KR20190141184A - 트리시클로-dna 뉴클레오시드를 포함하는 변형 올리고머 화합물 및 그의 용도 - Google Patents

트리시클로-dna 뉴클레오시드를 포함하는 변형 올리고머 화합물 및 그의 용도 Download PDF

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볼프강 안드레아스 레너
브라니슬라브 두고비치
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Abstract

본 발명은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물 및 하나 이상의 지질 모이어티를 포함하는 조성물이며, 여기서 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하는 것인 조성물, 뿐만 아니라 그의 제약 조성물 및 신경근육 또는 근골격 질환 예컨대 듀센형 근이영양증 또는 스타이네르트병의 예방 또는 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다.

Description

트리시클로-DNA 뉴클레오시드를 포함하는 변형 올리고머 화합물 및 그의 용도
관련 출원의 진술
본 출원은 2017년 4월 20일에 출원된 유럽 출원 번호 17167427.8 및 2017년 9월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 62/562,124를 우선권 주장하며, 이들 둘다는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
안티센스 기술은 특정 유전자 생성물의 발현을 감소시키기 위한 효과적인 수단이므로 치료, 진단, 및 연구 응용에서 유용할 수 있다. 일반적으로, 안티센스 기술 이면의 원리는 안티센스 화합물 (뉴클레오티드 또는 그의 유사체의 서열)이 표적 핵산에 혼성화되어 유전자 발현 활성 또는 기능, 예컨대 전사 및/또는 번역을 조정한다는 점이다. 특정 메커니즘에 관계없이, 그의 서열-특이성은 안티센스 화합물을 표적 검증 및 유전자 기능화를 위한 도구, 뿐만 아니라 치료제로서 매력적으로 만들어 질환의 발병기전에 관여하는 유전자의 발현을 선택적으로 조정한다.
화학적으로 변형된 뉴클레오시드는 전형적으로 안티센스 화합물에 혼입되어 그의 특성, 예컨대 표적 RNA에 대한 뉴클레아제 저항, 약물동태학 또는 친화도를 증진시킨다. 이들 화학적으로-변형된 안티센스 올리고뉴클레오티드 (AON)는 천연 RNA의 구조적 변형 예컨대 2'-OH 변형, 잠금 핵산 (LNA), 펩티드 핵산 (PNA), 헥시톨 핵산 (HNA)뿐만 아니라 트리시클로-DNA (tcDNA) 및 많은 다른 것들을 포함한다 (검토: 문헌 [Bennett CF and Swayze EE, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2010, 50:259-293; Deleavey GF and Damha M, Chemistry & Biology 2012, 19, 937-954; Sharma V. K. et al., Med. Chem. Commun. 2014, 5, 1454-1471; Siva, et al., Nucleic Acid Therapeutics 2014, 24:69-86; Goyenvalle A. et al., Journal of Neuromuscular Diseases 2016 3:157-167]; 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다). 게다가, 포스포디에스테르 연결의 비-가교 산소 원자 중 하나가 황 원자로 대체된 포스포로티오에이트 (PS) 연결과 같은 백본의 변형은 올리고뉴클레오티드 치료제에서 가장 광범위하게 조사된 핵산 화학적 변형 중 하나이다.
듀센형 근이영양증(Duchenne muscular dystrophy) (DMD)은 3500명의 살아있는 남성 출생마다에서 하나에 영향을 미치는 X-연관 열성 장애이다 (Emery. Neuromuscul. Disord. 1991). 이는 여러 가지의 조직, 특별히 중추신경계의 특정 영역에 있는 가로무늬근 섬유 및 뉴런에서 발견되는 큰 단백질 (427 kDa)인 디스트로핀을 코딩하는 유전자에서의 돌연변이에 기인한다 (Kunkel et al., PNAS. 1985; Muntoni F et al., Lancet Neurol. 2003). 디스트로핀은 막 디스트로핀-연관 당단백질 복합체를 통해 액틴 세포골격을 세포외 기질에 연결하는, 형질막의 내부 표면에 가까이 위치한다 (Culligan et al., 1988). 디스트로핀 부족은 근육 섬유가 특히 기계적 스트레스에 취약하게 하고 괴사의 재발 주기를 겪게 한다. 결과적으로, 환자는 골격근의 점진적인 쇠약을 나타내며, 이는 시간이 지남에 따라 지방섬유성 조직에 의해 대체되어, 12세가 되면 보행 상실을 야기하며, 그 결과로 조기 사망은 호흡 부전 또는 심근병증에 기인한다. 게다가, DMD 환자의 약 1/3이 신경 및 뇌 기능의 주목할 만한 붕괴를 시사하는 인지 장애를 또한 나타낸다 (Bresolin et al., Neuromuscul. Disord. 1994).
79개의 엑손으로 구성된 주요 14-kb mRNA 전사물로부터 번역된 전장 디스트로핀은, 개방 판독 프레임이 보존된다면 다중 엑손의 결실을 다행스럽게도 지원할 수 있는 모듈화된(modular) 단백질이다 (Koenig et al., Cell. 1987). 이 현상은 임상적으로 더 경미한 질환인 베커 근이영양증(Becker muscular dystrophy) (BMD)에서 발생하며, 여기서 개방 판독 프레임을 유지하는 결실은 말단절단된 반-기능 형태의 디스트로핀의 합성을 야기한다 (Monaco et al. Genomics. 1988). 인간 DMD는 79개의 엑손에 걸쳐 발생하는 돌연변이의 이종 군에 기인하긴 하지만, 엑손 3-7 및 엑손 45-55 영역에서 가장 높은 발생률의 두 영역이 관찰된다 [Muntoni, Neuromuscul. Disord. 2009, 20, 355-362]. DMD는 디스트로핀 mRNA에서 아웃 오브 프레임(out-of-frame) 결실로부터 생기거나 부적절한 정지 코돈에 기인한다. 이는 아웃 오브 프레임 말단절단된 mRNA, 불안정하고 불완전한 디스트로핀, 그리고 궁극적으로 DMD의 임상적 출현을 발생시킨다. 인 프레임(In-frame) 말단절단된 mRNA는 베커 근이영양증 (BMD)으로 공지된 훨씬 더 경미한 형태의 근병증 및 반기능성 디스트로핀을 야기하는 상이한 돌연변이로부터 생기는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 15년 전에, 안티센스 올리고뉴클레오티드 (AON)를 사용함으로써 선택된 엑손의 스플라이싱 과정을 방해하는 것이 DMD에 적합한 치료 접근법일 수 있다고 제안되었다 (Matsuo M. Brain Dev. 1996). DMD에 대한 올리고뉴클레오티드 요법의 목표는 일반적으로 엑손 스키핑(exon skipping) (예를 들어, 엑손 23 또는 엑손 51, 또는 임의의 다른 엑손의)을 초래하고, 디스트로핀 생성을 회복하고, DMD를 BMD로 형질전환시켜, 감소된 사망률 및 잠재적으로 인지 개선을 발생시키는 것이다. DMD 외에, 다수의 다른 질환이 후술된 그러한 질환을 포함하여, 올리고뉴클레오티드-매개 엑손 스키핑 접근법에 의해 잠재적으로 또한 치료될 수 있다.
두 가지 유형의 화합물, 전장 포스포로티오에이트 백본을 가진 2'-O-메틸-변형 리보스 올리고머 (2'OMe-PS) 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머 (PMO)가 안티센스-유도 엑손 스키핑에 대해 광범위하게 시험되어 왔다. 안티센스 분자의 두 유형 모두는 DMD의 동물 모델 및 임상 시험에서 전신 전달 후 골격근에서 디스트로핀을 구제하는 것으로 나타났다 (van Deutekom et al., New. Engl. J. Med. 2007; Kinali et al., Lancet Neurol. 2009; Goemans et al., New. Engl. J. Med. 2011; Cirak et al., Lancet. 2011). 그러나, DMD 환자에서 엑손 51을 표적으로 하는 2'OMe-PS 및 PMO AON을 사용한 최근의 연구는 불충분한 수준의 디스트로핀 구제로 인한 것 같은 현저한 임상적 이점을 나타내지 못하였다 (Lu et al., Mol. Ther. Nucleic Acids. 2014). 게다가, 마우스에서의 전임상 연구로부터 이들 두 화학이 심장 및 인지 결함을 해결하는데 적합하지 않은 것으로 공지되었고, 이는 여전히 많은 신경근 장애에서 성공하기 위한 주요 도전과제를 나타낸다. DMD의 mdx 마우스 모델에서의 보다 최근의 연구는, 전체(full) PS 백본을 가진 tcDNA AON은 2'OMe-PS 및 PMO AON으로 달성한 것보다 5-6배 더 높은 수준으로 엑손 23의 효과적인 스키핑을 유도함을 입증하였다 (Goyenvalle et al., Nat. Med. 2015).
중요하게도, 이는 12주의 처리 후 야생형 마우스와 비교하여, 특히 횡경막 및 심장에서의 디스트로핀 단백질 수준의 더 큰 구제로 번역되었으며, 여기서 수준은 각각 50% 및 40%에 도달하였다. 그러나, 포스페이트 에스테르 백본에서 산소에 대한 황의 치환은 생체 분포를 상당히 개선하면서도, 비특이적 단백질 결합뿐만 아니라 선천 면역 체계의 활성화, 특히 보체 활성화에 관여하는 것으로 또한 나타났으며, 이는 가능하게는 최악의 경우 급성 독성, 기껏해야 장기간의 독성을 발생시킬 수 있다 (Dirin and Winkler, Expert Opin. Biol. Ther. 2013).
이 부류의 분자의 치료 잠재력을 손상시키거나 적어도 제지하는 이 주요 난관은 우리가 더 높은 효율 및 잠재적으로 더 낮은 독성을 가진 신규한 실체를 탐구하도록 촉구하였다.
본 발명은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물 및 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결된 하나 이상의 지질 모이어티를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 상기 조성물을 사용함으로써 듀센형 근이영양증 (DMD), 척수 근육 위축증 (SMA), CNS-관련 적응증, 폼페병(Pompe disease), 1형 근긴장성 이영양증 (DM1)을 포함한 다수의 질환의 치료 방법이 또한 개시되어 있다.
놀랍게도 올리고머 화합물 및 상기 올리고머 화합물에 공유 연결된 하나 이상의 지질 모이어티를 포함하는 본 발명의 조성물은 상기 하나 이상의 지질 모이어티를 포함하지 않는 그의 tcDNA 대응물보다 전신 전달 후 골격근, 심장 조직 및 CNS를 관통하는데 훨씬 더 효율적이고 활성인 것으로 밝혀졌다. 후자는 상응하는 올리고머 대응물에 존재하는 뉴클레오시드간 연결의 성질에 상관 없는 경우이므로, 대응물이 전체 PS 백본을 가졌는지의 여부와 상관 없다. 게다가, 본 발명자들은 심장 조직을 효율적으로 관통하므로 PS 뉴클레오시드간 연결의 필요성을 피하면서 혈액-뇌 장벽을 가로질러서, 안전성 프로파일을 잠재적으로 현저하게 개선하고 높은 효능을 유지하면서 독성을 낮추는, 본 발명의 조성물의 예상치 못한 특성을 밝힐 수 있었다. 이는 적용된 본 발명의 제약 조성물의 투여량을 증가시킬 수 있게 하여 의학적 필요성을 맞추고 만족시킨다.
더욱이, 본 발명의 조성물은 모든 골격근, 심장근 및 CNS에 정맥내 전신 적용 후 혈류에서 수송되고 이들 조직에 의해 흡수되는 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 조성물은, 특히 전신 전달 후, 근육 및 심장 세포, 또는 CNS에서 안티센스 효과를 수득하기 위해, 안티센스 올리고뉴클레오티드 (AON)로서 특히 유용하다. 따라서, 본 발명은 대상체의 조직 또는 세포에서 비정상적인 유전자 발현에 기인한 다수의 질환을 위한 조성물을 또한 제공한다. 이 이론에 구속되지 않으면서, 본 발명의 조성물은 혈액 알부민과 응집체를 형성하여 혈류 내에서 본 발명의 조성물의 수송을 보장할뿐만 아니라 순환 반감기 및 그에 따라 본 발명의 조성물에 대한 조직의 노출 시간을 증가시키고, 게다가, 혈장내 분해 저항을 증진시키는 것으로 여겨진다.
게다가, 상기 올리고머 화합물에 공유 연결된 상기 하나 이상의 지질 모이어티를 포함하는 바람직한 본 발명의 조성물은 비록 상기 올리고머 화합물 내의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 기의 수가 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결 기에 이익이 되도록 감소된다 하더라도 높은 효능을 유지한다. 따라서, 바람직한 본 발명의 조성물, 특히 지방산 또는 지방 이산 모이어티 예컨대 팔미토일 모이어티를 포함하고 많은 수의 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결 기를 포함하는 조성물은, 그에 연결된 상기 지질 모이어티를 갖지 않는 그의 상응하는 tc-DNA 유사체와 비교하여 복수개의 조직에서 상당히 더 높은 수준의 엑손 스키핑을 유도하는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물 및 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하는 조성물이며, 여기서 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하는 것인 조성물을 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하고 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 제약 조성물은 신경근육 또는 근골격 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 것이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병(Niemann-Pick disease type C), 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병(Pelizaeus-Merzbacher disease), 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병(Steinert disease))으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하고 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 제약 조성물은 신경근육 또는 근골격 질환의 치료에서 사용하기 위한 것이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
다시 추가 측면에서, 본 발명은 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 질환은 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 질환의 치료에서 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 질환은 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 질환은 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
추가 측면에서, 본 발명은 질환을 예방, 치료 또는 진단하는 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 질환은 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
다시 추가 측면에서, 본 발명은 환자에게 치료 유효 용량의 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 신경근육 또는 근골격 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 그의 바람직한 실시양태에서, 상기 신경근육 또는 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 신경근육 또는 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
본 발명의 추가 측면 및 실시양태는 이 설명이 계속됨에 따라 명백해질 것이다.
도 1: tcDNA-PO M23D (SY-0308), tcDNA-PS M23D (SY-0210), SY-0299, SY-0442 및 SY-0455의 경우 200 mg/kg/wk, 그리고 SY-0343의 경우 178 mg/kg/wk의 투여량으로의 4주 처리 후 전경골근 (TA), 장딴지근 (Gas), 사두근 (Quad), 삼두근 (Tri), 이두근 (Bi), 횡경막 (Dia), 심장, 피질 및 소뇌 (Cbl)를 포함한, mdx 근육 및 CNS에서 엑손 23-스키핑된(skipped) 디스트로핀 mRNA의 검출. 엑손 23 스키핑은 타크만(Taqman) qPCR에 의해 정량화되고, 내인성 대조군을 사용한 정규화 후 엑손 4-5 발현 수준에 의해 측정된, 총 디스트로핀의 백분율로 표시된다. 군당 N=4 마우스; 오차 막대는 평균 ± SEM이다.
도 2: 프로트롬빈 시간 및 부분 트롬보플라스틴 시간은 출혈 문제를 예측하기 위해 주어진, 혈액이 응고되는데 걸리는 시간을 측정하는 두 가지 혈액-검사이다. 2 mg/ml의 하기 서열: tcDNA-PO M23D (SY-0308, 서열식별번호: 1) 또는 tcDNA-PS M23D (SY-0210, 서열식별번호: 23) 또는 tcDNA-PS SYN51 (모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 PS 연결 기인 서열식별번호: 19) 또는 tcDNA-PO SYN51 (모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 PO 연결 기인 서열식별번호: 19) 또는 SY-0343 또는 SY-0442 또는 SY-0455를, 50 μl의 시트레이트화된 혈장 C와 37℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음에, 제조업자의 사용설명서에 따라 반자동 START 맥스 혈액응고측정기(max coagulometer) (스타고(Stago)) 상에서 프로트롬빈 시간 (PT) 및 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (PTT) 검정을 수행하였다 (A 마우스 혈장, B 인간 혈장). PBS (포스페이트 완충 식염수)를 음성 대조군으로서 사용하였고, 마우스에서 매우 독성인 전체 PS 백본을 가진 (tcDNA-PS SYN51)을 양성 대조군으로서 사용하였다.
도 3: AON 주사 후 1시간에, 모든 마우스로부터 혈액 샘플을 수집하여 보체 C3을 측정하였다. 혈청 샘플에서의 보체 활성화는 마이크로뷰((Microvue) 범특이적(PanSpecific)-C3 전환기 및 SC5b-9 플러스(Plus) 키트 (콰이델 캄파니(Quidel Co.), 미국 캘리포니아주 샌디에이고)에 의해 결정하였다: 마우스 C3 단백질을 C3 전환기 시약 (범 특이적 C3 시약 키트, 마이크로뷰, 콰이델)을 사용하여 인간 SC5b9로 전환시킨 다음에 SC5b9 엘리사(Elisa) (콰이델)에 의해 검출하였다. 보체 활성화는 100%의 C3 (활성화 없음)의 PBS 조건에서 C3의 수준을 고려하여 샘플에서 C3의 지속 수준의 백분율로 표시하였다.
도 4: 4주 처리 종료시 혈청 생화학 분석. 신장 독성이 없음을 시사하는, 혈청 알부민, 크레아티닌 및 우레아에서 어떠한 유의한 변화도 없음. 대부분의 팔미토일 접합된 PO M23D에 대한 ALP의 단지 약간의 상승이 관찰되었다.
도 5: 200 mg/kg/wk의 SY-0299, SY-0455, 및 SY-0442의 투여량으로 4주 처리 후, 장딴지근 (Gas), 횡경막 (Dia), 삼두근 (Tri)에서 리코르 오디세이(licor Odyssey) 시스템을 사용하여 웨스턴 블롯에 의해 정량화된 회복된 디스트로핀의 수준.
도 6: 마우스 및 인간 혈청으로부터 잠재적으로 상호작용하는 단백질의 공-침전에 사용된 비오티닐화(Biotinylated) tcDNA 올리고뉴클레오티드 (M23D). A: SY-0446; A': tcDNA 서열의 세 번째 뉴클레오티드가 2'OMe-U로 변화된 것을 제외하고, SY-0446에 대한 SY-0448 유사체. B: SY-0445. C: tcDNA 올리고뉴클레오티드의 양쪽 말단에 2개의 PS가 존재하는 것을 제외하고, SY-0445에 대한 SY-0443 유사체. D: SY-0451. 팔미토일 잔기가 없는 AON (SY-0440 및 SY-0427)의 경우, 비오틴 모이어티는 C3 링커 (도시되지 않음)를 통해 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부착되었다. 본 발명의 조성물의 특성화 및 정의는 표 3에 기재되어 있다.
도 7: 도 6에 열거되고 도시된 올리고뉴클레오티드를 사용하여 마우스 (도 a) 및 인간 (도 b) 혈청으로부터 단백질 회수의 SDS-PAGE 분석. 20 μg의 고정화된-AO를 50 μL의 10배 희석된 혈청에서 인큐베이션하였다.
도 8: 뉴클레오시드간 연결에서 황의 가변 함량을 보유한 하기 서열의 프로트롬빈 시간 및 부분 트롬보플라스틴 시간: tcDNA-PO M23D (SY-0308, 서열식별번호: 1) 또는 tcDNA-PS M23D (SY-0210, 서열식별번호: 23) 또는 tcDNA-PS SYN51 (모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 PS 연결 기인 서열식별번호: 19) 또는 tcDNA-PO SYN51 (모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 PO 연결 기인 서열식별번호: 19), M23D-PS 25sb3은 (p-CCTCGGCTTA*C*C*T - 서열식별번호: 42)에 상응하고; M23D-PS 33sb3은 (p-CCTCGGCTT*A*C*C*T - 서열식별번호: 43)에 상응하고; M23D-PS 50sb3은 (p-CCTCGGC*T*T*A*C*C*T - 서열식별번호: 44)에 상응하고; M23D-PS 66sb3은 (p-CCTCG*G*C*T*T*A*C*C*T - 서열식별번호: 45)에 상응하고 M23D-PS 83sb3은 (p-CCT*C*G*G*C*T*T*A*C*C*T - 서열식별번호: 46)에 상응하고, 여기서 두 뉴클레오시드 사이의 "*"는 포스포로티에이트 뉴클레오시드간 연결을 나타내고 p는 말단 포스페이트 기를 나타낸다.
도 9: 올리고뉴클레오티드 SY-0357, SY-0299, SY-0442, SY-0455, SY-0343 및 SY-0450의 비변성 PAGE. 마우스에서 독성이었던 전체 PS 백본을 가진 올리고뉴클레오티드 SY-0221 (CTT TCA TAA TGC TGG - 서열식별번호: 47)을 사용하여 겔 상에서 다량체 밴드의 이동 (스테인스올(StainsAll)로 가시화)을 입증하였다.
도 10: 72시간 동안 200 mg/kg의 SY442 (도 10a) 또는 SY450 (도 10b)로 그리고 2주 동안 SY442 (도 10c) 또는 SY450 (도 10d)로 처리한 마우스로부터의 다양한 조직에서 RT-PCR을 중첩(nesting)시킴으로써 검출된 엑손 23 스키핑. 좌측 패널은 901 bp에서의 스키핑되지 않은 생성물 및 688 bp에서 스키핑된 생성물을 나타내는 엑손 20과 26 사이의 RT-PCR을 나타낸다. 우측 패널은 401 bp에서 스키핑된 생성물을 독점적으로 나타내는 엑손 20과 접합부 22-24 사이의 특이적 RT-PCR을 나타낸다. 스키핑 수준이 통상적인 RT-PCR에 의해 검출되기에 너무 낮았던 경우에만 우측 패널에 나타낸 특정 PCR을 사용하였다.
도 11: 72시간 동안 50 mg/kg의 SY442 (도 11a) 또는 SY450 (도 11b)으로 대조군으로서 SY0210 (도 11c)으로 그리고 2주 동안 SY442 (도 11d) 또는 SY450 (도 11e)으로 대조군으로서 SY0210 (도 11f)으로 처리한 마우스로부터의 다양한 조직에서 RT-PCR을 중첩시킴으로써 검출된 엑손 23 스키핑. 좌측 패널은 901 bp에서의 스키핑되지 않은 생성물 및 688 bp에서 스키핑된 생성물을 나타내는 엑손 20과 26 사이의 RT-PCR을 나타낸다. 우측 패널은 401 bp에서 스키핑된 생성물을 독점적으로 나타내는 엑손 20과 접합부 22-24 사이의 특이적 RT-PCR을 나타낸다. 스키핑 수준이 통상적인 RT-PCR에 의해 검출되기에 너무 낮았던 경우에만 우측 패널에 나타낸 특정 PCR을 사용하였다.
도 12: 주사 후 72시간 및 2주에 200 mg/kg의 tcDNA로 처리된 마우스로부터의 조직에서 타크만 qPCR에 의한 엑손 23 스키핑 정량화.
도 13: 주사 후 72시간 및 2주에 50 mg/kg의 tcDNA로 처리된 마우스로부터의 조직에서 타크만 qPCR에 의한 엑손 23 스키핑 정량화.
도 14: 주사 후 72시간 및 2주에 SY0442 및 SY0450 효능을 비교하는 풀링된 데이터. 50 mg/kg과 200 mg/kg 사이에서 용량 효과가 관찰될 수 있다 (대략 4배).
도 15: 전체 PO 및 전체 PS 화합물과 비교하여 200 mg/kg에서 엑손 23 스키핑의 정량화.
