TW202332467A - 脂質胺 - Google Patents

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TW202332467A
TW202332467A TW111141006A TW111141006A TW202332467A TW 202332467 A TW202332467 A TW 202332467A TW 111141006 A TW111141006 A TW 111141006A TW 111141006 A TW111141006 A TW 111141006A TW 202332467 A TW202332467 A TW 202332467A
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摩西卓拉 西伯沙德
馬修 克勞福德
丹尼爾 泰特
馬克 況必斯
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美商現代公司
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Abstract

本發明提供脂質胺化合物，其可用於製備將治療或預防酬載遞送至細胞中之脂質奈米粒子組合物。

Description

脂質胺
本發明提供脂質胺化合物，其可用於製備將治療或預防酬載遞送至細胞中之脂質奈米粒子組合物。
將生物活性酬載(例如核酸及蛋白質)遞送至細胞具有用於治療多種疾病及/或疾患之潛能。然而，該等酬載之有效靶向遞送代表持續的醫學挑戰。具體而言，將核酸遞送至細胞因該等物質之相對不穩定性及低細胞滲透性而變得困難。
脂質奈米粒子為酬載進入細胞及細胞內隔室提供有效之運輸媒劑，但仍需要改良安全性、效能及特異性。因此，業內需要開發出脂質奈米粒子組合物以幫助將治療劑及預防劑(例如核酸)遞送至細胞中。
本文提供具有式A1之結構之脂質胺： (A1) 或其鹽，其中組成成員定義於本文中。
本文亦提供脂質奈米粒子組合物，其包含式A1之脂質胺或其鹽。
本文亦提供醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之載劑，及包含式A1之脂質胺或其鹽之脂質奈米粒子組合物。
本文亦提供將酬載遞送至細胞中之方法，其包括使細胞與本文所述之脂質奈米粒子組合物接觸。
本文亦提供將治療或預防酬載遞送至患者之方法，其包括向患者投與本文所述之脂質奈米粒子組合物。
本文亦提供製備脂質奈米粒子組合物之製程，該製程包括使脂質奈米粒子核心與式A1之脂質胺化合物或其鹽接觸。
本文亦提供本文所述任一製程之產物。
每一限制可涵蓋多個實施例。因此，預期涉及任一種要素或要素組合之每一限制皆可包括在所述之每一態樣中。本發明之應用並不限於以下描述中所述或圖式中所圖解說明之構築細節及組分排列。以各種方式實踐或實施之其他實施例係可能的。
本文提供具有式A1之結構之脂質胺： (A1) 或其鹽，其中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代； (iii)     C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)     C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)  C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； 或R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； R 4、R 5、R 6及R 7各自獨立地選自H、鹵基及C 1-4烷基； 或R 4及R 5與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； 或R 6及R 7與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3、4、5或6； l係0或1； m係0、1、2、3、4、5或6；且 n係0或1； 其中當j係0時，則l係1， 其中j及l不皆係0。
本文提供具有式A1之結構之脂質胺： (A1) 或其鹽，其中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3係C 2-20烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； 或R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； R 4、R 5、R 6及R 7各自獨立地選自H、鹵基及C 1-4烷基； 或R 4及R 5與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； 或R 6及R 7與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3、4、5或6； l係0或1； m係0、1、2、3、4、5或6；且 n係0或1； 其中當j係0時，則l係1， 其中j及l不皆係0。
在一些實施例中，化合物不為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，Z係N。在一些實施例中，Z係CH。
在一些實施例中，R 1係C 1-14烷基。在一些實施例中，R 1係C 3-12烷基。在一些實施例中，R 1係C 6-12烷基。在一些實施例中，R 1係C 8-10烷基。在一些實施例中，R 1係C 8烷基。在一些實施例中，R 1係C 10烷基。
在一些實施例中，R 1係C 1-14羥基烷基。在一些實施例中，R 1係C 3-12羥基烷基。在一些實施例中，R 1係C 6-12羥基烷基。在一些實施例中，R 1係C 8-10羥基烷基。在一些實施例中，R 1係C 8羥基烷基。在一些實施例中，R 1係C 10羥基烷基。
在一些實施例中，R 1係C 1-14烯基。在一些實施例中，R 1係C 3-12烯基。在一些實施例中，R 1係C 6-12烯基。在一些實施例中，R 1係C 8-10烯基。在一些實施例中，R 1係C 8烯基。在一些實施例中，R 1係C 10烯基。
在一些實施例中，R 1係 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，R 1係 、 、 或 。
在一些實施例中，R 1係 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，R 1係 或 。
在一些實施例中，當j係1時，則l係0。
在一些實施例中，當j係0時，則l係1。
在一些實施例中，當j及l中之一者係1時，則另一者係0。
在一些實施例中，j係0。在一些實施例中，j係1。
在一些實施例中，k係0、1、2、3或4。在一些實施例中，k係0、2、3或4。在一些實施例中，k係0。在一些實施例中，k係1。在一些實施例中，k係2。在一些實施例中，k係3。在一些實施例中，k係4。在一些實施例中，k係5。在一些實施例中，k係6。
在一些實施例中，l係0。在一些實施例中，l係1。
在一些實施例中，m係0、1、2或4。在一些實施例中，m係0。在一些實施例中，m係1。在一些實施例中，m係2。在一些實施例中，m係3。在一些實施例中，m係4。在一些實施例中，m係5。在一些實施例中，m係6。
在一些實施例中，n係0。在一些實施例中，n係1。
在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係1，且n係1。在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係2，且n係1。在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係4，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係0，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係1，l係0，m係2，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，l係1，m係1，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係2，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係2，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係3，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係4，l係0，m係0，且n係1。
在一些實施例中，k係1且R 4及R 5皆係H。在一些實施例中，k係1，並且R 4及R 5中之一者係C 1-4烷基且R 4及R 5中之另一者係H。在一些實施例中，k係1，並且R 4及R 5中之一者係甲基且R 4及R 5中之另一者係H。在一些實施例中，k係2且每一R 4及R 5係H。在一些實施例中，k係2，並且一個R 4係C 1-4烷基且剩餘R 4及R 5取代基係H。在一些實施例中，k係2，並且一個R 4係甲基且剩餘R 4及R 5取代基係H。在一些實施例中，k係3且每一R 4及R 5係H。在一些實施例中，k係4且每一R 4及R 5係H。
在一些實施例中，m係1且R 6及R 7皆係H。在一些實施例中，m係2且每一R 6及R 7係H。在一些實施例中，m係4且每一R 6及R 7係H。在一些實施例中，m係2，一個R 6與R 2及R 3與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，且另一R 6係H，且R 7皆係H。
在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係1，R 6及R 7皆係H，且n係1。在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係2，每一R 6及R 7係H，且n係1。在一些實施例中，j係0，k係0，l係1，m係4，每一R 6及R 7係H，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係1，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，R 4及R 5中之一者係C 1-4烷基且R 4及R 5中之另一者係H，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係1，R 4及R 5中之一者係C 1-4烷基且R 4及R 5中之另一者係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係2，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係2，一個R 4係C 1-4烷基且剩餘R 4及R 5取代基係H，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係2，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係3，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係4，每一R 4及R 5係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係1，每一R 4及R 5係H，l係1，m係1，R 6及R 7皆係H，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係1，每一R 4及R 5係H，l係0，m係2，一個R 6與R 2及R 3與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，且另一R 6係H，R 7皆係H，且n係0。
在一些實施例中，j係1，k係1，R 4及R 5中之一者係甲基且R 4及R 5中之另一者係H，l係0，m係0，且n係0。在一些實施例中，j係1，k係1，R 4及R 5中之一者係甲基且R 4及R 5中之另一者係H，l係0，m係0，且n係1。在一些實施例中，j係1，k係2，一個R 4係甲基且剩餘R 4及R 5取代基係H，l係0，m係0，且n係0。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中C 2-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (ii)  C 2-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (iii)  C 2-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (iv)   C 2-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經C(=O)替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (v)  C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)     C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)    C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代； (iii)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)   C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)    C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (ii)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (iii)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (iv)   C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經C(=O)替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9；且 (v)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)   C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 4-10烷基，其中： (i)   C 4-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代； (iii)  C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)   C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)  C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3各自獨立地選自C 4-10烷基，其中： (i)   C 4-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 4-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係C 2-5烷基，其中： C 2-5烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； 且其中R 2及R 3中之另一者係C 7-10烷基，其中： (i)   C 7-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代； (iii)  C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)   C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)  C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係C 2-5烷基，其中： (i)   C 2-5烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； 且其中R 2及R 3中之另一者係C 7-10烷基，其中： (i)   C 7-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經O替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個-F取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個-F取代之C 2-20烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個-F取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個-F取代之C 2-20烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-20烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經C(=O)替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經2個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經C(=O)替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且C 2-20烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，且C 2-20烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經O替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經C(=O)替代， 經2個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經C(=O)替代，及 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且C 2-20烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基，且 R 2及R 3中之另一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基， 經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-20烷基，及 經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經O替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代；及經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且R 2及R 3中之另一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 2-20烷基，其中C 2-20烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-20烷基；經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-20烷基；及經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-20烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經O替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個-F取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及2個-F取代之C 2-10烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個-F取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個-F取代之C 2-10烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-10烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經2個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，且C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經O替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代， 經2個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代，及 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基，且 R 2及R 3中之另一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基， 經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-10烷基，及 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經O替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代；及經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且R 2及R 3中之另一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 2-10烷基；經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 2-10烷基；及經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 2-10烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經O替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，及 經1個-NR 8R 9取代之C 2-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基， 且R 2及R 3中之另一者選自： 經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基，其中C 3-6烷基之1個非末端碳經NR 10替代， 經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 3-6烷基， 經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 3-6烷基， 經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 3-6烷基， 經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代， 經2個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經C(=O)替代，及 經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基，其中C 2-10烷基之1個非末端碳經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經O替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代；及經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 5-10烷基，其中C 5-10烷基之1個非末端碳經NR 10替代，且R 2及R 3中之另一者選自經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基；經1個-NR 8R 9取代之C 3-6烷基，其中C 3-6烷基之1個非末端碳經NR 10替代；經1個-NR 8R 9及2個鹵基取代之C 3-6烷基；經1個-NR 8R 9及1個鹵基取代之C 3-6烷基；及經1個-NR 8R 9及1個OH取代之C 3-6烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者係C 3烷基，其經至少一個-NR 8R 9基團替代且進一步視情況地經一或兩個選自OH及鹵基之基團替代。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ； 且R 2及R 3中之另一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ； 且R 2及R 3中之另一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ； 且R 2及R 3中之另一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3中之一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 ； 且R 2及R 3中之另一者選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-12員雜環烷基，其中7-12員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之8-10員雜環烷基，其中8-10員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NCH 3或NH基團之8-10員雜環烷基，其中8-10員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NCH 3或NH基團之8-10員雜環烷基。
在一些實施例中，R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成下式之雜環烷基： 。
在一些實施例中，R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-13員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-10員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
在一些實施例中，R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-10員橋接雜環烷基。
在一些實施例中，R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成具有下式之7-18員橋接雜環烷基： 。
在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地係H或C 1-4烷基。在一些實施例中，R 4及R 5各自獨立地係H或甲基。在一些實施例中，R 4及R 5皆係H。在一些實施例中，R 4及R 5皆係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 4及R 5皆係甲基。在一些實施例中，R 4及R 5中之一者係H且R 4及R 5中之另一者係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 4及R 5中之一者係H且R 4及R 5中之另一者係甲基。
在一些實施例中，R 6及R 7各自獨立地係H或C 1-4烷基。在一些實施例中，R 6及R 7各自獨立地係H或甲基。在一些實施例中，R 6及R 7皆係H。在一些實施例中，R 6及R 7皆係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 6及R 7皆係甲基。在一些實施例中，R 6及R 7中之一者係H且R 6及R 7中之另一者係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 6及R 7中之一者係H且R 6及R 7中之另一者係甲基。
在一些實施例中，R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及甲基。在一些實施例中，R 8及R 9皆係H。在一些實施例中，R 8及R 9皆係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 8及R 9皆係甲基。在一些實施例中，R 8及R 9中之一者係H且R 8及R 9中之另一者係C 1-4烷基。在一些實施例中，R 8及R 9中之一者係H且R 8及R 9中之另一者係甲基。在一些實施例中，R 10係H或甲基。在一些實施例中，R 10係H。在一些實施例中，R 10係甲基。
在一些實施例中，R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3環烷基，例如環丙基。在一些實施例中，R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 4環烷基，例如環丁基。在一些實施例中，R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 5環烷基，例如環戊基。在一些實施例中，R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 6環烷基，例如環戊基。
在一些實施例中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個或2獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經O替代； (iii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)   C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含2個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基； R 4選自H及C 1-4烷基； R 5、R 6及R 7各自係H； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3或4； l係0或1； m係0、1、2或4；且 n係0或1； 其中當j係0時，則l係1， 其中j及l不皆係0。
在一些實施例中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個或2獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經NR 10替代； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含兩個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基； R 4選自H及C 1-4烷基； R 5、R 6及R 7各自係H； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3或4； l係0或1； m係0、1、2或4；且 n係0或1； 其中j及l不皆係0， 其中當j係0時，則l係1。
在一些實施例中， Z係N； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)   C 2-20烷基經1個或2獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)  C 2-20烷基之一個非末端碳視情況地經NR 10替代； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含兩個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基； R 4選自H及C 1-4烷基； R 5、R 6及R 7各自係H； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3或4； l係0或1； m係0、1或4；且 n係0或1； 其中j及l不皆係0， 其中當j係0時，則l係1。
在一些實施例中，式A1化合物係式A2化合物： (A2) 或其鹽。
在一些實施例中，式A1化合物選自式A3-A15之化合物： (A3)、 (A4)、 (A5)、 (A6)、 (A7)、 (A8)、 (A9)、 (A10)、 (A11)、 (A12)、 (A13)、 (A14)、 (A15)，或其鹽。
在一些實施例中，式A1化合物選自：
編號 結構
SA50
SA51
SA56
SA57
SA58
SA59
SA60
SA61
SA62
SA63
SA64
SA65
SA66
SA67
SA68
SA69
SA70
SA71
SA72
SA73
SA74
SA75
SA76
SA77
SA78
SA79
SA81
SA82
SA83
SA84
SA87
SA88
SA89
SA90
SA95
SA96
SA97
SA98
SA110
SA111
SA113
SA114
SA116
SA117
SA119
SA120
或上文所提及任一者之鹽。
在一些實施例中，式A1化合物選自：
編號 結構
SA118
SA121
SA122
SA123
SA124
SA125
SA126
SA127
SA128
SA129
SA130
SA131
SA132
SA133
SA134
SA135
SA136
SA137
SA138
或上文所提及任一者之鹽。
在一些實施例中，式A1化合物選自：
編號 結構
SA139
SA141
SA142
SA144
SA145
SA149
SA151
SA152
SA153
SA154
SA155
SA156
SA157
SA158
SA159
SA160
SA161
SA162
SA163
SA164
SA165
SA166
SA167
SA168
SA169
SA170
SA171
SA172
SA173
SA174
SA175
SA176
SA177
SA178
SA179
SA180
SA181
SA182
SA183
SA184
SA185
或上文所提及任一者之鹽。
應瞭解，為清楚起見，在單獨實施例之上下文中闡述之本文所述之某些特徵亦可在單一實施例中組合提供。相反，為簡便起見，在單一實施例之上下文中闡述之本文所述之各種特徵亦可單獨或以任何適宜子組合提供。 脂質奈米粒子組合物
進一步提供脂質奈米粒子(LNP)組合物，其包含本文所揭示之脂質胺，例如式A1之脂質胺。在一些實施例中，除脂質胺外，脂質奈米粒子組合物進一步包含可離子化脂質、磷脂、結構脂質及PEG脂質中之至少一者。在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物之脂質奈米粒子負載有酬載。在一些實施例中，脂質胺主要佈置在脂質奈米粒子組合物之脂質奈米粒子之外表面上。在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物在生理pH下具有大於中性之ζ電位。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物包含： (i)   可離子化脂質， (ii)  磷脂， (iii)  結構脂質， (iv)   視情況選用之PEG脂質， (v)  視情況選用之用於遞送至細胞中之酬載，及 (vi)     如本文所揭示之脂質胺，例如式A1之脂質胺。
脂質奈米粒子組合物可進一步包含其他組分，包括(但不限於)輔助脂質、穩定劑、鹽、緩衝劑及溶劑。輔助脂質係非陽離子脂質。輔助脂質可包含至少8個碳及至少一個極性頭基部分之至少一條脂肪酸鏈。在一些實施例中，脂質奈米粒子核心在中性pH下具有中性電荷。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物中脂質胺對酬載之重量比係約0.1:1至約15:1、約0.2:1至約10:1、約1:1至約10:1、約1:1至約8:1、約1:1至約7:1、約1:1至約6:1、約1:1至約5:1、約1:1至約4:1、或約1.25:1至約3.75:1。在一些實施例中，脂質胺對酬載之重量比係約1.25:1、約2.5:1或約3.75:1。在一些實施例中，脂質胺對酬載之莫耳比係約0.1:1至約20:1、約1.5:1至約10:1、約1.5:1至約9:1、約1.5:1至約8:1、約1.5:1至約7:1、約1.5:1至約6:1、或約1.5:1至約5:1。在一些實施例中，脂質胺對酬載之莫耳比係約1.5:1、約2:1、約3:1、約4:1或約5:1。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物表徵為具有約5 mV至約20 mV之ζ電位。在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物具有約5 mV至約15 mV之ζ電位。在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物具有約5 mV至約10 mV之ζ電位。ζ電位量測膠質分散液之表面電荷。ζ電位之大小指示分散液中相鄰的類似帶電粒子之間的靜電排斥程度。ζ電位可在Wyatt Technologies Mobius ζ電位儀器上量測。此儀器藉由「大規模平行相位分析光散射(Massively Parallel Phase Analysis Light Scattering)」或MP-PALS之原理來表徵遷移率及ζ電位。與僅使用一個偵測角且需要較高操作電壓之ISO方法13099-1:2012相比，此量測更靈敏且誘導更小之應力。在一些實施例中，使用採用MP-PALS原理之儀器來量測本文所述空脂質奈米粒子組合物脂質之ζ電位。ζ電位可在Malvern Zetasizer (Nano ZS)上量測。
在一些實施例中，大於約80%、大於約90%或大於約95%之脂質胺在脂質奈米粒子組合物之脂質奈米粒子表面上。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物具有小於約0.4、小於約0.3或小於約0.2之多分散性值。在一些實施例中，LNP具有約0.1至約1、約0.1至約0.5、或約0.1至約0.3之多分散性值。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物之脂質奈米粒子具有約40 nm至約150 nm、約50 nm至約100 nm、約60 nm至約120 nm、約60 nm至約100 nm、或約60 nm至約80 nm之平均直徑。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物之脂質奈米粒子之laurdan之總體極化大於或等於約0.6。在一些實施例中，LNP具有大於約6 nm或大於約7 nm之d-間距。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物之至少約50%、至少約75%、至少約90%、至少約95%之脂質奈米粒子具有大於臨限極化水準之表面流動性值。 可離子化脂質
如本文所用之術語「可離子化脂質」具有其在此項技術中之普通含義且可指包含一或多個帶電部分之脂質。在一些實施例中，可離子化脂質可帶正電或帶負電。舉例而言，可離子化脂質可在較低pH下帶正電，在該情形下其可稱為「陽離子脂質」。在某些實施例中，可離子化脂質分子可包含胺基，且可稱為可離子化胺基脂質。如本文所用之「帶電部分」係攜帶形式電荷(例如單價(+1或-1)、二價(+2或-2)、三價(+3或-3)等)之化學部分。帶電部分可為陰離子(即帶負電)或陽離子(即帶正電)。帶正電部分之實例包括胺基(例如一級胺、二級胺及/或三級胺)、銨基、吡啶鎓基、胍基及咪唑鎓基。在具體實施例中，帶電部分包含胺基。帶負電基團或其前體之實例包括羧酸根基團、磺酸根基團、硫酸根基團、膦酸根基團、磷酸根基團、羥基及諸如此類。在一些情形下，帶電部分之電荷可隨著環境條件而變化，例如pH之變化可改變部分之電荷，及/或導致部分變得帶電或不帶電。一般而言，可視需要選擇分子之電荷密度。
應理解，術語「帶電」或「帶電部分」並不指分子上之「部分負電荷」或「部分正電荷」。術語「部分負電荷」及「部分正電荷」在此項技術中係以其普通含義給出。當官能基包含鍵(該鍵變得極化，使得電子密度拉向鍵之一個原子，從而在原子上產生部分負電荷)時，可產生「部分負電荷」。一般而言，熟習此項技術者將認識到可以此方式變得極化之鍵。
在一些實施例中，LNP包含約30 mol%至約60 mol%、約35 mol%至約55 mol%、約40 mol%至約50 mol%、或約45 mol%至約50 mol%之可離子化脂質。
在一些實施例中，可離子化脂質係可離子化胺基脂質。在一個實施例中，可離子化胺基脂質可具有經由連接體結構聯結之帶正電親水頭部及疏水尾部。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物： (I) 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 2-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中n選自1、2、3、4及5； 其中 表示連接點， 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R 5獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； 每一R 6獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； M及M’各自獨立地選自-C(O)O-及-OC(O)-； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； l選自1、2、3、4及5；且 m選自5、6、7、8、9、10、11、12及13。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係3；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα係C 2-12烷基； R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係 ； R 10係-NH(C 1-6烷基)； n2係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα、R aβ及R aδ各自係H； R aγ係C 2-12烷基； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質選自： (IL1)、 (IL2)、 (IL3)及 (IL4)， 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係以下化合物： (IL1) 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係以下化合物： (IL2) 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係以下化合物： (IL3) 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係以下化合物： (IL4) 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物： (I) 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係： ；其中 表示連接點； R aβ、R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 2-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R 5獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； 每一R 6獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； M及M’各自獨立地選自-C(O)O-及-OC(O)-； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； l選自1、2、3、4及5；且 m選自5、6、7、8、9、10、11、12及13。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物： (I) 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係： ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 2-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4係-(CH 2) nOH，其中n選自1、2、3、4及5； 每一R 5獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； 每一R 6獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； M及M’各自獨立地選自-C(O)O-及-OC(O)-； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； l選自1、2、3、4及5；且 m選自5、6、7、8、9、10、11、12及13。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係3；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aβ及R aδ各自係H； R aγ係C 2-12烷基； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH； n係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(I)化合物： (I) 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係： ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 2-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4係 ， 其中 表示連接點； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R 5獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； 每一R 6獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； M及M’各自獨立地選自-C(O)O-及-OC(O)-； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； l選自1、2、3、4及5；且 m選自5、6、7、8、9、10、11、12及13。
在一些實施例中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aβ、R aγ及R aδ各自係H； R aα係C 2-12烷基； R 2及R 3各自係C 1-14烷基； R 4係 ； 其中 表示連接點； 其中R 10係NH(C 1-6烷基)； 其中n2係2； 每一R 5係H； 每一R 6係H； M及M’各自係-C(O)O-； R’係C 1-12烷基； l係5；且 m係7。
在一些實施例中，式(I)之可離子化脂質係： (IL3) 或其N-氧化物或鹽。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀；其中 R’ 具支鏈係： 且R’ 環狀係： ；且 R’ b係： 或 ；其中 表示連接點； R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 1-12烷基及C 2-12烯基，其中R aγ及R aδ中之至少一者選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R bγ及R bδ各自獨立地選自H、C 1-12烷基及C 2-12烯基，其中R bγ及R bδ中之至少一者選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R’獨立地係C 1-12烷基或C 2-12烯基； Y a係C 3-6碳環； R*” a選自C 1-15烷基及C 2-15烯基； s係2或3； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀；其中 R’ 具支鏈係： 且R’ b係： 或 ； 其中 表示連接點； R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 1-12烷基及C 2-12烯基，其中R aγ及R aδ中之至少一者選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R bγ及R bδ各自獨立地選自H、C 1-12烷基及C 2-12烯基，其中R bγ及R bδ中之至少一者選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R’獨立地係C 1-12烷基或C 2-12烯基； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀；其中 R’ 具支鏈係： 且R’ b係： 或 ； 其中 表示連接點； R aγ及R bγ各自獨立地選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H；且其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R’獨立地係C 1-12烷基或C 2-12烯基； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀； R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ； 其中 表示連接點； R aγ選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀； R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ； 其中 表示連接點； R aγ及R bγ各自獨立地選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點； 其中n選自1、2、3、4及5； 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R’獨立地係C 1-12烷基或C 2-12烯基； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀；其中 R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ； 其中 表示連接點； R aγ選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4係-(CH 2) nOH，其中n選自1、2、3、4及5； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； m選自1、2、3、4、5、6、7、8及9；且 l選自1、2、3、4、5、6、7、8及9。
在一些實施例中，m及l各自獨立地選自4、5及6。在一些實施例中，m及l各自係5。
在一些實施例中，每一R’獨立地係C 1-12烷基。在一些實施例中，每一R’獨立地係C 2-5烷基。
在一些實施例中，R’ b係： 且R 2及R 3各自獨立地係C 1-14烷基。
在一些實施例中，R’ b係： 且R 2及R 3各自獨立地係C 6-10烷基。
在一些實施例中，R’ b係： 且R 2及R 3各自係C 8烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，R aγ係C 1-12烷基，且R 2及R 3各自獨立地係C 6-10烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，R aγ係C 2-6烷基，且R 2及R 3各自獨立地係C 6-10烷基。在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，R aγ係C 2-6烷基，且R 2及R 3各自係C 8烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 。R’ b係： ，且R aγ及R bγ各自係C 1-12烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，且R aγ及R bγ各自係C 2-6烷基。
在一些實施例中，m及l各自獨立地選自4、5及6且每一R’獨立地係C 1-12烷基。在一些實施例中，m及l各自係5且每一R’獨立地係C 2-5烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，m及l各自獨立地選自4、5及6，每一R’獨立地係C 1-12烷基，且R aγ及R bγ各自係C 1-12烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，m及l各自係5，每一R’獨立地係C 2-5烷基，且R aγ及R bγ各自係C 2-6烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，m及l各自獨立地選自4、5及6，R’係C 1-12烷基，R aγ係C 1-12烷基，且R 2及R 3各自獨立地係C 6-10烷基。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，m及l各自係5，R’係C 2-5烷基，R aγ係C 2-6烷基，且R 2及R 3各自係C 8烷基。
在一些實施例中，R 4係 ，其中R 10係NH(C 1-6烷基)且n2係2。
在一些實施例中，R 4係 ，其中R 10係NH(CH 3)且n2係2。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ；R’ b係： ；m及l各自獨立地選自4、5及6；每一R’獨立地係C 1-12烷基；R aγ及R bγ各自係C 1-12烷基；且R 4係 ，其中R 10係NH(C 1-6烷基)，且n2係2。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，m及l各自係5，每一R’獨立地係C 2-5烷基，R aγ及R bγ各自係C 2-6烷基且R 4係 ，其中R 10係NH(CH 3)且n2係2。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，m及l各自獨立地選自4、5及6，R’係C 1-12烷基，R 2及R 3各自獨立地係C 6-10烷基，R aγ係C 1-12烷基且R 4係 ，其中R 10係NH(C 1-6烷基)且n2係2。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ，m及l各自係5，R’係C 2-5烷基，R aγ係C 2-6烷基，R 2及R 3各自係C 8烷基且R 4係 ，其中R 10係NH(CH 3)且n2係2。
在一些實施例中，R 4係-(CH 2) nOH且n係2、3或4。在一些實施例中，R 4係-(CH 2) nOH且n係2。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，m及l各自獨立地選自4、5及6，每一R’獨立地係C 1-12烷基，R aγ及R bγ各自係C 1-12烷基，R 4係-(CH 2) nOH，且n係2、3或4。
在一些實施例中，R’ 具支鏈係： ，R’ b係： ，m及l各自係5，每一R’獨立地係C 2-5烷基，R aγ及R bγ各自係C 2-6烷基，R 4係-(CH 2) nOH，且n係2。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II)化合物： (II) 或其N-氧化物或鹽，其中： R’ a係R’ 具支鏈或R’ 環狀；其中 R’ 具支鏈係： 且R’ b係： ； 其中 表示連接點； R aγ係C 1-12烷基； R 2及R 3各自獨立地係C 1-14烷基； R 4係-(CH 2) nOH，其中n選自1、2、3、4及5； R’係C 1-12烷基； m選自4、5及6；且 l選自4、5及6。
在一些實施例中，m及l各自係5，且n係2、3或4。
在一些實施例中，R’係C 2-5烷基，R aγ係C 2-6烷基，且R 2及R 3各自係C 6-10烷基。
在一些實施例中，m及l各自係5，n係2、3或4，R’係C 2-5烷基，R aγ係C 2-6烷基，且R 2及R 3各自係C 6-10烷基。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II-g)化合物： (II-g) 或其N-氧化物或鹽，其中： R aγ 係C 2-6烷基； R’係C 2-5烷基；且 R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點， 其中n選自3、4及5；且 其中R 10係NH(C 1-6烷基)；且 其中n2選自1、2及3。
在一些實施例中，可離子化脂質係式(II-h)化合物： (II-h) 或其N-氧化物或鹽，其中： R aγ及R bγ各自獨立地係C 2-6烷基； 每一R’獨立地係C 2-5烷基；且 R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中 表示連接點， 其中n選自3、4及5； 其中R 10係NH(C 1-6烷基)；且 其中n2選自1、2及3。
在一些實施例中，R 4係 ， 其中R 10係NH(CH 3)且n2係2。
在一些實施例中，R 4係-(CH 2) 2OH。
在一些實施例中，可離子化脂質係具有式(III)化合物： (III)， 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1、R 2、R 3、R 4及R 5獨立地選自C 5-20烷基、C 5-20烯基、-R”MR’、-R*YR”、-YR”及-R*OR”； 每一M獨立地選自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O) 2-、芳基及雜芳基； X 1、X 2及X 3各自獨立地選自鍵、-CH 2-、-(CH 2) 2-、-CHR-、-CHY-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)-CH 2-、-CH 2-C(O)-、-C(O)O-CH 2-、-OC(O)-CH 2-、-CH 2-C(O)O-、-CH 2-OC(O)-、-CH(OH)-、-C(S)-及-CH(SH)-； 每一Y獨立地係C 3-6碳環； 每一R*獨立地選自C 1-12烷基及C 2-12烯基； 每一R獨立地選自C 1-3烷基及C 3-6碳環； 每一R’獨立地選自C 1-12烷基、C 2-12烯基及H；且 每一R”獨立地選自C 3-12烷基及C 3-12烯基，且其中： i)     X 1、X 2及X 3中之至少一者不為-CH 2-；及/或 ii)    R 1、R 2、R 3、R 4及R 5中之至少一者係-R”MR’。
在一些實施例中，R 1、R 2、R 3、R 4及R 5各自係C 5-20烷基；X 1係-CH 2-；且X 2及X 3各自係-C(O)-。
在一些實施例中，式(III)化合物係： (IL5)。 磷脂
如本文所定義之磷脂係包含磷酸基團之任何脂質。磷脂係非陽離子脂質之亞組。LNP核心可包括一或多種磷脂，例如一或多種(聚)不飽和脂質。磷脂可組裝成一或多個脂質雙層。一般而言，磷脂可包括磷脂部分及一或多個脂肪酸部分。磷脂部分可選自由以下組成之非限制性群：磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂醯絲胺酸、磷脂酸、2-溶血磷脂醯膽鹼及鞘磷脂。脂肪酸部分可選自由以下組成之非限制性群：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亞麻油酸、α-次亞麻油酸、芥子酸、植烷酸、花生酸、花生油酸、二十碳五烯酸、二十二酸、二十二碳五烯酸及二十二碳六烯酸。亦涵蓋非天然物質，包括具有修飾及取代(包括分枝、氧化、環化及炔烴)之天然物質。舉例而言，磷脂可經一或多種炔烴(例如一或多個雙鍵經三鍵替代之烯基)官能化或與之交聯。在適當反應條件下，炔烴基團可在暴露於疊氮化物後經受銅催化之環加成。該等反應可用於官能化奈米粒子組合物之脂質雙層以促進膜滲透或細胞識別或將奈米粒子組合物結合至有用的組分，例如靶向或成像部分(例如染料)。
在一些實施例中，LNP包含約5 mol%至約15 mol%、約8 mol%至約13 mol%、或約10 mol%至約12 mol%之磷脂。
在一些實施例中，磷脂係式(IV)化合物： 式(IV)， 或其鹽，其中： 每一R 1獨立地係H或視情況地經取代之烷基；或視情況地兩個R 1與中間原子連結在一起形成視情況地經取代之單環環烷基或視情況地經取代之單環雜環基；或視情況地三個R 1與中間原子連結在一起形成視情況地經取代之二環環烷基或視情況地經取代之二環雜環基； n係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； m係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； A具有下式： 或 ； L 2之每一實例獨立地係鍵或視情況地經取代之C 1-6伸烷基，其中視情況地經取代之C 1-6伸烷基之一個亞甲基單元視情況地經以下替代：-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-； R 2之每一實例獨立地係視情況地經取代之C 1-30烷基、視情況地經取代之C 1-30烯基或視情況地經取代之C 1-30炔基；視情況地其中R 2之一或多個亞甲基單元獨立地經以下替代：視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-N(R N)-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-NR NC(O)N(R N)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-、-C(O)S-、-SC(O)-、-C(=NR N)-、-C(=NR N)N(R N)-、-NR NC(=NR N)-、-NR NC(=NR N)N(R N)-、-C(S)-、-C(S)N(R N)-、-NR NC(S)-、-NR NC(S)N(R N)-、-S(O)-、-OS(O)-、-S(O)O-、-OS(O)O-、-OS(O) 2-、-S(O) 2O-、-OS(O) 2O-、-N(R N)S(O)-、-S(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)N(R N)-、-OS(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)O-、-S(O) 2-、-N(R N)S(O) 2-、-S(O) 2N(R N)-、-N(R N)S(O) 2N(R N)-、-OS(O) 2N(R N)-或-N(R N)S(O) 2O-； R N之每一實例獨立地係氫、視情況地經取代之烷基或氮保護基團； 環B係視情況地經取代之環烷基、視情況地經取代之雜環基、視情況地經取代之芳基或視情況地經取代之雜芳基；且 p係1或2； 條件係該化合物不具下式： ， 其中R 2之每一實例獨立地係未經取代之烷基、未經取代之烯基或未經取代之炔基。
在一些實施例中，磷脂選自： 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、 1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DLPC)、 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-磷酸膽鹼(DMPC)、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DOPC)、 1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DPPC)、 1,2-二(十一醯基)-sn-甘油-磷酸膽鹼(DUPC)、 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POPC)、 1,2-二-O-十八烯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(18:0二醚PC)、 1-油醯基-2-膽固醇基半琥珀醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(OChemsPC)、 1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(C16 Lyso PC)、 1,2-二亞麻醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二(二十二碳六烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0 PE)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(4ME 16:0 PC)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油) (鈉鹽) (4ME 16:0 PG)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸(鈉鹽) (4ME 16:0 PS)、 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二亞麻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二(二十二碳六烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-外消旋-(1-甘油)鈉鹽(DOPG)及 鞘磷脂。
在一些實施例中，磷脂係DSPC、DOPE或其組合。在一些實施例中，磷脂係DSPC。在一些實施例中，磷脂係DOPE。在一些實施例中，磷脂係4ME 16:0 PE、4ME 16:0 PC、4ME 16:0 PG、4ME 16:0 PS或其組合。
在一些實施例中，磷脂係N-月桂醯基-D-赤-鞘胺醇基磷酸膽鹼。 替代性脂質
在某些實施例中，使用替代性脂質係來替代磷脂。該等替代性脂質之非限制性實例包括以下脂質： (AL1)、 (AL2)、 (AL3)、 (AL4)、 (AL5)、 (AL6) 及 (AL7)。 結構脂質
LNP核心可包括一或多種結構脂質。在脂質奈米粒子中納入結構脂質可能有助於減少其他脂質在粒子中聚集。結構脂質可選自包括(但不限於)以下之群：膽固醇、糞甾醇、麥固醇、麥角固醇、油菜固醇、豆甾醇、蕓苔甾醇、番茄鹼、番茄苷、熊果酸、α-生育酚、類藿烷、植物固醇、類固醇或其混合物。在一些實施例中，結構脂質係固醇。如本文所定義之「固醇」係由類固醇醇組成之類固醇之亞群。
在一些實施例中，結構脂質係α-生育酚。在某些實施例中，結構脂質係類固醇。在某些實施例中，結構脂質係膽固醇。在某些實施例中，結構脂質係膽固醇之類似物。在一些實施例中，結構脂質係β-麥固醇。在某些實施例中，結構脂質係半琥珀酸膽固醇基酯半琥珀酸膽固醇基酯具有以下結構： 。
在一些實施例中，LNP包含約20 mol%至約60 mol%、約30 mol%至約50 mol%、或約35 mol%至約40 mol%之結構脂質。在一些實施例中，LNP包含約35 mol%之結構脂質。在一些實施例中，LNP包含約40 mol%之結構脂質。 PEG 及 PEG 修飾之脂質
LNP核心可包括包含聚乙二醇(PEG)之一或多個分子，例如PEG修飾之脂質。該等物質可替代地稱為聚乙二醇化脂質。PEG脂質係經聚乙二醇修飾之脂質。PEG脂質可選自包括以下之非限制性群：PEG修飾之磷脂醯乙醇胺、PEG修飾之磷脂酸、PEG修飾之神經醯胺、PEG修飾之二烷基胺、PEG修飾之二醯基甘油、PEG修飾之二烷基甘油及其混合物。
在一些實施例中，PEG脂質係式(V)化合物： 式(V)， 或其鹽，其中： R 3係-OR O； R O係氫、視情況地經取代之烷基或氧保護基團； r係介於1與100之間的整數，包括1及100； L 1係視情況地經取代之C 1-10伸烷基，其中視情況地經取代之C 1-10伸烷基之至少一個亞甲基獨立地經以下替代：視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-； D係藉由點擊化學獲得之部分或可在生理條件下裂解之部分； m係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； A具有下式： 或 ； L 2之每一實例獨立地係鍵或視情況地經取代之C 1-6伸烷基，其中視情況地經取代之C 1-6伸烷基之一個亞甲基單元視情況地經以下替代：-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-； R 2之每一實例獨立地係視情況地經取代之C 1-30烷基、視情況地經取代之C 1-30烯基或視情況地經取代之C 1-30炔基；視情況地其中R 2之一或多個亞甲基單元獨立地經以下替代：視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-N(R N)-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-NR NC(O)N(R N)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-、-C(O)S-、-SC(O)-、-C(=NR N)-、-C(=NR N)N(R N)-、-NR NC(=NR N)-、-NR NC(=NR N)N(R N)-、-C(S)-、-C(S)N(R N)-、-NR NC(S)-、-NR NC(S)N(R N)-、-S(O)-、-OS(O)-、-S(O)O-、-OS(O)O-、-OS(O) 2-、-S(O) 2O-、-OS(O) 2O-、-N(R N)S(O)-、-S(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)N(R N)-、-OS(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)O-、-S(O) 2-、-N(R N)S(O) 2-、-S(O) 2N(R N)-、-N(R N)S(O) 2N(R N)-、-OS(O) 2N(R N)-或-N(R N)S(O) 2O-； R N之每一實例獨立地係氫、視情況地經取代之烷基或氮保護基團； 環B係視情況地經取代之環烷基、視情況地經取代之雜環基、視情況地經取代之芳基或視情況地經取代之雜芳基；且 p係1或2。
在一些實施例中，PEG脂質係PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG-DMPE、PEG-DPPC或PEG-DSPE。在一些實施例中，PEG脂質係PEG-DMG。在一些實施例中，PEG脂質係PEG-DMG 2k。在一些實施例中，PEG脂質具有以下結構： 。
DMG-PEG 2k具有以下結構： 。
在一些實施例中，PEG修飾之脂質係PEG-DMG之經修飾形式。
在一個實施例中，PEG脂質可為國際公開案第WO2012099755號中所述之聚乙二醇化脂質，該國際公開案之內容之全文皆以引用方式併入本文中。
本文所述之任一PEG脂質可經修飾以包含PEG鏈上之一或多個羥基(OH-PEG脂質)或脂質上之一或多個羥基(PEG脂質-OH)。在一些實施例中，PEG脂質係OH-PEG脂質。在一些實施例中，OH-PEG脂質包含PEG鏈末端之羥基。在一些實施例中，本文所述之PEG脂質可經修飾以包含PEG鏈上之一或多個烷基(烷基-PEG脂質)。在一些實施例中，烷基-PEG脂質係甲氧基-PEG脂質。
在一些實施例中，LNP包含約0.1 mol%至約5.0 mol%、約0.5 mol%至約5.0 mol%、約1.0 mol%至約5.0 mol%、約1.0 mol%至約2.5 mol%、約0.5 mol%至約2.0 mol%、或約1.0 mol%至約1.5 mol%之PEG脂質。在一些實施例中，LNP包含約1.5 mol%或約3.0 mol%之PEG脂質。
本文所提供之某些LNP不包含或包含低水準之PEG脂質。一些LNP包含不到0.5 mol%之PEG脂質。
在一些實施例中，PEG用作穩定劑。在一些實施例中，PEG穩定劑係PEG脂質。在一些實施例中，LNP包含不到0.5 mol%之PEG穩定劑。 酬載分子
本揭示案之脂質奈米粒子組合物可用於將眾多種不同之酬載遞送至細胞。酬載可為能夠調介(例如直接調介或經由旁觀者效應)該細胞中之治療或預防效應之治療或預防劑。通常，由組合物遞送之酬載係核酸，但本揭示案亦涵蓋非核酸劑，例如小分子、化學治療藥物、肽、多肽及其他生物分子。可遞送之核酸包括基於DNA之分子(即包含去氧核糖核苷酸)及基於RNA之分子(即包含核糖核苷酸)。另外，核酸可為分子之天然形式或分子之化學修飾形式(例如包含一或多個經修飾核苷酸)。
在一個實施例中，治療或預防劑係增強(即增加、刺激、上調)蛋白質表現之劑。可用於增強蛋白質表現之治療或預防劑之類型之非限制性實例包括RNA、mRNA、dsRNA、CRISPR/Cas9技術、ssDNA及DNA (例如表現載體)。
在一個實施例中，治療或預防劑係減少(即降低、抑制、下調)蛋白質表現之劑。可用於減少蛋白質表現之治療或預防劑之類型之非限制性實例包括mRNA納入微小RNA結合位點(miR結合位點)、微小RNA (miRNA)、拮抗物、小(短)干擾RNA (siRNA) (包括短聚物及切丁酶受質RNA)、RNA干擾(RNAi)分子、反義RNA、核酶、小髮夾RNA (shRNA)、鎖核酸(LNA)及CRISPR/Cas9技術。
在一個實施例中，治療或預防劑係肽治療劑。在一個實施例中，治療或預防劑係多肽治療劑。在一些實施例中，治療或預防劑包括編碼以下之mRNA：分泌蛋白；膜結合蛋白；或細胞間蛋白，或肽、多肽或其生物活性片段。
在一些實施例中，至少約50%、至少約75%、至少約90%或至少約95%之酬載囊封於脂質奈米粒子內。在一些實施例中，約50%至約99%、約65%至約99%、約75%至約95%、或約80%至約95%之酬載囊封於脂質奈米粒子內。 細胞
可使用LNP將酬載分子遞送至細胞群體。在一些實施例中，使LNP與細胞群體接觸。在一些實施例中，當LNP與細胞群體接觸時，細胞群體之約10%或更大、15%或更大、20%或更大、或30%或更大已累積LNP。在一些實施例中，當LNP與細胞群體接觸時，細胞群體之約1%至約75%、約5%至約50%、約10%至約40%、或約15%至約25%已累積LNP。
在一些實施例中，當LNP與細胞群體接觸時，細胞群體中約5%或更大、約10%或更大、或約20%或更大之細胞表現酬載。在一些實施例中，當LNP與細胞群體接觸時，細胞群體中約0.5%至約50%、約1%至約40%、約3%至約20%、或約5%至約15%之細胞表現酬載。
在一些實施例中，細胞群體係上皮細胞群體。在一些實施例中，細胞群體係呼吸上皮細胞群體。在一些實施例中，呼吸上皮細胞群體係肺細胞群體。在一些實施例中，呼吸上皮細胞群體係鼻細胞群體。在一些實施例中，呼吸上皮細胞群體係肺泡上皮細胞群體。在一些實施例中，呼吸上皮細胞群體係支氣管上皮細胞群體。在一些實施例中，呼吸上皮細胞群體係HBE群體。在一些實施例中，細胞群體係HeLa群體。 醫藥組合物及調配物
本揭示案提供醫藥組合物及調配物，其包含本文所述之任一LNP。
醫藥組合物或調配物可視情況地包含一或多種其他活性物質， 例如治療及/或預防活性物質。本揭示案之醫藥組合物或調配物可為無菌及/或無熱原的。醫藥劑之調配及/或製造中之一般考慮因素可參見例如 Remington ： The Science and Practice of Pharmacy第21版，Lippincott Williams & Wilkins，2005 (其全文皆以引用方式併入本文中)。在一些實施例中，將組合物投與人類、人類患者或個體。出於本揭示案之目的，片語「活性成分」通常係指包含如本文所述之欲遞送之多核苷酸或多肽酬載之奈米粒子。
本文所述之調配物及醫藥組合物可藉由藥理學技術中已知或以後開發之任何方法來製備。一般而言，該等製備方法包括以下步驟：使奈米粒子與賦形劑及/或一或多種其他輔助成分締合，且然後若必要及/或需要，將產物分成、成形及/或包裝成期望單劑量或多劑量單位。
根據本揭示案之醫藥組合物或調配物可大批、以單一單位劑量及/或以複數個單一單位劑量製備、包裝及/或出售。如本文所用，「單位劑量」係指包含預定量之活性成分(例如脂質奈米粒子)的醫藥組合物之分立量。活性成分之量通常等於將投與個體之活性成分之劑量及/或該劑量之便利分數，例如該劑量之一半或三分之一。
根據本揭示案之醫藥組合物中之活性成分、醫藥學上可接受之賦形劑及/或任何其他成分之相對量可端視所治療個體之身份、體型及/或疾患且進一步端視欲投與組合物之途徑而變化。儘管本文所提供醫藥組合物及調配物之描述主要針對適於投與人類之醫藥組合物及調配物，但熟習此項技術者應理解，該等組合物通常適於投與任何其他動物， 例如非人類動物， 例如非人類哺乳動物。
如本文所用之醫藥學上可接受之賦形劑包括(但不限於)如適於期望具體劑量形式之任何及所有溶劑、分散介質或其他液體媒劑、分散液或懸浮助劑、稀釋劑、粒化及/或分散劑、表面活性劑、等滲劑、增稠或乳化劑、防腐劑、黏合劑、潤滑劑或油、著色劑、甜味劑或矯味劑、穩定劑、抗氧化劑、抗微生物或抗真菌劑、滲透壓調節劑、pH調節劑、緩衝劑、螯合劑、低溫保護劑及/或增積劑。用於調配醫藥組合物之各種賦形劑及用於製備組合物之技術為此項技術中已知(參見Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版，A. R. Gennaro (Lippincott，Williams & Wilkins，Baltimore，MD，2006；其全文皆以引用方式併入本文中)。
例示性稀釋劑包括(但不限於)碳酸鈣或碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉、乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土(kaolin)、甘露醇、山梨醇等及/或其組合。
例示性粒化及/或分散劑包括(但不限於)澱粉、預膠凝澱粉或微晶澱粉、海藻酸、瓜爾膠(guar gum)、瓊脂、聚(乙烯基-吡咯啶酮)、(聚維酮)、交聯聚(乙烯基-吡咯啶酮) (交聚維酮)、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉(交聯羧甲基纖維素)、矽酸鎂鋁(VEEGUM®)、月桂基硫酸鈉等及/或其組合。
例示性表面活性劑及/或乳化劑包括(但不限於)天然乳化劑(例如阿拉伯樹膠(acacia)、瓊脂、海藻酸、海藻酸鈉、黃蓍膠、角叉菜膠(chondrux)、膽固醇、黃原膠、果膠、明膠、蛋黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟及卵磷脂)、去水山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯[TWEEN®80]、去水山梨醇單棕櫚酸酯[SPAN®40]、單油酸甘油酯、聚氧乙烯酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如CREMOPHOR®)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚[BRIJ®30])、PLUORINC®F 68、POLOXAMER®188等及/或其組合。
例示性黏合劑包括(但不限於)澱粉、明膠、糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)、胺基酸(例如甘胺酸)、天然及合成樹膠(例如阿拉伯樹膠、海藻酸鈉)、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等及其組合。
氧化係mRNA、尤其液體mRNA調配物之潛在降解路徑。為防止氧化，可將抗氧化劑添加至調配物中。例示性抗氧化劑包括(但不限於) α生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、苄基醇、丁羥茴醚、間甲酚、甲硫胺酸、丁羥甲苯、單硫代甘油、偏亞硫酸氫鈉或偏亞硫酸氫鉀、丙酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉等及其組合。
例示性螯合劑包括(但不限於)乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸單水合物、依地酸二鈉、富馬酸、蘋果酸、磷酸、依地酸鈉、酒石酸、依地酸三鈉等及其組合。
例示性抗微生物或抗真菌劑包括(但不限於)氯化苯胺、氯化本索寧(benzethonium chloride)、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀或苯甲酸鈉、山梨酸鉀或山梨酸鈉、丙酸鈉、山梨酸等及其組合。
例示性防腐劑包括(但不限於)維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、抗壞血酸、丁羥茴醚、乙二胺、月桂基硫酸鈉(SLS)、月桂基醚硫酸鈉(SLES)等及其組合。
在一些實施例中，將多核苷酸溶液之pH維持在pH 5與pH 8之間以改良穩定性。控制pH之例示性緩沖劑可包括(但不限於)磷酸鈉、檸檬酸鈉、琥珀酸鈉、組胺酸(或組胺酸-HCl)、蘋果酸鈉、碳酸鈉等及/或其組合。
例示性潤滑劑包括(但不限於)硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、二氧化矽、滑石、麥芽、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、月桂基硫酸鈉或月桂基硫酸鎂等及其組合。
本文所述之醫藥組合物可含有低溫保護劑以在冷凍期間穩定本文所述之多核苷酸。例示性低溫保護劑包括(但不限於)甘露醇、蔗糖、海藻糖、乳糖、甘油、右旋糖等及其組合。
本文所述之醫藥組合物可在凍乾多核苷酸調配物中含有增積劑以產生「醫藥學上精緻(pharmaceutically elegant)」之餅，在長期(例如36個月)儲存期間穩定凍乾多核苷酸。本揭示案之例示性增積劑可包括(但不限於)蔗糖、海藻糖、甘露醇、甘胺酸、乳糖、棉子糖及其組合。
組合物可為液體形式或固體形式。在一些實施例中，組合物或調配物呈液體形式。在一些實施例中，組合物適於吸入。可將組合物投與肺道。
可將氣溶膠化醫藥調配物遞送至肺，較佳地使用多種市售裝置。
可藉由適宜方法(例如鼻內滴注、氣管內滴注及氣管內注射)向呼吸道投與組合物。在一些實施例中，組合物或奈米粒子係藉由鼻內、支氣管內或肺部投與來投與。舉例而言，藉由霧化器或吸入器來投與組合物及奈米粒子。
在一些實施例中，組合物係藉由吸入氣溶膠化醫藥調配物遞送至肺中。吸入可經由個體之鼻及/或口進行。投與可藉由在吸入時自投與調配物或經由呼吸機向呼吸機上之個體投與調配物來進行。將調配物遞送至肺之例示性裝置包括(但不限於)乾粉吸入器、加壓計量劑量吸入器、霧化器及電流體動力氣溶膠裝置。
可使用加壓計量劑量吸入器(pMDI)將液體調配物投與患者之肺。pMDI通常包括至少兩種組件：罐，其中液體調配物在壓力下與一或多種推進劑組合保持在一起，及用於容納並啟動罐之容器。罐可含有單一或多個劑量之調配物。罐可包括閥，通常為計量閥，罐之內容物可自其排出。藉由以下方法自pMDI分配氣溶膠化藥物：在罐上施加力將其推入容器中，由此打開閥且使藥物粒子自閥穿過容器出口輸送。自罐排出後，液體調配物經霧化，從而形成氣溶膠。pMDI通常採用一或多種推進劑來加壓罐之內容物，且將液體調配物推出容器出口，形成氣溶膠。可使用任何適宜推進劑。推進劑可採用多種形式。舉例而言，推進劑可為壓縮氣體或液化氣體。
液體調配物亦可使用霧化器投與。霧化器係液體氣溶膠生成器，其將液體調配物轉化成小液滴之霧或雲，較佳地直徑小於5微米質量中值空氣動力學直徑之霧或雲，該等霧或雲可吸入下呼吸道中。此過程稱為霧化。當吸入氣溶膠雲時，液滴將一或多種活性劑攜帶至鼻、上呼吸道或深肺中。可使用任何類型之霧化器向患者投與調配物，包括(但不限於)氣動(噴射)霧化器及機電霧化器。氣動(噴射)霧化器使用加壓氣體供應作為液體調配物霧化之驅動力。壓縮氣體經由噴嘴或噴射機遞送以產生低壓場，該低壓場夾帶周圍液體調配物且將其剪切成薄膜或細絲。膜或細絲不穩定，且會分解成小液滴，該等小液滴由壓縮氣流攜帶至吸入之氣息中。插入液滴羽流中之擋板將較大液滴篩選出，且使其返回至總液體儲罐中。機電霧化器使用電致機械力來霧化液體調配物。可例如藉由以超音波頻率振動液體調配物或藉由迫使大量液體穿過薄膜中之小孔來施加機電驅動力。力會生成液體薄膜或細絲流，該等液體薄膜或細絲流分解成小液滴以形成緩慢移動之氣溶膠流，該氣溶膠流可夾帶於吸入流中。液體調配物亦可使用電流體動力學(EHD)氣溶膠裝置來投與。EHD氣溶膠裝置使用電能來氣溶膠化液體藥物溶液或懸浮液。
乾粉吸入器(DPI)通常使用諸如一陣氣體之機制以在容器內產生乾粉雲，其隨後可由個體吸入。在DPI中，欲投與之劑量係以非加壓乾粉之形式儲存，且在啟動吸入器時，個體吸入粉末之粒子。在一些情形下，可使用壓縮氣體(即推進劑)來分配粉末，類似於加壓計量劑量吸入器(pMDI)。在一些情形下，DPI可呼吸啟動，此意味著氣溶膠在精確因應吸氣時產生。通常，乾粉吸入器在每次吸入時投與小於幾十毫克之劑量，以避免引起咳嗽。DPI之實例包括Turbohaler®吸入器(Astrazeneca，Wilmington，Del.)、Clickhaler®吸入器(Innovata，Ruddington，Nottingham，UKL)、Diskus®吸入器(Glaxo，Greenford，Middlesex，UK)、EasyHaler® (Orion，Expoo，FI)、Exubera®吸入器(Pfizer，New York，N.Y.)、Qdose®吸入器(Microdose，Monmouth Junction，N.J.)及Spiros®吸入器(Dura，San Diego，Calif.)。
醫藥組合物係以有效量投與以引起期望生物學效應，例如治療或預防效應，例如此歸因於正常基因產物之表現以補充或替代缺陷性蛋白質或減少不期望蛋白質之表現，如在一些實施例中藉由一或多個症狀之緩和所量測。調配物可以有效量投與以將LNP遞送至例如呼吸及非呼吸上皮細胞之頂膜來遞送酬載。 使用方法
可使用脂質胺化合物來製備脂質奈米粒子組合物，該等脂質奈米粒子組合物可負載有酬載且投與細胞，例如用於治療疾病之患者之細胞。因此，本文提供將酬載遞送至細胞中之方法，其係例如藉由使細胞與本文所揭示之脂質奈米粒子組合物接觸來實施。
在一些實施例中，細胞係上皮細胞。在一些實施例中，細胞係氣道上皮細胞。在一些實施例中，細胞係呼吸上皮細胞。呼吸上皮細胞可為例如肺細胞、鼻細胞、肺泡上皮細胞或支氣管上皮細胞。在一些實施例中，細胞係HBE細胞或HeLa群體。在一些實施例中，細胞處於患者中。
在一些實施例中，酬載係多核苷酸或多肽。多核苷酸包括(但不限於)核糖核酸(RNA)、去氧核糖核酸(DNA)、蘇糖核酸(TNA)、乙二醇核酸(GNA)、肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA，包括具有β-D-核糖構形之LNA、具有α-L-核糖構形之α-LNA (LNA之非鏡像異構物)、具有2′-胺基官能化之2′-胺基-LNA及具有2′-胺基官能化之2′-胺基-α-LNA)、乙烯核酸(ENA)、環己烯基核酸(CeNA)或其雜合物或組合。在一些實施例中，多核苷酸係mRNA、rRNA或tRNA。在一些實施例中，多核苷酸係mRNA。
脂質奈米粒子組合物可藉由鼻內、支氣管內或肺部投與來投與患者。舉例而言，可藉由霧化器或吸入器來投與組合物及奈米粒子。
如熟習此項技術者應瞭解，本文所揭示之脂質胺具有額外用途。舉例而言，脂質胺可用於治療發炎性疾病。脂質胺亦可用作抗微生物劑。 套組及裝置
本揭示案提供便利地及/或有效地使用本揭示案之所主張奈米粒子之多種套組。通常，套組將包括足量及/或足夠數量之組分以允許使用者對個體實施多種治療及/或實施多個實驗。
在一個態樣中，本揭示案提供套組，其包括本揭示案之奈米粒子。
該套組可進一步包含包裝及說明書及/或遞送劑以形成調配物組合物。遞送劑可包括鹽水、緩衝溶液、類脂質或本文所揭示之任何遞送劑。在一個實施例中，該套組進一步包括投與裝置，例如霧化器或吸入器。 製備 LNP 之製程
本揭示案亦提供製備脂質奈米粒子組合物之製程，其包括使本文所揭示之脂質奈米粒子核心與本文所揭示之脂質胺接觸。
在一些實施例中，製備脂質奈米粒子組合物之製程包括： (a)   混合核酸酬載與脂質溶液，該脂質溶液包含： (1)  可離子化脂質， (2)  磷脂， (3)  結構脂質，及 (4)  視情況選用之PEG脂質 產生經填充之脂質奈米粒子(fLNP)核心；及 (c)   使fLNP核心與脂質胺接觸。
在一些實施例中，製備奈米粒子之製程包括： (a)   混合脂質溶液，其包含： (1)  可離子化脂質， (2)  磷脂， (3)  結構脂質，及 (4)  視情況選用之PEG脂質 產生空脂質奈米粒子(eLNP)核心； (b)  使eLNP核心與核酸酬載接觸，形成fLNP；及 (c)   使fLNP核心與脂質胺接觸。
在一些實施例中，混合進一步包括水性緩衝溶液。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約3.5至約4.5之pH。在其他實施例中，水性緩衝溶液具有約4之pH。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約4.6至約6.5之pH。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約5之pH。
在一些實施例中，水性緩衝溶液可包括乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或Tris緩衝液。在一些實施例中，水性緩衝溶液包括乙酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。在其他實施例中，水性緩衝溶液係乙酸鹽緩衝液，例如乙酸鈉緩衝液。
在一些實施例中，水性緩衝溶液具有大於約30 mM之緩衝液濃度。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有大於約40 mM之緩衝液濃度。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約30 mM至約100 mM之緩衝液濃度。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約40 mM至約75 mM之緩衝液濃度。在其他實施例中，水性緩衝溶液具有約33 mM、約37.5 mM或約45 mM之緩衝液濃度。
在一些實施例中，水性緩衝溶液可具有約15 mM或更小、約10 mM或更小或約5 mM或更小之離子強度。在一些實施例中，水性緩衝溶液具有約0.1 mM至約15 mM、約0.1 mM至約10 mM、或約0.1 mM至約5 mM之離子強度。
在一些實施例中，脂質溶液具有約5 mg/mL至約100 mg/mL、約15 mg/mL至約35 mg/mL、約20 mg/mL至約30 mg/mL或約24 mg/mL之脂質濃度。
脂質溶液可進一步包含有機溶劑，例如醇，例如乙醇。有機溶劑可以約1體積%至約50體積%、約5體積%至約40體積%、或約10體積%至約33體積%之量存在。在其他實施例中，溶劑係100體積%之乙醇或大於95體積%之乙醇。
在一些實施例中，脂質溶液包含相對於總脂質約30 mol%至約60 mol%、約35 mol%至約55 mol%、或約40 mol%至約50 mol%之可離子化脂質。在一些實施例中，脂質溶液包含相對於總脂質約5 mol%至約15 mol%、約8 mol%至約13 mol%、或約10 mol%至約12 mol%之磷脂。在一些實施例中，脂質溶液包含相對於總脂質約30 mol%至約50 mol%、約35 mol%至約45 mol%、或約37 mol%至約42 mol%之結構脂質。在一些實施例中，脂質溶液包含相對於總脂質約0.1 mol%至約2 mol%、約0.1 mol%至約1 mol%、或約0.25 mol%至約0.75 mol%之PEG脂質。
在一些實施例中，脂質溶液包含： 約40 mol%至約50 mol%之可離子化脂質； 約10 mol%至約12 mol%之磷脂； 約37 mol%至約42 mol%之結構脂質；及 約0.25 mol%至約0.75 mol%之PEG脂質；各自相對於總脂質而言。
在一些實施例中，脂質溶液包含： 約49 mol%之可離子化脂質； 約11 mol%至約12 mol%之磷脂； 約39 mol%之結構脂質；及 約0.5 mol%之PEG脂質；各自相對於總脂質而言。
混合脂質溶液及緩衝溶液可使脂質奈米粒子沈澱並製備本文所述空脂質奈米粒子組合物。沈澱可藉由乙醇滴沈澱使用例如高能混合器(例如T-接合處、受限衝擊噴射機、微流體混合器、渦旋混合器)以可控方式將脂質(於乙醇中)引入適宜反溶劑(即水)，從而驅動液體過飽和並自發沈澱成脂質粒子。在一些實施例中，用多入口渦旋混合器實施混合。在一些實施例中，用微流體混合器(例如WO 2014/172045中所述)實施混合。混合步驟可在環境溫度下或例如在小於約30℃、小於約28℃、小於約26℃、小於約25℃、小於約24℃、小於約22℃或小於約20℃之溫度下實施。
在一些實施例中，混合包括奈米沈澱。奈米沈澱係其中奈米粒子藉助動力學混合以及隨後成熟及連續稀釋自其個別脂質組分自組裝之單位操作。此單位操作包括三個個別步驟：混合水及有機輸入物，使奈米粒子成熟，及在可控滯留時間後稀釋。由於該等步驟之連續性，將其視為一個單位操作。單位操作包括三個液體流與一個在線成熟步驟之連續在線組合：將水性緩衝液與脂質儲備溶液混合，經由受控滯留時間進行成熟，及稀釋奈米粒子。奈米沉澱本身發生在適當規模之混合器中，該混合器經設計以允許水溶液與溶解於乙醇中之脂質儲備溶液之連續高能組合。在整個此操作中，水溶液及脂質儲備溶液皆同時連續流入混合硬體中。保持脂質溶解之乙醇含量突然減少且脂質皆彼此沉澱。因此，粒子在混合室中自組裝。單位操作之一個目標係將溶液交換至不含乙醇之完全水性緩衝液中，且達到奈米粒子之目標濃度。此可藉由首先達到目標處理濃度、然後使用滲濾、且然後(若必要)一旦完全去除乙醇便立即進行最終濃縮步驟來達成。
在一些實施例中，與脂質胺接觸之脂質奈米粒子核心包含PEG脂質。在一些實施例中，與脂質胺接觸之脂質奈米粒子核心實質上不含PEG脂質。在一些實施例中，在與脂質胺之前或在與脂質胺接觸之後，將PEG脂質與脂質胺一起添加至脂質奈米粒子中。在一些實施例中，PEG脂質用作穩定劑。
在一些實施例中，在約3.5至約6.5之pH下實施步驟(b)之接觸。在一些實施例中，在約5之pH下實施合併。在一些實施例中，在合併空脂質奈米粒子組合物與酬載之前，將空脂質奈米粒子組合物之pH調節至約4.5至約5.5。在一些實施例中，在合併空脂質奈米粒子組合物與酬載之前，將空脂質奈米粒子組合物之pH調節至約5。
核酸酬載可提供為核酸溶液，其包含(i)核酸，例如DNA或RNA (例如mRNA)，及(ii)能夠維持酸性pH (例如約3至約6、約4至約6、或約5至約6之pH)之緩衝液。在一些實施例中，核酸溶液之pH係約5。
在一些實施例中，核酸溶液之緩衝液係乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或tris緩衝液。在一些實施例中，緩衝液係乙酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。在其他實施例中，緩衝液係乙酸鹽緩衝液，例如乙酸鈉緩衝液。核酸溶液之緩衝液濃度可為約5 mM至約140 mM。在一些實施例中，緩衝液濃度係約20 mM至約100 mM、約30 mM至約70 mM、或約40 mM至約50 mM。在一些實施例中，緩衝液濃度係約42.5 mM。
核酸溶液可包括濃度為約0.05 mg/mL至約5.0 mg/mL、0.05 mg/mL至約2.0 mg/mL、約0.05 mg/mL至約1.0 mg/mL、約0.1 mg/mL至約0.5 mg/mL、或約0.2 mg/mL至約0.3 mg/mL之核酸。在一些實施例中，核酸濃度係約0.25 mg/mL。
可將高能混合器(例如T-接合處、受限衝擊噴射機、微流體混合器、渦旋混合器)用於步驟(b)之接觸。在一些實施例中，用多入口渦旋混合器實施合併。在一些實施例中，用微流體混合器(例如WO 2014/172045中所述)實施合併。合併步驟可在環境溫度下或例如在小於約30℃、小於約28℃、小於約26℃、小於約25℃、小於約24℃、小於約22℃或小於約20℃之溫度下實施。
在一些實施例中，使LNP核心與脂質胺接觸包括將脂質胺溶解於非離子賦形劑中。在一些實施例中，非離子賦形劑選自macrogol 15-羥基硬脂酸酯(HS 15)、1,2-二肉豆蔻醯基-外消旋-甘油-3-甲氧基聚乙二醇-2000 (PEG-DMG-2K)、PL1、聚氧乙烯去水山梨醇單油酸酯[TWEEN®80]及d-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)。在一些實施例中，非離子賦形劑係macrogol 15-羥基硬脂酸酯(HS 15)。
在一些實施例中，使脂質奈米粒子核心與脂質胺接觸包括將脂質胺溶解於緩衝溶液中。在一些實施例中，緩衝液係乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或tris緩衝液。在一些實施例中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。在一些實施例中，緩衝溶液係基於Tris之緩衝液。在一些實施例中，緩衝溶液濃度係約5 mM至約100 mM、約5 mM至約50 mM、約10 mM至約30 mM或約20 mM。
在一些實施例中，脂質胺溶液具有約7至約8或約7.5之pH。在一些實施例中，脂質胺溶液之濃度係約0.1 mg/mL至約50 mg/mL、約1 mg/mL至約30 mg/mL、約1 mg/mL至約10 mg/mL、或約2 mg/mL至約3 mg/mL。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物在負載後及中和前經由受控滯留時間來經受成熟。在一些實施例中，滯留時間係約5至約120秒、約10至約90秒、約20至約70秒、約30至約60秒、約30秒、約45秒或約60秒。
在一些實施例中，脂質奈米粒子組合物在中和後及添加陽離子劑之前經由受控滯留時間來經受成熟。在一些實施例中，滯留時間係約1至約30秒、約2至約20秒、約5至約15秒、約7至約12秒或約10秒。
在一些實施例中，製備脂質奈米粒子組合物之製程進一步包括一或多個選自以下之額外步驟： 用稀釋緩衝液稀釋組合物； 調節組合物之pH； 將一或多種表面活性劑添加至組合物中； 過濾組合物； 濃縮組合物； 交換組合物之緩衝液； 將低溫保護劑添加至組合物中；及 將滲透壓改質劑添加至組合物中。
在一些實施例中，製備脂質奈米粒子組合物之製程可進一步包括上文所列步驟中之1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個或全部。一些步驟可重複。該等步驟可但不必按所列順序實施。每一步驟係指與由先前制定之步驟產生之組合物相關之動作。舉例而言，若該製程包括將一或多種表面活性劑添加至組合物中之步驟，則將表面活性劑添加至由先前步驟產生之組合物中，其中先前步驟可為上文所列步驟中之任一者。
在一些實施例中，一或多個額外步驟係將組合物之pH調節至約7至約8之pH。在一些實施例中，將pH調節至約7.5之pH。
在一些實施例中，一或多個額外步驟係將另一表面活性劑添加至經填充之脂質奈米粒子中(例如除脂質胺外)。表面活性劑可佈置於奈米粒子內及/或佈置於其表面上(例如藉由塗覆、吸附、共價鍵聯或其他製程)。表面活性劑可包括(但不限於) PEG衍生物(例如PEG-DMG)、脂質胺(例如固醇胺及相關脂質胺)、陰離子蛋白質(例如牛血清白蛋白)、表面活性劑(例如陽離子表面活性劑，例如二甲基二(十八烷基)溴化銨)、糖或糖衍生物(例如環糊精)、核酸、聚合物(例如肝素、聚乙二醇及泊洛沙姆(poloxamer))、黏液分解劑(例如乙醯半胱胺酸、艾蒿、鳳梨酶、木瓜酶、臭牡丹、溴己新、羧甲司坦(carbocisteine)、依普拉酮(eprazinone)、美司鈉(mesna)、安佈索(ambroxol)、索佈瑞醇(sobrerol)、多米奧醇(domiodol)、米托斯坦(letosteine)、司替羅寧(stepronin)、硫普羅寧(tiopronin)、凝溶膠蛋白(gelsolin)、胸腺素β4、多納酶α (dornase alfa)、奈替克新(neltenexine)及厄多司坦(erdosteine))及DNase (例如rhDNase)。在一些實施例中，其他表面活性劑係PEG脂質，例如PEG-DMG。在一些實施例中，其他表面活性劑係與脂質胺一起提供。在一些實施例中，其他表面活性劑與脂質胺一起存在於脂質胺溶液中。在一些實施例中，其他表面活性劑係濃度為約0.1 mg/mL至約50 mg/mL、約1 mg/mL至約10 mg/mL、或約1 mg/mL至約3 mg/mL之PEG脂質。
