CN104023708A - 包含聚合物缀合的脂质的脂质体和有关用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了包含脂质双层和聚合物缀合的脂质的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。本发明也提供了:生产脂质体的方法以及将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的核酸的步骤;用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的诊断剂的步骤;和用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用混合型脂质体。
Description
技术领域
本发明提供了包含脂质双层和聚合物缀合的脂质的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。本发明也提供了:生产脂质体的方法以及将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的核酸的步骤;用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在混合型脂质体中的诊断剂的步骤;和用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用混合型脂质体。
背景技术
长期以来一直在寻求这样的药物递送系统的应用:所述药物递送系统会提供药物缓释和药物向期望的受影响器官/系统的特异性靶向,从而降低全身性分布和非靶器官的暴露。一种有前途的候选物是磷脂(PL)脂质体和它们的衍生物。脂质体是由磷脂组成的球形小囊泡,且由一个或多个包封水性内容物的脂质双层组成。脂质体可以包囊亲水药物(在水性内容物中)和亲脂药物(在脂质双层中),因而非常适合用于药物递送。
磷脂脂质体可以当持续释放或控制释放药物蓄池,从而促进药物效力的改善并实现给药频率的降低。通过为被包封的药物和生物环境提供保护,脂质体会降低药物失活和药物降解的风险。由于从颗粒中释放出的游离药物的药代动力学不同于直接施用的游离药物,这些载体可用于降低毒性和不希望的副作用。
可以制备宽范围尺寸(50-500nm)的磷脂脂质体。由于在发炎组织中,细胞间隙从50nm至100nm的正常距离扩大,所以小于100nm的携带药物的脂质体适合用于向靶系统选择性地递送药物。
尽管具有优点,仍存在着一些与使用药物包囊脂质体相关的困难。例如,脂质体具有有限的靶向能力、在循环中的有限保留和稳定性、长期施用后的潜在毒性以及不能外渗等。
为了防止已知的纳米脂质体的缺点,我们已经使用聚合物缀合的脂质(Po-L)来形成混合型脂质/Po-L纳米脂质体。
发明内容
在一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中,且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种生产混合型脂质体的方法,所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种混合型脂质体,其通过包括下述步骤的方法生产:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的组合物,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的组合物,所述脂质体包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的组合物,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中,且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括给所述受试者施用所述被包囊在脂质体中的核酸的步骤,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括给所述受试者施用被包囊在脂质体中的诊断剂和对所述患者成像的步骤,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用脂质体,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
附图说明
在本说明书的结束部分中特别地指出并明确地要求保护被视作本发明的主题。但是,当阅读附图时参考下述详细描述会最佳地理解本发明。
图1:描绘聚合物缀合的脂质(Po-L)/脂质体比例和聚合物大小的变化如何影响Po-L/脂质体的结构和功能的模型:(a)蘑菇;在较低Po-L/脂质体比例得到。(b)刷子,在较高Po-L/脂质体比例得到;(c)表面包被,用高分子量HA(或其它GAG)得到。
图2:HyPE对由EggPC:Chol:HyPE组成的脂质体的稳定性的影响,通过脂质体的添加剂填装参数(Additive Packing Parameter,PP)来表示:该图将PP显示为脂质体中与HyPE缀合的PE的摩尔百分比的函数。当PP接近于1.0(但是不高于1)时,得到最佳稳定性。垂直线显示了增加脂质体稳定性的HyPE浓度。EggPC=卵磷脂酰-胆碱;Chol=胆固醇;HyPE=透明质酸(HA)缀合的磷脂酰-乙醇胺(PE)。
图3:含有不同的聚合物缀合的脂质(Po-L)的脂质体的大小稳定性:将含有或不含指定的Po-L的脂质体在55℃温育17天,并使用动态光散射监测它们的大小的变化。该图显示了在第1天和第17天的大小(nm)。DMPC=二肉豆蔻酰基磷脂酰-胆碱;HyPE=HyPE=透明质酸(HA)缀合的磷脂酰-乙醇胺(PE);Dex(5)-PE=葡聚糖(分子量5K)缀合的PE;Dex(40)=葡聚糖(分子量40K)缀合的PE;Heta-PE=Hetastarch(羟乙基淀粉)缀合的PE;Hem-PE=Hemaccel(聚明胶肽)缀合的PE。
图4:Po-L会抑制外部PLA2的脂质体分解。含有或不含HyPE的、由二-油酰基-磷脂酰-胆碱(DOPC)和在碳2处被C6-NBD(荧光脂肪酸)标记的PC组成的脂质体会与外部磷脂酶A2(PLA2)相互作用。通过由PLA2作用释放的C6-NBD-脂肪酸PC的荧光强度的释放,确定脂质体磷脂的水解。该图描绘了水解5%的脂质体C6-NBD-PC(代表总脂质体磷脂)所需的时间。
图5:通过包囊化的药物(菊粉荧光素=InFl)的保留来检验的脂质体稳定性:将含有InFl的脂质体(由二肉豆蔻酰基磷脂酰-胆碱(DMPC)组成,含有或含Pol-PLI(HyPE))在血浆中在37℃温育,并持续6天监测释放到脂质体外介质中的In-Fl。
图6:Pol-PLI对脂质体在大鼠血液(体内)中的稳定性的影响:将含有InFl的脂质体注射给大鼠尾静脉,并持续28小时如下监测药物在循环中的保留:确定在注射后5分钟和28小时采集的血液样品中的药物水平,并表示为最初注射的InFl量的百分比。该图表明,Hem-PE向脂质体的添加会显著地减慢药物从脂质体的释放。
具体实施方式
纳米脂质体或亚微米双层脂囊泡是一种用于包囊和递送生物活性剂的技术。可以掺入纳米脂质体中的生物活性物质的列表是巨大的,从药物至化妆品和营养制品。因为它们的生物相容性和生物可降解性以及它们的纳米尺寸,纳米脂质体在众多领域中具有潜在应用,包括纳米治疗(例如诊断、癌症治疗、基因递送)、化妆品、食品技术和农业。纳米脂质体能够如下增强生物活性剂的性能:提高它们的溶解度和生物利用度、体外和体内稳定性、以及防止它们与其它分子的不希望的相互作用。纳米脂质体的另一个优点是细胞特异性的靶向,这是在靶位达到最适治疗效果所需的药物浓度同时使对健康细胞和组织的不良作用最小化的先决条件。
聚合物缀合的脂质(Pol-L)脂质体
在一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在一个实施方案中,所述脂质体由第一种脂质制成,而所述聚合物缀合的脂质的脂质由第二种脂质制成,所述第二种脂质是与所述第一种脂质不同的脂质。例如,且在一个实施方案中,所述脂质体可以用磷脂酰胆碱、用或不用胆固醇制成,而所述缀合物可以用磷脂酰乙醇胺制成。在一个实施方案中,所述聚合物是多糖。在一个实施方案中,所述多糖是糖胺聚糖。
在一个实施方案中,所述聚合物经由共价键与所述脂质缀合。在一个实施方案中,所述聚合物与所述脂质交联。
在一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含2种或更多种聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质是磷脂酶A2的抑制剂,或在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质会抑制磷脂酶A2的活性、功能或表达。
在一个实施方案中,所述聚合物是海藻酸。在一个实施方案中,所述海藻酸是低分子量海藻酸。在另一个实施方案中,所述海藻酸是截短的。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含2种或更多种糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含2种或更多种糖胺聚糖(GAG)缀合的磷脂,其中所述GAG缀合的磷脂包含2种或更多种与单一GAG缀合的磷脂。
在一个实施方案中,所述GAG是透明质酸。在一个实施方案中,所述透明质酸是低分子量透明质酸。在另一个实施方案中,所述透明质酸是截短的。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含2种或更多种低分子量透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺,其中所述低分子量透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺包含2种或更多种与单一透明质酸缀合的透明质酸缀合的磷脂酰乙醇胺。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中,且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是糖胺聚糖。在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是透明质酸。
在一个实施方案中,所述聚合物是多糖。在一个实施方案中,所述脂质是磷脂。在一个实施方案中,所述脂质体包含脂质双层。在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质掺入脂质体的脂质双层。在一个实施方案中,所述脂质体是经修饰的脂质体。
在一个实施方案中,所述脂质体是纳米脂质体。在一个实施方案中,所述脂质体具有小于100nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有小于150nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有小于75nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有小于50nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有1-100nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有20-100nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有50-100nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有50-150nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有20-150nm的直径。在另一个实施方案中,所述脂质体具有10-50nm的直径。
在一个实施方案中,所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。在另一个实施方案中,所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质仅掺入所述脂质双层的外层。在另一个实施方案中,所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质仅掺入所述脂质双层的内层。
在另一个实施方案中,本发明的Po-L脂质体会提供异常稳定的脂质体。在一个实施方案中,本发明的Po-L脂质体对称地插入脂质体的内层和外层中,即,在两个脂质体表面处具有所述聚合物,在一个实施方案中,与小聚合物仅插入在脂质体的外表面(层)上时的脂质体稳定性相比,这会增加脂质体稳定性。在一个实施方案中,大聚合物仅向外脂质体表面的插入会在脂质体中产生过度的不对称和损害脂质体稳定性。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)。
在一个实施方案中,本发明的脂质体是经修饰的脂质体,因为所述脂质体将如本文中所述的聚合物缀合的脂质掺入它的脂质双层中,在一个实施方案中,所述脂质双层包含与所述聚合物缀合的脂质的脂质不同的脂质。在一个实施方案中,本发明的经修饰的脂质体被称作混合型脂质体。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体,其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL),其中所述多糖是糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体,其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL),其中所述多糖是低分子量糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种经修饰的包含脂质双层的脂质体,其中所述脂质体包含掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL),其中所述多糖不是糖胺聚糖。
在一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的脂质体。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的胶束。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的纳米脂质体。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的四醚脂质体。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的免疫脂质体。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的病毒体。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的超变形的囊泡。在另一个实施方案中,本发明提供了包含聚合物缀合的脂质的隐形脂质体。在一个实施方案中,所述聚合物是多糖。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:2至1:1000之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:28至1:62之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:100至1:500之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:25至1:35之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:55至1:65之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:20至1:70之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:10至1:100之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例是在1:50至1:500之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中脂质与重复聚合物单元的比例低于1:100。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在20和70之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在28和62之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是在10和80之间。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是大约30。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是28。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是25-30。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是20-35。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是15-40。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是大约60。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是62。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是60-65。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是55-70。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质中重复聚合物单元与脂质的比例是50-75。在一个实施方案中,所述数目或范围大约是在上文中描述的数目或范围。在一个实施方案中,所述重复聚合物单元与脂质的比例是摩尔比。
在一个实施方案中,所述聚合物是多糖,在一个实施方案中,所述多糖是低分子量多糖。在一个实施方案中,重复聚合物单元是重复二糖单元。在另一个实施方案中,所述聚合物不是多糖,在一个实施方案中,它是海脉素(Haemaccel)。
在一个实施方案中,所述多糖的分子量是在5-20kD之间。在一个实施方案中,所述PoS-PL如下制备:使多糖与磷脂分别以约1:50至约1:1的质量PL/质量GAG比例反应。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约1:50至约1:10。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约1:40至约1:1。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约1:10至约1:40。
在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约1:25。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约0.5:15。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约1:15。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约2:15。在另一个实施方案中,所述质量PL/质量GAG比例是约5:15。
在另一个实施方案中,所述GAG的多分散性是约1:50直到50:50。在另一个实施方案中,所述GAG的多分散性是约1:1.75。在另一个实施方案中,所述GAG的多分散性是约1.25:1.5。
在一个实施方案中,本发明的脂质-聚合物缀合物包含低分子量多糖,其中所述多糖的平均分子量是在5kD至90kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在5kD至60kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在5kD至40kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在5kD至15kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在5kD至20kD之间。
