DE3851889T2 - Nukleosid-derivate. - Google Patents
Nukleosid-derivate.Info
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft Nukleosidderivate, Verfahren zu ihrer Synthese und Verfahren zur Synthese und zum Sequenzieren von Polynukleotiden unter Verwendung solcher Nukleosidderivate.
- (MAN BEACHTE: Die hierin angeführten Quellenverweise sind am Ende der Beschreibung zusammengefaßt).
- DNA, synthetische Oligonukleotide und mit identifizierbaren Markern markierte DNA, werden heute in der Molekularbiologie in vielfältiger Weise eingesetzt.
- Radioaktive Marker, z. B. ³²P und ³&sup5;S, wurden fast ausschließlich in molekularbiologischen Verfahren verwendet. Radioaktive Marker weisen jedoch den Nachteil auf, daß ihre Halbwertszeit relativ kurz ist (die Halbwertszeit von ³²P ist beispielsweise 14 Tage) und daß die während dieses Zerfalls ausgestrahlte ionisierende Strahlung die Zellkomponenten wie Protein, Lipide und Nukleinsäuren beschädigen kann, was zum Zelltod oder zur Umwandlung von Zellen in maligne Formen führen kann.
- Es wurde vorgeschlagen, Nukleotide oder Oligonukleotide mit nicht-radioaktiven Markern wie Fluorphoren, kolloidalen Verbindungen und Enzymen zu markieren.
- In einer vorgeschlagenen Vorgangsweise wurden Oligonukleotide hergestellt, die eine reaktive Aminogruppe am 5'-Ende enthielten. Fluorophore oder andere nicht-radioaktive Marker wurden dann an die Aminogruppe angehängt, um ein Oligonukleotid zu bilden, in das ein nachweisbarer Marker eingebaut ist. Eine solche Vorgangsweise weist den Nachteil auf, daß nur ein einziger nachweisbarer Marker in die Oligonukleotidkette über ihr 5'-Ende eingeführt werden kann.
- In einer weiteren Vorgangsweise ²&supmin;&sup5; wurden C-5-substituierte Deoxyuridinverbindungen hergestellt, die am entfernten Ende des C-5-Substituenten eine Aminogruppe aufweisen. Solche Verbindungen können mit einem nachweisbaren Marker markiert und in eine Oligonukleotidkette eingebaut werden, wodurch ein Oligonukleotid an mehreren Stellen markiert werden kann. Die Herstellung dieser Verbindungen ist schwierig und umfaßt Reaktionen unter Verwendung hochgiftiger Quecksilberderivate.
- EP-A-0 251 786, die unter Art. 54(3) EPÜ fällt, offenbart Alkinylaminonukleotide und markierte Derivate. Diese Derivate sind vor allem als Kettenabbrecher beim DNA- Sequenzieren gedacht. Demzufolge sind die meisten der beschriebenen Verbindungen Derivate von Didesoxynukleotiden.
- Daher besteht ein Bedarf an Nukleosidderivaten, die bei der Herstellung von nicht isotopenmarkierten Polynukleosiden verwendet und die einfach und sicher hergestellt werden können.
- Gemäß der vorliegenden Erfindung ist ein Nukleosidderivat der Formel (I):
- bereitgestellt, dadurch gekennzeichnet, daß:
- Y H oder OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
- X H, eine Phosphonatgruppe oder eine Phosphoramiditgruppe der Formel
- ist, worin R¹ und R² gleich oder voneinander verschieden sind und aus Alkyl und substituiertem Alkyl ausgewählt sind, das verzweigt oder unverzweigt sein kann; und Q eine Phosphatschutzgruppe ist;
- Z H, eine Phosphat- oder Triphosphatgruppe oder eine Hydroxyschutzgruppe ist;
- X' eine C&sub1;&submin;&sub1;&sub5;-Alkylengruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann;
- R eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder ein anderer nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker ist; oder die Gruppe Y'NHA, worin Y' eine Alkyl(C&sub1;&submin;&sub4;&sub0; carbonylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann, und A eine Aminoschutzgruppe oder Fluorophor oder ein anderer nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker ist;
- mit der Maßgabe, daß, wenn X' CH&sub2; und R -COCF&sub3; ist
- (i) Z nicht H ist, wenn X H ist und Y H ist;
- (ii) Z nicht Dimethoxytrityl ist, wenn X
- und Y H ist; und
- (iii) Z nicht Dimethoxytrityl ist, wenn X
- ist und Y-O-Tetrahydropyranyl ist.
- Der Einfachheit halber zeigt Fig. 1, die eine bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung darstellt, auch das in der vorliegenden Beschreibung für die C-5-substituierten Nukleoside verwendete Numerierungssystem.
- Es wurde gefunden, daß C-5-substituiertes Uridin und Desoxyuridin mit einer primären aliphatischen Aminogruppe, die an einem nicht-radioaktiven Marker angehängt ist oder zum Anhängen daran fähig ist, unter milden Bedingungen unter Verwendung einer Palladium-katalysierten C-C-Bindungs-Bildungsreaktion zwischen einem Aminoalkin und 5-Ioduridin oder 5-Ioddesoxyuridin-Derivaten leicht hergestellt werden kann.
- R¹ und R² können jeweils von 1 bis 30 C-Atome enthalten. Vorzugsweise sind R¹ und R² beide Isopropylgruppen. Wenn R¹ und/oder R² substituiertes Alkyl sind, ist die Beschaffenheit der Substituenten nicht entscheidend, soferne die Substituenten nicht die erwünschten Eigenschaften der Verbindung beeinträchtigen oder andere schädliche Wirkungen ausüben. Beispielsweise können die Substituenten aus Phenyl-, Benzyl- und Acylgruppen ausgewählt sein.
- Q kann jede beliebige Phosphatschutzgruppe sein, z. B. Methyl-, Phenyl-, substituierte Phenyl-, Benzyl- oder Cyanoäthylgruppen. Beispielsweise kann Phenyl mit Halogen-, Hydroxy- oder Nitrogruppen substituiert sein.
- Jede beliebige Hydroxyschutzgruppe, z. B. die von Greene &sup6; beschriebenen, kann verwendet werden. Beispielsweise können Hydroxyschutzgruppen aus Acyl ausgewählt sein, z. B. substituiertes oder unsubstituiertes Alkanoyl (z. B. Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Valeryl, Bromacetyl, Dichloracetyl, Trifluoracetyl), substituiertes oder unsubstituiertes Aroyl (Benzoyl, Toluyl, Xyloyl, Nitrobenzoyl, Brombenzoyl, Salicyloyl), Arylalkyl (z. B. Benzyl), Methyl, Methoxy, Methylthiomethyl, 2- Methoxyäthoxymethyl, bis(2-Chloräthoxy)methyl, Tetrahydropyranyl, Tetrahydrothiopyranyl, 4-Methoxytetrahydropyranyl, 4-Methoxytetrahydrothiopyranyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothiofuranyl, 1-Äthoxyäthyl, 1-Methyl-1-methoxyäthyl, 2- (phenylselenyl)äthyl, t-Butyl, Allyl, Benzyl, o-Nitrobenzyl, Triphenylmethyl, α- Naphthyldiphenylmethyl, p-Methoxyphenyldiphenylmethyl, 9-(9-Phenyl-10-oxo)anthryl (Tritylone), Dimethoxytrityl oder -pixyl, Trimethylsilyl, Isopropyldimethylsilyl, t- Butyldimethylsilyl, t-Butyl-diphenylsilyl, Tribenzylsilyl, Triisopropylsilyl.
- Jede beliebige Aminoschutzgruppe, z. B. die durch Greene &sup6; beschriebenen, kann verwendet werden. Beispielsweise können Aminoschutzgruppen aus Acyl, insbesondere organischem Acyl, beispielsweise substituiertem oder unsubstituiertem aliphatischen Kohlenwasserstoffoxycarbonyl ausgewählt sein, z. B.
- Alkoxycarbonyl (z. B. Methoxycarbonyl, Äthoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl, 5-Pentoxycarbonyl), Haloalkoxycarbonyl (z. B. Chlormethoxycarbonyl, Tribromäthoxycarbonyl, Trichloräthoxycarbonyl),
- einem Alkan- oder -arensulfonylalkoxycarbonyl (z. B. 2-(Mesyl)äthoxycarbonyl, 2-(p- Toluolsulfonyl)-äthoxycarbonyl),
- einem Alkylthio- oder Arylthioalkoxycarbonyl (z. B. 2-(Äthylthio)äthoxycarbonyl, 2-(p- Tolylthio)äthoxy-carbonyl), substituiertem oder unsubstituiertem Alkanoyl, z. B. Halo(nieder)alkanoyl (z. B. Formyl, Trifluoracetyl),
- einem monozyklischen oder verschmolzen-zyklischen alizyklischen Oxycarbonyl (z. B. Cyclohexyloxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl, Isobornyloxycarbonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Alkenyloxycarbonyl (z. B. Allyloxycarbonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Alkinyloxycarbonyl (z. B. 1,1- Dimethylpropargyloxycarbonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Aryloxycarbonyl (z. B. Phenoxycarbonyl, p Methylphenoxycarbonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Aralkoxycarbonyl (z. B. Benzyloxycarbonyl, p- Nitrobenzyloxycarbonyl, p-Phenylazobenzyloxycarbonyl, p-(p-Methoxyphenylazo)benzyloxycarbonyl, p-Chlorbenzyloxycarbonyl, p-Brombenzyloxycarbonyl, α- Naphthylmethoxycarbonyl, p-Biphenylisopropoxycarbonyl, Fluorenymethoxycarbonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Arensulfonyl (z. B. Benzolsulfonyl, p- Toluolsulfonyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Dialkylphosphoryl (z. B. Dimethylphosphoryl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Diaralkylphosphoryl (z. B. O,O- Dibenzylphosphoryl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Aryloxyalkanoyl (z. B. Phenoxyacetyl, p- Chlorphenoxyacetyl, 2-Nitrophenoxyacetyl, 2-Methyl-2-(2-nitro-phenoxy)propionyl),
- substituiertem oder unsubstituiertem Aryl wie Phenyl, Tolyl;
- substituiertem oder unsubstituiertem Aralkyl wie Benzyl, Diphenylmethyl, Trityl oder Nitrobenzyl.
- Der Ausdruck "Fluorophor" bezieht sich auf eine Gruppe, die selbst fähig zur Fluoreszenz ist oder die einer anderen Gruppe Fluoreszenz verleiht. Der in der vorliegenden Beschreibung verwendete Ausdruck "Fluorophor" bezieht sich auf einen Fluorophorvorläufer, der eine oder mehrere fluoreszenzunterdrückende Gruppen enthält, der aber zur Fluoreszenz fähig ist, sobald diese Gruppen entfernt sind. (Beispielsweise ist Diisobutyryl 6-carboxyfluorescein nicht fluoreszierend. Die Behandlung mit Ammoniak entfernt die Diisobutyrylgruppen, um fluoreszierendes 6- Carboxyfluorescein zu ergeben). Beispiele von Fluorophoren oder Fluorophorvorläufern:
- Fluorescein-5-isothiocyanat, Acyl (beispielsweise: Diisobutyryl, Acetyl oder Dipivaloyl)- 5-und/oder 6-Carboxy-fluoresceinpentafluorphenylester, 6-(Diaryl-5 und/oder 6- Carbonylfluorescein)amino-hexansäurepentafluorphenylester, Texas Red (Markennamen von Molecular Probes, Inc.), Tetramethylrhodamin-5- (und 6) isothiocyanat (nachstehend als Rhodamin bezeichnet), Eosin-5-isothiocyanat, Erythrosin- 5- isothiocyanat, 4-Chlor-7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol, 4-Fluor-7-nitrobenz-2-oxa-1,3- diazol, 3-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)methylaminopropionitril, 6-(7-Nitrobenz-2- oxa-1,3-diazol-yl)-aminohexansäure, Succinimidyl 12-(N-Methyl-N-(7-nitrobenz-2-oxa- 1,3-diazo-4-yl)aminododecanoat, 7-Diäthylamino-3-(4'-Isothiocyanatophenyl)-4- methylcumarin (CP), 7-Hydroxycumarin-4-Essigsäure, 7-Dimethylaminocumarin-4- Essigsäure, Succinimidyl 7-dimethylaminocumarin-4-acetat, 7-Methoxycumarin-4- Essigsäure, 4-Acetamido-4'-isothiocyanatostilben-2-2'-Disulfonsäure (SITS), 9- Chloracridin, Succinimidyl 3-(9-Carbazol)-Propionat, Succinimidyl 1-Pyrenbutyrat, Succinimidyl 1-Pyrenennonanoat, p-Nitrophenyl 1-Pyrenbutyrat, 9-Anthracenpropionsäure, Succinimidylanthracen-9-propionat, 2-Anthracensulfonylchlorid.
- Vorzugsweise weisen die Fluorophore oder fluorogenen Substanzen die folgenden spektroskopischen Eigenschaften auf:
- (i) ein Anregungsmaximum, das einer der stärksten Emissionslinien der kommerziell verwendeten Hochdruck-Quecksilberdampflampen entspricht;
- (ii) ein Emissionsmaximum im sichtbaren Teil des Spektrums.
- Zu nicht-radioaktiven nachweisbaren Markern gehören Einheiten, die direkt durch ihre physikalischen Eigenschaften nachgewiesen werden können, z. B. elektronendichte Materialien, die unter einem Mikroskop nachgewiesen werden können; oder Einheiten, die indirekt durch ihre chemischen oder biochemischen Eigenschaften nachgewiesen werden können, z. B. durch Reaktion des nachweisbaren Markers mit einem oder mehreren geeigneten Substraten zur Erzeugung eines nachweisbaren Signals, z. B. Farbe. Beispiele nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker, die direkt nachgewiesen werden können, sind kolloidale Verbindungen, z. B. kolloidales Gold und Silber und Ferritin. Beispiele nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker, die indirekt nachgewiesen werden können, sind Biotin, Avidin und Enzyme wie β-Galactosidase, Urease, Peroxidase und alkalische Phosphatase.
- X' ist vorzugsweise CH&sub2;
- R ist vorzugsweise CO(CH&sub2;)&sub1;&submin;&sub1;&sub5; A und bevorzugter CO(CH&sub2;)&sub5;A.
- Besonders bevorzugte Verbindungen der Formel (I) weisen die folgenden Substituenten auf: Triphosphat
- worin die Gruppe A wie oben definiert ist und sich DMTr auf Dimethoxytrityl bezieht und D eine Hydroxyschutzgruppe ist.
- Die Verbindungen der Formel (I')
- sind dadurch gekennzeichnet, daß
- Y H oder OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
- X H, eine Phosphonatgruppe oder eine Phosphoramiditgruppe der Formel
- ist, worin R¹ und R² gleich oder voneinander verschieden sind und aus Alkyl und substituiertem Alkyl ausgewählt sind, das verzweigt oder unverzweigt sein kann; und Q eine Phosphatschutzgruppe ist;
- Z H, eine Phosphat- oder eine Triphosphatgruppe oder eine Hydroxyschutzgruppe ist;
- eine C&sub1;&submin;&sub1;&sub5; Alkylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann;
- R eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder ein anderer nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker ist; oder die Gruppe Y'NHA, worin Y' eine Alkyl (C&sub1;&submin;&sub4;&sub0;) carbonylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann, und A eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorphor oder ein anderer nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker ist, und
- können durch Umsetzen eines 5-ioduridins oder 5-Ioddesoxyuridins der Formel:
- worin Y und Z wie weiter oben definiert sind und X eine Hydroxyschutzgruppe ist,
- mit einem Aminoalkin der Formel H-C CX'NI-R, worin X' und R wie weiter oben definiert sind, in Gegenwart eines Palladiumkatalysators hergestellt werden;
- mit der Maßgabe, daß, im Falle im Aminoalkin X' CH&sub2; und R COCF&sub3; ist, in der Verbindung der Formel II nicht alle aus Z, X und Y H sind.
- Genauer gesagt können Verbindungen der Formel (I) gemäß der folgenden Schritte hergestellt werden:
- (A) Umsetzen einer Verbindung der Formel (I'):
- worin B und B' Hydroxyschutzgruppen sind, die gleich oder verschieden voneinander sein können und Y wie oben definiert ist;
- mit H-C C-X'NR, worin X' und R wie oben definiert sind, in Gegenwart von (Ph&sub3;P)&sub2; PdCl&sub2; und Cul, bei Raumtemperatur zur Bildung von:
- (B) Entfernen der Schutzgruppen B und B' aus Verbindungen der Formel (2') zur Bildung von:
- Verbindungen der Formel (3') können gemäß der Erfindung durch weitere Reaktionen in andere Verbindungen umgewandelt werden.
- (C) Verbindung (3') kann mit einer Verbindung der Formel B''A', worin B'' eine Schutzgruppe ist, z. B. jedes beliebige Derivat der Tritylgruppe, und A' eine ausscheidende Gruppe ist, zur Bildung von:
- umgesetzt werden.
- (D) Verbindung (4) kann mit einer Verbindung der Formel XR', worin R' eine ausscheidende Gruppe ist und X wie oben definiert ist, zur Bildung von:
- umgesetzt werden.
- (E) Verbindung (5') kann beispielsweise mit einer Säure oder Base, je nachdem ob die Schutzgruppe B'' säuren- oder basenlabil ist, umgesetzt werden, um die Entfernung der Gruppe B'' zu bewirken, und danach mit POCl&sub3; in der Gegenwart von Triäthylphosphat zur Bildung von:
- umgesetzt werden.
- (F) Verbindung (6') kann zuerst mit Carbonyldiimidazol und dann mit Tris(tetrabutylammonium)pyrophosphat oder Tributylammoniumpyrophosphat zur Bildung von:
- umgesetzt werden.
- Verbindung (7'), die einer bevorzugten Klasse von Verbindungen der Erfindung angehört, kann aufgrund ihrer 5'-Triphosphatgruppe durch Ionenaustauschchromatographie, Umkehrphasenchromatographie oder Zellulosechromatographie gereinigt werden.
- Jede herkömmliche ausscheidende Gruppe R' kann in der obigen Reaktion (D) verwendet werden. Beispiele solcher Gruppen sind Cl, Br, I, p-Nitrophenyloxy, Pentafluorphenyloxy und Diisopropylamino. B'' kann das gleiche wie B und B' oder unterschiedlich davon sein. B'' kann unter Verwendung von Standardverfahren, die auf dem Gebiet an sich bekannt sind, am 5'Hydroxyl eingeführt werden.
- Die Kettenlänge des C-5 Substituenten von Verbindungen der Formel (2), worin R eine Aminoschutzgruppe wie BOC ist, kann durch Säurebehandlung zur Entfernung der Gruppe R und anschließende Reaktion mit einem aktiven Ester des Typs
- worin R eine Aminoschutzgruppe ist, n von 1 bis 50 ist und E eine gute ausscheidende Gruppe ist (auf dem Gebiet an sich bekannt), z. B. Nitrophenyloxy oder Pentafluorphenyloxy, in Gegenwart von (1,8-Diazacyclo(4.4.0)undec-7-en) DBU zur Bildung von:
- vergrößert werden.
- Dieses Verfahren kann beliebig oft durchgeführt werden, um die Kettenlänge des Kohlenstoff 5-Substituenten zu vergrößern.
- Es ist für Fachleute auf dem Gebiet offenkundig, daß in Verbindungen der Formel (I), worin die Gruppen R oder A eine Aminoschutzgruppe sind, z. B. BOC, die Schutzgruppe unter geeigneten Bedingungen entfernt werden kann, und daß ein Fluorophor oder ein anderer nicht-radioaktiver Marker mit der freien Aminogruppe umgesetzt werden kann, um dadurch ein Nukleosidderivat zu erzeugen, das mit einem Fluorophor oder einen anderen nicht-radioaktiven Marker markiert wird.
- Polynukleotide können unter Verwendung von Verbindungen der Formel (I) hergestellt werden.
- Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird ein Polynukleotid bereitgestellt, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es eine oder mehrere Nukleotideinheiten der Formel (III):
- enthält, worin X', Y und R wie oben definiert sind.
- Die Nukleotideinheit (III) stellt eine Verbindung der Formel (I) dar, die in eine Polynukleotidkette eingebaut ist.
- Verbindungen der Formel (I) können in cDNA, synthetische Oligonukleotide und RNA unter Verwendung von Standardverfahren eingebaut werden 7,8-12
- Gemäß einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt wird ein Verfahren zur Herstellung eines Polynukleotids bereitgestellt, worin einzelne Nukleotide oder Nukleotidgruppen der Reihe nach an einer wachsenden Nukleotidkette angehängt werden, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest eines der Nukleotide ein Nukleosidderivat der oben definierten Formel (I) ist.
- Genauer gesagt können Polynukleotide, die ein oder mehrere Nukleotidderivate der Formel (III) enthalten, durch gemeinsame Umsetzung:
- a) eines ersten Polynukleotids;
- (b) eines zweiten Polynukleotids, das an einen Abschnitt des ersten Polynukleotids hybridisiert;
- (c) eines oder mehrerer Nukleotidtriphosphate;
- (d) einer DNA-Polymerase oder RNA-Polymerase
- gebildet werden, wodurch das Polynukleotid vom 3'-Ende des zweiten Polynukleotids her synthetisiert wird, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest eines der Nukleotidtriphosphate ein Nukleosidderivat der Formel (I) ist, worin Z Triphosphat und X Wasserstoff ist.
- Polynukleotide, die eines oder mehrere Nukleosidderivate enthalten, können auch gemäß einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt durch sequentielles Aneinanderkoppeln von Nukleotiden über ihre jeweiligen 5'- und 3'-Enden hergestellt werden, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest eines der Nukleotide ein Nukleosidderivat der Formel (I) ist, worin X aus Phosphonat oder einer Gruppe der Formel
- ausgewählt ist, worin R¹, R² und Q wie oben definiert sind.
- Verbindungen der Formel (I) können in synthetische Oligonukleotide unter Verwendung herkömmlicher Phosphotriesterchemie¹&sup9; eingebaut werden.
- Zum Einbau in RNA weisen die Verbindungen der Formel (I) eine 5'-Triphosphatgruppe und Hydroxylgruppen an den 3'- und 2'-Positionen auf.
- An mehreren Stellen markierte Polynukleotide können gemäß einem erfindungsgemäßen Aspekt hergestellt werden. Die Auswirkung des Mehrfachmarkierens ist vorteilhaft, da das Ablesesignal im Vergleich zu jenem verstärkt wird, das durch Polynukleotide erzeugt wird, die an einer einzigen Position markiert sind.
- Wenn Nukleosidderivate der Formel (I) keinen Fluorophor oder keinen nichtradioaktiven Marker vor dem Einbau in ein Polynukleotid enthalten, kann ein nachweisbarer Marker nachher in das gebildete Polynukleotid eingebaut werden. Beispielsweise kann dies durch Entfernen einer Schutzgruppe, welche die aliphatische Aminogruppe auf dem C-5-Substituenten maskiert, und durch anschließendes Umsetzen der so erzeugten Aminogruppen mit einem Fluorophor wie Fluoroscein-5-isothiocyanat durchgeführt werden.
- Nukleoside, welche nicht-fluoreszierende Fluorophoranaloge (Fluorophorvorläufer) enthalten, können bei der Herstellung von Polynukleotiden verwendet werden. Die Verwendung von Fluorophorvorläufern verhindert die Möglichkeit des Fluorophorausbleichens während der für die Herstellung von Polynukleotiden erforderlichen chemischen Vorgänge. Unter geeigneten Bedingungen (z. B. bei einer Ammoniakbehandlung) können fluoreszenzhemmende Gruppen auf einem Fluorophorvorläufer entfernt werden, wodurch der Fluorophorvorläufer in eine fluoreszierende Form umgewandelt wird. Als Beispiel ist ein Reaktionsschema für die Herstellung eines Nukleosidderivats der Formel (I) in Fig. 2 dargestellt, das ein nichtfluoreszierendes Analog von Fluorescein enthält. Die resultierende Verbindung B von Fig. 2 weist die folgende Formel auf:
- Verbindung B fluoresziert bei Entfernung der iso-Butyylgruppen im Anschluß an die Ammoniakbehandlung. Verbindung B kann in der Oligonukleotidsynthese (in einer geschützten 5', 3' Phosphoramiditform) oder der cDNA-Synthese (in einer 5'Triphosphatform) verwendet werden. Ein Uridinanalog der Verbindung B kann bei der RNA-Synthese mit T7-Polymerase ¹¹ oder SP6-Polymerase ¹² verwendet werden.
- Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich für molekularbiologische Techniken, die normalerweise die Verwendung von isotopenmarkierten Sonden vorsehen. Solche Techniken umfassen DNA- und RNA-Hybridisierungen, z. B. Dot Blots, Southern Blots, Hybridisierungshistochemie, Northern Blots und Plaquehybridisierungen.
- Die Nukleosidderivate der Formel (I) oder Polydesoxynukleotide, in die solche Nukleosidderivate eingebaut sind, können in DNA-Sequenzierreaktionen verwendet werden.
- Gemäß einem weiteren erfindungsgemäßen Aspekt wird ein Verfahren zum Sequenzieren von DNA vorgesehen, das folgende Schritte umfaßt:
- (a) das Bereitstellen einer ersten Reaktionsmischung, die umfaßt:
- (i) ein Polydesoxynukleotid;
- (ii) einen Polydesoxynukleotidprimer, der zum Hybridisieren an einen Teil des Polydesoxynukleotids (i) fähig ist;
- (iii) dATP, dGTP, dCTP, dTTP;
- (iv) ddATP;
- (v) eine DNA-Polymerase oder das Klenow-Fragment von DNA-Polymerase;
- (b) das Bereitstellen einer zweiten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß ddATP durch ddGTP ersetzt ist, mit der ersten Reaktionsmischung gleich ist;
- (c) das Bereitstellen einer dritten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß ddATP durch ddCTP ersetzt ist, mit der ersten Reaktionsmischung gleich ist;
- (d) das Bereitstellen einer vierten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß ddATP durch ddTTP ersetzt ist, mit der ersten Reaktionsmischung gleich ist;
- (e) das getrennte Inkubieren der Reaktionsmischungen, um in jedem Fall den Polydesoxynukleotidprimer von seinem 3'-Ende her zu verlängern, um Polydesoxynukleotide mit unterschiedlichen Längen herzustellen, wobei die Anzahl an Nukleotiden in jedem dadurch neu synthetisierten Polynukleotid durch Einbau eines Didesoxynukleotids in die wachsende Kette bestimmt wird;
- (f) das Fraktionieren der Reaktionsmischungen (a) bis (d) durch Hindurchschicken durch eine Gelmatrix;
- dadurch gekennzeichnet, daß:
- der Polydesoxynukleotidprimer (ii) ein Polydesoxynukleotid ist, das eine oder mehrere Polynukleotideinheiten der Formel (III) enthält, wie dies weiter oben beschrieben ist, worin R und A ein Fluorophor oder ein anderer nicht-radioaktiver nachweisbarer Marker ist und/oder jede genannte Reaktionsmischung ein Nukleosidderivat der Formel (I) enthält, worin Z Triphosphat, X Wasserstoff und R oder A ein Fluorophor oder ein anderer nachweisbarer Marker ist, wodurch der Fluorophor oder der andere nichtradioaktive Marker in jedes neu synthetisierte Polydesoxynukleotid eingebaut wird;
- und dadurch, daß die relativen Positionen der neu synthetisierten, auf der Gelmatrix getrennten Polydesoxynukleotide durch das Bestimmen des Fluorophors oder des anderen nicht-radioaktiven nachweisbaren Markers identifiziert werden, der vom neu synthetisierten Polydesoxynukleotid getragen wird, so daß es möglich wird, die DNA- Sequenz des ersten Polynukleotids zu klären.
- Die neu synthetisierten Polynukleotide von obigem Schritt (e) können beispielsweise durch Fluoreszenz bestimmt werden, die durch Bestrahlung mit einer Lichtquelle, z. B. Laser, induziert wird.
- Jede der obigen Reaktionsmischungen (a) bis (d) kann einen verschiedenen Fluorophor mit unterschiedlichen Emissionsmaxima oder einen verschiedenen n icht-radioaktiven Marker enthalten. Das heißt, der Oligonukleotidprimer (ii) und/oder das Nukleosidderivat der Formel (I) in jeder der Reaktionsmischungen (a) bis (d) enthält Gruppen R oder A mit unterschiedlichen Emissionsmaxima.
- Es folgt eine rein beispielhafte Beschreibung mehrerer erfindungsgemäßer Ausführungsformen unter Bezugnahme auf die beigelegten Figuren, worin:
- Fig. 1 das Numerierungssystem für C-5 substituierte Nukleoside darstellt, das in der vorliegenden Beschreibung verwendet wird;
- Fig. 2 die Herstellung eines Fluoresceinderivats darstellt;
- Fig. 2A die Herstellung von erfindungsgemäßen Nukleosidderivaten zeigt, die eine eingebaute modifizierte nicht-fluoreszierende Fluorescein-Gruppe aufweisen;
- Fig. 3 die Herstellung des geschützten Aminoalkinnukleosids 2 darstellt;
- Fig. 4 die Herstellung des Nukleosidphosphoramidits 7 mit kurzem C-5-Arm darstellt;
- Fig. 5 die Herstellung des Nukleosidphosphoramidats 11 mit langem C-5-Arm darstellt;
- Fig. 6 die Dot-Blot-Hybridisierungsassays mit den fluoreszierend markierten Kallikreinoligonukleotiden mit kurzem C-5-Arm an Mäuse-Speicheldrüsen-mRNA darstellt. Die Sonden wurden ³²P endmarkiert und hybridisiert, wie dies weiter unten beschrieben ist. A, normale Sonde, sehr strenge Bedingungen, 4-stündiges Ausgesetztsein; B, einfach markierte Sonde; mittlere Strenge, 4-stündiges Ausgesetztsein; C, normale Sonde, hohe Strenge, 16-stündiges Ausgesetztsein; D, mehrfach markierte Sonde, niedrige Strenge, 16-stündiges Ausgesetztsein; E, mehrfach markierte Sonde, niedrigste Strenge, 16-stündiges Ausgesetztsein;
- Fig. 7 die Dot-Blot-Hybridisierungsassays mit der fluoreszierend markierten Kallikreinsonde mit langem C-5-Arm darstellt. Die Sonden wurden ³²P endmarkiert und unter Bedingungen hoher Strenge hybridisiert. Die Zeiträume des Ausgesetztseins betrugen für die Autoradiographen 4 Stunden A, normale Sonde; B, einfach markierte Sonde; c, mehrfach markierte Sonde; und
- Fig. 8 die Dot-Blot-Hybridisierungsassays mit den ³²P endmarkierten, einfach fluoreszierend markierten Kallikreinsonden an drei unterschiedliche RNA-Spezies darstellt. Die Hybridisierungen erfolgten unter Bedingungen mittlerer Strenge, und die Zeit des Ausgesetztseins betrug für die Autoradiographen 16 Stunden A, Sonde mit kurzem C-5-Arm; B, Sonde mit langem C-5-Arm.
- 5-Ioddesoxyuridin und Fluoresceinisothiocyanat (FITC) stammten von Sigma Chemical Company. ¹H NMR-Spektren wurden entweder auf einem JEOL FX90Q bei 90 MHz, einem JEOL FX100 bei 100 MHz oder einem BRUKER 300 bei 300 MHz bestimmt. ¹³C NMR-Spektren wurden entweder auf einem JEOL FX90Q bei 22,5 MHz, einem JEOL FX100 bei 25 MHz oder einem BRUKER 300 bei 75 MHz bestimmt. Multiplizitäten wurden dort, wo sie beobachtet wurden, durch das Einzelfrequenz-off-resonance- Verfahren (SFOR) im Falle von JEOL FX90Q oder FX100 und auf dem BRUKER 300 unter Verwendung der DEPT-Impulssequenz gemessen. Das in der NMR-Analyse verwendete Nukleosid-Numerierungssystem ist im Falle des Vorgängernukleosids in Fig. 1 dargestellt. ³¹P NMR-Spektren erhielt man mit einem BRUKER 300 bei 121 MHz und durch Messen feldabwärts von 85% H&sub3;PO&sub4; als äußerer Standard, wobei die Feldabwärtswerte positiv waren. Die Mikroanalysen wurden durch den Australian Microanalytical Service, Melbourne, bestimmt. Pyridin wurde über Kaliumhydroxid destilliert und über 5A Molekularsieben gelagert. Acetonitril und Methanol wurden über 3A Molekularsieben getrocknet. Triäthylamin wurde über Kalziumhydrid destilliert und unter Argon gelagert. Das in den Phosphoramiditsynthesen verwendete Dichlormethan wurde über 5A-Molekularsieben getrocknet. Tetrazol wurde bei 0,05 nmHg bei 110ºC sublimiert. Diisopropylamin wurde über Kalziumhydrid destilliert und über 3A Molekularsieben gelagert. Es erfolgte eine Dünnschichtchromatographie (tlc) auf Merck analytischen Silikagelplatten (Merck Nr. 5735) unter Verwendung der folgenden Lösungsmittelsysteme: S1, CH&sub2;Cl&sub2;/MeOH (90 : 10 v/v), S2, CH&sub2;Cl&sub2;/MeOH (98 : 2 v/v) oder S3, CH&sub2;Cl&sub2;/EtOAc/Et&sub3;N (45 : 45 : 10 v/v). Die Schmelzpunkte wurden in Kapillaren mit offenen Enden auf einer elektrothermalen Schmelzpunktvorrichtung bestimmt.
- 3',5'-Di-o-p-toluyl-5-ioddesoxyuridin (1): Die Titelverbindung wurde durch eine Modifizierung des Verfahrens nach Robins et al 18 unter Verwendung von 5-Ioddesoxyuridin anstelle von Desoxyuridin in einer Ausbeute von 92%, Schmelzpunkt 205-206ºC (lit ¹&sup4; 195-196) hergestellt.
- ¹³C NMR (CDCl&sub3;, 25 MHz) δ 21.7 (CH&sub3;), 38.7 (C-2'), 64.1 (C-5'), 69.0 (C-5), 74.9 (C-3'), 83.4 (C-1'), 85.8 (C-4'), 126.1, 126.4 (tol C-1), 129.3, 129.5, 129.8 (tol C-2, C-3, C-5 und C-6), 143.6 (C-6), 144.6 (tol C-4) 149.2 (C-2), 159.7 (C-4), 166.0 (tol C-0).
- 3-tert-Butyloxycarbonylamidopropin:
- Zu 200 ml CH&sub2;Cl&sub2; wurden 2,75 g (50 mmol) 3-Aminopropin und danach 10,92 g (50 mmol) di-tert-Butylpyrokarbonat hinzugefügt. Nach 3-stündigem Rühren wurde die Reaktionsmischung zu Sirup verdampft und bei -20ºC gehalten, um zu kristallisieren. Das Produkt wird ausgefiltert, mit Hexan gewaschen und getrocknet, um 5,34 g (69%), Schmelzpunkt 42-44ºC (lit ¹³ Schmelzpunkt 43ºC) zu ergeben. ¹H NMR (CDCl&sub3;, 90 MHz) δ 1,46 (9H, s, CH&sub3;), 2,21(1H, t, J-2,6 Hz, C=CH), 3,91(2H, dd, J=2,6 Hz und 3,5 Hz, CH&sub2;) 4,68 (1H, br s, NH). ¹³ C NMR (CDCl&sub3;, 22,5 MHz) δ 28,4 (CH&sub3;), 30,6 (CH&sub2;), 71,2 (C-1), 80,1 ( (CH&sub3;)&sub3;), 80,2 (C-2), 155,3 (C=0).
- 5-(3-tert-Butyloxycarbonylamidoprop-1-inyl)-3',5'-di-o-p-toluyldesox-yuridin (2):
- Zu 500 ml desoxygeniertem Äthylacetat wurden 5,90 g (10 mmol) 3',5'-di-o-p-Toluyl-5- ioddesoxyuridin (1) und anschließend 3,10 g (20 mmol) N-BOC-3-Aminopropin, 150 mg (Ph&sub3;P)&sub2;PdCl&sub2;, 150 mg Cul und 6,7 ml Triäthylamin (50 mmol) hinzugefügt. Die resultierende Suspension wurde bei Raumtemperatur gerührt, und an die Reaktion schloß sich tlc (S2) an.
- Nach 90 Stunden war das Ausgangsmaterial verschwunden. Weitere 200 ml Äthylacetat wurden danach hinzugefügt und die resultierende Mischung mit 5% Dinatrium EDTA/H&sub2;O (2 · 300 ml), H&sub2;O (300 ml) und Salzlösung (300 ml) gewaschen. Danach wurde sie getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;), das Lösungsmittel verdampft und der Rest in 15 ml Lösungsmittel S3 erneut aufgelöst und durch Flash-Chromatograhpie¹³ unter Verwendung des gleichen Lösungsmittels, Ausbeute 5,08 g (84%) gereinigt. Eine Probe wurde aus CHCl&sub3;/MeOH 1 : 5 umkristallisiert, um 2: Schmelzpunkt 169,5-170,5ºC zu ergeben. (UV(MeOH) λmax 290 (sh), 283,237 nm (ε 11800, 12400, 39800), λmin 263 nm (ε 5900). ¹H NMR (CDCl&sub3;, 90 MHz) 8 1,44 (9H, s, C(CH&sub3;)&sub3;), 2,42 (6H, s, tol CH&sub3;), 2,7 (2H, m, H&sub2;'), 3,97 (2H, d, J=5,1 Hz, Hg), 4,6-4,7 (4H, m, H&sub4;', H&sub5;' und BOC NH), 5,6 (1H, m, H&sub3;), 6,4(1H, m, H&sub1;'), 7,26 (4H, d, J=8,1Hz, tol H&sub3; und H&sub6;), 9,16 (1H, m, H&sub3;), 6,4 (1H, m, H&sub1;'), 7,26 (4H, d, J-8,1 Hz, tol H&sub3; und H&sub6;), 9,16 (1H, s, Ring NH). ¹³C NMR (CDCl&sub3;, 22,5 MHz) δ 21,7 (q, tol CH&sub3;), 28,4 (q, (CH&sub3;)&sub3;), 31,4 (t, C-9), 38,6 (t-C- 2'), 64,1 (t, C-5'), 73,8 (s, C-8), 74,9 (d, C-3'), 80,0 (s, (CH&sub3;)&sub3;, 83,4 (d, C-1'), 86,1 (d, C- 4'), 90,3 (s, C_7), 100,2 (s, C-5), 126,4 und 126,6 (2s, tol C-1), 129,3-129,9 (4s, tol C- 2, C-3, C-5 und C-6), 141,9 (d, C-6), 144,5 (s, tol C-4), 149,2 (s, C-2), 155,3 (s, BOC C=O), 161,7 (s, C-4), 166,04 und 166,15 (2s tol C=0). Analyse für C&sub3;&sub3;H&sub3;&sub5;O&sub9;N&sub3;: Berechnet: C, 64,17; H, 5,71; N, 6,80. Gefunden: C, 63,94: H, 5,52; N, 6,55.
- 5-(3-tert-Butyloxycarbonylamidoprop-1-inyl)-5'-0-dimethoxytrityldeso-xyuridin (5):
- Einer gerührten Suspension von 304 mg (2,2 mmol) von trockenem K&sub2;CO&sub3; in 5 ml trockenem Methanol wurden 617 mg (1 mmol) 2 hinzugefügt. Nach 1,5 h wurde die Reaktionsmischung, abgefiltert das Filtrat mit Dowex 50-X8 (H&spplus;) neutralisiert, das Harz abgefiltert, und das Filtrat zur Trockene eingedampft, um 4 zu ergeben. Das Produkt wurde durch gemeinsame Verdampfung mit trockenem Pyridin (3 · 5 ml) vollständig getrocknet und in 5 ml trockenem Pyridin erneut aufgelöst. 406 mg (1,2 mmol) 4,4'- Dimethoxytritylchlorid wurde hinzugefügt und die Mischung 4 h lang bei Raumtemperatur gerührt; danach wurde die Reaktion durch tlc (S1) als vollständig beurteilt. 2 ml MeOH wurden hinzugefügt, die Lösung weitere 10 Min. lang gerührt, verdampft, in 30 ml Dichlormethan erneut aufgelöst und mit 100/0 NaHCO&sub3;/H&sub2;O (30 ml), Salzlösung (30 ml) gewaschen und getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;). Das Lösungsmittel wurde wieder verdampft und das Produkt erneut in 5 ml CH&sub2;Cl&sub2; aufgelöst und durch Flash- Chromatographie gereinigt, wobei zunächst mit 300 ml 2% MeOH/CH&sub2;Cl&sub2; und dann mit 100/0 MeOH, CH&sub2;Cl&sub2; eluiert wurde. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen wurden gesammelt und zur Trockene eingedampft, um 468 mg (68% von 2) von 5 zu ergeben. UV(MeOH) λmax 294 (sh), 283, 231 nm (ε 6100, 6800, 21500), λmin 257 nm (2500). ¹H NMR (CDCl&sub3;, 100 MHz) δ 1,39 (9H, s, BOC CH&sub3;), 2,4 (2H, m, H&sub2;'), 3,38 (2H, m, H&sub5;'), 3,78 (8H, s, OCH&sub3; plus H&sub9;), 4,1(1H, m, H&sub4;'), 4,6 (3H, m, H&sub3;'+ BOC NH), 6,32 (1H, t, H&sub1;'), 6,80, 6,89 (4H, d, J=9,0 Hz, meta CH von PhOCH&sub3;), 7,2-7,5 (9H, m, einschließlich eines Dubletts bei 7,29, 7,34 (1=9,0 Hz) von ortho cH von PhOCH&sub3; und Ph), 8,11(1H, s, H6). Analyse für C&sub3;&sub8;H&sub4;&sub1;O&sub9;N&sub3;: Berechnet C, 66,75; H, 6,04; N, 6,15. Gefunden: C, 66,89; H, 5,82; N, 6,00.
- Das Nukleosid 4 wurde auch durch Flash-Chromatographie (20% MeOH/CH&sub2;Cl&sub2; als Eluens) der Rohreaktionsmischung aus der Schutzgruppenentfernungsreaktion nach dem Abfiltern des Kaliumkarbonats gereinigt. Dies ergab 4, ¹H NMR (d&sub6;-DMSO, 100 MHz) δ 1,39 (9H, s, CH&sub3;), 2,1 (2H, m, H&sub2;'), 3,35 (6H, s, 2 Methanolmoleküle in der Probe vorhanden), 3,6 (2H, m, H&sub5;'), 3,8 (1 H, m, H&sub4;'), 3,93 (2H, d, J = 5,9 Hz, H&sub9;), 4,2 (1 H, m, H&sub3;'), 5,10 (1H,t, J=5 Hz, 5'-OH), 2,25(1H, d, J=4 Hz, 3'-OH), 6,11(1H, t, J=6,6 Hz, H&sub1;'), 8,14 (1H, s, Ring NH); UV (MeOH) λmax 290, 231 nm (ε 12900, 18200), λmin 254 nm (ε 4200), bei 260 nm, ε = 5800 M&supmin;¹.
- 5-(3-tert-Butyloxycarbonylamidoprop-1-inyl)-5'-0-di-methoxytrityl-3'--N,N- diisopropylaminomethoxyphosphinyl-desoxyuridin (7):
- Zu einem Argon-gespülten 25 ml Rundbodenkolben wurde eine Lösung von 243 mg (0,5 mmol) 5 in 5 ml trockenem CH&sub2;Cl&sub2; eingebracht. Danach wurden 17,5 mg (0,25 mmol) Tetrazol und 25 ul (0,25 mmol) trockenes Diisopropylamin hinzugefügt. Die Lösung wurde gerührt, bis sich das Tetrazol auflöste 300 ul (1,1 mmol) bis(Diisopropylamino)methoxyphosphin 17 6 wurde dann hinzugefügt, und nach der Reaktion erfolgte tlc (S3). Nach 5 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit 10% NaHCO&sub3;/H&sub2;O (2 · 15 ml) und Salzlösung (2 · 25 ml) gewaschen und getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;). Das Lösungsmittel wurde verdampft, um 392 mg (93% Rohausbeute) 7 zu ergeben. Das ³¹P NMR Spektrum dieses Materials zeigte einen Hauptpeak aus einem Dublett bei 150,19 und 150,45 ppm und kleineren Peaks bei 4,23 und 10,41 ppm. Diese Nebenprodukte stellen keine Beeinträchtigung der Kupplungsreaktion dar.
- Ein Teil dieses Materials wurde durch Flash-Chromatographie gereinigt (S3). ¹H NMR (CD&sub3;CN, 100 MHz) δ 1,13 (12 H, 2d, J=6,5Hz, CH(CH&sub3;)&sub2;), 1,38 (9H, s, BOC CH&sub3;), 2,4 (2H, m, H&sub2;'), 3,2-3,5 (5H, m enthaltend 2d (J=13,3Hz, PCH&sub3;) und H&sub5;'), 3,5 (2H, m, CH(CH&sub3;)&sub2;), 3,7-3,8 (8H, m enthaltend ein starkes Singulett bei 3,77 (Trityl OCH&sub3;) und H&sub9;), 4,1(1H, m, H&sub4;'), 4,6 (1H, m, H&sub3;'), 6,1(1H, dt, H&sub1;'), 6-8-7,5 (13H, m, Trityl CH), 7,90 und 7,91(1 H, 2s, H&sub6;).
- 5-(3-Aminoprop-1-inyl)-3,5'-di-O-p-toluyldesoxyuridin, Trifluoracetatsalz (8):
- Zu 20 ml 95% CF&sub3;CO&sub2;H/H&sub2;O (TFA/H&sub2;O) wurden 3,09 g (5 mmol) 2 hinzugefügt. Nach zehnminütigem Rühren wurde das Lösungsmittel zur Trockene abgedampft. 10 ml Äthylacetat wurden hinzugefügt, es wurde erneut verdampft, das Produkt kristallisiert, gefiltert und getrocknet, um 2,56g (81%) 8, Schmelzpunkt 120ºC (zers) zu ergeben.
- UV(MeOH) λmax 290(sh), 282, 236 nm (ε 11900, 12400, 41200), λmin 263 nm (ε 9000). ¹H NMR (90 MHz, d&sub6;-DMSO) δ 2.39 (6H, s, CH&sub3;, 2.5-2.6 (m, Lösungsmittel plus H&sub2;'), 3.7 (m, H&sub2;O Verunreinigung in Lösungsmittel plus H&sub9;), 4.6 (3H, m, H&sub4;' und H&sub5;'), 5.6 (1H, m, H&sub3;), 6.24 (1H, t. H&sub1;'), 7.34 (4H, 2d, J=8.1 HZ, tol H&sub2; and H&sub6;), 7.90 (4H, 2d, J=8.1 Hz, tol H&sub3; und H&sub5;), 8.07 (1H, s, H&sub6;), 8.3 (3H, bs, NH&sub3;&spplus;), 11.80 (1H. s, ring NH). ¹³C NMR (75 MHz, d&sub6;-DMSO) δ 21.2 (CH&sub3;), 29.0 (C-9), 36.4 (C=2'), 64.2 (C-5'), 74.4 (C-3'), 78.5 (C-8), 81.5 (C=1'), 85.2 (C-7), 85.7 (C=4'), 97.6 (C-5), 126.4 (tol C-1), 129.3. 129.5 (tol C-2,C-3, C-5 and C-6), 143.9 (C-6), 144.8 (tol C-4), 149.3 (C-2), 161.3 (C-4), 165.2 (carboxyl), 165.6 (tol C=0).
- Analyse für C&sub3;&sub0;H&sub2;&sub8;O&sub9;N&sub3;F&sub3;: Berechnet C, 57,05; H, 4,47; N, 6,65; F, 902. Gefunden C, 57,12; H, 4,75; N, 6,42; F, 9,1.
- 6-tert-Butyloxycarbonylamidohexansäure:
- Zu 13,12 g (100 mmol) 6-Aminohexansäure in 400 ml Dioxan bei 0ºC wurden 100 ml 1 M NaOH und 24,01 g (110 mmol) di-tert-Butylpyrokarbonat hinzugefügt. Die resultierende Suspension wurde bei Raumtemperatur 3 Tage lang gerührt; nach Ablauf dieser Zeit ergab sich ein negativer Ninhydrin-Test. Das Volumen wurde dann unter Druck auf 100 ml reduziert, die Mischung auf 0ºC abgekühlt mit Äthylacetat abgedeckt und mit 1 M KHSO&sub4; auf einen pH-Wert von 2-3 angesäuert. Das Produkt wurde mit Äthylacetat (3 · 150 ml) extrahiert, die organische Phase mit H&sub2;O gewaschen (2 · 300 ml), getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;) und zu einem dicken Sirup eingedampft. Dieser wurde aus Äthylacetat/Hexan umkristallisiert, um 20,40 g (88%), Schmelzpunkt 39-41ºC (lit¹&sup4; Schmelzpunkt 39,5ºC) zu ergeben.