도 16: 전체 PO 및 전체 PS 화합물과 비교하여 50 mg/kg에서 엑손 23 스키핑의 정량화.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 과학기술 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 사용된 표제는 단지 편의상의 이유이며 본 발명의 측면 및 실시양태 중 어느 하나의 개시내용을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
정의
본원에 사용된 바와 같은 용어 "올리고머 화합물"은, 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결된 바람직하게는 8개 이상의 단량체 하위단위를 포함하며, 여기서 상기 8개 이상의 단량체 하위단위 중 적어도 2개가 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드인 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단량체 하위단위"는, 단량체 하위단위 예컨대 α-D-리보뉴클레오시드, β-D-리보뉴클레오시드, α-D-2'-데옥시리보뉴클레오시드, β-D-2'-데옥시리보뉴클레오시드, 자연 발생 뉴클레오시드, 변형 뉴클레오시드, 및 이로써 특히 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드 및 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드; 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드, 뉴클레오시드, 자연 발생 뉴클레오티드, 변형 뉴클레오티드, 및 이로써 특히 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오티드 및 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오티드의 모방체, 및 뉴클레오티드의 모방체를 포함하는, 그리고 전형적으로 그리고 바람직하게는 이들을 지칭하는, 올리고머 합성이 가능한 모든 방식의 단량체 단위를 포함하는 것을 의미한다. 전형적으로 그리고 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "단량체 하위단위"는, 자연 발생 뉴클레오시드 및 변형 뉴클레오시드, 및 이로써 특히 리보뉴클레오시드, 데옥시리보뉴클레오시드, 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드, 및 자연 발생 뉴클레오티드 및 변형 뉴클레오티드, 및 이로써 특히 리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드, 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오티드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오티드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오티드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오티드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오티드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오티드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오티드를 지칭한다. 추가로 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "단량체 하위단위"는, 변형 뉴클레오티드, 및 이로써 특히 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오티드 및 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오티드를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "지질 모이어티"는, 전형적으로 그리고 바람직하게는, 탄화수소, 오일, 지방 (예컨대 지방산, 글리세리드), 스테롤, 스테로이드, 및 이들 화합물의 유도체 형태로부터 유래된 모이어티를 지칭한다. 적합한 지질 모이어티는 지방산 및 그의 유도체, 탄화수소 및 그의 유도체, 및 스테롤, 예컨대 콜레스테롤로부터 유래된 모이어티를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 지질 모이어티는 지질 및 친수성 모이어티를 둘 다 함유하는, 양친매성 화합물 모이어티를 또한 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "탄화수소"는, 공유 결합에 의해 연결된 수소 및 탄소만으로 이루어진 화합물을 포함한다. 상기 용어는 (비분지형) 직쇄 및 분지형 탄화수소, 및 포화뿐만 아니라 단일 불포화 및 다중 불포화 탄화수소를 포함한, 개방형 쇄 (지방족) 탄화수소를 포함한다. 상기 용어는 또한 1개 이상의 방향족 고리를 함유하는 탄화수소를 포함하고, 바람직하게는 상기 용어는 1개 이상의 방향족 고리를 함유하는 탄화수소를 제외한다. 용어 "직쇄" 및 "비분지형"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "지방산"은, 카르복실산 기로 종결되는 탄화수소 쇄를 지칭하고, 여기서 상기 탄화수소 쇄는 전형적으로 그리고 바람직하게는 전형적으로 3 내지 32개의 탄소 길이의 알킬 또는 알케닐이고, 따라서, 이는 포화 또는 불포화되고, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 카르복실 기 (-COOH), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, C1-32 알킬, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스페이트 기 (HOP(O)(OH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스포네이트 기 (HOP(O)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 티오포스페이트 기 (HOP(O)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디티오포스페이트 기 (HOP(S)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 트리포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의 페닐 기 (-C6H5), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 치환된 하나 이상의 페닐 기에 의해 임의로 치환된다. 지방산이 하나 이상의 이중 결합을 함유하고, 따라서 불포화된 경우, 시스 또는 트랜스 기하 이성질현상의 가능성이 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "지방산 모이어티"는, 본원에 정의된 바와 같은 지방산으로부터 유래된 모이어티를 지칭하고, 여기서 상기 지방산의 하나의 카르복실 기 (-COOH)는 상기 지방산 모이어티의 -C(O)-기가 되고 지방산 모이어티의 -C(O)-기이고, 이 -C(O)-기가 본 발명에 따라 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고뉴클레오티드에 연결된다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "지방산"은 카르복실산 기로 종결되는 탄화수소 쇄를 지칭하고, 여기서 상기 탄화수소 쇄는 전형적으로 그리고 바람직하게는 전형적으로 3 내지 32개의 탄소 길이의 알킬 또는 알케닐이고, 따라서, 이는 포화 또는 불포화되고, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 카르복실 기 (-COOH), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, C1-32 알킬, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스페이트 기 (HOP(O)(OH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스포네이트 기 (HOP(O)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 티오포스페이트 기 (HOP(O)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디티오포스페이트 기 (HOP(S)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 트리포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의 페닐 기 (-C6H5), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 치환된 하나 이상의 페닐 기에 의해 임의로 치환된다. 바람직하게는, 상기 지방산은 탄소 원자의 짝수를 갖고, 여기서 상기 지방산의 카르복실 기 (-COOH) 또는 상기 지방산 모이어티의 상기 -C(O)- 기의 탄소 원자가 탄소 원자의 수의 계산에 포함된다.
따라서, 지방산은 바람직하게는 직쇄에서 탄소 원자의, 짝수 또는 홀수, 바람직하게는 짝수 (통상 3 - 32개 탄소)를 함유하고 포화 또는 불포화될 수 있고, 바람직하게는 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 카르복실 기 (-COOH), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, C1-32 알킬, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스페이트 기 (HOP(O)(OH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스포네이트 기 (HOP(O)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 티오포스페이트 기 (HOP(O)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디티오포스페이트 기 (HOP(S)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 트리포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의 페닐 기 (-C6H5), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 치환된 하나 이상의 페닐 기에 의한 여러 가지의 치환기 군을 함유할 수 있거나, 변형되어 함유할 수 있다.
용어 "지방 이산"은 본원에 정의된 바와 같으나 오메가 위치에 추가의 카르복실산 기를 가진 지방산을 지칭한다. 따라서, 지방 이산은 디카르복실산이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "지방 이산 모이어티"는, 본원에 정의된 바와 같은, 지방 이산으로부터 유래된 모이어티를 지칭하고, 여기서 상기 지방 이산의 한 카르복실 기 (-COOH)는 상기 지방 이산 모이어티의 -C(O)-기가 되고 상기 지방 이산 모이어티의 -C(O)-기이고, 이 -C(O)-기가 본 발명에 따라 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고뉴클레오티드에 연결된다. 지방 이산의 바람직한 실시양태는 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, C1-32 알킬, 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스페이트 기 (HOP(O)(OH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 포스포네이트 기 (HOP(O)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 티오포스페이트 기 (HOP(O)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디티오포스페이트 기 (HOP(S)(SH)O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 디포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 트리포스페이트 기 (HO-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-), 하나 이상의, 바람직하게는 하나의, 페닐 기 (-C6H5), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 치환된 하나 이상의, 바람직하게는 하나의 페닐 기에 의해 임의로 치환되는 포화된 지방 이산이다. 바람직한 예는 한 C6-24 알킬 예컨대 3-펜타데실글루타르산 (PDG)에 의해 임의로 치환되는 글루타르산이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬포스페이트 모이어티"는 C3-32알킬-O-P(O)(OH)-O-의 기를 지칭하고, 여기서 상기 C3-32알킬은 본원에 정의된 바와 같은 C3-32알킬로부터 독립적으로 선택된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬포스포네이트 모이어티"는 C3-32알킬-O-P(O)-O-의 기를 지칭하고, 여기서 상기 C3-32알킬은 본원에 정의된 바와 같은 C3-32알킬로부터 독립적으로 선택된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 불포화를 함유하지 않고, 1 내지 32개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 (예를 들어, (C1-32)알킬 또는 C1-32 알킬)을 지칭하고, 이는 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있거나 전형적으로 부착된다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "1 내지 32"와 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭한다. 예를 들어, "1 내지 32개의 탄소 원자"는 알킬 기가 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 등, 최대 32 (32 포함)개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미하긴 하지만, 상기 정의는 어떠한 수치 범위도 구체적으로 지정되지 않은 용어 "알킬"의 발생을 또한 포함하고자 한다. 전형적인 알킬 기는 메틸, 에틸, n-프로필, 1-메틸에틸 (이소-프로필과 상호교환적으로 사용됨; 본원에서 iPr 또는 Pri로서 상호교환적으로 약칭됨), n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 이소부틸, 3급 부틸 (1,1-디메틸에틸 또는 tert-부틸과 상호교환적으로 사용됨), n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 셉틸, 옥틸, 노닐 및 데실을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 알킬 기는 독립적으로 알케닐, 알콕시, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 히드록실, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4),인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬"은, 본원에 정의된 바와 같은 비치환 알킬을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬렌"은, 본원에 정의된 바와 같은 알킬로부터 유래된 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 비(bi)-라디칼을 지칭하고, 여기서 상기 알킬의 하나의 수소가 절단 제거되어 상기 알킬렌의 제2 라디칼을 생성한다. 알킬렌의 예는, 실례로서, -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(CH3)-CH2-, 또는 -CH(CH2CH3)-이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알케닐"은, 탄소 및 수소 원자만으로 이루어고, 적어도 1개의 이중 결합을 함유하고, 3 내지 32개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기 (즉, (C3-32)알케닐 또는 C3-32 알케닐)를 지칭하고, 이는 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있거나 전형적으로 부착된다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "3 내지 32"와 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하고 - 예를 들어, "3 내지 32개의 탄소 원자"는 알케닐 기가 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자 등, 최대 32 (32 포함)개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다. 전형적인 알케닐 기는 에테닐 (즉, 비닐), 프로프-1-에닐 (즉, 알릴), 부트-1-에닐, 펜트-1-에닐 및 펜타-1,4-디에닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 각각의 이중 결합은 (E)- 또는 (Z)-배위일 수 있다. 따라서, 알케닐은, 적용 가능한 경우, 그의 (E)-배위, 그의 (Z)-배위 및 임의의 비율의 그의 혼합물에서 상기 이중 결합 각각을 포함할 수 있다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 알케닐 기는 독립적으로 알케닐, 알콕시, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 히드록실, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4)인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "알케닐"은, 본원에 정의된 바와 같은 비치환 알케닐을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알케닐렌"은, 본원에 정의된 바와 같은 알케닐로부터 유래된 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 비-라디칼을 지칭하고, 여기서 상기 알케닐의 하나의 수소가 절단 제거되어 상기 알케닐렌의 제2 라디칼을 생성한다.
용어 "알키닐"은 탄소 및 수소 원자만으로 이루어지고, 적어도 1개의 삼중 결합을 함유하고, 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 라디칼 기 (즉, (C2-32)알키닐 또는 C2-32 알키닐)를 지칭한다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "2 내지 32"와 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하고 - 예를 들어, "2 내지 32개의 탄소 원자"는 알키닐 기가 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자 등, 최대 32 (32 포함)개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다. 전형적인 알키닐 기는 에티닐, 프로피닐, 부티닐, 펜티닐 및 헥시닐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 알키닐 기는 독립적으로 알케닐, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4)인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "알키닐"은 본원에 정의된 바와 같은 비치환 알키닐을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알키닐렌"은, 본원에 정의된 바와 같은 알키닐로부터 유래된 직쇄 또는 분지형 탄화수소 쇄 비-라디칼을 지칭하고, 여기서 상기 알키닐의 하나의 수소가 절단 제거되어 상기 알키닐렌의 제2 라디칼을 생성한다.
용어 "알콕시"는 -O-알킬 기를 지칭하고, 이는 산소를 통해 모 구조에 부착된, 직쇄형, 분지형 배위 및 그의 조합의 1 내지 32개의 탄소 원자를 포함한다. 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 시클로프로필옥시 및 시클로헥실옥시를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "저급 알콕시"는 (C1-6)알콕시 또는 O-C1-6알킬로도 지칭되는, 1 내지 6개의 탄소를 함유하는 알콕시 기를 지칭한다.
용어 "치환 알콕시"는 알킬 구성성분이 치환된 알콕시 (즉, -O-(치환 알킬))를 지칭한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 알콕시 기의 알킬 모이어티는 독립적으로 알케닐, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4)인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다.
용어 "아실"은 기가 카르보닐 관능기를 통해 모 구조에 부착되어 있는 기 (알킬)-C(O)-, (아릴)-C(O)-, (헤테로아릴)-C(O)-, 및 (헤테로알킬)-C(O)-를 지칭한다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 아실 기의 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 독립적으로 알케닐, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4)인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다.
용어 "아미노" 또는 "아민"은 -N(Ra)2 라디칼 기를 지칭하고, 여기서 각각의 Ra는, 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 독립적으로 수소, 알킬, 플루오로알킬, 카르보시클릴, 카르보시클릴알킬, 아릴, 아르알킬, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알킬알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로아릴알킬이다. -N(Ra)2 기가 수소 외에 2개의 Ra 치환기를 갖는 경우, 이들은 질소 원자와 조합하여 4-, 5-, 6- 또는 7-원 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, -N(Ra)2는 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함하도록 의도되나, 이에 제한되지는 않는다. 명세서에서 구체적으로 달리 언급하지 않는 한, 아미노 또는 아미노 기는 독립적으로 알케닐, 카르복실 기 (-COOH), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 포스페이트 기 (-OP(O)(OH)O-), 포스포네이트 기 (-OP(O)O-), 할로겐, 바람직하게는 아이오딘, 또는 카르복실 기로 임의로 치환된 페닐 기 (-C6H4)인 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된다.
용어 "방향족" 또는 "아릴" 또는 "Ar"은 6 내지 10개의 고리 원자를 가진 방향족 라디칼 (예를 들어, C6-C10 방향족 또는 C6-C10아릴)을 지칭하고, 이는 카르보시 클릭인 공액된 파이 전자 시스템을 갖는 적어도 1개의 고리를 갖는다 (예를 들어, 페닐, 플루오레닐, 및 나프틸). 치환된 벤젠 유도체로부터 형성되고 고리 원자에서 자유 원자가를 갖는 2가 라디칼은 치환된 페닐렌 라디칼로 명명된다. 자유 원자가를 가진 탄소 원자로부터 1개의 수소 원자를 제거함으로써 명칭이 "-일"로 끝나는 1가 폴리시클릭 탄화수소 라디칼로부터 유래된 2가 라디칼은 상응하는 1가 라디칼의 명칭에 "-이덴"을 첨가함으로써 명명되며, 예를 들어, 2개의 부착 지점을 가진 나프틸 기를 나프틸리덴이라고 칭한다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "6 내지 10"과 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하고; 예를 들어, "6 내지 10개의 고리 원자"는 아릴 기가 6개의 고리 원자, 7개의 고리 원자 등, 최대 10 (10 포함)개의 고리 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다. 상기 용어는 모노시클릭 또는 융합-고리 폴리시클릭 (즉, 고리 원자의 인접한 쌍을 공유하는 고리) 기를 포함한다.
용어 "아르알킬" 또는 "아릴 알킬"은 아릴 및 알킬이 본원에 개시된 바와 같고 각각 아릴 및 알킬에 대한 적합한 치환기로서 기재된 치환기 중 1개 이상에 의해 임의로 치환된 (아릴)알킬-라디칼을 지칭한다.
본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같은 용어 "카르복실" 또는 "카르복실릭"은 -(C=O)OH 라디칼을 지칭한다.
용어 "시클로알킬"은 탄소 및 수소만을 함유하고, 포화 또는 부분 불포화될 수 있는 모노시클릭 또는 폴리시클릭 라디칼을 지칭한다. 시클로알킬 기는 3 내지 10개의 고리 원자를 갖는 기 (즉 (C3-10)시클로알킬 또는 C3-10시클로알킬)를 포함한다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "3 내지 10"과 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하고 - 예를 들어, "3 내지 10개의 탄소 원자"는 시클로알킬 기가 3개의 탄소 원자 등, 최대 10 (10 포함)개의 탄소 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다. 시클로알킬 기의 예시적인 예는 하기 모이어티: 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로펜테닐, 시클로헥실, 시클로헥세닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로노닐, 시클로데실, 노르보닐 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
용어 "플루오로알킬"은 상기 정의된 바와 같이, 1개 이상의 플루오로 라디칼에 의해 치환되는, 상기 정의된 바와 같은 알킬 라디칼, 예를 들어, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1-플루오로메틸-2-플루오로에틸 등을 지칭한다. 플루오로알킬 라디칼의 알킬 부분은 알킬 기에 대해 상기 정의된 바와 같이 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "할로겐"은, 플루오린, 염소, 브로민, 또는 아이오딘, 바람직하게는 아이오딘을 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 할로겐 치환기는 아이오딘이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "헤테로알킬" 및 "헤테로알케닐"은, 임의로 치환된 알킬 및 알케닐 라디칼을 지칭하며 이는 탄소 이외의 원자, 예를 들어 산소, 질소, 황, 인 또는 그의 조합으로부터 선택된 1개 이상의 골격 쇄 원자를 갖는다. 총 쇄 길이를 지칭하는 수치 범위, 예를 들어, C1-C4 헤테로알킬이 제공될 수 있으며, 이는 이 예에서 4개 원자 길이이다.
용어 "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족" 또는 "HetAr"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택된 1개 이상의 고리 헤테로원자를 포함하는 5- 내지 18-원 방향족 라디칼 (예를 들어, C5-C13헤테로아릴)을 지칭하고, 이는 모노시클릭, 비시클릭, 트리시클릭 또는 테트라시클릭 고리 시스템일 수 있다. 그것이 본원에 나타날 때마다, "5 내지 18"과 같은 수치 범위는 주어진 범위 내의 각각의 정수를 지칭하고 - 예를 들어, "5 내지 18개의 고리 원자"는 헤테로아릴 기가 5개의 고리 원자, 6개의 고리 원자 등, 최대 18 (18 포함)개의 고리 원자로 이루어질 수 있음을 의미한다. 자유 원자가를 가진 원자로부터 1개의 수소 원자를 제거함으로써 명칭이 "-일"로 끝나는 1가 헤테로아릴 라디칼로부터 유래된 2가 라디칼은 상응하는 1가 라디칼의 명칭에 "-이덴"을 첨가함으로써 명명되며 - 예를 들어, 2개의 부착 지점을 가진 피리딜 기는 피리딜리덴이다.
용어 "입체이성질체"는 동일한 화학적 구성을 가지나, 공간에서의 원자 또는 기의 배열과 관련하여 상이한 화합물을 지칭한다.
"부분입체이성질체"는 화합물이 서로 거울상이 아닌 키랄성의 2개 이상의 중심을 가진 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성질체는 상이한 물리적 성질, 예를 들어 융점, 비점, 스펙트럼 특성, 및 화학적 및 생물학적 반응성을 갖는다. 부분입체이성질체의 혼합물은 전기영동 및 크로마토그래피와 같은 고해상도 분석 절차하에 분리될 수 있다.
"거울상이성질체"는 서로 중첩될 수 없는 거울 상인 화합물의 2개의 입체이성질체를 지칭한다.
본원에 사용된 입체화학적 정의 및 규칙은 일반적으로 문헌 [S.P. Parker, Ed., McRaw-Hiff Dictionary of Chemical Terms (1984), McGraw-Hill Book Company, New York]; 및 [Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994]에 따른다.
화학식에서 기호 (*), (#) 및 (§)는 i) 부착 지점, ii) 라디칼, 및/또는 iii) 비공유 전자를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "안티센스 올리고뉴클레오티드 (AON)"는 상보적 뉴클레오티드 서열을 갖는 프리(pre)-mRNA 또는 mRNA와 상호작용 및/또는 혼성화하여 유전자 발현을 변형시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "보호기"는 화학 반응이 또 다른 비보호된 반응성 부위 상에서 선택적으로 수행될 수 있고 이어서 기가 선택적 반응이 완료된 후 쉽게 제거되거나 탈보호될 수 있도록 다관능성 화합물에서 하나 이상의 반응성 부위를 선택적으로 차단하는 기를 의미하는 것으로 의도된다. 여러 가지의 보호기가 예를 들어 문헌 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York 1999]에 개시되어 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같은 용어 "아미노를 위한 보호기", "아미노 기를 위한 보호기", 또는 "아미노 보호기"는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며 문헌 [Protecting Groups in Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)], [Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, P. G. M. Wuts, 5th edition, John Wiley & Sons, (2014)], 및 [Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, edited by S. L. Beaucage et al. 06/2012], 및 이로써 특히 2장(Chapter)에 상세하게 기재된 것들을 포함한다. 본 발명에 적합한 "아미노 보호기"는 메틸 카르바메이트, 에틸 카르바메이트, 9-플루오레닐메틸 카르바메이트 (Fmoc), 9-(2-술포)플루오레닐메틸 카르바메이트, 2,7-디-t-부틸-[9-(10,10-디옥소-10,10,10,10-테트라히드로티오크산틸)]메틸 카르바메이트 (DBD-Tmoc), 4-메톡시펜아실 카르바메이트 (Phenoc), 2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (Troc), 2-트리메틸실릴에틸 카르바메이트 (Teoc), 2-페닐에틸 카르바메이트 (hZ), 1,1-디메틸-2,2-디브로모에틸 카르바메이트 (DB-t-BOC), 1,1-디메틸-2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (TCBOC), 벤질 카르바메이트 (Cbz), p-메톡시벤질 카르바메이트 (Moz) 및 2,4,6-트리메틸벤질 카르바메이트, (4-메톡시페닐)디페닐메틸 (MMTr); 뿐만 아니라 포름아미드, 아세트아미드, 벤즈아미드를 포함하고 전형적으로 그리고 바람직하게는 각 경우에 이들로부터 독립적으로 선택된다.
본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같은 용어 "히드록실을 위한 보호기", "히드록실 기를 위한 보호기", 또는 "히드록실 보호기"는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며 문헌 [Organic Synthesis, T. W. Greene and P. G. M. Wuts, 3rd edition, John Wiley & Sons, New York (1999)]; [Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, P. G. M. Wuts, 5th edition, John Wiley & Sons, (2014)], 및 [Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, edited by S. L. Beaucage et al. 06/2012], 및 이로써 특히 2장에 상세하게 기재된 것들을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 "히드록실 보호기"는, 아세틸, 벤조일, 벤질, β-메톡시에톡시메틸 에테르 (MEM), 디메톡시트리틸, [비스-(4-메톡시페닐)페닐메틸] (DMTr), 메톡시메틸 에테르 (MOM), 메톡시트리틸 [(4-메톡시페닐)디페닐메틸] (MMT), p-메톡시벤질 에테르 (PMB), 메틸티오메틸 에테르, 피발로일 (Piv), 테트라히드로피라닐 (THP), 테트라히드로푸란 (THF), 트리틸 (트리페닐메틸, Tr), 실릴 에테르, 예컨대 t-부틸디페닐실릴 에테르 (TBDPS), 트리메틸실릴 (TMS), tert-부틸디메틸실릴 (TBDMS), 트리-이소-프로필실릴옥시메틸 (TOM), 및 트리이소프로필실릴 (TIPS) 에테르; 메틸 에테르, 에톡시에틸 에테르 (EE)를 포함하고, 전형적으로 그리고 바람직하게는 각 경우에 이들로부터 독립적으로 선택된다.
본 발명의 "히드록실 보호기"의 바람직한 예는 아세틸, t-부틸, t-부톡시메틸, 메톡시메틸, 테트라히드로피라닐, 1-에톡시에틸, 1-(2-클로로에톡시)에틸, 2-트리메틸실릴에틸, p-클로로페닐, 2,4-디니트로페닐, 벤질, 벤조일, p-페닐벤조일, 2,6-디클로로벤질, 디페닐메틸, p-니트로벤질, 트리페닐메틸 (트리틸), 4,4'-디메톡시트리틸, 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, t-부틸디메틸실릴 (TBDMS), t-부틸디페닐실릴 (TBDPS), 트리페닐실릴, 트리이소프로필실릴, 벤조일포르메이트, 클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 트리플루오로아세틸, 피발로일, 9-플루오레닐메틸 카르보네이트, 메실레이트, 토실레이트, 트리플레이트, 4-모노메톡시트리틸 (MMTr), 4,4'디메톡시트리틸, (DMTr) 및, 4,4',4"-트리메톡시트리틸 (TMTr), 2-시아노에틸 (CE 또는 Cne), 2-(트리메틸실릴)에틸 (TSE), 2-(2-니트로페닐)에틸, 2-(4-시아노페닐)에틸 2-(4-니트로페닐)에틸 (NPE), 2-(4-니트로페닐술포닐)에틸, 3,5-디클로로페닐, 2,4-디메틸페닐, 2-니트로페닐, 4-니트로페닐, 2,4,6-트리메틸페닐, 2-(2-니트로페닐)에틸, 부틸티오카르보닐, 4,4',4"-트리스(벤조일옥시)트리틸, 디페닐카르바모일, 레불리닐, 2-(디브로모메틸)벤조일 (Dbmb), 2-(이소프로필티오메톡시메틸)벤조일 (Ptmt), 9-페닐크산텐-9-일 (pixyl) 또는 9-(p-메톡시페닐)크산틴-9-일 (MOX)을 포함하고 각 경우에 이들로부터 독립적으로 선택된다.
본원에 사용된 바와 같고 Bx로 약칭되는 용어 "핵염기"는, 변형되지 않거나 자연 발생 핵염기뿐만 아니라 변형되거나 비-자연 발생 핵염기 및 그의 합성 모방체를 지칭한다. 핵염기는 핵산의 헤테로시클릭 염기에 수소 결합할 수 있는 하나 이상의 원자 또는 원자 군을 함유하는 임의의 헤테로시클릭 염기이다.