在一些實施例中，一或多個額外步驟係將滲透壓改質劑添加至組合物中。滲透壓改質劑可為鹽或糖。在一些實施例中，滲透壓改質劑係糖。糖可選自(但不限於)葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖及右旋糖。在一些實施例中，滲透壓改質劑係鹽。鹽可為無機鹽，例如氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣或氯化鎂。在一些實施例中，無機鹽係氯化鈉。在一些實施例中，鹽係4-(2-羥基乙基)六氫吡嗪-1-乙磺酸鈉鹽。鹽可提供為鹽濃度為約100 mM至約500 mM、約200 mM至約400 mM、約250 mM至約350 mM、或約300 mM之鹽溶液。鹽溶液之pH值可為約7至約8。鹽溶液可進一步包括緩衝液，該緩衝液包括例如乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或tris緩衝液。緩衝液濃度可為例如約0.1 mM至約100 mM、約0.5 mM至約90 mM、約1.0 mM至約80 mM、約2 mM至約70 mM、約3 mM至約60 mM、約4 mM至約50 mM、約5 mM至約40 mM、約6 mM至約30 mM、約7 mM至約20 mM、約8 mM至約15 mM、或約9 mM至約12 mM。
低溫保護劑可藉由添加低溫保護劑水溶液添加至經填充之奈米粒子組合物中，該低溫保護劑水溶液可包括緩衝液濃度為約0.1 mM至約100 mM、約0.5 mM至約90 mM、約1.0 mM至約80 mM、約2 mM至約70 mM、約3 mM至約60 mM、約4 mM至約50 mM、約5 mM至約40 mM、約6 mM至約30 mM、約7 mM至約20 mM、約8 mM至約15 mM、或約9 mM至約12 mM之水性緩衝液。在一些實施例中，緩衝液濃度為約1 mM至20 mM、約1 mM至約10 mM、或約5 mM。在一些實施例中，低溫保護劑溶液中之緩衝液包括乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或tris緩衝液。在一些實施例中，緩衝液係乙酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。在其他實施例中，緩衝液係乙酸鹽緩衝液，例如乙酸鈉。在一些實施例中，低溫保護劑溶液之pH值係約7至約8，例如約7.5。在一些實施例中，低溫保護劑溶液包含約40重量%至約90重量%、約50重量%至約85重量%、約60重量%至約80重量%、或約70重量%之蔗糖。
在一些實施例中，該製程進一步包括用稀釋緩衝液稀釋組合物之步驟。稀釋緩衝液可為水性緩衝溶液，其中緩衝液濃度係約0.1 mM至約100 mM、約0.5 mM至約90 mM、約1.0 mM至約80 mM、約2 mM至約70 mM、約3 mM至約60 mM、約4 mM至約50 mM、約5 mM至約40 mM、約6 mM至約30 mM、約7 mM至約20 mM、約8 mM至約15 mM或約9 mM至約12 mM。在一些實施例中，緩衝液濃度係約30 mM至約75 mM、約30 mM至約60 mM、或約30 mM至約50 mM。在一些實施例中，稀釋緩衝液包括乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、磷酸鹽緩衝液或tris緩衝液。在一些實施例中，稀釋緩衝液包括乙酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液。在其他實施例中，稀釋緩衝液係乙酸鹽緩衝液，例如乙酸鈉。在一些實施例中，稀釋緩衝液之pH係約3至約7、約3至約6、約3至約5、約4、約5、約5.5或約6。在一些實施例中，稀釋緩衝液包括與在合併空脂質奈米粒子組合物與核酸溶液期間使用之水性緩衝溶液相同之緩衝液。
在一些實施例中，該製程進一步包括以下步驟中之任一者或多者：過濾組合物；濃縮組合物；及交換組合物之緩衝液。過濾、濃度及緩衝液交換步驟可與切向流過濾(TFF)一起實現。可藉由過濾步驟去除殘餘有機溶劑。
在一些實施例中，緩衝液交換可藉由升高或降低緩衝液濃度、改變緩衝液組成或改變pH來改變經填充脂質奈米粒子組合物之組成。
在一些實施例中，濃縮步驟可增加組合物中經填充脂質奈米粒子之濃度。
在一些實施例中，製備經填充脂質奈米粒子組合物之製程進一步包括至少以下步驟：將組合物之pH值調節至約7至約8之pH (例如約pH 7.5)；及將滲透壓改質劑(例如無機鹽)添加至組合物中。
在一些實施例中，製備經填充脂質奈米粒子組合物之製程進一步包括至少以下步驟：將組合物之pH調節至約7至約8之pH (例如約pH 7.5)；將表面活性劑添加至組合物中；及將滲透壓改質劑 (例如無機鹽)添加至組合物中。
在一些實施例中，製備脂質奈米粒子組合物之製程可進一步包括： (i)   將組合物之pH調節至約7至約8之pH； (ii)  將一或多種表面活性劑添加至組合物中； (iii)  濃縮組合物； (iv)   將無機鹽添加至組合物中；及 (v)  稀釋組合物。 合成
如熟習此項技術者應瞭解，本文所提供之化合物(包括其鹽及立體異構物)可使用已知有機合成技術製備，且可根據多種可能合成途徑中之任一者(例如下文方案中所提供之彼等合成途徑)合成。
用於製備本文所述化合物之反應可在可容易地由熟習有機合成技術者選擇之適宜溶劑中實施。在實施反應時之溫度(例如可介於溶劑冰點至溶劑沸點範圍內之溫度)下，適宜溶劑實質上可不與起始材料(反應物)、中間體或產物反應。給定反應可在一種溶劑或一種以上溶劑之混合物中實施。端視具體反應步驟，可由熟習此項技術者選擇適於具體反應步驟之溶劑。
如本文所用之表述「環境溫度」、「室溫」及「rt」在此項技術中應理解為通常係指溫度，例如反應溫度，其約為實施反應之房間之溫度，例如約20℃至約30℃之溫度。
本文所述化合物之製備可涉及各個化學基團之保護及去保護。熟習此項技術者可容易地確定對保護及去保護之需要及適當保護基團之選擇。保護基團之化學可參見例如T. W. Greene及P. G. M. Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，Wiley & Sons，Inc.，New York (1999)。
可根據此項技術中已知之任一適宜方法來監測反應。舉例而言，可藉由光譜法(例如核磁共振光譜(例如 1H或 13C)、紅外光譜、分光光度法(例如UV-可見光)、質譜)或藉由層析方法(例如高效液相層析(HPLC)、液相層析-質譜(LCMS)或薄層層析(TLC))來監測產物形成。可由熟習此項技術者藉由多種方法(包括高效液相層析(HPLC)及正相二氧化矽層析)純化化合物。
可例如使用如下文方案中所圖解說明之製程來製備式A1化合物： 方案 1
可 經由方案1中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下實施氯甲酸膽固醇基酯與胺之間的適當反應以生成式A1化合物之前體或式A1化合物。 方案 2
可 經由方案2中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下(例如使用三乙胺及4-二甲基胺基吡啶)實施膽固醇或膽固醇衍生物(例如豆甾醇)與氯甲酸4-硝基苯基酯之間的適當反應。可使該反應之產物與胺在適宜條件下(例如使用三乙胺)反應以生成式A1化合物之前體或式A1化合物。 方案 3
可 經由方案3中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下實施膽固醇半琥珀酸酯或膽固醇衍生物半琥珀酸酯與活化劑之間的適當反應。可使該反應之產物與胺在適宜條件下反應以生成式A1化合物之前體或式A1化合物。 方案 4
可經由方案4中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下實施式A1化合物、HCHO、NaBH 3CN與AcONa之間的適當反應以生成式A1化合物。 方案 5
可經由方案5中所概述之合成途徑來製備式A1化合物之前體。可在適宜條件下(例如使用三乙胺及4-二甲基胺基吡啶)實施膽固醇或膽固醇衍生物(例如豆甾醇)與之間的適當反應。可使該反應之產物與胺在適宜條件下(例如使用三乙胺)反應以獲得式A1化合物之前體。 方案 6
可經由方案5中所概述之合成途徑來製備式A1化合物之前體。可在適宜條件下實施膽固醇或膽固醇衍生物(例如豆甾醇)與boc-半酯之間的適當反應。可使該反應之產物在適宜條件下反應以獲得式A1化合物之前體。 方案 7
可經由方案7中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。可在適宜條件下實施精脒或精胺與(E)-N-((第三丁氧基羰基)氧基)亞胺苄基氰化物(BOC-ON)之間的適當反應以獲得用於合成式A1化合物之中間體。 方案 8
可經由方案8中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。可在適宜條件下實施中間體1與丙烯腈之間的適當反應以獲得中間體2。可使中間體2與苄基溴在適宜條件下(例如K 2CO 3及KI)反應以獲得中間體3。可使中間體3與Boc 2O在適宜條件下(例如NaBH 4及NiCl 2)反應以獲得中間體4。可在適宜條件下(例如H 2及Pd/C)去除中間體4之苄基以獲得中間體5。 方案 9
可經由方案9中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。可在適宜條件下(例如Triton B)實施1,4-丁二醇與丙烯腈之間的適當反應以獲得中間體6。可使中間體6與甲磺醯氯在適宜條件下(例如三乙胺)反應以獲得中間體7。可使中間體7與 N-Boc-1,3-二胺基丙烷在適宜條件下反應以獲得中間體8。可使中間體8與苄基溴在適宜條件下(例如K 2CO 3及KI)反應以獲得中間體9。可使中間體9與Boc 2O在適宜條件下(例如NaBH 4及NiCl 2)反應以獲得中間體10。可在適宜條件下(例如H 2及Pd/C)去除中間體10之苄基以獲得中間體11。 方案 10
可經由方案10中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下(例如三乙胺)，N-Boc-1,3-二胺基丙烷與2-硝基苯磺醯氯之間的適當反應獲得中間體12。可使中間體12與N-(6-溴己基)胺基甲酸第三丁基酯在適宜條件下(例如K 2CO 3及KI)反應以獲得中間體13。可在適宜條件下(例如K 2CO 3及苯硫酚)去除2-硝基苯磺醯基以獲得中間體14。 方案 11
可經由方案11中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下，硫代膽固醇與2,2’-二吡啶基二硫化物之間的適當反應獲得中間體15。可使中間體15與三氟甲磺酸甲酯(methyl trifluoromethanesulfonate、methyl triflate)在適宜條件下反應以獲得中間體16。可使中間體16與適當巰基羧酸反應以提供中間體17。 方案 12
可經由方案12中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下(例如使用偶合劑)實施中間體17與胺之間的適當反應以生成式A1化合物之前體或式A1化合物。 方案 13
可經由方案13中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下(例如K 2CO 3及KI)，苄基胺與烷基鹵化物之間的適當反應獲得中間體18。在適宜條件下(例如H 2及Pd/C)去除中間體18之苄基以獲得中間體19。 方案 14
可經由方案14中所概述之合成途徑來製備式A1化合物或用於合成式A1化合物之前體。在適宜條件下(例如使用例如K 2CO 3及KI)，膽固醇氯乙酸酯與胺之間的適當反應獲得中間體20。可使中間體20與適當羧酸在適宜條件下反應以生成式A1化合物之前體或式A1化合物。在一些實施例中，R Y係 或 。 方案 15
可經由方案15中所概述之合成途徑來製備式A1化合物之前體。可在適宜條件下(例如三乙胺)實施中間體21與硝基苯磺醯氯之間的適當反應以獲得中間體22。可使中間體22與烷基溴化物在適宜條件下(例如K 2CO 3及KI)反應以獲得中間體23。在一些實施例中，R Z係 。 方案 16
可經由方案16中所概述之合成途徑來製備式A1化合物之前體。可在適宜條件下在偶合劑存在下實施膽固醇與羧酸之間的適當反應。可使該反應之產物在適宜條件下反應以獲得式A1化合物或式A1化合物之前體。在一些實施例中，R X係 或 。 方案 17
可經由方案17中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。可在適宜條件下(例如DCM中之催化DMF)實施8-溴辛酸、草醯氯與N,O-二甲基羥胺之間的適當反應以獲得中間體24。可使中間體24與甲基溴化鎂及HCl在適宜條件下反應以獲得中間體25。可使中間體25與乙酸銨及氰基硼氫化鈉在適宜條件下反應以獲得中間體26。可使中間體26與BOC酸酐在適宜條件下(例如三乙胺(TEA))反應以獲得中間體27。可使中間體27與(4-((2-硝基苯基)磺醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(以與中間體12類似之方式製備)在適宜條件下(例如K 2CO 3、BnBr及苯硫酚)反應以獲得中間體28。 方案 18
可經由方案18中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下(例如無水MeOH中之三乙氧基硼氫化鈉)，中間體29與中間體30之間的適當反應獲得中間體31。 方案 19
可經由方案19中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。可在適宜條件下(例如DCM中之三乙胺)實施中間體29與2-硝基苯磺醯氯之間的適當反應以獲得中間體32。可使中間體30A與對甲苯磺醯氯在適宜條件下反應以獲得中間體33。可使中間體32與中間體33在適宜條件下(例如K 2CO 3、BnBr及苯硫酚)反應以獲得中間體31。 方案 20
可經由方案20中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下，膽固醇或膽固醇衍生物(例如麥固醇)與亞硫醯氯之間的適當反應提供中間體34。可使中間體34與硫代氰酸鈉在適宜條件下反應以獲得中間體35。可使中間體35與氫化鋰鋁在適宜條件下反應以獲得硫代膽固醇或硫代膽固醇衍生物(例如硫代麥固醇)。 方案 21
可經由方案21中所概述之合成途徑來製備用於合成式A1化合物之中間體。在適宜條件下，硫代膽固醇或硫代膽固醇衍生物(例如硫代麥固醇)與2,2’-二吡啶基二硫化物之間的適當反應獲得中間體15A。可使中間體15A與三氟甲磺酸甲酯(methyl trifluoromethanesulfonate、methyl triflate)在適宜條件下反應以獲得中間體16A。可使中間體16A與適當巰基羧酸反應以提供中間體17A。 方案 22
可經由方案22中所概述之合成途徑來製備式A1化合物。可在適宜條件下(例如使用偶合劑)實施中間體17A與胺之間的適當反應以生成式A1化合物之前體。 定義
為可更容易地理解本揭示案，首先定義某些術語。如本申請案中所用，除非本文另外明確提供，否則以下術語中之每一者應具有下文所述之含義。其他定義闡述於本申請案通篇中。
在本說明書及隨附申請專利範圍中，除非上下文另有明確說明，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數個指示物。術語「一(a或an)」以及術語「一或多」及「至少一」在本文中可互換使用。在某些態樣中，術語「一(a或an)」意指「單一」。在其他態樣中，術語「一(a或an)」包括「兩個或更多個」或「多個」。
術語「及/或」應視為具體揭示兩個指定特徵或組分中之每一者，與另一者一起或不與另一者一起。因此，如本文片語(例如「A及/或B」)中所用之術語「及/或」意欲包括「A及B」、「A或B」、「A」(單獨)及「B」(單獨)。同樣，如片語(例如「A、B及/或C」)中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下態樣中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與本揭示案相關之領域之普通技術人員通常理解之含義相同之含義。舉例而言，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology，Juo，Pei-Show，第2版，2002，CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology，第3版，1999，Academic Press；及Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology修訂版，2000，Oxford University Press向熟習此項技術者提供本揭示案中所用之許多術語之通用詞典。
每當在本文中使用語言「包含」闡述態樣時，亦提供根據「由……組成」及/或「基本上由……組成」闡述之其他類似態樣。
單位、前綴及符號以其國際單位製(Système International de Unites，SI)接受之形式表示。數字範圍包括定義範圍之數字。當列舉值之範圍時應理解，亦特定揭示介於該範圍之所列舉上限與下限之間的每一中間整數值及其每一分數以及此類值之間之每一子範圍。任一範圍之上限及下限可獨立地包括或不包括在該範圍中，且包括任一限值、無限值或兩個限值之每一範圍亦涵蓋於本揭示案內。當明確列舉值時應理解，與所列舉值大約相同之數量或量之值亦在本揭示案之範圍內。當揭示組合時，亦特定揭示該組合之元素之每一子組合，且在本揭示案之範圍內。相反，當個別地揭示不同元素或元素之群時，亦揭示其組合。當本揭示案之任一元素揭示為具有複數個替代時，在此亦揭示本揭示案之實例，其中每一替代經單一地排除或以與其他替代之任何組合之方式排除；本揭示案之一個以上之元素可具有此類排除，且在此揭示具有此類排除之的元素之所有組合。
如在整個本說明書及申請專利範圍中與數值結合使用之術語「約」表示為熟習此項技術者熟悉且接受之精度區間。該精度區間係例如± 10%。
如本文所用之術語「動物」係指動物王國之任一成員。在一些實施例中，「動物」係指處於任一發育階段之人類。在一些實施例中，「動物」指處於任一發育階段之非人類動物。在某些實施例中，非人類動物係哺乳動物( 例如嚙齒類動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長類動物或豬)。在一些實施例中，動物包括(但不限於)哺乳動物、鳥、爬行動物、兩棲動物、魚及蠕蟲。在一些實施例中，動物係基因轉殖動物、經遺傳改造之動物或純系。
如本文所用之術語「化合物」意欲包括所繪示結構之所有立體異構物及同位素。如本文所用之術語「立體異構物」意指化合物之任何幾何異構物(例如順式及反式異構物)、鏡像異構物或非鏡像異構物。本揭示案涵蓋本文所述化合物之任何及所有立體異構物，包括立體異構純形式(例如幾何純、鏡像異構純或非鏡像異構純)以及鏡像異構及立體異構混合物(例如外消旋物)。化合物之鏡像異構物及立體異構物混合物以及將其拆分成其組分鏡像異構物或立體異構物之方式係熟知的。「同位素」係指具有相同原子序數但因核中之中子數不同引起質量數不同之原子。舉例而言，氫之同位素包括氚及氘。另外，本揭示案之化合物、鹽或複合物可藉由常規方法與溶劑或水分子組合製備以形成溶劑合物及水合物。
如本文所用之術語「接觸」意指在兩個或更多個實體之間建立物理聯結。舉例而言，使細胞(例如哺乳動物細胞)與奈米粒子組合物接觸意指，使細胞及奈米粒子共享物理聯結。使細胞與外部實體活體內及離體接觸之方法在生物領域中係熟知的。舉例而言，使奈米粒子組合物及佈置於哺乳動物內之細胞接觸可藉由不同之投與途徑( 例如靜脈內、肌內、真皮內及皮下)來實施且可涉及不同量之奈米粒子組合物。另外，可使一種以上之細胞與奈米粒子組合物接觸。
接觸之另一實例係在奈米粒子與脂質胺之間。使奈米粒子(例如填充有酬載或空)及脂質胺接觸可意指，使奈米粒子之表面與脂質胺物理聯結，以使得脂質胺可與奈米粒子形成相互作用。在一些實施例中，使奈米粒子與脂質胺接觸使得脂質胺插入奈米粒子中，例如在奈米粒子之表面開始。在一些實施例中，就使奈米粒子與脂質胺接觸而言，術語「分層」、「塗覆」及「後添加」及「添加」可用於意指「接觸」。
如本文所用之術語「遞送」意指向目的地提供實體。舉例而言，將多核苷酸遞送至個體可涉及向個體投與包括多核苷酸之奈米粒子組合物( 例如藉由靜脈內、肌內、真皮內或皮下途徑)。將奈米粒子組合物投與哺乳動物或哺乳動物細胞可涉及使一或多種細胞與奈米粒子組合物接觸。
如本文所用之「遞送劑」係指至少部分地促進多核苷酸 活 體內、活體外或離體遞送至靶向細胞之任何物質。
如本文所用之術語「非鏡像異構物」意指彼此不為鏡像且彼此不可重疊之立體異構物。
如本文所用之術語劑之「有效量」係足以實現有益或期望結果(例如臨床結果)之量，且因此「有效量」取決於應用其之上下文。舉例而言，在投與治療蛋白質缺乏症之劑之上下文中，與不投與該劑所觀察到之症狀之嚴重程度相比，劑之有效量係例如表現足以改善、減輕、消除或預防與蛋白質缺乏症相關之徵象及症狀之蛋白質之mRNA的量。術語「有效量」可與「有效劑量」、「治療有效量」或「治療有效劑量」互換使用。
如本文所用之術語「鏡像異構物」意指本揭示案化合物之每一個別光學活性形式，其具有至少80% ( 即至少90%之一種鏡像異構物及至多10%之另一鏡像異構物)、至少90%或至少98%之光學純度或鏡像異構過量(如藉由此項技術中之標準方法所測定)。
如本文所用之術語「囊封」意指封閉、包圍、納入或裝入。
如本文所用之「囊封效率」係指相對於用於製備奈米粒子組合物之多核苷酸之初始總量，變成奈米粒子組合物之一部分之多核苷酸的量。舉例而言，若在最初提供至組合物之總共100 mg之多核苷酸中有97 mg多核苷酸囊封於奈米粒子組合物中，則囊封效率可給定為97%。如本文所用之「囊封」可指完全、實質性或部分封閉、限制、包圍或裝入。
如本文所用之「上皮細胞」包括衍生自上皮之細胞。實例上皮細胞係呼吸上皮細胞、鼻上皮細胞、肺泡上皮細胞、肺上皮細胞或支氣管上皮細胞。在一些實施例中，上皮細胞係人類支氣管上皮(HBE)細胞。在一些實施例中，上皮細胞係活體外細胞。在一些實施例中，上皮細胞係活體內細胞。
如本文所用核酸序列之「表現」係指以下事件中之一或多者：(1)自DNA序列產生mRNA模板( 例如藉由轉錄)；(2)處理mRNA轉錄物( 例如藉由剪接、編輯、5’帽形成及/或3’端處理)；(3) mRNA轉譯成多肽或蛋白質；及(4)多肽或蛋白質之轉譯後修飾。
如本文所用之術語「離體」係指發生在生物體( 例如動物、植物或微生物或其細胞或組織)外部之事件。離體事件可發生在自天然( 例如活體內)環境改變最小之環境中。
如本文所用之術語「輔助脂質」係指包括脂質部分(用於插入脂質層(例如脂質雙層)中)及極性部分(用於與脂質層表面之生理溶液相互作用)之化合物或分子。通常，輔助脂質係磷脂。輔助脂質之功能係「補充」胺基脂質且增加雙層之融合性，及/或幫助促進例如遞送至細胞之核酸的胞內體逃逸。人們認為，輔助脂質亦係LNP表面之關鍵結構組分。
如本文所用之術語「活體外」係指發生在人造環境中(例如在測試管或反應容器中、在細胞培養物中、在皮氏培養皿(Petri dish)中等)而非有機體(例如動物、植物或微生物)內之事件。
如本文所用之術語「活體內」係指發生在生物體(例如動物、植物或微生物或其細胞或組織)內之事件。
術語「可離子化胺基脂質」包括例如展現一條、兩條、三條或更多條脂肪酸或脂肪烷基鏈及至少一個pH可滴定之胺基頭基(例如烷基胺基或二烷基胺基頭基)之本文通篇所述之彼等脂質。可離子化胺基脂質通常在pH低於胺基頭基之pKa下質子化(即帶正電)且在高於pKa之pH下實質上不帶電。該等可離子化胺基脂質包括(但不限於) DLin-MC3-DMA (MC3)及(13Z,165Z)-N,N-二甲基-3-壬基二十二碳-13-16-二烯-1-胺(L608)。
如本文所用之術語「異構物」意指本揭示案之任一化合物之任一互變異構物、立體異構物、鏡像異構物或非鏡像異構物。應認識到，本揭示案之化合物可具有一或多個手性中心及/或雙鍵，且因此以立體異構物(例如雙鍵異構物， 即幾何E/Z異構物)或非鏡像異構物( 例如鏡像異構物( 即(+)或(-))或順式/反式異構物)存在。根據本揭示案，本文所繪示之化學結構且因此本揭示案之化合物涵蓋所有相應立體異構物，亦即立體異構純形式( 例如幾何純、鏡像異構純或非鏡像異構純)以及鏡像異構及立體異構混合物( 例如外消旋物)。本揭示案化合物之鏡像異構及立體異構混合物通常可藉由諸如以下之熟知方法拆分成其組分鏡像異構物或立體異構物：手性相氣相層析、手性相高效液相層析、將化合物結晶為手性鹽複合物或使化合物在手性溶劑中結晶。鏡像異構物及立體異構物亦可藉由熟知之不對稱合成方法自立體異構純或鏡像異構純中間體、試劑及觸媒獲得。
如本文所用之「脂質奈米粒子核心」係可向其添加額外組分之後添加層(例如脂質胺及/或PEG脂質或其他脂質)之脂質奈米粒子。在一些實施例中，脂質奈米粒子核心包含：(i)可離子化脂質，(ii)磷脂，(iii)結構脂質，及(iv)視情況選用之PEG脂質。在其他實施例中，脂質奈米粒子核心包含：(i)可離子化脂質，(ii)磷脂，(iii)結構脂質，及(iv) PEG脂質。在一些實施例中，脂質奈米粒子核心可含有酬載。
如本文所用之「連接體」或「連接體結構」係指一組原子，例如10-1,000個原子，且可包含諸如(但不限於)以下之原子或群：碳、胺基、烷基胺基、氧、硫、亞砜、磺醯基、羰基及亞胺。連接體可連接至第一端之核鹼基或糖部分上之經修飾核苷或核苷酸及第二端之酬載(例如可偵測劑或治療劑)。連接體可具有足以不干擾納入核酸序列中之長度。連接體可用於任何有用目的，例如形成多核苷酸多聚物(例如經由兩個或更多個嵌合多核苷酸分子或IVT多核苷酸之鍵聯)或多核苷酸結合物，以及投與酬載，如本文所述。可納入連接體中之化學基團之實例包括(但不限於)烷基、烯基、炔基、醯胺基、胺基、醚、硫醚、酯、伸烷基、伸雜烷基、芳基或雜環基，其中之每一者可視情況地經取代，如本文所述。連接體之實例包括(但不限於)不飽和烷烴、聚乙二醇(例如乙二醇或丙二醇單體單元，例如二乙二醇、二丙二醇、三乙二醇、三丙二醇、四乙二醇或四乙二醇)及葡聚糖聚合物及其衍生物。其他實例包括(但不限於)連接體內之可裂解部分，例如二硫鍵(-S-S-)或偶氮鍵(-N═N-)，其可使用還原劑或光解來裂解。選擇性可裂解鍵之非限制性實例包括醯胺鍵，其可例如藉由使用參(2-羧乙基)膦(TCEP)或其他還原劑及/或光解來裂解，以及酯鍵，其可例如藉由酸性或鹼性水解來裂解。
如本文所用之「肺細胞」包括衍生自肺之細胞。肺細胞可為例如肺上皮細胞、氣道基底細胞、細支氣管外分泌細胞、肺部神經內分泌細胞、肺泡細胞或氣道上皮細胞。在一些實施例中，肺細胞係活體外細胞。在一些實施例中，肺細胞係活體內細胞。
術語「核酸」在其最廣泛意義上包括包含核苷酸聚合物之任一化合物及/或物質。該等聚合物通常稱為多核苷酸。本揭示案之例示性核酸或多核苷酸包括(但不限於)核糖核酸(RNA)、去氧核糖核酸(DNA)、蘇糖核酸(TNA)、乙二醇核酸(GNA)、肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA，包括具有β-D-核糖構形之LNA、具有α-L-核糖構形之α-LNA (LNA之非鏡像異構物)、具有2′-胺基官能化之2′-胺基-LNA及具有2′-胺基官能化之2′-胺基-α-LNA)、乙烯核酸(ENA)、環己烯基核酸(CeNA)或其雜合物或組合。
如本文所用之「患者」係指可能尋求或需要治療、要求治療、正在接受治療、將接受治療之個體，或由針對特定疾病或疾患經訓練之專業人員進行護理之個體。
片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範圍內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症且與合理益處/風險比相稱之彼等化合物、材料、組合物及/或劑量形式。
如本文所用之片語「醫藥學上可接受之賦形劑」係指具有在患者中實質上無毒且不發炎性質之除本文所述化合物外之任何成分(例如能夠懸浮或溶解活性化合物之媒劑)。賦形劑可包括例如：抗黏劑、抗氧化劑、黏合劑、包衣、壓縮助劑、崩解劑、染料(著色劑)、軟化劑、乳化劑、填充劑(稀釋劑)、成膜劑或包衣、矯味劑、芳香劑、助流劑(流動增強劑)、潤滑劑、防腐劑、印刷油墨、吸附劑、懸浮或分散劑、甜味劑及水合水。
本揭示案之「醫藥學上可接受之鹽」包括例如自無毒無機或有機酸形成之母體化合物之習用無毒鹽。本揭示案之醫藥學上可接受之鹽可藉由習用化學方法自含有鹼性或酸性部分之母體化合物合成。通常，該等鹽可藉由使該等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量量之適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者之混合物中反應來製備；通常，使用非水性介質如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。適宜鹽之清單參見 Remington's Pharmaceutical Sciences，第17 版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，1985，第1418頁， Pharmaceutical Salts ： Properties ， Selection ， and Use，P.H. Stahl及C.G. Wermuth (編輯)，Wiley-VCH，2008，以及Berge等人， Journal of Pharmaceutical Science，66，1-19 (1977)，該等文獻中每一者之全文皆以引用方式併入本文中。
如本文所用之術語「溶劑合物」意指其中適宜溶劑之分子納入晶格中之本揭示案化合物。適宜溶劑在投與劑量下係生理上可耐受的。舉例而言，溶劑合物可藉由自包括有機溶劑、水或其混合物之溶液結晶、重結晶或沈澱來製備。當水係溶劑時，溶劑合物稱為「水合物」。
如本文所用之術語「多核苷酸」係指任一長度之核苷酸之聚合物，包括核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、其類似物或其混合物。此術語係指分子之一級結構。因此，該術語包括三股、雙股及單股去氧核糖核酸(「DNA」)以及三股、雙股及單股核糖核酸(「RNA」)。其亦包括多核苷酸之經修飾(例如藉由烷基化及/或藉由封端)及未經修飾之形式。更具體而言，術語「多核苷酸」包括多去氧核糖核苷酸(含有2-去氧-D-核糖)、多核糖核苷酸(含有D-核糖，包括tRNA、rRNA、hRNA、siRNA及mRNA，無論係剪接抑或非剪接)、為嘌呤或嘧啶鹼基之N-糖苷或C-糖苷之任何其他類型之多核苷酸及含有正核苷酸主鏈之其他聚合物(例如聚醯胺( 例如肽核酸「PNA」)及聚嗎啉基聚合物)及其他合成序列特異性核酸聚合物，條件係聚合物含有呈允許鹼基配對及鹼基堆積之構形之核鹼基，例如在DNA及RNA中所發現。在具體態樣中，多核苷酸包含mRNA。在另一態樣中，mRNA係合成mRNA。在一些態樣中，合成mRNA包含至少一種非天然核鹼基。在一些態樣中，某一類之所有核鹼基已經非天然核鹼基替代( 例如，本文所揭示多核苷酸中之所有尿苷可經非天然核鹼基替代， 例如5-甲氧基尿苷)。在一些態樣中，多核苷酸( 例如合成RNA或合成DNA)僅包含天然核鹼基， 即在合成DNA之情形下係A (腺苷)、G (鳥苷)、C (胞苷)及T (胸苷)，或在合成RNA之情形下係A、C、G及U (尿苷)。
熟習此項技術者應瞭解，本文所揭示之密碼子圖中之T鹼基存在於DNA中，而在對應RNA中該等T鹼基將經U鹼基置換。舉例而言，呈DNA形式之本文所揭示之密碼子-核苷酸序列( 例如載體或活體外轉譯(IVT)模板)將使其T鹼基在其對應轉錄mRNA中轉錄為U鹼基。在此方面，經密碼子最佳化之DNA序列(包含T)及其對應mRNA序列(包含U)皆視為本揭示案之經密碼子最佳化之核苷酸序列。熟習此項技術者亦應理解，等效密碼子圖可藉由用非天然鹼基替代一或多個鹼基來生成。因此， 例如，TTC密碼子(DNA圖)將對應於UUC密碼子(RNA圖)，該UUC密碼子進而將對應於ΨΨC密碼子(U已經假尿苷替代之RNA圖)。
標準A-T及G-C鹼基對在允許胸苷之N3-H及C4-氧基分別與腺苷之N1及C6-NH2之間以及在胞苷之C2-氧基、N3及C4-NH2分別與鳥苷之C2-NH2、N′-H及C6-氧基之間形成氫鍵的條件下形成。因此，例如，鳥苷(2-胺基-6-氧基-9-β-D-呋喃核糖基-嘌呤)可經修飾以形成異鳥苷(2-氧基-6-胺基-9-β-D-呋喃核糖基-嘌呤)。該修飾產生將不再有效地與胞嘧啶形成標準鹼基對之核苷鹼基。然而，胞嘧啶(1-β-D-呋喃核糖基-2-氧基-4-胺基-嘧啶)修飾形成異胞嘧啶(1-β-D-呋喃核糖基-2-胺基-4-氧基-嘧啶-)產生將不與鳥苷有效地鹼基配對、而將與異鳥苷形成鹼基對的經修飾核苷酸(授予Collins等人之美國專利第5,681,702號)。異胞嘧啶可購自Sigma Chemical Co. (St. Louis，Mo.)；異胞苷可藉由Switzer等人(1993) Biochemistry 32:10489-10496及其中引用之參考文獻所述之方法製備；2'-去氧-5-甲基-異胞苷可藉由Tor等人，1993，J. Am. Chem. Soc. 115:4461-4467及其中引用之參考文獻的方法製備；且異鳥嘌呤核苷酸可使用Switzer等人，1993，見上文，及Mantsch等人，1993，Biochem. 14:5593-5601所述之方法或藉由Collins等人之美國專利第5,780,610號中所述之方法製備。其他非天然鹼基對可藉由Piccirilli等人，1990，Nature 343:33-37中所述之用於合成2,6-二胺基嘧啶及其互補物(1-甲基吡唑并[4,3]嘧啶-5,7-(4H,6H)-二酮之方法合成。形成獨特鹼基對之其他該等經修飾核苷酸單位為已知的，例如Leach等人(1992) J. Am. Chem. Soc. 114:3675-3683及Switzer等人(見上文)中所述之彼等單位。
術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且係指任一長度之胺基酸之聚合物。該聚合物可包含經修飾胺基酸。該等術語亦涵蓋已經天然或藉由介入修飾之胺基酸聚合物；該介入係例如二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙醯化、磷酸化或任何其他操縱或修飾，例如與標記組分結合。該定義亦包括例如含有胺基酸(包括例如非天然胺基酸，例如高半胱胺酸、鳥胺酸、對乙醯基苯丙胺酸、D-胺基酸及肌酸)之一或多種類似物的多肽以及此項技術中已知之其他修飾。
如本文所用之該術語係指任一大小、結構或功能之蛋白質、多肽及肽。多肽包括經編碼多核苷酸產物、天然多肽、合成多肽、前述之同系物、異種同源物、同種同源物、片段及其他等效物、變異體及類似物。多肽可為單體或可為多分子複合物，例如二聚體、三聚體或四聚體。其亦可包含單鏈或多鏈多肽。最常見二硫鍵聯見於多鏈多肽中。術語多肽亦可應用於胺基酸聚合物，其中一或多個胺基酸殘基係相應天然胺基酸之人工化學類似物。在一些實施例中，「肽」可小於或等於50個胺基酸長， 例如約5個、10個、15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個或50個胺基酸長。
如本文所用之術語「預防」係指部分或完全延遲感染、疾病、病症及/或疾患之發作；部分或完全延遲特定感染、疾病、病症及/或疾患之一或多個徵象及症狀、特徵或臨床表現之發作；部分或完全延遲特定感染、疾病、病症及/或疾患之一或多個症徵象及症狀、特徵或表現之發作；部分或完全延遲感染、特定疾病、病症及/或疾患之進展；及/或降低患上與感染、疾病、病症及/或疾患相關之病狀之風險。
如本文所用之「預防」係指用於防止疾病傳播之治療或作用進程。
術語「鹽」包括任一陰離子及陽離子複合物。醫藥學上可接受之鹽代表如上文所述無毒鹽之亞組。
「個體(subject)」或「個體(individual)」或「動物」或「患者」或「哺乳動物」意指期望對其進行診斷、預後或治療之任一個體，尤其哺乳動物個體。哺乳動物個體包括(但不限於)人類、家畜、農場動物、動物園動物、運動動物、寵物，例如狗、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、牛、奶牛；靈長類動物，例如猿、猴、紅毛猩猩及黑猩猩；犬科動物，例如狗及狼；貓科動物，例如貓、獅及虎；馬科動物，例如馬、驢及斑馬；熊，食用動物，例如奶牛、豬及綿羊；有蹄動物，例如鹿及長頸鹿；囓齒類動物，例如小鼠、大鼠、倉鼠及豚鼠等。在某些實施例中，哺乳動物係人類個體。在其他實施例中，個體係人類患者。在具體實施例中，個體係需要治療之人類患者。
如本文所用之術語「實質上」係指展現所關注特徵或性質之全部或接近全部的範圍或程度之定性條件。熟習生物技術者應理解，生物及化學特徵極少(若有)進行完全及/或進展至完全或達成或避免絕對結果。因此，術語「實質上」在本文中用於捕獲許多生物及化學特徵中固有之潛在不完全性。
「患有」疾病、病症及/或疾患之個體已經診斷具有或展示疾病、病症及/或疾患之一或多個徵象及症狀。
「易患」疾病、病症及/或疾患之個體未經診斷具有及/或無法展現疾病、病症及/或疾患之徵象及症狀，但具有患上疾病或其徵象及症狀之傾向。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或疾患(例如癌症)之個體之特徵可在於以下中之一或多者：(1)與疾病、病症及/或疾患之發展相關之遺傳突變；(2)與疾病、病症及/或疾患之發展相關之遺傳多型性；(3)與疾病、病症及/或疾患相關之蛋白質及/或核酸之增加及/或降低的表現及/或活性；(4)與疾病、病症及/或疾患之發展相關之習慣及/或生活方式；(5)疾病、病症及/或疾患之家族史；及(6)暴露於及/或感染與疾病、病症及/或疾患之發展相關之微生物。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或疾患之個體將患上疾病、病症及/或疾患。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或疾患之個體將不患上疾病、病症及/或疾患。
術語「合成」意指藉由人手產生、製備及/或製造。本揭示案之多核苷酸或其他分子之合成可為化學合成或酶合成。
術語「治療或預防劑」係指在投與個體時具有治療、診斷及/或預防效應及/或引發期望生物及/或藥理學效應之任一劑。舉例而言，編碼多肽之mRNA可為治療或預防劑。
如本文所用之術語「治療有效量」意指在投與患有或易患感染、疾病、病症及/或疾患之個體時足以治療感染、疾病、病症及/或疾患、改良其徵象及症狀、診斷、預防及/或延遲其發作的欲遞送之劑( 例如核酸、藥物、治療劑、診斷劑、預防劑等)之量。
治療 (treating) 、治療 (treatment) 、療法 (therapy)：如本文所用之術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」或「療法(therapy)」係指部分或完全緩和、改善、改良、減輕疾病之一或多個徵象及症狀或特徵、延遲其發作、抑制其進展、降低其嚴重程度及/或減小之其發生率。舉例而言，「治療」疾病可指減少與疾病相關之徵象及症狀、延長患者之壽命(增加存活率)、降低疾病之嚴重程度、防止或延遲疾病之發作等。治療可投與不展現疾病、病症及/或疾患之徵象之個體及/或僅展現疾病、病症及/或疾患之早期徵象之個體，用於降低患上與疾病、病症及/或疾患相關之病狀的風險之目的。
術語「n員」(其中n係整數)通常闡述部分中成環原子之數量，其中成環原子之數量為n。舉例而言，六氫吡啶基係6員雜環烷基環之實例，吡唑基係5員雜芳基環之實例，吡啶基係6員雜芳基環之實例，且1,2,3,4-四氫-萘係10員環烷基之實例。
如本文所用之片語「視情況地經取代」意指未經取代或經取代。取代基係經獨立選擇的，且取代可處於任一化學可及位置。如本文所用之術語「經取代」意指，將氫原子移除且由取代基取代。單個二價取代基( 例如側氧基)可替代兩個氫原子。應理解，給定原子處之取代受化合價之限制。
在整個定義中，術語「C n-m」指示包括終點之範圍，其中n及m係整數且指示碳數量。實例包括C 1-4、C 1-6及諸如此類。
如本文所用，單獨使用或與其他術語組合使用之術語「C n-m烷基」係指具有n至m個碳之飽和烴基，其可為直鏈或具支鏈。烷基部分之實例包括(但不限於)諸如以下之化學基團：甲基、乙基、 正丙基、異丙基、 正丁基、 第三丁基、異丁基、 第二丁基；高級同系物，例如2-甲基-1-丁基、 正戊基、3-戊基、 正-己基、1,2,2-三甲基丙基及諸如此類。在一些實施例中，烷基含有1至6個碳原子、1至4個碳原子、1至3個碳原子或1至2個碳原子。
如本文所用之「C n-m烯基」係指具有一或多個碳-碳雙鍵且具有n至m個碳之烷基。實例烯基包括(但不限於)乙烯基、 正丙烯基、異丙烯基、 正丁烯基、 第二丁烯基及諸如此類。在一些實施例中，烯基部分含有2至6個、2至4個、或2至3個碳原子。
如本文所用之「C n-m炔基」係指具有一或多個碳-碳三鍵且具有n至m個碳之烷基。實例炔基包括(但不限於)乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基及諸如此類。在一些實施例中，炔基部分含有2至6個、2至4個、或2至3個碳原子。
如本文所用，單獨使用或與其他術語組合使用之術語「C n-m伸烷基」係指具有n至m個碳之二價烷基連接基團。伸烷基之實例包括(但不限於)乙-1,1-二基、乙-1,2-二基、丙-1,1,-二基、丙-1,3-二基、丙-1,2-二基、丁-1,4-二基、丁-1,3-二基、丁-1,2-二基、2-甲基-丙-1,3-二基及諸如此類。在一些實施例中，伸烷基部分含有2至6個、2至4個、2至3個、1至6個、1至4個、或1至2個碳原子。
如本文所用，單獨使用或與其他術語組合使用之術語「C n-m烷氧基」係指式-O-烷基之基團，其中烷基具有n至m個碳。實例烷氧基包括(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如 正丙氧基及異丙氧基)、丁氧基(例如 正丁氧基及 第三丁氧基)及諸如此類。在一些實施例中，烷基具有1至6個、1至4個、或1至3個碳原子。
如本文所用之術語「C n-m羥基烷基」係指經羥基(-OH)取代之烷基。
如本文所用之術語「C n-m烷基胺基」係指式-NH(烷基)之基團，其中烷基具有n至m個碳原子。在一些實施例中，烷基具有1至6個、1至4個、或1至3個碳原子。烷基胺基之實例包括(但不限於) N-甲基胺基、N-乙胺基、N-丙基胺基(例如N-( 正丙基)胺基及N-異丙基胺基)、N-丁基胺基(例如N-( 正丁基)胺基及N-( 第三丁基)胺基)及諸如此類。
如本文所用之術語「胺基」係指式-NH 2之基團。
如本文所用，單獨使用或與其他術語組合使用之術語「芳基」係指芳族烴基，其可為單環或多環(例如具有2個、3個或4個稠合環)。術語「C n-m芳基」係指具有n至m個環碳原子之芳基。芳基包括例如苯基、萘基、蒽基、菲基、二氫茚基、茚基及諸如此類。在一些實施例中，芳基具有6至10個碳原子。在一些實施例中，芳基係苯基或萘基。
如本文所用之「鹵基」係指F、Cl、Br或I。在一些實施例中，鹵基係F、Cl或Br。在一些實施例中，鹵基係F。
如本文所用之「環烷基」係指非芳族環烴，包括環化烷基及/或烯基。環烷基可包括單環或多環(例如具有2個、3個或4個稠合環)基團及螺環。環烷基之成環碳原子可視情況地經側氧基或硫基(例如C(O)或C(S))取代。環烷基之定義亦包括具有稠合至環烷基環(即與其具有共用鍵)之一或多個芳族環之部分，例如環戊烷、環己烷及諸如此類之苯并並或噻吩基衍生物。含有稠合芳族環之環烷基可經由任一成環原子(包括稠合芳族環之成環原子)連接。環烷基可具有3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個成環碳(C 3-10)。在一些實施例中，環烷基係C 3-10單環或二環環烷基。在一些實施例中，環烷基係C 3-7單環環烷基。實例環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環戊烯基、環己烯基、環己二烯基、環庚三烯基、降莰基、降蒎基、降蒈基及諸如此類。在一些實施例中，環烷基係環丙基、環丁基、環戊基或環己基。
如本文所用之「雜芳基」係指具有至少一個選自硫、氧及氮之雜原子環成員之單環或多環芳族雜環。在一些實施例中，雜芳基環具有1個、2個、3個或4個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員。在一些實施例中，雜芳基部分中之任一成環N可為N-氧化物。在一些實施例中，雜芳基係具有1個、2個、3個或4個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員之5-10員單環或二環雜芳基。在一些實施例中，雜芳基係具有1或2個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員之5-6單環雜芳基。在一些實施例中，雜芳基係5員或6員雜芳基環。5員雜芳基環係環具有5個環原子之雜芳基，其中一或多個(例如1個、2個或3個)環原子獨立地選自N、O及S。例示性5員環雜芳基係噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基及1,3,4-噁二唑基。6員雜芳基環係環具有6個環原子之雜芳基，其中一或多個(例如1個、2個或3個)環原子獨立地選自N、O及S。例示性6員環雜芳基係吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基及嗒嗪基。
如本文所用之「雜環烷基」係指具有一或多個選自O、N或S之成環雜原子之非芳族單環或多環雜環。雜環烷基包括單環4員、5員、6員、7員、8員、9員或10員雜環烷基。雜環烷基亦可包括螺環。實例雜環烷基包括吡咯啶-2-酮、1,3-異噁唑啶-2-酮、吡喃基、四氫吡喃、氧雜環丁基、氮雜環丁基、嗎啉基、硫嗎啉基、六氫吡嗪基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、六氫吡啶基、吡咯啶基、異噁唑啶基、異噻唑啶基、吡唑啶基、噁唑啶基、噻唑啶基、咪唑啶基、氮雜環庚基、苯并氮雜環庚三烯及諸如此類。雜環烷基之成環碳原子及雜原子可視情況地經側氧基或硫離子基(例如C(O)、S(O)、C(S)或S(O) 2等)取代。雜環烷基可經由成環碳原子或成環雜原子連接。在一些實施例中，雜環烷基含有0至3個雙鍵。在一些實施例中，雜環烷基含有0至2個雙鍵。雜環烷基之定義亦包括具有稠合至環烷基環( 即與其具有共用鍵)之一或多個芳族環之部分，例如六氫吡啶、嗎啉、氮呯等之苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族環之雜環烷基可經由任一成環原子(包括稠合芳族環之成環原子)連接。在一些實施例中，雜環烷基係具有1或2個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子且具有一或多個氧化環成員之單環4-6員雜環烷基。在一些實施例中，雜環烷基係具有1個、2個、3個或4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子且具有一或多個氧化環成員之單環或雙環4-10員雜環烷基。
在某些地方，定義或實施例係指特定環(例如氮雜環丁烷環、吡啶環等)。除非另有指示，否則該等環可連接至任一環成員，條件係不超過原子之化合價。舉例而言，氮雜環丁烷環可連接至環之任一位置，而吡啶-3-基環連接至3位。
如本文所用之「橋接環」或「橋接環基團」係具有共享三個或更多個原子之至少兩個連結環之環狀系統。橋接環可為碳環環或雜環烷基環。實例橋接環包括 、 、 、 及 。
當給予範圍時，包括終點。另外，應理解，除非另外指明或自上下文及熟習此項技術者之理解另外顯而易見，否則在本揭示案之不同實施例中，表示為範圍之值可假設為所述範圍內之任一特定值或子範圍，除非上下文另外明確說明，否則精確至該範圍下限單位之十分之一。
另外，應理解，在先前技術內之本揭示案之任何具體實施例可明確地自申請專利範圍之任一項或多項中排除。由於認為該等實施例為熟習此項技術者已知，即使本文中未明確闡述排除仍可將其排除。本揭示案之組合物之任何具體實施例( 例如任何核酸或由其編碼之蛋白質；任何生產方法；任何使用方法等)可出於任何原因自任一或多項申請專利範圍中排除，無論是否與先前技術之存在相關。
即使未在引用中明確陳述，所有引用源(例如本文引用之參考文獻、出版物、資料庫、資料庫條目及技術)仍以引用方式併入本申請案中。若引用源與本申請案之陳述存在衝突，則以本申請案中之陳述為準。
章節及表格標題不欲具有限制性。 實例
縮寫：ACN：乙腈 Aq.：水溶液 Boc 2O：焦碳酸二- 第三丁基酯 DBU：1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯 BnBr：苄基溴 DCC：N,N′-二環己基碳化二亞胺 DCM：二氯甲烷 DMAP：4-二甲基胺基吡啶 DMF：二甲基甲醯胺 EtOAc：乙酸乙酯 h：小時/小時 LCMS：液相層析-質譜 MTBE：甲基第三丁基醚 PMA：磷鉬酸 Soln.：溶液 rt：室溫 THF：四氫呋喃 TLC：薄層層析 實例 1 合成式 A1 化合物 中間體 A ： (5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 ) 戊 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1 ： (5- 羥基戊 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
在10分鐘內，向二碳酸二-第三丁基酯(2.45 mL，10.66 mmol)於氮下0℃下攪拌之無水DCM (30 mL)中之溶液中逐滴添加4-胺基戊-1-醇(1.00 g，9.69 mmol)。將溶液逐步升溫至室溫且持續攪拌3天。然後在真空下去除溶劑，且將所得殘餘物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-100% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份匯集且在真空中濃縮，以獲得油狀(5-羥基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.86 g，4.23 mmol，43.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.28 min。MS (ES)：C 10H 21NO 3之 m/z(MH +) 204.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 4.51 (br. s，1H)，3.62 (t，3H)，2.59 (br. s，1H)，1.53 (m，4H)，1.42 (s，9H)，1.12 (d，3H， J= 6 Hz)。 步驟 2 ： 4- 甲基苯磺酸 4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊基酯
向(5-羥基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.86 g，4.23 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (30 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.95 mL，21.15 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.10 g，0.85 mmol)及對甲苯磺醯氯(1.61 g，8.46 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜，隨後其變成深紅色。然後用DCM進一步稀釋混合物，用水(1×30 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(1×30 mL)及鹽水(1×30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成深棕色油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。匯集含有產物之流份且濃縮，以獲得淺棕色油狀4-甲基苯磺酸4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基酯(0.97 g，2.72 mmol，64.3%)。UPLC/ELSD：RT：1.02 min。MS (ES)：C 17H 27NO 5S之 m/z(MH +) 358.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.77 (d，2H， J= 6 Hz)，7.36 (d，2H， J= 6 Hz)，4.32 (br. s，1H)，4.03 (t，2H)，3.55 (br. s，1H)，2.45 (s，3H)，1.69 (br. m，2H)，1.41 (s，11H)，1.06 (d，3H， J= 6 Hz)。 步驟 3 ： (5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 ) 戊 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向 N-[4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.97 g，2.61 mmol)於室溫下氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加4-甲基苯磺酸4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基酯 (1.03 g，2.87 mmol)及碳酸鉀(1.08 g，7.82 mmol)。將溶液升溫至100℃且攪拌48小時。然後，用30 mL水淬滅反應且用50 mL EtOAc稀釋。分離有機層，且用EtOAc (3×30 mL)萃取水層。將有機層全部合併，用水(1×50 mL)及鹽水(1×50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成黃色油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-100% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於20 mL DMF中，向其中添加苯硫酚(1.03 mL，10.03 mmol)及碳酸鉀(1.08 g，7.82 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，藉由離心自混合物去除鹽且將上清液濃縮成殘餘物。將殘餘物吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得無色油狀(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.34 g，0.91 mmol，34.93%)。UPLC/ELSD：RT：0.28 min。MS (ES)：C 19H 39N 3O 4之 m/z(MH +) 374.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 4.91 (br. m，1H)，4.67 (br. m，1H)，3.70 (br. m，2H)，3.40 (s，2H)，2.72 (t，1H)，2.58 (br. m，3H)，2.41 (br. s，4H)，1.50 (br. m，5H)，1.41 (s，19H)，1.10 (d，6H， J= 6 Hz)。 A. 化合物 SA50 ： 3-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ：丙二酸第三丁基酯 ((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 酯
向膽固醇(4.00 g，10.14 mmol)及3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙酸(2.39 mL，15.21 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(2.95 g，15.21 mmol)。然後將反應混合物冷卻至0℃，且在20分鐘內逐滴添加二異丙基乙胺(5.36 mL，30.41 mmol)。將所得混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後將混合物用二氯甲烷稀釋至150 mL，用水(1×70 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×70 mL)及鹽水(1×70 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並 在真空中濃縮以獲得黃色油狀物。將油狀物吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-25%乙酸乙酯梯度純化，以獲得油狀丙二酸第三丁基酯((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)酯(4.99 g，9.44 mmol，93.1%)。UPLC/ELSD：RT：3.36 min。MS (ES)：C 34H 56O 4之 m/z(MH +) 529.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.41 (m，1H)，4.67 (m，1H)，3.27 (s，2H)，2.38 (d，2H)，1.91 (br. m，10 H)，1.49 (s，12H)，1.35 (br. m，6H)，1.04 (br. m，17H)，0.91 (d，3H， J= 3 Hz)，0.87 (d，3H， J= 3 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-3- 側氧基丙酸
在20分鐘內，向丙二酸第三丁基酯((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)酯(4.99 g，9.44 mmol)於氮下0℃下攪拌之二氯甲烷(50 mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸(10.85 mL，141.63 mmol)。將澄清淺黃色反應混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。第二天早上，在0℃下用20 mL 5%碳酸氫鈉水溶液淬滅反應。分離有機物，用10 mL 5%碳酸氫鈉水溶液再洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體。將固體吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-60%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-3-側氧基丙酸(3.12 g，6.61 mmol，70.0%)。UPLC/ELSD：RT：2.97 min。MS (ES)：C 30H 48O 4之 m/z(MH +) 473.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 10.99 (br. s，1H)，5.42 (m，1H)，4.73 (m，1H)，3.45 (s，2H)，2.37 (d，2H， J= 9 Hz)，1.89 (br. m，5H)，1.35 (br. m，18H)，1.05 (s，5H)，0.94 (d，4H， J= 2 Hz)，0.89 (d，6H， J= 2 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 3 ： 3-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-3-側氧基丙酸(3.12 g，6.61 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(60 mL)中之溶液中添加四甲基二伸丙基三胺(2.30 mL，9.81 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.08 g，0.65 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1.90 g，9.81 mmol)。將反應混合物冷卻至0℃且在20分鐘內逐滴添加二異丙基乙胺(3.46 mL，19.62 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×50 mL)及鹽水(1×50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用二氯甲烷中之0-60% (9:1甲醇/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化，以獲得黃色油狀3-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-3-側氧基丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.82 g，2.84 mmol，43.4%)。UPLC/ELSD：RT：1.85 min。MS (ES)：C 40H 71N 3O 3之 m/z(MH +) 643.0。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.39 (m，1H)，4.67 (m，1H)，3.54 (s，2H)，3.35 (br. m，4H)，2.37 (br. m，6H)，2.22 (d，12H， J= 3 Hz)，1.50 (br. m，28H)，1.02 (br. s，5H)，0.92 (d，4H， J= 6 Hz)，0.88 (d，6H， J= 9 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 4 ： 3-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向3-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-3-側氧基丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.22 g，0.32 mmol)於二乙醚(4.3 mL)及異丙醇(0.22 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5 M於異丙醇中，0.37 mL，1.85 mmol)。將混合物冷卻至0℃且劇烈攪拌30分鐘，此後經由真空過濾過濾出白色沈澱物並用冷醚重複洗滌。在真空中乾燥殘餘物，以獲得白色蠟質固體狀3-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-3-側氧基丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.11 g，0.15 mmol，46.6%)。UPLC/ELSD：RT：1.81 min。MS (ES)：C 40H 73Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 627.99。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.41 (br. s，1H)，4.64 (br. m，1H)，3.57 (br. m，7H)，3.33 (br. s，2H)，3.20 (br. m，5H)，2.93 (d，15H， J= 6 Hz)，2.40 (d，2H， J= 9 Hz)，2.05 (br. m，12H)，1.55 (br. m，14H)，1.20 (br. m，13H)，1.07 (s，7H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.91 (d，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 B. 化合物 SA51 ： 5-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-5- 側氧基戊酸
向膽固醇(5.00 g，12.67 mmol)於氮下攪拌之丙酮(50 mL)中之溶液中添加戊二酸酐(2.63 g，22.81 mmol)及三乙胺(3.21 mL，22.81 mmol)。將反應混合物在56℃下回流，自白色漿液變成無色澄清溶液，且在回流下進行3天。然後，將溶液冷卻至室溫，在真空下濃縮，且吸收於150 mL二氯甲烷中。然後將此用0.5 M HCl (1×100 mL)及飽和氯化銨水溶液(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體。將固體吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-50%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(6.011g，12.00 mmol，94.7%)。UPLC/ELSD：RT：2.96 min。MS (ES)：C 32H 52O 4之 m/z(MH +) 501.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.40 (m，1H)，4.66 (m，1H)，2.45 (br. m，5H)，2.01 (br. m，3H)，1.85 (br. m，3H)，1.34 (br. m，22H)，0.94 (d，3H， J= 6 Hz)，0.88 (d，6H， J= 9 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(6.01 g，11.88 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(100 mL)中之溶液中添加四甲基二伸丙基三胺(4.19 mL，17.82 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.15 g，1.19 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(3.45 g，17.83 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後逐滴添加二異丙基乙胺(6.29 mL，35.65 mmol)。將反應混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。進一步用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將材料吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上在二氯甲烷中之0-60% (9:1甲醇:氫氧化銨水溶液)梯度中純化，以獲得油狀5-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(2.30 g，11.88 mmol，28.9%)。UPLC/ELSD：RT：2.02 min。MS (ES)：C 42H 75N 3O 3之 m/z(MH +) 671.1。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (m，1H)，4.60 (m，1H)，3.33 (br. m，5H)，2.39 (br. m，12H)，2.23 (d，11H， J= 6 Hz)，1.99 (br. m，4H)，1.84 (br. m，3H)，1.71 (br. m，5H)，1.33 (br. m，11H)，1.14 (br. m，7H)，1.02 (s，6H)，0.92 (d，3H， J= 6 Hz)，0.87 (d，5H， J= 9 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 3 ： 5-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向5-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.23 g，0.33 mmol)於二乙醚(4.6 mL)及異丙醇(0.23 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5M於異丙醇中，0.37 mL，1.85 mmol)。將混合物冷卻至0℃且劇烈攪拌30分鐘，此後經由真空過濾過濾出白色沈澱物並用冷醚重複洗滌。在真空中乾燥殘餘物，以獲得白色蠟質固體狀5-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.12 g，0.16 mmol，49.5%)。UPLC/ELSD：RT：1.86 min。MS (ES)：C 42H 77Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 671.81。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.41 (br. s，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.54 (t，5H， J= 6 Hz)，3.24 (br. m，6H)，2.94 (d，14H， J= 6 Hz)，2.55 (t，2H， J= 6 Hz)，2.43 (t，2H， J= 6 Hz)，2.35 (d，2H， J= 9 Hz)，2.05 (br. m，6H)，1.90 (br. m，6H)，1.55 (br. m，12H)，1.19 (br. m，10H)，1.07 (s，7H)，0.98 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 C. 化合物 SA56 ： 4- 側氧基 -4-(1,4,7- 三氮雜環壬 -1- 基 ) 丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯 步驟 1 ： 7-(4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁醯基 )-1,4,7- 三氮雜環壬烷 -1,4- 二甲酸二 - 第三丁基酯
向半琥珀酸膽固醇基酯(100 mg，0.205 mmol)、1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4-二甲酸1,4-二-第三丁基酯(烯胺，Monmouth Junction，NJ) (0.068 g，0.20 mmol)及DMAP (cat.)於DCM (1.4 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.060 g，0.31 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在21.5 h添加水(1.5 mL)。攪拌16 h後，再添加水(10 mL)。然後用DCM (2 × 15 mL)萃取混合物。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，且然後濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-4% MeOH)純化粗材料，以提供澄清油狀7-(4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁醯基)-1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4-二甲酸二-第三丁基酯(130 mg，0.163 mmol，79.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.41 min。MS (ES)：C 47H 79N 3O 7之 m/z= 1619.2 [2M + Na] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.33-5.39 (m，1H)，4.52-4.68 (m，1H)，3.18-3.79 (br. m，12H)，2.49-2.71 (m，4H)，2.24-2.39 (m，2H)，1.74-2.06 (br. m，5H)，0.93-1.71 (br. m，39H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 4- 側氧基 -4-(1,4,7- 三氮雜環壬 -1- 基 ) 丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向7-(4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁醯基)-1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4-二甲酸二-第三丁基酯(123 mg，0.154 mmol)於iPrOH (2.0 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.18 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，再添加iPrOH (2.0 mL)及iPrOH中之5-6 N HCl (0.06 mL)。在41 h，將反應混合物冷卻至rt，且添加ACN (4 mL)。藉由真空過濾收集固體且用ACN沖洗，以提供白色固體狀4-側氧基-4-(1,4,7-三氮雜環壬-1-基)丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.082 g，0.11 mmol，73.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.30 min。MS (ES)：C 37H 63N 3O 3之 m/z= 598.1 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 10.36 (br. s，2H)，10.11 (br. s，2H)，5.34-5.43 (m，1H)，4.50-4.65 (m，1H)，3.97-4.29 (m，4H)，3.64-3.95 (m，6H)，3.41-3.61 (m，2H)，2.66-2.84 (m，2H)，2.45-2.65 (m，2H)，2.21-2.40 (m，2H)，1.75-2.08 (br. m，5H)，0.94-1.70 (br. m，21H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 3 ： 4- 側氧基 -4-(1,4,7- 三氮雜環壬 -1- 基 ) 丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將4-側氧基-4-(1,4,7-三氮雜環壬-1-基)丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.054 g，0.075 mmol)懸浮於5% NaHCO 3水溶液(10 mL)中且然後用DCM (3 × 10 mL)萃取。將K 2CO 3(約100 mg)添加至水層中。用DCM (2 × 10 mL)萃取水層。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供白色固體狀4-側氧基-4-(1,4,7-三氮雜環壬-1-基)丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.023 g，0.037 mmol，50.0%)。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.33-5.40 (m，1H)，4.54-4.70 (m，1H)，3.41-3.57 (m，4H)，2.99-3.15 (m，4H)，2.72-2.84 (m，4H)，2.58-2.72 (m，4H)，2.24-2.39 (m，2H)，1.74-2.19 (br. m，7H)，0.94-1.70 (br. m，21H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.67 (s，3H)。UPLC/ELSD：RT = 2.39 min。MS (ES)：C 37H 63N 3O 3之 m/z= 598.6 [M + H] +。 D. 化合物 SA57 ： 6-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯 步驟 1 ： 6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-6- 側氧基己酸
向膽固醇(5.00 g，12.93 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加己二酸酐(1.66 g，12.93 mmol)。然後，在10分鐘內逐滴添加吡啶(3.97 mL，28.45 mmol)。將反應混合物在40℃下加熱至回流且進行過夜。然後，將混合物冷卻至室溫並濃縮成黃色油狀物。將油狀物吸收於二氯甲烷中且在不具額外處理之二氧化矽上在己烷中之0-30%乙酸乙酯梯度中純化，以獲得白色固體狀6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-6-側氧基己酸(1.97 g，3.83 mmol，29.6%)。UPLC/ELSD：RT：3.09 min。MS (ES)：C 33H 54O 4之 m/z(MH +) 515.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 12.15 (br. s，1H)，5.39 (m，1H)，4.63 (br. m，1H)，2.40 (br. m，6H)，2.00 (br. m，2H)，1.85 (br. m，3H)，1.70 (br. m，4H)，1.34 (br. m，19H)，1.03 (s，6H)，0.93 (d，4H， J= 6 Hz)，0.88 (d，6H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 2 ： 6-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-6-側氧基己酸(1.00 g，1.92 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(25 mL)中之溶液中添加四甲基二伸丙基三胺(0.68 mL，2.89 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.02 g，0.19 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.56 g，2.89 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(1.02 mL，5.77 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用二氯甲烷中之0-60% (8:2:0.1二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化，以藉由 1H NMR獲得黃色油狀6-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-6-側氧基己酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯，因此在二氧化矽上使用二氯甲烷中之0-25% (8:2:0.1二氯甲烷/甲醇/濃氫氧化銨水溶液)梯度再純化材料，以獲得淺黃色油狀6-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-6-側氧基己酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.38 g，0.54 mmol，28.2%)。UPLC/ELSD：RT：2.11 min。MS (ES)：C 43H 77N 3O 3之 m/z(MH +) 685.1。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.40 (m，3H)，5.20 (m，1H)，4.40 (br. m，1H)，3.22 (m，4.48)，2.58 (s，3H)，2.38 (t，2H， J= 9 Hz)，2.26 (s，6H)，2.20 (d，3H， J= 9 Hz)，2.14 (br. s，9H)，1.49 (br. m，24H)，0.95 (br. m，7H)，0.85 (s，5H)，0.75 (d，4H， J= 6 Hz)，0.70 (d，5H， J= 9 Hz)，0.51 (s，3H)。 E. 化合物 SA58 ： 5-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.76 g，1.49 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.75 g，1.49 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.02 g，0.15 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.43 g，2.24 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(0.79 mL，4.48 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-60%乙酸乙酯梯度純化，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.71 g，0.72 mmol，48.2%)。UPLC/ELSD：RT：3.37 min。MS (ES)：C 57H 100N 4O 9之 m/z(MH +) 986.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.39 (m，2H)，4.64 (br. m，1H)，3.27 (br. m，11H)，2.38 (br. m，6H)，1.86 (br. m，13H)，1.46 (br. d，32H)，1.15 (br. m，11H)，1.03 (s，5H)， 0.94 (d，3H， J= 9 Hz)，0.88 (d，5H， J= 9 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.71 g，0.72 mmol)於氮下攪拌之2-丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5 M於2-丙醇中，1.44 mL，7.20 mmol)。將混合物加熱至45℃且攪拌過夜。然後，將溶液冷卻至室溫，且將乙腈(5 mL)添加至混合物中。然後對其進行音波處理以自燒瓶側去除沈澱之固體。在音波處理後攪拌30分鐘後，藉由真空過濾過濾出固體，用乙腈重複洗滌，並在真空中乾燥，以獲得淺紫色固體狀5-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.39 g，0.47 mmol，65.6%)。UPLC/ELSD：RT：1.68 min。MS (ES)：C 42H 79Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 686.1。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.40 (s，1H)，4.90 (br. s，9H)，4.55 (br. s，1H)，3.33 (br. m，12H)，2.32 (br. 6H)，2.16 (br. m，2H)，2.05 (s，5H)，1.91 (br. m，10H)，1.54 (br. m，7H)，1.39 (br. m，4H)，1.17 (d，8H， J= 6 Hz)，1.06 (s，5H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.73 (s，3H)。 F. 化合物 SA59 ： 3-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十七烷 -17- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-3-側氧基丙酸(0.70 g，1.47 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(20 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.74 g，1.47 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.02 g，0.15 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.43 g，2.20 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃，且逐滴添加二異丙基乙胺(0.78 mL，4.40 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用水(3 × 20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-60%乙酸乙酯梯度純化，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十七烷-17-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.13 g，1.18 mmol，80.4%)。UPLC/ELSD：RT：3.29 min。MS (ES)：C 55H 96N 4O 9之 m/z(MH +) 958.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.39 (m，2H)。4.70 (br. m，2H)，3.26 (br. m，13H)，2.37 (d，2H， J= 6 Hz)，1.86 (br. m，16H)，1.45 (br. s，28H)，1.23 (br. m，12H)，1.03 (s，4H)，0.94 (d，3H， J= 6 Hz)，0.88 (d，5H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 2 ： 3-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十七烷-17-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.13 g，1.18 mmol)於氮下攪拌之2-丙醇(15 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5 M於2-丙醇中，2.36 mL，11.79 mmol)。將混合物加熱至40℃且進行過夜。然後，添加乙腈(5 mL)，且對溶液進行音波處理直至所有固體自燒瓶側置換出。在音波處理後攪拌30分鐘後，藉由真空過濾過濾出固體且用乙腈重複洗滌並在真空下乾燥，以獲得淺紫色固體狀 3-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-3-側氧基丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.52 g，0.64 mmol，54.4%)。UPLC/ELSD：RT：1.57 min。MS (ES)：C 40H 75N 4O 3之 m/z(MH +) 657.2。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.88 (br. s，11H)，4.60 (m，1H)，3.33 (br. m，16H)，2.39 (d，2H， J= 3 Hz)，1.55 (br. m，40H)，0.96 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 G. 化合物 SA60 ： (8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N-{8-[(2- 氰基乙基 ) 胺基 ] 辛基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向 N-(8-胺基辛基)胺基甲酸 第三丁基酯(2.50 g，10.2 mmol)於水(100 mL)中之箔覆蓋之攪拌懸浮液中添加丙烯腈(1.00 mL，15.3 mmol)。在rt下攪拌懸浮液且藉由TLC監測。在26 h，用5% NaHCO 3水溶液(200 mL)稀釋反應混合物且然後用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-10% MeOH)純化粗材料，以提供黃色油狀 N-{8-[(2-氰基乙基)胺基]辛基}胺基甲酸第三丁基酯 (1.833 g，6.163 mmol，60.2%)。UPLC/ELSD：RT = 0.28 min。MS (ES)： m/z= 197.9 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +C 16H 31N 3O 2； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 4.50 (br. s，1H)，3.09 (dt，2H，6.6，6.5 Hz)，2.92 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.62 (t，2H， J= 7.1 Hz)，2.51 (t，2H， J= 6.7 Hz)，1.18-1.58 (m，13H)，1.44 (s，9H)。 步驟 2 ： N-{8-[ 苄基 (2- 氰基乙基 ) 胺基 ] 辛基 } 胺基甲酸第三丁基酯
在65℃下攪拌N-{8-[(2-氰基乙基)胺基]辛基}胺基甲酸第三丁基酯(0.870 g，2.92 mmol)、碳酸鉀(0.808 g，5.85 mmol)、苄基溴(0.40 mL，3.4 mmol)及碘化鉀(0.097 g，0.58 mmol)於ACN (17.5 mL)中之混合物。藉由LCMS監測反應。在3 h，將反應混合物冷卻至rt，經由矽藻土墊過濾，用MTBE沖洗，並濃縮。將殘餘物吸收於5% NaHCO 3水溶液(50 mL)中且然後用MTBE (3 × 30 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-40% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀 N-{8-[苄基(2-氰基乙基)胺基]辛基}胺基甲酸第三丁基酯 (0.783 g，2.02 mmol，69.1%)。UPLC/ELSD：RT = 0.44 min。MS (ES)：C 23H 37N 3O 2之 m/z= 331.9 [(M + H) - (CH 3)2C=CH 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.21-7.39 (m，5H)，4.49 (br. s，1H)，3.60 (s，2H)，3.09 (dt，2H， J= 6.5，6.2 Hz)，2.78 (t，2H， J= 6.9 Hz)，2.48 (t，2H， J= 7.4 Hz)，2.39 (t，2H， J= 7.0 Hz)，1.38-1.54 (m，4H)，1.44 (s，9H)，1.19-1.36 (m，8H)。 步驟 3 ： N-{3-[ 苄基 ({8-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 辛基 }) 胺基 ] 丙基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向N-{8-[苄基(2-氰基乙基)胺基]辛基}胺基甲酸第三丁基酯(0.492 g，1.27 mmol)於MeOH (8.8 mL)中之攪拌溶液中添加二碳酸二-第三丁基酯(0.693 g，3.17 mmol)及氯化鎳(II)六水合物(0.030 g，0.13 mmol)。將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃且然後在30 min內逐份添加NaBH 4(0.336 g，8.89 mmol)，以獲得黑色懸浮液(警告：在添加期間發生劇烈的氣體逸出)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17.3 h，逐滴添加二伸乙基三胺(0.15 mL，1.4 mmol)，且在rt下攪拌反應混合物。30 min後，再添加二伸乙基三胺(0.15 mL)。1.5 h後，將反應混合物濃縮，吸收於5% NaHCO 3水溶液中且用EtOAc (3×)萃取。將合併之有機物用5% NaHCO 3水溶液及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-65% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-{3-[苄基({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基})胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.512 g，1.04 mmol，82.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.92 min。MS (ES)：C 28H 49N 3O 4之 m/z= 492.5 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.19-7.35 (m，5H)，5.52 (br. s，1H)，4.49 (br. s，1H)，3.51 (s，2H)，3.00-3.22 (m，4H)，2.46 (t，2H， J= 6.2 Hz)，2.36 (t，2H， J= 7.4 Hz)，1.56-1.68 (m，2H)，1.36-1.55 (m，22H)，1.18-1.33 (m，8H)。 步驟 4 ： N-[3-({8-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 辛基 } 胺基 ) 丙基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
在H 2氣球下攪拌N-{3-[苄基({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基})胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.496 g，1.01 mmol)及10% Pd/C (0.429 g，0.202 mmol)於乙醇(10 mL)中之溶液。藉由TLC監測反應。3 h時，用EtOAc (20 mL)稀釋反應混合物，經由矽藻土墊過濾，且用EtOAc沖洗。將濾液濃縮，吸收於EtOAc中，且使用0.45 μm針筒過濾器過濾。濃縮過濾之有機物，以提供灰白色固體狀N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.323 g，0.805 mmol，79.8%)。UPLC/ELSD：RT = 0.59 min。MS (ES)：C 21H 43N 3O 4之 m/z= 402.0 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.17 (br. s，1H)，4.50 (br. s，1H)，3.20 (dt，2H， J= 6.0，6.0 Hz)，3.09 (dt，2H， J= 6.5，6.4 Hz)，2.67 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.58 (t，2H， J= 7.1 Hz)，1.89 (br. s，1H)，1.59-1.74 (m，2H)，1.37-1.55 (m，22H)，1.21-1.37 (m，8H)。 步驟 5 ： (8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.300 g，0.544 mmol)、N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.240 g，0.598 mmol)及三乙胺(0.12 mL，0.85 mmol)合併於CHCl 3(4.8 mL)中。在50℃下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在20.25 h，添加N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(77 mg)及三乙胺(0.04 mL)。在60℃下攪拌反應混合物。在95 h，將反應混合物冷卻至rt，用DCM (20 mL)稀釋，且用水(25 mL)洗滌。用DCM (2 × 20 mL)萃取水層。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-30% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.398 g，0.489 mmol，89.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.47 min。MS (ES)：C 49H 87N 3O 6之 m/z= 836.5 [M + Na] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.22-5.43 (m，2H)，4.40-4.84 (m，2H)，3.00-3.39 (br. m，8H)，2.21-2.44 (m，2H)，1.73-2.07 (br. m，5H)，0.93-1.71 (br. m，53H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 6 ： (8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.395 g，0.485 mmol)於iPrOH (2.5 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.7 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17.5 h，將反應混合物冷卻至rt。添加ACN (5 mL)，將懸浮液攪拌15 min，且藉由真空過濾收集固體，用2:1 ACN:iPrOH沖洗，以提供白色固體狀(8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.249 g，0.356 mmol，73.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.97 min。MS (ES)：C 39H 73Cl 2N 3O 2之 m/z= 614.4 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.00-8.64 (br. m，6H)，5.33-5.44 (m，1H)，4.39-4.56 (m，1H)，2.93-3.54 (br. m，8H)，2.20-2.43 (m，2H)，1.69-2.16 (br. m，10H)，0.93-1.66 (br. m，30H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 H. 化合物 SA61 ： (4-(3- 胺基丙氧基 ) 丁基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 3-(4- 羥基丁氧基 ) 丙腈
向1,4-丁二醇(8.0 mL，91 mmol)及苄基三甲基氫氧化銨(0.20 mL，1.3 mmol，40 wt%於水中)之溶液中添加丙烯腈(3.0 mL，46 mmol)。在rt下在用箔覆蓋的同時攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在2 h，用水(150 mL)稀釋反應混合物且用1:1己烷/MTBE (50 mL)及EtOAc (3 × 50 mL)萃取。用水及鹽水洗滌合併之有機物，經MgSO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之50%-100% EtOAc)純化粗材料，以提供黃色油狀3-(4-羥基丁氧基)丙腈(1.374 g，9.596 mmol，21.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.20 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 3.67 (t，2H， J= 6.0 Hz)，3.66 (t，2H， J= 6.4 Hz)，3.50-3.57 (m，2H)，2.60 (t，2H，6.4 Hz)，1.60-1.76 (m，5H)。 步驟 2 ：甲磺酸 4-(2- 氰基乙氧基 ) 丁基酯
