CN101932608A - 抗原结合构建体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗原结合构建体、制备所述构建体的方法及所述构建体的用途，所述抗原结合构建体包含连接一个或多个表位结合结构域的蛋白质骨架，其中所述抗原结合构建体具有至少两个抗原结合位点，其中至少一个来自表位结合结构域，其中至少一个来自配对的VH/VL结构域。

Description

抗原结合构建体
背景
抗体在治疗应用方面的用途众所周知。
抗体为包含至少两条重链和两条轻链的异多聚体糖蛋白。除IgM外，完整抗体通常是大约150Kda的异四聚体糖蛋白，其由两条同样的轻(L)链和两条同样的重链(H)链组成。通常每一条轻链由一个共价二硫键与重链连接，同时不同免疫球蛋白同种型重链之间的二硫键的数目不同。每一条重链和轻链也具有链间二硫键桥。每一重链在一端有可变结构域(VH)，接着是多个恒定区。每一轻链有可变结构域(VL)并在其另一端有恒定区；轻链恒定区与重链第一恒定区并排，轻链可变结构域与重链可变结构域并排。基于恒定区氨基酸序列，将来自大部分脊椎动物物种的抗体轻链指定为称为κ和λ的两类中的一种。根据其重链恒定区的氨基酸序列，可将人抗体指定为5种不同类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。可将IgG和IgA进一步再分为亚类：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；和IgA1和IgA2。在小鼠和大鼠中具有至少IgG2a、IgG2b的物种间变体。抗体可变结构域因抗体含有显示特定变化性的称为互补决定区(CDR)的某些区域而提供结合特异性。可变区更保守的部分被称为构架区(FR)。完整重链和轻链可变结构域各自包含由三个CDR连接的四个FR。各链中的CDR通过FR区紧密接近保持在一起，并与来自其它链的CDR促成抗体的抗原结合位点的形成。恒定区不直接参与抗体抗原间结合，但呈现各种效应器功能，例如参与以下功能：抗体依赖性细胞介导细胞毒性(ADCC)、经由结合Fcγ受体的吞噬作用、经由新生Fc受体(FcRn)的半衰期/清除率和经由补体级联的C1q组分的补体依赖性细胞毒性。
IgG抗体结构的特性是有两个抗原结合位点，其中两个都特异性针对同一表位。因此，它们为单特异性。
双特异性抗体是对至少两种不同的表位有结合特异性的抗体。制备所述抗体的方法为本领域所知。传统上，双特异性抗体的重组制备是基于两个免疫球蛋白H链-L链配对的共表达，其中两个H链具有不同的结合特异性，参见：Millstein等，Nature 305 537-539(1983)；WO93/08829；和Traunecker等EMBO，10，1991，3655-3659。因为H链和L链随机分配，产生了十种不同的抗体结构的潜在混合物，其中仅一种具有所需的结合特异性。备选方法涉及让具有所需结合性特异的可变结构域与重链恒定区融合，所述重链恒定区包含至少部分铰链区、CH2和CH3区。优选使含轻链结合所需位点的CH1区存在于融合体中的至少之一中。将编码这些融合体以及需要时的L链的DNA插入到单独的表达载体中，然后共转染到合适的宿主生物体。然而可将两条或所有三条链的编码序列插入到一个表达载体。在一种方法中，双特异性抗体由在一条臂上具有第一结合特异性的H链和在另一条臂上提供第二结合特异性的H-L链对组成，参见WO94/04690。也参见Suresh等Methods in Enzymology 121，210，1986。其它方法包括包含单结构域结合位点的抗体分子，其由WO2007/095338提出。
发明概述
本发明涉及抗原结合构建体，所述构建体包含连接一个或多个表位结合结构域的蛋白质骨架，其中所述抗原结合构建体具有至少两个抗原结合位点，其中至少之一来自表位结合结构域，并且其中至少之一来自配对的VH/VL结构域。
本发明进一步涉及抗原结合构建体，所述构建体包含至少一个包含两个或多个式I结构的同型二聚体：
Figure BPA00001189593300031
其中
X代表包含重链恒定结构域2和重链恒定结构域3的抗体恒定区；
R1、R4、R7和R8代表独立选自表位结合结构域的结构域；
R2代表选自重链恒定结构域1和表位结合结构域的结构域；
R3代表选自配对的VH和表位结合结构域的结构域；
R5代表选自轻链恒定结构域和表位结合结构域的结构域；
R6代表选自配对的VL和表位结合结构域的结构域；
n代表独立选自以下的整数：0、1、2、3和4；
m代表独立选自以下的整数：0和1；
其中重链恒定结构域1和轻链恒定结构域相连接(associate)；
其中存在至少一个表位结合结构域；
并且当R3代表配对的VH结构域时，R6代表配对的VL结构域，由此两个结构域一起能够结合抗原。
本发明涉及基于IgG的结构和制备所述构建体的方法及其用途，尤其是在治疗中的用途，所述基于IgG的结构包括单克隆抗体或连接一个或多个结构域抗体的片段。
本发明还提供编码本文所述任一种抗原结合构建体的重链的多核苷酸序列和编码本文所述任一种抗原结合构建体轻链的多核苷酸。所述多核苷酸表示对应于等同多肽序列的编码序列，然而，应该理解，可将所述多核苷酸序列连同起始密码子、合适的信号序列和终止密码子一起克隆到表达载体中。
本发明还提供重组转化的或转染的宿主细胞，所述宿主细胞包含一种或多种编码任一种本文所述抗原结合构建体的重链和轻链的多核苷酸。
本发明进一步提供用于制备任一种本文所述抗原结合构建体的方法，所述方法包括在无血清培养基中培养包含第一和第二载体的宿主细胞的步骤，所述第一载体包含编码任一种本文所述抗原结合构建体的重链的多核苷酸，所述第二载体包含编码任一种本文所述抗原结合构建体的轻链的多核苷酸。
本发明进一步提供药用组合物，所述药用组合物包含本文所述抗原结合构建体及可药用载体。
本发明还提供包含SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示多肽序列的结构域抗体或由其组成的结构域抗体。本发明一个方面提供从SEQID NO：60或SEQ ID NO：61所示的多核苷酸序列表达的蛋白质。
定义
本文所用术语“蛋白质骨架”包括但不限于免疫球蛋白(Ig)骨架(例如IgG骨架)，其可为四链抗体或两链抗体，或其可仅包含抗体的Fc区，或其可包含来自抗体的一个或多个恒定区，所述恒定区可为人源或灵长类源，或其可为人和灵长类恒定区的人造嵌合体。所述蛋白质骨架除一个或多个恒定区外还可包含抗原结合位点，例如所述蛋白质骨架包含全IgG。所述蛋白质骨架能够连接其它蛋白质结构域，例如具有抗原结合位点的蛋白质结构域，例如表位结合结构域或ScFv结构域。
“结构域”是折叠的蛋白质结构，其具有不依赖蛋白质其余部分的三级结构。结构域通常负责蛋白质不相关联的功能特性，在很多情况下可将其添加、除掉或转移到其它蛋白质而不丢失所述蛋白质其余部分和/或结构域的功能。“单一抗体可变结构域”是折叠的多肽结构域，其包含抗体可变结构域的序列特点。因此，其包括完整的抗体可变结构域和经修饰的可变结构域，例如，其中一个或多个环已被不具有抗体可变结构域特性的序列取代的可变结构域，或已被截短的或包含N-或C-末端突出端的抗体可变结构域，以及保留至少全长结构域的结合活性和特异性的可变结构域的折叠片段。
短语“免疫球蛋白单一可变结构域”指抗体可变结构域(VH、VHH、VL)，所述抗体可变结构域独立于不同V区或结构域地特异性结合抗原或表位。免疫球蛋白单一可变结构域可以以某种形式(例如同多聚体或异多聚体)与其它不同可变区或可变结构域存在，其中所述其它区或结构域对于通过单一免疫球蛋白可变结构域结合抗原不是必需的(即其中免疫球蛋白单一可变结构域不依赖另外的可变结构域结合抗原)。“结构域抗体”或“dAb”与如本文所用术语“免疫球蛋白单一可变结构域”一样，能够结合抗原。免疫球蛋白单一可变结构域可为人抗体可变结构域，但也包括来自以下其它物种的单一抗体可变结构域：例如啮齿动物(例如如WO 00/29004所公开)、铰口鲨和骆驼(Camelid)VHHdAb。骆驼VHH为源自以下物种的免疫球蛋白单一可变结构域多肽：包括骆驼、美洲驼、羊驼、单峰骆驼和骆马，它们都产生天然缺乏轻链的重链抗体。所述VHH结构域可根据本领域能获得的标准技术人源化，认为所述结构域仍为本发明“结构域抗体”。本文所用VH包括骆驼VHH结构域。NARV是在软骨鱼(包括铰口鲨)中鉴定的另一类免疫球蛋白单一可变结构域。这些结构域也被称为新型抗原受体可变结构域(Novel Antigen Receptor variable region通常缩写为V(NAR)或NARV)。进一步的详细资料参见Mol.Immunol.44，656-665(2006)和US20050043519A。
术语“表位结合结构域”指特异性结合独立于不同的V区或结构域地特异性结合抗原或表位的结构域，所述表位结合结构域可为结构域抗体(dAb)，例如人、骆驼或鲨鱼免疫球蛋白单一可变结构域，或其可为选自以下的骨架衍生物结构域：CTLA-4(Evibody)；脂质运载蛋白；来源于蛋白A的分子，例如蛋白A的Z-结构域(Affibody，SpA)、A-结构域(Avimer/Maxibody)；热休克蛋白，例如GroE1和GroES；转铁蛋白(trans-body)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域(四连凝集素(Tetranectin))；人γ-晶体蛋白和人泛素(affilin)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；对它们进行过蛋白质工程改造，以便获得结合不同于天然配体的配体。
CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)是在主要CD4+T-细胞上表达的CD28-家族受体。其胞外结构域具有可变结构域样Ig折叠。对应于抗体CDR的环可被异源序列取代，以提供不同的结合性质。经过工程改造具有不同结合特异性的CTLA-4分子也被称为Evibody。进一步的详细资料参见Journal of Immunological Methods 248(1-2)，31-45(2001)。
脂质运载蛋白是胞外蛋白质家族，其转运小疏水分子如类固醇、胆汁三烯、类视黄醇和脂质。它们具有在锥形结构开放末端处具有多个环的刚性β-折叠二级结构，可以经过工程改造以结合不同靶抗原。Anticalin大小为160-180个氨基酸，源自脂质运载蛋白。进一步的详细资料参见Biochim Biophys Acta 1482：337-350(2000)，US7250297B1和US20070224633。
Affibody为源自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)蛋白A的骨架，可将其工程改造以结合抗原。所述结构域由大约58个氨基酸的三螺旋束组成。通过表面残基的随机化产生文库。进一步的详细资料参见Protein Eng.Des.Sel.17，455-462(2004)和EP1641818A1。
Avimer为源自A-结构域骨架家族的多结构域蛋白质。大约35个氨基酸的天然结构域采用明确的二硫键合结构。通过对由A-结构域家族表现的天然变异进行改组来产生多样性。进一步的详细资料参见Nature Biotechnology 23(12)，1556-1561(2005)和Expert Opinion onInvestigational Drugs 16(6)，909-917(2007年六月)。
转铁蛋白为单体血清转运糖蛋白。可通过在允许的表面环中插入肽序列对转铁蛋白进行工程改造以结合不同的靶抗原。工程改造的转铁蛋白骨架的实例包括Trans-body。进一步的详细资料参见J.Biol.Chem 274，24066-24073(1999)。
设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)源自锚蛋白(Ankyrin)，所述锚蛋白为介导内膜蛋白与细胞骨架连接的蛋白质家族。单一锚蛋白重复序列为由两个α-螺旋和β-转角组成的33个残基的基序。可通过使每一重复序列的第一个α-螺旋和β-转角中的残基随机化对其进行工程改造以结合不同靶抗原。可通过增加功能模件(module)的数量来增大其结合界面(亲和力成熟方法)。进一步的详细资料参见J.Mol.Biol.332，489-503(2003)、PNAS 100(4)，1700-1705(2003)和J.Mol.Biol.369，1015-1028(2007)和US20040132028A1。
纤连蛋白是可对其进行工程改造以结合抗原的骨架。Adnectin由人纤连蛋白III型(FN3)的15个重复单位的第10个结构域的天然氨基酸序列骨架组成。可对β-夹层的一端的三个环进行工程改造以使Adnectin能特异性识别目的治疗靶标。进一步的详细资料参见ProteinEng.Des.Sel.18，435-444(2005)、US20080139791、WO2005056764和US6818418B1。
肽适体为由固定骨架蛋白组成的组合识别分子，其通常是含有插入到活性位点的限制性可变肽环的硫氧还蛋白(TrxA)。进一步的详细资料参见Expert Opin.Biol.Ther.5，783-797(2005)。
微体源自天然存在的长为25-50个氨基酸的含有3-4个半胱氨酸桥的微蛋白质，微蛋白实例包括KalataB1和食鱼螺毒素和打结素(knottin)。微蛋白具有可工程改造以包括至多25个氨基酸而不影响微蛋白的整体折叠的环。工程改造的打结素结构域的进一步的详细资料参见WO2008098796。
其它表位结合结构域包括用作骨架以工程改造不同靶抗原结合特性的蛋白质，包括在Handbook of Therapeutic Antibodies(2007，由Stefan Dubel主编)第7章-非抗体骨架和Protein Science 15：14-27(2006)中综述的人γ-晶体蛋白和人泛素(affilin)、人蛋白酶抑制剂kunitz型结构域、Ras-结合蛋白AF-6的PDZ-结构域、蝎毒素(卡律布德蝎毒素(charybdotoxin))、C-型凝集素结构域(四连凝集素)。本发明表位结合结构域可源自这些备选蛋白质结构域中的任一种。
本文所用术语“配对的VH结构域”、“配对的VL结构域”和“配对的VH/VL结构域”指仅当与其配偶体(partner)可变结构域配对时特异性结合抗原的抗体可变结构域。在任何配对中总是有一个VH和一个VL，术语“配对的VH结构域”指VH配偶体，术语“配对的VL结构域”指VL配偶体，术语“配对的VH/VL结构域”指两个结构域一起。
在本发明一个实施方案中，抗原结合位点以以下Kd结合抗原：至少1mM的Kd，例如10nM、1nM、500pM、200pM、100pM的Kd，对每一抗原如BiacoreTM所测量，例如在方法4或5中所述的BiacoreTM方法。
本文所用术语“抗原结合位点”指构建体上能够特异性结合抗原的位点，其可为单一结构域，例如表位结合结构域，或其可为如能在标准抗体上发现的配对的VH/VL结构域。在本发明某些方面，单链Fv(ScFv)结构域可提供抗原结合位点。
本文所用术语“mAb/dAb”和“dAb/mAb”指本发明抗原结合构建体。这两个术语可互换使用，意欲具有如本文所用相同的意义。
本文所用术语“重链恒定结构域1”指免疫球蛋白重链的CH1结构域。
本文所用术语“轻链恒定结构域”指免疫球蛋白轻链的恒定结构域。
发明详述
本发明涉及包含蛋白质骨架的抗原结合构建体，所述骨架连接一个或多个表位结合结构域，其中所述抗原结合构建体具有至少两个抗原结合位点，其中至少一个来自表位结合结构域，其中至少一个来自配对的VH/VL结构域。
所述抗原结合构建体包含蛋白质骨架，例如Ig骨架(例如IgG)，例如单克隆抗体，所述骨架连接一个或多个表位结合结构域，例如结构域抗体，其中所述结合构建体具有至少两个抗原结合位点，其中至少一个来自表位结合结构域。本发明涉及制备所述抗原结合构建体的方法及其用途，尤其是在治疗中的用途。
本发明抗原结合构建体的某些实例在图1中阐述。
本发明抗原结合构建体也被称为mAbdAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体的蛋白质骨架为Ig骨架，例如IgG骨架或IgA骨架。IgG骨架可包含抗体的所有结构域(即CH1、CH2、CH3、VH、VL)。本发明抗原结合构建体可包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgG4PE的IgG骨架。
本发明抗原结合构建体具有至少两个抗原结合位点，例如其具有两个结合位点，例如其中第一个结合位点对抗原第一表位具有特异性，第二结合位点对同一抗原的第二表位具有特异性。在另一实施方案中，有4个抗原结合位点，或6个抗原结合位点，或8个抗原结合位点，或10个或更多个抗原结合位点。在一个实施方案中，所述抗原结合构建体对不止一个抗原具有特异性，例如对两个抗原，或对三个抗原，或对四个抗原具有特异性。
在另一方面，本发明涉及包含至少一个包含两个或更多个式I结构的同型二聚体的抗原结合构建体：
Figure BPA00001189593300101
其中
X代表包含重链恒定结构域2和重链恒定结构域3的抗体恒定区；
R1、R4、R7和R8代表独立选自表位结合结构域的结构域；
R2代表选自重链恒定结构域1和表位结合结构域的结构域；
R3代表选自配对的VH和表位结合结构域的结构域；
R5代表选自轻链恒定结构域和表位结合结构域的结构域；
R6代表选自配对的VL和表位结合结构域的结构域；
n代表独立选自以下的整数：0、1、2、3和4；
m代表独立选自以下的整数：0和1；
其中重链恒定结构域1和轻链恒定结构域相连接；
其中存在至少一个表位结合结构域；
当R3代表配对的VH结构域时，R6代表配对的VL结构域，由此两个结构域一起能够结合抗原。
在一个实施方案中，R6代表配对的VL，R3代表配对的VH。
在另一实施方案中，R7和R8任一个或两个都代表表位结合结构域。
在又一实施方案中，R1和R4任一个或两个都代表表位结合结构域。
在一个实施方案中，R4存在。
在一个实施方案中，R1R7和R8代表表位结合结构域。
在一个实施方案中，R1R7和R8及R4代表表位结合结构域。
在一个实施方案中，(R1)n、(R2)m、(R4)m和(R5)m＝0，即不存在，R3为配对的VH结构域，R6为配对的VL结构域，R8为VH dAb，而R7为VL dAb。
在另一实施方案中，(R1)n、(R2)m、(R4)m和(R5)m为0，即不存在，R3为配对的VH结构域，R6为配对的VL结构域，R8为VH dAb，而(R7)m＝0，即不存在。
在另一实施方案中，(R2)m和(R5)m为0，即不存在，R1为dAb，R4为dAb，R3为配对的VH结构域，R6为配对的VL结构域，(R8)m和(R7)m＝0，即不存在。
在本发明一个实施方案中，所述表位结合结构域为dAb。
应该理解，本文所述任一种抗原结合构建体能够中和一种或多种抗原。
本说明书中各处使用的关于本发明抗原结合构建体的术语“中和”及其语法变体，意指在本发明抗原结合构建体存在下靶标的生物活性与在缺乏所述抗原结合构建体时的靶标的活性相比，总体或部分降低了。可由于(但不限于)以下一种或多种原因发生中和：封阻配体结合，妨碍配体激活受体，下调受体或影响效应器功能。
可以若干方法测量中和水平，例如通过使用由下文实施例及方法提出的测定中的任何一种，例如测量配体受体结合抑制的测定，其可如例如方法12、19或21或实施例32中任一个所述进行。通过评估在中和性抗原结合构建体存在下配体与其受体之间结合的降低情况来测量这些测定中VEGF、IL-4、IL-13或HGF的中和。
还可例如在TF1测定中测量中和水平，该测定可例如如方法8、9、10、20或21中所述来实施。在该测定中IL-13、IL-4或这两种细胞因子的中和都可通过评估在中和性抗原结合构建体存在下抑制TF1细胞增殖来测量。或者，可在EGFR磷酸化测定中测量中和，该测定可例如如方法13所述实施。可通过评估在中和性抗原结合构建体存在下受体的酪氨酸激酶磷酸化的抑制来测量该测定中的EGFR中和。或者，可用MRC-5细胞中的IL-8分泌测定来测量中和，该测定可例如如方法14或15中所述来实施。在该测定中可通过评估在中和性抗原结合构建体存在下IL-8分泌的抑制来测量NFα或IL-1R1的中和。
例如，通过评估在中和性抗原结合构建体存在下配体与其受体之间的结合降低情况来评估中和的其它方法在本领域已知，包括例如BiacoreTM测定。
本发明备选方面提供抗原结合构建体，所述抗原结合构建体具有与本文所举例的抗体至少基本上等同的中和活性，例如，分别在实施例4和20中提出的TF1细胞增殖测定或pSTAT6信号转导抑制测定中保留586H-TVAAPS-210或PascoH-G4S-474或PascoH-474、除去GS的PascoH-474、PascoL-G4S-474或PascoHL-G4S-474的中和活性的抗原结合构建体；或例如在实施例14.6和14.7提出的VEGFR结合测定或IGF-1R受体磷酸化的抑制中保留BPC1603、BPC1604、BPC1605、BPC1606的中和活性的抗原结合构建体。
本发明抗原结合构建体包括对IL-13具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合IL-13的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合IL-13的配对的VH/VL的抗原结合构建体。抗原结合构建体可包含能够结合IL-13的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合IL-13的dAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自IL-13、IL-5和IL-4的两种或更多种抗原，例如其中能够结合IL-13和IL-4，或其中能够结合IL-13和IL-5，或其中能够结合IL-5和IL-4。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自IL-13、IL-5和IL-4的两种或更多种抗原，例如其中能够同时结合IL-13和IL-4，或其中能够同时结合IL-13和IL-5，或其中能够同时结合IL-5和IL-4。
应该理解，本文所述任何抗原结合构建体可以能够同时结合两种或更多种抗原，例如其如通过用合适测定的化学计量学分析所测定，所述合适的测定例如实施例部分方法7中所述测定。
本发明抗原结合构建体实例包括具有对IL-4有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-4dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-13抗体，例如具有SEQ ID NO：16-39、SEQ IDNO：41-43、SEQ ID NO：87-90、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：152或SEQID NO：155所述的重链序列的mAbdAb。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域的IL-13抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
这样的抗原结合构建体的实例包括具有对IL-13有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-13dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-4抗体，例如具有SEQ ID NO：48-53、SEQID NO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：150或SEQ IDNO：157-160中所述的重链序列和/或SEQ ID NO：54-59中所述的轻链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-4抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
所述抗原结合构建体的实例包括具有对IL-5有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-5dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-5表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-5表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-5表位结合结构域的IL-13抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-5表位结合结构域的IL-13抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
所述抗原结合构建体实例包括具有对IL-13有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-13dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-5抗体，例如具有SEQ ID NO：72中所述的轻链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
所述抗原结合构建体实例包括具有对IL-5有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-5dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-5表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-5表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-5表位结合结构域的IL-4抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-5表位结合结构域的IL-4抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
所述抗原结合构建体实例包括具有对IL-4有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-4dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-5抗体，例如具有SEQ ID NO：71中所述的重链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域的IL-5抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域的IL-5抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明还提供三特异性结合构建体，其能够结合IL-4、IL-13和IL-5。
所述抗原结合构建体的实例包括具有对IL-4有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-4dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)和对IL-13有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-13dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-5抗体。
所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对IL-18具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合IL-18的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合IL-18的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合IL-18的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合IL-18的dAb。
本发明还提供能够结合IL-4、IL-13和IL-18的三特异性结合构建体。
所述抗原结合构建体实例包括具有对IL-4具有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-4dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)和对IL-13具有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-13dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的c-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到重链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL-4表位结合结构域和连接到轻链的n-末端的IL-13表位结合结构域的IL-18抗体。
所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对TNFα具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合TNFα的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合TNFα的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合TNFα的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合TNFα的dAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自TNFα、EGFR和VEGF的两种或更多种抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和VEGF。所述抗原结合构建体实例包括具有对EGFR具有特异性的表位结合结构域(例如抗-EGFR dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的TNFα抗体，例如具有SEQ ID NO：74中所述的重链序列和/或SEQ ID NO：79中所述的轻链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的EGFR表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的EGFR表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的EGFR表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的EGFR表位结合结构域的TNFα抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的TNFα表位结合结构域的EGFR抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的TNFα表位结合结构域的EGFR抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的TNFα表位结合结构域的EGFR抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的TNFα表位结合结构域的EGFR抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGF具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGF dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的TNFα抗体，例如具有SEQ ID NO：75、78或185中所述的重链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体可对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα及选自IL-4和IL-13的一种或两种抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα和IL-4，或其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα和IL-13，或其中所述抗原结合构建体能够结合TNFα和IL-13和IL-4。所述抗原结合构建体实例包括具有对TNFα具有特异性的表位结合结构域(例如抗-TNFαadnectin，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-13抗体，例如具有SEQ ID NO：134或135中所述的重链序列的mAbdAb。所述抗原结合构建体其它实例包括具有对TNFα具有特异性的表位结合结构域(例如抗-TNFαadnectin，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-4抗体，例如具有SEQ ID NO：146或147中所述的重链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的VEGF表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的VEGF表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的VEGF表位结合结构域的TNFα抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的VEGF表位结合结构域的TNFα抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的TNFα表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的TNFα表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的TNFα表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的TNFα表位结合结构域的VEGF抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对CD-20具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合CD-20的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合CD-20的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合CD-20的抗体，例如，其可包含具有SEQ ID NO：120和117的重链和轻链序列的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合CD-20的dAb。对CD-20具有特异性的mAbdAb的实例为具有SEQ ID NO：116，118中所述的重链序列的mAbdAb，或具有SEQ ID NO：119或121中所述的轻链序列的mAbdAb。
所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对IL1R1具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合IL1R1的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合IL1R1的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合IL1R1的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合IL1R1的dAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合IL1R1和第二种抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合IL1R1和VEGF。所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGF具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGF dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL1R1抗体，例如具有SEQ ID NO：77中所述的轻链序列的mAbdAb。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的VEGF表位结合结构域的IL1R1抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的VEGF表位结合结构域的IL1R1抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的VEGF表位结合结构域的IL1R1抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的VEGF表位结合结构域的IL1R1抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的n-末端的IL1R1表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的n-末端的IL1R1表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到重链的c-末端的IL1R1表位结合结构域的VEGF抗体。本发明抗原结合构建体包括具有连接到轻链的c-末端的IL1R1表位结合结构域的VEGF抗体。所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对EGFR具有特异性的抗原结合构建体，例如所述抗原结合构建体包含能够结合EGFR的表位结合结构域，或包含结合EGFR的配对的VH/VL。
抗原结合构建体可包含能够结合EGFR的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合EGFR的dAb。所述抗原结合构建体某些实例将能够结合包含SEQ ID NO：103的EGFR上的表位，例如，包含SEQ ID NO：97-SEQ ID NO：102和SEQ ID NO：104-SEQ ID NO：107中所述的CDR中的一个或多个的抗原结合构建体。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自EGFR、IGF-1R、VEGFR2和VEGF的两个或多个抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和IGF-1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和IGF-1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF-1R和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR、IGF-1R和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF、IGF-1R和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR、VEGF和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR、VEGF和IGF1R。所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGFR2具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGFR2 adnectin，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的EGFR抗体，例如具有SEQ ID NO：136、140或144中所述的重链序列和/或SEQ ID NO：138、142或145中所述的轻链序列的mAbdAb。
所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGF具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGF dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的EGFR抗体，例如具有SEQ ID NO：165、174、176、178、184或186中所述的重链序列和/或SEQ ID NO：188或190中所述的轻链序列的mAbdAb。
所述抗原结合构建体实例包括具有对EGFR具有特异性的表位结合结构域(例如抗-EGFR dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的VEGF抗体，例如具有SEQ ID NO：180中所述的重链序列的mAbdAb。所述mAbdAb还可包含SEQ ID NO：182中所述的轻链序列。
所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGF具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGF脂质运载蛋白，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IGF-1R抗体，例如具有SEQ ID NO：123或125中所述的重链序列的mAbdAb。所述mAbdAb还可包含SEQID NO：113中所述的轻链序列。
所述抗原结合构建体实例包括具有对VEGFR2具有特异性的表位结合结构域(例如抗-VEGFR2 adnectin，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IGF-1R抗体，例如具有SEQ ID NO：124或133中所述的重链序列的mAbdAb。所述mAbdAb还可包含SEQID NO：113中所述的轻链序列。
本发明抗原结合构建体包括对IL-23具有特异性的抗原结合构建体，例如包含能够结合IL-23的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合IL-23的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合IL-23的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合IL-23的dAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自TH17型细胞因子(例如IL-17、IL-22或IL-21)的两种或更多种抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合IL-23和IL-17，或其中所述抗原结合构建体能够结合IL-23和IL-21，或其中所述抗原结合构建体能够结合IL-23和IL-22。所述抗原结合构建体实例包括具有对IL-17具有特异性的表位结合结构域(例如抗-IL-17dAb，其连接到重链的c-末端或n-末端或轻链的c-末端或n-末端)的IL-23抗体。
本发明抗原结合构建体包括对PDGFRα具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合PDGFRα的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合PDGFRα的配对的VH/VL的抗原结合构建体。抗原结合构建体可包含能够结合PDGFRα的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合PDGFRα的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对FGFR1具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合FGFR1的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合FGFR1的配对的VH/VL的抗原结合构建体。抗原结合构建体可包含能够结合FGFR1的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合FGFR1的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对FGFR3具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合FGFR3的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合FGFR3的配对的VH/VL的抗原结合构建体。抗原结合构建体可包含能够结合FGFR3的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合FGFR3的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对VEGFR2具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合VEGFR2的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合VEGFR2的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合VEGFR2的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合VEGFR2的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对VEGFR3具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合VEGFR3的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合VEGFR3的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合VEGFR3的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合VEGFR3的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对VE钙黏着蛋白(cadherin)具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合VE钙黏着蛋白的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合VE钙黏着蛋白的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合VE钙黏着蛋白的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合VE钙黏着蛋白的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对神经毡蛋白(neuropilin)具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合神经毡蛋白的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合神经毡蛋白的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合神经毡蛋白的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合神经毡蛋白的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对Flt-3具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合Flt-3的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合Flt-3的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合Flt-3的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合Flt-3的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对ron具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合ron的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合ron的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合ron的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合ron的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对Trp-1具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合Trp-1的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合Trp-1的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合Trp-1的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合Trp-1的dAb。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体对不止一种抗原具有特异性，例如其中所述抗原结合构建体能够结合牵涉癌症的两种或更多种抗原，例如其中所述抗原结合构建体能够结合选自以下的两种或更多种抗原：PDGFRα、FGFR1、FGFR3、VEGFR2、VEGFR3、IGF1R、EGFR和VEGF、VE钙黏着蛋白、神经毡蛋白、Flt-3、ron、Trp-1、CD-20，例如其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和FGFR1，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和FGFR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和VEGFR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和IGF1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和Trp1，或其中所述抗原结合构建体能够结合PDGFRα和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和FGFR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和VEGR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和IGF1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR1和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和VEGFR2，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和VEGFR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和IGF1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合FGFR3和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和VEGFR3，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和IGF1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR2和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和IGF-1R，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGFR3和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和EGFR，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合IGF1R和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和VEGF，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合EGFR和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和VE钙黏着蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合VEGF和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合VE钙黏着蛋白和神经毡蛋白，或其中所述抗原结合构建体能够结合VE钙黏着蛋白和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合VE钙黏着蛋白和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合VE钙黏着蛋白和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合VE钙黏着蛋白和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合神经毡蛋白和Flt-3，或其中所述抗原结合构建体能够结合神经毡蛋白和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合神经毡蛋白和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合神经毡蛋白和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合Flt-3和ron，或其中所述抗原结合构建体能够结合Flt-3和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合Flt-3和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合ron和Trp-1，或其中所述抗原结合构建体能够结合ron和CD-20，或其中所述抗原结合构建体能够结合Trp-1和CD-20。