핵염기의 전형적이고 바람직한 예는 퓨린 염기 또는 피리미딘 염기이며, 여기서 바람직하게는 상기 퓨린 염기는 퓨린 또는 치환된 퓨린이고, 상기 피리미딘 염기는 피리미딘 또는 치환된 피리미딘이다. 더 바람직하게는, 핵염기는 (i) 아데닌 (A), (ii) 시토신 (C), (iii) 5-메틸시토신 (MeC), (iv) 구아닌 (G), (v) 우라실 (U), 또는 (vi) 5-메틸우라실 (MeU)이거나, (i), (ii), (iii), (iv), (v) 또는 (vi)의 유도체에 대한 것이다. 용어 "(i), (ii), (iii), (iv), (v) 또는 (vi)의 유도체, 및 "핵염기 유도체"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. (i), (ii), (iii), (iv), (v) 또는 (vi)의 유도체, 및 핵염기 유도체의 유도체는 각각 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌 [Sharma V. K. et al., Med. Chem. Commun., 2014, 5, 1454-1471]에 기재되어 있고, 5-히드록시메틸 시토신, 크산틴, 히포크산틴, 2-아미노아데닌, 알킬 아데닌, 예컨대 6-메틸 아데닌, 2-프로필 아데닌, 알킬 구아닌, 예컨대 6-메틸 구아닌, 2-프로필 구아닌, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로 우라실, 5-할로 시토신, 알키닐 피리미딘 염기, 예컨대 5-프로피닐 (-C=C-CH3) 우라실, 5-프로피닐 (-C=C-CH3) 시토신, 6-아조 우라실, 6-아조 시토신, 6-아조 티민, 슈도-우라실, 4-티오우라실; 8-치환 퓨린 염기, 예컨대 8-할로-, 8-아미노-, 8-티올-, 8-티오알킬-, 8-히드록실-아데닌 또는 구아닌, 5-치환 피리미딘 염기, 예컨대 5-할로-, 특히 5-브로모-, 5-트리플루오로메틸-우라실 또는 -시토신; 7-메틸구아닌, 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌, 7-데아자아데닌, 3-데아자구아닌, 3-데아자아데닌, 소수성 염기, 뒤섞인(promiscuous) 염기, 크기-확장된 염기, 또는 플루오린화 염기를 제한없이 포함한다. 특정 실시양태에서, 핵염기는 트리시클릭 피리미딘, 예컨대 1,3-디아자페녹사진-2-온, 1,3-디아자페노티아진-2-온 또는 9-(2-아미노에톡시)-1,3-디아자페녹사진-2-온 (G-클램프)를 제한없이 포함한다. 용어 "핵염기 유도체"는 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들어 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 또는 2-피리돈에 의해 대체되는 것들을 또한 포함한다. 본 발명의 추가의 핵염기는 통상의 기술자에게 공지된 것들을 제한없이 포함한다 (예를 들어 미국 특허 3,687,808; [Swayze et al., The Medicinal Chemistry of Oligonucleotides, in Antisense a Drug Technology, Chapter 6, pp. 143-182 (Crooke, S.T., ed., 2008)]; [The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., Ed., John Wiley & Sons, 1990, pp. 858-859]; [Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, Vol. 30 (6), pp. 613-623]; [Sanghvi, Y.S., Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. and Lebleu, B., Eds., CRC Press, 1993, pp. 273-302]). 용어 "핵염기 유도체"는 퓨린 또는 피리미딘 염기가, 특히, 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드의 내부에 상기 하나 이상의 지질 모이어티를 연결하기 위한, 본 발명의 스페이서에 상응하는 모이어티로 치환된 것들을 또한 포함한다. 스페이서에 상응하는 상기 모이어티의 특정 연결은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 바람직한 핵염기 유도체는 메틸화된 아데닌, 구아닌, 우라실 및 시토신 및, 바람직하게는 (i), (ii), (iii) 또는 (iv)의 핵염기 유도체를 포함하고, 여기서 각각의 아미노 기, 바람직하게는 엑소시클릭 아미노 기는, 아실 보호기 또는 디알킬포름아미디노, 바람직하게는 디메틸포름아미디노 (DMF)에 의해 보호되고, 핵염기 유도체 예컨대 2-플루오로우라실, 2-플루오로시토신, 5-브로모우라실, 5-아이오도우라실, 2,6-디아미노퓨린, 아자시토신 및 피리미딘 유사체 예컨대 슈도이소시토신 및 슈도우라실을 추가로 포함한다. 변형 핵염기의 제조는 관련 기술분야에 공지되어 있고 미국 특허 번호 3,687,808, 4,845,205; 5,130,302; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502, 177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594, 121; 5,596,091; 5,614,617; 5,645,985; 5,750,692; 5,830,653; 5,763,588; 6,005,096; 및 5,681,941에 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "뉴클레오시드간 연결 기"는, 펩티드, 단백질을 포함한 비-뉴클레오시드, tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드, 또는 추가의 tc-DNA 뉴클레오시드에 상기 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 연결시킬 수 있는, 바람직하게는 연결시키는 관련 기술분야에 공지된 임의의 연결 기를 지칭한다. 이러한 가능한 연결 기를 교시하는 대표적인 특허는 제한없이 미국 특허 5,034,506; 5,166,315; 5,185,444; 5,214,134; 5,216,141; 5,235,033; 5,264,562; 5,264,564; 5,405,938; 5,434,257; 5,466,677; 5,470,967; 5,489,677; 5,541,307; 5,561,225; 5,596,086; 5,602,240; 5,608,046; 5,610,289; 5,618,704; 5,623,070; 5,663,312; 5,633,360; 5,677,437; 5,677,439; 5,646,269 및 5,792,608이다. 따라서, 용어 "뉴클레오시드간 연결 기"는, 인 연결 기 및 비-인 연결 기를 포함한다. 비-인 연결 기는 인 원자를 함유하지 않고 비-인 연결 기의 예는, 알킬, 아릴, 바람직하게는, 페닐, 벤질, 또는 벤조일, 시클로알킬, 알킬렌아릴, 알킬렌디아릴, 알콕시, 알콕시알킬렌, 알킬술포닐, 알킨, 에테르 (각각은 서로 독립적으로 시아노, 니트로, 할로겐으로 임의로 치환됨); 카르복실, 아미드, 아민, 아미노, 이민, 티올, 술피드, 술폭시드, 술폰, 술파메이트, 술포네이트, 술폰아미드, 실록산 또는 그의 혼합물을 포함하고, 전형적으로 그리고 바람직하게는 이들로부터 선택된다. 전형적으로 그리고 바람직하게는, 상기 뉴클레오시드간 연결 기는 인 연결 기이고, 상기 인 연결 기는 PIII 또는 PV 원자가 상태에서 인 원자를 포함하는 모이어티를 지칭한다. 추가로 바람직하게는, 상기 뉴클레오시드간 연결 기는 인 연결 기이다. 다시 추가로 바람직하게는, 상기 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포디에스테르 연결 기, 포스포트리에스테르 연결 기, 포스포로티오에이트 연결 기, 포스포로디티오에이트 연결 기, 포스포네이트 연결 기, 바람직하게는 H-포스포네이트 연결 기 또는 메틸포스포네이트 연결 기; 포스포노티오에이트 연결 기, 바람직하게는 H-포스포노티오에이트 연결 기, 메틸 포스포노티오에이트 연결 기; 포스피네이트 연결 기, 포스포르티오아미데이트 연결 기, 포스포르아미데이트 연결 기, 또는 포스파이트 연결 기로부터 선택된다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포디에스테르 연결 기, 포스포트리에스테르 연결 기, 포스포로티오에이트 연결 기, 또는 포스포네이트 연결 기로부터 선택되고, 여기서 포스포네이트는 바람직하게는 H-포스포네이트 연결 기 또는 메틸포스포네이트 연결 기이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "뉴클레오시드"는 핵염기 및 상기 핵염기에 공유 연결된 당을 포함하는 화합물을 지칭한다. 추가로, 용어 "뉴클레오시드"는 자연 또는 화학적 올리고머 합성을 사용하여 올리고머에 혼입될 수 있는 모든 방식의 자연 발생 또는 변형 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 모방체를 포함하는 것을 의미한다. 전형적으로 그리고 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "뉴클레오시드"는, 자연 발생 뉴클레오시드, 변형 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 모방체를 지칭한다. 용어 "변형 뉴클레오시드"는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고 본원에 기재된 바와 같은 뉴클레오시드의 당 및/또는 핵염기에 대해 이루어진 변형을 포함하는 것으로 의도된다. 용어 "뉴클레오시드 모방체"는 당 및 핵염기를 대체하는데 사용된 그러한 구조를 포함하는 것으로 의도된다. 뉴클레오시드 모방체의 예는 핵염기가 페녹사진 모이어티 (예를 들어 9-(2-아미노에톡시)-1,3-디아자페녹사진-2-온 기)로 대체되고 당 모이어티가 시클로헥세닐 또는 비시클로[3.1.0]헥실 모이어티로 대체된 뉴클레오시드를 포함한다. 용어 "뉴클레오시드"는 하나 초과의 핵염기 변형, 하나 초과의 당 변형 또는 적어도 하나의 핵염기 및 적어도 하나의 당 변형과 같은 변형의 조합을 또한 포함한다.
뉴클레오시드의 당은 모노시클릭, 비시클릭 또는 트리시클릭 고리 시스템, 바람직하게는 트리시클릭 또는 비시클릭 시스템 또는 모노시클릭 리보스 또는 데(스)옥시리보스를 제한없이 포함한다. 당의 변형은 변형 입체화학 배위, 기의 적어도 하나의 치환 또는 기의 적어도 하나의 결실을 추가로 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 변형 당은 전형적으로 그리고 바람직하게는 RNA 및 DNA에서 자연 발생으로서 리보실 모이어티의 변형 형태 (즉 푸라노실 모이어티), 예컨대 비시클릭 당류, 테트라히드로피란, 2'-변형 당류, 3'-변형 당류, 4'-변형 당류, 5'-변형 당류, 또는 4'-치환 당류이다. 적합한 당 변형의 예는 통상의 기술자에게 공지되어 있고 2', 3' 및/또는 4' 치환 뉴클레오시드 (예를 들어 4'-S-변형 뉴클레오시드); 2'-O-변형 RNA 뉴클레오티드 잔기, 예컨대 2'-O-알킬 또는 2'-O-(치환)알킬 예를 들어 2'-O-메틸, 2'-O-(2-시아노에틸), 2'-O-(2-메톡시)에틸 (2'-MOE), 2'-O-(2-티오메틸)에틸; 2'-O-(할로알콕시)메틸 예를 들어 2'-O-(2-클로로에톡시)메틸 (MCEM), 2'-O-(2,2-디클로로에톡시)메틸 (DCEM); 2'-O-알콕시카르보닐 예를 들어 2'-O-[2-(메톡시카르보닐)에틸] (MOCE), 2'-O-[2-(N-메틸카르바모일)에틸] (MCE), 2'-O-[2-(N,N-디메틸카르바모일)에틸] (DMCE), 특히 2'-O-메틸 변형 또는 2'-O-메톡시에틸 (2'-O-MOE); 또는 다른 변형 당 모이어티, 예컨대 모르폴리노 (PMO), 양이온성 모르폴리노 (PMO플러스) 또는 변형 모르폴리노 기, 예컨대 PMO-X를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "PMO-X"는 적어도 하나의 3' 또는 5' 말단 변형, 예컨대 3'-형광 태그, 3' ?처 (예를 들어 3'-카르복시플루오레세인, 3'-유전자 툴즈 불루(Gene Tools Blue), 3'-리스아민, 3'-다브실), 화학적 연결을 위한 3'-친화도 태그 및 관능기 (예를 들어 3'-비오틴, 3'-1급 아민, 3'-디술피드 아미드, 3'-피리딜 디티오), 5'-말단 변형 (5'-1급 아민, 5'-다브실), 3'-아지드, 3'-알킨, 5'-아지드, 5'-알킨을 포함하는 변형 모르폴리노 기를 지칭하거나, WO2011/150408 및 US2012/0065169에 개시된 바와 같다.
"비시클릭 당 모이어티"는 2개의 상호연결된 고리 시스템, 예를 들어 비시클릭 뉴클레오시드를 포함하고 여기서 당 모이어티는 2'-O-CH(알킬)-4' 또는 2'-O-CH2-4' 기, 잠금 핵산 (LNA), 크실로-LNA, 알파-L-LNA, 베타-D-LNA, cEt (2'-O,4'-C 속박(constrained) 에틸) LNA, cMOEt (2'-O,4'-C 속박 메톡시에틸) LNA, 에틸렌-가교된 핵산 (ENA), 헥시톨 핵산 (HNA), 플루오린화 HNA (F-HNA), 피라노실-RNA (p-RNA), 또는 3'-데옥시피라노실-DNA (p-DNA)를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "올리고뉴클레오티드"는 각각 뉴클레오시드간 연결 기에 서로 연결된 적어도 2개의 뉴클레오시드를 포함하는 화합물을 지칭한다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "올리고뉴클레오티드"는, 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결된 적어도 2개의 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물을 포함하고, 전형적으로 그리고 바람직하게는 이들을 지칭하고, 여기서 상기 적어도 2개의 뉴클레오시드는 자연 발생 뉴클레오시드, 변형 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드 모방체로부터 독립적으로 선택된다.
올리고머 화합물은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 한 실시양태에서, 올리고머 화합물은 이중 가닥 (즉 듀플렉스)이다. 바람직한 실시양태에서, 올리고머 화합물은 단일 가닥이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 (i) 상기 올리고머 화합물의 말단 잔기, (ii) 상기 올리고머 화합물의 5' 말단, (iii) 상기 올리고머 화합물의 3' 말단; (iv) 상기 올리고머 화합물의 내부 잔기에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
용어 "' 말단"은 올리고머 화합물의 단부 또는 말단을 지칭하고, 여기서 정수 (3', 5 등)는 올리고머 화합물의 뉴클레오시드에 포함된 당의 탄소 원자를 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "5' 말단 기" 또는 "3' 말단 기"는 각각 5' 말단 또는 3' 말단에 위치한 기를 지칭한다.
본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같은 용어 "자연" 또는 "자연 발생"은 자연 기원의 화합물을 지칭한다.
용어 "상보적"은 상보적 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 사이에 전통적인 왓슨-크릿(Watson-Crick) 염기 쌍형성 또는 다른 비전통적인 유형의 쌍형성 (예를 들어, 후그스틴(Hoogsteen) 또는 역 후그스틴(reversed Hoogsteen) 수소 결합)에 의해 또 다른 핵산 분자와 수소 결합(들)을 형성할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. "상보적" (또는 "특이적으로 혼성화 가능한")은 올리고머 화합물과 프리-mRNA 또는 mRNA 표적 사이에서 안정적이고 특이적인 결합이 일어나도록 충분한 정도의 상보성 또는 정확한 쌍형성을 나타내는 용어이다. 핵산 분자는 특이적으로 혼성화하기 위해 표적 핵산 서열에 100% 상보적일 필요는 없다는 것이 관련 기술분야에서 이해된다. 즉, 2개 이상의 핵산 분자가 완전히 상보적인 것보다 덜 할 수 있다. 상보성은 제2 핵산 분자와 수소 결합을 형성할 수 있는 핵산 분자에서의 인접 잔기의 백분율로 표시될 수 있다. 예를 들어, 제1 핵산 분자가 10개의 뉴클레오티드를 갖고 제2 핵산 분자가 10개의 뉴클레오티드를 갖는 경우, 제1 및 제2 핵산 분자 사이의 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 뉴클레오티드의 염기 쌍형성은 각각 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 및 100% 상보성을 나타낸다. "완벽하게" 또는 "완전히" 상보적인 핵산 분자는 제1 핵산 분자의 모든 인접 잔기가 제2 핵산 분자에서 동일한 수의 인접 잔기와 수소 결합할 것이고, 여기서 핵산 분자는 둘 다 동일한 수의 뉴클레오티드를 갖거나 (즉, 동일한 길이를 갖거나) 두 분자는 상이한 길이를 갖는 것들을 의미한다.
용어 "엑손 스키핑"은 하나 이상의 상보적 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 올리고머 화합물을 사용한 프리-mRNA 내의 스플라이스 공여자 및/또는 수용자 부위의 표적화에 의한 프리-mRNA 스플라이싱의 변형을 지칭한다. 올리고뉴클레오티드는, 하나 이상의 스플라이스 공여자 또는 수용자 부위, 또는 스플라이싱 정의에 관여하는 엑손 또는 인트론 내의 임의의 다른 부위에 대한 스플라이세오솜의 접근을 차단함으로써, 스플라이싱 반응을 방지하고 완전히-프로세싱된 mRNA로부터 엑손을 결실시킬 수 있다. 엑손 스키핑은 프리-mRNA의 성숙 과정 동안에 핵에서 달성된다. 엑손 스키핑은 프리-mRNA 내에서 스플라이스 공여자 서열에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용함으로써 표적화된 엑손의 스플라이싱에 관여하는 주요 서열의 마스킹을 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 상기 올리고머 화합물을 포함하는 본 발명의 조성물은 디스트로핀 프리-mRNA 내의 인트론/엑손 접합부에서 스플라이스 부위의 마스킹을 통해 엑손 스키핑에 적합하게 이용될 수 있으며, 이로써 프리-mRNA의 성숙 mRNA로의 프로세싱 동안에 돌연변이 엑손의 결실을 용이하게 한다.
용어 "엑손 포함"은 엑손 또는 인트론 스플라이싱 인핸서를 차단하고 상응하는 스플라이싱 리프레서를 차단하고/거나 바람직하지 않은 2차 구조를 붕괴시켜, 스플라이세오솜에 의한 엑손의 보다 효율적인 인식 및 엑손 발현의 회복을 발생시키는, 안티센스 올리고뉴클레오티드의 표적 프리-mRNA에 대한 염기-쌍형성과 같은 올리고뉴클레오티드-매개 과정을 지칭한다.
용어 "생체내"는 대상체의 신체 내에서 일어나는 사건을 지칭한다.
용어 "시험관내"는 대상체의 신체 외부에서 일어나는 사건을 지칭한다. 시험관내 검정은 살아있거나 죽은 세포를 이용하는 세포-기반 검정을 포함하고 어떠한 무손상 세포도 이용되지 않는 무세포 검정을 또한 포함할 수 있다.
용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 질환 치료를 포함하나 이에 제한되지는 않는 의도된 적용을 수행하기에 충분한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 화합물의 조합물의 양을 지칭한다. 치료 유효량은 의도된 적용 (시험관내 또는 생체내), 또는 치료되는 인간 대상체 및 질환 상태 (예를 들어, 대상체의 체중, 연령 및 성별), 질환 상태의 중증도, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있는 투여 방식 등에 따라 달라질 수 있다. 상기 용어는 또한 표적 세포에서 특정 반응 (예를 들어, 세포 이동 및/또는 혈소판 부착의 감소)을 유도할 용량에 적용된다. 구체적 용량은 선택된 특정 화합물, 따라야 할 투여 요법, 화합물이 다른 화합물과 함께 투여되는지 여부, 투여 시기, 투여되는 조직, 및 화합물이 운반되는 물리적 전달 시스템에 따라 달라질 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료 효과"는 인간 대상체에서의 치료적 이점 및/또는 예방적 이점을 포함한다. 예방적 효과는 질환 또는 병태의 출현 지연 또는 제거, 질환 또는 병태의 증상의 발병 지연 또는 제거, 질환 또는 병태의 진행 둔화, 중단, 또는 역전, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
용어 "제약상 허용되는 염"은 관련 기술분야에 공지된 여러 가지의 유기 및 무기 반대 이온으로부터 유래된 염을 지칭한다. 제약상 허용되는 산 부가 염은 무기산 및 유기산으로 형성될 수 있다. 염이 유래될 수 있는 무기산은, 예를 들어, 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산 및 인산을 포함한다. 염이 유래될 수 있는 유기산은, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산 및 살리실산을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기로 형성될 수 있다. 염이 유래될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간 및 알루미늄을 포함한다. 염이 유래될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어, 1급, 2급, 및 3급 아민, 자연 발생 치환 아민을 포함한 치환 아민, 시클릭 아민 및 염기성 이온 교환 수지를 포함한다. 구체적 예는 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 및 에탄올아민을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약상 허용되는 염기 부가 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘, 및 마그네슘 염으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 제약상 허용되는 염은 나트륨 염이다.
전형적으로 그리고 바람직하게는 P(III) 또는 P(V)에 결합되고 본 발명의, 상기 하나 이상의 지질 모이어티에, 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 하나 이상의 지질 모이어티의 기 B의 부분으로서 존재하거나, 상기 스페이서에 존재하거나, 상기 올리고머 화합물에, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에, 전형적으로 그리고 바람직하게는 포스포로티오에이트 또는 포스포로디에스테르로부터 선택된, 상기 뉴클레오시드간 연결 기의 부분으로서 존재하는, 히드록실 기 (OH) 또는 티올 기 (SH)의 경우에, 상기 히드록실 기 (OH) 또는 티올 기 (SH) 각각은 서로 독립적으로 상기 OH 기로서 또는 그의 이온 상태 예컨대 O-음이온 및 제약상 허용되는 양이온으로, 또는 상기 SH 기로서 또는 그의 이온 상태 예컨대 S-음이온 및 제약상 허용되는 양이온으로 존재할 수 있다. 특히 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있는, 상기 P(III) 또는 P(V) 상의 추가의 산소 또는 황-함유 기 예컨대 (=O), (=S), 또 다른 OH 또는 SH 기를 고려하여, 본 발명의 조성물에서 상기 언급된 상황 사이의 임의의 조합 및 임의의 평형 상태가 추가로 포함된다. 단순성을 위해, 본 발명의 측면 및 실시양태에서, 전형적으로 상기 언급된 상황 중 하나만이 기재된다. 한 예로서, 본 발명의 바람직한 스페이서는 본원에서 #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§로서 표시된다. 제한없이 표시된 바와 같이, 수소가 산소에 위치하는 스페이서, 따라서 #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)(S)-§ 및 그의 제약상 허용되는 모든 염이 본원에 포함된다.
따라서, 전형적으로 그리고 바람직하게는 P(III) 또는 P(V)에 결합되고 본 발명의, 상기 하나 이상의 지질 모이어티에, 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 하나 이상의 지질 모이어티의 기 B의 부분으로서 존재하거나, 상기 스페이서에 존재하거나, 상기 올리고머 화합물에, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에, 전형적으로 그리고 바람직하게는 포스포로티오에이트 또는 포스포로디에스테르로부터 선택된, 상기 뉴클레오시드간 연결 기의 부분으로서 존재하는, 히드록실 기 (OH) 및 또는 티올 기 (SH)의 맥락에서 제약상 허용되는 염은, 상기 OH 기 또는 상기 SH 기 중 하나 이상이 서로 독립적으로 상기 OH 기로서 또는 그의 이온 상태 예컨대 그의 O-음이온 및 제약상 허용되는 양이온으로, 또는 상기 SH 기로서 또는 그의 이온 상태 예컨대 S-음이온 및 제약상 허용되는 양이온으로 존재하는 본 발명의 조성물을 지칭하며, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 제약상 허용되는 양이온은 양성자화된 트리메틸아민, 양성자화된 디에틸아민, 양성자화된 메틸아민, 암모늄, 나트륨 또는 칼륨으로 선택되고, 추가로 바람직하게는 여기서 상기 제약상 허용되는 양이온은 나트륨이다.
"제약상 허용되는 담체" 또는 "제약상 허용되는 부형제"는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제, 및 불활성 성분을 포함하도록 의도된다. 활성 제약 성분을 위한 이러한 제약상 허용되는 담체 또는 제약상 허용되는 부형제의 용도는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 제약상 허용되는 담체 또는 제약상 허용되는 부형제가 활성 제약 성분과 양립할 수 없는 한에 있어서를 제외하고, 본 발명의 치료 조성물에서의 그의 사용이 고려된다. 다른 약물과 같은 추가의 활성 제약 성분이 기재된 조성물 및 방법에 또한 혼입될 수 있다.
예를 들어, 분자량 또는 화학식과 같은 물리적 또는 화학적 특성을 기재하기 위해 범위가 사용되는 경우, 범위의 모든 조합 및 하위 조합 및 그 안의 구체적 실시양태가 포함되도록 의도된다. 수치 또는 수치 범위를 언급할 때 용어 "약"의 사용은 언급된 수치 또는 수치 범위가 실험 가변성 내의 (또는 통계적 실험 오류 내의) 근사치이므로, 수치 또는 수치 범위가 달라질 수 있음을 의미한다. 변동은 전형적으로 언급된 수치 또는 수치 범위의 0% 내지 15%, 0% 내지 10%, 0% 내지 5%이다.
제1 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물 및 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하는 조성물이며, 여기서 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하는 것인 조성물을 제공한다.
Tc-DNA 뉴클레오시드
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (1)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00001
화학식 (1)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이고;
q1, q2, q3, q4 및 q5는 각각 독립적으로 수소 (H), 할로겐, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, 치환 C1-6알킬, 치환 C2-6알케닐, 치환 C2-6알키닐, 및 -(CH2)n-C(O)-R6'로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 n은 0 내지 6이고 여기서 R6'는 OH, NH2, O-C1-32알킬 및 NH-C1-32알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
z1 및 z2는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-6알킬, C1-6알콕실, O-C2-6알케닐, O-C2-6알키닐, 치환 C1-6알킬, 치환 C1-6알콕시, 치환 O-C2-6알케닐, 및 치환 O-C2-6알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 q5가 H인 화학식 (1)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (1)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (1)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (1)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (2)의 화합물을 포함한다:
Figure pct00002
화학식 (2)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (2)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (2)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (2)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (3)의 화합물 (C(6')-관능화된 tc-DNA로도 공지됨)을 포함한다:
Figure pct00003
화학식 (3)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
R6'는 OH, NH2, O-C1-32알킬 및 NH-C1-32알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (3)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (3)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (3)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (4)의 화합물 (6'-플루오로-tc-DNA로도 공지됨)을 포함한다:
Figure pct00004
화학식 (4)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (4)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (4)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (4)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (5)의 화합물 (2'-플루오로-tc-DNA로도 공지됨)을 포함한다:
Figure pct00005
화학식 (5)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (5)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (5)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (5)의 화합물을 포함한다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 상기 하나 이상의 뉴클레오시드 tc-DNA 뉴클레오시드는 화학식 (5')의 화합물 (2'-플루오로-tc-ANA로도 공지됨)을 포함한다:
Figure pct00006
화학식 (5')
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 티민, 아데닌, 구아닌, 및 시토신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (5')의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (5')의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (5')의 화합물을 포함한다.