將3-(4-羥基丁氧基)丙腈(1.00 g，6.98 mmol)及三乙胺(1.5 mL，11 mmol)於DCM (10 mL)中之攪拌溶液在冰浴中冷卻至0℃，且然後逐滴添加甲磺醯氯(0.60 mL，7.8 mmol)。藉由TLC監測反應。將反應混合物緩慢升溫至rt。在2 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且再添加甲磺醯氯(0.06 mL)。在2 h 10 min，添加水(10 mL)，且將反應混合物在rt下攪拌5 min。此後，添加5% NaHCO 3水溶液(50 mL)，且然後用DCM (3 × 30 mL)萃取反應混合物。用水及鹽水洗滌合併之有機物，經MgSO 4乾燥，並濃縮以提供黃色油狀甲磺酸4-(2-氰基乙氧基)丁基酯(1.556 g，7.032 mmol，定量)。材料未經進一步純化即繼續用於下一步驟中。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 4.28 (t，2H， J= 6.4 Hz)，3.64 (t，2H， J= 6.2 Hz)，3.54 (t，2H， J= 5.9 Hz)，3.01 (s，3H)，2.59 (t，2H， J= 6.2 Hz)，1.81-1.93 (m，2H)，1.66-1.78 (m，2H)。 步驟 3 ： N-(3-{[4-(2- 氰基乙氧基 ) 丁基 ] 胺基 } 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
在65℃下攪拌 N-(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(4.272 g，24.52 mmol)、甲磺酸4-(2-氰基乙氧基)丁基酯(1.550 g，7.005 mmol)及EtOH (16 mL)之溶液。藉由TLC監測反應。在4 h，將反應混合物冷卻至rt。在21.5 h，將反應混合物濃縮且然後吸收於EtOAc (75 mL)及水(75 mL)之混合物中。分離各層，且用EtOAc (50 mL)萃取水溶液。用水(3×)及鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供黃色油狀N-(3-{[4-(2-氰基乙氧基)丁基]胺基}丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.396 g，4.662 mmol， 66.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.22 min。MS (ES)：C 15H 29N 3O 3之 m/z= 243.8 [(M + H) - t-Bu] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.19 (br. s，1H)，3.64 (t，2H， J= 6.3 Hz)，3.50 (t，2H， J= 6.0 Hz)，3.20 (dt，2H， J= 6.2，5.9 Hz)，2.67 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.61 (t，2H， J= 6.7 Hz)，2.59 (t，2H， J= 6.4 Hz)，1.48-1.70 (m，6H)，1.44 (s，9H)，1.10 (br. s，1H)。 步驟 4 ： N-(3-{ 苄基 [4-(2- 氰基乙氧基 ) 丁基 ] 胺基 } 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(3-{[4-(2-氰基乙氧基)丁基]胺基}丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.380 g，4.609 mmol)、碳酸鉀(1.274 g，9.218 mmol)及碘化鉀(0.150 g，0.904 mmol)於ACN (20 mL)中之混合物中添加苄基溴(0.63 mL，5.3 mmol)。在65℃下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在2.5 h，將反應混合物冷卻至rt且經由矽藻土墊過濾，用ACN沖洗，並濃縮濾液。將殘餘物吸收於5% NaHCO 3水溶液(約50 mL)中，然後用MTBE (2 × 25 mL)及EtOAc (25 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之30%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供黃色油狀 N-(3-{苄基[4-(2-氰基乙氧基)丁基]胺基}丙基)胺基甲酸第三丁基酯 (1.372 g，3.522 mmol，76.4%)。UPLC/ELSD：RT = 0.29 min。MS (ES)：C 22H 35N 3O 3之 m/z= 390.0 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.20-7.39 (m，5H)，5.41 (br. s，1H)，3.60 (t，2H， J= 6.4 Hz)，3.51 (s，2H)，3.38-3.47 (m，2H)，3.15 (dt，2H， J= 5.8，5.6 Hz)，2.56 (t，2H， J= 6.4 Hz)，2.47 (t，2H， J= 6.3 Hz)，2.35-2.43 (m，2H)，1.51-1.69 (m，6H)，1.44 (s，9H)。 步驟 5 ： N-{3-[ 苄基 (4-{3-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 丙氧基 } 丁基 ) 胺基 ] 丙基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(3-{苄基[4-(2-氰基乙氧基)丁基]胺基}丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.357 g，3.484 mmol)於MeOH (23 mL)中之攪拌溶液中添加二碳酸二-第三丁基酯(1.901 g，8.709 mmol)及氯化鎳(II)六水合物(0.083 g，0.35 mmol)。將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後在40 min內逐份添加NaBH 4(0.923 g，24.4 mmol) (警告：在添加期間發生劇烈的氣體逸出)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17.25 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後在30 min內逐份添加NaBH 4(500 mg)。在rt下攪拌反應混合物。在18.5 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加NaBH 4(100 mg)。在0℃下攪拌反應混合物。在19.5 h，添加NaBH 4(101 mg)。在20.5 h，添加NaBH 4(102 mg)。在21.5 h，添加Boc 2O (850 mg)及NaBH 4(103 mg)。將反應混合物緩慢升溫至rt。在40.5 h，逐滴添加二伸乙基三胺(0.55 mL，5.1 mmol)，且將反應混合物在rt下攪拌1 h。此後，將反應混合物濃縮，吸收於5% NaHCO 3水溶液中，且用DCM (3×)萃取。濃縮雙相混合物以去除揮發性有機物，且然後用MTBE (3×)萃取混合物。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-7% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供淺黃色油狀N-{3-[苄基(4-{3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙氧基}丁基)胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.836 g，1.69 mmol，48.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.65 min。MS (ES)：C 27H 47N 3O 5之 m/z= 494.5 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.19-7.38 (m，5H)，5.43 (br. s，1H)，4.87 (br. s，1H)，3.51 (s，2H)，3.43 (t，2H， J= 5.9 Hz)，3.31-3.39 (m，2H)，3.06-3.26 (m，4H)，2.46 (t，2H， J= 6.2 Hz)，2.35-2.43 (m，2H)，1.49-1.79 (br. m，8H)，1.44 (s，18H)。 步驟 6 ： N-{3-[4-({3-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 丙基 } 胺基 ) 丁氧基 ] 丙基 } 胺基甲酸第三丁基酯
在H 2氣球下攪拌N-{3-[苄基(4-{3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙氧基}丁基)胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.825 g，1.67 mmol)及10% Pd/C (0.711 g，0.334 mmol)於EtOH (10 mL)中之溶液。藉由TLC監測反應。在18 h，用EtOAc (40 mL)稀釋反應混合物且然後經由矽藻土墊過濾，用EtOAc沖洗。將濾液濃縮，吸收於EtOAc中，且使用0.45 μm針筒過濾器過濾。濃縮過濾之有機物，以提供黃色油狀N-{3-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}胺基)丁氧基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.636 g，1.58 mmol，94.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.40 min。MS (ES)：C 20H 41N 3O 5之 m/z= 404.5 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.20 (br. s，1H)，4.91 (br. s，1H)，3.47 (t，2H， J= 5.9 Hz)，3.41 (t，2H， J= 6.1 Hz)，3.13-3.23 (m，4H)，2.67 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.61 (t，2H， J= 6.6 Hz)，1.48-1.80 (br. m，9H)，1.44 (s，18H)。 步驟 7 ： (4-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙氧基 ) 丁基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
在90℃下攪拌膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.663 g，1.20 mmol)、N-{3-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}胺基)丁氧基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.630 g，1.56 mmol)及三乙胺(0.50 mL，3.6 mmol)於PhMe (10 mL)中之溶液。藉由LCMS監測反應。在18 h，將反應混合物冷卻至rt並濃縮。將殘餘物溶解於DCM (50 mL)中且然後用水(3 × 30 mL)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-60% EtOAc)純化粗材料，以提供黏性白色泡沫狀(4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙氧基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.825 g，1.01 mmol，84.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.39 min。MS (ES)：C 48H 85N 3O 7之 m/z= 839.2 [M + Na] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.34-5.43 (m，1H)，5.30 (br. s，1H)，4.73-5.00 (m，1H)，4.41-4.59 (m，1H)，3.46 (t，2H， J= 5.9 Hz)，3.41 (t，2H， J= 5.9 Hz)，3.00-3.36 (br. m，8H)，2.20-2.43 (m，2H)，0.93-2.09 (br. m，34H)，1.43 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6.5 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 8 ： (4-(3- 胺基丙氧基 ) 丁基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(4-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙氧基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.809 g，0.991 mmol)於iPrOH (6.0 mL)中之攪拌溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (1.4 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在15.5 h，將反應混合物冷卻至rt。將ACN (18 mL)添加至反應混合物中，且將懸浮液在rt下攪拌10 min。此後，藉由真空過濾收集固體且用3:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀(4-(3-胺基丙氧基)丁基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.609 g，0.828 mmol，83.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.00 min。MS (ES)：C 38H 69N 3O 3之 m/z= 617.0 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.51-8.82 (m，3H)，8.05 (br. s，3H)，5.33-5.42 (m，1H)，4.42-4.57 (m，1H)，3.63 (t，2H， J= 5.4 Hz)，2.97-3.58 (br. m，10H)，2.19-2.43 (m，2H)，0.93-2.13 (br. m，34H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.67 (s，3H)。 I. 化合物 SA62 ： 3-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 甲基 -3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 2- 甲基丙二酸 1-( 第三丁基 ) 酯 3-((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 酯
向膽固醇(1.85 g，4.69 mmol)及3-(第三丁氧基)-2-甲基-3-側氧基丙酸(0.96 mL，5.63 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(50 mL)中之溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1.36 g，7.03 mmol)。然後將反應混合物冷卻至0℃，且在20分鐘內逐滴添加二異丙基乙胺(2.48 mL，14.07 mmol)。將所得混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後將混合物用二氯甲烷稀釋至150 mL，用水(1 × 70 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2 × 70 mL)及鹽水(1 × 70 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並 在真空中濃縮以獲得黃色油狀物。將油狀物吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-25%乙酸乙酯梯度純化，以獲得油狀2-甲基丙二酸1-(第三丁基)酯3-((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)酯(1.62 g，2.99 mmol，63.7%)。UPLC/ELSD：RT：3.41 min。MS (ES)：C 35H 58O 4之 m/z(MH +) 543.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.31 (m，1H)，4.58 (br. m，1H)，3.21 (q，1H， J= 6 Hz)，2.27 (d，2H， J= 9 Hz)，1.87 (br. m，6H)，1.50 (br. m，6H)，1.39 (s，12H)，1.28 (br. m，12H)，1.07 (br. m，8H)，0.95 (s，4H)，0.91 (d，2H， J= 6 Hz)，0.86 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，8H， J= 6 Hz)，0.61 (s，3H)。 步驟 2 ： 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-2- 甲基 -3- 側氧基丙酸
將2-甲基丙二酸1-(第三丁基)酯3-((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)酯(1.62 g，2.99 mmol)於二氯甲烷(50 mL)中之溶液冷卻至0℃。在20分鐘內，向此溶液中逐滴添加三氟乙酸(3.43 mL，44.79 mmol)。將反應混合物逐步升溫至室溫且進行5小時，緩慢變成淺粉色。將粗反應混合物在真空中濃縮成粉色固體，吸收於DCM中，且在二氧化矽上用己烷中之0-40%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-甲基-3-側氧基丙酸(1.05 g，2.16 mmol，72.2%)。UPLC/ELSD：RT：3.02 min。MS (ES)：C 31H 50O 4之 m/z(MH +) 487.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 11.03 (br. s，1H)，5.40 (br. d，1H)，4.72 (br. m，1H)，3.49 (q，1H， J= 6 Hz)，2.38 (d，2H， J= 9 Hz)，2.01 (br. m，5H)，1.61 (br. m，5H)，1.50 (d，5H， J= 6 Hz)，1.27 (br. m，12H)，1.04 (s，5H)，0.95 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 3 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2,16- 三甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十七烷 -17- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-甲基-3-側氧基丙酸(0.50 g，1.02 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.72 g，1.42 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.01 g，0.10 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.30 g，1.53 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(0.54 mL，3.05 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用水(3×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-60%乙酸乙酯梯度純化，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,16-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十七烷-17-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.19 mmol，18.2%)。UPLC/ELSD：RT：3.26 min。MS (ES)：C 56H 98N 4O 9之 m/z(MH +) 972.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (br. s，1H)，4.58 (br. m，1H)，4.10 (q，1H， J= 6 Hz)，3.36 (br. m，13H)，2.26 (br. m，3H)，2.01 (s，4H)，1.80 (br. m，10H)，1.43 (br. m，47H)，1.23 (t，4H， J= 9 Hz)，1.08 (br. m，7H)，0.97 (s，8H)，0.90 (d，4H， J= 9 Hz)，0.84 (d，6H， J= 6 Hz)，0.65 (s，3H)。 步驟 4 ： 3-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 甲基 -3- 側氧基丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,16-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十七烷-17-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.19 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5 M於異丙醇中，0.37 mL，1.85 mmol)。將混合物加熱至45℃且攪拌過夜。然後，將溶液冷卻至室溫且將乙腈(5 mL)添加至混合物中。然後對其進行音波處理以自燒瓶側去除沈澱之固體。在音波處理後攪拌30分鐘後，藉由真空過濾過濾出固體，用乙腈重複洗滌，並在真空中乾燥，以獲得白色固體狀3-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-2-甲基-3-側氧基丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.06 g，0.07 mmol，38.7%)。UPLC/ELSD：RT：1.70 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 672.1。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.41 (s，1H)，4.88 (br. m，10H)，4.58 (br. m，1H)，3.92 (br. m，1H)，3.56 (br. m，4H)，3.33 (s，3H)，3.10 (br. m，8H)，2.34 (br. m，2H)，2.05 (br. m，15H)，1.54 (br. m，8H)，1.38 (br. m，8H)，1.17 (d，9H， J= 6 Hz)，1.06 (s，6H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.73 (s，3H)。 J. 化合物 SA63 ： 4-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2- 羥基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯 步驟 1 ： (3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2- 羥基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 醇
將鎂屑(2.21 g，90.87 mmol)及碘(1.54 g，6.06 mmol)之混合物用真空及氮吹掃兩次且然後保持在氮下。向此混合物中添加無水四氫呋喃(50 mL)且在氮下攪拌。在10分鐘內向此混合物中逐滴添加1-溴-4-甲基戊烷(8.82 mL，60.58 mmol)，且然後使反應在室溫下進行1小時。然後，將反應混合物在66℃下回流3小時，在此期間灰色反應漿液變成含有一些未溶解鎂之澄清無色溶液。然後將反應物冷卻至0℃，此時溶液再次變得渾濁。在0℃下，在1小時內逐滴添加孕烯醇酮(5.75 g，18.17 mmol)於無水四氫呋喃(25 mL)中之溶液，在此期間反應混合物發生固化。然後，將溶液升溫至室溫，再添加50 mL四氫呋喃，且使反應物持續在30℃下過夜，在此期間固化混合物在添加之溶劑中攪拌破裂成更小的片。第二天用飽和氯化銨水溶液(50 mL)淬滅反應且然後用100 mL乙酸乙酯稀釋。分離水層，且再用100 mL乙酸乙酯萃取。然後合併有機層，用水(1 × 100 mL)及鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮至乾燥。將所得殘餘物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-50%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀(3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2-羥基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-醇(2.68 g，6.64 mmol，36.6%)。UPLC/ELSD：RT：2.13 min。MS (ES)：C 27H 46O 2之 m/z(MH +) 403.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (br. d，1H， J= 6 Hz)，3.54 (br. m，1H)，2.29 (br. m，2H)，2.06 (br. m，2H)，1.85 (br. m，16H)，1.29 (s，6H)，1.17 (br. m，6H)，1.03 (s，6H)，0.88 (d，10H， J= 6 Hz)。 步驟 2 ： 4-(((3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2- 羥基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 ) 丁酸
向(3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2-羥基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-醇(0.50 g，1.24 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加琥珀酸酐(0.12 g，1.24 mmol)。然後在室溫下逐滴添加吡啶(0.17 mL，1.24 mmol)，且將混合物在40℃下回流過夜，此時所有固體變成溶液。第二天，TLC揭露不完全轉化，且添加二甲基胺基吡啶(0.05 g，0.41 mmol)及琥珀酸酐(0.03 g，0.25 mmol)，然後使反應混合物在40℃下再回流過夜。第二天早上，將混合物在真空中濃縮成黃色油狀物。將黃色油狀物吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-30%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀4-(((3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2-羥基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)丁酸(0.27 g，0.54 mmol，43.3%)。UPLC/ELSD：RT：2.20 min。MS (ES)：C 31H 50O 5之 m/z(MH +) 503.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 6.60 (br. s，1H)，5.38 (br. s，1H)，4.64 (br. m，1H)，4.13 (q，1H， J= 6 Hz)，2.66 (dd，4H， J= 6 Hz)，2.33 (d，2H， J= 6 Hz)，2.05 (br. m，2H)，1.84 (br. m，3H)，1.51 (br. m，12H)，1.28 (br. m，8H)，1.13 (br. m，5H)，1.02 (s，4H)，0.86 (d，10H， J= 6 Hz)。 步驟 3 ： 4-( 雙 (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2- 羥基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向4-(((3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2-羥基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)丁酸(0.35 g，0.68 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加四甲基二伸丙基三胺(0.24 mL，1.02 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.01 g，0.07 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.20 g，1.02 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃，且逐滴添加二異丙基乙胺(0.36 mL，2.04 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用DCM中之0-60% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化，以獲得淺黃色油狀4-(雙(3-(二甲基胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-(2-羥基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.07 g，0.09 mmol，13.6%)。UPLC/ELSD：RT：1.25 min。MS (ES)：C 41H 73N 3O 4之 m/z(MH +) 673.0。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.37 (br. s，1H)，4.64 (br. m，1H)，3.35 (br. t，4H， J= 9 Hz)，2.64 (s，4H)，2.28 (br. m，6H)，2.22 (s，12H)，1.83 (br. m，4H)，1.60 (br. m，15H)，1.28 (br. s，7H)，1.13 (br. m，5H)，1.02 (s，4H)，0.89 (d，9H， J= 6 Hz)。 K. 化合物 SA64 ： (8-( 二甲基胺基 ) 辛基 )(3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
在室溫下，向(8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(105 mg，0.15 mmol)及乙酸鈉三水合物(208 mg，1.53 mmol)於6 mL甲醇中之溶液中添加甲醛(0.12 mL，37 wt%於水中，1.53 mmol)及氰基硼氫化鈉(96.1 mg，1.53 mmol)。將溶液在室溫下攪拌16 小時，此後藉由LCMS未剩餘起始胺基固醇。用2 M NaOH水溶液稀釋混合物且用DCM萃取三次。合併有機物，用鹽水洗滌一次，乾燥(MgSO 4)，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(DCM中之0-50% (1%濃NH 4OH水溶液及20% MeOH於DCM中之混合物))純化殘餘物，以獲得無色油狀(8-(二甲基胺基)辛基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(63.2 mg，0.091 mmol，60%)。UPLC/ELSD：RT = 2.14 min。MS (ES)：C 43H 80N 3O 2之 m/z(MH +) 671.2。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.35 (d，1H， J= 5 Hz)；4.48 (七重峰，1H，J = 5 Hz)；3.19 (s，4H)；2.39-2.27 (m，12 H)；2.25 (s，6H)；2.22 (s，6H)；2.03-1.63 (m，8H)；1.58-1.04 (m，23H)；1.00 (s，6H)；0.90 (d，3H， J= 6 Hz)；0.86 (d，3H， J= 1 Hz)；0.84 (d，3H， J= 1 Hz)；0.66 (s，3H)。 L. 化合物 SA65 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 甘胺酸 ((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽 步驟 1 ： 2- 氯乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇(2 g，5.17 mmol)、氯乙酸(573 mg，5.69 mmol)、DMAP (63 mg，0.52 mmol)及DCC (1.17 g，5.69 mmol)溶解於10 mL DCM中。將溶液在室溫下攪拌17小時。將混合物過濾，且用乙酸乙酯洗滌濾液。將過濾之溶液濃縮且溶解於乙酸乙酯中。用水及鹽水將有機層洗滌一次，乾燥(MgSO 4)，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(己烷中之0-40%乙酸乙酯)純化殘餘物，以獲得白色固體狀2-氯乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.71 g，1.53 mmol，30%)。UPLC/ELSD：RT = 3.43 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.40 (d，1H， J= 5 Hz)；4.48 (七重峰，1H，J = 4 Hz)；4.03 (s，2H)；2.36 (d，2 H， J= 8 Hz)；2.06-1.77 (m，5H)；1.64-1.05 (m，21H)；1.02 (s，3H)；0.91 (d，3H， J= 6 Hz)；0.88 (s，3H)；0.86 (s，3H)；0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
在室溫下，向2-氯乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(350 mg，0.75 mmol)及NaI (113 mg，0.75 mmol)於7.5 mL乙腈中之溶液中添加N-{3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}-N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}胺基)丁基]胺基甲酸第三丁基酯(378 mg，0.75 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(0.2 mL，1.13 mmol)於7.5 mL乙腈中之溶液。將溶液在60℃下攪拌18小時。用乙酸乙酯稀釋混合物，用水及鹽水洗滌一次，經MgSO 4乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(DCM中之0-100% (1% NH 4OH、20% MeOH於DCM中之混合物))純化殘餘物，以獲得無色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(590 mg，0.63 mmol，84%)。UPLC/ELSD：RT = 2.94 min。MS (ES)：C 54H 97N 4O 8之 m/z(MH +) 930.0。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (d，1H， J= 5 Hz)；5.27 (br s，1H)；4.80 (br s，1H)；4.74-4.57 (m，1H)；3.40 (br s，1H)；3.31-2.99 (m，7H)；2.75 (br s，3 H)；2.31 (d，2 H， J= 8 Hz)；2.06-1.03 (m，64H)；1.00 (s，3H)；0.91 (d，3H， J= 6 Hz)；0.87 (s，3H)；0.85 (s，3H)；0.67 (s，3H)。 步驟 3 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(590 mg，0.64 mmol)於異丙醇(15 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5 M HCl溶液(15 mL，6.4 mmol)。將溶液在40℃下攪拌41小時。將混合物冷卻至室溫且用乙腈(15 mL)稀釋。藉由離心(5000 g，5 min)沈澱所得固體。去除上清液，且在真空下乾燥沈澱物，以獲得白色粉末狀N-(3-胺基丙基)-N-(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(350 mg，0.45 mmol，71%)。UPLC/ELSD：RT = 1.83 min。MS (ES)：C 39H 73N 4O 2之 m/z([M-3HCl-Cl -] +) 629.6。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.43 (d，1H， J= 4 Hz)；4.80-4.66 (m，1H)；4.28 (s，2H)；3.49-3.33 (m，4H)；3.22-3.02 (m，8H)；2.43 (d，2H， J= 7 Hz)；2.28-1.09 (m，29H)；1.06 (s，3H)；0.95 (d，3H， J= 6 Hz)；0.89 (s，3H)；0.87 (s，3H)；0.73 (s，3H)。 M. 化合物 SA66 ： 2-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-2- 側氧基乙酸
向膽固醇(0.500 g，1.29 mmol)於冰浴中冷卻至0℃之Et 2O (6.5 mL)及DCM (2.0 mL)之混合物中之攪拌溶液中緩慢逐滴添加草醯氯(0.23 mL，2.7 mmol)。將反應混合物緩慢升溫至rt且藉由TLC監測。在24 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後逐滴添加水(3.0 mL) (警告：在添加期間發生劇烈的氣體逸出)。將混合物在rt下攪拌1 h，且然後分離各層。用Et 2O (3×)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供白色固體狀2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-側氧基乙酸(0.534 g，1.16 mmol，90.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.95 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.68 (br. s，1H)，5.38-5.46 (m，1H)，4.75-4.89 (m，1H)，2.35-2.61 (m，2H)，1.70-2.11 (br. m，6H)，0.93-1.65 (br. m，20H)，1.04 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： 2- 氯 -2- 側氧基乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-側氧基乙酸(0.100 g，0.218 mmol)及DMF (cat.)於DCM (2 mL)中之溶液中緩慢逐滴添加草醯氯(0.03 mL，0.4 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在40 min，將反應混合物濃縮，且然後自PhMe再濃縮，以提供黃色固體狀2-氯-2-側氧基乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯。材料未經進一步純化即繼續使用，假設定量產率。 步驟 3 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向2-氯-2-側氧基乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.104 g，0.218 mmol)及三乙胺(0.10 mL，0.71 mmol)於冰浴中冷卻至0℃之甲苯(2.0 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加甲苯(0.75 mL)中之N-{3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}-N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}胺基)丁基]胺基甲酸第三丁基酯(0.150 g，0.298 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在30 min，在50℃下攪拌反應混合物。在17 h，將反應混合物冷卻至rt且然後濃縮。將殘餘物吸收於DCM中且用5% NaHCO 3水溶液洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.138 g，0.146 mmol，67.1%)。UPLC/ELSD：RT = 3.33 min。MS (ES)：C 54H 94N 4O 9之 m/z= 844.4 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.38-5.45 (m，1H)，5.21 (br. s，1H)，4.65-4.87 (m，2H)，3.32-3.47 (m，2H)，3.02-3.31 (br. m，10H)，2.35-2.53 (m，2H)，0.94-2.08 (br. m，34H)，1.46 (s，9H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 4 ： 2-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.132 g，0.140 mmol)於iPrOH (1.3 mL)中之攪拌溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.28 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18 h，將反應混合物冷卻至rt。將ACN (3 mL)添加至反應混合物中，且將懸浮液在rt下攪拌1 h。此後，藉由真空過濾收集固體，以提供白色固體狀2-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-2-側氧基乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.085 g，0.10 mmol，73.2%)。UPLC/ELSD：RT = 1.70 min。MS (ES)：C 39H 70N 4O 3之 m/z= 643.8 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.42-5.51 (m，1H)，4.72-4.85 (m，1H)，3.34-3.61 (br. m，4H)，3.04-3.19 (br. m，6H)，2.92-3.01 (m，2H)，2.37-2.54 (m，2H)，0.98-2.19 (br. m，34H)，1.08 (s，3H)，0.96 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.89 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.89 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.74 (s，3H)。 N. 化合物 SA67 ： (4-(3-( 二甲基胺基 ) 丙氧基 ) 丁基 )(3-( 二甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
在室溫下，向(4-(3-胺基丙氧基)丁基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(100 mg，0.15 mmol)及乙酸鈉三水合物(197.5 mg，1.45 mmol)於5.8 mL甲醇中之溶液中添加甲醛(0.11 mL，37 wt%於水中，1.45 mmol)及氰基硼氫化鈉(91.2 mg，1.45 mmol)。將溶液在室溫下攪拌6小時，此後藉由LCMS未剩餘起始胺基固醇。用2 M NaOH水溶液稀釋混合物且用DCM萃取三次。合併有機物，用鹽水洗滌一次，乾燥(MgSO 4)，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(DCM中之0-20% (1% NH 4OH及20% MeOH於DCM中之混合物))純化殘餘物，以獲得無色油狀(4-(3-(二甲基胺基)丙氧基)丁基)(3-(二甲基胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(35.6 mg，0.051 mmol，35%)。UPLC/ELSD：RT = 2.01 min。MS (ES)：C 42H 78N 3O 3之 m/z(MH +) 673.0。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (d，1H， J= 5 Hz)；4.49 (七重峰，1H，J = 5 Hz)；3.48-3.37 (m，4H)；3.23 (s，4H)；2.48-2.30 (m，12 H)；2.28 (s，6H)；2.24 (s，6H)；2.04-1.66 (m，10H)；1.64-1.04 (m，15H)；1.01 (s，6H)；0.91 (d，3H， J= 6 Hz)；0.87 (d，3H， J= 1 Hz)；0.85 (d，3H， J= 1 Hz)；0.67 (s，3H)。 O. 化合物 SA68 ： (3-( 二甲基胺基 ) 丙基 )(4-((3-( 二甲基胺基 ) 丙基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
在室溫下，向(3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(144 mg，0.2 mmol)及乙酸鈉三水合物(162.3 mg，1.19 mmol)於2 mL甲醇中之溶液中添加甲醛(0.094 mL，37 wt%於水中，1.19 mmol)及氰基硼氫化鈉(75 mg，1.19 mmol)。將溶液在室溫下攪拌17小時，此後藉由LCMS未剩餘起始胺基固醇。用2 M NaOH水溶液稀釋混合物且用DCM萃取三次。合併有機物，用鹽水洗滌一次，乾燥(MgSO 4)，過濾並濃縮。藉由矽膠層析(DCM中之0-20% (2%濃NH 4OH水溶液及20% MeOH於DCM中之混合物))純化殘餘物，以獲得無色油狀(3-(二甲基胺基)丙基)(4-((3-(二甲基胺基)丙基)(甲基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(31.7 mg，0.044 mmol，22%)。UPLC/ELSD：RT = 1.71 min。MS (ES)：C 43H 81N 4O 2之 m/z(MH +) 685.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (d，1H， J= 5 Hz)；4.49 (七重峰，1H，J = 5 Hz)；3.47 (s，4H)；3.22 (s，4H)；2.38-2.24 (m，12 H)；2.22 (s，6H)；2.21 (s，6H)；2.20 (s，3H)；2.05-1.95 (m，2H)；1.72-1.06 (m，23H)；1.01 (s，6H)；0.91 (d，3H， J= 6 Hz)；0.87 (d，3H， J= 1 Hz)；0.85 (d，3H， J= 1 Hz)；0.67 (s，3H)。 P. 化合物 SA69 ： (8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將β-麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.300 g，0.517 mmol)、N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.260 g，0.647 mmol)及三乙胺(0.22 mL，1.6 mmol)合併於PhMe (4.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18.25 h，將反應混合物冷卻至rt並濃縮。將殘餘物吸收於DCM (20 mL)中且用水(3×)洗滌。使有機層通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供白色泡沫狀(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.327 g，0.388 mmol，75.0%)。UPLC/ELSD：RT = 3.74 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 6之 m/z= 842.9 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.15-5.47 (m，2H)，4.40-4.86 (m，2H)，2.98-3.41 (br. m，8H)。2.20-2.45 (m，2H)，1.76-2.12 (br. m，5H)，0.89-1.75 (br. m，54H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.77-0.88 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.315 g，0.374 mmol)於iPrOH (4.0 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.53 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18 h，將反應混合物冷卻至rt且添加ACN (12 mL)。經由真空過濾收集固體且用3:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀(8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.236 g，0.309 mmol，82.5%)。UPLC/ELSD：RT = 3.54 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 2N 3O 2之 m/z= 342.6 [M + 2Na] 2+； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.33 (br. s，3H)，8.22 (br. s，3 H)，5.31-5.42 (m，1H)，4.38-4.53 (m，1H)，2.92-3.53 (br. m，8H)，2.20-2.42 (m，2H)，1.72-2.17 (br. m，10H)，0.94-1.71 (br. m，31H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.77-0.89 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 Q. 化合物 SA70 SA70 (3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯類似物自羥基膽固醇烯烴消除副產物) R. 化合物 SA71 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )-N-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將氯乙酸膽固醇基酯(0.227 g，0.490 mmol)、N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.236 g，0.589 mmol)、碳酸鉀(0.136 g，0.980 mmol)及碘化鉀(0.008 g，0.05 mmol)合併於THF (3.5 mL)中。在65℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在4 h，在60℃下攪拌反應混合物。在93 h，將反應混合物冷卻至rt。將反應混合物濃縮且然後吸收於DCM中。將有機物用水洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.318 g，0.384 mmol，78.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.62 min。MS (ES)：C 50H 89N 3O 6之 m/z= 829.0 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.45 (br. s，1H)，5.35-5.41 (m，1H)，4.58-4.72 (m，1H)，4.50 (br. s，1H)，3.25 (s，2H)，3.20 (dt，2H， J= 5.7，6.0 Hz)，3.09 (dt，2H， J= 6.4，5.8 Hz)，2.59 (t，2H， J= 6.4 Hz)，2.50 (t，2H， J= 7.5 Hz)，2.28-2.36 (m，2H)，1.75-2.08 (br. m，5H)，0.94-1.70 (br. m，53H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.310 g，0.374 mmol)於iPrOH (4.0 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.53 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在21.75 h，將反應混合物冷卻至rt，且添加ACN (12 mL)。經由真空過濾收集固體且用3:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀N-(8-胺基辛基)-N-(3-胺基丙基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.208 g，0.248 mmol，66.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.83 min。MS (ES)：C 40H 73N 3O 2之 m/z= 335.4 [M + 2Na] 2+； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 10.72 (br. s，1H)，8.41 (br. s，3H)，8.27 (br. s，3H)，5.38-5.48 (m，1H)，4.59-4.82 (m，1H)，2.91-4.42 (br. m，10H)，2.22-2.72 (br. m，4H)，1.72-2.18 (br. m，10H)，0.93-1.70 (br. m，28H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 5.5 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6.5Hz)，0.67 (s，3H)。 S. 化合物 SA72 ： 4-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(-)-膽固醇NHS琥珀酸酯(0.300 g，0.514 mmol)於THF (3.0 mL)中之攪拌溶液中添加THF (1.0 mL)中之N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.258 g，0.642 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，在50℃下攪拌反應混合物。在23 h，將反應混合物冷卻至rt且然後濃縮。將殘餘物吸收於DCM中且用水洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供白色泡沫狀4-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.315 g，0.362 mmol，70.4%)。UPLC/ELSD：RT = 3.96 min。MS (ES)：C 52H 91N 3O 7之 m/z= 871.0 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.27-5.46 (m，2H)，4.39-4.76 (m，2H)，2.95-3.48 (br. m，8H)，2.53-2.72 (m，4H)，2.24-2.39 (m，2H)，1.75-2.06 (br. m，5H)，0.93-1.70 (br. m，53H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.307 g，0.347 mmol)於iPrOH (4 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.49 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在21.75 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加ACN (16 mL)。經由真空過濾收集固體且用4:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀4-((8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.169 g，0.214 mmol，61.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.15 min。MS (ES)：C 42H 75N 3O 3之 m/z= 336.0 [M + 2H] 2+； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.01-8.61 (m，6H)，5.31-5.42 (m，1H)，4.51-4.69 (m，1H)，2.92-3.68 (br. m，8H)，2.62 (s，4H)，2.21-2.39 (m，2H)，1.71-2.20 (br. m，10H)，0.94-1.70 (br. m，30H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6.5 Hz)，0.67 (s，3H)。 T. 化合物 SA73 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 丙胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2,15- 三甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸
在室溫下，向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.83 g，1.65 mmol)及氫氧化鉀(0.37 g，6.60 mmol)於氮下攪拌之甲醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加2-溴丙酸(0.30 mL，3.30 mmol)。將所得溶液加熱至60℃且進行過夜。第二天，將溶液濃縮成油狀物。將油狀物吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-60%乙酸乙酯梯度純化，以獲得油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(0.13 g，0.22 mmol，13.2%)。UPLC/ELSD：RT：2.73 min。MS (ES)：C 28H 54N 4O 8之 m/z(MH +) 575.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 7.31 (br. s，1H)，5.72 (br. s，1H)，3.17 (br. m，13H)，1.90 (br. m，2H)，1.64 (br. m，7H)，1.40 (s，26H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2,15- 三甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向膽固醇(0.10 g，0.26 mmol)及9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(0.13 g，0.22 mmol)於氮下攪拌之二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加二甲基胺基吡啶(0.01 g，0.04 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.06 g，0.33 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(0.12 mL，0.65 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用水(1×10 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-25%乙酸乙酯梯度純化，以獲得無色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.05 g，0.05 mmol，21.9%)。UPLC/ELSD：RT：2.83 min。MS (ES)：C 55H 98N 4O 8之 m/z(MH +) 944.4。未藉由H-NMR分析化合物以免損失後續反應所需之先前材料。 步驟 3 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 丙胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.05 g，0.05 mmol)於氮下攪拌之2-丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5M於2-丙醇中，0.10 mL，0.48 mmol)。將混合物加熱至45℃且攪拌過夜。然後，將溶液冷卻至室溫，且將乙腈(3 mL)添加至混合物中。然後對其進行音波處理以自燒瓶側去除沈澱之固體。在音波處理後攪拌30分鐘後，藉由真空過濾過濾出固體，用乙腈重複洗滌，並在真空中乾燥，以獲得白色固體狀N-(3-胺基丙基)-N-(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)丙胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.03 g，0.03 mmol，62.8%)。UPLC/ELSD：RT：1.51 min。MS (ES)：C 40H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 644.1。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD) δ：ppm 5.54 (br. s，1H)，4.50 (br. m，1H)，3.33 (br. d，8H)，3.12 (br. m，9H)，2.45 (br. m，2H)，2.00 (br. m，15H)，1.55 (br. m，17H)，1.19 (br. m，14H)，0.96 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 U. 化合物 SA74 ： (4- 胺基丁 -2- 基 )(4-((4- 胺基丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基丁基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，5.31 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.89 mL，6.37 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.30 g，5.84 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1 M碳酸氫鈉水溶液(2 × 15 mL)、水(1 × 15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2 × 15 mL)、水(1 × 15 mL)及鹽水(2 × 15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(1.95 g，5.22 mmol，98.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.54 min。MS (ES)：C 15H 23N 3O 6S之 m/z(MH +) 374.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.07 (m，1H)，7.78 (m，1H)，7.68 (m，1H)，5.23 (m，1H)，4.81 (br. s，1H)，3.52 (m，1H)，3.19 (m，1H)，3.05 (m，1H)，1.63 (m，2H)，1.37 (s，9H)，0.98 (d，3H， J= 6 Hz)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 丁烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(1.95 g，5.22 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.10 g，15.17 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.33 mL，2.49 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.25 mL，2.06 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後，添加苯硫酚(0.98 mL，9.57 mmol)、碳酸鉀(1.03 g，7.46 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。 在真空中濃縮合併之上清液以獲得油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.76 g，1.77 mmol，71.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.42 min。MS (ES)：C 22H 46N 4O 4之 m/z(MH +) 431.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.47 (m，2H)，3.24 (br. m，4H)，2.74 (br. m，4H)，2.55 (m，2H)，1.53 (m，10H)，1.44 (s，18H)，1.09 (d，6H， J= 6 Hz)。 步驟 3 ： (4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁 -2- 基 )(4-((4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.49 g，1.15 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.48 mL，3.43 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.63 g，1.15 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.78 g，0.92 mmol，80.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.62 min。MS (ES)：C 50H 90N 4O 6之 m/z(MH +) 844.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.28 (m，1H)，3.14 (br. m，5H)，2.59 (m，4H)，2.25 (m，3H)，1.90 (br. m，7H)，1.46 (br. m，22H)，1.34 (s，23H)，1.09 (br. m，28H)，0.83 (d，5H， J= 6 Hz)，0.79 (d，7H， J= 6 Hz)，0.59 (s，3H)。 步驟 4 ： (4- 胺基丁 -2- 基 )(4-((4- 胺基丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.78 g，0.92 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.85 mL，9.23 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA74 (4-胺基丁-2-基)(4-((4-胺基丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.57 g，0.73 mmol，78.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.67 min。MS (ES)：C 40H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 753.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.49 (br. m，1H)，4.12 (br. m，1H)，3.45 (br. m，1H)，3.33 (s，2H)，3.24 (br. m，2H)，3.13 (br. m，4H)，2.90 (br. m，2H)，2.41 (d，2H， J= 3 Hz)，2.32 (br. m，1H)，1.93 (br. m，19H)，1.43 (d，6H， J= 6 Hz)，1.31 (d，5H， J= 6 Hz)，1.08 (br. m，12H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 V. 化合物 SA75 ： (3- 胺基 -2- 甲基丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2- 甲基 -3-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基-2-甲基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，5.31 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.89 mL，6.37 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.30 g，5.84 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2-甲基-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(2.20 g，5.90 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.58 min。MS (ES)：C 15H 23N 3O 6S之 m/z(MH +) 374.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.12 (m，1H)，7.84 (m，1H)，7.74 (m，1H)，6.20 (br. s，1H)，4.82 (br. s，1H)，3.19 (m，1H)，3.04 (m，3H)，1.84 (m，1H)，1.41 (s，9H)，0.91 (d，3H， J= 6 Hz)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2- 甲基丙烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2-甲基-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(2.20 g，5.90 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.37 g，17.14 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.37 mL，2.81 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.28 mL，2.33 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後，添加苯硫酚(1.11 mL，10.82 mmol)、碳酸鉀(1.17 g，8.43 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-甲基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.85 g，1.97 mmol，70.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.43 min。MS (ES)：C 22H 46N 4O 4之 m/z(MH +) 431.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.76 (m，1H)，2.93 (m，2H)，2.73 (m，2H)，2.28 (m，8H)，1.56 (m，4H)，1.28 (s，4H)，1.18 (s，17H)，0.66 (d，6H， J= 6 Hz)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 甲基丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-甲基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(1.06 g，2.45 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.86 mL，6.13 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.13 g，2.04 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.08 g，1.28 mmol，62.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.52 min。MS (ES)：C 50H 90N 4O 6之 m/z(MH +) 844.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.29 (m，1H)，4.42 (br. m，1H)，3.07 (br. m，5H)，2.87 (m，3H)，2.51 (m，4H)，2.25 (br. m，2H)，1.79 (br. m，7H)，1.46 (m，8H)，1.34 (s，18H)，1.05 (br. m，10H)，0.94 (s，5H)，0.82 (m，14H)，0.59 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -2- 甲基丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.08 g，1.28 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，2.57 mL，12.83 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA75 (3-胺基-2-甲基丙基)(4-((3-胺基-2-甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.66 g，0.85 mmol，66.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.59 min。MS (ES)：C 40H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 753.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.46 (br. m，1H)，3.33 (br. m，4H)，3.12 (br. m，5H)，2.95 (m，4H)，2.40 (d，3H， J= 9 Hz)，1.75 (br. m，19H)，1.20 (br. m，9H)，1.08 (m，8H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz )，0.89 (d，6H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 W. 化合物 SA76 ： (3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(4-胺基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，5.31 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.89 mL，6.37 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.30 g，5.84 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(4-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.47 g，3.94 mmol，74.1%)。UPLC/ELSD：RT = 0.61 min。MS (ES)：C 15H 23N 3O 6S之 m/z(MH +) 374.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.00 (m，1H)，7.81 (m，2H)，7.73 (m，2H)，6.15 (br. s，1H)，4.27 (br. s，1H)，3.64 (br. s，1H)，3.19 (br. s，1H)，2.95 (br. s，1H)，1.64 (m，1H)，1.30 (s，10H)，1.00 (d，3H， J= 6 Hz)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(4-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.47 g，3.94 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.58 g，11.44 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.25 mL，1.88 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.19 mL，1.56 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後，添加苯硫酚(0.74 mL，7.22 mmol)、碳酸鉀(0.78 g，5.62 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.17 g，0.40 mmol，21.2%)。UPLC/ELSD：RT = 0.45 min。MS (ES)：C 22H 46N 4O 4之 m/z(MH +) 431.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 4.94 (m，1H)，3.66 (m，5H)，2.66 (m，8H)，1.66 (m，8H)，1.39 (s，18H)，1.10 (d，6H， J= 9 Hz)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.17 g，0.40 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.15 mL，1.08 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.20 g，0.36 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.13 g，0.16 mmol，43.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.77 min。MS (ES)：C 50H 90N 4O 6之 m/z(MH +) 844.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (m，1H)，4.89 (m，1H)，4.50 (m，2H)，3.67 (br. m，2H)，3.22 (br. m，4H)，2.59 (m，4H)，2.33 (m，2H)，1.98 (br. m，6H)，1.54 (br. m，15H)，1.43 (s，22H)，1.34 (m，5H)，1.14 (m，14H)，1.02 (s，7H)，0.82 (m，14H)，0.91 (d，4H， J= 6 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.13 g，0.16 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.31 mL，1.55 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA76 (3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.06 g，0.07 mmol，47.9%)。UPLC/ELSD：RT = 1.49 min。MS (ES)：C 40H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 753.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.47 (br. m，2H)，3.33 (br. m，7H)，3.17 (m，4H)，2.40 (d，2H， J= 9 Hz)，2.05 (br. m，8H)，1.62 (br. m，10H)，1.39 (d，8H， J= 9 Hz)，1.16 (d，7H， J= 6 Hz )，1.08 (br. m，5H)，0.98 (d，3H， J= 6 Hz)，0.91 (d，5H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 X. 化合物 SA77 ： (3- 胺基 -2,2- 二甲基丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2,2- 二甲基 -3-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基-2,2-二甲基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，4.94 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.83 mL，5.93 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.20 g，5.44 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2,2-二甲基-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(2.00 g，5.15 mmol，104.1%)。UPLC/ELSD：RT = 0.85 min。MS (ES)：C 16H 25N 3O 6S之 m/z(MH +) 388.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.10 (m，1H)，7.82 (m，1H)，7.73 (m，2H)，6.54 (br. s，1H)，4.86 (br. s，1H)，2.99 (d，2H， J= 6 Hz)，2.81 (d，2H， J= 9 Hz)，1.41 (s，9H)，0.90 (s，6H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2,2- 二甲基丙烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2,2-二甲基-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(2.00 g，5.15 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.07 g，14.96 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.32 mL，2.45 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.24 mL，2.04 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後，添加苯硫酚(0.97 mL，9.44 mmol)、碳酸鉀(1.02 g，7.36 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。 在真空中濃縮合併之上清液以獲得油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2,2-二甲基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.63 g，1.38 mmol，56.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.46 min。MS (ES)：C 24H 50N 4O 4之 m/z(MH +) 459.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.84 (m，2H)，2.82 (d，4H， J= 6 Hz)，2.39 (br. s，4H)，2.22 (s，4H)，1.33 (br. m，4H)，1.24 (s，18H)，0.70 (s，12H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二甲基丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2,2-二甲基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.66 g，1.43 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.55 mL，3.90 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.72 g，1.30 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二甲基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.39 g，0.45 mmol，34.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.77 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.38 (m，1H)，5.09 (m，1H)，4.23 (m，1H)，2.92 (br. m，2H)，2.72 (m，6H)，2.27 (m，2H)，2.10 (m，4H)，1.70 (m，5H)，1.28 (br. m，8H)，1.14 (s，21H)，1.05 (m，4H)，0.85 (m，8H)，0.74 (s，7H)，0.60 (br. m，22H)，0.39 (s，4H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -2,2- 二甲基丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二甲基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二甲基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.39 g，0.45 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.90 mL，4.51 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA77 (3-胺基-2,2-二甲基丙基)(4-((3-胺基-2,2-二甲基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.21 g，0.26 mmol，58.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.49 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 781.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.51 (br. m，1H)，3.33 (br. m，5H)，3.08 (d，6H， J= 9 Hz)，2.73 (m，2H)，2.42 (d，2H， J= 6 Hz)，1.75 (br. m，16H)，1.39 (br. m，4H)，1.22 (br. m，11H)，1.09 (br. m，11H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 Y. 化合物 SA78 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2- 甲基 -4-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(4-胺基-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，4.94 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.83 mL，5.93 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.20 g，5.44 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2-甲基-4-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.86 g，4.79 mmol，96.9%)。UPLC/ELSD：RT = 0.69 min。MS (ES)：C 16H 25N 3O 6S之 m/z(MH +) 388.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.10 (m，1H)，7.84 (m，1H)，7.75 (m，2H)，5.46 (br. s，1H)，4.47 (s，1H)，3.15 (q，2H)，1.94 (t，2H)，1.39 (s，9H)，1.23 (s，6H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2- 甲基丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2-甲基-4-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.86 g，4.79 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.92 g，13.92 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.30 mL，2.28 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.23 mL，1.89 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後，添加苯硫酚(0.90 mL，8.78 mmol)、碳酸鉀(0.95 g，6.84 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.57 g，1.24 mmol，54.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.46 min。MS (ES)：C 24H 50N 4O 4之 m/z(MH +) 459.7。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.94 (m，2H)，2.61 (m，8H)，1.92 (br. m，2H)，1.61 (m，4H)，1.45 (br. m，4H)，1.32 (s，18H)，1.21 (s，12H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.68 g，1.48 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.57 mL，4.03 mmol)。然後添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.74 g，1.34 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.57 g，0.65 mmol，48.3%)。UPLC/ELSD：RT = 2.65 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.99 (m，1H)，5.27 (m，1H)，4.40 (m，2H)，3.11 (br. m，4H)，2.59 (t，2H)，2.50 (t，2H)，2.25 (m，2H)，1.77 (m，7H)，1.58 (m，2H)，1.44 (br. m，12H)，1.32 (s，18H)，1.20 (d，16H， J= 9 Hz)，1.01 (m，9H)，0.92 (s，6H)，0.82 (d，4H， J= 6 Hz)，0.75 (d，6H， J= 9 Hz)，0.57 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.57 g，0.65 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.30 mL，6.50 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA78 (3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.35 g，0.44 mmol，67.2%)。UPLC/ELSD：RT = 1.50 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 781.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.43 (m，1H)，4.44 (br. m，1H)，3.33 (br. m，5H)，3.15 (br. m，3H)，2.38 (m，2H)，2.16 (br. m，8H)，1.74 (br. m，10H)，1.43 (br. m，14H)，1.17 (d，9H， J= 6 Hz)，1.08 (br. m，5H)，0.98 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 Z. 化合物 SA79 ： (3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2,2- 二氟 -3-((4- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基-2,2-二氟丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.95 g，4.52 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.76 mL，5.42 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加4-硝基苯磺醯氯(1.10 g，4.97 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時，且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1 M碳酸氫鈉水溶液(2 × 15 mL)、水(1 × 15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2 × 15 mL)、水(1 × 15 mL)及鹽水(2 × 15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2,2-二氟-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.66 g，4.19 mmol，92.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.61 min。MS (ES)：C 14H 19F 2N 3O 6S之 m/z(MH +) 396.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.15 (m，1H)，7.87 (m，1H)，7.73 (m，2H)，6.68 (br. s，1H)，5.02 (br. s，1H)，3.55 (br. m，4H)，1.45 (s，9H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2,2- 二氟丙烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2,2-二氟-3-((4-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.65 g，4.18 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(1.68 g，12.14 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.26 mL，1.99 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.20 mL，1.65 mmol)，且使反應在室溫下進行24 h。