所述抗原结合构建体还可具有一个或多个具有相同或不同的抗原特异性的另外的表位结合结构域，所述表位结合结构域连接到重链的c-末端和/或n-末端和/或轻链的c-末端和/或n-末端。
本发明抗原结合构建体包括对β淀粉状蛋白具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合β淀粉状蛋白的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合β淀粉状蛋白的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合β淀粉状蛋白的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合β淀粉状蛋白的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对CD-3具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合CD-3的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合CD-3的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合CD-3的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合CD-3的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对gpIIIb/IIa具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合gpIIIb/IIa的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合gpIIIb/IIa的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合gpIIIb/IIa的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合gpIIIb/IIa的dAb。
本发明抗原结合构建体包括对TGFβ具有特异性的抗原结合构建体，例如，包含能够结合TGFβ的表位结合结构域的抗原结合构建体，或包含结合TGFβ的配对的VH/VL的抗原结合构建体。
抗原结合构建体可包含能够结合TGFβ的抗体。抗原结合构建体可包含能够结合TGFβ的dAb。
在本发明一个实施方案中，提供本文所述的本发明抗原结合构建体，其包含致使抗体具有降低的ADCC和/或补体激活或效应器功能的恒定区。在一个所述实施方案中，重链恒定区可包含IgG2或IgG4同种型的天然丧失能力的恒定区或突变的IgG1恒定区。合适修饰的实例阐述于EP0307434中。一个实例包括在235和237(EU索引编号)位的丙氨酸残基的取代。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体将保留Fc功能性，例如能够具有ADCC和CDC活性之一或二者。所述抗原结合构建体可包含位于轻链(例如在轻链c-末端)上的表位结合结构域。
本发明还提供通过在抗体轻链上配置表位结合结构域，尤其是通过在轻链c-末端配置表位结合结构域，来保持抗原结合构建体的ADCC和CDC功能的方法。所述ADCC和CDC功能可通过任何合适的测定法来测量，例如实施例15.3中所述的ADCC测定法和实施例15.4中所述的CDC测定法。
本发明还提供通过在抗体重链上配置表位结合结构域，尤其是通过在重链c-末端配置表位结合结构域，来降低抗原结合构建体的CDC功能的方法。所述CDC功能可通过任何合适的测定法来测量，例如实施例15.4中所述的CDC测定法。
在另一实施方案中，本发明抗原结合构建体能够结合选自VEGF、IGF-1R和EGFR的两种或更多种抗原，例如，其能够结合EGFR和VEGF、或EGFR和IGF1R、或IGF1R和VEGF，或例如其能够结合TNF和IL1-R。在包含IGF-1R结合位点的本发明实施方案中，本发明抗原结合构建体的IGF-1R结合位点可包含在蛋白质骨架中的配对的VH/VL结构域，所述配对的VH/VL结构域可包含选自以下的序列中所述的CDR中的一个或多个：SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：85和SEQ IDNO：86，例如，其可包含至少SEQ ID NO：80中所述的CDRH3，例如，其可包含SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85和SEQ ID NO：86中所述的所有CDR。
在包含EGFR结合位点的本发明实施方案中，本发明抗原结合构建体可结合包含成熟或正常或野生型EGFR序列的第273-501位残基的表位，例如，其可结合包含成熟或正常或野生型EGFR的第287-302位残基(SEQ ID NO：103)的表位。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体的EGFR结合位点可包含在蛋白质骨架中的配对的VH/VL结构域，所述配对的VH/VL结构域可包含选自以下序列中所述的CDR中的一个或多个：SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102，例如，其可包含SEQ ID NO：106中所述的CDRH3，或其可包含SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102中所述的所有6个CDR。所述配对的VH/VL结构域可进一步包含另外的残基，尤其是在重链CDR中，在一个实施方案中，CDRH1可包含SEQ ID NO：104加上至多5个另外的残基，例如，SEQ ID NO：97中所述的5个另外的残基中的一个或多个，CDRH2可包含SEQ ID NO：105加上至多2个另外的残基，例如SEQ ID NO：98和SEQ ID NO：107中所述的2个另外的残基中的一个或两个，而CDRH3可包含SEQ ID NO：106加上至多2个另外的残基，例如SEQ ID NO：99中所述的2个另外的残基中的一个或两个。在一个实施方案中，配对的VH/VL包含以下序列中所述的CDR中的一个或多个：SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102，例如，其可包含至少SEQ ID NO：99中所述的CDRH3，例如，其可包含SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100，SEQ ID NO：101和SEQ ID NO：102中所述的所有6个CDR(合适的抗体的更详细的资料可在WO02/092771和WO2005/081854中找到)。
在一个实施方案中，抗原结合构建体包含作为结构域抗体(dAb)的表位结合结构域，例如所述表位结合结构域可为人VH或人VL、或骆驼VHH或鲨鱼dAb(NARV)。
在一个实施方案中，抗原结合构建体包含作为选自以下的骨架衍生物的表位结合结构域：CTLA-4(Evibody)；脂质运载蛋白；诸如蛋白A的Z-结构域等来源于蛋白A的分子(Affibody，SpA)、A-结构域(Avimer/Maxibody)；热休克蛋白，例如GroEl和GroES；转铁蛋白(trans-body)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域(四连凝集素)；人γ-晶体蛋白和人泛素(affilin)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；对它们都进行蛋白质工程改造以便实现与不同于天然配体的配体结合。
本发明抗原结合构建体可包含连接到表位结合结构域adnectin的蛋白质骨架，例如含连接到重链c-末端的adnectin的IgG骨架；或其可包含连接到adnectin的蛋白质骨架，例如含连接到重链n-末端的adnectin的IgG骨架；或其可包含连接到adnectin的蛋白质骨架，例如含连接到轻链c-末端的adnectin的IgG骨架；或其可包含连接到adnectin的蛋白质骨架，例如含连接到轻链n-末端的adnectin的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域CTLA-4的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的CTLA-4的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的CTLA-4的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的CTLA-4的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的CTLA-4的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域脂质运载蛋白的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的脂质运载蛋白的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的脂质运载蛋白的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的脂质运载蛋白的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的脂质运载蛋白的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域SpA的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的SpA的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的SpA的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的SpA的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的SpA的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域affibody的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的affibody的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的affibody的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的affibody的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的affibody的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域affimer的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的affimer的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的affimer的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的affimer的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的affimer的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域GroEI的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的GroEI的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的GroEI的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的GroEI的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的GroEI的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域转铁蛋白的IgG骨架，例如含连接到重链的n-末端的转铁蛋白的IgG骨架；或其可包含例如具有连接到重链c-末端的转铁蛋白的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的转铁蛋白的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的转铁蛋白的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域GroES的IgG骨架，例如含连接到重链的n-末端的GroES的IgG骨架；或其可包含例如具有连接到重链c-末端的GroES的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的GroES的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的GroES的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域DARPin的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的DARPin的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的DARPin的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的DARPin的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的DARPin的IgG骨架。
在其它实施方案中，其可包含蛋白质骨架，例如连接到表位结合结构域肽适体的IgG骨架，例如含连接到重链n-末端的肽适体的IgG骨架；或其可包含例如含连接到重链c-末端的肽适体的IgG骨架；或其可包含例如含连接到轻链n-末端的肽适体的IgG骨架；或其可包含含连接到轻链c-末端的肽适体的IgG骨架。
在本发明一个实施方案中，有4个表位结合结构域，例如4结构域抗体，其中2个表位结合结构域可对相同抗原具有特异性，或存在于抗原结合构建体的所有表位结合结构域可对相同抗原具有特异性。
可通过用接头将本发明蛋白质骨架连接到表位结合结构域。合适的接头实例包括以下氨基酸序列：所述氨基酸序列长度可为1个氨基酸到150个氨基酸，或1个氨基酸到140个氨基酸，例如1个氨基酸-130个氨基酸，或1-120个氨基酸，或1-80个氨基酸，或1-50个氨基酸，或1-20个氨基酸，或1-10个氨基酸，或5-18个氨基酸。所述序列可具有其自己的三级结构，例如，本发明接头可包含单一可变结构域。在一个实施方案中，接头大小等同于单一可变结构域。合适的接头大小可为1-20埃，例如小于15埃或小于10埃或小于5埃。
在本发明一个实施方案中，用接头将至少一个表位结合结构域直接连接到Ig骨架，所述接头包含1-150个氨基酸，例如1-20个氨基酸，例如1-10个氨基酸。所述接头可选自以下接头中的任何一种：SEQID NO：6-11中所述的接头；‘STG’(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)；‘GSTG’或‘RS’；例如接头可为‘TVAAPS’，或接头可为‘GGGGS’。在本发明抗原结合构建体中使用的接头可单独包含或除包含其它接头外还包含一组或多组GS残基，例如‘GSTVAAPS’或‘TVAAPSGS’或‘GSTVAAPSGS’。在另一实施方案中，在表位结合结构域(例如dAb)与Ig骨架之间没有接头。在另一实施方案中，通过接头‘TVAAPS’将表位结合结构域(例如dAb)连接到Ig骨架。在另一实施方案中，通过接头‘TVAAPSGS’将表位结合结构域(例如dAb)连接到Ig骨架。在另一实施方案中，通过接头‘GS’将表位结合结构域(例如dAb)连接到Ig骨架。
在一个实施方案中，本发明抗原结合构建体包含能够结合人血清白蛋白的至少一个表位结合结构域。
在一个实施方案中，有至少3个抗原结合位点，例如有4或5或6或8或10个抗原结合位点，并且抗原结合构建体能够结合至少3或4或5或6或8或10个抗原，例如其能够同时结合3或4或5或6或8或10个抗原。
本发明还提供用于医学的抗原结合构建体，例如用于制备用于治疗癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病的药物。
本发明提供治疗罹患癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病的患者的方法，所述方法包括给予治疗量的本发明抗原结合构建体。
本发明抗原结合构建体可用于治疗癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病。
例如若蛋白质骨架含有源自具有效应器功能的抗体的Fc区，例如若蛋白质骨架包含来自IgG1的CH2和CH3，则本发明抗原结合构建体可具有某些效应器功能。效应器功能的水平可根据已知技术而变化，例如通过CH2结构域突变，例如其中IgG1CH2结构域在选自239和332和330的位点具有一个或多个突变，例如突变选自S239D和I332E和A330L，致使抗体效应器功能提高，和/或例如改变本发明抗原结合构建体的糖基化概况，致使Fc区的岩藻糖基化降低。
用于本发明的蛋白质骨架包括包含抗体所有结构域的完整单克隆抗体骨架，或本发明蛋白质骨架可包含非常规抗体结构，例如单价抗体。所述单价抗体可包含配对的重链和轻链，其中重链铰链区经过修饰致使重链不会同型二聚体化，例如阐述于WO2007059782中的单价抗体。其它单价抗体可包含配对的重链和轻链，它们与缺乏功能可变结构域和CH1区的第二条重链二聚体化，其中第一条和第二条重链经过修饰致使它们形成异型二聚体而不是同型二聚体，从而产生含两条重链和一条轻链的单价抗体，例如在WO2006015371中所述的单价抗体。所述单价抗体可提供表位结合结构域可连接的本发明蛋白质骨架，例如实施例32所述的抗原结合构建体。
用于本发明的表位结合结构域为独立于不同V区或结构域地特异性结合抗原或表位的结构域，其可为结构域抗体，或可为选自以下的骨架衍生物的结构域：CTLA-4(Evibody)；脂质运载蛋白；源自蛋白A的分子，例如蛋白A的Z-结构域(Affibody，SpA)、A-结构域(Avimer/Maxibody)；热休克蛋白，例如GroEl和GroES；转铁蛋白(trans-body)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域(四连凝集素)；人γ-晶体蛋白和人泛素(affilin)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)；它们已经过蛋白质工程改造以实现与不同于天然配体的配体结合。在一个实施方案中，它们可为结构域抗体或其它合适的结构域，例如选自以下的结构域：CTLA-4、脂质运载蛋白、SpA、Affibody、avimer、GroEl、转铁蛋白、GroES和纤连蛋白。在一个实施方案中，它们可选自dAb、Affibody、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin。在另一实施方案中，它们可选自Affibody、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin。在另一实施方案中，它们可为结构域抗体，例如选自人、骆驼或鲨鱼(NARV)结构域抗体的结构域抗体。
可在一个或多个位置将表位结合结构域连接到蛋白质骨架。这些位置包括蛋白质骨架的C-末端和N-末端，例如在IgG重链的C-末端和/或轻链的C-末端，或例如在IgG重链的N-末端和/或轻链的N-末端。
在一个实施方案中，将第一表位结合结构域连接到蛋白质骨架，将第二表位结合结构域连接到第一表位结合结构域，例如，其中所述蛋白质骨架为IgG骨架，可将第一表位结合结构域连接到IgG骨架重链的c-末端，并可将该表位结合结构域以其c-末端连接到第二表位结合结构域；或例如，可将表位结合结构域连接到IgG骨架轻链的c-末端，并可让该第一表位结合结构域进一步以其c-末端连接到第二表位结合结构域；或例如，可将第一表位结合结构域连接到IgG骨架轻链的n-末端，并可让所述第一表位结合结构域进一步以其n-末端连接到第二表位结合结构域；或例如，可将第一表位结合结构域连接到IgG骨架重链的n-末端，并可让该第一表位结合结构域进一步以其n-末端连接到第二表位结合结构域。所述抗原结合构建体实例阐述于实施例31中。
当表位结合结构域为结构域抗体时，某些结构域抗体可适于骨架内的特定位置。
用于本发明的结构域抗体可以在常规IgG重链和/或轻链的C-末端处连接。另外，可将某些dAb连接到常规抗体重链和轻链两者的C-末端。
在将dAb的N-末端融合到抗体恒定结构域(CH3或CL)的构建体中，肽接头可辅助dAb结合抗原。实际上，dAb的N-末端仅挨着涉及抗原结合活性的互补决定区(CDR)。因此，短肽接头在表位结合结构域与蛋白质骨架的恒定结构域之间起间隔物的作用，其可使得dAbCDR更易接触抗原，因此其可以以高亲和力结合。
dAb与IgG连接所处的环境将根据它们所融合的抗体链而不同：
当在IgG骨架的抗体轻链的C-末端处融合时，预期每一个dAb位于抗体铰链和Fc部分附近。很可能所述dAb彼此将离得较远。在常规抗体中，Fab片段之间的角度和每一个Fab片段与Fc部分之间的角度可显著不同。很可能的是，对于mAbdAb而言，Fab片段之间的角度将不会差异很大，同时对于每一Fab片段与Fc部分之间的角度可观察到某程度的角度限制。
当在IgG骨架的抗体重链的C-末端处融合时，预期每一dAb位于Fc部分的CH3结构域附近。预期这不会影响Fc对Fc受体(例如cγRI、II、III、FcRn)的结合特性，因为这些受体结合(engage with)CH2结构域(对于FcγRI、II和III类受体而言)或结合CH2和CH3结构域之间的铰链(例如FcRn受体)。所述抗原结合构建体的另一特征为预期两个dAb在空间上彼此靠近，前提是由合适接头提供柔韧性，这些dAb甚至可形成同型二聚体，从而累增成(propagate)Fc部分的‘拉链式’四级结构，而这可因此提高构建体的稳定性。
这样的结构上的考虑可有助于选择使表位结合结构域例如dAb连接到蛋白质骨架例如抗体上的最合适的位置。
抗原大小、其位置(在血液中或在细胞表面上)、其四级结构(单体或多聚体结构)可变化。因存在铰链区，常规抗体无需特别设计就能作为衔接构建体(adaptor construct)起作用，其中在Fab片段的末端的两个抗原结合位点的方向可大幅度变化，因此能适应抗原的分子特性及其环境。相比之下，连接到抗体或其它蛋白质骨架(例如包含无铰链区抗体的蛋白质骨架)的dAb可能直接或间接地具有较小的结构柔韧性。
了解溶液状态和Ab的结合模式也是有帮助的。积累了很多体外dAb在溶液中可主要以单体、同型二聚体或多聚体形式存在的证据(Reiter等(1999)J Mol Biol 290第685-698页；Ewert等(2003)J MolBiol 325，第531-553页；Jespers等(2004)J Mol Biol 337第893-903页；Jespers等(2004)Nat Biotechnol 22第1161-1165页；Martin等(1997)Protein Eng.10第607-614页；Sepulvada等(2003)J Mol Biol 333第355-365页)。这很容易让人联想到体内观察到的Ig结构域的多聚体化事件，例如Bence-Jones蛋白(它们为免疫球蛋白轻链的二聚体(Epp等(1975)Biochemistry 14第4943-4952页；Huan等(1994)Biochemistry33第14848-14857页；Huang等(1997)Mol immunol 34第1291-1301页)和淀粉样纤维(James等(2007)J Mol Biol.367：603-8)。
例如，对于易于在溶液中二聚体化的结构域抗体，可能期需使其与Fc部分的C-末端连接优先于与轻链C-末端连接，因为与Fc的C-末端连接将使得那些dAb在本发明抗原结合构建体的情况下二聚体化。
本发明抗原结合构建体可包含对单一抗原具有特异性的抗原结合位点，或可具有对两种或更多种抗原具有特异性或对单一抗原上的两个或多个表位具有特异性的抗原结合位点，或可存在每一个都对相同或不同的抗原上的不同的表位有特异性的抗原结合位点。
抗原结合位点可各自对抗原具有结合特异性，所述抗原例如人或动物蛋白质，包括细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体、酶(例如蛋白酶)、酶的辅因子、DNA结合蛋白、脂质和糖类。包括细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体和其它蛋白质在内的合适的靶标包括但不限于：ApoE、Apo-SAA、BDNF、心肌营养蛋白-1、CEA、CD40、CD40配体、CD56、CD38、CD138、EGF、EGF受体、ENA-78、嗜伊红细胞趋化因子(Eotaxin)、嗜伊红细胞趋化因子-2、Exodus-2、FAPα、酸性FGF、碱性FGF、成纤维细胞生长因子-10、FLT3配体、CXXXC趋化分子(CX3C)、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GF-β1、人血清白蛋白、胰岛素、IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1α、IL-1β、IL-1受体、IL-1受体1型、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8(72个氨基酸)、IL-8(77个氨基酸)、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18(IGIF)、抑制素α、抑制素β、IP-10、角质形成细胞生长因子-2(KGF-2)、KGF、瘦素、LIF、淋巴细胞趋化蛋白、穆勒氏抑制物(Mullerian inhibitory substance)、单核细胞集落抑制因子、单核细胞引诱蛋白(monocyte attractant protein)、M-CSF、c-fms、v-fmsMDC(67个氨基酸)、MDC(69个氨基酸)、MCP-1(MCAF)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MDC(67个氨基酸)、MDC(69个氨基酸)、MIG、MIP-1α、MIP-1β、MIP-3α、MIP-3β、MIP-4、骨髓祖细胞抑制因子-1(MPIF-1)、NAP-2、神经营养因子(Neurturin)、神经生长因子、β-NGF、NT-3、NT-4、制瘤素M、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PF-4、RANTES、SDF1α、SDF1β、SCF、SCGF、干细胞因子(SCF)、TARC、TGF-α、TGF-β、TGF-β2、TGF-β3、肿瘤坏死因子(TNF)、TNF-α、TNF-β、TNF受体I、TNF受体II、TNIL-1、TPO、VEGF、VEGF A、VEGF B、VEGF C、VEGF D、VEGF受体1、VEGF受体2、VEGF受体3、GCP-2、GRO/MGSA、GRO-β、GRO-γ、HCCl、1-309、HER 1、HER 2、HER 3、HER 4、血清白蛋白、vWF、淀粉状蛋白(例如淀粉状蛋白α)、MMP12、PDK1、IgE和本文公开的其它靶标。应该理解以上列举内容并不全面。
在某些实施方案中，蛋白酶抗性肽或多肽结合肺组织中的靶标，例如选自以下的靶标：TNFR1、IL-1、IL-1R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-8R、IL-9、IL-9R、IL-10、IL-12、IL-12R、IL-13、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-15、IL-15R、IL-16、IL-17R、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-23、IL-23R、IL-25、CD2、CD4、CD11a、CD23、CD25、CD27、CD28、CD30、CD40、CD40L、CD56、CD138、ALK5、EGFR、FcER1、TGFb、CCL2、CCL18、CEA、CR8、CTGF、CXCL12(SDF-1)、糜蛋白酶、FGF、弗林蛋白酶、内皮素-1、嗜伊红细胞趋化因子类(例如嗜伊红细胞趋化因子、嗜伊红细胞趋化因子-2、嗜伊红细胞趋化因子-3)、GM-CSF、ICAM-1、ICOS、IgE、IFNa、I-309、整联蛋白、L-选择蛋白、MIF、MIP4、MDC、MCP-1、MMP、中性粒细胞弹性蛋白酶、骨桥蛋白、OX-40、PARC、PD-1、RANTES、SCF、SDF-1、涎免凝集素8、TARC、TGFb、凝血酶、Tim-1、TNF、TRANCE、类胰蛋白酶、VEGF、VLA-4、VCAM、α4β7、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8、αvβ6、αvβ8、cMET、CD8、vWF、淀粉状蛋白(例如淀粉状蛋白α)、MMP12、PDK1和IgE。
具体而言，本发明抗原结合构建体可用于治疗与IL-13、IL-5和IL-4相关的疾病，例如：特应性皮炎、变应性鼻炎、克罗恩氏病(crohn’sdisease)、COPD、纤维化疾病或病况例如特发性肺纤维化、进行性系统性硬化症、肝纤维化、肝肉芽肿、血吸虫病、利什曼病、细胞周期调节病例如何杰金氏病(Hodgkins disease)、B细胞慢性淋巴性白血病，例如所述构建体可用于治疗哮喘。
本发明抗原结合构建体可用于治疗与诸如IGF-1R、VEGF和EGFR等生长因子有关的疾病，例如癌症或风湿性关节炎，其中可使用所述疗法治疗的癌症类型实例有乳腺癌、前列腺癌、肺癌和骨髓瘤。
本发明抗原结合构建体可用于治疗与TNF有关的疾病，例如关节炎，例如风湿性关节炎或骨关节炎。
本发明抗原结合构建体可用于治疗与IL1-R有关的疾病，例如关节炎，例如风湿性关节炎或骨关节炎。
本发明抗原结合构建体可用于治疗与CD-20有关的疾病，例如：自身免疫性疾病，例如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、风湿性关节炎、青少年风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、诸如多发性硬化症等神经退行性疾病、诸如COPD等中性粒细胞驱动的疾病、Wegener脉管炎、囊肿性纤维变性、斯耶格伦综合症(Sjogrenssyndrome)、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物抗宿主病、哮喘、变应性疾病异位性皮炎、湿疹皮炎、变应性鼻炎、包括甲状腺炎、脊柱关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病在内的其它自身免疫性疾病；或癌症，例如B-细胞淋巴瘤或成熟B细胞瘤，例如CLL或SLL。
本发明抗原结合构建体可用于治疗与IL-17和IL-23有关的疾病，例如牛皮癣、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、风湿性关节炎、青少年风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、诸如多发性硬化症等神经退行性疾病、诸如COPD等中性粒细胞驱动的疾病、Wegener脉管炎、囊肿性纤维变性、斯耶格伦综合症、慢性移植排斥、1型糖尿病移植物抗宿主病、哮喘、变应性疾病异位性皮炎、湿疹皮炎、变应性鼻炎、包括甲状腺炎、脊柱关节病、强直性脊柱炎、葡萄膜炎、多软骨炎或硬皮病在内的其它自身免疫性疾病。
本发明抗原结合构建体可通过用包含编码本发明抗原结合构建体序列的表达载体转染宿主细胞来产生。表达载体或重组质粒通过使这些编码抗原结合构建体的序列与常规调控序列以可操作方式连接来产生，所述常规调控序列能够在宿主细胞中调控复制和表达和/或调控从宿主细胞分泌。调控序列包括启动子序列(例如CMV启动子)和可源自其它已知抗体的信号序列。同样地，可产生第二表达载体，其具有编码互补的抗原结合构建体轻链或重链的DNA序列。在某些实施方案中，除了考虑编码序列和选择标记外，该第二表达载体与第一表达载体相同，以确保尽可能每一条多肽链都能功能表达。或者，抗原结合构建体的重链和轻链编码序列可位于单个载体上，例如在同一个载体的两个表达盒中。
通过常规技术用第一和第二载体二者来共转染(或简单地通过单个载体转染)所选择的宿主细胞，以制备包含重组或合成的轻链和重链二者的经转染的本发明宿主细胞。然后通过常规技术培养所转染的细胞，以产生工程改造的本发明抗原结合构建体。通过诸如ELISA或RIA等合适的测定法，从培养物中筛选包含重组重链和/或轻链二者结合的抗原结合构建体。可采用类似的常规技术来构建其它抗原结合构建体。
本领域技术人员可选择用于本发明方法及组合物构建中所用的克隆和亚克隆步骤的合适载体。例如，可使用常规pUC系列克隆载体。一种载体pUC19可购自供应商，例如Amersham(Buckinghamshire，United Kingdom)或Pharmacia(Uppsala，Sweden)。另外，能够容易地复制，具有大量的克隆位点及选择基因(例如抗生素抗性)并易于操作的任何载体都可用于克隆。因此，克隆载体的选择不是本发明的限制因素。
表达载体的特征还可在于适用于扩增异源DNA序列表达的基因，例如哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR)。其它优选的载体序列包括聚A信号序列，例如来自牛生长激素(BGH)和β球蛋白启动子序列(βglopro)。可通过本领域技术人员众所周知的技术合成用于本文的表达载体。
可通过市购或天然来源获得或通过已知方法合成所述载体组分，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等等，用于指导在所选宿主中表达和/或分泌重组DNA产物。为了该目的也可选择本领域已知的用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌表达的众多类型的其它合适的表达载体。
本发明还包括用含有编码本发明抗原结合构建体的序列的重组质粒转染的细胞系。用于克隆及用于这些克隆载体的其它操作的宿主细胞也为常规宿主细胞。然而，可将来自不同大肠杆菌(E.coli)株系的细胞用于复制克隆载体和构建本发明抗原结合构建体的其它步骤。
用于表达本发明抗原结合构建体的合适的宿主细胞或细胞系包括哺乳动物细胞，例如NS0、Sp2/0、CHO(例如DG44)、COS、HEK、成纤维细胞细胞(例如3T3)和骨髓瘤细胞，例如，其可在CHO或骨髓瘤细胞中表达。可使用人细胞，由此使得分子可以以人糖基化型式来修饰。或者，可使用其它真核细胞系。合适的哺乳动物宿主细胞的选择及用于转化、培养、扩增、筛选和产物产生及纯化的方法为本领域所知。参见例如上面引用的Sambrook等。
可证明细菌细胞作为宿主细胞适用于表达重组FAb或本发明其它实施方案(参见例如Plückthun，A.，Immunol.Rev.，130：151-188(1992))。然而，由于在细菌细胞中表达的蛋白质倾向于非折叠或不恰当折叠形式或呈非糖基化的形式，在细菌细胞中产生的任何重组Fab将必须为保留抗原结合能力接受筛选。如果由细菌细胞表达的分子以合适的折叠形式产生，那么该细菌细胞将是所期需的宿主，或在备选实施方案中该分子可在细菌宿主中表达然后接着重折叠。例如，用于表达的不同株系的大肠杆菌是生物技术领域众所周知的宿主细胞。在该方法中还可采用不同株系的枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、链霉菌(Streptomyces)、其它杆菌等。
若需要，本领域技术人员已知的酵母菌细胞株系以及昆虫细胞(例如果蝇(Drosophila)和鳞翅目(Lepidoptera))和病毒表达系统也可作为宿主细胞使用。参见例如Miller等，Genetic Engineering，8：277-298，PlenumPress(1986)及其中引用的参考文献。
可构建载体的通用方法、产生本发明宿主细胞所需的转染方法和从所述宿主细胞产生本发明抗原结合构建体所需的培养方法，都可为常规技术。通常，本发明培养方法为无血清培养方法，通常是通过在无血清混悬液中培养细胞。同样地，产生本发明抗原结合构建体后，可按照本领域标准方法将其从细胞培养内含物中纯化，所述方法包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱色谱、凝胶电泳等等。所述技术在本领域技术范围内，其不构成对本发明的限制。例如，改变的抗体的制备阐述于WO 99/58679和WO 96/16990中。
表达抗原结合构建体的又一方法可利用在转基因动物中的表达，例如如美国专利第4,873,316号所述。其涉及使用动物酪蛋白启动子的表达系统，当将其通过转基因纳入到哺乳动物中时，使得雌性动物可在其乳汁中产生所需的重组蛋白质。
本发明另一方面提供制备本发明抗体的方法，所述方法包括培养用编码本发明抗体轻链和/或重链的载体转化的或转染的宿主细胞并回收藉此产生的抗体的步骤。
本发明提供制备本发明抗原结合构建体的方法，该方法包括
以下步骤：
(a)提供编码抗原结合构建体重链的第一载体；
(b)提供编码抗原结合构建体轻链的第二载体；
(c)用所述第一和第二载体转化哺乳动物宿主细胞(例如CHO)；
(d)在有助于从所述宿主细胞分泌抗原结合构建体到所述培养基中的条件下培养步骤(c)的宿主细胞；
(e)回收步骤(d)所分泌的抗原结合构建体。
一旦用所需方法表达抗原结合构建体后，通过用合适的测定法来检查其体外活性。目前采用常规ELISA测定方式以评估抗原结合构建体与其靶标的定性及定量结合。另外，还可使用其它体外测定法来验证中和效价，之后进行后续的人临床研究以评估忽略常规清除机制的抗原结合构建体在体内的持续性。
治疗剂量及持续时间涉及本发明分子在人循环中的相对持续时间，可由本领域技术人员根据待治疗病症及患者的一般健康状况来调整。可设想的是，可能需要长期(例如4-6个月)重复给药(例如每周1次或每2周1次)以达到最佳治疗效果。
本发明治疗剂的给药方式可为将药物递送给宿主的任何合适的途径。本发明抗原结合构建体和药用组合物尤其适用于胃肠外给予，即皮下(s.c.)、鞘内、腹膜内、肌肉内(i.m.)、静脉内(i.v.)或鼻内给予。
可将本发明治疗剂制备成在可药用载体中含有作为活性成分的有效量的本发明抗原结合构建体的药用组合物。在本发明预防性药物中，优选以注射即用的形式并优选以生理pH缓冲的含有抗原结合构建体的水性混悬剂或溶液剂。胃肠外给予的组合物通常应包含本发明抗原结合构建体溶液或其溶解于可药用载体(优选水性载体)的混合物。可采用多种水性载体，例如0.9％盐水、0.3％甘氨酸等。这些溶液可无菌制备并通常不含微粒物质。可通过众所周知的常规灭菌技术(例如过滤)使这些溶液无菌。根据接近生理条件的需要，组合物可含有可药用辅助物质(例如pH调节剂和缓冲剂等)。在所述药物制剂中的本发明抗原结合构建体的浓度可大范围变化，即从小于约0.5％、通常为或至少约1％到差不多15或20％重量，其主要基于流液体积、粘度等根据所选的特定给药方式来选择。
因此，用于肌内注射的本发明药用组合物可制备为含有1mL无菌缓冲水及以下量的本发明抗原结合构建体：约1ng-约100mg，例如约50ng-约30mg或更优选约5mg-约25mg。相似地，用于静脉内输注的本发明药用组合物可制备为含有约250ml无菌林格氏液和每毫升林格氏液约1mg-约30mg并优选5mg-约25mg的本发明抗原结合构建体。用于制备可胃肠外给予的组合物的实际方法众所周知，或对本领域技术人员显而易见，其详述于例如Remington′sPharmaceutical Science，第15版，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania中。关于制备可静脉内给予的本发明抗原结合构建体制剂，参见：Lasmar U和Parkins D“The formulation of Biopharmaceuticalproducts(生物药物制品配制)”，Pharma.Sci.Tech.today，第129-137页，第3卷(200年4月3日)；Wang，W“Instability，stabilisation andformulation of liquid protein pharmaceuticals(液体蛋白药物制剂的不稳定性、稳定化及配制)”，Int.J.Pharm 185(1999)129-188；Ahem T.J.，Manning M.C.主编的Stability of Protein Pharmaceuticals Part A and B，New York，NY：Plenum Press(1992)；Akers，M.J.“Excipient-Druginteractions in Parenteral Formulations(胃肠外制剂中赋形剂-药物之间的相互作用)”，J.Pharm Sci 91(2002)2283-2300；Imamura，K等“Effectsof types of sugar on stabilization of Protein in the dried state(糖种类对干态蛋白质稳定化的作用)”，J Pharm Sci 92(2003)266-274；Izutsu，Kkojima，S.“Excipient crystalinity and its protein-structure-stabilizingeffect during freeze-drying(在冻干期间赋形剂结晶及其蛋白质结构稳定化作用)”，J Pharm.Pharmacol，54(2002)1033-1039；Johnson，R，“Mannitol-sucrose mixtures-versatile formulations for proteinlyophilization(用于蛋白质冻干的甘露醇-蔗糖混合物多功能制剂)”，J.Pharm.Sci，91(2002)914-922；Ha，E Wang W，Wang Yj.“Peroxideformation in polysorbate 80 and protein stability(在聚山梨醇酯80中过氧化物的形成和蛋白质稳定性)”，J.Pharm Sci，91，2252-2264，(2002)，它们的整体内容在此引作参考，读者尤其应参考这些文献。
优选本发明治疗剂在药物制剂中呈单位剂量形式存在。合适的治疗有效剂量将易于由本领域技术人员确定。可按照其体重计算患者的合适的剂量，例如，合适的剂量可在以下范围内：0.01-20mg/kg，例如0.1-20mg/kg，例如1-20mg/kg，例如10-20mg/kg或例如1-15mg/kg，例如10-15mg/kg。为了有效治疗病症，在本发明中人使用的合适的剂量可在以下范围内：0.01-1000mg，例如0.1-1000mg，例如0.1-500mg，例如500mg，例如0.1-100mg或0.1-80mg，或0.1-60mg或0.1-40mg，或例如1-100mg或1-50mg的本发明抗原结合构建体，它们可经胃肠外给予，例如经皮下、静脉内或肌肉内给予。若有需要，所述剂量可以以合适的时间间隔重复给予，这由医生适当选择。
本文所述抗原结合构建体可冻干储存，并在使用前以合适的载体复溶。该技术显示对常规免疫球蛋白有效，可采用本领域已知的冻干和复溶技术。
有若干种本领域已知的方法可用于发现本发明使用的表位结合结构域。
术语“文库”指异质的多肽或核酸的混合物。文库由成员组成，每一个成员具有单个多肽或核酸序列。在这个意义上，“文库”是“谱(repertoire)”的同义词。文库成员之间的序列差异是造成文库中存在多样性的原因。文库可呈简单的多肽或核酸混合物形式，或可呈用核酸文库转化的生物体或细胞形式，例如细菌、病毒、动物或植物细胞等等。在一个实例中，每一个单独的生物体或细胞仅含有一个或有限个数的文库成员。有利的是，为了使得由核酸编码的多肽表达，可将该核酸纳入到表达载体中。因此，在一个方面，文库可呈宿主生物体群的形式，每一生物体含有表达载体的一个或多个拷贝，所述表达载体含有核酸形式的单个文库成员，其可被表达以产生其对应的多肽成员。因此，宿主生物体群具有编码多种多肽的众多谱的可能性。
“通用构架”是对应于抗体序列保守区的单独的抗体构架序列，其如Kabat所定义(“Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫目的物的蛋白质序列)”，US Department of Health and Human Service)，或为对应于人种系免疫球蛋白谱或结构的单独的抗体构架序列，其如Chothia和Lesk，(1987)J.Mol.Biol.196：910-917所定义。可有单一构架或一套所述构架，业已发现它们尽管只在超变区变化，但使得可衍生几乎任何结合特异性。
在一个实施方案中，用算法BLAST 2 Sequences使用缺省参数(Tatusova，T.A.等，FEMS Microbiol Lett，174：187-188(1999))，来制备并测定本文所定义的氨基酸和核苷酸序列比对和同源性、相似性或同一性。
表位结合结构域和抗原结合位点可各自对通用配体(genericligand)或任何所需靶配体具有结合特异性，所述配体例如人或动物蛋白，包括细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体、酶(例如蛋白酶)、酶的辅因子、DNA结合蛋白、脂质和糖类。包括细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体和其它蛋白在内的合适的靶标包括但不限于：ApoE、Apo-SAA、BDNF、心肌营养蛋白-1、CEA、CD40、CD40配体、CD56、CD38、CD138、EGF、EGF受体、ENA-78、嗜伊红细胞趋化因子、嗜伊红细胞趋化因子-2、Exodus-2、FAPα、酸性FGF、碱性FGF、成纤维细胞生长因子-10、FLT3配体、CXXXC趋化分子(CX3C)、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GF-β1、人血清白蛋白、胰岛素、IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1α、IL-1β、IL-1受体、IL-1受体1型、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8(72个氨基酸)、IL-8(77个氨基酸)、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18(IGIF)、抑制素α、抑制素β、IP-10、角质形成细胞生长因子-2(KGF-2)、KGF、瘦素、LIF、淋巴细胞趋化蛋白、穆勒氏抑制物、单核细胞集落抑制因子、单核细胞引诱蛋白、M-CSF、c-fms、v-fmsMDC(67个氨基酸)、MDC(69个氨基酸)、MCP-1(MCAF)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MDC(67个氨基酸)、MDC(69个氨基酸)、MIG、MIP-1α、MIP-1β、MIP-3α、MIP-3β、MIP-4、骨髓祖细胞抑制因子-1(MPIF-1)、NAP-2、神经营养因子、神经生长因子、β-NGF、NT-3、NT-4、制瘤素M、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PF-4、RANTES、SDF1α、SDF1β、SCF、SCGF、干细胞因子(SCF)、TARC、TGF-α、TGF-β、TGF-β2、TGF-β3、肿瘤坏死因子(TNF)、TNF-α、TNF-β、TNF受体I、TNF受体II、TNIL-1、TPO、VEGF、VEGF A、VEGF B、VEGF C、VEGF D、VEGF受体1、VEGF受体2、VEGF受体3、GCP-2、GRO/MGSA、GRO-β、GRO-γ、HCC1、1-309、HER1、HER 2、HER 3、HER 4、血清白蛋白、vWF、淀粉状蛋白(例如淀粉状蛋白α)、MMP12、PDK1、IgE和本文公开的其它靶标。应该了解该名单并非详尽无遗。
在某些实施方案中，结合的是肺组织中的靶标，例如选自以下的靶标：TNFR1、IL-1、IL-1R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-8R、IL-9、IL-9R、IL-10、IL-12、IL-12R、IL-13、IL-13Rα1、IL-13Ra2、IL-15、IL-15R、IL-16、IL-17R、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-23  IL-23R、IL-25、CD2、CD4、CD11a、CD23、CD25、CD27、CD28、CD30、CD40、CD40L、CD56、CD138、ALK5、EGFR、FcER1、TGFb、CCL2、CCL18、CEA、CR8、CTGF、CXCL12(SDF-1)、糜蛋白酶、FGF、弗林蛋白酶、内皮素-1、嗜伊红细胞趋化因子(例如嗜伊红细胞趋化因子、嗜伊红细胞趋化因子-2、嗜伊红细胞趋化因子-3)、GM-CSF、ICAM-1、ICOS、IgE、IFNa、I-309、整联蛋白、L-选择蛋白、MIF、MIP4、MDC、MCP-1、MMP、中性粒细胞弹性蛋白酶、骨桥蛋白、OX-40、PARC、PD-1、RANTES、SCF、SDF-1、涎免凝集素8、TARC、TGFb、凝血酶、Tim-1、TNF、TRANCE、类胰蛋白酶、VEGF、VLA-4、VCAM、α4β7、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8、αvβ6、αvβ8、cMET、CD8、vWF、淀粉状蛋白(例如淀粉状蛋白α)、MMP12、PDK1和IgE。
当在本文所述方法中使用展示系统(例如联系核酸的编码功能与核酸编码的肽或多肽的功能特性的展示系统)时，例如选择dAb或其它表位结合结构域时，通常有利的是扩增或增加编码所选择的肽或多肽的核酸的拷贝数。这提供了有效方法来获得足够量核酸和/或肽或多肽，以用于通过本文所述方法或其它合适的方法进行另外轮次的选择，或用于制备另外的谱(例如亲和力成熟谱)。因此，在某些实施方案中，选择表位结合结构域的方法包括使用展示系统(例如联系核酸的编码功能和核酸编码的肽或多肽的功能特性的展示系统，例如噬菌体展示)，并另外包括扩增或增加编码所选择的肽或多肽的核酸的拷贝数。可用任何合适的方法例如通过噬菌体扩增、细胞生长或聚合酶链式反应扩增核酸。
在一个实例中，所述方法采用联系核酸编码功能和核酸编码的多肽的物理、化学和/或功能特性的展示系统。这样的展示系统可包含多个可复制的遗传包(genetic package)，例如噬菌体或细胞(细菌)。展示系统可包含文库，例如噬菌体展示文库。噬菌体展示是展示系统的实例。