- p-Nitrophenyl 6-tert-butyloxycarbonylamidohexanoat (9):
- Zu einer Lösung von 2,31 g (10 mmol) 6-tert-Butyloxycarbonylamidohexansäure und 1,62 g (12 mmol) p-Nitrophenol in 30 ml EtOAc bei 0ºC wurden tropfenweise 2,06 g (10 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid zugegeben. Diese Lösung wurde bei 0ºC 0,5 Stunden lang und dann bei Raumtemperatur 3,5 Stunden lang gerührt, zur Entfernung von Dicyclohexyl-Harnstoff gefiltert, zur Trockene eingedampft und das Produkt aus 95% 1% Essigsäure enthaltenden EtOH umkristallisiert, um 3,35 g (95%) 9, Schmelzpunkt 119-120ºC (lit¹&sup4; Schmelzpunkt 116,5ºC) zu ergeben.
- 5-[N-(6-tert-Butyloxycarbonylamidohexanoyl)-3-amino-prop-1-inyl]-3',-5'-di-o-p- toluoyldesoxyuridin (10):
- Zu einer Lösung von 1,89 g (3 mmol) 8 in 30 ml trockenem DMF wurden 443 ul DBU (3 mmol) und 1,16 g (3,3 mmol) 9 hinzugefügt. Nach einstündigem Rühren wurde die Mischung unter Vakuum eingedampft, der Rückstand in 50 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 400 ml Äthylacetat erneut aufgelöst, mit H&sub2;O (2 · 300 ml) und Salzlösung (300 ml) gewaschen, getrocknet (Na&sub2;SO&sub4;) und zur Trockene eingedampft. Der Feststoff wurde aus Methanol umkristallisiert, um 1,76 g (80%) 10, Schmelzpunkt 192-194ºC zu ergeben.
- UV(MeOH) λmax 290 (sh), 282, 237 mm (ε 13800, 14400, 43000), λmin 262 nm (ε 10300). ¹H NMR (CDCl&sub3;, 100 MHz) δ 1.4-1.9 (15H, m mit s bei 1.43 (BOC CH&sub3;) und H&sub3;'', H&sub4;'' and H&sub5;''), 2.16 (2H. 5, J=7.5 Hz, H&sub2;''), 2.42 (6H, s, tol CH&sub3;), 2.75 (2H, m, H&sub2;'), 3.1 (2H, m, H&sub6;''), 4.04 (2H, d, J=5.0 Hz, H&sub9;), 4.5.4.8 (4H, m, H&sub4;', H&sub5;' und BOC NH), 5.6 (1H, m, H&sub3;'), 6.31 (1H, dd, H&sub1;'), 7.27 (4H, d, J=8.2 Hz, tol H&sub3; und H&sub5;), 7.84 (1H, s, H&sub6;), 7.91 und 7.93 (4H, 2d, J=8.2 Hz. tol H&sub1; und H&sub6;), 9.0 (1H, br s, ring NH), ¹³C NMR (CDCl&sub2;, 75 MHz) δ 21.7 (tol CH&sub3;), 25.2 (C-4''), 26.4 (C-3''), 28.4 (BOC CH&sub3;), 29.7 (C-5''), 30.0 (C-9), 36.1 (C-2''), 38.6 (C-2'), 40.4 (C-6''), 64.2 (C-5'), 74.0 (C-8), 74.8 (C-3'), 79.8 ( (CH&sub3;)&sub3;), 83.4 (C-1'), 86.0 (C-4'), 89.9 (C-7), 100.0 (C-5), 126.2. 126.4 (tol C-1), 129.3. 129.5, 129.6 und 129.8 (tol cH), 142. 1 (C-6), 144.8 (tol C-4), 149.1 (C-2), 156.1 (BOC C-0), 161.9 (C-4), 166.0, 166.2 (tol C-0), 172.3 (C-1).
- Analyse für C&sub3;&sub9;H&sub4;&sub6;O&sub1;&sub0;N&sub4;: Berechnet: C, 64,10; H, 6,34; N, 7,67. Gefunden: C, 64,34; H, 6,32; N, 7,51.
- 5-[N-(6-tert-Butyloxycarbonylamidohexanoyl)-3-amino-prop-1-inyl]-5'--O- dimethoxytrityldesoxyuridin (12):
- Die Titelverbindung wurde aus 10 unter Verwendung des gleichen Verfahrens wie zur Herstellung von 5 aus 2 hergestellt. Ausbeute 1,20 g (75% aus 10). UV(MeOH) λmax 293 (sh) 283, 233 nm (s 8500, 9000, 24500), λmin 257 n m (ε 2900). Das 1 H NMR Spektrum dieser Verbindung war ein Gemisch jener Resonanzen, die sich aus dem Desoxyribosenanteil von 5 und dem heterozyklischen Basenanteil von 10 ergeben.
- ¹³C NMR (CDCl&sub3;, 75 MHz) δ 25.1 (C-4''), 26.4 (C-3''), 28.4 (C( H&sub3;)&sub3;, 29.7 (C-5''), 30.0 (C-9), 35.9 (C-2''), 40.4 (C-6'), 41.7 (C-2'), 55.3 (OCH&sub3;), 63.6 (C-5'), 72.2 (C-3'), 74.1 (C-8), 79.2 ( (CH&sub3;)&sub3;), 86.0 (C-4'), 86.8 (C-1'). 87.0 (Trityl zentral C), 89.7 (C-7), 99.5 (C=5), 113.4 (Methoxyphenyl C-3 und C-5), 127.0, 127.9 und 128.1 (phenyl CH), 130.0 (Methozyphenyl C-2 und C-6), 135.6 (Methoxyphenyl C-1), 143.1 (C-6), 144.6 (Phenyl C-1). 149.4 (C-2). 156.0 (BOC C=0), 158.6 (Methoxyphenyl (C-4), 162.5 (C-4), 172.7 (C-1'').
- Analyse für C&sub4;&sub4;H&sub5;&sub2;O&sub1;&sub0;M&sub4;: Berechnet C, 66,32; H, 6,58; N, 702. Gefunden: C, 65,94; H, 6,52; N. 6,70.
- 5-[N-(6-tert-Butyloxycarbonylamidohexanoyl)-3-aminoprop-1 -inyl]-5'-O-dimethoxytrityl- 3'-N,N-diisopropyl-aminomethoxyphosphinyldesoxyuridin (11):
- Die Herstellung von 11 war ähnlich wie jene von 7, mit der Ausnahme, daß die Reaktion 4 Stunden lang ablaufen gelassen und weitere 30 ml CH&sub2;Cl&sub2; vor den Wäschen der Reaktionsmischung hinzugefügt wurde. Die gewaschene und getrocknete Lösung wurde unter Vakuum zu Trockene eingedampft, um 903 mg (94% Rohausbeute) 11 zu ergeben. ³¹P NMR dieses Materials zeigte einen großen Peak bei 149,86 ppm, wobei kleinere Peaks bei 7,35, 13,06 und 18,25 ppm zu beobachten waren.
- Koppeln der Phosphoramidite 7 und 11 an das 5'-Hydroxyl eines Oligonukleotids:
- Die Verfahren zum Anhängen der modifizierten Nukleosidphosphoramidite an das 5'- Ende eines vollständig geschützten, an einen festen Träger gebundenen Oligonukleotids waren herkömmlich 20 Das vollständig geschützte, harzgebundene Oligonukleotid wurde auf dem Applied Biosystems 380A DNA-Synthetisierer in einem 1 pmol Maßstab synthetisiert. Der feste Träger wurde dann zu einer manuellen Reaktionszelle transportiert. Diese Zelle ähnelte einer Miniatur-Chromatographiesäule, sie wies einen Durchmesser von 1 cm auf und war 3 cm lang. Sie war mit einem B14 Schnellpaßdeckel und einer gesinterten Glasscheibe mittlerer Porosität mit einem
- Dreiweg-Teflonhahn am Boden versehen. Nach der Detritylierung (3%
- Dichloressigsäure/CH&sub2;Cl&sub2;) wurde das Harz gründlich mit trockenem CH&sub3;CN gewaschen und unter Argon gelassen. 10 umol des Phosphoramidits und 40 umol Tetrazol sowie anschließend 1 ml trockenes CH&sub3;CN wurden hinzugefügt. Die Zellen wurden 15 Minuten lang gerüttelt, entleert, und die Phosphittriester wurden mit 0,1 M Jodlösung in herkömmlicher Weise oxidiert. Ein Tritylassay erfolgte an einer kleinen Probe, um das Reaktionsausmaß zu quantifizieren. Nach der Entfernung der Methylschutzgruppen auf Phosphat (Thiophenoxidion, 2 h) wurde das Harz mit 90% TFA/Äthandithiol 5 min lang behandelt, abgetropft, gründlich mit CH&sub3;CN mit einer Gesamtmenge von 20 ml bei 20% Et&sub3;NiCH&sub2;Cl&sub2; und dann wieder mit CH&sub3;CN gewaschen und getrocknet. Das Oligonukleotid wurde dann mit 35% wässerigem NH&sub3; (4 ml) vom Träger abgespalten und die resultierende Lösung über Nacht bei 55ºC stehengelassen, um die Basenschutzgruppen zu entfernen. Die Verdampfung zur Trockene ergab das Produkt, das in H&sub2;O (3 ml) wiederaufgelöst wurde.
- Die Oligonukleotide wurden durch Polyacrylamidgelelektrophorese gereinigt. Das Produkt war das sich am langsamsten bewegende Hauptband, das um etwa 1-2 Nukleotide langsamer lief als die nicht derivatisierten Oligonukleotide. Typischerweise wurden etwa 150 ul der Oligonukleotidlösung auf einem 10%, 1,5 mm dicken, 20 cm langen Polyacrylamidgel (25 ul + 5 ul Formamid pro 1 cm · 1 cm Napf) gereinigt. Die Bänder wurden durch UV-Schattieren unter Verwendung einer Fluoreszenz-tlc- Silikagelfolie als Hintergrund sichtbar gemacht. Die Produktbänder wurden ausgeschnitten, in H&sub2;O eluiert, dialysiert, lyophilisiert und in 150 ul H&sub2;O erneut aufgelöst.
- Herstellung von Oligonukleotiden. die innere modifizierte Nukleotide enthalten:
- Die Nukleotidphosphoramidite 7 und 11 wurden auf dem Applied Biosystems DNA- Synthetisierer verwendet, um Oligonukleotide herzustellen, deren Thymidinreste durch das eine oder andere der modifizierten Nukleoside ersetzt waren. Die Phosphoramidite wurden mit trockenem Acetonitril entweder auf 0,1 M (für 7) oder 0,15 M (für 11) gebracht. Die Synthesen erfolgten in einem Maßstab von 0,2 umol. Die wiederholten Kopplungsausbeuten betrugen 99-100%. Nach dem Kettenaufbau wurde der feste Träger zu einer manuellen Reaktionszelle transportiert und dann von der Schutzgruppe befreit und vom festen Träger abgespalten, wie im Falle der Oligonukleotide, die das einzige 5' modifizierte Nukleosid enthielten. Das Endprodukt wurde erneut in 2 ml H&sub2;O aufgelöst.
- Farbstoffkonjugation an das Aminooligonukleotid:
- Die folgende Verfahrensweise wurde zur Konjugation von FITC an das gereinigte Oligonukleotid verwendet, das ein einziges modifiziertes Nukleosid am 5'-Ende enthielt. Einer Lösung von 2 mg (5 umol) FITC in 20 ul DMF wurden 180 ul 0,1 M K&sub2;HPO&sub4;, pH-Wert 9,0, und danach 100 ul (etwa 30 nmol) der Aminooligonukleotidlösung hinzugefügt. Die Mischung wurde über Nacht im Dunkeln gehalten und dann auf eine 10 ml Sephadex G-25-Säule (mittel) in 0,1 M Ammoniumacetat, pH-Wert 9,0, aufgebracht. 0,5 ml-Fraktionen wurden gesammelt, und das fluoreszierende Material (durch Bestrahlen mit einer UV-Lampe nachgewiesen), das im ausgeschlossenen Volumen eluierte, wurde gesammelt. Es wurde gefriergetrocknet, erneut in einem 200 ul 0,1 M Ammoniumacetatpuffer mit einem pH-Wert von 9,0 aufgelöst und auf eine andere ähnliche Sephadex G-25 Säule aufgebracht. Die fluoreszierenden Fraktionen wurden wie oben gesammelt und das dekadische Absorptionsvermögen bei 260 und 495 nm bestimmt. Aus diesem Verhältnis wurde die Anzahl an Fluoresceinresten pro Oligonukleotidmolekül unter Verwendung von ε&sub2;&sub6;&sub0; für die modifizierten KPIB und HCAL (siehe Ergebnisabschnitt der Nukleotidsequenzen dieser Oligonukleotide) von jeweils 3,2 · 10&sup5; und 4,4 · 10 M&supmin;¹ und ε&sub4;&sub9;&sub5; für Fluorescein von 7 · 1& M&supmin;¹ bestimmt. Das Produkt wurde anschließend lyophilisiert und zweimal aus H&sub2;O relyophilisiert.
- Für die Konjugation von TITC an das Oligonukleotid mit mehrfachen inneren Aminogruppen verwendete man einen viel größeren Überschuß an FITC. Einer Lösung von 26 mg (63 umol) FITC in 100 ul DMF wurden 100 ul 1 ,0 M K&sub2;HPO&sub4;, pH-Wert 9,0, und danach 100 ul (etwa 10 nmol) des Aminooligonukleotids hinzugefügt. Dieses ließ man über Nacht im Dunkeln reagieren. Es wurde wie im vorigen Fall gereinigt und die Fluoresceinbeladung bestimmt, wobei ε&sub2;&sub6;&sub0; für die modifizierten KPIB und HCAL von jeweils 3,1 · 10&sup5; und 4,3 · 10&sup5; M&supmin;¹ verwendet wurde und das dekadische Absorptionsvermögen von Fluorescein bei 260 nm unter Verwendung von ε&sub2;&sub6;&sub0; für Fluorescein von 2 · 10&sup4; M&supmin;¹ berücksichtigt wurde.
- Hybridisierung mit FITC-markierten Oligonukleotiden:
- RNA-Dot Blots mit polyadenylierter RNA aus Mäusespeicheldrüsen wurden wie oben hergestellt 15 Die RNA-Menge nahm um einen Faktor 3 bei jedem nacheinanderfolgenden Dot ab, wobei sie einen Anfangswert von 1 ug aufwies. Die Nitrozellulosefilter wurden 4 Stunden lang bei 42ºC in einer Lösung aus 5 s SSC (0,75 M NaCl, 0,075 M Natriumcitrat), 50 mM Natriumphosphat, pH-Wert 6,5, 0,02% Rinder-Serumalbumin, Fraktion V, 0,02% Ficoll, 0,02% Polyvinylpyrrolidon, 30 ug/ml denaturierter Kalbsbries-DNA und 50% Formamid prähybridisiert. Die Hybridisierungen erfolgten unter vier unterschiedlichen Bedingungsgruppen: hohe Strenge, Hybridisierung bei 40ºC über einen Zeitraum von 24 Stunden, und Auswaschen mit 2x SSC bei Raumtemperatur; mittlere Strenge, wie oben, nur Hybridisieren bei Raumtemperatur; niedere Strenge, wie oben, doch die Hybridisierungsmischung enthielt 10% Formamid anstelle von 50%; niederste Strenge, Prähybridisieren bei 4ºC, Hybridisieren bei 4ºC ohne vorhandenes Formamid über 5 Tage und Waschen bei Raumtemperatur mit 2xSSC.
- Herstellung von C-5 substituierten Nukleotiden:
- Die zur Herstellung der substituierten Desoxyuridine angewendete Vorgangsweise ist in Fig. 3 dargestellt. 3',5'di-O-p-p-Toluyl-5-ioddesoxyuridin (1), hergestellt aus im Handel erhältlichem 5-Ioddesoxyuridin, wurde mit N-BOC-3-Aminopropin in Gegenwart katalytischer Mengen von bis(Triphenylphosphin)palladiumchlorid und Kupfer(1)iodid kondensiert. Robins und Barr berichteten über dieses Koppeln von terminalen Alkinen mit 5-Ioduracilen und 5-Ioddesoxyuridinen unter Verwendung von Alkinen mit Alkyl-, Äther- oder Estersubstituenten ¹&sup8;. Die Reaktionen erfolgten in Triäthylamin als Lösungsmittel bei 50ºC. Es wurde eine Vielzahl Bedingungen untersucht, um die Ausbeute an Produkt 2 zu maximieren und die Ausbeute des hauptsächlichen Nebenprodukts, eines Fluoreszenznukleosids, zu minimieren, das analog zur Arbeit von Robbins und Barr, wahrscheinlich Struktur 3 aufweist. Die Bedingungen, die die besten Ausbeuten von 2 ergaben, sahen die Verwendung von Äthylacetat als Lösungsmittel mit einem fünffachen Molüberschuß von Triäthylamin gegenüber 1 und das Durchführen der Reaktion bei Raumtemperatur vor. Dies ergab eine Ausbeute von 84%. Die Struktur des Produkts wurde durch ¹H und 13C NMR-Spektroskopie bestätigt. Dieses Produkt ist eine Schlüsselverbindung, aus der man eine Anzahl anderer Derivate erhalten kann.
- Das Phosphoramidit 7 wurde durch ein dreistufiges, in Fig. 3 dargestelltes Verfahren aus 3 hergestellt. Die 3',5'-Esterschutzgruppen von 2 wurden unter Verwendung von Kaliumkarbonat/Methanol entfernt, und das resultierende Produkt 4 wurde mit Dimethoxytritylchlorid in Pyridin behandelt, um 5 zu ergeben. Das UV-Spektrum von 4 lieferte auch Beweise für die Struktur des Nukleosids. Das Absorptionsmaximum der heterozyklischen Base verschob sich von 265 nm in Thymidin auf 290 nm im Nukleosid 4, wobei auch die Intensität gleichzeitig zunahm. Diese Verschiebung im Absorptionsmaximum kann man in allen synthetisierten Derivaten beobachten, welche dieses Chromophor enthalten.
- Die Behandlung des 5'-tritylierten Nukleosids 5 mit einem zweifachen Überschuß des bis(Dialkylamino)phosphins 6 unter katalytischen Bedingungen ergab das Phosphoramidit 7. Dieses Verfahren der Phosphoramiditherstellung ähnelt dem durch Caruthers et al ¹&sup0; beschriebenen zur Herstellung von Phosphoramiditen in situ.
- Herstellung von Nukleosiden mit einem längeren Linkerarm an C-5:
- Obwohl man, wie dies weiter unten in der vorliegenden Beschreibung geschildert ist, 7 zum Einbau von inneren primären aliphatischen Aminogruppen in ein Oligonukleotid verwenden kann, vermutete man von Anfang an, daß die kurze Länge des Linkerarms zwischen der heterozyklischen Base und der Anhängstelle des Markers (der Endaminogruppe) die Hybridisierungseigenschaften der Oligonukleotide beeinflussen könnte. Dies würde besonders zutreffen, wenn fluoreszierende Gruppen angehängt würden, da diese zumeist große, ebene Moleküle sind. Es wurde daher eine Strategie entwickelt, um einen langen Linkerarm in C-5 einzubauen. Dies ist in Fig. 5 dargestellt. Die Aminogruppe der Schlüsselverbindung 2 wurde mit 95% TFA/H&sub2;O von der Schutzgruppe befreit, um 8 in hoher Ausbeute zu ergeben. Dieses wurde dann mit dem p-Nitrophenylester 9 in Gegenwart eines Äquivalents 1,8-Diazabicyclo-(5,4,0)undec-7- en (DBU) umgesetzt, um das Addukt 10 in hoher Ausbeute zu ergeben. Dieses Produkt wurde in ähnlicher Weise wie bei 2 zu Phosphoramidit 11 umgewandelt.
- Einbau von modifizierten Nukleosiden am 5'-Ende von Oligonukleotiden:
- Anfänglich wurden Phosphoramidite 7 und 11 durch ihr händisches Koppeln an das 5'- Ende eines vorgebildeten Oligonukleotids geprüft. Somit wurde das 30mer GGGCTTCACAACATCTGTGATGTCAGCAGG auf einem automatischen Applied Biosystems 380A DNA-Synthetisierer zusammengesetzt und voll geschützt auf dem Harz gelassen. Diese Sequenz ist komplementär zu einer Region der Kallikrein-mRNA, die allen Kallikreinen 15 gemein ist; sie wird hier als KPIB bezeichnet. Das Harz wurde zu einer manuellen Reaktionszelle transportiert. Nach der Detritylierung des letzten Nukleosids wurde entweder 7 oder 11 in Gegenwart von Tetrazol gekoppelt. Die Kopplungen waren im wesentlichen quantitativ, wie durch den Tritylversuch geprüft wurde. Nach der Entfernung der Phosphatschutzgruppen mit Thiophenoxidion wurde das Harz 5 Minuten lang mit 90% TFA:10% Äthandiol behandelt, um die BOC- Schutzgruppe zu entfernen. Die Gegenwart von Äthandiol schützte das Oligonukleotid vor Abbau. Triäthylamin diente dazu, die neu gebildete Aminogruppe und die sekundären Phosphate zu neutralisieren; anschließend wurde das Oligonukleotid in herkömmlicher Weise behandelt, um es vom Harz abzuspalten und die Basenschutzgruppen zu entfernen. Die Oligonukleotide wurden durch Polyacrylamidgelelektrophorese gereinigt, wobei die modifizierten Oligonukleotide um ein bis zwei Nukleotide langsamer liefen als man es von den normalen kürzeren Sequenzen im Produkt erwarten könnte.
- Koppeln von Fluorophoren an die Aminooligonukleotide.
- Die zur Befestigung der aminreaktiven Fluorophore an Aminooligonukleotide angewendete Vorgangsweise ist im Grunde genommen die gleiche wie jene, die zum Anhängen solcher Moleküle an die ε-Aminogrnppen von Lysinresten in Proteinen in großem Umfang verwendet wurde ¹&sup7;. Die Verfahrensweise umfaßt das Umsetzen des Aminooligonukleotids mit dem reaktiven Fluorophor bei einem pH-Wert von 9, so daß ein beträchtlicher Anteil der aliphatischen Aminogruppen nicht protoniert wird. Smith et al. wendeten eine ähnliche Verfahrensweise beim Koppeln von Fluorophoren an 5'- Aminothymidin-enthaltende Oligonukleotide an 1 Die Markierungreaktions-Mischung wird dann zweimal durch eine Sephadex G-25 Säule hindurchgeschickt, um den überschüssigen nicht umgesetzten Farbstoff vom Oligonukleotid zu trennen. Der Markierungsgrad wird danach durch das Messen der Absorption des Produkts bei 260 nm und bei 495 nm bestimmt. Wenn die Oligonukleotide das Nukleotid von 7 (kurzer C-5-Arm) am 5'-Ende enthielten, markierte eine einzige Reaktion unter Verwendung eines 150-fachen Molüberschusses von FITC 20% der Kallikrein- Oligonukleotidmoleküle und ein Drittel der Kalzitonin-Moleküle. Eine zweite FITC- Kopplungsreaktion auf dem gleichen Material erhöhte den Markierungsgrad auf 67 bzw. 83%. Dieses markierte Material wurde auch mit [γ³²P]ATP 5'-endmarkiert und der Elektrophorese unterworfen. Es wies ein einziges radioaktives Band an der erwarteten Position auf (Daten nicht dargestellt).
- Die Oligonukleotide, welche mehrere innere primäre aliphatische Aminogruppen und somit mehrere potentielle Stellen für den Markereinbau enthielten, wurden auch der FITC-Kopplungsreaktion unterworfen. Zunächst werden die den kurzen C-5-Arm enthaltenden Oligonukleotide markiert. Die Kallikreinsonde, die sieben potentielle Stellen für den Markereinbau enthielt, wies ein einziges Fluorescein pro Oligonukleotidmolkeül auf, wenn die gleiche Markierungsreaktion wie oben angewendet wurde. Die Kalzitoninsonde, die neun potentielle Stellen enthielt, wies 1,5 Moleküle Marker auf. Wenn die Verfahrensweise dahingehend geändert wurde, daß man einen viel größeren, nämlich einen 900-fachen, FITC-Überschuß verwendete, erhöhte sich die Einbaumenge auf 4,1 für KPIB und 7,2 für HCAL. Diese Zahlen wurden unter Berücksichtigung des dekadischen Absorptionsvermögens von Fluorescein bei 260 nm errechnet, da diese deutlich ansteigt, wenn eine Anzahl an Fluorophoren am Oligonukleotidmolekül angehängt wird. Das Wiederholen der Reaktion hatte keine entscheidende Auswirkung auf den Markierungsgrad. Als in einer Versuchsreaktion normale KPIB einer Markierungsreaktion mit dem großen Überschuß von FITC unterworfen wurde, stellte sich heraus, daß ein Hintergrund-Markierungswert von 1 in 110 Nukleotiden erzielt wurde. Demgegenüber stehen 15 pro 110 Nukleotiden bei den entsprechenden Aminooligonukleotiden.