然後添加苯硫酚(0.78 mL，7.67 mmol)、碳酸鉀(0.83 g，5.97 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2,2-二氟丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.50 g，1.07 mmol，53.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.39 min。MS (ES)：C 20H 38F 4N 4O 4之 m/z(MH +) 475.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.14 (m，2H)，3.25 (m，4H)，2.62 (m，4H)，2.33 (br. m，4H)，1.18 (br. m，4H)，1.12 (s，18H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二氟丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2,2-二氟丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.64 g，1.35 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.52 mL，3.68 mmol)。然後添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.68 g，1.23 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，且用水(3 × 10 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.12 g，0.13 mmol，10.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.63 min。MS (ES)：C 48H 82F 4N 4O 6之 m/z(MH +) 888.2。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.61 (m，1H)，5.31 (m，1H)，4.98 (m，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.63 (br. m，5H)，3.32 (m，2H)，2.97 (t，2H)，2.69 (t，2H)，2.36 (m，2H)，2.05 (br. m，5H)，1.60 (br. m，5H)，1.46 (s，21H)，1.15 (m，6H)，1.04 (s，5H)，0.93 (d，3H， J= 6 Hz)，0.89 (d，5H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.12 g，0.13 mmol)於在氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.26 mL，1.31 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀SA79 (3-胺基-2,2-二氟丙基)(4-((3-胺基-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.05 g，0.06 mmol，42.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.52 min。MS (ES)：C 38H 69Cl 3F 4N 4O 2之 m/z(MH +) 797.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.43 (m，1H)，4.49 (br. m，1H)，3.94 (br. m，7H)，3.77 (br. m，4H)，3.33 (m，3H)，3.22 (m，2H)，2.42 (m，2H)，1.76 (br. m，23H)，1.18 (d，12H，J = 6 Hz)，1.08 (br. m，6H)，0.98 (d，4H，J = 9 Hz)，0.91 (d，6H，J = 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 AA. 化合物 SA81 ：雙 (6- 胺基己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N-{6-[ 苄基 ({6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 }) 胺基 ] 己基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(6-溴己基)胺基甲酸第三丁基酯(2.694 g，9.613 mmol)、碳酸鉀(1.898 g，13.73 mmol)及碘化鉀(0.152 g，0.915 mmol)於二甲基甲醯胺(7.5 mL)中之懸浮液中添加苄基胺(0.50 mL，4.6 mmol)。在50℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在23.5 h，將反應混合物冷卻至rt且然後用甲基第三丁基醚(150 mL)稀釋。用水(4×)及鹽水洗滌稀釋之混合物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-70%甲基第三丁基醚)純化粗材料，以提供澄清油狀N-{6-[苄基({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基})胺基]己基}胺基甲酸第三丁基酯(2.144 g，4.239 mmol，92.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.87 min。MS (ES)：C 29H 51N 3O 4之 m/z= 506.70 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.17-7.37 (m，5H)，4.50 (br. s，2H)，3.52 (s，2H)，3.08 (dt，4H， J= 6.5，6.2 Hz)，2.37 (t，4H， J= 7.2 Hz)，1.37-1.51 (m，8H)，1.44 (s，18H)，1.22-1.33 (m，8H)。 步驟 2 ： N-[6-({6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 } 胺基 ) 己基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-{6-[苄基({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基})胺基]己基}胺基甲酸第三丁基酯(2.12 g，4.192 mmol)及10% Pd/C (0.892 g，0.419 mmol)合併於乙醇(35 mL)中且然後在H 2氣球下在rt下攪拌。藉由TLC監測反應。在19 h，經由矽藻土墊過濾反應混合物，用乙酸乙酯沖洗。將濾液濃縮，吸收於乙酸乙酯中，經由0.45 μm PTFE釉料過濾，並濃縮以提供灰白色固體狀N-[6-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)己基]胺基甲酸第三丁基酯(1.537 g，3.698 mmol，88.2%)。UPLC/ELSD：RT = 0.62 min。MS (ES)：C 22H 45N 3O 4之 m/z= 416.60 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 4.51 (br. s，2H)，3.10 (dt，4H， J= 6.4，6.4 Hz)，2.57 (t，4H， J= 7.1 Hz)，1.13-1.57 (br. m，17H)，1.44 (s，18H)。 步驟 3 ：雙 (6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.200 g，0.362 mmol)、N-[6-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)己基]胺基甲酸第三丁基酯(0.188 g，0.453 mmol)及三乙胺(0.15 mL，1.08 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(30 mL)稀釋，且用5% NaHCO 3水溶液(3 × 25 mL)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀雙(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.286 g，0.345 mmol，95.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.53 min。MS (ES)：C 50H 89N 3O 6之 m/z= 728.94 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.33-5.42 (m，1H)，4.41-4.64 (m，3H)，2.99-3.28 (m，8H)，2.20-2.41 (m，2H)，1.75-2.08 (m，5H)，0.93-1.67 (br. m，37H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 4 ：雙 (6- 胺基己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向雙(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.280 g，0.338 mmol)於異丙醇(3.5 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.52 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加乙腈(10.5 mL)。將懸浮液在冰浴中冷卻至0℃。然後藉由真空過濾收集固體，用冷3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀雙(6-胺基己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.179 g，0.251 mmol，74.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.09 min。MS (ES)：C 40H 73N 3O 2之 m/z= 335.49 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.36-5.44 (m，1H)，4.33-4.48 (m，1H)，3.25 (t，4H， J= 7.2 Hz)，2.92 (t，4H， J= 7.6 Hz)，2.24-2.39 (m，2H)，1.79-2.12 (m，5H)，0.97-1.73 (br. m，37H)，1.05 (s，3H)，0.95 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.73 (s，3H)。 AB. 化合物 SA82 ： 雙 (6- 胺基己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ：雙 (6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將β-麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.200 g，0.345 mmol)、N-[6-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)己基]胺基甲酸第三丁基酯(0.179 g，0.431 mmol)、三乙胺(0.15 mL，1.1 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(約30 mL)稀釋且用5% NaHCO 3水溶液(3 × 25 mL)洗滌。用二氯甲烷(25 mL)萃取合併之洗滌物。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-40%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀雙(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.259 g，0.302 mmol，87.7%)。UPLC/ELSD：RT = 3.63 min。MS (ES)：C 52H 93N 3O 6之 m/z= 857.26 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.33-5.42 (m，1H)，4.41-4.61 (m，3H)，3.02-3.28 (m，8H)，2.19-2.42 (m，2H)，1.76-2.08 (m，5H)，0.88-1.73 (br. m，38H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.79-0.89 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ：雙 (6- 胺基己基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向雙(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.256 g，0.299 mmol)於異丙醇(3.2 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.45 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加乙腈(9.6 mL)。將懸浮液在冰浴中冷卻至0℃，且藉由真空過濾收集固體，用冷3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀雙(6-胺基己基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.167 g，0.216 mmol，72.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.23 min。MS (ES)：C 42H 77N 3O 2之 m/z= 349.94 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.36-5.54 (m，1H)，4.33-4.48 (m，1H)，3.25 (t，4H， J= 7.1 Hz)，2.92 (t，4H， J= 7.6 Hz)，2.25-2.39 (m，2H)，1.79-2.13 (m，5H)，0.91-1.76 (br. m，38H)，1.05 (s，3H)，0.96 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.81-0.91 (m，9H)，0.73 (s，3H)。 AC. 化合物 SA83 ： (6- 胺基己基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N-[3-(2- 硝基苯磺醯胺基 ) 丙基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
在15 min內經由加料漏斗向N-(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.50 g，8.35 mmol)及三乙胺(1.50 mL，10.7 mmol)於冰浴中冷卻至0℃之二氯甲烷(40 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.00 g，8.75 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液。此後，在攪拌的同時將反應混合物緩慢升溫至rt。藉由TLC監測反應。在23 h，用二氯甲烷(50 mL)稀釋反應混合物且然後用5%檸檬酸水溶液洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供黏性淺黃色油狀N-[3-(2-硝基苯磺醯胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(2.611 g，7.265 mmol，87.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.54 min。MS (ES)：C 14H 21N 3O 6S之 m/z= 304.14 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.09-8.17 (m，1H)，7.81-7.89 (m，1H)，7.68-7.77 (m，2H)，5.86 (br. s，1H)，4.66 (br. s，1H)，3.21 (dt，2H， J= 6.2，6.2 Hz)，3.15 (dt，2H， J= 6.4，6.4 Hz)，1.63-1.76 (m，2H)，1.42 (s，9H)。 步驟 2 ： N-[3-(N-{6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 }2- 硝基苯磺醯胺基 ) 丙基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
向N-[3-(2-硝基苯磺醯胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(1.000 g，2.782 mmol)、碳酸鉀(0.769 g，5.56 mmol)及碘化鉀(0.046 g，0.28 mmol)於二甲基甲醯胺(15 mL)中之攪拌混合物中添加N-(6-溴己基)胺基甲酸第三丁基酯(0.858 g，3.06 mmol)於二甲基甲醯胺(1.0 mL)中之溶液。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20.3 h，將反應混合物加熱至50℃。在25 h，將反應混合物冷卻至rt。用甲基第三丁基醚及水稀釋反應混合物。分離各層，且用水(4×)及鹽水洗滌有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-85%甲基第三丁基醚)純化粗材料，以提供澄清油狀N-[3-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}2-硝基苯磺醯胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(1.399 g，2.504 mmol，90.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.43 min。MS (ES)：C 25H 42N 4O 8S之 m/z= 403.26 [(M + H) - 2[(CH 3) 2C=CH 2] - CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.96-8.04 (m，1H)，7.58-7.73 (m，3H)，4.84 (br. s，1H)，4.50 (br. s，1H)，3.35 (t，2H， J= 7.0 Hz)，3.25 (t，2H， J= 7.6 Hz)，3.15 (td，2H， J= 6.3，6.2 Hz)，3.06 (td，2H， J= 6.7，6.5 Hz)，1.68-1.79 (m，2H)，1.34-1.60 (m，4H)，1.44 (s，18H)，1.20-1.33 (m，4H)。 步驟 3 ： N-[3-({6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 } 胺基 ) 丙基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[3-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}2-硝基苯磺醯胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(1.391 g，2.490 mmol)、碳酸鉀(1.032 g，7.469 mmol)及苯硫酚(0.39 mL，3.82 mmol)合併於二甲基甲醯胺(20 mL)中。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18 h，經由矽藻土墊過濾反應混合物，用甲基第三丁基醚沖洗。用飽和NaHCO 3水溶液、水(3×)及鹽水洗滌濾液。經Na 2SO 4乾燥有機物並濃縮。經由矽膠層析(二氯甲烷中之0-20% (甲醇中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供白色固體狀N-[3-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.889 g，2.38 mmol，95.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.42 min。MS (ES)：C 19H 39N 3O 4之 m/z= 374.38 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.15 (br. s，1H)，4.52 (br. s，1H)，3.19 (dt，2H， J= 5.9，5.9 Hz)，3.10 (dt，2H， J= 6.4，6.4 Hz)，2.66 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.57 (t，2H， J= 7.0 Hz)，1.59-1.71 (m，2H)，1.24-1.55 (m，9H)，1.44 (s，18H)。 步驟 4 ： (6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.200 g，0.362 mmol)、N-[3-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.169 g，0.453 mmol)及三乙胺(0.15 mL，1.1 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(30 mL)稀釋，且用5% NaHCO 3水溶液(3 × 30 mL)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.240 g，0.305 mmol，84.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.43 min。MS (ES)：C 47H 83N 3O 6之 m/z= 687.36 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.17-5.44 (m，2H)，4.40-4.86 (m，2H)，2.98-3.40 (br. m，8H)，2.19-2.44 (m，2H)，1.74-2.10 (m，5H)，0.93-1.73 (br. m，31H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 5 ： (6- 胺基己基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.234 g，0.298 mmol)於異丙醇(2.8 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.42 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加乙腈(8.4 mL)。將懸浮液在rt下攪拌1 h且然後藉由真空過濾收集固體，用冷3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀(6-胺基己基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.177 g，0.264 mmol，88.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.98 min。MS (ES)：C 37H 67N 3O 2之 m/z= 314.63 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.35-5.44 (m，1H)，4.36-4.52 (m，1H)，3.37 (t，2H， J= 6.8 Hz)，3.28 (t，2H， J= 7.6 Hz)，2.88-2.99 (m，4H)，2.26-2.46 (m，2H)，1.78-2.14 (m，7H)，0.98-1.75 (br. m，29H)，1.06 (s，3H)，0.95 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.73 (s，3H)。 AD. 化合物 SA84 ： (6- 胺基己基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將β-麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.200 g，0.345 mmol)、N-[3-({6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.161 g，0.431 mmol)及三乙胺(0.15 mL，1.1 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(30 mL)稀釋，且用5% NaHCO 3水溶液(3 × 30 mL)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.218 g，0.268 mmol，77.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.55 min。MS (ES)：C 49H 87N 3O 6之 m/z= 715.12 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.13-5.44 (m，2H)，4.35-4.88 (m，2H)，2.98-3.40 (br. m，8H)，2.20-2.45 (m，2H)，1.76-2.09 (m，5H)，0.88-1.75 (br. m，32H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.78-0.89 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (6- 胺基己基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.213 g，0.262 mmol)於異丙醇(2.6 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.38 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加乙腈(7.8 mL)。將懸浮液在rt下攪拌1 h，且然後藉由真空過濾收集固體，用冷3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀(6-胺基己基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.169 g，0.232 mmol，88.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.17 min。MS (ES)：C 39H 71N 3O 2之 m/z= 328.70 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.36-5.45 (m，1H)，4.36-5.53 (m，1H)，3.37 (t，2H， J= 6.6 Hz)，3.28 (t，2H， J= 7.5 Hz)，2.88-2.98 (m，4H)，2.26-2.43 (m，2H)，1.80-2.12 (m，7H)，0.91-1.77 (br. m，30H)，1.06 (s，3H)，0.96 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.82-0.91 (m，9H)，0.73 (s，3H)。 AE. 化合物 SA87 ： (3- 胺基 -2- 氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2- 氟 -3-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基-2-氟丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.00 g，5.20 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.87 mL，6.24 mmol)。將溶液冷卻至0℃且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(1.27 g，5.72 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2-氟-3-((2-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.93 g，5.14 mmol，98.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.76 min。MS (ES)：C 14H 20FN 3O 6S之 m/z(MH +) 378.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.15 (m，1H)，7.87 (m，1H)，7.77 (m，2H)，6.14 (br. s，1H)，5.31 (m，1H)，4.71 (m，1H)，4.55 (m，1H)，3.39 (m，4H)，1.44 (s，9H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2- 氟丙烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2-氟-3-((2-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(1.94 g，5.14 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(2.06 g，14.92 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.32 mL，2.45 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.24 mL，2.03 mmol)，且使反應在室溫下進行8 h。然後，添加苯硫酚(0.96 mL，9.42 mmol)、碳酸鉀(1.01 g，7.34 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。 在真空中濃縮合併之上清液以獲得油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-80% (75:20:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-氟丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.77 g，1.76 mmol，72.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.34 min。MS (ES)：C 20H 40F 2N 4O 4之 m/z(MH +) 439.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.11 (m，2H)，4.73 (br. s，1H)，4.56 (br. s，1H)，3.36 (m，3H)，2.75 (br. m，9H)，1.51 (m，5H)，1.43 (s，18H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 氟丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-氟丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.73 g，1.67 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.59 mL，4.18 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.77 g，1.39 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，且用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.76 g，0.89 mmol，64.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.62 min。MS (ES)：C 48H 84F 2N 4O 6之 m/z(MH +) 852.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.89 (m，1H)，4.98 (br. m，1H)，4.76 (br. m，1H)，4.60 (m，2H)，3.42 (br. m，9H)，2.86 (d，1H， J= 6 Hz)，2.78 (m，1H)，2.65 (m，3H)，2.35 (m，2H)，1.90 (br. m，6H)，1.58 (br. m，10H)，1.46 (s，25H)，1.35 (m，4H)，1.15 (br. m，10H)，1.04 (s，6H)，0.94 (d，4H， J= 6 Hz)，0.78 (d，6H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -2- 氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.76 g，0.89 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，1.79 mL，8.93 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基-2-氟丙基)(4-((3-胺基-2-氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.54 g，0.67 mmol，75.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.65 min。MS (ES)：C 38H 71Cl 3F 2N 4O 2之 m/z(MH +) 651.7。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.41 (m，1H)，5.22 (br. m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.43 (br. m，7H)，3.34 (s，4H)，3.17 (m，4H)，2.41 (d，2H， J= 3 Hz)，2.05 (br. m，6H)，1.75 (br. m，17H)，1.16 (br. m，13H)，0.95 (d，4H， J= 6 Hz)，0.91 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AF. 化合物 SA88 ： (3- 胺基 -2- 羥基丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 羥基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2- 羥基 -3-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(3-胺基-2-羥基丙基)胺基甲酸第三丁基酯(10.51 g，55.27 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (200 mL)中之溶液中添加三乙胺(9.24 mL，66.37 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(12.25 g，55.27 mmol)於100 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×100 mL)、水(1×100 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×100 mL)、水(1×100 mL)及鹽水(2×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(2-羥基-3-((2-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(17.54 g，46.73 mmol，84.5%)。UPLC/ELSD：RT = 1.23 min。MS (ES)：C 14H 21N 3O 7S之 m/z(MH +) 376.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.13 (m，1H)，7.88 (m，1H)，7.78 (m，2H)，6.01 (br. s，1H)，5.01 (m，1H)，3.86 (m，1H)，3.29 (m，4H)，3.12 (m，1H)，1.45 (s，9H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (2- 羥基丙烷 -3,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(2-羥基-3-((2-硝基苯基)磺醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(4.00 g，10.66 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (40 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(4.28 g，30.95 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.67 mL，5.07 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.50 mL，4.21 mmol)，且使反應在室溫下進行16 h。然後，添加苯硫酚(2.00 mL，19.54 mmol)、碳酸鉀(2.10 g，15.22 mmol)及額外5 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-羥基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(1.12 g，2.58 mmol，50.8%)。UPLC/ELSD：RT = 0.20 min。MS (ES)：C 20H 42N 4O 6之 m/z(MH +) 435.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.47 (m，2H)，4.72 (br. s，1H)，3.76 (br. s，2H)，3.47 (m，9H)，3.22 (m，3H)，3.05 (m，3H)，2.62 (br. m，8H)，1.53 (m，5H)，1.42 (s，18H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 羥基丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 羥基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-羥基丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(1.12 g，2.58 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.91 mL，6.44 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.19 g，2.15 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (80:19:1 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.08 g，0.09 mmol，4.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.45 min。MS (ES)：C 48H 86N 4O 8之 m/z(MH +) 848.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.32 (m，2H)，5.07 (br. m，1H)，4.43 (br. m，1H)，3.77 (m，2H)，3.25 (br. m，6H)，2.95 (m，4H)，2.56 (m，4H)，2.26 (m，2H)，1.90 (m，5H)，1.47 (m，9H)，1.37 (s，18H)，1.07 (m，11H)，0.95 (s，6H)，0.86 (d，4H， J= 6 Hz)，0.78 (d，5H， J= 6 Hz)，0.61 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -2- 羥基丙基 )(4-((3- 胺基 -2- 羥基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-羥基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.08 g，0.09 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.18 mL，0.89 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(6 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基-2-羥基丙基)(4-((3-胺基-2-羥基丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.04 g，0.04 mmol，49.3%)。UPLC/ELSD：RT = 1.53 min。MS (ES)：C 38H 73Cl 3N 4O 4之 m/z(MH +) 648.2。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.45 (br. m，1H)，4.26 (br. m，1H)，4.08 (br. m，1H)，3.44 (m，3H)，3.13 (m，9H)，2.41 (d，2H， J= 3 Hz)，2.05 (s，3H)，1.92 (m，3H)，1.55 (br. m，13H)，1.16 (br. m，11H)，0.97 (d，3H， J= 6 Hz)，0.91 (d，5H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AG. 化合物 SA89 ： 6-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜二十烷 -20- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-6-側氧基己酸(0.40 g，0.77 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.43 g，0.85 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.02 g，0.15 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.22 g，1.15 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃，且逐滴添加二異丙基乙胺(0.41 mL，2.31 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜二十烷-20-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.59 g，0.59 mmol，77.0%)。UPLC/ELSD：RT：3.40 min。MS (ES)：C 58H 102N 4O 9之 m/z(MH +) 1000.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.25 (m，1H)。4.47 (br. m，1H)，4.00，(q，1H)，3.12 (br. m，12H)，2.20 (br. m，6H)，1.91 (br. m，8H)，1.54 (br. m，16H)，1.31 (br. s，33H)，1.13 (br. m，13H)，0.90 (s，6H)，0.81 (d，4H， J= 6 Hz)，0.73 (d，6H， J= 6 Hz)，0.56 (s，3H)。 步驟 2 ： 6-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜二十烷-20-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.59 g，0.59 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，1.19 mL，5.92 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(15 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀6-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-6-側氧基己酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.36 g，0.43 mmol，71.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.75 min。MS (ES)：C 43H 81Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 700.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.40 (m，1H)，4.54 (br. m，1H)，3.96 (m，1H)，3.52 (br. m，4H)，3.33 (s，1H)，3.12 (m，9H)，2.49 (br. m，2H)，2.36 (br. m，5H)，2.17 (m，3H)，2.06 (s，3H)，1.67 (br. m，30H)，1.16 (d，14H， J= 6 Hz)，1.07 (s，6H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (d，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AH. 化合物 SA90 6-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-6- 側氧基己酸
向麥固醇(0.44 g，1.01 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加氧雜環庚烷-2,7-二酮(0.13 g，1.01 mmol)，然後逐滴添加吡啶(0.31 mL，2.22 mmol)。然後將溶液在40℃下回流過夜，在此期間所有固體變成溶液。第二天，將混合物冷卻至室溫，濃縮成黃色油狀物，吸收於DCM中，且在不具進一步處理之二氧化矽上純化。在己烷中用0-30% EtOAc梯度運行二氧化矽管柱。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得白色固體狀6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-6-側氧基己酸(0.12 g，0.21 mmol，21.0%)。UPLC/ELSD：RT：3.23 min。MS (ES)：C 35H 58O 4之 m/z(MH +) 543.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.36 (m，1H)，3.54 (br. m，1H)，2.28，(m，2H)，2.04 (br. m，3H)，1.86 (br. m，3H)，1.49 (br. m，19H)，1.02 (s，6H)，0.94 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，10H)，0.69 (s，3H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜二十烷 -20- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向6-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-6-側氧基己酸(0.12 g，0.21 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.13 g，0.25 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.01 g，0.04 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.08 g，0.42 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(0.11 mL，0.64 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度純化，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜二十烷-20-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.15 g，0.14 mmol，67.5%)。UPLC/ELSD：RT：3.91 min。MS (ES)：C 60H 106N 4O 9之 m/z(MH +) 1028.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.38 (m，2H)，4.59 (br. m，2H)，4.14 (m，1H)，3.24 (br. m，11H)，2.32 (br. m，6H)，1.67 (br. m，17H)，1.47 (s，32H)，1.25 (br. m，11H)，1.03 (s，6H)， 0.94 (d，4H， J= 9 Hz)，0.86 (q，8H， J= 9 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 3 ： 6-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-6- 側氧基己酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜二十烷-20-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.15 g，0.14 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.29 mL，1.43 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀6-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-6-側氧基己酸((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.06 g，0.06 mmol，43.9%)。UPLC/ELSD：RT = 1.97 min。MS (ES)：C 45H 85Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 728.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.41 (m，1H),4.87 (br. m，9H)，4.55 (br. m，1H)，3.46 (m，3H)，3.33 (s，1H)，3.10 (m，6H)，2.35 (br. m，6H)，2.04 (s，5H)，1.68 (br. m，15H)，1.21 (m，9H)，1.06 (s，4H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.86 (q，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AI. 化合物 SA95 ： (10- 胺基癸基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N-{10-[(2- 氰基乙基 ) 胺基 ] 癸基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(10-胺基癸基)胺基甲酸第三丁基酯(1.500 g，5.506 mmol)、水(15 mL)及乙二醇二甲醚(15 mL)之懸浮液中添加triton B (cat.)。在50℃下攪拌懸浮液，且然後添加丙烯腈(0.40 mL，6.1 mmol)。在50℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt。將反應混合物濃縮且用二氯甲烷(100 mL)及5% NaHCO 3水溶液(100 mL)稀釋。用二氯甲烷(3 × 30 mL)萃取水層。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(二氯甲烷中之0-10%甲醇)純化粗材料，以提供白色固體狀N-{10-[(2-氰基乙基)胺基]癸基}胺基甲酸第三丁基酯(1.328 g，3.150 mmol，57.2%)。UPLC/ELSD：RT = 0.53 min。MS (ES)：C 18H 35N 3O 2之 m/z= 326.48 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 4.49 (br. s，1H)，3.09 (dt，2H， J= 6.5，6.3 Hz)，2.93 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.62 (t，2H， J= 7.1 Hz)，2.52 (t，2H， J= 6.6 Hz)，1.22-1.54 (m，17H)，1.44 (s，9H)。 步驟 2 ： N-{10-[ 苄基 (2- 氰基乙基 ) 胺基 ] 癸基 } 胺基甲酸第三丁基酯
向N-{10-[(2-氰基乙基)胺基]癸基}胺基甲酸第三丁基酯(1.209 g，2.867 mmol)及碳酸鉀(0.793 g，5.74 mmol)於乙腈(18 mL)中之攪拌懸浮液中添加苄基溴(0.43 mL，3.6 mmol)。在70℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt且然後經由矽藻土墊過濾，用乙腈沖洗。濃縮濾液且然後經由矽膠層析(己烷中之0-50%乙酸乙酯)純化，以提供澄清油狀N-{10-[苄基(2-氰基乙基)胺基]癸基}胺基甲酸第三丁基酯(1.283 g，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.74 min。MS (ES)：C 25H 41N 3O 2之 m/z= 416.47 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.20-7.42 (m，5H)，4.48 (br. s，1H)，3.61 (s，2H)，3.10 (td，2H， J= 6.6，6.3 Hz)，2.78 (t，2H， J= 7.0 Hz)，2.48 (t，2H， J= 7.2 Hz)，2.39 (t，2H， J= 7.0 Hz)，1.39-1.58 (m，4H)，1.44 (s，9H)，1.21-1.35 (m，12H)。 步驟 3 ： N-{3-[ 苄基 ({10-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 癸基 }) 胺基 ] 丙基 } 胺基甲酸第三丁基酯
將N-{10-[苄基(2-氰基乙基)胺基]癸基}胺基甲酸第三丁基酯(0.050 g，0.12 mmol)、二碳酸二-第三丁基酯(0.053 g，0.24 mmol)及氯化(II) (0.016 g，0.12 mmol)合併於乙醇(1.0 mL)中。將攪拌之反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加硼氫化鈉(0.014 g，0.36 mmol)。將反應混合物升溫至rt且藉由LCMS監測。在21 h，添加二伸乙基三胺(0.03 mL，0.3 mmol)。將反應混合物在rt下攪拌2 h且然後經由矽藻土墊過濾。將濾液濃縮，懸浮於5% NaHCO 3水溶液(25 mL)中，且用乙酸乙酯(3 × 15 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(二氯甲烷中之0-7%甲醇)純化粗材料，以提供澄清油狀N-{3-[苄基({10-[(第三丁氧基羰基)胺基]癸基})胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.040 g，0.077 mmol，64.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.25 min。MS (ES)：C 30H 53N 3O 4之 m/z= 520.77 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.19-7.39 (m，5H)，5.52 (br. s，1H)，4.49 (br. s，1H)，3.51 (s，2H)，3.01-3.22 (m，4H)，2.46 (t，2H， J= 6.1 Hz)，2.37 (t，2H， J= 7.1 Hz)，1.37-1.68 (m，6H)，1.44 (s，9 H)，1.44 (s，9H)，1.15-1.35 (m，12H)。 步驟 4 ： N-[3-({10-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 癸基 } 胺基 ) 丙基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-{3-[苄基({10-[(第三丁氧基羰基)胺基]癸基})胺基]丙基}胺基甲酸第三丁基酯(0.340 g，0.654 mmol)及10% Pd/C (0.139 g，0.065 mmol)合併於乙醇(5.1 mL)中且然後在H 2氣球下在rt下攪拌。藉由LCMS監測反應。在18 h，用乙酸乙酯(10 mL)稀釋反應混合物且然後經由矽藻土墊過濾，用乙酸乙酯沖洗。將濾液濃縮，吸收於乙酸乙酯中，經由0.45 μm PTFE針筒過濾器過濾，並濃縮以提供白色固體狀N-[3-({10-[(第三丁氧基羰基)胺基]癸基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.238 g，0.554 mmol，84.7%)。UPLC/ELSD：RT = 0.97 min。MS (ES)：C 23H 47N 3O 4之 m/z= 430.42 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.17 (br. s，1H)，4.49 (br. s，1H)，3.20 (dt，2H， J= 6.1，6.0 Hz)，3.09 (dt，2H， J= 6.6，6.4 Hz)，2.67 (t，2H， J= 6.6 Hz)，2.58 (t，2H， J= 7.1 Hz)，1.17-1.76 (br. m，19H)，1.44 (s，18H)。 步驟 5 ： (10-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 癸基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.112 g，0.203 mmol)、N-[3-({10-[(第三丁氧基羰基)胺基]癸基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.103 g，0.240 mmol)及三乙胺(0.088 mL，0.63 mmol)合併於甲苯(3.0 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，在100℃下加熱反應混合物。在20 h，添加DMAP (cat.)。在41 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且然後用5% NaHCO 3水溶液(3×)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-30%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀(10-((第三丁氧基羰基)胺基)癸基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.157 g，0.186 mmol，91.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.72 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 6之 m/z= 743.62 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.20-5.43 (m，2H)，4.40-4.83 (m，2H)，3.02-3.37 (m，8H)，2.21-2.43 (m，2H)，1.75-2.10 (m，5H)，0.93-1.75 (br. m，39H)，1.44 (s，9H)，1.44 (s，9H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 6 ： (10- 胺基癸基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(10-((第三丁氧基羰基)胺基)癸基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.154 g，0.183 mmol)於異丙醇(2.5 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.28 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加乙腈(7.5 mL)。藉由真空過濾收集固體，用冷3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀(10-胺基癸基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.080 g，0.11 mmol，59.2%)。UPLC/ELSD：RT = 2.23 min。MS (ES)：C 41H 75N 3O 2之 m/z= 342.41 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.35-5.45 (m，1H)，4.36-4.51 (m，1H)，3.36 (t，2H， J= 6.9 Hz)，3.26 (t，2H， J= 7.4 Hz)，2.87-2.98 (m，4H)，2.27-2.43 (m，2H)，1.78-2.12 (m，7H)，0.97-1.73 (br. m，37H)，1.06 (s，3H)，0.95 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.88 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.73 (s，3H)。 AJ. 化合物 SA96 ： (10- 胺基癸基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (10-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 癸基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將β-麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.140 g，0.241 mmol)、N-[3-({10-[(第三丁氧基羰基)胺基]癸基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.119 g，0.277 mmol)及三乙胺(0.10 mL，0.75 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物加熱至100℃。在20 h，添加DMAP (cat.)。在41 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且然後用5% NaHCO 3水溶液(3×)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-30%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀(10-((第三丁氧基羰基)胺基)癸基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.187 g，0.215 mmol，89.0%)。UPLC/ELSD：RT = 3.80 min。MS (ES)：C 53H 95N 3O 6之 m/z= 770.03 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.18-5.43 (m，2H)，4.40-4.83 (m，2H)，2.97-3.41 (m，8H)，2.21-2.44 (m，2H)，1.76-2.13 (m，5H)，0.87-1.74 (br. m，40H)，1.44 (s，9H)，1.44 (s，9H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.78-0.87 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (10- 胺基癸基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(10-((第三丁氧基羰基)胺基)癸基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.182 g，0.209 mmol)於異丙醇(2.5 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.28 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt且然後添加乙腈(8.25 mL)。濃縮混合物。添加甲基第三丁基醚(約10 mL)。濃縮混合物。將殘餘物溶解於異丙醇(1.5 mL)中且然後逐滴添加至乙腈(10 mL)中。濃縮混合物。添加乙腈/甲基第三丁基醚/異丙醇(85:10:5，約10 mL)。濃縮混合物。將殘餘物溶解於異丙醇(1.5 mL)中且然後逐滴添加至3:1己烷/乙酸乙酯(10 mL)中。濃縮混合物。將殘餘物溶解於異丙醇(1.5 mL)中且然後添加9:1乙腈/乙醇(10 mL)。然後添加乙腈(10 mL)。傾析掉上清液，且在真空下乾燥固體，以提供白色固體狀(10-胺基癸基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.075 g，0.089 mmol，42.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.34 min。MS (ES)：C 43H 79N 3O 2之 m/z= 356.73 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.36-5.46 (m，1H)，4.36-4.52 (m，1H)，3.36 (t，2H， J= 6.8 Hz)，3.26 (t，2H， J= 7.3 Hz)，2.87-2.98 (m，4H)，2.27-2.44 (m，2H)，1.80-2.12 (m，7H)，0.91-1.77 (br. m，38H)，1.06 (s，3H)，0.96 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.79-0.91 (m，9H)，0.73 (s，3H)。 AK. 化合物 SA97 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 吡啶
將硫代膽固醇(2.000 g，4.966 mmol)及2,2'-二吡啶基二硫化物(1.204 g，5.463 mmol)合併於氯仿(12.5 mL)中。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20 h，將反應混合物濃縮，且然後添加甲醇(35 mL)。將所得混合物靜置2 h。此後，藉由研缽及研杵將固體與甲醇一起研磨為漿液，且然後藉由真空過濾收集固體，以提供淺褐色固體狀2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)吡啶(1.812 g，3.540 mmol，71.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.45 min。MS (ES)：C 32H 49NS 2之 m/z= 512.62 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.39-8.49 (m，1H)，7.72-7.83 (m，1H)，7.57-7.69 (m，1H)，7.01-7.12 (m，1H)，5.27-5.43 (m，1H)，2.70-2.88 (m，1H)，2.20-2.47 (m，2H)，0.78-2.11 (br. m，38H)，0.66 (s，3H)。 步驟 2 ： 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 )-1- 甲基吡啶 -1- 鎓三氟甲磺酸鹽
在10 min內，向2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)吡啶(1.807 g，3.530 mmol)於二氯甲烷(3.5 mL)及庚烷(35 mL)中之溶液中逐滴添加三氟甲磺酸甲酯(0.40 mL，3.5 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在4 h，再逐滴添加三氟甲磺酸酯(0.08 mL)。在4 h 40 min，經由真空過濾收集固體，用庚烷沖洗，以提供灰白色固體狀2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲磺酸鹽(2.011 g，2.975 mmol，84.3%)。 1H NMR (300 MHz，CD 3CN)：δ 8.51-8.63 (m，2H)，8.30-8.41 (m，1H)，7.66-7.75 (m，1H)，5.34-5.45 (m，1H)，4.19 (s，3H)，2.87-3.06 (m，1H)，2.33-2.49 (m，2H)，0.78-2.08 (br. m，38H)，0.69 (s，3H)。 步驟 3 ： 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙酸
向2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲磺酸鹽(1.000 g，1.479 mmol)於二甲基甲醯胺(6.5 mL)中之混合物中添加 3-巰基丙酸(0.14 mL，1.6 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在21 h，再添加3-巰基丙酸(0.02 mL)。在24 h，添加水(8 mL)，並將反應混合物在rt下攪拌30 min且然後進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，用水沖洗。然後將濕固體溶解於二氯甲烷中且通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。將乙腈(40 mL)添加至殘餘物中，然後對該殘餘物進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，以提供白色固體狀3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.541 g，1.07 mmol，72.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.26 min.； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 10.32 (br. s，1H)，5.31-5.40 (m，1H)，2.86-2.95 (m，2H)，2.75-2.84 (m，2H)，2.59-2.73 (m，1H)，2.23-2.41 (m，2H)，1.74-2.08 (m，5H)，0.93-1.70 (br. m，21H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 4 ： (3-(N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.200 g，0.395 mmol)、N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.222 g，0.552 mmol)及N-羥基琥珀醯亞胺(0.068 g，0.59 mmol)於二氯甲烷(6.0 mL)中之混合物中添加二環己基碳化二亞胺(0.138 g，0.671 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，再添加N-羥基琥珀醯亞胺(15 mg)及二環己基碳化二亞胺(35 mg)。在5天時，經由矽藻土墊過濾反應混合物，用二氯甲烷沖洗。將濾液濃縮，吸收於9:1己烷/乙酸乙酯(10 mL)中，過濾，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供澄清油狀(3-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.203 g，0.228 mmol，57.8%)。UPLC/ELSD：RT = 3.61 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 5S 2之 m/z= 790.32 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.24-5.42 (m，2H)，4.42-4.67 (m，1H)，2.91-3.48 (br. m，10H)，2.57-2.78 (m，3H)，2.27-2.38 (m，2H)，0.93-2.09 (br. m，40H)，1.44 (s，9H)，1.43 (s，9H)，1.00 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 5 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(3-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丙基)胺基甲酸第三丁基酯(0.200 g，0.225 mmol)於異丙醇(3.0 mL)中之混合物中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.32 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加乙腈(9 mL)。將材料濃縮且然後吸收於4:1乙腈/甲醇(10 mL)中。過濾懸浮液，用甲醇沖洗。將濾液濃縮，與19:1乙腈/乙醇(10 mL)一起研磨，溶解於甲醇中，並濃縮以提供白色固體狀N-(8-胺基辛基)-N-(3-胺基丙基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.126 g，0.154 mmol，68.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.28 min。MS (ES)：C 41H 75N 3OS 2之 m/z= 366.60 [(M + 2H) + CH3CN] 2+。 AL. 化合物 SA98 2-((2-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙基 ) 二硫烷基 ) 乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 2-((2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-2- 側氧基乙基 ) 二硫烷基 ) 乙酸
向膽固醇(5.00 g，12.93 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (100 mL)中之溶液中添加二硫代二乙醇酸(4.53 mL，25.86 mmol)。然後將溶液冷卻至0℃且添加二甲基胺基吡啶(0.32 g，2.59 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(4.96 g，25.86 mmol)，然後逐滴添加三乙胺(4.52 mL，25.86 mmol)。將溶液逐步升溫至室溫且攪拌過夜。第二天，用飽和碳酸氫鈉(1×25 mL)及水(1×25 mL)洗滌溶液，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成棕色油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-100% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得深棕色固體狀2-((2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-側氧基乙基)二硫烷基)乙酸(3.76 g，6.82 mmol，52.7%)。UPLC/ELSD：RT：3.11 min。MS (ES)：C 31H 50O 4S 2之 m/z(MH +) 551.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 9.04 (br. s，1H)，5.41 (m，1H)，4.69 (br. m，1H)，3.65 (s，2H)，3.60 (s，1H)，2.39 (d，2H， J= 9 Hz )，2.01 (br. m，5H)，1.52 (br. m，11H)，1.16 (br. m，6H)，1.04 (s，6H)，0.95 (d，3H， J= 6 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 12-( 第三丁氧基羰基 )-7-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-19,19- 二甲基 -6,17- 二氧橋 -18- 氧雜 -3,4- 二硫雜 -7,12,16- 三氮雜二十烷酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向2-((2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-2-側氧基乙基)二硫烷基)乙酸(0.30 g，0.55 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.41 g，0.82 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.03 g，0.27 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.26 g，1.36 mmol)。將反應在室溫下進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×10 mL)及鹽水(1×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上用己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度純化，以獲得淺黃色油狀12-(第三丁氧基羰基)-7-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-19,19-二甲基-6,17-二氧橋-18-氧雜-3,4-二硫雜-7,12,16-三氮雜二十烷酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.33 g，0.31 mmol，57.6%)。UPLC/ELSD：RT：3.46 min。MS (ES)：C 56H 98N 4O 9S 2之 m/z(MH +) 1036.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.33 (m，2H)，4.61 (br. m，1H)，3.72 (s，2H)，3.51 (s，2H)，3.29 (br. m，11H)，2.28 (d，2H， J= 6 Hz)，1.81 (br. m，6H)，1.50 (s，26H)，1.20 (br. m，11H)，0.97 (s，5H)， 0.88 (d，3H， J= 6 Hz)，0.82 (d，5H， J= 6 Hz)，0.63 (s，3H)。 步驟 3 ： 2-((2-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙基 ) 二硫烷基 ) 乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向12-(第三丁氧基羰基)-7-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-19,19-二甲基-6,17-二氧橋-18-氧雜-3,4-二硫雜-7,12,16-三氮雜二十烷酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.33 g，0.31 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.63 mL，3.14 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將溶液冷卻至室溫，且將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀2-((2-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-2-側氧基乙基)二硫烷基)乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.21 g，0.22 mmol，70.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.00 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 3N 4O 3S 2之 m/z(MH +) 735.7。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.43 (m，1H)，4.60 (br. m，1H)，3.90 (m，2H)，3.67 (s，2H)，3.53 (m，5H)，3.33 (s，2H)，3.11 (m，9H)，2.39 (m，2H)，1.98 (br. m，10H)，1.55 (br. m，13H)，1.39 (m，7H)，1.18 (br. m，6H)，1.08 (s，6H)，0.98 (d，4H， J= 6 Hz)，0.91 (d，6H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 AM. 化合物 SA110 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 )-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 戊醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 戊酸
向2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲磺酸鹽(1.000 g，1.479 mmol)於二甲基甲醯胺(4.5 mL)中之攪拌混合物中添加二甲基甲醯胺(2.0 mL)中之5-硫基戊酸(0.208 g，1.55 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在15 h，再添加二甲基甲醯胺(0.5 mL)中之5-硫基戊酸(60 mg)。在40 h添加水(20 mL)，並將反應混合物在rt下攪拌15 min且然後進行音波處理。藉由真空過濾收集固體且用水沖洗。將固體溶解於二氯甲烷中，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。將乙腈(25 mL)添加至殘餘物中，且對懸浮液進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，用冷乙腈少量沖洗，以提供白色固體狀5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)戊酸(0.604 g，1.13 mmol，76.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.47 min； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 10.10 (br. s，1H)，5.30-5.48 (m，1H)，2.57-2.77 (m，3H)，2.22-2.46 (m，4H)，0.94-2.08 (br. m，30H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (8-(N-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 戊醯胺基 ) 辛基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)戊酸(0.250 g，0.467 mmol)、N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.263 g，0.654 mmol)及N-羥基琥珀醯亞胺(0.081 g，0.70 mmol)於二氯甲烷(7.5 mL)中之混合物中添加二環己基碳化二亞胺(0.164 g，0.795 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在50 h，添加N-羥基琥珀醯亞胺(34 mg)及二環己基碳化二亞胺(72 mg)。在92 h添加己烷(38 mL)，且然後經由矽藻土墊過濾反應混合物，用5:1己烷/二氯甲烷沖洗。濃縮濾液且然後經由矽膠層析(己烷中之10%-50%乙酸乙酯)純化，以提供澄清油狀(8-(N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)戊醯胺基)辛基)胺基甲酸第三丁基酯(0.210 g，0.229 mmol，48.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.53 min。MS (ES)：C 53H 95N 3O 5S 2之 m/z= 919.93 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.23-5.48 (m，2H)，4.38-4.67 (m，1H)，2.99-3.45 (br. m，8H)，2.56-2.76 (m，3H)，2.22-2.41 (m，4H)，0.93-2.08 (br. m，44H)，1.44 (s，9H)，1.43 (s，9H)，1.00 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 3 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(3- 胺基丙基 )-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 戊醯胺二鹽酸鹽
向(8-(N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)戊醯胺基)辛基)胺基甲酸第三丁基酯(0.208 g，0.226 mmol)於異丙醇(3.0 mL)中之混合物中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.32 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在24 h，用甲醇(3 mL)稀釋反應混合物且過濾，用甲醇沖洗。濃縮濾液，且然後將殘餘物與19:1乙腈/乙醇(2 × 3 mL)一起研磨。將殘餘物溶解於甲醇中且然後濃縮，以提供白色泡沫狀N-(8-胺基辛基)-N-(3-胺基丙基)-5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)戊醯胺二鹽酸鹽(0.111 g，0.140 mmol，62.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.28 min。MS (ES)：C 43H 79N 3OS 2之 m/z= 359.81 [M + 2H] 2+。
1H NMR (300 MHz，DMSO， 報告為在光譜中可見)：δ 7.67-8.29 (m，8.78H)，5.25-5.43 (m，1H)，3.14-3.43 (m，7.91H)，2.58-2.86 (m，10.97H)，2.17-2.39 (m，5.35H)，0.79-2.07 (br m，84.51H)，0.61-0.70 (m，3.34H)。 AN. 化合物 SA111 (3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.33 g，0.77 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.32 mL，2.30 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.44 g，0.77 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，且用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-70% (70:25:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.41 g，0.48 mmol，62.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.76 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.08 (m，1H)，4.67 (br. m，1H)，4.19 (br. m，2H)，3.42 (m，2H)，3.13 (s，3H)，2.90 (br. m，4H)，2.29 (m，4H)，2.05 (m，4H)，1.69 (m，6H)，1.35 (br. m，14H)，1.14 (br. s，17H)，0.99 (br. m，6H)，0.86 (d，9H， J= 6 Hz)，0.73 (s，5H)，0.64 (d，5H， J= 6 Hz)，0.55 (q，8H， J= 6 Hz)，0.38 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.41 g，0.48 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(7 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.95 mL，4.75 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.30 g，0.36 mmol，74.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.50 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 672.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.41 (m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.48 (br. m，2H)，3.33 (s，7H)，3.17 (m，3H)，2.39 (d，2H， J= 3 Hz)，1.92 (br. m，8H)，1.73 (br. m，10H)，1.37 (br. m，9H)，1.17 (d，4H， J= 6 Hz)，1.07 (s，5H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，8H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AO. 化合物 SA113 ： (4- 胺基丁 -2- 基 )(4-((4- 胺基丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁 -2- 基 )(4-((4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.19 g，0.43 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.18 mL，1.31 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.25 g，0.44 mmol)。將溶液加熱至90℃且進行48 h。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-80% (70:25:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.18 mmol，41.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.50 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.34 (br. m，2H)，4.48 (br. m，1H)，4.17 (br. m，1H)，3.15 (br. m，6H)，2.48 (br. m，7H)，1.95 (br. m，7H)，1.51 (br. m，15H)，1.39 (s，25H)，1.11 (br. m，15H)，1.04 (d，5H， J= 6 Hz)，0.98 (s，6H)，0.89 (d，6H， J= 6 Hz)，0.78 (q，10H， J= 6 Hz)，0.64 (s，3H)。 步驟 2 ： (4- 胺基丁 -2- 基 )(4-((4- 胺基丁 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.18 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.36 mL，1.80 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(4-胺基丁-2-基)(4-((4-胺基丁-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.11 g，0.13 mmol，72.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.69 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 673.2。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.43 (m，1H)，4.47 (br. m，1H)，4.12 (m，1H)，3.43 (br. m，1H)，3.33 (s，4H)，3.24 (br. m，2H)，3.13 (m，5H)，2.91 (br. m，2H)，2.41 (d，2H， J= 3 Hz)，1.99 (br. m，10H)，1.76 (br. m，12H)，1.43 (d，6H， J= 6 Hz)，1.31 (d，6H， J= 6 Hz)，1.18 (br. m，6H)，1.08 (s，6H)，0.99 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (q，9H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 AP. 化合物 SA114 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.30 g，0.65 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.32 mL，2.30 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.38 g，0.65 mmol)，且將溶液加熱至90 ℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-70% (70:25:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.36 g，0.40 mmol，60.5%)。UPLC/ELSD：RT = 2.86 min。MS (ES)：C 54H 98N 4O 6之 m/z(MH +) 900.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.63 (m，1H)，5.09 (m，1H)，5.01 (s，1H)，4.22 (br. m，2H)，2.93 (br. m，4H)，2.40 (t，2H)，2.32 (t，2H)，2.05 (br. m，2H)，1.59 (br. m，7H)，1.26 (br. m，13H)，1.14 (s，20H)，1.02 (d，16H， J= 9 Hz)，0.84 (br. m，9H)，0.73 (s，6H)，0.65 (d，6H， J= 6 Hz)，0.56 (q，10H， J= 6 Hz)，0.39 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.36 g，0.40 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(7 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.79 mL，3.96 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.24 g，0.27 mmol，69.3%)。UPLC/ELSD：RT = 1.50 min。MS (ES)：C 44H 85Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 700.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.44 (br. m，1H)，3.94 (m，1H)，3.48 (br. m，2H)，3.33 (br. m，8H)，3.15 (m，4H)，2.40 (d，2H， J= 3 Hz)，2.12 (br. m，10H)，1.74 (br. m，12H)，1.42 (d，16H， J= 6 Hz)，1.18 (d，11H， J= 6 Hz)，1.08 (s，6H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.87 (q，9H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 AQ. 化合物 SA116 ： (3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二氟丙基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(2,2-二氟丙烷-3,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.37 g，0.78 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.33 mL，2.33 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.45 g，0.78 mmol)。將溶液加熱至90℃且進行48 h。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-80% (70:25:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.05 g，0.06 mmol，7.3%)。UPLC/ELSD：RT = 2.77 min。MS (ES)：C50H86F4N4O6之 m/z (MH+) 916.3。1H NMR (300 MHz，CDCl3) δ：ppm 5.61 (br. m，1H)，5.41 (br. m，1H)，5.00 (br. m，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.65 (br. m，4H)，3.33 (br. m，2H)，2.97 (t，2H)，2.69 (t，1H)，2.36 (br. m，2H)，1.87 (br. m，4H)，1.59 (br. m，7H)，1.46 (s，17H)，1.14 (br. m，14H)，1.04 (s，5H)，0.95 (d，4H，J = 6 Hz)，0.86 (q，8H，J = 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 )(4-((3- 胺基 -2,2- 二氟丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.05 g，0.06 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.11 mL，0.57 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(10 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基-2,2-二氟丙基)(4-((3-胺基-2,2-二氟丙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.04 g，0.04 mmol，77.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.63 min。MS (ES)：C 40H 73Cl 3F 4N 4O 2之 m/z(MH +) 716.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.32 (m，1H)，4.38 (br. m，1H)，3.81 (br. m，6H)，3.33 (br. m，4H)，3.22 (s，5H)，3.08 (br. m，2H)，2.28 (d，2H， J= 3 Hz)，1.93 (br. m，5H)，1.54 (br. m，9H)，1.26 (br. m，6H)，1.06 (d，6H， J= 6 Hz)，0.97 (s，5H)，0.87 (d，4H， J= 6 Hz)，0.77 (q，7H， J= 6 Hz)，0.63 (s，3H)。 AR. 化合物 SA117 ： 5-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-5- 側氧基戊酸