业已阐述多种合适的噬菌体展示系统(例如单价展示和多价展示系统)。(参见例如Griffiths等，美国专利第6,555,313 B1号(在此引作参考)；Johnson等，美国专利第5,733,743号(在此引作参考)；McCafferty等，美国专利第5,969,108号(在此引作参考)；Mulligan-Kehoe，美国专利第5,702,892号(在此引作参考)；Winter，G.等，Annu.Rev.Immunol.12：433-455(1994)；Soumillion，P.等，Appl.Biochem.Biotechnol.47(2-3)：175-189(1994)；Castagnoli，L.等，Comb.Chem.HighThroughput Screen(高通量筛选)，4(2)：121-133(2001))。在噬菌体展示系统中展示的肽或多肽可在任何合适的噬菌体上展示，举例而言，所述细菌噬菌体例如丝状噬菌体(例如fd、M13、F1)、裂解性噬菌体(例如T4、T7、λ)或RNA噬菌体(例如MS2)。
通常产生或提供展示作为含合适噬菌体衣壳蛋白(例如fd pIII蛋白)的融合蛋白的肽或噬菌体多肽的谱的噬菌体文库。融合蛋白可在噬菌体衣壳蛋白的末端或若需要在内部位置展示肽或多肽。例如，被展示的肽或多肽可存在于pIII的氨基末端到结构域1的位置。(pIII的结构域1也被称为N1)。可将被展示的多肽直接融合到pIII(例如pIII的结构域1的N-末端)，或用接头融合到pIII。若有需要，融合体可进一步包含标签(tag)(例如myc表位、His标签)。用任何合适的方法可产生包含作为含噬菌体衣壳蛋白的融合蛋白展示的肽谱或多肽谱的文库，例如通过将编码被展示的肽或多肽的噬菌体载体或噬菌粒载体的文库引入到合适的宿主细菌，并培养所得到的细菌以产生噬菌体(例如若有需要，则用合适的辅助噬菌体或补充质粒(complementingplasmid))。可用任何合适的方法(例如沉淀和离心)从培养物回收噬菌体文库。
展示系统可包含含有任何所需多样性量的肽谱或多肽谱。例如，所述谱可含有具有对应于由一种生物体、一组生物体、所需组织或所需细胞类型表达的天然存在多肽的氨基酸序列的肽或多肽，或可含有具有随机或随机化氨基酸序列的肽或多肽。若有需要，多肽可享有共同核心或骨架。例如，谱或文库中的所有多肽可基于选自以下的骨架：蛋白A、蛋白L、蛋白G、纤连蛋白结构域、anticalin、CTLA4、所需酶(例如聚合酶、纤维素酶)或来自免疫球蛋白超家族的多肽，例如抗体或抗体片段(例如抗体可变结构域)。在谱或文库中的多肽可包含随机或随机化氨基酸序列的限定区及共有氨基酸序列的区。在某些实施方案中，谱中所有或基本上所有多肽为所需类型，例如所需的酶(例如聚合酶)或所需的抗体的抗原结合片段(例如人VH或人VL)。在某些实施方案中，多肽展示系统包含多肽谱，其中每一个多肽包含抗体可变结构域。例如，谱中的每一个多肽可含有VH、VL或Fv(例如单链Fv)。
可用任何合适的方法将氨基酸序列多样性引入到肽或多肽或骨架的任何所需区域中。例如，可通过用任何合适的诱变方法(例如低保真度PCR、寡核苷酸介导的诱变或定点诱变、用NNK密码子多样化)或任何其它合适的方法制备编码多样化的多肽的核酸文库，来将氨基酸序列多样性引入靶区域，例如抗体可变结构域的互补决定区或疏水结构域。若有需要，可使待多样化的多肽区域随机化。
构成谱的多肽的大小是主要的选择问题，多肽大小不必一致。谱中的多肽可具有至少三级结构(形成至少一个结构域)。
选择/分离/回收
可用任何合适的方法从谱或文库(例如在展示系统中)选择、分离和/或回收表位结合结构域或结构域群。例如，基于选择特性(例如物理特性、化学特性、功能特性)来选择或分离结构域。合适的选择性功能特性包括谱中的肽或多肽的生物活性，例如结合通用配体(例如超抗原)、结合靶配体(例如抗原、表位、底物)、结合抗体(例如通过在肽或多肽上表达的表位)和催化活性。(参见例如，Tomlinson等，WO99/20749；WO 01/57065；WO 99/58655)。
在某些实施方案中，从基本上所有结构域共享共同的选择性特征的肽或多肽文库或谱中选择和/或分离蛋白酶抗性肽或多肽。例如，结构域可选自其中基本上所有结构域具有以下特征的文库或谱：结合共同的通用配体、结合共同的靶配体、结合共同抗体(或被共同抗体结合)或拥有共同的催化活性。该选择类型尤其可用于制备基于具有所需生物活性的母体肽或多肽的结构域谱，例如当实施免疫球蛋白单一可变结构域的亲和力成熟时。
基于结合共同通用配体的选择可产生含有作为原始文库或谱组分的所有或基本上所有结构域的结构域集或群。例如，可通过淘选或用合适的亲和基质选择、分离和/或回收结合靶配体或通用配体(例如蛋白A、蛋白L或抗体)的结构域。可通过将配体(例如通用配体、靶配体)溶液加入到合适的容器(例如试管、培养皿)中并使配体沉积或覆盖在容器壁上来实施淘选。可洗掉过量配体，可将结构域加到容器中，并将容器保持在适于肽或多肽结合固定化配体的条件下。可洗掉未结合的结构域，并可例如用任何合适的方法(例如刮擦或降低pH)来回收结合的结构域。
合适的配体亲和基质通常含有配体共价或非共价连接其上的固相支持体或珠粒(例如琼脂糖)。可在适用于使结构域与基质上的配体结合的条件下用批处理、柱处理或任何其它合适的处理使亲和基质与肽或多肽(例如业已与蛋白酶孵育的谱)结合。可洗掉不结合亲和基质的结构域，用任何合适的方法洗脱并回收已结合的结构域，例如用较低pH的缓冲液、用温和变性剂(例如尿素)或用竞争结合配体的肽或结构域洗脱。在一个实例中，在适用于使谱中的结构域与靶配体结合的条件下让生物素化的靶配体与谱结合。用固定化(例如在珠粒上)的亲和素或链霉亲和素回收已结合的结构域。
在某些实施方案中，通用配体或靶配体为抗体或其抗原结合片段。与在文库或谱的肽或多肽中基本上保守的肽或多肽的结构特征结合的抗体或抗原结合片段尤其可用作通用配体。适于用作分离、选择和/或回收蛋白酶抗性肽或多肽所用的配体的抗体和抗原结合片段可为单克隆或多克隆的，并可用任何合适的方法制备。
文库/谱
可用任何合适的方法制备或获得编码和/或含有蛋白酶表位结合结构域的文库。可设计文库以编码基于目标结构域或骨架(例如选自文库的结构域)的结构域，或可用本文所述方法从另一文库中选择文库。例如，可用合适的多肽展示系统来制备富含结构域的文库。
可用任何合适的方法容易地产生编码所需结构域类型的谱的文库。例如，可获得编码所需多肽类型(例如免疫球蛋白可变结构域)的核酸序列，并且可例如通过用易错的聚合酶链式反应(PCR)系统扩增核酸、通过化学诱变(Deng等，J.Biol.Chem.，269：9533(1994))或用细菌增变株(LoW等，J.Mol.Biol.，260：359(1996))来制备每一个含有一个或多个突变的核酸集合。
在其它实施方案中，为了多样化可以特定的核酸区作为靶标。用于在所选择的位置进行突变的方法在本领域亦众所周知，包括例如在用或不用PCR时使用错配的寡核苷酸或简并的寡核苷酸。例如，通过将突变靶向抗原结合环来产生合成的抗体文库。业已将随机或半-随机抗体H3和L3区添加到种系免疫球蛋白V基因区段，以产生含未突变构架区的大文库(Hoogenboom和Winter(1992)上述；Nissim等(1994)见上述；Griffiths等(1994)见上述；DeKruif等(1995)见上述)。业已将所述多样性延伸到包括某些或所有其它抗原结合环(Crameri等(1996)Nature Med.，2：100；Riechmann等(1995)Bio/Technology，13：475；Morphosys，WO 97/08320，见上述)。在其它实施方案中，为了多样化可通过例如采用第一PCR产物为“大引物(mega-primer)”的两步PCR策略来靶向核酸的特定区。(参见例如Landt，O.等，Gene 96：125-128(1990))。例如通过SOE PCR也可完成靶向的多样化。(参见例如Horton，R.M.等，Gene 77：61-68(1989))。
可通过改变确定多肽序列的编码序列致使可将许多可能的氨基酸(例如所有20种氨基酸或其子集)引入到该位置来实现在所选位置的序列多样性。用IUPAC命名法，最多能的密码子是NNK，其编码所有氨基酸以及TAG终止密码子。可使用NNK密码子以引入所需多样性。也使用达到同样目的的其它密码子，包括NNN密码子，该密码子导致产生另外的终止密码子TGA和TAA。这样的靶向方法可使得靶区域的全序列范围得到探索。
某些文库包含作为免疫球蛋白超家族成员(例如抗体或其部分)的结构域。例如，文库可包含具有已知主链构象的结构域。(参见例如Tomlinson等，WO 99/20749)。可在合适的质粒或载体中制备文库。本文所用载体指分离的元件(discrete element)，其用于将异源DNA引入到细胞中用于表达和/或其复制。可使用任何合适的载体，包括质粒(例如细菌质粒)、病毒或噬菌体载体、人工染色体和游离型载体。这样的载体可用于简单克隆和诱变，或表达载体可用于驱动文库表达。载体和质粒通常含有一个或多个克隆位点(例如多接头)、复制起始点和至少一个选择标记基因。表达载体可进一步含有驱动多肽转录及翻译的元件，例如增强子元件、启动子、转录终止信号、信号序列等等。可以以使其可操作地连接编码多肽的克隆插入物的方式排列这些元件，由此当所述表达载体保持在适于表达的条件下(例如在合适的宿主细胞中)时可表达并产生所述多肽。
克隆载体和表达载体通常含有使得所述载体可在一个或多个所选择的宿主细胞中复制的核酸序列。在克隆载体中，通常该序列为能使得载体独立于宿主染色体DNA复制的序列，包括复制起始点或自主复制序列。对于多种细菌、酵母和病毒，所述序列众所周知。来自质粒pBR322的复制起始点适用于大部分革兰氏阴性细菌，2微米质粒起始适用于酵母菌，各种病毒复制起始点(例如SV40、腺病毒)可用于在哺乳动物细胞中克隆载体。除非在哺乳动物细胞(例如COS细胞)中使用的复制起始点能够复制高水平DNA，否则哺乳动物表达载体通常不需要复制起始点。
克隆载体或表达载体可含有也被称为选择标记的选择基因。此类标记基因编码使转化的宿主细胞在选择培养基中存活或生长必不可少的蛋白质。因此，未用含有选择基因的载体转化的宿主细胞将不能在培养基中存活。典型的选择基因编码的蛋白赋予抗生素及其它毒素(例如氨苄青霉素(ampicillin)、新霉素(neomycin)、甲氨蝶呤(methotrexate)或四环素(tetracycline))抗性，互补的营养缺陷或提供在生长培养基中不能获得的关键营养素。
合适的表达载体可含有多种组分，例如复制起始点、选择标记基因、诸如转录调控元件(例如启动子、增强子、终止子)等一种或多种表达调控元件和/或一种或多种翻译信号、信号序列或前导序列等。若存在，表达调控元件和信号序列或前导序列可由载体或其它来源提供。例如，编码抗体链的已克隆的核酸的转录和/或翻译调控序列可用于指导表达。
可提供启动子用于在所需宿主细胞中进行表达。启动子可为组成型或诱导型。例如，可让启动子可操作地连接编码抗体、抗体链或其部分的核酸，致使其指导该核酸转录。可利用多种适用于原核宿主的启动子(例如用于大肠杆菌的β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统、lac、tac、T3、T7启动子)和真核宿主的启动子(例如，猴肾病毒40早期或晚期启动子、劳氏肉瘤病毒长末端重复启动子、巨细胞病毒启动子、腺病毒晚期启动子、EG-1a启动子)。
另外，表达载体通常包含用于选择携带载体的宿主细胞的选择标记，并在可复制的表达载体情况下包含复制起点。编码赋予抗生素或药物抗性的产物的基因为常用选择标记，可用于原核细胞(例如β-内酰胺酶基因(氨苄青霉素抗性)、四环素抗性的Tet基因)和真核细胞(例如新霉素(G418或遗传霉素(geneticin))、gpt(霉酚酸)、氨苄青霉素或潮霉素(hygromycin)抗性基因)。二氢叶酸还原酶标记基因使得可用甲氨蝶呤在多种宿主中选择。在酵母中通常将编码宿主的营养缺陷型标记物的基因产物的基因(例如LEU2、URA3、HIS3)用作选择标记。还涵盖使用病毒(例如杆状病毒)或噬菌体载体和能够整合到宿主细胞基因组的载体(例如逆转录病毒载体)。
适用于在原核细胞(例如细菌细胞，例如大肠杆菌)或哺乳动物细胞中表达的表达载体包括例如：pET载体(例如pET-12a、pET-36、pET-37、pET-39、pET-40，Novagen等)、噬菌体载体(例如pCANTAB5 E，Pharmacia)、pRIT2T(蛋白A融合载体，Pharmacia)、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、pEF-1(Invitrogen，Carlsbad，CA)、pCMV-SCRIPT、pFB、pSG5、pXT1(Stratagene，La Jolla，CA)、pCDEF3(Goldman，L.A.，等，Biotechniques，21：1013-1015(1996))、pSVSPORT(GibcoBRL，Rockville，MD)、pEF-Bos(Mizushima，S.，等，Nucleic Acids Res.，18：5322(1990))等等。可利用适用于不同表达宿主的表达载体，所述不同表达宿主例如原核细胞(大肠杆菌)、昆虫细胞(果蝇(Drosophila Schnieder)S2细胞，Sf9)、酵母(甲醇毕赤酵母(P.methanolica)、巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)、酿酒酵母(S.cerevisiae))细胞和哺乳动物细胞(例如COS细胞)。
载体的某些实例为能使对应于多肽文库成员的核苷酸序列表达的表达载体。因此，可通过让表达多肽文库成员的单个克隆单独增殖并表达来进行用通用配体和/或靶配体的选择。如上所述，特定的选择展示系统为噬菌体展示。因此，可使用噬菌体或噬菌粒载体，例如，载体可为具有大肠杆菌复制起始点(用于双链复制)以及此外的噬菌体复制起始点(用于产生单链DNA)的噬菌粒载体。所述载体的操作及表达在本领域众所周知(Hoogenboom和Winter(1992)见上述；Nissim等(1994)见上述)。简言之，载体可含有β-内酰胺酶基因以赋予噬菌粒选择性，并含有表达盒上游的lac启动子，所述表达盒可含有合适的前导序列、多个克隆位点、一个或多个肽标签、一个或多个TAG终止密码子和噬菌体蛋白pIII。因此，用各种大肠杆菌阻抑菌株和非阻抑菌株并加入葡萄糖、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)或辅助噬菌体(例如VCS M13)，载体能够作为不表达而只产生大量的多肽文库成员的质粒复制，或作为产物噬菌体复制，所述产物噬菌体中某些在其表面含有多肽-pIII融合体的至少一个拷贝。
抗体可变结构域可包含靶配体结合位点和/或通用配体结合位点。在某些实施方案中，通用配体结合位点为超抗原(例如蛋白A、蛋白L或蛋白G)结合位点。可变结构域可基于任何所需的可变结构域，例如人VH(例如VH 1a、VH 1b、VH 2、VH 3、VH 4、VH 5、VH 6)、人Vλ(例如VλI、VλII、VλIII、VλIV、VλV、VλVI或Vκ1)或人Vκ(例如Vκ2、Vκ3、Vκ4、Vκ5、Vκ6、Vκ7、Vκ8、Vκ9或Vκ10)。
另一类技术涉及选择人工分隔间(artificial compartment)的谱，所述人工分隔间使得基因可与其基因产物相连接。例如，可在由油包水乳剂形成的微胶囊中选择编码所需基因产物的核酸的选择系统阐述于WO99/02671、WO00/40712和Tawfik & Griffiths(1998)NatureBiotechnol 16(7)，652-6中。可将编码具有所需活性的基因产物的遗传元件分区到微胶囊中，然后在微胶囊内转录和/或翻译以产生其各自的基因产物(RNA或蛋白质)。随后挑选产生具有所需活性的基因产物的遗传元件。本方法通过经由多种手段检测所需活性来选择目的基因产物。
表位结合结构域表征
可通过为本领域技术人员所熟悉的方法检测结构域与其特异性抗原或表位的结合，所述方法包括ELISA。在一个实例中，用单克隆噬菌体ELISA检测结合。
可按照任何合适程序实施噬菌体ELISA：以下提出例示性方案。
可通过ELISA针对所选择的抗原或表位的结合情况来筛选每一轮选择产生的噬菌体群，以鉴定″多克隆″噬菌体抗体。然后可通过ELISA筛选来自这些群中的单个受感染的细菌菌落的噬菌体，以鉴定″单克隆″噬菌体抗体。也期需针对与抗原或表位的结合情况来筛选可溶性抗体片段，这还可通过ELISA用例如针对C-或N-末端标签的试剂来进行(参见例如Winter等(1994)Ann.Rev.Immunology 12，433-55及其中所引用参考文献)。
还可通过PCR产物的凝胶电泳(Marks等1991，上述；Nissim等1994上述)、用探针探测(Tomlinson等，1992J.Mol.Biol.227，776)或通过测定载体DNA序列，来评估所选择的噬菌体单克隆抗体的多样性。
E.dAb结构
在例如用本文所述噬菌体展示技术从所选择的V-基因谱选择dAb的情况下，这些可变结构域包含通用构架区，由此可以通过本文所定义的特定通用配体来识别它们。通用构架区、通用配体等的使用阐述于WO99/20749中。
当使用V-基因谱时，多肽序列中的变化可位于可变结构域结构环内。任一可变结构域的多肽序列可通过DNA改组或通过突变来改变，致使提高每一可变结构域与其互补对的相互作用。DNA改组为本领域所知，由例如Stemmer，1994，Nature 370：389-391和美国专利第6,297,053号教导，它们在此引作参考。其它诱变方法为本领域技术人员所熟知。
用于构建dAb的骨架
i.选择主链构象
免疫球蛋白超家族成员在其多肽链方面都共享相似的折叠。例如，尽管抗体就其一级序列而言高度不同，但与预期的相反，序列比较和晶体结构显示抗体的6个抗原结合环中的5个(H1、H2、L1、L2、L3)采用少数主链构象或规范结构(Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.，196：901；Chothia等(1989)Nature，342：877)。因此，环长度及关键残基分析使得可预测在大部分人抗体中存在的H1、H2、L1、L2和L3的主链构象(Chothia等(1992)J.Mol.Biol.，227：799；Tomlinson等(1995)EMBO J.，14：4628；Williams等(1996)J.Mol.Biol.，264：220)。尽管就序列、长度及结构(由于使用D区段)而言H3区更多样，但其由于环长度短而同样形成少数主链构象，这要视长度及环中及抗体构架中关键位置的特定残基的存在情况或残基类型而定(Martin等(1996)J.Mol.Biol.，263：800；Shirai等(1996)FEBS Letters，399：1)。
有利地的是，从结构域文库(例如VH结构域文库和/或VL结构域文库)组装dAb。在一个方面，对结构域文库进行设计，其中选择某些环长度和关键残基以确保成员的主链构象是已知的。有利的是，为了使其无功能的几率最小化，它们是在自然界发现的免疫球蛋白超家族分子的真正构象，其如上所述。种系V基因区段用作一个合适的基本构架用于构建抗体或T-细胞受体文库；其它序列也有用。可以以低频率发生变化，以使少数功能成员可拥有改变的主链构象，所述构象并不影响其功能。
规范结构理论还可用于评估由配体编码的不同的主链构象的数量，以基于配体序列预测主链构象，并为多样化选择不影响规范结构的残基。已知在人Vκ结构域中，L1环可采用4种规范结构中的1种，L2环具有单一的规范结构，对于L3环90％的人Vκ结构域采用4种或5种规范结构中的1种(Tomlinson等(1995)见上述)；因此，在单独的Vκ结构域中，不同的规范结构可联合以产生一系列不同的主链构象。已知Vλ结构域编码L1、L2和L3环的一系列不同的规范结构，且Vκ和Vλ结构域可与可编码H1和H2环的若干规范结构的任何VH结构域配对，那么在这5种环中观察到的规范结构组合的数目将极大。这表明主链构象多样性的产生对于产生大范围的结合特异性可能是必需的。然而，通过基于单一已知主链构象构建抗体文库，业已发现与预期相反，对于产生足以靶向基本上所有抗原的多样性并不需要主链构象多样性。甚至更意想不到的是，单一主链构象不必为共有结构-单一天然存在的构象可用作整个文库的基础。因此，在一个特别的方面，dAb拥有单一的已知主链构象。
所选择的单一主链构象可以是所考虑的免疫球蛋白超家族类型分子中的普通的一种。当观察到大量天然存在的分子采用该构象时，所述构象就是普通构象。因此，在一个方面，单独考虑对于免疫球蛋白结构域的每一结合环的不同主链构象的天然存在情况，然后为不同环选择天然存在的可变结构域，所述可变结构域拥有所期需的主链构象组合。如果没有一个可以利用，那么可选择最接近的等同物。可通过选择编码所需主链构象的种系基因区段来产生对于不同环的所期需的主链构象组合。在一个实例中，所选择的种系基因区段在自然界中频繁表达，具体而言，在所有天然种系基因区段中它们可能是最频繁地表达。
在设计文库的过程中，可以单独考虑对于6个抗原结合环中的每一个的不同的主链构象发生率。对于H1、H2、L1、L2和L3，选择20％-100％的天然存在的分子的抗原结合环所采用的既定构象。通常，其观察到的发生率超过35％(即35％至100％之间)，理想情况为超过50％或甚至超过65％。由于绝大多数H3环不具有规范结构，因而优选选择在这些不展示规范结构的环中普通的主链构象。因此，对于每一种环，选择在天然谱中最经常观察到的构象。在人抗体中，对于每一种环而言最普遍的规范结构(CS)如下：H1-CS 1(79％所表达的谱)、H2-CS 3(46％)、L1-CS 2Vκ(39％)、L2-CS 1(100％)、L3-CS 1Vκ(36％)(计算假设
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λ比率为70：30，Hood等(1967)Cold SpringHarbor Symp.Quant.Biol.，48：133)。对于具有规范结构的H3环，在第94位残基-第101位残基含有盐桥的长7个残基的CDR3(Kabat等(1991)Sequences of proteins of immunological interest，U.S.Departmentof Health and Human Services)以乎是最普遍的。在EMBL数据库中有至少16种人抗体序列含有形成该构象所需的H3长度和关键残基，在用作抗体建模的基础的蛋白质数据库中有至少两种晶体结构(2cgr和1tet)。规范结构的这种组合的最频繁表达的种系基因区段为VH区段3-23(DP-47)、JH区段JH4b、Vκ区段O2/O12(DPK9)和Jκ区段Jκ1。VH区段DP45和DP38也是合适的。因此，可将这些区段组合用作构建具有所期需单一主链构象的文库的基础。
或者，代替基于处于孤立状态的每一结合环的不同的主链构象的天然发生率来选择单一主链构象，将主链构象组合的天然发生率作为用于选择单一主链构象的基础。例如，在抗体情况下，可确定对于抗原结合环中的任何两个、三个、四个、五个或所有六个的规范结构组合的自然发生率。此时所选择的构象可为天然存在的抗体中的普通构象，并且可在天然谱中最经常地观察到。因此，例如在人抗体中，当考虑5种抗原结合环H1、H2、L1、L2和L3的天然组合时，确定规范结构的最频繁的组合，然后与H3环的最普遍的构象联合，作为选择单一主链构象的基础。
规范序列的多样化
选择了几种已知主链构象或单一已知主链构象后，就可通过改变分子的结合位点来构建dAb，以产生含结构和/或功能多样性的谱。这意味着产生变体，致使在其结构和/或其功能方面具有足够的多样性，由此它们能够提供一系列的活性。
通常通过在一个或多个位置改变所选择的分子来产生所期需的多样性。可随机选择待改变的位置，或它们可能已被选定。然后通过以下方式来实现变异：随机化，在随机化期间由任意氨基酸或其天然或合成的类似物取代氨基酸残基产生极大量的变体；或者用一种或多种限定的氨基酸子集置换氨基酸残基，产生更少量的变体。
业已报道用于引入所述多样性的各种方法。可用易错PCR(Hawkins等(1992)J.Mol.Biol.，226：889)、化学诱变(Deng等(1994)J.Biol.Chem.，269：9533)或细菌增变株(LoW等(1996)J.Mol.Biol.，260：359)来将随机突变引入编码分子的基因中。用于突变所选位置的方法在本领域亦众所周知，包括用或不用PCR使用错配的寡核苷酸或简并寡核苷酸。例如，通过以抗原结合环作为目标进行突变产生若干合成的抗体文库。使结合人破伤风类毒素-Fab的H3区随机化以产生一系列新的结合特异性(Barbas等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457)。随机或半-随机H3和L3区业已被添加到种系V基因区段以产生含未突变构架区的大文库(Hoogenboom & Winter(1992)J.Mol.Biol.，227：381；Barbas等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457；Nissim等(1994)EMBO J.，13：692；Griffiths等(1994)EMBO J.，13：3245；De Kruif等(1995)J.Mol.Biol.，248：97)。所述多样化业已延伸到包括某些或所有其它抗原结合环(Crameri等(1996)Nature Med.，2：100；Riechmann等(1995)Bio/Technology，13：475；Morphosys，WO97/08320，见上述)。
由于环的随机化有可能产生大约超过1015种针对单独的H3的结构，以及同样大量的其它5种环的变体，因而用目前的转化技术或甚至通过用无细胞系统以产生代表所有可能组合的文库是不可行的。例如，在迄今构建的最大的文库之一中，产生了6x1010种不同的抗体，这仅是该设计的文库的潜在多样性的小部分而已(Griffiths等(1994)见上述)。
在一个实施方案中，仅那些直接参与产生或修饰所期需的分子功能的残基被多样化。对于很多分子而言，功能应为结合靶标，因此多样性应该集中在靶标结合位点，同时避免改变对于分子的整体包装或对于维持所选择的主链构象很重要的残基。
在一个方面，使用其中仅那些抗原结合位点的残基被改变的dAb文库。这些残基在人抗体谱中极具多样性，并且已知为高分辨的抗体/抗原复合体的接触点。例如，在L2中，已知在天然存在的抗体中位置50和53是多变的，并观察到其与抗原接触。相比之下，常规方法将使由Kabat等(1991，上述)定义的相应的互补决定区(CDR1)中的所有残基多样化，与文库中多样化的两个残基相比某些有7个残基被多样化。就产生一系列抗原结合特异性所需的功能多样性而言，这代表显著改进。
实际上，抗体多样性是两个过程的结果：种系V、D和J基因区段的体细胞重组致使产生天然的初始谱(primary repertoire)(所谓的种系和连接多样性)和导致产生重排的V基因的体细胞超突变。人抗体序列分析显示，初始谱多样性集中在抗原结合位点中心，而体细胞超突变将多样性散布在在初始谱中高度保守的抗原结合位点的外围区域(参见Tomlinson等(1996)J.Mol.Biol.，256：813)。这种互补很可能进化为搜寻序列间隔的有效策略，尽管对于抗体明显是独特的，但这可能容易地应用到其它多肽谱。被改变的残基是形成靶标结合位点的那些残基的子集。若有需要，靶标结合位点中不同的(包括重叠的)残基子集在选择期间在不同阶段被多样化。
在抗体谱情况下，当某些而不是所有抗原结合位点残基被多样化时，产生了初始“天然”谱。本文上下文所用术语“天然”或“假体(dummy)”指没有预先确定靶标的抗体分子。这些分子类似于尚未经历免疫多样化的个体的免疫球蛋白基因所编码的分子，所述尚未经历免疫多样化的个体的例子为胎儿及新生儿个体，其免疫系统尚未受到多种抗原刺激物的攻击。然后针对一系列抗原或表位选择该谱。若有需要，可在初始谱中被多样化的区域之外引入另外的多样性。可选择这种成熟的谱用于改变功能、特异性或亲和力。
应该理解的是，本文所述序列包括与本文所述序列具有基本同一性的序列，例如至少90％同一性，例如至少91％或至少92％或至少93％或至少94％或至少95％或至少96％或至少97％或至少98％或至少99％同一性。
对于核酸，术语“基本同一性”表明当对两种核酸或其指定序列以适当的核苷酸插入或缺失进行最佳比对及比较时，它们有至少约80％的核苷酸、通常至少约90％-95％并更优选至少约98％-99.5％的核苷酸相同。或者，当区段在选择性杂交条件下与互补链杂交时存在基本上同一性。
对于核苷酸和氨基酸序列，术语“同一″表明当两个核酸或氨基酸序列之间以适当插入或缺失进行最佳比对和比较时的相同程度。或者，当DNA区段在选择性杂交条件与互补链杂交时存在基本上同一性。
两个序列之间的同一性百分比是序列共有的同一位置数量的函数(即同一性％＝同一位置数目/位置总数乘以100)，为了两个序列的最佳比对需要考虑空位数目及每一空位长度。可用数学算法完成序列比较和两个序列之间同一性百分比的测定，其如以下非限制性实施例所述。
可用GCG软件包中的GAP程序、用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重，来测定两个核苷酸序列之间的同一性百分比。还可用被整合到ALIGN程序(2.0版)的E.Meyers和W.Miller算法(Comput.Appl.Biosci.，4：11-17(1988))、用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来测定两个核苷酸或氨基酸序列之间的同一性百分比。另外，可用业已整合到GCG软件包中的GAP程序的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48：444-453(1970))算法、用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵和空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6，来测定两个氨基酸序列之间的同一性百分比。
举例而言，本发明多核苷酸序列可与SEQ ID NO：122参考序列同一，也就是说100％同一，或其与参考序列比较可包括至多某些整数个的核苷酸改变。所述改变选自至少一个核苷酸缺失、置换(包括转换和颠换)或插入，并且其中所述改变可发生在参考核苷酸序列的5′或3′末端位置，或这些末端位置之间的任何位置，其各自散布在参考序列的核苷酸之中的或在参考序列内的一个或多个邻接基团(contiguousgroup)中。通过让SEQ ID NO：122的核苷酸总数乘以各自同一性百分比数值(除以100)，并从所述SEQ ID NO：122核苷酸总数减去该乘积，求出核苷酸改变数目，或：
nn≤xn-(xn·y)，
其中nn为核苷酸改变数目，xn为SEQ ID NO：122核苷酸总数，y：对于50％为0.50、对于60％为0.60、对于70％为0.70、对于80％为0.80、对于85％为0.85、对于90％为0.90、对于95％为0.95、对于97％为0.97或对于100％为1.00，其中在从xn减去xn与y的任何非整数乘积之前将其四舍五入成最接近的整数。SEQ ID NO：122多核苷酸序列的改变可在该编码序列中产生无意义、错义或移码突变，藉此在所述改变后改变多核苷酸所编码的多肽。
同样地，在另一实施例中，本发明可多肽序列可与SEQ ID NO：26编码的参考序列同一，也就是说100％同一，或其与参考序列比较可包括至多某些整数个的氨基酸改变，致使同一性％小于100％。所述改变选自至少一个核苷酸缺失、取代(包括保守和非保守取代)或插入，其中所述改变可发生在参考多肽序列的氨基末端或羧基末端位置，或这些末端位置之间的任何位置，其各自散布在参考序列的氨基酸之中或在参考序列内的一个或多个邻接基团中。通过让SEQ ID NO：26编码的多肽序列中氨基酸总数乘以各自同一性百分比数值(除以100)，然后从所述SEQ ID NO：26编码的多肽序列中氨基酸总数减去该乘积，求出对应于既定同一性％的氨基酸改变数目，或：
na≤xa-(xa·y)，
其中na为氨基酸改变数目，xa为SEQ ID NO：26所编码的多肽序列中氨基酸的总数，y为例如：对于70％为0.70、对于80％为0.80、对于85％为0.85等，其中在从xa减去xa与y的任何非整数乘积之前将其四舍五入成最接近的整数。
实施例
以下方法在本文所述实施例中使用。
方法1
通过ELISA测定与大肠杆菌表达的重组人IL-13的结合
在直接结合ELISA中评估mAbdAb分子对大肠杆菌表达的重组人IL-13的结合。简言之，将5μg/ml大肠杆菌表达的重组人IL-13(由GSK制备并纯化)包被到96孔ELISA板。在室温将各孔封闭1小时，然后对所述板滴定出(titrate out)mAbdAb构建体(通常从3倍稀释液中的大约100nM到大约0.01nM)。用抗-人κ轻链过氧化物酶缀合抗体(货号A7164，Sigma-Aldrich)的适当稀释液或抗-人IgG γ链特异性过氧化物酶缀合检测抗体(货号A6029，Sigma-Aldrich)的适当稀释液检测结合。
方法2
通过ELISA测定与大肠杆菌表达的重组人IL-4的结合
在直接结合ELISA中评估mAbdAb构建体对大肠杆菌表达的重组人IL-4的结合。简言之，将5μg/ml大肠杆菌表达的重组人IL-4(由GSK制备并纯化)包被到96孔ELISA板。在室温将各孔封闭1小时，然后对所述板滴定出mAbdAb构建体(通常从3倍稀释液中的大约100nM到大约0.01nM)。用山羊抗-人κ轻链过氧化物酶缀合抗体(货号A7164，Sigma-Aldrich)的适当稀释液或抗-人IgG γ链特异性过氧化物酶缀合检测抗体(货号A6029，Sigma-Aldrich)的适当稀释液检测结合。
方法3
通过ELISA检测与大肠杆菌表达的重组人IL-18的结合
在直接结合ELISA中评估mAbdAb构建体对大肠杆菌表达的重组人IL-18的结合。简言之，将5μg/ml大肠杆菌表达的重组人IL-18(由GSK制备并纯化)包被到96孔ELISA板。在室温将各孔封闭1小时，然后对所述板滴定出mAbdAb构建体(通常从3倍稀释液中的大约100nM到大约0.01nM)。用抗-人κ轻链过氧化物酶缀合抗体(货号A7164，Sigma-Aldrich)的2000倍稀释液或抗-人IgG γ链特异性过氧化物酶缀合检测抗体(货号A6029，Sigma-Aldrich)的2000倍稀释液检测结合。
方法4
对结合大肠杆菌表达的重组人IL-13的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb构建体对于大肠杆菌表达的重组人IL-13的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb构建体捕获到该表面上，以限定浓度使人IL-13(由GSK制备并纯化)通过(pass over)。用温和的酸洗脱条件(例如100mM磷酸)使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-13结合事件的能力。用与再生蛋白A表面相似的条件或通过用3M MgCl2使抗-人IgG表面再生。在BiacoreTM 3000和/或T100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃或37℃实施BiacoreTM运行。
方法5
对结合大肠杆菌表达的重组人IL-4的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb构建体对于大肠杆菌表达的重组人IL-4的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb构建体捕获到该表面，以限定浓度使人IL-4(由GSK制备并纯化)通过。用温和的酸洗脱条件(例如100mM磷酸)使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-4结合事件的能力。用与再生蛋白A表面相似的条件或通过用3M MgCl2使抗-人IgG表面再生。在BiacoreTM 3000和/或T100和/或A100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃或37℃实施BiacoreTM运行。
方法6
对结合大肠杆菌表达的重组人IL-18的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb构建体对于大肠杆菌表达的重组人IL-18的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb构建体捕获到该表面，以限定浓度使人IL-18(由GSK制备并纯化)通过。用温和的酸洗脱条件(例如100mM磷酸)使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-18结合事件的能力。用与再生蛋白A表面相似的条件或通过用3M MgCl2使抗-人IgG表面再生。在BiacoreTM 3000和/或T100和/或A100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃实施BiacoreTM运行。
方法7
对IL-13、IL-4或IL-18的mAbdAb双特异性抗体或三特异性抗体的 化学计量评估(用Biacore TM )
通过伯胺偶联将抗-人IgG固定到CM5生物传感器芯片上。在使单一浓度的IL-13、IL-4或IL-18细胞因子通过后，将mAbdAb构建体捕获到该表面上，该浓度足以使结合表面饱和，所观察到的结合信号达到满R-max。然后用给定公式计算化学计量：
化学计量＝Rmax*Mw(配体)/Mw(分析物)*R(被固定或捕获的配体)
当计算不止一种在同一时间结合的分析物的化学计量时，使不同的细胞因子以饱和细胞因子浓度序贯通过，如上计算化学计量。本工作在Biacore 3000上于25℃下用HBS-EP运行缓冲液进行。
方法8
在TF-1细胞增殖生物测定中大肠杆菌表达的重组人IL-13的中和
TF-1细胞因响应包括人IL-13在内的许多不同的细胞因子而增殖。因此，可将这些细胞对IL-13的增殖性响应用于测量IL-13的生物活性，并随后开发出测定mAbdAb构建体对IL-13的中和效能(抑制IL-13生物活性)的测定法。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔以一式三份进行。让大约14ng/ml大肠杆菌表达的重组人IL-13与mAbdAb构建体的各种稀释液(通常从以3倍稀释滴定的200nM到0.02nM)在50μl总体积中于37℃预孵育1小时。然后将这些样品加到无菌96孔组织培养板的50μl的TF-1细胞(以每毫升2x105个细胞的浓度)中。因此，最后100μl测定体积含有各种稀释度的mAbdAb构建体(以从以3倍稀释滴定的100nM到0.01nM的终浓度)、大肠杆菌表达的重组人IL-13(以7ng/ml的终浓度)和TF-1细胞(以每毫升1x105个细胞的终浓度)。让测定板在37℃增湿CO2培养箱中孵育大约3天。然后用来自Promega的‘CellTitreNon-Radioactive Cell ProliferationAssay’(货号G4100)如制造商说明书所述测定细胞增殖的量。在板读数器中于570nm处读取96-孔板的样品的吸光度。
将mAbdAb构建体中和大肠杆菌表达的重组人IL-13的生物活性的能力，表示为中和限定量的人IL-13(7ng/ml)的生物活性到50％所需的mAbdAb构建体浓度(＝ND50)。所需mAbdAb构建体的浓度越低，中和能力的功效越强。手动或通过用微软excel固有的Robosage软件包计算本文提供的ND50数据.
方法9
在TF-1细胞增殖生物测定中大肠杆菌表达的重组人IL-4的中和
TF-1细胞因响应包括人IL-4在内的许多不同的细胞因子而增殖。因此，可将这些细胞对IL-4的增殖性响应用于测量IL-4的生物活性，并随后开发出测定mAbdAb构建体对IL-4的中和效价(抑制IL-4生物活性)的测定法。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔以一式三份进行。让大约2.2ng/ml大肠杆菌表达的重组人IL-4与mAbdAb构建体的各种稀释液(通常从以3倍稀释滴定的200nM到0.02nM)在50μl总体积中于37℃预孵育1小时。然后将这些样品加到于无菌96孔组织培养板的50μl的TF-1细胞(以每毫升2x105个细胞的浓度)中。因此，最后100μl测定体积含有各种稀释度的mAbdAb构建体(以从以3倍稀释滴定的100nM到0.01nM的终浓度)、大肠杆菌表达的重组人IL-4(以1.1ng/ml的终浓度)和TF-1细胞(以每毫升1x105个细胞的终浓度)。让测定板在37℃增湿CO2培养箱中孵育大约3天。然后用来自Promega的‘CellTitre
Figure BPA00001189593300711
Non-Radioactive CellProliferation Assay’(货号G4100)如制造商说明书所述测定细胞增殖的量。在板读数器中于570nm处读取96-孔板的样品的吸光度。
将mAbdAb构建体中和大肠杆菌表达的重组人IL-4的生物活性的能力，表示为中和限定量的人IL-4(1.1ng/ml)的生物活性到50％所需的mAbdAb构建体浓度(＝ND50)。所需mAbdAb构建体的浓度越低，中和能力的功效越强。手动或通过用微软excel固有的Robosage软件包计算本文提供的ND50数据.
方法10
在TF-1细胞增殖生物测定中大肠杆菌表达的重组人IL-13和大肠杆 菌表达的重组人IL-4的双重中和
TF-1细胞因响应包括人IL-13和人IL-4在内的许多不同的细胞因子而增殖。因此，可将这些细胞对IL-13及IL-4的增殖性响应用于同时测量IL-13及IL-4的生物活性，并随后开发出测定mAbdAb构建体对IL-13及IL-4双重中和效价(IL-13及IL-4生物活性的双重抑制)的测定法。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔以一式三份进行。让大约14ng/ml大肠杆菌表达的重组人IL-13和大约2.2ng/ml大肠杆菌表达的重组人IL-4与mAbdAb构建体的各种稀释液(通常从以3倍稀释滴定的200nM到0.02nM)在50μl总体积中于37℃预孵育1小时。然后将这些样品加到无菌96孔组织培养板的50μl的TF-1细胞(以每毫升2x105个细胞的浓度)中。因此，最后100μl测定体积含有各种稀释度的mAbdAb构建体(以从以3倍稀释滴定的100nM到0.01nM的终浓度)、大肠杆菌表达的重组人IL-13(以7ng/ml的终浓度)、大肠杆菌表达的重组人IL-4(以1.1ng/ml的终浓度)和TF-1细胞(以每毫升1x105个细胞的终浓度)。让测定板在37℃增湿CO2培养箱中孵育大约3天。然后用来自Promega的‘CellTitre
Figure BPA00001189593300721
Non-Radioactive Cell Proliferation Assay’(货号G4100)如制造商说明书所述测定细胞增殖的量。在板读数器中于570nm处读取96-孔板的样品的吸光度。
方法11
对结合Sf21-表达的重组人IL-5的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb分子对于Sf21-表达的重组人IL-5的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb分子捕获到该表面上，以限定浓度使人IL-5(由GSK制备并纯化)通过。用温和的酸洗脱条件(例如100mM磷酸)使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-5结合事件的能力。用与再生蛋白A表面相似的条件或通过用3M MgCl2使抗-人IgG表面再生。在BiacoreTM 3000、T100和A100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃实施BiacoreTM运行。
方法12
VEGF受体结合测定
本测定测量VEGF165与VEGF R2(VEGF受体)的结合及测试分子封阻该相互作用的能力。用VEGF受体(R&D Systems，货号：357-KD-050)(在0.2M碳酸钠/碳酸氢钠pH9.4中0.5μg/ml终浓度)过夜包被ELISA板，洗涤并用2％BSA/PBS封闭。在将VEGF(R&D Systems，货号：293-VE-050)和测试分子(在含0.1％BSA的0.05％Tween 20TMPBS中稀释)预孵育1小时，随后加入到板(3ng/ml VEGF终浓度)中。用生物素化抗-VEGF抗体(0.5μg/ml终浓度)(R&D Systems，货号：BAF293)和过氧化物酶缀合抗-生物素第二抗体(1∶5000稀释)(Stratech，货号：200-032-096)检测VEGF与VEGF受体的结合，并在用等体积1MHCl终止反应后用比色底物(Sure Blue TMB过氧化物酶底物，KPL)在OD450处显示。
方法13
EGFR激酶测定
通过其与EGF的相互作用激活在A431细胞表面表达的EGFR，导致受体的酪氨酸激酶磷酸化。测量EGFR酪氨酸激酶磷酸化的减少以测定测试分子的效价。让A431细胞过夜附着到96孔组织培养板，然后加入测试分子并放置1小时，然后与EGF(300ng/ml)(R&D Systems货号236-EG)孵育10分钟。使细胞裂解，并将裂解的制备物转移到用抗-EGFR抗体(1ug/ml)(R&D Systems，货号AF231)包被的ELISA板。捕获在裂解细胞液中存在的磷酸化和非磷酸化的两种EGFR。洗掉未结合的物质后，用HRP缀合的抗-磷酸酪氨酸抗体(1∶2000稀释)(UpstateBiotechnology，货号16-105)特异性检测磷酸化的EGFR。用显色底物使结合可视化。
方法14
MRC-5/TNF测定
用人肺成纤维细胞MRC-5细胞测定测试分子防止人TNF-a结合人TNFR1及中和IL-8分泌的能力。让系列稀释的测试样品与TNF-a(500pg/ml)(Peprotech)孵育1小时。然后用MRC-5细胞悬浮液(ATCC，货号CCL-171)(5x103细胞/孔)对其进行1∶2稀释。过夜孵育后，将样品稀释10倍，用IL-8 ABI 8200细胞检测测定(FMAT)来测定IL-8的释放，其中用抗-IL-8(R&D Systems，货号208-IL)包被的聚苯乙烯珠粒、生物素化抗-IL-8(R&D Systems，货号BAF208)和链霉亲和素Alexanuor647(Molecular Probes，货号S32357)测定IL-8浓度。以647nm荧光发射来定位测定读数，用包括在该测定中的IL-8标准曲线内推(interpolate)未知IL-8浓度。
方法15
MRC-5/IL-1测定
用人肺成纤维细胞MRC-5细胞测定测试分子防止人IL-1a结合人IL1-R及中和IL-8分泌的能力。用胰蛋白酶处理MRC-5细胞(ATCC，货号CCL-171)，然后作为混悬液与测试样品孵育1小时。然后加入IL-1a(200pg/ml终浓度)(R&D Systems货号：200-LA)。过夜孵育后，用IL-8定量ELISA试剂盒(R&D Systems)与抗-IL-8包被的ELISA板、生物素化抗-IL-8和链霉亲和素-HRP来测定IL-8的释放。测定读数为450nm处的色度吸光度，用包括在该测定中的IL-8标准曲线内推未知IL-8浓度。
方法16
在全血磷-STAT6生物测定中大肠杆菌表达的重组人IL-13或IL-4的 中和效价
可用大肠杆菌表达的重组人IL-4(rhIL-14)或IL-13(rhIL-13)离体刺激全血细胞，以表达磷-STAT6(pSTAT6)。本测定被开发为定量测量pSTAT6，并由此测定mAbdAb构建体的中和效价(抑制IL-4或IL-13的生物活性)。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔以一式三份进行。在无血清细胞培养基中制备12ng/ml的rhIL-13或rhIL-4，加31.2μL到96孔板的孔中。以6x的最终测定浓度制备mAbdAb构建体或同种型对照的9点稀释曲线，将31.2μL的各稀释液加到含有rhIL-4或rhIL-13的孔中。将125μL肝素化的人全血加到所有孔中，并在混合器上混合30秒。最终测定体积含有各个稀释度的mAbdAb构建体，连同终浓度为2ng/mL的rhIL-13或rhIL-4。让测定板在37℃、5％CO2中孵育60分钟。
然后通过加入62.5μL的4x裂解缓冲液裂解细胞。裂解缓冲液含有最终测定浓度的50mM Tris盐酸、300mM氯化钠、1％NP40、0.5％脱氧胆酸钠、50mM氟化钠、1mM原钒酸钠、1mM EDTA和蛋白酶抑制剂混合物。将板置于冰上30分钟，然后在-80℃冷冻直到用于pSTAT6测定。
用电致化学发光免疫测定(Meso-Scale-Discovery，MSD)实施全血样品的pSTAT6测量。简言之，用每孔150μL的5％MSD封闭剂A于室温在混合器上以750rpm对亲和素包被的96孔MSD板封闭1小时。用每孔150μL的MSD Tris洗涤缓冲液洗涤板3次。每孔加入25μL的捕获抗体(生物素化小鼠抗-人STAT6单克隆抗体)，让板在4℃孵育过夜。让捕获抗体在由50mM Tris、150mM氯化钠、0.2％BSA、0.5％Tween 20、1mM EDTA组成的测定缓冲液中稀释到4μg/mL。用MSDtris洗涤缓冲液洗涤板3次，然后用150μL的5％MSD封闭剂A于室温在混合器上对板封闭1小时。如前述洗涤板3次，然后每孔加入25μL全血裂解物或pSTAT6标定剂(calibrator)。让板于室温在混合器上孵育3小时。洗涤板3次，然后加入25μL兔抗人pSTAT6抗体(在测定缓冲液中以1∶800稀释)，然后于室温孵育1小时。进一步洗涤后，每孔加入25μL的1∶500稀释的MSD TAG山羊抗-兔IgG抗体，然后于室温在混合器上孵育1小时。在每孔加入150μL的2x MSD读出缓冲液T之前再次洗涤板。在MSD SECTOR成像器上立即读板。
将mAbdAb构建体中和rhIL-13或rhIL-4生物活性的能力表示为中和2ng/mL人IL-4或人IL-13到50％所需的mAbdAb构建体浓度(IC50)。所需mAbdAb构建体浓度越低，中和能力的功效就越强。
方法17
通过ELISA测定与大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13的结合
在直接结合ELISA中评估mAbdAb分子对大肠杆菌表达的重组猕猴(cynomolgus)IL-13的结合。简言之，将5μg/ml大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13(由GSK制备并纯化)包被到96孔ELISA板。在室温将各孔封闭1小时，然后对所述板滴定出mAbdAb分子(通常从3倍稀释液中的大约100nM到大约0.01nM)。用抗-人κ轻链过氧化物酶缀合抗体(货号A7164，Sigma-Aldrich)的适当稀释液或抗-人IgG γ链特异性过氧化物酶缀合检测抗体(货号A6029，Sigma-Aldrich)的适当稀释液检测结合。
方法18
未使用
方法19
通过ELISA检测人IL-4与人IL4受体α(IL4Rα)结合的抑制
除非另外指出，否则所有试剂在使用前于封闭液(tris缓冲的盐水和0.05％Tween20中的4％牛血清白蛋白)中稀释到所需浓度。用磷酸盐缓冲盐水中的5μg/ml重组人IL4Rα-Fc嵌合体(R&D Systems，货号604-4R)于4℃过夜包被ELISA板。所有随后的步骤都在室温进行。在加入业已与0.02μg/ml重组人IL-4(由GSK制备)预混合的50μl不同浓度的mAbdAb(或阳性对照mAb或dAb)之前，让板在封闭液中封闭2小时。在用洗涤缓冲液(Tris缓冲的盐水和0.05％Tween20)洗涤板4次之前让板孵育1小时。将50μl的0.5μg/ml生物素化抗-人IL-4(R&D Systems，货号BAF 204)溶液加入到每一孔，并孵育1小时。用洗涤缓冲液洗涤板4次，然后加入50μl/孔的1/2000稀释的Extravadin(Sigma，货号E2886)。1小时后，洗涤板4次，通过与OPD过氧化物酶底物(来自Sigma)孵育来检测色度信号，用终止溶液(3M H2SO4酸)终止该反应，通过在板读数器上于490nm处获得吸光度数据。在GraphPad Prism上对平均吸光度和标准差作图，用Cambridge Soft BioAssay计算IC50值。
方法20
在TF-1细胞增殖生物测定中大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13的中和
TF-1细胞因响应包括猕猴IL-13在内的许多不同的细胞因子而增殖。因此，可将这些细胞对IL-13的增殖性响应用于测量IL-13的生物活性，并随后开发出测定mAbdAb构建体对IL-13的中和效价(抑制IL-13生物活性)的测定法。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔一式三份进行。让大约14ng/ml大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13与mAbdAb构建体的各种稀释液(通常从以3倍稀释滴定的1000nM或200nM到1nM或0.02nM)在50μl总体积中于37℃预孵育1小时。然后将这些样品加到无菌96孔组织培养板的50μl的TF-1细胞(以每毫升2x105个细胞的浓度)中。因此，最后100μl测定体积含有各种稀释度的mAbdAb构建体(以从以3倍稀释滴定的500nM或100nM到0.5nM或0.01nM的终浓度)、大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13(以7ng/ml的终浓度)和TF-1细胞(以每毫升1x105个细胞的终浓度)。让测定板在37℃增湿CO2培养箱中孵育大约3天。然后用来自Promega的‘CellTitreNon-Radioactive Cell Proliferation Assay’(货号G4100)如制造商说明书所述测定细胞增殖的量。在板读数器中于570nm处读取96-孔板的样品的吸光度。
将mAbdAb构建体中和大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13的生物活性的能力，表示为中和限定量的猕猴IL-13(7ng/ml)的生物活性到50％所需的mAbdAb构建体浓度(＝ND50)。所需mAbdAb构建体的浓度越低，中和能力的功效越强。手动或通过用微软excel固有的Robosage软件包计算本文提供的ND50数据.