在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在10kD至30kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量是在10kD至50kD之间。在另一个实施方案中,所述多糖的平均分子量大于10kD。
在一个实施方案中,所述多糖是糖胺聚糖(GAG)。在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质是糖胺聚糖缀合的磷脂。在一个实施方案中,糖胺聚糖是粘多糖。在一个实施方案中,糖胺聚糖是由重复二糖单元(氨基糖-酸性糖重复单元)组成的长链。在一个实施方案中,所述氨基糖是葡糖胺或半乳糖胺。在一个实施方案中,所述氨基糖被硫酸化。在一个实施方案中,所述酸性糖是D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸。
在一个实施方案中,糖胺聚糖包括糖胺聚糖的盐和游离酸以及已经经过化学修饰但是仍然保留它们的功能的糖胺聚糖。这些修饰包括酯化、硫酸化、多硫酸化和甲基化。例如,透明质酸酯包括透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸镁和透明质酸钙。
在一个实施方案中,糖胺聚糖可以被化学修饰成含有比它们的最初提取形式更多的硫基。在另一个实施方案中,糖胺聚糖可以是部分地或完全地合成的,且可以具有植物或动物起源。
在一个实施方案中,糖胺聚糖得自天然来源。在一个实施方案中,糖胺聚糖的天然来源包括植物和动物源,即,山毛榉木树和动物软骨形式,包括鲨鱼软骨、牛科动物气管、鲸鱼隔膜、猪鼻孔和软体动物类(诸如青边贻贝)和海参。在另一个实施方案中,用于本发明中的糖胺聚糖是重组糖胺聚糖。
在一个实施方案中,然后将糖胺聚糖截短至大约10-30kD,用于本发明的组合物和方法中。
在本发明的一个实施方案中,所述糖胺聚糖可以是:除了别的以外,透明质酸、肝素、硫酸类肝素、硫酸软骨素、角蛋白、硫酸角质素、硫酸皮肤素或其衍生物。
在一个实施方案中,所述GAG是透明质酸。在一个实施方案中,所述透明质酸是低分子量透明质酸、截短的透明质酸或它们的组合。在一个实施方案中,所述低分子量透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
在一个实施方案中,本发明的聚合物与本发明的脂质共价地结合。在一个实施方案中,在本发明的脂质体的制备中不使用高分子量GAG,诸如具有大于100kD的分子量的透明质酸,因为发现它们会非共价地附着于脂质体。
在一个实施方案中,低分子量GAG,诸如透明质酸钠,通过如在WO2010/132402的实施例9中描述的透明质酸钠的酸水解来制备,其通过引用整体并入本文。
在一个实施方案中,所述透明质酸和衍生物的分子量通过如在WO2010/132402中描述的尺寸排阻色谱法和多角度光散射(SEC-MALS)来确定。
在一个实施方案中,所述多糖不是糖胺聚糖(GAG)。在一个实施方案中,所述多糖是壳聚糖、海藻酸、羟乙基淀粉、葡聚糖或它们的组合。
在一个实施方案中,脂质或磷脂可以用于本发明的组合物和方法中。在一个实施方案中,“脂质”表示任意类型的脂质,包括:除了别的以外,磷脂、甘油脂、鞘脂、甾醇脂质、戊二烯醇脂质、糖脂质等。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质是聚合物缀合的磷脂。在另一个实施方案中,所述磷脂是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酸或磷脂酰甘油。在另一个实施方案中,所述磷脂包含棕榈酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸或二十二碳六烯酸的残余物。
在一个实施方案中,用于本发明的组合物和方法中的磷脂可以具有变化的链长度。在一个实施方案中,所述磷脂是二肉豆蔻酰基磷脂。在另一个实施方案中,所述磷脂是二棕榈酰基磷脂。在另一个实施方案中,所述磷脂是二月桂基-磷脂。在另一个实施方案中,所述磷脂是二硬脂酰基-磷脂。在另一个实施方案中,所述磷脂是二油酰基-磷脂。
在一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(A)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(A)
其中
L是脂质或磷脂;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱、磷酸酯或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是糖胺聚糖;且
n是1-70的数;
其中L、Z、Y和X之
间的任何键是酰胺键或酯键;其中所述糖胺聚糖的分子量是在5kD至20kD之间。
在一个实施方案中,L是脂质。在另一个实施方案中,L是磷脂。在另一个实施方案中,L是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酸或磷脂酰甘油。在另一个实施方案中,L包含棕榈酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸或二十二碳六烯酸的残余物。在另一个实施方案中,L是二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺。在另一个实施方案中,所述L是二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺。
在另一个实施方案中,X是透明质酸、肝素、硫酸类肝素、软骨素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素或硫酸角质素。在另一个实施方案中,X是透明质酸。在另一个实施方案中,X是肝素。在另一个实施方案中,X是软骨素。在另一个实施方案中,X是硫酸软骨素。在另一个实施方案中,X是硫酸皮肤素,在另一个实施方案中,X是硫酸角质素。在另一个实施方案中,X是海脉素、海藻酸酯、海藻酸、壳聚糖或它们的组合。
在另一个实施方案中,所述硫酸软骨素是软骨素-6-硫酸、软骨素-4-硫酸或其衍生物。在另一个实施方案中,所述硫酸皮肤素是皮肤素-6-硫酸、皮肤素-4-硫酸或其衍生物。
在一个实施方案中,X是非多糖的聚合物,在一个实施方案中,其为海脉素。在一个实施方案中,X不是PEG。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(I)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(I)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;和
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或生理上可接受的聚合物;且
n是1-1,000的数;
其中如果Y不存在,那么磷脂酰乙醇胺经由酰胺键与X直接连接,且如果Y是间隔基,那么所述间隔基经由酰胺键或酯键与X直接连接并经由酰胺键与磷脂酰乙醇胺直接连接。
在一个实施方案中,用于本发明的脂质体中的化合物包括下述之一作为缀合的部分X:乙酸酯、丁酸酯、戊二酸酯、琥珀酸酯、十二酸酯、双十二酸酯、麦芽糖、乳糖酸、葡聚糖、海藻酸酯、阿司匹林、胆酸酯、胆甾醇基半琥珀酸酯、羧甲基纤维素、肝素、透明质酸、硫酸软骨素、聚明胶肽(海脉素)、聚乙二醇、多羧酸酯化的聚乙二醇、糖胺聚糖、多糖、杂多糖、同多糖或聚吡喃糖。被用作制备PE-缀合物的起始原料的聚合物的分子量可以在1至2,000kDa之间变化。在一个实施方案中,肝素是超低分子量肝素,在一个实施方案中,所述超低分子量肝素包含5-6个二糖单元。
磷脂酰乙醇胺(PE)部分的例子是磷脂的类似物,其中与磷脂的甘油主链连接的两个脂肪酸基团的链长度在2-30个碳原子长度之间变化,且其中这些脂肪酸链含有饱和的和/或不饱和的碳原子。代替脂肪酸链,包括直接地或经由醚连接而连接到磷脂的甘油主链的烷基链,作为PE的类似物。在一个实施方案中,所述PE部分是二棕榈酰基-磷脂酰-乙醇胺。在另一个实施方案中,所述PE部分是二肉豆蔻酰基-磷脂酰-乙醇胺。
磷脂酰-乙醇胺及其类似物可以来自各种来源,包括天然的、合成的和半合成的衍生物及其异构体。
可用于代替PE部分的磷脂是经由N-甲基-PE的氨基通过共价键连接的N-甲基-PE衍生物及其类似物;经由N,N-二甲基-PE的氨基通过共价键连接的N,N-二甲基-PE衍生物及其类似物;磷脂酰丝氨酸(PS)和它的类似物,诸如棕榈酰基-硬脂酰基-PS、来自各种的来源的天然的PS、半合成的PS、合成的、天然的和人工PS以及它们的异构体。适于用作本发明的共轭部分的其它磷脂是磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸和磷脂酰甘油(PG)以及其衍生物,包含磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、鞘磷脂、溶血鞘磷脂、神经酰胺和鞘氨醇。
对PE-缀合物和PS-缀合物而言,磷脂是经由磷脂极性首基的氮原子直接或经由间隔基连接到缀合的单体或聚合物部分。对PE、PI和PG缀合物而言,磷脂是经由极性首基的氮或氧原子之一直接或经由间隔基连接到缀合的单体或聚合物部分。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(II)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(II)
其中:
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中如果Y不存在,那么磷脂酰丝氨酸经由酰胺键与X直接连接,且如果Y是间隔基,那么所述间隔基经由酰胺键或酯键与X直接连接并经由酰胺键与磷脂酰丝氨酸直接连接。
在一个实施方案中,所述磷脂酰丝氨酸可以键合至Y,或者如果Y不存在,经由磷脂酰丝氨酸的COO-部分键合至X。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(III)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(III)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂酰基、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(IV)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(IV)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(V)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(V)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(VI)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(VI)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(VII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(VII)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在本发明的一个实施方案中,磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酸(PA)(其中Z不存在)和磷脂酰甘油(PG)缀合物在本文中被定义为通式(III)的化合物。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(VIII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(VIII)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(IX)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(IX)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(IXa)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(IXa)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(IXb)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(IXb)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中磷脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(X)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(X)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中神经酰胺磷酰基、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XI)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XI)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中如果Y不存在,那么鞘氨醇基经由酰胺键与X直接连接,且如果Y是间隔基,那么所述间隔基直接连接至X、和经由酰胺键连接至鞘氨醇基、和经由酰胺键或酯键连接至X。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XII)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是乙醇胺、丝氨酸、肌醇、胆碱或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中神经酰胺、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XIII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XIII)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中二甘油基、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XIV)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XIV)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中甘油脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XV)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XV)
其中
R1是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中甘油脂、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XVI)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XVI)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XVII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XVII)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XVIII)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XVIII)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XIX)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XIX)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XX)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XX)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含由通式(XXI)的结构表示的脂质-聚合物缀合物:
(XXI)
其中
R1是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
R2是氢或长度范围为2-30个碳原子的直链、饱和的、单不饱和的、或多不饱和的烷基链;
Z不存在,或者是胆碱、磷酸酯、肌醇或甘油;
Y不存在,或者是长度范围为2-30个原子的间隔基;
X是生理上可接受的单体、二聚体、寡聚体或聚合物,其中X是糖胺聚糖;且
n是1-1000的数;
其中脂质、Z、Y和X之间的任何键是酰胺键或酯键。
对在上文中由通式(A)、(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(IXa)、(IXb)、(X)、(XI)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XVI)、(XVII)、(XVIII)、(XIX)、(XX)、(XXI)和(XXII)的结构表示的任何或所有化合物而言:在一个实施方案中,X是糖胺聚糖。根据这个方面且在一个实施方案中,所述糖胺聚糖可以是:除了别的以外,透明质酸、肝素、硫酸类肝素、硫酸软骨素、角蛋白、硫酸角质素、硫酸皮肤素或其衍生物。在另一个实施方案中,X不是糖胺聚糖。在另一个实施方案中,X是多糖,在一个实施方案中,所述多糖是杂多糖,且在另一个实施方案中,所述多糖是同多糖。在另一个实施方案中,X是聚吡喃糖。
在另一个实施方案中,所述糖胺聚糖是二糖单元的聚合物。在另一个实施方案中,所述聚合物中二糖单元的数目是m。在另一个实施方案中,m是2-10,000之间的数。在另一个实施方案中,m是2-500之间的数。在另一个实施方案中,m是2-1000之间的数。在另一个实施方案中,m是50-500之间的数。在另一个实施方案中,m是2-2000之间的数。在另一个实施方案中,m是500-2000之间的数。在另一个实施方案中,m是1000-2000之间的数。在另一个实施方案中,m是2000-5000之间的数。在另一个实施方案中,m是3000-7000之间的数。在另一个实施方案中,m是5000-10,000之间的数。在另一个实施方案中,糖胺聚糖的二糖单元可与1个脂质或磷脂部分结合。在另一个实施方案中,糖胺聚糖的每个二糖单元可与0或1个脂质或磷脂部分结合。在另一个实施方案中,脂质或磷脂部分是与二糖单元的-COOH基团结合。在另一个实施方案中,脂质或磷脂部分与二糖单元之间的键是酰胺键。
在另一个实施方案中,所述糖胺聚糖包含糖胺聚糖的二糖或三糖单元单体。
在另一个实施方案中,所述硫酸软骨素可以是:除了别的以外,软骨素-6-硫酸、软骨素-4-硫酸或其衍生物。
在本发明的一个实施方案中,Y不存在。根据本发明的实施方案,形成任选的桥连基团(在一个实施方案中,称为间隔基)Y的合适二价基团的非限制性例子是,具有例如2个或更多个、优选4至30个碳原子的直链或支链亚烷基、-CO-亚烷基-CO、-NH-亚烷基-NH-、-CO-亚烷基-NH-、-NH-亚烷基-NH、CO-亚烷基-NH-、氨基酸、亚环烷基,其中在每种情况中的亚烷基是直链或支链,并在-(-O-CH(CH3)CH2-)x-链中含有2个或更多个、优选2至30个原子,其中x是1或更大的整数。
根据本发明的实施方案,除了传统的磷脂结构以外,用于本发明中的有关衍生物是在C1或C2位被修饰成含有胺、醚或烷基键来替代酯键的磷脂。在本发明的一个实施方案中,在本文中举例说明了烷基磷脂衍生物和醚磷脂衍生物。
在本发明的一个实施方案中,磷脂结合的糖胺聚糖的糖环是完整的。在另一个实施方案中,完整指的是闭合的。在另一个实施方案中,完整指的是天然的。在另一个实施方案中,完整指的是未断裂的。
在本发明的一个实施方案中,根据本发明的任何化合物的脂质或磷脂的结构是完整的。在另一个实施方案中,根据本发明的任何化合物的脂质或磷脂的天然结构被保留。
在一个实施方案中,用于本发明的化合物是可生物降解的。
在某些实施方案中,使用的化合物列在下文表1中。
表1.样品聚合物缀合的脂质.
