路によって提供される液滴は、約１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の平均直径を有し得る。
肺送達に有用であると本明細書に記載される製剤は、薬学的組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み、約０．２μｍ～５００μｍの平均粒子を有する粗製粉末である。このような製剤は、スナッフが服用される方法、すなわち、鼻の近くに保持される粉末の容器から鼻通路を通って急速に吸入することによって投与される。
経鼻投与に好適な製剤は、例えば、０．１％（重量／重量）程度に少ない、及び１００％（重量／重量）程度に多い活性成分を含み得、本明細書に記載の追加の成分のうちの１つ以上を含み得る。薬学的組成物は、頬側投与に好適な製剤で調製、包装、及び／または販売され得る。かかる製剤は、例えば、従来の方法を使用して作製される錠剤及び／またはロゼンジの形態であり得、例えば、０．１％～２０％（重量／重量）の活性成分であり得、残りは、経口的に溶解可能及び／または分解可能な組成物、ならびに任意選択的に本明細書に記載の追加の成分のうちの１つ以上を含む。あるいは、頬側投与に好適な製剤は、活性成分を含む粉末及び／またはエアロゾル化及び／または噴霧化溶液及び／または懸濁液を含んでもよい。かかる粉末状、エアロゾル化、及び／またはエアロゾル化製剤は、分散されるとき、約０．１ｎｍ～約２００ｎｍの範囲の平均粒子及び／または液滴サイズを有してよく、本明細書に記載される任意の追加の成分のうちの１つ以上をさらに含んでもよい。
薬学的組成物は、眼科投与に好適な製剤で調製、包装、及び／または販売され得る。かかる製剤は、例えば、０．１／１．０％（重量／重量）の溶液、及び／または活性成分の水性もしくは油性液体賦形剤中の懸濁液を含む点眼剤の形態であり得る。かかる点眼剤は、緩衝剤、塩、及び／または本明細書に記載される任意の追加成分の１つ以上の他の成分をさらに含み得る。有用な他の眼科投与可能な製剤には、微結晶形態及び／またはリポソーム調製物中の活性成分を含むものが含まれる。点耳剤及び／または点眼剤は、本開示の範囲内にあるものとして企図される。
細胞においてポリペプチドを生成する方法
本開示は、哺乳類の細胞において目的のポリペプチドを生成する方法を提供する。ポリペプチドを生成する方法は、目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰを含む開示の製剤と細胞を接触させることが関わる。細胞を脂質ナノ粒子と接触させると、細胞内にｍＲＮＡが取り込まれ、翻訳されて目的のポリペプチドが生成され得る。
一般に、目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰと哺乳類の細胞を接触させるステップは、インビボ、エクスビボ、培養中、またはインビトロで実施され得る。細胞と接触させる脂質ナノ粒子の量、及び／またはその中のｍＲＮＡの量は、接触させる細胞または組織の種類、投与手段、脂質ナノ粒子及びその中のｍＲＮＡの生理化学的特徴（例えば、サイズ、電荷、及び化学組成）、ならびに他の要因に依存し得る。一般に、有効量の脂質ナノ粒子は、細胞における効率的なポリペプチド生成を可能にするであろう。効率のためのメトリックは、ポリペプチド翻訳（ポリペプチド発現によって示される）、ｍＲＮＡ分解レベル、及び免疫応答インジケータを含み得る。
ｍＲＮＡを含むＬＮＰを細胞と接触させるステップは、トランスフェクションが関わり得るか、またはトランスフェクションを引き起こし得る。ＬＮＰの脂質成分に含まれるリン脂質は、例えば、細胞膜または細胞内膜と相互作用及び／または融合することによって、トランスフェクションを促進し、及び／またはトランスフェクション効率を増加させ得る。トランスフェクションは、細胞内でのｍＲＮＡの翻訳を可能にし得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、治療的に使用され得る。例えば、ＬＮＰ中に含まれるｍＲＮＡは、治療用ポリペプチドを（例えば、翻訳可能な領域に）コードし、細胞に接触及び／または進入（例えば、トランスフェクション）すると、治療用ポリペプチドを生成し得る。他の実施形態では、ＬＮＰ中に含まれるｍＲＮＡは、対象の免疫を改善または増加させ得るポリペプチドをコードし得る。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、顆粒球コロニー刺激因子をコードし得るか、またはトラスツズマブであり得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰ中に含まれるｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子と接触した細胞内では実質的に不在であり得る１つ以上のポリペプチドで置き換えられ得る組換えポリペプチドをコードし得る。１つ以上の実質的に不在のポリペプチドは、コード遺伝子またはその調節経路の遺伝的変異に起因して欠如している場合がある。代替的に、ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内に存在する、細胞表面上の、または細胞から分泌される内因性タンパク質の活性に拮抗し得る。拮抗性組換えポリペプチドは、変異によって引き起こされる活性の変更または局在化などの内因性タンパク質の活性によって引き起こされる有害作用に対抗するために望ましい場合がある。別の代替例では、ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内に存在する、細胞表面上の、または細胞から分泌される生物学的部分の活性に間接的または直接的に拮抗し得る。拮抗される生物学的部分としては、限定されないが、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、及び小分子毒素が挙げられ得る。ｍＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、核などの特定の区画内などの細胞内での局在化のために操作され得るか、または細胞からの分泌のために、もしくは細胞の形質膜への転座のために操作され得る。
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡを含むＬＮＰと細胞を接触させることにより、外因性核酸に対する細胞の自然免疫応答を低減し得る。細胞は、翻訳可能領域を含む、第１の量の第１の外因性ｍＲＮＡを含む第１の脂質ナノ粒子と接触され得、第１の外因性ｍＲＮＡに対する細胞の自然免疫応答のレベルが決定され得る。その後、細胞は、第２の量の第１の外因性ｍＲＮＡを含む第２の組成物と接触され得、第２の量は、第１の量と比較して、第１の外因性ｍＲＮＡの量が少ない。代替的に、第２の組成物は、第１の量の、第１の外因性ｍＲＮＡとは異なる第２の外因性ｍＲＮＡを含み得る。第１及び第２の組成物と細胞を接触させるステップは、１回以上繰り返され得る。加えて、細胞内のポリペプチド生成（例えば、翻訳）の効率は、任意選択的に決定され得、細胞は、標的タンパク質生成効率が達成されるまで、第１及び／または第２の組成物と繰り返し再接触され得る。
治療薬を細胞及び臓器に送達する方法
本開示は、核酸などの治療剤及び／または予防剤を哺乳類の細胞または臓器に送達する方法を提供する。治療剤及び／または予防剤を細胞に送達することは、核酸などの治療剤及び／または予防剤を含むＬＮＰを含む開示の製剤を対象に投与することが関わり、組成物の投与は、組成物と細胞を接触させることが関わる。いくつかの実施形態では、タンパク質、細胞傷害性剤、放射性イオン、化学療法剤、または核酸（ＲＮＡ、例えばｍＲＮＡなど）が、細胞または臓器に送達され得る。治療剤及び／または予防剤がｍＲＮＡである場合、脂質ナノ粒子と細胞を接触させると、翻訳可能なｍＲＮＡが細胞内で翻訳されて、目的のポリペプチドが生成され得る。しかしながら、実質的に翻訳可能でないｍＲＮＡもまた、細胞に送達され得る。実質的に非翻訳可能なｍＲＮＡは、ワクチンとして有用であり得、及び／または細胞の翻訳成分を封鎖して、細胞内の他の種の発現を低減し得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、特定の種類またはクラスの細胞（例えば、特定の臓器またはその系の細胞）を標的にし得る。いくつかの実施形態では、目的の治療剤及び／または予防剤を含むＬＮＰが、哺乳類の肝臓、腎臓、脾臓、大腿骨、または肺に特異的に送達され得る。特定のクラスの細胞、臓器、またはそれらの系もしくは群への特異的送達は、治療剤及び／または予防剤を含むより高い割合の脂質ナノ粒子が、例えば、哺乳類へのＬＮＰの投与の際に、他の対象とする場所と比較して、目的の対象とする場所（例えば、組織）に送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、特異的送達は、別の対象とする場所（例えば、脾臓）と比較して、標的とする対象とする場所の組織（例えば、肝臓などの目的の組織）１ｇ当たり、治療剤及び／または予防剤の量に２倍、５倍、１０倍、１５倍、または２０倍超の増加を生じ得る。いくつかの実施形態では、目的の組織は、肝臓、腎臓、肺、脾臓、大腿骨、血管内（例えば、腫瘍内または大腿骨内）の血管内皮からなる群から選択される。
標的化送達または特異的送達の別の例として、タンパク質結合パートナー（例えば、抗体もしくはその機能的断片、骨格タンパク質、またはペプチド）または細胞表面上の受容体をコードするｍＲＮＡが、ＬＮＰ中に含まれ得る。ｍＲＮＡが、脂質、炭水化物、または他の生物学的部分の合成及び細胞外局在化を誘導するために、加えて、または代わりに使用され得る。代替的に、ＬＮＰの他の治療剤及び／または予防薬または要素（例えば、脂質またはリガンド）は、ＬＮＰが、受容体を含む標的細胞集団とより容易に相互作用することができるように、特定の受容体（例えば、低密度リポタンパク質受容体）に対するそれらの親和性に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態では、リガンドとしては、限定されないが、特異的結合対のメンバー、抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、単一ドメイン抗体、ラクダ化抗体及びそれらの断片、ヒト化抗体及びそれらの断片、及びそれらの多価バージョン；ジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ｓｃＦｖタンデム、ダイアボディ、トリボディ、またはテトラボディなどの単一または二重特異的抗体を含む多価結合試薬；ならびにアプタマー、受容体、及び融合タンパク質が挙げられ得る。
いくつかの実施形態では、リガンドは、細胞標的化特異性の調整を可能にし得る表面結合抗体であり得る。これは、特異性が高い抗体を、所望の標的化部位の目的のエピトープに対して高めることができるので、特に有用である。一実施形態では、複数の抗体が細胞の表面上で発現され、各抗体は、所望の標的に対する異なる特異性を有し得る。かかるアプローチは、標的化相互作用の親和性及び特異性を増加させることができる。
リガンドは、例えば、生物学的技術分野の当業者によって、細胞の所望の局在化または機能に基づいて選択され得る。
いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、肝細胞を標的とし得る。アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）などのアポリポタンパク質は、体内で中性またはほぼ中性の脂質を含有する脂質ナノ粒子と会合することが示されており、肝細胞の表面に見出される低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）などの受容体と会合することが知られている。したがって、対象に投与される中性またはほぼ中性の電荷を有する脂質成分を含むＬＮＰは、対象の体内でａｐｏＥを獲得することができ、その後、標的化した様式で、ＬＤＬＲを含む肝細胞に治療剤及び／または予防剤（例えば、ＲＮＡ）を送達することができる。
疾患及び障害を治療する方法
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、本明細書に記載の空のＬＮＰを投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、本明細書に記載の空のＬＮＰ溶液を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、本明細書に記載の充填されたＬＮＰを投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、本明細書に記載の充填されたＬＮＰ溶液を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止する方法を提供し、方法は、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、本明細書に記載のＬＮＰ製剤を投与することを含む。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、本明細書に開示の空のＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、本明細書に開示の空のＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、本明細書に開示の充填されたＬＮＰを提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、本明細書に開示の充填されたＬＮＰ溶液を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、本明細書に開示のＬＮＰ製剤を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、本明細書に開示の空のＬＮＰの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、本明細書に開示の空のＬＮＰ溶液の使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、本明細書に開示の充填されたＬＮＰの使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、本明細書に開示の充填されたＬＮＰ溶液の使用を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象に、本明細書に開示の空のＬＮＰを投与する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象に、本明細書に開示の空のＬＮＰ溶液を投与する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象に、本明細書に開示の充填されたＬＮＰを投与する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象に、本明細書に開示の充填されたＬＮＰ溶液を投与する方法を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、対象に、本明細書に開示のＬＮＰ製剤を投与する方法を提供する。
脂質ナノ粒子は、疾患、障害、または状態を治療するのに有用であり得る。特に、かかる組成物は、欠損または異常なタンパク質またはポリペプチド活性を特徴とする疾患、障害、または状態の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、欠損したかまたは異常なポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含むＬＮＰを含む開示の製剤が、細胞に投与または送達され得る。ｍＲＮＡのその後の翻訳は、ポリペプチドを生成し得、それによって、ポリペプチドの不在またはポリペプチドが引き起こす異常な活性によって引き起こされる問題を低減または排除し得る。翻訳は急速に生じ得るので、方法及び組成物は、敗血症、脳卒中、及び心筋梗塞などの急性疾患、障害、または状態の治療に有用であり得る。ＬＮＰ中に含まれる治療剤及び／または予防剤はまた、所与の種の転写速度を改変することが可能であり、それによって遺伝子発現に影響を及ぼし得る。
開示は、核酸などの１つ以上の治療薬及び／または予防薬を含む脂質ナノ粒子、ならびにそれを含む薬学的組成物を投与することが関わる方法を提供する。治療剤及び予防剤という用語は、本明細書では、本開示の特色及び実施形態に関して同義的に使用され得る。治療組成物、またはそれらのイメージング、診断、もしくは予防組成物は、疾患、障害、及び／または状態、及び／または任意の他の目的を防止、治療、診断、またはイメージングするのに有効な任意の合理的な量及び任意の投与経路を使用して、対象に投与され得る。所与の対象に投与される特定の量は、対象の種、年齢、及び全身状態、投与の目的、特定の組成物、投与様式などに応じて変動し得る。本開示による組成物は、投与の簡便性及び投薬量の均一性のために、単位剤形で製剤化され得る。しかしながら、本開示の組成物の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されるであろうことが理解されるであろう。任意の特定の患者に対する特定の治療的に有効な、予防的に有効な、またはその他の適切な（例えば、イメージングのための）用量レベルは、（存在する場合）治療される障害の重症度及びそれが何であるか；使用される１つ以上の治療剤及び／または予防剤；使用される特定の組成物；患者の年齢、体重、総合的健康状態、性別、及び食事；使用される特定の薬学的組成物の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療期間；使用される特定の薬学的組成物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の同様の要因を含む様々な要因に依存するであろう。
核酸などの１つ以上の治療剤及び／または予防剤を含むＬＮＰは、任意の経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の脂質ナノ粒子を含む、予防、診断、またはイメージング組成物を含む組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、くも膜下腔内、皮下、心室内、経皮または皮内、皮間、直腸、膣内、腹腔内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／またはドロップによる）、粘膜、経鼻、頬内、経腸、硝子体内、腫瘍内、舌下、鼻腔内を含む様々な経路のうちの１つ以上によって；気管内注入、気管支注入、及び／または吸入によって；経口スプレー及び／または粉末、鼻スプレー、及び／またはエアロゾルとして、及び／または門脈カテーテルを通じて投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内、筋肉内、皮内、動脈内、腫瘍内、皮下、または吸入によって投与され得る。しかしながら、本開示は、薬物送達の科学における可能性のある進歩を考慮した任意の適切な経路による本明細書に記載の組成物の送達または投与を包含する。一般に、最も適切な投与経路は、１つ以上の治療剤及び／または予防剤を含む脂質ナノ粒子の性質（例えば、血流及び胃腸管などの様々な身体環境におけるその安定性）、患者の状態（例えば、患者が特定の投与経路に耐えることが可能であるかどうか）などを含む様々な要因に依存するであろう。
ある特定の実施形態では、本開示による組成物は、所与の用量で、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇの治療剤及び／または予防剤（例えば、ｍＲＮＡ）を送達するのに十分な投薬レベルで投与され得、１ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）の用量が、対象の体重１ｋｇ当たり１ｍｇの治療剤及び／または予防剤を提供する。いくつかの実施形態では、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量の治療剤及び／または予防剤（例えば、ｍＲＮＡ）のＬＮＰが投与され得る。他の実施形態では、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇの用量の治療剤及び／または予防剤が投与され得る。ある特定の実施形態では、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの用量が投与され得る。他の実施形態では、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇの用量が投与され得る。用量は、所望のレベルのｍＲＮＡ発現、及び／または治療、診断、予防、もしくはイメージング効果を得るために、同じかまたは異なる量で１日に１回以上投与され得る。所望の投薬量は、例えば、１日３回、１日２回、１日１回、隔日、３日毎、毎週、２週間毎、３週間毎、または４週間毎に送達され得る。ある特定の実施形態では、所望の投薬量は、複数の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、またはそれよりも多くの投与）を使用して送達され得る。いくつかの実施形態では、単回用量は、例えば、外科的処置の前または後、または急性疾患、障害、もしくは状態の場合に投与されてもよい。
核酸などの１つ以上の治療剤及び／または予防剤を含む脂質ナノ粒子は、１つ以上の他の治療薬、予防薬、診断薬、またはイメージング剤と組み合わせて使用され得る。「と組み合わせる」は、これらの送達方法は本開示の範囲内であるが、薬剤が同時に投与されなければならないこと、及び／または送達のために一緒に製剤化されなければならないことを暗示することは意図されない。いくつかの実施形態では、１つ以上の異なる治療剤及び／または予防剤を含む１つ以上の脂質ナノ粒子を組み合わせて投与され得る。組成物は、１つ以上の他の所望の治療薬または医療処置と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／または時間スケジュールで投与される。いくつかの実施形態では、本開示は、バイオアベイラビリティを改善し、代謝を低減及び／または変更し、排泄を阻害し、及び／または体内での分布を変更する薬剤と組み合わせた、組成物、またはそれらのイメージング、診断、もしくは予防組成物の送達を包含する。