올리고머 화합물과 함께 사용하기 위한 화학식 (1) 및 화학식 (2)의 화합물의 일반적인 제조 방법은 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0141637, 2016/0002280, 및 2014/0296323에 기재된 방법을 포함하여, 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. tc-DNA에 대한 표준 포스포르아미다이트 빌딩 블록은 관련 기술분야, 예를 들어, 문헌 [Steffens and Leumann, Helv. Chim. Acta 1997, 80, 2426-2439]에 기재되어 있다. 화학식 (3)의 화합물의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌 [Lietard and Leumann, J. Org. Chem. 2012, 77, 4566-77]에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 화학식 (4)의 화합물의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌 [Medvecky, Istrate, and Leumann, J. Org. Chem. 2015, 80, 3556-65]에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 화학식 (5) 및 (5')의 화합물의 제조 방법은, 예를 들어, 문헌 [Istrate, Medvecky, and Leumann, Org. Lett. 2015, 17, 1950-53]에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
2'-변형 RNA 뉴클레오시드 및 다른 뉴클레오시드
한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 화학식 (6)의 RNA 뉴클레오시드 (RNA 뉴클레오시드)이다:
Figure pct00007
화학식 (6)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (6)의 RNA 뉴클레오시드이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (6)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (6)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 바람직한 본 발명의 조성물의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (7)의 화합물 (2'-O-메틸-RNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00008
화학식 (7)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (7)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (7)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (7)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (8)의 화합물 (2'-O-프로파르길-RNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00009
화학식 (8)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (8)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (8)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (8)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (9)의 화합물 (2'-O-프로필아미노-RNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00010
화학식 (9)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (9)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (9)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (9)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (10)의 화합물 (2'-아미노-RNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00011
화학식 (10)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (10)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (10)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (10)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (11)의 화합물 (2'-플루오로-RNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00012
화학식 (11)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (11)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (11)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (11)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 화학식 (11')의 화합물 (2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드 (2'-FANA))을 포함한다:
Figure pct00013
화학식 (11')
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (11')의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (11')의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (11')의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (12)의 화합물 (2'-O-메톡시에틸-RNA, 또는 2'-MOE, 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00014
화학식 (12)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (12)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (12)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (12)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 화학식 (13)의 화합물 (모르폴리노 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00015
화학식 (13)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (13)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (13)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (13)의 화합물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 화학식 (14)의 화합물 (잠금 핵산 또는 LNA 뉴클레오시드)을 포함한다:
Figure pct00016
화학식 (14)
상기 식에서,
Bx는 핵염기이고;
T1 및 T2 중 하나는 뉴클레오시드간 연결 기이고, T1 및 T2 중 다른 하나는 OR1, OR2, 5' 말단 기, 3' 말단 기 또는 뉴클레오시드간 연결 기이고, 여기서 R1은 H 또는 히드록실 보호기이고, R2는 인 모이어티이다.
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 시토신, 아데닌, 구아닌, 및 우라실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화학식 (14)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 변형 염기인 화학식 (14)의 화합물을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 Bx가 5-메틸시토신, 5-메틸우라실, 5-브로모우라실, 이노신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형 염기인 화학식 (14)의 화합물을 포함한다.
올리고머 화합물과 함께 사용하기 위한 화학식 (6) 내지 화학식 (14)의 화합물의 일반적인 제조 방법은 미국 특허 번호 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,81l;5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,670,633; 5,700,920; 5,792,847; 및 6,600,032; 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0141637, 2016/0002280, 및 2014/0296323; 및 문헌 [Renneberg, et al., J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 5993-6002]에 기재된 방법을 포함하여, 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로
리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드;
데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드;
2'-변형-RNA 뉴클레오시드
바람직하게는 2'-O-N-C 가교된 시스템을 갖는 2',4'-BNA (2',4'-BNANC)로부터 선택된 비시클릭 핵산 (2',4'-BNA) 뉴클레오시드, LNA-α-L-LNA의 입체이성질체 및 에틸렌 핵산 (ENA) 뉴클레오시드;
펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드;
2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 (FANA) 뉴클레오시드;
헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드; 및
포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드
로부터 선택된다.
본 발명에 유용한 추가의 뉴클레오시드는 문헌 [Biochemistry 2005, 44, 9045-9057]에 기재된 바와 같은 다른 친유성 2'-O-알킬 RNA와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 공지되어 있다.
비-뉴클레오시드
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물은 관련 기술분야에 비-뉴클레오시드 링커, 비-뉴클레오티드 링커, 및 비뉴클레오티딜 링커로도 공지된 비-뉴클레오시드를 포함하며, 이는 예를 들어, 리보푸라논 모이어티의 당 탄소에 대한 매우 유연한 대체물이고, 본 발명의 올리고머 화합물의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드를 대체하는데 사용될 수 있다. 예시적인 비-뉴클레오티드는 화학식 (15)에 나타낸 1,3-프로판디올 기이며, 이는 2개의 예시적인 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결을 연결하는 것으로 나타나 있다:
Figure pct00017
화학식 (15)
화학식 (15)에서의 물결 선은 본원에 기재된 바와 같이 추가의 올리고머 반복 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드간 연결 단위를 의미한다.
본 발명의 비-뉴클레오티드는 화학식 (15)에 나타낸 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결이 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결로 대체되는 실시양태를 포함한, 본원에 기재된 뉴클레오시드간 연결 중 어느 하나와 함께 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 비-뉴클레오티드는 1,3-프로판디올 기이다. 1,3-프로판디올 기의 올리고머 화합물로의 합성 및 혼입은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Seela and Kaiser, Nuc. Acids Res. 1987, 15, 3113-29]에 기재되어 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물은 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결, 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결, 또는 그의 혼합물에 의해 연결된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개의 1,3-프로판디올 기를 포함한다.
다양한 길이의 에틸렌 글리콜 올리고머 (즉, 단일 비-뉴클레오시드를 형성하기 위해 연결된 1, 2, 3개 또는 그 초과의 에틸렌 글리콜 단위)와 같은 대안적인 비-뉴클레오시드가 본 발명의 올리고머 화합물과 함께 또한 사용될 수 있다. 다양한 적합한 에틸렌 글리콜 기가, 예를 들어, 문헌 [Pils and Micura, Nuc. Acids Res. 2000, 28, 1859-63]에 기재되어 있다. 비-뉴클레오시드의 합성 및 용도는 또한, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,573,906에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
뉴클레오시드간 연결 기
한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포로디에스테르 연결, 포스포트리에스테르 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 메틸 포스포네이트 연결, 알킬 포스포네이트 연결, 5'-알킬렌 포스포네이트 연결, 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포르아미데이트 연결, 3'-아미노포스포르아미데이트 연결, 아미노알킬 포스포르아미데이트 연결, 티오노포스포르아미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 셀레노포스페이트 연결, 및 보라노포스페이트 연결로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 뉴클레오시드간 연결은 포스포로티오에이트 연결 및 포스포로디에스테르 연결로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 올리고머 화합물의 뉴클레오시드간 연결은 단지 포스포로디에스테르 연결을 포함한다.
예시적인 포스포로티오에이트 연결은 화학식 (16)에 표시되어 있다:
Figure pct00018
화학식 (16)
예시적인 포스포로디에스테르 연결은 화학식 (17)에 표시되어 있다:
Figure pct00019
화학식 (17)
화학식 (16) 및 화학식 (17)에서의 물결 선은 본원에 기재된 바와 같이 추가의 올리고머 반복 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드간 연결을 나타낸다.
올리고머 화합물과 함께 사용하기 위한 뉴클레오시드간 연결의 일반적인 제조 방법은 미국 특허 번호 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,196; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286, 717; 5,321, 131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,306; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; 5, 194,599; 5,565,555; 5,527,899; 5,721,218; 5,672,697 및 5,625,050에 기재된 방법을 포함하여, 관련 기술분야에 공지되어 있고, 상기 특허의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. 포스포로티오에이트는, 예를 들어, 4-반응 3'- 내지 5'-연장 사이클 (탈트리틸화, 커플링, PADS를 사용한 황화, 및 캡핑), 이어서 탈보호, 지지체로부터의 절단, 및 정제 단계를 사용하는 고상 합성의 일부로서, 예를 들어, 문헌 [Krotz, et al., Org. Proc. R&D 2004, 8, 852-58]에 기재된 페닐아세틸 디술피드 (PADS) 화학을 사용하여, 포스페이트 트리에스테르로부터 제조될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인 모이어티"는 PIII 또는 PV 원자가 상태에서 인 원자를 포함하고 화학식 (18)로 표시되는 모이어티를 지칭하고
Figure pct00020
화학식 (18)
상기 식에서,
W는 O, S 또는 Se를 나타내거나 W는 전자쌍을 나타내고;
R3 및 R4는 서로 독립적으로 H, 할로겐, OH, OR5, NR6R7, SH, SR8, C1-C6알킬, C1-C6할로알킬, C1-C6알콕시, C1-C6할로알콕시, C1-C6아미노알킬이고; 여기서 R5는 C1-C9알킬, C1-C6알콕시 (각각은 서로 독립적으로 시아노, 니트로, 할로겐, -NHC(O)C1-C3알킬, -NHC(O)C1-C3할로알킬, C1-C3알킬술포닐로 임의로 치환됨); 아릴, C1-C6알킬렌아릴, C1-C6알킬렌디아릴 (각각은 서로 독립적으로 시아노, 니트로, 할로겐, C1-C4알콕시, C1-C4할로알킬, C1-C4할로알콕시, NHC(O)C1-C3알킬, NHC(O)C1-C3할로알킬, C1-C3알킬술포닐로 임의로 치환됨); 아세틸; 히드록실 보호기이고; 여기서 R6 및 R7은 서로 독립적으로 수소, C1-C9알킬 (시아노, 니트로, 할로겐, C2-C6알케닐, C3-C6시클로알킬, C1-C3알콕시로 임의로 치환됨); 아릴 (시아노, 니트로, 할로겐, C1-C3알킬, C1-C3알콕시로 임의로 치환됨); 아미노 보호기이거나; 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 여기서 바람직하게는 상기 헤테로시클릭 고리는 피롤리디닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 피페라지닐 및 호모피페라진으로부터 선택되고, 여기서 상기 헤테로시클릭 고리는 C1-C3 알킬로 임의로 치환되고; 여기서 R8은 티올 보호기이고; 여기서 물결 선은 화학식 (1) 내지 (14) 중 어느 하나에서의 또는 본원에 화학식에 의해 명시적으로 나타내지 않은 뉴클레오시드에 유사한 방식으로 상기 OR2 기의 산소에의 부착을 나타낸다. W가 O, S 또는 Se를 나타내는 경우, 상기 인 모이어티 내의 상기 P 원자는 그의 PV 원자가 상태에 있다. W가 전자쌍을 나타내는 경우, 상기 인 모이어티 내의 상기 P 원자는 그의 PIII 원자가에 있다. 화학식 (18)의 모이어티는 임의의 가능한 입체이성질체를 포함한다. 화학식 (18)로 표시되는 상기 모이어티에 추가로 그의 염이 포함되며, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 염은 무기 염기 또는 아민으로 처리시 형성되며, 전형적으로 그리고 바람직하게는 반응으로부터 유래된 염이고 여기서 OH 또는 SH 기는 (서로 독립적으로) 상기 R3 및 R4이다. OH 또는 SH 기를 가진 상기 염 형성을 야기하는 바람직한 무기 염기 또는 아민은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 전형적으로 그리고 바람직하게는 트리메틸아민, 디에틸아민, 메틸아민 또는 수산화암모늄이다. 본 발명에 포함된 이들 인 모이어티는, 적절한 경우, "O-HB+"로도 약칭되며, 여기서 상기 HB+는 형성된 반대 양이온을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인 모이어티"는 포스포네이트, 포스파이트 트리에스테르, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 포스페이트 트리에스테르, 포스페이트 디에스테르, 티오포스페이트 에스테르, 디-티오포스페이트 에스테르 또는 포스포르아미다이트로부터 유래된 모이어티를 포함하고, 전형적으로 그리고 바람직하게는 각 경우에 이들로부터 독립적으로 선택된다. 따라서, 한 실시양태에서, 화학식 (1) 내지 (14) 중 어느 하나에서 또는 본원에 화학식에 의해 명시적으로 나타내지 않은 뉴클레오시드에 유사한 방식으로 상기 OR2는 각 경우에 포스포네이트, 포스파이트 트리에스테르, 모노포스페이트, 디포스페이트, 트리포스페이트, 포스페이트 트리에스테르, 포스페이트 디에스테르, 티오포스페이트 에스테르, 디-티오포스페이트 에스테르 또는 포스포르아미다이트로부터 독립적으로 선택된다. 본 발명에서 사용가능한 추가의 인 모이어티는 문헌 [Tetrahedron Report Number 309 (Beaucage and Iyer, Tetrahedron, 1992, 48, 2223-2311)]에 개시되어 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인 모이어티"는 바람직하게는, PIII 또는 PV 원자가 상태에서 인을 포함하고 화학식 (19), 화학식 (20) 또는 화학식 (21)에 의해 각 경우에 독립적으로 나타내어지는, 화학식 (1) 내지 (14) 중 어느 하나에 정의된 바와 같거나 본원에 임의의 화학식에 의해 명시적으로 나타내지 않은 뉴클레오시드에 유사한 방식으로 기 R2 를 지칭하고,
Figure pct00021
화학식 (19)
Figure pct00022
화학식 (20)
Figure pct00023
화학식 (21)
상기 식에서, Y는 O, S 또는 Se이고, 여기서 Y는 바람직하게는 O 또는 S이고, 더 바람직하게는 Y는 O이고; R5 및 R5'는 독립적으로 각 경우에 그리고 서로 수소, C1-C9알킬, C1-C6알콕시 (각각은 서로 독립적으로 시아노, 니트로, 할로겐, -NHC(O)C1-C3알킬, -NHC(O)C1-C3할로알킬, C1-C3알킬술포닐로 임의로 치환됨); 아릴, C1-C6알킬렌아릴, C1-C6알킬렌디아릴 (각각은 서로 독립적으로 시아노, 니트로, 할로겐, C1-C4알콕시, C1-C4할로알킬, C1-C4할로알콕시, -NHC(O)C1-C3알킬, NHC(O)C1-C3할로알킬, C1-C3알킬술포닐로 임의로 치환됨); 히드록실 보호기이고; 여기서 R6 및 R7은 서로 독립적으로 수소, C1-C9알킬 (시아노, 니트로, 할로겐, C2-C6알케닐, C3-C6시클로알킬, C1-C3알콕시로 임의로 치환됨); 아릴, 바람직하게는 페닐 (시아노, 니트로, 할로겐, C1-C3 알킬, C1-C3알콕시로 임의로 치환됨); 아미노 보호기이거나; 이들이 부착되어 있는 질소 원자와 함께 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 여기서 바람직하게는 상기 헤테로시클릭 고리는 피롤리디닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 피페라지닐 및 호모피페라진으로부터 선택되고, 여기서 상기 헤테로시클릭 고리는 C1-C3 알킬로 임의로 치환되고; 여기서 R8은 티올 보호기이고; 여기서 물결 선은 화학식 (1) 내지 (5) 중 어느 하나에서 상기 OR2 기의 산소에의 부착을 나타낸다.
조성물
따라서, 제1 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물 및 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하는 조성물이며, 여기서 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하는 것인 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티, 지방 이산 모이어티, 글리세로지질 모이어티, 글리세로인지질 모이어티, 스핑고지질 모이어티, 인지질, 알킬포스페이트 모이어티 및 알킬포스포네이트 모이어티로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티, 지방 이산 모이어티, 인지질, 알킬포스페이트 모이어티 및 알킬포스포네이트 모이어티로부터 선택된다.
한 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방 이산 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 글리세로지질 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 글리세로인지질 모이어티이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 스핑고지질 모이어티이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 알킬포스페이트 모이어티이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 알킬포스포네이트 모이어티이다.
한 실시양태에서, 하나 이상의 지질 모이어티는 pH 7.4에서 음으로 하전되며, 여기서 전형적으로 상기 pH 7.4는 생리학적 pH에 상응한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티, 지방 이산 모이어티, 알킬포스페이트 모이어티 및 알킬포스포네이트 모이어티로부터 선택된다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티 또는 지방 이산 모이어티이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 포화 지방산 모이어티이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 불포화 지방산 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방 이산 모이어티이고, 여기서 상기 지방 이산 모이어티는 포화 지방 이산 모이어티이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방 이산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 불포화 지방 이산 모이어티이다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 포화 비분지형 지방산 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 포화 비분지형 지방산으로부터 유래된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방 이산 모이어티이고, 여기서 상기 지방 이산 모이어티는 포화 비분지형 지방 이산으로부터 유래된다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 지방산 모이어티 또는 지방 이산 모이어티이고, 여기서 상기 지방산 모이어티는 포화 비분지형 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 지방 이산 모이어티는 포화 비분지형 지방 이산 모이어티이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (I)의 모이어티이고
A-B-* (I)
여기서, A는 C3-32알킬, C3-32알케닐, C3-32알키닐, HOOC-C3-32알킬렌, HOOC-C3-32알케닐렌 또는 HOOC-C3-32알키닐렌이고, B는 C(O), OP(OH), OP(O)OH), OP(O)(SH), NH-C(O), NH-P(O)(OH), NH-P(O)(SH)이거나 또는 그의 제약상 허용되는 염이고; 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타낸다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (a) 내지 (u) 중 어느 하나로부터 선택되고
a. C3-32알킬-C(O)-*,
b. C3-32알케닐-C(O)-*,
c. C3-32알키닐-C(O)-*,
d. C3-32알킬-OP(OH)-*,
e. C3-32알케닐-OP(OH)-* ,
f. C3-32알키닐-OP(OH)-* ,
g. C3-32알킬-OP(O)(OH)-*,
h. C3-32알케닐-OP(O)(OH)-*,
i. C3-32알키닐-OP(O)(OH)-*,
j. C3-32알킬-OP(O)(SH)-*,
k. C3-32알케닐-OP(O)(SH)-*,
l. C3-32알키닐-OP(O)(SH)-*,
m. C3-32알킬-NH-C(O)-*,
n. C3-32알케닐-NH-C(O)-*,
o. C3-32알키닐-NH-C(O)-*,
p. C3-32알킬-NH-P(O)(OH)-*,
q. C3-32알케닐-NH-P(O)(OH)-*,
r. C3-32알키닐-NH-P(O)(OH)-*,
s. HOOC-C3-32알킬렌-C(O)-*,
t. HOOC-C3-32알케닐렌-C(O)-*, 및
u. HOOC-C3-32알키닐렌-C(O)-*,
여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타낸다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-OP(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-OP(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-OP(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-OP(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-OP(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-OP(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-OP(O)(SH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-OP(O)(SH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-OP(O)(SH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-NH-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-NH-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-NH-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-NH-P(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-NH-P(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알키닐-NH-P(O)(OH)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 HOOC-C3-32알킬렌-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 HOOC-C3-32알케닐렌-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 HOOC-C3-32알키닐렌-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (a) 내지 (d) 중 어느 하나로부터의 모이어티이고
a. C3-32알킬-C(O)-*,
b. HOOC-C3-32알킬렌-C(O)-*,
c. C3-32알킬-OP(O)(OH)-*
d. C3-32알킬-OP(O)(SH)-*
여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 비분지형 C3-32알킬이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬이고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 비분지형 C3-32알킬렌이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬렌이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 비분지형 C3-32알킬이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 C3-32알킬이 비분지형 C3-32알킬이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알킬-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 C3-32알킬이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알케닐이 분지형 C3-32알케닐이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알케닐이 홀수의 탄소 원자를 갖는 분지형 C3-32알케닐이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 C3-32알케닐이 분지형 C3-32알케닐이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 C3-32알케닐-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 조성물은 정확히 하나의 지질 모이어티를 포함하고, 여기서 상기 C3-32알케닐은 홀수의 탄소 원자를 갖는 분지형 C3-32알케닐이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 포화 C8-26-지방산 모이어티이고, 여기서 바람직하게는 상기 포화 C8-26-포화 지방산 모이어티는 카프릴산 (C8), 카프르산 (C10), 라우르산 (C12), 미리스트산 (C14), 팔미트산 (C16), 스테아르산 (C18), 아라키드산 (C20), 리노세르산 (C22) 또는 세로트산 (C24)으로부터 유래된다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 포화 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 포화 지방산 모이어티는 카프릴산 (C8), 카프르산 (C10), 라우르산 (C12), 미리스트산 (C14), 팔미트산 (C16), 스테아르산 (C18), 아라키드산 (C20), 리노세르산 (C22) 및 세로트산 (C24)으로부터 유래된다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 팔미트산 (C16) 또는 스테아르산 (C18)으로부터 유래된 포화 지방산 모이어티이고, 여기서 바람직하게는 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 팔미트산 (C16)으로부터 유래된 포화 지방산 모이어티이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 불포화 C14-22-지방산 모이어티이고, 여기서 바람직하게는 상기 불포화 C14-22-지방산 모이어티는 미리스톨레산, 팔미톨레산, 사피엔산, 올레산, 엘라이드산, 박센산, 리놀레산, 리놀레라이드산, α-리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 에루크산 및 도코사헥사엔산으로부터 유래된다. 추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 팔미톨레산으로부터 유래된 포화 지방산 모이어티이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 불포화 지방산 모이어티이고, 여기서 상기 불포화 지방산 모이어티는 미리스톨레산, 팔미톨레산, 사피엔산, 올레산, 엘라이드산, 박센산, 리놀레산, 리놀레라이드산, α-리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산, 에루크산 및 도코사헥사엔산으로부터 유래된다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 올레산으로부터 유래된 불포화 지방산 모이어티이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-C3-32알킬렌-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 비분지형 C3-32알킬렌이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬렌이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)(C5-25알킬)-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3의 정수이고, 여기서 t는 서로 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)[(CH2)sCH3]-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3의 정수이고, 여기서 s는 서로 독립적으로 4 내지 24의 정수이고, 여기서 t는 서로 독립적으로 1 내지 3의 정수이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)[(CH2)sCH3]-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 s는 서로 독립적으로 5 내지 19의 정수이고, 여기서 t는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)[(CH2)sCH3]-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 1이고, 여기서 s는 서로 독립적으로 4 내지 24, 바람직하게는 5 내지 19의 정수이고, 여기서 t는 1이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)[(CH2)sCH3]-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 1이고, 여기서 s는 서로 독립적으로 5 내지 19, 바람직하게는 11 내지 17의 정수이고, 여기서 t는 1이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 화학식 (HOOC)-(CH2)r-(CH)[(CH2)sCH3]-(CH2)t-C(O)-*의 모이어티이고, 여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 r은 1이고, 여기서 s는 15이고, 여기서 t는 1이다.
따라서, 추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 3-펜타데실글루타르산 (PDG)이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 지질 모이어티는 상기 올리고머 화합물에 직접 연결된다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
한 실시양태에서, 상기 스페이서는 5 내지 30개의 C-원자, 바람직하게는 5 내지 25개의 C-원자, 더 바람직하게는 5 내지 20개의 C-원자, 또는 가장 바람직하게는 5 내지 17개의 C-원자를 갖는다. 추가적 실시양태에서, 상기 스페이서는 4 내지 20개의 헤테로-원자, 바람직하게는 4 내지 18개의 헤테로-원자, 더 바람직하게는 4 내지 14개의 헤테로-원자, 또는 가장 바람직하게는 4 내지 12개의 헤테로-원자를 갖는다. 헤테로-원자의 특히 바람직한 예는 N-, 및 O-원자이다. H-원자는 헤테로-원자가 아니다.
바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
#-NH-C2-12알킬렌-§,
#-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
#-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§,
#-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§,
#-SH-C2-12알킬렌-§,
#-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
#-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
#-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§,
여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O-, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -OP(OH)O-, OP(O)(SH)O-, OP(O)(OH)O-, NHP(O)(OH)O-, NHP(O)(SH)O-, 또는 -(O-CH2-CH2)k- (여기서 k는 1 내지 8의 정수임)에 의해 임의로 대체되고, 여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 서로 독립적으로 하나 이상의 -COOH, -NH2, -OP(O)(OH)2 또는 -OH로 임의로 치환되고 (따라서 C2-12알킬렌에서 하나 이상의 -CH2-모이어티에서 수소 원자 중 하나 또는 둘 다, 바람직하게는 하나는 서로 독립적으로 하나 이상의 -COOH, -NH2, -OP(O)(OH)2 또는 -OH로 임의로 치환됨을 의미), 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-NH-C2-12알킬렌-§,
b. #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
c. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§,
d. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§,
e. #-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
f. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
g. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§,
여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-NH-C2-12알킬렌-§,
b. #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
c. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§,
d. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§,
e. #-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
f. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
g. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§,
여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O-, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -OP(OH)O-, OP(O)(SH)O-, OP(O)(OH)O-, NHP(O)(OH)O-, NHP(O)(SH)O-, 또는 -(O-CH2-CH2)k- (여기서 k는 1 내지 8의 정수임)에 의해 임의로 대체되고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-NH-C2-12알킬렌-§,
b. #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
c. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§,
d. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§,
e. #-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
f. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
g. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§.