在一个实施方案中,用于本发明的组合物和方法中的GAG和PL包含间隔基,在一个实施方案中,其是氨基酸,其中所述氨基酸的氨基结合至GAG的羧基,且所述氨基酸的羧基结合至磷脂的氨基。
在本发明的一个实施方案中,用于本发明中的化合物是化合物I-LXXXVIII中的任意一种或多种。在另一个实施方案中,用于本发明中的化合物是与生理上可接受的载体或溶剂相组合的化合物XXII、化合物XXIII、化合物XXIV、化合物XXV、化合物XXVI、化合物XXVII、化合物XXVIII、化合物XXIX、化合物XXX或其药学上可接受的盐。根据本发明的实施方案,这些聚合物当被选择为缀合的部分时,其分子量可以在200-2,000,000道尔顿之间变化。在本发明的一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是200-1000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是200-1000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是1000-5000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是5000-10,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是10,000-20,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是10,000-50,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是20,000-70,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是50,000-100,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是100,000-200,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是200,000-500,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是200,000-1,000,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是500,000-1,000,000道尔顿。在另一个实施方案中,在本文中提及的聚合物的分子量是1,000,000-2,000,000道尔顿。已经证实,多种分子量物质具有期望的生物效能。
在本发明的一个实施方案中,低分子量脂质-缀合物在上文中被定义为式(I)-(XXI)的化合物,其中X是单-或二糖、羧酸酯化的二糖、单-或二-羧酸、水杨酸酯、水杨酸、阿司匹林、乳糖酸、麦芽糖、氨基酸、甘氨酸、乙酸、丁酸、二羧酸、戊二酸、琥珀酸、脂肪酸、十二烷酸、双十二烷酸、胆汁酸、胆酸、胆甾醇基半琥珀酸酯、二肽或三肽、寡肽、三糖或肝素的二糖或三糖单体单元、硫酸类肝素、角蛋白、硫酸角质素、软骨素、软骨素-6-硫酸、软骨素-4-硫酸、皮肤素、硫酸皮肤素、葡聚糖、透明质酸、糖胺聚糖或聚吡喃糖。
形成任选的桥连基Y的合适二价基团的例子是,具有例如2个或更多个、优选4-18个碳原子的直链或支链亚烷基、-CO-亚烷基-CO、-NH-亚烷基-NH-、-CO-亚烷基-NH-、亚环烷基,其中在每种情况下的亚烷基为直链或支链,且在链-(-O-CH(CH3)CH2-)x-中包含2个或更多个、优选2-18个碳原子,其中x为1或更大的整数。
在另一个实施方案中,除了传统的磷脂结构以外,用于本发明中的有关衍生物是在Cl或C2位被修饰成含有醚或烷基键来替代酯键的磷脂。在上文中通过通式(VIII)和(IX)举例说明了这些衍生物。
在本发明的一个实施方案中,X共价地缀合至脂质。在另一个实施方案中,X经由酰胺键共价地缀合至脂质。在另一个实施方案中,X经由酯共价地缀合至脂质。在另一个实施方案中,所述脂质是磷脂酰乙醇胺。
在一个实施方案中,本发明提供了一种脂质体,其包含聚合物缀合的脂质,在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质是多糖缀合的磷脂(PoS-PL)。在一个实施方案中,所述PoS-PL是透明质酸-磷脂酰-乙醇胺(HyPE;化合物A),在一个实施方案中,所述透明质酸-磷脂酰-乙醇胺包含通过交替的β-1,3-葡萄糖醛酸苷键和β-1,4-氨基葡萄糖苷键连接的交替的N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖醛酸残基。
化合物A
在一个实施方案中,在本发明的组合物和方法中可以使用透明质酸的衍生物,诸如从成盐、部分和/或完全酯化、内部酯化、脱乙酰化、O-硫酸化、过羧基化和酰胺化的化学修饰得到的那些。在一个实施方案中,“n”描述了在完整HyPE缀合的PE分子中存在的PE的数目,而“m”描述了在所述分子中存在的二糖的数目,其中一些二糖单元包含缀合的HyPE,且其它二糖单元不包含缀合的HyPE。
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是硫酸软骨素-磷脂酰-乙醇胺(CSAPE;化合物B)。
化合物B
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是硫酸皮肤素-磷脂酰-乙醇胺(DerPE;化合物C)。
化合物C
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是肝素-磷脂酰-乙醇胺(HepPE;化合物D)。
化合物D
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是非糖胺聚糖缀合的磷脂。
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是壳聚糖-戊二酰基-磷脂酰-乙醇胺(ChiPE;化合物E)。
化合物E
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是海藻酸-磷脂酰-乙醇胺(AlgPE;化合物F)。
化合物F
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是羟乙基淀粉-戊二酰基-磷脂酰-乙醇胺(HetPE;化合物G)。
化合物G
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是葡聚糖-戊二酰基-磷脂酰-乙醇胺(DexPE;化合物H)。
化合物H
在另一个实施方案中,所述Po-L是海脉素-戊二酰基-磷脂酰-乙醇胺(HemPE或聚明胶肽;化合物I)。
化合物I
在一个实施方案中,所述PoS-PL是硫酸角质素-磷脂酰-乙醇胺(KSPE;化合物J)。
化合物J
在另一个实施方案中,所述PoS-PL是在美国公开号US2010/0022473(其通过引用并入本文)中描述的脂质或磷脂缀合物。
在一个实施方案中,多糖通过通过磷脂的胺残基连接至磷脂。在一个实施方案中,多糖通过多糖的羧酸残基连接至磷脂。在另一个实施方案中,多糖经由羟基单元(例如,--CH2-OH)连接至磷脂,所述羟基单元可以在没有交联剂存在下氧化成醛。
在一个实施方案中,脂质体是由一个或多个包封亲水芯的双脂质层形成的不同大小(在50nm至1000nm范围内)的中空微球。该结构可以借助于具有疏水尾巴和亲水头的磷脂的特殊性质来实现;在水性介质中,所述疏水尾巴彼此吸引,而亲水头倾向于面对水。结果是凑到一起以形成小囊泡的双脂质层,在所述小囊泡内部存在不同的亲水环境。脂质体首次描述在1965年(Standish M M等人,J Mol Biol,1965,13:238-252),并且已经作为药物和/或活性成分的载体进行了研究(例如,Liposomes as drug carriers,Gregoriadis G.编,New York:JohnWiley & Sons,1985:3-18;Banerjee R.,J Biomater Appl,2001,16:3-21)。通常基于它们的大小和双脂质层的数目对它们分类。一般而言,如例如Callow R A等人(Cryobiology,1985:251-267,通过引用并入本文)所述,参考:a)多层囊泡:它们具有洋葱-样结构,其中许多双脂质层夹杂着亲水层;b)大(直径超过1μm)和小(直径小于1μm)单层囊泡:它们由一个单独的双脂质层形成,并包封强亲水核;c)寡层囊泡,由几个双脂质层构成,其包封明显疏水的环境。
在一个实施方案中,使用本领域已知的方法制备脂质体,在一个实施方案中,所述脂质体是多层囊泡(MLV)、微乳化的脂质体(MEL)或大单层囊泡(LUVET)。在一个实施方案中,所述脂质体不包含磷脂酰乙醇胺(PE)。在另一个实施方案中,所述脂质体包含磷脂酰乙醇胺。
在一个实施方案中,使用用于生产单层脂质体的经典脂质膜技术来制备脂质体:将选择的会构成双层的脂质与有机溶剂混合,然后暴露于设定的环境条件(例如,设定的压力和温度参数),从而使溶剂蒸发和形成干燥的脂质膜。然后用水性介质和/或用含有要与脂质体结合的聚合物的溶液,将脂质膜水合。将一份混合物冷冻,冷冻干燥,然后通过加入合适的介质重构至它的最初体积。基于实验发现(Peer等人,Biochim Biophys Acta,2003,1612:76-82,通过引用并入本文)来设计冷冻、冷冻干燥和重构的步骤,所述实验发现证实:透明质酸和/或其衍生物可以充当单层脂质体微结构的冷冻保护剂。通常,当将简单的结构化的磷脂混悬液冷冻干燥并然后重构时,脂质体会丧失它们的原始特征,并变得组成远远更大的多层囊泡,后者不适合用于本发明的目的,因为它们的结构和它们所携带的物质的控释是无效的。大量多糖在要冷冻干燥的混合物中的存在会通过稳定性氢键的形成而保存脂质体的原始结构性能,并在重构它们以后维持它们作为控释系统的效力。
在另一个实施方案中,本发明的脂质体可以通过技术人员已知的任意方法来得到。在一个实施方案中,使用声处理/超声、挤出或它们的组合,制备适当大小的脂质体。
在另一个实施方案中,通过反相蒸发(REV)方法(参见美国专利号4,235,871,通过引用并入本文)、输注操作或去污剂稀释,可以生产脂质体制品。用于生产脂质体的这些和其它方法的综述,可以参见教科书:Liposomes,Marc Ostro,编,Marcel Dekker,Inc.,New York,1983,第1章,通过引用并入本文。也参见Szoka Jr.等人,(1980,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.,9:467),通过引用并入本文。在Cullis等人的标题为“Extrusion Technique for Producing Unilamellar Vesicles”的PCT公开号87/00238(1986年1月16日)(通过引用并入本文)中,描述了用于形成单层脂质体(ULV)的方法。可以通过脂质膜法来制备多层脂质体(MLV),其中将脂质溶解在氯仿-甲醇溶液(3:1,vol/vol)中,在减压下蒸发至干燥,并通过溶胀溶液进行水合。随后,对溶液进行充分搅拌并温育,例如,在例如37℃温育2小时。温育后,通过挤出得到单层脂质体(ULV)。挤出步骤通过使脂质体的尺寸减小到优选平均直径来调整脂质体。可替换地,可以使用诸如过滤或其它尺寸选择技术来选择期望尺寸的脂质体。
尽管本发明的经尺寸选择的脂质体应当具有小于约300nm的平均直径,然而优选的是,选择成小于约200nm的平均直径的脂质体,特别优选的是选择成小于约100nm的平均直径的脂质体。当本发明的脂质体是单层脂质体时,优选地将其选择为具有小于约200nm的平均直径。本发明的最优选的单层脂质体具有小于约100nm的平均直径。但是,应当理解,从较小的单层脂质体衍生而来的本发明的多囊脂质体通常较大,且可以具有小于约1000nm的平均直径。本发明的优选多囊脂质体具有小于约800nm的平均直径,更优选地小于约500nm,本发明的最优选的多囊脂质体具有小于约300nm的平均直径。
在一个实施方案中,所述脂质体由具有天然或合成起源的脂质形成,所述脂质由亲水部分和亲脂部分构成,所述亲脂部分可以具有单个或多个饱和的或不饱和的直链或支链。可以添加使生物流体中的脂质体稳定化的其它要素(诸如胆固醇),或本领域技术人员已知具有期望作用的任意其它要素。
在一个实施方案中,本发明的脂质体包含2个或更多个侧链亲脂链。在一个实施方案中,本发明的脂质体包含:含有2种饱和的和/或不饱和的脂肪酸(具有例如10-30个碳原子)的亲脂阳离子链、脂肪酸与季胺的盐、二甲基二酰基季胺(其中酰基含有8-30个碳原子)。其它例子在文献中有详细描述(包括Fasbender等人,Am J Physiol,1995,269:L45-L51;Solodin等人,Biochemistry,1995,34:13537-13544;Felgner等人,J Biol Chem,1994,269:2550-2561;Stamatatos等人,Biochemistry,1988,27:3917-3925,通过引用整体并入本文)。
在一个实施方案中,本发明的脂质体包含非离子链,在一个实施方案中,所述非离子链是具有例如10-30个碳原子的甘油二酯,且在另一个实施方案中,所述非离子链是烷氧基化的胺。在一个实施方案中,阴离子侧链的例子包括磷脂酸和带负电荷的磷脂诸如二棕榈酰基磷脂酰甘油。在一个实施方案中,具有单个非离子链的物质的例子是在链中具有10-30个碳原子的单甘油酯,诸如癸酸甘油酯、辛酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、异硬脂酸甘油酯、羊毛脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯等。
在另一个实施方案中,脂质体由聚氧乙烯衍生物构成,亲脂链通过醚和/或酯键与所述聚氧乙烯衍生物结合。为了例证目的,我们可以提及鲸蜡基和硬脂基醚,和具有3-10个氧乙烯单元的所有那些,以及它们的衍生物。
具有单个阴离子链的物质包括、但不限于:脂肪酸诸如油酸,和具有单链的带负电荷的磷脂,诸如磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油。
在一个实施方案中,所述脂质体可以由具有天然或合成起源的磷脂构成。天然的磷脂包括原样或经氢化的卵磷脂酰胆碱,以及得自大豆或其它植物来源的磷脂。
从众所周知的和本领域中常规地用于生产脂质体的脂质材料的组合,可以生产根据本发明的脂质体。脂质可以包括相对刚性的种类,诸如鞘磷脂,或流体类型,诸如具有不饱和酰基链的磷脂。“磷脂”表示任何一种磷脂或能够形成脂质体的磷脂的组合。磷脂酰胆碱(PC),包括从蛋、大豆或其它植物来源获得的那些,或者部分地或完全合成的那些,或者具有可变脂质链长度和不饱和度的那些,都适合用于本发明中。合成的、半合成的和天然产物磷脂酰胆碱,包括、但不限于二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、大豆磷脂酰胆碱(大豆PC)、卵磷脂酰胆碱(卵PC)、氢化卵磷脂酰胆碱(HEPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰基甘油磷酸胆碱(DMPC)、二月桂酰基甘油磷酸胆碱(DLPC)、棕榈酰油酰基甘油磷酸-胆碱(POPC)、磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、二棕榈酰基磷脂酸(DPPA)和磷脂酰丝氨酸,都是适合用于本发明中的磷脂酰胆碱。所有这些磷脂是商购可得的。此外,磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)也是适合用于本发明中的磷脂,且包括、但不限于:二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)、二月桂基磷脂酰甘油(DLPG)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(DSPG)二肉豆蔻酰基磷脂酸(DMPA)、二硬脂酰基磷脂酸(DSPA)、二月桂基磷脂酸(DLPA)和二棕榈酰基磷脂酸(DPPA)。在另一个实施方案中,脂质体由下述物质组成:二-油酰基-磷脂酰-胆碱(DOPC),在碳2处被C6-NBD(一种荧光脂肪酸)标记的PC,或它们的组合。在另一个实施方案中,脂质体由二肉豆蔻酰基磷脂酰-胆碱(DMPC)组成。其它合适的磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂和含有月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酰基和棕榈酸链的磷脂酸。为了稳定化脂质膜的目的,优选的是,添加额外的脂质组分,诸如胆固醇。在一个实施方案中,用于生产根据本发明的脂质体的脂质包括与胆固醇(CH)进一步组合的磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰胆碱(PC)。根据本发明的一个实施方案,用于生产本发明的脂质体的脂质与胆固醇组合包含摩尔比为3:1:1的PE:PC:Chol。