組み合わせて利用される治療、予防、診断、またはイメージング活性剤は、単一の組成物中で一緒に投与され得るか、または異なる組成物中で別々に投与され得ることがさらに理解されるであろう。一般に、組み合わせて利用される薬剤は、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用されるであろうことが予期される。いくつかの実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、個々に利用されるレベルよりも低い場合がある。
併用レジメンで使用する療法（治療薬または手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬及び／または手順と、達成される所望の治療効果との適合性を考慮に入れるであろう。また、使用される療法は、同じ障害に対して所望の効果を達成し得る（例えば、がんを治療するのに有用な組成物は、化学療法剤と同時に投与され得る）か、またはそれらは、異なる効果（例えば、注入に関連する反応などの任意の有害な効果の制御）を達成し得ることが理解されるであろう。
ＬＮＰは、組成物の有効性及び／または治療時間枠を増加させる薬剤と組み合わせて使用され得る。かかる薬剤は、例えば、抗炎症性化合物、ステロイド（例えば、コルチコステロイド）、スタチン、エストラジオール、ＢＴＫ阻害剤、Ｓ１Ｐ１アゴニスト、グルココルチコイド受容体調節剤（ＧＲＭ）、または抗ヒスタミンであり得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは、デキサメタゾン、メトトレキサート、アセトアミノフェン、Ｈ１受容体遮断薬、またはＨ２受容体遮断薬と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、疾患もしくは障害の治療を必要とする対象を治療するか、または治療剤及び／または予防剤を対象（例えば、哺乳類）に送達する方法は、ＬＮＰを投与する前に、対象を１つ以上の薬剤で予め治療することが関わり得る。いくつかの実施形態では、対象は、有用な量（例えば、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、または任意の他の有用な量）のデキサメタゾン、メトトレキサート、アセトアミノフェン、Ｈ１受容体遮断薬、またはＨ２受容体遮断薬で予め治療され得る。予めの治療は、脂質ナノ粒子の投与の２４時間前またはそれよりも少ない時間（例えば、２４時間、２０時間、１６時間、１２時間、８時間、４時間、２時間、１時間、５０分、４０分、３０分、２０分、または１０分）に行われ得、例えば、増加させた投薬量で１回、２回、またはそれよりも多く行われ得る。
当業者であれば、ほんの日常的な実験を用いて、本明細書に記載される本開示による具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識するか、またはそれを確認することができよう。本開示の範囲は、上の発明を実施するための形態に限定されることを意図しておらず、添付の特許請求の範囲に記載されるものを意図する。
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、１つ以上を意味し得る。グループの１つ以上のメンバー間の「または（ｏｒ）」を含む請求項または説明は、反対の指示がない限り、または文脈から明らかでない限り、グループのメンバーのうちの１つ、２つ以上、またはすべてが所与の生成物もしくはプロセスにおいて存在するか、使用されるか、または他の方法でそれと関連する場合に満たされるとみなされる。本開示は、グループの正確に１つのメンバーが、所与の生成物もしくはプロセスにおいて存在するか、使用されるか、または他の方法でそれと関連する実施形態を含む。開示は、グループメンバーのうちの２つ以上またはすべてが、所与の生成物またはプロセスにおいて存在するか、使用されるか、またはそれと関連する実施形態を含む。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、開放的であることを意図し、追加の要素またはステップの包含を許容するが、それを必要としないことにも留意されたい。したがって、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語が本明細書で使用する場合、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語も包含され、開示される。本明細書全体を通して、組成物が特定の成分を有する、含む、または含むと記載される場合、組成物はまた、列挙された成分から本質的になるか、またはそれからなることが企図される。同様に、方法またはプロセスが、特定のプロセスステップを有する、含む、または含むと記載される場合、プロセスはまた、列挙された処理ステップから本質的になるか、またはそれからなる。さらに、ある特定の行為を実施するためのステップの順序または順序は、発明が動作可能であり続ける限り重要ではないことが理解されるべきである。さらに、２つ以上のステップまたは行為を同時に実行することができる。
範囲が与えられている場合、終点が含まれる。さらに、別段の指示がない限り、または文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現される値は、文脈が別段明らかに指示しない限り、開示の異なる実施形態に記載の範囲内の任意の特定の値または部分範囲を、範囲の下限の単位の１０分の１に想定することができることを理解されたい。
加えて、従来技術に該当する本開示の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲のいずれか１つ以上から明示的に除外され得ることを理解されたい。かかる実施形態は、当業者に既知であるとみなされるので、それらは、除外が本明細書に明示的に記載されていない場合さえも除外され得る。
たとえ引用文献に明示的に記載されていなくても、すべての引用文献、例えば、参照文献、刊行物、特許出願書、データベース、データベースエントリー、及び本明細書に引用される技術は、参照により本出願に組み込まれる。引用元及び本出願の記述が相反する場合、本出願の記述を優先するものとする。
開示について記載してきたが、以下の実施例は、限定ではなく、例示として提供される。
等価物
本発明の１つ以上の実施形態の詳細が、添付の上の説明に記載されている。本明細書に記載のものと同様または同等の任意の方法及び材料を本開示の実践または試験において使用することができるが、好ましい方法及び材料を、以下に記載する。開示の他の特色、目的、及び利点は、記載及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書及び添付の特許請求の範囲において、別段文脈が明らかに示さない限り、単数形は複数の対象物を含む。別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で引用されるすべての特許及び刊行物は、参照により組み込まれる。
前述の記載は、例示目的のためにのみ提示されており、発明を、開示の厳密な形態に限定するのではなく、本明細書に添付される特許請求の範囲によって限定することを意図するものである。
実施形態の列挙
実施形態１．空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
（ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、
前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、前記混合ステップを含む、前記方法。
実施形態２．空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
（ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質を含み、
前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、前記混合ステップを含む、前記方法。
実施形態３．前記空のＬＮＰ溶液を処理することをさらに含む、実施形態１に記載の方法。
実施形態４．充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
（ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、前記混合ステップと、
（ｉｉ）核酸を含む核酸溶液を前記空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって、充填されたＬＮＰを含む充填されたＬＮＰ溶液を形成することを含む、充填ステップと、を含む、前記方法。
実施形態５．充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
（ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質を含み、前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、前記混合ステップと、
（ｉｉ）核酸を含む核酸溶液を前記空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって、充填されたＬＮＰを含む充填されたＬＮＰ溶液を形成することを含む、充填ステップと、を含む、前記方法。
実施形態６．前記充填されたＬＮＰ溶液を処理し、それによって脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７．前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記充填されたＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８．前記第１の添加ステップが、前記充填されたＬＮＰ溶液に前記ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９．前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０．前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、ｐＨ調整をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１．前記ｐＨ調整が、第２の緩衝剤を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２．前記第２の緩衝剤が、第２の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３．前記第２の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４．前記緩衝剤が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的組成物。
実施形態１５．前記緩衝剤が、酢酸塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６．前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、濾過をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７．前記濾過が、タンジェンシャルフロー濾過によって実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８．前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、緩衝液交換をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９．前記緩衝液交換が、第３の緩衝剤を含む水性緩衝液の添加を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０．前記第３の緩衝剤が、第３の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１．前記第３の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２２．前記第３の水性緩衝液が、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３．前記第３の水性緩衝液が、約７．５のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２４．前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２５．前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２６．前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記充填されたＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２７．前記第２の添加ステップが、前記緩衝液交換の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２８．前記第２の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２９．前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液を希釈することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３１．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結乾燥させることをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３２．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を保管することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３３．前記混合ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３４．前記充填ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３５．前記水性緩衝液が、約４．５～約６．５、約４．６～約６．０、約４．７～約５．７５、約４．８～約５．５、または約４．９～約５．２５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３６．前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７．前記空のＬＮＰ溶液が、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、または約５．０～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３８．前記核酸溶液が、約４．５～約６．５、約４．８～約６．２５、約４．８～約６．０、約５．０～約５．８、または約５．２～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３９．前記核酸溶液、前記空のＬＮＰ溶液、及び前記ＬＮＰ製剤のｐＨが、約５．０～約６．０、約５．１～約５．７５、または約５．２～約５．５の範囲である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４０．前記充填されたＬＮＰ溶液が、約４．５～約６．０、約４．６～約５．８、約４．８～約５．６、約５．０～約５．５、または約５．１～約５．４の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４１．前記脂質溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４３．前記第１の有機溶媒が、アルコールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４４．前記第１の有機溶媒が、エタノールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４５．前記第１の緩衝剤が、第１の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６．前記第１の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４７．前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約３０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４８．前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約３ｍＭ～約１０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約４ｍＭ～約８ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約５ｍＭ～約６ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４９．前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、またはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５０．前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭの酢酸塩を含み、前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５１．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５２．前記等張化剤が、糖である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５３．前記糖が、スクロースである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５４．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．０１ｇ／ｍＬ～約１．０ｇ／ｍＬ、約０．０５ｇ／ｍＬ～約０．５ｇ／ｍＬ、約０．１ｇ／ｍＬ～約０．４ｇ／ｍＬ、約０．１５ｇ／ｍＬ～約０．３ｇ／ｍＬ、または約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５５．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬのスクロースをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５７．前記核酸溶液が、約０．０１～約１．０ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．０５～約０．５ｍｇ／ｍＬの前記核酸、または約０．１～約０．２５ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８．前記核酸溶液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５９．前記核酸溶液が、酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６０．前記核酸溶液が、約１ｍＭ～約２００ｍＭの酢酸緩衝液、約２ｍＭ～約１８０ｍＭの酢酸緩衝液、約３ｍＭ～約１６０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１４０ｍＭの酢酸緩衝液、約５ｍＭ～約１３０ｍＭの酢酸緩衝液、約６ｍＭ～約１２０ｍＭの酢酸緩衝液、約７ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸緩衝液、約８ｍＭ～約１００ｍＭの酢酸緩衝液、約９ｍＭ～約９０ｍＭの酢酸緩衝液、約１０ｍＭ～約８０ｍＭの酢酸緩衝液、約１５ｍＭ～約７０ｍＭの酢酸緩衝液、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸緩衝液、約２５ｍＭ～約５０ｍＭの酢酸緩衝液、または約３０ｍＭ～約４０ｍＭの酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６１．前記核酸溶液及び前記空のＬＮＰ溶液が、前記充填ステップ中に、約５：１～約７：１、約４：１～約６：１、約３：１～約５：１、または約２：１～約４：１の体積流量比で混合される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６２．前記充填されたＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６３．前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、封入剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６４．前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６５．前記空のＬＮＰが、
約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、
約０～３０ｍｏｌ％のリン脂質と、