여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O-, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -OP(OH)O-, OP(O)(SH)O-, OP(O)(OH)O-, NHP(O)(OH)O-, NHP(O)(SH)O-, 또는 -(O-CH2-CH2)k- (여기서 k는 1 내지 8의 정수임)에 의해 임의로 대체되고, 여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 서로 독립적으로 하나 이상의 -COOH, -NH2, -OP(O)(OH)2 또는 -OH로 임의로 치환되고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-NH-C2-12알킬렌-§,
b. #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
c. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§,
d. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§,
e. #-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
f. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
g. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§,
여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O-, 페닐, 트리아졸릴, 시클로펜틸, 시클로헥실, 숙신이미딜, -OP(OH)O-, OP(O)(SH)O-, OP(O)(OH)O-, NHP(O)(OH)O-, NHP(O)(SH)O-, 또는 -(O-CH2-CH2)k- (여기서 k는 1 내지 8의 정수임)에 의해 임의로 대체되고, 여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 서로 독립적으로 하나 이상의 -COOH, -NH2, -OP(O)(OH)2 또는 -OH로 임의로 치환되고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고:
a. -NH-(CH2)m-,
b. -NH-(CH2)m-X-,
c. -NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-,
d. -NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-,
e. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-,
f. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-X-,
g. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)m-,
h. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)m-X-,
i. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-,
j. -NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)rX-,
여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 내지 8의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 2 내지 12의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고:
a. #-NH-(CH2)m-§,
b. #-NH-(CH2)m-X-§,
c. #-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-§,
d. #-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§,
e. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-§,
f. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-X-§,
g. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)m-§,
h. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)m-X-§,
i. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§,
j. #-NH-CH(COOH)-(CH2)q-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)r-X-§,
여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(OH)(S) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 내지 8의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 2 내지 12의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. -Z-NH-(CH2)m-X-
b. -Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-
c. -Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-
d. -Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, 여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH), OP(O)(OH), NHP(O)(OH), NHP(O)(SH) 또는 NH-C(O)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 내지 8의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 2 내지 12의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6, 바람직하게는 3 또는 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, 여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH), OP(O)(OH), NHP(O)(OH), NHP(O)(SH) 또는 NH-C(O)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 내지 8의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 2 내지 12의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6, 바람직하게는 3 또는 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, 여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH), OP(O)(OH), NHP(O)(OH), NHP(O)(SH) 또는 NH-C(O)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 4 내지 8의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 4 내지 8의 정수이고, 여기서 n은 2이고, 여기서 p는 1이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(O)(SH) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 4 내지 8의 정수이고, 여기서 n은 2이고, 여기서 p는 1이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(O)(SH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 4 내지 8의 정수이고, 여기서 n은 2이고, 여기서 p는 1이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 또는 2의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 4 내지 8의 정수이고, 여기서 n은 2이고, 여기서 p는 1이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고
a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-C[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(O)(SH) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 k는 1이고, 여기서 m은 6이고, 여기서 n은 2이고, 여기서 p는 1이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 6의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 #-Z-NH-(CH2)m-X-§를 포함하고, 바람직하게는 이것이고, 여기서 -Z-는 결합을 나타내고, X는 서로 독립적으로 OP(O)(SH) 또는 OP(O)(OH)이고, 여기서 m은 6이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 #-Z-NH-(CH2)m-X-§를 포함하고, 바람직하게는 이것이고, 여기서 -Z-는 결합을 나타내고, X는 OP(O)(OH)이고, 여기서 m은 6이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 스페이서는 #-Z-NH-(CH2)m-X-§를 포함하고, 바람직하게는 이것이고, 여기서 -Z-는 결합을 나타내고, X는 OP(O)(SH)이고, 여기서 m은 6이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타낸다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함되는, -OP(O)(SH)- 또는 -OP(O)(OH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 또는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기 또는 3'-말단 OH-기에 연결된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 (i) 상기 올리고머 화합물의 말단 잔기, (ii) 상기 올리고머 화합물의 5' 말단, (iii) 상기 올리고머 화합물의 3' 말단; (iv) 상기 올리고머 화합물의 내부 잔기에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 상기 정확히 하나의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 상기 올리고머 화합물의 말단 잔기에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 상기 정확히 하나의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 상기 올리고머 화합물의 5' 말단에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 상기 정확히 하나의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 상기 올리고머 화합물의 3' 말단에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 상기 정확히 하나의 지질 모이어티는 서로 독립적으로 상기 올리고머 화합물의 내부 잔기에서 상기 올리고머 화합물에 연결된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함되는, -OP(O)(SH)- 또는 -OP(O)(OH)- 또는 -NHP(O)(OH)- 또는 -NHP(O)(SH)- 또는 -NH-C(O)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 또는 상기 -OP(O)(OH)- 또는 상기 -NHP(O)(OH)- 또는 상기 -NHP(O)(SH)- 또는 상기 -NH-C(O)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기 또는 3'-말단 OH-기에 연결된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(SH)- 또는 -OP(O)(OH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 또는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기 또는 3'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(SH)- 또는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(SH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기 또는 3'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(SH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(SH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 3'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(SH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(OH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -P(O)(OH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기 또는 3'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(OH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -P(O)(OH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 5'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티, 바람직하게는 정확히 하나의 지질 모이어티는, -OP(O)(OH)- 모이어티를 통해 스페이서를 통해 또는 직접 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드에 공유 결합되고, 여기서 상기 -P(O)(OH)- 모이어티는 상기 올리고머 화합물의 3'-말단 OH-기에 연결되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 -OP(O)(OH)- 모이어티는 상기 하나 이상의 지질 모이어티 또는 상기 스페이서에 의해 포함된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드를 포함하지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드를 포함하지 않는다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 50% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 60% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 70% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 75% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 80% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 85% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 90% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 95% 이상의 모든 뉴클레오시드가 tc-DNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로
i. 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드;
ii. 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드;
iii. 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드;
iv. 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드;
v. 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드;
vi. 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드;
vii. 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드; 및
viii. 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드
로부터 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 자기-상보성 왓슨-크릭 염기 쌍을 형성하는 적어도 2개의 인접 위치에서 혼입된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 2'-변형-RNA 뉴클레오시드는 자기-상보성 왓슨-크릭 염기 쌍을 형성하는 3개 이상의 인접 위치에서 혼입된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로
i. RNA 뉴클레오시드;
ii. 2'-O-메틸-RNA 뉴클레오시드;
iii. 2'-O-프로파르길-RNA 뉴클레오시드;
iv. 2'-O-프로필아미노-RNA 뉴클레오시드;
v. 2'-O-아미노-RNA 뉴클레오시드;
vi. 2'-플루오로-RNA 뉴클레오시드;
vii. 2'-O-메톡시에틸-RNA 뉴클레오시드;
viii. 모르폴리노 뉴클레오시드; 및
ix. 잠금 핵산 뉴클레오시드
로부터 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-O-메틸-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-O-프로파르길-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-O-프로필아미노-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-O-아미노-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-플루오로-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 2'-O-메톡시에틸-RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 모르폴리노 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 서로 독립적으로 잠금 핵산 RNA 뉴클레오시드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 표적 서열에 상보적이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은, 최대 40개의 단량체 하위단위, 바람직하게는 최대 30개의 단량체 하위단위, 더 바람직하게는 최대 30개의 단량체 하위단위, 더욱 더 바람직하게는 최대 20개의 단량체 하위단위 또는 최대 15개의 단량체 하위단위의 길이를 갖는다. 추가 실시양태에서, 상기 올리고머는 5 내지 40개의 단량체 하위단위, 바람직하게는 8 내지 30개의 단량체 하위단위, 더 바람직하게는 8 내지 25개의 단량체 하위단위, 더욱 더 바람직하게는 8 내지 20개의 단량체 하위단위를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 5 내지 40개의 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 10 내지 30개의 뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 10 내지 25개의 뉴클레오티드를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하고, 여기서 상기 올리고머 화합물은 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위는 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 단량체 하위단위는 서로 독립적으로 자연 발생 뉴클레오시드, 변형 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드의 모방체로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 자연 발생 뉴클레오시드, 상기 변형 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드의 상기 모방체는 서로 독립적으로 트리시클릭 뉴클레오시드, 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 단량체 하위단위는 서로 독립적으로 자연 발생 뉴클레오시드, 변형 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드의 모방체로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 자연 발생 뉴클레오시드, 상기 변형 뉴클레오시드 및 뉴클레오시드의 상기 모방체는 서로 독립적으로 트리시클릭 뉴클레오시드, 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 상기 단량체 하위단위는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나 이상이 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나 이상이 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나 이상이 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드를 포함하지 않는다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드를 포함하지 않는다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 포함한다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드, 또는 상기 하나 이상의 tc-DNA 뉴클레오시드 및 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 하나 이상의 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 모두는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나는 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 5개, 바람직하게는 많아야 4개, 추가로 바람직하게는 많아야 3개는 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드외에 상기 많아야 5개, 바람직하게는 많아야 4개, 추가로 바람직하게는 많아야 3개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 3개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 3 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 2개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 2개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 1개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 1개의 뉴클레오시드가 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나는 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나는 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나는 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드 및 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 2개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 2개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기, 포스포로디티오에이트 연결 기, 및 포스포로디에스테르 연결 기, 포스포트리에스테르 연결 기, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결 기, 메틸 포스포네이트 연결 기, 알킬 포스포네이트 연결 기, 5'-알킬렌 포스포네이트 연결 기, 포스포네이트 연결 기, 포스피네이트 연결 기, 포스포르아미데이트 연결 기, 3'-아미노포스포르아미데이트 연결 기, 아미노알킬 포스포르아미데이트 연결 기, 티오노포스포르아미데이트 연결 기, 티오노알킬포스포네이트 연결 기, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결 기, 셀레노포스페이트 연결 기, 또는 보라노포스페이트 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 50% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 45% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 40% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 35% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 33% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 30% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 25% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 20% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 20% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 15% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 10% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 5% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 어느 것 (0%)도 포스포로티오에이트 연결 기가 아니다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 8개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 7개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 6개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 5개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 4개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 3개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 2개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 1개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 어느 것 (제로/0)도 포스포로티오에이트 연결 기가 아니다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 30% 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 50%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 55%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 60%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 65%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 66%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 70%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 75%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 80%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 85%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 90%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 적어도 95%의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 모두 (100%)는 포스포로디에스테르 연결 기이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 적어도 80%는 포스포로디에스테르 연결 기이고, 여기서 바람직하게는 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 6개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 5개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 4개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 3개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 2개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 1개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다. 따라서, 또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 모두는 포스포로디에스테르 연결 기이다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 3개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 3개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 6개 이하, 바람직하게는 5개 이하, 추가로 바람직하게는 4개 이하, 더욱 추가로 바람직하게는 3개 이하, 추가로 바람직하게는 2개 이하, 추가로 바람직하게는 1개 이하는 포스포로티오에이트 연결 기이다. 본 발명의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 모두는 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드의 많아야 2개가 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 2개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 6개 이하, 바람직하게는 5개 이하, 추가로 바람직하게는 4개 이하, 더욱 추가로 바람직하게는 3개 이하, 추가로 바람직하게는 2개 이하, 추가로 바람직하게는 1개 이하는, 포스포로티오에이트 연결 기이다. 본 발명의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 모두는 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 많아야 1개가, tc-DNA 뉴클레오시드 외에 뉴클레오시드이고, 여기서 다른 모든 상기 뉴클레오시드는 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드는 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되고, 여기서 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 상기 많아야 1개의 뉴클레오시드는 리보핵산 (RNA) 뉴클레오시드, 데옥시리보핵산 (DNA) 뉴클레오시드, 2'-변형 리보핵산 (2'-변형-RNA) 뉴클레오시드, 잠금 핵산 (LNA) 뉴클레오시드, 펩티드 핵산 (PNA) 뉴클레오시드, 2'-데옥시 2'-플루오로-아라비노 뉴클레오시드, 헥시톨 핵산 (HNA) 뉴클레오시드 및 포스포로디아미데이트 모르폴리노 (PMO) 뉴클레오시드로부터 선택되고, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물은 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 중 6개 이하, 바람직하게는 5개 이하, 추가로 바람직하게는 4개 이하, 더욱 추가로 바람직하게는 3개 이하, 추가로 바람직하게는 2개 이하, 추가로 바람직하게는 1개 이하는, 포스포로티오에이트 연결 기이다. 본 발명의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 모두는 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 직접적인 tc-DNA 대 tc-DNA 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결을 함유하지 않는다.
하기 표는 본 발명의 매우 바람직한 실시양태를 제공한다.
<표 1>
모든 올리고뉴클레오티드가 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디에스테르 연결, 또는 다른 뉴클레오시드간 연결, 또는 그의 혼합물을 사용할 수 있고, 나타낸 핵염기 외에 적합한 염기 유사체가 이용될 수 있는, 본 발명의 올리고머 화합물의 바람직한 실시양태
Figure pct00024
여기서 두 뉴클레오시드 사이의 *는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 두 뉴클레오시드 사이의 *의 부재는 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 대문자 A, C, G, 및 T는 tc-DNA 뉴클레오시드를 나타내고; 소문자 a, c, u, g, 및 t는 2'-변형-RNA, 바람직하게는 2'-O-메틸-RNA, 뉴클레오시드를 나타내고, 모든 C 위치에서의 핵염기는 5-메틸시토신이고, 모든 c 위치에서의 핵염기는 시토신이고, 프라임드(primed) 소문자 a', u', g', 및 t'는 데옥시리보뉴클레오시드를 나타낸다.
바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 표 1에 열거된 올리고머 화합물로부터 선택되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드는 서열식별번호: 1-22의 서열 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드는 서열식별번호: 1-22의 서열 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이고, 여기서 서열식별번호: 1-22의 서열의 상기 뉴클레오시드간 연결 기 각각은 포스포로디에스테르 연결 기이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 1의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 2의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 3의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 3의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 4의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 4의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 5의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 5의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 6의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 6의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 7의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 8의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 8의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 9의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 10의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 11의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 11의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 12의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 12의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 14의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 14의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 15의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 15의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 16의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 16의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 17의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 17의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 18의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 18의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 19의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 20의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 20의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 21의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 22의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 표 2에 열거된 올리고머 화합물로부터 선택되고, 여기서 전형적으로 그리고 바람직하게는 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드는, 서열식별번호: 1-37의 서열 중 어느 하나로부터 선택된다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물, 바람직하게는 상기 올리고뉴클레오티드는, 서열식별번호: 1-37의 서열 중 어느 하나로부터 선택되고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
<표 2> 본 발명의 올리고머 화합물의 올리고뉴클레오티드 서열의 매우 바람직한 실시양태. PO는 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결을 지칭하고 PS는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 (표에서 *로 나타냄)을 지칭한다. A, G, C, 및 T는 tc-DNA를 지칭하고; a, g, c, 및 u는 2'-O-Me-RNA를 지칭하고; a', g', c' 및 t'는 DNA를 지칭한다. 모든 tc-DNA 시토신 위치 ("C")는 5-메틸시토신 염기 유사체를 사용하고, 모든 2'-O-Me RNA 위치 ("c")는 시토신을 사용한다.
Figure pct00025
Figure pct00026
여기서 두 뉴클레오시드 사이의 *는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 두 뉴클레오시드 사이의 *의 부재는 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 대문자 A, C, G, 및 T는 tc-DNA 뉴클레오시드를 나타내고; 소문자 a, c, u, g, 및 t는 2'-변형-RNA, 바람직하게는 2'-O-메틸-RNA 뉴클레오시드를 나타내고, 모든 C 위치에서의 핵염기는 5-메틸시토신이고, 모든 c 위치에서의 핵염기는 시토신이고, 프라임드 소문자 a', u', g', 및 t'는 데옥시리보뉴클레오시드를 나타낸다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 1-37의 서열 중 어느 하나로부터 선택된 서열이고, 여기서 서열식별번호: 1-22의 서열의 상기 뉴클레오시드간 연결 기 각각은 포스포로디에스테르 연결 기이고, 여기서 바람직하게는 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다. 추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 1-37의 서열 중 어느 하나로부터 선택된 서열이고, 여기서 서열식별번호: 1-22의 서열의 상기 뉴클레오시드간 연결 기 각각은 포스포로디에스테르 연결 기이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 23의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 24의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 24의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 25의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 25의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 26의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 26의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 27의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 27의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 28의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 28의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 29의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 29의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 30의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 30의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이고, 여기서 상기 2'-변형-RNA는 2'-OMe-RNA이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 31의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 32의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 33의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 34의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 35의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 36의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 올리고머 화합물은 서열식별번호: 37의 서열을 포함하고, 바람직하게는 이 서열이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 표 3에 열거된 조성물 중 어느 하나로부터 선택된다.
<표 3>
본 발명의 조성물의 매우 바람직한 실시양태.
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
pS = 5'-OP(O)(SH)-3'는, 올리고머 화합물의 5'-말단에 있을 경우 pS = -OP(O)(SH)->이고 올리고머 화합물의 3'-말단에 있을 경우 pS = <-P(O)(SH)O-임을 의미하고, 여기서 > 및 <는 상응하는 뉴클레오티드의 5' O- 및 3' O 원자에 대한 P의 부착을 나타내고;
p = 5'-OP(O)(OH)-3'는, 올리고머 화합물의 5'-말단에 있을 경우 p = -OP(O)(OH)->이고 올리고머 화합물의 3'-말단에 있을 경우 p = <-P(O)(OH)O-임을 의미하고, 여기서 > 및 <는 상응하는 뉴클레오티드의 5' O- 및 3' O 원자에 대한 P의 부착을 나타내고;
여기서 두 뉴클레오시드 사이의 *는 포스포로티오에이트 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 두 뉴클레오시드 사이의 *의 부재는 포스포로디에스테르 뉴클레오시드간 연결 기를 나타내고, 대문자 A, C, G, 및 T는 tc-DNA 뉴클레오시드를 나타내고 (A,C,G,T = tc-DNA); 소문자 a, c, u, g, 및 t는 2'-O-메틸-RNA 뉴클레오시드를 나타내고 ( a , c , g , u = 2'-OMe-RNA), 모든 C 위치에서의 핵염기는 5-메틸시토신이고, 모든 c 위치에서의 핵염기는 시토신이고, 프라임드 소문자 a', u', g', 및 t'는 데옥시리보뉴클레오시드를 나타내고;
t =dT-내부 팜(internal palm)이다:
Figure pct00031
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0299를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0343을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0357을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0427을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0440을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0442를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0443을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0444를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0445를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0446을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0448을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0450을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0451을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0455를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0457를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0458을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0459를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0460을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0487을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0488을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0489를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0490을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0491을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0492을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0493을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0494를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0495를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0496을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0497을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0498을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0499를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0487을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0500을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0501을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0502를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0503을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0504를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0505를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0506을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0507을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0508을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0509를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0510을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0511을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0512를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0513을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0514를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0515를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0516을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0517을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0518을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0519를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0520을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0521을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0522를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0523을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0524를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0525를 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0526을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0527을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
추가의 매우 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 SY-0543을 포함하고, 바람직하게는 이것이다.
질환을 치료하는 방법
본원에 기재된 조성물은 질환을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 질환은 엑손-스키핑 올리고머 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 질환이다. 일부 실시양태에서, 질환은 안티센스-매개 엑손-포함 올리고머 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 질환이다. 본 발명의 한 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 혈액-뇌 장벽을 가로지르기 때문에, 중추신경계 질환, 행동 장애, 정신 장애 및/또는 질환의 행동 증상을 치료하는데 유용하다. 일부 실시양태에서, 질환은 중추신경제 (CNS)의 질환이다. 일부 실시양태에서, 질환은 근위축 측삭 경화증 (ALS), 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병 (PD), 다발성 경화증 (MS), 간질, 크로이츠 펠트-야콥(Creutzfeldt-Jakob) (CJ), 멘케스병(Menkes Disease), 또는 헌팅턴병(Huntington's Disease) (HD)이다. 일부 실시양태에서, 질환은 운동실조증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 소뇌 기능에 영향을 미치는 질환이다. 일부 실시양태에서, 질환은 우르바흐-비테 질환(Urbach-Wiethe Disease)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 편도체 기능에 영향을 미치는 질환이다. 일부 실시양태에서, 질환은 질환은 기억력 저하를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 해마 기능에 영향을 미치는 질환이다. 일부 실시양태에서, 치료될 질환은 정신 또는 행동 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 기분 장애, 치매, 불안, 양극성 장애, 조현병, 수면 장애, 외상 후 스트레스 장애 (PTSD), 주의 결핍 과잉행동 장애 (ADHD), 및 우울 장애이다.
본 발명의 일부 실시양태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 수면 및/또는 인지 장애, 및 그와 연관된 증상을 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 수면 장애는 불면증 또는 서파 수면 장애이다. 일부 실시양태에서, 인지 장애는 조현병이다. 치료되고 있는 질환이 조현병인 경우, 조현병의 양성 및 음성 증상 둘 다가 치료될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조현병의 양성 증상은 환각, 망상, 또는 논리적 사고 과정의 장애이다. 일부 실시양태에서, 조현병의 음성 증상은 동기 부여 결핍, 자발성 결핍, 추상적 사고 불능, 기분 표현 결핍, 인지 결핍, 쾌락 경험 능력 결핍, 정서적 둔마, 무언어증, 무욕증, 불쾌한 기분 (분노, 불안 및 우울증 포함), 수면 패턴 장애, 충동 제어 부족, 판단력 부족, 비정상적인 정신 운동 활동, 예컨대 페이싱(pacing) 또는 로킹(rocking), 및 운동 장애, 예컨대 지연성 이상증을 포함한다. 일부 실시양태에서, 인지 영역, 예컨대 언어 기억, 언어 유창, 기억 강화, 및 실행 기능은 본 발명의 1종 이상의 올리고뉴클레오티드 화합물의 투여에 의해 개선된다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 1종 이상의 올리고뉴클레오티드 화합물의 투여로, 서파 수면이 증가되어, 인지력이 개선된다. 일부 실시양태에서, 질환은 듀센형 근이영양증 (DMD), 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증 (SMA), 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매 (FTD), 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 및 1형 근긴장성 이영양증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 듀센형 근이영양증 (DMD), 척수 근육 위축증 (SMA), 3형 척수소뇌성 실조증 (SCA3), 및 다른 질환의 치료를 위해 tc-DNA 올리고뉴클레오티드를 사용하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,981,957; 5,118,800; 5,319,080; 5,359,044; 5,393,878; 5,446,137; 5,466,786; 5,514,785; 5,519,134; 5,567,81l; 5,576,427; 5,591,722; 5,597,909; 5,610,300; 5,627,053; 5,639,873; 5,646,265; 5,670,633; 5,700,920; 5,792,847; 및 6,600,032; 및 미국 특허 출원 공개 번호 2015/0141637, 2016/0002280, 2014/0296323, 및 2012/0149756에 기재되어 있고, 상기 문헌의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
표 A는 본 발명의 조성물이 유용한 특정 신경퇴행성 질환 및 그의 표적의 목록을 제공한다.
Figure pct00032
명시된 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 관리하는데 본원에 기재된 조성물의 효능은 인간 질환의 치료를 위한 지침을 제공하는, 관련 기술분야에 공지된 다양한 모델을 사용하여 시험될 수 있다. 엑손-스키핑 올리고머 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 질환에 대한 모델은 예를 들어 문헌 [Siva, et al., Nucleic Acid Therapeutics 2014, 24, 69-86]에 기재되어 있다. 안티센스-매개 엑손-포함 올리고머 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 질환에 대한 모델은, 예를 들어, 문헌 [Hua and Krainer, Methods Mol. Biol. 2012, 867, 307-323]에 기재되어 있다.
DMD에 대한 유전자 동물 모델은 관련 기술분야에 공지되어 있다. mdx 마우스는 디스트로핀 유전자의 엑손 23에서 넌센스 돌연변이를 보유하며, 이는 전장의 야생형 디스트로핀 단백질의 합성을 방해한다 [Grounds, et al., Neurobiol. Dis. 2008, 31, 1-19]. GRMD (골든 리버 근이영양증(Golden Retriever Muscle Dystrophy) 개 모델은 인트론 6의 스플라이스 부위 돌연변이로 인해 기능성 디스트로핀이 결여되어, 판독 프레임을 붕괴시킨다. GRMD 모델에서, 인간 DMD에서와 같이, 섬유의 점진적인 분해는 현저한 근내막 및 근주막 섬유증으로 골격근의 붕괴를 야기한다. DMD에 대한 다른 모델은 디스트로핀/유트로핀 이중 녹아웃 마우스, 인간화 DMD 마우스, mdx52 마우스 (뮤린 DMD에서 엑손 52의 결실을 보유), 및 4CV 마우스 (엑손 53에서 넌센스 돌연변이를 보유)를 포함한다. [Goyenvalle, et al., Mol. Ther. 2010, 18, 198-05; Bremmer-Bout, et al., Mol. Ther. 2004, 10, 232-240; Aoki, et al., Mol. Ther. 2010, 18, 1995-2005; Mitrpant, et al., J. Gene. Med. 2009, 11, 46-56].
척수 근육 위축증 (SMA)은 염색체 5q11.2-13.3에 맵핑된 생존 운동 뉴런 유전자 (SMN1)의 결함으로부터 발생하는 유전 질환의 부류이다. 전반적으로, SMA는 신경 접촉의 손실로부터의 근육 위축증을 발생시키는, 척수 및 뇌간 운동 뉴런의 손실을 특징으로 한다. 다양한 SMA는 6,000명 중 약 1명의 발생률을 갖는다. 베르드니히-호프만병(Werdnig-Hoffman disease) 또는 중증 영아 SMA로도 공지된, 제I형 SMA는, 그의 생후 첫 해에 아기에게 영향을 미치며, 일반적으로 치명적이다. 중간 SMA로도 공지된 제II형 SMA는 어린이에게 영향을 미치고 근육 쇠약을 초래하여 환자가 결코 서서 걸을 수는 없으나, 앉을 수는 있지만, 나이가 들수록 쇠약이 증가한다. 제III형 SMA 환자는 그의 발달의 일부 시점에서 걸을 수 있다.