- Wenn das Kallikreinoligonukleotid, welches das Nukleotid von 11 (langer C-5-Arm) am 5'-Ende enthielt, mit einem 900-fachen FlTC-Überschuß markiert wurde, ergab eine einfache Reaktion den völligen Einbau des Markers. Das fluoreszierende Produkt wurde auch am 5'-Ende radioaktiv markiert, und bei Gelelektrophorese ergab sich ein einfaches Band an der erwarteten Position (Daten nicht dargestellt).
- Wenn die Oligonukleotide, welche die mehrfachen inneren, den langen C-5-Arm tragenden Nukleotidsubstitutionen enthielten, der gleichen FITC-Kopplungsreaktion wie oben (großer FITC-Überschuß) unterworfen wurden, betrug der Einbauwert für KPIB 2,7 und 5,2 für HCAL. Die mehrfach markierten Sonden wurden auch mit (γ-³²P)ATP 5'- endmarkiert. Die Reinigung der Produktmischung aus der Reaktion auf Sephadex G-25 ergab einen radioaktiven Peak mit hohem Molekulargewicht; bei der Gelelektrophorese konnte man jedoch kein radioaktives Band beobachten.
- Hybridisierung mit den markierten Oligonukleotiden:
- Die Kallikreinoligonukleotide wurden auf ihre Fähigkeit getestet, mit Mäusespeicheldrüsen-poly(A)&spplus;-mRNA zu hybridisieren, die reich an Kallikrein-Botschaft ist ¹&sup5; Poly(A)&spplus;-mRNA wurde auf Nitrozellulosefiltern aufgedottet, mit verschiedenen Konzentrationen von 1 ug/pro Dot abwärts. Die fluoreszierenden Oligonukleotide wurden dann in herkömmlicher Weise am 5'-Ende ³²P-markiert und dazu verwendet, die Nitrozellulosefilter zu sondieren. Wenn die fluoreszierenden Oligonukleotide, welche den kurzen Linkerarm enthielten, bei hoher Strenge zur Sondierung der Nitrozellulosefilter verwendet wurden, konnte man kein Signal sehen. Herrschten jedoch Bedingungen mittlerer Strenge, ergab die 5'einfach markierte Sonde ein Signal, dessen Intensität jenem entsprach, das durch die normale nichtmodifizierte Sonde (Fig. 6) abgegeben wird, während die mehrfach markierte Sonde nach wie vor kein deutliches Signal aussendete. Beim Hybridisieren unter Bedingungen niedriger und niedrigster Strenge mit der mehrfach markierten Sonde war das Signal zehnmal bzw. dreimal weniger intensiv als jenes der normalen Sonde.
- Diese Ergebnisse zeigen auch, daß es nicht eine kontaminierende kleine Menge einer normalen Sonde ist die Anlaß für das Hybridisierungssignal ist, sondern die fluoreszierend markierte Sonde selbst; ansonsten könnte man auch unter den strengeren Hybridisierungsbedingungen ein Signal sehen.
- Als die den C-5-Arm enthaltenden fluoreszierenden Oligonukleotide hybridisiert wurden, hybridisierte die einfach markierte Sonde ebenso wie die normale Sonde unter den Bedingungen hoher Strenge (Fig. 7). Die mehrfach markierte Sonde ergab unter diesen gleichen Bedingungen ein Signal, das etwa dreimal schwächer war.
- Die Spezifität der Hybridisierung der fluoreszierend markierten Oligonukleotide wurde ebenfalls untersucht. Fig. 8 zeigt die Ergebnisse der Hybridisierung unter Bedingungen mittlerer Strenge für die zwei einfach markierten Kallikreinoligonukleotide (kurze und lange Arme) mit Leber-mRNA und tRNA im Vergleich zur Speicheldrüsen-mRNA. Kein sichtbares Signal ist im Falle der Nukleinsäuren enthaltenden Nicht-Kallikrein-RNA festzustellen, was darauf hindeutet, daß die Hybridisierung für die Kallikrein-mRNA enthaltenden Spezien spezifisch ist.
- QUELLENVERWEISE:
- 1. Sinith. L.M . . Fung. s . . Hunkapiller. N.W . . Hunkapiller, T.J., and Hood. L.E. (1985) Nucleic Acids Res. 13, 2439-2502.
- 2. Jablonski, E . . Moomaw. E.W . . Tullis. R.H. and Ruth. J.L. (1986) Nucleic Acids Res. 14, 6115-6128.
- 3. Ruth. J.L. (1984) DNA 3, 123.
- 4. Ruth. J.L . . Norgan. C. and Pasko, A. (1985) DNA 4, 93.
- 5. Jablonski, E. and Ruth. J.L. (1986) DNA 5, 89.
- 6. Greene. T.W. (1981) Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, Inc.
- 7. Sarone. A.D., Tang, J.-Y. and Caruthers. M.H. (1984) Nucleic Acids Res. 12, 4051-4061
- 8. Rigby. P.J.W . . Dieckmann, N., Rhodes. C., and Berg, P. (1977) J. Mol. Biol. 113 : 237-251
- 9. Taylor, P.N . . Illmensee. R., and Summers, J. (1976) Biochim. Biophys. Acta 442 : 324=330
- 10. Caruthers, M.H . . Beaucage. S.L., Eheavitim, J.W . . Fisher, E.F., Goldman. R.A . . de Hasetu, P.L., Nanchecki, W., Nattkucci, N.D., Rosenthal, N.S., and Stabiusky, &. (1982) Cold Spring Harbor Sym. Quant. Bio. 47 : 411-418
- 11. Nelton, D.A . . Krieg, P.A . . Rebagliati. N.R . . Maniatis, T., Zinn, K., Green, N.R. (1984) Nuclelc Acids Res. 12 : 7035-7056
- 12. Lowary, P., Sainpson, J., Milligan, J . . Croebe, D. and Ohlenbeck, O.C. (1986) "Structure and Dynamics of RNA. NATO ASI Series 110" pp. 69-76. ed. van Knippeuberg, P.H. and Hilbers. C.W . . Plenum Press, New York
- 13. Still. W.C . . Kahn, M. and Mitra. A. (1978) J. Org. Chem. 43, 2923-2925.
- 14. Tesser, G.I . . Fischer- H. and Schwyzer, R. (1974) Helv. Chirn. Acta 57, 1718-1730.
- 15. van Leeuwen, S.J . . Evans. B.A., Tregear G.W. and Richards. R.I. (1986) J. Bio. Chem. 261, 5529-5535.
- 16. Zajac, J.D., Penschow. J . . Mason. T., Tregear, G.W., Coghlan. J.P. and Martin, T.J. (1986) J. Clin. End. Metab. 62, 1037-1043.
- 17. Nairn, R.C. Fluorescent protein tracing, 4th Ed . . Churchill Livingstone. Edingburgh, 1976.
- 18. Robins. N.J. and Barr, P.J. (1983) J. Org. Chern. 48, 1854-1862.
- 19. Sproat. S. and Bait, M.J. (1984) Oligonucleotide Synthesis (a practical approach), Bait, M.J. ed. pp. 83-116, IRL Press, Oxford
- 20. Penschow. J.D., Haralambidis. J . . Aldred, P., Treqear, G.W. and Coghlan. J.P. (1986) Methods in Enzymology 124, 534-548.
Claims (21)
1. Nukleosidderivat der Formel (I):
dadurch gekennzeichnet, daß
Y H oder OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
X H, eine Phosphonatgruppe oder eine Phosphoramiditgruppe der Formel
ist, worin R¹ und R² gleich oder voneinander verschieden sind und aus Alkyl
und substituiertem Alkyl ausgewählt ist, das verzweigt oder unverzweigt sein
kann; und Q eine Phosphatschutzgruppe ist;
Z H, eine Phosphat- oder Triphosphatgruppe oder eine Hydroxyschutzgruppe ist;
X' eine C&sub1;&submin;&sub1;&sub5;-Alkylengruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann;
R eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder eine andere nicht-radioaktive
nachweisbare Markierung ist; oder die Gruppe Y'NHA, worin Y' eine
Alkyl(C&sub1;&submin;&sub4;&sub0;)carbonylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann, und A
eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder eine andere nicht-radioaktive
nachweisbare Markierung ist;
mit der Maßgabe, daß, wenn X' CH&sub2; ist und R CHOCF&sub3; ist
(i) Z nicht H ist, wenn X -H ist und Y -H ist;
(ii) Z nicht Dimethoxytrityl ist, wenn X
und Y -H ist; und
(iii) Z nicht Dimethoxytrityl ist, wenn
ist und Y -O-Tetrahydropyranyl ist.
2. Nukleosidderivat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sowohl R¹ als auch
R² Isopropylgruppen sind.
3. Nukleosidderivat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß X'
Methylen ist und R CO(CH&sub2;)nNHA ist, worin A wie in Anspruch 1 definiert ist und n 1
bis 15 ist.
4. Nukleosidderivat nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß n 5 ist.
5. Nukleosidderivat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß:
Y H oder OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
X
ist;
Z Dimethoxytrityl ist;
X' CH&sub2; ist; und
R CO(CH&sub2;)&sub5;NHA ist, worin A wie in Anspruch 1 definiert ist.
6. Nukleosidderivat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß:
Y H, OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
X H ist;
Z Triphosphat ist;
X' CH&sub2; ist; und
R CO(CH&sub2;)&sub5;NHA ist, worin A wie in Anspruch 1 definiert ist.
7. Nukleosidderivat nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß Q
aus Methyl-, Phenyl-, substituierten Phenyl-, Benzyl- und Cyanoäthylgruppen
ausgewählt ist.
8. Nukleosidderivat nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß
die nicht-radioaktive nachweisbare Markierung aus Biotin, Avidin, kolloidalem Gold
oder Silber und Ferritin ausgewählt ist.
9. Nukleosidderivat nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß
die nicht-radioaktive nachweisbare Markierung ein Enzym ist.
10. Nukleosidderivat nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym β-
Galaktosidase, Urease, Peroxidase oder alkalische Phosphatase ist.
11. Nukleosidderivat nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß
das Fluorophor Fluorescein ist.
12. Nukleosidderivat nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß
das Fluorophor ein Fluorophorvorläufer ist, der eine oder mehrere Gruppen enthält, die
Fluoreszenz unterdrücken, aber zur Fluoreszenz fähig ist, sobald diese Gruppen entfernt
sind.
13. Nukleosidderivat nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß es folgende
Formel hat:
14. Verfahren zur Herstellung eines Nukleosidderivat der Formel (I')
dadurch gekennzeichnet, daß:
Y H oder OH oder eine geschützte Hydroxygruppe ist;
X H, eine Phosphatgruppe oder eine Phosphoramiditgruppe der Formel:
ist, worin R¹ und R² gleich oder voneinander verschieden sind und aus Alkyl und
substituiertem Alkyl ausgewählt sind, das verzweigt oder unverzweigt sein kann;
und Q eine Phosphatschutzgruppe ist;
Z H, eine Phosphat- oder Triphosphatgruppe oder eine Hydroxyschutzgruppe ist;
X' eine C&sub1;&submin;&sub1;&sub5;-Alkylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann;
R eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder eine andere nicht-radioaktive
nachweisbare Markierung ist; oder die Gruppe Y'NHA, worin Y' ein
Alkyl(C&sub1;&submin;&sub4;&sub0;carbonylgruppe ist, die verzweigt oder unverzweigt sein kann, und A
eine Aminoschutzgruppe oder ein Fluorophor oder eine andere nicht-radioaktive
nachweisbare Markierung ist;
dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
das Umsetzen eines 5-Joduridins oder 5-Joddesoxyuridins der Formel (II):
worin Y und Z die oben angeführte Bedeutung haben und X eine Hydroxyschutzgruppe
ist,
mit einem Aminoalkin der Formel H-C CX'NHR, worin X' und R die in Anspruch 1
angeführte Bedeutung haben, in Gegenwart eines Palladiumkatalysators;
mit der Maßgabe, daß, im Falle ein Aminoalkin X' CH&sub2; und R COCF&sub3; ist, in der
genannten Verbindung 11 nicht jedes von Z, X und Y H ist.
15. Polynukleotid, dadurch gekennzeichnet, daß es eine oder mehrere
Nukleotideinheiten der Formel (III)
aufweist, worin X', Y und R die in Anspruch 1 angeführte Bedeutung haben.
16. Verfahren zur Synthese eines Polynukleotids nach Anspruch 15, worin einzelne
Nukleotide oder Nukleotidgruppen der Reihe nach an einer wachsenden Nukleotidkette
angehängt werden, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest eines der Nukleotide ein
Nukleosidderivat der Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, ist.
17. Verfahren nach Anspruch 16, welches die gemeinsame Umsetzung
(a) eines ersten Polynukleotids;
(b) eines zweiten Polynukleotids, das an einen Abschnitt des ersten Polynukleotids
hybridisiert;
(c) eines oder mehrerer Nukleotidtriphosphate;
(d) einer DNA-Polymerase oder RNA-Polymerase umfaßt;
wodurch das Polynukleotid vom 3'-Ende des genannten zweiten Polynukleotids
synthetisiert wird, dadurch gekennzeichnet, daß zumindest eines der genannten
Nukleotidtriphosphate ein Nukleosidderivat der Formel (I) wie in Anspruch 1 definiert
ist, worin Z Triphosphat ist und X Wasserstoff ist.
18. Verfahren nach Anspruch 15, welches das sequentielle Aneinanderkoppeln von
Nukleotiden über ihre jeweiligen 5'- und 3'-Enden umfaßt, dadurch gekennzeichnet,
daß mindestens eines der genannten Nukleotide ein Nukleosidderivat der Formel (I) wie
in Anspruch 1 definiert ist, worin X aus Phophonat oder einer Gruppe der Formel
ausgewählt ist, worin R¹, R² und Q die in Anspruch 1 angeführte Bedeutung haben.
19. Verfahren zum Sequenzieren von DNA, welches folgende Schritte umfaßt:
(a) das Bereitstellen einer ersten Reaktionsmischung, die umfaßt:
(i) ein Polydesoxynukleotid;
(ii) einen Polydesoxynukleotidprimer, der zum Hybridiseren an einen Teil des
Polydesoxynukleotids (i) fähig ist;
(iii) dATP, dGTP, dCTP, dTTP;
(iv) ddATP;
(v) eine DNA-Polymerase oder das Klenow-Fragment von DNA-Polymerase;
(b) das Bereitstellen einer zweiten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß
ddATP durch ddGTP ersetzt ist, mit der genannten ersten Reaktionsmischung gleich ist;
(c) das Bereitstellen einer dritten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß ddATP
durch ddCTP ersetzt ist, mit der genannten ersten Reaktionsmischung gleich ist;
(d) das Bereitstellen einer vierten Reaktionsmischung, die abgesehen davon, daß ddATP
durch ddTTP ersetzt ist, mit der genannten ersten Reaktionsmischung gleich ist;
(e) das getrennte Inkubieren der genannten Reaktionsmischungen, um in jedem Fall den
Polydesoxynukleotidprimer von seinem 3'-Ende her zu verlängern, um
Polydesoxynukleotide mit unterschiedlichen Längen herzustellen, wobei die Anzahl an
Nukleotiden in jedem dadurch neu synthetisierten Polynukleotid durch die Aufnahme
eines Didesoxynukleotids in die wachsende Kette bestimmt wird;
(f) das Fraktionieren der Reaktionsmischungen (a) bis (d) durch Hindurchschicken durch
eine Gelmatrix;
dadurch gekennzeichnet, daß:
der Polydesoxynukleotidprimer (ii) ein Polydesoxynukleotid wie in Anspruch 15
definiert ist, worin R oder A ein Fluorophor oder eine andere nicht-radioaktive
nachweisbare Markierung ist und/oder jede genannte Reaktionsmischung ein
Nukleosidderivat der Formel (I) enthält, wie in Anspruch 1 definiert, worin Z
Triphosphat, X Wasserstoff und R oder A ein Fluorophor oder eine andere
nichtradioaktive nachweisbare Markierung ist, wodurch das Fluorophor oder die andere
nicht-radioaktive nachweisbare Markierung in jedes neu synthetisierte
Polydesoxynukleotid eingebaut wird;
und dadurch, daß die relativen Positionen der neu synthetisierten, auf der Gelmatrix
getrennten Polydesoxynukleotide durch das Bestimmen des Fluorophors oder der
anderen nicht-radioaktiven nachweisbaren Markierung identifiziert werden, das/die vom
neu synthetisierten Polydesoxynukleotid getragen wird, so daß es möglich wird, die
DNA-Sequenz des ersten Polynukleotids zu klären.
20. Verfahren nach Anspruch 19, worin jedes neu synthetisierte Polydesoxynukleotid
zumindest ein Fluorophor enthält, das durch Fluoreszenz bestimmt wird, die durch
Bestrahlung mit einer Lichtquelle induziert wird.
21. Verfahren nach Anspruch 19 oder 20, dadurch gekennzeichnet, daß jede der
Reaktionsmischungen (a) bis (d) ein verschiedenes Fluorophor mit anderen
Emissionsmaxima oder eine verschiedene nicht-radioaktive nachweisbare Markierung
enthält.