約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、
約０．１～０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、
を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６６．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６７．前記構造的脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラジカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６８．前記リン脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６９．前記イオン化可能な脂質が、イオン化可能なアミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７０．前記核酸が、リボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７１．前記リボ核酸が、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及び長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのリボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７２．前記核酸が、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７３．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造からなる群から選択される少なくとも１つのモチーフを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７４．前記ｍＲＮＡが、少なくとも３０ヌクレオチド長である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７５．前記ｍＲＮＡが、少なくとも３００ヌクレオチド長である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７６．前記ＬＮＰ製剤が、約１．１：１～約３０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７７．前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約２０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７８．前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約１０：１、または約２：１～約５：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７９．前記ＬＮＰ製剤が、約０．０１～約５００ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．１～約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．２５～約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８０．約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
実施形態８１．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ。
実施形態８２．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ溶液。
実施形態８３．空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液であって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、前記空のＬＮＰ溶液。
実施形態８４．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ。
実施形態８５．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ溶液。
実施形態８６．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、ＬＮＰ製剤。
実施形態８７．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰを投与することを含む、前記方法。
実施形態８８．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液を投与することを含む、前記方法。
実施形態８９．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤を投与することを含む、前記方法。
実施形態９０．前記投与が、非経口で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９１．前記投与が、筋肉内、皮内、皮下、及び／または静脈内で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９２．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ。
実施形態９３．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液。
実施形態９４．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤。
実施形態９５．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰの使用。
実施形態９６．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液の使用。
実施形態９７．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤の使用。
実施形態９８．実施形態７７～８３のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
実施形態９９．約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
実施形態１００．約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
実施形態１０１．イオン化可能な脂質をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ。
実施形態１０２．リン脂質及び構造的脂質をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ。
実施形態１０３．約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０～３０ｍｏｌ％リン脂質と、約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１～１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む、空のＬＮＰ。
実施形態１０４．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１０５．酢酸緩衝液をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１０６．等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１０７．前記等張化剤が、スクロースである、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１０８．
（ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
（ｉｉ）酢酸緩衝液と、を含む、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１０９．
（ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
（ｉｉ）酢酸緩衝液と、
（ｉｉｉ）スクロースと、を含む、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１０．
（ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
（ｉｉ）酢酸緩衝液と、を含む、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１１．
（ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
（ｉｉ）酢酸緩衝液と、
（ｉｉｉ）スクロースと、を含む、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１２．約４．５～約６．２５、約４．６～約６．０、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、または約５．０～約５．５のｐＨ値を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１３．約５ｍＭの酢酸緩衝液を含み、前記酢酸緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１４．約０．２ｇ／ｍＬのスクロースを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１５．前記空のＬＮＰが、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の前記イオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の前記リン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の前記構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質と、を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１６．前記空のＬＮＰが、約４０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の前記イオン化可能な脂質と、約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％の前記リン脂質と、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の前記構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質と、を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１７．前記ＰＥＧ脂質が、約０．２ｍｏｌ％～約０．７ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１８．前記ＰＥＧ脂質が、約０．５ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１１９．前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２０．前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約３０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２１．前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２２．前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約１０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２３．前記空のＬＮＰ溶液が、約５ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２４．前記緩衝液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２５．前記緩衝液が、５．５未満のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２６．前記緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２７．前記空のＬＮＰ溶液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２８．前記空のＬＮＰ溶液が、５．５未満のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１２９．前記空のＬＮＰ溶液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３０．前記ＬＮＰが、約４５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３１．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000075
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３２．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000076
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３３．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３４．前記構造的脂質が、コレステロールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３５．前記リン脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３６．前記空のＬＮＰが、治療薬または予防薬を実質的に含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３７．前記空のＬＮＰが、治療薬または予防薬を含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３８．前記空のＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の治療薬または予防薬を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１３９．前記空のＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の治療薬または予防薬を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１４０．前記空のＬＮＰが、核酸を実質的に含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１４１．前記空のＬＮＰが、核酸を含まない、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１４２．前記空のＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１４３．前記空のＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１重量％未満の核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液。
実施形態１４４．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む、調製物。
実施形態１４５．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰと、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液と、を含む、調製物。
実施形態１４６．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む、調製物。
実施形態１４７．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、治療薬または予防薬を実質的に含まず、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１４８．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが治療薬または予防薬を含まず、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１４９．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の治療薬または予防薬を含み、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５０．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の治療薬または予防薬を含み、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５１．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、核酸を実質的に含まず、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５２．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、核酸を含まず、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５３．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の核酸を含み、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５４．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、前記ＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の核酸を含み、前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
実施形態１５５．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、治療薬または予防薬を実質的に含まず、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１５６．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、治療薬または予防薬を含まず、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１５７．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の治療薬または予防薬を含み、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１５８．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の治療薬または予防薬を含み、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１５９．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、核酸を実質的に含まず、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１６０．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、核酸を実質的に含まず、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１６１．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、５重量％未満、４重量％未満、３重量％未満、２重量％未満、または１重量％未満の核酸を含み、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１６２．脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
（ａ）前記ＬＮＰが、
約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
を含み、
（ｂ）前記ＬＮＰが、０．９重量％未満、０．８重量％未満、０．７重量％未満、０．６重量％未満、０．５重量％未満、０．４重量％未満、０．３重量％未満、０．２重量％未満、または０．１％未満の核酸を含み、
（ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、
前記調製物。