在一个实施方案中,为了防止脂质体向细胞内皮系统中的摄取和增强脂质体向目标组织中的摄取,可用长循环剂修饰脂质体的外表面。已知用亲水聚合物作为长循环剂对脂质体的修饰能延长脂质体在血液中的半衰期。亲水聚合物的例子包括聚乙二醇、聚甲基乙二醇、聚羟基丙二醇、聚丙二醇、聚甲基丙二醇和聚羟基环氧丙烷。因而,在一个实施方案中,本发明也涵盖含有聚乙二醇(PEG)的磷脂的掺入。
显然,存在许多可能的组合,所述组合可以得到适合用于所述目的的脂质体,并且,因为它们已经在文献中进行了详细报道,所以本领域的技术人员可能选择最合适的组合。
在一个实施方案中,根据本发明的化合物是可生物降解的。
生产聚合物缀合的脂质脂质体的方法
在另一个实施方案中,本发明提供了一种生产混合型脂质体的方法,所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种生产经修饰的脂质体的方法,所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产经修饰的脂质体。在一个实施方案中,所述方法进一步包括:在使PoS-PL与脂质体接触的步骤之前,分离所述聚合物缀合的脂质的步骤。在一个实施方案中,所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种混合型脂质体,其通过包括下述步骤的方法生产:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
生产脂质体的方法
在一个实施方案中,如下制备脂质体:将磷脂提供在水性环境中,并允许所述磷脂形成脂质体。在一个实施方案中,供给能量来加速脂质体的产生。因而,在一个实施方案中,声处理、挤出和Mozafari方法可以用于生产脂质体。在一个实施方案中,使用Phospholipon90H、Phospholipon100H、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、硬脂酰胺(SA)、二鲸蜡基磷酸酯(DCP)、胆固醇或它们的组合,可以制备脂质体。
生产纳米脂质体的方法
在一个实施方案中,为了分离脂质体,如下通过连续离心(每次在1.3x105的g力在4℃运行40分钟)将颗粒分级分离:3次运行后的沉淀物是富含微粒的级分,进行另外3次运行的富含微粒的级分的上清液是富含纳米颗粒的级分。
在一个实施方案中,可以将脂质体低压冻干。
生产聚合物缀合的脂质的方法
在一个实施方案中,使用交联剂来将聚合物连接至脂质。在一个实施方案中,所述交联剂包含戊二醛(GAD)、水溶性的碳二亚胺,在一个实施方案中,所述水溶性的碳二亚胺是1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、京尼平、转谷氨酰胺酶、甲醛或它们的组合。
在一个实施方案中,聚合物直接地或经由接头缀合至脂质。在一个实施方案中,所述接头是戊二酰基接头,在一个实施方案中,所述戊二酰基接头由下式表示:-OC(CH2)3CO-。在另一个实施方案中,--CO-亚烷基-CO、--NH-亚烷基-NH--、--CO-亚烷基-NH--、--NH-亚烷基-NHCO-亚烷基-NH--、氨基酸、亚环烷基,其中亚烷基在每种情况下是直链或支链,且在链--(--O--CH(CH3)CH2--)x—中包含2个或更多个、优选2-30原子,其中x是1或更大的整数。
在一个实施方案中,聚合物之间的连接是酰胺键,在一个实施方案中,所述聚合物是糖和脂质,在一个实施方案中,所述脂质是磷脂。在另一个实施方案中,所述多糖和所述磷脂之间的连接是酯键。
在一个实施方案中,使聚合物缀合的脂质与脂质体在溶液中混合,其中所述聚合物缀合的脂质的脂质组分掺入脂质体的脂质双层中。在一个实施方案中,经由共价结合的脂质锚定至脂质体表面的聚合物从脂质体表面伸出(即,垂直于脂质体表面),呈蘑菇状(图1a)。在一个实施方案中,所述蘑菇结构源自相对较低的Po-L/脂质体比例,其中所述Po-L的填充密度较低。在一个实施方案中,经由共价结合的脂质锚定至脂质体表面的聚合物从脂质体表面伸出(即,垂直于脂质体表面),呈刷子状(图1b)。在一个实施方案中,所述刷子结构源自相对较高的Po-L/脂质体比例,其中所述Po-L拥挤在一起。在一个实施方案中,调节所述Po-L/脂质体比例,使得存在中间结构,即蘑菇-刷子结构,在一个实施方案中,所述蘑菇-刷子结构会提供大约3-10nm的保护。在一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约3-10nm的保护层(图1a-1b),在一个实施方案中,所述保护层会保护脂质体免于降解酶或其它有害的/裂解性的试剂,诸如磷脂酶A2(PLA2),如在本文中所证实的(图4)。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物在脂质体上形成大于1nm的层。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约3.5nm的层。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约4.5nm的层。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约3.5-4.5nm的层。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约3-5nm的层。在另一个实施方案中,所述脂质缀合的聚合物形成大约2-7nm的层。本领域已知脂质缀合的聚合物会充当PLA2抑制剂,并且本文中提供的数据证实,脂质缀合的聚合物还可以保护脂质体免于降解。
这不同于大多糖,诸如天然的、未截短的透明质酸,其包被脂质体的外表面,从而形成大约1nm的层(图1c),所述层不足以保护脂质体免于许多酶。另外,本领域中已知,即使在有交联剂存在下将聚合物与脂质混合所形成的脂质体,可以导致聚合物向所述脂质体的表面的附着,而不是聚合物-脂质体缀合物向脂质体中的整合。
聚合物缀合的脂质脂质体的用途
在一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含2种或更多种低分子量糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述低分子量GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种包含脂质体的药物递送系统,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质会增加脂质体的稳定性,在一个实施方案中,所述脂质体包含生物活性的药物。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质会减少脂质体的降解。在另一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质会增加脂质体的半衰期。在另一个实施方案中,所述脂质体将生物活性的聚合物缀合的脂质靶向发炎组织,由此增加聚合物缀合的脂质的有效性。在一个实施方案中,所述包含生物活性的聚合物缀合的脂质的脂质体进一步包含额外的生物活性的药物。在一个实施方案中,所述脂质体由于它的大小而靶向发炎组织,所述大小允许它进入发炎组织,但是不能进入未发炎组织。
在一个实施方案中,本发明的和用于本发明的方法中的任意脂质体包含本发明的一种或多种聚合物缀合的脂质。因而,在一个实施方案中,本发明的脂质体包含HyPE和KSPE。在另一个实施方案中,本发明的脂质体包含CSAPE和PEG-PE。在另一个实施方案中,本发明的脂质体包含HyPE和PEG-PE。应当理解,本发明的脂质体可以包含本发明的2、3、4种或更多种不同的聚合物缀合的脂质,所述脂质掺入所述脂质体的脂质双层中。
在一个实施方案中,本发明的脂质体包含在脂质层中的疏水试剂。
在另一个实施方案中,本发明的脂质体包含被包囊在脂质体中的亲水试剂。
在一个实施方案中,所述试剂是核酸,诸如质粒DNA、短干扰RNA(siRNA)、短发夹RNA、时序小RNA(stRNA)、微RNA(miRNA)、RNA模拟物或异染色质siRNA,其与阳离子肽(诸如硫酸鱼精蛋白和聚赖氨酸)或阳离子聚合物(诸如聚乙烯亚胺(PEI)、多胺精脒和精胺)缩合。
在一个实施方案中,本发明的组合物可以用作微观药物递送系统(MDDS)。在另一个实施方案中,本发明的组合物会提供治疗或诊断药物的持续或受控释放。在另一个实施方案中,本发明的组合物会减少药物降解或灭活。在另一个实施方案中,本发明的组合物会提高药物效力,并允许降低给药频率。在另一个实施方案中,本发明的组合物会减小药物的毒性和不希望的副作用。在另一个实施方案中,本发明的组合物包囊药物以备以后递送用于治疗和诊断中。在另一个实施方案中,本发明的组合物会提高药物、疫苗、化妆品、减肥试剂或营养制品的效率和减少它们的副作用。在另一个实施方案中,本发明的组合物能够掺入和保护不同类型的生物活性剂以及将它们递送至人或动物体内的靶位。
在一个实施方案中,可以将小分子(诸如抗生素和化疗药物)和大分子(诸如蛋白)包囊在本文中描述的经修饰的脂质体中。在另一个实施方案中,所述经修饰的脂质体可以用于包囊DNA,且较大的经修饰的脂质体甚至可以包囊整个细胞和细胞系。因而,经修饰的脂质体还可以用作用于组织工程的支架。
在本发明的另一个实施方案中,可以将其它分子首先连接至多糖,所述其它分子然后与脂质反应。这些颗粒具有出现在颗粒的外侧上的其它分子。这些其它分子可以是,例如,抗体、叶酸盐、卟啉或凝集素,且可以用于靶向。在另一个实施方案中,可以将靶向试剂连接至多糖,在一个实施方案中,所述靶向试剂是特异性的单克隆抗体、scFv、Fab片段、受体配体或它们的组合。
在一个实施方案中,可以给本发明的多糖缀合针对MUC1、MUC2或MUC3的抗体,所述抗体用于靶向乳房、肺和前列腺癌的肿瘤。可替代地,可以给本发明的多糖缀合针对神经节苷脂GM3的抗体,所述抗体用于靶向黑素瘤。
在一个实施方案中,本发明提供了一种将一种或多种试剂包囊在脂质体中的方法。所述方法包括下述步骤:(1)提供低压冻干的脂质体,所述脂质体具有与聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物共价地连接至所述脂质,(2)提供包含亲水试剂的水溶液;和(3)用所述包含亲水试剂的水溶液再水合所述低压冻干的脂质体。在一个实施方案中,所述聚合物缀合的脂质可以进一步包含与所述聚合物缀合的脂质共价连接的靶向部分。
本发明也提供了用于制备包含聚合物缀合的脂质的脂质体的试剂盒以及用于药物和/或试剂包囊(其包含脂质体和聚合物缀合的脂质)的试剂盒。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗遭受病理学状况的受试者的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在脂质体中的生物活性剂,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在脂质体中的生物活性剂,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用脂质体,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。在一个实施方案中,所述脂质体包含可有效地治疗、抑制或遏制所述病理学状况的试剂。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在脂质体中的生物活性剂,所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在脂质体中的生物活性剂,所述脂质体包含2种或更多种低分子量糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述低分子量GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在脂质体中的生物活性剂,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在一个实施方案中,所述脂质体的治疗或预防作用是由于纳米脂质体向发炎组织的天然靶向。根据该方面,且在一个实施方案中,纳米脂质体将聚合物缀合的脂质靶向发炎组织,所述聚合物缀合的脂质在此处发挥抗炎效应,由此在受试者中开始治疗或预防作用。在另一个实施方案中,所述脂质体包含生物活性剂,并且本发明的组合物和方法的改善的作用是由于脂质体上的聚合物缀合的脂质所实现的免于降解的保护,由此增加脂质体在受试者中的半衰期,从而增加它对所述受试者的作用。在另一个实施方案中,并且本发明的组合物和方法的改善的作用是由于生物活性剂从脂质体的更慢释放,所述更慢释放是由于掺入脂质体的脂质双层中的聚合物缀合的脂质的存在。
在一个实施方案中,所述病理学状况是脓毒症。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是肠疾病,在一个实施方案中,所述肠疾病是克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、免疫炎症性的肠损伤、药物诱导的肠病变、缺血诱导的肠损伤、炎性肠病或它们的组合。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是与炎症应答有关的中枢神经系统或周围神经系统的疾病或障碍,在一个实施方案中,所述疾病或障碍是多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、脑膜炎、中枢和周围神经系统的脱髓鞘疾病或它们的任意组合,其中所述中枢和周围神经系统的脱髓鞘疾病包括多发性硬化、特发性脱髓鞘多神经病或格-巴二氏综合征、阿尔茨海默氏病、疼痛、亨廷顿病(HD)、重症肌无力(MG)、HIV-相关的痴呆、额颞叶痴呆(FTD)、中风、创伤性脑损伤、年龄相关的视网膜变性、脑脊髓炎、慢性炎症性的脱髓鞘多神经病、大脑缺血诱导的损伤或它们的组合。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是阻塞性呼吸疾病,在一个实施方案中,所述阻塞性呼吸疾病是哮喘、慢性阻塞性肺疾病或它们的组合。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是皮肤病学病症,在一个实施方案中,所述皮肤病学病症是银屑病、脂溢性皮炎、接触性皮炎、异位性皮炎或它们的组合。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是感染。在一个实施方案中,所述感染是病毒感染。在一个实施方案中,所述病毒感染是流感感染、HIV感染或痘病毒感染。在另一个实施方案中,所述感染是细菌感染。在一个实施方案中,所述细菌感染是衣原体属感染。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是瘤形成。在另一个实施方案中,所述病理学状况是肉瘤、腺癌、结肠癌、黑素瘤、乳腺癌、白血病、淋巴瘤、胃癌、胶质母细胞瘤、星形细胞瘤、膀胱癌、胸膜间皮瘤、燕麦细胞癌、支气管原癌或它们的组合。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于治疗、抑制或遏制受试者的疾病、病症或障碍的方法,所述方法包括:给所述受试者施用被包囊在本发明的脂质体中的生物活性剂。在一个实施方案中,所述病症是结膜炎,在一个实施方案中,所述结膜炎是病毒性结膜炎,且在另一个实施方案中,所述结膜炎是细菌性结膜炎。在另一个实施方案中,所述结膜炎是由于变应原或由于刺激剂。