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US5849482A (en) * | 1988-09-28 | 1998-12-15 | Epoch Pharmaceuticals, Inc. | Crosslinking oligonucleotides |
US5824796A (en) * | 1988-09-28 | 1998-10-20 | Epoch Pharmaceuticals, Inc. | Cross-linking oligonucleotides |
USRE38416E1 (en) | 1988-09-28 | 2004-02-03 | Epoch Biosciences, Inc. | Cross-linking oligonucleotides |
FR2642074B1 (fr) * | 1989-01-20 | 1994-04-29 | Oris Ind | Derives de molecules polyhydroxylees permettant l'introduction d'au moins une ramification dans un oligonucleotide |
WO1990014353A1 (en) * | 1989-05-18 | 1990-11-29 | Microprobe Corporation | Crosslinking oligonucleotides |
WO1993024511A1 (en) * | 1992-05-29 | 1993-12-09 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates |
US6013434A (en) * | 1989-12-22 | 2000-01-11 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates |
DE4102289A1 (de) * | 1991-01-26 | 1992-07-30 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von (hetero)arylalk(en/in)-ylaminen und neue (hetero)arylkinylamine |
US6136601A (en) * | 1991-08-21 | 2000-10-24 | Epoch Pharmaceuticals, Inc. | Targeted mutagenesis in living cells using modified oligonucleotides |
US6335434B1 (en) | 1998-06-16 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc., | Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates |
US8153602B1 (en) | 1991-11-19 | 2012-04-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Composition and methods for the pulmonary delivery of nucleic acids |
US6235887B1 (en) * | 1991-11-26 | 2001-05-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines |
AU678968B2 (en) * | 1992-05-29 | 1997-06-19 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates |
JP3484197B2 (ja) | 1993-09-03 | 2004-01-06 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | アミン誘導化ヌクレオシドおよびオリゴヌクレオシド |
US6028190A (en) | 1994-02-01 | 2000-02-22 | The Regents Of The University Of California | Probes labeled with energy transfer coupled dyes |
US6420549B1 (en) | 1995-06-06 | 2002-07-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide analogs having modified dimers |
US6008373A (en) | 1995-06-07 | 1999-12-28 | Carnegie Mellon University | Fluorescent labeling complexes with large stokes shift formed by coupling together cyanine and other fluorochromes capable of resonance energy transfer |
US5854033A (en) | 1995-11-21 | 1998-12-29 | Yale University | Rolling circle replication reporter systems |
US7825237B2 (en) * | 1996-05-03 | 2010-11-02 | Applied Biosystems, Llc | Oligonucleotides and analogs labeled with energy transfer dyes |
US5945526A (en) | 1996-05-03 | 1999-08-31 | Perkin-Elmer Corporation | Energy transfer dyes with enhanced fluorescence |
US7388092B2 (en) * | 1996-05-03 | 2008-06-17 | Applera Corporation | Oligonucleotides and analogs labeled with energy transfer dyes |
US5898031A (en) | 1996-06-06 | 1999-04-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligoribonucleotides for cleaving RNA |
US20030044941A1 (en) | 1996-06-06 | 2003-03-06 | Crooke Stanley T. | Human RNase III and compositions and uses thereof |
US7875733B2 (en) | 2003-09-18 | 2011-01-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising 4′-thionucleosides for use in gene modulation |
US7812149B2 (en) | 1996-06-06 | 2010-10-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations |
US9096636B2 (en) | 1996-06-06 | 2015-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
SE9701783D0 (sv) * | 1997-05-14 | 1997-05-14 | Marek Kwiatkowski | In situ synthesis of oligonucleotides of inverse orientation |
US6887906B1 (en) | 1997-07-01 | 2005-05-03 | Isispharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the delivery of oligonucleotides via the alimentary canal |
US6007992A (en) * | 1997-11-10 | 1999-12-28 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
US6028183A (en) * | 1997-11-07 | 2000-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives and oligonucleotides containing same |
US20040186071A1 (en) | 1998-04-13 | 2004-09-23 | Bennett C. Frank | Antisense modulation of CD40 expression |
EP1080226A4 (de) | 1998-05-21 | 2004-04-21 | Isis Pharmaceuticals Inc | Zusammensetzungen und methoden zur topischen verabreichung von oligonukleotiden |
EP1080103A4 (de) | 1998-05-21 | 2003-07-02 | Isis Pharmaceuticals Inc | Zubereitungen und verfahren zur nicht-parenteralen verabreichung von oligonukleotiden |
US6867294B1 (en) | 1998-07-14 | 2005-03-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages |
US6225293B1 (en) | 1998-09-02 | 2001-05-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compounds for tracking the biodistribution of macromolecule-carrier combinations |
US6077709A (en) | 1998-09-29 | 2000-06-20 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of Survivin expression |
US6300320B1 (en) | 1999-01-05 | 2001-10-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of c-jun using inhibitors of protein kinase C |
US6127124A (en) * | 1999-01-20 | 2000-10-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Fluorescence based nuclease assay |
US7098192B2 (en) | 1999-04-08 | 2006-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression |
US6656730B1 (en) | 1999-06-15 | 2003-12-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs |
US6147200A (en) * | 1999-08-19 | 2000-11-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers |
US6358684B1 (en) * | 1999-08-27 | 2002-03-19 | Pe Corporation | UV excitable fluorescent energy transfer dyes |
US20020055479A1 (en) | 2000-01-18 | 2002-05-09 | Cowsert Lex M. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6261840B1 (en) | 2000-01-18 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6436641B1 (en) * | 2000-04-17 | 2002-08-20 | Visible Genetics Inc. | Method and apparatus for DNA sequencing |
US6680172B1 (en) | 2000-05-16 | 2004-01-20 | Regents Of The University Of Michigan | Treatments and markers for cancers of the central nervous system |
US8568766B2 (en) | 2000-08-24 | 2013-10-29 | Gattadahalli M. Anantharamaiah | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease |
AU9684601A (en) | 2000-10-12 | 2002-04-22 | Univ Rochester | Compositions that inhibit proliferation of cancer cells |
US7767802B2 (en) | 2001-01-09 | 2010-08-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes |
US7083951B2 (en) * | 2001-02-14 | 2006-08-01 | The Regents Of The University Of California | Flow cytometric detection method for DNA samples |
US6573051B2 (en) * | 2001-03-09 | 2003-06-03 | Molecular Staging, Inc. | Open circle probes with intramolecular stem structures |
US7803915B2 (en) | 2001-06-20 | 2010-09-28 | Genentech, Inc. | Antibody compositions for the diagnosis and treatment of tumor |
CA2451239A1 (en) | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Genentech, Inc. | Antibodies against tumor-associated antigenic taget (tat) polypeptides |
EP2270024B1 (de) | 2001-06-21 | 2018-10-24 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense-Modulation von Superoxid-Dismutase 1, Expression in Lösung |
US7425545B2 (en) | 2001-07-25 | 2008-09-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of C-reactive protein expression |
US6964950B2 (en) | 2001-07-25 | 2005-11-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of C-reactive protein expression |
US20030096772A1 (en) | 2001-07-30 | 2003-05-22 | Crooke Rosanne M. | Antisense modulation of acyl CoA cholesterol acyltransferase-2 expression |
US7407943B2 (en) | 2001-08-01 | 2008-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
US7227014B2 (en) | 2001-08-07 | 2007-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression |
NZ531674A (en) | 2001-09-18 | 2009-03-31 | Genentech Inc | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US6750019B2 (en) | 2001-10-09 | 2004-06-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of insulin-like growth factor binding protein 5 expression |
NZ566396A (en) | 2001-10-09 | 2009-07-31 | Isis Pharmaceuticals Inc | Antisense modulation of insulin-like growth factor binding protein 5 expressions |
GB0128526D0 (en) * | 2001-11-29 | 2002-01-23 | Amersham Pharm Biotech Uk Ltd | Nucleotide analogues |
US6965025B2 (en) | 2001-12-10 | 2005-11-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of connective tissue growth factor expression |
KR100623128B1 (ko) | 2002-01-02 | 2006-09-14 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물 |
US7553619B2 (en) | 2002-02-08 | 2009-06-30 | Qiagen Gmbh | Detection method using dissociated rolling circle amplification |
US20030180712A1 (en) | 2002-03-20 | 2003-09-25 | Biostratum Ab | Inhibition of the beta3 subunit of L-type Ca2+ channels |
US7169916B2 (en) * | 2002-04-01 | 2007-01-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chloral-free DCA in oligonucleotide synthesis |
MXPA04010092A (es) | 2002-04-16 | 2004-12-13 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores. |
US7199107B2 (en) | 2002-05-23 | 2007-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of kinesin-like 1 expression |
US20050287648A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-12-29 | University Of Rochester | Protein Transducing Domain/Deaminase Chimeric Proteins, Related Compounds, and Uses Thereof |
EP2233494A3 (de) * | 2002-09-20 | 2013-05-29 | Yale University | Riboswitches, Verfahren für deren Anwendung, Zusammensetzungen damit |
US7229976B2 (en) | 2002-09-26 | 2007-06-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of forkhead box O1A expression |
AU2003290596B2 (en) | 2002-11-05 | 2011-05-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
WO2004044138A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation |
US9150606B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
US9150605B2 (en) | 2002-11-05 | 2015-10-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation |
JP4986109B2 (ja) | 2002-11-13 | 2012-07-25 | ジェンザイム・コーポレーション | アポリポタンパク質b発現のアンチセンス調節 |
DK2336318T3 (da) | 2002-11-13 | 2013-07-15 | Genzyme Corp | Antisense-modulering af apolipoprotein b-ekspression |
AU2003298650B2 (en) | 2002-11-15 | 2010-03-11 | Musc Foundation For Research Development | Complement receptor 2 targeted complement modulators |
AU2003295576B2 (en) | 2002-11-15 | 2011-03-17 | Eisai, Inc. | Methods of generating high-production of antibodies from hybridomas created by in vitro immunization |
EP1624753B1 (de) | 2002-11-21 | 2012-01-25 | The University of Utah Research Foundation | Purinerge geruchsmodulation |
US7144999B2 (en) | 2002-11-23 | 2006-12-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hypoxia-inducible factor 1 alpha expression |
US20040121338A1 (en) * | 2002-12-19 | 2004-06-24 | Alsmadi Osama A. | Real-time detection of rolling circle amplification products |
EP2261371B1 (de) | 2002-12-20 | 2015-07-22 | QIAGEN GmbH | Nukleinsäureamplifikation |
US9487823B2 (en) | 2002-12-20 | 2016-11-08 | Qiagen Gmbh | Nucleic acid amplification |
US6977153B2 (en) * | 2002-12-31 | 2005-12-20 | Qiagen Gmbh | Rolling circle amplification of RNA |
WO2004063339A2 (en) * | 2003-01-08 | 2004-07-29 | Lesley Davenport | G-quadruplex binding assays and compounds therefor |
NZ541637A (en) | 2003-02-11 | 2008-07-31 | Antisense Therapeutics Pty Ltd | Modulation of insulin like growth factor I receptor |
US7002006B2 (en) * | 2003-02-12 | 2006-02-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Protection of nucleosides |
US7803781B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-09-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression |
US20040185559A1 (en) | 2003-03-21 | 2004-09-23 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 1 expression |
US8043834B2 (en) | 2003-03-31 | 2011-10-25 | Qiagen Gmbh | Universal reagents for rolling circle amplification and methods of use |
US7598227B2 (en) | 2003-04-16 | 2009-10-06 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of apolipoprotein C-III expression |
US7399853B2 (en) | 2003-04-28 | 2008-07-15 | Isis Pharmaceuticals | Modulation of glucagon receptor expression |
WO2004108081A2 (en) | 2003-06-02 | 2004-12-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide synthesis with alternative solvents |
EP1633307A4 (de) | 2003-06-03 | 2009-06-24 | Isis Pharmaceuticals Inc | Modulation der survivin-expression |
US7786290B2 (en) | 2003-06-13 | 2010-08-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism |
EP2530157B1 (de) | 2003-07-31 | 2016-09-28 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomerverbindungen und Zusammensetzungen zur Verwendung bei der Modulation von miRNAs |
US7825235B2 (en) | 2003-08-18 | 2010-11-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression |
US7759472B2 (en) | 2003-08-27 | 2010-07-20 | Ophthotech Corporation | Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders |
US20050053981A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-03-10 | Swayze Eric E. | Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini |
US7425544B2 (en) | 2003-09-18 | 2008-09-16 | Eli Lilly And Company | Modulation of eIF4E expression |
JP2007507430A (ja) | 2003-10-10 | 2007-03-29 | メディテック リサーチ リミテッド | 疾患の治療におけるヒアルロナン合成および分解の調節法 |
US20050191653A1 (en) | 2003-11-03 | 2005-09-01 | Freier Susan M. | Modulation of SGLT2 expression |
NZ596981A (en) | 2003-11-17 | 2013-10-25 | Genentech Inc | Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin |
EP2363480A3 (de) | 2004-01-20 | 2015-10-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulierung der Glukokortikoid-Rezeptor-Expression |
US7468431B2 (en) | 2004-01-22 | 2008-12-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E-BP2 expression |
US8778900B2 (en) * | 2004-01-22 | 2014-07-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E-BP1 expression |
US8569474B2 (en) | 2004-03-09 | 2013-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand |
EP1730309B1 (de) | 2004-03-15 | 2016-05-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur optimierung der spaltung von rna durch rnase h |
US20050267300A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-12-01 | Muthiah Manoharan | Processes and reagents for oligonucleotide synthesis and purification |
US20050244869A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Brown-Driver Vickie L | Modulation of transthyretin expression |
JP4584987B2 (ja) | 2004-04-30 | 2010-11-24 | アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | C5修飾ピリミジンを含むオリゴヌクレオチド |
EP1773872B1 (de) | 2004-05-21 | 2017-03-15 | The Uab Research Foundation | Variable lymphozytenrezeptoren, verwandte polypeptide und nukleinsäuren sowie verwendung dafür |
US8394947B2 (en) | 2004-06-03 | 2013-03-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Positionally modified siRNA constructs |
WO2006023880A2 (en) | 2004-08-23 | 2006-03-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the characterization of oligonucleotides |
US7884086B2 (en) | 2004-09-08 | 2011-02-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays |
EP1809303B1 (de) | 2004-09-23 | 2019-03-06 | ARC Medical Devices, Inc. | Pharmazeutische zusammensetzungen und verfahren zur hemmung von fibröser adhäsion oder entzündungserkrankung mit niedermolekularen sulfat-fucanen |
BRPI0607985A2 (pt) | 2005-03-10 | 2009-10-27 | Genentech Inc | modulador da dscr1, métodos de tratamento, método de melhoria de efeitos colaterais e método de inibição do crescimento de tumores |
US8309303B2 (en) | 2005-04-01 | 2012-11-13 | Qiagen Gmbh | Reverse transcription and amplification of RNA with simultaneous degradation of DNA |
EP1891141B1 (de) | 2005-05-31 | 2016-11-16 | Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) | Triblockcopolymere zur zytoplasmatischen zuführung von arzneistoffen auf genbasis |
WO2006138145A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
CA2618665C (en) | 2005-08-11 | 2012-11-13 | J. Craig Venter Institute | Method for in vitro recombination |
CA2617693A1 (en) | 2005-08-17 | 2007-02-22 | Medexis S.A. | Composition and method for determination of ck19 expression |
ATE494372T1 (de) | 2005-08-29 | 2011-01-15 | Regulus Therapeutics Inc | Verfahren für mir-122a-modulation |
EP1762627A1 (de) | 2005-09-09 | 2007-03-14 | Qiagen GmbH | Verfahren zur Aktivierung einer Nukleinsäure für eine Polymerase-Reaktion |
US20070087987A1 (en) | 2005-09-19 | 2007-04-19 | Monia Brett P | Modulation of glucagon receptor expression |
WO2007035759A1 (en) | 2005-09-19 | 2007-03-29 | Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development L.L.C. | Modulation of glucocorticoid receptor expression |
US8080534B2 (en) | 2005-10-14 | 2011-12-20 | Phigenix, Inc | Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer |
EP2392647A1 (de) | 2005-10-14 | 2011-12-07 | MUSC Foundation For Research Development | Targeting von PAX2 zur Induktion der DEFB1-vermittelten Tumorimmunität und Krebstherapie |
CA2627025A1 (en) | 2005-10-28 | 2007-05-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of huntingtin gene |
AU2006311730B2 (en) | 2005-11-09 | 2010-12-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of Factor V Leiden mutant gene |
CA2630602A1 (en) | 2005-11-21 | 2007-05-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eif4e-bp2 expression |
EP1974052A2 (de) * | 2005-12-21 | 2008-10-01 | Yale University | Verfahren und zusammensetzungen in verbindung mit der modulation von riboschaltern |
CN103301475B (zh) | 2005-12-28 | 2016-08-03 | 斯克里普斯研究所 | 药物组合物和表达载体以及调节基因表达的方法和核酸分子的应用 |
DK1984381T3 (da) | 2006-01-27 | 2010-11-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | 6-modificerede bicycliske nukleinsyreanaloger |
US7569686B1 (en) | 2006-01-27 | 2009-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs |
EP2388328A1 (de) | 2006-01-27 | 2011-11-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomerverbindungen und Zusammensetzungen zur Verwendung bei der Modulation von microRNAs |
KR101462874B1 (ko) | 2006-03-31 | 2014-11-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Eg5 유전자의 발현을 억제하는 이본쇄 리보핵산 |
CA2651031A1 (en) | 2006-05-03 | 2007-11-08 | Baltic Technology Development, Ltd. | Antisense agents combining strongly bound base - modified oligonucleotide and artificial nuclease |
WO2007143315A2 (en) | 2006-05-05 | 2007-12-13 | Isis Pharmaceutical, Inc. | Compounds and methods for modulating expression of pcsk9 |
CA2651453C (en) * | 2006-05-11 | 2014-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs |
US7666854B2 (en) | 2006-05-11 | 2010-02-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs |
BRPI0712034A2 (pt) | 2006-05-19 | 2012-01-10 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | modulação de rnai de aha e usos terapêuticos do mesmo |
EP2584051B1 (de) | 2006-05-22 | 2014-07-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur Hemmung von IKK-B-Genexpressionen |
WO2008097328A2 (en) * | 2006-06-23 | 2008-08-14 | Northwestern University | Asymmetric functionalized nanoparticles and methods of use |
US8198253B2 (en) | 2006-07-19 | 2012-06-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to HBXIP |
WO2008033866A2 (en) * | 2006-09-11 | 2008-03-20 | Yale University | Methods and compositions for the use of lysine riboswitches |
US20100099858A1 (en) * | 2006-09-28 | 2010-04-22 | Mirkin Chad A | Maximizing Oligonucleotide Loading on Gold Nanoparticle |
KR101556798B1 (ko) | 2006-10-05 | 2015-10-01 | 메사츄세츠 인스티튜트 어브 테크놀로지 | 고성능 분석을 위한 다중기능성 인코딩된 입자 |
EP2104516B1 (de) | 2006-11-01 | 2015-01-07 | University of Rochester | Verfahren und zusammensetzungen in zusammenhang mit der struktur und funktion von apobec3g |
BRPI0720038A2 (pt) | 2006-12-11 | 2013-12-24 | Univ Utah Res Found | Métodos para inibir a permeabilidade vascular em tecido, para triar ou avaliar um agente que inibe a permeabilidade vascular, para tratar ou prevenir a síndrome da angústia respiratória, a retinopatia de prematuridade, a retinopatia diabética e a degeneração macular úmida em um indivíduo, para tratar indivíduos com sugestões repulsivas ou miméticos e para promover a angiogênese em um tecido, polipeptídeo isolado, ácido nucleico isolado, e, vetor |
US8507200B2 (en) | 2007-02-09 | 2013-08-13 | Northwestern University | Particles for detecting intracellular targets |
EP2471925A1 (de) | 2007-03-22 | 2012-07-04 | Yale University | Verfahren und Zusammensetzungen für Riboswitches, die das alternative Spleissen kontrollieren |
EP2905336A1 (de) | 2007-03-29 | 2015-08-12 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur Hemmung der Expression eines Gens von Ebola |
KR20100017893A (ko) * | 2007-05-29 | 2010-02-16 | 예일 유니버시티 | 택일적 스플라이싱 및 rna 프로세싱을 조절하는 리보스위치와 관련된 방법 및 조성물 |
KR20100017905A (ko) | 2007-05-29 | 2010-02-16 | 예일 유니버시티 | 리보스위치, 리보스위치의 사용 방법 및 리보스위치를 함유하는 조성물 |
WO2008151049A2 (en) | 2007-05-30 | 2008-12-11 | Northwestern University | Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications |
US8278425B2 (en) | 2007-05-30 | 2012-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
US7807372B2 (en) * | 2007-06-04 | 2010-10-05 | Northwestern University | Screening sequence selectivity of oligonucleotide-binding molecules using nanoparticle based colorimetric assay |
DK2173760T4 (en) | 2007-06-08 | 2016-02-08 | Isis Pharmaceuticals Inc | Carbocyclic bicyclic nukleinsyreanaloge |
US8278283B2 (en) * | 2007-07-05 | 2012-10-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-disubstituted or unsaturated bicyclic nucleic acid analogs |
AU2008286771B2 (en) * | 2007-08-15 | 2013-08-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tetrahydropyran nucleic acid analogs |
CA2697957A1 (en) | 2007-08-28 | 2009-03-12 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein e mimicking polypeptides and methods of use |
US9422363B2 (en) | 2007-08-28 | 2016-08-23 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use |
US8445217B2 (en) | 2007-09-20 | 2013-05-21 | Vanderbilt University | Free solution measurement of molecular interactions by backscattering interferometry |
WO2009039442A1 (en) | 2007-09-21 | 2009-03-26 | California Institute Of Technology | Nfia in glial fate determination, glioma therapy and astrocytoma treatment |
USRE47320E1 (en) | 2007-11-20 | 2019-03-26 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of CD40 expression |
US7871985B2 (en) | 2007-12-10 | 2011-01-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of factor VII gene |
JP5749494B2 (ja) | 2008-01-02 | 2015-07-15 | テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイション | 核酸の送達のための改善された組成物および方法 |
WO2009100320A2 (en) * | 2008-02-07 | 2009-08-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs |
KR101397407B1 (ko) | 2008-03-05 | 2014-06-19 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Eg5 및 VEGF 유전자의 발현을 억제하기 위한 조성물 및 방법 |
EP2282744B1 (de) | 2008-03-21 | 2018-01-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomere verbindungen mit trizyklischen nukleosiden und anwendungsverfahren dafür |
DK2285819T3 (da) * | 2008-04-04 | 2013-12-02 | Isis Pharmaceuticals Inc | Oligomere forbindelser omfattende neutralt bundne, terminale bicykliske nukleosider |
US8846639B2 (en) * | 2008-04-04 | 2014-09-30 | Isis Pharmaceutical, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and having reduced toxicity |
DK2281042T3 (en) | 2008-04-18 | 2015-11-09 | Baxter Int | Microsphere-based composition for preventing and / or deletion of starting autoimmune diabetes |
MX2011000227A (es) * | 2008-07-15 | 2011-02-24 | Hoffmann La Roche | Composiciones y metodos para inhibir la expresion de genes del receptor de factor de crecimiento por transformacion-beta. |
AU2009275387B2 (en) | 2008-08-25 | 2010-07-08 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof |
US20120107272A1 (en) * | 2008-09-02 | 2012-05-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Synthetic methods and derivatives of triphosphate oligonucleotides |
EP2690175B1 (de) | 2008-09-02 | 2016-12-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und Verfahren zur kombinierten Hemmung der Expression eines mutierenden EGFR-Gens und IL-6 |
DK2361256T3 (da) * | 2008-09-24 | 2013-07-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | Cyclohexenyl-nukleinsyreanaloger |
US8501805B2 (en) * | 2008-09-24 | 2013-08-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted alpha-L-bicyclic nucleosides |
CA2739170A1 (en) | 2008-09-25 | 2010-04-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene |
CA2740000C (en) | 2008-10-09 | 2017-12-12 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
ES2657679T3 (es) | 2008-10-15 | 2018-03-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulación del factor de expresión 11 |
LT2937418T (lt) | 2008-10-20 | 2018-02-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kompozicijos ir būdas transtiretino raiškos slopinimui |
EP2358397B1 (de) | 2008-10-24 | 2020-01-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5 - und 2 -bis-substituierte nukleoside und daraus hergestellte oligomere verbindungen |
EP2358398A2 (de) | 2008-10-24 | 2011-08-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomere verbindungen und verfahren |
EP2358876A1 (de) * | 2008-11-17 | 2011-08-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Zusammensetzungen und verfahren zur hemmung der expression von faktor-vii-genen |
KR101692880B1 (ko) | 2008-11-24 | 2017-01-04 | 노오쓰웨스턴 유니버시티 | 다가 rna-나노입자 구조체 |
BRPI0923225A2 (pt) | 2008-12-02 | 2016-10-04 | Chiralgen Ltd | metodo para sintese de acidos nucleicos modificados no atomo de fosforo |
US20110237649A1 (en) | 2008-12-04 | 2011-09-29 | Opko Curna, Llc | Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirtuin 1 |
RU2620970C2 (ru) | 2008-12-04 | 2017-05-30 | КьюРНА,Инк., | Лечение связанных с эритропоэтином (еро) заболеваний путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к еро |
CN102361985B (zh) | 2008-12-04 | 2017-06-20 | 库尔纳公司 | 通过抑制肿瘤抑制基因的天然反义转录物治疗肿瘤抑制基因相关性疾病 |
US8324368B2 (en) | 2008-12-10 | 2012-12-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | GNAQ targeted dsRNA compositions and methods for inhibiting expression |
US20100233270A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-09-16 | Northwestern University | Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles |
KR101546673B1 (ko) * | 2009-01-15 | 2015-08-25 | 삼성전자주식회사 | 전자 사진용 토너 및 그의 제조방법 |
JP2012516155A (ja) | 2009-01-27 | 2012-07-19 | キアゲン ゲーザーズバーグ | エンドポイント均一蛍光検出を用いた好熱性ヘリカーゼ依存性増幅技術 |
EP2391343B1 (de) | 2009-01-29 | 2017-03-01 | Arbutus Biopharma Corporation | Verbesserte lipidformulierung zur verabreichung von nukleinsaueren |
SG173182A1 (en) * | 2009-02-03 | 2011-09-29 | Hoffmann La Roche | Compositions and methods for inhibiting expression of ptp1b genes |
US8536320B2 (en) | 2009-02-06 | 2013-09-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tetrahydropyran nucleic acid analogs |