実施形態１６３．前記ＰＥＧ脂質が、約０．２ｍｏｌ％～約０．７ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６４．前記ＰＥＧ脂質が、約０．５ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６５．前記調製物が、約２ｍＭ～約３０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６６．前記調製物が、約２ｍＭ～約２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６７．前記調製物が、約２ｍＭ～約１０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６８．前記調製物が、約５ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１６９．前記緩衝液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７０．前記緩衝液が、５．５未満のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７１．前記緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７２．前記ＬＮＰが、約４５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７３．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000077
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７４．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000078
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７５．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７６．前記構造的脂質が、コレステロールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７７．前記リン脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の調製物。
実施形態１７８．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰの集団。
実施形態１７９．空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を調製する方法であって、
ｉ）イオン化可能な脂質を第１の緩衝剤と混合し、それによって前記空のＬＮＰを形成することを含む、混合ステップを含み、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、前記方法。
実施形態１８０．前記混合ステップが、前記イオン化可能な脂質を含む脂質溶液を、前記第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を形成することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８１．約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
実施形態１８２．空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液であって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、前記空のＬＮＰ溶液。
実施形態１８３．核酸と会合している充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を調製する方法であって、
ｉｉ）核酸を空のＬＮＰと混合し、それによって前記充填されたＬＮＰを形成することを含む、充填ステップを含む、前記方法。
実施形態１８４．前記充填ステップが、前記核酸を含む前記核酸溶液を前記空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって前記充填されたＬＮＰを含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を形成することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８５．形成の際に、保持または保管することなく、前記空のＬＮＰまたは前記空のＬＮＰ溶液に前記充填ステップが施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８６．一定期間保持した後、前記空のＬＮＰまたは前記空のＬＮＰ溶液に前記充填ステップが施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８７．一定期間保管した後、前記空のＬＮＰまたは前記空のＬＮＰ溶液に前記充填ステップが施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８８．形成の際に、一定期間保持または保管することなく、前記空のＬＮＰまたは前記空のＬＮＰ溶液に前記充填ステップが施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８９．
ｉｉｉ）前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理し、それによって脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９０．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ。
実施形態１９１．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ溶液。
実施形態１９２．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ。
実施形態１９３．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ溶液。
実施形態１９４．先行実施形態のいずれか１つに記載の方法によって調製された、ＬＮＰ製剤。
実施形態１９５．前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰが、０．１～０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、リン脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態１９６．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、ポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態１９７．前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液に前記ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態１９８．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、ポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態１９９．前記第２の添加ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液に前記ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２００．前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０１．前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０２．前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記ＬＮＰに約１．７５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０３．前記第２の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０４．前記第２の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ、約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧを添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０５．前記第２の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに約１．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０６．前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰが、約３．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約２．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．７５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．２５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約１．０ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．９ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．８ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．７ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．６ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．４ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．３ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質、または約０．１ｍｏｌ％以下のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０７．前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰが、約０ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、０．１ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約１．７５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０８．前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰが、約０ｍｏｌ％～０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２０９．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、濾過、ｐＨ調整、緩衝液交換、希釈、透析、濃縮、凍結、凍結乾燥、保管、及び包装から選択される少なくとも１つのステップをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１０．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、ｐＨ調整をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１１．前記ｐＨ調整が、第２の緩衝剤を添加することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１２．前記第２の緩衝剤が、第２の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１３．前記第２の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１４．前記第２の水性緩衝液が、トリス緩衝液である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１５．前記第２の水性緩衝液が、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１６．前記第２の水性緩衝液が、約７．５のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１７．前記第１の添加ステップが、前記ｐＨ調整の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１８．前記第１の添加ステップが、前記ｐＨ調整の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２１９．前記第２の添加ステップが、前記ｐＨ調整の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２０．前記第２の添加ステップが、前記ｐＨ調整の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２１．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、濾過をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２２．前記濾過が、タンジェンシャルフロー濾過である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２３．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、緩衝液交換をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２４．前記緩衝液交換が、第３の緩衝剤を含む水性緩衝液の添加を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２５．前記第３の緩衝剤が、第３の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２６．前記第３の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２７．前記第３の水性緩衝液が、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２８．前記第３の水性緩衝液が、約７．５のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２２９．前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３０．前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３１．前記第２の添加が、前記緩衝液交換の前に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３２．前記第２の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３３．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、希釈をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３４．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、透析をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３５．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、濃縮をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３６．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、凍結をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３７．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、凍結乾燥をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３８．前記凍結乾燥が、前記充填されたＬＮＰ溶液を、約－１００℃～約０℃、約－８０℃～約－１０℃、約－６０℃～約－２０℃、約－５０℃～約－２５℃、または約－４０℃～約－３０℃の温度で凍結することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２３９．前記凍結乾燥が、前記凍結させた充填されたＬＮＰ溶液を乾燥させて、凍結乾燥させた空のＬＮＰまたは凍結乾燥させた充填されたＬＮＰを形成することをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４０．前記乾燥が、約５０ｍＴｏｒｒ～約１５０ｍＴｏｒｒの範囲の真空で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４１．前記乾燥が、約－３５℃～約－１５℃で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４２．前記乾燥が、約室温～約２５℃で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４３．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、保管をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４４．前記保管が、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰを、約－８０℃、約－７８℃、約－７６℃、約－７４℃、約－７２℃、約－７０℃、約－６５℃、約－６０℃、約－５５℃、約－５０℃、約－４５℃、約－４０℃、約－３５℃、または約－３０℃の温度で、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年の間保管することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４５．前記保管が、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰを、約－４０℃、約－３５℃、約－３０℃、約－２５℃、約－２０℃、約－１５℃、約－１０℃、約－５℃、約０℃、約５℃、約１０℃、約１５℃、約２０℃、または約２５℃の温度で、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年の間保管することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４６．前記保管が、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰを、約－４０℃～約０℃、約－３５℃～約－５℃、約－３０℃～約－１０℃、約－２５℃～約－１５℃、約－２２℃～約－１８℃、または約－２１℃～約－１９℃の温度で、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年の間保管することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４７．前記保管が、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰを、約－２０℃の温度で、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年の間保管することを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４８．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、包装をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２４９．前記混合ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５０．前記充填ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５１．前記混合ステップが、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または約周囲温度未満の温度で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５２．前記充填ステップが、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または約周囲温度未満の温度で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５３．前記第１の添加ステップが、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または約周囲温度未満の温度で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５４．前記第２の添加ステップが、約３０℃未満、約２８℃未満、約２６℃未満、約２４℃未満、約２２℃未満、約２０℃未満、または約周囲温度未満の温度で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５５．前記混合ステップと前記第１の添加ステップとの間の滞留時間が、約１．