向麥固醇(2.50 g，5.71 mmol)於氮下攪拌之丙酮(30 mL)中之溶液中添加戊二酸酐(1.17 g，10.28 mmol)及三乙胺(1.43 mL，10.28 mmol)。將反應混合物在56℃下回流，自白色漿液變成無色澄清溶液，且在回流下進行3天。然後將溶液冷卻至室溫，在真空下濃縮，且吸收於150 mL二氯甲烷中。然後將此用0.5 M HCl (1×100 mL)、飽和氯化銨水溶液(1×100 mL)及水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成白色固體。將固體吸收於二氯甲烷中且在二氧化矽上用己烷中之0-80%乙酸乙酯梯度純化，以獲得白色固體狀5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(2.33 g，4.40 mmol，77.1%)。UPLC/ELSD：RT：3.30 min。MS (ES)：C 34H 56O 4之 m/z(MH +) 529.8。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.38 (m，1H)，3.53 (m，1H)，2.31 (br. m，3H)，2.07 (br. m，3H)，1.98 (br. m，3H)，1.50 (br. m，7H)，1.26 (br. m，12H)，1.03 (s，5H)，0.93 (d，6H， J= 6 Hz)，0.85 (q，10H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(1.50 g，2,81 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (25 mL)中之溶液中添加(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(1.41 g，2.81 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04 g，0.28 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(1.09 g，5.62 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(1.49 mL，8.42 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行48 h。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-80% (70:25:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.41 g，0.40 mmol，14.3%)。UPLC/ELSD：RT：3.29 min。MS (ES)：C 49H 104N 4O 9之 m/z(MH +) 1014.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.41 (m，2H)，4.52 (br. m，1H)，4.14 (m，1H)，3.16 (br. m，13H)，2.29 (br. m，7H)，1.75 (br. m，21H)，1.35 (d，33H， J= 6 Hz)，1.09 (br. m，12H)，0.93 (s，7H)，0.85 (d，5H， J= 6 Hz)，0.76 (q，9H， J= 6 Hz)，0.59 (s，3H)。 步驟 3 ： 5-((3- 胺基丙基 )(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.41 g，0.40 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，0.80 mL，4.01 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(15 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((3-胺基丙基)(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.24 g，0.27 mmol，66.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.64 min。MS (ES)：C 44H 83Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 714.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.40 (m，1H)，4.56 (br. m，1H)，3.95 (m，1H)，3.52 (br. m，3H)，3.33 (s，3H)，3.15 (br. m，6H)，2.42 (br. m，5H)，1.91 (br. m，10H)，1.54 (br. m，7H)，1.32 (br. m，7H)，1.17 (d，4H， J= 6 Hz)，1.06 (s，4H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.88 (q，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AS. 化合物 SA119 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽 步驟 1 ： 2- 氯乙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向麥固醇(2.00 g，2.57 mmol)於無水二氯乙烷(22.84 mL)中之溶液中添加DBU (2.05 mL，13.70 mmol)。將反應物冷卻至0℃，且將氯乙醯氯(0.73 mL，9.13 mmol)於5 mL二氯乙烷中之溶液逐滴添加至反應混合物中，使得自澄清無色溶液變成渾濁深棕色混合物。將混合物逐步升溫至室溫且攪拌過夜。第二天早上，TLC表明反應進行不完全，因此將混合物再冷卻至0℃且再添加0.50 mL DBU及0.20 mL氯乙醯氯。將混合物升溫至室溫，且在2小時後藉由TLC完成反應。將混合物再冷卻至0℃，且添加30 mL水。升溫至室溫後，分離水層且用DCM (3×30 mL)洗滌，並將所有有機層合併，經硫酸鈉乾燥，過濾，且濃縮以獲得棕色油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-20% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得白色固體狀2-氯乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.40 g，2.84 mmol，62.2%)。UPLC/ELSD：RT：3.49 min。MS (ES)：C 31H 51ClO 2之 m/z(MH +) 492.2。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.41 (m，1H)，4.70 (br. m，1H)，4.06 (s，2H)，2.40 (d，2H， J= 6 Hz)，1.93 (br. m，5H)，1.52 (br. m，7H)，1.20 (br. m，11H)，1.05 (s，6H)， 0.96 (d，5H， J= 6 Hz)，0.85 (q，9H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將2-氯乙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.51 g，1.04 mmol)及(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)丁基)胺基甲酸第三丁基酯(0.71 g，1.41 mmol)合併於瓶中，且用三個真空及氮循環吹掃。然後，將其吸收於無水THF (10.42 mL)中，且添加三乙胺(0.29 mL，2.09 mmol)。將混合物在氮下攪拌，加熱至65℃，且攪拌48 h。然後，將混合物冷卻至室溫且用乙酸乙酯(30 mL)及飽和碳酸氫鈉水溶液(30 mL)稀釋。分離水層且用EtOAc (3×30 mL)萃取。合併所有有機層，用鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成黃色油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-70% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.47 g，0.49 mmol，46.8%)。UPLC/ELSD：RT：2.90 min。MS (ES)：C 56H 100N 4O 8之 m/z(MH +) 958.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.39 (m，1H)，4.64 (br. m，1H)，4.14 (m，1H)，3.26 (br. m，9H)，2.60 (m，4H)，2.35 (d，2H， J= 6 Hz)，2.05 (br. m，6H)，1.65 (br. m，8H)，1.47 (br. s，30H)，1.20 (br. m，11H)，1.03 (s，5H)， 0.95 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，8H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 3 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.47 g，0.49 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(7 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5N於異丙醇中，1.17 mL，5.85 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將溶液冷卻至室溫且將無水乙腈(15 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀N-(3-胺基丙基)-N-(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯四鹽酸鹽(0.36 g，0.41 mmol，83.5%)。UPLC/ELSD：RT = 1.71 min。MS (ES)：C 41H 80Cl 4N 4O 2之 m/z(MH +) 658.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.73 (br. m，2H)，4.30 (br. m，2H)，3.93 (m，1H)，3.32 (br. m，6H)，3.10 (br. m，8H)，2.43 (br. s，2H)，2.17 (br. m，4H)，2.03 (br. m，10H)，1.53 (br. m，8H)，1.31 (br. m，9H)，1.15 (d，6H， J= 6 Hz)，1.05 (s，6H)，0.95 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，9H， J= 6 Hz)，0.72 (s，3H)。 AT. 化合物 SA120 ： (4- 胺基丁基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將β-麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.200 g，0.345 mmol)、N-[3-({4-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.155 g，0.448 mmol)及三乙胺(0.15 mL，1.1 mmol)合併於甲苯(3.5 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在21 h，將反應混合物冷卻至rt，用二氯甲烷(20 mL)稀釋，且用5% NaHCO 3水溶液(3 × 10 mL)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-50%乙酸乙酯)純化粗材料，以提供白色泡沫狀(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.210 g，0.267 mmol，77.4%)。UPLC/ELSD：RT = 3.37 min。MS (ES)：C 47H 83N 3O 6之 m/z= 787.67 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.10-5.44 (m，2H)，4.42-4.89 (m，2H)，3.01-3.40 (br. m，8H)，2.22-2.42 (m，2H)，1.76-2.09 (m，5H)，0.88-1.75 (br. m，28H)，1.44 (s，18H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.78-0.88 (m，9H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (4- 胺基丁基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(4-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.203 g，0.258 mmol)於異丙醇(3.0 mL)中之溶液中添加異丙醇中之5-6 N HCl (0.37 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在24 h添加乙腈(9 mL)，且將反應混合物攪拌5 min。此後，藉由真空過濾收集固體，用3:1乙腈/異丙醇沖洗，以提供白色固體狀(4-胺基丁基)(3-胺基丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.151 g，0.218 mmol，84.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.93 min。MS (ES)：C 37H 67N 3O 2之 m/z= 586.67 [M + H] +； 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.38-5.47 (m，1H)，4.39-4.55 (m，1H)，3.28-3.46 (m，4H)，2.91-3.06 (m，4H)，2.31-2.47 (m，2H)，1.83-2.14 (m，7H)，0.93-1.79 (br. m，26H)，1.08 (s，3H)，0.98 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.82-0.93 (m，9H)，0.75 (s，3H)。 AU. 化合物 SA118 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 丙胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽 步驟 1 ： 2- 氯丙酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向β-麥固醇(1.25 g，2.85 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯(1.28 mL，8.56 mmol)。將反應物冷卻至0℃，且在20分鐘內逐滴添加2-氯丙醯氯(0.55 mL，5.71 mmol)於5 mL無水DCM中之溶液，使得溶液自澄清無色混合物變成渾濁深棕色混合物。將反應混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。第二天早上，經由薄層層析(7:3己烷/乙酸乙酯，PMA染色)顯示反應不完全，因此將反應混合物再冷卻至0℃，且再添加0.50 mL 1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯。將反應物升溫至室溫。1小時後，藉由TLC顯示反應完全。將反應混合物冷卻至0℃且用20 mL水淬滅。將混合物升溫至室溫後，分離各層，且用DCM (3×30 mL)萃取水層。合併所有有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成深棕色油狀物。將油狀物吸收並在二氧化矽上在己烷中用0-20%乙酸乙酯梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得白色固體狀2-氯丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.12g，2.22 mmol，77.7%)。UPLC/ELSD：RT = 3.39 min。MS (ES)：C 32H 53ClO 2之 m/z(MH +) 506.2。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.44 (m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.95 (m，1H)，3.33 (br. m，5H)，3.11 (br. m，8H)，2.45 (br. m，7H)，1.99 (br. m，7H)，1.68 (br. m，11H)，1.37 (br. m，9H)，1.15 (d，8H， J= 6 Hz)，1.08 (s，6H)，0.95 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，9H)，0.74 (s，3H)。 步驟 2 ： 9-( 第三丁氧基羰基 )-14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 )-2,2,15- 三甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十六烷 -16- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向2-氯丙酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.12g，2.22 mmol)及N-{3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基} -N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙基}胺基)丁基]胺基甲酸第三丁基酯(1.34 g，2.66 mmol)於氮下攪拌之無水THF (22 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.62 mL，4.43 mmol)。將混合物加熱至65℃且進行一週，在此期間如藉由LCMS所監測形成極少產物。一週後，將混合物冷卻至室溫並在真空中濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-50%乙酸乙酯梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.09 g，0.10 mmol，4.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.79 min。MS (ES)：C 57H 102N 4O 8之 m/z(MH +) 972.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.31 (m，1H)，4.54 (br. m，1H)，3.39 (m，1H)，3.07 (br. m，7H)，2.52 (br. m，4H)，2.23 (d，2H， J= 6 Hz)，1.77 (br. m，6H)，1.54 (br. m，9H)，1.36 (d，30H， J= 9 Hz)，1.17 (br. m，14H)，0.95 (s，5H)，0.86 (d，5H， J= 6 Hz)，0.75 (q，8H)，0.61 (s，3H)。 步驟 3 ： N-(3- 胺基丙基 )-N-(4-((3- 胺基丙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 丙胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯四鹽酸鹽
向9-(第三丁氧基羰基)-14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)-2,2,15-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十六烷-16-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.09 g，0.10 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.19 mL，0.97 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀N-(3-胺基丙基)-N-(4-((3-胺基丙基)胺基)丁基)丙胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯四鹽酸鹽(0.07 g，0.07 mmol，76.9%)。UPLC/ELSD：RT = 1.61 min。MS (ES)：C 42H 82Cl 4N 4O 2之 m/z(MH +) 672.2。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.44 (m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.95 (m，1H)，3.32 (s，5H)，3.11 (br. m，8H)，2.27 (br. m，7H)，1.99 (br. m，7H)，1.68 (br. m，11H)，1.37 (br. m，9H)，1.15 (d，8H， J= 6 Hz)，1.08 (s，6H)，0.95 (d，5H， J= 6 Hz)，0.86 (q，9H)，0.74 (s，3H)。 AV. 化合物 SA121 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )-2,2,6,6- 四甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-9a,11a-二甲基-1-[(2R)-6-甲基庚-2-基]-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.23 g，0.45 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)丁基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.23 g，0.49 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.01 g，0.09 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.17 g，0.89 mmol)。將所得溶液冷卻至0℃且逐滴添加二異丙基乙胺(0.24 mL，1.34 mmol)。將混合物逐步升溫至室溫且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-80% (70:25:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.09 g，0.09 mmol，20.2%)。UPLC/ELSD：RT：2.74 min。MS (ES)：C 56H 100N 4O 7之 m/z(MH +) 942.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.30 (m，1H)，4.52 (br. m，2H)，3.23 (m，4H)，2.93 (s，1H)，2.61 (t，2H) 2.54 (t，2H)，2.29 (br. m，6H)，1.87 (br. m，10H)，1.62 (m，3H)，1.49 (m，6H)，1.36 (d，24H， J= 3 Hz)，1.23 (br. m，17H)，1.06 (br. m，7H)，0.94 (s，7H)， 0.85 (d，4H， J= 9 Hz)，0.81 (d，7H， J= 9 Hz)，0.61 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.06 g，0.06 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.12 mL，0.61 mmol)。將溶液加熱至42℃且進行過夜。第二天早上，將無水乙腈(15 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理且再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.03 g，0.04 mmol，58.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.62 min。MS (ES)：C 46H 87Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 742.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.57 (br. m，1H)，3.48 (m，4H)，3.33 (br. m，3H)，3.16 (br. m，4H)，2.48 (br. m，5H)，2.14 (m，2H)，1.91 (br. m，10H)，1.54 (br. m，6H)，1.42 (br. m，14H)，1.16 (m，6H)，1.06 (s，5H)，0.97 (d，3H， J= 6 Hz)，0.91 (q，5H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AW. 化合物 SA122 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(5- 胺基戊醯基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將N-(8-胺基辛基)胺基甲酸第三丁基酯(0.994 g，4.07 mmol)、氯乙酸膽固醇基酯(1.000 g，2.159 mmol)、碘化鉀(0.072 g，0.43 mmol)及碳酸鉀(0.597 g，4.32 mmol)合併於密封管中之二噁烷(15 mL)中。藉由LCMS監測反應混合物。在攪拌的同時，將反應混合物用微波在140℃下照射3 h。在攪拌的同時，將反應混合物用微波在150℃下照射3 h，冷卻至rt，且經由矽藻土墊過濾，用EtOAc沖洗。將濾液濃縮且然後吸收於DCM (100 mL)中。將有機物用水洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之30%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供黏性琥珀色油狀(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.993 g，1.48 mmol，68.5%)。UPLC/ELSD：RT = 2.56 min。MS (ES)：C 42H 74N 2O 4之 m/z= 672.06 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.35-5.43 (m，1H)，4.60-4.76 (m，1H)，4.50 (br. s，1H)，3.46 (s，2H)，2.99-3.17 (m，2H)，2.69 (t，2H， J= 7.3 Hz)，2.28-2.40 (m，2H)，1.72-2.08 (m，5H)，0.93-1.71 (br. m，33H)，1.44 (s，9H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )-N-(5-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊醯基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.150 g，0.224 mmol)、5-[(第三丁氧基羰基)胺基]戊酸(0.058 g，0.268 mmol)及DMAP (cat.)合併於DCM (3.0 mL)中。將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃且然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.064 g，0.34 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(3 mL)。用DCM (5 mL)稀釋雙相混合物。分離各層，且用DCM (5 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-60% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-N-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)戊醯基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.185 g，0.213 mmol，95.1%)。UPLC/ELSD：RT = 3.27 min。MS (ES)：C 52H 91N 3O 7之 m/z= 872.43 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.32-5.47 (m，1H)，4.29-4.78 (m，3H)，3.92-4.06 (m，2H)，3.23-3.42 (m，2H)，3.01-3.21 (m，4H)，2.18-2.45 (m，4H)，1.05-2.10 (br. m，60H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.2 Hz)，0.87 (d，6H， J= 6.5 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 3 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-(5- 胺基戊醯基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)-N-(5-((第三丁氧基羰基)胺基)戊醯基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.237 g，0.272 mmol)於iPrOH (3.5 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.39 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加ACN (10.5 mL)。藉由真空過濾收集固體，用3:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀N-(8-胺基辛基)-N-(5-胺基戊醯基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.150 g，0.185 mmol，68.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.94 min。MS (ES)：C 42H 75N 3O 3之 m/z= 336.11 [M + 2H] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO)：δ 7.90 (br. s，6H)，5.31-5.40 (m，1H)，4.39-4.61 (m，1H)，3.89-4.24 (m，2H)，3.18-3.39 (m，2H)，2.65-2.88 (m，4H)，2.13-2.41 (m，4H)，1.70-2.05 (m，5H)，0.91-1.67 (br. m，37H)，0.98 (s，3H)，0.89 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.84 (d，6H， J= 6.5 Hz)，0.65 (s，3H)。 AX. 化合物 SA123 ： N-(6- 胺基己醯基 )-N-(8- 胺基辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己醯基 )-N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.200 g，0.298 mmol)、6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸(0.090 g，0.39 mmol)及DMAP (cat.)合併於DCM (4.0 mL)中。將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.086 g，0.45 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(4 mL)。用DCM (5 mL)稀釋雙相混合物。分離各層，且用DCM (5 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-60% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.260 g，0.294 mmol，98.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.28 min。MS (ES)：C 53H 93N 3O 7之 m/z= 885.39 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.27-5.51 (m，1H)，4.28-4.76 (m，3H)，3.94-4.05 (m，2H)，3.23-3.41 (m，2H)，3.02-3.20 (m，4H)，2.16-2.43 (m，4H)，0.93-2.11 (br. m，65H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.63-0.75 (m，3H)。 步驟 2 ： N-(6- 胺基己醯基 )-N-(8- 胺基辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向N-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.251 g，0.284 mmol)於iPrOH (4.0 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.40 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt，然後添加ACN (12 mL)。藉由真空過濾收集固體，用3:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀N-(6-胺基己醯基)-N-(8-胺基辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.163 g，0.198 mmol，69.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.97 min。MS (ES)：C 43H 77N 3O 3之 m/z= 343.02 [M + 2H] 2+。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.37-5.47 (m，1H)，4.51-4.70 (m，1H)，4.02-4.25 (m，2H)，3.35-3.49 (m，2H)，2.87-3.01 (m，4H)，2.28-2.56 (m，4H)，1.79-2.14 (m，5H)，0.99-1.78 (br. m，39H)，1.07 (s，3H)，0.96 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6.6 Hz)，0.74 (s，3H)。 AY. 化合物 SA124 ： (2-(1- 胺基環丙基 ) 乙基 )(4-((2-(1- 胺基環丙基 ) 乙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (1-(2-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 乙基 ) 環丙基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向N-[1-(2-胺基乙基)環丙基]胺基甲酸第三丁基酯(2.00 g，9.49 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (25 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.64 mL，18.98 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.31 g，10.44 mmol)於25 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後，用10 mL DCM再稀釋混合物，用1M碳酸氫鈉水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)、10%檸檬酸水溶液(2×15 mL)、水(1×15 mL)及鹽水(2×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(1-(2-((2-硝基苯基)磺醯胺基)乙基)環丙基)胺基甲酸第三丁基酯(3.73 g，9.70 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.59 min。MS (ES)：C 16H 23N 3O 6S之 m/z(MH +) 386.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.13 (m，1H)，7.84 (m，1H)，7.73 (m，2H)，6.45 (br. s，1H)，4.89 (br. s，1H)，3.27 (q，2H)，1.73 (t，2H)，1.38 (s，9H)，0.82 (br. m，2H)，0.69 (br. s，2H)。 步驟 2 ： ((( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 乙烷 -2,1- 二基 )) 雙 ( 環丙烷 -1,1- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(1-(2-((2-硝基苯基)磺醯胺基)乙基)環丙基)胺基甲酸第三丁基酯(3.74 g，9.70 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(3.89 g，28.16 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.61 mL，4.62 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.46 mL，3.83 mmol)，且使反應在室溫下進行8 h。然後添加苯硫酚(1.82 mL，17.78 mmol)、碳酸鉀(1.91 g，13.85 mmol)及額外10 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×5 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-60% (70:20:10 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(乙烷-2,1-二基))雙(環丙烷-1,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.47 g，1.04 mmol，22.5%)。UPLC/ELSD：RT = 0.35 min。MS (ES)：C 24H 46N 4O 4之 m/z(MH +) 455.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.03 (m，2H)，2.76 (t，4H)，2.64 (m，4H)，1.72 (m，4H)，1.59 (m，4H)，1.44 (s，17H)，0.80 (m，4H)，0.66 (m，4H)。 步驟 3 ： (2-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環丙基 ) 乙基 )(4-((2-(1-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 環丙基 ) 乙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(乙烷-2,1-二基))雙(環丙烷-1,1-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.47 g，1.03 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.43 mL，3.08 mmol)。然後添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.57 g，1.03 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-70% (70:25:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(2-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)環丙基)乙基)(4-((2-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)環丙基)乙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.35 g，0.41 mmol，39.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.65 min。MS (ES)：C 52H 90N 4O 6之 m/z(MH +) 868.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.80 (m，1H)，5.40 (m，1H)，4.96 (br. m，2H)，4.50 (m，1H)，3.42 (m，2H)，3.15 (m，2H)，2.74 (t，2H)，2.61 (m，2H)，2.34 (m，2H)，2.00 (m，5H)，1.70 (m，4H)，1.56 (br. m，8H)，1.44 (s，18H)，1.15 (br. m，10H)，1.03 (s，5H)，0.94 (d，4H， J= 6 Hz)，0.89 (d，5H， J= 6 Hz)，0.69 (br. m，11H)。 步驟 4 ： (2-(1- 胺基環丙基 ) 乙基 )(4-((2-(1- 胺基環丙基 ) 乙基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(2-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)環丙基)乙基)(4-((2-(1-((第三丁氧基羰基)胺基)環丙基)乙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.35 g，0.41 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.81 mL，4.05 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫，且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(2-(1-胺基環丙基)乙基)(4-((2-(1-胺基環丙基)乙基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.27 g，0.32 mmol，80.2%)。UPLC/ELSD：RT = 1.60 min。MS (ES)：C 42H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 668.7。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.41 (m，1H)，4.46 (br. m，1H)，3.93 (br. m，1H)，3.53 (m，2H)，3.33 (m，6H)，3.11 (m，2H)，2.40 (m，2H)，2.15 (br. m，4H)，1.93 (br. m，5H)，1.55 (br. m，15H)，1.18 (br. m，11H)，1.08 (m，8H)，0.97 (m，7H)，0.89 (m，7H)，0.74 (s，3H)。 AZ. 化合物 SA125 ： 5-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )-2,2,6- 三甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-9a,11a-二甲基-1-[(2R)-6-甲基庚-2-基]-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.30 g，0.59 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (15 mL)中之溶液中添加((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.77 g，1.78 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.15 g，1.19 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.23 g，1.19 mmol)。在室溫下攪拌混合物且進行過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.20 mmol，32.9%)。UPLC/ELSD：RT：2.50 min。MS (ES)：C 54H 96N 4O 7之 m/z(MH +) 914.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.33 (m，1H)，4.82 (br. m，3H)，3.62 (br. m，2H)，3.24 (m，4H)，2.55 (m，4H)，2.31 (m，6H)，1.89 (m，7H)，1.54 (m，12H)，1.39 (s，20H)，1.28 (m，6H)，1.11 (d，12H， J= 6 Hz)，0.97 (s，6H)，0.87 (d，4H， J= 6 Hz)，0.82 (d，6H， J= 6 Hz)，0.63 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.20 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.39 mL，1.95 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(15 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.07 g，0.08 mmol，40.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.60 min。MS (ES)：C 42H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 668.7。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.41 (m，1H)，4.46 (br. m，1H)，3.93 (br. m，1H)，3.53 (m，2H)，3.33 (m，6H)，3.11 (m，2H)，2.40 (m，2H)，2.15 (br. m，4H)，1.93 (br. m，5H)，1.55 (br. m，15H)，1.18 (br. m，11H)，1.08 (m，8H)，0.97 (m，7H)，0.89 (m，7H)，0.74 (s，3H)。 BA. 化合物 SA126 ： (4- 胺基戊 -2- 基 )(4-((4- 胺基戊 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 戊 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(4-胺基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(2.50 g，11.74 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (50 mL)中之溶液中添加三乙胺(3.27 mL，23.48 mmol)。將溶液冷卻至0℃，且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.86 g，12.91 mmol)於50 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)、10%檸檬酸水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(4-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(4.56 g，11.77 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.78 min。MS (ES)：C 16H 25N 3O 6S之 m/z(MH +) 388.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.10 (m，1H)，7.79 (m，1H)，7.66 (m，2H)，5.31 (br. s，1H)，4.29 (br. s，1H)，3.59 (m，2H)，1.64 (m，2H)，1.38 (s，9H)，1.05 (t，6H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 戊烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(4-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(4.56 g，11.77 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(4.72 g，34.18 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.74 mL，5.60 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.55 mL，4.65 mmol)且使反應在室溫下進行8 h。然後，添加苯硫酚(2.21 mL，21.57 mmol)、碳酸鉀(2.32 g，16.81 mmol)及額外20 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(戊烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(2.07 g，4.51 mmol，80.5%)。UPLC/ELSD：RT = 0.27 min。MS (ES)：C 24H 50N 4O 4之 m/z(MH +) 459.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.31 (m，2H)，3.77 (m，2H)，2.75 (m，4H)，2.51 (m，2H)，1.56 (m，7H)，1.45 (s，20H)，1.17 (m，12H)。 步驟 3 ： (4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊 -2- 基 )(4-((4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(戊烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.83 g，1.80 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.76 mL，5.40 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.99 g，1.80 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，且用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.70 g，0.80 mmol，44.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.74 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.26 (m，1H)，4.61 (m，1H)，4.41 (br. m，1H)，3.69 (br. m，4H)，2.97 (m，2H)，2.58 (m，2H)，2.24 (br. m，4H)，1.89 (m，6H)，1.44 (m，11H)，1.33 (s，20H)，1.24 (br. m，5H)，1.04 (m，19H)，0.92 (s，5H)，0.83 (d，4H， J= 6 Hz)，0.77 (d，6H， J= 6 Hz)，0.58 (s，3H)。 步驟 4 ： (4- 胺基戊 -2- 基 )(4-((4- 胺基戊 -2- 基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊-2-基)(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)戊-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.70 g，0.80 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.60 mL，7.99 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(4-胺基戊-2-基)(4-((4-胺基戊-2-基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.46 g，0.57 mmol，70.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.96 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 672.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.47 (br. m，1H)，4.28 (m，1H)，3.53 (br. m，2H)，3.53 (m，2H)，3.33 (s，2H)，3.15 (m，4H)，2.40 (m，2H)，1.93 (br. m，18H)，1.42 (br. m，12H)，1.28 (br. m，4H)，1.16 (d，8H， J= 6 Hz)，1.08 (m，6H)，0.98 (d，4H， J= 9 Hz)，0.89 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 BB. 化合物 SA127 ： (3- 胺基戊基 )(4-((3- 胺基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (1-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 戊 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向(1-胺基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(2.00 g，9.39 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (50 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.62 mL，18.78 mmol)。將溶液冷卻至0℃且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.29 g，10.33 mmol)於50 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)、10%檸檬酸水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(1-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(3.73 g，9.61 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.81 min。MS (ES)：C 16H 25N 3O 6S之 m/z(MH +) 388.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.12 (m，1H)，7.83 (m，1H)，7.74 (m，2H)，6.26 (br. s，1H)，4.27 (br. s，1H)，3.54 (m，1H)，3.31 (m，1H)，3.03 (m，1H)，1.76 (m，1H)，1.41 (s，9H)，0.87 (t，3H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 戊烷 -1,3- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(1-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(3.73 g，9.61 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(3.86 g，27.93 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.60 mL，4.58 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.45 mL，3.80 mmol)，且使反應在室溫下進行8 h。然後添加苯硫酚(1.80 mL，17.63 mmol)、碳酸鉀(1.90 g，13.73 mmol)及額外20 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(戊烷-1,3-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(1.40 g，3.05 mmol，66.7%)。UPLC/ELSD：RT = 0.34 min。MS (ES)：C 24H 50N 4O 4之 m/z(MH +) 459.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 4.94 (m，2H)，3.29 (m，4H)，2.47 (m，8H)，1.53 (m，2H)，1.36 (m，8H)，1.21 (s，19H)，0.69 (t，6H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(戊烷-1,3-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.58 g，1.27 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.54 mL，3.82 mmol)。然後添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.70 g，1.27 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.67 g，0.77 mmol，60.5%)。UPLC/ELSD：RT = 3.06 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 6之 m/z(MH +) 872.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.24 (m，1H)，4.61 (br. m，3H)，3.43 (br. m，2H)，3.11 (br. m，4H)，2.47 (m，4H)，2.22 (m，2H)，1.87 (br. m，8H)，1.42 (m，13H)，1.32 (s，24H)，1.14 (br. m，13H)，1.04 (m，19H)，0.91 (s，6H)，0.79 (d，9H， J= 6 Hz)，0.76 (d，7H， J= 6 Hz)，0.56 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基戊基 )(4-((3- 胺基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.67 g，0.77 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.54 mL，7.70 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基戊基)(4-((3-胺基戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.52 g，0.65 mmol，84.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.90 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 672.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.31 (m，1H)，4.34 (br. m，1H)，3.81 (m，2H)，3.22 (br. m，6H)，3.01 (m，5H)，2.26 (m，2H)，1.98 (m，2H)，1.94 (s，4H)，1.81 (br. m，5H)，1.63 (br. m，8H)，1.44 (br. m，7H)，1.28 (br. m，5H)，1.06 (d，15H， J= 9 Hz)，0.96 (m，11H)，0.84 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.63 (s，3H)。 BC. 化合物 SA128 ： ((1-( 胺基甲基 ) 環丙基 ) 甲基 )(4-(((1-( 胺基甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： ((1-(((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向((1-(胺基甲基)環丙基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(2.50 g，11.86 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (25 mL)中之溶液中添加三乙胺(3.31 mL，23.72 mmol)。將溶液冷卻至0℃且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.89 g，13.04 mmol)於50 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時，且然後在室溫下再進行3小時。然後，用10 mL DCM再稀釋混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)、10%檸檬酸水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀((1-(((2-硝基苯基)磺醯胺基)甲基)環丙基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(4.60 g，11.92 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.83 min。MS (ES)：C 16H 23N 3O 6S之 m/z(MH +) 386.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.11 (m，1H)，7.85 (m，1H)，7.75 (m，2H)，6.33 (br. s，1H)，4.82 (br. s，1H)，3.08 (d，2H， J= 6 Hz)，3.02 (d，2H， J= 6 Hz)，1.45 (s，9H)，0.48 (m，4H)。 步驟 2 ： (((( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 ( 亞甲基 )) 雙 ( 環丙烷 -1,1- 二基 )) 雙 ( 亞甲基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向((1-(((2-硝基苯基)磺醯胺基)甲基)環丙基)甲基)胺基甲酸第三丁基酯(4.60 g，11.92 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(4.79 g，34.64 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.75 mL，5.68 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.56 mL，4.71 mmol)，且使反應在室溫下進行8 h。然後添加苯硫酚(2.24 mL，21.86 mmol)、碳酸鉀(2.35 g，17.03 mmol)及額外20 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(亞甲基))雙(環丙烷-1,1-二基))雙(亞甲基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(2.47 g，5.43 mmol，95.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.28 min。MS (ES)：C 24H 46N 4O 4之 m/z(MH +) 455.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.67 (m，2H)，2.87 (d，4H， J= 6 Hz)，2.41 (m，4H)，2.34 (s，4H)，1.36 (m，5H)，1.28 (s，19H)，0.25 (m，4H)，0.17 (m，4H)。 步驟 3 ： ((1-((( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 環丙基 ) 甲基 )(4-(((1-((( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(亞甲基))雙(環丙烷-1,1-二基))雙(亞甲基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.92 g，2.02 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(20 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.85 mL，6.04 mmol)。然後添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(1.11 g，2.02 mmol)。將溶液加熱至90℃且進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，且用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((1-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)環丙基)甲基)(4-(((1-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)環丙基)甲基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.83 g，0.95 mmol，47.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.05 min。MS (ES)：C 52H 90N 4O 6之 m/z(MH +) 868.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.77 (br. m，1H)，5.29 (m，1H)，4.44 (br. m，1H)，3.13 (br. m，4H)，2.97 (m，2H)，2.85 (m，2H)，2.50 (t，2H)，2.42 (s，2H)，2.26 (br. m，2H)，1.85 (br. m，5H)，1.47 (m，9H)，1.34 (s，19H)，1.05 (br. m，11H)，0.94 (s，6H)，0.84 (d，4H， J= 6 Hz)，0.78 (d，6H， J= 6 Hz)，0.59 (s，3H)，0.50 (m，2H)，0.35 (m，2H)，0.26 (m，4H)。 步驟 4 ： ((1-( 胺基甲基 ) 環丙基 ) 甲基 )(4-(((1-( 胺基甲基 ) 環丙基 ) 甲基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向((1-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)環丙基)甲基)(4-(((1-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)環丙基)甲基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.83 g，0.95 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.91 mL，9.54 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫，且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀((1-(胺基甲基)環丙基)甲基)(4-(((1-(胺基甲基)環丙基)甲基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.67 g，0.83 mmol，86.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.61 min。MS (ES)：C 42H 77Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 668.1。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.44 (m，1H)，4.54 (br. m，1H)，3.86 (m，2H)，3.33 (br. m，6H)，3.15 (m，6H)，2.81 (m，2H)，2.44 (m，2H)，1.73 (br. m，11H)，1.55 (br. m，6H)，1.39 (m，5H)，1.18 (d，17H， J= 6 Hz)，1.09 (s，6H)，0.98 (d，7H， J= 9 Hz)，0.90 (d，9H， J= 6 Hz)，0.74 (br. m，7H)。 BD. 化合物 SA129 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-((S)-2,5- 二胺基戊醯基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： N-((S)-2,5- 雙 (( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 戊醯基 )-N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.250 g，0.373 mmol)及(2S)-2,5-雙[(第三丁氧基羰基)胺基]戊酸(0.161 g，0.484 mmol)於DCM (3.75 mL)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.107 g，0.559 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(3.0 mL)。分離各層，且用DCM (10 mL)萃取水層。將合併之有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-40% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-((S)-2,5-雙((第三丁氧基羰基)胺基)戊醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.380 g，定量)。UPLC/ELSD：RT = 4.03 min。MS (ES)：C 57H 100N 4O 9之 m/z= 987.54 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.20-5.43 (m，2H)，4.24-4.80 (m，4H)，4.29 (d，1H， J= 17.0 Hz)，3.72 (d，1H， J= 17.2 Hz)，3.02-3.53 (m，6H)，2.20-2.42 (m，2H)，0.93-2.18 (br. m，69H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.63-0.76 (m，3H)。 步驟 2 ： N-(8- 胺基辛基 )-N-((S)-2,5- 二胺基戊醯基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向N-((S)-2,5-雙((第三丁氧基羰基)胺基)戊醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.356 g，0.347 mmol)於iPrOH (3.5 mL)中之攪拌溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.50 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，再添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.10 mL)。在22 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加ACN (7 mL)。在冰浴中冷卻懸浮液，且然後藉由真空過濾收集固體，用2:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀N-(8-胺基辛基)-N-((S)-2,5-二胺基戊醯基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.182 g，0.203 mmol，58.6%)。UPLC/ELSD：RT = 1.94 min。MS (ES)：C 42H 76N 4O 3之 m/z= 343.40 [M + 2H] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO)：δ 7.85-8.59 (m，9H)，5.24-5.55 (m，1H)，4.25-4.68 (m，2H)，4.17 (d，1H， J= 17.0 Hz)，3.95 (d，1H， J= 17.2 Hz)，3.12-3.61 (m，2H)，2.65-2.85 (m，4H)，2.20-2.42 (m，2H)，0.92-2.03 (br. m，42H)，0.98 (s，3H)，0.89 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.84 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.84 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.65 (s，3H)。 BE. 化合物 SA130 ： N-(L- 離胺醯基 )-N-(8- 胺基辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： N-(N2,N6- 雙 ( 第三丁氧基羰基 )-L- 離胺醯基 )-N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.235 g，0.350 mmol)及(2S)-2,6-雙[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸(0.121 g，0.350 mmol)於DCM (3.5 mL)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃。然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.101 g，0.525 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，將反應混合物冷卻至0℃，且然後再添加(2S)-2,6-雙[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸(23 mg)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(20 mg)。在rt下攪拌反應混合物。在21 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(3.5 mL)。分離各層，且用DCM (10 mL)萃取水層。將合併之有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之10%-40% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-(N2,N6-雙(第三丁氧基羰基)-L-離胺醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.323 g，0.323 mmol，92.3%)。UPLC/ELSD：RT = 4.09 min。MS (ES)：C 58H 102N 4O 9之 m/z= 1001.35 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.21-5.46 (m，2H)，4.26-4.79 (m，4H)，4.30 (d，1H， J= 17.1 Hz)，3.71 (d，1H， J= 17.0 Hz)，3.01-3.52 (m，6H)，2.22-2.43 (m，2H)，0.93-2.14 (br. m，71H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，6H， J= 6.6 Hz)，0.64-0.75 (m，3H)。 步驟 2 ： N-(L- 離胺醯基 )-N-(8- 胺基辛基 ) 甘胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向N-(N2,N6-雙(第三丁氧基羰基)-L-離胺醯基)-N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.303 g，0.303 mmol)於iPrOH (3.0 mL)中之攪拌溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.45 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，再添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.10 mL)。在22 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加ACN (6 mL)。將懸浮液在冰浴中冷卻至0℃，且然後藉由真空過濾收集固體，用2:1 ACN/iPrOH沖洗，以提供白色固體狀N-(L-離胺醯基)-N-(8-胺基辛基)甘胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.163 g，0.173 mmol，57.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.96 min。MS (ES)：C 43H 78N 4O 3之 m/z= 350.43 [M + 2H] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO)：δ 7.89-8.51 (m，9H)，5.22-5.41 (m，1H)，4.23-4.61 (m，2H)，4.19 (d，1H， J= 17.0 Hz)，3.93 (d，1H， J= 17.1 Hz)，3.13-3.51 (m，2H)，2.64-2.85 (m，4H)，2.22-2.36 (m，2H)，0.92-2.04 (br. m，44H)，0.98 (s，3H)，0.90 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.84 (d，6H， J= 6.6 Hz)，0.65 (s，3H)。 BF. 化合物 SA131 ： (6- 胺基己基 )-L- 離胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： N6-( 第三丁氧基羰基 )-N2-((2- 硝基苯基 ) 磺醯基 )-L- 離胺酸甲酯
將(2S)-2-胺基-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己酸甲酯鹽酸鹽(1.000 g，3.369 mmol)、DMAP (cat.)及三乙胺(1.40 mL，9.96 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物冷卻至0℃，且然後逐滴添加DCM (5 mL)中之2-硝基苯磺醯氯(0.896 g，4.04 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在1 h，將反應混合物冷卻至0℃，且然後添加水(20 mL)。分離各層，且用5% NaHCO 3水溶液洗滌有機層，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之30%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供黏性黃色油狀N6-(第三丁氧基羰基)-N2-((2-硝基苯基)磺醯基)-L-離胺酸甲酯(1.44 g，3.23 mmol，95.9%)。UPLC/ELSD：RT = 0.78 min。MS (ES)：C 18H 27N 3O 8S之 m/z= 390.30 [(M + H) - ((CH 3) 2C=CH 2)] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.02-8.10 (m，1H)，7.89-7.97 (m，1H)，7.68-7.78 (m，2H)，6.08 (d，1H， J= 9.1 Hz)，4.53 (br. s，1H)，4.16 (td，1H， J= 8.5，5.0 Hz)，3.47 (s，3H)，3.09 (td，2H， J= 6.1，6.1 Hz)，1.33-1.94 (m，6H)，1.44 (s，9H)。 步驟 2 ： N6-( 第三丁氧基羰基 )-N2-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )-N2-((2- 硝基苯基 ) 磺醯基 )-L- 離胺酸甲酯
將(2S)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(2-硝基苯磺醯胺基)己酸甲酯(0.603 g，1.35 mmol)、N-(6-溴己基)胺基甲酸第三丁基酯(0.504 g，1.80 mmol)、碳酸鉀(0.480 g，3.48 mmol)及碘化鉀(0.046 g，0.28 mmol)合併於DMF (9.0 mL)中且在80℃下攪拌。藉由LCMS監測反應。在18 h，將反應混合物冷卻至rt，過濾，用MTBE (100 mL)稀釋，用水(3×)及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N6-(第三丁氧基羰基)-N2-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-N2-((2-硝基苯基)磺醯基)-L-離胺酸甲酯(0.693 g，1.08 mmol，79.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.53 min。MS (ES)：C 29H 48N 4O 10S之 m/z= 489.29 [(M + H) - 2((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.99-8.09 (m，1H)，7.64-7.75 (m，2H)，7.52-7.61 (m，1H)，4.42-4.73 (m，3H)，3.54 (s，3H)，3.31-3.45 (m，1H)，2.99-3.21 (m，5H)，1.94-2.13 (m，1H)，1.20-1.89 (br. m，13H)，1.44 (s，18H)。 步驟 3 ： N6-( 第三丁氧基羰基 )-N2-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )-N2-((2- 硝基苯基 ) 磺醯基 )-L- 離胺酸
向(2S)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)己酸甲酯(0.690 g，1.07 mmol)於THF (7.0 mL)及MeOH (1.4 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物水溶液(0.90 mL，15 w/v%)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，將反應混合物濃縮以去除揮發性有機物，且然後分配於水(50 mL)與EtOAc (50 mL)之間。用5% K 2CO 3水溶液及0.1 N HCl水溶液洗滌雙相混合物，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供琥珀色油狀(2S)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)己酸(0.578 g，0.916 mmol，85.6%)。UPLC/ELSD：RT = 1.27 min。MS (ES)：C 28H 46N 4O 10S之 m/z= 475.35 [(M + H) - 2((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.03-8.12 (m，1H)，7.63-7.74 (m，2H)，7.53-7.62 (m，1H)，4.48-4.79 (m，3H)，2.94-3.42 (m，6H)，1.92-2.18 (m，1H)，1.20-1.83 (br. m，13H)，1.44 (s，18H)。 步驟 4 ： N6-( 第三丁氧基羰基 )-N2-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )-N2-((2- 硝基苯基 ) 磺醯基 )-L- 離胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(2S)-6-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)己酸(0.560 g，0.888 mmol)、膽固醇(0.378 g，0.977 mmol)及DMAP (cat.)於DCM (8.5 mL)中之混合物冷卻至0℃。然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.238 g，1.24 mmol)。在攪拌的同時，將反應混合物緩慢升溫至rt且藉由LCMS監測。在19 h，將反應混合物冷卻至0℃，且然後添加5% NaHCO 3水溶液(8.5 mL)。一旦反應混合物升溫至rt，便立即分離各層。用DCM (8 mL)萃取水層。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-40% EtOAc)純化粗材料，以提供白色泡沫狀N6-(第三丁氧基羰基)-N2-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-N2-((2-硝基苯基)磺醯基)-L-離胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.562 g，0.562 mmol，63.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.62 min。MS (ES)：C 55H 90N 4O 10S之 m/z= 900.19 [(M + H) - ((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.99-8.10 (m，1H)，7.64-7.74 (m，2H)，7.52-7.60 (m，1H)，5.24-5.36 (m，1H)，4.36-4.81 (m，4H)，3.33-3.51 (m，1H)，2.94-3.24 (m，5H)，1.48 (br. m，60H)，0.93 (s，3H)，0.90 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.66 (s，3H)。 步驟 5 ： N6-( 第三丁氧基羰基 )-N2-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )-L- 離胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向N6-(第三丁氧基羰基)-N2-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-N2-((2-硝基苯基)磺醯基)-L-離胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.540 g，0.540 mmol)及碳酸鉀(0.224 g，1.621 mmol)於DMF (6.5 mL)中之混合物中添加苯硫酚(0.10 mL，0.980 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，LCMS數據與反應完成一致。用DCM (20 mL)稀釋反應混合物，且然後經由Celite®墊過濾。用DCM將濾液稀釋至80 mL，且然後用水(3×)及5% NaHCO 3水溶液洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之40%-80% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N6-(第三丁氧基羰基)-N2-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-L-離胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.400 g，0.491 mmol，90.9%)。UPLC/ELSD：RT = 2.92 min。MS (ES)：C 49H 87N 3O 6之 m/z= 815.18 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.34-5.43 (m，1H)，4.30-4.75 (m，3H)，3.20-3.32 (m，1H)，3.00-3.20 (m，4H)，2.47-2.71 (m，2H)，2.22-2.43 (m，2H)，0.93-2.13 (br. m，58H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 6 ： (6- 胺基己基 )-L- 離胺酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向N6-(第三丁氧基羰基)-N2-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-L-離胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.379 g，0.465 mmol)於iPrOH (5.5 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.93 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加iPrOH (30 mL)。將懸浮液離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，且然後將固體懸浮於MTBE (35 mL)中。將懸浮液離心 (10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，並將固體懸浮於庚烷中且然後濃縮，以提供白色固體狀(6-胺基己基)-L-離胺酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.133 g，0.166 mmol，35.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.85 min。MS (ES)：C 39H 71N 3O 2之 m/z= 328.58 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO)：δ 9.85 (br. s，1H)，9.33 (br. s，1H)，7.71-8.43 (m，6H)，5.26-5.52 (m，1H)，4.50-4.76 (m，1H)，3.87-4.07 (m，1H)，2.67-3.06 (m，6H)，2.25-2.44 (m，2H)，0.92-2.11 (br. m，40H)，0.99 (s，3H)，0.89 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.84 (d，6H， J= 6.5 Hz)，0.65 (s，3H)。 BG. 化合物 SA132 ： (S)-5- 胺基 -2-((6- 胺基己基 ) 胺基 ) 戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (2S)-5-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ]-2-(2- 硝基苯磺醯胺基 ) 戊酸甲酯