SMA는 기능성 SMN1 유전자의 손실, 및 SMN2 이원체(paralog)의 엑손 7에서의 돌연변이에 기인하고 이는 이 엑손의 실질적인 스키핑 및 단지 낮은 수준의 기능성 단백질의 생성을 초래하여, SMN2 단백질은 SMN1의 손실을 보상할 수 없도록 한다 [Cartegni, et al., Am. J. Hum. Genet. 2006, 78, 63-77]. SMA의 치료를 위한 올리고뉴클레오티드-매개 엑손-포함 방법은 SMN2 유전자 내에서 인트론 침묵 서열 및/또는 말단 줄기-루프 서열을 마스킹함으로써 엑손 7에 의해 코딩된 아미노산 서열을 포함하는 변형 기능성 SMN2 단백질을 산출하여, 비-기능적 SMN1 단백질을 적어도 부분적으로 상보시킬 수 있는, SMN2에서 유해한 돌연변이를 보상하는 방법을 포함하여 탐구되고 있다. 예를 들어, WO 2010/115993 A1을 참조하며, 이의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다. SMA 이외에도, 본원에 기재된 그러한 질환을 포함하여, 본 발명의 조성물에 의해 제공되는 엑손 포함 접근법에 의해 수많은 다른 질환이 또한 잠재적으로 치료될 수 있다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하고 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물을 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 제약 조성물은 신경근육 또는 근골격 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 것이며, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
본 발명은 본 발명의 조성물을 포함하고 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 본 발명의 제약 조성물을 추가로 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 제약 조성물은 신경근육 또는 근골격 질환의 치료에서 사용하기 위한 것이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
본 발명은 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 조성물을 추가로 제공하며, 여기서 바람직하게는 상기 질환은 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택되고, 그리고 다시 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환은 듀센형 근이영양증, 척수 근육 위축증, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된다.
실시예
본원에 포함된 실시양태는 이제 다음 실시예를 참조하여 기재된다. 이들 실시예는 단지 실례의 목적으로 제공되며, 본원에 포함된 개시내용은 이들 실시예에 제한되는 것으로 해석되어서는 결코 안되며, 본원에 제공된 교시내용의 결과로서 명백해지는 임의의 그리고 모든 변형을 포함하도록 해석되어야 한다.
물질 및 방법
동물: mdx 마우스 (Bulfield et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81, 1189-1192; Ryder-Cook et al., EMBO J., 1988, 7, 3017-3021)는 디스트로핀 유전자의 엑손 23 내에 단일 염기 치환을 갖고, 이는 폴리펩티드 쇄의 조기 종료를 초래하여 (Sicinski et al., Science, 1989, 244, 1578-1580), 디스트로핀의 전장 427 kDa 근육 이소형이 생성되지 않는다. 그러나, 상이한 프로모터 (점 돌연변이의 3'에서)로부터 생성된 다른 이소형은 영향을 받지 않는다. 돌연변이는 독자생존 가능하고 번식력이 있다. 그들은 어떠한 명백한 증상도 없으며 기계적 또는 화학적 손상에 의해 근육 손상이 유발되지 않는 한 그의 수명에 걸쳐 기계적으로 손상되지 않는다 (Reimann et al., Neuromusc. Disord., 2000, 10, 276-282; Connolly et al., Neuromusc. Disord., 2001, 11, 703-712).
조직학적 수준에서, mdx는 수많은 괴사성 섬유를 특징으로 하는 이영양증 근육의 통상적인 특징을 스캐빈저 세포의 후속적 침윤과 함께 나타낸다 (Coulton et al., Neuropathol. Appl. Neurobiol., 1988, 14, 299-314). 그러나, DMD와는 달리, 효율적인 미지의 보상 메커니즘은 퇴행에 대응하여 재생 과정을 유지관리하여 끊임없는 기계적 손상을 복원한다. 복귀돌연변이체 섬유의 수는 적으며, 통상 총 섬유의 약 1%에 존재하긴 하지만, 그 수는 마우스의 나이에 따라 증가한다 (Lu et al., J. Cell. Biol, 2000, 148, 985-995). 엑손 상배열(phasing)에 따르면, mRNA 스플라이싱의 과정에서 엑손 23의 스키핑에 의해 단축-디스트로핀의 번역이 가능하다.
올리고뉴클레오티드 합성: 생체내 실험을 위한 올리고뉴클레오티드는 아에타(Aekta) 올리고 파일롯(Oligo Pilot) 10 합성기 및 범용 고체 지지체인 니토페이스(NittoPhase)® 우니링커(UnyLinker)™ 200을 사용하여 260 μmol 규모로 합성하였다. 3' 말단에 하나 이상의 지질 모이어티 및/또는 상기 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 변형된, 그리고 전형적으로 그리고 바람직하게는 Fmoc-보호된, 포스포로아미다이트를 합성의 첫 번째 사이클에 도입하였다. 전형적으로 2.2 당량의 포스포르아미다이트 및 4분 커플링 시간을 사용하는 변형된 합성 사이클을 이용하였다. 5' 말단에 상기 하나 이상의 지질 모이어티 및/또는 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 변형된, 포스포로아미다이트를 마지막 사이클에서 사용하였다. Fmoc 및 시아노에틸 보호기를 제거하기 위해 MeCN 중 20% 디에틸아민으로 고체 지지체를 처리하였다.
시험관내 실험을 위한 올리고뉴클레오티드를 신속 핵산 합성 시스템(Expedite Nucleic Acids Synthesis System) 및 범용 고체 지지체인 하이 로드(High Load) 글렌(Glen) 우니서포트(UnySupport)™를 사용하여, 1 μmol 규모로 합성하였다. 3' 말단에 상기 지질 모이어티 및/또는 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 변형된 포스포로아미다이트를 합성의 첫 번째 사이클에 도입하였다. 3' 말단에 상기 비오틴 모이어티 및/또는 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 비오틴 포스포로아미다이트를 합성의 첫 번째 사이클에 도입한 후, C4 스페이서 포스포르아미다이트를 합성의 두 번째 사이클에 도입하고, 상응하는, 그리고 전형적으로 그리고 바람직하게는 Fmoc-보호된, 스페이서 포스포로아미다이트를 합성의 세 번째 사이클에 도입하였다. 전형적으로 9 당량의 포스포르아미다이트 및 3.5분 커플링 시간을 사용하는 변형된 합성 사이클을 이용하였다. 5' 말단에 상기 하나 이상의 지질 모이어티 및/또는 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 변형된 포스포로아미다이트를 마지막 사이클에서 사용하였다. Fmoc 및 시아노에틸 보호기를 제거하기 위해 MeCN 중 20% 디에틸아민으로 고체 지지체를 처리하였다.
탈보호는 65℃에서 3시간 동안 포화 NH4OH로 고체 지지된 올리고뉴클레오티드를 가열함으로써 수행하였다. 이어서, 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 4M NaOH 및 MeOH를 첨가하여 혼합물의 최종 조성물이 0.4M NaOH 및 60% MeOH가 되도록 하고, 주위 온도에서 추가의 2.5시간 동안 처리를 계속하였다. 고체를 여과 제거하고, EtOH/H2O 1:1로 세척하고 여액을 2M NaH2PO4를 첨가하여 중화시켰다. 조 올리고뉴클레오티드의 생성된 용액을 물에 대해 TFF를 사용하여 탈염시키고 동결건조시켰다. 하나 이상의 -COOH 기능을 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 앞서 기재된 조건 (Surzhikov et al., Nucleic Acids Res., 2000, 28, e29)을 사용하였다.
생체내 실험을 위한 올리고뉴클레오티드는 75℃에서 아세트산암모늄 완충제 (pH 7) 중 42% MeCN 및 4 mL/분의 유량을 사용하여 등용매 RP HPLC (워터스(Waters) x 브릿지(Bridge) prep C18, 5 μm, 10×150 mm)에 의해 정제하였다. 충분한 순도 (>70% FLP)의 생성물을 함유하는 분획을 합하고 부분적으로 동결건조시켰다. 약 20 당량의 NaCl을 용액에 첨가한 후, 이를 물에 대한 TFF를 사용하여 탈염시켰다.
시험관내 실험을 위한 올리고뉴클레오티드는 60℃에서 중탄산암모늄 완충제 (pH 7) 중 약 30% iPrOH 및 1 mL/분의 유량을 사용하여 등용매 RP HPLC (워터스 x 브릿지 prep C18, 5 μm, 4.6×150 mm)에 의해 정제하였다. 충분한 순도의 생성물을 함유하는 분획을 합하고 이어서 용리액으로서 물과 함께 SEC (지이 헬쓰케어(GE Healthcare), HiPrep 26/10)를 사용하여 탈염시켰다.
지질 모이어티의 올리고머 화합물에의 연결: 상기 하나 이상의 지질 모이어티를 올리고뉴클레오티드에 직접 고체 지지체 상에 또는 용액 중에 본 발명에 따라 상기 연결하는 것에 대한 다수의 접근법이 존재한다. 이들 접근법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고 문헌 (Bioconjugate Techniques, Greg T. Hermanson, Pierce Biotechnology; Singh, Chem. Soc. Rev., 2010, 39, 2054-2070; H. Rosemeyer, Chem. Biodiversity, 2005, 2, 977-1062)에 광범위하게 기재된 통상적인 접합 화학을 따른다. 명시된 바와 같이, 3' 말단 또는 5' 말단에 상기 하나 이상의 지질 모이어티 및/또는 스페이서를 포함하는 본 발명의 조성물의 경우에, 상응하는 변형된, 그리고 전형적으로 그리고 바람직하게는 Fmoc- 또는 MMTr-보호된, 포스포로아미다이트를 합성의 첫 번째 사이클 또는 마지막 사이클에 도입하였다.
본 발명에 따라 화학식 (I), A-B-* (여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타낸다)의 상기 하나 이상의 지질 모이어티를 연결하기 위한 전형적이고 바람직한 연결 절차는 다음을 포함하나 이에 제한되지는 않는다
i. B가 바람직하게는 OP(O)(OH), OP(O)(SH), 추가로 바람직하게는 OP(O)(SH)인 경우, 하기 반응식에 따라 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드의 5'-말단을 각각 연결하고:
5'-HO-OLIGO-3' + A-O-P(O-PG)-X -> 5'-A-O-P(O-PG)-O-OLIGO-3' + HX
이어서 P(III)을 P(V)로 산화시키는 것 (여기서 X는 적합한 이탈 기이고; PG는 적합한 보호기임);
ii. B가 바람직하게는 NH-P(O)(OH)인 경우, 하기 반응식에 따라 포스포로아미데이트 화학을 통해, 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드의 5'-말단을 각각 연결하는 것:
5'-HO-OLIGO-3'-> 5'-H-(O-PG)(O)P-O-OLIGO-3'
5'-H-(O-PG)(O)P-O-OLIGO-3' + H2N-A -> 5'-A-NH-(O-PG)(O)P-O-OLIGO-3'(여기서 PG는 적합한 보호기임);
iii. B가 바람직하게는 NH-P(S)(OH)인 경우, 하기 반응식에 따라 포스포로아미데이트 화학을 통해, 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드의 5'-말단을 각각 연결하고;
5'-HO-OLIGO-3'-> 5'-X-P(O-PG)-O-OLIGO-3'
5'-X-P(O-PG)-O-OLIGO-3' + H2N-A -> 5'-A-NH-P(O)(O-PG)-O-OLIGO-3'
이어서 적절한 황 전달 시약을 사용하여 P(III)을 P(V)로 산화시키는 것 (여기서 PG는 적합한 보호기임);
iv. B가 바람직하게는 NH-C(O)인 경우, 하기 반응식에 따라 카르바메이트 화학을 통해, 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드의 5'-말단을 각각 연결하는 것:
5'-HO-OLIGO-3'-> 5'-X-C(O)-O-OLIGO-3'
5'-X-C(O)-O-OLIGO-3' + H2N-A -> 5'-A-NH-C(O)-O-OLIGO-3' + HX
(여기서 X는 적합한 이탈기임); 또는
5'-HO-OLIGO-3' + OCN-A -> 5'-A-NH-C(O)-O-OLIGO-3';
상기 언급된 연결 절차는 또한, 전형적으로 각각 역전된 5'-> 3' 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드 합성시 각각 올리고머 화합물 및 올리고뉴클레오티드의 3'-말단에 연결하는데 적용 가능하다.
한 예로서: 바람직한 본 발명의 조성물 예컨대 SY-0457, SY-0458, SY-0459 및 SY-0460의 합성을 위해, 지질 모이어티는, DIPEA (15 당량)의 존재하에 DMSO 중 10 당량의 NHS-에스테르를 이용하는 고체 지지체 상에서 또는 37℃에서 1:1 DMSO/완충제 (0.1M NaHCO3 pH 8.5) 중 3×10 당량의 NHS-에스테르를 이용하는 용액 중에서, 상응하는 NHS-에스테르를 아미노-변형 올리고뉴클레오티드와 반응시킴으로써 접합시켰다.
추가의 한 예로서: 서열식별번호: 1의 올리고머 화합물 (전체 PO 뉴클레오시드간 연결 기를 가짐)의 5' 말단 OH-기에 -NH-C6알킬렌-OP(O)(SH)- 또는 -NH-C6알킬렌-OP(O)(OH)-스페이서에 의해 상기 올리고머 화합물에 연결된 상기 하나의 지질 모이어티로서 팔미토일 잔기를 포함하는 바람직한 본 발명의 조성물 예컨대 SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455의 합성을 위해, 5'-팔미테이트-CE-포스포르아미다이트 (링크(Link), P/N 2199)를 마지막 사이클에서 포스포로아미다이트로서 사용하였다. SY-0343 및 SY-0299의 3' 말단에 부착된 모이어티, 즉 -P(O)(SH)O-CH2CH-(CH2OH)-(CH2)4NH2 모이어티를, 상응하는 Fmoc-보호된 포스포로아미다이트를 제1 뉴클레오티드의 3' 말단의 OH기에 커플링함으로써 합성의 첫 번째 사이클에 도입하였다.
실험 부문에서 사용된 본 발명의 구체적이고 바람직한 조성물은 본 명세서 전반에 걸쳐 전형적으로 사용되는 그의 명칭 및 약어를 각각 추가로 참조하여 표 3에 특성화되어 있다.
RP-HPLC-DAD-MS에 의한 올리고뉴클레오티드의 분석: 분석용 HPLC를 위해 하기 파라미터를 사용하였다: 1.7 μm의 입자 크기로 C18 컬럼을 사용하였다. 컬럼 온도를 75℃로 설정하였다. 이동상 A는 400 mM 헥사플루오로이소프로판올 (HFIP) 및 15 mM 트리에틸아민 + 10% 메탄올이었다. 이동상 B는 메탄올이었다. 32 내지 52% 이동상 B의 구배를 적용하였다. 유량은 0.25 mL/분으로 설정하였다. 올리고뉴클레오티드는 260 nm에서 UV 광도계 및 비행 시간 질량 분석계를 사용하여 검출하였다.
다량체의 검출: 폴리아크릴아미드-겔 전기영동 (PAGE) 실험을 수행하여 자기-다량체를 검출하였다. 다음 화학물질을 사용하였다: 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (트리스(Tris)), (TCI A0321); 아세트산 (머크(Merck) 1.00063); 아크릴아미드/비스 용액, 29:1 (40%, 세르바(Serva) 10680.01); 테트라메틸에틸렌디아민 (TEMED, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) T9281); 과황산암모늄 (시그마-알드리치 248614); 및 글리세롤 (시그마-알드리치 G9012). 완충제 용액 A는 60 g의 트리스를 200 mL의 물에 용해시킴으로써 제조하였다. 빙초산 (약 25-30 mL)으로 pH를 7.4로 조정하였다. 용액을 물로 500 mL로 희석하고 +4℃에서 보관하였다. 완충제 용액 B는 16 mL의 완충제 용액 A를 물로 800 mL로 희석함으로써 제조하였다. 과황산암모늄 10% (w/v)는 100 mg의 과황산암모늄을 0.9 mL의 물에 용해시킴으로써 제조하였다. 겔의 제조는 유리 비이커에서 다음 용액을 혼합함으로써 수행하였다: 9.4 mL 아크릴아미드/비스 용액; 15 mL 물; 500 μL의 완충제 용액 A; 125 μL의 과황산암모늄 10% (w/v), 및 38 μL의 TEMED. 시험 용액은 10% 글리세롤 중 1 mg/mL이었고, 10 μL를 적용하였다 (10 μg의 올리고뉴클레오티드와 동일). 사전-이동 설정(pre-migration setting)은 완충제 용액 B를 사용하여 40분/90 V이었다. 이동 설정은 완충제 용액 B를 사용하여 90분/90 V 또는 15분/90 V 플러스 45-60분/120 V이었다. 5-7 μL의 6X DNA 로딩 염료가 또한 이동되었다. 겔을 TLC 플레이트 상에 놓고 254 nm에서 UV 광하에 검사함으로써 검출을 수행하였다. 그 후, 제조업자의 프로토콜에 따라 스테인스-올 (시그마-알드리치, 1-에틸-2-[3-(1-에틸나프토[1,2-d]티아졸린-2-일리덴)-2-메틸프로페닐]나프토[1,2-d]티아졸륨 브로마이드, 3,3'-디에틸-9-메틸-4,5,4',5'-디벤조티아카르보시아닌)로 염색을 수행하였다.
올리고뉴클레오티드와 상호작용하는 단백질의 단리: 스트렙타비딘 비드 (고용량 스트렙타비딘 아가로스(High Capacity Streptavidin Agarose), 피어스(Pierce))에 고정화된 비오티닐화 올리고뉴클레오티드로 혈액 단백질의 단리를 수행하였다. 비오티닐화 올리고뉴클레오티드를 30분 동안 비드 (20 μg의 올리고뉴클레오티드의 경우 10 μl의 비드) 상에 고정화시키고 과잉의 올리고뉴클레오티드를 포스페이트 완충 용액 (PBS)으로 3회 세척함으로써 제거하였다. 이와 같이 제조된 비드를 5 내지 50 μl의 마우스 또는 인간 혈청과 함께 1시간 동안 인큐베이션한 다음에, 비-결합 단백질을 PBS에서 4회 연속 세척하여 제거하였다. 마지막 세척 후, 침전된 단백질을 SDS-PAGE에 의한 추가 분석을 위해 래믈리(Laemmli) 샘플 완충제에 용해시키거나 오르비-트랩(ORBI-TRAP) 기기 상에서 질량 분석법 분석을 위해 트립신으로 직접 소화시켰다,
상업적으로 입수가능한 인간 혈청 (시그마(SIGMA), 미주리주 세인트루이스) 또는 규정 지침에 따라 수득된 건강한 인간 성인으로부터의 혈청 샘플을 실험에서 사용하였다. C57BL/6 마우스 혈액 샘플을 꼬리 정맥 또는 후안와총(retro-orbital plexus)으로부터 수집하였다. 동물과 관련된 모든 절차는 우리의 연구소의 동물 윤리위원회의 지침에 따라 수행하였다.
오르비트랩(OrbiTrap) 기술을 이용한 질량 분석법 분석에 의해 포획된 단백질의 확인: 질량 분석법 분석을 위해, 침전된 단백질을 500 ng의 트립신 (서열 등급 트립신(Sequence Grade Trypsin), 프로메가(Promega)) 및 100 mM 탄산암모늄을 함유하는 완충제 pH 8.0 중 트립신에 의해 16시간 동안 37℃에서 직접 소화시키고 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. 펩티드 혼합물을 집팁(ZipTip) μ-C18 피펫 팁(Pipette Tip) (밀리포어(Millipore))을 사용하여 탈염시키고 역상 C18 컬럼 (이지-컬럼(Easy-Column) 프록세온(Proxeon) C18, L 15 cm, ID 75 μm)이 장착된 이지 나노(Easy nano)-LC 프록세온 시스템 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))으로 분리하였다. 용출액을 LTQ 벨로스오르비트랩(VelosOrbitrap) 질량 분석계 (써모 피셔 사이언티픽)에 의해 모니터링하고 탠덤(tandem) MS (MS/MS) 데이터를 앞서 기재된 바 (Rouillon, 2015)와 같은 스위스프롯(SwissProt) 데이터베이스를 사용하는 사내 마스코트(Mascot) 검색 서버 (매트릭스 사이언스(Matrix Science), 2.3.2 213 버전)에 커플링된 프로테오메 디스커버러(Proteome Discoverer) 1.4 소프트웨어 (써모 피셔 사이언티픽)로 프로세싱하였다. 확인된 각각의 단백질의 상대적 존재도는 프로게네시스(Progenesis) LC MS 소프트웨어 (비선형 동역학(Nonlinear Dynamics), 4.0 버전)를 사용하는 무-표지 정량화에 의해 추산하였다. 프로게네시스 분석에서 단백질의 상대적인 양을 반영하는 평균 정규화 존재도(Average Normalized Abundance) (ANA)를 사용하여 벡터에 결합된 단백질의 양을 비교하였다.
SDS-PAGE 분리 후 단백질 확인: 단백질 확인을 전에 기재된 바와 같이 수행하였다 (Denard, Proteomics, 2009, 9, 3666-3676). SDS-PAGE (4 내지 12% 구배, 누페이지(NuPAGE) 노벡스(Novex) 비스-트리스 겔(Bis-Tris Gel) 1.0 mm, 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies)) 상에서 단리된 단백질을 분리한 후, 쿠마시 블루(Coomassie blue) (인스턴트블루(InstantBlue) 프로테인 스테인(Protein Stain), 엑스페데온(Expedeon))로 염색하여 겔을 가시화하고 관심 밴드를 추가 분석을 위해 슬라이스하였다. 겔 슬라이스를 96%의 CH2CHOH로 1 ml에서 10분 동안 세척한 다음에, 알콜을 조심스럽게 제거하고 100 mM 탄산암모늄 pH 8.0 및 100 ng의 트립신 (프로메가)을 함유하는 20 μl의 용액으로 대체하였다. 샘플을 16시간 동안 37℃에서 소화시킨 다음에, 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. 펩티드 혼합물을 집팁 μ-C18 피펫 팁 (밀리포어)을 사용하여 탈염시키고 80% 아세토니트릴, 0.1% 포름산 중 α-시아노-4-히드록시신남산 (HCCA) (5 μg) 매트릭스와 함께 MALDI 플라크 상에 증착시켰다.
MALDI-TOF MS 분석을 MALDI TOF/TOF ABI 4800+ (AB 시엑스(Sciex)) 상에서 수행하였다. 모든 스펙트럼은 양성 리플렉터 모드(positive reflector mode)에서 획득되었다. 생성된 질량 목록은 메티오닌의 부분 산화를 고려하여 사내 마스코트 검색 서버 (매트릭스 사이언스, 2.3.2 213 버전) 및 스위스프롯 데이터베이스 인간/마우스, 하나의 누락된 절단 부위 및 50 ppm의 질량 공차 설정을 사용하여 검색하였다.
AON의 전신 투여: 동물 절차는 프랑스 정부에 의해 승인된, 국가 및 유럽 법령에 따라 수행하였다 (고등교육 연구부(Minist
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re de l'Enseignement Sup
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rieur et de la Recherche), 허가(Autorisation) APAFiS #6518). Mdx (C57BL/10ScSc-Dmdmdx/J) 및 C57BL/10 마우스를 베르사유 대학교 건강과학부(UFR des Sciences de la sant
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, Universit
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de Versailles Saint Quentin), 플랫폼 2 케어(Platform 2 Care)에서 우리의 동물 시설에서 사육하였으며 음식 및 물에 자유로운 접근과 함께 표준 12시간 명/암 주기로 유지시켰다. 마우스는 출생후 4-5 주에 이유시키고 케이지당 2-5 마리의 개체를 수용하였다.
6-8 주령의 mdx 마우스를, 4-12주 범위의 기간 동안 상이한 AON (15량체 또는 13량체, PO 또는 PS, 접합되거나 그렇지 않음)으로 1주 1회, 1.5-2% 이소플루란을 사용하여 전신 마취하에 후안와동(retro-orbital sinus)에 정맥 주사하였다. 동등한 부피의 멸균 식염수를 수용하는 연령-일치 C57/BL10 (WT) 기 및 mdx 기를 대조군으로서 포함시켰다. 첫 번째 주사 후 1시간에, 모든 마우스로부터 혈액 샘플을 수집하여 보체 C3 및 시토카인/케모카인 수준을 측정하였다. 추가의 혈액 샘플을 6 번째 주사 (중간 처리) 후 1주 및 처리 종료 후 1주에 수집하였다. 이어서, 마우스를 24시간의 기간에 걸쳐 소변 수집을 위해 대사 케이지에 두었다. 동물을 마지막 주사 후 2주에 희생시켰다. 근육 및 조직을 수확하고 액체 질소-냉각 이소펜탄에서 급속 냉동시키고(snap-frozen) 추가 분석 전에 -80℃에서 보관하였다. 샘플 크기 및 n 값은 각각의 도면 범례에 나타냈다. 조사원들은 RNA 및 단백질 분석에 맹검이었다.