在另一个实施方案中,所述病理学状况是囊性纤维化。
在一个实施方案中,所述病理学状况是癌症,且所述生物活性剂是抗癌药物。在一个实施方案中,所述癌症是转移性癌症。在另一个实施方案中,所述病理学状况是感染,在一个实施方案中,所述感染是细菌感染、真菌感染、病毒感染或寄生虫感染。在一个实施方案中,所述生物活性剂是抗细菌药物、抗真菌药物、抗病毒药物或抗寄生虫药物。在另一个实施方案中,所述病理学状况是朊病毒感染。
在一个实施方案中,口服地、静脉内地、鼻内地、眼内地、肌肉内地或皮下地或局部地施用所述药物。
在一个实施方案中,“治疗”表示治疗性处理或预防性或防止性措施,其中目的是防止或减轻如上文描述的目标病理性病症或障碍。因此,在一个实施方案中,治疗可以包括直接影响或治愈、遏制、抑制、预防、降低疾病、障碍或病症的严重程度,延缓其发作,减少与其有关的征状,或它们的组合。因此,在一个实施方案中,“治疗”尤其是指延缓进展、加快缓解、诱导缓解、增强缓解、加快恢复、提高替代治疗剂的效力或减小对其的抗性、或它们的组合。在一个实施方案中,“预防”尤其是指延缓征状的发作、防止疾病的复发、降低复发事件的次数或频率、增加有征状事件之间的潜伏期、或它们的组合。在一个实施方案中,“遏制”或“抑制”尤其是指降低征状的严重程度、降低急性事件的严重程度、减少征状的数目、降低疾病相关征状的发病率、减少征状的潜伏期、改善征状、减少继发性征状、减少继发性感染、延长患者存活期、或它们的组合。
在一个实施方案中,征状是原发性的,而在另一个实施方案中,征状是继发性的。在一个实施方案中,“原发性的”表示作为受试者病毒感染的直接结果的征状,而在一个实施方案中,“继发性的”表示由原发性原因衍生出或引起的征状。在一个实施方案中,用于本发明中的组合物和方法治疗原发性或继发性征状或与病理学状况有关的继发性并发症。
在某些实施方案中,本发明的和用于本发明的方法中的任意脂质体将包含本发明的一种或多种聚合物缀合的脂质,所述脂质为任意形式或如本文中所述的实施方案。在某些实施方案中,本发明的任意脂质体由本发明的一种或多种聚合物缀合的脂质组成,所述脂质为任意形式或如本文中所述的实施方案。在某些实施方案中,本发明的脂质体基本上由本发明的一种或多种聚合物缀合的脂质组成,所述脂质为任意形式或如本文中所述的实施方案。
在某些实施方案中,术语“包含”表示,包括聚合物缀合的脂质(诸如HyPE),以及包括本领域可能已知的其它脂质或脂质缀合物。在某些实施方案中,术语”基本上由......组成”表示这样的脂质体:其与标准脂质体的唯一差别是,包括指定的聚合物缀合的脂质,但是可以包括在脂质体的改进的药物释放特性中没有直接涉及的其它脂质或脂质缀合物。在某些实施方案中,术语“由......组成”表示这样的脂质体:其仅含有特定聚合物缀合的脂质,或者可替换地,仅含有列举的掺入脂质体中的聚合物缀合的脂质。
在一个实施方案中,术语“靶向试剂”或“靶向部分”表示这样的试剂:其归巢与或优先缔合或结合特定组织、细胞类型、受体、感染试剂或其它目标区域。靶向试剂的例子包括、但不限于:寡核苷酸、抗原、抗体或其功能片段、配体、受体、特异性结合对的一个成员、聚酰胺(包括对生物受体具有亲和力的肽)、寡糖、多糖、类固醇或类固醇衍生物、激素(例如,雌二醇或组胺)、激素-模仿物(例如,吗啡)、或对靶标具有结合特异性的其它化合物。在本发明的方法中,所述靶向试剂会促进本发明的脂质颗粒的运输或向目标靶标的优先定位。
本文中使用的“抗体”或抗体的“功能片段”包括多克隆和单克隆抗体制品、以及包括杂合或嵌合抗体的制品,所述杂合或嵌合抗体是例如人源化抗体、改变的抗体、F(ab')2片段、F(ab)片段、Fv片段、单结构域抗体、二聚体和三聚体抗体片段构建体、微体和它们的功能片段,所述功能片段表现出亲本抗体分子的免疫学结合性能和/或结合细胞表面抗原。
所述靶向试剂可以是任意配体,所述配体的受体在靶细胞上差异性地表达。非限制性例子包括转铁蛋白、叶酸盐、其它维生素、EGF、胰岛素、调蛋白、RGD肽或可与整联蛋白受体反应的其它多肽、抗体或其片段。糖分子或糖蛋白、脂质分子或脂蛋白可以是靶向试剂。
在一个实施方案中,针对在疾病状态中特异性地表达的细胞表面标志物的抗体可以用作靶向试剂。在肿瘤细胞中特异性地出现的抗原的例子包括:在黑素瘤上的神经节苷脂GM3,在乳腺癌、肺癌和前列腺癌的表面上的MUC1、MUC2和MUC3,以及在胃肠消化癌的表面上的Lewis X。在一个实施方案中,所述抗体是含有抗体的抗原结合区域的功能片段。一种优选的抗体片段是抗体的单链Fv片段。抗体或抗体片段是这样的:其将结合靶细胞表面上的受体,且优选地结合在靶细胞上差异性地表达的受体。在一个实施方案中,可以将多种类型的靶向试剂共价地结合至脂质颗粒。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在脂质体中的诊断剂的步骤,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括给所述受试者施用被包囊在脂质体中的诊断剂和对所述患者成像的步骤,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在脂质体中的诊断剂的步骤,所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在脂质体中的诊断剂的步骤,所述脂质体包含2种或更多种低分子量糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述低分子量GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括施用被包囊在脂质体中的诊断剂的步骤,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于抑制受试者中的PLA2的方法,所述方法包括给所述受试者施用脂质体的步骤,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于抑制受试者中的PLA2的方法,所述方法包括给所述受试者施用脂质体的步骤,所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于抑制受试者中的PLA2的方法,所述方法包括给所述受试者施用脂质体的步骤,所述脂质体包含2种或更多种低分子量糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述低分子量GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种用于抑制受试者中的PLA2的方法,所述方法包括给所述受试者施用脂质体的步骤,所述脂质体包含聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
在一个实施方案中,本文中使用的术语“包囊”和“包封”表示,将试剂掺入脂质颗粒中。所述试剂存在于脂质颗粒的水性内容物中。在一个实施方案中,被包囊的试剂的一部分呈在脂质体内部沉淀出的盐的形式。所述试剂也可以在脂质体内部自沉淀。
在一个实施方案中,“试剂”是指,可以在治疗上影响身体或者可以用于体内诊断的任意试剂或化合物。治疗剂的例子包括:用于治疗癌症的化疗剂,用于治疗感染的抗生素,用于治疗真菌感染的抗真菌剂,治疗性核酸(包括核酸类似物,例如,siRNA)。在一个实施方案中,感兴趣的试剂是基因、多核苷酸,诸如质粒DNA、DNA片段、寡核苷酸、寡脱氧核苷酸、反义寡核苷酸、嵌合的RNA/DNA寡核苷酸、RNA、siRNA、核酶或病毒颗粒。在一个实施方案中,所述试剂是生长因子、细胞因子、免疫调节剂或其它蛋白,包括当表达时呈递会刺激或遏制免疫系统的抗原的蛋白。在一个实施方案中,所述试剂是能够在施用后进行体内检测的诊断剂。示例性的诊断剂包括电子致密材料、磁共振成像剂、放射性药物和荧光分子。可用于成像的放射性核素包括铜、镓、铟、铼和锝的放射性同位素,包括同位素64Cu、67Cu、111In、99mTc、67Ga或68Ga。Low等人在美国专利号5,688,488(通过引用并入本文)中公开的成像剂可用于本文中描述的脂质体复合物中。
在一个实施方案中,感兴趣的试剂是核酸,例如,DNA、RNA、siRNA、质粒DNA、短发夹RNA、时序小RNA(stRNA)、微RNA(miRNA)、RNA模拟物或异染色质siRNA。感兴趣的核酸试剂具有带电荷的主链,所述主链会阻止在脂质颗粒中的有效包囊。因此,感兴趣的核酸试剂可以在包囊进脂质颗粒中之前与阳离子聚合物(例如,PEI、多胺精脒和精胺)或阳离子肽(例如,鱼精蛋白和聚赖氨酸)缩合。在一个实施方案中,所述试剂没有与阳离子聚合物缩合。
在一个实施方案中,以下述方式将感兴趣的试剂包囊在脂质颗粒中。提供低压冻干的脂质颗粒,其包括冷冻保护剂和靶向试剂。感兴趣的试剂是在水溶液中。使用含有感兴趣的试剂的水溶液再水合低压冻干的脂质颗粒。从而将感兴趣的试剂包囊在再水合的脂质颗粒中。
在一个实施方案中,脂质颗粒可以递送2种感兴趣的试剂。一种试剂是疏水的,且另一种是亲水的。在形成脂质颗粒的过程中,将疏水试剂加入脂质颗粒中。疏水试剂与脂质颗粒的脂质部分结合。将亲水试剂加入再水合低压冻干的脂质颗粒的水溶液中。
本发明涵盖有效的任何合适的脂质:药学试剂比例。在一个实施方案中,脂质:药学试剂摩尔比包括约2:1至约30:1、约5:1至约100:1、约10:1至约40:1、约15:1至约25:1。
在一个实施方案中,药学试剂的负载效率是约50%、约60%、约70%或更大的包囊化药学试剂百分比。在一个实施方案中,亲水试剂的负载效率是在50-100%范围内。与脂质颗粒的脂质部分结合的药学试剂(例如,难溶于水溶液中的药学试剂)的优选负载效率是,约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、约100%的负载药学试剂百分比。在一个实施方案中,所述脂质层中的疏水试剂的负载效率是在80-100%范围内。
在该方法的一个方面,用选自下述的标记可检测地标记脂质体产品:放射性标记、荧光标记、非荧光标记、染料、或增强磁共振成像(MRI)的化合物。在一个实施方案中,通过声音反射率检测脂质体产品。所述标记可连接至脂质体的外部,或可包囊在脂质体的内部。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括给所述受试者施用所述被包囊在脂质体中的核酸的步骤,所述脂质体包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
在另一个实施方案中,本发明提供了一种将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括给所述受试者施用所述核酸的步骤,所述核酸被包囊在经修饰的包含脂质双层的脂质体中,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入所述脂质双层中的多糖缀合的磷脂(PoS-PL)。
本发明的另一个目的是,使用脂质颗粒作为基因递送物质,提供基因递送。例如,为了抗血管生成目的,可以将突变体Raf基因靶向和递送至肿瘤细胞;可以将高细胞毒性的细胞因子TNF-α的基因递送给癌症以促进细胞死亡;可以将细胞因子IL-12和IFN-γ的基因递送给肺以实现变态反应诱导的超应答性(AHR);和可以将胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)的cDNA靶向帕金森病患者的黑质处的多巴胺细胞。
在一个实施方案中,使用本发明的脂质体来递送抗癌剂。在一个实施方案中,在本发明的组合物和有关的方法中包括这样的脂质体:其包含HYPE,且含有有丝分裂抑制剂诸如紫杉醇。在一个实施方案中,众多人肿瘤类型(包括卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、头颈癌和其它恶性肿瘤)具有CD44家族的细胞-表面蛋白聚糖的显著表达。例如,CD44蛋白聚糖家族在多达约90%的得自原发性人卵巢肿瘤或腹膜植入物的新鲜样品中表达。另外,对头颈鳞状细胞癌的研究已经证实,多达75%具有CD44的表达。通常,上皮癌干细胞也表达CD44。
CD44蛋白聚糖家族包括一种亲本形式和10种或更多种异形体,它们是透明质酸的主要受体。透明质酸在细胞外基质内发挥多种功能,包括对细胞行为的直接的受体介导的作用。这些作用经由细胞内的信号传递途径而发生,在所述途径中,透明质酸结合CD44细胞表面受体被被所述受体内化。
本文中使用的术语“抗癌剂”表示这样的化合物:其能够不利地影响受试者中的癌症,例如,通过杀死一个或多个癌细胞,诱导一个或多个癌细胞的细胞凋亡,降低一个或多个癌细胞的生长速率,减少转移灶的发生率或数目,减小肿瘤的大小,抑制肿瘤的生长,减少向肿瘤或一个或多个癌细胞的血液供给,促进针对一个或多个癌细胞或肿瘤的免疫应答,预防或抑制癌症的进展,或增加患有癌症的受试者的寿命。
在某些实施方案中,适合用于本公开内容的经修饰的脂质体中的抗癌剂包括紫杉烷。一般而言,紫杉烷通常是具有抗肿瘤性能(诸如抑制微管功能)的二萜。合适的紫杉烷的例子包括、但不限于:紫杉醇、多西他赛、及其衍生物。在一个实施方案中,合适的抗癌剂可以呈现为活性酯,诸如N-羟基琥珀酰亚胺酯(“NHS酯”)。例如,在一个实施方案中,合适的抗癌剂可以是紫杉醇-N-羟基琥珀酰亚胺酯,也被称作“紫杉醇-NHS酯”或“泰素-NHS酯”。在另一个实施方案中,要使用本发明的脂质体递送的抗癌剂是多柔比星、托泊替康或它们的组合。
其它抗癌剂也可能适合用于公开的经修饰的脂质体中。抗癌剂包括,例如,化疗剂(化学疗法)、放疗剂(放射疗法)、免疫治疗剂(免疫疗法)、基因治疗剂(基因疗法)、激素疗法、其它生物剂(生物疗法)和/或替代疗法。可能适合用作本文公开的经修饰的脂质体中的抗癌剂的抗癌剂的非穷举列表可以参见美国专利号7,344,829的第12列第43行至第13列第4行,通过引用并入本文。
在一个实施方案中,本发明提供了一种包含本发明的脂质体的组合物。
短语“治疗上有效的”意图描述在疾病或障碍的治疗中使用的活性成分的量。该量会实现减少或消除所述疾病或障碍的目标。
本发明的药物组合物可以用于治疗有此需要的受试者中的适应症,即,病理学状况。本文中使用的术语”受试者”用于包括人类和其它哺乳动物,诸如牛、绵羊、猪、山羊、狗、猫、大鼠、小鼠等,以及包括两栖动物类、禽类、爬行动物类和鱼在内的动物。
根据本发明的药物组合物优选地口服施用,但是也可以通过其它合适的途径施用,包括胃肠外,例如,皮下、静脉内、局部、肌肉内、腹膜内、透皮、直肠、阴道、鼻内或眼内。可替换地或伴随地,可以通过口服途径施用。口服施用途径应当理解为包括含服和舌下施用途径。
可采用快速推注或随着时间梯度灌注进行胃肠外施用。胃肠外施用通常被表征为注射,最典型地为皮下、肌肉内或静脉内。
可以以多种方式施用局部制剂,其由本发明的药物组合物的活性成分、穿透促进剂和其它生物活性的药物或药剂组成。可以将液体制剂从合适的递送装置逐滴施用于皮肤或患病皮肤或粘膜的适当区域,并用手擦涂或简单地任其风干。
可以将合适的胶凝剂加至液体制剂中,并可以将所述制剂施用于适当区域并擦涂。为了施用到伤口或烧伤,可以将活性成分掺入诸如油剂、乳剂等剂型中。这样的制剂可以以洗剂、乳膏剂、糊剂、软膏剂等形式直接施用于受影响的区域。