EP2393825A2 (de) | 2009-02-06 | 2011-12-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomere verbindungen und verfahren |
ES2560107T3 (es) | 2009-02-12 | 2016-02-17 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) por inhibición de transcrito antisentido natural para BDNF |
ES2658626T3 (es) | 2009-02-12 | 2018-03-12 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor neurotrófico derivado de células gliales (GDNF) por inhibición de transcrito antisentido natural a GDNF |
US20120041051A1 (en) | 2009-02-26 | 2012-02-16 | Kevin Fitzgerald | Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of MIG-12 Gene |
EP2963116B1 (de) | 2009-03-04 | 2020-11-11 | CuRNA, Inc. | Behandlung von sirtuin 1 (sirt1)-bedingten erkrankungen mittels hemmung des natürlichen antisense-transkripts gegen sirt 1 |
WO2010105209A1 (en) | 2009-03-12 | 2010-09-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | LIPID FORMULATED COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING EXPRESSION OF Eg5 AND VEGF GENES |
CA2755409C (en) | 2009-03-16 | 2019-04-30 | Joseph Collard | Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2 |
CA2755404C (en) | 2009-03-17 | 2020-03-24 | Joseph Collard | Treatment of delta-like 1 homolog (dlk1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlk1 |
CA2757694C (en) | 2009-04-15 | 2020-10-06 | Northwestern University | Delivery of oligonucleotide-functionalized nanoparticles |
EP3248618A1 (de) | 2009-04-22 | 2017-11-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Angeborene immununterdrückung mit ermöglichung der wiederholten verabreichung von langen rna-molekülen |
NO2424987T3 (de) | 2009-05-01 | 2018-04-14 | ||
US8883202B2 (en) | 2009-05-05 | 2014-11-11 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Lipid compositions |
CA3045126A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Arbutus Biopharma Corporation | Methods of delivering oligonucleotides to immune cells |
CN106237345A (zh) | 2009-05-06 | 2016-12-21 | 库尔纳公司 | 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病 |
US20120046236A1 (en) | 2009-05-06 | 2012-02-23 | Opko Curna Llc | Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp |
CA2759838A1 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (gcr) genes |
EP2430161A1 (de) | 2009-05-15 | 2012-03-21 | Yale University | Gemm-riboswitches, strukturbasierte verbindungskonstruktion mit gemm-riboswitches sowie verfahren und zusammensetzungen zur verwendung von und mit gemm-riboswitches |
CA2762369C (en) | 2009-05-18 | 2021-12-28 | Joseph Collard | Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor |
WO2010135695A2 (en) | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Curna, Inc. | TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3 |
ES2618576T3 (es) | 2009-05-28 | 2017-06-21 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen antivírico mediante la inhibición de una transcripción antisentido natural a un gen antivírico |
TR201811076T4 (tr) | 2009-06-10 | 2018-08-27 | Arbutus Biopharma Corp | Geliştirilmiş lipit formulasyonu. |
CN102612560B (zh) | 2009-06-16 | 2017-10-17 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对对氧磷酶1(pon1)的天然反义转录物来治疗pon1相关的疾病 |
EP2443237B1 (de) | 2009-06-16 | 2017-02-22 | CuRNA, Inc. | Behandlung von krankheiten im zusammenhang mit dem kollagengen durch hemmung des natürlichen antisense-transkripts zu einem kollagengens |
US8859515B2 (en) | 2009-06-24 | 2014-10-14 | Curna, Inc. | Treatment of tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to TNFR2 |
CN102482672B (zh) | 2009-06-26 | 2016-11-09 | 库尔纳公司 | 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病 |
BR112012000828A8 (pt) | 2009-07-06 | 2017-10-10 | Ontorii Inc | Novas pró-drogas de ácido nucleico e métodos de uso das mesmas |
CA2769302C (en) * | 2009-07-30 | 2018-10-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A set of oligonucleotide probes as well as methods and uses related thereto |
CA2769665A1 (en) | 2009-08-05 | 2011-02-10 | Opko Curna, Llc | Treatment of insulin gene (ins) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (ins) |
EP2462153B1 (de) | 2009-08-06 | 2015-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclische cyclohexosenukleinsäureanaloga |
EP2810643A3 (de) | 2009-08-14 | 2015-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Zusammensetzungen aus Lipidformulierung und Verfahren zur Hemmung der Expression eines Gens aus dem Ebola-Virus |
US20120157324A1 (en) | 2009-08-17 | 2012-06-21 | Yale University | Methylation biomarkers and methods of use |
JP5964232B2 (ja) | 2009-08-25 | 2016-08-03 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | ‘iqモチーフ含有gtpアーゼ活性化タンパク質’(iqgap)に対する天然アンチセンス転写産物の阻害によるiqgap関連疾患の治療 |
AU2010289400B2 (en) | 2009-09-02 | 2014-10-23 | Curis, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
JP5819308B2 (ja) | 2009-10-22 | 2015-11-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | マクロファージ刺激タンパク質のヘプシン活性化を調節するための方法及び組成物 |
US20110129832A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-06-02 | Swift Biosciences, Inc. | Polynucleotide Primers and Probes |
KR20120136345A (ko) | 2009-10-30 | 2012-12-18 | 노오쓰웨스턴 유니버시티 | 주형화된 나노컨쥬게이트 |
EP2496716A1 (de) | 2009-11-03 | 2012-09-12 | University Of Virginia Patent Foundation | Vielseitiges sichtbares verfahren für den nachweis von polymeranalyten |
AR078921A1 (es) * | 2009-11-09 | 2011-12-14 | Hoffmann La Roche | Composiciones y metodos para inhibir la expresion de genes de la superfamilia de quinesinas, kif10 |
JP2013511285A (ja) | 2009-11-23 | 2013-04-04 | スイフト・バイオサイエンシズ・インコーポレイテツド | 一本鎖標的分子を伸長させるデバイス |
MX338694B (es) | 2009-11-30 | 2016-04-27 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores. |
KR101823702B1 (ko) | 2009-12-16 | 2018-01-30 | 큐알엔에이, 인크. | 막 결합 전사 인자 펩티다제, 부위 1(mbtps1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 mbtps1 관련 질환의 치료 |
US20110152349A1 (en) | 2009-12-18 | 2011-06-23 | Anke Geick | Compositions and methods for inhibiting expression of il-18 genes |
KR101793753B1 (ko) | 2009-12-23 | 2017-11-03 | 큐알엔에이, 인크. | 커플링방지 단백질 2(ucp2)에 대한 천연 안티센스 전사체의 저해에 의한 ucp2 관련 질환의 치료 |
RU2609631C2 (ru) | 2009-12-23 | 2017-02-02 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с фактором роста гепатоцитов (фрг), посредством ингибирования природного антисмыслового транскрипта к фрг |
US8921334B2 (en) | 2009-12-29 | 2014-12-30 | Curna, Inc. | Treatment of nuclear respiratory factor 1 (NRF1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NRF1 |
RU2611186C2 (ru) | 2009-12-29 | 2017-02-21 | Курна, Инк. | ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ОПУХОЛЕВЫМ БЕЛКОМ 63 (р63), ПУТЕМ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРИРОДНОГО АНТИСМЫСЛОВОГО ТРАНСКРИПТА К р63 |
JP5886757B2 (ja) | 2010-01-04 | 2016-03-16 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | インターフェロン調節因子8(irf8)に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるインターフェロン調節因子8(irf8)関連疾患の治療 |
RU2612161C2 (ru) | 2010-01-06 | 2017-03-02 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с геном развития поджелудочной железы, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к гену развития поджелудочной железы |
WO2011085102A1 (en) | 2010-01-11 | 2011-07-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Base modified bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
KR101854926B1 (ko) | 2010-01-11 | 2018-05-04 | 큐알엔에이, 인크. | 성 호르몬 결합 글로불린 (shbg)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 성 호르몬 결합 글로불린 (shbg) 관련된 질환의 치료 |
SG182365A1 (en) | 2010-01-12 | 2012-08-30 | Univ Yale | Structured rna motifs and compounds and methods for their use |
CA2786568A1 (en) | 2010-01-25 | 2011-07-28 | Curna, Inc. | Treatment of rnase h1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to rnase h1 |
US20130028889A1 (en) | 2010-02-04 | 2013-01-31 | Ico Therapeutics Inc. | Dosing regimens for treating and preventing ocular disorders using c-raf antisense |
US20110196016A1 (en) * | 2010-02-05 | 2011-08-11 | Anke Geick | Compositions and Methods for Inhibiting Expression of IKK2 Genes |
CA2790506A1 (en) | 2010-02-22 | 2011-08-25 | Curna, Inc. | Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (pycr1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pycr1 |
WO2011105900A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 8-alpha (c8-alpha) and uses thereof |
WO2011105902A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 8-beta (c8-beta) and uses thereof |
CN102985113B (zh) | 2010-02-23 | 2015-05-20 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于肿瘤诊断和治疗的组合物和方法 |
WO2011105901A2 (en) | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Antagonists of complement component 9 (c9) and uses thereof |
WO2011112516A1 (en) | 2010-03-08 | 2011-09-15 | Ico Therapeutics Inc. | Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides |
US20130101512A1 (en) | 2010-03-12 | 2013-04-25 | Chad A. Mirkin | Crosslinked polynucleotide structure |
ES2743600T3 (es) | 2010-03-12 | 2020-02-20 | Brigham & Womens Hospital Inc | Métodos de tratamiento de los trastornos inflamatorios vasculares |
WO2011115817A1 (en) | 2010-03-16 | 2011-09-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of preparing 2'-o-substituted purine nucleosides |
US9193752B2 (en) | 2010-03-17 | 2015-11-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
WO2011120046A2 (en) | 2010-03-26 | 2011-09-29 | Swift Biosciences, Inc. | Methods and compositions for isolating polynucleotides |
CA2792291A1 (en) | 2010-03-29 | 2011-10-06 | Kumamoto University | Sirna therapy for transthyretin (ttr) related ocular amyloidosis |
US8507663B2 (en) | 2010-04-06 | 2013-08-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of CD274/PD-L1 gene |
WO2011127337A2 (en) | 2010-04-09 | 2011-10-13 | Opko Curna Llc | Treatment of fibroblast growth factor 21 (fgf21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fgf21 |
WO2011133695A2 (en) | 2010-04-20 | 2011-10-27 | Swift Biosciences, Inc. | Materials and methods for nucleic acid fractionation by solid phase entrapment and enzyme-mediated detachment |
WO2011133868A2 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides |
US10913767B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
EP2606057B1 (de) | 2010-04-28 | 2016-06-15 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modifizierte 5' diphosphat-nukleoside und daraus hergestellte oligomere verbindungen |
CN103154014B (zh) | 2010-04-28 | 2015-03-25 | Isis制药公司 | 修饰核苷、其类似物以及由它们制备的寡聚化合物 |
EP2625186B1 (de) | 2010-04-28 | 2016-07-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-modifizierte nukleoside und daraus hergestellte oligomere verbindungen |
PT2563920T (pt) | 2010-04-29 | 2017-05-26 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulação da expressão de transtirretina |
WO2011139911A2 (en) | 2010-04-29 | 2011-11-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Lipid formulated single stranded rna |
KR20130079384A (ko) | 2010-05-03 | 2013-07-10 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료를 위한 조성물 및 방법 |
JP2013525483A (ja) | 2010-05-03 | 2013-06-20 | カッパーアールエヌエー,インコーポレイテッド | サーチュイン(sirt)に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるサーチュイン(sirt)関連疾患の治療 |
TWI586356B (zh) | 2010-05-14 | 2017-06-11 | 可娜公司 | 藉由抑制par4天然反股轉錄本治療par4相關疾病 |
US20130203045A1 (en) | 2010-05-26 | 2013-08-08 | University Of Virginia Patent Foundation | Method for detecting nucleic acids based on aggregate formation |
EP2576783B1 (de) | 2010-05-26 | 2017-11-29 | CuRNA, Inc. | Behandlung von durch atonal homolog 1 (atoh1) vermittelten erkrankungen durch hemmung des natürlichen antisense-transkripts für atoh1 |
WO2011150227A1 (en) | 2010-05-26 | 2011-12-01 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Quantitative helicase assay |
EP2576579B1 (de) | 2010-06-02 | 2018-08-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von leberfibrose |
US8957200B2 (en) | 2010-06-07 | 2015-02-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
CA2802059C (en) | 2010-06-07 | 2020-05-12 | Firefly Bioworks, Inc. | Nucleic acid detection and quantification by post-hybridization labeling and universal encoding |
US8846637B2 (en) | 2010-06-08 | 2014-09-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 2′-amino and 2′-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
WO2011156713A1 (en) | 2010-06-11 | 2011-12-15 | Vanderbilt University | Multiplexed interferometric detection system and method |
WO2011159836A2 (en) | 2010-06-15 | 2011-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating interaction between proteins and target nucleic acids |
WO2011163466A1 (en) | 2010-06-23 | 2011-12-29 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Regulation of skin pigmentation by neuregulin-1 (nrg-1) |
RU2611190C2 (ru) | 2010-07-14 | 2017-02-21 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с геном dlg, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена dlg |
CN106434648A (zh) | 2010-07-19 | 2017-02-22 | F·C·贝内特 | 肌强直性营养障碍蛋白激酶(dmpk)表达的调节 |
US20130143955A1 (en) | 2010-08-09 | 2013-06-06 | Yale University | Cyclic di-GMP-II Riboswitches, Motifs, and Compounds, and Methods for Their Use |
WO2012039448A1 (ja) | 2010-09-24 | 2012-03-29 | 株式会社キラルジェン | 不斉補助基 |
AU2011312205B2 (en) | 2010-10-05 | 2015-08-13 | Curis, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
EP2625274B1 (de) | 2010-10-06 | 2017-07-19 | CuRNA, Inc. | Behandlung sialidase-4-(neu4)-vermittelter erkrankungen durch hemmung des natürlichen antisense-transkripts gegen neu4 |
US20140031250A1 (en) | 2010-10-07 | 2014-01-30 | David Tsai Ting | Biomarkers of Cancer |
WO2012052258A1 (en) | 2010-10-18 | 2012-04-26 | Arrowhead Research Corporation | Compositions and methods for inhibiting expression of rrm2 genes |
US8648053B2 (en) | 2010-10-20 | 2014-02-11 | Rosalind Franklin University Of Medicine And Science | Antisense oligonucleotides that target a cryptic splice site in Ush1c as a therapeutic for Usher syndrome |
EP2630241B1 (de) | 2010-10-22 | 2018-10-17 | CuRNA, Inc. | Behandlung von alpha-l-iduronidase (idua)-bedingten erkrankungen mittels hemmung des natürlichen antisense-transkripts gegen idua |
WO2012058268A2 (en) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | Opko Curna Llc | Treatment of interferon-related developmental regulator 1 (ifrd1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ifrd1 |
CN110123830A (zh) | 2010-11-09 | 2019-08-16 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制Eg5和VEGF基因的表达的脂质配制的组合物和方法 |
AU2011325956B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-07-14 | The General Hospital Corporation | Polycomb-associated non-coding RNAs |
WO2012068405A2 (en) | 2010-11-17 | 2012-05-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of alpha synuclein expression |
WO2012071238A2 (en) | 2010-11-23 | 2012-05-31 | Opko Curna Llc | Treatment of nanog related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nanog |
US9150926B2 (en) | 2010-12-06 | 2015-10-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Diagnosis and treatment of adrenocortical tumors using human microRNA-483 |
WO2012078967A2 (en) | 2010-12-10 | 2012-06-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for increasing erythropoietin (epo) production |
EP2648763A4 (de) | 2010-12-10 | 2014-05-14 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Zusammensetzungen und verfahren zur expressionshemmung der gene klf-1 und bcl11a |
WO2012097261A2 (en) | 2011-01-14 | 2012-07-19 | The General Hospital Corporation | Methods targeting mir-128 for regulating cholesterol/lipid metabolism |
US20130338178A1 (en) | 2011-02-02 | 2013-12-19 | The Trustees Of Princeton University | Sirtuin modulators as inhibitors of cytomegalovirus |
EP2670411B1 (de) | 2011-02-02 | 2019-04-10 | Excaliard Pharmaceuticals, Inc. | Auf dem bindegewebe-wachstumsfaktor (ctgf) gerichtete antisense-verbindungen zur verwendung in einem verfahren zur behandlung von keloiden oder hypertrophischen narben |
EP2673381A4 (de) | 2011-02-07 | 2014-10-15 | Univ Toronto | Biosonden und verfahren zu ihrer verwendung |
EP3467109A1 (de) | 2011-02-08 | 2019-04-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomere verbindungen mit bicyclischen nukleotiden und verwendungen davon |
US9562853B2 (en) | 2011-02-22 | 2017-02-07 | Vanderbilt University | Nonaqueous backscattering interferometric methods |
WO2012135246A2 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of tmprss6 gene |
EP2694660B1 (de) | 2011-04-03 | 2018-08-08 | The General Hospital Corporation | Effiziente in-vivo-proteinexpression mittels modifizierter rna (mod-rna) |
US20140186844A1 (en) | 2011-04-26 | 2014-07-03 | Swift Biosciences, Inc. | Polynucleotide primers and probes |
WO2012151268A1 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | University Of Virginia Patent Foundation | Method and system for high throughput optical and label free detection of analytes |
WO2012151289A2 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | University Of Virginia Patent Foundation | Method and system to detect aggregate formation on a substrate |
WO2012151324A1 (en) | 2011-05-02 | 2012-11-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with usher syndrome |
WO2012170347A1 (en) | 2011-06-09 | 2012-12-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
CA2838588C (en) | 2011-06-09 | 2021-09-14 | Curna, Inc. | Treatment of frataxin (fxn) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fxn |
EP2723756B1 (de) | 2011-06-21 | 2020-03-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur hemmung der expression von apolipoprotein-c-iii (apoc3)-genen |
US9068184B2 (en) | 2011-06-21 | 2015-06-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibition of expression of protein C (PROC) genes |
AU2012272970A1 (en) | 2011-06-21 | 2014-02-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) iRNA compositions and methods of use thereof |
US20140235693A1 (en) | 2011-06-23 | 2014-08-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpina1 sirnas: compositions of matter and methods of treatment |
KR102554783B1 (ko) | 2011-06-30 | 2023-07-11 | 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 | B형 간염 바이러스의 유전자 발현 저해용 조성물 및 방법 |
US9222093B2 (en) | 2011-06-30 | 2015-12-29 | The University Of Hong Kong | Two-way, portable riboswitch mediated gene expression control device |
EP3248982A1 (de) | 2011-07-19 | 2017-11-29 | Wave Life Sciences Ltd. | Thiosulfonate reagente zur synthese von funktionalisierten nukleinsäuren |
EP2739735A2 (de) | 2011-08-01 | 2014-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren zur verbesserung der erfolgsquote von hämatopoetischen stammzellentransplantaten |
WO2013022966A1 (en) | 2011-08-11 | 2013-02-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Linkage modified gapped oligomeric compounds and uses thereof |
WO2013033230A1 (en) | 2011-08-29 | 2013-03-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomer-conjugate complexes and their use |
EP2751269B1 (de) | 2011-08-29 | 2016-03-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren und verbindungen für erkrankungen im zusammenhang mit repeat-expansion |
CA2847698C (en) | 2011-09-14 | 2020-09-01 | Northwestern University | Nanoconjugates able to cross the blood-brain barrier |
WO2013040429A1 (en) | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Rana Therapeutics Inc. | Multimeric oligonucleotide compounds |
WO2013040548A2 (en) | 2011-09-17 | 2013-03-21 | Yale University | Fluoride-responsive riboswitchs, fluoride transporters, and methods of use |
AU2012322788B2 (en) | 2011-10-11 | 2018-01-04 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Micrornas in neurodegenerative disorders |
US9243291B1 (en) | 2011-12-01 | 2016-01-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of predicting toxicity |
JP2015502365A (ja) | 2011-12-12 | 2015-01-22 | オンコイミューニン,インコーポレイティド | オリゴヌクレオチドのイン−ビボ送達 |
MX356509B (es) | 2011-12-22 | 2018-05-30 | Alios Biopharma Inc | Nucleósidos sustituidos, nucleótidos y análogos de los mismos. |
ES2842938T3 (es) | 2012-01-11 | 2021-07-15 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para la modulación del empalme de IKBKAP |
WO2013138536A1 (en) | 2012-03-13 | 2013-09-19 | Swift Biosciences, Inc. | Methods and compositions for size-controlled homopolymer tailing of substrate polynucleotides by a nucleic acid polymerase |
US20150031750A1 (en) | 2012-03-15 | 2015-01-29 | The Scripps Research Institute | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
US9610362B2 (en) | 2012-03-16 | 2017-04-04 | Valerion Therapeutics, Llc | Antisense conjugates for decreasing expression of DMPK |
USRE48171E1 (en) | 2012-03-21 | 2020-08-25 | Janssen Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
US9441007B2 (en) | 2012-03-21 | 2016-09-13 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof |
WO2013148283A1 (en) | 2012-03-30 | 2013-10-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome |
WO2013154799A1 (en) | 2012-04-09 | 2013-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tricyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
US9221864B2 (en) | 2012-04-09 | 2015-12-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tricyclic nucleic acid analogs |
US9133461B2 (en) | 2012-04-10 | 2015-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene |
WO2013159108A2 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
CN104704122A (zh) | 2012-04-20 | 2015-06-10 | 艾珀特玛治疗公司 | 产热的miRNA调节剂 |
US9127274B2 (en) | 2012-04-26 | 2015-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serpinc1 iRNA compositions and methods of use thereof |
EP3597741A1 (de) | 2012-04-27 | 2020-01-22 | Duke University | Genetische korrektur mutierter gene |
US9273949B2 (en) | 2012-05-11 | 2016-03-01 | Vanderbilt University | Backscattering interferometric methods |
JP2015523854A (ja) | 2012-05-16 | 2015-08-20 | ラナ セラピューティクス インコーポレイテッド | Smn遺伝子ファミリー発現を調節するための組成物及び方法 |
CA2873809A1 (en) | 2012-05-16 | 2013-11-21 | Rana Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for modulating gene expression |
US20160002624A1 (en) | 2012-05-17 | 2016-01-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide compositions |
US9574193B2 (en) | 2012-05-17 | 2017-02-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression |
WO2013181665A1 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with fibronectin |
WO2013181666A2 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense compounds targeting genes associated with fibronectin |
WO2013184209A1 (en) | 2012-06-04 | 2013-12-12 | Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. | Mif for use in methods of treating subjects with a neurodegenerative disorder |
WO2013185097A1 (en) | 2012-06-08 | 2013-12-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Ultrasound-triggerable agents for tissue engineering |
RU2015104762A (ru) | 2012-07-13 | 2018-08-31 | Уэйв Лайф Сайенсес Лтд. | Хиральный контроль |
PT2872485T (pt) | 2012-07-13 | 2021-03-05 | Wave Life Sciences Ltd | Grupo auxiliar assimétrico |
SG11201500243WA (en) | 2012-07-13 | 2015-04-29 | Shin Nippon Biomedical Lab Ltd | Chiral nucleic acid adjuvant |
US20140038182A1 (en) | 2012-07-17 | 2014-02-06 | Dna Logix, Inc. | Cooperative primers, probes, and applications thereof |
CA2880833A1 (en) | 2012-08-03 | 2014-02-06 | Aptamir Therapeutics, Inc. | Cell-specific delivery of mirna modulators for the treatment of obesity and related disorders |
EP2885312A4 (de) | 2012-08-15 | 2016-01-20 | Isis Pharmaceuticals Inc | Verfahren zur herstellung oligomerer verbindungen unter verwendung von modifizierten kappungsprotokollen |
ES2878650T3 (es) | 2012-09-06 | 2021-11-19 | Univ Chicago | Polinucleótidos antisentido para inducir la omisión de exón y procedimientos de tratamiento de distrofias |
WO2014059353A2 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof |
EP2906255B1 (de) | 2012-10-12 | 2023-02-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense-verbindungen und verwendungen davon |
US20150275208A1 (en) | 2012-10-12 | 2015-10-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Selective antisense compounds and uses thereof |
US9029335B2 (en) | 2012-10-16 | 2015-05-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted 2′-thio-bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
CA2887702C (en) | 2012-10-26 | 2023-08-01 | Geron Corporation | C-myc antisense oligonucleotides and methods for using the same to treat cell-proliferative disorders |
WO2014071358A2 (en) | 2012-11-05 | 2014-05-08 | Foundation Medicine, Inc. | Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof |
US9695475B2 (en) | 2012-12-11 | 2017-07-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Competitive modulation of microRNAs |
EP2945652B1 (de) | 2013-01-18 | 2021-07-07 | Foundation Medicine, Inc. | Verfahren zur behandlung cholangiokarzinom |
ES2817050T3 (es) | 2013-02-04 | 2021-04-06 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos antisentido selectivos y usos de los mismos |
US20150366890A1 (en) | 2013-02-25 | 2015-12-24 | Trustees Of Boston University | Compositions and methods for treating fungal infections |
MX2015012621A (es) | 2013-03-14 | 2016-05-31 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para modular la expresion de tau. |
WO2014153206A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Andes Biotechnologies S.A. | Methods for detecting and treating multiple myeloma |
US9862944B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-01-09 | Andes Biotechnologies S.A. | Antisense oligonucleotides for treatment of cancer stem cells |
CA2904654C (en) | 2013-03-14 | 2023-12-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
WO2014152054A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital assays for mutation detection |
WO2014160871A2 (en) | 2013-03-27 | 2014-10-02 | The General Hospital Corporation | Methods and agents for treating alzheimer's disease |
CN105518146B (zh) | 2013-04-04 | 2022-07-15 | 哈佛学院校长同事会 | 利用CRISPR/Cas系统的基因组编辑的治疗性用途 |
US9677075B2 (en) | 2013-04-23 | 2017-06-13 | Northwestern University | Metal-ligand coordination polymer nanoparticles and methods for making |
JP6995478B2 (ja) | 2013-05-01 | 2022-01-14 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法 |
RU2015154721A (ru) | 2013-05-22 | 2017-06-27 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ RNAi SERPINA1 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
WO2014190157A1 (en) | 2013-05-22 | 2014-11-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Tmprss6 compositions and methods of use thereof |
US20160113911A1 (en) | 2013-06-06 | 2016-04-28 | The General Hospital Corporation | Methods and compositions for the treatment of cancer |
CA2918787A1 (en) | 2013-06-13 | 2014-12-18 | George Tachas | Combination therapy |