方法21
在TF-1细胞增殖生物测定中大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4的中和
TF-1细胞因响应包括猕猴IL-4在内的许多不同的细胞因子而增殖。因此，可将这些细胞对IL-4的增殖性响应用于测量IL-4的生物活性，并随后开发出测定mAbdAb构建体对IL-4的中和效价(抑制IL-4生物活性)的测定。
在无菌条件下于无菌96孔组织培养板中实施测定，所有测试孔以一式三份进行。让大约2.2ng/ml大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4与mAbdAb构建体的各种稀释液(通常从以3倍稀释滴定的200nM到0.02nM)在50μl总体积中于37℃预孵育1小时。然后将这些样品加到无菌96孔组织培养板的50μl的TF-1细胞(以每毫升2x105个细胞的浓度)中。因此，最后100μl测定体积含有各种稀释度的mAbdAb构建体(以从以3倍稀释滴定的100nM到0.01nM的终浓度)、大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4(以1.1ng/ml的终浓度)和TF-1细胞(以每毫升1x105个细胞的终浓度)。让测定板在37℃增湿CO2培养箱中孵育大约3天。然后用来自Promega的‘CellTitre
Figure BPA00001189593300772
Non-Radioactive CellProliferation Assay’(货号G4100)如制造商说明书所述测定细胞增殖的量。在板读数器中于570nm处读取96-孔板中的样品的吸光度。
将mAbdAb构建体中和大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4的生物活性的能力，表示为中和限定量的猕猴IL-4(1.1ng/ml)的生物活性到50％所需的mAbdAb构建体浓度(＝ND50)。所需mAbdAb构建体的浓度越低，中和能力的功效越强。手动或通过用微软excel固有的Robosage软件包计算本文提供的ND50数据。
方法22
通过ELISA测定人IL-13与人IL13受体α2(IL13Rα)结合的抑制
除非另外指出，否则所有试剂在使用前于封闭液(tris缓冲的盐水和0.05％Tween20中的1％牛血清白蛋白)中稀释到所需浓度。用包被缓冲液(0.05M碳酸氢盐pH9.6，Sigma C-3041)溶液中的5μg/ml在Sf21细胞中表达的重组人IL13Rα-Fc嵌合体(R&D Systems，货号614-1R)于4℃过夜包被ELISA板。在加入业已于37℃与30ng/ml重组人IL-13(由GSK制备)预孵育30分钟的不同浓度的mAbdAb(或阳性对照mAb或dAb)之前，让板于室温在封闭液(TBST中的1％BSA)中封闭1小时。在用洗涤缓冲液(Tris缓冲的盐水和0.05％Tween20)洗涤板3次之前，让板于室温孵育1小时。将50μl的0.5μg/ml生物素化抗-人IL-13(R&DSystems，货号BAF 213)溶液加入到每一孔，并在室温孵育1小时。用洗涤缓冲液洗涤板3次，然后加入合适稀释度的Extravadin(Sigma，货号E2886)。1小时后洗涤板，通过与OPD过氧化物酶底物(来自Sigma)孵育来检测色度信号，用终止溶液(3M酸)终止该反应，通过在板读数器上于490nm处获得吸光度数据。在Excel表格上对平均吸光度和标准差作图，用来自微软Excel的Robosage软件计算IC50值。
方法23
对结合大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb(或mAb)分子对于大肠杆菌表达的重组猕猴IL-13的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb(或mAb)分子捕获到该表面上，以限定浓度使猕猴IL-13(由GSK制备并纯化)通过。用温和的酸洗脱条件使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-13结合事件的能力。在BiacoreTM 3000和/或T100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃或37℃实施BiacoreTM运行。
方法24
对结合大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4的Biacore TM 结合亲和力评估
由BiacoreTM分析评估了mAbdAb(或mAb)分子对于大肠杆菌表达的重组猕猴IL-4的结合亲和力。用蛋白A或抗-人IgG捕获抗体进行分析。简言之，按照制造商提议通过伯胺偶联将蛋白A或抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb(或mAb)分子捕获到该表面上，以限定浓度使猕猴IL-4(由GSK制备并纯化)通过。用温和的酸洗脱条件(例如100mM磷酸)使该表面再生为蛋白A表面，这不会显著影响捕获抗体对随后的IL-4结合事件的能力。用与再生蛋白A表面相似的条件或通过用3M MgCl2使抗-人IgG表面再生。在BiacoreTM 3000和/或T100和/或A100设备上实施该工作，用设备中的评估软件分析数据，并拟合为1∶1的结合模型。在25℃或37℃实施BiacoreTM运行。
方法25
基于IL-13细胞的中和测定
在IL-13细胞测定中用工程改造的报告细胞系HEK Blue-STAT6测定对IL13具有特异性的mAbdAb的效价。
转录因子STAT6主要由两种具有重叠生物学功能的细胞因子IL-4和IL-13激活，这两种细胞因子结合由IL-4Ra和IL-13Ra1组成的受体复合体。配体结合后，受体复合体激活受体相关的Janus激酶(JAK1和Tyk2)，导致STAT6募集及其磷酸化。活化的STAT6形成转移到细胞核的同型二聚体，诱导基因在响应型启动子控制下转录。将HEK Blue-STAT6细胞系工程改造为在所述启动子调控下表达分泌性胎盘碱性磷酸酶(Secreted Embryonic Alkaline Phosphatase，SEAP)。
将细胞接种到96孔板，并与预先平衡的人IL-13及测试分子孵育20-24小时。在该孵育期后，然后用Quanti-blue系统(Invivogen)测量因IL-13刺激而由细胞产生的SEAP量。
实施例1
1.产生双重靶向的mAbdAb
用以下方法构建表1-4中所述的双重靶向的mAbdAb。通过将编码结构域抗体的序列移植到编码单克隆抗体重链或轻链(或二者)的序列上来产生表达构建体，致使表达时dAb被连接到重链或轻链的c-末端。对于某些构建体，将接头序列用于连接结构域抗体与重链CH3或轻链Cκ。在其它构建体中，将结构域抗体不用接头序列直接连接到重链或轻链。这些mAbdAb构建体的总示意图示于图8(mAb重链用灰色画出；mAb轻链用白色画出；dAb用黑色画出)中。
由图8中所述的mAbdAb 1型实例为PascoH-G4S-474。由图8中所述的mAbdAb 2型实例为PascoL-G4S-474。由图8中所述的mAbdAb3型实例为PascoHL-G4S-474。mAbdAb 1型和2型为四价构建体，mAbdAb 3型为六价构建体。
以下显示描述构建mAbdAb重链(上图)或mAbdAb轻链(下图)的示意图。除非另外指出，否则将这些限制性位点用于构建表1-4所述的mAbdAb。
Figure BPA00001189593300811
注意对于重链，术语“VH”为单克隆抗体可变重链序列；“CH1、CH2和CH3”为人IgG1重链恒定区序列；“接头”是所用的特定接头区的序列；“dAb”为结构域抗体序列。对于轻链，术语“VL”为单克隆抗体可变轻链序列；“Cκ”为人轻链恒定区序列；“接头”是所用的特定接头区的序列；“dAb”为结构域抗体序列。
某些DNA表达构建体通过寡核苷酸构件(build)从头制备。其它DNA表达构建体通过限制性克隆或位点定向诱变从现存的构建体(其根据上文所述来制备)获得。
用标准分子生物技术将这些构建体(mAbdAb重链或轻链)克隆到哺乳动物表达载体(Rln、Rld或pTT载体系列)。将哺乳动物氨基酸信号序列(如SEQ ID NO：64所示)用于构建这些构建体。
为了表达其中dAb连接到单克隆抗体重链的C-末端的mAbdAb，，让合适的重链mAbdAb表达载体与对于该单克隆抗体的合适轻链表达载体配对。为了表达其中dAb连接到单克隆抗体轻链的C-末端的mAbdAb，让合适的轻链mAbdAb表达载体与对于该单克隆抗体的合适重链表达载体配对。
为了表达其中dAb连接到单克隆抗体重链的C-末端并且其中dAb连接到单克隆抗体轻链的C-末端的mAbdAb，让合适的重链mAbdAb表达载体与合适的轻链mAbdAb表达载体配对。
1.1.命名及所用缩写
单克隆抗体(mAb)
单克隆抗体(mAbs)
结构域抗体(dAb)
结构域抗体(dAbs)
重链(H链)
轻链(L链)
重链可变结构域(VH)
轻链可变结构域(VL)
人IgG1恒定重链区1(CH1)
人IgG1恒定重链区2(CH2)
人IgG1恒定重链区3(CH3)
人κ轻链恒定区(Cκ)
1.2.抗-IL13mAb-抗-IL4dAb
如上所述构建双特异性抗-IL13mAb-抗-IL4dAb。将多种不同的接头用于将抗-IL4结构域抗体连接到单克隆抗体。某些构建体没有接头。
注意BamHI克隆位点(其编码氨基酸残基G和S)用于将接头和dAb克隆到mAb重链的CH3或克隆到mAb轻链的Cκ。因此，除既定的接头序列外，另外的G和S氨基酸残基也存在于接头序列与重链及轻链表达构建体二者的结构域抗体之间，或于CH3与某些但不是所有重链表达构建体中的接头序列之间。然而，当将G4S接头置于mAbdAb形式的mAb和dAb之间时，已经存在BamHI克隆位点(由于G和S氨基酸残基为G4S接头序列内固有)，因此，在CH3或Cκ与用该接头的构建体内的结构域抗体之间不存在另外的G和S氨基酸残基。当在mAbdAb形式的mAb和dAb之间不使用接头序列时，BamHI克隆位点(并因此G和S氨基酸残基)仍存在于CH3或Cκ与结构域抗体之间。关于mAbdAb重链和轻链的氨基酸序列的详细资料在表1阐述。
以下若干实施例使用IL-4mAb为对照抗体。在这些实施例中所用的对照IL-4mAb将为具有SEQ ID NO：14重链序列和SEQ ID NO：15轻链序列的抗体，或将为具有SEQ ID NO：166重链序列和SEQ ID NO：15轻链序列的抗体。这两种IL-4mAb共享相同的CDR，预期它们以同样的方式结合，因此这两种抗体在以下实施例中都被称为帕考珠单抗“帕考珠单抗(Pascolizumab)”或“IL-4mAb”。
以下若干实施例使用IL-5mAb为对照抗体。在这些实施例中所用的对照IL-5mAb应为具有SEQ ID NO：65重链序列和SEQ ID NO：66轻链序列的抗体，或为具有SEQ ID NO：191重链序列和SEQ ID NO：66轻链序列的抗体。这两种IL-5mAb共享相同的CDR，预期它们以同样的方式结合，因此这两种抗体在以下实施例中都被称为“美泊利单抗(Mepolizumab)”或“IL-5mAb”。
在CHOK1细胞上清液中瞬时表达表1中所述的mAbdAb。在定量测定mAbdAb后，分析这些含有mAbdAb的上清液在IL-13和IL-4结合ELISA中的活性。
表1
Figure BPA00001189593300841
Figure BPA00001189593300851
Figure BPA00001189593300861
在CHOK1或CHOE1a细胞上清液中的一种或两者中表达表2所述的mAbdAb，经纯化并在多种IL-13和IL-4活性测定法中分析。
表2
Figure BPA00001189593300872
1.3.抗-IL4mAb-抗-IL13dAb
如上所述构建双特异性抗-IL4mAb-抗-IL13dAb。将多种不同的接头用于连接抗-IL13结构域抗体与单克隆抗体。某些构建体没有接头。
注意BamHI克隆位点(其编码氨基酸残基G和S)用于将接头和dAb克隆到mAb重链的CH3或克隆到mAb轻链的Cκ。因此，除几既定接头序列外，另外的G和S氨基酸残基也存在于接头序列与重链及轻链表达构建体二者的结构域抗体之间，或于CH3与某些但不是所有重链表达构建体的接头序列之间。然而，当将G4S接头置于mAbdAb形式的mAb和dAb之间时，已经存在BamHI克隆位点(由于G和S氨基酸残基为G4S接头序列内固有)，因此，在CH3或Cκ与用该接头的构建体内的结构域抗体之间不存在另外的G和S氨基酸残基。当在mAbdAb形式的mAb和dAb之间不使用接头序列时，BamHI克隆位点(并因此G和S氨基酸残基)仍存在于CH3或Cκ与结构域抗体之间。关于mAbdAb重链和轻链的氨基酸序列的详细资料在表3中阐述。
在CHOK1细胞上清液中瞬时表达表3中所述的mAbdAb。在定量测定mAbdAb后，分析这些含有mAbdAb的上清液在IL-13和IL-4结合ELISA中的活性。
表3
Figure BPA00001189593300881
Figure BPA00001189593300891
在CHOK1、CHOE1a或HEK293-6E细胞中的一种或多种中表达表4中所述的mAbdAb。
表4
Figure BPA00001189593300901
1.4.单克隆抗体、结构域抗体和接头的序列ID号
用于产生mAbdAb的单克隆抗体(mAb)、结构域抗体(dAb)和接头的序列ID号示于下表5中。
表5
Figure BPA00001189593300902
Figure BPA00001189593300911
成熟人IL-13氨基酸序列(无信号序列)示于SEQ ID NO：63中。
成熟人IL-4氨基酸序列(无信号序列)示于SEQ ID NO：62中。
1.5.mAbdAb的表达和纯化
将实施例1所述的mAbdAb表达构建体转染到CHOK1细胞、CHOE1a细胞或HEK293-6E细胞中的一种或多种细胞中，小规模(大约3ml)或中等规模(大约50ml-100ml)或大规模(大约1升)表达，然后用固定化的蛋白A柱纯化某些构建体，通过在280nm处读取吸光度来定量测定。
1.6.纯化的mAbdAb的大小排阻色谱分析
通过大小排阻色谱(SEC)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分析了多种mAbdAb。这些分子中的某些(PascoH-G4S-474，PascoL-G4S-474，PascoH-474和PascoHL-G4S-474.)的代表性数据分别示于图9、10、11和12。显示对这些除掉“GS”基序的分子的SEC和SDS Page分析的代表性数据示于图90-98中。
在某些情况下SEC用于进一步纯化这些分子以除去凝聚物。
实施例2
通过ELISA测定mAbdAb与人IL-13和人IL-4的结合
2.1.抗-IL13mAb-抗-IL4dAb与IL-13和IL-4的结合
在直接结合ELISA(如方法1所述)中测试mAbdAb上清液对人IL-13的结合。这些数据示于图13中。
图13显示所有抗-IL13mAb-抗-IL4dAb结合IL-13。这些mAbdAb的结合活性亦与单独的纯化的抗-人IL13mAb接近相等(在2倍-3倍内)，在本测定中包括所述抗-人IL13mAb作为IL-13结合的阳性对照，并为了直接与mAbdAb比较。包括纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。
在直接结合ELISA(如方法2所述)中还测试这些分子与人IL-4的结合。这些数据示于图14中。
图14显示所有抗-IL13mAb-抗-IL4dAb结合IL-4，但未观察到在IL-4结合活性中的某种程度变化。当mAbdAb构建体中不存在抗-IL4dAb时，未观察到与IL-4的结合。也包括纯化的抗-人IL13mAb作为IL-4结合的阴性对照。注意在本测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb，因为所述dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是在本测定中用纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。
还可在直接结合ELISA(如方法1所述)中测试纯化的mAbdAb样品对人IL-13的结合。这些数据示于图15中。
这些纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb结合IL-13。这些mAbdAb对IL-13的结合活性与单独的纯化的抗-人IL13mAb相等。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-13结合的阴性对照。
在直接结合ELISA(如方法2所述)中还测试这些纯化的mAbdAb与人IL-4的结合。这些数据示于图16中。
所有这些抗-IL13mAb-抗-IL4dAb结合IL-4。注意在本测定中不检测单独的抗-IL-4dAb，因为所述dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该测定中使用纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-4结合的阴性对照。
2.2.抗-IL4mAb-抗-IL13dAb与IL-13和IL-4的结合
在直接结合ELISA(如方法2所述)中测试mAbdAb上清液对人IL-4的结合。这些数据示于图17(某些样品一式二份制备和测试，并标注为样品1和样品2)。
图17显示所有这些mAbdAb结合了IL-4。在本测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)，但不产生结合曲线，因为当稀释该mAb用于测定时出错(帕考珠单抗业已成功用于所有其它随后的IL-4结合ELISA)。包括纯化的抗-人IL13mAb作为IL-4结合的阴性对照。
在直接结合ELISA(如方法1所述)中还测试同一mAbdAb上清液对人IL-13的结合。这些数据示于图18(某些样品一式二份制备和测试，并标注为样品1和样品2)。
图18显示所有这些抗-IL4mAb-抗-IL13dAb结合IL-13。在本测定中包括单独的纯化的抗-人IL13mAb，但不产生结合曲线，因为当稀释该mAb用于测定时出错(纯化的抗-人IL13mAb业已成功用于所有其它随后的IL-13结合ELISA)。包括纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。注意在该测定中不检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测。
在直接结合ELISA(如方法2所述)中还检测纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、“PascoH-G4S-474”、“PascoH-474”、“PascoL-G4S-474”和“PascoHL-G4S-474”对人IL-4的结合。这些数据示于图19中。
这些纯化的抗-IL4mAb-抗-IL 13dAb结合IL-4。这些mAbdAb的结合活性与单独的纯化的抗-IL4mAb(帕考珠单抗)接近相等(在2倍内)。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-4结合的阴性对照。
在直接结合ELISA(如方法1所述)中还检测这些相同的纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474对人IL-13的结合。这些数据示于图20A。
这些纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb结合IL-13。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-13结合的阴性对照。注意在本测定中没有检测单独的抗-IL-13 dAb(DOM10-53-474)，因为所述dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在本测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
在如方法17所述的直接结合ELISA中，还检测纯化的PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-ELQLE-474对猕猴IL-13的结合(在本测定中也包括去除GS的PascoH-474和去除GS的PascoH-TVAAPS-474，这些分子的构建如实施例18所述)。显示代表性数据的图出示于图20B中。
所有纯化的PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-ELQLE-474都结合猕猴IL-13。在本测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。包括纯化的抗-人IL13mAb作为猕猴IL-13结合的阳性对照。注意在本测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在本测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
实施例3
通过表面等离子共振(BIAcore TM )检测mAbdAb与人IL-13和人IL-4 的结合
3.1.通过BIAcoreTM检测抗-IL13mAb-抗-IL4dAb与IL-13和IL-4的结合
用BIAcoreTM于25℃(如方法4所述)检测mAbdAb(在CHO细胞上清液中，如1.5章节所述制备)对人IL-13的结合。对于该数据集，评估了两条IL-13浓度曲线(100nM和1nM)，关于每一mAbdAb构建体的相对响应捕获水平达到1000至1300(大约)之间。由于使用限定浓度的IL-13，产生的数据更适用于为构建体排等级而不是准确的动力学测量。这些数据示于表6中。
表6
  抗体   结合亲和力KD(nM)
  586H-25   0.39
  586H-G4S-25   0.41
  586H-TVAAPS-25   0.5
  586H-ASTKG-25   0.54
  586H-EPKSC-25   0.55
  586H-ELQLE-25   0.42
  586H-147   0.46
  586H-G4S-147   0.45
  586H-TVAAPS-147   0.56
  586H-ASTKG-147   0.44
  586H-EPKSC-147   0.46
  586H-ELQLE-147   0.51
  586H-154   0.46
  586H-G4S-154   0.37
  586H-TVAAPS-154   0.56
  586H-ASTKG-154   0.44
  586H-EPKSC-154   0.42
  586H-ELQLE-154   0.44
  586H-210   0.44
  586H-G4S-210   0.42
  586H-TVAAPS-210   0.4
  586H-ASTKG-210   0.4
  586H-EPKSC-210   0.43
  586H-ELQLE-210   0.43
  586H   0.44
  586H-ASTKG   0.32
  586H-ELQLE   0.47
  586H-EPKSC   0.45
  抗-人IL-13mAb(纯化的)   0.38
  帕考珠单抗(纯化的)   未结合
所有这些抗-IL13mAb-抗-IL4dAb以相似的结合亲和力结合IL-13，所述结合亲和力与单独的纯化的抗-人IL13mAb结合亲和力接近相等。这些数据提示将接头和/或抗-IL4dAb加到抗-IL13mAb重链，不影响这些mAbdAb构建体内mAb组分的IL-13结合亲和力。
也用BIAcoreTM于25℃(如方法5所述)检测这些mAbdAb对人IL-4的结合。这些数据示于表7中。对于该数据集，评估了四个IL-4浓度曲线(512、128、32和8nM)，在表中指出了关于所检测的每一mAbdAb的大概相对响应捕获水平。注意在本测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb，因为不能将所述dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在本测定中使用抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。
表7
Figure BPA00001189593300961
Figure BPA00001189593300971
Figure BPA00001189593300981
对上述某些数据集观察到预示(caveat)。对某些数据集(*)观察到次等曲线拟合，因此，应该谨慎处理在这些数据中已经测定的实际结合亲和力值。某些曲线观察到正解离(positive dissociation)(**)，因此，应该谨慎处理在这些数据中已经测定的实际结合亲和力值。另外，BIAcoreTM不能(即不够灵敏)测定所有含有DOM9-112-210 dAb的mAbdAb构建体的结合速率和解离速率，这是由于这些mAbdAb与IL-4的结合异常紧密。这些mAbdAb对IL-4的结合动力学的测定进一步受到所观察到的正解离作用的妨碍。这些数据示于图21中。
在另外的实验中获得相似数据。这些数据示于图22中。
这2个独立的数据集表明所有抗-IL13mAb-抗-IL4dAb结合IL-4，但结合亲和力根据用于连接抗-IL4dAb与抗-IL13mAb重链的接头而变化。在本实验中，发现接头的存在提高了mAbdAb形式中抗-IL4dAb组分(当位于重链时)对IL-4的结合亲和力。例如，具有TVAAPS或ELQLEESCAEAQDGELDG接头的分子似乎是更有效的结合物(binder)。当mAbdAb构建体中不存在抗-IL4dAb时，没有观察到结合IL-4。由于这些mAbdAb的DOM9-112-210组分结合得极为紧密并因此解离速率太小而不能用BIAcoreTM测定这一事实，测量586-接头-210mAbdAb对于IL-4的结合亲和力是不可能的。
也用BIAcoreTM在25℃(如方法4和5所述)检测纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb对人IL-13和人IL-4的结合。这些数据示于表8中。
表8
Figure BPA00001189593300991
所有586H-TVAAPS-25、586H-TVAAPS-154和586H-TVAAPS-210都以相似的结合亲和力结合IL-13，所述结合亲和力与单独的纯化的抗-人IL13mAb结合亲和力接近相等。所有586H-TVAAPS-25、586H-TVAAPS-154和586H-TVAAPS-210都结合IL-4。由于该mAbdAb的DOM9-112-210组分结合得极为紧密并因此解离速率太小而不能用BIAcoreTM测定这一事实，测量586-TVAAPS-210对于IL-4的结合亲和力是不可能的。注意在本测定形式中没有检测单独的抗-IL-4dAb(DOM9-155-25、DOM9-155-154和DOM9-112-210)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是在本测定中用抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。
3.2.通过BIAcoreTM测定抗-IL4mAb-抗-IL13dAb与IL-4和IL-13的结合
用BIAcoreTM于25℃(如方法5所述)检测mAbdAb(在CHO细胞上清液中，如1.5章节所述制备)对人IL-4的结合。这些数据示于表9(某些样品以一式二份制备并测试，其被标注为样品1和样品2)。对于该数据集，评估了四个IL-4浓度曲线(100nM、10nM、1nM和0.1nM)，表中指示关于所测的每一mAbdAb的大约的相对响应捕获水平。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-4结合的阴性对照。
表9
Figure BPA00001189593301001
测试的所有抗-IL4mAb-抗-IL13dAb都以相似结合亲和力结合IL-4，该结合亲和力与单独的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)的结合亲和力接近相等。PascoL-EPKSC-474以比帕考珠单抗小约2倍的效价结合IL-4。这些数据提示将接头和抗-IL13dAb加到帕考珠单抗的重链或轻链，并不明显影响mAbdAb构建体中mAb组分对IL-4的结合亲和力。
也用BIAcoreTM于25℃(如方法4所述)检测这些mAbdAb对人IL-13的结合。这些数据示于表10(某些样品以一式二份制备并测定，其被标注为样品1和样品2)。对于该数据集，评估了四个IL-13浓度曲线(128nM、32nM、8nM和2nM)，表中指示关于所测的每一mAbdAb的大约的相对响应捕获水平。
表10
Figure BPA00001189593301011
Figure BPA00001189593301021
在实验2中所测的构建体的结合亲和力数据也示于图23中。
所有的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb都结合IL-13。在大部分情况下，当将接头置于抗-IL4mAb重链中时，接头的存在似乎不提高抗-IL13dAb组分对IL-13的结合亲和力。然而，当将接头置于抗-IL4mAb轻链上时，接头的存在似乎不提高抗-IL13dAb组分对IL-13的结合亲和力。在本实验中，PascoL-TVAAPS-474似乎具有最强的IL-13结合亲和力。
注意在本测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在本测定中用纯化的抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。在本测定中还包括同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为IL-13结合的阴性对照。
也用BIAcoreTM于25℃(如方法4和5所述)检测纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb对人IL-4和人IL-13的结合。这些数据示于表11中。
表11
在该实验中，所有PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474都以相似的结合亲和力结合IL-4，该结合亲和力与单独的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)的结合亲和力接近相等。它们全部也结合IL-13。注意该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为不能将dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在本测定中将抗-人IL13mAb用作阳性对照以证明IL-13结合。
3.3.用BIAcoreTM的IL-13和IL-4与抗-IL4mAb-抗-IL13dAb结合的化学计量
用BIAcoreTM(如方法7所述)评估纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb结合IL-13和IL-4的化学计量。这些数据示于表12中。
表12
Figure BPA00001189593301031
PascoH-G4S-474、PascoH-474和PascoL-G4S-474能够结合几乎两个IL-13分子和两个IL-4分子。PascoHL-G4S-474能够结合几乎两个IL-4分子和几乎4个IL-13分子。这些数据表明所测构建体能够被预期数目的IL-13或IL-4分子完全占据。
实施例4
mAbdAb在IL-13和IL-4生物测定中的中和效价
4.1.抗-IL 13mAb-抗-IL4dAb
在TF-1细胞生物测定(如方法8所述)中测试纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb对人IL-13的中和。这些数据示于图24中。
在TF-1细胞生物测定中，纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb、586H-TVAAPS-25、586H-TVAAPS-154和586H-TVAAPS-210完全中和IL-13的生物活性。这些mAbdAb的中和效价在单独的纯化的抗-人IL-13mAb效价的2倍内。在该测定中包括纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)和纯化的抗-IL4dAb(DOM9-155-25、DOM9-155-154或DOM9-112-210)作为中和IL-13的阴性对照。
也在TF-1细胞生物测定(如方法9所述)中检测纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb、586H-TVAAPS-25、586H-TVAAPS-154和586H-TVAAPS-210对人IL-4的中和。这些数据示于图25中。
在该TF-1细胞生物测定中，586H-TVAAPS-210完全中和IL-4的生物活性。该mAbdAb的中和效价在单独的纯化的抗-人IL-4dAb(DOM9-112-210)中和效价的2倍内。586H-TVAAPS-25和586H-TVAAPS-154不中和IL-4的生物活性，这与单独的纯化的抗-人IL-4dAb(DOM9-155-25和DOM9-155-154)相反。如BIAcoreTM所证明，纯化的586H-TVAAPS-25和586H-TVAAPS-154对于IL-4具有1.1nM和0.49nM的结合亲和力(分别)。IL-4结合IL-4受体极为紧密(在文献出版物中报道大约为50pM的结合亲和力)，因此，在TF-1细胞生物测定中观察到586H-TVAAPS-25或586H-TVAAPS-154二者都不能有效中和IL-4的生物活性，这可能是与IL-4对于IL-4受体的效价相比，这些mAbdAb对于IL-4的亲和力相对较低的结果。
在本生物测定中包括纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)作为中和IL-4的阳性对照。在本生物测定中包括纯化的抗-人IL-13mAb作为中和IL-4的阴性对照。
4.2.抗-IL4mAb-抗-IL13dAb
在TF-1细胞生物测定(如方法9所述)中检测纯化的抗-IL4mAb-抗-IL 13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474对人IL-4的中和。这些数据示于图26中。
在TF-1细胞生物测定中，纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474完全中和IL-4的生物活性。这些mAbdAb的中和效价与单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)、纯化的抗-人IL-13mAb、纯化的DOM10-53-474dAb的中和效价接近相等，并且在本生物测定中也包括对不相关抗原具有特异性的dAb(阴性对照dAb)作为IL-4中和的阴性对照。
在TF-1细胞生物测定(如方法8所述)中，检测纯化的抗-IL4mAb-抗-IL 13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474对人IL-13的中和。这些数据示于图27中。
在TF-1细胞生物测定中，纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474完全中和IL-13的生物活性。这些mAbdAb的中和效价在单独的纯化的抗-IL13dAb(DOM10-53-474)中和效价的3倍内。在本生物测定中还包括纯化的抗-人IL-13mAb作为IL-13中和的阳性对照。在本生物测定中，还包括对不相关抗原具有特异性的dAb(阴性对照dAb)和单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-4中和的阴性对照。
还在双重中和TF-1细胞生物测定(如方法10所述)中检测纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474对人IL-4和人IL-13的同时中和。这些数据示于图28中。
在双重中和TF-1细胞生物测定中，纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474完全中和IL-4和IL-13二者的生物活性。这些mAbdAb的中和效价与纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)和纯化的抗-IL13 dAb(DOM10-53-474)组合的中和效价接近相等。在该双重IL-4和IL-13中和生物测定中，单独的纯化的抗-人IL-13mAb、单独的纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)和单独的抗-人IL-13dAb(DOM10-53-474)(其作为阴性对照被包括在内)并不完全中和IL-4和IL-13二者的生物活性。
实施例5
dAb的SEC-MALLS分析
通过SEC-MALLS(大小排阻色谱法-多角度激光散射)表征抗原特异性dAb的溶液状态，结果示于表13中：DOM10-53-474，dAb在溶液中以单体存在，而所有DOM9 dAb(DOM9-112-210、DOM9-155-25、DOM9-155-147和DOM9-155-154)可形成稳定二聚体(在某些情况下为四聚体)。
5.1.蛋白的制备
将样品纯化并透析到合适的缓冲液例如PBS中。透析后过滤样品，测定浓度(0.43mg/ml DOM-155-25)、(1.35mg/ml DOM9-155-147)和1.4mg/ml DOM9-155-159)。将DOM10-53-474和DOM9-112-210调整为1mg/ml。
BSA购自Sigma，无需进一步纯化使用。
5.2.大小排阻色谱法和检测仪设置
将带有自动进样器(SIL-20A)和SPD-20A Prominence紫外/可见光检测仪的Shimadzu LC-20AD Prominence HPLC系统连接到WyattMini Dawn Treos(MALLS，多角度激光散射检测仪)和Wyatt OptilabrEX DRI(示差折光率)检测仪。按以下顺序连接检测仪：LS-UV-RI。RI和LS两种仪器都在488nm波长处操作。以50mM磷酸盐缓冲液(不含盐)或1xPBS(二者都是pH7.4)流动相使用TSK2000(Tosoh公司))柱(基于二氧化硅的HPLC柱)。所用流速为0.5或1ml/分钟，调整运行时间(45或23分钟)来形成不同的流速，不期望对分子的分离有显著影响。在缓冲液中将蛋白制备成1mg/ml的浓度，注射体积为100ul。
5.3.检测仪标定
按照制造商说明书用甲苯标定激光散射检测仪。
5.4.用BSA标定检测仪
将UV检测仪输出和RI检测仪输出连接到光散射设备上，致使能同时用Wyatt ASTRA软件收集来自所有三个检测仪的信号。使若干含BSA的PBS流动相的注射液(1ml/分钟)流过Tosoh TSK2000柱，由Wyatt软件收集UV、LS和RI信号。然后用ASTRA软件分析图录(trace)，按照制造商说明书针对谱带增宽对信号进行标准化、比对和校正。然后将标定常数取平均值，并输入到用于将来样品运行的模板中。
5.5.绝对摩尔质量计算
将100ul的各个样品注射到合适的预平衡柱上。
样品经过SEC柱后经过3个在线检测仪-UV检测仪、MALLS(多角度激光散射)检测仪和DRI(示差折光率)检测仪，其使得可测定绝对摩尔质量。在柱上进行的稀释为约10倍，酌情测定溶液状态中的浓度。
ASTRA以及通常在批样品模式中执行的Zimm作图技术的计算基础是来自Zimm的方程式[J.Chem.Phys.16，1093-1099(1948)]：
R e Kc = MP ( θ ) - 2 A 2 c M 2 P 2 ( θ ) (方程式1)
其中
●C为溶剂中溶质分子的质量浓度(g/mL)
●M为重均分子量(g/mol)
●A2为第二维里系数(mol mL/g2)
●K*＝4p2n0 2(dh/dc)2l0 -4NA -1，其为光学常数，其中n0为溶剂在入射辐射(真空)波长的折射率，l0为入射辐射(真空)波长，以纳米表示，NA为阿伏伽德罗数，等于6.022x1023mol-1，而dn/dc为溶剂-溶质溶液关于溶质浓度变化的示差折射率增量，以mL/g表示(该系数应该用dRI检测仪独立测量)。
●P(q)为理论推导的波形因素，大约等于L-2μ2<r2>/3l+…，
其中μ＝(4π/λ)sin(θ/2)，而<r2>为均方半径。P(q)为分子的z-平均大小、形态及结构的函数。
●Rq为超出的瑞利(Rayleigh)比(cm-1)
本方程式假设为垂直偏振入射光，并对于阶(order)c2有效。
为了用Zimm拟合方法进行计算，我们需要展开方程式1一阶c的倒数，所述Zimm拟合方法为拟合到Rq/K*c对比sin2(q/2)：
为了用Zimm拟合方法进行计算，我们需要展开方程式1一阶c的倒数，所述Zimm拟合方法为拟合到Rq/K*c对比sin2(q/2)：
K * c R e = 1 MP ( &theta; ) + 2 A 2 c 方程式2
在该情况下合适的结果是：
M = ( K * c R 0 - 2 A 2 c ) - 1 方程式3
和
&lang; r 2 &rang; = 3 m 0 &lambda; 2 M 16 &pi; 2 方程式4
其中m0≡d[K*c/Rθ]/d[sin3(θ/2)]θ-0    方程式5
通过ASTRA软件进行自动计算，其产生具有所测的每一部分(slice)的摩尔质量图表[Astra手册]。
将从在色谱图中观察到的每个峰的图获得的摩尔质量与一个单位的蛋白质的预期分子量比较。这提供得到关于蛋白质溶液状态的结论的基础。代表性数据示于表13中。
表13：概述
Figure BPA00001189593301091
DOM10-53-474
具有确定为约14kDa的平均摩尔质量的单峰表明在溶液中为单体状态，其示于图29中。
DOM9-112-210
具有确定为30kDa的摩尔质量的单峰表明在溶液中为二聚体状态，其示于图30中。
DOM9-155-25
精致的对称峰，但在缓冲液前面流出。峰的中间部分用作摩尔质量测定(参见含所有三个重叠信号的下图)。摩尔质量为28kDa，其代表二聚体dAb，示于图31中。
所有三个信号重叠(图32)。
DOM9-155-147
主峰的右边部分确定为26kDa摩尔质量，峰的左边向上渐陡的部分确定为高达53kDa。该峰最可能代表二聚体和在快速平衡中的小部分四聚体。在7.6分钟洗脱的更小的峰代表摩尔质量为51kDa的四聚体蛋白质(图33)。
DOM9-155-159
蛋白质作为单个对称峰流动，其确定为约28kDa的平均摩尔质量，这表明在溶液中为二聚体状态(图34)。
用于通过SEC-MALLS确定MW的对照：BSA
上所述的每一次实验的每一次BSA流动产生预期的MW，例如含67及145kDa摩尔质量的2个峰(单体和二聚体)(图35)。
实施例6
产生三特异性mAbdAb
通过组装PCR产生VH和VL序列然后克隆到现有的mAbdAb表达载体，或通过将来自mAb表达载体的现有VH和VL区亚克隆到现有mAbdAb表达载体，来构建三特异性mAb-dAb，致使当表达时，该三特异性mAbdAb具有连接到重链和轻链二者的C-末端的dAb。
将接头序列用于连接结构域抗体与重链CH3或轻链Cκ。三特异性mAbdAb分子的示意图示于图36(mAb重链画为灰色；mAb轻链画为白色；dAb画为黑色)中。
以下显示阐明构建三特异性mAbdAb重链(上图)和三特异性mAbdAb轻链(下图)的示意图。
Figure BPA00001189593301101
对于重链，术语“VH”为单克隆抗体可变重链序列；“CH1、CH2和CH3”为人IgG1重链恒定区序列；“接头”是所用的特定接头区的序列；“dAb”为结构域抗体序列。对于轻链：“VL”为单克隆抗体可变轻链序列；“Cκ”为人轻链恒定区序列；“接头”是所用的特定接头区的序列；“dAb”为结构域抗体序列。
将哺乳动物氨基酸信号序列(如SEQ ID NO：64所示)用于产生这些构建体。
6.1.三特异性抗-IL18mAb-抗-IL4dAb-抗-IL13dAb
通过将编码抗-人IL-4结构域抗体(DOM9-112-210)的序列移植到编码重链的序列上，并将编码抗-IL13结构域抗体(DOM10-53-474)的序列移植到编码抗-人IL-18人源化单克隆抗体轻链的序列上，来构建三特异性抗-IL18mAb-抗-IL4dAb-抗-IL13dAb(也称为IL18mAb-210-474)。G4S接头用于将抗-IL4结构域抗体连接到单克隆抗体重链上。G4S接头还用于将抗-IL13结构域抗体连接到单克隆抗体轻链上。
在CHOK1细胞上清液中瞬时表达IL18mAb-210-474，在对细胞上清液中的IL18mAb-210-474定量测定后，以多种IL-18、IL-4和IL-13结合测定法进行分析。
Figure BPA00001189593301111
6.2.三特异性抗-IL5mAb-抗-IL4dAb-抗-IL13dAb
通过将编码抗-人IL-4结构域抗体DOM9-112-210的序列(SEQ IDNO：4)移植到编码抗-人IL-5人源化单克隆抗体(SEQ ID NO：65)的重链序列上，并将编码抗-IL13结构域抗体DOM10-53-474的序列(SEQID NO：5)移植到编码抗-人IL-5人源化单克隆抗体轻链的序列(SEQID NO：66)上，来构建三特异性抗-IL5mAb-抗-IL4dAb-抗-IL13dAb(也称为Mepo-210-474)。G4S接头用于将抗-IL4结构域抗体连接到单克隆抗体重链上。G4S接头还用于将抗-IL13结构域抗体连接到单克隆抗体轻链上。
在CHOK1和HEK293-6E细胞上清液中瞬时表达该mAbdAb，在对细胞上清液定量后，以多种IL-4、IL-5和IL-13结合测定法进行分析。
Figure BPA00001189593301121
6.3.单克隆抗体、结构域抗体和接头的序列
用于产生三特异性mAbdAb的单克隆抗体、结构域抗体和接头的序列(或在以下举例说明的内容中用作对照试剂)示于下表14中。
表14
Figure BPA00001189593301122
成熟人IL-4氨基酸序列(无信号序列)示于SEQ ID NO：62中。
成熟人IL-13氨基酸序列(无信号序列)示于SEQ ID NO：63中。
6.4.三特异性mAbdAb的表达和纯化
用标准分子生物学技术将编码三特异性mAbdAb分子的DNA序列克隆到哺乳动物表达载体(Rln、Rld或pTT)。将三特异性mAbdAb表达构建体瞬时转染到CHOK1或HEK293-6E细胞之一或二者中，以小规模(3ml-150ml)表达。用于产生三特异性mAbdAb的表达程序与常规用于表达单克隆抗体的程序相同。
用固定化的蛋白A柱纯化某些构建体，通过在280nm处读取吸光度来定量测定。
实施例7
通过ELISA测定三特异性mAbdAb与人IL-4、人IL-13和人IL-18 的结合
7.1.通过ELISA测定IL-18mAb-210-474与IL-4、IL-13和IL-18的结合
在直接结合ELISA(如方法1、2和3所述)中，检测如实施例6所述制备的三特异性mAbdAb IL18mAb-210-474(上清液)(SEQ IDNO：69和70)对人IL-18、人IL-13和人IL-4的结合，这些数据分别示于图37、38和39(多次制备并检测IL18mAb-210-474，其在图中被标注为样品1、样品2、样品3等)中。
这些图显示IL18mAb-210-474通过ELISA结合IL-4、IL-13和IL-18。在IL-18结合ELISA中包括纯化的抗-人IL18mAb作为IL-18结合的阳性对照。在IL-4结合ELISA中没有检测抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该ELISA中用纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。在IL-13结合ELISA中没有检测抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该ELISA中用纯化的抗-人IL-13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。如图所示，在每次结合ELISA中包括针对不相关抗原的阴性对照mAb。
在每次ELISA中，IL18mAb-210-474样品5的结合曲线位置上远离其它IL18mAb-210-474样品的结合曲线。其原因尚不知道，然而，可能是由于在人IgG定量ELISA中对于该特定IL18mAb-210-474样品5的定量问题。
7.2.通过ELISA测定Mepo-210-474与IL-4和IL-13的结合
在直接结合ELISA(分别如方法1和2所述)中，检测如第1部分所述制备的三特异性mAbdAb Mepo-210-474(上清液)(序列ID号为71和72)对人IL-13和人IL-4的结合，这些数据分别示于图40和41(Mepo-210-474以一式四份制备并检测，其被标注为样品1、样品2、样品3和样品4)中。
这些图说明Mepo-210-474通过ELISA结合IL-4和IL-13。在IL-4结合ELISA中没有检测抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为该该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该ELISA中用纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。在IL-13结合ELISA中没有检测抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该ELISA中包括纯化的抗-人IL-13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。如图40和41所示，在每次结合ELISA中包括针对不相关抗原的阴性对照mAb。
在一个瞬时转染实验中制备Mepo-210-474样品1和样品2，在另一单独的瞬时转染实验中制备Mepo-210-474样品3和样品4。在IL-13和IL-4结合ELISA中，所有四种样品都结合IL-13和IL-4。然而，样品1和2相对样品3和4结合曲线不同的原因尚不知道，但可反映在每一次转染实验中产生的mAbdAb(在上清液中)的质量差异。
实施例8
通过表面等离子共振(BIAcore TM )测定三特异性mAbdAb与人IL-4、 人IL-5、人IL-13和人IL-18的结合
8.1.通过BIAcoreTM测定L-18mAb-210-474与IL-4、IL-13和IL-18的结合
用BIAcoreTM于25℃(分别如方法4、5和6所述)检测如实施例6.1所述制备的三特异性mAbdAb IL18mAb-210-474(上清液)(SEQ IDNO：69和70)对人IL-4、人IL-13和人IL-18的结合。捕获水平在大约400-850响应单位范围内。检测每一分析物的三个浓度(256、32和4nM)。得到的数据示于表15(样品以一式三份制备并检测，其被标注为样品1、样品2和样品3)中。
表15
Figure BPA00001189593301151
Figure BPA00001189593301161
*由于正解离作用和BIAcoreTM技术的灵敏度水平而不能测定KD
用BIAcoreTM确定了三特异性mAbdab结合IL-4、IL-13和IL-18。mAbdAb对IL-18的结合亲和力与单独的纯化的抗-人IL18mAb的结合亲和力接近相等，在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL18mAb作为IL-18结合的阳性对照，便于直接与mAbdab的结合亲和力比较。由于该三特异性mAbdAb的DOM9-112-210组分极为紧密地结合IL-4并因此解离速率太小而不能用BIAcoreTM测定这一事实，不可能测定mAbdab对IL-4的绝对结合亲和力。在该测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中包括抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中包括抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
8.2.通过BIAcoreTM测定Mepo-210-474与IL-4、IL-5和IL-13的结合
用BIAcoreTM于25℃(分别如方法5、11和4所述)检测如实施例6.2所述制备的三特异性mAbdAb Mepo-210-474(上清液)(SEQ ID NO：71和72)对人IL-4、人IL-5和人IL-13的结合。捕获水平在大约450-900响应单位范围内。对于IL-4和IL-13结合，检测每一分析物的5个浓度(256、64、16、4和1nM)。对于IL-5结合，检测每一分析物的4个浓度(64、16、4和1nM)。得到的数据示于表16中。
表16
Figure BPA00001189593301162
用BIAcoreTM测定了Mepo-210-474结合IL-4、IL-5和IL-13。Mepo-210-474对IL-5的结合亲和力与纯化的抗-人IL5mAb(美泊利单抗)的结合亲和力接近相等，在该测定中包括纯化的抗-人IL5mAb作为IL-5结合的阳性对照，便于直接与Mepo-210-474的结合亲和力比较。由于该三特异性mAbdAb的DOM9-112-210组分极为紧密地结合IL-4并因此解离速率太小而不能用BIAcoreTM测定这一事实，不可能测定Mepo-210-474对IL-4的绝对结合亲和力。在该测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中包括抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。在该测定中没有检测单独的抗-IL-13 dAb(DOM10-53-474)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中包括抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
实施例9
化学计量
9.1.用BIAcoreTM的IL-4、IL-13和IL-18与IL-18mAb-210-474结合的化学计量
用BIAcoreTM(如方法7所述)评估IL18mAb-210-474(在CHO细胞上清液中如第1章节所述制备)(SEQ ID NO：69和70)对IL-4、IL-13和IL-18结合的化学计量。这些数据示于表17(R-max为饱和结合响应，其为按照方法7中给出的公式计算化学计量所需要)中。每种细胞因子的浓度为500nM。注射位置指加入每一种细胞因子的次序。
表17
  细胞因子   注射位置  R-max   化学计量
  IL-4   第一  59   0.9
  IL-4   第二  56   0.9
  IL-4   第三  51   0.8
  IL-13   第一  74   1.6
  IL-13   第二  77   1.7
  IL-13   第三  80   1.8
  IL-18   第一  112   1.8
  IL-18   第二  113   1.8
  IL-18   第三  110   1.7
化学计量数据表明IL18mAb-210-474结合大约两个IL-18分子、两个IL-13分子和仅一个IL-4分子。已知单独的抗-IL4dAb(DOM9-112-210)在溶液状态中为二聚体，仅能够结合一个IL-4分子。因此，IL18mAb-210-474仅结合一个IL-4分子是在意料之中。这些数据表明所测分子能被预期数目的IL-18、IL-13和IL-4分子完全占据。所述化学计量数据还表明细胞因子的捕获次序似乎与加入细胞因子的次序无关。
实施例10
10.1.产生双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb
通过让dAb与mAb重链C-末端融合，来构建该双重靶向的mAbdAb。先前业已构建了抗-TNF mAb重链和轻链表达盒。用于克隆的限制性位点在下面显示(图42)。
为了将用于插入dAb的限制性位点引入到重链中，用mAb重链表达载体作为模板将位点定向诱变用于产生SalI和HindIII克隆位点。然后通过PCR(用编码SalI和HindIII末端的引物)扩增编码抗-EGFRdAb(DOM16-39-542)的DNA，并将其插入到经修饰的3’编码区，在mAb和dAb之间产生接头“STG”(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：170和169分别为轻链和重链)，按照制造商方案用Qiagen Mega Prep试剂盒大规模制备。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：73和74)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
10.2.双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已确定的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液中纯化抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化样品的浓度。纯化的样品的SDS-PAGE分析(图43)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示为泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
对于大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb上样到预平衡的Superdex-200 10/30HR柱(连接到Akta Express FPLC系统)，并用PBS以0.5ml/分钟流动。SEC曲线显示作为对称峰流动的单一物质(图44)。
10.3.双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb的结合亲和力
分别如方法13和14所述测定对EGFR和TNF的结合亲和力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb的抗-EGFR效价(图45)计算为39.1nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为3.4nM。在抗-TNF生物测定(图46)中，mAbdAb效价为3pM(0.0028nM)，而抗-TNF对照mAb产生的EC50为104pM。综上所述，测定数据显示实施例10的构建体即双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb对两种抗原都有效。
10.4.双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb的大鼠PK
在大鼠中检测该分子的体内药代动力学特性。静脉内给予三只大鼠抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb，经7天(168小时)时间采集血清样品。通过针对TNF及EGFR的ELISA评估给药后不同时间点残留的药物浓度。结果示于图125中。
PK参数证实该分子具有长半衰期，与先前观察的未经修饰的阿达木单抗(adalimumab)在同一区域(125小时)。进一步的详细资料示于表17.1中。
表17.1
Figure BPA00001189593301201
实施例11
11.1.产生双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb
采用实施例10所述相似策略制备抗-TNF/抗-VEGF。为了构建重链表达盒，采用编码实施例10重链的载体DNA作为起始点。用限制性酶SalI和HindIII切割抗-EGFR dAb。通过PCR(用编码SalI和HindIII末端的引物)扩增DOM15-26-593(抗-VEGF dAb)，并将其连接到具有先前业已通过相同限制性位点切割的抗-EGFR dAb的载体主链，在mAb和dAb之间产生接头“STG”(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：169和168分别为轻链和重链)，大规模制备DNA制备物，通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：73和75)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达抗-TNF/抗-VEG mAbdAb。
11.2.双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已确定的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液中纯化抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb(命名为DMS4000)。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化样品的浓度。纯化的样品的SDS-PAGE分析(图47)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示为泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
对于大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb上样到经预平衡的Superdex-200  10/30HR柱(连接到Akta Express FPLC系统)，并用PBS以0.5ml/分钟流动。SEC曲线显示作为对称峰流动的单一物质(图48)。
11.3.双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb的结合亲和力
分别如方法12和14所述测定对EGFR和TNF的结合亲和力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb的抗-VEGF效价(图49)计算为57pM，而对照抗-VEGF mAb给出的EC50值为366pM。在抗-TNF生物测定(图50)中效价为10pM，而抗-TNF对照mAb产生的EC50为22pM。综上所述，测定数据显示实施例11的分子即双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb对两种抗原都有效。
11.4.双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb的大鼠PK
在大鼠中检测该分子的体内药代动力学特性。静脉内给予三只大鼠抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb，经10天(240小时)时间采集血清样品。通过针对TNF及VEGF二者的ELISA评估给药后不同时间点残留的药物浓度。结果示于图126中。
PK参数证实该分子具有可与未经修饰的阿达木单抗相比的体内药代动力学特性。不认为所观察到的对VEGF组分的较短t1/2β具有意义，其可能是测定假象。进一步的详细资料示于表17.2中。
表17.2
Figure BPA00001189593301221
11.5.备选抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb的产生
以与上面实施例11.1所述相似的方式构建备选抗-TNF/抗-VEGFmAbdAb，该过程用STG接头将同样的抗-TNF mAb连接到重链C-末端上的VEGF dAb。在该案例中所用抗-VEGF dAb为DOM15-10-11。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：73和185)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达该分子。该分子经表达获得与实施例11.2所述相似的表达水平的mAbdAb，然而，当如实施例11.3所述在相同的VEGF测定中检测效价时，在该测定中发现具有不可检测的抑制VEGF结合VEGF受体的水平。
实施例12
12.1.产生双重靶向的抗-VEGF/抗-IL1R1 dAb-延伸的IgG
按照在dAb和两个链的恒定区之间插入假体V结构域(Dummy Vdomain)编码区的策略，用标准分子生物学技术构建两个双重靶向的dAb-延伸IgG分子。
对于轻链，先前将抗-IL1R1 dAb DOM4-130-54克隆到含SalI和BsiWI位点的表达盒(图51)，以产生dAb-Ck链。为了制备dAb-延伸的IgG轻链，通过PCR用两端编码BsiWI的引物扩增假体Vk区。用BsiWI消化含有dAb-Ck表达盒的质粒。让BsiWI消化的假体Vk结构域与其连接，产生在两个可变结构域之间含“TVAAPS”接头的dAb-延伸的IgG轻链。
按照同样的策略产生dAb-延伸的IgG重链，其中将PCR扩增的含NheI端的假体VH结构域连接到经NheI消化的dAb重链，在dAbDOM15-26和CH1之间(图51)，其在两个可变结构域之间有接头“ASTKGPS”。
其被命名为DMS2090，具有SEQ ID NO：163(SEQ ID NO：162的DNA序列)中所述的序列。其与SEQ ID NO：77(DNA序列SEQ ID NO：171)中所述的轻链配对。
以同样方式但用dAb DOM15-26-593构建第二条重链。其被命名为DMS2091，具有SEQ ID NO：76(DNA序列SEQ ID NO：172)中所述的序列。其与SEQ ID NO：77(DNA序列SEQ ID NO：171)中所述的轻链配对。
选择已验证序列的克隆，按照制造商方案用Qiagen Maxi或MegaPrep试剂盒大规模制备DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链在哺乳动物细胞中表达得到的构建体。
12.2.双重靶向的抗-VEGF/抗-IL1R1 mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已确定的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液中纯化两种抗-IL1R1/抗-VEGF dAb-延伸的IgG分子。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化样品的浓度。DMS2090的SDS-PAGE分析示于图52，DMS2091的SDS-PAGE分析示于图53。两种纯化的样品都显示未经还原的样品泳动至190kDa，而经还原的样品显示为泳动到35和60kDa的两条带，其分别对应于dAb-延伸的轻链和重链。
对于大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-VEGF/抗-IL1R1 dAb-延伸的-IgG上样到经预平衡的Superdex-20010/30HR柱(连接到Akta ExpressFPLC系统)，并用PBS以0.5ml/分钟流动。DMS2090(图54)和DMS2091(图55)二者的SEC曲线都显示作为对称峰流动的单一物质。
12.3.双重靶向的抗-VEGF/抗-IL1R1 mAbdAb的结合亲和力
分别如方法12和15所述测定对VEGF和IL1R1的结合亲和力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。计算DMS2090的抗-VEGF效价(图57)为158.4pM，而对照抗-VEGF mAb给出的EC50值为689.2pM。计算DMS2091的抗-VEGF效价(图56)为55pM，而对照抗-VEGF mAb给出的EC50值为766pM。
在抗-IL1R1生物测定(图46)中，DMS2090效价(图58)为32pM，而抗-IL1R1对照mAb产生的EC50为35pM。DMS2091效价(图59)为17.47pM，而抗-IL1-R1对照mAb产生的EC50为35.02pM。
综上所述，测定数据显示实施例12的双重靶向的抗-IL1R1/抗-VEGF dAb-延伸的IgG对两种抗原都有效。
12.4.双重靶向的抗-VEGF/抗-IL1R1 mAbdAb的大鼠PK
在大鼠中检测该分子的体内药代动力学特性。静脉内给予三只大鼠抗-IL1R1/抗-VEGF dAb-延伸的IgG A，经7天(168小时)时间采集血清样品。通过针对IL1R1及VEGF两者的ELISA评估给药后不同时间点残留的药物浓度。结果示于图127中。
PK参数示于表17.3中。
表17.3
Figure BPA00001189593301241
实施例13
13.1.产生三重靶向的抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb
用标准分子生物学技术并按照在dAb和两种链的恒定区之间插入mAb V结构域编码区的策略，构建三重靶向的mAb。
对于轻链，先前已将抗-EGFR dAb DOM16-39-542克隆到含SalI和BsiWI位点的表达盒(图15)，以产生dAb-Ck链。为了制备mAbdAb轻链，通过PCR用两端编码BsiWI的引物扩增mAb VL区。用BsiWI消化含有dAb-Ck表达盒的质粒。让经BsiWI消化的mAb VL结构域与其连接，以产生mAbdAb轻链，导致产生在两个可变结构域之间的“TVAAPS”接头。
按照同样的策略产生mAbdAb重链，其中将PCR扩增的含NheI端的mAb VH区连接到经NheI消化的dAb重链载体，在dAb(DOM15-26)和CH1之间(图60)，导致产生在两个可变结构域之间的接头“ASTKGPS”。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：78和79分别为重链和轻链)，按照制造商方案用Qiagen Mega Prep试剂盒大规模制备DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链在哺乳动物细胞中表达mAbdAb。
13.2.三重靶向的抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb的纯化
按照已确定的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液中纯化抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化样品的浓度。经纯化的样品的SDS-PAGE分析(图61)显示未经还原的样品泳动到190kDa，而经还原的样品显示为泳动到35和60kDa的两条带，其分别对应于dAb-延伸的轻链和重链。
13.3.三重靶向的抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb的结合亲和力
分别如方法12、13和14所述测定对VEGF、EGFR和TNF的结合亲和力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb的抗-VEGF效价(图62)计算为1.885mM，而对照抗-VEGF mAb给出的EC50值为0.145nM。
在抗-TNF生物测定(图636)中效价为87pM，而抗-TNF对照mAb产生的EC50为104pM。在抗-EGFR测定(图64)中，三重靶向mAbdAb在约300nM下产生约20％抑制。同时计算VEGF和TNF结合的EC50值，对于EGFR结合，没有产生用于计算EC50值的连续曲线(fullcurve)。
实施例14：IGF-1R/VEGF mAbdAb
14.1.IGF-1R/VEGF mAbdAb的构建
从重叠寡核苷酸的PCR从头开始构建抗IGF-1R可变重链和可变轻链基因序列。用标准分子生物学技术在哺乳动物表达载体中将这些区域融合到人IgG1或κ恒定区。同样用重叠寡核苷酸的PCR构建抗VEGF结构域抗体的基因序列，并如上所述将其融合到抗IGF-1R组分的重链或轻链基因的3’端。融合体在抗体与结构域抗体组分之间并入了两个氨基酸(GS)的接头或8个氨基酸(TVAAPSGS)的接头。此外，构建不含结构域抗体和接头序列的抗体重链和轻链。按照制造商方案用Endofree Qiagen Maxiprep试剂盒选择已验证序列的克隆用于大规模DNA制备。
在序列SEQ ID NO：108、109、111和112中，在抗体和结构域抗体之间的接头序列位置下划线。可通过除掉全部接头或通过用不同的接头，构建备选变体。在SEQ ID NO：6和8-11中提供其它合适的接头实例。表18提供一系列经构建并表达的抗体。
表18-经构建并检测的抗体
实施例14.2：IGF-1R/VEGF mAbdAb的表达、纯化和SEC曲线
在瞬时转染的HEK293-6E中表达重链和轻链载体组合。简言之，用先前与293fectin试剂(Invitrogen#51-0031)孵育的25μg重链和25μg轻链质粒，转染50ml的1.5x106个细胞/ml的HEK293-6E细胞。将细胞置于37℃、5％CO2和95％相对湿度的震荡培养箱中。24小时后，加入蛋白胨养料培养基(feeding media)，让细胞再生长72小时。离心收获上清液，接着用0.22μm过滤器过滤。用蛋白A琼脂糖柱纯化表达的蛋白质，并透析到PBS中。通过大小排阻色谱(SEC)分析纯化的蛋白质，示于图65中。
在以下测定中用IGF-1R抗体(H0L0)作为比较物。该分子具有SEQID NO：110中所述的重链序列和SEQ ID NO：113中所述的轻链序列。
在以下测定中将另一具有不相关特异性的mAbdAb用作比较物。该分子具有SEQ ID NO：87中所述的重链序列和SEQ ID NO：13中所述的轻链序列，并被命名为BPC1601。
实施例14.3：IGF-1R结合ELISA
进行结合ELISA以检测纯化的抗-IGF-1R/VEGF mAbdAb与IGF-1R的结合。简言之，将400ng/ml重组人IGF-1R-his标签(R&DSystems 305-GR)的PBS溶液装到用1μg/ml抗-聚组氨酸(AbCamAB9108)包被并用封闭液(在Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭的ELISA板中。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板于室温孵育1小时。加入在封闭液中稀释的各种浓度的纯化的mAbdAb以及抗IGF-1R单克隆抗体(H0L0)和不相关的mAbdAb(BPC1601)。在用TBST洗涤前让板于室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板于室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)使板显色，通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。
结合ELISA的结果提供在图66中，其确证所检测的所有IGF1R-VEGF mAbdAb变体(BPC1603-1606)都显示以可比得上抗-IGF-1R抗体H0L0的水平与IGF-1R结合。用Cambridgesoft Bioassay软件计算EC50值，结果如下：H0L0(0.1797μg/ml))、BPC1603(0.1602μg/ml)、BPC1604(0.1160μg/ml)、BPC1605(0.1975μg/ml)、BPC1606(0.1403μg/ml)。不相关的对照双特异性抗体BPC1601显示对IGF-1R没有可检测的结合。
实施例14.4：VEGF结合ELISA
进行结合ELISA以检测经纯化的抗-IGF-1R/VEGF双特异性抗体与VEGF的结合。用PBS中的400ng/ml重组人VEGF(GSK)包被并用封闭液(TBS中的4％BSA)封闭ELISA板。加入在封闭液中稀释的各种浓度的纯化的mAbdAb，包括mAbdAb BPCI601作为阴性对照。在用TBST洗涤前让板于室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板于室温孵育40分钟。通过加入OPD底物(Sigma P9187)使板显色，通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。
结合ELISA的结果提供在图67中，其确证所有四种抗-IGF-1R/VEGF mAbdAb(BPC1603-1606)都可结合固定化VEGF。BPC1605和BPC1606显然更低的结合活性可归因于结构域抗体(位于轻链的C-末端)与检测抗体之间的干扰。用Cambridgesoft Bioassay软件计算EC50值，结果如下：BPC1603(0.044μg/ml)、BPC1604(0.059μg/ml)、BPC1605(0.571μg/ml)。由于较低的响应值而不可能计算BPC1606的精确EC50值。抗-IGF-1R抗体H0L0和不相关的对照mAbdAb BPC1601显示对VEGF没有可检测的结合。
实施例14.5：与VEGF结合的动力学
通过伯胺偶联到CM5生物感受器芯片来固定针对人IgG的小鼠单克隆抗体(Biacore BR-1008-39)。用该表面来捕获抗体构建体。在捕获后，使VEGF通过表面后，然后用3M MgCl2使所述表面再生。用于产生动力学的VEGF浓度为256、64、16、4、1和0.25nM，且仅将缓冲液注入捕获表面上用于双重参考(double referencing)。用1xHBS-EP缓冲液(BR-1006-69)于25℃在Biacore T100设备上进行实验。用其分析软件将数据拟合到设备固有的1∶1模型。来自两个独立实验的数据示于表19中。
表19-结合人VEGF的动力学
Figure BPA00001189593301291
实施例14.6：VEGF与受体结合的抑制
如方法12所述用VEGF受体结合测定测量mAbdAb活性。在该测定中获得的抑制VEGF与VEGFR2结合的IC50为：
BPC1603(0.037nM)
BPC1604(0.010nM)
BPC1605(0.167nM)
BPC1606(0.431nM)
这些结果确证所有四种抗原结合构建体抑制配体结合受体。
实施例14.7：IGF-1R受体磷酸化的抑制
将3T3/LISN c4细胞以10000个细胞/孔的密度接种到96孔板中，并在完全DMEM(DMEM-Hepes改良+10％FCS)中孵育过夜。将纯化的mAbdAb加到细胞中并孵育1小时。将rhIGF-1加到处理的细胞中以达到50ng/ml的终浓度，并再孵育30分钟以刺激受体磷酸化。吸出培养基，然后通过加入RIPA裂解缓冲液(150mM NaCl、50mMTrisHCl、6mM脱氧胆酸钠、1％Tween 20)加上蛋白酶抑制剂混合物(Roche 11 697 498 001)来裂解细胞。过夜冷冻所述板。解冻后将各孔的裂解液转移到用2μg/ml抗IGF-1R捕获抗体2B9(GSK)预先包被并用封闭液4％BSA/TBS封闭的96孔ELISA板。用TBST(TBS+0.1％Tween 20)洗涤板，将用4％BSA/TBS以1/2500稀释的铕标记的抗磷酸酪氨酸抗体(PerkinElmer DELFIA Eu-N1 PT66)加入到各孔中。孵育1小时后洗涤板，加入DELFIA增强(PerkinElmer 1244-105)溶液。孵育10分钟后，用板读数器装置测定受体磷酸化水平以测量铕时间分辨荧光(TRF)。
实验结果提供在图68和69中。结果确证mAbdAb BPC1603-1606可以以比得上抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0的水平抑制IGF-I介导的受体磷酸化。在该测定中不相关抗体(标记为IgG1，Sigma I5154)显示无活性。
实施例15 抗-CD20/IL-13抗原结合蛋白
实施例15.1：分子生物学
用基于PCR的方法和标准分子生物学技术从头构建编码SEQ IDNO：117和120中所述的抗-CD20mAb的重链和轻链序列的哺乳动物表达载体。通过将编码抗-CD20mAb重链和轻链可变区的序列克隆到含有融合到抗-人IL-13结构域抗体(DOM10-53-474)的人抗体恒定区的哺乳动物表达载体，来构建双特异性抗-CD20mAb-抗-IL13dAb重链和轻链。
将mAbdAb表达构建体转染到CHOE1a细胞。收获上清液，然后用固定化的蛋白A纯化抗体，通过读取280nm处的吸光度来定量。已构建并检测的mAbdAb(和抗-CD20对照mAb)列于表20中。
表20
Figure BPA00001189593301311
实施例15.2：与人IL-13结合的动力学
通过BIAcoreTM分析评估mAbdAb构建体对人IL-13的结合亲和力。进行抗-人IgG捕获分析。简言之，通过伯胺偶联将抗-人IgG(Biacore BR-1008-39)偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb构建体捕获到该表面。以限定浓度使人IL-13(由GSK制备并纯化)通过。用3MMgCl2使该表面再生回抗人IgG表面。该处理不显著影响捕获抗体对随后的IL-13结合事件的能力。用HBS-EP缓冲液在25℃于BIAcoreTMT100设备上进行运作。用设备中的评估软件分析数据，并拟合成1∶1结合模型。分析结果提供在表48中，其确证所有mAbdAb构建体结合IL-13的动力学都相当。
表48-表面等离子共振(BIAcoreTM)数据
通过流式细胞术用CD20阳性细胞系(Wein133)评估mAb-dAb与CD20的结合。所有mAb-dAb(BPC1401-BPC1404)和抗-CD20对照抗体显示平均荧光强度剂量依赖性增加(MFI)(数据未显示)
实施例15.3：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行ADCC测定
ADCC测定基于Boyd等(1995)J.Imm.Meth.184：29-38公开的方法。简言之，用铕如下标记Raji细胞(靶标)。收获细胞，计数，并在15ml falcon试管中制备为终密度1x107，用Hepes缓冲液(50mMHEPES、83mM NaCl、5mM KCl、2mM MgCl2.H2O、pH7.4)洗涤一次。沉淀细胞，将1ml冰冷的铕标记的缓冲液(HEPES缓冲液加600μMEuCl3、3mM DTPA和25mg/ml硫酸葡聚糖)加入到各管中。在标记开始猛烈弹击细胞悬浮液，然后在冰上孵育的30分钟期间每10分钟弹击一次。加入10ml冰冷的修复缓冲液(含有294mg/l CaCl2.2H2O、1.8g/lD-葡萄糖、pH7.4的Hepes缓冲液)，细胞在冰上再孵育10分钟。然后离心细胞，滗出上清液，用修复缓冲液洗涤2次，然后用完全培养基洗涤一次。然后计数标记的细胞，以2x105细胞/ml重新悬浮在无血清培养基中，并储存在冰上。
如下制备人纯化的血单核细胞(PBMC或效应细胞)。以2000rpm将150ml全血离心10分钟以除掉血清。用PBS(Invitrogen/Gibco，#14190)将细胞稀释到原始体积的2倍。通过加15ml淋巴细胞分离剂(lymphoprep)(Axis shield，#NYC1114547)制备Accuspin密度梯度管(Sigma，#A2055-10EA)，以1500rpm离心1分钟。将25ml血混悬液加入到密度梯度管，以2500rpm离心20分钟，让离心机慢慢减速。弃掉10ml顶部上清液。将剩余物(包括“淡黄色”层)倒入干净试管中，用PBS加满，以1500rpm离心5分钟。弃掉上清液，合并细胞沉淀，用RPMI培养基洗涤一次，重新离心并计数。在无血清RPMI培养基中以5x106/ml制备效应细胞。
在96孔圆底板(Nunc 96 maxisorb板，#735-0199)中如下设定测定板。在无血清RPMI培养基中以大约12μg/ml的起始浓度制备抗体稀释液，甚至进一步3倍稀释。以下进行板布置，将50μl抗体样品加入合适的孔(仅B-G排)中，使每个稀释度进行6个重复。将50μl RPMI培养基加入A和H排的所有孔中。将50μl的RPMI培养基加入到培养基标记的板的所有孔中。将在RPMI培养基中稀释到4μg/ml(1μg/ml终浓度，GSK内部材料)的50μl重组人IL-13加入到+IL13标记的板的所有孔中。所有板在4℃孵育最少30分钟。将50μl铕标记的靶标细胞加入到所有板。将20μl的10X triton加入到所有板H排的所有孔中。让板在4℃孵育最少30分钟。将50μl RPMI培养基加入到仅标记靶标的列的所有孔中。将50μl PBMC加入到标记的效应器：靶标为25∶1比率的列的所有孔中。让板以1500rpm离心3分钟，并37℃孵育3-4小时。将200μl的增强液(Wallac/Perkin Elmer，货号1244-105)加入到nunc免疫吸附ELISA板(一个ELISA板对应每一个测定板)的各孔中。将20μl上清液从测定板转移到ELISA板。让ELISA板于室温在板振荡器上孵育最少30分钟，或储存在4℃过夜。用时间滞后荧光测定法(time-delayed fluorimetry)(Wallac Victor板读数器)测量铕释放。自发裂解＝只从细胞和培养基中释放的铕的测量值。最大裂解＝通过加入Triton-X100(非离子去污剂)靶标细胞的非特异性裂解。
Figure BPA00001189593301341
在两个单独的时机用两种不同的供体PBMC进行ADCC测定。来自一个代表性测定的结果提供在图70和71中。另外，在单独的时机用不同的供体PBMC进行使用较窄剂量范围的相似的ADCC测定。
将来自该测定的结果示于图72和73中。
实施例15.4：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行CDC测定
用铕如下标记WEIN细胞(靶标)。简言之，收获细胞，计数，并在15ml falcon试管中制备为终密度1x107，用Hepes缓冲液(50mMHEPES、83mM NaCl、5mM KCl、2mM MgCl2.H2O、pH7.4)洗涤一次。沉淀细胞，将1ml冰冷的铕标记的缓冲液(HEPES缓冲液加上600μMEuCl3、3mM DTPA和25mg/ml硫酸葡聚糖)加入到各管中。在标记开始猛烈弹击细胞悬浮液，然后在冰上孵育的30分钟期间每10分钟弹击一次。加入10ml冰冷的修复缓冲液(含有294mg/l CaCl2.2H2O、1.8g/lD-葡萄糖、pH7.4的Hepes缓冲液)，细胞在冰上再孵育10分钟。然后离心细胞，滗出上清液，用修复缓冲液洗涤2次，然后用完全培养基洗涤一次。然后计数标记的细胞，以2x105细胞/ml重新悬浮在无血清培养基中，并储存在冰上。
通过离心从采集自内部供体的全血中移走血清。让一半样品在56℃热处理30分钟灭活。在无血清RPMI培养基中以大约12μg/ml的起始浓度稀释抗体，进行5次3倍稀释。将50μl抗体样品加入到仅B-G排的合适的孔(按照以下所述的板布置)中。将50μl RPMI培养基加入到1-6列的所有孔中。在必要时将50μl的重组人IL-13(以在RPMI培养基中4μg/ml)加入到第7-12列的各孔中。让板在4℃孵育最少30分钟。将50μl铕标记的靶标细胞加入到所有板，并让板在4℃孵育最少30分钟。将50μl血清(活性或热灭活)加入到合适的孔(参见以下板布置)中。让板在37℃培养箱中孵育2-3小时，之后将所述板以1500rpm离心3分钟。将200μl的增强液(Wallac/Perkin Elmer，Catalogue#1244-105)加入到nunc免疫吸附ELISA板(一个ELISA板对应每一个测定板)的各孔中。将20μl上清液从测定板转移到ELISA板。让ELISA板于室温在板振荡器上孵育最少30分钟，或储存在4℃过夜。用时间滞后荧光测定法(Wallac Victor板读数器)测量铕释放。自发裂解＝只从细胞和培养基中释放的铕的测量值。最大裂解＝通过加入Triton-X100(非离子去污剂)使靶标细胞非特异性裂解。
Figure BPA00001189593301361
在三个单独的时机用三种不同的供体血清进行CDC测定。来自一个代表性测定的结果提供在图74和75中，并显示抗体样品的CDC活性比得上无IL-13时的CDC活性。在过量IL-13存在下，抗体样品BPC1401和BPC1402(融合到重链的结构域抗体)的CDC活性降低了，而BPC1403和BPC1404(融合到轻链的结构域抗体)的CDC活性并没有受IL-13存在的较大影响。
实施例16
16.1包含由备选骨架组成的表位结合结构域的抗原结合蛋白的设计与 构建
将以下列出的5种备选骨架与单克隆抗体联合以提供mAb-备选骨架双特异性分子：
●抗VEGF泪液脂质运载蛋白(TLPC)
●抗HER2 Affibody(AFFI)
●抗HER2 DARPin(DRPN)
●抗鸡蛋白溶菌酶(NARV)
●抗-RNA酶A骆驼VHH
将TLPC(其进一步的资料参见US2007/0224633)、AFFI(其进一步的资料参见WO2005003156A1)、DRPN(其进一步的资料参见Zahnd，C.等(2007)、J.Mol.Biol.，369，1015-1028)和NARV(其进一步的资料参见US20050043519A)的蛋白序列逆翻译为DNA并优化密码子。在这4种备选骨架的每一种中包括在N-末端处的BamHI位点和在C-末端处的EcoR1位点，以方便克隆。
用基于PCR的策略和重叠寡核苷酸从头构建编码这四种备选骨架DNA序列的DNA片段。将TLPC、AFFI和DRPN PCR产物克隆到含有H0L0重链(抗-hIGF-1R抗体)的哺乳动物表达载体。得到的DNA序列编码经由TVAAPSGS接头或GS接头融合到重链的C-末端的备选骨架。将NAR V PCR产物克隆到含有编码帕考珠单抗(抗-IL-4抗体)重链的DNA的哺乳动物表达载体。得到的DNA序列编码经由GS接头融合到重链的C-末端的NAR V。
通过PCR修饰抗-RNA酶A骆驼VHH DNA序列，以在5’端包括BamHI位点并在3’端包括EcoR1位点便于克隆。将PCR产物克隆到含有帕考珠单抗(抗-IL-4抗体)重链的哺乳动物表达载体。得到的DNA序列编码经由GS接头融合到重链的C-末端的骆驼VHH。
以下表21概述了业已构建的抗原结合蛋白。
表21
Figure BPA00001189593301371
用293fectin(Invitrogen，12347019)将表21中所述的编码抗原结合蛋白的重链和轻链表达质粒瞬时共转染到HEK 293-6E细胞。在同一天或第二天将蛋白胨养料加入到各细胞培养物中，在初始转染约2-6天后收获上清液物质。用蛋白A柱纯化来自上清液的抗原结合蛋白，然后在结合测定中进行检测。
16.2：rhIGF-1R结合ELISA
用1μg/ml抗-his-标签抗体(Abcam，ab9108)的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后再进行另一洗涤步骤。将0.4μg/mL的rhIGF-1R(R&D Systems)以每孔50μL加入到各孔中。让板在室温孵育1小时，然后洗涤。用封闭液在板中对纯化的抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在进行另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMaxTunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图76、78和80显示ELISA结果，并确证抗原结合蛋白BPC1803-BPC1808结合重组人IGF-1R。还显示抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0结合重组人IGF-1R，然而阴性对照抗体(sigma I5154)显示不结合IGF-1R。
16.3：VEGF结合ELISA
用0.4μg/ml的hVEGF165(R&D Systems)包被96孔高结合板，并在+4℃孵育过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对纯化的抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图77显示VEGF结合ELISA结果，并确证双特异性抗体BPC1803和BPC1804结合人VEGF。在该测定中抗VEGF双特异性抗体(BPC1603)用作阳性对照，显示结合VEGF。与此相反，显示抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0不结合人VEGF。
16.4：HER2结合ELISA
用1μg/ml的HER2(R&D Systems)包被96孔高结合板，并在+4℃孵育过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后再进行一次洗涤。用封闭液在板中对纯化的抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMaxTunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图79和80显示HER结合ELISA结果，并确证抗原结合蛋白BPC1805、BPC1806、BPC1807和BPC1808结合重组人HER2。在该测定中赫赛汀(Herceptin)用作阳性对照，显示结合HER2。与此相反，显示抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0不结合人HER2。
16.5：IL-4结合ELISA
用5μg/ml人IL-4的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对纯化的抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma，A7164)稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图82显示ELISA结果，并确证抗原结合蛋白BPC1809以可比得上抗IL-4单克隆抗体帕考珠单抗的水平结合人IL-4。显示阴性对照抗体(Sigma I5154)不结合IL-4。
图84显示ELISA结果，并确证抗原结合蛋白BPC1816以可比得上抗IL-4单克隆抗体帕考珠单抗的水平结合人IL-4。显示阴性对照抗体(Sigma I5154)不结合IL-4。
16.6：RNA酶A结合ELISA
将业已用PBS稀释的50uL的1ug/mL RNA酶A(Qiagen，19101)加入到96孔Costar板的各孔中。让板在室温孵育2小时，然后用PBST洗涤板，之后将200uL的4％BSA/PBS的封闭液加入到各孔中。让板孵育1小时，并在加入样品前洗涤。以2ug/mL的浓度将纯化的抗体和抗原结合蛋白BPC1809加入到第1列的孔中，然后以1∶2用封闭液对板进行系列稀释。让板孵育1小时然后洗涤。加入50μL用封闭液以1∶1000稀释的山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma，A7164)。让板孵育1小时然后洗涤。将50μl的OPD加入到各孔中，在15-30分钟后用3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图83显示RNA酶A结合ELISA的结果，并确证纯化的人单克隆抗体-骆驼VHH双特异性抗体BPC1809显示结合RNA酶A。与此相反，显示IL-4单克隆抗体帕考珠单抗和阴性对照(sigma I5154)二者都不结合RNA酶A。
16.7：HEL结合ELISA
用5μg/ml的HEL(鸡蛋溶菌酶，Sigma L6876)的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对纯化的抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma，A7164)稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图85显示HEL结合ELISA的结果，并确证纯化的人单克隆抗体-NAR V双特异性抗体BPC1816结合HEL。与此相反，显示IL-4单克隆抗体帕考珠单抗不结合HEL。
实施例17
17.1包含由adnectin组成的表位结合结构域的抗原结合蛋白的设计与 构建
CT01 adnectin对VEGFR2(进一步资料参见WO2005/056764)具有特异性。将CT01 adnectin蛋白序列逆翻译为DNA并优化密码子。包括N-末端的BamHI位点和C-末端的EcoR1位点以便于克隆。
用基于PCR的策略和重叠寡核苷酸从头构建编码最终CT01 DNA序列的DNA片段。将PCR产物克隆到含有H0L0重链(抗-hIGF-1R抗体)的哺乳动物表达载体，使得经由GS接头或TVAAPSGS接头将adnectin融合到重链的C-末端。IGF-1R-VEGFR2双特异性的重链和轻链的蛋白序列示于SEQ ID NO 124、113和133中。
将编码抗-TNF-αadnectin(进一步资料参见US20080139791)的另一adnectin蛋白序列逆翻译为DNA，优化密码子，并在用前述重叠寡核苷酸PCR方法构建之前修饰为包括末端BamHI和EcoR1位点。将PCR产物克隆到含有编码帕考珠单抗(抗-IL-4抗体)重链的DNA的哺乳动物表达载体，使得经由GS接头或TVAAPSGS接头将编码抗-TNF-αadnectin的DNA融合到重链C-末端。IL-4-TNF-α双特异性重链和轻链的蛋白序列示于SEQ ID NO：146、147和15中。
还设计了利用在IL-13单克隆抗体重链C-末端处融合的TNF-α特异性adnectin的抗原结合蛋白。蛋白序列实例示于SEQ ID 134、13和135中。另外，业已设计基于在抗-EGFR抗体爱必妥和IMC-11F8的重链或轻链的C-末端或N-末端处融合CT01的双特异性分子。已设计的蛋白序列的实例示于SEQ ID NO：136-145中。
在这些实例序列中，很多已被构建。已构建了编码SEQ ID NO 136(融合到爱必妥重链的C-末端上的CT01)、SEQ ID NO 144(融合到爱必妥重链N-末端上的CT01)和SEQ ID NO 138(融合到爱必妥轻链C-末端上的CT01)的DNA序列。已用基于PCR的克隆方法构建所有这三种序列，并将其克隆到哺乳动物表达载体。下表22是已被设计和/或构建的抗原结合蛋白的概述。
表22
Figure BPA00001189593301431
Figure BPA00001189593301441
Figure BPA00001189593301451
用293fectin(Invitrogen，12347019)将编码BPC1801、BPC1802、BPC1822、BPC1823、BPC1812、BPC1813和BPC1818的重链和轻链表达质粒瞬时共转染到HEK 293-6E细胞。在同一天或第二天将蛋白胨养料加入到各孔细胞培养物中，在初始转染约2-6天后收获上清液物质。在某些情况下，在结合测定中用上清液材料作为测试物。在其它情况下，用蛋白A柱纯化抗原结合蛋白，然后在结合测定中进行检测。
17.2：rhIGF-1R结合ELISA
用1μg/ml抗-his-标签抗体(Abcam，ab9108)的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。将0.4μg/mL的rhIGF-1R(R&D Systems)以每孔50μL加入到各孔中。让板在室温孵育1小时，然后洗涤。用封闭液在板中对纯化的抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图86显示IGF-1R结合ELISA的结果，并确证纯化的人单克隆抗体-adnectin双特异性抗体(BPC1801和BPC 1802)以可比得上抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0的水平结合重组人IGF-1R。显示阴性对照抗体(Sigma I5154)不结合IGF-1R。
17.3：VEGFR2结合ELISA
用0.4μg/ml的VEGFR2(R&D Systems)包被96孔高结合板，并在+4℃孵育过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对上清液或经纯化的抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMaxTunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图87显示VEGFR2结合ELISA的结果，并确证纯化的人单克隆抗体-adnectin双特异性抗体(BPC1801和BPC1802)结合重组人VEGFR2。与此相反，显示抗-IGF-1R单克隆抗体H0L0不结合人VEGFR2。
图172显示VEGFR2结合ELISA的结果，并确证抗原结合蛋白BPC1818和BPC1813结合重组人VEGFR2。与此相反，显示爱必妥不结合人VEGFR2。对于抗原结合蛋白BPC1813和BPC1818而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图172提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于爱必妥而言，在测定中以2μg/ml的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图172中的稀释倍数1。
图175显示VEGFR2结合ELISA的结果，并确证抗原结合蛋白BPC1812结合重组人VEGFR2。与此相反，显示爱必妥和阴性对照Sigma IgG I5154抗体不结合人VEGFR2。对于抗原结合蛋白BPC1812而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图175提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于爱必妥和Sigma IgG I5154而言，在测定中以2μg/ml的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图175中的稀释倍数1。
17.4：IL-4结合ELISA
用5μg/ml人IL-4的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对上清液或纯化的抗体/抗原结合蛋白进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMaxTunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图88显示IL-4结合ELISA的结果，并确证人单克隆抗体-adnectin双特异性抗体(BPC1823和BPC 1822)结合重组人IL-4。显示阳性对照抗-IL-4单克隆抗体帕考珠单抗结合IL-4，显示阴性对照抗体(SigmaI5154)不结合IL-4。
在本实验中重复HEK转染以获得具有较高抗体浓度的上清液材料。图88b显示通过ELISA测定的该较高浓度的上清液人单克隆抗体-adnectin双特异性抗体(BPC1823)与人IL-4的结合。
对于抗原结合蛋白BPC1823和BPC1822而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图88和88b提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于帕考珠单抗和阴性对照抗体(Sigma I5154)而言，在测定中以1μg/ml的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图88和88b中的稀释倍数1。
17.5：TNF-α结合ELISA
用0.4μg/ml重组人TNFα(RnD Systems 210-TA-050/CF)的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对上清液或纯化的抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma，A7164)稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，15分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(MolecularDeviees)用碱性终点方案读取吸光度。
图89显示TNF-α结合ELISA的结果，并确证人单克隆抗体-adneetin双特异性抗体(BPC1823和BPC1822)结合重组人TNF-α。与此相反，显示抗-IL-4单克隆抗体帕考珠单抗不结合重组人TNF-α。
在本实验中重复HEK转染以获得具有较高抗体浓度的上清液材料。图89b显示通过ELISA测定的该较高浓度的上清液人单克隆抗体-adnectin双特异性抗体(BPC1823)与重组人TNFα的结合。显示IgG对照不结合重组人TNF-α。
对于抗原结合蛋白BPC1822和BPC1823而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图89和89b提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于帕考珠单抗而言，在测定中以1μg/ml的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图89和89b中的稀释倍数1。
17.6：EGFR结合ELISA
用0.67μg/ml重组人EGFR蛋白的PBS溶液包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水洗涤板2次。将200μL封闭液(5％BSA/DPBS缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一个洗涤步骤。用封闭液在板中对抗原结合蛋白质/抗体进行连续稀释。1小时孵育后，洗涤板。用封闭液将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma，A7164)稀释到1μg/mL，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。在另一个洗涤步骤后，将50μl的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，25分钟后通过加入25μL的3M硫酸终止反应。在490nm处用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)用碱性终点方案读取吸光度。
图171显示EGFR结合ELISA的结果，并确证双特异性抗体BPC1818和BPC1813结合重组人EGFR。还显示阳性对照抗体爱必妥结合重组人EGFR。与此相反，显示Sigma IgG I5154不结合重组人EGFR。对于双特异性抗体BPC1813和BPC1818而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图171提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于爱必妥和阴性对照抗体(Sigma I5154)而言，在测定中分别以2μg/ml和1μg/ml的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图171中的稀释倍数1。
图176显示EGFR结合ELISA的结果，并确证双特异性抗体BPC1812结合重组人EGFR。还显示阳性对照抗体爱必妥结合重组人EGFR。与此相反，显示Sigma IgG I5154不结合重组人EGFR。对于双特异性抗体BPC1812而言，上清液中的抗体的量不能被定量，因此图176提供的数据表示为净上清液材料稀释倍数。对于爱必妥和阴性对照抗体(Sigma I5154)而言，在测定中分别以2μg/ml和1μg/m的起始浓度使用纯化的材料，该起始浓度相当于图176中的稀释倍数1。
实施例18
其中“G和S”氨基酸残基已经被除去的IL-13/IL-4mAbdAb的结合 活性数据
18.1.构建mAbdAb
构建了其中G和S氨基酸残基(紧挨接头序列)被除去的mAbdAb。用标准分子生物学技术构建了表达质粒。这些mAbdAb如表23所述。将它们克隆，然后在HEK293-6E细胞、CHOK1细胞或CHOE1a细胞的一种或多种中表达，将它们纯化(分别如实施例1、1.3和1.5所述)，并在多种IL-13和IL-4活性测定中进行分析。
表23
Figure BPA00001189593301501
Figure BPA00001189593301511
18.2.表达和纯化
通过SEC和SDS PAGE纯化并分析这些mAbdAb。制备多个纯化的制备物，示于图90-98中的SEC和SDS PAGE数据代表这些制备物。
18.3.在直接结合ELISA中结合人IL-4
在直接结合ELISA中如方法2所述检测纯化的除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474对人IL-4的结合(在该测定中还检测PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-ELQLE-474的结合)。完成这些分子的多种ELISA测定，示于图99中的数据代表这些测定。
除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474二者都结合人IL-4。在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为结合IL-4的阳性对照。包括纯化的抗-人IL13mAb作为IL-4结合的阴性对照。除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474的结合活性与单独的纯化的抗-IL4mAb(帕考珠单抗)、PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-ELQLE-474相似。
18.4.在直接结合ELISA中结合人IL-13
在直接结合ELISA中如方法1所述检测纯化的除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474对人IL-13的结合(在该测定中还检测如实施例19所述产生的分子PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616的结合)。完成这些分子的多种ELISA测定，示于图100中的数据代表所有测定。
除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616全部都结合人IL-13。在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。包括纯化的抗-人IL13mAb作为IL-13结合的阳性对照。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
18.5.在直接结合ELISA中结合猕猴IL-13
还在直接结合ELISA(如方法17所述)中检测纯化的除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616mAbdAb对猕猴IL-13的结合。完成了这些分子的多种ELISA测定，示于图101中的数据代表所有测定。
除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616全部都结合猕猴IL-13。在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。包括纯化的抗-人IL13mAb作为猕猴IL-13结合的阳性对照。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474和DOM10-53-616)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
18.6.结合人IL-4和人IL-13的Biacore分析
用BIAcoreTM T100在25℃(如方法4和5所述)检测纯化的mAbdAb对人IL-4和人IL-13的结合。这些数据示于表24中。
在实验1中，mAbdAb捕获水平达到大约600的相对响应单位，评估了6个IL-13和IL-4浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。在实验1中对于mAb仅评估一个IL-13(256nM)和IL-4(256nM)浓度曲线。
在实验2中，达到大约400相对响应单位的mAbdAb捕获水平，评估了6个IL-4浓度曲线(64nM、16nM、4nM、1nM、0.25nM和0.0625nM)和6个IL-13浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。在实验2中，对于抗-IL13mAb仅评估一个IL-13浓度曲线(256nM)，对于帕考珠单抗，评估5个IL-4浓度曲线(64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。
在实验3中，达到大约700相对响应单位的mAbdAb或mAb捕获水平，评估了6个IL-4浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)和6个IL-13浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。
表24
Figure BPA00001189593301531
在实验1和2中，除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474二者都以相似的结合亲和力结合IL-4，该结合亲和力与单独的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)的结合亲和力接近相等。除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474还以相似的结合亲和力结合IL-13。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
在实验3中，除去GS的586H-210和除去GS的586H-TVAAPS-210二者都以相似的结合亲和力结合IL-13，该结合亲和力与抗-人IL13mAb的结合亲和力接近相等。除去GS的586H-210和除去GS的586H-TVAAPS-210也极为紧密地结合IL-4，然而由于正解离作用和BIAcoreTM技术的灵敏度水平(*)，本方法不能测定其结合亲和力。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。
18.7.结合猕猴IL-4和猕猴IL-13的Biacore分析
用BIAcoreTM T100在25℃(如方法24和23所述)检测纯化的mAbdAb对猕猴IL-4和猕猴IL-13的结合。这些数据示于表25中。mAbdAb捕获水平达到大约600相对响应单位，评估了6个IL-13浓度曲线(256、64、16、4、1、0.25nM)和5个IL-4浓度曲线(64、16、4、1、0.25nM)。
表25
Figure BPA00001189593301541
Figure BPA00001189593301551
除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、除去第二个GS的PascoH-ASTKGPT-474、PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474和PascoH-ASTKG-474全部都以相似结合亲和力结合猕猴IL-4。除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、除去第二个GS的PascoH-ASTKGPT-474、PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474和PascoH-ASTKG-474全部也都以相似结合亲和力结合IL-13。
还用BIAcoreTM T100于25℃(如方法24和23所述)检测纯化的mAbdAb对猕猴IL-4和猕猴IL-13的结合。这些数据示于表26中。mAbdAb捕获水平达到大约600相对响应单位，评估了6个IL13和6个IL-4浓度曲线(256、64、16、4、1和0.25nM)。
表26
Figure BPA00001189593301552
Figure BPA00001189593301561
除去GS的586H-210和除去GS的586H-TVAAPS-210二者都以相似的结合亲和力结合猕猴IL-13；这些mAbdAb似乎结合IL13比结合抗-人IL13mAb更有效，然而在该mAb情况中，仅完成一个浓度曲线，这固然不如全浓度范围评估精确。除去GS的586H-210和除去GS的586H-TVAAPS-210也极为紧密地结合IL-4，然而由于正解离作用和BIAcoreTM技术的灵敏度水平(*)，本方法不能测定该结合亲和力。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-4dAb(DOM9-112-210)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为阳性对照以证明IL-4结合。
18.8.IL-4结合mAbdAb对随后的IL-13结合动力学的影响及反之的 Biacore分析；和IL-13结合mAbdAb对随后的IL-4结合动力学的影 响及反之的Biacore分析
也将IL-13和IL-4BIAcoreTM结合测定用于研究IL-4结合除去GS的PascoH-474对随后的IL-13结合动力学的影响及反之；和IL-13结合586H-TVAAPS-210对随后的IL-4结合动力学后影响及反之。用BIAcoreTM T100设备于25℃用抗-人IgG捕获mAbdAb(或阳性对照mAb)进行分析。简言之，按照制造商建议通过伯胺偶联将抗-人IgG偶联到CM5芯片上。然后将mAbdAb构建体(或阳性对照mAb)捕获到该表面(以大约250-750RU)上，以256nM使第一分析物(人IL-13或人IL-4)通过4分钟。然后以256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM的浓度使第二分析物(分别为人IL-4或人IL-13)通过，并且为了双重参考，让缓冲注射液通过捕获抗体或mAbdAb表面。用评估软件在设备中分析(拟合成1∶1结合的模型)数据。然后用3M氯化镁再生该表面。将来自这些实验的数据示于表27和28中。
表27
Figure BPA00001189593301571
不管人IL-4是否结合除去GS的PascoH-474，该分子对人IL-13的结合亲和力都相似。另外，不管人IL-4是否结合586H-TVAAPS-210，该分子对人IL-13的结合亲和力都相似，并所述结合亲和力也类似于抗-IL13mAb对人IL-13的结合亲和力。
获得的IL-4结合除去GS的PascoH-474和586H-TVAAPS-210的解离速率(kd)极低，并且超出BIAcoreTM T100的灵敏度范围，因此不能用作结合亲和力(数据未显示)的精确测定。然而，数据确实表明所测的所有构建体对人IL-4结合极为紧密。因此，不管人IL-13是否结合除去GS的PascoH-474，该分子对人IL-4的结合亲和力都极为紧密。另外，不管人IL-13是否结合586H-TVAAPS-210，该分子对人IL-4的结合亲和力都极为紧密。
18.9.mAbdAb效价
通过ELISA如方法19所述检测mAbdAb对人IL-4结合人IL-4Rα的抑制。在一个实验中检测示于表28的所有分子，然而，将数据绘制在两个图中以区分曲线图(586H-TVAAPS-210进行2次，这在表25中被标为样品1和样品2)。这些数据示于图102和103.