０ミリ秒～約６０分、約２．０ミリ秒～約３０分、約３．０ミリ秒～約１５分、約４．０ミリ秒～約１０分、約５．０ミリ秒～約５分、約１０．０ミリ秒～約２分、約１００．０ミリ秒～約１．０分、約１０００ミリ秒～約１．０分の範囲である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５６．前記水性緩衝液が、約４．５～約６．５、約４．６～約６．０、約４．７～約５．７５、約４．８～約５．５、または約４．９～約５．２５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５７．前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５８．前記脂質溶液が、約７．０～約８．０、約７．１～約７．８、約７．２～約７．６、または約７．３～約７．５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２５９．前記空のＬＮＰ溶液が、約４．５～約６．２５、約４．６～約６．０、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、約５．０～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６０．前記核酸溶液が、約４．５～約６．５、約４．８～約６．２５、約４．８～約６．０、約５．０～約５．８、または約５．２～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６１．前記核酸溶液、前記空のＬＮＰ溶液、及び前記ＬＮＰ製剤のｐＨが、約５．０～約６．０、約５．１～約５．７５、または約５．２～約５．５の範囲である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６２．前記充填されたＬＮＰ溶液が、約４．５～約６．０、約４．６～約５．８、約４．８～約５．６、約５．０～約５．５、または約５．１～約５．４の範囲のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６３．前記脂質溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６４．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６５．前記第１の有機溶媒液が、アルコールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６６．前記第１の有機溶媒が、エタノールである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６７．前記第１の緩衝剤が、第１の水性緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６８．前記第１の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２６９．前記第１の水性緩衝液が、約１０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約３０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７０．前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約３０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７１．前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約３ｍＭ～約１０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約４ｍＭ～約８ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約５ｍＭ～約６ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７２．前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、またはトリスを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７３．前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭの酢酸塩を含み、前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７４．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７５．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、等張化剤を用いる前記充填ステップの前に保管される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７６．前記等張化剤が、糖である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７７．前記糖が、スクロースである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７８．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が約０．０１ｇ／ｍＬ～約１．０ｇ／ｍＬ、約０．０５ｇ／ｍＬ～約０．５ｇ／ｍＬ、約０．１ｇ／ｍＬ～約０．４ｇ／ｍＬ、約０．１５ｇ／ｍＬ～約０．３ｇ／ｍＬ、または約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２７９．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８０．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬのスクロースをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８１．前記核酸溶液が、約０．０１～約１．０ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．０５～約０．５ｍｇ／ｍＬの前記核酸、または約０．１～約０．２５ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８２．前記核酸溶液が、約０．００１～約１．０ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．００２５～約０．５ｍｇ／ｍＬの前記核酸、または約０．００５～約０．２ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８３．前記核酸溶液が、約０．００５～約０．２ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８４．前記核酸溶液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８５．前記核酸溶液が、酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８６．前記核酸溶液が、約１ｍＭ～約２００ｍＭの酢酸緩衝液、約２ｍＭ～約１８０ｍＭの酢酸緩衝液、約３ｍＭ～約１６０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１４０ｍＭの酢酸緩衝液、約５ｍＭ～約１３０ｍＭの酢酸緩衝液、約６ｍＭ～約１２０ｍＭの酢酸緩衝液、約７ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸緩衝液、約８ｍＭ～約１００ｍＭの酢酸緩衝液、約９ｍＭ～約９０ｍＭの酢酸緩衝液、約１０ｍＭ～約８０ｍＭの酢酸緩衝液、約１５ｍＭ～約７０ｍＭの酢酸緩衝液、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸緩衝液、約２５ｍＭ～約５０ｍＭの酢酸緩衝液、または約３０ｍＭ～約４０ｍＭの酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８７．前記核酸溶液が、約８．８ｍＭの酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８８．前記核酸溶液が、約１３０ｍＭの酢酸緩衝液を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２８９．前記核酸溶液及び前記空のＬＮＰ溶液が、前記充填ステップ中に、約５：１～約７：１、約４：１～約６：１、約３：１～約５：１、または約２：１～約４：１の体積流量比で混合される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９０．前記核酸溶液及び前記空のＬＮＰ溶液が、前記充填ステップ中に、約３：１の体積流量比で混合される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９１．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９２．前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約５ｍＭの酢酸緩衝液を含み、前記酢酸緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９３．前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、封入剤をさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９４．前記封入剤が、式（ＥＡ－Ｉ）：
Figure 2023513043000079
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｒ２０１及びＲ２０２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、及び（Ｃ＝ＮＨ）Ｎ（Ｒ１０１）２からなる群から選択され、各Ｒ１０１は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、及びＣ２～Ｃ６アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２０３は、Ｃ１～Ｃ２０アルキル及びＣ２～Ｃ２０アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ２０４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ２～Ｃ２０アルケニル、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ１～Ｃ２０アルキル）、Ｃ（Ｏ）（ＯＣ２～Ｃ２０アルケニル）、Ｃ（Ｏ）（ＮＨＣ１～Ｃ２０アルキル）、及びＣ（Ｏ）（ＮＨＣ２～Ｃ２０アルケニル）からなる群から選択され、
ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９５．前記封入剤が、式（ＥＡ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000080
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｘ１０１は、結合、ＮＨ、またはＯであり、
Ｒ１０１及びＲ１０２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、及びＣ２～Ｃ６アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ１０３及びＲ１０４は、各々独立して、Ｃ１～Ｃ２０アルキル及びＣ２～Ｃ２０アルケニルからなる群から選択され、
ｎ１は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９６．前記封入剤が、アルギン酸エチルラウロイル、またはその塩もしくは異性体である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９７．前記ＬＮＰ製剤対前記核酸の重量／重量比が、約５：１～約６０：１の範囲である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９８．前記ＬＮＰ製剤対前記核酸の重量／重量比が、約１０：１～約５０：１の範囲である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態２９９．前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３００．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、
約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、
約０～３０ｍｏｌ％のリン脂質と、
約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、
約０．１～０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、
を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０１．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、
約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、
約０～３０ｍｏｌ％のリン脂質と、
約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、
約０．０１～１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、
を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０２．前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０３．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－Ｉ）：
Figure 2023513043000081
の化合物、またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｌ１は、任意選択的に置換されたＣ１～１０アルキレンであり、任意選択的に置換されたＣ１～１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられ、
Ｄは、クリックケミストリーによって得られる部分、または生理学的条件下で切断可能な部分であり、
ｍは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは、式：
Figure 2023513043000082
のものであり、
Ｌ２の各事例は、独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンであり、任意選択的に置換されたＣ１～６アルキレンの１つのメチレン単位は、任意選択的に、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置き換えられ、
Ｒ２の各事例は、独立して、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１～３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１～３０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ２の１つ以上のメチレン単位は、独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、－Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
ｐは、１または２である、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０４．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－Ｉ－ＯＨ）：
Figure 2023513043000083
の化合物、またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０５．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000084
の化合物、またはその塩であり、式中、
Ｒ３は、－ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５は、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０６．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－ＩＩ－ＯＨ）：
Figure 2023513043000085
の化合物、またはその塩であり、式中、
ｒは、１～１００の整数であり、
Ｒ５は、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１０～４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５の１つ以上のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、－ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置き換えられ、
ＲＮの各事例は、独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０７．前記ｒが、４０～５０の整数である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０８．前記ｒが、４５である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３０９．前記Ｒ５が、Ｃ１７アルキルである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１０．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000086
の化合物、またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１１．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000087
の化合物である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１２．前記ＰＥＧ脂質が、式（ＰＬ－ＩＩＩ）：
Figure 2023513043000088
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１～１００の整数である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１３．前記ＰＥＧ脂質が、以下の式：
Figure 2023513043000089
の化合物である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１４．前記構造的脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラジカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１５．前記リン脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１６．前記リン脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１７．前記イオン化可能な脂質が、イオン化可能なアミノ脂質を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１８．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－１）：
Figure 2023513043000090
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択されるか、またはＲ２及びＲ３は、それらが結合している原子と一緒になって、複素環もしくは炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３～６炭素環、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、Ｑは、炭素環、複素環、－ＯＲ、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、各ｎは、独立して、１、２、３、４、及び５から選択され、
各Ｒ５は、独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１８アルキル、Ｃ２～１８アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１５アルキル及びＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、Ｒ４は、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）Ｑは、ｎが１、２、３、４、もしくは５である場合に－Ｎ（Ｒ）２ではないか、あるいは（ｉｉ）Ｑは、ｎが１または２である場合に５、６、または７員のヘテロシクロアルキルではない、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３１９．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＡ）：