將(S)-2-胺基-5-((第三丁氧基羰基)胺基)戊酸甲酯鹽酸鹽(1.000 g，3.537 mmol)及三乙胺(1.50 mL，10.7 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃，且然後逐滴添加DCM (5.0 mL)中之2-硝基苯磺醯氯(0.940 g，4.24 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(20 mL)。分離各層，且將有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之30%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供黏性黃色油狀(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(2-硝基苯磺醯胺基)戊酸甲酯(1.366 g，3.166 mmol，89.5%)。UPLC/ELSD：RT = 0.68 min。MS (ES)：C 17H 25N 3O 8S之 m/z= 376.23 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.03-8.10 (m，1H)，7.88-7.96 (m，1H)，7.68-7.78 (m，2H)，6.14 (d，1H， J= 9.0 Hz)，4.55 (br. s，1H)，4.18 (td，1H， J= 8.4，5.2 Hz)，3.47 (s，3H)，3.14 (dt，2H， J= 6.0，5.7 Hz)，1.82-1.97 (m，1H)，1.55-1.80 (m，3H)，1.44 (s，9H)。 步驟 2 ： (2S)-5-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ]-2-(N-{6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 }-2- 硝基苯磺醯胺基 ) 戊酸甲酯
將(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(2-硝基苯磺醯胺基)戊酸甲酯(0.600 g，1.39 mmol)、N-(6-溴己基)胺基甲酸第三丁基酯(0.506 g，1.81 mmol)、碳酸鉀(0.480 g，3.48 mmol)及碘化鉀(0.046 g，0.28 mmol)合併於DMF (9.0 mL)中。在80℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在2.5 h，將反應混合物冷卻至rt且然後過濾，用MTBE沖洗。將濾液用MTBE稀釋至80 mL，用水(3×)及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之30%-70% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)戊酸甲酯(0.720 g，1.141 mmol，82.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.41 min。MS (ES)：C 28H 46N 4O 10S之 m/z= 475.47 [(M + H) - 2((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 7.99-8.09 (m，1H)，7.64-7.73 (m，2H)，7.53-7.61 (m，1H)，4.42-4.76 (m，3H)，3.54 (s，3H)，3.32-3.45 (m，1H)，2.99-3.23 (m，5H)，1.99-2.16 (m，1H)，1.20-1.91 (br. m，11H)，1.44 (s，18H)。 步驟 3 ： (2S)-5-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ]-2-(N-{6-[( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ] 己基 }-2- 硝基苯磺醯胺基 ) 戊酸
向(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)戊酸甲酯(0.716 g，1.14 mmol)於THF (7.7 mL)及MeOH (1.5 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰單水合物水溶液(0.96 mL，15 w/v%)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19 h，將反應混合物濃縮以去除揮發性有機物，吸收於水(50 mL)中，且用EtOAc (3 × 25 mL)萃取。將合併之有機物用5% K 2CO 3水溶液且然後用5%檸檬酸水溶液洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供琥珀色油狀(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)戊酸(0.619 g，1.00 mmol，88.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.22 min。MS (ES)：C 27H 44N 4O 10S之 m/z= 461.4 [(M + H) - 2((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.02-8.11 (m，1H)，7.62-7.72 (m，2H)，7.54-7.62 (m，1H)，4.47-4.84 (m，3H)，2.98-3.44 (m，6H)，1.94-2.13 (m，1H)，1.20-1.83 (br. m，11H)，1.44 (s，18H)。 步驟 4 ： (S)-5-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2-((N-(6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 )-2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將(2S)-5-[(第三丁氧基羰基)胺基]-2-(N-{6-[(第三丁氧基羰基)胺基]己基}-2-硝基苯磺醯胺基)戊酸(0.520 g，0.843 mmol)、膽固醇(0.359 g，0.927 mmol)及DMAP (cat.)於DCM (8.0 mL)中之混合物冷卻至0℃。然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.226 g，1.18 mmol)。在攪拌的同時，將反應混合物緩慢升溫至rt且藉由LCMS監測。在22 h，將反應混合物冷卻至0℃，且然後添加DMAP (cat.)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(105 mg)。在rt下攪拌反應混合物。在26 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且然後添加水(8 mL)。將雙相混合物升溫至rt且然後分離。將有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-40% EtOAc)純化粗材料，以提供琥珀色泡沫狀(S)-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-((N-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-2-硝基苯基)磺醯胺基)戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.299 g，0.303 mmol，36.0%)。UPLC/ELSD：RT = 3.59 min。MS (ES)：C 54H 88N 4O 10S之 m/z= 829.74 [(M + H) - 2((CH 3) 2C=CH 2) - CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 8.00-8.09 (m，1H)，7.63-7.74 (m，2H)，7.53-7.60 (m，1H)，5.23-5.35 (m，1H)，4.35-4.84 (m，4H)，3.33-3.53 (m，1H)，2.93-3.27 (m，5H)，0.94-2.17 (br. m，58H)，0.92 (s，3H)，0.90 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.66 (s，3H)。 步驟 5 ： (S)-5-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-2-((6-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 己基 ) 胺基 ) 戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(S)-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-((N-(6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)-2-硝基苯基)磺醯胺基)戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.284 g，0.288 mmol)及碳酸鉀(0.119 g，0.865 mmol)於DMF (5.0 mL)中之混合物中添加苯硫酚(0.05 mL，0.49 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在3 h，添加DCM (10 mL),，且經由Celite®墊過濾反應混合物。將濾液用DCM稀釋至80 mL且然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌一次，且用水洗滌三次。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之40%-80% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清黏性油狀(S)-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-((6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基)戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.203 g，0.254 mmol，88.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.92 min。MS (ES)：C 48H 85N 3O 6之 m/z= 801.37 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.34-5.42 (m，1H)，5.03-5.13 (m，1H)，4.45-4.81 (m，2H)，3.50-3.81 (m，1H)，2.82-3.32 (m，6H)，2.22-2.48 (m，2H)，0.94-2.19 (br. m，56H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.4 Hz)，0.87 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 6 ： (S)-5- 胺基 -2-((6- 胺基己基 ) 胺基 ) 戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(S)-5-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-((6-((第三丁氧基羰基)胺基)己基)胺基)戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.197 g，0.246 mmol)於iPrOH (3.0 mL)中之溶液中添加iPrOH中之5-6 N HCl (0.49 mL)。在40℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt，且然後添加ACN (9 mL)。過濾懸浮液，但使粒子通過釉料。濃縮懸浮液，且將殘餘物懸浮於MTBE (30 mL)中。將懸浮液離心(10,000 × g保持30 min)，且然後傾析掉上清液。將固體懸浮於庚烷中，且然後濃縮以提供白色固體狀(S)-5-胺基-2-((6-胺基己基)胺基)戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.147 g，0.170 mmol，69.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.86 min。MS (ES)：C 38H 69N 3O 2之 m/z= 321.42 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO)：δ 9.75 (br. s，1H)，9.40 (br. s，1H)，7.61-8.32 (m，6H)，5.31-5.48 (m，1H)，4.53-4.72 (m，1H)，3.92-4.16 (m，1H)，2.66-3.05 (m，6H)，2.24-2.45 (m，2H)，0.92-2.13 (br. m，38H)，1.00 (s，3H)，0.90 (d，3H， J= 6.3 Hz)，0.84 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.84 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.66 (s，3H)。 BH. 化合物 SA133 ： (3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3- 乙基 -1-((2- 硝基苯基 ) 磺醯胺基 ) 戊 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(1-胺基-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(2.50 g，10.31 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (50 mL)中之溶液中添加三乙胺(2.87 mL，20.62 mmol)。將溶液冷卻至0℃且然後在30分鐘內逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(2.51 g，11.34 mmol)於50 mL無水DCM中之溶液。使反應在0℃下進行1小時且然後在室溫下再進行3小時。然後用10 mL DCM再稀釋混合物，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)、10%檸檬酸水溶液(1×100 mL)、水(1×100 mL)及鹽水(1×100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得白色固體狀(3-乙基-1-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(4.48 g，10.31 mmol，定量)。UPLC/ELSD：RT = 1.27 min。MS (ES)：C 18H 29N 3O 6S之 m/z(MH +) 415.5。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 8.12 (m，1H)，7.85 (m，1H)，7.76 (m，2H)，5.41 (br. s，1H)，4.19 (br. s，1H)，3.14 (m，2H)，1.92 (t，2H)，1.63 (m，2H)，1.45 (m，2H)，1.40 (s，9H)，0.78 (t，6H)。 步驟 2 ： (( 丁烷 -1,4- 二基雙 ( 氮烷二基 )) 雙 (3- 乙基戊烷 -1,3- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向(3-乙基-1-((2-硝基苯基)磺醯胺基)戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(4.48 g，10.78 mmol)於氮下攪拌之無水DMF (50 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(4.33 g，31.32 mmol)及1,4-二碘丁烷(0.68 mL，5.13 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，添加苄基溴(0.51 mL，4.26 mmol)且使反應在室溫下進行8 h。然後，添加苯硫酚(2.02 mL，19.77 mmol)、碳酸鉀(2.13 g，15.40 mmol)及額外20 mL無水DMF，且使反應再進行過夜。第二天早上，經由多輪離心並用DMF沖洗自上清液去除鹽。將合併之上清液 在真空中濃縮成油狀物，將其吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物再吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(3-乙基戊烷-1,3-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(2.14 g，4.17 mmol，81.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.52 min。MS (ES)：C 28H 58N 4O 4之 m/z(MH +) 515.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.20 (m，2H)，2.45 (br. m，8H)，1.48 (m，13H)，1.35 (s，4H)，1.23 (s，19H)，0.62 (t，12H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 乙基戊基 )(4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(3-乙基戊烷-1,3-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.50 g，0.97 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(10 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.41 mL，2.91 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.54 g，0.97 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天早上，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在DCM中用0-30% (50:45:5 DCM/MeOH/濃氫氧化銨水溶液)梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.55 g，0.59 mmol，60.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.06 min。MS (ES)：C 56H 102N 4O 6之 m/z(MH +) 928.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.34 (br. m，1H)，5.02 (m，1H)，4.46 (br. m，3H)，3.18 (br. m，4H)，2.56 (m，4H)，2.28 (m，2H)，1.83 (m，6H)，1.58 (br. m，16H)，1.39 (s，18H)，1.10 (br. m，11H)，0.97 (s，5H)，0.88 (d，3H， J= 6 Hz)，0.79 (m，18H)，0.64 (s，4H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.55 g，0.59 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(10 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，1.18 mL，5.90 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀(3-胺基-3-乙基戊基)(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.34 g，0.40 mmol，68.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.08 min。MS (ES)：C 46H 89Cl 3N 4O 2之 m/z(MH +) 728.2。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.45 (m，1H)，4.48 (br. m，1H)，3.94 (m，1H)，3.37 (br. m，3H)，3.14 (m，4H)，2.40 (m，2H)，2.11 (m，3H)，1.93 (br. m，6H)，1.74 (br. m，13H)，1.55 (m，12H)，1.18 (d，14H， J= 6 Hz)，1.04 (br. m，17H)，0.98 (d，4H， J= 6 Hz)，0.91 (d，6H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 BI. 化合物 SA134 ： 5-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-9a,11a-二甲基-1-[(2R)-6-甲基庚-2-基]-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.24 g，0.48 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.19 g，0.48 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.12 g，0.95 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.18 g，0.95 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液且進行過夜。然後用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀5-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.32 g，0.37 mmol，77.0%)。UPLC/ELSD：RT：3.52 min。MS (ES)：C 53H 93N 3O 7之 m/z(MH +) 885.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.17 (m，1H)，5.02 (m，1H)，4.43 (br. m，1H)，4.29 (br. m，1H)，3.06 (m，2H)，2.95 (m，1H)，2.86 (m，2H) 2.73 (m，4H)，2.04 (br. m，6H)，1.62 (br. m，4H)，1.51 (m，4H)，1.20 (br. m，12H)，1.10 (s，19H)，0.97 (br. m，13H)，0.81 (br. m，7H)，0.68 (s，6H)， 0.60 (d，4H， J= 6 Hz)，0.54 (d，6H， J= 6 Hz)，0.35 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向5-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.32 g，0.37 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.73 mL，3.66 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.16 g，0.19 mmol，53.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.99 min。MS (ES)：C 43H 79Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 684.9。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.48 (t，2H)，3.36 (m，2H)，2.94 (m，4H)，2.49 (t，2H)，2.40 (m，4H)，1.92 (br. m，9H)，1.63 (br. m，11H)，1.41 (br. m，12H)，1.16 (m，8H)，1.07 (s，5H)，0.97 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 BJ. 化合物 SA135 ： 5-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 辛基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基]-9a,11a-二甲基-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.24 g，0.45 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加N-[3-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]辛基}胺基)丙基]胺基甲酸第三丁基酯(0.18 g，0.45 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.11 g，0.90 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.17 g，0.90 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液且進行過夜。然後用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀5-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.27 g，0.30 mmol，67.0%)。UPLC/ELSD：RT：3.60 min。MS (ES)：C 55H 97N 3O 7之 m/z(MH +) 913.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.03 (m，1H)，4.44 (m，1H)，4.25 (br. m，1H)，3.06 (br. m，2H)，2.95 (m，1H)，2.86 (m，2H) 2.74 (m，4H)，2.04 (br. m，6H)，1.62 (br. m，4H)，1.50 (m，4H)，1.32 (br. m，11H)，1.10 (s，19H)，0.97 (br. m，12H)，0.79 (br. m，7H)，0.68 (s，5H)， 0.60 (d，5H， J= 6 Hz)，0.51 (q，9H)，0.35 (s，4H)。 步驟 2 ： 5-((8- 胺基辛基 )(3- 胺基丙基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向5-((8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛基)(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.27 g，0.30 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.59 mL，2.96 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((8-胺基辛基)(3-胺基丙基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.12 g，0.12 mmol，44.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.23 min。MS (ES)：C 45H 83Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 712.8。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.40 (m，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.48 (t，2H)，3.33 (m，1H)，2.91 (m，3H)，2.49 (t，2H)，2.40 (m，4H)，1.91 (br. m，7H)，1.66 (br. m，11H)，1.41 (br. m，15H)，1.18 (d，6H， J= 6 Hz)，1.07 (s，6H)，0.99 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 BK. 化合物 SA136 ： 5-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )-2,2,6- 三甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基]-9a,11a-二甲基-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.33 g，0.61 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁基]胺基}丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.79 g，1.83 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.15 g，1.22 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.24 g，1.22 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液且進行過夜。然後用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.12 g，0.12 mmol，20.2%)。UPLC/ELSD：RT：2.81 min。MS (ES)：C 56H 100N 4O 7之 m/z(MH +) 942.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.33 (m，1H)，4.85 (m，3H)，3.70 (br. m，1H)，3.23 (br. m，5H)，2.56 (br. m，4H)，2.32 (m，7H) 1.91 (m，8H)，1.56 (br. m，12H)，1.40 (s，21H)，1.21 (m，6H)，1.12 (m，11H)，0.98 (s，5H)，0.90 (d，5H， J= 6 Hz)，0.79 (q，9H)，0.65 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.12 g，0.12 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.25 mL，1.23 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.05 g，0.05 mmol，42.5%)。UPLC/ELSD：RT = 1.90 min。MS (ES)：C 46H 87Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 742.0。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.57 (br. m，1H)，3.67 (m，1H)，3.48 (m，5H)，3.18 (m，5H)，2.42 (m，6H)，1.92 (br. m，22H)，1.39 (m，10H)，1.20 (m，8H)，1.07 (s，5H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.87 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 BL. 化合物 SA137 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )-2,2,6,6- 四甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基]-9a,11a-二甲基-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.31 g，0.58 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)丁基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.80 g，1.75 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.14 g，1.17 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.23 g，1.17 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液且進行過夜。然後用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.20 g，0.20 mmol，35.0%)。UPLC/ELSD：RT：2.86 min。MS (ES)：C 58H 104N 4O 7之 m/z(MH +) 970.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 5.54 (m，1H)，5.04 (m，1H)，4.23 (m，2H)，2.91 (br. m，4H)，2.35 (br. m，4H)，2.03 (br. m，6H)，1.61 (m，8H) 1.35 (m，10H)，1.10 (s，19H)，0.94 (m，15H)，0.83 (m，6H)，0.68 (s，6H)，0.60 (m，5H)，0.49 (q，9H)，0.35 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.20 g，0.20 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5 N於異丙醇中，0.41 mL，2.04 mmol)。將溶液加熱至40℃且進行過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫且將無水乙腈(20 mL)添加至混合物中，對該混合物進行音波處理並再攪拌1小時。然後自溶液過濾出白色固體，用乙腈重複洗滌，且 在真空中乾燥，以獲得白色固體狀5-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.11 g，0.11 mmol，54.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.94 min。MS (ES)：C 48H 91Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 770.0。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ：ppm 5.42 (m，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.45 (m，4H)，3.16 (m，4H)，2.41 (m，6H)，1.89 (br. m，22H)，1.43 (m，14H)，1.27 (m，7H)，1.18 (m，4H)，1.07 (s，6H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 BM. 化合物 SA138 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽 步驟 1 ： (9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 )-2,2,6,6,17- 五甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -17- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.250 g，0.493 mmol)、N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)丁基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.452 g，0.986 mmol)及三乙胺(0.20 mL，1.4 mmol)於DCM (2.5 mL)中之溶液在冰浴中冷卻至0℃，且然後逐滴添加丙烷膦酸酐(50 wt%於DCM中) (0.62 g，0.97 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在1.5 h，將反應混合物在冰浴中冷卻至0℃，且添加5% NaHCO 3水溶液(10 mL)。然後將反應混合物在rt下攪拌10 min。此後，用DCM (3 × 15 mL)萃取混合物。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-12% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供透明凝膠狀(9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2,6,6,17-五甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.269 g，0.284 mmol，57.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.90 min。MS (ES)：C 54H 98N 4O 5S 2之 m/z= 948.55 [M + H] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 5.32-5.39 (m，1H)，3.18-3.58 (m，6H)，2.43-3.03 (m，9H)，2.26-2.40 (m，2H)，0.91-2.18 (br. m，64H)，1.00 (s，3H)，0.91 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.86 (d，3H， J= 6.6 Hz)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽
向(9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2,6,6,17-五甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.266 g，0.281 mmol)於螺帽瓶中之DCM (2.6 mL)中之溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.49 mL)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在2 h，將反應混合物用MTBE稀釋至30 mL，且然後離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液。將固體懸浮於MTBE中且然後濃縮，以提供白色固體狀N-(3-胺基-3-甲基丁基)-N-(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺三鹽酸鹽(0.203 g，0.225 mmol，80.3%)。UPLC/ELSD：RT = 1.96 min。MS (ES)：C 44H 82N 4OS 2之 m/z= 264.75 [(M + 3H) + CH 3CN] 3+。 1H NMR (300 MHz，CD 3OD)：δ 5.35-5.42 (m，1H)，3.37-3.59 (m，4H)，3.05-3.25 (m，4H)，2.92-3.03 (m，2H)，2.76-2.89 (m，2H)，2.57-2.74 (m，1H)，2.25-2.42 (m，2H)，0.96-2.18 (br. m，46H)，1.03 (s，3H)，0.95 (d，3H， J= 6.5 Hz)，0.88 (d，6H， J= 6.6 Hz)，0.72 (s，3H)。 BN. 化合物 SA139 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(8- 胺基 -8- 甲基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (9-(N-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺基 )-2- 甲基壬 -2- 基 ) 胺基甲酸 4- 甲氧基苄基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.100 g，0.197 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.103 g，0.197 mmol)及三乙胺(0.09 mL，0.6 mmol)於冷卻至0℃之DCM (1.0 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.20 mL，0.39 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，用DCM (10 mL)稀釋反應混合物，且然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水層。使合併之有機層通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(9-(N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)-2-甲基壬-2-基)胺基甲酸4-甲氧基苄基酯(0.146 g，0.144 mmol，73.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.80 min。MS (ES)：C 59H 99N 3O 6S 2之m/z = 1012.83 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.32 - 7.26 (m，2H)，6.93 - 6.84 (m，2H)，5.40 - 5.31 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.73 - 4.34 (m，2H)，3.80 (s，3H)，3.37 - 3.17 (m，4H)，3.03 - 2.88 (m，2H)，2.76 - 2.56 (m，3H)，2.42 - 2.25 (m，2H)，2.12 - 0.94 (m，61H)，0.99 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(8- 胺基 -8- 甲基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(9-(N-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)-2-甲基壬-2-基)胺基甲酸4-甲氧基苄基酯(0.143 g，0.142 mmol)於冷卻至0℃之DCM (2.5 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.25 mL)。在攪拌的同時將反應混合物緩慢升溫至室溫且藉由LCMS監測。在22小時，添加二噁烷中之4 N HCl (0.10 mL)。在27小時，添加MTBE (20 mL)，且將反應混合物在4℃下保持過夜。將懸浮液離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀N-(3-胺基-3-甲基丁基)-N-(8-胺基-8-甲基壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.067 g，0.078 mmol，55.0%)。UPLC/ELSD：RT = 2.33 min。MS (ES)：C 45H 83N 3OS 2之m/z = 374.56 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.33 (m，1H)，3.53 - 3.34 (m，4H)，3.01 - 2.89 (m，2H)，2.85 - 2.75 (m，2H)，2.74 - 2.57 (m，1H)，2.40 - 2.27 (m，2H)，2.14 - 1.77 (m，7H)，1.73 - 0.97 (m，33H)，1.37 (s，6H)，1.33 (s，6H)，1.03 (s，3H)，0.95 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.89 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.7 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 BO. 化合物 SA141 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.100 g，0.200 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.104 g，0.200 mmol)及DMAP (0.049 g，0.40 mmol)於DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.077 g，0.40 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在15小時，用DCM (15 mL)稀釋反應混合物且用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.158 g，0.157 mmol，78.8%)。UPLC/ELSD：RT = 3.68 min。MS (ES)：C 61H 101N 3O 8之m/z = 1005.92 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.32 - 7.26 (m，2H)，6.92 - 6.84 (m，2H)，5.41 - 5.30 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.76 - 4.34 (m，3H)，3.80 (s，3H)，3.37 - 3.13 (m，4H)，2.41 - 2.24 (m，6H)，2.08 - 0.94 (m，63H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.143 g，0.143 mmol)於DCM (2.2 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.25 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，添加二噁烷中之4 N HCl (0.10 mL)。在22小時，添加MTBE (15 mL)，且將反應混合物在4℃下保持過夜。將懸浮液離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液。將固體懸浮於MTBE中並濃縮，以提供白色固體狀5-((3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.082 g，0.098 mmol，68.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.24 min。MS (ES)：C 47H 85N 3O 3之m/z = 371.23 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.43 - 5.35 (m，1H)，4.62 - 4.47 (m，1H)，3.51 - 3.33 (m，4H)，2.49 - 2.27 (m，6H)，2.11 - 1.78 (m，9H)，1.71 - 0.98 (m，33H)，1.37 (s，6H)，1.33 (s，6H)，1.05 (s，3H)，0.95 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.89 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 BP. 化合物 SA142 ： 5-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 5-{[(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-9a,11a-二甲基-1-[(2R)-6-甲基庚-2-基]-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基]氧基}-5-側氧基戊酸(0.09 g，0.18 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.08 g，0.18 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04 g，0.35 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.35 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.13 g，0.15 mmol，82.9%)。UPLC/ELSD：RT：3.53 min。MS (ES)：C 55H 97N 3O 7之 m/z(MH +) 913.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.35 (br. m，1H)，4.59 (br. m，2H)，4.38 (br. s，1H)，3.59 (br. m，2H)，3.22 (br. m，4H)，2.32 (m，6H)，1.93 (m，4H)，1.81 (m，3H)，1.50 (br. m，10H)，1.42 (s，18H)，1.27 (s，14H)，1.09 (m，12H)，0.99 (s，6H)，0.90 (d，4H， J= 6 Hz)，0.83 (d，6H， J= 6 Hz)，0.66 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.13 g，0.15 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.36 mL，1.45 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 5-((3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.10 g，0.12 mmol，80.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.77 min。MS (ES)：C 45H 83Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 713.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.49 (br. m，2H)，8.29 (br. m，3H)，5.39 (s，1H)，4.63 (br. m，1H)，3.45 (br. m，5H)，2.61 (br. m，2H)，2.43 (br. m，2H)，2.31 (d，2H， J= 9 Hz)，2.01 (br. m，6H)，1.86 (br. m，5H)，1.45 (br. m，29H)，1.14 (br. m，8H)，1.04 (s，6H)，0.94 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，7H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 BQ. 化合物 SA144 ： (3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 8- 溴 -N- 甲氧基 -N- 甲基辛醯胺
向8-溴辛酸(5.00 g，22.41 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (50 mL)中之溶液中逐滴添加草醯氯溶液(16.81 mL，33.62 mmol，2M於DCM中)。添加初始3 mL草醯氯後，添加催化二甲基甲醯胺(0.17 mL，2.24 mmol)，藉由鼓泡可見開始形成氣體。然後逐滴添加剩餘草醯氯溶液。使反應在室溫下進行3 h，且然後將溶液在真空中濃縮成黃色油狀物。將殘餘物吸收於30 mL DCM中且逐滴添加至N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(2.69g，27.57 mmol)於氮下攪拌之80 mL DCM中之溶液中。在添加期間隨著形成HCl氣體排放出溶液。將渾濁黃色反應混合物在室溫下攪拌過夜。然後，用DCM進一步稀釋混合物，用水(1×30 mL)、1M HCl (1×30 mL)、1M NaOH (1×30 mL)及鹽水(1×30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮以獲得澄清黃色液體狀8-溴-N-甲氧基-N-甲基辛醯胺，其未經進一步純化即使用(5.87 g，22.04 mmol，98.4%)。UPLC/ELSD：RT = 0.67 min。MS (ES)：C 10H 20BrNO 2之 m/z(MH +) 267.1。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 3.61 (s，3H)，3.33 (t，2H)，3.10 (s，3H)，2.34 (t，2H)，1.78 (qu，2H)，1.56 (qu，2H)，1.29 (br. m，7H)。 步驟 2 ： 9- 溴壬 -2- 酮
將8-溴-N-甲氧基-N-甲基辛醯胺(5.87 g，22.04 mmol)於無水THF (100 mL)中之溶液在氮下攪拌且冷卻至0℃。然後，將甲基溴化鎂溶液(11.02 ml，33.06 mmol，3M於二乙醚中)逐滴添加至攪拌混合物中。將混合物在0℃下攪拌2.5 h，且然後逐步升溫至室溫且再保持2 h。然後將混合物再冷卻至0℃，且藉由逐滴添加鹽酸(66.13 mL，66.13 mmol，1M)淬滅反應。持續攪拌混合物，在30分鐘內逐步升溫至室溫。在真空下去除THF，且用EtOAc (3×50 mL)萃取混合物。用鹽水(1×50 mL)洗滌合併之有機相，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得無色油狀9-溴壬-2-酮(4.44 g，20.08 mmol，91.1%)。UPLC/ELSD：RT = 0.84 min。MS (ES)：C 9H 17BrO之 m/z(MH +) 222.1。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 3.33 (t，2H)，2.36 (t，2H)，2.06 (s，3H)，1.78 (qu，2H)，1.50 (qu，2H)，1.30 (br. m，7H)。 步驟 3 ： 9- 溴壬 -2- 胺
向9-溴壬-2-酮(3.44 g，15.56 mmol)於無水MeOH (100 mL)中之溶液中添加乙酸銨(10.79 g，140.00 mmol)及氰基硼氫化鈉(1.27 g，20.22 mmol)。將溶液在室溫下劇烈攪拌36 h。然後，藉由緩慢添加HCl (100 mL，2M)淬滅反應。然後，逐滴添加10M NaOH直至溶液之pH達到11-12，用pH紙定性量測。然後，用DCM (3×150 mL)萃取混合物，且用鹽水(1×100 mL)洗滌合併之有機相，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成黃色油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (1:1 DCM/MeOH)梯度純化。將含有產物之流份匯集且在真空中濃縮，以獲得無色油狀9-溴壬-2-胺(1.23 g，5.53 mmol，35.6%)。UPLC/ELSD：RT = 0.89 min。MS (ES)：C 9H 20BrN之 m/z(MH +) 223.1。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 3.29 (t，2H)，2.82 (br. m，2H)，2.66 (s，3H)，1.74 (qu，2H)，1.21 (br. m，11H)，0.99 (d，3H)。 步驟 4 ： (9- 溴壬 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向9-溴壬-2-胺(0.57 g，2.54 mmol)於氮下0℃下攪拌之無水THF (10 mL)中之溶液中添加二碳酸二-第三丁基酯(0.64 mL，2.80 mmol)。然後，逐滴添加三乙胺(0.39 mL，2.80 mmol)，且將溶液逐步升溫至室溫並持續攪拌過夜。然後在真空下去除溶劑，且將所得殘餘物吸收於DCM中，用5% HCl水溶液(1×15 mL)及水(1×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且在真空中濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中並在二氧化矽上在己烷中用0-20% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份匯集且在真空中濃縮，以獲得油狀(9-溴壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.47 g，1.47 mmol，57.6%)。UPLC/ELSD：RT = 1.54 min。MS (ES)：C 14H 28BrNO 2之 m/z(MH +) 323.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ：ppm 4.35 (br. m，1H)，3.60 (br. m，1H)，3.37 (t，2H)，1.84 (qu，2H)，1.41 (br. s，11H)，1.28 (br. m，8H)，1.08 (d，3H)。 步驟 5 ： (9-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 ) 壬 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將 N-[4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.88 g，2.37 mmol)及(9-溴壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.76 g，2.37 mmol)溶解於20 mL無水DMF中且在氮下攪拌。然後，添加碳酸鉀(1.96 g，14.21 mmol)，且將溶液加熱至40℃並攪拌過夜。第二天早上，將混合物冷卻至室溫，且添加苄基溴(0.17 mL，1.42 mmol)。將溶液在室溫下攪拌5小時。然後，添加苯硫酚(0.727 mL，7.10 mmol)、碳酸鉀(0.98 g，7.10 mmol)及額外10 mL無水DMF，且將反應物攪拌2天。然後，藉由離心自溶液去除鹽，且將上清液蒸發成殘餘物。將殘餘物吸收於40 mL DCM中且用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物重懸浮於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH水溶液)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得無色油狀(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.77 g，1.80 mmol，76.1%)。UPLC/ELSD：RT = 0.61 min。MS (ES)：C 23H 47N 3O 4之 m/z(MH +) 430.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 4.94 (br. s，1H)，4.33 (br. s，1H)，3.62 (br. m，2H)，2.61 (m，4H)，1.66 (br. s，1H)，1.45 (s，21H)，1.29 (s，9H)，1.14 (m，6H)。 步驟 6 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.11 g，0.26 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.11 mL，0.78 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.15 g，0.26 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行2天。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-30% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.21 mmol，81.3%)。UPLC/ELSD：RT = 3.79 min。MS (ES)：C 53H 95N 3O 6之 m/z(MH +) 871.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.07 (s，1H)，4.14 (br. m，3H)，3.33 (br. s，2H)，2.91 (br. m，4H)，2.07 (m，2H)，1.66 (m，6H)，1.26 (br. m，10H)，1.14 (s，21H)，0.98 (s，15H)，0.83 (d， J= 21.1 Hz，12H)，0.73 (s，6H)，0.65 (s，5H)，0.56 (s，9H)，0.39 (s，3H)。 步驟 7 ： (3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.18 g，0.21 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.53 mL，2.11 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀(3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.14 g，0.18 mmol，83.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.89 min。MS (ES)：C 43H 81Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 671.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.52 (br. m，3H)，8.33 (br. m，3H)，5.40 (br. s，1H)，4.52 (br. s，1H)，3.33 (br. m，6H)，2.37 (m，2H)，2.01 (br. m，7H)，1.34 (br. m，31H)，1.18 (dd， J= 13.1，7.6 Hz，4H)，1.11 (s，2H)，1.04 (br. m，4H)，0.93 (br. s，4H)，0.85 (q，8H)，0.68 (s，3H)。 BR. 化合物 SA145 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(4- 胺基 -4- 甲基戊基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(N-(4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺基 )-2- 甲基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.11 g，0.22 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.09 g，0.22 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.45 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.09 g，0.45 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 (4-(N-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.17 g，0.19 mmol，86.7%)。UPLC/ELSD：RT：3.70 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 5S 2之 m/z(MH +) 891.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.27 (br. s，1H)，4.68 (s，1H)，4.41 (br. s，1H)，4.03 (q，1H)，3.20 (br. m，4H)，2.87 (br. m，2H)，2.62 (br. m，3H)，2.26 (br. m，2H)，1.96 (br. m，8H)，1.50 (br. m，9H)，1.37 (s，19H)，1.28 (br. m，3H)，1.20 (m，14H)，1.04 (br. m，6H)，0.92 (s，5H)，0.85 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.60 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(4- 胺基 -4- 甲基戊基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(4-(N-(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.17 g，0.19 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.49 mL，1.94 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 N-(3-胺基-3-甲基丁基)-N-(4-胺基-4-甲基戊基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽 (0.13 g，0.17 mmol，85.9%)。UPLC/ELSD：RT = 2.12 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 2N 3OS 2之 m/z(MH +) 691.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.39 (br. s，1H)，3.48 (br. m，4H)，3.33 (br. s，2H)，2.98 (br. m，2H)，2.86 (br. m，2H)，2.67 (br. m，1H)，2.37 (d，2H， J= 6 Hz)，1.97 (br. m，7H)，1.66 (br. m，12H)，1.46 (s，4H)，1.41 (s，13H)，1.31 (s，3H)，1.17 (br. m，8H)，1.05 (s，5H)，0.96 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，8H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 BS. 化合物 SA149 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.09 g，0.22 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.07 mL，0.09 mmol)。然後，添加4-硝基苯基碳酸(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基]-9a,11a-二甲基-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基酯 (0.13 g，0.22 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行2天。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，且用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.14 g，0.17 mmol，74.7%)。UPLC/ELSD：RT = 3.78 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 6之 m/z(MH +) 843.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.30 (br. s，1H)，4.42 (br. m，3H)，3.12 (br. s，4H)，2.28 (br. m，2H)，1.80 (br. m，7H)，1.52 (br. m，11H)，1.35 (s，18H)，1.20 (s，18H)，1.08 (br. m，5H)，0.94 (s，6H)，0.86 (d，5H， J= 6 Hz)，0.75 (q，9H)，0.61 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.14 g，0.17 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.42 mL，1.67 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀(3-胺基-3-甲基丁基)(4-胺基-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.08 g，0.10 mmol，61.2%)。UPLC/ELSD：RT = 2.07 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 643.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.44 (br. s，1H)，4.47 (br. m，1H)，3.34 (br. m，7H)，2.40 (br. m，2H)，1.97 (br. m，7H)，1.66 (br. m，11H)，1.37 (d，14H， J= 6 Hz)，1.20 (br. m，8H)，1.08 (s，5H)，0.99 (d，5H， J= 6 Hz)，0.87 (q，8H)，0.75 (s，3H)。 BT. 化合物 SA151 ： (3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.12 g，0.27 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.12 mL，0.82 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.15 g，0.27 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行2天。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.17 g，0.21 mmol，75.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.70 min。MS (ES)：C 51H 91N 3O 6之 m/z(MH +) 843.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.35 (br. s，1H)，4.46 (br. m，3H)，3.59 (br. m，2H)，3.19 (br. m，4H)，2.29 (m，2H)，2.01 (m，6H)，1.59 (br. m，10H)，1.40 (s，20H)，1.25 (br. m，15H)，1.10 (q，12H)，0.99 (s，6H)，0.90 (d，4H， J= 6 Hz)，0.83 (d，6H， J= 6 Hz)，0.65 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.17 g，0.21 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.52 mL，2.05 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 (3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.15 g，0.20 mmol，95.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.83 min。MS (ES)：C 41H 77Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 643.3。 1H NMR (301 MHz，CDCl 3) δ 8.51 (br. s，3H)，8.32 (br. s，3H)，5.39 (br. m，1H)，4.50 (br. m，1H)，3.34 (br. m，6H)，2.37 (m，2H)，2.01 (br. m，7H)，1.45 (br. m，29H)，1.11 (br. m，8H)，1.04 (s，4H)，0.93 (d，3H， J= 6 Hz，3H)，0.90 (d，3H， J= 6 Hz，6H)，0.70 (s，3H)。 BU. 化合物 SA152 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 9- 氯 -2,2- 二甲基壬酸甲酯
向冷卻至-78℃之 THF (30 mL)及二異丙基醯胺鋰(19 mL，2.0 M於THF中)之溶液中添加異丁酸甲酯(3.0 mL，26 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌50 min，然後冷卻至-78℃。逐滴添加 1-溴-7-氯庚烷(4.2 mL，27 mmol)。在緩慢升溫至室溫的同時攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在20小時，將反應混合物冷卻至0℃，且然後逐滴添加1 N HCl水溶液(30 mL)。分離雙相混合物，且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機物，經 Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供琥珀色油狀9-氯-2,2-二甲基壬酸甲酯(6.205 g，定量)。材料以原樣繼續使用。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3)：δ 3.65 (s，3H)，3.52 (t， J= 6.7 Hz，2H)，1.83 - 1.63 (m，2H)，1.63 - 1.17 (m，10H)，1.15 (s，6H)。 步驟 2 ： 9- 氯 -2,2- 二甲基壬酸
在50℃下攪拌9-氯-2,2-二甲基壬酸甲酯(6.2 g，26 mmol)、THF (60 mL)、MeOH (45 mL)及10% NaOH水溶液(31 mL，78 mmol)之混合物。藉由TLC監測反應。在23小時，將反應混合物濃縮以去除揮發性有機物。將殘餘物吸收於水(70 mL)中，用MTBE (2 × 50 mL)洗滌，且然後用2 N HCl水溶液酸化至pH約1。用EtOAc (3 × 50 mL)萃取水溶液，經Na 2SO 4乾燥，且然後濃縮以提供琥珀色油狀9-氯-2,2-二甲基壬酸(4.997 g，22.64 mmol，85.7%)。UPLC/ELSD：RT = 1.00 min。MS (ES)：C 11H 21ClO 2之 m/z= 174.98 (M - CO 2H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 9.71 (br. s，1H)，3.53 (t， J= 6.7 Hz，2H)，1.88 - 1.66 (m，2H)，1.62 - 1.22 (m，10H)，1.19 (s，6H)。 步驟 3 ： N-(9- 氯 -2- 甲基壬 -2- 基 ) 胺基甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向9-氯-2,2-二甲基壬酸(2.00 g，9.06 mmol)及三乙胺(1.8 mL，13 mmol)於PhMe (30 mL)中之攪拌溶液中添加 二苯基磷醯基疊氮化物(2.4 mL，11 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1.25小時，然後在80℃下攪拌。發生氣體逸出。在2小時，將反應混合物冷卻至室溫，然後用5% NaHCO 3水溶液(2×)、水及鹽水洗滌。經Na 2SO 4乾燥有機物，且然後依序添加4-甲氧基苄基醇(2.2 mL，18 mmol)及1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯(2.8 mL，19 mmol)。在80℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18小時，將反應混合物冷卻至室溫，用EtOAc (150 mL)稀釋，用5%檸檬酸水溶液(2×)、水及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-30% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀N-(9-氯-2-甲基壬-2-基)胺基甲酸(4-甲氧基苯基)甲酯(1.613 g，4.532 mmol，50.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.70 min。MS (ES)：C 19H 30ClNO 3之m/z = 378.33 (M + Na) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 7.29 (d， J= 8.3 Hz，2H)，6.88 (d， J= 8.1 Hz，2H)，4.98 (s，2H)，4.58 (s，1H)，3.81 (s，3H)，3.53 (t， J= 6.7 Hz，2H)，1.84 - 1.69 (m，2H)，1.68 - 1.16 (m，16H)。 步驟 4 ： N-(4-{N-[8-({[(4- 甲氧基苯基 ) 甲氧基 ] 羰基 } 胺基 )-8- 甲基壬基 ]-2- 硝基苯磺醯胺基 }-2- 甲基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[2-甲基-4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.907 g，2.34 mmol)、N-(9-氯-2-甲基壬-2-基)胺基甲酸(4-甲氧基苯基)甲酯(0.700 g，1.97 mmol)、碳酸鉀(0.544 g，3.93 mmol)、碘化鉀(0.164 g，0.983 mmol)及丙腈(10.5 mL)合併於密封管中。在攪拌的同時經由微波照射在150℃下加熱反應混合物且藉由LCMS監測。在12小時，將反應混合物冷卻至室溫且過濾，用ACN沖洗，並濃縮濾液。將殘餘物吸收於EtOAc (100 mL)中，然後用5% NaHCO 3水溶液及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供黃色油狀N-(4-{N-[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]-2-硝基苯磺醯胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.267 g，1.792 mmol，91.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.00 min。MS (ES)：C 35H 54N 4O 9S之m/z = 607.64 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.06 - 7.93 (m，1H)，7.77 - 7.52 (m，3H)，7.37 - 7.20 (m，2H)，6.97 - 6.78 (m，2H)，4.97 (s，2H)，4.59 (s，1H)，4.39 (s，1H)，3.80 (s，3H)，3.41 - 3.20 (m，4H)，2.00 - 1.84 (m，2H)，1.66 - 1.10 (m，33H)。 步驟 5 ： N-(4-{[8-({[(4- 甲氧基苯基 ) 甲氧基 ] 羰基 } 胺基 )-8- 甲基壬基 ] 胺基 }-2- 甲基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(4-{N-[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]-2-硝基苯磺醯胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(1.258 g，1.780 mmol)及碳酸鉀(0.738 g，5.34 mmol)於DMF (19 mL)中之混合物中添加苯硫酚(0.33 mL，3.2 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在2小時，過濾反應混合物，用EtOAc沖洗。將濾液用EtOAc稀釋至125 mL，用5% NaHCO 3水溶液、水(3×)及鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-16% (MeOH中之5%濃NH 4OH))純化粗材料，以提供黃色油狀N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.699 g，1.34 mmol，75.3%)。UPLC/ELSD：RT = 0.89 min。MS (ES)：C 29H 51N 3O 5之m/z = 522.74 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.33 - 7.27 (m，2H)，6.91 - 6.84 (m，2H)，5.61 (s，1H)，4.97 (s，2H)，4.59 (s，1H)，3.80 (s，3H)，2.75 (t， J= 7.2 Hz，2H)，2.64 (t， J= 7.3 Hz，2H)，1.81 (t， J= 7.2 Hz，2H)，1.70 - 1.13 (m，33H)。 步驟 6 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將膽固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.150 g，0.272 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.184 g，0.353 mmol)及三乙胺(0.12 mL，0.86 mmol)合併於PhMe (2.05 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20小時，將反應混合物冷卻至室溫，用DCM (30 mL)稀釋，且然後用5% NaHCO 3水溶液(3×)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-30% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.227 g，0.243 mmol，89.4%)。UPLC/ELSD：RT = 3.79 min。MS (ES)：C 57H 95N 3O 7之m/z = 935.72 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.34 - 7.24 (m，2H)，6.95 - 6.83 (m，2H)，5.42 - 5.32 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.64 - 4.32 (m，3H)，3.80 (s，3H)，3.33 - 3.07 (m，4H)，2.48 - 2.21 (m，2H)，2.12 - 0.94 (m，61H)，1.02 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.87 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.68 (s，3H)。 步驟 7 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.222 g，0.238 mmol)於DCM (2.6 mL)中之溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.43 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18小時，添加己烷(30 mL)，且將混合物離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，將固體懸浮於己烷(30 mL)中，且將懸浮液離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，且在減壓下乾燥固體，以提供白色固體狀(3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.125 g，0.163 mmol，68.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.87 min。MS (ES)：C 43H 79N 3O 2之m/z = 335.74 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO) δ 8.29 - 7.87 (m，6H)，5.41 - 5.26 (m，1H)，4.39 - 4.22 (m，1H)，3.29 - 3.06 (m，4H)，2.36 - 2.11 (m，2H)，2.09 - 0.90 (m，52H)，0.98 (s，3H)，0.89 (d， J= 6.2 Hz，3H)，0.84 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.65 (s，3H)。 BV. 化合物 SA153 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將麥固醇碳酸4-硝基苯基酯(0.175 g，0.302 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.205 g，0.392 mmol)及三乙胺(0.13 mL，0.93 mmol)合併於PhMe (2.3 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在20小時，將反應混合物冷卻至室溫，用DCM (30 mL)稀釋，且然後用5% NaHCO 3水溶液(3×)洗滌。使有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-30% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.252 g，0.262 mmol，86.8%)。UPLC/ELSD：RT = 3.89 min。MS (ES)：C 59H 99N 3O 7之m/z = 963.23 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.32 - 7.24 (m，2H)，6.94 - 6.85 (m，2H)，5.42 - 5.32 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.66 - 4.40 (m，3H)，3.81 (s，3H)，3.33 - 3.08 (m，4H)，2.47 - 2.20 (m，2H)，2.13 - 0.77 (m，71H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.3 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.248 g，0.258 mmol)於DCM (2.6 mL)中之溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.46 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18小時，添加己烷(30 mL)，且將混合物離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，將固體懸浮於己烷(30 mL)中，且將懸浮液離心(10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液，且在減壓下乾燥固體，以提供白色固體狀(3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.107 g，0.130 mmol，50.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.89 min。MS (ES)：C 45H 83N 3O 2之m/z = 370.68 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，DMSO) δ 8.34 - 7.91 (m，6H)，5.39 - 5.29 (m，1H)，4.41 - 4.21 (m，1H)，3.30 - 3.07 (m，4H)，2.37 - 2.16 (m，2H)，2.05 - 0.74 (m，62H)，0.98 (s，3H)，0.90 (d， J= 6.3 Hz，3H)，0.65 (s，3H)。 BW. 化合物 SA154 ： 5-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.09 g，0.18 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.08 g，0.18 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04 g，0.35 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.35 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.09 g，0.10 mmol，57.3%)。UPLC/ELSD：RT：3.63 min。MS (ES)：C 57H 101N 3O 7之 m/z(MH +) 941.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.35 (br. s，1H)，4.60 (br. m，2H)，4.34 (br. m，1H)，3.63 (br. m，3H)，3.20 (br. m，3H)，2.35 (m，6H)，1.94 (m，4H)，1.83 (br. m，3H)，1.55 (br. m，10H)，1.43 (s，18H)，1.28 (br. m，16H)，1.11 (m，12H)，1.01 (s，5H)，0.92 (d，5H， J= 6 Hz)，0.82 (q，10H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.09 g，0.10 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.25 mL，1.00 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 5-((3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.06 g，0.06 mmol，63.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.96 min。MS (ES)：C 47H 87Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 741.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.41 (m，6H)，5.38 (br. s，1H)，4.83 (br. s，1H)，4.61 (br. m，1H)，3.56 (br. m，6H)，2.50 (br. m，2H)，2.41 (br. m，2H)，2.31 (d，2H， J= 9 Hz)，2.01 (br. m，6H)，1.86 (br. m，3H)，1.62 (br. m，9H)，1.46 (br. m，16H)，1.19 (br. m，11H)，1.04 (s，5H)，0.96 (d，5H， J= 6 Hz)，0.85 (q，10H)，0.70 (s，3H)。 BX. 化合物 SA155 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.100 g，0.189 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.099 g，0.19 mmol)及DMAP (0.046 g，0.38 mmol)於DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.073 g，0.38 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在15小時，用DCM (15 mL)稀釋反應混合物且用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.121 g，0.117 mmol，62.0%)。UPLC/ELSD：RT = 3.77 min。MS (ES)：C 63H 105N 3O 8之m/z = 1034.04 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.33 - 7.27 (m，2H)，6.92 - 6.84 (m，2H)，5.42 - 5.31 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.77 - 4.30 (m，3H)，3.81 (s，3H)，3.36 - 3.14 (m，4H)，2.43 - 2.24 (m，6H)，2.16 - 0.76 (m，73H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.116 g，0.112 mmol)於DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.20 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，添加二噁烷中之4 N HCl (0.10 mL)。在22小時，添加MTBE (20 mL)，且將反應混合物在4℃下保持過夜。將懸浮液離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。傾析掉上清液。將固體懸浮於MTBE中並濃縮，以提供白色固體狀5-((3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.073 g，0.080 mmol，71.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.38 min。MS (ES)：C 49H 89N 3O 3之m/z = 385.65 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.43 - 5.32 (m，1H)，4.62 - 4.47 (m，1H)，3.50 - 3.33 (m，4H)，2.51 - 2.23 (m，6H)，2.13 - 1.77 (m，9H)，1.76 - 0.77 (m，43H)，1.37 (s，6H)，1.33 (s，6H)，1.05 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.75 - 0.70 (m，3H)。 BY. 化合物 SA156 ： 5-( 雙 (3- 胺基丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 5-( 雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.100 g，0.189 mmol)、N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.075 g，0.21 mmol)及DMAP (0.051 g，0.42 mmol)於DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.073 g，0.38 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，用DCM (10 mL)稀釋反應混合物，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-65% EtOAc)純化粗材料，以提供白色泡沫狀5-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.097 g，0.11 mmol，58.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.57 min。MS (ES)：C 52H 91N 3O 7之m/z = 871.11 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl3) δ 5.48 - 5.30 (m，1H)，4.77 - 4.42 (m，3H)，3.79 - 3.07 (m，6H)，2.52 - 2.19 (m，6H)，2.14 - 0.76 (m，66H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-( 雙 (3- 胺基丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向5-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.086 g，0.099 mmol)於DCM (1.8 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.25 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，添加MTBE (20 mL)，且將反應混合物離心(10,000 × g保持15 min在4℃下)。抽掉上清液，且用MTBE少量沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀5-(雙(3-胺基丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.066 g，0.082 mmol，82.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.22 min。MS (ES)：C 42H 75N 3O 3之m/z = 670.59 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.43 - 5.31 (m，1H)，4.62 - 4.48 (m，1H)，3.73 - 3.33 (m，5H)，3.24 - 3.11 (m，1H)，2.60 - 2.23 (m，6H)，2.11 - 0.76 (m，42H)，1.37 (d， J= 6.6 Hz，3H)，1.33 (d， J= 6.6 Hz，3H)，1.05 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 BZ. 化合物 SA157 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4- 甲基苯磺酸 4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基酯