AU2014284152B2 (en) | 2013-06-21 | 2020-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of target nucleic acids |
EP3022176B8 (de) | 2013-07-15 | 2019-12-25 | The Regents of the University of California | Eingeschränkte azacyclische analoga von fty720 |
TWI702046B (zh) | 2013-07-19 | 2020-08-21 | 美商Ionis製藥公司 | 用於調節τ蛋白表現之組合物 |
KR20160042917A (ko) | 2013-07-25 | 2016-04-20 | 엑시큐어, 인크. | 예방 및 치료 용도를 위한 면역자극제로서의 구형 핵산-기재 구축물 |
EP3027617A4 (de) | 2013-07-31 | 2017-04-12 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren und verbindungen für erkrankungen im zusammenhang mit repeat-expansion |
AU2014306271A1 (en) | 2013-08-08 | 2016-03-24 | The Scripps Research Institute | A method for the site-specific enzymatic labelling of nucleic acids in vitro by incorporation of unnatural nucleotides |
TW201536329A (zh) | 2013-08-09 | 2015-10-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | 用於調節失養性肌強直蛋白質激酶(dmpk)表現之化合物及方法 |
WO2015042447A1 (en) | 2013-09-20 | 2015-03-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted therapeutic nucleosides and their use |
TWI669393B (zh) | 2013-10-02 | 2019-08-21 | 艾爾妮蘭製藥公司 | 抑制lect2基因表現之組合物及方法 |
CA2925129C (en) | 2013-10-04 | 2023-04-04 | Novartis Ag | 3' end caps for rnai agents for use in rna interference |
CA2925357C (en) | 2013-10-04 | 2024-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the alas1 gene |
CN105792832B (zh) | 2013-10-04 | 2021-03-23 | 诺华股份有限公司 | 用于治疗乙肝病毒的有机化合物 |
US9988627B2 (en) | 2013-10-04 | 2018-06-05 | Novartis Ag | Formats for organic compounds for use in RNA interference |
WO2015054451A1 (en) | 2013-10-09 | 2015-04-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services | Detection of hepatitis delta virus (hdv) for the diagnosis and treatment of sjögren's syndrome and lymphoma |
US11162096B2 (en) | 2013-10-14 | 2021-11-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript |
EP3683321B1 (de) | 2013-10-21 | 2021-12-08 | The General Hospital Corporation | Verfahren im zusammenhang mit zirkulierenden tumorzellclustern und mit der behandlung von krebs |
US10301622B2 (en) | 2013-11-04 | 2019-05-28 | Northwestern University | Quantification and spatio-temporal tracking of a target using a spherical nucleic acid (SNA) |
DK3066219T3 (en) | 2013-11-08 | 2019-03-11 | Ionis Pharmaceuticals Inc | METHODS FOR DETECTING OIGONUCLEOTIDES |
ES2797679T3 (es) | 2013-12-02 | 2020-12-03 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos antisentido y usos de los mismos |
CA2932122C (en) | 2013-12-03 | 2022-04-19 | Northwestern University | Liposomal particles, methods of making same and uses thereof |
CA2844640A1 (en) | 2013-12-06 | 2015-06-06 | The University Of British Columbia | Method for treatment of castration-resistant prostate cancer |
US10385388B2 (en) | 2013-12-06 | 2019-08-20 | Swift Biosciences, Inc. | Cleavable competitor polynucleotides |
KR20210158880A (ko) | 2013-12-12 | 2021-12-31 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 보체 성분 iRNA 조성물 및 이의 이용 방법 |
EP3082840B1 (de) | 2013-12-20 | 2021-03-24 | The General Hospital Corporation | Verfahren und tests im zusammenhang mit zirkulierenden tumorzellen |
EP3095461A4 (de) | 2014-01-15 | 2017-08-23 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chirales nukleinsäure-adjuvans mit immunitätsinduktionswirkung und immunitätsinduktionsaktivator |
JPWO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
US10322173B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-06-18 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent |
KR20230152178A (ko) | 2014-01-16 | 2023-11-02 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 키랄 디자인 |
CA2937539A1 (en) | 2014-02-04 | 2015-08-13 | Genentech, Inc. | Mutant smoothened and methods of using the same |
EA201691587A1 (ru) | 2014-02-11 | 2017-01-30 | Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. | КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ iRNA ДЛЯ КЕТОГЕКСОКИНАЗЫ (KHK) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ |
US10036019B2 (en) | 2014-03-17 | 2018-07-31 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic carbocyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
RS62526B1 (sr) | 2014-03-19 | 2021-11-30 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Kompozicije za modulaciju ekspresije ataksina 2 |
WO2015143245A1 (en) | 2014-03-19 | 2015-09-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating ataxin 2 expression |
EP3126499B1 (de) | 2014-04-01 | 2020-06-24 | Biogen MA Inc. | Zusammensetzungen zur modulierung der sod-1 -expression |
EP3943607A1 (de) | 2014-04-09 | 2022-01-26 | The Scripps Research Institute | Import von unnatürlichen oder modifizierten nukleosid-triphosphaten in zellen mittels nukleinsäure-triphosphattransportern |
WO2015164693A1 (en) | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising alpha-beta-constrained nucleic acid |
EP3137476B1 (de) | 2014-04-28 | 2019-10-09 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verbindungsmodifizierte oligomerverbindungen |
BR112016024850B1 (pt) | 2014-05-01 | 2021-07-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | compostos e composições para modulação da expressão de angptl3 e seus usos |
CA2942570A1 (en) | 2014-05-01 | 2015-11-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating growth hormone receptor expression |
SG11201608502TA (en) | 2014-05-01 | 2016-11-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for modulating complement factor b expression |
WO2015175510A1 (en) | 2014-05-12 | 2015-11-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating a serpinc1-associated disorder |
WO2015179693A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
CA3215908A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiotensinogen (agt) irna compositions and methods of use thereof |
EP3148564B1 (de) | 2014-06-02 | 2020-01-08 | Children's Medical Center Corporation | Verfahren und zusammensetzungen zur immunmodulation |
WO2015187966A1 (en) | 2014-06-04 | 2015-12-10 | Aurasense Therapeutics, Llc | Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications |
AU2015272128B2 (en) | 2014-06-10 | 2021-10-28 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Antisense oligonucleotides useful in treatment of Pompe disease |
TW201620526A (zh) | 2014-06-17 | 2016-06-16 | 愛羅海德研究公司 | 用於抑制α-1抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法 |
US10301624B2 (en) | 2014-06-25 | 2019-05-28 | The General Hospital Corporation | Targeting human satellite II (HSATII) |
US9951327B1 (en) | 2014-07-17 | 2018-04-24 | Integrated Dna Technologies, Inc. | Efficient and rapid method for assembling and cloning double-stranded DNA fragments |
CN107074923B (zh) | 2014-07-31 | 2021-08-03 | Uab研究基金会 | Apoe模拟肽及对清除血浆胆固醇的较高效力 |
CN113069551A (zh) | 2014-08-19 | 2021-07-06 | 西北大学 | 蛋白质/寡核苷酸核-壳纳米颗粒治疗剂 |
AU2015305440A1 (en) | 2014-08-20 | 2017-03-16 | Northwestern University | Biocompatible infinite coordination polymer nanoparticle-nucleic acid conjugates for antisense gene regulation |
WO2016033424A1 (en) | 2014-08-29 | 2016-03-03 | Genzyme Corporation | Methods for the prevention and treatment of major adverse cardiovascular events using compounds that modulate apolipoprotein b |
US10060921B2 (en) | 2014-08-29 | 2018-08-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating transthyretin (TTR) mediated amyloidosis |
CA2959386C (en) | 2014-08-29 | 2024-06-04 | Lee Adam Wheeler | Methods and compositions for the treatment of cancer |
US10436802B2 (en) | 2014-09-12 | 2019-10-08 | Biogen Ma Inc. | Methods for treating spinal muscular atrophy |
WO2016040589A1 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting complement component c5 and methods of use thereof |
US10556020B2 (en) | 2014-09-26 | 2020-02-11 | University Of Massachusetts | RNA-modulating agents |
JOP20200115A1 (ar) | 2014-10-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات وطرق لتثبيط التعبير الجيني عن hao1 (حمض أوكسيداز هيدروكسيلي 1 (أوكسيداز جليكولات)) |
EP3207138B1 (de) | 2014-10-17 | 2020-07-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Gegen aminolävulinsäuresynthase-1 (alas1) gerichtete polynukleotidmittel und verwendungen davon |
WO2016069694A2 (en) | 2014-10-30 | 2016-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting serpinc1 (at3) and methods of use thereof |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
US10287584B2 (en) | 2014-11-12 | 2019-05-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the modulation of COMP |
AU2015350120B2 (en) | 2014-11-17 | 2021-05-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein C3 (APOC3) iRNA compositions and methods of use thereof |
JP2017537619A (ja) | 2014-11-21 | 2017-12-21 | ノースウェスタン ユニバーシティ | 球状核酸ナノ粒子複合体の配列特異的細胞内取込 |
EP3229842B1 (de) | 2014-12-08 | 2022-07-06 | The Board of Regents of The University of Texas System | Lipokationische polymere und verwendungen davon |
EP4372091A2 (de) | 2014-12-12 | 2024-05-22 | Tod M. Woolf | Zusammensetzungen und verfahren zur bearbeitung von nukleinsäuren in zellen unter verwendung von oligonukleotiden |
US9688707B2 (en) | 2014-12-30 | 2017-06-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic morpholino compounds and oligomeric compounds prepared therefrom |
WO2016112132A1 (en) | 2015-01-06 | 2016-07-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript |
US10538763B2 (en) | 2015-01-16 | 2020-01-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulation of DUX4 |
EP3247988A4 (de) | 2015-01-23 | 2018-12-19 | Vanderbilt University | Robustes interferometer und verfahren zur verwendung davon |
JP6929791B2 (ja) | 2015-02-09 | 2021-09-01 | デューク ユニバーシティ | エピゲノム編集のための組成物および方法 |
CA2976445A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
US20180200387A1 (en) | 2015-02-23 | 2018-07-19 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies |
US11129844B2 (en) | 2015-03-03 | 2021-09-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating MECP2 expression |
CA2984237A1 (en) | 2015-03-27 | 2016-10-06 | President And Fellows Of Harvard College | Modified t cells and methods of making and using the same |
WO2016164463A1 (en) | 2015-04-07 | 2016-10-13 | The General Hospital Corporation | Methods for reactivating genes on the inactive x chromosome |
US10745702B2 (en) | 2015-04-08 | 2020-08-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the LECT2 gene |
LT3283500T (lt) | 2015-04-08 | 2020-12-10 | The University Of Chicago | Kompozicijos ir būdai, skirti 2c tipo dubens-žasto raumenų distrofijos korekcijai, panaudojant egzono peršokimą |
WO2016167780A1 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript |
WO2016201301A1 (en) | 2015-06-12 | 2016-12-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions and methods of use thereof |
WO2016205323A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotde agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof |
WO2016209862A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof |
AU2016282986A1 (en) | 2015-06-26 | 2018-02-01 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Cancer therapy targeting tetraspanin 33 (tspan33) in myeloid derived suppressor cells |
CA2991045A1 (en) | 2015-06-29 | 2017-01-05 | Caris Science, Inc. | Therapeutic oligonucleotides binding c1q |
JP2018519811A (ja) | 2015-06-29 | 2018-07-26 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 修飾crispr rna及び修飾単一crispr rnaならびにその使用 |
CA2991894A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2) |
WO2017011286A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (igfals) and insulin-like growth factor 1 (igf-1) irna compositions and methods of use thereof |
MA43072A (fr) | 2015-07-22 | 2018-05-30 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
AU2016298317B2 (en) | 2015-07-28 | 2021-02-18 | Caris Science, Inc. | Targeted oligonucleotides |
WO2017021961A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods of screening for riboswitches and attenuators |
US10130651B2 (en) | 2015-08-07 | 2018-11-20 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNAi Therapy for Hepatitis B Virus Infection |
CN108368507B (zh) | 2015-09-02 | 2022-03-22 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)的iRNA组合物及其使用方法 |
JP7041616B2 (ja) | 2015-09-14 | 2022-03-24 | ザ ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティー オブ テキサス システム | リポカチオン性デンドリマーおよびその使用 |
EP3353328A4 (de) | 2015-09-24 | 2019-06-12 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulatoren der kras-expression |
EP3352753A4 (de) | 2015-09-24 | 2019-03-13 | The Regents of The University of California | Synthetische sphingolipid-ähnliche moleküle, arzneimittel, verfahren zu deren synthese und behandlungsverfahren |
US20190048340A1 (en) | 2015-09-24 | 2019-02-14 | Crispr Therapeutics Ag | Novel family of rna-programmable endonucleases and their uses in genome editing and other applications |
WO2017053781A1 (en) | 2015-09-25 | 2017-03-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression |
WO2017058672A1 (en) | 2015-09-29 | 2017-04-06 | The Regents Of The University Of Michigan Office Of Technology Transfer | Biodegradable hydrogel for tissue expansion |
US11970710B2 (en) | 2015-10-13 | 2024-04-30 | Duke University | Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells |
JP2019507579A (ja) | 2015-10-28 | 2019-03-22 | クリスパー セラピューティクス アーゲー | デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置のための材料および方法 |
ES2938883T3 (es) | 2015-11-05 | 2023-04-17 | Los Angeles Childrens Hospital | Oligo antisentido para su uso en el tratamiento de la leucemia mieloide aguda |
WO2017077386A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of glycogen storage disease type 1a |
PE20181180A1 (es) | 2015-11-06 | 2018-07-20 | Ionis Pharmaceuticals Inc | MODULAR LA EXPRESION DE APOLIPOPROTEINA (a) |
US20190046555A1 (en) | 2015-11-06 | 2019-02-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds for use in therapy |
AU2016355178B9 (en) | 2015-11-19 | 2019-05-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Lymphocyte antigen CD5-like (CD5L)-interleukin 12B (p40) heterodimers in immunity |
EP3967758A1 (de) | 2015-12-01 | 2022-03-16 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von alpha-1-antitrypsin-defizienz |
EP3389670A4 (de) | 2015-12-04 | 2020-01-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verfahren zur behandlung von brustkrebs |
AU2015416656B2 (en) | 2015-12-07 | 2023-02-23 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Enzymatic replacement therapy and antisense therapy for Pompe disease |
WO2017106767A1 (en) | 2015-12-18 | 2017-06-22 | The Scripps Research Institute | Production of unnatural nucleotides using a crispr/cas9 system |
EP3394260B1 (de) | 2015-12-23 | 2021-02-17 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von amyothrophischer lateraler sklerose und/oder frontotemporaler demenz |
US10907160B2 (en) | 2016-01-05 | 2021-02-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing LRRK2 expression |
WO2017132483A1 (en) | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Vanderbilt University | Free-solution response function interferometry |
EP3411078A1 (de) | 2016-02-02 | 2018-12-12 | Crispr Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von schwerer kombinierter immundefizienz (scid) oder omenn-syndrom |
JP2019509721A (ja) | 2016-02-04 | 2019-04-11 | キュリス,インコーポレイテッド | 突然変異体スムースンド及びその使用方法 |
US20190112353A1 (en) | 2016-02-18 | 2019-04-18 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of severe combined immunodeficiency (scid) or omenn syndrome |
US11234996B2 (en) | 2016-02-25 | 2022-02-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Treatment methods for fibrosis targeting SMOC2 |
EP3423581A4 (de) | 2016-03-04 | 2020-03-04 | Rhode Island Hospital | Targeting von mikrorna zur krebsbehandlung |
CA3013797A1 (en) | 2016-03-09 | 2017-09-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting pmp22 expression |
CA3013799A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modulating keap1 |
WO2017161168A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of dyrk1b expression |
WO2017158422A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hereditary haemochromatosis |
US10731166B2 (en) | 2016-03-18 | 2020-08-04 | Caris Science, Inc. | Oligonucleotide probes and uses thereof |
CA3017532A1 (en) | 2016-04-13 | 2017-10-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing c9orf72 expression |
EP3445388B1 (de) | 2016-04-18 | 2024-04-17 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materialien und verfahren zur behandlung von hämoglobinopathien |
MA45295A (fr) | 2016-04-19 | 2019-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser |
WO2017191503A1 (en) | 2016-05-05 | 2017-11-09 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
BR112018072362A2 (pt) | 2016-05-06 | 2019-02-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | oligonucleotídeos conjugados a uma unidade de ligando do receptor glp-1 e seus usos |
CA3024129A1 (en) | 2016-05-16 | 2017-11-23 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Cationic sulfonamide amino lipids and amphiphilic zwitterionic amino lipids |
IL306052A (en) | 2016-05-25 | 2023-11-01 | Caris Science Inc | Oligonucleotide probes and their uses |
US20190256845A1 (en) | 2016-06-10 | 2019-08-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT C5 iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA (PNH) |
WO2017218789A1 (en) | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Streck, Inc. | Assays and methods for determining microbial resistance |
EP3471781A4 (de) | 2016-06-17 | 2020-05-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulierung der gys1-expression |
ES2929047T3 (es) | 2016-06-24 | 2022-11-24 | Scripps Research Inst | Transportador de nucleósido trifosfato novedoso y usos del mismo |
US11427838B2 (en) | 2016-06-29 | 2022-08-30 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materials and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 (DM1) and other related disorders |
WO2018002783A1 (en) | 2016-06-29 | 2018-01-04 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of friedreich ataxia and other related disorders |
US11174469B2 (en) | 2016-06-29 | 2021-11-16 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) and other related disorders |
CN109843914B (zh) | 2016-07-06 | 2024-03-15 | 沃泰克斯药物股份有限公司 | 用于治疗疼痛相关病症的材料和方法 |
WO2018007976A1 (en) | 2016-07-06 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of pain related disorders |
WO2018007871A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of transthyretin amyloidosis |
WO2018013525A1 (en) | 2016-07-11 | 2018-01-18 | Translate Bio Ma, Inc. | Nucleic acid conjugates and uses thereof |
PL3484524T3 (pl) | 2016-07-15 | 2023-03-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Związki i sposoby modulacji smn2 |
WO2018020323A2 (en) | 2016-07-25 | 2018-02-01 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of fatty acid disorders |
JOP20170161A1 (ar) | 2016-08-04 | 2019-01-30 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب |
NL2017295B1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-14 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Antisense oligomeric compound for Pompe disease |
NL2017294B1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-14 | Univ Erasmus Med Ct Rotterdam | Natural cryptic exon removal by pairs of antisense oligonucleotides. |
JP2019532027A (ja) | 2016-08-17 | 2019-11-07 | ソルスティス バイオロジクス,リミティッド | ポリヌクレオチド構築物 |
WO2018039629A2 (en) | 2016-08-25 | 2018-03-01 | Northwestern University | Micellar spherical nucleic acids from thermoresponsive, traceless templates |
SG10201607303YA (en) | 2016-09-01 | 2018-04-27 | Agency Science Tech & Res | Antisense oligonucleotides to induce exon skipping |
WO2018055577A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | Synthena Ag | Mixed tricyclo-dna, 2'-modified rna oligonucleotide compositions and uses thereof |
JOP20190065A1 (ar) | 2016-09-29 | 2019-03-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau |
CN109661233A (zh) | 2016-10-06 | 2019-04-19 | Ionis 制药公司 | 缀合低聚化合物的方法 |
SG10201609048RA (en) | 2016-10-28 | 2018-05-30 | Agency Science Tech & Res | Antisense oligonucleotides |
US11459568B2 (en) | 2016-10-31 | 2022-10-04 | University Of Massachusetts | Targeting microRNA-101-3p in cancer therapy |
JOP20190104A1 (ar) | 2016-11-10 | 2019-05-07 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3 |
TWI788312B (zh) | 2016-11-23 | 2023-01-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 絲胺酸蛋白酶抑制因子A1 iRNA組成物及其使用方法 |
WO2018102745A1 (en) | 2016-12-02 | 2018-06-07 | Cold Spring Harbor Laboratory | Modulation of lnc05 expression |
CN110191955B (zh) | 2016-12-13 | 2024-05-31 | 西雅图儿童医院(Dba西雅图儿童研究所) | 在体外和体内对工程化的细胞中表达的化学物质诱导的信号传导复合物进行外源性药物激活的方法 |
KR20190098181A (ko) | 2016-12-16 | 2019-08-21 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스티레틴(TTR) iRNA 조성물을 사용하여 TTR-관련 질병을 치료하거나 예방하는 방법 |
US10450565B2 (en) | 2017-01-10 | 2019-10-22 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | Alpha-1 antitrypsin (AAT) RNAi agents, compositions including AAT RNAi agents, and methods of use |
BR112019014841A2 (pt) | 2017-01-23 | 2020-04-28 | Regeneron Pharma | rna guia, uso do rna guia, rna antissentido, sirna ou shrna, uso do rna antissentido, do sirna ou do shrna, ácido nucleico isolado, vetor, composição, célula, e, métodos para modificar um gene hsd17b13 em uma célula, para diminuir a expressão de um gene hsd17b13 em uma célula, para modificar uma célula e para tratar um indivíduo que não é portador da variante de hsd17b13 |
US20200040061A1 (en) | 2017-02-22 | 2020-02-06 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of early onset parkinson's disease (park1) and other synuclein, alpha (snca) gene related conditions or disorders |
EP3585899A1 (de) | 2017-02-22 | 2020-01-01 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von primärer hyperoxalurie typ 1 (ph1) und anderen mit dem alanin-glyoxylataminotransferase (agxt)-gen assoziierten erkrankungen oder störungen |
JP2020508056A (ja) | 2017-02-22 | 2020-03-19 | クリスパー・セラピューティクス・アクチェンゲゼルシャフトCRISPR Therapeutics AG | 遺伝子編集のための組成物および方法 |
EP3585898A1 (de) | 2017-02-22 | 2020-01-01 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von spinozerebellärer ataxie typ 1 (sca1) und anderen mit dem gen des proteins von spinozerebellärer ataxie typ 1 (atxn1) assoziierten erkrankungen oder störungen |
EP3585900B1 (de) | 2017-02-22 | 2022-12-21 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und methoden zur behandlung von spinocerebellar ataxia typ 2 (sca2) und anderen spinocerebellar ataxia typ 2 protein (atxn2) gen verwandten erkrankungen oder störungen |
US11180756B2 (en) | 2017-03-09 | 2021-11-23 | Ionis Pharmaceuticals | Morpholino modified oligomeric compounds |
JOP20190215A1 (ar) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
WO2018183969A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | California Institute Of Technology | Barcoded rapid assay platform for efficient analysis of candidate molecules and methods of making and using the platform |
SG11201909516VA (en) | 2017-04-14 | 2019-11-28 | Tollnine Inc | Immunomodulating polynucleotides, antibody conjugates thereof, and methods of their use |
CA3059446A1 (en) | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (hbv) infection |
WO2018193428A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Synthena Ag | Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof |
CA3059321A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Synthena Ag | Modified oligomeric compounds comprising tricyclo-dna nucleosides and uses thereof |
US20200384115A1 (en) | 2017-04-21 | 2020-12-10 | The Broad Institute , Inc. | Targeted delivery to beta cells |
WO2018209270A1 (en) | 2017-05-11 | 2018-11-15 | Northwestern University | Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas) |
US20180325955A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for engineering cells and uses thereof in immuno-oncology |
EP3645546A4 (de) | 2017-06-30 | 2021-12-01 | Solstice Biologics, Ltd. | Chirale phosphoramidithilfsmittel und verfahren zu ihrer verwendung |
AR112756A1 (es) | 2017-07-11 | 2019-12-11 | Synthorx Inc | Incorporación de nucleótidos no naturales, y su método |
CA3069868A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof |
EP3652186A4 (de) | 2017-07-13 | 2021-03-31 | Northwestern University | Allgemeines und direktes verfahren zur herstellung von oligonukleotidfunktionalisierten metallorganischen gerüstnanopartikeln |
KR20200035092A (ko) | 2017-08-03 | 2020-04-01 | 신톡스, 인크. | 자가면역 질환의 치료를 위한 사이토카인 접합체 |
AU2018318231A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-02-13 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of the notch signaling pathway for treatment of respiratory disorders |
WO2019051173A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | MODULATORS OF SMAD7 EXPRESSION |
US11999953B2 (en) | 2017-09-13 | 2024-06-04 | The Children's Medical Center Corporation | Compositions and methods for treating transposon associated diseases |
AU2018336806A1 (en) | 2017-09-19 | 2020-05-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating transthyretin (TTR) mediated amyloidosis |
BR112020007502A2 (pt) | 2017-10-17 | 2020-10-06 | Crispr Therapeutics Ag | composições e métodos para edição gênica para hemofilia a |
EP3701029A1 (de) | 2017-10-26 | 2020-09-02 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Materialien und verfahren zur behandlung von hämoglobinopathien |
SG11202002940QA (en) | 2017-11-01 | 2020-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
TWI809004B (zh) | 2017-11-09 | 2023-07-21 | 美商Ionis製藥公司 | 用於降低snca表現之化合物及方法 |
EP3707256A1 (de) | 2017-11-09 | 2020-09-16 | CRISPR Therapeutics AG | Selbstinaktivierende (sin) crispr/cas- oder crispr/cpf1-systeme und verwendungen davon |
US20200385719A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof |
EP3714054A1 (de) | 2017-11-20 | 2020-09-30 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serum-amyloid p-komponente (apcs) irna zusammensetzungen und verfahren zu deren verwendung |
EP3714055A1 (de) | 2017-11-21 | 2020-09-30 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung von autosomal-dominanter retinitis pigmentosa |
KR20200106159A (ko) | 2017-12-05 | 2020-09-11 | 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 크리스퍼-cas9 변형된 cd34+ 인간 조혈 줄기 및 전구 세포 및 그의 용도 |
JP2021506239A (ja) | 2017-12-14 | 2021-02-22 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 複合アンチセンス化合物及びその使用 |
JP2021506251A (ja) | 2017-12-14 | 2021-02-22 | クリスパー セラピューティクス アーゲー | 新規rnaプログラム可能エンドヌクレアーゼ系、ならびにゲノム編集および他の適用におけるその使用 |