可替换地,可以将局部液体制剂放入喷雾装置中,并作为喷雾剂来递送。这类药物递送装置特别适合施用于受真皮病理学影响的大皮肤区域、高度敏感的皮肤或鼻腔或口腔。任选地,可以以软膏剂或透皮贴剂形式施用药物组合物。
本发明的药物组合物也可以通过优化粘膜层摄取的其它途径来施用,例如,阴道(特别是在治疗阴道病理学的情况下)、直肠和鼻内施用途径。此外,所述药物组合物可能适合用于通过粘膜组织或上皮来递送。如果鼻内施用,所述药物组合物通常以气溶胶形式或者以滴鼻剂形式施用。这对于治疗肺病理学而言可能是特别有用的。
合适的制剂可以参见:A.Gennaro(2000)“Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy”,第20版,Lippincott,Williams,& Wilkins;Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(1999)H.C.Ansel等人编,第7版,Lippincott,Williams,&Wilkins;和Handbook ofPharmaceutical Excipients(2000)A.H.Kibbe等人编,,第3版Amer.Pharmaceutical Assoc.,它们中的每一篇通过引用并入本文。
取决于预期的施用模式,所用组合物可以呈固体、半固体或液体剂型的形式,例如,片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、液体、混悬液等,优选为适合以精确剂量单次施用的单位剂型。本发明的药物组合物和药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂、佐剂或助剂。优选的是,药学上可接受的载体是这样的载体:其对有活性的治疗性蛋白是化学惰性的,并且在使用条件下没有有害的副作用或毒性。载体的选择部分地取决于特定活性成分以及用于施用组合物的特定方法。因此,本发明的药物组合物存在多种合适的制剂。
合适的赋形剂具体地是,填充剂诸如糖类(例如,乳糖或蔗糖、甘露醇、山梨醇等)、纤维素制剂和/或磷酸钙(例如,磷酸三钙、磷酸氢钙等)以及粘合剂诸如淀粉糊(其使用例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉)、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷。
用于胃肠外施用的可注射制剂可以制备为液体混悬液、适合在注射前用液体配制成溶液或混悬液的固体形式、或乳剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等。另外,如果需要的话,要施用的药物组合物还可以含有少量无毒的助剂,例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等,例如醋酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。
水性注射用混悬液还可以含有增加混悬液粘度的物质,包括例如羧甲纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。任选地,所述混悬液还可以含有稳定剂。
胃肠外制剂可以呈单位剂量或多次剂量密封容器形式,诸如安瓿和管形瓶,并可在冷冻干燥(低压冻干)条件下贮存,仅需在即将使用前加入无菌液体载体(例如水)而配成注射剂。可以从前述种类的无菌粉剂、颗粒和片剂制备即时注射混悬液。
对于口服施用,通过掺入任何常用的赋形剂,例如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、交联羧甲纤维素钠、葡萄糖、明胶、蔗糖、碳酸镁等,形成药学上可接受的无毒组合物。这样的组合物包括混悬液、片剂、可分散的片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、持续释放制剂等。适合口服施用的制剂包括:液体混悬液(例如有效量的包囊gagomer颗粒的药物悬浮于稀释剂例如水、盐水或橙汁中);药囊、锭剂和糖锭,各自含有预定量的固体或颗粒状活性成分;粉剂;在适当液体中的混悬液;和合适的乳剂。液体制剂可以包括稀释剂(例如,水和醇,例如乙醇、苯甲醇、和聚乙烯醇),加入或不加入药学上可接受的表面活性剂、助悬剂或乳化剂。
当所述组合物为丸剂或片剂时,它将含有与活性成分一起的:稀释剂诸如乳糖、蔗糖、磷酸二钙等;润滑剂诸如硬脂酸镁等;和粘合剂诸如淀粉、金合欢树胶、明胶、聚乙烯基吡咯烷、纤维素及其衍生物等。
片剂形式可以包括下述的一种或多种:乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸、微晶纤维素、阿拉伯胶、明胶、瓜尔胶、胶体二氧化硅、交联羧甲纤维素钠、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸、防腐剂、矫味剂、药学上可接受的崩解剂、润湿剂和药理学上相容的载体。
胶囊形式可以属于常规的硬壳或软壳明胶类型,其含有例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂,诸如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉。
锭剂形式可以包括负载于载体(一般为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中的包囊gagomer颗粒的药物,以及包含负载于惰性基质(诸如明胶或甘油、或蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分的软锭剂。
要施用给任意给定患者的本发明的药物组合物中的活性成分的量必须根据经验确定,并且应根据患者状况而变化。可以首先施用相对少量的药物组合物,如果未观察到不良作用,那么平稳地提高剂量。当然,不应超过在常规动物毒性试验中确定的最大安全毒性剂量。
在本发明范围内的药物组合物包括,其中含有可有效地达到其预期目的的量的活性成分的所有组合物。尽管个体需要存在差异,但是每种化合物的有效量的最佳范围的确定属于本领域的技能。施用的剂量取决于其单个接受者的年龄、健康和重量,以及任何并行治疗的性质和期望的效果。典型的剂量包括0.01-100mg/kg体重。优选剂量是在约0.1-100mg/kg体重范围内。最优选剂量在约1-50mg/kg体重范围内。
实施例1
聚合物缀合的脂质(Po-L)的制备
透明质酸缀合的二-棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(HyPE)
在搅拌下,将20.0g透明质酸溶解在770ml0.1M MES缓冲液(用5N NaOH调至pH=6.4)中,并加热至35℃(溶液1)。在搅拌下,将2.00g二-棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)溶解在750ml叔丁醇(93%t-BuOH,7%水)和65ml水的混合物中,并加热至50℃,直到达到DPPE的完全溶解(溶液2)。
在搅拌下,将溶液2加入溶液1中,加入2.00g HOBT,并将混合物冷却至30±5℃。加入20g EDAC,并在溶解时(1-2分钟),将反应混合物转移至2升RB烧瓶。
将反应混合物在超声浴中声处理3小时。在声处理步骤结束后,将反应混合物保持在室温搅拌过夜。
海脉素缀合的二-棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(HemPE)
Hem NH制备
将4g己烷二胺溶解在400ml H2O中,然后用HCl滴定至pH=6.0。加入500ml3.5%海脉素和2g EDAC。通过滴定,使pH维持在6.0保持3-4h,并将反应物静置过夜。次日早晨,将pH调至6.0,加入0.5g EDAC,并继续反应4h。将溶液酸化至pH3.0-4.0,并穿过10kDFiltron过滤。
Hem-NH与戊二酰基-PE(Glu-PE)的结合
将200mg Glu-PE溶解在C/M:1/1中,将溶液用800mg DCC活化1.5h。在转子真空中蒸发溶剂。立即加入1g Hem-Nh溶解在40mlH2O(含有1ml DiDAB和0.5ml三乙胺)中的溶液。使反应进行48h。用DCM/MeOH/EtOH洗涤得到的溶液,以除去游离的Glu-PE。在水中透析水相,并低压冻干。溶解在H2O/MeOH:1/1中,穿过离子交换柱(Amberlite IR120)。在水中透析,低压冻干。
脂质体的制备
根据公开的操作(MacDonald等人,1991),从溶解在叔丁醇中的脂质(诸如DMPC或卵-PC,含有/不含33mole%胆固醇)制备单层脂质体,将其低压冻干至干燥,悬浮于tris-缓冲液(pH=7.4)中,并穿过聚碳酸酯滤器挤出,以得到具有在50-100nm之间的平均直径大小的纳米脂质体。为了得到Po-L/脂质脂质体,在挤出之前,将脂质混悬液与Po-L溶液(例如,含HyPE或Hem-PE的缓冲液)以期望的比例混合。通过动态光散射,确定混合的纳米脂质体的大小。
结果
Po-L/脂质形成100-130nm的纳米脂质体,其适合于选择性地穿透发炎组织的细胞间隙,同时避免穿透进入健康组织中,具有0.8的填装参数(稳定范围=0.74-1.0)。图2显示了达到PE-HyPE脂质体的最佳稳定性所需的、脂质体中缀合至HyPE的PE的摩尔百分比,当填装参数(PP)接近于1.0(但是不高于1)时,得到所述最佳稳定性。
Po-L/脂质纳米脂质体的大小在60℃稳定至少27天(数据未显示),而裸露的脂质二肉豆蔻酰基磷脂酰-胆碱(DMPC)纳米脂质体(对照)的大小在第17天之前增加(图3),并且在第20天开始减小(数据未显示)。包含1.6%HyPE-2、0.6%HyPE-5、Dex(5)-PE、Dex(40)-PE、Heta-PE和Hem-PE的纳米脂质体都具有比对照纳米脂质体更稳定的纳米脂质体大小(图3)。HyPE-2和HyPE-5描述了那些缀合物中的透明质酸与PE的摩尔比,其还可以描述为每个PE的透明质酸二糖单元的数目(表2)。
表2:两批HyPE的组成,针对它们对含有Po-L的DMPC脂质体的大小稳定性进行了试验(如在图3中)
*-HA平均分子量=50KD;**DSU=在HyPE中的HA二糖单元(分子量=379)
与对照(图4)或聚乙二醇化的(数据未显示)纳米脂质体相比,Po-L/脂质NL明显更耐受外部磷脂酶A2(主要的PL-水解酶)的裂解。另外,在体外(图5)和体内(图6)实验中,包囊化的药物从Po-L/脂质纳米脂质体的释放(在血浆中2天,37℃)显著慢于从对照纳米脂质体的释放。
这些结果提示,Po-L/脂质NL适合用于药物的缓慢释放和靶向递送,且可能具有胜过目前使用的组合物的优点:一些PoSPL已经被开发为抗炎药,并且它们的应用因而会提供额外的治疗益处,并且如在众多先前的研究中所记载
的,是天然的、可生物降解的、非免疫原性的和无毒的。另外,Po-L会提供组合物平台,该平台可以经修改后用于有差别的治疗和器官靶向。
尽管在本文中已经解释和描述了本发明的某些特征,本领域普通技术人员现在可以做出许多修改、替换、变化和等同方案。因此,应当理解,所附权利要求意图涵盖落入本发明的真实精神内的所有这样的修改和变化。
Claims (123)
1.一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
2.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述脂质体是纳米脂质体。
3.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
4.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
5.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
6.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
7.根据权利要求6所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。
8.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述聚合物是海脉素。
9.根据权利要求8所述的脂质体,其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
10.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述聚合物是多糖。
11.根据权利要求10所述的脂质体,其中所述多糖是糖胺聚糖。
12.根据权利要求11所述的脂质体,其中所述糖胺聚糖是透明质酸。
13.根据权利要求12所述的脂质体,其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
14.根据权利要求11所述的脂质体,其中所述糖胺聚糖是硫酸软骨素。
15.根据权利要求11所述的脂质体,其中所述糖胺聚糖是硫酸皮肤素。
16.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述糖胺聚糖是肝素。
17.根据权利要求10所述的脂质体,其中所述多糖是壳聚糖。
18.根据权利要求17所述的脂质体,其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
19.根据权利要求10所述的脂质体,其中所述多糖是海藻酸。
20.根据权利要求10所述的脂质体,其中所述多糖是羟乙基淀粉。
21.根据权利要求10所述的脂质体,其中所述多糖是葡聚糖。
22.根据权利要求21所述的脂质体,其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
23.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述脂质是磷脂。
24.根据权利要求23所述的脂质体,其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
25.根据权利要求1所述的脂质体,其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
26.根据权利要求25所述的脂质体,其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
27.一种脂质体,其包含脂质双层和糖胺聚糖(GAG)缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层中。
28.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述脂质体是纳米脂质体。
29.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
30.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
31.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的GAG缀合的脂质。
32.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG缀合的脂质包含2种或更多种与单一GAG缀合的脂质。
33.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG中的脂质与二糖单元的比例是2:4至2:2000。
34.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG是透明质酸。
35.根据权利要求34所述的脂质体,其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