혈청 및 소변 분석: 전신 마취하에 꼬리 채혈로부터 혈액 샘플을 수집하였다. 혈청 크레아틴 키나제 (CK), 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT), 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST), 알칼리성 포스파타제 (ALP), 빌리루빈, 크레아티닌, 우레아 및 알부민 수준의 분석을 영국 옥스퍼드셔 주 하웰의 의료 연구 위원회(Medical Research Council), 매리 라이온 센터(Mary Lyon Centre)의 병리 실험실에 의해 수행하였다. 혈청 중의 시토카인 및 케모카인 수준을 루미넥스(Luminex)® 기술을 사용하여, 멀티플렉스 검정에 의해 분석하였다. 바이오-플렉스 프로 마우스 시토카인 10-플렉스(Bio-Plex Pro Mouse Cytokine 10-Plex) 면역검정 패널 (바이오-라드(Bio-Rad,) 캘리포니아주 에르쿨레스)을 사용하여 제조업자의 지침에 따라 IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17, IFN-γ, MCP-1, RANTES 및 TNF-α의 수준을 검출하였다. 면역검정은 바이오-플렉스 MAGPIX 멀티플렉스 판독기를 사용하여 판독하였고 결과는 바이오-플렉스 매니저(Bio-Plex manager) 6.1 소프트웨어 (바이오-라드, 프랑스)로 분석하였다.
소변은 냉장관 (4℃)에서 직접, 24시간에 걸쳐 대사 케이지를 사용하여 수집하였다. 수집 후, 소변을 10,000 x g에서 10분 동안 원심분리하고 추가 분석을 위해 상청액을 분취하여 -80℃에서 동결시켰다. 소변 크레아티닌은 제조업자의 사용설명서에 따라 크레아티닌 검정 키트 (알앤드디 시스템즈, 인크(R&D Systems, Inc), 미네소타주 미네아폴리스)를 사용하여 측정하였다. 소변 샘플 중의 총 단백질은 앞서 기재된 바와 같이 측정되었다 (Swayze et al., Nucleic Acids Res., 2007, 35, 687-700). 간단히 말하자면, 40 μL dH2O 및 200 μL의 미리 칠링한 아세톤을 10 μL의 소변에 첨가함으로써 소변 샘플로부터 단백질을 침전시켰다. 이어서 샘플을 -20℃에서 30분 동안 인큐베이션한 다음에, 14,000 x g, 4℃에서 15분 동안 원심분리하였다. 펠렛을 40 μl dH2O에 재현탁시키고 단백질 농도를 피어스(Pierce) BCA 검정 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 일리노이주 락포트)을 사용하여 측정하였다. 소변 샘플로부터의 알부민은 제조업자의 사용설명서에 따라 알부민 엘리사(ELISA) 키트 (베티 라보라토리즈(Bethy Laboratories), 텍사스주 몽고메리)를 사용하여 측정하였다. 급성 신장 손상 (AKI) 바이오마커 수준을 루미넥스® 기술을 사용하여, 멀티플렉스 검정에 의해 분석하였다. 멀티플렉스 신장 손상 패널 (MKI1MAG-94K, MKI2MAG-94K, 머크-밀리포어(Merck-Millipore))은 제조업자의 사용설명서에 따라 사용하여 β-2-마이크로글로불린 (B2M), 레닌, 신장 손상 분자 1 (KIM-1), 인터페론-감마 유도 단백질 10 (IP-10), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 시스타틴 C, 표피 성장 인자 (EGF), 리포칼린-2-NGAL, 클러스테린 및 오스테오폰틴 (OPN)의 수준을 측정하였다. 결과는 바이오-플렉스 MAGPIX 멀티플렉스 판독기를 사용하여 판독하고 바이오-플렉스 매니저 6.1 소프트웨어 (바이오-라드, 프랑스)로 분석하였다.
보체 활성화를 위한 검정: 마우스 혈청 샘플에서의 보체 활성화는 마이크로뷰 범특이적-C3 전환기 및 SC5b-9 플러스 키트 (콰이델 캄파니, 미국 캘리포니아주 샌디에이고)에 의해 측정하였다. 간단히 말하자면, 마우스 C3 단백질을 C3 전환기 시약 (범 특이적 C3 시약 키트, 마이크로뷰, 콰이델)을 사용하여 인간 SC5b9로 전환시킨 다음에 SC5b9 엘리사 (콰이델)에 의해 검출하였다.
시험관내 보체 활성화 연구를 위해, AON 분자를 37℃에서 45분 동안 정상 풀링된 인간 혈청 (1:10) (세라랩(Seralab), 영국)과 함께 인큐베이션하였다. 보체 활성화의 결정은 인간 SC5b-9 플러스 키트 (콰이델 캄파니, 미국 캘리포니아주 샌디에이고)를 사용하여 평가하였다. 5 mg/ml 지모산 (컴플리먼트 테크놀로지, 인크(Complement Technology, Inc,), 미국 텍사스주)을 양성 대조군으로서 사용하였다. 보체 활성화는 100%의 C3 (활성화 없음)의 PBS 조건에서 C3의 수준을 고려하여 샘플에서 C3의 지속 수준의 백분율로 표시하였다.
응고 검정: 마우스 혈액 샘플을 3.2% 시트르산나트륨을 함유하는 관에 수집하였다. 전혈 샘플을 2,500 x g에서 15분 동안 원심분리한 다음에, 혈장을 즉시 분리하여 사용할 때까지 -80℃에서 보관하였다. 2 mg/mL의 tcDNA-AON을 37℃에서 30분 동안 50 μL의 시트레이트화 혈장 C와 함께 인큐베이션한 다음에, 제조업자의 사용설명서에 따라 반자동 START 맥스 혈액응고측정기 (스타고) 상에서 프로트롬빈 시간 (PT) 및 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 검정을 수행하였다.
RNA 분석: 제조업자의 지침 (써모피셔 사이언티픽, 미국)에 따라 트리졸(TRIzol) 시약을 사용하여 냉동섹션(cryosection) 동안에 수집된 개재 근육 섹션으로부터 총 RNA를 단리하였다. 500 ng의 총 RNA의 분취액을 외부 프라이머를 사용하여 50 μL 반응물에서 액세스(Access) RT-PCR 시스템 (프로메가, 미국)을 사용하여 RT-PCR 분석에 사용하였다:
Ex 20Fo (5'-CAGAATTCTGCCAATTGCTGAG-3'- 서열식별번호: 38) 및 Ex 26Ro (5'-TTCTTCAGCTTGTGTCATCC-3'- 서열식별번호: 39).
cDNA 합성을 45℃에서 45분 동안 수행한 후, 95℃ (30초), 55℃ (1분) 및 72℃ (2분)의 30회 사이클의 1차 PCR을 직접 수행하였다. 이어서, 2 μL의 이들 반응물을 내부 프라이머를 사용하여 중첩 PCR에서 95℃ (30초), 55℃ (1분) 및 72℃ (2분)의 22회 사이클로 재-증폭시켰다:
Ex 20Fi (5'-CCCAGTCTACCACCCTATCAGAGC-3'- 서열식별번호: 40) 및 Ex 26Ri (5'- CCTGCCTTTAAGGCTTCCTT-3'- 서열식별번호: 41).
PCR 산물을 2% 아가로스 겔 상에서 분석하였다. 엑손 23 스키핑은 앞서 기재된 바와 같이 타크만 정량적 RT-PCR에 의해 또한 측정하였다 (Goyenvalle et al., Hum. Mol. Genet., 2012, 21, 2559-2571; Straub et al., Lancet Neurol., 2016, 15, 882-890).
총 RNA는 앞서 기재된 바와 같이 신장 피질 샘플 (Frazier et al., Toxicol. Pathol., 2014, 42, 923-935) 및 신장 손상 바이오마커 (KIB) 유전자: 인터페론 감마 (IFNg), 인터루킨 6 (IL6), 그랜자임(Granzyme) B (Gzmb), 인터페론-감마 유도 단백질 10 (IP-10), 종양 괴사 인자 (TNF), 케모카인 리간드 2 (Ccl2), 케모카인 리간드 3 (Ccl3), β-2-마이크로글로불린 (B2M), 신장 손상 분자 1 (KIM-1), 레닌 1 (Ren1) 및 표피 성장 인자 (EGF)에 대해 수행된 정량적 RT-PCR로부터 또한 단리하였다.
통계적 분석: 데이터를 그라프패드 프리즘(GraphPad Prism)5 소프트웨어 (미국 캘리포니아주 샌디에이고)에 의해 분석하고 평균 ± S.E.M으로서 나타냈다. "n"은 군당 마우스의 수를 지칭한다. 통계적 유의성 비교는 비모수적 만-휘트니(Mann-Whitney) U 검정에 의해 평가하였다. 유의한 수준은 *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001으로 설정되었다.
본원에 기재된 바와 같이, 본 발명의 조성물에 의해 포함된 올리고머 화합물은 바람직한 실시양태에서 특이적 mRNA 또는 프리-mRNA의 상보성이 되도록 설계된 안티센스 올리고뉴클레오티드 (AON)이다. 본 발명의 이러한 바람직한 부류의 화합물은 수많은 질환의 치료에 사용될 수 있다. 하기에 제공되는 예시적인 질환은 본 발명을 제한하지 않으며, 제공되는 본 발명의 조성물은 AON의 투여에 의해 치료가능한 임의의 질환의 치료에 사용될 수 있다.
실시예 1
듀센형 근이영양증의 치료를 위한 본 발명의 조성물
효능 평가
성체 mdx 마우스는 디스트로핀 프리-mRNA (M23D: +2-11)의 엑손 23의 공여자 스플라이스 부위를 표적으로 하는 상이한 13-량체 AON을, 즉 SY-0308, SY-0210 및 본 발명의 SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455와 함께 정맥 주사로 4주에 걸쳐 매주 처리하였다. SY-0308 (본원에서 상호교환적으로 "tcDNA-PO M23D"로도 명명됨)은 서열식별번호: 1의 p-CCTCGGCTTACCT-OH에 상응하며, 여기서 모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이고, p는 5' 말단에서의 포스페이트 모이어티이다. SY-0210 (본원에서 상호교환적으로 "tcDNA-PS M23D"로도 지칭됨)은 서열식별번호: 1의 p-CCTCGGCTTACCT-OH에 상응하고, 여기서 모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이고, p는 5' 말단에서의 포스페이트 모이어티이다. 본 발명의 조성물 SY-0343은 다음에 도시되는 "Palm-2PS-tcDNA-PO M23D"로 본원에서 상호교환적으로 지칭된다:
Figure pct00037
본 발명의 조성물 SY-0442는 다음에 도시되는 "Palm-1PS-tcDNA-PO M23D"로서 본원에서 상호교환적으로 지칭된다:
Figure pct00038
본 발명의 조성물 SY-0299는 다음에 도시되는 "Palm-2PO-tcDNA-PO M23D"로서 본원에서 상호교환적으로 지칭된다:
Figure pct00039
본 발명의 조성물 SY-0455는 다음에 도시되는 "Palm-1PO-tcDNA/2OMe-PO M23D"로서 본원에서 상호교환적으로 지칭된다:
Figure pct00040
SY-0308, SY-0210, SY-0299, SY-0442 및 SY-0455는 200 mg/kg/주의 체중의 용량에서 사용하였으며, 한편 SY-0343은 178 mg/kg/주의 용량에서 사용하였다. 마지막 주사 후 2주에, 근육을 수확하고 RNA 샘플을 정량적 RT-PCR에 의해 분석하여 디스트로핀 유전자의 엑손 23의 스키핑 수준을 결정하고 (도 1), 회복된 디스트로핀의 수준은 리코르 오디세이 시스템을 사용하여 웨스턴 블롯에 의해 정량화하였다 (도 5). 도 1은 스키핑의 수준이 tcDNA-PO M23D의 경우보다 팔미토일 접합된-AON의 경우 항상 일관되게 더 높았다는 것을 나타낸다. 엑손 23 스키핑의 수준은 또한 tcDNA-PS M23D AON으로 처리된 것들과 비교하여 팔미토일 접합된-AON으로 처리된 마우스의 조직의 대부분에서 또한 더 높았으며, 심장, 피질 및 소뇌에서 가장 현저한 차이가 있었다. 엑손 23-스키핑된 디스트로핀 mRNA의 백분율은 몇몇 골격근 및 심장에 대해 15% 값을 초과하였다. 심장의 경우, SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455 내지 SY-0308 또는 내지 SY-0210 각각 사이의 배수 변화는 각각 4.4 내지 9.2 및 4.0 내지 8.5이었다. 중요하게는, 팔미토일 접합된-AON으로 4주 처리 직후에 피질 및 소뇌에서 스키핑이 분명히 검출되었으나 아직 다른 두 화합물로는 검출되지 않았다.
따라서, 뉴클레오시드간 연결 기가 PO인 팔미토일 접합된-tcDNA AON이 PS 결합의 유무에 관계없이 그의 네이키드(naked) tcDNA 등가 AON보다 더 효율적이다.
이 실시예는 상기 5'-팔미토일-C6-아미노 지질 모이어티 및 스페이서와 연결된 안티센스 올리고머를 포함하고 전체 PO 백본을 갖는 본 발명의 조성물 (팔미토일 접합된 PO M23D)의 전신 전달이 PO 또는 PS 백본을 가진 tcDNA로 제조된 등가 서열과 비교하여, 디스트로핀의 더 큰 구제를 허용하였다는 것을 나타낸다.
독성 평가
마우스에서 디스트로핀의 (M23D: +2-11) 영역을 표적으로 하는 3 가지 유형의 AON을 사용한 실험의 과정 동안에 어떠한 현저한 임상 징후도 관찰되지 않았다. 그러나, 본원에서 SYN51로 명명된 인간 디스트로핀의 엑손 51을 표적으로 하는, 다른 관심 서열, 예를 들어, (H51: +67+81 - AAGATGGCATTTCTA - 서열식별번호: 19)로 급성 유해 효과가 관찰되었다. 따라서, 또한, 본원에서 상호교환적으로 "tcDNA-PS SYN51"로도 명명되고, 모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로티오에이트 연결 기이고, p는 5' 말단에서의 포스페이트 모이어티인 서열식별번호: 19의 p-AAGATGGCATTTCT-OH에 상응하는 SY-0206는, 추가 임상 개발을 위협한다. 역사상, PO 뉴클레오시드간 연결 기는 PS 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 치환되어 올리고머를 안정화시키고 그의 분해를 방지하였다. 비록 tcDNA 올리고뉴클레오티드가 매우 안정적이어서, PS 변형에 의한 PO의 변형 및 치환이 선험적으로 필요하지 않긴 하였지만, 이러한 변형은, 그럼에도 불구하고, 도 1에 나타낸 바와 같이, 전신 전달이 허용된 후 tcDNA-PS 생체분포를 크게 증가시켜, tcDNA-PO와 비교하여 더 양호한 광범위한 스키핑 효능을 가능하게 하였다. 이 현상은 PS 잔기와 혈청 단백질의 상호작용의 증가로 인한 것일 수 있었다.
독성 tcDNA-PS AON의 주요 급성 효과 중 하나는 이들이 혈액 응고, 혈전증 및 보체 활성화를 초래하였다는 점이었다.
여기서, 우리는 2개의 상보적 혈액 응고 시험, 프로트롬빈 시간 (PT) 및 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT)을 사용하여, 상이한 tcDNA AON, 즉 SY-0308 (tcDNA-PO M23D), SY-0210 (tcDNA-PS M23D), SY-0343 (Palm-2PS-tcDNA-PO M23D), SY-0442 (Palm-1PS-tcDNA-PO M23D), SY-0455 (Palm-1PO-tcDNA/2OMe-PO M23D), SY-0206 (tcDNA-PS SYN51) 및 SY-0252에 의해 유도된 잠재적 출혈 문제를 점검하였다. 본원에서 상호교환적으로 "tcDNA-PO SYN51"로도 명명된 SY-0252는 서열식별번호: 19의 p-AGATGGCATTTCT-OH에 상응하고, 여기서 모든 뉴클레오티드는 tc-DNA이고 모든 뉴클레오시드간 연결 기는 포스포로디에스테르 연결 기이고, p는 5' 말단에서의 포스페이트 모이어티이다. SYN51은 PS 결합의 존재하에 마우스에서 매우 독성이 있는 서열로서 공지되어 있다.
도 2는 PT 및 aPTT 프로파일이 마우스 및 인간 혈장에서 매우 유사하였다는 것을 나타낸다. 두 경우 모두에서, PO 결합을 가진 tcDNA (tcDNA-PO M23D뿐만 아니라 tcDNA-PO SYN51 및 팔미토일 접합된-AON의 경우)는 프로트롬빈 시간 (PT)에서 유의한 변화를 촉발하지 않았으며, 한편 PS 결합을 가진 tcDNA는 PT, 특히 tcDNA-PS SYN51을 증가시켰으며, 이는 정맥 주사 후 마우스에서 급성 독성을 정기적으로 촉발하였다. 게다가, tcDNA-PS AON은 또한, 특히 인간 혈장을 사용한 경우, aPTT뿐만 아니라, SYN51 서열을 보유한 tcDNA-PO를 크게 증가시켰다 (도 2d). 상이한 AON에 의해 촉발된 임상 징후의 관점에서, PT 시험은 적어도 마우스에서 급성 유해 효과의 진폭을 반영하는 것으로 나타났다. 모든 tcDNA-PO AON은 마우스에서 안전하고 PT를 증가시키지 않았다. 다른 한편으로는, tcDNA-PS M23D는 PT의 작은 증가를 단지 촉발하였으며 독성이 전혀 인지되지 않았으며 한편 tcDNA-PS SYN51은 PT를 크게 증가시켜 매우 독성이었다.
도 8은 올리고뉴클레오티드의 백본에서 PS 연결의 감소에 따라 PT 및 aPTT가 비례적으로 감소함을 나타낸다. 여기서, 우리는 가변 양의 뉴클레오시드간 PS 연결을 가진 tc-DNA M23D 서열을 사용하였으며, 따라서 M23D-PS 25sb3은 (p-CCTCGGCTTA*C*C*T - 서열식별번호: 42)에 상응하고; M23D-PS 33sb3은 (p-CCTCGG CTT*A*C*C*T - 서열식별번호: 43)에 상응하고; M23D-PS 50sb3은 (p-CCTCGGC*T*T* A*C*C*T - 서열식별번호: 44)에 상응하고; M23D-PS 66sb3은 (p-CCTCG*G*C*T*T* A*C*C*T - 서열식별번호: 45)에 상응하고 M23D-PS 83sb3은 (p-CCT*C*G*G*C*T*T* A*C*C*T - 서열식별번호: 46)에 상응하고, 여기서 두 뉴클레오시드 사이의 "*"는 포스포로티에이트 뉴클레오시드간 연결을 나타내고 p는 말단 포스페이트 기를 나타낸다. 앞서 입증된 바와 같이, aPTT 시험은 PT보다 PS 함량에 더 민감하고, 6개의 뉴클레오시드간 PS (화합물 M23D-PS 50sb3)에서 그의 최대 측정 시간에 도달한다. 더 적은 수의 PS 연결은 PT 및 aPTT의 단지 매우 제한된 증가를 유도한다.
보체 활성화는 200 mg/kg의 고용량으로 AON의 전신 주사 후 마우스에서 또한 시험되었다.
도 3은 뉴클레오시드간 연결 기로서 포스포로디에스테르 연결 기, 구체적으로 tcDNA-PO M23D, tc-DNA-PS M23D, tcDNA-PO SYN51 및 본 발명의 팔미토일 접합된-AON (SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455)을 포함하는 안전한 AON은 보체 캐스케이드를 상당히 활성화시키지 않았다는 것을 나타낸다. 단지 독성 tcDNA-PS SYN51이 C3의 절단을 분명히 활성화시켰다 (50%). 안전하다고 여겨졌던 tcDNA-PS M23D는 여전히 약간의 C3 소비를 활성화시켰다.
화합물 SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455로 4주 처리 종료시 혈청을 수집하고 혈청 생화학을 평가하였다 (도 4). 신장 독성이 없음을 시사하는, 혈청 알부민, 크레아티닌 및 우레아에서 어떠한 유의한 변화도 없음. 대부분의 팔미토일 접합된 PO M23D의 경우 ALP의 단지 약간의 상승 (도 4e)이 관찰되었다.
따라서, 그리고 명시된 바와 같이, 상기 5'-팔미토일-C6-아미노 지질 모이어티 및 스페이서와 연결된 안티센스 올리고머를 포함하고 전체 PO 백본을 갖는 본 발명의 조성물 (팔미토일 접합된 PO M23D, SY-0343)은 PO 또는 PS 백본을 가진 tcDNA로 제조된 등가 서열과 비교하여, 디스트로핀의 더 큰 구제를 허용하였다. 더욱이, 상기 본 발명의 조성물 (SY-0299, SY-0343, SY-0442 및 SY-0455) 및 AON은 각각 전신 전달 후 혈액 구획에서 유해한 결과를 촉발하지 않는다. 게다가, AON의 포스페이트 백본에 황의 결여는 혈청 단백질의 비-특이적 결합 그리고 따라서 보체 활성화 및/또는 응고 유해 효과의 위험을 상당히 감소시켰다. 뉴클레오시드간 연결 기가 PO인 팔미토일 접합된-tcDNA AON과 같은 적어도 하나의 지질 모이어티를 포함하는 본 발명의 조성물은 PO-tcDNA 함유 분자에 새로운 특성을 부여하였으며, 이는 현재 혈청 단백질 예컨대 알부민 및 지질단백질에 우선적으로 결합하는 것으로 여겨지고, 이는 지방산을 포함하여 저 수용해도의 분자를 위한 자연 담체이다. 더욱이 그리고 상기 제시된 결과를 요약하면 응고 특성을 변형시키는 tcDNA AON이 생체내에서 보체 캐스케이드를 또한 체계적으로 활성화시킨다는 점이 지적된다. PTT 값의 상당한 증가 (>180 s)는 잠재적 위험의 징후이며, 아눈 PT 값이 또한 크게 증가될 때 (>100 s) 현실화된다. 마지막으로, tcDNA-PO 및 본 발명의 조성물 Palm-tcDNA-PO는 그의 관련 tcDNA-PS보다 훨씬 더 안전하다.
실시예 2
공-침전 실험 및 프로테오믹스
관심 올리고뉴클레오티드는 스트렙타비딘-비드를 사용함으로써 잠재적으로 상호작용하는 혈청 단백질의 후속 공-침전을 위한 비오티닐화 접합체로서 합성되었다. 본 연구에서 사용된 비오티닐화 유도체는 SY-0440, SY-0427, SY-0446, SY-0448, SY-0445, SY-0443, 및 SY-0451이며, 이들은 표 3에 정의되고 특성화되고 도 6에 나타냈다.
스트렙타비딘-비드에 고정화된 비오티닐화 올리고뉴클레오티드를 1시간 동안 혈청의 존재하에 인큐베이션하였다. 비드를 저속 원심분리에 의해 수집하고, 세척한 다음에 SDS-PAGE, 오르비트랩 LC-MS/MS 및 SDS-PAGE/MALDI-TOF에 의한 추가 단백질 분석을 위해 적절한 완충제에 가용화시켰다.
도 7은 본 연구에서 사용된 올리고뉴클레오티드에 대한 마우스 및 인간 혈청으로부터 단백질 회수의 SDS-PAGE 분석을 예시한다. SY-0440, 즉 전체-PS를 가진 tcDNA M23D는 그의 tcDNA-PO 등가물인 SY-0427보다 훨씬 더 많은 혈청 단백질을 보유했던 것으로 보인다. 이 결과는 다양한 서열 (M23D, SYN51, 및 폴리 T) 및 백본 화학 (DNA, tcDNA, 2'OMe-PS 및 PMO)을 사용한 이전 연구 (표시되지 않음)와 일치하며 이는 PS 결합이 없는 올리고머가 혈청 단백질에 상당히 결합하지 않았음을 입증하는 것이며, 이는 단백질 흡수는 티오포스페이트 백본의 수준에서 우선적으로 발생하고 공통 서열 모티프를 수반하지 않았다는 것을 시사한다.
일반적인 용어로, 우리는 많은 단백질에 결합된 tcDNA-PS 올리고뉴클레오티드가 보체 경로 및 응고와 관련되어 있다는 것을 밝혀냈다. 오르비트랩 분석에 따르면 tcDNA-PS 올리고뉴클레오티드는 렉틴 경로를 통해 선천 면역에 도움이 되는 만노스-결합 단백질 (MBL)을 보유한 것으로 밝혀졌다. MBL은 MASP (MBL-연관 세린 프로테아제 - MASP-1; -2; -3)에 결합되며, 이는 피콜린과 복합체를 또한 형성한다. MBL이 그의 표적 (예를 들어, 표면 상의 만노스)에 결합할 때, MASP 단백질은 혈액 단백질 C4를 C4a 및 C4b로 절단하는 기능을 한다. 이어서 C4b 단편은 표면에 결합하여, C3-전환효소의 형성을 개시할 수 있다. MBL/MASP-1 복합체는 또한 트롬빈-유사 활성 (혈전을 개시하는 트롬빈 응고 피브린)을 갖는다. 이들 모든 단백질은 tcDNA-PS 샘플에서 발견되었으나, PS 뉴클레오시드간 연결이 없는 올리고뉴클레오티드와의 복합체에서는 발견되지 않았다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 tcDNA-팔미토일 접합체는 단백질 회수의 비슷한 패턴을 나타냈으며, 이는 네이키드 tcDNA-PS 및 tcDNA-PO로 수득된 것들과 매우 상이하였다. tcDNA-PO가 혈청 단백질에 일관되게 그러나 상당히 결합하지 않았다는 사실을 고려하여, A, B, C, A' 및 D 분자에 대한 생성된 패턴은 그의 팔미토일 및 알킬포스페이트 모이어티에 의해 크게 기여되었을 가능성이 높았다. 마우스 및 인간 혈청으로부터 회수된 주요 단백질의 SDS-PAGE MALDI-ToF MS 분석은 우세한 단백질이 LDL (저밀도 지질단백질) 및 HDL (고밀도 지질단백질) 복합체의 알부민 및 지질단백질 성분이며, 모두 지질의 수송에 관여함을 나타냈다 (표 4 및 표 5).