除去GS的PascoH-474与帕考珠单抗相似地抑制人IL-4与人IL4Rα的结合。除去GS的586H-210、除去GS的586H-TVAAPS-210、586H-TVAAPS-210、586H-210、586H-G4S-210和586H-ASTKG-210全部都与DOM9-112-210相似地抑制人IL-4与人IL4Rα的结合。包括帕考珠单抗和DOM9-112-210作为抑制IL-4结合IL4Rα的阳性对照。包括DOM10-53-474和同种型-匹配的mAb(对不相关抗原具有特异性)作为抑制IL-4结合IL4Rα的阴性对照。
还用这些数据来测定各种分子的IC50值。IC50值是能够抑制人IL-4与人IL4Rα结合到50％的mAbdAb或mAb或dAb的浓度。IC50值示于表28中。
表28
Figure BPA00001189593301581
这些数据确证除去GS的PascoH-474的表现与帕考珠单抗相似，所有586H-210mAbdAb“家族成员”的表现与DOM9-112-210dAb相似。
18.10.在TF-1细胞生物测定中mAbdAb对人和猕猴IL-13的中和
在TF-1细胞生物测定(分别如方法8和方法20所述)中检测多种纯化的mAbdAb对人和猕猴IL-13的中和。在这些测定中每种分子检测1-9次，没有显示所有图表，但图104和105分别为显示对
人IL-13和猕猴IL-13的中和数据的代表性图表。在本生物测定中包括DOM10-53-474作为中和人或猕猴IL-13的阳性对照。在本生物测定中还包括对不相关抗原具有特异性的dAb(阴性对照dAb)作为中和人或猕猴IL-13的阴性对照。
在TF-1细胞生物测定中，除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474和除去第二个GS的PascoH-ASTKG-474以及PascoH-616、PascoH-TVAAPS-616和DOM10-53-616(它们如实施例19所述)完全中和人和猕猴IL-13二者的生物活性。
18.11.在TF-1细胞生物测定中mAbdAb对人和猕猴IL-4的中和
在TF-1细胞生物测定(分别如方法9和方法21所述)中检测多种纯化的mAbdAb对人和猕猴IL-4的中和。在这些测定中每种分子检测2次，没有显示所有图表，但图106和107分别为显示人IL-4和猕猴IL-4的中和数据的代表性图表(来自数据集)。在本生物测定中包括抗-IL13mAb作为中和人或猕猴IL-4的阴性对照，包括帕考珠单抗作为中和人或猕猴IL-4的阳性对照。另外，在这些生物测定中还检测PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-G4S-474对人和猕猴IL-4的中和。
在TF-1细胞生物测定中，除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474完全中和人和猕猴IL-4二者的生物活性。另外，在TF-1细胞生物测定中，PascoH-474、PascoH-TVAAPS-474、PascoH-ASTKG-474和PascoH-G4S-474还完全中和人IL-4的生物活性。
基于从多种不同的实验获得的数据得出ND50值。ND50值是能够中和IL-13或IL-4的生物活性到50％的mAbdAb或mAb或dAb的浓度。平均ND50值、标准偏差(SD)和所测次数(n)示于表29中。
表29
Figure BPA00001189593301601
在TF-1细胞生物测定中，除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474和除去第二个GS的PascoH-ASTKGPT-474都完全中和人和猕猴IL-13的生物活性。另外，除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474和除去第二个GS的PascoH-ASTKGPT-474对人IL-13的中和效价(ND50值)都相似，并且在单独的纯化的抗-IL13 dAb(DOM10-53-474)的ND50值的1倍内。
在TF-1细胞生物测定中，除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474二者都完全中和人和猕猴IL-4的生物活性。另外，除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474对人IL-13和猕猴IL-13的中和效价(ND50值)都相似，并且在帕考珠单抗的ND50值的1倍内。
18.12.mAbdAb抑制人IL-13与人IL-13Rα2的结合的能力
通过ELISA如方法22所述检测表30所列分子对人IL-13与人IL-13Rα2结合的抑制。在一个实验中检测所有分子。数据示于图108中。
所测的所有mAbdAb抑制人IL-13与人IL13Rα2的结合。抑制水平与DOM10-53-474、DOM10-53-616和抗-IL13mAb的抑制水平相似。包括帕考珠单抗和阴性对照dAb(对不相关抗原具有特异性)作为抑制IL-13结合IL13Rα2的阴性对照。
也用这些数据测定各种分子的IC50值。IC50值为能够抑制人IL-13与人IL13Rα2的结合到50％的mAbdAb或mAb或dAb的浓度。IC50值示于表30中。
表30
Figure BPA00001189593301611
这些数据确证除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616的表现与DOM10-53-474、DOM10-53-616和抗-IL13mAb相似。
实施例19
含有抗-IL13DOM10-53-616dAb的mAbdAb
19.1.含有抗-IL13DOM10-53-616dAb的mAbdAb的构建
通过位点定向诱变如实施例1所述从现有载体克隆表31中所述的两种抗-IL4mAb-抗-IL13dAb。
表31
Figure BPA00001189593301622
19.2.含有抗-IL13DOM10-53-616dAb的mAbdAb的表达和纯化
如实施例1.3所述在HEK293-6E细胞和CHOE1a细胞中表达这些mAbdAb。
通过SEC和SDS PAGE纯化并分析mAbdAb。制备了PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616mAbdAb的多个纯化的制备物，示于图109(关于PascoH-616的SEC曲线)、110(关于PascoH-TVAAPS_616的SEC曲线)、111(关于PascoH-616的SDS PAGE)和112(关于PascoH-TVAAPS-616的SDS PAGE)中的SEC和SDS PAGE数据代表了这些制备物。
19.3.在直接结合ELISA中mAbdAb与人IL-13的结合
在直接结合ELISA(如方法1所述)中检测PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616纯化的mAb dAb对人IL-13的结合。这些数据示于图113中。
纯化的PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616二者都结合人IL-13。在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)作为IL-13结合的阴性对照。包括纯化的抗-人IL13mAb作为IL-13结合的阳性对照。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-616)，因为该dAb不能被第二检测抗体检测；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
19.4.对结合人IL-4和人IL-13的Biacore分析
用BIAcoreTM T100在25℃(如方法4和5所述)检测纯化的mAbdAb对人IL-4和人IL-13的结合。这些数据示于表32中。
在实验1中，mAbdAb捕获水平达到大约600相对响应单位，评估了6个IL-13和IL-4浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。在实验1中对于mAb仅评估一个IL-13(256nM)和IL-4(256nM)浓度曲线。
在实验2中，mAbdAb捕获水平达到大约400相对响应单位，评估了6个IL-4(64nM、16nM、4nM、1nM、0.25nM和0.0625nM)和6个IL-13浓度曲线(256nM、64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。在实验2中，对于抗-IL13mAb仅评估一个IL-13浓度曲线(256nM)，对于帕考珠单抗，评估5个IL-4浓度曲线(64nM、16nM、4nM、1nM和0.25nM)。
表32
Figure BPA00001189593301631
PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616二者都以相似的结合亲和力结合IL-4，该结合亲和力与单独的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)的结合亲和力相似。PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616二者都结合IL-13。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-616)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
19.5.对结合猕猴IL-13的Biacore
也用BIAcoreTM T100在25℃(如方法30所述)检测纯化的mAbdAb对猕猴IL-13的结合。这些数据示于表33中。mAbdAb捕获水平达到大约400相对响应单位，评估了6个IL-13浓度曲线(256、64、16、4、1和0.25nM)。对于抗-IL13mAb仅有一个IL-13浓度曲线(256nM)。
表33
PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616二者都以相似的结合亲和力结合猕猴IL-13。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-616)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中使用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
19.6.在TF-1细胞生物测定中mAbdAb对人和猕猴IL-13的中和
在TF-1细胞生物测定(分别如方法8和方法20所述)中检测纯化的mAbdAb对人IL-13和猕猴IL-13的中和。在每一测定中对这些分子检测3次，图114为显示对人IL-13的中和数据的代表性图表。图114a为显示对猕猴IL-13的中和数据的代表性图表。在本生物测定中包括DOM10-53-616作为中和IL-13的阳性对照。在本生物测定中还包括对不相关抗原具有特异性的dAb(阴性对照dAb)作为中和IL-13的阴性对照。
平均ND50值、标准偏差(SD)和所测次数(n)示于表34中。
表34
Figure BPA00001189593301651
在TF-1细胞生物测定中，PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616二者以及另外的mAbdAb(除去GS的PascoH-TVAAPS-474和除去GS的PascoH-474)完全中和人和猕猴IL-13的生物活性。
另外，PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616对人IL-13的中和效价(ND50值)相似，并且在单独的纯化的抗-IL13dAb(DOM10-53-616)的ND50值的2倍内。
还通过ELISA如方法22所述检测PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616对人IL-13结合人IL-13Rα2的抑制。这些数据提供在实施例18.12中。
实施例20
在人全血磷-STAT6生物测定中mAbdAb中和人IL-13或IL-4的能 力
如方法16所述在人全血磷-STAT6生物测定中检测mAbdAb中和人IL-13或IL-4的能力。
测定了2种mAbdAb构建体(纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb、586H-TVAAPS-210；和纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、除去GS的PascoH-474)的IL-4或IL-13中和效价(即抑制IL-4或IL-13生物活性)。在该测定中包括纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)和纯化的抗-IL4dAb(DOM9-112-210)作为中和rhIL-4的阳性对照。包括纯化的抗-人IL-13mAb和纯化的抗-IL13 dAb(DOM10-53-474)作为中和rhIL-13的阳性对照。包括与dAb混合的同种型匹配的mAb(二者都对不相关抗原具有特异性)作为中和rhIL-4或rhIL-13的阴性对照。用来自不同供体的血对每种分子检测至少2次。图115-124为显示代表性数据的图表。
纯化的mAbdAb完全中和rhIL-13和rhIL-4的生物活性。
如方法16所述，将测试分子中和rhIL-13或rhIL-4生物活性的能力表示为中和2ng/mL人IL-4或人IL-13到50％所需的分子(例如mAbdAb)的浓度(IC50)。这些数据示于表35中。出示了关于每一种分子的来自所有供体的合并平均IC50连同标准偏差。
表35
Figure BPA00001189593301661
IC50值比较表明586-TVAAPS-210与抗-IL13mAb和DOM9-112-210相似地抑制IL-13和IL-4诱导的pSTAT-6(分别在IL-13和IL-4全血测定中)。IC50数据的比较还表明除去GS的PascoH-474与DOM10-53-474和帕考珠单抗相似地抑制IL-13和IL-4诱导的pSTAT-6(分别在IL-13和IL-4全血测定中)。对照mAb显示在所有供体中在高达所测的最大浓度661nM下无抑制，对照dAb显示在所有供体中在高达所测的最大浓度2291nM下不中和。
实施例21
双重靶向的抗-IL4/抗-IL13mAbdAb的大鼠PK研究
在大鼠PK研究(如表35.1所概述)中评估PascoH-G4S-474、PascoL-G4S-474、586H-TVAAPS-210和586H-TVAAPS-154。简言之，以2mg/kg的目标剂量水平将mAbdAb单次静脉内(i/v)给予雄性Sprague-Dawley大鼠(体重大约200克-220克)。在分配的时间点(0小时到312小时)抽取100l血液样品，处理为血浆。在人IgG检测测定和/或IL-13配体结合测定和/或IL-4配体结合测定中，评估大鼠血浆样品中测试分子的存在情况。另外，还评估血浆中帕考珠单抗(在大鼠中)的PK曲线：在该情况下，在人IgG检测测定和IL-4配体结合测定中评估帕考珠单抗在大鼠血浆样品中的存在情况。
在第一个研究中，将帕考珠单抗给予4只大鼠。在第二个研究中，有4个治疗组(2mg/kg PascoH-G4S-474、2mg/kg PascoL-G4S-474、2mg/kg 586H-TVAAPS-210和2mg/kg 586H-TVAAPS-154)，每组4只大鼠。
由血浆浓度-时间曲线数据(未显示)得出PK参数(示于表35.1)。注意在这些测定中不止一次分析某些血浆样品，并且仅从这些数据集之一得出表35.1中的PK参数。还要注意对于个别的动物剂量，没有将PK参数标准化，取而代之的是假定为2mg/kg的标称剂量。注意在对PascoH-G4S-474的IgG PK测定中某些遇到技术困难，因此浓度可能估计过高。另外，在某些情况下进行两次IgG血浆浓度-时间曲线分析(在表35.1中被标注为分析1和分析2)。仅在分析2中对产生自IL-13和IL-4配体结合PK测定的血浆浓度-时间曲线数据进行分析。对PascoL-G4S-474和586H-TVAAPS-154的IL-13和IL-4配体结合测定所产生的血浆浓度-时间曲线数据不用于获得这些分子的PK参数。
表35.1
Figure BPA00001189593301681
在对PascoH-G4S-474的IL-13和IL-4测定中产生的血浆浓度-时间曲线数据(及随后获得的PK参数)趋向于类似；在对586H-TVAAPS-210的IL-13、IL-4和IgG PK测定中产生的血浆浓度-时间曲线数据(及随后获得的PK参数)也是这种情况。这表明在整个研究过程中这些mAbdAb在大鼠血浆中是“完好”的。获得的586H-TVAAPS-154的PK参数比起任何其它mAbdAb，似乎与获得的帕考珠单抗的PK参数更相似。
实施例22
猕猴PK研究
在猕猴中进行PK研究。以1mg/kg的目标剂量水平单次静脉内给予动物。在分配的时间点抽取500μl血液样品，处理为血浆。然后在IL-13配体结合测定、IL-4配体结合测定和IL-13/IL-4桥联测定(bridging assay)中，评估猕猴血浆样品中测试分子的存在情况。
来自这些研究的关于“除去GS的PascoH-474”和“586H-TVAAPS-210”mAbdAb的初始数据与上述大鼠PK数据一致，表明这些分子比mAb更快地从系统循环中清除，但比dAb清除慢。
实施例23
23.1.产生双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
通过将dAb融合到mAb重链的C-末端来构建该双重靶向的mAbdAb。先前已构建抗-EGFR mAb重链和轻链表达盒。用于克隆的限制性位点与由实施例10中所述的限制性位点(SaII和HindIII)一样。
然后通过PCR(用编码SalI和HindIII端的引物)扩增编码抗-VEGF dAb(DOM15-26-593)的DNA，并将其插入到经修饰的3’编码区，在mAb和dAb之间产生接头“STG”(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：164和243分别为轻链和重链)，按照制造商方案用Qiagen Mega Prep试剂盒制备大规模DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：165和137)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
23.2.双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化该双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品(命名为DMS4010)的SDS-PAGE分析(图128)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb上样到预平衡的S-20010/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以1ml/分钟流动。SEC曲线显示作为对称峰流动的单一物质(图129)。
23.3.双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的效价
分别如方法12和13所述测定该分子中和VEGF和EGFR的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb(命名为DMS4010)的抗-EGFR效价(图130)计算为4.784nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为4.214nM。在抗-VEGF受体结合测定(图131)中，该mAbdAb(命名为DMS4010)的EC50为58pM(0.058nM)，而抗-VEGF对照mAb产生的EC50为214.1pM(0.2141nM)。综上所述，测定数据显示实施例23的构建体即双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb对两种抗原都有效。
23.4.双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的PK
在将双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb(命名为DMS4010)给予猕猴后测定其药代动力学曲线。以5mg/kg的剂量静脉内给予该化合物，通过在单独的ELISA测定中结合EGFR和VEGF二者来测定给药后多个时间点药物的血清水平。图132显示该测定的结果，其中将数据与业已产生的mAb西妥昔单抗(cetuximab)(抗-EGFR)和贝伐珠单抗(bevacizumab)(抗-VEGF)的历史数据进行比较。进一步的详细资料示于表36中。
表36
23.5.产生备选抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
以与上面实施例11.1所述相似方式构建备选抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb，用STG接头将相同的抗-EGFR mAb在重链C-末端连接到VEGF dAb上。在该种情况下所用的抗-VEGF dAb为DOM15-10-11。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：165和186)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达该分子，然而，与实施例23.2所述分子的表达相比，得到显著较低的表达水平。当在如实施例23.3所述的同一VEGF测定中检测效价时，发现在该测定中抑制VEGF结合VEGF受体的水平不可检测。
实施例24
24.1.不用接头产生双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
制备在上述实施例23中的mAbdAb的衍生物，其中除去dAb和mAb的CH3结构域之间的“STG”接头。SDM用于从编码重链的质粒删去编码STG接头的残基。选择已分别验证轻链和重链序列(SEQID NO：243和SEQ ID NO：174)的克隆，用Qiagen Mega Prep试剂盒按照制造商方案制备大规模的DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：175和137)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
24.2.不含接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的纯化和 SEC分析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化该双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品(命名为DMS4011)的SDS-PAGE分析(图133)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb上样到预平衡的S-200 10/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以1ml/分钟流动。SEC曲线显示作为对称峰流动的单一物质(图134)。
24.3.不含接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的效价
分别如方法12和13所述测定该分子中和VEGF和EGFR的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb(命名为DMS4011)的抗-EGFR效价(图135)计算为3.529nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为3.647nM。在抗-VEGF受体结合测定(图136)中，该mAbdAb(命名为DMS4011)的EC50为34209pM(0.3429nM)，而抗-VEGF对照mAb产生的EC50为214.1pM(0.2141nM)。综上所述，测定数据显示实施例24的构建体即不含接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb对两种抗原都有效。
实施例25
25.1.产生含较长接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
制备在上述实施例23中的mAbdAb的衍生物，其中通过将柔性的“GGGGS”基序的一个或多个重复插入到编码重链的质粒来延长dAb和mAb的CH3结构域之间的接头。
含SEQ ID NO：175中所述的重链序列的第一种分子具有该基序的一个重复，因此具有接头“STGGGGGS”。
含SEQ ID NO：177中所述的重链序列的第二种分子具有该基序的两个重复，因此具有接头“STGGGGGSGGGGS”。
这两者都独立与实施例23(SEQ ID NO：243)中所用的相同的轻链配对。
选择已验证轻链和重链序列的克隆，用Qiagen Mega Prep试剂盒按照制造商方案制备大规模的DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(命名为DMS4023的SEQ ID NO：176和137；命名为DMS4024的SEQ ID NO：178和137)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
25.2.含较长接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的纯化 和SEC分析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化这些双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品DMS4023和DMS4024的SDS-PAGE分析(图137)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb上样到预平衡的S-200 10/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以1ml/分钟流动。DMS4023(图138)和DMS4024(图139)二者的SEC曲线都显示具有稍微拖尾的峰的单一物质。
25.3.含有较长接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的效 价
分别如方法12和13所述测定该分子中和VEGF和EGFR的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。mAbdAb DMS4023的抗-EGFR效价(图140)计算为7.066nM并且mAbdAb DMS4024的效价计算为6.420nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为7.291nM。在抗-VEGF受体结合测定(图141)中，mAbdAb DMS4023的EC50为91.79pM(0.091nM)并且mAbdAb DMS4024的EC50为90pM(0.0906nM)，而抗-VEGF对照mAb产生的EC50为463.2pM(0.4632nM)。综上所述，测定数据显示实施例25的构建体即含较长接头的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb对两种抗原都有效。
实施例26
26.1.产生双重靶向的抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb
通过将dAb融合到mAb重链的C-末端来构建该双重靶向的mAbdAb。先前已构建抗-VEGF mAb重链和轻链表达盒。用于克隆的限制性位点与由实施例10中所述的限制性位点(SaII和HindIII)相同。
然后通过PCR(用编码SalI和HindIII端的引物)扩增编码抗-EGFR dAb(DOM16-39-542)的DNA，并将其插入到经修饰的3’编码区，导致产生在mAb和dAb之间的接头“STG”(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：179和181分别为轻链和重链)，按照制造商方案用Qiagen Mega Prep试剂盒制备大规模DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：180和182)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
26.2.双重靶向的抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb的纯化和SEC分 析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化这些双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品(命名为DMS4009)的SDS-PAGE分析(图142)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb上样到预平衡的S-20010/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以1ml/分钟流动。该分子的SEC曲线显示具有对称峰的单一物质(图143)。
26.3.双重靶向的抗-VEGF/抗-EGFR mAbdAb的效价
分别如方法12和13所述测定该分子中和VEGF和EGFR的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。该mAbdAb DMS4009的抗-EGFR效价(图144)计算为132.4nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为6.585nM。在抗-VEGF受体结合测定(图145)中，该mAbdAb的EC50为539.7pM(0.5397nM)，而抗-VEGF对照mAb产生的EC50为380.5pM(0.3805nM)。综上所述，测定数据显示实施例26的构建体即双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb对两种抗原都有效。
实施例27
27.1.产生双重靶向的抗-EGFR/抗-IL-13mAbdAb
通过将dAb融合到mAb重链的C-末端来构建该双重靶向的mAbdAb。先前已构建抗-EGFR mAb重链和轻链表达盒。用于克隆的限制性位点与由实施例10中所述的限制性位点(SaII和HindIII)一样。
然后通过PCR(用编码SalI和HindIII端的引物)扩增编码抗-IL-13dAb(DOM10-53-474)的DNA，并将其插入到经修饰的3’编码区，导致产生在mAb和dAb之间的接头“STG”(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸)。
选择已验证序列的克隆(SEQ ID NO：243和183分别为轻链和重链)，按照制造商方案用Qiagen Mega Prep试剂盒制备大规模DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：137和184)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
27.2.双重靶向的抗-EGFR/抗-IL-13mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化这些双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品(命名为DMS4029)的SDS-PAGE分析(图146)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约25和约60kDa的两条带，其分别对应于轻链和融合dAb的重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-IL-13mAbdAb上样到预平衡的S-200 10/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以0.5ml/分钟流动。该分子的SEC曲线显示具有对称峰的单一物质(图147)。
27.3.双重靶向的抗-EGFR/抗-IL-13mAbdAb的效价
分别如方法13和25所述测定该分子中和EGFR和IL-13的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。mAbdAb DMS4029的抗-EGFR效价(图148)计算为9.033nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为8.874nM。在基于IL-13细胞的中和测定(图149)中，该mAbdAb的EC50为1.654nM，而抗-IL-13对照mAb产生的EC50为0.996nM。综上所述，测定数据显示实施例27的构建体即双重靶向的抗-EGFR/抗-IL-13mAbdAb对两种抗原都有效。
实施例28
28.1.产生其中dAb位于轻链上的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
通过将dAb融合到mAb轻链的C-末端来构建双重靶向的mAbdAb。先前已构建抗-EGFR mAb重链和轻链表达盒。
为了引入用于将dAb插入到轻链的限制性位点，用mAb轻链表达载体作为模板使用位点定向诱变来产生BamHI和HindIII克隆位点。然后通过PCR(用编码SalI和HindIII端的引物)扩增编码抗-VEGFdAb(DOM15-26-593)的DNA，并将其插入到经修饰的3’编码区，导致产生mAb和dAb之间的接头“GSTG”或“GSTVAAPS”。
含SEQ ID NO：187中所述的轻链序列的第一种分子具有接头“GSTG”。
含SEQ ID NO：189中所述的轻链序列的第二种分子具有接头“GSTVAAPS”。
这两者都独立与SEQ ID NO：245重链配对。
选择已验证轻链和重链序列的克隆，按照制造商方案用QiagenMega Prep试剂盒制备大规模DNA制备物。通过用瞬时转染技术共转染轻链和重链(SEQ ID NO：188和139命名为DMS4013；和SEQ ID NO：190和139命名为DMS4027)在哺乳动物HEK293-6E细胞中表达mAbdAb。
28.2.其中dAb位于轻链上的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的纯化和SEC分析
按照已建立的方案用蛋白-A亲和色谱法从澄清的表达上清液纯化这些双重靶向的mAbdAb。通过分光光度法根据在280nm处的光吸光度测量值确定纯化的样品的浓度。纯化的样品DMS4013和DMS4027的SDS-PAGE分析(图150)显示未经还原的样品泳动至约170kDa，而经还原的样品显示泳动至约38和约50kDa的两条带，其分别对应于融合dAb的轻链和重链。
为了进行大小排阻色谱(SEC)分析，将抗-EGFR/抗-VEGFmAbdAb上样到预平衡的S-200 10/300GL柱(连接到HPLC系统)上，用PBS以1ml/分钟流动。DMS4013(图151)和DMS4027(图152)二者的SEC曲线都显示具有对称峰的单一物质。
28.3.其中dAb位于轻链上的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的效价
分别如方法12和13所述测定该分子中和VEGF和EGFR的能力。用GraphPad Prism分析测定数据。用S形剂量应答曲线测定效价，用最佳拟合模型拟合数据。mAbdAb DMS4013的抗-EGFR效价(图153)计算为7.384nM，mAbdAb DMS4027的效价计算为7.554nM，而对照抗-EGFR mAb给出的EC50值为7.093nM。在抗-VEGF受体结合测定(图154)中，mAbdAb DMS4013的EC50为1.179nM，mAbdAbDMS4027的EC50为0.1731nM，而抗-VEGF对照mAb产生的EC50为0.130nM。综上所述，测定数据显示实施例28的构建体即其中dAb位于轻链上的双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb对两种抗原都有效。
实施例29
双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF和抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb的 Biacore分析
对在实施例11(抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb)和实施例23、24、25和28(抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb)中所述的mAbdAb进行BIAcore分析，以测定它们结合其相应抗原的动力学结合常数及解离常数。在BIAcoreTM 3000设备上进行分析。设备温度设定为25℃。将HBS-EP缓冲液用作流动缓冲液。以设备最高可能比率采集实验数据。按照制造商说明书用标准胺偶联化学用蛋白A包被研究级的CM5芯片上的一流动细胞，同样处理第二批流动细胞，但用缓冲液代替蛋白A以产生参考表面。然后将用蛋白A包被的流动细胞用于捕获mAbdAb。抗原如表37中所详述以2x系列稀释液注入。几种稀释液以一式二份来进行。单独的缓冲注入液代替配体用于本底扣除。用设备软件自带的动力学Wizard以随机顺序注入样品。在每一次循环结束时通过注入10mM甘氨酸，pH 1.5来使表面再生。用BIA评估软件4.1来进行数据处理和动力学拟合。显示重复结果(来自同一次运作)平均值的数据示于表37中。显示的DMS4010的多个值代表在单独场合的两次实验运作。因所分析的配体的浓度，787nM的值可能高估了亲和力。
表37
Figure BPA00001189593301781
Figure BPA00001189593301791
实施例30
包含融合到双特异性抗体骨架上的单一结构域抗体的三特异性抗体
30.1.构建
用合适的限制性酶位点和所加的信号序列，从头构建了编码对IL-18和IL-12抗原具有特异性的双特异性抗体分子的可变重链和轻链结构域的基因(进一步的资料参见WO 2007/024715)。用标准分子生物学技术将可变重链结构域克隆到表达载体，所述表达载体含有经由TVAAPS接头在恒定区的c-末端融合到抗-IL4结构域抗体DOM9-112-210(SEQ ID NO：4)的IgG1重链恒定区。将轻链可变结构域同样地克隆到含有Ck恒定区序列的表达载体中。已构建和表达的抗体列入表38中。
表38
Figure BPA00001189593301792
30.2表达和纯化
简言之，用先前与293fectin试剂(Invitrogen#51-0031)孵育的重链和轻链表达质粒共转染25ml 1.5x106细胞/ml的HEK293细胞。将其置于37℃、5％CO2和95％RH的振荡培养箱中。24小时后，加入蛋白胨养分培养基，让细胞再生长48小时。通过离心收获上清液，通过ELISA定量IgG水平。将得到的mAbdAb命名为BPC1616(SEQID NO：193和194)。
30.3.IL-12结合ELISA
评估了转染的细胞上清液对重组人IL-12的结合。简言之，用抗-人IL-12(R&D Systems AF219NA)以2μg/ml包被ELISA板，并用封闭液(Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭。然后将封闭液中的25ng/ml重组人IL-12(PeproTech#200-12)装入板中。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板在室温孵育1小时。加入在封闭液中稀释的各种稀释度的细胞上清液以及不相关对照抗体(帕考珠单抗和同种型匹配的对照hIgG)。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(SigmaA7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)来使板显色，并通过加入3M H2SO4终止显色。用板读数器在490nm处测量吸光度，作图确定平均吸光度。
结果显示在图155中，其显示BPC1616结合重组人IL-12，而两种对照抗体显示不结合。
30.4.IL-1R结合ELISA
评估了转染的细胞上清液对重组人IL-18的结合。简言之，用抗-人IL-18(由GSK制备)以1μg/ml包被ELISA板，并用封闭液(Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭。加入在封闭液中稀释的各种稀释度的细胞上清液以及不相关抗体(帕考珠单抗和同种型匹配的对照人IgG)。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)来使板显色，并通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。结果显示在图156中，其显示BPC1616结合重组人IL-18，而两种对照抗体显示不结合。
30.5.IL-4结合ELISA
评估了转染的细胞上清液对重组人IL-14的结合。简言之，用IL-4(由GSK制备)以1μg/ml包被ELISA板，并用封闭液(Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭。加入在封闭液中稀释的各种稀释度的细胞上清液以及抗-IL-4单克隆抗体(帕考珠单抗)和不相关的抗体(同种型匹配的对照hIgG)。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)来使板显色，并通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。
结果显示在图157中，其显示BPC1616和帕考珠单抗结合重组人IL-4，而对照抗体显示不结合。
实施例31
包含线内融合到单克隆抗体C-末端的两个单一结构域抗体的三特异 性mAbdAb
31.1.构建
构建了三种三特异性抗体(mAbdAb-dAb)，其中将两个单一结构域抗体线内(in line)融合到单克隆抗体重链的C-末端。
简言之，通过PCR引入N-末端的BglII限制性位点和C-末端的BamHI限制性位点，以使编码结构域抗体的DNA序列位于DOM10-53-474(SEQ ID NO：5)、DOM9-155-154(SEQ ID NO：3)和DOM9-112-210(SEQ ID NO：4)的侧翼。
然后将编码DOM10-53-474结构域抗体的DNA片段克隆到编码与抗IL-4结构域抗体DOM9-112-210(SEQ ID NO：71)融合的抗IL-5单克隆抗体重链的哺乳动物表达载体的BamHI位点。将编码DOM9-155-154和DOM9-112-210结构域抗体的DNA片段二者都独立克隆到编码与抗IL-13结构域抗体DOM10-53-474(SEQ ID NO：116)融合的抗-CD20单克隆抗体重链的哺乳动物表达载体的BamHI位点。得到的表达载体编码含融合到C-末端的两个单一结构域抗体的重链。重链的蛋白质序列示于表39中所述的SEQ ID NO：195、196和197。
表39为业已构建的mAbdAb的概述。
表39
Figure BPA00001189593301821
31.2.表达和纯化
用293fectin试剂(Invitrogen，12347019)将编码BPC1008、BPC1009和BPC1010重链和轻链的表达质粒共转染到HEK 2936E细胞中。第二天将蛋白胨养料加入到细胞培养物中，从初始转染约2-6天后收获上清液物质。在用结合测定检测前用蛋白A柱纯化抗体。
31.3.IL-4结合ELISA
用包被缓冲液(0.05M碳酸氢盐pH9.6，Sigma C-3041)3中的5μg/ml人IL-4(GSK)包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水(TBST)洗涤板2次。将100μL封闭液(含1％BSA的TBST缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。用封闭液在板中连续稀释纯化的抗体。孵育1小时后，将板洗涤3次。将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(SigmaA7164)在封闭液中以1∶2000稀释，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。将板洗涤3次，然后将OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，5分钟后通过加入25μL的3M硫酸使反应终止。用碱性终点方案用VersaMax Tunable微板读数器(MoleCularDevices)在490nm处读取吸光度。
ELISA结果示于图158中，其确证抗体BPC1008、1009和BPC1010结合重组人IL-4。还显示阳性对照帕考珠单抗结合重组IL-4，然而显示阴性对照抗IL-13mAb和美泊利单抗不结合IL-4。也在单独的实验中检测抗体BPC1009和BPC1010，其给出与图158所示相似的结果。
31.4.IL-5结合ELISA
用包被缓冲液(0.05M碳酸氢盐pH9.6)中的5.9μg/ml人IL-5(GSK)包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水(TBST)洗涤板2次。将100μL封闭液(含1％BSA的TBST缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。用封闭液在板中连续稀释纯化的抗体。孵育1小时后，将板洗涤3次。将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma A7164)在封闭液中以1∶2000稀释，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。将板洗涤3次，然后将OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，5分钟后通过加入25μL的3M硫酸使反应终止。用碱性终点方案用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)在490nm处读取吸光度。
图159显示ELISA结果，其确证抗体BPC1008结合重组人IL-5，而BPC1009和BPC1010显示不结合IL-5。也显示阳性对照帕考珠单抗结合重组IL-5，然而显示阴性对照抗IL-13mAb和美泊利单抗不结合IL-5。
IL-13结合ELISA
用包被缓冲液(0.05M碳酸氢盐pH9.6，Sigma C-3041)3中的5μg/ml人IL-13(GSK)包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水(TBST)洗涤板2次。将100μL封闭液(1％BSA的TBST缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。用封闭液在板中连续稀释纯化的抗体。孵育1小时后，将板洗涤3次。将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(SigmaA7164)在封闭液中以1∶2000稀释，将50μL加入到各孔中。让板孵育1小时。将板洗涤3次，然后将OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，5分钟后通过加入25μL的3M硫酸使反应终止。用碱性终点方案用VersaMax Tunable微板读数器(MolecularDevices)在490nm处读取吸光度。
ELISA结果示于图160中，其确证抗体BPC1008、1009和BPC1010结合重组人IL-13。还显示阳性对照抗IL-13mAb结合重组IL-13，然而显示阴性对照帕考珠单抗和美泊利单抗不结合IL-13。也在单独的实验中检测抗体BPC1009和BPC1010，其给出与图160所示相似的结果。
实施例32
含融合到单价骨架的单一结构域抗体的mAbdAb
32.1.mAbdAb的构建
如下构建包含单价抗体(进一步资料参见WO2006015371和WO2007059782)和结构域抗体DOM-15-26-293融合体的双特异性抗体。用基于PCR的策略接着位点定向诱变构建编码抗-c-MetKnob-into-hole重链(SEQ ID NO：202和203)的DNA序列。用基于PCR的策略接着通过基于PCR的方法除去铰链区构建了编码抗-c-MetUnibody重链(SEQ ID NO：204)的DNA序列。另外，对于融合构建体，在重链表达盒的C-末端包括BamHI和EcoRI限制性位点，以促进作为来自现有载体的BamHI-EcoRI片段的抗VEGF-A结构域抗体(DOM-15-26-593)DNA序列(编码SEQ ID NO：75的455-570位氨基酸)的随后克隆。得到的表达载体编码经由GS接头融合到重链C-末端的抗-VEGFA结构域抗体(SEQ ID NO：198、199和201)。通过基于PCR的策略已构建编码抗-c-Met轻链(SEQ ID NO：200)的DNA序列。
BPC1604的构建如实施例14所述。下表40为业已产生并表达的单价骨架mAbdAb和抗体的概述。
表40
Figure BPA00001189593301861
32.2.表达和纯化
用293fectin(Invitrogen，12347019)将编码BPC1017、BPC1018和BPC1020重链的表达质粒共转染到HEK 2936E细胞中。第二天将蛋白胨养料加入到细胞培养物中，从初始转染约2-6天后收获上清液物质。在用结合测定检测前用蛋白A柱纯化抗体。
32.3.HGF受体结合ELISA
用包被缓冲液(0.05M碳酸氢盐pH9.6，Sigma C-3041)3中的5μg/ml重组人HGF R(c-MET)/Fc嵌合体(R&D system，货号：358-MT/CF)包被96孔高结合板，并在4℃储存过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水(TBST)洗涤板2次。将100μL封闭液(含1％BSA的TBST缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少30分钟。将板洗涤3次。然后用封闭液在板中连续稀释纯化的抗体。在室温孵育1小时后，将板洗涤3次。将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体(Sigma A7164)在封闭液中以1∶2000稀释，并加入到各孔中。让板孵育1小时。将板洗涤3次，然后将OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，5分钟后通过加入25μL的3M硫酸使反应终止。用碱性终点方案用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)在490nm处读取吸光度。
ELISA结果示于图161中，其确证mAbdAb BPC1017和BPC1018以可比得上抗体BPC1019和BPC1020的活性结合重组人c-MET。显示阴性对照帕考珠单抗和BPC1604(IGF-1R/VEGF mAbdAb)不结合c-MET。
32.4.VEGF结合ELISA
用PBS中的0.45μg/ml人VEGF(GSK)包被96孔高结合板，并在4℃孵育过夜。用含0.05％的Tween-20的Tris-缓冲的盐水(TBST)洗涤板2次。将100μL封闭液(含1％BSA的TBST缓冲液)加入到各孔中，让板在室温孵育至少1小时。然后进行另一次洗涤步骤。用封闭液在板中连续稀释纯化的抗体。室温孵育1小时后，洗涤板。将山羊抗-人κ轻链特异性过氧化物酶缀合抗体在封闭液中以1∶2000稀释，并加入到各孔中。让板在室温孵育1小时。在另一洗涤步骤后，将OPD(邻苯二胺二盐酸盐)SigmaFast底物溶液加入到各孔中，5分钟后通过加入25μL的3M硫酸使反应终止。用碱性终点方案用VersaMax Tunable微板读数器(Molecular Devices)在490nm处读取吸光度。
图162显示ELISA结果，其确证抗体mAbdAb BPC1017和BPC1018结合重组人VEGF。还显示阳性对照BPC1604结合重组人VEGF，然而显示帕考珠单抗、BPC1019和BPC1020不结合VEGF。
实施例33
含有抗-IL13dAb DOM10-53-546dAb和DOM10-53-567的mAbdAb
33.1.构建、表达和纯化
对示于表41的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb进行克隆并在HEK2936E细胞中瞬时表达，纯化(分别如实施例1、1.3和1.5所述)。
表41
通过大小排阻色谱(SEC)和在还原条件下的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分析纯化的PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567mAbdAb。SEC和SDS PAGE数据示于图163、164、165和166中。
33.2.与IL-13和IL-4结合的Biacore分析
用BIAcoreTM T100于25℃(如方法4和5所述)检测纯化的PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567对人IL-13和人IL-4的结合。这些数据示于表42中。
表42
Figure BPA00001189593301882
在该测定中所测的二种mAbdAb都以极高亲和力(注意对于PascoH-TVAAPS-567其亲和力超出了设备的灵敏度)结合IL-4，且所述结合亲和力与单独的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)的结合亲和力相似。PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567二者都结合IL-13。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-546和DOM10-53-567)，因为不能将该dAb捕获蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
还用BIAcoreTM T100于25℃(如方法23所述)检测这些mAbdAb对猕猴IL-13的结合。这些数据示于表43中。mAbdAb捕获水平达到500和750相对响应单位之间，对于mAbdAb和抗-IL13mAb二者都评估6个IL-13浓度曲线(256、64、16、4、1和0.25nM)。
表43
Figure BPA00001189593301891
PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567二者都以相似的结合亲和力结合猕猴IL-13。注意在该测定中没有检测单独的抗-IL-13dAb(DOM10-53-546和DOM10-53-567)，因为不能将该dAb捕获到蛋白A或抗-人IgG包被的CM5芯片上；取而代之的是，在该测定中用抗-人IL13mAb作为阳性对照以证明IL-13结合。
33.3.在TF-1细胞生物测定中人IL-13和猕猴IL-13的中和
在TF-1细胞生物测定(分别如方法8和方法20所述)中检测纯化的PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567对人IL-13和猕猴IL-13的中和。图167和168分别显示对人IL-13和猕猴IL-13(在TF-1细胞生物测定中)的中和数据。在这些生物测定中包括DOM10-53-616作为中和IL-13的阳性对照。还包括对不相关抗原具有特异性的dAb(阴性对照dAb)作为中和IL-13的阴性对照。另外，在这些测定中还检测PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616。
在TF-1细胞生物测定中，PascoH-TVAAPS-546和PascoH-TVAAPS-567二者都完全中和人和猕猴IL-13的生物活性。
从数据集计算ND50值。ND50值是能够中和IL-13的生物活性到50％的mAbdAb或mAb或dAb的浓度。平均ND50值、标准偏差(SD)和所测次数(n)示于表44中。
表44
Figure BPA00001189593301901
实施例34
含IgG2、IgG4和IgG4PE重链恒定区的mAbdAb
34.1.mAbdAb的构建
通过PCR从现有构建体扩增人抗体同种型IgG2、IgG4和变体IgG4(IgG4PE)的重链恒定区基因，并用标准分子生物学技术克隆到编码PascoH-GS-474重链(SEQ ID NO：48)的表达载体。已设计并检测的mAbdAb抗体列入表45中。
表45
Figure BPA00001189593301911
34.2.表达
表达了表45中所述的mAbdAb连同命名为BPC1000的PascoH-GS-474(SEQ ID NO：48和15)。简言之，用先前与293fectin试剂(Invitrogen#51-0031)孵育的重链和轻链表达质粒共转染含1.5x106细胞/ml的750μl的HEK293细胞。将这些置于37℃、5％CO2和95％RH的震荡培养箱中。1小时后，加入蛋白胨养分培养基，让细胞再生长72小时。通过离心收获上清液。
34.3.IL-4结合ELISA
评估了含这些mAbdAb的上清液对重组人IL-4的结合。简言之，用人IL-4(由GSK制备)以1μg/ml包被ELISA板，并用封闭液(Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭。加入各种稀释度的细胞上清液、抗IL-4单克隆抗体(帕考珠单抗)和不相关特异性的抗体(586抗IL-13)。所有样品都用封闭液稀释。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)来使板显色，并通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。
在图169中提供的结果显示含有备选同种型的mAbdAb都结合人IL-4。对于mAbdAb BPC1000、BPC1617、BPC1618和BPC1619而言，不能定量测定上清液中的抗体的量，因此，图169提供的数据代表洁净上清液物质稀释倍数。对于抗-IL4和IL-13对照抗体而言，在该测定中使用纯化的物质，所用的起始浓度分别为1μg/ml和1μg/ml(其等同于图169中的稀释倍数1)。
34.4.IL-13结合ELISA
评估了含这些mAbdAb的上清液对重组人IL-13的结合。简言之，用人IL-13(由GSK制备)以5μg/ml包被ELISA板，并用封闭液(Tris缓冲的盐水中的4％BSA)封闭。加入各种稀释度的细胞上清液、抗IL-13单克隆抗体(586)和不相关特异性的抗体(帕考珠单抗抗IL-4)。所有样品都用封闭液稀释。在用TBS+0.05％Tween 20(TBST)洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入在封闭液中以1/1000稀释的过氧化物酶标记的抗人κ轻链抗体(Sigma A7164)来检测结合。在用TBST洗涤前让板在室温孵育1小时。通过加入OPD底物(Sigma P9187)来使板显色，并通过加入3M H2SO4终止显色。在490nm处用板读数器测量吸光度，作图确定平均吸光度。
在图170中提供的结果显示含有备选同种型的双特异性抗体都结合人IL-13。对于双特异性抗体BPC1000、BPC1617、BPC1618和BPC1619而言，不能定量测定上清液中的抗体的量，因此，图170提供的数据表示为净上清液物质稀释倍数。对于抗-IL4和IL-13对照抗体而言，在该测定中分别以1μg/ml和1μg/ml的起始浓度(其等同于图170中的稀释倍数1)使用纯化的物质。
实施例35
备选抗-IL-13/IL-4mAbdAb
35.1.含备选可变区序列的抗-IL-13/IL-4mAbdAb的构建
用标准分子生物学技术将编码命名为“C1”和“D1”的备选重链可变区抗-IL-13mAb的DNA序列，从现有构建体转移到含有编码经由TVAAPSGS接头在恒定区c-末端融合到抗IL-4结构域抗体(DOM9-112-210)的hIgG1恒定区的DNA的表达载体。从头开始组装编码命名为“M0”和“N0”的IL-13mAb的备选轻链可变区的DNA序列，并克隆到含有人Ck恒定区的表达载体。这些备选重链和轻链抗体可变区包含与SEQ ID NO：12和13所述的抗-IL-13抗体相同的CDR区，但含有备选的人源化可变构架区。
35.2.用抗IL-13mAb“656”可变区构建mAbdAb
用标准分子生物学技术将编码人源化抗IL-13mAb“656”重链可变区的DNA序列，从现有构建体转移并克隆到含有编码经由TVAAPS接头在恒定区c-末端融合到抗IL-4结构域抗体(DOM9-112-210)的hIgG1恒定区的DNA的表达载体。将编码可变轻链区的DNA序列从现有构建体转移并克隆到含有人Ck恒定区的表达载体。
35.3.mAbdAb的表达
简言之，用先前与293fectin试剂(Invitrogen#51-0031)孵育的重链和轻链表达质粒共转染25ml 1.5x106细胞/ml的HEK293细胞。将其置于37℃、5％CO2和95％RH的振荡培养箱中。24小时后，加入蛋白胨养分培养基，让细胞再生长72小时。通过离心收获上清液，并通过ELISA定量IgG水平。已构建并表达的抗体列举在表46中。
表46
35.4.mAbdAb与IL-13的结合
通过ELISA评估mAbdAb与IL-13的结合活性。简言之，将5μg/ml大肠杆菌表达的重组人IL-13(由GSK制备并纯化)包被到96孔ELISA板。于室温封闭孔2小时，然后用滴定法测量板中的mAbdAb构建体。用1∶1000稀释的抗-人κ轻链过氧化物酶缀合抗体(货号A7164，Sigma-Aldrich)检测结合。
图177显示所有测试分子都能够结合人IL-13。
尽管在该ELISA中BPC1615显示结合，但不可能准确定量该分子的浓度，因此，在图177中未标出该分子的IL-13结合ELISA数据。在独立的Biacore测定(表47)中，BPC1615也显示具有与IL-13结合的高亲和力。
35.5.通过BIAcore TM 测定抗-IL13mAb-抗-IL4dAb与IL-13的结合
也用BIAcoreTM于25℃(如方法4所述)检测来自HEK细胞转染的细胞上清液对大肠杆菌表达的重组人IL-13的结合。BPC1601作为纯化的蛋白质被检测。表47所提供的结合亲和力确证所有抗体显示与IL-13结合的高亲和力。
表47
  ka   kd   KD(nM)
  C1-TVAAPSGS-210 & M0Kappa BPC1607   5.15E+5   8.89E-4   1.73
  C1-TVAAPSGS-210 & N0Kappa BPC1608   4.90E+5   8.83E-4   1.80
  C1-TVAAPSGS-210 & 586kappa BPC1609   7.55E+5   7.61E-4   1.01
  D1-TVAAPSGS-210 & M0kappa BPC1610   3.31E+5   4.66E-4   1.41
  D1-TVAAPSGS-210 & N0kappa BPC1611   2.59E+5   3.31E-4   1.28
  D1-TVAAPSGS-210 & 586kappa BPC1612   4.85E+5   2.74E-4   0.565
  586H TVAAPS-210 & M0kappa BPC1613   5.54E+5   4.45E-4   0.804
  586H TVAAPS-210 & N0kappa BPC1614   5.49E+5   4.42E-4   0.805
  656H TVAAPS-210 & 656kappa BPC1615   4.89E+6   4.17E-4   0.085
  586H-TVAAP-210无GS BPC1602   8.21E+5   4.62E-4   0.562
  纯化的586H-无接头-210无GS BPC1601   8.93E+5   3.93E-4   0.440
Kappa＝κ，&＝和
实施例36
产生对人IL-5和人IL-13具有特异性的mAbdAb
36.1.mAbdAb的构建和表达
在HEK2936E细胞中表达了具有SEQ ID NO：65中所述的重链和SEQ ID NO：72中所述的轻链的mAbdAb分子。其被命名为美泊利单抗L-G4S-474或BPC1021。
36.2.抗-IL5mAb-抗-IL13dAb与IL-5和IL-13的结合
在直接结合ELISA(如方法1所述)中检测该mAbdAb(在细胞上清液中)对人IL-13的结合。这些数据示于图173中。样品以一式二份被转染并检测，其被标注为样品A和样品B。
该mAbdAb结合IL-13。在该测定中包括单独的纯化的抗-人IL13mAb作为IL-13结合的阳性对照。包括纯化的抗-人IL-4mAb(帕考珠单抗)和抗-人IL-5mAb(美泊利单抗)作为IL-13结合的阴性对照。
还在直接结合ELISA(如实施例31.4所述)中检测该mAbdAb对人IL-5的结合。这些数据示于图174中。
美泊利单抗L-G4S-474结合IL-5。包括纯化的抗-人IL4mAb(帕考珠单抗)和纯化的抗人13mAb作为结合IL-5的阴性对照。在该测定中使用纯化的抗-人IL5mAb(美泊利单抗)作为阳性对照以证明IL-5结合。
序列
表49：
Figure BPA00001189593301961
Figure BPA00001189593301971
Figure BPA00001189593301981
Figure BPA00001189593301991
Figure BPA00001189593302001
Figure BPA00001189593302011
Figure BPA00001189593302021
Figure BPA00001189593302041
附图简述
图1-7：抗原结合构建体实例。
图8：mAbdAb构建体示意图。
图9：PascoH-G4S-474的SEC和SDS Page分析。
图10：PascoL-G4S-474的SEC和SDS Page分析。
图11：PascoH-474的SEC和SDS Page分析。
图12：PascoHL-G4S-474的SEC和SDS Page分析。
图13：在直接结合ELISA中mAbdAb上清液对人IL-13的结合。
图14：在直接结合ELISA中mAbdAb上清液对人IL-4的结合。
图15：在直接结合ELISA中纯化的mAbdAb对人IL-13的结合。
图16：在直接结合ELISA中纯化的mAbdAb对人IL-4的结合。
图17：在直接结合ELISA中mAbdAb上清液对人IL-4的结合。
图18：在直接结合ELISA中mAbdAb上清液对人IL-13的结合。
图19：在直接结合ELISA中纯化的mAbdAb对人IL-4的结合。
图20A：在直接结合ELISA中纯化的mAbdAb对人IL-13的结合。
图20B：在直接结合ELISA中纯化的mAbdAb对猕猴IL-13的结合。
图21：用BIAcoreTM的mAbdAb对IL-4的结合动力学。
图22：用BIAcoreTM的mAbdAb对IL-4的结合动力学。
图23：用BIAcoreTM的mAbdAb对IL-13的结合动力学。
图24：在TF-1细胞生物测定中纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb中和人IL-13的能力。
图25：在TF-1细胞生物测定中纯化的抗-IL13mAb-抗-IL4dAb中和人IL-4的能力。
图26：在TF-1细胞生物测定中纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAbPascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474中和人IL-4的能力。
图27：在TF-1细胞生物测定中纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474中和人IL-13的能力。
图28：在双重中和TF-1细胞生物测定中纯化的抗-IL4mAb-抗-IL13dAb、PascoH-G4S-474、PascoH-474、PascoL-G4S-474和PascoHL-G4S-474同时中和人IL-4和人IL-13的能力。
图29：DOM10-53-474SEC-MALLS。
图30：DOM9-112-210SEC-MALLS。
图31：DOM9-155-25SEC-MALLS。
图32：所有三种信号的DOM9-155-25SEC-MALLS重叠。
图33：DOM9-155-147SEC-MALLS
图34：DOM9-155-159SEC-MALLS
图35：用于通过SEC-MALLS确定MW的对照：BSA。
图36：三特异性mAbdAb分子的示意图。
图37：在直接结合ELISA中三特异性mAbdAb IL18mAb-210-474(上清液)对人IL-18的结合。
图38：在直接结合ELISA中三特异性mAbdAb IL18mAb-210-474(上清液)对人IL-13的结合。
图39：在直接结合ELISA中三特异性mAbdAb IL18mAb-210-474(上清液)对人IL-4的结合。
图40：在直接结合ELISA中三特异性mAbdAb Mepo-210-474(上清液)对人IL-13的结合。
图41：在直接结合ELISA中三特异性mAbdAb Mepo-210-474(上清液)对人IL-4的结合。
图42：抗-TNF/抗-EGFR mAb-dAb的克隆。
图43：抗-TNF/抗-EGFR mAb-dAb的SDS-PAGE分析。
图44：抗-TNF/抗-EGFR mAb-dAb的SEC曲线(实施例10)。
图45：实施例10的抗-EGFR活性。
图46：实施例10的抗-TNF活性。
图47：抗-TNF/抗-VEGF mAb-dAb的SDS-PAGE分析(实施例11)，
图48：抗-TNF/抗-VEGF mAb-dAb的SEC曲线(实施例11)。
图49：实施例11的抗-VEGF活性。
图50：实施例11的抗-TNF活性。
图51：抗-VEGF/抗-IL1R1 dAb-延伸的-IgG的克隆(实施例12)。
图52：抗-TNF/抗-VEGF dAb-延伸的IgG A的SDS-PAGE分析(实施例12)
图53：抗-TNF/抗-VEGF dAb-延伸的IgG B的SDS-PAGE分析(实施例12)
图54：抗-TNF/抗-VEGF dAb-延伸的IgG A的SEC曲线(实施例12)。
图55：抗-TNF/抗-VEGF dAb-延伸的IgG B的SEC曲线(实施例12)。
图56：实施例12(DMS2091)的抗-VEGF活性。
图57：实施例12(DMS2090)的抗-VEGF活性。
图58：实施例12(DMS2090)的抗-IL1R1活性。
图59：实施例12(DMS2091)的抗-IL1R1活性。
图60：抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAb-dAb的克隆(实施例13)。
图61：抗-TNF/抗-VEGF/抗-EGFR mAb-dAb的SDS-PAGE分析(实施例13)。
图62：实施例13的抗-VEGF活性。
图63：实施例13的抗-TNF活性。
图64：实施例13的抗-EGFR活性。
图65：纯化的双特异性抗体BPC1603(A)、BPC1604(B)、BPC1605(C)、BPC1606(D)的SEC分析。
图66：双特异性抗体与固定化的IGF-1R的结合。
图67：双特异性抗体与固定化的VEGF的结合。
图68：不同双特异性抗体对配体介导的受体磷酸化的抑制。
图69：不同双特异性抗体对配体介导的受体磷酸化的抑制。
图70：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行ADCC测定。
图71：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行ADCC测定。
图72：用较短的剂量范围用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行ADCC测定。
图73：用较短的剂量范围用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行ADCC测定。
图74：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行CDC测定。
图75：用抗-CD20/IL-13双特异性抗体进行CDC测定。
图76：在重组人IGF-1R ELISA中BPC1803和BPC1804的结合。
图77：在重组VEGF结合ELISA中BPC1803和BPC1804的结合。
图78：在重组人IGF-1R ELISA中BPC1805和BPC1806的结合。
图79：在重组人HER2 ELISA中BPC1805和BPC1806的结合。
图80：在重组人IGF-1R ELISA中BPC1807和BPC1808的结合。
图81：在重组人HER2 ELISA中BPC1807和BPC1808的结合。
图82：在重组人IL-4ELISA中BPC1809的结合。
图83：在RNA酶A ELISA中BPC1809的结合。
图84：在重组人IL-4ELISA中BPC1816的结合。
图85：在HEL ELISA中BPC1816的结合。
图86：在重组人IGF-1R ELISA中BPC1801和BPC1802的结合。
图87：在重组人VEGFR2 ELISA中BPC1801和BPC1802的结合。
图88：在重组人IL-4ELISA中BPC1823和BPC 1822的结合。
图88b：在重组人IL-4ELISA中BPC1823(较高浓度的上清液)的结合。
图89：在重组人TNF-αELISA中BPC1823和BPC1822的结合。
图89b：在重组人TNF-αELISA中BPC1823(较高浓度的上清液)的结合。
图90：除去GS的PascoH-474的SEC曲线。
图91：除去GS的PascoH-TVAAPS-474的SEC曲线。
图92：除去第二个GS的PascoH-GS-ASTKGPT-474的SEC曲线。
图93：除去GS的586H-210的SEC曲线。
图94：除去GS的586H-TVAAPS-210的SEC曲线。
图95：除去GS的PascoH-474(B泳道)和除去GS的PascoH-TVAAPS-474(A泳道)的SDS PAGE。
图96：除去第二个GS的PascoH-GS-ASTKGPT-474的SDS PAGE[A＝非还原条件，B＝还原条件]。
图97：除去GS的586H-210的SDS PAGE(A泳道)。
图98：除去GS的586H-TVAAPS-210的SDS PAGE(A泳道)。
图99：在人IL-4ELISA中纯化的除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474的结合。
图100：在人IL-13ELISA中纯化的除去GS的PascoH-474和除去GS的PascoH-TVAAPS-474的结合。
图101：在猕猴IL-13ELISA中纯化的除去GS的PascoH-474、除去GS的PascoH-TVAAPS-474、PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616的结合。
图102：通过ELISA测定mAbdAb抑制人IL-4与人IL-4Rα的结合。
图103：通过ELISA测定mAbdAb抑制人IL-4与人IL-4Rα的结合。
图104：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和人IL-13。
图105：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和猕猴IL-13。
图106：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和人IL-4。
图107：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和猕猴IL-4。
图108：mAbdAb抑制人IL-13结合人IL-13Rα2的能力。
图109：PascoH-616的SEC曲线。
图110：PascoH-TVAAPS_616的SEC曲线。
图111：PascoH-616的SDS PAGE[E1＝非还原性条件，E2＝还原性条件]。
图112：PascoH-TVAAPS-616的SDS PAGE[A＝非还原性条件，B＝还原性条件]。
图113：在人IL-13ELISA中纯化的PascoH-616和PascoH-TVAAPS-616的结合。
图114：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和人IL-13。
图114a：在TF-1细胞生物测定中mAbdAb中和猕猴IL-13。
图115：除去GS的PascoH-474抑制IL-4活性。
图116：除去GS的PascoH-474抑制IL-13活性。
图117：586-TVAAPS-210抑制IL-4活性。
图118：586-TVAAPS-210抑制IL-13活性。
图119：帕考珠单抗抑制IL-4活性。
图120：DOM9-112-210抑制IL-4活性。
图121：抗-IL13mAb抑制IL-13活性。
图122：DOM10-53-474抑制IL-13活性。
图123：在IL-4全血测定中对照mAb和dAb的活性。
图124：在IL-13全血测定中对照mAb和dAb的活性。
图125：通过针对TNF及EGFR二者的ELISA评估在给药后不同时间点的药物残留浓度。
图126：通过针对TNF及VEGF二者的ELISA评估在给药后不同时间点的药物残留浓度。
图127：通过针对IL1R1及VEGF二者的ELISA评估在给药后不同时间点的药物残留浓度。
图128：纯化的DMS4010的SDS-PAGE。
图129：纯化的DMS4010的SEC曲线。
图130：DMS4010的抗-EGFR效价。
图131：抗-VEGF受体结合测定。
图132：双重靶向的抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb的药代动力学曲线。
图133：纯化的DMS4011的SDS-PAGE分析。
图134：纯化的DMS4011的SEC曲线。
图135：DMS4011的抗-EGFR效价。
图136：在抗-VEGF受体结合测定中的DMS4011。
图137：纯化的样品DMS4023和DMS4024的SDS-PAGE分析。
图138：DMS4023的SEC曲线。
图139：DMS4024的SEC曲线。
图140：mAbdAb DMS4023的抗-EGFR效价。
图141：在抗-VEGF受体结合测定中的DMS4023和DMS4024。
图142：纯化的DMS4009的SDS-PAGE分析。
图143：DMS4009的SEC曲线。
图144：mAbdAb DMS4009的抗-EGFR效价。
图145：抗-VEGF受体结合测定中的DMS4009。
图146：纯化的DMS4029的SDS-PAGE分析。
图147：DMS4029的SEC曲线。
图148：mAbdAb DMS4029的抗-EGFR效价。
图149：在基于IL-13细胞的中和测定中的DMS4029。
图150：纯化的样品DMS4013和DMS4027的SDS-PAGE分析。
图151：DMS4013的SEC曲线。
图152：DMS4027的SEC曲线。
图153：mAbdAb DMS4013的抗-EGFR效价。
图154：在抗-VEGF受体结合测定中的DMS4013。
图155：在重组人IL-12ELISA中的BPC1616的结合。
图156：在重组人IL-18ELISA中的BPC1616的结合。
图157：在重组人IL-4ELISA中的BPC1616的结合。
图158：在重组人IL-4ELISA中的BPC1008、1009和BPC1010的结合。
图159：在重组人IL-5ELISA中的BPC1008的结合。
图160：在重组人IL-13ELISA中的BPC1008、1009和BPC1010的结合。
图161：在重组人c-MET ELISA中的BPC1017和BPC1018的结合。
图162：在重组人VEGF ELISA中的BPC1017和BPC1018的结合。
图163：PascoH-TVAAPS-546的SEC曲线。
图164：PascoH-TVAAPS-567的SEC曲线。
图165：PascoH-TVAAPS-546的SDS PAGE[A＝非还原性条件，B＝还原性条件]。
图166：PascoH-TVAAPS-567的SDS PAGE[A＝非还原性条件，B＝还原性条件]。
图167：在TF-1细胞生物测定中对人IL-13的中和数据。
图168：在TF-1细胞生物测定中对猕猴IL-13的中和数据。
图169：在人IL-4ELISA中含有备选同种型的mAbdAb的结合。
图170：在人IL-13ELISA中含有备选同种型的mAbdAb的结合。
图171：在重组人EGFR ELISA中BPC1818和BPC1813的结合。
图172：在重组人VEGFR2ELISA中BPC1818和BPC1813的结合。
图173：在IL-13ELISA中抗-IL5mAb-抗-IL13dAb的结合。
图174：在IL-5ELISA中抗-IL5mAb-抗-IL13dAb的结合。
图175：在重组人VEGFR2ELISA中BPC1812的结合。
图176：在重组人EGFR ELISA中BPC1812的结合。
图177：在人IL-13ELISA中mAbdAb的结合。
1.结构域抗体
SEQ ID NO：1＝DOM9-155-25
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASTLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO：2＝DOM9-155-147
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASSLYEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO：3＝DOM9-155-154
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO：4＝DOM9-112-210
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：5＝DOM10-53-474
GVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：60＝DOM9-155-147的DNA序列(蛋白质＝SEQ IDNO：2)
GACATCCAGATGACCCAATCACCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCATCACTtGCCGGGCAAGTCGCCCCATtAGCGACTGGTTACATtGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCGCCTGGGCGtCCTCGTTGTACGAGGGGGtCCCATCACGtTTCAGTGGCAGTGGGTCGGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCCGAAGATTTCGCTACGTACTACTGTTTGCAGGAGGGGTGGGGTCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG
SEQ ID NO：61＝DOM9-155-154的DNA序列(蛋白质＝SEQ IDNO：3)
GACATCCAGATGACCCAATCACCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACCGTGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCGCCCCATTAGCGACTGGTTACATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCCAAGCTCCTGATCGCCTGGGCGTCCAGCTTGCAGGGGGGGGTCCCATCACGTTTCAGTGGCAGTGGGTCGGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCCGAAGATTTCGCTACGTACTACTGTTTGCAGGAGGGGTGGGGTCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGG
2.接头
SEQ ID NO：6＝G4S接头
GGGGS
SEQ ID NO：7＝接头
TVAAPS
SEQ ID NO：8＝接头
ASTKGPT
SEQ ID NO：9＝接头
ASTKGPS
SEQ ID NO：10＝接头
EPKSCDKTHTCPPCP
SEQ ID NO：11＝接头
ELQLEESCAEAQDGELDG
3.单克隆抗体
SEQ ID NO：12＝抗-人IL 13mAb(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：13＝抗-人IL13mAb(L链)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHINGNTYLEWYLQKPGQSPRLLIYKISDRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEADDVGIYYCFQGSHVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：14＝帕考珠单抗(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：15＝帕考珠单抗(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：65＝美泊利单抗(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTVSGFSLTSYSVHWVRQPPGKGLEWLGVIWASGGTDYNSALMSRLSISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDPPSSLLRLDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：66＝美泊利单抗(L链)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNVHSFPFTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：67＝抗-人IL-18mAb(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGEISTGYYFHWVRQAPGKGLEWMGRIDPEDDSTKYAERFKDRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTWRIYRDSSGRPFYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLYKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：68＝抗-人IL-18mAb(L链)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCLASEDIYTYLTWYQQKPGKAPKLLIYGANKLQDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQGSKFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
4.双特异性mAbdAb
注意，序列“粗体”文字的下划线部分对应于接头。“GS”氨基酸残基(其DNA编码序列用作BamHI克隆位点)不以“粗体”文字表示，但下划线。
SEQ ID NO：16＝586H-25(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASTLDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO：17＝586H-147(H链)
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SEQ ID NO：42＝586H-EPKSC(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEPKSCDKTHTCPPCPGS
SEQ ID NO：43＝586H-ELQLE(H链)
 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSELQLEESCAEAQDGELDGGS
SEQ ID NO：44＝586L-G4S-25(L链)
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SEQ ID NO：45＝586L-G4S-147(L链)
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SEQ ID NO：46＝586L-G4S-154(L链)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNIVHINGNTYLEWYLQKPGQSPRLLIYKISDRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEADDVGIYYCFQGSHVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKR
SEQ ID NO：47＝586L-G4S-210(L链)
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRS SQNIVHINGNTYLEWYLQKPGQSPRLLIYKISDRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEADDVGIYYCFQGSHVPWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：48＝PascoH-474(H链)
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SEQ ID NO：49＝PascoH-G4S-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：50＝PascoH-TVAAPS-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：51＝PascoH-ASTKG-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSASTKGPTGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：52＝PascoH-EPKSC-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEPKSCDKTHTCPPCPGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：53＝PascoH-ELQLE-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSELQLEESCAEAQDGELDGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：54＝PascoL-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：55＝PascoL-G4S-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：56＝PascoL-TVAAPS-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：57＝PascoL-ASTKG-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECASTKGPTG SGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：58＝PascoL-EPKSC-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEPKSCDKT HTCPPCPGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：59＝PascoL-ELQLE-474(L链)
DIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGIPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQSNEDPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECELQLEESC AEAQDGELDGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
5.细胞因子
SEQ ID NO：62＝IL-4(白介素-4)
HKCDITLQEIIKTLNSLTEQKTLCTELTVTDIFAASKNTTEKETFCRAATVLRQFYSHHEKD
TRCLGATAQQFHRHKQLIRFLKRLDRNLWGLAGLNSCPVKEANQSTLENFLERLKTIMREKY
SKCSS
SEQ ID NO：63＝IL-13(白介素-13)
GPVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN
6.信号序列
SEQ ID NO：64＝哺乳动物氨基酸信号序列
MGWSCIILFLVATATGVHS
7.IGF-1R结合CDR
SEQ ID 80＝VH CDR3
WILYYGRSKWYFDV
SEQ ID 81＝VH CDR2
NINPNNGGTNYNQKFKD
SEQ ID 82＝VH CDR1
DYYMN
SEQ ID 83＝VL CDR1
RSSQSIVQSNGDTYLE
SEQ ID 84＝备选VL CDR2
RISNRFS
SEQ ID 85＝VL CDR3
FQGSHVPYT
SEQ ID 86＝VL CDR2
RVSNRFS
8.三特异性mAbdAb
SEQ ID NO：69＝IL 18mAb-G4S-DOM9-112-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGEISTGYYFHWVRQAPGKGLEWMGRIDPEDDSTKYAERFKDRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCTTWRIYRDSSGRPFYVMDAWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：70＝IL18mAb-G4S-DOM10-53-474(L链)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCLASEDIYTYLTWYQQKPGKAPKLLIYGANKLQDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCLQGSKFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：71＝IL-5mAb-G4S-DOM9-112-210重链
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTVSGFSLTSYSVHWVRQPPGKGLEWLGVIWASGGTDYNNSALMSRLSISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDPPSSLLRLDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：72＝IL-5mAb-G4S-DOM10-53-474轻链
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKS SQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNVHSFPFTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGG SGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
9.双重靶向的抗-TNF/抗-EGFR mAbdAb
SEQ ID NO：73＝抗-TNFmAb(L链)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：74＝抗-TNFmAb-DOM16-39-542(H链)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSTGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGNLLDWYQQKPGKAPKLLIYYASFLQSGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANPAPLTFGQGTKVEIKR
10.双重靶向的抗-TNF/抗-VEGF mAbdAb
SEQ ID NO：75＝抗-TNFmAb-DOM15-26-593(H链)
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSTGEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