Figure 2023513043000091
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｉは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
実施形態３２０．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＢ）：
Figure 2023513043000092
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、そのすべての可変要素は、本明細書に定義されるとおりである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。いくつかの実施形態では、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、または（ＣＨ２）ｎＱであり、Ｑは、－ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ｍは、５、７、または９である。いくつかの実施形態では、Ｑは、ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。いくつかの実施形態では、Ｑは、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
実施形態３２１．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩ）：
Figure 2023513043000093
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｉは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１～３アルキル、または－（ＣＨ２）ｎＱであり、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、－ＯＨ、－ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｒ８、－ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２２．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩａ）：
Figure 2023513043000094
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２３．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩｂ）：
Figure 2023513043000095
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２４．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩｃ）または（ＩＬ－ＩＩｅ）：
Figure 2023513043000096
の化合物、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載されるとおりである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２５．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩｆ）：
Figure 2023513043000097
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｍは、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－または－ＯＣ（Ｏ）－であり、Ｍ”は、Ｃ１～６アルキルまたはＣ２～６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２６．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩｄ）：
Figure 2023513043000098
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ”、及びＲ２～Ｒ６は、本明細書に記載されるとおりである、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３の各々は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され得る。
実施形態３２７．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩｇ）：
Figure 2023513043000099
の化合物、もしくはそのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は、結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）－Ｍ”－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。いくつかの実施形態では、Ｍ”は、Ｃ１～６アルキル（例えば、Ｃ１～４アルキル）またはＣ２～６アルケニル（例えば、Ｃ２～４アルケニル）である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、独立して、Ｃ５～１４アルキル及びＣ５～１４アルケニルからなる群から選択され得る。
実施形態３２８．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000100
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３２９．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000101
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３０．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000102
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３１．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000103
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３２．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＩＩＩ）：
Figure 2023513043000104
の化合物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｗは、
Figure 2023513043000105
であり、
環Ａは、
Figure 2023513043000106
であり、
ｔは、１または２であり、
Ａ１及びＡ２は、各々独立して、ＣＨまたはＮから選択され、
Ｚは、ＣＨ２であるか、または不在であり、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）は、各々単結合を表し、Ｚが存在しない場合、破線（１）及び（２）は、両方とも存在せず、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、独立して、Ｃ５～２０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ”ＭＲ’、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、及び－Ｒ＊ＯＲ”からなる群から選択され、
ＲＸ１及びＲＸ２は、各々独立して、ＨまたはＣ１～３アルキルであり、
各Ｍは、独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｏ）－、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
Ｍ＊は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２は、各々独立して、－Ｏ－及び－Ｎ（Ｒ６）－からなる群から選択され、
各Ｒ６は、独立して、Ｈ及びＣ１～５アルキルからなる群から選択され、
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、結合、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－ＣＨＲ－、－ＣＨＹ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２）ｎ－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｃ（Ｓ）－、及び－ＣＨ（ＳＨ）－からなる群から独立して選択され、
各Ｙは、独立して、Ｃ３～６炭素環であり、
各Ｒ＊は、独立して、Ｃ１～１２アルキル及びＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、
各Ｒは、独立して、Ｃ１～３アルキル及びＣ３～６炭素環からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
各Ｒ”は、独立して、Ｃ３～１２アルキル、Ｃ３～１２アルケニル、及び－Ｒ＊ＭＲ’からなる群から選択され、
ｎは、１～６の整数であり、
式中、環Ａが
Figure 2023513043000107
である場合、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは、－ＣＨ２－ではない、及び／または
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは、－Ｒ”ＭＲ’である、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３３．前記イオン化可能な脂質が、（ＩＬ－ＩＩＩａ１）～（ＩＬ－ＩＩＩａ８）：
Figure 2023513043000108
のうちのいずれかの化合物である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３４．前記イオン化可能な脂質が、
Figure 2023513043000109
またはその塩である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３５．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＶＩＶａ）：
Figure 2023513043000110
の化合物、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、
式中、Ｒ’ａは、Ｒ’分岐状またはＲ’環式であり、
Ｒ’分岐状は、
Figure 2023513043000111
であり、Ｒ’環式は、
Figure 2023513043000112
であり、
Ｒ’ｂは、
Figure 2023513043000113
であり、
Figure 2023513043000114
は、結合点を示し、
Ｒａγ及びＲｂγは、各々独立して、Ｃ２～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、－（ＣＨ２）２ＯＨであり、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｙａは、Ｃ３～６炭素環であり、
Ｒ＊”ａは、Ｃ１～１５アルキル及びＣ２～１５アルケニルからなる群から選択され、
ｓは、２または３である、
先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３６．前記イオン化可能な脂質が、式（ＩＬ－ＶＩＶｂ）：
Figure 2023513043000115
の化合物、もしくはそれらのＮ－オキシド、またはそれらの塩もしくは異性体であり、
式中、Ｒ’ａは、Ｒ’分岐状またはＲ’環式であり、
Ｒ’分岐状は、
Figure 2023513043000116
であり、Ｒ’環式は、
Figure 2023513043000117
であり、
Ｒ’ｂは、
Figure 2023513043000118
であり、
Figure 2023513043000119
は、結合点を示し、
Ｒａγ及びＲｂγは、各々独立して、Ｃ２～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｒ２及びＲ３は、各々独立して、Ｃ１～１４アルキル及びＣ２～１４アルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４は、
Figure 2023513043000120
であり、
Figure 2023513043000121
は、結合点を示し、
Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２であり、各Ｒは、独立して、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、ｎ２は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群から選択され、
各Ｒ’は、独立して、Ｃ１～１２アルキルまたはＣ２～１２アルケニルであり、
Ｙａは、Ｃ３～６炭素環であり、
Ｒ＊”ａは、Ｃ１～１５アルキル及びＣ２～１５アルケニルからなる群から選択され、
ｓは、２または３である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３７．前記イオン化可能な脂質が、以下から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
Figure 2023513043000122
実施形態３３８．前記イオン化可能な脂質が、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、オクタトリアコンタン－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる群から選択される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３３９．前記核酸溶液が、リボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４０．前記リボ核酸が、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及び長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのリボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４１．前記核酸溶液が、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４２．前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造からなる群から選択される少なくとも１つのモチーフを含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４３．前記ｍＲＮＡが、少なくとも３０ヌクレオチド長である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４４．前記ｍＲＮＡが、少なくとも３００ヌクレオチド長である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４５．前記ＬＮＰ製剤が、約１．１：１～約３０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４６．前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約２０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４７．前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約１０：１、または約２：１～約５：１のＮ：Ｐ比を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４８．前記ＬＮＰが、約０．０１～約５００ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．１～約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．２５～約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３４９．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／またはＬＮＰ製剤が、約０．０１～約０．２５の多分散性指数（ＰＤＩ）を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５０．前記ＬＮＰ製剤が、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％の封入効率を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５１．前記ＬＮＰ製剤が、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の封入効率を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５２．前記ＬＮＰ製剤が、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９４％、少なくとも約９６％、または少なくとも約９８％の封入効率を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５３．前記ＬＮＰ製剤の前記核酸発現（例えば、前記ｍＲＮＡ発現）が、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５４．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、約２００ｎｍ以下、約１７５ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１２５ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、約９０ｎｍ以下、約８０ｎｍ以下、約７５ｎｍ以下、約７０ｎｍ以下、約６５ｎｍ以下、約６０ｎｍ以下、約５５ｎｍ以下、約５０ｎｍ以下、約４５ｎｍ以下、約４０ｎｍ以下、約３５ｎｍ以下、約３０ｎｍ以下、約２５ｎｍ以下、または約２０ｎｍ以下の平均脂質ナノ粒子直径を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５５．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約１２５ｎｍ、約３０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約３５ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４５ｎｍ～約８０ｎｍ、または約５０ｎｍ～約７０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５６．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、約１５ｎｍ～約５５ｎｍ、約２０ｎｍ～約５０ｎｍ、約２５ｎｍ～約４５ｎｍ、または約３０ｎｍ～約４０ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５７．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／またはＬＮＰ製剤が、約２５～約４５ｎｍの平均脂質ナノ粒子直径を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５８．前記ＬＮＰ製剤の、約－５～２５℃、約０～１０℃、または約２～８℃での少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年間の保管後に、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤の多分散性指数（ＰＤＩ）が、約０．２５未満、約０．２０未満、約０．１５未満、約０．１０未満、約０．０５未満、約０．０４未満、約０．０３未満、約０．０２未満、または約０．０１増加する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３５９．前記ＬＮＰ製剤の、約－１００℃～約８０℃、約－８０℃～約６０℃、約－４０℃～約４０℃、約－２０℃～約３０℃、約－５℃～約２５℃、約０℃～約１０℃、または約２℃～約８℃での少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年間の保管後に、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤の多分散性指数（ＰＤＩ）が、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％増加する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３６０．前記ＬＮＰ製剤の、約－１００℃～約８０℃、約－８０℃～約６０℃、約－４０℃～約４０℃、約－２０℃～約３０℃、約－５℃～約２５℃、約０℃～約１０℃、または約２℃～約８℃での少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも８か月、または少なくとも１年間の保管後に、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、封入効率の約２５％未満の減少、約２０％未満の減少、約１５％未満の減少、約１０％未満の減少、約５％未満の減少、約４％未満の減少、約３％未満の減少、約２％未満の減少、または約１％未満の封入効率の減少を有する、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３６１．前記空のＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ、及び／または前記ＬＮＰ製剤の平均脂質ナノ粒子直径が、同等の方法によって生成された前記ＬＮＰ製剤と比較して、約９９％以下、約９８％以下、約９７％以下、約９６％以下、約９５％以下、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、約５５％以下、約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、または約１０％以下である、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３６２．前記ＬＮＰ製剤の封入効率が、同等の方法によって生成された前記ＬＮＰ製剤の封入効率よりも、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３６３．前記ＬＮＰ製剤の前記核酸発現（例えば、前記ｍＲＮＡ発現）が、同等の方法によって生成された前記ＬＮＰ製剤の前記核酸発現（例えば、前記ｍＲＮＡ発現）よりも、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法、空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤。