36.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG是硫酸软骨素。
37.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG是硫酸皮肤素。
38.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述GAG是肝素。
39.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述脂质是磷脂。
40.根据权利要求39所述的脂质体,其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
41.根据权利要求27所述的脂质体,其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
42.根据权利要求41所述的脂质体,其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
43.一种脂质体,其包含脂质双层和聚合物缀合的脂质,其中所述聚合物缀合的脂质掺入
所述脂质双层中,且其中所述聚合物不是糖胺聚糖。
44.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述脂质体是纳米脂质体。
45.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
46.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
47.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
48.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
49.根据权利要求48所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。
50.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物是海脉素。
51.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
52.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物是多糖。
53.根据权利要求52所述的脂质体,其中所述多糖是壳聚糖。
54.根据权利要求53所述的脂质体,其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
55.根据权利要求52所述的脂质体,其中所述多糖是海藻酸。
56.根据权利要求52所述的脂质体,其中所述多糖是羟乙基淀粉。
57.根据权利要求52所述的脂质体,其中所述多糖是葡聚糖。
58.根据权利要求57所述的脂质体,其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
59.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述脂质是磷脂。
60.根据权利要求59所述的脂质体,其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
61.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述聚合物缀合的脂质的脂质不同于所述脂质体的所述脂质双层的脂质。
62.根据权利要求43所述的脂质体,其中所述脂质体进一步包含第二种聚合物缀合的脂质。
63.根据权利要求62所述的脂质体,其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
64.一种生产混合型脂质体的方法,所述方法包括下述步骤:使脂质与聚合物缀合以形成聚合物缀合的脂质,和使所述聚合物缀合的脂质与脂质体接触以生产混合型脂质体。
65.根据权利要求64所述的方法,所述方法另外包括下述步骤:在所述接触步骤之前,分离所述聚合物缀合的脂质。
66.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体包含2种或更多种聚合物缀合的脂质。
67.根据权利要求64所述的方法,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
68.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体是纳米脂质体。
69.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的内层和外层。
70.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质掺入所述脂质双层的外层。
71.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体包含2种或更多种掺入其中的聚合物缀合的脂质。
72.根据权利要求64所述的方法,其中所述聚合物缀合的脂质包含2种或更多种与单一聚合物缀合的脂质。
73.根据权利要求72所述的方法,其中所述聚合物缀合的脂质中的脂质与聚合物单元的比例是在2:4至2:2000之间。
74.根据权利要求64所述的方法,其中所述聚合物是海脉素。
75.根据权利要求74所述的方法,其中所述海脉素经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
76.根据权利要求64所述的方法,其中所述聚合物是多糖。
77.根据权利要求76所述的方法,其中所述多糖是糖胺聚糖。
78.根据权利要求77所述的方法,其中所述糖胺聚糖是透明质酸。
79.根据权利要求78所述的方法,其中所述透明质酸具有大约10-50kD的平均分子量。
80.根据权利要求77所述的方法,其中所述糖胺聚糖是硫酸软骨素。
81.根据权利要求77所述的方法,其中所述糖胺聚糖是硫酸皮肤素。
82.根据权利要求77所述的方法,其中所述糖胺聚糖是肝素。
83.根据权利要求76所述的方法,其中所述多糖是壳聚糖。
84.根据权利要求83所述的方法,其中所述壳聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
85.根据权利要求76所述的方法,其中所述多糖是海藻酸。
86.根据权利要求76所述的方法,其中所述多糖是羟乙基淀粉。
87.根据权利要求76所述的方法,其中所述多糖是葡聚糖。
88.根据权利要求87所述的方法,其中所述葡聚糖经由戊二酰基接头缀合至所述脂质。
89.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质是磷脂。
90.根据权利要求89所述的方法,其中所述磷脂是磷脂酰乙醇胺。
91.根据权利要求64所述的方法,其中所述脂质体包含脂质双层,且所述聚合物缀合的脂质的脂质不同于所述脂质双层的脂质。
92.根据权利要求64所述的方法,所述方法另外包括下述步骤:使第二种脂质与第二种聚合物缀合以形成第二种聚合物缀合的脂质,和使所述第二种聚合物缀合的脂质与所述混合型脂质体接触。
93.根据权利要求92所述的方法,其中所述第二种聚合物缀合的脂质是聚乙二醇(PEG)缀合的脂质。
94.通过根据权利要求64所述的方法生产的混合型脂质体。
95.一种组合物,其包含根据权利要求1所述的脂质体。
96.一种组合物,其包含根据权利要求27所述的脂质体。
97.一种组合物,其包含根据权利要求43所述的脂质体。
98.一种药物递送系统,其包含根据权利要求1所述的脂质体。
99.一种将核酸递送给受试者的方法,所述方法包括给所述受试者施用所述核酸的步骤,所述核酸被包囊在根据权利要求1所述的脂质体中。
100.根据权利要求99所述的方法,其中为了治疗目的将所述核酸递送给所述受试者。
101.一种用于在受试者中执行诊断成像的方法,所述方法包括给所述受试者施用诊断剂和对所述患者成像的步骤,所述诊断剂被包囊在根据权利要求1所述的脂质体中。
102.一种用于治疗、抑制或遏制受试者的病理学状况的方法,所述方法包括:给所述受试者施用根据权利要求1所述的脂质体。
103.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是癌症。
104.根据权利要求103所述的方法,其中所述癌症是转移性癌症。
105.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是瘤形成。
106.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是感染。
107.根据权利要求106所述的方法,其中所述感染是脓毒症。
108.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是阻塞性呼吸疾病。
109.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是皮肤病学病症。
110.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是囊性纤维化。
111.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是结膜炎。
112.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是炎性肠病。
113.根据权利要求102所述的方法,其中所述病理学状况是神经系统障碍。
114.根据权利要求102所述的方法,其中所述神经系统障碍是多发性硬化。
115.根据权利要求102所述的方法,其中所述脂质体进一步包含用于治疗所述病理学状况的生物活性剂。
116.根据权利要求115所述的方法,其中所述病理学状况是癌症,且所述生物活性剂是抗癌药物。
117.根据权利要求115所述的方法,其中所述病理学状况是细菌感染、真菌感染、病毒感染或寄生虫感染,且所述生物活性剂是抗细菌药物、抗真菌药物、抗病毒药物或抗寄生虫药物。
118.根据权利要求115所述的方法,其中所述病理学状况是朊病毒感染,且所述生物活性剂是适合用于治疗朊病毒感染的生物活性剂。
119.根据权利要求102所述的方法,其中口服地、静脉内地、鼻内地、眼内地、肌肉内地、皮下地或局部地施用所述药物。
120.根据权利要求102所述的方法,其中所述脂质体充当靶向发炎组织的聚合物-脂质体缀合物的载体。
121.根据权利要求102所述的方法,其中所述聚合物-脂质体缀合物具有抗炎活性。
122.根据权利要求102所述的方法,其中所述聚合物-脂质体缀合物会增加所述脂质体的稳定性。
123.根据权利要求102所述的方法,其中所述聚合物-脂质体缀合物会增加所述脂质体的半衰期。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109833297A (zh) * | 2017-11-27 | 2019-06-04 | 张正风 | 一种微脂体组合物 |
CN110214005A (zh) * | 2016-11-11 | 2019-09-06 | DNALite治疗学公司 | 用于基因治疗的结构和方法 |
Families Citing this family (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3578205A1 (en) | 2010-08-06 | 2019-12-11 | ModernaTX, Inc. | A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof |
CA3162352A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-04-05 | Modernatx, Inc. | Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof |
DE12722942T1 (de) | 2011-03-31 | 2021-09-30 | Modernatx, Inc. | Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren |
US10179106B2 (en) * | 2011-05-12 | 2019-01-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Liposomes comprising polymer-conjugated lipids and related uses |
US9464124B2 (en) | 2011-09-12 | 2016-10-11 | Moderna Therapeutics, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
PT3682905T (pt) | 2011-10-03 | 2022-04-07 | Modernatx Inc | Nucleósidos, nucleótidos e ácidos nucleicos modificados e respetivas utilizações |
LT2791160T (lt) | 2011-12-16 | 2022-06-10 | Modernatx, Inc. | Modifikuotos mrnr sudėtys |
US9303079B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-04-05 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins |
CA2868996A1 (en) | 2012-04-02 | 2013-10-10 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of proteins |
US9572897B2 (en) | 2012-04-02 | 2017-02-21 | Modernatx, Inc. | Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins |
US9283287B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins |
PL2922554T3 (pl) | 2012-11-26 | 2022-06-20 | Modernatx, Inc. | Na zmodyfikowany na końcach |
US8980864B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-03-17 | Moderna Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of altering cholesterol levels |
ITMI20130576A1 (it) * | 2013-04-11 | 2014-10-12 | Labomar S R L | Composizione comprendente un poliamminoglicoside |
EP3052106A4 (en) | 2013-09-30 | 2017-07-19 | ModernaTX, Inc. | Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides |
JP2016538829A (ja) | 2013-10-03 | 2016-12-15 | モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドModerna Therapeutics,Inc. | 低密度リポタンパク質受容体をコードするポリヌクレオチド |