向 N-(5-羥基-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(2.50 g，11.50 mmol)於氮下攪拌之無水DCM (30 mL)中之溶液中添加三乙胺(8.02 mL，57.52 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.14 g，1.15 mmol)及對甲苯磺醯氯(4.39 g，23.01 mmol)。將溶液在室溫下攪拌6 小時，隨後其變成深紅色。然後用DCM進一步稀釋混合物，用水(1×30 mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(1×30 mL)及鹽水(1×30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成深棕色油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-20% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺棕色油狀4-甲基苯磺酸4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基酯(3.55 g，9.64 mmol，83.0%)。UPLC/ELSD：RT：1.20 min。MS (ES)：C 18H 29NO 5S之 m/z(MH +) 372.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.78 (d，2H， J= 9 Hz)，7.36 (d，2H， J= 9 Hz)，4.37 (br. s，1H)，4.00 (br. m，2H)，2.45 (s，3H)，1.64 (br. s，4H)，1.40 (s，10H)，1.20 (s，6H)。 步驟 2 ： (5-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基 )-2- 甲基戊 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向 N-[2-甲基-4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.91 g，2.34 mmol)於室溫下氮下攪拌之無水DMF (20 mL)中之溶液中添加N-{2-甲基-5-[(4-甲基苯磺醯基)氧基]戊-2-基}胺基甲酸第三丁基酯(0.87 g，2.34 mmol)及碳酸鉀(1.97 g，14.25 mmol)。將溶液升溫至40℃且攪拌過夜。第二天早上，藉由LC-MS反應不完全，因此將其加熱至100℃且再攪拌3小時。然後，將混合物冷卻至室溫，且添加苄基溴(0.23 mL，1.94 mmol)。將溶液在室溫下攪拌4小時且然後添加苯硫酚(0.92 mL，8.99 mmol)，然後再添加碳酸鉀(0.97 g，7.01 mmol)及DMF (20 mL)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，藉由離心自混合物去除鹽，且將上清液濃縮成殘餘物。將殘餘物吸收於40 mL DCM中，用水(2×10 mL)及鹽水(2×10 mL)洗滌，經碳酸鉀乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-50% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得無色油狀(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.49 g，1.22 mmol，52.24%)。UPLC/ELSD：RT：0.30 min。MS (ES)：C 21H 43N 3O 4之 m/z(MH +) 402.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.88 (br. s，1H)，4.69 (br. s，1H)，2.61 (t，2H)，2.52 (t，2H)，1.61 (br. m，4H)，1.35 (s，21H)，1.18 (s，12H)。 步驟 3 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.09 g，0.22 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.07 mL，0.09 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.12 g，0.22 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行2天。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.20 mmol，89.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.67 min。MS (ES)：C 49H 87N 3O 6之 m/z(MH +) 815.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.29 (br. s，1H)，4.41 (br. m，3H)，3.13 (br. m，4H)，2.26 (br. m，2H)，1.78 (br. m，7H)，1.45 (br. m，10H)，1.35 (s，19H)，1.26 (br. m，3H)，1.20 (s，14H)，1.06 (br. m，6H)，0.94 (s，6H)，0.85 (d，3H， J= 6 Hz)，0.81 (d，6H， J= 6 Hz)，0.61 (s，3H)。 步驟 4 ： (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.20 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.50 mL，2.01 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀(3-胺基-3-甲基丁基)(4-胺基-4-甲基戊基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.09 g，0.12 mmol，60.2%)。UPLC/ELSD：RT = 1.90 min。MS (ES)：C 39H 73Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 614.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.41 (br. s，1H)，4.45 (br. m，1H)，3.33 (br. m，6H)，2.37 (br. m，2H)，1.93 (br. m，7H)，1.60 (br. m，11H)，1.37 (s，15H)，1.18 (br. m，6H)，1.08 (s，5H)，0.98 (d，3H， J= 6 Hz)，0.89 (d，7H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 CA. 化合物 SA158 ：雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： ( 氮烷二基雙 (2- 甲基丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
將 (4-胺基-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.50 g，2.36 mmol)及(2-甲基-4-側氧基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.50 g，2.36 mmol)溶解於10 mL無水甲醇中且在室溫下在氮下攪拌。2小時後，添加三乙氧基硼氫化鈉(1.25 g，5.90 mmol)，且將反應物持續在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將琥珀色反應混合物用幾滴水淬滅，濃縮成橙色油狀物，且吸收回DCM中。然後將其用飽和碳酸氫鈉(1×15 mL)及鹽水(1×15 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成黃色油狀物。將油狀物重懸浮於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-40% (50:45:5 DCM/MeOH/NH 4OH水溶液)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得黃色油狀 (氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.53 g，1.37 mmol，58.2%)。UPLC/ELSD：RT = 0.38 min。MS (ES)：C 20H 41N 3O 4之 m/z(MH +) 388.6。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.56 (br. s，2H)，2.67 (t，4H)，1.77 (br. m，5H)，1.62 (br. s，4H)，1.44 (s，18H)，1.30 (s，12H)。 步驟 2 ：雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 (氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.10 g，0.26 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.11 mL，0.77 mmol)。然後，添加(4-硝基苯基)碳酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.14 g，0.26 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天，反應不完全，因此再添加3當量之三乙胺，並使反應在90℃下再進行24小時。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.15 g，0.19 mmol，72.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.41 min。MS (ES)：C 48H 85N 3O 6之 m/z(MH +) 801.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.29 (br. s，1H)，4.57 (br. s，1H)，4.44 (br. m，2H)，3.15 (br. m，4H)，2.26 (m，2H)，1.80 (m，9H)，1.42 (br. m，7H)，1.35 (s，19H)，1.27 (m，3H)，1.21 (s，13H)，1.05 (br. m，8H)，0.95 (s，6H)，0.85 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.60 (s，3H)。 步驟 3 ：雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.15 g，0.19 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.47 mL，1.86 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(15 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀雙(3-胺基-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.10 g，0.14 mmol，74.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.78 min。MS (ES)：C 38H 71Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 601.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.42 (br. s，1H)，4.45 (br. m，1H)，3.40 (m，6H)，2.41 (d，2H， J= 6 Hz)，1.94 (br. m，10H)，1.56 (br. m，7H)，1.41 (s，16H)，1.17 (br. m，7H)，1.06 (s，6H)，0.98 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.75 (s，4H)。 CB. 化合物 SA159 ：雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ：雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向(氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.10 g，0.26 mmol)於氮下攪拌之無水甲苯(5 mL)中之溶液中添加三乙胺(0.11 mL，0.77 mmol)。然後，添加 4-硝基苯基碳酸(1R,3aS,3bS,7S,9aR,9bS,11aR)-1-[(2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基]-9a,11a-二甲基-1H,2H,3H,3aH,3bH,4H,6H,7H,8H,9H,9bH,10H,11H-環戊[a]菲-7-基酯 (0.15 g，0.26 mmol)，且將溶液加熱至90℃並進行過夜。第二天，反應不完全，因此再添加3當量之三乙胺，並使反應在90℃下再進行24小時。然後，將反應混合物冷卻至室溫，用甲苯稀釋，用水(3×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且經由矽膠層析在己烷中用0-50% EtOAc梯度純化。將含有產物之流份合併且濃縮，以獲得淺黃色油狀雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.17 g，0.20 mmol，78.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.55 min。MS (ES)：C 50H 89N 3O 6之 m/z(MH +) 823.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.41 (br. s，1H)，4.53 (br. m，3H)，3.25 (br. m，4H)，2.40 (m，2H)，1.90 (br. m，9H)，1.58 (m，7H)，1.45 (s，18H)，1.30 (s，13H)，1.18 (br. m，7H)，1.04 (s，5H)，0.95 (d，5H， J= 6 Hz)，0.83 (q，9H)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ：雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.17 g，0.20 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.51 mL，2.03 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(15 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀雙(3-胺基-3-甲基丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.12 g，0.16 mmol，77.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.94 min。MS (ES)：C 40H 75Cl 2N 3O 2之 m/z(MH +) 629.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.42 (br. s，1H)，4.45 (br. m，1H)，3.38 (br. m，6H)，2.41 (d，2H， J= 6 Hz)，1.94 (br. m，9H)，1.56 (br. m，8H)，1.41 (s，15H)，1.22 (br. m，6H)，1.09 (s，6H)，0.99 (d，4H， J= 6 Hz)，0.87 (q，9H)，0.75 (s，4H)。 CC. 化合物 SA160 ： 4-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )-2,2,6- 三甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -18- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.15 g，0.31 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加((丁烷-1,4-二基雙(氮烷二基))雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.33 g，0.76 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.08 g，0.61 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.12 g，0.61 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.08 g，0.09 mmol，30.2%)。UPLC/ELSD：RT：2.49 min。MS (ES)：C 53H 94N 4O 7之 m/z(MH +) 900.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.37 (br. s，1H)，4.79 (br. m，1H)，4.62 (br. m，2H)，3.71 (br. m，3H)，3.29 (m，5H)，2.64 (br. m，8H)，2.35 (t，3H)，2.24 (s，2H)，2.00 (br. m，6H)，1.62 (br. m，14H)，1.45 (s，20H)，1.27 (br. m，7H)，1.15 (m，12H)，1.03 (s，5H)，0.94 (d，4H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向 14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.08 g，0.09 mmol)於氮下攪拌之異丙醇(3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(5.5 M於異丙醇中，0.19 mL，0.92 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將乙腈(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液過濾且用3:1乙腈/異丙醇洗滌。 在真空中乾燥所得固體，以獲得白色固體狀4-((3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽 (0.05 g，0.06 mmol，60.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.36 min。MS (ES)：C 43H 81Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 700.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.28 (br. s，1H)，4.41 (br. m，1H)，3.85 (m，1H)，3.39 (br. m，5H)，3.20 (s，2H)，3.02 (br. m，5H)，2.60 (br. m，4H)，2.23 (br. m，4H)，1.92 (s，5H)，1.71 (br. m，9H)，1.43 (br. m，8H)，1.28 (m，12H)，1.06 (d，11H， J= 6 Hz)，0.95 (s，6H)，0.86 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.63 (s，3H)。 CD. 化合物 SA161 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )-2,2,6,6- 四甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -18- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.10 g，0.19 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)丁基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.22 g，0.48 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.05 g，0.39 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.39 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.03 g，0.03 mmol，16.3%)。UPLC/ELSD：RT：2.77 min。MS (ES)：C 57H 102N 4O 7之 m/z(MH +) 956.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.35 (br. s，1H)，4.60 (br. m，1H)，3.25 (br. m，5H)，3.00 (br. m，2H)，2.60 (br. m，6H)，2.34 (d，3H， J= 6 Hz)，2.23 (m，4H)，1.99 (br. m，3H)，1.87 (br. m，4H)，1.63 (br. m，12H)，1.42 (s，18H)，1.28 (d，15H， J= 6 Hz)，1.12 (br. m，7H)，1.02 (s，5H)，0.93 (d，5H， J= 6 Hz)，0.83 (q，8H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.03 g，0.03 mmol)於氮下攪拌之DCM (1 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.08 mL，0.31 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽 (0.03 g，0.03 mmol，89.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.69 min。MS (ES)：C 47H 89Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 756.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.41 (br. s，1H)，4.56 (br. m，1H)，3.49 (br. m，5H)，3.33 (br. s，2H)，3.18 (br. m，5H)，2.94 (m，1H)，2.65 (br. m，4H)，2.33 (d，2H， J= 6 Hz)，2.15 (br. m，5H)，1.84 (br. m，8H)，1.63 (br. m，9H)，1.43 (t，15H)，1.25 (br. m，10H)，1.07 (s，5H)，0.97 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 CE. 化合物 SA162 ： 4-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.09 g，0.18 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.08 g，0.18 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04 g，0.35 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.35 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.11 g，0.12 mmol，67.6%)。UPLC/ELSD：RT：3.29 min。MS (ES)：C 54H 95N 3O 7之 m/z(MH +) 899.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.30 (br. s，1H)，4.53 (br. m，2H)，4.34 (br. s，1H)，3.54 (br. m，2H)，3.14 (br. m，4H)，2.56 (m，4H)，2.26 (d，2H， J= 9 Hz)，1.85 (br. m，5H)，1.49 (br. m，9H)，1.36 (s，19H)，1.24 (br. m，13H)，1.02 (m，13H)，0.94 (s，5H)，0.85 (d，4H， J= 6 Hz)，0.81 (d，6H， J= 6 Hz)，0.60 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.11 g，0.12 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.30 mL，1.18 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-((3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.08 g，0.10 mmol，86.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.75 min。MS (ES)：C 44H 81Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 699.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.40 (m，6H)，5.39 (br. s，1H)，4.64 (br. m，1H)，3.39 (br. m，5H)，2.66 (s，4H)，2.35 (d，2H， J= 6 Hz)，2.04 (br. m，4H)，1.86 (m，3H)，1.58 (br. m，9H)，1.46 (br. m，21H)，1.12 (br. m，7H)，1.03 (s，6H)，0.92 (d，4H， J= 6 Hz)，0.88 (d，7H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 CF. 化合物 SA163 ： 4-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.10 g，0.19 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 N-[4-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]壬基}胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯 (0.08 g，0.19 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.05 g，0.39 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.39 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.17 mmol，86.7%)。UPLC/ELSD：RT：3.65 min。MS (ES)：C 56H 99N 3O 7之 m/z(MH +) 927.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.28 (br. s，1H)，4.56 (br. m，3H)，3.54 (br. m，3H)，3.16 (br. m，3H)，2.57 (m，4H)，2.26 (d，2H， J= 3 Hz)，1.76 (br. m，5H)，1.52 (br. m，9H)，1.36 (s，20H)，1.23 (br. m，15H)，1.08 (br. m，12H)，0.94 (s，6H)，0.86 (d，5H， J= 6 Hz)，0.75 (q，9H)，0.60 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基丁基 )(8- 胺基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.16 g，0.17 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.42 mL，1.68 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-((3-胺基丁基)(8-胺基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.13 g，0.13 mmol，79.3%)。UPLC/ELSD：RT = 2.09 min。MS (ES)：C 46H 85Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 728.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.40 (br. s，1H)，4.54 (br. m，1H)，3.69 (br.m，1H)，3.33 (s，9H)，2.65 (br. m，4H)，2.32 (d，2H， J= 6 Hz)，1.92 (br. m，7H)，1.63 (br. m，11H)，1.43 (br. m，11H)，1.32 (t，8H)，1.20 (br. m，7H)，1.07 (s，5H)，0.99 (d，5H， J= 6 Hz)，0.87 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 CG. 化合物 SA164 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向半琥珀酸膽固醇基酯(0.100 g，0.205 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.107 g，0.205 mmol)及DMAP (cat.)於冷卻至0℃之DCM (2 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.079 g，0.411 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，添加DMAP (0.050 g，0.41 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(40 mg)。在43小時，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(65 mg)。在64小時，用DCM (15 mL)稀釋反應混合物，且然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (15 mL)萃取水溶液。將合併之有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.097 g，0.098 mmol，47.7%)。UPLC/ELSD：RT = 3.68 min。MS (ES)：C 60H 99N 3O 8之m/z = 990.87 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.33 - 7.27 (m，2H)，6.92 - 6.84 (m，2H)，5.41 - 5.31 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.77 - 4.38 (m，3H)，3.81 (s，3H)，3.37 - 3.18 (m，4H)，2.71 - 2.51 (m，4H)，2.38 - 2.26 (m，2H)，2.17 - 1.04 (m，61H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d， J= 5.9 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.093 g，0.094 mmol)於DCM (1.5 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.17 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，添加二噁烷中之4 N HCl (0.07 mL)。在22小時，添加MTBE (10 mL)，且將反應混合物在4℃下保持過夜。將反應混合物在N 2流下吹至凝膠狀。然後，添加冰冷MTBE (10 mL)，且將懸浮液離心(在4℃下10,000 × g保持1 h)。傾析掉上清液。用冷MTBE沖洗固體，懸浮於MTBE中，並濃縮以提供白色固體狀4-((3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.058 g，0.068 mmol，72.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.23 min。MS (ES)：C 46H 83N 3O 3之m/z = 364.70 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.43 - 5.34 (m，1H)，4.62 - 4.45 (m，1H)，3.56 - 3.34 (m，4H)，2.73 - 2.57 (m，4H)，2.42 - 2.26 (m，2H)，2.14 - 1.77 (m，7H)，1.75 - 0.97 (m，33H)，1.05 (s，3H)，1.36 (s，6H)，1.33 (s，6H)，0.95 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.5 Hz，6H)，0.73 (s，3H)。 CH. 化合物 SA165 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 氧基 )-4- 側氧基丁酸
將麥固醇(3.00 g，7.23 mmol)及琥珀酸酐(0.941 g，9.40 mmol)合併於吡啶(6.0 mL)中。在80℃下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在19小時，添加DMAP (cat.)。在89小時，將反應混合物冷卻至室溫，用DCM (100 mL)稀釋，且用水洗滌。用1 N NaOH水溶液(3 × 50 mL)萃取有機物。形成沈澱。將混合物過濾。將固體吸收於1 N HCl水溶液中，且然後用DCM (3 × 50 mL)萃取。將有機萃取物用1 N HCl水溶液(2×)及水洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中且在加熱的同時添加己烷(30 mL)。使用熱(37℃熱水浴)除去溶劑直至形成固體。將溶液冷卻至室溫，且進一步冷卻至0℃。1.5小時後，形成白色固體。將混合物升溫至室溫，且藉由真空過濾收集固體，用冷9:1己烷/DCM沖洗，以提供灰白色固體狀4-4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.436 g，0.847 mmol，11.7%)。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.42 - 5.30 (m，1H)，4.71 - 4.56 (m，1H)，2.72 - 2.55 (m，4H)，2.36 - 2.23 (m，2H)，2.09 - 1.75 (m，5H)，1.73 - 0.75 (m，31H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向4-4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.100 g，0.194 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.111 g，0.214 mmol)及DMAP (cat.)於冷卻至0℃之DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.074 g，0.39 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，添加DMAP (0.047 g，0.39 mmol)，然後添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(45 mg)。在43小時，添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(65 mg)。在64 小時，用DCM (15 mL)稀釋反應混合物，且用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (15 mL)萃取水溶液。將合併之有機物用5% NaHCO 3水溶液洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.097 g，0.095 mmol，49.0%)。UPLC/ELSD：RT = 3.74 min。MS (ES)：C 62H 103N 3O 8之m/z = 1018.87 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.34 - 7.26 (m，2H)，6.92 - 6.83 (m，2H)，5.39 - 5.32 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.80 - 4.36 (m，3H)，3.80 (s，3H)，3.39 - 3.18 (m，4H)，2.69 - 2.52 (m，4H)，2.35 - 2.23 (m，2H)，2.12 - 0.77 (m，71H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 3 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(8- 胺基 -8- 甲基壬基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.093 g，0.091 mmol)於DCM (1.5 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.17 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，添加二噁烷中之4 N HCl (0.07 mL)。在22小時，添加MTBE (10 mL)，且將反應混合物在4℃下保持過夜。將反應混合物在N 2流下吹至凝膠狀。添加冷MTBE (10 mL)，且將懸浮液離心(在4℃下10,000 × g保持1 h)。傾析掉上清液，用冷MTBE沖洗固體，然後濃縮以提供白色固體狀4-((3-胺基-3-甲基丁基)(8-胺基-8-甲基壬基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.034 g，0.039 mmol，42.2%)。UPLC/ELSD：RT = 2.34 min。MS (ES)：C 48H 87N 3O 3之m/z = 377.76 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.46 - 5.32 (m，1H)，4.65 - 4.43 (m，1H)，3.54 - 3.34 (m，4H)，2.74 - 2.50 (m，4H)，2.45 - 2.21 (m，2H)，2.13 - 1.79 (m，7H)，1.77 - 0.78 (m，43H)，1.36 (s，6H)，1.32 (s，6H)，1.05 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CI. 化合物 SA166 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.11 g，0.22 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.09 g，0.22 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.45 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.09 g，0.45 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.17 g，0.19 mmol，85.6%)。UPLC/ELSD：RT：3.55 min。MS (ES)：C 52H 91N 3O 7之 m/z(MH +) 871.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.37 (br. s，1H)，4.62 (br. m，3H)，3.27 (br. m，4H)，2.64 (br. m，4H)，2.35 (d，2H， J= 6 Hz)，2.01 (br. m，3H)，1.85 (br. m，4H)，1.56 (br. m，11H)，1.44 (s，17H)，1.35 (br. m，3H)，1.30 (m，13H)，1.14 (br. m，6H)，1.03 (s，5H)，0.95 (d，3H， J= 6 Hz)，0.90 (d，6H， J= 6 Hz)，0.70 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.17 g，0.19 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.48 mL，1.92 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀4-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-胺基-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.12 g，0.14 mmol，74.0%)。UPLC/ELSD：RT = 1.99 min。MS (ES)：C 42H 77Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 671.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.52 (s，1H)，5.39 (br. s，1H)，4.56 (br. m，1H)，3.68 (s，1H)，3.47 (br. m，3H)，3.32 (br. s，2H)，2.64 (br. m，4H)，2.35 (br. m，2H)，1.90 (br. m，6H)，1.55 (br. m，10H)，1.46 (s，3H)，1.40 (br. s，14H)，1.16 (br. m，5H)，1.07 (s，5H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (d，8H， J= 6 Hz)，0.75 (s，3H)。 CJ. 化合物 SA167 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-((3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )(4-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.12 g，0.22 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(5-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-2-甲基戊-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.09 g，0.22 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.45 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.09 g，0.45 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.14 g，0.15 mmol，67.6%)。UPLC/ELSD：RT：3.64 min。MS (ES)：C 54H 95N 3O 7之 m/z(MH +) 899.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.31 (br. s，1H)，4.57 (br. m，3H)，3.24 (br. m，4H)，2.57 (br. m，4H)，2.30 (d，2H， J= 6 Hz)，2.00 (br. m，4H)，1.82 (br. m，4H)，1.53 (br. m，11H)，1.38 (s，18H)，1.31 (br. m，2H)，1.24 (m，16H)，1.11 (br. m，6H)，0.98 (s，6H)，0.88 (d，5H， J= 6 Hz)，0.79 (q，10H)，0.64 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4- 胺基 -4- 甲基戊基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)(4-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.14 g，0.15 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.38 mL，1.51 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀4-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-胺基-4-甲基戊基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.10 g，0.12 mmol，80.3%)。UPLC/ELSD：RT = 2.18 min。MS (ES)：C 44H 81Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 699.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.41 (br. s，1H)，4.53 (br. m，1H)，3.46 (br. m，3H)，3.32 (m，5H)，2.65 (br. m，4H)，2.33 (br. m，2H)，1.91 (br. m，7H)，1.64 (br. m，11H)，1.45 (s，3H)，1.40 (s，13H)，1.20 (br. m，7H)，1.07 (s，5H)，0.99 (d，4H， J= 6 Hz)，0.87 (q，9H)，0.75 (s，4H)。 CK. 化合物 SA168 ： 4-( 雙 (3- 胺基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-( 雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向4-4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.100 g，0.194 mmol)、N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.077 g，0.21 mmol)及DMAP (0.052 g，0.43 mmol)於DCM (2.0 mL)中之攪拌溶液中添加1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.074 g，0.39 mmol) . 在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，用DCM (15 mL)稀釋反應混合物，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-65% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.129 g，0.151 mmol，77.6%)。UPLC/ELSD：RT = 3.53 min。MS (ES)：C 51H 89N 3O 7之m/z = 856.81 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.41 - 5.32 (m，1H)，4.70 - 4.35 (m，3H)，3.78 - 3.08 (m，6H)，2.74 - 2.46 (m，4H)，2.38 - 2.23 (m，2H)，2.10 - 0.75 (m，64H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.3 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-( 雙 (3- 胺基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.125 g，0.146 mmol)於DCM (2.5 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.37 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，添加MTBE (20 mL)，且將反應混合物離心(10,000 × g保持15 min在4℃下)。抽掉上清液，且用MTBE少量沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀4-(雙(3-胺基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.084 g，0.11 mmol，74.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.11 min。MS (ES)：C 41H 73N 3O 3之m/z = 349.41 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.43 - 5.34 (m，1H)，4.62 - 4.46 (m，1H)，3.75 - 3.34 (m，5H)，3.26 - 3.15 (m，1H)，2.83 - 2.59 (m，4H)，2.42 - 2.25 (m，2H)，2.16 - 0.78 (m，40H)，1.38 (d， J= 6.6 Hz，3H)，1.32 (d， J= 6.5 Hz，3H)，1.05 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CL. 化合物 SA169 ： 4-( 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-( 雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.13 g，0.26 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 (氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.10 g，0.26 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.52 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.10 g，0.52 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.22 g，0.26 mmol，100.0%)。UPLC/ELSD：RT：3.58 min。MS (ES)：C 51H 89N 3O 7之 m/z(MH +) 857.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.07 (br. s，1H)，4.55 (br. s，1H)，4.32 (br. m，1H)，4.20 (br. s，1H)，3.04 (br. m，4H)，2.33 (s，4H)，2.05 (br. s，2H)，1.65 (br. m，9H)，1.28 (br. m，7H)，1.14 (s，19H)，1.00 (s，15H)，0.83 (br. m，7H)，0.74 (s，6H)，0.65 (d，4H， J= 6 Hz)，0.60 (d，6H， J= 6 Hz)，0.39 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-( 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.22 g，0.26 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.65 mL，2.59 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(15 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-(雙(3-胺基-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.12 g，0.16 mmol，62.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.03 min。MS (ES)：C 41H 75Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 657.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.39 (br. s，1H)，4.53 (br. m，1H)，3.48 (br. m，4H)，3.33 (br. s，3H)，2.67 (br. m，4H)，2.33 (br. m，2H)，2.04 (br. m，3H)，1.91 (br. m，6H)，1.55 (br. m，7H)，1.46 (s，6H)，1.40 (s，8H)，1.16 (br. m，11H)，1.07 (s，6H)，0.96 (d，4H， J= 6 Hz)，0.89 (d，8H， J= 6 Hz)，0.75 (s，4H)。 CM. 化合物 SA170 ： 4-( 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： 4-( 雙 (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.13 g，0.26 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 (氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.10 g，0.26 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.52 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.10 g，0.52 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.18 g，0.21 mmol，80.2%)。UPLC/ELSD：RT：3.65 min。MS (ES)：C 53H 93N 3O 7之 m/z(MH +) 885.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.06 (br. s，1H)，4.54 (br. s，1H)，4.33 (br. m，1H)，4.21 (s，1H)，3.03 (m，4H)，2.32 (s，4H)，2.02 (d，2H， J= 6 Hz)，1.63 (br. m，9H)，1.29 (br. m，7H)，1.14 (s，19H)，0.99 (s，15H)，0.84 (br. m，6H)，0.73 (s，5H)，0.65 (d，5H， J= 6 Hz)，0.54 (q，9H)，0.39 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-( 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向 4-(雙(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.18 g，0.21 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.52 mL，2.07 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(15 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-(雙(3-胺基-3-甲基丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽 (0.16 g，0.19 mmol，91.5%)。UPLC/ELSD：RT = 2.13 min。MS (ES)：C 43H 79Cl 2N 3O 3之 m/z(MH +) 685.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.39 (br. s，1H)，4.53 (br. m，1H)，3.53 (m，4H)，3.33 (br. s，3H)，2.67 (d，4H， J= 3 Hz)，2.33 (d，2H， J= 6 Hz)，2.04 (br. m，3H)，1.93 (br. m，6H)，1.58 (br. m，8H)，1.46 (s，7H)，1.40 (s，8H)，1.25 (br. m，11H)，1.07 (s，5H)，0.99 (m，5H)，0.87 (q，10H)，0.75 (s，3H)。 CN. 化合物 SA171 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽 步驟 1 ： (9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 )-2,2,6- 三甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -17- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.15 g，0.30 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加 N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁基]胺基}丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.32 g，0.74 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.07 g，0.59 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.11 g，0.59 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 (9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2,6-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.08 g，0.09 mmol，28.7%)。UPLC/ELSD：RT：2.79 min。MS (ES)：C 52H 94N 4O 5S 2之 m/z(MH +) 920.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.37 (br. s，1H)，4.79 (br. m，2H)，3.64 (br. m，3H)，3.31 (br. m，4H)，2.95 (t，2H)，2.69 (br. m，7H)，2.34 (d，2H， J= 6 Hz)，2.24 (m，1H)，1.94 (br. m，4H)，1.60 (br. m，11H)，1.44 (s，22H)，1.31 (br. m，5H)，1.16 (br. m，13H)，1.00 (s，6H)，0.93 (d，4H， J= 6 Hz)，0.88 (d，4H， J= 6 Hz)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽
向 (9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2,6-三甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.08 g，0.09 mmol)於氮下攪拌之DCM (2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.21 mL，0.85 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(10 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀N-(3-胺基丁基)-N-(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺三鹽酸鹽(0.05 g，0.05 mmol，63.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.77 min。MS (ES)：C 42H 81Cl 3N 4OS 2之 m/z(MH +) 720.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.39 (br. s，1H)，3.68 (br. m，1H)，3.46 (br. m，6H)，3.33 (s，4H)，3.14 (br. m，6H)，3.00 (br. m，5H)，2.63 (br. m，1H)，2.37 (d，2H， J= 6 Hz)，1.99 (br. m，16H)，1.53 (br. m，8H)，1.40 (m，13H)，1.18 (br. m，8H)，1.05 (s，4H)，0.98 (d，5H， J= 6 Hz)，0.90 (d，8H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 CO. 化合物 SA172 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(8- 胺基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.09 g，0.18 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加(9-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)胺基)壬-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.08 g，0.18 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04 g，0.35 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.35 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 (4-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.11 g，0.12 mmol，66.1%)。UPLC/ELSD：RT：3.50 min。MS (ES)：C 53H 95N 3O 5S 2之 m/z(MH +) 919.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.29 (br. s，1H)，4.59 (br. s，1H)，4.35 (br. s，1H)，3.55 (br. m，3H)，3.17 (br. m，3H)，2.89 (t，2H)，2.63 (br. m，3H)，2.27 (br. m，2H)，1.86 (m，5H)，1.51 (br. m，9H)，1.36 (s，19H)，1.24 (br. m，14H)，1.05 (m，13H)，0.93 (s，6H)，0.86 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.61 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(8- 胺基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向 (4-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.11 g，0.12 mmol)於氮下攪拌之DCM (3 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 N於二噁烷中，0.29 mL，1.15 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(25 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 N-(3-胺基丁基)-N-(8-胺基壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽 (0.09 g，0.11 mmol，94.3%)。UPLC/ELSD：RT = 1.86 min。MS (ES)：C 43H 81Cl 2N 3OS 2之 m/z(MH +) 719.3。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.39 (br. m，6H)，5.38 (br. s，1H)，3.41 (br. m，5H)，3.00 (br. s，2H)，2.85 (br. s，2H)，2.70 (br. m，1H)，2.35 (br. m，2H)，2.01 (m，8H)，1.44 (br. m，28H)，1.12 (br. m，7H)，1.02 (s，6H)，0.94 (d，3H， J= 6 Hz)，0.87 (d，7H， J= 6 Hz)，0.69 (s，3H)。 CP. 化合物 SA173 ： N,N- 雙 (3- 胺基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 ) 氮烷二基 ) 雙 ( 丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.100 g，0.197 mmol)、N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.078 g，0.22 mmol)及三乙胺(0.08 mL，0.6 mmol)於冷卻至0℃之DCM (1.6 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.20 mL，0.39 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17小時，用DCM (10 mL)稀釋反應混合物，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.124 g，0.146 mmol，74.1%)。UPLC/ELSD：RT = 3.60 min。MS (ES)：C 48H 85N 3O 5S 2之m/z = 849.65 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl3) δ 5.39 - 5.32 (m，1H)，4.68 - 4.38 (m，2H)，3.77 - 3.12 (m，6H)，3.06 - 2.85 (m，2H)，2.80 - 2.54 (m，3H)，2.41 - 2.23 (m，2H)，2.03 - 0.94 (m，54H)，1.00 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.87 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.86 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N,N- 雙 (3- 胺基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.121 g，0.143 mmol)於冷卻至0℃之DCM (2.5 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加二噁烷中之4 N HCl (0.36 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16小時，添加MTBE (20 mL)，且將反應混合物離心(10,000 × g保持15 min在4℃下)。去除上清液，且用MTBE少量沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀N,N-雙(3-胺基丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.089 g，0.12 mmol，83.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.12 min。MS (ES)：C 38H 69N 3OS 2之m/z = 648.64 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.31 (m，1H)，3.77 - 3.33 (m，5H)，3.27 - 3.17 (m，1H)，3.05 - 2.74 (m，4H)，2.73 - 2.59 (m，1H)，2.42 - 2.27 (m，2H)，2.15 - 1.75 (m，9H)，1.72 - 0.96 (m，21H)，1.39 (d， J= 6.8 Hz，3H)，1.33 (d， J= 6.5 Hz，3H)，1.03 (s，3H)，0.95 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.73 (s，3H)。 CQ. 化合物 SA174 ： N,N- 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 ) 氮烷二基 ) 雙 (2- 甲基丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.13 g，0.26 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 (氮烷二基雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.10 g，0.26 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.06 g，0.52 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.10 g，0.52 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 (((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.21 g，0.24 mmol，92.9%)。UPLC/ELSD：RT：3.72 min。MS (ES)：C 50H 89N 3O 5S 2之 m/z(MH +) 877.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.07 (br. s，1H)，5.02 (s，1H)，4.50 (s，1H)，4.18 (s，1H)，3.01 (br. m，4H)，2.64 (t，2H)，2.43 (br. m，3H)，2.03 (br. m，2H)，1.61 (br. m，9H)，1.27 (br. m，5H)，1.14 (s，19H)，0.99 (s，15H)，0.83 (br. m，8H)，0.71 (s，5H)，0.64 (d，4H， J= 6 Hz)，0.58 (d，6H， J= 6 Hz)，0.39 (s，3H)。 步驟 2 ： N,N- 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向 (((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯 (0.21 g，0.24 mmol)於氮下攪拌之DCM (5 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.60 mL，2.40 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(15 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀N,N-雙(3-胺基-3-甲基丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.14 g，0.17 mmol，71.9%)。UPLC/ELSD：RT = 2.17 min。MS (ES)：C 40H 75Cl 2N 3OS 2之 m/z(MH +) 677.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.40 (br. s，1H)，3.51 (br. m，4H)，3.32 (br. s，2H)，2.99 (t，2H)，2.86 (t，2H)，2.64 (br. m，1H)，2.37 (d，2H， J= 6 Hz)，2.07 (br. m，9H)，1.55 (br. m，8H)，1.47 (s，6H)，1.41 (s，8H)，1.18 (br. m，11H)，1.05 (s，5H)，0.96 (d，4H， J= 6 Hz)，0.92 (d，7H， J= 6 Hz)，0.74 (s，3H)。 CR. 化合物 SA175 ： 4-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丁基 )-2,2,6- 三甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -18- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.10 g，0.19 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (5 mL)中之溶液中添加 N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁基}胺基)丁基]胺基}丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.21 g，0.48 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.05 g，0.39 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.07 g，0.39 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.03 g，0.03 mmol，14.6%)。UPLC/ELSD：RT：2.76 min。MS (ES)：C 55H 98N 4O 7之 m/z(MH +) 928.4。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.30 (br. s，1H)，4.70 (br. m，1H)，4.53 (br. m，2H)，3.57 (br. m，2H)，3.25 (br. m，4H)，2.57 (br. m，8H)，2.26 (d，3H， J= 6 Hz)，1.77 (br. m，6H)，1.54 (br. m，13H)，1.37 (s，20H)，1.17 (br. m，5H)，1.08 (br. m，12H)，0.94 (s，5H)，0.86 (d，5H， J= 6 Hz)，0.78 (q，9H)，0.61 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基丁基 )(4-((3- 胺基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)丁基)-2,2,6-三甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.03 g，0.03 mmol)於氮下攪拌之DCM (1 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.07 mL，0.28 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(5 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀4-((3-胺基丁基)(4-((3-胺基丁基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.02 g，0.02 mmol，63.9%)。UPLC/ELSD：RT = 1.75 min。MS (ES)：C 45H 85Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 728.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.40 (br. s，1H)，4.55 (br. m，1H)，3.68 (br. s，1H)，3.50 (br. m，4H)，3.33 (br. m，3H)，3.14 (br. m，5H)，2.66 (br. m，4H)，2.33 (br. m，3H)，1.81 (br. m，19H)，1.37 (m，11H)，1.20 (br. m，6H)，1.07 (s，5H)，0.99 (d，5H， J= 6 Hz)，0.89 (q，9H)，0.75 (s，3H)。 CS. 化合物 SA176 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁基 )-2,2,6,6- 四甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十八烷 -18- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向 4-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-4-側氧基丁酸(0.15 g，0.31 mmol) 於氮下攪拌之無水DCM (10 mL)中之溶液中添加 N-(4-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)丁基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯 (0.35 g，0.76 mmol)、二甲基胺基吡啶(0.8 g，0.61 mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(0.12 g，0.61 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然後，用二氯甲烷稀釋溶液，用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20 mL)及鹽水(1×20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並濃縮成油狀物。將油狀物吸收於DCM中且在二氧化矽上在DCM中用0-100% (80:19:1 DCM/MeOH/NH 4OH)梯度純化。將含有產物之流份匯集並濃縮，以獲得淺黃色油狀 14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.10 g，0.10 mmol，33.6%)。UPLC/ELSD：RT：2.70 min。MS (ES)：C 55H 98N 4O 7之 m/z(MH +) 928.4。 1H NMR (301 MHz，CDCl 3) δ 5.70 (br. s，1H)，5.29 (br. s，1H)，4.50 (br. m，2H)，3.21 (br. m，4H)，2.54 (br. m 8H)，2.24 (d，2H， J= 6 Hz)，1.87 (br. m，7H)，1.53 (br. m，10H)，1.36 (s，22H)，1.23 (s，15H)，1.02 (br. m，7H)，0.94 (s，6H)，0.85 (d，4H， J= 6 Hz)，0.80 (d，6H， J= 6 Hz)，0.60 (s，3H)。 步驟 2 ： 4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 )(4-((3- 胺基 -3- 甲基丁基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向 14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-甲基丁基)-2,2,6,6-四甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十八烷-18-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯 (0.10 g，0.10 mmol)於氮下攪拌之DCM (2 mL)中之溶液中逐滴添加鹽酸(4 M於二噁烷中，0.26 mL，1.02 mmol)。將溶液在室溫下攪拌過夜。第二天早上，將己烷(5 mL)添加至混合物中，將混合物冷卻至0℃且攪拌30分鐘。然後將溶液離心20分鐘，丟棄上清液，且 在真空中乾燥白色沈澱物，以獲得白色固體狀 4-((3-胺基-3-甲基丁基)(4-((3-胺基-3-甲基丁基)胺基)丁基)胺基)-4-側氧基丁酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽 (0.09 g，0.08 mmol，74.4%)。UPLC/ELSD：RT = 1.72 min。MS (ES)：C 45H 85Cl 3N 4O 3之 m/z(MH +) 728.3。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.40 (br. s，1H)，4.54 (br. m，1H)，3.69 (br. s，1H)，3.49 (br. m，4H)，3.32 (br. s，6H)，3.17 (br. m，5H)，2.66 (br. m，4H)，2.33 (br. m，2H)，2.05 (br. m，10H)，1.66 (br. m，16H)，1.43 (br. m，16H)，1.32 (br. s，16H)，1.16 (br. m，8H)，1.07 (s，5H)，0.92 (br. m，25H)，0.75 (s，3H)。 CT. 化合物 SA177 ： N,N- 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ：麥固醇氯
將麥固醇(3.000 g，7.234 mmol)及亞硫醯氯(3.00 mL，41.4 mmol)合併於PhMe (30 mL)中。在80℃下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在20小時，將反應混合物濃縮，然後自PhMe (2×)再濃縮。將固體溶解於熱3:1 EtOH/EtOAc (45 mL)中，然後冷卻至室溫。固體自溶液沈澱出。傾析掉母液，且用冷3:1 EtOH/EtOAc少量沖洗固體，以提供透明固體狀麥固醇氯(2.534 g，5.850 mmol，80.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.74 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.41 - 5.33 (m，1H)，3.87 - 3.67 (m，1H)，2.69 - 2.39 (m，2H)，2.17 - 1.75 (m，6H)，1.73 - 0.76 (m，30H)，1.03 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 13C NMR (75 MHz，CDCl 3) δ 140.96，122.64，60.50，56.85，56.19，50.22，45.98，43.56，42.46，39.85，39.27，36.53，36.29，34.09，33.53，31.98，31.93，29.30，28.38，26.22，24.43，23.22，21.11，19.98，19.41，19.19，18.93，12.13，12.00。 步驟 2 ：硫氰酸麥固醇酯
將麥固醇氯(2.748 g，6.344 mmol)及硫代氰酸鈉(19.235 g，237.27 mmol)於EtOH (105 mL)中回流。藉由TLC監測反應。在64小時，將反應混合物熱過濾，用大量DCM沖洗。將濾液濃縮，吸收於DCM (150 mL)中，且用水洗滌。使有機層通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。將所得固體溶解於接近沸騰的1:1 EtOAc/己烷(19 mL)中，然後緩慢冷卻。一旦達到室溫，便立即將混合物進一步冷卻至4℃。藉由真空過濾收集固體，用冷1:1 EtOAc/己烷少量沖洗，以提供灰白色固體狀硫氰酸麥固醇酯(2.183 g，4.789 mmol，75.5%)。UPLC/ELSD：RT = 3.47 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.48 - 5.35 (m，1H)，3.23 - 2.97 (m，1H)，2.65 - 2.35 (m，2H)，2.10 - 0.76 (m，36H)，1.03 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 13C NMR (75 MHz，CDCl3) δ 140.10、123.29，111.40，56.80，56.18，50.20，48.23，45.98，42.45，39.89，39.79，39.51，36.61，36.28，34.08，31.96，31.86，30.10，29.29，28.37，26.21，24.41，23.21，21.06，19.97，19.35，19.18，18.93，12.13，12.00。 步驟 3 ：硫代麥固醇
在15 min內，向THF (30 mL)及2.3 M氫化鋰鋁於2-甲基四氫呋喃(4.7 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加硫氰酸麥固醇酯(2.100 g，4.607 mmol)於PhMe (20 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在2.5小時，將反應混合物冷卻至0℃，然後在10 min內逐滴緩慢添加3 N HCl水溶液(50 mL)。完成添加後，分離各層。用MTBE (3 × 30 mL)萃取水層。用水及鹽水洗滌合併之有機物層，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供白色固體狀硫代麥固醇(1.944 g，4.513 mmol，97.9%)。UPLC/ELSD：RT = 3.70 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.43 - 5.22 (m，1H)，2.80 - 2.60 (m，1H)，2.45 - 2.23 (m，2H)，2.10 - 1.75 (m，5H)，1.74 - 0.78 (m，32H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 13C NMR (75 MHz，CDCl 3) δ 142.07，121.19，56.90，56.20，50.35，45.98，44.35，42.45，40.08，39.89，39.60，36.49，36.30，34.22，34.09，31.95，29.29，28.39，26.21，24.43，23.21，21.04，19.98，19.48，19.18，18.93，12.13，12.00。 步驟 4 ： 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 吡啶
將硫代麥固醇(1.92 g，4.46 mmol)及Aldrithiol (1.08 g，4.90 mmol)合併於氯仿(12 mL)中。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在24小時，添加Aldrithiol (0.25 g)。在6天，將反應混合物濃縮，吸收於MeOH (30 mL)中，且進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，用MeOH少量沖洗，以提供淺黃色固體狀2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)吡啶(2.098 g，3.886 mmol，87.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.56 min。MS (ES)：C 34H 53NS 2之 m/z= 540.62 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.51 - 8.39 (m，1H)，7.83 - 7.71 (m，1H)，7.69 - 7.57 (m，1H)，7.13 - 7.00 (m，1H)，5.40 - 5.28 (m，1H)，2.89 - 2.69 (m，1H)，2.41 - 2.28 (m，2H)，2.08 - 1.75 (m，5H)，1.74 - 0.74 (m，31H)，0.98 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.3 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 5 ： 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 )-1- 甲基吡啶 -1- 鎓三氟甲磺酸鹽
在10 min內，向 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)吡啶 (2.000 g，3.704 mmol)於庚烷(30 mL)及DCM (3.0 mL)中之溶液中逐滴添加三氟甲磺酸甲酯(0.51 mL，4.5 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在19小時，藉由真空過濾收集固體，用庚烷沖洗，以提供白色固體狀2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲磺酸鹽(2.443 g，3.470 mmol，93.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.67 min。MS (ES)：C 35H 56NS 2之 m/z= 554.80 (M) +。 1H NMR (300 MHz，CD 3CN) δ 8.60 - 8.49 (m，2H)，8.39 - 8.30 (m，1H)，7.75 - 7.66 (m，1H)，5.40 - 5.35 (m，1H)，4.19 (s，3H)，3.04 - 2.89 (m，1H)，2.49 - 2.32 (m，2H)，2.08 - 0.76 (m，36H)，1.01 (s，3H)，0.93 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.69 (s，3H)。 步驟 6 ： 3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙酸
向 2-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-1-甲基吡啶-1-鎓三氟甲磺酸鹽 (2.400 g，3.409 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液中添加3-巰基丙酸(0.34 mL，3.9 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在23小時，將反應混合物傾倒至水(30 mL)中且進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，用水沖洗。將固體溶解於DCM中，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。將ACN (15 mL)添加至殘餘物中。對懸浮液進行音波處理且在冰浴中冷卻。然後藉由真空過濾收集固體，用冷ACN少量沖洗。將固體吸收於ACN (15 mL)中且進行音波處理。藉由真空過濾收集固體，用ACN沖洗，以提供白色固體狀3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(1.333 g，2.492 mmol，73.1%)。UPLC/ELSD：RT = 3.28 min。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 11.10 (br. s，1H)，5.46 - 5.25 (m，1H)，2.96 - 2.85 (m，2H)，2.84 - 2.74 (m，2H)，2.74 - 2.56 (m，1H)，2.42 - 2.22 (m，2H)，2.09 - 1.75 (m，5H)，1.75 - 0.75 (m，31H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 7 ： (((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 ) 氮烷二基 ) 雙 (2- 甲基丁烷 -4,2- 二基 )) 二胺基甲酸二 - 第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.110 g，0.206 mmol)、N-[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-甲基丁基}胺基)-2-甲基丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.088 g，0.226 mmol)及三乙胺(0.09 mL，0.6 mmol)於冷卻至0℃之DCM (1.1 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.21 mL，0.41 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，將反應混合物用DCM稀釋至10 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。將合併之有機物用水洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.139 g，0.154 mmol，74.7%)。UPLC/ELSD：RT = 3.65 min。MS (ES)：C 52H 93N 3O 5S 2之 m/z= 905.77 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.39 - 5.30 (m，1H)，4.73 (s，1H)，4.39 (s，1H)，3.40 - 3.18 (m，4H)，3.04 - 2.90 (m，2H)，2.78 - 2.56 (m，3H)，2.42 - 2.22 (m，2H)，2.11 - 0.78 (m，70H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.3 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 8 ： N,N- 雙 (3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(((3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)氮烷二基)雙(2-甲基丁烷-4,2-二基))二胺基甲酸二-第三丁基酯(0.131 g，0.145 mmol)於DCM (2.0 mL)中之溶液中逐滴添加二噁烷中之4 N HCl (0.26 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，將反應混合物用MBTE稀釋至30 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持15 min)。抽掉上清液。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀N,N-雙(3-胺基-3-甲基丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.089 g，0.109 mmol，75.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.25 min。MS (ES)：C 42H 77N 3OS 2之 m/z= 373.20 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.46 - 5.31 (m，1H)，3.61 - 3.39 (m，4H)，3.01 - 2.91 (m，2H)，2.88 - 2.77 (m，2H)，2.74 - 2.58 (m，1H)，2.40 - 2.24 (m，2H)，2.16 - 1.79 (m，9H)，1.77 - 0.78 (m，31H)，1.44 (s，6H)，1.39 (s，6H)，1.03 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CU. 化合物 SA178 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(8- 胺基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(N-(8-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺基 ) 丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.100 g，0.187 mmol)、N-[4-({8-[(第三丁氧基羰基)胺基]壬基}胺基)丁-2-基]胺基甲酸第三丁基酯(0.088 g，0.206 mmol)及三乙胺(0.08 mL，0.569 mmol)於冷卻至0℃之DCM (2.5 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐 (0.19 mL，0.37 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物。在19小時，將反應混合物用DCM稀釋至10 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。使合併之有機層通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供白色泡沫狀(4-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.130 g，0.137 mmol，73.5%)。UPLC/ELSD：RT = 3.65 min。MS (ES)：C 55H 99N 3O 5S 2之 m/z= 946.96 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.45 - 5.29 (m，1H)，4.70 - 4.18 (m，2H)，3.80 - 3.10 (m，6H)，3.05 - 2.87 (m，2H)，2.83 - 2.56 (m，3H)，2.43 - 2.25 (m，2H)，2.14 - 0.75 (m，74H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基丁基 )-N-(8- 胺基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(4-(N-(8-((第三丁氧基羰基)胺基)壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺基)丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.126 g，0.133 mmol)於DCM (1.9 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加二噁烷中之4 N HCl (0.24 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，用MTBE (30 mL)稀釋反應混合物，且將反應混合物離心(在4℃下10,000 × g保持15 min)。抽掉上清液，且將固體懸浮於MTBE中並濃縮，以提供N-(3-胺基丁基)-N-(8-胺基壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.101 g，0.115 mmol，86.7%)。UPLC/ELSD：RT = 2.28 min。MS (ES)：C 45H 83N 3OS 2之 m/z= 373.82 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.42 - 5.33 (m，1H)，3.76 - 3.59 (m，1H)，3.56 - 3.10 (m，5H)，3.03 - 2.57 (m，5H)，2.42 - 2.25 (m，2H)，2.12 - 0.78 (m，56H)，1.04 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CV. 化合物 SA179 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(8- 胺基 -8- 甲基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽 步驟 1 ： (4-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 )-N-(8-((((4- 甲氧基苄基 ) 氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 甲基壬基 ) 丙醯胺基 )-2- 甲基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.102 g，0.191 mmol)、N-(4-{[8-({[(4-甲氧基苯基)甲氧基]羰基}胺基)-8-甲基壬基]胺基}-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.113 g，0.217 mmol)及三乙胺(0.08 mL，0.6 mmol)於冷卻至0℃之DCM (2.5 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50%丙烷膦酸酐(0.19 mL，0.37 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，將反應混合物用DCM稀釋至10 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(4-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-N-(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)丙醯胺基)-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.160 g，0.154 mmol，80.8%)。UPLC/ELSD：RT = 3.68 min。MS (ES)：C 61H 103N 3O 6S 2之 m/z= 1039.59 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 7.33 - 7.27 (m，2H)，6.92 - 6.85 (m，2H)，5.39 - 5.30 (m，1H)，4.97 (s，2H)，4.71 - 4.35 (m，2H)，3.81 (s，3H)，3.38 - 3.16 (m，4H)，3.01 - 2.89 (m，2H)，2.79 - 2.55 (m，3H)，2.39 - 2.25 (m，2H)，2.09 - 0.77 (m，71H)，1.00 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 甲基丁基 )-N-(8- 胺基 -8- 甲基壬基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺二鹽酸鹽
向(4-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)-N-(8-((((4-甲氧基苄基)氧基)羰基)胺基)-8-甲基壬基)丙醯胺基)-2-甲基丁-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.154 g，0.148 mmol)於DCM (2.4 mL)中之溶液中逐滴添加二噁烷中之4 N HCl (0.26 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，將反應混合物用MTBE稀釋至30 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持15 min)。抽掉上清液。將固體懸浮於MTBE (30 mL)中，然後離心(在4℃下10,000 × g保持15 min)。抽掉上清液。將固體懸浮於MBTE中且然後濃縮，以提供白色固體狀N-(3-胺基-3-甲基丁基)-N-(8-胺基-8-甲基壬基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺二鹽酸鹽(0.042 g，0.047 mmol，31.6%)。UPLC/ELSD：RT = 2.33 min。MS (ES)：C 47H 87N 3OS 2之 m/z= 388.12 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.33 (m，1H)，3.52 - 3.34 (m，4H)，3.02 - 2.89 (m，2H)，2.87 - 2.74 (m，2H)，2.73 - 2.57 (m，1H)，2.40 - 2.26 (m，2H)，2.13 - 1.79 (m，7H)，1.37 (s，6H)，1.33 (s，6H)，1.77 - 0.78 (m，43H)，1.04 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CW. 化合物 SA180 ： (4-( 甲基胺基 ) 丁基 )(3-( 甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽 步驟 1 ： N- 甲基 -N-[4-(2- 硝基苯磺醯胺基 ) 丁基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
向N-(4-胺基丁基)-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(1.000 g，4.943 mmol)及三乙胺(0.95 mL，6.8 mmol)於冷卻至0℃之DCM (15 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加2-硝基苯磺醯氯(1.315 g，5.932 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液。添加後，在室溫下攪拌反應混合物且藉由TLC監測。在17小時，將反應混合物冷卻至0℃，然後添加5% NaHCO 3水溶液(10 mL)。升溫至室溫後，分離各層。用DCM (15 mL)萃取水層。將合併之有機物用5%檸檬酸水溶液及水(2×)洗滌，通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮以提供琥珀色油狀N-甲基-N-[4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁基]胺基甲酸第三丁基酯(1.932 g，定量)。UPLC/ELSD：RT = 0.76 min。MS (ES)：C 16H 25N 3O 6S之 m/z= 288.09 [(M + H) - (CH 3) 2C=CH 2- CO 2] +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.18 - 8.08 (m，1H)，7.90 - 7.80 (m，1H)，7.80 - 7.68 (m，2H)，5.34 (br. s，1H)，3.23 - 3.06 (m，4H)，2.79 (s，3H)，1.60 - 1.46 (m，4H)，1.43 (s，9H)。 步驟 2 ： N-[3-(N-{4-[( 第三丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ] 丁基 }-2- 硝基苯磺醯胺基 ) 丙基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
將N-甲基-N-[4-(2-硝基苯磺醯胺基)丁基]胺基甲酸第三丁基酯(0.750 g，1.94 mmol)、N-(3-溴丙基)-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(0.586 g，2.32 mmol)及碳酸鉀(0.535 g，3.87 mmol)合併於DMF (11.25 mL)中。在80℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在19小時，過濾反應混合物，用EtOAc沖洗。將濾液用EtOAc稀釋至150 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液、水(3×)及鹽水洗滌。經Na 2SO 4乾燥有機物並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之20%-80% EtOAc)純化粗材料，以提供白色固體狀N-[3-(N-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]丁基}-2-硝基苯磺醯胺基)丙基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(0.836 g，1.50 mmol，82.8%)。UPLC/ELSD：RT = 1.46 min。MS (ES)：C 25H 42N 4O 8S之 m/z= 559.37 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 8.06 - 7.93 (m，1H)，7.76 - 7.55 (m，3H)，3.42 - 3.10 (m，8H)，2.80 (s，6H)，1.89 - 1.70 (m，2H)，1.70 - 1.46 (m，4H)，1.44 (s，18H)。 步驟 3 ： N-[3-({4-[( 第三丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ] 丁基 } 胺基 ) 丙基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
向N-[3-(N-{4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]丁基}-2-硝基苯磺醯胺基)丙基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(0.830 g，1.49 mmol)及碳酸鉀(0.616 g，4.46 mmol)於DMF (12.5 mL)中之混合物中添加苯硫酚(0.28 mL，2.7 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在23小時，過濾反應混合物，用EtOAc沖洗。將濾液用EtOAc稀釋至150 mL，然後用5% K 2CO 3水溶液(2×)、水(3×)及鹽水洗滌。經Na 2SO 4乾燥有機物，且然後濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供黃色油狀N-[3-({4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]丁基}胺基)丙基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(0.477 g，1.28 mmol，86.0%)。UPLC/ELSD：RT = 0.45 min。MS (ES)：C 19H 39N 3O 4之 m/z= 374.56 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 3.33 - 3.11 (m，4H)，2.83 (s，6H)，2.70 - 2.50 (m，4H)，1.76 - 1.62 (m，2H)，1.62 - 1.37 (m，22H)。 步驟 4 ： (4-(( 第三丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丁基 )(3-(( 第三丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將4-硝基苯基碳酸膽固醇酯(0.120 g，0.207 mmol)、N-[3-({4-[(第三丁氧基羰基)(甲基)胺基]丁基}胺基)丙基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(0.077 g，0.207 mmol)及三乙胺(0.09 mL，0.6 mmol)合併於PhMe (1.8 mL)中。在90℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在24小時，將反應混合物冷卻至室溫，用DCM稀釋至10 mL，且用5% K 2CO 3水溶液(2×)洗滌。用DCM (10 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(己烷中之0-50% EtOAc)純化粗材料，以提供澄清油狀(4-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.152 g，0.187 mmol，90.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.59 min。MS (ES)：C 49H 87N 3O 6之 m/z= 814.88 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.41 - 5.33 (m，1H)，4.58 - 4.42 (m，1H)，3.32 - 3.10 (m，8H)，2.88 - 2.79 (m，6H)，2.41 - 2.20 (m，2H)，2.09 - 0.75 (m，60H)，1.02 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 5 ： (4-( 甲基胺基 ) 丁基 )(3-( 甲基胺基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯二鹽酸鹽
向(4-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丁基)(3-((第三丁氧基羰基)(甲基)胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.143 g，0.176 mmol)於DCM (2.2 mL)中之溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.31 mL)。在室溫下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在18小時，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液。將固體用MTBE沖洗，懸浮於MTBE中，並濃縮以提供白色固體狀(4-(甲基胺基)丁基)(3-(甲基胺基)丙基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯二鹽酸鹽(0.102 g，0.131 mmol，74.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.03 min。MS (ES)：C 39H 71N 3O 2之 m/z= 328.45 [(M + 2H) + CH 3CN] 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.44 - 5.33 (m，1H)，4.52 - 4.37 (m，1H)，3.47 - 3.33 (m，4H)，3.10 - 2.90 (m，4H)，2.78 - 2.63 (m，6H)，2.44 - 2.27 (m，2H)，2.19 - 0.78 (m，42H)，1.06 (s，3H)，0.96 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.73 (s，3H)。 CX. 化合物 SA181 ： N-(3- 胺基 -3- 乙基戊基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽 步驟 1 ： (6,6,17- 三乙基 -9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 )-2,2- 二甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -17- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.150 g，0.280 mmol)、N-(1-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-乙基戊基}胺基)丁基]胺基}-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.217 g，0.421 mmol)及三乙胺(0.14 mL，1.0 mmol)於DCM (3.75 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.29 mL，0.56 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物用DCM稀釋15 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (2 × 15 mL)萃取水溶液。經Na 2SO 4乾燥合併之有機物並濃縮。經由矽膠層析(3:2 EtOAc/己烷，然後DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供白色泡沫狀(6,6,17-三乙基-9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.110 g，0.107 mmol，38.2%)。UPLC/ELSD：RT = 3.01 min。MS (ES)：C 60H 110N 4O 5S 2之 m/z= 1032.19 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.44 - 5.32 (m，1H)，4.89 (br. s，1H)，4.53 - 4.16 (m，1H)，3.43 - 3.14 (m，4H)，3.11 - 2.86 (m，2H)，2.84 - 2.43 (m，5H)，2.43 - 2.22 (m，2H)，2.10 - 0.73 (m，84H)，0.99 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.6 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 乙基戊基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽
向(6,6,17-三乙基-9-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.103 g，0.100 mmol)於DCM (2.1 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.17 mL，0.68 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液，且用MTBE沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀N-(3-胺基-3-乙基戊基)-N-(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺三鹽酸鹽(0.092 g，0.088 mmol，87.8%)。UPLC/ELSD：RT = 2.17 min。MS (ES)：C 50H 94N 4OS 2之 m/z= 416.72 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.41 - 5.33 (m，1H)，3.58 - 3.37 (m，4H)，3.19 - 3.06 (m，4H)，3.03 - 2.92 (m，2H)，2.88 - 2.78 (m，2H)，2.73 - 2.57 (m，1H)，2.39 - 2.27 (m，2H)，2.20 - 0.77 (m，70H)，0.72 (s，3H)。 CY. 化合物 SA182 ： 5-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 乙基戊基 )-6,6- 二乙基 -2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.150 g，0.284 mmol)、N-(1-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-乙基戊基}胺基)丁基]胺基}-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.219 g，0.425 mmol)及三乙胺(0.14 mL，1.0 mmol)於DCM (3.75 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.29 mL，0.56 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在17 h，將反應混合物用DCM稀釋15 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (2 × 15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(3:2 EtOAc/己烷，然後DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供白色泡沫狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)-6,6-二乙基-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.123 g，0.120 mmol，42.3%)。UPLC/ELSD：RT = 2.96 min。MS (ES)：C 62H 112N 4O 7之 m/z= 1026.39 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.41 - 5.31 (m，1H)，5.00 - 4.70 (m，1H)，4.69 - 4.51 (m，1H)，4.51 - 4.16 (m，1H)，3.37 - 3.11 (m，4H)，3.11 - 2.53 (m，4H)，2.43 - 2.21 (m，6H)，2.12 - 0.72 (m，84H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.4 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)-6,6-二乙基-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.119 g，0.116 mmol)於DCM (2.4 mL)中之溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.20 mL)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液，且用MTBE沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供灰白色固體狀5-((3-胺基-3-乙基戊基)(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.105 g，0.092 mmol，79.5%)。UPLC/ELSD：RT = 2.09 min。MS (ES)：C 52H 96N 4O 3之 m/z= 413.39 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.42 - 5.35 (m，1H)，4.62 - 4.46 (m，1H)，3.57 - 3.36 (m，4H)，3.18 - 3.01 (m，4H)，2.56 - 2.25 (m，6H)，2.20 - 0.77 (m，72H)，0.72 (s，3H)。 CZ. 化合物 SA183 ： (3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： (3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 乙基戊基 )(4-((3- 乙基 -3-((( 新戊基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
將4-硝基苯基碳酸麥固醇酯(0.140 g，0.241 mmol)、N-(1-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-乙基戊基}胺基)丁基]胺基}-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.187 g，0.362 mmol)及三乙胺(0.14 mL，1.0 mmol)合併於PhMe (3.5 mL)中。在100℃下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物冷卻至rt，用DCM稀釋至15 mL，且然後用5% K 2CO 3水溶液(2×)洗滌。用DCM (2 × 15 mL)萃取合併之洗滌物。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料。經由矽膠層析(1:1 EtOAc/己烷，然後DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))進一步純化材料，以提供白色泡沫狀(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)(4-((3-乙基-3-(((新戊基氧基)羰基)胺基)戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.097 g，0.10 mmol，41.5%)。UPLC/ELSD：RT = 2.95 min。MS (ES)： C 58H 106N 4O 6之 m/z= 956.34 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.44 - 5.29 (m，1H)，5.17 - 4.91 (m，1H)，4.59 - 4.41 (m，1H)，4.35 - 4.06 (m，1H)，3.35 - 3.02 (m，4H)，2.70 - 2.53 (m，4H)，2.46 - 2.17 (m，2H)，2.08 - 0.73 (m，82H)，1.01 (s，3H)，0.92 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.68 (s，3H)。 步驟 2 ： (3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基甲酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5- 乙基 -6- 甲基庚 -2- 基 )-10,13- 二甲基 -2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)(4-((3-乙基-3-(((新戊基氧基)羰基)胺基)戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.094 g，0.098 mmol)於DCM (1.9 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.17 mL)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL且然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液，且用MTBE沖洗固體。將固體懸浮於MTBE中，然後濃縮以提供白色固體狀(3-胺基-3-乙基戊基)(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基甲酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-((2R,5R)-5-乙基-6-甲基庚-2-基)-10,13-二甲基-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.083 g，0.089 mmol，90.1%)。UPLC/ELSD：RT = 1.99 min。MS (ES)：C 48H 90N 4O 2之 m/z= 378.75 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.36 (m，1H)，4.52 - 4.35 (m，1H)，3.44 - 3.34 (m，4H)，3.17 - 3.05 (m，4H)，2.42 - 2.31 (m，2H)，2.16 - 0.78 (m，70H)，0.73 (s，3H)。 DA. 化合物 SA184 ： N-(3- 胺基 -3- 乙基戊基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽 步驟 1 ： (14-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯基 )-6,6,17- 三乙基 -2,2- 二甲基 -4- 側氧基 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -17- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
向3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙酸(0.140 g，0.276 mmol)、N-(1-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-乙基戊基}胺基)丁基]胺基}-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.213 g，0.414 mmol)及三乙胺(0.14 mL，1.0 mmol)於DCM (3.5 mL) 中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.24 mL，0.468 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在3 h，將反應混合物用DCM稀釋15 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (2 × 15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-20% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供澄清黃色油狀(14-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-6,6,17-三乙基-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.097 g，0.097 mmol，35.1%)。UPLC/ELSD：RT = 2.95 min。MS (ES)：C 58H 106N 4O 5S 2之 m/z= 1004.81 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.39 - 5.31 (m，1H)，5.03 - 4.74 (m，1H)，4.52 - 4.25 (m，1H)，3.39 - 3.10 (m，4H)，3.10 - 2.85 (m，3H)，2.85 - 2.42 (m，6H)，2.42 - 2.22 (m，2H)，2.09 - 0.72 (m，78H)，0.99 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： N-(3- 胺基 -3- 乙基戊基 )-N-(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 )-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基 ) 二硫烷基 ) 丙醯胺三鹽酸鹽
向 (14-(3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯基)-6,6,17-三乙基-2,2-二甲基-4-側氧基-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-17-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.091 g，0.091 mmol)於DCM (2.3 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.16 mL)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液。用MTBE沖洗固體，然後懸浮於MTBE中並濃縮，以提供白色固體狀N-(3-胺基-3-乙基戊基)-N-(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)-3-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)二硫烷基)丙醯胺三鹽酸鹽(0.080 g，0.080 mmol，88.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.04 min。MS (ES)：C 48H 90N 4OS 2之 m/z= 402.54 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.31 (m，1H)，3.58 - 3.36 (m，4H)，3.19 - 3.04 (m，4H)，3.03 - 2.89 (m，2H)，2.89 - 2.76 (m，2H)，2.73 - 2.55 (m，1H)，2.42 - 2.23 (m，2H)，2.18 - 0.96 (m，57H)，0.94 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.72 (s，3H)。 DB. 化合物 SA185 ： 5-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽 步驟 1 ： 14-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3- 乙基戊基 )-6,6- 二乙基 -2,2- 二甲基 -4,15- 二氧橋 -3- 氧雜 -5,9,14- 三氮雜十九烷 -19- 酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯
向5-(((3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基)氧基)-5-側氧基戊酸(0.140 g，0.28 mmol)、N-(1-{[4-({3-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-乙基戊基}胺基)丁基]胺基}-3-乙基戊-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(0.216 g，0.419 mmol)及三乙胺(0.14 mL，1.0 mmol)於DCM (3.5 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加DCM中之50 wt%丙烷膦酸酐(0.28 mL，0.546 mmol)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在3 h，將反應混合物用DCM稀釋15 mL，然後用5% NaHCO 3水溶液洗滌。用DCM (2 × 15 mL)萃取水溶液。使合併之有機物通過疏水釉料，經Na 2SO 4乾燥，並濃縮。經由矽膠層析(DCM中之0-14% (MeOH中之5%濃NH 4OH水溶液))純化粗材料，以提供澄清黃色油狀14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)-6,6-二乙基-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.071 g，0.071 mmol， 25.4%)。UPLC/ELSD：RT = 2.89 min。MS (ES)：C 60H 108N 4O 7之 m/z= 998.15 (M + H) +。 1H NMR (300 MHz，CDCl 3) δ 5.43 - 5.31 (m，1H)，5.11 - 4.87 (m，1H)，4.68 - 4.51 (m，1H)，4.40 - 4.12 (m，1H)，3.37 - 3.12 (m，4H)，2.72 - 2.51 (m，4H)，2.43 - 2.21 (m，6H)，2.07 - 0.74 (m，80H)，1.01 (s，3H)，0.91 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.67 (s，3H)。 步驟 2 ： 5-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 )(4-((3- 胺基 -3- 乙基戊基 ) 胺基 ) 丁基 ) 胺基 )-5- 側氧基戊酸 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13- 二甲基 -17-((R)-6- 甲基庚 -2- 基 )-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17- 十四氫 -1H- 環戊 [a] 菲 -3- 基酯三鹽酸鹽
向14-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-乙基戊基)-6,6-二乙基-2,2-二甲基-4,15-二氧橋-3-氧雜-5,9,14-三氮雜十九烷-19-酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯(0.067 g，0.067 mmol)於DCM (1.8 mL)中之攪拌溶液中添加二噁烷中之4 N HCl (0.12 mL)。在rt下攪拌反應混合物且藉由LCMS監測。在16 h，將反應混合物用MTBE稀釋至20 mL，然後離心(在4℃下10,000 × g保持30 min)。抽掉上清液。用MTBE沖洗固體，然後懸浮於MTBE中並濃縮，以提供白色固體狀5-((3-胺基-3-乙基戊基)(4-((3-胺基-3-乙基戊基)胺基)丁基)胺基)-5-側氧基戊酸(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-二甲基-17-((R)-6-甲基庚-2-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十四氫-1H-環戊[a]菲-3-基酯三鹽酸鹽(0.061 g，0.066 mmol，97.5%)。UPLC/ELSD：RT = 1.96 min。MS (ES)：C 50H 92N 4O 3之 m/z= 399.58 (M + 2H) 2+。 1H NMR (300 MHz，MeOD) δ 5.45 - 5.33 (m，1H)，4.62 - 4.46 (m，1H)，3.56 - 3.36 (m，4H)，3.18 - 3.03 (m，4H)，2.55 - 2.25 (m，6H)，2.18 - 0.98 (m，59H)，0.95 (d， J= 6.5 Hz，3H)，0.88 (d， J= 6.6 Hz，6H)，0.73 (s，3H)。 實例 2 奈米粒子組合物之產生
將脂質以24 mg/mL之濃度及49.0:11.2:39.3:0.5之莫耳比(IL1:DSPC:膽固醇:PEG-DMG-2K)溶解於乙醇中且與酸化緩衝液(pH 4之45 mM乙酸鹽緩衝液)混合。使用多入口渦旋混合器以脂質:緩衝液之3:7體積比(用於混合器1及混合器2)及脂質:緩衝液(25%乙醇)之1:3體積比(用於混合器3)將脂質溶液及酸化緩衝液混合。在5秒的滯留時間後，將所得奈米粒子與55 mM乙酸鈉(pH 5.6)以奈米粒子:緩衝液之5:7體積比混合。混合參數參見表2a。然後將所得稀奈米粒子緩衝液交換並使用切向流過濾(TFF)濃縮成含有5 mM乙酸鈉(pH 5.0)之最終緩衝液。TFF參數參見表2b。然後，隨後添加5 mM乙酸鹽緩衝液(pH 5)中之70%蔗糖溶液。 表 2a ：混合參數
混合器
流 1 2 3
1 mL/min 21 75 281
2 mL/min 49 175 844
3 mL/min 98 350 1575
奈米沈澱 (1+2) 30% 30% 25%
混合產物 (1+2+3) 12.5% 12.5% 10.4%
表 2b ： TFF 參數
TFF 參數 混合器值
進料通量 240 L/m 2/hr
負載 100-300 g/m 3
初始濃度：因數 10×
滲濾體積(DV) 8 DV
最終濃度：因數 4×
TMP 4-6 psi
將5 mM乙酸酯(pH 5)及75 g/L蔗糖中之7.33 mg/mL脂質濃度之所得奈米粒子與42.5 mM乙酸鈉(pH 5.0)中之0.625 mg/mL濃度之mRNA (螢光素酶或CFTR)混合，N:P為4.93。使用多入口渦旋混合器將奈米粒子溶液及奈米粒子以奈米粒子:mRNA之3:2體積比混合。一旦負載有mRNA，該等中間奈米粒子便立即經受300秒滯留時間，然後以奈米粒子:緩衝液之5:1體積比添加含有120 mM TRIS (pH 8.12)之中和緩衝液。
對於 評估螢光素酶蛋白質表現之HeLa研究，將溶解於20 mM TRIS緩衝液(pH 7.5)中之PEG-DMG-2K以1:6之比率添加至中和中間奈米粒子溶液中，使溶液達到48.5:11.1:38.9:1.5%之IL1:DSPC:膽固醇:PEG-DMG-2K之最終莫耳比。然後用脂質胺改質此奈米粒子調配物。在典型實例中，用脂質胺SA50 (467.2 nmol)改質濃度為0.18 mg/mL mRNA且體積為0.56 mL之奈米粒子調配物，該脂質胺係以奈米粒子:緩衝液之1:1體積比在含有20 mM TRIS、14.3 mM乙酸鈉、32 g/L蔗糖及140 mM NaCl (pH 7.5)之緩衝液中製備。
對於評估CFTR蛋白表現之HeLa研究，將中間奈米粒子調配物(1 mL，0.415 mg mRNA)與含有20 mM TRIS (pH 7.5)、0.9 mg/mL PEG-DMG-2K及脂質胺SA50 (647.1 nmol)之緩衝液以奈米粒子:緩衝液之6:1體積比混合。使用離心過濾裝置(100 kDa分子量截留)將所得奈米粒子懸浮液濃縮且在含有300 mM NaCl溶液之運行緩衝液(20 mM TRIS、14.3 mM乙酸鈉及32 g/L蔗糖，pH 7.5)稀釋至含有70 mM NaCl之最終緩衝液基質。
將兩種所得奈米粒子懸浮液經由0.8/0.2 μm膠囊過濾器過濾且以約 0.1 - 1 mg/mL之mRNA強度填充至玻璃瓶中。含有脂質胺之螢光素酶及CFTR mRNA奈米粒子之生物物理數據(來自DLS量測之直徑及PDI以及使用核糖綠分析(Ribogreen assay)之囊封%)分別顯示於表2c及表2d中。 表 2c ：螢光素酶 mRNA 奈米粒子生物物理數據
SA 編號 直徑 (nm) PDI 囊封 % ( 核糖綠 )
SA59 74 0.15 99.7
SA60 74 0.13 98.8
SA61 77 0.16 99.1
SA62 78 0.20 99.0
SA66 72 0.18 88.2
SA69 71 0.16 98.9
SA70 76 0.21 97.9
SA71 73 0.15 99.1
SA72 72 0.11 99.1
SA74 75 0.19 99.1
SA75 74 0.16 98.8
SA76 75 0.20 98.1
SA77 74 0.20 98.2
SA78 76 0.20 99.8
SA79 74 0.18 97.0
SA81 72 0.12 99.8
SA82 73 0.11 99.1
SA83 75 0.14 99.3
SA84 74 0.16 99.9
SA87 75 0.18 98.2
SA88 75 0.13 99.8
SA89 77 0.16 99.7
SA90 76 0.19 99.6
SA95 75 0.20 99.7
SA96 71 0.15 99.6
SA97 72 0.16 98.8
SA98 70 0.15 97.0
SA110 70 0.14 98.8
SA111 76 0.18 99.6
SA113 77 0.23 99.7
SA114 75 0.18 99.7
SA116 73 0.20 97.6
SA117 77 0.28 99.7
SA118 74 0.19 99.7
SA119 78 0.18 99.4
SA120 76 0.28 99.1
SA122 75 0.15 99.4
SA123 73 0.14 99.5
SA124 74 0.14 99.8
SA125 77 0.19 99.7
SA126 75 0.18 99.7
SA127 74 0.17 99.7
SA128 75 0.16 99.4
SA129 70 0.16 99.5
SA131 72 0.12 99.6
SA132 81 0.41 99.3
SA133 73 0.17 99.0
SA134 72 0.13 99.5
SA135 71 0.12 99.3
SA136 75 0.16 99.7
SA137 79 0.20 99.6
SA138 72 0.19 99.2
SA139 72 0.12 99.4
SA141 73 0.15 98.9
SA142 72 0.19 99.5
SA144 71 0.15 99.2
SA145 77 0.17 99.7
SA149 75 0.15 99.5
SA151 72 0.12 95.8
SA152 78 0.15 98.2
SA153 72 0.15 95.8
SA154 73 0.18 99.6
SA155 73 0.11 98.9
SA156 74 0.15 99.5
SA157 75 0.13 99.6
SA158 79 0.28 99.7
SA160 75 0.11 99.7
SA161 77 0.16 99.6
SA162 75 0.15 99.4
SA163 71 0.17 99.1
SA164 73 0.14 98.0
SA165 72 0.13 98.8
SA166 75 0.14 99.2
SA167 75 0.15 98.7
SA168 79 0.16 99.3
SA169 77 0.20 99.4
SA170 75 0.21 99.6
SA171 73 0.23 99.2
SA172 74 0.10 99.4
SA173 73 0.18 99.5
SA174 73 0.17 99.5
SA178 75 0.20 98.8
SA179 73 0.17 99.0
SA180 76 0.17 98.7
SA181 74 0.16 99.5
SA182 73 0.14 99.0
SA183 76 0.21 99.6
SA184 74 0.12 98.8
SA185 75 0.16 99.4
表 2d ： CFTR mRNA 奈米粒子生物物理數據
SA 編號 直徑 (nm) PDI 囊封 % ( 核糖綠 )
SA50 77.1 0.11 99.3
SA51 74.3 0.15 98.4
SA58 71.6 0.10 99.6
SA59 76.9 0.15 99.6
SA60 70.9 0.08 99.5
SA61 71.3 0.11 99.4
SA62 74.2 0.10 99.6
SA64 67.8 0.09 99.1
SA65 78.0 0.14 99.6
SA66 75.7 0.13 99.5
SA67 72.8 0.10 99.2
SA68 74.6 0.12 99.2
SA69 74.0 0.13 99.9
SA70 76.2 0.16 99.8
SA71 74.3 0.12 99.8
SA72 73.0 0.11 99.8
SA73 92.8 0.16 100
SA75 86.9 0.11 100
SA76 83.9 0.11 100
SA77 83.9 0.13 100
SA78 87.7 0.17 100
SA79 78.4 0.13 97.9
SA81 87.6 0.18 99.4
SA82 80.7 0.13 99.4
SA83 82.3 0.15 99.8
SA84 82 0.13 99.5
SA87 81.2 0.1 99.5
SA88 89.4 0.19 99.1
SA89 86.5 0.15 98.6
SA90 84.6 0.14 98.1
SA95 83.6 0.14 99.3
SA96 82.3 0.12 98.9
SA97 83.2 0.12 98.4
SA98 82.8 0.14 93
SA110 84.2 0.15 98.8
SA111 86.4 0.14 98.6
SA114 85.9 0.13 98.5
SA117 94.7 0.17 98.6
SA118 89.9 0.16 97.9
SA119 88.3 0.15 98.9
SA120 83.6 0.14 97.5
SA121 79.2 0.14 97.4
SA122 83.5 0.13 98.6
SA123 83.2 0.12 99.0
SA124 72.0 0.10 98.3
SA125 75.0 0.15 99.0
SA126 79.3 0.15 99.4
SA127 74.1 0.12 99.5
SA128 74.5 0.13 99.4
SA129 81.6 0.12 96.2
SA130 85.7 0.18 95.7
SA131 83.8 0.14 98.6
SA132 84.2 0.15 96.8
SA133 73.5 0.11 99.4
SA134 74.1 0.10 98.7
SA135 73.5 0.11 98.0
SA136 76.9 0.13 97.7
SA137 76.3 0.13 98.3
SA138 89.6 0.12 96.4
SA139 68.9 0.12 99.4
SA141 70.8 0.12 98.9
SA142 69.5 0.14 99.0
SA144 69.3 0.12 98.8
SA145 71.8 0.14 99.8
SA149 72.3 0.14 99.9
SA151 72.0 0.14 98.2
SA152 71.6 0.14 98.4
SA153 69.3 0.12 98.5
SA154 72.8 0.13 99.1
SA155 71.1 0.13 99.4
SA156 76.5 0.18 99.6
SA157 73.9 0.16 99.8
SA158 72.4 0.15 98.3
SA160 77.4 0.15 98.1
SA161 74.2 0.15 99.6
SA162 75.4 0.16 98.6
SA163 70.6 0.09 100
SA164 72.5 0.14 99.2
SA165 69.8 0.12 98.8
SA166 76.1 0.16 99.5
SA167 75.1 0.16 100
SA168 76.1 0.15 99.3
SA169 73.0 0.14 99.2
SA170 74.8 0.15 99.2
SA171 71.3 0.11 99.4
SA172 70.3 0.13 98.3
SA173 71.8 0.16 100
SA174 71.1 0.16 98.1
SA178 83 0.26 100
SA179 73 0.15 99.8
SA181 69 0.13 98.7
SA182 72 0.13 98.0
SA183 71 0.14 99.0
SA184 71 0.13 99.0
SA185 73 0.16 98.6
實例 3 人類子宮頸癌上皮細胞 (HeLa) 中之蛋白質表現
以與實例2中類似之方式製備脂質奈米粒子組合物。為評估活 體外LNP細胞攝取及蛋白質表現，使用來自ATCC.org之HeLa細胞(ATCC CCL-2)。在運行實驗之前，將細胞培養於完全最小必需培養基(MEM)中且平鋪於具有PDL包被表面之96孔細胞載劑超板(PerkinElmer)中。 HeLa 細胞中之螢光素酶蛋白表現分析
在無血清MEM培養基中用緩衝液對照(PBS)或囊封螢光素酶  mRNA之LNP (25 ng/孔；N = 4個重複孔)轉染細胞。將LNP轉染之細胞培育5 h，然後去除培養基且補充完全MEM培養基。將細胞進一步在完全MEM培養基中培育過夜(24 h)。培育24 hr後，使用ONE-Glo™螢光素酶分析(Promega)來量測螢光素酶蛋白表現。在室溫下在微量板混合器中使用1×被動溶解緩衝液(目錄編號E194A)將細胞溶解10 min。藉由添加含有螢光素之螢光素酶分析試劑(目錄編號E151A)來量測上清液中之螢光素酶。然後立即在Synergy H1讀板儀(BioTek)上量測生物發光。表3a中所顯示之結果顯示每一測試樣品之平均相對光單位(RLU)。 表 3a ：螢光素酶表現結果
SA 編號 平均相對光單位 ± 標準偏差
SA59 17590.1    ±    6267.4
SA60 30508.5    ±    6869.7
SA61 14343.1    ±    5298.1
SA62 18807.1    ±    6618.4
SA66 13951.3    ±    6740.3
SA69 35256.9    ±    8309.9
SA70 11822.1    ±    4128.6
SA71 32758.9    ±    5897.1
SA72 30826.5    ±    5913.2
SA74 23899.2    ±    6943.7
SA75 37732.4    ±    6382.7
SA76 38232.8    ±    4603.5
SA77 39191.9    ±    4319
SA78 14341.8    ±    3497.6
SA79 105.1    ±    20
SA81 19619.8    ±    4362.6
SA82 33396.2    ±    4902.7
SA83 35394.8    ±    5033.2
SA84 29639.9    ±    7554
SA87 13346.1    ±    2590.8
SA88 17105.3    ±    7097.3
SA89 8209.2    ±    4138.5
SA90 9337.4    ±    3055.2
SA95 22952.2    ±    5937.7
SA96 17172.8    ±    2176
SA97 13144.4    ±    4350.5
SA98 80.7    ±    36.7
SA110 14227    ±    2513.9
SA111 26647.6    ±    9522.1
SA113 20665.4    ±    7510.5
SA114 22594.3    ±    9128.4
SA116 110.9    ±    26.9
SA117 10134.1    ±    3860.2
SA118 12261.7    ±    4328.5
SA119 18979.6    ±    7864.8
SA120 34695.5    ±    9492.2
SA122 29605.6    ±    6326.9
SA123 28520.5    ±    6429.4
SA124 45805.9    ±    5630.6
SA125 15625.8    ±    3399.4
SA126 31706.7    ±    7386.3
SA127 41246.9    ±    5672.4
SA128 39386.4    ±    5261.4
SA129 144.8    ±    21.6
SA131 40915.5    ±    4983.3
SA132 131.6    ±    15.5
SA133 26696.2    ±    5831.4
SA134 29194.3    ±    6336.9
SA135 27499.8    ±    7269.5
SA136 16245.8    ±    6554.6
SA137 15239.8    ±    6248.1
SA138 22039.8    ±    8550.1
SA139 24497.9    ±    3998.9
SA141 35801.9    ±    8884.3
SA142 44925.4    ±    6006.5
SA144 33357.5    ±    5288.8
SA145 36033.7    ±    4254.5
SA149 31035.2    ±    6333.7
SA151 36345.5    ±    6730.7
SA152 41692.8    ±    9336.8
SA153 35859.3    ±    5894.9
SA154 28128.6    ±    4655.3
SA155 31922.9    ±    8053.8
SA156 37662.9    ±    8258.6
SA157 24130.4    ±    4741.7
SA158 33097.8    ±    7405.1
SA160 19694.4    ±    6954.5
SA161 17839.3    ±    7760
SA162 34454.6    ±    3101.8
SA163 30168    ±    7878.9
SA164 17129.2    ±    2374.1
SA165 33585.6    ±    7766.5
SA166 33377.3    ±    8879.8
SA167 38742.4    ±    6037.5
SA168 35639.5    ±    6688.9
SA169 28034.9    ±    4050.3
SA170 23687.3    ±    3865
SA171 22232.4    ±    9084.1
SA172 27528.4    ±    6654.4
SA173 33596.1    ±    6033
SA174 31280.7    ±    5830.7
SA178 10196.5    ±    602.4
SA179 12298.9    ±    928.6
SA180 35476    ±    6770.8
SA181 12107.3    ±    1481.4
SA182 38564.9    ±    12453
SA183 33915.2    ±    6639.9
SA184 26222.4    ±    4612.1
SA185 36168.3    ±    7638.9
HeLa 細胞中之 CFTR 蛋白表現分析
在血清不存在下，將緩衝液對照(PBS)及囊封囊性纖維化跨膜傳導調控劑(CFTR) mRNA之LNP與MEM培養基一起投用(N = 4個重複孔)。將LNP轉染之細胞培育5 h，然後去除培養基且補充完全MEM培養基。將細胞進一步在完全MEM培養基中培育過夜(24 h)。
培育24 hr後，將細胞用PFA固定且使用抗CFTR兔單株抗體處理用於免疫螢光(IF)。簡言之，將細胞用0.5% TX-100透化10 min，用3%牛血清白蛋白(BSA) + PBST在室溫下封閉1 hr，且與一級抗CFTR單株抗體一起在4℃下培育過夜。一級抗體培育後，將細胞與Alexa 488結合之二級抗體一起培育30 min且用DAPI及HCS CellMask藍色染色劑染色。在不同培育步驟之間，用PBS或PBST洗滌細胞。使用Opera Phoenix轉盤式共焦顯微鏡(PerkinElmer)對細胞成像，且使用488 nm通道偵測CFTR蛋白表現。在Harmony 4.9中實施影像分析，其中主要分析輸出係每個細胞之CFTR強度。表3b中所顯示之結果顯示與緩衝液(PBS)對照相比，每個細胞之CFTR信號強度之倍數變化(NA = 未獲得)。 表 3b ： CFTR 蛋白表現結果
脂質胺 與緩衝液對照相比每個細胞之 CFTR 信號強度之平均倍數變化 ± 標準偏差
SA50 7.1 ± 0.4
SA51 6.5 ± 0.4
SA58 4.5 ± 0.3
SA59 5.6 ± 0.5
SA60 10.7 ± 0.1
SA61 7.2 ± 0.4
SA62 5.5 ± 1.3
SA64 9.1 ± 0.6
SA65 5.9 ± 0.5
SA66 2.4 ± 0.1
SA67 7.7 ± 0.7
SA68 8.9 ± 0.4
SA69 5.3 ± 0.5
SA70 4.5 ± 0.8
SA71 6.0 ± 0.4
SA72 6.6 ± 0.6
SA73 9.4 ± 0.6
SA75 11.9 ± 0.6
SA76 12.0 ± 1.1
SA77 12.2 ± 1.3
SA78 11.3 ± 0.7
SA79 0.8 ± 0
SA81 4.4 ± 0.3
SA82 4.6 ± 0.2
SA83 4.8 ± 0.3
SA84 5.0 ± 0.2
SA87 3.2 ± 0.1
SA88 4.5 ± 0.2
SA89 3.7 ± 0.4
SA90 4.2 ± 0.4
SA95 4.2 ± 0.8
SA96 5.2 ± 0.7
SA97 5.3 ± 1.0
SA98 1.0 ± 0
SA110 4.0 ± 0.2
SA111 4.8 ± 0.2
SA114 6.3 ± 1.3
SA117 4.9 ± 1.2
SA118 9.7 ± 1.2
SA119 5.7 ± 1.0
SA120 16.8 ± 1.1
SA121 16.2 ± 1.8
SA122 14.8 ± 1.1
SA123 14.7 ± 1.0
SA124 15.0 ± 1.2
SA125 14.2 ± 0.9
SA126 18.2 ± 2.0
SA127 20.1 ± 1.9
SA128 19.9 ± 0.4
SA129 1.0 ± 0
SA130 1.0 ± 0
SA131 10.8 ± 0.5
SA132 1.6 ± 0.1
SA133 18.5 ± 0.8
SA134 17.7 ± 0.9
SA135 16.6 ± 1.5
SA136 15.8 ± 1.4
SA137 14.0 ± 0.8
SA138 12.1 ± 1.1
SA139 13.3 ± 1.2
SA141 14.9 ± 0.6
SA142 20.0 ± 1.0
SA144 17.9 ± 2.1
SA145 14.4 ± 0.6
SA149 15.8 ± 1.4
SA151 20.2 ± 1.3
SA152 20.6 ± 1.6
SA153 17.5 ± 1.4
SA154 16.7 ± 0.8
SA155 12.2 ± 1.0
SA156 14.6 ± 0.8
SA157 15.9 ± 1.4
SA158 20.4 ± 1.3
SA160 18.2 ± 1.4
SA161 14.1 ± 1.5
SA162 21.3 ± 0.6
SA163 11.3 ± 0.5
SA164 16.2 ± 0.7
SA165 14.0 ± 0.5
SA166 15.6 ± 1.3
SA167 14.9 ± 1.4
SA168 14.8 ± 0.7
SA169 19.7 ± 1.6
SA170 19.0 ± 1.7
SA171 18.9 ± 1.9
SA172 17.8 ± 1.1
SA173 13.5 ± 0.8
SA174 14.8 ± 1.4
SA178 9.8 ± 0.3
SA179 7.0 ± 0.6
SA181 6.3 ± 0.4
SA182 13.2 ± 0.9
SA183 13.6 ± 0.7
SA184 11.3 ± 0.7
SA185 14.2 ± 1.0
已闡述多個實施例。無論如何應理解，可在不背離所述精神及範圍的情況下進行多種修改。因此，其他實施例在隨附申請專利範圍之範圍內。本申請案中所引用之每一參考文獻(包括所有專利、專利申請案及出版物)之全文皆以引用方式併入本文中。

Claims (102)

  1. 一種式A1之脂質胺化合物， (A1) 或其鹽，其中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)      該C 2-20烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代； (iii)    該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)    該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)     該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之C原子一起形成C 3-6環烷基； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中該7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； 或R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； R 4、R 5、R 6及R 7各自獨立地選自H、鹵基及C 1-4烷基； 或R 4及R 5與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； 或R 6及R 7與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3、4、5或6； l係0或1； m係0、1、2、3、4、5或6；且 n係0或1； 其中當j係0時，則l係1， 其中j及l不皆係0， 前提係該化合物不為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  2. 一種式A1之脂質胺化合物， (A1) 或其鹽，其中： Z係N或CH； R 1係C 1-14烷基、C 1-14烯基或C 1-14羥基烷基； R 2及R 3各自係C 2-20烷基，其中： (i)      該C 2-20烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)    該C 2-20烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； 其中R 2及R 3係相同或不同的； 或R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中該7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； 或R 2、R 3及R 6與其所連接之原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基； R 4、R 5、R 6及R 7各自獨立地選自H、鹵基及C 1-4烷基； 或R 4及R 5與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； 或R 6及R 7與其所連接之碳原子一起形成C 3-7環烷基； R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及C 1-4烷基； j係0或1； k係0、1、2、3、4、5或6； l係0或1； m係0、1、2、3、4、5或6；且 n係0或1； 其中當j係0時，則l係1， 其中j及l不皆係0， 前提係該化合物不為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 及 。
  3. 如請求項1或2之化合物或其鹽，其中Z係N。
  4. 如請求項1或2之化合物或其鹽，其中Z係CH。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物或其鹽，其中R 1係C 1-14烷基。
  6. 如請求項1至4中任一項之化合物或其鹽，其中R 1係C 1-14羥基烷基。
  7. 如請求項1至4中任一項之化合物或其鹽，其中R 1係C 1-14烯基。
  8. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中R 1係 、 、 或 。
  9. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係0。
  10. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物或其鹽，其中k係0、2、3或4。
  12. 如請求項1至10中任一項之化合物或其鹽，其中k係0。
  13. 如請求項1至10中任一項之化合物或其鹽，其中k係2。
  14. 如請求項1至10中任一項之化合物或其鹽，其中k係3。
  15. 如請求項1至10中任一項之化合物或其鹽，其中k係4。
  16. 如請求項1至15中任一項之化合物或其鹽，其中l係0。
  17. 如請求項1至15中任一項之化合物或其鹽，其中l係1。
  18. 如請求項1至17中任一項之化合物或其鹽，其中m係0、1、2或4。
  19. 如請求項1至17中任一項之化合物或其鹽，其中m係0。
  20. 如請求項1至17中任一項之化合物或其鹽，其中m係1。
  21. 如請求項1至17中任一項之化合物或其鹽，其中m係2。
  22. 如請求項1至17中任一項之化合物或其鹽，其中m係4。
  23. 如請求項1至22中任一項之化合物或其鹽，其中n係0。
  24. 如請求項1至22中任一項之化合物或其鹽，其中n係1。
  25. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係0，k係0，l係1，m係1，且n係1。
  26. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係0，k係0，l係1，m係2，且n係1。
  27. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係0，k係0，l係1，m係4，且n係1。
  28. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係0，l係0，m係0，且n係0。
  29. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係1，l係0，m係0，且n係0。
  30. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係1，l係0，m係0，且n係1。
  31. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係1，l係0，m係2，且n係0。
  32. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係1，l係1，m係1，且n係1。
  33. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係2，l係0，m係0，且n係0。
  34. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係2，l係0，m係0，且n係1。
  35. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係3，l係0，m係0，且n係1。
  36. 如請求項1至8中任一項之化合物或其鹽，其中j係1，k係4，l係0，m係0，且n係1。
  37. 如請求項1及3至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)      該C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代； (iii)    該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)    該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)     該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之該C原子一起形成C 3-6環烷基。
  38. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2及R 3各自獨立地選自C 2-10烷基，其中： (i)      該C 2-10烷基經1個、2個、3個或4個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)    該C 2-10烷基之1或2個非末端碳視情況地經NR 10替代。
  39. 如請求項1及3至36中任一項之化合物或其鹽，其中R 2及R 3中之一者係C 2-5烷基，其中：該C 2-5烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； 且其中R 2及R 3中之另一者係C 7-10烷基，其中： (i)      該C 7-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代； (iii)    該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代； (iv)    該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經C(=O)替代；且 (v)     該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經CR aR b替代，其中R a及R b與其所連接之該C原子一起形成C 3-6環烷基。
  40. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中R 2及R 3中之一者係C 2-5烷基，其中： (i)      該C 2-5烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； 且其中R 2及R 3中之另一者係C 7-10烷基，其中： (i)      該C 7-10烷基經1個、2個、3個、4個或5個獨立地選自-NR 8R 9、OH及鹵基之取代基取代，其中至少一個取代基係-NR 8R 9； (ii)     該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經O替代；且 (iii)    該C 7-10烷基之1個、2個、3個或4個非末端碳視情況地經NR 10替代。
  41. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中R 2及R 3中之一者係C 3烷基，其經至少一個-NR 8R 9基團替代且進一步視情況地經一或兩個選自OH及鹵基之基團替代。
  42. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2及R 3與其所連接之N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之7-18員雜環烷基，其中該7-18員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
  43. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2及R 3與其所連接之該N原子一起形成包含1個、2個或3個成環NR 10基團之8-10員雜環烷基，其中該8-10員雜環烷基視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
  44. 如請求項1至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2及R 3與其所連接之該N原子一起形成下式之雜環烷基： 。
  45. 如請求項1至11、13至24及29至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2、R 3及R 6與其所連接之該等原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其視情況地經1個、2個或3個獨立地選自以下之取代基取代：C 1-4烷基、-NR 8R 9、OH及鹵基。
  46. 如請求項1至11、13至24及29至36中任一項之化合物或其鹽，其中： R 2、R 3及R 6與其所連接之該等原子及任何中間原子一起形成7-18員橋接雜環烷基，其選自： 。
  47. 如請求項1至11、13至24及29至46中任一項之化合物或其鹽，其中R 4及R 5各自獨立地係H或C 1-4烷基。
  48. 如請求項1至11、13至24及29至46中任一項之化合物或其鹽，其中R 4及R 5各自獨立地係H或甲基。
  49. 如請求項1至11、13至24及29至46中任一項之化合物或其鹽，其中R 4及R 5皆係H。
  50. 如請求項1至11、13至24及29至46中任一項之化合物或其鹽，其中R 4及R 5皆係C 1-4烷基。
  51. 如請求項1至11、13至24及29至46中任一項之化合物或其鹽，其中R 4及R 5中之一者係H且另一者係C 1-4烷基。
  52. 如請求項1至18、20至27、31、32及37至51中任一項之化合物或其鹽，其中R 6及R 7各自獨立地係H或C 1-4烷基。
  53. 如請求項1至18、20至27、31、32及37至51中任一項之化合物或其鹽，其中R 6及R 7各自獨立地係H或甲基。
  54. 如請求項1至18、20至27、31、32及37至51中任一項之化合物或其鹽，其中R 6及R 7皆係H。
  55. 如請求項1至18、20至27、31、32及37至51中任一項之化合物或其鹽，其中R 6及R 7皆係C 1-4烷基。
  56. 如請求項1至18、20至27、31、32及37至51中任一項之化合物或其鹽，其中R 6及R 7中之一者係H且另一者係C 1-4烷基。
  57. 如請求項1至43、45及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 8、R 9及R 10各自獨立地選自H及甲基。
  58. 如請求項1至43、45及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 8及R 9皆係H。
  59. 如請求項1至43、45及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 8及R 9皆係C 1-4烷基。
  60. 如請求項1至43、45及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 8及R 9皆係甲基。
  61. 如請求項1至43、45及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 8及R 9中之一者係H且另一者係C 1-4烷基。
  62. 如請求項1至43及47至56中任一項之化合物或其鹽，其中R 10係H。
  63. 如請求項1至62中任一項之化合物，其具有式A2： (A2) 或其鹽。
  64. 如請求項1之化合物，其選自： 脂質胺編號 結構 SA50 SA51 SA56 SA57 SA58 SA59 SA60 SA61 SA62 SA63 SA64 SA65 SA66 SA67 SA68 SA69 SA70 SA71 SA72 SA73 SA74 SA75 SA76 SA77 SA78 SA79 SA81 SA82 SA83 SA84 SA87 SA88 SA89 SA90 SA95 SA96 SA97 SA98 SA110 SA111 SA113 SA114 SA116 SA117 SA119 SA120
    或上文所提及任一者之鹽。
  65. 如請求項1之化合物，其選自： 編號 結構 SA118 SA121 SA122 SA123 SA124 SA125 SA126 SA127 SA128 SA129 SA130 SA131 SA132 SA133 SA134 SA135 SA136 SA137 SA138
    或上文所提及任一者之鹽。
  66. 如請求項1之化合物，其選自： 編號 結構 SA139 SA141 SA142 SA144 SA145 SA149 SA151 SA152 SA153 SA154 SA155 SA156 SA157 SA158 SA159 SA160 SA161 SA162 SA163 SA164 SA165 SA166 SA167 SA168 SA169 SA170 SA171 SA172 SA173 SA174 SA175 SA176 SA177 SA178 SA179 SA180 SA181 SA182 SA183 SA184 SA185
    或上文所提及任一者之鹽。
  67. 一種脂質奈米粒子組合物，其包含如請求項1至66中任一項之脂質胺化合物或其鹽。
  68. 如請求項67之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質奈米粒子組合物進一步包含： (i)      可離子化脂質， (ii)     磷脂， (iii)    結構脂質，及 (iv)    視情況選用之PEG脂質，及 (v)     視情況選用之用於遞送至細胞中之酬載。
  69. 如請求項68之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質胺對該酬載之重量比係約1:1至約4:1。
  70. 如請求項68之脂質奈米粒子組合物，其中該該脂質胺對該酬載之重量比係約1.25:1、約2.5:1或約3.75:1。
  71. 如請求項68至70中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該可離子化脂質係式(I)化合物： (I) 或其N-氧化物或鹽，其中： R 1係 ；其中 表示連接點； R aα、R aβ、R aγ及R aδ各自獨立地選自H、C 2-12烷基及C 2-12烯基； R 2及R 3各自獨立地選自C 1-14烷基及C 2-14烯基； R 4選自-(CH 2) nOH及 ， 其中n選自1、2、3、4及5； 其中 表示連接點， 其中R 10係N(R) 2； 其中每一R獨立地選自C 1-6烷基、C 2-3烯基及H； 其中n2選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 每一R 5獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； 每一R 6獨立地選自C 1-3烷基、C 2-3烯基及H； M及M’各自獨立地選自-C(O)O-及-OC(O)-； R’係C 1-12烷基或C 2-12烯基； l選自1、2、3、4及5；且 m選自5、6、7、8、9、10、11、12及13。
  72. 如請求項68至70中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該可離子化脂質係 (IL1)、 (IL2)、 (IL3)或 (IL4)， 或其N-氧化物或鹽。
  73. 如請求項68至70中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該可離子化脂質係IL1： (IL1)，或其鹽。
  74. 如請求項68至73中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質奈米粒子組合物包含約30 mol%至約60 mol%之可離子化脂質。
  75. 如請求項68至74中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該磷脂係式(IV)化合物： 式(IV)， 或其鹽，其中： 每一R 1獨立地係H或視情況地經取代之烷基；或視情況地兩個R 1與中間原子連結在一起形成視情況地經取代之單環環烷基或視情況地經取代之單環雜環基；或視情況地三個R 1與中間原子連結在一起形成視情況地經取代之二環環烷基或視情況地經取代之二環雜環基； n係1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； m係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； A具有下式： 或 ； L 2之每一實例獨立地係鍵或視情況地經取代之C 1-6伸烷基，其中該視情況地經取代之C 1-6伸烷基之一個亞甲基單元視情況地經以下替代：-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-； R 2之每一實例獨立地係視情況地經取代之C 1-30烷基、視情況地經取代之C 1-30烯基或視情況地經取代之C 1-30炔基；視情況地其中R 2之一或多個亞甲基單元獨立地經以下替代：視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-N(R N)-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-NR NC(O)N(R N)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-、-C(O)S-、-SC(O)-、-C(=NR N)-、-C(=NR N)N(R N)-、-NR NC(=NR N)-、-NR NC(=NR N)N(R N)-、-C(S)-、-C(S)N(R N)-、-NR NC(S)-、-NR NC(S)N(R N)-、-S(O)-、-OS(O)-、-S(O)O-、-OS(O)O-、-OS(O) 2-、-S(O) 2O-、-OS(O) 2O-、-N(R N)S(O)-、-S(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)N(R N)-、-OS(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)O-、-S(O) 2-、-N(R N)S(O) 2-、-S(O) 2N(R N)-、-N(R N)S(O) 2N(R N)-、-OS(O) 2N(R N)-或-N(R N)S(O) 2O-； R N之每一實例獨立地係氫、視情況地經取代之烷基或氮保護基團； 環B係視情況地經取代之環烷基、視情況地經取代之雜環基、視情況地經取代之芳基或視情況地經取代之雜芳基；且 p係1或2； 條件係該化合物不具下式： 、 其中R 2之每一實例獨立地係未經取代之烷基、未經取代之烯基或未經取代之炔基。
  76. 如請求項68至74中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該磷脂係 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DSPC)、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、 1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DLPC)、 1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油-磷酸膽鹼(DMPC)、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DOPC)、 1,2-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(DPPC)、 1,2-二(十一醯基)-sn-甘油-磷酸膽鹼(DUPC)、 1-棕櫚醯基-2-油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(POPC)、 1,2-二-O-十八烯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(18:0二醚PC)、 1-油醯基-2-膽固醇基半琥珀醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(OChemsPC)、 1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(C16 Lyso PC)、 1,2-二亞麻醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二(二十二碳六烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸膽鹼、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0 PE)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼(4ME 16:0 PC)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-外消旋-甘油) (鈉鹽) (4ME 16:0 PG)、 1,2-二植烷醯基-sn-甘油-3-磷酸-L-絲胺酸(鈉鹽) (4ME 16:0 PS)、 1,2-二硬脂醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二亞油醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二亞麻醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二花生四烯醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二(二十二碳六烯醯基)-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、 1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸-外消旋-(1-甘油)鈉鹽(DOPG)或 鞘磷脂。
  77. 如請求項68至74中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該磷脂係DSPC。
  78. 如請求項68至77中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質奈米粒子組合物包含約5 mol%至約15 mol%之磷脂。
  79. 如請求項68至78中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該結構脂質係膽固醇、糞甾醇、麥固醇、麥角固醇、油菜固醇、豆甾醇、蕓苔甾醇、番茄鹼、番茄苷、熊果酸、α-生育酚、類藿烷、植物固醇、類固醇或其混合物。
  80. 如請求項68至78中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該結構脂質係α-生育酚、膽固醇、β-麥固醇或半琥珀酸膽固醇基酯。
  81. 如請求項68至80中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質奈米粒子組合物包含約20 mol%至約60 mol%之結構脂質。
  82. 如請求項68至81中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該PEG脂質係式(V)化合物： 式(V)， 或其鹽，其中： R 3係-OR O； R O係氫、視情況地經取代之烷基或氧保護基團； r係介於1與100之間的整數，包括1及100； L 1係視情況地經取代之C 1-10伸烷基，其中該視情況地經取代之C 1-10伸烷基之至少一個亞甲基獨立地經視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-替代； D係藉由點擊化學獲得之部分或可在生理條件下裂解之部分； m係0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10； A具有下式： 或 ； L 2之每一實例獨立地係鍵或視情況地經取代之C 1-6伸烷基，其中該視情況地經取代之C 1-6伸烷基之一個亞甲基單元視情況地經以下替代：-O-、-N(R N)-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-或-NR NC(O)N(R N)-； R 2之每一實例獨立地係視情況地經取代之C 1-30烷基、視情況地經取代之C 1-30烯基或視情況地經取代之C 1-30炔基；視情況地其中R 2之一或多個亞甲基單元獨立地經以下替代：視情況地經取代之伸環烷基、視情況地經取代之伸雜環基、視情況地經取代之伸芳基、視情況地經取代之伸雜芳基、-N(R N)-、-O-、-S-、-C(O)-、-C(O)N(R N)-、-NR NC(O)-、-NR NC(O)N(R N)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R N)-、-NR NC(O)O-、-C(O)S-、-SC(O)-、-C(=NR N)-、-C(=NR N)N(R N)-、-NR NC(=NR N)-、-NR NC(=NR N)N(R N)-、-C(S)-、-C(S)N(R N)-、-NR NC(S)-、-NR NC(S)N(R N)-、-S(O)-、-OS(O)-、-S(O)O-、-OS(O)O-、-OS(O) 2-、-S(O) 2O-、-OS(O) 2O-、-N(R N)S(O)-、-S(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)N(R N)-、-OS(O)N(R N)-、-N(R N)S(O)O-、-S(O) 2-、-N(R N)S(O) 2-、-S(O) 2N(R N)-、-N(R N)S(O) 2N(R N)-、-OS(O) 2N(R N)-或-N(R N)S(O) 2O-； R N之每一實例獨立地係氫、視情況地經取代之烷基或氮保護基團； 環B係視情況地經取代之環烷基、視情況地經取代之雜環基、視情況地經取代之芳基或視情況地經取代之雜芳基；且 p係1或2。
  83. 如請求項68至81中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該PEG脂質係PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG DMPE、PEG-DPPC、PEG-DSPE或PL1： (PL1)。
  84. 如請求項63至78中任一項之脂質奈米粒子組合物，其中該脂質奈米粒子組合物包含約0.1 mol%至約5.0 mol%之PEG脂質。
  85. 一種醫藥組合物，其包含如請求項62至79中任一項之脂質奈米粒子組合物或其鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  86. 如請求項85之醫藥組合物，其中該組合物適於吸入。
  87. 一種將酬載遞送至細胞中之方法，其包括使該細胞與如請求項67至84中任一項之脂質奈米粒子組合物接觸。
  88. 如請求項87之方法，其中該細胞係氣道上皮細胞。
  89. 一種將治療或預防酬載遞送至患者之方法，其包括向該患者投與如請求項67至84中任一項之脂質奈米粒子組合物。
  90. 如請求項89之方法，其中該治療或預防酬載係mRNA。
  91. 如請求項89或90之方法，其中將該治療或預防酬載遞送至該患者之氣道上皮細胞。
  92. 如請求項89至91中任一項之方法，其中該脂質奈米粒子組合物係藉由鼻內、支氣管內或肺部投與來投與。
  93. 如請求項89至91中任一項之方法，其中該脂質奈米粒子組合物係藉由霧化器或吸入器來投與。
  94. 一種製備脂質奈米粒子組合物之製程，該製程包括使脂質奈米粒子核心與如請求項1至66中任一項之脂質胺化合物或其鹽接觸。
  95. 如請求項94之製程，其中該脂質奈米粒子核心包含： (i)      可離子化脂質， (ii)     磷脂， (iii)    結構脂質，及 (iv)    視情況選用之PEG脂質。
  96. 如請求項95之製程，其中該脂質奈米粒子核心包含： 約40 mol%至約50 mol%之可離子化脂質； 約10 mol%至約12 mol%之磷脂； 約37 mol%至約42 mol%之結構脂質；及 約0.25 mol%至約0.75 mol%之PEG脂質；各自相對於總脂質而言。
  97. 如請求項95之製程，其中該脂質奈米粒子核心包含： 約49 mol%之可離子化脂質； 約11 mol%至約12 mol%之磷脂； 約39 mol%之結構脂質；及 約0.5 mol%之PEG脂質；各自相對於總脂質而言。
  98. 如請求項95至97中任一項之製程，其中該脂質奈米粒子核心進一步包含經囊封以遞送至細胞中之酬載。
  99. 如請求項94至98中任一項之製程，其中該脂質胺化合物存在於液體組合物中。
  100. 如請求項99之製程，其中該液體組合物包含非離子賦形劑。
  101. 如請求項100之製程，其中該非離子賦形劑係macrogol 15羥基硬脂酸酯(HS 15)。
  102. 一種脂質奈米粒子組合物，其係藉由如請求項94至101中任一項之製程來製備。
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