実施形態３６４．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを投与することを含む、前記方法。
実施形態３６５．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液を投与することを含む、前記方法。
実施形態３６６．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、前述の実施形態のいずれか１つの充填されたＬＮＰを投与することを含む方法。
実施形態３６７．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液を投与することを含む、前記方法。
実施形態３６８．疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤を投与することを含む、前記方法。
実施形態３６９．前記投与が、非経口で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７０．前記投与が、筋肉内、皮内、皮下、及び／または静脈内で実施される、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７１．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ。
実施形態３７２．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液。
実施形態３７３．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ。
実施形態３７４．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液。
実施形態３７５．対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤。
実施形態３７６．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰの使用。
実施形態３７７．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ溶液の使用。
実施形態３７８．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰの使用。
実施形態３７９．疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ溶液の使用。
実施形態３８０．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
実施形態３８１．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
実施形態３８２．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰまたは空のＬＮＰ溶液を含む、薬学的キット。
実施形態３８３．先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
実施形態３８４．先行実施形態のいずれか１つに記載のＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
実施形態３８５．先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰを含む医薬品を含む、薬学的キット。
実施形態３８６．先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を含む医薬品を含む、薬学的キット。
実施形態３８７．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰの集団を含む、薬学的キット。
実施形態３８８．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰの集団と、治療薬または予防薬溶液と、を含む、薬学的キット。
実施形態３８９．
（ａ）先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む第１の容器と、
（ｂ）治療薬または予防薬を含む溶液を含む第２の容器と、
を含む、薬学的キット。
実施形態３９０．
（ａ）先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む第１の容器と、
（ｂ）治療薬または予防薬を含む溶液を含む第２の容器と、
（ｃ）前記第１の容器及び前記第２の容器の内容物を合わせるための指示書と、
を含む、薬学的キット。
実施形態３９１．前記第１の容器が、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。
実施形態３９２．前記第２の容器が、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。
実施形態３９３．先行実施形態のいずれか１つに記載の充填されたＬＮＰを含む医薬品を含む、容器。
実施形態３９４．先行実施形態のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物を含む医薬品を含む、容器。
実施形態３９５．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰを含む、容器。
実施形態３９６．先行実施形態のいずれか１つに記載の空のＬＮＰの集団を含む、容器。
実施形態３９７．前記容器が、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）バッグである、先行実施形態のいずれか１つに記載の容器。
実施形態３９８．前記治療薬または予防薬が、核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。
実施形態３９９．前記核酸が、リボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。
実施形態４００．前記リボ核酸が、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及び長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのリボ核酸である、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。
実施形態４０１．前記核酸が、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、先行実施形態のいずれか１つに記載の薬学的キット。

Claims (147)

  1. 空の脂質ナノ粒子（空のＬＮＰ）を含む空の脂質ナノ粒子溶液（空のＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
    （ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質を含み、
    前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、
    前記混合ステップを含む、方法。
  2. 前記空のＬＮＰ溶液を処理することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  3. 充填された脂質ナノ粒子（充填されたＬＮＰ）を含む充填された脂質ナノ粒子溶液（充填されたＬＮＰ溶液）を調製する方法であって、
    （ｉ）イオン化可能な脂質と、リン脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質と、を含む、脂質溶液を、第１の緩衝剤を含む水性緩衝液と混合し、それによって、前記空のＬＮＰを含む前記空のＬＮＰ溶液を形成することを含む、混合ステップであって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質を含み、前記空のＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含み、約４．６～約６．０の範囲のｐＨを有する、前記混合ステップと、
    （ｉｉ）核酸を含む核酸溶液を前記空のＬＮＰ溶液と混合し、それによって、充填されたＬＮＰを含む充填されたＬＮＰ溶液を形成することを含む、充填ステップと、を含む、方法。
  4. 前記充填されたＬＮＰ溶液を処理し、それによって脂質ナノ粒子製剤（ＬＮＰ製剤）を形成することをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記充填されたＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第１の添加ステップを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記第１の添加ステップが、前記充填されたＬＮＰ溶液に前記ＰＥＧ脂質を含むポリエチレングリコール溶液（ＰＥＧ溶液）を添加することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記第１の添加ステップが、前記空のＬＮＰまたは前記充填されたＬＮＰに、約０．１ｍｏｌ％～約３．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．２ｍｏｌ％～約２．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．５ｍｏｌ％～約２．０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、約０．７５ｍｏｌ％～約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質、または約１．０ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を添加することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、ｐＨ調整をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  9. 前記ｐＨ調整が、第２の緩衝剤を添加することを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  10. 前記第２の緩衝剤が、第２の水性緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  11. 前記第２の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、濾過をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記濾過が、タンジェンシャルフロー濾過によって実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、緩衝液交換をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記緩衝液交換が、第３の緩衝剤を含む水性緩衝液の添加を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記第３の緩衝剤が、第３の水性緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記第３の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記第３の水性緩衝液が、約６．５～約８．５、約７．０～約８．０、約７．２～約７．８、または約７．４～約７．６の範囲のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記第３の水性緩衝液が、約７．５のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の前に実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記第１の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  22. 前記充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記充填されたＬＮＰにポリエチレングリコール脂質（ＰＥＧ脂質）を添加することを含む、第２の添加ステップを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  23. 前記第２の添加ステップが、前記緩衝液交換の前に実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記第２の添加ステップが、前記緩衝液交換の後に実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記空のＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液を希釈することをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結することをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を凍結乾燥させることをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を処理する前記ステップが、前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液を保管することをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記混合ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  30. 前記充填ステップが、Ｔ字合流管、閉じ込め衝突ジェット、マイクロ流体混合器、またはボルテックス混合器で実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記水性緩衝液が、約４．５～約６．５、約４．６～約６．０、約４．７～約５．７５、約４．８～約５．５、または約４．９～約５．２５の範囲のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  33. 前記空のＬＮＰ溶液が、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、または約５．０～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記核酸溶液が、約４．５～約６．５、約４．８～約６．２５、約４．８～約６．０、約５．０～約５．８、または約５．２～約５．５の範囲のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記核酸溶液、前記空のＬＮＰ溶液、及び前記ＬＮＰ製剤のｐＨが、約５．０～約６．０、約５．１～約５．７５、または約５．２～約５．５の範囲である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記充填されたＬＮＰ溶液が、約４．５～約６．０、約４．６～約５．８、約４．８～約５．６、約５．０～約５．５、または約５．１～約５．４の範囲のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記脂質溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、第１の有機溶媒をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記第１の有機溶媒が、アルコールである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記第１の有機溶媒が、エタノールである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記第１の緩衝剤が、第１の水性緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  42. 前記第１の水性緩衝液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  43. 前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約１５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２５ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約３０ｍＭ超のクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  44. 前記第１の水性緩衝液が、約１ｍＭ～約３０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約２ｍＭ～約２０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約３ｍＭ～約１０ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、約４ｍＭ～約８ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリス、または約５ｍＭ～約６ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、もしくはトリスを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  45. 前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭのクエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、またはトリスを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  46. 前記第１の水性緩衝液が、約５ｍＭの酢酸塩を含み、前記水性緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  47. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、等張化剤をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記等張化剤が、糖である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記糖が、スクロースである、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  50. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．０１ｇ／ｍＬ～約１．０ｇ／ｍＬ、約０．０５ｇ／ｍＬ～約０．５ｇ／ｍＬ、約０．１ｇ／ｍＬ～約０．４ｇ／ｍＬ、約０．１５ｇ／ｍＬ～約０．３ｇ／ｍＬ、または約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬ～約０．２５ｇ／ｍＬの等張化剤をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  52. 前記空のＬＮＰ溶液または充填されたＬＮＰ溶液が、約０．２ｇ／ｍＬのスクロースをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  53. 前記核酸溶液が、約０．０１～約１．０ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．０５～約０．５ｍｇ／ｍＬの前記核酸、または約０．１～約０．２５ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  54. 前記核酸溶液が、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びトリス緩衝液からなる群から選択される緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  55. 前記核酸溶液が、酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  56. 前記核酸溶液が、約１ｍＭ～約２００ｍＭの酢酸緩衝液、約２ｍＭ～約１８０ｍＭの酢酸緩衝液、約３ｍＭ～約１６０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸緩衝液、約４ｍＭ～約１４０ｍＭの酢酸緩衝液、約５ｍＭ～約１３０ｍＭの酢酸緩衝液、約６ｍＭ～約１２０ｍＭの酢酸緩衝液、約７ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸緩衝液、約８ｍＭ～約１００ｍＭの酢酸緩衝液、約９ｍＭ～約９０ｍＭの酢酸緩衝液、約１０ｍＭ～約８０ｍＭの酢酸緩衝液、約１５ｍＭ～約７０ｍＭの酢酸緩衝液、約２０ｍＭ～約６０ｍＭの酢酸緩衝液、約２５ｍＭ～約５０ｍＭの酢酸緩衝液、または約３０ｍＭ～約４０ｍＭの酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記核酸溶液及び前記空のＬＮＰ溶液が、前記充填ステップ中に、約５：１～約７：１、約４：１～約６：１、約３：１～約５：１、または約２：１～約４：１の体積流量比で混合される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  58. 前記充填されたＬＮＰ溶液が、酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、封入剤をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記脂質溶液、前記空のＬＮＰ溶液、前記充填されたＬＮＰ、前記充填されたＬＮＰ溶液、及び／または前記ＬＮＰ製剤が、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造的脂質、またはそれらの任意の組み合わせをさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記空のＬＮＰが、