11.双重靶向的抗-IL1R1/抗-VEGF dAb-延伸的IgG
SEQ ID NO：76＝DOM 15-26-593-VH假体(H链)
EVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSYGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：77＝DOM4-130-54-Vk假体(L链)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIYLNLDWYQQKPGKAPKLLINFGSELQSGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQPSFYFPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPNTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
12.三重靶向的抗-TNF/抗-EGFR/抗-VEGF mAbdAb
SEQ ID NO：78＝DOM 15-26-抗-TNFmAb(H链)
 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：79＝DOM 16-39-542-抗-TNFmAb(L链)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQWIGNLLDWYQQKPGKAPKLLIYYASFLQSGVPSRFSGSGYGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANPAPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：87＝除去GS的586H-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：88＝除去GS的586H-TVAAPS-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：89＝两个GS都除去的586H-ASTKGPT-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPTEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：90＝两个GS都除去的586H-ASTKGPS-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：91＝除去GS的PascoH-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：92＝除去GS的PascoH-TVAAPS-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：93＝两个GS都除去的PascoH-ASTKGPT-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPTGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：94＝两个GS都除去的PascoH-ASTKGPS-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：95＝除去第二个GS的PascoH-ASTKGPS-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSASTKGPSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：96＝除去第二个GS的PascoH-ASTKGPT-474(H链)
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSASTKGPTGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：97＝CDRH1
GYSITSDFAWN
SEQ ID NO：98＝CDRH2
GYISYSGNYNPSLK
SEQ ID NO：99＝CDRH3
VTAGRGFPY
SEQ ID NO：100＝CDRL1
HSSQDINSNIG
SEQ ID NO：101＝CDRL2
HGINLDD
SEQ ID NO：102＝CDRL3
VQYAQFPWT
SEQ ID NO：103＝EGFR表位
CGADSYEMEEDGVRKC
SEQ ID NO：104＝CDRH1
SDFAWN
SEQ ID NO：105＝CDRH2
YISYSGNYNPSLK
SEQ ID NO：106＝CDRH3
AGRGFPY
SEQ ID NO：107＝CDRH2
YISYSGNYNPSLKS
SEQ ID NO：108＝在C-末端用TVAAPSGS接头与DOM15-26-593融合的抗-IGF-1R抗体H0L0重链
 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGNINPNNGGTNYNQKFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWILYYGRSKWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：109＝在C-末端用GS接头与DOM15-26-593融合的抗-IGF-1R抗体H0L0重链
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGNINPNNGGTNYNQKFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWILYYGRSKWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：110＝抗-IGF-1R抗体H0L0重链
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGNINPNNGGTNYNQKFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWILYYGRSKWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：111＝在C-末端用TVAAPSGS接头与DOM15-26-593融合的抗-IGF-1R抗体H0L0轻链
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVQSNGDTYLEWYLQKPGQSPQLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPS GSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：112＝在C-末端用GS接头与DOM15-26-593融合的抗-IGF-1R抗体H0L0轻链
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVQSNGDTYLEWYLQKPGQSPQLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：113＝抗-IGF-1R抗体H0L0轻链
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSIVQSNGDTYLEWYLQKPGQSPQLLIYRVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：114＝抗体2B9的重链可变结构域
QVQLKQSGPGLVQSSQSLSITCTISGFSLTSHGIYWLRQSPGKGLEWLGVIWSGGSADYNAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARSPYYYRSSLYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO：115＝抗体2B9的轻链可变结构域
NIVLTQSPKSMSMSIGERVTLSCKASENVGTYVSWYQQKAEQSPKLLIYGASNRHTGVPDRFTGSGSSTDFTLTISSVQAEDLADYHCGQSYSDPLTFGAGTKLELKRA
SEQ ID NO：116＝含TVAAPSGS接头并在C-末端融合DOM10-53-474结构域抗体的抗-CD20mAb重链蛋白质序列
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：117＝抗-CD20mAb VL-人CK轻链的蛋白质序列
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：118＝含GS接头并在C-末端融合DOM10-53-474结构域抗体的抗-CD20mAb重链蛋白质序列
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：119＝含TVAAPSGS接头并在C-末端融合DOM10-53-474结构域抗体的抗-CD20mAb轻链蛋白质序列
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：120＝抗-CD20mAb VH-人IgG1重链的蛋白质序列
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：121＝含GS接头并在C-末端融合DOM10-53-474结构域抗体的抗-CD20mAb轻链蛋白质序列
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：122：586H-TVAAPS-154重链
CAGGTGCAGCTCGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTTCTACATCAAGGACACCTACATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCACTATCGACCCCGCCAACGGCAACACCAAGTACGTGCCCAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGATGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGAGCATCTACGACGACTACCACTACGACGACTACTACGCCATGGACTACTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATTACCTGCAGGGCCAGCAGGCCCATCAGCGACTGGCTGCACTGGTACCAACAGAAGCCCGGCAAGGCTCCCAAGCTGCTGATCGCCTGGGCCAGCAGCCTGCAGGGAGGCGTGCCCAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTCACCATCTCTTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCTGCAGGAGGGCTGGGGGCCCCCTACTTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGAGG
SEQ ID NO：123
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGNINPNNGGTNYNQKFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWILYYGRSKWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSDGGGIRRSMSGTWYLKAMTVDREFPEMNLESVTPMTLTLLKGHNLEAKVTMLISGRCQEVKAVLGRTKERKKYTADGGKHVAYIIPSAVRDHVIFYSEGQLHGKPVRGVKLVGRDPKNNLEALEDFEKAAGARGLSTESILIPRQSETCSPG
SEQ ID NO：124
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMNWVRQAPGQGLEWMGNINPNNGGTNYNQKFKDRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARWILYYGRSKWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEVVAATPTSLLISWRHPHFPTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPLQPPTATISGLKPGVDYTITVYAVTDGRNGRLLSIPISINYRT
SEQ ID NO：125
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SEQ ID NO：131
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SEQ ID NO：132：抗IL-4重链-TVAAPSGS-抗TNF-a adnectin
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGTGAGCGACGTGCCAAGGGACCTCGAGGTGGTGGCAGCCACTCCCACCTCTCTGCTGATCAGCTGGGACACACACAACGCCTACAACGGCTACTACAGGATCACCTACGGAGAGACCGGCGGCAATAGCCCCGTGAGGGAGTTCACCGTGCCCCACCCCGAGGTGACCGCCACCATTAGCGGCCTGAAGCCCGGCGTGGACGATACCATCACCGTCTACGCCGTGACCAACCACCACATGCCCCTGAGGATCTTCGGCCCCATCAGCATCAACCATAGGACC
SEQ ID NO：133
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SEQ ID NO：134
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SEQ ID NO：135
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SEQ ID NO：136
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SEQ ID NO：137
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SEQ ID NO：138
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SEQ ID NO：139
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SEQ ID NO：140
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SEQ ID NO：141
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SEQ ID NO：142
EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQYGSTPLTFGGGTKAEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGSEVVAATPTSLLISWRHPHFPTRYYRITYGETGGNSPVQEFTVPLQPPTATISGLKPGVDYTITVYAVTDGRNGRLLSIPISINYRT
SEQ ID NO：143
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SEQ IID NO：144
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SEQ ID NO：145
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SEQ ID NO：146
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SEQ ID NO：147
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SEQ ID NO：148＝DOM10-53-616(dAb)
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SEQ ID NO：149＝PascoH-616(H链)
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SEQ ID NO：150＝PascoH-TVAAPS-616(H链)
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SEQ ID NO：151＝C1-TVAAPSGS-210(H链)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFYIKDTYMHWVRQAPGQGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：152＝D1-TVAAPSGS-210(H链)
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGFYIKDTYMHWVRQMPGKGLEWMGTIDPANGNTKYVPKFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSIYDDYHYDDYYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：153＝N0(L链)
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SEQ ID NO：154＝M0(L链)
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SEQ ID NO：155＝656H-TVAAPS-210_(H链)
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SEQ ID NO：170
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SEQ ID NO：172
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SEQ ID NO：174
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SEQ ID NO：175
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SEQ ID NO：176
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SEQ ID NO：177
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SEQ ID NO：178
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SEQ ID NO：179
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SEQ ID NO：180
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SEQ ID NO：181
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SEQ ID NO：182
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SEQ ID NO：183
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SEQ ID NO：189
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SEQ ID NO：190
DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGSTVAAPSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：191
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTVSGFSLTSYSVHWVRQPPGKGLEWLGVIWASGGTDYNSALMSRLSISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDPPSSLLRLDYWGRGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：192：586H-ASTKG-210重链
CAGGTGCAGCTCGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTTCTACATCAAGGACACCTACATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCACTATCGACCCCGCCAACGGCAACACCAAGTACGTGCCCAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGATGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGAGCATCTACGACGACTACCACTACGACGACTACTACGCCATGGACTACTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCAGCCAGCACCAAGGGCCCCACGGGATCCGAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：193
EVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSKSVMGVSWIRQPPGKALEWLAHIYWDDDKYYNPSLKSRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRGIRSAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPEVQLVQSGTEVKKPGESLKISCKGSGYTVTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGFIYPGDSETRYSPTFQGQVTISADKSFNTAFLQWSSLKASDTAMYYCARVGSGWYPYTFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：194
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKASQSVSNDVAWYQQKPGQPPKLLIYYASNRYTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQDYNSPWTFGGGTKVEIKRTVAAPEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASESASSNLAWYQQKPGQAPRLFIYTASTRATDIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPSITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：195：抗IL-5重链-G4S-dAb474-TVAAPSGS-dAb210
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTVSGFSLTSYSVHWVRQPPGKGLEWLGVIWASGGTDYNSALMSRLSISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARDPPSSLLRLDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSSTVAAPSGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：196：抗CD-20重链-TVAAPSGS-dAb 154-TVAAPSGS-dAb474
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPISDWLHWYQQKPGKAPKLLIAWASSLQGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQEGWGPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：197：抗CD-20重链-TVAAPSGS-dAb210-TVAAPSGS-dAb474
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKTVAAPSGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRNFGMGWVRQAPGKGLEWVSWIISSGTETYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSLGRFDYWGQGTLVTVSSTVAAPSGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：198：抗cMET 5D5v2重链(hole)-GS-dAb593
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：199：抗cMET 5D5v2重链(knob)-GS-dAb593
CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：200：抗cMET 5D5v2轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：201：抗cMET 5D5v2 IgG4重链(UNIBODY)-GS-dAb593
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKGSEVQLLVSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFKAYPMMWVRQAPGKGLEWVSEISPSGSYTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDPRKLDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：202：抗cMET 5D5v2重链(hole)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：203：抗cMET 5D5v2重链(knob)
CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：204：抗cMET 5D5v2IgG4重链(UNIBODY)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLYKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO：205：抗-人IL13mAb重链
CAGGTGCAGCTCGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTTCTACATCAAGGACACCTACATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCACTATCGACCCCGCCAACGGCAACACCAAGTACGTGCCCAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGATGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGAGCATCTACGACGACTACCACTACGACGACTACTACGCCATGGACTACTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：206：备选抗-人IL13mAb重链
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATTCTACATTAAAGACACCTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAACGATTGATCCTGCGAATGGTAATACTAAATATGTCCCGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACGAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAGCATCTATGATGATTACCACTACGACGATTACTATGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO 207：PascoH IgG2-GS-474重链
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 208：PascoH IgG4-GS-474重链
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 209：PascoH IgG4PE-GS-474重链
QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKGSGVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFAWYDMGWVRQAPGKGLEWVSSIDWHGEVTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCATAEDEPGYDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO：210：抗-人IL13mAb轻链
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCTCTGAGCCTCCCCGTGACCCCCGGCGAACCAGCCAGCATCTCCTGCAGAAGCAGCCAGAACATCGTGCACATCAACGGCAACACCTACCTGGAGTGGTACCTGCAAAAGCCCGGCCAGAGCCCCAGGCTGCTGATCTACAAGATCAGCGACAGGTTCAGCGGCGTGCCCGATAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATCAGCAGGGTGGAGGCCGACGACGTGGGCATCTACTACTGCTTCCAGGGCAGCCACGTCCCCTGGACTTTCGGACAGGGCACCAAGCTGGAGATTAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：211：帕考珠单抗重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：212：帕考珠单抗轻链
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCCTCTTCCCTGAGCGCAAGCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACTACGACGGCGACAGCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGCCGCCAGCAACCTCGAGTCAGGCATTCCCAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAACGAGGACCCTCCCACCTTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：213：美泊利单抗重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACACAGACCCTCACTCTGACCTGCACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCTCCTACAGCGTCCACTGGGTGAGGCAGCCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGCTGGGCGTGATCTGGGCAAGCGGCGGCACCGACTACAACAGCGCCCTGATGAGCAGGCTCTCCATCAGCAAGGACACCAGCCGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTATTACTGCGCCAGGGACCCTCCCTCTAGCCTGCTGAGGCTGGACTACTGGGGCAGGGGAACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：214：美泊利单抗轻链
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCCGATTCACTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTCCTGAACAGCGGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTATGGCGCCTCCACCAGGGAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGAACGTCCACAGCTTCCCCTTCACCTTCGGCGGGGGAACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：215：PascoH-474重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：216：PascoH-TVAAPS-474重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：217：PascoL-474轻链
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCCTCTTCCCTGAGCGCAAGCGTGGGCGATAGGGTGACC
ATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACTACGACGGCGACAGCTACATGAACTGGTAC
CAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGCCGCCAGCAACCTCGAGTCA
GGCATTCCCAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACAATCAGC
AGCCTGCAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAACGAGGACCCTCCC
ACCTTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTC
ATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTG
AACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGC
GGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGC
AGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG
ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGTGGATCC
GGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCC
CCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTAC
GCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTAC
CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAG
GACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：218：PascoL-TVAAPS-474轻链
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCCTCTTCCCTGAGCGCAAGCGTGGGCGATAGGGTGACC
ATCACCTGCAAGGCCAGCCAGAGCGTGGACTACGACGGCGACAGCTACATGAACTGGTAC
CAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAACTGCTGATCTACGCCGCCAGCAACCTCGAGTCA
GGCATTCCCAGCAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCTTCACAATCAGC
AGCCTGCAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCAACGAGGACCCTCCC
ACCTTCGGACAGGGCACCAAGGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTC
ATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTG
AACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGC
 GGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGC
AGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTG
ACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGCACCGTG
GCCGCCCCCTCGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCC
GGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATG
GGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCC TGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCAC
GGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAAC
AGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTAC
TACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTG
ACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：219：IL-5mAb-G4S-DOM9-112-210重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACACAGACCCTCACTCTGACCTGCACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCTCCTACAGCGTCCACTGGGTGAGGCAGCCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGCTGGGCGTGATCTGGGCAAGCGGCGGCACCGACTACAACAGCGCCCTGATGAGCAGGCTCTCCATCAGCAAGGACACCAGCCGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTATTACTGCGCCAGGGACCCTCCCTCTAGCCTGCTGAGGCTGGACTACTGGGGCAGGGGAACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGGCGGCGGATCCGAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：220：IL-5mAb-G4S-DOM10-53-474轻链
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCCGATTCACTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACC
ATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTCCTGAACAGCGGCAACCAGAAGAACTACCTGGCC
TGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTATGGCGCCTCCACCAGG
GAGAGCGGCGTGCCAGACAGGTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACA
ATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCAGAACGTCCACAGCTTC
CCCTTCACCTTCGGCGGGGGAACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGC
GTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGT
CTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTG
CAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGC
CTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGT
GAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
GGCGGCGGCGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGC
GGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGC
TGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGG
GAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGC
AAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTAC
TGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGG
GCCAGGGCACCCTGGTGACT
GTGAGCAGC
SEQ ID NO：221：586H-210重链(除去GS)
CAGGTGCAGCTCGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTTCTACATCAAGGACACCTACATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCACTATCGACCCCGCCAACGGCAACACCAAGTACGTGCCCAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGATGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGAGCATCTACGACGACTACCACTACGACGACTACTACGCCATGGACTACTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：222：586H-TVAAPS-210重链(除去GS)
CAGGTGCAGCTCGTGCAGAGCGGCGCCGAAGTGAAAAAGCCCGGCAGCAGCGTGAAGGTGAGCTGCAAGGCCTCCGGCTTCTACATCAAGGACACCTACATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCACTATCGACCCCGCCAACGGCAACACCAAGTACGTGCCCAAGTTCCAGGGCAGGGTGACCATCACCGCCGATGAGAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCAGCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCAGGAGCATCTACGACGACTACCACTACGACGACTACTACGCCATGGACTACTGGGGACAGGGCACACTAGTGACCGTGTCTAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：223：PascoH-474重链(除去GS)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGA
GGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTC
GCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCC
AGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACC
ATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAG
GACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGC
CAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：224：PascoH-TVAAPS-474重链(除去GS)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGCGTGCAG
CTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCC
GCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAG
GGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGC
GTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG
AACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCC
GGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：225：PascoH-ASTKGPT-474重链(除去第二个GS)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
 AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCAGCCAGCACCAAGGGCCCCACG
GGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCC
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CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAG
GACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：226：在C-末端用TVAAPSGS接头与DOM15-26-593融合的抗-IGF-1R抗体H0L0的重链
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SEQ ID NO：227：IGF1RmAb-GS-DOM15-26-593重链
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SEQ ID NO：231：抗-IGF-1R抗体轻链
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SEQ ID NO：232：抗-IGF1R重链-GS-TLPC
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SEQ ID NO：233：抗-IGF1R重链-GS-CT01 adnectin
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAGAAGCCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTACATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCAACATCAACCCCAACAACGGCGGCACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACCGGGTCACCATGACCACCGACACCAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGCGGAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGTGGATCCTGTACTACGGCCGGTCCAAGTGGTACTTCGACGTGTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCGAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCCTGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAACAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCAAGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTGCTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACC
SEQ ID NO：234：抗-IGF 1R重链-TVAAPSGS-TLPC
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SEQ ID NO：235：抗-IGF1R重链-GS-AFFI
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SEQ ID NO：236：抗-IGF1R重链-TVAAPSGS-AFFI
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SEQ ID NO：237：抗-IGF1R重链-GS-DRPN
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SEQ ID NO：238：抗-IGF 1R重链-TVAAPSGS-DRPN
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAGAAGCCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTACATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCAACATCAACCCCAACAACGGCGGCACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACCGGGTCACCATGACCACCGACACCAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGCGGAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGTGGATCCTGTACTACGGCCGGTCCAAGTGGTACTTCGACGTGTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGACCTGGGGAAAAAGCTGCTTGAAGCCGCTAGGGCAGGACAGGATGACGAGGTGAGGATTCTGATGGCAAATGGCGCCGACGTCAATGCCAAAGACGAGTACGGCCTCACCCCTCTTTATCTGGCCACTGCACACGGACACTTGGAGATCGTGGAGGTGCTGCTCAAGAACGGAGCTGATGTGAACGCTGTGGACGCTATTGGGTTCACACCCCTTCACCTCGCAGCCTTTATTGGCCACCTGGAGATCGCCGAAGTTCTCCTGAAACACGGCGCAGACGTCAACGCACAGGATAAGTTCGGGAAGACCGCCTTCGACATCAGCATCGGCAATGGGAACGAGGATCTGGCCGAGATCCTGCAGAAGCTG
SEQ ID NO：239：抗IL-4重链-GS-抗RNA酶A骆驼VHH
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCCAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGGCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATACGCATACACTTACATCTACATGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAAGAGCGTGAGGGGGTCGCAGCTATGGATAGTGGTGGTGGTGGCACACTCTACGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCGCGACAAAGGCAAGAACACGGTGTATCTGC AATGGACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCACGTATTACTGTGCTGCAGGTGGCTACGAGCTGCGTGACCGGACATATGGGCAGTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO：240：抗IL-4重链-GS-NARV
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCGCGCGCGTCGACCAGACGCCGCGCAGCGTCACGAAGGAAACCGGCGAGTCCCTCACCATCAACTGCGTGCTGCGGGATGCCTCCTACGCCCTGGGCAGCACATGTTGGTACAGAAAGAAGAGCGGGGAAGGCAACGAGGAGTCCATCTCCAAGGGGGGAAGATACGTCGAGACCGTGAACAGCGGAAGCAAGAGCTTCAGCCTGCGGATCAACGACCTCACCGTCGAGGACGGGGGCACCTACCGTTGCGGTCTGGGCGTGGCCGGCGGCTATTGCGATTACGCCCTGTGCAGTAGCCGGTATGCTGAGTGCGGCGACGGCACCGCTGTGACCGTGAAC
SEQ ID NO：241：抗-IGF1R重链-TVAAPSGS-CT01 adnectin
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGAGCCGAGGTGAAGAAGCCTGGCGCCAGCGTCAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCGACTACTACATGAACTGGGTGCGGCAGGCCCCAGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCAACATCAACCCCAACAACGGCGGCACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACCGGGTCACCATGACCACCGACACCAGCACCAGCACCGCCTACATGGAACTGCGGAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGTGGATCCTGTACTACGGCCGGTCCAAGTGGTACTTCGACGTGTGGGGCAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCCTGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAACAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCAAGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTGCTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACC
SEQ ID NO：242：爱必妥重链-RS-CT01 adnectin
CAGGTGCAGCTGAAGCAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGCAGCCCTCTCAGAGCCTGAGCATCACCTGTACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCAATTACGGCGTGCATTGGGTGCGGCAGTCTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGCTGGGAGTGATCTGGTCCGGCGGCAACACCGACTACAACACCCCCTTCACCAGCAGACTGAGCATCAACAAGGACAACAGCAAGAGCCAGGTGTTCTTCAAGATGAACAGCCTGCAGAGCAACGACACCGCCATCTACTATTGTGCCAGGGCCCTGACCTACTACGACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAGCCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCTCCTGGCAAGAGATCCGAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCCTGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAACAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCAAGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTGCTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACC
SEQ ID NO：243：爱必妥轻链
GACATCCTGCTGACCCAGAGCCCCGTGATCCTGAGCGTGAGCCCTGGCGAGAGAGTGAGCTTCAGCTGCCGGGCCAGCCAGAGCATCGGCACCAACATCCACTGGTATCAGCAGCGGACCAACGGCAGCCCCAGGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGTCCATCAGCGGCATCCCCAGCCGGTTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAGCATCAACAGCGTGGAGAGCGAGGATATCGCCGACTACTACTGCCAGCAGAACAACAACTGGCCCACCACCTTCGGAGCCGGCACCAAGCTGGAACTGAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTCAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAAGTGCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：244：爱必妥轻链-RS-CT01 adnectin
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SEQ ID NO：245：爱必妥重链
CAGGTGCAGCTGAAGCAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGCAGCCCTCTCAGAGCCTGAGCATCACCTGTACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCAATTACGGCGTGCATTGGGTGCGGCAGTCTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGCTGGGAGTGATCTGGTCCGGCGGCAACACCGACTACAACACCCCCTTCACCAGCAGACTGAGCATCAACAAGGACAACAGCAAGAGCCAGGTGTTCTTCAAGATGAACAGCCTGCAGAGCAACGACACCGCCATCTACTATTGTGCCAGGGCCCTGACCTACTACGACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAGCCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：246：CT01 adnectin-GSTG-爱必妥重链
GAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCCTGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAACAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCAAGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTGCTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACCGGATCCACCGGCCAGGTGCAGCTGAAGCAGAGCGGCCCTGGCCTGGTGCAGCCCTCTCAGAGCCTGAGCATCACCTGTACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCAATTACGGCGTGCATTGGGTGCGGCAGTCTCCAGGCAAGGGCCTGGAATGGCTGGGAGTGATCTGGTCCGGCGGCAACACCGACTACAACACCCCCTTCACCAGCAGACTGAGCATCAACAAGGACAACAGCAAGAGCCAGGTGTTCTTCAAGATGAACAGCCTGCAGAGCAACGACACCGCCATCTACTATTGTGCCAGGGCCCTGACCTACTACGACTACGAGTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCGCCGCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAATAGCGGAGCCCTGACCTCCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACTCCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAAGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGATAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGACCTAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCCGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAAGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGCGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAAGTGAGCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGAGAGCCCCAGGTCTACACCCTGCCTCCCTCCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGTCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：247：CT01 adnectin-STG-爱必妥轻链
GAGGTGGTGGCCGCCACCCCCACCAGCCTGCTGATTTCCTGGAGGCACCCCCACTTCCCCACACGCTACTACAGGATCACCTACGGCGAGACCGGCGGCAACAGCCCCGTGCAGGAGTTCACCGTGCCCCTGCAGCCTCCCACTGCCACCATCAGCGGCCTCAAGCCCGGCGTGGACTACACCATCACCGTGTACGCCGTCACCGACGGAAGGAACGGCAGGCTGCTGAGCATCCCCATCAGCATCAACTACAGGACGTCGACCGGTGACATCCTGCTGACCCAGAGCCCCGTGATCCTGAGCGTGAGCCCTGGCGAGAGAGTGAGCTTCAGCTGCCGGGCCAGCCAGAGCATCGGCACCAACATCCACTGGTATCAGCAGCGGACCAACGGCAGCCCCAGGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGTCCATCAGCGGCATCCCCAGCCGGTTCAGCGGCAGCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGAGCATCAACAGCGTGGAGAGCGAGGATATCGCCGACTACTACTGCCAGCAGAACAACAACTGGCCCACCACCTTCGGAGCCGGCACCAAGCTGGAACTGAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTCAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAAGTGCAGTGGAAAGTGGACAACGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAAGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：248(PascoH-616重链)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
 CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGA
GGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTC
CCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCC
AGCATCGACTGGCACGGGAAGATCACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACC
ATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAG
 GACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGC
CAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：249(PascoH-TVAAPS-616重链)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
 TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCC TGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGCGTGCAG
CTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCC
GCCAGCGGCTTCGTGTTCCCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAG
GGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGAAGATCACCTACTACGCCGACAGC
GTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG
AACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCC
GGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：250：656H-TVAAPS-210重链
CAGGTGCAGCTCGTCCAGTCTGGGGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGAGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTATACCTTCATCGACTACGAGATCCATTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGGCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCATCGACCCAGAGACCGGAGGCACGGCGTACAACCAGAAGTTCAAGGGACGGGTCACCATGACAACCGATACCAGCACCTCCACCGCTTACATGGAGCTGCGCAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCGGTGTACTACTGTACGCGCATCCTGCTCTACTACTACCCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCTAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCAcCCAGACCTACATCTgTAACgTgAACCACAaGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：251：656轻链
GAGATCGTGCTGACCCAGAGTCCAGCCACCCTCAGCCTGAGCCCTGGGGAACGCGCCACCCTGTCCTGCCGGGCGAGTCAGAACATCTCCGACTACCTGCATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTCGCCTGCTGATCTACTACGCCTCCCAGAGCATCAGCGGAATCCCCGCCCGGTTCTCCGGAAGTGGGTCCGGAACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCTCTCGAGCCAGAGGACTTCGCGGTGTACTACTGCCAGAACGGGCATAGTTTCCCACTGACCTTCGGAGGGGGCACAAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGCGTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGTCTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGCCTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGTGAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：252：PascoH-TVAAPS-546_重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
 GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
 GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGCGTGCAG
CTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCC
GCCAGCGGCTTCGTGTTCCCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAG
GGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGAAGGGGGGCAAGACCTACTACGCCGACAGC
GTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG
AACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCC
GGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：253：PascoH-546_重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTCCCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGAAGGGGGGCAAGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：254：PascoH-TVAAPS-567_重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
 CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
 GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGCGTGCAG
CTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCC
GCCAGCGGCTTCGTGTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAG
GGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGC
GTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATG
AACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCC
GGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：255(PascoH-567_重链)
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTG
ACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGG
CAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGG
TACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTG
GTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGG
GAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAA CC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCA AGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGA
GGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCGTGTTC
GCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCC
AGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACC
ATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAG
GACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGC
CAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：256：656重链
CAGGTGCAGCTCGTCCAGTCTGGGGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGAGCTTCTGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCAGCGGCTATACCTTCATCGACTACGAGATCCATTGGGTGAGGCAGGCTCCCGGGCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCGCCATCGACCCAGAGACCGGAGGCACGGCGTACAACCAGAAGTTCAAGGGACGGGTCACCATGACAACCGATACCAGCACCTCCACCGCTTACATGGAGCTGCGCAGCCTGAGAAGCGACGACACCGCGGTGTACTACTGTACGCGCATCCTGCTCTACTACTACCCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTCACAGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO：257：抗IL-5重链-G4S-dAb474-TVAAPSGS-dAb210
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACACAGACCCTCACTCTG
ACCTGCACCGTGAGCGGCTTCAGCCTGACCTCCTACAGCGTCCACTGGGTGAGGCAGCCC
CCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGCTGGGCGTGATCTGGGCAAGCGGCGGCACCGACTACAAC
AGCGCCCTGATGAGCAGGCTCTCCATCAGCAAGGACACCAGCCGGAACCAGGTGGTGCTG
ACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTATTACTGCGCCAGGGACCCTCCC
TCTAGCCTGCTGAGGCTGGACTACTGGGGCAGGGGAACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCC
AGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGC
 ACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGG
AACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGC
CTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTAC
ATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAG
AGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCC
AGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAG
GTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTAC
GTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGC
ACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAG
TACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAG
GCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTG
ACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCC
GTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTG
GACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAG
CAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAG
AAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGCGGCGGCGGATCTGGCGTGCAGCTCCTGGAG
 AGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGC
TTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAG
TGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGC
AGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTG
AGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGAC
TACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGCACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCC
GAAGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCC
CCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTAC
GCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTAC
CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTG
GGCAGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：258：抗CD-20重链-TVAAPSGS-dAb154-TVAAPSGS-dAb474
CAGGTGCAGCTGCAGCAGCCTGGAGCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAAATG
TCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACAACATGCACTGGGTGAAGCAGACC
CCCGGCAGGGGCCTCGAGTGGATCGGAGCTATCTACCCCGGCAACGGCGACACTAGCTAC
 AACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTAC
ATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGCGCCAGGAGCACC
TACTACGGCGGCGACTGGTACTTCAACGTCTGGGGCGCCGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
 ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCTGAC
ATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATT
ACCTGCAGGGCCAGCAGGCCCATCAGCGACTGGCTGCACTGGTACCAACAGAAGCCCGGC
AAGGCTCCCAAGCTGCTGATCGCCTGGGCCAGCAGCCTGCAGGGAGGCGTGCCCAGCAGG
TTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTCACCATCTCTTCCCTGCAGCCCGAG
GACTTCGCCACCTACTACTGCCTGCAGGAGGGCTGGGGGCCCCCTACTTTCGGCCAGGGC
ACCAAGGTGGAGATCAAGAGGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTG
GAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGC
GGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTG
GAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAG
GGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGC
CTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTAC
GACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：259：抗CD-20重链-TVAAPSGS-dAb210-TVAAPSGS-dAb474
CAGGTGCAGCTGCAGCAGCCTGGAGCCGAGCTGGTGAAGCCCGGCGCCAGCGTGAAAATG
TCCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACAACATGCACTGGGTGAAGCAGACC
CCCGGCAGGGGCCTCGAGTGGATCGGAGCTATCTACCCCGGCAACGGCGACACTAGCTAC
AACCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACCCTGACCGCCGACAAGAGCAGCAGCACCGCCTAC
ATGCAGCTGAGCAGCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTATTACTGCGCCAGGAGCACC
TACTACGGCGGCGACTGGTACTTCAACGTCTGGGGCGCCGGCACACTAGTGACCGTGTCC
AGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGC
GGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTG
TCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGC
AGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAG
ACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAG
CCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGA
GGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACC
CCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAAC
TGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTAC
 AACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGC
AAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATC
AGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGAT
GAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGAC
ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCT
GTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGA
TGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTAC
ACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGACCGTGGCCGCCCCCTCGGGATCTGAA
GTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGC
TGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAGGAACTTCGGCATGGGCTGGGTCAGGCAGGCCCCC
GGCAAGGGCCTGGAGTGGGTCAGCTGGATCATCAGCTCCGGCACCGAGACCTACTACGCC
GACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCCGCGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTG
CAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTCTACTACTGCGCCAAGAGCCTGGGC
AGGTTCGACTACTGGGGACAGGGGACCCTGGTGACTGTGAGCAGCACCGTGGCCGCCCCC
TCGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGC
CTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTG
 AGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTG
ACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAAC
ACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCC
ACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGC
AGC
SEQ ID NO：260：抗cMET 5D5v2重链(ho1e)-GS-dAb593
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCTCCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGCTCCACTGGGTCAGGCAGGCCCCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGCATGATCGACCCCAGCAACAGCGACACCAGGTTCAACCCCAACTTCAAGGACAGGTTCACCATCAGCGCCGACACTAGCAAGAACACCGCCTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCCACCTACAGGAGCTACGTCACCCCCCTGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGAGCTGCGCCGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGGTGAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCGAGGTGCAGCTCCTGGTCAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGAGGCTCACTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGGTGTCTGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCAGGAAGCTGGACTATTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO：261：抗cMET 5D5v2重链(knob)-GS-dAb593
TGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCC
AAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGAT
GTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCAC
AATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTG
CTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAAC
AAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAG
CCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTG
TGGTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGC
CAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTC
CTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGC
TCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCT
GGCAAGGGATCCGAGGTGCAGCTCCTGGTCAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGAGGC
TCACTGAGGCTGAGCTGCGCCGCTAGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGG
GTCAGGCAGGCCCCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGGTGTCTGAGATCAGCCCCAGCGGCAGC
TACACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAG
AACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGC
GCCAAGGACCCCAGGAAGCTGGACTATTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO：262：抗cMET 5D5v2轻链
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCTCAGTGGGAGACAGGGTGACC
ATCACCTGCAAGAGCAGCCAGAGCCTCCTGTACACCAGCAGCCAGAAGAACTACCTGGCC
TGGTACCAGCAGAAACCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACCAGG
GAGTCAGGCGTGCCCAGCAGGTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACTCTGACC
ATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTACTACGCCTAT
 CCCTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCCGCCCCCAGC
GTGTTCATCTTCCCCCCCAGCGATGAGCAGCTGAAGAGCGGCACCGCCAGCGTGGTGTGT
CTGCTGAACAACTTCTACCCCCGGGAGGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTG
CAGAGCGGCAACAGCCAGGAGAGCGTGACCGAGCAGGACAGCAAGGACTCCACCTACAGC
CTGAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGT
GAGGTGACCCACCAGGGCCTGTCCAGCCCCGTGACCAAGAGCTTCAACCGGGGCGAGTGC
SEQ ID NO：263：抗cMET 5D5V2 IgG4重链(UNIBODY)-GS-dAb593
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCTCCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCTAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGCTCCACT GGGTCAGGCAGGCC
CCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGCATGATCGACCCCAGCAACAGCGACACCAGGTTC
AACCCCAACTTCAAGGACAGGTTCACCATCAGCGCCGACACTAGCAAGAACACCGCCTAC
CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCCACCTACAGG
AGCTACGTCACCCCCCTGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTCACCGTGAGCAGCGCC
AGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGC
ACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGG
AACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGC
 CTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTAC
ACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGCCCCCGAG
TTCCTGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATC
AGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGATCCCGAGGTC
CAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAG
GAACAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGG
CTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAG
AAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCA
TCCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTAC
CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACC
ACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGAC
AAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTCTTTAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCAC
AACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGGGATCCGAGGTGCAGCTC
CTGGTCAGCGGCGGCGGCCTGGTCCAGCCCGGAGGCTCACTGAGGCTGAGCTGCGCCGCT
AGCGGCTTCACCTTCAAGGCCTACCCCATGATGTGGGTCAGGCAGGCCCCCGGCAAAGGC
CTGGAGTGGGTGTCTGAGATCAGCCCCAGCGGCAGCTACACCTACTACGCCGACAGCGTG
 AAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAAC
TCTCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAAGGACCCCAGGAAGCTGGAC
TATTGGGGCCAGGGCACTCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO：264：抗cMET 5D5V2重链(hole)
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCTCCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCTAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGCTCCACTGGGTCAGGCAGGCC
CCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGCATGATCGACCCCAGCAACAGCGACACCAGGTTC
AACCCCAACTTCAAGGACAGGTTCACCATCAGCGCCGACACTAGCAAGAACACCGCCTAC
CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCCACCTACAGG
AGCTACGTCACCCCCCTGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCC
AGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGC
ACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGG
AACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGC
CTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTAC
ATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAG
AGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCC
AGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAG
GTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTAC
GTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGC
ACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAG
TACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAG
GCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTG
ACCAAGAACCAGGTGTCCCTGAGCTGCGCCGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCC
GTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTG
GACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGGTGAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAG
CAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAG
AAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAG
SEQ ID NO：265：抗cMET 5D5v2重链(knob)
TGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCC
AAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGAT
GTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCAC
AATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTG
CTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAAC
AAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAG
CCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTG
TGGTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGC
CAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTC
CTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGC
TCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCT
GGCAAG
SEQ ID NO：266：抗cMET 5D5v2IgG4重链(UNIBODY)
GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCCGGCGGCTCCCTGAGGCTG
AGCTGCGCCGCTAGCGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGCTCCACTGGGTCAGGCAGGCC
CCAGGCAAGGGACTGGAGTGGGTGGGCATGATCGACCCCAGCAACAGCGACACCAGGTTC
AACCCCAACTTCAAGGACAGGTTCACCATCAGCGCCGACACTAGCAAGAACACCGCCTAC
CTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCCGTGTATTACTGCGCCACCTACAGG
AGCTACGTCACCCCCCTGGATTACTGGGGCCAGGGCACACTAGTCACCGTGAGCAGCGCC
AGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGC
ACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGG
AACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGC
CTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTAC
ACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGCCCCCGAG
TTCCTGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATC
AGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGATCCCGAGGTC
CAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAG
GAACAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGG
CTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAG
AAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCA
TCCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTAC
CCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACC
ACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGAC
AAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTCTTTAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCAC
AACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAG
SEQ ID NO：267：PascoH IgG2-GS-474重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTCACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACCGTGGAGCGGAAGTGCTGCGTGGAGTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCTCCTGTGGCCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAACAGTTCAACAGCACCTTCCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGACCAAGGGCCAGCCCAGGGAACCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCCGGGAGGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCATGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACAGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCCGGCAAGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：268：PascoH IgG4-GS-474重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTCACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTACACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCAGCTGCCCTGCCCCCGAGTTCCTGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGATCCCGAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAACAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTCTTTAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：269：PascoH IgG4PE-GS-474重链
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTCACCGTGAGCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCTGCAGCAGAAGCACCAGCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCAAGACCTACACCTGCAACGTGGACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAGAGCAAGTACGGCCCTCCCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGTTCGAGGGCGGACCCTCCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCCGGACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGATCCCGAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCCGGGAGGAACAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCCAGCTCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGGGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAGGCTGACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAAGGCAACGTCTTTAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCTGGGCAAGGGATCCGGCGTGCAGCTCCTGGAGAGCGGCGGAGGCCTGGTCCAGCCCGGCGGCAGCCTGAGGCTGAGCTGCGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCGCCTGGTATGATATGGGCTGGGTGAGGCAGGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGTCCAGCATCGACTGGCACGGGGAGGTGACCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCAGGTTCACCATCAGCAGGGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCCGAGGACACCGCAGTGTACTACTGCGCCACCGCCGAGGACGAACCCGGCTACGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACTGTGAGCAGC
SEQ ID NO：270：抗IL-4重链-GS-抗TNF-a adnectin
CAGGTGACCCTGAGGGAGAGCGGCCCCGCCCTGGTGAAGCCCACCCAGACCCTGACCCTGACCTGCACCTTCAGCGGCTTTAGCCTCAGCACCTCCGGCATGGGCGTGAGCTGGATCAGGCAGCCACCCGGCAAAGGCCTGGAGTGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGAGGTACAACCCCAGCCTGAAGAGCCGGCTGACCATCAGCAAGGATACCAGCAGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCTACCTACTACTGCGCCAGGAGGGAGACCGTCTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGAAGGGGCACACTAGTGACCGTGTCCAGCGCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCCTGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAGGTGGAGCCCAAGAGCTGTGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCTGCCCCCGAGCTGCTGGGAGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGTGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAGGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAATGCCAAGACCAAGCCCAGGGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACCGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGTAAGGTGTCCAACAAGGCCCTGCCTGCCCCTATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCTAGCAGAGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGCGATGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAATCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCAAGGGATCCGTGAGCGACGTGCCAAGGGACCTCGAGGTGGTGGCAGCCACTCCCACCTCTCTGCTGATCAGCTGGGACACACACAACGCCTACAACGGCTACTACAGGATCACCTACGGAGAGACCGGCGGCAATAGCCCCGTGAGGGAGTTCACCGTGCCCCACCCCGAGGTGACCGCCACCATTAGCGGCCTGAAGCCCGGCGTGGACGATACCATCACCGTCTACGCCGTGACCAACCACCACATGCCCCTGAGGATCTTCGGCCCCATCAGCATCAACCATAGGACC
Figure ISB00000241717900011
Figure ISB00000241717900021
Figure ISB00000241717900031
Figure ISB00000241717900061
Figure ISB00000241717900071
Figure ISB00000241717900081
Figure ISB00000241717900091
Figure ISB00000241717900101
Figure ISB00000241717900111
Figure ISB00000241717900121
Figure ISB00000241717900131
Figure ISB00000241717900151
Figure ISB00000241717900161
Figure ISB00000241717900171
Figure ISB00000241717900181
Figure ISB00000241717900191
Figure ISB00000241717900201
Figure ISB00000241717900231
Figure ISB00000241717900241
Figure ISB00000241717900251
Figure ISB00000241717900261
Figure ISB00000241717900271
Figure ISB00000241717900281
Figure ISB00000241717900291
Figure ISB00000241717900301
Figure ISB00000241717900311
Figure ISB00000241717900321
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Claims (49)

1.抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含连接到一个或多个表位结合结构域的蛋白质骨架，其中所述抗原结合构建体具有至少两个抗原结合位点，其中至少一个来自表位结合结构域，并且其中至少一个来自配对的VH/VL结构域。
2.抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含至少一个包含两个或更多个式I结构的同型二聚体：
Figure FPA00001189593200011
其中
X代表包含重链恒定结构域2和重链恒定结构域3的抗体恒定区；
R1、R4、R7和R8代表独立选自表位结合结构域的结构域；
R2代表选自重链恒定结构域1和表位结合结构域的结构域；
R3代表选自配对的VH和表位结合结构域的结构域；
R5代表选自轻链恒定结构域和表位结合结构域的结构域；
R6代表选自配对的VL和表位结合结构域的结构域；
n代表独立选自以下的整数：0、1、2、3和4；
m代表独立选自以下的整数：0和1；
其中重链恒定结构域1与轻链恒定结构域相连接；
并且其中存在至少一个表位结合结构域；
当R3代表配对的VH结构域时，R6代表配对的VL结构域，由此两个结构域一起能够结合抗原。
3.权利要求2的抗原结合构建体，其中R6代表配对的VL并且R3代表配对的VH。
4.权利要求3的抗原结合构建体，其中R7和R8中的任一个或两个代表表位结合结构域。
5.权利要求2-4中任一项的抗原结合构建体，其中R1和R4中的任一个或两个代表表位结合结构域。
6.权利要求2-4中任一项的抗原结合构建体，其中存在R4。
7.权利要求2-6中任一项的抗原结合构建体，其中R1R7和R8代表表位结合结构域。
8.权利要求2-6中任一项的抗原结合构建体，其中R1R7和R8、和R4代表表位结合结构域。
9.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中至少一个表位结合结构域为dAb。
10.权利要求9的抗原结合构建体，其中所述dAb为人dAb。
11.权利要求9的抗原结合构建体，其中所述dAb为骆驼dAb。
12.权利要求9的抗原结合构建体，其中所述dAb为鲨鱼dAb(NARV)。
13.权利要求1-8中任一项的抗原结合构建体，其中至少一个表位结合结构域源自选自以下的骨架：CTLA-4(Evibody)；脂质运载蛋白；源自蛋白A的分子，例如蛋白A的Z-结构域(Affibody，SpA)、A-结构域(Avimer/Maxibody)；热休克蛋白，例如GroEl和GroES；转铁蛋白(trans-body)；锚蛋白重复蛋白(DARPin)；肽适体；C-型凝集素结构域(四连凝集素)；人γ-晶体蛋白和人泛素(affilin)；PDZ结构域；人蛋白酶抑制剂蝎毒素kunitz型结构域；和纤连蛋白(adnectin)。
14.权利要求13的抗原结合构建体，其中所述表位结合结构域来源于选自Affibody、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin的骨架。
15.权利要求1-8中任一项的抗原结合构建体，其中所述表位结合结构域选自dAb、Affibody、锚蛋白重复蛋白(DARPin)和adnectin。
16.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述结合构建体对不止一种抗原具有特异性。
17.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述第一结合位点对抗原上的第一表位具有特异性，所述第二结合位点对同一抗原上的第二表位具有特异性。
18.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够结合IL-13。
19.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够结合两种或更多种选自IL-13、IL-5和IL-4的抗原。
20.权利要求19的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够同时结合IL-13和IL-4。
21.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够结合两种或更多种选自VEGF、IGF-1R和EGFR的抗原。
22.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够结合TNF。
23.权利要求22的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体能够结合TNF和IL1-R。
24.权利要求1或9-23中任一项的抗原结合构建体，其中所述蛋白质骨架为Ig骨架。
25.权利要求24的抗原结合构建体，其中所述Ig骨架为IgG骨架。
26.权利要求25的抗原结合构建体，其中所述IgG骨架选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
27.权利要求1或9-26中任一项的抗原结合构建体，其中所述蛋白质骨架包括单价抗体。
28.权利要求25-27中任一项的抗原结合构建体，其中所述IgG骨架包含抗体的所有结构域。
29.权利要求9-12或15-28中任一项的抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体包含四个结构域抗体。
30.权利要求29的抗原结合构建体，其中两个结构域抗体对同一抗原具有特异性。
31.权利要求29的抗原结合构建体，其中所有结构域抗体对同一个抗原具有特异性。
32.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中至少一个单一可变结构域通过接头直接连接到Ig骨架，所述接头包含1-150个氨基酸。
33.权利要求32的抗原结合构建体，其中至少一个单一可变结构域通过接头直接连接到Ig骨架，所述接头包含1-20个氨基酸。
34.权利要求33的抗原结合构建体，其中至少一个表位结合结构域通过接头直接连接到所述Ig骨架，所述接头选自以下任一种：SEQ ID NO：6-11中所述的接头或“GS”或其任意组合。
35.前述权利要求中任一项的抗原结合构建体，其中至少一个表位结合结构域结合人血清白蛋白。
36.权利要求21-33中任一项的抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含在轻链的N-末端连接到Ig骨架的表位结合结构域。
37.权利要求21-33中任一项的抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含在重链的N-末端连接到Ig骨架的表位结合结构域。
38.权利要求21-33中任一项的抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含在轻链的C-末端连接到Ig骨架的表位结合结构域。
39.权利要求21-33中任一项的抗原结合构建体，所述抗原结合构建体包含在重链的C-末端连接到Ig骨架的表位结合结构域。
40.权利要求1或2的抗原结合构建体，所述抗原结合构建体具有4个抗原结合位点并能够同时结合4个抗原。
41.用于药物的前述权利要求中任一项的抗原结合构建体。
42.用于制备治疗癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病的药物的前述权利要求中任一项的抗原结合构建体。
43.治疗罹患癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病的患者的方法，所述方法包括给予治疗量的前述权利要求中任一项的抗原结合构建体。
44.用于治疗癌症或诸如哮喘、风湿性关节炎或骨关节炎等炎性疾病的前述权利要求中任一项的抗原结合构建体。
45.编码权利要求1-40中任一项的抗原结合构建体的重链的多核苷酸序列。
46.编码权利要求1-40中任一项的抗原结合构建体的轻链的多核苷酸。
47.经转化或转染的重组宿主细胞，所述宿主细胞包含一个或多个编码前述权利要求中任一项的抗原结合构建体的重链和轻链的多核苷酸序列。
48.用于制备权利要求1-40中任一项的抗原结合构建体的方法，所述方法包括培养权利要求47的宿主细胞和分离所述抗原结合构建体的步骤。
49.药用组合物，所述药用组合物包含权利要求1-38中任一项的抗原结合构建体和可药用载体。
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PE (1) PE20091234A1 (zh)
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UY (1) UY31504A1 (zh)
WO (1) WO2009068649A2 (zh)
ZA (1) ZA201003850B (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102676569A (zh) * 2012-05-08 2012-09-19 百泰生物药业有限公司 一种新型噬菌粒展示载体pCANTAB5M
CN104341529A (zh) * 2013-07-26 2015-02-11 三星电子株式会社 带有DARPin的双特异性嵌合蛋白
CN104540518A (zh) * 2012-04-27 2015-04-22 西托姆克斯治疗公司 结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法
CN106084067A (zh) * 2016-06-15 2016-11-09 无锡市人民医院 具有肿瘤抑制作用的新型真核重组蛋白及其制备方法
CN108137683A (zh) * 2015-08-24 2018-06-08 葛兰素史密斯克莱知识产权（第2 号）有限公司 生物医药组合物
CN109310766A (zh) * 2016-02-26 2019-02-05 伊蒙纽斯私人有限公司 多特异性分子
WO2019134710A1 (en) * 2018-01-08 2019-07-11 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
CN113645996A (zh) * 2019-02-01 2021-11-12 新石生物制药有限公司 抗claudin 18抗体及其使用方法
US11447573B2 (en) 2016-07-20 2022-09-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof

Families Citing this family (207)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090286962A1 (en) * 2005-12-20 2009-11-19 Woolven Benjamin P Chimeric antibodies with part new world primate binding regions
EA017417B1 (ru) * 2006-02-01 2012-12-28 Сефалон Астралия Пти Лтд. КОНСТРУКТ ОДНОДОМЕННОГО АНТИТЕЛА, КОТОРЫЙ СВЯЗЫВАЕТСЯ С ЧЕЛОВЕЧЕСКИМ TNF-α, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
EP2195341B1 (en) 2007-09-26 2017-03-22 UCB Biopharma SPRL Dual specificity antibody fusions
TW200944231A (en) * 2007-11-30 2009-11-01 Glaxo Group Ltd Antigen-binding constructs
US8574577B2 (en) 2008-01-03 2013-11-05 The Scripps Research Institute VEGF antibodies comprising modular recognition domains
US8557242B2 (en) 2008-01-03 2013-10-15 The Scripps Research Institute ERBB2 antibodies comprising modular recognition domains
US8454960B2 (en) 2008-01-03 2013-06-04 The Scripps Research Institute Multispecific antibody targeting and multivalency through modular recognition domains
US8557243B2 (en) 2008-01-03 2013-10-15 The Scripps Research Institute EFGR antibodies comprising modular recognition domains
AU2008346734A1 (en) 2008-01-03 2009-07-16 The Scripps Research Institute Antibody targeting through a modular recognition domain
KR101705911B1 (ko) 2008-09-03 2017-02-10 제넨테크, 인크. 다중특이적 항체
HUE033438T2 (en) 2008-09-26 2017-11-28 Ucb Biopharma Sprl Biological products
US8268314B2 (en) 2008-10-08 2012-09-18 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific anti-VEGF/anti-ANG-2 antibodies
EP2358754A1 (en) * 2008-11-26 2011-08-24 Glaxo Group Limited Ligands that bind il-13
GB0904214D0 (en) 2009-03-11 2009-04-22 Ucb Pharma Sa Biological products
MA33381B1 (fr) 2009-05-28 2012-06-01 Glaxo Group Ltd Proteine de liaison a il-13
KR20140014405A (ko) * 2009-05-28 2014-02-06 글락소 그룹 리미티드 안구 질병을 치료하거나 예방하는데 사용되는 ｔｎｆ-알파 길항제 및 ｖｅｇｆ 길항제의 조합물
BRPI1013177A2 (pt) * 2009-05-28 2016-04-12 Glaxo Group Ltd construto de ligação de antígeno, polipeptídeo isolado, e, método para tratar doença cardíaca
JP5901517B2 (ja) 2009-05-28 2016-04-13 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ 抗原結合性タンパク質
US20120064064A1 (en) * 2009-05-28 2012-03-15 Thil Dinuk Batuwangala Antigen-binding proteins
JP5680087B2 (ja) * 2009-09-22 2015-03-04 シャンハイ・イージェー・バイオテクノロジー・カンパニー、リミテッドＳｈａｎｇｈａｉ Ｙｉｊｉｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ 特異的結合タンパク質およびその使用
EP2308897A1 (en) * 2009-10-09 2011-04-13 Pierre Fabre Medicament Chimeric antibodies specific for CD151 and use thereof in the treatment of cancer
KR101836217B1 (ko) 2009-10-30 2018-03-08 얀센 바이오테크 인코포레이티드 Ｉｌ-１７ａ 길항제
TW201120210A (en) 2009-11-05 2011-06-16 Hoffmann La Roche Glycosylated repeat-motif-molecule conjugates
WO2011057347A1 (en) 2009-11-12 2011-05-19 Tgr Biosciences Pty Ltd Analyte detection
JP2013518863A (ja) * 2010-02-09 2013-05-23 グラクソ グループ リミテッド 代謝障害の治療
AU2011218243A1 (en) 2010-02-18 2012-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Fibronectin based scaffold domain proteins that bind IL-23
AR080794A1 (es) * 2010-03-26 2012-05-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos bivalentes biespecificos anti- vegf/ anti-ang-2
JP2013528362A (ja) 2010-04-21 2013-07-11 グラクソ グループ リミテッド 結合ドメイン
HUE060541T2 (hu) * 2010-05-14 2023-03-28 Univ Leland Stanford Junior Humanizált és kiméra monoklonális CD47 elleni ellenanyagok
AU2011254559B2 (en) 2010-05-20 2014-09-04 Glaxo Group Limited Improved anti-serum albumin binding variants
TWI488966B (zh) * 2010-07-09 2015-06-21 優普生物科技股份有限公司 Ｄｎａ疫苗
WO2012009705A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Zyngenia, Inc. Ang-2 binding complexes and uses thereof
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
EP2603522A1 (en) 2010-08-13 2013-06-19 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Improved anti-serum albumin binding variants
JP2013537421A (ja) 2010-08-20 2013-10-03 グラクソスミスクライン、インテレクチュアル、プロパティー、ディベロップメント、リミテッド 改良された抗血清アルブミン結合変異体
US20120237975A1 (en) 2010-10-01 2012-09-20 Jason Schrum Engineered nucleic acids and methods of use thereof
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
EP2643351A1 (en) 2010-11-24 2013-10-02 Glaxo Group Limited Multispecific antigen binding proteins targeting hgf
SG190938A1 (en) * 2010-12-06 2013-07-31 Seattle Genetics Inc Humanized antibodies to liv-1 and use of same to treat cancer
JP2014504587A (ja) 2010-12-22 2014-02-24 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ−２３に結合するフィブロネクチンをベースとするスカフォールドドメインタンパク質
UY33826A (es) * 2010-12-22 2012-07-31 Abbott Lab Proteínas de unión con dominios trivariables y sus usos
EP2668210B1 (en) 2011-01-26 2020-06-17 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-kit antibodies and uses thereof
US20130310281A1 (en) 2011-02-02 2013-11-21 Glaxo Group Limited Novel antigen binding proteins
CN102251013A (zh) * 2011-02-22 2011-11-23 北京市肿瘤防治研究所 一个识别肿瘤起始细胞的抗体和抗原及其应用
EP3235508B1 (en) 2011-03-16 2020-12-30 Sanofi Compositions comprising a dual v region antibody-like protein
EP2691101A2 (en) 2011-03-31 2014-02-05 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
KR20140018966A (ko) * 2011-04-07 2014-02-13 글락소스미스클라인 엘엘씨 점도가 감소된 제제
EP2714738B1 (en) 2011-05-24 2018-10-10 Zyngenia, Inc. Multivalent and monovalent multispecific complexes and their uses
JP2014519338A (ja) * 2011-06-16 2014-08-14 ノバルティス アーゲー 治療薬として使用される可溶性タンパク質
EP3626739A1 (en) * 2011-06-24 2020-03-25 Stephen D. Gillies Light chain immunoglobulin fusion proteins and methods of use thereof
EP2546268A1 (en) * 2011-07-13 2013-01-16 F-Star Biotechnologische Forschungs - und Entwicklungsges. M.B.H. Internalising immunoglobulin
GB201112429D0 (en) * 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
CA2842099A1 (en) 2011-07-27 2013-01-31 Glaxo Group Limited Antigen binding constructs
KR102143506B1 (ko) 2011-08-17 2020-08-12 글락소 그룹 리미티드 변형된 단백질 및 펩티드
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2850624A1 (en) 2011-10-03 2013-04-11 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
WO2013063702A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
KR20140102759A (ko) 2011-12-16 2014-08-22 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물
SI2812443T1 (sl) 2012-02-06 2019-10-30 Inhibrx Inc Protitelesa CD47 in postopki za njihovo uporabo
GB2502127A (en) * 2012-05-17 2013-11-20 Kymab Ltd Multivalent antibodies and in vivo methods for their production
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
CA2868398A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US20130280282A1 (en) * 2012-04-24 2013-10-24 Daiichi Sankyo Co., Ltd. Dr5 ligand drug conjugates
US20130336973A1 (en) * 2012-05-10 2013-12-19 Zymeworks Inc. Heteromultimer Constructs of Immunoglobulin Heavy Chains with Mutations in the Fc Domain
WO2014004586A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Zymeworks Inc. Process and methods for efficient manufacturing of highly pure asymmetric antibodies in mammalian cells
CN104508129A (zh) * 2012-06-28 2015-04-08 分子伴侣公司 设计的与血小板衍生生长因子结合的锚蛋白重复序列蛋白
HUE056217T2 (hu) 2012-07-13 2022-02-28 Roche Glycart Ag Bispecifikus anti-VEGF/anti-ANG-2 antitestek és ezek alkalmazása szemészeti érbetegségek kezelésében
US9334332B2 (en) 2012-07-25 2016-05-10 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Anti-kit antibodies
EP2888279A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 Glaxo Group Limited Anti lrp6 antibodies
AU2013326974B2 (en) 2012-10-03 2019-01-03 Zymeworks Bc Inc. Methods of quantitating heavy and light chain polypeptide pairs
JP6144355B2 (ja) 2012-11-26 2017-06-07 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 化学修飾ｍＲＮＡ
WO2014082179A1 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
US9914785B2 (en) 2012-11-28 2018-03-13 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
WO2014111550A1 (en) 2013-01-17 2014-07-24 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Modified anti-serum albumin binding proteins
EP2951192A1 (en) 2013-01-31 2015-12-09 Glaxo Group Limited Method of producing a protein
KR102276974B1 (ko) * 2013-02-06 2021-07-13 인히브릭스, 인크. 비-혈소판 및 비-적혈구 세포 격감성 cd47 항체 및 이를 이용하는 방법
RU2015140915A (ru) * 2013-02-26 2017-04-03 Роше Гликарт Аг Биспецифические антигенсвязывающие молекулы, активирующие т-клетки
EA201890895A1 (ru) 2013-03-15 2019-02-28 Зинджения, Инк. Мультивалентные и моновалентные мультиспецифические комплексы и их применение
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP3000827B1 (en) 2013-05-22 2020-04-22 Seoul National University Hospital Anti-tnf-alpha/cxcl10 double-targeting antibody and use thereof
CN104341504B (zh) * 2013-08-06 2017-10-24 百奥泰生物科技(广州)有限公司 双特异性抗体
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
JP2016538829A (ja) 2013-10-03 2016-12-15 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 低密度リポタンパク質受容体をコードするポリヌクレオチド
US9540440B2 (en) 2013-10-30 2017-01-10 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies that bind epidermal growth factor receptor and methods of use thereof
WO2015073721A1 (en) * 2013-11-13 2015-05-21 Zymeworks Inc. Monovalent antigen binding constructs targeting egfr and/or her2 and uses thereof
MX2016006572A (es) 2013-11-27 2016-12-09 Zymeworks Inc Construcciones de union a antigenos biespecificas dirigidas a her2.
WO2015089283A1 (en) 2013-12-11 2015-06-18 Cytomx Therapeutics, Inc. Antibodies that bind activatable antibodies and methods of use thereof
TW201609805A (zh) 2013-12-23 2016-03-16 美國禮來大藥廠 結合ｅｇｆｒ及ｍｅｔ之多功能抗體
WO2015095972A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 The Centre For Drug Research And Development Antibodies comprising c-terminal light chain polypeptide extensions and conjugates and methods of use thereof
AU2015205530B8 (en) * 2014-01-13 2019-09-19 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Multi-specific polypeptide useful for localized tumor immunomodulation
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
JOP20200096A1 (ar) 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
CN106103484B (zh) 2014-03-14 2021-08-20 诺华股份有限公司 针对lag-3的抗体分子及其用途
EP3593812A3 (en) 2014-03-15 2020-05-27 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric antigen receptor
EA201692476A1 (ru) 2014-05-28 2017-07-31 Займворкс Инк. Модифицированные антигенсвязывающие полипептидные конструкции и их применение
SG11201609707WA (en) 2014-07-01 2017-01-27 Pfizer Bispecific heterodimeric diabodies and uses thereof
KR102272213B1 (ko) * 2014-07-08 2021-07-01 삼성전자주식회사 표적화 부위, 절단 부위, 및 세포막 투과 부위를 포함하는 융합 단백질 및 그의 용도
CN112481283A (zh) 2014-07-21 2021-03-12 诺华股份有限公司 使用cd33嵌合抗原受体治疗癌症
CN106687483B (zh) 2014-07-21 2020-12-04 诺华股份有限公司 使用人源化抗-bcma嵌合抗原受体治疗癌症
JP2017528433A (ja) 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
US11542488B2 (en) 2014-07-21 2023-01-03 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
US20170209492A1 (en) 2014-07-31 2017-07-27 Novartis Ag Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing t-cells
WO2016025880A1 (en) 2014-08-14 2016-02-18 Novartis Ag Treatment of cancer using gfr alpha-4 chimeric antigen receptor
MY189028A (en) 2014-08-19 2022-01-20 Novartis Ag Anti-cd123 chimeric antigen receptor (car) for use in cancer treatment
DK3194443T3 (da) 2014-09-17 2021-09-27 Novartis Ag Målretning af cytotoksiske celler med kimære receptorer i forbindelse med adoptiv immunterapi
GB201416832D0 (en) 2014-09-24 2014-11-05 Glaxosmithkline Plc Methods of treatment
RU2609627C2 (ru) * 2014-09-26 2017-02-02 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Высокоаффинные и агрегационно стабильные антитела на основе вариабельных доменов vl и производного vhh
CU20170052A7 (es) 2014-10-14 2017-11-07 Dana Farber Cancer Inst Inc Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1
WO2016090034A2 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Novartis Ag Methods for b cell preconditioning in car therapy
WO2016135041A1 (en) * 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
SI3280729T1 (sl) 2015-04-08 2022-09-30 Novartis Ag Terapije CD20, terapije CD22 in kombinacija terapij s celico, ki izraža himerni antigenski receptor CD19 (CAR)
US20180298068A1 (en) 2015-04-23 2018-10-18 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric antigen receptor and protein kinase a blocker
CA2980840A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Pieris Pharmaceuticals Gmbh Anti-cancer fusion polypeptide
EP3325512B1 (en) 2015-07-23 2023-09-06 Inhibrx, Inc. Multivalent and multispecific gitr-binding fusion proteins
EP3316902A1 (en) 2015-07-29 2018-05-09 Novartis AG Combination therapies comprising antibody molecules to tim-3
SI3317301T1 (sl) 2015-07-29 2021-10-29 Novartis Ag Kombinirane terapije, ki obsegajo molekule protitelesa na LAG-3
CN108025071B (zh) * 2015-09-17 2022-11-01 斯克利普斯研究院 双重可变结构域免疫缀合物及其用途
MX2018004029A (es) * 2015-10-02 2018-07-06 Tgr Biosciences Pty Ltd Deteccion de analitos con multiples sustratos.
CA3000869A1 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Zymeworks Inc. Antigen-binding polypeptide constructs comprising kappa and lambda light chains and uses thereof
JP2019502695A (ja) 2015-12-17 2019-01-31 ノバルティス アーゲー ＰＤ−１に対する抗体分子とＣ−Ｍｅｔ阻害剤との組合せおよびその使用
CA3007671A1 (en) 2015-12-17 2017-06-22 Novartis Ag Antibody molecules to pd-1 and uses thereof
EP3851457A1 (en) 2016-01-21 2021-07-21 Novartis AG Multispecific molecules targeting cll-1
EP3423482A1 (en) 2016-03-04 2019-01-09 Novartis AG Cells expressing multiple chimeric antigen receptor (car) molecules and uses therefore
MA45324A (fr) 2016-03-15 2019-01-23 Seattle Genetics Inc Polythérapie utilisant un adc-liv1 et un agent chimiothérapeutique
WO2017165683A1 (en) 2016-03-23 2017-09-28 Novartis Ag Cell secreted minibodies and uses thereof
MX2018012615A (es) 2016-04-15 2019-05-30 Novartis Ag Composiciones y metodos para la expresion selectiva de proteinas.
US20210177896A1 (en) 2016-06-02 2021-06-17 Novartis Ag Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells
JP7219376B2 (ja) 2016-07-15 2023-02-08 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体をキナーゼ阻害薬と併用して使用したサイトカイン放出症候群の治療及び予防
AU2017302668B9 (en) 2016-07-28 2023-06-22 Novartis Ag Combination therapies of chimeric antigen receptors and PD-1 inhibitors
CA3032581A1 (en) 2016-08-01 2018-02-08 Novartis Ag Treatment of cancer using a chimeric antigen receptor in combination with an inhibitor of a pro-m2 macrophage molecule
AR110676A1 (es) 2016-10-07 2019-04-24 Novartis Ag Tratamiento del cáncer utilizando receptores de antígenos quiméricos
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
TW201829462A (zh) * 2016-11-02 2018-08-16 英商葛蘭素史克智慧財產（第二）有限公司 結合蛋白
WO2018140725A1 (en) 2017-01-26 2018-08-02 Novartis Ag Cd28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
CN108456250A (zh) * 2017-02-17 2018-08-28 科济生物医药（上海）有限公司 靶向il-13ra2的抗体及其应用
EP3589647A1 (en) 2017-02-28 2020-01-08 Novartis AG Shp inhibitor compositions and uses for chimeric antigen receptor therapy
EP3619235A1 (en) 2017-04-11 2020-03-11 Inhibrx, Inc. Multispecific polypeptide constructs having constrained cd3 binding and methods of using the same
WO2018201051A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Novartis Ag Bcma-targeting agent, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
WO2018201056A1 (en) 2017-04-28 2018-11-01 Novartis Ag Cells expressing a bcma-targeting chimeric antigen receptor, and combination therapy with a gamma secretase inhibitor
CA3064859A1 (en) * 2017-06-06 2018-12-13 Glaxosmithkline Llc Biopharmaceutical compositions and methods for pediatric patients
WO2018232357A1 (en) 2017-06-15 2018-12-20 Modernatx, Inc. Rna formulations
JP7433910B2 (ja) 2017-06-22 2024-02-20 ノバルティス アーゲー Ｃｄ７３に対する抗体分子及びその使用
WO2019006007A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag POSOLOGICAL REGIMES FOR ANTI-TIM3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
MX2020000342A (es) 2017-07-11 2020-08-17 Compass Therapeutics Llc Anticuerpos agonistas que se unen a cd137 humano y sus usos.
GB201711208D0 (en) 2017-07-12 2017-08-23 Iontas Ltd Ion channel inhibitors
JP2020527572A (ja) 2017-07-20 2020-09-10 ノバルティス アーゲー 抗ｌａｇ−３抗体の投薬量レジメンおよびその使用
WO2019028367A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. METHODS OF TREATING ESOPHAGITIS WITH ACTIVE EOSINOPHILES
JP7275111B2 (ja) 2017-08-31 2023-05-17 モデルナティエックス インコーポレイテッド 脂質ナノ粒子の生成方法
TWI801425B (zh) * 2017-09-29 2023-05-11 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 Il-5 抗體、其抗原結合片段及醫藥用途
WO2019089798A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Novartis Ag Anti-car compositions and methods
WO2019089753A2 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and pd-1 antagonists and uses thereof
JP2021503478A (ja) 2017-11-16 2021-02-12 ノバルティス アーゲー 組み合わせ治療
WO2019100052A2 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Compass Therapeutics Llc Cd137 antibodies and tumor antigen-targeting antibodies and uses thereof
KR20200104333A (ko) 2017-12-28 2020-09-03 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Tigit에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체
US11713353B2 (en) 2018-01-15 2023-08-01 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against PD-1
US20210038659A1 (en) 2018-01-31 2021-02-11 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
US20210047405A1 (en) 2018-04-27 2021-02-18 Novartis Ag Car t cell therapies with enhanced efficacy
WO2019226658A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Multispecific antigen-binding compositions and methods of use
WO2019226617A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
WO2019227003A1 (en) 2018-05-25 2019-11-28 Novartis Ag Combination therapy with chimeric antigen receptor (car) therapies
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
US20210198370A1 (en) * 2018-05-31 2021-07-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Bi-specific antibodies and use thereof
WO2019241426A1 (en) 2018-06-13 2019-12-19 Novartis Ag Bcma chimeric antigen receptors and uses thereof
KR20210035173A (ko) 2018-06-19 2021-03-31 아타르가, 엘엘씨 보체 성분 5에 대한 항체분자 및 이의 용도
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
GB2576914A (en) * 2018-09-06 2020-03-11 Kymab Ltd Antigen-binding molecules comprising unpaired variable domains produced in mammals
MX2021005594A (es) 2018-11-13 2021-10-22 Compass Therapeutics Llc Constructos multiespecificos de union contra moleculas de puntos de control y usos de los mismos.
JP2022514017A (ja) 2018-12-20 2022-02-09 ノバルティス アーゲー 医薬の組み合わせ
AU2019402189B2 (en) 2018-12-20 2023-04-13 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
AU2020222346B2 (en) 2019-02-15 2021-12-09 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
US10871640B2 (en) 2019-02-15 2020-12-22 Perkinelmer Cellular Technologies Germany Gmbh Methods and systems for automated imaging of three-dimensional objects
EA202192019A1 (ru) 2019-02-15 2021-11-02 Новартис Аг Производные 3-(1-оксо-5-(пиперидин-4-ил)изоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и пути их применения
EP3927371A1 (en) 2019-02-22 2021-12-29 Novartis AG Combination therapies of egfrviii chimeric antigen receptors and pd-1 inhibitors
AU2020231343A1 (en) 2019-03-06 2021-10-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-4/IL-13 pathway inhibitors for enhanced efficacy in treating cancer
AU2020240132A1 (en) 2019-03-21 2021-09-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of IL-4/IL-13 pathway inhibitors and plasma cell ablation for treating allergy
TW202102261A (zh) 2019-03-29 2021-01-16 美商艾特加有限責任公司 Fgf23之抗體分子及其用途
WO2020247871A2 (en) * 2019-06-06 2020-12-10 Janux Therapeutics, Inc. Compositions and methods relating to tumor activated t cell engagers
MX2022004769A (es) 2019-10-21 2022-05-16 Novartis Ag Inhibidores de tim-3 y sus usos.
CN114786679A (zh) 2019-10-21 2022-07-22 诺华股份有限公司 具有维奈托克和tim-3抑制剂的组合疗法
EP4065158A2 (en) 2019-11-26 2022-10-05 Novartis AG Chimeric antigen receptors binding bcma and cd19 and uses thereof
WO2021123996A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
EP4090762A1 (en) 2020-01-17 2022-11-23 Becton, Dickinson and Company Methods and compositions for single cell secretomics
CN114980902A (zh) 2020-01-17 2022-08-30 诺华股份有限公司 用于治疗骨髓增生异常综合征或慢性粒单核细胞白血病的包含tim-3抑制剂和低甲基化药物的组合
EP4110377A2 (en) 2020-02-27 2023-01-04 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
WO2021260528A1 (en) 2020-06-23 2021-12-30 Novartis Ag Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
CN115667316A (zh) * 2020-06-30 2023-01-31 和铂医药(上海)有限责任公司 Fab-HCAb结构的结合蛋白
TW202216761A (zh) 2020-07-16 2022-05-01 瑞士商諾華公司 抗β細胞素抗體、其片段及多特異性結合分子
WO2022026592A2 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Celltas Bio, Inc. Antibody molecules to coronavirus and uses thereof
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
EP4240765A2 (en) 2020-11-06 2023-09-13 Novartis AG Antibody fc variants
MX2023005609A (es) 2020-11-13 2023-05-29 Novartis Ag Terapias de combinacion con celulas que expresan receptores quimericos para el antigeno (car).
JP2024505049A (ja) 2021-01-29 2024-02-02 ノバルティス アーゲー 抗ｃｄ７３及び抗ｅｎｔｐｄ２抗体のための投与方式並びにその使用
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
WO2023044483A2 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
WO2023092004A1 (en) 2021-11-17 2023-05-25 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of tau-related disorders
US20230220089A1 (en) 2021-12-30 2023-07-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for attenuating atopic march by administering an il-4/il-13 antagonist
WO2023150778A1 (en) 2022-02-07 2023-08-10 Visterra, Inc. Anti-idiotype antibody molecules and uses thereof
WO2023220695A2 (en) 2022-05-13 2023-11-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of her2 positive cancer
WO2024030976A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for crossing the blood brain barrier

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DK1024191T3 (da) 1991-12-02 2008-12-08 Medical Res Council Fremstilling af autoantistoffer fremvist på fag-overflader ud fra antistofsegmentbiblioteker
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
ATE149570T1 (de) 1992-08-17 1997-03-15 Genentech Inc Bispezifische immunoadhesine
GB9221657D0 (en) * 1992-10-15 1992-11-25 Scotgen Ltd Recombinant bispecific antibodies
GB9225453D0 (en) * 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
US5605793A (en) 1994-02-17 1997-02-25 Affymax Technologies N.V. Methods for in vitro recombination
GB9424449D0 (en) 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies
US5702892A (en) 1995-05-09 1997-12-30 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Phage-display of immunoglobulin heavy chain libraries
EP0859841B1 (en) 1995-08-18 2002-06-19 MorphoSys AG Protein/(poly)peptide libraries
DK1019496T3 (da) 1997-07-07 2005-01-10 Medical Res Council In vitro-sorteringsmetode
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
GB9809839D0 (en) 1998-05-09 1998-07-08 Glaxo Group Ltd Antibody
PT1078051E (pt) 1998-05-13 2008-03-17 Domantis Ltd Sistema de apresentação em fagos para a selecção de proteínas correctamente organizadas
IL127127A0 (en) 1998-11-18 1999-09-22 Peptor Ltd Small functional units of antibody heavy chain variable regions
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
GB9900298D0 (en) 1999-01-07 1999-02-24 Medical Res Council Optical sorting method
AU3040101A (en) 2000-02-03 2001-08-14 Domantis Limited Combinatorial protein domains
US6846486B1 (en) * 2000-02-24 2005-01-25 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Method of treating allergy by administering an anti-histamine antibody
ES2528794T3 (es) * 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
EP1332209B1 (en) 2000-09-08 2009-11-11 Universität Zürich Collections of repeat proteins comprising repeat modules
ES2552281T3 (es) 2001-05-11 2015-11-26 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Proteínas de unión específica y usos de las mismas
DK1419179T3 (da) 2001-08-10 2010-06-21 Univ Aberdeen Antigenbindingsdomæner fra fisk
US20050142539A1 (en) * 2002-01-14 2005-06-30 William Herman Targeted ligands
US7317091B2 (en) * 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2004253835B2 (en) 2003-07-04 2009-01-29 Affibody Ab Polypeptides having binding affinity for HER2
AU2003275958A1 (en) 2003-08-25 2005-03-10 Pieris Proteolab Ag Muteins of tear lipocalin
KR20060129246A (ko) * 2003-12-05 2006-12-15 컴파운드 쎄라퓨틱스, 인크. 타입 2 혈관 내피 성장 인자 수용체의 억제제
US7767792B2 (en) 2004-02-20 2010-08-03 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Antibodies to EGF receptor epitope peptides
AR049390A1 (es) * 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
SI1773885T1 (sl) 2004-08-05 2010-08-31 Genentech Inc Humanizirani anti-CMET antagonisti
WO2006036877A2 (en) * 2004-09-27 2006-04-06 Cornell Research Foundation, Inc. Recombinant bifunctional protein of human lutropin receptor and human chorionic gonadotropin b-subunit and uses thereof
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1957541A2 (en) * 2005-11-21 2008-08-20 Laboratoires Serono SA Compositions and methods of producing hybrid antigen binding molecules and uses thereof
EP1973576B1 (en) 2005-11-28 2019-05-15 Genmab A/S Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof
EP1966242A1 (en) * 2005-12-06 2008-09-10 Domantis Limited Ligands that have binding specificity for egfr and/or vegf and methods of use therefor
US8486187B2 (en) * 2006-01-18 2013-07-16 Basf Se Multipurpose additive for low VOC solvent based coatings
AU2007209201A1 (en) * 2006-01-24 2007-08-02 Domantis Limited Fusion proteins that contain natural junctions
JP2009526857A (ja) 2006-02-15 2009-07-23 イムクローン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 機能性抗体
CA2644405A1 (en) * 2006-03-13 2007-09-20 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6 and polypeptides comprising the same for the treatment of diseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
EP1958957A1 (en) 2007-02-16 2008-08-20 NascaCell Technologies AG Polypeptide comprising a knottin protein moiety
NZ581395A (en) * 2007-05-14 2012-08-31 Biogen Idec Inc Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto
EP2050764A1 (en) * 2007-10-15 2009-04-22 sanofi-aventis Novel polyvalent bispecific antibody format and uses thereof
TW200944231A (en) * 2007-11-30 2009-11-01 Glaxo Group Ltd Antigen-binding constructs
MX2010008874A (es) * 2008-02-14 2010-09-22 Bristol Myers Squibb Co Terapeuticos dirigidos a base de proteinas manipuladas que se unen al receptor de factor de crecimiento epidermico.
RS60577B1 (sr) * 2009-10-20 2020-08-31 Abbvie Inc Izolacija i prečišćavanje anti-il-13 antitela upotrebom protein a afinitetne hromatografije

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104540518A (zh) * 2012-04-27 2015-04-22 西托姆克斯治疗公司 结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法
CN110078827A (zh) * 2012-04-27 2019-08-02 西托姆克斯治疗公司 结合表皮生长因子受体的可活化的抗体其使用方法
CN102676569A (zh) * 2012-05-08 2012-09-19 百泰生物药业有限公司 一种新型噬菌粒展示载体pCANTAB5M
CN104341529A (zh) * 2013-07-26 2015-02-11 三星电子株式会社 带有DARPin的双特异性嵌合蛋白
CN104341529B (zh) * 2013-07-26 2020-03-24 三星电子株式会社 带有DARPin的双特异性嵌合蛋白
CN108137683A (zh) * 2015-08-24 2018-06-08 葛兰素史密斯克莱知识产权（第2 号）有限公司 生物医药组合物
US11345736B2 (en) 2016-02-26 2022-05-31 Imunexus Therapeutics Limited Multi-specific molecules
CN109310766A (zh) * 2016-02-26 2019-02-05 伊蒙纽斯私人有限公司 多特异性分子
CN106084067A (zh) * 2016-06-15 2016-11-09 无锡市人民医院 具有肿瘤抑制作用的新型真核重组蛋白及其制备方法
US11447573B2 (en) 2016-07-20 2022-09-20 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
WO2019134710A1 (en) * 2018-01-08 2019-07-11 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
CN111836832A (zh) * 2018-01-08 2020-10-27 南京传奇生物科技有限公司 多特异性抗原结合蛋白及其使用方法
CN113645996A (zh) * 2019-02-01 2021-11-12 新石生物制药有限公司 抗claudin 18抗体及其使用方法
CN113645996B (zh) * 2019-02-01 2024-04-02 新石生物制药有限公司 抗claudin 18抗体及其使用方法

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