CN111727252A (zh) | 2017-12-18 | 2020-09-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 高速泳动族盒-1(HMGB1)iRNA组合物及其使用方法 |
EP3728594A1 (de) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | CRISPR Therapeutics AG | Materialien und verfahren zur behandlung des usher-syndroms typ 2a |
WO2019126641A2 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of frataxin expression |
WO2019123430A1 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Casebia Therapeutics Llp | Materials and methods for treatment of usher syndrome type 2a and/or non-syndromic autosomal recessive retinitis pigmentosa (arrp) |
MA51637A (fr) | 2018-01-12 | 2020-11-18 | Bayer Healthcare Llc | Compositions et méthodes pour l'édition génique par ciblage de la transferrine |
JP2021511072A (ja) | 2018-01-15 | 2021-05-06 | アイオニス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | Dnm2発現のモジュレーター |
US20200369639A1 (en) | 2018-01-19 | 2020-11-26 | Synthena Ag | Tricyclo-dna nucleoside precursors and processes for preparing the same |
WO2019147743A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Massachusetts Institute Of Technology | Structure-guided chemical modification of guide rna and its applications |
WO2019150196A1 (en) | 2018-02-05 | 2019-08-08 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies |
MA51788A (fr) | 2018-02-05 | 2020-12-16 | Vertex Pharma | Substances et méthodes pour traiter des hémoglobinopathies |
CA3090901A1 (en) | 2018-02-12 | 2019-08-15 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified compounds and uses thereof |
EP3752616A1 (de) | 2018-02-16 | 2020-12-23 | CRISPR Therapeutics AG | Zusammensetzungen und verfahren zur geneditierung durch targeting von fibrinogen-alpha |
BR112020017016A2 (pt) | 2018-02-26 | 2020-12-29 | Synthorx, Inc. | Conjugados da il-15 e usos dos mesmos |
CN111886011B (zh) | 2018-03-02 | 2024-03-08 | Ionis制药公司 | Irf4表达的调节剂 |
EP3759127A4 (de) | 2018-03-02 | 2022-03-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verbindungen und verfahren zur modulation des amyloid-beta-vorläuferproteins |
WO2019183150A1 (en) | 2018-03-19 | 2019-09-26 | Casebia Therapeutics Limited Liability Partnership | Novel rna-programmable endonuclease systems and uses thereof |
US11661601B2 (en) | 2018-03-22 | 2023-05-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating FMR1 expression |
EP4051799A2 (de) | 2018-03-30 | 2022-09-07 | Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn | Aptamere zur gezielten aktivierung von t-zellvermittelter immunität |
JP2021520781A (ja) | 2018-04-06 | 2021-08-26 | チルドレンズ メディカル センター コーポレーションChildren’S Medical Center Corporation | 体細胞リプログラミングおよびインプリンティングのモジュレートのための組成物および方法 |
EP3775204A4 (de) | 2018-04-11 | 2021-12-29 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulatoren der ezh2-expression |
WO2019204668A1 (en) | 2018-04-18 | 2019-10-24 | Casebia Therapeutics Limited Liability Partnership | Compositions and methods for knockdown of apo(a) by gene editing for treatment of cardiovascular disease |
AU2019260687B2 (en) | 2018-04-27 | 2022-09-22 | Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) | Rapamycin resistant cells |
EP3788366B1 (de) | 2018-05-03 | 2023-05-17 | The Trustees of Wheaton College | Verbesserte membranen für detektionsanwendungen mit nanoporen |
CA3098144A1 (en) | 2018-05-09 | 2019-11-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing atxn3 expression |
EP3799604A4 (de) | 2018-05-09 | 2022-09-07 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Verbindungen und verfahren zur verminderung der fxi-expression |
TW202016304A (zh) | 2018-05-14 | 2020-05-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 血管收縮素原(AGT)iRNA組成物及其使用方法 |
WO2019241648A1 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for increasing stmn2 expression |
TWI833770B (zh) | 2018-06-27 | 2024-03-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法 |
JP7411632B2 (ja) | 2018-07-25 | 2024-01-11 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | Atxn2発現を低減するための化合物及び方法 |
CA3106701A1 (en) | 2018-08-13 | 2020-02-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Hepatitis b virus (hbv) dsrna agent compositions and methods of use thereof |
TW202020157A (zh) | 2018-08-16 | 2020-06-01 | 美商艾爾妮蘭製藥公司 | 用於抑制lect2基因表現之組合物及方法 |
US11939582B2 (en) | 2018-08-20 | 2024-03-26 | Rogcon, Inc. | Antisense oligonucleotides targeting SCN2A for the treatment of SCN1A encephalopathies |
EP3843845A4 (de) | 2018-08-29 | 2022-05-11 | University Of Massachusetts | Hemmung von proteinkinasen zur behandlung von friedreich-ataxie |
EP3620520A1 (de) | 2018-09-10 | 2020-03-11 | Universidad del Pais Vasco | Neuartiges target zur behandlung einer stoffwechselerkrankung in einem individuum |
EP3849584A4 (de) | 2018-09-14 | 2022-06-22 | Northwestern University | Programmierung von proteinpolymerisation mit dna |
US20210332367A1 (en) | 2018-09-18 | 2021-10-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | KETOHEXOKINASE (KHK) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
TW202023573A (zh) | 2018-09-19 | 2020-07-01 | 美商Ionis製藥公司 | Pnpla3表現之調節劑 |
WO2020081843A1 (en) | 2018-10-17 | 2020-04-23 | Casebia Therapeutics Limited Liability Partnership | Compositions and methods for delivering transgenes |
US10913951B2 (en) | 2018-10-31 | 2021-02-09 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure |
TW202028222A (zh) | 2018-11-14 | 2020-08-01 | 美商Ionis製藥公司 | Foxp3表現之調節劑 |
EA202191342A1 (ru) | 2018-11-15 | 2021-08-10 | Айонис Фармасьютикалз, Инк. | Модуляторы экспрессии irf5 |
SG11202103794QA (en) | 2018-11-21 | 2021-05-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for reducing prion expression |
US20210332495A1 (en) | 2018-12-06 | 2021-10-28 | Northwestern University | Protein Crystal Engineering Through DNA Hybridization Interactions |
CA3123617A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Praxis Precision Medicines, Inc. | Compositions and methods for the treatment of kcnt1 related disorders |
AU2019405961A1 (en) | 2018-12-20 | 2021-07-22 | Humabs Biomed Sa | Combination HBV therapy |
AU2019406214A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-08-05 | Northwestern University | Use of annexins in preventing and treating muscle membrane injury |
US20220062299A1 (en) | 2018-12-26 | 2022-03-03 | Northwestern University | Use of glucocorticoid steroids in preventing and treating conditions of muscle wasting, aging and metabolic disorder |
BR112021013956A2 (pt) | 2019-01-16 | 2021-09-21 | Genzyme Corporation | Composições de irna de serpinc1 e métodos de uso das mesmas |
SG11202107399WA (en) | 2019-01-31 | 2021-08-30 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulators of yap1 expression |
TW202045208A (zh) | 2019-02-06 | 2020-12-16 | 美商欣爍克斯公司 | Il-2結合物及其使用方法 |
SG11202108357PA (en) | 2019-02-15 | 2021-08-30 | Crispr Therapeutics Ag | Gene editing for hemophilia a with improved factor viii expression |
US11279932B2 (en) | 2019-02-27 | 2022-03-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of MALAT1 expression |
WO2020181144A1 (en) | 2019-03-06 | 2020-09-10 | Northwestern University | Hairpin-like oligonucleotide-conjugated spherical nucleic acid |
EP3937986A4 (de) | 2019-03-11 | 2023-04-12 | Ochsner Health System | Mikrorna-regulatorisches netzwerk als biomarker von anfällen in patienten mit spontaner intrazerebraler blutung |
AU2020239225A1 (en) | 2019-03-12 | 2021-09-30 | Bayer Healthcare Llc | Novel high fidelity RNA-programmable endonuclease systems and uses thereof |
KR20210144822A (ko) | 2019-03-29 | 2021-11-30 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | Ube3a-ats를 조절하기 위한 화합물 및 방법 |
BR112021022806A2 (pt) | 2019-05-13 | 2022-01-25 | Vir Biotechnology Inc | Método para tratar a infecção crônica por hbv, sirna, usos de um sirna, e de um sirna e peg-ifna e de um sirna, peg-ifna e um nrti, método, composição para uso ou uso e kit |
US20220243203A1 (en) | 2019-05-28 | 2022-08-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing fus expression |
EP3976834A1 (de) | 2019-05-31 | 2022-04-06 | Streck, Inc. | Nachweis von antibiotikaresistenzgenen |
AU2020291535A1 (en) | 2019-06-14 | 2022-01-20 | The Scripps Research Institute | Reagents and methods for replication, transcription, and translation in semi-synthetic organisms |
WO2021021673A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating gfap |
EP4007812A1 (de) | 2019-08-01 | 2022-06-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna-zusammensetzungen der serpinfamilie f element 2 (serpinf2) und verfahren zu deren verwendung |
WO2021022108A2 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
EP4013870A1 (de) | 2019-08-13 | 2022-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna-wirkstoffzusammensetzungen der kleinen ribosomalen proteinuntereinheit 25 (rps25) und verfahren zu ihrer verwendung |
CN114555621A (zh) | 2019-08-15 | 2022-05-27 | Ionis制药公司 | 键修饰的寡聚化合物及其用途 |
TW202120128A (zh) | 2019-08-15 | 2021-06-01 | 美商欣爍克斯公司 | 使用il-2接合物之免疫腫瘤學組合療法 |
TW202122401A (zh) | 2019-08-23 | 2021-06-16 | 美商欣爍克斯公司 | 新穎之il-15接合物及其用途 |
MX2022002689A (es) | 2019-09-03 | 2022-04-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen de quimiotaxina derivada de celulas de leucocitos 2 (lect2). |
BR112022003335A2 (pt) | 2019-09-10 | 2022-05-24 | Synthorx Inc | Conjugados de il-2 e métodos de uso para tratar doenças autoimunes |
US20220389429A1 (en) | 2019-10-04 | 2022-12-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing ugt1a1 gene expression |
EP4045062A1 (de) | 2019-10-14 | 2022-08-24 | Astrazeneca AB | Modulatoren der pnpla3-expression |
EP4045652A1 (de) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna-zusammensetzungen eines elements der solute-carrier-familie und verwendungsverfahren dafür |
CA3158320A1 (en) | 2019-10-22 | 2021-04-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
WO2021086623A1 (en) | 2019-10-31 | 2021-05-06 | The Trustees Of Wheaton College | Design and characterization of multilayered structures for support of lipid bilayers |
JP2023500661A (ja) | 2019-11-01 | 2023-01-10 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | ハンチンチン(HTT)iRNA剤組成物およびその使用方法 |
US20230040920A1 (en) | 2019-11-01 | 2023-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for silencing dnajb1-prkaca fusion gene expression |
TW202131952A (zh) | 2019-11-04 | 2021-09-01 | 美商欣爍克斯公司 | 介白素10接合物及其用途 |
PE20230179A1 (es) | 2019-11-13 | 2023-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Metodos y composiciones para el tratamiento de un trastorno asociado con angiotensinogeno (agt) |
US20230056569A1 (en) | 2019-11-22 | 2023-02-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
AU2020391215A1 (en) | 2019-11-27 | 2022-06-02 | Bayer Healthcare Llc | Methods of synthesizing RNA molecules |
TW202140509A (zh) | 2019-12-13 | 2021-11-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 人類染色體9開讀框72(C9ORF72)iRNA劑組成物及其使用方法 |
WO2021126734A1 (en) | 2019-12-16 | 2021-06-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof |
EP4077674A1 (de) | 2019-12-18 | 2022-10-26 | Alia Therapeutics S.R.L. | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von retinitis pigmentosa |
WO2021142245A1 (en) | 2020-01-10 | 2021-07-15 | Translate Bio, Inc. | Compounds, pharmaceutical compositions and methods for modulating expression of muc5b in lung cells and tissues |
WO2021154705A1 (en) | 2020-01-27 | 2021-08-05 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Rab13 and net1 antisense oligonucleotides to treat metastatic cancer |
WO2021154941A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c5 irna compositions for use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
KR20220140593A (ko) | 2020-02-10 | 2022-10-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Vegf-a 발현을 사일런싱하기 위한 조성물 및 방법 |
EP4107265A1 (de) | 2020-02-18 | 2022-12-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein-c3 (apoc3)-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon |
MX2022010515A (es) | 2020-02-28 | 2022-11-14 | Tallac Therapeutics Inc | Conjugacion mediada por transglutaminasa. |
KR20220148230A (ko) | 2020-02-28 | 2022-11-04 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | Smn2를 조절하기 위한 화합물 및 방법 |
EP4114947A1 (de) | 2020-03-05 | 2023-01-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Komplementkomponenten-c3-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon zur behandlung oder prävention von mit komplementkomponenten-c3-assoziierten erkrankungen |
CN115485383A (zh) | 2020-03-06 | 2022-12-16 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 己酮糖激酶(KHK)iRNA组合物及其使用方法 |
WO2021188611A1 (en) | 2020-03-18 | 2021-09-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant |
CN116209759A (zh) | 2020-03-26 | 2023-06-02 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 冠状病毒iRNA组合物及其使用方法 |
EP4127171A2 (de) | 2020-03-30 | 2023-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur ausschaltung der dnajc15-genexpression |
JP2023520582A (ja) | 2020-04-06 | 2023-05-17 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Myoc発現をサイレンシングするための組成物および方法 |
TW202204617A (zh) | 2020-04-07 | 2022-02-01 | 美商艾爾妮蘭製藥公司 | 用於靜默scn9a表現之組合物及方法 |
WO2021206917A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2021206922A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
CN115955972A (zh) | 2020-04-27 | 2023-04-11 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 载脂蛋白E(APOE)iRNA剂组合物及其使用方法 |
IL297680A (en) | 2020-04-30 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | IRNA compounds complement factor b (cfb) and methods of using them |
WO2021222768A2 (en) | 2020-05-01 | 2021-11-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating atxn1 |
EP4150088A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten bearbeitung von argininosuccinat-synthetase (ass1) |
EP4150087A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten bearbeitung des gap-junction-proteins beta 2 (gjb2) |
WO2021231685A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1) |
EP4150076A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten bearbeitung von methyl-cpg-bindendem protein 2 (mecp2) |
EP4150089A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten bearbeitung von retinosin 1 (rs1) |
EP4150078A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten editierung von argininosuccinat-lyase (asl) |
WO2021231692A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof) |
EP4150086A1 (de) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen zur adar-vermittelten bearbeitung von leucinreicher repeat-kinase 2 (lrrk2) |
WO2021237097A1 (en) | 2020-05-21 | 2021-11-25 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting marc1 gene expression |
AR122534A1 (es) | 2020-06-03 | 2022-09-21 | Triplet Therapeutics Inc | Métodos para el tratamiento de los trastornos de expansión por repetición de nucleótidos asociados con la actividad de msh3 |
EP4162050A1 (de) | 2020-06-09 | 2023-04-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon zur verabreichung durch inhalation |
KR20230026455A (ko) | 2020-06-18 | 2023-02-24 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 크산틴 데하이드로게나제 (XDH) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 |
JP2023531520A (ja) | 2020-06-24 | 2023-07-24 | ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド | 操作されたb型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用 |
CA3183834A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-30 | Giovanni Abbadessa | Immuno oncology combination therapy with il-2 conjugates and anti-egfr antibodies |
CA3185749A1 (en) | 2020-06-29 | 2022-01-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating plp1 |
TW202227102A (zh) | 2020-09-22 | 2022-07-16 | 瑞典商阿斯特捷利康公司 | 治療脂肪肝病之方法 |
EP4217489A1 (de) | 2020-09-24 | 2023-08-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidylpeptidase 4 (dpp4)-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon |
US20220290136A1 (en) | 2020-09-30 | 2022-09-15 | Crispr Therapeutics Ag | Materials and methods for treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
EP3978608A1 (de) | 2020-10-05 | 2022-04-06 | SQY Therapeutics | Oligomere verbindung zur dystrophinrettung in dmd-patienten während des skipping exon-51 |
JP2023544413A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Gタンパク質共役受容体75(GPR75)iRNA組成物およびその使用方法 |
CA3194880A1 (en) | 2020-10-09 | 2022-04-14 | Carolina E. CAFFARO | Immuno oncology therapies with il-2 conjugates |
EP4225376A1 (de) | 2020-10-09 | 2023-08-16 | Synthorx, Inc. | Immunonkologische kombinationstherapie mit il-2-konjugaten und pembrolizumab |
CA3198823A1 (en) | 2020-10-21 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating primary hyperoxaluria |
WO2022087329A1 (en) | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
TW202237841A (zh) | 2020-11-13 | 2022-10-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 凝血因子V(F5)iRNA組成物及其使用方法 |
TW202227101A (zh) | 2020-11-18 | 2022-07-16 | 美商Ionis製藥公司 | 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法 |
WO2022106695A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | Alpha Anomeric Sas | Nucleic acid duplexes |
US11987795B2 (en) | 2020-11-24 | 2024-05-21 | The Broad Institute, Inc. | Methods of modulating SLC7A11 pre-mRNA transcripts for diseases and conditions associated with expression of SLC7A11 |
CA3201452A1 (en) | 2020-12-01 | 2022-06-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression |
WO2022125490A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof |
GB2603454A (en) | 2020-12-09 | 2022-08-10 | Ucl Business Ltd | Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
JP2023554346A (ja) | 2020-12-18 | 2023-12-27 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 第xii因子を調節するための化合物及び方法 |
MX2023007630A (es) | 2020-12-23 | 2023-08-25 | Flagship Pioneering Innovations Vi Llc | Composiciones de trem modificadas y usos de las mismas. |
WO2022150260A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
TW202245843A (zh) | 2021-02-12 | 2022-12-01 | 美商欣爍克斯公司 | Il-2接合物及西米普利單抗(cemiplimab)之皮膚癌組合療法 |
IL304880A (en) | 2021-02-12 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Superoxide dismutase 1 (SOD1) IRNA compositions and methods of using them to treat or prevent superoxide dismutase 1- (SOD1-) associated neurodegenerative diseases |
WO2022174102A1 (en) | 2021-02-12 | 2022-08-18 | Synthorx, Inc. | Lung cancer combination therapy with il-2 conjugates and an anti-pd-1 antibody or antigen-binding fragment thereof |
WO2022182864A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Prion protein (prnp) irna compositions and methods and methods of use thereof |
KR20230150844A (ko) | 2021-02-26 | 2023-10-31 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 케토헥소키나아제(KHK) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법 |
IL305442A (en) | 2021-03-04 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them |
WO2022192519A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022192038A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Northwestern University | Antiviral vaccines using spherical nucleic acids |
KR20230162024A (ko) | 2021-03-29 | 2023-11-28 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 헌팅틴(HTT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법 |
EP4314293A1 (de) | 2021-04-01 | 2024-02-07 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Prolindehydrogenase 2 (prodh2)-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon |
WO2022214632A1 (en) | 2021-04-07 | 2022-10-13 | Neoplants Sas | Compositions and methods for indoor air remediation |
TW202309280A (zh) | 2021-04-26 | 2023-03-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 跨膜絲胺酸蛋白酶6(TMPRSS6)iRNA組成物及其使用方法 |
WO2022232343A1 (en) | 2021-04-29 | 2022-11-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
EP4334448A1 (de) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von transthyretin(ttr)-vermittelter amyloidose |
WO2022245583A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022246023A1 (en) | 2021-05-20 | 2022-11-24 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
WO2022256283A2 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Korro Bio, Inc. | Methods for restoring protein function using adar |
EP4347823A1 (de) | 2021-06-02 | 2024-04-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patin-ähnliche phospholipasedomäne mit 3 (pnpla3)-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon |
WO2022256534A1 (en) | 2021-06-03 | 2022-12-08 | Synthorx, Inc. | Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab |
JP2024521907A (ja) | 2021-06-04 | 2024-06-04 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | ヒト9番染色体オープンリーディングフレーム72(C9ORF72)iRNA剤組成物及びその使用方法 |
AR126070A1 (es) | 2021-06-08 | 2023-09-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para tratar o prevenir la enfermedad de stargardt y/o trastornos asociados con la proteína transportadora de retinol 4 (rbp4) |
KR20240021218A (ko) | 2021-06-11 | 2024-02-16 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 신규 유형 v rna 프로그래밍가능 엔도뉴클레아제 시스템 |
EP4101928A1 (de) | 2021-06-11 | 2022-12-14 | Bayer AG | Programmierbare typ-v-rna-endonukleasesysteme |
WO2022266414A1 (en) | 2021-06-18 | 2022-12-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing ifnar1 expression |
EP4363574A1 (de) | 2021-06-29 | 2024-05-08 | Korro Bio, Inc. | Verfahren und zusammensetzungen für adar-vermittelte bearbeitung |
US20230194709A9 (en) | 2021-06-29 | 2023-06-22 | Seagate Technology Llc | Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics |
WO2023278576A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating an angiotensinogen- (agt-) associated disorder |
WO2023285431A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-19 | Alia Therapeutics Srl | Compositions and methods for allele specific treatment of retinitis pigmentosa |
CA3226878A1 (en) | 2021-07-23 | 2023-01-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Beta-catenin (ctnnb1) irna compositions and methods of use thereof |
EP4377458A1 (de) | 2021-07-29 | 2024-06-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa-reduktase (hmgcr)-irna-zusammensetzungen und verfahren zur verwendung davon |
IL310244A (en) | 2021-08-03 | 2024-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Transthyretin (TTR) IRNA compositions and methods of using them |
IL310295A (en) | 2021-08-04 | 2024-03-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | iRNA compositions and methods for silencing angiotensinogen (AGT) |
BR112024001923A2 (pt) | 2021-08-13 | 2024-04-30 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de fator xii (f12) e métodos de usos das mesmas |
WO2023034870A2 (en) | 2021-09-01 | 2023-03-09 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing dmpk expression |
EP4144841A1 (de) | 2021-09-07 | 2023-03-08 | Bayer AG | Neue programmierbare rna-endonuklease-systeme mit verbesserter pam-spezifität und deren verwendung |
WO2023044370A2 (en) | 2021-09-17 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3) |
IL311454A (en) | 2021-09-20 | 2024-05-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Inhibin subunit E (INHBE) modulator compositions and methods of using them |
WO2023056329A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Akouos, Inc. | Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss |
CA3234835A1 (en) | 2021-10-22 | 2023-04-27 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing |
CA3234636A1 (en) | 2021-10-29 | 2023-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement factor b (cfb) irna compositions and methods of use thereof |
WO2023076450A2 (en) | 2021-10-29 | 2023-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2023086295A2 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | University Of Rochester | Antisense oligonucleotides for modifying protein expression |
CA3237769A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | University Of Rochester | Gata4-targeted therapeutics for treatment of cardiac hypertrophy |
GB202117758D0 (en) | 2021-12-09 | 2022-01-26 | Ucl Business Ltd | Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
WO2023122573A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Synthorx, Inc. | Head and neck cancer combination therapy comprising an il-2 conjugate and pembrolizumab |
WO2023118349A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Alia Therapeutics Srl | Type ii cas proteins and applications thereof |
WO2023118068A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel small type v rna programmable endonuclease systems |
WO2023122750A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Synthorx, Inc. | Cancer combination therapy with il-2 conjugates and cetuximab |
WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
WO2023194359A1 (en) | 2022-04-04 | 2023-10-12 | Alia Therapeutics Srl | Compositions and methods for treatment of usher syndrome type 2a |
WO2023237587A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel small type v rna programmable endonuclease systems |
WO2024039776A2 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof |
WO2024050261A1 (en) | 2022-08-29 | 2024-03-07 | University Of Rochester | Antisense oligonucleotide-based anti-fibrotic therapeutics |
WO2024059165A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
WO2024056880A2 (en) | 2022-09-16 | 2024-03-21 | Alia Therapeutics Srl | Enqp type ii cas proteins and applications thereof |
WO2024105162A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Alia Therapeutics Srl | Type ii cas proteins and applications thereof |
WO2024129743A2 (en) | 2022-12-13 | 2024-06-20 | Bluerock Therapeutics Lp | Engineered type v rna programmable endonucleases and their uses |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3870700A (en) * | 1973-05-29 | 1975-03-11 | Miles Lab | 2-halogeno-2-deoxy-5-(substituted)uridines |
US4211773A (en) * | 1978-10-02 | 1980-07-08 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | 5-Substituted 1-(2'-Deoxy-2'-substituted-β-D-arabinofuranosyl)pyrimidine nucleosides |
US4711955A (en) * | 1981-04-17 | 1987-12-08 | Yale University | Modified nucleotides and methods of preparing and using same |
GB8517402D0 (en) * | 1985-07-10 | 1985-08-14 | Wellcome Found | Treatment of viral infections |
DE3606634A1 (de) * | 1986-02-28 | 1987-09-03 | Mack Chem Pharm | Isohexid-nucleoside, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel |
US5047519A (en) * | 1986-07-02 | 1991-09-10 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Alkynylamino-nucleotides |
GB8629892D0 (en) * | 1986-12-15 | 1987-01-28 | Wellcome Found | Antiviral compounds |
-
1988
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Also Published As
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JPH02504144A (ja) | 1990-11-29 |
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