<표 4>
상이한 비오티닐화된 팔미토일-tcDNA 조성물을 사용하여 마우스 혈청으로부터 회수된 단백질 (도 7a).
Figure pct00041
<표 5>
상이한 비오티닐화된 팔미토일-tcDNA 조성물을 사용하여 인간 혈청으로부터 회수된 단백질 (도 7b).
Figure pct00042
명백하게는, tcDNA 서열의 3' 말단에서의 C7 모이어티는 비록 B가 마우스에서 더 많은 이량체 형태의 알부민을 보유하였긴 하지만 혈청 단백질의 결합에 상당히 기여하지는 않았다 (A (SY-0446)와 B (SY-0445) 비교). B와 C (SY-0443)의 비교는 tcDNA 서열의 양쪽 말단에 티오포스페이트의 존재가 단백질 결합을 증진시키지 않았고; 그 정반대로, 인간 혈청의 일부 단백질 (인자 H 및 보체 C3의 단편)이 약간 감소한 것으로 나타났다. A' (SY-0448) 분자는 A'에서 서열의 세 번째 뉴클레오티드가 2'OMe-U에 의해 대체된 것을 제외하고, A와 유사하였다. A/A' 프로파일은 마우스 상태에서 거의 동일하였으나, 인간 혈청에서 약간의 차이를 나타냈으며; 특히, A'는 인자 H 및 보체 C3을 덜 보유하였으며, 이는 가능하게는 더 양호한 안전성 프로파일을 시사하는 것이다. 마지막으로, C7 및 C6 둘 다가 없는 D 분자 (SY-0451)는 A 및 A'와 비교하여 약간 적은 알부민 및 HDL 성분을 보유하여, 이전에 한계 밴드의 강도의 증가에 의해 나타난 바와 같이 추가 단백질에 대한 여지를 남겼다.
C7 모티프는 초기에 추가 조직 특이적 표적화를 위한 리간드의 그래프팅을 허용하기 위해 도입되었다. 비록 우리의 연구가 C7 모이어티가 혈청 단백질의 보유에 어떠한 영향도 미치지 않는다는 것을 나타내긴 하였지만, 화합물의 크기를 확대하고 그에 따라 그의 프리-mRNA 표적의 수준에서 입체 장애를 개선하기 위해 AON의 3' 말단에 이를 유지하는 것이 여전히 유리할 수 있다. 화합물의 다른 측면에서, C6과 tcDNA 서열의 5' 말단으로부터 팔미토일 모이어티를 이격시키는 것은 지방산 수송에 관여하는 알부민 및 지질단백질 복합체의 우선적인 결합을 증가시키는 것으로 보인다.
실시예 3
인간 혈청에서 본 발명의 조성물의 안정성
인간 혈청에서 바람직한 본 발명의 조성물의 안정성은 올리고뉴클레오티드 SY-0343, SY-0442, SY-0299, SY-0450, SY-0455 및 SY-0357에서 연구되었다. 본 발명의 조성물은 표 3에서 정의되고 특성화된다.
인간 혈청 40 μL, 올리고뉴클레오티드 스톡 용액, 20 μL의 PBS (2x) 및 밀리큐(milliQ) 물로 구성된 혼합물 (총 부피 80 μL)을 0.2 mL PCR 바이알에서 제조하여, 올리고뉴클레오티드의 최종 농도가 2 μM이 되도록 하고 37℃에서 인큐베이션하였다. 4, 24, 및 120시간 후 분취액을 빼냈다. 혼합물을 PCR 바이알에서 프로테이나제 K (80 μL의 혼합물, 100 μL의 프로테이나제 K 완충제 2x (200 mM 트리스-HCl, pH 8.5, 400 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.4% SDS), 20 μL 프로테이나제 K (100 mM 트리스-HCl pH 8.5 중 20 mg/mL, 10 mM CaCl2)로 55℃에서 2시간 동안 소화시켰다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 원심분리하고 (13400 rpm, 10분) 상청액을 수집하였다. 이어서, SPE를 위해 50 μL의 분취액을 취하고 50 μL의 0.2 M TEAB 완충제로 희석하였다. 30분 후, 50 μL의 Condi-용액 (15 mM Et3N, 100 mM HFIP)을 첨가하였다. SPE 컬럼 (오아시스(Oasis) HLB 1cc (10 mg) 추출 카트리지, 워터스 186000383)을 1 mL의 MeOH 및 2 × 500 μL의 Condi-용액을 연속적으로 통과시켜 컨디셔닝하였다. 상기로부터의 시험 용액을 SPE 컬럼 상에 정량적으로 적용하였고, 컬럼을 2 × 250 μL의 Condi-용액 및 300 μL의 TEAB (0.2 M) 용액을 통과시켜 연속적으로 세척하였다. 2 × 200 μL의 용리-용액 (Condi-용액/MeOH 4:6) 및 150 μL의 MeOH를 적용함으로써 올리고뉴클레오티드를 세척해 내고 용출액을 수집하였다. 용출액은 속도-진공(speed-vac)에서 동결건조시켜 건조시킨 후, 100 μL의 밀리큐 물로 희석하였다. 이어서, 혼합물을 HPLC-DAD-MS (워터스 액쿼티(Waters Acquity) OST C18, 100 x 2.1 mm, 1.7 μm, 이동상 A: 400 mM HFIP, 15 mM TEA + 10% 메탄올, 이동상 B: 메탄올, 유량 0.2 mL/분, 70℃)에 의해 분석하였다.
표 6 및 표 7에 기재된 바와 같이, 인간 혈청에서 인큐베이션 후 주요 분해 생성물은 모든 시험된 서열에 대해 하기에 도시된 바와 같이 모 올리고뉴클레오티드였다:
Figure pct00043
어떠한 다른 분해 생성물도 상당량 검출되지 않았다. 특별히, 120시간 후 tc- 및 2'-OMe 뉴클레오시드 사이의 무절단 (서열 SY-0455) 및 3'-말단에서 C7-아미노 기의 무절단 (서열 SY-0343, SY-0299, SY-0357)이 관찰되었다. 올리고뉴클레오티드와 스페이서/지질 모이어티 사이의 PO 연결을 가진 서열은 그의 PS 대응물과 비교하여 인간 혈청에서 상당히 덜 안정하였다. 24시간 후, 실질적인 양의 스페이서/지질 부분이 절단되었고 PO를 통해 연결된 서열에서 120시간 후에 거의 어떠한 원래 올리고뉴클레오티드도 존재하지 않았으며, 한편 각각 24시간 및 120시간 후에 PS 링커를 통해 연결된 지방산의 경우에 단지 약 1 및 8%의 스페이서/지질 모이어티가 절단되었다.
<표 6>
인간 혈청에서 본 발명의 TcDNA-팔미토일 조성물의 안정성 (1차 실험)
Figure pct00044
<표 7>
인간 혈청에서 본 발명의 TcDNA-팔미토일 조성물의 안정성 (2차 실험)
Figure pct00045
* 혈청 신호로 인해 통합하기 어려움
실시예 4
다량체의 확인
폴리아크릴아미드-겔 전기영동 (PAGE) 실험을 수행하여 자기-다량체를 검출하였다. 다음 화학물질을 사용하였다: 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (트리스), (TCI A0321); 아세트산 (머크 1.00063); 아크릴아미드/비스 용액, 29:1 (40%, 세르바 10680.01); 테트라메틸에틸렌디아민 (TEMED, 시그마-알드리치 T9281); 과황산암모늄 (시그마-알드리치 248614); 및 글리세롤 (시그마-알드리치 G9012). 완충제 용액 A는 60 g의 트리스를 200 mL의 물에 용해시킴으로써 제조하였다. 빙초산 (약 25-30 mL)으로 pH를 7.4로 조정하였다. 용액을 물로 500 mL로 희석하고 +4℃에서 보관하였다. 완충제 용액 B는 16 mL의 완충제 용액 A를 물로 800 mL로 희석하여 제조하였다. 과황산암모늄 10% (w/v)는 100 mg의 과황산암모늄을 0.9 mL의 물에 용해시킴으로써 제조하였다. 겔의 제조는 유리 비이커에서 다음 용액을 혼합함으로써 수행하였다: 9.4 mL 아크릴아미드/비스 용액; 15 mL 물; 500 μL의 완충제 용액 A; 125 μL의 과황산암모늄 10% (w/v), 및 38 μL의 TEMED. 시험 용액은 50% 글리세롤 중 2 mg/mL이었고, 10 μL를 적용하였다 (10 μg의 올리고뉴클레오티드와 동일). 사전-이동 설정은 완충제 용액 B를 사용하여 40분/90 V이었다. 이동 설정은 완충제 용액 B를 사용하여 90분/90 V 또는 15분/90 V 플러스 45-60분/120 V이었다. 5-7 μL의 6X DNA 로딩 염료가 또한 이동되었다. 겔을 TLC 플레이트 상에 놓고 254 nm에서 UV 광하에 검사함으로써 검출을 수행하였다. 그 후, 제조업자의 프로토콜에 따라 스테인스-올 (시그마-알드리치, 1-에틸-2-[3-(1-에틸나프토[1,2-d]티아졸린-2-일리덴)-2-메틸프로페닐]나프토[1,2-d]티아졸륨 브로마이드, 3,3'-디에틸-9-메틸-4,5,4',5'-디벤조티아카르보시아닌) 염색을 수행하였다.
앞서 언급된 바와 같이, 급성 독성을 가진 tc-DNA 올리고뉴클레오티드는 40-60 BP의 수준으로 이동하는 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 실험에서 추가 밴드를 나타내는 것으로 관찰되었다. 이 다소 날카로운 밴드는 올리고뉴클레오티드의 다량체 (예를 들어, 듀플렉스, 삼량체, 또는 더 큰 응집체)인 것으로 제안되었다. 겔 전기영동 실험의 결과는, 연구된 올리고뉴클레오티드 중 어느 하나에 대한 다량체 밴드의 어떠한 명백한 출현이 없이 도 9에 나타냈다. 다량체 밴드의 실례를 위해, 생체내 독성을 나타낸 올리고뉴클레오티드 SY-0221을 또한 나타냈다.
실시예 5
마우스 M23D 대리 서열로 수행된 엑손 23 스키핑 연구
SY0442 및 SY0450을 엑손 23 스키핑의 효능에 대한 추가 조사를 위해 선택하였다. SY0210 (전체 PS) 및 SY0308 (전체 PO)은 본원에 상세하게 설명된 실험 중 일부에 대한 대조군으로서 사용하였다. 이들 실험의 목적은 조직에서 효능 및 tcDNA 함량을 시험하고 시험 화합물의 잠재적 독성을 결정하는 것이었다.
Mdx23 마우스에 4주 동안 50 mg/kg/wk 또는 200 mg/kg/wk의 화합물을 주사하였다. 군 1은 마지막 주사 후 72시간에 분석하였고 군 2는 마지막 주사 후 2주에 분석하였다. 실시예 1 및 2에서 논의된 시험관내 및 마우스 모델 연구를 수행하였고 결과는 그러한 실시예들과 일치하였다.
엑손 23 스키핑 수준은 중첩된 RT-PCR을 사용하여 평가하였다. 마우스 모델의 특정 조직으로부터 총 RNA를 추출하고 SSIII cDNA 합성 키트를 사용하여 역전사시켰다. 엑손 20 내지 26 사이에서 RT-PCR을 수행하였고, 스키핑 생성물을 독점적으로 검출하는 특이적 RT-PCR을 또한 수행하였다. 도 10a-d는 72시간 (도 10a 및 10b) 및 2주 (도 10c 및 10d)에서 200 mg/kg/wk에 대한 RT-PCR의 결과를 입증한다. 화합물로 처리된 모든 근육에서 엑손 23 스키핑된 생성물에 상응하는 유의한 밴드가 관찰될 수 있다. 스키핑 수준은 모든 경우에 심장에서 특히 높게 나타난다. 특정 중첩된 PCR을 사용하여, 엑손 23 스키핑을 CNS, GI 관의 평활근, 및 망막에서 또한 검출하였다. 50 mg/kg/wk 코호트에 대해서도 유사한 결과를 수득하였다 (도 11).
엑손 23 스키핑은 더 민감한 타그만 qPCR 프로토콜을 사용하여 더욱 더 정확하게 정량화되었다. 도 12A 및 12B는 200 mg/kg (도 12A) 및 50 mg/kg (도 12B) 코호트에 걸쳐 유사한 결과를 입증한다. 72시간 및 2주 코호트 사이에서 계산된 비율은 각각의 용량에서 SY0442 및 SY0450 각각에 대해 대부분의 경우에 1에 가까웠다:
Figure pct00046
엑손 스키핑의 비율을 SY0442와 SY0450 사이에서 또한 계산하였으며, 이는 SY0442가 일반적으로 SY0450보다 약간 더 높은 전반적인 수준의 스키핑을 가진다는 것을 입증하였다:
Figure pct00047
주사 후 72시간 및 2주에 SY0442 및 SY0450 효능을 비교하는 풀링된 데이터를 나타내는 도 14에서 데이터를 추가로 조작하였다. 50 mg/kg과 200 mg/kg 사이에서 용량 효과가 관찰될 수 있다 (대략 4배). 전체 PO 및 전체 PS 화합물과 비교하여 200 mg/kg에서 (도 15) 및 50 mg/kg (도 16)에서 엑손 23 스키핑의 정량화를 또한 측정하였다.
가장 효능이 강한 화합물을 확인하기 위해, 조직에서 발견된 화합물의 효능/양의 비를 200 mg/kg에 대해 계산하였다:
Figure pct00048
및 50 mg/kg에 대해:
Figure pct00049
* 2주째 SY0450은, 조직에서 낮은 검출 또는 임계 값 미만의 양 때문에, 정확한 계산을 수득할 수 없었다.
SEQUENCE LISTING <110> Synthena AG Renner, Wolfgang Dugovic, Branislav Bertolini, Reto <120> MODIFIED OLIGOMERIC COMPOUNDS COMPRISING TRICYCLO-DNA NUCLEOSIDES AND USES THEREOF <130> P5250EP00 <160> 47 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (4)..(4) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (7)..(7) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (11)..(12) <223> m5c <400> 1 cctcggctta cct 13 <210> 2 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (2)..(3) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (5)..(5) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (12)..(13) <223> m5c <400> 2 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end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (1)..(2) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (4)..(4) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (7)..(7) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (11)..(12) <223> m5c <400> 23 cctcggctta cct 13 <210> 24 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 24 aagauggcat ttcta 15 <210> 25 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 25 aagauggcat ttcta 15 <210> 26 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 26 aagauggcat ttcta 15 <210> 27 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 27 aagauggcat ttcta 15 <210> 28 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 28 aagauggcat ttcta 15 <210> 29 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 29 aagauggcat ttcta 15 <210> 30 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(7) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> 2'-modified ribonucleoside, preferably 2'-O-methyl ribonucleoside <220> <221> misc_feature <222> (6)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 30 aagauggcat ttcta 15 <210> 31 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 31 aagatggcat ttcta 15 <210> 32 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 32 aagatggcat ttcta 15 <210> 33 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(3) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 33 aagatggcat ttcta 15 <210> 34 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(4) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 34 aagatggcat ttcta 15 <210> 35 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(5) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 35 aagatggcat ttcta 15 <210> 36 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(6) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 36 aagatggcat ttcta 15 <210> 37 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(7) <223> a phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> m5c <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> m5c <400> 37 aagatggcat ttcta 15 <210> 38 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 38 cagaattctg ccaattgctg ag 22 <210> 39 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 39 ttcttcagct tgtgtcatcc 20 <210> 40 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 40 cccagtctac caccctatca gagc 24 <210> 41 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 41 cctgccttta aggcttcctt 20 <210> 42 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> terminal phosphate group <220> <221> misc_feature <222> (10)..(12) <223> phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <400> 42 cctcggctta cct 13 <210> 43 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> terminal phosphate group <220> <221> misc_feature <222> (9)..(12) <223> phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <400> 43 cctcggctta cct 13 <210> 44 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> terminal phosphate group <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (7)..(12) <223> phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <400> 44 cctcggctta cct 13 <210> 45 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> terminal phosphate group <220> <221> misc_feature <222> (5)..(12) <223> phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <400> 45 cctcggctta cct 13 <210> 46 <211> 13 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(13) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> terminal phosphate group <220> <221> misc_feature <222> (3)..(12) <223> phosphorothioate internucleoside linkage group between the 3' end of this nucleoside and the 5' end of the next nucleoside <400> 46 cctcggctta cct 13 <210> 47 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (1)..(15) <223> deoxyribonucleoside with tricyclic sugar <400> 47 ctttcataat gctgg 15

Claims (15)

  1. a. 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드를 포함하는 올리고머 화합물이며, 여기서 바람직하게는 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하는 것인, 올리고머 화합물; 및
    b. 하나 이상의 지질 모이어티
    를 포함하며;
    여기서 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 직접 또는 스페이서를 통해 상기 올리고머 화합물에 공유 연결되는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 서로 독립적으로 지방산 모이어티, 지방 이산 모이어티, 알킬포스페이트 모이어티 및 알킬포스포네이트 모이어티로부터 선택된 것인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 서로 독립적으로 화학식 (I)의 모이어티이고:
    A-B-* (I)
    여기서, A는 C3-32알킬, C3-32알케닐, C3-32알키닐, HOOC-C3-32알킬렌, HOOC-C3-32알케닐렌 또는 HOOC-C3-32알키닐렌이고, B는 C(O), OP(OH), OP(O)OH), OP(O)(SH), NH-P(O)(OH), NH-P(O)(SH), NH-C(O)이거나 또는 그의 제약상 허용되는 염이고;
    여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내는 것인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 서로 독립적으로 화학식 (a) 내지 (u) 중 어느 하나로부터 선택되고:
    a. C3-32알킬-C(O)-*,
    b. C3-32알케닐-C(O)-*,
    c. C3-32알키닐-C(O)-*,
    d. C3-32알킬-OP(OH)-*,
    e. C3-32알케닐-OP(OH)-* ,
    f. C3-32알키닐-OP(OH)-*,
    g. C3-32알킬-OP(O)(OH)-*,
    h. C3-32알케닐-OP(O)(OH)-*,
    i. C3-32알키닐-OP(O)(OH)-*,
    j. C3-32알킬-OP(O)(SH)-*,
    k. C3-32알케닐-OP(O)(SH)-*,
    l. C3-32알키닐-OP(O)(SH)-*,
    m. C3-32알킬-NH-C(O)-*,
    n. C3-32알케닐-NH-C(O)-*,
    o. C3-32알키닐-NH-C(O)-*,
    p. C3-32알킬-NH-P(O)(OH)-*,
    q. C3-32알케닐-NH-P(O)(OH)-*,
    r. C3-32알키닐-NH-P(O)(OH)-*,
    s. HOOC-C3-32알킬렌-C(O)-*,
    t. HOOC-C3-32알케닐렌-C(O)-*, 및
    u. HOOC-C3-32알키닐렌 -C(O)-*,
    여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내는 것인 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 서로 독립적으로 화학식 (a) 및 (b) 중 어느 하나로부터의 모이어티이고:
    a. C3-32알킬-C(O)-*,
    b. HOOC-C3-32알킬렌-C(O)-*,
    여기서 상기 별표 (*)는 상기 올리고머 화합물 또는 상기 스페이서에 대한 상기 공유 연결의 지점을 나타내고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 비분지형 C3-32알킬이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬이고, 여기서 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 비분지형 C3-32알킬렌이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 C3-32알킬렌이 홀수의 탄소 원자를 갖는 비분지형 C3-32알킬렌인 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스페이서가 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고:
    a. #-NH-C2-12알킬렌-§,
    b. #-NH-C2-12알킬렌-OP(OH)-§,
    c. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(SH)-§
    d. #-NH-C2-12알킬렌-OP(O)(OH)-§
    e. #-NH-C2-12알킬렌-NH-C(O)-§,
    f. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(OH)-§, 및
    g. #-NH-C2-12알킬렌-NH-P(O)(SH)-§,
    여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 독립적으로 -O-, -S-, -NH-, -C(O)-, -C(O)O-, 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬, 헤테로시클로알킬, -OP(OH)O-, -OP(O)(SH)O-, -OP(O)(OH)O-, -NHP(O)(OH)O-, -NHP(O)(SH)O-, 또는 -(O-CH2-CH2)k- (여기서 k는 1 내지 8의 정수임)에 의해 임의로 대체되고, 여기서 상기 C2-12알킬렌에서의 하나 이상의 -CH2-모이어티는 서로 독립적으로 하나 이상의 -COOH, -NH2, -OP(O)(OH)2 또는 -OH로 임의로 치환되고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타내는 것인 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스페이서가 하기 화학식 중 어느 하나를 포함하고, 바람직하게는 이들로부터 독립적으로 선택되고:
    a. #-Z-NH-(CH2)m-X-§
    b. #-Z-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-X-§
    c. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]-NH-(CH2)q-X-§
    d. #-Z[-NH-(CH2)n-(O-CH2-CH2)k-O-(CH2)p-C(O)-]r-NH-(CH2)q-(O-CH2-CH2)k-X-§
    여기서 -Z-는 서로 독립적으로 결합 또는 -NH-CH(COOH)-(CH2)2-C(O)- 또는 -NH-CH[(CH2)2COOH]-C(O)-를 나타내고, 여기서 X는 서로 독립적으로 OP(OH), OP(O)(SH), OP(O)(OH), NHP(O)(OH), NHP(O)(SH) 또는 NH-C(O)이고, 여기서 k는 서로 독립적으로 1 내지 8의 정수이고, 여기서 m은 서로 독립적으로 2 내지 12의 정수이고, 여기서 n은 서로 독립적으로 2 내지 4의 정수이고, 여기서 p는 서로 독립적으로 1 내지 5의 정수이고, 여기서 q는 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 r은 서로 독립적으로 1 내지 3, 바람직하게는 1 또는 2의 정수이고, 여기서 상기 (#)는 상기 지질 모이어티에 대한 공유 연결의 지점을 나타내고 상기 (§)는 상기 올리고머 화합물에 대한 공유 연결의 지점을 나타내는 것인 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 지질 모이어티가 서로 독립적으로 (i) 상기 올리고머 화합물의 말단 잔기, (ii) 상기 올리고머 화합물의 5' 말단, (iii) 상기 올리고머 화합물의 3' 말단; (iv) 상기 올리고머 화합물의 내부 잔기에서 상기 올리고머 화합물에 연결되는 것인 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머 화합물이 tc-DNA 뉴클레오시드 외에 하나 이상의 뉴클레오시드를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머 화합물이 5 내지 40개의 단량체 하위단위를 포함하고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 뉴클레오시드 중 하나 이상이 상기 하나 이상의 트리시클로-데옥시리보핵산 (tc-DNA) 뉴클레오시드이고, 여기서 상기 단량체 하위단위가 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기에 의해 연결되는 것인 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기가 포스포로티오에이트 연결 기 및 포스포로디에스테르 연결 기로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 6개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기가 포스포로티오에이트 연결 기이고, 여기서 바람직하게는 3개 이하의 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기가 포스포로티오에이트 연결 기인 조성물.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 복수개의 뉴클레오시드간 연결 기 모두가 포스포로디에스테르 연결 기인 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고머 화합물이 서열식별번호: 1-37의 서열 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 것인 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하고 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 바람직하게는 상기 제약 조성물이 신경근육 또는 근골격 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 사용하기 위한 것인, 제약 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 질환의 예방, 치료 또는 진단에서 의약으로서 사용하기 위한 조성물 또는 제약 조성물이며, 여기서 바람직하게는 상기 질환이 신경근육 또는 근골격 질환이고, 여기서 추가로 바람직하게는 상기 신경근육 또는 상기 근골격 질환이 듀센형 근이영양증, 가족성 자율신경실조증, 척수 근육 위축증, 모세혈관확장성 실조증, 선천성 당화 장애, 전측두엽 치매, 염색체 17과 연결된 파킨슨증, C형 니만 피크병, 1형 신경섬유종증, 2형 신경섬유종증, 피질하 낭종을 가진 거대뇌성 백질뇌병증 1형, 펠리제우스-메르츠바하병, 폼페병, 2형 근긴장성 이영양증 (DM2 또는 근위성 근긴장성 근육병증), 및 1형 근긴장성 이영양증 (DM1 또는 스타이네르트병)으로부터 선택된 것인, 조성물 또는 제약 조성물.
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