WO2015068155A1 (en) * | 2013-11-06 | 2015-05-14 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd | Lipid-polysaccharide conjugates, their preparation and uses thereof |
CN106456546A (zh) * | 2014-03-12 | 2017-02-22 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于黏膜递送的脂质体组合物 |
RU2642786C2 (ru) * | 2015-01-30 | 2018-01-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Стабилизатор липосомальных суспензий |
US10307491B2 (en) | 2015-01-30 | 2019-06-04 | The Regents Of The University Of Michigan | Liposomal particles comprising biological molecules and uses thereof |
CA2979712C (en) | 2015-03-25 | 2024-01-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoparticle compositions for delivery of biomacromolecules |
AU2016324310B2 (en) | 2015-09-17 | 2021-04-08 | Modernatx, Inc. | Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents |
DK3386484T3 (da) | 2015-12-10 | 2022-07-04 | Modernatx Inc | Sammensætninger og fremgangsmåder til afgivelse af terapeutiske midler |
DK3394030T3 (da) | 2015-12-22 | 2022-03-28 | Modernatx Inc | Forbindelser og sammensætninger til intracellulær afgivelse af midler |
WO2018089540A1 (en) | 2016-11-08 | 2018-05-17 | Modernatx, Inc. | Stabilized formulations of lipid nanoparticles |
JP7220154B2 (ja) | 2017-03-15 | 2023-02-09 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | アミノ脂質の結晶形態 |
HUE060693T2 (hu) | 2017-03-15 | 2023-04-28 | Modernatx Inc | Vegyület és készítmények terápiás szerek intracelluláris bejuttatására |
WO2018232357A1 (en) | 2017-06-15 | 2018-12-20 | Modernatx, Inc. | Rna formulations |
JP7275111B2 (ja) | 2017-08-31 | 2023-05-17 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | 脂質ナノ粒子の生成方法 |
CN112351976B (zh) * | 2018-06-20 | 2024-04-19 | 圣多利康制药责任有限公司 | 紫杉烷-脂类-多聚糖双型偶联体、其制备方法及用途 |
US11273124B2 (en) * | 2019-05-23 | 2022-03-15 | Brown University | Antifungal nanoparticles for targeted treatment of fungal infections |
CA3154618A1 (en) | 2019-09-19 | 2021-03-25 | Modernatx, Inc. | Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents |
US11524023B2 (en) | 2021-02-19 | 2022-12-13 | Modernatx, Inc. | Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same |
IT202100022253A1 (it) * | 2021-08-24 | 2023-02-24 | Univ Degli Studi Di Torino | Liposomi, composizioni che li comprendono, relativi usi |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040241885A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-12-02 | Jorn Maeritz | Method, device, computer-readable storage medium and computer program element for the monitoring of a manufacturing process of a plurality of physical objects |
CN101282733A (zh) * | 2005-08-03 | 2008-10-08 | 莫里亚生物制药公司 | 脂质结合物在囊性纤维化病中的用途及其应用 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
US5688488A (en) | 1989-04-03 | 1997-11-18 | Purdue Research Foundation | Composition and method for tumor imaging |
ES2084335T3 (es) * | 1991-02-14 | 1996-05-01 | Baxter Int | Union de sustancias de reconocimiento a liposomas. |
US5603872A (en) * | 1991-02-14 | 1997-02-18 | Baxter International Inc. | Method of binding recognizing substances to liposomes |
US5395619A (en) * | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
US5785975A (en) * | 1995-06-26 | 1998-07-28 | Research Triangle Pharmaceuticals | Adjuvant compositions and vaccine formulations comprising same |
TW520297B (en) * | 1996-10-11 | 2003-02-11 | Sequus Pharm Inc | Fusogenic liposome composition and method |
US6071532A (en) * | 1996-10-15 | 2000-06-06 | Emory University | Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof |
US7311924B2 (en) * | 1999-04-01 | 2007-12-25 | Hana Biosciences, Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
US6852334B1 (en) * | 1999-04-20 | 2005-02-08 | The University Of British Columbia | Cationic peg-lipids and methods of use |
US7141552B2 (en) | 2000-01-10 | 2006-11-28 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases |
US7034006B2 (en) | 2000-01-10 | 2006-04-25 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of disease |
WO2002039121A2 (en) | 2000-11-03 | 2002-05-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for detecting the efficacy of anticancer treatments |
US8883761B2 (en) | 2001-01-10 | 2014-11-11 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Use of lipid conjugates in the treatment of diseases associated with vasculature |
EA200601761A1 (ru) * | 2004-03-24 | 2007-06-29 | Телос Фармасьютикалз, Инк. | Композиции в качестве адъювантов для усиления иммунных ответов на вакцины и способы их применения |
MX2008001639A (es) * | 2005-08-03 | 2008-11-06 | Morria Biopharmaceuticals | Uso de conjugados de lipido en fibrosis cistica y sus aplicaciones. |
JPWO2009020094A1 (ja) * | 2007-08-09 | 2010-11-04 | 第一三共株式会社 | 疎水性分子で修飾した抗体 |
CN102458420A (zh) | 2009-05-11 | 2012-05-16 | 以色列耶路撒冷希伯来大学伊索研究发展公司 | 脂质-聚合物共轭物及其制备和用途 |
US20120237589A1 (en) * | 2009-07-09 | 2012-09-20 | Marina Biotech, Inc. | Amphoteric liposomes comprising imino lipids |
US9937128B2 (en) * | 2009-08-03 | 2018-04-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Liposomes comprising a calcium phosphate-containing precipitate |
JP5337722B2 (ja) | 2010-01-07 | 2013-11-06 | ヤマハ発動機株式会社 | 船舶用推進制御装置および船舶 |
US10179106B2 (en) * | 2011-05-12 | 2019-01-15 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Liposomes comprising polymer-conjugated lipids and related uses |
-
2012
- 2012-05-10 US US14/115,869 patent/US10179106B2/en active Active
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-
2019
- 2019-01-14 US US16/246,920 patent/US10624851B2/en active Active
-
2020
- 2020-04-20 US US16/853,635 patent/US20200246265A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-07-15 US US17/377,134 patent/US11911507B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040241885A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-12-02 | Jorn Maeritz | Method, device, computer-readable storage medium and computer program element for the monitoring of a manufacturing process of a plurality of physical objects |
CN101282733A (zh) * | 2005-08-03 | 2008-10-08 | 莫里亚生物制药公司 | 脂质结合物在囊性纤维化病中的用途及其应用 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110214005A (zh) * | 2016-11-11 | 2019-09-06 | DNALite治疗学公司 | 用于基因治疗的结构和方法 |
CN109833297A (zh) * | 2017-11-27 | 2019-06-04 | 张正风 | 一种微脂体组合物 |
CN109833297B (zh) * | 2017-11-27 | 2021-10-29 | 张正风 | 一种微脂体组合物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10179106B2 (en) | 2019-01-15 |
US11911507B2 (en) | 2024-02-27 |
EP2706988A4 (en) | 2015-06-17 |
ES2762224T3 (es) | 2020-05-22 |
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AU2012254842A1 (en) | 2013-05-02 |
DK2706988T3 (da) | 2020-01-20 |
JP2014519493A (ja) | 2014-08-14 |
WO2012153338A3 (en) | 2014-06-12 |
US10624851B2 (en) | 2020-04-21 |
US20210338582A1 (en) | 2021-11-04 |
WO2012153338A2 (en) | 2012-11-15 |
US20200246265A1 (en) | 2020-08-06 |
US20190142751A1 (en) | 2019-05-16 |
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