    約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、
    約０～３０ｍｏｌ％のリン脂質と、
    約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、
    約０．１～０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、
    を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記構造的脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラジカステロール、トマチジン、ウルソール酸、アルファ－トコフェロール、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  64. 前記リン脂質が、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリン、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  65. 前記イオン化可能な脂質が、イオン化可能なアミノ脂質を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  66. 前記核酸が、リボ核酸である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  67. 前記リボ核酸が、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、非対称干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ダイサー基質ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、及び長い非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）からなる群から選択される少なくとも１つのリボ核酸である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  68. 前記核酸が、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記ｍＲＮＡが、ステムループ、鎖終結ヌクレオシド、ポリＡ配列、ポリアデニル化シグナル、及び５’キャップ構造からなる群から選択される少なくとも１つのモチーフを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  70. 前記ｍＲＮＡが、少なくとも３０ヌクレオチド長である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  71. 前記ｍＲＮＡが、少なくとも３００ヌクレオチド長である、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  72. 前記ＬＮＰ製剤が、約１．１：１～約３０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  73. 前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約２０：１のＮ：Ｐ比を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  74. 前記ＬＮＰ製剤が、約２：１～約１０：１、または約２：１～約５：１のＮ：Ｐ比を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記ＬＮＰ製剤が、約０．０１～約５００ｍｇ／ｍＬの前記核酸、約０．１～約１００ｍｇ／ｍＬ、約０．２５～約５０ｍｇ／ｍＬ、約０．５～約１０ｍｇ／ｍＬ、または約１．０～約１０ｍｇ／ｍＬの前記核酸を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  76. 約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
  77. 先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ。
  78. 先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって調製された、空のＬＮＰ溶液。
  79. 空のＬＮＰを含む空のＬＮＰ溶液であって、前記空のＬＮＰが、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、前記空のＬＮＰ溶液。
  80. 先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ。
  81. 先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって調製された、充填されたＬＮＰ溶液。
  82. 先行請求項のいずれか１項に記載の方法によって調製された、ＬＮＰ製剤。
  83. 疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰを投与することを含む、方法。
  84. 疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰ溶液を投与することを含む、方法。
  85. 疾患または障害を治療または防止する方法であって、疾患または障害の治療または防止を必要とする対象に、先行請求項のいずれか１項に記載のＬＮＰ製剤を投与することを含む、方法。
  86. 前記投与が、非経口で実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  87. 前記投与が、筋肉内、皮内、皮下、及び／または静脈内で実施される、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
  88. 対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰ。
  89. 対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰ溶液。
  90. 対象における疾患または障害の治療または防止に使用するための、先行請求項のいずれか１項に記載のＬＮＰ製剤。
  91. 疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰの使用。
  92. 疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行請求項のいずれか１項に記載の充填されたＬＮＰ溶液の使用。
  93. 疾患または障害を治療または防止するための医薬品の製造における、先行請求項のいずれか１項に記載のＬＮＰ製剤の使用。
  94. 請求項７７～８３のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ、空のＬＮＰ溶液、充填されたＬＮＰ、充填されたＬＮＰ溶液、またはＬＮＰ製剤を含む、薬学的キット。
  95. 約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
  96. 約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰ。
  97. イオン化可能な脂質をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ。
  98. リン脂質及び構造的脂質をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ。
  99. 約３０～６０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質と、約０～３０ｍｏｌ％リン脂質と、約１５～５０ｍｏｌ％の構造的脂質と、約０．１～１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質と、を含む、空のＬＮＰ。
  100. 先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰを含む、空のＬＮＰ溶液。
  101. 酢酸緩衝液をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  102. 等張化剤をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  103. 前記等張化剤が、スクロースである、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  104. （ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
    （ｉｉ）酢酸緩衝液と、
    を含む、空のＬＮＰ溶液。
  105. （ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
    （ｉｉ）酢酸緩衝液と、
    （ｉｉｉ）スクロースと、
    を含む、空のＬＮＰ溶液。
  106. （ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
    （ｉｉ）酢酸緩衝液と、
    を含む、空のＬＮＰ溶液。
  107. （ｉ）約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、空のＬＮＰと、
    （ｉｉ）酢酸緩衝液と、
    （ｉｉｉ）スクロースと、
    を含む、空のＬＮＰ溶液。
  108. 約４．５～約６．２５、約４．６～約６．０、約４．８～約５．８、約５．０～約５．７５、または約５．０～約５．５のｐＨ値を有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  109. 約５ｍＭの酢酸緩衝液を含み、前記酢酸緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  110. 約０．２ｇ／ｍＬのスクロースを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  111. 前記空のＬＮＰが、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の前記イオン化可能な脂質と、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％の前記リン脂質と、約１５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の前記構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約０．５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質と、を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  112. 前記空のＬＮＰが、約４０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％の前記イオン化可能な脂質と、約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％の前記リン脂質と、約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の前記構造的脂質と、約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％の前記ＰＥＧ脂質と、を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  113. 前記ＰＥＧ脂質が、約０．２ｍｏｌ％～約０．７ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  114. 前記ＰＥＧ脂質が、約０．５ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  115. 前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  116. 前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約３０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  117. 前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  118. 前記空のＬＮＰ溶液が、約２ｍＭ～約１０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  119. 前記空のＬＮＰ溶液が、約５ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  120. 前記緩衝液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  121. 前記緩衝液が、５．５未満のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  122. 前記緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  123. 前記空のＬＮＰ溶液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  124. 前記空のＬＮＰ溶液が、５．５未満のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  125. 前記空のＬＮＰ溶液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  126. 前記ＬＮＰが、約４５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  127. 前記イオン化可能な脂質が、
    Figure 2023513043000123
    またはその塩である、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  128. 前記イオン化可能な脂質が、
    Figure 2023513043000124
    またはその塩である、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  129. 前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  130. 前記構造的脂質が、コレステロールである、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  131. 前記リン脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、先行請求項のいずれか１項に記載の空のＬＮＰ溶液。
  132. 脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を含む調製物であって、
    （ａ）前記ＬＮＰが、
    約４０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質、
    約３０ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％の構造的脂質、
    約５ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％のリン脂質、及び
    約０．１ｍｏｌ％～約１．２５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質
    を含み、
    （ｂ）前記ＬＮＰが、治療薬または予防薬を実質的に含まず、
    （ｃ）前記調製物が、約２ｍＭ～約４０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、前記調製物。
  133. 前記ＰＥＧ脂質が、約０．２ｍｏｌ％～約０．７ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  134. 前記ＰＥＧ脂質が、約０．５ｍｏｌ％の濃度で存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  135. 前記調製物が、約２ｍＭ～約３０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  136. 前記調製物が、約２ｍＭ～約２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  137. 前記調製物が、約２ｍＭ～約１０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  138. 前記調製物が、約５ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  139. 前記緩衝液が、前記イオン化可能な脂質のｐＫａよりも少なくとも１単位低いｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  140. 前記緩衝液が、５．５未満のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  141. 前記緩衝液が、約５．０のｐＨを有する、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  142. 前記ＬＮＰが、約４５ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％のイオン化可能な脂質を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  143. 前記イオン化可能な脂質が、
    Figure 2023513043000125
    またはその塩である、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  144. 前記イオン化可能な脂質が、
    Figure 2023513043000126
    またはその塩である、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  145. 前記ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ２ｋ－ＤＭＧである、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  146. 前記構造的脂質が、コレステロールである、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
  147. 前記リン脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）である、先行請求項のいずれか１項に記載の調製物。
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